(57)【要約】単独でまたは少なくとも１つの免疫調節剤と組み合わせて、少なくとも１つのヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）ポリペプチド、または前記ＨＲＳポリペプチドをコードする発現可能なポリヌクレオチドの使用を含む、間質性肺疾患（ＩＬＤ）を含む、肺の炎症の治療のための併用療法を含む、療法が、提供される。本開示の実施形態は、単独でまたは少なくとも１つの免疫調節剤と組み合わせて、少なくとも１つのヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）ポリペプチド、または当該ＨＲＳポリペプチドをコードする発現可能なポリヌクレオチドの使用を含む、間質性肺疾患（ＩＬＤ）を含む、肺の炎症の治療のための併用療法を含む、療法に関する。【選択図】図３
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）ポリペプチド、または前記ＨＲＳポリペプチドをコードする発現可能なポリヌクレオチドと、
（ｂ）免疫調節剤と、を含む、治療用組成物。
【請求項２】
前記ＨＲＳポリペプチドが、表Ｈ１、表Ｈ２、および表Ｈ４から選択される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる、請求項１に記載の治療用組成物。
【請求項３】
前記ＨＲＳポリペプチドが、５００〜５０６アミノ酸長であり、配列番号８（ＨＲＳ（１〜５０６））または９（ＨＲＳ（２〜５０６））に対して少なくとも９０％同一であり、配列番号１の残基５０７〜５０９を欠いている、請求項２に記載の治療用組成物。
【請求項４】
前記ＨＲＳポリペプチドが、配列番号８（ＨＲＳ（１〜５０６））を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる、請求項３に記載の治療用組成物。
【請求項５】
前記ＨＲＳポリペプチドが、配列番号９（ＨＲＳ（２〜５０６）またはＨｉｓＲＳ１Ｎ８）を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる、請求項３に記載の治療用組成物。
【請求項６】
前記ＨＲＳポリペプチドが、異種ポリペプチドと融合している、請求項１〜５のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【請求項７】
前記異種ポリペプチドが、Ｆｃ領域を含み、ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドを形成し、任意に、前記ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドが、表Ｈ８から選択される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる、請求項６に記載の治療用組成物。
【請求項８】
前記ＨＲＳポリペプチドが、配列番号１５７（Ｆｃ−ＨＲＳ（２〜６０）またはＨＲＳＦＣ１）を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる、請求項７に記載の治療用組成物。
【請求項９】
前記ＨＲＳポリペプチドが、タンパク質ベースで少なくとも約８０％、８５％、９０％、または９５％純粋であり、約５％未満凝集している、請求項１〜８のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【請求項１０】
（ａ）が、前記ＨＲＳポリペプチドをコードする発現可能なポリヌクレオチド、任意に、修飾ｍＲＮＡポリヌクレオチドであり、前記修飾ｍＲＮＡポリヌクレオチドは、任意に、１つ以上の非天然ベースおよび／または非天然ヌクレオチド間結合を含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【請求項１１】
前記ＨＲＳポリペプチドが、非正準活性、任意に、抗炎症活性を有する、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【請求項１２】
前記免疫調節剤が、ピルフェニドン、ニンテダニブ、スフィンゴシン−１−ホスフェート（Ｓ１Ｐ）および／またはＳ１Ｐ受容体（Ｓ１ＰＲ）モジュレーター、ステロイド、任意にグルココルチコイド、カルシニューリン阻害剤、ラパマイシンの機構的標的（ｍＴＯＲ）阻害剤、インドールアミン−ピロール２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、イノシン−５’−モノホスフェートデヒドロゲナーゼ（ＩＭＰＤＨ）阻害剤、サイトカインおよび／またはサイトカイン受容体阻害剤、Ｂ細胞受容体阻害剤、キナーゼ阻害剤、ならびに細胞増殖抑制剤、任意にメトトレキサートのうちの１つ以上から選択される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【請求項１３】
前記Ｓ１Ｐおよび／またはＳ１ＰＲモジュレーターが、アミセリモド（Ｓ１ＰＲアンタゴニスト）、フィンゴリモド（Ｓ１ＰＲ１機能的アンタゴニスト）、ソネプシズマブ（Ｓ１Ｐ特異的モノクローナル抗体）、ＫＲＰ２０３（Ｓ１ＰＲ１アゴニスト）、ＳＥＷ２８７１（Ｓ１ＰＲ１アゴニスト）、シポニモド（Ｓ１ＰＲ１およびＳ１ＰＲ５モジュレーター）、ＲＰＣ１０６３（Ｓ１ＰＲ１モジュレーター）、ＯＮＯ−４６４１（Ｓ１ＰＲ１およびＳ１ＰＲ５アゴニスト）、ＪＴＥ−０１３（Ｓ１ＰＲ２アンタゴニスト）、ＧＳＫ２０１８６８２（Ｓ１ＰＲ１アゴニスト）、ポネシモド（Ｓ１ＰＲ１アゴニスト）、スラミン（選択的Ｓ１ＰＲ３およびＳ１ＰＲ５アンタゴニスト）、ＶＰＣ２３０１９（アリール−アミド類似体；競合的Ｓ１ＰＲ１およびＳ１ＰＲ３アンタゴニスト）、およびＷ１４６（選択的Ｓ１ＰＲ１アンタゴニスト）、Ｓ１ＰＲを標的とするアンチセンスまたはＲＮＡｉ剤、ならびにＳ１Ｐおよび／またはＳ１ＰＲに特異的に結合する抗体または抗原結合断片もしくは小分子から選択される、請求項１２に記載の治療用組成物。
【請求項１４】
前記ステロイドが、ベタメタゾン、ブデソニド、コルチゾール（ヒドロコルチゾン）、コルチゾン、デフラザコート、デオキシコルチコステロン、デキサメタゾン、フルドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、プレドニゾロン、およびトリアムシノロンから選択される、請求項１２に記載の治療用組成物。
【請求項１５】
前記カルシニューリン阻害剤が、シクロスポリン、ピメクロリムス、タクロリムス、カルシニューリンまたはそのサブユニットを標的とするアンチセンスまたはＲＮＡｉ剤、ならびにカルシニューリンまたはそのサブユニットに特異的に結合する抗体または抗原結合断片もしくは小分子から選択される、請求項１２に記載の治療用組成物。
【請求項１６】
前記ｍＴＯＲ阻害剤が、ＡＴＰ競合的ｍＴＯＲキナーゼ阻害剤、ｍＴＯＲＣ１／ｍＴＯＲＣ２二重阻害剤、および／またはｍＴＯＲ／ＰＩ３Ｋ二重阻害剤であるか、あるいは、前記ｍＴＯＲ阻害剤が、エベロリムス、ラパマイシン、デフォロリムス、テムシロリムス、ダクトリシブ、ＢＧＴ２２６、ＳＦ１１２６、ＰＫＩ−５８７、ＮＶＰＢＥ２３５、サパニセルチブ、ＡＺＤ８０５５、ＡＺＤ２０１４、ｍＴＯＲを標的とするアンチセンスまたはＲＮＡｉ剤、ならびにｍＴＯＲに特異的に結合する抗体または抗原結合断片もしくは小分子のうちの１つ以上から選択される、請求項１２に記載の治療用組成物。
【請求項１７】
前記ＩＤＯ阻害剤が、インドキシモド（ＮＬＧ−８１８９）、１−メチル−トリプトファン（１ＭＴ）、β−カルボリン（ノルハルマン；９Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール）、ロスマリン酸、およびエパカドスタット、ＩＤＯを標的とするアンチセンスまたはＲＮＡｉ剤、ならびにＩＤＯに特異的に結合する抗体または抗原結合断片もしくは小分子から選択される、請求項１２に記載の治療用組成物。
【請求項１８】
前記ＩＭＰＤＨ阻害剤が、ミコフェノール酸（ミコフェノール酸モフェチル）、リバビリン、および６ＴＧＭＰ（６−チオグアニンモノホスフェート）、ＩＭＰＤＨを標的とするアンチセンスまたはＲＮＡｉ剤、ならびにＩＭＰＤＨに特異的に結合する抗体または抗原結合断片もしくは小分子のうちの１つ以上から選択される、請求項１２に記載の治療用組成物。
【請求項１９】
前記サイトカイン阻害剤が、ＩＬ−１αおよびＩＬ−１βを含むインターロイキン−１（ＩＬ−１）、インターロイキン−５（ＩＬ−５）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、インターロイキン−８（ＩＬ−８）、インターロイキン−１１（ＩＬ−１１）、インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）、インターロイキン−１７（ＩＬ−１７）、インターロイキン−１８（ＩＬ−１８）、インターロイキン−２０（ＩＬ−２０）、インターロイキン−３３（ＩＬ−３３）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ−ガンマ）、形質転換成長因子−β（ＴＧＦ−β）、および顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、および／またはＩＬ−１Ｒ、ＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−８Ｒ、ＩＬ−１１Ｒ、ＩＬ−１２Ｒ、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−２０Ｒのうちの１つ以上から選択されるサイトカイン受容体、ＳＴ２（インターロイキン１受容体様１、ＩＬ１ＲＬ１）、ＴＮＦＲ１などのＴＮＦＲ、インターフェロン−ガンマ受容体（ＩＦＮＧＲ）、ならびにＴＧＦβＲ１（ＡＬＫ５）またはＴＧＦβＲ２などのＴＧＦ−β受容体のうちの１つ以上から選択されるサイトカインの阻害剤であり、さらに、前記サイトカインおよび／またはサイトカイン受容体阻害剤が、前記サイトカインおよび／またはサイトカイン受容体を標的とするアンチセンスまたはＲＮＡｉ剤、ならびに前記サイトカインまたはサイトカイン受容体に特異的に結合する抗体または抗原結合断片もしくは小分子から選択される、請求項１２に記載の治療用組成物。
【請求項２０】
前記サイトカインおよび／またはサイトカイン受容体阻害剤が、アダリムマブ、アナキンラ、バシリキシマブ、カナキヌマブ、セルトリズマブ、ダクリズマブ、エタネルセプト、ゴリムマブ、インフリキシマブ、イキセキズマブ、メポリズマブ、レスリズマブ、リロナセプト、セクキヌマブ、セリルマブ（ｓｅｒｉｌｕｍａｂ）、シルクマブ、トシリズマブ、およびウステキヌマブのうちの１つ以上から選択される、請求項１２または１９に記載の治療用組成物。
【請求項２１】
前記キナーゼ阻害剤が、ヤーヌスキナーゼ（ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、ＴＹＫ２を含むＪＡＫ）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、受容体チロシン−タンパク質キナーゼｅｒｂＢ−２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕまたはＥＲＢＢ２）、Ｂｃｒ−Ａｂｌ、ｃ−ＳＲＣ、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰ）キナーゼ、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）、脾臓チロシンキナーゼ（ＳＹＫ）、ブルトンチロシンキナーゼ（ＢＴＫ）、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、血管内皮成長因子受容体（ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＶＥＧＦＲ３を含むＶＥＧＦＲ）、線維芽細胞成長因子受容体（ＦＧＦＲ）、Ｂ−Ｒａｆ、ＲＥＴがん原遺伝子、血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦ−Ｒ）、トロポミオシン受容体キナーゼ（ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、ＴｒｋＣを含むＴｒｋ）、およびｃ−Ｍｅｔのうちの１つ以上から選択されるキナーゼの阻害剤であり、さらに、前記キナーゼ阻害剤が、前記キナーゼを標的とするアンチセンスまたはＲＮＡｉ剤、ならびに前記キナーゼに特異的に結合する抗体または抗原結合断片もしくは小分子から選択される、請求項１２に記載の治療用組成物。
【請求項２２】
前記キナーゼ阻害剤が、ニンテダニブ、バリシチニブ、フェドラチニブ、フィルゴチニブ、ガンドチニブ、レスタウルチニブ、モメロチニブ、パクリチニブ、ペフィシチニブ、ルキソリチニブ、トファシチニブ、パダシチニブ、アファチニブ、アキシチニブ、ボスチニブ、セツキシマブ、コビメチニブ、クリゾチニブ、カボザンチニブ、ダサチニブ、エヌトレクチニブ（ｅｎｔｒｅｃｔｉｎｉｂ）、エルロチニブ、フォスタマチニブ、ゲフィチニブ、イブルチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、レンバチニブ、ムブリチニブ、ネラチニブ、ニロチニブ、パゾパニブ、ペガプタニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、ＳＵ６６５６、トセラニブ、バンデタニブ、バタラニブ、およびベムラフェニブのうちの１つ以上から選択される、請求項１２または２１に記載の治療用組成物。
【請求項２３】
前記Ｂ細胞受容体阻害剤が、ＣＤ２０を標的とするアンチセンスまたはＲＮＡｉ剤、ならびにＣＤ２０に特異的に結合する抗体または抗原結合断片もしくは小分子から選択されるか、または前記Ｂ細胞受容体阻害剤が、任意に、イブリツモマブ・チウキセタン、オビヌツズマブ、オカラツズマブ、オクレリズマブ、リツキシマブ、トシツモマブ、およびベルツズマブのうちの１つ以上から選択される、請求項１２に記載の治療用組成物。
【請求項２４】
前記アンチセンス剤が、約１０〜４０塩基長であり、任意に、モルホリノオリゴヌクレオチド（ＰＭＯ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、２’Ｏ−メチルホスホロチオエートオリゴヌクレオチド、トリシクロ−ホスホロチオエートオリゴヌクレオチド、およびロックド核酸（ＬＮＡ）から選択される、請求項１３〜２３のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【請求項２５】
前記アンチセンス剤が、標的タンパク質をコードするプレｍＲＮＡまたはｍＲＮＡ標的配列内の標的領域に特異的にハイブリダイズし、前記標的領域が、前記ｍＲＮＡのＡＵＧ開始コドン、前記ＡＵＧ開始コドンの上流の領域、前記ＡＵＧコドンの下流の領域、予め処理したｍＲＮＡの３’または５’スプライス部位、分岐点、３’未翻訳領域（ＵＴＲ）、およびポリアデニル化シグナル配列のうちの１つ以上から選択される、請求項２４に記載の治療用組成物。
【請求項２６】
前記ＲＮＡｉ剤が、前記標的タンパク質をコードするｍＲＮＡ標的配列と実質的に同一であるセンス鎖、および任意に、前記標的タンパク質をコードする前記ｍＲＮＡ標的配列と相補的であるか、または実質的に相補的であるアンチセンス鎖を含み、任意に、前記ＲＮＡｉ剤が、二本鎖短干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）オリゴヌクレオチドであるか、または任意に、前記ＲＮＡｉ剤、任意に、ｓｉＲＮＡオリゴヌクレオチドが、ウイルスベクターによってコードされる、請求項１３〜２３のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【請求項２７】
前記抗体またはその抗原結合断片が、モノクローナル抗体、任意に、ヒト化抗体、または任意に、Ｆｖ断片もしくは一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）ポリペプチドである、請求項１３〜２３のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【請求項２８】
前記組成物が、タンパク質ベースまたは重量−重量ベースで少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％の純度を有し、実質的には、凝集体を含まない、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【請求項２９】
実質的には、内毒素を含まない、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【請求項３０】
脂質ナノ粒子を含む、請求項１〜２９のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【請求項３１】
前記組成物が、シリンジ、任意に、注射可能なシリンジ中にあるか、または前記組成物が、カプセル、任意に、経口カプセルである、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【請求項３２】
肺の炎症の治療を必要とする対象においてそれを行う方法であって、前記対象に、
（ａ）ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）ポリペプチド、または前記ＨＲＳポリペプチドをコードする発現可能なポリヌクレオチドと、
（ｂ）免疫調節剤と、を投与することを含む、方法。
【請求項３３】
（ａ）および（ｂ）が、別々に投与され、任意に、請求項１〜３１のいずれか１項に従って定義される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
（ａ）および（ｂ）が、一緒に、任意に、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の治療用組成物として投与される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
前記ＨＲＳポリペプチドが、Ｆｃ領域を含み、ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドを形成し、任意に、前記ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドが、表Ｈ８から選択される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる、請求項３２〜３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３６】
前記ＨＲＳポリペプチドが、配列番号１５７（Ｆｃ−ＨＲＳ（２〜６０）またはＨＲＳＦＣ１）を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記免疫調節剤が、前記ＨＲＳポリペプチドのみと比較して、前記ＨＲＳポリペプチドの１つ以上の薬物動態学的特徴を変化させる、請求項３２〜３６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３８】
前記ＨＲＳポリペプチドの前記１つ以上の変化する薬物動態学的特徴が、血清濃度の増加、血清半減期の増加、バイオアベイラビリティの増加、曝露（ＡＵＣ）の増加、および／またはクリアランスの減少である、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記免疫調節剤が、ピルフェニドンまたはニンテダニブである、請求項３２〜３８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４０】
前記ＨＲＳポリペプチドが、配列番号１５７（Ｆｃ−ＨＲＳ（２〜６０）またはＨＲＳＦＣ１を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなり、前記免疫調節剤が、ピルフェニドンである、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記ピルフェニドンが、前記ＨＲＳポリペプチドのみと比較して、前記対象における前記ＨＲＳポリペプチドの前記血清濃度を少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、または２００％以上増加させる、請求項３９または４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記ピルフェニドンが、約５０〜約１０００ｍｇの範囲である個々の投与量単位で、あるいは約５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、もしくは１０００ｍｇ、約５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、もしくは１０００ｍｇ以下、または少なくとも約５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、もしくは１０００ｍｇの個々の投与量単位で、任意に、経口投与用の１つ、２つ、または３つのカプセルで投与される、請求項３９または４０に記載の方法。
【請求項４３】
前記ピルフェニドンが、約１００〜約４０００ｍｇ／日の範囲である１日投与量単位で、あるいは約１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、２０００、２１００、２２００、２３００、２４００、２５００、２６００、２７００、２８００、２９００、３０００、３１００、３２００、３３００、３４００、３５００、３６００、３７００、３８００、３９００、もしくは４０００ｍｇ／日、約１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、２０００、２１００、２２００、２３００、２４００、２５００、２６００、２７００、２８００、２９００、３０００、３１００、３２００、３３００、３４００、３５００、３６００、３７００、３８００、３９００、もしくは４０００ｍｇ／日以下、または少なくとも約１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、２０００、２１００、２２００、２３００、２４００、２５００、２６００、２７００、２８００、２９００、３０００、３１００、３２００、３３００、３４００、３５００、３６００、３７００、３８００、３９００、もしくは４０００ｍｇ／日の１日投与量単位で、任意に、経口投与用の約１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つのカプセルで投与される、請求項３９〜４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４４】
前記ピルフェニドンが、約８００ｍｇ（例えば８０１ｍｇ）の個々の投与量単位で、任意に、個々の投与量につき３つのカプセルとして服用される、経口投与用の３つの約２６７ｍｇのカプセルとして投与される、請求項３９〜４３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４５】
前記ピルフェニドンが、約２４００ｍｇ／日（例えば２４０３ｍｇ／日）の１日投与量単位で、任意に、個々の投与量につき３つのカプセルとして服用される、１日３回の経口投与用の９つの約２６７ｍｇのカプセルとして投与される、請求項３９〜４４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４６】
前記ニンテダニブが、約１０〜約５００ｍｇの範囲である個々の投与量単位で、あるいは約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、もしくは５００ｍｇ、約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、もしくは５００ｍｇ以下、または少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、もしくは５００ｍｇの個々の投与量単位で、任意に、約１つ、２つ、または３つのカプセルで投与される、請求項３９に記載の方法。
【請求項４７】
前記ニンテダニブが、約２０〜約１０００ｍｇ／日の範囲である１日投与量単位で、あるいは約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００ｍｇ／日、約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００ｍｇ／日以下、または少なくとも約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００ｍｇ／日の１日投与量単位で、任意に、約１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのカプセルで投与される、請求項３９または４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記ニンテダニブが、約１００〜１５０ｍｇの範囲である、または約２００〜３００ｍｇ／日の範囲である１日投与量単位で、任意に、１日１回または２回の投与量で投与される、請求項３９または４６〜４７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４９】
前記ニンテダニブが、約１００〜１５０ｍｇ、または約２００〜３００ｍｇ／日の１日投与量単位で、任意に、１日１回または２回の投与量で投与される、請求項３９または４６〜４８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５０】
前記対象が、間質性肺疾患（ＩＬＤ）に罹患しているか、または罹患するリスクがある、請求項３２〜４９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５１】
前記ＩＬＤが、特発性であるか、または結合組織疾患、自己免疫疾患、吸入物質もしくは薬物への曝露、感染症、または悪性腫瘍に関連している、請求項３２〜５０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５２】
前記ＩＬＤが、特発性間質性肺炎、特発性肺線維症、サルコイドーシス、ハンマンリッチ症候群、抗合成酵素症候群、特発性好酸球性肺炎、肺胞出血症候群、肺胞タンパク症、石綿肺症、珪肺症、ベリリウム症、リウマチ性関節炎、紅斑性狼瘡、肺障害を伴う慢性移植片対宿主病、硬化症（全身性）または強皮症、多発性筋炎、皮膚筋炎、慢性肺疾患、喘息、気管支炎（呼吸気管支炎）、肺炎、過敏性肺炎、慢性過敏性肺炎、呼吸窮迫症候群、スティル病、急性肺損傷、顕微鏡的多発血管炎、肺水腫、肺ランゲルハンス細胞組織球症、急性吸入曝露、薬物誘導性肺疾患、剥離性間質性肺炎、および／または嚢胞性線維症のうちの１つ以上から選択されるか、またはそれらと関連している、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記ＩＬＤが、サーファクタントタンパク質Ｂ欠乏症（ＳＦＴＰＢにおける変異）、サーファクタントタンパク質Ｃ欠乏症（ＳＦＴＰＣにおける変異）、ＡＢＣＡ３欠乏症（ＡＢＣＡ３における変異）、脳肺甲状腺症候群（ＴＴＦ１における変異）、または先天性肺胞タンパク症（ＣＳＦＲ２Ａ、ＣＳＦＲ２Ｂにおける変異）、肺胞毛細血管異形成（ＦｏｘＦ１における変異）、テロメラーゼ逆転写酵素（ＴＥＲＴ）における変異、テロメラーゼＲＮＡ成分（ＴＥＲＣ）における変異、テロメア伸長ヘリカーゼ１の調節因子（ＲＴＥＬ１）における変異、および／またはポリ（Ａ）特異的リボヌクレアーゼ（ＰＡＲＮ）における変異のうちの１つ以上と関連している、請求項５１または５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記薬物が、抗生物質、化学療法剤、抗不整脈剤、およびスタチン薬のうちの１つ以上から選択される、請求項５１に記載の方法。
【請求項５５】
前記感染が、非定型肺炎、ニューモシスチス肺炎（ＰＣＰ）、結核、クラミジアトラコマチス、および呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、特発性器質化肺炎のうちの１つ以上から選択される、請求項５１に記載の方法。
【請求項５６】
前記悪性腫瘍が、がん性リンパ管症またはリンパ腫である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５７】
前記肺の炎症の治療を必要とする対象が、アトピー性喘息、非アトピー性喘息、アレルギー性喘息、アトピー性気管支ＩｇＥ仲介性喘息、気管支喘息、本態性喘息、真正喘息、病態生理学的かく乱により引き起こされる内因性喘息、環境因子により引き起こされる外因性喘息、知られていないかまたは明らかでない原因の本態性喘息、非アトピー性喘息、気管支炎様喘息、気腫性喘息、運動誘発性喘息、アレルゲン誘発性喘息、冷気誘発性喘息、職業喘息、細菌、真菌、原虫、またはウイルス感染症により引き起こされる感染型喘息、非アレルギー性喘息、初発性喘息、喘鳴乳児症候群および細気管支炎、慢性または急性気管支収縮、慢性気管支炎、末梢気道閉塞、ならびに肺気腫のうちの１つ以上から選択される状態を有する、請求項３２〜５６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５８】
前記肺の炎症の治療を必要とする対象が、閉塞性または炎症性の気道疾患を有する、請求項３２〜５７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５９】
前記閉塞性または炎症性の気道疾患が、慢性好酸球性肺炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性気管支炎、肺気腫または呼吸困難を含むＣＯＰＤ、不可逆性進行性気道閉塞を特徴とするＣＯＰＤ、および急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）のうちの１つ以上から選択される、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記肺の炎症の治療を必要とする対象が、他の薬物療法の結果として生じる気道過敏性の悪化、肺高血圧症を伴う気道疾患、気管支炎または急性気管支炎、急性喉頭気管気管支炎、アラキン酸気管支炎、カタル性気管支炎、クループ性気管支炎、乾性気管支炎、感染性喘息性気管支炎、増殖性気管支炎（ｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ  ｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ）、ブドウ球菌性もしくは連鎖球菌性の気管支炎、小胞性気管支炎、急性肺損傷、気管支拡張症、または円柱状気管支拡張症、嚢状気管支拡張症、紡錘状気管支拡張症、毛細管性気管支拡張症、嚢胞状気管支拡張症、乾性気管支拡張症、または濾胞性気管支拡張症に関連する状態を有する、請求項３２〜５９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６１】
前記肺の炎症の治療を必要とする対象が、１、２、３、４、５、６、７、または８のアッシュクロフトスコアを有する、請求項３２〜６０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６２】
前記肺の炎症の治療を必要とする対象の平均余命を、任意に、約または少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０年、またはそれ以上増加させる、請求項３２〜６１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６３】
前記肺の炎症の治療を必要とする対象における肺の炎症の臨床症状またはパラメータのうちの１つ以上を改善する、請求項３２〜６２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６４】
前記１つ以上の臨床症状またはパラメータが、肺線維症、肺における炎症細胞浸潤、呼吸機能、および体重のうちの１つ以上から選択される、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
任意に、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４カ月間以上の期間にわたって測定されたときに、約または少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００％、またはそれ以上、前記肺の炎症の治療を必要とする対象において肺線維症を改善する、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
任意に、初期スコアと比較して、アッシュクロフトスコアが１、２、３、４、５、６、７、または８グレード低下する、アッシュクロフトスコアの低下によって測定されるように、前記肺の炎症の治療を必要とする対象における肺線維症を改善する、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
任意に、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４カ月間以上の期間にわたって測定されたときに、約または少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００％、またはそれ以上、前記肺における炎症細胞浸潤を減少させる、請求項６４に記載の方法。
【請求項６８】
任意に、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４カ月間以上の期間にわたって測定されたときに、約または少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００％、またはそれ以上、呼吸機能を改善する、請求項６４に記載の方法。
【請求項６９】
前記改善した呼吸機能が、呼気時間の増加、吸気時間の増加、最大呼気流量の減少、最大吸気流量の減少、毎分呼吸量（ＲＭＶ）の減少、および呼吸数の減少のうちの１つ以上から選択される、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
（ａ）ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）ポリペプチド、または前記ＨＲＳポリペプチドをコードする発現可能なポリヌクレオチドと、
（ｂ）免疫調節剤と、を含む、患者ケアキット。
【請求項７１】
（ａ）および（ｂ）が、別々の組成物中にあり、任意に、請求項１〜３１のいずれか１項に従って定義される、請求項７０に記載の患者ケアキット。
【請求項７２】
（ａ）および（ｂ）が、任意に、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の治療用組成物と同じ組成物中に存在する、請求項７０に記載の患者ケアキット。
【請求項７３】
前記免疫調節剤が、ピルフェニドンまたはニンテダニブである、請求項７０〜７２のいずれか１項に記載の患者ケアキット。
【請求項７４】
前記ピルフェニドンが、約５０〜約１０００ｍｇの範囲である個々の投与量単位で、あるいは約５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、もしくは１０００ｍｇ、約５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、もしくは１０００ｍｇ以下、または少なくとも約５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、もしくは１０００ｍｇの個々の投与量単位で、任意に、経口投与用の１つ、２つ、または３つのカプセルで、である、請求項７３に記載の患者ケアキット。
【請求項７５】
前記ピルフェニドンが、約１００〜約４０００ｍｇ／日の範囲である１日投与量単位で、あるいは約１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、２０００、２１００、２２００、２３００、２４００、２５００、２６００、２７００、２８００、２９００、３０００、３１００、３２００、３３００、３４００、３５００、３６００、３７００、３８００、３９００、もしくは４０００ｍｇ／日、約１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、２０００、２１００、２２００、２３００、２４００、２５００、２６００、２７００、２８００、２９００、３０００、３１００、３２００、３３００、３４００、３５００、３６００、３７００、３８００、３９００、または４０００ｍｇ／日以下、または少なくとも約１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、２０００、２１００、２２００、２３００、２４００、２５００、２６００、２７００、２８００、２９００、３０００、３１００、３２００、３３００、３４００、３５００、３６００、３７００、３８００、３９００、もしくは４０００ｍｇ／日で、任意に、経口投与用の約１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つのカプセルにおいて、である、請求項７３または７４に記載の患者ケアキット。
【請求項７６】
前記ピルフェニドンが、約８００ｍｇ（例えば８０１ｍｇ）の個々の投与量単位で、任意に、個々の投与量につき３つのカプセルとして服用される、経口投与用の３つの約２６７ｍｇのカプセルとして、である、請求項７３〜７５のいずれか１項に記載の患者ケアキット。
【請求項７７】
前記ピルフェニドンが、約２４００ｍｇ／日（例えば２４０３ｍｇ／日）の１日投与量単位で、任意に、個々の投与量につき３つのカプセルとして服用される、１日３回の経口投与用の９つの約２６７ｍｇのカプセルとして、である、請求項７６に記載の患者ケアキット。
【請求項７８】
前記ニンテダニブが、約１０〜約５００ｍｇの範囲である個々の投与量単位で、あるいは約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、もしくは５００ｍｇ、約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、もしくは５００ｍｇ以下、または少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、もしくは５００ｍｇの個々の投与量単位で、任意に、約１つ、２つ、または３つのカプセルで、である、請求項７０に記載の患者ケアキット。
【請求項７９】
前記ニンテダニブが、約２０〜約１０００ｍｇ／日の範囲である１日投与量単位で、あるいは約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００ｍｇ／日、約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００ｍｇ／日以下、または少なくとも約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００ｍｇ／日の１日投与量単位で、任意に、約１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのカプセルで、である、請求項７０または７８に記載の患者ケアキット。
【請求項８０】
前記ニンテダニブが、約１００〜１５０ｍｇの範囲である、または約２００〜３００ｍｇ／日の範囲である１日投与量単位で、任意に、１日１回または２回の投与量である、請求項７０または７８〜７９のいずれか１項に記載の患者ケアキット。
【請求項８１】
前記ニンテダニブが、約１００または１５０ｍｇの１日投与量単位、または約２００〜３００ｍｇ／日で、任意に、１日１回または２回の投与量である、請求項８０に記載の患者ケアキット。
【請求項８２】
対象におけるＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドの１つ以上の薬物動態学的特徴を変化させる方法であって、前記対象に、前記ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチド、またはピルフェニドンと組み合わせて、前記ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドをコードする発現可能なポリヌクレオチドを投与することを含む、方法。
【請求項８３】
前記ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドが、表Ｈ８から選択される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる、請求項８２に記載の方法。
【請求項８４】
前記ＨＲＳポリペプチドが、配列番号１５７（Ｆｃ−ＨＲＳ（２〜６０）またはＨＲＳＦＣ１）を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる、請求項８３に記載の方法。
【請求項８５】
肺の炎症の治療を必要とする対象においてそれを行う方法であって、前記対象に、ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチド、または前記ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドをコードする発現可能なポリヌクレオチドを投与することを含む、方法。
【請求項８６】
前記ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドが、表Ｈ８から選択される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる、請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
前記ＨＲＳポリペプチドが、配列番号１５７（Ｆｃ−ＨＲＳ（２〜６０）またはＨＲＳＦＣ１）を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる、請求項８６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１７年４月２０日に出願された米国特許出願第６２／４８７，８１２号の３５  Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９（ｅ）の下で優先権の利益を主張し、その開示が参照によりその全体が組み込まれる。
【０００２】
配列表に関する陳述
本出願に関連する配列表は、紙コピーの代わりにテキスト形式で提供され、これによって参照により本明細書に組み込まれる。配列表を含むテキストファイルの名称はＡＴＹＲ＿１３１＿０１ＷＯ＿ＳＴ２５．ｔｘｔである。テキストファイルは約２７６ＫＢであり、２０１８年４月１８日に作成され、ＥＦＳ−Ｗｅｂを介して電子提出されている。
背景
【０００３】
本開示の実施形態は、単独でまたは少なくとも１つの免疫調節剤と組み合わせて、少なくとも１つのヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）ポリペプチド、または当該ＨＲＳポリペプチドをコードする発現可能なポリヌクレオチドの使用を含む、間質性肺疾患（ＩＬＤ）を含む、肺の炎症の治療のための併用療法を含む、療法に関する。
【背景技術】
【０００４】
間質性肺疾患（ＩＬＤ）は、異種障害の炎症が主な発症機序である肺間質に影響を与える異種障害の群である。ＩＬＤ指定のうちで、概して、いくつかのレベルで発症機序の一因となる先天性および適応的免疫機構の両方を含む測定可能な炎症性要素を有すると認識される多くの線維性肺状態がある。
【０００５】
ＩＬＤに罹患している患者は、しばしば、進行性の消耗性呼吸器症状を患っており、一般集団と比較して、著しく高い死亡率および死亡率の増加が認められる。一群として、これらの状態は、高い満たされない医療ニーズとなり、それに対して、重大な望ましくない副作用を有しない効果的な治療がほとんどない。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本開示の実施形態は、適切な部分において、治療用組成物であって、
（ａ）ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）ポリペプチド、またはＨＲＳポリペプチドをコードする発現可能なポリヌクレオチドと、
（ｂ）免疫調節剤と、を含む、治療用組成物に関する。
【０００７】
いくつかの実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、表Ｈ１、表Ｈ２、および表Ｈ４から選択される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる。
【０００８】
いくつかの実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、５００〜５０６アミノ酸長であり、配列番号８（ＨＲＳ（１〜５０６））または９（ＨＲＳ（２〜５０６））に対して少なくとも９０％同一であり、配列番号１の残基５０７〜５０９を欠いている。いくつかの実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、配列番号８（ＨＲＳ（１〜５０６））を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる。いくつかの実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、配列番号９（ＨＲＳ（２〜５０６））を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる。
【０００９】
いくつかの実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、異種ポリペプチドに縮合している。いくつかの実施形態では、異種ポリペプチドは、Ｆｃ領域を含み、ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドを形成する。
【００１０】
いくつかの実施形態では、ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドは、表Ｈ８から選択される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる。いくつかの実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、タンパク質ベースで少なくとも約８０％、８５％、９０％、または９５％純粋で、約５％未満凝集している。
【００１１】
いくつかの実施形態では、（ａ）は、ＨＲＳポリペプチドをコードする発現可能なポリヌクレオチド、任意に、修飾ｍＲＮＡポリヌクレオチドであり、これは、任意に、１つ以上の非天然ベースおよび／または非天然ヌクレオチド間結合を含む。
【００１２】
いくつかの実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、非正準活性、任意に、抗炎症活性を有する。
【００１３】
いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、ピルフェニドン、ニンテダニブ、スフィンゴシン−１−ホスフェート（Ｓ１Ｐ）および／またはＳ１Ｐ受容体（Ｓ１ＰＲ）モジュレーター、ステロイド、任意にグルココルチコイド、カルシニューリン阻害剤、ラパマイシンの機構的標的（ｍＴＯＲ）阻害剤、インドールアミン−ピロール２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、イノシン−５’−モノホスフェートデヒドロゲナーゼ（ＩＭＰＤＨ）阻害剤、サイトカインおよび／またはサイトカイン受容体阻害剤、Ｂ細胞受容体阻害剤、キナーゼ阻害剤、ならびに細胞増殖抑制剤、任意にメトトレキサートのうちの１つ以上から選択される。
【００１４】
いくつかの実施形態では、Ｓ１Ｐおよび／またはＳ１ＰＲモジュレーターは、アミセリモド（Ｓ１ＰＲアンタゴニスト）、フィンゴリモド（Ｓ１ＰＲ１機能的アンタゴニスト）、ソネプシズマブ（Ｓ１Ｐ特異的モノクローナル抗体）、ＫＲＰ２０３（Ｓ１ＰＲ１アゴニスト）、ＳＥＷ２８７１（Ｓ１ＰＲ１アゴニスト）、シポニモド（Ｓ１ＰＲ１およびＳ１ＰＲ５モジュレーター）、ＲＰＣ１０６３（Ｓ１ＰＲ１モジュレーター）、ＯＮＯ−４６４１（Ｓ１ＰＲ１およびＳ１ＰＲ５アゴニスト）、ＪＴＥ−０１３（Ｓ１ＰＲ２アンタゴニスト）、ＧＳＫ２０１８６８２（Ｓ１ＰＲ１アゴニスト）、ポネシモド（Ｓ１ＰＲ１アゴニスト）、スラミン（選択的Ｓ１ＰＲ３およびＳ１ＰＲ５アンタゴニスト）、ＶＰＣ２３０１９（アリール−アミド類似体；競合的Ｓ１ＰＲ１およびＳ１ＰＲ３アンタゴニスト）、ならびにＷ１４６（選択的Ｓ１ＰＲ１アンタゴニスト）、Ｓ１ＰＲを標的とするアンチセンスまたはＲＮＡｉ剤、ならびにＳ１Ｐおよび／またはＳ１ＰＲに特異的に結合する抗体または抗原結合断片もしくは小分子から選択され、任意に、アミセリモドは、約０．１ｍｇ〜約１０ｍｇの範囲である投与量単位で、あるいは約０．１、０．２、０．３、０．３３７、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０ｍｇ、約０．１、０．２、０．３、０．３３７、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０ｍｇ以下、または少なくとも約０．１、０．２、０．３、０．３３７、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０ｍｇの投与量単位であるか、または任意に、アミセリモドが、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの範囲である投与量単位で、あるいは約０．１、０．２、０．３、０．３３７、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０ｍｇ、約０．１、０．２、０．３、０．３３７、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０ｍｇ以下、または少なくとも約０．１、０．２、０．３、０．３３７、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０ｍｇ／ｋｇである。
【００１５】
いくつかの実施形態では、ステロイドは、ベタメタゾン、ブデソニド、コルチゾール（ヒドロコルチゾン）、コルチゾン、デフラザコート、デオキシコルチコステロン、デキサメタゾン、フルドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、プレドニゾロン、およびトリアムシノロンから選択される。
【００１６】
いくつかの実施形態では、カルシニューリン阻害剤は、シクロスポリン、ピメクロリムス、タクロリムス、カルシニューリンまたはそのサブユニットを標的とするアンチセンスまたはＲＮＡｉ剤、ならびにカルシニューリンまたはそのサブユニットに特異的に結合する抗体または抗原結合断片もしくは小分子から選択される。
【００１７】
いくつかの実施形態では、ｍＴＯＲ阻害剤は、ＡＴＰ競合的ｍＴＯＲキナーゼ阻害剤、ｍＴＯＲＣ１／ｍＴＯＲＣ２二重阻害剤、および／またはｍＴＯＲ／ＰＩ３Ｋ二重阻害剤であるか、あるいは、ｍＴＯＲ阻害剤は、エベロリムス、ラパマイシン、デフォロリムス、テムシロリムス、ダクトリシブ、ＢＧＴ２２６、ＳＦ１１２６、ＰＫＩ−５８７、ＮＶＰＢＥ２３５、サパニセルチブ、ＡＺＤ８０５５、ＡＺＤ２０１４、ｍＴＯＲを標的とするアンチセンスまたはＲＮＡｉ剤、ならびにｍＴＯＲに特異的に結合する抗体または抗原結合断片もしくは小分子のうちの１つ以上から選択される。
【００１８】
いくつかの実施形態では、ＩＤＯ阻害剤は、インドキシモド（ＮＬＧ−８１８９）、１−メチル−トリプトファン（１ＭＴ）、β−カルボリン（ノルハルマン；９Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール）、ロスマリン酸、およびエパカドスタット、ＩＤＯを標的とするアンチセンスまたはＲＮＡｉ剤、ならびにＩＤＯに特異的に結合する抗体または抗原結合断片もしくは小分子から選択される。
【００１９】
いくつかの実施形態では、ＩＭＰＤＨ阻害剤は、ミコフェノール酸（ミコフェノール酸モフェチル）、リバビリン、および６ＴＧＭＰ（６−チオグアニンモノホスフェート）、ＩＭＰＤＨを標的とするアンチセンスまたはＲＮＡｉ剤、ならびにＩＭＰＤＨに特異的に結合する抗体または抗原結合断片もしくは小分子のうちの１つ以上から選択される。
【００２０】
いくつかの実施形態では、サイトカイン阻害剤は、ＩＬ−１αおよびＩＬ−１βを含むインターロイキン−１（ＩＬ−１）、インターロイキン−５（ＩＬ−５）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、インターロイキン−８（ＩＬ−８）、インターロイキン−１１（ＩＬ−１１）、インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）、インターロイキン−１７（ＩＬ−１７）、インターロイキン−１８（ＩＬ−１８）、インターロイキン−２０（ＩＬ−２０）、インターロイキン−３３（ＩＬ−３３）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ−ガンマ）、形質転換成長因子−β（ＴＧＦ−β）、および顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、および／またはＩＬ−１Ｒ、ＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−８Ｒ、ＩＬ−１１Ｒ、ＩＬ−１２Ｒ、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−２０Ｒのうちの１つ以上から選択されるサイトカイン受容体、ＳＴ２（インターロイキン１受容体様１、ＩＬ１ＲＬ１）、ＴＮＦＲ１などのＴＮＦＲ、インターフェロン−ガンマ受容体（ＩＦＮＧＲ）、ならびにＴＧＦβＲ１（ＡＬＫ５）またはＴＧＦβＲ２などのＴＧＦ−β受容体のうちの１つ以上から選択されるサイトカインの阻害剤であり、さらに、サイトカインおよび／またはサイトカイン受容体阻害剤は、サイトカインおよび／またはサイトカイン受容体を標的とするアンチセンスまたはＲＮＡｉ剤、ならびにサイトカインまたはサイトカイン受容体に特異的に結合する抗体または抗原結合断片もしくは小分子から選択される。
【００２１】
いくつかの実施形態では、サイトカインおよび／またはサイトカイン受容体阻害剤は、アダリムマブ、アナキンラ、バシリキシマブ、カナキヌマブ、セルトリズマブ、ダクリズマブ、エタネルセプト、ゴリムマブ、インフリキシマブ、イキセキズマブ、メポリズマブ、レスリズマブ、リロナセプト、セクキヌマブ、セリルマブ（ｓｅｒｉｌｕｍａｂ）、シルクマブ、トシリズマブ、およびウステキヌマブのうちの１つ以上から選択される。
【００２２】
いくつかの実施形態では、キナーゼ阻害剤は、ヤーヌスキナーゼ（ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、ＴＹＫ２を含むＪＡＫ）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、受容体チロシン−タンパク質キナーゼｅｒｂＢ−２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕまたはＥＲＢＢ２）、Ｂｃｒ−Ａｂｌ、ｃ−ＳＲＣ、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰ）キナーゼ、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）、脾臓チロシンキナーゼ（ＳＹＫ）、ブルトンチロシンキナーゼ（ＢＴＫ）、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、血管内皮成長因子受容体（ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＶＥＧＦＲ３を含むＶＥＧＦＲ）、線維芽細胞成長因子受容体（ＦＧＦＲ）、Ｂ−Ｒａｆ、ＲＥＴがん原遺伝子、血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦ−Ｒ）、トロポミオシン受容体キナーゼ（ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、ＴｒｋＣを含むＴｒｋ）、およびｃ−Ｍｅｔのうちの１つ以上から選択されるキナーゼの阻害剤であり、さらに、キナーゼ阻害剤は、キナーゼを標的とするアンチセンスまたはＲＮＡｉ剤、ならびにキナーゼに特異的に結合する抗体または抗原結合断片もしくは小分子から選択される。
【００２３】
いくつかの実施形態では、キナーゼ阻害剤は、ニンテダニブ、バリシチニブ、フェドラチニブ、フィルゴチニブ、ガンドチニブ、レスタウルチニブ、モメロチニブ、パクリチニブ、ペフィシチニブ、ルキソリチニブ、トファシチニブ、パダシチニブ、アファチニブ、アキシチニブ、ボスチニブ、セツキシマブ、コビメチニブ、クリゾチニブ、カボザンチニブ、ダサチニブ、エヌトレクチニブ（ｅｎｔｒｅｃｔｉｎｉｂ）、エルロチニブ、フォスタマチニブ、ゲフィチニブ、イブルチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、レンバチニブ、ムブリチニブ、ネラチニブ、ニロチニブ、パゾパニブ、ペガプタニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、ＳＵ６６５６、トセラニブ、バンデタニブ、バタラニブ、およびベムラフェニブのうちの１つ以上から選択される。
【００２４】
いくつかの実施形態では、Ｂ細胞受容体阻害剤は、ＣＤ２０を標的とするアンチセンスまたはＲＮＡｉ剤、ならびにＣＤ２０に特異的に結合する抗体または抗原結合断片もしくは小分子から選択されるか、またはＢ細胞受容体阻害剤は、任意に、イブリツモマブ・チウキセタン、オビヌツズマブ、オカラツズマブ、オクレリズマブ、リツキシマブ、トシツモマブ、およびベルツズマブのうちの１つ以上から選択される。
【００２５】
いくつかの実施形態では、アンチセンス剤は、約１０〜４０塩基長であり、任意に、モルホリノオリゴヌクレオチド（ＰＭＯ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、２’Ｏ−メチルホスホロチオエートオリゴヌクレオチド、トリシクロ−ホスホロチオエートオリゴヌクレオチド、およびロックド核酸（ＬＮＡ）から選択される。
【００２６】
いくつかの実施形態では、アンチセンス剤は、標的タンパク質をコードするプレｍＲＮＡまたはｍＲＮＡ標的配列内の標的領域に特異的にハイブリダイズし、標的領域は、ｍＲＮＡのＡＵＧ開始コドン、ＡＵＧ開始コドンの上流の領域、ＡＵＧコドンの下流の領域、予め処理したｍＲＮＡの３’または５’スプライス部位、分岐点、３’未翻訳領域（ＵＴＲ）、およびポリアデニル化シグナル配列のうちの１つ以上から選択される。
【００２７】
いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤は、標的タンパク質をコードするｍＲＮＡ標的配列と実質的に同一であるセンス鎖、および任意に、標的タンパク質をコードするｍＲＮＡ標的配列と相補的であるか、または実質的に相補的であるアンチセンス鎖を含み、任意に、ＲＮＡｉ剤は、二本鎖短干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）オリゴヌクレオチドであるか、または任意に、ＲＮＡｉ剤、任意に、ｓｉＲＮＡオリゴヌクレオチドが、ウイルスベクターによってコードされる。
【００２８】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、モノクローナル抗体、任意に、ヒト化抗体、または任意に、Ｆｖ断片もしくは一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）ポリペプチドである。
【００２９】
いくつかの実施形態では、組成物は、タンパク質ベースまたは重量−重量ベースで少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％の純度を有し、実質的には、凝集体を含まない。
【００３０】
いくつかの実施形態では、組成物は、実質的には、内毒素を含まない。
【００３１】
ある特定の組成物は、脂質ナノ粒子を含む。
【００３２】
いくつかの実施形態では、組成物は、シリンジ、任意に、注射可能なシリンジ中にある。いくつかの実施形態では、組成物は、カプセル、例えば、経口カプセルである。
【００３３】
治療を必要とする対象における肺の炎症を治療する方法であって、対象に、
（ａ）ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）ポリペプチド、またはＨＲＳポリペプチドをコードする発現可能なポリヌクレオチドと、
（ｂ）免疫調節剤と、を投与することを含む、方法もまた含まれる。
【００３４】
いくつかの実施形態では、（ａ）および（ｂ）は、別々に投与され、任意に、本明細書に記載されるように定義される。いくつかの実施形態では、（ａ）および（ｂ）は、一緒に、任意に、本明細書に記載の治療用組成物として投与される。
【００３５】
いくつかの実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、Ｆｃ領域を含み、ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドを形成し、例えば、このＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドは、表Ｈ８から選択される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる。いくつかの実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、配列番号１５７（Ｆｃ−ＨＲＳ（２〜６０）またはＨＲＳＦＣ１）を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる。
【００３６】
いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、ＨＲＳポリペプチドのみと比較して、ＨＲＳポリペプチドの１つ以上の薬物動態学的特徴を変化させる。ある特定の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドの１つ以上の変化する薬物動態学的特徴は、血清濃度の増加、血清半減期の増加、バイオアベイラビリティの増加、曝露（ＡＵＣ）の増加、血清濃度の増加、および／またはクリアランスの減少である。
【００３７】
いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、ピルフェニドンまたはニンテダニブである。
【００３８】
いくつかの実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、配列番号１５７（Ｆｃ−ＨＲＳ（２〜６０）またはＨＲＳＦＣ１を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなり、免疫調節剤は、ピルフェニドンである。いくつかの実施形態では、ピルフェニドンは、ＨＲＳポリペプチドのみと比較して、対象におけるＨＲＳポリペプチドの血清濃度を少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、または２００％以上増加させる。
【００３９】
いくつかの実施形態では、ピルフェニドンは、約５０〜約１０００ｍｇの範囲である個々の投与量単位、あるいは約５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、もしくは１０００ｍｇ、約５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、もしくは１０００ｍｇ以下、または少なくとも約５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、もしくは１０００ｍｇの個々の投与量単位で、任意に、経口投与用の１つ、２つ、または３つのカプセルで投与される。
【００４０】
いくつかの実施形態では、ピルフェニドンの投与量は、約１００〜約４０００ｍｇ／日の範囲である１日投与量単位で、あるいは約１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、２０００、２１００、２２００、２３００、２４００、２５００、２６００、２７００、２８００、２９００、３０００、３１００、３２００、３３００、３４００、３５００、３６００、３７００、３８００、３９００、もしくは４０００ｍｇ／日、約１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、２０００、２１００、２２００、２３００、２４００、２５００、２６００、２７００、２８００、２９００、３０００、３１００、３２００、３３００、３４００、３５００、３６００、３７００、３８００、３９００、もしくは４０００ｍｇ／日以下、または少なくとも約１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、２０００、２１００、２２００、２３００、２４００、２５００、２６００、２７００、２８００、２９００、３０００、３１００、３２００、３３００、３４００、３５００、３６００、３７００、３８００、３９００、もしくは４０００ｍｇ／日の１日投与量単位で、任意に、経口投与用の約１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つのカプセルで投与される。
【００４１】
いくつかの実施形態では、ピルフェニドンは、約８００ｍｇ（例えば８０１ｍｇ）の個々の投与量単位で、任意に、個々の投与量につき３つのカプセルとして服用される、経口投与用の３つの約２６７ｍｇのカプセルとして投与される。いくつかの実施形態では、ピルフェニドンは、約２４００ｍｇ／日（例えば２４０３ｍｇ／日）の１日投与量単位で、任意に、個々の投与量につき３つのカプセルとして服用される、１日３回の経口投与用の９つの約２６７ｍｇのカプセルとして投与される。
【００４２】
いくつかの実施形態では、ニンテダニブは、約１０〜約５００ｍｇの範囲である個々の投与量単位で、あるいは約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、もしくは５００ｍｇ、約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、もしくは５００ｍｇ以下、または少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、もしくは５００ｍｇの個々の投与量単位で、任意に、約１つ、２つ、または３つのカプセルで投与される。
【００４３】
いくつかの実施形態では、ニンテダニブは、約２０〜約１０００ｍｇ／日の範囲である１日投与量単位で、あるいは約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００ｍｇ／日、約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００ｍｇ／日以下、または少なくとも約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００ｍｇ／日の１日投与量単位で、任意に、約１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのカプセルで投与される。
【００４４】
いくつかの実施形態では、ニンテダニブは、約１００〜１５０ｍｇの範囲である、または約２００〜３００ｍｇ／日の範囲である１日投与量単位で、任意に、１日１回または２回の投与量で投与される。いくつかの実施形態では、ニンテダニブは、約１００〜１５０ｍｇ、または約２００〜３００ｍｇ／日の１日投与量単位で、任意に、１日１回または２回の投与量で投与される。
【００４５】
いくつかの実施形態では、対象は、間質性肺疾患（ＩＬＤ）に罹患しているか、または罹患するリスクがある。いくつかの実施形態では、ＩＬＤは、特発性であるか、または結合組織疾患、自己免疫疾患、吸入物質もしくは薬物への曝露、感染症、または悪性腫瘍に関連している。
【００４６】
いくつかの実施形態では、ＩＬＤは、特発性間質性肺炎、特発性肺線維症、サルコイドーシス、ハンマンリッチ症候群、抗合成酵素症候群、特発性好酸球性肺炎、肺胞出血症候群、肺胞タンパク症、石綿肺症、珪肺症、ベリリウム症、リウマチ性関節炎、紅斑性狼瘡、肺障害を伴う慢性移植片対宿主病、硬化症（全身性）または強皮症、多発性筋炎、皮膚筋炎、慢性肺疾患、喘息、気管支炎（呼吸気管支炎）、肺炎、過敏性肺炎、慢性過敏性肺炎、呼吸窮迫症候群、スティル病、急性肺損傷、顕微鏡的多発血管炎、肺水腫、肺ランゲルハンス細胞組織球症、急性吸入曝露、薬物誘導性肺疾患、剥離性間質性肺炎、および／または嚢胞性線維症のうちの１つ以上から選択されるか、またはそれらと関連している。
【００４７】
いくつかの実施形態では、ＩＬＤは、サーファクタントタンパク質Ｂ欠乏症（ＳＦＴＰＢにおける変異）、界面活性剤−プロテイン−Ｃ欠乏症（ＳＦＴＰＣにおける変異）、ＡＢＣＡ３−欠乏症（ＡＢＣＡ３における変異）、脳肺甲状腺症候群（ＴＴＦ１における変異）、または先天性肺胞タンパク症（ＣＳＦＲ２Ａ、ＣＳＦＲ２Ｂにおける変異）、肺胞毛細血管異形成（ＦｏｘＦ１における変異）、テロメラーゼ逆転写酵素（ＴＥＲＴ）における変異、テロメラーゼＲＮＡ成分（ＴＥＲＣ）における変異、テロメア伸長ヘリカーゼ１（ＲＴＥＬ１）の調節因子における変異、および／またはポリ（Ａ）特異的リボヌクレアーゼ（ＰＡＲＮ）における変異のうちの１つ以上と関連している。
【００４８】
いくつかの実施形態では、薬物は、抗生物質、化学療法剤、抗不整脈剤、およびスタチン薬のうちの１つ以上から選択される。いくつかの実施形態では、感染症は、ニューモシスチス肺炎（ＰＣＰ）、結核、クラミジアトラコマチス、および呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、特発性器質化肺炎のうちの１つ以上から選択される。いくつかの実施形態では、悪性腫瘍は、がん性リンパ管症またはリンパ腫である。
【００４９】
いくつかの実施形態では、それを必要とする対象は、アトピー性喘息、非アトピー性喘息、アレルギー性喘息、アトピー性気管支ＩｇＥ仲介性喘息、気管支喘息、本態性喘息、真正喘息、病態生理学的かく乱により引き起こされる内因性喘息、環境因子により引き起こされる外因性喘息、知られていないかまたは明らかでない原因の本態性喘息、非アトピー性喘息、気管支炎様喘息、気腫性喘息、運動誘発性喘息、アレルゲン誘発性喘息、冷気誘発性喘息、職業喘息、細菌、真菌、原虫、またはウイルス感染症により引き起こされる感染型喘息、非アレルギー性喘息、初発性喘息、喘鳴乳児症候群および細気管支炎、慢性または急性気管支収縮、慢性気管支炎、末梢気道閉塞、ならびに肺気腫のうちの１つ以上から選択される状態を有する。
【００５０】
いくつかの実施形態では、それを必要とする対象は、閉塞性または炎症性の気道疾患を有する。いくつかの実施形態では、閉塞性または炎症性の気道疾患は、慢性好酸球性肺炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性気管支炎を包含するＣＯＰＤ、不可逆性進行性気道閉塞を特徴とするＣＯＰＤ、肺気腫または呼吸困難、および急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）のうちの１つ以上から選択される。
【００５１】
いくつかの実施形態では、肺の炎症の治療を必要とする対象は、他の薬物療法の結果として生じる気道過敏性の悪化、肺高血圧症を伴う気道疾患、気管支炎または急性気管支炎、急性喉頭気管気管支炎、アラキン酸気管支炎、カタル性気管支炎、クループ性気管支炎、乾性気管支炎、感染性喘息性気管支炎、増殖性気管支炎（ｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ  ｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ）、ブドウ球菌性もしくは連鎖球菌性の気管支炎、小胞性気管支炎、急性肺損傷、気管支拡張症、または円柱状気管支拡張症、嚢状気管支拡張症、紡錘状気管支拡張症、毛細管性気管支拡張症、嚢胞状気管支拡張症、乾性気管支拡張症、または濾胞性気管支拡張症に関連する状態を有する。
【００５２】
いくつかの実施形態では、それを必要とする対象は、１、２、３、４、５、６、７、または８のアッシュクロフトスコアを有する。
【００５３】
ある特定の実施形態は、それを必要とする対象の平均余命、任意に、約または少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０年、もしくはそれ以上増加させる。
【００５４】
ある特定の実施形態は、それを必要とする対象における肺の炎症の臨床症状またはパラメータのうちの１つ以上を改善する。
【００５５】
いくつかの実施形態では、１つ以上の臨床症状またはパラメータは、肺線維症、肺における炎症細胞浸潤、呼吸機能、および体重のうちの１つ以上から選択される。
【００５６】
ある特定の実施形態は、任意に、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、もしくは２４カ月間以上の期間にわたって測定されたときに、約または少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００％、もしくはそれ以上、それを必要とする対象において肺線維症を改善する。
【００５７】
ある特定の実施形態は、任意に、初期スコアと比較して、アッシュクロフトスコアが１、２、３、４、５、６、７、または８グレード低下する、アッシュクロフトスコアの低下によって測定されるように、それを必要とする対象における肺線維症を改善する。
【００５８】
ある特定の実施形態は、任意に、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、もしくは２４カ月間以上の期間にわたって測定されたときに、約または少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００％、もしくはそれ以上、肺における炎症細胞浸潤を減少させる。
【００５９】
ある特定の実施形態は、任意に、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、もしくは２４カ月間以上の期間にわたって測定されたときに、約または少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００％、もしくはそれ以上、呼吸機能を改善する。いくつかの実施形態では、改善した呼吸機能は、呼気時間の増加、吸気時間の増加、最大呼気流量の減少、最大吸気流量の減少、毎分呼吸量（ＲＭＶ）の減少、および呼吸数の減少のうちの１つ以上から選択される。
【００６０】
（ａ）ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）ポリペプチド、または前記ＨＲＳポリペプチドをコードする発現可能なポリヌクレオチドと、
（ｂ）免疫調節剤と、を投与することを含む、患者ケアキットもまた、含まれる。
【００６１】
ある特定の患者ケアキットでは、（ａ）および（ｂ）は、別々の組成物中にあり、任意に、本明細書に記載されるように定義される。いくつかの患者ケアキットでは、（ａ）および（ｂ）は、同じ組成物中にあり、本明細書に記載されるように定義される。
【００６２】
いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、ピルフェニドンまたはニンテダニブである。
【００６３】
いくつかの実施形態では、ピルフェニドンは、（任意に、経口投与用の約１つ、２つ、または３つのカプセルにおいて）約５０〜約１０００ｍｇの範囲である個々の投与量単位で、あるいは（任意に、経口投与用の１つ、２つ、または３つのカプセルにおいて）約５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、もしくは１０００ｍｇ、約５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、もしくは１０００ｍｇ以下、または少なくとも約５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、もしくは１０００ｍｇの個々の投与量単位である。
【００６４】
いくつかの実施形態では、ピルフェニドンは、（任意に、経口投与用の約３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、または９つのカプセルにおいて）約１００〜約４０００ｍｇ／日の範囲である１日投与量単位で、あるいは（任意に、経口投与用の約３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、または９つのカプセルで）約１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、２０００、２１００、２２００、２３００、２４００、２５００、２６００、２７００、２８００、２９００、３０００、３１００、３２００、３３００、３４００、３５００、３６００、３７００、３８００、３９００、もしくは４０００ｍｇ／日、約１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、２０００、２１００、２２００、２３００、２４００、２５００、２６００、２７００、２８００、２９００、３０００、３１００、３２００、３３００、３４００、３５００、３６００、３７００、３８００、３９００、もしくは４０００ｍｇ／日以下、または少なくとも約１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、２０００、２１００、２２００、２３００、２４００、２５００、２６００、２７００、２８００、２９００、３０００、３１００、３２００、３３００、３４００、３５００、３６００、３７００、３８００、３９００、もしくは４０００ｍｇ／日の個々の投与量単位で、である。
【００６５】
特定の実施形態では、ピルフェニドンは、約８００ｍｇ（例えば８０１ｍｇ）の個々の投与量単位で、例えば、個々の投与量につき３つのカプセルとして服用される、経口投与用の３つの約２６７ｍｇのカプセルとして、である。特定の実施形態では、ピルフェニドンは、約２４００ｍｇ／日（例えば２４０３ｍｇ／日）の１日投与量単位で、例えば、個々の投与量につき３つのカプセルとして服用される、１日３回の経口投与用の９つの約２６７ｍｇのカプセルとして、である。
【００６６】
いくつかの実施形態では、ニンテダニブは、（任意に、経口投与用の約１つ、２つ、または３つのカプセルにおいて）約１０〜約５００ｍｇの範囲である個々の投与量単位で、あるいは（任意に、経口投与用の約１つ、２つ、または３つのカプセルにおいて）約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、もしくは５００ｍｇ、約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、もしくは５００ｍｇ以下、または少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、もしくは５００ｍｇの個々の投与量単位で、である。
【００６７】
いくつかの実施形態では、ニンテダニブは、（任意に、約１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのカプセルにおいて）約２０〜約１０００ｍｇ／日の範囲である１日投与量単位で、あるいは（任意に、約１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのカプセルにおいて）約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００ｍｇ／日、約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００ｍｇ／日以下、または少なくとも約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００ｍｇ／日の１日投与量単位で、である。
【００６８】
いくつかの実施形態では、ニンテダニブは、約１００〜１５０ｍｇの範囲である、または約２００〜３００ｍｇ／日の範囲である１日投与量単位で、任意に、１日１回または２回の投与量である。いくつかの実施形態では、ニンテダニブは、約１００〜１５０ｍｇの範囲である、または約２００〜３００ｍｇ／日の範囲である投与量単位で、任意に、１日１回または２回の投与量である。
【００６９】
対象におけるＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドの１つ以上の薬物動態学的特徴を変化させる方法であって、対象に、ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチド、またはピルフェニドンと組み合わせて、ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドをコードする発現可能なポリヌクレオチドを投与することを含む、方法もまた、含まれる。いくつかの実施形態では、ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドは、表Ｈ８から選択される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる。いくつかの実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、配列番号１５７（Ｆｃ−ＨＲＳ（２〜６０）もしくはＨＲＳＦＣ１）を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる。
【００７０】
（本明細書に記載される）肺の炎症の治療を必要とする対象においてそれを行う方法であって、対象に、ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチド、またはＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドをコードする発現可能なポリヌクレオチドを投与することを含む、方法もまた、含まれる。いくつかの実施形態では、ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドは、表Ｈ８から選択される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる。いくつかの実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、配列番号１５７（Ｆｃ−ＨＲＳ（２〜６０）もしくはＨＲＳＦＣ１）を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる。
【図面の簡単な説明】
【００７１】
【図１】ＢＡＬ流体細胞数を示す。個々の細胞数を、群平均を示す線を用いて示す：「ｎｏ  ｔｘ」は、処置なしを示し、「Ｖｅｈ」は、ビヒクルによる処置を示し、「Ｄｅｘ．」は、デキサメタゾンによる処置を示し、「Ｎｉｎｔｅ．」は、ニンテダニブによる処置を示し、「ＴＡ」は、被験物質による処置を示す。統計比較を、ＰＯまたはＩＶ処置群内で一方向ＡＮＯＶＡ、続いて、Ｄｕｎｎｅｔｔのｐｏｓｔ−ｈｏｃ検定によって実施した。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１対ＩＶビヒクル。
【図２】組織学的線維症（アッシュクロフト）スコアを示す。各群内で採点された全ての分野からの平均データを示す（＋ＳＥＭ）：「ｎｏ  ｔｘ」は、処置なしを示し、「Ｖｅｈ」は、ビヒクルによる処置を示し、「Ｄｅｘ．」は、デキサメタゾンによる処置を示し、「Ｎｉｎｔｅ．」は、ニンテダニブによる処置を示し、「ＴＡ」は、被験物質による処置を示す。統計比較を、ＰＯまたはＩＶ処置群内で一方向ＡＮＯＶＡ、続いて、Ｄｕｎｎｅｔｔのｐｏｓｔ−ｈｏｃ検定によって実施した。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１対それぞれのビヒクル。
【図３】１５日目の毎分呼吸量（ＲＭＶ）を示す。個々のＲＭＶを、群平均を示す線を用いて示す：「Ｖｅｈ」は、ビヒクルによる処置を示し、「Ｎｉｎｔｅ．」は、ニンテダニブによる処置を示し、「ＴＡ」は、被験物質による処置を示す。被験物質の投与量を、括弧内に示す。ＩＶ群を、一方向ＡＮＯＶＡによって比較し、ＰＯ群をｔ検定によって比較した。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１。
【図４】組織学的線維症（アッシュクロフト）スコアを示す。各群内で採点された全ての分野からの平均データを示す（＋ＳＥＭ）：「Ｖｅｈ」は、ビヒクルによる処置を示し、「Ｎｉｎｔｅ．」は、ニンテダニブによる処置を示し、「ＴＡ」は、被験物質による処置を示す。被験物質の投与量を、括弧内に示す。統計比較を、ＰＯまたはＩＶ処置群内でｔ検定によって実施した。＊ｐ＜０．０５対ＩＶビヒクル。
【図５】間質性／肺胞炎症細胞浸潤スコアを示す。各群内の個々の平均スコアを示す：「Ｖｅｈ」は、ビヒクルによる処置を示し、「Ｎｉｎｔｅ．」は、ニンテダニブによる処置を示し、「ＴＡ」は、被験物質による処置を示す。被験物質の投与量を、括弧内に示す。統計比較を、ＰＯまたはＩＶ処置群内でｔ検定によって実施した。＊ｐ＜０．０５対ＩＶビヒクル。
【図６】ｐＭｏｌでの平均血清ＨＲＳＦＣ１レベルを示す（＋ＳＥＭ）：研究の２２日目に終了した各群において：統計比較を、被験物質と組み合わせてビヒクル（Ｖｅｈ）、被験物質と組み合わせてニンテダニブで処置した群、または被験物質と組み合わせてピルフェニドンで処置した群間で、それぞれ、ｔ検定によって＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００５で実施した。
【発明を実施するための形態】
【００７２】
本発明の実践では、特に反対のことが示されなければ、分子生物学の従来の方法および当技術分野の技術の範囲内の組換えＤＮＡ技法が用いられ、その多くが例示のために下に記載されている。そのような技法は、参考文献において十分に説明されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，２０００）、ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，ｖｏｌ．Ｉ＆ＩＩ（Ｄ．Ｇｌｏｖｅｒ，ｅｄ．）、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｎ．Ｇａｉｔ，ｅｄ．，１９８４）、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（Ｐ．Ｈｅｒｄｅｗｉｊｎ，ｅｄ．，２００４）、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｈａｍｅｓ＆Ｓ．Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．，１９８５）、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ：Ｍｏｄｅｒｎ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（Ｂｕｚｄｉｎ  ａｎｄ  Ｌｕｋｙａｎｏｖ，ｅｄｓ．，２００９）、Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｈａｍｅｓ＆Ｓ．Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．，１９８４）、Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．，１９８６）、Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ｒ．Ｉ．（２００５）Ｃｕｌｔｕｒｅ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌｓ，ａ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｂａｓｉｃ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｈｏｂｏｋｅｎ  ＮＪ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｂ．Ｐｅｒｂａｌ，Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ（３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ  ２０１０）、Ｆａｒｒｅｌｌ，Ｒ．，ＲＮＡ  Ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｇｕｉｄｅ  ｆｏｒ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ（３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ  ２００５）．Ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ），Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ＡＣＳ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，１９９７、Ｖｅｒｏｎｅｓｅ，Ｆ．，ａｎｄ  Ｊ．Ｍ．Ｈａｒｒｉｓ，Ｅｄｓ．，Ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ＰＥＧｙｌａｔｉｏｎ，Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，５４（４）４５３−６０９（２００２）、Ｚａｌｉｐｓｋｙ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，“Ｕｓｅ  ｏｆ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄ  Ｐｏｌｙ（Ｅｔｈｙｌｅｎｅ  Ｇｌｙｃｏｌｓ）ｆｏｒ  ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ”ｉｎ  Ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ  Ｇｌｙｃｏｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓを参照のこと。
【００７３】
定義
別途の定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されている意味と同じ意味を有する。任意の方法、材料、組成物、試薬、細胞、本明細書に説明されるものと類似または同等の類似または類似のものを、本開示の主題の実践または試験で使用することができるが、好ましい方法および材料が本明細書に説明される。本明細書で引用される特許文献および特許出願文献を含むが、これらに限定されない、全ての出版物および参考文献は、各個々の刊行物または参考文献が、完全に記載されたものとして本明細書中に参照により組み込まれるように具体的にかつ個々に示されるように、参照によりそれらの全体が本明細書中に組み込まれる。本出願が優先権を主張する任意の特許出願もまた、刊行物および参考文献のために上述の様式で参照によりそれらの全体が本明細書中に組み込まれる。
【００７４】
本開示の目的のために、以下の用語は、以下に定義される。
【００７５】
冠詞「ａ」および「ａｎ」は、冠詞の文法上の目的の１つまたは１つより多いこと（すなわち、少なくとも１つ）を指すために本明細書で使用される。例として、「構成要素」は、１つの構成要素または１つを超える構成要素を意味する。
【００７６】
「約」は、参照の数量、レベル、値、数、頻度、百分率、寸法、大きさ、量、重量、または長さの３０、２５、２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１％まで変動する数量、レベル、値、数、頻度、百分率、寸法、大きさ、量、重量、または長さを意味する。
【００７７】
「アンタゴニスト」または「阻害剤」は、別の薬剤または分子の生理作用を妨げるまたはそうでなければ軽減する、生物学的構造または化学剤を指す。場合によっては、アンタゴニストは、他の薬剤または分子に特異的に結合する。完全および部分的アンタゴニストが、含まれる。
【００７８】
「アゴニスト」は、別の薬剤または分子の生理作用を増加させるまたは増強する、生物学的構造または化学剤を指す。場合によっては、アゴニストは、他の薬剤または分子に特異的に結合する。完全および部分的アゴニストが、含まれる。
【００７９】
「アネルギー」という用語は、抗原による再刺激へのＴ細胞またはＢ細胞の応答の機能的不活性化を指す。
【００８０】
本明細書で使用される、「アミノ酸」という用語は、天然に存在する、および天然に存在しないアミノ酸の両方、ならびにアミノ酸類似体および模倣体を意味するように意図されている。天然に存在するアミノ酸は、例えば、タンパク質生合成の間に利用される２０の（Ｌ）−アミノ酸、ならびにその他、例えば、４−ヒドロキシプロリン、ヒドロキシリジン、デスモシン、イソデスモシン、ホモシステイン、シトルリン、およびオルニチンなどを含む。天然に存在しないアミノ酸は、例えば、当業者に公知である、（Ｄ）−アミノ酸、ノルロイシン、ノルバリン、ｐ−フルオロフェニルアラニン、エチオニンなどを含む。アミノ酸類似体は、天然に存在する、および天然に存在しないアミノ酸の修飾体を含む。このような修飾は、例えば、アミノ酸上の化学基および部分の置換もしくは置き換え、またはアミノ酸の誘導体化によるものを含み得る。アミノ酸模倣体には、例えば、参照アミノ酸に特徴的な電荷および電荷間隔などの機能的に同様の特性を呈する有機構造体が含まれる。例えば、アルギニン（ＡｒｇまたはＲ）を模倣する有機構造体は、同様の分子空間内に位置した正電荷部分を有し、天然に存在するＡｒｇアミノ酸の側鎖のｅ−アミノ基と同程度の移動度を有し得る。模倣体は、アミノ酸またはアミノ酸官能基の最適な間隔および電荷相互作用を維持するように拘束された構造も含む。当業者は、何の構造が機能的に等価なアミノ酸類似体およびアミノ酸模倣体を構成するかを知っており、または求めることができる。
【００８１】
本明細書で使用される、疾患または有害反応を生じさせる「リスクのある」対象は、検出可能な疾患または疾患の症状を有していても、有していなくてもよく、本明細書に記載の処置方法の前に検出可能な疾患または疾患の症状を示していても、示していなくてもよい。「リスクのある」は、対象が、本明細書に記載の、かつ当技術分野で公知の、疾患を生じさせることと相関する測定可能なパラメータである１つ以上のリスク要因を有することを表す。これらのリスク要因の１つ以上を有する対象は、これらのリスク要因の１つ以上を有さない対象よりも、疾患または有害反応を生じさせる確率が高い。
【００８２】
「コード配列」とは、遺伝子のポリペプチド生成物のコードに寄与する任意の核酸配列を意味する。これに対し、「非コード配列」という用語は、遺伝子のポリペプチド生成物のコードに直接寄与しない任意の核酸配列を指す。
【００８３】
「結合」という用語は、例えば、共有結合、静電気、疎水性、ならびにイオン性および／または水素結合の相互作用による、２つの分子間の直接会合を指し、塩架橋および水架橋などの相互作用を含む。
【００８４】
「クローン除去」という用語は、自己反応性Ｔ細胞の除去（例えば、喪失または死）を指す。クローン除去は、胸腺内もしくは周辺内、または両方で主として実現され得る。
【００８５】
本開示全体にわたって、文脈による別段の要求のない限り、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という単語は、述べたステップもしくは要素、またはステップもしくは要素の群を含めることを暗示するが、任意の他のステップもしくは要素、またはステップもしくは要素の群の除外を暗示しないと理解されよう。
【００８６】
「からなる」とは、「からなる」という語句に続くものを含み、それに限定されることを意味する。したがって、「からなる」という語句は、列挙された要素が要求され、または必須であり、他の要素はまったく存在し得ないことを示す。「本質的に〜からなる」とは、語句の後に列挙された任意の要素を含むことを意味し、列挙された要素についての開示で指定された活性または作用を妨げず、またはそれに寄与しない他の要素に限定される。したがって、「本質的に〜からなる」という語句は、列挙された要素が要求され、または必須であるが、他の要素は、必要に応じてであり、これらが列挙された要素の活性または作用に実質的に影響するか否かに応じて存在しても、または存在しなくてもよいことを示す。
【００８７】
「内毒素を含まない」または「内毒素を実質的に含まない」という用語は、概して、多くとも微量（例えば、対象に対して臨床的に有害な生理学的影響を有さない量）の内毒素、好ましくは検出不能な量の内毒素を含む、組成物、溶媒、および／または容器を指す。内毒素が、エンドトキシンは、リステリア・モノサイトゲネスなどのグラム陽性細菌においても見出され得るが、内毒素は、ある特定の微生物、例えば、細菌、典型的にはグラム陰性細菌と関連する毒素である。最も流行の内毒素は、種々のグラム陰性細菌の外膜において見出されるリポポリサッカリド（ＬＰＳ）またはリポ−オリゴ−サッカリド（ＬＯＳ）であり、これらの細菌が疾患を引き起こす能力において中心的な病原性特徴を示す。ヒトにおける少量の内毒素は、他の有害な生理学的影響の中でも、発熱、血圧の低下、ならびに炎症および凝固の活性化を生じ得る。
【００８８】
したがって、薬学的生成物では、少量でさえも、ヒトにおいて有害な影響を引き起こし得るため、薬物製品および／または薬物容器から、内毒素のほとんどまたは全ての痕跡を除去することが望ましい場合が多い。３００℃を超える温度が、ほとんどの内毒素を分解するために典型的には必要とされるので、発熱物質除去（ｄｅｐｙｒｏｇｅｎａｔｉｏｎ）オーブンが、この目的のために使用され得る。例えば、シリンジまたはバイアルなどの主要な包装材料に基づいて、２５０℃のガラス温度と３０分間の保持時間との組み合わせが、内毒素レベルにおける３ｌｏｇの低減を達成するために十分である場合が多い。本明細書に記載され、当該技術分野で既知の、例えば、クロマトグラフィーおよび濾過方法を含む、内毒素を除去する他の方法が、企図される。
【００８９】
内毒素は、当該技術分野で既知の通常の技術を用いて検出され得る。例えば、カブトガニからの血液を利用する、リムルスアメボサイト溶解物アッセイは、内毒素の存在を検出するための非常に高感度のアッセイである。この試験では、非常に低いレベルのＬＰＳが、この反応を増幅する強力な酵素カスケードに起因して、リムルス溶解物の検出可能な凝固を引き起こし得る。内毒素はまた、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によっても定量され得る。内毒素を実質的に含まないように、内毒素レベルは、活性化合物の約０．００１、０．００５、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０８、０．０９、０．１、０．５、１．０、１．５、２、２．５、３、４、５、６、７、８、９、または１０ＥＵ／ｍｇ未満であり得る。典型的には、１ｎｇのリポポリサッカリド（ＬＰＳ）は、約１〜１０ＥＵに対応する。
【００９０】
本明細書で使用される、「細胞を接触させること」、「導入すること」、または「送達すること」という用語は、当技術分野で慣例的な方法、例えば、トランスフェクション（例えば、リポソーム、リン酸カルシウム、ポリエチレンイミン）、エレクトロポレーション（例えば、ヌクレオフェクション）、マイクロインジェクション）、または対象への投与によって、細胞への本明細書に記載の薬剤（例えば、ポリペプチド剤、ポリヌクレオチド剤）の送達を含む。
【００９１】
「細胞透過性ペプチド」（ＣＰＰ）または「細胞取り込みを増強するペプチド部分」という用語は、互換的に使用され、「輸送ペプチド」、「担体ペプチド」、または「ペプチド導入ドメイン」ともまた呼ばれる、カチオン性細胞透過性ペプチドを指す。いくつかの実施形態では、ペプチドは、全身投与されると、所与の細胞培養集団の細胞のうちの約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、もしくは１００％、または少なくとも約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、もしくは１００％の細胞内の細胞（例えば、筋肉細胞）透過を誘導し、またはインビボにおいて、他の投与形態において複数の組織（例えば、筋肉組織）内の高分子のトランスロケーションを可能とする能力を有する。いくつかの実施形態では、ＣＰＰは、式−［（Ｃ（Ｏ）ＣＨＲ’ＮＨ）ｍ］Ｒ’’（式中、Ｒ’は、天然に存在するアミノ酸またはその１−もしくは２−炭素類似体の側鎖であり、Ｒ’’は、水素またはアシルから選択され、ｍは、最大で５０の整数である）のＣＰＰである。さらなるＣＰＰは、当該技術分野で公知であり、例えば、米国特許出願第２０１０／００１６２１５号（参照によりその全体が組み込まれる）において開示されている。いくつかの実施形態では、ｍは、１〜５０から選択される整数であり、ｍが１であるとき、部分は、単一のアミノ酸またはその誘導体である。本明細書に記載のポリヌクレオチド剤（例えば、アンチセンス、ＲＮＡｉ剤）のいずれも、ＣＰＰにコンジュゲート化され、例えば、標的細胞、例えば、筋肉細胞への取り込みを改善することができる。
【００９２】
「半数効果濃度」または「ＥＣ５０」という用語は、いくらかの特定された曝露時間の後に、ベースラインと最大との間の中間の反応を誘導する、本明細書に記載される薬剤（例えば、ＨＲＳポリペプチドまたは他の薬剤）の濃度を指し、したがって、段階的用量反応曲線のＥＣ５０は、その最大効果の５０％が観察される化合物の濃度を表す。ＥＣ５０はまた、インビボで最大効果の５０％を得るために必要とされる血漿濃度も表す。同様に、「ＥＣ９０」は、その最大効果の９０％が観察される薬剤または組成物の濃度を指す。「ＥＣ９０」は、「ＥＣ５０」およびＨｉｌｌ勾配から計算することができるか、または当該技術分野における慣用的な知識を用いて、データから直接決定され得る。いくつかの実施形態では、薬剤のＥＣ５０は、約０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、または５００ｎＭ未満である。いくつかの実施形態では、生物治療用組成物は、約１ｎＭ以下のＥＣ５０値を有することになる。
【００９３】
「相同性」とは、同一であるか、または保存的置換を構成するアミノ酸の百分率数を指す。相同性は、ＧＡＰなどの配列比較プログラムを使用して決定され得る（Ｄｅｖｅｒａｕｘ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １２，３８７−３９５）。このようにして、本明細書に引用される配列に対して類似または実質的に異なる長さの配列を、アラインメント中にギャップを挿入することによって比較することができ、このようなギャップは、例えば、ＧＡＰによって使用される比較アルゴリズムによって決定される。
【００９４】
「先天性免疫応答」という用語は、病原体によって感染から宿主を防御する、免疫細胞（マクロファージおよびナチュラルキラー細胞（ＮＫ）を含む）の応答、ならびにサイトカイン発現および放出（例えば、インターフェロンおよびインターフェロン−シグナル伝達）を調節し、細胞死を誘導し、タンパク質合成を阻害する関連機構を指す。
【００９５】
「単離された」とは、その天然状態においてそれに通常付随する成分を、実質的にまたは本質的に含まない材料を意味する。例えば、本明細書で使用される、「単離されたポリヌクレオチド」、「単離されたオリゴヌクレオチド」、または「単離されたオリゴヌクレオチド」は、天然に存在する状態においてポリヌクレオチドに隣接する配列から精製または取り出されたポリヌクレオチド、例えば、ゲノム中でその断片に隣接する配列から取り出されたＤＮＡ断片を指し得る。「単離する」という用語は、それが細胞に関するとき、供給源対象（例えば、ポリヌクレオチド反復疾患に罹患している対象）からの細胞（例えば、線維芽細胞、リンパ芽球）の精製を指す。ｍＲＮＡまたはタンパク質の文脈では、「単離する」は、供給源、例えば、細胞からのｍＲＮＡまたはタンパク質の回収を指す。
【００９６】
「調節する」という用語には、任意に、定義されたおよび／または統計的に有意な量によって１つ以上の定量可能なパラメータを「増大させる」または「減少させる」ことが含まれる。「増大させる」もしくは「増大させること」、「増強する」もしくは「増強すること」、または「刺激する」もしくは「刺激すること」とは、概して、薬剤／化合物なしまたは対照化合物によって引き起こされる応答と比較して、細胞または対象においてより大きな生理学的応答（すなわち、下流の効果）を生じるまたは引き起こす１つ以上の薬剤または組成物の能力を指す。関連の生理学的または細胞応答（インビボまたはインビトロ）は、当業者には明らかであり、組織またはそれを必要とする対象において骨格筋量の増加を含み得る。「増大した」または「増強された」量は、典型的には、「統計的に有意な」量であり、薬剤／化合物なし（薬剤の不在）または対照化合物によって生じる量の１．１、１．２、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０、４０、５０倍、またはそれ以上（例えば、５００、１０００倍）、１との間のおよび１を上回るあらゆる整数および小数点を含む（例えば、１．５、１．６、１．７、１．８）である増加を含んでもよい。「減少する」または「阻害する」という用語は、概して、診断技術の日常技法によって測定されるとき、本明細書に記載される、標的遺伝子または疾患もしくは状態の症状の発現などの関連の生理学的または細胞応答を「低下させる」ための１つ以上の薬剤または組成物の能力に関し得る。関連の生理学的または細胞応答（インビボまたはインビトロ）は、当業者には明らかであり、本明細書に記載される、肺の炎症またはＩＬＤの症状または病理の減少または改善を含み得る。応答の「減少」は、薬剤もしくは組成物なし、または対照剤もしくは組成物によって生じさせる応答と比較して、「統計的に有意」であり得、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％の減少を含み得、中間の全ての整数を含む。
【００９７】
ある特定の実施形態では、組成物中の任意の所与の薬剤の「純度」は、具体的に定義することができる。例えば、ある特定の組成物は、例えば、かつ決して限定的ではなく、化合物を分離、同定、および定量化するのに生化学および分析化学において頻繁に使用されるカラムクロマトグラフィーの周知の形態である高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって測定した場合、中間の全ての少数を含めて、少なくとも８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％の純度である薬剤を含み得る。
【００９８】
「脂質ナノ粒子」または「固体脂質ナノ粒子」は、約１０〜約１０００ナノメートルの平均直径を有し、かつ脂溶性分子を可溶化することができる固体脂質コアマトリックスを含む１つ以上の球状ナノ粒子を指す。脂質コアは、界面活性剤（例えば、乳化剤）によって安定化され、トリグリセリド（例えば、トリステアリン）、ジグリセリド（例えば、ベヘン酸グリセロール）、モノグリセリド（例えば、グリセロールモノステアレート）、脂肪酸（例えば、ステアリン酸）、ステロイド（例えば、コレステロール）、およびワックス（例えば、パルミチン酸セチル）のうちの１つ以上を含み得、これらの組み合わせを含む。脂質ナノ粒子は、例えば、Ｐｅｔｒｉｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１５：８４７−５５，２０１４、ならびに米国特許第６，２１７，９１２号、同第６，８８１，４２１号、同第７，４０２，５７３号、同第７，４０４，９６９号、同第７，５５０，４４１号、同第７，７２７，９６９号、同第８，００３，６２１号、同第８，６９１，７５０号、同第８，８７１，５０９号、同第９，０１７，７２６号、同第９，１７３，８５３号、同第９，２２０，７７９号、同第９，２２７，９１７号、および同第９，２７８，１３０号（これらは、参照によりそれらの全体が組み込まれる）において記載されている。
【００９９】
本明細書で使用される、「核酸塩基」（Ｎｕ）、「塩基対合部分」または「塩基」は、互換的に使用され、天然ＤＮＡまたはＲＮＡにおいて見出されるプリンまたはピリミジン塩基（ウラシル、チミン、アデニン、シトシン、およびグアニン）、ならびに改善された特性、例えば、オリゴヌクレオチドへの結合親和性を付与する天然に存在するプリンおよびピリミジンの類似体を指す。例示的な類似体は、ヒポキサンチン（ヌクレオシドイノシンの塩基構成成分）、２，６−ジアミノプリン、５−メチルシトシン、Ｃ５−プロピニル修飾ピリミジン、９−（アミノエトキシ）フェノキサジン（Ｇ−クランプ）などを含む。
【０１００】
塩基対合部分のさらなる例としては、それらのそれぞれのアミノ基を、アシル保護基で保護した、ウラシル、チミン、アデニン、シトシン、グアニン、およびヒポキサンチン、２−フルオロウラシル、２−フルオロシトシン、５−ブロモウラシル、５−ヨードウラシル、２，６−ジアミノプリン、アザシトシン、シュードイソシトシンおよびシュードウラシルなどのピリミジン類似体、ならびに８置換プリン、８置換キサンチン、または８置換ヒポキサンチン（後者の２つは、天然の分解産物である）などの他の修飾核酸塩基が挙げられるが、これらに限定されない。Ｃｈｉｕ  ａｎｄ  Ｒａｎａ，ＲＮＡ，２００３，９，１０３４−１０４８、Ｌｉｍｂａｃｈ  ｅｔ  ａｌ．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９４，２２，２１８３−２１９６、およびＲｅｖａｎｋａｒ  ａｎｄ  Ｒａｏ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｖｏｌ．７，３１３において開示されている修飾ヌクレオ塩基もまた企図される。
【０１０１】
塩基対合部分のさらなる例としては、１つ以上のベンゼン環を付加したサイズ拡大型核酸塩基が挙げられるが、これらに限定されない。Ｇｌｅｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈのカタログ（ｗｗｗ．ｇｌｅｎｒｅｓｅａｒｃｈ．ｃｏｍ）、Ｋｒｕｅｇｅｒ  ＡＴ  ｅｔ  ａｌ，Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．，２００７，４０，１４１−１５０、Ｋｏｏｌ，ＥＴ，Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．，２００２，３５，９３６−９４３、Ｂｅｎｎｅｒ  Ｓ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔ．，２００５，６，５５３−５４３、Ｒｏｍｅｓｂｅｒｇ，Ｆ．Ｅ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．，２００３，７，７２３−７３３、Ｈｉｒａｏ，Ｉ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．，２００６，１０，６２２−６２７において記載されている核塩基置換は、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドの合成に有用であると企図される。サイズ拡大型核酸塩基の例を、下記に示す。
【化１】
2020517638.tif 000003
【０１０２】
リボース、糖類似体、またはモルホリノに共有結合的に連結された核酸塩基は、ヌクレオシドを含む。「ヌクレオチド」は、１つのリン酸基と一緒にヌクレオシドからなる。リン酸基は、互いに隣接するヌクレオチドに共有結合的に連結し、オリゴマーを形成する。
【０１０３】
「ポリペプチド」および「タンパク質」という用語は、本明細書で互換的に使用され、アミノ酸残基のポリマーならびにそのバリアントおよび合成類似体を指す。したがって、これらの用語は、１つ以上のアミノ酸残基が、対応する天然に存在するアミノ酸の化学的類似体などの合成の天然に存在しないアミノ酸であるアミノ酸ポリマーに、ならびに天然に存在するアミノ酸ポリマーであるアミノ酸ポリマーに適用する。
【０１０４】
「ポリヌクレオチド」および「核酸」という用語は、ｍＲＮＡ、ＲＮＡ、ｃＲＮＡ、ｃＤＮＡ、およびＤＮＡを含む。この用語は、典型的には、少なくとも１０塩基長のポリマー形態のヌクレオチド、リボヌクレオチドまたはデオキシヌクレオチドのいずれか、あるいはいずれかの型のヌクレオチドの修飾形態を指す。この用語は、ＤＮＡの一本鎖および二本鎖形態を含む。「単離されたＤＮＡ」および「単離されたポリヌクレオチド」、および「単離された核酸」という用語は、特定の種の全ゲノムＤＮＡを含まない単離された分子を指す。したがって、ポリペプチドをコードする単離されたＤＮＡセグメントは、１つ以上のコード配列を含むが、ＤＮＡセグメントが得られる種の全ゲノムＤＮＡから実質的には離れて単離されるか、またはそれが存在しないように精製されているＤＮＡセグメントを指す。ポリペプチドをコードしない、非コードポリヌクレオチド（例えば、プライマー、プローブ、オリゴヌクレオチド）も含まれる。例えば、発現ベクター、ウイルスベクター、プラスミド、コスミド、ファージミド、ファージ、ウイルスなどを含む、組換えベクターも含まれる。
【０１０５】
さらなるコードまたは非コード配列は、本明細書に記載されるポリヌクレオチド内に存在してもよいが、存在している必要はなく、またポリヌクレオチドは、他の分子および／または支持体材料と結合していてもよいが、結合している必要はない。したがって、ポリヌクレオチドまたは発現可能なポリヌクレオチドは、コード配列自体の長さに関係なく、他の配列、例えば、発現対照配列と組み合わせてもよい。
【０１０６】
「発現対照配列」は、核酸、または対応するアミノ酸の調節配列を含み、例えば、転写または翻訳に影響を及ぼす能力を有する、プロモーター、リーダー、エンハンサー、イントロン、ＲＮＡのための認識モチーフ、またはＤＮＡ結合タンパク質、ポリアデニル化シグナル、ターミネーター、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）、分泌シグナル、細胞内局在性シグナルなど、または宿主細胞中のコード配列の細胞内もしくは細胞部位が含まれる。例示的な発現対照配列は、Ｇｏｅｄｄｅｌ；Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １８５，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．（１９９０）において記載されている。
【０１０７】
「プロモーター」は、細胞中のＲＮＡポリメラーゼを結合し、下流（３’方向）コード配列の転写を開始することができる、ＤＮＡ調節領域である。本明細書で使用される、プロモーター配列は、その３’末端で転写開始部位によって結合されており、上流（５’方向）に伸長し、バックグラウンドを超えて検出可能なレベルで転写を開始させるに必要な最小数の塩基またはエレメントを含む。プロモーター配列内には、（ヌクレアーゼＳ１でのマッピングによって便宜上規定される）転写開始部位、ならびにＲＮＡポリメラーゼの結合を担うタンパク質結合ドメイン（コンセンサス配列）が見られ得る。真核性プロモーターは、必ずしも「ＴＡＴＡ」ボックスおよび「ＣＡＴ」ボックスを含むわけではないが、しばしば、含むことができる。原核生物プロモーターは、−１０および−３５コンセンサス配列に加えて、Ｓｈｉｎｅ−Ｄａｌｇａｒｎｏ配列を含む。
【０１０８】
様々な異なる源から構造性、誘導性、および抑制性プロモーターを含む、多数のプロモーターは、当該技術分野でよく知られている。代表的な源には、例えば、ウイルス性、哺乳動物、昆虫、植物、酵母菌、および細菌性細胞型）が含まれ、これらの供給源からの好適なプロモーターは、容易に入手可能であるか、またはオンラインで、もしくは、例えば、ＡＴＣＣなどの寄託機関、ならびに他の商業的または個々の供給源から公に入手可能な配列に基づいて合成的に作製することができる。プロモーターは、一方向性（すなわち、１つの方向で転写を開始する）または二方向性（すなわち、３’または５’方向のいずれかで転写を開始する）であり得る。プロモーターの非限定的な例には、例えば、Ｔ７細菌性発現システム、ｐＢＡＤ（ａｒａＡ）細菌性発現システム、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ＲＳＶプロモーターが含まれる。誘導性プロモーターには、Ｔｅｔシステム（米国特許第５，４６４，７５８号および同第５，８１４，６１８号）、エクジソン誘導性システム（Ｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（１９９６）９３（８）：３３４６−３３５１、Ｔ−ＲＥｘＴＭシステム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）、ＬａｃＳｗｉｔｃｈ（登録商標）（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、およびＣｒｅ−ＥＲＴタモキシフェン誘導性リコンビナーゼシステム（Ｉｎｄｒａ  ｅｔ  ａｌ．Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．（１９９９）２７（２２）：４３２４−４３２７、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．（２０００）２８（２３）：ｅ９９、米国特許第７，１１２，７１５号、ならびにＫｒａｍｅｒ＆Ｆｕｓｓｅｎｅｇｇｅｒ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（２００５）３０８：１２３−１４４）または所望の細胞内での発現に好適な、当該技術分野で知られている任意のプロモーターが含まれる。
【０１０９】
「発現可能なポリヌクレオチドは、少なくとも１つのコード配列、および任意に、少なくとも１つの発現対照配列、例えば、転写および／または翻訳調節エレメントを含む、ｃＤＮＡ、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、または他のポリヌクレオチドを含み、細胞、例えば、対象における細胞への導入時に、コードしたポリペプチド（例えば、ＨＲＳポリペプチド）を発現することができる。
【０１１０】
いくつかの実施形態では、発現可能なポリヌクレオチドは、修飾されたＲＮＡまたは修飾されたｍＲＮＡポリヌクレオチド、例えば、天然に存在しないＲＮＡ類似体である。ある特定の実施形態では、修飾されたＲＮＡまたはｍＲＮＡポリペプチドは、１つ以上の修飾されたまたは非天然塩基、例えば、アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）、シトシン（Ｃ）、チミン（Ｔ）、および／またはウラシル（Ｕ）以外のヌクレオチド塩基を含む。いくつかの実施形態では、修飾されたｍＲＮＡは、１つ以上の修飾されたまたは非天然のヌクレオチド間連結を含む。コードされた治療用ポリペプチドを送達するための発現可能なＲＮＡポリヌクレオチドは、例えば、Ｋｏｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２９：１５４−７，２０１１、および米国特許出願第２０１５／０１１１２４８号、同第２０１４／０２４３３９９号、同第２０１４／０１４７４５４号、および同第２０１３／０２４５１０４号において記載されており、これらは、参照によりそれらの全体が組み込まれる。
【０１１１】
いくつかの実施形態では、発現可能なポリヌクレオチドを送達するために使用することができる様々なウイルスベクターは、アデノウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、およびレトロウイルスベクターを含む。場合によっては、レトロウイルスベクターは、マウスまたはトリ類レトロウイルスベクターの誘導体であるか、またはレンチウイルスベクターである。単一の外来遺伝子が挿入され得るレトロウイルスベクターの例としては、Ｍｏｌｏｎｅｙマウス白血病ウイルス（ＭｏＭｕＬＶ）、Ｈａｒｖｅｙマウス肉腫ウイルス（ＨａＭｕＳＶ）、マウス乳腺腫瘍ウイルス（ＭｕＭＴＶ）、ＳＩＶ、ＢＩＶ、ＨＩＶ、およびラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）が挙げられるが、これらに限定されない。多くのさらなるレトロウイルスベクターは、複数の遺伝子を組み込むことができる。これらのベクターの全ては、形質導入細胞が特定され、生成することができるように、選択可能なマーカーのための遺伝子を移動させるか、またはそれを組み込むことができる。特定の標的細胞上の受容体のためにリガンドをコードする別の遺伝子と一緒に、対象となるポリペプチド配列をウイルスベクターに挿入することによって、例えば、ベクターは、標的特異性を行い得る。レトロウイルスベクターは、例えば、タンパク質をコードするポリヌクレオチドを挿入することによって標的特異性を行い得る。例示的な標的化は、レトロウイルスベクターを標的とする抗体を用いることによって達成され得る。当業者は、過度な実験を行うことなく、レトロウイルスベクターの標的特異的送達を可能にするレトロウイルスゲノムに送達され得る特定のポリヌクレオチド配列について知っているか、または容易に確認することができる。
【０１１２】
ある特定の場合によっては、本明細書に記載される発現可能なポリヌクレオチドは、細胞内、潜在的には、核などの特定の区画内に局在化すべく工学操作されるか、または細胞から分泌すべくもしくは細胞の形質膜に転位すべく工学操作される。例示的な実施形態では、発現可能なポリヌクレオチドは、核の局在化のために工学操作される。
【０１１３】
本明細書に記載される、ポリペプチドの生物学的に活性な「バリアント」および「断片」、ならびにそれをコードするポリヌクレオチドもまた含まれる。「バリアント」は、参照ポリペプチドまたはポリヌクレオチドと比較して、１つ以上の置換、付加、欠失、および／または挿入を含有する（例えば、表および配列表を参照のこと）。バリアントポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、本明細書に記載される、参照配列に対して少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上の配列同一性または類似性または相同性を有するアミノ酸またはポリヌクレオチド配列を含み、その参照配列の活性を実質的に保持する。１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０またはそれ以上のアミノ酸またはヌクレオチドの付加、欠失、挿入、または置換によって参照配列からなるか、またはそれとは異なり、その参照配列の活性を実質的に保持する、配列もまた含まれる。ある特定の実施形態では、付加または欠失は、Ｃ末端および／またはＮ末端の付加および／または欠失を含む。
【０１１４】
「配列同一性」という用語または例えば、「に対して配列５０％の同一性」を含むとは、本明細書で使用される場合、比較のウインドウにわたってヌクレオチド毎を基礎にしてまたはアミノ酸毎を基礎にして、それらの配列が同一である程度を指す。したがって、「配列同一性の百分率」は、比較のウインドウにわたって２つの最適にアラインされた配列を比較し、同一の核酸塩基（例えば、Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ｉ）または同一のアミノ酸残基（例えば、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｃｙｓ、およびＭｅｔ）が両方の配列において存在する位置の数を決定して、一致した位置の数を得、比較のウインドウ中の位置の総数（すなわち、ウインドウサイズ）によってこの一致した位置の数を除算し、その結果に１００を乗じて配列同一性の百分率を得ることによって、計算され得る。比較ウインドウをアラインするための配列の最適なアラインメントは、アルゴリズム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ７．０、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒｉｖｅ  Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．，ＵＳＡにおけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ）のコンピューター化実行によって、または検査および選択された種々の方法のいずれかによって生成された最良のアラインメント（すなわち、比較ウインドウにわたって最も高い百分率の相同性を生じる）によって実施され得る。例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９，１９９７によって開示されるような、ＢＬＡＳＴファミリーのプログラムに対しても参照がなされ得る。
【０１１５】
「統計的に有意な」とは、その結果が偶然起こる可能性が低いことを意味する。統計的有意性は、当該技術分野で既知の任意の方法によって決定され得る。有意性の一般に使用される尺度には、帰無仮説が真であるとした場合に、観察された事象が発生する頻度または確率であるｐ値が含まれる。得られたｐ値が有意性レベルよりも小さい場合、この帰無仮説は棄却される。単純な例では、この有意性レベルは、０．０５またはそれ未満のｐ値において規定される。
【０１１６】
「溶解度」という用語は、液体溶媒中で溶解し、均質溶液を形成する、本明細書で提供される薬剤の特性を指す。溶解度は典型的に、単位体積の溶媒当たりの溶質の質量（溶媒１ｋｇ当たりの溶質のｇ、ｇ／ｄＬ（１００ｍＬ）、ｍｇ／ｍｌなど）、モル濃度、重量モル濃度、モル分率、または濃度の他の類似の記述のいずれかによって、濃度として表される。溶媒の量当たり溶解し得る溶質の最大平衡量は、温度、圧力、ｐＨ、および溶媒の性質を含む特定の条件下での、その溶媒におけるその溶質の溶解度である。ある特定の実施形態では、溶解度は、生理学的ｐＨまたは他のｐＨ、例えば、ｐＨ５．０、ｐＨ６．０、ｐＨ７．０、またはｐＨ７．４で測定される。ある特定の実施形態では、溶解度は、水または生理学的緩衝液、例えば、ＰＢＳもしくはＮａＣｌ（ＮａＰありまたはなし）中で測定される。特定の実施形態では、溶解度は、比較的低いｐＨ（例えば、ｐＨ６．０）および比較的高い塩（例えば、５００ｍＭ  ＮａＣｌおよび１０ｍＭ  ＮａＰ）において測定される。ある特定の実施形態では、溶解度は、生体液（溶媒）、例えば、血液または血清中で測定される。ある特定の実施形態では、温度は、約室温（例えば、約２０、２１、２２、２３、２４、２５℃）または約体温（３７℃）であり得る。ある特定の実施形態では、薬剤は、室温または３７℃で、少なくとも約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、または１００ｍｇ／ｍｌの溶解度を有する。
【０１１７】
「対象」または「それを必要とする対象」は、ヒト対象などの哺乳動物対象を含む。
【０１１８】
「実質的に」または「本質的に」とは、ほぼ全体的にまたは完全に、例えば、ある所与の量のうちの９５％またはそれ以上を意味する。
【０１１９】
「治療反応」は、治療反応の投与に基づいた症状の改善（持続するかどうかにかかわらず）を指す。
【０１２０】
本明細書で使用される、「標的」という用語は、ＲＮＡ領域、具体的には、本明細書に記載される標的遺伝子のＲＮＡ領域を指す。標的は、コードおよび非コード配列、５’上流配列、３’下流配列、および本明細書に記載される他のＲＮＡ配列を含み得る。
【０１２１】
「標的配列」という用語は、アンチセンスまたはＲＮＡｉ剤が向けられた標的ＲＮＡの一部、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドが相補配列のワトソンクリック塩基対合によってハイブリダイズする配列、またはＲＮＡｉ剤のセンス鎖に対応する配列を指す。
【０１２２】
本明細書で使用される、「定量化する」、「定量化」、または他の関連する語は、核酸、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質の単位体積中の量、質量、または濃度を決定することを指す。
【０１２３】
本明細書で使用される、「治療有効量」、「治療用量」、「予防上有効な量」、または「診断上有効な量」という用語は、投与後、所望の生物学的反応を生じるために必要とされる薬剤の量である。同様に、「アンチセンス療法」または「ＲＮＡｉ療法」という用語は、最低限有効な治療レベルの上に患者の血漿または他の組織区画（例えば筋肉組織）中のアンチセンスまたはＲＮＡｉ剤の平均定常状態濃度を維持する療法を含む。
【０１２４】
本明細書で使用される、対象（例えば、哺乳動物、例えばヒト）または細胞の「処置」は、個体または細胞の自然経過を変更する試みに用いられる任意のタイプの介入である。処置としては、薬学的組成物の投与が含まれるが、これに限定されず、予防的にまたは病理学的事象の開始もしくは病原体との接触の後のいずれかに実施されてもよい。「予防的」処置もまた含まれ、これは、処置されている疾患または状態の進行速度を低下させること、疾患または状態の発症を遅らせること、あるいはその発症の重篤度を軽減することに向けることができる。「処置」または「予防」は、必ずしも疾患または状態あるいはその関連症状の完全な根絶、治癒または防止を示すわけではない。
【０１２５】
「野生型」という用語は、集団において最も頻繁に観察されるものであり、したがって、遺伝子の「正常」または「野生型」の形態を適宜設計されている、遺伝子または遺伝子産物（例えば、ポリペプチド）を指す。
【０１２６】
ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）ポリペプチドおよびポリヌクレオチド
ある特定の実施形態は、コンジュゲート（例えば、Ｆｃコンジュゲート）、バリアント、およびその断片、ならびにＨＲＳポリペプチドをコードする発現可能なポリヌクレオチドを含む、ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼポリペプチド（「ＨＲＳ」または「ＨｉｓＲＳ」ポリペプチド）を含む。ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼは、３つの高度に保存された配列モチーフを有する、クラスＩＩ  ｔＲＮＡシンテターゼファミリーに属する。クラスＩおよびＩＩ  ｔＲＮＡシンテターゼは、２ステップ反応においてその同族ｔＲＮＡへのアミノ酸の特異的結合を担うと広く認識されている：アミノ酸（ＡＡ）は、ＡＴＰによって最初に活性化されてＡＡ−ＡＭＰを形成し、次いで、ｔＲＮＡの受容体末端に転移される。完全長ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼは、典型的に、サイトゾルホモダイマーまたは選択的スプライシングされたミトコンドリア形態のいずれかとして存在する。
【０１２７】
真核性ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼのある特定の生物学的断片もしくは選択的スプライシングされたアイソフォーム、または一部の文脈では無傷な完全長シンテターゼが、ある特定の治療的に関連する細胞シグナル伝達経路を調節し、および／または抗炎症特性を有する。タンパク質合成におけるｔＲＮＡシンテターゼの古典的役割とは異なるこれらの活性は、本明細書で「非正準活性」と称される。例えば、本明細書で提供される、ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼのＮ末端断片（例えば、ＨＲＳ１〜４８、ＨＲＳ１〜６０）などのＨＲＳポリペプチドは、とりわけ、活動性炎症の部位と関連する炎症性細胞（例えば、単球、マクロファージ、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、樹枝状細胞）の遊走、活性化、または分化をインビボで遮断することによって、抗炎症性シグナルを働かせることが可能である。加えて、完全長ＨＲＳポリペプチド配列と比較して、ある特定の変異または欠失（例えば、ＨＲＳ１〜５０６、ＨＲＳ１〜６０）は、増加した活性および／または改善された薬理学的特性を付与する。ある特定の例示的なＨＲＳポリペプチドの配列を、以下の表Ｈ１中に提供する。
【表Ｈ１−１】
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【表Ｈ１−２】
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【表Ｈ１−３】
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【表Ｈ１−４】
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【表Ｈ１−５】
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【表Ｈ１−６】
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【表Ｈ１−７】
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【表Ｈ１−８】
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【表Ｈ１−９】
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【表Ｈ１−１０】
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【表Ｈ１−１１】
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【表Ｈ１−１２】
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【表Ｈ１−１３】
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【表Ｈ１−１４】
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【表Ｈ１−１５】
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【表Ｈ１−１６】
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【表Ｈ１−１７】
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【表Ｈ１−１８】
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【表Ｈ１−１９】
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【表Ｈ１−２０】
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【表Ｈ１−２１】
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【表Ｈ１−２２】
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【表Ｈ１−２３】
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【表Ｈ１−２４】
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【表Ｈ１−２５】
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【表Ｈ１−２６】
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【表Ｈ１−２７】
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【表Ｈ１−２８】
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【０１２８】
したがって、ある特定の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、表Ｈ１中の哺乳動物ＨＲＳアミノ酸配列（例えば、配列番号１〜１１７）またはそれらの活性バリアントもしくは断片を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。いくつかの実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、表Ｈ１中のヒトＨＲＳアミノ酸配列（例えば、配列番号１〜１０９）またはそれらの活性バリアントもしくは断片を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。いくつかの実施形態では、発現可能なポリヌクレオチドは、表Ｈ１中のアミノ酸配列（例えば、配列番号１〜１１７）、例えば、表Ｈ１中のヒトＨＲＳ配列（配列番号１〜１０９）またはそれらの活性バリアントもしくは断片を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなるＨＲＳポリペプチドをコードする。
【０１２９】
上述のように、ＨＲＳポリペプチドは、アミノ酸置換、欠失、短縮、付加、および挿入を含む、種々の方法で変更され得る。かかる操作のための方法は、一般に、当該技術分野で周知である。例えば、ＨＲＳ参照ポリペプチドのアミノ酸配列バリアントは、ＤＮＡ中の変異によって調製され得る。変異誘発およびヌクレオチド配列変更のための方法は、当該技術分野で周知である。例えば、Ｋｕｎｋｅｌ（１９８５，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８２：４８８−４９２）、Ｋｕｎｋｅｌら（１９８７，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌ，１５４：３６７−３８２）、米国特許第４，８７３，１９２号、Ｗａｔｓｏｎ，Ｊ．Ｄ．ら（“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｇｅｎｅ”，Ｆｏｕｒｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ，Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ，Ｃａｌｉｆ．，１９８７）、およびこれらの中で引用される参考文献を参照のこと。対象となるタンパク質の生物学的活性に影響を与えないアミノ酸置換を充当するためのガイダンスは、Ｄａｙｈｏｆｆら（１９７８）Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｎａｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．）のモデルにおいて見出され得る。
【０１３０】
生物学的に活性な短縮型および／またはバリアントＨＲＳポリペプチドは、参照ＨＲＳアミノ酸残基と比較して、それらの配列に沿った種々の位置において保存的アミノ酸置換を含み得る。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられる置換である。以下のように一般に下位分類され得る、類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーが、当該技術分野において規定されている：
酸性：この残基は、生理学的ｐＨにおけるＨイオンの喪失に起因して負の電荷を有し、この残基は、ペプチドが生理学的ｐＨにおいて水性媒体中に存在する場合に、この残基が含まれるペプチドのコンフォメーションにおける表面位置を求めるように、水性溶液によって引きつけられる。酸性側鎖を有するアミノ酸は、グルタミン酸およびアスパラギン酸を含む。
【０１３１】
塩基性：この残基は、生理学的ｐＨにおけるまたはその１もしくは２のｐＨ単位内でのＨイオンとの会合に起因して正の電荷を有し（例えば、ヒスチジン）、この残基は、ペプチドが生理学的ｐＨにおいて水性媒体中に存在する場合に、この残基が含まれるペプチドのコンフォメーションにおける表面位置を求めるように、水性溶液によって引きつけられる。塩基性側鎖を有するアミノ酸は、アルギニン、リジン、およびヒスチジンを含む。
【０１３２】
荷電：これらの残基は、生理学的ｐＨにおいて荷電し、したがって、これには酸性側鎖または塩基性側鎖を有するアミノ酸（すなわち、グルタミン酸、アスパラギン酸、アルギニン、リジン、およびヒスチジン）が含まれる。
【０１３３】
疎水性：これらの残基は、生理学的ｐＨにおいて荷電せず、この残基は、ペプチドが水性媒体中に存在する場合に、この残基が含まれるペプチドのコンフォメーションにおける内部位置を求めるように、水性溶液によって反発される。疎水性側鎖を有するアミノ酸は、チロシン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、およびトリプトファンを含む。
【０１３４】
中性／極性：これらの残基は、生理学的ｐＨにおいて荷電せず、この残基は、ペプチドが水性媒体中に存在する場合に、この残基が含まれるペプチドのコンフォメーションにおける内部位置を求めるように、水性溶液によって十分には反発されない。中性／極性側鎖を有するアミノ酸は、アスパラギン、グルタミン、システイン、ヒスチジン、セリン、およびスレオニンを含む。
【０１３５】
この説明はまた、ある特定のアミノ酸を「小さい」として特徴付けているが、これは、ある特定のアミノ酸の側鎖が、極性基を欠いていても、疎水性を付与するのに十分には大きくないからである。プロリンを除いて、「小さい」アミノ酸は、少なくとも１つの極性基が側鎖上に存在する場合、４つ以下の炭素を有するアミノ酸であり、存在しない場合には、３つ以下の炭素を有するアミノ酸である。小さい側鎖を有するアミノ酸は、グリシン、セリン、アラニン、およびスレオニンを含む。遺伝子にコードされる二次アミノ酸プロリンは、ペプチド鎖の二次コンフォメーションに対するその公知の効果に起因して、特別の場合である。プロリンの構造は、その側鎖が、α−アミノ基の窒素ならびにα−炭素に結合しているという点で、他の全ての天然に存在するアミノ酸とは異なる。いくつかのアミノ酸類似性マトリックスが、当該技術分野で周知である（例えば、Ｄａｙｈｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，１９７８，Ａ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ  ｃｈａｎｇｅ  ｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎｓによって例えば開示される、例えば、ＰＡＭ１２０マトリックスおよびＰＡＭ２５０マトリックスを参照のこと）。しかしながら、Ｍ．Ｏ．Ｄａｙｈｏｆｆ，（ｅｄ．），Ａｔｌａｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｖｏｌ．５，ｐｐ．３４５−３５８、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  ＤＣ、およびＧｏｎｎｅｔら（Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５６：１４４３０−１４４５，１９９２）による距離の関係性を決定するためのマトリックスは、グリシン、セリン、アラニン、およびスレオニンと同じ群中にプロリンを含む。したがって、プロリンは、「小さい」アミノ酸として分類される。
【０１３６】
極性または非極性としての分類のために必要とされる引きつけまたは反発の程度は、任意であり、したがって、本発明によって具体的に企図されるアミノ酸は、一方または他方として分類されている。具体的に命名されていないほとんどのアミノ酸は、既知の挙動に基づいて分類され得る。
【０１３７】
アミノ酸残基は、環式または非環式、および芳香族または非芳香族、残基の側鎖置換基に関して自明の分類、および小型または大型として、さらに下位分類され得る。残基は、さらなる極性置換基が存在することを条件として、カルボキシル炭素を含めて、合計４つまたはそれ以下の炭素原子を含む場合に小さいと見なされ、そうでない場合には、３つ以下を含む場合に小さいと見なされる。小さい残基は、当然、常に非芳香族である。それらの構造特性に依存して、アミノ酸残基は、２つ以上のクラスに入り得る。天然に存在するタンパク質アミノ酸について、このスキームに従う下位分類は、表Ａ中に提示される。
【表Ａ−１】
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【表Ａ−２】
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【０１３８】
保存的アミノ酸置換はまた、側鎖に基づいた分類も含む。例えば、脂肪族側鎖を有するアミノ酸の群は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、およびイソロイシンであり、脂肪族−ヒドロキシル側鎖を有するアミノ酸の群は、セリンおよびスレオニンであり、アミド含有側鎖を有するアミノ酸の群は、アスパラギンおよびグルタミンであり、芳香族側鎖を有するアミノ酸の群は、フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファンであり、塩基性側鎖を有するアミノ酸の群は、リジン、アルギニン、およびヒスチジンであり、硫黄含有側鎖を有するアミノ酸の群は、システインおよびメチオニンである。例えば、ロイシンとイソロイシンまたはバリン、アスパルテートとグルタメート、スレオニンとセリンとの置換、またはアミノ酸と構造的に関連したアミノ酸との類似の置換は、得られたバリアントポリペプチドの特性における大きな影響を与えないであろう。アミノ酸変化が機能的な短縮型および／またはバリアントＨＲＳポリペプチドを生じるかどうかは、本明細書に記載されるように、その非正準活性をアッセイすることによって、容易に決定され得る。保存的置換は、例示的な置換の見出しの下に、表Ｂ中に示される。本発明の範囲内に入るアミノ酸置換は、一般に、（ａ）置換の領域におけるペプチド骨格の構造、（ｂ）標的部位における分子の電荷もしくは疎水性、（ｃ）側鎖の嵩高さ、または（ｄ）生物学的機能を維持することに対するその影響が顕著には異ならない置換を選択することによって達成される。置換が導入された後、これらのバリアントは、生物学的活性についてスクリーニングされる。
【表Ｂ−１】
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【表Ｂ−２】
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【０１３９】
あるいは、保存的置換を行うための類似のアミノ酸は、側鎖の正体に基づいて３つのカテゴリーに群分けされ得る。Ｚｕｂａｙ，Ｇ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｔｈｉｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗｍ．Ｃ．Ｂｒｏｗｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（１９９３）に記載されるように、第１の群は、グルタミン酸、アスパラギン酸、アルギニン、リジン、ヒスチジンを含み、その全てが荷電側鎖を有し、第２の群は、グリシン、セリン、スレオニン、システイン、チロシン、グルタミン、アスパラギンを含み、第３の群は、ロイシン、イソロイシン、バリン、アラニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、メチオニンを含む。
【０１４０】
いくつかの実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、１つ以上のシステインの挿入または置換を有し、例えば、１つ以上の非システイン残基が、（例えば、安定性を変更するために、Ｆｃ断片のチオールベースのコンジュゲート化を促進するために、ＰＥＧまたは他の分子のチオールベースの結合を促進するために）システイン残基で置換されている。いくつかの実施形態では、１つ以上のシステイン置換は、ＨＲＳポリペプチドのＮ末端および／もしくはＣ末端、またはＨＲＳポリペプチドの他の表面曝露された領域の近傍である。特定の実施形態は、ＨＲＳポリペプチドのＮ末端および／もしくはＣ末端に対して１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５アミノ酸内の残基のうちの１つ以上がシステイン残基で置換される場合を含む。いくつかの実施形態では、システイン残基は、Ｎ末端またはＣ末端融合タンパク質の創出を介して、ＨＲＳポリペプチドに付加され得る。かかる融合タンパク質は、任意の長さのものであり得るが、典型的には約１〜５、または約５〜１０、約１０〜２０、または約２０〜３０アミノ酸長である。
【０１４１】
ＨＲＳポリペプチドＨＲＳ（１〜６０）に基づく、システイン改変タンパク質の具体的な例を、表Ｈ２中に示す。このアプローチは、表Ｈ１のＨＲＳポリペプチドおよび本明細書に記載される他のＨＲＳポリペプチドに、適用することができる。
【表Ｈ２】
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【０１４２】
したがって、ある特定の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、表Ｈ２中のアミノ酸配列（配列番号１１８〜１２０）またはそれらの活性バリアントもしくは断片を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。いくつかの実施形態では、発現可能なポリヌクレオチドは、表Ｈ２中のアミノ酸配列（例えば、配列番号１１８〜１２０）またはそれらの活性バリアントもしくは断片を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなるＨＲＳポリペプチドをコードする。
【０１４３】
いくつかの実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、内因性または天然に存在するシステイン残基が代替的アミノ酸に変異しているか、または欠失している変異体を有し得る。いくつかの実施形態では、ＨＲＳポリペプチド中へのシステイン残基の挿入または置換は、他の表面曝露された反応性システイン残基の排除と組み合わされる。したがって、いくつかの実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、例えば、天然に存在するシステイン残基を除去するために、Ｃｙｓ８３、Ｃｙｓ１７４、Ｃｙｓ１９１、Ｃｙｓ１９６、Ｃｙｓ２２４、Ｃｙｓ２３５、Ｃｙｓ３７９、Ｃｙｓ４５５、Ｃｙｓ５０７、および／またはＣｙｓ５０９（配列番号１によって規定される）のうちの任意の１つ以上において、１つ以上の置換および／または欠失を含み、それには、これらの組み合わせが含まれる。
【０１４４】
特定の実施形態は、Ｃｙｓ８３、Ｃｙｓ１７４、Ｃｙｓ１９１、Ｃｙｓ１９６、Ｃｙｓ２２４、Ｃｙｓ２３５、Ｃｙｓ３７９、Ｃｙｓ４５５のうちの任意の１つ以上の変異もしくは欠失、または例えば、Ｃ末端の３アミノ酸（Δ５０７〜５０９）の欠失によるＣｙｓ５０７およびＣｙｓ５０９の欠失を有する、表Ｈ１のＨＲＳポリペプチドを含む。これらの位置における例示的な変異には、例えば、システインからセリン、アラニン、ロイシン、バリンまたはグリシンへの変異が含まれる。ある特定の実施形態では、特異的システイン置換のためのアミノ酸残基は、他の種および生物からのＨＲＳオルソログにおいて見出される天然に存在する置換から選択され得る。この型の例示的な置換は、
表Ｈ３中に示される。
【表Ｈ３】
2020517638.tif 000037
【０１４５】
いくつかの実施形態では、変異誘発のために選択された天然に存在するシステインは、それらの表面曝露に基づいて選択される。したがって、一態様では、置換のために選択されたシステイン残基は、Ｃｙｓ２２４、Ｃｙｓ２３５、Ｃｙｓ５０７、およびＣｙｓ５０９から選択される。いくつかの実施形態では、配列番号１の最後の３つ（Ｃ末端）の残基は、残基５０７〜５０９を欠失するように欠失している。いくつかの実施形態では、これらのシステインは、分子内システイン対、例えばＣｙｓ１７４およびＣｙｓ１９１を排除するように、変異または欠失のために選択される。
【０１４６】
表面曝露されたシステイン残基を低減させるためのシステイン変異／置換（太字下線で示される）の具体的な例には、表Ｈ４中に以下に列挙されるものが含まれる。
【表Ｈ４−１】
2020517638.tif 000038
【表Ｈ４−２】
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【０１４７】
したがって、ある特定の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、表Ｈ４中のアミノ酸配列（配列番号１２１〜１２７）またはそれらの活性バリアントもしくは断片を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。いくつかの実施形態では、発現可能なポリヌクレオチドは、表Ｈ４中のアミノ酸配列（例えば、配列番号１２１〜１２７）またはそれらの活性バリアントもしくは断片を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなるＨＲＳポリペプチドをコードする。
【０１４８】
いくつかの実施形態では、かかるシステイン置換変異体は、規定された表面曝露された位置において新たな表面曝露されたシステイン残基を操作して入れ込む、挿入する、またはそうでなければ導入するために改変され、ここで、導入された残基は、ＨＲＳポリペプチドの非正準活性を実質的に妨害しない。具体的な例には、例えば、上記の低減したシステインのＨＲＳポリペプチドのいずれかのＮ末端またはＣ末端における、さらなるシステイン残基の挿入（または再挿入戻し）が含まれる。いくつかの実施形態では、かかるＮ末端またはＣ末端の表面曝露されたシステインの挿入は、ＨＲＳポリペプチドの低減したシステインバリアントへの、完全長ヒトＨＲＳの最後の１つ、最後の２つ、または最後の３つの天然に存在するＣ末端アミノ酸の再挿入、例えば、配列ＣＩＣ（Ｃｙｓ  Ｉｌｅ  Ｃｙｓ）の全てまたは一部の再挿入を含む。例示的な低減したシステイン変異体には、例えば、表Ｈ１のＨＲＳポリペプチドのうちのいずれかにおける、残基Ｃｙｓ１７４、Ｃｙｓ１９１、Ｃｙｓ２２４、およびＣｙｓ２３５における変異（またはそれらの欠失）の任意の組み合わせ、ならびにまたはＣｙｓ５０７およびＣｙｓ５０９の欠失もしくは置換（完全長ヒト細胞質ＨＲＳ（配列番号１）の番号付けに基づく）が含まれる。
【０１４９】
Ｆｃ領域またはＰＥＧまたは他の異種分子などの異種分子への部位特異的なコンジュゲート化または結合のいくつかの型について、ＨＲＳポリペプチドは、１つ以上のグルタミン置換を有し得、１つ以上の天然に存在する（非グルタミン）残基は、例えば、グルタミンのアミド基への分子のトランスグルタミナーゼ触媒性の結合を促進するために、グルタミンで置換される。いくつかの実施形態では、グルタミン置換は、ＨＲＳポリペプチドのＮ末端および／またはＣ末端の近傍に導入される。特定の実施形態は、ＨＲＳポリペプチドのＮ末端および／またはＣ末端に対して１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５アミノ酸内の残基のうちの１つ以上がグルタミン残基で置換される場合を含む。これらおよび関連のＨＲＳポリペプチドはまた、任意の天然に存在するグルタミン残基を除去し、所望の場合、それによって部位特異的なコンジュゲート化または結合の程度を調節するために、置換（例えば、保存的置換）も含み得る。
【０１５０】
Ｆｃ領域またはＰＥＧまたは他の異種分子などの異種分子への部位特異的なコンジュゲート化または結合のいくつかの型について、ＨＲＳポリペプチドは、１つ以上のリジン置換を有し得、１つ以上の天然に存在する（非リジン）残基は、例えば、リジンのアミド基への分子のアシル化またはアルキル化に基づく結合を促進するために、リジンで置換される。これらの方法はまた、典型的には、Ｎ末端残基への分子の結合を生じる。いくつかの実施形態では、リジン置換は、ＨＲＳポリペプチドのＮ末端および／またはＣ末端の近傍である。特定の実施形態は、ＨＲＳポリペプチドのＮ末端および／またはＣ末端に対して１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５アミノ酸内の残基のうちの１つ以上がリジン残基で置換される場合を含む。これらおよび関連のＨＲＳポリペプチドはまた、任意の天然に存在するリジン残基を除去し、所望の場合、それによって部位特異的なコンジュゲート化または結合の程度を調節するために、置換（例えば、保存的置換）も含み得る。
【０１５１】
ＨＲＳポリペプチドへの部位特異的なコンジュゲート化は、ＨＲＳポリペプチドの１つ以上の溶媒アクセス可能な表面アミノ酸を置換することによっても、実施され得る。例えば、好適な溶媒アクセス可能なアミノ酸は、例示的なＨＲＳポリペプチドの公開された結晶構造を使用し、ＳＰＩＤＤＥＲサーバー（ｈｔｔｐ：／／ｓｐｐｉｄｅｒ．ｃｃｈｍｃ．ｏｒｇ／）を使用して予測された溶媒アクセス可能性に基づいて決定され得る（Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ．２０：１４７０−７，２０１２および米国特許出願第６１／６７４，６３９号を参照のこと）。この分析に基づいて、表面上のいくつかのアミノ酸は、コンジュゲート化または結合に適切な官能基を導入するための変異部位として潜在的に使用され得る。結晶構造に基づくアミノ酸の表面アクセス可能性スコアが計算され得、ここで、より高いスコアは、より良いアクセス可能性を示す。特定の実施形態では、より高いスコア（例えば、＞４０）が好ましい。したがって、いくつかの実施形態では、４０よりも大きい表面アクセス可能性スコアを有するアミノ酸位置が、システイン、リジン、グルタミン、または他の天然に存在しないアミノ酸を導入するために使用され得る。
【０１５２】
特定の実施形態では、溶媒アクセス可能な表面アミノ酸は、アラニン、グリシン、およびセリンからなる群から選択され、システイン、グルタミン、もしくはリジンが含まれるが、これらに限定されない、天然に存在するアミノ酸、または部位特異的なコンジュゲート化もしくは結合のために最適化された天然に存在しないアミノ酸で置換され得る。
【０１５３】
ある特定の実施形態は、Ｆｃ領域またはＰＥＧまたは他の異種分子などの異種分子に結合した官能基と共有結合を形成する官能基を含む天然に存在しないアミノ酸を置換することによる、任意のアミノ酸位置におけるＨＲＳポリペプチドへの部位特異的なコンジュゲート化または結合を含む。天然に存在しないアミノ酸は、例えば、本明細書に記載される、ＨＲＳポリペプチドのＮ末端および／またはＣ末端に対して、Ｎ末端および／またはＣ末端で、あるいは溶媒アクセス可能な表面アミノ酸残基において、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５アミノ酸内の残基のうちの１つ以上で、挿入または置換され得る。
【０１５４】
特定の実施形態では、天然に存在しないアミノ酸としては、任意のアミノ酸、改変アミノ酸、またはセレノシステイン以外のアミノ酸アナログ、および以下の２０種の遺伝子にコードされるアルファ−アミノ酸：アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリンが挙げられるが、これらに限定されない。アルファ−アミノ酸の一般構造は、以下の式によって例示される：
【化２】
2020517638.tif 000040
【０１５５】
非天然アミノ酸は、典型的には、上述の式を有する任意の構造であり、式中、Ｒ基は、２０種の天然アミノ酸において使用される置換基以外の任意の置換基である。２０種の天然アミノ酸の構造については、例えば、Ｌ．Ｓｔｒｙｅｒ，３ｒｄ  ｅｄ．１９８８，Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ  ＹｏｒｋによるＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙなどの生物化学の教科書を参照のこと。本明細書に開示される非天然アミノ酸は、上記の２０種のアルファ−アミノ酸以外の天然に存在する化合物であり得ることに留意されたい。本明細書に開示される非天然アミノ酸は、典型的には、側鎖のみが天然アミノ酸と異なるので、これらの非天然アミノ酸は、天然に存在するタンパク質において形成されるのと同じ様式で、例えば天然または非天然の他のアミノ酸とアミド結合を形成する。しかしながら、これらの非天然アミノ酸は、天然アミノ酸からそれらを識別する側鎖基を有する。例えば、上述の式中のＲは、任意に、アルキル−、アリール−、アリールハライド、ビニルハライド、アルキルハライド、アセチル、ケトン、アジリジン、ニトリル、ニトロ、ハライド、アシル−、ケト−、アジド−、ヒドロキシル−、ヒドラジン、シアノ−、ハロ−、ヒドラジド、アルケニル、アルキニル、エーテル、チオエーテル、エポキシド、スルホン、ボロン酸、ボロン酸エステル、ボラン、フェニルボロン酸、チオール、セレノ−、スルホニル−、ボレート、ボロネート、ホスホ、ホスホノ、ホスフィン、複素環式−、ピリジル、ナフチル、ベンゾフェノン、シクロオクチンなどの束縛された環、チオエステル、エノン、イミン、アルデヒド、エステル、チオ酸、ヒドロキシルアミン、アミノ、カルボン酸、アルファ−ケトカルボン酸、アルファもしくはベータ不飽和酸およびアミド、グリオキシルアミド、またはオルガノシラン基など、あるいはそれらの任意の組み合わせを含む。
【０１５６】
非天然アミノ酸の具体的な例としては、ｐ−アセチル−Ｌ−フェニルアラニン、Ｏ−メチル−Ｌ−チロシン、Ｌ−３−（２−ナフチル）アラニン、３−メチル−フェニルアラニン、Ｏ−４−アリル−Ｌ−チロシン、４−プロピル−Ｌ−チロシン、トリ−Ｏ−アセチル−ＧｌｃＮＡｃβ−セリン、β−Ｏ−ＧｌｃＮＡｃ−Ｌ−セリン、トリ−Ｏ−アセチル−ＧａｌＮＡｃ−α−スレオニン、α−ＧａｌＮＡｃ−Ｌ−スレオニン、Ｌ−Ｄｏｐａ、フッ素化フェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アジド−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アシル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−ベンゾイル−Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−ホスホセリン、ホスホノセリン、ホスホノチロシン、ｐ−ヨード−フェニルアラニン、ｐ−ブロモフェニルアラニン、ｐ−アミノ−Ｌ−フェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、以下に列挙されるもの、または本発明の他の箇所に列挙されるものなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５７】
したがって、所望の分子（例えば、Ｆｃ領域、ＰＥＧ）の任意の好ましい官能基と共有結合を形成する官能基を含む天然に存在しないアミノ酸を選択することができる。非天然アミノ酸は、一旦選択されると、供給業者から購入され得るか、または化学的に合成され得るかのいずれかである。任意の数の非天然アミノ酸が、標的分子中に取り込まれ得、これは、結合される所望の分子の数に従って変動し得る。これらの分子は、非天然アミノ酸の全てまたは一部のみに結合され得る。さらに、同じまたは異なる非天然アミノ酸が、所望の成果に依存して、ＨＲＳポリペプチド中に取り込まれ得る。ある特定の実施形態では、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上の非天然アミノ酸が、ＨＲＳポリペプチド中に取り込まれ、そのうちのいずれかまたは全てが、所望の官能基を含む分子にコンジュゲート化され得る。
【０１５８】
ある特定の態様では、非天然アミノ酸の使用は、ＨＲＳポリペプチドの選択された非正準活性を改変する（例えば、増加させる）ために、またはタンパク質のインビボもしくはインビトロ半減期を変更するために、利用され得る。非天然アミノ酸は、本明細書に記載されるように、ＨＲＳタンパク質の（選択的）化学的改変（例えば、ペグ化）を促進するためにも使用され得る。例えば、ある特定の非天然アミノ酸は、所与のタンパク質へのＦｃ領域またはＰＥＧなどのポリマーの選択的結合を可能にし、それによって、その薬物動態学的特性を改善する。
【０１５９】
アミノ酸類似体および模倣体の具体的な例は、例えば、Ｒｏｂｅｒｔｓ  ａｎｄ  Ｖｅｌｌａｃｃｉｏ，Ｔｈｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｅｄｓ．Ｇｒｏｓｓ  ａｎｄ  Ｍｅｉｎｈｏｆｅｒ，Ｖｏｌ．５，ｐ．３４１，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９８３）に記載されることが見出され得、この全内容が参照により本明細書に組み込まれる。他の例には、過アルキル化アミノ酸、特に過メチル化アミノ酸が含まれる。例えば、Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｅｄｓ．Ｗｉｌｓｏｎ  ａｎｄ  Ｃｚａｒｎｉｋ，Ｃｈ．１１，ｐ．２３５，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ  Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９９７）を参照されたく、この全内容が参照により本明細書に組み込まれる。なお他の例には、そのアミド部分（およびしたがって、得られたペプチドのアミド骨格）が、例えば、糖環、ステロイド、ベンゾジアゼピン、またはカルボサイクル（ｃａｒｂｏ  ｃｙｃｌｅ）によって置き換えられたアミノ酸が含まれる。例えば、Ｂｕｒｇｅｒ’ｓ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，Ｅｄ．Ｍａｎｆｒｅｄ  Ｅ．Ｗｏｌｆｆ，Ｃｈ．１５，ｐｐ．６１９−６２０，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ  Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９９５）を参照されたく、この全内容が参照により本明細書に組み込まれる。ペプチド、ポリペプチド、ペプチド模倣体、およびタンパク質を合成するための方法は、当該技術分野で周知である（例えば、米国特許第５，４２０，１０９号；Ｍ．Ｂｏｄａｎｚｓｋｙ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（１ｓｔ  ｅｄ．＆２ｄ  ｒｅｖ．ｅｄ．）、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９８４＆１９９３）、７章を参照のこと；Ｓｔｅｗａｒｔ  ａｎｄ  Ｙｏｕｎｇ，Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，（２ｄ  ｅｄ．），Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌ．（１９８４）を参照されたく、これらの各々は、参照により本明細書に組み込まれる）。したがって、ＨＲＳポリペプチドは、天然に存在するアミノ酸および天然に存在しないアミノ酸ならびにアミノ酸類似体および模倣体から構成され得る。
【０１６０】
ある特定の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、インビボで抗炎症活性を調節するか、または抗体もしくは自己反応性Ｔ細胞を遮断する活性を有することができる完全長ＨＲＳポリペプチドの最小活性断片を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。いくつかの実施形態では、そのような最小活性断片は、ＷＨＥＰドメイン（例えば、配列番号１の約アミノ酸１〜４３）またはその活性バリアントもしくは断片を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。いくつかの態様では、この最小活性断片は、アミノアシル化ドメイン（例えば、配列番号１の約アミノ酸５４〜３９８）またはその活性バリアントもしくは断片を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。いくつかの態様では、この最小活性断片は、アンチコドン結合ドメイン（すなわち、配列番号１の約アミノ酸４０６〜５０１）またはその活性バリアントもしくは断片を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。
【０１６１】
ある特定の実施形態では、このＨＲＳポリペプチドは、約２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５０１、５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７、５０８、もしくは５０９アミノ酸長、少なくとも約２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５０１、５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７、５０８、もしくは５０９アミノ酸長、およびまたは最大約２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５０１、５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７、５０８、もしくは５０９アミノ酸長であり、その間の範囲にある全ての整数を含み、表Ｈ１、表Ｈ２、もしくは表Ｈ４中のアミノ酸配列を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。
【０１６２】
ある特定の実施形態では、このＨＲＳポリペプチドは、少なくとも１つの非正準活性、例えば、抗炎症活性、またはヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼに対する自己抗体（例えば、Ｊｏ−１抗体）と関連する疾患を有する対象からの自己抗体もしくまたは自己反応性Ｔ細胞との交差反応を有する。インビトロ細胞からのサイトカイン放出の慣用的な測定ベースの、および動物研究を含む、抗炎症活性を決定するためのアッセイは、当該技術分野で十分確立されており（例えば、Ｗｉｔｔｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｖｉｓ  Ｅｘｐ．（６５）：ｅ４２０３．ｄｏｉ：１０．３７９１／４２０３，２０１２、Ｆｅｌｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ．４７：５８５−９５，２０１２、Ｃｌｕｔｔｅｒｂｕｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ．７４：７０４−１５，２０１１，Ｇｉｄｄｉｎｇｓ  ａｎｄ  Ｍａｉｔｒａ，Ｊ  Ｂｉｏｍｏｌ  Ｓｃｒｅｅｎ．１５：１２０４−１０，２０１０、Ｗｉｊｎｈｏｖｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＧｌｙｃｏｃｏｎｊＪ．２５：１７７−８５，２００８、およびＦｒｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｄ  Ｒｅｓ  Ｒｅｖ．２４：２７６−９８，２００４を参照のこと）、抗炎症活性をプロファイリングおよび最適化するために、容易に使用され得る。例示的なインビボ実験系もまた、添付の実施例中に記載されている。
【０１６３】
いくつかの実施形態では、このＨＲＳポリペプチドは、最大約１〜５×１０−７Ｍまたはそれ以上の濃度まで、競合的ＥＬＩＳＡにおいて、野生型ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼに対する疾患関連の自己抗体の結合（例えば、Ｊｏ−１抗体）について顕著には競合しない。したがって、いくつかの実施形態では、このＨＲＳポリペプチドは、競合的ＥＬＩＳＡにおいて測定した場合、野生型ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（配列番号１）よりも、疾患関連の自己抗体に対する低い親和性を有する。いくつかの実施形態では、このＨＲＳポリペプチドは、野生型ヒト（配列番号１）に対する疾患関連の自己抗体の親和性よりも、少なくとも約１０倍少ない、または少なくとも約２０倍少ない、または少なくとも約５０倍少ない、または少なくとも約１００倍少ない、疾患関連の自己抗体（例えば、Ｊｏ−１抗体）に対する見かけの親和性を有する。
【０１６４】
ＨＲＳポリペプチドのいずれかにおいて、ＨＲＳポリペプチドのＮ末端酸（例えば、Ｎ末端Ｍｅｔ）が欠失され得ることを理解されよう。
【０１６５】
他の実施形態では、他の（非ＨＡＲＳ）タンパク質（例えば、異種タンパク質またはポリペプチド）へのＨＲＳポリペプチドの融合タンパク質もまた、含まれ、これらの融合タンパク質は、ＨＲＳポリペプチドの生物学的活性、分泌、抗原性、ターゲティング、生物学的寿命、細胞膜もしくは血液脳関門を貫通する能力、または薬物動態学的性質を調節することができる。薬物動態学的性質を改善する融合タンパク質（「ＰＫモディファイヤー」）の例としては、限定することなく、ヒトアルブミン（Ｏｓｂｏｒｎ  ｅｔ  ａｌ．：Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４５６（１−３）：１４９−１５８，（２００２））、抗体Ｆｃドメイン、ポリＧｌｕまたはポリＡｓｐ配列、およびトランスフェリンへの融合物がある。さらに、アミノ酸Ｐｒｏ、Ａｌａ、およびＳｅｒからなる（「ＰＡＳ化」）コンフォメーション的に無秩序なポリペプチド配列、またはヒドロキシエチルデンプン（商標ＨＥＳＹＬＡＴＩＯＮ（登録商標）の下で販売されている）との融合物は、ＨＲＳポリペプチドの流体力学的体積を増大させる単純な方法を提供する。この追加の伸長は、嵩高いランダムな構造をとり、それは、得られる融合タンパク質のサイズを著しく増大させる。この手段によって、腎臓濾過を介したより小さいＨＲＳポリペプチドの一般に急速なクリアランスが数桁遅延される。さらに、Ｉｇ  Ｇ融合タンパク質を使用すると、いくつかの融合タンパク質が血液脳関門を貫通することが可能になることも示された（Ｆｕ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．１３５２：２０８−１３）。
【０１６６】
ＨＲＳポリペプチドの抗原性または免疫調節性を調節する融合タンパク質の例としては、例えば、ＭＨＣクラスＩおよびＩＩタンパク質、ｂ−２ミクログロブリン、ＬＦＡ−３の部分、重鎖のＦｃ領域の部分、ならびにこれらのコンジュゲートおよび誘導体を含めたＴ細胞結合リガンドへの融合物があり、このような融合タンパク質の例は、例えば、ＥＰ１９６４８５４、米国特許第５，４６８，４８１号、同第５，１３０，２９７号、同第５，６３５，３６３号、同第６，４５１，３１４号、およびＵＳ２００９／０２８０１３５に記載されている。
【０１６７】
さらに、いくつかの実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、他の十分に特徴付けられた分泌タンパク質に由来する合成の、または天然に存在する分泌シグナル配列を含み得る。いくつかの実施形態では、かかるタンパク質は、原位置でＨＲＳポリペプチドを形成するために、タンパク質分解的切断によって加工することができる。いくつかの実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、細胞内または細胞外の位置でＨＲＳポリペプチドの原位置発現および産生を可能にするための異種タンパク質分解的切断部位を含み得る。他の融合タンパク質は、例えば、新しいＮ末端アミノ酸を提供するためのユビキチンへのＨＲＳポリペプチドの融合、または細胞外媒体中へのＨＲＳポリペプチドの高レベル分泌を媒介するための分泌シグナルの使用、または精製もしくは検出を改善するためのＮ末端もしくはＣ末端エピトープタグ、および細胞透過性ペプチドへの融合も含み得る。
【０１６８】
ある特定の態様では、非天然アミノ酸の使用は、ＨＲＳポリペプチドの選択された非正準活性を改変する（例えば、増加させる）ために、またはタンパク質のインビボもしくはインビトロ半減期を変更するために、利用され得る。非天然アミノ酸はまた、本明細書の他の箇所に記載されるように、ＨＲＳタンパク質の（選択的）化学的改変（例えば、ペグ化）を促進するためにも使用され得る。例えば、ある特定の非天然アミノ酸は、所与のタンパク質へのＰＥＧなどのポリマーの選択的結合を可能にし、それによって、その薬物動態学的特性を改善する。
【０１６９】
ある特定の実施形態は、１つ以上のＨＲＳポリペプチドと共有結合している少なくとも１つのＦｃ領域を含むＨＲＳ−Ｆｃコンジュゲートを含む。ＨＲＳ−Ｆｃコンジュゲートの例には、融合タンパク質および種々の形態の化学的に架橋されたタンパク質が含まれる。任意の数の種からの野生型配列、ならびにそれらのバリアント、断片、ハイブリッド、および化学的に改変された形態を含む、ＨＲＳ−Ｆｃコンジュゲートにおいて使用され得る。ＨＲＳ−Ｆｃポリペプチドはまた、本明細書に記載され、当該技術分野で公知のように、ペプチドリンカーおよび化学的リンカーを含む、Ｆｃ領域をＨＲＳポリペプチドから典型的には分離する１つ以上のリンカーもまた、（任意に）含み得る。これらのＨＲＳ−Ｆｃコンジュゲートのいずれかにおいて、ＨＲＳポリペプチドのネイティブのＮもしくはＣ末端アミノ酸、またはＦｃドメイン中のネイティブのＮもしくはＣ末端アミノ酸が、例えば、発現およびもしくはクローニングを促進するため、または２つのタンパク質間のリンカー配列として機能するために、欠失し得、および／または非ネイティブアミノ酸で置き換えられ得ることが理解されよう。
【０１７０】
ＨＲＳ−Ｆｃコンジュゲートポリペプチドは、非コンジュゲート化または未改変ＨＲＳポリペプチド、例えば、それに結合されたＦｃ領域を有さない同じまたは類似の配列の対応するＨＲＳポリペプチドと比較して、種々の利点を提供し得る。単なる例示として、１つ以上のＦｃ領域の共有結合は、同じまたは類似の配列を有する未改変ＨＲＳポリペプチドと比較して、例えば、Ｆｃ領域関連エフェクター機能（例えば、古典的補体カスケードの活性化、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を介した免疫エフェクター細胞との相互作用、免疫グロブリンの区画化）、細胞取り込み、細胞内輸送、組織分布、および／またはバイオアベイラビリティを提供することによって、ＨＲＳポリペプチドの溶解度、半減期（例えば、血清中、選択された組織中、保存条件下での試験管中、例えば、室温でまたは冷蔵下で）、ダイマー化またはマルチマー化特性、生物学的活性（単数または複数）を変更（例えば、増加、減少）させ得る。ある特定の態様では、Ｆｃ領域は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、および／または抗体依存性細胞媒介性食作用（ＡＤＣＰ）に関するエフェクター機能を付与でき、これらは、腫瘍細胞および感染細胞などの特定の標的細胞を一掃するにあたり、役割を果たすと考えられている。
【０１７１】
ある特定の実施形態は、ＨＲＳ−Ｆｃ融合タンパク質を使用する。「融合タンパク質」は、融合タンパク質を作製する方法と同様、本明細書の他の場所に定義され、当該技術分野で周知である（例えば、Ｆｃ融合タンパク質に関する一般的な開示および方法については、米国特許第５，１１６，９６４号、同第５，４２８，１３０号、同第５，４５５，１６５号、同第５，５１４，５８２号、同第６，４０６，６９７号、同第６，２９１，２１２号、および同第６，３００，０９９号を参照のこと）。ＨＲＳ−Ｆｃ融合タンパク質では、Ｆｃ領域は、ＨＲＳポリペプチドのＮ末端、Ｃ末端、または両方に融合され得る。いくつかの実施形態では、１つ以上のＦｃ領域は、例えば、第１のＨＲＳ配列（例えば、ドメイン）と第２のＨＲＳ配列（例えば、ドメイン）との間にＦｃ領域を配置することによって、ＨＲＳ配列に対して内部に融合され得、第１のＨＲＳ配列は、Ｆｃ領域のＮ末端に融合され、第２のＨＲＳ配列は、Ｆｃ領域のＣ末端に融合される。特定の実施形態では、第１および第２のＨＲＳ配列は、同一である。他の実施形態では、第１および第２のＨＲＳ配列は、異なる（例えば、これらは、ＨＲＳポリペプチドの異なる機能的ドメインを含む）。ある特定のＨＲＳ−Ｆｃ融合タンパク質はまた、さらなる異種タンパク質配列、すなわち、非Ｆｃ領域および非ＨＲＳポリペプチド配列もまた含み得る。
【０１７２】
「ＨＲＳ−Ｆｃ」という用語は、ＨＲＳポリペプチドへのＦｃ領域のＮ末端またはＣ末端結合を示し得るが、必ずしも示すわけではない。例えば、ある特定の場合によっては、「Ｆｃ−ＨＲＳ」という用語は、ＨＲＳポリペプチドのＮ末端へのＦｃ領域の融合を示し、「ＨＲＳ−Ｆｃ」という用語は、ＨＲＳポリペプチドのＣ末端へのＦｃ領域の融合を示す。しかしながら、いずれの用語も、Ｆｃ領域およびＨＲＳポリペプチドの任意の融合タンパク質またはコンジュゲートをより一般に指すために使用され得る。
【０１７３】
いくつかの実施形態では、ＨＲＳ−Ｆｃ融合タンパク質は、任意に、リンカーペプチドによって分離された、単一のＦｃドメインにカップリングされたＨＲＳポリペプチドのタンデム反復コピーを含み得る。例示的なタンデム反復ＨＲＳ−Ｆｃ融合タンパク質は、表Ｈ５中に提供される。特定のタンデム反復ＨＲＳ−Ｆｃコンジュゲートの調製および配列は、実施例に例示される。
【表Ｈ５】
2020517638.tif 000041
【０１７４】
ある特定の実施形態は、ＨＲＳ−Ｆｃコンジュゲートに関し、例えば、１つ以上のＦｃ領域が、ＨＲＳポリペプチドに化学的にコンジュゲート化されるか、または架橋された、ＨＲＳ−Ｆｃコンジュゲートに関する。これらおよび関連の態様では、Ｆｃ領域は、Ｎ末端領域（例えば、最初の１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００などのアミノ酸）、内部領域（Ｎ末端領域とＣ末端領域との間）、および／またはＣ末端領域（例えば、最後の１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００などのアミノ酸内）において、ＨＲＳポリペプチドにコンジュゲート化され得る。ポリペプチドは、当該技術分野の種々の慣用的な技術に従って、他のポリペプチドにコンジュゲート化されるか、または架橋され得る。例えば、ある特定の技術は、Ｄ、Ｅ、およびＣ末端カルボキシル基を介して共有結合するカルボキシル−反応性カルボジイミド架橋剤ＥＤＣ（またはＥＤＡＣ）を使用する。他の技術は、ＫおよびＮ末端アミノ基を介して共有結合する活性化ＥＤＣを使用する）。なお他の技術は、システイン残基のチオール基を介して共有結合するｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）またはスルホ−ＭＢＳを使用する（チオールコンジュゲート化に使用され得るシステイン操作されたＩｇ領域については、米国特許出願第２００７／００９２９４０号もまた参照のこと）。かかる架橋されたタンパク質はまた、切断可能なまたはそうでなければ放出可能なリンカー（例えば、酵素的に切断可能なリンカー、加水分解可能なリンカー）、および切断不能なリンカー（すなわち、生理学的に安定なリンカー）を含むリンカーもまた含み得る。ある特定の実施形態は、例えば、米国特許出願第２００６／０２６９５５３号に記載されるように、Ｆｃ領域とＨＲＳポリペプチドとの間の架橋剤として、非ペプチドポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー；ＨＲＳ−Ｎ−ＰＥＧ−Ｎ−Ｆｃコンジュゲート）を使用し得る。Ｆｃ領域コンジュゲート化部位の例示的な記載については、米国特許出願第２００７／０２６９３６９号もまた参照のこと。
【０１７５】
ある特定の実施形態では、以下により詳細に議論されるように、野生型Ｆｃ領域と比較して変更された特性または生物学的活性を有するものを含む、バリアントまたはそうでなければ改変されたＦｃ領域が使用され得る。改変されたＦｃ領域の例には、例えば、野生型配と比較して１つも以上のアミノ酸の置換、挿入、欠失、もしくは短縮によって変異した配列を有するもの、異なる免疫グロブリンクラス／サブクラス由来のドメインからなるハイブリッドＦｃポリペプチド、変更されたグリコシル化／シアル酸付加パターンを有するＦｃポリペプチド、ならびに例えばビオチン化（例えば、米国特許出願第２０１０／０２０９４２４号を参照のこと）、リン酸化、硫酸化などによって改変されたもしくは誘導体化されたＦｃポリペプチド、または上述の任意の組み合わせが含まれる。かかる修飾は、対応する野生型Ｆｃ配列と比較して、本明細書に記載される他の特性の中で、１つ以上の特定のＦｃＲ（例えば、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩｃ、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩＩｂ、ＦｃＲｎ）へのＦｃ領域の結合特性、その薬物動態学的特性（例えば、安定性または半減期、バイオアベイラビリティ、組織分布、分布容積、濃度、排出速度定数、排出速度、曲線下面積（ＡＵＣ）、クリアランス、Ｃｍａｘ、ｔｍａｘ、Ｃｍｉｎ、変動）、その免疫原性、その補体結合（ｆｉｘａｔｉｏｎ）もしくは活性化、および／またはＦｃ領域のＣＤＣ／ＡＤＣＣ／ＡＤＣＰ関連活性を変更（例えば、増加、減少）させるために使用され得る。
【０１７６】
本明細書に提供されるＨＲＳ−Ｆｃコンジュゲートの「Ｆｃ領域」は、免疫グロブリン（Ｉｇ）分子の重鎖から通常誘導される。典型的なＩｇ分子は、２つの重鎖および２つの軽鎖からなる。重鎖は、少なくとも３つの機能的領域：Ｆｄ領域、Ｆｃ領域（断片結晶化可能な領域）、およびヒンジ領域へと分割され得、後者は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＤ免疫グロブリンにおいてのみ見出される。Ｆｄ領域は、重鎖の可変（ＶＨ）および定常（ＣＨ１）ドメインを含み、軽鎖の可変（ＶＬ）および定常（ＣＬ）ドメインと一緒になって、抗原結合性断片またはＦａｂ領域を形成する。
【０１７７】
ＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＤ免疫グロブリンのＦｃ領域は、ＣＨ２およびＣＨ３領域としてそれぞれ指定される重鎖定常ドメイン２および３を含み、ＩｇＥおよびＩｇＭ免疫グロブリンのＦｃ領域は、ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４領域としてそれぞれ指定される重鎖定常ドメイン２、３、および４を含む。Ｆｃ領域は、主として、例えば、補体結合およびエフェクター細胞の同族Ｆｃ受容体との結合を含む免疫グロブリンエフェクター機能を担う。
【０１７８】
ヒンジ領域（ＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＤにおいて見出される）は、Ｆａｂ部分がＦｃ領域に対して空間的に自由に動くように、可撓性スペーサーとして作用する。定常領域とは対照的に、ヒンジ領域は、免疫グロブリンクラスおよびサブクラスの中で、配列および長さの両方において変動して、構造的に多様である。ヒンジ領域はまた、炭水化物結合のためのいくつかの構造的に別個の型の部位を含む、１つ以上のグリコシル化部位も含み得る。例えば、ＩｇＡ１は、ヒンジ領域の１７アミノ酸のセグメント内に５つのグリコシル化部位を含み、腸プロテアーゼに対するヒンジ領域ポリペプチドの顕著な抵抗性を付与する。ＣＨ２ドメインのヒンジ近位領域中の残基は、免疫グロブリンとそのそれぞれのＦｃ受容体との間の相互作用の特異性にも影響し得る（例えば、Ｓｈｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０：１７７−１８６，１９９３を参照のこと）。
【０１７９】
したがって、「Ｆｃ領域」または「Ｆｃ断片」または「Ｆｃ」という用語は、本明細書で使用される場合、それらの断片およびバリアントおよび組み合わせを含む、１つ以上の選択された免疫グロブリン由来のＣＨ２領域、ＣＨ３領域、および／またはＣＨ４領域のうちの１つ以上を含むタンパク質を指す。「Ｆｃ領域」はまた、免疫グロブリンの重鎖定常領域のうちの１つ以上のヒンジ領域も含み得る。ある特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、免疫グロブリンのＣＨ１、ＣＬ、ＶＬ、および／またはＶＨ領域のうちの１つ以上を含まない。
【０１８０】
このＦｃ領域は、それらのサブクラスおよび組み合わせを含む、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭが含まれるが、これらに限定されない、任意の１つ以上の免疫グロブリンクラスのＣＨ２領域、ＣＨ３領域、ＣＨ４領域、および／またはヒンジ領域から誘導され得る。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、サブクラスＩｇＡ１および／またはＩｇＡ２を含む、ＩｇＡ免疫グロブリンから誘導される。ある特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＤ免疫グロブリンから誘導される。特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＥ免疫グロブリンから誘導される。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、サブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、および／またはＩｇＧ４を含む、ＩｇＧ免疫グロブリンから誘導される。ある特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＭ免疫グロブリンから誘導される。
【０１８１】
ある特定のＦｃ領域は、１つ以上のＦｃ−受容体（ＦｃＲ）に対する特異的結合を実証する。Ｆｃ受容体のクラスの例には、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）、Ｆｃα受容体（ＦｃαＲ）、Ｆｃε受容体（ＦｃεＲ）、および新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）が含まれる。例えば、ある特定のＦｃ領域は、ＦｃαＲ、ＦｃεＲ、および／またはＦｃＲｎと比較して、１つ以上のＦｃγＲへの結合（またはそれに対する親和性）を増加させる。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、１つ以上のＦｃγＲ、ＦｃεＲ、および／またはＦｃＲｎと比較して、ＦｃαＲへの結合を増加させる。他の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つ以上のＦｃγＲ、ＦｃαＲ、および／またはＦｃＲｎと比較して、ＦｃαＲ（例えば、ＦｃαＲＩ）への結合を増加させる。特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つ以上のＦｃγＲ、ＦｃαＲ、および／またはＦｃεＲと比較して、ＦｃＲｎへの結合を増加させる。ある特定の実施形態では、１つ以上の選択されたＦｃＲへのＦｃ領域の結合（または親和性）は、１つ以上の異なるＦｃＲに対するその結合（またはそれに対する親和性）と比較して、典型的には、約１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、２００倍、３００倍、４００倍、５００倍、６００倍、７００倍、８００倍、９００倍、１０００倍またはそれ以上（その間の全ての整数を含む）増加する。
【０１８２】
ＦｃγＲの例には、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩｃ、ＦｃγＲＩＩＩａ、およびＦｃγＲＩＩＩｂが含まれる。ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）は、マクロファージおよび樹状細胞上で発現され、食作用、呼吸性バースト、サイトカイン刺激、および樹状細胞エンドサイトーシス輸送において役割を果たす。ＦｃγＲＩの発現は、ＧＭ−ＣＳＦおよびγ−インターフェロン（γ−ＩＦＮ）の両方によって上方調節され、インターロイキン−４（ＩＬ−４）によって下方調節される。ＦｃγＲＩＩａは、多形核白血球（ＰＭＮ）、マクロファージ、樹状細胞、および肥満細胞上で発現される。ＦｃγＲＩＩａは、食作用、呼吸性バースト、およびサイトカイン刺激において役割を果たす。ＦｃγＲＩＩａの発現は、ＧＭ−ＣＳＦおよびγ−ＩＦＮによって上方調節され、ＩＬ−４によって減少される。ＦｃγＩＩｂは、Ｂ細胞、ＰＭＮ、マクロファージ、および肥満細胞上で発現される。ＦｃγＩＩｂは、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）媒介性の応答を阻害し、したがって、阻害受容体である。ＦｃγＲＩＩｃの発現は、静脈内免疫グロブリン（ＩＶＩＧ）およびＩＬ−４によって上方調節され、γ−ＩＦＮによって減少される。ＦｃγＲＩＩｃは、ＮＫ細胞上で発現される。ＦｃγＲＩＩＩａは、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、肥満細胞、および血小板上で発現される。この受容体は、食作用、呼吸性バースト、サイトカイン刺激、血小板凝集および脱顆粒、ならびにＮＫ媒介性ＡＤＣＣに関与する。ＦｃγＲＩＩＩの発現は、Ｃ５ａ、ＴＧＦ−β、およびγ−ＩＦＮによって上方調節され、ＩＬ−４によって下方調節される。ＦｃγＲＩＩＩｂは、ＰＭＮ上で発現されるＧＰＩ結合型受容体である。
【０１８３】
ある特定のＦｃ領域は、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩｃ、ＦｃγＲＩＩＩａ、および／またはＦｃγＲＩＩＩｂと比較して、ＦｃγＲＩへの結合を増加させる。いくつかの実施形態は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩｃ、ＦｃγＲＩＩＩａ、および／またはＦｃγＲＩＩＩｂと比較して、ＦｃγＲＩＩａへの結合を増加させる。特定のＦｃ領域は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｃ、ＦｃγＲＩＩＩａ、および／またはＦｃγＲＩＩＩｂと比較して、ＦｃγＲＩＩｂへの結合を増加させる。ある特定のＦｃ領域は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、および／またはＦｃγＲＩＩＩｂと比較して、ＦｃγＲＩＩｃへの結合を増加させる。いくつかのＦｃ領域は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩｃ、および／またはＦｃγＲＩＩＩｂと比較して、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合を増加させる。特定のＦｃ領域は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩｃ、および／またはＦｃγＲＩＩＩａと比較して、ＦｃγＲＩＩＩｂへの結合を増加させる。
【０１８４】
ＦｃαＲは、ＦｃαＲＩ（ＣＤ８９）を含む。ＦｃαＲＩは、好中球、好酸球、単球、ある特定のマクロファージ（例えば、クッパー細胞）、およびある特定の樹状細胞の表面上に見出される。ＦｃαＲＩは、２つの細胞外Ｉｇ様ドメインからなり、免疫グロブリンスーパーファミリーおよび多重鎖免疫認識受容体（ＭＩＲＲ）ファミリーの両方のメンバーであり、２つのＦｃＲγシグナル伝達鎖と会合することによってシグナル伝達する。
【０１８５】
ＦｃεＲは、ＦｃεＲＩおよびＦｃεＲＩＩを含む。高親和性受容体ＦｃεＲＩは、免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーであり、上皮ランゲルハンス細胞、好酸球、肥満細胞、および好塩基球上で発現され、アレルギー性応答の制御において主要な役割を果たす。ＦｃεＲＩはまた、抗原提示細胞上でも発現され、炎症促進性サイトカインの産生を調節する。低親和性受容体ＦｃεＲＩＩ（ＣＤ２３）は、膜結合型または可溶性受容体として機能し得るＣ型レクチンである。ＦｃεＲＩＩは、Ｂ細胞の増殖および分化を調節し、好酸球、単球、および好塩基球のＩｇＥ結合を遮断する。ある特定のＦｃ領域は、ＦｃεＲＩＩと比較して、ＦｃεＲＩへの結合を増加させる。他のＦｃ領域は、ＦｃεＲＩと比較して、ＦｃεＲＩＩへの結合を増加させる。
以下の表Ｈ６は、ある特定のＦｃＲの特徴付けを要約する。
【表Ｈ６−１】
2020517638.tif 000042
【表Ｈ６−２】
2020517638.tif 000043
【０１８６】
Ｆｃ領域は、ウシ、ヤギ、ブタ、イヌ、マウス、ウサギ、ハムスター、ラット、モルモット、非ヒト霊長類、およびヒトなどの哺乳動物などの脊椎動物を含む、任意の動物の免疫グロブリン分子から誘導され得る。例示的な野生型ヒトＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、およびＩｇＭ免疫グロブリンからのＣＨ２、ＣＨ３、ＣＨ４、およびヒンジ領域のアミノ酸配列を、表Ｈ７中に示す。
【表Ｈ７−１】
2020517638.tif 000044
【表Ｈ７−２】
2020517638.tif 000045
【表Ｈ７−３】
2020517638.tif 000046
【表Ｈ７−４】
2020517638.tif 000047
【表Ｈ７−５】
2020517638.tif 000048
【０１８７】
したがって、ＨＲＳ−ＦｃコンジュゲートのＦｃ領域は、それらのバリアント、断片、ホモログ、オルソログ、パラログ、および組み合わせを含む、表Ｈ７のヒトＦｃ領域アミノ酸配列のうちの１つ以上を含み得るか、それらからなり得るか、または本質的にそれらからなり得る。ある特定の例示的な実施形態は、大きさが約２０〜５０、２０〜１００、２０〜１５０、２０〜２００、２０〜２５０、２０〜３００、２０〜４００、５０〜１００、５０〜１５０、５０〜２００、５０〜２５０、５０〜３００、５０〜４００、１００〜１５０、１００〜２００、１００〜２５０、１００〜３００、１００〜３５０、１００〜４００、２００〜２５０、２００〜３００、２００〜３５０、または２００〜４００アミノ酸長の範囲であるＦｃ領域を含み、任意に、表Ｈ７中の配列のうちの任意の１つ以上を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。ある特定の実施形態は、最大約５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、３００、３５０、４００またはそれ以上のアミノ酸のＦｃ領域を含み、任意に、表Ｈ７中の配列のうちの任意の１つ以上を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。
【０１８８】
ある特定のＦｃ領域は、それらの組み合わせ、ならびにそれらのバリアントおよび断片を含む、Ｎ末端からＣ末端へと読む任意の順序で、表Ｈ７のヒトＩｇＡ１配列を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。ある特定のＦｃ領域は、表Ｈ７のヒトＩｇＡ１配列を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。ある特定のＦｃ領域は、表Ｈ７のヒトＩｇＡ１配列を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。ある特定のＦｃ領域は、表Ｈ７のヒトＩｇＡ１配列を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。
【０１８９】
いくつかのＦｃ領域は、それらの組み合わせ、ならびにそれらのバリアントおよび断片を含む、Ｎ末端からＣ末端へと読む任意の順序で、表Ｈ７のヒトＩｇＡ２配列を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。ある特定のＦｃ領域は、表Ｈ７のヒトＩｇＡ２配列を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。ある特定のＦｃ領域は、表Ｈ７のヒトＩｇＡ２配列を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。ある特定のＦｃ領域は、表Ｈ７のヒトＩｇＡ２配列を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。
【０１９０】
ある特定のＦｃ領域は、それらの組み合わせ、ならびにこれらの配列および組み合わせのバリアントおよび断片を含む、Ｎ末端からＣ末端へと読む任意の順序で、表Ｈ７のヒトＩｇＤ配列を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。ある特定のＦｃ領域は、それらの組み合わせ、ならびにこれらの配列および組み合わせのバリアントおよび断片を含む、Ｎ末端からＣ末端へと読む任意の順序で、表Ｈ７のヒトＩｇＥ配列を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。ある特定のＦｃ領域は、それらの組み合わせ、ならびにこれらの配列および組み合わせのバリアントおよび断片を含む、Ｎ末端からＣ末端へと読む任意の順序で、表Ｈ７のヒトＩｇＧ１配列を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。ある特定のＦｃ領域は、それらの組み合わせを含む、Ｎ末端からＣ末端へと読む任意の順序で、表Ｈ７のヒトＩｇＧ２配列を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。ある特定のＦｃ領域は、それらの組み合わせを含む、Ｎ末端からＣ末端へと読む任意の順序で、表Ｈ７のヒトＩｇＧ３配列を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。ある特定のＦｃ領域は、それらの組み合わせを含む、Ｎ末端からＣ末端へと読む任意の順序で、表Ｈ７のヒトＩｇＧ４配列を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。ある特定のＦｃ領域は、それらの組み合わせ、ならびにこれらの配列および組み合わせのバリアントおよび断片を含む、Ｎ末端からＣ末端へと読む任意の順序で、表Ｈ７のヒトＩｇＭ配列を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。
【０１９１】
例示的なＨＲＳ−Ｆｃ融合コンジュゲートを、以下の表Ｈ８中に提供する。
【表Ｈ８−１】
2020517638.tif 000049
【表Ｈ８−２】
2020517638.tif 000050
【表Ｈ８−３】
2020517638.tif 000051
【表Ｈ８−４】
2020517638.tif 000052
【表Ｈ８−５】
2020517638.tif 000053
【表Ｈ８−６】
2020517638.tif 000054
【０１９２】
したがって、ある特定の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、融合しているか、またはそうでなければＦｃ領域にコンジュゲート化されているか、または表Ｈ８中のアミノ酸配列（配列番号１５７〜１７２）またはそれらの活性バリアントもしくは断片を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。いくつかの実施形態では、発現可能なポリヌクレオチドは、表Ｈ８中のアミノ酸配列（例えば、配列番号１５７〜１７２）またはそれらの活性バリアントもしくは断片を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなるＨＲＳポリペプチドをコードする。
【０１９３】
上述のように、ある特定の実施形態は、本明細書に記載され、当該技術分野で公知のＦｃ領域の、バリアント、断片、ハイブリッド、および／またはそうでなければ改変された形態を使用する。表Ｈ７または表Ｈ８の参照配列のうちの任意の１つ以上などの参照配列と比較して、１つ以上のアミノ酸の置換、挿入、欠失、および／または短縮を有するバリアントが含まれる。ポリペプチドおよびポリヌクレオチドバリアントは、本明細書の他の箇所に記載されている。
【０１９４】
ハイブリッドＦｃ領域、例えば、異なる種、異なるＩｇクラス、および／または異なるＩｇサブクラスの免疫グロブリンからのＦｃドメイン（例えば、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３、ＣＨ４）の組み合わせを含むＦｃ領域である。一般の例には、ＣＨ２／ＣＨ３ドメインの以下の組み合わせ：ＩｇＡ１／ＩｇＡ１、ＩｇＡ１／ＩｇＡ２、ＩｇＡ１／ＩｇＤ、ＩｇＡ１／ＩｇＥ、ＩｇＡ１／ＩｇＧ１、ＩｇＡ１／ＩｇＧ２、ＩｇＡ１／ＩｇＧ３、ＩｇＡ１／ＩｇＧ４、ＩｇＡ１／ＩｇＭ、ＩｇＡ２／ＩｇＡ１、ＩｇＡ２／ＩｇＡ２、ＩｇＡ２／ＩｇＤ、ＩｇＡ２／ＩｇＥ、ＩｇＡ２／ＩｇＧ１、ＩｇＡ２／ＩｇＧ２、ＩｇＡ２／ＩｇＧ３、ＩｇＡ２／ＩｇＧ４、ＩｇＡ２／ＩｇＭ、ＩｇＤ／ＩｇＡ１、ＩｇＤ／ＩｇＡ２、ＩｇＤ／ＩｇＤ、ＩｇＤ／ＩｇＥ、ＩｇＤ／ＩｇＧ１、ＩｇＤ／ＩｇＧ２、ＩｇＤ／ＩｇＧ３、ＩｇＤ／ＩｇＧ４、ＩｇＤ／ＩｇＭ、ＩｇＥ／ＩｇＡ１、ＩｇＥ／ＩｇＡ２、ＩｇＥ／ＩｇＤ、ＩｇＥ／ＩｇＥ、ＩｇＥ／ＩｇＧ１、ＩｇＥ／ＩｇＧ２、ＩｇＥ／ＩｇＧ３、ＩｇＥ／ＩｇＧ４、ＩｇＥ／ＩｇＭ、ＩｇＧ１／ＩｇＡ１、ＩｇＧ１／ＩｇＡ２、ＩｇＧ１／ＩｇＤ、ＩｇＧ１／ＩｇＥ、ＩｇＧ１／ＩｇＧ１、ＩｇＧ１／ＩｇＧ２、ＩｇＧ１／ＩｇＧ３、ＩｇＧ１／ＩｇＧ４、ＩｇＧ１／ＩｇＭ、ＩｇＧ２／ＩｇＡ１、ＩｇＧ２／ＩｇＡ２、ＩｇＧ２／ＩｇＤ、ＩｇＧ２／ＩｇＥ、ＩｇＧ２／ＩｇＧ１、ＩｇＧ２／ＩｇＧ２、ＩｇＧ２／ＩｇＧ３、ＩｇＧ２／ＩｇＧ４、ＩｇＧ２／ＩｇＭ、ＩｇＧ３／ＩｇＡ１、ＩｇＧ３／ＩｇＡ２、ＩｇＧ３／ＩｇＤ、ＩｇＧ３／ＩｇＥ、ＩｇＧ３／ＩｇＧ１、ＩｇＧ３／ＩｇＧ２、ＩｇＧ３／ＩｇＧ３、ＩｇＧ３／ＩｇＧ４、ＩｇＧ３／ＩｇＭ、ＩｇＧ４／ＩｇＡ１、ＩｇＧ４／ＩｇＡ２、ＩｇＧ４／ＩｇＤ、ＩｇＧ４／ＩｇＥ、ＩｇＧ４／ＩｇＧ１、ＩｇＧ４／ＩｇＧ２、ＩｇＧ４／ＩｇＧ３、ＩｇＧ４／ＩｇＧ４、ＩｇＧ４／ＩｇＭ、ＩｇＭ／ＩｇＡ１、ＩｇＭ／ＩｇＡ２、ＩｇＭ／ＩｇＤ、ＩｇＭ／ＩｇＥ、ＩｇＭ／ＩｇＧ１、ＩｇＭ／ＩｇＧ２、ＩｇＭ／ＩｇＧ３、ＩｇＭ／ＩｇＧ４、ＩｇＭ／ＩｇＭ（またはそれらの断片もしくはバリアント）を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなり、任意に、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、もしくはＩｇＧ４のうちの１つ以上からのヒンジ、ならびに／またはＩｇＥおよび／またはＩｇＭからのＣＨ４ドメインを含む、ハイブリッドＦｃ領域が含まれる。特定の実施形態では、このヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４ドメインは、ヒトＩｇからのものである。
【０１９５】
さらなる例には、ＣＨ２／ＣＨ４ドメインの以下の組み合わせ：ＩｇＡ１／ＩｇＥ、ＩｇＡ２／ＩｇＥ、ＩｇＤ／ＩｇＥ、ＩｇＥ／ＩｇＥ、ＩｇＧ１／ＩｇＥ、ＩｇＧ２／ＩｇＥ、ＩｇＧ３／ＩｇＥ、ＩｇＧ４／ＩｇＥ、ＩｇＭ／ＩｇＥ、ＩｇＡ１／ＩｇＭ、ＩｇＡ２／ＩｇＭ、ＩｇＤ／ＩｇＭ、ＩｇＥ／ＩｇＭ、ＩｇＧ１／ＩｇＭ、ＩｇＧ２／ＩｇＭ、ＩｇＧ３／ＩｇＭ、ＩｇＧ４／ＩｇＭ、ＩｇＭ／ＩｇＭ（またはそれらの断片もしくはバリアント）を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなり、任意に、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４のうちの１つ以上からのヒンジ、および／またはＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、もしくはＩｇＭのうちの１つ以上からのＣＨ３ドメインを含む、ハイブリッドＦｃ領域が含まれる。特定の実施形態では、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４ドメインは、ヒトＩｇからのものである。
【０１９６】
ある特定の例には、ＣＨ３／ＣＨ４ドメインの以下の組み合わせ：ＩｇＡ１／ＩｇＥ、ＩｇＡ２／ＩｇＥ、ＩｇＤ／ＩｇＥ、ＩｇＥ／ＩｇＥ、ＩｇＧ１／ＩｇＥ、ＩｇＧ２／ＩｇＥ、ＩｇＧ３／ＩｇＥ、ＩｇＧ４／ＩｇＥ、ＩｇＭ／ＩｇＥ、ＩｇＡ１／ＩｇＭ、ＩｇＡ２／ＩｇＭ、ＩｇＤ／ＩｇＭ、ＩｇＥ／ＩｇＭ、ＩｇＧ１／ＩｇＭ、ＩｇＧ２／ＩｇＭ、ＩｇＧ３／ＩｇＭ、ＩｇＧ４／ＩｇＭ、ＩｇＭ／ＩｇＭ（またはそれらの断片もしくはバリアント）を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなり、任意に、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４のうちの１つ以上からのヒンジ、および／またはＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、もしくはＩｇＭのうちの１つ以上からのＣＨ２ドメインを含む、ハイブリッドＦｃ領域が含まれる。特定の実施形態では、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４ドメインは、ヒトＩｇからのものである。
【０１９７】
特定の例は、ヒンジ／ＣＨ２ドメインの以下の組み合わせ：ＩｇＡ１／ＩｇＡ１、ＩｇＡ１／ＩｇＡ２、ＩｇＡ１／ＩｇＤ、ＩｇＡ１／ＩｇＥ、ＩｇＡ１／ＩｇＧ１、ＩｇＡ１／ＩｇＧ２、ＩｇＡ１／ＩｇＧ３、ＩｇＡ１／ＩｇＧ４、ＩｇＡ１／ＩｇＭ、ＩｇＡ２／ＩｇＡ１、ＩｇＡ２／ＩｇＡ２、ＩｇＡ２／ＩｇＤ、ＩｇＡ２／ＩｇＥ、ＩｇＡ２／ＩｇＧ１、ＩｇＡ２／ＩｇＧ２、ＩｇＡ２／ＩｇＧ３、ＩｇＡ２／ＩｇＧ４、ＩｇＡ２／ＩｇＭ、ＩｇＤ／ＩｇＡ１、ＩｇＤ／ＩｇＡ２、ＩｇＤ／ＩｇＤ、ＩｇＤ／ＩｇＥ、ＩｇＤ／ＩｇＧ１、ＩｇＤ／ＩｇＧ２、ＩｇＤ／ＩｇＧ３、ＩｇＤ／ＩｇＧ４、ＩｇＤ／ＩｇＭ、ＩｇＧ１／ＩｇＡ１、ＩｇＧ１／ＩｇＡ２、ＩｇＧ１／ＩｇＤ、ＩｇＧ１／ＩｇＥ、ＩｇＧ１／ＩｇＧ１、ＩｇＧ１／ＩｇＧ２、ＩｇＧ１／ＩｇＧ３、ＩｇＧ１／ＩｇＧ４、ＩｇＧ１／ＩｇＭ、ＩｇＧ２／ＩｇＡ１、ＩｇＧ２／ＩｇＡ２、ＩｇＧ２／ＩｇＤ、ＩｇＧ２／ＩｇＥ、ＩｇＧ２／ＩｇＧ１、ＩｇＧ２／ＩｇＧ２、ＩｇＧ２／ＩｇＧ３、ＩｇＧ２／ＩｇＧ４、ＩｇＧ２／ＩｇＭ、ＩｇＧ３／ＩｇＡ１、ＩｇＧ３／ＩｇＡ２、ＩｇＧ３／ＩｇＤ、ＩｇＧ３／ＩｇＥ、ＩｇＧ３／ＩｇＧ１、ＩｇＧ３／ＩｇＧ２、ＩｇＧ３／ＩｇＧ３、ＩｇＧ３／ＩｇＧ４、ＩｇＧ３／ＩｇＭ、ＩｇＧ４／ＩｇＡ１、ＩｇＧ４／ＩｇＡ２、ＩｇＧ４／ＩｇＤ、ＩｇＧ４／ＩｇＥ、ＩｇＧ４／ＩｇＧ１、ＩｇＧ４／ＩｇＧ２、ＩｇＧ４／ＩｇＧ３、ＩｇＧ４／ＩｇＧ４、ＩｇＧ４／ＩｇＭ（またはそれらの断片もしくはバリアント）を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなり、任意に、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、もしくはＩｇＭのうちの１つ以上からのＣＨ３ドメイン、ならびに／またはＩｇＥおよび／もしくはＩｇＭからのＣＨ４ドメインを含む、ハイブリッドＦｃ領域が含まれる。特定の実施形態では、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４ドメインは、ヒトＩｇからのものである。
【０１９８】
ある特定の例には、ヒンジ／ＣＨ３ドメインの以下の組み合わせ：ＩｇＡ１／ＩｇＡ１、ＩｇＡ１／ＩｇＡ２、ＩｇＡ１／ＩｇＤ、ＩｇＡ１／ＩｇＥ、ＩｇＡ１／ＩｇＧ１、ＩｇＡ１／ＩｇＧ２、ＩｇＡ１／ＩｇＧ３、ＩｇＡ１／ＩｇＧ４、ＩｇＡ１／ＩｇＭ、ＩｇＡ２／ＩｇＡ１、ＩｇＡ２／ＩｇＡ２、ＩｇＡ２／ＩｇＤ、ＩｇＡ２／ＩｇＥ、ＩｇＡ２／ＩｇＧ１、ＩｇＡ２／ＩｇＧ２、ＩｇＡ２／ＩｇＧ３、ＩｇＡ２／ＩｇＧ４、ＩｇＡ２／ＩｇＭ、ＩｇＤ／ＩｇＡ１、ＩｇＤ／ＩｇＡ２、ＩｇＤ／ＩｇＤ、ＩｇＤ／ＩｇＥ、ＩｇＤ／ＩｇＧ１、ＩｇＤ／ＩｇＧ２、ＩｇＤ／ＩｇＧ３、ＩｇＤ／ＩｇＧ４、ＩｇＤ／ＩｇＭ、ＩｇＧ１／ＩｇＡ１、ＩｇＧ１／ＩｇＡ２、ＩｇＧ１／ＩｇＤ、ＩｇＧ１／ＩｇＥ、ＩｇＧ１／ＩｇＧ１、ＩｇＧ１／ＩｇＧ２、ＩｇＧ１／ＩｇＧ３、ＩｇＧ１／ＩｇＧ４、ＩｇＧ１／ＩｇＭ、ＩｇＧ２／ＩｇＡ１、ＩｇＧ２／ＩｇＡ２、ＩｇＧ２／ＩｇＤ、ＩｇＧ２／ＩｇＥ、ＩｇＧ２／ＩｇＧ１、ＩｇＧ２／ＩｇＧ２、ＩｇＧ２／ＩｇＧ３、ＩｇＧ２／ＩｇＧ４、ＩｇＧ２／ＩｇＭ、ＩｇＧ３／ＩｇＡ１、ＩｇＧ３／ＩｇＡ２、ＩｇＧ３／ＩｇＤ、ＩｇＧ３／ＩｇＥ、ＩｇＧ３／ＩｇＧ１、ＩｇＧ３／ＩｇＧ２、ＩｇＧ３／ＩｇＧ３、ＩｇＧ３／ＩｇＧ４、ＩｇＧ３／ＩｇＭ、ＩｇＧ４／ＩｇＡ１、ＩｇＧ４／ＩｇＡ２、ＩｇＧ４／ＩｇＤ、ＩｇＧ４／ＩｇＥ、ＩｇＧ４／ＩｇＧ１、ＩｇＧ４／ＩｇＧ２、ＩｇＧ４／ＩｇＧ３、ＩｇＧ４／ＩｇＧ４、ＩｇＧ４／ＩｇＭ（またはそれらの断片もしくはバリアント）を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなり、任意に、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、もしくはＩｇＭのうちの１つ以上からのＣＨ２ドメイン、ならびに／またはＩｇＥおよび／もしくはＩｇＭからのＣＨ４ドメインを含む、ハイブリッドＦｃ領域が含まれる。特定の実施形態では、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４ドメインは、ヒトＩｇからのものである。
【０１９９】
いくつかの例には、ヒンジ／ＣＨ４ドメインの以下の組み合わせ：ＩｇＡ１／ＩｇＥ、ＩｇＡ１／ＩｇＭ、ＩｇＡ２／ＩｇＥ、ＩｇＡ２／ＩｇＭ、ＩｇＤ／ＩｇＥ、ＩｇＤ／ＩｇＭ、ＩｇＧ１／ＩｇＥ、ＩｇＧ１／ＩｇＭ、ＩｇＧ２／ＩｇＥ、ＩｇＧ２／ＩｇＭ、ＩｇＧ３／ＩｇＥ、ＩｇＧ３／ＩｇＭ、ＩｇＧ４／ＩｇＥ、ＩｇＧ４／ＩｇＭ（またはそれらの断片もしくはバリアント）を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなり、任意に、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、もしくはＩｇＭのうちの１つ以上からのＣＨ２ドメイン、ならびに／またはＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、もしくはＩｇＭのうちの１つ以上からのＣＨ３ドメインを含む、ハイブリッドＦｃ領域が含まれる。
【０２００】
ＩｇＧサブクラスの組み合わせまたはヒトＩｇＤおよびＩｇＧの組み合わせから誘導される、ハイブリッドＦｃ領域の特定の例は、例えば、ＷＯ２００８／１４７１４３において見出され得る。
【０２０１】
誘導体化またはそうでなければ改変されたＦｃ領域もまた、含まれる。ある特定の態様では、Ｆｃ領域は、例えば、野生型または天然に存在するＦｃ領域と比較して、リン酸化、硫酸化、アクリル化、グリコシル化、メチル化、ファルネシル化、アセチル化、アミド化などによって修飾され得る。ある特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、野生型もしくは天然のグリコシル化パターンを含み得るか、またはあるいは、天然形態と比較して増加したグリコシル化、天然形態と比較して減少したグリコシル化を含み得るか、または完全に脱グリコシル化され得る。改変されたＦｃグリコフォームの一例として、Ｆｃ領域の減少したグリコシル化は、第１の補体成分Ｃ１のＣ１ｑ領域への結合、ＡＤＣＣ関連活性における減少、および／またはＣＤＣ関連活性における減少を低減させる。したがって、ある特定の実施形態は、脱グリコシル化されたまたは非グリコシル化されたＦｃ領域を使用する。例示的な非グリコシル化されたＦｃ領域の生成については、例えば、ＷＯ２００５／０４７３３７を参照のこと。Ｆｃ領域グリコフォームの別の例は、Ｋａｂａｔらの番号付け系に従って、Ｑ２９５位をシステイン残基で置換することによって（例えば、米国特許出願第２０１０／００８０７９４号を参照のこと）生成され得る。ある特定の実施形態は、Ｆｃ領域中の糖タンパク質の約８０〜１００％がフルクトースを欠く成熟コア炭水化物構造を含む、Ｆｃ領域を含み得る（例えば、米国特許出願第２０１０／０２５５０１３号を参照のこと）。いくつかの実施形態は、例えば、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩａ、もしくはＦｃγＲＩＩＩａに対する親和性を増加させるためおよび／またはＦｃγＲＩＩａ発現細胞による食作用を改善するために、フコシル化のレベルを低減させるために置換または欠失によって最適化されたＦｃ領域を含み得る（米国特許出願第２０１０／０２４９３８２号および米国特許出願第２００７／０１４８１７０号を参照のこと）。
【０２０２】
改変されたＦｃグリコフォームの別の例として、Ｆｃ領域は、オリゴマンノース型Ｎ−グリカンを含み得、任意に、以下のうちの１つ以上を有する：複合型Ｎ−グリカンを含む対応するＦｃ領域またはＨＲＳ−Ｆｃコンジュゲートと比較して、増加したＡＤＣＣ活性、ＦｃγＲＩＩＩＡ（およびある特定の他のＦｃＲ）に対する増加した結合親和性、ＨＲＳポリペプチドの標的に対する類似のもしくは増加した結合特異性、ＨＲＳポリペプチドの標的に対する類似のもしくはより高い結合親和性、および／またはマンノース受容体に対する類似のもしくはより低い結合親和性（例えば、米国特許出願第２００７／００９２５２１号および米国特許第７，７００，３２１号を参照のこと）。別の例として、ＦｃγＲに対するＦｃ領域の増強された親和性は、操作されたまたはバリアント細胞株における抗体の発現によって生成される操作されたグリコフォームを使用して達成されている（例えば、Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７：１７６−１８０、１９９９、Ｄａｖｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｅｎｇ．７４：２８８−２９４，２００１、Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  ＢｉｏｌＣｈｅｍ．２７７：２６７３３−２６７４０，２００２、Ｓｈｉｎｋａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｊ  ＢｉｏｌＣｈｅｍ．２７８：３４６６−３４７３，２００３、および米国特許出願第２００７／０１１１２８１号を参照のこと）。ある特定のＦｃ領域グリコフォームは、糖鎖の還元末端においてＮ−アセチルグルコサミンの６位に結合したフコースの１位を有さない、Ｎ−グリコシド結合型複合糖鎖の増加した割合を含む（例えば、米国特許出願第２０１０／００９２９９７号を参照のこと）。特定の実施形態は、α−２，６結合によってそれぞれの末端シアル酸部分に接続された少なくとも１つのガラクトース部分によってグリコシル化されたＩｇＧのＦｃ領域を含み得、任意に、このＦｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ領域と比較して、より高い抗炎症活性を有する（米国特許出願第２００８／０２０６２４６号を参照のこと）。これらおよび関連の変更されたグリコシル化アプローチのある特定のものは、本明細書に記載するように、Ｆｃ領域がＦｃγＲＩＩＩなどのＦｃＲに選択的に結合する能力、ＡＤＣＣを媒介する能力、およびＦｃ領域の他の特性を変更する能力の、実質的な増強を生じている。
【０２０３】
ある特定のバリアント、断片、ハイブリッド、またはそうでなければ改変されたＦｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ配列（例えば、同じ種、同じＩｇクラス、同じＩｇサブクラス）と比較して、１つ以上のＦｃＲに対する変更された結合を有し得る。例えば、かかるＦｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ配列と比較して、Ｆｃγ受容体、Ｆｃα受容体、Ｆｃε受容体、および／または新生児Ｆｃ受容体のうちの１つ以上に対する増加した結合を有し得る。他の実施形態では、バリアント、断片、ハイブリッド、または改変されたＦｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ配列と比較して、Ｆｃγ受容体、Ｆｃα受容体、Ｆｃε受容体、および／または新生児Ｆｃ受容体のうちの１つ以上に対する減少した結合を有し得る。特異的ＦｃＲは、本明細書の他の箇所に記載されている。
【０２０４】
変更された（例えば、増加した、減少した）ＦｃＲ結合を有するＦｃバリアントの具体的な例は、例えば、米国特許第５，６２４，８２１号および同第７，４２５，６１９号、米国特許出願第２００９／００１７０２３号、同第２００９／００１０９２１号、および同第２０１０／０２０３０４６号、ならびにＷＯ２０００／４２０７２およびＷＯ２００４／０１６７５０に見出され得る。ある特定の例は、活性化受容体ＦｃγＲＩＩＩａに対する結合を増加させることおよび阻害受容体ＦｃγＲＩＩｂに対する結合を低減させることが示されている、２９８位、３３３位、および／または３３４位における１つ以上の置換、例えば、Ｓ２９８Ａ、Ｅ３３３Ａ、および／またはＫ３３４Ａ（ＫａｂａｔらのＥＵ指標の番号付けに基づく）を有するヒトＦｃ領域が含まれる。これらの変異は、ＦｃＲに対する結合におけるさらなる改善を有する二重変異および三重変異バリアントを得るために、組み合わされ得る。ある特定の実施形態は、ＦｃγＲＩＩＩａに対する増加した結合、ＦｃγＲＩＩｂに対する減少した結合、および増加したＡＤＣＣを有する、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ三重変異体を含む（例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  ＢｉｏｌＣｈｅｍ．２７６：６５９１−６６０４，２００１およびＰｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  Ｔｒａｎｓ．３０：４８７−４９０，２００２を参照のこと）。Ｕｍａｎａら、上記；および米国特許第７，６６２，９２５号に開示されるような、ＦｃＲに対する増加した結合を有する操作されたＦｃグリコフォームもまた参照のこと。いくつかの実施形態は、ＫａｂａｔらのＥＵ指標の番号付けに基づく、４３４Ｓ、２５２Ｙ／４２８Ｌ、２５２Ｙ／４３４Ｓ、および４２８Ｌ／４３４Ｓ（米国特許出願第２００９／０１６３６９９号および同第２００６／０１７３１７０号を参照のこと）から選択される１つ以上の置換を含むＦｃ領域を含む。
【０２０５】
ある特定のバリアント、断片、ハイブリッド、または改変されたＦｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ配列と比較して、変更されたエフェクター機能を有し得る。例えば、かかるＦｃ領域は、増加した補体結合もしくは活性化、増加したＣｌｑ結合親和性、増加したＣＤＣ関連活性、増加したＡＤＣＣ関連活性および／または増加したＡＤＣＰ関連活性を有し得る。他の実施形態では、かかるＦｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ配列と比較して、減少した補体結合もしくは活性化、減少したＣｌｑ結合親和性、減少したＣＤＣ関連活性、減少したＡＤＣＣ関連活性および／または減少したＡＤＣＰ関連活性を有し得る。単なる例示的な一例として、Ｆｃ領域は、Ｃ１ｑ結合部位などの補体結合部位における欠失もしくは置換および／またはＡＤＣＣ部位における欠失もしくは置換を含み得る。かかる欠失／置換の例は、例えば、米国特許第７，０３０，２２６号に記載されている。ＡＤＣＣなどの多くのＦｃエフェクター機能は、当該技術分野における慣用的な技術に従ってアッセイされ得る（例えば、Ｚｕｃｋｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ  Ｒｅｖ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．７：１−２６，１９７８を参照のこと）。かかるアッセイのために有用なエフェクター細胞としては、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、および他の末梢血単核球細胞（ＰＢＭＣ）が挙げられるが、これらに限定されない。あるいは、またはさらに、ある特定のＦｃエフェクター機能は、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．ＰＮＡＳ．９５：６５２−６５６，１９９８に記載される動物モデルを使用することによって、インビボで評価され得る。
【０２０６】
ある特定のバリアントハイブリッドまたは改変されたＦｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ配列と比較して、変更された安定性または半減期を有し得る。ある特定の実施形態では、かかるＦｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ配列と比較して、増加した半減期を有し得る。他の実施形態では、バリアントハイブリッドまたは改変されたＦｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ配列と比較して、減少した半減期を有し得る。半減期は、放射標識、ＥＬＩＳＡ、または他の方法などの、当該技術分野における慣用的な技術に従って、インビトロ（例えば、生理学的条件下）またはインビボで測定され得る。安定性または半減期のインビボ測定は、血液、血清、血漿、尿、もしくは脳脊髄液を含む１つ以上の体液、または所与の組織、例えば、肝臓、腎臓、筋肉、中枢神経系組織、骨などにおいて測定され得る。一例として、ＦｃＲｎに結合するその能力を変更するＦｃ領域への改変は、その半減期をインビボで変更し得る。インビボ薬物動態学的特性（例えば、インビボ平均排出半減期）を測定するためのアッセイ、およびＦｃＲｎに対するその結合を変更するＦｃ改変の非限定的な例は、例えば、米国特許第７，２１７，７９７号および同第７，７３２，５７０号；ならびに米国特許出願第２０１０／０１４３２５４号および同第２０１０／０１４３２５４号に記載されている。
【０２０７】
安定性または半減期を変更するための改変のさらなる非限定的な例には、Ｋａｂａｔらの番号付け系に従って、ＣＨ２ドメイン中の２５１〜２５６、２８５〜２９０、および３０８〜３１４、ならびにＣＨ３ドメイン中の３８５〜３８９および４２８〜４３６から選択されるアミノ酸残基のうちの１つ以上における、置換／欠失が含まれる。米国特許出願第２００３／０１９０３１１号を参照のこと。具体的な例には、任意のそれらの組み合わせを含め、２５１位におけるロイシンによる置換、２５２位におけるチロシン、トリプトファン、もしくはフェニルアラニンによる置換、２５４位におけるスレオニンもしくはセリンによる置換、２５５位におけるアルギニンによる置換、２５６位におけるグルタミン、アルギニン、セリン、スレオニン、もしくはグルタミン酸塩による置換、３０８位におけるスレオニンによる置換、３０９位におけるプロリンによる置換、３１１位におけるセリンによる置換、３１２位におけるアスパラギン酸塩による置換、３１４位におけるロイシンによる置換、３８５位におけるアルギニン、アスパラギン酸塩、もしくはセリンによる置換、３８６位におけるスレオニンもしくはプロリンによる置換、３８７位におけるアルギニンもしくはプロリンによる置換、３８９位におけるプロリン、アスパラギン、もしくはセリンによる置換、４２８位におけるメチオニンもしくはスレオニンによる置換、４３４位におけるチロシンもしくはフェニルアラニンによる置換、４３３位におけるヒスチジン、アルギニン、リジン、もしくはセリンによる置換、および／または４３６位におけるヒスチジン、チロシン、アルギニン、もしくはスレオニンによる置換、が含まれる。かかる改変は、任意に、対応する野生型Ｆｃ領域と比較して、ＦｃＲｎに対するＦｃ領域の親和性を増加させ、それによって半減期を増加させる。
【０２０８】
ある特定のバリアントハイブリッドまたは改変されたＦｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ配列と比較して、変更された溶解度を有し得る。ある特定の実施形態では、かかるＦｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ配列と比較して、増加した溶解度を有し得る。他の実施形態では、バリアントハイブリッドまたは改変されたＦｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ配列と比較して、減少した溶解度を有し得る。溶解度は、当該技術分野における慣用的な技術に従って、例えば、インビトロ（例えば、生理学的条件下）で測定され得る。例示的な溶解度測定は、本明細書の他の箇所に記載されている。
【０２０９】
バリアントのさらなる例には、重鎖の２５０位、３１４位、もしくは４２８位のうちの１つ以上またはそれらの任意の組み合わせ、例えば、２５０位および４２８位、もしくは２５０位および３１４位、または３１４位および４２８位、または２５０位、３１４位、および４２８位において、保存的または非保存的置換（本明細書の他の箇所に記載されている）を有するＩｇＧのＦｃ領域が含まれる（例えば、米国特許出願第２０１１／０１８３４１２号を参照のこと）。特定の実施形態では、２５０位における残基は、グルタミン酸もしくはグルタミンで置換され、および／または４２８位における残基は、ロイシンもしくはフェニルアラニンで置換される。ＩｇＧのＦｃバリアントの別の例示的な例として、２１４〜２３８位、２９７〜２９９位、３１８〜３２２位、および／または３２７〜３３１位におけるアミノ酸残基のうちの任意の１つ以上は、改変（例えば、保存的または非保存的置換、欠失）のための適切な標的として使用され得る。特定の実施形態では、ＩｇＧのＦｃバリアントのＣＨ２ドメインは、Ｆｃ領域のエフェクター機能を減弱させるために、２２８、２３４、２３５、および／または３３１位においてアミノ酸置換を含む（例えば、Ｓｅｒ２２８ＰｒｏおよびＬｅｕ２３５Ａｌａ変異を有するヒトＩｇＧ４）（米国特許第７，０３０，２２６号を参照のこと）。ここで、重鎖中の残基の番号付けは、ＥＵ指標の番号付けである（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，”５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）を参照のこと）。これらおよび関連の実施形態のうちのある特定のものは、任意に、ＡＤＣＣ関連活性またはＣＤＣ関連活性などのエフェクター機能の低減を伴わずに、ＦｃＲｎ結合および／または血清半減を変更（例えば、増加、減少）させている。
【０２１０】
さらなる例には、野生型Ｆｃ領域の２７９位、３４１位、３４３位、もしくは３７３位またはそれらの任意の組み合わせにおいて、１つ以上のアミノ酸置換を含むバリアントＦｃ領域が含まれる（例えば、米国特許出願２００７／０２２４１８８号を参照のこと）。ヒトＩｇＧについてこれらの位置における野生型アミノ酸残基は、バリン（２７９）、グリシン（３４１）、プロリン（３４３）、およびチロシン（３７３）である。置換は、保存的もしくは非保存的であり得るか、または本明細書に記載される、天然に存在しないアミノ酸もしくは模倣体を含み得る。単独でまたはこれらの置換と組み合わせて、ある特定の実施形態は、以下から選択される少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上のアミノ酸置換を含むバリアントＦｃ領域もまた使用し得る：２３５Ｇ、２３５Ｒ、２３６Ｆ、２３６Ｒ、２３６Ｙ、２３７Ｋ、２３７Ｎ、２３７Ｒ、２３８Ｅ、２３８Ｇ、２３８Ｈ、２３８Ｉ、２３８Ｌ、２３８Ｖ、２３８Ｗ、２３８Ｙ、２４４Ｌ、２４５Ｒ、２４７Ａ、２４７Ｄ、２４７Ｅ、２４７Ｆ、２４７Ｍ、２４７Ｎ、２４７Ｑ、２４７Ｒ、２４７Ｓ、２４７Ｔ、２４７Ｗ、２４７Ｙ、２４８Ｆ、２４８Ｐ、２４８Ｑ、２４８Ｗ、２４９Ｌ、２４９Ｍ、２４９Ｎ、２４９Ｐ、２４９Ｙ、２５１Ｈ、２５１Ｉ、２５１Ｗ、２５４Ｄ、２５４Ｅ、２５４Ｆ、２５４Ｇ、２５４Ｈ、２５４Ｉ、２５４Ｋ、２５４Ｌ、２５４Ｍ、２５４Ｎ、２５４Ｐ、２５４Ｑ、２５４Ｒ、２５４Ｖ、２５４Ｗ、２５４Ｙ、２５５Ｋ、２５５Ｎ、２５６Ｈ、２５６Ｉ、２５６Ｋ、２５６Ｌ、２５６Ｖ、２５６Ｗ、２５６Ｙ、２５７Ａ、２５７Ｉ、２５７Ｍ、２５７Ｎ、２５７Ｓ、２５８Ｄ、２６０Ｓ、２６２Ｌ、２６４Ｓ、２６５Ｋ、２６５Ｓ、２６７Ｈ、２６７Ｉ、２６７Ｋ、２６８Ｋ、２６９Ｎ、２６９Ｑ、２７１Ｔ、２７２Ｈ、２７２Ｋ、２７２Ｌ、２７２Ｒ、２７９Ａ、２７９Ｄ、２７９Ｆ、２７９Ｇ、２７９Ｈ、２７９Ｉ、２７９Ｋ、２７９Ｌ、２７９Ｍ、２７９Ｎ、２７９Ｑ、２７９Ｒ、２７９Ｓ、２７９Ｔ、２７９Ｗ、２７９Ｙ、２８０Ｔ、２８３Ｆ、２８３Ｇ、２８３Ｈ、２８３Ｉ、２８３Ｋ、２８３Ｌ、２８３Ｍ、２８３Ｐ、２８３Ｒ、２８３Ｔ、２８３Ｗ、２８３Ｙ、２８５Ｎ、２８６Ｆ、２８８Ｎ、２８８Ｐ、２９２Ｅ、２９２Ｆ、２９２Ｇ、２９２Ｉ、２９２Ｌ、２９３Ｓ、２９３Ｖ、３０１Ｗ、３０４Ｅ、３０７Ｅ、３０７Ｍ、３１２Ｐ、３１５Ｆ、３１５Ｋ、３１５Ｌ、３１５Ｐ、３１５Ｒ、３１６Ｆ、３１６Ｋ、３１７Ｐ、３１７Ｔ、３１８Ｎ、３１８Ｐ、３１８Ｔ、３３２Ｆ、３３２Ｇ、３３２Ｌ、３３２Ｍ、３３２Ｓ、３３２Ｖ、３３２Ｗ、３３９Ｄ、３３９Ｅ、３３９Ｆ、３３９Ｇ、３３９Ｈ、３３９Ｉ、３３９Ｋ、３３９Ｌ、３３９Ｍ、３３９Ｎ、３３９Ｑ、３３９Ｒ、３３９Ｓ、３３９Ｗ、３３９Ｙ、３４１Ｄ、３４１Ｅ、３４１Ｆ、３４１Ｈ、３４１Ｉ、３４１Ｋ、３４１Ｌ、３４１Ｍ、３４１Ｎ、３４１Ｐ、３４１Ｑ、３４１Ｒ、３４１Ｓ、３４１Ｔ、３４１Ｖ、３４１Ｗ、３４１Ｙ、３４３Ａ、３４３Ｄ、３４３Ｅ、３４３Ｆ、３４３Ｇ、３４３Ｈ、３４３Ｉ、３４３Ｋ、３４３Ｌ、３４３Ｍ、３４３Ｎ、３４３Ｑ、３４３Ｒ、３４３Ｓ、３４３Ｔ、３４３Ｖ、３４３Ｗ、３４３Ｙ、３７３Ｄ、３７３Ｅ、３７３Ｆ、３７３Ｇ、３７３Ｈ、３７３Ｉ、３７３Ｋ、３７３Ｌ、３７３Ｍ、３７３Ｎ、３７３Ｑ、３７３Ｒ、３７３Ｓ、３７３Ｔ、３７３Ｖ、３７３Ｗ、３７５Ｒ、３７６Ｅ、３７６Ｆ、３７６Ｇ、３７６Ｈ、３７６Ｉ、３７６Ｌ、３７６Ｍ、３７６Ｎ、３７６Ｐ、３７６Ｑ、３７６Ｒ、３７６Ｓ、３７６Ｔ、３７６Ｖ、３７６Ｗ、３７６Ｙ、３７７Ｇ、３７７Ｋ、３７７Ｐ、３７８Ｎ、３７９Ｎ、３７９Ｑ、３７９Ｓ、３７９Ｔ、３８０Ｄ、３８０Ｎ、３８０Ｓ、３８０Ｔ、３８２Ｄ、３８２Ｆ、３８２Ｈ、３８２Ｉ、３８２Ｋ、３８２Ｌ、３８２Ｍ、３８２Ｎ、３８２Ｐ、３８２Ｑ、３８２Ｒ、３８２Ｓ、３８２Ｔ、３８２Ｖ、３８２Ｗ、３８２Ｙ、３８５Ｅ、３８５Ｐ、３８６Ｋ、４２３Ｎ、４２４Ｈ、４２４Ｍ、４２４Ｖ、４２６Ｄ、４２６Ｌ、４２７Ｎ、４２９Ａ、４２９Ｆ、４２９Ｍ、４３０Ａ、４３０Ｄ、４３０Ｆ、４３０Ｇ、４３０Ｈ、４３０Ｉ、４３０Ｋ、４３０Ｌ、４３０Ｍ、４３０Ｎ、４３０Ｐ、４３０Ｑ、４３０Ｒ、４３０Ｓ、４３０Ｔ、４３０Ｖ、４３０Ｗ、４３０Ｙ、４３１Ｈ、４３１Ｋ、４３１Ｐ、４３２Ｒ、４３２Ｓ、４３８Ｇ、４３８Ｋ、４３８Ｌ、４３８Ｔ、４３８Ｗ、４３９Ｅ、４３９Ｈ、４３９Ｑ、４４０Ｄ、４４０Ｅ、４４０Ｆ、４４０Ｇ、４４０Ｈ、４４０Ｉ、４４０Ｋ、４４０Ｌ、４４０Ｍ、４４０Ｑ、４４０Ｔ、４４０Ｖ、または４４２Ｋ。上記のように、重鎖中の残基の番号付けは、ＥＵ指標の番号付けである（Ｋａｂａｔら、上記を参照のこと）。かかるバリアントＦｃ領域は、典型的には、バリアントＦｃ領域が作動可能に結合されるＨＲＳポリペプチドに、変更されたエフェクター機能または変更された血清半減期を付与する。好ましくは、変更されたエフェクター機能は、かかるアミノ酸置換を欠く対応するＦｃ領域と比較した、ＡＤＣＣにおける増加、ＡＤＣＣにおける減少、ＣＤＣにおける増加、ＣＤＣにおける減少、Ｃｌｑ結合親和性における増加、Ｃｌｑ結合親和性における減少、ＦｃＲ（好ましくはＦｃＲｎ）結合親和性における増加またはＦｃＲ（好ましくはＦｃＲｎ）結合親和性における減少である。
【０２１１】
さらなる例には、２２１位、２２２位、２２４位、２２７位、２２８位、２３０位、２３１位、２２３位、２３３位、２３４位、２３５位、２３６位、２３７位、２３８位、２３９位、２４０位、２４１位、２４３位、２４４位、２４５位、２４６位、２４７位、２４９位、２５０位、２５８位、２６２位、２６３位、２６４位、２６５位、２６６位、２６７位、２６８位、２６９位、２７０位、２７１位、２７２位、２７３位、２７４位、２７５位、２７６位、２７８位、２８０位、２８１位、２８３位、２８５位、２８６位、２８８位、２９０位、２９１位、２９３位、２９４位、２９５位、２９６位、２９７位、２９８位、２９９位、３００位、３０２位、３１３位、３１７位、３１８位、３２０位、３２２位、３２３位、３２４位、３２５位、３２６位、３２７位、３２８位、３２９位、３３０位、３３１位、３３２位、３３３位、３３４位、３３５位  ３３６位、および／または４２８位のうちの１つ以上においてアミノ酸置換を含むバリアントＦｃ領域が含まれる（例えば、米国特許第７，６６２，９２５号を参照のこと）。特定の実施形態では、バリアントＦｃ領域は、Ｐ２３０Ａ、Ｅ２３３Ｄ、Ｌ２３４Ｅ、Ｌ２３４Ｙ、Ｌ２３４Ｉ、Ｌ２３５Ｄ、Ｌ２３５Ｓ、Ｌ２３５Ｙ、Ｌ２３５Ｉ、Ｓ２３９Ｄ、Ｓ２３９Ｅ、Ｓ２３９Ｎ、Ｓ２３９Ｑ、Ｓ２３９Ｔ、Ｖ２４０Ｉ、Ｖ２４０Ｍ、Ｆ２４３Ｌ、Ｖ２６４Ｉ、Ｖ２６４Ｔ、Ｖ２６４Ｙ、Ｖ２６６Ｉ、Ｅ２７２Ｙ、Ｋ２７４Ｔ、Ｋ２７４Ｅ、Ｋ２７４Ｒ、Ｋ２７４Ｌ、Ｋ２７４Ｙ、Ｆ２７５Ｗ、Ｎ２７６Ｌ、Ｙ２７８Ｔ、Ｖ３０２Ｉ、Ｅ３１８Ｒ、Ｓ３２４Ｄ、Ｓ３２４Ｉ、Ｓ３２４Ｖ、Ｎ３２５Ｔ、Ｋ３２６Ｉ、Ｋ３２６Ｔ、Ｌ３２８Ｍ、Ｌ３２８Ｉ、Ｌ３２８Ｑ、Ｌ３２８Ｄ、Ｌ３２８Ｖ、Ｌ３２８Ｔ、Ａ３３０Ｙ、Ａ３３０Ｌ、Ａ３３０Ｉ、Ｉ３３２Ｄ、Ｉ３３２Ｅ、Ｉ３３２Ｎ、Ｉ３３２Ｑ、Ｔ３３５Ｄ、Ｔ３３５Ｒ、およびＴ３３５Ｙからなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。他の特定の実施形態では、バリアントＦｃ領域は、Ｖ２６４Ｉ、Ｆ２４３Ｌ／Ｖ２６４Ｉ、Ｌ３２８Ｍ、Ｉ３３２Ｅ、Ｌ３２８Ｍ／Ｉ３３２Ｅ、Ｖ２６４Ｉ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２９８Ａ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｅ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｑ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｅ、Ａ３３０Ｙ、Ｉ３３２Ｄ、Ｌ３２８Ｉ／Ｉ３３２Ｅ、Ｌ３２８Ｑ／Ｉ３３２Ｅ、Ｖ２６４Ｔ、Ｖ２４０Ｉ、Ｖ２６６Ｉ、Ｓ２３９Ｄ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｄ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｎ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｑ、Ｓ２３９Ｅ／Ｉ３３２Ｄ、Ｓ２３９Ｅ／Ｉ３３２Ｎ、Ｓ２３９Ｅ／Ｉ３３２Ｑ、Ｓ２３９Ｎ／Ｉ３３２Ｄ、Ｓ２３９Ｎ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｑ／Ｉ３３２Ｄ、Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ、Ｖ２６４Ｉ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ、Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｖ２６４Ｉ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｌ２３４Ｅ、Ｌ２３４Ｙ、Ｌ２３４Ｉ、Ｌ２３５Ｄ、Ｌ２３５Ｓ、Ｌ２３５Ｙ、Ｌ２３５Ｉ、Ｓ２３９Ｔ、Ｖ２４０Ｍ、Ｖ２６４Ｙ、Ａ３３０Ｉ、Ｎ３２５Ｔ、Ｌ３２８Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｌ３２８Ｖ／Ｉ３３２Ｅ、Ｌ３２８Ｔ／Ｉ３３２Ｅ、Ｌ３２８Ｉ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｅ／Ｖ２６４Ｉ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｑ／Ｖ２６４Ｉ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｅ／���２６４Ｉ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｎ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｎ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｖ２６４Ｉ／Ｓ２９８Ａ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｓ２９８Ａ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｎ／Ｓ２９８Ａ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｖ２６４Ｉ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｖ２６４Ｉ／Ｓ２９８Ａ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｖ２６４Ｉ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０Ｉ、Ｐ２３０Ａ、Ｐ２３０Ａ／Ｅ２３３Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｅ２７２Ｙ、Ｋ２７４Ｔ、Ｋ２７４Ｅ、Ｋ２７４Ｒ、Ｋ２７４Ｌ、Ｋ２７４Ｙ、Ｆ２７５Ｗ、Ｎ２７６Ｌ、Ｙ２７８Ｔ、Ｖ３０２Ｉ、Ｅ３１８Ｒ、Ｓ３２４Ｄ、Ｓ３２４Ｉ、Ｓ３２４Ｖ、Ｋ３２６Ｉ、Ｋ３２６Ｔ、Ｔ３３５Ｄ、Ｔ３３５Ｒ、Ｔ３３５Ｙ、Ｖ２４０Ｉ／Ｖ２６６Ｉ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ／Ｌ２３４Ｉ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ／Ｌ２３５Ｄ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ／Ｖ２４０Ｉ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ／Ｖ２６４Ｔ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ／Ｋ３２６Ｅ、およびＳ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ／Ｋ３２６Ｔからなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。さらに特定の実施形態では、このバリアントＦｃ領域は、Ｎ２９７Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｆ２４１Ｙ／Ｆ２４３Ｙ／Ｖ２６２Ｔ／Ｖ２６４Ｔ／Ｎ２９７Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｎ２９７Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｅ／Ｎ２９７Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｄ２６５Ｙ／Ｎ２９７Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｄ２６５Ｈ／Ｎ２９７Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｖ２６４Ｅ／Ｎ２９７Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｙ２９６Ｎ／Ｎ２９７Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｎ２９７Ｄ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｄ２６５Ｖ／Ｎ２９７Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｄ２６５Ｉ／Ｎ２９７Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、およびＮ２９７Ｄ／Ｓ２９８Ａ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅからなる群から選択される一連の置換を含む。特定の実施形態では、このバリアントＦｃ領域は、３３２位においてアミノ酸置換を含む（ＥＵ指標、Ｋａｂａｔら、上記の番号付けを用いて）。置換の例は、３３２Ａ、３３２Ｄ、３３２Ｅ、３３２Ｆ、３３２Ｇ、３３２Ｈ、３３２Ｋ、３３２Ｌ、３３２Ｍ、３３２Ｎ、３３２Ｐ、３３２Ｑ、３３２Ｒ、３３２Ｓ、３３２Ｔ、３３２Ｖ、３３２Ｗ、および３３２Ｙを含む。Ｆｃ領域中の残基の番号付けは、ＫａｂａｔらのＥＵ指標の番号付けである。本明細書に記載される他の特性のうちで、かかるバリアントＦｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ領域と比較して、ＦｃγＲに対する増加した親和性、増加した安定性、および／または増加した溶解度を有し得る。
【０２１２】
さらなる例には、以下のアミノ酸置換：２２４Ｎ／Ｙ、２２５Ａ、２２８Ｌ、２３０Ｓ、２３９Ｐ、２４０Ａ、２４１Ｌ、２４３Ｓ／Ｌ／Ｇ／Ｈ／Ｉ、２４４Ｌ、２４６Ｅ、２４７Ｌ／Ａ、２５２Ｔ、２５４Ｔ／Ｐ、２５８Ｋ、２６１Ｙ、２６５Ｖ、２６６Ａ、２６７Ｇ／Ｎ、２６８Ｎ、２６９Ｋ／Ｇ、２７３Ａ、２７６Ｄ、２７８Ｈ、２７９Ｍ、２８０Ｎ、２８３Ｇ、２８５Ｒ、２８８Ｒ、２８９Ａ、２９０Ｅ、２９１Ｌ、２９２Ｑ、２９７Ｄ、２９９Ａ、３００Ｈ、３０１Ｃ、３０４Ｇ、３０５Ａ、３０６Ｉ／Ｆ、３１１Ｒ、３１２Ｎ、３１５Ｄ／Ｋ／Ｓ、３２０Ｒ、３２２Ｅ、３２３Ａ、３２４Ｔ、３２５Ｓ、３２６Ｅ／Ｒ、３３２Ｔ、３３３Ｄ／Ｇ、３３５Ｉ、３３８Ｒ、３３９Ｔ、３４０Ｑ、３４１Ｅ、３４２Ｒ、３４４Ｑ、３４７Ｒ、３５１Ｓ、３５２Ａ、３５４Ａ、３５５Ｗ、３５６Ｇ、３５８Ｔ、３６１Ｄ／Ｙ、３６２Ｌ、３６４Ｃ、３６５Ｑ／Ｐ、３７０Ｒ、３７２Ｌ、３７７Ｖ、３７８Ｔ、３８３Ｎ、３８９Ｓ、３９０Ｄ、３９１Ｃ、３９３Ａ、３９４Ａ、３９９Ｇ、４０４Ｓ、４０８Ｇ、４０９Ｒ、４１１Ｉ、４１２Ａ、４１４Ｍ、４２１Ｓ、４２２Ｉ、４２６Ｆ／Ｐ、４２８Ｔ、４３０Ｋ、４３１Ｓ、４３２Ｐ、４３３Ｐ、４３８Ｌ、４３９Ｅ／Ｒ、４４０Ｇ、４４１Ｆ、４４２Ｔ、４４５Ｒ、４４６Ａ、４４７Ｅのうちの１つ以上を含むバリアントＦｃ領域が含まれ、ここで、任意に、このバリアントは、親Ｆｃポリペプチドと比較して、Ｆｃリガンドの変更された認識および／または変更されたエフェクター機能を有し、残基の番号付けは、ＫａｂａｔらのＥＵ指標の番号付けである。これらおよび関連の実施形態の具体的な例には、以下の置換のセット：（１）Ｎ２７６Ｄ、Ｒ２９２Ｑ、Ｖ３０５Ａ、Ｉ３７７Ｖ、Ｔ３９４Ａ、Ｖ４１２Ａ、およびＫ４３９Ｅ、（２）Ｐ２４４Ｌ、Ｋ２４６Ｅ、Ｄ３９９Ｇ、およびＫ４０９Ｒ、（３）Ｓ３０４Ｇ、Ｋ３２０Ｒ、Ｓ３２４Ｔ、Ｋ３２６Ｅ、およびＭ３５８Ｔ、（４）Ｆ２４３Ｓ、Ｐ２４７Ｌ、Ｄ２６５Ｖ、Ｖ２６６Ａ、Ｓ３８３Ｎ、およびＴ４１１Ｉ、（５）Ｈ２２４Ｎ、Ｆ２４３Ｌ、Ｔ３９３Ａ、およびＨ４３３Ｐ、（６）Ｖ２４０Ａ、Ｓ２６７Ｇ、Ｇ３４１Ｅ、およびＥ３５６Ｇ、（７）Ｍ２５２Ｔ、Ｐ２９１Ｌ、Ｐ３５２Ａ、Ｒ３５５Ｗ、Ｎ３９０Ｄ、Ｓ４０８Ｇ、Ｓ４２６Ｆ、およびＡ４３１Ｓ、（８）Ｐ２２８Ｌ、Ｔ２８９Ａ、Ｌ３６５Ｑ、Ｎ３８９Ｓ、および５４４０Ｇ、（９）Ｆ２４１Ｌ、Ｖ２７３Ａ、Ｋ３４０Ｑ、およびＬ４４１Ｆ、（１０）Ｆ２４１Ｌ、Ｔ２９９Ａ、Ｉ３３２Ｔ、およびＭ４２８Ｔ、（１１）Ｅ２６９Ｋ、Ｙ３００Ｈ、Ｑ３４２Ｒ、Ｖ４２２Ｉ、およびＧ４４６Ａ、（１２）Ｔ２２５Ａ、Ｒ３０１ｃ、Ｓ３０４Ｇ、Ｄ３１２Ｎ、Ｎ３１５Ｄ、Ｌ３５１Ｓ、およびＮ４２１Ｓ、（１３）Ｓ２５４Ｔ、Ｌ３０６Ｉ、Ｋ３２６Ｒ、およびＱ３６２Ｌ、（１４）Ｈ２２４Ｙ、Ｐ２３０Ｓ、Ｖ３２３Ａ、Ｅ３３３Ｄ、Ｋ３３８Ｒ、およびＳ３６４Ｃ、（１５）Ｔ３３５Ｉ、Ｋ４１４Ｍ、およびＰ４４５Ｒ、（１６）Ｔ３３５ＩおよびＫ４１４Ｍ、（１７）Ｐ２４７Ａ、Ｅ２５８Ｋ、Ｄ２８０Ｎ、Ｋ２８８Ｒ、Ｎ２９７Ｄ、Ｔ２９９Ａ、Ｋ３２２Ｅ、Ｑ３４２Ｒ、Ｓ３５４Ａ、およびＬ３６５Ｐ、（１８）Ｈ２６８Ｎ、Ｖ２７９Ｍ、Ａ３３９Ｔ、Ｎ３６１Ｄ、およびＳ４２６Ｐ、（１９）Ｃ２６１Ｙ、Ｋ２９０Ｅ、Ｌ３０６Ｆ、Ｑ３１１Ｒ、Ｅ３３３Ｇ、およびＱ４３８Ｌ、（２０）Ｅ２８３Ｇ、Ｎ３１５Ｋ、Ｅ３３３Ｇ、Ｒ３４４Ｑ、Ｌ３６５Ｐ、およびＳ４４２Ｔ、（２１）Ｑ３４７Ｒ、Ｎ３６１Ｙ、およびＫ４３９Ｒ、（２２）Ｓ２３９Ｐ、Ｓ２５４Ｐ、Ｓ２６７Ｎ、Ｈ２８５Ｒ、Ｎ３１５Ｓ、Ｆ３７２Ｌ、Ａ３７８Ｔ、Ｎ３９０Ｄ、Ｙ３９１Ｃ、Ｆ４０４Ｓ、Ｅ４３０Ｋ、Ｌ４３２Ｐ、およびＫ４４７Ｅ、ならびに（２３）Ｅ２６９Ｇ、Ｙ２７８Ｈ、Ｎ３２５Ｓ、およびＫ３７０Ｒを含むか、またはそれらからなるバリアントＦｃ領域が含まれ、ここで、残基の番号付けは、ＫａｂａｔらのＥＵ指標の番号付けである（例えば、米国特許出願第２０１０／０１８４９５９号を参照のこと）。
【０２１３】
Ｆｃバリアントの別の特定の例は、表Ｈ７のＦｃ配列を含み、式中、１位におけるＸａａは、Ａｌａであるかもしくは存在せず、１６位におけるＸａａは、ＰｒｏもしくはＧｌｕであり、１７位におけるＸａａは、Ｐｈｅ、Ｖａｌ、もしくはＡｌａであり、１８位におけるＸａａは、Ｌｅｕ、Ｇｌｕ、もしくはＡｌａであり、８０位におけるＸａａは、ＡｓｎもしくはＡｌａであり、および／または２３０位におけるＸａａは、Ｌｙｓであるかもしくは存在しない（例えば、米国特許出願第２００７／０２５３９６６号を参照のこと）。これらのＦｃ領域のある特定のものおよび関連のＨＲＳ−Ｆｃコンジュゲートは、増加した半減期、低減したエフェクター活性を有し、および／または野生型Ｆｃ配列よりも免疫原性が顕著に低い。
【０２１４】
バリアントＦｃ領域は、例えば、米国特許出願第２００３／０１１８５９２号に記載されるように、１つ以上の変異したヒンジ領域もまた有し得る。例えば、ヒンジ領域中の１つ以上のシステインは、欠失し得るか、または異なるアミノ酸で置換され得る。変異したヒンジ領域は、システイン残基を含み得ないか、または対応する野生型ヒンジ領域よりも１つ、２つ、または３つ少ないシステイン残基を含み得る。いくつかの実施形態では、この型の変異したヒンジ領域を有するＦｃ領域は、野生型Ｉｇヒンジ領域と比較して、低減したダイマー化する能力を示す。
【０２１５】
上述のように、ＨＲＳ−Ｆｃコンジュゲート、例えばＨＲＳ−Ｆｃ融合タンパク質は、典型的に、対応するＨＲＳポリペプチドと比較して、変更された（例えば、改善された、増加した、減少した）薬物動態学的特性を有する。薬物動態学的特性の例には、安定性もしくは半減期、バイオアベイラビリティ（吸収される薬物の分率）、組織分布、分布容積（薬物が静脈内注射された直後に分布し、血漿と周辺組織との間で平衡に達する、見かけの容積）、濃度（血漿中の薬物の初期または定常状態濃度）、排出速度定数（薬物が身体から除去される速度）、排出速度（排出のバランスをとるために必要とされる注入の速度）、曲線下面積（ＡＵＣまたは曝露；単一の用量後の、または定常状態における、濃度−時間曲線の積分）、クリアランス（単位時間当たりの薬物が一掃される血漿の体積）、Ｃｍａｘ（経口投与後の薬物のピーク血漿濃度）、ｔｍａｘ（Ｃｍａｘに達するまでの時間）、Ｃｍｉｎ（次の用量が投与される前に薬物が到達する最も低い濃度）、および変動（定常状態における１回の投薬間隔内のピークトラフ変動）が含まれる。いくつかの態様では、これらの改善された特性は、二次構造を顕著に変更することおよび／またはＨＲＳポリペプチドの非正準生物学的活性を低減させることなしに、達成される。実際、一部のＨＲＳ−Ｆｃコンジュゲートは、増加した非正準生物学的活性を有する。
【０２１６】
したがって、いくつかの実施形態では、ＨＲＳ−ＦｃコンジュゲートまたはＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドは、同じまたは匹敵する条件下で哺乳動物に投与した場合、対応する未改変または異なって改変されたＨＲＳポリペプチドよりも、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、５０、１００、２００、３００、４００、または５００倍大きい、血漿または血清薬物動態学的ＡＵＣプロファイルを有する。ある特定の実施形態では、ＨＲＳ−ＦｃコンジュゲートまたはＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドは、室温における類似の条件下、例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４日間、または１、２、３、４週間などにわたりｐＨ７．４のＰＢＳ中と比較した場合、対応する未改変または異なって改変されたＨＲＳポリペプチドよりも、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、２００％、３００％、４００％、または５００％大きい安定性（例えば、半減期によって測定される）を有する。
【０２１７】
特定の実施形態では、ＨＲＳ−ＦｃコンジュゲートまたはＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドは、約３０分間、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約１２時間、約１８時間、約２０時間、約２４時間、約３０時間、約３６時間、約４０時間、約４８時間、約５０時間、約６０時間、約７０時間、約７２時間、約８０時間、約８４時間、約９０時間、約９６時間、約１２０時間、もしくは約１４４時間またはそれ以上の、あるいは少なくとも約３０分間、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約１２時間、約１８時間、約２０時間、約２４時間、約３０時間、約３６時間、約４０時間、約４８時間、約５０時間、約６０時間、約７０時間、約７２時間、約８０時間、約８４時間、約９０時間、約９６時間、約１２０時間もしくは約１４４時間またはそれ以上の、ｐＨ７．４、２５℃、例えば、生理学的ｐＨ、ヒト体温（例えば、インビボ、血清中、所与の組織中、ラット、マウス、サル、またはヒトなどの所与の種中）における生物学的半減期、あるいは任意の介在する半減期を有する。
【０２１８】
ある特定の実施形態では、ＨＲＳ−ＦｃコンジュゲートまたはＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドは、対応する未改変ＨＲＳポリペプチドと比較して、皮下（ＳＣ）投与後により大きいバイオアベイラビリティを有する。ある特定の実施形態では、ＨＲＳ−ＦｃコンジュゲートまたはＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドは、対応する未改変ＨＲＳポリペプチドと比較して、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、もしくは少なくとも約１００％以上のバイオアベイラビリティを有する。
【０２１９】
ある特定の実施形態では、ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドは、ＵＶ円偏光二色性分析を介して決定されるとおり、対応する未改変または異なって改変されたＨＲＳポリペプチドと実質的に同じ二次構造を有する。ある特定の実施形態では、ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドは、抗炎症活性のアッセイにおいて、対応する未改変または異なって改変されたＨＲＳポリペプチドと実質的に同じ活性を有する。他の実施形態では、ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドは、抗炎症活性のアッセイにおいて、対応する未改変または異なって改変されたＨＲＳポリペプチドの活性の、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０倍超の活性を有する。
【０２２０】
ある特定の実施形態では、ペプチドリンカー配列は、各ポリペプチドがその所望の二次構造および三次構造へと折り畳まるのを確実にするのに十分な距離によって、ＨＲＳポリペプチドとＦｃ領域またはＰＥＧとを分離するために使用され得る。かかるペプチドリンカー配列は、当該技術分野で周知の標準的な技術を用いて、コンジュゲートまたは融合タンパク質中に組み込まれ得る。
【０２２１】
ある特定のペプチドリンカー配列は、以下の例示的な因子に基づいて選択され得る：（１）可撓性の伸展されたコンフォメーションをとる能力、（２）第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチド上の機能的エピトープと相互作用し得る二次構造をとることができないこと、（３）生理学的安定性、ならびに（４）ポリペプチドの機能的エピトープと反応し得る疎水性残基または荷電残基の欠如、または他の特徴。例えば、Ｇｅｏｒｇｅ  ａｎｄ  Ｈｅｒｉｎｇａ，Ｊ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．１５：８７１−８７９，２００２を参照のこと。
【０２２２】
リンカー配列は、概して、１〜約２００アミノ酸長であり得る。特定のリンカーは、約１〜２００アミノ酸、１〜１５０アミノ酸、１〜１００アミノ酸、１〜９０アミノ酸、１〜８０アミノ酸、１〜７０アミノ酸、１〜６０アミノ酸、１〜５０アミノ酸、１〜４０アミノ酸、１〜３０アミノ酸、１〜２０アミノ酸、１〜１０アミノ酸、１〜５アミノ酸、１〜４アミノ酸、１〜３アミノ酸、または約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、６０、７０、８０、９０、１００もしくはそれ以上のアミノ酸の、全体的アミノ酸長を有し得る。
【０２２３】
ペプチドリンカーは、本明細書の他の箇所に記載され、当該技術分野で公知の、任意の１つ以上の天然に存在するアミノ酸、天然に存在しないアミノ酸、アミノ酸類似体、および／またはアミノ酸模倣体を使用し得る。リンカーとして有用に使用され得るある特定のアミノ酸配列には、Ｍａｒａｔｅａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  ４０：３９−４６，１９８５、Ｍｕｒｐｈｙ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．８３：８２５８−８２６２，１９８６、米国特許第４，９３５，２３３号および米国特許第４，７５１，１８０号に開示されるものが含まれる。特定のペプチドリンカー配列は、Ｇｌｙ残基、Ｓｅｒ残基、および／またはＡｓｎ残基を含む。ＴｈｒおよびＡｌａなどの他の近中性のアミノ酸もまた、所望の場合、ペプチドリンカー配列中で使用され得る。
【０２２４】
ある特定の例示的なリンカーには、以下のような、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、および／またはＡｓｎ含有リンカー：［Ｇ］ｘ、［Ｓ］ｘ、［Ｎ］ｘ、［ＧＳ］ｘ、［ＧＧＳ］ｘ、［ＧＳＳ］ｘ、［ＧＳＧＳ］ｘ（配列番号１７３）、［ＧＧＳＧ］ｘ（配列番号１７４）、［ＧＧＧＳ］ｘ（配列番号１７５）、［ＧＧＧＧＳ］ｘ（配列番号１７６）、［ＧＮ］ｘ、［ＧＧＮ］ｘ、［ＧＮＮ］ｘ、［ＧＮＧＮ］ｘ（配列番号１７７）、［ＧＧＮＧ］ｘ（配列番号１７８）、［ＧＧＧＮ］ｘ（配列番号１７９）、［ＧＧＧＧＮ］ｘ（配列番号１８０）リンカーが含まれ、式中、ｘは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、もしくは２０またはそれ以上である。これらおよび関連のアミノ酸の他の組み合わせは、当業者に明らかである。
【０２２５】
リンカーペプチドのさらなる例には、以下のアミノ酸配列が含まれるが、これらに限定されない：Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−（配列番号１８１）、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−（配列番号１８２）、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−（配列番号１８３）、Ａｓｐ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−（配列番号１８４）、およびＡｓｎ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−（配列番号１８５）。
【０２２６】
リンカーペプチドのさらなる非限定的な例には、ＤＧＧＧＳ（配列番号１８６）、ＴＧＥＫＰ（配列番号１８７）（例えば、Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ．９４：５５２５−５５３０，１９９７を参照のこと）、ＧＧＲＲ（配列番号１８８）（Ｐｏｍｅｒａｎｔｚ  ｅｔ  ａｌ．１９９５）、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１７６）（Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ．９３：１１５６−１１６０，１９９６）、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＶＤ（配列番号１８９）（Ｃｈａｕｄｈａｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ．８７：１０６６−１０７０，１９９０）、ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ（配列番号１９０）（Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２４２：４２３−４２６，１９８８）、ＧＧＲＲＧＧＧＳ（配列番号１９１）、ＬＲＱＲＤＧＥＲＰ（配列番号１９２）、ＬＲＱＫＤＧＧＧＳＥＲＰ（配列番号１９３）、ＬＲＱＫｄ（ＧＧＧＳ）２ＥＲＰ（配列番号１９４）が含まれる。特定の実施形態では、このリンカー配列は、３つのグリシン残基を含む、Ｇｌｙ３リンカー配列を含む。特定の実施形態では、可撓性のリンカーは、ＤＮＡ結合部位およびペプチド自体の両方をモデル化することが可能なコンピュータープログラムを使用して（Ｄｅｓｊａｒｌａｉｓ＆Ｂｅｒｇ，ＰＮＡＳ．９０：２２５６−２２６０，１９９３およびＰＮＡＳ．９１：１１０９９−１１１０３，１９９４）、またはファージディスプレイ法によって、合理的に設計され得る。
【０２２７】
このペプチドリンカーは、生理学的に安定であり得るか、または放出可能なリンカー、例えば、生理学的に分解可能なリンカーまたは酵素的に切断可能なリンカー（例えば、タンパク質分解的に切断可能なリンカー）を含み得る。ある特定の実施形態では、１つ以上の放出可能なリンカーは、コンジュゲートのより短い半減期およびより迅速なクリアランスを生じ得る。これらおよび関連の実施形態は、例えば、血流中でのＨＲＳポリペプチドの溶解度および血液循環寿命を増強するために使用され得、一方でまた、リンカー分解に引き続いて、血流中にＦｃ領域を実質的に含まないＨＲＳポリペプチドを送達する。これらの態様は、ＨＲＳポリペプチドが、Ｆｃ領域へと永久的にコンジュゲート化された場合に、低減した活性を実証する場合に、特に有用である。本明細書に提供されるリンカーを使用することによって、かかるＨＲＳポリペプチドは、コンジュゲート化形態にあるとき、その治療活性を維持し得る。別の例として、大きい、比較的不活性なＨＲＳ−Ｆｃコンジュゲートポリペプチドが投与され得、次いで、これは、Ｆｃ領域の一部分を所有するまたはＦｃ領域を全体的に欠く生理活性ＨＲＳポリペプチドを生成するために、インビボで（分解可能なリンカーを介して）分解される。これらおよび他の方法において、ＨＲＳ−Ｆｃコンジュゲートポリペプチドの特性は、ＨＲＳポリペプチドの生理活性および循環半減期のバランスを経時的にとるために、より効率的に個別化され得る。
【０２２８】
特定の実施形態では、このリンカーペプチドは、自己触媒的または自己切断性ペプチド切断部位を含む。特定の一実施形態では、自己切断性ペプチドは、ポティウイルスおよびカルジオウイルス２Ａペプチド、ＦＭＤＶ（口蹄疫ウイルス）、ウマ鼻炎Ａウイルス、Ｔｈｏｓｅａ  ａｓｉｇｎａウイルス、ならびにブタテッショウウイルスから得られるポリペプチド配列が含まれる。ある特定の実施形態では、自己切断性ポリペプチド部位は、２Ａまたは２Ａ様部位、配列またはドメインを含む（Ｄｏｎｎｅｌｌｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．８２：１０２７−１０４１，２００１）。例示的な２Ａ部位には、以下の配列が含まれる：ＬＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号１９５）、ＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号１９６）、ＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号１９７）、ＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号１９８）、ＱＬＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号１９９）、ＡＰＶＫＱＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号２００）、ＶＴＥＬＬＹＲＭＫＲＡＥＴＹＣＰＲＰＬＬＡＩＨＰＴＥＡＲＨＫＱＫＩＶＡＰＶＫＱＴ（配列番号２０１）、ＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号２０２）、ＬＬＡＩＨＰＴＥＡＲＨＫＱＫＩＶＡＰＶＫＱＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号２０３）、およびＥＡＲＨＫＱＫＩＶＡＰＶＫＱＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号２０４）。いくつかの実施形態では、この自己触媒的ペプチド切断部位は、例えば、１８アミノ酸の配列であるアフトウイルス口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）ポリタンパク質の２Ａ領域などの、翻訳２Ａシグナル配列を含む。使用され得る２Ａ様配列のさらなる例には、例えば、Ｄｏｎｎｅｌｌｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ．８２：１０２７−１０４１，２００１に記載されるような、昆虫ウイルスポリタンパク質、Ｃ型ロタウイルスのＮＳ３４タンパク質、およびＴｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｓｐｐ．中の反復配列が含まれる。
【０２２９】
適切なプロテアーゼ切断部位および自己切断性ペプチドは、当業者に公知である（例えば、Ｒｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎｅｒ．Ｖｉｒｏｌ．７８：６９９−７２２，１９９７およびＳｃｙｍｃｚａｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．５：５８９−５９４，２００４を参照のこと）。例示的なプロテアーゼ切断部位としては、ポティウイルスＮＩａプロテアーゼ（例えば、タバコエッチ病ウイルスプロテアーゼ）、ポティウイルスＨＣプロテアーゼ、ポティウイルスＰ１（Ｐ３５）プロテアーゼ、ビオウイルス（ｂｙｏｖｉｒｕｓ）ＮＩａプロテアーゼ、ビオウイルスＲＮＡ−２コード化プロテアーゼ、アフトウイルスＬプロテアーゼ、エンテロウイルス２Ａプロテアーゼ、ライノウイルス２Ａプロテアーゼ、ピコルナ３Ｃプロテアーゼ、コモウイルス２４Ｋプロテアーゼ、ネポウイルス２４Ｋプロテアーゼ、ＲＴＳＶ（ライスツングロスフェリカルウイルス（ｒｉｃｅ  ｔｕｎｇｒｏ  ｓｐｈｅｒｉｃａｌ  ｖｉｒｕｓ））３Ｃ様プロテアーゼ、ＰＹＶＦ（パースニップ黄斑ウイルス）３Ｃ様プロテアーゼ、ヘパリン、トロンビン、第Ｘａ因子およびエンテロキナーゼの切断部位が挙げられるが、これらに限定されない。その高い切断ストリンジェンシーに起因して、いくつかの実施形態では、ＥＸＸＹＸＱ（Ｇ／Ｓ）（配列番号２０５）、例えば、ＥＮＬＹＦＱＧ（配列番号２０６）およびＥＮＬＹＦＱＳ（配列番号２０７）などのＴＥＶ（タバコエッチ病ウイルス）プロテアーゼ切断部位が含まれ、式中、Ｘは、任意のアミノ酸を表す（ＴＥＶによる切断は、ＱとＧとの間またはＱとＳとの間で起きる）。
【０２３０】
特定の実施形態における使用のために適している酵素的に分解可能なリンカーのさらなる例としては、トロンビン、キモトリプシン、トリプシン、エラスターゼ、カリクレイン、またはスブチリシン（ｓｕｂｓｔｉｌｉｓｉｎ）などのセリンプロテアーゼによって切断されるアミノ酸配列が挙げられるが、これらに限定されない。トロンビン切断可能なアミノ酸配列の例示的な例としては、−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−（配列番号２０８）、−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−、−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−（配列番号２０９）、−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−（配列番号２１０）、−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−（配列番号２１１）、−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−、−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−、および−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−が挙げられるが、これらに限定されない。エラスターゼ切断可能なアミノ酸配列の例示的な例としては、−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−、−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−（配列番号２１２）、−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−（配列番号２１３）、−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−（配列番号２１４）、−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−（配列番号２１５）、および−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−（配列番号２１６）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２３１】
酵素的に分解可能なリンカーには、コラゲナーゼ、ストロメライシン、およびゼラチナーゼなどのマトリックスメタロプロテイナーゼによって切断され得るアミノ酸配列もまた含まれる。マトリックスメタロプロテイナーゼ切断可能なアミノ酸配列の例示的な例としては、−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｚ−（配列番号２１７）、−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｚ−（配列番号２１８）、−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｚ−（配列番号２１９）、および−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｚ−（配列番号２２０）が挙げられるが、これらに限定されず、式中、Ｚはアミノ酸である。コラゲナーゼ切断可能なアミノ酸配列の例示的な例としては、−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｚ−（配列番号２２１）、−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｚ−（配列番号２２２）、−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−（配列番号２２３）、−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｍｅ）−Ｈｉｓ−（配列番号２２４）、−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｌａ−（配列番号２２５）、−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ａｒｇ−（配列番号２２６）、および−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ａｒｇ−（配列番号２２７）が挙げられるが、これらに限定されず、式中、Ｚはアミノ酸である。ストロメライシン切断可能なアミノ酸配列の１つの例示的な例は、−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ａｒｇ−（配列番号２２８）であり、ゼラチナーゼ切断可能なアミノ酸配列の一例は、−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｍｅｔ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−（配列番号２２９）である。
【０２３２】
特定の実施形態における使用のために適している酵素的に分解可能なリンカーには、アンギオテンシン変換酵素によって切断され得るアミノ酸配列、例えば、−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−、−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−（配列番号２３０）および−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−（配列番号２３１）などもまた含まれる。
【０２３３】
特定の実施形態における使用のために適している酵素的に分解可能なリンカーには、カテプシンＢによって分解され得るアミノ酸配列、例えば、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−（配列番号２３２）、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−（配列番号２３３）、およびＰｈｅ−Ｌｙｓなどもまた含まれる。
【０２３４】
特定の実施形態では、放出可能なリンカーは、ｐＨ７．４、２５℃、例えば、生理学的ｐＨ、ヒト体温（例えば、インビボ、血清中、所与の組織中）において、約３０分間、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約１２時間、約１８時間、約２４時間、約３６時間、約４８時間、約７２時間、もしくは約９６時間またはそれ以上の半減期、あるいは任意の介在する半減期を有する。当業者は、ＨＲＳ−Ｆｃコンジュゲートポリペプチドの半減期が、特定の放出可能なリンカーを使用することによって精密に個別化され得ることを理解し得る。
【０２３５】
しかしながら、ある特定の実施形態では、ペプチドリンカーのうちの任意の１つ以上は、任意選択である。例えば、第１および第２のポリペプチドが、機能的ドメインを分離し、立体的障害を防止するために使用され得る非必須のＮ末端および／またはＣ末端アミノ酸領域を有する場合には、リンカー配列は、必要とされない可能性がある。
【０２３６】
ＨＲＳポリペプチドおよびポリヌクレオチド、例えば、発現可能なポリヌクレオチドは、本明細書に記載される、組成物、方法、および／またはキットのいずれかにおいて使用され得る。
【０２３７】
免疫調節剤
ある特定の実施形態は、１つ以上の免疫調節剤を使用する。例示的な免疫調節剤は、小分子、ポリペプチド、例えば、抗体およびその抗原結合断片、リガンド、少量のペプチド、アンチセンス剤、ＲＮＡｉ剤、ならびにこれらの混合物を含む。
【０２３８】
いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、スフィンゴシン−１−ホスフェート（Ｓ１Ｐ）および／またはＳ１Ｐ受容体（Ｓ１ＰＲ）モジュレーター、ステロイド、カルシニューリン阻害剤、ラパマイシンの機構的標的（ｍＴＯＲ）阻害剤、インドールアミン−ピロール２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、イノシン−５’−モノホスフェートデヒドロゲナーゼ（ＩＭＰＤＨ）阻害剤、サイトカインおよび／またはサイトカイン受容体阻害剤、Ｂ細胞受容体阻害剤、キナーゼ阻害剤、ならびにメトトレキサートなどの細胞増殖抑制剤のうちの１つ以上から選択される。
【０２３９】
いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、ピルフェニドンであり、これは、しばしば、特発性肺線維症（ＩＰＦ）の治療用に使用される。ピルフェニドンは、様々なインビトロ系および線維症の動物モデルにおいて、抗線維性および抗炎症特性を有する。例えば、細胞ベースの研究は、ピルフェニドンが、線維芽細胞増殖を減少させ、ＴＧＦ−β刺激コラーゲン産生を阻害し、ＴＧＦ−βなどの維形成メディエーターの産生を減少させることを示している。ピルフェニドンは、培養細胞および単離されたヒト末梢血単核細胞の両方において、ＴＮＦ−αおよびＩＬ−１βなどの炎症性メディエーターの産生を減少させることも示している。米国では、ピルフェニドンは、２４０３ｍｇ／日の全経口投与用に、１日３回の経口で服用される、８０１ｍｇの経口用量単位（３つの２６７ｍｇのカプセル）としてＩＰＦの治療用に承認されている。ピルフェニドンのさらなる例示的な投与量は、本明細書に記載されている。
【０２４０】
いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、ニンテダニブであり、これもまた、ＩＰＦの治療用に使用される。ニンテダニブは、血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦＲ）、線維芽細胞成長因子受容体（ＦＧＦＲ）、および血管内皮成長因子受容体（ＶＥＧＦＲ）を含む、肺線維症に関与する特定の成長因子受容体を阻害する。ニンテダニブが、ＩＰＦの疾患の進行を減速させ、線維化プロセスに関わるシグナル伝達経路を遮断することによって肺の機能の低下を遅らせると考えられている。ニンテダニブは、エタンスルホン酸を含む塩として製剤化される。米国では、ニンテダニブは、合計３００ｍｇ／日に対して１日２回服用される１５０ｍｇの経口用量単位としてのＩＰＦの治療用に承認されており、これは、合計２００ｍｇ／日に対して１日２回服用される約１００ｍｇの投与量に対する副作用を軽減させることができる。ニンテダニブのさらなる例示的な投与量は、本明細書に記載されている。
【０２４１】
いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、スフィンゴシン−１−ホスフェート（Ｓ１Ｐ）および／またはＳ１Ｐ受容体（Ｓ１ＰＲ）モジュレーターである。モジュレーターの一般的な例は、Ｓ１Ｐおよび／もしくはＳ１ＰＲアンタゴニストまたは阻害剤、あるいはＳ１Ｐおよび／もしくはＳ１ＰＲアゴニストまたは活性剤を含む。Ｓ１Ｐは、細胞増殖、分化、血管新生、走化性、および移送を含む、種々の生物学的機能を有する生物活性脂質である。Ｓ１Ｐの多くの活性は、スフィンゴ脂質代謝に重要な役割を担う、スフィンゴシン−１−リン酸受容体ファミリー（Ｓ１ＰＲ）の５つの密接に関連したＧタンパク質共役型受容体を介して作用する。Ｓ１ＰＲは、Ｓ１ＰＲ１、Ｓ１ＰＲ２、Ｓ１ＰＲ３、Ｓ１ＰＲ４、およびＳ１ＰＲ５を含む。これらの受容体の発現は、以下のように異なる：Ｓ１ＰＲ１、Ｓ１ＰＲ２、およびＳ１ＰＲ３は、多種多様な細胞型において発現するが、主に、白血球上に大量に発現し、Ｓ１ＰＲ４は、主に、リンパ球および造血組織において発現し、Ｓ１ＰＲ５は、主に、脾臓および中枢神経系（ＣＮＳ）の白質に発現する。
【０２４２】
Ｓ１ＰまたはＳ１ＰＲモジュレーターの特定の非限定的な例は、アミセリモド（別名ＭＴ−１３０３；Ｓ１ＰＲアンタゴニスト；Ｋａｐｐｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ  Ｎｅｕｒｏｌ  ２０１６；１５：１１４８−５９，２０１６を参照のこと）、フィンゴリモド（Ｓ１ＰＲ１機能的アンタゴニスト）、ソネプシズマブ（Ｓ１Ｐ特異的モノクローナル抗体）、ＫＲＰ２０３（Ｓ１ＰＲ１アゴニスト）、ＳＥＷ２８７１（Ｓ１ＰＲ１アゴニスト）、シポニモド（Ｓ１ＰＲ１およびＳ１ＰＲ５モジュレーター）、ＲＰＣ１０６３（Ｓ１ＰＲ１モジュレーター）、ＯＮＯ−４６４１（Ｓ１ＰＲ１およびＳ１ＰＲ５アゴニスト）、ＪＴＥ−０１３（Ｓ１ＰＲ２アンタゴニスト）、ＧＳＫ２０１８６８２（Ｓ１ＰＲ１アゴニスト）、ポネシモド（Ｓ１ＰＲ１アゴニスト）、スラミン（選択的Ｓ１ＰＲ３およびＳ１ＰＲ５アンタゴニスト）、ＶＰＣ２３０１９（アリール−アミド類似体；競合的Ｓ１ＰＲ１およびＳ１ＰＲ３アンタゴニスト）；ならびにＷ１４６（選択的Ｓ１ＰＲ１アンタゴニスト）を含む。特定の実施形態では、Ｓ１ＰまたはＳ１ＰＲモジュレーターは、アミセリモドである。
【０２４３】
ある特定のＳ１ＰまたはＳ１ＰＲモジュレーターは、Ｓ１ＰまたはＳ１ＰＲに特異的に結合する、抗体または抗原結合断片または小分子を含む（例えば、Ｓ１Ｐに結合するソネプシズマブを参照のこと）。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、Ｓ１Ｐおよび／またはＳ１ＰＲアンタゴニストである。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、Ｓ１Ｐおよび／またはＳ１ＰＲアゴニストである。
【０２４４】
ある特定のＳ１ＰＲアンタゴニストまたは阻害剤は、Ｓ１ＰＲコード配列に対するアンチセンス剤およびＲＮＡｉ剤を含む（例えば、受入番号ＮＭ＿００１４００．４；ＮＭ＿００４２３０．３を参照のこと）。ある特定のアンチセンス剤は、Ｓ１ＰＲをコードするプレｍＲＮＡまたはｍＲＮＡ標的配列内の標的領域に特異的にハイブリダイズし、標的領域は、ｍＲＮＡのＡＵＧ開始コドン、ＡＵＧ開始コドンの上流の領域、ＡＵＧコドンの下流の領域、予め処理したｍＲＮＡの３’または５’スプライス部位、分岐点、３’未翻訳領域（ＵＴＲ）、およびポリアデニル化シグナル配列のうちの１つ以上から選択される。ある特定のＲＮＡｉ剤は、Ｓ１ＰＲをコードするｍＲＮＡ標的配列と実質的に同一であるセンス鎖、および任意に、Ｓ１ＰＲをコードするｍＲＮＡ標的配列に対して相補的であるか、または実質的に相補的であるアンチセンス鎖を含む。
【０２４５】
いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、ステロイドまたはコルチコステロイド、例えば、グルココルチコイドである。特定の実施形態では、ステロイドは、抗炎症性ステロイドである。ステロイドの例には、とりわけ、ベタメタゾン、ブデソニド、コルチゾール（ヒドロコルチゾン）、コルチゾン、デフラザコート、デオキシコルチコステロン、デキサメタゾン、フルドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、プレドニゾロン、およびトリアムシノロンが含まれる。
【０２４６】
いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、カルシニューリンアンタゴニストまたは阻害剤である。カルシニューリンは、Ｔ細胞を活性化する、カルシウムおよびカルモジュリン依存性セリン／スレオニンタンパク質ホスファターゼである。具体的には、カルシニューリンは、核に移行し、インターロイキン２（ＩＬ−２）の発現を上方調節し、次いで、Ｔ細胞応答の成長および分化を刺激する、活性化したＴ細胞の核因子（ＮＦＡＴｃ）を活性化する。カルシニューリンアンタゴニストまたは阻害剤の特定の例は、シクロスポリン、ピメクロリムス、およびタクロリムスを含む。
【０２４７】
ある特定のカルシニューリンアンタゴニストまたは阻害剤は、カルシニューリンに特異的に結合する、抗体または抗原結合断片または小分子を含む。カルシニューリンコード配列またはそのサブユニットに対するアンチセンス剤およびＲＮＡｉ剤もまた含まれる（例えば、受入番号ＮＭ＿０００９４４；ＮＭ＿０２１１３２；ＮＭ＿００５６０５；ＮＭ＿０００９４５；ＮＭ＿１４７１８０を参照のこと）。ある特定のアンチセンス剤は、カルシニューリンまたはそのサブユニットをコードするプレｍＲＮＡまたはｍＲＮＡ標的配列内の標的領域に特異的にハイブリダイズし、例えば、標的領域は、ｍＲＮＡのＡＵＧ開始コドン、ＡＵＧ開始コドンの上流の領域、ＡＵＧコドンの下流の領域、予め処理したｍＲＮＡの３’または５’スプライス部位、分岐点、３’未翻訳領域（ＵＴＲ）、およびポリアデニル化シグナル配列のうちの１つ以上から選択される。ある特定のＲＮＡｉ剤は、カルシニューリンまたはそのサブユニットをコードするｍＲＮＡ標的配列と実質的に同一であるセンス鎖、および任意に、カルシニューリンまたはそのサブユニットをコードするｍＲＮＡ標的配列に対して相補的であるか、または実質的に相補的であるアンチセンス鎖を含む。
【０２４８】
いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、ラパマイシンの機構的標的（ｍＴＯＲ）アンタゴニストまたは阻害剤である。ｍＴＯＲは、タンパク質キナーゼのホスファチジルイノシトール３−キナーゼ関連キナーゼファミリーのメンバーであり、異なる細胞内区画に局在し、そのため、特にそれらの活性化および機能に影響を及ぼす、２つの構造的に異なる複合体：ｍＴＯＲＣ１およびｍＴＯＲＣ２の触媒サブユニットである。両方の複合体のコア成分として、ｍＴＯＲは、細胞成長、細胞増殖、細胞の運動性、細胞生存、タンパク質合成、自食作用、および転写を調節する、セリン／スレオニンタンパク質キナーゼとして作用する。ｍＴＯＲＣ２のコア成分として、ｍＴＯＲはまた、インスリン受容体およびインスリン様成長因子１受容体の活性化を促進するチロシンタンパク質キナーゼとしても作用する。ｍＴＯＲＣ２はまた、アクチン細胞骨格の制御および維持にも関与している。ｍＴＯＲは、線維症および自己免疫の役割を果たし、ｍＴＯＲＣ経路の封鎖は、かかる疾患に対する治療として研究中である。
【０２４９】
ｍＴＯＲ阻害剤の特定の例は、エベロリムス、ラパマイシン、デフォロリムス、およびテムシロリムスを含む。ｍＴＯＲ阻害剤の一般的な例は、ｍＴＯＲＣ１／ｍＴＯＲＣ２二重阻害剤を含む、ＡＴＰ競合ｍＴＯＲキナーゼ阻害剤、ならびにｍＴＯＲＣ１、ｍＴＯＲＣ２、およびＰＩ３Ｋの触媒アイソフォームを阻害するｍＴＯＲ／ＰＩ３Ｋ二重阻害剤を含む。特定の例は、ダクトリシブ、ＢＧＴ２２６、ＳＦ１１２６、ＰＫＩ−５８７、ＮＶＰＢＥ２３５、サパニセルチブ、ＡＺＤ８０５５、およびＡＺＤ２０１４を含む。
【０２５０】
ある特定のｍＴＯＲアンタゴニストまたは阻害剤は、ｍＴＯＲまたはｍＴＯＲ複合体のメンバーに特異的に結合する、抗体または抗原結合断片または小分子を含む。ｍＴＯＲのコード配列またはｍＴＯＲ複合体のメンバーに対するアンチセンス剤およびＲＮＡｉ剤もまた含まれる（例えば、Ｒａｖｉｃｈａｎｄｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍ  Ｍｏｌ  Ｇｅｎｅｔ．２３：４９１９−３１，２０１４を参照のこと）。ある特定のアンチセンス剤は、ｍＴＯＲまたはｍＴＯＲ複合体のメンバーをコードするプレｍＲＮＡまたはｍＲＮＡ標的配列内の標的領域に特異的にハイブリダイズし、例えば、標的領域は、ｍＲＮＡのＡＵＧ開始コドン、ＡＵＧ開始コドンの上流の領域、ＡＵＧコドンの下流の領域、予め処理したｍＲＮＡの３’または５’スプライス部位、分岐点、３’未翻訳領域（ＵＴＲ）、およびポリアデニル化シグナル配列のうちの１つ以上から選択される。ある特定のＲＮＡｉ剤は、ｍＴＯＲまたはｍＴＯＲ複合体のメンバーをコードするｍＲＮＡ標的配列と実質的に同一であるセンス鎖、および任意に、ｍＴＯＲまたはｍＴＯＲ複合体のメンバーをコードするｍＲＮＡ標的配列に対して相補的であるか、または実質的に相補的であるアンチセンス鎖を含む。
【０２５１】
いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、ＩＤＯアンタゴニストまたは阻害剤である。ＩＤＯは、免疫阻害特性を有するトリプトファン異化酵素である。例えば、ＩＤＯは、Ｔ細胞およびＮＫ細胞を抑制し、Ｔｒｅｇおよび骨髄由来サプレッサー細胞を生成させて活性化し、腫瘍血管新生を促進することが公知である。ＩＤＯアンタゴニストまたは阻害剤の特定の例は、インドキシモド（ＮＬＧ−８１８９）、１−メチル−トリプトファン（１ＭＴ）、β−カルボリン（ノルハルマン；９Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール）、ロスマリン酸、およびエプカドスタットを含む（例えば、Ｓｈｅｒｉｄａｎ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．３３：３２１−３２２，２０１５を参照のこと）。ある特定のＩＤＯアンタゴニストまたは阻害剤は、ＩＤＯに特異的に結合する、抗体または抗原結合断片または小分子を含む（例えば、Ｐｌａｔｔｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：６７３，２０１４を参照のこと）。ＩＤＯコード配列に対するアンチセンス剤およびＲＮＡｉ剤もまた含まれる（例えば、受入番号ＡＨ００２８２８．２を参照のこと）。ある特定のアンチセンス剤は、ＩＤＯをコードするプレｍＲＮＡまたはｍＲＮＡ標的配列内の標的領域に特異的にハイブリダイズし、例えば、標的領域は、ｍＲＮＡのＡＵＧ開始コドン、ＡＵＧ開始コドンの上流の領域、ＡＵＧコドンの下流の領域、予め処理したｍＲＮＡの３’または５’スプライス部位、分岐点、３’未翻訳領域（ＵＴＲ）、およびポリアデニル化シグナル配列のうちの１つ以上から選択される。ある特定のＲＮＡｉ剤は、ＩＤＯをコードするｍＲＮＡ標的配列と実質的に同一であるセンス鎖、および任意に、ＩＤＯをコードするｍＲＮＡ標的配列に対して相補的であるか、または実質的に相補的であるアンチセンス鎖を含む。
【０２５２】
いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、イノシン−５’−モノホスフェートデヒドロゲナーゼ（ＩＭＰＤＨ）アンタゴニストまたは阻害剤である。ＩＭＰＤＨは、イノシン一リン酸（ＩＭＰ）のキサントシン一リン酸（ＸＭＰ）へのニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ＋）−依存酸化を触媒するプリン生合成酵素であり、ＩＭＰからのグアニンヌクレオチドのデノボ合成に対して初めて認定された、律速段階である。グアニンヌクレオチド合成は、正常な細胞機能および成長を維持するのに不可欠であり、細胞増殖および免疫応答の維持にも重要である。特に、ＢおよびＴ細胞は、正常な活性化および機能においてＩＭＰＤＨへの依存を示し、上方調節したＩＭＰＤＨの発現を示している。
【０２５３】
ＩＭＰＤＨ阻害剤野特定の例は、ミコフェノール酸（ミコフェノール酸モフェチル）、リバビリン、および６ＴＧＭＰ（６−チオグアニンモノホスフェート）を含む。ある特定のＩＭＰＤＨアンタゴニストまたは阻害剤は、ＩＭＰＤＨに特異的に結合する、抗体または抗原結合断片または小分子を含む。ＩＭＰＤＨコード配列に対するアンチセンス剤およびＲＮＡｉ剤もまた含まれる。ある特定のアンチセンス剤は、ＩＭＰＤＨをコードするプレｍＲＮＡまたはｍＲＮＡ標的配列内の標的領域に特異的にハイブリダイズし、例えば、標的領域は、ｍＲＮＡのＡＵＧ開始コドン、ＡＵＧ開始コドンの上流の領域、ＡＵＧコドンの下流の領域、予め処理したｍＲＮＡの３’または５’スプライス部位、分岐点、３’未翻訳領域（ＵＴＲ）、およびポリアデニル化シグナル配列のうちの１つ以上から選択される。ある特定のＲＮＡｉ剤は、ＩＭＰＤＨをコードするｍＲＮＡ標的配列と実質的に同一であるセンス鎖、および任意に、ＩＭＰＤＨをコードするｍＲＮＡ標的配列に対して相補的であるか、または実質的に相補的であるアンチセンス鎖を含む。
【０２５４】
いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、サイトカインおよび／またはサイトカイン受容体アンタゴニストまたは阻害剤である。サイトカインは、造血、免疫応答、および炎症に影響する、小（糖）タンパク質（８〜７５ｋＤａの分子量を有する）である。ある特定の例示的なサイトカイン阻害剤は、サイトカインの合成を減少させ、自由な活性型においてサイトカインの濃度を減少させ、サイトカインとそれらの同種の受容体との間の相互作用を遮断し、かつ／またはサイトカイン受容体のシグナル伝達を妨げる。
【０２５５】
いくつかの実施形態では、標的サイトカインまたはサイトカイン受容体は、炎症性またはプロ炎症性サイトカインまたはサイトカイン受容体である。標的サイトカインの例としては、ＩＬ−１αおよびＩＬ−１βを含むインターロイキン−１（ＩＬ−１）、インターロイキン−５（ＩＬ−５）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、インターロイキン−８（ＩＬ−８）、インターロイキン−１１（ＩＬ−１１）、インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）、インターロイキン−１７（ＩＬ−１７）、インターロイキン−１８（ＩＬ−１８）、インターロイキン−２０（ＩＬ−２０）、インターロイキン−３３（ＩＬ−３３）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ−ガンマ）、形質転換成長因子−β（ＴＧＦ−β）、および顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、ならびにそれらの同種サイトカイン受容体、例えば、ＩＬ−１Ｒ、ＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−８Ｒ、ＩＬ−１１Ｒ、ＩＬ−１２Ｒ、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−２０Ｒ、ＳＴ２（インターロイキン１受容体様１、ＩＬ１ＲＬ１）、ＴＮＦＲ１などのＴＮＦＲ、インターフェロン−ガンマ受容体（ＩＦＮＧＲ）、ＴＧＦβＲ１（ＡＬＫ５）またはＴＧＦβＲ２などのＴＧＦ−β受容体が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２５６】
サイトカインおよび／またはサイトカイン受容体阻害剤の特定の例には、ヒトＩｇＧ１骨格上の可溶性ＩＩ型ＴＮＦ受容体の組換え融合タンパク質であるエタネルセプト、ならびにマウスＴＮＦ−アルファ結合領域およびヒトＩｇＧ１骨格を含むキメラ抗ＴＮＦ−アルファモノクローナル抗体であるインフリキシマブなどのＴＮＦ−アルファ阻害剤を含む。アダリムマブ、セルトリズマブ、およびゴリムマブは、ＴＮＦ阻害剤としても含まれる。
【０２５７】
インターロイキン阻害剤の特定の例には、例えば、アナキンラなどのＩＬ−１Ｒアンタゴニスト、リロナセプト（ＩＬ−１Ｒ１成分の細胞外部分のリガンド結合ドメインと、ＩＬ−１に結合し、中和するヒトＩｇＧ１の断片−結晶化部分（Ｆｃ領域）にインラインで連結されたＩＬ−１受容体アクセサリタンパク質（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）とからなる二量体融合タンパク質）などのＩＬ−１阻害剤、バシリキシマブ（Ｔ細胞のＩＬ−２受容体のα鎖（ＣＤ２５）に対するキメラマウス−ヒトモノクローナル抗体）およびダクリズマブ（ＣＤ２５に結合するヒト化モノクローナル抗体）などのＩＬ−２競合的阻害剤、カナキヌマブ（ヒトモノクローナル抗体）などのＩＬ−１β特異的阻害剤、イキセキズマブ（ＩＬ−１７に結合するヒト化モノクローナル抗体）およびセクキヌマブ（タンパク質インターロイキン（ＩＬ）−１７Ａに結合するヒトＩｇＧ１κモノクローナル抗体）などのＩＬ−１７アンタゴニスト、メポリズマブ（ＩＬ−５に結合し、ＩＬ−５受容体のアルファサブユニットへの結合を妨げるヒト化モノクローナル抗体）およびレスリズマブなどのＩＬ−５阻害剤、シルツキシマブ（ＩＬ−６に結合する抗体）、シルクマブ（ＩＬ−６に結合する抗体）、セリルマブ（ＩＬ−６受容体に結合する抗体）、トシリズマブ（ＩＬ−６受容体に結合する抗体）などのＩＬ−６阻害剤、ならびにウステキヌマブ（ＩＬ−１２およびＩＬ−２３の両方のｐ−４０サブユニットに結合する抗体）などのＩＬ−１２／ＩＬ−２３シグナル伝達阻害剤が含まれる。
【０２５８】
ある特定のサイトカインおよび／またはサイトカイン受容体アンタゴニストまたは阻害剤には、サイトカインおよび／またはサイトカイン受容体、例えば、前述のサイトカインおよび／またはサイトカイン受容体のうちの１つ以上に特異的に結合する抗体または抗原結合断片または小分子が含まれる。サイトカインおよび／またはサイトカイン受容体コード配列、例えば、前述のサイトカインおよび／またはサイトカイン受容体のうちの１つ以上に対するアンチセンス剤およびＲＮＡｉ剤もまた含まれる。ある特定のアンチセンス剤は、サイトカインまたはサイトカイン受容体をコードするプレｍＲＮＡまたはｍＲＮＡ標的配列内の標的領域に特異的にハイブリダイズし、例えば、標的領域は、ｍＲＮＡのＡＵＧ開始コドン、ＡＵＧ開始コドンの上流の領域、ＡＵＧコドンの下流の領域、予め処理したｍＲＮＡの３’または５’スプライス部位、分岐点、３’未翻訳領域（ＵＴＲ）、およびポリアデニル化シグナル配列のうちの１つ以上から選択される。ある特定のＲＮＡｉ剤は、サイトカインまたはサイトカイン受容体をコードするｍＲＮＡ標的配列と実質的に同一であるセンス鎖、および任意に、サイトカインまたはサイトカイン受容体をコードするｍＲＮＡ標的配列に対して相補的であるか、または実質的に相補的であるアンチセンス鎖を含む。
【０２５９】
いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、キナーゼアンタゴニストまたは阻害剤、つまり、１つ以上のキナーゼを標的とするか、またはそれに対して標的される阻害剤である。一般的な例は、チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）を含む。標的キナーゼの例としては、とりわけ、ヤーヌスキナーゼ（ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、ＴＹＫ２を含むＪＡＫ）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、受容体チロシン−タンパク質キナーゼｅｒｂＢ−２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕまたはＥＲＢＢ２）、Ｂｃｒ−Ａｂｌ、ｃ−ＳＲＣ、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰ）キナーゼ、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）、脾臓チロシンキナーゼ（ＳＹＫ）、ブルトンチロシンキナーゼ（ＢＴＫ）、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、血管内皮成長因子受容体（ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＶＥＧＦＲ３を含むＶＥＧＦＲ）、線維芽細胞成長因子受容体（ＦＧＦＲ）、Ｂ−Ｒａｆ、ＲＥＴがん原遺伝子、血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦ−Ｒ）、トロポミオシン受容体キナーゼ（ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、ＴｒｋＣを含むＴｒｋ）、およびｃ−Ｍｅｔが挙げられるが、これらに限定されない。したがって、ある特定の実施形態では、キナーゼ阻害剤は、前述のキナーゼのうちの１つ以上の阻害剤またはアンタゴニストである。
【０２６０】
キナーゼ阻害剤の特定の例には、バリシチニブ、フェドラチニブ、フィルゴチニブ、ガンドチニブ、レスタウルチニブ、モメロチニブ、パクリチニブ、ペフィシチニブ、ルキソリチニブ、トファシチニブ、およびパダシチニブなどのＪＡＫ阻害剤が含まれる。キナーゼ阻害剤のさらなる例としては、ニンテダニブ、アファチニブ、アキシチニブ、ボスチニブ、セツキシマブ、コビメチニブ、クリゾチニブ、カボザンチニブ、ダサチニブ、エヌトレクチニブ（ｅｎｔｒｅｃｔｉｎｉｂ）、エルロチニブ、フォスタマチニブ、ゲフィチニブ、イブルチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、レンバチニブ、ムブリチニブ、ネラチニブ、ニロチニブ、パゾパニブ、ペガプタニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、ＳＵ６６５６、トセラニブ、バンデタニブ、バタラニブ、およびベムラフェニブが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２６１】
ある特定のキナーゼアンタゴニストまたは阻害剤は、キナーゼ、例えば、前述のキナーゼのうちの１つ以上に特異的に結合する、抗体または抗原結合断片または小分子を含む。キナーゼコード配列、例えば、前述のキナーゼのうちの１つ以上に対するアンチセンス剤およびＲＮＡｉ剤もまた含まれる。ある特定のアンチセンス剤は、キナーゼをコードするプレｍＲＮＡまたはｍＲＮＡ標的配列内の標的領域に特異的にハイブリダイズし、例えば、標的領域は、ｍＲＮＡのＡＵＧ開始コドン、ＡＵＧ開始コドンの上流の領域、ＡＵＧコドンの下流の領域、予め処理したｍＲＮＡの３’または５’スプライス部位、分岐点、３’未翻訳領域（ＵＴＲ）、およびポリアデニル化シグナル配列のうちの１つ以上から選択される。ある特定のＲＮＡｉ剤は、キナーゼをコードするｍＲＮＡ標的配列と実質的に同一であるセンス鎖、および任意に、キナーゼをコードするｍＲＮＡ標的配列に対して相補的であるか、または実質的に相補的であるアンチセンス鎖を含む。
【０２６２】
いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、Ｂ細胞受容体阻害剤、例えば、ＣＤ２０を標的とする薬剤である。Ｂリンパ球抗原ＣＤ２０またはＣＤ２０は、プロＢ期から始まる全てのＢ細胞の表面上に発現する活性化−グリコシル化されたリンタンパク質（ＣＤ４５Ｒ＋、ＣＤ１１７＋）であり、成熟するまで濃度が漸増する。タンパク質は、既知の天然リガンドを有さず、その機能は、具体的には、Ｔ非依存性抗原に対して最適なＢ細胞の免疫応答を可能にすることである。ＣＤ２０に対する例示的な免疫調節剤は、モノクローナル抗体イブリツモマブ・チウキセタン、オビヌツズマブ、オカラツズマブ、オクレリズマブ、リツキシマブ、トシツモマブ、およびベルツズマブを含む。
【０２６３】
いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、細胞増殖抑制剤または細胞毒性剤である。細胞増殖抑制剤または細胞毒性剤の例は、とりわけ、アザチオプリン、クロラムブシル、シクロホスファミド、シクロスポリンＡ、メトトレキサート、およびナイトロジェンマスタードを含む。
【０２６４】
いくつかの実施形態では、上述のように、免疫調節剤は、合成または生物学的起源（生体分子）であるが、典型的にはポリマーではない有機化合物を指す「小分子」である。有機化合物は、その分子が炭素を含む化合物の大きなクラスを指し、典型的には、炭酸塩のみを含むもの、単純な炭素の酸化物、またはシアン化物が除外される。「生体分子」は、一般に、ペプチド、ポリサッカリド、および核酸などの大きなポリマー分子（バイオポリマー）、ならびに主要な二次代謝産物、脂質、リン脂質、糖脂質、ステロール、グリセロ脂質、ビタミン、およびホルモンなどの小分子を含む、生物によって産生される有機分子を指す。「ポリマー」は、一般に、反復構造単位からなる大分子または高分子を指し、反復構造単位は通常、共有化学結合に連結されている。
【０２６５】
ある特定の実施形態では、小分子は、約５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、５００、６５０、６００、７５０、７００、８５０、８００、９５０、１０００、もしくは２０００ダルトン、または約５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、５００、６５０、６００、７５０、７００、８５０、８００、９５０、１０００、もしくは２０００ダルトン未満を含む、約１０００〜２０００ダルトンまたは約１０００〜２０００ダルトン未満、典型的には、約３００〜７００ダルトンの分子量を有する。
【０２６６】
ある特定の小分子は、本明細書に記載される、「特異的結合」の特徴を有し得る。例えば、いくつかの実施形態では、小分子は、約０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、もしくは５０ｎＭ、少なくとも約０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、もしくは５０ｎＭ、または約０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、もしくは５０ｎＭ未満の結合親和性（Ｋｄ）を有する、標的（例えば、Ｓ１Ｐ、Ｓ１ＰＲ、カルシニューリン、ｍＴＯＲ、ＩＤＯ、ＩＭＰＤＨ、サイトカインおよび／またはサイトカイン受容体、Ｂ細胞受容体、キナーゼ）に特異的に結合する。
【０２６７】
特定の実施形態では、免疫調節剤は、ポリペプチドまたはペプチドである。「ペプチド」および「ポリペプチド」という用語は、本明細書で互換的に使用されるが、ある特定の場合によっては、「ペプチド」は、より短いポリペプチド、例えば、間にある全ての整数および範囲（例えば、５〜１０、８〜１２、１０〜１５）を含む、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０個のアミノ酸からなるポリペプチドを指し得る。ポリペプチドおよびペプチドは、本明細書に記載されるように、天然に存在するアミノ酸および／または天然に存在しないアミノ酸からなり得る。抗体はまた、ポリペプチドとしても含まれる。
【０２６８】
ポリペプチドの結合特性は、当該技術分野で周知の方法を用いて定量化され得る（Ｄａｖｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５９：４３９−４７３，１９９０を参照のこと）。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、約１０−７〜約１０−８Ｍの範囲に及ぶ平衡解離定数を有する標的分子（例えば、Ｓ１Ｐ、Ｓ１ＰＲ、カルシニューリン、ｍＴＯＲ、ＩＤＯ、ＩＭＰＤＨ、サイトカインおよび／またはサイトカイン受容体、Ｂ細胞受容体、キナーゼ、またはそのエピトープ）に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、平衡解離定数は、約１０−９Ｍ以下〜約１０−１０Ｍの範囲に及ぶ。ある特定の例示的な実施形態では、ポリペプチドは、本明細書に記載される標的（特異的に結合するもの、例えば、Ｓ１Ｐ、Ｓ１ＰＲ、カルシニューリン、ｍＴＯＲ、ＩＤＯ、ＩＭＰＤＨ、サイトカインおよび／またはサイトカイン受容体、Ｂ細胞受容体、またはキナーゼを含む）に対して約０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、もしくは５０ｎＭ、少なくとも約０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、もしくは５０ｎＭ、または約０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、もしくは５０ｎＭ未満の親和性（Ｋｄ）を有する。
【０２６９】
いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、本明細書に記載される標的に特異的に結合する、抗体または「その抗原結合断片」である。抗体または抗原結合断片は、本質的にあらゆるタイプの抗体または抗原結合断片であり得る。当該技術分野で周知であるように、抗体は、免疫グロブリン分子の可変領域内に位置する少なくとも１つのエピトープ認識部位を介して、標的（例えば、Ｓ１Ｐ、Ｓ１ＰＲ、カルシニューリン、ｍＴＯＲ、ＩＤＯ、ＩＭＰＤＨ、サイトカインおよび／またはサイトカイン受容体、Ｂ細胞受容体、キナーゼ）に特異的に結合することができる免疫グロブリン分子である。
【０２７０】
本明細書で使用される、「抗体」という用語は、無傷ポリクローナルまたはモノクローナル抗体だけでなく、それらの断片（ｄＡｂ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖなど）、一本鎖（ＳｃＦｖ）、その合成バリアント、天然に存在するバリアント、必要とされる特異性の抗原結合断片を有する抗体部分を含む融合タンパク質、ヒト化抗体、キメラ抗体、および必要とされる特異性の抗原結合部位または断片（エピトープ認識部位）を含む任意の他の修飾形態の免疫グロブリン分子も包含する。抗体（およびその抗原結合断片）のある特定の特性および特徴付けは、本明細書でより詳細に記載されている。
【０２７１】
本明細書で使用される、「抗原結合断片」という用語は、対象となる抗原に結合する免疫グロブリン重鎖および／または軽鎖の少なくとも１つのＣＤＲを含有するポリペプチド断片を指す。この点で、本明細書に記載される抗体の抗原結合断片は、標的分子に結合する抗体からＶＨおよびＶＬ配列の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つ全てのＣＤＲを含み得る。
【０２７２】
「抗原」という用語は、抗体などの選択的結合剤によって結合することができ、さらに動物において、その抗原のエピトープに結合することができる抗体を産生するように使用することができる、分子または分子の一部分である。抗原は、１つ以上のエピトープを有し得る。
【０２７３】
「エピトープ」という用語は、任意の決定基、例えば、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体に特異的に結合することができる、ポリペプチド決定基を含む。エピトープは、抗体によって結合する、抗原または標的タンパク質の領域である。ある特定の実施形態では、エピトープ決定基は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル、またはスルホニルなどの分子の化学的に活性な表面分類を含み、ある特定の実施形態では、特異的な三次元構造の特徴および／または特異的な電荷的特徴を有することができる。エピトープは、抗原の一次構造に関して連続または非連続であり得る。
【０２７４】
ポリペプチドまたは抗体などの分子は、特定の細胞または物質と、それが代替の細胞または物質と反応または会合するよりも、頻繁に、急速に、長い持続時間、および／または大きい親和性で、反応または会合する場合、「特異的結合」または「選択的結合」を呈すると言われている。抗体は、標的に、それが、例えば、統計的に有意な量で、他の物質に結合するより大きい親和性、結合活性で、より容易に、かつ／またはより長い持続時間で結合する場合、「特異的に結合する」または「選択的に結合する」。例えば、特定のエピトープに特異的または選択的に結合する抗体は、それが他のエピトープに結合するよりもより大きな親和性、結合活性で、より容易に、かつ／またはより長い持続時間でその特異的エピトープを結合させる、抗体である。この定義を読むことによって、例えば、第１の標的に特異的または選択的に結合する抗体（または部分またはエピトープ）は、第２の標的に特異的または選択的に結合しても、結合しなくてもよいことも理解される。したがって、「特異的結合」または「選択的結合」は、排他的結合を必ずしも要求しない（しかし、それは、排他的結合を含むことができる）。一般に、しかし必ずしもではないが、結合への言及は、優先的結合を意味する。
【０２７５】
免疫学的結合は、免疫グロブリン分子と免疫グロブリンが特異的である抗原との間で、例えば、実例としておよび限定ではなく、静電気、イオン性、親水性、および／または疎水性引力もしくは反発力、立体障害力、水素結合、ファンデルワールス力、ならびに他の相互作用の結果として起こるタイプの非共有結合性相互作用を指す。免疫学的結合相互作用の強度または親和性を、その相互作用の解離定数（Ｋｄ）によって表現することができ、より小さいＫｄがより大きい親和性を表す。選択されたポリペプチドの免疫学的結合特性を、当該技術分野で周知の方法を用いて定量化され得る。１つのかかる方法は、抗原結合部位／抗原複合体形成および解離の速度の測定を必要とし、それらの速度は、複合体パートナーの濃度、相互作用の親和性、および両方向の速度に等しく影響を及ぼす幾何学的パラメータに依存する。したがって、「オン速度定数」（Ｋｏｎ）および「オフ速度定数」（Ｋｏｆｆ）の両方を、濃度ならびに実際の会合および解離速度の計算によって決定することができる。Ｋｏｆｆ／Ｋｏｎの比は、親和性に関係しない全てのパラメータの相殺を可能にし、したがって解離定数Ｋｄに等しい。
【０２７６】
抗体は、当業者に既知の様々な技術のいずれかによって調製され得る。例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，１９８８を参照のこと。対象となるポリペプチドに特異的なモノクローナル抗体は、例えば、Ｋｏｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：５１１−５１９，１９７６の技術およびそれを改良したものを用いて調製され得る。マウスなどのトランスジェニック動物を用いて、ヒト抗体を発現する方法もまた含まれる。例えば、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４：８２６，１９９６、Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  １１３：４９−１０１，１９９４、およびＬｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １３：６５−９３，１９９５を参照のこと。特定の例には、ＲＥＧＥＮＥＲＥＸ（登録商標）によるＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）プラットフォームが含まれる（例えば、米国特許第６，５９６，５４１号を参照のこと）。
【０２７７】
抗体はまた、ファージディスプレイまたは酵母ディスプレイライブラリの使用により抗体を作製または同定することもできる（例えば、米国特許第７，２４４，５９２号、Ｃｈａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ．１：７５５−７６８，２００６を参照のこと）。利用可能なライブラリの非限定的な例には、ヒト抗体レパートリーの構造的多様性が７つの重鎖および７つの軽鎖可変領域遺伝子により表されるヒトコンビナトリアル抗体ライブラリ（ＨｕＣＡＬ）のような、クローンライブラリまたは合成ライブラリが含まれる。これらの遺伝子の組み合わせにより、マスターライブラリ内に４９のフレームワークが生じる。これらのフレームワークに可変性の高い遺伝子カセット（ＣＤＲ＝相補性決定領域）を重ね合わせることにより、膨大なヒト抗体レパートリーを再現することができる。また、軽鎖可変領域、重鎖ＣＤＲ−３をコードするヒトドナー起源の断片と、重鎖ＣＤＲ−１の多様性をコードする合成ＤＮＡと、重鎖ＣＤＲ−２の多様性をコードする合成ＤＮＡとを用いて設計されたヒトライブラリもまた含まれる。使用に適した他のライブラリは、当業者に明らかであろう。
【０２７８】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される、抗体およびその抗原結合断片には、重鎖および軽鎖フレームワーク領域（ＦＲ）セット間にそれぞれ挿入された重鎖および軽鎖ＣＤＲセットを含み、ＣＤＲへの支持を提供し、ＣＤＲの互いに対する空間的関係を規定する。本明細書で使用される、「ＣＤＲセット」という用語は、重または軽鎖Ｖ領域の３つの超可変領域を指す。重または軽鎖のＮ末端から進んで、これらの領域を、それぞれ、「ＣＤＲ１」、「ＣＤＲ２」、および「ＣＤＲ３」として表される。したがって、抗原結合部位は、重または軽鎖Ｖ領域のそれぞれからＣＤＲセットを含む、６つのＣＤＲを含む。単一のＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３）を含むポリペプチドは、本明細書では「分子認識単位」と称される。多数の抗原−抗体複合体の結晶解析により、ＣＤＲのアミノ酸残基が、結合抗原との広範な接触を形成し、その最も広範な抗原接触が重鎖ＣＤＲ３とのものであることは実証されている。したがって、分子認識部位は、主として抗原結合部位の特異性を担っている。
【０２７９】
本明細書で使用される、「ＦＲセット」という用語は、重または軽鎖Ｖ領域のＣＤＲセットのＣＤＲを枠組みする４つの隣接アミノ酸配列を指す。いくつかのＦＲ残基は、結合抗原と接触し得るが、ＦＲ、特にＣＤＲに直接隣接するＦＲ残基は、主として、抗原結合部位へのＶ領域のフォールディングを担う。ＦＲ内では、ある特定のアミノ酸残基およびある特定の構造特徴が非常に高度に保存される。この点に関して、全てのＶ領域配列は、約９０アミノ酸残基の内部ジスルフィドループを含有する。Ｖ領域が結合部位へとフォールディングすると、ＣＤＲは、抗原結合面を形成する突出ループモチーフとして提示される。その正確なＣＤＲアミノ酸配列に関係なく、ある特定の「正準」構造にフォールディングされたＣＤＲループ形状に影響を及ぼすＦＲの保存構造領域があることは、一般に認知されている。さらに、ある特定のＦＲ残基は、抗体重鎖および軽鎖の相互作用を安定させる非共有結合性ドメイン間接触に関与することは公知である。
【０２８０】
免疫グロブリン可変ドメインの構造および位置は、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ．４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ．ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ．１９８７への言及およびその最新版によって決定され得る。
【０２８１】
「モノクローナル」抗体もまた含まれ、同種抗体集団を指し、該モノクローナル抗体は、エピトープの選択的結合に関与する（天然に存在するまたは天然に存在しない）アミノ酸からなる。モノクローナル抗体は、単一のエピトープに対する、高度に特異的である。「モノクローナル抗体」という用語は、無傷モノクローナル抗体および完全長モノクローナル抗体だけでなく、それらの断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２，Ｆｖ）、一本鎖（ＳｃＦｖ）、そのバリアント、抗原結合部分を含む融合タンパク質、ヒト化モノクローナル抗体、キメラモノクローナル抗体、ならびに必要とされる特異性およびエピトープに結合する能力の抗原結合断片（エピトープ認識部位）を含む任意の他の修飾形態の免疫グロブリン分子も包含する。それは、抗体源または抗体を作製する手法（例えば、ハイブリドーマ、ファージ選択、組換え発現、トランスジェニック動物による）に関して限定することを意図したものではない。この用語は、全免疫グロブリン、ならびに「抗体」の定義の下で上述の断片などを含む。
【０２８２】
タンパク質分解酵素パパインは、ＩｇＧ分子を選択的に切断して、いくつかの断片を生じさせ、そのうちの２つ（Ｆ（ａｂ）断片）はそれぞれ、無傷抗原結合部位を含む共有結合性ヘテロ二量体を含む。酵素ペプシンは、ＩｇＧ分子を切断して、両方の抗原結合部位を含むＦ（ａｂ’）２断片を含む、いくつかの断片を生じさせることができる。本発明のある特定の実施形態に従って使用するためのＦｖ断片は、ＩｇＭのおよび稀にＩｇＧまたはＩｇＡ免疫グロブリン分子の選択的タンパク質分解的切断によって生成することができる。しかしながら、Ｆｖ断片は、より一般的には、当該技術分野で既知の組換え技術を用いて得られる。Ｆｖ断片は、天然抗体分子の抗原認識および結合能力の大部分を保持する抗原結合部位を含む非共有結合性ＶＨ：：ＶＬヘテロ二量体を含む。Ｉｎｂａｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．６９：２６５９−２６６２，１９７２、Ｈｏｃｈｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．１５：２７０６−２７１０，１９７６、およびＥｈｒｌｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９：４０９１−４０９６，１９８０を参照のこと。
【０２８３】
ある特定の実施形態では、一本鎖ＦｖまたはｓｃＦＶ抗体が企図される。例えば、Ｋａｐｐａ体（Ｉｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇ．１０：９４９−５７，１９９７）、ミニボディ（Ｍａｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ  １３：５３０５−９，１９９４）、ダイアボディ（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ９０：６４４４−８，１９９３）、またはＪａｎｕｓｉｎｓ（Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ  １０：３６５５−５９，１９９１およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｕｐｐｌ．７：５１−５２，１９９２）は、標準的な分子生物学技術を用い、所望の特異性を有する抗体の選択に関しては本出願の教示に従って、調製することができる。
【０２８４】
一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）ポリペプチドは、ペプチドをコードするリンカーによって連結されたＶＨをコードする遺伝子およびＶＬをコードする遺伝子を含む遺伝子融合体から発現される共有結合で連結されたＶＨ：：ＶＬヘテロ二量体である。Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．８５（１６）：５８７９−５８８３，１９８８）。自然に凝集しているが、化学的に分離されている軽および重ポリペプチド鎖を、抗体Ｖ領域から、抗原結合部位の構造と実質的に同様の三次元構造にフォールディングすることとなるｓＦｖ分子に変換するための化学構造を識別する多数の方法が記載されている。例えば、Ｈｕｓｔｏｎらによる米国特許第５，０９１，５１３号および同第５，１３２，４０５号、ならびにＬａｄｎｅｒらによる米国特許第４，９４６，７７８号を参照のこと。
【０２８５】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、「ダイアボディ」の形態である。ダイアボディは、ポリペプチドの多量体であって、各ポリペプチドが、免疫グロブリン軽鎖の結合領域を含む第１のドメインと、免疫グロブリン重鎖の結合領域を含む第２のドメインとを含み、この２つのドメインが（例えば、ペプチドリンカーによって）連結されているが、互いに会合して抗原結合部位を形成することはできない多量体である：抗原結合部位は、多量体内の１つのポリペプチドの第１のドメインと多量体内の別のポリペプチドの第２のドメインとの会合によって形成される（ＷＯ９４／１３８０４）。抗体のｄＡｂ断片は、ＶＨドメインからなる（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６，１９８９）。ダイアボディおよび他の多価または多重特異性の断片は、例えば、遺伝子融合によって構築され得る（ＷＯ９４／１３８０４、およびＨｏｌｌｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．９０：６４４４−６４４８，１９９３）を参照のこと）。
【０２８６】
ＣＨ３ドメインに結合したｓｃＦｖを含むミニボディもまた含まれる（Ｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５６：３０５５−３０６１，１９９６を参照のこと）。Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．３４１：５４４−５４６，１９８９、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２４２：４２３−４２６，１９８８、Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．８５：５８７９−５８８３，１９８８）、ＰＣＴ／ＵＳ９２／０９９６５、ＷＯ９４／１３８０４、およびＲｅｉｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．１４：１２３９−１２４５，１９９６も参照のこと。
【０２８７】
二重特異性抗体を用いようとする場合、これらは、従来の二重特異性抗体であってよく、様々な方法（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．４：４４６−４４９，１９９３）で製造することができ、例えば、化学的にもしくはハイブリッドハイブリドーマから調製してもよいか、または上述の二重特異性抗体断片のいずれであってもよい。ダイアボディおよびｓｃＦｖは、可変ドメインのみを用いて、潜在的に抗イディオタイプ反応の効果を低減して、Ｆｃ領域なしで構築することができる。
【０２８８】
二重特異性全抗体とは反対に、二重特異性ダイアボディは、容易に構築することができ、かつ大腸菌に発現させることができるため、特に有用であり得る。適切な結合特異性のダイアボディ（および抗体断片などの多くの他のポリペプチド）は、ライブラリからのファージディスプレイ（ＷＯ９４／１３８０４）を用いて、容易に選択することができる。ダイアボディの一方のアームを、例えば、抗原Ｘに対して特異性を有するように定常的に維持する場合には、他方のアームを多様化したライブラリを作製して、適切な特異性を有する抗体を選択することができる。二重特異性全抗体は、「ノブ・イントゥ・ホール（ｋｎｏｂｓ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅｓ）」操作によって作製され得る（Ｒｉｄｇｅｗａｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．，９：６１６−６２１，１９９６）。
【０２８９】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＵｎｉＢｏｄｙ（登録商標）の形態で提供され得る。ＵｎｉＢｏｄｙ（登録商標）は、ヒンジ領域が除去されたＩｇＧ４抗体である（ＧｅｎＭａｂ  Ｕｔｒｅｃｈｔ，Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓを参照のこと、例えば、ＵＳ２００９／０２２６４２１も参照のこと）。この抗体技術は、現行の小さい抗体形式（ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｆｏｒｍａｔ）よりも長い治療域（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｗｉｎｄｏｗ）を有すると予期される安定的なより小さい抗体形式を作り出す。ＩｇＧ４抗体は、不活性であると考えられるので、免疫系と相互作用しない。完全ヒトＩｇＧ４抗体は、その抗体のヒンジ領域を除去することによって改変され、それにより、対応する無傷ＩｇＧ４（ＧｅｎＭａｂ、Ｕｔｒｅｃｈｔ）と比較して異なる安定性特性を有する半分子断片が得られ得る。ＩｇＧ４分子を半分にすることにより、同族抗原（例えば、疾患標的）に結合し得る１つの領域だけがＵｎｉＢｏｄｙ（登録商標）に残され、したがって、そのＵｎｉＢｏｄｙ（登録商標）は、標的細胞上のただ１つの部位に一価で結合する。
【０２９０】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ナノボディの形態をとり得る。ミニボディは、単一の遺伝子によってコードされ、ほとんど全ての原核生物および真核生物の宿主、例えば、大腸菌（米国特許第６，７６５，０８７号を参照のこと）、カビ（例えば、ＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓまたはＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）および酵母（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｋｌｕｙｖｅｒｍｙｃｅｓ、Ｈａｎｓｅｎｕｌａ、またはＰｉｃｈｉａ（例えば、米国特許第６，８３８，２５４号を参照のこと）において効率的に産生される。その産生プロセスは、拡大でき、数キログラムの量のナノボディが産生されている。ナノボディは、長い有効期間を有する使用準備済みの溶液として製剤化され得る。ナノクローン（Ｎａｎｏｃｌｏｎｅ）法（例えば、ＷＯ０６／０７９３７２を参照のこと）は、Ｂ細胞の自動化されたハイスループット選択に基づいて、所望の標的に対するナノボディを作製するための専有の方法である。
【０２９１】
ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ヒト化されている。これらの実施形態は、通常、組換え技法を用いて調製される、非ヒト種の免疫グロブリンに由来する抗原結合部位、ならびにヒト免疫グロブリンの構造および／または配列に基づくその分子の残りの免疫グロブリン構造を有する、キメラ分子を指す。抗原結合部位は、定常ドメイン上に融合した完全な可変ドメインまたは可変ドメインの適切なフレームワーク領域に移植したＣＤＲだけのいずれかを含み得る。エピトープ結合部位は、野生型であってもよいし、１つ以上のアミノ酸置換によって改変されてもよい。これにより、ヒト個体における免疫原としての定常領域は排除されるが、外来可変領域に対する免疫応答の可能性は残る（ＬｏＢｕｇｌｉｏ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ８６：４２２０−４２２４，１９８９、Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．８６：１００２９−１００３３，１９８８、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．３３２：３２３−３２７，１９８８）。抗体をヒト化するための例示的な方法としては、米国特許第７，４６２，６９７号に記載されている方法が挙げられる。
【０２９２】
別のアプローチは、ヒト由来の定常領域を提供することだけでなく、可変領域をできるだけヒトの形態に近く再形成するように可変領域を改変することにも注目している。重鎖と軽鎖の両方の可変領域が、所与の種において比較的保存されており、推定的にはＣＤＲに対して足場を提供する、４つのフレームワーク領域（ＦＲ）に隣接した３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）（それは、問題となっているエピトープに応じて異なり、結合能を決定する）を含むことが知られている。非ヒト抗体が、特定のエピトープに対して調製されるとき、可変領域は、非ヒト抗体に由来するＣＤＲを、改変するべきヒト抗体に存在するＦＲに移植することによって、「再形成」または「ヒト化」され得る。このアプローチの様々な抗体への適用は、Ｓａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５３：８５１−８５６，１９９３、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７，１９８８、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６，１９８８、Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ．４：７７３−３７８３，１９９１、Ｍａｅｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  ２：１２４−１３４，１９９１、Ｇｏｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．８８：４１８１−４１８５，１９９１、Ｔｅｍｐｅｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：２６６−２７１，１９９１、Ｃｏ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．８８：２８６９−２８７３，１９９１、Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．８９：４２８５−４２８９，１９９２、およびＣｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１１４９−１１５４，１９９２によって報告されている。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、全てのＣＤＲ配列を保存している（例えば、マウス抗体からの６つ全てのＣＤＲを含むヒト化マウス抗体）。他の実施形態では、ヒト化抗体は、元の抗体の１つ以上のＣＤＲ「に由来する」１つ以上のＣＤＲとも称される、元の抗体に対して変更された１つ以上のＣＤＲ（１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ）を有する。
【０２９３】
ある特定の実施形態では、抗体は、キメラ抗体であり得る。この点において、キメラ抗体は、異なる抗体の異種Ｆｃ部分に作動可能に連結したまたはそうでなければ融合した抗体の抗原結合断片からなる。ある特定の実施形態では、異種Ｆｃドメインは、ヒト起源である。他の実施形態では、異種Ｆｃドメインは、ＩｇＡ（サブクラスＩｇＡ１およびＩｇＡ２を含む）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ（サブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４を含む）、ならびにＩｇＭを含む、親抗体とは異なるＩｇクラスからのものであり得る。さらなる実施形態では、異種Ｆｃドメインは、異なるＩｇクラスのうちの１つ以上からのＣＨ２およびＣＨ３ドメインからなり得る。ヒト化抗体に関して上述のように、キメラ抗体の抗原結合断片は、本明細書に記載される抗体のＣＤＲのうちの１つ以上（例えば、本明細書に記載される抗体のＣＤＲの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つのＣＤＲ）のみを含み得るか、または可変ドメイン全体（ＶＬ、ＶＨ、または両方）を含み得る。
【０２９４】
いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、標的分子の、「リガンド」、例えば、天然リガンドであるか、またはそれを含む。「リガンド」とは、一般に、生物学的目的を果たすために標的分子（例えば、生体分子）との複合体を形成する物質または分子を指し、一般に、標的分子または標的タンパク質上の部位に結合することによってシグナルを生成する、「タンパク質リガンド」を含む。したがって、ある特定の薬剤は、実際には、標的分子に結合し、シグナルを生成するタンパク質リガンドである。「修飾リガンド」、例えば、薬物動態修飾因子、例えば、免疫グロブリン由来のＦｃ領域に融合しているタンパク質リガンドもまた含まれる。
【０２９５】
いくつかの実施形態では、免疫調節剤または阻害剤は、アンチセンス剤である。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載される、標的タンパク質、標的配列、および／または標的遺伝子（例えば、Ｓ１ＰＲ、カルシニューリン、ｍＴＯＲ、ＩＤＯ、ＩＭＰＤＨ、サイトカインおよび／またはサイトカイン受容体、Ｂ細胞受容体、キナーゼ）は、オリゴヌクレオチドベースの薬剤または方法を含む、任意の様々なアンチセンス剤によって標的化する。アンチセンス剤またはオリゴヌクレオチドは、典型的には、標的配列内の領域を標的化する（例えば、領域に対して十分に補完的であるか、または領域に特異的にハイブリダイズする）塩基配列を含み、任意に、以下のうちの１つ以上を含む：ｍＲＮＡのＡＵＧ開始コドンを含むか、または取り囲む領域（例えば、開始コドンの上流の領域、開始コドンの下流の領域、開始コドンを含む領域）、予め処理したｍＲＮＡの３’または５’スプライス部位、スプライス受容体部位の上流のピリミジンリッチなまたはポリピリミジントラクト、エクソン−イントロン境界、イントロン−エクソン境界、分岐部位、エクソンスプライシングエンハンサー構成要素、５’および３’未翻訳領域、ならびにポリアデニル化シグナル配列。
【０２９６】
ある特定の実施形態では、アンチセンス剤は、投与を必要とする対象への投与時、または細胞、例えば、筋肉細胞との接触時に、標的遺伝子の発現を有効に修飾する（例えば、発現を減少させる、スプライシングを変更させる）ことができる。アンチセンス剤が、（ａ）哺乳動物細胞（例えば、筋肉細胞）によって能動的に取り込まれる能力を有し、（ｂ）取り込まれると、標的ＲＮＡと約４５℃超のＴｍで二重鎖を形成するときに、この必要条件は、典型的には、満たされる。
【０２９７】
ある特定の「アンチセンス剤」は、「アンチセンスオリゴヌクレオチド」、「アンチセンスオリゴマー」、および「オリゴヌクレオチド」を含み、ヌクレオチドの直鎖配列またはヌクレオチド類似体を指し、核酸塩基が、ワトソンクリック塩基対によってＲＮＡ中の標的配列にハイブリダイズして、標的配列内のオリゴヌクレオチド：ＲＮＡのヘテロ二重鎖を形成することができる。「アンチセンスオリゴヌクレオチド」、「アンチセンスオリゴマー」、「オリゴマー」、および「化合物」という用語は、互換的に使用され、オリゴヌクレオチドを指し得る。環状サブユニットは、リボースまたは別のペントース糖、またはある特定の実施形態では、モルホリノ基（以下のモルホリノオリゴヌクレオチドの記載を参照のこと）に基づき得る。当該技術分野で周知の他のアンチセンス剤の中に、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮＡ）、トリシクロ−ＤＮＡオリゴマー、トリシクロ−ホスホロチオエートオリゴヌクレオチド、および２’−Ｏ−メチルオリゴヌクレオチドもまた、企図される。
【０２９８】
ある特定の実施形態では、「標的配列」は、ｍＲＮＡのＡＵＧ開始コドンを含むか、または取り囲む領域（例えば、開始コドンの上流の領域、開始コドンの下流の領域、開始コドンを含む領域）、予め処理したｍＲＮＡの３’または５’スプライス部位、分岐点、または３’−ＵＴＲもしくはポリアデニル化シグナルなどの３’非コードｍＲＮＡ領域を含む。標的配列は、エクソン内またはイントロン内であり得る。スプライス部位のための標的配列は、予め処理したｍＲＮＡ（プレｍＲＮＡ）中の通常のスプライス受容体ジャンクションの１〜約２５塩基対の下流にその５’末端を有するｍＲＮＡ配列を含み得る。スプライス領域のための例示的な標的配列は、スプライス部位を含む予め処理したｍＲＮＡの任意の領域であるか、またはエキソンコード配列内に完全に含有され、またはスプライス受容体部位もしくはドナー部位にまたがる。アンチセンス剤は、より一般的には、本明細書に記載され、当該技術分野で周知の様式で標的の核酸を標的としている、例えば、それに特異的にハイブリダイズされるか、またはそれに対して相補的であるとき、生物学的に関連する標的を「標的としている」と言われている。標的領域または標的配列の他の例は、本明細書に記載されている。
【０２９９】
「標的化配列」という用語は、ＲＮＡ中の「標的配列」に対して相補的である（さらに、実質的に相補的であることを意味する）オリゴヌクレオチドにおける配列である。アンチセンス剤の全配列または一部のみが、標的配列に対して相補的であり得る。例えば、２０〜３０の塩基を有するアンチセンス剤において、約６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、または２９は、標的領域に対して相補的である標的化配列であり得る。典型的には、標的配列は、オリゴヌクレオチドにおいて連続的な塩基で形成されるが、代替として、例えば、オリゴヌクレオチドの反対の末端から一緒に置かれたときに、標的配列をまたがる配列を構成する、非連続的な配列で形成されてもよい。
【０３００】
標的配列は、標的化配列に対して「概ねの」または「実質的な」相補性を有し得、まだ本開示の目的のために機能し得、すなわち、標的化配列は、依然として「相補的」であり得る。好ましくは、本開示で使用されるオリゴヌクレオチドは、１０ヌクレオチド中、標的配列と最大で１つのミスマッチ、好ましくは２０ヌクレオチド中、最大で１つのミスマッチを有する。あるいは、使用されるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、例示的なアンチセンス標的化配列と、少なくとも９０％の配列相同性もしくは同一性、少なくとも９５％の配列相同性もしくは同一性、または少なくとも９８％の配列相同性もしくは同一性を有する。
【０３０１】
（ｉ）修飾された骨格構造、例えば、天然に存在するオリゴヌクレオチドおよびポリヌクレオチドにおいて見出される標準的なホスホジエステル連結以外の骨格、ならびに／または（ｉｉ）修飾された糖部分、例えば、リボースもしくはデオキシリボース部分よりもむしろモルホリノ部分を有するオリゴヌクレオチドを含む、天然に存在しないオリゴヌクレオチドまたは「オリゴヌクレオチド類似体」が含まれる。オリゴヌクレオチド類似体は、ワトソンクリック塩基対合によって標準的なポリヌクレオチド塩基に水素結合をすることができる塩基を支持し、類似体骨格は、オリゴヌクレオチド類似体分子と、標準的なポリヌクレオチド（例えば、一本鎖ＲＮＡまたは一本鎖ＤＮＡ）中の塩基との間のこのような水素結合を配列特異的様態で可能にする様式で塩基を提示する。類似体の特定の例は、実質的に荷電していない、リン含有骨格を有するものを含む。
【０３０２】
「ヌクレアーゼ耐性」オリゴヌクレオチドは、非ハイブリダイズ形態またはハイブリダイズ形態において、その骨格が、（例えば、３’−エキソヌクレアーゼ、エンドヌクレアーゼ、ＲＮａｓｅ  Ｈなどのエキソヌクレアーゼによって）体内の通常の細胞外および細胞内ヌクレアーゼによるヌクレアーゼ切断に対して実質的に耐性であるものを指す。すなわち、オリゴヌクレオチドが曝される体内で通常のヌクレアーゼ条件下で、そのオリゴヌクレオチドがヌクレアーゼ切断をほとんどまたはまったく示さない。「ヌクレアーゼ耐性ヘテロ二重鎖」は、二本鎖のＲＮＡ／ＲＮＡまたはＲＮＡ／ＤＮＡ複合体を切断することができる、細胞内および細胞外ヌクレアーゼによるインビボ分解に対してヘテロ二重鎖が実質的に耐性となるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドがその相補的な標的と結合することによって形成されたヘテロ二重鎖を指す。「ヘテロ二重鎖」は、アンチセンスオリゴヌクレオチドと、標的ＲＮＡの相補的部分との間の二重鎖を指す。
【０３０３】
ある特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、細胞膜、例えば、筋肉細胞膜を横切る能動または促進輸送のための基質として認識される。標的ＲＮＡと安定的な二本鎖を形成するオリゴヌクレオチドの能力はまた、標的に関するアンチセンスオリゴヌクレオチドの長さおよび相補性の程度、Ｇ：Ｃ塩基マッチとＡ：Ｔ塩基マッチとの比、ならびに任意のミスマッチの塩基の位置を含む、オリゴヌクレオチド骨格の他の特性に関し得る。細胞ヌクレアーゼに抵抗するアンチセンスオリゴヌクレオチドの能力は、生存、および細胞の細胞質への薬剤の最終的な送達を促進し得る。したがって、ある特定の実施形態は、ヌクレアーゼ耐性であるかまたは実質的にヌクレアーゼ耐性である天然に存在しないアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む。
【０３０４】
ある特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ホスホロアミデートまたはホスホロジアミデートモルホリノオリゴヌクレオチド（ＰＭＯ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮＡ）、ホスホロチオエートオリゴヌクレオチド、トリシクロ−ＤＮＡオリゴヌクレオチド、トリシクロ−ホスホロチオエートオリゴヌクレオチド、２’Ｏ−Ｍｅ−修飾オリゴヌクレオチド（例えば、２’Ｏ−メチルホスホロチオエートオリゴヌクレオチド）、または前述の任意の組み合わせから選択される非天然の化学的骨格を含む。
【０３０５】
オリゴヌクレオチドが生理学的条件下で標的にハイブリダイズする場合、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、実質的に４０℃または４５℃超、好ましくは少なくとも５０℃、典型的には６０℃〜８０℃またはより高いＴｍを伴い、標的配列またはポリヌクレオチド（例えば、プレｍＲＮＡ、ｍＲＮＡ）に「特異的にハイブリダイズする」。かかるハイブリダイゼーションは、好ましくは、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件に相当する。所与のイオン強度およびｐＨで、Ｔｍは、標的配列の５０％が相補的ポリヌクレオチドにハイブリダイズする温度である。かかるハイブリダイゼーションは、標的配列に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドの「概ねの」または「実質的な」相補性によって、ならびに正確な相補性によって起こり得る。
【０３０６】
本明細書で使用される、「十分な長さ」は、本明細書に記載される標的配列または遺伝子において、少なくとも８、より典型的には、８〜４０、連続的な核酸塩基に対して相補的であるアンチセンスオリゴヌクレオチドを指す。十分な長さのアンチセンスオリゴヌクレオチドは、標的配列または遺伝子の領域にハイブリダイズすることができるように少なくとも最小数のヌクレオチドを有する。好ましくは、十分な長さのオリゴヌクレオチドは、８〜３０個のヌクレオチド長さである。より好ましくは、十分な長さのオリゴヌクレオチドは、９〜２７個のヌクレオチド長さである。
【０３０７】
アンチセンスオリゴヌクレオチドは、一般に、複数のヌクレオチドサブユニットを含み、それぞれ、総合すれば、標的化配列を形成するまたはそれを含む核酸塩基を有する。したがって、いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、約１０〜約４０個のサブユニット、または約１０〜３０個のサブユニット、および典型的には、１５〜２５個のサブユニットの長さの範囲に及ぶ。例えば、いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、約１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９または４０個のサブユニットの長さであるか、または約１０〜４０個のサブユニット、１０〜３０個のサブユニット、１４〜２５個のサブユニット、１５〜３０個のサブユニット、１７〜３０個のサブユニット、１７〜２７個のサブユニット、１０〜２７個のサブユニット、１０〜２５個のサブユニット、および１０〜２０個の範囲に及ぶ。ある特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、約１０〜約４０個または約５〜約３０個のヌクレオチド長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、約１４〜約２５個または約１７〜約２７個のヌクレオチド長さである。
【０３０８】
いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドの骨格は、実質的に荷電しておらず、任意に、細胞膜を横切る能動または促進輸送のための基質として認識される。いくつかの実施形態では、全てのヌクレオチド間結合は、荷電していない。標的ＲＮＡと安定的な二重鎖を形成するオリゴヌクレオチドの能力はまた、標的に関するアンチセンスオリゴヌクレオチドの長さおよび相補性の程度、Ｇ：Ｃ塩基マッチとＡ：Ｔ塩基マッチとの比、ならびに任意のミスマッチの塩基の位置を含む、その骨格の他の特性に関し得る。細胞ヌクレアーゼに抵抗するアンチセンスオリゴヌクレオチドの能力は、生存、および細胞の細胞質への薬剤の最終的な送達を促進し得る。
【０３０９】
ある特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、生理学的ｐＨで、正に荷電するか、または陽イオンである少なくとも１つのヌクレオチド間結合を有する。いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、約５．５〜約１２のｐＫａを示す少なくとも１つのヌクレオチド間結合を有する。任意に、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、塩基性窒素とアルキル、アリール、またはアラルキル基との両方を含有する少なくとも１つのヌクレオシド間結合を有する。特定の実施形態では、陽イオン性ヌクレオシド間結合は、４−アミノピペルジン−１−イル（ＡＰＮ）基またはその誘導体を含む。あらゆる特定の理論によって拘束されることなく、オリゴヌクレオチドにおいて陽イオン性連結（例えば、ＡＰＮ基またはＡＰＮ誘導体）の存在が、標的ヌクレオチド内の負に荷電したホスファートへの結合を促進すると考えられている。したがって、変異ＲＮＡと陽イオン性連結含有オリゴヌクレオチドとの間のヘテロ二重鎖の形成は、イオン引力およびワトソンクリック塩基対合の両方によって一緒に保持されてもよい。
【０３１０】
いくつかの実施形態では、陽イオン性連結の数は、少なくとも２および約半分以下の全ヌクレオチド間結合、例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個の陽イオン性連結、または約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個以下の陽イオン性連結である。いくつかの実施形態では、しかしながら、最大全てのヌクレオチド間結合は、陽イオン性連結であり、例えば、全てのヌクレオチド間結合の約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、もしくは４０個、または少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、もしくは４０個が、陽イオン性連結である。特定の実施形態では、約１９〜２０のサブユニットのオリゴヌクレオチドは、２〜１０、例えば、４〜８個の陽イオン性連結を有し、残りが無電荷結合であってもよい。他の特定の実施形態では、１４〜１５のサブユニットのオリゴヌクレオチドは、２〜７、例えば、２、３、４、５、６、または７個の陽イオン性連結を有し、残りが無電荷結合であってもよい。したがって、オリゴヌクレオチド内の陽イオン性連結の総数は、約１〜１０〜１５〜２０〜３０またはそれ以上（その間の全ての整数を含む）変動し得、オリゴヌクレオチド全体に散在され得る。
【０３１１】
いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、全ての２〜５、または２、３、４、もしくは５個の荷電していない結合につき約１個または最大約１個の陽イオン性連結、例えば、全ての１０個の荷電していない結合につき約４〜５または４または５個有し得る。
【０３１２】
ある特定の実施形態は、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％の陽イオン性連結を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、アンチセンス活性の最適な改善は、骨格結合のうちの約２５％が陽イオン性である場合、見られ得る。ある特定の実施形態では、増強は、少数、例えば、１０〜２０％の陽イオン性連結で、または陽イオン性連結の数が、５０〜８０％の範囲、例えば、約６０％である場合に見られ得る。
【０３１３】
いくつかの実施形態では、陽イオン性連結は、骨格に沿って散在している。かかるオリゴヌクレオチドは、任意に、少なくとも２つの連続的な荷電していない結合を含有する、すなわち、オリゴヌクレオチドは、任意に、その全体の長さに沿って厳密に交互になっているパターンを有さない。特定の例では、それぞれの１個または２個の陽イオン性連結は、骨格に沿って少なくとも１、２、３、４、または５個の荷電していない結合によって分離されている。
【０３１４】
陽イオン性連結のブロックおよび荷電していない結合のブロックを有するオリゴヌクレオチドもまた含まれる。例えば、荷電していない結合の中央ブロックは、陽イオン性連結のブロックが隣接してもよく、または逆もまた同じである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ほぼ等しい長さの５’，３’および中央領域を有し、中央領域における陽イオン性連結の百分率は、陽イオン性連結の全数の約５０％、６０％、７０％、または８０％超である。
【０３１５】
ある特定のアンチセンスオリゴヌクレオチドでは、大量の陽イオン性連結（例えば、陽イオン性連結の７０、７５％、８０％、９０％）は、「中央領域」骨格結合近くに、例えば、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５の真ん中の結合において分配している。例えば、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４−マーのオリゴヌクレオチドは、８、９、１０、１１、または１２個の真ん中の連結において局在化している全ての陽イオン性連結の少なくとも５０％、６０％、７０％、または８０％を有し得る。
【０３１６】
上述のように、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、様々なアンチセンス化学物質を使用し得る。オリゴヌクレオチド化学物質の例としては、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮＡ）、ホスホロチオエート、２’Ｏ−Ｍｅ−修飾オリゴヌクレオチド、モルホリノ、ＰＭＯ、ＰＰＭＯ、ＰＭＯｐｌｕｓ、およびＰＭＯ−Ｘ化学物質が挙げられるが、これらに限定されず、前述のいずれかの組み合わせを含む。一般に、ＰＮＡおよびＬＮＡ化学物質は、ＰＭＯおよび２’Ｏ−Ｍｅオリゴヌクレオチドと比較してこれらの相対的に高い標的結合強度によって、より短い標的化配列を利用し得る。ホスホロチオエートおよび２’Ｏ−Ｍｅ−修飾化学物質は、しばしば、組み合わせて、２’Ｏ−Ｍｅ−ホスホロチオエート骨格を生成する。例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ／２０１３／１１２０５３号および同第ＷＯ／２００９／００８７２５号を参照されたく、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
【０３１７】
ペプチド核酸（ＰＮＡ）は、ピリミジンまたはプリン塩基が付着しているＮ−（２−アミノエチル）グリシン単位からなるデオキシリボース骨格と構造的に同形である、ＤＮＡの類似体である。天然ピリミジンおよびプリン塩基を含有するＰＮＡは、ワトソン−クリック塩基対合則に従って相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズし、塩基対認識に関してＤＮＡを模倣する（Ｅｇｈｏｌｍ，Ｂｕｃｈａｒｄｔ  ｅｔ  ａｌ．１９９３）。ＰＮＡの骨格は、ホスホジエステル結合よりむしろペプチド結合によって形成され、ＰＮＡをアンチセンス用途に良好に適しているものとする（以下の構造を参照のこと）。骨格は荷電しておらず、通常の熱安定性を超えるものを示すＰＮＡ／ＤＮＡまたはＰＮＡ／ＲＮＡ二重鎖がもたらされる。ＰＮＡは、ヌクレアーゼまたはプロテアーゼによって認識されない。
【０３１８】
天然構造へのラジカル構造変化にかかわらず、ＰＮＡは、らせん形態で、ＤＮＡまたはＲＮＡへの配列特異的結合が可能である。ＰＮＡの特徴は、相補的ＤＮＡまたはＲＮＡへの高い結合親和性、一塩基ミスマッチによってもたらされる不安定化効果、ヌクレアーゼおよびプロテアーゼへの耐性、塩濃度およびホモプリンＤＮＡとの三重鎖形成と無関係であるＤＮＡまたはＲＮＡとのハイブリダイゼーションを含む。ＰＡＮＡＧＥＮＥ（商標）は、Ｂｔｓ  ＰＮＡモノマー（Ｂｔｓ；ベンゾチアゾール−２−スルホニル基）およびオリゴマー化工程を開発してきた。Ｂｔｓ  ＰＮＡモノマーを用いたＰＮＡオリゴマー化は、脱保護、カップリングおよびキャッピングの反復的サイクルからなる。ＰＮＡは、当該技術分野で既知の任意の技術を用いて合成的に生成され得る。例えば、米国特許第６，９６９，７６６号、同第７，２１１，６６８号、同第７，０２２，８５１号、同第７，１２５，９９４号、同第７，１４５，００６号、および同第７，１７９，８９６号を参照のこと。ＰＮＡの調製のために米国特許第５，５３９，０８２号、同第５，７１４，３３１号、および同第５，７１９，２６２号も参照のこと。ＰＮＡ化合物のさらなる教示は、Ｎｉｅｌｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５４：１４９７−１５００，１９９１において見出され得る。前述のそれぞれは、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０３１９】
アンチセンスオリゴヌクレオチドはまた、「ロックド核酸」サブユニット（ＬＮＡ）も含有し得る。「ＬＮＡ」は、架橋核酸（ＢＮＡ）と呼ばれる修飾のクラスのメンバーである。ＢＮＡは、Ｃ３０−エンド（ノーザン）糖パッカーのリボース環のコンフォメーションをロックする共有結合を特徴とする。ＬＮＡでは、架橋が２’−Ｏ位と４’−Ｃ位との間のメチレンからなる。ＬＮＡは、骨格のプレオーガナイゼーションおよび塩基スタッキングを増強し、ハイブリダイゼーションおよび熱安定性を増大させる。ＬＮＡの構造は、例えば、Ｗｅｎｇｅｌ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ（１９９８）４５５、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ（１９９８）５４：３６０７、およびＡｃｃｏｕｎｔｓ  ｏｆＣｈｅｍ．Ｒｅｓｅａｒｃｈ（１９９９）３２：３０１）、Ｏｂｉｋａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ（１９９７）３８：８７３５；（１９９８）３９：５４０１、およびＢｉｏｏｒｇａｎｉｃ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００８）１６：９２３０において見出され得る。
【０３２０】
本開示の化合物は、１つ以上のＬＮＡを組み込み得、場合によっては、化合物は、全体的にＬＮＡからなり得る。個々のＬＮＡヌクレオシドサブユニットの合成、およびオリゴヌクレオチド中へのこれらの組み込みのための方法は、例えば、米国特許第７，５７２，５８２号、同第７，５６９，５７５号、同第７，０８４，１２５号、同第７，０６０，８０９号、同第７，０５３，２０７号、同第７，０３４，１３３号、同第６，７９４，４９９号、および同第６，６７０，４６１号において記載されており、これらのそれぞれは、それらの全体が参照により組み込まれる。典型的なサブユニット間リンカーは、ホスホジエステルおよびホスホロチオエート部分を含み、代替として、非リン含有リンカーを用い得る。一実施形態は、ＬＮＡ含有化合物であり、各ＬＮＡサブユニットは、ＤＮＡサブユニットによって分離されている。ある特定の化合物は、サブユニット間リンカーが、ホスホロチオエートである場合の交互になっているＬＮＡおよびＤＮＡサブユニットからなる。
【０３２１】
「ホスホロチオエート」（またはＳ−オリゴ）は、非架橋酸素の１つが硫黄によって置き換えられる、正常なＤＮＡのバリアントである。ヌクレオチド間結合の硫化は、５’から３’および３’から５’のＤＮＡ  ＰＯＬ  １エキソヌクレアーゼ、ヌクレアーゼＳ１およびＰ１、ＲＮａｓｅｓ、血清ヌクレアーゼならびにヘビ毒ホスホジエステラーゼを含む、エンドヌクレアーゼおよびエキソヌクレアーゼの作用を低減する。ホスホロチオエートは、２つの主要な経路によって：ホスホン酸水素に対する、二硫化炭素中の元素状態の硫黄の溶液の作用によって、またはテトラエチルチウラムジスルフィド（ＴＥＴＤ）または３Ｈ−１，２−ベンゾジチオール（ｂｅｎｓｏｄｉｔｈｉｏｌ）−３−オン１，１−ジオキシド（ＢＤＴＤ）のいずれかで亜リン酸トリエステルを硫化する方法によって作製される（例えば、Ｉｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５５，４６９３−４６９９，１９９０を参照のこと）。後者の方法は、大部分の有機溶媒中で元素状態の硫黄が不溶性であること、および二硫化炭素の毒性という問題を回避する。ＴＥＴＤ法およびＢＤＴＤ法はまた、より高い純度のホスホロチオエートが得られる。
【０３２２】
トリシクロ−ＤＮＡ（ｔｃ−ＤＮＡ）は、各ヌクレオチドが、シクロプロパン環の導入により修飾され、骨格の配座柔軟性を制限するため、およびねじれ角γの骨格配置が最適化された、拘束されたＤＮＡ類似体のクラスである。ホモベーシック（ｈｏｍｏｂａｓｉｃ）アデニンおよびチミン含有ｔｃ−ＤＮＡは、相補的ＲＮＡと非常に安定したＡ−Ｔ塩基対を形成する。トリシクロ−ＤＮＡおよびそれらの合成は、国際特許出願公開第ＷＯ２０１０／１１５９９３号に記載されている。本開示の化合物は、１つ以上のトリシクリル−ＤＮＡヌクレオチドを組み込み得、場合によっては、化合物は、全体的にトリシクリル−ＤＮＡヌクレオチドからなり得る。
【０３２３】
トリシクロ−ホスホロチオエートヌクレオチドは、ホスホロチオエートサブユニット間連結を有するトリシクロ−ＤＮＡヌクレオチドである。トリシクロ−ホスホロチオエートヌクレオチドおよびそれらの合成は、国際特許出願公開第ＷＯ２０１３／０５３９２８号に記載されている。本開示の化合物は、１つ以上のトリシクリル−ＤＮＡヌクレオチドを組み込み得、場合によっては、化合物は、全体的にトリシクリル−ＤＮＡヌクレオチドからなり得る。
【０３２４】
「２’Ｏ−Ｍｅオリゴヌクレオチド」分子は、リボース分子の２’−ＯＨ残基でメチル基を担持する。２’−Ｏ−Ｍｅ−ＲＮＡは、ＤＮＡと同じ（または類似した）挙動を示すが、ヌクレアーゼ分解から保護されている。２’−Ｏ−Ｍｅ−ＲＮＡはまた、さらに安定化させるために、ホスホロチオエートオリゴヌクレオチド（ＰＴＯ）と組み合わせることもできる。２’Ｏ−Ｍｅオリゴヌクレオチド（ホスホジエステルまたはホスホチオエート）を、当該技術分野で日常的な技術に従って合成することができる（例えば、Ｙｏｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．３２：２００８−１６，２００４を参照のこと）。場合によっては、２’Ｏ−Ｍｅオリゴヌクレオチドは、ホスホロチオエート連結（２’Ｏ−Ｍｅホスホロチオエートオリゴヌクレオチド）を含む。
【０３２５】
「モルホリノオリゴヌクレオチド」または「ＰＭＯ」は、典型的なポリヌクレオチドに水素結合することができる核酸塩基を支持する骨格を有するオリゴヌクレオチドを指し、ポリマーは、ペントース糖骨格部分を欠くが、代わりにモルホリノ環を含有する。したがって、ＰＭＯにおいて、モルホリノ環構造は、塩基対合部分を支持して、典型的には、細胞または治療される対象において選択されたアンチセンス標的にハイブリダイズするように設計された塩基対合部分の配列を形成する。例示的な「モルホリノ」オリゴヌクレオチドは、１つのサブユニットのモルホリノ窒素を隣接するサブユニットの４’の環外炭素に結合させるホスホラミデートまたはホスホロジアミデート連結によって一緒に連結されたモルホリノサブユニット構造を含み、各サブユニットは、塩基特異的水素結合によってポリヌクレオチド中の塩基に結合するのに有効なプリンまたはピリミジン核酸塩基を含む。モルホリノオリゴヌクレオチド（アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む）は、例えば、米国特許第５，６９８，６８５号、同第５，２１７，８６６号、同第５，１４２，０４７号、同第５，０３４，５０６号、同第５，１６６，３１５号、同第５，１８５，４４４号、同第５，５２１，０６３号、同第５，５０６，３３７号、および係属中の米国特許出願第１２／２７１，０３６号、同第１２／２７１，０４０号、ならびにＰＣＴ公開ＷＯ／２００９／０６４４７１およびＷＯ／２０１２／０４３７３０に記載されており、これらの全ては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０３２６】
オリゴヌクレオチド構造内では、リン酸基は、一般に、オリゴヌクレオチドの「ヌクレオシド間連結」を形成すると称されている。ＲＮＡおよびＤＮＡの天然に存在するヌクレオシド間連結は、３’から５’のホスホジエステル連結である。「ホスホロアミデート」基は、３個の付着した酸素原子および１個の付着した窒素原子を有するリンを含み、一方、「ホスホロジアミデート」基は、２個の付着した酸素原子および２個の付着した窒素原子を有するリンを含む。本明細書に記載される、ＰＭＯおよび／またはＰＭＯ−Ｘオリゴヌクレオチドの荷電していないまたは陽イオン性サブユニット間連結において、１個の窒素は、常に、骨格鎖に対してペンダントである。ホスホロジアミデート連結における第２の窒素は、典型的には、モルホリノ環構造における環窒素である。
【０３２７】
「ＰＭＯ−Ｘ」は、（ｉ）モルホリノ環の窒素原子との共有結合、および（ｉｉ）４−アミノピペルジン−１−イル（すなわち、ＡＰＮ）の環窒素または４−アミノピペルジン−１−イルの誘導体との第２の共有結合を有するリン原子を有する、ホスホロジアミデートモルホリノオリゴヌクレオチド（ＰＭＯ）を指す。例示的なＰＭＯ−Ｘオリゴヌクレオチドは、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／３８４５９号およびＰＣＴ公開第ＷＯ／２０１３／０７４８３４号に開示されており、これらのそれぞれは、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。「ＰＭＯ−ａｐｎ」または「ＡＰＮ」は、リン原子が、モルホリノ基および４−アミノピペルジン−１−イル（すなわち、ＡＰＮ）の環窒素に連結している、少なくとも１つのヌクレオチド間連結を含むＰＭＯ−Ｘオリゴヌクレオチドを指す。特定の実施形態では、本明細書に記載される標的化配列を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのＡＰＮ含有連結またはＡＰＮ誘導体含有連結を含む。特定の実施形態は、約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％のＡＰＮ／ＡＰＮ誘導体含有連結を有するＰＭＯを含み、残りの連結（１００％未満の場合）は、荷電していない連結であり、例えば、全てのヌクレオチド間結合の約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、もしくは４０個、または少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、もしくは４０個が、ＡＰＮ／ＡＰＮ誘導体含有連結である。
【０３２８】
本明細書に提供される本方法および組成物に従って使用され得るさらなるアンチセンスオリゴヌクレオチド／化学物質は、以下の特許および特許出願において記載されているものを含み、これらの内容は、参照により本明細書に組み込まれる：ＰＣＴ公開第ＷＯ／２００７／００２３９０号、同第ＷＯ／２０１０／１２０８２０号、および同第ＷＯ／２０１０／１４８２４９号、米国特許第７，８３８，６５７号および米国特許出願第２０１１／０２６９８２０号。
【０３２９】
いくつかの実施形態では、免疫調節剤または阻害剤は、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）剤である。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載される、標的タンパク質、標的配列、および／または標的遺伝子（例えば、Ｓ１ＰＲ、カルシニューリン、ｍＴＯＲ、ＩＤＯ、ＩＭＰＤＨ、サイトカインおよび／またはサイトカイン受容体、Ｂ細胞受容体、キナーゼ）は、任意の様々なＲＮＡベースの薬剤または方法によって標的化される。ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）は、元々、ｔｈｅ  ｎｅｍａｔｏｄｅ  Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ  ｅｌｅｇａｎｓの研究において発見された、進化的に保存された遺伝子サイレンシング機構である（Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ，Ｃｅｌｌ  ７５：８４３，１９９３、Ｒｅｉｎｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ４０３：９０１，２０００）。ＲＮＡ干渉は適切な分子機構を発現する細胞内に、ｄｓＲＮＡを導入することが引き金になり、対応する内因性ｍＲＮＡを分解する。この機構には、ｄｓＲＮＡの短いＲＮＡへの転換が含まれるが、これらの短いＲＮＡは、リボヌクレアーゼを相同なｍＲＮＡ標的に向かわせる（Ｒｕｖｋｕｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９４：７９７，２００１を参照のこと）。
【０３３０】
ある特定の実施形態では、ＲＮＡ剤は、より一般には、本明細書に記載され、当該技術分野で周知の方法で、標的遺伝子の「標的配列」に対応するセンス鎖を含むとき、生物学的に関連のある標的（遺伝子）「を標的とする」と言われている。
【０３３１】
ＲＮＡｉ剤は、ＲＮＡｉ核酸分子およびＲＮＡｉ核酸類似体分子、例えば、低分子干渉核酸および低分子干渉核酸類似体（ｓｉＮＡ）を含み、これには、低分子干渉ＲＮＡおよび低分子干渉ＲＮＡ核酸類似体（ｓｉＲＮＡ）を含み、例えば、二本鎖ＲＮＡおよび二本鎖ＲＮＡ類似体（ｄｓＲＮＡ）、マイクロ−ＲＮＡおよびマイクロ−ＲＮＡ類似体（ｍｉＲＮＡ）、ならびに低分子ヘアピンＲＮＡおよび低分子ヘアピンＲＮＡ類似体（ｓｈＲＮＡ）を含む。
【０３３２】
ある特定の実施形態は、ＲＮＡｉ剤として二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）分子を使用する。ｄｓＲＮＡは、概して、２つの一本鎖を含む。ｄｓＲＮＡの一方の鎖（「センス」鎖）は、標的遺伝子または標的配列の一部と実質的に同一であるヌクレオチド配列を含み、もう一方の鎖（「相補的な」または「アンチセンス」鎖）は、標的領域の一部に対して相補的であるか、または実質的に相補的である配列を含む。実質的に同一の配列は、標的配列に対して少なくとも約８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９％同一であるものを含む。これらの鎖は、ハイブリダイズするのに十分相補的であり、二重構造を形成する。ある特定の実施形態では、相補的なＲＮＡ鎖は、３０個未満のヌクレオチド、２５個未満のヌクレオチド長さ、またはさらに１９〜２４個のヌクレオチド長さであり得る。ある特定の態様では、相補的なヌクレオチド配列は、２０〜２３個のヌクレオチド長さ、または２２個のヌクレオチド長さであり得る。ある特定の実施形態では、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、本明細書に記載される標的配列の一部と実質的に同一である。いくつかの実施形態では、このアンチセンス鎖は、本明細書に記載される標的配列の一部に対して相補的であるか、または実質的に相補的である。ある特定の実施形態では、当該一部は、本明細書に記載される標的配列の約６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、もしくは２５、少なくとも約６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、もしくは２５、または約６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、もしくは２５以下の隣接するヌクレオチドを含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる。
【０３３３】
好適なｓｉＲＮＡ配列は、当該技術分野で既知の任意の手段を用いて特定され得る。場合によっては、本明細書に記載される例示的な標的配列を用いて、Ｅｌｂａｓｈｉｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，４１１：４９４−４９８（２００１）およびＥｌｂａｓｈｉｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．，２０：６８７７−６８８８（２００１）に記載される方法は、Ｒｅｙｎｏｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．，２２：３２６−３３０（２００４）に記述されている合理的な設計ルールと組み合わされる。
【０３３４】
概して、対象となる標的遺伝子からの転写物のＡＵＧ開始コドンのヌクレオチド配列３’を、ジヌクレオチド配列（例えば、ＡＡ、ＮＡ、ＣＣ、ＧＧ、またはＵＵ、ここで、Ｎは、Ｃ、Ｇ、またはＵである）について走査することができる（例えば、Ｅｌｂａｓｈｉｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．，２０：６８７７−６８８８（２００１）を参照のこと）。ジヌクレオチド配列のすぐ３’側のヌクレオチドは、潜在的ｓｉＲＮＡ配列（すなわち、標的配列またはセンス鎖配列）として特定される。場合によっては、ジヌクレオチド配列のすぐ３’側の１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５個またはそれ以上のヌクレオチドは、潜在的ｓｉＲＮＡ配列として特定される。いくつかの実施形態では、ジヌクレオチド配列は、ＡＡまたはＮＡ配列であり、ＡＡまたはＮＡジヌクレオチドのすぐ３’側の１９個のヌクレオチドは、潜在的ｓｉＲＮＡ配列として特定される。  ｓｉＲＮＡ配列は、通常、標的遺伝子の長さに沿って異なる位置で間隔があけられている。ｓｉＲＮＡ配列のサイレンシング効率をさらに増進させるために、潜在的ｓｉＲＮＡ配列を分析して、例えば、標的細胞または生物体中に、他のコード配列と相同性の領域を含まない部位を特定することができる。例えば、約２１個の塩基対の好適なｓｉＲＮＡ配列は、典型的には、標的細胞または生物体中のコード配列と相同性の１６〜１７個超の隣接する塩基対は有しないことになる。ｓｉＲＮＡ配列がＲＮＡ  Ｐｏｌ  ＩＩＩプロモーターから発現されることになる場合、４個超の隣接するＡ’またはＴ’が欠けたｓｉＲＮＡ配列が選択される。
【０３３５】
潜在的ｓｉＲＮＡ配列が特定されたら、配列は、当該技術分野で既知の様々な基準を用いて分析することができる。例えば、それらのサイレンシング効率を増進させるために、合理的設計アルゴリズムによってｓｉＲＮＡ配列を分析して、以下の特性：（１）約２５％〜約６０％のＧ／ＣのＧ／Ｃ含量、（２）センス鎖の１５〜１９位で少なくとも３つのＡ／Ｕ、（３）内部反復はなし、（４）センス鎖の１９位にＡ、（５）センス鎖の３位にＡ、（６）センス鎖の１０位にＵ、（７）センス鎖の１９位にＧ／Ｃなし、および（８）センス鎖の１３位にＧなしのうちの１つ以上を有する配列を特定することができる。これらの特性のそれぞれの適切な値を指定するものであり、ｓｉＲＮＡの選択に有用であるアルゴリズムを組み込んでいるｓｉＲＮＡ設計ツールは、既知である。当業者は、前述の特徴のうちの１つ以上を有する配列が、さらなる分析および試験のために、潜在的ｓｉＲＮＡ配列として選択できることを理解されよう。
【０３３６】
さらに、以下の基準のうちの１つ以上を有する潜在的ｓｉＲＮＡ標的配列は、ｓｉＲＮＡとしてしばしば排除することができる：（１）列の中に４つ以上の同じ塩基のストレッチを含む配列、（２）Ｇのホモポリマーを含む配列（すなわち、これらのポリマーの構造的特徴に起因する非特異的効果の可能性を低減させるため、（３）三重塩基モチーフ（例えば、ＧＧＧ、ＣＣＣ、ＡＡＡ、またはＴＴＴ）を含む配列、（４）列の中に７つ以上のＧ／Ｃのストレッチを含む配列、および（５）内部折り返し構造をもたらす候補中の４つ以上の塩基の直列反復を含む配列。しかしながら、当業者は、前述の特徴のうちの１つ以上を有する配列が、依然として、潜在的ｓｉＲＮＡ配列としてさらに分析および試験するために選択することができることを理解されよう。
【０３３７】
いくつかの実施形態では、潜在的ｓｉＲＮＡ標的配列は、例えば、Ｋｈｖｏｒｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ，１１５：２０９−２１６（２００３）、およびＳｃｈｗａｒｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ，１１５：１９９−２０８（２００３）に記載されている、ｓｉＲＮＡ二重鎖非対称に基づいてさらに分析することができる。ある特定の実施形態では、潜在的ｓｉＲＮＡ標的配列は、例えば、Ｌｕｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，３１８：３０３−３１０（２００４）に記載されている、ｍＲＮＡ標的部位での二次構造に基づいてさらに分析することができる。例えば、ｍＲＮＡでの二次構造を、Ｍｆｏｌｄアルゴリズムを用いてモデル化して、塩基対合およびステム−ループの形態でより少ない二次構造が存在するｍＲＮＡ標的部位でのアクセス性に好都合なｓｉＲＮＡ配列を選択することができる。
【０３３８】
潜在的ｓｉＲＮＡ配列はまた、例えば、インビトロサイトカインアッセイまたはインビボ動物モデルを用いて、任意の免疫賦活特性の存在について分析することができる。ＧＵ−リッチモチーフなど（例えば、５’−ＧＵ−３’、５’−ＵＧＵ−３’、５’−ＧＵＧＵ−３’、５’−ＵＧＵＧＵ−３’など）のｓｉＲＮＡ配列のセンスおよび／またはアンチセンス鎖中のモチーフは、その配列が免疫賦活性であるかどうかの目安も提供することができる。ｓｉＲＮＡ分子が免疫賦活性であることが分かったら、次いで、これを修飾して、本明細書に記載されるようなその免疫賦活特性を減少させることができる。非限定的な例として、細胞が検出可能な免疫応答をもたらすような条件下で、ｓｉＲＮＡ配列を哺乳動物のレスポンダー細胞と接触させ、ｓｉＲＮＡが免疫賦活性であるか非免疫賦活性ｓｉＲＮＡであるか判定することができる。哺乳動物のレスポンダー細胞は、ナイーブ哺乳動物（すなわち、以前にｓｉＲＮＡ配列の遺伝子産生物と接触したことがない哺乳動物）からのものであってよい。哺乳動物のレスポンダー細胞は、例えば、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、マクロファージなどであり得る。検出可能な免疫応答には、例えば、ＴＮＦ−アルファ、ＩＦＮ−アルファ、ＩＦＮ−ベータ、ＩＦＮ−ガンマ、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、またはそれらの組み合わせのようなサイトカインまたは成長因子の産生が含まれ得る。次いで、免疫賦活性であることが同定されたｓｉＲＮＡ分子は、センス鎖および／またはアンチセンス鎖のヌクレオチドのうちの少なくとも１個を修飾ヌクレオチドに交換することによって、免疫賦活特性を減少させるために修飾され得る。例えば、ｓｉＲＮＡ二重鎖の二重鎖領域内のヌクレオチドのうちの約３０％未満（例えば、約３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、または５％未満）が、２’ＯＭｅヌクレオチドなどの修飾ヌクレオチドに交換され得る。次いで、修飾ｓｉＲＮＡは、免疫賦活特性が低下したかまたは抑止されたことを確認するため、上記のような哺乳動物のレスポンダー細胞と接触させられ得る。
【０３３９】
ＲＮＡｉ剤は、典型的には、サイレンシングが、所望であり、それ故に、当該ＲＮＡｉ剤によって標的化される、ｍＲＮＡと同一であるか、またはほとんど同一である（例えば、と９０％またはそれ以上、例えば、少なくとも９５％の配列同一性を示す、または最大２つおよび任意に１つのみのミスマッチを示す）、少なくとも１６個の塩基、任意に、少なくとも１７個の塩基、より任意に、少なくとも１８個の塩基、さらにより任意に、少なくとも１９個の塩基、および通常、１８〜３５個の塩基、任意に、１９〜３０個の塩基、より任意に、２０〜２５個の塩基、およびさらにより任意に、２１〜２３個の塩基を含む、二本鎖部分（任意の一本鎖オーバーハンドの任意のおよび潜在的に好ましい存在にもかかわらず）を含む。
【０３４０】
ある特定の実施形態では、ＲＮＡ鎖の少なくとも１つは、１〜４個のヌクレオチド長さのヌクレオチドオーバーハングを含む。いくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡは、少なくとも１つの化学的に修飾されたヌクレオチドを含む。ある特定の態様では、１〜４個のヌクレオチドの一本鎖オーバーハングを含むｄｓＲＮＡは、末端ヌクレオチド対に直接隣接する一本鎖オーバーハングの不対ヌクレオチドがプリン塩基を含む、分子を含み得る。いくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡの両端上の最後の相補的ヌクレオチド対は、Ｇ−Ｃ対であるか、または最後の４つの末端ヌクレオチド対の少なくとも２つは、Ｇ−Ｃ対である。
【０３４１】
ある特定の実施形態では、ＲＮＡｉ剤は、マイクロＲＮＡを含む。マイクロＲＮＡは、生物において天然に産生される低分子ＲＮＡの大きな群を表し、これらの一部は、標的遺伝子の発現を調節する。マイクロＲＮＡは、ダイサーによって約７０ヌクレオチドの一本鎖ヘアピン前駆体転写物から形成される。（Ｖ．Ａｍｂｒｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １３：８０７，２００３を参照のこと）。マイクロＲＮＡは、タンパク質へ翻訳されず、しかしそれどころか特定のメッセンジャーＲＮＡと結合し、それによって翻訳を遮断する。マイクロＲＮＡは標的と不正確に塩基対形成して、翻訳を阻害すると考えられている。ある特定のマイクロＲＮＡは、ヘアピンＲＮＡ前駆体として転写され得、ダイサー酵素によって成熟形態へプロセシングされる。
【０３４２】
ある特定の実施形態では、ＲＮＡｉ剤またはオリゴヌクレオチドは、一本鎖である。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤またはオリゴヌクレオチドは、二本鎖である。ある特定の実施形態は、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）を含む。ある特定の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドの第１の鎖は、第２の鎖よりも２つ以上のヌクレオシド残基を含有する。他の実施形態では、第１の鎖および第２の鎖は、同じ数のヌクレオシドを有するが、第１および第２の鎖は、第１の鎖および第２の鎖上の２つの末端ヌクレオシドが、相補的鎖上の残基と対合しないように相殺される。ある特定の場合によっては、対合されない２つのヌクレオシドは、チミジン残基である。
【０３４３】
調節剤がｓｉＲＮＡを含む場合によっては、この薬剤は、ｓｉＲＮＡ剤またはその断片が、標的遺伝子またはＲＮＡの下方調節を媒介することができるように、標的領域に対して十分な相同性の領域を含み、ヌクレオチドに関して十分な長さのものである。「リボヌクレオチド」または「ヌクレオチド」という用語は、修飾ＲＮＡまたはヌクレオチドサロゲートの場合、１つ以上の位置における修飾ヌクレオチドまたはサロゲート置換部分を指し得ることも理解されよう。したがって、ｓｉＲＮＡ剤は、標的配列に対して少なくとも部分的に相補的である領域であるか、またはそれを含む。ｓｉＲＮＡ剤と標的配列との間に完全な相補性が存在する必要はないが、対応関係は、例えば、ｓｉＲＮＡ剤またはその開裂産物が、例えば、標的ＲＮＡのＲＮＡｉ開裂によって配列特異的サイレンシングを導くことを可能にするほどに十分でなければならない。標的鎖との相補性または相同性度は、アンチセンス鎖において最も重要である。完全な相補性は、特に、アンチセンス鎖において、しばしば所望されているが、いくつかの実施形態は、１つ以上、但し好ましくは１０、８、６、５、４、３、２個またはそれ未満のミスマッチを標的配列に対して含む。ミスマッチは、末端領域で最も寛容され、存在する場合には、好ましくは、末端領域内、例えば、５’および／または３’末端の６、５、４、または３個のヌクレオチド内の末端領域内にある。センス鎖は、分子の全体的二本鎖特性を維持するためにアンチセンス鎖と十分に相補的であることしか必要でない。
【０３４４】
いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤またはオリゴヌクレオチド、例えば、ｓｉＲＮＡオリゴヌクレオチドは、修飾されるか、またはヌクレオシドサロゲートを含む。ｓｉＲＮＡ剤の一本鎖領域は、修飾されるか、またはヌクレオシドサロゲートを含み得、例えば、ヘアピン構造の不対領域、例えば、２つの相補的な領域を連結する領域は、修飾またはヌクレオシドサロゲートを有し得る。例えば、エキソヌクレアーゼに対して、ｓｉＲＮＡ剤の１つ以上の３’もしくは５’末端を安定化するための、またはアンチセンスｓｉＲＮＡ剤がＲＩＳＣに入ることを助長するための修飾もまた、含まれる。例示的な修飾は、Ｃ３（またはＣ６、Ｃ７、Ｃ１２）アミノリンカー、チオールリンカー、カルボキシルリンカー、非ヌクレオチドスペーサー（Ｃ３、Ｃ６、Ｃ９、Ｃ１２、脱塩基、トリエチレングリコール、ヘキサエチレングリコール）、ならびにホスホラミダイトとして生じ、かつＲＮＡ合成中に複数のカップリングを可能にするように、別のＤＭＴ保護ヒドロキシル基を有する、特別なビオチンまたはフルオレセイン試薬を含むことができる。
【０３４５】
ある特定のｓｉＲＮＡ剤は、例えば、インターフェロン応答を引き起こすのに十分長い分子（Ｄｉｃｅｒ（Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．２００１．Ｎａｔｕｒｅ，４０９：３６３−３６６）によって切断され、ＲＩＳＣ（ＲＮＡｉ誘発サイレンシング複合体）に入ることができる）を含む。インターフェロン応答を引き起こさないくらい十分長い分子（この分子はまた、Ｄｉｃｅｒによって開裂され、および／またはＲＩＳＣに入ることができる）、例えば、ＲＩＳＣへ入ることを可能にするサイズの分子、例えば、Ｄｉｃｅｒ開裂産物に類似する分子もまた、含まれる。インターフェロン応答を引き起こさないくらい十分短い分子は、本明細書において、ｓｉＲＮＡ剤またはより短いＲＮＡｉ剤と呼ばれる。使用する、「ｓｉＲＮＡ剤またはより短いＲＮＡｉ剤」は、ヒト細胞内で有害なインターフェロン応答を誘発しないくらい十分短い、ｓｉＲＮＡ剤を指し、例えば、それは、６０未満であるが、好ましくは、５０、４０、または３０未満のヌクレオチド対の二重鎖領域を有する。ｓｉＲＮＡ調節剤またはその開裂産物は、例えば、標的ＲＮＡに対してＲＮＡｉを誘発することによって、標的遺伝子を下方制御することができる。
【０３４６】
場合によっては、ｓｉＲＮＡ剤の各鎖は、約３５、３４、３３、３２、３１、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、もしくは１５個または約３５、３４、３３、３２、３１、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、もしくは１５個未満のヌクレオチド長さである。例えば、各鎖は、約２１〜２５個のヌクレオチド長さであり得る。特定のｓｉＲＮＡ剤は、約１７、１８、１９、２９、２１、２２、２３、２４、または２５個のヌクレオチ対の二重鎖領域、および１つ以上のオーバーハング、例えば、１〜３個のヌクレオチドの１つまたは２つの３’オーバーハングを有する。
【０３４７】
標的ＲＮＡに対する相同性および標的遺伝子を下方調節する能力に加えて、ｓｉＲＮＡ剤は、以下の特性のうちの１つ以上を有してもよい：それは、極めて多数のまたは全てのヌクレオシドに対してさえ修飾がなされているにもかかわらず、正確な塩基対の形成、および例えば、標的ＲＮＡの切断によって、標的の下方調節を可能にするのに十分な、相同な標的ＲＮＡとの二重鎖構造の形成が可能であるように適切な３次元フレームワークで塩基（または修飾塩基）を提示することができるアンチセンス鎖を有し得、極めて多数のまたは全てのヌクレオシドに対してさえ修飾がなされているにもかかわらず、「ＲＮＡ様」特性をなお有し得、すなわち、リボヌクレオチドベースの内容物だけに限られないか、またはリボヌクレオチドベースの内容物が一部ですらあるとしても、ＲＮＡ分子の全体的な構造的、化学的、および物理的特性を有し得る。例えば、ｓｉＲＮＡ剤は、例えば、全てのヌクレオチド糖が、例えば、２’ヒドロキシルの代わりに２’フルオロを含有するセンスおよび／またはアンチセンス鎖を含有することができる。このデオキシリボヌクレオチド含有剤はなお、ＲＮＡ様特性を示すことが期待され得る。理論に拘束されることを望まないが、電気陰性のフッ素は、リボースのＣ２’位に結合する場合、軸配向を好む。フッ素のこの空間的選好は、同様に、糖にＣ３’エンドパッカーを取ることを強制することできる。これは、ＲＮＡ分子に観察されるのと同じパッカリング様式であり、ＲＮＡに特徴的なＡファミリー型ヘリックスを生じる。さらに、フッ素は、良好な水素結合受容体であるため、ＲＮＡ構造を安定化することが知られている水分子と同じ水素結合相互作用に参与することができる。概して、２’糖位置の修飾部分は、デオキシリボヌクレオチドのＨ部分よりもリボヌクレオチドのＯＨ部分にさらに特徴的であるＨ結合に入ることが可能である。
【０３４８】
本明細書で使用される、「一本鎖ＲＮＡｉ剤」は、単一分子から構成されたＲＮＡｉ剤である。一本鎖ＲＮＡｉ剤は、鎖内対によって形成される二重鎖領域を含んでもよく、例えば、一本鎖ＲＮＡｉ剤は、ヘアピン構造もしくはパンハンドル（ｐａｎ−ｈａｎｄｌｅ）構造であり得るか、またはそれを含み得る。一本鎖ＲＮＡｉを調節する薬剤は、好ましくは、標的分子に関してアンチセンスである。一本鎖ＲＮＡｉ剤は、ＲＩＳＣに入り、ＲＩＳＣを介した標的ｍＲＮＡの切断に関与することができるぐらい十分に長くてもよい。一本鎖ＲＮＡｉ剤は、少なくとも１４個、より好ましくは、少なくとも１５、２０、２５、２９、３５、４０、または５０個のヌクレオチド長さである。それは、好ましくは、２００、１００、または６０個未満のヌクレオチド長さである。
【０３４９】
ヘアピンＲＮＡｉ剤は、１７、１８、１９、２９、２１、２２、２３、２４、もしくは２５個のヌクレオチド対に等しいか、または少なくとも１７、１８、１９、２９、２１、２２、２３、２４、もしくは２５個のヌクレオチド対の二重鎖領域を有し得る。二重鎖領域は、好ましくは、２００、１００、もしくは５０個の長さに等しいか、または２００、１００、もしくは５０個未満の長さであり得る。二重鎖領域のある特定の範囲は、１５〜３０、１７〜２３、１９〜２３、および１９〜２１個のヌクレオチド対である。ヘアピンは、好ましくは、３’に、および好ましくは、ヘアピンのアンチセンス側に、一本鎖オーバーハングまたは末端不対領域を有し得る。ある特定の実施形態では、オーバーハングは、２〜３個のヌクレオチ長さである。
【０３５０】
本明細書に提供される方法に従って使用されるある特定の調節剤は、キメラオリゴヌクレオチドまたは「キメラ」が、２つ以上の化学的に異なる領域を含有するなどのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを含み、このような領域は、それぞれ、少なくとも１つのモノマー単位、すなわち、オリゴヌクレオチド化合物の場合はヌクレオチドからなっている。これらのオリゴヌクレオチドは、典型的には、少なくとも１つの領域を含み、このオリゴヌクレオチドは、ヌクレアーゼ分解に対する耐性を強化する、細胞取り込みを増強させる、および／または標的核酸に対する結合親和性を増強させるように修飾されている。その結果、キメラオリゴヌクレオチドを使用する場合には、ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドと比較して、より短いオリゴヌクレオチドを用いていられた結果と類似した結果がしばしば得られ得る。キメラオリゴヌクレオチドは、上述のように、２つ以上のオリゴヌクレオチド、修飾オリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、および／またはオリゴヌクレオチド模倣体からなる複合構造として形成され得る。このようなオリゴヌクレオチドはまた、当該技術分野において、ハイブリッドまたはギャップマーとも称される。このようなハイブリッド構造の調製を教示する代表的な米国特許としては、米国特許第５，０１３，８３０号、同第５，１４９，７９７号、同第５，２２０，００７号、同第５，２５６，７７５号、同第５，３６６，８７８号、同第５，４０３，７１１号、同第５，４９１，１３３号、同第５，５６５，３５０号、同第５，６２３，０６５号、同第５，６５２，３５５号、同第５，６５２，３５６号、同第５，７００，９２２号、および同第５，９５５，５８９号が挙げられるが、これらに限定されず、これらのそれぞれは、参照により本明細書に組み込まれる。ある特定の実施形態では、キメラオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡ−ＤＮＡ、ＤＮＡ−ＲＮＡ、ＲＮＡ−ＤＮＡ−ＲＮＡ、ＤＮＡ−ＲＮＡ−ＤＮＡ、またはＲＮＡ−ＤＮＡ−ＲＮＡ−ＤＮＡであり、ここで、オリゴヌクレオチドは、５〜６０個のヌクレオチド長さである。
【０３５１】
いくつかの態様では、ＲＮＡｉ剤には、変更されたまたは非天然の核酸塩基につながれた少なくとも１つのリガンドを含むオリゴヌクレオチドが含まれる。多数の化合物が、変更された塩基として機能し得る。変更された塩基の構造は、変更された塩基が、その標的、例えば、ｍＲＮＡに対するオリゴヌクレオチドの結合を実質的に妨げることがないはずである程度に重要である。ある特定の実施形態では、変更された塩基は、ジフルオロトリル、ニトロピロリル、ニトロイミダゾリル、ニトロインドリル、ナフタレニル、アントラセニル、ピリジニル、キノリニル、ピレニル、または本明細書に記載される非天然の核酸塩基のいずれか１つの２価のラジカルである。ある特定の実施形態では、非天然の核酸塩基は、ジフルオロトリル、ニトロピロリル、またはニトロイミダゾリルである。ある特定の実施形態では、非天然の核酸塩基は、ジフルオロトリルである。多種多様なリガンドが、当該技術分野で周知である。例えば、リガンドは、ステロイド、胆汁酸、脂質、葉酸、ピリドキサール、Ｂ１２、リボフラビン、ビオチン、芳香族化合物、多環式化合物、クラウンエーテル、干渉物質、切断剤分子、タンパク質結合剤、または炭水化物であり得る。ある特定の実施形態では、リガンドは、ステロイドまたは芳香族化合物である。ある特定の場合によっては、リガンドは、コレステリルである。
【０３５２】
いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤は、細胞の標的化および取り込みを改善する目的のためにリガンドにつながれるオリゴヌクレオチドである。例えば、ＲＮＡｉ剤は、抗体またはその抗原結合断片につながれ得る。さらなる例として、ＲＮＡｉ剤は、特定の細胞表面受容体に特異的に結合する、ポリペプチドまたはポリペプチド断片などの特異的なリガンド結合分子につながれ得る。
【０３５３】
ある特定の実施形態では、ＲＮＡｉ剤は、非天然の核酸塩基を含む。いくつかの実施形態では、非天然の核酸塩基は、ジフルオロトリル、ニトロイミダゾリル、ニトロインドリル、またはニトロピロリルである。ある特定の実施形態では、芳香族化合物に提供される調節剤は、二本鎖オリゴヌクレオチド配列に関し、二本鎖の一本のみが、非天然の核酸塩基を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で使用される調節剤は、二本鎖オリゴヌクレオチド配列に関し、これらの鎖の両方が独立して、少なくとも１つの非天然の核酸塩基を含む。
【０３５４】
ある特定の場合によっては、ヌクレオシドに天然に存在するリボース糖部分は、ヘキソース糖で置き換えられる。ある特定の態様では、ヘキソース糖は、アロース、アルトロース、グルコース、マンノース、グロース、イドース、ガラクトース、タロース、またはそれらの誘導体である。好ましい実施形態では、ヘキソースは、Ｄ−ヘキソースである。ある特定の場合によっては、ヌクレオシドに天然に存在するリボース糖部分は、多環式ヘテロアルキル環またはシクロヘキセニル基で置き換えられる。ある特定の場合によっては、多環式ヘテロアルキル基は、環内に１個の酸素原子を含む二環式環である。ある特定の場合によっては、多環式ヘテロアルキル基は、ビシクロ［２．２．１］ヘプタン、ビシクロ［３．２．１］オクタン、またはビシクロ［３．３．１］ノナンである。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドの骨格を修飾して、オリゴヌクレオチド化合物の治療用または診断用特性を向上させる。ある特定の実施形態では、塩基の少なくとも１つまたはオリゴヌクレオチドの糖の少なくとも１つを修飾して、オリゴヌクレオチド化合物の治療用または診断用特性を向上させる。オリゴヌクレオチドが二本鎖であるときの場合によっては、二本の鎖は、相補的、部分的に相補的、またはキメラオリゴヌクレオチドである。
【０３５５】
修飾されたＲＮＡｉ剤の例には、修飾された骨格または非天然のヌクレオチド間連結を含むオリゴヌクレオチドが含まれる。本明細書に定義されるように、修飾された骨格または非天然のヌクレオチド間連結を有するオリゴヌクレオチドには、骨格内にリン原子を保持しているものおよび骨格内にリン原子を保持していないものが含まれる。それらの糖間骨格内にリン原子を有しない修飾されたオリゴヌクレオチドはまた、オリゴヌクレオチドであると考えることができる。特定のオリゴヌクレオチド化学的修飾を、以下に記載する。与えられた化合物中の全ての位置において均一に修飾されている必要はなく、実際、以下の修飾のうちの１つ以上が、単一のオリゴヌクレオチド化合物、またはそれらの単一のヌクレオチドにおいてでさえ組み込まれ得る。
【０３５６】
修飾されたヌクレオチド間連結または骨格の例には、例えば、ホスホロチオエート、キラルホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、メチルおよびその他のアルキルホスホナート（３’−アルキレンホスホナートおよびキラルホスホナートを含む）、ホスフィナート、ホスホロアミダート（３’−アミノホスホロアミダートおよびアミノアルキルホスホロアミダート類を含む）、チオノホスホロアミダート、チオノアルキルホスホナート、チオノアルキルホスホトリエステル、およびボラノホスフェート（正常な３’−５’連結を有するもの、これらの２’−５’連結された類似体、ならびに、極性が逆であるもの、このとき、隣接するヌクレオシドユニット対は、３’−５’から５’−３’に、２’−５’から５’−２’に連結している）などが含まれる。様々な塩、混合塩、および遊離酸型もまた含まれる。
【０３５７】
上記のリン原子含有連結の調製を教示する代表的な米国特許としては、米国特許第３，６８７，８０８号、同第４，４６９，８６３号、同第４，４７６，３０１号、同第５，０２３，２４３号、同第５，１７７，１９６号、同第５，１８８，８９７号、同第５，２６４，４２３号、同第５，２７６，０１９号、同第５，２７８，３０２号、同第５，２８６，７１７号、同第５，３２１，１３１号、同第５，３９９，６７６号、同第５，４０５，９３９号、同第５，４５３，４９６号、同第５，４５５，２３３号、同第５，４６６，６７７号、同第５，４７６，９２５号、同第５，５１９，１２６号、同第５，５３６，８２１号、同第５，５４１，３０６号、同第５，５５０，１１１号、同第５，５６３，２５３号、同第５，５７１，７９９号、同第５，５８７，３６１号、同第５，６２５，０５０号、および同第５，６９７，２４８号が挙げられるが、これらに限定されず、これらのそれぞれは、参照により本明細書に組み込まれる。
【０３５８】
その中にリン原子を含まない、修飾されたヌクレオチド間連結または骨格（すなわち、オリゴヌクレオチド）の例は、短鎖アルキルまたはシクロアルキル糖間連結、ヘテロ原子とアルキルもしくはシクロアルキルが混じった糖間連結、あるいは、１つ以上の短鎖ヘテロ原子もしくは複素環式糖間連結によって形成された骨格を有する。これらには、モルホリノ連結（ヌクレオシドの糖部分からその一部が形成されている）；シロキサン骨格；スルフィド、スルホキシドおよびスルホン骨格；ホルムアセチルおよびチオホルムアセチル骨格；メチレンホルムアセチルおよびチオホルムアセチル骨格；アルケン含有骨格；スルファメート骨格、メチレンイミノおよびメチレンヒドラジノ骨格；スルホナートおよびスルホンアミド骨格；アミド骨格；ならびに、Ｎ、Ｏ、Ｓ、およびＣＨ２の構成部分が混じったその他の骨格などが含まれる。
【０３５９】
上記のオリゴヌクレオチドの調製を教示する代表的な米国特許としては、米国特許第５，０３４，５０６号、同第５，１６６，３１５号、同第５，１８５，４４４号、同第５，２１４，１３４号、同第５，２１６，１４１号、同第５，２３５，０３３号、同第５，２６４，５６２号、同第５，２６４，５６４号、同第５，４０５，９３８号、同第５，４３４，２５７号、同第５，４６６，６７７号、同第５，４７０，９６７号、同第５，４８９，６７７号、同第５，５４１，３０７号、同第５，５６１，２２５号、同第５，５９６，０８６号、同第５，６０２，２４０号、同第５，６１０，２８９号、同第５，６０２，２４０号、同第５，６０８，０４６号、同第５，６１０，２８９号、同第５，６１８，７０４号、同第５，６２３，０７０号、同第５，６６３，３１２号、同第５，６３３，３６０号、同第５，６７７，４３７号、および同第５，６７７，４３９号が挙げられるが、これらに限定されず、これらのそれぞれは、参照により本明細書に組み込まれる。
【０３６０】
オリゴヌクレオチド模倣体の他の例では、糖およびヌクレオシド間連結の両方、すなわち、ヌクレオシド単位の骨格が他の基で置換され得る。ヌクレオシド単位は、適切な核酸標的化合物とのハイブリダイゼーションのために維持されている。卓越したハイブリダイゼーション特性を有することが示されている、１つのそのようなオリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオチド模倣体は、ペプチド核酸（ＰＮＡ）と称されている。ＰＮＡ化合物においては、オリゴヌクレオチドの糖骨格は、アミド含有骨格、特に、アミノエチルグリシン骨格に置換されている。核酸塩基は、保持されており、骨格のアミド部分の原子に直接または間接的に結合している。ＰＮＡ化合物の調製を教示する代表的な米国特許としては、米国特許第５，５３９，０８２号、同第５，７１４，３３１号、および同第５，７１９，２６２号が挙げられるが、これらに限定されず、これらのそれぞれは、参照により本明細書に組み込まれる。ＰＮＡ化合物のさらなる教示は、Ｎｉｅｌｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９１，２５４，１４９７において見出され得る。
【０３６１】
リボザイムを使用するオリゴヌクレオチドもまた含まれる。高度に特異的なエンドリボヌクレアーゼ活性を触媒する、合成ＲＮＡ分子およびそれらの誘導体は、リボザイムとして知られている。（一般的には、Ｈａｓｅｌｏｆｆらによる米国特許第５，５４３，５０８号およびＧｏｏｄｃｈｉｌｄらによる米国特許第５，５４５，７２９号を参照のこと）。切断反応は、ＲＮＡ分子自身によって触媒される。天然に存在するＲＮＡ分子においては、自己触媒切断部位は、ＲＮＡの二次構造の高度に保存された領域内に存在している（Ｂｕｚａｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．８３：８８５９，１９８６）。天然に存在する自己触媒性ＲＮＡ分子を修飾し、特定の細胞性または病原性ＲＮＡ分子を高い特異度を有する標的化することができるリボザイムを生成する。したがって、リボザイムは、アンチセンスオリゴヌクレオチドと同じ一般的目的（すなわち、特定の遺伝子の発現制御）に役立ち、オリゴヌクレオチドと同様に、一本鎖の鎖状態のかなりの部分を有する核酸である。すなわち、リボザイムは、オリゴヌクレオチドと実質的な化学的および機能的同一性を有しており、したがって、本明細書に記載される目的に対しては等価物であると考えられる。
【０３６２】
ある特定の場合によっては、ＲＮＡｉ剤は、非リガンド基によって修飾され得る。多数の非リガンド分子は、オリゴヌクレオチドの活性、細胞性分布、細胞標的化、または細胞取り込みを増強させるためにコンジュゲートされており、そのようなコンジュゲーションを行うための手順は、参考文献から入手可能である。非リガンド部分の例には、脂質部分、例えば、コレステロール（Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９８９，８６：６５５３）、コール酸（Ｍａｎｏｈａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１９９４，４：１０５３）、チオエーテル、例えば、ヘキシル−５−トリチルチオール（Ｍａｎｏｈａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，１９９２，６６０：３０６、Ｍａｎｏｈａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔ．，１９９３，３：２７６５）、チオコレステロール（Ｏｂｅｒｈａｕｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，１９９２，２０：５３３）、脂肪族鎖、例えば、ドデカンジオールもしくはウンデシル残基（Ｓａｉｓｏｎ−Ｂｅｈｍｏａｒａｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．，１９９１，１０：１１１、Ｋａｂａｎｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．，１９９０，２５９：３２７、Ｓｖｉｎａｒｃｈｕｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ，１９９３，７５：４９）、リン脂質、例えば、ジ−ヘキサデシル−ｒａｃ−グリセロールもしくはトリエチルアンモニウム１，２−ジ−Ｏ−ヘキサデシル−ｒａｃ−グリセロ−３−Ｈ−ホスホナート（Ｍａｎｏｈａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．，１９９５，３６：３６５１、Ｓｈｅａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，１９９０，１８：３７７７）、ポリアミンもしくはポリエチレングリコール鎖（Ｍａｎｏｈａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ＆Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，１９９５，１４：９６９）、あるいはアダマンタン酢酸（Ｍａｎｏｈａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．，１９９５，３６：３６５１）、パルミチル部分（Ｍｉｓｈｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，１９９５，１２６４：２２９）、あるいはオクタデシルアミンもしくはヘキシルアミノ−カルボニル−オキシコレステロール部分（Ｃｒｏｏｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，１９９６，２７７：９２３）が含まれる。典型的なコンジュゲーションプロトコルは、配列の１つ以上の位置においてアミノリンカーを有するオリゴヌクレオチドを合成することを含む。次いで、アミノ基に、適切なカップリングまたは活性化試薬を用い、コンジュゲートされた分子を反応させる。コンジュゲーション反応は、オリゴヌクレオチドが固体支持体に結合したままの状態で、または、オリゴヌクレオチドを液相中に切断した後のいずれでも行うことができる。ＨＰＬＣによるオリゴヌクレオチドコンジュゲートの精製することにより、典型的には、純粋なコンジュゲートが得られる。
【０３６３】
ある特定の例示的なＲＮＡｉ剤は、ベクターにおける送達を提供する。「ベクター」という用語は、概して、核酸分子、典型的には、ＤＮＡを指し、核酸セグメントは、挿入され、クローン化、すなわち、伝播され得る。したがって、ベクターは、典型的には、１つ以上の独自の制限酵素認識部位を含み、クローン化した配列が再生可能であるため、定義された宿主またはビヒクル生物における自己複製が可能であり得る。ベクターとしては、プラスミド、ファージミド、バクテリオファージ、バクテリオファージ由来ベクター、ＰＡＣ、ＢＡＣ、直鎖状核酸、例えば、直鎖状ＤＮＡ、ウイルスベクターなどを含み得る。発現ベクターは、そこに導入された核酸もしくはＯＲＦの発現を所望の発現系、例えばインビトロで、宿主細胞、宿主器官および／もしくは宿主生物において可能にし、かつ／または実行するように一般的に構成される。例えば、発現ベクターは、好適な調節配列を有利に含んでよい。
【０３６４】
本明細書で使用するための例示的なベクターは、ウイルスベクターを含み、これは、公知であり、例えば、限定されず、レトロウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）由来のベクターを含む。このようなウイルスベクターは、本明細書に開示されるアンチセンスまたはＲＮＡｉ剤のうちのいずれか１つをコードする核酸配列をここに導入するように、それ自体知られる組換え技術によって操作され得る。
【０３６５】
例えば、レトロウイルスベクターは、ＲＮＡｉ剤を送達するために本明細書で使用され得る。概して、レトロウイルスベクターは、対象となる宿主細胞ゲノムおよび核酸配列、例えば、特に、本明細書に開示されているアンチセンスまたはＲＮＡｉ剤のうちの１つをコードする核酸配列への組換えウイルスゲノム（ランダムに）の統合に必要な構成要素をコードするレトロウイルスゲノム配列を含み得る。このようなレトロウイルスベクターは、標準的な組換え技術を用いて、例えば、Ｂ、Ｃ、およびＤ型レトロウイルス、ならびにスプマウイルスおよびレンチウイルスを含む様々なレトロウイルスから容易に構築され得る（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，２ｄ  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９８９）（ＲＮＡ  Ｔｕｍｏｒ  Ｖｉｒｕｓｅｓ，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，１９８５を参照のこと）。
【０３６６】
組換えアデノウイルスベクターはまた、宿主細胞において本明細書に開示されているように、ＲＮＡｉ剤の送達および発現のために企図され得る。アデノウイルスに基づいたウイルスベクターは、非分裂宿主細胞を感染させることができるという利点があるが、組換えウイルスゲノムは、宿主細胞ゲノムに統合されない。例えば、好適なアデノウイルスベクター、その組換えアデノウイルスベクターを構築するための方法、および宿主細胞に組換えベクターを送達するための方法は、Ｘｉａ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）において記載されている（Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２０：１００６−１０１０）。組換えＡＡＶ（ＲＡＡＶ）ベクターの使用はまた、本明細書に企図される。ＲＡＡＶベクターは、分裂および非分裂細胞の両方に感染させることができ、その組換えウイルスゲノムを宿主の組換えウイルスゲノムに組み込んでもよい。ＲＡＡＶベクターは、例えば、血清型１〜６を含む、様々なアデノ随伴ウイルスから生成され得る。概して、ＲＡＡＶベクターは、順に、５’アデノ随伴ウイルス逆方向末端反復（ＩＴＲ）、対象となる核酸、例えば、特に、宿主細胞または宿主生物においてその発現を調節する配列に作動可能に連結される、本明細書に開示されているアンチセンスまたはＲＮＡｉ剤のいずれか１つをコードする核酸配列、および３’アデノ随伴ウイルスのＩＴＲを含み得る。加えて、ｒＡＡＶベクターは、好ましくは、ポリアデニル化シグナルを有し得る。好適なＲＡＡＶベクターは、とりわけ、ＷＯ１９９４／１３７８８、ＷＯ１９９３／２４６４１、Ｇｏｙｅｎｖａｌｌｅ  ｅｔ  ａｌ．２００４（Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３０６：１７９６−１７９９）に記載されており、アンチセンス配列は、修飾されたＵ７小型核ＲＮＡに連結されている。
【０３６７】
本明細書に使用するための他の例示的なウイルスベクターは、ワクシニアウイルスなどのポックスウイルス、例えば、弱毒化したワクシニアウイルス、例えば、修飾ウイルスアンカラ（ＭＶＡ）またはＮＹＶＡＣ、アビポックスウイルス、例えば、家禽ジフテリアウイルスまたはカナリア痘ウイルスから由来するベクターである。
【０３６８】
ｓｉＲＮＡオリゴヌクレオチドを含むＲＮＡｉオリゴヌクレオチドなどの調節剤のさらなる例は、米国特許出願公開第２００９／０３１２５３１号、同第２００９／０３１８６７６号、同第２０１１／０１１７１２５号、同第２０１１／０２６９８１４号、同第２００７／０２７５４６５号、同第２００７／００５４２７９号、同第２００６／０２８７２６０号、同第２００６／００３５２５４号、および同第２００６／０００８８２２号において見出され得、これらは、参照により組み込まれる。
【０３６９】
使用方法
ある特定の実施形態は、免疫療法剤のみまたは免疫療法剤と組み合わせて肺の炎症を治療するために本明細書に記載される、ＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび組成物の使用を含む。間質性肺疾患（ＩＬＤ）および関連障害の治療も含まれる。いくつかの実施形態では、ＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび組成物、方法、および／または併用療法は、肺の炎症の治療を必要とする対象における肺の炎症を減少させる、１つ以上のＩＬＤを治療する、および／または疾患の臨床症状もしくはパラメータを改善するために使用される。
【０３７０】
したがって、いくつかの実施形態は、肺の炎症の治療を必要とする対象においてそれを行う方法であって、対象に、ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）ポリペプチド（例えば、ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチド）、またはＨＲＳポリペプチドをコードする発現可能なポリヌクレオチドを投与することを含む、方法を含む。
【０３７１】
ある特定の実施形態は、肺の炎症の治療を必要とする対象においてそれを行う方法であって、対象に、（ａ）ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）ポリペプチドまたはＨＲＳポリペプチドをコードする発現可能なポリヌクレオチドと、（ｂ）例えば、本明細書に記載される、免疫調節剤とを投与することを含む、方法を含む。いくつかの実施形態では、（ａ）および（ｂ）は、別々に投与され、任意に、本明細書に記載されるように定義される。ある特定の実施形態では、（ａ）および（ｂ）は、一緒に、任意に、本明細書に記載の治療用組成物として投与される。
【０３７２】
特定の実施形態では、免疫調節剤は、ピルフェニドンまたはニンテダニブである。いくつかの方法または組成物では、ピルフェニドンは、約５０〜約１０００ｍｇの範囲である個々の投与量単位、あるいは約５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、もしくは１０００ｍｇ、約５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、もしくは１０００ｍｇ以下、または少なくとも約５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、もしくは１０００ｍｇの個々の投与量単位で、例えば、経口投与用の約１つ、２つ、または３つのカプセルで投与される。
【０３７３】
いくつかの実施形態では、ピルフェニドンは、約１００〜約４０００ｍｇ／日の範囲である１日投与量単位で、あるいは約１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、２０００、２１００、２２００、２３００、２４００、２５００、２６００、２７００、２８００、２９００、３０００、３１００、３２００、３３００、３４００、３５００、３６００、３７００、３８００、３９００、もしくは４０００ｍｇ／日、約１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、２０００、２１００、２２００、２３００、２４００、２５００、２６００、２７００、２８００、２９００、３０００、３１００、３２００、３３００、３４００、３５００、３６００、３７００、３８００、３９００、もしくは４０００ｍｇ／日以下、または少なくとも約１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、２０００、２１００、２２００、２３００、２４００、２５００、２６００、２７００、２８００、２９００、３０００、３１００、３２００、３３００、３４００、３５００、３６００、３７００、３８００、３９００、もしくは４０００ｍｇ／日の１日投与量単位で、例えば、経口投与用の約１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つのカプセルで投与される。
【０３７４】
特定の実施形態では、ピルフェニドンは、約８００ｍｇ（例えば８０１ｍｇ）、例えば、個々の投与量につき３つのカプセルとして服用される、経口投与用の３つの約２６７ｍｇのカプセルとして投与されるか、またはピルフェニドンは、約２４００ｍｇ／日（例えば２４０３ｍｇ／日）の１日投与量単位で、例えば、個々の投与量につき３つのカプセルとして服用される、１日３回の経口投与用の９つの約２６７ｍｇのカプセルとして投与される。
【０３７５】
いくつかの方法または組成物では、ニンテダニブは、約１０〜約５００ｍｇの範囲である個々の投与量単位、あるいは約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、もしくは５００ｍｇ、約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、もしくは５００ｍｇ以下、または少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、もしくは５００ｍｇの個々の投与量単位で、例えば、約１つ、２つ、または３つのカプセルで投与される。
【０３７６】
いくつかの実施形態では、ニンテダニブは、約２０〜約１０００ｍｇ／日の範囲である１日投与量単位で、あるいは約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００ｍｇ／日、約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００ｍｇ／日以下、または少なくとも約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００ｍｇ／日の１日投与量単位で、例えば、約１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのカプセルで投与される。
【０３７７】
特定の実施形態では、ニンテダニブは、約１００〜１５０ｍｇの範囲である、または約２００〜３００ｍｇ／日の範囲である１日投与量単位で、例えば、１日１回または２回の投与量で投与されるか、あるいはニンテダニブは、約１００〜１５０ｍｇの１日投与量単位、または約２００〜３００ｍｇ／日で、例えば、１日１回または２回の投与量で投与される。
【０３７８】
いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、ＨＲＳポリペプチドのみと比較して、ＨＲＳポリペプチドの１つ以上の薬物動態学的特徴を変化させるか、または改善する。薬物動態学的特徴の例には、安定性もしくは半減期、バイオアベイラビリティ（吸収される薬物の分率）、組織分布、分布容積（薬物が静脈内注射された直後に分布し、血漿と周辺組織との間で平衡に達する、見かけの容積）、濃度（血漿中の薬物の初期または定常状態濃度）、排出速度定数（薬物が身体から除去される速度）、排出速度（排出のバランスをとるために必要とされる注入の速度）、濃度−時間グラフの曲線下面積（ＡＵＣまたは曝露；単一の用量後の、または定常状態における、濃度−時間曲線の積分）、クリアランス（単位時間当たりの薬物が一掃される血漿の体積）、Ｃｍａｘ（経口投与後の薬物のピーク血漿濃度）、ｔｍａｘ（Ｃｍａｘに達するまでの時間）、Ｃｍｉｎ（次の用量が投与される前に薬物が到達する最も低い濃度）、および変動（定常状態における１回の投薬間隔内のピークトラフ変動）が含まれる。特定の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドの１つ以上の変化する薬物動態学的特徴は、血清濃度の増加、血清半減期の増加、バイオアベイラビリティの増加、曝露（ＡＵＣ）の増加、血清濃度の増加、および／またはクリアランスの減少である。
【０３７９】
いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、ＨＲＳポリペプチドのみと比較して、対象におけるＨＲＳポリペプチドの半減期または血清半減期を少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、または２００％以上増加させる。いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、ＨＲＳポリペプチドのみと比較して、対象におけるＨＲＳポリペプチドのバイオアベイラビリティを少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、または２００％以上増加させる。いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、ＨＲＳポリペプチドのみと比較して、対象におけるＨＲＳポリペプチドの曝露（ＡＵＣ）を少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、または２００％以上増加させる。いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、ＨＲＳポリペプチドのみと比較して、対象におけるＨＲＳポリペプチドの血清濃度を少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、または２００％以上増加させる。いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、ＨＲＳポリペプチドのみと比較して、対象におけるＨＲＳポリペプチドのクリアランスを少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、または２００％以上減少させる。特定の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、配列番号１５７（Ｆｃ−ＨＲＳ（２〜６０）またはＨＲＳＦＣ１）を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなり、免疫調節剤は、ピルフェニドンである。特定の実施形態では、ピルフェニドンは、ＨＲＳポリペプチドのみと比較して、対象におけるＨＲＳポリペプチド（例えば、ＨＲＳＦＣ１）の血清濃度を少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、または２００％以上増加させる。
【０３８０】
したがって、ある特定の実施形態は、対象におけるＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドの１つ以上の薬物動態学的特徴を変化させる方法であって、対象に、ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチド、またはピルフェニドンと組み合わせて、ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドをコードする発現可能なポリヌクレオチドを投与することを含む、方法を含む。特定の実施形態では、ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドは、表Ｈ８から選択される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる。特定の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、配列番号１５７（Ｆｃ−ＨＲＳ（２〜６０）またはＨＲＳＦＣ１）を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる。
【０３８１】
ある特定の実施形態では、それを必要とする対象は、炎症性肺疾患または間質性肺疾患に罹患しているか、または罹患するリスクがある。間質性肺疾患（ＩＬＤ）は、瘢痕（すなわち、「線維症」）および／または肺の炎症を特徴とする１３０超の障害を含む広義のカテゴリーの肺疾患を指す。ＩＬＤは、呼吸器科医によって見られる症例の１５％を占める。場合によっては、ＩＬＤは、特発性である。しかしながら、場合によっては、ＩＬＤは、他の疾患から環境要因に及ぶ様々な源または状態から生じ得るか、またはそれと関連し得る。ＩＬＤの原因またはそれとの関連性のいくつかには、例えば、強皮症／進行性全身性硬化症、ループス（全身性エリテマトーデス）、関節リウマチ、および多発性筋炎／皮膚筋炎を含む、結合組織疾患、自己免疫疾患が含まれる。例えば、粉塵、ガス、アレルゲン、または毒素／毒物などの吸入物質への曝露；抗生物質、化学療法剤、抗不整脈剤、およびスタチンなどの薬物への曝露；肺炎（例えば、非定型肺炎）、ニューモシスチス肺炎（ＰＣＰ）、結核、クラミジアトラコマチス、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、および特発性器質化肺炎などの感染症への曝露；放射線療法への曝露；ならびにがん性リンパ管症およびリンパ腫などの悪性腫瘍を含む、職業性のおよび環境的な曝露もまた含まれる。ある特定の実施形態では、肺の炎症の治療を必要とする対象は、急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）を有する。
【０３８２】
ＩＬＤでは、肺内の組織は、炎症性かつ／または瘢痕化の状態になる。肺の間質は、酸素と二酸化炭素の交換が行われる小血管および肺胞（空気袋）の中および周囲の範囲を含む。間質の炎症および瘢痕は、この組織を破壊し、肺が空気から酸素を抽出する能力を減少させる。
【０３８３】
ＩＬＤの進行は、疾患によって、かつ人によって異なる。間質性肺疾患は、肺内の酸素および二酸化炭素の移動を混乱させるので、その症状は典型的には、呼吸の問題として顕在化する。ＩＬＤの２つの最も一般的な症状は、運動での息切れ、および非生産的な咳である。
【０３８４】
ある特定の実施形態では、ＩＬＤは、特発性間質性肺炎、特発性肺線維症、サルコイドーシス、ハンマンリッチ症候群、抗合成酵素症候群、特発性好酸球性肺炎、肺胞出血症候群、肺胞タンパク症、石綿肺症、珪肺症、ベリリウム症、リウマチ性関節炎、紅斑性狼瘡、肺障害を伴う慢性移植片対宿主病、硬化症（全身性）または強皮症、多発性筋炎、皮膚筋炎、慢性肺疾患、喘息、気管支炎（呼吸気管支炎）、肺炎、過敏性肺炎、慢性過敏性肺炎、呼吸窮迫症候群、スティル病、急性肺損傷、顕微鏡的多発血管炎、肺水腫、肺ランゲルハンス細胞組織球症、急性吸入曝露、薬物誘導性肺疾患、剥離性間質性肺炎、および／または嚢胞性線維症のうちの１つ以上から選択されるか、またはそれらと関連している。
【０３８５】
ある特定の遺伝的欠損または変異もまた、ＩＬＤに関連している。例えば、ある特定の実施形態では、ＩＬＤは、サーファクタントタンパク質Ｂ欠乏症（ＳＦＴＰＢにおける変異）、界面活性剤−プロテイン−Ｃ欠乏症（ＳＦＴＰＣにおける変異）、ＡＢＣＡ３−欠乏症（ＡＢＣＡ３における変異）、脳肺甲状腺症候群（ＴＴＦ１における変異）、または先天性肺胞タンパク症（ＣＳＦＲ２Ａ、ＣＳＦＲ２Ｂにおける変異）、肺胞毛細血管異形成（ＦｏｘＦ１における変異）、テロメラーゼ逆転写酵素（ＴＥＲＴ）における変異、テロメラーゼＲＮＡ成分（ＴＥＲＣ）における変異、テロメア伸長ヘリカーゼ１（ＲＴＥＬ１）の調節因子における変異、および／またはポリ（Ａ）特異的リボヌクレアーゼ（ＰＡＲＮ）における変異のうちの１つ以上と関連している。
【０３８６】
いくつかの実施形態では、それを必要とする対象は、アトピー性喘息、非アトピー性喘息、アレルギー性喘息、アトピー性気管支ＩｇＥ仲介性喘息、気管支喘息、本態性喘息、真正喘息、病態生理学的かく乱により引き起こされる内因性喘息、環境因子により引き起こされる外因性喘息、知られていないかまたは明らかでない原因の本態性喘息、非アトピー性喘息、気管支炎様喘息、気腫性喘息、運動誘発性喘息、アレルゲン誘発性喘息、冷気誘発性喘息、職業喘息、細菌、真菌、原虫、またはウイルス感染症により引き起こされる感染型喘息、非アレルギー性喘息、初発性喘息、喘鳴乳児症候群および細気管支炎、慢性または急性気管支収縮、慢性気管支炎、末梢気道閉塞、ならびに肺気腫のうちの１つ以上から選択される状態を有する。
【０３８７】
いくつかの実施形態では、それを必要とする対象は、閉塞性または炎症性の気道疾患を有する。例には、慢性好酸球性肺炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性気管支炎を包含するＣＯＰＤ、不可逆性進行性気道閉塞を特徴とするＣＯＰＤ、肺気腫または呼吸困難、および急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）が含まれる。いくつかの実施形態では、肺の炎症の治療を必要とする対象は、他の薬物療法の結果として生じる気道過敏性の悪化、肺高血圧症を伴う気道疾患、気管支炎または急性気管支炎、急性喉頭気管気管支炎、アラキン酸気管支炎、カタル性気管支炎、クループ性気管支炎、乾性気管支炎、感染性喘息性気管支炎、増殖性気管支炎（ｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ  ｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ）、ブドウ球菌性もしくは連鎖球菌性の気管支炎、小胞性気管支炎、急性肺損傷、気管支拡張症、または円柱状気管支拡張症、嚢状気管支拡張症、紡錘状気管支拡張症、毛細管性気管支拡張症、嚢胞状気管支拡張症、乾性気管支拡張症、または濾胞性気管支拡張症に関連する状態を有する。
【０３８８】
ある特定の実施形態では、上述のように、肺の炎症の治療を必要とする対象は、線維症または肺線維症に罹患している。肺線維症の重篤度は、アッシュクロフトスコアと称される、数値的尺度において測定することができる（例えば、Ａｓｈｃｒｏｆｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐａｔｈ．４１：４６７−４７０，１９８８を参照のこと）。アッシュクロフトスコアは、肺胞または細気管支肺の壁の最小の線維性肥厚、肺構造に対して明らかではない壁の中等度の肥厚、肺構造に対する明確な損傷および線維帯または小線維塊の形成を伴う線維症の増加、構造のひどい歪みおよび広い繊維状領域（「蜂巣肺」を含む）、ならびに分野の総繊維状の閉塞の範囲に及び得る。アッシュクロフトスコアの０は、正常肺を指す。いくつかの実施形態では、例えば、治療前に、肺の炎症の治療を必要とする対象は、１、２、３、４、５、６、７、または８のアッシュクロフトスコア（この尺度では、１が最高であり、８が最低スコアである）を有する。
【０３８９】
ある特定の実施形態では、肺の炎症は、自己免疫成分を有する。例えば、重度の肺気腫を有する患者における肺および末梢血Ｔ細胞は、インビトロで、エラスチンペプチドで刺激されたとき、Ｔｈｌサイトカインおよびケモカインを分泌し、これらの患者は、対照と比較して、抗エラスチン抗体が増大している（Ｇｏｓｗａｍｉ  ｅｔ  ａｌ，Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．１７８：１３０．４１，２００７を参照のこと）。また、肺上皮に対する結合活性を有するＩｇＧ自己抗体、および細胞傷害性を媒介する潜在性が、ＣＯＰＤを有する患者において蔓延している（Ｆｅｇｈａｌｉ−Ｂｏｓｔｗｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．１７７：１５６−６３，２００８を参照のこと）。例えば、エラスチンなどの自己抗原に対する自己反応性応答を含む自己反応性免疫応答は、この疾患の病因において重要であり得、ＣＯＰＤにおいて役割を果たし得るので、本明細書に記載される併用療法は、これらの抗原に対する免疫細胞を脱感作するために使用し、これによって、肺の炎症を低減することができる。
【０３９０】
いくつかの実施形態では、本方法および組成物は、肺の炎症の治療を必要とする対象の平均余命を、例えば、約または少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０年、もしくはそれ以上増加させる。
【０３９１】
いくつかの実施形態では、本方法および組成物は、肺の炎症の治療を必要とする対象における肺の炎症の臨床症状またはパラメータのうちの１つ以上を改善する。例示的な臨床症状またはパラメータは、肺線維症、肺における炎症細胞浸潤、呼吸機能、および体重を含む。
【０３９２】
したがって、いくつかの実施形態では、本方法および組成物は、例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、もしくは２４カ月間以上の期間にわたって測定されたときに、約または少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００％、もしくはそれ以上、肺の炎症の治療を必要とする対象において肺線維症を改善する。特定の実施形態は、初期スコアと比較して、アッシュクロフトスコアが１、２、３、４、５、６、７、または８グレード低下する、アッシュクロフトスコアの低下によって測定されるように、肺の炎症の治療を必要とする対象における肺線維症を改善する。いくつかの実施形態では、本方法および組成物は、０、１、２、または３以下のアッシュクロフトスコアをもたらす。
【０３９３】
いくつかの実施形態では、本方法および組成物は、例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、もしくは２４カ月間以上の期間にわたって測定されたときに、約または少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００％、もしくはそれ以上、肺における炎症細胞浸潤を減少させる。
【０３９４】
いくつかの実施形態では、本方法および組成物は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、もしくは２４カ月間以上の期間にわたって測定されたときに、約または少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００％、もしくはそれ以上、呼吸機能を改善する。いくつかの実施形態では、呼吸機能は、呼気時間の増加、吸気時間の増加、最大呼気流量の減少、最大吸気流量の減少、毎分呼吸量（ＲＭＶ）の減少、および呼吸数の減少のうちの１つ以上から選択される。かかる症状またはパラメータを測定するための例示的な方法は、当該技術分野で周知であるか、または本明細書に記載されている（実施例を参照のこと）。
【０３９５】
薬学的組成物およびキット
ある特定の実施形態は、本明細書に記載される、ＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび免疫調節剤の治療用送達に適している、薬学的組成物、治療用組成物、および製剤を含む。いくつかの実施形態は、したがって、１つ以上の薬学的に許容される担体および／または希釈剤と一緒に製剤化される、治療上有効な量の、本明細書に記載される、ＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび免疫調節剤のうちの１つ以上を含む、薬学的に許容される組成物を含む。
【０３９６】
本組成物は、以下に適合するものを含む、固体または液体形態で投与のために特異的に製剤化することができる：（１）経口投与、例えばドレンチ（水性もしくは非水性溶液または懸濁液）、錠剤、例えば、口腔、舌下、および全身吸収、ボーラス、散剤、顆粒、舌への塗布用ペーストを目的とするもの、（２）非経口投与、例えば、皮下、筋肉内、静脈内、または硬膜外注射による、例えば、滅菌溶液または懸濁液または徐放製剤として、（３）局所適用、例えば、クリーム、軟膏、もしくは制御放出パッチまたは肌に適用するスプレーとして、（４）膣内または直腸内、例えば、ペッサリー、クリーム、または泡状物として、（５）舌下、（６）眼内、（７）経皮、あるいは（８）鼻腔。
【０３９７】
「薬学的に許容される」という語句は、妥当な医学的判断の範囲内で過剰な毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症を伴わないヒトおよび動物の組織との接触における使用に適し、相応な便益／リスク比に釣り合う化合物、物質、組成物、および／または剤形を指すものとして本明細書で用いられる。
【０３９８】
本明細書で使用される、「薬学的に許容される担体」という語句は、ある臓器または身体の一部から別の臓器または身体の一部への対象化合物の輸送または運搬に関与する、液体または固体充填剤、希釈剤、賦形剤、製造補助剤（例えば、滑沢剤、タルク、ステアリン酸マグネシウム、カルシウムもしくは亜鉛、またはステアリン酸）、または溶媒カプセル化物質などの薬学的に許容される材料、組成物、またはビヒクルを意味する。各担体は、製剤の他の成分に適合可能であるが、患者に無害であるという意味で「許容され」なければならない。
【０３９９】
薬学的に許容される担体として供し得る材料のいくつかの例としては、（１）ラクトース、グルコース、およびスクロースなどの糖、（２）トウモロコシデンプンおよびジャガイモデンプンなどのデンプン、（３）ナトリウムカルボキシメチルセルロース、エチルセルロース、および酢酸セルロースなどのセルロースおよびその誘導体、（４）粉末化トラガカント、（５）麦芽、（６）ゼラチン、（７）タルク、（８）ココアバターおよび坐剤用ワックスなどの賦形剤、（９）ピーナッツ油、綿実油、サフラワー油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油、および大豆油などのオイル、（１０）プロピレングリコールなどのグリコール、（１１）グリセリン、ソルビトール、マンニトール、およびポリエチレングリコールなどのポリオール、（１２）オレイン酸エチルおよびラウリル酸エチルなどのエステル、（１３）寒天、（１４）水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウムなどの緩衝剤、（１５）アルギン酸、（１６）ピロゲン不含水、（１７）等張性食塩水、（１８）リンゲル溶液、（１９）エチルアルコール、（２０）ｐＨ緩衝溶液、（２１）ポリエステル、ポリカーボネート、および／またはポリアンヒドリド、ならびに（２２）薬学的製剤に用いられる他の無毒性の適合可能な物質が挙げられる。
【０４００】
ＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび免疫調節剤との製剤化に適している薬剤のさらなる非限定的な例には、ＰＥＧ結合核酸、リン脂質結合核酸、親油性部分を含有する核酸、ホスホロチオエート、様々な組織への薬物の侵入を増強し得るＰ−糖タンパク質阻害剤（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｐ８５など）、移植後の持続放出送達のためのポリ（ＤＬ−ラクチド−コグリコリド）マイクロスフェア（Ｅｍｅｒｉｃｈ，Ｄ  Ｆ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｃｅｌｌ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ，８，４７−５８）Ａｌｋｅｒｍｅｓ，Ｉｎｃ．Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｍａｓｓ．などの生体分解性ポリマー、ならびに血液脳関門を越えて薬物を送達することができ、ニューロンの取り込み機構を変更することができる、ポリブチルシアノアクリレートから作製されたナノ粒子などの充填ナノ粒子（Ｐｒｏｇ  Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｂｉｏｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ，２３，９４１−９４９，１９９９）が含まれる。
【０４０１】
ポリ（エチレングリコール）脂質を含有する表面改変リポソーム（ＰＥＧ改変リポソーム、分枝リポソーム、および非分枝リポソームもしくはこれらの組み合わせ、または長時間循環型リポソームもしくはステルスリポソーム）を含む組成物もまた含まれる。ＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または免疫調節剤はまた、様々な分子量の共有結合しているＰＥＧ分子も含むことができる。これらの製剤により、標的組織内における薬剤の蓄積を増加させる方法が与えられる。長時間循環型リポソームはまた、その肝臓および脾臓などの代謝的に侵襲性のＭＰＳ組織における蓄積を回避する能力に基づき、陽イオンリポソームと比較して、より大幅に薬物をヌクレアーゼ分解から防御する可能性も高い。
【０４０２】
米国特許第６，６９２，９１１号、同第７，１６３，６９５号、および同第７，０７０，８０７号に記載されるように、送達のために調製された組成物もまた含まれる。この点において、ある特定の実施形態は、単独でまたはＰＥＧ（例えば、分枝または非分枝ＰＥＧまたは両方の混合物）と組み合わせて、ＰＥＧおよび標的化部分または架橋剤と組み合わせた前述のいずれかと組み合わせて、米国特許第７，１６３，６９５号、同第７，０７０，８０７号、および同第６，６９２，９１１号に記載されるように、リジンおよびヒスチジン（ＨＫ）のコポリマーを含む組成物を含む。いくつかの実施形態は、グルコン酸修飾ポリヒスチジンまたはグルコニル化ポリヒスチジン／トランスフェリン−ポリリジンを含む組成物中のＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または免疫調節剤を提供する。当業者はまた、ＨｉｓおよびＬｙｓに類似の特性を有するアミノ酸が組成物中で置換されてもよいこともまた認識している。
【０４０３】
本明細書に記載されるある特定の薬剤は、アミノまたはアルキルアミノなどの塩基性官能基を含んでもよく、これは、薬学的に許容される酸とともに薬学的に許容される塩を形成することが可能である。「薬学的に許容される塩」という用語は、この点に関して、比較的非毒性である、薬剤の無機および有機酸付加塩を指す。これらの塩は、投与ビヒクルもしくは剤形製造プロセスで、原位置で調製することができ、またはその遊離塩基型の精製した薬剤を適切な有機酸もしくは無機酸と別々に反応させること、および引き続く精製の間にこのように形成した塩を単離することによって調製できる。代表的な塩には、臭化水素酸塩、塩酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、酢酸塩、吉草酸塩、オレイン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリン酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、リン酸塩、トシル酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ナフチル酸塩（ｎａｐｔｈｙｌａｔｅ）、メシル酸塩、グルコヘプトン酸塩、ラクトビオン酸塩、およびラウリルスルホン酸塩などが含まれる。
【０４０４】
本明細書に記載される薬剤の薬学的に許容される塩には、例えば、非毒性有機または無機酸からの、化合物の従来の非毒性塩または第四級アンモニウム塩が含まれる。例えば、このような従来的な非毒性塩には、塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸などの無機塩から誘導されたもの；および酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パルミチン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、スルファニル酸、２−アセトキシ安息香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸、イソチオン酸などの有機酸から調製された塩が含まれる。
【０４０５】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される薬剤は、１つ以上の酸性官能基を含んでもよく、したがって、薬学的に許容される塩基と薬学的に許容される塩を形成することが可能である。これらの例において「薬学的に許容される塩」という用語は、薬剤の比較的非毒性である、無機塩基付加塩および有機塩基付加塩を指す。これらの塩は、同様に、投与ビヒクルもしくは剤形製造プロセスで、原位置で調製することができ、またはその遊離酸型の精製した化合物を、適切な塩基、例えば、薬学的に許容される金属カチオンの水酸化物、炭酸塩、もしくは炭酸水素塩と、アンモニアと、または薬学的に許容される有機一級、二級、もしくは三級アミンと別々に反応させることによって調製することができる。代表的なアルカリ塩またはアルカリ土類塩には、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、およびアルミニウム塩などが含まれる。塩基付加塩の形成のために有用である代表的な有機アミンには、エチルアミン、ジエチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジンなどが含まれる。
【０４０６】
ラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウムなどの湿潤剤、乳化剤、および潤滑剤、ならびに着色剤、離型剤、コート剤、甘味料、香料および芳香剤、保存料、ならびに抗酸化剤もまた、組成物中に存在することができる。
【０４０７】
薬学的に許容される抗酸化剤の例には、（１）水溶性抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸、塩酸システイン、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなど、（２）脂溶性抗酸化剤、例えば、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、αトコフェロールなど、ならびに（３）金属キレート剤、例えば、クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸など。
【０４０８】
製剤は、静脈内、筋肉内、経口、鼻、局所（口腔および舌下を含む）、直腸、膣、および／または非経口投与のために適切なものが含まれる。これらの製剤は、単位剤形で便利に存在してもよく、薬学分野において周知である任意の方法によって調製されてもよい。単一の剤形を生じるために担体材料と合わせることができる活性成分の量は、治療される宿主、投与の特定の様式に依存して変化する。単一の剤形を生じるために担体材料と合わせることができる活性成分の量は、一般的には、治療効果を生じる化合物の量である。一般的には、１００パーセントの中から、この量は、約０．１パーセントから約９９パーセント、好ましくは、約５パーセントから約７０パーセント、最も好ましくは、約１０パーセントから約３０パーセントの活性成分の範囲である。
【０４０９】
ある特定の実施形態では、組成物または製剤は、シクロデキストリン、セルロース、リポソーム、ミセル形成剤、例えば、胆汁酸、およびポリマー性担体、例えば、ポリエステルおよびポリ無水物から選択される賦形剤、ならびにＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび免疫調節剤を含む。
【０４１０】
経口投与のために適切な本発明の製剤は、カプセル、カシェ剤、丸薬、錠剤、ロゼンジ（香料ベース、通常、スクロースおよびアカシアまたはトラガカントを使用）、散剤、顆粒剤、または水性もしくは非水性液体中の溶液もしくは懸濁液として、または水中油もしくは油中水の液体エマルジョン、またはエリキシルもしくはシロップとして、または香錠（不活性ベース、例えば、ゼラチンおよびグリセリン、またはスクロースおよびアカシアを使用）、ならびに／またはマウスウォッシュとしてなどの型であってもよく、各々が活性成分として所定量のＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または免疫調節剤を含む。組成物または薬剤はまた、ボーラス、舐剤、またはペーストとして投与されてもよい。
【０４１１】
経口投与用の固体剤形（カプセル、錠剤、丸薬、糖衣錠、散剤、顆粒剤、トローチなど）において、活性成分は、１種以上の薬学的に許容される担体と混合されてもよく、この担体は、例えば、クエン酸ナトリウムまたはリン酸二カルシウム、および／または以下のいずれかである：（１）充填剤または増量剤、例えば、デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、および／もしくはケイ酸、（２）結合剤、例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース、および／またはアカシアなど、（３）保湿剤、例えば、グリセロール、（４）崩壊剤、例えば、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモもしくはタピオカデンプン、アルギン酸、ある特定のケイ酸、およびカルボン酸ナトリウム、（５）溶液遅延剤、例えば、パラフィン、（６）吸収加速剤、例えば、第四級アンモニウム化合物および界面活性剤、例えば、ポロキサマーおよびラウリル硫酸ナトリウム、（７）湿潤剤、例えば、セチルアルコール、モノステアリン酸グリセロール、および非イオン性界面活性剤など、（８）吸着剤、例えば、カオリンおよびベントナイトクレイ、（９）潤滑剤、例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸、およびこれらの混合物、（１０）着色剤、ならびに（１１）制御放出剤、例えば、クロスポビドンまたはエチルセルロース。カプセル、錠剤、および丸薬の場合において、本組成物はまた、緩衝剤も含んでもよい。同様の型の固体組成物はまた、ラクトースまたは乳糖、ならびに高分子量ポリエチレングリコールなどのような賦形剤を使用して、ソフトおよびハード殻のゼラチンカプセル中の充填剤としても利用されてもよい。
【０４１２】
錠剤は、任意に１つ以上の付属成分とともに、圧縮または成型によって作製されてもよい。圧縮錠剤は、結合剤（例えば、ゼラチンもしくはヒドロキシプロピルメチルセルロース）、潤滑剤、不活性希釈剤、保存剤、崩壊剤（例えば、デンプングリコール酸ナトリウムもしくは架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム）、界面活性剤、または分散剤を使用して調製されてもよい。成型された錠剤は、不活性液体希釈剤を用いて湿らされた粉末化合物の混合物を、適切な機械の中で成型することによって作製されてもよい。
【０４１３】
錠剤および他の剤形、例えば、糖衣錠、カプセル、丸薬、および顆粒剤は、腸溶コーティングおよび製薬分野で周知の他のコーティングなどのコーティングおよびシェルを用いて、任意に入手および調製されてもよい。これらはまた、例えば、所望の放出プロファイルを提供するために様々な比率のヒドロキシプロピルメチルセルロース、他のポリマーマトリックス、リポソーム、および／またはミクロスフェアを使用して、その中の活性成分の遅延または制御放出を提供するように製剤化されてもよい。これらは、迅速な放出のために製剤化、例えば、凍結乾燥されてもよい。これらは、例えば、細菌保持フィルターによって、または使用直前に滅菌水もしくはいくつかの他の注射可能な媒体に溶解することができる滅菌固体組成物の型で滅菌薬剤を取り込むことによって、滅菌されてもよい。これらの組成物はまた、任意に、乳白剤を含んでもよく、胃腸管のある特定の部分のみにおいて、または選択的に胃腸管の特定の部分で優先的に、任意に遅延様式で、活性成分を放出する組成物であってもよい。使用され得る包埋組成物の例には、ポリマー性物質およびワックスが含まれる。活性成分はまた、適切な場合、上記の賦形剤のうちの１種以上とともに、マイクロカプセル化型であり得る。
【０４１４】
ＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび免疫調節剤の経口投与用の液体剤形には、薬学的に許容されるエマルジョン、マイクロエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップ、およびエリキシルが含まれる。活性成分に加えて、液体剤形は、例えば、水または他の溶媒などの当該技術分野で共通して使用される不活性希釈剤、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、油類（特に、綿実油、ラッカセイ油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコール、およびソルビタンの脂肪酸エステル、およびこれらの混合物などの溶解剤および乳化剤を含んでもよい。
【０４１５】
不活性希釈剤に加えて、経口組成物はまた、湿潤剤、乳化剤、および懸濁剤、甘味料、香料、着色料、芳香剤、ならびに保存剤などのアジュバントも含むことができる。
【０４１６】
懸濁液は、活性化合物に加えて、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール、およびソルビタンエステル、微結晶セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天、およびトラガカント、ならびにこれらの混合物としての懸濁剤を含んでもよい。
【０４１７】
ＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび免疫調節剤の局所的または経皮投与用の製剤または剤形には、散剤、スプレー、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ジェル、溶液、パッチ、および吸入剤が含まれる。活性ＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または免疫調節剤は、滅菌条件下で、薬学的に許容される担体とともに、および必要とされ得る、任意の保存剤、緩衝剤、または噴霧剤とともに混合されてもよい。軟膏、ペースト、クリーム、およびジェルは、ＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または免疫調節剤に加えて、賦形剤、例えば、動物性および植物性脂肪、油、ワックス、パラフィン、デンプン、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコーン、ベントナイト、ケイ酸、タルクおよび酸化亜鉛、またはこれらの混合物を含んでもよい。
【０４１８】
散剤およびスプレーは、賦形剤、例えば、ラクトース、タルク、ケイ酸、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウム、およびポリアミド粉末、またはこれら物質の混合物を含むことができる。スプレーは、慣例的な噴霧剤、例えば、クロロフルオロハイドロカーボンおよび揮発性非置換炭化水素、例えば、ブタンおよびプロパンをさらに含むことができる。
【０４１９】
経皮パッチは、ＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または免疫調節剤の身体への制御送達を提供するさらなる利点を有する。このような剤形は、適切な媒体中に薬剤を溶解または分散させることによって作製することができる。吸収増強剤もまた、皮膚を横切って薬剤の流入を増加させるために使用することができる。このような流入の速度は、当該技術分野で公知である他の方法の中でも、速度制御膜を提供すること、またはポリマーマトリックスもしくはゲル中で薬剤を分散させることのいずれかによって制御することができる。
【０４２０】
非経口投与用に適切な薬学的組成物は、１つ以上のＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または免疫調節剤を、１つ以上の薬学的に許容される滅菌等張水性または非水性溶液、分散液、懸濁液、またはエマルジョン、あるいは、使用直前に滅菌注射用溶液または分散液に再構築されてもよい滅菌粉末と組み合わせて含んでもよく、これらは、糖、アルコール、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、製剤を意図されるレシピエントの血液と等張性にする溶質、または懸濁剤もしくは濃厚剤を含んでもよい。薬学的組成物において利用されてもよい適切な水性および非水性担体の例には、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、およびこれらの適切な混合物、植物油、例えば、オリーブ油、ならびに注射可能な有機エステル、例えば、オレイン酸エチルが含まれる。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング材料の使用によって、分散の場合には必要とされる粒子サイズの維持によって、および界面活性剤の使用によって、維持することができる。
【０４２１】
これらの組成物はまた、保存剤、湿潤剤、乳化剤、および分散剤などのアジュバントも含んでもよい。対象に対する微生物の作用の予防は、種々の抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸などを含めることによって保証されてもよい。組成物に、糖、塩化ナトリウムなどの等張剤を含めることもまた望ましくあり得る。加えて、注射可能な薬剤型の吸収の延長は、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンなどの吸収を遅延させる薬剤を含めることによってもたらされてもよい。
【０４２２】
場合によっては、薬物の効果を延長させるために、皮下または筋肉内注射からの薬物の吸収を遅延させることが望ましい。これは、当該技術分野で公知の他の方法の中でも、乏しい水溶性を有する結晶性またはアモルファス性材料の液体懸濁液の使用によって達成されてもよい。次いで、薬物の吸収の速度は、その溶解の速度に依存し、次には、結晶サイズおよび結晶型に依存するかもしれない。あるいは、非経口投与された薬物型の吸収の遅延は、油性ビヒクル中で薬物を溶解または懸濁することによって達成される。
【０４２３】
注射用デポー型は、ポリラクチド−ポリグリコリドなどの生物分解可能なポリマー中で対象のＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または免疫調節剤のマイクロカプセル化マトリックスを形成することによって作製されてもよい。薬剤対ポリマーの比率、および利用される特定のポリマーの性質に応じて、放出の速度は制御することができる。他の生物分解可能なポリマーの例には、ポリ（オルトエステル）およびポリ（無水物）が含まれる。デポー注射用製剤はまた、身体組織と適合可能であるリポソームまたはマイクロエマルジョン中に薬物をトラップすることによって調製されてもよい。
【０４２４】
ＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または免疫調節剤がヒトおよび動物に医薬品として投与されるとき、これらは、それ自体で、または薬学的に許容される担体と組み合わせて、例えば、活性成分の０．１〜９９％（より好ましくは、１０〜３０％）を含む薬学的組成物として与えられ得る。
【０４２５】
「非経口投与」および「非経口的に投与される」という語句は、本明細書で使用される場合、通常は注射による、腸内および局所的投与以外の投与の様式を意味し、静脈内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、および胸骨内の注射および注入を含むが、これらに限定されない。
【０４２６】
「全身投与」、「全身的に投与される」、「末梢投与」、および「末梢的に投与される」という語句は、本明細書で使用される場合、中枢神経系に直接的である以外の、化合物、薬物、または他の物質の投与であって、その結果、これは、患者の系に入り、したがって、代謝および他の同様のプロセスに供されることを意味し、これは、例えば、皮下投与である。
【０４２７】
選択される投与経路にかかわらず、ＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または免疫調節剤は、当業者に公知である従来的な方法によって、薬学的に許容される剤形に製剤化されてもよい。薬学的組成物における活性成分の実際の投薬量レベルは、患者に対して受容可能でない毒性を伴うことなく、特定の患者についての所望の治療反応、組成物、および投与の様式を達成するために有効である活性成分の量を得るために変動されてもよい。
【０４２８】
選択された投薬量レベルは、利用される特定のＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または免疫調節剤、またはそのエステル、塩、またはアミドの活性、投与の経路、投与の時間、利用される特定の薬剤の排出または代謝の速度、吸収の速度または程度、治療の期間、利用される特定の薬剤と組み合わせて使用される他の薬物、化合物、および／または物質、治療される患者の年齢、性別、体重、状態、一般的健康、および以前の医学的履歴、ならびに医学分野で周知である同様の要因を含む種々の要因に応じて異なる。
【０４２９】
当該技術分野で通常の技能を有する医師は、必要とされる薬学的組成物の有効量を容易に決定および処方することができる。例えば、医師は、所望の治療効果を達成するために、薬学的組成物中で利用されるＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または免疫調節剤の用量を、必要とされるレベルよりも低いレベルで開始し、所望の効果が達成されるまで、投与量を徐々に増加させ得る。一般的に、ＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または免疫調節剤の適切な１日の用量は、治療効果を生じるために有効である最低の用量である化合物の量である。このような有効用量は、一般的には、本明細書に記載される要因に応じて異なる。一般的には、対象または患者のためのＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または免疫調節剤の経口、静脈内、筋肉内、脳室内、および皮下用量は、示される効果のために使用されるとき、約０．０００１〜約１００ｍｇ／用量、または約約０．０００１〜約１００ｍｇ／体重キログラム／用量の範囲である。
【０４３０】
所望される場合、活性薬剤の有効１日用量は、１日または１週間を通して適切な間隔で別々に投与される１回、２回、３回、４回、５回、６回、またはそれ以上のサブ用量として、例えば、単位剤形で投与され得る。ある特定の状況において、投薬は、１日当たり１回の投与である。ある特定の状況において、投薬は、１週間当たり１回、２回、または３回の投与である。ある特定の実施形態では、投薬は、所望の状態を治療するために、必要に応じて、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４日毎、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２週間毎、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２カ月毎当たりに１回以上の投与である。
【０４３１】
ＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または免疫調節剤は、当業者に公知である種々の方法によって細胞に投与することができ、これらには、本明細書に記載され、当該技術分野で周知である、リポソーム中のカプセル化、イオントフォレシス、または、ヒドロゲル、シクロデキストリン、生物分解性ナノカプセル、および生体接着性ミクロスフェアなどの他のビヒクルへの取り込みによる方法が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、マイクロエマルジョン化技術は、親油性（水不溶性）薬学的製剤のバイオアベイラビリティを改善するために利用されてもよい。例には、トリメトリン（Ｄｏｒｄｕｎｏｏ，Ｓ．Ｋ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，１７（１２），１６８５−１７１３，１９９１およびＲＥＶ  ５９０１（Ｓｈｅｅｎ，Ｐ．Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ８０（７），７１２−７１４，１９９１）が含まれる。他の利点の中でも、マイクロエマルジョン化は、循環系の代わりに、リンパ系への吸収を優先的に指向することによって、バイオアベイラビリティの増強を提供し、それによって、肝臓をバイパスし、肝胆汁性循環における化合物の破壊を防止する。
【０４３２】
いくつかの実施形態では、組成物または製剤は、ＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または免疫調節剤ならびに少なくとも１つの両親媒性担体から形成されるミセルを含み、ここでは、このミセルは、約１００ｎｍ未満の平均直径を有する。例示的な実施形態は、約５０ｎｍ未満の平均直径を有するミセルを提供し、さらにある特定の実施形態は、約３０ｎｍ未満、またはさらに約２０ｎｍ未満の平均直径を有するミセルを提供する。全ての適切な両親媒性担体が企図されるが、現在好ましい担体は、一般的には、一般的に安全であると認められている（Ｇｅｎｅｒａｌｌｙ−Ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ−ａｓ−Ｓａｆｅ）（ＧＲＡＳ）状態であり、溶液が複雑な水相と接触されるときの後期段階において（例えば、ヒトの胃腸管で見出されるもの）、活性成分を可溶化することと、それをマイクロエマルジョン化することの両方ができるものである。通常、これらの要件を満たす両親媒性成分は、２〜２０のＨＬＢ（親水性対親油性バランス）値を有し、それらの構造はＣ−６〜Ｃ−２０の範囲の直鎖脂肪族基を含む。例は、ポリエチレン−グリコール化脂肪グリセリドおよびポリエチレングリコールである。
【０４３３】
両親媒性担体の例には、完全にまたは部分的に水素化された種々の植物油から得られるものなどの、飽和およびモノ不飽和ポリエチレングリコール化脂肪酸グリセリドが含まれる。このような油は、トリ−、ジ−、およびモノ−脂肪酸グリセリドならびに対応する脂肪酸のジ−およびモノ−ポリエチレングリコールエステルから有利になってもよく、特に好ましい脂肪酸組成は、カプリン酸４〜１０、カプリン酸３〜９、ラウリン酸４０〜５０、ミリスチン酸１４〜２４、パルミチン酸４〜１４、およびステアリン酸５〜１５％を含む。別の有用なクラスの両親媒性担体には、飽和またはモノ不飽和脂肪酸（ＳＰＡＮシリーズ）または対応するエトキシ化アナログ（ＴＷＥＥＮシリーズ）を有する、部分的にエステル化されたソルビタンおよび／またはソルビトールが含まれる。
【０４３４】
市販の両親媒性担体は、特に有用であり得、これらには、Ｇｅｌｕｃｉｒｅシリーズ、Ｌａｂｒａｆｉｌ，Ｌａｂｒａｓｏｌ、またはＬａｕｒｏｇｌｙｃｏｌ（全て、Ｇａｔｔｅｆｏｓｓｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｓａｉｎｔ  Ｐｒｉｅｓｔ，Ｆｒａｎｃｅにより製造および販売）、ＰＥＧ−モノ−オレエート、ＰＥＧ−ジ−オレエート、ＰＥＧ−モノ−ラウレートおよびジ−ラウレート、レシチン、ポリソルベート８０など（米国および世界中の多くの企業によって製造および販売されている）が含まれる。
【０４３５】
ある特定の実施形態では、送達は、適切な宿主細胞へのＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または免疫調節剤の導入のために、リポソーム、ナノカプセル、微粒子、ミクロスフェア、脂質粒子、ベシクルなどの使用によって行われてもよい。特に、本組成物は、送達のために、脂質粒子、リポソーム、ベシクル、ナノスフェア、ナノ粒子などのいずれかにカプセル化されて製剤化されてもよい。このような送達ベシクルの製剤および使用は、公知であり、かつ従来の技術を使用して実行することができる。
【０４３６】
使用に適している親水性ポリマーは、容易に水に溶解し、ベシクル形成脂質に共有結合することができ、毒性効果を伴わずにインビボで耐性を示す（すなわち、生体適合性がある）ものである。適切なポリマーには、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ乳酸（ポリラクチドとも呼ばれる）、ポリグリコール酸（ポリグリコリドとも呼ばれる）、ポリ乳酸−ポリグリコール酸コポリマー、およびポリビニルアルコールが含まれる。ある特定の実施形態では、ポリマーは、約１００もしくは１２０ダルトンから約５，０００もしくは１０，０００ダルトンまで、または約３００ダルトンから約５，０００ダルトンまでの分子量を有する。他の実施形態では、ポリマーは、約１００から約５，０００ダルトンまでの分子量を有するか、または約３００から約５，０００ダルトンまでの分子量を有するポリエチレングリコールである。ある特定の実施形態では、ポリマーは、７５０ダルトンのポリエチレングリコール（ＰＥＧ（７５０））である。ポリマーはまた、その中のモノマーの数によって規定されてもよい。
【０４３７】
適切であり得る他の親水性ポリマーには、ポリビニルピロリドン、ポリメトキサゾリン、ポリエチルオキサゾリン、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミド、ポリメタクリルアミド、ポリジメチルアクリルアミド、およびヒドロキシメチルセルロースまたはヒドロキシエチルセルロースなどの誘導体化セルロースが含まれる。
【０４３８】
ある特定の実施形態では、組成物または製剤は、ポリアミド、ポリカーボネート、ポリアルキレン、アクリルおよびメタクリルエステルのポリマー、ポリビニルポリマー、ポリグリコリド、ポリシロキサン、ポリウレタンおよびそのコポリマー、セルロース、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリスチレン、乳酸およびグリコール酸のポリマー、ポリ無水物、ポリ（オルト）エステル、ポリ（ブチック（ｂｕｔｉｃ）酸）、ポリ（吉草酸）、ポリ（ラクチド−コ−カプロラクトン）、ポリサッカリド、タンパク質、ポリヒアルロン酸、ポリシアノアクリレート、およびこれらのブレンド、混合物、またはコポリマーを含む。
【０４３９】
シクロデキストリンは、環状オリゴサッカリドであり、ギリシャ文字α、β、またはγによってそれぞれ示される、６、７、または８個のグルコース単位からなる。これらのグルコース単位は、α−１，４−グルコシド結合によって連結されている。糖単位のイス型コンフォメーションの結果として、全ての二次ヒドロキシル基（Ｃ−２、Ｃ−３における）は、環の一方の側に位置するのに対して、Ｃ−６における全ての一次ヒドロキシル基は、他の側に配置されている。結果として、外部表面は親水性であり、シクロデキストリンを水溶性にする。対照的に、シクロデキストリンの空洞は疎水性であり、そのため、これらは、Ｃ−３およびＣ−５の水素原子によって、およびエーテル様酸素によって並べられている。これらのマトリックスは、例えば、１７α−エストラジオールなどのステロイド化合物を含む、種々の比較的疎水的な化合物との複合体形成を可能にする（例えば、ｖａｎ  Ｕｄｅｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｔｉｓｓ．Ｏｒｇ．Ｃｕｌｔ．３８：１−３−１１３（１９９４）を参照のこと）。この複合体形成は、Ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｗａａｌｓ相互作用によって、および水素結合形成によって起こる。シクロデキストリン誘導体の物理化学的特性は、置換の種類および程度に応じて異なる。例えば、これらの水溶性は、不溶性（例えば、トリアセチル−β−シクロデキストリン）から１４７％の可溶性（ｗ／ｖ）（Ｇ−２−β−シクロデキストリン）までの範囲である。加えて、これらは、多くの有機溶媒中で可溶性である。シクロデキストリンの特性は、それらの溶解度を増加または減少させることによって、種々の製剤成分の溶解度に対する制御を可能にする。
【０４４０】
多数のシクロデキストリンおよびそれらの調製のための方法が記載されている。例えば、Ｐａｒｍｅｔｅｒ（Ｉ）ら（米国特許第３，４５３，２５９号）およびＧｒａｍｅｒａら米国特許第３，４５９，７３１号）は電気的中性シクロデキストリンを記載している。他の誘導体には、カチオン性特性を有するシクロデキストリン［Ｐａｒｍｅｔｅｒ（ＩＩ）、米国特許第３，４５３，２５７号］、不溶性架橋シクロデキストリン（Ｓｏｌｍｓ、米国特許第３，４２０，７８８号）、およびアニオン性特性を有するシクロデキストリン［Ｐａｒｍｅｔｅｒ（ＩＩＩ）、米国特許第３，４２６，０１１号］が含まれる。アニオン性特性を有するシクロデキストリン誘導体の中では、カルボン酸、亜リン酸、亜ホスフィン酸、ホスホン酸、リン酸、チオホスホン酸、チオスルフィン酸、およびスルホン酸が、親シクロデキストリンに付加されている［Ｐａｒｍｅｔｅｒ（ＩＩＩ）、上記を参照のこと］。さらに、スルホアルキルエーテルシクロデキストリン誘導体が、Ｓｔｅｌｌａら（米国特許第５，１３４，１２７号）によって記載されている。
【０４４１】
いくつかの実施形態は、ＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または免疫調節剤を含むリポソームを含む製剤に関し、リポソーム膜は、輸送能力が増加したリポソームを提供するように製剤化される。あるいは、または加えて、活性成分は、リポソームのリポソーム二重層に含まれてもよく、またはそこに吸着されてもよい。ＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または免疫調節剤は、脂質界面活性剤で凝集されてもよく、リポソームの内部空間に輸送されてもよく、これらの場合、リポソーム膜は、活性薬剤−界面活性剤凝集体の破壊的効果に抵抗するように製剤化される。
【０４４２】
リポソームは、水性内部区画を囲む少なくとも１つの脂質二重層膜からなる。リポソームは、膜の型およびサイズによって特徴付けられ得る。小さな単層ベシクル（ＳＵＶ）は、単一の膜を有し、典型的には、直径が０．０２〜０．０５μｍの範囲であり、大きな単層ベシクル（ＬＵＶ）は、典型的には、０．０５μｍよりも大きい。オリゴ層の大きなベシクルおよび多層ベシクルは、複数の、通常は同心性の膜の層を有し、典型的には、０．１μｍよりも大きい。いくつかの非同心性膜を有するリポソーム、すなわち、より大きなベシクル内に含まれるいくつかのより小さなベシクルは、多ベシクル性ベシクルと称する。
【０４４３】
いくつかの実施形態では、リポソームの脂質二重層は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖が脂質二重層の内部表面からリポソームによってカプセル化された内部空間にまで伸び、脂質二重層の外部から周囲環境にまで伸びるように、ＰＥＧで誘導体化された脂質を含む。
【０４４４】
リポソームは、当該技術分野で周知の様々な技術のいずれかによって調製され得る。例えば、米国特許第４，２３５，８７１号、ＰＣＴ出願公開ＷＯ９６／１４０５７、Ｎｅｗ  ＲＲＣ，Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ：Ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ（１９９０），ｐａｇｅｓ  ３３−１０４、Ｌａｓｉｃ  ＤＤ，Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  ｆｒｏｍ  ｐｈｙｓｉｃｓ  ｔｏ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ  ＢＶ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，１９９３を参照のこと。例えば、リポソームは、予め形成されたリポソームに、親水性ポリマーで誘導体化した脂質を分散させることによって、例えば、リポソーム中で所望される誘導体化脂質の最終モルパーセントに対応する脂質濃度で、脂質グラフト結合ポリマーから構成されるミセルに、予め形成されたリポソームを露出させることによって調製されてもよい。親水性ポリマーを含むリポソームはまた、当該技術分野で周知であるように、均質化、脂質フィールド水和、または押し出し技術によって形成することができる。
【０４４５】
別の例示的な製剤手順において、ＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または免疫調節剤は、容易に疎水性分子を溶解する、リゾホスファチジルコリンまたは他の低ＣＭＣ界面活性剤（ポリマーグラフト結合脂質を含む）中での超音波処理によって最初に分散される。次いで、得られた活性薬剤のミセル懸濁液は、適切なモルパーセントのポリマーグラフト結合脂質またはコレステロールを含む乾燥脂質サンプルを再水和するために使用される。次いで、脂質および活性薬剤懸濁液が、当該技術分野で周知であるように、押し出し技術を使用してリポソームに形成され、得られたリポソームは、標準的なカラム分離によって非カプセル化溶液から分離される。
【０４４６】
一態様では、リボソームは、選択されたサイズ範囲において実質的に均一なサイズを有するように調製される。１つの有効なサイズ決定方法は、選択された均一なポアサイズを有する一連のポリカーボネート膜を通してリポソームの水性懸濁液を押し出しする工程を包含し、この膜のポアサイズは、その膜を通した押し出しによって産生されるリポソームの最大サイズとおおまかに一致する。例えば、米国特許第４，７３７，３２３号（Ａｐｒ．１２，１９８８）を参照のこと。ある特定の実施形態では、ＤｈａｒｍａＦＥＣＴ（商標）およびＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）などの試薬が、ポリヌクレオチドまたはタンパク質を細胞に導入するために利用されてもよい。
【０４４７】
製剤の放出特性は、カプセル化材料、カプセル化された薬物の濃度、および放出修飾剤の存在に応じて異なる。例えば、放出は、例えば、胃の中のような低ｐＨにおいてのみ、または腸の中のようなより高いｐＨにおいてのみ放出するｐＨ感受性コーティングを使用して、ｐＨ依存性に操作することができる。腸溶コーティングは、胃を通った通路の後まで放出が起こることを防止するために使用することができる。異なる材料中にカプセル化されたシアナミドの複数のコーティングまたはその混合物は、胃の中で初期の放出を得、続いて、腸の中でより後期の放出を得るために使用することができる。放出はまた、塩またはポア形成薬剤を含めることによって操作することができ、カプセルからの分散により、水の取り込みまたは薬物の放出を増加することができる。薬物の溶解度を修飾する賦形剤もまた、放出速度を制御するために使用することができる。マトリックスの分解またはマトリックスからの放出を増強する薬剤もまた、組み込むことができる。これらは、薬物に加えることができ、別々の相として（すなわち、微粒子として）加えることができるか、または化合物に応じてポリマー相に共溶解することができる。多くの場合において、その量は、０．１から３０パーセント（ｗ／ｗポリマー）の間であるべきである。分解促進剤の型には、無機塩、例えば、硫酸アンモニウムおよび塩化アンモニウム、有機酸、例えば、クエン酸、安息香酸、およびアスコルビン酸、無機塩基、例えば、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸カルシウム、炭酸亜鉛、および水酸化亜鉛、ならびに有機塩基、例えば、硫酸プロタミン、スペルミン、コリン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、およびトリエタノールアミン、ならびに界面活性剤、例えば、Ｔｗｅｅｎ（商標）およびＰｌｕｒｏｎｉｃ（商標）が含まれる。マトリックスに微細構造を加えるポア形成剤（すなわち、無機塩および糖などの水溶性化合物）は、微粒子として加えられる。その範囲は、典型的には、１〜３０％（ｗ／ｗポリマー）である。
【０４４８】
取り込みはまた、腸における粒子の滞留時間を変化させることによって操作することができる。これは、例えば、粘膜接着ポリマーで粒子をコーティングすること、またはカプセル化材料として粘膜接着ポリマーを選択することによって達成することができる。例としては、遊離のカルボキシル基を有する最も多くのポリマー、例えば、キトサン、セルロース、および特に、ポリアクリレート（本明細書で使用される場合、ポリアクリレートは、アクリレート基および修飾アクリレート基、例えば、シアノアクリレートおよびメタクリレートを含むポリマーを指す）が含まれる。
【０４４９】
ＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または免疫調節剤は、外科的または医学的デバイスもしくは移植物の中に含まれるように製剤化されても、これらによって放出されるように適合されてもよい。ある特定の態様では、移植物は、薬剤でコーティングされるか、またはそうでなければ薬剤で処理されてもよい。例えば、ヒドロゲルまたは他のポリマー、例えば、生体適合性および／または生物分解性ポリマーが、ＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または免疫調節剤で移植物をコーティングするために使用されてもよい（すなわち、組成物は、ヒドロゲルまたは他のポリマーを使用することによって、医学的デバイスを伴う使用のために適合されてもよい）。薬剤で医学的デバイスをコーティングするためのポリマーおよびコポリマーは、当該技術分野で周知である。移植物の例としては、ステント、薬物溶出ステント、縫合糸、プロテーゼ、血管カテーテル、透析カテーテル、血管移植片、人工心臓弁、心臓ペースメーカー、植え込み型除細動器、静脈針、骨の設定および形成のためのデバイス、例えば、ピン、スクリュー、プレート、およびその他のデバイス、ならびに創傷治癒のための人工組織マトリックスが挙げられるが、これらに限定されない。
【０４５０】
ＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または免疫調節剤は、生理学的に許容される任意の便利なビヒクル中で投与されてもよい。このような組成物は、当業者によって利用される、様々な標準的な薬学的に許容される担体のうちのいずれかを含んでもよい。例としては、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、水、水性エタノール、エマルジョン、例えば、油／水エマルジョンまたはトリグリセリドエマルジョン、錠剤およびカプセル剤が挙げられるが、これらに限定されない。適切な生理学的に許容される担体の選択は、選択される投与様式に応じて異なるであろう。
【０４５１】
キット、例えば、本明細書に記載される、治療用組成物、ＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または免疫調節剤のうちの１つ以上で充填した１つ以上の容器を含む、患者ケアキットもまた含まれる。いくつかの実施形態では、キットは、例えば、１つ以上の疾患の治療でのかかる組成物の使用法についての書面での取扱説明書を含む。
【０４５２】
したがって、ある特定の実施形態は、（ａ）ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）ポリペプチド、またはＨＲＳポリペプチドをコードする発現可能なポリヌクレオチドと、（ｂ）免疫調節剤と、を含む、患者ケアキットを含む。いくつかのキットでは、（ａ）および（ｂ）は、別々の組成物中にあり、任意に、本明細書に記載されるように定義される。いくつかのキットでは、（ａ）および（ｂ）は、同じ組成物中にあり、任意に、本明細書に記載の治療用組成物として、である。
【０４５３】
特定の実施形態では、治療用組成物および／または患者ケアキット中の免疫調節剤は、ピルフェニドンまたはニンテダニブである。
【０４５４】
いくつかの実施形態では、ピルフェニドンは、（任意に、経口投与用の約１つ、２つ、または３つのカプセルにおいて）約５０〜約１０００ｍｇの範囲である個々の投与量単位で、あるいは（任意に、経口投与用の１つ、２つ、または３つのカプセルにおいて）約５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、もしくは１０００ｍｇ、約５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、もしくは１０００ｍｇ以下、または少なくとも約５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、もしくは１０００ｍｇの個々の投与量単位である。
【０４５５】
いくつかの実施形態では、ピルフェニドンは、（任意に、経口投与用の約３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、または９つのカプセルにおいて）約１００〜約４０００ｍｇ／日の範囲である１日投与量単位で、あるいは（任意に、経口投与用の約３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、または９つのカプセルで）約１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、２０００、２１００、２２００、２３００、２４００、２５００、２６００、２７００、２８００、２９００、３０００、３１００、３２００、３３００、３４００、３５００、３６００、３７００、３８００、３９００、もしくは４０００ｍｇ／日、約１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、２０００、２１００、２２００、２３００、２４００、２５００、２６００、２７００、２８００、２９００、３０００、３１００、３２００、３３００、３４００、３５００、３６００、３７００、３８００、３９００、もしくは４０００ｍｇ／日以下、または少なくとも約１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、２０００、２１００、２２００、２３００、２４００、２５００、２６００、２７００、２８００、２９００、３０００、３１００、３２００、３３００、３４００、３５００、３６００、３７００、３８００、３９００、もしくは４０００ｍｇ／日の個々の投与量単位で、である。
【０４５６】
特定の実施形態では、ピルフェニドンは、約８００ｍｇ（例えば８０１ｍｇ）の個々の投与量単位で、例えば、個々の投与量につき３つのカプセルとして服用される、経口投与用の３つの約２６７ｍｇのカプセルとして、である。特定の実施形態では、ピルフェニドンは、約２４００ｍｇ／日（例えば２４０３ｍｇ／日）の１日投与量単位で、例えば、個々の投与量につき３つのカプセルとして服用される、１日３回の経口投与用の９つの約２６７ｍｇのカプセルとして、である。
【０４５７】
いくつかの実施形態では、ニンテダニブは、（任意に、経口投与用の約１つ、２つ、または３つのカプセルにおいて）約１０〜約５００ｍｇの範囲である個々の投与量単位で、あるいは（任意に、経口投与用の約１つ、２つ、または３つのカプセルにおいて）約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、もしくは５００ｍｇ、約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、もしくは５００ｍｇ以下、または少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、もしくは５００ｍｇの個々の投与量単位で、である。
【０４５８】
いくつかの実施形態では、ニンテダニブは、（任意に、約１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのカプセルにおいて）約２０〜約１０００ｍｇ／日の範囲である１日投与量単位で、あるいは（任意に、約１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのカプセルにおいて）約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００ｍｇ／日、約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００ｍｇ／日以下、または少なくとも約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００ｍｇ／日の１日投与量単位で、である。
【０４５９】
いくつかの実施形態では、ニンテダニブは、約１００〜１５０ｍｇの範囲である、または約２００〜３００ｍｇ／日の範囲である１日投与量単位で、任意に、１日１回または２回の投与量である。いくつかの実施形態では、ニンテダニブは、約１００〜１５０ｍｇの範囲である、または約２００〜３００ｍｇ／日の範囲である投与量単位で、任意に、１日１回または２回の投与量である。
【０４６０】
本明細書に記載のキットおよび組成物はまた、治療される適応症に適しているまたは所望される１つ以上のさらなる治療剤または他の構成要素を含んでもよい。さらなる治療剤は、所望の場合、第２の容器中に含有してもよい。さらなる治療剤の例としては、抗炎症剤、抗がん剤、抗菌剤、抗ウイルス剤が挙げられるが、これらに限定されない。
【０４６１】
本明細書でのキットはまた、送達の意図した様式（例えば、ステント、移植可能なデポーなど）を促進するために必要なまたは所望される１つ以上のシリンジ（例えば、注射シリンジ）または他の構成要素も含むことができる。
【実施例】
【０４６２】
ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）ポリペプチドは、マウスまたはラットでのブレオマイシン誘導性肺線維症モデルにおける活性のために試験した。ブレオマイシン（ＢＬＭ）の気管内投与は、例えば、ヒトにおける様々なＩＬＤに見出される肺の炎症および線維症を含む、ある特定のＩＬＤの変化と同様に、肺の連続変化を誘導し、ＩＬＤ、肺の損傷、炎症、および線維症の治療用の治療剤の評価のために検査における一般モデルとして使用され得ることを示唆している（例えば、Ａｄａｍｓｏｎ  ａｎｄ  Ｂｏｗｄｅｎ．Ｔｈｅ  ＡｍｅｒｉｃａｎＪ．Ｐａｔｈ．７７：１８５−１９７，１９７４、Ｗｙｎｎ，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．２０８：１３３９−１３５０，２０１１、Ｗｉｌｌｉａｍｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐ．Ｌｕｎｇ  Ｒｅｓ．４１：５７−７３，２０１５を参照のこと）。
【０４６３】
実施例１
ブレオマイシン誘導性間質性肺疾患の治療用のＨＲＳポリペプチドの評価
研究は、例示的なＨＲＳポリペプチド（ＨｉｓＲＳ１Ｎ８）がブレオマイシン誘導性肺線維症のマウスモデルにおける呼吸障害および／または肺線維症を減少するかどうかを判定するために行われた。炎症性および線維性プロセスにおけるＨＲＳポリペプチドの効果は、気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）の細胞内含有量、組織学的線維症スコア、および肺コラーゲン含有量を測定することによって判定した。
【０４６４】
プロトコルおよび方法。肺の炎症および線維症は、ＢＬＭの口腔咽頭投与によって雄Ｃ５７Ｂｌ／６Ｊマウスにおいて誘導された。馴化段階後、マウスを、異なる群にわたって体重に基づいてランダム化した。イソフルラン麻酔下、５０μｌのＰＢＳまたはＢＬＭを、声帯上に液滴し、吸引を促進した。マウスを、イソフルラン麻酔下で、末梢血流を用いて２１日目に殺処分した。動物を、以下の表Ｅ１に示されるように処置した。
【表Ｅ１】
2020517638.tif 000055
【０４６５】
非疾患対照としての役割を果たす０日目にＰＢＳを受容している動物。０日目に口腔咽頭でＢＬＭを受容している動物は、治療用治療なし、経口ビヒクル（０．５％のナトロソル）、経口ニンテダニブ（ナトロソル中６０ｍｇ／ｋｇ）、経口デキサメタゾン（水中０．２５ｍｇ／ｋｇ）、静脈内（ＩＶ）ビヒクル（５０ｍＭ  Ｈｉｓ、１４０ｍＭ  ＮａＣｌ、０．０５％ポリソルベート２０、ｐＨ７．３）、または１、３、または１０ｍｇ／ｋｇで静脈内ビヒクル中に希釈された被験物質（ＨｉｓＲＳ１Ｎ８；ロット番号Ｓ０６１３０４３）のいずれかで受容した。毎日の経口処置は、０日目に開始したが、毎日の静脈内処置は、８日目に開始した。投与は、終了日（２１日目）まで継続する予定であったが、静脈内処置群における高い死亡率のため（結果を参照のこと）、１９日目および２０日目の静脈内投与をスキップした。新規のコラーゲン形成を決定するために、マウスに、７日目、被験物質による処置を開始する１日前に、１００％重水素化（Ｄ２Ｏ）水／０．９％ＮａＣｌ（３５μｌ／体重ｇ）の静脈内ボーラス注射を施した。続いて、マウスに、新規に形成されたコラーゲンの標識化を維持するために殺処分するまで、８％Ｄ２Ｏ（Ｋｉｎｅｍｅｄ，Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ）飲料水を与えた。体重は、週３回モニタリングした。
【０４６６】
終了時、マウスは、被験物質の最終投与から１日後（非疾患対照、デキサメタゾン、およびビヒクル群）または被験物質の最終静脈内投与から２時間後、イソフルランを用いて殺処分し、心臓穿刺を介して放血した。血液試料は、血漿（新規のコラーゲンアッセイ）または血清に処理し、冷凍保存した（−７０℃未満）。
【０４６７】
肺を、７５０μｌのＰＢＳで２回洗い流し、気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）試料と組み合わせ、遠心分離するまで氷上で保存した。上清を収集し、冷凍保存した（−７０℃未満）。細胞ペレット中の赤血球を溶解し、残りの細胞を、１００μｌのＰＢＳ中に再懸濁した。２０μｌを、トリパンブルー溶液中に希釈し、血球計を用いて生細胞を計数するために使用した。
【０４６８】
５つの肺葉を収集し、単離した。中葉および副肺葉の湿質量を記録した。次いで、この葉を、急速凍結し、ヒドロキシプロリン分析用に使用するまで、−７０℃未満で保存した。左肺葉を、膨張させ、４％  ホルムアルデヒド中で４８時間固定し、組織学的分析のためにパラフィン中に包埋した。頭蓋肺葉を、急速凍結し、新規のコラーゲン形成の決定のためにＫｉｎｅｍｅｄへの出荷まで、−８０℃で保存した。
【０４６９】
左肺葉の切片を、マッソンのトリクロムを用いて染色し、修飾されたアッシュクロフトスコアを用いて盲目様式でスコア化した（Ｈｕｂｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ．４４：５０７−５１１，５１４−５０７，２００８）。ヒドロキシプロリン含有量を、酸加水分解を用い、発色アッセイを用いて、中葉および副肺葉において決定した（ＱｕｉｃｋＺｙｍｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｌｅｉｄｅｎ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）。新規に形成されたコラーゲンを、正規化のために２Ｈ中で濃縮した体内の水画分を用いて、Ｋｉｎｅｍｅｄ  Ｉｎｃ．，Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ，ＵＳＡによって頭蓋肺葉中で測定した。
【０４７０】
全ての統計分析を、Ｗｉｎｄｏｗｓ統計ソフトウェアパッケージ用のＳＰＳＳ２２（ＳＰＰＳ  Ｉｎｃ．，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ，ＵＳＡ）を用いて実施した。第１に、誤差分散の平等は、Ｌｅｖｅｎｅ検定を用いて試験し、ｐ＞０．０１で等分散性が仮定された。誤差分散の平等の場合、群を、一方向ＡＮＯＶＡ検定を用いて、続いて、適切な場合、ＢＬＭ＋適切なビヒクル群に対して、ｐｏｓｔ−ｈｏｃ  Ｄｕｎｎｅｔｔ検定によって比較した。誤差分散の平等の場合、群を、Ｋｒｕｓｋａｌｌ−Ｗａｌｌｉｓ検定、続いて、Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ検定を用いて比較した。
【０４７１】
結果−生存。この研究は、非疾患対照群の７匹の動物、およびＢＬＭ誘導性基の１２匹の動物で開始した。生存を、以下の表Ｅ２に示す。
【表Ｅ２】
2020517638.tif 000056
【０４７２】
未処置対照（生理食塩水ＩＴ）群およびＢＬＭでＰＯ処置したビヒクル群における全ての動物は、実験期間生存した。ＢＬＭ未処置群における生存率は、８３％であった。経口処置群では、デキサメタゾン処置後、生存率は、７５％であり、ニンテダニブ処置群では、９２％であった。生存率は、ＩＶビヒクルにおいて５８％まで低下し、被験物質処置群において類似の範囲まで低下した（表Ｅ２を参照のこと）。
【０４７３】
結果−体重。予定された剖検まで生存した動物からのデータに基づいて、肺内でのＢＬＭの投与は、このモデルの特徴付けである実験の初期段階（初めの８〜１０日）中、マウスの体重の減少をもたらした。この段階後、ＢＬＭ誘導性マウスの体重は、安定し、残りの実験期間にわたって徐々に増加し始めた。ＰＢＳ誘導性未処置群では、体重は、安定した状態であり、実験期間全体にわたって徐々に増加した（合計６％）。動物を、ビヒクル、デキサメタゾン、またはニンテダニブで毎日のベースで経口処置するとき、体重は、未処置ＢＬＭ誘導性動物と同等であり、初期体重の約９０％にとどまった。ＩＶ処置を開始するまで、体重は、全てのＩＶ処置において同等であった。８日目に被験物質によるＩＶ処置を開始した後、１および３ｍｇ／ｋｇで処置した体重は、ＢＬＭ未処置群の傾向線より下に落ちるか、またはその線に従った。１０ｍｇ／ｋｇで被験物質による毎日のＩＶ処置は、より低い投与群と比較したとき、ＢＷに対して陽性効果があった。
【０４７４】
結果−ＢＡＬ流体中の細胞数。試料毎のＢＡＬ中の細胞の総数は、ＢＬＭによる肺線維症の誘導後、１９．８倍高かった（図１を参照のこと）。デキサメタゾンまたはニンテダニブによる経口処置は、終了時にＢＡＬ流体中で計数した生細胞に著しく影響を及ぼさなかった。被験物質処置群では、ＩＶ−ビヒクル処置群と比較したＢＡＬ流体中の細胞数は、１、３、または１０ｍｇ／ｋｇで被験物質によるＩＶ処置後、それぞれ、約４６％、３８％、および４５％減少した。
【０４７５】
結果−肺質量、コラーゲン含有量、および新規のコラーゲン含有量。ＢＬＭ誘導は、ＰＢＳ誘導性マウスと比較して、湿重量において１．８倍の増加、および肺乾燥重量において２．１倍の増加をもたらしたＢＬＭ誘導性未処置マウスの肺湿重量および乾燥重量に有意に影響を及ぼした。ＰＯビヒクル処置群と比較したとき、デキサメタゾンは、１５．６％の肺湿重量を減少した。肺湿重量または乾燥重量の著しい変化は、他の処置で観察されなかった。
【０４７６】
ＢＬＭによる誘導は、ＰＢＳ誘導性マウスと比較して、中葉および副肺葉中のコラーゲン含有量の１．９７倍の著しい増加をもたらした。中葉および副肺葉中のコラーゲン含有量の著しい変化は、いかなる処置でも観察されなかった。
【０４７７】
ＢＬＭ投与後、新規のコラーゲン合成の５．４倍の著しい増加は、ＰＢＳ  ＩＴを受容するマウスと比較して観察された。新規のコラーゲン合成の著しい増加は、いかなる処置でも観察されなかった。
【０４７８】
結果−組織学的線維症（アッシュクロフト）スコア。肺線維症の程度は、マッソンのトリクロムを用いて染色した左肺葉のパラフィン切片のアッシュクロフトスコアリングによって判定した。ＢＬＭ誘導は、ＰＢＳ誘導性動物と比較して、左肺葉中の線維症スコアの８．３倍の著しい増加をもたらした。デキサメタゾンまたはニンテダニブによる経口処置は、ＰＯビヒクル群と比較して、群平均組織学的スコアの著しい減少をもたらさなかったが、デキサメタゾン処置は、１１．７％の組織学的スコアの減少を示した。同様に、被験物質による処置は、ＩＶビヒクル群と比較して、組織学的スコアの著しい減少をもたらさなかったが、被験物質１０ｍｇ／ｋｇの用量は、１２．３％の組織学的スコアの減少を示した。
【０４７９】
モデルの局所的性質により、群内の平均アッシュクロフト指数スコアおよび各個人内の肺病理学における高い変動性を示すため、全ての分野からスコア化した（１動物当たり１３〜２０）アッシュクロフトスコアを分析し、ＢＬＭ誘導性群において観察数を８４〜１８２まで増加した。この総合的分析を用いて、０．２５ｍｇ／ｋｇのデキサメタゾンおよび１０ｍｇ／ｋｇの被験物質による処置は、ビヒクル処置群と比較して、肺線維症を著しく減少させた（図２を参照のこと）。
【０４８０】
要約。この研究の目標は、ＢＬＭの口腔咽頭投与によって誘導されたマウスの肺線維症における被験物質による処置の治療用用量反応効果を研究することであった。肺線維症は、雄Ｃ５７Ｂｌ／６Ｊマウスの肺へのＢＬＭの単一の口腔咽頭の点滴によって誘導された。ＢＬＭの代わりにＰＢＳを受容している動物を、対照として使用した。肺の線維症プロセスの誘導は、左肺葉におけるＢＡＬ細胞数の１９．８倍の増加および線維症スコアの８．３倍の増加によって示された。全コラーゲンの１．９７倍の増加が観察された。加えて、肺湿重量または乾燥重量の著しい変化も観察された。総合すると、これらのデータは、線維症が肺において著しく誘導されたという結論を支持する。
【０４８１】
ＢＬＭと組み合わされた静脈内注射の組み合わせは、全てのＩＶ注射群の動物の著しい死をもたらした。生存におけるこの死の正確な理由は、決定することができなかったが、ＩＶ注射を容易にするために加温パッド上に動物を置くことによって引き起こされる体温の増加は、ＢＬＭによる肺の損傷と相まって一因となると推測する。
【０４８２】
被験物質による処置は、ＢＡＬ流体中の細胞全体の著しい減少をもたらした（すなわち、１、３、および１０ｍｇ／ｋｇについては、それぞれ、４６％、３８％、および４５％）。肺へのＢＬＭの点滴から８日後に開始する被験物質による処置はまた、用量関連様式でアッシュクロフト線維症スコアも向上して（すなわち、１、３、および１０ｍｇ／ｋｇについては、それぞれ、４．９％、８．６％、および１３．１％）、１０ｍｇ／ｋｇの被験物質で処置した動物において統計的有意性に達した。
【０４８３】
肺へのＢＬＭの点滴日に開始するデキサメタゾン（０．２５ｍｇ／ｋｇ／用量）による処置は、肺湿重量の著しい減少およびアッシュクロフト線維症スコアの著しい向上（１１．３％）をもたらした。
【０４８４】
肺へのＢＬＭの点滴日に開始するニンテダニブ（６０ｍｇ／ｋｇ／用量）による処置は、この実験において著しい効果を示さなかった。効果の欠如は、この実験の条件下で、線維症を改善することが困難である表れと見られる。このモデルの誘導は、実験的再現の間およびその間で異なることが知られており、ニンテダニブは、参考文献中で同様の用量レベルおよび投与パラダイムで線維症を改善することが示されている（Ｗｏｌｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ３４９：２０９−２２０，２０１４を参照のこと）。
【０４８５】
結論。概して、被験物質は、ＢＬＭの点滴から８日後に開始する、治療的に投与したときに、ＢＬＭ誘導性肺の炎症および線維症モデルにおいて強力な疾患を改善する活性を示した。ＢＡＬ流体において得られた細胞数は、肺の免疫細胞湿潤の度合いに反映すると考えられる。被験物質は、これらの細胞が著しく減少し、このことは、肺の免疫細胞湿潤が減少したことを強く示唆している。対照的に、抗線維性のニンテダニブも免疫抑制剤のデキサメタゾンも、予防投与にもかかわらず、いかなる効果も得られなかった。
【０４８６】
被験物質による治療的介入もまた、ＢＬＭの点滴から２１日後、組織学的線維症を改善し（減少させ）、分子の抗線維性の可能性を実証した。デキサメタゾンは、このエンドポイントで同様の効果を得たが、ニンテダニブは、効果を得られたかった。この研究において、被験物質は、ニンテダニブをしのいでおり、特発性肺線維症の治療用に市販されている。これらの結果は、被験物質などのＨＲＳポリペプチドが広範囲のＩＬＤにおいて肺の炎症および線維症の治療のために著しい治療的有用性を示すことを示唆している。
【０４８７】
実施例２
ブレオマイシン誘導性間質性肺疾患の処置のためのＨＲＳポリペプチド−Ｆｃ融合タンパク質の評価
研究は、例示的なＨＲＳ−Ｆｃ融合タンパク質（ＨＲＳＦＣ１）がブレオマイシン誘導性肺線維症のラットモデルにおける呼吸障害および／または肺線維症を減少するかどうかを判定するために行われた。炎症性および線維性プロセスにおけるＨＲＳ−Ｆｃ融合タンパク質の効果は、組織学的線維症スコアおよび炎症スコア、ならびに肺コラーゲン含有量を測定することによって判定した。
【０４８８】
プロトコルおよび方法。肺の炎症および線維症は、１００μｌ中の約１ｍｇ／ｋｇの投与レベルでブレオマイシン（ＢＬＭ）の口腔咽頭投与によって雄Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ（Ｃｒｌ：ＣＤ（ＳＤ））ラットにおいて最長連続７日間誘導された。ＰＢＳまたはＢＬＭを、イソフルラン麻酔下で投与した。ＢＬＭ投与の初日を、１日目と定義した。ラットを、二酸化炭素投与後、末梢血流を用いて２２日目に殺処分した。動物を、以下の表Ｅ３に示されるように処置した。
【表Ｅ３】
2020517638.tif 000057
【０４８９】
ＢＬＭを受容している動物における大幅な体重減少のため、４日目および５日目の口腔咽頭投与をスキップした。１、２、３、６、および７日目にＰＢＳを受容している動物は、非疾患対照としての役割を果たした。１、２、３、６、および７日目に口腔咽頭でＢＬＭを受容している動物は、治療用治療なし、経口ビヒクル（水）、経口ニンテダニブ（水中６０ｍｇ／ｋｇ）、静脈内（ＩＶ）ビヒクル（２０ｍＭ  Ｈｉｓ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ６．９）、または０．１、０．３、１、または３ｍｇ／ｋｇで静脈内ビヒクル中に希釈された被験物質（ＨＲＳＦＣ１；ロット番号Ｈ−Ｆｃｖ３−Ｎ４−９２１）のいずれかで受容した。毎日の経口処置は、１日目に開始したが、毎週の静脈内処置は、９日目（全ての用量レベル）または２日目（１ｍｇ／ｋｇ）に開始した。
【０４９０】
生存中、体重を測定し、臨床的観察を毎日行った。８日目および１５日目に、動物を、ケージから取り出し、全身プレチスモグラフィチャンバに個々に入れた。２０分の順化段階後、呼吸パラメータを、１０分間記録した。
【０４９１】
終了時、ラットは、被験物質の最終経口投与から１日後（非疾患対照、ニンテダニブ、および経口ビヒクル群）または被験物質の最終静脈内投与から６日後、二酸化炭素を用いて殺処分し、心臓穿刺を介して放血した。
【０４９２】
５つの肺葉を収集し、重量を量った。右肺葉を、膨張させ、１０％  中性緩衝ホルマリン中で固定し、組織学的分析のためにパラフィン中に包埋した。左肺葉の約５０ｍｇの切片を、急速凍結し、潜在的なＲＮＡ分析用に−８０℃で保存した。この葉の残りもまた、コラーゲン含有量用に分析されるまで、急速凍結した。
【０４９３】
組織学用の切片を、ピクロシリウスレッドを用いて染色し、修飾されたアッシュクロフトスコアを用いて獣医病理学者によって盲目様式でスコア化した（４つの葉のそれぞれに対して１スコア）（Ｈｕｂｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。ヒドロキシプロリン含有量は、質量分析法を用いて左肺葉において決定した。
【０４９４】
全ての統計分析を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を用いて実施した。群を、一方向ＡＮＯＶＡ検定を用いて、続いて、適切な場合、ＢＬＭ＋適切なビヒクル群に対して、ｐｏｓｔ−ｈｏｃ  Ｄｕｎｎｅｔｔ検定によって比較した。
【０４９５】
結果−生存。動物の中には、ＢＬＭ誘導性によって引き起こされた重篤な体重減少のため、人道的な理由のため殺処分を必要としたものがあった。群３および群８において、それぞれ、２匹の動物が存在した。殺処分のうちの３匹は、被験物質投与前に行われた。残りの殺処分は、１３日目に群８（３ｍｇ／ｋｇの被験物質）において行われた。この動物が処置開始前に体重の１１％を失ったため、殺処分は、被験物質の副作用に起因しなかった。
【０４９６】
結果−体重。予定された剖検まで生存した動物からのデータに基づいて、肺内でのＢＬＭの投与は、このモデルの特徴付けである実験にわたって非疾患対照に対するラットの体重の減少をもたらした。ニンテダニブまたは被験物質により処置された群のいずれも、それらのそれぞれの対照とは有意に異なる体重曲線を有しなかった。
【０４９７】
結果−呼吸測定。呼吸測定を、８日目に行い、ＢＬＭによって引き起こされた明らかな障害を示した。これらの結果を、以下の表Ｅ４に示す。
【表Ｅ４−１】
2020517638.tif 000058
【表Ｅ４−２】
2020517638.tif 000059
【０４９８】
呼気時間および吸気時間の著しい減少が観察され、一方、最大呼気流量、最大吸気流量、毎分呼吸量（ＲＭＶ）、および呼吸速度は、著しく増加した。１回の呼吸量は、８日目に、ＢＬＭ誘導性動物と非誘導性動物との間で同様であった。
【０４９９】
１５日目に行われた呼吸測定（表Ｅ４）は、ＢＬＭ誘導性ビヒクル処置群において継続した障害を示す。ニンテダニブによる処置は、呼吸パラメータにおけるＢＬＭ誘導性変化に著しく影響を及ぼさなかった。対照的に、被験物質は、ＢＬＭ誘導性により損なわれた全ての呼吸測定を著しく逆転させた（呼気時間および吸気時間は、非疾患対照に対して増加し、最大呼気流量、最大吸気流量、ＲＭＶ、および呼吸速度は、非疾患対照に対して減少した）。興味深いことには、ＢＬＭ曝露によって著しく上昇しなかった１回の呼吸量は、被験物質の処置によって減少した。
【０５００】
ＲＭＶのグラフ表示を、図３に示す。ＲＭＶは、毎分吸気または呼気されたガスの容積である。図３に示されるように、ＲＭＶは、ＢＬＭ誘導によって著しく上昇し（ビヒクル群と生理食塩水ＩＴを受容した群を比較）、肺胞腔と血液との間でガス交換障害に対する生理学的補償に反映すると思われる。ガス交換は、その他によるモデルに記載される、高いレベルの免疫細胞湿潤およびサイトカインの放出に続発する進行中の組織浮腫により悪いと思われる。ニンテダニブは、ＲＭＶ（または任意の他の呼吸測定）に影響を及ぼさない。対照的に、９日目または２日目に開始する被験物質は、全ての用量レベルでこのエンドポイントを著しく減少させ、実際には、ＲＭＶは、被験物質処置によって正規化する（すなわち、口腔咽頭生理食塩水とは異ならない）。
【０５０１】
結果−肺質量およびコラーゲン含有量。２２日目に剖検で得られた肺質量（湿重量）およびコラーゲン含有量は、１、２、３、４、６、および７日目にＢＬＭ誘導によって著しく上昇した。処置群のいずれも、肺湿重量またはコラーゲン含有量を著しく変化させなかった。
【０５０２】
結果−組織学的スコア。スライドは、獣医病理学者によって読み込まれ、評価された４つの葉のそれぞれは、４つのスコア［線維症に対するアッシュクロフト（０〜８の範囲のスコア）、血管周囲／細気管支周囲の炎症細胞浸潤（０〜５の範囲のスコア）、間質性／肺胞炎症細胞浸潤（０〜５の範囲のスコア）、ＩＩ型肺細胞過形成（０〜５の範囲のスコア）］に割り当てた。
【０５０３】
ＰＢＳ誘導性動物に割り当てられたアッシュクロフトスコアは、均一に、スコア０であったが、一方、ＢＬＭ誘導性ビヒクル処置動物は、８ポイントスケールで２〜６の範囲のスコアを有し、線維症が著しく誘導されたことを確認した。ニンテダニブによる経口処置は、ＰＯビヒクル群と比較して、群平均組織学的スコアを５％減少し、統計学的基準を満たさなかった。同様に、被験物質による処置は、ＩＶビヒクル群と比較して、組織学的スコアの著しい減少をもたらさなかったが、２、９、および１６日目に１ｍｇ／ｋｇの被験物質を受容している群は、１５．３％のアッシュクロフトスコアの減少を示した。
【０５０４】
モデルの局所的性質により、群内の平均アッシュクロフト指数スコアおよび各個人内の肺病理学における高い変動性を示すため、全ての分野からスコア化した（１動物当たり４）アッシュクロフトスコアを分析し、ＢＬＭ誘導性群において観察数を２４〜３２まで増加した。この総合的分析を用いて、２、９、および１６日目に１ｍｇ／ｋｇの被験物質による処置は、ビヒクル処置群と比較して、肺線維症を著しく減少させた（図４を参照のこと）。
【０５０５】
血管周囲／細気管支周囲の炎症細胞浸潤およびＩＩ型肺細胞過形成は、生理食塩水誘導性非疾患対照からの切片の全てにおいて存在しなかった。血管周囲／細気管支周囲の炎症細胞浸潤は、最小限から軽度（スコア＝１〜２）浸潤が観察された、ビヒクルＰＯを受容している２匹の動物およびビヒクルＩＶを受容している１匹の動物を除いて全てにおいて存在しなかった。ＢＬＭの効果がほとんどなかったため、統計学的評価は、このエンドポイントで行われなかった。同様に、最小限（スコア＝１）のＩＩ型肺細胞過形成は、ＢＬＭ誘導性動物からのいくつかの切片において観察されたが、処置の影響を受けなかった。
【０５０６】
間質性／肺胞炎症細胞浸潤は、生理食塩水誘導性肺からの全ての切片において存在しなかった（スコア＝０）。ＢＬＭで誘導された動物において、最小限から軽度（スコア＝１〜３）の間質性炎症細胞浸潤は、図５に示されるように観察された。ニンテダニブによる経口処置は、間質性炎症細胞浸潤に影響を及ぼさなかったが、２、９、および１６日目に１ｍｇ／ｋｇの被験物質による処置は、ビヒクル処置群と比較して、間質性炎症細胞浸潤を著しく減少させた。
【０５０７】
要約。この研究の全体的な目的は、被験物質が、ブレオマイシン誘導性肺線維症のラットモデルにおける呼吸障害および／または肺線維症の程度を減少させるかどうかを判定することであった。肺線維症は、実験の初めの７日間、雄Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットの肺へのＢＬＭの５つの口腔咽頭の点滴によって引き起こされた。ＢＬＭの代わりに生理食塩水を受容している動物を、対照として使用した。肺の炎症および線維症プロセスの誘導は、ＢＬＭ誘導性動物において、最小限から軽度の間質性／肺胞炎症細胞浸潤の組織学的観察および２〜６のアッシュクロフト線維症スコアによって実証された。８日目および１５日目に行われた呼吸測定は、ＢＬＭによって引き起こされた著しい変化を示し、ビヒクルを受容した動物において持続し、ガス交換が、恐らく炎症関連の肺水腫によって損なわれるという仮説を支持した。総合すると、これらのデータは、炎症および線維症が少なくとも８日目まで存在する病理学的変化とともに、肺において著しく誘導されたという結論を支持する。
【０５０８】
被験物質による処置は、１５日目に行われた呼吸評価基準の著しい軽減をもたらした。ビヒクル処置動物が８日目〜１５日目に安定した値を有したが、一方、被験物質処置は、生理食塩水誘導性非疾患対照において得られた測定基準に対して（およびそれに一致する多くの場合において）著しい変化を生じた。被験物質の活性は、用量レベル（０．１〜３ｍｇ／ｋｇ）にわたって観察された。被験物質の処置はまた、アッシュクロフトスコア、ならびに２、９、および１６日目に１ｍｇ／ｋｇを受容したラットにおいて２２日目に測定した間質性炎症の著しい減少（改善）をもたらした。
【０５０９】
９日目に開始するニンテダニブ（５０ｍｇ／ｋｇ／用量）による処置は、この実験において著しい効果を示さなかった。効果の欠如は、この実験の条件下で、線維症を改善することが困難である表れと見られる。このモデルの誘導は、実験的再現の間およびその間で異なることが知られており、ニンテダニブは、参考文献中で同様の用量レベルで線維症を改善することが示されている（Ｃｈａｕｄｈａｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｊｏｕｒｎａｌ：Ｏｆｆｉｃｉａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ．２９：９７６−９８５，２００７を参照のこと）。
【０５１０】
結論。概して、被験物質は、ＢＬＭの点滴の開始から２または９日後に開始する、治療的に投与したときに、ＢＬＭ誘導性肺の炎症および線維症モデルにおいて強力な疾患を改善する活性を示した。呼吸評価基準は、この研究における最も影響を受けるエンドポイントであり、試験した全ての用量およびパラダイムで著しい効果を示した（毎週０．１〜３ｍｇ／ｋｇ投与）。対照的に、驚くべきことではなく、このモデルにおいて免疫主導の間質性浮腫における呼吸評価基準の見込まれる信頼性を考えると、抗線維性のニンテダニブは、効果がなかった。
【０５１１】
被験物質による治療的介入もまた、２２日目に測定された組織学的線維症および間質性免疫細胞湿潤も改善し（減少させ）、免疫調節の可能性をさらに実証し、分子の抗線維性の可能性を示した。被験物質は、この研究では著しい効果を得られなかったが、ニンテダニブをしのいでおり、特発性肺線維症の治療用に市販されている。これらの結果は、被験物質などのＨＲＳポリペプチドが広範囲のＩＬＤにおいて肺の炎症および線維症の治療のために著しい治療的有用性を示すことを示唆している。
【０５１２】
実施例３
ブレオマイシン誘導性間質性肺疾患の処置のためのニンテダニブまたはピルフェニドンと組み合わされたＨＲＳポリペプチド−Ｆｃ融合タンパク質の評価
研究は、ＩＰＦの治療用に市販されているニンテダニブまたはピルフェニドンと組み合わされた、例示的なＨＲＳ−Ｆｃ融合タンパク質（ＨＲＳＦＣ１）がブレオマイシン誘導性肺線維症のラットモデルにおける呼吸障害および／または肺線維症を減少するかどうかを判定するために行われた。炎症性および線維性プロセスにおけるＨＲＳ−Ｆｃ融合タンパク質の効果は、呼吸測定基準、組織学的線維症スコアおよび炎症スコア、ならびに肺コラーゲン含有量を測定することによって判定した。ＨＲＳＦＣ１の循環濃度もまた、判定された。
【０５１３】
プロトコルおよび方法。実施例２に記載されるものと同一の方法を用いた同じ実験室では、肺の炎症および線維症は、１００μｌ中の約１ｍｇ／ｋｇの投与レベルでブレオマイシン（ＢＬＭ）の口腔咽頭投与によって雄Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ（Ｃｒｌ：ＣＤ（ＳＤ））ラットにおいて最長連続７日間誘導された。ＰＢＳまたはＢＬＭを、イソフルラン麻酔下で投与した。過剰なラットを、ＢＬＭで誘導し、過度な体重減少を有する任意の動物と置き換えるために使用した。ＢＬＭ投与の初日を、１日目と定義した。ラットを、二酸化炭素投与後、末梢血流を用いて１７日目または２２日目に殺処分した。動物を、以下の表Ｅ５−ＡおよびＥ５−Ｂに示されるように処置した。
【表Ｅ５Ａ】
2020517638.tif 000060
【表Ｅ５Ｂ】
2020517638.tif 000061
【０５１４】
ＢＬＭを受容している動物における大幅な体重減少のため、４日目および７日目の口腔咽頭投与をスキップした。１、２、３、５、および６日目にＰＢＳを受容している動物は、非疾患対照（群１）としての役割を果たした。１、２、３、５、および６日目にＢＬＭを口腔咽頭に受容している動物は、経口ビヒクル（０．５％ＣＭＣおよび０．５％Ｔｗｅｅｎ−８０）を１日３回、ならびにＩＶビヒクル（２０ｍＭ  Ｈｉｓ、１２５ｍＭ  ＮａＣｌ、１０ｍＭメチオニン、３％スクロース、０．０２％ＰＳ２０、ｐＨ６．９）を週１回（群２）、経口ニンテダニブ（６０ｍｇ／ｋｇ）を正午に１日１回、ならびに経口ビヒクルを午前および午後で１日２回ならびにＩＶビヒクルを週１回（群３）、経口ピルフェニドン（１用量当たり７０ｍｇ／ｋｇ）を１日３回ならびにＩＶビヒクルを週１回（群４）、経口ビヒクルを１日３回ならびに被験物質（ＨＲＳＦＣ１；３ｍｇ／ｋｇ；ロット番号Ｈ−Ｆｃｖ３−Ｎ４−１００５）を週１回（群５）、経口ニンテダニブを正午に１日１回、経口ビヒクルを午前および午後で１日２回ならびにＩＶ被験物質を週１回（群６）、あるいは経口ピルフェニドンを１日３回およびＩＶ被験物質を週１回（群４）のいずれかで受容した。全ての処置は、９日目に開始した。
【０５１５】
生存中、体重を測定し、臨床的観察を毎日行った。８日目、１５日目、および２１日目に、動物を、ケージから取り出し、全身プレチスモグラフィチャンバに個々に入れた。２０分の順化段階後、呼吸パラメータを、１０分間記録した。研究前および１０日目および１７日目に、全血を尾静脈から得、ＨＲＳＦＣ１の測定のために血清に処理した。
【０５１６】
１７日目（ｎ＝４）または２２日目（ｎ＝８）の終了時、ラットは、被験物質の最終経口投与から１日後（非疾患対照、ニンテダニブ、および経口ビヒクル群）または被験物質の最終静脈内投与から６日後、二酸化炭素を用いて殺処分し、心臓穿刺を介して放血した。
【０５１７】
５つの肺葉を収集し、重量を量った。１７日目に、右副葉を保持し、乾燥させて、乾燥重量を得た。残りの右肺葉を、膨張させ、１０％  中性緩衝ホルマリン中で固定し、組織学的分析のためにパラフィン中に包埋した。左肺葉の約５０ｍｇの切片を、急速凍結し、潜在的なＲＮＡ分析用に−８０℃で保存した。この葉の残りもまた、コラーゲン含有量用に分析されるまで、急速凍結した。
【０５１８】
組織学用の切片を、ピクロシリウスレッドを用いて染色し、修飾されたアッシュクロフトスコアを用いて獣医病理学者によって盲目様式でスコア化した（３〜４つの葉のそれぞれに対して１スコア）（Ｈｕｂｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。ヒドロキシプロリン含有量は、質量分析法を用いて左肺葉において決定した。
【０５１９】
ＨＲＳＦＣ１により処置した動物からの血清試料を使用して、ＨＲＳ部分を捕捉し、融合タンパク質のＦｃ部分を検出する抗体を用いた標準的なサンドイッチＥＬＩＳＡ技術を用いて体循環におけるタンパク質のレベルを判定した。
【０５２０】
全ての統計分析を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を用いて実施した。群を、一方向ＡＮＯＶＡ検定（組織学、肺重量、コラーゲン含有量）をまたは二方向反復測定ＡＮＯＶＡ検定（ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ）用いて、続いて、適切な場合、ｐｏｓｔ−ｈｏｃ  Ｄｕｎｎｅｔｔ検定によって比較した。
【０５２１】
結果−生存。９日目に処置を開始した全ての動物は、予定した剖検まで生存した。
【０５２２】
結果−体重。肺内でのＢＬＭの投与は、このモデルの特徴付けである実験にわたって非疾患対照に対するラットの体重の減少をもたらした。ニンテダニブ、ピルフェニドン、または被験物質により単独でまたは組み合わせて処置された群のいずれも、それらのそれぞれの対照とは有意に異なる体重曲線を有しなかった。
【０５２３】
結果−呼吸測定。呼吸測定を、８日目に行い、ＢＬＭによって引き起こされた明らかな障害を示した（表Ｅ６）。
【表Ｅ６−１】
2020517638.tif 000062
【表Ｅ６−２】
2020517638.tif 000063
【０５２４】
任意の処置前の８日目に、呼気時間および吸気時間の著しい減少が観察され、一方、最大呼気流量および呼吸速度は、著しく増加した。１回の呼吸量、最大吸気流量、および毎分呼吸量（ＲＭＶ）は、この実験では、ＢＬＭ誘導性動物と非誘導性動物との間で同様であった。
【０５２５】
１５日目および２１日目に行われた呼吸測定（表Ｅ６）は、ＢＬＭ誘導性ビヒクル処置群において障害の低下を示し、このことはブレオマイシンモデルにおいて報告されている急速な自然消散を示唆している。ニンテダニブ、ピルフェニドン、または被験物質による処置は、この研究において、呼吸パラメータにおけるＢＬＭ誘導性変化に著しく影響を及ぼさず、疾患のこの急速な自然消散によると思われる。
【０５２６】
結果−肺質量およびコラーゲン含有量。１７日目または２２日目に剖検で得られた肺質量（湿重量）および２２日目に測定されたコラーゲン含有量は、１、２、３、５、および６日目にＢＬＭ誘導によって著しく上昇した。処置群のいずれも、肺湿重量またはコラーゲン含有量を著しく変化させなかった（データは示さず）。
【０５２７】
結果−組織学的スコア。スライドは、獣医病理学者によって読み込まれ、評価された３つの葉のそれぞれは、４つのスコア型［線維症に対するアッシュクロフト（０〜８の範囲のスコア）、血管周囲／細気管支周囲の炎症細胞浸潤（０〜５の範囲のスコア）、間質性／肺胞炎症細胞浸潤（０〜５の範囲のスコア）、ＩＩ型肺細胞過形成（０〜５の範囲のスコア）］に割り当てた。
【０５２８】
ＰＢＳ誘導性動物に割り当てられたアッシュクロフトスコアは、均一に、スコア０であったが、一方、ＢＬＭ誘導性ビヒクル処置動物は、８ポイントスケールで１〜５の範囲のスコアを有し、より中等度ではあるが、実施例２において観察された、線維症が著しく誘導されたことを確認した。ニンテダニブ、ピルフェニドン、または被験物質による介入は、単独でまたは組み合わせて、ＰＯ＋ＩＶビヒクルを受容している対照と比較して、間質性炎症細胞浸潤への著しい効果を有しなかった（データを示さず）。
【０５２９】
間質性／肺胞炎症細胞浸潤は、生理食塩水誘導性肺からの全ての切片において存在しなかった（スコア＝０）。ＢＬＭで誘導された動物において、最小限から軽度（スコア＝１〜３）の間質性炎症細胞浸潤は、観察された。ニンテダニブ、ピルフェニドン、または被験物質による介入は、単独でまたは組み合わせて、ＰＯ＋ＩＶビヒクルを受容している対照と比較して、間質性炎症細胞浸潤への著しい効果を有しなかった（データを示さず）。
【０５３０】
結果：ＰＫ。ＨＲＳＦＣ１の血清レベルは、９日目および１６日目に被験物質ＨＲＳＦＣ１を受容している動物における１０日目、１７日目、および２２日目に検出可能であった。予期されるように、ＨＲＳＦＣ１のレベルは、１７日目〜２２日目に減少し、経時的に、被験物質のクリアランスを示した。ＨＲＳＦＣ１はまた、ニンテダニブまたはピルフェニドンも受容している動物において測定可能であった。しかしながら、驚いたことには、投与から約２４時間後に測定された、ＨＲＳＦＣ１のレベルは、ＢＬＭの口腔咽頭投与によって引き起こされる肺の炎症および線維症のこの齧歯動物モデルにおけるＩＰＦの処置用に市販されている小分子による併用療法によって著しく増加した（図６）。
【０５３１】
要約。この研究の全体的な目的は、被験物質が、ブレオマイシン誘導性肺線維症のラットモデルにおける呼吸障害および／または肺線維症の程度を減少させるかどうかを判定することであった。肺線維症は、実験の初めの７日間、雄Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットの肺へのＢＬＭの５つの口腔咽頭の点滴によって引き起こされた。ＢＬＭの代わりに生理食塩水を受容している動物を、対照として使用した。肺の炎症および線維症プロセスの誘導は、ＢＬＭ誘導性動物において、最小限から軽度の間質性／肺胞炎症細胞浸潤の組織学的観察および１〜５のアッシュクロフト線維症スコアによって実証された。８日目に行われた呼吸測定は、ビヒクルを受容した動物において減少したが、ＢＬＭによって引き起こされた著しい変化を示した。総合すると、これらのデータは、炎症が少なくとも８日目まで存在する病理学的変化とともに、肺において著しく誘導され、中等度の炎症および線維症が２２日目まで持続したという結論を支持する。
【０５３２】
ニンテダニブ、ピルフェニドン、または被験物質による９日目に開始する介入は、実施例２において要約される実験と比較して、この実験における著しい効果を有さず、この研究における反応の急速な自然消失および一時的性質に関連すると思われた。
【０５３３】
結論。概して、試験された介入（ニンテダニブ、ピルフェニドン、または被験物質）のいずれも、単独でまたは組み合わせて、この実験における改善するための疾患測定において有効であった。ニンテダニブおよびピルフェニドンの両方がこのモデルに有効であると報告されているため、これらの結果は、潜在的に、この実験的コホートによって引き起こされるより軽度の表現型に続発する。
【０５３４】
被験物質および小分子は、モデル有効性に影響を及ぼさなかったが、ＨＲＳＦＣ１のデータは、遺伝子操作されたタンパク質である、被験物質の薬物動態学的特徴と相互作用することを明らかに示す。
【０５３５】
ニンテダニブおよびピルフェニドンがＨＲＳＦＣ１のＰＫを変化させたという観察を確認するために、実施例３に記載されるものと同一の方法を用いて同じ実験室において行われる第２の研究を評価した。驚くべきことには、ニンテダニブおよびピルフェニドンの同時投与は、初回の観察を確認するＩＶ注入から血清２４時間後に測定されたＨＲＳＦＣ１（データを示さず）の量を増加させた。どちらにおいても、この効果は、２回目の注入後にさらに顕著であった。ＨＲＳＦＣ１、遺伝子操作したＨＲＳポリペプチドの変化したＰＫのこの新規および予期しない観察は、作用の異なる機序を伴うＩＰＦのための２つの小分子療法の存在下で、これらの分子が炎症性および線維性疾患との関連において直接または共有経路と相互作用することを示唆している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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