(57)【要約】本発明は、癌転移抑制因子Ｎｍ２３の活性剤化合物、その立体異性体、またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含む癌転移抑制用医薬組成物に関するものであって、本発明に係る化合物は、癌転移に関連するＮｍ２３の活性を増進させることで、癌細胞転移を抑制して癌転移抑制用医薬組成物として有用に使用可能である。【選択図】図１０
2020517710.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記化学式１で表される化合物、その立体異性体、またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含む癌転移抑制用医薬組成物。
【化１】
2020517710.tif 000020
（化学式１中、
環Ａは、シクロヘキセン（ｃｙｃｌｏｈｅｘｅｎｅ）、シクロヘキサン（ｃｙｃｌｏｈｅｘａｎｅ）、またはベンゼン（ｂｅｎｚｅｎｅ）である。）
【請求項２】
前記化学式１で表される化合物が、下記化学式２〜４のうち何れか１つで表されるものである、請求項１に記載の癌転移抑制用医薬組成物。
【化２】
2020517710.tif 000021
2020517710.tif 000022
【請求項３】
前記化学式１で表される化合物の立体異性体がＥ  ｆｏｒｍである、請求項１に記載の癌転移抑制用医薬組成物。
【請求項４】
前記医薬組成物がＮｍ２３−Ｈ１、Ｎｍ２３−Ｈ２、またはＮｍ２３−Ｈ１とＮｍ２３−Ｈ２の活性剤である、請求項１に記載の癌転移抑制用医薬組成物。
【請求項５】
前記癌は、乳癌、肺癌、黒色腫、前立腺癌、大腸癌、膀胱癌、骨癌、血液癌、甲状腺癌、副甲状線癌、骨髄癌、直腸癌、咽喉癌、喉頭癌、食道癌、膵臓癌、胃癌、舌癌、皮膚癌、脳腫瘍、子宮癌、頭部または頸部癌、胆嚢癌、口腔癌、結腸癌、肛門付近癌、中枢神経系腫瘍、肝癌、および大腸癌からなる群から選択される何れか１つである、請求項１に記載の癌転移抑制用医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規なＮｍ２３活性剤を含む癌転移抑制用医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
癌の転移（ｔｕｍｏｒ  ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ）は、癌患者の予後を決定する最も重要な因子の一つであり、癌による死亡を決定する主な過程である。癌の治療において、手術や放射線療法、化学療法など、患者の生存のための多くの努力が行われているが、癌患者の生存率を高めるための努力は依然として続けられている。癌の転移を研究する分野は、癌を克服する最後の戦略の一つであり、癌転移抑制タンパク質（ｔｕｍｏｒ  ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ）を研究することは、転移抑制薬物を開発するにおいて必須である。
【０００３】
Ｎｍ２３は、正常組織の発達および分化に関与するタンパク質をコードする遺伝子であって、種々の転移性細胞株でＮｍ２３の発現減少が報告されている。一般に、１５０〜１８０個のアミノ酸から構成されるＮｍ２３タンパク質は、ロイシンジッパーモチーフ（ｌｅｕｃｉｎｅ  ｚｉｐｐｅｒ  ｍｏｔｉｆ）を含み、ヌクレオシド二リン酸キナーゼ（ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ  ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｋｉｎａｓｅ、ＮＤＰＫ）活性を有する。特に、Ｎｍ２３−Ｈ１は、癌転移および他の様々な細胞機序、例えば、細胞増殖、胚発達、分化、腫瘍形成などにおいて重要な役割を担うということが明らかになっている。図１は、癌の転移が起こる段階を示した図である。癌の転移は、癌細胞が、一次生成された腫瘍組織（ｐｒｉｍａｒｙ  ｔｕｍｏｒ）で血管に浸透することから始まり、血管を介して移動し生存して、二次位置（ｓｅｃｏｎｄａｒｙ  ｓｉｔｅ）で新しいコロニー（ｃｏｌｏｎｙ）を形成する、多段階の過程を経て起こる。上記の図１を参照すると、癌転移の過程で浸潤（Ｉｎｖａｓｉｏｎ）／血管浸透（Ｉｎｔｒａｖａｓａｔｉｏｎ）と血管外遊出（Ｅｘｔｒａｖａｓａｔｉｏｎ）、転移性コロニー化（Ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ）などの多段階で、Ｎｍ２３−Ｈ１が癌転移抑制活性に関与していることを確認することができる（Ｈｏｒａｋ  ＣＥ，ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  ｇｅｎｅｓ  ｉｎ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｄｏｒｍａｎｃｙ．，ＡＰＭＩＳ．（２００８）Ｊｕｌ−Ａｕｇ；１１６（７−８）：５８６−６０１）。
【０００４】
Ｎｍ２３が癌転移および発達に影響するメカニズムはまだ明確に判明されていないが、ＮＤＰＫ（Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｋｉｎａｓｅ）として、ＡＴＰを用いてＮＤＰ（ＵＤＰ、ＧＤＰ、ＣＤＰ）をＮＴＰ（ＵＴＰ、ＧＴＰ、ＣＴＰ）に転換するタンパク質により細胞中のＮＴＰ量を調節している酵素と判明された。図２は、Ｎｍ２３のＮＤＰＫ活性を示した模式図である。また、Ｎｍ２３−Ｈ１の過発現が癌細胞の浸潤減少と密接な連関を有することが明らかになっている（Ｌｅｅ  Ｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｎｍ２３−Ｈ１  ａｒｅ  ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｂｙ  ｏｘｉｄｏ−ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ  ｓｙｓｔｅｍ．，ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．（２００９）Ｎｏｖ  ２３；４（１１）：ｅ７９４９）。
【０００５】
このような発見に基づき、Ｎｍ２３の発現を増加させるか、細胞浸透性（ｃｅｌｌ  ｐｅｒｍｅａｂｌｅ）Ｎｍ２３−Ｈ１を処理する方向に研究が進んで来た。具体的に、ＭＰＡ（Ｍｅｄｒｏｘｙｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ  ａｃｅｔａｔｅ）を処理すると、Ｎｍ２３−Ｈ１の発現量が増加することが確認され、このような現象は、ＭＰＡ処理により癌転移が抑制されるメカニズムと理解されている（Ｐａｌｍｉｅｒｉ  Ｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｄｒｏｘｙｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ  ａｃｅｔａｔｅ  ｅｌｅｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｎｍ２３−Ｈ１  ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ．，Ｊ  Ｎａｔｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．（２００５）Ｍａｙ  ４；９７（９）：６３２−４２）。しかしながら、ＭＰＡの処理は、Ｎｍ２３−Ｈ１のレベルを高めること以外に、不測の細胞内反応を起こすため、ＭＰＡは薬物として使用できていない。
【０００６】
また、近年、細胞浸透性Ｎｍ２３−Ｈ１を用いて癌転移を抑制する方法が提案されている（Ｌｉｍ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ−ｐｅｒｍｅａｂｌｅ  ＮＭ２３  ｂｌｏｃｋｓ  ｔｈｅ  ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ  ａｎｄ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（２０１１）Ｄｅｃ  １；７１（２３）：７２１６−２５）。細胞浸透性Ｎｍ２３−Ｈ１の場合、原形質膜を通過できるトランスポーターペプチド（ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ  ｐｅｐｔｉｄｅ）を融合する方式により細胞に投入させていた。その結果、細胞浸透性Ｎｍ２３−Ｈ１の処理により、癌転移抑制活性が現れることを確認した。しかし、かかる細胞浸透性Ｎｍ２３−Ｈ１がタンパク質医薬品に適用されるには、生体内安定性を克服しなければならないという課題が残っており、癌転移抑制薬物は、短期間の処理では大きい効果が得られないため、タンパク質医薬品などのような高コストの薬剤を選択するしかないという現実的な問題を持っている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明者らは、癌転移過程に関与するＮｍ２３の活性を調節する低分子物質に関する研究開発を行い、本発明を完成した。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明の一目的は、新規なＮｍ２３の活性剤を含む癌転移抑制用医薬組成物を提供することにある。
【発明の効果】
【０００９】
本発明の化学式１で表される化合物、その立体異性体、またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含む医薬組成物は、Ｎｍ２３−Ｈ１および／またはＮｍ２３−Ｈ２の活性剤として作用し、癌細胞の転移および浸潤を抑制する。したがって、本発明に係るＮｍ２３活性剤は、癌の転移抑制用医薬組成物として非常に有用に活用可能である。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】癌の転移が起こる段階を示した模式図である。
【図２】Ｎｍ２３のＮＤＰＫ活性を示した模式図である。
【図３】化学式２−１の化合物に対するＮＤＰＫ活性を確認した図である。
【図４】化学式２−１の化合物に対する等温熱量測定法（ｉｓｏｔｈｅｒｍａｌ  ｃａｌｏｒｉｍｅｔｒｙ）を行った結果を示した図である。
【図５】プラズモン共鳴分析の結果を示した図である。
【図６】化学式２−１の化合物を２種の乳癌細胞株（ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ）に処理して細胞の形状変化を観察し、それぞれの細胞株でＲａｃ１活性を観察した図である。
【図７】ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞に対する、化学式２−１の化合物の浸潤（ｉｎｖａｓｉｏｎ）および移動（ｍｉｇｒａｔｉｏｎ）の抑制を検証した図である。
【図８】乳癌転移モデル（ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  ｍｏｄｅｌ）における、化学式２−１の化合物の転移抑制活性を示した図である。
【図９】化学式２−１の化合物の処理による、癌の体積およびマウスの体重変化を示した図である。
【図１０】乳癌転移モデルにおける、化学式２−１の化合物の転移抑制活性を示した図である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明者らは、Ｎｍ２３のＮＤＰＫ活性を高める化合物を明らかにすることで、本発明を完成した。
【００１２】
以下、本明細書についてより詳細に説明する。
【００１３】
本明細書において、ある部分がある構成要素を「含む」とするときに、これは、特に反対の記載がない限り、他の構成要素を除くのではなく、他の構成要素をさらに含み得ることを意味する。
本発明の一様態は、下記化学式１で表される化合物、その立体異性体、またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含む癌転移抑制用医薬組成物である。
【化１】
2020517710.tif 000003
化学式１中、
環Ａは、シクロヘキセン（ｃｙｃｌｏｈｅｘｅｎｅ）、シクロヘキサン（ｃｙｃｌｏｈｅｘａｎｅ）、またはベンゼン（ｂｅｎｚｅｎｅ）である。
【００１４】
本発明の一具現例において、前記化学式１で表される化合物は、下記化学式２〜４のうち何れか１つで表される化合物である。
【化２】
2020517710.tif 000004
【００１５】
本発明において、立体異性体（ｓｔｅｒｅｏｉｓｏｍｅｒ）は、光学異性体、ラセミ体、ラセミ混合物、単一のエナンチオマー、ジアステレオマー混合物、およびそれぞれのジアステレオマーとして存在し得る。このような異性体は、従来技術、例えば、カラムクロマトグラフィーまたはＨＰＬＣなどの分割により分離が可能である。または、化学式１で表される化合物のそれぞれの立体異性体は、公知の配列の光学的に純粋な出発物質および／または試薬を使用して立体特異的に合成することができる。
【００１６】
本発明のさらに一具現例において、前記化学式１で表される化合物の立体異性体は、Ｅ  ｆｏｒｍである。
【００１７】
本発明の一具現例において、前記化学式１で表される化合物は、下記化学式２−１〜４−１のうち何れか１つで表されてもよい。
【化３】
2020517710.tif 000005
【００１８】
前記化学式２−１〜４−１の化合物は、例えば、本発明の製造例１〜３で提示された工程を経て製造可能であり、これに制限されるものではない。
【００１９】
本発明において、薬学的に許容される塩は、医薬業界で通常用いられる塩を意味し、例えば、カルシウム、ポタシウム、ソディウム、およびマグネシウムなどで製造された無機イオン塩、塩酸、硝酸、リン酸、臭素酸、ヨウ素酸、過塩素酸、および硫酸などで製造された無機酸塩；酢酸、トリフルオロ酢酸、クエン酸、マレイン酸、コハク酸、シュウ酸、安息香酸、酒石酸、フマル酸、マンデル酸、プロピオン酸、乳酸、グリコール酸、グルコン酸、ガラクツロン酸、グルタミン酸、グルタール酸、グルクロン酸、アスパラギン酸、アスコルビン酸、カルボン酸、バニリン酸、ヨウ化水素酸などで製造された有機酸塩；メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸などで製造されたスルホン酸塩；グリシン、アルギニン、リシンなどで製造されたアミノ酸塩；およびトリメチルアミン、トリエチルアミン、アンモニア、ピリジン、ピコリンなどで製造されたアミン塩などが挙げられるが、挙げられたこれらの塩に、本発明で意味する塩の種類が限定されるものではない。
【００２０】
また、本発明の医薬組成物は、Ｎｍ２３−Ｈ１、Ｎｍ２３−Ｈ２、またはＮｍ２３−Ｈ１とＮｍ２３−Ｈ２の活性剤として作用することができる。具体的に、本発明の化学式１の化合物は、Ｎｍ２３−Ｈ１との相互作用により、疎水性ポケット（ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃ  ｐｏｃｋｅｔ）を形成することで、Ｎｍ２３−Ｈ１の活性部位とＮＤＰＫ活性調節において最も重要であると知られているｋｐｎ−ｌｏｏｐの露出を調節し、アロステリック（ａｌｌｏｓｔｅｒｉｃ）にＮＤＰＫ活性を増加させることができる。また、本発明の化学式１の化合物は、Ｎｍ２３の他のサブタイプであるＮｍ２３−Ｈ２に対しても同様の活性を示すことができる（図３および表２）。
【００２１】
本発明の前記化学式１で表される化合物、その立体異性体、またはその薬学的に許容される塩は、ＡＴＰの存在下でＮｍ２３の活性をさらに促進させることができる（図４）。
【００２２】
本発明の一具現例において、前記癌は、乳癌、肺癌、黒色腫、前立腺癌、大腸癌、膀胱癌、骨癌、血液癌、甲状腺癌、副甲状線癌、骨髄癌、直腸癌、咽喉癌、喉頭癌、食道癌、膵臓癌、胃癌、舌癌、皮膚癌、脳腫瘍、子宮癌、頭部または頸部癌、胆嚢癌、口腔癌、結腸癌、肛門付近癌、中枢神経系腫瘍、肝癌、および大腸癌からなる群から選択される何れか１つであってもよい。
【００２３】
本発明の一具現例において、本発明の医薬組成物は、薬効を増加させるのではないが、医薬組成物に通常使用されて、匂い、味、視覚などを向上させることができる成分をさらに含んでもよい。また、本発明の医薬組成物は、薬学的に許容される添加剤をさらに含んでもよい。薬学的に許容される添加剤としては、例えば、澱粉、ゼラチン化澱粉、微結晶セルロース、乳糖、ポビドン、コロイダルシリコンジオキシド、リン酸水素カルシウム、ラクトース、マンニトール、飴、アラビアガム、アルファ化澱粉、とうもろこし澱粉、粉末セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、オパドライ、澱粉グリコール酸ナトリウム、カルナウバロウ、合成ケイ酸アルミニウム、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸アルミニウム、ステアリン酸カルシウム、白糖、デキストロース、ソルビトール、およびタルクなどが挙げられるが、これに限定されない。
【００２４】
追加に、前記医薬組成物は、前記化学式１で表される化合物、その立体異性体、またはその薬学的に許容される塩の他に、同一または類似の薬効を示す有効成分を１種以上さらに含んでもよい。
【００２５】
本発明の前記医薬組成物は、薬学的に許容される担体を含み、経口または非経口用の人体または獣医用に剤型化されてもよい。本発明の医薬組成物を製剤化する場合、充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、および界面活性剤などの希釈剤または賦形剤を使用してもよい。経口投与のための固形製剤としては、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、およびカプセル剤などが挙げられ、このような固形製剤は、本発明の化合物を含む医薬組成物に、少なくとも１つ以上の賦形剤、例えば、澱粉、炭酸カルシウム、スクロース、ラクトース、またはゼラチンなどを混合して調製してもよい。また、単なる賦形剤の他に、マグネシウム、ステアレート、タルクなどのような潤滑剤を使用してもよい。経口のための液状製剤としては、懸濁剤、内溶液剤、乳剤、およびシロップ剤などが相当するが、通常用いられる単純希釈剤である水および流動パラフィンの他に、種々の賦形剤、例えば、湿潤剤、甘味剤、芳香剤、および保存剤などが含まれてもよい。非経口投与のための製剤としては、滅菌された水溶液、非水性溶剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥製剤、および坐剤が挙げられる。非水性溶剤および懸濁溶剤としては、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブオイルなどのような植物性油、およびエチルオレエートなどのような注射可能なエステルなどが使用可能である。坐剤の基剤としては、ウィテップゾール（ｗｉｔｅｐｓｏｌ）、マクロゴ−ル、ツイーン６１、カカオ脂、ラウリン脂、グリセロゼラチンなどが使用可能である。
【００２６】
本発明の医薬組成物は、目的する方法によって、経口投与または非経口投与することができ、非経口投与の時には、皮膚外用または腹腔内注射、直腸内注射、皮下注射、静脈注射、筋肉内注射、または胸部内注射の注入方式を選択することができるが、これに制限されるものではない。
【００２７】
また、本発明の医薬組成物は、単独で用いてもよいが、治療効率を増加させるために、追加的に放射線療法、化学療法などの様々な癌治療方法と併用して用いてもよい。
【００２８】
本発明の他の一様態は、前記化学式１で表される化合物、その立体異性体、またはその薬学的に許容される塩を含む組成物の、治療学的に有効な量の投与を含む癌転移抑制方法である。
【００２９】
本発明のさらに他の一様態は、前記化学式１で表される化合物、その立体異性体、またはその薬学的に許容される塩の癌転移抑制用薬物の製造のための用途である。
【００３０】
本発明の前記医薬組成物は、個体に投与されて癌転移を抑制することができる。本発明で用いられた用語「個体」は、癌またはその直・間接的な原因により誘発された疾患を有しており、本発明の前記医薬組成物を投与して症状が好転され得る疾患を有しているヒトを含んだ馬、羊、豚、ヤギ、犬などの哺乳動物を意味するが、これに制限されるものではない。
【００３１】
本発明で用いられた用語「投与」は、ある適切な方法により、個体に本発明の医薬組成物を導入することを意味する。投与経路は、目的組織に達することができる限り、任意の経路を介して経口または非経口投与されてもよい。また、本発明の医薬組成物が標的細胞に移動できるようにする任意の装置によって投与されてもよい。
【００３２】
本発明の医薬組成物は、薬学的に有効な量で投与されることができる。本発明で用いられた用語「薬学的に有効な量」は、医学的治療に適用可能な合理的な受恵／危険の割合で疾患を治療するに十分な量を意味し、有効用量のレベルは、患者の体重、性別、年齢、健康状態、重症度、薬物の活性、薬物に対する敏感度、投与時間、投与経路、および排出の割合、治療期間、同時使用される薬物を含んだ要素およびその他に医学分野で公知の要素によって決定されればよい。本発明の医薬組成物は、個別治療剤として投与してもよく、他の治療剤と併用して投与してもよいが、併用投与する時には、従来の治療剤と順にまたは同時に投与することができる。単一または多重投与してもよい。上記の要素を全て考慮して、副作用がないように最小限の量で最大効果が得られる量を投与することが重要であり、これは、当業者によって容易に決定され得る。１日１回投与してもよく、数回に分けて投与してもよい。但し、上記の投与量、投与用法が本発明の範囲を限定するものではない。
【実施例】
【００３３】
以下、下記実施例および実験例によって本発明をさらに詳細に説明する。しかし、下記実施例は、本発明の範囲を制限するものではなく、本発明の理解のためのものと解釈されるべきである。
【００３４】
製造例１．化学式２−１の化合物
（１）工程Ａ
【化４】
2020517710.tif 000006
（Ｅ）−４−（ブタ−１，３−ジエニル）−１，２−ジメトキシベンゼン（１．０当量）とメチルアクリレート（１．５当量）をジクロロメタンに溶かした後、Ｍｅ２ＡｌＣｌ（１．０Ｍ  ｉｎ  Ｈｘ）（１．１当量）を−７８℃でゆっくりと入れた。混合物を室温に上げた後、一晩交ぜた。さらに０℃に温度を低め、混合物に塩化アンモニウムと蒸留水を入れて反応を終了させた後、ジクロロメタンで抽出した。抽出した有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させた後、ろ過して濃縮させた。この混合物をカラムクロマトグラフィーを用いてシリカゲルから分離した。
【００３５】
（２）工程Ｂ
【化５】
2020517710.tif 000007
−７８℃で（１Ｒ，２Ｓ）メチル２−（３，４−ジメトキシフェニル）シクロヘキス−３−エンカルボキシレート（１．０当量）を溶かしたジクロロメタンに、ＤＩＢＡＬ−Ｈ（１．０Ｍ  ｉｎ  ＤＣＭ  １．０５当量）をゆっくりと添加した。−７８℃で２時間交ぜた後、蒸留水（１０当量）とＮａＦ（５．０当量）を添加し、３０分間室温で交ぜた。混合物をシリカとセライトでろ過した後、濃縮させてカラムクロマトグラフィーを用いてシリカゲルから分離した。
【００３６】
（３）工程Ｃ
【化６】
2020517710.tif 000008
メタノールに溶解されている（１Ｒ，２Ｓ）−２−（３，４−ジメトキシフェニル）シクロヘキス−３−エンカルバルデヒド（１．０当量）に、Ｋ２ＣＯ３を室温で添加した。３６時間〜７２時間程度エピマー化（ｅｐｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ）反応を進行した後、酢酸エチルで希釈させ、塩化アンモニウムと水で反応を終了させた。酢酸エチルで抽出した後、濃縮させてカラムクロマトグラフィーを用いてシリカゲルから分離した。
【００３７】
（４）工程Ｄ
【化７】
2020517710.tif 000009
ジエチル３，４−ジメトキシベンジルホスホネート（２．０当量）が溶解されているテトラヒドロフランに、ｎＢｕＬｉ（２．４８Ｍ  ｉｎ  Ｈｘ）（１．９５当量）を０℃で添加した。この混合物を室温で３０分間交ぜた後、さらに０℃に温度を低め、（１Ｓ，２Ｓ）−２−（３，４−ジメトキシフェニル）シクロヘキス−３−エンカルバルデヒド（１．０当量）とＤＭＰＵ（５．０当量）をＴＨＦに溶かし、カニューレを用いて添加した。この混合物を一晩室温で交ぜた後、塩化アンモニウムと水を用いて反応を終了させた。酢酸エチルで抽出した後、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮させてカラムクロマトグラフィーを用いてシリカゲルから分離した。
【００３８】
製造された化学式２−１の化合物の１Ｈ  ＮＭＲ結果は次のとおりである。
【化８】
2020517710.tif 000010
1H NMR (599 MHz, CDCl3) δ 6.81 - 6.75 (m, 2H), 6.78 - 6.72 (m, 2H), 6.71 (dd,J= 8.2, 1.8 Hz, 1H), 6.68 (d,J= 1.8 Hz, 1H), 6.07 (d,J= 15.9 Hz, 1H), 6.00 (dd,J= 15.9, 7.4 Hz, 1H), 5.88 (ddt,J= 9.6, 4.9, 2.8 Hz, 1H),5.66 (dd,J= 10.0, 2.1 Hz, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.84 (s, 3H), 3.83 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 3.16 (dt,J= 8.2, 2.6 Hz,1H), 2.33 (dtd,J= 10.7, 7.7, 2.8 Hz, 1H), 2.20 (ddp,J= 6.5, 4.5, 2.4 Hz, 2H), 1.90 (dq,J= 12.3, 4.5 Hz, 1H), 1.65 (dtd,J= 12.9, 10.1, 6.2 Hz, 1H).
【００３９】
（５）大量合成工程
化学式２−１の化合物は、下記反応式５によっても製造されることができる。
【００４０】
【化９】
2020517710.tif 000011
４−（（１Ｓ，６Ｓ）−６−エチニルシクロヘキス−２−エニル）−１，２−ジメトキシベンゼン（１．０当量）（次の論文の方法により合成できる；Ｊ．Ｃｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．２０１１，７４，１８１７）を溶かした後、ルテニウム触媒（０．１当量）を室温で添加した。１５分間混合物を脱気（ｄｅｇａｓｓｉｎｇ）した後、トリブチルスズヒドリド（２．０当量）を添加した。混合物をＬＥＤ光の下で２時間交ぜた後、溶媒を真空状態で蒸発させた。薄いシリカパッドでろ過した後、真空で濃縮させてから、直ちに次の反応で使用した。
【００４１】
ビニルスタンナン（１．０当量）をＮＭＰに溶かした後、４−ブロモ−１，２−ジメトキシベンゼン（１．２当量）、ＬｉＣｌ（１．２当量）とＰｄ（ＰＰｈ３）４を添加し、室温で交ぜた。５時間後、酢酸エチルで希釈させた後、ブライン（ｂｒｉｎｅ）で洗浄した。抽出された有機層はＭｇＳＯ４で乾燥させた後、ろ過して濃縮させてからカラムクロマトグラフィーを用いてシリカゲルから分離した。
【００４２】
製造例２．化学式３−１の化合物
【化１０】
2020517710.tif 000012
ｏ−ブロモベンズアルデヒド（１．０当量）をＤＭＦに溶かした後、３，４−ジメトキシフェニルボロン酸（１．０当量）と２Ｍ  Ｎａ２ＣＯ３（３．０当量）とＰｄ（ＰＰｈ３）４（０．０１当量）を室温で添加した。混合物を８０℃で一晩交ぜた後、酢酸エチルで希釈させ、塩化アンモニウムと水を入れて反応を終了させた。次に、酢酸エチルで抽出し、有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させた。この混合物をろ過して集められた有機層を濃縮させた後、カラムクロマトグラフィーを用いてシリカゲルから分離した。
【００４３】
【化１１】
2020517710.tif 000013
前記製造例１の工程Ｄと同様の方法により化学式３−１の化合物を合成した。製造された化学式３−１の化合物の１Ｈ  ＮＭＲ結果は次のとおりである。
【化１２】
2020517710.tif 000014
1H NMR (599 MHz, CDCl3) δ 7.70 (d,J= 7.6 Hz, 1H), 7.33 (d,J= 7.1 Hz, 2H), 7.30 (d,J= 6.2 Hz, 1H), 7.03- 6.91 (m, 6H), 6.89 (d,J= 1.6 Hz, 1H), 6.80 (d,J= 8.3 Hz, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.86 (s, 3H), 3.84 (s, 3H), 3.83 (s,3H).
【００４４】
製造例３．化学式４−１の化合物
【化１３】
2020517710.tif 000015
前記製造例１の工程Ａ−Ｃに従って製造した（１Ｓ，２Ｓ）−２−（３，４−ジメトキシフェニル）シクロヘキス−３−エンカルバルデヒド（１．０当量）を酢酸エチルに溶かした後、Ｐｄ／Ｃ１０重量％（０．１当量）を室温で添加した。６時間後、シリカとセライトでろ過した後、酢酸エチルで洗浄した。次に、集められた有機混合物を濃縮させた後、カラムクロマトグラフィーを用いてシリカゲルから分離した。
【００４５】
【化１４】
2020517710.tif 000016
ジメチル（３，４−ジメトキシベンジル）ホスホネート（２．０当量）をＤＭＦに溶かした後、ＮａＨ（６０％  ｉｎ  ｍｉｎｅｒａｌ  ｏｉｌ）（１．９５当量）を０℃で添加した。一晩その後、混合物を３０分間室温で交ぜた後、（１Ｓ，２Ｓ）−２−（３，４−ジメトキシフェニル）シクロヘキサンカルバルデヒド（１．０当量）をＤＭＦに溶かし、カニューレを用いて添加した。混合物を一晩室温で交ぜた後、塩化アンモニウムと水を入れて反応を終了させた。次に、酢酸エチルで抽出した後、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。フィルタでろ過した後、有機層を濃縮させ、カラムクロマトグラフィーを用いてシリカゲルから分離した。製造された化学式４−１の化合物の１Ｈ  ＮＭＲ結果は次のとおりである。
【化１５】
2020517710.tif 000017
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.07 - 6.98 (m, 4H), 6.91 (s, 2H), 6.84 (d,J= 8.2 Hz, 2H), 6.74 (d,J=8.0 Hz, 1H), 6.72 - 6.65 (m, 5H), 6.04 (d,J= 15.9 Hz, 1H), 5.77 (dd,J= 15.9, 6.9 Hz, 1H), 3.93 (s, 6H), 3.88 (s,6H), 3.82 (s, 3H), 3.81 (s, 9H), 2.35 - 2.21 (m, 2H), 1.87 (td,J= 19.9, 16.5, 9.8 Hz, 5H), 1.38 (t,J= 10.8 Hz,9H).
【００４６】
実施例１．ＮＤＰＫの活性の確認
（１）ＮＤＰＫ分析
５ｎｇの組換えＮｍ２３−Ｈ１を、常温で１分間、５μＭのＡＤＰおよび試験物質（化学式２−１、３−１、または４−１の化合物）とともにＮＤＰＫ分析緩衝液（２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、３ｍＭのＭｇＣｌ２）で培養し、細胞ベースＮＤＰＫ分析を行った。プロテアーゼ阻害剤カクテル（ｐｒｏｔｅａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｃｏｃｋｔａｉｌ）とＮＤＰＫ分析緩衝液（ＮＤＰＫ  ａｓｓａｙ  ｂｕｆｆｅｒ）で溶解させた５，０００Ｋ  ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞から得た細胞溶解物を、４℃で１０分間、８，０００ｒｐｍで遠心分離した。４０μＬの溶解物を試験物質とともに５分間培養した後、５０μＭ  ＵＤＰを添加してＮＤＰＫと反応させた。ＡＴＰの消費は、ＡＴＰ決定キット（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｐｒｏｂｅ、ＵＳＡ）により評価した。
【００４７】
（２）等温滴定熱量分析（Ｉｓｏｔｈｅｒｍａｌ  Ｔｉｔｒａｔｉｏｎ  Ｃａｌｏｒｉｍｅｔｒｙ）
ＩＴＣ実験は、ＩＴＣ２００装備（Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｃ．）を用いて行い、データはＯＲＩＧＩＮ  ７．０プログラムを用いて分析した。細胞において、Ｎｍ２３−Ｈ１タンパク質の濃度は３０μＭであり、注射器には、３００μＭの活性剤または１ｍＭのＡＴＰが含まれた。活性剤は、ＤＭＳＯ（Ｄｉｍｅｔｈｙｌ  ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ）に５０ｍＭの濃度で準備し、−２０℃で保管した。ＩＴＣ緩衝液は、ｐＨ７．５、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＭｇＣｌ２、および最大２％のＤＭＳＯで２０ｍＭのＨＥＰＥＳを含ませた。滴定は、２５℃でそれぞれ２μＬを２０回注入し、１５０秒間隔で注入した。ヌクレオチド結合部位で、ＤＭＳＯの結合に対する如何なる証拠も観察されなかった。実験ローデータは、緩衝液に対する値を引いて希釈して補正した後、単一部位結合モデルで適合させた。滴定データは、化学量論（ｓｔｏｉｃｈｉｏｍｅｔｒｙ；Ｎ）、解離定数（ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｃｏｎｓｔａｎｔ；ＫＤ）、および相互作用エンタルピの変化（ｃｈａｎｇｅ  ｏｆ  ｅｎｔｈａｌｐｙ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ）の３種の浮動変数を有する非線形最小自乗曲線−適合アルゴリズム（ｎｏｎｌｉｎｅａｒ  ｌｅａｓｔ−ｓｑｕａｒｅｓ  ｃｕｒｖｅ−ｆｉｔｔｉｎｇ  ａｌｇｏｒｉｔｈｍ）を用いて適合化した。
【００４８】
（３）表面プラズモン共鳴分析（Ｓｕｒｆａｃｅ  Ｐｌａｓｍｏｎ  Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  ａｎａｌｙｓｉｓ）
化学式２−１の化合物とＮｍ２３−Ｈ１の相互作用を、２５℃で表面プラズモン共鳴装置（ＳＲ７５００  ＤＣ、Ｒｅｉｃｈｅｒｔ  Ｉｎｃ．、ＮＹ）を用いて分析した。
【００４９】
１０ｍＭのＳ．Ａ緩衝液（ｐＨ４．５）中のＮｍ２３−Ｈ１（１ｍｇ／ｍＬ）を、カルボキシメチルデキストランヒドロゲル（ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ  ｄｅｘｔｒａｎ  ｈｙｄｒｏｇｅｌ；ＣＭＤＨ）表面センサチップ（Ｒｅｉｃｈｅｒｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｄｅｐｅｗ、ＮＹ）にて、２０μＬ／分で１０分間、標準アミノカップリング（ｓｔａｎｄａｒｄ  ａｍｉｎｏ  ｃｏｕｐｌｉｎｇ）を用いて飽和度が達成されるまで固定させた。
【００５０】
固定バッファ（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、１００ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＭｇＣｌ２、２ｍＭのＡＴＰを含むかまたは含まない）で、化学式２−１の化合物の濃度を異ならせて（１０〜１６０μＭ）固定化されたＮｍ２３−Ｈ１（約８２００ＲＵ）を３０μＬ／分の速度で供給した。
【００５１】
２ＭのＮａＣｌを１分間注入し、それぞれの結合（ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）および解離（ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）サイクルの後に、センサ表面を再生させた。センサグラムは、データ分析プログラムＳｃｒｕｂｂｅｒ  ２．０（ＢｉｏＬｏｇｉｃ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ａｕｓｔｒａｌｉａ、ａｎｄ  ＫａｌｅｉｄａＧｒａｐｈ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ａｕｓｔｒａｌｉａ）を使用し、簡単な１：１  Ｌａｎｇｍｕｉｒ相互作用モデル（Ｌａｎｇｍｕｉｒ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｍｏｄｅｌ）（Ａ＋Ｂ⇔ＡＢ）に適合させた。
【００５２】
ＳＰＲ分析を独立に少なくとも３回行い、平均化した値を下記表１に示した。ＫＤはＫｄ／Ｋａを計算した値である。
【００５３】
【表１】
2020517710.tif 000018
【００５４】
前記表１の結果を参照すると、ＡＴＰが存在する際に、解離が遅くなってＫＤ値が減少することを確認することができる。このような結果から、ＡＴＰの存在下で、Ｎｍ２３−Ｈ１と本願発明の化合物の相互作用がさらに強化されることを確認することができる。
【００５５】
図３は、化学式２−１の化合物に対するＮＤＰＫの活性を確認した図である。以下、各図での化学式２−１の化合物はＮＭａｃ１で示した。
【００５６】
具体的に、図３Ａの結果から、化学式２−１の化合物の濃度によって、Ｎｍ２３−Ｈ１のＮＤＰＫ活性が増加されることを確認することができる。また、図３Ｂで、ＵＤＰ濃度によるＮＤＰＫ活性を測定してｅｎｚｙｍｅのＶ０、Ｋｍ  ｖａｌｕｅを測定した結果、既存のエンザイム活性剤（ｅｎｚｙｍｅ  ａｃｔｉｖａｔｏｒ）と同様の傾向であるＫｍ−ｔｙｐｅ活性を示すことを確認することができた。このような結果から、ＮＤＰＫ活性剤は、基質であるＮＴＰに対する親和度を高める方法によりＮＤＰＫの活性を高めることが分かる。また、図３Ｃの結果から、細胞ベースのＮＤＰＫ活性が、化学式２−１の化合物の濃度によって増加されることを確認した。また、図３Ｄで、本発明の化学式２−１の化合物は、Ｎｍ２３−Ｈ１だけでなく、Ｎｍ２３の他のサブタイプであるＮｍ２３−Ｈ２に対しても同様の活性を示すことを確認することができた。より具体的に、本発明の化学式２−１の化合物は、Ｎｍ２３−Ｈ１の活性型であるヘキサマリックＮｍ２３−Ｈ１のみを特異的に活性化することを、図３Ｅから確認することができる。
【００５７】
また、前記化学式２−１の化合物の誘導体として、化学式３−１および４−１の化合物を製造し、前記誘導体のＮＤＰＫ活性を確認した。各試験物質のＤＭＳＯ処理群に対する相対的なＮＤＰＫ活性を下記表２に示した。
【００５８】
【表２】
2020517710.tif 000019
【００５９】
上記の結果から、化学式１に該当する化合物（すなわち、化学式２−１の化合物、およびその変異体化学式３−１および４−１の化合物）は、何れも優れたＮＤＰＫ活性（Ｎｍ２３に対する活性増加）を有することを確認した。したがって、以下では、代表的に化学式２−１の化合物のＮｍ２３活性に関連する追加実験を行った。
【００６０】
図４は、化学式２−１の化合物に対する等温滴定熱量分析（ｉｓｏｔｈｅｒｍａｌ  ｃａｌｏｒｉｍｅｔｒｙ）を行った結果を示した図である。図４の結果を参照すると、Ｎｍ２３−Ｈ１と本願発明の化学式２−１の化合物の直接的な相互作用（ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ）を確認することができ、ＡＴＰの存在下でさらに行われることを確認することができた。
【００６１】
図５は、プラズモン共鳴分析の結果を示した図である。図５の結果から、Ｎｍ２３−Ｈ１と本発明の化合物が直接的に結合することを確認することができた。
【００６２】
実施例２．化学式２−１の化合物の転移抑制活性の検証
（１）Ｒａｃ１活性分析
ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を１００ｍｍのディッシュで培養し、表示された濃度の化学式２−１の化合物または０．０５％のＤＭＳＯで１６時間処理した。活性Ｒａｃ１プルダウン検定は、製造者の指示（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に従って行った。
【００６３】
（２）免疫蛍光分析
ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞をＳｅｃｕｒｅｓｌｉｐＴＭ（Ｓｉｇｍａ）細胞培養ガラスカバースリップ上で５０〜７０％のレベルまで培養した後、化学式２−１の化合物の存在または不在下で、様々な時間処理した。細胞が冷たいＨＢＳＳで穏かに洗浄した後、ＲＢＳで１０分間、常温で４％のパラホルムアルデヒド含有ＨＢＳＳで固定させた。ＨＢＳＳで洗浄した後、１０分間常温で０．１％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００による浸透を行い、ＨＢＳＳで２回洗浄した後、常温で１時間、３％のＢＳＡ、０．２％のツイーン２０、および０．２％のゼラチン含有ＨＢＳＳでブロッキングし、３７℃で２時間１次抗体培養した後、蛍光色素結合種特異的な２次抗体（ｆｌｕｏｒｏｃｈｒｏｍｅ−ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ  ｓｐｅｃｉｅｓ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｓｅｃｏｎｄａｒｙ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）と１時間培養した。
【００６４】
全ての抗体を１％のＢＳＡ含有ＨＢＳＳで希釈した。カバースリップ（Ｃｏｖｅｒ  ｓｌｉｐｓ）は、アンチフェージング溶液（ａｎｔｉ−ｆａｄｉｎｇ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）で固定させ、ＬＳＭ５１０  ＭＥＴＡ（Ｚｅｉｓｓ）レーザースキャニング共焦点顕微鏡（ｃｏｎｆｏｃａｌ  ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ）のｘ６３対物レンズを用いて観察した。
【００６５】
（３）浸潤分析
細胞が７０％満たされた時に、化学式２−１の化合物で１６時間処理した。１ｘ１０５個の細胞を、ＦＢＳなしに培地に浮遊させ、ボイデンチャンバーメンブレン（Ｂｏｙｄｅｎ  ｃｈａｍｂｅｒ  ｍｅｍｂｒａｎｅ）上に添加した。１０％のＦＢＳを含有した培養培地をメンブレンの底に添加した。チャンバーを３７℃、５％ＣＯ２で４時間培養した。移動した細胞を固定し、クリスタルバイオレット／メタノールで染色した。写真を撮り、移動した細胞を数え、対照群細胞と標準化した。
【００６６】
図６は、化学式２−１の化合物を２種の乳癌細胞株（ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ）に処理し、細胞の形状変化を観察し、それぞれの細胞株でＲａｃ１活性を観察した図である。
【００６７】
図６Ａは、共焦点レーザー顕微鏡（ｃｏｎｆｏｃａｌ  ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ）を用いて化学式２−１の化合物を処理した場合を観察した図であって、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞のＦ−ａｃｔｉｎの変化をみると、ラッフル（Ｒｕｆｆｌｅ）が減少し、細胞間接触が増加することを確認することができる。これは、Ｎｍ２３−Ｈ１の細胞移動に関与するＲａｃ１の活性を抑制し、細胞の移動性を減少させたことを意味する。
【００６８】
また、図６Ｂは、三種陰性乳癌細胞株（Ｔｒｉｐｌｅ  ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ）であるＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞における、化学式２−１の化合物による形状変化とＲａｃ１の活性変化を測定した図である。図６Ｂを参照すると、活性化されたＲａｃ１のプル−ダウンアッセイをした時に、本願発明の化学式２−１の化合物は、濃度依存的にＲａｃ１の活性を低めることを確認することができる。図６Ｃおよび図６Ｄで、Ｎｍ２３−Ｈ１のノックダウンによって消えることから、Ｒａｃ１の活性を阻害することは、Ｎｍ２３−Ｈ１を経由して起こることであることを確認することができる。
【００６９】
図７は、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞に対する化学式２−１の化合物の浸潤および移動抑制を検証した図である。
【００７０】
図７Ａは、三種陰性乳癌細胞株（Ｔｒｉｐｌｅ  ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ）であるＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞での浸潤分析、トランスウェル移動分析（ｔｒａｎｓｗｅｌｌ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ａｓｓａｙ）を行った結果を示した図である。
【００７１】
図７Ａを参照すると、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞で、化学式２−１の化合物の濃度を異ならせて処理した結果、濃度によってトランスウェル移動とマトリゲル浸潤が減少することを確認することができる。
【００７２】
図７Ｂは、肺癌細胞株（ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ）であるＡ５４９細胞における、化学式２−１の化合物のＮｍ２３−Ｈ１活性を示した図である。図７Ｂの結果から、Ａ５４９細胞で、本発明の化学式２−１の化合物は傷治癒とマトリゲル浸潤の両方を濃度毎に減少させることを確認することができる。
【００７３】
図７Ｃは、化学式２−１の化合物のＮｍ２３−Ｈ１およびＮｍ２３−Ｈ２活性を示した図である。図７Ｃで、化学式２−１の化合物の効果はＮｍ２３−Ｈ１およびＮｍ２３−Ｈ２のノックダウンによって何れも減少していることから、化学式２−１のｉｎ  ｖｉｔｒｏ転移抑制活性は、Ｎｍ２３−Ｈ１およびＮｍ２３−Ｈ２を経由して起こることを確認することができる。
【００７４】
実施例３．乳癌転移モデルを用いた化学式２−１の化合物の転移抑制活性の検証
本発明の化学式２−１の化合物の転移抑制活性を実際の動物モデルで確認するために、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１  ｌｕｃ細胞を用いた乳癌転移モデルに適用した。ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞をヌードマウスの乳房脂肪パッド（ｍａｍｍａｒｙ  ｆａｔ  ｐａｄ）に注射した後、腫瘍サイズ（ｔｕｍｏｒ  ｓｉｚｅ）が１００ｍｍに達した時に、化学式２−１の化合物を１０ｍｇ／ｋｇで毎日注射し、４週間肺へ転移される様相を観察した。
【００７５】
図８は、乳癌転移モデルにおける化学式２−１の化合物の転移抑制活性を示した図である。図８の結果から、本発明の化学式２−１の化合物を処理した群で、肺への転移が減少することを確認することができる。
【００７６】
図９は、化学式２−１の化合物の処理による癌の体積、体重変化を示した図である。上記の図９の結果から、本発明の化学式２−１の化合物を処理した群で、癌の体積が減少することを確認することができた。
【００７７】
図１０は、乳癌転移モデルにおける化学式２−１の化合物の転移抑制活性を示した図である。図１０の結果から、肺へ転移された細胞が、統計的に有意に減少していることを確認することができた。
【００７８】
上記の実施例の結果から、本発明に係る化学式１で表される化合物は、Ｎｍ２３のＮＤＰＫ活性を高め、癌の転移抑制において効果的な医薬組成物として使用可能であることを確認することができる。
【００７９】
本明細書において、本発明の技術分野において通常の知識を有する者であれば十分に認識して類推できる内容は、その詳細な記載を省略し、本明細書に記載の具体的な例示の他に、本発明の技術的思想や必須構成を変更しない範囲内で、より多様な変形が可能である。したがって、本発明は、本明細書で具体的に説明して例示したものと異なる方式で実施されてもよく、これは、本発明の技術分野で通常の知識を有する者であれば理解できる事項である。
【図１】
2020517710.tif 000023
【図２】
2020517710.tif 000024
【図３】
2020517710.tif 000025
【図４】
2020517710.tif 000026
【図５】
2020517710.tif 000027
【図６】
2020517710.tif 000028
【図７】
2020517710.tif 000029
【図８】
2020517710.tif 000030
【図９】
2020517710.tif 000031
【図１０】
2020517710.tif 000032
【国際調査報告】
2020517710.tif 000033
2020517710.tif 000034
2020517710.tif 000035
2020517710.tif 000036
2020517710.tif 000037
2020517710.tif 000038