(57)【要約】【解決手段】化合物、その誘導体、前記化合物及び誘導体を１種以上含む組成物、並びに微生物感染及び／又は関連する疾患若しくは状態を防止及び／又は治療するためのその使用を提供する。その化合物及び／又はその誘導体は、化学式（Ｉ）で表すことができる。本使用は、微生物感染及び／又は関連する疾患若しくは状態を防止及び／又は治療するための１種以上の式（Ｉ）の化合物を有効量含む組成物を調製することを含む。一実施形態において、微生物感染は細菌感染である。より具体的に、その細菌感染はブドウ球菌感染である。2020528405.tif 000061                                                    （Ｉ）【選択図】なし
2020528405.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
化学式（Ｉ）：
【化１】
2020528405.tif 000015
（Ｉ）
（式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して又は一緒に、Ｈ；Ｆ；ＣＩ；Ｂｒ；Ｉ；ＯＨ；ＣＮ；メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル及びｔｅｒｔ−ブチルを含む（Ｃ１−４）アルキル；エテニル、プロペニル及びブテニルを含む（Ｃ２−４）アルケニルであって、その二重結合は任意にアルケニル炭素鎖中の任意の場所に位置し、その任意のアルケニル配座異性体を含む（Ｃ２−４）アルケニル；アルキニル；アラルキル；アルカリル；ハロゲン化アルキル；ヘテロアルキル；アリール；ヘテロシクリル；シクロアルキル；シクロアルケニル；シクロアルキニル；ヒドロキシアルキル；アミノアルキル；アミノ；アルキルアミノ；アリールアミノ；ジアルキルアミノ；アルキルアリールアミノ；ジアリールアミノ；アシルアミノ；ヒドロキシル；チオール；チオアルキル；アルコキシ；アルキルチオ；アルコキシアルキル；アリールオキシ；アリールアルコキシ；アシルオキシ；ニトロ；カルバモイル；トリフルオロメチル；フェノキシ；ベンジルオキシ；ホスホン酸；リン酸エステル；スルホン酸（−ＳＯ３Ｈ）；スルホン酸エステル；スルホンアミド；アルカリル；アリールアルキル；カルバメート；アミノ；アルキルアミノ；アリールアミノ；ジアルキルアミノ；アルキルアリールアミノ；ジアリールアミノ；アルキルチオ；ヘテロアルキル；アルキルトリフェニルホスホニウム；ヘテロシクリル；ケトン（＝Ｏ）；エーテル（−ＯＲ４）；及びエステル（−ＣＯＯＲ５及び−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ５）からなる群から選択され、
Ｒ１及びＲ２は、互いに任意に結合して４、５又は６員環のヘテロシクリル、シクロアルケニル又はシクロアルキルを形成し、
Ｒ４及びＲ５は、それぞれ独立して又は一緒に、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル及びｔｅｒｔ−ブチルを含む（Ｃ１−４）アルキル；エテニル、プロペニル及びブテニルを含む（Ｃ２−４）アルケニルであって、二重結合は任意にアルケニル炭素鎖中の任意の場所に位置し、任意のアルケニル配座異性体を含む（Ｃ２−４）アルケニル；及びアルキニルからなる群から選択される）
を有する化合物及びその誘導体。
【請求項２】
Ｒ１及びＲ２が、それぞれ独立して又は一緒に、
【化２】
2020528405.tif 000016
及び
【化３】
2020528405.tif 000017
から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ３がＨ又はメチルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
前記誘導体が、
【化４】
2020528405.tif 000018
【化５】
2020528405.tif 000019
【化６】
2020528405.tif 000020
【化７】
2020528405.tif 000021
及び
【化８】
2020528405.tif 000022
を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
前記誘導体が、
【化９】
2020528405.tif 000023
【化１０】
2020528405.tif 000024
【化１１】
2020528405.tif 000025
【化１２】
2020528405.tif 000026
及び
【化１３】
2020528405.tif 000027
を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
前記誘導体が、
【化１４】
2020528405.tif 000028
【化１５】
2020528405.tif 000029
【化１６】
2020528405.tif 000030
【化１７】
2020528405.tif 000031
【化１８】
2020528405.tif 000032
【化１９】
2020528405.tif 000033
【化２０】
2020528405.tif 000034
【化２１】
2020528405.tif 000035
【化２２】
2020528405.tif 000036
及び
【化２３】
2020528405.tif 000037
を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
請求項１から請求項６までのいずれか一項に記載の化合物、その誘導体、製薬上の担体、塩、エステル、賦形剤、媒体、プロドラッグ、溶媒、希釈剤又はそれらの任意の組み合わせを含む組成物。
【請求項８】
対象における微生物感染及び／又は関連する疾患若しくは状態を治療及び／又は防止するための組成物の調製における、１種以上の化合物の使用であって、
前記組成物は、１種以上の化学式（Ｉ）：
【化２４】
2020528405.tif 000038
（Ｉ）
（式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して又は一緒に、Ｈ；Ｆ；ＣＩ；Ｂｒ；Ｉ；ＯＨ；ＣＮ；メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル及びｔｅｒｔ−ブチルを含む（Ｃ１−４）アルキル；エテニル、プロペニル及びブテニルを含む（Ｃ２−４）アルケニルであって、その二重結合は任意にアルケニル炭素鎖中の任意の場所に位置し、その任意のアルケニル配座異性体を含む（Ｃ２−４）アルケニル；アルキニル；アラルキル；アルカリル；ハロゲン化アルキル；ヘテロアルキル；アリール；ヘテロシクリル；シクロアルキル；シクロアルケニル；シクロアルキニル；ヒドロキシアルキル；アミノアルキル；アミノ；アルキルアミノ；アリールアミノ；ジアルキルアミノ；アルキルアリールアミノ；ジアリールアミノ；アシルアミノ；ヒドロキシル；チオール；チオアルキル；アルコキシ；アルキルチオ；アルコキシアルキル；アリールオキシ；アリールアルコキシ；アシルオキシ；ニトロ；カルバモイル；トリフルオロメチル；フェノキシ；ベンジルオキシ；ホスホン酸；リン酸エステル；スルホン酸（−ＳＯ３Ｈ）；スルホン酸エステル；スルホンアミド；アルカリル；アリールアルキル；カルバメート；アミノ；アルキルアミノ；アリールアミノ；ジアルキルアミノ；アルキルアリールアミノ；ジアリールアミノ；アルキルチオ；ヘテロアルキル；アルキルトリフェニルホスホニウム；ヘテロシクリル；ケトン（＝Ｏ）；エーテル（−ＯＲ４）；及びエステル（−ＣＯＯＲ５及び−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ５）からなる群から選択され、
Ｒ１及びＲ２は、互いに任意に結合して４、５又は６員環のヘテロシクリル、シクロアルケニル又はシクロアルキルを形成し、
Ｒ４及びＲ５は、それぞれ独立して又は一緒に、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル及びｔｅｒｔ−ブチルを含む（Ｃ１−４）アルキル；エテニル、プロペニル及びブテニルを含む（Ｃ２−４）アルケニルであって、二重結合は任意にアルケニル炭素鎖中の任意の場所に位置し、任意のアルケニル配座異性体を含む（Ｃ２−４）アルケニル；及びアルキニルからなる群から選択される）
の化合物を有効量含む、使用。
【請求項９】
Ｒ１及びＲ２が、それぞれ独立して又は一緒に、
【化２５】
2020528405.tif 000039
及び
【化２６】
2020528405.tif 000040
から選択される、請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
Ｒ３がＨ又はメチルである、請求項８に記載の使用。
【請求項１１】
前記１種以上の化合物が、
【化２７】
2020528405.tif 000041
【化２８】
2020528405.tif 000042
【化２９】
2020528405.tif 000043
【化３０】
2020528405.tif 000044
及び
【化３１】
2020528405.tif 000045
を含む、請求項８に記載の使用。
【請求項１２】
前記１種以上の化合物が、
【化３２】
2020528405.tif 000046
【化３３】
2020528405.tif 000047
【化３４】
2020528405.tif 000048
【化３５】
2020528405.tif 000049
及び
【化３６】
2020528405.tif 000050
を含む、請求項８に記載の使用。
【請求項１３】
前記１種以上の化合物が、
【化３７】
2020528405.tif 000051
【化３８】
2020528405.tif 000052
【化３９】
2020528405.tif 000053
【化４０】
2020528405.tif 000054
【化４１】
2020528405.tif 000055
【化４２】
2020528405.tif 000056
【化４３】
2020528405.tif 000057
【化４４】
2020528405.tif 000058
【化４５】
2020528405.tif 000059
及び
【化４６】
2020528405.tif 000060
を含む、請求項８に記載の使用。
【請求項１４】
前記微生物感染がブドウ球菌感染を含む、請求項８から請求項１３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１５】
前記方法により黄色ブドウ球菌中の色素の生成量が減少する、請求項８から請求項１３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１６】
前記微生物感染及び／又は関連する疾患若しくは状態が、皮膚及び軟部組織、骨及び関節、手術創傷、留置装置、肺並びに心臓弁の感染を含む、請求項８から請求項１３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１７】
前記対象が哺乳動物である、請求項８から請求項１３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１８】
前記対象がヒトである、請求項８から請求項１３のいずれか一項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、２０１７年７月２１日に出願された米国特許仮出願第６２／５３５，５４０号明細書及び２０１８年７月２２日に出願された米国特許出願第１６／０４１，８３６号明細書からの優先権を主張し、その開示全体を参照により本明細書に援用する。
【０００２】
本発明は、化合物及びその誘導体、その化合物及び／又は誘導体を含む組成物、並びに微生物感染及び／又は関連する疾患若しくは状態を治療するためのその使用に関する。より具体的には、本化合物、誘導体、それらを含む組成物及びその使用は、細菌感染に対するものである。
【背景技術】
【０００３】
黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）は市中及び院内での主要なヒト病原体であり、無害な感染から重篤な状態まで、様々な感染を引き起こす［非特許文献１８］。院内及び市中においてメチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）が広く蔓延しているため、黄色ブドウ球菌関連の感染の治療はますます困難になってきている［非特許文献１９］。スタフィロキサンチンは、細菌の侵入を促進する重要な因子であることが証明されている［非特許文献１］。あるオペロンに位置する５つの遺伝子、ｃｒｔＯＰＱＭＮは、この色素の生合成を担うものである。このオペロンの転写はｃｒｔＯ上流のσＢ依存性プロモーターにより駆動され、ｃｒｔＮ下流のターミネーターで終了する［非特許文献２］。黄色ブドウ球菌に黄金色を付与するこの色素により、活性酸素種（ＲＯＳ）及び好中球からの攻撃に対する抵抗性が得られる［非特許文献３］。色素性細菌では、宿主の免疫防御耐性が増加した［非特許文献４］。
【０００４】
マウス皮下感染モデルでは、黄色ブドウ球菌の野生型株に感染した動物は、非色素性細菌に感染した動物よりも細菌負荷が高く、目に見える病変が大きかった［非特許文献４］。カロテノイド合成欠陥のある菌株の毒性減少は、黄色ブドウ球菌全身感染のマウスモデルでもまた示されている［非特許文献３］。色素合成を阻止することで病原性が減少し得るこがインビトロ及びインビボのデータにより示唆されている。
【０００５】
デヒドロスクアレン合成酵素（ＣｒｔＭ）は生合成経路の最初のステップを触媒するものであり、毒性因子の中和に基づく抗感染療法の標的であることが示されている。高マイクロモル濃度のジフェニルアミンは、４，４−ジアポフィトエン不飽和化酵素（ＣｒｔＮ）の阻害剤であることが分かっている［非特許文献５］。ＣｒｔＮを阻害可能な別の阻害剤であるナフチフィンは、ＦＤＡに承認された抗真菌化合物であるが、各種の感染マウスモデルにおける細菌負荷を減少させることが示されている［非特許文献６］。しかし、ブドウ球菌感染を治療及び／又は防止するための組成物の調製において、新しい化合物、治療方法及びその化合物の使用が依然として必要とされている。
以下の非特許文献は、その全体を参照により本明細書に援用する。
【非特許文献１】Ｃｌａｕｄｉｔｚ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｔａｐｈｙｌｏｘａｎｔｈｉｎ  ｐｌａｙｓ  ａ  ｒｏｌｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｆｉｔｎｅｓｓ  ｏｆ  Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ａｂｉｌｉｔｙ  ｔｏ  ｃｏｐｅ  ｗｉｔｈ  ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  ｓｔｒｅｓｓ．Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ，２００６．７４（８）：ｐ．４９５０−３
【非特許文献２】Ｐｅｌｚ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ｓｔａｐｈｙｌｏｘａｎｔｈｉｎ  ｆｒｏｍ  Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，２００５．２８０（３７）：ｐ．３２４９３−８
【非特許文献３】Ｌｉｕ，Ｃ．Ｉ．，ｅｔ  ａｌ．，Ａ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｂｌｏｃｋｓ  Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ  ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００８．３１９（５８６８）：ｐ．１３９１−４
【非特許文献４】Ｌｉｕ，Ｇ．Ｙ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ  ｇｏｌｄｅｎ  ｐｉｇｍｅｎｔ  ｉｍｐａｉｒｓ  ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ  ｋｉｌｌｉｎｇ  ａｎｄ  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｉｔｓ  ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ  ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ，２００５．２０２（２）：ｐ．２０９−１５
【非特許文献５】Ｒａｉｓｉｇ，Ａ．  ａｎｄ  Ｇ．Ｓａｎｄｍａｎｎ，４，４’−ｄｉａｐｏｐｈｙｔｏｅｎｅ  ｄｅｓａｔｕｒａｓｅ：ｃａｔａｌｙｔｉｃ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  ａｎ  ｅｎｚｙｍｅ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  Ｃ（３０）  ｃａｒｏｔｅｎｏｉｄ  ｐａｔｈｗａｙ  ｏｆ  Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ．Ｊ  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ，１９９９．１８１（１９）：ｐ．６１８４−７
【非特許文献６】Ｃｈｅｎ，Ｆ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｍａｌｌ−ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｏｆ  ａ  ｄｉａｐｏｐｈｙｔｏｅｎｅ  ｄｅｓａｔｕｒａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  Ｓ．ａｕｒｅｕｓ  ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ．Ｎａｔ  Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ，２０１６
【非特許文献７】Ｓａｋａｉ，Ｋ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅａｒｃｈ  ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  Ｓｔａｐｈｙｌｏｘａｎｔｈｉｎ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｂｙ  ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ  Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ．Ｂｉｏｌ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｕｌｌ，２０１２．３５（１）：ｐ．４８−５３
【非特許文献８】Ｈｏ，Ｐ．Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ  Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ  ｓｋｉｎ  ａｎｄ  ｓｏｆｔ  ｔｉｓｓｕｅ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｈｏｎｇ  Ｋｏｎｇ．Ｈｏｎｇ  Ｋｏｎｇ  Ｍｅｄ  Ｊ，２００９．１５  Ｓｕｐｐｌ  ９：ｐ．９−１１
【非特許文献９】Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，Ｓ．Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｂａｃｔｅｒｉａｌ  ｐａｔｈｏｇｅｎｓ  ｍｏｄｕｌａｔｅ  ａｎ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｐｒｏｇｒａｍ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ，２００３．１００（１９）：ｐ．１０９４８−５３
【非特許文献１０】Ｌａｎ，Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｇｏｌｄｅｎ  ｐｉｇｍｅｎｔ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｒｅ  ａｆｆｅｃｔｅｄ  ｂｙ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｓ  ｉｎ  Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ．Ｊ  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ，２０１０．１９２（１２）：ｐ．３０６８−７７
【非特許文献１１】Ｋｕ，Ｂ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ，ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ，ａｎｄ  ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  Ｃ３０  ｃａｒｏｔｅｎｏｉｄ  ｐａｔｈｗａｙ．Ａｐｐｌ  Ｅｎｖｉｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００５．７１（１１）：ｐ．６５７８−８３
【非特許文献１２】Ｓｏｎｇ，Ｙ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈｏｓｐｈｏｎｏｓｕｌｆｏｎａｔｅｓ  ａｒｅ  ｐｏｔｅｎｔ，ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｄｅｈｙｄｒｏｓｑｕａｌｅｎｅ  ｓｙｎｔｈａｓｅ  ａｎｄ  ｓｔａｐｈｙｌｏｘａｎｔｈｉｎ  ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｉｎ  Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ．Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ，２００９．５２（４）：ｐ．９７６−８８
【非特許文献１３】Ｆａｖｒｅ，Ｂ．  ａｎｄ  Ｎ．Ｓ．Ｒｙｄｅｒ，Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｑｕａｌｅｎｅ  ｅｐｏｘｉｄａｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ｄｅｒｍａｔｏｐｈｙｔｅ  Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  ｒｕｂｒｕｍ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｂｙ  ｔｅｒｂｉｎａｆｉｎｅ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ａｎｔｉｍｙｃｏｔｉｃ  ａｇｅｎｔｓ．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，１９９６．４０（２）：ｐ．４４３−７
【非特許文献１４】Ｖａｇｏ，Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｎａｆｔｉｆｉｎｅ  ａｎｄ  ｔｅｒｂｉｎａｆｉｎｅ，ｔｗｏ  ａｌｌｙｌａｍｉｎｅ  ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ  ｄｒｕｇｓ，ｏｎ  ｓｅｌｅｃｔｅｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｏｎｕｃｌｅａｒ  ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓ．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，１９９４．３８（１１）：ｐ．２６０５−１１
【非特許文献１５】Ｆａｎｇ，Ｆ．Ｃ．，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｏｘｙｇｅｎ  ａｎｄ  ｎｉｔｒｏｇｅｎ  ｓｐｅｃｉｅｓ：ｃｏｎｃｅｐｔｓ  ａｎｄ  ｃｏｎｔｒｏｖｅｒｓｉｅｓ．Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００４．２（１０）：ｐ．８２０−３２
【非特許文献１６】Ｌｉｕ，Ｇ．Ｙ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｗｏｒｄ  ａｎｄ  ｓｈｉｅｌｄ：ｌｉｎｋｅｄ  ｇｒｏｕｐ  Ｂ  ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ  ｂｅｔａ−ｈｅｍｏｌｙｓｉｎ／ｃｙｔｏｌｙｓｉｎ  ａｎｄ  ｃａｒｏｔｅｎｏｉｄ  ｐｉｇｍｅｎｔ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｔｏ  ｓｕｂｖｅｒｔ  ｈｏｓｔ  ｐｈａｇｏｃｙｔｅ  ｄｅｆｅｎｓｅ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ，２００４．１０１（４０）：ｐ．１４４９１−６
【非特許文献１７】Ｓｕｌｌｙ，Ｅ．Ｋ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｇｒ  ｑｕｏｒｕｍ  ｓｅｎｓｉｎｇ  ｉｎ  Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｈｏｓｔ  ｄｅｆｅｎｓｅ  ｗｉｔｈ  ｍｉｎｉｍａｌ  ｉｍｐａｃｔ  ｏｎ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．ＰＬｏＳ  Ｐａｔｈｏｇ，２０１４．１０（６）：ｐ．ｅ１００４１７４
【非特許文献１８】Ｃｒｏｓｓｌｅｙ，Ｋ．Ｂ．，Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｄｉｓｅａｓｅ．２ｎｄ  ｅｄ．２０１０，Ｃｈｉｃｈｅｓｔｅｒ，Ｗｅｓｔ  Ｓｕｓｓｅｘ；Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪ：Ｗｉｌｅｙ−Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ．ｘｉｉ，６２３  ｐ．，１０  ｐ．ｏｆ  ｐｌａｔｅｓ
【非特許文献１９】Ｂｌｏｔ，Ｓ．Ｉ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｏｕｔｃｏｍｅ  ａｎｄ  ａｔｔｒｉｂｕｔａｂｌｅ  ｍｏｒｔａｌｉｔｙ  ｉｎ  ｃｒｉｔｉｃａｌｌｙ  Ｉｌｌ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｂａｃｔｅｒｅｍｉａ  ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ  ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ−ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ  ａｎｄ  ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ  Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ．Ａｒｃｈ  Ｉｎｔｅｒｎ  Ｍｅｄ，２００２．１６２（１９）：ｐ．２２２９−３５
【非特許文献２０】Ｐｅｎｇ  Ｇａｏ，Ｊｕｌｉａｎ  Ｄａｖｉｅｓ  ａｎｄ  Ｒｉｃｈａｒｄ  Ｙｉ  Ｔｓｕｎ  Ｋａｏ，“Ｄｅｈｙｄｒｏｓｑｕａｌｅｎｅ  ｄｅｓａｔｕｒａｓｅ  ａｓ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｔａｒｇｅｔ  ｆｏｒ  ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ｉｎ  Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ”，ｍＢｉｏ，８：ｅ０１２２４−１７，（２０１７）
【発明の概要】
【０００６】
本発明の目的は、微生物感染及び／又は関連する疾患若しくは状態を防止及び／又は治療するための化合物並びにその使用を提供することである。第１の態様では、本発明は化学式（Ｉ）で表すことができる化合物及び／又はその誘導体を提供する。
【化１】
2020528405.tif 000003
（Ｉ）
式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して又は一緒に、Ｈ；Ｆ；ＣＩ；Ｂｒ；Ｉ；ＯＨ；ＣＮ；メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル等の（Ｃ１−４）アルキル；エテニル、プロペニル、ブテニル等の（Ｃ２−４）アルケニルであって、その二重結合はアルケニル炭素鎖中の任意の場所に位置することができ、その任意のアルケニル配座異性体を含む（Ｃ２−４）アルケニル；アルキニル；アラルキル；アルカリル；ハロゲン化アルキル；ヘテロアルキル；アリール；ヘテロシクリル；シクロアルキル；シクロアルケニル；シクロアルキニル；ヒドロキシアルキル；アミノアルキル；アミノ；アルキルアミノ；アリールアミノ；ジアルキルアミノ；アルキルアリールアミノ；ジアリールアミノ；アシルアミノ；ヒドロキシル；チオール；チオアルキル；アルコキシ；アルキルチオ；アルコキシアルキル；アリールオキシ；アリールアルコキシ；アシルオキシ；ニトロ；カルバモイル；トリフルオロメチル；フェノキシ；ベンジルオキシ；ホスホン酸；リン酸エステル；スルホン酸（−ＳＯ３Ｈ）；スルホン酸エステル；スルホンアミド；アルカリル；アリールアルキル；カルバメート；アミノ；アルキルアミノ；アリールアミノ；ジアルキルアミノ；アルキルアリールアミノ；ジアリールアミノ；アルキルチオ；ヘテロアルキル；アルキルトリフェニルホスホニウム；ヘテロシクリル；ケトン（＝Ｏ）；エーテル（−ＯＲ４）；及びエステル（−ＣＯＯＲ５及び−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ５）からなる群から選択することができる。Ｒ１及びＲ２は、互いに結合して４、５又は６員環のヘテロシクリル、シクロアルケニル又はシクロアルキルを形成することができる。Ｒ４及びＲ５は、それぞれ独立して又は一緒に、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル等の（Ｃ１−４）アルキル；エテニル、プロペニル、ブテニル等の（Ｃ２−４）アルケニルであって、二重結合はアルケニル炭素鎖中の任意の場所に位置することができ、任意のアルケニル配座異性体を含む（Ｃ２−４）アルケニル；及びアルキニルからなる群から選択することができる。
【０００７】
一実施形態において、本化合物及び／又はその誘導体は、細菌に対する抗毒性剤であってもよい。
【０００８】
別の実施形態において、本化合物及び／又はその誘導体は、細菌の毒性を減少させるのに有効である。
【０００９】
他の実施形態において、本化合物及び／又はその誘導体が毒性を減少させるのに有効である細菌は、ブドウ球菌種を含む。
【００１０】
さらに別の実施形態において、本化合物及び／又はその誘導体が毒性を減少させるのに有効である細菌は、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）を含む。
【００１１】
さらに別の実施形態において、本化合物及び／又はその誘導体が毒性を減少させるのに有効である細菌は、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）を含む。
【００１２】
他の実施形態において、本化合物及び／又はその誘導体により細菌の毒性を減少させることは、細菌中のスタフィロキサンチンの生合成を阻害すること及び／又は細菌宿主の免疫防御に耐性がある色素の生成を阻害すること若しくはその生成量を減少させることを含む。
【００１３】
本発明の別の目的は、第１の態様における本化合物及び／又はその誘導体を有効量含む、微生物感染及び／又は関連する疾患若しくは状態を防止及び／又は治療するための組成物を提供することである。
【００１４】
一実施形態において、微生物感染は細菌感染である。
【００１５】
別の実施形態において、微生物感染はブドウ球菌感染を含む。
【００１６】
他の実施形態において、組成物は薬学的に許容可能な担体、塩、エステル、賦形剤、媒体、プロドラッグ、溶媒及び希釈剤、又はそれらの任意の組み合わせをさらに含む。
【００１７】
第２の態様において、本発明は、微生物感染及び／又は関連する疾患若しくは状態を防止及び／又は治療するための本化合物及び／又はその誘導体の使用を提供する。この使用は、微生物感染及び／又は関連する疾患若しくは状態の防止及び／又は治療を必要とする対象の前記防止及び／又は治療するための組成物を調製する際、本化合物及び／又はその誘導体を使用することを含む。前記組成物は、１種以上の化学式（Ｉ）の化合物を有効量含む。
【化２】
2020528405.tif 000004
（Ｉ）
式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して又は一緒に、Ｈ；Ｆ；ＣＩ；Ｂｒ；Ｉ；ＯＨ；ＣＮ；メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル等の（Ｃ１−４）アルキル；エテニル、プロペニル、ブテニル等の（Ｃ２−４）アルケニルであって、その二重結合はアルケニル炭素鎖中の任意の場所に位置することができ、その任意のアルケニル配座異性体を含む（Ｃ２−４）アルケニル；アルキニル；アラルキル；アルカリル；ハロゲン化アルキル；ヘテロアルキル；アリール；ヘテロシクリル；シクロアルキル；シクロアルケニル；シクロアルキニル；ヒドロキシアルキル；アミノアルキル；アミノ；アルキルアミノ；アリールアミノ；ジアルキルアミノ；アルキルアリールアミノ；ジアリールアミノ；アシルアミノ；ヒドロキシル；チオール；チオアルキル；アルコキシ；アルキルチオ；アルコキシアルキル；アリールオキシ；アリールアルコキシ；アシルオキシ；ニトロ；カルバモイル；トリフルオロメチル；フェノキシ；ベンジルオキシ；ホスホン酸；リン酸エステル；スルホン酸（−ＳＯ３Ｈ）；スルホン酸エステル；スルホンアミド；アルカリル；アリールアルキル；カルバメート；アミノ；アルキルアミノ；アリールアミノ；ジアルキルアミノ；アルキルアリールアミノ；ジアリールアミノ；アルキルチオ；ヘテロアルキル；アルキルトリフェニルホスホニウム；ヘテロシクリル；ケトン（＝Ｏ）；エーテル（−ＯＲ４）；及びエステル（−ＣＯＯＲ５及び−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ５）からなる群から選択することができる。Ｒ１及びＲ２は、互いに結合して４、５又は６員環のヘテロシクリル、シクロアルケニル又はシクロアルキルを形成することができる。Ｒ４及びＲ５は、それぞれ独立して又は一緒に、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル等の（Ｃ１−４）アルキル；エテニル、プロペニル、ブテニル等の（Ｃ２−４）アルケニルであって、二重結合はアルケニル炭素鎖中の任意の場所に位置することができ、任意のアルケニル配座異性体を含む（Ｃ２−４）アルケニル；及びアルキニルからなる群から選択することができる。Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して又は一緒に、
【化３】
2020528405.tif 000005
及び
【化４】
2020528405.tif 000006
から任意に選択される。Ｒ３はＨ又はメチルである。
【００１８】
一実施形態において、微生物感染は細菌感染である。
【００１９】
別の実施形態において、微生物感染はブドウ球菌感染を含む。
【００２０】
他の実施形態において、微生物感染及び／又は関連する疾患若しくは状態は、ブドウ球菌種により引き起こされる。
【００２１】
さらに別の実施形態において、ブドウ球菌種は黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）を含む。
【００２２】
さらに別の実施形態において、黄色ブドウ球菌はメチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）を含む。
【００２３】
他の実施形態において、微生物感染及び／又は関連する疾患若しくは状態は、皮膚及び軟部組織、骨及び関節、手術創傷、留置装置、肺並びに心臓弁の感染を含む。
【００２４】
ある特定の実施形態において、本使用は、この組成物を投与した対象において、微生物感染及び／又は関連する疾患若しくは状態を引き起こす細菌の毒性を減少させることをさらに含む。
【００２５】
別の実施形態では、本使用は、この組成物を投与した対象における細菌中のスタフィロキサンチンの生合成を阻害すること及び／又は細菌宿主の免疫防御耐性のある色素の生成を阻害すること若しくはその生成量を減少させることをさらに含む。
【００２６】
さらに別の実施形態において、対象又は細菌宿主は哺乳動物である。
【００２７】
他の実施形態において、対象又は細菌宿主はヒトである。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
以下の発明を実施するための形態では、本発明の例示的、非限定的、及び限定的な実施形態を示した添付の図面を参照する。本発明の上記の特徴を詳細に理解することができるよう実施形態を参照することにより、上記で簡単に要約した本発明のより詳細な説明を得ることができる。実施形態のいくつかは添付の図面に示されている。しかし、図面は本発明の典型的な実施形態のみを示したものであり、本発明の範囲を制限するとみなされるものではなく、したがって本発明は他の同等に有効な実施形態も許容することができる。
図１Ａ〜図１Ｄは化合物ＮＰ１６によるインビトロでの色素阻害を示す。全データは平均値±ＳＤを表している。
【図１Ａ】ＮＰ１６の濃度増加を用いた、野生型（ＷＴ）黄色ブドウ球菌における色素産生の阻害を示す。
【図１Ｂ】ＮＰ１６による色素阻害を示し、色素形成におけるＩＣ５０は、３００ｎＭ以下である。
【図１Ｃ】化合物ＮＰ１６の化学構造を示す。
【図１Ｄ】各種ＮＰ１６濃度存在下における黄色ブドウ球菌ＣＯＬ株の増殖曲線を示す。
【００２９】
図２Ａ〜図２Ｄは酸化及び好中球による殺菌に対する感度が、ＮＰ１６処理により増加さすることを示す。全データは平均値±ＳＤを表している（＊＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１）。Ｐ値は、グラフパッドプリズムを用いたウェルチ補正を伴う対応のないｔ検定により決定した。
【図２Ａ】化合物ＮＰ１６のＭＤＣＫ細胞に対する細胞障害活性を示す。
【図２Ｂ】ＮＰ１６処理した黄色ブドウ球菌ＣＯＬ株の、過酸化水素による殺菌に対する感受性増加を示す。
【図２Ｃ】ＮＰ１６処理した黄色ブドウ球菌ＣＯＬの、好中球による殺菌に対する感受性増加を示す。
【図２Ｄ】ＮＰ１６処理した又は処理していない、各種の株から抽出したカロテノイドのＵＶスペクトルである。
【００３０】
図３Ａ〜図３ＦはＣｒｔＮのインビボでの作用及びＮＰ１６によるその阻害を示す。全データは平均値±ＳＥＭを表している（＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１）。Ｐ値は、グラフパッドプリズムを用いたウェルチ補正を伴う対応のないｔ検定により決定した。
【図３Ａ】野生型ＣＯＬ又はＣＯＬ−ΔｃｒｔＮ株に感染したマウスの肝臓から回収した細菌を示す。
【図３Ｂ】野生型ＣＯＬ又はＣＯＬ−ΔｃｒｔＮ株に感染したマウスの脾臓から回収した細菌を示す。
【図３Ｃ】化合物ＮＰ１６で治療した又は治療していない、ＣＯＬ株に感染したマウスの肝臓から回収した細菌を示す。
【図３Ｄ】化合物ＮＰ１６で治療した又は治療していない、ＣＯＬ株に感染したマウスの脾臓から回収した細菌を示す。
【図３Ｅ】臨床分離株ＡＥ０５２又はＡＥ０５２−ΔｃｒｔＮに感染したマウスの腎臓から回収した細菌を示す。
【図３Ｆ】化合物ＮＰ１６で治療した又は治療していない、株ＡＥ０５２に感染したマウスの腎臓から回収した細菌を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
黄色ブドウ球菌の色素産生を減少させる薬剤を発見するための確立されたスクリーニング法［非特許文献７］により、本化合物（以下、ＮＰ１６と呼ぶ）及びその誘導体が、４，４−ジアポフィトエン不飽和化酵素（ＣｒｔＮ）を標的とすることで黄色ブドウ球菌の色素生成を阻止することが確認されている。ＣｒｔＮは、黄色ブドウ球菌の抗毒性治療のための新しい標的として提案されている。黄色ブドウ球菌のスタフィロキサンチンは、宿主の免疫除去機構を妨害することで病態形成に実質的に寄与するが、その細菌のエクスビボでの生存にはほとんど影響を与えない。理論に束縛されるものではないが、スタフィロキサンチン生成を阻止する薬剤は、抗菌薬耐性に対する選択圧がかかることなく細菌感染の確立と維持を妨げ得ることが分かっている。
【００３２】
ＮＰ１６及びその誘導体は、化学式（Ｉ）で表すことができる。
【化５】
2020528405.tif 000007
式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して又は一緒に、Ｈ；Ｆ；ＣＩ；Ｂｒ；Ｉ；ＯＨ；ＣＮ；メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル等の（Ｃ１−４）アルキル；エテニル、プロペニル、ブテニル等の（Ｃ２−４）アルケニルであって、その二重結合はアルケニル炭素鎖中の任意の場所に位置することができ、その任意のアルケニル配座異性体を含む（Ｃ２−４）アルケニル；アルキニル；アラルキル；アルカリル；ハロゲン化アルキル；ヘテロアルキル；アリール；ヘテロシクリル；シクロアルキル；シクロアルケニル；シクロアルキニル；ヒドロキシアルキル；アミノアルキル；アミノ；アルキルアミノ；アリールアミノ；ジアルキルアミノ；アルキルアリールアミノ；ジアリールアミノ；アシルアミノ；ヒドロキシル；チオール；チオアルキル；アルコキシ；アルキルチオ；アルコキシアルキル；アリールオキシ；アリールアルコキシ；アシルオキシ；ニトロ；カルバモイル；トリフルオロメチル；フェノキシ；ベンジルオキシ；ホスホン酸；リン酸エステル；スルホン酸（−ＳＯ３Ｈ）；スルホン酸エステル；スルホンアミド；アルカリル；アリールアルキル；カルバメート；アミノ；アルキルアミノ；アリールアミノ；ジアルキルアミノ；アルキルアリールアミノ；ジアリールアミノ；アルキルチオ；ヘテロアルキル；アルキルトリフェニルホスホニウム；ヘテロシクリル；ケトン（＝Ｏ）；エーテル（−ＯＲ４）；及びエステル（−ＣＯＯＲ５及び−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ５）からなる群から選択することができる。Ｒ１及びＲ２は、互いに結合して、
【化６】
2020528405.tif 000008
及び
【化７】
2020528405.tif 000009
等の４、５又は６員環のヘテロシクリル、シクロアルケニル又はシクロアルキルを形成することができる。Ｒ３はＨ又はメチルである。Ｒ４及びＲ５は、それぞれ独立して又は一緒に、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル等の（Ｃ１−４）アルキル；エテニル、プロペニル、ブテニル等の（Ｃ２−４）アルケニルであって、二重結合はアルケニル炭素鎖中の任意の場所に位置することができ、任意のアルケニル配座異性体を含む（Ｃ２−４）アルケニル；及びアルキニルからなる群から選択することができる。
【００３３】
化学式（Ｉ）の化合物としては表１に示す化合物を挙げることができるが、これらに限定されない。
【表１−１】
2020528405.tif 000010
【表１−２】
2020528405.tif 000011
【表１−３】
2020528405.tif 000012
【００３４】
１種以上の化学式（Ｉ）の化合物を、１種以上の薬学的に許容可能な担体、塩、エステル、賦形剤、媒体、プロドラッグ、溶媒及び希釈剤と組み合わせて、かつ／又は混合して、組成物を製造することができる。
【００３５】
本明細書中、表現「薬学的に許容可能」は、動物及び／又はヒト用として、連邦政府若しくは州政府の規制機関により承認されているか、又は米国薬局方若しくは他の広く認められた薬局方に挙げられていることを意味し得る。
【００３６】
本明細書中、用語「担体」は化合物及び／又は抗生物質が共に投与される希釈剤、補助剤、賦形剤、及び／又は媒体を指し得る。このような製薬上の担体は、水、油等の滅菌液であってもよく、油は、例えば、ラッカセイ油、ダイズ油、鉱油、ゴマ油等の石油、動物、植物又は合成由来のものを含む。
【００３７】
本明細書中、表現「薬学的に許容可能な塩」は本明細書で定義される本化合物の誘導体を指し得る。親化合物はその酸性塩又は塩基性塩の作製により改変する。
【００３８】
対象における微生物感染を治療及び／又は防止する方法としては、対象に１種以上の化学式（Ｉ）の化合物を有効量投与することを含んでもよいが、これに限定されない。
【００３９】
微生物感染及び／又は関連する疾患若しくは状態を防止及び／又は治療するための組成物の調製における本化合物又はその誘導体の使用は、有効量の本化合物並びに／若しくはその誘導体、製薬上の担体、塩、エステル、賦形剤、媒体、プロドラッグ、溶媒、希釈剤又はそれらの任意の組み合わせを含むこの組成物の調製における本化合物及び／又は誘導体の使用であってもよいが、これに限定されない。
【００４０】
本明細書中、用語「治療」又は「治療すること」は、感染の発症若しくは進行を阻止若しくは阻害すること、又は阻止若しくは阻害しようと試みること、並びに／あるいは感染及び／若しくはその症状の軽減、抑制、後退、若しくは寛解を引き起こすこと、又は引き起こそうと試みることを指し得る。当業者には理解されるように、感染の発症又は進行を診断するために種々の臨床的及び科学的な方法論及びアッセイを使用してもよく、同様に、感染又はその症状の軽減、後退又は寛解を診断するために種々の臨床的及び科学的な方法論及びアッセイを使用してもよい。「治療」は、治療的処置及び予防又は防止策の両方を指す。治療が必要な対象としては、感染しやすい対象又は感染を防止すべき対象に加えて、すでに感染している対象も含む。少なくともいくつかの形態では、治療される感染症として黄色ブドウ球菌感染症を挙げることができるが、これに限定されない。他の形態では、治療される感染症は微生物感染症である。
【００４１】
投与としては、局所投与に加えて、カプセル、錠剤、顆粒、スプレー、シロップ又はその他の形態での経口経路による投与、水性懸濁液、油性配合物等として、又は点滴、座薬、膏薬、軟膏等としての非経口経路による投与、注射による皮下、腹腔内、静脈内、筋肉内、皮内等への投与、並びに放出制御製剤、デポ製剤、及び注入ポンプ送達を介した投与を挙げることができるが、これらに限定されない。
【００４２】
静脈内投与の場合、滅菌した等張水性バッファー溶液中に本化合物をパッケージして組成物を作製することができる。この組成物は、必要に応じて可溶化剤を含むことができる。本化合物の組成物は、別々に供給する又は単位剤形中に共に混合して供給することができ、例えば、活性薬剤の量を表示したアンプル又は小袋等の密封容器中の乾燥した凍結乾燥粉末又は濃縮溶液として供給することができる。本化合物を注入により投与しようとする場合、滅菌した製薬等級の水又は生理食塩水を含む注入ボトルに分注することができる。本化合物を注射により投与する場合、注射前に成分を混合できるように、滅菌した水又は生理食塩水のアンプルを用いることができる。
【００４３】
本明細書において、用語「対象」は動物を指し得る。通常、用語「対象」及び「患者」は、本明細書においては対象として区別なく使用され得る。したがって、「対象」としては、患者として微生物感染の治療を受けているヒトを含み得る。
【００４４】
本明細書において、「動物」は、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウサギ、ブタ、サル、チンパンジー及びヒトを指し得る。
【００４５】
本明細書において、用語「有効量」及び「治療上有効な量」は、記載された化合物、抗生物質及び医薬組成物に適用する場合には区別なく使用することができ、所望の治療結果をもたらすのに必要な量を意味し得る。例えば、有効量とは、組成物及び／若しくは抗生物質又は医薬組成物を投与した場合に感染の症状を治療、治癒又は緩和するのに有効な量である。求められる特定の治療目標に有効な量は、治療する感染並びにその発症／進行の重症度及び／又は段階、使用する具体的な化合物及び／若しくは抗生物質又は医薬組成物の生物学的利用能及び活性、対象における投与ルート又は投与方法及び導入部位、具体的な組成物のクリアランス速度及び他の薬物動態学的特性、治療の継続期間、接種レジメン、具体的な組成物と組み合わせて又は同時に使用する薬物、治療する対象の年齢、体重、性別、食事、生理機能及び全身の健康、並びに当業者に周知である類似の要因を含む様々な要因に依存することになる。治療する対象の状態に応じて用量は必然的にいくらか変化することになり、いずれにせよ、医師又は治療を施す他の個人が、個々の患者に適切な用量を決定することになる。さらに、記載された治療方法は対象の治療に適用されるだけではなく、細胞培養物、臓器、組織、又は個々の細胞に対してインビボ、エクスビボ又はインビトロで適用することも考え得る。
【００４６】
本明細書において、用語「ヒドロカルビル」は、水素及び炭素原子のみからなる基の意味も含む。このような基は、脂肪族及び／又は芳香族基を含み得る。この基は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の炭素原子を含み得る。ヒドロカルビル基としては、Ｃ１−６アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ノルマルブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル等のＣ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４アルキル）；アリール（例えば、ベンジル）又はシクロアルキル（例えば、シクロプロピルメチル）により置換されたＣ１−６アルキル；シクロアルキル（例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル）；アリール（例えば、フェニル、ナフチルフルオレニル）が挙げられる。
【００４７】
本明細書において、用語「アルキル」は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖アルキル基を意味し得る。アルキル基としては、例えば、「Ｃ１−６アルキル」及び「Ｃ２−１０アルキル」が挙げられる。本明細書において、用語「Ｃ１−６アルキル」は、１、２、３、４、５又は６個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖アルキル基の意味も含む。本明細書において、用語「Ｃ２−１０アルキル」は、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖アルキル基の意味も含む。この用語は、例えば、メチル、エチル、プロピル（ｎ−プロピル又はイソプロピル）、ブチル（ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル又はｔｅｒｔ−ブチル）、ペンチル、ヘキシル等の基の意味も含む。特に、アルキル基は１、２、３、４、５又は６個の炭素原子を有してもよい。
【００４８】
本明細書において、用語「アルケニル」及び「Ｃ２−６アルケニル」は２、３、４、５又は６個の炭素原子を有し、加えて、適用可能な場合にはＥ体又はＺ体選択性の少なくとも１つの二重結合を有する、直鎖又は分岐鎖アルキル基の意味を含みえる。この用語は、例えばエテニル、２−プロペニル、１−ブテニル、２−ブテニル、３−ブテニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、３−ペンテニル、１−ヘキセニル、２−ヘキセニル及び３−ヘキセニル等の基の意味を含む。
【００４９】
本明細書において、用語「アルキニル」及び「Ｃ２−６アルキニル」は２、３、４、５又は６個の炭素原子を有し、加えて少なくとも１つの三重結合を有する、直鎖又は分岐鎖アルキル基の意味を含む。この用語は、例えば、エチニル、１−プロピニル、２−プロピニル、１−ブチニル、２−ブチニル、３−ブチニル、１−ペンチニル、２−ペンチニル、３−ペンチニル、１−ヘキシニル、２−ヘキシニル及び３−ヘキシニル等の基の意味を含む。
【００５０】
本明細書において、用語「アルコキシ」及び「Ｃ１−６アルコキシ」は、−Ｏ−アルキルであって、アルキルが直鎖又は分岐鎖であり、かつ１、２、３、４、５又は６個の炭素原子を含む、−Ｏ−アルキルの意味を含む。１分類の実施形態において、アルコキシは１、２、３又は４個の炭素原子を有する。この用語は、例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ペントキシ、ヘキソキシ等の基の意味を含む。
【００５１】
本明細書において、用語「シクロアルキル」は、３、４、５、６、７又は８個の炭素原子を有する脂環基の意味を含む。この基は、架橋した又は多環系であってもよい。シクロアルキル基の多くは単環である。この用語は、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、ノルボミル、ビシクロ［２．２．２］オクチル等の意味を含む。
【００５２】
本明細書において、用語「アリール」は、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又は１６個の環炭素原子を含む芳香環系の意味を含む。アリールの多くはフェニルであるが、少なくとも１個が芳香族である２個以上の環を有する多環系であってもよい。この用語は、例えば、フェニル、ナフチル、フルオレニル、アズレニル、インデニル、アントリル等の基の意味を含む。
【００５３】
「環式基」は、環又は環系を意味し、不飽和又は部分的不飽和であってもよいが、一般的に飽和であり、通常は５〜１３個の環形成原子を含み、例えば５又は６員環である。環又は環系は、１個以上のヒドロカルビル基で置換されていてもよい。環式基としては、カルボシクリル及びヘテロシクリル部分が挙げられる。
【００５４】
本明細書において、用語「カルボシクリル」は、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又は１６個の炭素環原子を有する飽和（例えば、シクロアルキル）又は不飽和（例えば、アリール）環基の意味を含む。特に、カルボシクリルは３〜１０員環又は環系、特に５又は６員環を含み、飽和でも不飽和でもよい。環又は環系は、１個以上のヒドロカルビル基で置換されていてもよい。炭素環基は、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、ノルボルニル、ビシクロ［２．２．２］オクチル、フェニル、ナフチル、フルオレニル、アズレニル、インデニル、アントリルから選択される。
【００５５】
本明細書において、用語「ヘテロシクリル」は、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又は１６個以上の環原子を有する飽和（例えば、ヘテロシクロアルキル）又は不飽和（例えば、ヘテロアリール）ヘテロ環基の意味を含み、これらの原子の少なくとも一つは、窒素、酸素、リン、ケイ素及び硫黄から選択される。特に、ヘテロシクリルは、３〜１０員環又は環系、特に５又は６員環を含み、飽和でも不飽和でもよい。環又は環系は、１個以上のヒドロカルビル基で置換されていてもよい。
【００５６】
ヘテロ環基は、例えば、オキシラニル、アジリニル、１，２−オキサチオラニル、イミダゾリル、チエニル、フリル、テトラヒドロフリル、ピラニル、チオピラニル、チアントレニル、イソベンゾフラニル、ベンゾフラニル、クロメニル、２Ｈ−ピロリル、ピロリル、ピロリニル、ピロリジニル、ピロリジジニル（ｐｙｒｒｏｌｉｚｉｄｉｎｙｌ）、イミダゾリル、イミダゾリジニル、ベンゾイミダゾリル、ピラゾリル、ピラジニル、ピラゾリジニル、チアゾリル、イソチアゾリル、ジチアゾリル、オキサゾイル、イソキサゾイル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピペリジル、ピペラジニル、ピリダジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、特に、チオモルホリノ、インドリジニル、イソインドリル、３Ｈ−インドリル、インドリル、ベンズイミダゾリル、クマリル（ｃｕｍａｒｙｌ）、インダゾリル、トリアゾリル、テトラゾイル、プリニル、４／Ｖ−キノリジニル、イソキノリル、キノリル、テトラヒドロキノリル、テトラヒドロイソキノリル、デカヒドロキノリル、オクタヒドロイソキノリル、ベンゾフラニル、ジベンゾフラニル、ベンゾチオフェニル、ジベンゾチオフェニル、フタラジニル、ナフチリジニル、キノキサリル、キナゾリニル、キナゾリニル、シンノリニル、プテリジニル、カルバゾイイル（ｃａｒｂａｚｏｉｙｌ）、β−カルボリニル、フェナントリジニル、アクリジニル、ペリミジニル、フェナントロリニル、フラザニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フェノキサジニル、クロメニル、イソクロマニル、クロマニル等から選択される。
【００５７】
本明細書において、用語「ヘテロシクロアルキル」は、３、４、５、６又は７個の環炭素原子、並びに窒素、酸素、リン及び硫黄から選択される１、２、３、４又は５個の環ヘテロ原子を有する飽和ヘテロ環基の意味を含む。この基は多環系であってもよいが、多くは単環である。この用語は、例えば、アゼチジニル、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、ピペリジニル、オキシラニル、ピラゾリジニル、イミダゾリル、インドリジジニル（ｉｎｄｏｌｉｚｉｄｉｎｙｌ）、ピペラジニル、チアゾリジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、キノリジジニル（ｑｕｉｎｏｌｉｚｉｄｉｎｙｌ）等の基の意味を含む。環又は環系は、１個以上のヒドロカルビル基で置換されていてもよい。
【００５８】
本明細書において、用語「ヘテロアリール」は、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又は１６個の環原子を有する芳香族ヘテロ環系の意味を含み、該環原子の１個は窒素、酸素及び硫黄から選択される。この基は、少なくとも１個が芳香族である２個以上の環を有する多環系であってもよいが、多くは単環である。環又は環系は、１個以上のヒドロカルビル基で置換されていてもよい。この用語は、例えば、ピリミジニル、フラニル、ベンゾ［ｂ］チオフェニル、チオフェニル、ピロリル、イミダゾリル、ピロリジニル、ピリジニル、ベンゾ［ｂ］フラニル、ピラジニル、プリニル、インドリル、ベンゾイミダゾリル、キノリニル、フェノチアジニル、トリアジニル、フタラジニル、２Ｈ−クロメニル、オキサゾイル、イソキサゾイル、チアゾリル、イソインドリル、インダゾリル、プリニル、イソキノリニル、キナゾリニル、プテリジニル等の基の意味を含む。
【００５９】
本明細書において、用語「ハロゲン」は、Ｆ、ＣＩ、Ｂｒ又はＩの意味を含む。
【００６０】
本明細書において、表現「ハロゲン含有基」は、少なくとも１個のハロゲンを含み、炭素、窒素、酸素及び硫黄から選択される複数原子価原子を１〜３０個含む基の意味を含む。この基は、ヒドロカルビル、例えば、Ｃ１−６アルキル若しくはＣ１−６アルコキシであってもよく、又はカルボシクリル、例えば、アリールであってもよい。
【００６１】
本明細書において、ある基に関して、用語「置換された」は、その基の１個以上、特に最大５個、とりわけ１、２又は３個の水素原子が、対応する数の記載されている置換基により互いに独立して置き換えられたことを意味する。本明細書において、用語「任意に置換された」は、置換又は非置換を意味する。置換基はそれらが化学的に可能な位置にのみ存在し、当業者はある特定の置換が可能かどうかを、容易に（実験的又は理論的に）決定することができるということが、当然理解される。
【００６２】
本明細書において、用語「エナンチオマー」は、互いに鏡像を有する２個の立体異性体のうちの１個を意味する。
【００６３】
本明細書において、用語「ラセミ化合物」は、キラル分子のエナンチオマーの等量混合物を意味する。
【００６４】
本明細書において、用語「ジアステレオマー」は、エナンチオマーではなく、１個以上の同等のキラル中心で異なる立体配置を有する立体異性体のクラスの１つを意味する。ジアステレオマーは、例えば、キラル中心１つのみの配置が異なるエピマーである。
【００６５】
本明細書において、用語「立体異性体」は、分子式及び結合原子の配列は同じであるが、空間におけるそれらの原子の三次元配向が異なる異性体分子の分類の１つを意味する。
【００６６】
本明細書において、用語「プロドラッグ」は、不活性な（又は完全な活性には及ばない）化学的誘導体として投与され、その後体内で、多くの場合通常の代謝プロセスを経て、活性のある薬理学的薬剤に変換される医薬品を意味する。
【００６７】
本明細書において、用語「独立して」は、挙げられた原子又は基から各々選択される２個以上の基について、それらの基同士が同じでも異なっていてもよいことを意味する。したがって、各基の独自性は、１個以上の他の基の独自性とは独立している。
【００６８】
本明細書において、用語「一緒に」は、挙げられた原子又は基から選択される２個以上の基が同一であることを意味する。言い換えると、各基の独自性は挙げられた原子又は基から「一緒に」選択されることを意味する１個以上の他の基の独自性に依存している。
【実施例】
【００６９】
本明細書に記載される実施例及び実施形態は単に例示目的であり、その範囲内での種々の改良又は変更は、当業者に対して示唆され、また、本出願の趣旨及び範囲内に含まれる。さらに、本明細書中に記載されるいずれかの発明又はその具体例のいずれかの構成要素および限定は、本明細書中で開示されるいずれかの及び／又は全ての他の構成要素又は限定（個別に又はいずれかの組み合わせで）若しくはいずれか他の発明又はその具体例と組み合わせることができ、かかる組み合わせの全ては、それらに限定されることなく本発明の範囲内と意図される。
【００７０】
細菌、マウス及び化学試薬
【００７１】
黄色ブドウ球菌及び大腸菌（Ｅ．  ｃｏｌｉ）の株を表２に挙げる。ＢＡＬＢ／ｃマウスは、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入した。テリフィック培地（ＴＢ）中又はＴＢ寒天上（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で黄色ブドウ球菌を培養した。特に指示がない限り、全実験は、色素産生の表現型が容易に識別できる時点である、遮光した黄色ブドウ球菌の培養３６〜４８時間後の定常期における培養物由来の細菌を用いて実施した。
【表２】
2020528405.tif 000013
【００７２】
最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）試験
【００７３】
抗生物質の段階希釈液を含む９６ウェルプレート中のＢＨＩ培地１００μｌに５×１０４個の黄色ブドウ球菌細胞を播種することで、ＭＩＣを決定した。ＭＩＣは、３７℃で１８時間インキュベート後、６２０ｎｍで０．０５ＯＤ未満の細胞密度となる最小濃度として定義し、これは目に見える増殖がないことに相当する。
【００７４】
スタフィロキサンチン生成におけるＮＰ−１６類似体の評価
【００７５】
ブレインハートインフュージョン培地（ＢＨＩ）中又はＢＨＩ寒天上（Ｏｘｏｉｄ）で黄色ブドウ球菌を培養した。インビトロでの色素阻害検討は、ＢＨＩ中、阻害剤化合物の存在下又は非存在下、３７℃、２５０ｒｐｍで３６〜４８時間培養した黄色ブドウ球菌ＵＳＡ３００により実施した。メタノールを用いたスタフィロキサンチンの精製に先立ち、細菌をＰＢＳで２回洗浄した。抽出物のＯＤは、ＤＴＸ８８０マルチプレートリーダー分光光度計（Ｂｅｃｋｍａｎ）を用いて４５０ｎｍにてモニターした。試験に用いた化合物の濃度範囲は３００ｎＭ〜７００ｎＭであり、対照群には同体積のＤＭＳＯを加えた。
【００７６】
ＭＤＣＫ細胞におけるＮＰ１６の細胞毒性評価
【００７７】
ＭＤＣＫ細胞におけるＮＰ１６の細胞毒性を、ＭＴＴ（３−［４，５−ジメチルチアゾール−２−イル］−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド）アッセイにより、取扱説明書に従い評価した。ＭＴＴアッセイが有効であることを保証するため、毒性対照（１％）ＳＤＳを含めた。溶解度の制限のため、使用できるＮＰ１６の最高濃度は５００μＭであった。グラフ作成にはＳｉｇｍａＰｌｏｔ  １１．０（ＳＰＳＳ，ＩＬ）を使用した。実験は、３連で２回繰り返した。
【００７８】
阻害データをＳｉｇｍａＰｌｏｔ（ＣＡ）の規定の用量反応曲線に当てはめることにより、ＩＣ５０値を得た。
【００７９】
Ｒａｗ２６４．７細胞における他のＮＰ−１６類似体の細胞毒性評価
【００８０】
Ｒａｗ２６４．７細胞におけるＮＰ−１６及びその類似体のいくつかの細胞毒性も、ＭＴＴ（３−［４，５−ジメチルチアゾール−２−イル］−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド）アッセイにより、取扱説明書に従い評価した。ＭＴＴアッセイが適切に機能していることを保証するため、毒性対照（１％）ＳＤＳを含めた。溶解度の制限のため、使用したＮＰ−１６類似体の最高濃度は５００μＭであった。グラフ作成にはＳｉｇｍａＰｌｏｔ  １１．０（ＳＰＳＳ，ＩＬ）を使用した。実験は３連で行い、２回繰り返した。
【００８１】
ＮＰ−１６及びそのいくつかの類似体のＲａｗ２６４．７細胞に対する細胞毒性を試験し、各化合物の細胞寛容性を表３に示す。ＮＰ−１６類似体のインビトロでのスタフィロキサンチン生成の試験中、これらの化合物はスタフィロキサンチン生成を阻害することができる。一晩培養した細菌由来のスタフィロキサンチンをメタノールで抽出し、分光光度測定により定量した。その結果を、阻害率及びＴＣ５０の両方において、ＮＰ−１６に対する相対比として表３に挙げる（化合物／類似体番号は表１に挙げられているものと対応する）。
【表３】
2020528405.tif 000014
【００８２】
ｃｒｔＮの発現、精製及び酵素アッセイ
【００８３】
ヒスチジン−マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）タグを備えたＣｒｔＮを、大腸菌Ｒｏｓｅｔｔａ（ＤＥ３）細胞にて過剰発現させた。一晩培養物１０ｍｌを、１００μｇ／ｍｌのアンピシリンを追加した１ＬのＬＢ培地中に移した。１ｍＭのＩＰＴＧを用い、６００ｎｍ、ＯＤ０．６にて、１６℃で１２時間誘導を行った。細胞可溶化物をＮｉ−ＮＴＡカラムに充填し、ＣｒｔＮは、５０ｍＭのリン酸ナトリウムバッファー中に、ｐＨ６．６の４００ｎＭ塩化ナトリウムを含む０〜０．４Ｍイミダゾール７５ｍｌの直接濃度勾配を用いて溶出した。採取した画分をＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分析し、ＭＢＰ−ＣｒｔＮのピークを確認した。標的のピーク画分を濃縮し、ＰＤ−１０カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いてバッファーをイミダゾールを含まないローディングバッファーに交換した。採取した溶液を、ＴＥＶプロテアーゼにて４℃で一晩処理した。タンパク質試料をマルトースカラムに供し、通過画分を天然のＣｒｔＮタンパク質として採取した。酵素アッセイ用に、精製したＣｒｔＮ１０μｇを４，４’−ジアポフィトエンリポソーム（ｄｉａｐｏｐｈｙｔｏｅｎｅ  ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ）１００μｌ（４，４’−ジアポフィトエン５ｎｍｏｌを含む）、１５０μＭＦＡＤ及び２０ｍＭバッファーＩＩ（ｐＨ８．０のリン酸バッファー、１００ｍＭＮａＣｌ）を含む総体積６６０μｌの液中、３７℃で２時間インキュベートした（標準アッセイ）。１分子容のＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ（２：１、ｖ／ｖ）を加えることにより、反応を停止させた。混合後、試料を１６，０００ｇで１０分間遠心分離した。ＬＣ／ＭＳ分析用に、有機相を乾燥させた。
【００８４】
カロテノイドの単離
【００８５】
基質（４，４’−ジアポフィトエン）及び生成物（４，４’−ジアポニューロスポレン）を、ＣＯＬ−ΔｃｒｔＮ株及びＣＯＬ−ΔｃｒｔＯＰ株から抽出した。培養した細菌ペレット１リットル当たり３００ｍｌのメタノールを用いて、目に見える色素を全て取り除かれるまで、細胞ペレットからカロテノイドを抽出した。遠心分離（４℃、８，０００ｇ）後、有色の上澄みをプールし、ＥＺ−２Ｐｌｕｓ遠心エバポレーター（Ｇｅｎｅｖａｃ  Ｉｎｃ．，Ｇａｒｄｉｎｅｒ，ＮＹ，ＵＳＡ）を用いて５０ｍｌに濃縮した。試料を１００ｍｌのＥｔＯＡｃ及び２００ｍｌのＮａＣｌ（２．５Ｍ）と混合した。上部有機相の抽出試料を採取し、同体積の蒸留水で洗浄し、ＥＺ−２Ｐｌｕｓエバポレーターを用いて乾燥させた。乾燥試料はシリカゲル分離に供せる状態であった、又は分析前に−７０℃で保存した。構造を解明するためにＨＰＬＣの保持時間、ＵＶ可視吸収スペクトル及び質量スペクトルフラグメンテーションの組み合わせで、カロテノイドを同定した。大気圧化学イオン化インターフェースを備えたＶａｒｉａｎ  １２００Ｌ  ＬＣ／ＭＳシステムにて、ｍ／ｚが２００〜１０００である質量範囲で、ネガティブイオンモード及びポジティブイオンモードの両方を用いて質量スペクトルフラグメンテーションをモニターした。
【００８６】
過酸化水素感受性アッセイ
【００８７】
ＮＰ１６（４０μＭ）を含む又は含まないＢＨＩ中で、黄色ブドウ球菌を増殖させた。２日後、細菌をＰＢＳ中で２回洗浄し、９６ウェルプレート中で反応混合物１００μｌ当たり１×１０７ＣＦＵの濃度に希釈した。過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）のＰＢＳ溶液を最終濃度４４０ｍＭになるまで加え、該プレートを３７℃で１時間、振とうしながらインキュベートした。１，０００Ｕ／ｍｌ外因性カタラーゼ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を加えて反応を停止させ、ＢＨＩ寒天プレート上で平板培養することで細菌生存率を評価した。
【００８８】
多形核白血球の殺菌活性
【００８９】
一部変更した以外は先に記載した通り［非特許文献９］、ヒト多形核白血球（ＰＭＮ）による黄色ブドウ球菌の死滅を測定した。すなわち、２４ウェルの組織培養プレート中で、ＰＭＮ（１０６個）を〜１０７個のオプソニン化黄色ブドウ球菌細菌ＭＯＩ＝１０と混合した。３８０ｇで８分間遠心分離した後、プレートを３７℃で最大１．５時間インキュベートした。ＰＭＮをサポニンで溶解し（氷上で２０分間）、ＢＨＩＡプレート上で平板培養した。時間ゼロで正規化して生存率を計算した。スチューデントのｔ検定（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ）で統計を実施した。
【００９０】
腹腔内感染のマウスモデル
【００９１】
８〜１０週齢のメスのＢＡＬＢ／ｃマウスに、４×１０８ＣＦＵの定常期初期黄色ブドウ球菌ＣＯＬを腹腔内（ｉ．ｐ）注射した。３日後、該マウスを安楽死させ、肝臓及び脾臓を分離し、ＰＢＳ中で均質化し、平板培養して生細胞数を得た。治療調査のため、実験開始時にマウスを２群に無作為化し、０．３５ｍｇのＮＰ１６、又は対照として５％Ｔｗｅｅｎ−８０を含むＰＢＳのいずれかを、−１日目に開始して２日目まで、１日２回腹腔内投与した（各々について合計８用量）。０日目に、４×１０８ＣＦＵの定常期初期黄色ブドウ球菌ＣＯＬによる腹腔内攻撃を実施した。肝臓及び脾臓の粉砕物中での細菌のＣＦＵを計数するため、３日目にマウスを屠殺した。
【００９２】
臨床分離株である黄色ブドウ球菌株ＡＥ０５２に関しては、感染モデルにて１０８ＣＦＵの定常期初期細菌を使用したこと、及び細菌負荷をモニターするために腎臓を採取したことを除き、全操作はＣＯＬ株の場合と同様に行った。スチューデントのｔ検定（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ）を用いて統計を実施した。
【００９３】
化合物ＮＰ１６による色素生成量の減少
【００９４】
図１Ａに示すように、化合物ＮＰ１６（図１Ｃに示す構造）はインビトロでの黄色ブドウ球菌の色素形成に対して強力な活性を有し、ＩＣ５０値は１００〜３００ｎＭの範囲であった（図１Ｂ）。スタフィロキサンチンの生合成において、ＣｒｔＭ触媒前の生成物は無色であるのに対して、ＣｒｔＮの生成物である４，４’−ジアポニューロスポレンは黄色がかった化合物である。したがって、ＮＰ１６治療では、ＣｒｔＭ若しくはＣｒｔＮ、又はｓｉｇＢ若しくはｉｓｐＡ等ｃｒｔＯＰＱＭＮクラスターの発現に影響を与える他の調節因子を標的とすることが提案されている［非特許文献１０］。ＵＳＡ３００に対するＮＰ１６のＭＩＣは、５００μＭより大きかった（図１Ｄ）。
【００９５】
遺伝子欠損変異株の生成物分析により、コードされた５つの酵素の機能を特徴づけた。スタフィロキサンチンの生合成では、第１に、ファルネシル二リン酸２分子がｈｅａｄ−ｔｏ−ｈｅａｄで縮合してデヒドロスクアレン（４，４’−ジアポフィトエン）が形成され、これはデヒドロスクアレン合成酵素ＣｒｔＭにより触媒される。第２に、デヒドロスクアレンはデヒドロスクアレン不飽和化酵素ＣｒｔＮにより脱水素化され、黄色の中間体である４，４’−ジアポニューロスポレンが形成される。第３に、４，４’−ジアポニューロスポレンの末端メチル基の酸化が混合機能オキシダーゼＣｒｔＰにより触媒され、４，４’−ジアポニューロスポレン酸が形成される。次に、糖転移酵素であるＣｒｔＱが関与して、４，４’−ジアポニューロスポレン酸のＣ１”位のグルコースがエステル化されることで、グリコシル４，４’−ジアポニューロスポレノエート（ｄｉａｐｏｎｅｕｒｏｓｐｏｒｅｎｏａｔｅ）が形成される。最後に、アシルトランスフェラーゼＣｒｔＯによりＣ６”位のグルコースが１２−メチルテトラデカン酸のカルボキシル基でエステル化され、スタフィロキサンチンが得られる。スタフィロキサンチンは、β−Ｄ−グルコピラノシル１−Ｏ−（４，４’−ジアポニューロスポレン−４−オエート）−６−Ｏ−（１２−メチルテトラデカノエート）として同定された。
【００９６】
ＮＰ１６によるＣｒｔＮの阻害に伴うＨ２Ｏ２及び好中球による死滅
【００９７】
ＣｒｔＮの生物学的活性を精査するため、対立遺伝子の置換により、ＣＯＬ株の同質遺伝子的ｃｒｔＮ変異株を発生させた。変異の結果、黄色色素が消失した。化合物ＮＰ１６は、ＭＤＣＫ細胞の増殖に影響を及ぼさなかった（図２Ａ）。ＮＰ１６存在下で増殖した黄色ブドウ球菌では、色素生成量の低下が見られた（図１Ａ）。黄色ブドウ球菌の色素形成を阻止すると、過酸化水素による病原体死滅に対する病原体の感受性が増加した。非色素産生株であるＲＮ６３９０の場合、その感受性はＮＰ１６処理とは無関係に同様であった（図２Ｂ）。さらに、カロテノイド生成株として（図２Ｄ）、ＣＯＬの生存は、ヒト好中球中でＲＮ６３９０及びＮＰ１６処理したＣＯＬよりも有意に良好であった（図２Ｃ）。
【００９８】
動物実験
【００９９】
黄色ブドウ球菌全身感染モデルを用いることで、黄色ブドウ球菌由来の酵素ＣｒｔＭが、毒性因子の中和に基づく抗感染療法の標的となることが明らかになった［非特許文献３］。同様のモデルを適用し、ｃｒｔＮもまたマウスにおける感染に不可欠であるかどうかを判断した。同質遺伝子的黄色ブドウ球菌変異株ＣＯＬ−ΔｃｒｔＮを接種したマウスでは、持続的な感染をもたらした４×１０８ＣＦＵの（腹腔内注射された）野生型黄色ブドウ球菌と比較して、肝臓及び脾臓由来の細菌集団が小さいものであったため、スタフィロキサンチンの消失により侵襲性疾患の可能性が減少した（図３Ａ及び３Ｂ）。ＣＯＬ株は低毒性株であるため、１日目から３日目までは腎臓中に細菌は検出されなかった。
【０１００】
別の強毒性の臨床分離株であるＡＥ０５２、及びＣｒｔＮ酵素を欠くそのアイソジェニックな同質遺伝子的黄色ブドウ球菌変異株もまた、同様に検討した。腎臓では、野生型株と比較して、変異株は感染の７２時間後に宿主により除去された（図３Ｅ）。
【０１０１】
図３Ａ、３Ｂ及び３Ｅで用いたものと同じ腹腔内攻撃に加え、１群のマウス（ｎ＝１４）を０．３５ｍｇのＮＰ１６で、２群（ｎ＝１２）を溶媒対照で、１日２回（−１日目、０日目、１日目及び２日目）処理した。７２時間目にマウスを屠殺すると、化合物ＮＰ１６で治療したマウスの肝臓及び脾臓における黄色ブドウ球菌ＣＯＬの細菌数は、対照群の細菌数よりも有意に低いものであった（Ｐ＜０．０１）（図３Ｃ及び３Ｄ）。ＡＥ０５２感染の場合、ＮＰ１６で治療したマウスの腎臓における細菌数は対照群の細菌数よりも有意に低いものであり（Ｐ＜０．００１）（両群においてｎ＝１０）、１０匹中６匹が検出閾値未満であった。これに対して、対照群では１０匹中２匹のみが検出閾値未満であった（図３Ｆ）。この結果は、ＣＯＬ又はＡＥ０５２に感染した治療群中の生存細菌が９８％減少したことを示すものである。
【０１０２】
考察
【０１０３】
ＮＰ−１６はＣｒｔＮに対する阻害剤であり、黄色ブドウ球菌に対して抗毒性効果を発揮できることが明らかになった。ＣｒｔＭ及びＣｒｔＮは、スタフィロキサンチンの生合成において重要な酵素である［非特許文献１１］。スタフィロキサンチンは宿主防御に対する黄色ブドウ球菌寛容性において重要な役割を担うと同時に、黄色ブドウ球菌に対して使用するための、合理的薬物設計における標的候補の基盤となる。通常の宿主の自然免疫除去に対して感受性を有する病原体に対する機構のみを標的とする、直接的な殺菌特性のない新規の抗感染薬を提供することを提案する。ヒトＳＱＳと細菌ＣｒｔＭとの間には３０％の配列相同性があるため、重要な構造的特徴を共有している。このような相同体の存在により、新薬の開発につながるような標的としてのＣｒｔＭの使用が困難となった。これは最近出版された、ＢＰＨ６５２のＣｒｔＭに対する特異性向上に焦点を当てた調査［非特許文献１２］によりさらに裏付けられている。ＣｒｔＭと比較して、ＣｒｔＮはヒトコレステロール生合成経路に相同酵素を含んでおらず、このため、魅力的な薬物標的となる。最近提案されたＣｒｔＮ阻害剤であるナフチフィン（ｎａｆｉｔｉｆｉｎｅ）は局所投与される抗真菌化合物であり［非特許文献１３］、高濃度で多形核白血球の走化性、化学運動性、化学発光及びスーパーオキシドアニオンの生成を抑制することが示されている［非特許文献１４］。ナフチフィンの効果は各種器官で安定しておらず（効果がないものから細菌負荷がほぼ４ｌｏｇ減少するものまで）、ＣｒｔＮ変異株（細菌負荷が常に０．２〜最大２ｌｏｇ減少する）と矛盾する。これは、ＣｒｔＮはナフチフィンの主標的とはならないことを示していると考えられている［非特許文献６］。
【０１０４】
細菌を排除するために、貪食細胞はＲＯＳを使用する。貪食細胞は、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）オキシダーゼにより生成される［非特許文献１５］。黄色ブドウ球菌により発現する細菌カロテノイドには、これらの防御分子に対する保護機能がある可能性がある［非特許文献４、１６］。色素が欠乏した黄色ブドウ球菌株は、野生型黄色ブドウ球菌株と比較して、インビトロにおいて酸化剤、過酸化水素及び一重項酸素に対する感度が高いことが証明されている［非特許文献１］。細菌内の阻害アッセイシステムを用いて、カロテノイド合成を妨害する同質遺伝子的ＣｒｔＮ変異株は、精製したヒト好中球に対してより感受性が高いことが示された。これにより、黄色ブドウ球菌の細胞内生存におけるＣｒｔＮの重要性が確認された。
【０１０５】
直接的な殺菌特性のないＣｒｔＮ阻害剤には、薬物耐性を発揮するために病原体又は常在菌叢に直接的な選択圧をかけないという理論上の利点があるはずである。きわめて特異的な抗ブドウ球菌療法用の他の毒性因子に基づく概念［非特許文献３、１７］だけではなく、我々のアプローチもまた、病原体クリアランスのための宿主における通常の自然免疫応答を主に頼りにするものである。このような手法は、抗生物質で観察される場合とは異なり薬剤抵抗性の病原体が生じるリスクが限定されるため、臨床治療及び予防用途においてはるかに理想的である。
【０１０６】
本明細書に記載される実施例及び実施形態は単に例示目的であり、その範囲内にて種々の修正又は変更が当業者に提示され、本出願の趣旨及び範囲内に包含されることは理解すべきである。
【０１０７】
本明細書で言及又は引用される全ての特許、特許出願、仮出願及び刊行物は、全ての図及び表を含め、それらが本明細書の明示的な教示と矛盾しない範囲で参照により援用される。
【０１０８】
本発明の理解の徹底を期すために、具体的な詳細、関係及び方法が多数記載されていると理解すべきである。しかしながら、本発明が、細部にわたる詳細な説明のうち１つ又は複数を用いることなく、又は他の方法、プロトコル、試薬、細胞系及び動物を用いて実施することができることは、当業者には容易に理解されよう。本発明は、例示した順序の行為又は事象に限定されず、いくつかの行為は、異なる順序及び／又は他の行為又は事象と同時になされてもよい。さらに、本発明による手法を実施するのに、例示した全ての行為、工程又は事象が必要なわけではない。本明細書に記載又は参照した技術および手順は、当業者であれば十分理解できるものであり、従来の手法を用いて行うことができるものである。
【０１０９】
特に断りのない限り、本明細書で用いた技術用語、表記、その他科学用語や専門用語は全て、本発明に関連する当業者であれば理解されるものである。場合によっては、一般的に理解されている意味の用語を、明瞭かつ／又はすぐに参照できるよう本明細書において定義してある。本明細書にそのような定義を含めることは、必ずしも当該技術分野において広く理解されていることに対する実質的な差異を示すとは必ずしも解釈されない。辞書で一般的に定義されているような用語は、関連技術での意味及び／又は本明細書で定義されたその他意味と一致する意味を有するものとし、そうでない場合は、本明細書で定義される。
【図１Ａ】
2020528405.tif 000062
【図１Ｂ】
2020528405.tif 000063
【図１Ｃ】
2020528405.tif 000064
【図１Ｄ】
2020528405.tif 000065
【図２Ａ】
2020528405.tif 000066
【図２Ｂ】
2020528405.tif 000067
【図２Ｃ】
2020528405.tif 000068
【図２Ｄ】
2020528405.tif 000069
【図３Ａ】
2020528405.tif 000070
【図３Ｂ】
2020528405.tif 000071
【図３Ｃ】
2020528405.tif 000072
【図３Ｄ】
2020528405.tif 000073
【図３Ｅ】
2020528405.tif 000074
【図３Ｆ】
2020528405.tif 000075
【国際調査報告】
2020528405.tif 000076
2020528405.tif 000077