(57)【要約】  抗ＣＤ５９及び抗糖化ＣＤ５９抗体が開示される。このような抗体を含む、アッセイ、診断、キット、及びアッセイが提供される。糖尿病関連徴候を評価する方法、並びにＣＤ５９糖化の阻害剤、及びこのような阻害剤を評価する方法が含まれる。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号３８〜４３からなる群から選択されるアミノ配列と少なくとも７０％のアミノ酸配列同一性を有する相補性決定領域（ＣＤＲ）を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む抗体。
【請求項２】
前記ＣＤＲが、配列番号４２及び４３からなる群から選択されるＣＤＲ−Ｈ３である、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
前記ＶＨが、
ｉ．配列番号３８及び３９からなる群から選択される配列と少なくとも７０％の配列同一性があるアミノ酸配列を有する、ＣＤＲ−Ｈ１；
ｉｉ．配列番号４０及び４１からなる群から選択される配列と少なくとも７０％の配列同一性があるアミノ酸配列を有する、ＣＤＲ−Ｈ２；及び
ｉｉｉ．配列番号４２及び４３からなる群から選択される配列と少なくとも７０％の配列同一性があるアミノ酸配列を有する、ＣＤＲ−Ｈ３
を含む、請求項２に記載の抗体。
【請求項４】
配列番号３３〜３７からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも７０％のアミノ酸配列同一性を有するＣＤＲを有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項５】
前記ＶＬが、配列番号３６及び３７からなる群から選択されるＣＤＲ−Ｌ３を含む、請求項４に記載の抗体。
【請求項６】
前記ＶＬが、
ｉ．配列番号３３及び３４からなる群から選択される配列と少なくとも７０％の配列同一性があるアミノ酸配列を有する、ＣＤＲ−Ｌ１；
ｉｉ．配列番号３５の配列と少なくとも３０％の配列同一性があるアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｌ２；及び
ｉｉｉ．配列番号３６及び３７からなる群から選択される配列と少なくとも７０％の配列同一性があるアミノ酸配列を有する、ＣＤＲ−Ｌ３
を含む、請求項５に記載の抗体。
【請求項７】
前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項８】
前記抗体がヒト化抗体である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項９】
前記抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４抗体である、請求項７又は８に記載の抗体。
【請求項１０】
配列番号２９〜３２からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する少なくとも１つの可変ドメインを有する、抗体。
【請求項１１】
前記少なくとも１つの可変ドメインが、配列番号３０及び３２からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列があるＶＨを含む、請求項１０に記載の抗体。
【請求項１２】
前記少なくとも１つの可変ドメインが、配列番号２９及び３１からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列があるＶＬを含む、請求項１１に記載の抗体。
【請求項１３】
配列番号３及び５からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有する翻訳されたアミノ酸配列がある、重鎖を有する、抗体。
【請求項１４】
前記重鎖が、配列番号７、８、及び１０からなる群から選択される核酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる、請求項１３に記載の抗体。
【請求項１５】
配列番号２及び４からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有する翻訳されたアミノ酸配列を有する軽鎖を有する、抗体。
【請求項１６】
前記軽鎖が、配列番号６及び９からなる群から選択されるヌクレオチド配列によってコードされる、請求項１５に記載の抗体。
【請求項１７】
ｉ．配列番号３及び５からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性がある翻訳されたアミノ酸配列を有する重鎖；及び
ｉｉ．配列番号２及び４からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性がある翻訳されたアミノ酸配列を有する軽鎖
を含む、抗体。
【請求項１８】
前記抗体がＣＤ５９に結合する、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１９】
前記抗体がＣＤ５９の非糖化エピトープに結合する、請求項１８に記載の抗体。
【請求項２０】
前記抗体が、リジン４１（Ｋ４１）を含まないＣＤ５９のエピトープに結合する、請求項１８に記載の抗体。
【請求項２１】
前記抗体が、糖化ＣＤ５９（ＧＣＤ５９）の糖化エピトープに結合する、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２２】
前記ＧＣＤ５９の糖化エピトープが、アマドリ修飾Ｋ４１を含む、請求項２１に記載の抗体。
【請求項２３】
前記抗体が、前記ＧＣＤ５９の糖化エピトープに、約１．０ｐＭ〜約５．０×１０８ｐＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合する、請求項２１又は２２に記載の抗体。
【請求項２４】
前記抗体が、前記ＧＣＤ５９の糖化エピトープに、約１．５ｐＭ〜約１５０ｐＭの平衡解離定数で結合する、請求項２３に記載の抗体。
【請求項２５】
前記ＧＣＤ５９の糖化エピトープが、表面付着形式及び溶液ベース形式の少なくとも１つから選択される形式で提示される、請求項２１〜２４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２６】
前記溶液ベース形式が、尿、血漿、血清、血液、汗、及び唾液の少なくとも１つを含む溶液を含む、請求項２５に記載の抗体。
【請求項２７】
前記溶液が血清を含み、前記血清が約１：１〜約１：１００，０００に希釈される、請求項２６に記載の抗体。
【請求項２８】
捕捉剤；及び
キットの使用説明書
を含む、キット。
【請求項２９】
前記捕捉剤が捕捉抗体であり、前記捕捉抗体が請求項１〜２７のいずれか一項に記載の抗体を含む、請求項２８に記載のキット。
【請求項３０】
前記捕捉抗体がＣＤ５９に結合し、前記捕捉抗体が請求項１９又は２０に記載の抗体を含む、請求項２９に記載のキット。
【請求項３１】
検出剤を含み、前記検出剤がレクチン及び検出抗体から選択され、前記検出抗体が請求項１〜１７及び２１〜２７のいずれか一項に記載の抗体を含む、請求項３０に記載のキット。
【請求項３２】
前記捕捉剤が捕捉抗体であり、前記捕捉抗体が請求項１〜１７及び２１〜２７のいずれか一項に記載の抗体を含む、請求項２８に記載のキット。
【請求項３３】
検出剤を含み、前記検出剤がレクチン及び検出抗体から選択される、請求項３２に記載のキット。
【請求項３４】
検出抗体を含み、前記検出抗体がＣＤ５９に結合し、前記検出抗体が請求項１９又は２０に記載の抗体を含む、請求項３３に記載のキット。
【請求項３５】
前記検出剤が、ＧＣＤ５９のグリコシル化エピトープに結合する、請求項３３に記載のキット。
【請求項３６】
前記ＧＣＤ５９のグリコシル化エピトープが、ＧＣＤ５９のＮ−グリコシル化エピトープを含む、請求項３５に記載のキット。
【請求項３７】
検量線を生成するための化合物を含む、請求項２８〜３６のいずれか一項に記載のキット。
【請求項３８】
少なくとも１つの緩衝液を含む、請求項２８〜３７のいずれか一項に記載のキット。
【請求項３９】
前記少なくとも１つの緩衝液が、対象サンプルに接触させるために使用される緩衝液を含む、請求項３８に記載のキット。
【請求項４０】
対象サンプルに接触させるために使用される前記緩衝液が、還元剤、酸化剤、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、及びβ−メルカプトエタノール（ＢＭＥ）の少なくとも１つを含む、請求項３９に記載のキット。
【請求項４１】
１つ又は複数の内部対照を含む、請求項２８〜４０のいずれか一項に記載のキット。
【請求項４２】
前記１つ又は複数の内部対照が、１つ又は複数の血漿アッセイ対照を含む、請求項４１に記載のキット。
【請求項４３】
アッセイ希釈剤、コンジュゲート希釈剤、及び洗浄緩衝液の１つ又は複数を含む、請求項２８〜４２のいずれか一項に記載のキット。
【請求項４４】
１つ又は複数の試薬が凍結乾燥されている、請求項２８〜４３のいずれか一項に記載のキット。
【請求項４５】
サンプル中の標的タンパク質を検出する方法であって、前記標的タンパク質がＧＣＤ５９を含み、該方法が、
ｉ．サンプルを入手するステップと；
ｉｉ．ＣＤ５９のＮ−グリコシル化エピトープに結合する抗体、請求項１９に記載の抗体、及び請求項２０に記載の抗体の少なくとも１つから選択される捕捉抗体を含む基材に、前記サンプルを適用するステップと；
ｉｉｉ．前記基材に、ＧＣＤ５９の糖化又は非糖化エピトープを含む標的エピトープに結合する検出抗体を適用するステップと；
ｉｖ．前記検出抗体の存在について前記基材を分析するステップと
を含む、方法。
【請求項４６】
前記検出抗体が、請求項１〜１７及び２１〜２７のいずれか一項に記載の抗体から選択される、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
サンプル中の標的タンパク質を検出する方法であって、前記標的タンパク質がＧＣＤ５９を含み、該方法が、
ｉ．サンプルを入手するステップと；
ｉｉ．請求項１〜１７及び２１〜２７のいずれか一項に記載の抗体から選択される捕捉抗体を含む基材に、前記サンプルを適用するステップと；
ｉｉｉ．ＧＣＤ５９の非糖化エピトープを含む標的エピトープに結合する検出抗体を適用するステップと；
ｉｖ．前記検出抗体の存在について前記基材を分析するステップと
を含む、方法。
【請求項４８】
前記検出抗体が、請求項１９又は２０に記載の抗体から選択される、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記標的エピトープが、ＧＣＤ５９のグリコシル化エピトープを含む、請求項４７に記載の方法。
【請求項５０】
前記標的エピトープが、ＧＣＤ５９のＮ−グリコシル化エピトープを含む、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記サンプルが対象サンプルである、請求項４５〜５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
前記対象サンプルが、尿、血液、血漿、血清、汗、及び唾液の少なくとも１つから選択される、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記サンプルが、還元剤、酸化剤、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、及びβ−メルカプトエタノール（ＢＭＥ）の少なくとも１つで処理される、請求項４５〜５２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
前記サンプルが希釈されている、請求項４５〜５３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５５】
前記サンプルが約１：１〜約１：１，０００に希釈される、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
サンプル中の標的タンパク質を検出する方法であって、前記標的タンパク質がＧＣＤ５９を含み、該方法が、
ｉ．細胞、組織、及び組織切片の少なくとも１つを含むサンプルを入手するステップと；
ｉｉ．ＧＣＤ５９の糖化エピトープを含む標的エピトープに結合する検出抗体を前記サンプルに適用するステップと；
ｉｉｉ．前記検出抗体の存在について前記サンプルを分析するステップと
を含む、方法。
【請求項５７】
前記検出抗体が検出可能な標識を含む、請求項４５〜５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５８】
前記検出可能な標識が、ビオチン、ストレプトアビジン、アビジン、蛍光標識、酵素的標識、ルミネセンス標識、及び放射性標識からなる群から選択される、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記検出抗体が二次検出剤を使用して検出され、前記二次検出剤が検出可能な標識を含む、請求項４５〜５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６０】
前記二次検出剤が抗体である、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記検出可能な標識が、ビオチン、ストレプトアビジン、アビジン、蛍光標識、酵素的標識、ルミネセンス標識、及び放射性標識からなる群から選択される、請求項５７〜６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６２】
前記基材が、アッセイプレート、ビーズ、膜、導電性表面、及び導電性ナノ粒子の少なくとも１つから選択される、請求項４５〜５５及び５７〜６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６３】
前記方法の全部又は一部がポイントオブケアで実行される、請求項４５〜６２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６４】
前記方法の少なくとも一部が患者モニタリング装置と連動して実行される、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
前記患者モニタリング装置が電子シグナルを受信及び／又は送信できる、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記患者モニタリング装置が、スマートフォン及びスマートウォッチの少なくとも１つから選択されるスマート装置である、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
前記標的タンパク質の濃度又は濃度等価物が、前記検出可能な標識に関連する少なくとも１つのシグナルを測定することによって判定される、請求項５７〜６６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６８】
対象を評価する方法であって、
ｉ．少なくとも１つの試験サンプルを対象から採取するステップと；
ｉｉ．請求項６７に記載の方法を実行するステップであって、前記サンプルが（ｉ）で採取された前記少なくとも１つの試験サンプルを含む、ステップと；
ｉｉｉ．請求項６７に記載の方法を実行するステップであって、前記サンプルが少なくとも１つの対照サンプルを含む、ステップと；
ｉｖ．前記少なくとも１つの試験サンプル中の前記標的タンパク質の濃度又は濃度等価物と、前記少なくとも１つの対照サンプル中で検出された前記標的タンパク質の濃度又は濃度等価物とを比較するステップと
を含む、方法。
【請求項６９】
対象における糖尿病関連徴候をスクリーニング、診断、及びモニタリングする方法であって、
請求項６８に記載の方法を実行するステップを含み、前記少なくとも１つの試験サンプル中の前記標的タンパク質の濃度又は濃度等価物が、前記少なくとも１つの対照サンプル中で検出された前記標的タンパク質の濃度又は濃度等価物と閾値分異なる場合、前記対象が前記糖尿病関連徴候があると診断される、方法。
【請求項７０】
対象における１つ又は複数の糖尿病関連徴候をモニタリングする方法であって、前記対象が１つ又は複数の糖尿病関連徴候を有し、該方法が、
ｉ．少なくとも２つの試験サンプルを前記対象から採取するステップであって、前記２つの試験サンプルが少なくとも２つの期間にわたって獲得される、ステップと；
ｉｉ．請求項６７に記載の方法を実行するステップであって、前記サンプルが（ｉ）で採取された前記少なくとも２つの試験サンプルを含む、ステップと；
ｉｉｉ．前記少なくとも２つの試験サンプル中の前記標的タンパク質の濃度又は濃度等価物間の変動をモニタリングするステップと
を含む、方法。
【請求項７１】
前記方法がコンパニオン診断法の一部として実行される、請求項６８又は６９に記載の方法。
【請求項７２】
請求項６８〜７０の１以上の請求項に記載の方法を含む、治療法の有効性を評価する方法。
【請求項７３】
前記治療法が、少なくとも１つの治療用化合物を少なくとも１つの対象に投与するステップを含む、請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
リスクレベルを対象に割り当てる方法であって、前記リスクレベルが１つ又は複数の糖尿病関連徴候の発症に関連するリスクレベルを含み、該方法が、
ｉ．請求項６８に記載の方法を実行するステップと；
ｉｉ．前記少なくとも１つの試験サンプル中の前記標的タンパク質の濃度又は濃度等価物と、前記少なくとも１つの対照サンプル中で検出された前記標的タンパク質の濃度又は濃度等価物とを比較するステップと
ｉｉｉ．（ｉｉ）で実施された比較に基づいて、前記リスクレベルを前記対象に割り当てるステップと
を含む、方法。
【請求項７５】
前記対象が、妊娠した対象、妊娠が疑われる対象、及び妊娠可能な対象の少なくとも１つである、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
前記糖尿病関連徴候が妊娠性糖尿病である、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
請求項４５〜７６のいずれか一項に記載の方法の全部又は一部を実行するための装置。
【請求項７８】
ウェアラブル装置である、請求項７７に記載の装置。
【請求項７９】
前記ウェアラブル装置がリストバンドを含む、請求項７８に記載の装置。
【請求項８０】
前記ウェアラブル装置がスマートウォッチである、請求項７９に記載の装置。
【請求項８１】
前記標的エピトープが、ＧＣＤ５９の残基Ｎ１８を含むＧＣＤ５９のＮ−グリコシル化エピトープを含み、残基Ｎ１８がＮ−グリコシル化されている、請求項６９に記載の方法。
【請求項８２】
前記１つ又は複数の糖尿病関連徴候が、糖尿病、糖尿病の臓器特異的合併症の素因；前臨床糖尿病性末梢神経障害；前臨床糖尿病性腎障害；前臨床糖尿病性網膜症；及び前臨床糖尿病性血管疾患の少なくとも１つから選択される、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
Ｎ−グリコシル化ＧＣＤ５９を検出する方法であって、
ｉ．請求項１〜１７及び２１〜２７のいずれか一項に記載の抗体を使用してＧＣＤ５９を単離するステップと；
ｉｉ．ステップ（ｉ）で単離されたＧＣＤ５９を分析してＮ−グリコシル化残基の存在を検出するステップと
を含む、方法。
【請求項８４】
ステップ（ｉｉ）が、質量分析法の使用を含む、請求項８３に記載の方法。
【請求項８５】
ステップ（ｉｉ）が、前記Ｎ−グリコシル化残基に結合できるレクチンの使用を含む、請求項８３に記載の方法。
【請求項８６】
前記Ｎ−グリコシル化残基がＧＣＤ５９の残基Ｎ１８である、請求項８３〜８５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８７】
ＣＤ５９  Ｋ４１糖化の阻害剤を同定する方法であって、
ｉ．少なくとも１つのサンプルを少なくとも１つの試験化合物に接触させるステップであって、前記少なくとも１つのサンプルが、ＣＤ５９と、Ｋ４１糖化に適した条件とを含むステップと；
ｉｉ．前記少なくとも１つのサンプル中のＧＣＤ５９の濃度又は濃度等価物を判定するステップと；
ｉｉｉ．ステップ（ｉ）の結果として、ステップ（ｉｉ）で判定されたＧＣＤ５９の濃度又は濃度等価物が低下した場合、前記少なくとも１つの試験化合物の１つ又は複数をＣＤ５９  Ｋ４１糖化の阻害剤として同定するステップと
を含む、方法。
【請求項８８】
ステップ（ｉｉ）が、請求項１〜１７及び２１〜２７のいずれか一項に記載の抗体の使用を含む、請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
前記少なくとも１つの試験化合物が、小分子、ペプチド、合成コンストラクト、融合タンパク質、アプタマー、核酸、及び抗体の１つ又は複数から選択される、請求項８７又は８８に記載の方法。
【請求項９０】
請求項８７〜８９のいずれか一項に記載の方法に従って開発される、阻害剤。
【請求項９１】
請求項１〜１７のいずれか一項に記載の抗体又はその１つ又は複数の断片をコードする、ベクター。
【請求項９２】
請求項９１に記載のベクターから生成される、組換え抗体。
【請求項９３】
請求項９１に記載のベクターを含む、細胞。
【請求項９４】
請求項９３に記載の細胞から生成される、抗体。
【請求項９５】
請求項９０に記載の阻害剤の使用を含む、糖尿病関連徴候を治療する方法。
【請求項９６】
前記糖尿病関連徴候が、補体機能不全、溶血性疾患、発作性夜間血色素尿症、非定型溶血性尿毒症症候群、創傷治癒、臓器移植に伴う合併症、血管徴候、及び加齢黄斑変性の１つ又は複数から選択される、請求項９５に記載の方法。
【請求項９７】
リスクレベルを胎児対象に割り当てる方法であって、前記リスクレベルが１つ又は複数のＧＤＭ関連病状の発症に関連しており、該方法が、
ｉ．前記胎児対象の妊娠キャリアから少なくとも１つの試験サンプルを採取するステップと；
ｉｉ．アッセイを使用して、前記試験サンプル中のＧＣＤ５９のレベルを判定するステップであって、前記アッセイが請求項２０に記載の捕捉抗体及び請求項２２に記載の検出抗体を利用する、ステップと；
ｉｉｉ．前記試験サンプル中で判定された前記ＧＣＤ５９のレベルに基づいて、前記１つ又は複数のＧＤＭ関連病状の発症に関連する前記リスクレベルに割り当てるステップと
を含む、方法。
【請求項９８】
前記１つ又は複数のＧＤＭ関連病状が、巨人児、大妊娠年齢（ＬＧＡ）、先天異常、出産外傷、高ビリルビン血症、低血糖、癲癇発作、及び死産の１つ又は複数から選択される、請求項９７に記載の方法。
【請求項９９】
プラットフォーム技術を使用するステップを含む、請求項４５〜７６、８１〜８３、８５〜８９、９７、又は９８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１００】
前記プラットフォーム技術が自動プラットフォーム技術を含む、請求項９９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、グルコースレベルの上昇に関連する因子を検出するための化合物、方法、及びキットに関する。これらの因子としては、血中グルコースレベルの上昇により翻訳後修飾されたタンパク質が挙げられる。本開示はまた、検出された因子に基づいて、患者を診断、治療、モニタリング、及び層別化する方法にも関する。
【背景技術】
【０００２】
糖尿病は、血中グルコースレベルの上昇によって特徴付けられる。血中グルコースレベルの持続的な上昇は、糖化として知られているプロセスによってタンパク質に影響を及ぼしうる。糖化は、タンパク質へのグルコースの非酵素的付着であり、糖尿病対象の組織損傷を引き起こす主要な病態生理学的機序と見なされる。糖化は、グルコース及び／又はその他の還元糖とタンパク質中のアミノ基との反応を伴い、シッフ塩基又はアルジミンの形成をもたらす。この不安定な付加物は、アマドリ転位を介してより安定なケトアミンに互変異性化し得る。
【０００３】
アルブミン、ヘモグロビンなどをはじめとする、異なる糖化タンパク質が糖尿病の対象において同定されている。影響を受けるアミノ基の位置によっては、糖化タンパク質の機能が損なわれることもある。例えば、ヘモグロビンβ鎖のアミノ末端糖化は糖化ヘモグロビン（ＨｂＡ１ｃ）を生じさせ、その中では２，３−ジホスホグリセリン酸の反応性が低下して酸素親和性が増加する。凝固系の主要なトロンビン阻害剤である抗トロンビンＩＩＩの糖化は、ヘパリンに対する親和性を低下させ、糖尿病に関連する凝固性亢進状態に寄与するとみなされている。
【０００４】
特定のタンパク質のタンパク質「糖化」の程度の測定は、グルコースレベルを直接測定するなどのより短期的な指標よりも、血糖コントロールのより安定した指標を提供する貴重な臨床ツールであり、最終的に治療の有効性を改善するのに役立つ。本発明者らは、ＣＤ５９のＫ４１糖化が異常な血糖レベルと相関し、Ｋ４１における糖化がＣＤ５９の正常な活性を妨げることを以前に示した（そのそれぞれの内容全体が参照により本明細書に援用される、（特許文献１）；（特許文献２）；及び（特許文献３））。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】米国特許第６，８３５，５４５号明細書
【特許文献２】米国特許第７，０４９，０８２号明細書
【特許文献３】米国特許第７，４３９，３３０号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかし、糖尿病の病状を検出し診断する、改善された方法に対する必要が依然として存在する。特に、対象サンプル中の糖化ＣＤ５９（ＧＣＤ５９）のレベルを検出及び／又は判定するための、簡単で正確且つ費用対効果の高い方法、試薬、及びキットの必要性が依然として存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号３８〜４３からなる群から選択されるアミノ配列と少なくとも７０％のアミノ酸配列同一性を有する相補性決定領域（ＣＤＲ）がある、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む抗体を提供する。ＣＤＲは、配列番号４２及び４３からなる群から選択されるＣＤＲ−Ｈ３であってもよい。ＶＨは、配列番号３８及び３９からなる群から選択される配列と少なくとも７０％の配列同一性があるアミノ酸配列を有する、ＣＤＲ−Ｈ１；配列番号４０及び４１からなる群から選択される配列と少なくとも７０％の配列同一性があるアミノ酸配列を有する、ＣＤＲ−Ｈ２；及び配列番号４２及び４３からなる群から選択される配列と少なくとも７０％の配列同一性があるアミノ酸配列を有する、ＣＤＲ−Ｈ３を含んでもよい。抗体は、配列番号３３〜３７からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも７０％のアミノ酸配列同一性を有するＣＤＲがある、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含んでもよい。ＶＬは、配列番号３６及び３７からなる群から選択されるＣＤＲ−Ｌ３を含んでもよい。ＶＬは、配列番号３３及び３４からなる群から選択される配列と少なくとも７０％の配列同一性があるアミノ酸配列を有する、ＣＤＲ−Ｌ１；配列番号３５の配列と少なくとも３０％の配列同一性があるアミノ酸配列を有する、ＣＤＲ−Ｌ２；及び配列番号３６及び３７からなる群から選択される配列と少なくとも７０％の配列同一性があるアミノ酸配列を有する、ＣＤＲ−Ｌ３を含んでもよい。抗体は、モノクローナル抗体であってもよい。抗体は、ヒト化抗体であってもよい。抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４抗体であってもよい。
【０００８】
本開示の抗体は、配列番号２９〜３２からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列がある、少なくとも１つ可変ドメインを含んでもよい。少なくとも１つの可変ドメインは、配列番号３０及び３２からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である、アミノ酸配列があるＶＨを含んでもよい。少なくとも１つの可変ドメインは、配列番号２９及び３１からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である、アミノ酸配列があるＶＬを含んでもよい。
【０００９】
本開示の抗体は、配列番号３及び５からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有する、翻訳されたアミノ酸配列を含んでもよい。重鎖は、配列番号７、８、及び１０からなる群から選択される核酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有する、ヌクレオチド配列によってコードされてもよい。
【００１０】
本開示の抗体は、配列番号２及び４からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有する、翻訳されたアミノ酸配列がある軽鎖を含んでもよい。軽鎖は、配列番号６及び９からなる群から選択されるヌクレオチド配列によってコードされてもよい。
【００１１】
いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号３及び５からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性がある翻訳されたアミノ酸配列がある、重鎖；及び配列番号２及び４からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性がある翻訳されたアミノ酸配列がある、軽鎖を含む抗体を提供する。抗体は、ＣＤ５９に結合してもよい。抗体は、ＣＤ５９の非糖化エピトープに結合してもよい。抗体は、リジン４１（Ｋ４１）を含まないＣＤ５９のエピトープに結合してもよい。抗体は、糖化ＣＤ５９（ＧＣＤ５９）の糖化エピトープに結合してもよい。ＧＣＤ５９の糖化エピトープは、アマドリ修飾Ｋ４１を含んでもよい。ＧＣＤ５９の糖化エピトープへの結合は、約１．０ｐＭ〜約５．０×１０８ｐＭの平衡解離定数（ＫＤ）を特徴としてもよい。ＫＤは、約１．５ｐＭ〜約１５０ｐＭであってもよい。ＧＣＤ５９エピトープは、表面付着形式及び溶液ベースの形式の少なくとも１つから選択される形式で、提示されてもよい。溶液ベースの形式は、尿、血漿、血清、血液、汗、及び唾液の少なくとも１つの溶液を含んでもよい。血清は、約１：１〜約１：１００，０００に希釈されてもよい。
【００１２】
いくつかの実施形態では、本開示は、捕捉剤とキットの使用説明書とを含むキットを提供する。捕捉剤は捕捉抗体であってもよく、捕捉抗体は本明細書に記載の抗体である。捕捉抗体は、ＣＤ５９に結合してもよい。キットは検出剤を含んでもよく、検出剤はレクチン及び検出抗体から選択され、検出抗体は本明細書に記載の抗体である。検出抗体は、ＣＤ５９に結合してもよい。検出剤は、ＧＣＤ５９のグリコシル化エピトープに結合してもよい。ＧＣＤ５９のグリコシル化エピトープには、ＧＣＤ５９のＮ−グリコシル化エピトープが含まれてもよい。キットには、検量線の生成のための化合物が含まれてもよい。キットには、少なくとも１つの緩衝液が含まれてもよい。緩衝液は、対象サンプルに接触させるために使用されてもよい。緩衝液には、還元剤、酸化剤、ジチオトレイトール（ＤＴＴ）、及びβ−メルカプトエタノール（ＢＭＥ）の少なくとも１つが含まれてもよい。キットには、１つ又は複数の内部対照が含まれてもよい。１つ又は複数の内部対照には、１つ又は複数の血漿アッセイ対照が含まれてもよい。キットには、アッセイ希釈剤、コンジュゲート希釈剤、及び洗浄緩衝液の１つ又は複数が含まれてもよい。キット中の１つ又は複数の試薬は、凍結乾燥されてもよい。
【００１３】
本開示の方法は、サンプル中の標的タンパク質を検出する方法を含む。標的タンパク質には、ＧＣＤ５９が含まれてもよい。方法は、サンプルを得るステップと；サンプルをＣＤ５９のＮ−グリコシル化エピトープに結合する抗体又は本明細書に記載の抗体のいずれかから選択される捕捉抗体を有する基材に適用するステップと；ＧＣＤ５９の糖化又は非糖化エピトープから選択される標的エピトープに結合する検出抗体を基材に適用するステップと；基材を検出抗体の存在について分析するステップとを含んでもよい。方法は、サンプルを得るステップと；サンプルを本明細書に記載の抗体から選択される捕捉抗体を有する基材に適用するステップと；ＧＣＤ５９の非糖化エピトープに結合する検出抗体を適用するステップと；基材を検出抗体の存在について分析するステップとを含んでもよい。検出抗体は、本明細書に記載の抗体のいずれかから選択されてもよい。標的エピトープには、ＧＣＤ５９のグリコシル化エピトープが含まれてもよい。標的エピトープには、ＧＣＤ５９のＮ−グリコシル化エピトープが含まれてもよい。サンプルは、対象サンプルであってもよい。対象サンプルは、尿、血液、血漿、血清、汗、及び唾液の少なくとも１つから選択されてもよい。サンプルは、還元剤、酸化剤、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、及びβ−メルカプトエタノール（ＢＭＥ）の少なくとも１つで処理されてもよい。サンプルは、希釈されたサンプルであってもよい。サンプルは、約１：１〜約１：１，０００に希釈されてもよい。
【００１４】
いくつかの実施形態では、本開示は、サンプル中のＧＣＤ５９を含む標的タンパク質を検出する方法を提供し、方法は、細胞、組織、及び組織切片の少なくとも１つを含むサンプルを得るステップと；ＧＣＤ５９の糖化エピトープを含む標的エピトープに結合する検出抗体をサンプルに適用するステップと；サンプルを検出抗体の存在について分析するステップとを含む。検出抗体には、検出可能な標識が含まれてもよい。検出可能な標識は、ビオチン、ストレプトアビジン、アビジン、蛍光標識、酵素的標識、ルミネセンス標識、及び放射性標識からなる群から選択されてもよい。検出抗体は、検出可能な標識を含む二次検出剤を使用して検出されてもよい。二次検出剤は、抗体であってもよい。検出可能な標識は、ビオチン、ストレプトアビジン、アビジン、蛍光標識、酵素的標識、ルミネセンス標識、及び放射性標識からなる群から選択されてもよい。基材は、アッセイプレート、ビーズ、膜、導電性表面、及び導電性ナノ粒子の少なくとも１つから選択されてもよい。方法は、ポイントオブケアで実行されてもよい。方法の少なくとも一部は、患者モニタリング装置と連携して実行されてもよい。患者モニタリング装置は、電子シグナルを受信及び／又は送信できてもよい。患者モニタリング装置は、スマートフォン及びスマートウォッチの少なくとも１つから選択されるスマート装置であってもよい。標的タンパク質の濃度又は濃度等価物は、検出可能な標識に関連する少なくとも１つのシグナルを測定することによって判定されてもよい。
【００１５】
いくつかの実施形態では、本開示は、少なくとも１つの試験サンプルを対象から採取するステップと；サンプルが少なくとも１つの試験サンプルと少なくとも１つの対照サンプルとを含む、明細書に記載の方法のいずれかを実行するステップと；少なくとも１つの試験サンプル中の標的タンパク質の濃度又は濃度等価物と、少なくとも１つの対照サンプル中で検出された標的タンパク質の濃度又は濃度等価物とを比較するステップとを含む、対象を評価する方法を提供する。
【００１６】
いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に記載の方法のいずれかを実行することによって、対象における糖尿病関連徴候をスクリーニング、診断、及びモニタリングする方法を提供し、少なくとも１つの試験サンプル中の標的タンパク質の濃度又は濃度等価物が、少なくとも１つの対照サンプル中で検出された標的タンパク質の濃度又は濃度等価物と閾値分異なる場合、対象は糖尿病関連徴候があると診断される。本開示の方法は、対象における１つ又は複数の糖尿病関連徴候をモニタリングする方法を含み、対象は１つ又は複数の糖尿病関連徴候を有し、方法は、少なくとも２つの期間にわたって少なくとも２つの試験サンプルを対象から採取するステップと；サンプルが採取された少なくとも２つの試験サンプルを含む、本明細書に記載の方法のいずれかを実行するステップと；少なくとも２つの試験サンプル中の標的タンパク質の濃度又は濃度等価物間の変動をモニタリングするステップとを含む。対象における１つ又は複数の糖尿病関連徴候をモニタリングする方法は、コンパニオン診断法の一部として実行されてもよい。
【００１７】
いくつかの実施形態では、治療法の有効性を評価する方法が提供される。治療法は、少なくとも１人の対象への少なくとも１つの治療用化合物の投与を含んでもよい。
本開示の方法は、リスクレベルを対象に割り当てる方法を含んでもよく、リスクレベルは、１つ又は複数の糖尿病関連徴候の発症に関連するリスクレベルを含む。方法は、少なくとも１つの試験サンプル中の標的タンパク質の濃度又は濃度等価物と、少なくとも１つの対照サンプル中で検出された標的タンパク質の濃度又は濃度等価物とを比較するステップと；実施された比較に基づいて、リスクレベルを対象に割り当てるステップとを含んでもよい。対象は、妊娠した対象、妊娠が疑われる対象、及び妊娠できる対象の少なくとも１人であってもよい。糖尿病関連徴候には、妊娠性糖尿病が含まれてもよい。
【００１８】
いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に記載の方法のいずれかの全部又は一部を実行するための装置を提供する。装置は、ウェアラブル装置であってもよい。ウェアラブル装置には、リストバンドが含まれてもよい。ウェアラブル装置は、スマートウォッチであってもよい。
【００１９】
いくつかの実施形態では、対象における糖尿病関連徴候のスクリーニング、診断、及びモニタリングに使用される本開示の方法は、標的エピトープを検出するステップを含んでもよく、標的エピトープは、ＧＣＤ５９の残基Ｎ１８を含むＧＣＤ５９のＮ−グリコシル化エピトープを含んでもよく、残基Ｎ１８はＮ−グリコシル化されている。１つ又は複数の糖尿病関連徴候は、糖尿病、糖尿病の臓器特異的合併症の素因；前臨床糖尿病性末梢神経障害；前臨床糖尿病性腎障害；前臨床糖尿病性網膜症；及び前臨床糖尿病性血管疾患の少なくとも１つから選択されてもよい。
【００２０】
本開示の方法は、Ｎ−グリコシル化ＧＣＤ５９を検出する方法を含み、方法は、本明細書に記載の抗体を使用してＧＣＤ５９を単離するステップと；単離されたＧＣＤ５９を分析してＮ−グリコシル化残基の存在を検出するステップとを含む。分析には、質量分析法の使用が含まれてもよい。分析には、Ｎ−グリコシル化残基に結合できるレクチンの使用が含まれてもよい。Ｎ−グリコシル化残基は、ＧＣＤ５９の残基Ｎ１８であってもよい。
【００２１】
いくつかの実施形態では、本開示は、ＣＤ５９と、Ｋ４１糖化に適した条件とを含む、少なくとも１つのサンプルを少なくとも１つの試験化合物に接触させるステップと；少なくとも１つのサンプル中でＧＣＤ５９の濃度又は濃度等価物を判定するステップと；少なくとも１つの試験化合物との接触の結果として、ＧＣＤ５９の濃度又は濃度等価物が低下したと判定されれば、少なくとも１つの試験化合物の１つ又は複数をＣＤ５９  Ｋ４１糖化阻害剤として同定するステップとを含む、ＣＤ５９  Ｋ４１糖化の阻害剤を同定する方法を提供する。ＧＣＤ５９の濃度又は濃度等価物の判定は、本明細書に記載の抗体を使用して実行されてもよい。少なくとも１つの試験化合物は、小分子、ペプチド、合成コンストラクト、融合タンパク質、アプタマー、核酸、及び抗体の１つ又は複数から選択されてもよい。いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書中で提供される方法を含む、ＣＤ５９  Ｋ４１糖化の阻害剤を同定する方法に従って開発された阻害剤を提供する。
【００２２】
いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に記載の抗体又はその断片若しくは変異型の１つ又は複数をコードするベクターを提供する。本開示はまた、このようなベクターを使用して産生される組換え抗体、このようなベクターを含む細胞、及びこのような細胞によって産生される抗体も提供する。
【００２３】
本開示の方法は、本明細書に記載の方法のいずれかに従って生成された阻害剤を使用して、糖尿病関連徴候を治療する方法を含む。糖尿病関連徴候は、補体機能不全、溶血性疾患、発作性夜間血色素尿症、非定型溶血性尿毒症症候群、創傷治癒、臓器移植に伴う合併症、血管徴候、及び加齢黄斑変性の１つ又は複数から選択されてもよい。
【００２４】
いくつかの実施形態では、本開示は、胎児対象にリスクレベルを割り当てる方法を提供し、リスクレベルとしては、１つ又は複数のＧＤＭ関連病状の発症に関連するリスクレベルが挙げられる。方法は、胎児対象の妊娠キャリアから少なくとも１つの試験サンプルを採取するステップと；本明細書に記載されたもののいずれかからそれぞれ選択される捕捉抗体及び検出抗体を利用するアッセイを用いて、試験サンプル中のＧＣＤ５９のレベルを判定するステップと；試験サンプル中で判定されたＧＣＤ５９のレベルに基づいて、１つ又は複数のＧＤＭ関連病状の発症に関連するリスクレベルを割り当てるステップとを含んでもよい。１つ又は複数のＧＤＭ関連病状は、巨人児、大妊娠年齢（ＬＧＡ）、先天異常、出産外傷、高ビリルビン血症、低血糖、癲癇発作、及び死産の１つ又は複数から選択されてもよい。
【００２５】
本開示の方法は、プラットフォーム技術の使用を通じて実行されてもよい。プラットフォーム技術には、自動プラットフォーム技術が含まれてもよい。
前述の及びその他の目的、特徴、及び利点は、添付の図面に示されるように、本発明の特定の実施形態の以下の説明から明らかになるであろう。図面は必ずしも一定の縮尺でなく、むしろ重点は、本発明の様々な実施形態の原理を例示することに置かれる。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１Ａ】アマドリ修飾ＧＣＤ５９サロゲート及び抗アマドリ修飾ＧＣＤ５９抗体（Ｄ２）を使用して作成された、検量線のグラフである。
【図１Ｂ】尿サンプル希釈百分率と、抗体Ｄ２を使用して検出された合成ペプチドユニット（ＳＰＵ）との相関関係を示すグラフである。
【図２】抗体Ｄ２を用いたアマドリ修飾ｈＧＣＤ５９の検出を示す、ウエスタンブロット分析の画像である。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
いくつかの実施形態では、本開示は、種々の治療、診断、モニタリング、及び／又は研究用途のための化合物、組成物、試薬、方法、キット、及び装置を提供する。本開示の一部は、例えば、診断キットなどのＣＤ５９への翻訳後修飾を検出するためのキットに関する。本明細書には、修飾又は未修飾ＣＤ５９に結合する抗体をコードする、アミノ酸及び核酸配列が含まれる。これらの抗体は、様々な治療用途のために翻訳後修飾ＣＤ５９を検出するために使用されるキットで使用されてもよい。これらの及びその他の抗体の用途は、本明細書でさらに詳細に説明されている。
【００２８】
Ｉ．化合物及び組成物
タンパク質
本開示の化合物は、タンパク質を含んでもよい。タンパク質は、独立して１つ若しくは複数の核酸、複数の核酸、核酸の断片又は前述のいずれかの変異型によってコードされてもよい、ポリペプチド全体、複数のポリペプチド又はポリペプチドの断片として存在してもよい。本明細書の用法では、「ポリペプチド」は、ほとんどの場合ペプチド結合によって連結された、アミノ酸残基（天然又は非天然）のポリマーを意味する。用語は、本明細書の用法では、任意のサイズ、構造、又は機能のタンパク質、ポリペプチド、及びペプチドを指す。場合によっては、コードされるポリペプチドが約５０アミノ酸よりも小型であれば、ポリペプチドはペプチドと称される。ポリペプチドがペプチドである場合、それは少なくとも約２、３、４、又は少なくとも５アミノ酸残基長である。したがって、ポリペプチドとしては、遺伝子産物、天然ポリペプチド、合成ポリペプチド、ホモログ、オルソログ、パラログ、前述の断片及びその他の同等物、変異型、及びアナログが挙げられる。ポリペプチドは、単一分子であってもよく、又は二量体、三量体若しくは四量体などの多重分子複合体であってもよい。それらはまた、一本鎖又は多重鎖ポリペプチドを含んでもよく、付着又は連鎖していてもよい。ポリペプチドという用語はまた、その中で１つ又は複数のアミノ酸残基が、対応する天然アミノ酸の人工化学的類似体である、アミノ酸ポリマーにも適用されてもよい。
【００２９】
「ポリペプチド変異型」という用語は、それらのアミノ酸配列が、天然又は参照配列とは異なる分子を指す。アミノ酸配列変異型は、天然又は参照配列と比較して、アミノ酸配列中の特定の位置に置換、欠失、及び／又は挿入を有してもよい。通常、変異型は、天然又は参照配列と少なくとも約５０％の同一性（相同性）を有し、好ましくは、天然又は参照配列と少なくとも約８０％、より好ましくは少なくとも約９０％同一（相同）である。
【００３０】
いくつかの実施形態では、「変異型模倣体」が提供される。本明細書の用法では、「変異型模倣物」という用語は、活性化配列を模倣する１つ又は複数のアミノ酸を含有するものである。例えば、グルタミン酸は、ホスホロスレオニン及び／又はホスホロセリンの模倣体の役割を果たしてもよい。代案としては、変異型模倣体は、不活性化をもたらし又は模倣体を含有する不活性化された生成物をもたらしてもよく、例えば、フェニルアラニンはチロシンの不活化置換として機能してもよく；又はアラニンはセリンの不活化置換として機能してもよい。本開示のポリペプチドのアミノ酸配列は、天然に存在するアミノ酸を含んでなってもよく、それ自体が、タンパク質、ペプチド、ポリペプチド、又はその断片であると見なされてもよい。
【００３１】
代案としては、本開示のポリペプチドは、天然アミノ酸及び非天然アミノ酸の双方を含んでもよい。
「アミノ酸配列変異型」という用語は、天然又は出発配列と比較して、アミノ酸配列にいくつかの違いがある分子を指す。アミノ酸配列変異型は、アミノ酸配列内の特定の位置で置換、欠失、及び／又は挿入を有してもよい。「天然」又は「出発」配列は、野生型配列と混同されるべきではない。本明細書の用法では、天然又は出発配列は、それに対して比較が行われてもよい、元の分子を指す相対用語である。「天然」若しくは「出発」配列又は分子は、野生型（天然に見られる配列）に相当してもよいが、必ずしも野生型配列でなくてよい。
【００３２】
通常、変異型は、天然配列と比較して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％少なくとも９９．８％、又は少なくとも９９．９％の配列同一性を有する。アミノ酸配列に適用される「配列同一性」は、配列を整列させて、必要ならば、最大パーセント配列同一性を達成するために、ギャップ及び断片を考慮した後に、第２の配列のアミノ酸配列中の残基と同一である候補アミノ酸配列中の残基の百分率と定義される。２つの重合配列のパーセント同一性の計算は、例えば、２つの配列を最適比較目的で整列させることで実施され得る（例えば、最適アライメントのために第１の及び第２の重合配列の片方又は双方にギャップを導入し得て、非同一の配列は、比較目的で無視され得る）。特定の実施形態では、比較目的で整列される配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％である。次に、対応するヌクレオチド配列部位のヌクレオチドが比較される。第１の配列中の位置が、第２の配列中の対応する位置と同一のヌクレオチドによって占有される場合、分子は、その位置において同一である。２つの配列間のパーセント同一性は、２つの配列の最適アライメントのために導入する必要がある、ギャップ数と各ギャップ長とを考慮した、配列により共有される同一位置数の関数である。２つの配列間の配列の比較及びパーセント同一性の判定は、数学的アルゴリズムを使用して達成され得る。例えば、２つのヌクレオチド配列間のパーセント同一性は、そのそれぞれが参照により本明細書に援用される、「コンピュータによる分子生物学（Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）」、レスク，Ａ．Ｍ．（Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．）編、オックスフォード・ユニバーシティ・プレス（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ）、ニューヨーク、１９８８年；「バイオコンピューティング：情報科学及びゲノムプロジェクト（Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ）」、スミス，Ｄ．Ｗ．（Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．）編、アカデミック・プレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ）、ニューヨーク、１９９３年；「分子生物学における配列解析（Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）」フォンヘインジュ，Ｇ．（ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．）著、アカデミック・プレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ）、１９８７年；「配列データのコンピュータ解析（Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａ）」、第Ｉ部、グリフィン，Ａ．Ｍ．（Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．）及びグリフィン，Ｈ．Ｇ．（Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．）編、フマナ・プレス（Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ）、ニュージャージー、１９９４年；「配列解析入門（Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ）」、グリプスコウ，Ｍ．（Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．）及びデベロー，Ｊ．（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．）編、Ｍストックトン・プレス（Ｍ  Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ）、ニューヨーク、１９９１年に記載されるものなどの方法を使用して、確認され得る。例えば、２つのヌクレオチド配列間のパーセント同一性は、ＰＡＭ１２０重み残基表、ギャップ長ペナルティ１２、及びギャップペナルティ４を使用して、アライン（ＡＬＩＧＮ）プログラム（バージョン２．０）に組み込まれている、マイアーズ（Ｍｅｙｅｒｓ）及びミラー（Ｍｉｌｌｅｒ）著（コンピュータ・アプリケーション・イン・ザ・バイオサイエンシス（ＣＡＢＩＯＳ）、１９８９年、第４巻、ｐ．１１〜１７）のアルゴリズムを用いて判定され得る。代案としては、２つのヌクレオチド配列間のパーセント同一性は、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックスを使用して、ＧＣＧソフトウェアパッケージ中のギャッププログラムを使用して判定され得る。配列間のパーセント同一性を判定するために、一般に用いられる方法としては、参照により本明細書に援用される、カリロ，Ｈ．（Ｃａｒｉｌｌｏ，Ｈ．）及びリップマン，Ｄ．（Ｌｉｐｍａｎ，Ｄ．）著、ＳＩＡＭジャーナル・オブ・アプライド・マセマティクス（ＳＩＡＭ  Ｊ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈ．）、第４８巻、ｐ．１０７３、１９８８年で開示されるものが挙げられるが、これに限定されるものではない。同一性を判定する技術は、公的に利用可能なコンピュータプログラムで体系化される。２つの配列間の相同性を判定するための代表的コンピュータソフトウェアとしては、ＧＣＧプログラムパッケージ（デベロー，Ｊ．（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．）ら著、ヌクレイック・アシッズ・リサーチ（Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、第１２巻、第１号、ｐ．３８７、１９８４年）、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、及びＦＡＳＴＡ（アルツシュール  Ｓ．Ｆ．（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  Ｓ．Ｆ．）ら著、ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー（Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．）、第２１５巻、ｐ．４０３、１９９０年）が挙げられるが、これに限定されるものではない。
【００３３】
アミノ酸配列に適用される「ホモログ」は、第２の生物種の第２の配列と実質的な同一性を有する、その他の生物種の対応する配列を意味するものとする。「アナログ」は、例えば、アミノ酸残基の置換、付加又は欠失などの、１つ又は複数のアミノ酸改変によって異なるが、依然として、親ポリペプチドの特性を維持する、ポリペプチド変異型を含むことが意図される。「相同性」は、例えば、ポリペプチド分子、核酸分子、及びオリゴ糖間などの重合分子間の全体的な関連性を指す。相同性の判定は、比較される重合分子の配列同一性、配列類似性、三次元立体構造、及び／又は機能を考慮に入れてもよい。
【００３４】
本発明は、変異型及び誘導体を含めたアミノ酸ベースの数種類のポリペプチドを考察する。これらとしては、置換的、挿入的、欠失的、及び共有結合的な変異型並びに誘導体が挙げられる。そのようなものとして、本発明の範囲内に含まれるのは、置換、挿入及び／又は付加、欠失、並びに共有結合修飾を含有するポリペプチドである。例えば、１つ又は複数のリジンなどの配列タグ又はアミノ酸が、本発明のペプチド配列に付加され得る（例えば、Ｎ末端又はＣ末端に）。ペプチド精製又は局在化のために、配列タグが使用され得る。ペプチド溶解度を高め、又はビオチン化を可能にするために、リジンが使用され得る。代案としては、ペプチド又はタンパク質のアミノ酸配列のカルボキシ及びアミノ末端領域に位置するアミノ酸残基が任意選択的に欠失して、トランケート型配列を提供してもよい。代案としては、特定のアミノ酸（例えば、Ｃ末端又はＮ末端残基）は、例えば、可溶性のより大型の配列の一部としての配列発現などの配列の用途次第で、欠失するか、又は固体担体に結合されてもよい。
【００３５】
「置換変異型」は、タンパク質に言及する場合、天然配列又は出発配列中の少なくとも１つのアミノ酸残基が除去され、それに変えて同一位置に異なるアミノ酸が挿入されているものである。置換は、分子中の１つのアミノ酸のみが置換されている単一置換であってもよく、又は同一分子中の２つ以上のアミノ酸が置換されている多置換であってもよい。
【００３６】
本明細書の用法では「保存的アミノ酸置換」という用語は、常態では、類似したサイズ、電荷、又は極性がある、異なるアミノ酸の配列中に存在する、アミノ酸置換を指す。保存的置換の例としては、別の非極性残基による、イソロイシン、バリン、及びロイシンなどの非極性（疎水性）残基の置換が挙げられる。同様に、保存的置換の例としては、アルギニン及びリジン間、グルタミン及びアスパラギン間、並びにグリシン及びセリン間などの、別の残基極性（親水性）による極性（親水性）残基の置換が挙げられる。さらに、別の塩基性残基によるリジン、アルギニン又はヒスチジンなどの塩基性残基の置換、或いは別の酸性残基によるアスパラギン酸又はグルタミン酸などの酸性残基の置換は、保存的置換の追加的な例である。非保存的置換の例としては、システイン、グルタミン、グルタミン酸又はリジンなどの極性（親水性）残基による、イソロイシン、バリン、ロイシン、アラニン、メチオニンなどの非極性（疎水性）アミノ酸残基の置換及び／又は非極性残基による、極性残基の置換が挙げられる。
【００３７】
「挿入変異型」は、タンパク質に言及する場合、天然配列又は出発配列中の特定位置のアミノ酸に直接隣接して、１つ又は複数のアミノ酸が挿入されたものである。アミノ酸に「直接隣接する」とは、アミノ酸のα−カルボキシ又はα−アミノ官能基のどちらかに結合することを意味する。
【００３８】
「欠失変異型」は、タンパク質に言及する場合、天然アミノ酸配列又は出発アミノ酸配列中の１つ又は複数のアミノ酸が除去されたものである。通常、欠失変異型は、１つ又は複数のアミノ酸が、分子の特定領域で欠失している。
【００３９】
本明細書の用法では、「誘導体」という用語は、「変異型」という用語と同義で使用され、参照分子又は出発分子に対して、任意の方法で修飾又は変更された分子を指す。いくつかの実施形態では、誘導体としては、有機タンパク質性又は非タンパク質性誘導体化剤で、及び翻訳後修飾で、修飾されている天然又は出発タンパク質が挙げられる。共有結合修飾は、従来より、タンパク質の標的アミノ酸残基剤と、選択された側鎖若しくは末端残基と反応する能力がある有機誘導体化剤とを反応させることで、又は選択された組換え宿主細胞内で機能する翻訳後修飾の機構を活用することで、導入されている。結果として生じる共有結合誘導体は、生物学的活性にとって、免疫測定法にとって、又は組換え体タンパク質のイムノアフィニティー精製のための抗タンパク質抗体の調製にとって、重要な残基の同定を目的とするプログラムにおいて、有用である。このような修飾は、当該技術分野の技巧の範囲内であり、過度の実験なしに実施される。
【００４０】
特定の翻訳後修飾は、発現したポリペプチドに対する組換え宿主細胞の作用の結果である。グルタミニル及びアスパラギニル残基は、しばしば翻訳後に脱アミドされて、対応するグルタミル及びアスパルチル残基になる。代案としては、これらの残基は、弱酸性条件下で脱アミドされる。これらの残基のいずれの形態も、本発明に従って使用されるタンパク質に存在してもよい。
【００４１】
その他の翻訳後修飾としては、プロリン及びリジンのヒドロキシル化、セリル又はスレオニル残基のヒドロキシル基のリン酸化、リジン、アルギニン、及びヒスチジン側鎖のα−アミノ基のメチル化が挙げられる（Ｔ．Ｅ．クレイトン（Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ）著、「タンパク質：構造分子特性（Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ）」、Ｗ．Ｈ．フリーマン・アンド・カンパニー（Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ＆  Ｃｏ．）、サンフランシスコ、ｐ．７９〜８６、１９８３年）。
【００４２】
共有結合誘導体は、その中で本発明のタンパク質が非タンパク質性ポリマーに共有結合する、融合分子を特に含む。非タンパク質性ポリマーは、通常、親水性合成ポリマーであり、すなわち、その他の点では天然に見られないポリマーである。しかし、天然で存在し、組換え又は生体外法によって生産されたポリマーは、自然界から単離されたポリマーと同様に有用である。例えば、ポリビニルアルコール及びポリビニルピロリドンなどの親水性ポリビニルポリマーは、本発明の範囲内に入る。特に有用なのは、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールなどのポリビニルアルキレンエーテルである。タンパク質は、米国特許第４，６４０，８３５号明細書；米国特許第４，４９６，６８９号明細書；米国特許第４，３０１，１４４号明細書；米国特許第４，６７０，４１７号明細書；米国特許第４，７９１，１９２号明細書又は米国特許第４，１７９，３３７号明細書に記載される方法で、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール又はポリオキシアルキレンなどの様々な非タンパク質性ポリマーに連結させてもよい。
【００４３】
「特徴」は、タンパク質に言及する場合、分子の特徴的なアミノ酸配列ベースの構成要素と定義される。本発明のタンパク質の特徴としては、表面顕在化、局所立体配座形状、折り畳み、ループ、半ループ、ドメイン、半ドメイン、部位、末端又はそれらの任意の組み合わせが挙げられる。
【００４４】
本明細書の用法では、タンパク質に言及する場合、「表面顕在化」という用語は、最外側の表面に出現する、タンパク質のポリペプチドベースの構成要素を指す。
本明細書の用法では、タンパク質に言及する場合、「局所立体構造的形状」という用語は、タンパク質の限定できる空間内に位置する、タンパク質のポリペプチドベースの構造的発現を意味する。
【００４５】
本明細書の用法では、タンパク質に言及する場合、「折り畳み」という用語は、エネルギー最小化時に、結果として生じるアミノ酸配列の立体構造を意味する。折り畳みは、折り畳みプロセスの二次的又は三次的レベルで起こってもよい。二次的レベル折り畳みの例としては、βシート及びαらせんが挙げられる。三次的折り畳みの例としては、エネルギー力の凝集又は分離のために形成される、ドメイン及び領域が挙げられる。このようにして形成される領域としては、疎水性及び親水性ポケットなどが挙げられる。
【００４６】
本明細書の用法では、タンパク質立体構造に関わる「ターン」という用語は、ペプチド又はポリペプチド骨格の方向を変化させて、１つ、２つ、３つ以上のアミノ酸残基が関与してもよい、折れ曲がりを意味する。
【００４７】
本明細書の用法ではタンパク質を指す場合、「ループ」という用語は、ペプチド又はポリペプチドの骨格の方向を逆転させて、４つ以上のアミノ酸残基を含む、ペプチド又はポリペプチドの構造的特徴を指す。オリバ（Ｏｌｉｖａ）らは、少なくとも５クラスのタンパク質ループを同定した（ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー（Ｊ．Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ）、第２６６巻、第４号、ｐ．８１４〜８３０、１９９７年）。
【００４８】
本明細書の用法では、タンパク質に言及する場合、「半ループ」という用語は、それが由来するループのアミノ酸数の少なくとも半分を有する、同定されたループの一部を指す。ループは、常に偶数のアミノ酸残基を含有しなくてもよいものと理解される。したがって、ループが奇数のアミノ酸を含有し又はそれを含むと同定された場合、奇数ループの半ループは、ループの整数部分又は次の整数部分を含む（ループ／２±０．５アミノ酸のアミノ酸数）。例えば、７アミノ酸ループとして同定されたループは、３アミノ酸又は４アミノ酸の半ループを生じ得る（７／２＝３．５±０．５は３又は４である）。
【００４９】
本明細書の用法では、タンパク質に言及する場合、「ドメイン」という用語は、１つ又は複数の識別可能な構造特性若しくは機能特性又は性質（例えば、結合能力、タンパク質−タンパク質相互作用部位の役割を果たす）を有するポリペプチドのモチーフを指す。
【００５０】
本明細書の用法では、タンパク質に言及する場合、「半ドメイン」という用語は、それが由来するドメインとして同定されたドメインに属するアミノ酸数の少なくとも半分を有する部分を指す。ドメインは、常に偶数のアミノ酸残基を含有しなくてもよいものと理解される。したがって、ドメインが奇数のアミノ酸を含有し又はそれを含むと同定された場合、奇数ドメインの半ドメインは、ドメインの整数部分又は次の整数部分を含む（ドメイン／２±０．５アミノ酸のアミノ酸数）。例えば、７アミノ酸ドメインとして同定されたドメインは、３アミノ酸又は４アミノ酸の半ドメインを生じ得る（７／２＝３．５±０．５は３又は４である）。ドメイン又は半ドメイン内にサブドメインが同定されてもよく、これらのサブドメインが、それらが由来するドメイン又は半ドメイン中で同定された構造特性又は機能的性質の全てに満たない、構造特性又は機能的性質を保持することもまた理解される。本明細書のドメインタイプのいずれかを含むアミノ酸が、ポリペプチド骨格に沿って連続していなくてもよいこともまた理解される（すなわち、非隣接アミノ酸は構造的に折り畳まれて、ドメイン、半ドメイン又はサブドメインを生じてもよい）。
【００５１】
本明細書の用法では、タンパク質に言及する場合、アミノ酸ベースの実施形態に関する「部位」という用語は、「アミノ酸残基」及び「アミノ酸側鎖」の同意語として使用される。部位は、本発明のポリペプチドベースの分子中で、修飾され、操作され、改変され、誘導体化され、又は変動してもよい、ペプチド又はポリペプチド内の位置を表す。
【００５２】
本明細書の用法では「複数の末端又は１つの末端」という用語は、タンパク質に言及する場合、ペプチド又はポリペプチドの端を指す。このような端は、ペプチド又はポリペプチドの最初の又は最後の部位のみに限定されず、末端領域に追加的なアミノ酸を含んでもよい。本発明のポリペプチドベースの分子は、Ｎ末端（遊離アミノ基（ＮＨ２）があるアミノ酸で終了）と、Ｃ末端（遊離カルボキシル基（ＣＯ２Ｈ）があるアミノ酸で終了）との双方を有することを特徴としてもよい。本発明のタンパク質は、場合によっては、ジスルフィド結合によって、又は非共有結合力によってまとめられた、多ポリペプチド鎖（多量体、オリゴマー）で構成される。これらの種類のタンパク質は、複数のＮ末端及びＣ末端を有する。代案としては、ポリペプチド末端は、場合によっては、有機コンジュゲートなどの非ポリペプチドベース部分によって開始し又は終結するように、修飾されてもよい。
【００５３】
ひとたび特徴のいずれかが本発明の分子の成分として同定又は定義されると、これらの特徴のいくつかの操作及び／又は修正のいずれかが、移動、交換、反転、欠失、ランダム化又は複製によって実施されてもよい。さらに、特徴の操作は、本発明の分子に対する修飾と同一の結果をもたらしてもよいものと理解される。例えば、ドメインの欠失を伴う操作は、全長分子未満をコードする核酸の修飾と全く同じように、分子長の改変をもたらす。
【００５４】
修飾及び操作は、部位特異的変異誘発などの当該技術分野で知られている方法によって達成され得る。次に結果として生じる修飾分子は、本明細書に記載されるもの、又は当該技術分野で公知の任意のその他の適切なスクリーニングアッセイなどの生体外又は生体内アッセイを使用して、配列、構造、及び／又は活性について試験されてもよい。
【００５５】
同位体の変異型
本開示の化合物は、同位体である１つ又は複数の原子を含有してもよい。本明細書の用法では、「同位体」という用語は、１つ又は複数の追加的な中性子を有する化学元素を指す。一実施形態では、本発明の化合物は重水素化であってもよい。本明細書の用法では、「重水素化」という用語は、１つ又は複数の水素原子が重水素同位体で置換された物質を指す。重水素同位体は、水素の同位体である。水素の核が１つの陽子を含有する一方で、重水素原子核は陽子及び中性子の双方を含有する。安定性などの化合物の物理的性状を変化させるため、又は化合物を診断及び実験用途で使用できるようにするために、化合物が重水素化されてもよい。
【００５６】
抗体
いくつかの実施形態では、本開示は標的タンパク質に結合する抗体を提供する。本明細書の用法では、「標的タンパク質」は、タンパク質の検出及び／又は分析を伴う、アッセイ、診断法、又は本明細書に記載の任意のその他の方法の一部として分析される、タンパク質をはじめとする、関心のあるタンパク質を指す。標的タンパク質はまた、１つ又は複数のアミノ酸ベースのセグメントを有する合成コンストラクトもまた含んでもよい。合成コンストラクトには、リンカー、化学的部分、又は化学基などの１つ又は複数の非アミノ酸ベースの要素が含まれてもよい。場合によっては、標的タンパク質は、検出可能な標識をはじめとするが、これに限定されるものではない部分又はタグを含む。
【００５７】
いくつかの実施形態では、標的タンパク質は、ＣＤ５９、ＣＤ５９断片、ＣＤ５９変異型、ＣＤ５９翻訳後修飾バージョン、並びに／又はＣＤ５９、ＣＤ５９断片、ＣＤ５９変異型、ＣＤ５９翻訳後修飾、ＣＤ５９翻訳後修飾断片、及び／若しくはＣＤ５９翻訳後修飾変異型を含む合成コンストラクトを含む。成熟したヒトＣＤ５９（ｈＣＤ５９；シグナル配列を欠く）は、ＬＱＣＹＮＣＰＮＰＴ１０ＡＤＣＫＴＡＶＮＣＳ２０ＳＤＦＤＡＣＬＩＴＫ３０ＡＧＬＱＶＹＮＫＣＷ４０ＫＦＥＨＣＮＦＮＤＶ５０ＴＴＲＬＲＥＮＥＬＴ６０ＹＹＣＣＫＫＤＬＣＮ７０ＦＮＥＱＬＥＮ７７（配列番号１）のアミノ酸配列を有する。本明細書で言及されるｈＣＤ５９の残基番号は、この配列に存在する残基番号を参照する。ｈＣＤ５９断片及び変異型には、それぞれその内容全体が参照により援用される、欧州特許第２３４８０５０号明細書、国際公開第２０１５０８４９９４号パンフレット、及び米国特許第９０６８００６号明細書、米国特許第９４１７２４８号明細書に記載されるもののいずれかが含まれてもよい。
【００５８】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、ＣＤ５９の非糖化エピトープに結合する。いくつかの捕捉抗体は、ｈＣＤ５９（配列番号１）のリジン４１（本明細書で「Ｋ４１」と称される）を含まないｈＣＤ５９のエピトープに結合する。本開示のいくつかの抗体は、糖化ＣＤ５９（ＧＣＤ５９）の糖化エピトープに結合する。このような糖化エピトープには、Ｋ４１糖化ヒトＧＣＤ５９が含まれてもよい。いくつかの糖化エピトープは、アマドリ修飾Ｋ４１を含む。
【００５９】
ｈＣＤ５９の糖化エピトープには、それぞれその内容全体が参照により援用される、欧州特許第２３４８０５０号明細書、国際公開第２０１５０８４９９４号パンフレット、及び米国特許第９０６８００６号明細書、米国特許第９４１７２４８号明細書に記載されるもののいずれかが含まれてもよい。
【００６０】
いくつかの実施形態では、ＧＣＤ５９のアマドリ修飾Ｋ４１を含む糖化エピトープに結合する抗体（本明細書では「抗アマドリ修飾ＧＣＤ５９抗体」又は「抗アマドリ抗体」とも称される）は、約１．０ｐＭ〜約５．０×１０８ｐＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合してもよい。場合によっては、ＫＤは、約１．５ｐＭ〜約１５０ｐＭである。
【００６１】
本開示の抗体は、捕捉抗体を含んでもよい。捕捉抗体とは、このような標的タンパク質の単離、固定化、及び／又はさらなる分析の目的で、標的タンパク質に結合する抗体を指す。捕捉抗体は、ＣＤ５９又はその断片及び／若しくは変異型に結合してもよい。いくつかの捕捉抗体は、１つ又は複数の翻訳後修飾の存在に関係なく、ＣＤ５９に結合する。
【００６２】
いくつかの捕捉抗体は、標的タンパク質の標的エピトープに結合する。
本明細書の用法では、「標的エピトープ」は、抗体又はその他の分子が特異的親和性を有する特異的配列、特徴、又は部分を指す。ＣＤ５９、ＣＤ５９断片、又はＣＤ５９変異型上に存在する標的エピトープには、場合によってはその糖化、非糖化、グリコシル化、及び非グリコシル化特徴をはじめとする、特異的アミノ酸、アミノ酸配列、及び／又は三次元的特徴が含まれてもよいが、これに限定されるものではない。ｈＣＤ５９の標的エピトープは、前述のＣＤ５９エピトープのいずれか、又はそれぞれその内容全体が参照により援用される、欧州特許第２３４８０５０号明細書、国際公開第２０１５０８４９９４号パンフレット、及び米国特許第９０６８００６号明細書、米国特許第９４１７２４８号明細書に記載されるｈＣＤ５９（ヒトＣＤ５９）エピトープのいずれかを含んでもよい。このようなエピトープは、抗体の使用、又はレクチン、アプタマー、その他のタンパク質若しくは核酸などのその他の生体分子の使用をはじめとする、様々な方法で捕捉又は検出されてもよい。例えば、Ｎ−グリコシル化エピトープのようなｈＣＤ５９エピトープなどのＣＤ５９は、その他のタンパク質に、又はＣＤ５９タンパク質が存在する環境に、ＣＤ５９を結合させ及び／又はそれから分離するのに十分に特異的な任意の検出剤を使用して、検出されてもよい。検出剤は、例えば、糖化又は非糖化などのそのグリコシル化状態に関わりなく、ＣＤ５９に結合し又はそれを認識する抗体であってもよい。
【００６３】
本明細書の用法では、検出抗体とは、そのような標的タンパク質の存在、非存在、及び／若しくはレベルを判定する目的で、又は標的タンパク質の特徴付けのために、標的タンパク質に結合する抗体である。場合によっては、検出抗体を使用して、標的タンパク質上の標的エピトープの有無が判定されてもよい。このような標的エピトープには、標的タンパク質上に存在する翻訳後修飾エピトープが含まれてもよい。いくつかの実施形態では、検出抗体は、ＣＤ５９を標的化してもよい。このような検出抗体は、ＣＤ５９化学種間で変動してもよいＣＤ５９のエピトープ（例えば、異なる翻訳後修飾ＣＤ５９化学種）を認識してもよい。いくつかの実施形態では、検出抗体は、ＣＤ５９上に存在する翻訳後修飾エピトープを認識する。一例では、検出抗体は、糖化ＣＤ５９（ＧＣＤ５９）を認識する。糖化ｈＣＤ５９には、Ｋ４１糖化ｈＣＤ５９が含まれてもよい。場合によっては、検出抗体は、アマドリ形態の糖残基を保有する、Ｋ４１糖化ＣＤ５９を認識してもよい。Ｋ４１アマドリ−修飾ｈＣＤ５９の例は、例えば、それぞれその内容全体が参照により援用される、米国特許第９，０６８，００６号明細書及び国際公開第２０１５／０８４９９４号パンフレットに記載される。いくつかの検出抗体は、ＧＣＤ５９のみに結合し、非糖化形態には結合しない。本明細書で「捕捉」又は「検出」抗体として記載される抗体は、それぞれ、捕捉及び検出機能に限定されない。場合によっては、このような抗体は、本明細書に記載の目的のいずれかをはじめとするが、これに限定されるものではないその他の目的（例えば、治療又は製造）に有用であってもよい。
【００６４】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、溶液ベースの形式で提示される標的タンパク質に結合する。本明細書の用法では、「溶液ベースの形式」とは、溶液中に存在するタンパク質の立体構造を指す。このような溶液には、生理食塩水、緩衝液（例えば、リン酸緩衝食塩水）、血清、血漿、血液、リンパ液、汗、尿、及び唾液が含まれてもよいが、これに限定されるものではない。場合によっては、抗体は、希釈された血清又は血漿中で標的タンパク質に結合できてもよい。場合によっては、血清は、約１：１〜約１：１００，０００に希釈されてもよい。
【００６５】
本明細書の用法では、「抗体」という用語は、最も広い意味で言及され、具体的には、望ましい生物学的活性（例えば、「機能的」）を示す限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多特異性抗体（例えば、少なくとも２つの無傷の抗体から形成される二重特異性抗体）、及び抗体断片（例えば、二特異性抗体）をはじめとするが、これに限定されるものではない、様々な実施形態をカバーする。抗体は、主にアミノ酸ベースの分子であるが、１つ又は複数の修飾（糖部分、蛍光部分、化学標識などの付加をはじめとするが、これに限定されるものではない）もまた含んでなってもよい。
【００６６】
本明細書の用法では、「抗体ベースの」又は「抗体由来の」組成物は、既知抗体配列又は親抗体配列に由来する少なくとも１つのアミノ酸領域と、例えば哺乳類タンパク質などの非抗体配列に由来する少なくとも１つのアミノ酸領域とを含む、単量体又は多量体ポリペプチドである。
【００６７】
本開示の抗体は、治療用、診断用、工業的であってもよく、又は研究目的で使用されてもよい。さらに、本開示の抗体は、このような抗体の断片、又はこのような断片（例えば、可変ドメイン又は相補的決定領域（ＣＤＲ））の１つ又は複数を含むように開発された抗体を含んでもよい。
【００６８】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体を使用して、サンプル（例えば、臨床サンプル）中のＣＤ５９及び／又はＧＣＤ５９が捕捉されてもよい。
抗体の生成
本開示の抗体は、当該技術分野で公知の方法を使用して生成されてもよい。このような方法には、免疫化及びディスプレイ技術（例えば、ファージディスプレイ、酵母ディスプレイ、及びリボソームディスプレイ）が含まれてもよいが、これに限定されるものではない。抗体は、例えば、天然又は合成抗原を使用して開発されてもよい。本明細書の用法では、「抗原」は、生物において免疫応答を誘発又は誘起する実体である。免疫応答は、生物の細胞、組織及び／又は器官の異物の存在に対する反応によって特徴付けられる。このような免疫応答は、典型的には、生物による、例えば抗原又は抗原の一部などの異物に対する、１つ又は複数の抗体の産生をもたらす。本明細書の用法では、「抗原」はまた、ディスプレイライブラリ中の特異的抗体又は結合因子の結合パートナーも指す。
【００６９】
本開示の抗体は、ハイブリドーマ技術を使用して生成された抗体に由来してもよい。宿主動物（例えば、マウス、ウサギ、ヤギ、及びラマ）は、抗原に特異的に結合するリンパ球を惹起するために、抗原タンパク質の注射によって免疫化される。リンパ球が収集され、不死化細胞株と融合されて、増殖を促進するために適切な培地中で培養され得るハイブリドーマが生成されてもよい。培養されたハイブリドーマによって産生された抗体は分析に供され、標的抗原に対する抗体の結合特異性が判定されてもよい。ひとたび望ましい特性がある抗体が特定されたら、対応するハイブリドーマを限界希釈法を通じてサブクローニングされ、標準法で増殖させる。これらの細胞によって産生される抗体は、標準的な免疫グロブリン精製手順を使用して単離及び精製されてもよい。
【００７０】
組換え抗体は、本明細書の用法では、組換えＤＮＡの発現によって生成される抗体である。本開示の組換え抗体は、当該技術分野で公知の標準技術を使用して生成されてもよい。組換え抗体は、本明細書に記載の方法に従って生成されたハイブリドーマ細胞由来の抗体から得られた可変ドメインを使用して、生成されてもよい。抗体の重鎖及び軽鎖可変領域ｃＤＮＡ配列は、標準的な生化学的技術を使用して判定されてもよい。全ＲＮＡは、抗体産生ハイブリドーマ細胞から抽出され、逆転写酵素（ＲＴ）ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によってｃＤＮＡに変換される。得られたｃＤＮＡに対してＰＣＲ増幅を実行し、可変領域遺伝子を増幅してもよい。このような増幅は、重鎖及び軽鎖配列の増幅に特異的なプライマーの使用を含んでもよい。その他の実施形態では、組換え抗体は、その他の供給源から得られた可変ドメインを使用して生成され得る。これは、抗原パニングで使用されるｓｃＦｖライブラリなどの１つ又は複数の抗体断片ライブラリから選択される、可変ドメインの使用を含む。次に、得られたＰＣＲ産物はプラスミドにサブクローニングされてもよく、検証及び／又は最適化のために配列解析に供されてもよい。抗体コード配列は、発現ベクター中に配置されてもよい。ヒト化のためには、ヒト重鎖及び軽鎖定常ドメイン及び／又は可変ドメインフレームワーク領域のコード配列を使用して、相同的な又はそうでなければ対応するマウス配列が置換されてもよい。次に、得られたコンストラクトは、大規模翻訳のために、細胞（例えば、哺乳類細胞）に形質移入されてもよい。いくつかの実施形態では、組換え抗体及び／又は組換え抗体をコードするベクターは、本明細書に提示される配列のいずれかの１つ又は複数を使用して生成されてもよい。
【００７１】
本開示の抗体は、ディスプレイ技術を使用して生成されてもよい。本発明のポリペプチドを生成するために使用されるディスプレイ技術には、その内容全体が参照により援用される、米国特許出願公開第２０１５／０２８４４５５号明細書で開示されるディスプレイ技術（例えば、ディスプレイライブラリスクリーニング技術）のいずれかが含まれてもよい。いくつかの実施形態では、ディスプレイ技術（例えば、ファージディスプレイ技術）を使用して標的抗原をスクリーニングすることにより、合成抗体が、設計、選択又は最適化されてもよい。ディスプレイライブラリは、数百万〜数十億個のディスプレイ粒子（例えば、ファージ又は細胞ディスプレイ粒子）を含んでなってもよく、それぞれがそれらの表面に（例えば、ウイルスコートタンパク質又は細胞表面分子若しくはタンパク質の一部として）ユニークな抗体断片を発現する。このようなライブラリは、１つ又は複数の関心のある抗原に対する多様なレベルの親和性がある、潜在的に数百の抗体断片を選択するために使用されてもよい、豊富な多様な資源を提供してもよい（それぞれその内容全体が参照により援用される、マッカファティ（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ）ら著、１９９０年、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、第３４８巻、ｐ．５５２〜４；エドワーズ，Ｂ．Ｍ．（Ｅｄｗａｒｄｓ，Ｂ．Ｍ．）ら著、２００３年、ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー（ＪＭＢ．）、第３３４巻、ｐ．１０３〜１８；スコフィールド，Ｄ．（Ｓｃｈｏｆｉｅｌｄ，Ｄ．）ら著、２００７年、ゲノム・バイオロジー（Ｇｅｎｏｍｅ  Ｂｉｏｌ．）、第８巻、Ｒ２５４；及びペルシャード，Ｋ．（Ｐｅｒｓｈａｄ，Ｋ．）ら著、２０１０年、プロティン・エンジニアリング・デザイン・アンド・セレクション（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ）、第２３巻、ｐ．２７９〜８８）。このようなライブラリに存在する抗体断片は、フレキシブルリンカーによって結合されたＶＨ及びＶＬ抗体ドメインの融合タンパク質を含む、ｓｃＦｖ抗体断片であってもよい。場合によっては、ＣＤＲの可変ループをコードするユニークな配列を除き、ｓｃＦｖは同一配列を含有してもよい。場合によっては、ｓｃＦｖは、表面分子に連結される融合タンパク質（例えば、ファージディスプレイ粒子使用時における、ウイルスｐＩＩＩコートタンパク質のＮ末端）として発現される。ＶＬ鎖は、表面分子への複雑な取り込みに先だって、ペリプラズム中又は細胞内でのＶＨ鎖とのアセンブリのために、別々に発現されてもよい。沈殿したライブラリメンバーは、結合したディスプレイ粒子から配列決定され、所望のｓｃＦｖをコードするｃＤＮＡが得られてもよい。このような配列からの抗体可変ドメイン又はＣＤＲは、組換え抗体生成のために抗体配列に直接組み込まれ、又は変異されて、親和性成熟を通じたさらなる最適化に利用されてもよい。
【００７２】
いくつかの実施形態では、抗体は、酵母表面ディスプレイ技術を使用して生成されてもよく、その中で抗体可変ドメイン配列は、サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）の細胞表面で発現されてもよい。組換え抗体は、酵母表面で、例えば、Ａｇａ２ｐタンパク質への融合物として、関心のある抗体断片を提示することによって生じさせてもよく、タンパク質は、溶液中でタンパク質及び小型分子と相互作用する。所望の抗原に親和性のあるｓｃＦｖは、磁気分離及びフローサイトメトリーを使用して、酵母表面から単離されてもよい。数サイクルの酵母表面ディスプレイ及び分離が実施され、指向性進化を通じて、所望の特性があるｓｃＦｖが得られてもよい。酵母ディスプレイは、例えば、その内容全体が参照により援用される、チャオ，Ｇ（Ｃｈａｏ，Ｇ）ら著、ネイチャー・プロトコルズ（Ｎａｔ  Ｐｒｏｔｏｃ．）、２００６年、第１巻、第２号、ｐ．７５５〜６８に教示される方法のいずれかに従って実行されてもよい。
【００７３】
ＩｇＧ合成
いくつかの実施形態では、本開示の抗体はＩｇＧ抗体である。ＩｇＧ抗体（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４）は、本明細書中で提示される、１つ又は複数の可変ドメイン及び／又はＣＤＲアミノ酸配列（又はその断片若しくは変異型）を含んでもよい。このようなＩｇＧ抗体は、さらなる試験及び／又は製品開発のために合成されてもよい。いくつかのＩｇＧ抗体は、ＩｇＧ生成に適した発現ベクターに、所望のアミノ酸配列をコードするｃＤＮＡの１つ又は複数のセグメントを挿入することによって生成されてもよい。発現ベクターは、哺乳類細胞におけるＩｇＧ発現に適した哺乳類発現ベクターを含んでなってもよい。ＩｇＧの哺乳類発現は、生成された抗体が哺乳類タンパク質に特徴的な修飾（例えば、グリコシル化）を含むことを確実にするために、及び／又は抗体調製物が細菌発現系からのタンパク質調製物中に存在してもよい、内毒素及び／又は他の混入物を欠くことを確実にするために、実行されてもよい。
【００７４】
抗体断片及び変異型
本開示の抗体は、無傷の抗体からの抗体断片（例えば、抗原結合領域）を含んでもよい。抗体断片の例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片；二特異性抗体；直鎖抗体；並びに一本鎖抗体分子が含まれてもよいが、これに限定されるものではない。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、抗体断片から形成される多重特異性抗体を含む。抗体のパパイン消化は、それぞれに単一の抗原結合部位がある、「Ｆａｂ」断片と称される２つの同一の抗原結合断片を生じる。また、残留「Ｆｃ」断片も生成され、その名称は、それが容易に結晶化する能力を反映する。ペプシン処理は、２つの抗原結合部位を有してなおも抗原を架橋できる、Ｆ（ａｂ’）２断片をもたらす。本開示の抗体は、これらの断片の１つ又は複数を含んでなってもよい。本明細書の目的のために、「抗体」は、重鎖及び軽鎖可変ドメイン並びにＦｃ領域から構成されてもよい。
【００７５】
一実施形態では、Ｆｃ領域は、米国特許出願公開第２０１５００６５６９０号明細書に記載されるような修飾Ｆｃ領域であってもよく、Ｆｃ領域は、野生型Ｆｃ領域の対応する配列と比較して、単一アミノ酸置換を有してもよく、単一アミノ酸置換は、野生型Ｆｃ領域の特性よりも好ましい特性を有するＦｃ領域をもたらす。単一アミノ酸置換によって変化してもよいＦｃ特性の非限定な例としては、結合特性及びｐＨ条件への応答（例えば、安定性及び／又は標的親和性の変化）が挙げられる。
【００７６】
本明細書の用法では、「天然抗体」という用語は、２つの同一の軽（Ｌ）鎖及び２つの同一の重（Ｈ）鎖から構成される、通常は約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質を指す。天然抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子は知られており、それぞれを構成するセグメントは特徴がよく分かっており、記載されている（それぞれその内容全体が参照により援用される、マツダ，Ｆ．（Ｍａｔｓｕｄａ，Ｆ．）ら著、１９９８年、ザ・ジャーナル・オブ・エクスペリメンタル・メディシン（Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）、第１８８巻、第１１号、ｐ．２１５１〜６２；及びリー，Ａ．（Ｌｉ，Ａ．）ら著、２００４年、ブラッド（Ｂｌｏｏｄ）、第１０３巻、第１２号、ｐ．４６０２〜９）。各軽鎖は１つの共有ジスルフィド結合によって重鎖に連結されるが、ジスルフィド結合の数は、異なる免疫グロブリンイソタイプの重鎖間で異なる。各重鎖及び軽鎖は、典型的には、規則的間隔の鎖内ジスルフィド架橋を有する。各重鎖は、一端に重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を有し、それにいくつかの定常ドメインが続く。各軽鎖は、一端に軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、他端に定常ドメインを有し；軽鎖の定常ドメインは重鎖の第１の定常ドメインと整列し、軽鎖の可変ドメインは重鎖の可変ドメインと整列する。
【００７７】
本明細書の用法では、「可変ドメイン」という用語は、抗体間で配列が大幅に異なりうるとともに各特定の抗体の特定の抗原に対する結合及び特異性に使用される、抗体の重鎖及び軽鎖の双方に存在する特異的抗体ドメインを指す。可変ドメインは、典型的に超可変領域を含む。本明細書の用法では、「超可変領域」という用語は、抗原結合に関与するアミノ酸残基を有する可変ドメイン内の領域を指す。超可変領域内に存在するアミノ酸は、抗体の抗原結合部位の一部となる相補性決定領域（ＣＤＲ）の構造を決定する。本明細書の用法では、「ＣＤＲ」という用語は、その標的抗原又はエピトープに相補的な構造を有する、抗体の領域を指す。抗原と相互作用しない可変ドメインのその他の部分は、フレームワーク（ＦＷ）領域と称される。抗原結合部位（抗原結合部位又はパラトープとしても知られている）は、典型的に、特定の抗原と相互作用するのに必要なアミノ酸残基を含む。抗原結合部位を構成する正確な残基は、典型的には、結合した抗原との共結晶学によって解明されるが、その他の抗体との比較に基づいて、計算による評価も使用され得る（その内容全体が参照により援用される、ストロール，Ｗ．Ｒ．（Ｓｔｒｏｈｌ，Ｗ．Ｒ．）著、「治療抗体工学（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ）」、ウッドヘッド・パブリッシング（Ｗｏｏｄｈｅａｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ）、フィラデルフィア、ペンシルベニア州、２０１２年、第３章、ｐ．４７〜５４）。ＣＤＲを構成する残基の判定には、それぞれその内容全体が参照により援用される、カバット（Ｋａｂａｔ）［ウー，Ｔ．Ｔ．（Ｗｕ，Ｔ．Ｔ．）ら著、１９７０年、ジャーナル・オブ・エクスペリメンタル・メディシン（ＪＥＭ）、第１３２巻、第２号、ｐ２１１−５０；及びジョンソン，Ｇ．（Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｇ．）ら著、２０００年、ニュークリック・アシッズ・リサーチ（Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．）、第２８巻、第１号、ｐ．２１４〜８］；それぞれその内容全体が参照により援用される、チョチア（Ｃｈｏｔｈｉａ）［チョチア（Ｃｈｏｔｈｉａ）及びレスク（Ｌｅｓｋ）著、ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．）、第１９６巻、ｐ．９０１、１９８７年；チョチア（Ｃｈｏｔｈｉａ）ら著、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、第３４２巻、ｐ．８７７、１９８９年；及びアルラジカニ，Ｂ．（Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ，Ｂ．）ら著、１９９７年、ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．）、第２７３巻、第４号、ｐ．９２７〜４８］及びそれぞれその内容全体が参照により援用される、レフランク（Ｌｅｆｒａｎｃ）（レフランク，Ｍ．Ｐ．（Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．Ｐ．）ら著、２００５年、イムノーム・リサーチ（Ｉｍｍｕｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．）第１巻、第３号）、及びオネゲル（Ｈｏｎｅｇｇｅｒ）（オネゲル，Ａ．（Ｈｏｎｅｇｇｅｒ，Ａ．）及びプルックツン，Ａ．（Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ａ．）、２００１年、ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．）、第３０９巻、第３号、ｐ６５７〜７０）によって教示されるものをはじめとするが、これに限定されるものではない、番号付けスキームの使用が含まれてもよい。
【００７８】
ＶＨ及びＶＬドメインは、典型的には、それぞれ３つのＣＤＲを有する。ＶＬ  ＣＤＲは、本明細書で、可変ドメインポリペプチドに沿ってＮ末端からＣ末端に移動する際の出現順に、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３と称される。ＶＨ  ＣＤＲは、本明細書で、可変ドメインポリペプチドに沿ってＮ末端からＣ末端に移動する際の出現順に、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３と称される。ＣＤＲのそれぞれは、抗体間で配列及び長さが高度に可変的であって抗原結合ドメインに様々な三次元的構造をもたらしうるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を除いて、典型的には、好適な標準（ｃａｎｏｎｉｃａｌ）構造を有する（その内容全体が参照により援用される、ニコロウディス，Ｄ．（Ｎｉｋｏｌｏｕｄｉｓ，Ｄ．）ら著、２０１４年、ピア・ジャーナル（Ｐｅｅｒ  Ｊ）、第２巻、ｅ４５６）。場合によっては、関連する抗体のパネル間でＣＤＲ−Ｈ３が分析されて、抗体の多様性が評価されてもよい。ＣＤＲ配列を決定する種々の方法が当該技術分野で知られており、既知の抗体配列に適用されてもよい（その内容全体が参照により援用される、ストロール，Ｗ．Ｒ．（Ｓｔｒｏｈｌ，Ｗ．Ｒ．）著、「治療抗体工学（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ）」、ウッドヘッド・パブリッシング（Ｗｏｏｄｈｅａｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ）、フィラデルフィア、ペンシルベニア州、２０１２年、第３章、ｐ．４７〜５４）。
【００７９】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体はＦｖ断片として整形されてもよい。本明細書の用法では「Ｆｖ」という用語は、完全な抗原結合部位を形成するのに必要な抗体上の最小断片を含む抗体断片を指す。これらの領域は、１つの重鎖と１つの軽鎖可変ドメインとの二量体で構成され、非共有結合で緊密に結合する。Ｆｖ断片はタンパク質分解性切断によって生成され得るが、ほとんど不安定である。典型的に、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインの間にフレキシブルリンカーを挿入することによって［一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を形成する］、又は重鎖と軽鎖可変ドメインの間にジスルフィド架橋を導入することによって、安定したＦｖ断片を生成する、組換え法が当該技術分野で知られている（その内容全体が参照により援用される、ストロール，Ｗ．Ｒ．（Ｓｔｒｏｈｌ，Ｗ．Ｒ．）著、「治療抗体工学（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ）」、ウッドヘッド・パブリッシング（Ｗｏｏｄｈｅａｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ）、フィラデルフィア、ペンシルベニア州、２０１２年、第３章、ｐ．４６〜４７）。
【００８０】
本明細書の用法では、「軽鎖」という用語は、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいてκ及びλと称される、明確に異なる２つのタイプの１つに割り当てられた、任意の脊椎動物種からの抗体構成要素を指す。
【００８１】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体はｓｃＦｖとして整形されてもよい。本明細書の用法では、「一本鎖Ｆｖ」又は「ｓｃＦｖ」という用語は、ＶＨとＶＬ抗体ドメインとの融合タンパク質を指し、これらのドメインは、フレキシブルなペプチドリンカーによって、単一のポリペプチド鎖に連結する。いくつかの実施形態では、Ｆｖポリペプチドリンカーは、ｓｃＦｖが抗原結合に望ましい構造を形成できるようにする。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、抗体提示法（例えば、ファージディスプレイ、酵母ディスプレイ又はその他の提示形式）と併せて利用され、表面メンバー（例えば、ファージコートタンパク質又は細胞表面分子）と共同で発現され、所与の抗原に対する高親和性ペプチドの同定に使用される。
【００８２】
本開示の抗体は、二重特異性抗体（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）として整形されてもよい。本明細書の用法では、「二重特異性抗体」という用語は、２つの異なる抗原に結合できる抗体を指す。このような抗体は、典型的には、少なくとも２つの異なる抗体からの領域を含む。二重特異性抗体には、それぞれその内容全体が参照により援用される、リエスマラー，Ｇ．（Ｒｉｅｔｈｍｕｌｌｅｒ，Ｇ．）、２０１２年、キャンサー・イミュニティ（Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ）、第１２巻、ｐ．１２〜１８；マービン，Ｊ．Ｓ．（Ｍａｒｖｉｎ，Ｊ．Ｓ．）ら著、２００５年、アクタ・ファーマコロジカ・シニカ（Ａｃｔａ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａ  Ｓｉｎｉｃａ）、第２６巻、第６号、ｐ．６４９〜５８；及びシェーファー，Ｗ．（Ｓｃｈａｅｆｅｒ，Ｗ．）ら著、２０１１年、米国科学アカデミー紀要（ＰＮＡＳ）、第１０８巻、第２７号、ｐ．１１１８７〜９２に記載されるもののいずれかが含まれてもよい。
【００８３】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は二特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｙ）として生成されてもよい。本明細書の用法では、「二特異性抗体」という用語は、２つの抗原結合部位がある小型の抗体断片を指す。二特異性抗体は、同一ポリペプチド鎖中で軽鎖可変ドメインＶＬに連結される、重鎖可変ドメインＶＨを含む。同一鎖上の２つのドメイン間の対合を可能にするには短すぎるリンカーを使用することによって、ドメインは別の鎖の相補ドメインとの対合を強制され、２つの抗原結合部位を作り出す。二特異性抗体は、例えば、それぞれその内容全体が参照により援用される、欧州特許第４０４０９７号明細書；国際公開第１９９３０１１１６１号パンフレット；及びホリンガー（Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ）ら（ホリンガー，Ｐ．（Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ，Ｐ．）ら著、「“二特異性抗体”：小型の二価及び二重特異性抗体断片（“Ｄｉａｂｏｄｉｅｓ”：Ｓｍａｌｌ  ｂｉｖａｌｅｎｔ  ａｎｄ  ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｆｒａｇｍｅｎｔｓ）」、米国科学アカデミー紀要（ＰＮＡＳ）、１９９３年、第９０巻、ｐ．６４４４〜８）でより詳細に説明される。
【００８４】
本開示の抗体は、モノクローナル抗体であってもよい。本明細書の用法では、「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均一な細胞（又はクローン）集団から得られる抗体を指し、すなわち、モノクローナル抗体の産生中に生じうる一般的に微量に存在する可能な変異型を除いて、集団を構成する個々の抗体は同一であり及び／又は同一エピトープに結合する。異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を典型的に含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一決定基に向けられる。
【００８５】
修飾語「モノクローナル」は、抗体の実質的に均一な集団から得られるという抗体の特性を示唆し、特定の方法による抗体の産生を必要とすると解釈されるものではない。本明細書におけるモノクローナル抗体が、特定の種に由来する、又は特定の抗体クラス若しくはサブクラスに属する、抗体の対応する配列と、重鎖及び／又は軽鎖の一部が同一又は相同である「キメラ」抗体（免疫グロブリン）を含む一方で、鎖の残りの部分は、別の種に由来する、又は別の抗体クラス若しくはサブクラスに属する、抗体の対応する配列と同一又は相同であり、このような抗体の断片についても同様である。
【００８６】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体はヒト化抗体であってもよい。本明細書の用法では、「ヒト化抗体」という用語は、１つ又は複数の非ヒト（例えば、マウス）抗体源からの最小部分と、１つ又は複数のヒト免疫グロブリン源に由来する残りの部分とを含むキメラ抗体を指す。ほとんどの場合、ヒト化抗体はヒト免疫グロブリン（受容者抗体）であり、受容者の抗体の超可変領域からの残基は、所望の特異性、親和性、及び／又は能力を有する、マウス、ラット、ウサギ又は非ヒト霊長類などの非ヒト種の抗体（供与者抗体）の超可変領域からの残基によって置換される。抗体のヒト化は、その内容全体が参照により援用される、米国特許出願公開第２０１５０２８４４５５号明細書に教示される方法のいずれかに従って実行されてもよい。
【００８７】
本開示の抗体は、抗体模倣物を含んでもよい。本明細書の用法では、「抗体模倣物」という用語は、抗体の機能又は効果を模倣し、それらの分子標的に特異的且つ高親和性で結合する、任意の分子を指す。いくつかの実施形態では、抗体模倣物は、タンパク質スキャフォールドとしてフィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン（Ｆｎ３）を組み込むように設計されたモノ抗体であってもよい（米国特許第６，６７３，９０１号明細書；米国特許第６，３４８，５８４号明細書）。いくつかの実施形態では、抗体模倣物は、アフィボディ分子、アフィリン、アフィチン、アンチカリン、アビマー、センチリン、ダルピンズ（ＤＡＲＰＩＮＳ）（商標）、フィノマー及びクニッツ及びドメインペプチドをはじめとするが、これに限定されるものではない、当該技術分野で公知のものであってもよい。その他の実施形態では、抗体模倣物は、１つ又は複数の非ペプチド領域を含んでもよい。
【００８８】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、抗体変異型を含んでもよい。本明細書の用法では、「抗体変異型」という用語は、構造及び／又は機能において、天然抗体又は出発抗体に類似する修飾抗体（天然抗体又は出発抗体に関して）又は生体分子（例えば、抗体模倣物）を指す。抗体変異体は、天然抗体と比較して、アミノ酸配列、組成又は構造が変化していてもよい。抗体変異型には、イソタイプが変化した抗体（例えば、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、又はＩｇＭ）、ヒト化変異型、最適化された変異型、多重特異性抗体変異型（例えば、二重特異性変異型）、及び抗体断片が含まれてもよいが、これに限定されるものではない。
【００８９】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、ヒンジ領域がＩｇＧ４分子から除去されている「ユニボディ」を含んでもよい。ＩｇＧ４分子は不安定で軽鎖−重鎖ヘテロ二量体を互いに交換し得るが、ヒンジ領域の欠失は重鎖と重鎖の対合を完全に妨げ、Ｆｃ領域を保持して安定性及び生体内半減期を確実にしながら、高度に特異的な一価の軽／重ヘテロ二量体が残される。この立体配置では、ＩｇＧ４がＦｃＲと不十分に相互作用し一価のユニボディが細胞内シグナル伝達複合体の形成を促進できないことから、免疫活性化又は発がん性増殖のリスクを最小化させてもよい。その他の抗体は、圧縮された１００ｋＤａ抗体である、「小型化された」抗体であってもよい（例えば、ネルソン，Ａ．Ｌ．（Ｎｅｌｓｏｎ，Ａ，Ｌ．）、ｍＡｂｓ、２０１０年１月〜２月、第２巻、第１号、ｐ７７〜８３を参照されたい）。
【００９０】
抗体の調製は、モノクローナル又はポリクローナルを問わず、当該技術分野で公知の任意の方法を使用して実行されてもよい。抗体の製造のための技術は、例えば、それぞれその内容全体が参照により援用される、ハーロウ（Ｈａｒｌｏｗ）及びレーン（Ｌａｎｅ）著、「抗体、実験室マニュアル（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ）」、コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー・プレス（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、１９８８年；ハーロウ（Ｈａｒｌｏｗ）及びレーン（Ｌａｎｅ）著、「抗体の使用：実験室マニュアル（Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ）」、コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー・プレス（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ）、１９９９年；及び「治療用抗体工学：製薬業界で最も強力な成長分野を推進する現在及び将来の進歩（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：Ｃｕｒｒｅｎｔ  ａｎｄ  Ｆｕｔｕｒｅ  Ａｄｖａｎｃｅｓ  Ｄｒｉｖｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｓｔｒｏｎｇｅｓｔ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ａｒｅａ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ）」、ウッドヘッド・パブリッシング（Ｗｏｏｄｈｅａｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ）、２０１２年に記載されるように実行されてもよい。
【００９１】
多重特異性抗体
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、２つ以上のエピトープに結合してもよい。本明細書の用法では、用語「マルチボディ」又は「多重特異性抗体」は、２つ以上の可変領域が異なるエピトープに結合する、抗体を指す。エピトープは、同一又は異なる標的上にあってもよい。特定の実施形態では、多重特異性抗体は、同一又は異なる抗原上の２つの異なるエピトープを認識する「二重特異性抗体」である。
【００９２】
抗体薬物コンジュゲート
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）治療用途のために開発された抗体を含んでもよい。ＡＤＣは、１つ又は複数のカーゴ（例えば、治療剤）が（例えば、直接又はリンカーを介して）付着している、抗体である。ＡＤＣは、１つ若しくは複数の標的細胞又は組織への治療剤（例えば、薬物）の送達に有用である（パノウスキー，Ｓ．（Ｐａｎｏｗｓｋｉ，Ｓ．）ら著、２０１４年、ｍＡｂｓ、第６巻、第１号、ｐ．３４〜４５）。場合によっては、ＡＤＣは、標的とされる細胞上の表面抗原に結合するように設計されてもよい。結合すると、抗体−抗原複合体全体が内部に取り込まれ、細胞リソソームに向けられる。次に、ＡＤＣが分解されて結合したカーゴが放出されてもよい。
【００９３】
抗体配列
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、表１に列挙される翻訳されたポリペプチドの１つ又は複数を使用して生成されてもよい。シグナルペプチドは、太字でマーキングされる。成熟した抗体では、完全な抗体のアセンブリに先だって、シグナルペプチドが除去されてもよい。
【００９４】
【表１−１】
2020517306.tif 000003
【００９５】
【表１−２】
2020517306.tif 000004
【００９６】
いくつかの抗体は、前の表に列挙されるもののいずれかと少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９８．５％、少なくとも９９％、又は少なくとも９９．５％の配列同一性を有する、翻訳されたポリペプチドを使用して生成されてもよい。いくつかの抗体は、前の表に列挙されるアミノ酸配列の断片の１つ又は複数を使用して生成されてもよい。
【００９７】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、表２に列挙される核酸の１つ又は複数を使用して生成されてもよい。いくつかの抗体は、列挙されるもののいずれかと少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９８．５％、少なくとも９９％、又は少なくとも９９．５％の配列同一性を有する、１つ又は複数の核酸によってコードされた重鎖又は軽鎖を含んでもよい。いくつかの抗体は、列挙される核酸配列の１つ又は複数の断片及び／又はコドン最適化変異型を含む、核酸によってコードされてもよい。抗体は、これらの核酸、それらの変異型、及び／又はそれらの断片の１つ又は複数を担持するコンストラクトから生成されてもよい。
【００９８】
【表２−１】
2020517306.tif 000005
【００９９】
【表２−２】
2020517306.tif 000006
【０１００】
【表２−３】
2020517306.tif 000007
【０１０１】
【表２−４】
2020517306.tif 000008
【０１０２】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、表３に列挙される翻訳されたリーダアミノ酸配列の１つ又は複数を有する、翻訳された可変ドメインアミノ酸配列を含んでもよい。いくつかの抗体は、列挙されるアミノ酸配列のいずれかと少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９８．５％、少なくとも９９％、又は少なくとも９９．５％の配列同一性を有する、翻訳された可変ドメインアミノ酸配列を有してもよい。
【０１０３】
【表３】
2020517306.tif 000009
【０１０４】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、表４に列挙されるアミノ酸配列の１つ又は複数を含む、フレームワーク領域（ＦＲ）アミノ酸配列を含んでもよい。ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４は、可変ドメインのＮ末端から可変ドメインのＣ末端への位置の順に、フレームワーク領域を指す。フレームワーク領域の後には、可変ドメインの最後のＣＤＲの後にあるＦＲ４を除く、相補性決定領域（ＣＤＲ）が典型的に続く。
【０１０５】
【表４】
2020517306.tif 000010
【０１０６】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、表５に提示される重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）アミノ酸配列の１つ又は複数を含んでもよい。いくつかの抗体は、列挙されるもののいずれかと少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９８．５％、少なくとも９９％、又は少なくとも９９．５％の配列同一性を有するアミノ酸配列がある、少なくとも１つの可変ドメイン含んでもよい。いくつかの抗体は、列挙されるアミノ酸配列の１つ又は複数の断片又は変異型を有する、可変ドメインを含んでもよい。
【０１０７】
【表５】
2020517306.tif 000011
【０１０８】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、表６に列挙される翻訳されたＣＤＲポリペプチドの１つ又は複数を使用して生成されてもよい。ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３は、可変ドメインのＮ末端から可変ドメインのＣ末端までの位置の順に軽鎖可変ドメイン上に存在するＣＤＲを指す。ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３は、可変ドメインのＮ末端から可変ドメインのＣ末端までの位置の順に重鎖可変ドメイン上に存在するＣＤＲを指す。いくつかの抗体は、列挙されるもののいずれかと少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９８．５％、少なくとも９９％、又は少なくとも９９．５％の配列同一性を有する、翻訳されたポリペプチドを使用して生成されてもよい。いくつかの抗体は、列挙されるアミノ酸配列の１つ又は複数の断片を使用して生成されてもよい。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、提示されたＣＤＲ配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列と少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、又は少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有するＣＤＲを有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。場合によっては、重鎖ＣＤＲはＣＤＲ−Ｈ３である。いくつかの抗体はＶＨドメインを含み、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３は全て、提示された重鎖ＣＤＲのいずれかから、又は提示された重鎖可変ドメインの１つ又は複数と少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、又は少なくとも９０％の配列同一性を有するその変異型から選択される。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、提示されたＣＤＲ配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列と少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、又は少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有するＣＤＲを有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。場合によっては、軽鎖ＣＤＲはＣＤＲ−Ｌ３である。いくつかの抗体はＶＬドメインを含み、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３は全て、提示された軽鎖ＣＤＲのいずれかから、又は提示された軽鎖可変ドメインの１つ又は複数と少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、又は少なくとも９０％の配列同一性を有するその変異型から選択される。
【０１０９】
【表６】
2020517306.tif 000012
【０１１０】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、表７に列挙される定常領域アミノ酸配列の１つ又は複数を含んでもよい。いくつかの抗体は、列挙されるもののいずれかと少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９８．５％、少なくとも９９％、又は少なくとも９９．５％の配列同一性を有する定常ドメインアミノ酸配列を含んでもよい。いくつかの抗体は、列挙されるアミノ酸配列の１つ又は複数の断片又は変異型を含む、定常ドメインを含んでもよい。
【０１１１】
【表７】
2020517306.tif 000013
【０１１２】
エピトープ及び断片
いくつかの実施形態では、捕捉抗体は、国際公開第２０１５０８４９９４号パンフレットに記載されるｈＣＤ５９断片及び／若しくは変異型を含む又はそれらに存在する、エピトープに結合する。このような断片及び／又は変異型は、ＦＥＨＣＮＦＮＤＶＴＴＲＬＲＥＮＥＬＴＹＹＣＣＫＫＤＬ（配列番号４６）；ＦＥＨＣＮＦＮＤＶＴＴＲＬＲＥＮＥＬＴＹＹＣＣＫＫ（配列番号４７）；ＨＣＮＦＮＤＶＴＴＲＬＲＥＮＥＬＴＹＹＣＣＫＫ（配列番号４８）；ＡＣＮＦＮＤＶＴＴＲＬＲＥＮＥＬＴＹＹＣＡＡＫ（配列番号４９）；Ａｃ−ＡＣＮＦＮＤＶＴＴＲＬＲＥＮＥＬＴＹＹＣＡＡＫ−ＮＨ２（配列番号５０、Ａｃはアセチル基であり、ＮＨ２はアミン基である）；ＡＦＥＨＣＮＦＮＤＶＴＴＲＬＲＥＮＥＬＴＹＹＣＡＡＫＤＬ（配列番号５１）；ＡＦＥＨＣＮＦＮＤＶＴＴＲＬＲＥＮＥＬＴＹＹＣ（βＡ）ＫＤＬ（配列番号５２、βＡはβ−アラニンである）；又はＡＦＥＨＣＮＦＮＤＶＴＴＲＬＲＥＮＥＬＴＹＹＣ（Ａｉｂ）ＡＫＤＬ（配列番号５３、Ａｉｂはα−アミノ−イソ酪酸である）を含んでもよい。いくつかの実施形態では、これらの断片及び／又は変異型は、システイン残基間のジスルフィド結合を含んでもよい。いくつかの実施形態では、これらの断片及び／又は変異型は、Ｎ末端基及び／又はＣ末端基（例えば、ヒドロキシル基「−ＯＨ」、アセチル基「Ａｃ−」又はアミン基「−ＮＨ２」）を含んでも、又は除外してもよい。いくつかの実施形態では、捕捉抗体は、これらの断片及び／又は変異型のいずれかで哺乳類を免疫化し、免疫化哺乳類から、又は免疫化哺乳類から得られた抗体産生細胞から、得られた抗体を単離することによって生成される。いくつかの実施形態では、捕捉抗体は、免疫化哺乳類から得られた抗体アミノ酸若しくは核酸配列から、又は免疫化哺乳類から得られた抗体産生細胞から、組換え的又は合成的に生成される。
【０１１３】
いくつかの実施形態では、検出抗体は、国際公開第２０１５０８４９９４号パンフレットに記載される糖化ＣＤ５９断片及び／若しくは変異型を含む又はそれらに存在する、エピトープに結合する。このような断片及び／又は変異型は、ＮＫＣＷＫＦＥＨＣＮＦＮＤＶ（配列番号５４）；ＷＫＦＥＨ（配列番号５５）；ＮＫＡＷＫＦＥＨＡＮＦＮＤ（配列番号５６）；Ａｃ−ＮＫＡＷＫＦＥＨＡＮＦＮＤＣ−ＯＨ（配列番号５７、Ａｃはアセチル基でありＯＨはヒドロキシル基である）を含んでもよい。いくつかの実施形態では、これらの断片及び／又は変異型は、Ｎ末端基及び／又はＣ末端基（例えば、ヒドロキシル基「−ＯＨ」、アセチル基「Ａｃ−」又はアミン基「−ＮＨ２」）を含んでも、又は除外してもよい。断片及び／又は変異型は、糖化リジン残基を含んでもよい。糖化残基には、化学結合と立体化学構造の異なる配置が含まれてもよい。このような残基には、リジンの糖化及び／又は再配列中に生じる構造又は中間体が含まれてもよい。糖化残基は、下に示される構造Ｉ〜ＶＩＩのいずれかを含んでもよい。
【０１１４】
【化１】
2020517306.tif 000014
【０１１５】
いくつかの実施形態では、検出抗体は、上に提示した糖化ＣＤ５９の断片及び／又は変異型のいずれかで哺乳類を免疫化し、免疫化哺乳類から、又は免疫化哺乳類から得られた抗体産生細胞から、得られた抗体を単離することによって生成される。いくつかの実施形態では、検出抗体は、免疫化哺乳類から得られた抗体アミノ酸若しくは核酸配列から、又は免疫化哺乳類から得られた抗体産生細胞から、組換え的又は合成的に生成される。
【０１１６】
Ｋ４１糖化の調節因子
いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書で「糖化調節因子」と称される、ＣＤ５９の糖化を調節するための化合物を提供する。糖化調節因子には、小型分子、ペプチド、合成コンストラクト、融合タンパク質、アプタマー、核酸、及び抗体が含まれてもよいが、これに限定されるものではない。いくつかの糖化調節因子は、ｈＣＤ５９の残基Ｋ４１の糖化を調節してもよい。いくつかの糖化調節因子は、補体レギュレータとしてのＣＤ５９の機能を阻害することなく、ＣＤ５９の糖化を調節してもよい。ｈＣＤ５９の残基Ｋ４１の糖化を阻害する糖化調節因子は、本明細書で「Ｋ４１糖化阻害剤」と称される。Ｋ４１糖化阻害剤は、例えば、Ｋ４１に、又はＫ４１付近の１つ又は複数の残基（例えば、ポリペプチドの長さに沿ったＫ４１付近及び／又は二次及び三次タンパク質構造によるＫ４１付近）に結合し、そうでなければ相互作用してもよい。いくつかの実施形態では、Ｋ４１糖化阻害剤は、Ｋ４１における糖化を物理的に妨害し、又はＫ４１が糖化されるのを妨げるようにｈＣＤ５９タンパク質の立体構造を変化させてもよい。いくつかのＫ４１糖化阻害剤はｈＣＤ５９の残基Ｈ４４に結合し、Ｋ４１糖化に必要な化学反応を妨害してもよい。
【０１１７】
いくつかの実施形態では、Ｋ４１糖化阻害剤は、本明細書で開示される抗体を含んでもよい。このような抗体は、Ｋ４１における糖化を物理的に妨害し、又はＫ４１が糖化されるのを妨げるようにｈＣＤ５９タンパク質の立体構造を変化させてもよい。いくつかの抗体は、例えば、ヒトｈＣＤ５９のＨ４４を標的化することによって、Ｋ４１糖化を阻害してもよい。いくつかの実施形態では、このような抗体は、Ｋ４１糖化に必要な化学反応を妨害してもよい。
【０１１８】
ＩＩ．使用方法
本開示の方法は、本明細書に記載の種々の因子の存在を検出し、レベル及び又はレベルの変化を測定する方法を含む。このような因子には、標的タンパク質、翻訳後修飾、及び標準薬剤が含まれてもよいが、これに限定されるものではない。「レベル」は、検出された因子の実際の数、因子の濃度、又は相対レベルを指してもよい（例えば、検出された因子とサロゲート因子又は標準的薬剤との間の検出シグナルの比較を通じた）。このような方法には、ＣＤ５９を捕捉するための捕捉剤の使用が含まれてもよい。本明細書の用法では、「捕捉剤」という用語は、アッセイ構成要素（例えば、アッセイ標的タンパク質又は化合物）に結合できる、任意の化合物を指す。捕捉剤には、捕捉抗体が含まれてもよい。捕捉抗体には、本明細書に記載の抗体のいずれかが含まれてもよい。場合によっては、捕捉剤は、グリコシル化アッセイ構成要素に結合できるレクチンである。
【０１１９】
追加的な方法には、検出剤の使用が含まれてもよい。本明細書の用法では、「検出剤」という用語は、分析物に結合でき、又はそうでなければその存在及び／又はレベルを表示できる、アッセイ構成要素を指す。いくつかの実施形態では、検出剤は抗体（検出抗体）である。検出剤には、ＧＣＤ５９を検出するために使用される抗体が含まれてもよい。検出抗体には、本明細書に記載の任意の抗体が含まれてもよい。さらなる検出剤には、グリコシル化アッセイ構成要素を検出できるレクチンが含まれてもよい。検出剤は、検出可能な標識を含んでなってもよい。このような検出可能な標識には、ビオチン、ストレプトアビジン、アビジン、蛍光標識、酵素的標識、ルミネセンス標識、及び放射性標識が含まれてもよいが、これに限定されるものではない。いくつかの方法では、検出剤は、二次抗体を使用して検出されてもよい。
【０１２０】
いくつかの実施形態では、本発明の方法は、ＣＤ５９及び／又はＧＣＤ５９を捕捉又は検出するための技術分野で公知のその他の抗体の使用を含んでもよい。このような抗体は、それぞれその内容全体が参照により援用される、欧州特許第２３４８０５０号明細書、国際公開第２０１５０８４９９４号パンフレット、及び米国特許第９０６８００６号明細書、米国特許第９４１７２４８号明細書のいずれかに記載され及び／又は特許請求されるものを含んでもよい。
【０１２１】
方法には、タンパク質を捕捉し、このようなタンパク質上に存在する１つ又は複数の特定のエピトープを検出するための標準的な免疫学的アッセイ形式が含まれてもよい。このようなエピトープには、翻訳後修飾エピトープが含まれてもよい。翻訳後修飾エピトープには、糖化及び／又はグリコシル化エピトープが含まれてもよい。
【０１２２】
方法には、免疫学的アッセイが含まれてもよい。本明細書の用法では、「免疫学的アッセイ」は、分析物を検出するための少なくとも１つの抗体を利用する、任意のアッセイを指す。免疫学的アッセイには、酵素結合免疫吸着アッセイ（エライザ（ＥＬＩＳＡ））、免疫沈降アッセイ、免疫蛍光アッセイ、酵素免疫アッセイ（ＥＩＡ）、放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）、及びウエスタンブロット分析が含まれてもよいが、これに限定されるものではない。本開示の方法には、表面付着形式又は溶液ベース形式の使用が含まれてもよい。本明細書の用法では、「表面付着形式」という用語は、表面への１つ又は複数のアッセイ構成要素の固定化を含む方法を指す。このような表面には、アッセイプレート、膜、センサー、又は表面を含むその他の基材が含まれてもよいが、これに限定されるものではない。いくつかの実施形態では、表面付着形式には、磁気相互作用表面、ビーズ又は被覆磁性ビーズが含まれてもよい。いくつかの実施形態では、それらは強磁性標識の使用を含んでもよい。
【０１２３】
本明細書の用法では、「溶液ベース形式」という用語は、液体培地中で自由に移動できる基材上への１つ又は複数のアッセイ構成要素の固定化を含む方法を指す。溶液ベース形式に適する基材には、液体媒体中で移動可能なビーズ又はその他の粒子が含まれてもよい。溶液ベース形式を利用する方法は、結合した分析物の検出が実行されてもよい、チューブ、チャネル、又はその他の通路に液体媒体を通過させることによって、分析されてもよい。アッセイ構成要素は、変動するレベル及び／又は被覆密度で、表面又は溶液ベース形式で固定化されてもよい。固定化は、共有結合、非共有結合、水素結合、及び疎水性結合をはじめとするが、これに限定されるものではない、任意の数の相互作用の形成を通じて促進されてもよい。
【０１２４】
いくつかの実施形態では、本開示の方法は、ＣＤ５９を表面又は基材に固定化するための捕捉抗体の使用を含む。このような方法は、ＣＤ５９上に存在する特定のエピトープを検出するための検出剤（例えば、レクチン又は検出抗体）の使用をさらに含んでもよい。このようなエピトープには、糖化及び／又はグリコシル化エピトープが含まれてもよい。糖化エピトープには、ｈＣＤ５９の糖化Ｋ４１が含まれてもよい。このようなエピトープには、ＧＣＤ５９のアマドリ修飾Ｋ４１が含まれてもよい。グリコシル化エピトープには、ｈＣＤ５９及び／又はＧＣＤ５９上にＮ−グリコシル化エピトープが含まれてもよい。Ｎ−グリコシル化エピトープの検出は、検出剤としてのレクチンを使用して実行されてもよく、レクチンは、このようなＮ−グリコシル化エピトープ（ｅｐｔｉｔｏｐｅｓ）（例えば、ＧＣＤ５９のＮ−グリコシル化残基）に結合する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリコシル化エピトープの検出は、検出抗体を使用して実行されてもよい。
【０１２５】
本開示のいくつかの方法によれば、抗アマドリ修飾ＧＣＤ５９抗体は、ＧＣＤ５９を表面又は基材に固定化するための捕捉抗体として使用されてもよい。このような方法は、ＧＣＤ５９の非糖化エピトープを認識する検出抗体の使用をさらに含んでもよい。いくつかの方法には、ＧＣＤ５９のグリコシル化エピトープを認識する検出抗体の使用が含まれてもよい。このようなエピトープには、ＧＣＤ５９のＮ−グリコシル化エピトープが含まれてもよい。
【０１２６】
本開示の方法は、１つ又は複数の内部対照の使用を含んでもよい。このような内部対照には、血漿アッセイ対照が含まれてもよい。いくつかの方法は、アッセイ希釈剤、コンジュゲート希釈剤、及び洗浄緩衝液の１つ又は複数を含む。場合によっては、方法は、還元剤、酸化剤、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、及び／又はβ−メルカプトエタノール（ＢＭＥ）の１つ又は複数を有する少なくとも１つの緩衝剤を含む。
【０１２７】
いくつかの実施形態では、本開示の方法は、それぞれその内容全体が参照により援用される、欧州特許第２３４８０５０号明細書、国際公開第２０１５０８４９９４号パンフレット、及び米国特許第６８３５５４５号明細書、米国特許第９０６８００６号明細書、米国特許第９４１７２４８号明細書のいずれかに記載される方法のいずれかを実行するための本明細書に記載の抗体の１つ又は複数の使用を含んでもよい。
【０１２８】
濃度レベルを判定する方法には、標的タンパク質の濃度を判定するための標準曲線との比較が含まれてもよい。標準曲線は、標準薬剤の一連の濃度を有するサンプルから得られるデータのセットである。本明細書の用法では、「標準薬剤」は、アッセイで検出される標的タンパク質と同一の又薬剤は代表的な薬剤である。いくつかの実施形態では、標準薬剤はサロゲート化合物である。本明細書の用法では、「サロゲート化合物」は、標的タンパク質又はその他の分子の１つ又は複数の特徴を呈する化合物である。このような特徴には、１つ又は複数の標的タンパク質上に存在するエピトープが含まれてもよい。いくつかの実施形態では、サロゲート化合物は、ＣＤ５９断片又はその変異型を含む。いくつかの実施形態では、サロゲート化合物は、配列番号５０を含む断片を含む。いくつかの実施形態では、捕捉剤がこのような断片に結合する。いくつかの実施形態では、サロゲート化合物は、糖化ＣＤ５９断片又はその変異型を含む。糖化断片には、配列番号５７が含まれてもよい。このような断片には、糖化リジン残基が含まれてもよい。いくつかの実施形態では、糖化リジン残基は、グルシトールリジンを含む。いくつかの実施形態では、糖化リジン残基は、アマドリ修飾糖化リジンを含む。いくつかの実施形態では、検出剤がこのような断片に結合する。サロゲート化合物には、１つ又は複数の非タンパク質構成要素が含まれてもよい。このような非タンパク質構成要素には、天然又は標的タンパク質上に存在しない、リンカー、標識（例えば、検出可能標識）、部分、又はその他の特徴が含まれてもよい。いくつかの実施形態では、サロゲート化合物は、それぞれその内容全体が参照により援用される、米国特許第９，４１７，２４８号明細書又は米国特許出願公開第２０１６／０２９９１５０号明細書で開示されるもののいずれかを含んでもよい。このようなサロゲート化合物には、米国特許第９，４１７，２４８号明細書の図２７で描写される化合物が含まれてもよい。
【０１２９】
いくつかの実施形態では、標的タンパク質の濃度等価物を使用して、標的タンパク質の濃度が示される。本明細書の用法では、「濃度等価物」は、サロゲート化合物を使用して作成された標準曲線との比較に基づく濃度の指標である。
【０１３０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の診断、スクリーニング、及び／又はモニタリングの方法には、対象からの因子レベルと閾値又は受信者動作特性（ＲＯＣ）曲線との比較が含まれてもよい。
【０１３１】
いくつかの実施形態では、本開示は、治療、診断、及びモニタリング用途の方法を提供する。このような方法には、本明細書に記載の１つ又は複数の抗体の使用が含まれてもよい。このような抗体には、抗アマドリ修飾ＧＣＤ５９抗体が含まれてもよいが、これに限定されるものではない。
【０１３２】
治療用途
いくつかの実施形態では、本発明の方法は、対象における１つ又は複数の疾患及び／又は障害の発生又は症状を治療、予防、及び／又は低減するために使用されてもよい治療用途を含む。本明細書の用法では、「対象」は、任意の人、個人、胎児、新生児、乳児、動物、及び／又は患者である。対象には、胎児対象が含まれてもよい。本明細書の用法では、「胎児対象（ｇｅｓｔａｔｉｏｎａｌ  ｓｕｂｊｅｃｔ）」は、子宮内に存在する対象であるが、この用語は、対象が子宮内外の双方の期間を含む期間にわたり対象を指すために使用されてもよい。例えば、胎児対象の診断は、出産時又は出産後に確認された診断を指してもよい。本明細書の用法では、「妊娠対象（ｐｒｅｇｎａｎｔ  ｓｕｂｊｅｃｔ）」又は「妊娠キャリア（ｇｅｓｔａｔｉｏｎａｌ  ｃａｒｒｉｅｒ）」は、対象の子宮内に胎児対象を保有する個人を指し、胎児対象との生物学的関係性の有する又は有しない個人を含む。本明細書の用法では、「乳児対象」という用語は、乳児である対象を指し、出生から約１才までの対象を包含する。対象は、治療を受けていてもよく、治療を必要としていてもよく、治療を受けたことがあってもよく、又は可能な若しくは潜在的な治療についてスクリーニング又は層別化されてもよい。対象には、例えば、霊長類、非ヒト霊長類などの動物、又は家畜などの動物が含まれてもよい。
【０１３３】
糖尿病
いくつかの実施形態では、本開示の方法を使用して、１つ又は複数の糖尿病関連徴候の発生又は症状が、治療、予防、及び／又は低減されてもよい。本明細書の用法では、「糖尿病関連徴候」という用語は、血中グルコースレベルの上昇、細胞グルコース取り込みの低下、インスリンレベルの低下、又はインスリン感受性の低下に関連する任意の疾患、障害、及び／又は状態を指す。糖尿病関連徴候としては、糖尿病及び前糖尿病が挙げられる。
【０１３４】
いくつかの実施形態では、本開示は、補体機能不全、溶血性疾患、発作性夜間血色素尿症、非定型溶血性尿毒症症候群、創傷治癒、臓器移植に伴う合併症、血管徴候、及び加齢黄斑変性に関連する徴候が含まれてもよいが、これに限定されるものではない、１つ又は複数の糖尿病関連徴候を診断、モニタリング、スクリーニング、及び／又は治療する方法を提供する。いくつかの実施形態では、糖尿病関連徴候には、前臨床糖尿病関連徴候が含まれてもよい。前臨床糖尿病関連徴候には、糖尿病の臓器特異的合併症、前臨床糖尿病性末梢神経障害、前臨床糖尿病性腎障害、前臨床糖尿病性網膜症、及び前臨床糖尿病性血管疾患の素因が含まれてもよいが、これに限定されるものではない。
【０１３５】
糖尿病は、血中グルコースレベルの上昇を特徴とする疾患であり、高血糖症とも称される。インスリンは、グルカゴン及びエピネフリンをはじめとするが、これに限定されるものではないその他のホルモンと並んで、血中の正常なグルコースレベルを維持するために重要である。細胞の受容体に結合するインスリンは、グルコースの細胞内取り込みを促進し、細胞にエネルギー源を提供し、血中グルコースレベルを低下させる（ロジャー，Ｗ．（Ｒｏｄｇｅｒ，Ｗ．）著、カナディアン・メディカル・アソシエーション・ジャーナル（ＣＭＡＪ）、１９９１年、第１４５巻、第１０号、ｐ．１２２７〜３７）。インスリンは膵臓β細胞によって発現され、血中グルコースレベルが上昇するとその発現は上方制御される。糖尿病では、インスリンレベル及び／又はインスリンに対する感受性が妨害され、細胞のグルコース取り込みが減少し、グルコースの循環レベルが上昇する。糖尿病の２つの主要な形態は、インスリン依存型（本明細書では若年性糖尿病又はＩ型糖尿病とも称される）及びインスリン非依存型（本明細書では成人発症型糖尿病又はＩＩ型糖尿病とも称される）である。Ｉ型糖尿病はあまり一般的でなく、典型的には、インスリンの主要な供給源であるβ細胞の自己免疫性破壊によって引き起こされる。糖尿病患者の９０％以上は、ＩＩ型糖尿病に罹患している。この形態の疾患は、インスリン分泌の低下及び／又はインスリンに対する感受性の低下（例えば、細胞におけるグルコース取り込みを刺激するインスリンの能力の低下）によって特徴付けられる（ロジャー，Ｗ．（Ｒｏｄｇｅｒ，Ｗ．）著、「インスリン非依存型（ＩＩ型）糖尿病（Ｎｏｎ−ｉｎｓｕｌｉｎ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ（Ｔｙｐｅ  ＩＩ）ｄｉａｂｅｔｅｓ  ｍｅｌｌｉｔｕｓ）」、カナディアン・メディカル・アソシエーション・ジャーナル（ＣＭＡＪ）、１９９１年、第１４５巻、第１２号、ｐ．１５７１〜８１）。ＩＩ型糖尿病は、遺伝的易罹患性にある程度起因すると考えられており、過体重及び／又は肥満の対象において最も頻繁に発生する。
【０１３６】
本明細書の用法では、「糖尿病患者」という用語は、１つ又は複数のタイプのインスリン欠乏症（例えば、インスリンレベルの低下及び／又はインスリン感受性の低下）を含む個人を指す。糖尿病患者という用語には、若年性糖尿病（Ｉ型糖尿病）、成人発症型糖尿病（ＩＩ型糖尿病）、妊娠性糖尿病（ＧＤＭ）、及び任意のその他のインスリン欠乏症状態がある個人が含まれるが、これに限定されるものではない。「糖尿病」という用語は技術用語であり、医療専門職に従事している人々に知られ、理解されており、その正式な定義は「ハリソンの医学の原則（Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）」、（ハリソン（Ｈａｒｒｉｓｏｎｓ）著、第１４巻、「内科の原則（Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）」、ファウチ，Ａ．Ｓ．（Ｆａｕｃｉ，Ａ．Ｓ．）、Ｅ．ブラウンウォルド（Ｅ．Ｂｒａｕｎｗａｌｄ）、Ｋ．Ｊ．イッセルバッハー（Ｋ．Ｊ．Ｉｓｓｅｌｂａｃｈｅｒ）、Ｊ．Ｄ．ウィルソン（Ｊ．Ｄ．Ｗｉｌｓｏｎ）、Ｊ．Ｂ．マーティン（Ｊ．Ｂ．Ｍａｒｔｉｎ）、Ｄ．Ｌ．カスパー（Ｄ．Ｌ．Ｋａｓｐｅｒ）、Ｓ．Ｌ．ハウザー（Ｓ．Ｌ．Ｈａｕｓｅｒ）、Ｄ．Ｌ．ロンゴ（Ｄ．Ｌ．Ｌｏｎｇｏ）編、マグローヒル（ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ）、ニューヨーク、１９９９年）に見いだされ得る。
【０１３７】
妊娠性糖尿病（ＧＤＭ）
いくつかの実施形態では、本開示の方法は、妊娠性糖尿病（ＧＤＭ）の検出、診断及び／又は予後に有用であってもよい。本明細書の用法では、「妊娠糖尿病」又は「ＧＤＭ」という用語は、血中グルコースレベルの上昇、炭水化物不耐性、及び／又は妊娠によって引き起こされるインスリン感受性の低下を特徴とする糖尿病状態を指す。場合によっては、各国のＧＤＭ診断は、そこで従事している医師に勧告を出す、このような国々の専門機関によって設定された異なる基準に依存してもよい。ＧＤＭは妊娠の１８％にまで影響を及ぼして、短期的及び長期的双方の影響を含めて、母親と子孫の双方に悪影響を及ぼす結果をもたらすこともある。現在、妊娠中の女性対象のＧＤＭの診断及びモニタリングは、血中グルコースレベルの測定に大きく依存している。血中グルコースは絶えず変化し、食事や活動レベルをはじめとする外部要因によって影響を受ける。グルコースレベルは毎時間、変化しうる。これは、試験を受ける対象に食餌の要件及び／又は制限を課すことによって、ＧＤＭ試験を複雑にする。
【０１３８】
ＧＤＭは、妊婦に影響を及ぼす最も多く見られる障害の１つであり、妊娠中、出産時、さらには出産後も合併症のリスクがより高くなる。さらに、このような合併症は、母親及び子孫の双方に影響を及ぼしうる。ＧＤＭがある個人は、炭水化物をエネルギーに適切に分解する能力を欠く（オーカン，Ｎ．（Ｏｋｕｎ，Ｎ．）著、カナディアン・ファミリー・フィジシャン（Ｃａｎ．Ｆａｍ．Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ．）、１９９７年、第４３巻、ｐ．８８〜９３）。場合によっては、ＧＤＭ診断は、高い血中グルコースレベルの検出を通じて、及び／又は妊娠中のグルコース負荷に応答する能力の低下の観察を通じて、実行されてもよい。このような診断は、妊娠第三期に最も頻繁に発生する。ＧＤＭをもたらす機序は未だに不明確であるが、場合によっては、妊娠中に上昇するホルモンが、インスリン抵抗性をはじめとするが、これに限定されるものではない、正常なインスリンシグナル伝達を妨げることもあると考えられる。このインスリンシグナル伝達機能不全は、細胞のグルコース取り込みの減少、及び血中グルコースレベルの上昇をもたらす。ＧＣＤ５９レベルは、ＧＤＭと診断された対象をはじめとする、異なるレベルの耐糖能異常を示す対象において、上昇しうる。
【０１３９】
ＧＤＭスクリーニング及び診断
ＧＤＭは、妊娠の最も一般的な医学的合併症の１つである。各国において、ＧＤＭ診断は、開業医に勧告を出す責任を負う専門機関によって設定された基準によって、決定されてもよい。ＧＤＭ診断へのアプローチ方法については、米国内の専門機関の間、並びに米国内の専門機関と海外の専門機関との間で、進行中の議論がある。このような米国の専門機関には、米国国立衛生研究所（ＮＩＨ）、米国糖尿病協会（ＡＤＡ）、米国産婦人科医会議（ＡＣＯＧ）が含まれてもよいが、これに限定されるものではない。このような国際機関には、国際糖尿病・妊娠学会（ＩＡＤＰＳＧ）が含まれてもよいが、これに限定されるものではない。米国及び海外の専門機関は、異なる研究、そのような研究の異なる分析に基づいてアプローチを調整してもよく、医療及び経済的圧力の影響を受けることもある。確かに、ＧＤＭを定義する要因及び診断の基準は、時間経過と共に変化しうる。このように、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の本開示の方法は、妊婦、胎児、及び新生児の健康に関与する各国の専門機関によって出された、最新の勧告に従って実施されてもよい。
【０１４０】
いくつかの現行の米国の慣行によれば、ＧＤＭについて、全ての妊婦のスクリーニングが提案されている。場合によっては、スクリーニングは、患者病歴のレビュー、臨床リスク因子の評価、及び／又はグルコース負荷を含む１つ又は複数の検査を含んでなってよい。本明細書の用法では、「グルコース負荷」という用語は、対象へのグルコースの投与を特徴とする試験構成要素を指す。グルコース負荷試験は、典型的には、グルコース負荷に対する対象の応答を評価する。これは、血中グルコースレベルを分析することを含んでなってもよい。グルコース負荷中に投与されるグルコースの量は、変動してもよい。典型的な試験は、約５０ｇ〜約１００ｇのグルコースの投与を含む。その他の実施形態では、７５ｇのグルコースが投与される。場合によっては、血漿グルコースレベルは、１回又は複数回のグルコース負荷後、又は食後に評価されてもよい。いくつかの実施形態では、ＧＣＤ５９検出に関連する本開示の方法は、絶食の有無にかかわらず対象で実行されてもよい。いくつかの方法は、グルコース負荷を伴う又は伴わない対象で実行されてもよい。
【０１４１】
ＧＤＭを発症するリスクが最も低い「低リスク」の妊娠対象は、２５才未満であり、正常体型指数を有し、糖尿病の家族歴がなく（第一度近親者のレベルで）、異常なグルコース代謝の病歴がなく、芳しくない産科の結果の病歴がなく、高リスクの民族（例えば、ヒスパニック、北米先住民、アフリカ系米国人、及び南アジア系）でない対象を含む。妊娠対象のリスク評価は、典型的には、出産前の最初の来院中に実行される。ＧＤＭを発症するリスクがより高い女性（例えば、肥満、ＧＤＭの個人歴、糖尿症、糖尿病の家族歴など）は、典型的に、できる限り速やかに検査を受ける。このような女性の最初の検査が陰性の場合、妊娠２４週〜２８週の間の再検査が推奨される。
【０１４２】
高い血漿グルコースレベルは、グルコース負荷の非存在下で、ＧＤＭの指標となってもよい。本明細書で開示されるいくつかの方法は、空腹時グルコース試験を含む。このような試験に従って、空腹時血漿グルコース（ＦＰＧ）レベル判定されてもよい。空腹時血漿グルコースレベルは、絶食期間の直後に測定されたグルコースのレベルを指す。絶食の期間は、約１時間〜約２４時間であってもよい。特定の実施形態では、ＦＰＧレベルは、約１２時間の絶食後に測定されてもよい。医療基準に関する米国糖尿病協会（ＡＤＡ）の勧告によれば、妊娠２４〜２８週におけるＧＤＭ診断は、顕性糖尿病と以前に診断されていない女性におけるＦＰＧ≧９２ｍｇ／ｄＬ（５．１ｍｍｏｌ／Ｌ）の場合に、下されるべきである（米国糖尿病協会（ＡＤＡ）、ダイアベーテス・ケア（Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ）、第３７巻、（補遺１）、Ｓ１４〜Ｓ８０、２０１４年）。国際糖尿病・妊娠学会（ＩＡＤＰＳＧ）によれば、ＦＰＧ≧９２ｍｇ／ｄＬ（５．１ｍｍｏｌ／Ｌ）であるが＜１２６ｍｇ／ｄＬ（７．０ｍｍｏｌ／Ｌ）の場合は、出生前の最初の来院時にＧＤＭの診断を行うことが推奨される。（メツガー，Ｂ．Ｅ．（Ｍｅｔｚｇｅｒ，Ｂ．Ｅ．）、ダイアベーテス・ケア（Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ）、第３３巻、ｐ．６７６、２０１０年）。いくつかの実施形態では、対象におけるＧＣＤ５９を評価するための本明細書に記載の方法は、ＦＰＧの評価と組み合わせて実行されてもよい。本開示のいくつかの方法は、ＡＤＡ及び／又はＩＡＤＰＳＧによって承認されるＧＤＭ診断レベルの範囲内又は範囲外のＦＰＧレベルの判定に先だって又はそれに応答して、実行されてもよい。
【０１４３】
いくつかの実施形態では、ランダムグルコース試験が実施されてもよい。このような試験は、ランダムな血漿グルコースレベル（カジュアル血漿グルコースレベルとも称される）を測定する。ランダムグルコースレベルとは、いかなる摂食制限及び／又は要件（例えば、絶食）もなしで、得られたグルコースレベルを指す。妊娠対象では、２００ｍｇ／ｄｌを超えるランダム血漿グルコースレベルは、そのような対象におけるＧＤＭを示唆する。特定の実施形態では、ＧＤＭの診断を確認するために、ＦＧＰレベル及びランダム血漿レベルの双方について、翌日、２回目の測定が必要とされる。本発明のいくつかの実施形態では、ＧＣＤ５９レベルもまた、摂食制限及び／又は要件（例えば、絶食）なしで得られてもよい。
【０１４４】
高血糖が微妙な場合、診断にはその他のアプローチが必要であってもよい。高リスクと同定された妊娠対象では、一段階のアプローチで十分でありうる。一段階アプローチによれば、診断は、経口グルコース負荷試験（ＯＧＴＴ）によって、事前の血糖スクリーニングなしに行われてもよい。平均リスクの個人に対しては、典型的には、二段階のアプローチが実行される。二段階アプローチによれば、グルコース負荷を含む最初のスクリーニングが実施される。二段階アプローチの最初のスクリーニングでは、２００１年に出された米国産科婦人科学会（Ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｉａｎｓ）の勧告は、５０ｇで１時間の経口グルコース負荷試験（ＧＣＴ）の使用を求めている（産科診療委員会（Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｎ  Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ）、米国産科婦人科学会（Ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｉａｎｓ  ａｎｄ  Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｉｓｔｓ）：委員会意見書（Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  Ｏｐｉｎｉｏｎ）、２０１１年）。１時間の経口ＧＣＴは、５０ｇのグルコースの経口投与の１時間後に血糖値を測定する。ＧＤＭがある妊娠対象の８０％は、１３０ｍｇ／ｄｌのカットオフ値を超える血糖値を含み、９０％は、１４０ｍｇ／ｄｌのカットオフ値を超えるレベルを含む。本明細書の用法では、「カットオフ値」という用語は、診断の決定又はその他の種類の決定に関して指標となりうる値又はレベルを指し、所与のカットオフ未満のレベルは、所定のカットオフを超えるレベルに基づく決定とは異なる決定をもたらす（米国糖尿病協会（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）、ダイアベーテス・ケア（Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ）、第３１巻、第１号、Ｓ６２〜Ｓ６７）。
【０１４５】
二段階アプローチの第２段階では、１００ｇのＯＧＴＴが実行されてもよい。本明細書の用法では、「経口耐糖能試験」又は「ＯＧＴＴ」という用語は、身体がグルコースを利用する能力を測定する試験を指す。このような試験は典型的には、対象が８〜１２時間食事をしていない午前中に始まる。ベースライン濃度は、最初の血液サンプルに基づいて確立される。本明細書の用法では、「ベースライン」という用語が測定値、レベル又は値を指す場合、引き続く測定値、レベル又は値が比較されてもよい、初期測定値、レベル又は値を指す。最初の血液サンプルが採取された後、対象は、測定されたグルコース濃度の飲用グルコース溶液を与えられる。１００ｇのＯＧＴＴでは、１００ｇのグルコースがグルコース溶液中で投与される。対象は典型的には、５分間の時間内に飲料を飲み干す必要がある。最後に、ＯＧＴＴは、血中グルコース及び／又はインスリンレベルをモニターするために、引き続いて血液サンプルを取得することを含む。１００ｇのＯＧＴＴによれば、妊娠対象の血中グルコースレベルが、ベースライン読み取りで９５ｍｇ／ｄｌのカットオフ値、グルコース投与の１時間後の１８０ｍｇ／ｄｌのカットオフ値、グルコース投与の２時間後の１５５ｍｇ／ｄｌのカットオフ値、及び／又はグルコース投与の３時間後の１４０ｍｇ／ｄｌのカットオフ値を超える場合に、ＧＤＭの診断が下されてもよい。いくつかの実施形態では、ＧＤＭの診断は、４つの試験のうち２つが血中グルコースレベルの上昇をもたらすことを必要としてもよい（例えば、本明細書に記載の評価のいずれかに従って）。
【０１４６】
場合によっては、ＧＤＭ診断への二段階アプローチの２番目のステップにおいて、７５ｇのＯＧＴＴが実行される。７５ｇのＯＧＴＴは、７５ｇのグルコースのみが投与されることを除いては、１００ｇのＯＧＴＴに従って実行されてもよい。７５ｇのＯＧＴＴによれば、妊娠対象の血中グルコースレベルが、ベースライン読み取りで９５ｍｇ／ｄｌのカットオフ値、グルコース投与の１時間後の１８０ｍｇ／ｄｌのカットオフ値、及び／又はグルコース投与の２時間後の１５５ｍｇ／ｄｌのカットオフ値を超える場合に、ＧＤＭの診断が下されてもよい。いくつかの実施形態では、ＧＤＭの診断は、４つの試験のうちの２つが血中グルコースレベルの上昇をもたらすことを必要としてもよい。
【０１４７】
場合によっては、ＧＤＭスクリーニング中に、食後２時間のグルコース試験が実行される。食後２時間のグルコース試験は、食後２時間の血中グルコースレベルの分析を含む。
場合によっては、ＧＤＭスクリーニング中に、１，５−アンヒドログルシトール試験が実行されてもよい。１，５−アンヒドログルシトールのレベルは、高血糖（血糖値が１８０ｍｇ／ｄｌを超える）期間中に低下し、高血糖状態が終了した後に、正常に戻るまで最大２週間を要する（マギル，Ｊ．Ｂ．（ＭｃＧｉｌｌ，Ｊ．Ｂ．）ら著、ダイアベーテス・ケア（Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ）、２００４年、第２７巻、第８号、ｐ．１８５９〜６５）。１，５−アンヒドログルシトール試験は、対象が長期間にわたり高血糖に耐えているかどうかを判定するために行われてもよい。
【０１４８】
場合によっては、ＧＤＭスクリーニング中に、ヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）試験が実行されてもよい。このような試験は、血中のヘモグロビンの糖化バージョンであるＨｂＡ１ｃのレベルを測定する。ＨｂＡ１ｃレベルは、高血糖の期間中に増加する。ＨｂＡ１ｃは、ＨｂＡ１ｃを含む赤血球が置換されるまで約８週間〜約１２週間血中に残留し、ＨｂＡ１ｃは、その期間中の全体的な血中グルコースレベルの良好な長期的読み取り値になる（ｈｔｔｐ：／／ｍｅｄｗｅｂ．ｂｈａｍ．ａｃ．ｕｋ／ｅａｓｄｅｃ／ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ／ｗｈａｔ＿ｉｓ＿ｔｈｅ＿ｈｂａ１ｃ．ｈｔｍ）。
【０１４９】
いくつかの実施形態では、ＧＤＭスクリーニング中に、フルクトサミン試験が実行されてもよい。フルクトサミンレベルは、高血糖状態で上昇する。フルクトサミンレベルの上昇は、高血糖状態が鎮まった後に２〜３週間上昇したままであり、それらは、高い血中グルコースレベルの良好な長期的指標になる（デルピエール，Ｇ．（Ｄｅｌｐｉｅｒｒｅ，Ｇ．）ら著、バイオケミストリー・ジャーナル（Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ．）、２００２年、第３６５巻、ｐ．８０１〜８）。
【０１５０】
いくつかの実施形態では、対象サンプルは、妊娠前に取得され分析されてもよい。このような対象サンプルは、女性対象から取得されてもよい。対象サンプルはまた、現在及び／又は将来の妊娠において、ＧＤＭ及び／又は子癇前症を発症するリスクのレベルを判定するために使用されてもよい。
【０１５１】
いくつかの実施形態では、本開示の方法は、本明細書に記載の試験のいずれかと組み合わされてもよい。このような試験には、グルコース負荷試験、経口グルコース負荷試験、空腹時グルコース試験、ランダムグルコース試験、食後２時間グルコース試験、ヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）試験、フルクトサミン試験、及び１，５−アンヒドログルシトール試験が含まれてもよいが、これに限定されるものではない。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、ＧＤＭ又はその他の糖尿病状態の診断、予後及び／又はモニタリングの目的で、このような試験と組み合わされてもよい。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、ＩＩ型糖尿病の産後スクリーニングのために使用されてもよい。
【０１５２】
いくつかの実施形態では、本開示の方法は、その他の糖化タンパク質の検出と組み合わされてもよい。体液内に存在するその他の多くのタンパク質は、糖化される可能性があるアミノ基を含む。このようなタンパク質には、糖化アルブミン、糖化ヘモグロビン、糖化免疫グロブリン、糖化ヘモペキシン、糖化ビタミンＤ結合タンパク質、糖化フィブリノーゲンα鎖、糖化アポリポタンパク質Ａ１、糖化トランスフェリン、糖化マクログロブリンα２、糖化補体成分４Ａ、糖化フィブリノーゲンβ鎖、糖化フィブリノーゲンα鎖、糖化ａｂヒドロラーゼドメイン含有タンパク質１４Ｂ、糖化アミロライド感受性アミンオキシダーゼ銅含有、糖化アンギオテンシン変換酵素イソ型１前駆体、糖化ペプチダーゼ系統群Ｍ２アンギオテンシン変換酵素、糖化アコニターゼ１、糖化リソソーム酸ホスファターゼイソ型１前駆体、糖化膵臓炎関連タンパク質、糖化α−アクチニン−４、トロンボスポンジン１型モチーフを有する糖化メタロプロテイナーゼ、糖化アスパルチルグルコサミニダーゼ、糖化アデノシルホモシステイナーゼ、糖化α−２−ＨＳ−糖タンパク質、糖化アルコールデヒドロゲナーゼＮＡＤＰ＋、糖化アルドケト還元酵素ファミリー１、糖化アルデヒドデヒドロゲナーゼファミリー１ファミリーメンバーＬ１、糖化アルドラーゼＢフルクトース二リン酸、糖化膵臓アミラーゼＡ、糖化アポリポタンパク質Ａ４が含まれてもよい（ウキタ（Ｕｋｉｔａ）ら著、クリニカル・ケミストリー（Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．）、１９９１年、第３７巻、ｐ．５０４；ヨハンセン（Ｊｏｈａｎｓｅｎ）ら著、グリコバイオロジー（Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌ．）、２００６年、第１６号、ｐ．８４４；及びデービス（Ｄａｖｉｅｓ）ら著、ジャーナル・オブ・エクスペリメンタル・メディシン（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．）、１９８９年、第１７０号、ｐ．６３７）。いくつかの実施形態では、ＧＣＤ５９は、上に列挙される糖化タンパク質のいずれかを含むバイオマーカのパネル又はアレイの一部として検出されてもよい。
【０１５３】
ＧＤＭカテゴリー
いくつかの実施形態では、妊娠対象は、特定の基準に基づいて疾患の異なるサブカテゴリーに入れられてもよい。このような２つのカテゴリーには、耐糖能障害（ＩＧＴ）のあるカテゴリー及び空腹時血糖値の異常（ＩＦＧ）のあるカテゴリーが含まれる。これらのカテゴリーは、グルコースレベルが正常を超えているが、ＧＤＭのレベルまで上昇していない対象、又はＧＤＭ診断の要件を満たしていない対象向けに指定されている。このようなカテゴリーへの対象の位置付けを決定する要因は国毎に異なってもよく、このような国々で従事している医師に勧告を提供する責任を負う、このような国々の専門機関によって管理されてもよい。
【０１５４】
いくつかの実施形態では、妊娠対象は、このような対象における空腹時グルコースレベルが、正常絶食時グルコースレベル（例えば、先に記載されている評価によると、９２ｍｇ／ｄＬ未満）のもの、及びそのレベルがＧＤＭの暫定診断につながるもの［場合によっては、レベルが≧９２ｍｇ／ｄＬ（５．１ｍｍｏｌ／Ｌ）であり、又はレベルが≧９２ｍｇ／ｄＬ（５．１ｍｍｏｌ／Ｌ）であるが＜１２６ｍｇ／ｄＬ（７．０ｍｍｏｌ／Ｌ）である］と比較して、約１００ｍｇ／ｄｌ〜約１２５ｍｇ／ｄｌを含む場合に、ＩＦＧと診断されてもよい。場合によっては、妊娠対象は、ＯＧＴＴ結果の後にＩＧＴと診断されてもよい。場合によっては、ＩＧＴがある妊娠対象は、正常レベルのもの（レベルが１４０ｍｇ／ｄｌ未満の場合）、及びそのレベルがＧＤＭの暫定診断につながるもの（レベルが２００ｍｇ／ｄｌを超える場合）と比較して、グルコース投与の２時間後に、約１４０ｍｇ／ｄｌ〜約１９９ｍｇ／ｄｌの血中グルコースレベルを含んでなってもよい。
【０１５５】
いくつかの実施形態では、ＩＧＴ及び／又はＩＦＧを有する妊娠対象は、前糖尿病を有すると称される。本明細書の用法では、「前糖尿病」という用語は、糖尿病を発症する高リスクを特徴とする状態を指す（米国糖尿病協会（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）、ダイアベーテス・ケア（Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ）、２００８年、第３１巻、第１号、Ｓ６２〜Ｓ６７）。前糖尿病のカテゴリーへの対象の指定を決定する要因は国毎に異なってもよく、このような国々で従事している医師に勧告を提供する責任を負う、このような国々の専門機関によって管理されてもよい。
【０１５６】
場合によっては、ＧＤＭに罹患している妊娠対象は、本書では「ホワイトのＧＤＭクラス」と称される、プリシラ・ホワイト博士によって開発されたＧＤＭのクラスを含むカテゴリーに割り当てられてもよい（その全体が参照により本明細書に援用される、ダン，Ｐ．Ｍ．（Ｄｕｎｎ，Ｐ．Ｍ．）著、「ボストンのプリシラ・ホワイト博士（１９００年生まれ、１９８９年死去）と妊娠糖尿病（Ｄｒ．Ｐｒｉｓｃｉｌｌａ  Ｗｈｉｔｅ（１９００−１９８９）  ｏｆ  Ｂｏｓｔｏｎ  ａｎｄ  ｐｒｅｇｎａｎｃｙ  ｄｉａｂｅｔｅｓ）」、アーカイブス・オブ・ディジーズ・イン・チャイルドフッド・フェータル・アンド・ネオネイタル・エディション（Ａｒｃｈ  Ｄｉｓ  Ｃｈｉｌｄ  Ｆｅｔａｌ  Ｎｅｏｎａｔａｌ  Ｅｄ．）、２００４年５月、第８９巻、第３号、Ｆ２７６〜８）。このようなＧＤＭクラスには、表８に列挙されるもののいずれかが含まれてもよい。
【０１５７】
【表８】
2020517306.tif 000015
【０１５８】
ホワイトのＧＤＭクラスには、クラスＡ１、クラスＡ２、クラスＢ、クラスＣ、クラスＤ、クラスＦ、クラスＲ、クラスＴ、及びクラスＨが含まれる。これらのうち、クラスＡ１及びクラスＡ２は、ＧＤＭがあるが既存の糖尿病はない対象を分類するために使用される。その他のクラスは、妊娠前のある時点で発症した糖尿病に罹患している妊娠対象のカテゴリーのために使用される。
【０１５９】
いくつかの実施形態では、ＧＤＭは、ＧＤＭ重症度の２つ以上のレベルに従って分類されてもよい。本明細書の用法では、「ＧＤＭ重症度のレベル」という用語は、典型的には低重症度から高重症度への、合併症又は負の転帰の異なるレベルを特徴とする、疾患のカテゴリーを指す。ＧＤＭ重症度は、このような合併症又は負の転帰と相関する、１つ又は複数の因子のレベルに基づいて割り当てられてもよい。その他の実施形態では、ＧＤＭ重症度は、血中グルコースの代謝に基づいて割り当てられてもよい。ＧＤＭ重症度はまた、ＧＣＤ５９のレベルによって判定されてもよい。このような実施形態では、対象サンプルから得られたＧＣＤ５９の濃度レベルが所定のカットオフ値の間のどこに入るかに応じて、軽度、中度、及び重度のＧＤＭレベルが対象に割り当てられてもよい。
【０１６０】
予備的徴候及びリスク因子
典型的には、ＧＤＭには症状がない。場合によっては症状が起こり、喉の渇き、疲労、悪心、嘔吐、膀胱感染、酵母感染、及びかすみ目が挙げられるが、これに限定されるものではない（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｍｅｄｌｉｎｅｐｌｕｓ／ｅｎｃｙ／ａｒｔｉｃｌｅ／０００８９６．ｈｔｍ）。疾患の予備的徴候は、典型的には、試験結果（例えば、グルコースレベルの上昇、糖化タンパク質のレベル上昇）を伴う。
【０１６１】
ＧＤＭのリスク因子には、体型指数（ＢＭＩ）の上昇、糖尿病又はＧＤＭの家族歴、高齢の母親、多嚢胞性卵巣症候群の病歴、喫煙歴、産科問題の病歴、高コレステロール、低身長、及び民族性が含まれてもよいが、これに限定されるものではない（ロス，Ｇ．（Ｒｏｓｓ，Ｇ．）著、オーストラリアン・ファミリー・フィジシャン（Ａｕｓｔｒａｌｉａｎ  Ｆａｍｉｌｙ  Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ）、２００６年、第３５巻、第６号、ｐ．３９２〜６；ビョージ，Ｔ．（Ｂｊｏｒｇｅ，Ｔ．）ら著、アメリカン・ジャーナル・オブ・エピデモロジー（Ａｍ  Ｊ  Ｅｐｉｄ．）、２００４年、第１６０巻、第１２号、ｐ．１１６８〜７６；マー，Ｒ．Ｍ．（Ｍａ，Ｒ．Ｍ．）ら著、ダイアベーテス・ケア（Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ）、２００７年、第３０巻、第１１号、ｐ．２９６０〜１）。場合によっては、リスク因子の有無が、女性対象の試験及び／又は治療に関する１つ又は複数の行動方針に影響を与えてもよい。
【０１６２】
本明細書の用法では、「体型指数」という用語は対象の体重及び身長から計算される数を指し、それは所与の対象の体脂肪のレベルと相関する。この値は、対象のキログラム単位の体重をメートル単位の（身長）２で除算することによって得られる。場合によっては、ＢＭＩ値は、次のように解釈されてもよい：１８．５ｋｇ／ｍ２未満は低体重；１８．５ｋｇ／ｍ２〜２４．９ｋｇ／ｍ２は正常；２５．０ｋｇ／ｍ２〜２９．９ｋｇ／ｍ２は過体重；３０．０ｋｇ／ｍ２〜３４．９ｋｇ／ｍ２はグレードＩ肥満症；３５．０ｋｇ／ｍ２〜３９．９ｋｇ／ｍ２はグレードＩＩ肥満症；及び４０ｋｇ／ｍ２以上はグレードＩＩＩ肥満症。このような解釈によると、過体重の対象は、ＧＤＭを発症するリスクが２．１４倍増加する（イエッソウフォウ，Ａ．（Ｙｅｓｓｏｕｆｏｕ，Ａ．）ら著、エクスペリメンタル・ダイアベーテス・リサーチ（Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、２０１１年、第２０１１巻、ｐ．１〜１２）。肥満の対象はＧＤＭの発症リスクが３．５６倍増加し、重度の肥満の対象はＧＤＭの発症リスクが８．５６倍増加する。ＢＭＩの解釈は国毎に異なってもよく、このような国々及び／又は管理機関で従事している医師に勧告を提供する責任を負う、専門機関によって判定されてもよい。
【０１６３】
前糖尿病及び／又はＧＤＭの病歴を有する妊娠対象は、ＧＤＭを発症するリスクがより高い。さらに、糖尿病、前糖尿病及び／又はＧＤＭの家族歴を有する妊娠対象は、ＧＤＭを発症するリスクがより高い。対象の病歴及び／又は家族歴は、典型的には、出産前の最初の予約時に審査される。いくつかの実施形態では、対象の病歴及び／又は家族歴を使用して、対象の試験及び／又は治療に関する決定が下されてもよい。
【０１６４】
高齢の母親もまた、ＧＤＭを発症するリスク因子である。ＧＤＭがある妊娠対象の百分率は、異なる年齢層間で変動する（ロス，Ｇ．（Ｒｏｓｓ，Ｇ．）著、オーストラリアン・ファミリー・フィジシャン（Ａｕｓｔｒａｌｉａｎ  Ｆａｍｉｌｙ  Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ）、２００６年、第３５巻、第６号、ｐ．３９２〜６）。２０才未満の妊娠対象の約１％が妊娠中にＧＤＭを発症する一方で、２０〜２４才の妊娠対象の約１．８％がＧＤＭを発症し、２５〜２９才の妊娠対象の約２．５％がＧＤＭを発症し、３０〜３４才の妊娠対象の約４．１％がＧＤＭを発症し、３５〜３９才の妊娠対象の約６．５％がＧＤＭを発症し、４０〜４５才の妊娠対象の約９．８％がＧＤＭを発症し、４５才を超える妊娠対象の約１２．８％がＧＤＭを発症する。
【０１６５】
ＧＤＭの率は民族性にも影響され、アフリカ系米国人、北米先住民、ヒスパニック、及び南アジア系（太平洋諸島系住民をはじめとするが、これに限定されるものではない）の妊娠対象における発生率が高い（キム，Ｓ．Ｙ．（Ｋｉｍ，Ｓ．Ｙ．）ら著、プリベンティング・クロニック・ディジーズ（Ｐｒｅｖ  Ｃｈｒｏｎｉｃ  Ｄｉｓ．）、２０１２年、第９巻、Ｅ８８）。
【０１６６】
ＧＤＭ関連病状
ＧＤＭは、母親と彼女らの子孫の出産前後の合併症の主原因である。ＧＤＭに罹患している妊婦は、１つ又は複数のＧＤＭ関連病状を有してもよく、又は発症するリスクがあってもよい。本明細書の用法では、「ＧＤＭ関連病状」は、ＧＤＭに関連する、又はＧＤＭの結果生じる、妊娠キャリア又は胎児対象のあらゆる障害である。妊婦のＧＤＭ関連症状には、分娩時の合併症、帝王切開の増加、子癇前症／子癇のリスク、流産及び／又は及び／また妊娠後糖尿病が含まれてもよいが、これに限定されるものではない。ＧＤＭに罹患している妊婦から産まれた胎児対象及び／又は乳児対象は、巨人児、在胎期間に比べて大きい（ＬＧＡ）胎児、先天異常、出産外傷、高ビリルビン血症、低血糖、癲癇発作、及び死産をはじめとするが、これに限定されるものではない、１つ又は複数のＧＤＭ関連病状を有してもよく、又は発症するリスクがあってもよい。いくつかの実施形態では、妊娠キャリアにおけるＧＤＭのリスクを診断、評価、モニター、又は層別化する（すなわち、１人又は複数人の対象にリスクレベルを割り当てる）ために使用される本開示の方法を使用して、１つ又は複数のＧＤＭ関連病状を発症するリスクがある、胎児対象及び／又は乳児対象が同定されてもよい。
【０１６７】
胎児対象及び／又は乳児対象に影響を及ぼすＧＤＭ関連病状には、巨人児が含まれうる。本明細書の用法では、巨人児という用語は、出生時体重が大きいことを特徴とする、乳児対象における状態を指す。本明細書の用法では、大きな出生時体重とは、約８ポンド１３オンス又は約４ｋｇを超える出生時体重を指す。巨人児と特徴付けられた乳児対象は、全出産の約１０％を構成する。往々にして、ＧＤＭがある妊娠対象から産まれた幼児対象に関連する異常な又は難しい出産（本明細書では難産とも称される）及び／又は出産外傷は、このような幼児対象のサイズが大きく、出産中に母親及び子孫の双方に物理的ストレスを引き起こすことに起因する（ナジャフィアン，Ｍ．（Ｎａｊａｆｉａｎ，Ｍ．）ら著、オブステトリックス・アンド・ガイネコロジー（Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ）、２０１２年、第２０１２号、ｐ．３５３７９１）。ＧＤＭに罹患している妊娠対象では、血中グルコースレベルの上昇は、典型的には、発達中の子孫への胎盤を通過するグルコース及び栄養素の輸送の増加につながる（イエッソウフォウ，Ａ．（Ｙｅｓｓｏｕｆｏｕ，Ａ．）ら著、エクスペリメンタル・ダイアベーテス・リサーチ（Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、２０１１年、第２０１１巻、ｐ．１〜１２）。発達中の子孫における過剰な栄養レベルはまた、このような子孫を出生後に低血糖又は低血中グルコースを発症する危険にさらすこともある。子宮内の栄養レベルの増加は、発達中の子孫によるインスリン産生の増加につながる。出生後、胎盤栄養素の移動が停止し、乳児対象の循環インスリンが上昇すると、血糖値が低下して低血糖をもたらす。いくつかの実施形態では、ＧＤＭのリスクを診断、評価、モニター、又は層別化するために使用される本開示の方法は、巨人児を発症するリスクを診断、評価、モニター及び／又は層別化するために使用されてもよい。
【０１６８】
ＧＤＭ関連病状には、在胎期間に比べて大きい（ＬＧＡ）胎児が含まれうる。在胎期間に比べて大きいとは、所与の在胎期間で出生時体重が９０パーセンタイル値を超えることを特徴とする状態を指す。このために、閾値重量は変動しうるが、一般的に、満期で産まれた場合に約４ｋｇ（８ポンド１３オンス）より大きい赤ちゃんは、ＬＧＡのカテゴリーに分類される。妊婦がＧＤＭを有する場合、妊婦の高い血中グルコースレベルに応答して胎児によって産生される過剰なインスリンによってＬＧＡが生じてもよく、それは通常よりも大きい成長と引き続く出生時体重上昇をもたらす。いくつかの実施形態では、ＧＤＭのリスクを診断、評価、モニター、又は層別化するために使用される本開示の方法を使用して、ＬＧＡを発症するリスクがある胎児対象が同定されてもよい。
【０１６９】
子癇前症などの妊娠関連高血圧障害もまた、ＧＤＭに関連することが示されている（フェイグ，Ｄ．Ｓ．（Ｆｅｉｇ，Ｄ．Ｓ．）ら著、プロス・メディシン（ＰＬｏＳ  Ｍｅｄ．）、２０１３年、第１０巻、第４号、ｅ１００１４２５）。子癇前症は、血圧上昇及びタンパク尿症（尿中のタンパク質）を特徴とする、妊娠対象の重篤な医学的状態である。研究は、妊娠中のＧＤＭ患者は、子癇前症を発症するリスクがより高いことを示している。それはまた、子癇前症子のリスクが、グルコース不耐性と共に増加することを示している。さらに、子癇前症がある妊娠対象は、インスリン抵抗性の発生率がより高いことが示されている。いくつかの実施形態では、ＧＤＭのリスクを診断、評価、モニター、又は層別化するために使用される本開示の方法は、子癇前症を発症するリスクを診断、評価、モニター及び／又は層別化するために使用されてもよい。
【０１７０】
妊娠期間
本発明の実施形態の文脈で、妊娠を構成する時間の長さは、２つ以上の妊娠期間に分割され得る。本明細書の用法では、「妊娠期間」という用語は任意の時間的、発達的及び／又は生理学的に定義された、妊娠期間を指す。妊娠期間は、妊娠週を含んでなってもよい。ヒトの妊娠の典型的な期間は、約４０〜約４２週間（ただし、場合によっては４２週間を超えることもある）であり、妊娠対象の最後の月経周期の終わりから計算される。このように、妊娠期間は、約０〜約４６、約０〜約４２、約２〜約４２、約４〜約４２、約８〜約４２、約１２〜約４２、約１６〜約４２、約２０〜約４２、約２４〜約４２、約２８〜約４２、約３２〜約４２、約３６〜約４２、約１２〜約３６、約１６〜約３６、約２０〜約３６、約２４〜約３６、約１０〜約２８、約１６〜約２８、約２０〜約２８、約１６〜約２４、又は約１８〜約２４週間の妊娠を含んでなってもよい。場合によっては、妊娠期間は、妊娠１週、２週、３週、４週、５週、６週、７週、８週、９週、１０週、１１週、１２週、１３週、１４週、１５週、１６週、１７週、１８週、１９週、２０週、２１週、２２週、２３週、２４週、２５週、２６週、２７週、２８週、２９週、３０週、３１週、３２週、３３週、３４週、３５週、３６週、３７週、３８週、３９週、４０週、４１週、４２週、４３週、４４週、４５週、４６週、又は４６週後を含んでなってもよい。妊娠期間は、妊娠月を含んでなってもよい。妊娠の典型的な期間は、９〜１０ヶ月間である。このように、妊娠期間は、約１ヶ月〜１０ヶ月、約２ヶ月〜１０ヶ月、約３ヶ月〜１０ヶ月、約４ヶ月〜１０ヶ月、約５ヶ月〜１０ヶ月、約６ヶ月〜１０ヶ月、約７ヶ月〜１０ヶ月、約８ヶ月〜１０ヶ月、約９ヶ月〜１０ヶ月、約１ヶ月〜９ヶ月、約２ヶ月〜９ヶ月、約３ヶ月〜９ヶ月、約４ヶ月〜９ヶ月、約５ヶ月〜９ヶ月、約６ヶ月〜９ヶ月、約７ヶ月〜９ヶ月、約８ヶ月〜約９ヶ月（ｍｏｕｎｔ）、約１ヶ月〜６ヶ月、約１ヶ月〜４ヶ月、約１ヶ月〜３ヶ月、約３ヶ月〜９ヶ月、約３ヶ月〜６ヶ月、約４ヶ月〜６ヶ月、約３ヶ月〜７ヶ月、約２ヶ月〜７又は約２ヶ月〜６ヶ月の妊娠を含んでなってもよい。場合によっては、妊娠期間は、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０ヶ月を含んでなってもよい。その他の実施形態では、妊娠期間は三半期を含んでなってもよい。妊娠期間は、３つの三半期に分割されてもよい。妊娠の第１の三半期は、妊娠の約１ヶ月〜約３ヶ月及び／又は妊娠の約１週〜約１２週を含んでなってもよい。第１の三半期中に、典型的な発達は、体重約２８ｇ（又は約１オンス）及び身長約７．６ｃｍ〜約１０ｃｍ（又は約３〜約４インチ）への胎児の成長を含む。第２の三半期は、約４ヶ月〜約６ヶ月の妊娠及び／又は約１３週〜約２８週の妊娠を含んでなってもよい。第２の三半期中に、典型的な発達は、体重約９１０ｇ（又は約２ポンド）及び身長約２３ｃｍ〜約３１ｃｍ（又は約９インチ〜約１２インチ）への胎児の成長を含む。第３の三半期は、約７ヶ月〜約９ヶ月の妊娠及び／又は約２９週〜約４０週の妊娠を含んでなってもよい。第３の三半期中に、典型的な発達は、体重約３．２ｋｇ（又は約７ポンド）及び身長約４５ｃｍ〜約５１ｃｍ（又は約１８インチ〜約２０インチ）への胎児の成長を含む。
【０１７１】
いくつかの実施形態では、妊娠期間は胎児の発達段階を含んでなってもよい。このような段階には、胚盤胞形成、胎盤形成、胚形成、心臓発達、肺発達、肝臓発達、腎臓発達、胃腸発達及び神経系発達が含まれてもよいが、これに限定されるものではない。
モニタリング及び治療
本明細書で開示される分析は、対象から取得された単一サンプルの使用を含んでなってもよい。このようなサンプルは、体液サンプルを含んでなってもよい。体液サンプルには、血液、尿、粘液、羊水、唾液、及び／又は本明細書に開示されるその他のサンプルタイプが含まれてもよいが、これに限定されるものではない。バイオマーカレベルは、単一の対象サンプル又は複数の対象サンプル中で、分析されてもよい。例えば、ＧＣＤ５９レベルは、経時的にモニターされてもよい。本明細書の用法では、「モニタリング」という用語は、経時的な観察、評価、及び／又は測定の行為を指す。観察、評価、及び／又は測定は、１つ又は複数の量又は値の形式で記録されてもよい。
【０１７２】
いくつかの実施形態では、モニタリングの目的のための値は、濃度値又は濃度等価値を含んでなってもよい。モニタリングは典型的には、初期値又はベースライン値を得ることによって実行され、それによって引き続く値が比較されてもよい。モニタリング中に、１つ又は複数の引き続く値が得られ、ベースライン値及び／又は以前に得られた任意のその他の値と比較される。引き続く値は、短期比較、長期比較、毎週の比較、毎月の比較などの目的で得られてもよい。短期比較を使用して、対象に対する特定の負荷（例えば、グルコース負荷）に応答する、対象サンプル中の１つ又は複数のバイオマーカレベルがモニターされてもよい。このような対象サンプルは、１０、２０、３０、４０、５０、７５、及び／又は１５０分毎に取得され分析されて、比較のための引き続く値が生成されてもよい。短期比較のための対象サンプルは、引き続く値を生成するために、１、２、３、４、５、１０、１２、及び／又は２４時間毎に取得されてもよい。このような対象サンプルは、血液、尿、粘液、羊水、唾液及び／又は本明細書で開示される任意のその他の体液を含んでなってもよい。グルコースレベル及び／又は糖化タンパク質のレベルもまた、このようなサンプルから得られてもよい。場合によっては、短期比較のために、対象サンプルからＧＣＤ５９のレベル（濃度値をはじめとするが、これに限定されるものではない）が得られてもよい。
【０１７３】
いくつかの実施形態では、長期比較を使用して、対象の１つ又は複数のバイオマーカレベル／濃度がモニターされてもよい。長期比較のために得られた引き続く値は、毎週、毎月、各四半期、毎年、及び／又は少なくとも毎年、取得されてもよい。長期比較は、約２週間から約２ヶ月間離れた対象サンプルから得られた、引き続く値を含んでなってもよい。このような対象サンプルは、体液サンプルを含んでなってもよい。このような体液サンプルは、血液、尿、粘液、羊水、唾液及び／又は本明細書で開示される任意のその他の体液サンプルを含んでなってもよい。いくつかの実施形態では、長期比較のために、サンプルからグルコースレベルが得られてもよい。その他の実施形態では、長期比較のために、サンプルから糖化タンパク質のレベルが得られてもよい。さらなる実施形態では、ＧＣＤ５９レベル（例えば、ＧＣＤ５９濃度レベル）が得られてもよい。
【０１７４】
ＧＤＭのモニタリングに関連するいくつかの実施形態では、遵守（ｏｂｓｅｒｖａｎｃｅ）、評価及び／又は測定値には、体重、血中グルコースレベル、糖化タンパク質（例えば、ＧＣＤ５９）のレベル、バイオマーカレベル、胎児の体重、胎児のサイズ、及びＢＭＩを反映する値が含まれてもよいが、これに限定されるものではない。ＧＤＭのモニタリングは、試験及び／又は観察を繰り返すことによって実行されてもよい。ベースライン値は、妊娠前、出産前の最初の健康診断時、又は妊娠の所与の間隔内に、取得されてもよい。ベースライン値は、例えば、妊娠約１２週〜約３６週、妊娠約２０週〜約３６週、及び／又は妊娠約２４〜約２８週（妊娠２４週、妊娠２５週、妊娠２６週、妊娠２７週及び／又は妊娠２８週を含む）に得られてもよい。いくつかのベースライン値は、濃度値であってもよい。このような濃度値は、様々な情報源から得られてもよい。ベースライン濃度値はまた、血液、尿、粘液、羊水、唾液及び／又は本明細書で開示される任意のその他の体液をはじめとするが、これに限定されるものではない、体液から得られてもよい。対象のサンプルレベルは、ベースラインレベル及び／又は以前に得られたレベルと比較され、分析中の１つ又は複数の因子のレベルの変化が判定されてもよい。場合によっては、対象サンプルレベルは、分析中の１つ又は複数の因子の閾値と比較される。
【０１７５】
いくつかの実施形態では、ベースライン値は、ＧＤＭに関連する１つ又は複数の因子を評価するために使用される、１つ又は複数の試験の結果を含んでなってもよい。このような試験には、グルコース負荷試験（ＧＣＴ）、ＯＧＴＴ、空腹時グルコース試験、日和見的グルコース試験、食後２時間グルコース試験、ＨｂＡ１ｃ試験、フルクトサミン試験、及び１，５−アンヒドログルシトール試験が含まれてもよいが、これに限定されるものではない。
【０１７６】
ＧＤＭモニタリング中に、１つ又は複数の引き続く値が得られ、ベースライン値及び／又は以前に得られた任意のその他の値と比較される。短期比較、長期比較、毎週の比較、毎月の比較、三半期の比較、経分娩時の比較（例えば、分娩前後の比較）、経妊娠時の比較（例えば、妊娠前、妊娠中、及び／又は妊娠後の比較）及び妊娠間の比較（例えば、最初の妊娠と２回目、３回目、及び／又は４回目の妊娠の間の）の目的で、いくつかの引き続く値が得られてもよい。短期比較を使用して、対象に対する特定の負荷（例えば、グルコース負荷）に応答する、１つ又は複数のバイオマーカレベルがモニターされてもよい。短期比較のために取得された体液サンプルは、１０、２０、３０、４０、５０、７５、及び／又は１５０分毎に取得され分析されて、比較のための引き続く値が生成されてもよい。その他の実施形態では、１、２、３、４、５、１０、１２、及び／又は２４時間毎に短期比較のための体液が取得され、引き続く値が生成されてもよい。短期比較のためのいくつかの体液サンプルは、血液、尿、粘液、羊水、唾液及び／又は本明細書で開示される任意のその他の体液を含んでなってもよい。場合によっては、グルコースレベルが、このようなサンプルから得られてもよい。短期比較のために、糖化タンパク質のレベル（濃度値をはじめとするが、これに限定されるものではない）が、体液から得られてもよい。このようなレベルは、ＧＣＤ５９レベルを含んでなってもよい。
【０１７７】
いくつかの実施形態では、長期比較を使用して、妊娠対象の１つ又は複数のバイオマーカレベル／濃度がモニターされてもよい。長期比較のために得られる引き続く値は、毎週、毎月、三半期毎、妊娠毎、及び／又は妊娠前、妊娠中、及び妊娠後の各期間に得られてもよい。いくつかの長期比較は、約２週間から約２ヶ月間離れた対象サンプルから得られた、引き続く値を含んでなってもよい。いくつかのこのような対象サンプルは、体液サンプルを含んでなってもよい。このような体液サンプルは、血液、尿、粘液、羊水、唾液及び／又は本明細書で開示される任意のその他の体液を含んでなってもよい。場合によっては、長期比較のために、サンプルからグルコースレベルが得られてもよい。その他の実施形態では、長期比較のために、サンプルから糖化タンパク質のレベルが得られてもよい。さらなる実施形態では、ＧＣＤ５９レベル（例えば、ＧＣＤ５９濃度レベル）が得られてもよい。
【０１７８】
モニタリングが実行されて、１つ又は複数の病状及び／又は疾患の発生が観察されてもよい。いくつかのモニタリングが実行されて、ＧＤＭ及び／又は子癇前症の発症が判定されてもよい。このような実施形態では、得られたベースライン値は、ＧＤＭ及び／又は子癇前症を示唆しなくてもよい；しかし、得られた引き続く値は、発症を示唆してもよい。発症は、体液をはじめとするが、これに限定されるものではない、対象サンプルをモニタリングすることによって判定されてもよい。このような体液には、血液、尿、粘液、羊水、唾液及び／又は本明細書で開示される任意のその他の体液が含まれてもよい。いくつかの対象サンプルでは、グルコースレベルをモニターして、ＧＤＭ及び／又は子癇前症の発症が判定されてもよい。その他の実施形態では、糖化タンパク質のレベルを監視して、ＧＤＭ及び／又は子癇前症の発症が判定されてもよい。さらなる実施形態では、ＧＣＤ５９レベル（例えば、ＧＣＤ５９濃度レベル）をモニターして、ＧＤＭ及び／又は子癇前症の発症が判定されてもよい。
【０１７９】
いくつかの実施形態では、モニタリングを実行して、１つ又は複数の病状及び／又は疾患の進行又は退行が、観察又は評価されてもよい。いくつかのモニタリングを実行して、ＧＤＭ及び／又は子癇前症の進行又は退行が観察又は評価されてもよい。このような実施形態では、得られたベースライン値は、ＧＤＭ及び／又は子癇前症を示唆してもよい；しかし、得られた引き続く値は、疾患の進行又は退行を示唆してもよい。進行又は退行は、体液をはじめとするが、これに限定されるものではない、対象サンプルをモニタリングすることによって評価されてもよい。このような体液には、血液、尿、粘液、羊水、唾液及び／又は本明細書で開示される任意のその他の体液が含まれてもよい。いくつかの実施形態では、グルコースレベルをモニターして、ＧＤＭ及び／又は子癇前症の進行又は退行が評価されてもよい。その他の実施形態では、糖化タンパク質のレベルをモニターして、ＧＤＭ及び／又は子癇前症の進行又は退行が評価されてもよい。さらなる実施形態では、ＧＣＤ５９レベル（例えば、ＧＣＤ５９濃度レベル）をモニターして、ＧＤＭ及び／又は子癇前症の進行又は退行が評価されてもよい。
【０１８０】
いくつかの実施形態では、モニタリングを実行して、分娩後対象における糖尿病状態の進行が観察又は評価されてもよい。本明細書の用法では、「分娩後対象」という用語は、最近出産した対象を指す。分娩後対象には、ほぼ１時間前、ほぼ昨日、ほぼ先月、ほぼ３ヶ月前及び／又はほぼ１年前に出産した対象が含まれてもよい。いくつかの実施形態では、本開示の方法を使用して、分娩後対象から取得された１つ又は複数のサンプルにおけるＧＣＤ５９レベルが判定されてもよい。分娩後対象から取得された１つ又は複数のサンプルから得られたこのようなＧＣＤ５９レベルを使用して、このような分娩後対象における１つ又は複数の糖尿病状態が、診断され、予測され又は別の様式で分析されてもよい。
【０１８１】
いくつかの実施形態では、治療の適切な形態を適用するために、対象サンプルの評価が実行されてもよい。このような対象のサンプルは、ＧＤＭがある妊娠対象から取得されてもよい。ＧＤＭの治療ストラテジーは、食生活の調整、活動の増加、運動の増加、定期的な血中グルコースモニタリング及び／又はインスリン療法を含んでなってもよい。妊娠対象からのサンプルの評価に基づいて１つ又は複数の治療ストラテジーを選択し、選択された治療ストラテジーの１つ又は複数を妊娠対象に適用することで、このような妊娠対象から産まれた乳児対象に影響するＧＤＭ関連の病状が予防されてもよい。このような妊娠対象から取得されたサンプルは、１つ又は複数の治療ストラテジーを選択するために、１つ又は複数のバイオマーカのレベルについて評価されてもよい。このようなバイオマーカには、ＧＣＤ５９をはじめとするが、これに限定されるものではない、糖化タンパク質が含まれてもよい。妊娠対象サンプルから得られたＧＣＤ５９濃度値は、ＧＤＭの治療のための１つ又は複数の治療法を選択するために使用されてもよい。このような実施形態では、このような妊娠対象から産まれた乳児対象における１つ又は複数のＧＤＭ関連病状が、軽減、逆転及び／又は予防されてもよい。
【０１８２】
いくつかの実施形態では、本開示の方法を使用して、ＧＤＭの治療を受けている対象がモニターされてもよい。このような方法は、本明細書に記載のモニタリングのタイプのいずれかから得られた見識に基づいて、治療用量及び／又は治療のタイプを調節することを含んでなってもよい。
【０１８３】
コンパニオン診断
いくつかの実施形態では、本開示の方法は、コンパニオン診断として使用されてもよい。本明細書の用法では、「コンパニオン診断」という用語は、その結果が対象の診断又は治療対象を助けるアッセイを指す。コンパニオン診断は、患者の疾患、障害又は病状の重症度レベルを層別化するのに役立ってもよく、治療レジメン及び用量を調整してコストを削減できるようにし、臨床試験の持続期間を短縮し、安全性を高め、及び／又は有効性を高める。コンパニオン診断を使用して、疾患、障害、又は病状の進行を予測し、予防療法の処方を助けてもよい。いくつかのコンパニオン診断を使用して、１つ又は複数の臨床試験の対象が選択されてもよい。場合によっては、コンパニオン診断アッセイが特定の治療と連携し、治療の最適化を容易にしてもよい。
【０１８４】
いくつかの実施形態では、本開示の方法は、血糖レベルに関連する疾患、障害及び／又は病状のためのコンパニオン診断として有用であってもよい。本発明のいくつかのコンパニオン診断は、糖尿病、前糖尿病又はＧＤＭをはじめとするが、これに限定されるものではない、その他の糖尿病状態の重症度を予測及び／又は判定するのに役立ってもよい。本発明のいくつかのコンパニオン診断を使用して、糖尿病性合併症を発症するリスクによって、対象が層別化されてもよい。このような糖尿病性合併症には、糖尿病性ケトアシドーシス、高血糖、低血糖、高血糖高浸透圧状態、糖尿病性昏睡、気道感染症、歯周病、心臓損傷、腎臓損傷、感覚低下、視力喪失、心血管疾患、筋肉劣化及び脳卒中が含まれてもよいが、これに限定されるものではない。本発明のいくつかのコンパニオン診断を使用して、抗糖尿病及び代謝障害薬の薬剤開発を容易にし促進してもよい。
【０１８５】
ポイントオブケア検査
いくつかの実施形態では、本明細書で説明される本開示の方法は、ポイントオブケア検査のために使用されてもよい。本明細書の用法では、「ポイントオブケア検査」という用語は、対象が医療を受けている現場又はその付近で実行される医学検査を指す。ポイントオブケア検査は、試験、試験結果のレビュー、及び治療の間隔をより短くするのに役立ってもよい。ポイントオブケア検査はまた、患者が試験され、同日中に及び／又は同じ医療訪問中にこのような試験の結果によって決定された治療を受けられるようにしてもよい。
【０１８６】
プラットフォーム技術
いくつかの実施形態では、本開示の方法は、１つ又は複数のプラットフォーム技術を使用して実行されてもよい。本明細書の用法では、「プラットフォーム技術」は、方法又はアッセイの１つ又は複数のステップを標準化するように構成された、機器又はシステムを指す。プラットフォーム技術を使用して、例えば、免疫学的アッセイ（例えば、エライザ（ＥＬＩＳＡ）、免疫沈降アッセイ、免疫蛍光アッセイ、ＥＩＡ、ＲＩＡ、及びウエスタンブロット分析）が実行されてもよい。プラットフォーム技術には、例えば、１つ又は複数のバイオ・ラッド（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）（ハーキュリーズ、カリフォルニア州）機器（イマーク（ＩＭＡＲＫ）（商標）マイクロプレート吸光度読取装置、エックスマーク（ＸＭＡＲＫ）（商標）マイクロプレート吸光分光光度計、ＰＷ４１マイクロプレート洗浄機、及び／又はイムノウォッシュ（ＩＭＭＵＮＯＷＡＳＨ）（商標）１５７５マイクロプレート洗浄機をはじめとするが、これに限定されるものではない）；１つ又は複数のバイオテック（ＢｉｏＴｅｋ）（ウィヌースキ、バーモント州）機器（ＥＬＸ８００（商標）吸光度読取装置、シナジー（ＳＹＮＥＲＧＹ）（商標）ＨＴ多重モードマイクロプレートリーダ、ＥＬＸ５０（商標）マイクロプレートストリップ洗浄機、プレシジョン（ＰＲＥＣＩＳＩＯＮ）（商標）ＸＳ自動ピペット操作システム、マルチフロ（ＭＵＬＴＩＦＬＯ）（商標）自動ディスペンサー、ＥＬ４０６（商標）洗浄機ディスペンサー、マルチフロ（ＭＵＬＴＩＦＬＯ）（商標）ＦＸ多モードディスペンサー、４０５ＴＳ（商標）マイクロプレート洗浄機、４０５ＬＳ（商標）マイクロプレート洗浄機、ＥＬｘ４０５セレクト（Ｓｅｌｅｃｔ）深型ウェル洗浄機、及び／又はＥＬｘ５０洗浄機をはじめとするが、これに限定されるものではない）；１つ又は複数のサーモフィッシャー（Ｔｈｅｒｍｏ−Ｆｉｓｈｅｒ）（ウォルサム、マサチューセッツ州）機器（マルチスカン（ＭＵＬＴＩＳＫＡＮ）（商標）ＦＣマイクロプレート光度計、マルチスカン（ＭＵＬＴＩＳＫＡＮ）（商標）ＧＯマイクロプレート吸光分光光度計、マルチドロップ（ＭＵＬＴＩＤＲＯＰ）（商標）コンビ（Ｃｏｍｂｉ）試薬ディスペンサー、マルチドロップ（ＭＵＬＴＩＤＲＯＰ）（商標）３８４試薬ディスペンサー、マルチドロップ（ＭＵＬＴＩＤＲＯＰ）（商標）ＤＷ試薬ディスペンサー、及び／又はウェルウォッシュ（ＷＥＬＬＷＡＳＨ）（商標）マイクロプレート洗浄機をはじめとするが、これに限定されるものではない）；１つ又は複数のモレキュラー・デバイス（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）（サニーベール、カリフォルニア州）機器（ジェネピックス（ＧＥＮＥＰＩＸ）（登録商標））４３００Ａマイクロアレイスキャナ、ジェネピックス（ＧＥＮＥＰＩＸ）（登録商標）４４００Ａマイクロアレイスキャナ、ジェネピックス（ＧＥＮＥＰＩＸ）（登録商標）４０００Ｂマイクロアレイスキャナ、アクアマックス（ＡＱＵＡＭＡＸ）（登録商標）マイクロプレート洗浄機、マルチウォッシュプラス（ＭＵＬＴＩＷＡＳＨ＋）（商標）マイクロプレート洗浄機、及び／又はジェネピックス（ＧＥＮＥＰＩＸ）（登録商標）ＳＬ５０自動スライドローダーをはじめと���るが、これに限定されるものではない）；及び／又は１つ又は複数のテカン（Ｔｅｃａｎ）（メンネドルフ、スイス）機器（サンライズ（ＳＵＮＲＩＳＥ）（商標）吸収度マイクロプレートリーダ、インフィニト（ＩＮＦＩＮＩＴＥ）（登録商標）Ｆ５０吸収度マイクロプレートリーダ、ハイドロフレックス（ＨＹＤＲＯＦＬＥＸ）（商標）マイクロプレート洗浄機、ハイドロスピード（ＨＹＤＲＯＳＰＥＥＤ）（商標）マイクロプレート洗浄機、及び／又はコネクト（ＣＯＮＮＥＣＴ）（商標）マイクロプレートスタッカーをはじめとするが、これに限定されるものではない）などの免疫学的アッセイの実行に使用される１つ以上の市販の機器又はシステムが含まれてもよい。
【０１８７】
いくつかの実施形態では、プラットフォーム技術には、自動プラットフォーム技術が含まれる。自動化プラットフォーム技術は、方法また又はアッセイの１つ又は複数のステップを標準化された方法で人為的操とは無関係に実行するように構成された、自動化された機器又はシステムであるが、そのようなステップは、ヒトの入力又はガイダンスに基づいて実行されてもよい。自動プラットフォーム技術には、例えば、１つ又は複数のバイオ・ラッド（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）（ハーキュリーズ、カリフォルニア州）システム（バイオ・プレックス（ＢＩＯ−ＰＬＥＸ）（登録商標）２００システム及び／又はバイオ・プレックス（ＢＩＯ−ＰＬＥＸ）（登録商標）３Ｄ懸濁液アレイシステムをはじめとするが、これに限定されるものではない）；１つ又は複数のテカン（Ｔｅｃａｎ）（メンネドルフ、スイス）システム（フリードメボ（ＦＲＥＥＤＯＭＥＶＯ）（登録商標）シリーズシステムをはじめとするが、これに限定されるものではない）；トリツラス（ＴＲＩＴＵＲＵＳ）（登録商標）システム（グリフォルス（Ｇｒｉｆｏｌｓ）、ロサンゼルス、カリフォルニア州）；１つ又は複数のハミルトン・ラボラトリー・ソリューションズ（Ｈａｍｉｌｔｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）（マニトウォック（Ｍａｎｉｔｏｗａｃ）、ウィスコンシン州）システム（マイクロラブ・スター（Ｍｉｃｒｏｌａｂ  ＳＴＡＲ）（商標））ライン（Ｌｉｎｅ）システム、マイクロラブ・ニンバス（Ｍｉｃｒｏｌａｂ  ＮＩＭＢＵＳ）（商標）システム、及び／又はマイクロラブ・バンテージ（Ｍｉｃｒｏｌａｂ  ＶＡＮＴＡＧＥ）（商標）リキッド・ハンドリング（Ｌｉｑｕｉｄ  Ｈａｎｄｌｉｎｇ）システムをはじめとするが、これに限定されるものではない）；１つ又は複数のアボット・ラボラトリーズ（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅ）（アボットパーク、イリノイ州）システム（アーチテクト（ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ）（商標）ｉ２０００ＳＲ免疫アッセイ分析装置、アーチテクト（ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ）（商標）ｉ１０００ＳＲ免疫アッセイ分析装置、及び／又はアーチテクト（ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（商標）ｉ４０００ＳＲ免疫アッセイ分析装置をはじめとするが、これに限定されるものではない）；１つ又は複数のロシュ・ダイアグノスティックス（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）（ブランフォード、コネチカット州）システム（コーバス（ＣＯＢＡＳ）（登録商標）８１００自動ワークフローシリーズシステム、ＣＯＢコーバス（ＣＯＢＡＳ）（登録商標）８０００モジュラー分析装置システム、コーバス（ＣＯＢＡＳ）（登録商標）６０００分析装置システム、コーバス（ＣＯＢＡＳ）（登録商標）４０００分析装置システム、コーバス（ＣＯＢＡＳ）（登録商標）ｃ５１３分析装置システム、及び／又はウリシス（Ｕｒｉｓｙｓ  ）２４００（登録商標）分析器システムをはじめとするが、これに限定されるものではない）；１つ又は複数のメソ・スケール・ディスカバリー（ＭＥＳＯ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）（ロックビル、メリーランド州）システム（メソ・クイックプレックス（ＭＥＳＯ  ＱｕｉｃｋＰｌｅｘ）ＳＱ１２０システム及び／又はメソ・セレクトル（ＭＥＳＯ  ＳＥＣ���ＯＲ）Ｓ６００システムをはじめとするが、これに限定されるものではない）；１つ又は複数のシーメンス（Ｓｉｅｍｅｎｓ）（ミュンヘン、独国）システム（ディメンション（ＤＩＭＥＮＳＩＯＮ）（登録商標）ＥＸＬ（商標）システム、ディメンションビスタ（ＤＩＭＥＮＳＩＯＮ  ＶＩＳＴＡ）（登録商標）システム、ディメンション（ＤＩＭＥＮＳＩＯＮ）（登録商標）エクスパンド（ＸＰＡＮＤ）（登録商標）プラス（Ｐｌｕｓ）システム、ディメンション（ＤＩＭＥＮＳＩＯＮ）（登録商標）ＲＸＬ  マックス（ＭＡＸ）（登録商標）システム、アドビア・セントール（ＡＤＶＩＡ  Ｃｅｎｔａｕｒ）ＸＰＴ免疫アッセイシステム、アドビア・セントール（ＡＤＶＩＡ  Ｃｅｎｔａｕｒ）ＸＰ免疫アッセイシステム、アドビア・セントール（ＡＤＶＩＡ  Ｃｅｎｔａｕｒ）ＣＰ免疫アッセイシステム、イムライテ（ＩＭＭＵＬＩＴＥ）２０００  ＸＰｉ免疫アッセイシステム、イムライテ（ＩＭＭＵＬＩＴＥ）ＩＭＭＵＬＩＴＥ  １０００免疫アッセイシステム、ベルサセル（ＶｅｒｓａＣｅｌｌ）システム、及び／又はベルサセル（ＶｅｒｓａＣｅｌｌ）Ｘ３システムをはじめとするが、これに限定されるものではない）；及び／又は１つ又は複数のルミネックス（Ｌｕｍｉｎｅｘ）（オースチン、テキサス州）システム（マグピックス（ＭＡＧＰＩＸ）（登録商標）システム及び／又はルミネックス（ＬＵＭＩＮＥＸ）（登録商標）１００／２００（商標）システムをはじめとするが、これに限定されるものではない）などの免疫学的アッセイの実行に使用される１つ又は複数の市販のシステムが含まれてもよい。
【０１８８】
いくつかの実施形態では、免疫学的アッセイを実行するために使用されるプラットフォーム技術には、１つ又は複数の所望のステップを実行できる１つ又は（ｏｎｅ  ｏｒ）モジュールが含まれてもよい。このようなモジュールは、サンプルの配分、試薬の添加及び／又は除去、インキュベーション、混合、シグナル検出、シグナル分析、分析物の定量化、すすぎ、及びサンプル及び／又は基質廃棄の１つ又は複数を実行するように構成されてもよい。
【０１８９】
製剤及び投与
医薬製剤
いくつかの実施形態では、本開示の化合物又は組成物は、（１）安定性を高め；（２）細胞透過性を高め；（３）徐放又は遅延放出させ（例えば、製剤から）；及び／又は（４）生体内分布を変化させる（例えば、組成物を特定の組織又は細胞型標的化する）ための１つ又は複数の賦形剤を使用して製剤化され得る。あらゆる全ての溶剤、分散媒、希釈剤、又はその他の液体ビヒクル、分散又は懸濁助剤、表面活性剤、等張剤、増粘又は乳化剤、保存料などの伝統的な賦形剤に加えて、本発明の製剤は、制限なしに、リポソーム、脂質ナノ粒子、ポリマー、リポプレックス、コアシェルナノ粒子、ペプチド、タンパク質、（例えば、対象への移植のために）本発明の化合物又は組成物で形質移入された細胞、及びそれらの組み合わせを含み得る。
【０１９０】
賦形剤
本明細書の用法では、「賦形剤」という用語は、使用前に、本発明の化合物及び／又は組成物と組み合わされる任意の物質を指す。いくつかの実施形態では、賦形剤は、非活性であり、主に本発明の化合物及び／又は組成物のための担体、希釈剤又はビヒクルとして使用される。医薬組成物を製剤化するための種々の賦形剤と、組成物を調製するための技術とが、当該技術分野で知られている（参照により本明細書に援用される、「レミントン：薬学の科学と実践（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ）」、第２１版、Ａ．Ｒ．ジェンナーロ（Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ）著、リッピンコット、ウィリアムズ＆ウィルキンズ（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ）、ボルチモア、メリーランド州、２００６年を参照されたい）。
【０１９１】
望ましくない生物学的効果を生じさせること、又はそうでなければ有害な様式で医薬組成物の任意のその他の構成成分と相互作用することなどによって、任意の従来の賦形剤媒体が物質又はその誘導体と不適合であってもよい場合を除いて、従来の賦形剤媒体の使用は本開示の範囲内で想定される。
【０１９２】
本明細書に記載の医薬組成物の製剤は、薬理学の分野で既知の又は今後開発される任意の方法によって調製されてもよい。一般に、このような調製方法は、活性成分を賦形剤及び／又は１つ又は複数のその他の副成分と結び付けるステップを含む。
【０１９３】
本開示による医薬組成物は、単回単位用量として、及び／又は複数の単回単位用量として、バルクで調製、包装、及び／又は販売されてもよい。
本開示による医薬組成物中の活性成分、薬学的に許容可能な賦形剤、及び／又は任意の追加的成分の相対量は、治療される対象のアイデンティティ、サイズ、及び／又は状態に応じて、さらには組成物がそれによって投与される経路に応じて、変動してもよい。
【０１９４】
いくつかの実施形態では、薬学的に許容可能な賦形剤は、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％純粋である。いくつかの実施形態では、賦形剤は、ヒトでの使用及び獣医学的使用について承認されている。いくつかの実施形態では、賦形剤は、米国食品医薬品局によって承認されている。いくつかの実施形態では、賦形剤は製薬等級である。いくつかの実施形態では、賦形剤は、米国薬局方（ＵＳＰ）、欧州薬局方（ＥＰ）、英国薬局方、及び／又は国際薬局方の基準を満たす。
【０１９５】
医薬組成物の製造に使用される薬学的に許容可能な賦形剤としては、不活性希釈剤、分散及び／又は造粒剤、表面活性剤及び／又は乳化剤、崩壊剤、結合剤、保存料、緩衝剤、潤滑剤、及び／又は油が挙げられるが、これに限定されるものではない。このような賦形剤は、任意選択的に、医薬組成物に含まれてもよい。
【０１９６】
例示的な希釈剤としては、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、リン酸カルシウム、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、リン酸ナトリウム乳糖、スクロース、セルロース、微結晶セルロース、カオリン、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、塩化ナトリウム、乾燥デンプン、コーンスターチ、粉砂糖など及び／又はそれらの組み合わせが挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０１９７】
例示的な造粒及び／又は分散剤としては、ジャガイモデンプン、コーンスターチ、タピオカデンプン、デンプングリコール酸ナトリウム、粘土、アルギン酸、グアーガム、柑橘類パルプ、寒天、ベントナイト、セルロース及び木材製品、天然スポンジ、カチオン交換樹脂、炭酸カルシウム、ケイ酸塩、炭酸ナトリウム、架橋ポリ（ビニル−ピロリドン）（クロスポビドン）、ナトリウムカルボキシメチルデンプン（デンプングリコール酸ナトリウム）、カルボキシメチルセルロース、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム（クロスカルメロース）、メチルセルロース、α化デンプン（デンプン１５００）、微結晶デンプン、水不溶性デンプン、カルシウムカルボキシメチルセルロース、ケイ酸アルミニウムマグネシウム（ビーガム（ＶＥＥＧＵＭ）（登録商標））、ラウリル硫酸ナトリウム、四級アンモニウム化合物など、及び／又はそれらの組み合わせが挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０１９８】
例示的な表面活性剤及び／又は乳化剤としては、天然乳化剤（例えば、アカシア、寒天、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、トラガカント、コンドレックス（ｃｈｏｎｄｒｅｘ）、コレステロール、キサンタン、ペクチン、ゼラチン、卵黄、カゼイン、羊毛脂、コレステロール、ワックス、及びレシチン）、コロイド粘土（例えば、ベントナイト［ケイ酸アルミニウム］及びビーガム（ＶＥＥＧＵＭ）ｒｅｇ（登録商標）［ケイ酸アルミニウムマグネシウム］）、長鎖アミノ酸誘導体、高分子量アルコール（例えば、ステアリルアルコール、セチルアルコール、オレイルアルコール、トリアセチンモノステアレート、ジステアリン酸エチレングリコール、モノステアリン酸グリセリル、及びモノステアリン酸プロピレングリコール、ポリビニルアルコール）、カルボマー（例えば、カルボキシポリメチレン、ポリアクリル酸、アクリル酸ポリマー、及びカルボキシビニルポリマー）、カラゲニン、セルロース系誘導体（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、粉末セルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース）、ソルビタン脂肪酸エステル（例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート［ツイーン（登録商標）２０］、ポリオキシエチレンソルビタン［ツイーン（ＴＷＥＥＮｎ）（登録商標）６０］、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート［ツイーン（登録商標）８０］、ソルビタンモノパルミテート［ＳＰＡＮ（登録商標）４０］、ソルビタンモノステアレート［スパン（Ｓｐａｎ）（登録商標）６０］、ソルビタントリステアレート［スパン（Ｓｐａｎ）（登録商標）６５］、グリセリルモノオレエート、ソルビタンモノオレエート［スパン（ＳＰＡＮ）（登録商標）８０］）、ポリオキシエチレンエステル（例えば、ポリオキシエチレンモノステアレート［ＭＹＲＪ（登録商標）４５］、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリエトキシ化ヒマシ油、ポリオキシメチレンステアレート、及びソルトル（ＳＯＬＵＴＯＬ）（登録商標））、スクロース脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル（例えば、クレモフォール（ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ）（登録商標））、ポリオキシエチレンエーテル（例えば、ポリオキシエチレンラウリルエーテル［ブリジ（ＢＲＩＪ）（登録商標）３０］）、ポリ（ビニル−ピロリドン）、ジエチレングリコールモノラウレート、オレイン酸トリエタノールアミン、オレイン酸ナトリウム、オレイン酸カリウム、オレイン酸エチル、オレイン酸、ラウリン酸エチル、ラウリル硫酸ナトリウム、プルオリンク（ＰＬＵＯＲＩＮＣ）（登録商標）Ｆ６８、ポロキサマー（ＰＯＬＯＸＡＭＥＲ）（登録商標）１８８、臭化セトリモニウム、塩化セチルピリジニウム、塩化ベンザルコニウム、ドキュセートナトリウムなど及び／又はそれらの組み合わせが挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０１９９】
例示的な結合剤としては、デンプン（例えば、コーンスターチ及びデンプンペースト）；ゼラチン；糖類（例えば、スクロース、グルコース、デキストロース、デキストリン、糖蜜、乳糖、ラクチトール、マンニトール）；天然及び合成ガム（例えば、アカシア、アルギン酸ナトリウム、アイリッシュモス抽出物、パンワールガム、ガッチガム、イサポール穀皮の粘液、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、微結晶セルロース、酢酸セルロース、ポリ（ビニル−ピロリドン）、ケイ酸アルミニウムマグネシウム（ビーガム（Ｖｅｅｇｕｍ）（登録商標））、及びカラマツアラボガラクタン）；アルギン酸塩；ポリエチレンオキシド；ポリエチレングリコール；無機カルシウム塩；ケイ酸；ポリメタクリレート；ワックス；水；アルコールなど；及びそれらの組み合わせが挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０２００】
例示的な保存料には、抗酸化剤、キレート化剤、抗菌保存料、抗真菌保存料、アルコール保存料、酸性保存料、及び／又はその他の保存料が含まれてもよいが、これに限定されるものではない。例示的な抗酸化剤としては、αトコフェロール、アスコルビン酸、パルミチン酸アスコルビル（ａｃｏｒｂｙｌ  ｐａｌｍｉｔａｔｅ）、ブチルヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシトルエン、モノチオグリセロール、メタ重亜硫酸カリウム、プロピオン酸、没食子酸プロピル、アスコルビン酸ナトリウム、重亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、及び／又は亜硫酸ナトリウムが挙げられるが、これに限定されるものではない。例示的なキレート化剤としては、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、クエン酸一水和物、エデト酸二ナトリウム、エデト酸二カリウム、エデト酸、フマル酸、リンゴ酸、リン酸、エデト酸ナトリウム、酒石酸、及び／又はエデト酸三ナトリウムが挙げられる。例示的な抗菌保存料としては、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ベンジルアルコール、ブロノポール、セトリミド、塩化セチルピリジニウム、クロルヘキシジン、クロロブタノール、クロロクレゾール、クロロキシレノール、クレゾール、エチルアルコール、グリセリン、ヘキセチジン、イミド尿素、フェノール、フェノキシエタノール、フェニルエチルアルコール、硝酸フェニル水銀、プロピレングリコール、及び／又はチメロサールが挙げられるが、これに限定されるものではない。例示的な抗真菌保存料としては、ブチルパラベン、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、安息香酸、ヒドロキシ安息香酸、安息香酸カリウム、ソルビン酸カリウム、安息香酸ナトリウム、ナトリウムプロピオン酸塩、及び／又はソルビン酸が挙げられるが、これに限定されるものではない。例示的なアルコール保存料としては、エタノール、ポリエチレングリコール、フェノール、フェノール化合物、ビスフェノール、クロロブタノール、ヒドロキシベンゾエート、及び／又はフェニルエチルアルコールが挙げられるが、これに限定されるものではない。例示的な酸性保存料としては、ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＥ、β−カロチン、クエン酸、酢酸、デヒドロ酢酸、アスコルビン酸、ソルビン酸、及び／又はフィチン酸が挙げられるが、これに限定されるものではない。その他の保存料としては、トコフェロール、酢酸トコフェロール、メシル酸デテロキシム、セトリミド、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチルヒドロキシトルエン（ｈｙｄｒｏｘｙｔｏｌｕｅｎｅｄ）（ＢＨＴ）、エチレンジアミン、ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）、ラウリルエーテル硫酸ナトリウム（ＳＬＥＳ）、重亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸カリウム、メタ重亜硫酸カリウム、グリダント・プラス（ＧＬＹＤＡＮＴ  ＰＬＵＳ）（登録商標）、フェノニップ（ＰＨＥＮＯＮＩＰ）（登録商標）、メチルパラベン、ジャーマル（ＧＥＲＭＡＬＬ）（登録商標）１１５、ジャーマベン（ＧＥＲＭＡＢＥＮ）（登録商標）ＩＩ、ネオロン（ＮＥＯＬＯＮＥ）（商標）、カソン（ＫＡＴＨＯＮ）（商標）、及び／又はユーキシル（ＥＵＸＹＬ）（登録商標）が挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０２０１】
例示的な緩衝剤としては、クエン酸緩衝液、酢酸緩衝液、リン酸緩衝液、塩化アンモニウム、炭酸カルシウム、塩化カルシウム、クエン酸カルシウム、グルビオン酸カルシウム、グルセプト酸カルシウム、グルコン、Ｄ−グルコン酸、グリセロリン酸カルシウム、乳酸カルシウム、プロパン酸、レブリン酸カルシウム、ペンタン酸、第二リン酸カルシウム、リン酸、三塩基性リン酸カルシウム、水酸化リン酸カルシウム、酢酸カリウム、塩化カリウム、グルコン酸カリウム、カリウム混合物、二塩基性リン酸カリウム、一塩基性リン酸カリウム、リン酸カリウム混合物、酢酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、二塩基性リン酸ナトリウム、塩基性リン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム混合物、トロメタミン、水酸化マグネシウム、水酸化アルミニウム、アルギン酸、発熱性物質非含有水、等張生理食塩水、リンゲル液、エチルアルコールなど、及び／又はそれらの組み合わせが挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０２０２】
例示的な潤滑剤としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸、シリカ、滑石、麦芽、ベヘン酸（ｂｅｈａｎａｔｅ）グリセリル、水素化植物油、ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ロイシン、ラウリル硫酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウムなど、及びそれらの組み合わせが挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０２０３】
例示的な油としては、アーモンド、杏仁、アボカド、ババス、ベルガモット、クロスグリ（ｃｕｒｒｅｎｔ）種子、ルリヂサ、カデ、カモミール、キャノーラ、ヒメウイキョウ、カルナウバ、ヒマシ油、シナモン、カカオ脂、ココナツ、タラ肝、コーヒ、トウモロコシ、綿実、エミュー、ユーカリノキ、月見草、魚類、亜麻仁、ゲラニオール、ヒョウタン、ブドウ種子、ヘーゼルナッツ、ヤナギハッカ、ミリスチン酸イソプロピル、ホホバ、ククイナッツ、ラバンジン、ラベンダー、レモン、リツェアクベバ、マカダミア（ｍａｃａｄｅｍｉａ）ナッツ、ゼニアオイ、マンゴー種子、メドウフォーム種子、ミンク、ナツメグ、オリーブ、オレンジ、オレンジラフィー、パーム、パーム核、桃仁、落花生、ケシの実、カボチャ種子、ナタネ、米糠、ローズマリー、紅花、ビャクダン、サザンカ（ｓａｓｑｕａｎａ）、セイバリー（ｓａｖｏｕｒｙ）、シーバックソーン、ゴマ、シアバター、シリコーン、大豆、ヒマワリ、ティーツリー、アザミ、椿、ベチベル、クルミ、及びコムギ胚芽油が挙げられるが、これに限定されるものではない。例示的な油としては、ステアリン酸ブチル、カプリルトリグリセリド、カプリン酸トリグリセリド、シクロメチコン、セバシン酸ジエチル、ジメチコン３６０、ミリスチン酸イソプロピル、鉱物油、オクチルドデカノール、オレイルアルコール、シリコーン油、及び／又はそれらの組み合わせが挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０２０４】
処方者の判断に従って、カカオ脂及び坐薬ワックスなどの賦形剤、着色剤、コーティング剤、甘味剤、香味剤、及び／又は香料が、組成物中に存在し得る。
ビヒクル
リポソーム、リポプレックス、及び脂質ナノ粒子
本開示の化合物又は組成物は、１つ又は複数のリポソーム、リポプレックス、又は脂質ナノ粒子を使用して製剤化されてもよい。一実施形態では、本開示の医薬化合物又は組成物は、リポソームをさらに含む。リポソームは、人工的に調製された小胞であり、それは主に１つ又は複数の脂質二重層を含み、栄養素及び医薬製剤の投与のための送達ビヒクルとして使用されてもよい。リポソームは、直径が数百ナノメートルであってもよく、狭い水性区画で区切られた一連の同心二重層を含有してもよい多重膜小胞（ＭＬＶ）；直径が５０ｎｍ未満であってもよい小型単細胞小胞（ＳＵＶ）；及び直径が５０〜５００ｎｍであってもよい大型単層小胞（ＬＵＶ）などであるが、これに限定されるものではない異なるサイズであり得る。リポソームの設計には、不健康な組織へのリポソームの付着を改善するための、又はエンドサイトーシスなどであるが、これに限定されるものではない事象を活性化するための、オプソニン又はリガンドが含まれてもよいが、これに限定されるものではない。リポソームは、医薬製剤の送達を改善するために、低い又は高いｐＨを含有してもよい。
【０２０５】
リポソームの形成は、封入された医薬製剤及びリポソーム性成分、その中に脂質小胞が分散されている媒体の性質、封入された物質の有効濃度及びその潜在的な毒性、小胞の適用及び／又は送達中に関与する追加的プロセス、意図される用途に対する最適化サイズと多分散性と小胞の貯蔵寿命、及び安全且つ効率的なリポソーム製品のバッチ毎の再現性と大規模生産の可能性などであるが、これに限定されるものではない物理化学的特性に依存してもよい。
【０２０６】
一実施形態では、このような製剤は、それらが生体内で受動的又は能動的に異なる細胞型に向けられるように、構築されてもよく又は組成が変更されてもよい。
製剤は、葉酸、トランスフェリン、Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、及び抗体標的化アプローチによって例示されるが、これに限定されるものではない、それらの表面上の異なるリガンドの発現を通じて、選択的に標的化され得る。
【０２０７】
リポソーム、リポプレックス、又は脂質ナノ粒子は、本発明の組成物による細胞形質移入を増加させてもよいので、これらの製剤が本開示の化合物又は組成物の機能的効能を改善するために使用されてもよい。リポソーム、リポプレックス、又は脂質ナノ粒子を使用して、本発明の化合物又は組成物の安定性もまた高めてもよい。
【０２０８】
エップシュタイン（Ｅｐｐｓｔｅｉｎ）ら、（エップシュタイン，Ｄ．Ａ．（Ｅｐｐｓｔｅｉｎ，Ｄ．Ａ．）ら著、「リポソームカプセル化マウスインターフェロンγの生物学的活性は細胞膜受容体により媒介される（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｌｉｐｏｓｏｍｅ−ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｄ  ｍｕｒｉｎｅ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  ｇａｍｍａ  ｉｓ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｂｙ  ａ  ｃｅｌｌ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）」、米国科学アカデミー紀要（Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．）、１９８５年６月、第８２巻、第１１号、ｐ．３６８８〜９２）；ウォング（Ｈｗａｎｇ）ら、（ウォング，Ｋ．Ｊ．（Ｈｗａｎｇ，Ｋ．Ｊ．）ら著、「単層スフィンゴミエリン／コレステロールリポソームの肝臓への取り込み及び分解：動態研究（Ｈｅｐａｔｉｃ  ｕｐｔａｋｅ  ａｎｄ  ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｕｎｉｌａｍｅｌｌａｒ  ｓｐｈｉｎｇｏｍｙｅｌｉｎ／ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ：ａ  ｋｉｎｅｔｉｃｓｔｕｄｙ）」、米国科学アカデミー紀要（Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．）、１９８０年７月第７７巻、第７号、ｐ．４０３０〜４）；米国特許第４，４８５，０４５号明細書及び米国特許第４，５４４，５４５号明細書などによって記載されるように、抗体カーゴ用に特に調製されたリポソームは、当該技術分野で公知の技術に従って調製される。持続的な循環時間を備えたリポソームの製造は、米国特許第５，０１３，５５６号明細書にも記載される。
【０２０９】
本発明の化合物又は組成物を含むリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロール、並びにポリエチレングリコール誘導体化されたホスファチジルエタノールアミンなどの脂質を利用する逆相蒸発を使用して、生成されてもよい。規定の孔径のフィルターを使用して、所望の直径のリポソームが押し出される。別の実施形態では、本発明の組成物は、マーティン（Ｍａｒｔｉｎ）ら、（マーティン，Ｆ．Ｊ．（Ｍａｒｔｉｎ，Ｆ．Ｊ．）ら著、「免疫グロブリン断片の予備形成された小胞への不可逆的結合。リポソーム標的化の改善された方法（Ｉｒｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  ｃｏｕｐｌｉｎｇ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｆｒａｇｍｅｎｔｓ  ｔｏ  ｐｒｅｆｏｒｍｅｄ  ｖｅｓｉｃｌｅｓ．Ａｎ  ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  ｌｉｐｏｓｏｍｅ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ）」、ジャーナル・オブ・バイロジカル・ケミストリー（Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．）、１９８２年１月１０日、第２５７巻、第１号、ｐ．２８６〜８）によって記載されるような、ジスルフィド交換反応によってリポソームの外表面にコンジュゲートされ得る。
【０２１０】
ポリマー及びナノ粒子
化合物又は本発明の組成物は、天然及び／又は合成ポリマーを使用して製剤化され得る。送達に使用されてもよいポリマーの非限定的例としては、ＤＭＲＩ／ＤＯＰＥ、ポロキサマー、キトサン、シクロデキストリン、及びポリ（乳酸−コ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）ポリマーが挙げられるが、これに限定されるものではない。これらは生分解性であってもよい。
【０２１１】
ポリマー製剤は、組成物の持続又は遅延放出を可能にし得る（例えば、筋肉内又は皮下注射に続いて）。本開示の化合物又は組成物の変更された放出プロファイルは、例えば、長期間にわたる化合物又は組成物の放出をもたらし得る。ポリマー製剤はまた、本発明の化合物又は組成物の安定性を高めるために使用されてもよい。
【０２１２】
ポリマー製剤はまた、葉酸、トランスフェリン、及びＮ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）によって例示されるが、これに限定されるものではない、異なるリガンドの発現を通じて選択的に標的化され得る。（その全体が参照により本明細書に援用される、ベノア（Ｂｅｎｏｉｔ）ら著、バイオマクロモレキュールズ（Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ）、２０１１年、第１２巻、ｐ．２７０８〜２７１４；ロゼマ（Ｒｏｚｅｍａ）ら著、米国科学アカデミー紀要（Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．）、２００７年、第１０４号、ｐ．１２９８２〜１２８８７；デービス（Ｄａｖｉｓ）著、モレキュラー・ファーマコロジー（Ｍｏｌ  Ｐｈａｒｍ）、２００９年、第６巻、ｐ．６５９〜６６８；デービス（Ｄａｖｉｓ）著、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、２０１０年、第４６４巻、ｐ．９１０６７〜１０７０）。
【０２１３】
本開示の化合物又は組成物はまた、ポリマー、脂質、及び／又はリン酸カルシウムなどであるが、これに限定されるものではないその他の生分解性薬剤の組み合わせを使用して、ナノ粒子として製剤化され得る。構成要素をコア−シェル、ハイブリッド、及び／又は層毎の構造で組合わせて、ナノ粒子の微調整ができるようにしてもよく、その結果、発明の化合物又は組成物の送達が促進されてもよい。本開示の化合物又は組成物では、ポリ（２−（メタクリロイルオキシ）エチルホスホリルコリン）−ブロック−（２−（ジイソプロピルアミノ）エチルメタクリレート）、（ＰＭＰＣ−ＰＤＰＡ）、ポリマーソームとしても知られる、生理学的ｐＨで自己集合しナノメートルサイズの小胞を形成するｐＨ感受性ジブロック共重合体に基づくシステムが使用されてもよい。これらのポリマーソームは、生細胞内で比較的高いペイロードを成功裏に送達することが示されている（マッシニャニ（Ｍａｓｓｉｇｎａｎｉ）ら著、「抗体の細胞送達：効果的な標的化された細胞内イメージング及び新規治療ツール（Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ  ｉｍａｇｉｎｇ  ａｎｄ  ｎｅｗ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｔｏｏｌ）」、ネイチャー・プロシーディングス（Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ）、２０１０年５月）。
【０２１４】
一実施形態では、ＰＥＧ電荷反転型ポリマー（ピテラ（Ｐｉｔｅｌｌａ）ら著、バイオマテリアルズ（Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ）、２０１１年、第３２巻、ｐ．３１０６〜３１１４）を使用して、本発明の化合物又は組成物を送達するナノ粒子が形成されてもよい。ＰＥＧ電荷変換ポリマーは、酸性ｐＨでポリカチオンに切断されエンドソーム漏出を促進することによって、ＰＥＧ−ポリアニオンブロック共重合体を改善してもよい。
【０２１５】
コアシェルナノ粒子の使用は、カチオン性架橋ナノゲルコア及び種々のシェルを合成するための高スループットアプローチに、さらに焦点を合わせている（ジークバルト（Ｓｉｅｇｗａｒｔ）ら著、米国科学アカデミー紀要（Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．）、２０１１年、第１０８巻、ｐ．１２９９６〜１３００１）。重合ナノ粒子の複合体形成、送達、及び内部移行は、ナノ粒子のコア及びシェル構成要素の双方の化学組成を改変することによって、正確に制御され得る。
【０２１６】
一実施形態では、ポリ（エチレン−コ−酢酸ビニル）マトリックスを使用して、本発明の化合物又は組成物が送達される。このようなマトリックスは、ネイチャー・バイオテクノロジー（Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、１９９２年、第１０巻、ｐ．１４４６〜１４４９に記載される。
【０２１７】
投与経路
本発明の化合物又は組成物は、当該技術分野で公知の標準的な方法又は経路のいずれかによって投与されてもよい。
【０２１８】
本発明の化合物又は組成物は、治療的に有効な成果をもたらす任意の経路によって投与されてもよい。これらとしては、経腸、胃腸部、硬膜外、経口、経皮、硬膜外（硬膜周囲）、大脳内（大脳の中へ）、脳室内（脳室の中へ）、皮膚上（皮膚への塗布）、皮内（皮膚自体の中へ）、皮下（皮膚の下へ）、経鼻投与（鼻を介して）、静脈内（静脈の中へ）、（動脈の中へ）、筋肉内（筋肉の中へ）、心臓内（心臓の中へ）、骨内注入（骨髄の中へ）、クモ膜下腔内（脊柱管の中へ）、腹腔内（腹腔内への注入又は注射）、膀胱内注入、硝子体内（目を介して）、海綿体内注射（陰茎基部の中へ）、膣内投与、子宮内、羊膜外投与、経皮（全身拡散のための無傷の皮膚を介した拡散）、経粘膜（粘膜を介した拡散）、吹送（鼻からの吸引）、舌下、唇下、浣腸、点眼薬（結膜上へ）、又は点耳薬が挙げられるが、これに限定されるものではない。特定の実施形態では、化合物又は組成物は、それらが血液脳関門、血管関門、又はその他の上皮性関門を通過できるような様式で投与されてもよい。本発明の化合物又は組成物の非限定的投与経路は、下述される。
【０２１９】
非経口及び注射投与
経口及び非経口投与用の液体剤形としては、薬学的に許容可能なエマルション、マイクロエマルション、溶液、懸濁液、シロップ剤、及び／又はエリキシル剤が挙げられるが、これに限定されるものではない。活性成分に加えて、液体剤形は、例えば、水；又はエチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド；油（特に、綿実、落花生、トウモロコシ、胚芽、オリーブ、ヒマシ油、ゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール、及びエステルソルビタン脂肪酸などのその他の溶媒や可溶化剤や乳化剤、及びそれらの混合物などの当該技術分野で一般に使用される不活性希釈剤を含んでなってもよい。不活性希釈剤に加えて、経口組成物は、例えば、湿潤剤、乳化及び懸濁剤、甘味剤、着香料、及び／又は芳香剤などのアジュバントを含み得る。非経口投与の特定の実施形態では、クレモフォール（ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ）（登録商標）、アルコール、油、改質油、グリコール、ポリソルベート、シクロデキストリン、ポリマーなどの可溶化剤、及び／又はそれらの組み合わせと混合される。その他の実施形態では、ヒドロキシプロピルセルロースなどの界面活性剤が含まれる。
【０２２０】
注射用製剤、例えば、無菌注射用水性又は油性懸濁液は、適当な分散剤、又は湿潤剤、及び／又は懸濁剤を使用して、公知の技術に従って製剤化されてもよい。滅菌注射用製剤は、非毒性の非経口的に許容される希釈剤及び／又は溶剤中の、例えば１，３−ブタンジオールの溶液としての滅菌注射用溶液、懸濁液、及び／又はエマルションであり得る。用いられてもよい許容できるビヒクル及び溶媒は、水、米国薬局方リンゲル液、及び等張塩化ナトリウム溶液である。無菌の不揮発性油が、溶媒又は懸濁媒として従来法で用いられる。この目的で、合成モノ又はジグリセリドをはじめとする、あらゆる無刺激不揮発性油が用いられ得る。脂肪酸などのオレイン酸が、注射剤の調製に使用され得る。
【０２２１】
注射用製剤は、例えば、細菌保持フィルターを通過させる濾過によって、及び／又は使用前に滅菌水又はその他の無菌注射用培地中に溶解又は分散され得る、無菌固体組成物の形態の滅菌剤を組み込むことによって、滅菌され得る。
【０２２２】
活性成分の効果を延長するために、皮下注射又は筋肉内注射からの有効成分の吸収を遅くすることがしばしば望ましい。これは、水溶性が劣る結晶性又は非晶質物質の液体懸濁液の使用によって、達成されてもよい。次に薬物の吸収速度は、その溶出速度に左右され、それは次に結晶サイズ及び結晶形態に左右されてもよい。代案としては、非経口的に投与される剤形の遅延性の吸収は、薬物をオイルビヒクルに溶解又は懸濁することによって達成される。注射用デポー形態は、ポリラクチド−ポリグリコリドなどの生分解性ポリマー内に、薬物の微小カプセル化マトリックスを形成することで製造される。薬物とポリマーの比率及び用いられる特定のポリマーの性質に応じて、薬物放出速度は調節され得る。その他の生分解性ポリマーの例としては、ポリ（オルトエステル）及びポリ（酸無水物）が挙げられる。デポー注射用製剤は、薬物を身体組織適合性のリポソーム又はマイクロエマルション中に封入することによって調製される。
【０２２３】
直腸内及び膣内投与
直腸内又は膣内投与のための組成物は、典型的には坐薬であり、それは環境温度で固体であるが体温では液体であり、したがって直腸又は膣窩洞内で溶融して活性成分を放出する、カカオ脂、ポリエチレングリコール又は坐薬ワックスなどの適切な非刺激性の賦形剤に、組成物を混合することで、調製され得る。
【０２２４】
経口投与
経口投与のための固体剤形としては、カプセル、錠剤、丸薬、粉末、及び顆粒が挙げられる。このような固体剤形では、活性成分は、クエン酸ナトリウム又はリン酸二カルシウム及び／又は充填剤又は増量剤（例えば、デンプン、乳糖、スクロース、グルコース、マンニトール、及びケイ酸）、結合剤（例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース、及びアカシア）、保湿剤（例えば、グリセロール）、崩壊剤（例えば、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモ又はタピオカデンプン、アルギン酸、特定のケイ酸塩、及び炭酸ナトリウム）、溶解遅延剤（例えば、パラフィン）、吸収促進剤（例えば、四級アンモニウム化合物）、湿潤剤（例えば、セチルアルコール及びモノステアリン酸グリセリン）吸収剤（例えば、カオリン及びベントナイト粘土）、及び潤滑剤（例えば、滑石、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム）、及びそれらの混合物などの少なくとも１つの不活性で薬学的に許容可能な賦形剤と混合される。カプセル、錠剤、及び丸薬の場合、剤形は、緩衝剤を含んでなってもよい。
【０２２５】
局所又は経皮投与
本明細書に記載されるように、本開示の化合物又は組成物は、局所投与のために製剤化されてもよい。皮膚は、容易にアクセスできるので、送達のための理想的な標的部位であってもよい。遺伝子発現は皮膚に制限されて非特異的毒性を潜在的に回避するだけでなく、皮膚内の特定の層及び細胞型にもまた制限される。
【０２２６】
送達された化合物又は組成物の皮膚発現の部位は、核酸送達の経路に依存するであろう。本発明の化合物又は組成物を皮膚に送達するために、（ｉ）局所塗布（例えば、局限的／局所的治療及び／又は美容用途のため）；（ｉｉ）皮内注射（例えば、局限／局所的治療及び／又は美容用途のため）；及び（ｉｉｉ）全身送達（例えば、皮膚及び真皮外領域の双方に影響する皮膚疾患の治療のため）の３つの経路が一般的に検討される。本発明の化合物又は組成物は、当該技術分野で公知のいくつかの異なるアプローチによって皮膚に送達され得る。
【０２２７】
一実施形態では、本発明は、本発明の方法を好都合に及び／又は効果的に実行するための様々な包帯（例えば、創傷包帯）又は絆創膏（例えば、接着絆創膏）を提供する。典型的には包帯剤又は絆創膏は、本明細書に記載される本開示の医薬組成物及び／又は化合物又は組成物の十分量を含み、使用者が対象の複数回の治療を実施できるようにしてもよい。
【０２２８】
一実施形態では、本発明は、２回以上の注射で送達される、化合物又は組成物を提供する。
組成物の局所及び／又は経皮投与のための剤形には、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、粉末、溶液、スプレー、吸入剤及び／又はパッチが含まれてもよい。一般的に、活性成分は、必要に応じて、滅菌条件下で、薬学的に許容可能な賦形剤及び／又は任意の所要の保存料及び／又は緩衝剤と混合される。
【０２２９】
さらに、本発明は、経皮パッチの使用を考察し、これはしばしば、身体への化合物の制御送達を提供するという追加的利点を有する。このような剤形は、例えば、化合物を適切な媒体に溶解及び／又は分配することによって、調製されてもよい。代案としては、又はそれに加えて、速度制御膜を提供することによって、及び／又は化合物をポリマーマトリックス及び／又はゲルに分散させることによって、速度が制御されてもよい。
【０２３０】
製剤に適した局所投与としては、リニメント剤やローションなどの液体及び／又は半液体製剤；クリーム、軟膏及び／又はペーストなどの水中油及び／又は油中水エマルション；及び／又は溶液及び／又は懸濁液が挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０２３１】
局所投与可能な製剤は、例えば、約１％〜約１０％（ｗ／ｗ）の活性成分を含んでなってもよいが、活性成分の濃度は、溶媒中の活性成分の溶解限度と同程度に高くてもよい。局所投与用の製剤は、本明細書に記載の追加的な成分の１つ又は複数をさらに含んでなってもよい。
【０２３２】
デポー投与
本明細書に記載されるように、いくつかの実施形態では、本発明の化合物又は組成物は、持続放出用のデポー剤に製剤化される。一般的に、特定の臓器又は組織（「標的組織」）が投与の標的になる。
【０２３３】
いくつかの実施形態では、本発明の化合物又は組成物は、標的組織内又は標的組織の近位に空間的に保持される。化合物又は組成物が標的組織に実質的に保持される、すなわち、少なくとも組成物の１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、９９．９、９９．９９又は９９．９９％以上が標的組織に保持されるような条件下で、１つ又は複数の標的組織（１つ又は複数の標的細胞を含む）を化合物又は組成物に接触させることによって、哺乳類対象の１つ又は複数の標的組織に化合物又は組成物を提供する方法が提供される。有利なことに、保持は、標的組織及び／又は細胞に入る組成物のレベルを測定することによって判定される。例えば、対象に投与された本発明の化合物又は組成物の少なくとも１、５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、９９．９、９９．９９又は９９．９９％以上が、投与後一定期間、細胞内に存在する。例えば、哺乳類対象への筋肉内注射が、本発明の水性組成物及び形質移入試薬を使用して実施され、組成物の保持は、筋肉細胞に存在する本発明の化合物又は組成物のレベルを測定することによって判定される。
【０２３４】
本発明の特定の態様は、化合物又は組成物が標的組織に実質的に保持されるような条件下で、標的組織（１つ又は複数の標的細胞を含有する）を化合物又は組成物と接触させることによって、哺乳類対象の標的組織に化合物又は組成物を提供する方法に関する。いくつかの実施形態では、目的の効果が少なくとも１つの標的細胞で生じるように、本開示の化合物又は組成物の有効量が使用されてもよい。化合物又は組成物は一般に細胞浸透剤及び薬学的に許容可能な担体を含有するが、「裸の」形態の化合物又は組成物（細胞浸透剤又はその他の薬剤を含まない化合物又は組成物など）もまた想定される。
【０２３５】
いくつかの実施形態では、化合物又は組成物は、複数の化合物又は組成物を含む。任意選択的に、組成物はまた、細胞浸透剤を含有して、組成物の細胞内送達を助ける。標的組織の所定の体積内に含有されるかなりの割合の細胞で（一般に、所定の体積に隣接する組織内、又は標的組織の遠位にある化合物を標的化することなく）、目的の標的を標的とするのに必要な組成物の用量を決定する。この決定に引き続いて、決定された用量が哺乳類対象の組織に直接導入されてもよい。
【０２３６】
一実施形態では、本発明は、２回以上の注射で又は分割投与注射によって送達される、化合物又は組成物を提供する。
肺内投与
医薬組成物は、頬側口腔を介した肺内与に適した製剤中で、調製、包装、及び／又は販売されてもよい。このような製剤は、活性成分を含み約０．５ｎｍ〜約７ｎｍ又は約１ｎｍ〜約６ｎｍの範囲の直径を有する、乾燥粒子をさらに含んでなってもよい。このような組成物は、適切には、それに対して粉体を分散させるために噴射剤の流れが向けられ得る乾燥粉末リザーバーを含む装置を使用する、及び／又は密封容器内の低沸点噴射剤に溶解及び／又は懸濁した活性成分を含む装置などの自走式溶剤／粉末分配容器を使用する、投与用の乾燥粉末の形態である。このような粉末は、重量で粒子の少なくとも９８％が０．５ｎｍを超える直径を有し、数で粒子の少なくとも９５％が７ｎｍ未満の直径を有する、粒子を含む。代案としては、重量で粒子の少なくとも９５％が１ｎｍを超える直径を有し、数で粒子の少なくとも９０％が６ｎｍ未満の直径を有する。乾燥粉末組成物は、砂糖などの固体微粉末希釈剤を含んでもよく、好都合には単位用量形態で提供される。
【０２３７】
低沸点噴射剤は、一般に、大気圧で１８．３３３３℃（６５°Ｆ）未満の沸点を有する液体噴射剤を含む。一般に、推進剤は組成物の５０％〜９９．９％（ｗ／ｗ）を構成してもよく、活性成分は組成物の０．１％〜２０％（ｗ／ｗ）を構成してもよい。噴射剤は、液体非イオン性及び／又は固体アニオン性界面活性剤及び／又は固体希釈剤（活性成分を含む粒子と同程度の粒度を有してもよい）などの追加的成分をさらに含んでなってもよい。
【０２３８】
肺送達用に製剤化された医薬組成物は、溶液及び／又は懸濁液の液滴の形態で活性成分を提供してもよい。このような製剤は、活性成分を含む任意選択的に滅菌された水性及び／又は希釈アルコール性溶液及び／又は懸濁液として、調製、包装、及び／又は販売されてもよく、好都合には任意の噴霧化及び／又は微粒化装置を使用して投与されてもよい。このような製剤は、サッカリンナトリウムや揮発油などの香味剤、緩衝剤、表面活性剤、及び／又はメチルヒドロキシ安息香酸などの保存料をはじめとするが、これに限定されるものではない、１つ又は複数の追加的な成分をさらに含んでなってもよい。この投与経路により提供される液滴は、約０．１ｎｍ〜約２００ｎｍの範囲の平均直径を有してもよい。
【０２３９】
鼻腔内、経鼻、及びバッカル投与
本明細書で肺送達に有用であると記載されている製剤は、医薬組成物の鼻腔内送達に有用である。鼻腔内投与に適した別の製剤は、活性成分を含み約０．２μｍ〜５００μｍの平均粒子を有する粗粉末である。このような製剤は、嗅剤が鼻吸入される、すなわち鼻近くに保持される粉末容器からの鼻腔を介する迅速な吸入の様式で投与される。
【０２４０】
経鼻投与に適した製剤は、例えば、わずか約０．１％（ｗ／ｗ）から１００％（ｗ／ｗ）に至る有効成分を含み、本明細書に記載の１つ又は複数の追加的成分を含んでもよい。医薬組成物は、バッカル投与に適した製剤で、調製、包装、及び／又は販売されてもよい。このような製剤は、例えば、従来法を使用して製造された錠剤及び／又はロゼンジの形態であってもよく、例えば、０．１％〜２０％（ｗ／ｗ）の活性成分を有してもよく、残りは、経口溶解性及び／又は分解性組成物、そして任意選択的、本明細書に記載の１つ又は複数の追加的成分を含む。交互に（Ａｌｔｅｒｎａｔｅｌｙ）、バッカル投与に適した製剤は、活性成分を含む粉末及び／又はエアロゾル化及び／又は噴霧化された溶液及び／又は懸濁液を含んでなってもよい。このような粉末状のエアロゾル化された、及び／又はエアロゾル化された製剤は、分散すると、約０．１ｎｍ〜約２００ｎｍの範囲の平均粒子及び／又は液滴サイズを有してもよく、本明細書に記載の任意の追加的な成分の１つ又は複数をさらに含んでなってもよい。
【０２４１】
眼又は耳への投与
医薬組成物は、眼又は耳投与に適した製剤で、調製、包装、及び／又は販売されてもよい。このような製剤は、例えば、水性又は油性液体賦形剤中に０．１〜１．０％（ｗ／ｗ）の活性成分の溶液及び／又は懸濁液を含む、点眼薬又は点耳薬の形態であってもよい。このような滴剤は、緩衝剤、塩、及び／又は本明細書に記載の１つ又は複数の任意の追加的成分をさらに含んでなってもよい。有用なその他の眼に投与可能な製剤としては、微結晶形態の及び／又はリポソーム性調製物中の活性成分を含むものが挙げられる。網膜下挿入物もまた、投与形態として使用されてもよい。
【０２４２】
ペイロード投与
本明細書に記載される本発明の化合物又は組成物は、例えば、標的を検出するための検出可能な物質の送達又は治療薬若しくは診断薬の送達など、その中で生物学的標的への物質の送達（「ペイロード」）が望ましいいくつかの異なるシナリオで使用されてもよい。検出方法には、例えば、免疫組織化学検査、生物発光画像法（ＢＬＩ）、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）、電子顕微鏡検査、Ｘ線コンピュータ断層撮影、ラマン画像法、光干渉断層撮影、吸収画像法、赤外線画像、蛍光反射画像法、蛍光顕微鏡検査、蛍光分子断層撮影、核磁気共鳴画像法、Ｘ線画像法、超音波画像法、光音響画像法、ラボアッセイ、又は標識付け／染色／画像法が必要なあらゆる状況などの、生体外及び生体内画像検査法の双方の画像法が含まれ得るが、これに限定されるものではない。
【０２４３】
本開示の化合物又は組成物は、任意の有用な配向でリンカー及びペイロードの双方を含むように設計され得る。例えば、２つの末端を有するリンカーを使用して、一端をペイロードに付着させ、他端を本開示の化合物又は組成物に付着させる。いくつかの実施形態では、本発明の化合物又は組成物は、２つ以上のペイロード並びに切断可能リンカーを含み得る。別の例では、リンカーを介して本開示の化合物又は組成物に付着されてもよく、蛍光標識されてもよい薬物を使用して、薬物が、例えば細胞内などの生体内で追跡され得る。
【０２４４】
その他の例としては、細胞への可逆的薬物送達における、本開示の化合物又は組成物の使用が挙げられるが、これに限定されるものではない。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される本開示の化合物又は組成物は、例えば検出可能薬又は治療薬などの特定細胞小器官へのペイロードの細胞内標的化に使用され得る。さらに、本開示の化合物又は組成物を使用して、例えば生きている動物の細胞又は組織に治療薬が送達されてもよい。例えば、本明細書に記載の化合物又は組成物を使用して、化学療法剤を送達してがん細胞を死滅させてもよい。リンカーを介して治療薬に付着した本明細書に記載の化合物又は組成物は、膜透過を促進し得て、治療薬が細胞内に移動し細胞内標的に到達できるようにする。
【０２４５】
いくつかの実施形態では、ペイロードは、細胞毒、放射性イオン、化学療法薬、又はその他の治療薬などの治療薬であってもよい。細胞毒又は細胞傷害性薬としては、細胞に有害であってもよいあらゆる薬剤が挙げられる。例としては、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テニポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラセンジオン（ｄｉｈｙｄｒｏｘｙａｎｔｈｒａｃｉｎｅｄｉｏｎｅ）、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、ピューロマイシン、そして例えばメイタンシノール（その全体が本明細書に援用される、米国特許第５，２０８，０２０号明細書を参照されたい）などのメイタンシノイド、ラケルマイシン（ＣＣ−１０６５、全て参照により本明細書に援用される、米国特許第５，４７５，０９２号明細書、米国特許第５，５８５，４９９号明細書、及び米国特許第５，８４６，５４５号明細書を参照されたい）、及びそれらの類似体又はホモログが挙げられるが、これに限定されるものではない。放射性イオンとしては、ヨウ素（例えば、ヨウ素１２５又はヨウ素１３１）、ストロンチウム８９、亜リン酸、パラジウム、セシウム、イリジウム、リン酸塩、コバルト、イットリウム９０、サマリウム１５３、及びプラセオジムが挙げられるが、これに限定されるものではない。その他の治療剤としては、代謝拮抗剤（例えば、メトトレキサート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルダカルバジン（ｄｅｃａｒｂａｚｉｎｅ））、アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオテパクロランブシル、ラケルマイシン（ＣＣ−１０６５）、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、及びシス−ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（元ダウノマイシン）及びドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（旧称アクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン、及びアントラマイシン（ＡＭＣ））、及び糸分裂阻害剤（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、タキソール、及びメイタンシノイド）が挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０２４６】
いくつかの実施形態では、ペイロードは、種々の有機小分子、無機化合物、ナノ粒子、酵素又は酵素基質、蛍光物質、発光物質（例えば、ルミノール）、生物発光物質（例えば、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、及びエクオリン）、化学発光物質、放射性物質（例えば、１８Ｆ、６７Ｇａ、８１ｍＫｒ、８２Ｒｂ、１１１Ｉｎ、１２３Ｉ、１３３Ｘｅ、２０１Ｔｌ、１２５Ｉ、３５Ｓ、１４Ｃ、３Ｈ、又は９９ｍＴｃ（例えば、過テクネチウム酸塩（テクネチウム酸塩（ＶＩＩ）、ＴｃＯ４−）として）、及び造影剤（例えば、金（例えば、金ナノ粒子）、ガドリニウム（例えば、キレート化Ｇｄ）、酸化鉄（例えば、超常磁性酸化鉄（ＳＰＩＯ）、単結晶酸化鉄ナノ粒子（ＭＩＯＮ）、及び超小型超常磁性酸化鉄（ＵＳＰＩＯ））、マンガンキレート（例えば、Ｍｎ−ＤＰＤＰ）、硫酸バリウム、ヨウ化造影剤（イオヘキソール）、マイクロバブル、又はパーフルオロカーボン）などの検出可能薬剤であってもよい。このような光学的に検出可能な標識としては、例えば、制限なしに、４−アセタミド−４’−イソチオシアナトスチルベン−２，２’ジスルホン酸；アクリジン及び誘導体（例えば、アクリジン及びイソチオシアン酸アクリジン）；５−（２’−アミノエチル）アミノナフタレン−１−スルホン酸（ＥＤＡＮＳ）；４−アミノ−Ｎ−［３−ビニルスルホニル）フェニル］ナフタルイミド−３，５−ジスルホネート；Ｎ−（４−アニリノ−１−ナフチル）マレイミド；アントラニルアミド；ボディピー（ＢＯＤＩＰＹ）；ブリリアントイエロー；クマリン及び誘導体（例えば、クマリン、７−アミノ−４−チルクマリン（ＡＭＣ、クマリン１２０）、及び７−アミノ−４−トリフルオロチルクマリン（クマリン１５１））；シアニン染料；シアノシン；４’，６−ジアミジノ（ｄｉａｍｉｎｉｄｉｎｏ）−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）；５’５”−ジブロモピロガロール−スルホナフタレイン（ブロモピロガロールレッド）；７−ジエチルアミノ−３−（４’−イソチオシアナトフェニル）−４−チルクマリン；ジエチレントリアミン五酢酸；４，４’−ジイソチオシアナトジヒドロ−スチルベン−２，２’−ジスルホン酸；４，４’−ジイソチオシアナトスチルベン−２，２’−ジスルホン酸；５−［ジメチルアミノ］−ナフタレン−１−塩化スルホニル（ＤＮＳ、塩化ダンシル）；４−ジメチルアミノフェニルアゾフェニル−４’−イソチオシアネート（ＤＡＢＩＴＣ）；エオシン及び誘導体（例えば、エオシン及びエオジンイソチオシアネート）；エリスロシン及び誘導体（例えば、エリスロシンＢ及びエリスロシンイソチオシアネート）；エチジウム；フルオレセイン及び誘導体（例えば、５−カルボキシフルオレセイン（ＦＡＭ）、５−（４，６−ジクロロトリアジン−２−イル）アミノフルオレセイン（ＤＴＡＦ）、２’，７’−ジメトキシ−４’５’−ジクロロ−６−カルボキシフルオレセイン、フルオレセイン、イソチオシアン酸フルオレセイン、Ｘ−ローダミン−５−（及び−６）−イソチオシアネート（ＱＦＩＴＣ又はＸＲＩＴＣ）、及びフルオレスカミン）；２−［２−［３−［［１，３−ジヒドロ−１，１−ジメチル−３−（３−スルホプロピル）−２Ｈ−ベンズ［エ］インドール−２−イルイデン］エチリデン］−２−［４−（エトキシカルボニル）−１−ピペラジニル］−１−シクロペンテン−１−イル］エテニル］−１，１−ジメチル−３−（３−スルホプロピル（ｓｕｌｆｏｒｐｒｏｐｙｌ））−１Ｈ−ベンズ［エ］インドリウム水酸化物、分子内塩、ｎ，ｎ−ジエチルエタンアミン（１：１）（ＩＲ１４４）との化合物；５−クロロ−２−［２−［３−［（５−クロロ−３−エチル−２（３Ｈ）−ベンゾチアゾール−イルイデン）エチリデン］−２−（ジフェニルアミノ）−１−シクロペンテン−１−イル］エテニル］−３−エチルベンゾチアゾリウムパークロレート（ＩＲ１４０）；マラカイトグリーンイソチオシアン酸塩；４−メチルウンベリフェロンオルトクレゾールフタレイン；ニトロチロシン；パラローザニリン；フェノールレッド；Ｂ−フィコエリトリン；ｏ−フタルジアルデヒド；ピレン及び誘導体（例えば、ピレン、酪酸ピレン、及びスクシンイミジル１−ピレン）；酪酸塩量子ドット；リアクティブレッド４（シバクロン（ＣＩＢＡＣＲＯＮ）（商標）ブリリアントレッド３Ｂ−Ａ）；ローダミン及び誘導体（例えば、６−カルボキシ−Ｘ−ローダミン（ＲＯＸ）、６−カルボキシローダミン（Ｒ６Ｇ）、リサミンローダミンＢ塩化スルホニルローダミン（ｒｈｏｄａｒｎｉｎｅ）（Ｒｈｏｄ）、ローダミンＢ、ローダミン１２３、ローダミンＸイソチオシアネート、スルホローダミンＢ、スルホローダミン１０１、スルホローダミン１０１（テキサスレッド）の塩化スルホニル誘導体、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−６−カルボキシローダミン（ＴＡＭＲＡ）テトラメチルローダミン、及びテトラメチルローダミンイソチオシアネート（ＴＲＩＴＣ））；リボフラビン；ロゾール酸；テルビウムキレート化誘導体；シアニン−３（Ｃｙ３）；シアニン−５（Ｃｙ５）；シアニン−５．５（Ｃｙ５．５）、シアニン−７（Ｃｙ７）；ＩＲＤ７００；ＩＲＤ８００；アレクサ（Ａｌｅｘａ）６４７；ラ・ホヤ・ブルー（Ｌａ  Ｊｏｌｔａ  Ｂｌｕｅ）；フタロシシアニン；及びナフタロシアニンが挙げられる。
【０２４７】
いくつかの実施形態では、検出可能薬剤は、活性化時に検出可能になる検出不能前駆体（例えば、蛍光発生テトラジン−フルオロフォアコンストラクト（例えば、テトラジン−ボディピー（ＢＯＤＩＰＹ）ＦＬ、テトラジン−オレゴングリーン４８８、又はテトラジン−ボディピー（ＢＯＤＩＰＹ）ＴＭＲ−Ｘ）、又は酵素活性化可能な蛍光発生剤（例えば、プロセンス（ＰＲＯＳＥＮＳＥ）（登録商標）（ビスエン・メディカル（ＶｉｓＥｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ）））であってもよい。酵素標識された組成物が使用され得る生体外アッセイとしては、酵素結合免疫吸着アッセイ（エライザ（ＥＬＩＳＡ））、免疫沈降アッセイ、免疫蛍光アッセイ、酵素免疫アッセイ（ＥＩＡ）、放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）、及びウエスタンブロット分析が挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０２４８】
用量
本開示の化合物又は組成物は、薬物送達の科学における有望な進歩を勘案した適切な経路により、治療、医薬、診断又は画像法のいずれかのために送達されてもよい。送達は、裸でも又は配合中でもよい。
【０２４９】
裸の送達
いくつかの実施形態では、本開示の化合物又は組成物は、細胞、組織、器官又は生物に裸の形態で送達されてもよい。本明細書用法では、「裸の」という用語は、形質移入又は透過性を促進する薬剤又は修飾を含まない送達を指す。本開示の化合物又は組成物は、当該技術分野で公知の及び本明細書に記載される投与経路を使用して、細胞、組織、器官及び／又は生物に送達されてもよい。裸の送達には、生理食塩水又はＰＢＳなどの単純な緩衝液中の製剤が含まれてもよい。
【０２５０】
製剤化された送達
いくつかの実施形態では、本開示の化合物又は組成物は、本明細書に記載の方法を使用して製剤化されてもよい。製剤は、修飾及び／又は非修飾であってもよい、本開示の化合物又は組成物を含んでもよい。製剤は、これに限定されるものではないが、細胞浸透剤、薬学的に許容される担体、送達剤、生体内分解性又は生体適合性ポリマー、溶剤、及び徐放性送達デポー剤をさらに含んでもよい。本開示の化合物又は組成物は、当該技術分野で公知の及び本明細書に記載される投与経路を使用して、細胞に送達されてもよい。
【０２５１】
化合物又は組成物は、直接浸漬又は湯浴、カテーテルを経由して、ゲル、粉末、軟膏、クリーム、ゲル、ローション、及び／又は滴剤によって、化合物又は組成物で被覆又は含浸された布帛又は生分解性物質などの基材を使用することによってなどであるが、これに限定されるものではない、当該技術分野のいくつかの方法のいずれかで、臓器又は組織に直接送達するために製剤化されてもよい。
【０２５２】
投薬
本発明は、本発明による本発明の化合物又は組成物の１つ又は複数を、それを必要とする対象に投与するステップを含む方法を提供する。抗体をコードする核酸、タンパク質、又は本開示の化合物又は組成物を含む複合体、又は医薬、画像法、診断、又は予防的な化合物又はその組成物は、疾患、障害、及び／又は病状の予防、治療、診断、又は画像法に有効な任意の量及び任意の投与経路を使用して、対象に投与されてもよい。必要な正確な量は、対象の生物種、年齢、及び全身状態、疾患の重症度、特定の組成物、その投与様式、その活動様式などに応じて、対象毎に変動するであろう。本発明による化合物又は組成物は、典型的には、投与の容易さ及び投与量の均一性のために、投与単位形態で製剤化される。しかし、本発明の化合物又は組成物の１日の総使用量は、健全な医学的判断の範囲内で、主治医によって決定されることが理解されるであろう。特定の対象に対する特定の治療的に有効である、予防的に有効である、又は画像法に適する、投与レベルは、治療される障害及び障害の重症度；用いられる特定の化合物の活性；用いられる特定の組成物；患者の年齢、体重、総体的な健康、性別、及び食生活；投与時間、投与経路、及び用いられる特定の化合物の排泄速度；治療の持続時間；用いられる特定の化合物と組み合わせて又は同時に使用される薬物；及び医学分野で周知の同様の要因をはじめとする、様々な要因に依存する。
【０２５３】
特定の実施形態では、本発明による化合物又は組成物は、１日１回又は複数回、対象の体重１日当たり、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ〜約５．０ｍｇ／ｋｇ、又は約１ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇを送達して、所望の治療、診断、予防、又は画像法効果を得るのに十分な用量レベルで投与されてもよい。所望の投与量は、１日３回、１日２回、１日１回、１日おき、３日毎、毎週、２週間毎、３週間毎、又は４週間毎に送達されてもよい。特定の実施形態では、所望の投与量は、複数回の投与（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４回、又はそれ以上の投与）を使用して送達されてもよい。
【０２５４】
本発明によれば、本開示の化合物又は組成物は、分割用量レジメンで投与され得る。本明細書の用法では、「分割用量」は、例えば、単回単位用量の２回以上の投与などの、単回単位用量又は総１日用量を２回以上の用量に分割することである。本明細書の用法では、「単回単位用量」は、１用量／１回／１経路／単一接触点、すなわち、単回投与事象において投与される任意の治療薬の用量である。本明細書で使用される「総１日用量」は、２４時間の間に与えられ又は処方される量である。それは、単回単位用量として投与されてもよい。一実施形態では、本開示の化合物又は組成物は、分割用量で対象に投与される。本開示の化合物又は組成物は、緩衝剤のみで製剤化されても、又は本明細書に記載の製剤に製剤化されてもよい。本明細書に記載の本発明の医薬組成物は、局所、鼻腔内、気管内、又は注射可能（例えば、静脈内、眼内、硝子体内、筋肉内、心臓内、腹腔内又は皮下）などの本明細書に記載の剤形に製剤化されてもよい。医薬品の調製及び／又は製造における一般的な考察事項は、例えば、「レミントン：薬学の科学と実践（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ）」、第２１版、リッピンコット、ウィリアムズ＆ウィルキンズ（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ）、２００５年（参照により本明細書に援用される）に見いだされる。
【０２５５】
いくつかの実施形態では、本開示の組成物の用量は、バイスタンダー効果を低減するために調節されてもよい。本明細書の用法では、「バイスタンダー効果」は、非標的細胞に対する、又は標的細胞に隣接する細胞（本明細書ではバイスタンダー細胞とも呼ばれる）対する、負の効果を指す。このような方法によれば、バイスタンダー効果を低減するために、用量又はコンジュゲートの種類が調節調されてもよい。このような調節は、９５％を超える、９０％を超える、８５％を超える、８０％を超える、７５％を超える、７０％を超える、６５％を超える、６０％を超える、５５％を超える、５０％を超える、４５％を超える、４０％を超える、３５％を超える、３０％を超える、又は２５％を超えるバイスタンダー細胞が生存したままである治療をもたらしてもよい。
【０２５６】
コーティング又はシェル
錠剤、糖衣丸、カプセル、丸薬、及び顆粒の固体剤形は、腸内コーティング及び製剤処方技術分野で周知のその他のコーティングなどのコーティング及びシェルを用いて調製され得る。それらは任意選択的に不透明剤を含んでなってもよく、それらは腸管の特定部分のみで又は優先的に、活性成分を任意選択的に遅延様式で放出する組成物であってもよい。使用され得る包埋組成物の例としては、ポリマー物質、及びワックスが挙げられる。類似タイプの固体組成物が、乳糖又は乳糖類、並びに高分子量ポリエチレングリコールなどの賦形剤を使用する、軟質及び硬質充填ゼラチンカプセル中の充填剤として用いられてもよい。
【０２５７】
組み合わせ
いくつかの実施形態では、本開示の化合物又は組成物は、１つ又は複数のその他の治療薬、予防薬、診断薬、又は造影剤と組み合わせて使用されてもよい。「と組み合わせて」によって、薬剤を同時に投与すべき、及び／又は一緒に送達するために製剤化すべきであることの暗示は意図されないが、これらの送達方法は本開示の範囲内である。化合物又は組成物は、１つ又は複数のその他の所望の治療又的は医学的手順と同時に、その前に、又はその後に投与され得る。一般に、各薬剤は、その薬剤に対して決定された用量及び／又は時間スケジュールで投与される。いくつかの実施形態では、本開示は、生物学的利用能を改善し、代謝を低減及び／又は変更し、排泄を阻害し、及び／又は体内分布を変更してもよい、薬剤と組み合わされた、医薬、予防、診断、及び／又は画像法組成物の送達を包含する。
【０２５８】
測定
生物学的利用能
本発明の化合物及び組成物は、本明細書に記載の送達／製剤化剤又はビヒクルと共に組成物に製剤化されると、本明細書に記載の送達剤を欠く組成物と比較して、生物学的利用能の増加を呈し得る。本明細書の用法では、「生物学的利用能」という用語は、哺乳類に投与された本発明の化合物及び組成物の所与の量の全身的利用可能性を指す。生物学的利用能は、哺乳類への化合物の投与に続く化合物の無変化形態の曲線下面積（ＡＵＣ）又は最大血清又は血漿濃度（Ｃｍａｘ）を測定することによって、評価され得る。ＡＵＣは、横座標（Ｘ軸）に沿った時間に対して、縦座標（Ｙ軸）に沿った化合物の血清又は血漿濃度をプロットする、曲線下面積の判定である。一般に、特定の化合物のＡＵＣは、当業者に知られており、本明細書に参照により援用される、Ｇ．Ｓ．バンカー（Ｇ．Ｓ．Ｂａｎｋｅｒ）、「現代薬剤学、薬剤、及び薬学（Ｍｏｄｅｒｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ、Ｄｒｕｇｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ）」、第７２巻、マルセル・デッカー（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ）、ニューヨーク、Ｉｎｃ．１９９６年に記載されるような方法を使用して、計算され得る。
【０２５９】
Ｃｍａｘ値は、哺乳類への化合物の投与に続いて、哺乳類の血清又は血漿中で達成される化合物の最大濃度である。特定の化合物のＣｍａｘ値は、当業者に知られている方法を用いて測定され得る。語句「生物学的利用能の増加」又は「薬物動態の改善」は、本明細書の用法では、哺乳類におけるＡＵＣ、Ｃｍａｘ、又はＣｍｉｎとして測定される本発明の化合物及び組成物の全身的利用可能性が、本明細書に記載の送達剤と同時投与された場合、そのような同時投与が行われない場合よりも大きいことを意味する。いくつかの実施形態では、本発明の化合物及び組成物の生物学的利用能は、少なくとも約２％、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、又は約１００％増加し得る。
【０２６０】
治療濃度域
本発明の化合物及び組成物は、本明細書に記載の送達剤と共に組成物に製剤化された場合、本明細書に記載の送達剤を欠く投与された化合物及び組成物の治療濃度域と比較して、投与された本発明の化合物及び組成物の治療濃度域の増加を呈し得る。本明細書の用法では、「治療濃度域」は、治療効果を引き出す可能性が高い、作用部位における治療活性物質の血漿濃度範囲又はレベル範囲を指す。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の送達剤と同時投与された場合の本発明の化合物及び組成物の治療濃度域は、少なくとも約２％、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、又は約１００％増加し得る。
【０２６１】
いくつかの実施形態において、本発明の化合物及び組成物は、投与後、少なくとも２日間、少なくとも５日間、少なくとも１０日間、少なくとも２週間、少なくとも４週間、少なくとも２ヶ月、少なくとも６ヶ月、又は少なくとも１年にわたり対象サンプル中で検出可能である。
【０２６２】
分布容積
本発明の化合物及び組成物は、本明細書に記載の送達剤と共に組成物に製剤化されると、本明細書に記載の送達剤を欠く組成物と比較して、例えば、減少又は標的化などの改善された分布容積（Ｖｄｉｓｔ）を呈し得る。分布容積（Ｖｄｉｓｔ）は、体内の薬物の量を血液又は血漿中の薬物の濃度に関連付ける。本明細書の用法では「分布容積」という用語は、血液又は血漿中と同一濃度で、体内の薬物の総量を含有するのに必要な液量を指し：Ｖｄｉｓｔは体内薬物量／血液又は血漿中の薬物濃度に等しい。例えば、１０ｍｇの用量及び１０ｍｇ／Ｌの血漿濃度の場合、分布容積は１リットルになる。分布容積は、血管外組織に薬物が存在する程度を反映する。大量の分布容積は、血漿タンパク質結合と比較して、化合物が組織構成要素に結合する傾向を反映する。臨床状況では、Ｖｄｉｓｔを使用して、定常状態の濃度を達成する初回負荷量が判定され得る。いくつかの実施形態では、送達剤との同時投与を使用して、本開示の化合物及び／又は組成物の分布容積が調節されてもよい。例えば、分布容積は、少なくとも約２％、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、又は少なくとも約７０％減少してもよい。
【０２６３】
いくつかの実施形態では、本発明の化合物及び組成物は、１つ又は複数の薬学的に許容可能な賦形剤と組み合わされた、組成物及び／又は複合体を含む。医薬組成物は、例えば、治療的及び／又は予防的活性物質などの１つ又は複数の追加的活性物質を任意選択的に含んでなってもよい。医薬品の調製及び／又は製造における一般的な考察事項は、例えば、「レミントン：薬学の科学と実践（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ）」、第２１版、リッピンコット、ウィリアムズ＆ウィルキンズ（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ）、２００５年に見いだされる（参照により本明細書に援用される）。
【０２６４】
いくつかの実施形態では、組成物は、ヒト、ヒト患者又は対象に投与される。本開示の目的で、「活性成分」という語句は、本明細書に記載されるように送達される、本発明の化合物及び組成物を一般に指す。
【０２６５】
本明細書で提供される医薬組成物の説明は、主にヒトへの投与に適した医薬組成物を対象とするが、このような組成物は、一般に、例えば非ヒト動物、例えば非ヒト哺乳類などの任意のその他の動物投与に適することが当業者によって理解されるであろう。組成物を種々の動物への投与に適したものにするための、ヒトへの投与に適した医薬組成物の改変は良く理解されており、通常の獣医薬理学者は、たとえあったとしても単に通常の実験で、そのような改変を設計及び／又は実施し得る。それに対する医薬組成物の投与が想定される対象としては、ヒト及び／又は他の霊長類；畜牛、豚、馬、羊、猫、犬、マウス、及び／又はラットなどの商業的価値を持つ哺乳類をはじめとする哺乳類；及び／又は家禽、鶏、鴨、ガチョウ、及び／又は七面鳥などの商業的価値を持つ鳥類をはじめとする鳥類が挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０２６６】
本明細書に記載の医薬組成物の製剤は、薬理学の分野で既知の又は今後開発される任意の方法によって調製されてもよい。一般に、このような調製方法は、活性成分を賦形剤及び／又は１つ又は複数のその他の副成分と結合させ、次に、必要である及び／又は望ましい場合、望ましい単回又は複数回投与ユニットに、製品を分割、成形及び／又は包装するステップを含む。
【０２６７】
本発明による医薬組成物は、単回単位用量として、及び／又は複数の単回単位用量として、バルクで調製、包装、及び／又は販売されてもよい。本明細書の用法では、「単位用量」は、所定量の活性成分を含む医薬組成物の個別の量である。活性成分の量は、一般に、対象に投与される活性成分の用量に等しく、及び／又は例えば、そのような投与量の半分又は３分の１などのそのような用量の便利な画分に等しい。
【０２６８】
本発明による医薬組成物中の活性成分、薬学的に許容可能な賦形剤、及び／又は任意の追加的成分の相対量は、治療される対象のアイデンティティ、サイズ、及び／又は状態に応じて、さらには組成物がそれによって投与される経路に応じて、変動するであろう。例として、組成物は、例えば、０．５〜５０％、１〜３０％、５〜８０％、又は少なくとも８０％（ｗ／ｗ）などの０．１％〜１００％の活性成分を含んでなってもよい。一実施形態では、活性成分はがん細胞に対する抗体である。
【０２６９】
診断及びモニタリング用途
いくつかの実施形態では、本開示は、対象サンプルを取得するステップと；対象サンプルをＣＤ５９捕捉抗体を有する基材に適用するステップと；アマドリ修飾ＧＣＤ５９検出抗体を適用するステップと；アマドリ修飾ＧＣＤ５９検出抗体を検出するステップとを含む、ＧＣＤ５９を検出する方法を提供する。対象サンプルには、細胞、組織、組織切片、そして例えば、尿、血液、汗、血清、血漿、及び唾液などの体液の１つ又は複数が含まれてもよいが、これに限定されるものではない。
【０２７０】
いくつかの方法によれば、サンプルは前処理なしで使用される。場合によっては、サンプルは分析に先だって希釈されてもよい。このような希釈は、少なくとも１０：１、少なくとも５：１、少なくとも２：１、少なくとも１：１、少なくとも１：１０、少なくとも１：１００、少なくとも１：１，０００、少なくとも１：１０，０００、少なくとも１：１００，０００、少なくとも１：１，０００，０００、少なくとも１：１０９、少なくとも１：１０１２、又は少なくとも１：１０１５であってもよい。場合によっては、サンプルは約１：２００〜約１：３００に希釈される。場合によっては、サンプルは、分析に先だって、還元剤、酸化剤、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、及び／又はβ−メルカプトエタノール（ＢＭＥ）で処理される。
【０２７１】
本明細書の用法では、「還元剤」という用語は、酸化還元反応に関与し又はその中で使用される、電子供与体化学物質又は化合物を指す。いくつかの実施形態では、還元剤は、水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ４）及びシアノ水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＣＮＢＨ３）から選択される。還元剤によるサンプル前処理を実施して、例えば、還元Ｋ４１によるＧＣＤ５９の検出剤認識のために、糖化側鎖構造が修飾されてもよい。ＮａＣＮＢＨ３処理は、シッフ塩基糖化Ｋ４１をグルシトールリジンに還元する。ＮａＢＨ４処理は、シッフ塩基糖化Ｋ４１及びアマドリ修飾糖化Ｋ４１の双方をグルシトールリジンに還元する。
【０２７２】
還元剤は、単独で又は溶液中（本明細書では「還元剤溶液」と称される）で使用されてもよい。還元剤溶液には、様々な溶剤のいずれかが含まれてもよい。いくつかの実施形態では、還元剤溶液は水を含む。いくつかの実施形態では、還元剤溶液は有機溶剤を含む。有機溶剤は、炭素ベースの構成要素を含む溶剤である。いくつかの実施形態では、有機溶剤には、１，１−ジクロロエタン、１，２−ジクロロエタン、１，２−ジメトキシ−エタン、１−ブタノール、１−ヘプタノール、１−ヘキサノール、１−オクタノール、１−ペンタノール、１−プロパノール、２−アミノエタノール、２−ブタノール、２−ブタノン、ビス（２−メトキシエチル）エーテル、２−ペンタノール、２−ペンタノン、２−プロパノール、３−ペンタノール、３−ペンタノン、酢酸、アセトン、アセトニトリル、アセチルアセトン、アニリン、アニソール、ベンゼン、ベンゾニトリル、ベンジルアルコール、二硫化炭素、四塩化炭素、クロロベンゼン、クロロホルム、シクロヘキサン、シクロヘキサノール、シクロヘキサノン、ジエチルエーテル、ジエチルアミン、ジエチレングリコール、ジグリム、ジメトキシエタン（グリム）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジメチルエーテル、Ｎ，Ｎ−ジメチル−ホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ，Ｎ−ジメチル−アセトアミド、ジメチルフタル酸、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジ−ｎ−フタル酸ブチル、ジオキサン、エタノール、エーテル、酢酸エチル、エチルアセト酢酸、安息香酸エチル、エチレングリコール、グリセリン、ヘプタン、２−エチルヘキサノール、ヘキサメチルホスホラミド、ヘキサメチル亜リン酸トリアミド（ＨＭＰＴ）、ヘキサン、ｉ−ブタノール、メタノール、酢酸メチル、メチルｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）、塩化メチレン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン、ニトロメタン、Ｎ−メチル−２−ピロリジノン、ペンタン、石油エーテル（リグロイン）、ピリジン、ｔ−ブチルアルコール、テトラグリム、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、トルエン、トリエチルアミン、ニトロメタン、及びトリエチレングリコールジメチルエーテルが含まれてもよいが、これに限定されるものではない。いくつかの実施形態では、還元剤溶液は、トリエチレングリコールジメチルエーテル、ビス（２−メトキシエチル）エーテル及び／又はテトラグリム溶剤を含んでなってもよい。
【０２７３】
有機溶媒を含む還元剤溶液には、ＮａＢＨ４溶液が含まれてもよい。このような溶液には、市販の製剤（例えば、ミズーリ州セントルイスのシグマアルドリッチ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）から）が含まれてもよく、又はそれから調製されてもよい。このような商業的調製物には、ビス（２−メトキシエチル）エーテル中の９９％水素化ホウ素ナトリウム溶液０．５Ｍ；テトラグリムエーテル中の９９％水素化ホウ素ナトリウム溶液３Ｍ；トリエチレングリコールジメチルエーテル中の９９％水素化ホウ素ナトリウム溶液２．０Ｍ；ビス（２−メトキシエチル）エーテル中の９９．５％水素化ホウ素ナトリウム溶液０．５Ｍ；テトラグリムエーテル中の９９．５％水素化ホウ素ナトリウム溶液３Ｍ；トリエチレングリコールジメチルエーテル中の９９．５％水素化ホウ素ナトリウム溶液２．０Ｍ；テトラグリムエーテル中の９９．９％水素化ホウ素ナトリウム溶液３Ｍ；トリエチレングリコールジメチルエーテル中の９９．９％水素化ホウ素ナトリウム溶液２．０Ｍ；ビス（２−メトキシエチル）エーテル中の９９．９５％水素化ホウ素ナトリウム溶液０．５Ｍ；テトラグリムエーテル中の９９．９５％水素化ホウ素ナトリウム溶液３Ｍ；トリエチレングリコールジメチルエーテル中の９９．９５％水素化ホウ素ナトリウム溶液２．０Ｍ；ビス（２−メトキシエチル）エーテル中の９９．９９％水素化ホウ素ナトリウム溶液０．５Ｍ；テトラグリムエーテル中の９９．９９％水素化ホウ素ナトリウム溶液３Ｍ；トリエチレングリコールジメチルエーテル中の９９．９９％水素化ホウ素ナトリウム溶液２．０Ｍ；ビス（２−メトキシエチル）エーテル中の９９．９９９％水素化ホウ素ナトリウム溶液０．５Ｍ；テトラグリムエーテル中の９９．９９９％水素化ホウ素ナトリウム溶液３Ｍ；トリエチレングリコールジメチルエーテル中の９９．９９９％水素化ホウ素ナトリウム溶液２．０Ｍ；及びビス（２−メトキシエチル）エーテル中の９９．９％水素化ホウ素ナトリウム溶液０．５Ｍが含まれてもよいが、これに限定されるものではない。
【０２７４】
還元剤溶液は、約０．１Ｍ〜約１０Ｍの還元剤濃度を含んでもよい。いくつかの実施形態では、使用に先だって希釈を必要とする還元剤溶液の貯蔵溶液が使用される。還元剤貯蔵溶液は、１Ｍを超える（例えば、約１．１〜約１．５Ｍ、約１．２Ｍ〜約２Ｍ、約１．７Ｍ〜約３Ｍ、約２．５Ｍ〜約４Ｍ、約３．５Ｍ〜約５Ｍ、約４．５Ｍ〜約８Ｍ、又は約６Ｍ〜約１０Ｍの）還元剤濃度を含んでもよい。還元剤貯蔵溶液は、サンプル処理に先だって、約０．５Ｍ〜約１Ｍの還元剤濃度に希釈されてもよい。希釈は、水性及び／又は有機溶剤を使用して実行されてもよい。
【０２７５】
いくつかの実施形態では、本開示の方法で使用される抗アマドリ修飾ＧＣＤ５９検出抗体は、検出可能な標識を含んでもよい。このような検出可能な標識には、ビオチン、ストレプトアビジン、アビジン、蛍光標識、酵素的標識、ルミネセンス標識、及び放射性標識が含まれてもよいが、これに限定されるものではない。いくつかの方法では、抗アマドリ修飾ＧＣＤ５９検出抗体は、二次抗体を使用して検出されてもよい。
【０２７６】
いくつかの実施形態では、１Ｍ還元剤溶液は、約１：１（サンプル：還元剤溶液）〜約１：１０００の比率で対象サンプルと組み合わされてもよい。例えば、比率は、１：５、１：１０、１：２０、１：１００又は１：５００であってもよい。サンプルは、約２０分〜約２時間、約１時間〜約４時間、約３時間〜約２４時間、約１２時間〜約３日、約２日〜約５日間、又は少なくとも５日間、還元剤溶液と共にインキュベートして、サンプルの還元が起こるようにしてもよい。
【０２７７】
本開示のいくつかの方法によれば、マイクロタイタープレートが使用される。
いくつかの実施形態では、本開示の方法は、対象の糖尿病をモニタリング、検出、及び／又はスクリーニングするために使用されてもよい。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、糖尿病対象におけるリスクを評価及び／又は層別化するために使用されてもよい。いくつかの方法は、糖尿病関連徴候のコンパニオン診断の一部として使用されてもよい。
【０２７８】
いくつかの実施形態では、本開示の方法は、薬剤開発のために使用されてもよい。このような実施形態は、糖尿病関連徴候の治療薬を試験及び／又は開発するステップを含んでもよい。場合によっては、本開示の方法を使用して、臨床試験が実施されてもよい。
【０２７９】
いくつかの実施形態では、本開示の方法は、対象の遠隔モニタリングを含む。このような方法は、本明細書で教示されるその他の方法の全部又は一部を組み込んでもよい。
いくつかの実施形態では、本開示の方法は、少なくとも１つのＮ−グリコシル化の存在について、ＧＣＤ５９を評価する方法を含む。ＣＤ５９は、補体活性化の一次制御因子であるＮ−グリコシル化膜ＧＰＩアンカータンパク質である。複数のグリコシル化酵素経路は、タンパク質上の成熟炭水化物ユニットの形成をもたらし、これらの修飾は、細胞及び／又は組織特異的であってもよい。ＣＤ５９  Ｎ−グリコシル化のサンプルの評価を使用して、残基Ｋ４１でのＣＤ５９糖化によって最も影響を受ける器官及び／又は組織が同定されてもよい。場合によっては、ＣＤ５９は、残基Ｎ１８上でＮ−グリコシル化されてもよい。いくつかの実施形態では、血漿、血清、及び／又は尿を評価して、糖化によって最も影響を受け、ひいては糖尿病の血管合併症に最も感受性の臓器／組織が同定されてもよい。例えば、前糖尿病患者又は糖尿病患者の血液及び尿サンプル中のＧＣＤ５９の優勢な形態である腎臓特異的Ｎ−グリコシル化ＧＣＤ５９の検出は、糖尿病腎症の発症に対する患者の易罹患性を示してもよい。場合によっては、この検出は、そうでなければ現行の診断法では非検出のままである、実際の腎臓損傷の発生前に実行されてもよい。このような早期発見は、患者の自覚を高め、生活習慣の変更に対する必要性を示すために、使用されてもよい。場合によっては、早期発見は、早期の予防的治療介入を開始するように医師を誘導してもよい。
【０２８０】
いくつかの実施形態では、本開示は、Ｋ４１アマドリ修飾ＧＣＤ５９に結合できる抗体によってＧＣＤ５９を単離するステップと、ＧＣＤ５９上に存在する少なくとも１つのＮ−グリコシル化（例えば、ＧＣＤ５９の残基Ｎ１８上のＮ−グリコシル化）を検出するステップとを含む、ＧＣＤ５９を評価する方法を提供する。
【０２８１】
本開示の方法は、（１）糖尿病の臓器特異的合併症の素因；（２）前臨床糖尿病性末梢神経障害；（３）前臨床糖尿病性腎障害；（４）前臨床糖尿病性網膜症；及び（５）前臨床糖尿病患者血管疾患の少なくとも１つを同定する方法を含んでもよい。このような方法は、（１）Ｋ４１アマドリ修飾ＧＣＤ５９に特異的な抗体によってＧＣＤ５９を単離するステップと、（２）ＧＣＤ５９上に存在する少なくとも１つのＮ−グリコシル化（例えば、ＧＣＤ５９の残基Ｎ１８上のＮ−グリコシル化）を検出するステップとを含んでもよい。
【０２８２】
ＧＣＤ５９  Ｎ−グリコシル化の検出は、当該技術分野で公知の任意の方法によって実行されてもよい。場合によっては、ＧＣＤ５９  Ｎ−グリコシル化は、免疫学的方法を使用して検出される。その他の実施形態では、ＧＣＤ５９  Ｎ−グリコシル化は、質量分析法を使用して検出されてもよい。
【０２８３】
ポイントオブケア検査
開示されているキット及び方法（このような方法の全部又は一部を含む）は、ポイントオブケア使用のために体裁が整えられてもよい。いくつかの実施形態では、ポイントオブケア使用は、１つ又は複数の患者モニタリング装置の使用を含んでもよい。このような装置は、電子シグナルを受信及び／又は送信できる装置を含んでもよい。場合によっては、患者モニタリング装置は、スマート装置（例えば、スマートフォン又はスマートウォッチ）であってもよく、又はそれと併用されてもよい。
【０２８４】
ＣＤ５９糖化阻害
いくつかの実施形態では、本開示は、ＣＤ５９糖化阻害剤と、このような阻害剤を開発する方法とを提供する。ヒトＣＤ５９は主要な補体調節因子であり、その正常な機能は、高血糖状態下で生じ得る糖化によって、低下し又は遮断されうる。ｈＣＤ５９は、残基Ｋ４１及びＨ４４を含む推定糖化モチーフを含有する。これらの残基は、タンパク質の活性部位の不可欠な部分であると考えられるＷ４０の近くに収まる。Ｋ４１の糖化には、グルコースとＫ４１のεアミノ基との間の化学反応に酸塩基触媒作用を提供する、Ｈ４４が必要である。Ｋ４１におけるｈＣＤ５９の糖化は、血管糖尿病をはじめとするが、これに限定されるものではない、糖尿病関連の合併症を発症するリスクを高め得る。
【０２８５】
本開示の方法は、ＣＤ５９糖化を阻害する方法を含んでもよい。いくつかのこのような方法によって、ＣＤ５９を標的化してＫ４１糖化を妨げる薬剤が投与されてもよい。このような薬剤は、例えば、ヒトＣＤ５９のＨ４４を標的化してＫ４１の糖化を妨げてもよい。いくつかの実施形態では、抗アマドリ修飾ＧＣＤ５９抗体をスクリーニング手順で使用して、ＣＤ５９を標的化してＫ４１糖化を妨げる薬剤が同定されてもよい。
【０２８６】
本開示の方法は、ｈＣＤ５９  Ｋ４１糖化の阻害剤を開発する方法を含んでもよい。このような方法は、本明細書に記載の抗Ｋ４１アマドリ修飾ｈＣＤ５９抗体のいずれかをはじめとするが、これに限定されるものではない、Ｋ４１糖化ＣＤ５９に結合できる１つ又は複数の抗体の使用を含んでもよい。いくつかの実施形態では、このような方法は、（１）Ｋ４１糖化に適した条件でｈＣＤ５９（精製又は組換え）を含むサンプルを少なくとも１つの試験化合物に接触させるステップと、（２）ＧＣＤ５９検出抗体を使用して、サンプル中のＫ４１糖化ｈＣＤ５９のレベルを評価するステップとを含む。評価は、本明細書に記載される方法、又はそれぞれその内容全体が参照により援用される、米国特許第６，８３５，５４５号明細書；米国特許第７，０４９，０８２号明細書；米国特許第７，４３９，３３０号明細書；米国特許第９，０６８，００６号明細書；米国特許第９，４１７，２４８号明細書；及び米国特許出願公開第２０１６／０２９９１５０号明細書のいずれかで以前に記載された方法のいずれかに従って実行されてもよい。このような方法には、ＧＣＤ５９サロゲート化合物をはじめとするが、これに限定されるものではない、標準薬剤の使用が含まれてもよい。試験化合物がｈＣＤ５９  Ｋ４１糖化を阻害できる場合、検出されるＧＣＤ５９のレベルは低下するであろう。試験化合物には、小型分子、ペプチド、合成コンストラクト、融合タンパク質、アプタマー、核酸、及び抗体が含まれてもよいが、これに限定されるものではない。
【０２８７】
ＩＩＩ．キット
いくつかの実施形態では、本開示は、対象サンプル中のＧＣＤ５９の濃度を判定するためのキットを提供する。このようなキットは、（１）捕捉抗体、（２）検出抗体、及び（３）使用説明書の１つ又は複数を含んでもよい。いくつかのキットは、標準曲線を作成するための化合物を含む。このような化合物には、標準薬剤（例えば、サロゲート化合物）が含まれてもよい。いくつかの実施形態では、サロゲート化合物には、それぞれその内容全体が参照により援用される、米国特許第９，４１７，２４８号明細書（例えば、その中の図２７で提示されるサロゲート化合物）又は米国特許出願公開第２０１６／０２９９１５０号明細書で開示されるもののいずれかが含まれてもよい。場合によっては、キットは、少なくとも１つの緩衝剤を含む。このような緩衝剤を使用して、対象サンプルに接触させてもよい。緩衝剤には、還元剤、酸化剤、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、及び／又はβ−メルカプトエタノール（ＢＭＥ）が含まれてもよい。還元剤は、還元剤溶液の一部として提供されてもよい。還元剤溶液は、水及び／又は有機溶媒を含んでもよい。有機溶媒は、ビス（２−メトキシエチル）エーテルを含んでもよい。
【０２８８】
本開示のキットは、ＧＣＤ５９レベルの存在、レベル、及び／又は変化を検出するために使用されてもよい。このようなキットは１つ又は複数の捕捉抗体を含み、ＣＤ５９及び／又はＧＣＤ５９が捕捉されてもよい。捕捉抗体には、本明細書に記載の抗体のいずれか（例えば、配列番号９及び１０によってコードされる抗体Ｈ９）が含まれてもよい。追加的なキットは１つ又は複数の検出抗体を含んで、ＧＣＤ５９及び／又はＣＤ５９が検出されてもよい。検出抗体には、本明細書に記載の任意の抗体（例えば、Ｄ２では配列番号６及び７によってコードされ、又はＤ３では配列番号６及び８によってコードされる、抗体Ｄ２又はＤ３）が含まれてもよい。いくつかの実施形態では、キットは、ＣＤ５９及び／又はＧＣＤ５９を捕捉又は検出するための当技術分野で公知のその他の抗体を含んでもよい。このような抗体には、それぞれその内容全体が参照により援用される、欧州特許第２３４８０５０号明細書、国際公開第２０１５０８４９９４号パンフレット、及び米国特許第９０６８００６号明細書、米国特許第９４１７２４８号明細書のいずれかに記載され及び／又は特許請求されるものが含まれてもよい。
【０２８９】
本開示のキットは、１つ又は複数の内部対照を含んでもよい。このような内部対照には、血漿アッセイ対照が、及び／又は任意のその他の体液をベースとする対照が、含まれてもよい。いくつかのキットは、アッセイ希釈剤、コンジュゲート希釈剤、及び洗浄緩衝液の１つ又は複数を含む。キット試薬は、凍結乾燥されていてもよい。
【０２９０】
いくつかの実施形態では、キットを使用して、グリコシル化タンパク質エピトープの存在、非存在、又は分量が判定されてもよい。このようなグリコシル化タンパク質エピトープには、グリコシル化ＣＤ５９エピトープが含まれてもよい。場合によっては、Ｎ−グリコシル化ＣＤ５９及び／又はＧＣＤ５９が検出されてもよい。このようなキットを使用して、例えば、細胞及び／又は組織特異的Ｎ−グリコシル化エピトープが検出されてもよい。
【０２９１】
キットは、それぞれその内容全体が参照により援用される、欧州特許第２３４８０５０号明細書、国際公開第２０１５０８４９９４号パンフレット、及び米国特許第９０６８００６号明細書、米国特許第９４１７２４８号明細書のいずれかに記載され及び／又は特許請求されるものを含んでもよい。このようなキットは、このようなキットに記載される抗体の１つ又は複数の代替として、本明細書に記載される１つ又は複数の抗体を有してもよい。場合によっては、このようなキットは、その中に記載される検出抗体の代わりに、本明細書に記載される抗アマドリ修飾ＧＣＤ５９抗体を含んでもよい。これらのキットは、還元剤なしで組み立てられ、サンプル還元ステップを実行する必要なしに、サンプル中のＧＣＤ５９の検出及び／又は定量のために使用できる。
【０２９２】
ＩＶ．装置
開示されているキット及び方法（このような方法の全部又は一部を含む）は、装置と共に使用するために体裁が整えられていてもよい。いくつかの実施形態では、装置には、ウェアラブル装置が含まれてもよい。このような装置は、例えば、腕時計の形態であっても及び／又はリストバンドを含んでもよい。
【０２９３】
本明細書に記載の化合物、組成物、方法、キット、及び試薬は、いくつかの実施形態では、その内容全体が参照により援用される、国際公開第２０１５０８４９９４号パンフレットに記載されているものと共に使用されてもよく、又はそれらを改善してもよい。
【０２９４】
Ｖ．定義
本明細書の用法では、「受信者動作特性曲線」又は「ＲＯＣ曲線」という用語は、その識別カットオフ（閾値）が変動するときに、バイナリ分類指標システムの性能を描写する図形プロットを作成する、統計的ツールを指す。ＲＯＣ曲線は、診断試験評価のツールの役割を果たしてもよく、医療診断試験が患者の２つの状態をどの程度正確に識別できるかを定量化するために使用できる。一例では、ＲＯＣ曲線を使用して、分析における感度と特異性の間のトレードオフが実証されてもよい。なじみ深い統計的手法を用いたＲＯＣ曲線の分析は、バイオマーカのレベルに最適な診断カットオフを同定するために使用されてもよい。次に、最適な診断カットオフ値を使用して、医学的判断が下されてもよい。
【０２９５】
本明細書の用法では、「閾値」という用語は、結果を生成するために使用される作用因子を特徴付けるために、連続的な結果をカテゴリー（例えば、正及び負）に分割するため、１つ又は複数のこのようなカテゴリーへの作用因子の位置付け配置を決定するため、又は１つ又は複数のこのような対象に関連付けられた対応する値（連続的な結果の範囲に入る）に基づいて、対象をカテゴリーに分離するために使用される値を指す。いくつかの実施形態では、閾値は、閾値を上回る、下回る、又はそれに等しいバイオマーカ又はその他の指標レベルを有する１人又は複数人の対象を分類するために使用される、バイオマーカ又はその他の指標のレベルであってもよい。例えば、閾値は、対象を疾患カテゴリーに分けるために使用される、対象に又は対象サンプルに存在する因子の濃度であり得る。閾値が対象のＧＣＤ５９レベルである場合、閾値を使用して、対象のＧＣＤ５９レベルがそれぞれ閾値を上回るか下回るかに基づいて、対象が糖尿病又は非糖尿病のカテゴリーに割り当てられてもよい。場合によっては、閾値を使用して、１人又は複数人の患者に関連付けられた値が閾値を上回る、下回る、又はそれに等しいかどうかに基づいて医学的判断が下されてもよい。いくつかの実施形態では、連続的な実数値をもたらすバイオマーカの診断閾値（「カットオフポイント」と称される）を使用して、テスト陽性及びテスト陰性が描写されてもよい。例えば、血漿サンプルのトレーニングセットを使用して、異なる可能なカットオフポイントの偽陽性率に対する真陽性率のプロットである、受信者動作特性（ＲＯＣ）曲線が作成されてもよい。ＲＯＣ曲線の分析は、当業者に知られているなじみ深い統計的方法を用いて、バイオマーカの最適な診断カットオフの同定をもたらしてもよい。最適な診断カットオフ値は、医学的判断に到達するのに使用されてもよい。
【０２９６】
ＶＩ．等価物及び範囲
当業者は、単に通例の実験法を使用して、本明細書に記載される本発明による特定の実施形態の多くの同等物を認識し、又は見極めることができるであろう。本発明の範囲は、上の説明に限定されることは意図されず、むしろ添付の特許請求の範囲に記載される。
【０２９７】
別段の指示があり又はさもなければ文脈から明白な場合を除いて、特許請求の範囲では、「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」などの冠詞は、１つ又は２つ以上を意味してもよい。グループの１つ又は複数の構成要素間に「又は」を含む特許請求の範囲又は説明は、別段の指示があり又はさもなければ文脈から明白な場合を除いて、１つ、２つ以上、又は全てのグループ構成要素が存在し、用いられ、又はさもなければ所与の生成物又は方法に関連する場合に、満たされると見なされる。本発明は、その中でグループの正確に１つの構成要素が、存在し、用いられ、又はさもなければ所与の生成物又は方法に関連する、実施形態を含む。本発明は、その中で２つ以上の、又は全てのグループ構成要素が、存在し、用いられ、又はさもなければ所与の生成物又は方法に関連する実施形態を含む。
【０２９８】
「含む」という用語は開放型を意図しており、追加の要素又はステップを許可するが、それらの包含を必要としないことにもまた留意されたい。「を含む」という用語が本明細書で使用される場合、「からなる」という用語もしたがって包含され、開示される。
【０２９９】
範囲が示される場合、両端が包含される。さらに、特に断りのない限り、又はさもなければ文脈及び当業者の理解から明白な場合を除いて、範囲として表される値は、本発明の異なる実施形態で、文脈上例外が明記されていない限り、範囲下限の単位の１０分の１まで、任意の特定値又は記述される範囲内の部分的範囲を取り得るものと理解される。
【０３００】
さらに、先行技術内に入る本発明の任意の特定の実施形態は、請求項のいずれか１つ又は複数から明示的に除外されてもよいと理解される。このような実施形態は、当業者に知られていると見なされるので、たとえ除外が本明細書で明示的に記載されていない場合でさえ、それらは除外されてもよい。本発明の組成物の任意の特定の実施形態（例えば、それによってコードされる任意の核酸又はタンパク質；任意の生成方法；任意の使用方法など）は、理由の如何を問わず、先行技術の存在に関連するか否かを問わず、あらゆる１つ又は複数の請求項から除外され得る。
【０３０１】
引用中に明示的に記述されなくても、例えば、参考文献、出版物、データベース、データベース入力項目、及び参照により本出願に援用される技術などの引用された全ての情報源は、参照により本出願に援用される。引用された情報源と本出願の記述が矛盾する場合、本出願の記述が効力を持つものとする。セクション及び表の見出しは、限定的であることを意図しない。
【０３０２】
（実施例）
実施例１．抗体の調製及び配列決定
ＣＤ５９及びＫ４１アマドリ修飾ＧＣＤ５９に対する抗体は、それぞれＣＤ５９断片を使用して生成した。抗Ｋ４１アマドリ修飾ＧＣＤ５９抗体調製物のために、アマドリ修飾Ｋ４１を有するＣＤ５９断片を使用した。抗体は、マウスの免疫化、及び高い親和性及び特異性を備えた抗体の成功裏の発現を示す動物からのハイブリドーマ細胞の開発によって調製した。糖化及び非糖化ＣＤ５９の双方に結合する捕捉抗体として、クローンＨ９を開発した。Ｋ４１アマドリ修飾ＧＣＤ５９に結合する検出抗体として、クローンＤ２及びＤ３を開発した。抗体を配列決定して分析し、抗体領域を同定した。得られた配列は、表１〜７に提供される。抗体Ｄ２及びＤ３は、同一のアミノ酸配列がある重鎖及び軽鎖を有することが判明したが、重鎖ヌクレオチド配列はヌクレオチドが１つ異なる。
【０３０３】
実施例２．尿サンプルにおけるＧＣＤ５９検出
上述したアマドリ修飾ＧＣＤ５９に特有の検出抗体Ｄ２を使用して、尿サンプル中のＧＣＤ５９検出を実行した。アッセイプレートを最初に、ＣＤ５９捕捉抗体Ｈ９で被覆した。１人は高レベルのＨｂＡ１Ｃ（ＨｂＡ１Ｃ−Ｈ）を有することが知られており、もう１人は低レベルのＨｂＡ１Ｃ（ＨｂＡＣ１−Ｌ）を有することが知られている２人の対象から、尿サンプルを取得した。高レベルのＨｂＡ１Ｃは、血中グルコースの上昇の既知の指標である。最初にβ−メルカプトエタノール（ＢＭＥ）を５％の最終濃度に添加することで、サンプルを調製した。次に、サンプルを１００℃で５分間煮沸し、遠心分離してあらゆる残骸をペレット化した。次に、アッセイのために上清を単離した。米国特許第９，４１７，２４８号明細書の図２７に示されているようなサロゲート化合物標準を使用して、検量線を作成するための希釈系列を調製した。アマドリ修飾ＧＣＤ５９サロゲートには、フレキシブルリンカーで連鎖された捕捉及び検出ペプチドをはじめとする合成化合物が含まれた。
【０３０４】
標準サンプル、尿サンプル、並びに対照サンプル［血清希釈緩衝液（５０ｍＭ酢酸／酢酸Ｎａ；２％ノニデット（ＮｏｎＩｄｅｔ）Ｐ４０代替品；０．１５％ツイーン２０；０．１％トリトンＸ−１００；５０ｐｐｍのプロクリン（ＰｒｏＣｌｉｎ）３００）単独］を三連でアッセイプレートに添加した。血清希釈緩衝液を使用して尿サンプルをさらに希釈し、血清希釈緩衝液中の６％ｖ／ｖ尿サンプルから０．２％尿サンプルまでの一連の状態を作成した。アッセイプレートを室温で１時間振盪機に載せた。次に、１００μｌの抗体Ｄ２溶液［１０％無タンパク質ブロック緩衝液添加リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中の１．２５μｇ／ｍｌ（サーモフィッシャー（Ｔｈｅｒｍｏ−Ｆｉｓｈｅｒ）、ウォルサム、マサチューセッツ州）］の添加前に、プレートを洗浄緩衝液［０．０５％ツイーン（登録商標）２０添加ＰＢＳ］で洗浄した。次に、プレートを振盪しながら室温で２時間インキュベートした。
【０３０５】
２時間後、プレートを洗浄緩衝液で洗浄し、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）にコンジュゲートされた１００μｌの二次抗体と共にインキュベートし、ＴＭＢ基質試薬Ａ及びＢの存在下で振盪しながら室温で１時間インキュベートした。プレートをＨ２ＳＯ４溶液処理によってクエンチし、比色分析最終生成物を生成した。次に、ウェルを分光光度法で検査して、４５０ｎｍで光学濃度値を得た。
【０３０６】
サロゲート化合物標準を使用して、ウェルに基づいて検量線（図１Ａ）を作成した。尿サンプルの結果を検量線に基づいて標準タンパク質単位（ＳＰＵ）に変換し、各サンプルの百分率尿値に対してプロットした（図１Ｂ）。ＨｂＡＣ１−Ｈサンプルから得られた値は、高濃度サンプル中で約２．５ＳＰＵの濃度依存性抗体Ｄ２結合を示した。ＨｂＡＣ１−Ｌのサンプル値は低く、抗体Ｄ２の結合が極微量又は皆無であることが示唆された。これらの結果は、Ｈ９がＣＤ５９及びＤ２を捕捉して、液状サンプル中のアマドリ修飾ＧＣＤ５９を濃度依存様式で検出する能力を実証する。
【０３０７】
実施例３．ウエスタンブロットによるＧＣＤ５９検出
糖尿病遺伝子組換えマウス由来の細胞溶解物中で、抗アマドリ修飾ｈＧＣＤ５９  ｍＡｂ  Ｄ２及びＤ３の糖化ｈＣＤ５９に対する特異性を試験した。１用量のストレプトゾトシン（ＳＴＺ）を投与することによって、ｈＣＤ５９遺伝子組換えマウスに糖尿病を誘発し、２週間後に血中グルコースを測定した。血糖レベルが２００ｍｇ／ｄＬを超える場合に、マウスは糖尿病と見なされた。糖尿病の遺伝子組換えマウス（Ｄ）及び対照の非糖尿病マウス（ＮＤ）からＲＢＣを取得し、溶解してタンパク質を抽出した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動）を使用してタンパク質サンプルを分離し、抗アマドリ修飾ｈＧＣＤ５９抗体（Ｄ２）及び抗ｈＣＤ５９抗体を用いて免疫ブロット法を実施した（図２）。糖尿病における糖化ＣＤ５９の上昇と一致して、抗アマドリ修飾ｈＧＣＤ５９抗体は、糖尿病マウスでは強いバンドを示し、対照の非糖尿病マウスではかすかなバンドのみを示した。糖尿病マウス及び対照の非糖尿病マウスはどちらも同様のレベルのｈＣＤ５９を示し、抗アマドリ修飾ｈＧＣＤ５９抗体の特異性が実証された。
【０３０８】
実施例４．エライザ（ＥＬＩＳＡ）キット
糖化ＣＤ５９（ＧＣＤ５９）ペプチドハイブリッドサロゲートと比較してＧＣＤ５９を特異的に定量化する、サンドイッチ型エライザ（ＥＬＩＳＡ）アッセイを調製する。試験サンプル中のＣＤ５９を捕捉する捕捉抗体として、抗体Ｈ９を使用する。検出抗体は、ＣＤ５９のＫ４１と同等の位置にグルシトールリジン残基を含有する、ペプチド抗原を使用して開発される。この理由から、これらのアッセイは還元型のＧＣＤ５９を検出する。これらの抗グルシトールリジンＧＣＤ５９  エライザ（ＥＬＩＳＡ）キットアッセイには、糖化形態のＧＣＤ５９を還元糖化形態のＧＣＤ５９に変換するための還元剤としてＮａＢＨ４を利用する、サンプル調製ステップもまた含まれる。キットには、このステップを実行するための有機溶媒中の還元剤溶液が含まれる。
【０３０９】
サンドイッチ型アマドリ修飾ＧＣＤ５９  エライザ（ＥＬＩＳＡ）アッセイは、非還元アマドリ修飾型ＧＣＤ５９に対する抗体特異性を検出するので、ＮａＢＨ４還元によるサンプル調製を必要としない。しかし、ＤＴＴによるサンプル処理は、抗体親和性を改善しうる。
【０３１０】
実施例５．ポイントオブケア検査
開示されているキット及び方法は、ポイントオブケア検査で使用するために体裁が整えられている。これには、患者モニタリング装置と、スマート装置（例えば、スマートフォンなど）との併用され得る装置とで使用するための体裁が含まれる。
【０３１１】
実施例６．ウェアラブル装置
開示されたキット及び方法は、手首、指、首又は四肢の周囲に着用されてもよい、時計又はその他のバンドの形態のウェアラブル装置で使用するために整形される。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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2020517306.tif 000020
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