(57)【要約】  サポニンおよび任意でリポ多糖を含有するリポソーム製剤が、本明細書で提供される。リポソーム製剤および抗原を含む薬学的組成物およびワクチン組成物もまた、本明細書で提供される。薬学的組成物およびワクチン組成物は、例えば、ワクチンまたは治療的使用のための免疫応答を誘発または増強することができる。免疫応答を誘発または増強するためのリポソーム製剤の作製およびリポソーム製剤の使用に関連する組成物および方法もまた、提供される。【選択図】図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト対象に投与するためのサポニンおよびリポ多糖を含むリポソーム製剤であって、前記サポニンが、１用量当たり約１μｇ〜１用量当たり約１０μｇの濃度であり、前記リポ多糖が、１用量当たり約３μｇ〜１用量当たり約２５μｇの濃度であり、リポ多糖対サポニンの重量比が、約２．５対１である、製剤。
【請求項２】
前記サポニンが、１用量当たり約１μｇ〜１用量当たり約８μｇの濃度であり、前記リポ多糖が、１用量当たり約３μｇ〜１用量当たり約２０μｇの濃度である、請求項１に記載の製剤。
【請求項３】
前記サポニンが、ステロールに複合体化している、請求項１または請求項２に記載の製剤。
【請求項４】
サポニン対ステロールの重量比が、約１：１１０〜約１：２００である、請求項３に記載の製剤。
【請求項５】
サポニン対ステロールの重量比が、約１：１１０〜約１：１５０である、請求項３に記載の製剤。
【請求項６】
サポニン対ステロールの重量比が、約１：１２０〜約１：１５０である、請求項３に記載の製剤。
【請求項７】
サポニン対ステロールの重量比が、約１：１２５である、請求項３に記載の製剤。
【請求項８】
前記サポニンが、１用量当たり約４μｇの濃度である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項９】
前記リポ多糖が、１用量当たり約１０μｇの濃度である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１０】
前記サポニンが、１用量当たり約２μｇの濃度である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１１】
前記リポ多糖が、１用量当たり５μｇの濃度である、請求項１〜７または請求項１０のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１２】
前記サポニンが、Ｑｕｉｌｌａｊａ  ｓａｐｏｎａｒｉａ  Ｍｏｌｉｎａの樹皮に由来する免疫学的に活性なサポニン断片である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１３】
前記サポニン断片が、ＱＳ２１である、請求項１２に記載の製剤。
【請求項１４】
前記サポニンが、合成である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１５】
前記ステロールが、コレステロールである、請求項３〜１４のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１６】
リン脂質をさらに含む、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１７】
前記リン脂質が、ＤＬＰＣ、ＤＭＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＳＰＣ、ＤＯＰＣ、ＰＯＰＣ、ＤＬＰＧ、ＤＭＰＧ、ＤＰＰＧ、ＤＳＰＧ、ＤＯＰＧ、ＤＳＴＡＰ、ＤＰＴＡＰ、ＤＳＰＥ、ＤＰＰＥ、ＤＭＰＥ、およびＤＬＰＥからなる群から選択される、請求項１６に記載の製剤。
【請求項１８】
前記リポ多糖が、グルコピラノシル脂質Ａ（ＧＬＡ）である、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１９】
前記リポ多糖が、以下の式を有し、
【化１】
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式中、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、およびＲ６が、Ｃ１１アルキルであり、Ｒ２およびＲ４が、Ｃ１３アルキルまたはその薬学的に許容される塩である、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項２０】
前記リポ多糖が、式、
【化２】
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もしくは
【化３】
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、またはそれらの薬学的に許容される塩を有する、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項２１】
前記リポ多糖が、以下の式を有し、
【化４】
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式中、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、およびＲ６が、Ｃ１０アルキルであり、Ｒ２およびＲ４が、Ｃ８アルキルまたはその薬学的に許容される塩である、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項２２】
前記リポ多糖が、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）である、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項２３】
前記製剤が、ヒト用量での使用に好適な体積である、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項２４】
前記体積が、約０．５ｍｌ〜約１．５ｍｌである、請求項２３に記載の製剤。
【請求項２５】
請求項１〜２４に記載の製剤のいずれか１つを含む、薬学的組成物。
【請求項２６】
抗原をさらに含む、請求項２５に記載の薬学的組成物。
【請求項２７】
請求項１〜２４に記載の製剤のいずれか１つ、および抗原を含む、ワクチン組成物。
【請求項２８】
前記抗原が、（ｉ）感染性疾患に関連する少なくとも１つの感染性病原体、（ｉｉ）がんに関連する少なくとも１つのエピトープ、生体分子、細胞、もしくは組織、または（ｉｉｉ）自己免疫疾患に関連する少なくとも１つのエピトープ、生体分子、細胞、もしくは組織に由来するか、またはそれと免疫学的に交差反応性であることにより、免疫応答を誘発または増強する、請求項２６または２７に記載の組成物。
【請求項２９】
対象における免疫応答の誘発または増強方法であって、請求項１〜２４のいずれか１項に記載のリポソーム製剤、請求項２５もしくは２６に記載の薬学的組成物、または請求項２７もしくは２８に記載のワクチン組成物を対象に投与することを含む、方法。
【請求項３０】
請求項１〜２４のいずれか１項に記載のリポソーム製剤、請求項２５もしくは２６に記載の薬学的組成物、または請求項２７もしくは２８に記載のワクチン組成物が、抗原と併用して投与される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記対象が、がん、感染性疾患、または自己免疫疾患に苦しんでいる、請求項２９または請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記対象が、ヒトである、請求項２９〜３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
ヒト対象に投与するためのサポニンおよび任意でリポ多糖を含むリポソーム製剤であって、前記サポニンが、ステロールに複合体化しており、サポニン対ステロールの重量比が、約１：１１０〜約１：２００である、製剤。
【請求項３４】
前記リポソーム製剤が、リン脂質を含み、リン脂質対ステロールの重量比が、１：１〜約１０：１である、請求項３３に記載の製剤。
【請求項３５】
前記リポソーム製剤が、リン脂質を含み、リン脂質対ステロールの重量比が、約４：１である、請求項３３に記載の製剤。
【請求項３６】
前記サポニンが、１用量当たり約０．５μｇ〜１用量当たり約１０μｇの濃度である、請求項３３に記載の製剤。
【請求項３７】
前記サポニンが、１用量当たり約１μｇ〜１用量当たり約１０μｇの濃度である、請求項３３に記載の製剤。
【請求項３８】
前記サポニンが、１用量当たり約１μｇ〜１用量当たり約８μｇの濃度である、請求項３３に記載の製剤。
【請求項３９】
前記リポ多糖が、存在し、１用量当たり１．２５μｇ〜１用量当たり約２５μｇの濃度である、請求項３３〜３８のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項４０】
前記リポ多糖が、存在し、１用量当たり約３μｇ〜１用量当たり約２５μｇの濃度である、請求項３３〜３９のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項４１】
前記サポニンが、１用量当たり約１μｇ〜１用量当たり約８μｇの濃度であり、前記リポ多糖が、存在し、１用量当たり約３μｇ〜１用量当たり約２０μｇの濃度である、請求項３３に記載の製剤。
【請求項４２】
前記製剤が、約８ｕｇ／ｍｌの濃度のサポニン、約２０ｕｇ／ｍｌの濃度のリポ多糖、約４ｍｇ／ｍｌの濃度のリン脂質、および約１ｍｇ／ｍｌの濃度のステロールを含む、請求項３３〜４１のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項４３】
好ましくは２〜１０倍希釈の希釈形態である、請求項４２に記載の製剤。
【請求項４４】
好ましくは２〜１０倍濃縮の濃縮形態である、請求項４２に記載の製剤。
【請求項４５】
サポニン対ステロールの比が、約１：１１０〜約１：１５０である、請求項３３〜４４のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項４６】
サポニン対ステロールの比が、約１：１２０〜約１：１５０である、請求項３３〜４４のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項４７】
サポニン対ステロールの比が、約１：１２５である、請求項３３〜４４のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項４８】
リポ多糖対サポニンの比が、約２．５対１である、請求項３３〜４７のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項４９】
前記サポニンが、１用量当たり約４μｇの濃度である、請求項３３〜４８のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項５０】
前記リポ多糖が、１用量当たり約１０μｇの濃度である、請求項３３〜４９のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項５１】
前記サポニンが、１用量当たり約２μｇの濃度である、請求項３３〜４８のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項５２】
前記リポ多糖が、１用量当たり５μｇの濃度である、請求項３３〜４８または請求項５１のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項５３】
前記サポニンが、Ｑｕｉｌｌａｊａ  ｓａｐｏｎａｒｉａ  Ｍｏｌｉｎａの樹皮に由来する免疫学的に活性なサポニン断片である、請求項３３〜５２のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項５４】
前記サポニン断片が、ＱＳ２１である、請求項５３に記載の製剤。
【請求項５５】
前記ステロールが、コレステロールである、請求項３３〜５４のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項５６】
リン脂質を含み、前記リン脂質が、ＤＬＰＣ、ＤＭＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＳＰＣ、ＤＯＰＣ、ＰＯＰＣ、ＤＬＰＧ、ＤＭＰＧ、ＤＰＰＧ、ＤＳＰＧ、ＤＯＰＧ、ＤＳＴＡＰ、ＤＰＴＡＰ、ＤＳＰＥ、ＤＰＰＥ、ＤＭＰＥ、およびＤＬＰＥからなる群から選択される、請求項３３〜５５のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項５７】
前記リン脂質が、ＤＯＰＣである、請求項５６に記載の製剤。
【請求項５８】
前記リポ多糖が、グルコピラノシル脂質Ａ（ＧＬＡ）である、請求項３３〜５７のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項５９】
前記リポ多糖が、以下の式を有し、
【化５】
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式中、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、およびＲ６が、Ｃ１１アルキルであり、Ｒ２およびＲ４が、Ｃ１３アルキルまたはその薬学的に許容される塩である、請求項３３〜５７のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項６０】
前記リポ多糖が、以下の式、
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、もしくは
【化６】
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、またはそれらの薬学的に許容される塩を有する、請求項３３〜５７のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項６１】
前記リポ多糖が、以下の式を有し、
【化７】
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式中、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、およびＲ６が、Ｃ１０アルキルであり、Ｒ２およびＲ４が、Ｃ８アルキルまたはその薬学的に許容される塩である、請求項３３〜５７のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項６２】
前記リポ多糖が、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）である、請求項３３〜５７のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項６３】
前記製剤が、ヒト用量での使用に好適な体積である、請求項３３〜４３および４５〜６２のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項６４】
前記体積が、約０．５ｍｌ〜約１．５ｍｌである、請求項６３に記載の製剤。
【請求項６５】
請求項３３〜４３および４５〜６２に記載の製剤のいずれか１つを含む、薬学的組成物。
【請求項６６】
抗原をさらに含む、請求項６５に記載の薬学的組成物。
【請求項６７】
請求項３３〜４３および４５〜６２に記載の製剤のいずれか１つ、ならびに抗原を含む、ワクチン組成物。
【請求項６８】
前記抗原が、（ｉ）感染性疾患に関連する少なくとも１つの感染性病原体、（ｉｉ）がんに関連する少なくとも１つのエピトープ、生体分子、細胞、もしくは組織、または（ｉｉｉ）自己免疫疾患に関連する少なくとも１つのエピトープ、生体分子、細胞、もしくは組織に由来するか、またはそれと免疫学的に交差反応性であることにより、免疫応答を誘発または増強する、請求項６６または６７に記載の組成物。
【請求項６９】
対象における免疫応答の誘発または増強方法であって、請求項３３〜４３および４５〜６２のいずれか１項に記載のリポソーム製剤、請求項６５もしくは６６に記載の薬学的組成物、または請求項６７もしくは６８に記載のワクチン組成物を対象に投与することを含む、方法。
【請求項７０】
請求項３３〜４３および４５〜６２のいずれか１項に記載のリポソーム製剤、請求項６５もしくは６６に記載の薬学的組成物、または請求項６７もしくは６８に記載のワクチン組成物が、抗原と併用して投与される、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
前記対象が、がん、感染性疾患、または自己免疫疾患に苦しんでいる、請求項６９または請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
前記対象が、ヒトである、請求項６９〜７１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７３】
１用量当たり約２ｕｇのサポニンが、前記対象に送達される、請求項６９〜７２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７４】
１用量当たり約５ｕｇのＧＬＡが、前記対象に送達される、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
１用量当たり約４ｕｇのサポニンが、前記対象に送達される、請求項６９〜７２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７６】
１用量当たり約１０ｕｇのＧＬＡが、前記対象に送達される、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
前記製剤または組成物が、ウエストナイルウイルスの治療に使用するためのものではない、請求項１〜７６のいずれかに記載の製剤または組成物。
【請求項７８】
前記製剤または組成物が、抗原と混合され、前記抗原が、ウエストナイルウイルスに関連しないか、またはそれに由来しない、請求項１〜７７のいずれかに記載の製剤または組成物。
【請求項７９】
前記製剤または組成物が、ＴＢ、ＨＩＶ、またはマラリアの治療に使用するためのものである、請求項１〜７８のいずれかに記載の製剤または組成物。
【請求項８０】
前記製剤または組成物が、抗原と混合され、前記抗原が、ＴＢ、ＨＩＶ、またはマラリアに関連するか、またはそれに由来する、請求項１〜７９のいずれかに記載の製剤または組成物。
【請求項８１】
前記抗原が、ＩＤ９３、ＩＤ９１、またはＩＤ９７である、請求項８０に記載の製剤または組成物。
【請求項８２】
請求項１〜８１のいずれか１項に記載のサポニン含有リポソーム製剤の製造方法であって、前記サポニンを事前形成されたステロール含有リポソームと混合することを含む、方法。
【請求項８３】
前記サポニンが、ＱＳ２１であり、前記粗サポニン混合物Ｑｕｉｌ  Ａを精製して、前記サポニンが得られる、請求項８２に記載の方法。
【請求項８４】
前記サポニンが、リポソームとの混合前に緩衝液中に可溶化される、請求項８２または８３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８５】
前記事前形成されたステロール含有リポソームが、前記リン脂質および前記ステロールを混合することと、高圧均質化を介して結果として得られる前記リポソームの粒径を低減することと、によって調製される、請求項８２〜８４のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１７年９月８日出願の米国特許仮出願第６２／５５６，２５７号の優先権の利益を主張し、その出願全体が、あらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本開示は一般に、薬学的組成物およびワクチン組成物に関する。より具体的には、本明細書に記載の実施形態は、サポニンおよび任意でリポ多糖（ＬＰＳ）を含むリポソーム製剤、ならびにそれらの製造方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
高等生物の免疫系は、外来性作用物質が免疫応答を誘発する一方で、「自己」構成成分は無視または許容されるように、外来性作用物質（または「非自己」）作用物質を見慣れた構成成分または「自己」構成成分から区別することを特徴としている。免疫応答は、伝統的に、形質細胞として知られる分化Ｂリンパ球によって抗原に特異的な抗体が産生される体液性応答、または様々な種類のＴリンパ球がいくつかの機構によって抗原を排除するように作用する細胞媒介性応答のいずれかを特徴としている。例えば、特異的抗原を認識することができるＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞は、サイトカインなどの可溶性媒介物質を放出して、免疫応答に参加する免疫系の追加の細胞を動員することによって応答することができる。また、特異的抗原認識もすることができるＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞は、抗原担持細胞または粒子に結合し、それを破壊または損傷することによって応答することができる。免疫学の当該技術分野では、通常、宿主における所望の免疫応答を誘導するための、様々な製剤に従った特定のワクチン組成物を提供することが既知である。
【０００４】
ワクチンを宿主に投与することを通して特異的免疫応答を誘発するためのいくつかの戦略には、ウイルス、細菌、または特定の真核生物病原体などの加熱死感染性病原体または弱毒生感染性病原体を用いた免疫化、免疫応答が所望される抗原（複数可）をコードする遺伝子材料の発現を指向することができる非病原性感染性作用物質を用いた免疫化、および特定の病原体に対する免疫を誘導するための、その病原体から単離された免疫原（タンパク質など）を含有するサブユニットワクチン組成物を用いた免疫化が含まれる。（例えば、Ｌｉｕ，１９９８  Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ４（５ｓｕｐｐｌ．）：５１５を参照されたい）。特定の抗原について、これらのアプローチのいずれも特に有効ではない１種類以上の望ましい免疫が存在する可能性があり、これには、ヒト免疫不全ウイルス、または他の感染性病原体、がん、自己免疫疾患、もしくは他の臨床病態に対して免疫学的に宿主を保護するのに有効なワクチン組成物の開発が含まれる。
【０００５】
ワクチン組成物中では、毒性への潜在性を最小化しながら、任意の所与の抗原に関連する免疫原性を改善するために、様々なアジュバントが用いられている。例えば、キラヤサポニンは、Ｑｕｉｌｌａｊａ  ｓａｐｏｎａｒｉａの木の樹皮から抽出されるトリテルペングリコシドの混合物である。粗サポニンは、口蹄疫に対するワクチン組成物中で、ならびにＴｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ  ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍなどの寄生原虫に対する実験的なワクチン組成物によって付与される防御免疫、およびヒツジ赤血球に対する体液性応答を増幅する上で、アジュバントとして用いられている（Ｂｏｍｆｏｒｄ，Ｉｎｔ．Ａｒｃｈ．Ａｌｌｅｒｇ．ａｐｐｌ．Ｉｍｍｕｎ．，６７：１２７（１９８２））。しかしながら、アジュバント活性および毒性に影響を与える、粗混合物中に存在する不均一性および不純物のために、粗サポニンは、獣医学的診療またはヒト用の薬学的組成物での使用には望ましくない。Ｑｕｉｌ−Ａは、キラヤサポニン材料の部分的に精製された水性抽出物であり、トリテルペノイドキラ酸にグリコシド結合している炭水化物部分を化学的な特徴とする。Ｑｕｉｌ−Ａは、粗サポニンに対する改善を示す一方で、それはまた、有意な不均一性を実証することも示されている。ＱＳ２１は、アジュバント活性を有するＱｕｉｌ−ＡのＨＰＬＣ精製された非毒性断片であり、その生成のその方法は、米国特許第５，０５７，５４０号に（ＱＡ２１として）開示されている。
【０００６】
腸内細菌リポ多糖（ＬＰＳ）が、免疫系の強力な刺激物質であることは長く知られているが、アジュバント中でのその使用は、その毒性効果によって縮小されている。しかしながら、ＬＰＳの脂質Ａ尾部の合成非毒性誘導体であるグルコピラノシル脂質Ａ（ＧＬＡ）は、米国特許第８，２７３，３６１号に開示されているように、免疫応答を誘導する強力な潜在性を有することが示されている。還元末端グルコサミンからコア炭水化物基およびリン酸塩を除去することによって生成される、ＬＰＳの天然に存在する非毒性誘導体であるモノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）については、Ｒｉｂｉら（１９８６，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｂａｃｔｅｒｉａｌ  Ｅｎｄｏｔｏｘｉｎｓ，Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｕｂｌ．Ｃｏｒｐ．，ＮＹ，ｐ４０７−４１９）によって記載されている。
【０００７】
ＭＰＬのさらなる解毒バージョンは、二糖骨格の３位からアシル鎖を除去することにより生じ、これは、３−Ｏ−脱アシル化モノホスホリル脂質Ａ（３Ｄ−ＭＰＬ）と呼ばれる。それは、ＧＢ２１２２２０４Ｂに教示される方法によって精製および調製することができ、この参考文献はまた、ジホスホリル脂質Ａおよびその３−Ｏ−脱アシル化変異体の調製についても開示している。例えば、３Ｄ−ＭＰＬは、直径０．２μｍ未満の小さな粒径を有するエマルジョンの形態で調製されており、その製造方法は、ＷＯ９４／２１２９２に開示されている。モノホスホリル脂質Ａおよび界面活性剤を含む水性製剤については、ＷＯ９８／４３６７０Ａ２に記載されている。
【０００８】
アジュバントの組み合わせ中に製剤化される細菌ＬＰＳ由来アジュバントは、細菌源から精製および処理されてもよく、またはあるいは、それらは、合成であってもよい。例えば、合成サポニン、および具体的には合成ＱＳ２１（ＳＱＳ２１）が、開示されている（Ｒａｇｕｐａｔｈｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ．２０１１  Ａｐｒｉｌ；１０（４）：４６３−４７０）。精製モノホスホリル脂質Ａについては、Ｒｉｂｉ  ｅｔ  ａｔ１９８６（上記）に記載されており、３−Ｏ−脱アシル化モノホスホリルまたはＳａｌｍｏｎｅｌｌａ菌種に由来するジホスホリル脂質Ａについては、ＧＢ２２２０２１１および米国特許第４，９１２，０９４号に記載されている。３Ｄ−ＭＰＬおよびβ（１−６）グルコサミン二糖、ならびに他の精製リポ多糖および合成リポ多糖が、記載されている（ＷＯ９８／０１１３９、米国特許第６，００５，０９９号、およびＥＰ０７２９４７３Ｂ１、Ｈｉｌｇｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６  Ｉｎｔ．Ａｒｃｈ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，７９（４）：３９２−６、Ｈｉｌｇｅｒｓ  ｅｔ  ａｔ．，１９８７，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６０（１）；１４１−６、ならびにＥＰ０５４９０７４Ｂ１）。加えて、ＧＬＡの修飾によって設計される合成第二世代脂質アジュバント（ＳＬＡ）が、記載されている（Ｐａｅｓ  ｅｔ  ａｌ．２０１６，Ｖａｃｃｉｎｅ，３４（３５）：４１２３−４１３１）。
【０００９】
３Ｄ−ＭＰＬとＱｕｉｌｌａｊａ  Ｓａｐｏｎａｒｉａ  ｍｏｌｉｎａの樹皮に由来するサポニンとの組み合わせについては、ＥＰ０７６１２３１ＢおよびＵＳ２００８０２７９９２６に記載されている。ＷＯ９５／１７２１０は、ＱＳ２１とともに製剤化され、任意で３Ｄ−ＭＰＬを含む、スクアレン、ａ−トコフェロール、およびポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ＴＷＥＥＮ（商標）−８０）に基づくアジュバントエマルジョン系を開示している。そのような組み合わせが利用可能であるにも関わらず、天然生成物に由来するアジュバントの使用には、高い生産費用、ロット間の非一貫性、大規模生産に関連する困難、および任意の所与の調製物の組成構造における不純物の存在に関する不確実性が伴う。
【００１０】
したがって、改善されたワクチン組成物、および具体的にはロット間の一貫性を呈し、かつ望ましくない混入物または未知構造の汚染物を導入することなく工業規模で効率的に製造することができる、高純度で既知組成のアジュバント構成成分を有利に含有する、ワクチン組成物に対する必要性が存在する。本開示は、これらの必要性を満たし、他の関連する利点を提供する。
【発明の概要】
【００１１】
本開示は、そのいくつかの態様では、リポソーム製剤中の構成成分（複数可）として、サポニンおよび任意でリポ多糖を有利に用いる組成物および方法を対象とする。一態様では、リポソーム製剤は、サポニンおよびリポ多糖（ＬＰＳ）を含む。別の態様では、リポソーム製剤は、サポニンを含み、ＬＰＳは含有しない。別の態様では、リポソーム製剤は、ステロールに複合体化されたサポニン、および任意でＬＰＳを含む。
【００１２】
特定の実施形態では、天然由来の精製ＱＳ２１または合成ＱＳ２１（例えば、米国特許第５，０５７，５４０号、ＥＰ０３６２２７９Ｂ１、ＷＯ９５／１７２１０を参照されたい）を含むサポニンが提供される。
【００１３】
本明細書に記載の本開示の一実施形態に従うと、サポニンは、ステロールに複合体化されており、ステロールは、コレステロールである。
【００１４】
本開示のリポソーム製剤中で使用される任意のＬＰＳは、当該技術分野で既知かつ利用可能であるＴＬＲ４アゴニストから選択することができる。特定の具体的な実施形態では、ＴＬＲ４アゴニストは、ＧＬＡ、ＭＰＬ、または３Ｄ−ＭＰＬから選択される。
【００１５】
本明細書に記載の本開示の一態様に従うと、以下の構造を有するＧＬＡ化合物が提供され、
【化１】
2020533340.tif 000003
式中、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、およびＲ６は、Ｃ１１−Ｃ２０アルキルであり、Ｒ２およびＲ４は、Ｃ９−Ｃ２０アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、およびＲ６は、Ｃ１１−１４アルキルであり、Ｒ２およびＲ４は、Ｃ１２−１５アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、およびＲ６は、Ｃ１１アルキルであり、Ｒ２およびＲ４は、Ｃ１３アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、およびＲ６は、Ｃ１１アルキルであり、Ｒ２およびＲ４は、Ｃ９アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、およびＲ６は、Ｃ１０アルキルであり、Ｒ２およびＲ４は、Ｃ８アルキルである。
【００１６】
いくつかの実施形態では、ＧＬＡは、以下の構造を有し、本明細書ではＳＬＡと称される。
【化２】
2020533340.tif 000004
【００１７】
いくつかの実施形態では、ＧＬＡは、以下の構造を有する（実施例ではＧＬＡ＊と称される）。
【化３】
2020533340.tif 000005
【００１８】
本明細書に記載の本開示の特定の実施形態では、感染性疾患、がん、または自己免疫疾患に関連する抗原が提供される。
【００１９】
別の態様では、本開示は、感染性疾患に関連する少なくとも１つの感染性病原体に由来するか、またはそれと免疫学的に交差反応性である抗原に対する免疫応答を刺激および増強するための方法であって、免疫応答の刺激および増強を必要とする哺乳動物に本開示の組成物を投与することを含む、方法を提供する。特定の実施形態では、本開示は、がんに関連する少なくとも１つのエピトープ、生体分子、細胞、または組織に対する免疫応答を誘発および増強するための方法を提供する。特定の実施形態では、本開示は、自己免疫疾患に関連する少なくとも１つのエピトープ、生体分子、細胞、または組織に対する免疫応答を刺激および増強するための方法を提供する。特定の実施形態では、本開示は、感染性疾患に関連する少なくとも１つのエピトープ、生体分子、細胞、または組織に対する免疫応答を刺激および増強するための方法を提供する。
【００２０】
本発明のサポニン含有リポソームの製造方法もまた提供される。
【００２１】
本明細書に記載の様々な実施形態の特性の１つ、いくつか、または全てを組み合わせて、本開示の他の実施形態を形成することができることを理解されたい。本開示のこれらの態様および他の態様は、以下の発明を実施するための形態および添付の図面を参照すれば明らかになるだろう。本明細書に開示される全ての参考文献の全体が、あたかもその各々が個々に組み込まれるかのように、これにより参照により組み込まれる。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】本発明の例示的な製剤の例示的な製造およびスケールアッププロセスの流れを示す。
【図２】経時的なモルモットの生存を描写する。マンテル・コックス検定を実行して、有意性を示すｐ，０．０５での有意性を決定した。線に沿った記号は、単に線を区別するために使用され、個々の動物を示すものではない。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
本開示は一般に、サポニンおよび任意でリポ多糖（ＬＰＳ）を含むリポソーム製剤、ならびに薬学的組成物およびワクチン組成物中でそれを使用するための関連する方法を対象とする。特定の態様では、リポソーム製剤は、ステロールに複合体化されたサポニン、および任意でＬＰＳを含み得る。本開示の薬学的組成物およびワクチン組成物は、例えば、ＱＳ２１、および任意でＧＬＡを含有するリポソーム製剤を含む。別の例では、本開示の薬学的組成物およびワクチン組成物は、ステロールに複合体化されたＱＳ２１、および任意でＧＬＡを含有するリポソーム製剤を含み得る。特定の好ましい実施形態では、サポニンは、コレステロールに複合体化している。
【００２４】
リポソーム製剤を含有する薬学的組成物およびワクチン組成物は、任意で抗原をさらに含み、抗原は、感染性疾患、がん、または自己免疫疾患に関連している。本開示はまた、感染性疾患、がん、または自己免疫疾患を有する対象における免疫応答を誘発または増強するための薬学的組成物またはワクチン組成物としての、リポソーム製剤の使用も企図する。
【００２５】
Ｑｕｉｌｌａｊａ  ｓａｐｏｎａｒｉａ  Ｍｏｌｉｎａ樹皮の世界的な利用可能性は、ますます限定的になっており、これは、この天然資源が、各用量中に高濃度のサポニンを用いるワクチン組成物の大規模生産には十分でない可能性があることを示唆している（Ｒａｇｕｐａｔｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ．Ｖａｃｃｉｎｅｓ  ２０１１；１０（４）：４６３−４７０）。さらに、天然サポニンの調達に関連する高価な費用は、その強力なアジュバント活性にも関わらず、その広範な使用における限定因子である。対象的に、本明細書で提供されるリポソーム製剤、薬学的組成物、およびワクチン組成物は、当該技術分野で既知である以前のサポニン含有製剤と比較して、１用量当たりで低濃度範囲内のサポニンを有利に使用する。したがって、本開示の組成物は、ロット間の一貫性を呈し、かつ工業規模で効率的に製造することができる、高純度で既知組成の構成成分を有利に含有する。
【００２６】
Ｉ．定義
以下の用語は、別段示されない限り、以下の意味を有する。いかなる定義されていない用語も、それらの当該技術分野で認識される意味を有する。
【００２７】
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その」は、別段文脈が明確に指示しない限り、複数の参照対象を含む。
【００２８】
本明細書に記載の本開示の態様および実施形態は、態様および実施形態「を含む」、「からなる」、および「から本質的になる」を含むことが理解される。
【００２９】
本記述では、「約」および「から本質的になる」は、別段示されない限り、示される範囲、値、または構造の±２０％を意味する。
【００３０】
選択肢（例えば、「または」）の使用は、選択肢の一方、両方、またはそれらの任意の組み合わせのいずれかを意味することが理解されるべきである。
【００３１】
本明細書で使用される場合、「を含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「を有する」、および「を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という用語は、同義に使用され、これらの用語およびそれらの変形は、非限定的なものと解釈されるべきであることが意図される。
【００３２】
本明細書で使用される場合、「巨大分子」という用語は、生物起源または合成起源のペプチド、タンパク質、オリゴヌクレオチド、およびポリヌクレオチド（これらに限定されない）によって例証される大きな分子を指す。
【００３３】
「アルキル」という用語は、示される数の炭素原子を含有する、直鎖または分岐鎖、非環状または環状、不飽和または飽和の脂肪族炭化水素を意味する。不飽和アルキルは、隣接する炭素原子との間に少なくとも１つの二重結合または三重結合を含有する。
【００３４】
「ポリペプチド」、「ペプチド」、および「タンパク質」という用語は、本明細書では任意の長さのアミノ酸のポリマーを指すために互換的に使用される。ポリマーは、直鎖状または分岐状であってもよく、それは、修飾ヌクレオチドまたはアミノ酸を含んでもよく、それは、非ヌクレオチドまたは非アミノ酸によって中断されていてもよい。この用語はまた、天然に、または介入（例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または任意の他の操作もしくは修飾（標識化構成成分との共役など））によって修飾されているヌクレオチドまたはアミノ酸ポリマーも包含する。この定義には、例えば、ヌクレオチドまたは（例えば、非天然アミノ酸などを含む）アミノ酸の１つ以上の類似体、および当該技術分野で既知の他の修飾を含有する、ポリヌクレオチドまたはポリペプチドもまた含まれる。
【００３５】
「単離された」という用語は、分子がその天然の環境から除去されていることを意味する。
【００３６】
「精製された」は、分子が、それがその天然の環境に存在するよりも、ならびに／または実験室条件下で最初に合成および／もしくは増幅されたときよりも純粋な形態で存在するように、その純度が増加していることを意味する。純度は、相対的な用語であり、必ずしも絶対的な純度を意味するものではない。
【００３７】
本明細書で互換的に使用される場合、「ポリヌクレオチド」または「核酸」は、ＤＮＡおよびＲＮＡを含む、任意の長さのヌクレオチドのポリマーを指す。ヌクレオチドは、例えば、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾ヌクレオチドもしくは塩基、および／またはそれらの類似体、あるいはＤＮＡもしくはＲＮＡポリメラーゼによって、または合成反応によってポリマーに組み込まれ得る、任意の基質であり得る。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチドおよびそれらの類似体などの修飾ヌクレオチドを含み得る。存在する場合、ヌクレオチド構造に対する修飾は、ポリマーの組み立て前に付与されても、その後に付与されてもよい。
【００３８】
本明細書で使用される場合、「オリゴヌクレオチド」は一般に、一般に約２００ヌクレオチド長であるが必ずしもそうでなくてもよい、短鎖、一般に一本鎖で、一般に合成のポリヌクレオチドを指す。「オリゴヌクレオチド」および「ポリヌクレオチド」という用語は、相互排他的ではない。ポリヌクレオチドについての上記の記述は、オリゴヌクレオチドに対して等しくかつ完全に適用可能である。
【００３９】
「個体」または「対象」は、任意の哺乳動物である。哺乳動物には、ヒト、霊長類、家畜、競技用動物、ペット（ネコ、イヌ、ウマなど）、およびげっ歯類が含まれるが、これらに限定されない。
【００４０】
本開示の実施には、別段示されない限り、当該技術分野の範囲内である分子生物学、組み換えＤＮＡ、生化学、および化学の従来の技術が用いられるだろう。そのような技術は、文献において完全に説明されている。例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ  Ｅｄ．，Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ：（１９８９）、ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｖｏｌｕｍｅｓ  Ｉ  ａｎｄ  ＩＩ（Ｄ．Ｎ．Ｇｌｏｖｅｒ  ｅｄ．，１９８５）、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ  ｅｄ．，１９８４）、Ｍｕｌｌｉｓらの米国特許第４，６８３，１９５号、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ＆Ｓ．Ｊ．Ｈｉｇｇｉｎｓ  ｅｄｓ．１９８４）、Ｂ．Ｐｅｒｂａｌ，Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  Ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８４）、専門書、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｉｎｃ．，Ｎ．Ｙ．）、およびＡｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ（１９８９）を参照されたい。
【００４１】
ＩＩ．リポソーム製剤
本開示は、リポソーム製剤を提供する。リポソーム製剤は、サポニン、および任意でＬＰＳを含む。加えて、リポソーム製剤は、任意で少なくとも１つのステロールおよび少なくとも１つのリン脂質を含み得る。
【００４２】
Ａ．アジュバント
本明細書で考察されるように、本開示のリポソーム製剤は、サポニン、および任意でＬＰＳを含む。サポニンおよびＬＰＳは一般に、アジュバント活性を持つことが既知である。
【００４３】
サポニン
サポニンは、例えば、米国特許第６，５４４，５１８号、Ｌａｃａｉｌｌｅ−Ｄｕｂｏｉｓ，Ｍ  ａｎｄ  Ｗａｇｎｅｒ  Ｈ．（１９９６  Ｐｈｙｔｏｍｅｄｉｃｉｎｅ２：３６３−３８６）、米国特許第５，０５７，５４０号、Ｋｅｎｓｉｌ，Ｃｒｉｔ  Ｒｅｖ  Ｔｈｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓｔ，１９９６，１２（１−２）：１−５５、およびＥＰ０３６２２７９Ｂ１に教示されている。Ｑｕｉｌ  Ａ（サポニン）の断片を含む、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭＳ）と呼ばれる粒子性構造は、溶血性であり、ワクチン組成物の製造に使用されている（Ｍｏｒｅｉｎ，Ｂ．のＥＰ０１０９９４２Ｂ１）。これらの構造は、アジュバント活性を有することが報告されている（ＥＰ０１０９９４２Ｂ１、ＷＯ９６／１１７１１）。溶血性サポニンＱＳ２１およびＱＳ１７（Ｑｕｉｌ  ＡのＨＰＬＣ精製断片）は、強力な全身アジュバントとして記載されており、それらの生成方法は、米国特許第５，０５７，５４０号およびＥＰ０３６２２７９Ｂ１に開示されている。これらの参考文献には、全身ワクチン組成物のための強力なアジュバントとして作用するＱＳ７（Ｑｕｉｌ−Ａの非溶血性断片）の使用もまた記載されている。ＱＳ２１の使用については、Ｋｅｎｓｉｌら（１９９１．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ１４６：４３１−４３７）にもさらに記載されている。ＱＳ２１とポリソルベートまたはシクロデキストリンとの組み合わせもまた、既知である（ＷＯ９９／１０００８）。ＱＳ２１およびＱＳ７のＱｕｉｌＡの断片を含む粒子性アジュバント系については、ＷＯ９６／３３７３９およびＷＯ９６／１１７１１に記載されている。全身ワクチン接種研究で使用されている他のサポニンには、ＧｙｐｓｏｐｈｉｌａおよびＳａｐｏｎａｒｉａなどの他の植物種に由来するものが含まれる（Ｂｏｍｆｏｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｖａｃｃｉｎｅ，１０（９）：５７２−５７７，１９９２）。
【００４４】
本明細書で提供されるリポソーム製剤の一実施形態では、サポニンは、Ｑｕｉｌｌａｊａ  ｓａｐｏｎａｒｉａ  Ｍｏｌｉｎａの樹皮に由来する免疫学的に活性なサポニン断片である。そのような一実施形態では、サポニン断片は、ＱＳ２１である。
【００４５】
ますます限定的なＱｕｉｌｌａｊａ  ｓａｐｏｎａｒｉａ  Ｍｏｌｉｎａ樹皮の世界的な供給、およびバッチ間の一貫性を有する高度に精製された免疫学的に活性なサポニン断片の達成に関連する困難のために、合成ＱＳ２１（ＳＱＳ２１）、ＱＳ２１−Ａｐｉ、およびＱＳ２１−Ｘｙｌなどの合成サポニンの化学生成が、記載されている（Ｒａｇｕｐａｔｈｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ．２０１１  Ａｐｒｉｌ；１０（４）：４６３−４７０）。合成ＱＳ２１（ＳＱＳ２１）および天然由来のＱＳ２１は、類似したアジュバント活性を持つことが示されている。
【００４６】
本明細書で提供されるリポソーム製剤の特定の実施形態では、サポニンは、合成である。そのような一実施形態では、合成サポニンは、合成ＱＳ２１（ＳＱＳ２１）である。
【００４７】
エスチンは、本明細書に開示されるリポソーム製剤の実施形態で使用することができる、サポニンに関連する別の化合物である。エスチンは、Ｍｅｒｃｋ指標（１２ｔｈ  Ｅｄ．、エントリ３７３７）において、セイヨウトチノキ（Ａｅｓｃｕｌｕｓ  ｈｉｐｐｏｃａｓｔａｎｕｍ）の木の種子内に生じるサポニンの混合物として記載されている。その単離は、クロマトグラフィーおよび精製（Ｆｉｅｄｌｅｒ，Ａｒｚｎｅｉｍｉｔｔｅｌ−Ｆｏｒｓｃｈ．４，２１３（１９５３））によって、ならびにイオン交換樹脂（Ｅｒｂｒｉｎｇらの米国特許第３，２３８，１９０）によって記載されている。エスチン（エスシンとしても知られる）の断片は、精製されており、生物学的に活性であることが示されている（Ｙｏｓｈｉｋａｗａ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．（Ｃｈｅｍ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｕｌｌ（Ｔｏｋｙｏ）１９９６  Ａｕｇｕｓｔ；４４（８）：１４５４−１４６４））。同様にＭｅｒｃｋ指標（１２ｔｈ  Ｅｄ．、エントリ３２０４）にサポニンとして記載されているジギトニンは、Ｄｉｇｉｔａｌｉｓ  ｐｕｒｐｕｒｅａの種子に由来し、Ｇｉｓｖｏｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｐｈａｒｍ．Ａｓｓｏｃ．，１９３４，２３，６６４、およびＲｕｂｅｎｓｔｒｏｔｈ−Ｂａｕｅｒ，Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９５５，３０１，６２１によって記載されている手順に従って精製される。
【００４８】
特定の例示的な実施形態では、サポニンは、ＱＳ２１およびＱＳ７（Ａｑｕｉｌａ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｉｎｃ．、Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ，Ｍａｓｓ．）、エスチン、ジギトニン、またはＧｙｐｓｏｐｈｉｌａサポニンもしくはＣｈｅｎｏｐｏｄｉｕｍ  ｑｕｉｎｏａサポニンを含む、Ｑｕｉｌ−Ａまたはその誘導体を含む。他の例示的な製剤は、本開示のリポソーム製剤中に２つ以上のサポニン、例えば、以下のＱＳ２１、ＱＳ７、Ｑｕｉｌ−Ａ、エスチン、またはジギトニンを含む群の少なくとも２つの組み合わせを含む。
【００４９】
サポニン、および任意でＬＰＳを含むリポソーム製剤は、ヒト対象に投与するための組成物であることが、本明細書で企図される。特定の実施形態では、サポニンの濃度は、１用量当たり約０．５ｕｇ〜１用量当たり約１０ｕｇ、または１用量当たり約１μｇ〜１用量当たり約１０μｇである。いくつかの好ましい実施形態では、サポニンの濃度は、１用量当たり約０．５μｇ〜１用量当たり約８μｇ、または１用量当たり約１μｇ〜１用量当たり約８μｇである。ある構成成分の濃度が、１用量当たり約０．５ｕｇ〜１用量当たり約１０ｕｇである場合、対象に送達される量は、１用量当たり約０．５ｕｇ〜約１０ｕｇであることが、当業者によって理解されるだろう。製剤自体は、対象への送達前に希釈され得る。
【００５０】
本明細書で提供される組成物の特定の例示的な実施形態では、サポニンの濃度は、１用量当たり約１μｇ、１用量当たり約２μｇ、１用量当たり約３μｇ、１用量当たり約４μｇ、１用量当たり約５μｇ、１用量当たり約６μｇ、１用量当たり約７μｇ、１用量当たり約８μｇ、１用量当たり約９μｇ、または１用量当たり約１０μｇである。いくつかの実施形態では、サポニンの濃度は、１用量当たり約１μｇ〜１用量当たり約２μｇ、１用量当たり約２μｇ〜１用量当たり約３μｇ、１用量当たり約３μｇ〜１用量当たり約４μｇ、１用量当たり約４μｇ〜１用量当たり約５μｇ、１用量当たり約５μｇ〜１用量当たり約６μｇ、１用量当たり約６μｇ〜１用量当たり約７μｇ、１用量当たり約７μｇ〜１用量当たり約８μｇ、１用量当たり約８μｇ〜１用量当たり約９μｇ、または１用量当たり約９μｇ〜１用量当たり約１０μｇである。いくつかの態様では、サポニンは、１用量当たり約１μｇ未満、例えば、１用量当たり約０．５ｕｇ〜１用量当たり約１ｕｇの濃度である。
【００５１】
ＬＰＳ
本発明の例示的な実施形態では、ＬＰＳは、免疫刺激剤である。換言すると、ＬＰＳは、単独で、または病状に関連する抗原との併用のいずれかで、対象における免疫応答を誘発することができる。特定の例示的な実施形態では、ＬＰＳは、ＴＬＲ４アゴニストである。本明細書で使用される場合、「ＴＬＲ４アゴニスト」は、ＴＬＲ４とのその相互作用を通して、その生物学的活性に影響を与えるアゴニストを指す。特定の好ましい実施形態では、本開示の製剤中で使用されるＴＬＲ４アゴニストは、米国特許公開第ＵＳ２００７／０２１０１７号、同第ＵＳ２００９／０４５０３３号、および同第ＵＳ２０１０／０３７４６６号に記載のものなどのグルコピラノシル脂質アジュバント（ＧＬＡ）であり、それらの内容の全体が、参照により本明細書に組み込まれる。
【００５２】
上述のように、ＧＬＡは、化学的に合成されるために、それは、実質的に均一な形態（これは、ＧＬＡ分子に関して、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、およびさらにより好ましくは少なくとも９６％、９７％、９８％、または９９％純粋なＧＬＡ調製物を指す）で調製することができる。
【００５３】
例えば、特定の実施形態では、ＴＬＲ４アゴニストは、式（Ｉ）の以下の構造を有する合成ＧＬＡ、
【化４】
2020533340.tif 000006
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｌ４、Ｌ５、およびＬ６は、同じであるか、または異なり、独立して、−Ｏ−、−ＮＨ−、または−（ＣＨ２）−であり、
Ｌ７、Ｌ８、Ｌ９、およびＬ１０は、同じであるか、または異なり、独立して、不在であるか、または−Ｃ（＝Ｏ）−であり、
Ｙ１は、酸官能基であり、
Ｙ２およびＹ３は、同じであるか、または異なり、独立して、−ＯＨ、−ＳＨ、または酸官能基であり、
Ｙ４は、−ＯＨまたは−ＳＨであり、
Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、およびＲ６は、同じであるか、または異なり、独立して、Ｃ８−１３アルキルであり、
Ｒ２およびＲ４は、同じであるか、または異なり、独立して、Ｃ６−１１アルキルである。
【００５４】
合成ＧＬＡ構造のいくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、およびＲ６は、Ｃ１０アルキルであり、Ｒ２およびＲ４は、Ｃ８アルキルである。特定の実施形態では、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、およびＲ６は、Ｃ１１アルキルであり、Ｒ２およびＲ４は、Ｃ９アルキルである。
【００５５】
例えば、特定の実施形態では、ＴＬＲ４アゴニストは、式（ＩＩ）の以下の構造を有する合成ＧＬＡ、またはその薬学的に許容される塩である。
【化５】
2020533340.tif 000007
【００５６】
上記のＧＬＡ構造の特定の実施形態では、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、およびＲ６は、Ｃ１１−Ｃ２０アルキルであり、Ｒ２およびＲ４は、Ｃ１２−Ｃ２０アルキルである。別の特定の実施形態では、ＧＬＡは、上記の式を有し、式中、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、およびＲ６は、Ｃ１１アルキルであり、Ｒ２およびＲ４は、Ｃ１３アルキルである。別の特定の実施形態では、ＧＬＡは、上記の式を有し、式中、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、およびＲ６は、Ｃ１０アルキルであり、Ｒ２およびＲ４は、Ｃ８アルキルである。
【００５７】
別の特定の実施形態では、ＧＬＡは、上記の式を有し、式中、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、およびＲ６は、Ｃ１１−Ｃ２０アルキルであり、Ｒ２およびＲ４は、Ｃ９−Ｃ２０アルキルである。特定の実施形態では、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、およびＲ６は、Ｃ１１アルキルであり、Ｒ２およびＲ４は、Ｃ９アルキルである。
【００５８】
特定の実施形態では、ＴＬＲ４アゴニストは、式（ＩＩＩ）の以下の構造を有する合成ＧＬＡ、またはその薬学的に許容される塩である。
【化６】
2020533340.tif 000008
【００５９】
上記のＧＬＡ構造の特定の実施形態では、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、およびＲ６は、Ｃ１１−Ｃ２０アルキルであり、Ｒ２およびＲ４は、Ｃ９−Ｃ２０アルキルである。特定の実施形態では、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、およびＲ６は、Ｃ１１アルキルであり、Ｒ２およびＲ４は、Ｃ９アルキルである。
【００６０】
特定の実施形態では、ＴＬＲ４アゴニストは、式（ＩＶ）の以下の構造を有する合成ＧＬＡである。
【化７】
2020533340.tif 000009
【００６１】
上記のＧＬＡ構造の特定の実施形態では、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、およびＲ６は、Ｃ１１−Ｃ２０アルキルであり、Ｒ２およびＲ４は、Ｃ９−Ｃ２０アルキルである。特定の実施形態では、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、およびＲ６は、Ｃ１１アルキルであり、Ｒ２およびＲ４は、Ｃ９アルキルである。
【００６２】
特定の実施形態では、ＴＬＲ４アゴニストは、式（Ｖ）の以下の構造を有する合成ＧＬＡ、またはその薬学的に許容される塩である。
【化８】
2020533340.tif 000010
【００６３】
上記のＧＬＡ構造の特定の実施形態では、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、およびＲ６は、Ｃ１１−Ｃ２０アルキルであり、Ｒ２およびＲ４は、Ｃ９−Ｃ２０アルキルである。特定の実施形態では、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、およびＲ６は、Ｃ１１アルキルであり、Ｒ２およびＲ４は、Ｃ９アルキルである。
【００６４】
特定の実施形態では、ＴＬＲ４アゴニストは、以下の構造を有する合成ＧＬＡ、またはその薬学的に許容される塩である。
【化９】
2020533340.tif 000011
【００６５】
特定の実施形態では、ＴＬＲ４アゴニストは、以下の造を有する（本明細書ではＳＬＡと称される）合成ＧＬＡ、またはその薬学的に許容される塩である。
【化１０】
2020533340.tif 000012
【００６６】
特定の実施形態では、ＴＬＲ４アゴニストは、以下の構造を有する合成ＧＬＡ、またはその薬学的に許容される塩である。
【化１１】
2020533340.tif 000013
【００６７】
本明細書で提供されるリポソーム製剤の例示的な実施形態では、ＬＰＳは、式（ＩＩ）に従う構造を有するＧＬＡであり、式中、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、およびＲ６は、Ｃ１１アルキルであり、Ｒ２およびＲ４は、Ｃ１３アルキル、またはその薬学的に許容される塩である。本明細書で提供されるリポソーム製剤の例示的な実施形態では、ＬＰＳは、式（ＩＩ）に従う構造を有するＧＬＡであり、式中、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、およびＲ６は、Ｃ１０アルキルであり、Ｒ２およびＲ４は、Ｃ８アルキル、またはその薬学的に許容される塩である。本明細書で提供されるリポソーム製剤のさらに別の例示的な実施形態では、ＬＰＳは、ＭＰＬである。
【００６８】
本明細書に記載の組成物の特定の実施形態では、ＬＰＳは、ＧＬＡの修飾によって設計される合成第二世代脂質アジュバント（ＳＬＡ）である。別の実施形態では、弱毒脂質Ａ誘導体（ＡＬＤ）が、本明細書に記載の組成物に組み込まれる。ＡＬＤは、分子がより少ないかまたは異なる脂質Ａの有害作用を提示するように改変または構築されている、脂質Ａ様分子である。これらの有害作用には、発熱性、局所シュワルツマン反応性、およびニワトリ胚５０％致死用量アッセイ（ＣＥＬＤ５０）で評価される毒性が含まれる。本開示に従う有用なＡＬＤには、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＬＡまたはＭＰＬ）および３−脱アシル化モノホスホリル脂質Ａ（３Ｄ−ＭＬＡまたは３Ｄ−ＭＰＬ）が含まれる。ＭＬＡ（ＭＰＬ）および３Ｄ−ＭＬＡ（３Ｄ−ＭＰＬ）は、既知であり、本明細書で詳細に記載する必要はない。例えば、参照により全ての目的のために本明細書に組み込まれる、米国特許第４，４３６７２７号および同第４，９１２，０９４号を参照されたい。
【００６９】
上記のＴＬＲ４アゴニスト化合物中では、全体的な変化は、分子中の官能基に従って決定することができる。例えば、リン酸基は、リン酸基のイオン化状態に応じて、負電荷であっても中性であってもよい。
【００７０】
ＧＬＡ化合物の合成
上述のとおり、本開示は、ＧＬＡ化合物を提供する。本開示の代表的なＧＬＡ化合物は、既知の有機合成技術によって調製することができ、例えば、それらの全体が、参照により全ての目的のために本明細書に組み込まれる、米国特許第８，７２２，０６４号および同第８２７３，３６１号を参照されたい。
【００７１】
本開示の化合物は一般に、遊離塩基または遊離酸として利用することができる。あるいは、本開示の化合物は、酸付加塩または塩基付加塩の形態で使用することができる。本開示の遊離アミノ化合物の酸付加塩は、当該技術分野で周知の方法によって調製することができ、有機酸および無機酸から形成することができる。好適な有機酸には、マレイン酸、フマル酸、安息香酸、アスコルビン酸、コハク酸、メタンスルホン酸、酢酸、シュウ酸、プロピオン酸、酒石酸、サリチル酸、クエン酸、グルコン酸、乳酸、マンデル酸、桂皮酸、アスパラギン酸、ステアリン酸、パルミチン酸、グリコール酸、グルタミン酸、およびベンゼンスルホン酸が含まれる。好適な無機酸には、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、および硝酸が含まれる。
【００７２】
同様に、本開示の酸化合物の塩基付加塩は、当該技術分野で周知の方法によって調製することができ、有機酸および無機酸から形成することができる。好適な有機塩基には、トリエチルアミンおよびピリジンが含まれるが、これらに限定されない。好適な無機塩基には、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、およびアンモニアが含まれるが、これらに限定されない。したがって、式（Ｉ）の「薬学的に許容される塩」は、ありとあらゆる許容される塩形態を包含することが意図される。
【００７３】
加えて、プロドラッグもまた、本開示の文脈に含まれる。プロドラッグは、そのようなプロドラッグを患者に投与したときに、インビボで式（Ｉ）の化合物を放出する、任意の共有結合した担体である。プロドラッグは一般に、通例的な操作によってまたはインビボでのいずれかで修飾が切断され、親化合物がもたらされるような方法で、官能基を修飾することによって調製される。プロドラッグには、例えば、ヒドロキシ基、アミン基、またはスルフヒドリル基が、患者に投与したときに切断されて、ヒドロキシ基、アミン基、またはスルフヒドリル基を形成する、任意の基に結合している、本開示の化合物が含まれる。したがって、プロドラッグの代表的な例には、式（Ｉ）の化合物のアルコールおよびアミン官能基の酢酸、ギ酸、および安息香酸誘導体が含まれる（が、これらに限定されない）。さらに、カルボン酸（ＣＯＯＨ）の場合、メチルエステルおよびエチルエステルなどのエステルを用いることができる。
【００７４】
立体異性体に関して、式（Ｉ）の化合物は、キラル中心を有してもよく、ラセミ体、ラセミ混合物として、および個々のエナンチオマーまたはジアステレオマーとして生じてもよい。それらの混合物を含む、全てのそのような異性体形態が、本開示に含まれる。さらに、結晶形態の式（Ｉ）の化合物のいくつかは、多形として存在してもよく、これは、本開示に含まれる。加えて、式（Ｉ）の化合物のいくつかはまた、水または他の有機溶媒と溶媒和化合物を形成することもできる。そのような溶媒和化合物は、同様に本開示の範囲内に含まれる。
【００７５】
サポニンおよびＬＰＳを含むリポソーム製剤は、ヒト対象に投与するための組成物であることが、本明細書で企図される。特定の実施形態では、ＬＰＳの濃度は、１用量当たり約１μｇ、１用量当たり約２μｇ、または１用量当たり約２．５μｇ〜１用量当たり約２５μｇである。いくつかの好ましい実施形態では、ＬＰＳの濃度は、１用量当たり約３μｇ〜１用量当たり約２０μｇである。
【００７６】
本明細書で提供される組成物の特定の例示的な実施形態では、ＬＰＳの濃度は、１用量当たり約２．５μｇ、１用量当たり約３μｇ、１用量当たり約３．５μ、１用量当たり約４μｇ、１用量当たり約４．５μｇ、１用量当たり約５μｇ、１用量当たり約５．５μｇ、１用量当たり約６μｇ、１用量当たり約６．５μｇ、１用量当たり約７μｇ、１用量当たり約７．５μｇ、１用量当たり約８μｇ、１用量当たり約８．５μｇ、１用量当たり約９μｇ、１用量当たり約９．５μｇ、１用量当たり約１０μｇ、１用量当たり約１０．５μｇ、１用量当たり約１１μｇ、１用量当たり約１１．５μｇ、１用量当たり約１２μｇ、１用量当たり約１２．５μｇ、１用量当たり約１３μｇ、１用量当たり約１３．５μｇ、１用量当たり約１４μｇ、１用量当たり約１４．５μｇ、１用量当たり約１５μｇ、１用量当たり約１５．５μｇ、１用量当たり約１６μｇ、１用量当たり約１６．５μｇ、１用量当たり約１７μｇ、１用量当たり約１７．５μｇ、１用量当たり約１８μｇ、１用量当たり約１８．５μｇ、１用量当たり約１９μｇ、１用量当たり約１９．５μｇ、１用量当たり約２０μｇ、１用量当たり約２０．５μｇ、１用量当たり約２１μｇ、１用量当たり約２１．５μｇ、１用量当たり約２２μｇ、１用量当たり約２２．５μｇ、１用量当たり約２３μｇ、１用量当たり約２３．５μｇ、１用量当たり約２４μｇ、１用量当たり約２４．５μｇ、または１用量当たり約２５μｇである。
【００７７】
特定の実施形態では、ＬＰＳの濃度は、１用量当たり約２．５μｇ〜１用量当たり約５μｇ、１用量当たり約５μｇ〜１用量当たり約７．５μｇ、１用量当たり約７．５μｇ〜１用量当たり約１０μｇ、１用量当たり約１０μｇ〜１用量当たり約１２．５μｇ、１用量当たり約１２．５μｇ〜１用量当たり約１５μｇ、１用量当たり約１５μｇ〜１用量当たり約１７．７μｇ、１用量当たり約１７．５μｇ〜１用量当たり約２０μｇ、１用量当たり約２０μｇ〜１用量当たり約２２．５μｇ、または１用量当たり約２２．５μｇ〜１用量当たり約２５μｇである。
【００７８】
サポニン対ＬＰＳの比
本明細書に記載のリポソーム製剤の例示的な態様では、サポニン対ＬＰＳの比は、約１対２．５である。サポニン対ＬＰＳの比を有するいくつかの実施形態では、サポニンの濃度は、１用量当たり約１μｇであり、ＬＰＳの濃度は、１用量当たり約２．５μｇである。サポニン対ＬＰＳの比を有するいくつかの実施形態では、サポニンの濃度は、１用量当たり約２μｇであり、ＬＰＳの濃度は、１用量当たり約５μｇである。サポニン対ＬＰＳの比を有するいくつかの実施形態では、サポニンの濃度は、１用量当たり約３μｇであり、ＬＰＳの濃度は、１用量当たり約７．５μｇである。サポニン対ＬＰＳの比を有するいくつかの実施形態では、サポニンの濃度は、１用量当たり約４μｇであり、ＬＰＳの濃度は、１用量当たり約１０μｇである。サポニン対ＬＰＳの比を有するいくつかの実施形態では、サポニンの濃度は、１用量当たり約約５μｇであり、ＬＰＳの濃度は、１用量当たり約１２．５μｇである。サポニン対ＬＰＳの比を有するいくつかの実施形態では、サポニンの濃度は、１用量当たり約６μｇであり、ＬＰＳの濃度は、１用量当たり約１５μｇである。サポニン対ＬＰＳの比を有するいくつかの実施形態では、サポニンの濃度は、１用量当たり約７μｇであり、ＬＰＳの濃度は、１用量当たり約１７．５μｇである。サポニン対ＬＰＳの比を有するいくつかの実施形態では、サポニンの濃度は、１用量当たり約８μｇであり、ＬＰＳの濃度は、１用量当たり約２０μｇである。サポニン対ＬＰＳの比を有するいくつかの実施形態では、サポニンの濃度は、１用量当たり約９μｇであり、ＬＰＳの濃度は、１用量当たり約２２．５μｇである。サポニン対ＬＰＳの比を有するいくつかの実施形態では、サポニンの濃度は、１用量当たり約１０μｇであり、ＬＰＳの濃度は、１用量当たり約２５μｇである。
【００７９】
Ｂ．ステロール
ステロールとともにそのクエンチ形態で提示されるサポニンは、ヒト対象におけるＴ細胞応答を促進する上で有効である。ステロールは、ステロイドアルコールであり、ステロイドに特徴的な４員環構造、および３炭素位にヒドロキシ（−ＯＨ）置換またはエステル（−ＯＲ）置換を有する任意の分子を指す。ステロールは、植物、動物、および微生物の膜内に天然に存在し、それぞれ植物ステロール、動物ステロール、および菌類ステロールと呼ばれる。ステロールは、他の環炭素の１つ以上でさらに置換されてもよく、また、環内に様々な二重結合を含有してもよい。ステロールの非限定的な例には、コレステロール、クロロギ酸コレステリル、スチグマステロール、シトステロール、エルゴステロール、ラノステロール、デスモステロール、またはカンペステロールが含まれ得る。ステロールは一般に、サポニンと会合して、安定した不溶性複合体を形成する。本明細書に記載の組成物の特定の実施形態では、リポソーム製剤は、サポニン、および任意でＬＰＳを含み、サポニンは、ステロールに複合体化されている。例示的な実施形態では、リポソーム製剤は、サポニン、および任意でＬＰＳを含み、サポニンは、コレステロールに複合体化されている。
【００８０】
ステロールに複合体化されたサポニンを含むリポソーム製剤の特定の実施形態では、サポニン対ステロールの比は、約１：１１０〜１：２００である。いくつかの実施形態では、サポニン対ステロールの比は、約１：１１０〜１：１５０である。いくつかの好ましい実施形態では、サポニン対ステロールの比は、約１：１２０〜１：１５０である。例示的な実施形態では、サポニン対ステロールの比は、約１：１２５である。典型的には、ステロールは、サポニンの溶血活性を低減するように作用する。いくつかの態様では、ステロールは、サポニンの溶血活性を５０％、６０％、７０％、８０％、９０％だけ、またはさらには１００％低減するように作用する。
【００８１】
他の好ましい実施形態では、本開示はまた、ステロールに複合体化されたサポニン、およびＬＰＳを含むリポソーム製剤も企図し、ＬＰＳの濃度は、１用量当たり約１０μｇまたは１用量当たり約５μｇである。特定の実施形態では、サポニンは、ステロールに複合体化されており、サポニンの濃度は、１用量当たり約４μｇまたは１用量当たり約２μｇである。例示的な実施形態では、リポソーム製剤は、ステロールに複合体化されたサポニン、およびＬＰＳを含み、サポニンの濃度は、１用量当たり約４μｇであり、ＬＰＳの濃度は、１用量当たり約１０μｇである。
【００８２】
別の例示的な実施形態では、リポソーム製剤は、ステロールに複合体化されたサポニン、およびＬＰＳを含み、サポニンの濃度は、１用量当たり約２μｇであり、ＬＰＳの濃度は、１用量当たり約５μｇである。
【００８３】
他の好ましい実施形態では、本開示はまた、ステロールに複合体化されたサポニン、およびＬＰＳを含むリポソーム製剤も企図し、サポニンは、Ｑｕｉｌｌａｊａ  ｓａｐｏｎａｒｉａ  Ｍｏｌｉｎａの樹皮に由来する免疫学的に活性なサポニン断片である。好ましい実施形態では、活性サポニン断片は、ＱＳ２１である。本明細書に記載の組成物の他の実施形態では、サポニンは、合成である。例示的な実施形態では、リポソーム製剤は、コレステロールに複合体化されたＱＳ２１、およびＬＰＳを含む。別の例示的な実施形態では、リポソーム製剤は、コレステロールに複合体化された合成ＱＳ２１（ＳＱＳ２１）、およびＬＰＳを含む。
【００８４】
Ｃ．リン脂質
リポソームは、サブユニットタンパク質ワクチン組成物およびアジュバントの送達に用いられている。リポソームは、所望の脂質濃度、電荷、サイズ、ならびに抗原およびアジュバントの分布または標的化を達成するようにリポソーム製剤を適合させる能力のために、魅力的な送達ビヒクルである。アニオン性、カチオン性、および中性リポソームを含む、多数のリポソームに基づく系が、評価されている。リポソーム製剤の脂質構成成分は、（リン脂質を含む）任意の脂質の少なくとも１つを構成して、安定したリポソーム構造を形成することができることが本明細書で企図される。
【００８５】
本明細書で提供される組成物の特定の実施形態では、リポソーム製剤は、少なくとも１つのリン脂質を含む。いくつかの実施形態では、リン脂質は、アニオン性である。いくつかの実施形態では、リン脂質は、カチオン性である。他の実施形態では、リン脂質は、中性電荷を有する。
【００８６】
表１は、本開示で使用するための例示的な脂質の非限定的な一覧を提供する。
表１：例示的な脂質
【表１】
2020533340.tif 000014
【表２】
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【００８７】
本明細書に記載のリポソーム製剤の特定の例示的な実施形態では、脂質構成成分は、ＤＬＰＣ、ＤＭＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＳＰＣ、ＤＯＰＣ、ＰＯＰＣ、ＤＬＰＧ、ＤＭＰＧ、ＤＰＰＧ、ＤＳＰＧ、ＤＯＰＧ、ＤＳＴＡＰ、ＤＰＴＡＰ、ＤＳＰＥ、ＤＰＰＥ、ＤＭＰＥ、ＤＬＰＥ、ＤＬＰＳ  １，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−Ｌ−セリン、ＤＭＰＳ  １，２−ミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−Ｌ−セリン、ＤＰＰＳ：１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−Ｌ−セリン、ＤＳＰＳ  １，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−Ｌ−セリン、ＤＯＰＳ  １，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−Ｌ−セリン、ＰＯＰＳ  １−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−Ｌ−セリン、ＤＬＰＩ  １，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−（１’−ミオ−イノシトール）、ＤＭＰＩ  １，２−ミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−（１’−ミオ−イノシトール）、ＤＰＰＩ  １，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−（１’−ミオ−イノシトール）、ＤＳＰＩ  １，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホイノシトール、ＤＯＰＩ  １，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−（１’−ミオ−イノシトール）、およびＰＯＰＩ  １−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホイノシトールからなる群から選択される少なくとも１つのリン脂質を含む。リン脂質は、塩形態（例えば、アンモニウムまたはナトリウム塩）であり得ることが、当業者によって理解されるだろう。
【００８８】
Ｄ．リポソームの特徴
サイズ
本開示は、リポソーム製剤を提供する。本明細書で提供されるリポソームは、Ｘ線およびレーザー回折、動的光散乱（ＤＬＳ）、ＣｒｙｏＥＭ、またはＭａｌｖｅｒｎ  Ｚｅｔａｓｉｚｅを含むがこれらに限定されない、当該技術分野における既知の技術によって評価することができる。いくつかの実施形態では、リポソームのサイズは、Ｚ平均直径を指す。
【００８９】
本明細書で提供されるリポソームは、１マイクロメートル以下の平均直径（すなわち、数平均直径）を有する。リポソーム粒子の平均粒径（すなわち、数平均直径）は、約９００ｎｍ以下、約８００ｎｍ以下、約７００ｎｍ以下、約６００ｎｍ以下、約５００ｎｍ以下、約４００ｎｍ以下、３００ｎｍ以下、または２００ｎｍ以下、例えば、約５０ｎｍ〜約９００ｎｍ、約５０ｎｍ〜約８００ｎｍ、約５０ｎｍ〜約７００ｎｍ、約５０ｎｍ〜約６００ｎｍ、約５０ｎｍ〜約５００ｎｍ、約５０ｎｍ〜約４００ｎｍ、約５０ｎｍ〜約３００ｎｍ、約５０ｎｍ〜約２００ｎｍ、約５０ｎｍ〜約１７５ｎｍ、約５０ｎｍ〜約１５０ｎｍ、約５０ｎｍ〜約１２５ｎｍ、約５０ｎｍ〜約１００ｎｍであることが特に望ましい。
【００９０】
本明細書に記載のリポソームのサイズは、典型的には、約８０ｎｍであるか、約８５ｎｍであるか、約９０ｎｍであるか、約９５ｎｍであるか、約１００ｎｍであるか、約１０５ｎｍであるか、約１１０ｎｍであるか、約１１５ｎｍであるか、約１２０ｎｍであるか、約１２５ｎｍであるか、約１３０ｎｍであるか、約１３５ｎｍであるか、約１４０ｎｍであるか、約１４５ｎｍであるか、約１５０ｎｍであるか、約１５５ｎｍであるか、約１６０ｎｍであるか、約１６５ｎｍであるか、約１７０ｎｍであるか、約１７５ｎｍであるか、約１８０ｎｍであるか、約１８５ｎｍであるか、約１９０ｎｍであるか、約１９５ｎｍであるか、または約２００ｎｍである。リポソームは、粒子で構成されていることが、当業者によって理解されるだろう。平均粒径は、リポソームを構成する粒子の平均直径を指す。
【００９１】
本開示の例示的なリポソーム製剤は、少なくとも０．４５ミクロンのフィルターを通して濾過することができる。例示的な実施形態では、リポソーム製剤は、０．２０または０．２２ミクロンのフィルターを通して濾過することができる。
【００９２】
体積
本開示の特定の実施形態は、サポニンおよびＬＰＳを含むリポソーム製剤を企図し、製剤は、ヒト用量での使用に好適な体積である。いくつかの実施形態では、製剤の体積は、約０．５ｍｌ〜約１．５ｍｌである。特定の実施形態では、製剤の体積は、約０．５ｍｌ、約０．６ｍｌ、約０．７ｍｌ、約０．８ｍｌ、約０．９ｍｌ、約１．０ｍｌ、約１．１ｍｌ、約１．２ｍｌ、約１．３ｍｌ、約１．４ｍｌ、または約１．５ｍｌである。特定の実施形態では、製剤の体積は、約０．５ｍｌ〜約０．７５ｍｌ、約０．７５ｍｌ〜約１．０ｍｌ、約１．０ｍｌ〜約１．２５ｍｌ、または約１．２５ｍｌ〜約１．５ｍｌである。
【００９３】
安定性
本明細書で提供されるリポソーム製剤は、安定しており、使用の容易さ、製造性、輸送性、および保管を可能にする。リポソームサイズを含むがこれに限定されない、リポソーム製剤の生理化学的な特徴が、様々な温度で、および様々な条件下で経時的に維持される。
【００９４】
時間の関数にわたる粒径の進化は、コロイド安定性の情報を提供する。例示的な安定したリポソーム製剤は、リポソームが、異なる温度（典型的には、摂氏３７、２５、または５度であるが、これらに限定されない）で、ある期間（例えば、３０日間または７日間の期間）にわたって実質的に同じｚ平均直径サイズを保持するものである。実質的に同じＺ平均直径サイズを保持することは、リポソームが、３０日間の期間にわたって、その元のサイズの２０％、１５％、１０％、５％以内に留まることを意味する。特に安定したリポソーム製剤は、その粒子が、摂氏２５度またはさらには摂氏３７度で、３０日間の期間にわたって実質的に同じＺ平均直径サイズを保持するものである。
【００９５】
リポソーム製剤の安定性は、当業者が精通している技術によって測定することができる。いくつかの実施形態では、安定性は、目視観察される。目視検査には、微粒子、綿状性、または凝集体の検査が含まれ得る。典型的には、コロイド安定性は、リポソームの粒径によって（Ｚ平均直径を測定することによってなど）決定され、任意で、経時的な、または様々な温度での、または特定の条件下での、サイズの変化として表される。いくつかの実施形態では、安定性は、粒径の増加を評価することによって決定される。いくつかの実施形態では、安定性は、例えば、動的光散乱（ＤＬＳ）技術の使用による、多分散指数（ＰＤＩ）の測定によって決定される。他の実施形態では、安定性は、ＤＬＳ技術の使用による、ゼータ電位の測定によって決定される。
【００９６】
いくつかの実施形態では、リポソームのＺ平均直径は、アッセイされる期間にわたって、５０％未満、４０％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１２％未満、１０％未満、７％未満、５％未満、３％未満、１％未満増加する。
【００９７】
いくつかの実施形態では、リポソームの多分散指数は、約０．５で、約０．４で、約０．３で、約０．２で、約０．１で、または約０．１〜約０．５で、約０．１〜約０．４で、約０．１〜約０．３で、もしくは約０．１〜約０．２で維持される。
【００９８】
ＩＩＩ．例示的な製剤
一態様では、リポソーム製剤は、サポニン、および任意でＬＰＳを含有する。別の態様では、リポソーム製剤は、ステロールに複合体化されたサポニン、および任意でＬＰＳを含有する。別の態様では、リポソーム製剤は、サポニンおよびＬＰＳを含有し、サポニンは、ステロールに複合体化されている。
【００９９】
特定の実施形態では、サポニンは、１用量当たり約１μｇ〜１用量当たり約８μｇの濃度であり、ＬＰＳは、１用量当たり約３μｇ〜１用量当たり約２０μｇの濃度である。
【０１００】
例示的な一実施形態では、リポソーム製剤は、サポニン、および任意でＬＰＳを含み、サポニンは、約１：１１０対１：２００の比でステロールに複合体化されている。別の例示的な実施形態では、リポソーム製剤は、サポニン、および任意でＬＰＳを含み、サポニンは、約１：１２５の比でステロールに複合体化されている。
【０１０１】
特定の実施形態では、サポニンは、ステロールに複合体化されており、サポニンは、１用量当たり約４μｇの濃度である。特定の実施形態では、サポニンは、ステロールに複合体化されており、サポニンは、１用量当たり約２μｇの濃度である。
【０１０２】
特定の実施形態では、サポニンは、ステロールに複合体化されており、ＬＰＳは、存在し、１用量当たり約１０μｇの濃度である。特定の実施形態では、サポニンは、ステロールに複合体化されており、ＬＰＳは、１用量当たり約５μｇの濃度で存在する。
【０１０３】
例示的な実施形態では、サポニンは、ステロールに複合体化されており、サポニンは、１用量当たり４μｇの濃度であり、ＬＰＳは、存在し、１用量当たり約１０μｇの濃度である。別の例示的な実施形態では、サポニンは、ステロールに複合体化されており、サポニンは、１用量当たり２μｇの濃度であり、ＬＰＳは、存在し、１用量当たり約５μｇの濃度である。
【０１０４】
本明細書に記載のリポソーム製剤の好ましい実施形態では、サポニンは、Ｑｕｉｌｌａｊａ  ｓａｐｏｎａｒｉａ  Ｍｏｌｉｎａの樹皮に由来する免疫学的に活性なサポニン断片である。例示的な実施形態では、サポニン断片は、ＱＳ２１である。
【０１０５】
特定の実施形態では、サポニンは、合成である。特定の実施形態では、リポソーム製剤は、ステロールに複合体化された合成ＱＳ２１（ＱＳ２１）、および任意でＬＰＳを含む。
【０１０６】
本明細書で提供される製剤の例示的な実施形態では、サポニンは、コレステロールに複合体化されている。
【０１０７】
本明細書で提供される製剤の例示的な実施形態では、製剤は、ＤＬＰＣ、ＤＭＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＳＰＣ、ＤＯＰＣ、ＰＯＰＣ、ＤＬＰＧ、ＤＭＰＧ、ＤＰＰＧ、ＤＳＰＧ、ＤＯＰＧ、ＤＳＴＡＰ、ＤＰＴＡＰ、ＤＳＰＥ、ＤＰＰＥ、ＤＭＰＥ、およびＤＬＰＥからなる群から選択されるリン脂質をさらに含む。
【０１０８】
例示的な実施形態では、ＬＰＳは、式（ＩＩ）に従う構造を有するＧＬＡであり、式中、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、およびＲ６は、Ｃ１１アルキルであり、Ｒ２およびＲ４は、Ｃ１３アルキル、またはその薬学的に許容される塩である。別の例示的な実施形態では、リポソーム製剤は、サポニンおよびＬＰＳを含み、ＬＰＳは、式（ＩＩ）に従う構造を有するＧＬＡであり、式中、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、およびＲ６は、Ｃ１０アルキルであり、Ｒ２およびＲ４は、Ｃ８アルキル、またはその薬学的に許容される塩である。
【０１０９】
さらに別の例示的な実施形態では、ＬＰＳは、ＭＰＬである。
【０１１０】
特定の実施形態では、リポソーム製剤は、ヒト用量での使用に好適な体積である。例示的な実施形態では、リポソーム製剤の体積は、約０．５ｍｌ〜約１．５ｍｌである。
【０１１１】
特定の例示的な実施形態では、ヒト対象に投与するためのリポソーム製剤は、サポニンおよびＬＰＳを含み、サポニンは、１用量当たり約１μｇ〜１用量当たり約１０μｇの濃度であり、ＬＰＳは、１用量当たり約３μｇ〜１用量当たり約２５μｇの濃度であり、サポニンは、ステロールに複合体化されており、サポニン対ステロールの比は、約１：１１０〜約１：２００である。特定の実施形態では、サポニンは、１用量当たり約１μｇ〜１用量当たり約８μｇの濃度であり、ＬＰＳは、１用量当たり約３μｇ〜１用量当たり約２０μｇの濃度である。
【０１１２】
例示的な実施形態では、ヒト対象に投与するためのリポソーム製剤は、サポニンおよびＬＰＳを含み、サポニンは、１用量当たり約１μｇ〜１用量当たり約１０μｇの濃度であり、ＬＰＳは、１用量当たり約３μｇ〜１用量当たり約２５μｇの濃度であり、サポニンは、ステロールに複合体化されており、サポニン対ステロールの比は、約１：１２５である。特定の実施形態では、サポニン対ＬＰＳの比は、１：２．５である。
【０１１３】
例示的な実施形態では、リポソーム製剤は、サポニンおよびＬＰＳを含み、サポニンは、ステロールに複合体化されており、サポニンは、１用量当たり４μｇの濃度であり、ＬＰＳは、１用量当たり約１０μｇの濃度であり、サポニンは、ステロールに複合体化されており、サポニン対ステロールの比は、約１：１２５である。
【０１１４】
別の例示的な実施形態では、リポソーム製剤は、サポニンおよびＬＰＳを含み、サポニンは、ステロールに複合体化されており、サポニンは、１用量当たり２μｇの濃度であり、ＬＰＳは、１用量当たり約５μｇの濃度であり、サポニンは、ステロールに複合体化されており、サポニン対ステロールの比は、約１：１２５である。
【０１１５】
特定の例示的な実施形態では、ヒト対象に投与するためのリポソーム製剤は、ＱＳ２１およびＬＰＳを含有し、ＱＳ２１は、１用量当たり約１μｇ〜１用量当たり約１０μｇの濃度であり、ＬＰＳは、１用量当たり約３μｇ〜１用量当たり約２５μｇの濃度であり、ＱＳ２１は、ステロールに複合体化されており、サポニン対ステロールの比は、約１：１１０〜約１：２００である。
【０１１６】
特定の例示的な実施形態では、リポソーム製剤は、約１：１１０〜約１：２００の比でコレステロールに複合体化されたＱＳ２１、およびＬＰＳを含有する。特定の実施形態では、約１：１１０〜約１：２００の比でコレステロールに複合体化されたＱＳ２１、およびＬＰＳを含むリポソーム製剤は、ＤＬＰＣ、ＤＭＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＳＰＣ、ＤＯＰＣ、ＰＯＰＣ、ＤＬＰＧ、ＤＭＰＧ、ＤＰＰＧ、ＤＳＰＧ、ＤＯＰＧ、ＤＳＴＡＰ、ＤＰＴＡＰ、ＤＳＰＥ、ＤＰＰＥ、ＤＭＰＥ、およびＤＬＰＥからなる群から選択されるリン脂質をさらに含む。
【０１１７】
特定の例示的な実施形態では、リポソーム製剤は、約１：１１０〜約１：２００の比でステロールに複合体化されたＱＳ２１、および式（ＩＩ）に従うＧＬＡを含み、式中、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、およびＲ６は、Ｃ１１アルキルであり、Ｒ２およびＲ４は、Ｃ１３アルキル、またはその薬学的に許容される塩である。
【０１１８】
他の例示的な実施形態では、リポソーム製剤は、約１：１１０〜約１：２００の比でコレステロールに複合体化されたＱＳ２１、および式（ＩＩ）に従うＧＬＡを含み、式中、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、およびＲ６は、Ｃ１０アルキルであり、Ｒ２およびＲ４は、Ｃ８アルキル、またはその薬学的に許容される塩である。
【０１１９】
別の例示的な実施形態では、リポソーム製剤は、約１：１１０〜約１：２００の比でコレステロールに複合体化されたＱＳ２１、およびＭＰＬを含む。
【０１２０】
別の例示的な実施形態では、リポソーム製剤は、サポニン、および任意でリポ多糖を含み、サポニンは、ステロールに複合体化されており、サポニン対ステロールの重量比は、約１：１１０〜約１：２００、１：１１０〜約１：１５０、１：１２０〜約１：１５０、または約１：１２５である。リポソーム製剤は、例えば、リン脂質を含んでもよく、リン脂質対ステロールの重量比は、例えば、１：１〜約１０：１であってもよい。いくつかの態様では、リポソーム製剤は、リン脂質を含み、リン脂質対ステロールの重量比は、約４：１である。サポニンは、例えば、１用量当たり約０．５μｇ〜１用量当たり約１０μｇの濃度、１用量当たり約１μｇ〜１用量当たり約１０μｇの濃度、１用量当たり約１μｇ〜１用量当たり約８μｇの濃度であり得る。リポ多糖は、任意で存在し、存在する場合、それは、例えば、１用量当たり１．２５μｇ〜１用量当たり約２５μｇの濃度、１用量当たり約３μｇ〜１用量当たり約２５μｇの濃度であり得るが、異なる投薬量レベルが企図される。サポニンは、例えば、１用量当たり約１μｇ〜１用量当たり約８μｇの濃度であってもよく、リポ多糖は、１用量当たり約３μｇ〜１用量当たり約２０μｇの濃度であってもよい。リポ多糖対サポニンの比は、例えば、約２．５対１であり得る。サポニンは、例えば、１用量当たり約４μｇの濃度であってもよく、リポ多糖は、例えば、１用量当たり約１０μｇの濃度であってもよい。サポニンは、例えば、１用量当たり約２μｇの濃度であってもよく、リポ多糖は、例えば、１用量当たり約５μｇの濃度であってもよい。製剤は、例えば、約８ｕｇ／ｍｌの濃度のサポニン、約２０ｕｇ／ｍｌの濃度のリポ多糖、約４ｍｇ／ｍｌの濃度のリン脂質、および約１ｍｇ／ｍｌの濃度のステロールを含んでもよい。製剤は、希釈形態（例えば、２〜１０倍希釈、またはそれ以上）であっても、濃縮形態（例えば、２〜１０倍濃縮、またはそれ以上）であってもよい。これらの実施形態のいずれにおいても、サポニンは、Ｑｕｉｌｌａｊａ  ｓａｐｏｎａｒｉａ  Ｍｏｌｉｎａの樹皮に由来する免疫学的に活性なサポニン断片であり得る。サポニンは、例えば、ＱＳ２１であり得る。これらの実施形態のいずれにおいても、ステロールは、コレステロールであり得るが、他のステロールが企図される。これらの実施形態のいずれにおいても、リポソームは、リン脂質で構成され得る。例えば、ＤＬＰＣ、ＤＭＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＳＰＣ、ＤＯＰＣ、ＰＯＰＣ、ＤＬＰＧ、ＤＭＰＧ、ＤＰＰＧ、ＤＳＰＧ、ＤＯＰＧ、ＤＳＴＡＰ、ＤＰＴＡＰ、ＤＳＰＥ、ＤＰＰＥ、ＤＭＰＥ、ＤＬＰＥ、ＤＬＰＳ、ＤＭＰＳ、ＤＰＰＳ、ＤＳＰＳ、ＤＯＰＳ、ＰＯＰＳ、ＤＬＰＩ、ＤＭＰＩ、ＤＰＰＩ、ＤＳＰＩ、ＤＯＰＩ、またはＰＯＰＩを含む、任意の好適なリン脂質を使用することができる。本明細書に記載のリポ多糖のいずれも、ならびに当該技術分野で既知の他のものも、使用することができる。投与の直前に、製剤は、ヒト用量での使用に好適な体積であるだろう。例示的な体積には、０．５ｍｌ〜約１．５ｍｌが含まれる。抗原は、製剤と混合され得る。本明細書に記載の抗原のいずれも、ならびに当該技術分野で既知の他の好適なものも、使用することができる。製剤を��用して、対象における免疫応答を誘発または増強することができる。対象は、例えば、がん、感染性疾患、または自己免疫疾患を含む、いくつかの疾患に罹患している。対象は、ヒトであり得る。１用量当たりで様々な量のサポニンおよびＬＰＳ（例えば、５ｕｇのＬＰＳ（例えば、ＧＬＡ）とともに２ｕｇのサポニン、１０ｕｇのＬＰＳ（例えば、ＧＬＡ）とともに４ｕｇのサポニン）が、送達され得る。
【０１２１】
本明細書に記載のサポニン含有リポソーム製剤のいずれかの製造方法であって、サポニンを事前形成されたステロール含有リポソームと混合することを含む、方法もまた提供される。サポニンは、例えば、ＱＳ２１であってもよく、いくつかの態様では、粗サポニン混合物Ｑｕｉｌ  Ａを精製して、サポニンが得られる。いくつかの態様では、サポニンは、リポソームとの混合前に緩衝液中に可溶化される。事前形成されたステロール含有リポソームは、リン脂質およびステロールを混合することと、高圧均質化を介して結果として得られるリポソームの粒径を低減することとによって調製することができる。
【０１２２】
ＩＶ．薬学的組成物およびワクチン組成物
特定の態様では、本明細書に記載のリポソーム製剤は、薬学的組成物またはワクチン組成物に組み込まれる。本明細書に記載のポリペプチド、抗原、ポリヌクレオチド、部分、変異体、融合ポリペプチドなどもまた、薬学的組成物またはワクチン組成物に組み込まれ得る。薬学的組成物は一般に、生理学的許容される担体と組み合わせて、リポソーム製剤を含む。免疫原性組成物とも称されるワクチン組成物は一般に、本明細書に記載のポリペプチド、抗原、およびポリペプチド、ポリヌクレオチド、部分、変異体、融合タンパク質などの１つ以上を含む。
【０１２３】
好ましい実施形態では、薬学的組成物は、本明細書で提供されるリポソーム製剤、および任意で抗原を含有する。リポソーム製剤および薬学的組成物は、任意で抗原と混合される。そのような実施形態では、リポソーム製剤および薬学的組成物は、それらが抗原との混合に好適であるように製剤化される。いくつかの好ましい実施形態では、ワクチン組成物は、本明細書で提供されるリポソーム製剤および抗原を含有する。
【０１２４】
Ａ．抗原
抗原は、任意の標的エピトープ、分子（生体分子を含む）、分子複合体（生体分子を含有する分子複合体を含む）、細胞内組み立て体、対象における免疫反応性の誘発または増強が所望される細胞または組織であり得る。頻繁に、抗原という用語は、目的のポリペプチド抗原を指す。しかしながら、本明細書で使用される場合、抗原はまた、ポリペプチド抗原をコードする核酸分子（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ）も指し得る。抗原はまた、目的のポリペプチド抗原をコードする組み換え構築物（例えば、発現構築物）であり得る。好適な抗原には、細菌抗原、ウイルス抗原、真菌抗原、原虫抗原、植物抗原、がん抗原、またはそれらに対する組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。本明細書に記載の抗原は、例えば、感染性疾患、がん、自己免疫疾患、アレルギー、喘息、または抗原特異的免疫応答の刺激が望ましいかもしくは有利である、任意の他の病態に関与し得るか、またはそれに由来し得る。
【０１２５】
特定の実施形態では、抗原は、感染性疾患に関連する少なくとも１つの感染性病原体に由来し得るか、またはそれと免疫学的に交差反応性である。特定の実施形態では、抗原は、がんに関連する少なくとも１つのエピトープ、生体分子、細胞、または組織に由来し得るか、またはそれと免疫学的に交差反応性である。特定の実施形態では、抗原は、自己免疫疾患に関連する少なくとも１つのエピトープ、生体分子、細胞、または組織に由来し得るか、またはそれと免疫学的に交差反応性である。
【０１２６】
本発明のリポソーム製剤および薬学的組成物は、組成物が抗原を含有しない場合に、ヒトにおける免疫応答を誘発することができることが理解されるだろう。特定の他の実施形態では、本開示の薬学的組成物およびワクチン組成物は、ヒトまたは他の哺乳動物宿主における免疫応答を誘発することができる抗原または抗原組成物を含有する。抗原または抗原組成物は、それ自体で、または本発明の製剤および組成物と併用したときに、免疫応答を誘発することができる。いくつかの態様では、本発明の製剤は、抗原または抗原組成物がヒトまたは他の哺乳動物における免疫応答を誘発する能力を増強する。
【０１２７】
抗原または抗原組成物は、Ｎ．ｇｏｎｏｒｒｈｅａおよびＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ（例えば、莢膜多糖およびそれらの共役体、トランスフェリン結合タンパク質、ラクトフェリン結合タンパク質、ＰｉｌＣ、アドヘシン）を含むＮｅｉｓｓｅｒｉａ菌種；Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ（例えば、Ｍタンパク質もしくはそれらの断片、Ｃ５Ａプロテアーゼ、リポテイコ酸）、Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓ．ｍｕｔａｎｓ：Ｈ．ｄｕｃｒｅｙｉ、Ｂｒａｎｈａｍｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓとしても知られるＭ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓを含むＭｏｒａｘｅｌｌａ菌種（例えば、高分子および低分子のアドヘシンおよびインベイシン）；Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ（例えば、パータクチン、百日咳毒素、もしくはそれらの誘導体、繊維状赤血球凝集素、アデニル酸シクラーゼ、線毛）、Ｂ．ｐａｒａｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、およびＢ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａを含むＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ菌種；Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ（例えば、ＥＳＡＴ６、抗原８５Ａ、抗原８５Ｂ、もしくは抗原８５Ｃ）、Ｍ．ｂｏｖｉｓ、Ｍ．ｌｅｐｒａｅ、Ｍ．ａｖｉｕｍ、Ｍ．ｐａｒａｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｍ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓを含むＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ菌種；Ｌ．ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａを含むＬｅｇｉｏｎｅｌｌａ菌種；腸内毒素原性Ｅ．ｃｏｌｉ（例えば、定着因子、熱不安定性毒素もしくはその誘導体、熱安定性毒素もしくはその誘導体）、腸管出血性Ｅ．ｃｏｌｉ、腸管病原性Ｅ．ｃｏｌｉ（例えば、志賀毒素様毒素もしくはその誘導体）を含むＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ菌種；Ｖ．ｃｈｏｌｅｒａ（例えば、コレラ毒素もしくはその誘導体）を含むＶｉｂｒｉｏ菌種；Ｓ．ｓｏｎｎｅｉ、Ｓ．ｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ、Ｓ．ｆｌｅｘｎｅｒｉｉを含むＳｈｉｇｅｌｌａ菌種、Ｙ．ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ（例えば、Ｙｏｐタンパク質）、Ｙ．ｐｅｓｔｉｓ、Ｙ．ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓを含むＹｅｒｓｉｎｉａ菌種；Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ（例えば、毒素、アドヘシン、およびインベイシン）ならびにＣ．ｃｏｌｉを含むＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ菌種；Ｓ．ｔｙｐｈｉ、Ｓ．ｐａｒａｔｙｐｈｉ、Ｓ．ｃｈｏｌｅｒａｅｓｕｉｓ、Ｓ．ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓを含むＳａｌｍｏｎｅｌｌａ菌種；Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓを含むＬｉｓｔｅｒｉａ菌種；Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ（例えば、ウレアーゼ、カタラーゼ、空胞化毒素）を含むＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ菌種；Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａを含むＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ菌種；Ｓ．ａｕｒｅｕｓ、Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓを含むＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ菌種；Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｅ．ｆａｅｃｉｕｍを含むＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ菌種；Ｃ．ｔｅｔａｎｉ（例えば、破傷風毒素およびその誘導体）、Ｃ．ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ（例えば、ボツリヌス毒素およびその誘導体）、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ（例えば、クロストリジウム毒素ＡもしくはＢ、およびそれらの誘導体）を含むＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ菌種；Ｂ．ａｎｔｈｒａｃｉｓ（例えば、ボツリヌス毒素およびその誘導体）を含むＢａｃｉｌｌｕｓ菌種；Ｃ．ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ（例えば、ジフテリア毒素およびその誘導体）を含むＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅ��ｉｕｍ菌種；Ｂ．ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ（例えば、ＯｓｐＡ、ＯｓｐＣ、ＤｂｐＡ、ＤｂｐＢ）、Ｂ．ｇａｒｉｎｉｉ（例えば、ＯｓｐＡ、ＯｓｐＣ、ＤｂｐＡ、ＤｂｐＢ）、Ｂ．ａｆｚｅｌｉｉ（例えば、ＯｓｐＡ、ＯｓｐＣ、ＤｂｐＡ、ＤｂｐＢ）、Ｂ．ａｎｄｅｒｓｏｎｉｉ（例えば、ＯｓｐＡ、ＯｓｐＣ、ＤｂｐＡ、ＤｂｐＢ）、Ｂ．ｈｅｒｍｓｉｉを含むＢｏｒｒｅｌｉａ菌種；Ｅ．ｅｑｕｉおよびヒト顆粒球エーリキア症の作用物質を含むＥｈｒｌｉｃｈｉａ菌種；Ｒ．ｒｉｃｋｅｔｔｓｉｉを含むＲｉｃｋｅｔｔｓｉａ菌種；Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ（例えば、ＭＯＭＰ、ヘパリン結合タンパク質）、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（例えば、ＭＯＭＰ、ヘパリン結合タンパク質）、Ｃ．ｐｓｉｔｔａｃｉを含むＣｈｌａｍｙｄｉａ菌種；Ｌ．ｉｎｔｅｒｒｏｇａｎｓを含むＬｅｐｔｏｓｐｉｒａ菌種；Ｔ．ｐａｌｌｉｄｕｍ（例えば、希少外膜タンパク質）、Ｔ．ｄｅｎｔｉｃｏｌａ、Ｔ．ｈｙｏｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅを含むＴｒｅｐｏｎｅｍａ菌種；または他の細菌病原体などの１つ以上の細菌病原体に由来する組成物を含み得る。
【０１２８】
特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物およびワクチン組成物は、ヒトまたは他の哺乳動物宿主における免疫応答を誘発することができる抗原または抗原組成物を含有し、抗原または抗原組成物は、ＨＩＶ−１（ｔａｔ、ｎｅｆ、ｇｐ１２０、またはｇｐ１６０など）、ヒトヘルペスウイルス（ｇＤもしくはその誘導体など）または最初期タンパク質（ＨＳＶ１もしくはＨＳＶ２由来のＩＣＰ２７など）、サイトメガロウイルス（（特にヒト）（ｇＢまたはその誘導体など）、ロタウイルス（弱毒生ウイルスを含む）、エプスタイン・バーウイルス（ｇｐ３５０またはその誘導体など）、水痘帯状疱疹ウイルス（ｇｐｌ、ＩＩ、およびＩＥ６３など）などの１つ以上の感染性ウイルスに由来するか、あるいはＢ型肝炎ウイルス（例えば、Ｂ型肝炎表面抗原またはその誘導体）、Ａ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、およびＥ型肝炎ウイルスなどの肝炎ウイルスに由来するか、あるいはパラミクソウイルス：呼吸器多核体ウイルス（ＦおよびＧタンパク質もしくはそれらの誘導体）、パラインフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、ヒトパピローマウイルス（例えば、ＨＰＶ６、１１、１６、１８など）、フラビウイルス（例えば、黄熱病ウイルス、デングウイルス、ダニ媒介性脳炎ウイルス、日本脳炎ウイルス）、またはインフルエンザウイルス（卵内またはＭＤＣＫ細胞内で成長させた、完全生ウイルスまたは不活化ウイルス、スプリットインフルエンザウイルス、あるいは完全インフルエンザビロソーム（Ｇｌｕｃｋ，Ｖａｃｃｉｎｅ，１９９２，１０，９１５−９２０により記載のもの）またはそれらの精製タンパク質もしくは組み換えタンパク質（ＨＡ、ＮＰ、ＮＡ、もしくはＭタンパク質、またはそれらの組み合わせ））などの他のウイルス病原体に由来する組成物を含み得る。
【０１２９】
特定の他の実施形態では、本開示の薬学的組成物およびワクチン組成物は、ヒトまたは他の哺乳動物宿主における免疫応答を誘発することができる抗原または抗原組成物を含有し、抗原または抗原組成物は、Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍを含むＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ菌種；Ｔ．ｇｏｎｄｉｉ（例えば、ＳＡＧ２、ＳＡＧ３、Ｔｇ３４）を含むＴｏｘｏｐｌａｓｍａ菌種；Ｅ．ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａを含むＥｎｔａｍｏｅｂａ菌種；Ｂ．ｍｉｃｒｏｔｉを含むＢａｂｅｓｉａ菌種；Ｔ．ｃｒｕｚｉを含むＴｒｙｐａｎｏｓｏｍａ菌種；Ｇ．ｌａｍｂｌｉａを含むＧｉａｒｄｉａ菌種；Ｌ．ｍａｊｏｒを含むＬｅｓｈｍａｎｉａ菌種；Ｐ．ｃａｒｉｎｉｉを含むＰｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ菌種；Ｔ．ｖａｇｉｎａｌｉｓを含むＴｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ菌種などの１つ以上の寄生虫（例えば、Ｊｏｈｎ，Ｄ．Ｔ．ａｎｄ  Ｐｅｔｒｉ，Ｗ．Ａ．，Ｍａｒｋｅｌｌ  ａｎｄ  Ｖｏｇｅ’ｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｐａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ−９ｔｈ  Ｅｄ．，２００６，ＷＢ  Ｓａｕｎｄｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、Ｂｏｗｍａｎ，Ｄ．Ｄ．，Ｇｅｏｒｇｉｓ’  Ｐａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ  ｆｏｒ  Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｉａｎｓ−８ｔｈ  Ｅｄ．，２００２，ＷＢ  Ｓａｕｎｄｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａを参照されたい）に由来するか、または（ｉ）線虫感染症（Ｅｎｔｅｒｏｂｉｕｓ  ｖｅｒｍｉｃｕｌａｒｉｓ、Ａｓｃａｒｉｓ  ｌｕｍｂｒｉｃｏｉｄｅｓ、Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ  ｔｒｉｃｈｕｒｉａ、Ｎｅｃａｔｏｒ  ａｍｅｒｉｃａｎｕｓ、Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ  ｄｕｏｄｅｎａｌｅ、Ｗｕｃｈｅｒｅｒｉａ  ｂａｎｃｒｏｆｔｉ、Ｂｒｕｇｉａ  ｍａｌａｙｉ、Ｏｎｃｈｏｃｅｒｃａ  ｖｏｌｖｕｌｕｓ、Ｄｒａｃａｎｃｕｌｕｓ  ｍｅｄｉｎｅｎｓｉｓ、Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａ  ｓｐｉｒａｌｉｓ、およびＳｔｒｏｎｇｙｌｏｉｄｅｓ  ｓｔｅｒｃｏｒａｌｉｓを含むが、これらに限定されない）；（ｉｉ）吸虫感染症（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｍａｎｓｏｎｉ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｈａｅｍａｔｏｂｉｕｍ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｊａｐｏｎｉｃｕｍ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｍｅｋｏｎｇｉ、Ｏｐｉｓｔｈｏｒｃｈｉｓ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ、Ｐａｒａｇｏｎｉｍｕｓ菌種、Ｆａｓｃｉｏｌａ  ｈｅｐａｔｉｃａ、Ｆａｓｃｉｏｌａ  ｍａｇｎａ、Ｆａｓｃｉｏｌａ  ｇｉｇａｎｔｉｃａを含むが、これらに限定されない）；ならびに（ｉｉｉ）条虫感染症（Ｔａｅｎｉａ  ｓａｇｉｎａｔａおよびＴａｅｎｉａ  ｓｏｌｉｕｍを含むが、これらに限定されない）などの、哺乳動物に感染することができる蠕虫に由来する組成物を含み得る。したがって、特定の実施形態は、Ｓｃｈｉｓｏｓｔｏｍａ菌種、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｍａｎｓｏｎｉｉ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｈａｅｍａｔｏｂｉｕｍ、および／もしくはＳｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｊａｐｏｎｉｃｕｍに由来するか、またはＣ．ａｌｂｉｃａｎｓを含むＣａｎｄｉｄａ菌種；Ｃ．ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓを含むＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ菌種などの酵母に由来する抗原を含むワクチン組成物を企図する。
【０１３０】
特定の好ましい実施形態は、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓもしくはＭ．ｌｅｐｒａｅなどのＡｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、または別のｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ；Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ属、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ属、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ属、Ｂｏｒｒｅｌｉａ属、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ属、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ属、もしくはＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ属のメンバーなどの細菌；単純ヘルペスウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ−１もしくはＨＩＶ−２などのＨＩＶ）、インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、風疹ウイルス、コロナウイルス（ＳＡＲＳもしくはＭＥＲＳなど）、ロタウイルス、ノロウイルス、ピコルナウイルス（ポリオウイルス、エンテロウイルス、もしくはコクサッキーウイルスなど）、獣医学的病原体、例えば、ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）、サイトメガロウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、肝炎ウイルス、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、フラビウイルスウイルス（デングウイルス、日本脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス、ジカウイルス、ポワッサンウイルス、もしくはダニ媒介性脳炎ウイルスなど）、ヘニパウイルス（ヘンドラウイルスもしくはニパウイルスなど）、ブニヤウイルス（ハンタウイルスもしくはリフトバレー熱ウイルスなど）、アレナウイルス（ラッサウイルス、フニンウイルス、マチュポウイルス、もしくはグアナリトウイルスなど）、フィロウイルス（エボラウイルスもしくはマールブルグウイルスなど）、リッサウイルス（狂犬病ウイルスなど）、呼吸器多核体ウイルス、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、およびサイトメガロウイルスなどのウイルス；Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ、およびＰｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉなどの真菌、もしくはＣ．ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃ．ｇｌａｂｒａｔａ、Ｃ．ｋｒｕｓｅｉ、Ｃ．ｌｕｓｉｔａｎｉａｅ、Ｃ．ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、およびＣ．ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓなどのＣａｎｄｉｄａ種を含む酵母；原虫、例えば、Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、Ｐ．ｖｉｖａｘ、Ｐ．ｍａｌａｒｉａｅ、およびＰ．ｏｖａｌｅを含むＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ種などの寄生虫；またはＡｃａｎｔｈａｍｏｅｂａ、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ、Ａｎｇｉｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｍａｎｓｏｎｉｉ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｈａｅｍａｔｏｂｉｕｍ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｊａｐｏｎｉｃｕｍ、Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ、Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｃｏｌｉ、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｄｉｓｐａｒ、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｈａｒｔｍａｎｎｉ、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｐｏｌｅｃｋｉ、Ｗｕｃｈｅｒｅｒｉａ  ｂａｎｃｒｏｆｔｉ、Ｇｉａｒｄｉａ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ、およびＬｅｉｓｈｍａｎｉａの１つ以上などの別の寄生虫を含む、細菌、ウイルス、または真菌などの少なくとも１つの感染性病原体に由来する抗原を企図する。特定の実施形態では、抗原は、結核、インフルエンザ、アメーバ症、ＨＩＶ、肝炎、またはリーシュマニア症に関与する抗原に由来するか、またはそれに関連する��のであり得る。
【０１３１】
本開示に従うと、特定の態様では、本明細書に記載の薬学的組成物およびワクチン組成物に含まれる抗原は、ウエストナイルウイルスに由来しないか、またはそれに関連しない。いくつかの態様では、抗原は、ＴＢ、ＨＩＶ、またはマラリアに由来するか、またはそれに関連する。
【０１３２】
いくつかの実施形態では、抗原は、インフルエンザ関連抗原である。いくつかの実施形態では、抗原は、インフルエンザを引き起こす抗原である。いくつかの実施形態では、抗原は、インフルエンザを引き起こすウイルスに由来する。一実施形態では、抗原は、Ｈ５Ｎ１に由来する赤血球凝集素（ＨＡ）を含む。一実施形態では、抗原は、Ｈ５Ｎ１に由来するノイラミニダーゼを含む。
【０１３３】
例えば、特定の実施形態では、抗原は、Ｂｏｒｒｅｌｉａ菌種に由来し、抗原は、核酸、病原体由来抗原または抗原調製物、組み換え生成されたタンパク質またはペプチド、およびキメラ融合タンパク質を含み得る。１つのそのような抗原は、ＯｓｐＡである。ＯｓｐＡは、宿主細胞内でのその生合成のために脂質化形態である完全成熟タンパク質（Ｌｉｐｏ−ＯｓｐＡ）であっても、あるいは非脂質化誘導体であってもよい。そのような非脂質化誘導体は、インフルエンザウイルスの非構造タンパク質（ＮＳ１）の最初の８１個のＮ末端アミノ酸を有する非脂質化ＮＳ１−ＯｓｐＡ融合タンパク質を含み、完全ＯｓｐＡタンパク質、および別のＭＤＰ−ＯｓｐＡは、３つの追加のＮ末端アミノ酸を担持するＯｓｐＡの非脂質化形態である。
【０１３４】
他の特異的抗原は、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、例えば、Ｔｈ  Ｒａ１２、Ｔｂ  Ｈ９、Ｔｂ  Ｒａ３５、Ｔｂ３８−１、Ｅｒｄ１４、ＤＰＶ、ＭＴＩ、ＭＳＬ、ｍＴＴＣ２、およびｈＴＣＣ１に由来する（ＷＯ９９／５１７４８）。Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓのタンパク質にはまた、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓの少なくとも２つ、３つ、もしくは４つ、またはそれ以上のポリペプチドがより大きなタンパク質に融合されている、融合タンパク質およびそれらの変異体も含まれる。特定の融合には、Ｒａ１２−ＴｂＨ９−Ｒａ３５、Ｅｒｄ１４−ＤＰＶ−ＭＴＩ、ＤＰＶ−ＭＴＩ−ＭＳＬ、Ｅｒｄ１４ＤＰＶ−ＭＴＩ−ＭＳＬ−ｍＴＣＣ２、Ｅｒｄ１４−ＤＰＶ−ＭＴＩ−ＭＳＬ、ＤＰＶ−ＭＴＩ−ＭＳＬ−ｍＴＣＣ２、ＴｂＨ９−ＤＰＶ−ＭＴＩ（ＷＯ９９１５１７４８）が含まれる。使用することができる他の抗原には、参照により全ての目的のために本明細書に組み込まれる、ＵＳ２０１０／０１２９３９１、ＷＯ２００８／１２４６４７、および米国特許第８，４８６，４１４号に記載の抗原、抗原の組み合わせ、および融合タンパク質が含まれる。例示的な一実施形態では、融合タンパク質は、ＩＤ９３である。例示的な一実施形態では、融合タンパク質は、ＩＤ９１である。例示的な一実施形態では、融合タンパク質は、ＩＤ９７である。
【０１３５】
他の特異的抗原は、Ｃｈｌａｍｙｄｉａに由来し、それらには、例えば、高分子量タンパク質（ＨＷＭＰ）（ＷＯ９９／１７７４１）、ＯＲＦ３（ＥＰ３６６４１２）、および推定膜タンパク質（Ｐｍｐ）が含まれる。他のＣｈｌａｍｙｄｉａ抗原は、ＷＯ９９１２８４７５に記載の群から選択され得る。特定の抗原は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（例えば、莢膜多糖およびそれらの共役体、ＰｓａＡ、ＰｓｐＡ、ストレプトリジン、コリン結合タンパク質）を含むＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ菌種、ならびにタンパク質抗原ニューモリシン（Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ，１９８９，６７，１００７、Ｒｕｂｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ，２５，３３７−３４２）、ならびにそれらの突然変異解毒誘導体（ＷＯ９０／０６９５１、ＷＯ９９／０３８８４）に由来し得る。他の細菌ワクチン組成物は、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ  Ｂ型（例えば、ＰＲＰおよびその共役体）、無莢膜型Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅを含むＨａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ菌種に由来する抗原、例えば、ＯＭＰ２６、高分子量アドヘシン、Ｐ５、Ｐ６、タンパク質Ｄおよびリポタンパク質Ｄ、ならびにフィンブリンおよびフィンブリン由来ペプチド（米国特許第５，８４３，４６４号）、またはそれらの多重コピー変異体もしくは融合タンパク質を含む。
【０１３６】
他の特異的抗原は、Ｂ型肝炎に由来する。Ｂ型肝炎表面抗原の誘導体は、当該技術分野で周知であり、それらには、とりわけ、欧州特許出願第ＥＰ−Ａ４１４３７４号、同第ＥＰ−Ａ−０３０４５７８号、および同第ＥＰ１９８４７４号に明記され記載される、ＰｒｅＳ１、ＰｒｅＳ２、Ｓ抗原が含まれる。
【０１３７】
他の実施形態では、抗原は、性器疣贅を担うと考えられているヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）（ＨＰＶ６またはＨＰＶ１１、および他のもの）、ならびに子宮頚がんを担うＨＰＶウイルス（ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１８、および他のもの）に由来する。特定の抗原は、Ｌ１粒子またはカプソメア、ならびにＨＰＶ６およびＨＰＶ１１タンパク質Ｅ６、Ｅ７、Ｌ１、およびＬ２から選択される１つ以上の抗原を含む融合タンパク質を含む。特定の形態の融合タンパク質は、ＷＯ９６／２６２７７に開示されるＬ２Ｅ７、およびＧＢ９７１７９５３．５（ＰＣＴ／ＥＰ９８／０５２８５）に開示されるタンパク質Ｄ（１／３）−Ｅ７を含む。追加の可能性のある抗原には、ＨＰＶ１６、１８、３３、５８抗原が含まれる。例えば、Ｌ１もしくはＬ２抗原モノマー、またはともにウイルス様粒子（ＶＬＰ）として提示されるＬ１もしくはＬ２抗原、またはＶＬＰまたはカプソメアにおいて単独で提示されるＬ１単独タンパク質である。そのような抗原、ウイルス様粒子、およびカプソメア自体は、既知である。例えば、ＷＯ９４／００１５２、ＷＯ９４／２０１３７、ＷＯ９４／０５７９２、およびＷＯ９３／０２１８４を参照されたい。
【０１３８】
他の実施形態では、抗原は、融合タンパク質である。融合タンパク質は、単独で、または例えば、Ｅ７、Ｅ２、もしくはＦ５などの融合タンパク質として含まれ、特定の実施形態は、Ｌ１Ｅ７融合タンパク質を含むＶＬＰを含む（ＷＯ９６／１１２７２）。特定のＨＰＶ１６抗原は、タンパク質Ｄ担体と融合して、ＨＰＶ１６からタンパク質Ｄ−Ｅ６もしくはＥ７融合体を形成する、初期タンパク質Ｅ６もしくはＦ７、またはそれらの組み合わせ、あるいはＥ６またはＥ７とＬ２との組み合わせを含む（ＷＯ９６／２６２７７）。あるいは、ＨＰＶ１６または１８初期タンパク質Ｅ６およびＥ７は、単一分子中、例えば、タンパク質Ｄ−Ｅ６／Ｅ７融合体に提示され得る。組成物は、任意で、例えば、タンパク質Ｄ−Ｅ６もしくはタンパク質Ｄ−Ｅ７融合タンパク質またはタンパク質ＤＥ６／Ｅ７融合タンパク質の形態で、一方または両方のＥ６およびＥ７タンパク質前端ＨＰＶ１８を含有する。組成物は、加えて、他のＨＰＶ株由来、例えば、ＨＰＶ３１または３３由来の抗原を含み得る。
【０１３９】
抗原はまた、マラリアを引き起こす寄生虫にも由来し得る。例えば、Ｐｌａｓｍｏｄｉａ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ由来の抗原には、ＲＴＳ，ＳおよびＴＲＡＰが含まれる。ＲＴＳは、Ｂ型肝炎表面抗原のｐｒｅＳ２部分の４つのアミノ酸を介してＢ型肝炎ウイルスの表面（Ｓ）抗原に結合した、Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍのスポロゾイト周囲（ＣＳ）タンパク質の実質的に全てのＣ末端部分を含むハイブリッドタンパク質である。その完全な構造は、英国特許出願第９１２４３９０．７号の優先権を主張するＷＯ９３／１０１５２として公開された、国際特許出願第ＰＣＴ／ＥＰ９２／０２５９１号に開示されている。酵母において発現される場合、ＲＴＳは、リポタンパク質粒子として生成され、それがＨＢＶ由来のＳ抗原と同時発現される場合、それは、ＲＴＳ，Ｓとして知られる混合粒子を生成する。
【０１４０】
ＴＲＡＰ抗原は、ＷＯ９０／０１４９６として公開された国際特許出願第ＰＣＴ／ＧＢ８９／００８９５号に記載されている。本開示の実施形態は、抗原調製物がＲＴＳ，ＳとＴＲＡＰ抗原との組み合わせを含む、マラリアワクチンである。多段階マラリアワクチンの構成成分の候補となる可能性が高い他のマラリア原虫抗原は、Ｐ．ｆａｃｉｐａｒｕｍ  ＭＳＰ１、ＡＭＡ１、ＭＳＰ３、ＥＢＡ、ＧＬＵＲＰ、ＲＡＰ１、ＲＡＰ２、セケストリン（Ｓｅｑｕｅｓｔｒｉｎ）、ＰｆＥＭＰ１、Ｐｆ３３２、ＬＳＡ１、ＬＳＡ３、ＳＴＡＲＰ、ＳＡＬＳＡ、ＰｆＥＸＰ１、Ｐｆｓ２５、Ｐｆｓ２８、ＰＦＳ２７１２５、Ｐｆｓ１６、Ｐｆｓ４８／４５、Ｐｆｓ２３０、およびＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ菌種のそれらの類似体である。
【０１４１】
一実施形態では、がんの免疫療法による治療に有用であり得るため、抗原は、がん細胞に由来する。例えば、抗原は、前立腺がん、乳がん、結腸直腸がん、肺がん、膵がん、腎がん、または黒色腫がんのものなどの腫瘍拒絶抗原であり得る。例示的ながんまたはがん細胞由来抗原には、ＭＡＧＥ１、３、およびＭＡＧＥ４、もしくはＷＯ９９／４０１８８に開示されるものなどの他のＭＡＧＥ抗原、ＰＲＡＭＥ、ＢＡＧＥ、Ｌａｇｅ（ＮＹ  Ｅｏｓ１としても知られる）ＳＡＧＥおよびＨＡＧＥ（ＷＯ９９／５３０６１）、またはＧＡＧＥ（Ｒｏｂｂｉｎｓ  ａｎｄ  Ｋａｗａｋａｍｉ，１９９６  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ８，ｐｐｓ６２８−６３６、Ｖａｎ  ｄｅｎ  Ｅｙｎｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ＆Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（１９９７＆１９９８）、Ｃｏｒｒｅａｌｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７），Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ８９，ｐ．２９３）が含まれる。がん抗原のこれらの非限定的な例は、黒色腫、肺がん、肉腫、および膀胱がんなどの広範囲な腫瘍型において発現される。例えば、米国特許第６，５４４，５１８号を参照されたい。
【０１４２】
他の腫瘍特異的抗原には、ＧＭ２およびＧＭ３、もしくは担体タンパク質へのそれらの共役体などの腫瘍特異的もしくは腫瘍関連ガングリオシド、または多くのがんの治療に有用な１０アミノ酸長の短鎖ペプチドである、全長ゴナドトロピンホルモン放出ホルモン（ＧｎＲＨ、ＷＯ９５／２０６００）などの自己ペプチドホルモンが含まれるが、これらに制限されない。別の実施形態では、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ＰＡＰ、ＰＳＣＡ（例えば、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９５（４）１７３５−１７４０  １９９８）、ＰＳＭＡなどの前立腺抗原、または一実施形態では、プロスターゼとして知られる抗原が使用される。（例えば、Ｎｅｌｓｏｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９９９）９６：３１１４−３１１９、Ｆｅｒｇｕｓｏｎ，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ１９９９．９６，３１１４−３１１９、ＷＯ９８／１２３０２、米国特許第５，９５５，３０６号、ＷＯ９８／２０１１７、米国特許第５，８４０，８７１号および同第５，７８６，１４８号、ＷＯ００／０４１４９）。他の前立腺特異的抗原は、ＷＯ９８／１３７４１８およびＷＯ／００４１４９から既知である。別のものは、ＳＴＥＡＰ（ＰＮＡＳ９６  １４５２３  １４５２８  ７−１２  １９９９）である。
【０１４３】
本開示の文脈で有用な他の腫瘍関連抗原には、Ｐｌｕ−１（Ｊ  Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ２７４（２２）１５６３３−１５６４５，１９９９）、ＨＡＳＨ−１、ＨａｓＨ−２、クリプト（Ｃｒｉｐｔｏ）（Ｓａｌｏｍｏｎ  ｅｔ  ａｌ  Ｂｉｏｅｓｓａｙｓ１９９，２１：６１−７０、米国特許第５，６５４，１４０号）、およびクリプチン（Ｃｒｉｐｔｉｎ）（米国特許第５，９８１，２１５号）が含まれる。加えて、がんの療法においてワクチン組成物に特に関連する抗原はまた、チロシナーゼおよびサバイビンも含む。
【０１４４】
本明細書に開示される実施形態はまた、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ発現などの腫瘍関連抗原発現、または他のがん特異的抗原もしくはがん関連抗原を特徴とする任意のがんに対して有用であり得る、がん抗原も含む。
【０１４５】
がんを有するリスクを有するか、またはリスクがあることが疑われる対象におけるがんの診断は、臨床症状、がんの進行の程度、がんの種類、および他の因子を含む様々な因子に応じて変動し得る、広範な当該技術分野で許容される方法論のいずれかによって達成することができる。がんの診断学の例には、患者試料（例えば、血液、皮膚生検、他の組織生検、外科検体など）の病理組織学的、組織化学的、および免疫病理組織学的検査、定義された遺伝子（例えば、核酸）マーカーのＰＣＲ試験、循環がん関連抗原もしくはそのような抗原を担持する細胞、または定義された特異性の抗体の血清学的試験、あるいは当業者が精通している他の方法論が含まれる。例えば、米国特許第６，７３４，１７２号、同第６，７７０，４４５号、同第６，８９３，８２０号、同第６，９７９，７３０号、同第７，０６０，８０２号、同第７，０３０，２３２号、同第６，９３３，１２３号、同第６，６８２，９０１号、同第６，５８７，７９２号、同第６，５１２，１０２号、同第７，０７８，１８０号、同第７，０７０，９３１号、同第ＪＰ５−３２８９７５号、Ｗａｓｌｙｌｙｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３  Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈ．２１１（７）：１８を参照されたい。
【０１４６】
本開示の特定の実施形態に従う、リポソーム製剤、薬学的組成物、およびワクチン組成物、ならびに方法はまた、自己免疫疾患の予防または療法にも使用することができ、自己免疫疾患には、宿主または対象の免疫系が、「自己」組織、細胞、生体分子（例えば、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、糖タンパク質、リポタンパク質、プロテオリピド、脂質、糖脂質、核酸（ＲＮＡおよびＤＮＡなど）、オリゴ糖、多糖、プロテオグリカン、もしくはグリコサミノグリカンなど、ならびに対象の細胞および組織の他の分子構成成分）、またはエピトープ（例えば、抗体可変領域相補性決定領域（ＣＤＲ）によって、もしくはＴ細胞受容体ＣＤＲによって認識されるものなどの免疫学的に定義された特異的認識構造）に対して指向される免疫応答を有害な方法で媒介する、疾患、病態、または障害が含まれる。
【０１４７】
したがって、自己免疫疾患は、いずれの場合も正常な自己組織に対して指向される、細胞または抗体のいずれかに関与する異常な免疫応答を特徴とする。哺乳動物における自己免疫疾患は一般に、２つの異なるカテゴリ、つまり細胞媒介性疾患（すなわち、Ｔ細胞）または抗体媒介性障害のうちの１つに分類することができる。細胞媒介性自己免疫疾患の非限定的な例には、多発性硬化症、関節リウマチ、橋本病、Ｉ型糖尿病（若年発症糖尿病）、および自己免疫性ぶどう膜網膜炎が含まれる。抗体媒介性自己免疫障害には、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス（またはＳＬＥ）、グレーブス病、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少症、自己免疫性喘息、クリオグロブリン血症、血栓性血小板減少性紫斑病、原発性胆管硬化症、および悪性貧血が含まれるが、これらに限定されない。全身性エリテマトーデスに関連する抗原（複数可）は、小核リボ核酸タンパク質（ｓｎＲＮＰ）であり、グレーブス病に関連する抗原（複数可）は、サイロトロピン受容体、サイログロブリン、および甲状腺上皮細胞の他の構成成分であり（Ａｋａｍｉｚｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６、Ｋｅｌｌｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５、Ｒａｊｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７、およびＴｅｘｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２）、天疱瘡に関連する抗原（複数可）は、デスモグレイン３などのカドヘリン様天疱瘡抗原および他の接着分子であり（Ｍｅｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６：Ｓｔａｎｌｅｙ，１９９５、Ｐｌｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４、およびＨａｓｈｉｍｏｔｏ，１９９３）、血栓性血小板減少性紫斑病に関連する抗原（複数可）は、血小板の抗原である。（例えば、米国特許第６，９２９，７９６号、Ｇｏｒｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．（Ｅｄｓ．），Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ，２００１，Ｋｌｕｗｅｒ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｎｏｒｗｅｌｌ，Ｍ  Ａ、Ｒａｄｂｒｕｃｈ  ａｎｄ  Ｌｉｐｓｋｙ，Ｐ．Ｅ．（Ｅｄｓ．）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｃｏｎｃｅｐｔｓ  ｉｎ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ  ａｎｄ  Ｃｈｒｏｎｉｃ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ（Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．）２００１，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｎ．Ｙ．を参照されたい）。
【０１４８】
特定の実施形態では、本開示の組成物は、高齢者ならびに／または免疫抑制された者（腎臓透析を受けている対象、化学療法および／もしくは放射線療法を受けている対象、移植レシピエントなどを含む）の治療に特に適用可能である。そのような個体は一般に、ワクチン組成物に対して減少した免疫応答を呈するため、本開示の組成物の使用は、これらの対象において達成される免疫応答を増強することができる。
【０１４９】
他の実施形態では、本開示の組成物中で使用される抗原（複数可）には、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）などの病態の予防または療法のための、細菌感染症（例えば、肺炎球菌）によって引き起こされるか、または悪化するものなどの呼吸器疾患に関連する抗原が含まれる。ＣＯＰＤは、慢性気管支炎および／または肺気腫を有する患者における、不可逆的または部分的に可逆的な気道閉塞の存在によって生理学的に定義される（Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．１９９５  Ｎｏｖｅｍｂｅｒ；１５２（５Ｐｔ２）：Ｓ７７−１２１）。ＣＯＰＤの悪化はしばしば、細菌（例えば、肺炎球菌）感染症によって引き起こされる（Ｃｌｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｒｅｖ．２００１  Ａｐｒｉｌ；１４（２）：３３６−６３）。
【０１５０】
好ましい実施形態では、リポソーム製剤は、薬学的組成物中に収容される。別の好ましい実施形態では、リポソーム製剤は、ワクチン組成物中に収容される。例示的な実施形態では、薬学的組成物は、リポソーム製剤および抗原を含む。別の例示的な実施形態では、ワクチン組成物は、リポソーム製剤および抗原を含む。いくつかのそのような例示的な実施形態では、抗原は、感染性疾患、がん、または自己免疫疾患に関連する。例示的な実施形態では、リポソーム製剤および薬学的製剤を使用して、感染性疾患、がん、または自己免疫疾患などの疾患を治療することができる。例示的な実施形態では、リポソーム製剤および薬学的製剤を使用して、感染性疾患、がん、または自己免疫疾患などの疾患を有する、ヒトを含む哺乳動物における増強した免疫応答を誘発することができる。そのような実施形態では、リポソーム製剤および薬学的製剤は、抗原および／または抗原をコードする核酸をさらに含んでも、含まなくてもよい。
【０１５１】
本明細書に開示される特定の実施形態に従うと、薬学的組成物およびワクチン組成物は、抗原を含む代わりに、抗原をコードする核酸を含み得る。例えば、実施形態では、薬学的組成物およびワクチン組成物は、抗原をコードする核酸配列に作動可能に結合したプロモーターを含む、少なくとも１つの組み換え発現構築物を含有し得る。特定のさらなる実施形態では、組み換え発現構築物は、アデノウイルスベクター、アデノ関連ウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、ポックスウイルスベクター、またはレトロウイルスベクターなどのウイルスベクター内に存在する。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（Ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，２００６  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹに従う、本明細書で提供されるポリペプチド抗原の発現のための、そのような発現構築物およびベクターを作製および使用するための組成物および方法は、当該技術分野で既知である。組み換え発現構築物の非限定的な例は一般に、現在開示されている特定の実施形態で使用するための、本明細書で提供されるポリペプチド抗原の発現に適応させることができる教示とともに、例えば、米国特許第６，８４４，１９２号、同第７，０３７，７１２号、同第７，０５２，９０４号、同第７，００１，７７０号、同第６，１０６，８２４号、同第５，６９３，５３１号、同第６，６１３，８９２号、同第６，８７５，６１０号、同第７，０６７，３１０号、同第６，２１８，１８６号、同第６，７８３，９８１号、同第７，０５２，９０４号、同第６，７８３，９８１号、同第６，７３４，１７２号、同第６，７１３，０６８号、同第５，７９５，５７７号、および同第６，７７０，４４５号、ならびに他のものに見出すことができる。
【０１５２】
本明細書で提供される組成物は、典型的には、本発明の製剤および組成物中で免疫刺激剤として作用する、サポニンおよび任意のリポ多糖に加えて、少なくとも１つの追加の免疫刺激剤を含み得る。免疫刺激剤は、抗原に対する免疫応答（抗体媒介性および／または細胞媒介性）を増強または強化する物質である。免疫刺激剤の例には、アジュバント、生分解性マイクロスフェア（例えば、ポリ乳酸ガラクチド）、およびリポソーム（それに化合物が組み込まれるもの、例えば、Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎの米国特許第４，２３５，８７７号を参照されたい）が含まれる。ワクチン調製物は一般に、例えば、Ｐｏｗｅｌｌ＆Ｎｅｗｍａｎ，ｅｄｓ．，Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｄｅｓｉｇｎ（サブユニットおよびアジュバントアプローチ）（１９９５）に記載されている。
【０１５３】
例えば、背景（例えば、米国特許第６，５４４，５１８号を参照されたい）として、非メチル化ＣｐＧジヌクレオチド（「ＣｐＧ」）を含有する免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、全身経路および粘膜経路の両方によって投与される場合に、アジュバントであることが知られている（ＷＯ９６／０２５５５、ＥＰ４６８５２０、Ｄａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１９９８．１６０（２）：８７０−８７６、ＭｃＣｌｕｓｋｉｅ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｓ，Ｊ．ｌｍｍｕｎｏｌ．，１９９８，１６１（９）：４４６３−６）。ＣｐＧは、ＤＮＡ中に存在するシトシン−グアノシンジヌクレオチドモチーフの略語である。免疫刺激におけるＣＧモチーフの中心的な役割は、Ｋｒｉｅｇ，Ｎａｔｕｒｅ３７４，ｐ５４６  １９９５によって解明された。詳細な分析は、ＣＧモチーフが、特定の配列の文脈にある必要があること、およびそのような配列が、細菌ＤＮＡ中では一般的であるが、脊椎動物ＤＮＡ中では希少であることを示している。免疫刺激性配列はしばしば、プリン、プリン、Ｃ、Ｇ、ピリミジン、ピリミジンであり、式中、ジヌクレオチドＣＧモチーフは、メチル化されていないが、他の非メチル化ＣｐＧ配列は、免疫刺激性であることが知られおり、特定の実施形態で使用することができる。ワクチン組成物中に製剤化される場合、ＣｐＧは、遊離溶液中で遊離抗原とともに投与されても（ＷＯ９６／０２５５５、ＭｃＣｌｕｓｋｉｅ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｓ（上記））、抗原に共有結合的に共役されても（ＰＣＴ公開第ＷＯ９８／１６２４７号）、水酸化アルミニウムなどの担体とともに製剤化されてもよい（例えば、Ｄａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ（上記）、Ｂｒａｚｏｌｏｔ−Ｍｉｌｌａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．ＮａｔＬＡｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，１９９８，９５（２６），１５５５３−８）。
【０１５４】
本開示の組成物中で使用するための他の例示的なオリゴヌクレオチドはしばしば、少なくとも３つ、より好ましくは少なくとも６つ以上のヌクレオチドによって分離された、２つ以上のジヌクレオチドＣｐＧモチーフを含有する。本開示のオリゴヌクレオチドは、典型的には、デオキシヌクレオチドである。一実施形態では、オリゴヌクレオチド内の介在ヌクレオチドは、ジチオリン酸、またはより好ましくはホスホロチオエート結合であるが、混合介在ヌクレオチド結合を有するオリゴヌクレオチドを含む、リン酸ジエステルおよび他の介在ヌクレオチド結合が、本開示の範囲内である。ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドまたはジチオリン酸を生成するための方法は、米国特許第５，６６６，１５３、同第５，２７８，３０２号、およびＷ０９５／２６２０４に記載されている。
【０１５５】
オリゴヌクレオチドの他の例は、以下の出版物に開示される配列を有し、本明細書に開示される特定の実施形態では、配列は、好ましくは以下のホスホロチオエート修飾介在ヌクレオチド結合を含有する。
【０１５６】
ＣＰＧ７９０９：Ｃｏｏｐｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，“ＣＰＧ７９０９ ａｄｊｕｖａｎｔ  ｉｍｐｒｏｖｅｓ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｂ  ｖｉｒｕｓ  ｖａｃｃｉｎｅ  ｓｅｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ａｎｔｉｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ−ｔｒｅａｔｅｄ  ＨＩＶ−ｉｎｆｅｃｔｅｄ  ａｄｕｌｔｓ．”ＡＩＤＳ，２００５  Ｓｅｐ２３；１９（１４）：１４７３−９。
【０１５７】
ＣｐＧ１０１０１：Ｂａｙｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｇａｔｅｗａｙｓ  ｔｏ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔｒｉａｌｓ．”Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｆｉｎｄ．Ｅｘｐ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００５  Ａｐｒ；２７（３）：１９３−２１９。ＶｏｌｌｍｅｒＪ．，“Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｉｎ  ｄｒｕｇ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｓｔｉｍｕｌａ−ｔｏｒｙ  ＣｐＧ  ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｌｉｇａｎｄｓ  ｆｏｒ  ＴＬＲ９．”Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｏｎ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｔｈｅｒａｐｙ．２００５  Ｍａｙ；５（５）：６７３−６８２。
【０１５８】
代替的なＣｐＧオリゴヌクレオチドは、上記に引用した出版物に記載の好ましい配列の変異体を含んでもよく、それらには、重要でないヌクレオチド配列置換、挿入、欠失、および／または付加がされているという点で異なる。本開示の特定の実施形態で利用されるＣｐＧオリゴヌクレオチドは、当該技術分野で既知の任意の方法（例えば、ＥＰ４６８５２０）によって合成することができる。好都合であることに、そのようなオリゴヌクレオチドは、自動化合成機を利用して合成することができる。オリゴヌクレオチドは、典型的には、デオキシヌクレオチドである。好ましい実施形態では、オリゴヌクレオチド内の介在ヌクレオチド結合は、ジチオリン酸、またはより好ましくはホスホロチオエート結合であるが、リン酸ジエステルもまた、現在企図されている実施形態の範囲内である。異なる介在ヌクレオチド結合を含むオリゴヌクレオチド、例えば、混合ホスホロチオエートホホジエステル（ｐｈｏｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒ）もまた、企図される。オリゴヌクレオチドを安定化する他の介在ヌクレオチド結合もまた、使用することができる。
【０１５９】
Ｂ．担体および賦形剤
本開示の薬学的組成物およびワクチン組成物は、様々な周知の貂順のいずれかを使用して製剤化することができる。特定の実施形態では、薬学的組成物およびワクチン組成物は、安定したエマルジョン（例えば、水中油型エマルジョン）または水溶液として調製される。
【０１６０】
特定の用途では、本明細書に開示される組成物は、経口投与を介して対象に送達することができる。したがって、これらの組成物は、不活性希釈剤とともに、もしくは無防備な食用担体とともに製剤化してもよく、またはそれらは、硬質もしくは軟質シェルゼラチンカプセル内に封入されてもよく、またはそれらは、錠剤に圧縮されてもよく、またはそれらは、食事の食品に直接組み込まれてもよい。
【０１６１】
特定の状況では、本明細書に開示される組成物を、例えば、米国特許第５，５４３，１５８号、米国特許第５，６４１，５１５号、および米国特許第５，３９９，３６３号（各々の全体が、参照により本明細書に具体的に組み込まれる）に記載のように、非経口、皮下、静脈内、皮内、筋肉内、またはさらには腹腔内送達することが望ましいだろう。遊離塩基または薬学的に許容される塩としての活性化合物の溶液は、ヒドロキシプロピルセルロースなどの界面活性物質と好適に混合した水中に調製することができる。分散剤もまた、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、およびそれらの混合物中に、ならびに油中に調製することができる。通常の保管および使用条件下では、これらの調製物は、微生物の成長を防止するための保存剤を含有する。
【０１６２】
注射剤用途に好適な薬学的組成物形態には、無菌注射用溶液または分散剤の即時調製のための無菌水溶液または分散液および無菌粉末が含まれる（その全体が、参照により本明細書に具体的に組み込まれる、米国特許第５，４６６，４６８号）。いずれの場合でも、形態は、無菌でなくてはならず、容易な注射針通過性が存在する程度まで流動性でなくてはならない。それは、製造および保管条件下で安定していなくてはならず、細菌および真菌などの微生物の汚染作用に対して保存されていなくてはならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、それらの好適な混合物、ならびに／または植物油を含有する、溶媒または分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散剤の場合、必要な粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって維持することができる。微生物の作用の防止は、様々な抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、およびチメロサールなどによって促進することができる。多くの場合、等張剤、例えば、糖または塩化ナトリウムを含めることが好ましいだろう。注射用組成物の吸収の延長は、組成物中に吸収を遅延させる薬剤、例えば、ステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを使用することによってもたらすことができる。
【０１６３】
例えば、水溶液中の非経口投与では、溶液は、まず液体希釈剤を十分な食塩水またはグルコースで等張にして、必要に応じて好適に緩衝されるべきである。これらの特定の溶液は、静脈内、筋肉内、および腹腔内投与に特に好適である。これに関連して、用いることができる無菌水溶性培地は、本開示に照らして、当業者にとって既知のものである。例えば、１回の投薬量は、１ｍｌの等張ＮａＣＩ溶液中に溶解させ、１０００ｍｌの皮下点滴流体に添加するか、または提案された注入部位に注射することができる（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１５ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，ｐｐ．１０３５−１０３８および１５７０−１５８０を参照されたい）。治療される対象の病態に応じて、投薬量のいくらかの変動が、必然的に生じるだろう。いずれにしても、投与を担う者は、個々の対象に適切な用量を決定する。さらに、ヒト投与では、調製物は、無菌性、発熱性、ならびにＦＤＡ生物製剤基準局によって要求される一般的な安全性および純度基準を満たすべきである。
【０１６４】
無菌注射用溶液は、必要な量の活性化合物を、必要に応じて上記に列挙される様々な他の成分を有する適切な溶媒に組み込み、その後濾過滅菌することによって調製される。一般に、分散剤は、様々な無菌活性成分を、塩基性分散媒および上記に列挙される成分から必要な他の成分を含有する無菌ビヒクルに組み込むことによって調製される。無菌注射用溶液の調製のための無菌粉末の場合、好ましい調製方法は、活性成分に加えて、その以前の無菌濾過溶液からの任意の追加の所望の成分の粉末をもたらす真空乾燥技術および凍結乾燥技術である。
【０１６５】
本明細書に開示される組成物は、天然形態または塩形態で製剤化され得る。薬学的に許容される塩には、（タンパク質の遊離アミノ基で形成される）酸付加塩、例えば、塩酸もしくはリン酸などの無機塩、または酢酸、シュウ酸、酒石酸、およびマンデル酸などの有機塩で形成されるものが含まれる。遊離カルボキシ基で形成される塩は、例えば、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、もしくは水酸化第二鉄などの無機塩基、またはイソプロピルアミン、トリエチルアミン、ヒスチジン、およびプロカインなどの有機塩基に由来し得る。製剤化時、溶液は、投薬量製剤と適合する様式で、かつハンセン病の治療に治療的に有効であるような量で、投与される。製剤は、注射用溶液および薬物放出カプセルなどの様々な剤形で容易に投与される。
【０１６６】
本明細書で使用される場合、「担体」は、ありとあらゆる溶液、分散媒、ビヒクル、コーティング、希釈剤、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤、緩衝液、担体溶液、懸濁剤、ならびにコロイドなどを含む。薬学的活性物質へのそのような培地および薬剤の使用は、当業者に周知である。任意の従来の培地または薬剤が活性成分と適合しない場合を除いて、治療組成物中でのその使用が企図される。補足活性成分もまた、組成物に組み込まれ得る。
【０１６７】
「薬学的に許容される」という語句は、ヒトに投与したときに、許容できないアレルギー反応または類似の有害反応を生成しない分子実体および組成物を指す。活性成分としてタンパク質を含有する水性組成物の調製は、当業者によく理解されている。典型的には、そのような組成物は、液体溶液または懸濁液のいずれかとして、注射剤として調製され、注射前の液体中の溶液または懸濁液に好適な固体形態もまた、調製され得る。調製物はまた、乳化させることもできる。
【０１６８】
特定の実施形態では、本開示の組成物は、鼻腔内スプレー、吸入、および／または他のエアロゾル送達ビヒクルによって送達することができる。遺伝子、ポリヌクレオチド、およびペプチド組成物を、経鼻エアロゾルスプレーを介して肺に直接送達するための方法は、例えば、（各々の全体が、参照により本明細書に具体的に組み込まれる）米国特許第５，７５６，３５３号および米国特許第５，８０４，２１２号に記載されている。同様に、鼻腔内微小粒子樹脂（Ｔａｋｅｎａｇａら、１９９８）およびリゾホスファチジル−グリセロール化合物（その全体が、参照により本明細書に具体的に組み込まれる、米国特許第５，７２５，８７１号）を使用する薬物の送達もまた、薬学の当該技術分野で周知である。同様に、ポリテトラフルオロエチレン支持体マトリックスの形態の経粘膜的な薬物送達は、（その全体が、参照により本明細書に具体的に組み込まれる）米国特許第５，７８０，０４５号に記載されている。
【０１６９】
あるいは、薬学的組成物またはワクチン組成物は、免疫刺激剤、および所望のポリペプチドがインサイチュで生成されるように、上記のポリペプチドまたは融合ポリペプチドの１つ以上をコードする、ＤＮＡ分子を含有し得る。そのような組成物中では、融合タンパク質をコードするＤＮＡは、核酸発現系、細菌発現系、およびウイルス発現系を含む、当業者に既知の様々な送達系のいずれかにおいて存在し得る。適切な核酸発現系は、（好適なプロモーターおよび終結シグナルなどの）その患者における発現に必要なＤＮＡ配列を含有する。細菌送達系は、その細胞表面上にポリペプチドの免疫原性部分を発現する（Ｂａｃｉｌｌｕｓ−Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｒｉｎなどの）細菌の投与を伴う。特定の実施形態では、ＤＮＡは、非病原体（欠損）複製可能ウイルスの使用を伴い得るウイルス発現系（例えば、ワクチニア、または他のポックスウイルス、レトロウイルス、もしくはアデノウイルス）を使用して導入され得る。そのような発現系にＤＮＡを組み込むための技術は、当業者に周知である。ＤＮＡはまた、例えば、Ｕｌｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ２５９：１７４５−１７４９（１９９３）に記載され、Ｃｏｈｅｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ２５９：１６９１−１６９２（１９９３）によって概説されているように、「ネイキッド」でもあり得る。ネイキッドＤＮＡの取り込みは、細胞に効率的に輸送される生分解性ビーズ上にＤＮＡをコーティングすることによって、増加させることができる。
【０１７０】
Ｃ．キットおよび製造物品
特定の実施形態では、本明細書に記載のリポソーム製剤、薬学的組成物、およびワクチン組成物を含有するキットもまた企図され、これは、１つ以上の容器内に提供され得る。一実施形態では、リポソーム製剤の全ての構成成分は、単一の容器内にともに存在する。特定の実施形態では、薬学的組成物の全ての構成成分は、単一の容器内にともに存在する。特定の実施形態では、ワクチン組成物の全ての構成成分は、単一の容器内にともに存在する。他の実施形態では、薬学的組成物およびワクチン組成物の構成成分は、２つ以上の容器内に存在し得る。好ましい実施形態では、リポソーム製剤は、１つの容器内に提供され、抗原は、別の容器内に提供される。
【０１７１】
本開示のキットは、本明細書に記載の使用のための指示書、またはバイアル内に収容される材料を混合するための指示書をさらに含み得る。いくつかの実施形態では、バイアル内の材料は、乾燥または凍結乾燥されている。いくつかの実施形態では、バイアル内の材料は、液体である。
【０１７２】
そのようなキットの実施形態に従う容器は、任意の好適な容器、入れ物、バイアル、アンプル、管、カップ、箱、ボトル、フラスコ、瓶、単一ウェル装置もしくは複数ウェル装置のウェル、リザーバ、槽など、または本明細書に開示される組成物を配置、保管、および／もしくは輸送し、かつ内容物を取り出すためにアクセスすることができる、他のデバイスであり得る。典型的には、そのような容器は、意図される用途と適合し、かつ収容される内容物の回収が容易に達成され得る材料からなる。そのような容器の非限定的な例には、ゴム製のセプタム、または針もしくはシリンジを使用して内容物を取り除くのに適合した他の密封手段を有するものを含む、ガラスおよび／またはプラスチック製の密封または再密封可能管およびアンプルが含まれる。そのような容器は、例えば、ガラス、または化学的に適合するプラスチックもしくは樹脂からなってもよく、これは、容器からの材料の効率的な回収を可能にし、かつ例えば、紫外光もしくは極高低温などの分解条件から、または微生物汚染物を含む望まれない汚染物の導入から材料を保護する材料からなっても、それでコーティングされてもよい。容器は、好ましくは無菌または無菌化可能であり、本明細書に記載のワクチン組成物および／または免疫学的アジュバント組成物および／または抗原および／または組み換え発現構築物などの懸濁または溶解に使用され得るものなどの、任意の担体、賦形剤、溶媒、またはビヒクルなどと適合する材料からなる。
【０１７３】
Ｖ．本開示の組成物の作製方法
本発明者らは、サポニン（および任意のＬＰＳ）を事前形成されたリポソームと混合して、本明細書に記載の製剤を作製するプロセスにおいて、サポニン含有リポソームを作製することができることを有利に発見した。
【０１７４】
本明細書で提供されるように、例示的なリポソーム製剤の１つの作製方法は、４対１のリン脂質対コレステロール重量比で、ＬＰＳをＤＯＰＣおよびコレステロールと混合することを伴う。混合ステップは、クロロホルムの存在下、ガラス製の丸底フラスコ内で実行してから、真空下でクロロホルムを蒸発させ、薄膜をリン酸緩衝液で水和させる。特定の実施形態では、ＬＰＳは、ＳＬＡである。例示的な実施形態では、ＬＰＳは、ＧＬＡである。いくつかの実施形態では、さらなるステップは、粒径をナノメートル（ｎｍ）直径（ＤＬＳ測定に基づいて、７０〜１３０ｎｍの平均粒径）に均一に低減するための、水浴超音波処理（１０ｍｌ規模の場合）または高圧均質化（１００ｍｌ以上の規模の場合）を含む。高圧均質化は、２０，０００ｐｓｉ、１０〜１５℃、および５回の均質化通過で、Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓの１１０ＥＨまたは１１０Ｐ微少流体機モデルを使用して実行することができる。
【０１７５】
特定の実施形態では、ＱＳ２１は、粗サポニン混合物Ｑｕｉｌ−ＡのＨＰＬＣ精製を介して得られる。好ましい実施形態では、ＱＳ２１は、リン酸緩衝液中に別個に可溶化され、その後調製されたＬＰＳおよびコレステロールを含有するリポソーム中に混合されてから、無菌濾過され得る。例示的な実施形態では、最終製造製品は、０．２２μｍのフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｓｔｅｒｉｐａｋ  ＧＰ１０）で濾過無菌化され、４ｍｇ／ｍＬのＤＯＰＣ、１ｍｇ／ｍＬのコレステロール、２０ｕｇ／ｍｌのＧＬＡ、および８ｍｇ／ｍｌのＱＳ２１を含有する。薬学的組成物またはワクチン組成物は、投与前に１対１の比でリポソーム製剤を抗原と混合することによって調製することができる。製造後、製剤は、５℃で保管され、製造時、ならびに製造日時から１週間後、２週間後、１ヶ月後、３ヶ月後、６ヶ月後、および１２ヶ月後などの、（ＤＬＳを介した）粒径の測定および目視外観を含む安定性監視プログラム下に置かれ得る。加えて、ＬＰＳ濃度およびＱＳ２１濃度は、製造時、ならびに製造日時から６ヶ月後および１２ヶ月後などの、荷電化粒子検出器（ＣＡＤ）を有するＨＰＬＣによって測定することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のリポソーム製剤は、安定性の監視の加速のために、より高い温度（２５℃、３７℃、および６０℃）で保管される。
【０１７６】
ＶＩ．免疫応答の誘発または増強方法
対象における免疫応答の誘発または増強方法であって、免疫応答の誘発または増強を必要とする対象に、本明細書に記載のリポソーム製剤、薬学的組成物、またはワクチン組成物を投与するステップを含む、方法が、本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、製剤または組成物は、抗原をさらに含み、抗原は、ポリペプチド抗原、またはポリペプチド抗原をコードする核酸分子である。いくつかのそのような実施形態では、製剤または組成物は、ポリペプチド抗原、またはポリペプチド抗原をコードする核酸分子との混合に好適である。
【０１７７】
本明細書で提供される実施形態では、対象は、哺乳動物（例えば、家畜（ウシ、ブタ、ヤギ、ウマなど）、ペット（ネコ、イヌなど）、およびげっ歯類（ラット、マウスなど）を含む動物）、またはヒトである。一実施形態では、対象は、ヒトである。別の実施形態では、対象は、非ヒト哺乳動物である。別の実施形態では、非ヒト哺乳動物は、イヌ、ウシ、またはウマである。
【０１７８】
例示的な実施形態では、本明細書に開示されるリポソーム製剤は、ワクチン組成物に組み込まれる。本明細書に記載のリポソーム製剤を使用して、対象における免疫応答（非特異的応答および抗原特異的応答を含む）を誘発または増強することができる。いくつかの実施形態では、免疫応答は、全身免疫応答を含む。いくつかの実施形態では、免疫応答は、粘膜免疫応答を含む。免疫応答の誘発または増強は、免疫応答の刺激および免疫応答のブーストを含む。
【０１７９】
したがって、本開示は、免疫応答を開始することができる宿主における免疫応答を改変する（すなわち、統計的に有意な様式で、例えば、当業者が精通している適切な対照と比較して、増加または低下させる）ための組成物を提供する。当業者に既知であるように、免疫応答は、宿主の免疫状態の維持および／または制御に関与する１つ以上の組織、器官、細胞、または分子の構造または機能の任意の改変を含み得る、宿主の免疫状態の任意の能動的な改変であり得る。典型的には、免疫応答は、可溶性免疫グロブリンもしくは抗体；サイトカイン、リンホカイン、ケモカイン、ホルモン、および成長因子などの可溶性媒介物質、ならびに他の可溶性小ペプチド、炭水化物、ヌクレオチド、および／もしくは脂質媒介物質；免疫系の細胞の機能もしくは構造特性の改変によって決定される細胞活性化状態の変化、例えば、細胞増殖、運動性の改変、特殊活性（特異的遺伝子発現もしくは細胞溶解挙動など）の導入；表面抗原発現プロファイルの改変もしくはアポトーシス（プログラム細胞死）の発生を含む、免疫系の細胞による細胞分化；または免疫応答の存在が検出され得る任意の他の基準の、インビボまたはインビトロ決定を含むがこれらに限定されない、様々な周知のパラメータのいずれかによって検出することができる。したがって、製剤は、抗体産生を増強および／または誘導する（例えば、中和抗体の産生を誘導する、抗原特異的抗体応答を増強する）ように作用し得る。
【０１８０】
免疫応答はしばしば、例えば、分子および細胞レベルでの宿主の免疫系の細胞および組織による自己構造と非自己構造との識別と見なされ得るが、本開示は、それほど限定的であるべきではない。例えば、免疫応答はまた、免疫系構成成分の典型的な制御などの任意の数の正常な状態に伴い得るか、または自己免疫疾患および変性疾患において観察される不適切な自己免疫応答などの病理学的状態に存在し得る、自己分子、細胞、または組織の免疫認識から生じる免疫系状態の変化も含み得る。別の例として、特定の免疫系活性（抗体および／もしくはサイトカイン産生、または細胞媒介性免疫の活性化など）の上方制御による誘導に加えて、免疫応答はまた、選択される抗原、抗原投与の経路、特異的寛容の誘導、または他の因子の結果であり得る、検出可能な免疫の抑制、減弱、または任意の他の下方制御も含み得る。
【０１８１】
本開示のワクチン組成物による免疫応答の誘導の決定は、当業者が容易に精通している、いくつかの周知の免疫学的アッセイのいずれかによって確立され得る。そのようなアッセイには、可溶性抗体；サイトカイン、リンホカイン、ケモカイン、ホルモン、および成長因子などの可溶性媒介物質、ならびに他の可溶性小ペプチド、炭水化物、ヌクレオチド、および／または脂質媒介物質；免疫系の細胞の機能または構造特性の改変によって決定される細胞活性化状態の変化、例えば、細胞増殖、運動性の改変、特殊活性（特異的遺伝子発現または細胞溶解挙動など）の導入；表面抗原発現プロファイルの改変またはアポトーシス（プログラム細胞死）の発生を含む、免疫系の細胞による細胞分化のインビボまたはインビトロ決定が含まれるが、これらに限定されない。これらのアッセイおよび類似のアッセイを手順は、広く既知であり、例えば、Ｌｅｆｋｏｖｉｔｓ（Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍａｎｕａｌ：Ｔｈｅ  Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｓｏｕｒｃｅｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１９９８、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙもまた参照されたく、例えば、Ｗｅｉｒ，Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９８６  Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｂｏｓｔｏｎ，Ｍａｓｓ．、Ｍｉｓｈｅｌｌ  ａｎｄ  Ｓｈｉｇｉｉ（ｅｄｓ．）Ｓｅｌｅｃｔｅｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９７９  Ｆｒｅｅｍａｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆ．、Ｇｒｅｅｎ  ａｎｄ  Ｒｅｅｄ，１９９８  Ｓｃｉｅｎｃｅ２８１：１３０９、およびこれらの中で引用されている参考文献もまた参照されたい）に見出すことができる。
【０１８２】
抗原反応性Ｔ細胞の増殖の検出は、様々な既知の技術によって達成することができる。例えば、Ｔ細胞増殖は、ＤＮＡ合成の速度を測定することによって検出することができ、抗原特異性は、候補抗原反応性Ｔ細胞が曝露される刺激（例えば、所望の特異的抗原パルス抗原提示細胞または対照抗原パルス抗原提示細胞など）を制御することによって決定することができる。増殖するように刺激されているＴ細胞は、ＤＮＡ合成の速度の増加を呈する。ＤＮＡ合成の速度を測定するための典型的な方法は、例えば、Ｔ細胞の培養物を、新たに合成されるＤＮＡに組み込まれるヌクレオチド前駆体であるトリチウム標識したチミジンでパルス標識することによる。組み込まれるトリチウム標識したチミジンの量は、液体シンチレーション分光光度計を使用して決定することができる。Ｔ細胞増殖を検出するための他の方法には、インターロイキン−２（ＩＬ−２）産生、Ｃａ２＋流束、または色素取り込み（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニル−テトラゾリウムなど）の増加の測定が含まれる。あるいは、リンホカイン（インターフェロン−ガンマなど）の合成を測定しても、特定の抗原に応答し得るＴ細胞の相対数を定量化してもよい。
【０１８３】
抗原特異的抗体の産生の検出は、例えば、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、平衡透析法、または固相免疫ブロット法（ウエスタンブロット法を含む）などのインビトロ方法論を使用して、本開示に従うワクチンで治療した宿主由来の試料（例えば、血清、血漿、または血液などの免疫グロブリン含有試料）をアッセイすることによって達成することができる。好ましい実施形態では、ＥＬＩＳＡアッセイは、例えば、アッセイの感受性を増強するための、その抗原に特異的な固相モノクローナル抗体による標的抗原の抗原捕獲固定化をさらに含み得る。可溶性媒介物質（例えば、サイトカイン、ケモカイン、リンホカイン、プロスタグランジンなど）の同化作用もまた、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）によって、例えば、市販の供給源（例えば、Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ２００６  Ｃａｔａｌｏｇ，Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，Ｍｉｎｎ．も参照されたい）から容易に入手可能な方法、装置、および試薬を使用して容易に決定することができる。
【０１８４】
核酸分子がタンパク質抗原をコードする場合、本明細書に開示される薬学的組成物またはワクチン組成物の免疫原性を評価する別の方法は、免疫ブロット法および／またはマイクロアレイによって、患者の血清または粘膜分泌物をスクリーニングするための組み換えタンパク質抗原を発現させることである。タンパク質と患者の試料との間の陽性反応は、その患者が問題のタンパク質に対する免疫応答を開始したことを示す。この方法を使用して、タンパク質抗原における免疫優性抗原および／またはエピトープを特定することもできる。
【０１８５】
当該技術分野で周知の通例的なアッセイを使用して、任意の数の他の免疫学的パラメータを監視することができる。これらには、例えば、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）アッセイ、二次性インビトロ抗体応答、十分に確立したマーカー抗原系を使用する様々な抹消血液もしくはリンパ球単核細胞亜集団のフロー免疫細胞蛍光分析、免疫組織化学、または他の関連するアッセイが含まれ得る。これらのアッセイおよび他のアッセイは、例えば、Ｒｏｓｅ  ｅｔ  ａｌ．（Ｅｄｓ．），Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，５ｔｈ  Ｅｄ．，１９９７  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．に見出すことができる。
【０１８６】
したがって、本明細書で提供されるワクチン組成物は、宿主において、ＴＨ１型Ｔリンパ球応答、ＴＨ２型Ｔリンパ球応答、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）応答、抗体応答、サイトカイン応答、リンホカイン応答、ケモカイン応答、および炎症性応答から選択される少なくとも１つの免疫応答を誘発または増強することができることが企図される。特定の実施形態では、免疫応答は、１つまたは複数のサイトカインの産生（サイトカインは、インターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）から選択される）、１つまたは複数のインターロイキンの産生（インターロイキンは、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、およびＩＬ−２３から選択される）、１つまたは複数のケモカインの産生（ケモカインは、ΜΙΡ−１α、ΜΙΡ−１β、ＲＡＮＴＥＳ、ＣＣＬ４、およびＣＣＬ５から選択される）、リンパ球応答（メモリーＴ細胞応答、メモリーＢ細胞応答、エフェクターＴ細胞応答、細胞傷害性Ｔ細胞応答、およびエフェクターＢ細胞応答から選択される）の少なくとも１つを含み得る。例えば、ＷＯ９４／００１５３、ＷＯ９５／１７２０９、ＷＯ９６／０２５５５、米国特許第６，６９２，７５２号、米国特許第７，０８４，２５６号、米国特許第６，９７７，０７３号、米国特許第６，７４９，８５６号、米国特許第６，７３３，７６３号、米国特許第６，７９７，２７６号、米国特許第６，７５２，９９５号、米国特許第６，０５７，４２７号、米国特許第６，４７２，５１５号、米国特許第６，３０９，８４７号、米国特許第６，９６９，７０４号、米国特許第６，１２０，７６９号、米国特許第５，９９３，８００号、米国特許第５，５９５，８８８号、Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７  Ｊ  ＢｉｏｌＣｈｅｍ．２６２：６９５１、Ｋｒｉｅｇｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８  Ｃｅｌｌ５３：４５  ５３、Ｂｅｕｔｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６  Ｎａｔｕｒｅ３２０：５８４、米国特許第６，９９１，７９１号、米国特許第６，６５４，４６２号、米国特許第６，３７５，９４４号を参照されたい。
【０１８７】
本明細書で提供される組成物の有効性はまた、適切な動物モデルを目的の感染症の病原体に曝露することによってインビボで決定することもできる。
【０１８８】
本明細書に記載の組成物を使用して、Ｎ．ｇｏｎｏｒｒｈｅａおよびＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ（例えば、莢膜多糖およびそれらの共役体、トランスフェリン結合タンパク質、ラクトフェリン結合タンパク質、ＰｉｌＣ、アドヘシン）を含むＮｅｉｓｓｅｒｉａ菌種；Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ（例えば、Ｍタンパク質もしくはそれらの断片、Ｃ５Ａプロテアーゼ、リポテイコ酸）、Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓ．ｍｕｔａｎｓ：Ｈ．ｄｕｃｒｅｙｉ、Ｂｒａｎｈａｍｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓとしても知られるＭ．ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓを含むＭｏｒａｘｅｌｌａ菌種（例えば、高分子および低分子のアドヘシンおよびインベイシン）；Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ（例えば、パータクチン、百日咳毒素、もしくはそれらの誘導体、繊維状赤血球凝集素、アデニル酸シクラーゼ、線毛）、Ｂ．ｐａｒａｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、およびＢ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａを含むＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ菌種；Ｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ（例えば、ＥＳＡＴ６、抗原８５Ａ、抗原８５Ｂ、もしくは抗原８５Ｃ）、Ｍ．ｂｏｖｉｓ、Ｍ．ｌｅｐｒａｅ、Ｍ．ａｖｉｕｍ、Ｍ．ｐａｒａｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｍ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓを含むＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ菌種；Ｌ．ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａを含むＬｅｇｉｏｎｅｌｌａ菌種；腸内毒素原性Ｅ．ｃｏｌｉ（例えば、定着因子、熱不安定性毒素もしくはその誘導体、熱安定性毒素もしくはその誘導体）、腸管出血性Ｅ．ｃｏｌｉ、腸管病原性Ｅ．ｃｏｌｉ（例えば、志賀毒素様毒素もしくはその誘導体）を含むＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ菌種；Ｖ．ｃｈｏｌｅｒａ（例えば、コレラ毒素もしくはその誘導体）を含むＶｉｂｒｉｏ菌種；Ｓ．ｓｏｎｎｅｉ、Ｓ．ｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ、Ｓ．ｆｌｅｘｎｅｒｉｉを含むＳｈｉｇｅｌｌａ菌種、Ｙ．ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ（例えば、Ｙｏｐタンパク質）、Ｙ．ｐｅｓｔｉｓ、Ｙ．ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓを含むＹｅｒｓｉｎｉａ菌種；Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ（例えば、毒素、アドヘシン、およびインベイシン）ならびにＣ．ｃｏｌｉを含むＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ菌種；Ｓ．ｔｙｐｈｉ、Ｓ．ｐａｒａｔｙｐｈｉ、Ｓ．ｃｈｏｌｅｒａｅｓｕｉｓ、Ｓ．ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓを含むＳａｌｍｏｎｅｌｌａ菌種；Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓを含むＬｉｓｔｅｒｉａ菌種；Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ（例えば、ウレアーゼ、カタラーゼ、空胞化毒素）を含むＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ菌種；Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａを含むＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ菌種；Ｓ．ａｕｒｅｕｓ、Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓを含むＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ菌種；Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｅ．ｆａｅｃｉｕｍを含むＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ菌種；Ｃ．ｔｅｔａｎｉ（例えば、破傷風毒素およびその誘導体）、Ｃ．ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ（例えば、ボツリヌス毒素およびその誘導体）、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ（例えば、クロストリジウム毒素ＡもしくはＢ、およびそれらの誘導体）を含むＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ菌種；Ｂ．ａｎｔｈｒａｃｉｓ（例えば、ボツリヌス毒素およびその誘導体）を含むＢａｃｉｌｌｕｓ菌種；Ｃ．ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ（例えば、ジフテリア毒素およびその誘導体）を含むＣｏｒｙｎｅ��ａｃｔｅｒｉｕｍ菌種；Ｂ．ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ（例えば、ＯｓｐＡ、ＯｓｐＣ、ＤｂｐＡ、ＤｂｐＢ）、Ｂ．ｇａｒｉｎｉｉ（例えば、ＯｓｐＡ、ＯｓｐＣ、ＤｂｐＡ、ＤｂｐＢ）、Ｂ．ａｆｚｅｌｉｉ（例えば、ＯｓｐＡ、ＯｓｐＣ、ＤｂｐＡ、ＤｂｐＢ）、Ｂ．ａｎｄｅｒｓｏｎｉｉ（例えば、ＯｓｐＡ、ＯｓｐＣ、ＤｂｐＡ、ＤｂｐＢ）、Ｂ．ｈｅｒｍｓｉｉを含むＢｏｒｒｅｌｉａ菌種；Ｅ．ｅｑｕｉおよびヒト顆粒球エーリキア症の作用物質を含むＥｈｒｌｉｃｈｉａ菌種；Ｒ．ｒｉｃｋｅｔｔｓｉｉを含むＲｉｃｋｅｔｔｓｉａ菌種；Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ（例えば、ＭＯＭＰ、ヘパリン結合タンパク質）、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（例えば、ＭＯＭＰ、ヘパリン結合タンパク質）、Ｃ．ｐｓｉｔｔａｃｉを含むＣｈｌａｍｙｄｉａ菌種；Ｌ．ｉｎｔｅｒｒｏｇａｎｓを含むＬｅｐｔｏｓｐｉｒａ菌種；Ｔ．ｐａｌｌｉｄｕｍ（例えば、希少外膜タンパク質）、Ｔ．ｄｅｎｔｉｃｏｌａ、Ｔ．ｈｙｏｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅを含むＴｒｅｐｏｎｅｍａ菌種；または他の細菌病原などの１つ以上の細菌病原体に対する防御免疫を増強することができる。
【０１８９】
本明細書に記載の組成物を使用して、ウイルスに対する防御免疫を増強することができる。そのようなウイルスおよびウイルス抗原には、例えば、ＨＩＶ−１（ｔａｔ、ｎｅｆ、ｇｐ１２０、もしくはｇｐ１６０など）、ヒトヘルペスウイルス（ｇＤもしくはその誘導体など）または最初期タンパク質（ＨＳＶ１もしくはＨＳＶ２由来のＩＣＰ２７など）、サイトメガロウイルス（（特にヒト、ｇＢまたはその誘導体など）、ロタウイルス（弱毒生ウイルスを含む）、エプスタイン・バーウイルス（ｇｐ３５０またはその誘導体など）、水痘帯状疱疹ウイルス（ｇｐｌ、ＩＩ、およびＩＥ６３など）など、あるいはＢ型肝炎ウイルス（例えば、Ｂ型肝炎表面抗原またはその誘導体）、Ａ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、およびＥ型肝炎ウイルスなどの肝炎ウイルスに由来するか、あるいはパラミクソウイルス：呼吸器多核体ウイルス（ＦおよびＧタンパク質もしくはそれらの誘導体）、パラインフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、ヒトパピローマウイルス（例えば、ＨＰＶ６、１１、１６、１８など）、フラビウイルス（例えば、デングウイルス、日本脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス、ジカウイルス、ポスワナン（Ｐｏｓｗａｎａｎ）ウイルス、ダニ媒介性脳炎ウイルス）、またはインフルエンザウイルス（卵内またはＭＤＣＫ細胞内で成長させた、完全生ウイルスまたは不活化ウイルス、スプリットインフルエンザウイルス、あるいは完全インフルエンザビロソーム（Ｇｌｕｃｋ，Ｖａｃｃｉｎｅ，１９９２，１０，９１５−９２０により記載のもの）またはそれらの精製タンパク質もしくは組み換えタンパク質（ＨＡ、ＮＰ、ＮＡ、もしくはＭタンパク質、またはそれらの組み合わせ））が含まれる。本開示に従うと、本明細書に記載の組成物は、ウエストナイルウイルスに対する防御免疫は誘発または増強しない。
【０１９０】
本明細書に記載の組成物を使用して、Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍを含むＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ菌種；Ｔ．ｇｏｎｄｉｉ（例えば、ＳＡＧ２、ＳＡＧ３、Ｔｇ３４）を含むＴｏｘｏｐｌａｓｍａ菌種；Ｅ．ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａを含むＥｎｔａｍｏｅｂａ菌種；Ｂ．ｍｉｃｒｏｔｉを含むＢａｂｅｓｉａ菌種；Ｔ．ｃｒｕｚｉを含むＴｒｙｐａｎｏｓｏｍａ菌種；Ｇ．ｌａｍｂｌｉａを含むＧｉａｒｄｉａ菌種；Ｌ．ｍａｊｏｒを含むＬｅｓｈｍａｎｉａ菌種；Ｐ．ｃａｒｉｎｉｉを含むＰｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ菌種；Ｔ．ｖａｇｉｎａｌｉｓを含むＴｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ菌種などの１つ以上の寄生虫（例えば、Ｊｏｈｎ，Ｄ．Ｔ．ａｎｄ  Ｐｅｔｒｉ，Ｗ．Ａ．，Ｍａｒｋｅｌｌ  ａｎｄ  Ｖｏｇｅ’ｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｐａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ−９ｔｈ  Ｅｄ．，２００６，ＷＢ  Ｓａｕｎｄｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、Ｂｏｗｍａｎ，Ｄ．Ｄ．，Ｇｅｏｒｇｉｓ’  Ｐａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ  ｆｏｒ  Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｉａｎｓ−８ｔｈ  Ｅｄ．，２００２，ＷＢ  Ｓａｕｎｄｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａを参照されたい）、または（ｉ）線虫感染症（Ｅｎｔｅｒｏｂｉｕｓ  ｖｅｒｍｉｃｕｌａｒｉｓ、Ａｓｃａｒｉｓ  ｌｕｍｂｒｉｃｏｉｄｅｓ、Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ  ｔｒｉｃｈｕｒｉａ、Ｎｅｃａｔｏｒ  ａｍｅｒｉｃａｎｕｓ、Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ  ｄｕｏｄｅｎａｌｅ、Ｗｕｃｈｅｒｅｒｉａ  ｂａｎｃｒｏｆｔｉ、Ｂｒｕｇｉａ  ｍａｌａｙｉ、Ｏｎｃｈｏｃｅｒｃａ  ｖｏｌｖｕｌｕｓ、Ｄｒａｃａｎｃｕｌｕｓ  ｍｅｄｉｎｅｎｓｉｓ、Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａ  ｓｐｉｒａｌｉｓ、およびＳｔｒｏｎｇｙｌｏｉｄｅｓ  ｓｔｅｒｃｏｒａｌｉｓを含むが、これらに限定されない）；（ｉｉ）吸虫感染症（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｍａｎｓｏｎｉ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｈａｅｍａｔｏｂｉｕｍ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｊａｐｏｎｉｃｕｍ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｍｅｋｏｎｇｉ、Ｏｐｉｓｔｈｏｒｃｈｉｓ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ、Ｐａｒａｇｏｎｉｍｕｓ菌種、Ｆａｓｃｉｏｌａ  ｈｅｐａｔｉｃａ、Ｆａｓｃｉｏｌａ  ｍａｇｎａ、Ｆａｓｃｉｏｌａ  ｇｉｇａｎｔｉｃａを含むが、これらに限定されない）；ならびに（ｉｉｉ）条虫感染症（Ｔａｅｎｉａ  ｓａｇｉｎａｔａおよびＴａｅｎｉａ  ｓｏｌｉｕｍを含むが、これらに限定されない）などの、哺乳動物に感染することができる蠕虫に対する防御免疫を増強することができる。特定の実施形態では、抗原は、Ｓｃｈｉｓｏｓｔｏｍａ菌種、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｍａｎｓｏｎｉｉ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｈａｅｍａｔｏｂｉｕｍ、および／もしくはＳｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｊａｐｏｎｉｃｕｍに由来するか、またはＣ．ａｌｂｉｃａｎｓを含むＣａｎｄｉｄａ菌種；Ｃ．ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓを含むＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ菌種などの酵母；Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓもしくはＭ．ｌｅｐｒａｅなどのＡｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、または別のｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ；Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ属、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ属、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ属、Ｂｏｒｒｅｌｉａ属、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ属、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ属、もしくはＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ属のメンバーなどの細菌；単純ヘルペスウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）、サイトメガロウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、肝炎ウイルス、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、ジカウイルス（ＺＩＫＶ）、呼吸器多核体ウイルス、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、およびサイトメガロウイルスなどのウイルス；ＨＩＶ−１もしくはＨＩＶ−２などのＨＩＶ；Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ、およびＰｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉなどの真菌、もしくはＣ．ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃ．ｇｌａｂｒａｔａ、Ｃ．ｋｒｕｓｅｉ、Ｃ．ｌｕｓｉｔａｎｉａｅ、Ｃ．ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、およびＣ．ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓなどのＣａｎｄｉｄａ種を含む酵母；原虫、例えば、Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、Ｐ．ｖｉｖａｘ、Ｐ．ｍａｌａｒｉａｅ、およびＰ．ｏｖａｌｅを含むＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ種などの寄生虫；Ａｃａｎｔｈａｍｏｅｂａ、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ、Ａｎｇｉｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｍａｎｓｏｎｉｉ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｈａｅｍａｔｏｂｉｕｍ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｊａｐｏｎｉｃｕｍ、Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ、Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｃｏｌｉ、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｄｉｓｐａｒ、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｈａｒｔｍａｎｎｉ、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｐｏｌｅｃｋｉ、Ｗｕｃｈｅｒｅｒｉａ  ｂａｎｃｒｏｆｔｉ、Ｇｉａｒｄｉａ、およびＬｅｉｓｈｍａｎｉａの１つ以上などの別の寄生虫を含む、細菌、ウイルス、または真菌などの少なくとも１つの感染性病原体に由来する。
【０１９１】
本明細書に記載の組成物を使用して、腺がん、脈絡膜黒色腫、急性白血病、聴神経鞘腫、膨大部がん、肛門がん、星細胞腫、基底細胞がん、膵がん（ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）、膀胱がん、気管支がん、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、乳がん（ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ）、バーキットリンパ腫、体がん（ｃｏｒｐｕｓ  ｃａｎｃｅｒ）、ＣＵＰ症候群（原発不明のがん）、結腸直腸がん（ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｃａｎｃｅｒ）、小腸がん、小腸腫瘍、卵巣がん（ｏｖａｒｉａｎ  ｃａｎｃｅｒ）、子宮内膜がん、上衣腫、上皮がん型、ユーイング腫瘍、胃腸腫瘍、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）、胆嚢がん（ｇａｌｌｂｌａｄｄｅｒ  ｃａｎｃｅｒ）、胆嚢がん（ｇａｌｌ  ｂｌａｄｄｅｒ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、子宮がん、子宮頚がん（ｃｅｒｖｉｃａｌ  ｃａｎｃｅｒ）、子宮頚部、膠芽腫、婦人科腫瘍、耳、鼻、および咽喉腫瘍、血液腫瘍、有毛細胞白血病、尿道がん、皮膚がん、皮膚精巣がん、脳腫瘍（神経膠腫）、脳転移、精巣がん、脳下垂体腫瘍、カルチノイド、カポジ肉腫、喉頭がん、胚細胞性腫瘍、骨がん、結腸直腸がん（ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、頭頸部腫瘍（耳、鼻、および咽喉領域の腫瘍）、結腸がん、頭蓋咽頭腫、口腔がん（口腔領域および唇のがん）、中枢神経系のがん、肝がん、肝転移、白血病、眼瞼腫瘍、肺がん、リンパ節がん（ホジキン／非ホジキン）、リンパ腫、胃がん（ｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｃｅｒ）、悪性黒色腫、悪性腫瘍（ｎｅｏｐｌａｓｉａ）、悪性腫瘍（ｔｕｍｏｒ）、胃腸、乳がん（ｂｒｅａｓｔ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、直腸がん（ｒｅｃｔａｌ  ｃａｎｃｅｒ）、髄芽腫、黒色腫、髄膜腫、ホジキン病、菌状息肉症、鼻がん、神経鞘腫、神経芽腫、腎がん、腎細胞がん、非ホジキンリンパ腫、乏突起神経膠腫、食道がん（ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、溶骨性がんおよび骨形成性がん、骨肉腫、卵巣がん（ｏｖａｒｉａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、膵がん（ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、陰茎がん、形質細胞腫、頭頸部の扁平上皮細胞がん（ＳＣＣＨＮ）、前立腺がん、咽頭がん、直腸がん（ｒｅｃｔａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、網膜芽細胞腫、腟がん、甲状腺がん、シュネーベルガー病、食道がん（ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ  ｃａｎｃｅｒ）、スピナリオムズ（ｓｐｉｎａｌｉｏｍｓ）、Ｔ細胞リンパ腫（菌状息肉症）、胸腺腫、尿道がん、泌尿器腫瘍、尿路上皮がん、外陰部がん、ならびに子宮頚がん（ｃｅｒｖｉｃａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）を含むがんに由来する少なくとも１つの抗原に対する防御免疫を増強することができる。
【０１９２】
本明細書に記載の組成物を使用して、多発性硬化症、関節リウマチ、橋本病、Ｉ型糖尿病（若年発症糖尿病）、および自己免疫性ぶどう膜網膜炎などの自己免疫疾患１つ以上の抗原に対する防御免疫を増強することができる。抗体媒介性自己免疫障害には、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス（またはＳＬＥ）、グレーブス病、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少症、自己免疫性喘息、クリオグロブリン血症、血栓性血小板減少性紫斑病、原発性胆管硬化症、および悪性貧血が含まれるが、これらに限定されない。
【０１９３】
リポソーム製剤、薬学的組成物、およびワクチン組成物の典型的な投与経路には、経口、局所、非経口、舌下、頬側、直腸、腟内、静脈内、皮内、経皮、経鼻、粘膜内、または皮下が非限定的に含まれる。いくつかの例示的な実施形態では、リポソーム製剤、薬学的組成物、およびワクチン組成物の投与は、筋肉内、眼内、非経口、または肺内である。
【０１９４】
好ましい実施形態では、本明細書に記載のリポソーム製剤、本明細書に記載の薬学的組成物、および本明細書に記載のワクチン組成物の投与方法は、対象における免疫応答を誘発または増強する。
【０１９５】
好ましい実施形態では、本明細書に記載のリポソーム製剤、本明細書に記載の薬学的組成物、および本明細書に記載のワクチン組成物の投与方法は、がん、感染性疾患、または自己免疫疾患に苦しんでいる対象における免疫応答を誘発または増強する。
【０１９６】
例示的な実施形態では、本明細書に記載のリポソーム製剤、本明細書に記載の薬学的組成物、および本明細書に記載のワクチン組成物の投与方法は、がん、感染性疾患、または自己免疫疾患に苦しんでいるヒト対象における免疫応答を誘発または増強する。
【０１９７】
本開示の治療方法は、単独で、または他の薬剤と組み合わせて本開示の組成物の投与を含んでもよく、したがって、治療ワクチンは、より広い治療処置管理体制の一部としての複数の治療構成成分のうちの１つであってもよいこともまた理解されるだろう。
【０１９８】
上記の様々な実施形態を組み合わせて、さらなる実施形態を提供することができる。本明細書で言及され、かつ／または出願データシートに列挙される、米国特許、米国出願公開、米国特許出願、外国特許、外国特許出願、および非特許出版物の全ての全体が、参照により本明細書に組み込まれる。様々な特許、出願、および出版物の概念を用いて、さらなる実施形態を提供するために、実施形態の態様は、必要に応じて修正され得る。
【実施例】
【０１９９】
実施例１：Ｑ２１をサポニンとし、コレステロールをステロールとし、およびジオレオイルホスファチジルコリンをリン脂質とし、ＧＬＡ＊−ＬＳＱ製剤またはＳＬＡ−ＬＳＱ製剤の、１：１２５のサポニン対ステロール重量比を有する、リポソーム製剤ＧＬＡ−ＬＳＱ（例えば、ＬＰＳとしてのＧＬＡ＊またはＳＬＡ）の合成のための例示的な方法。
【０２００】
例示的なＧＬＡ＊−ＬＳＱリポソーム製剤またはＳＬＡ−ＬＳＱリポソーム製剤を製造するために、ＧＬＡ＊またはＳＬＡを、まずガラス製の丸底フラスコ内のクロロホルム中、ジオレオイルホスファチジルコリンおよびコレステロール（４：１のリン脂質：コレステロール重量比）と混合してから、真空下でクロロホルムを蒸発させ、薄膜をリン酸緩衝液で水和させる。水浴超音波処理（１０ｍｌ規模の場合）または高圧均質化（１００ｍｌ以上の規模の場合）は、粒径をナノ寸法（動的光散乱［ＤＬＳ］測定に基づいて、７０〜１３０ｎｍの平均サイズ）に均一に低減する。高圧均質化を、２０，０００ｐｓｉ、１０〜１５℃、および５回の均質化通過で、Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓの１１０ＥＨまたは１１０Ｐ微少流体機モデルを使用して実行する。ＱＳ２１分子を、粗サポニン混合物Ｑｕｉｌ−ＡのＨＰＬＣ精製を介して得る。ＱＳ２１を、リン酸緩衝液中に別個に可溶化させ、その後調製されたＳＬＡリポソームまたはＧＬＡ＊リポソーム中に混合してから、無菌濾過する。このプロセスは現在、再現可能かつ頑強である。例示的な最終製造製品を、０．２２μｍのフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｓｔｅｒｉｐａｋ  ＧＰ１０）で濾過無菌化し、４ｍｇ／ｍｌのＤＯＰＣ、１ｍｇ／ｍｌのコレステロール、２０ｕｇ／ｍｌのＧＬＡ＊またはＳＬＡ、および８ｕｇ／ｍｌのＱＳ２１を含有し、これは現在、投与前に抗原と１：１で混合するように設計されている。製造後、製剤を、５℃で保管し、製造時、ならびに製造日時から１週間後、２週間後、１ヶ月後、３ヶ月後、６ヶ月後、および１２ヶ月後などの、（ＤＬＳを介した）粒径の測定および目視外観を含む安定性監視プログラム下に置く。加えて、ＧＬＡ＊またはＳＬＡ濃度およびＱＳ２１濃度を、製造時、ならびに製造日時から６ヶ月後および１２ヶ月後などの、荷電化粒子検出器（ＣＡＤ）を有するＨＰＬＣによって測定する。ＩＤＲＩで製造したバッチでは、粒径およびアジュバント濃度の監視は、ＳＬＡ−ＬＳＱ製剤およびＧＬＡ＊−ＬＳＱ製剤の良好な安定性を示す。試料はまた、安定性の監視の加速のために、より高い温度（２５℃、３７℃、および６０℃）でも保管する。
【０２０１】
実施例２：ＢＣＧで準備刺激したモルモットにおけるブーストとしての、ＩＤ９３＋ＧＬＡ−ＳＥおよびＩＤ９３＋ＧＬＡ−ＬＳＱの比較。
この研究の目的は、ＢＣＧで準備刺激したモルモットにおけるＩＤ９３ワクチンとの使用に最適なアジュバント製剤を決定することである。ＩＤ９３ワクチンは、病原性および潜在性に関連する４つのＭｔｂタンパク質（Ｒｖ２６０８、Ｒｖ３６１９、Ｒｖ３６２０、およびＲｖ１８１３）由来の融合タンパク質として製剤化される、組み換えサブユニットワクチン抗原である。最終的な８９１個のアミノ酸の融合タンパク質は、９３ＫＤａの予測質量を有する。ＩＤ９３を、２つの異なるアジュバント製剤、ＧＬＡ＊−ＳＥおよびＧＬＡ＊−ＬＳＱと併用して試験し、ＢＣＧで準備刺激したモルモットにおけるこのワクチンの防御有効性を決定した。ＢＣＧで皮内に準備刺激し、３ヶ月間休ませた８０匹の雌のモルモットを、研究に使用した。ＩＤ９３ワクチンを用いた免疫化は、３週間間隔で３回（０日目、２１日目、および４２日目）であった。３回目の免疫化の１０週間後、低用量のエアロゾル（１．１７×１０７ｃｆｕ／ｍｌ）のＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ  Ｂｅｉｊｉｎｇ４６１９に曝露する。ＩＤ９３の用量は、１０ｕｇであった。アジュバントＡは、５ｕｇのＧＬＡ＊および２ｕｇのＱＳ２１を有するＧＬＡ＊−ＬＳＱであった。アジュバントＢは、ＧＬＡ−ＳＥ（５ｕｇのＧＬＡ）であった。群１は、ＢＣＧで準備刺激しない唯一の群であり、食塩水を単独で投与し、群２には、食塩水を投与し、群３には、アジュバントＡを投与し、群４には、ＩＤ９３およびアジュバントＡを投与し、群５には、ＩＤ９３およびアジュバントＢを投与した。
【０２０２】
感染後６０日目、ＩＤ９３−ＧＬＡ−ＳＥワクチンは、食塩水対照と比較して、ＢＣＧで準備刺激した群に類似して、肺および脾臓において細菌負荷が有意に低減した。加えて、ＩＤ９３−ＧＬＡ−ＳＥ群は、食塩水群と比較して、縦隔リンパ節において細菌が低下した一方で、ＢＣＧで準備刺激した群における細菌の低減は、この時点では統計的に有意ではなかった。ＢＣＧで準備刺激した群と比較して、改善した生存を示した唯一の群は、ＩＤ９３＋ＧＬＡ−ＬＳＱであった。ＩＤ９３＋ＧＬＡ−ＬＳＱは、感染後３０日目および６０日目の両方で、食塩水群と比較して、脾臓において細菌が有意に低減したが、肺またはＭＤＬでは細菌の有意な低減はなかった。
【０２０３】
実施例３：健康な成人対象における、筋肉内投与されるワクチン候補ＩＤ９３＋ＧＬＡ＊−ＬＳＱおよびＩＤ９３＋ＧＬＡ−ＳＥの安全性、許容性、および免疫原性を評価するための、第１相、無作為化、二重盲検臨床試験
【０２０４】
１８〜４９歳の年齢の７０人の健康な成人における、単独で、またはＧＬＡ−ＳＥもしくはＧＬＡ＊−ＬＳＱアジュバントとともに製剤化される、ＩＤ９３組み換えタンパク質抗原の安全性、許容性、および免疫原性を評価するための、無作為化、二重盲検臨床試験が進行中である。４つの治療群の概要を、以下の表１に述べる。対象は、１日目、２９日目、および５７日目に筋肉内投与される合計３回の用量を受けた。各研究注射の直前および７日後に行った安全性実験室分析を含めて、対象を、約４２２日間（３回目の研究注射後３６５日間）監視する。免疫学的アッセイ（１日目および７１日目のＬｕｍｉｎｅｘ、細胞内サイトカイン染色、ならびに１日目および８５日目の抗体分析）のために、血液試料を得る。
表１  
【表３】
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【０２０５】
グルコピラノシル脂質Ａ（ＧＬＡ＊）は、合成Ｔｏｌｌ様受容体４（ＴＬＲ４）アゴニストである。ＧＬＡを安定した水中油型エマルジョン（ＳＥ）中に製剤化して、アジュバント製剤ＧＬＡ−ＳＥをもたらす。ＧＬＡ分子のＴＬＲ４活性のために、ＧＬＡ−ＳＥと組み換えタンパク質抗原（ＩＤ９３）との組み合わせは、Ｔｈ１型Ｔ細胞応答をもたらす。ＧＬＡ＊−ＬＳＱは、ＧＬＡおよびサポニンＱＳ−２１を含むリポソーム製剤である。リポソームとともに製剤化されるＧＬＡは、頑強な免疫応答を刺激することが示されているが、ＱＳ−２１などの追加の免疫刺激性リガンドの添加は、Ｔｈ１免疫応答を増加させる（Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ  Ｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ２０１１；１０：５１３−２１）。ＱＳ−２１は、ソープバーク（ｓｏａｐ  ｂａｒｋ）の木（Ｑｕｉｌｌａｊａ  Ｓａｐｏｎａｒｉａ）に由来し、ＩＦＮγおよびＴＮＦを発現する両方のＣＤ４  Ｔ細胞を誘発し、多数の抗原に対する細胞傷害性Ｔリンパ球を産生することが示されている。
【０２０６】
ＧＬＡ＊をＱＳ−２１（ＬＳＱ）を有するリポソーム組成物中に製剤化して、アジュバントＧＬＡ＊−ＬＳＱを生成し、使い捨てバイアル内に８μｇ／ｍＬのＱＳ−２１と組み合わせた２０μｇ／ｍＬのＧＬＡ＊として供給する。ＧＬＡ＊−ＬＳＱは、濁った液体のように見える。各２ｍＬのバイアルは、０．４ｍＬの充填体積を収容し、２〜８℃で保管されなくてはならない。以下は、注射再構成手順に関する指示書である。群１：１０μｇのＩＤ９３＋５μｇのＧＬＡ＊−ＬＳＱ：上記の１．２５ｍＬのＷＦＩを添加することによって、ＩＤ９３のバイアルを再構成する（濃度：８０μｇ／ｍＬのＩＤ９３）。０．２ｍＬの再構成したＩＤ９３および０．２ｍＬのＷＦＩを、ＧＬＡ＊−ＬＳＱの０．４ｍＬのバイアルに添加し、完全に混合する。この最終混合バイアル内の合計体積は、これで０．８ｍＬになる（濃度：２０μｇ／ｍＬのＩＤ９３、１０μｇ／ｍＬのＧＬＡ）。０．５ｍＬ超の混合調製物を１ｍＬのシリンジ中に引き出し、筋肉内注射のために、針を２３〜２５ゲージ１〜１  １／２インチの針と交換する。いかなる気泡も除去し、シリンジを０．５ｍＬ（１０μｇのＩＤ９３および５μｇのＧＬＡ）の送達のために準備する。シリンジおよび用量調製物の標準的な病院方針を遵守して、必要な用量の投与を確実にする。群２：１０μｇのＩＤ９３＋１０μｇのＧＬＡ＊−ＬＳＱ：上記の１．２５ｍＬのＷＦＩを添加することによって、ＩＤ９３のバイアルを再構成する（濃度：８０μｇ／ｍＬのＩＤ９３）。０．１５ｍＬの再構成したＩＤ９３、０．４５ｍＬのＷＦＩ、および０．２ｍＬのＧＬＡ＊−ＬＳＱを、ＧＬＡ＊−ＬＳＱの別個の０．４ｍＬのバイアルに添加し、完全に混合する。この最終混合バイアル内の合計体積は、これで１．２ｍＬになる（濃度：１０μｇ／ｍＬのＩＤ９３、１０μｇ／ｍＬのＧＬＡ）。１．０ｍＬ超の混合調製物を２．５または３ｍＬのシリンジ中に引き出し、筋肉内注射のために、針を２３〜２５ゲージ１〜１  １／２インチの針と交換する。いかなる気泡も除去し、シリンジを１．０ｍＬ（１０μｇのＩＤ９３および１０μｇのＧＬＡ）の送達のために準備する。シリンジおよび用量調製物の標準的な病院方針を遵守して、必要な用量の投与を確実にする。群３：１０μｇのＩＤ９３＋５μｇのＧＬＡ＊−ＳＥ：上記の１．２５ｍＬのＷＦＩを添加することによって、ＩＤ９３のバイアルを再構成する（濃度：８０μｇ／ｍＬのＩＤ９３）。０．２ｍＬの再構成したＩＤ９３および０．２ｍＬのＷＦＩを、ＧＬＡ−ＳＥの０．４ｍＬのバイアルに添加し、完全に混合する。この最終混合バイアル内の合計体積は、これで０．８ｍＬになる（濃度：２０μｇ／ｍＬのＩＤ９３、１０μｇ／ｍＬのＧＬＡ）。０．５ｍＬ超の混合調製物を１ｍＬのシリンジ中に引き出し、筋肉内注射のために、針を２３〜２５ゲージ１〜１  １／２インチの針と交換する。いかなる気泡も除去し、シリンジを０．５ｍＬ（１０μｇのＩＤ９３および５μｇのＧＬＡ＊）の送達のために準備する。シリンジおよび用量調製物の標準的な病院方針を遵守して、必要な用量の投与を確実にする。群４：１０μｇのＩＤ９３単独：上記の１．２５ｍＬのＷＦＩを添加することによって、ＩＤ９３のバイアルを再構成する（濃度：８０μｇ／ｍＬのＩＤ９３）。０．３ｍＬの再構成したＩＤ９３および０．９ｍＬのＷＦＩを、空の無菌バイアルに添加し、完全に混合する。この最終混合バイアル内の合計体積は、これで１．２ｍＬになる（濃度：２０μｇ／ｍＬのＩＤ９３）。０．５ｍＬ超の混合調製物を１ｍＬのシリンジ中に引き出し、筋肉内注射のために、針を２３〜２５ゲージ１〜１  １／２インチの針と交換する。いかなる気泡も除去し、シリンジを０．５ｍＬ（１０μｇのＩＤ９３）の送達のために準備する。シリンジおよび用量調製物の標準的な病院方針を遵守して、必要な用量の投与を確実にする。
【０２０７】
ＩＤ９３に対するＩｇＧ抗体応答によって測定される抗体応答を、記述統計学を使用して研究日（１〜８５日目）によってまとめる。ベースラインから各訪問までの変化を、提示する。各用量の経時的な免疫学的応答データのグラフを、信頼限界とともに提示する。ＩｇＧおよびサイトカインの応答率を、正確な信頼区間とともに提示し、フィッシャー直接確率法を使用して治療群間で比較する。サイトカイン濃度の大きさは、データが正常に分布している場合、分散分析を使用して、またはデータ分布が非ガウス性である場合、適切な非パラメトリック分析方法を使用して、比較する。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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