(57)【要約】式（I）：X-[NH-CHR1-C(O)-NH-CHR2-C(O)]x-Y  （I）またはその薬学的に許容される塩もしくは互変異性体を有する化合物が開示され、式中、R1はHまたは中性アミノ酸の側鎖であり；R2は、塩基性アミノ酸の側鎖、またはR3であり；xは、1と5を含めて1〜5であり；Xは、H、または治療用物質の残基であり；Yは、OH、または治療用物質の残基であり；R3は下記の式であり；R5は治療用物質の残基であり；かつただし、R2がR3である場合、XはHでありかつYは-OHである。さらに、（a）それを必要としている対象の眼に治療用ナノ粒子組成物の有効量を硝子体内投与する段階であって、該治療用ナノ粒子組成物が、（i）ナノ構造の少なくとも1つの集合体と、（ii）ナノ構造の該少なくとも1つの集合体に結合した少なくとも1つのペプチドとを含む、段階を含む、眼障害を処置する方法も開示される。該ナノ構造は、該眼内で光に曝露され、それにより該眼を電気刺激して眼障害を処置し得る。さらに、それを必要としている対象の眼を治療用ナノ粒子組成物の有効量に接触させる段階であって、該治療用ナノ粒子組成物が、（i）ナノ構造の少なくとも1つの集合体と、（ii）ナノ構造の該少なくとも1つの集合体に結合したペプチドと、（iii）ナノ構造の該少なくとも1つの集合体にまたは該ペプチドに結合した、眼障害の処置のために有用な治療用物質と、（iv）任意で、ナノ構造の該少なくとも1つの集合体または該ペプチドと該治療用物質の間の連結とを含む、該眼障害を処置する方法も開示される。2020514410.tif 000084
2020514410.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（a）それを必要としている対象の眼に治療用ナノ粒子組成物の有効量を硝子体内投与する段階であって、該治療用ナノ粒子組成物が、（i）ナノ構造の少なくとも1つの集合体と、（ii）ナノ構造の該少なくとも1つの集合体に結合した少なくとも1つのペプチドとを含む、段階
を含む、眼障害を処置する方法。
【請求項２】
前記ナノ構造が周辺光に曝露され、それにより眼を電気刺激する、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
前記眼内での、ナノ構造の前記少なくとも1つの集合体の半減期が1日から4週間である、請求項1または2に記載の方法。
【請求項４】
前記眼内での、ナノ構造の前記少なくとも1つの集合体の半減期が1〜5日である、請求項3に記載の方法。
【請求項５】
前記眼内での、ナノ構造の前記少なくとも1つの集合体の半減期が5〜14日である、請求項3に記載の方法。
【請求項６】
前記眼内での、ナノ構造の前記少なくとも1つの集合体の半減期が7〜9日である、請求項3に記載の方法。
【請求項７】
前記眼内での、ナノ構造の前記少なくとも1つの集合体の半減期が1〜2週間である、請求項3に記載の方法。
【請求項８】
前記眼内での、ナノ構造の前記少なくとも1つの集合体の半減期が2〜4週間である、請求項3に記載の方法。
【請求項９】
前記治療用ナノ粒子組成物を1週間に1回〜6ヶ月に1回投与する、請求項1〜8のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記ナノ構造がシェルに囲まれたコアであり、該シェルが少なくとも2つの異なる分子を含む、請求項1〜9のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記ナノ構造が、1〜100ナノメートルの直径を有するコアを有する、請求項1〜10のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記シェルが、ZnS、CdS、ZnSe、およびCdSeからなる群より選択される2つの異なる分子を含む、請求項10または11に記載の方法。
【請求項１３】
前記ナノ構造コアが、周期表のII〜IV族、III〜V族、またはIV族からの元素からなる分子の群より選択される1つまたは複数の分子を含む、請求項1〜12のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記ナノ構造コアがCdSeを含む、請求項1〜13のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記ナノ構造コアがInPを含む、請求項1〜14のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記シェルがZnS分子および/またはCdS分子を含む、請求項10〜15のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記シェルが1〜10個の単層を含む、請求項10〜16のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記ナノ構造コアの直径が4〜5ナノメートルであり、かつ前記シェルが3〜6個の単層を含む、請求項10〜17のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記シェルの表面への前記少なくとも1つのペプチドの結合の前および/または後に、該シェルに囲まれた前記ナノ構造コアを紫外線照射によってアニールする、請求項10〜18のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
ナノ構造の前記少なくとも1つの集合体が量子ドットである、請求項1〜19のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記少なくとも1つのペプチドが、式（I）：
Ra-[NH-CHR1-C(O)-NH-CHR2-C(O)]x-H  （I）
、またはその薬学的に許容される塩もしくは互変異性体を有し、
式中、
R1は、H、または中性アミノ酸の側鎖であり；
R2は塩基性アミノ酸の側鎖であり；
RaはHまたはビオチノイルであり；かつ
xは、1と5を含めて1〜5である、請求項1〜20のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
R1がCH3でありかつR2が(イミダゾル-4-イル)メチルである、請求項21に記載の方法。
【請求項２３】
xが2である、請求項22に記載の方法。
【請求項２４】
前記ナノ構造が、約13nmの直径を有するCdSe量子ドットを含み、シェルがZnSを含み、かつ前記少なくとも1つのペプチドがAla-Hisである、請求項1〜23のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記治療用ナノ粒子組成物が水を含む、請求項1〜24のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記治療用ナノ粒子組成物のpHが7〜8である、請求項1〜25のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記対象がヒトである、請求項1〜26のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記周辺光が、ナノ構造の前記少なくとも1つの集合体により吸収され、前記眼に電気刺激を提供し、それにより前記障害を処置する、請求項1〜27のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記障害が網膜の変性である、請求項1〜28のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
非動脈炎性前部虚血性視神経症に、多発性硬化症に、CIS（clinically isolated syndrome）に、網膜色素変性症に、長期網膜動脈閉塞症に、神経病患者における視神経の部分萎縮に、線維筋痛症に、光誘発性光受容体変性に、進行性近視に、弱視に、急性眼高血圧関連損傷に起因する視力喪失を処置するための方法、または脳卒中患者における半側無視症候群のリハビリテーションのための方法である、請求項1〜28のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
緑内障に、虚血性神経症に、または網膜血管閉塞に起因する視力喪失を処置するための方法である、請求項1〜28のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記緑内障が、開放隅角緑内障、閉塞隅角緑内障、無虹彩性緑内障、先天性緑内障、若年性緑内障、水晶体原性緑内障、血管新生緑内障、外傷後緑内障、ステロイド緑内障、スタージ・ウェーバー症候群緑内障、およびブドウ膜炎誘発緑内障からなる群より選択される、請求項31に記載の方法。
【請求項３３】
それを必要としている対象の眼を治療用ナノ粒子組成物の有効量に接触させる段階であって、該治療用ナノ粒子組成物が、（i）ナノ構造の少なくとも1つの集合体と、（ii）ナノ構造の該少なくとも1つの集合体に結合したペプチドと、（iii）ナノ構造の該少なくとも1つの集合体にまたは該ペプチドに結合した、眼障害の処置のために有用な治療用物質とを含む、段階
を含む、該眼障害を処置する方法。
【請求項３４】
前記治療用物質が、抗体、タンパク質、核酸、および有機小分子からなる群より選択される、請求項33に記載の方法。
【請求項３５】
前記治療用物質が、抗炎症剤、抗感染症剤、抗ウイルス剤、カルシウムチャネル遮断薬、神経保護剤、成長因子、成長因子アンタゴニスト、眼内圧降下薬、および抗新生物薬からなる群より選択される、請求項33に記載の方法。
【請求項３６】
前記眼障害が、開放隅角緑内障、閉塞隅角緑内障、無虹彩性緑内障、先天性緑内障、若年性緑内障、水晶体原性緑内障、血管新生緑内障、外傷後緑内障、ステロイド緑内障、スタージ・ウェーバー症候群緑内障、およびブドウ膜炎誘発緑内障を含む緑内障、糖尿病性網膜症、黄斑変性症、脈絡膜血管新生、血管閉塞、血管漏出、網膜浮腫、細菌性結膜炎、真菌性結膜炎、ウイルス性結膜炎、アレルギー性結膜炎、ブドウ膜炎、角膜後面沈着物、黄斑浮腫、眼内レンズ移植後の炎症反応、ブドウ膜炎症候群、網膜血管炎、サルコイドーシス、イールズ病、急性網膜壊死、フォークト・小柳・原田症候群、眼トキソプラスマ症、放射線網膜症、増殖性硝子体網膜症、眼内炎、眼緑内障、視神経炎、虚血性視神経症、甲状腺眼症、眼窩偽腫瘍、色素散乱症候群、強膜炎、上強膜炎脈絡膜症、網膜症、網膜血管疾患、網膜動脈閉塞、網膜静脈閉塞、未熟児網膜症、網膜色素変性症、家族性滲出性硝子体網膜症（FEVR）、特発性ポリープ状脈絡膜血管症、黄斑部網膜上膜および白内障、ならびに乾性角結膜炎（KCS）からなる群より選択される、請求項33に記載の方法。
【請求項３７】
前記眼障害が、黄斑浮腫、血管新生緑内障、糖尿病性網膜症、または脈絡膜新生血管である、請求項36に記載の方法。
【請求項３８】
前記治療用物質が、（i）血管内皮成長因子（VEGF）デコイ、色素由来成長因子（PDGF）、エンドスタチン、アンジオスタチン、もしくはアンジオポエチン-1、または（ii）VEGFデコイ、PDGF、エンドスタチン、アンジオスタチン、もしくはアンジオポエチン-1をコードするヌクレオチド分子である、請求項37に記載の方法。
【請求項３９】
前記眼障害が黄斑変性症である、請求項36に記載の方法。
【請求項４０】
前記治療用物質が、（i）VEGFデコイ、PDGF、エンドスタチン、アンジオスタチン、アンジオポエチン-1、もしくはATP結合カセットサブファミリーAメンバー4、または（ii）VEGFデコイ、PDGF、エンドスタチン、アンジオスタチン、アンジオポエチン-1、ATP結合カセットサブファミリーAメンバー4、グルタミン酸アゴニスト、もしくはグルタミン酸アンタゴニストをコードするヌクレオチド分子である、請求項39に記載の方法。
【請求項４１】
前記眼障害が虚血性視神経症である、請求項36に記載の方法。
【請求項４２】
前記治療用物質が、（i）異地性NADHデヒドロゲナーゼユニット4、または（ii）異地性NADHデヒドロゲナーゼユニット4をコードするヌクレオチド分子である、請求項41に記載の方法。
【請求項４３】
前記眼障害が網膜症である、請求項36に記載の方法。
【請求項４４】
前記治療用物質が、（i）グリア細胞由来神経栄養因子もしくはペリフェリン-2、または（ii）グリア細胞由来神経栄養因子もしくはペリフェリン-2をコードするヌクレオチド分子である、請求項43に記載の方法。
【請求項４５】
前記眼障害が網膜色素変性症である、請求項36に記載の方法。
【請求項４６】
前記治療用物質が、（i）網膜色素特異的65kDaタンパク質、または（ii）網膜色素特異的65kDaタンパク質をコードするヌクレオチド分子、または（iii）量子ドットなどの電気刺激源である、請求項45に記載の方法。
【請求項４７】
前記眼障害が眼のウイルス感染症である、請求項36に記載の方法。
【請求項４８】
前記治療用物質が、ウイルス複製を阻害するアンチセンスオリゴヌクレオチドである、請求項47に記載の方法。
【請求項４９】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、サイトメガロウイルス（CMV）複製を阻害する、請求項48に記載の方法。
【請求項５０】
前記ペプチドが、式（I）：
X-[NH-CHR1-C(O)-NH-CHR2-C(O)]x-Y  （I）
、またはその薬学的に許容される塩もしくは互変異性体を有し、
式中、
R1は、H、または中性アミノ酸の側鎖であり；
R2は、塩基性アミノ酸の側鎖、またはR3であり；
xは、1と5を含めて1〜5であり；
Xは、-H、または治療用物質の残基であり；
Yは、-OH、または治療用物質の残基であり；
R3は、
2020514410.tif 000083
であり；
R5は、治療用物質の残基であり；かつ
ただし、R2がR3である場合、Xは-HでありかつYは-OHである、請求項36〜49のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５１】
R1がCH3であり、かつR2が(イミダゾル-4-イル)メチルであり、かつxが2である、請求項50に記載の方法。
【請求項５２】
前記ヌクレオチド分子が発現ベクターの一部である、請求項38、40、42、44、46、47、または48のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
前記ヌクレオチド分子が、SEQ ID NO: 14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62、66、70、74、78、および82からなる群より選択される配列を有する、請求項52に記載の方法。
【請求項５４】
前記治療用物質が、SEQ ID NO: 15〜17、19〜21、23〜25、27〜29、31〜33、35〜37、39〜41、43〜45、47〜49、51〜53、55〜57、59〜61、63〜65、67〜69、71〜73、75〜77、79〜81、83〜85、87〜89、および91〜93からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する、請求項38、40、42、44、または46のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５５】
前記治療用物質が、アシクロビル、ベタメタゾン、ビマトプロスト、ブリンゾラミド、カルテオロール、シプロフロキサシン、デキサメサゾン、トリアムシノロンアセトニド、ドルゾラミド、エピナスチン、フルオロメトロン、フシジン酸、ゲンタマイシン、レボブノロール、ロドキサミド、モキシフロシン（moxiflocin）、ネパフェナク（nepaphenac）、オロパタジン、アセチルシステイン、アトロピン、アジスロマイシン、ベタキソロール、ブロムフェナク、クロラムフェニコール、ジクロフェナク、フルルビプロフェン、ガンシクロビル、ホマトロピン、ケトロラック、ラタノプロスト、レボフロキサシン、ロテプレドノール、ネドクロミル、オフロキサシン、リメキソロン、チモロール、トラボプロスト、タフルプロスト、トブラマイシン、トロピカミド、シクロスポリン、フェキソフェナジン、テルフェナジン、セチリジン、レボセチリジン、デスロラタジン、およびヒドロキシジンからなる群より選択される、請求項33〜37、39、41、43、45、47、50、または51のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
前記ナノ構造がシェルに囲まれたコアであり、該シェルが少なくとも2つの異なる分子を含む、請求項33〜55のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５７】
前記ナノ構造が、1〜10ナノメートルの直径を有するコアを有する、請求項33〜56のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５８】
前記シェルが、ZnS、CdS、ZnSe、およびCdSeからなる群より選択される2つの異なる分子を含む、請求項55または56に記載の方法。
【請求項５９】
前記ナノ構造が、周期表のII〜IV族、III〜V族、またはIV族からの元素からなる分子の群より選択される1つまたは複数の分子を含む、請求項33〜58のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６０】
前記ナノ構造コアがCdSeまたはInPを含む、請求項33〜59のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６１】
前記ナノ構造コアがInPを含む、請求項33〜60のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６２】
前記シェルがZnS分子およびCdS分子を含む、請求項56、57、または59〜61のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６３】
前記シェルが1〜10個の単層を含む、請求項56〜62のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６４】
前記ナノ構造コアの直径が4〜5ナノメートルであり、かつ前記シェルが3〜6個の単層を含む、請求項56〜63のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６５】
前記シェルの表面への前記ペプチドの結合の前および/または後に、該シェルに囲まれた前記ナノ構造コアを紫外線照射によってアニールする、請求項56〜64のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６６】
前記ナノ粒子組成物を治療用組成物の一部として投与する、請求項33〜65のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６７】
前記ナノ粒子組成物を前記眼に局所投与する、請求項33〜66のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６８】
前記ナノ粒子組成物を硝子体内投与によって投与する、請求項33〜67のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６９】
前記ナノ構造が量子ドットである、請求項33〜68のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７０】
前記量子ドットが蛍光を発することができる、請求項69に記載の方法。
【請求項７１】
前記ナノ構造が、約13nmの直径を有するCdSe量子ドットを含み、シェルがZnSを含み、かつ少なくとも1つの前記ペプチドがAla-Hisである、請求項33〜70のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７２】
前記ペプチドが、切断可能な連結により前記治療用物質に可逆的に連結されている、請求項33〜71のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７３】
前記量子ドットが光に曝露された場合に、該量子ドットが蛍光を発することができ、かつ前記連結が該量子ドットによって放出された蛍光によって切断されることができる、請求項72に記載の方法。
【請求項７４】
前記治療用物質が前記量子ドットに連結されている場合、該治療用物質がまた、該量子ドットによって放出された蛍光が消光剤によって消光されるような該消光剤にも連結されている、請求項73に記載の方法。
【請求項７５】
前記連結がpH不安定である、請求項74に記載の方法。
【請求項７６】
前記連結が8.0未満のpHで加水分解される、請求項75に記載の方法。
【請求項７７】
前記連結が約3.0〜約6.0のpHで加水分解される、請求項75に記載の方法。
【請求項７８】
前記連結が酵素的に不安定である、請求項75に記載の方法。
【請求項７９】
前記連結が、プロテアーゼ、エステラーゼ、ヒドロラーゼ、ヌクレアーゼ、グリコシダーゼ、リパーゼ、ホスファターゼ、スルファターゼ、またはホスホリパーゼによって酵素的に切断される、請求項78に記載の方法。
【請求項８０】
前記連結がプロテアーゼによって酵素的に切断される、請求項80に記載の方法。
【請求項８１】
前記プロテアーゼがトリプシン様プロテアーゼである、請求項80に記載の方法。
【請求項８２】
前記プロテアーゼがキモトリプシン様プロテアーゼである、請求項80に記載の方法。
【請求項８３】
前記プロテアーゼがエラスターゼ様プロテアーゼである、請求項80に記載の方法。
【請求項８４】
前記連結がヒドロラーゼによって酵素的に切断される、請求項72に記載の方法。
【請求項８５】
前記ヒドロラーゼがエステラーゼである、請求項84に記載の方法。
【請求項８６】
前記ペプチドが、第1の波長の量子ドットによって放出されたエネルギーによって切断可能な連結を介して前記治療用物質に可逆的に連結されており、光に曝露されると該量子ドットが、該治療用物質が連結されている場合には第1の波長のエネルギーを放出し、かつ該治療用物質が遊離されている場合には第2の波長のエネルギーを放出する、請求項72〜85のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８７】
前記消光剤が、酵素的に不安定である連結を介して前記ペプチドに結合されており、該消光剤が前記量子ドットに連結されている場合に該消光剤が該量子ドットの蛍光を消光する、請求項72〜86のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８８】
前記量子ドットがターゲティング分子をさらに含む、請求項69〜87のいずれか一項に記載のナノ粒子。
【請求項８９】
エネルギーを放出するように前記量子ドットを誘導するのに十分な光に前記ナノ粒子を曝露する段階であって、該エネルギーが前記連結を切断し、かつ前記治療用物質が遊離される、段階
をさらに含む、請求項73〜88のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９０】
前記治療用ナノ粒子組成物を1〜4週間に1回投与する、請求項33〜89のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９１】
前記治療用ナノ粒子組成物を1〜4週間に1回投与する、請求項33〜90のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は眼科の分野に属する。（a）それを必要としている対象の眼に治療用ナノ粒子組成物の有効量を硝子体内投与する段階であって、治療用ナノ粒子組成物が（i）ナノ構造の少なくとも1つの集合体と（ii）ナノ構造の少なくとも1つの集合体に結合した少なくとも1つのペプチドとを含む、段階を含む、眼障害を処置する方法が、開示される。眼内の場合、ナノ構造は、光に曝露され、それにより眼を電気刺激して眼障害を処置する。また、それを必要としている対象の眼を、治療用ナノ粒子組成物の有効量に接触させる段階であって、該治療用ナノ粒子組成物が、（i）ナノ構造の少なくとも1つの集合体と、（ii）ナノ構造の少なくとも1つの集合体に結合したペプチドと、（iii）ナノ構造の少なくとも1つの集合体にまたはペプチドに結合した、眼障害の処置のために有用な治療用物質と、（iv）任意で、ナノ構造の少なくとも1つの集合体またはペプチドと治療用物質の間の連結とを含む、段階を含む、眼障害を処置する方法も開示される。
【背景技術】
【０００２】
米国特許第6,685,730号（特許文献1）は、熱の局所送達法および組織を修復するためのその使用を開示している。この方法は、ナノ粒子を組織に送達し、ナノ粒子を、それらが熱を放出する条件下で励起源に曝露することによる、組織内の高熱の局所誘導を含む。熱の生成は、組織の結合に影響をおよぼす。
【０００３】
米国特許第8,535,681号（特許文献2）は、治療化合物に結合した荷電部分を含む薬物組成物を開示している。荷電部分は、生体組織内の少なくとも1つの型の反対電荷の構成要素と相互作用して長期薬物送達のためのインサイチューデポーを生成するように構成されている。生体組織は、荷電構成要素を含む眼組織または任意の組織であり得る。さらに、ヒトの体の処置法も開示されている。この方法は、治療化合物に結合した荷電部分を含む薬物組成物を、ヒトの体に導入するためのものである。
【０００４】
米国特許第8,283,179号（特許文献3）は、機能付与された蛍光ナノ結晶組成物およびこれらの組成物を作製するための方法を開示している。組成物は、少なくとも1つの材料でコーティングされた蛍光ナノ結晶である。コーティング材料は、水溶液中のコーティング蛍光ナノ結晶に溶解性を付与するための共役電子および共役部分を有する官能基または部分を有する化学化合物またはリガンドを有する。コーティング材料は機能付与された蛍光ナノ結晶組成物を提供し、該蛍光ナノ結晶組成物は、水溶性であり、化学的に安定であり、かつ、光によって励起された場合に高い量子収率および/または発光効率で発光する。コーティング材料はまた、標的分子および標的細胞に結合するための部分、ならびにコーティングを架橋するための部分を有する化学化合物またはリガンドも有し得る。キャッピング層を形成するための反応に適した試薬存在下で、コーティング中の化合物は、蛍光ナノ結晶上にキャッピング層を形成し得、コーティング化合物はキャッピング層に機能的に結合されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】米国特許第6,685,730号
【特許文献２】米国特許第8,535,681号
【特許文献３】米国特許第8,283,179号
【発明の概要】
【０００６】
本発明は、ペプチドコーティングを有するナノ粒子が、予想よりもはるかに長い眼中の滞留時間を有するという発見に部分的に基づいている。（a）それを必要としている対象の眼に治療用ナノ粒子組成物の有効量を硝子体内投与する段階であって、治療用ナノ粒子組成物が（i）ナノ構造の少なくとも1つの集合体と（ii）ナノ構造の少なくとも1つの集合体に結合した少なくとも1つのペプチドとを含む、段階を含む、眼障害を処置する方法が開示される。眼内の場合、ナノ構造は、光に曝露され、それにより眼を電気刺激して眼障害を処置し得る。
【０００７】
1つの態様において、光は周辺光である。
【０００８】
1つの態様において、眼内での、ナノ構造の少なくとも1つの集合体の半減期は1日から4週間である。別の態様において、眼内での、ナノ構造の少なくとも1つの集合体の半減期は1〜5日である。別の態様において、眼内での、ナノ構造の少なくとも1つの集合体の半減期は5〜14日である。別の態様において、眼内での、ナノ構造の少なくとも1つの集合体の半減期は7〜9日である。別の態様において、眼内での、ナノ構造の少なくとも1つの集合体の半減期は1〜2週間である。別の態様において、眼内での、ナノ構造の少なくとも1つの集合体の半減期は2〜4週間である。
【０００９】
1つの態様において、治療用ナノ粒子組成物を1週間に1回〜6ヶ月に1回投与する。別の態様において、治療用ナノ粒子組成物を1、2、3、もしくは4週間に1回、または1、2、3、4、5、もしくは6ヶ月に1回投与する。
【００１０】
1つの態様において、ナノ構造はシェルに囲まれたコアであり、シェルは少なくとも2つの異なる分子を含む。
【００１１】
1つの態様において、ナノ構造は、1〜100ナノメートルの直径を有するコアを有する。別の態様において、ナノ構造は、1〜5nm、5〜10nm、10〜20nm、20〜50nm、または50〜100nmの直径を有するコアを有する。
【００１２】
1つの態様において、シェルは、ZnS、CdS、ZnSe、およびCdSeからなる群より選択される2つの異なる分子を含む。別の態様において、ナノ構造コアは、周期表のII〜IV族、III〜V族、またはIV族からの元素からなる分子の群より選択される1つまたは複数の分子を含む。別の態様において、ナノ構造コアはCdSeを含む。別の態様において、ナノ構造コアはInPを含む。別の態様において、シェルはZnS分子および/またはCdS分子を含む。
【００１３】
1つの態様において、シェルは1〜10個の単層を含む。別の態様において、ナノ構造コアの直径は4〜5ナノメートルであり、かつシェルは3〜6個の単層を含む。
【００１４】
1つの態様において、シェルの表面への前記少なくとも1つのペプチドの結合の前および/または後に、シェルに囲まれたナノ構造コアを紫外線照射によってアニールする。
【００１５】
1つの態様において、ナノ構造の少なくとも1つの集合体は量子ドットである。
【００１６】
1つの態様において、少なくとも1つのペプチドは、式（I）：
Ra-[NH-CHR1-C(O)-NH-CHR2-C(O)]x-H  （I）
、またはその薬学的に許容される塩もしくは互変異性体を有し、
式中、
R1はHまたは中性アミノ酸の側鎖であり；
R2は塩基性アミノ酸の側鎖であり；
RaはHまたはビオチノイルであり；かつ
xは、1と5を含めて1〜5である。
【００１７】
1つの態様において、R1はCH3であり、かつR2は(イミダゾル-4-イル)メチルである。別の態様において、xは2である。別の態様において、RaはHである。
【００１８】
1つの態様において、ナノ構造は、約13nmの直径を有するCdSe量子ドットを含み、シェルはZnSを含み、かつ少なくとも1つのペプチドはAla-Hisである。
【００１９】
1つの態様において、治療用ナノ粒子組成物は水を含む。別の態様において、治療用ナノ粒子組成物のpHは7〜8である。
【００２０】
1つの態様において、対象はヒトである。
【００２１】
1つの態様において、光は、ナノ構造の少なくとも1つの集合体により吸収されて、眼に電気刺激を提供する。
【００２２】
1つの態様において、障害は網膜の変性である。別の態様において、方法は、非動脈炎性前部虚血性視神経症に、多発性硬化症に、CIS（clinically isolated syndrome）に、網膜色素変性症に、長期網膜動脈閉塞症に、神経疾患患者における視神経の部分萎縮に、線維筋痛症に、光誘発性光受容体変性、進行性近視に、弱視に、および急性眼高血圧関連損傷に起因する視力喪失を処置するための方法、または脳卒中患者における半側無視症候群のリハビリテーションのための方法である。別の態様において、方法は、緑内障に、虚血性神経症に、または網膜血管閉塞に起因する視力喪失を処置するための方法である。別の態様において、障害は、開放隅角緑内障、閉塞隅角緑内障、無虹彩性緑内障、先天性緑内障、若年性緑内障、水晶体原性緑内障、血管新生緑内障、外傷後緑内障、ステロイド緑内障、スタージ・ウェーバー症候群緑内障、およびブドウ膜炎誘発緑内障を含む、緑内障である。
【００２３】
それを必要としている対象の眼を治療用ナノ粒子組成物の有効量に接触させる段階であって、治療用ナノ粒子組成物が、（i）ナノ構造の少なくとも1つの集合体と、（ii）ナノ構造の少なくとも1つの集合体に結合したペプチドと、（iii）ナノ構造の少なくとも1つの集合体にまたはペプチドに結合した、眼障害の処置のために有用な治療用物質とを含む、段階を含む、眼障害を処置する方法が、提供される。本発明は、眼組織中に活性薬物が存在する持続時間を増加させることによって活性薬物の治療有用性を高め、かつ/または罹患状態の間に組織に存在する条件下で薬物を遊離する。本発明は、ナノ粒子組成物が眼の硝子体における長い滞留を提供したという予期せぬ発見に部分的に基づいている。眼内の長い滞留は、例えば、1〜4週間に1回という低頻度の投与を可能にする。別の態様において、治療用ナノ粒子組成物を、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10週間、またはそれより長い期間に1回投与する。
【００２４】
治療用ナノ粒子組成物は、特定の薬物および疾患状態に合わせた様々な連結化学を可能にする、その表面上のペプチドコーティングを含む。粒径を制御することにより、ナノ粒子組成物の標的組織への分布およびその後の除去を容易にし得る。加えて、ペプチドコーティングは、作用部位での保持を高めるために調整することができる。また、コーティングは、より大きな粒子と比較して、視力を妨害するナノ粒子組成物の可能性を低減する、コロイド溶液の注入を可能にする。
【００２５】
1つの態様において、治療用物質は、抗体、タンパク質、核酸、および有機小分子からなる群より選択される。別の態様において、治療用物質は、抗炎症剤、抗感染症剤、抗ウイルス剤、カルシウムチャネル遮断薬、神経保護剤、成長因子、成長因子アンタゴニスト、眼内圧降下薬、および抗新生物薬からなる群より選択される。
【００２６】
1つの態様において、眼障害は、開放隅角緑内障（例えば、原発性開放隅角緑内障、色素性緑内障、落屑緑内障、および低眼圧緑内障）、閉塞隅角緑内障（閉塞角緑内障、狭隅角緑内障、瞳孔ブロック緑内障、および毛様体ブロック緑内障としても臨床上公知）（例えば、急性閉塞隅角緑内障および慢性閉塞隅角緑内障）、無虹彩性緑内障、先天性緑内障、若年性緑内障、水晶体原性緑内障、血管新生緑内障、外傷後緑内障、ステロイド緑内障、スタージ・ウェーバー症候群緑内障、およびブドウ膜炎誘発緑内障を含む緑内障、糖尿病性網膜症、黄斑変性症、脈絡膜血管新生、血管閉塞、血管漏出、網膜浮腫、細菌性結膜炎、真菌性結膜炎、ウイルス性結膜炎、アレルギー性結膜炎、ブドウ膜炎、角膜後面沈着物、黄斑浮腫、眼内レンズ移植後の炎症反応、ブドウ膜炎症候群（例えば、慢性虹彩毛様体炎または慢性眼内炎）、網膜血管炎（例えば、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、進行性全身性硬化症、結節性多発動脈炎、ウェゲナー肉芽腫症、側頭動脈炎、ベーチェット病（Adamantiades Bechcet disease）、シェーグレン病、再発性多発軟骨炎およびHLA-B27関連脊椎炎で見られる場合の）、サルコイドーシス、イールズ病、急性網膜壊死、フォークト・小柳・原田症候群、眼トキソプラスマ症、放射線網膜症、増殖性硝子体網膜症、眼内炎、眼緑内障（例えば、炎症性緑内障）、視神経炎、虚血性視神経症、甲状腺眼症、眼窩偽腫瘍、色素散乱症候群（色素性緑内障）、強膜炎、上強膜炎脈絡膜症（例えば、急性後部多発性小板状を含むが、これに限定されない「白点」症候群）、網膜症（例えば、嚢胞様黄斑浮腫、中心性漿液性脈絡膜症および推定眼ヒストプラスマ症候群、網膜血管疾患（例えば、糖尿病性網膜症、コーツ病および網膜細動脈瘤）、網膜動脈閉塞、網膜静脈閉塞、未熟児網膜症、網膜色素変性症、家族性滲出性硝子体網膜症（FEVR）、特発性ポリープ状脈絡膜血管症、黄斑部網膜上膜および白内障、ならびに乾性角結膜炎（KCS）からなる群より選択される。
【００２７】
1つの態様において、眼障害は、黄斑浮腫、血管新生緑内障、糖尿病性網膜症、または脈絡膜新生血管である。別の態様において、治療用物質は、（i）血管内皮成長因子（VEGF）デコイ、色素由来成長因子（PDGF）、エンドスタチン、アンジオスタチン、もしくはアンジオポエチン-1、または、（ii）VEGFデコイ、PDGF、エンドスタチン、アンジオスタチン、もしくはアンジオポエチン-1をコードするヌクレオチド分子である。
【００２８】
1つの態様において、眼障害は黄斑変性症である。別の態様において、治療用物質は、（i）VEGFデコイ、PDGF、エンドスタチン、アンジオスタチン、アンジオポエチン-1、もしくはATP結合カセットサブファミリーAメンバー4、または（ii）VEGFデコイ、PDGF、エンドスタチン、アンジオスタチン、アンジオポエチン-1、ATP結合カセットサブファミリーAメンバー4、グルタミン酸アゴニスト、もしくはグルタミン酸アンタゴニストをコードするヌクレオチド分子である。
【００２９】
1つの態様において、眼障害は虚血性視神経症である。別の態様において、治療用物質は、（i）異地性NADHデヒドロゲナーゼユニット4、または（ii）異地性NADHデヒドロゲナーゼユニット4をコードするヌクレオチド分子である。
【００３０】
1つの態様において、眼障害は網膜症である。別の態様において、治療用物質は、（i）グリア細胞由来神経栄養因子もしくはペリフェリン-2、または（ii）グリア細胞由来神経栄養因子もしくはペリフェリン-2をコードするヌクレオチド分子である。
【００３１】
1つの態様において、眼障害は網膜色素変性症である。別の態様において、治療用物質は、（i）網膜色素特異的65kDaタンパク質、または（ii）網膜色素特異的65kDaタンパク質をコードするヌクレオチド分子、または（iii）量子ドットなどの電気刺激源である。
【００３２】
1つの態様において、眼障害は眼のウイルス感染症である。別の態様において、治療用物質は、ウイルス複製を阻害するアンチセンスオリゴヌクレオチドである。別の態様において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、サイトメガロウイルス（CMV）複製を阻害する。
【００３３】
1つの態様において、ペプチドは、式（I）：
X-[NH-CHR1-C(O)-NH-CHR2-C(O)]x-Y  （I）
、またはその薬学的に許容される塩もしくは互変異性体を有し、
式中、
R1は、H、または中性アミノ酸の側鎖であり；
R2は塩基性アミノ酸の側鎖であり；
xは、1と5を含めて1〜5であり；
Xは、-H、または治療用物質の残基であり；かつ
Yは、-OH、または治療用物質の残基であり；ただしXまたはYの一方は治療用物質の残基である。
【００３４】
1つの態様において、R1はCH3であり、かつR2は(イミダゾール-4-イル)メチルである。別の態様において、xは2である。
【００３５】
1つの態様において、ペプチドは、式（II）：
H-[NH-CHR3-C(O)-NH-CHR4-C(O)]x-OH  （II）
、またはその薬学的に許容される塩もしくは互変異性体を有し、
式中、
R3は、H、または中性アミノ酸の側鎖であり；
R4は、
2020514410.tif 000003
であり；
ここでR5は治療用物質の残基であり；
xは、1と5を含めて1〜5である。
【００３６】
1つの態様において、ヌクレオチド分子は発現ベクターの一部である。別の態様において、ヌクレオチド分子は、SEQ ID NO: 14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62、66、70、74、78、および82からなる群より選択される配列を有する。
【００３７】
1つの態様において、治療用物質は、SEQ ID NO: 15〜17、19〜21、23〜25、27〜29、31〜33、35〜37、39〜41、43〜45、47〜49、51〜53、55〜57、59〜61、63〜65、67〜69、71〜73、75〜77、79〜81、83〜85、87〜89、および91〜93からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する。
【００３８】
1つの態様において、治療用物質は、アシクロビル、ベタメタゾン、デキサメサゾン、トリアムシノロンアセトニド、ビマトプロスト、ラタノプロスト、ブリンゾラミド、カルテオロール、フルオロキノロン（例えば、シプロフロキサシンおよびオフロキサシン）、デキサメサゾン、ドルゾラミド、エピナスチン、フルオロメトロン、フシジン酸、ゲンタマイシン、レボブノロール、ロドキサミド、モキシフロシン（moxiflocin）、ネパフェナク（nepaphenac）、オロパタジン、アセチルシステイン、アトロピン、アジスロマイシン、ベタキソロール、ブロムフェナク、クロラムフェニコール、ジクロフェナク、フルルビプロフェン、ガンシクロビル、ホマトロピン、ケトロラック、ラタノプロスト、レボフロキサシン、ロテプレドノール、ネドクロミル、リメキソロン、チモロール、トラボプロスト、タフルプロスト、アミノ配糖体系抗生物質（例えば、トブラマイシン）、トロピカミド、シクロスポリン、フェキソフェナジン、テルフェナジン、セチリジン、レボセチリジン、デスロラタジン、ヒドロキシジン、天然レチノイド、および合成レチノイドからなる群より選択される。
【００３９】
1つの態様において、ナノ構造はシェルに囲まれたコアであり、シェルは、少なくとも2つの異なる分子を含む。別の態様において、ナノ構造は、1〜10ナノメートルの直径を有するコアを有する。別の態様において、シェルは、ZnS、CdS、ZnSe、およびCdSeからなる群より選択される2つの異なる分子を含む。別の態様において、ナノ構造コアは、周期表のII〜IV族、III〜V族、またはIV族からの元素からなる分子の群より選択される1つまたは複数の分子を含む。別の態様において、ナノ構造コアはCdSeを含む。別の態様において、ナノ構造コアはInPを含む。別の態様において、シェルはZnS分子およびCdS分子を含む。別の態様において、シェルは1〜10個の単層を含む。別の態様において、ナノ構造コアの直径は4〜5ナノメートルであり、かつシェルは3〜6個の単層を含む。別の態様において、シェルの表面へのペプチドの結合の前および/または後に、シェルに囲まれたナノ構造コアを紫外線照射によってアニールする。
【００４０】
1つの態様において、ナノ粒子組成物を治療用組成物の一部として投与する。別の態様において、ナノ粒子組成物を眼に局所投与する。別の態様において、ナノ粒子組成物を硝子体内投与によって投与する。
【００４１】
1つの態様において、ナノ構造は量子ドットである。別の態様において、量子ドットは蛍光を発することができる。
【００４２】
1つの態様において、ペプチドは、切断可能な連結を介して治療用物質に可逆的に連結されている。
【００４３】
1つの態様において、量子ドットは光に曝露された場合に、量子ドットは蛍光を発することができかつ連結は量子ドットによって放出された蛍光によって切断されることができる。
【００４４】
別の態様において、治療用物質は量子ドットに連結されている場合、治療用物質はまた、量子ドットによって放出された蛍光が消光剤によって消光されるような消光剤にも連結されている。
【００４５】
別の態様において、連結はpH不安定である。別の態様において、連結は8.0未満のpHで加水分解される。別の態様において、連結は約3.0〜約6.0のpHで加水分解される。別の態様において、連結は酵素的に不安定である。別の態様において、連結は、プロテアーゼ、エステラーゼ、ヒドロラーゼ、ヌクレアーゼ、グリコシダーゼ、リパーゼ、ホスファターゼ、スルファターゼ、またはホスホリパーゼによって酵素的に切断される。別の態様において、連結は、プロテアーゼによって酵素的に切断される。別の態様において、プロテアーゼはトリプシン様プロテアーゼである。別の態様において、プロテアーゼはキモトリプシン様プロテアーゼである。別の態様において、プロテアーゼはエラスターゼ様プロテアーゼである。別の態様において、連結は、ヒドロラーゼによって酵素的に切断される。別の態様において、ヒドロラーゼはエステラーゼである。
【００４６】
1つの態様において、ペプチドは、第1の波長の量子ドットによって放出されたエネルギーによって切断可能な連結を介して治療用物質に可逆的に連結されており、光に曝露されると量子ドットは、治療用物質が連結されている場合には第1の波長のエネルギーを放出し、かつ治療用物質が遊離されている場合には第2の波長のエネルギーを放出する。別の態様において、消光剤は、酵素的に不安定である連結を介してペプチドに結合されており、消光剤は、量子ドットに連結されている場合に量子ドットの蛍光を消光する。
【００４７】
1つの態様において、量子ドットはターゲティング分子をさらに含む。
【００４８】
1つの態様において、方法は、エネルギーを放出するように量子ドットを誘導するのに十分な光にナノ粒子を曝露する段階であって、エネルギーが連結を切断し、かつ治療用物質が遊離される、段階をさらに含む。
【図面の簡単な説明】
【００４９】
【図１】眼1個あたり168pmolの硝子体内注射後のウサギ硝子体におけるSeeQ Cd/Se 655 Altの濃度を示すグラフを示す。データは眼4個の平均±SDで表す。
【図２】眼1個あたり168pmolの硝子体内注射後のウサギ網膜におけるSeeQ Cd/Se 655 Altの濃度を示すグラフを示す。データは平均±SDで表す。
【図３Ａ】ペプチド-治療用物質結合体を作製するための方法を示す。
【図３Ｂ】ペプチド-治療用物質結合体を作製するための方法を示す。
【図４】ペプチド治療用物質結合体を作製するための方法を示す。
【発明を実施するための形態】
【００５０】
発明の詳細な説明
本明細書において用いられる「1つの（a）」または「1つの（an）」は1つまたは複数を意味し得る。「含む」なる用語と合わせて用いられる場合、特許請求の範囲において本明細書で用いられる「1つの（a）」または「1つの（an）」なる用語は、1つまたは複数を意味し得る。
【００５１】
本明細書において用いられる「標的にされた」なる用語は、化学種の結合を特定の部位に向けるための、抗原抗体結合相互作用、リガンド受容体結合相互作用、ならびに他の化学的および/または生化学的結合相互作用の使用を含む。
【００５２】
本明細書において用いられる「光」とは、赤外線、可視光線、および紫外線を含むがそれらに限定されない、電磁放射線を意味する。光の波長は600〜2000nmの範囲であってもよい。1つの態様において、光は700〜1200nmの波長を有する。別の態様において、光は750〜1100nmの波長を有する。
【００５３】
本明細書において用いられる「コア/シェル」ナノ粒子は、1つまたは複数のシェル層で囲まれた個別のコア部を有するナノ粒子である。
【００５４】
本明細書において用いられる「ナノ粒子」とは、1つまたは複数のナノ粒子を意味する。本明細書において用いられる「コア/シェルナノ粒子」とは、1つまたは複数のコア/シェルナノ粒子を意味する。本明細書において用いられる「シェル」とは、1つまたは複数のシェルを意味する。
【００５５】
本明細書において用いられる「局所」とは、所望の領域に実質的に制限され、そのような領域の外に散在したとしても散在が最小限であることを意味する。
【００５６】
ナノ粒子は、標準の方法を用いて動物に投与してもよい。治療し得る動物には、ヒト、非ヒト霊長類、ウシ、ウマ、ブタ、イヌ、ネコ、ヒツジ、ヤギ、ウサギ、ラット、マウス、鳥類、ニワトリ、または魚が含まれるが、それらに限定されない。
【００５７】
「ナノメートル」は、10-9メートルであり、かつ略称「nm」と交換可能に用いられる。
【００５８】
ナノ構造は、少なくとも1つの領域または特性寸法を有し、約500nm未満からおよそ約1nm未満までの寸法を有する。ナノ構造は、任意の形状または形態を有してもよい。
【００５９】
任意の数値に言及する場合、「約」は、記載された値の±10％の値を意味する（例えば、「約100nm」は、90nmと110nmを含めて90nmから110nmまでのサイズ範囲を含む）。
【００６０】
本明細書において用いられる「ナノ結晶」なる用語は、実質的に単結晶であるナノ構造を意味する。「ナノ結晶」、「ナノドット」、「ドット」および「量子ドット」なる用語は、当業者によって同様の構造を表すと理解され、本明細書において交換可能に用いられる。本発明はまた、多結晶または非晶質ナノ結晶の使用を含む。本明細書において用いられる「ナノ結晶」なる用語は、「発光ナノ結晶」も含む。本明細書において用いられる「発光ナノ結晶」なる用語は、外部エネルギー源（適切には光）によって励起されると発光するナノ結晶を意味する。
【００６１】
典型的には、特性寸法の領域は構造の最小軸に沿うことになる。ナノ結晶は、材料の性質において実質的に均質であり得、またはある特定の態様において、不均質であり得る。ナノ結晶の光学的性質は、その粒径、化学的または表面組成によって決定され得る。1つの態様において、発光ナノ結晶のサイズは、約1nm〜約15nmの範囲である。
【００６２】
本明細書において用いるためのナノ構造は、当業者には公知の任意の方法を用いて生成することができる。適切な方法および例示的ナノ結晶は、公開された米国特許出願第2008/0237540号；米国特許第7,374,807号；2004年3月10日提出の米国特許出願第10/796,832号；米国特許第6,949,206号；および2004年6月8日提出の米国特許仮出願第60/578,236号に開示されている。本発明において用いるナノ結晶は、無機材料、より適切には無機導電性または半導電性材料を含む、任意の適切な材料から生成することができる。適切な材料には、米国特許出願第10/796,832号に開示されるものが含まれ、II〜VI族、III〜V族、IV〜VI族、およびIV族半導体を含む、任意のタイプの半導体が含まれる。適切な半導体材料には、Si、Ge、Sn、Se、Te、B、C（ダイヤモンドを含む）、P、BN、BP、BAs、AlN、AlP、AlAs、AlSb、GaN、GaP、GaAs、GaSb、InN、InP、InAs、InSb、ZnO、ZnS、ZnSe、ZnTe、CdS、CdSe、CdTe、HgS、HgSe、HgTe、BeS、BeSe、BeTe、MgS、MgSe、GeS、GeSe、GeTe、SnS、SnSe、SnTe、PbO、PbS、PbSe、PbTe、CuF、CuCl、CuBr、CuI、Si3N4、Ge3N4、Al2O3、(Al、Ga、In)2(S、Se、Te)3、Al2CO、および2つまたはそれ以上のそのような半導体の適切な組み合わせが含まれるが、それらに限定されない。
【００６３】
ある特定の局面において、半導体ナノ結晶は、p型ドーパントまたはn型ドーパントからなる群からのドーパントを含んでもよい。本発明において有用なナノ結晶は、II〜VI族またはIII〜V族半導体を含むこともできる。II〜VI族またはIII〜V族半導体ナノ結晶の例には、周期表のZn、CdおよびHgなどのII族の元素の、S、Se、Te、PoなどのVI族の任意の元素との任意の組み合わせ；ならびに周期表のB、Al、Ga、In、およびTlなどのIII族の元素の、N、P、As、SbおよびBiなどのV族の任意の元素との任意の組み合わせが含まれる。
【００６４】
本発明において有用な、発光ナノ結晶を含むナノ結晶は、全体を通して記載するその表面に対して結合、協働、会合、または付着するリガンドをさらに含むこともできる。適切なリガンドには、米国特許第7,374,807号、米国特許第6,949,206号、および米国特許仮出願第60/578,236号に開示されるものを含む、当業者には公知の任意の群が含まれる。
【００６５】
1つの態様において、式IIのペプチドを、塩基性アミノ酸側鎖(イミダゾル-4-イル)メチル（his）を含むペプチドから合成することができ、方法は、
（i）塩基存在下でペプチドをアクリル酸メチルと反応させる段階；
（ii）塩基処理によりメチルアクリレート置換基からメチル基を除去して、カルボン酸基を露出させる段階；
（iii）治療用物質を露出したカルボン酸基に、任意に添加物質の存在下でカップリング試薬により結合する段階
を含む。
【００６６】
塩基の例には、2,6-ジ-tert-ブチルピリジン、N,N-ジイソプロピルエチルアミン、1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]ウンデカ-7-エン、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、および水酸化リチウムが含まれるが、それらに限定されない。
【００６７】
カップリング試薬の例には、ジシクロヘキシルカルボジイミド（DCC）、ジイソプロピルカルボジイミド（DIC）、および(N-(3-ジメチルアミノプロピル)-N'-エチルカルボジイミド・HCl（EDAC）が含まれるが、それらに限定されない。
【００６８】
添加物質の例には、1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（HOBt）、ヒドロキシ-3,4-ジヒドロ-4-オキソ-1,2,3-ベンゾトリアジン（HOOBt）、N-ヒドロキシスクシンイミド（HOSu）、1-ヒドロキシ-7-アザ-1H-ベンゾトリアゾール（HOAt）、(4-(N,N-ジメチルアミノ)ピリジン（DMAP）が含まれるが、それらに限定されない。
【００６９】
1つの態様において、ペプチドは、式（I）：
X-[NH-CHR1-C(O)-NH-CHR2-C(O)]x-Y  （I）
、またはその薬学的に許容される塩もしくは互変異性体を有し、
式中、
R1は、H、または中性アミノ酸の側鎖であり；
R2は塩基性アミノ酸の側鎖であり；
xは、1と5を含めて1〜5であり；
Xは、-H、または治療用物質の残基であり；かつ
Yは、-OH、または治療用物質の残基である。
【００７０】
中性アミノ酸の側鎖の例には、メチル（ala）、イソプロピル（val）、2-メチルプロピル（leu）、および1-メチルプロピル（ile）が含まれる。
【００７１】
塩基性アミノ酸の側鎖の例には、4-アミノブチル（lys）、4-グアニジノブチル（arg）および(イミダゾル-4-イル)メチル（his）が含まれる。
【００７２】
治療用物質に連結して式（I）の化合物を生じ得るペプチドの特定の例には、
2020514410.tif 000004
が含まれるが、それらに限定されない。
【００７３】
ペプチドで誘導体化され得る治療用物質には、抗炎症剤、抗感染剤、抗ウイルス剤、カルシウムチャネル遮断薬、神経保護剤、成長因子、成長因子アンタゴニスト、眼内圧降下薬、および抗新生物薬が含まれるが、それらに限定されない。ペプチドで誘導体化され得る、眼障害の処置のために有用な治療用物質の特定の例には、アシクロビル、ベタメタゾン、ビマトプロスト、ブリンゾラミド、カルテオロール、シプロフロキサシン、デキサメタゾン、ドルゾラミド、エピナスチン、フルオロメトロン、フシジン酸、ゲンタマイシン、レボブノロール、ロドキサミド、モキシフロキシシン（moxifloxicin）、ネパフェナク（nepaphenac）、オロパタジン、アセチルシステイン、アトロピン、アジスロマイシン、ベタキソロール、ブロムフェナク、クロラムフェニコール、ジクロフェナク、フルルビプロフェン、ガンシクロビル、ホマトロピン、ケトロラック、ラタノプロスト、レボフロキサシン、ロテプレドノール、ネドクロミル、オフロキサシン、リメキソロン、チモロール、トラボプロスト、タフルプロスト、トブラマイシン、トロピカミド、シクロスポリン、フェキソフェナジン、テルフェナジン、セチリジン、レボセチリジン、デスロラタジン、およびヒドロキシジンが含まれるが、それらに限定されない。
【００７４】
誘導体化された治療用物質を下記によって例示する。
1.
2020514410.tif 000005
2-(2-アミノプロパンアミド)-N-(9-((2-ヒドロキシエトキシ)メチル)-6-オキソ-6,9-ジヒドロ-1H-プリン-2-イル)-3-(1H-イミダゾル-4-イル)プロパンアミド。
2.
2020514410.tif 000006
2-((8S,9R,10S,13S,14S,16S,17R)-9-フルオロ-17-ヒドロキシ-10,13,16-トリメチル-3-オキソ-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-ドデカヒドロ-3H-シクロペンタ[a]フェナントレン-17-イル)-2-オキソエチルアラニルヒスチジネート。
3.
2020514410.tif 000007
(1R,2R,3R,4S)-3-((Z)-7-(エチルアミノ)-7-オキソヘプタ-2-エン-1-イル)-4-ヒドロキシ-2-((S,E)-3-ヒドロキシ-5-フェニルペンタ-1-エン-1-イル)シクロペンチルアラニルヒスチジネート。
4.
2020514410.tif 000008
2-(2-アミノプロパンアミド)-N-エチル-3-(1H-イミダゾル-4-イル)-N-((R)-2-(3-メトキシプロピル)-1,1-ジオキシド-6-スルファモイル-3,4-ジヒドロ-2H-チエノ[3,2-e][1,2]チアジン-4-イル)プロパンアミド。
5.
2020514410.tif 000009
1-(tert-ブチルアミノ)-3-((2-オキソ-1,2,3,4-テトラヒドロキノリン-5-イル)オキシ)プロパン-2-イルアラニルヒスチジネート。
6.
2020514410.tif 000010
(1-シクロプロピル-6-フルオロ-4-オキソ-7-(ピペラジン-1-イル)-1,4-ジヒドロキノリン-3-カルボニル)アラニルヒスチジン。
7.
2020514410.tif 000011
2-((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)-9-フルオロ-11,17-ジヒドロキシ-10,13,16-トリメチル-3-オキソ-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-ドデカヒドロ-3H-シクロペンタ[a]フェナントレン-17-イル)-2-オキソエチルアラニルヒスチジネート。
8.
2020514410.tif 000012
2-(2-アミノプロパンアミド)-N-エチル-3-(1H-イミダゾル-4-イル)-N-((4S,6S)-6-メチル-7,7-ジオキシド-2-スルファモイル-5,6-ジヒドロ-4H-チエノ[2,3-b]チオピラン-4-イル)プロパンアミド。
9.
2020514410.tif 000013
2-(2-アミノプロパンアミド)-N-(9,13b-ジヒドロ-1H-ジベンゾ[c,f]イミダゾ[1,5-a]アゼピン-3-イル)-3-(1H-イミダゾル-4-イル)プロパンアミド。
10.
2020514410.tif 000014
(6S,8S,9R,10S,11S,13S,14S,17R)-17-アセチル-9-フルオロ-17-ヒドロキシ-6,10,13-トリメチル-3-オキソ-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-ドデカヒドロ-3H-シクロペンタ[a]フェナントレン-11-イルアラニルヒスチジネート。
11.
2020514410.tif 000015
((Z)-2-((3R,4S,5S,8S,9S,10S,11R,13R,14S,16S)-16-アセトキシ-3,11-ジヒドロキシ-4,8,10,14-テトラメチルヘキサデカヒドロ-17H-シクロペンタ[a]フェナントレン-17-イリデン)-6-メチルヘプタ-5-エノイル)アラニルヒスチジン。
12.
2020514410.tif 000016
N-((R)-1-((2S,5R,6R)-5-アミノ-6-(((1R,2S,3S,4R,6S)-4,6-ジアミノ-3-(((2R,3R,4R,5R)-3,5-ジヒドロキシ-5-メチル-4-(メチルアミノ)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-2-ヒドロキシシクロヘキシル)オキシ)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)エチル)-2-(2-アミノプロパンアミド)-3-(1H-イミダゾル-4-イル)プロパンアミド。
13.
2020514410.tif 000017
(R)-1-(tert-ブチルアミノ)-3-((5-オキソ-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-1-イル)オキシ)プロパン-2-イルアラニルヒスチジネート。
14.
2020514410.tif 000018
(2-((3-(カルボキシホルムアミド)-2-クロロ-5-シアノフェニル)アミノ)-2-オキソアセチル)アラニルヒスチジン。
15.
2020514410.tif 000019
(1-シクロプロピル-6-フルオロ-8-メトキシ-7-((4aS,7aS)-オクタヒドロ-6H-ピロロ[3,4-b]ピリジン-6-イル)-4-オキソ-1,4-ジヒドロキノリン-3-カルボニル)アラニルヒスチジン。
16.
2020514410.tif 000020
N-(2-(2-アミノ-2-オキソエチル)-6-ベンゾイルフェニル)-2-(2-アミノプロパンアミド)-3-(1H-イミダゾル-4-イル)プロパンアミド。
17.
2020514410.tif 000021
(Z)-(2-(11-(3-(ジメチルアミノ)プロピリデン)-6,11-ジヒドロジベンゾ[b,e]オキセピン-2-イル)アセチル)アラニルヒスチジン。
18.
2020514410.tif 000022
アセチル-L-システイニルアラニルヒスチジン。
19.
2020514410.tif 000023
3-(((1R,3s,5S)-8-メチル-8-アザビシクロ[3.2.1]オクタン-3-イル)オキシ)-3-オキソ-2-フェニルプロピルアラニルヒスチジネート。
20.
2020514410.tif 000024
(2S,3S,4R)-6-(((2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-11-(((2S,3R,4S,6R)-4-(ジメチルアミノ)-3-ヒドロキシ-6-メチルテトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-2-エチル-3,4,10-トリヒドロキシ-3,5,6,8,10,12,14-ヘプタメチル-15-オキソ-1-オキサ-6-アザシクロペンタデカン-13-イル)オキシ)-4-メトキシ-2,4-ジメチルテトラヒドロ-2H-ピラン-3-イルアラニルヒスチジネート。
21.
2020514410.tif 000025
2-(2-アミノプロパンアミド)-N-(3-(4-(2-(シクロプロピルメトキシ)エチル)フェノキシ)-2-ヒドロキシプロピル)-3-(1H-イミダゾル-4-イル)-N-イソプロピルプロパンアミド。
22.
2020514410.tif 000026
(2-(2-アミノ-3-(4-ブロモベンゾイル)フェニル)アセチル)アラニルヒスチジン。
23.
2020514410.tif 000027
(2R,3R)-2-(2,2-ジクロロアセトアミド)-3-ヒドロキシ-3-(4-ニトロフェニル)プロピルアラニルヒスチジネート。
24.
2020514410.tif 000028
(2-(3-((2,6-ジクロロフェニル)アミノ)フェニル)アセチル)アラニルヒスチジン。
25.
2020514410.tif 000029
(2-(2-フルオロ-[1,1'-ビフェニル]-4-イル)プロパノイル)アラニルヒスチジン。
26.
2020514410.tif 000030
2-(2-アミノプロパンアミド)-N-(9-(((1,3-ジヒドロキシプロパン-2-イル)オキシ)メチル)-6-オキソ-6,9-ジヒドロ-1H-プリン-2-イル)-3-(1H-イミダゾル-4-イル)プロパンアミド。
27.
2020514410.tif 000031
2-(((1R,3s,5S)-8-メチル-8-アザビシクロ[3.2.1]オクタン-3-イル)オキシ)-2-オキソ-1-フェニルエチルアラニルヒスチジネート。
28.
2020514410.tif 000032
(5-ベンゾイル-2,3-ジヒドロ-1H-ピロリジン-1-カルボニル)アラニルヒスチジン。
29.
2020514410.tif 000033
イソプロピル(Z)-7-((1R,2R,3R,5S)-3-((アラニルヒスチジル)オキシ)-5-ヒドロキシ-2-((R)-3-ヒドロキシ-5-フェニルペンチル)シクロペンチル)ヘプタ-5-エノエート。
30.
2020514410.tif 000034
((S)-9-フルオロ-3-メチル-10-(4-メチルピペラジン-1-イル)-7-オキソ-2,3-ジヒドロ-7H-[1,4]オキサジノ[2,3,4-ij]キノリン-6-カルボニル)アラニルヒスチジン。
31.
2020514410.tif 000035
クロロメチル(8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)-11-((アラニルヒスチジル)オキシ)-17-((エトキシカルボニル)オキシ)-10,13-ジメチル-3-オキソ-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-ドデカヒドロ-3H-シクロペンタ[a]フェナントレン-17-カルボキシレート。
32.
2020514410.tif 000036
2-((1-((1-カルボキシ-2-(1H-イミダゾル-4-イル)エチル)アミノ)-1-オキソプロパン-2-イル)カルバモイル)-9-エチル-4,6-ジオキソ-10-プロピル-6,9-ジヒドロ-4H-ピラノ[3,2-g]キノリン-8-カルボン酸。
33.
2020514410.tif 000037
(9-フルオロ-3-メチル-10-(4-メチルピペラジン-1-イル)-7-オキソ-2,3-ジヒドロ-7H-[1,4]オキサジノ[2,3,4-ij]キノリン-6-カルボニル)アラニルヒスチジン。
34.
2020514410.tif 000038
(8S,9S,10R,11S,13S,14S,16R,17S)-10,13,16,17-テトラメチル-3-オキソ-17-プロピオニル-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-ドデカヒドロ-3H-シクロペンタ[a]フェナントレン-11-イルアラニルヒスチジネート。
35.
2020514410.tif 000039
(S)-1-(tert-ブチルアミノ)-3-((4-モルホリノ-1,2,5-チアジアゾル-3-イル)オキシ)プロパン-2-イルアラニルヒスチジネート。
36.
2020514410.tif 000040
イソプロピル(Z)-7-((1R,2R,3R,5S)-5-((アラニルヒスチジル)オキシ)-3-ヒドロキシ-2-((R,E)-3-ヒドロキシ-4-(3-(トリフルオロメチル)フェノキシ)ブタ-1-エン-1-イル)シクロペンチル)ヘプタ-5-エノエート。
37.
2020514410.tif 000041
イソプロピル(Z)-7-((1R,2R,3R,5S)-3-((アラニルヒスチジル)オキシ)-2-((E)-3,3-ジフルオロ-4-フェノキシブタ-1-エン-1-イル)-5-ヒドロキシシクロペンチル)ヘプタ-5-エノエート。
38.
2020514410.tif 000042
N-(((2R,3S,5R,6R)-5-アミノ-6-(((1R,2S,3S,4R,6S)-4,6-ジアミノ-3-(((2S,3R,4S,5S,6R)-4-アミノ-3,5-ジヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-2-ヒドロキシシクロヘキシル)オキシ)-3-ヒドロキシテトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)メチル)-2-(2-アミノプロパンアミド)-3-(1H-イミダゾル-5-イル)プロパンアミド。
39.
2020514410.tif 000043
3-(エチル(ピリジン-4-イルメチル)アミノ)-3-オキソ-2-フェニルプロピルアラニルヒスチジネート。
40.
2020514410.tif 000044
(1R,2R,E)-1-((2S,5S,11S,14S,17S,20S,23R,26S,29S,32S)-5-エチル-11,17,26,29-テトライソブチル-14,32-ジイソプロピル-1,7,10,16,20,23,25,28,31-ノナメチル-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-ウンデカオキソ-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-ウンデカアザシクロトリトリアコンタン-2-イル)-2-メチルヘキサ-4-エン-1-イルアラニルヒスチジネート。
41.
2020514410.tif 000045
(2-(4-(1-ヒドロキシ-4-(4-(ヒドロキシジフェニルメチル)ピペリジン-1-イル)ブチル)フェニル)-2-メチルプロパノイル)アラニルヒスチジン。
42.
2020514410.tif 000046
1-(4-(tert-ブチル)フェニル)-4-(4-(ヒドロキシジフェニルメチル)ピペリジン-1-イル)ブチルアラニルヒスチジネート。
43.
2020514410.tif 000047
2-(2-(4-((4-クロロフェニル)(フェニル)メチル)ピペラジン-1-イル)エトキシ)エチルアラニルヒスチジネート。
44.
2020514410.tif 000048
2-アミノ-N-(1-(4-(8-クロロ-5,6-ジヒドロ-11H-ベンゾ[5,6]シクロヘプタ[1,2-b]ピリジン-11-イリデン)ピペリジン-1-イル)-3-(1H-イミダゾル-5-イル)-1-オキソプロパン-2-イル)プロパンアミド。
45.
2020514410.tif 000049
Nα-アラニル-Nτ-(3-(2-((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16S,17R)-9-フルオロ-11,17-ジヒドロキシ-10,13,16-トリメチル-3-オキソ-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-ドデカヒドロ-3H-シクロペンタ[a]フェナントレン-17-イル)-2-オキソエトキシ)-3-オキソプロピル)ヒスチジン。
46.
2020514410.tif 000050
Na-アラニル-Nt-(3-(((1R,2R,3R,4S)-3-((Z)-7-(エチルアミノ)-7-オキソヘプタ-2-エン-1-イル)-4-ヒドロキシ-2-((S,E)-3-ヒドロキシ-5-フェニルペンタ-1-エン-1-イル)シクロペンチル)オキシ)-3-オキソプロピル)ヒスチジン。
47.
2020514410.tif 000051
Na-アラニル-Nt-(3-(2-((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)-9-フルオロ-11,17-ジヒドロキシ-10,13,16-トリメチル-3-オキソ-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-ドデカヒドロ-3H-シクロペンタ[a]フェナントレン-17-イル)-2-オキソエトキシ)-3-オキソプロピル)ヒスチジン。
48.
2020514410.tif 000052
Na-アラニル-Nt-(3-オキソ-3-(2-((6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル)メトキシ)エトキシ)プロピル)ヒスチジン。
49.
2020514410.tif 000053
Na-アラニル-Nt-(3-((1-(tert-ブチルアミノ)-3-((2-オキソ-1,2,3,4-テトラヒドロキノリン-5-イル)オキシ)プロパン-2-イル)オキシ)-3-オキソプロピル)ヒスチジン。
50.
2020514410.tif 000054
Nt-(3-(((6S,8S,9R,10S,11S,13S,14S,17R)-17-アセチル-9-フルオロ-17-ヒドロキシ-6,10,13-トリメチル-3-オキソ-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-ドデカヒドロ-3H-シクロペンタ[a]フェナントレン-11-イル)オキシ)-3-オキソプロピル)-Na-アラニルヒスチジン。
51.
2020514410.tif 000055
(Z)-2-((3R,4S,5S,8S,9S,10S,11R,13R,14S,16S)-16-アセトキシ-3-((3-(アラニル-Nt-ヒスチジノ)プロパノイル)オキシ)-11-ヒドロキシ-4,8,10,14-テトラメチルヘキサデカヒドロ-17H-シクロペンタ[a]フェナントレン-17-イリデン)-6-メチルヘプタ-5-エン酸。
52.
2020514410.tif 000056
Na-アラニル-Nt-(3-(((2R,3R,4R,5R)-2-(((1S,2S,3R,4S,6R)-4,6-ジアミノ-3-(((2R,3R,6S)-3-アミノ-6-((R)-1-アミノエチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-2-ヒドロキシシクロヘキシル)オキシ)-5-ヒドロキシ-5-メチル-4-(メチルアミノ)テトラヒドロ-2H-ピラン-3-イル)オキシ)-3-オキソプロピル)ヒスチジン。
53.
2020514410.tif 000057
Na-アラニル-Nt-(3-(((S)-1-(tert-ブチルアミノ)-3-((5-オキソ-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-1-イル)オキシ)プロパン-2-イル)オキシ)-3-オキソプロピル)ヒスチジン。
54.
2020514410.tif 000058
Na-アラニル-Np-(3-(3-(((1R,3s,5S)-8-メチル-8-アザビシクロ[3.2.1]オクタン-3-イル)オキシ)-3-オキソ-2-フェニルプロポキシ)-3-オキソプロピル)ヒスチジン。
55.
2020514410.tif 000059
Na-アラニル-Nt-(3-(((2S,3S,4R)-6-(((2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-11-(((2S,3R,4S,6R)-4-(ジメチルアミノ)-3-ヒドロキシ-6-メチルテトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-2-エチル-3,4,10-トリヒドロキシ-3,5,6,8,10,12,14-ヘプタメチル-15-オキソ-1-オキサ-6-アザシクロペンタデカン-13-イル)オキシ)-4-メトキシ-2,4-ジメチルテトラヒドロ-2H-ピラン-3-イル)オキシ)-3-オキソプロピル)ヒスチジン。
56.
2020514410.tif 000060
Na-アラニル-Nt-(3-((1-(4-(2-(シクロプロピルメトキシ)エチル)フェノキシ)-3-(イソプロピルアミノ)プロパン-2-イル)オキシ)-3-オキソプロピル)ヒスチジン。
57.
2020514410.tif 000061
Na-アラニル-Nt-(3-((2R,3R)-2-(2,2-ジクロロアセトアミド)-3-ヒドロキシ-3-(4-ニトロフェニル)プロポキシ)-3-オキソプロピル)ヒスチジン。
58.
2020514410.tif 000062
Na-アラニル-Nt-(3-((R)-3-ヒドロキシ-2-((6-オキソ-1,6-ジヒドロ-9H-プリン-9-イル)メトキシ)プロポキシ)-3-オキソプロピル)ヒスチジン。
59.
2020514410.tif 000063
Na-アラニル-Nt-(3-(2-(((1R,3s,5S)-8-メチル-8-アザビシクロ[3.2.1]オクタン-3-イル)オキシ)-2-オキソ-1-フェニルエトキシ)-3-オキソプロピル)ヒスチジン。
60.
2020514410.tif 000064
Na-アラニル-Nt-(3-(((1R,2R,3R,4S)-4-ヒドロキシ-2-((R)-3-ヒドロキシ-5-フェニルペンチル)-3-((Z)-7-イソプロポキシ-7-オキソヘプタ-2-エン-1-イル)シクロペンチル)オキシ)-3-オキソプロピル)ヒスチジン。
61.
2020514410.tif 000065
Na-アラニル-Nt-(3-(((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)-17-((クロロメトキシ)カルボニル)-17-((エトキシカルボニル)オキシ)-10,13-ジメチル-3-オキソ-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-ドデカヒドロ-3H-シクロペンタ[a]フェナントレン-11-イル)オキシ)-3-オキソプロピル)ヒスチジン。
62.
2020514410.tif 000066
Na-アラニル-Nt-(3-オキソ-3-(((8S,9S,10R,11S,13S,14S,16R,17S)-10,13,16,17-テトラメチル-3-オキソ-17-プロピオニル-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-ドデカヒドロ-3H-シクロペンタ[a]フェナントレン-11-イル)オキシ)プロピル)ヒスチジン。
63.
2020514410.tif 000067
Na-アラニル-Nt-(3-(((S)-1-(tert-ブチルアミノ)-3-((4-モルホリノ-1,2,5-チアジアゾル-3-イル)オキシ)プロパン-2-イル)オキシ)-3-オキソプロピル)ヒスチジン。
64.
2020514410.tif 000068
Na-アラニル-Nt-(3-(((1S,2R,3R,4R)-4-ヒドロキシ-3-((R,E)-3-ヒドロキシ-4-(3-(トリフルオロメチル)フェノキシ)ブタ-1-エン-1-イル)-2-((Z)-7-イソプロポキシ-7-オキソヘプタ-2-エン-1-イル)シクロペンチル)オキシ)-3-オキソプロピル)ヒスチジン。
65.
2020514410.tif 000069
Na-アラニル-Nt-(3-(((1R,2R,3R,4S)-2-((E)-3,3-ジフルオロ-4-フェノキシブタ-1-エン-1-イル)-4-ヒドロキシ-3-((Z)-7-イソプロポキシ-7-オキソヘプタ-2-エン-1-イル)シクロペンチル)オキシ)-3-オキソプロピル)ヒスチジン。
66.
2020514410.tif 000070
Na-アラニル-Nt-(3-(((2R,3S,4S,5R,6S)-4-アミノ-6-(((1S,2S,3R,4S,6R)-4,6-ジアミノ-3-(((2S,3R,5S,6S)-3,6-ジアミノ-5-ヒドロキシテトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-2-ヒドロキシシクロヘキシル)オキシ)-3,5-ジヒドロキシテトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)メトキシ)-3-オキソプロピル)ヒスチジン。
67.
2020514410.tif 000071
Na-アラニル-Nt-(3-(3-(エチル(ピリジン-4-イルメチル)アミノ)-3-オキソ-2-フェニルプロポキシ)-3-オキソプロピル)ヒスチジン。
68.
2020514410.tif 000072
Na-アラニル-Nt-(3-(((1R,2R,E)-1-((2S,5S,11S,14S,17S,20S,23R,26S,29S,32S)-5-エチル-11,17,26,29-テトライソブチル-14,32-ジイソプロピル-1,7,10,16,20,23,25,28,31-ノナメチル-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-ウンデカオキソ-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-ウンデカアザシクロトリトリアコンタン-2-イル)-2-メチルヘキサ-4-エン-1-イル)オキシ)-3-オキソプロピル)ヒスチジン。
69.
2020514410.tif 000073
2-(4-(1-((3-(アラニル-Nt-ヒスチジノ)プロパノイル)オキシ)-4-(4-(ヒドロキシジフェニルメチル)ピペリジン-1-イル)ブチル)フェニル)-2-メチルプロパン酸。
70.
2020514410.tif 000074
Na-アラニル-Nt-(3-(1-(4-(tert-ブチル)フェニル)-4-(4-(ヒドロキシジフェニルメチル)ピペリジン-1-イル)ブタオキシ)-3-オキソプロピル)ヒスチジン。
71.
2020514410.tif 000075
Na-アラニル-Nt-(3-(2-(2-(4-((4-クロロフェニル)(フェニル)メチル)ピペラジン-1-イル)エトキシ)エトキシ)-3-オキソプロピル)ヒスチジン。
【００７５】
代替では、ペプチドはタンパク質治療用物質またはタンパク質薬物をコードするヌクレオチド分子に結合されていてもよい。本発明の実施において用い得るタンパク質薬物および核酸分子の例には、以下の表に挙げるSEQ ID NOを有するものが含まれるが、それらに限定されない。
【００７６】
【表１】
2020514410.tif 000076
2020514410.tif 000077
2020514410.tif 000078
2020514410.tif 000079
2020514410.tif 000080
【００７７】
1つの態様において、治療用物質は、ウイルス複製を阻害するアンチセンスオリゴヌクレオチドである。別の態様において、アンチセンスオリゴヌクレオチドはサイトメガロウイルス（CMV）複製を阻害する。サイトメガロウイルスの処置のために有用なアンチセンスオリゴヌクレオチドは、Henry et al., (2001)に開示されている。
【００７８】
治療用物質がヌクレオチド分子である場合、当技術分野において公知のとおり、プラスミド、コスミド、人工染色体、および改変ウイルスを含むベクターに含まれてもよい。例えば、Current Protocols in Molecular Biology (eds. Ausubel et al., Wiley, 2004 edition)およびMolecular Cloning: A Laboratory Manual (Sambrook and Russell (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001, third edition)を参照されたい。
【００７９】
1つの態様において、治療用物質は抗体である。別の態様において、抗体はベバシズマブ（アバスチン(商標)）またはラニビズマブ（ルセンティス(商標)）である。別の態様において、眼障害は黄斑変性症である。
【００８０】
ナノ粒子組成物は、抗体などのターゲティング物質をさらに含んでもよい。抗体なる用語は、抗原結合領域を有する任意の抗体様分子を意味し、Fab'、Fab、F(ab')2、シングルドメイン抗体（DAB）、Fv、scFv（単鎖Fv）などの抗体断片を含む。様々な抗体に基づく作成物および断片を調製および使用するための技術は、当技術分野において周知である。抗体を調製して特徴決定するための手段も当技術分野において周知である（例えば、Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, 1988参照）。眼に有用であると考えられる抗体ターゲティング物質には、成長因子（例えば、VEGFおよびPDGF）、成長因子受容体（例えば、VEGFおよびPDGF）、炎症メディエーターの受容体、およびインテグリン受容体が含まれる。
【００８１】
モノクローナル抗体（MAb）は、ある特定の利点、例えば、再現性および大規模生産を有すると認識されている。抗体は、ヒト、マウス、サル、ラット、ハムスター、ウサギ、およびニワトリ由来であり得る。
【００８２】
マウス、ラット、または他の種由来のキメラ抗体と同様に、ヒト定常および/または可変部ドメイン、二重特異性抗体、組換えおよび遺伝子操作抗体、ならびにそれらの断片を有する、ヒト化抗体も企図される。患者の疾患に対して「オーダーメード」された抗体の開発方法も同様に公知であり、そのようなオーダーメード抗体も企図される。
【００８３】
抗体は、必要に応じて、ろ過、遠心分離、およびHPLCまたはアフィニティクロマトグラフィなどの様々なクロマトグラフィ法を用いて、さらに精製してもよい。抗体の断片は、ペプシンもしくはパパインなどの酵素による消化を含む方法により、および/または化学的還元によるジスルフィド結合の切断により産生される抗体から得ることができる。または、本発明に含まれる抗体断片は、自動ペプチド合成機を用いて、または大腸菌中の全長遺伝子もしくは遺伝子断片の発現により合成することができる。
【００８４】
分子クローニングアプローチを、モノクローナル抗体を生成するために用いてもよい。1つの態様において、コンビナトリアル免疫グロブリンファージミドライブラリを、免疫動物の脾臓から単離されたRNAから調製し、適切な抗体を発現するファージミドを、抗原を発現する細胞および対照細胞を用いてパニングすることにより選択する。従来のハイブリドーマ技術に比べ、このアプローチの利点は、より多くの抗体を1ラウンドで産生およびスクリーニングできること、ならびにH鎖とL鎖との組み合わせによって新しい特異性が生じることで、これにより適切な抗体を発見する可能性がさらに高まる。
【００８５】
ペプチド-治療用物質結合体は、図3に例示する固相合成の方法によって作製されてもよい。
【００８６】
ナノ粒子組成物は、眼科用の薬学的に許容される担体と共に調合してもよい。特定の担体には、還元型グルタチオン、ビタミンA、ビタミンEなどの任意の成分と共に、食塩水、緩衝化食塩水が含まれる。米国特許第6,194,457号参照。
【００８７】
前記組成物は、眼への接触を達成する任意の手段によって投与してもよい。いくつかの態様において、組成物は、硝子体内注射、点眼剤などによって投与する。硝子体内のナノ粒子組成物の位置は、検眼鏡検査によって決定してもよい。
【００８８】
1つの態様において、ナノ粒子組成物を光に曝露する。1つの態様において、方法は、エネルギーを放出するように量子ドットを誘導するのに十分な光にナノ粒子を曝露する段階であって、エネルギーが連結を切断し、かつ治療用物質が遊離される、段階をさらに含む。別の態様において、光の波長は600〜2000nmの範囲である。別の態様において、光の波長は700〜1200nmの範囲である。別の態様において、光の波長は750〜1100nmの範囲である。さらなる態様において、レーザーがナノ粒子に光を提供する。
【００８９】
本発明は、（a）それを必要としている対象の眼に治療用ナノ粒子組成物の有効量を硝子体内投与する段階であって、治療用ナノ粒子組成物が、（i）ナノ構造の少なくとも1つの集合体と、（ii）ナノ構造の少なくとも1つの集合体に結合した少なくとも1つのペプチドとを含む、段階を含む、眼障害を処置する方法を提供する。眼内の場合、ナノ構造は、光に曝露され、それにより眼を電気刺激して眼障害を処置する。
【００９０】
表面に結合したペプチドを含む治療用ナン粒子組成物は、硝子体内手段によって投与する薬物と比較してより長い滞留時間を有することが発見された。したがって、ナノ粒子組成物は眼内でのはるかに長い半減期、例えば、5〜15日を有する。別の態様において、半減期は7〜9日である。
【００９１】
治療用ナノ粒子組成物は、眼に電気刺激を提供し、かつ、電気刺激によって処置可能ないくつかの障害を処置するのに有用である。そのような障害の例には、非動脈炎性前部虚血性視神経症、多発性硬化症、およびCIS（ウェブサイトwillseye.org/transcorneal-electrical-stimulation-tes参照）に；網膜色素変性症（Adam et al., Exp. Eye Res. 149:75-83 (2016)参照）に；長期網膜動脈閉塞（Inomata et al., Clin. Invest. 245:1773-80 (2007)参照）に；神経病患者における視神経の部分的萎縮（Shandurina et al., Neurosci. Behav. Physiol. 26:137 (1996)参照）に；線維筋痛症（Hargrove et al., Pain Med. 13:115-124 (2012)参照）に；光誘発性光受容体変性症（Ying-qin Ni et al., Exp. Neurol. 219:439-52 (2009)参照）に；進行性近視（Okovitov, Vestn Oftalmol. 113:24-6 (1997)参照）に；弱視（S.B. Slobodyanik and V.S. Ponomarchuk, ''Electrical stimu-lation of the visual pathway based on phosphen phenomenon in amblyopia therapy,'' XI Congress of the European Society of Ophthalmology (Hungary, Budapest, June 1-5, 1997), Budapest (1997), p. 193参照）に；ならびに急性眼高血圧関連損傷（ウェブサイトhub.hku.hk/handle/10722/207462のFu et al.参照）に起因する視力喪失が含まれる。
【００９２】
治療用ナノ粒子組成物はまた、血流および代謝を高めることにより、循環の増大を提供して最適な眼機能を回復させる。治療用ナノ粒子組成物はまた、血管透過性を高めてより正常な細胞電位を達成し、ATPレベルを高め、かつ正常な細胞代謝を回復させる。加えて、治療用ナノ粒子組成物は、網膜の小血管に治癒効果を有し、網膜細胞への栄養素のより効率的な送達と網膜上に蓄積し得るタンパク質のより効率的な取り込みを提供し、したがって、目の細胞を若返らせる（米国特許第6,275,735号参照）。
【００９３】
治療用ナノ粒子組成物を、脳卒中患者における一側性無視症候群のリハビリテーションのために用いてもよい（Yang et al., Frontiers in Human Neurosci. 7:187 (2013)参照）。別の態様において、治療用ナノ粒子組成物を、網膜の変性の処置のために用いてもよい。別の態様において、非動脈炎性前部虚血性視神経症に、多発性硬化症に、CISに、網膜色素変性症に、長期網膜動脈閉塞に、神経病患者における視神経の部分的萎縮に、線維筋痛に、光誘発性光受容体変性症に、進行性近視に、弱視に、および急性眼高血圧関連損傷に起因する視力喪失の処置のため、ならびに脳卒中患者における半側無視症候群のリハビリテーションのために、治療用ナノ粒子組成物を用いてもよい。別の態様において、緑内障に、虚血性神経症に、または網膜血管閉塞に起因する視力喪失の処置のために、治療用ナノ粒子組成物を用いてもよい。別の態様において、開放隅角緑内障、閉塞隅角緑内障、無虹彩性緑内障、先天性緑内障、若年性緑内障、水晶体原性緑内障、血管新生緑内障、外傷後緑内障、ステロイド緑内障、スタージ・ウェーバー症候群緑内障、およびブドウ膜炎誘発緑内障を含む緑内障の処置のために、治療用ナノ粒子組成物を用いてもよい。
【００９４】
また、ナノ粒子の生物学的眼環境を利用するように物理的/化学的性質を適合させて、眼の異なる解剖学的領域における治療用物質の接触時間を増やす方法も提供する。この態様において、異なるサイズおよび組成のナノ粒子を、眼の異なる解剖学的領域に投与し、眼内の滞留時間を測定する。例えば、ナノ粒子組成物を、水晶体のすぐ外側の硝子体、硝子体の中心、網膜の上、結膜下腔、網膜下腔、または視神経の上への注入によって投与し、滞留時間を測定して、特定の場所に注入した場合にどの組成物が最も長い滞留時間を有するかを判定してもよい。
【実施例】
【００９５】
硝子体内投与は、黄斑変性症（Kuppermann et al., 2007）、糖尿病網膜症（Martidis et al., 2002）、またはウイルス感染症（Henry et al., 2001）などの疾患の処置のために、薬物を含む作用物質を後眼房中に送達する有効な方法であった。ほとんどの場合、作用物質は、部分的には硝子体および網膜からのクリアランスのためまたは酵素による不活化のために、定期的に投与しなければならない。したがって、硝子体もしくは網膜からのクリアランスが遅いかまたはこれらの組織における滞留が長い化合物は、投与回数が少ないという利点を有する。この実験では、ウサギの眼への硝子体内注射後に、SeeQ Cd/Se 655 Alt（重量比が約8：1のジペプチドHis-LeuおよびGly-Hisでコーティングした6.5nm量子ドット；ThermoFisher Scientificから入手）のクリアランスと、硝子体および網膜におけるその持続時間を評価した。
【００９６】
方法
体重2〜2.5kgのニュージーランドホワイトウサギを試験で用いた。ウサギを、50mg/kgのケタミンおよび10mg/kgキシラジンの筋肉内注射で麻酔した。眼をプロパラカイン（0.5％）で局所麻酔し、眼表面を注射前にポビドンヨード0.5％で洗浄した。眼球の上四分円の角膜輪部から2〜3mmで硝子体内注射を行った。12羽のウサギに、0.5mlのツベルクリンシリンジを用いて、両眼に40μlのSeeQ Cd/Se 655 Alt（4.2μM水溶液、pH8）を単回注射した。硝子体および網膜試料を、注射後0、4時間、1、3、7、および14日の時点で採取した。1時点ごとに2羽のウサギ（眼4個）を使用した。倒像検眼鏡およびスリットランプを用いて、眼の炎症および毒性を日常的に検査した。ウサギを屠殺する前に、硝子体内の薬物の局所性も倒像検眼鏡で評価した。ウサギをケタミンおよびキシラジンの静脈内注射で安楽死させ、眼球を摘出した。注射を行わなかった動物をブランク対照とした。硝子体および網膜試料をあらかじめ秤量したチューブに採取し、秤量し、そして、分析するまで凍結した。網膜および硝子体内のSeeQ Cd/Se 655 Alt濃度を蛍光（励起410および発光660）測定によって決定した。試料を調製し、希釈し、値を40、30、20、10、5、4、3、2、1、および0.5nMの濃度による外部標準曲線から測定した。検出限界および定量限界はそれぞれ0.1nMおよび0.5nMであった。
【００９７】
結果
2週間の期間中の目の検査は、炎症または薬物のいかなる毒性効果も示さなかった。倒像検眼鏡およびスリットランプを用いた後眼部の検査は、硝子体内の治療剤の存在を示した。時間0では治療剤は注射部位に位置した。注射の4時間後、薬物は、硝子体液の大部分に分布し、網膜に向かって移動した。実験期間（1〜14日）の残りの期間中、硝子体内の橙色によって見られるように、薬物の存在が明らかであった。
【００９８】
SeeQ Cd/Se 655 Altのクリアランス
硝子体液中のSeeQ Cd/Se 655 Altの濃度を図1に示す。最高濃度は、注射後の最初の3日間平均80.9±10.7nMで一定であり、この期間中クリアランスがほとんどないことを示していた。第7日および第14日の後、硝子体濃度はそれぞれ56.4nM（25％）および25.6nM（67％）に低下した。硝子体からのクリアランスの半減期は9日であった。これは一次プロセスに従っていると考えられる。
【００９９】
網膜では、薬物は最初の3日間で増大して1日で最大に達し、3日後に高いままであった。第7日および第14日の後、網膜濃度はそれぞれ0.152 nモル/g（47％）および0.0399 nモル/g（88％）に低下した。網膜からのクリアランスの半減期は7.5日であった。網膜からのクリアランス速度も硝子体と同様であった。
【０１００】
考察
薬物の水晶体内注射は、後眼部への薬物標的送達の非常に有効な方法である。この実験では、水晶体および網膜におけるSeeQ Cd/Se 655 Altの分布およびクリアランスを示した。単回の水晶体内注射の後、SeeQ Cd/Se 655 Altは、これらの組織からゆっくり排出され、半減期が網膜において7.5日および水晶体において9日であった。水晶体と網膜との間に生じた濃度勾配により注射後3日の時点で網膜がCmaxに達することができた。
【０１０１】
水晶体内投与した材料のクリアランス速度は、材料の物理化学的性質に依存する。これらの性質には、材料の親油性、分子サイズ、構造、および表面電荷が含まれる。加えて、薬物の滞留およびクリアランスに影響を与え得る、能動輸送メカニズム、酵素分解もある。例えば、溶液形態の小分子デキサメタゾンは速やかに消失する（半減期3日）（Berthe et al., 1992）。一方、持続放出形態（乳酸-グリコール酸共重合体に埋め込まれた）で調製した場合、1ヶ月を超えて一定濃度を維持した（Chang-Lin et al., 2011）。この場合、網膜にはるかに高い濃度が蓄積された。デキサメタゾン溶液とは異なり、トリアムシノロンアセトニドの懸濁液は、異なるクリアランス特性を有していた（Kim et al., 2006）。トリアムシノロンアセトニドの半減期は4mgの場合は24日、16mgの場合は39日であり、投与した2用量の場合は最大4〜6ヶ月間持続した（Kim et al., 2006）。トリアムシノロンのこの長い持続期間は、化合物の非常に低い溶解性に起因し、したがって、溶解速度が網膜中の定常状態濃度に寄与している。親水性抗ウイルス剤のホスカルネットなどの他の小分子は12時間の半減期を有する（Kwak et al., 1994）。黄斑浮腫の処置に使用される抗体、アバスチン(商標)のような大きいタンパク質分子は、6日という短い半減期を有したが、30日よりも長い間検出され得る（Sinapis et al., 2011）。この試験はまた、未処置の反対側の眼においてベバシズマブが見られたように、アバスチン(商標)が全身送達されることを示した。
【０１０２】
この実験では、SeeQ Cd/Se 655 Alt（168 pモル/眼）を水溶液中で調製した。網膜および水晶体において、半減期はそれぞれ7.5日および9日であった。これらの値は、デキサメタゾンナトリウムの水溶液について報告された値よりも2.5〜3倍長い。材料のバイオアベイラビリティは、作用部位に存在する濃度に依存する。現在、ウサギの水晶体におけるSeeQ Cd/Se 655 Altの物理化学的性質は不明である。しかし、2週間の終わりに網膜よりも水晶体で高い薬物濃度が見られたという知見は、水晶体が徐放性製剤として作用し得ることを示唆している。
【０１０３】
参照文献
2020514410.tif 000081
2020514410.tif 000082
【０１０４】
ここで本発明を十分に説明したが、当業者であれば、本発明またはその任意の態様の範囲に影響を与えることなく、条件、製剤、および他のパラメータの広範かつ等価の範囲内でこれを実施し得ることを理解するであろう。
【０１０５】
本発明の他の態様は、本明細書において開示する本発明の明細および実施を考慮すれば、当業者には明らかであろう。本明細書および実施例は、例示にすぎないと考えられ、本発明の真の範囲および精神は添付の特許請求の範囲によって示されることが意図される。本明細書において引用されたすべての特許、特許出願、および刊行物は、参照により完全に本明細書に組み入れられる。
【図１】
2020514410.tif 000085
【図２】
2020514410.tif 000086
【図３Ａ】
2020514410.tif 000087
【図３Ｂ】
2020514410.tif 000088
【図４】
2020514410.tif 000089
【配列表】
2020514410000001.app
【国際調査報告】
2020514410.tif 000090
2020514410.tif 000091
2020514410.tif 000092
2020514410.tif 000093
2020514410.tif 000094