(57)【要約】  第一級若しくは第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性薬剤を送達するための薬物送達システム、その薬学的に許容できる塩、それに関連する薬物送達試薬、この薬物送達システムを含む医薬組成物、及び持続放出治療薬としての薬物送達システムの使用が本明細書に記載される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）によって表されるＤ−Ｒ（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分であり；
Ｒが、生物学的活性部分Ｄの放出に好適なリンカーであり：
【化１】
2020517623.tif 000248
ここで、破線が、前記第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子への結合を示し；
Ｒ１が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１ａが、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１Ｒ１ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｒ２が、独立して、それぞれ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル又はオキソから選択され、又は２つのＲ２基が、それらが結合される炭素原子と組み合わされて、縮合Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル又はスピロＣ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイル基を形成し；
ａが、０、１、２、３又は４であり；
Ｒ３が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ３ａが、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ３Ｒ３ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｙが、Ｃ（Ｏ）Ｒ４、Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６、ＳｉＲ５Ｒ６Ｒ７、又はＣＲ１２Ｒ１２ａＯＲ１３であり；
Ｒ１２が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１２ａが、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１２Ｒ１２ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｒ１３が、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであるか；又は
Ｒ１２及びＲ１３が、Ｃ（Ｒ１２ａ）及びＯと組み合わされて、５、６、又は７員環状エーテルを形成し；
Ｒ４が、Ｃ１〜Ｃ８アルキル又はＣ３〜Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１〜Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシで任意選択的に置換され；
Ｒ５及びＲ６がそれぞれ、独立して、Ｃ１〜Ｃ４アルキル及びＣ３〜Ｃ６シクロアルキルから選択され；
Ｒ７が、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルオキシ、ヘテロシクロアルキルオキシ、又は−（ＯＣＨＲ３ＣＨ２）ｂＯ−Ｃ１〜Ｃ４アルキルであり、ここで、前記ヘテロシクロアルキルオキシが、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つの環ヘテロ原子を有し、且つ０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１〜Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換される４〜７員飽和複素環であり；
ｂが、１〜１０の整数であり；
Ｚが、ＣＨ−Ｌ−Ａ、ＣＨ−Ａ、Ｎ−Ｌ−Ａ、又はＮ−Ａであり；
Ｌが、任意選択的に置換される二価リンカーであり；
Ａが、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜Ｃ８アルキル、Ｒ１０、又はＲ１１であり、ここで、前記アルキル基が、０又は１つのＲ１０で任意選択的に置換され；
Ｒ１０が、式（Ｉ）を担体に結合するのに好適な反応性官能基であり；
Ｒ１１が担体である）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩。
【請求項２】
Ｄが、タンパク質、ペプチド、ポリペプチド、核酸、オリゴヌクレオチド若しくはポリヌクレオチド、炭水化物、オリゴ糖若しくは多糖、又は小分子を含み、これらのそれぞれが、少なくとも１つの第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含み、前記小分子が、１００ｇ／ｍｏｌ〜約２０００ｇ／ｍｏｌの分子量を有する、請求項１に記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
【請求項３】
Ｄが、タンパク質、ペプチド、核酸、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、モノクローナル抗体、又は小分子を含む、請求項１又は２に記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
【請求項４】
Ｄが、ブロルシズマブ（配列番号４）、Ｄ２（配列番号５）、Ｄ３（配列番号６）、Ｄ４（配列番号７）、アブシキシマブ、アダリムマブ、アフリベルセプト、アレムツズマブ、バシリキシマブ、ベリムマブ、ベバシズマブ、ブレンツキシマブ、カナキヌマブ、セルトリズマブ、セツキシマブ、ダクリズマブ、ダラツムマブ、デノスマブ、エクリズマブ、エファリズマブ、ゴリムマブ、イブリツモマブ、インフリキシマブ、イピリムマブ、ランパリズマブ、ムロモナブ−ＣＤ３、ナタリズマブ、ニボルマブ、オファツムマブ、オマリズマブ、パリビズマブ、パニツムマブ、ペグプレラニブ、ペムブロリズマブ、ラニビズマブ、リツキシマブ、トシリズマブ、トシツモマブ、トラスツズマブ、ウステキヌマブ、若しくはベドリズマブ、又はそれらの組合せを含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
【請求項５】
Ｄが、Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）、心房性ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ）、エキセンジン−４、インスリン、副腎皮質刺激ホルモン、アドレノメデュリン、アドロピン、ω−アガトキシン、アグーチ関連タンパク質、アンジオテンシン、アペリン１２、アペリン１３、アペリン３６、若しくはその誘導体、ブラジキニン、カルシトニン、コカイン・アンフェタミン調節転写産物（ＣＡＲＴ）、コルチコトロピン放出因子（ＣＲＦ）、α−ディフェンシン、β−ディフェンシン、デルタ睡眠誘発ペプチド（ＤＳＩＰ）、エラスターゼ特異的阻害剤（Ｅｌａｆｉｎ）、エンドキニン、エンドモルフィン、エンドルフィン、エンドセリン、エキセンジン、フィブロネクチン活性フラグメント、ガラニン、ガラニン様ペプチド、大ガストリン、ガストリンＩ、ガストリン関連ペプチド、消化管抑制ポリペプチド、ガストリン放出ペプチド、グレリン、ｄｅｓ−アシルグレリン、グルカゴン、グルカゴン様ペプチド、成長ホルモン放出因子、グラモストラ・スパチュラタ（Ｇｒａｍｍｏｓｔｏｌａ  ｓｐａｔｕｌａｔａ）ＧｓＭＴｘ−４、グアンシィトキシン（ｇｕａｎｇｘｉｔｏｘｉｎ）−１Ｅ、グアニリン、ヘプシジン１、ヘプシジン／ＬＥＡＰ−１、ヒスタチン５、ヒト成長ホルモン、ヒューマニン、フエントキシン、イベリオトキシン、インペラトキシンＡ、インスリン様成長因子、インテルメジン、ＩＲＬ  １６２０、連結ペプチド、カリオトキシン、キスペプチン、クルトキシン、リポトロピン、リポトロピン、肝細胞増殖因子、肝臓由来抗菌ペプチド２、黄体形成ホルモン放出ホルモン、ライセニン、ＬＬ−３７、マルガトキシン、マストパラン、肥満細胞脱顆粒ペプチド、メラニン凝集ホルモン、メラノサイト刺激ホルモン、ＭＳＨ放出抑制因子、ミッドカイン、軟体動物心臓興奮性神経ペプチド、モルフィン耐性ペプチド、モチリン、ムスカリン毒素、神経内分泌調節ペプチド−２、ニューロキニンＡ、ニューロキニンＢ、ニューロメジン、ニューロスタチン−１３、神経ペプチド、ニューロテンシン、神経毒ＮＳＴＸ−３、ノシスタチン、ノシセプチン、オベスタチン、オピオイドペプチド（エンケファリン、エンドルフィン、ＢＡＭ−１２Ｐ、カソモルフィン、ダイノルフィン、エンドモルフィン、ネオエンドルフィン、ノシセプチン）、オレキシン−Ａ／−Ｂ、オルファニン、オステオカルシン、オキシトシン、パンクレアスタチン、副甲状腺ホルモン、副甲状腺ホルモン関連タンパク質、ペプチド２３４、ペプチドヒスチジン−メチオニン、ペプチドＴ、ペプチドＹＹ、フィサラミン、下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ポリペプチド、血小板第４因子、プレクタシン、プレイオトロフィン、プロアドレノメデュリン、プロラクチン放出ペプチド、プサルモトキシン１、プロトキシン−１、ピログルタミン化ＲＦアミドペプチド、レニン、ＲＦアミド関連ペプチド−１、ＲＦアミド関連ペプチド−３、サルシン−α／β、サラフォトキシン、統合失調症関連ペプチド、シラトキシン、セクレチン、セレラキシン、血清胸腺因子、ナトリウムカリウムＡＴＰａｓｅ阻害剤−１、ソマトスタチン、スティコダクチラ（ｓｔｉｃｈｏｄａｃｔｙｌａ）毒素、サブスタンスＫ、ストレスコピン、ストレスコピン関���ペプチド、サブスタンスＰ、タキキニン、タランチュラＳＮＸ−４８２、タランチュラＰｒｏＴｘ−Ｉ、タランチュラＰｒｏＴｘ−ＩＩ、テルチアピン、チチュストキシンＫａ、サイロトロピン放出ホルモン、タフトシン、ウログアニリン、ウログアニリン異性体Ａ又はＢ、ウロコルチン、ウロコルチンＩＩ、ウロテンシンＩＩ、ウロテンシンＩＩ関連ペプチド、血管作動性腸管ペプチド、バソプレシン、バソトシン、ウイルス複製阻害ペプチド、キセニン、又はそれらの組合せを含むがこれらに限定されない１つ以上の生物学的活性ペプチドを含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
【請求項６】
Ｄが、約１００ｇ／ｍｏｌ〜約２０００ｇ／ｍｏｌ以下の分子量を有し、第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を介してＲに結合される小分子である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
前記小分子が、５−（５，６，７，８−テトラヒドロ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルオキシ）−インドール−１−カルボン酸［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−アミド；５−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［３，４ｄ］ピリミジン−４−イルオキシ）−インドール−１−カルボン酸［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−アミド；Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド；（Ｓ）−５−（６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルオキシ）−Ｎ−（５−（１−メチルシクロプロピル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド、又はそれらの組合せを含む、請求項６に記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
【請求項８】
Ｒ１が、水素又はメチルであり、Ｒ１ａが、水素又はメチルであるか、又はＣＲ１Ｒ１ａが、組み合わされて、シクロプロパン−１，１−ジイル基を形成する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
【請求項９】
変数ａが０である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
【請求項１０】
Ｒ３及びＲ３ａがそれぞれ水素である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
【請求項１１】
Ｙが、Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４が、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル又はＣ１〜Ｃ２アルコキシＣ１〜Ｃ２アルキルである、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
【請求項１２】
Ｒ４が、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、１−メチル−シクロプロピル、又はメトキシメチルである、請求項１１に記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
【請求項１３】
ＹがＳｉＲ５Ｒ６Ｒ７であり；
Ｒ５及びＲ６がそれぞれ、メチル、エチル、プロピル又はイソプロピルであり；
Ｒ７が、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソ−ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、２−エトキシエトキシ、２−イソプロポキシ−エトキシ、テトラヒドロピラニルオキシ、又は−（ＯＣＨＲ３ＣＨ２）ｂＯ−Ｃ１〜Ｃ４アルキルであり、ここで、ｂが、２、３、又は４である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
【請求項１４】
Ｚが、ＣＨ−Ｌ−Ａ、ＣＨ−Ａ、Ｎ−Ｌ−Ａ、又はＮ−Ａであり；
Ｌが、任意選択的に置換される二価リンカーＱ−［Ｓｐ−Ｑ］ｈ−Ｑであり；
Ｑが、独立して、それぞれ、結合、Ｏ、Ｃ（Ｏ）、Ｎ（Ｈ）、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｃ（Ｏ）ＮＨ、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｏ、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）２、Ｎ（Ｈ）Ｓ（Ｏ）２、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）Ｓ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｈ）、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｃ１〜Ｃ２アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ２アルキル、Ｃ１〜Ｃ２アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ２アルキル、１，２，３−トリアゾール、ＯＰ（Ｏ）２、Ｐ（Ｏ）２Ｏ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル−Ｐ（Ｏ）２−Ｏ、又はＯ−Ｐ（Ｏ）２−Ｃ１−４アルキルから選択され；
Ｓｐが、独立して、それぞれ、任意選択的に置換されるＣ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、［Ｗ−Ｏ］ｇ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル−［Ｏ−Ｗ］ｇ、［Ｏ−Ｗ］ｇ−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８Ｃアルキル−［Ｏ−Ｗ］ｇ−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、又はオリゴペプチドから選択され；
ｈが、１〜２０の整数であり；
ｇが、約２〜約５０の加重平均数であり；
Ｗが、Ｃ２〜Ｃ４アルキル−１，２−ジイルであり、ここで、水素、メチル、又はエチル側鎖が、いずれかの骨格炭素原子上に存在してもよく；
Ａが、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｒ１０、又はＲ１１であり、ここで、前記アルキル基が、０又は１つのＲ１０で任意選択的に置換され；
Ｒ１０が、式（Ｉ）を担体に結合するのに好適な反応性官能基であり；
Ｒ１１が担体である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
【請求項１５】
Ｚが、ＣＨＲ８又はＮＲ９であり；
Ｒ８及びＲ９がそれぞれ、独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ−Ｑ−Ａ、Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、又は−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑ［Ｏ−Ｗ］ｇ（ＮＨＣ（Ｏ））ｍ（ＣＨ２）ｑ［Ｏ−Ｗ］ｐ−Ｑ−Ａから選択され、ここで、前記アルキル基は、０又は１つのＱ−Ａで任意選択的に置換され；
ｑが、独立して、それぞれ、１、２、又は３であり；
ｇ及びｐがそれぞれ、独立して、約２〜約５０の加重平均長さを有し；
ｍが、１又は０であり；
Ｗが、Ｃ２〜Ｃ４アルキル−１，２−ジイルであり、ここで、水素、メチル、又はエチル側鎖が、いずれかの骨格炭素原子上に存在してもよく；
Ｑが、結合、Ｏ、Ｎ（Ｈ）又はＮ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）であり；
Ａが、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜Ｃ８アルキル、Ｒ１０、又はＲ１１であり、ここで、前記アルキル基が、０又は１つのＲ１０で任意選択的に置換され；
Ｒ１０が、式（Ｉ）を担体に結合するのに好適な反応性官能基であり；
Ｒ１１が担体である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
【請求項１６】
ＺがＮＲ９であり；
Ｒ９が、Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ−Ｑ−Ａ又は−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑ［Ｏ−Ｗ］ｇ（ＮＨＣ（Ｏ））ｍ（ＣＨ２）ｑ［Ｏ−Ｗ］ｐ−Ｑ−Ａであり；
ｎが、１〜８の整数であり；
Ａが、Ｒ１０又はＲ１１である、請求項１５に記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
【請求項１７】
Ｒ１０が、アジジル、アルキニル、置換若しくは非置換Ｃ７〜Ｃ１２シクロアルキニル、置換若しくは非置換Ｃ７〜Ｃ１２ヘテロシクロアルキニル、置換若しくは非置換Ｃ７〜Ｃ１２シクロアルケニル、ノルボルニル、置換若しくは非置換ビニルカルボキシル、置換若しくは非置換ビニルスルホニル、置換若しくは非置換Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、アミノ、チオール、置換若しくは非置換Ｃ１〜Ｃ８カルボキシル、置換若しくは非置換Ｃ１〜Ｃ８カルボニル、−Ｏ−ＮＨ２、ヒドラジジル、マレイミド、α−ハロカルボニル、フラン、置換若しくは非置換テトラジニル、リジン、グルタミン、シクロデキストリン、又はアダマンタニルである、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
【請求項１８】
Ｒ１０が、式（Ｉ）の前記薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩を担体に結合するのに好適な反応性官能基を含む、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
【請求項１９】
Ｒ１１が生分解性である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
【請求項２０】
Ｒ１１が、ポリマー又は架橋ポリマーを含む、請求項１〜１６又は１９のいずれか一項に記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
【請求項２１】
Ｒ１１が、１つ以上の架橋ポリマーを含むヒドロゲルを含む、請求項１９又は２０に記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
【請求項２２】
Ｒ１１が、ポリマー、架橋ポリマー、又はヒアルロン酸、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリエチレンオキシド、プロピレンオキシド、ポリグルタメート、ポリリジン、ポリシアル酸、ポリビニルアルコール、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリアクリルアミド、ポリメタクリルアミド、ポリビニルピロリドン、ポリオキサゾリン、ポリイミノカーボネート、ポリアミノ酸、親水性ポリエステル、ポリアミド、ポリウレタン、ポリ尿素、デキストラン、アガロース、キシラン、マンナン、カラギーナン、アルギネート、ゼラチン、コラーゲン、アルブミン、セルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルデンプン、キトサン、核酸、それらの誘導体、それらのコポリマー、又はそれらの組合せのうちの１つ以上を含むヒドロゲルを含む、請求項１〜１６及び１９〜２１のいずれか一項に記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
【請求項２３】
Ｒ１１が、ヒアルロン酸、ポリエチレングリコール、ヒアルロン酸の架橋ヒドロゲル、ポリエチレングリコールの架橋ヒドロゲル、又はそれらの組合せを含む、請求項１〜１６及び１９〜２２のいずれか一項に記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
【請求項２４】
Ｒ１１が、ヒアルロン酸又はポリエチレングリコールを含む、請求項１〜１６及び１９〜２３のいずれか一項に記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
【請求項２５】
Ｒ１１が、架橋ヒアルロン酸又は架橋ポリエチレングリコールを含むヒドロゲルを含む、請求項１〜１６及び１９〜２３のいずれか一項に記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
【請求項２６】
前記ヒアルロン酸又はポリエチレングリコールが、アジジル、アルキニル、置換若しくは非置換Ｃ７〜Ｃ１２シクロアルキニル、置換若しくは非置換Ｃ７〜Ｃ１２ヘテロシクロアルキニル、Ｃ７〜Ｃ１２シクロアルケニル、ノルボルニル、ビニルカルボキシル、ビニルスルホニル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、アミノ、チオール、Ｃ１〜Ｃ８カルボキシル、Ｃ１〜Ｃ８カルボニル、−Ｏ−ＮＨ２、カルボヒドラジド、マレイミド、α−ハロカルボニル、フラン、置換若しくは非置換テトラジニル、リジン、グルタミン、シクロデキストリン、アダマンタニル、又はそれらの組合せを含む少なくとも１つの官能基で官能化される、請求項２４又は２５に記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
【請求項２７】
Ｒ１１が、架橋ヒアルロン酸を含むヒドロゲルを含み、ここで、前記ヒアルロン酸は、−ＮＨ（Ｗ１）（Ｏ（Ｗ１））ｄ−Ｖから選択される少なくとも１つの側鎖を含み、Ｗ１が、Ｃ２〜Ｃ４アルキル−１，２−ジイルであり、ここで、水素、メチル、又はエチル側鎖が、いずれかの骨格炭素原子上に存在してもよく；
ｄが、０〜５００の数平均であり；
Ｖが、アジジル、アルキニル、置換若しくは非置換Ｃ７〜Ｃ１２シクロアルキニル、置換若しくは非置換Ｃ７〜Ｃ１２ヘテロシクロアルキニル、Ｃ７〜Ｃ１２シクロアルケニル、ノルボルニル、ビニルカルボキシル、ビニルスルホニル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、アミノ、チオール、Ｃ１〜Ｃ８カルボキシル、Ｃ１〜Ｃ８カルボニル、−Ｏ−ＮＨ２、カルボヒドラジド、マレイミド、α−ハロカルボニル、フラン、置換若しくは非置換テトラジニル、リジン、グルタミン、シクロデキストリン、又はアダマンタニルを含む好適な官能基である、請求項１〜１６及び１９〜２６のいずれか一項に記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
【請求項２８】
Ｖがアジドである、請求項２７に記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
【請求項２９】
架橋担体製剤を作製するための方法であって、
（ａ）担体分子Ｒ１１を官能化する工程と；
（ｂ）反応性架橋剤を調製する工程と；
（ｃ）前記官能化された担体分子を前記反応性架橋剤と反応させて、約４℃〜約６０℃の温度での約０．５時間〜約４８時間にわたるインキュベーションによって架橋担体を形成する工程とを含む方法。
【請求項３０】
前記担体分子が、ヒアルロン酸又はポリエチレングリコールを含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記担体分子が、アジド、スルフヒドリル、アミン、アミノキシ（Ｏ−ＮＨ２）又はアルデヒド部分で官能化されて、架橋のための反応性官能基が得られる、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記反応性架橋剤の前記調製が、ポリエチレングリコールを、１−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）シクロプロパン−１−カルボン酸、３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）プロパン酸、１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジン−４−カルボン酸、２−（１−（（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）メチル）シクロプロピル）酢酸、２−メチル−３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）プロパン酸、又は７−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ヘプタン酸と反応させる工程と、前記官能化されたポリエチレングリコールエステルを脱保護する工程とを含む、請求項２９〜３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
前記反応性架橋剤の前記調製が、前記官能化されたポリエチレングリコールエステルの脱保護後に少なくとも２つのビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル）メチル基の導入をさらに含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
請求項２９〜３３のいずれか一項に記載の方法を用いて得られる架橋ヒドロゲル。
【請求項３５】
前記担体分子が、アジドで官能化される、請求項３４に記載の架橋ヒドロゲル。
【請求項３６】
生物学的活性薬剤Ｄに結合されたトレースレスリンカーＲを含む薬物付加物を調製するための方法であって、
（ａ）第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性薬剤Ｄを提供する工程と；
（ｂ）前記生物学的活性薬剤を、活性化されたカルボニル官能基を有するトレースレスリンカーＲと反応させる工程と；
（ｃ）前記薬物付加物を前記試薬から精製する工程と
を含む方法。
【請求項３７】
請求項３６に記載の方法を用いて得られる薬物付加物。
【請求項３８】
薬物送達システムを作製するための方法であって、
（ａ）担体分子Ｒ１１を調製する工程であって、Ｒ１１が架橋ヒドロゲルであり；任意選択的に、工程（ａ）が、前記架橋ヒドロゲル担体分子Ｒ１１を精製する工程をさらに含み得る工程と；
（ｂ）別々に、前記トレースレスリンカーＲを、第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性薬剤Ｄにコンジュゲートし、それによって、前記トレースレスリンカー−Ｄ付加物を形成する工程であって；工程（ｂ）が、任意選択的に、前記トレースレスリンカー−Ｄ付加物の精製をさらに含み得る工程と、
（ｃ）前記担体分子Ｒ１１を、前記トレースレスリンカー−Ｄ付加物とコンジュゲートする工程と；
（ｄ）前記薬物送達システムを前記試薬から精製する工程と
を含む方法。
【請求項３９】
請求項３８に記載の方法を用いて作製される薬物送達システム。
【請求項４０】
黄斑変性症を治療するための方法であって、それを必要とする対象に、式（Ｉ）によって表されるコンジュゲートＤ−Ｒ（式中、Ｄが、ブロルシズマブ（配列番号４）、アフリベルセプト、ペグプレラニブ、ラニビズマブ、５−（５，６，７，８−テトラヒドロ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルオキシ）−インドール−１−カルボン酸［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−アミド；５−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［３，４ｄ］ピリミジン−４−イルオキシ）−インドール−１−カルボン酸［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−アミド；Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド；（Ｓ）−５−（６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルオキシ）−Ｎ−（５−（１−メチルシクロプロピル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド、又はそれらの組合せを含む、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分であり；
Ｒが、生物学的活性部分Ｄの放出に好適なリンカーであり：
【化２】
2020517623.tif 000249
ここで、破線が、前記第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子への結合を示し；
Ｒ１が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１ａが、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１Ｒ１ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｒ２が、独立して、それぞれＣ１〜Ｃ４アルキル又はオキソから選択されるか、又は２つのＲ２基が、組み合わされて、縮合Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル又はスピロＣ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイル基を形成し；
ａが、０、１、２、３又は４であり；
Ｒ３が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ３ａが、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ３Ｒ３ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｙが、Ｃ（Ｏ）Ｒ４、Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６、ＳｉＲ５Ｒ６Ｒ７、又はＣＲ１２Ｒ１２ａＯＲ１３であり；
Ｒ１２が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１２ａが、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１２Ｒ１２ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｒ１３が、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであるか；又は
ＣＨＲ１２ＯＲ１３が、組み合わされて、５、６、若しくは７員環状エーテルを形成し；
Ｒ４が、Ｃ１〜Ｃ８アルキル又はＣ３〜Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１〜Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ又はモノ−及びジ−Ｃ１〜Ｃ４アルキルアミノで任意選択的に置換され；
Ｒ５及びＲ６がそれぞれ、独立して、Ｃ１〜Ｃ４アルキル及びＣ３〜Ｃ６シクロアルキルから選択され；
Ｒ７が、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルオキシ、ヘテロシクロアルキルオキシ、又は−（ＯＣＨＲ３ＣＨ２）ｂＯ−Ｃ１〜Ｃ４アルキルであり、ここで、前記ヘテロシクロアルキルオキシが、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つの環ヘテロ原子を有し、且つ０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１〜Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換される４〜７員飽和複素環であり；
ｂが、１〜１０の整数であり；
Ｚが、ＣＨＲ８又はＮＲ９であり；
Ｒ８及びＲ９がそれぞれ、独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、又は−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑ［Ｏ−Ｗ］ｇ（ＮＨＣ（Ｏ））ｍ（ＣＨ２）ｑ［Ｏ−Ｗ］ｐ−Ｑ−Ａから選択され、ここで、前記アルキル基は、０又は１つのＱ−Ａで任意選択的に置換され；
ｑが、独立して、それぞれ、１、２、又は３であり；
ｇ及びｐがそれぞれ、独立して、約２〜約５０の加重平均長さを有し；
ｍが、１又は０であり；
Ｗが、Ｃ２〜Ｃ４アルキル−１，２−ジイルであり、ここで、水素、メチル、又はエチル側鎖が、いずれかの骨格炭素原子上に存在してもよく；
Ｑが、結合、Ｏ、Ｎ（Ｈ）又はＮ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）であり；
Ａが、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜Ｃ８アルキル、Ｒ１０、又はＲ１１であり、ここで、前記アルキル基が、０又は１つのＲ１０で任意選択的に置換され；
Ｒ１０が、式（Ｉ）を担体に結合するのに好適な反応性官能基であり；
Ｒ１１が担体である）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩を投与する工程を含む方法。
【請求項４１】
筋骨格系疾患を治療するための方法であって、それを必要とする対象に、式（Ｉ）によって表されるコンジュゲートＤ−Ｒ（式中、Ｄが、Ｄ２（配列番号４）、Ｄ３（配列番号５）、他のインスリン様成長因子、又はそれらの組合せを含む、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分であり；
Ｒが、生物学的活性部分Ｄの放出に好適なリンカーであり：
【化３】
2020517623.tif 000250
ここで、破線が、前記第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子への結合を示し；
Ｒ１が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１ａが、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１Ｒ１ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｒ２が、独立して、それぞれＣ１〜Ｃ４アルキル又はオキソから選択されるか、又は２つのＲ２基が、組み合わされて、縮合Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル又はスピロＣ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイル基を形成し；
ａが、０、１、２、３又は４であり；
Ｒ３が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ３ａが、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ３Ｒ３ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｙが、Ｃ（Ｏ）Ｒ４、Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６、ＳｉＲ５Ｒ６Ｒ７、又はＣＲ１２Ｒ１２ａＯＲ１３であり；
Ｒ１２が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１２ａが、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１２Ｒ１２ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｒ１３が、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであるか；又は
ＣＨＲ１２ＯＲ１３が、組み合わされて、５、６、若しくは７員環状エーテルを形成し；
Ｒ４が、Ｃ１〜Ｃ８アルキル又はＣ３〜Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１〜Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ又はモノ−及びジ−Ｃ１〜Ｃ４アルキルアミノで任意選択的に置換され；
Ｒ５及びＲ６がそれぞれ、独立して、Ｃ１〜Ｃ４アルキル及びＣ３〜Ｃ６シクロアルキルから選択され；
Ｒ７が、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルオキシ、ヘテロシクロアルキルオキシ、又は−（ＯＣＨＲ３ＣＨ２）ｂＯ−Ｃ１〜Ｃ４アルキルであり、ここで、前記ヘテロシクロアルキルオキシが、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つの環ヘテロ原子を有し、且つ０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１〜Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換される４〜７員飽和複素環であり；
ｂが、１〜１０の整数であり；
Ｚが、ＣＨＲ８又はＮＲ９であり；
Ｒ８及びＲ９がそれぞれ、独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、又は−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑ［Ｏ−Ｗ］ｇ（ＮＨＣ（Ｏ））ｍ（ＣＨ２）ｑ［Ｏ−Ｗ］ｐ−Ｑ−Ａから選択され、ここで、前記アルキル基は、０又は１つのＱ−Ａで任意選択的に置換され；
ｑが、独立して、それぞれ、１、２、又は３であり；
ｇ及びｐがそれぞれ、独立して、約２〜約５０の加重平均長さを有し；
ｍが、１又は０であり；
Ｗが、Ｃ２〜Ｃ４アルキル−１，２−ジイルであり、ここで、水素、メチル、又はエチル側鎖が、いずれかの骨格炭素原子上に存在してもよく；
Ｑが、結合、Ｏ、Ｎ（Ｈ）又はＮ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）であり；
Ａが、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜Ｃ８アルキル、Ｒ１０、又はＲ１１であり、ここで、前記アルキル基が、０又は１つのＲ１０で任意選択的に置換され；
Ｒ１０が、式（Ｉ）を担体に結合するのに好適な反応性官能基であり；
Ｒ１１が担体である）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩を投与する工程を含む方法。
【請求項４２】
心疾患を治療するための方法であって、それを必要とする対象に、式（Ｉ）によって表されるコンジュゲートＤ−Ｒ（式中、Ｄが、セレラキシン又は配列番号７を含む、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分であり；
Ｒが、生物学的活性部分Ｄの放出に好適なリンカーであり：
【化４】
2020517623.tif 000251
ここで、破線が、前記第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子への結合を示し；
Ｒ１が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１ａが、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１Ｒ１ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｒ２が、独立して、それぞれＣ１〜Ｃ４アルキル又はオキソから選択されるか、又は２つのＲ２基が、組み合わされて、縮合Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル又はスピロＣ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイル基を形成し；
ａが、０、１、２、３又は４であり；
Ｒ３が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ３ａが、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ３Ｒ３ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｙが、Ｃ（Ｏ）Ｒ４、Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６、ＳｉＲ５Ｒ６Ｒ７、又はＣＲ１２Ｒ１２ａＯＲ１３であり；
Ｒ１２が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１２ａが、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１２Ｒ１２ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｒ１３が、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであるか；又は
ＣＨＲ１２ＯＲ１３が、組み合わされて、５、６、若しくは７員環状エーテルを形成し；
Ｒ４が、Ｃ１〜Ｃ８アルキル又はＣ３〜Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１〜Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ又はモノ−及びジ−Ｃ１〜Ｃ４アルキルアミノで任意選択的に置換され；
Ｒ５及びＲ６がそれぞれ、独立して、Ｃ１〜Ｃ４アルキル及びＣ３〜Ｃ６シクロアルキルから選択され；
Ｒ７が、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルオキシ、ヘテロシクロアルキルオキシ、又は−（ＯＣＨＲ３ＣＨ２）ｂＯ−Ｃ１〜Ｃ４アルキルであり、ここで、前記ヘテロシクロアルキルオキシが、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つの環ヘテロ原子を有し、且つ０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１〜Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換される４〜７員飽和複素環であり；
ｂが、１〜１０の整数であり；
Ｚが、ＣＨＲ８又はＮＲ９であり；
Ｒ８及びＲ９がそれぞれ、独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、又は−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑ［Ｏ−Ｗ］ｇ（ＮＨＣ（Ｏ））ｍ（ＣＨ２）ｑ［Ｏ−Ｗ］ｐ−Ｑ−Ａから選択され、ここで、前記アルキル基は、０又は１つのＱ−Ａで任意選択的に置換され；
ｑが、独立して、それぞれ、１、２、又は３であり；
ｇ及びｐがそれぞれ、独立して、約２〜約５０の加重平均長さを有し；
ｍが、１又は０であり；
Ｗが、Ｃ２〜Ｃ４アルキル−１，２−ジイルであり、ここで、水素、メチル、又はエチル側鎖が、いずれかの骨格炭素原子上に存在してもよく；
Ｑが、結合、Ｏ、Ｎ（Ｈ）又はＮ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）であり；
Ａが、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜Ｃ８アルキル、Ｒ１０、又はＲ１１であり、ここで、前記アルキル基が、０又は１つのＲ１０で任意選択的に置換され；
Ｒ１０が、式（Ｉ）を担体に結合するのに好適な反応性官能基であり；
Ｒ１１が担体である）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩を投与する工程を含む方法。
【請求項４３】
疾病又は疾患を治療するための方法であって、それを必要とする対象に、式（Ｉ）によって表されるコンジュゲートＤ−Ｒ（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分であり；Ｒが、生物学的活性部分Ｄの放出に好適なリンカーであり：
【化５】
2020517623.tif 000252
ここで、破線が、前記第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子への結合を示し；
Ｒ１が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１ａが、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１Ｒ１ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｒ２が、独立して、それぞれＣ１〜Ｃ４アルキル又はオキソから選択されるか、又は２つのＲ２基が、組み合わされて、縮合Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル又はスピロＣ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイル基を形成し；
ａが、０、１、２、３又は４であり；
Ｒ３が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ３ａが、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ３Ｒ３ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｙが、Ｃ（Ｏ）Ｒ４、Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６、ＳｉＲ５Ｒ６Ｒ７、又はＣＲ１２Ｒ１２ａＯＲ１３であり；
Ｒ１２が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１２ａが、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１２Ｒ１２ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｒ１３が、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであるか；又は
ＣＨＲ１２ＯＲ１３が、組み合わされて、５、６、若しくは７員環状エーテルを形成し；
Ｒ４が、Ｃ１〜Ｃ８アルキル又はＣ３〜Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１〜Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ又はモノ−及びジ−Ｃ１〜Ｃ４アルキルアミノで任意選択的に置換され；
Ｒ５及びＲ６がそれぞれ、独立して、Ｃ１〜Ｃ４アルキル及びＣ３〜Ｃ６シクロアルキルから選択され；
Ｒ７が、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルオキシ、ヘテロシクロアルキルオキシ、又は−（ＯＣＨＲ３ＣＨ２）ｂＯ−Ｃ１〜Ｃ４アルキルであり、ここで、前記ヘテロシクロアルキルオキシが、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つの環ヘテロ原子を有し、且つ０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１〜Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換される４〜７員飽和複素環であり；
ｂが、１〜１０の整数であり；
Ｚが、ＣＨＲ８又はＮＲ９であり；
Ｒ８及びＲ９がそれぞれ、独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、又は−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑ［Ｏ−Ｗ］ｇ（ＮＨＣ（Ｏ））ｍ（ＣＨ２）ｑ［Ｏ−Ｗ］ｐ−Ｑ−Ａから選択され、ここで、前記アルキル基は、０又は１つのＱ−Ａで任意選択的に置換され；
ｑが、独立して、それぞれ、１、２、又は３であり；
ｇ及びｐがそれぞれ、独立して、約２〜約５０の加重平均長さを有し；
ｍが、１又は０であり；
Ｗが、Ｃ２〜Ｃ４アルキル−１，２−ジイルであり、ここで、水素、メチル、又はエチル側鎖が、いずれかの骨格炭素原子上に存在してもよく；
Ｑが、結合、Ｏ、Ｎ（Ｈ）又はＮ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）であり；
Ａが、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜Ｃ８アルキル、Ｒ１０、又はＲ１１であり、ここで、前記アルキル基が、０又は１つのＲ１０で任意選択的に置換され；
Ｒ１０が、式（Ｉ）を担体に結合するのに好適な反応性官能基であり；
Ｒ１１が担体である）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩を投与する工程を含む方法。
【請求項４４】
少なくとも１つの第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分Ｄの半減期を延ばすための手段であって、式（Ｉ）によって表される、ＲへのＤの結合（式中、Ｒが、生物学的活性部分Ｄの放出に好適なリンカーであり：
【化６】
2020517623.tif 000253
ここで、破線が、前記第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子への結合を示し；
Ｒ１が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１ａが、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１Ｒ１ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｒ２が、独立して、それぞれＣ１〜Ｃ４アルキル又はオキソから選択されるか、又は２つのＲ２基が、組み合わされて、縮合Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル又はスピロＣ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイル基を形成し；
ａが、０、１、２、３又は４であり；
Ｒ３が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ３ａが、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ３Ｒ３ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｙが、Ｃ（Ｏ）Ｒ４、Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６、ＳｉＲ５Ｒ６Ｒ７、又はＣＲ１２Ｒ１２ａＯＲ１３であり；
Ｒ１２が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１２ａが、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１２Ｒ１２ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｒ１３が、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであるか；又は
ＣＨＲ１２ＯＲ１３が、組み合わされて、５、６、若しくは７員環状エーテルを形成し；
Ｒ４が、Ｃ１〜Ｃ８アルキル又はＣ３〜Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１〜Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ又はモノ−及びジ−Ｃ１〜Ｃ４アルキルアミノで任意選択的に置換され；
Ｒ５及びＲ６がそれぞれ、独立して、Ｃ１〜Ｃ４アルキル及びＣ３〜Ｃ６シクロアルキルから選択され；
Ｒ７が、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルオキシ、ヘテロシクロアルキルオキシ、又は−（ＯＣＨＲ３ＣＨ２）ｂＯ−Ｃ１〜Ｃ４アルキルであり、ここで、前記ヘテロシクロアルキルオキシが、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つの環ヘテロ原子を有し、且つ０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１〜Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換される４〜７員飽和複素環であり；
ｂが、１〜１０の整数であり；
Ｚが、ＣＨＲ８又はＮＲ９であり；
Ｒ８及びＲ９がそれぞれ、独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、又は−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑ［Ｏ−Ｗ］ｇ（ＮＨＣ（Ｏ））ｍ（ＣＨ２）ｑ［Ｏ−Ｗ］ｐ−Ｑ−Ａから選択され、ここで、前記アルキル基は、０又は１つのＱ−Ａで任意選択的に置換され；
ｑが、独立して、それぞれ、１、２、又は３であり；
ｇ及びｐがそれぞれ、独立して、約２〜約５０の加重平均長さを有し；
ｍが、１又は０であり；
Ｗが、Ｃ２〜Ｃ４アルキル−１，２−ジイルであり、ここで、水素、メチル、又はエチル側鎖が、いずれかの骨格炭素原子上に存在してもよく；
Ｑが、結合、Ｏ、Ｎ（Ｈ）又はＮ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）であり；
Ａが、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜Ｃ８アルキル、Ｒ１０、又はＲ１１であり、ここで、前記アルキル基が、０又は１つのＲ１０で任意選択的に置換され；
Ｒ１０が、式（Ｉ）を担体に結合するのに好適な反応性官能基であり；
Ｒ１１が担体である）
を含む手段。
【請求項４５】
式（ＩＩＩ）：
【化７】
2020517623.tif 000254
（式中、ブロルシズマブが配列番号４を含み；Ｒ４が、ＣＨ３−、ＣＨ３−Ｏ−ＣＨ２−、ＣＨ３ＣＨ２−、又は（ＣＨ３）２ＣＨ−であり；担体が、ヒアルロン酸、ポリエチレングリコール、そのヒドロゲル、その架橋ヒドロゲル、又はそれらの組合せを含む）
を含む薬物送達システム。
【請求項４６】
式（ＩＶ）：
【化８】
2020517623.tif 000255
（式中、Ｄ２が配列番号５を含み、Ｄ３が配列番号６を含み；Ｒ４が、ＣＨ３−、ＣＨ３−Ｏ−ＣＨ２−、ＣＨ３ＣＨ２−、又は（ＣＨ３）２ＣＨ−であり；担体が、ヒアルロン酸、ポリエチレングリコール、そのヒドロゲル、その架橋ヒドロゲル、又はそれらの組合せを含む）
を含む薬物送達システム。
【請求項４７】
Ｄ−Ｒ−Ｒ１１（式中、Ｒが、生物学的活性薬剤Ｄに結合されたトレースレスリンカーを含み；Ｄが、少なくとも１つの第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分を含み；Ｒ１１が、複数のヒアルロン酸ポリマーを含み、これらのそれぞれが、ランダムに並んだ非官能化Ｄ−グルクロン酸モノマー、架橋剤で官能化された１つ以上のＤ−グルクロン酸モノマー、又は薬物付加物で官能化された１つ以上のＤ−グルクロン酸モノマーＤ−Ｒを含む）を含む薬物送達システム。
【請求項４８】
Ｄが、ブロルシズマブ、Ｄ１（配列番号４）、Ｄ２（配列番号５）、Ｄ３（配列番号６）、Ｄ４（配列番号７）、セレラキシン、アフリベルセプト、ペグプレラニブ、ラニビズマブ、５−（５，６，７，８−テトラヒドロ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルオキシ）−インドール−１−カルボン酸［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−アミド；５−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［３，４ｄ］ピリミジン−４−イルオキシ）−インドール−１−カルボン酸［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−アミド；Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド；（Ｓ）−５−（６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルオキシ）−Ｎ−（５−（１−メチルシクロプロピル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド、又はそれらの組合せを含む、請求項４４に記載の手段。
【請求項４９】
式（ＸＸＩＶ）によって表されるＤ−Ｒ：
【化９】
2020517623.tif 000256
（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分であり；Ｒが、生物学的活性部分Ｄの放出に好適なリンカーである）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩。
【請求項５０】
式（ＸＸＶ）によって表されるＤ−Ｒ：
【化１０】
2020517623.tif 000257
（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分であり；Ｒが、生物学的活性部分Ｄの放出に好適なリンカーである）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩。
【請求項５１】
式（ＸＸＶＩ）によって表されるＤ−Ｒ：
【化１１】
2020517623.tif 000258
（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分であり；Ｒが、生物学的活性部分Ｄの放出に好適なリンカーである）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩。
【請求項５２】
式（ＸＸＶＩＩ）によって表されるＤ−Ｒ：
【化１２】
2020517623.tif 000259
（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分であり；Ｒが、生物学的活性部分Ｄの放出に好適なリンカーである）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩。
【請求項５３】
式（ＸＸＶＩＩＩ）によって表されるＤ−Ｒ：
【化１３】
2020517623.tif 000260
（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分であり；Ｒが、生物学的活性部分Ｄの放出に好適なリンカーである）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩。
【請求項５４】
式（ＸＸＩＸ）によって表されるＤ−Ｒ：
【化１４】
2020517623.tif 000261
（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分であり；Ｒが、生物学的活性部分Ｄの放出に好適なリンカーである）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩。
【請求項５５】
式（ＸＸＸ）：
【化１５】
2020517623.tif 000262
（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分であり；Ｒ４が、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、１−メチル−シクロプロピル、又はメトキシメチルである）
によって表される薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩。
【請求項５６】
式（ＸＸＸＩ）によって表されるＤ−Ｒ（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分であり；
Ｒが、生物学的活性部分Ｄの放出に好適なリンカーであり：
【化１６】
2020517623.tif 000263
ここで、破線が、前記第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子への結合を示し；
ＹがＣ（Ｏ）Ｒ４であり；
Ｒ４が、Ｃ１〜Ｃ８アルキル又はＣ３〜Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１〜Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシで任意選択的に置換され；
ＺがＮ−Ｌ−Ａであり；
ＬがＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＮＨであり；
ＡがＲ１１であり；
Ｒ１１が、架橋ヒアルロン酸に由来するヒドロゲルであり、ここで、前記ヒアルロン酸は、Ｎ（Ｈ）（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３  ＣＨ２ＣＨ２Ｎ３の少なくとも１つのアミド結合した側鎖を含み、前記ヒドロゲルを形成するのに使用される前記架橋剤は、ＰＥＧ（２０００）−ビス−［３−（（（（（１Ｒ，８Ｓ，９ｓ）−ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパノエート］を含む）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩。
【請求項５７】
式（ＸＸＸＩＩ）：
【化１７】
2020517623.tif 000264
（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分であり；Ｒ４が、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、１−メチル−シクロプロピル、又はメトキシメチルである）
によって表される薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩。
【請求項５８】
式ＸＸＸＩＩＩによって表されるＤ−Ｒ（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分であり；
Ｒが、生物学的活性部分Ｄの放出に好適なリンカーであり：
【化１８】
2020517623.tif 000265
ここで、破線が、前記第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子への結合を示し；
ＹがＣ（Ｏ）Ｒ４であり；
Ｒ４が、Ｃ１〜Ｃ８アルキル又はＣ３〜Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１〜Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシで任意選択的に置換され；
ＺがＮ−Ｌ−Ａであり；
ＬがＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＮＨであり；
ＡがＲ１１であり；
Ｒ１１が、架橋ヒアルロン酸に由来するヒドロゲルであり、ここで、前記ヒアルロン酸は、Ｎ（Ｈ）（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３  ＣＨ２ＣＨ２Ｎ３の少なくとも１つのアミド結合した側鎖を含み、前記ヒドロゲルを形成するのに使用される前記架橋剤は、ＰＥＧ（２０００）−ビス−［１−（（（（１’Ｒ，８’Ｓ，９’ｓ）−ビシクロ［６．１．０］ノナ−４’−イン−９’−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ−シクロプロパン−１−カルボン酸エステル］を含む）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩。
【請求項５９】
式（ＸＸＸＩＶ）：
【化１９】
2020517623.tif 000266
（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分であり；Ｒ４が、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、１−メチル−シクロプロピル、又はメトキシメチルである）
によって表される薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩。
【請求項６０】
式ＸＸＸＶによって表されるＤ−Ｒ（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分であり；
Ｒが、生物学的活性部分Ｄの放出に好適なリンカーであり：
【化２０】
2020517623.tif 000267
ここで、破線が、前記第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子への結合を示し；
ＹがＣ（Ｏ）Ｒ４であり；
Ｒ４が、Ｃ１〜Ｃ８アルキル又はＣ３〜Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１〜Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシで任意選択的に置換され；
ＺがＮ−Ｌ−Ａであり；
ＬがＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＮＨであり；
ＡがＲ１１であり；
Ｒ１１が、架橋ヒアルロン酸に由来するヒドロゲルであり、ここで、前記ヒアルロン酸は、Ｎ（Ｈ）（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３  ＣＨ２ＣＨ２Ｎ３の少なくとも１つのアミド結合した側鎖を含み、前記ヒドロゲルを形成するのに使用される前記架橋剤は、ＰＥＧ（２０００）−ビス−［１−（（（（１’Ｒ，８’Ｓ，９’ｓ）−ビシクロ［６．１．０］ノナ−４’−イン−９’−イル）メトキシ）カルボニル）ピペリジン−４−カルボン酸エステル］を含む）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩。
【請求項６１】
式（ＸＸＸＶＩ）：
【化２１】
2020517623.tif 000268
（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分であり；Ｒ４が、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、１−メチル−シクロプロピル、又はメトキシメチルである）
によって表される薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩。
【請求項６２】
式ＸＸＸＶＩＩによって表されるＤ−Ｒ（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分であり；
Ｒが、生物学的活性部分Ｄの放出に好適なリンカーであり：
【化２２】
2020517623.tif 000269
ここで、破線が、前記第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子への結合を示し；
ＹがＣ（Ｏ）Ｒ４であり；
Ｒ４が、Ｃ１〜Ｃ８アルキル又はＣ３〜Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１〜Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシで任意選択的に置換され；
ＺがＮ−Ｌ−Ａであり；
ＬがＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＮＨであり；
ＡがＲ１１であり；
Ｒ１１が、架橋ヒアルロン酸に由来するヒドロゲルであり、ここで、前記ヒアルロン酸は、Ｎ（Ｈ）（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３  ＣＨ２ＣＨ２Ｎ３の少なくとも１つのアミド結合した側鎖を含み、前記ヒドロゲルを形成するのに使用される前記架橋剤は、ＰＥＧ（２０００）−ビス−［７−（（（（（１’Ｒ，８’Ｓ，９’ｓ）−ビシクロ［６．１．０］ノナ−４’−イン−９’−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）ヘプタノエート］を含む）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩。
【請求項６３】
式（ＸＸＸＶＩＩＩ）：
【化２３】
2020517623.tif 000270
（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分であり；Ｒ４が、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、１−メチル−シクロプロピル、又はメトキシメチルである）
によって表される薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩。
【請求項６４】
式（ＸＸＸＩＸ）によって表されるＤ−Ｒ（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分であり；
Ｒが、生物学的活性部分Ｄの放出に好適なリンカーであり：
【化２４】
2020517623.tif 000271
ここで、破線が、前記第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子への結合を示し；
ＹがＣ（Ｏ）Ｒ４であり；
Ｒ４が、Ｃ１〜Ｃ８アルキル又はＣ３〜Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１〜Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシで任意選択的に置換され；
ＺがＮ−Ｌ−Ａであり；
ＬがＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＮＨであり；
ＡがＲ１１であり；
Ｒ１１が、架橋ヒアルロン酸に由来するヒドロゲルであり、ここで、前記ヒアルロン酸は、Ｎ（Ｈ）（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３  ＣＨ２ＣＨ２Ｎ３の少なくとも１つのアミド結合した側鎖を含み、前記ヒドロゲルを形成するのに使用される前記架橋剤は、ＰＥＧ（２０００）−ビス−［２−メチル−３−（（（（（１’Ｒ，８’Ｓ，９’ｓ）−ビシクロ［６．１．０］ノナ−４’−イン−９’−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパノエート］を含む）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩。
【請求項６５】
Ｄがブロルシズマブであり、Ｒ４がＣＨ２ＣＨ３である、請求項５５〜６４のいずれか一項に記載の薬物送達システム。
【請求項６６】
Ｄがブロルシズマブであり、Ｒ４がＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ３である、請求項５５〜６４のいずれか一項に記載の薬物送達システム。
【請求項６７】
式：
【化２５】
2020517623.tif 000272
（式中、
Ｌが、任意選択的に置換される二価リンカーＱ−［Ｓｐ−Ｑ］ｈ−Ｑであり；
Ｑが、独立して、それぞれ、結合、Ｏ、Ｃ（Ｏ）、Ｎ（Ｈ）、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｃ（Ｏ）ＮＨ、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｏ、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）２、Ｎ（Ｈ）Ｓ（Ｏ）２、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）Ｓ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｈ）、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｃ１〜Ｃ２アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ２アルキル、Ｃ１〜Ｃ２アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ２アルキル、１，２，３−トリアゾール、ＯＰ（Ｏ）２、Ｐ（Ｏ）２Ｏ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル−Ｐ（Ｏ）２−Ｏ、又はＯ−Ｐ（Ｏ）２−Ｃ１−４アルキルから選択され；
Ｓｐが、独立して、それぞれ、任意選択的に置換されるＣ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、［Ｗ−Ｏ］ｇ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル−［Ｏ−Ｗ］ｇ、［Ｏ−Ｗ］ｇ−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８Ｃアルキル−［Ｏ−Ｗ］ｇ−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、又はオリゴペプチドから選択され；
ｈが、１〜２０の整数であり；
ｇが、約２〜約５０の加重平均数であり；
Ｗが、Ｃ２〜Ｃ４アルキル−１，２−ジイルであり、ここで、水素、メチル、又はエチル側鎖が、いずれかの骨格炭素原子上に存在してもよく；
Ｒ４が、Ｃ１〜Ｃ８アルキル又はＣ３〜Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１〜Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシで任意選択的に置換される）
によって表される担体組成物又はその薬学的に許容できる塩。
【請求項６８】
下式：
【化２６】
2020517623.tif 000273
【化２７】
2020517623.tif 000274
【化２８】
2020517623.tif 000275
【化２９】
2020517623.tif 000276
【化３０】
2020517623.tif 000277
【化３１】
2020517623.tif 000278
のうちの１つで表される、請求項６７に記載の担体組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
第一級若しくは第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性薬剤を送達するための薬物送達システム、その薬学的に許容できる塩、それに関連する薬物送達試薬、この薬物送達システムを含む医薬組成物、及び持続放出治療薬としての薬物送達システムの使用が本明細書に記載される。
【背景技術】
【０００２】
インビボの薬物の物理化学的又は薬物速度論的特性の調節は、薬物と担体とのコンジュゲーションによって影響され得る。特に、薬物と担体とのコンジュゲーションは、治療的作用持続時間を増加させるか、投与後の薬物の最高濃度を低下させるか、又は薬物の送達を所望の組織若しくは区画に限局するか又はこれらの目的の組合せの手段として使用されることが多い。典型的に、薬物送達システム中の担体は、（ａ）溶媒−担体混合物へと物理化学的に製剤化される薬物とともに非共有結合的な方法で使用されるか、又は（ｂ）薬物中に存在する官能基への担体試薬の共有結合によって結合されるかのいずれかである。
【０００３】
非共有結合的手法は、担体−薬物システムの初回投与時又は対象への投与後の担体の分解中のいずれかに起こり得る、薬物の無制御のバースト放出を防ぐために、高効率の薬物封入を必要とする。結合されていない水溶性薬物分子の拡散を抑えることは、疎水性部分によって媒介されることが多い強いファン・デル・ワールス接触、水素結合、又は荷電部分を介して媒介される静電結合を必要とする。タンパク質、ペプチド、又は抗体などの多くの立体配座的に感受性の薬物は、封入プロセス中及び／又は封入された薬物のその後の貯蔵中に機能しなくなる。
【０００４】
或いは、薬物は、安定したリンカーを介して又は薬物が放出される可逆性リンカー部分を介して、担体に共有結合され得る。薬物が担体に安定的に結合される場合、このようなコンジュゲートは、薬剤効果を有するために十分な残留活性を示す必要があり、コンジュゲートは、常に活性形態である。
【０００５】
薬物が切断可能なリンカーを介して担体にコンジュゲートされる場合、このようなコンジュゲートは、典型的に、担体結合薬物と呼ばれる。この手法は、低分子量有機分子から、天然産物、担体及びその類似体、タンパク質、ペプチドなどの、様々な種類及びサイズの生物学的活性分子に適用され得る。担体結合薬物の重要な考慮事項は、担体から薬物を放出するための機構である。放出機構は、酵素によるか、ｐＨ依存性であるか、又は自発的加水分解によるものであり得る。典型的に、薬物放出は、容易に制御することができず、長期間にわたって持続するのが難しい。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
治療用途において生物学的活性部分の持続放出に好適な新規な薬物送達システムが必要とされ続けている。治療的に関連する用途のために生物学的活性部分の持続放出を提供する薬物送達システムが本明細書に記載される。
【０００７】
生物学的活性分子、担体、及び生物学的活性分子を担体に結合するための手段を提供するトレースレスリンカーを含む薬物送達システム、この薬物送達システムを含む医薬組成物、及び持続放出治療薬としての薬物送達システムの使用が本明細書に記載される。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本明細書に記載される一実施形態は、式（Ｉ）によって表されるＤ−Ｒ（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分であり；Ｒが、生物学的活性部分Ｄの放出に好適なリンカーであり：
【化１】
2020517623.tif 000002
ここで、破線が、第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子への結合を示し；
Ｒ１が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１ａが、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１Ｒ１ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｒ２が、独立して、それぞれＣ１〜Ｃ４アルキル又はオキソから選択されるか、又は２つのＲ２基が、組み合わされて、縮合Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル又はスピロＣ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイル基を形成し；
ａが、０、１、２、３又は４であり；
Ｒ３が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ３ａが、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ３Ｒ３ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｙが、Ｃ（Ｏ）Ｒ４、Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、Ｃ（Ｏ）Ｎ  Ｒ５Ｒ６、ＳｉＲ５Ｒ６Ｒ７、又はＣＲ１２Ｒ１２ａＯＲ１３であり；
Ｒ１２が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１２ａが、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１２Ｒ１２ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｒ１３が、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであるか；又は
ＣＨＲ１２ＯＲ１３が、組み合わされて、５、６、若しくは７員環状エーテルを形成し；
Ｒ４が、Ｃ１〜Ｃ８アルキル又はＣ３〜Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１〜Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシで任意選択的に置換され；
Ｒ５及びＲ６がそれぞれ、独立して、Ｃ１〜Ｃ４アルキル及びＣ３〜Ｃ６シクロアルキルから選択され；
Ｒ７が、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルオキシ、ヘテロシクロアルキルオキシ、又は−（ＯＣＨＲ３ＣＨ２）ｂＯ−Ｃ１〜Ｃ４アルキルであり、ここで、ヘテロシクロアルキルオキシが、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つの環ヘテロ原子を有し、且つ０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１〜Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換される４〜７員飽和複素環であり；
ｂが、１〜１０の整数であり；
Ｚが、ＣＨ−Ｌ−Ａ、ＣＨ−Ａ、Ｎ−Ｌ−Ａ、又はＮ−Ａであり；
Ｌが、任意選択的に置換される二価リンカーであり；
Ａが、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜Ｃ８アルキル、Ｒ１０、又はＲ１１であり、ここで、アルキル基が、０又は１つのＲ１０で任意選択的に置換され；
Ｒ１０が、式（Ｉ）を担体に結合するのに好適な反応性官能基であり；
Ｒ１１が担体である）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩である。
【０００９】
一態様において、Ｄが、タンパク質、ペプチド、ポリペプチド、核酸、オリゴヌクレオチド若しくはポリヌクレオチド、炭水化物、オリゴ糖若しくは多糖、又は小分子を含み、これらのそれぞれが、少なくとも１つの第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含み、小分子が、１００ｇ／ｍｏｌ〜約２０００ｇ／ｍｏｌの分子量を有する。
【００１０】
別の態様において、Ｄが、タンパク質、ペプチド、核酸、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、モノクローナル抗体、又は小分子を含む。別の態様において、Ｄが、ブロルシズマブ（Ｄ１）（配列番号４）、Ｄ２（配列番号５）、Ｄ３（配列番号６）、Ｄ４（配列番号７）、アブシキシマブ、アダリムマブ、アフリベルセプト、アレムツズマブ、バシリキシマブ、ベリムマブ、ベバシズマブ、ブレンツキシマブ、カナキヌマブ、セルトリズマブ、セツキシマブ、ダクリズマブ、ダラツムマブ、デノスマブ、エクリズマブ、エファリズマブ、ゴリムマブ、イブリツモマブ、インフリキシマブ、イピリムマブ、ランパリズマブ、ムロモナブ−ＣＤ３、ナタリズマブ、ニボルマブ、オファツムマブ、オマリズマブ、パリビズマブ、パニツムマブ、ペグプレラニブ（ｐｅｇｐｌｅｒａｎｉｂ）、ペムブロリズマブ、ラニビズマブ、リツキシマブ、トシリズマブ、トシツモマブ、トラスツズマブ、ウステキヌマブ、若しくはベドリズマブ、又はそれらの組合せを含む。別の態様において、Ｄが、Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）、心房性ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ）、エキセンジン−４、インスリン、副腎皮質刺激ホルモン、アドレノメデュリン、アドロピン、ω−アガトキシン、アグーチ関連タンパク質、アンジオテンシン、アペリン１２、アペリン１３、アペリン３６、若しくはその誘導体、ブラジキニン、カルシトニン、コカイン・アンフェタミン調節転写産物（ＣＡＲＴ）、コルチコトロピン放出因子（ＣＲＦ）、α−ディフェンシン、β−ディフェンシン、デルタ睡眠誘発ペプチド（ＤＳＩＰ）、エラスターゼ特異的阻害剤（Ｅｌａｆｉｎ）、エンドキニン、エンドモルフィン、エンドルフィン、エンドセリン、エキセンジン、フィブロネクチン活性フラグメント、ガラニン、ガラニン様ペプチド、大ガストリン、ガストリンＩ、ガストリン関連ペプチド、消化管抑制ポリペプチド、ガストリン放出ペプチド、グレリン、ｄｅｓ−アシルグレリン、グルカゴン、グルカゴン様ペプチド、成長ホルモン放出因子、グラモストラ・スパチュラタ（Ｇｒａｍｍｏｓｔｏｌａ  ｓｐａｔｕｌａｔａ）ＧｓＭＴｘ−４、グアンシィトキシン（ｇｕａｎｇｘｉｔｏｘｉｎ）−１Ｅ、グアニリン、ヘプシジン１、ヘプシジン／ＬＥＡＰ−１、ヒスタチン５、ヒト成長ホルモン、ヒューマニン、フエントキシン、イベリオトキシン、インペラトキシンＡ、インスリン様成長因子、インテルメジン、ＩＲＬ  １６２０、連結ペプチド、カリオトキシン、キスペプチン、クルトキシン、リポトロピン、リポトロピン、肝細胞増殖因子、肝臓由来抗菌ペプチド２、黄体形成ホルモン放出ホルモン、ライセニン、ＬＬ−３７、マルガトキシン、マストパラン、肥満細胞脱顆粒ペプチド、メラニン凝集ホルモン、メラノサイト刺激ホルモン、ＭＳＨ放出抑制因子、ミッドカイン、軟体動物心臓興奮性神経ペプチド、モルフィン耐性ペプチド、モチリン、ムスカリン毒素、神経内分泌調節ペプチド−２、ニューロキニンＡ、ニューロキニンＢ、ニューロメジン、ニューロスタチン−１３、神経ペプチド、ニューロテンシン、神経毒ＮＳＴＸ−３、ノシスタチン、ノシセプチン、オベスタチン、オピオイドペプチド（エンケファリン、エンドルフィン、ＢＡＭ−１２Ｐ、カソ��ルフィン、ダイノルフィン、エンドモルフィン、ネオエンドルフィン、ノシセプチン）、オレキシン−Ａ／−Ｂ、オルファニン、オステオカルシン、オキシトシン、パンクレアスタチン、副甲状腺ホルモン、副甲状腺ホルモン関連タンパク質、ペプチド２３４、ペプチドヒスチジン−メチオニン、ペプチドＴ、ペプチドＹＹ、フィサラミン、下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ポリペプチド、血小板第４因子、プレクタシン、プレイオトロフィン、プロアドレノメデュリン、プロラクチン放出ペプチド、プサルモトキシン１、プロトキシン−１、ピログルタミン化ＲＦアミドペプチド、レニン、ＲＦアミド関連ペプチド−１、ＲＦアミド関連ペプチド−３、サルシン−α／β、サラフォトキシン、統合失調症関連ペプチド、シラトキシン、セクレチン、セレラキシン、血清胸腺因子、ナトリウムカリウムＡＴＰａｓｅ阻害剤−１、ソマトスタチン、スティコダクチラ（ｓｔｉｃｈｏｄａｃｔｙｌａ）毒素、サブスタンスＫ、ストレスコピン、ストレスコピン関連ペプチド、サブスタンスＰ、タキキニン、タランチュラＳＮＸ−４８２、タランチュラＰｒｏＴｘ−Ｉ、タランチュラＰｒｏＴｘ−ＩＩ、テルチアピン、チチュストキシンＫａ、サイロトロピン放出ホルモン、タフトシン、ウログアニリン、ウログアニリン異性体Ａ又はＢ、ウロコルチン、ウロコルチンＩＩ、ウロテンシンＩＩ、ウロテンシンＩＩ関連ペプチド、血管作動性腸管ペプチド、バソプレシン、バソトシン、ウイルス複製阻害ペプチド、キセニン、又はそれらの組合せを含むがこれらに限定されない１つ以上の生物学的活性ペプチドを含む。
【００１１】
別の態様において、Ｄは、約１００ｇ／ｍｏｌ〜約２０００ｇ／ｍｏｌ以下の分子量を有し、第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を介してＲに結合される小分子である。
【００１２】
別の態様において、小分子は、５−（５，６，７，８−テトラヒドロ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルオキシ）−インドール−１−カルボン酸［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−アミド；５−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［３，４ｄ］ピリミジン−４−イルオキシ）−インドール−１−カルボン酸［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−アミド；Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド；（Ｓ）−５−（６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルオキシ）−Ｎ−（５−（１−メチルシクロプロピル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド、又はそれらの組合せを含む。
【００１３】
別の態様において、Ｒ１が、水素又はメチルであり、Ｒ１ａが、水素又はメチルであるか、又はＣＲ１Ｒ１ａが、組み合わされて、シクロプロパン−１，１−ジイル基を形成する。別の態様において、Ｒ３及びＲ３ａがそれぞれ水素である。別の態様において、ＸがＯである。別の態様において、Ｙが、Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４が、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル又はＣ１〜Ｃ２アルコキシＣ１〜Ｃ２アルキルである。別の態様において、Ｒ４が、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、１−メチル−シクロプロピル、又はメトキシメチルである。別の態様において、ＹがＳｉＲ５Ｒ６Ｒ７であり；Ｒ５及びＲ６がそれぞれ、メチル、エチル、プロピル又はイソプロピルであり；Ｒ７が、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソ−ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、２−エトキシエトキシ、２−イソプロポキシ−エトキシ、テトラヒドロピラニルオキシ、又は−（ＯＣＨＲ３ＣＨ２）ｂＯ−Ｃ１〜Ｃ４アルキルであり、ここで、ｂが、２、３、又は４である。
【００１４】
別の態様において、Ｚが、ＣＨ−Ｌ−Ａ、ＣＨ−Ａ、Ｎ−Ｌ−Ａ、又はＮ−Ａであり；
Ｌが、任意選択的に置換される二価リンカーＱ−［Ｓｐ−Ｑ］ｈ−Ｑであり；
Ｑが、独立して、それぞれ、結合、Ｏ、Ｃ（Ｏ）、Ｎ（Ｈ）、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｃ（Ｏ）ＮＨ、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｏ、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）２、Ｎ（Ｈ）Ｓ（Ｏ）２、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）Ｓ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｈ）、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｃ１〜Ｃ２アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ２アルキル、Ｃ１〜Ｃ２アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ２アルキル、１，２，３−トリアゾール、ＯＰ（Ｏ）２、Ｐ（Ｏ）２Ｏ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル−Ｐ（Ｏ）２−Ｏ、又はＯ−Ｐ（Ｏ）２−Ｃ１−４アルキルから選択され；
Ｓｐが、独立して、それぞれ、任意選択的に置換されるＣ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、［Ｗ−Ｏ］ｇ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル−［Ｏ−Ｗ］ｇ、［Ｏ−Ｗ］ｇ−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８Ｃアルキル−［Ｏ−Ｗ］ｇ−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、オリゴペプチドから選択され；
ｈが、１〜２０の整数であり；
ｇが、約２〜約５０の加重平均数であり；
Ｗが、Ｃ２〜Ｃ４アルキル−１，２−ジイルであり、ここで、水素、メチル、又はエチル側鎖が、いずれかの骨格炭素原子上に存在してもよく；
Ａが、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｒ１０、又はＲ１１であり、ここで、アルキル基が、０又は１つのＲ１０で任意選択的に置換され；
Ｒ１０が、式（Ｉ）を担体に結合するのに好適な反応性官能基であり；
Ｒ１１が担体である。
【００１５】
別の態様において、ＺがＮＲ９であり；Ｒ９が、Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ−Ｑ−Ａ又は−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑ［Ｏ−Ｗ］ｇ（ＮＨＣ（Ｏ））ｍ（ＣＨ２）ｑ［Ｏ−Ｗ］ｐ−Ｑ−Ａであり；ｎが、１〜８の整数であり；Ａが、Ｒ１０又はＲ１１である。別の態様において、Ｒ１０が、アジジル（ａｚｉｄｙｌ）、アルキニル、置換若しくは非置換Ｃ７〜Ｃ１２シクロアルキニル、置換若しくは非置換Ｃ７〜Ｃ１２ヘテロシクロアルキニル、置換若しくは非置換Ｃ７〜Ｃ１２シクロアルケニル、ノルボルニル、置換若しくは非置換ビニルカルボキシル、置換若しくは非置換ビニルスルホニル、置換若しくは非置換Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、アミノ、チオール、置換若しくは非置換Ｃ１〜Ｃ８カルボキシル、置換若しくは非置換Ｃ１〜Ｃ８カルボニル、−Ｏ−ＮＨ２、ヒドラジジル（ｈｙｄｒａｚｉｄｙｌ）、マレイミド、α−ハロカルボニル、フラン、置換若しくは非置換テトラジニル、リジン、グルタミン、シクロデキストリン、又はアダマンタニルである。別の態様において、Ｒ１０が、式（Ｉ）を担体に結合するのに好適な反応性官能基を含む。別の態様において、Ｒ１１が生分解性である。別の態様において、Ｒ１１が、ポリマー又は架橋ポリマーを含む。別の態様において、Ｒ１１が、１つ以上の架橋ポリマーを含むヒドロゲルを含む。別の態様において、Ｒ１１が、ポリマー、架橋ポリマー、又はヒアルロン酸、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリエチレンオキシド、プロピレンオキシド、ポリグルタメート、ポリリジン、ポリシアル酸、ポリビニルアルコール、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリアクリルアミド、ポリメタクリルアミド、ポリビニルピロリドン、ポリオキサゾリン、ポリイミノカーボネート、ポリアミノ酸、親水性ポリエステル、ポリアミド、ポリウレタン、ポリ尿素、デキストラン、アガロース、キシラン、マンナン、カラギーナン、アルギネート、ゼラチン、コラーゲン、アルブミン、セルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルデンプン、キトサン、核酸、それらの誘導体、それらのコポリマー、又はそれらの組合せのうちの１つ以上を含むヒドロゲルを含む。別の態様において、Ｒ１１が、ヒアルロン酸、ポリエチレングリコール、ヒアルロン酸の架橋ヒドロゲル、ポリエチレングリコールの架橋ヒドロゲル、又はそれらの組合せを含む。別の態様において、Ｒ１１が、ヒアルロン酸又はポリエチレングリコールを含む。別の態様において、Ｒ１１が、架橋ヒアルロン酸又は架橋ポリエチレングリコールを含むヒドロゲルを含む。別の態様において、ヒアルロン酸又はポリエチレングリコールは、アジジル、アルキニル、置換若しくは非置換Ｃ７〜Ｃ１２シクロアルキニル、置換若しくは非置換Ｃ７〜Ｃ１２ヘテロシクロアルキニル、Ｃ７〜Ｃ１２シクロアルケニル、ノルボルニル、ビニルカルボキシル、ビニルスルホニル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、アミノ、チオール、Ｃ１〜Ｃ８カルボキシル、Ｃ１〜Ｃ８カルボニル、−Ｏ−ＮＨ２、カルボヒドラジド、マレイミド、α−ハロカルボニル、フラン、置換若しくは非置換テトラジニル、リジン、グルタミン、シクロデキストリン、アダマンタニ��、又はそれらの組合せを含む少なくとも１つの官能基で官能化される。別の態様において、Ｒ１１が、架橋ヒアルロン酸を含むヒドロゲルを含み、ここで、ヒアルロン酸は、−ＮＨ（Ｗ１）（Ｏ（Ｗ１））ｄ−Ｖから選択される少なくとも１つの側鎖を含み、Ｗ１が、Ｃ２〜Ｃ４アルキル−１，２−ジイルであり、ここで、水素、メチル、又はエチル側鎖が、いずれかの骨格炭素原子上に存在してもよく；ｄが、０〜５００の数平均であり；Ｖが、アジジル、アルキニル、置換若しくは非置換Ｃ７〜Ｃ１２シクロアルキニル、置換若しくは非置換Ｃ７〜Ｃ１２ヘテロシクロアルキニル、Ｃ７〜Ｃ１２シクロアルケニル、ノルボルニル、ビニルカルボキシル、ビニルスルホニル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、アミノ、チオール、Ｃ１〜Ｃ８カルボキシル、Ｃ１〜Ｃ８カルボニル、−Ｏ−ＮＨ２、カルボヒドラジド、マレイミド、α−ハロカルボニル、フラン、置換若しくは非置換テトラジニル、リジン、グルタミン、シクロデキストリン、又はアダマンタニルを含む好適な官能基である。一態様において、Ｖがアジドである。
【００１６】
本明細書に記載される別の実施形態は、架橋担体製剤を作製するための方法であって、（ａ）担体分子Ｒ１１を官能化する工程と；（ｂ）反応性架橋剤を調製する工程と；（ｃ）官能化された担体分子を反応性架橋剤と反応させて、約４℃〜約６０℃の温度での約０．５時間〜約４８時間にわたるインキュベーションによって架橋担体を形成する工程とを含む方法である。一態様において、担体分子Ｒ１１が、ポリマー又は架橋ポリマーを含む。別の態様において、Ｒ１１が、１つ以上の架橋ポリマーを含むヒドロゲルを含む。一態様において、担体分子は、ヒアルロン酸又はポリエチレングリコールを含む。別の態様において、担体分子は、アジド、スルフヒドリル、アミン、アミノキシ（Ｏ−ＮＨ２）又はアルデヒド部分で官能化されて、架橋のための反応性官能基が得られる。別の態様において、反応性架橋剤の調製は、ポリエチレングリコールを、１−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）シクロプロパン−１−カルボン酸、３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）プロパン酸、１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジン−４−カルボン酸、２−（１−（（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）メチル）シクロプロピル）酢酸、２−メチル−３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）プロパン酸、又は７−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ヘプタン酸と反応させること、及び官能化されたポリエチレングリコールエステルを脱保護することを含む。別の態様において、反応性架橋剤の調製は、官能化されたポリエチレングリコールエステルの脱保護後に少なくとも２つのビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル）メチル基の導入をさらに含む。別の態様において、反応性架橋剤の調製は、脱保護された官能化されたポリエチレングリコールエステルと、１つ又は複数の好適な試薬との反応により、アルキニル、シクロアルキニル、ヘテロシクロアルキニル、カルボン酸又は活性カルボン酸、アルデヒド又はケトン、アミノ又はアミノキシ部分などの末端反応基を導入して、担体分子の架橋のための反応性官能基を得ることをさらに含む。
【００１７】
本明細書に記載される別の実施形態は、本明細書に記載される方法を用いて得られる架橋ヒドロゲルである。一態様において、担体分子は、アジドで官能化される。
【００１８】
本明細書に記載される別の実施形態は、生物学的活性薬剤Ｄに結合されたトレースレスリンカーＲを含む薬物付加物を調製するための方法であって、（ａ）第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性薬剤Ｄを提供する工程と；（ｂ）生物学的活性薬剤を、活性化されたカルボニル官能基を有するトレースレスリンカーＲと反応させる工程と；（ｃ）薬物付加物を試薬から精製する工程とを含む方法である。一態様において、Ｒが、式（Ｉ）において上に定義されるとおりである。
【００１９】
本明細書に記載される別の実施形態は、本明細書に記載される方法を用いて得られる薬物付加物である。
【００２０】
本明細書に記載される別の実施形態は、薬物送達システムを作製するための方法であって、（ａ）担体分子Ｒ１１（ここで、Ｒ１１が架橋ヒドロゲルである）を調製する工程であって、次に、この工程が、そのヒドロゲルを調製するのに使用されるプロセスを含み；担体分子が、任意選択的に、この段階で精製され得る工程と；（ｂ）別々に、トレースレスリンカーＲを、第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性薬剤Ｄにコンジュゲートし、それによって、トレースレスリンカー−Ｄ付加物を形成する工程であって；トレースレスリンカー−Ｄ付加物が、任意選択的に、この段階で精製され得る工程と、（ｃ）担体分子Ｒ１１を、トレースレスリンカー−Ｄ付加物とコンジュゲートする工程と；（ｄ）薬物送達システムを試薬から精製する工程とを含む方法である。
【００２１】
本明細書に記載される別の実施形態は、本明細書に記載される方法を用いて得られる薬物送達システムである。
【００２２】
本明細書に記載される別の実施形態は、黄斑変性症（すなわち、滲出型加齢性黄斑変性症）などの眼疾患を治療するための方法であって、それを必要とする対象に、式（Ｉ）によって表されるコンジュゲートＤ−Ｒ（式中、Ｄが、ブロルシズマブ（配列番号４）、アフリベルセプト、ペグプレラニブ、ラニビズマブ、５−（５，６，７，８−テトラヒドロ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルオキシ）−インドール−１−カルボン酸［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−アミド；５−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［３，４ｄ］ピリミジン−４−イルオキシ）−インドール−１−カルボン酸［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−アミド；Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド；（Ｓ）−５−（６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルオキシ）−Ｎ−（５−（１−メチルシクロプロピル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド、又はそれらの組合せを含む、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分であり；Ｒが、生物学的活性部分Ｄの放出に好適なリンカーであり：
【化２】
2020517623.tif 000003
ここで、破線が、第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子への結合を示し；
Ｒ１が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１ａが、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１Ｒ１ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｒ２が、独立して、それぞれＣ１〜Ｃ４アルキル又はオキソから選択されるか、又は２つのＲ２基が、組み合わされて、縮合Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル又はスピロＣ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイル基を形成し；
ａが、０、１、２、３又は４であり；
Ｒ３が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ３ａが、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ３Ｒ３ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｙが、Ｃ（Ｏ）Ｒ４、Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６、ＳｉＲ５Ｒ６Ｒ７、又はＣＲ１２Ｒ１２ａＯＲ１３であり；
Ｒ１２が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１２ａが、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１２Ｒ１２ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｒ１３が、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであるか；又は
ＣＨＲ１２ＯＲ１３が、組み合わされて、５、６、若しくは７員環状エーテルを形成し；
Ｒ４が、Ｃ１〜Ｃ８アルキル又はＣ３〜Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１〜Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシで任意選択的に置換され；
Ｒ５及びＲ６がそれぞれ、独立して、Ｃ１〜Ｃ４アルキル及びＣ３〜Ｃ６シクロアルキルから選択され；
Ｒ７が、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルオキシ、ヘテロシクロアルキルオキシ、又は−（ＯＣＨＲ３ＣＨ２）ｂＯ−Ｃ１〜Ｃ４アルキルであり、ここで、ヘテロシクロアルキルオキシが、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つの環ヘテロ原子を有し、且つ０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１〜Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換される４〜７員飽和複素環であり；
ｂが、１〜１０の整数であり；
Ｚが、ＣＨＲ８又はＮＲ９であり；
Ｒ８及びＲ９がそれぞれ、独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、又は−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑ［Ｏ−Ｗ］ｇ（ＮＨＣ（Ｏ））ｍ（ＣＨ２）ｑ［Ｏ−Ｗ］ｐ−Ｑ−Ａから選択され、ここで、アルキル基は、０又は１つのＱ−Ａで任意選択的に置換され；
ｑが、１、２、又は３であり；
ｇ及びｐがそれぞれ、独立して、約２〜約５０の加重平均長さを有し；
ｍが、１又は０であり；
Ｗが、Ｃ２〜Ｃ４アルキル−１，２−ジイルであり、ここで、水素、メチル、又はエチル側鎖が、いずれかの骨格炭素原子上に存在してもよく；
Ｑが、結合、Ｏ、Ｎ（Ｈ）又はＮ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）であり；
Ａが、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜Ｃ８アルキル、Ｒ１０、又はＲ１１であり、ここで、アルキル基が、０又は１つのＲ１０で任意選択的に置換され；
Ｒ１０が、式（Ｉ）を担体に結合するのに好適な反応性官能基であり；
Ｒ１１が担体である）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩を投与する工程を含む方法である。
【００２３】
本明細書に記載される別の実施形態は、筋骨格系疾患を治療するための方法であって、それを必要とする対象に、式（Ｉ）によって表されるコンジュゲートＤ−Ｒ（式中、Ｄが、Ｄ２（配列番号４）、Ｄ３（配列番号５）、他のインスリン様成長因子、又はそれらの組合せを含む、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分であり；Ｒが、生物学的活性部分Ｄの放出に好適なリンカーであり：
【化３】
2020517623.tif 000004
ここで、破線が、第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子への結合を示し；
Ｒ１が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１ａが、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１Ｒ１ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｒ２が、独立して、それぞれＣ１〜Ｃ４アルキル又はオキソから選択されるか、又は２つのＲ２基が、組み合わされて、縮合Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル又はスピロＣ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイル基を形成し；
ａが、０、１、２、３又は４であり；
Ｒ３が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ３ａが、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ３Ｒ３ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｙが、Ｃ（Ｏ）Ｒ４、Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６、ＳｉＲ５Ｒ６Ｒ７、又はＣＲ１２Ｒ１２ａＯＲ１３であり；
Ｒ１２が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１２ａが、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１２Ｒ１２ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｒ１３が、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであるか；又は
ＣＨＲ１２ＯＲ１３が、組み合わされて、５、６、若しくは７員環状エーテルを形成し；
Ｒ４が、Ｃ１〜Ｃ８アルキル又はＣ３〜Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１〜Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシで任意選択的に置換され；
Ｒ５及びＲ６がそれぞれ、独立して、Ｃ１〜Ｃ４アルキル及びＣ３〜Ｃ６シクロアルキルから選択され；
Ｒ７が、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルオキシ、ヘテロシクロアルキルオキシ、又は−（ＯＣＨＲ３ＣＨ２）ｂＯ−Ｃ１〜Ｃ４アルキルであり、ここで、ヘテロシクロアルキルオキシが、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つの環ヘテロ原子を有し、且つ０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１〜Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換される４〜７員飽和複素環であり；
ｂが、１〜１０の整数であり；
Ｚが、ＣＨＲ８又はＮＲ９であり；
Ｒ８及びＲ９がそれぞれ、独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、又は−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑ［Ｏ−Ｗ］ｇ（ＮＨＣ（Ｏ））ｍ（ＣＨ２）ｑ［Ｏ−Ｗ］ｐ−Ｑ−Ａから選択され、ここで、アルキル基は、０又は１つのＱ−Ａで任意選択的に置換され；
ｑが、１、２、又は３であり；
ｇ及びｐがそれぞれ、独立して、約２〜約５０の加重平均長さを有し；
ｍが、１又は０であり；
Ｗが、Ｃ２〜Ｃ４アルキル−１，２−ジイルであり、ここで、水素、メチル、又はエチル側鎖が、いずれかの骨格炭素原子上に存在してもよく；
Ｑが、結合、Ｏ、Ｎ（Ｈ）又はＮ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）であり；
Ａが、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜Ｃ８アルキル、Ｒ１０、又はＲ１１であり、ここで、アルキル基が、０又は１つのＲ１０で任意選択的に置換され；
Ｒ１０が、式（Ｉ）を担体に結合するのに好適な反応性官能基であり；
Ｒ１１が担体である）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩を投与する工程を含む方法である。
【００２４】
本明細書に記載される別の実施形態は、心疾患を治療するための方法であって、それを必要とする対象に、式（Ｉ）によって表されるコンジュゲートＤ−Ｒ（式中、Ｄが、セレラキシン又は配列番号７を含む、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分であり；Ｒが、生物学的活性部分Ｄの放出に好適なリンカーであり：
【化４】
2020517623.tif 000005
ここで、破線が、第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子への結合を示し；
Ｒ１が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１ａが、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１Ｒ１ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｒ２が、独立して、それぞれＣ１〜Ｃ４アルキル又はオキソから選択されるか、又は２つのＲ２基が、組み合わされて、縮合Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル又はスピロＣ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイル基を形成し；
ａが、０、１、２、３又は４であり；
Ｒ３が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ３ａが、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ３Ｒ３ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｙが、Ｃ（Ｏ）Ｒ４、Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６、ＳｉＲ５Ｒ６Ｒ７、又はＣＲ１２Ｒ１２ａＯＲ１３であり；
Ｒ１２が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１２ａが、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１２Ｒ１２ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｒ１３が、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであるか；又は
ＣＨＲ１２ＯＲ１３が、組み合わされて、５、６、若しくは７員環状エーテルを形成し；
Ｒ４が、Ｃ１〜Ｃ８アルキル又はＣ３〜Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１〜Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシで任意選択的に置換され；
Ｒ５及びＲ６がそれぞれ、独立して、Ｃ１〜Ｃ４アルキル及びＣ３〜Ｃ６シクロアルキルから選択され；
Ｒ７が、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルオキシ、ヘテロシクロアルキルオキシ、又は−（ＯＣＨＲ３ＣＨ２）ｂＯ−Ｃ１〜Ｃ４アルキルであり、ここで、ヘテロシクロアルキルオキシが、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つの環ヘテロ原子を有し、且つ０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１〜Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換される４〜７員飽和複素環であり；
ｂが、１〜１０の整数であり；
Ｚが、ＣＨＲ８又はＮＲ９であり；
Ｒ８及びＲ９がそれぞれ、独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、又は−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑ［Ｏ−Ｗ］ｇ（ＮＨＣ（Ｏ））ｍ（ＣＨ２）ｑ［Ｏ−Ｗ］ｐ−Ｑ−Ａから選択され、ここで、アルキル基は、０又は１つのＱ−Ａで任意選択的に置換され；
ｑが、１、２、又は３であり；
ｇ及びｐがそれぞれ、独立して、約２〜約５０の加重平均長さを有し；
ｍが、１又は０であり；
Ｗが、Ｃ２〜Ｃ４アルキル−１，２−ジイルであり、ここで、水素、メチル、又はエチル側鎖が、いずれかの骨格炭素原子上に存在してもよく；
Ｑが、結合、Ｏ、Ｎ（Ｈ）又はＮ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）であり；
Ａが、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜Ｃ８アルキル、Ｒ１０、又はＲ１１であり、ここで、アルキル基が、０又は１つのＲ１０で任意選択的に置換され；
Ｒ１０が、式Ｉを担体に結合するのに好適な反応性官能基であり；
Ｒ１１が担体である）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩を投与する工程を含む方法である。
【００２５】
本明細書に記載される別の実施形態は、疾病又は疾患を治療するための方法であって、それを必要とする対象に、式（Ｉ）によって表されるコンジュゲートＤ−Ｒ（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分であり；Ｒが、生物学的活性部分Ｄの放出に好適なリンカーであり：
【化５】
2020517623.tif 000006
ここで、破線が、第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子への結合を示し；
Ｒ１が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１ａが、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１Ｒ１ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｒ２が、独立して、それぞれＣ１〜Ｃ４アルキル又はオキソから選択されるか、又は２つのＲ２基が、組み合わされて、縮合Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル又はスピロＣ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイル基を形成し；
ａが、０、１、２、３又は４であり；
Ｒ３が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ３ａが、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ３Ｒ３ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｙが、Ｃ（Ｏ）Ｒ４、Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６、ＳｉＲ５Ｒ６Ｒ７、又はＣＲ１２Ｒ１２ａＯＲ１３であり；
Ｒ１２が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１２ａが、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１２Ｒ１２ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｒ１３が、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであるか；又は
ＣＨＲ１２ＯＲ１３が、組み合わされて、５、６、若しくは７員環状エーテルを形成し；
Ｒ４が、Ｃ１〜Ｃ８アルキル又はＣ３〜Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１〜Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシで任意選択的に置換され；
Ｒ５及びＲ６がそれぞれ、独立して、Ｃ１〜Ｃ４アルキル及びＣ３〜Ｃ６シクロアルキルから選択され；
Ｒ７が、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルオキシ、ヘテロシクロアルキルオキシ、又は−（ＯＣＨＲ３ＣＨ２）ｂＯ−Ｃ１〜Ｃ４アルキルであり、ここで、ヘテロシクロアルキルオキシが、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つの環ヘテロ原子を有し、且つ０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１〜Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換される４〜７員飽和複素環であり；
ｂが、１〜１０の整数であり；
Ｚが、ＣＨＲ８又はＮＲ９であり；
Ｒ８及びＲ９がそれぞれ、独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、又は−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑ［Ｏ−Ｗ］ｇ（ＮＨＣ（Ｏ））ｍ（ＣＨ２）ｑ［Ｏ−Ｗ］ｐ−Ｑ−Ａから選択され、ここで、アルキル基は、０又は１つのＱ−Ａで任意選択的に置換され；
ｑが、１、２、又は３であり；
ｇ及びｐがそれぞれ、独立して、約２〜約５０の加重平均長さを有し；
ｍが、１又は０であり；
Ｗが、Ｃ２〜Ｃ４アルキル−１，２−ジイルであり、ここで、水素、メチル、又はエチル側鎖が、いずれかの骨格炭素原子上に存在してもよく；
Ｑが、結合、Ｏ、Ｎ（Ｈ）又はＮ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）であり；
Ａが、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜Ｃ８アルキル、Ｒ１０、又はＲ１１であり、ここで、アルキル基が、０又は１つのＲ１０で任意選択的に置換され；
Ｒ１０が、式Ｉを担体に結合するのに好適な反応性官能基であり；
Ｒ１１が担体である）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩を投与する工程を含む方法である。
【００２６】
本明細書に記載される別の実施形態は、少なくとも１つの第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分Ｄの半減期を延ばすための手段であって、式（Ｉ）によって表される、ＲへのＤの結合（式中、Ｒが、生物学的活性部分Ｄの放出に好適なリンカーであり：
【化６】
2020517623.tif 000007
ここで、破線が、第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子への結合を示し；
Ｒ１が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１ａが、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１Ｒ１ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｒ２が、独立して、それぞれＣ１〜Ｃ４アルキル又はオキソから選択されるか、又は２つのＲ２基が、組み合わされて、縮合Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル又はスピロＣ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイル基を形成し；
ａが、０、１、２、３又は４であり；
Ｒ３が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ３ａが、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ３Ｒ３ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｙが、Ｃ（Ｏ）Ｒ４、Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６、ＳｉＲ５Ｒ６Ｒ７、又はＣＲ１２Ｒ１２ａＯＲ１３であり；
Ｒ１２が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１２ａが、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１２Ｒ１２ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｒ１３が、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであるか；又は
ＣＨＲ１２ＯＲ１３が、組み合わされて、５、６、若しくは７員環状エーテルを形成し；
Ｒ４が、Ｃ１〜Ｃ８アルキル又はＣ３〜Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１〜Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシで任意選択的に置換され；
Ｒ５及びＲ６がそれぞれ、独立して、Ｃ１〜Ｃ４アルキル及びＣ３〜Ｃ６シクロアルキルから選択され；
Ｒ７が、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルオキシ、ヘテロシクロアルキルオキシ、又は−（ＯＣＨＲ３ＣＨ２）ｂＯ−Ｃ１〜Ｃ４アルキルであり、ここで、ヘテロシクロアルキルオキシが、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つの環ヘテロ原子を有し、且つ０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１〜Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換される４〜７員飽和複素環であり；
ｂが、１〜１０の整数であり；
Ｚが、ＣＨＲ８又はＮＲ９であり；
Ｒ８及びＲ９がそれぞれ、独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、又は−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑ［Ｏ−Ｗ］ｇ（ＮＨＣ（Ｏ））ｍ（ＣＨ２）ｑ［Ｏ−Ｗ］ｐ−Ｑ−Ａから選択され、ここで、アルキル基は、０又は１つのＱ−Ａで任意選択的に置換され；
ｑが、１、２、又は３であり；
ｇ及びｐがそれぞれ、独立して、約２〜約５０の加重平均長さを有し；
ｍが、１又は０であり；
Ｗが、Ｃ２〜Ｃ４アルキル−１，２−ジイルであり、ここで、水素、メチル、又はエチル側鎖が、いずれかの骨格炭素原子上に存在してもよく；
Ｑが、結合、Ｏ、Ｎ（Ｈ）又はＮ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）であり；
Ａが、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜Ｃ８アルキル、Ｒ１０、又はＲ１１であり、ここで、アルキル基が、０又は１つのＲ１０で任意選択的に置換され；
Ｒ１０が、式Ｉを担体に結合するのに好適な反応性官能基であり；
Ｒ１１が担体である）
を含む手段である。
【００２７】
本明細書に記載される別の実施形態は、式（ＩＩＩ）：
【化７】
2020517623.tif 000008
（式中、ブロルシズマブが、Ｄ１、配列番号４を含み；Ｒ４が、ＣＨ３−、ＣＨ３−Ｏ−ＣＨ２−、ＣＨ３ＣＨ２−、又は（ＣＨ３）２ＣＨ−であり；担体が、ヒアルロン酸、ポリエチレングリコール、そのヒドロゲル、その架橋ヒドロゲル、又はそれらの組合せを含む）
を含む薬物送達システムである。
【００２８】
本明細書に記載される別の実施形態は、式（ＩＶ）：
【化８】
2020517623.tif 000009
（式中、Ｄ２が配列番号５を含み、Ｄ３が配列番号６を含み；Ｒ４が、ＣＨ３−、ＣＨ３−Ｏ−ＣＨ２−、ＣＨ３ＣＨ２−、又は（ＣＨ３）２ＣＨ−であり；担体が、ヒアルロン酸、ポリエチレングリコール、そのヒドロゲル、その架橋ヒドロゲル、又はそれらの組合せを含む）
を含む薬物送達システムである。
【００２９】
本明細書に記載される別の実施形態は、Ｄ−Ｒ−Ｒ１１（式中、Ｒが、生物学的活性薬剤Ｄに結合されたトレースレスリンカーを含み；Ｄが、少なくとも１つの第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分を含み；Ｒ１１が、複数のヒアルロン酸モノマーを含み、これらのそれぞれが、ランダムに並んだ非官能化ヒアルロン酸モノマー、１つ以上の架橋ヒアルロン酸モノマー及び１つ以上の薬物付加物で官能化されたヒアルロン酸モノマーＤ−Ｒを含む）を含む薬物送達システムである。一態様において、Ｄが、ブロルシズマブ（配列番号４）、Ｄ２（配列番号５）、Ｄ３（配列番号６）、Ｄ４（配列番号７）、セレラキシン、アフリベルセプト、ペグプレラニブ、ラニビズマブ、５−（５，６，７，８−テトラヒドロ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルオキシ）−インドール−１−カルボン酸［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−アミド；５−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［３，４ｄ］ピリミジン−４−イルオキシ）−インドール−１−カルボン酸［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−アミド；Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド；（Ｓ）−５−（６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルオキシ）−Ｎ−（５−（１−メチルシクロプロピル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド、又はそれらの組合せを含む。一態様において、トレースレスリンカーＲは、本明細書に記載されるとおりである。
【００３０】
本明細書に記載される別の実施形態は、式（ＸＸＩＶ）によって表されるＤ−Ｒ：
【化９】
2020517623.tif 000010
（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分であり；Ｒが、生物学的活性部分Ｄの放出に好適なリンカーである）を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩である。
【００３１】
本明細書に記載される別の実施形態は、式（ＸＸＶ）によって表されるＤ−Ｒ：
【化１０】
2020517623.tif 000011
（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分であり；Ｒが、生物学的活性部分Ｄの放出に好適なリンカーである）を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩である。
【００３２】
本明細書に記載される別の実施形態は、式（ＸＸＶＩ）によって表されるＤ−Ｒ：
【化１１】
2020517623.tif 000012
（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分であり；Ｒが、生物学的活性部分Ｄの放出に好適なリンカーである）を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩である。
【００３３】
本明細書に記載される別の実施形態は、式（ＸＸＶＩＩ）によって表されるＤ−Ｒ：
【化１２】
2020517623.tif 000013
（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分であり；Ｒが、生物学的活性部分Ｄの放出に好適なリンカーである）を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩である。
【００３４】
本明細書に記載される別の実施形態は、式（ＸＸＶＩＩＩ）によって表されるＤ−Ｒ：
【化１３】
2020517623.tif 000014
（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分であり；Ｒが、生物学的活性部分Ｄの放出に好適なリンカーである）を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩である。
【００３５】
本明細書に記載される別の実施形態は、式（ＸＸＩＸ）によって表されるＤ−Ｒ：
【化１４】
2020517623.tif 000015
（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分であり；Ｒが、生物学的活性部分Ｄの放出に好適なリンカーである）を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩である。
【００３６】
本明細書に記載される別の実施形態は、式（ＸＸＸ）：
【化１５】
2020517623.tif 000016
（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分であり；Ｒ４が、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、１−メチル−シクロプロピル、又はメトキシメチルである）によって表される薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩である。
【００３７】
本明細書に記載される別の実施形態は、式（ＸＸＸＩ）によって表されるＤ−Ｒ（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分であり；
Ｒが、生物学的活性部分Ｄの放出に好適なリンカーであり：
【化１６】
2020517623.tif 000017
ここで、破線が、第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子への結合を示し；
ＹがＣ（Ｏ）Ｒ４であり；
Ｒ４が、Ｃ１〜Ｃ８アルキル又はＣ３〜Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１〜Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシで任意選択的に置換され；
ＺがＮ−Ｌ−Ａであり；
ＬがＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＮＨであり；
ＡがＲ１１であり；
Ｒ１１が、架橋ヒアルロン酸に由来するヒドロゲルであり、ここで、ヒアルロン酸は、Ｎ（Ｈ）（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３  ＣＨ２ＣＨ２Ｎ３の少なくとも１つのアミド結合した側鎖を含み、ヒドロゲルを形成するのに使用される架橋剤は、ＰＥＧ（２０００）−ビス−［３−（（（（（１Ｒ，８Ｓ，９ｓ）−ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパノエート］を含む）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩である。一態様において、Ｄがブロルシズマブであり、Ｒ４がＣＨ２ＣＨ３である。別の態様において、Ｄがブロルシズマブであり、Ｒ４がＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ３である。
【００３８】
本明細書に記載される別の実施形態は、式（ＸＸＸＩＩ）：
【化１７】
2020517623.tif 000018
（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分であり；Ｒ４が、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、１−メチル−シクロプロピル、又はメトキシメチルである）によって表される薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩である。
【００３９】
一態様において、Ｄがブロルシズマブであり、Ｒ４がＣＨ２ＣＨ３である。別の態様において、Ｄがブロルシズマブであり、Ｒ４がＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ３である。
【００４０】
本明細書に記載される別の実施形態は、式ＸＸＸＩＩＩによって表されるＤ−Ｒ（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分であり；
Ｒが、生物学的活性部分Ｄの放出に好適なリンカーであり：
【化１８】
2020517623.tif 000019
ここで、破線が、第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子への結合を示し；
ＹがＣ（Ｏ）Ｒ４であり；
Ｒ４が、Ｃ１〜Ｃ８アルキル又はＣ３〜Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１〜Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシで任意選択的に置換され；
ＺがＮ−Ｌ−Ａであり；
ＬがＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＮＨであり；
ＡがＲ１１であり；
Ｒ１１が、架橋ヒアルロン酸に由来するヒドロゲルであり、ここで、ヒアルロン酸は、Ｎ（Ｈ）（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３  ＣＨ２ＣＨ２Ｎ３の少なくとも１つのアミド結合した側鎖を含み、ヒドロゲルを形成するのに使用される架橋剤は、ＰＥＧ（２０００）−ビス−［１−（（（（１’Ｒ，８’Ｓ，９’ｓ）−ビシクロ［６．１．０］ノナ−４’−イン−９’−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ−シクロプロパン−１−カルボン酸エステル］を含む）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩である。
【００４１】
一態様において、Ｄがブロルシズマブであり、Ｒ４がＣＨ２ＣＨ３である。別の態様において、Ｄがブロルシズマブであり、Ｒ４がＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ３である。
【００４２】
本明細書に記載される別の実施形態は、式（ＸＸＸＩＶ）：
【化１９】
2020517623.tif 000020
（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分であり；Ｒ４が、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、１−メチル−シクロプロピル、又はメトキシメチルである）によって表される薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩である。
【００４３】
一態様において、Ｄがブロルシズマブであり、Ｒ４がＣＨ２ＣＨ３である。別の態様において、Ｄがブロルシズマブであり、Ｒ４がＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ３である。
【００４４】
本明細書に記載される別の実施形態は、式ＸＸＸＶによって表されるＤ−Ｒ（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分であり；
Ｒが、生物学的活性部分Ｄの放出に好適なリンカーであり：
【化２０】
2020517623.tif 000021
ここで、破線が、第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子への結合を示し；
ＹがＣ（Ｏ）Ｒ４であり；
Ｒ４が、Ｃ１〜Ｃ８アルキル又はＣ３〜Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１〜Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシで任意選択的に置換され；
ＺがＮ−Ｌ−Ａであり；
ＬがＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＮＨであり；
ＡがＲ１１であり；
Ｒ１１が、架橋ヒアルロン酸に由来するヒドロゲルであり、ここで、ヒアルロン酸は、Ｎ（Ｈ）（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３  ＣＨ２ＣＨ２Ｎ３の少なくとも１つのアミド結合した側鎖を含み、ヒドロゲルを形成するのに使用される架橋剤は、ＰＥＧ（２０００）−ビス−［１−（（（（１’Ｒ，８’Ｓ，９’ｓ）−ビシクロ［６．１．０］ノナ−４’−イン−９’−イル）メトキシ）カルボニル）ピペリジン−４−カルボン酸エステル］を含む）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩である。
【００４５】
一態様において、Ｄがブロルシズマブであり、Ｒ４がＣＨ２ＣＨ３である。別の態様において、Ｄがブロルシズマブであり、Ｒ４がＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ３である。
【００４６】
本明細書に記載される別の実施形態は、式（ＸＸＸＶＩ）：
【化２１】
2020517623.tif 000022
（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分であり；Ｒ４が、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、１−メチル−シクロプロピル、又はメトキシメチルである）によって表される薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩である。
【００４７】
一態様において、Ｄがブロルシズマブであり、Ｒ４がＣＨ２ＣＨ３である。別の態様において、Ｄがブロルシズマブであり、Ｒ４がＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ３である。
【００４８】
本明細書に記載される別の実施形態は、式ＸＸＸＶＩＩによって表されるＤ−Ｒ（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分であり；
Ｒが、生物学的活性部分Ｄの放出に好適なリンカーであり：
【化２２】
2020517623.tif 000023
ここで、破線が、第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子への結合を示し；
ＹがＣ（Ｏ）Ｒ４であり；
Ｒ４が、Ｃ１〜Ｃ８アルキル又はＣ３〜Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１〜Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシで任意選択的に置換され；
ＺがＮ−Ｌ−Ａであり；
ＬがＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＮＨであり；
ＡがＲ１１であり；
Ｒ１１が、架橋ヒアルロン酸に由来するヒドロゲルであり、ここで、ヒアルロン酸は、Ｎ（Ｈ）（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３  ＣＨ２ＣＨ２Ｎ３の少なくとも１つのアミド結合した側鎖を含み、ヒドロゲルを形成するのに使用される架橋剤は、ＰＥＧ（２０００）−ビス−［７−（（（（（１’Ｒ，８’Ｓ，９’ｓ）−ビシクロ［６．１．０］ノナ−４’−イン−９’−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）ヘプタノエート］を含む）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩である。
【００４９】
一態様において、Ｄがブロルシズマブであり、Ｒ４がＣＨ２ＣＨ３である。別の態様において、Ｄがブロルシズマブであり、Ｒ４がＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ３である。
【００５０】
本明細書に記載される別の実施形態は、式（ＸＸＸＶＩＩＩ）：
【化２３】
2020517623.tif 000024
（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分であり；Ｒ４が、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、１−メチル−シクロプロピル、又はメトキシメチルである）によって表される薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩である。
【００５１】
一態様において、Ｄがブロルシズマブであり、Ｒ４がＣＨ２ＣＨ３である。別の態様において、Ｄがブロルシズマブであり、Ｒ４がＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ３である。
【００５２】
本明細書に記載される別の実施形態は、式（ＸＸＸＩＸ）によって表されるＤ−Ｒ（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分であり；
Ｒが、生物学的活性部分Ｄの放出に好適なリンカーであり：
【化２４】
2020517623.tif 000025
ここで、破線が、第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子への結合を示し；
ＹがＣ（Ｏ）Ｒ４であり；
Ｒ４が、Ｃ１〜Ｃ８アルキル又はＣ３〜Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１〜Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシで任意選択的に置換され；
ＺがＮ−Ｌ−Ａであり；
ＬがＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＮＨであり；
ＡがＲ１１であり；
Ｒ１１が、架橋ヒアルロン酸に由来するヒドロゲルであり、ここで、ヒアルロン酸は、Ｎ（Ｈ）（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３  ＣＨ２ＣＨ２Ｎ３の少なくとも１つのアミド結合した側鎖を含み、ヒドロゲルを形成するのに使用される架橋剤は、ＰＥＧ（２０００）−ビス−［２−メチル−３−（（（（（１’Ｒ，８’Ｓ，９’ｓ）−ビシクロ［６．１．０］ノナ−４’−イン−９’−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパノエート］を含む）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩である。一態様において、Ｄがブロルシズマブであり、Ｒ４がＣＨ２ＣＨ３である。別の態様において、Ｄがブロルシズマブであり、Ｒ４がＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ３である。
【００５３】
本明細書に記載される別の実施形態は、式：
【化２５】
2020517623.tif 000026
（式中、
Ｌが、任意選択的に置換される二価リンカーＱ−［Ｓｐ−Ｑ］ｈ−Ｑであり；
Ｑが、独立して、それぞれ、結合、Ｏ、Ｃ（Ｏ）、Ｎ（Ｈ）、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｃ（Ｏ）ＮＨ、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｏ、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）２、Ｎ（Ｈ）Ｓ（Ｏ）２、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）Ｓ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｈ）、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｃ１〜Ｃ２アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ２アルキル、Ｃ１〜Ｃ２アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ２アルキル、１，２，３−トリアゾール、ＯＰ（Ｏ）２、Ｐ（Ｏ）２Ｏ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル−Ｐ（Ｏ）２−Ｏ、又はＯ−Ｐ（Ｏ）２−Ｃ１−４アルキルから選択され；
Ｓｐが、独立して、それぞれ、任意選択的に置換されるＣ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、［Ｗ−Ｏ］ｇ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル−［Ｏ−Ｗ］ｇ、［Ｏ−Ｗ］ｇ−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８Ｃアルキル−［Ｏ−Ｗ］ｇ−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、又はオリゴペプチドから選択され；
ｈが、１〜２０の整数であり；
ｇが、約２〜約５０の加重平均数であり；
Ｗが、Ｃ２〜Ｃ４アルキル−１，２−ジイルであり、ここで、水素、メチル、又はエチル側鎖が、いずれかの骨格炭素原子上に存在してもよく；
Ｒ４が、Ｃ１〜Ｃ８アルキル又はＣ３〜Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１〜Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシで任意選択的に置換される）
によって表される担体システム又はその薬学的に許容できる塩である。
【図面の簡単な説明】
【００５４】
【図１】図１は、トレースレスリンカーによって担体にコンジュゲートされた薬物、及び放出後の薬物を含む薬物送達システムの図を示す。トリガーの反応により、薬物を薬物送達システムに結合するアミド結合を切断する求核官能基が生成される。この非限定的な例において、薬物は、第一級アミン基を介して結合される。
【図２】図２は、ヒドロゲル−薬物コンジュゲートの部分的な化学的な図を示し、ここで、ヒドロゲルは、ＰＥＧで架橋されたヒアルロン酸で構成され、薬物は、トリガーＹを有するトレースレスリンカーによってヒドロゲルにコンジュゲートされる。図２及び本明細書全体を通して、ヒアルロン酸などのポリマー分子が、［Ｐ］ｎとして表され、ここで、Ｐは、モノマー繰返し単位を表し、ｎは、モノマーの繰返し単位の平均数を表す。繰返し単位の数は、任意の所与のポリマー集団のランダムな分布である。さらに、本明細書に記載されるヒドロゲル又は薬物送達システムのための独立した分子の相対的な結合性は、集団内でランダムである。ヒドロゲル又は薬物送達システムの構造図は、二次元で１つの可能な構造単位を表すが、これらの複合体は、多くの構造サブユニットを有する三次元である。
【図３Ａ】図３：図３Ａは、トレースレスリンカーと、アジド官能化ヒアルロン酸ポリマーとの例示的な反応を示し、図３Ｂは、トレースレスリンカーと、アジド官能化ヒドロゲルとの例示的な反応を示す。
【図３Ｂ】（上記の通り。）
【図４Ａ】図４：図４Ａ（実施例８．１を例示する）は、ヒドロゲルコンジュゲートからのブロルシズマブのインビトロ放出の例を示し、図４Ｂは、ヒドロゲルコンジュゲートＣ１ａ、Ｃ２ａ、Ｃ３ａ、及びＣ４ａからのブロルシズマブのインビトロでの比較放出を示す。
【図４Ｂ】（上記の通り。）
【図５Ａ】図５：図５Ａ（実施例８．２を例示する）は、ＰＢＳ緩衝液中へのトレースレスリンカーＬ１、Ｌ２、及びＬ５からの放出を比較する、ヒドロゲルコンジュゲートからのＤ２のインビトロ放出を示し、図５Ｂは、ウシ滑液（ＢＳＦ）中へのトレースレスリンカーＬ１、Ｌ２、及びＬ５からの放出を比較する、ヒドロゲルコンジュゲートからのＤ２のインビトロ放出を示す。
【図５Ｂ】（上記の通り。）
【図６】図６（実施例８．３を例示する）は、トレースレスリンカーからのＤ４のインビトロ放出を示し、親の損失、中間体の出現、及びその後の消失及びＤ４の放出を示す。
【図７Ａ】図７：図７（実施例９．１を例示する）は、２つの異なる用量レベルでのブロルシズマブ−ヒドロゲルのインビボ試験からのデータを示す。図７Ａは、ウサギＶＥＧＦ接種モデルからのフルオレセイン漏出データを示し、図７Ｂは、図７Ａにおける同じウサギからの液体硝子体液中で測定される、ブロルシズマブＤ１のレベルを示す。
【図７Ｂ】（上記の通り。）
【図８】図８（実施例９．３を例示する）は、ヒドロゲルコンジュゲートからのＤ４のインビボ放出を示す。
【図９】図９（実施例８．２を例示する）は、ウシ滑液（毎日採取）中へヒドロゲルからインビトロで放出されるＤ２の活性を示す。
【発明を実施するための形態】
【００５５】
第一級若しくは第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性薬剤を送達するための薬物送達システム、その薬学的に許容できる塩、それに関連する薬物送達試薬、この薬物送達システムを含む医薬組成物、及び持続放出治療薬としての薬物送達システムの使用が本明細書に記載される。
【００５６】
本明細書において使用される際、「アルキル」という用語は、直鎖、分枝鎖又は環状炭素鎖を指す。特に規定されない限り、アルキル炭素の１つ以上の水素原子は、置換基で置換され得る。アルキルの代表例としては、限定はされないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシル、３−メチルヘキシル、２，２−ジメチルペンチル、２，３−ジメチルペンチル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル、ｎ−ノニル、ｎ−デシルなどが挙げられる。分子の２つの部分がアルキル基によって結合される場合、それは、アルキレンとも呼ばれる。本明細書において使用される際の「低級アルキル」は、好ましいある実施形態において、アルキルのサブセットであり、１〜４個の炭素原子を含有する直鎖状又は分枝鎖状炭化水素基を指す。低級アルキルの代表例としては、限定はされないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチルなどが挙げられる。「アルキル」又は「低級アルキル」という用語は、特に示されない限り、置換及び非置換アルキル又は低級アルキルの両方を含むことが意図され、これらの基は、ハロ（例えば、ハロアルキルを形成するため）、アルキル、ハロアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、アリールアルキル、複素環式、ヘテロシクロアルキル、ヒドロキシル、アルコキシ（それによって、ポリエチレングリコールなどのポリアルコキシを生成する）、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、ハロアルコキシ、シクロアルコキシ、シクロアルキルアルキルオキシ、アリールオキシ、アリールアルキルオキシ、ヘテロシクロオキシ、ヘテロシクロｌアルキルオキシ、メルカプト、アミノ、アルキルアミノ、アルケニルアミノ、アルキニルアミノ、ハロアルキルアミノ、シクロアルキルアミノ、シクロアルキルアルキルアミノ、アリールアミノ、アリールアルキルアミノ、ヘテロシクロアミノ、ヘテロシクロアルキルアミノ、二置換アミノ、アシルアミノ、アシルオキシ、エステル、アミド、スルホンアミド、尿素、アルコキシアシルアミノ、アミノアシルオキシ、ニトロ、シアノアルキル−Ｓ（Ｏ）ｍ、ハロアルキル−Ｓ（Ｏ）ｍ、アルケニル−Ｓ（Ｏ）ｎ、アルキニル−Ｓ（Ｏ）ｍ、シクロアルキル−Ｓ（Ｏ）ｍ、シクロアルキルアルキル−Ｓ（Ｏ）ｍ、アリール−Ｓ（Ｏ）ｍ、アリールアルキル−Ｓ（Ｏ）ｍ、ヘテロシクロ−Ｓ（Ｏ）ｍ、又はヘテロシクロアルキル−Ｓ（Ｏ）ｍ（ここで、ｍ＝０、１、２、又は３である）から選択される基を含むがこれらに限定されないさらなる有機及び／又は無機基で置換され得る。
【００５７】
本明細書において使用される際、「アルケニル」という用語は、単独で又は別の基の一部として、１〜１０、２０、又は３０個以上の炭素原子（又は低級アルケニルでは１〜４個の炭素原子）を含有し、直鎖中に１〜４、５、又は６つ以上の二重結合を含む直鎖状又は分枝鎖状炭化水素を指す。アルケニルの代表例としては、限定はされないが、ビニル、２−プロペニル、３−ブテニル、２−ブテニル、４−ペンテニル、３−ペンテニル、２−ヘキセニル、３−ヘキセニル、２，４−ヘプタジエンなどが挙げられる。「アルケニル」又は「低級アルケニル」という用語は、特に示されない限り、置換及び非置換アルケニル又は低級アルケニルの両方を含むことが意図され、これらの基は、上記のアルキル及び低級アルキルに関連して記載される基で置換され得る。
【００５８】
本明細書において使用される際、「アルキニル」という用語は、本明細書において使用される際、単独で又は別の基の一部として、直鎖中に１、２、又は３個以上の三重結合を含む、１〜１０、２０、３０、又は４０個以上の炭素原子（又は低級アルキニルでは１〜４個の炭素原子）を含有する直鎖状又は分枝鎖状炭化水素を指す。アルキニルの代表例としては、限定はされないが、２−プロピニル、３−ブチニル、２−ブチニル、４−ペンチニル、３−ペンチニルなどが挙げられる。「アルキニル」又は「低級アルキニル」という用語は、特に示されない限り、置換及び非置換アルキニル又は低級アルキニルの両方を含むことが意図され、これらの基は、上記のアルキル及び低級アルキルに関連して記載されるのと同じ基で置換され得る。
【００５９】
本明細書において使用される際、「シクロアルキニル」という用語は、６〜１６個の炭素原子、及び環構造中に少なくとも１つ以上の三重結合を含む１、２、又は３つの縮合若しくは架橋環を有する環状炭化水素環系を指す。
【００６０】
本明細書において使用される際、「ヘテロシクロアルキニル」という用語は、６〜１６個の炭素原子、酸素、窒素及び硫黄から独立して選択される１、２、３、又は４個のヘテロ原子、及び環構造中に少なくとも１つ以上の三重結合を含む１、２又は３つの縮合若しくは架橋環を有する環状炭化水素環系を指す。
【００６１】
本明細書において使用される際、「シクロアルキル」という用語は、単独で又は別の基の一部として、３、４、５、６、７、又は８個の炭素（この炭素は、後述される複素環式基において置換され得る）を含有する飽和又は部分的に不飽和の環状炭化水素基を指す。シクロアルキルの代表例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、及びシクロオクチルが挙げられる。これらの環は、ハロ又は低級アルキルなどの本明細書に記載されるさらなる置換基で任意選択的に置換され得る。「シクロアルキル」という用語は、包括的であり、特に規定されない限り、後述される複素環式基を含むことが意図される。
【００６２】
本明細書において使用される際、「複素環式」又は「ヘテロシクリル」という用語は、単独で又は別の基の一部として、脂肪族（例えば、完全若しくは部分的に飽和した複素環式）又は芳香族（例えば、ヘテロアリール）単環式−又は二環式環系を指す。単環式環系は、酸素、窒素及び硫黄から独立して選択される１、２、３、又は４個のヘテロ原子を含有する任意の３員〜８員環によって例示される。５員環は、０〜２つの二重結合を有し、６員環は、０〜３つの二重結合を有する。単環式環系の代表例としては、限定はされないが、アゼチジン、アゼピン、アジリジン、ジアゼピン、１，３−ジオキソラン、ジオキサン、ジチアン、フラン、イミダゾール、イミダゾリン、イミダゾリジン、イソチアゾール、イソチアゾリン、イソチアゾリジン、イソオキサゾール、イソオキサゾリン、イソオキサゾリジン、モルホリン、オキサジアゾール、オキサジアゾリン、オキサジアゾリジン、オキサゾール、オキサゾリン、オキサゾリジン、ピペラジン、ピペリジン、ピラン、ピラジン、ピラゾール、ピラゾリン、ピラゾリジン、ピリジン、ピリミジン、ピリダジン、ピロール、ピロリン、ピロリジン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェン、テトラジン、テトラゾール、チアジアゾール、チアジアゾリン、チアジアゾリジン、チアゾール、チアゾリン、チアゾリジン、チオフェン、チオモルホリン、チオモルホリンスルホン、チオピラン、トリアジン、トリアゾール、トリチアンなどが挙げられる。二環式環系は、本明細書に定義されるアリール基、本明細書に定義されるシクロアルキル基に縮合された上記の単環式環系、又は本明細書に定義される別の単環式環系のいずれかによって例示される。二環式環系の代表例としては、限定はされないが、例えば、ベンズイミダゾール、ベンゾチアゾール、ベンゾチアジアゾール、ベンゾチオフェン、ベンゾオキサジアゾール、ベンゾオキサゾール、ベンゾフラン、ベンゾピラン、ベンゾチオピラン、ベンゾジオキシン、１，３−ベンゾジオキソール、シンノリン、インダゾール、インドール、インドリン、インドリジン、ナフチリジン、イソベンゾフラン、イソベンゾチオフェン、イソインドール、イソインドリン、イソキノリン、フタラジン、プリン、ピラノピリジン、キノリン、キノリジン、キノキサリン、キナゾリン、テトラヒドロイソキノリン、テトラヒドロキノリン、チオピラノピリジンなどが挙げられる。これらの環は、その四級化誘導体を含み、ハロ、アルキル、ハロアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、アリールアルキル、複素環式、ヘテロシクロアルキル、ヒドロキシル、アルコキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、ハロアルコキシ、シクロアルコキシ、シクロアルキルアルキルオキシ、アリールオキシ、アリールアルキルオキシ、ヘテロシクロオキシ、ヘテロシクロｌアルキルオキシ、メルカプト、アミノ、アルキルアミノ、アルケニルアミノ、アルキニルアミノ、ハロアルキルアミノ、シクロアルキルアミノ、シクロアルキルアルキルアミノ、アリールアミノ、アリールアルキルアミノ、ヘテロシクロアミノ、ヘテロシクロアルキルアミノ、二置換アミノ、アシルアミノ、アシルオキシ、エステル、アミド、スルホンアミド、尿素、アルコキシアシルアミノ、アミノアシルオキシ、ニトロ、シアノ、アルキル−Ｓ（Ｏ）ｍハロアルキル−Ｓ（Ｏ）ｍ、アルケニル−Ｓ（Ｏ）ｍ、アルキニル−Ｓ（Ｏ）ｍ、シクロアルキル−Ｓ（Ｏ）ｍ、シクロアルキルアルキル−Ｓ（Ｏ）ｍ、アリール−Ｓ（Ｏ）ｍ、アリールアルキル−Ｓ（Ｏ）ｍ、ヘテロシクロ−Ｓ（Ｏ）ｍ、ヘテロシクロアルキル−Ｓ（Ｏ）ｍ（ここで、ｍ＝０、１、２、又は３である）から選択される基を含むがこれらに限定されないさらなる有機及び／又は無機基で任意選択的に置換され得る。
【００６３】
本明細書において使用される際、「ヘテロアリール」という用語は、上記の複素環式に関連して記載されるとおりである。
【００６４】
本明細書において使用される際、「シクロアルキルアルキル」、「シクロアルキルアルケニル」、及び「シクロアルキルアルキニル」という用語は、本明細書において使用される際、単独で又は別の基の一部として、本明細書に定義される、それぞれのアルキル、アルケニル、又はアルキニル基を介して親分子部分に付加される、本明細書に定義されるシクロアルキル基を指す。
【００６５】
本明細書において使用される際、「アルコキシ」という用語は、単独で又は別の基の一部として、オキシ基、−Ｏ−を介して親分子部分に付加される、本明細書に定義されるアルキル又は低級アルキル基（ひいては、ポリアルコキシなどの置換形態を含む）を指す。アルコキシの代表例としては、限定はされないが、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、２−プロポキシ、ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ペンチルオキシ、ヘキシルオキシなどが挙げられる。ある態様において、アルコキシ基は、より複雑な分子の一部である場合、エーテル結合を介してアルキル又は低級アルキルに結合されるアルコキシ置換基を含む。
【００６６】
本明細書において使用される際、「ハロ」又は「ハロゲン」という用語は、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、又は−Ｉを含む任意の好適なハロゲンを指す。
【００６７】
本明細書において使用される際、「アシル」という用語は、単独で又は別の基の一部として、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’基を指し、ここで、Ｒ’が、アリール、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル又は本明細書に記載される他の好適な置換基などの任意の好適な置換基である。
【００６８】
本明細書において使用される際、「アルキルチオ」という用語は、単独で又は別の基の一部として、本明細書に定義されるチオール部分を介して親分子部分に付加される、本明細書に定義されるアルキル基を指す。アルキルチオの代表例としては、限定はされないが、メチルチオ、エチルチオ、ｔｅｒｔ−ブチルチオ、ヘキシルチオなどが挙げられる。
【００６９】
本明細書において使用される際、「アミド」、「アミド」、又は「アミジル」という用語は、本明細書において使用される際、単独で又は別の基の一部として、−Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂ基を指し、ここで、Ｒａ及びＲｂが、独立して、アルキル、水素、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル又はアリールなどの任意の好適な置換基である。
【００７０】
本明細書において使用される際、「エステル」という用語は、単独で又は別の基の一部として、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’基を指し、ここで、Ｒ’が、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル又はアリールなどの任意の好適な置換基である。
【００７１】
本明細書において使用される際、「エーテル」という用語は、単独で又は別の基の一部として、−ＣＯＲ’基を指し、ここで、Ｒ’が、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、又はアリールなどの任意の好適な置換基である。
【００７２】
本明細書において使用される際、「スルホン」という用語は、単独で又は別の基の一部として、−Ｓ（Ｏ）（Ｏ）Ｒ’基を指し、ここで、Ｒ’が、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル又はアリールなどの任意の好適な置換基である。
【００７３】
本明細書において使用される際、「スルホンアミド」という用語は、単独で又は別の基の一部として、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲａＲｂ基を指し、ここで、Ｒａ及びＲｂが、独立して、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル又はアリールなどの任意の好適な置換基である。
【００７４】
本明細書において使用される際、「カルボキシル」という用語は、基−Ｃ（Ｏ）ＯＨを指す。
【００７５】
本明細書において使用される際、「ヒドロキシル」という用語は、基−ＯＨを指す。
【００７６】
本明細書において使用される際、「アミノ」という用語は、基−ＮＨ２を指す。
【００７７】
本明細書において使用される際、ビニルは、基−ＣＨ２ＣＨ２を指す。
【００７８】
本明細書において使用される際、「スルホネート」という用語は、基−Ｓ（Ｏ）（Ｏ）ＯＲ’を指し、ここで、Ｒ’が、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル又はアリールなどの任意の好適な置換基である。
【００７９】
本明細書において使用される際、「スルホニル」という用語は、基−Ｓ（Ｏ）（Ｏ）Ｒ’を指し、ここで、Ｒ’が、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル又はアリールなどの任意の好適な置換基である。
【００８０】
本明細書において使用される際、チオールは、基−ＳＨを指す。
【００８１】
本明細書において使用される際、オキシアミン又はアミノキシは、基−ＯＮＨ２を指す。
【００８２】
本明細書において使用される際、「ヒドラジド」又は「ヒドラジジル」は、基−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＮＨ２を指す。
【００８３】
本明細書において使用される際、「マレイミド又はマレイミジル」は、少なくとも１つのＣ−Ｃ二重結合を有する分子式Ｃ２Ｈ２（Ｃ（Ｏ））２ＮＨ又は基−Ｎ（Ｃ（Ｏ））２Ｃ２Ｈ２で表される環状化合物を指す。
【００８４】
本明細書において使用される際、フランは、４個の炭素原子及び１個の酸素を有する５員芳香環を指す。
【００８５】
本明細書において使用される際、「テトラジン」又は「テトラジニル」は、分子式Ｃ２Ｈ２Ｎ４又は基−Ｃ２ＨＮ４を有する、４個の窒素原子を含有する６員芳香環を指す。
【００８６】
本明細書において使用される際、「アジド」、「アジジル」、又は「アジド」という用語は、−Ｎ３基を指す。
【００８７】
本明細書において使用される際、「ＢＣＮ」という用語は、ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル）メチルを指し、ここで、環外メチレンは、示されるように二環に対してエキソ（ｅｘｏ）又はエンド（ｅｎｄｏ）配向を有し得る。
【化２６】
2020517623.tif 000027
【００８８】
本明細書において使用される際、本明細書全体を通して、便宜上、ほとんどの構造が、立体化学を示さず、したがってあらゆる可能な立体異性体を表す。
【００８９】
特に、ＢＣＮとアジド化合物との間の反応のトリアゾール生成物の構造に関して、本明細書において使用される際、本明細書全体を通して、トリアゾール環上のＮ−結合置換基は、便宜上、１つの位置化学位置で示される。当業者は、ＢＣＮアルキンとアジド化合物との反応が、示されるようにトリアゾールの１位及び３位におけるＮ−結合置換基を有する生成物の立体異性体混合物をもたらすことを認識するであろう。
【化２７】
2020517623.tif 000028
【００９０】
本明細書において使用される際、「反応性官能基」は、直交カップリング反応に好適な官能基を指す。好適な反応性官能基は、直交反応を容易に起こすものである。例示的及び非限定的な直交化学反応は、表１に示される官能基を含む。
【００９１】
本明細書において使用される際、「トリガー」は、新たな官能基をもたらす化学反応を起こすことが可能な、薬物トレースレスリンカー付加物Ｄ−Ｒ中に存在する官能基を指す。新たな官能基の存在は、薬物とトレースレスリンカーとの間の結合の安定性を著しく低下させ、薬物放出の可能性を高める。
【００９２】
「数平均分子量」又は「Ｍｎ」という用語は、ｇ／ｍｏｌの単位で表される試料中の全ての分子の統計的平均分子量を指す。数平均分子量は、ゲル浸透クロマトグラフィー（ここで、Ｍｎは、屈折率、紫外線、又は他の検出器などのオンライン検出システムに基づく公知の標準に基づいて計算され得る）、粘度測定、質量分析法、又は束一的（ｃｏｌｌｉｇａｔｉｖｅ）方法（例えば、蒸気圧浸透圧法、末端基決定、若しくはプロトンＮＭＲ）などの当該技術分野において公知の技術によって決定され得る。数平均分子量は、下式
【数１】
2020517623.tif 000029
によって定義され、式中、Ｍｉは、分子の分子量であり、Ｎｉは、その分子量の分子の数である。
【００９３】
「重量平均分子量」又は「Ｍｗ」という用語は、ｇ／ｍｏｌの単位で表される、分子量平均へのその寄与を決定する際に各分子の重量を考慮に入れて、全ての分子の統計的平均分子量を指す。所与の分子の分子量が高くなるほど、より多くの該当する分子がＭｗ値に寄与する。重量平均分子量は、静的光散乱、小角中性子散乱、Ｘ線散乱、及び沈降速度などの、分子サイズに対して感受性である、当該技術分野において公知の技術によって計算され得る。重量平均分子量は、下式
【数２】
2020517623.tif 000030
によって定義され、式中、Ｍｉは、分子の分子量であり、Ｎｉは、その分子量の分子の数である。
【００９４】
「粘度平均分子量」又は「Ｍｖ」という用語は、ｇ／ｍｏｌの単位で表される、分子量平均へのその寄与を決定する際に各分子の重量を考慮に入れて、全ての分子の統計的平均分子量を指す。より大きい分子又はポリマーは、より小さい分子より高い粘度を有する。粘度平均分子量は、下式
【数３】
2020517623.tif 000031
によって定義され、式中、Ｍｉは、分子の分子量であり、Ｎｉは、その分子量の分子の数であり、ａは、分子、溶媒、及び温度によって決定される定数である。可撓性ポリマー分子は、０．５≦ａ≦０．８のａ値を有する。半可撓性ポリマー分子は、≧０．８のａを有する。粘度平均分子量は、固有粘度実験又はサイズ排除クロマトグラフィーから決定され得る。
【００９５】
本明細書において使用される際、「薬物」は、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む１つ以上の生物学的活性部分を含む。生物学的活性部分は、小分子、高分子、例えばタンパク質、ペプチド、若しくは核酸、又はそれらの組合せであり得る。特に、トレースレスリンカーＲに関して、薬物又は生物学的活性部分は、Ｄ−Ｒの図中の「Ｄ」を含む。「薬物」、「生物学的活性分子」、「生物学的活性部分」、「生物学的活性薬剤」、「活性薬剤」という用語又は語句は、ウイルス、細菌、真菌、植物、動物、及びヒトを含むがこれらに限定されない生物有機体の任意の物理的又は生化学的特性に影響を与え得る任意の物質を指す。特に、薬物又は生物学的活性分子は、ヒト若しくは他の動物の疾病の診断、治癒、軽減、治療、若しくは予防、又はヒト若しくは動物の身体的若しくは精神的健康を他の形で向上させることを意図した任意の物質を含む。本明細書において使用される際、いくつかの薬物は、全体を通してＤ１〜Ｄ４と呼ばれる。Ｄ１は、ブロルシズマブ（配列番号４）を含む。Ｄ２は、（配列番号５）を含む。Ｄ３は、（配列番号６）を含む。Ｄ４は、（配列番号７）を含む。
【００９６】
本明細書において使用される際、「少なくとも１つの第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分」は、トレースレスリンカーへの結合前の遊離生物学的活性部分、又はトレースレスリンカー付加物「Ｄ−Ｒ」からの切断後に生じる遊離生物学的活性部分「Ｄ−Ｈ」の両方を指す。ある態様において、薬物付加物Ｄ−Ｒは、生物学的活性を有し得る。
【００９７】
本明細書において使用される際、薬物又は生物学的活性部分の「遊離形態」は、トレースレスリンカーに結合される前又は薬物送達システム中でトレースレスリンカーから放出された後などの、その非修飾、薬理活性形態の薬物を指す。
【００９８】
本明細書において使用される際、「トレースレスリンカー」、Ｒは、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分Ｄの放出に好適な式（Ｉ）によって表されるリンカーであり：
【化２８】
2020517623.tif 000032
ここで、破線が、第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子への結合を示し；
Ｒ１が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１ａが、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１Ｒ１ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｒ２が、独立して、それぞれＣ１〜Ｃ４アルキル又はオキソから選択されるか、又は２つのＲ２基が、組み合わされて、縮合Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル又はスピロＣ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイル基を形成し；
ａが、０、１、２、３又は４であり；
Ｒ３が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ３ａが、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ３Ｒ３ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｙが、Ｃ（Ｏ）Ｒ４、Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６、ＳｉＲ５Ｒ６Ｒ７、又はＣＲ１２Ｒ１２ａＯＲ１３であり；
Ｒ１２が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１２ａが、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１２Ｒ１２ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｒ１３が、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであるか；又は
ＣＨＲ１２ＯＲ１３が、組み合わされて、５、６、若しくは７員環状エーテルを形成し；
Ｒ４が、Ｃ１〜Ｃ８アルキル又はＣ３〜Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１〜Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシで任意選択的に置換され；
Ｒ５及びＲ６がそれぞれ、独立して、Ｃ１〜Ｃ４アルキル及びＣ３〜Ｃ６シクロアルキルから選択され；
Ｒ７が、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルオキシ、ヘテロシクロアルキルオキシ、又は−（ＯＣＨＲ３ＣＨ２）ｂＯ−Ｃ１〜Ｃ４アルキルであり、ここで、ヘテロシクロアルキルオキシが、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つの環ヘテロ原子を有し、且つ０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１〜Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換される４〜７員飽和複素環であり；
ｂが、１〜１０の整数であり；
Ｚが、ＣＨ−Ｌ−Ａ、ＣＨ−Ａ、Ｎ−Ｌ−Ａ、又はＮ−Ａであり；
Ｌが、任意選択的に置換される二価リンカーであり；
Ａが、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜Ｃ８アルキル、Ｒ１０、又はＲ１１であり、ここで、アルキル基が、０又は１つのＲ１０で任意選択的に置換され；
Ｒ１０が、式Ｉを担体に結合するのに好適な反応性官能基であり；
Ｒ１１が担体である。
【００９９】
別の実施形態において、Ｒは、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分Ｄの放出に好適な式（Ｉ）によって表されるリンカーであり：
【化２９】
2020517623.tif 000033
ここで、破線が、第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子への結合を示し；
Ｒ１が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１ａが、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１Ｒ１ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｒ２が、独立して、それぞれＣ１〜Ｃ４アルキル又はオキソから選択されるか、又は２つのＲ２基が、組み合わされて、縮合Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル又はスピロＣ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイル基を形成し；
ａが、０、１、２、３又は４であり；
Ｒ３が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ３ａが、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ３Ｒ３ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｙが、Ｃ（Ｏ）Ｒ４、Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６、ＳｉＲ５Ｒ６Ｒ７、又はＣＲ１２Ｒ１２ａＯＲ１３であり；
Ｒ１２が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１２ａが、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１２Ｒ１２ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｒ１３が、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであるか；又は
ＣＨＲ１２ＯＲ１３が、組み合わされて、５、６、若しくは７員環状エーテルを形成し；
Ｒ４が、Ｃ１〜Ｃ８アルキル又はＣ３〜Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１〜Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシで任意選択的に置換され；
Ｒ５及びＲ６がそれぞれ、独立して、Ｃ１〜Ｃ４アルキル及びＣ３〜Ｃ６シクロアルキルから選択され；
Ｒ７が、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルオキシ、ヘテロシクロアルキルオキシ、又は−（ＯＣＨＲ３ＣＨ２）ｂＯ−Ｃ１〜Ｃ４アルキルであり、ここで、ヘテロシクロアルキルオキシが、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つの環ヘテロ原子を有し、且つ０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１〜Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換される４〜７員飽和複素環であり；
ｂが、１〜１０の整数であり；
Ｚが、ＣＨ−Ｌ−Ａ、ＣＨ−Ａ、Ｎ−Ｌ−Ａ、又はＮ−Ａであり；
Ｌが、任意選択的に置換される二価リンカーＱ−［Ｓｐ−Ｑ］ｈ−Ｑであり；
Ｑが、独立して、それぞれ、結合、Ｏ、Ｃ（Ｏ）、Ｎ（Ｈ）、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｃ（Ｏ）ＮＨ、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｏ、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）２、Ｎ（Ｈ）Ｓ（Ｏ）２、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）Ｓ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｈ）、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｃ１〜Ｃ２アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ２アルキル、Ｃ１〜Ｃ２アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ２アルキル、１，２，３−トリアゾール、ＯＰ（Ｏ）２、Ｐ（Ｏ）２Ｏ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル−Ｐ（Ｏ）２−Ｏ、又はＯ−Ｐ（Ｏ）２−Ｃ１−４アルキルから選択され；
Ｓｐが、独立して、それぞれ、任意選択的に置換されるＣ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、［Ｗ−Ｏ］ｇ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル−［Ｏ−Ｗ］ｇ、［Ｏ−Ｗ］ｇ−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８Ｃアルキル−［Ｏ−Ｗ］ｇ−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、オリゴペプチドから選択され；
ｈが、１〜２０の整数であり；
ｇが、約２〜約５０の加重平均数であり；
Ｗが、Ｃ２〜Ｃ４アルキル−１，２−ジイルであり、ここで、水素、メチル、又はエチル側鎖が、いずれかの骨格炭素原子上に存在してもよく；
Ａが、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｒ１０、又はＲ１１であり、ここで、アルキル基が、０又は１つのＲ１０で任意選択的に置換され；
Ｒ１０が、式Ｉを担体に結合するのに好適な反応性官能基であり；
Ｒ１１が担体である。
【０１００】
別の実施形態において、Ｒは、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分Ｄの放出に好適な式（Ｉ）によって表されるリンカーであり：
【化３０】
2020517623.tif 000034
ここで、破線が、第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子への結合を示し；
Ｒ１が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１ａが、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１Ｒ１ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｒ２が、独立して、それぞれＣ１〜Ｃ４アルキル又はオキソから選択されるか、又は２つのＲ２基が、組み合わされて、縮合Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル又はスピロＣ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイル基を形成し；
ａが、０、１、２、３又は４であり；
Ｒ３が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ３ａが、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ３Ｒ３ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｙが、Ｃ（Ｏ）Ｒ４、Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６、ＳｉＲ５Ｒ６Ｒ７、又はＣＲ１２Ｒ１２ａＯＲ１３であり；
Ｒ１２が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１２ａが、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１２Ｒ１２ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｒ１３が、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであるか；又は
ＣＨＲ１２ＯＲ１３が、組み合わされて、５、６、若しくは７員環状エーテルを形成し；
Ｒ４が、Ｃ１〜Ｃ８アルキル又はＣ３〜Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１〜Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシで任意選択的に置換され；
Ｒ５及びＲ６がそれぞれ、独立して、Ｃ１〜Ｃ４アルキル及びＣ３〜Ｃ６シクロアルキルから選択され；
Ｒ７が、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルオキシ、ヘテロシクロアルキルオキシ、又は−（ＯＣＨＲ３ＣＨ２）ｂＯ−Ｃ１〜Ｃ４アルキルであり、ここで、ヘテロシクロアルキルオキシが、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つの環ヘテロ原子を有し、且つ０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１〜Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換される４〜７員飽和複素環であり；
ｂが、１〜１０の整数であり；
Ｚが、ＣＨＲ８又はＮＲ９であり；
Ｒ８及びＲ９がそれぞれ、独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、又は−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑ［Ｏ−Ｗ］ｇ（ＮＨＣ（Ｏ））ｍ（ＣＨ２）ｑ［Ｏ−Ｗ］ｐ−Ｑ−Ａから選択され、ここで、アルキル基は、０又は１つのＱ−Ａで任意選択的に置換され；
ｑが、独立して、それぞれ、１、２、又は３であり；
ｇ及びｐがそれぞれ、独立して、約２〜約５０の加重平均長さを有し；
ｍが、１又は０であり；
Ｗが、Ｃ２〜Ｃ４アルキル−１，２−ジイルであり、ここで、水素、メチル、又はエチル側鎖が、いずれかの骨格炭素原子上に存在してもよく；
Ｑが、結合、Ｏ、Ｎ（Ｈ）又はＮ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）であり；
Ａが、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜Ｃ８アルキル、Ｒ１０、又はＲ１１であり、ここで、アルキル基が、０又は１つのＲ１０で任意選択的に置換され；
Ｒ１０が、式Ｉを担体に結合するのに好適な反応性官能基であり；
Ｒ１１が担体である。
【０１０１】
一態様において、トレースレスリンカーは、生物学的活性部分の持続放出に好適なリンカーである。一態様において、「Ｒ」は、図Ｄ−Ｒ中のトレースレスリンカーであり、ここで、「Ｄ」は、少なくとも１つの第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分を含む薬物を指す。
【０１０２】
本明細書において使用される際、「薬物付加物」は、トレースレスリンカーＲに結合された薬物Ｄである。特に、トレースレスリンカーＲに関して、薬物付加物は、「Ｄ−Ｒ」を含む。
【０１０３】
本明細書において使用される際、「担体」は、可溶性ポリマー、バイオポリマー、又は架橋ポリマー又はバイオポリマーである。担体は、タンパク質、核酸、炭水化物、又はポリエチレングリコールを含む。一態様において、１つ又は複数の担体は、分子間で、分子内で、又はそれらの組合せで架橋される。一態様において、架橋担体は、ヒドロゲルを含む。特に、トレースレスリンカーＲに関して、担体は、Ｒ１１を含む。一態様において、Ｚは、担体、典型的に、ポリマー又はヒドロゲルに結合される。担体は、直接又は非切断性スペーサを介してトレースレスリンカーＲに結合される。非限定的な例として、担体は、ポリエチレングリコール、ヒアルロン酸ポリマー、又はヒドロゲルを形成することが可能な架橋ヒアルロン酸若しくはポリエチレングリコールを含み得る。
【０１０４】
本明細書において使用される際、「ポリマー」は、合成若しくは生物由来又はその両方の組合せのものであり得る、直鎖状、環状、分枝鎖状、若しくは樹状の方式で又はそれらの組合せで化学結合によって結合される繰返し構造単位（モノマー）で構成される分子を指す。典型的に、ポリマーは、少なくとも１ｋＤａの平均分子量を有する。コポリマーは、少なくとも２つの化学的に異なるモノマーで構成されるポリマーである。典型的に、ポリマーは、分子量の分布を有する分子で構成される。ポリマーの分子量分布を表すための一方法は、平均分子量である。典型的に、ポリマーは、重合度の分布を有する分子で構成される。ポリマーの重合度分布を表すための一方法は、平均重合度である。
【０１０５】
本明細書に記載され、及び本明細書における構造中に示される際、ポリエチレングリコール又はヒアルロン酸などのポリマー分子が、［Ｐ］ｎとして表され、ここで、Ｐは、モノマー繰返し単位を表し、ｎは、ポリマー中のモノマーの平均重合度を表す。当業者は、同一の繰返し単位Ｐを有するが異なるｎを有するように示される２つのポリマー分子は、差がｎの約１０％以下である場合に同等と見なされることを理解するであろう。記載され、本明細書における構造中に示されるヒアルロン酸コポリマーについて、ポリマー中のモノマーの分布は、不明確であり、ランダムであると仮定される。さらに、本明細書に記載されるヒドロゲル又は薬物送達システムのための独立した分子の相対的な結合性は、集団内でランダムである。ヒドロゲル又は薬物送達システムの構造図は、二次元で１つの可能な構造単位を表すが、これらの複合体は、多くの構造サブユニットを有する三次元である。
【０１０６】
本明細書に記載される際、アミド結合形成の正確な位置は、トレースレスリンカー−薬物付加物Ｒ−Ｄについて正確に知られていない。これは、Ｄが、リンカーＲ（例えば、タンパク質）とともにアミド結合を形成することが可能な、２つ以上の第一級又は第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含有する場合に起こり得る。便宜上、アミド結合形成の位置が正確に知られていない付加物は、本明細書において以下のように示される。
【化３１】
2020517623.tif 000035
【０１０７】
本明細書において使用される際、「ヒドロゲル」は、大量の水を吸収することが可能な三次元の親水性又は両親媒性ポリマー網目構造を指す。この網目構造は、ホモポリマー又はコポリマーで構成され、共有結合性の化学的又は物理的（イオン性、疎水性相互作用、交絡）架橋の存在のため不溶性である。この架橋は、網目構造及び物理的完全性を提供する。ヒドロゲルは、水性媒体中でそれが膨潤するのを可能にする、水との熱力学的相溶性を示す。網目構造の鎖は、細孔が存在し、細孔より小さい寸法を有する水溶性溶質が網目構造を出入りして拡散するのが可能であるように結合される。
【０１０８】
本明細書において使用される際、「リンカー」又は「非生物学的活性リンカー」は、薬理作用を生じないリンカーを指す。ある実施形態において、リンカーは、生物系と適合性の二価又は多価有機リンカーを含む。「二価」は、ポリマーの各末端において、トレースレスリンカー又は薬物Ｄへの結合に好適な反応基を有することを指す。「多価」は、さらなる反応性部分がリンカー分子に沿って組み入れられたポリマーの各末端において、トレースレスリンカー又は薬物Ｄへの結合に好適な反応基を有することを指す。
【０１０９】
本明細書において使用される際、「薬物送達システム」は、薬物付加物に結合された担体、Ｄ−Ｒ−Ｒ１１を含み、ここで、担体はＲ１１を含む。本明細書に記載される薬物送達システムは、１つ以上の薬物Ｄ；１つ以上のトレースレスリンカーＲ；及び１つ以上の担体Ｒ１１を含む分子コンジュゲートである。ある実施形態において、薬物送達システムにコンジュゲートされた複数の異なる薬物種があり得る。例えば、Ｄ１及びＤ２などの２つの異なる薬物が、単一の薬物送達システムにおいてコンジュゲートされ得る。
【０１１０】
本明細書において使用される際、「水溶性」という語句は、ヒドロゲルを形成する膨潤性の三次元架橋分子網目構造を指す。ヒドロゲルは、大量の水又は生理的オスモル濃度の水性緩衝液中で懸濁される場合、かなりの量の水、例えば、重量／重量基準で最大で１０倍を吸収することができ、したがって膨潤性であるが、過剰な水を除去した後、ゲルの物理的安定性及び形状を保持したままである。このような形状は、任意の幾何学形状のものであってもよく、このような個々のヒドロゲル物体は、各構成要素が化学結合によって互いに結合された複数の構成要素からなる単一の分子と見なされることが理解される。
【０１１１】
本明細書において使用される際、「持続放出」又は「持続放出速度」は、所望の治療効果を達成するのに必要とされるそれぞれの薬物送達システムの次の投与間の間隔が延長される状況を指す。１日投与量を有する薬物は、例えば２つの投与間の１週間又はさらに長い間隔を有する持続放出形態に変えられ得る。
【０１１２】
本明細書において使用される際、「官能基」は、特定の化学活性を示す分子内の原子団を指す。例は、アミド、アミン、アルコール、カルボニル、カルボン酸、チオールである。
【０１１３】
本明細書において使用される際、「保護基」は、次の化学反応において化学選択性を得るために合成中に分子の官能基を一時的に保護する部分を指す。アルコールの保護基は、例えば、ベンジル及びトリチルであり、アミンの保護基は、例えば、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル及びベンジルであり、チオールについては、保護基の例は、２，４，６−トリメトキシベンジル、フェニルチオメチル、アセトアミドメチル、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ブチルチオ、トリフェニルメチル、３−ニトロ−２−ピリジルチオ、４−メチルトリチルである。
【０１１４】
本明細書において使用される際、「保護された官能基」は、１つ以上の保護基によって保護された官能基を意味する。
【０１１５】
本明細書において使用される際、「ＰＢＳ」は、リン酸緩衝生理食塩水を指す。
【０１１６】
本明細書において使用される際、「薬学的に許容できる塩」という用語は、生物学的活性薬剤の生物学的効果及び特性を保持し、典型的に、生物学的に又は他の形で不都合でない塩を指す。多くの場合、生物学的活性薬剤は、アミノ基及び／又はカルボキシル基又はそれと同様の基の存在によって酸及び／又は塩基塩を形成することが可能である。
【０１１７】
薬学的に許容できる酸付加塩は、無機酸及び有機酸とともに形成され得、例えば、酢酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベシル酸塩、臭化物／臭化水素酸塩、炭酸水素塩／炭酸塩、硫酸水素塩／硫酸塩、カンファースルホン酸塩、塩化物／塩酸塩、クロロテオフィリン酸塩（ｃｈｌｏｒｔｈｅｏｐｈｙｌｌｉｎａｔｅ）、クエン酸塩、エタンジスルホン酸塩、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、馬尿酸塩、ヨウ化水素酸塩／ヨウ化物、イセチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メチル硫酸塩、ナフトエ酸塩、ナプシル酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オクタデカン酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、リン酸塩／リン酸水素塩／リン酸二水素塩、ポリガラクツロ酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、次サリチル酸塩、酒石酸塩、トシル酸塩及びトリフルオロ酢酸塩である。
【０１１８】
塩が誘導され得る無機酸としては、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などが挙げられる。
【０１１９】
塩が誘導され得る有機酸としては、例えば、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、スルホサリチル酸などが挙げられる。
【０１２０】
薬学的に許容できる塩基付加塩は、無機及び有機塩基とともに形成され得る。
【０１２１】
塩が誘導され得る無機塩基としては、例えば、アンモニウム塩及び周期表のＩ〜ＸＩＩ列の金属が挙げられる。特定の実施形態において、塩は、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、銀、亜鉛、及び銅から誘導され；特に好適な塩としては、アンモニウム塩、カリウム塩、ナトリウム塩、カルシウム塩及びマグネシウム塩が挙げられる。
【０１２２】
塩が誘導され得る有機塩基としては、例えば、第一級、第二級、及び第三級アミン、置換アミン（天然の置換アミンを含む）、環状アミン、塩基性イオン交換樹脂などが挙げられる。特定の有機アミンとしては、イソプロピルアミン、ベンザチン、コリネート（ｃｈｏｌｉｎａｔｅ）、ジエタノールアミン、ジエチルアミン、リジン、メグルミン、ピペラジン、又はトロメタミンが挙げられる。
【０１２３】
薬学的に許容できる塩は、従来の化学的方法によって、親化合物、塩基性又は酸性部分から合成され得る。
【０１２４】
一般に、このような塩は、これらの化合物の遊離酸形態を、化学量論量の適切な塩基（Ｎａ、Ｃａ、Ｍｇ、又はＫの水酸化物、炭酸塩、炭酸水素塩など）と反応させることによって、又はこれらの化合物の遊離塩基形態を、化学量論量の適切な酸と反応させることによって調製され得る。このような反応は、典型的に、水中若しくは有機溶媒中で、又はこれら２つの混合物中で行われる。一般に、実行可能である場合、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、又はアセトニトリルのような非水性媒体の使用が望ましい。さらなる好適な塩のリストは、例えば、“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ”，１８ｔｈ  ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，（１９９０）；及び“Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｕｓｅ”ｂｙ  Ｓｔａｈｌ  ａｎｄ  Ｗｅｒｍｕｔｈ（Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，Ｗｅｉｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ，２００２）において見られる。
【０１２５】
本明細書において使用される際、「薬学的に許容できる担体」という用語は、当業者に公知であるように（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  ｅｄ．Ｍａｃｋ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０，ｐｐ．１２８９−１３２９を参照）、あらゆる溶媒、分散媒、コーティング、界面活性剤、酸化防止剤、保存剤（例えば、抗菌剤、抗真菌薬）、等張剤、吸収遅延剤、塩、薬物、薬物安定剤、結合剤、賦形剤、崩壊剤、潤滑剤、甘味料、着香剤、染料など及びそれらの組合せを含む。従来の担体が活性成分と非相溶性でない限り、治療薬又は医薬組成物におけるその使用が想定される。
【０１２６】
生物学的活性薬剤の「治療有効量」という用語は、対象の生物学的又は医学的応答、例えば、症状の改善、病態の緩和を引き起こすか、疾病の進行を減速若しくは遅延させるか、又は疾病を予防するなどの生物学的活性薬剤の量を指す。
【０１２７】
別の非限定的な実施形態において、「治療有効量」という用語は、細胞、又は組織、又は非細胞の生物学的物質、又は培地に投与したとき、疾病又は疾患を少なくとも部分的に治療するのに有効である生物学的活性薬剤の量を指す。当業者によって理解されるように、有効である特定の薬剤の絶対量は、所望の生物学的エンドポイント、送達される薬剤、標的組織などの要因に応じて変化し得る。当業者は、「治療有効量」は、単回用量で投与され得るか、又は複数回用量の投与によって達成され得ることを理解する。例えば、心不全を治療するための薬剤の場合、有効量は、患者の臨床的改善をもたらす、例えば、運動耐容能／運動能力を向上させ、血圧を上昇させ、体液貯留を減少させ、及び／又は心臓機能、例えば、駆出率、運動能力（疲労困憊までの時間）などの定量試験に対する結果を向上させるのに十分な量であり得る。
【０１２８】
本明細書において使用される際、「対象」という用語は、動物を指す。典型的に、動物は哺乳動物である。対象はまた、例えば、霊長類（例えば、ヒト）、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、マウス、魚類、鳥類などを指す。特定の実施形態において、対象は霊長類である。さらに他の実施形態において、対象はヒトである。
【０１２９】
本明細書において使用される際、「阻害する（ｉｎｈｉｂｉｔ）」、「阻害（ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ）」、又は「阻害すること（ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ）」という用語は、所与の病態、症状、若しくは疾患、若しくは疾病の軽減若しくは抑制、又は生物学的活性若しくは過程のベースライン活性の有意な低下を指す。
【０１３０】
本明細書において使用される際、任意の疾病又は疾患を「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、又は「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」という用語は、一実施形態において、疾病又は疾患を改善すること（すなわち、疾病又はその臨床症状の少なくとも１つの発生を遅延させるか又は停止させるか又は低減すること）を指す。別の実施形態において、「治療する」、「治療すること」、又は「治療」は、患者が識別できないものを含む少なくとも１つの身体的パラメータを緩和又は改善することを指す。さらに別の実施形態において、「治療する」、「治療すること」、又は「治療」は、身体的に（例えば、識別可能な症状の安定化）、生理的に、（例えば、身体的パラメータの安定化）、又はその両方で疾病又は疾患を調節することを指す。さらに別の実施形態において、「治療する」、「治療すること」、又は「治療」は、疾病又は疾患の発症又は発生又は進行を予防するか又は遅延させることを指す。本明細書において使用される際、「予防する（ｐｒｅｖｅｎｔ）」、「予防すること（ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）」、及び「予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）」という用語は、治療（例えば、治療剤）の投与、又は治療の組合せ（例えば、治療剤の組合せ）の投与から得られる、対象の疾患の１つ以上の症状の再発、発症、又は発生の予防を指す。
【０１３１】
本明細書において使用される際、対象が、生物学的に、医学的に、又は生活の質においてこのような治療から利益を得られる場合、このような対象は、治療「を必要とする」又は「それを必要とする」。
【０１３２】
本明細書において使用される際、本明細書において使用される単数形の用語（「ａ」、「ａｎ」「ｔｈｅ」）及び類似の用語は、（特に特許請求の範囲の文脈において）本明細書に特に示されない限り、又は文脈上明らかに矛盾していない限り、単数及び複数の両方を包含するものと解釈されるべきである。
【０１３３】
本明細書において使用される際、「約」という用語は、整数及び分数成分の両方を含む任意の値が、「約」という用語によって修飾される値の最大で±１０％の変動の範囲内にあることを指す。
【０１３４】
「又は」という用語は、「又は」が「及び／又は」を包含するように、連言的（ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖｅ）又は選言的（ｄｉｓｊｕｎｃｔｉｖｅ）であり得る。
【０１３５】
本明細書に記載される一実施形態は、薬物及びトレースレスリンカーＤ−Ｒ（式中、Ｒが、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分Ｄの放出に好適な式（Ｉ）によって表されるリンカーであり：
【化３２】
2020517623.tif 000036
ここで、破線が、第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子への結合を示し；
Ｒ１が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１ａが、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１Ｒ１ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｒ２が、独立して、それぞれＣ１〜Ｃ４アルキル又はオキソから選択されるか、又は２つのＲ２基が、組み合わされて、縮合Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル又はスピロＣ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイル基を形成し；
ａが、０、１、２、３又は４であり；
Ｒ３が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ３ａが、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ３Ｒ３ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｙが、Ｃ（Ｏ）Ｒ４、Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６、ＳｉＲ５Ｒ６Ｒ７、又はＣＲ１２Ｒ１２ａＯＲ１３であり；
Ｒ１２が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１２ａが、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１２Ｒ１２ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｒ１３が、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであるか；又は
ＣＨＲ１２ＯＲ１３が、組み合わされて、５、６、若しくは７員環状エーテルを形成し；
Ｒ４が、Ｃ１〜Ｃ８アルキル又はＣ３〜Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１〜Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシで任意選択的に置換され；
Ｒ５及びＲ６がそれぞれ、独立して、Ｃ１〜Ｃ４アルキル及びＣ３〜Ｃ６シクロアルキルから選択され；
Ｒ７が、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルオキシ、ヘテロシクロアルキルオキシ、又は−（ＯＣＨＲ３ＣＨ２）ｂＯ−Ｃ１〜Ｃ４アルキルであり、ここで、ヘテロシクロアルキルオキシが、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つの環ヘテロ原子を有し、且つ０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１〜Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換される４〜７員飽和複素環であり；
ｂが、１〜１０の整数であり；
Ｚが、ＣＨ−Ｌ−Ａ、ＣＨ−Ａ、Ｎ−Ｌ−Ａ、又はＮ−Ａであり；
Ｌが、任意選択的に置換される二価リンカーであり；
Ａが、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜Ｃ８アルキル、Ｒ１０、又はＲ１１であり、ここで、アルキル基が、０又は１つのＲ１０で任意選択的に置換され；
Ｒ１０が、式Ｉを担体に結合するのに好適な反応性官能基であり；
Ｒ１１が担体である）
を含む薬物付加物である。
【０１３６】
本明細書に記載される別の実施形態は、薬物及びトレースレスリンカーＤ−Ｒ（式中、Ｒが、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分Ｄの放出に好適な式（Ｉ）によって表されるリンカーであり：
【化３３】
2020517623.tif 000037
ここで、破線が、第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子への結合を示し；
Ｒ１が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１ａが、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１Ｒ１ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｒ２が、独立して、それぞれＣ１〜Ｃ４アルキル又はオキソから選択されるか、又は２つのＲ２基が、組み合わされて、縮合Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル又はスピロＣ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイル基を形成し；
ａが、０、１、２、３又は４であり；
Ｒ３が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ３ａが、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ３Ｒ３ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｙが、Ｃ（Ｏ）Ｒ４、Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６、ＳｉＲ５Ｒ６Ｒ７、又はＣＲ１２Ｒ１２ａＯＲ１３であり；
Ｒ１２が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１２ａが、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１２Ｒ１２ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｒ１３が、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであるか；又は
ＣＨＲ１２ＯＲ１３が、組み合わされて、５、６、若しくは７員環状エーテルを形成し；
Ｒ４が、Ｃ１〜Ｃ８アルキル又はＣ３〜Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１〜Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシで任意選択的に置換され；
Ｒ５及びＲ６がそれぞれ、独立して、Ｃ１〜Ｃ４アルキル及びＣ３〜Ｃ６シクロアルキルから選択され；
Ｒ７が、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルオキシ、ヘテロシクロアルキルオキシ、又は−（ＯＣＨＲ３ＣＨ２）ｂＯ−Ｃ１〜Ｃ４アルキルであり、ここで、ヘテロシクロアルキルオキシが、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つの環ヘテロ原子を有し、且つ０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１〜Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換される４〜７員飽和複素環であり；
ｂが、１〜１０の整数であり；
Ｚが、ＣＨ−Ｌ−Ａ、ＣＨ−Ａ、Ｎ−Ｌ−Ａ、又はＮ−Ａであり；
Ｌが、任意選択的に置換される二価リンカーＱ−［Ｓｐ−Ｑ］ｈ−Ｑであり；
Ｑが、独立して、それぞれ、結合、Ｏ、Ｃ（Ｏ）、Ｎ（Ｈ）、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｃ（Ｏ）ＮＨ、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｏ、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）２、Ｎ（Ｈ）Ｓ（Ｏ）２、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）Ｓ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｈ）、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｃ１〜Ｃ２アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ２アルキル、Ｃ１〜Ｃ２アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ２アルキル、１，２，３−トリアゾール、ＯＰ（Ｏ）２、Ｐ（Ｏ）２Ｏ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル−Ｐ（Ｏ）２−Ｏ、又はＯ−Ｐ（Ｏ）２−Ｃ１−４アルキルから選択され；
Ｓｐが、独立して、それぞれ、任意選択的に置換されるＣ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、［Ｗ−Ｏ］ｇ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル−［Ｏ−Ｗ］ｇ、［Ｏ−Ｗ］ｇ−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８Ｃアルキル−［Ｏ−Ｗ］ｇ−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、オリゴペプチドから選択され；
ｈが、１〜２０の整数であり；
ｇが、約２〜約５０の加重平均数であり；
Ｗが、Ｃ２〜Ｃ４アルキル−１，２−ジイルであり、ここで、水素、メチル、又はエチル側鎖が、いずれかの骨格炭素原子上に存在してもよく；
Ａが、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｒ１０、又はＲ１１であり、ここで、アルキル基が、０又は１つのＲ１０で任意選択的に置換され；
Ｒ１０が、式Ｉを担体に結合するのに好適な反応性官能基であり；
Ｒ１１が担体である）
を含む薬物付加物である。
【０１３７】
本明細書に記載される別の実施形態は、薬物及びトレースレスリンカーＤ−Ｒ（式中、Ｒが、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分Ｄの放出に好適な式（Ｉ）によって表されるリンカーであり：
【化３４】
2020517623.tif 000038
ここで、破線が、第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子への結合を示し；
Ｒ１が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１ａが、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１Ｒ１ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｒ２が、独立して、それぞれＣ１〜Ｃ４アルキル又はオキソから選択されるか、又は２つのＲ２基が、組み合わされて、縮合Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル又はスピロＣ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイル基を形成し；
ａが、０、１、２、３又は４であり；
Ｒ３が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ３ａが、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ３Ｒ３ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｙが、Ｃ（Ｏ）Ｒ４、Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６、ＳｉＲ５Ｒ６Ｒ７、又はＣＲ１２Ｒ１２ａＯＲ１３であり；
Ｒ１２が、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１２ａが、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１２Ｒ１２ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成し；
Ｒ１３が、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであるか；又は
ＣＨＲ１２ＯＲ１３が、組み合わされて、５、６、若しくは７員環状エーテルを形成し；
Ｒ４が、Ｃ１〜Ｃ８アルキル又はＣ３〜Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１〜Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシで任意選択的に置換され；
Ｒ５及びＲ６がそれぞれ、独立して、Ｃ１〜Ｃ４アルキル及びＣ３〜Ｃ６シクロアルキルから選択され；
Ｒ７が、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルオキシ、ヘテロシクロアルキルオキシ、又は−（ＯＣＨＲ３ＣＨ２）ｂＯ−Ｃ１〜Ｃ４アルキルであり、ここで、ヘテロシクロアルキルオキシが、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つの環ヘテロ原子を有し、且つ０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１〜Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換される４〜７員飽和複素環であり；
ｂが、１〜１０の整数であり；
Ｚが、ＣＨＲ８又はＮＲ９であり；
Ｒ８及びＲ９がそれぞれ、独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、又は−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑ［Ｏ−Ｗ］ｇ（ＮＨＣ（Ｏ））ｍ（ＣＨ２）ｑ［Ｏ−Ｗ］ｐ−Ｑ−Ａから選択され、ここで、アルキル基は、０又は１つのＱ−Ａで任意選択的に置換され；
ｑが、独立して、それぞれ、１、２、又は３であり；
ｇ及びｐがそれぞれ、独立して、約２〜約５０の加重平均長さを有し；
ｍが、１又は０であり；
Ｗが、Ｃ２〜Ｃ４アルキル−１，２−ジイルであり、ここで、水素、メチル、又はエチル側鎖が、いずれかの骨格炭素原子上に存在してもよく；
Ｑが、結合、Ｏ、Ｎ（Ｈ）又はＮ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）であり；
Ａが、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜Ｃ８アルキル、Ｒ１０、又はＲ１１であり、ここで、アルキル基が、０又は１つのＲ１０で任意選択的に置換され；
Ｒ１０が、式Ｉを担体に結合するのに好適な反応性官能基であり；
Ｒ１１が担体である）
を含む薬物付加物である。
【０１３８】
ある態様において、式（Ｉ）のＲ１〜Ｒ８は、以下の意味を有する。一態様において、Ｒ１が、水素又はメチルである。別の態様において、Ｒ１ａが、水素、又はメチルである。別の態様において、Ｒ１及びＲ１ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成する。別の態様において、Ｒ２がメチルである。別の態様において、２つのＲ２基が、組み合わされて、縮合又はスピロＣ３〜Ｃ６シクロアルキル基を形成する。別の態様において、Ｒ３が、水素又はメチルである。別の態様において、Ｒ３ａが、水素又はメチルである。別の態様において、Ｒ３及びＲ３ａが、組み合わされて、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルカ−１，１−ジイルを形成する。別の態様において、ＹがＣ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４が、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ２アルキル又はＣ１〜Ｃ６アルコキシである。別の態様において、Ｒ４が、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、１−メチル−シクロプロピル、又はメトキシメチルである。別の態様において、ＹがＳｉＲ５Ｒ６ＯＲ７であり；Ｒ５及びＲ６がそれぞれ、メチル、エチル、プロピル又はイソプロピルであり；Ｒ７が、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃブチル、エトキシエチル、エトキシイソプロピル、テトラヒドロピラニル、又は−（ＯＣＨＲ３ＣＨ２）ｂＯ−Ｃ１〜Ｃ４アルキルであり、ここで、ｂが、２、３、又は４である。
【０１３９】
ある態様において、式（Ｉ）のＲ８及びＲ９は、以下の意味を有する。一態様において、Ｒ９が、Ｃ（Ｏ）Ｃ２カルバモイルである。別の態様において、Ｒ９が、Ｃ（Ｏ）Ｃ２アミジルである。別の態様において、Ｒ９が、Ｃ（Ｏ）Ｃ５アルキルである。別の態様において、Ｒ９が、Ｃ（Ｏ）Ｃ２アルキルである。別の態様において、Ｒ９が、Ｃ（Ｏ）Ｃ１アルキルである。別の態様において、Ｒ９が、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２である。別の態様において、Ｒ９が、Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｂＣＨ２ＣＨ２であり、ここで、ｂが、１、２、３、又は４である。別の態様において、Ｒ９がアミジルである。別の態様において、Ｒ９がカルバモイルである。別の態様において、Ｒ９が、Ｃ１アルキルアミジルである。別の態様において、Ｒ９が、Ｃ２アルキルアミジルである。
【０１４０】
ある態様において、Ｚが、ＣＨ−Ｌ−Ａ、ＣＨ−Ａ、Ｎ−Ｌ−Ａ、又はＮ−Ａであり；
Ｌが、任意選択的に置換される二価リンカーであり；
Ａが、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜Ｃ８アルキル、Ｒ１０、又はＲ１１であり、ここで、アルキル基が、０又は１つのＲ１０で任意選択的に置換され；
Ｒ１０が、式Ｉを担体に結合するのに好適な反応性官能基であり；
Ｒ１１が担体である。
【０１４１】
ある態様において、Ｚが、ＣＨ−Ｌ−Ａ、ＣＨ−Ａ、Ｎ−Ｌ−Ａ、又はＮ−Ａであり；
Ｌが、任意選択的に置換される二価リンカーＱ−［Ｓｐ−Ｑ］ｈ−Ｑであり；
Ｑが、独立して、それぞれ、結合、Ｏ、Ｃ（Ｏ）、Ｎ（Ｈ）、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｃ（Ｏ）ＮＨ、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｏ、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）２、Ｎ（Ｈ）Ｓ（Ｏ）２、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）Ｓ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｈ）、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｃ１〜Ｃ２アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ２アルキル、Ｃ１〜Ｃ２アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ２アルキル、１，２，３−トリアゾール、ＯＰ（Ｏ）２、Ｐ（Ｏ）２Ｏ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル−Ｐ（Ｏ）２−Ｏ、又はＯ−Ｐ（Ｏ）２−Ｃ１−４アルキルから選択され；
Ｓｐが、独立して、それぞれ、任意選択的に置換されるＣ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、［Ｗ−Ｏ］ｇ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル−［Ｏ−Ｗ］ｇ、［Ｏ−Ｗ］ｇ−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８Ｃアルキル−［Ｏ−Ｗ］ｇ−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、オリゴペプチドから選択され；
ｈが、１〜２０の整数であり；
ｇが、約２〜約５０の加重平均数であり；
Ｗが、Ｃ２〜Ｃ４アルキル−１，２−ジイルであり、ここで、水素、メチル、又はエチル側鎖が、いずれかの骨格炭素原子上に存在してもよく；
Ａが、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｒ１０、又はＲ１１であり、ここで、アルキル基が、０又は１つのＲ１０で任意選択的に置換され；
Ｒ１０が、式Ｉを担体に結合するのに好適な反応性官能基であり；
Ｒ１１が担体である。
【０１４２】
特定の態様において、ｇ及びｈが、１〜約２５又は１〜約１０である。
【０１４３】
ある態様において、式（Ｉ）のＺがＮＲ９である。一態様において、Ｒ９が、Ｒ１０でさらに置換される。別の態様において、Ｒ９が、Ｒ１１でさらに置換される。
【０１４４】
式（Ｉ）によれば、Ｒ１０が、直交カップリング反応に好適な反応性官能基である。好適な反応性官能基は、直交反応を容易に起こすものである。例示的及び非限定的な直交化学反応は、表１に示される官能基を含む。表１中の所与の行では、官能基Ｘ（左列）が、官能基Ｙ（右列）とのカップリング反応に好適である。カップリング反応は、共有結合又は分子間複合体であり得る。ほとんどの実施形態において、カップリング反応は、共有結合をもたらす。シクロデキストランとのアダマンタンなどの、他の反応において、カップリングは、非共有結合性分子会合である。一態様において、官能基は、アジジル、アルキニル、置換若しくは非置換Ｃ６〜Ｃ１２シクロアルキニル、Ｃ６〜Ｃ１２ヘテロシクロアルキニル、Ｃ６〜Ｃ１２シクロアルケニル、ノルボルニル、ビニルカルボキシル、ビニルスルホニル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、置換若しくは非置換Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、チオール、Ｃ１〜Ｃ８カルボキシル、Ｃ１〜Ｃ８カルボニル、オキシアミン、カルボヒドラジド、マレイミド、α−ハロカルボニル、フラン、置換若しくは非置換テトラジニル、リジン、グルタミン、シクロデキストリン、及びアダマンタニルから選択される。別の態様において、官能基は、置換Ｃ６〜Ｃ１２シクロアルキニルであり、ここで、置換は、縮合シクロプロピル基を含む。別の態様において、官能基は、ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イルである。別の態様において、官能基はアジジルである。
【０１４５】
【表１】
2020517623.tif 000039
【０１４６】
【表２】
2020517623.tif 000040
【０１４７】
【表３】
2020517623.tif 000041
【０１４８】
【表４】
2020517623.tif 000042
【０１４９】
ある実施形態において、トレースレスリンカーＲは、式（ＩＩ）：
【化３５】
2020517623.tif 000043
を含み、式中、Ｒ９及びＤが両方とも、上記の式（Ｉ）について定義されるとおりであり、Ｔ１が、窒素又は酸素から選択される１つ以上のヘテロ原子を含有する、置換若しくは非置換Ｃ２〜Ｃ１０エステル、置換若しくは非置換Ｃ３〜Ｃ１０シリルエーテルを含む。
【０１５０】
ある態様において、Ｔ１が、−ＣＲ１Ｒ１ａＯＹであり、これは、トリガー部分を含有し、表２中の以下の構造のうちの１つを含む。
【０１５１】
【表５】
2020517623.tif 000044
【０１５２】
ある実施形態において、式Ｉ又はＩＩのいずれかで表されるトレースレスリンカーＲは、表３中の以下の構造のいずれか１つを含む。
【０１５３】
【表６】
2020517623.tif 000045
【０１５４】
【表７】
2020517623.tif 000046
【０１５５】
【表８】
2020517623.tif 000047
【０１５６】
別の実施形態において、式（Ｉ）又は式（ＩＩ）のトレースレスリンカーＲは、薬物又は生物活性部分にコンジュゲートされる。一態様において、コンジュゲートされた薬物トレースレスリンカーは、表４中の以下の構造のいずれか１つを含む。
【０１５７】
【表９】
2020517623.tif 000048
【０１５８】
【表１０】
2020517623.tif 000049
【０１５９】
【表１１】
2020517623.tif 000050
【０１６０】
トレースレスリンカーＲの合成
別の実施形態は、式（Ｉ）のトレースレスリンカーＲを製造するための方法であって、（Ａ）Ｃ２位に求核基を含むピペラジン化合物のＮ４窒素を、官能化アシルリンカー化合物と反応させて、Ｎ４−アシルピペラジンを形成する工程；（Ｂ）Ｎ４−アシルピペラジンのピペラジン環のＮ１窒素をカルボキシメチル化する工程であって、カルボキシル基が好適な保護基に共有結合される工程；（Ｃ）Ｎ４−アシルピペラジンの求核基を、本明細書に記載されるトリガー化合物と反応させる工程；（Ｄ）必要に応じて、トレースレスリンカーを担体化合物に結合するのに好適な官能基を含むようにＮ４における官能化アシルリンカーを構成する工程のいずれか１つを含む方法である。一態様において、ピペラジン化合物のＣ２位における求核基は、ヒドロキシルを含む。別の態様において、ピペラジン化合物のＣ２位における求核基は、第一級アルコールである。別の態様において、工程（Ａ）又は（Ｄ）のピペラジン化合物中に存在する第一級アルコールは、好適な保護基又はトリガー基にコンジュゲートされる。別の態様において、保護基又はトリガー基は、エステル、シリルエーテル、アセタール、カルバメート、カーボネート、又はジシロキサン含有化合物を含む。一態様において、Ｎ４カルボキシメチルエステル保護基は、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性薬剤へのアミド結合を形成するのに好適なカルボン酸を形成するように脱保護される。別の態様において、カルボキシメチル化工程において、カルボキシメチル化試薬のカルボキシル基は、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性薬剤へのアミド結合を介して共有結合される。一態様において、工程Ａの官能基は、トレースレスリンカーを担体化合物に結合するのに好適である。
【０１６１】
別の実施形態は、式（Ｉ）のトレースレスリンカーＲを製造するための方法であって、（Ａ）Ｃ２位に求核基を含むピペラジン化合物のＮ１窒素をカルボキシメチル化する工程であって、カルボキシル基が好適な保護基に共有結合される工程；（Ｂ）ピペラジン化合物のＮ４窒素を、官能化アルキルリンカーと反応させて、Ｎ４−アルキルピペラジンを形成する工程；（Ｃ）Ｎ４−アルキルピペラジンの求核基を、本明細書に記載されるトリガー化合物と反応させる工程；（Ｄ）必要に応じて、トレースレスリンカーを担体化合物に結合するのに好適な官能基を含むようにＮ４における官能化アルキルリンカーを構成する工程のいずれか１つを含む方法である。一態様において、ピペラジン化合物における反応基は、ヒドロキシルを含む。別の態様において、ピペラジン化合物のＣ２位における求核基は、第一級アルコールである。別の態様において、好適（Ａ）又は（Ｄ）のピペラジン化合物上に存在する第一級アルコールは、好適な保護基又はトリガー基にコンジュゲートされる。別の態様において、トリガー化合物は、エステル、シリルエーテル、アセタール、カルバメート、カーボネート、又はジシロキサン含有化合物を含む。一態様において、Ｎ４カルボキシメチルエステル保護基は、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性薬剤へのアミド結合を形成するのに好適なカルボン酸を形成するように脱保護される。別の態様において、カルボキシメチル化工程において、カルボキシメチル化試薬のカルボキシル基は、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性薬剤へのアミド結合を介して共有結合される。一態様において、工程Ａの官能基は、トレースレスリンカーを担体化合物に結合するのに好適である。
【０１６２】
別の実施形態は、式（Ｉ）のトレースレスリンカーＲを製造するための方法であって、（Ａ）クロスカップリング又は置換反応によってＣ２位に求核基を含むピリジン化合物のＣ４位に官能化リンカーを導入する工程；（Ｂ）４−置換ピリジン化合物を水素化して、４−置換ピペリジン化合物を形成する工程；（Ｃ）４−置換ピペリジン化合物のＮ１窒素をカルボキシメチル化する工程であって、カルボキシル基が好適な保護基に共有結合される工程；（Ｄ）４−置換ピペリジン化合物の求核基を、本明細書に記載されるトリガー化合物と反応させる工程；（Ｅ）必要に応じて、トレースレスリンカーを担体化合物に結合するのに好適な官能基を含むようにＣ４における官能化アルキルリンカーを構成する工程のいずれか１つを含む方法である。一態様において、ピリジン又はピペリジン化合物における求核基は、ヒドロキシルを含む。別の態様において、ピリジン又はピペリジン化合物のＣ２位における求核基は、第一級アルコールである。別の態様において、トリガー化合物は、エステル、シリルエーテル、アセタール、カルバメート、カーボネート、又はジシロキサン含有化合物を含む。一態様において、Ｎ４カルボキシメチルエステル保護基は、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性薬剤へのアミド結合を形成するのに好適なカルボン酸を形成するように脱保護される。別の態様において、カルボキシメチル化工程において、カルボキシメチル化試薬のカルボキシル基は、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性薬剤へのアミド結合を介して共有結合される。一態様において、工程Ａの官能基は、トレースレスリンカーを担体化合物に結合するのに好適である。
【０１６３】
好適な保護基は、反応性官能基又は化学官能基に可逆的に結合されて、それらが例えば他の化学官能基と反応できないようにする部分である。例示的及び非限定的なアミノ保護基としては、フルオレニルメチレンオキシ基（ＦＭＯＣ）、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（ＢＯＣ）、カルボキシベンジル（Ｃｂｚ）などが挙げられる。例示的及び非限定的なアルコール保護基としては、ｔ−ブチルエーテル、アリルエーテル、ベンジルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルエーテル（ＴＢＤＭＳ）などが挙げられる。特定の部分をブロック及び露出するために合成全体を通して必要に応じて脱保護基が付加又は除去され得る。
【０１６４】
一実施形態において、トレースレスリンカーを製造するための方法は、反応スキーム１〜３で表される。以下のスキームは、トレースレスリンカーを製造するための一般的及び非限定的なスキームである。本明細書の実施例に示されるように、ある合成経路は、これらの一般的なスキームと特に一致しない。別の態様において、反応スキームで表されるトレースレスリンカーを製造するための方法は、実施例１において提供される。
【０１６５】
【化３６】
2020517623.tif 000051
式中、上に示される工程の１つ以上は、異なる連続した順序で行われても、又は用いられる試薬に応じて省略されてもよく；
Ｘが、Ｃｌ、Ｏ−ＮＨＳ、Ｏ（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ２ａ、又はＸ−ＯＨを含む活性化基であり、反応は、１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム３−オキシドヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）などの標準的なペプチドカップリング試薬を含み；
Ｒ２ａが、Ｃ１〜Ｃ８アルキル又はアリールであり；
Ｐ４が、好適な保護基又はＨであり；
Ｌが、任意選択的に置換される二価リンカーであり；
Ｐ１及びＰ２が、同一であり得る保護基であり；
Ｙが、表２中に示される好適なトリガーであり；
ＦＧが、本明細書に記載される担体にコンジュゲートすることが可能な好適な官能基を含む。
【０１６６】
【化３７】
2020517623.tif 000052
式中、上に示される工程の１つ以上は、異なる連続した順序で行われても、又は用いられる試薬に応じて省略されてもよく；
ここで、Ｘ２が、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、又はトリフレートなどの活性化基であり；
Ｙ、Ｌ、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ４、及びＦＧが、スキーム１に記載されるとおりであり；
Ｐ３が、Ｐ１及びＰ２と同一であり得る保護基である。
【０１６７】
【化３８】
2020517623.tif 000053
式中、上に示される工程の１つ以上は、異なる連続した順序で行われても、又は用いられる試薬に応じて省略されてもよく；
Ｌ、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｙ、及びＦＧが、スキーム２に記載されるとおりである。
【０１６８】
本明細書に記載されるように、式（Ｉ）又は式（ＩＩ）の付加物Ｄ−Ｒは、トレースレスリンカーＲのカルボン酸形態を、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性薬剤のアミノ基と反応させて、アミド結合を形成することによって調製される。このプロセスは、スキーム４に記載されている。好適なカルボン酸活性化剤が、アミド結合形成反応を促進するのに使用される。一例として、カルボン酸は、炭酸ジスクシンイミジルの作用によってアミノ反応性形態に変換されて、ＮＨＳエステルが形成され得；次に、トレースレスリンカーＲのＮＨＳエステルは、アミノ含有薬物Ｄと反応されて、付加物Ｄ−Ｒが形成される。
【０１６９】
スキーム４において、Ｌ、Ｙ、及びＦＧが、スキーム１〜３に記載されるとおりであり；Ｄが、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性薬剤である。
【化３９】
2020517623.tif 000054
【０１７０】
本明細書に記載される一実施形態は、１つ以上の官能基を有するリンカーを介して担体組成物に結合された式（Ｉ）又は式（ＩＩ）のトレースレスリンカーＲである。一態様において、担体組成物は、本明細書に記載されるトレースレスリンカーのＲ１１を含む。一態様において、Ｒ１１が、リンカーを介してＲ８又はＲ９に結合された、ポリマー、バイオポリマー、又はポリエチレングリコールを含む。一態様において、担体組成物は、ヒドロゲルである。一態様において、ヒドロゲル組成物は、ヒアルロン酸、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリエチレンオキシド、ポリグルタメート、ポリリジン、ポリシアル酸、ポリビニルアルコール、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリアクリレート／ポリメタクリレートコポリマー、ポリアクリルアミド、ポリメタクリルアミド、ポリビニルピロリドン、ポリオキサゾリン、ポリイミノカーボネート、ポリアミノ酸、親水性ポリエステル、ポリアミド、ポリウレタン、ポリ尿素、デキストラン、アガロース、キシラン、マンナン、カラギーナン、アルギネート、ゼラチン、コラーゲン、アルブミン、セルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルデンプン、キトサン、核酸、それらの誘導体、それらのコポリマー、又はそれらの組合せを含む。別の態様において、Ｒ１１が、ナノ粒子又は分子表面を含む。一態様において、ヒドロゲルは、ヒアルロン酸又はポリエチレングリコールを含む。別の態様において、Ｒ１１が、ヒアルロン酸又はポリエチレングリコールの架橋ヒドロゲルを含む。薬物送達システムが眼又は滑膜関節に用いられる一態様において、Ｒ１１が、ヒアルロン酸又は架橋ヒアルロン酸を含む。
【０１７１】
本明細書に記載されるように、Ｒ１１担体組成物は、架橋されて、複数の分子を一緒に結合し、ヒドロゲル形成を促進し得る。架橋は、当該技術分野において公知の任意の手段を用いて行われ得る（例えば、Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．５１，（２０１５）を参照されたい。本明細書に記載される一実施形態において、ヒアルロン酸又はポリエチレングリコールは、表１に示される１つ以上の官能基で官能化されて、架橋のための反応性官能基を提供する。別の態様において、ヒアルロン酸又はポリエチレングリコールは、アジジル、アルキニル、置換若しくは非置換Ｃ７〜Ｃ１２シクロアルキニル、Ｃ７〜Ｃ１２シクロアルケニル、置換若しくは非置換Ｃ７〜Ｃ１２ヘテロシクロアルキニル、ビニルカルボキシル、ビニルスルホニル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、アミノ、チオール、Ｃ１〜Ｃ８カルボキシル、Ｃ１〜Ｃ８カルボニル、オキシアミン、カルボヒドラジド、マレイミド、α−ハロカルボニル、フラン、置換若しくは非置換テトラジニル、リジン、グルタミン、シクロデキストリン、及びアダマンタニルから選択される官能基で官能化される。別の態様において、ヒアルロン酸は、アジジル基で官能化される。
【０１７２】
官能化度は、ヒドロゲルの多孔性を決定し得る。一態様において、担体ポリマーの約５％〜約５０％（規定の範囲内の全ての整数を含む）が官能化される。一態様において、担体ポリマーは、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、或いはそれ以上官能化される。
【０１７３】
一態様において、担体は、ヒアルロン酸である。別の態様において、ヒアルロン酸は、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリン−４−イウムクロリド（ＣＡＳ番号３９４５−６９−５）及び２−（２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）エトキシ）エタンアミン（ＣＡＳ番号１３４１７９−３８−７）と反応されて、アジド官能化ヒアルロン酸（［ＨＡ−Ｎ３］）が形成される。一態様において、反応は以下のとおりである。
【化４０】
2020517623.tif 000055
【０１７４】
実験条件が、実施例３に記載されている。一態様において、ヒアルロン酸の約５％〜約５０％（規定の範囲内の全ての整数を含む）が官能化される。一態様において、ヒアルロン酸は、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、或いはそれ以上官能化される。
【０１７５】
別の実施形態において、ポリエチレングリコールは、様々な試薬で官能化されて、上述される官能化ヒアルロン酸モノマーを結合するための架橋剤が形成される。
【０１７６】
２ｋＤａの２アームＰＥＧ−ＢＣＮ架橋剤の合成
一態様において、Ｍｎ約２ｋＤａのポリエチレングリコールジアミン塩酸塩が、示されるように反応される。反応条件は、実施例４に記載されている。
【化４１】
2020517623.tif 000056
【０１７７】
１０ｋＤａの４アームＰＥＧ−ＢＣＮ架橋剤の合成
別の態様において、Ｍｎ約１０ｋＤａの４アームポリエチレングリコールアミン塩酸塩（ペンタエリトリトールコア、ＪｅｎＫｅｍ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）が、示されるように反応される。反応条件は、実施例４に記載されている。
【化４２】
2020517623.tif 000057
【０１７８】
２ｋＤａの２アームβ−アラニンＰＥＧ−ＢＣＮ架橋剤の合成
別の態様において、Ｍｎ約２ｋＤａのポリエチレングリコール及び３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）プロパン酸が、示されるように反応される。反応条件は、実施例４に記載されている。
【化４３】
2020517623.tif 000058
【０１７９】
２ｋＤａの２アームアミノシクロプロパンカルボン酸ＰＥＧ−ＢＣＮ架橋剤の合成
別の態様において、Ｍｎ約２ｋＤａのポリエチレングリコール及び１−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）シクロプロパン−１−カルボン酸が、示されるように反応される。反応条件は、実施例４に記載されている。
【化４４】
2020517623.tif 000059
【０１８０】
本明細書に記載される別の実施形態は、１つ以上の架橋剤である。一態様において、架橋剤は、式Ｖ：
【化４５】
2020517623.tif 000060
を含む。
【０１８１】
別の態様において、架橋剤は、式ＶＩ：
【化４６】
2020517623.tif 000061
を含む。
【０１８２】
別の態様において、架橋剤は、式ＶＩａ：
【化４７】
2020517623.tif 000062
を含む。
【０１８３】
別の態様において、架橋剤は、式ＶＩｂ：
【化４８】
2020517623.tif 000063
を含む。
【０１８４】
別の態様において、架橋剤は、式ＶＩｃ：
【化４９】
2020517623.tif 000064
を含む。
【０１８５】
別の態様において、架橋剤は、式ＶＩＩ：
【化５０】
2020517623.tif 000065
を含む。
【０１８６】
別の態様において、架橋剤は、式ＶＩＩＩ：
【化５１】
2020517623.tif 000066
を含む。
【０１８７】
別の態様において、架橋剤は、式ＩＸ：
【化５２】
2020517623.tif 000067
を含む。
【０１８８】
本明細書に記載される別の実施形態において、Ｒ１１が、架橋担体を形成するために１つ以上の架橋剤と反応された官能化担体を含む。一実施形態において、架橋担体は、ヒドロゲルを形成する。一態様において、架橋担体は、ヒドロゲルを形成するために本明細書に記載される１つ以上のポリエチレングリコール架橋剤で官能化及び架橋されたヒアルロン酸である。
【０１８９】
一実施形態において、ヒアルロン酸を含む架橋担体は、示されるように、適切に官能化されたポリマーを反応させることによって調製され得る。
【化５３】
2020517623.tif 000068
【０１９０】
何らかの特定の例によって制約されるものではなく、例示として、一実施形態において、供給業者、Ｌｉｆｅｃｏｒｅ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ（ＨＡ２００Ｋ，Ｃｈａｓｋａ，ＭＮ）によって、公称平均分子量を有するとラベル付けされたヒアルロン酸ナトリウム塩は、粘度測定によって決定した際に、バッチ間で１５１〜３００ｋＤａの範囲で変動する。この例示のため、２００ｋＤａの仮定公称平均分子量を有するヒアルロン酸ナトリウム塩の分子は、平均約５００モノマー単位からなる。この及び以下の構造において、非修飾モノマー単位が「ｍ」として定義され、アジド基で修飾されたモノマー単位が「ｎ」として定義され、架橋分子にコンジュゲートされたアジド−モノマー単位が「ｐ」として定義され、トレースレスリンカー−薬物付加物にコンジュゲートされたアジドモノマー単位が「ｑ」として定義される。約５００モノマー単位を含むポリマー鎖の場合、（ｎ＋ｍ＋ｐ＋ｑ≒５００）である。ヒアルロン酸ナトリウム塩分子の修飾パーセントが２５％である場合、ｍ＝７５％且つ（ｎ＋ｐ＋ｑ）＝２５％である。
【０１９１】
同様に、架橋剤の一実施形態において存在するＰＥＧ単位は、２ｋＤａの公称平均分子量を有すると記載される出発ＰＥＧから誘導され、これらの示される構造中で「ｗ」として記載される約４４の繰返しＰＥＧモノマー単位からなる。
【０１９２】
下式中、一実施形態において、ランダム分布中のヒアルロン酸（ｍ）の非修飾二糖繰返し単位＋ヒアルロン酸の修飾二糖繰返し単位（ｎ＋ｐ＋ｑ）の和（＝ｍ＋ｎ＋ｐ＋ｑ）は、約２００ｋＤａの粘度測定によって決定した際に公称平均分子量について約５００単位を含み得る。これは、式Ｘ〜ＸＸＩＩに適用される。
【０１９３】
一態様において、架橋担体は、式Ｘ：
【化５４】
2020517623.tif 000069
を含む。
【０１９４】
別の態様において、架橋担体は、式ＸＩ：
【化５５】
2020517623.tif 000070
を含む。
【０１９５】
別の態様において、架橋担体は、式ＸＩＩ：
【化５６】
2020517623.tif 000071
を含む。
【０１９６】
別の態様において、架橋担体は、式ＸＩＩａ：
【化５７】
2020517623.tif 000072
を含む。
【０１９７】
別の態様において、架橋担体は、式ＸＩＩｂ：
【化５８】
2020517623.tif 000073
を含む。
【０１９８】
別の態様において、架橋担体は、式ＸＩＩｃ：
【化５９】
2020517623.tif 000074
を含む。
【０１９９】
別の態様において、架橋担体は、式ＸＩＩＩ：
【化６０】
2020517623.tif 000075
を含む。
【０２００】
本明細書に記載される別の実施形態は、薬物付加物Ｄ−Ｒであり、式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分であり；Ｒが、生物学的活性部分の放出に好適なリンカーである。一態様において、Ｄが、タンパク質、核酸、炭水化物、ペプチド、ヌクレオチド、オリゴ糖、又は小分子を含み、これらのそれぞれが、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミンを有し、小分子が、約１００ｇ／ｍｏｌ〜約２０００ｇ／ｍｏｌの分子量を有する。
【０２０１】
本明細書に記載される一実施形態において、Ｄが、低分子量生物学的活性分子を含む。一態様において、Ｄが、少なくとも１つの第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子及び約１００ｇ／ｍｏｌ〜約２０００ｇ／ｍｏｌ（規定の範囲内の全ての整数を含む）の分子量を含む生物学的活性分子を含む。一態様において、Ｄが、少なくとも１つの第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子及び約１００ｇ／ｍｏｌ、約１５０ｇ／ｍｏｌ、約２００ｇ／ｍｏｌ、約２５０ｇ／ｍｏｌ、約３００ｇ／ｍｏｌ、約３５０ｇ／ｍｏｌ、約４００ｇ／ｍｏｌ、約４５０ｇ／ｍｏｌ、約５００ｇ／ｍｏｌ、約５５０ｇ／ｍｏｌ、約６００ｇ／ｍｏｌ、約６５０ｇ／ｍｏｌ、約７００ｇ／ｍｏｌ、約７５０ｇ／ｍｏｌ、約８００ｇ／ｍｏｌ、約８５０ｇ／ｍｏｌ、約９００ｇ／ｍｏｌ、約９５０ｇ／ｍｏｌ、約１０００ｇ／ｍｏｌ、約１０５０ｇ／ｍｏｌ、約１１００ｇ／ｍｏｌ、約１１５０ｇ／ｍｏｌ、約１２００ｇ／ｍｏｌ、約１２５０ｇ／ｍｏｌ、約１３００ｇ／ｍｏｌ、約１３５０ｇ／ｍｏｌ、約１４００ｇ／ｍｏｌ、約１４５０ｇ／ｍｏｌ、約１５００ｇ／ｍｏｌ、約１５５０ｇ／ｍｏｌ、約１６００ｇ／ｍｏｌ、約１６５０ｇ／ｍｏｌ、約１７００ｇ／ｍｏｌ、約１７５０ｇ／ｍｏｌ、約１８００ｇ／ｍｏｌ、約１８５０ｇ／ｍｏｌ、約１９００ｇ／ｍｏｌ、約１９５０ｇ／ｍｏｌ、又は約２０００ｇ／ｍｏｌの分子量を含む生物学的活性分子を含む。
【０２０２】
別の実施形態において、Ｄが、治療的に有益な方法で少なくとも１つの生物学的に関連する標的を調節する、少なくとも１つの第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子及び約１００ｇ／ｍｏｌ〜約２０００ｇ／ｍｏｌの分子量を含む生物学的活性分子を含む。一態様において、Ｄが、中枢神経系活性剤、抗感染症薬、抗アレルギー薬、免疫抑制剤、抗肥満剤、抗凝固剤、抗糖尿病薬、抗悪性腫瘍剤、抗菌薬、抗真菌薬、鎮痛薬、避妊薬、抗炎症剤、抗血管新生薬、抗緑内障薬、再生剤（ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ  ａｇｅｎｔ）、ステロイド、血管拡張剤、血管収縮剤、又は心血管作動薬を含む。一態様において、Ｄが、アカルボース、アラプロクラート、アレンドロネート、アマンタジン、アミカシン、アミネプチン、アミノグルテチミド、アミスルプリド、アムロジピン、アモトサレン、アモキサピン、アモキシシリン、アンフェタミン、アムホテリシンＢ、アンピシリン、アンプレナビル、アミノン（ａｍｉｎｏｎｅ）、アニレリジン、アプラクロニジン、アプラマイシン、アルチカイン、アテノロール、アトモキセチン、アビザフォン、バクロフェン、ベナゼプリル、ベンセラジド、ベンゾカイン、ベタキソロール、ブレオマイシン、ブロムフェナク、ブロファロミン、カルベジロール、カチン、カチノン、カルブタミド、セファレキシン、クリナフロキサシン、シプロフロキサシン、デフェロキサミン、デラビルジン、デシプラミン、ダウノルビシン、デキサメチルフェニデート、ジアフェニルスルホン、ジゾシルピン、ドパミン（ｄｏｐａｍｉｎ）、ドブタミン（ｄｏｂｕｔａｍｉｎ）、ドルゾラミド、ドキソルビシン、デュロキセチン、エフロルニチン、エナラプリル、エピネフリン、エピルビシン、エルゴリン、エルタペネム、エスモロール、エノキサシン、エタンブトール、フェンフルラミン、フェノルドパム、フェノテロール、フィンゴリモド、フレカイニド（ｆｌｅｃａｍｉｄｅ）、フルボキサミン、ホスアンプレナビル、フロバトリプタン、フロセミド、フルオキセチン（ｆｌｕｏｅｘｅｔｉｎｅ）、ガバペンチン、ガチフロキサシン、ゲミフロキサシン（ｇｅｍｉｆｌｏｃａｃｉｎ）、ゲンタマイシン、グレパフロキサシン、ヘキシルカイン、ヒドララジン、ヒドロクロロチアジド、イコフンギペン（ｉｃｏｆｕｎｇｉｐｅｎ）、イダルビシン、イミキモド、インベルシン（ｉｎｖｅｒｓｉｎｅ）、イソプロテレノール、イスラジピン、カナマイシンＡ、ケタミン、ラベタロール、ラミブジン、レボブノロール、レボドパ、レボチロキシン、リシノプリル、ロメフロキサシン、ロラカルベフ、マプロチリン、メフロキン、メルファラン、メマンチン、メロペネム、メサラジン、メスカリン、メチルドパ、メチレンジオキシメタンフェタミン、メトプロロール、ミルナシプラン、ミトキサントロン（ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎ）、モキシフロキサシン、ノルエピネフリン、ノルフロキサシン、ノルトリプチリン、ネオマイシンＢ、ニスタチン、オセルタミビル、パミドロン酸、パロキセチン、パズフロキサシン、ペメトレキセド、ペリンドプリル、フェンメトラジン、フェネルジン、プレガバリン、プロカイン、プソイドエフェドリン、プロトリプチリン、レボキセチン、リトド���ン、サバルビシン、サルブタモール、セロトニン、セルトラリン、シタグリプチン、ソタロール、スペクチノマイシン、スルファジアジン（ｓｕｌｆａｄｉａｚｉｎ）、スルファメラジン（ｓｕｌｆａｍｅｒａｚｉｎ）、セルトラリン、スペクチノマイシン、スルファレン（ｓｕｌｆａｌｅｎ）、スルファメトキサゾール（ｓｕｌｆａｍｅｔｈｏｘａｚｏｌ）、タクリン、タムスロシン、テルブタリン、チモロール、チロフィバン、トブラマイシン、トカイニド（ｔｏｃａｍｉｄｅ）、トスフロキサシン、トランドラプリル、トラネキサム酸、トラニルシプロミン、トリメトレキサート、トロバフロキサシン、バラシクロビル、バルガンシクロビル、バンコマイシン、バイオマイシン、ビロキサジン、及びザルシタビンを含む。
【０２０３】
別の実施形態において、Ｄが、Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）、心房性ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ）、エキセンジン−４、インスリン、副腎皮質刺激ホルモン、アドレノメデュリン、アドロピン、ω−アガトキシン、アグーチ関連タンパク質、アンジオテンシン、アペリン１２、アペリン１３、アペリン３６、若しくはその誘導体、ブラジキニン、カルシトニン、コカイン・アンフェタミン調節転写産物（ＣＡＲＴ）、コルチコトロピン放出因子（ＣＲＦ）、α−ディフェンシン、β−ディフェンシン、デルタ睡眠誘発ペプチド（ＤＳＩＰ）、エラスターゼ特異的阻害剤（Ｅｌａｆｉｎ）、エンドキニン、エンドモルフィン、エンドルフィン、エンドセリン、エキセンジン、フィブロネクチン活性フラグメント、ガラニン、ガラニン様ペプチド、大ガストリン、ガストリンＩ、ガストリン関連ペプチド、消化管抑制ポリペプチド、ガストリン放出ペプチド、グレリン、ｄｅｓ−アシルグレリン、グルカゴン、グルカゴン様ペプチド、成長ホルモン放出因子、グラモストラ・スパチュラタ（Ｇｒａｍｍｏｓｔｏｌａ  ｓｐａｔｕｌａｔａ）ＧｓＭＴｘ−４、グアンシィトキシン（ｇｕａｎｇｘｉｔｏｘｉｎ）−１Ｅ、グアニリン、ヘプシジン１、ヘプシジン／ＬＥＡＰ−１、ヒスタチン５、ヒト成長ホルモン、ヒューマニン、フエントキシン、イベリオトキシン、インペラトキシンＡ、インスリン様成長因子、インテルメジン、ＩＲＬ  １６２０、連結ペプチド、カリオトキシン、キスペプチン、クルトキシン、リポトロピン、リポトロピン、肝細胞増殖因子、肝臓由来抗菌ペプチド２、黄体形成ホルモン放出ホルモン、ライセニン、ＬＬ−３７、マルガトキシン、マストパラン、肥満細胞脱顆粒ペプチド、メラニン凝集ホルモン、メラノサイト刺激ホルモン、ＭＳＨ放出抑制因子、ミッドカイン、軟体動物心臓興奮性神経ペプチド、モルフィン耐性ペプチド、モチリン、ムスカリン毒素、神経内分泌調節ペプチド−２、ニューロキニンＡ、ニューロキニンＢ、ニューロメジン、ニューロスタチン−１３、神経ペプチド、ニューロテンシン、神経毒ＮＳＴＸ−３、ノシスタチン、ノシセプチン、オベスタチン、オピオイドペプチド（エンケファリン、エンドルフィン、ＢＡＭ−１２Ｐ、カソモルフィン、ダイノルフィン、エンドモルフィン、ネオエンドルフィン、ノシセプチン）、オレキシン−Ａ／−Ｂ、オルファニン、オステオカルシン、オキシトシン、パンクレアスタチン、副甲状腺ホルモン、副甲状腺ホルモン関連タンパク質、ペプチド２３４、ペプチドヒスチジン−メチオニン、ペプチドＴ、ペプチドＹＹ、フィサラミン、下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ポリペプチド、血小板第４因子、プレクタシン、プレイオトロフィン、プロアドレノメデュリン、プロラクチン放出ペプチド、プサルモトキシン１、プロトキシン−１、ピログルタミン化ＲＦアミドペプチド、レニン、ＲＦアミド関連ペプチド−１、ＲＦアミド関連ペプチド−３、サルシン−α／β、サラフォトキシン、統合失調症関連ペプチド、シラトキシン、セクレチン、セレラキシン、血清胸腺因子、ナトリウムカリウムＡＴＰａｓｅ阻害剤−１、ソマトスタチン、スティコダクチラ（ｓｔｉｃｈｏｄａｃｔｙｌａ）毒素、サブスタンスＫ、ストレスコ���ン、ストレスコピン関連ペプチド、サブスタンスＰ、タキキニン、タランチュラＳＮＸ−４８２、タランチュラＰｒｏＴｘ−Ｉ、タランチュラＰｒｏＴｘ−ＩＩ、テルチアピン、チチュストキシンＫａ、サイロトロピン放出ホルモン、タフトシン、ウログアニリン、ウログアニリン異性体Ａ又はＢ、ウロコルチン、ウロコルチンＩＩ、ウロテンシンＩＩ、ウロテンシンＩＩ関連ペプチド、血管作動性腸管ペプチド、バソプレシン、バソトシン、ウイルス複製阻害ペプチド、キセニン、又はそれらの組合せを含むがこれらに限定されない１つ以上の生物学的活性ペプチドを含む。
【０２０４】
別の態様において、Ｄが、ＡＣＴＨ、アデノシンデアミナーゼ、アガルシダーゼ、α−１アンチトリプシン（ＡＡＴ）、α−１プロティナーゼ阻害剤（ＡＰＩ）、アルテプラーゼ、アミリン（アミリン、シムリン）、アニストレプラーゼ、アンクロッドセリンプロテアーゼ、担体（モノクローナル又はポリクローナル、及び断片又は融合物）、抗トロンビンＩＩＩ、アンチトリプシン、アプロチニン、アスパラギナーゼ、アトシバン、ビファリン、ビバリルジン、骨形態形成タンパク質、ウシ膵臓トリプシン阻害剤（ＢＰＴＩ）、カドヘリン断片、カルシトニン（サケ）、コラゲナーゼ、補体Ｃ１エステラーゼ阻害剤、コノトキシン、サイトカイン受容体断片、ＤＮａｓｅ、ダイノルフィンＡ、エンドルフィン、エンフビルチド、エンケファリン、エリスロポエチン、エキセンジン、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩａ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＶＩＩＩａ因子、第ＩＸ因子、フィブリノリジン、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、成長ホルモン放出ペプチド２（ＧＨＲＰ２）、融合タンパク質、卵胞刺激ホルモン、グラミシジン、グレリン、デスアシル−グレリン、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、ガラクトシダーゼ、グルカゴン、グルカゴン様ペプチド、グルコセレブロシダーゼ、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、ヒト熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）、ホスホリパーゼ活性化タンパク質（ＰＬＡＰ）、絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）、ヘモグロビン、Ｂ型肝炎ワクチン、ヒルジン、ヒトセリンプロテアーゼ阻害剤、ヒアルロニダーゼ、イズロニダーゼ、免疫グロブリン、インフルエンザワクチン、インターロイキン（１α、１β、２、３、４、６、１０、１１、１２、１３、２１）、ＩＬ−１受容体拮抗薬（ｒｈＩＬ−１ｒａ）、インスリン、インスリン様成長因子、インスリン様成長因子結合タンパク質（ｒｈＩＧＦＢＰ）、インターフェロン（α２ａ、α２ｂ、α２ｃ、β１ａ、β１ｂ、γ１ａ、γ１ｂ）、細胞内接着分子、ケラチノサイト成長因子（ＫＧＦ）、Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド（ＰＳＧＬ）、形質転換成長因子、ラクターゼ、レプチン、ロイプロリド、レボチロキシン、黄体形成ホルモン、ライムワクチン、ナトリウム利尿（ＡＮＰ、ＢＮＰ、ＣＮＰ及び断片）、神経ペプチドＹ、パンクレリパーゼ、膵臓ポリペプチド、パパイン、副甲状腺ホルモン、ＰＤＧＦ、ペプシン、ペプチドＹＹ、血小板活性化因子アセチルヒドロラーゼ（ＰＡＦ−ＡＨ）、プロラクチン、プロテインＣ、チマルファシン、オクトレオチド、セクレチン、セルモレリン、可溶性腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）、ソマトロピン（成長ホルモン）、ソマトスタチン、ストレプトキナーゼ、スクラーゼ、テルリプレシン、破傷風毒素断片、チラクターゼ、トロンビン、チモシン、甲状腺刺激ホルモン、サイロトロピン、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ  Ｆｃ、組織プラスミノゲン活性化因子（ｔＰＡ）、ＴＳＨ、ウロジラチン、尿酸オキシダーゼ、ウロキナーゼ、ワクチン、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、血管作動性腸管ペプチド、バソプレシン、ジコノチド、レクチン、リシン、又はそれらの組合せのうちの１つ以上を含む。
【０２０５】
別の実施形態において、Ｄが、アブシキシマブ、アダリムマブ、アフリベルセプト、アレムツズマブ、バシリキシマブ、ベリムマブ、ベバシズマブ、ブレンツキシマブ、カナキヌマブ、セルトリズマブ、セツキシマブ、ダクリズマブ、ダラツムマブ、デノスマブ、エクリズマブ、エファリズマブ、ゴリムマブ、イブリツモマブ、インフリキシマブ、イピリムマブ、ランパリズマブ、ムロモナブ−ＣＤ３、ナタリズマブ、ニボルマブ、オファツムマブ、オマリズマブ、パリビズマブ、パニツムマブ、ペグプレラニブ、ペムブロリズマブ、ラニビズマブ、リツキシマブ、トシリズマブ、トシツモマブ、トラスツズマブ、ウステキヌマブ、ベドリズマブ、又はそれらの誘導体若しくは組合せを含む。
【０２０６】
別の実施形態において、Ｄが、アバタセプト、アルブミン、アレファセプト、α−１プロテアーゼ阻害剤、α−ガラクトシダーゼＡ、α−Ｌ−イズロニダーゼ、ボツリヌス毒素Ａ、ボツリヌス毒素Ｂ、ダルベポエチン、デニロイキン、ドルナーゼアルファ、コラゲナーゼ、補体タンパク質、エリスロポエチン、エタネルセプト、第ＶＩＩＩ因子、フィブリン、フィブリノゲン、フィルグラスチム、卵胞刺激ホルモン、グルコセレブロシダーゼ、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、サルグラモスチム、ヒト成長ホルモン、ヒト絨毛性ゴナドトロピン、ヒアルロニダーゼ、インスリン、インスリン様成長因子、インスリン様成長因子１（ＩＧＦ−１）、インターフェロン（ＩＦ）、ルトロピン、オプレルベキン、プラムリンチド、メカセルミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン−４−スルファターゼ（ガルスルファーゼ）、組織プラスミノゲン活性化因子（ＴＰＡ）、タンパク質ベースのワクチン、又はそれらの組合せを含む。
【０２０７】
別の実施形態において、Ｄが、タンパク質、ペプチド、担体、ヒト化担体、抗体断片、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、核酸、炭水化物、小分子、又はそれらの組合せのうちの１つ以上を含む。
【０２０８】
別の実施形態において、Ｄが、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、核酸（ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＰＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡを含むがこれらに限定されない）、又はそれらの組合せのうちの１つ以上を含む。
【０２０９】
一実施形態において、Ｄが、ブロルシズマブ（配列番号４）、Ｄ２（配列番号５）、Ｄ３（配列番号６）、若しくはＤ４（配列番号７）、ラニビズマブ、ベバシズマブ、５−（５，６，７，８−テトラヒドロ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルオキシ）−インドール−１−カルボン酸［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−アミド；５−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［３，４ｄ］ピリミジン−４−イルオキシ）−インドール−１−カルボン酸［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−アミド；Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド；（Ｓ）−５−（６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルオキシ）−Ｎ−（５−（１−メチルシクロプロピル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド、又はそれらの組合せを含む。
【０２１０】
本明細書に記載される別の実施形態は、担体−トレースレスリンカー生物学的活性薬剤コンジュゲートＤ−Ｒ−Ｒ１１（式中、Ｄが、本明細書に記載される、少なくとも１つの第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分を含み、Ｒが、本明細書に記載される担体ポリマー又はヒドロゲルを含む、Ｒ１１に結合された本明細書に記載されるトレースレスリンカーを含む）を含む薬物送達システムである。一態様において、Ｒ１１が、ヒアルロン酸、架橋ヒアルロン酸、ポリエチレングリコール、架橋ポリエチレングリコール又は本明細書に記載される他の好適なポリマーを含む。別の態様において、Ｒが、本明細書に記載されるトレースレスリンカーを含む。別の態様において、Ｄが、少なくとも１つの第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む、タンパク質、ペプチド、担体、Ｆａｂｓ、Ｆｃｓ、ｓｃＦｖｓ、核酸、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｍＲＮＡ、炭水化物、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、小有機分子、又はそれらの組合せのうちの１つ以上を含む。一態様において、Ｄが、ブロルシズマブ（配列番号４）、Ｄ２（配列番号５）、Ｄ３（配列番号６）、若しくはＤ４（配列番号７）、ラニビズマブ、ベバシズマブ、５−（５，６，７，８−テトラヒドロ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルオキシ）−インドール−１−カルボン酸［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−アミド；５−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［３，４ｄ］ピリミジン−４−イルオキシ）−インドール−１−カルボン酸［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−アミド；Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド；（Ｓ）−５−（６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルオキシ）−Ｎ−（５−（１−メチルシクロプロピル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド、又はそれらの組合せを含む。
【０２１１】
別の実施形態において、Ｄ−Ｒ−Ｒ１１が、式ＸＩＶを含み、式中、「薬物」が、ブロルシズマブ（配列番号４）、Ｄ２（配列番号５）、Ｄ３（配列番号６）、若しくはＤ４（配列番号７）、ラニビズマブ、ベバシズマブ、５−（５，６，７，８−テトラヒドロ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルオキシ）−インドール−１−カルボン酸［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−アミド；５−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［３，４ｄ］ピリミジン−４−イルオキシ）−インドール−１−カルボン酸［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−アミド；Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド；（Ｓ）−５−（６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルオキシ）−Ｎ−（５−（１−メチルシクロプロピル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド、又はそれらの組合せのうちの１つ以上であり得る。
【０２１２】
ある実施形態において、Ｄ−Ｒ−Ｒ１１が、式ＸＩＶ〜ＸＸＩＩＩに示される種のいずれかを含む。
【０２１３】
一実施形態において、薬物又は生物学的活性薬剤Ｄは、ポリペプチドＤ２（配列番号５）、又は例えば、Ｄ３（配列番号６）などのそのＰＥＧ化形態を含む。Ｄ２及びＤ３ポリペプチド、並びにそれらの誘導体は、国際特許出願公報番号国際公開第２００７／１４６６８９号パンフレット（このような教示のために参照により本明細書に援用される）に記載されるように調製され得る。
【０２１４】
別の実施形態において、薬物又は生物学的活性薬剤Ｄは、ブロルシズマブ（配列番号４）を含む。ブロルシズマブは、ＶＨ領域（配列番号１）、ＶＬ領域（配列番号２）、及びリンカー領域（配列番号３）を含む単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。ブロルシズマブ、並びにそれらの誘導体は、国際特許出願公報番号国際公開第２００９／１５５７２４号パンフレット（このような教示のために参照により本明細書に援用される）に記載されるように調製され得る。開始コドンから誘導されるメチオニンが、ブロルシズマブのＶＬに存在する。場合によっては、メチオニンは、翻訳後に切断されてから、本明細書に記載される薬物送達システムへと組み立てられ得る。
【０２１５】
別の実施形態において、薬物又は生物学的活性薬剤Ｄは、Ｄ４（配列番号７）を含む。Ｄ４は、Ｃ６とＣ１２との間にジスルフィド結合を含む、配列ｐＥ−Ｒ−Ｐ−Ｒ−Ｌ−Ｃ−Ｈ−Ｋ−Ｇ−Ｐ−Ｎｌｅ−Ｃ−Ｆ−ＯＨ（配列番号７）を含む１３アミノ酸ペプチドであり、ここで、ｐＥが、ピログルタメートを示し、Ｎｌｅが、ノルロイシンを示す。Ｄ４並びにそれらの誘導体は、国際特許出願公報番号国際公開第２０１３／１１１１１０号パンフレット（このような教示のために参照により本明細書に援用される）に記載されるように調製され得る。
【０２１６】
別の実施形態において、薬物又は生物学的活性薬剤Ｄは、アペリン１２、アペリン１３、アペリン３６、又はそれらの誘導体を含む。アペリン及び誘導体は、国際公開第２０１３／１１１１１０号パンフレット、国際公開第２０１４／０８１７０２号パンフレット、国際公開第２０１５／０１３１６８号パンフレット、国際公開第２０１５／０１３１６５号パンフレット、又は国際公開第２０１５／０１３１６７号パンフレット（これらはそれぞれ、このような教示のために参照により本明細書に援用される）に開示されている。
【０２１７】
別の実施形態において、薬物又は生物学的活性薬剤Ｄは、ベバシズマブ又はラニビズマブなどの１つ以上の抗血管内皮増殖因子薬物を含む。ベバシズマブは、インビトロ及びインビボアッセイシステムにおいてヒト血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）に結合し、その生物学的活性を阻害する組み換えヒト化モノクローナルＩｇＧ１抗体である。ベバシズマブは、ＶＥＧＦに結合するマウス抗体のヒトフレームワーク領域及び相補性決定領域を含有する。抗体は、１４９ｋＤａの概算分子量を有する。ベバシズマブは、栄養培地中でチャイニーズハムスター卵巣発現系において産生される。ラニビズマブは、眼内使用のために設計された組み換えヒト化ＩｇＧ１  κアイソタイプモノクローナル抗体断片である。ラニビズマブは、ヒト血管内皮増殖因子Ａ（ＶＥＧＦ−Ａ）に結合し、その生物学的活性を阻害する。Ｆｃ領域を欠いたラニビズマブは、約４８ｋＤａの分子量を有し、栄養培地中で大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）発現系によって産生される。ベバシズマブ及びラニビズマブは、それぞれ国際特許出願公報番号国際公開第１９９４／００４６７９号パンフレット及び国際公開第１９９８／４５３３１号パンフレット（これらは両方とも、このような教示のために参照により本明細書に援用される）に記載されている。
【０２１８】
別の実施形態において、薬物又は生物学的活性薬剤Ｄは、５−（５，６，７，８−テトラヒドロ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルオキシ）−インドール−１−カルボン酸［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−アミド；５−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［３，４ｄ］ピリミジン−４−イルオキシ）−インドール−１−カルボン酸［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−アミド；Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド；又は（Ｓ）−５−（６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルオキシ）−Ｎ−（５−（１−メチルシクロプロピル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドを含む。これらの分子の合成は、国際特許出願公報番号国際公開第２０１０／０６６６８４号パンフレット（このような教示のために参照により本明細書に援用される）に記載されている。
【０２１９】
本明細書に記載される別の実施形態は、薬物送達システムを組み立てるための方法であり；この方法は、以下の一連の工程：
（ａ）担体分子Ｒ１１（ここで、Ｒ１１が架橋ヒドロゲルである）を調製する工程であって、次に、この工程が、そのヒドロゲルを調製するのに使用されるプロセスを含み；担体分子が、任意選択的に、この段階で精製され得る工程；
（ｂ）別々に、トレースレスリンカーＲを、第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性薬剤Ｄにコンジュゲートし、それによって、トレースレスリンカー−Ｄ付加物を形成する工程であって；トレースレスリンカー−Ｄ付加物が、任意選択的に、この段階で精製され得る工程、
（ｃ）担体分子Ｒ１１を、トレースレスリンカー−Ｄ付加物とコンジュゲートする工程；及び
（ｄ）薬物送達システムを試薬から精製する工程のうちの１つを含み得る。この方法は、以下のスキーム５Ａに示される。
【０２２０】
本明細書に記載される別の実施形態は、薬物送達システムを組み立てるための方法であって、以下の工程：
（ａ）担体分子Ｒ１１（ここで、Ｒ１１が架橋ヒドロゲルである）を調製する工程であって、次に、この工程が、そのヒドロゲルを調製するのに使用されるプロセスを含み；担体分子が、任意選択的に、この段階で精製され得る工程と；
（ｂ）トレースレスリンカーＲを、担体分子Ｒ１１にコンジュゲートし、それによって、担体分子−トレースレスリンカー付加物を形成する工程であって、担体分子−トレースレスリンカー付加物が、任意選択的に、この段階で精製され得る工程と；
（ｃ）第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性薬剤Ｄを、担体分子−トレースレスリンカー付加物にコンジュゲートする工程と；
（ｄ）薬物送達システムを試薬から精製する工程とを含む方法である。この方法は、以下のスキーム５Ｂに示される。
【０２２１】
本明細書に記載される別の実施形態は、薬物送達システムを組み立てるための方法であって、以下の工程：
（ａ）非架橋担体分子Ｒ１１を調製する工程であって、担体分子が、任意選択的に、この段階で精製され得る工程と；
（ｂ）別々に、トレースレスリンカーＲを、第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性薬剤Ｄにコンジュゲートし、それによって、トレースレスリンカー−Ｄ付加物を形成する工程であって；トレースレスリンカー−Ｄ付加物が、任意選択的に、この段階で精製され得る工程と；
（ｃ）担体分子Ｒ１１を、トレースレスリンカー−Ｄ付加物とコンジュゲートする工程であって、トレースレスリンカー−Ｄ付加物が、任意選択的に、この段階で精製され得る工程と；
（ｄ）非架橋担体分子−トレースレスリンカー−生物学的活性薬剤Ｒ１１−Ｒ−Ｄを、適切な架橋試薬とともにインキュベートして、ヒドロゲルを形成することによって、架橋ヒドロゲルを調製する工程と；
（ｅ）薬物送達システムを試薬から精製する工程とを含む方法である。この方法は、以下のスキーム５Ｃに示される。
【０２２２】
本明細書に記載される別の実施形態は、薬物送達システムを組み立てるための方法であって、以下の工程：
（ａ）非架橋担体分子Ｒ１１を調製する工程であって、担体分子が、任意選択的に、この段階で精製され得る工程と；
（ｂ）トレースレスリンカーＲを、担体分子Ｒ１１にコンジュゲートし、それによって、担体分子−トレースレスリンカー付加物を形成する工程であって、担体分子−トレースレスリンカー付加物が、任意選択的に、この段階で精製され得る工程と；
（ｃ）第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性薬剤Ｄを、担体分子−トレースレスリンカー付加物にコンジュゲートする工程と；
（ｄ）非架橋担体分子−トレースレスリンカー−生物学的活性薬剤Ｒ１１−Ｒ−Ｄを、適切な架橋試薬とともにインキュベートして、ヒドロゲルを形成することによって、架橋ヒドロゲルを調製する工程と；
（ｅ）薬物送達システムを試薬から精製する工程とを含む方法である。この方法は、以下のスキーム５Ｄに示される。
【０２２３】
本明細書に記載される別の実施形態は、薬物送達システムを組み立てるための方法であって、以下の工程：
（ａ）非架橋担体分子Ｒ１１を調製する工程であって、担体分子が、任意選択的に、この段階で精製され得る工程と；
（ｂ）トレースレスリンカーＲを、担体分子Ｒ１１にコンジュゲートし、それによって、担体分子−トレースレスリンカー付加物を形成する工程であって、担体分子−トレースレスリンカー付加物が、任意選択的に、この段階で精製され得る工程と；
（ｃ）非架橋担体分子−トレースレスリンカー−付加物Ｒ１１−Ｒを、適切な架橋試薬とともにインキュベートして、ヒドロゲルを形成することによって、架橋ヒドロゲルを調製する工程であって、ヒドロゲルが、任意選択的に、この段階で精製され得る工程と；
（ｄ）第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性薬剤Ｄを、架橋担体分子−トレースレスリンカー付加物にコンジュゲートする工程であって、架橋担体分子−トレースレスリンカー付加物が、任意選択的に、この段階で精製され得る工程と；
（ｅ）薬物送達システムを試薬から精製する工程とを含む方法である。この方法は、以下のスキーム５Ｅに示される。
【０２２４】
スキーム５Ａ〜Ｅ．スキーム５は、本明細書に記載される薬物送達システムを組み立てるための５つの方法Ａ〜Ｅを示す。
【化６１】
2020517623.tif 000076
【化６２】
2020517623.tif 000077
【０２２５】
一実施形態において、薬物送達システムは、式（ＸＩＶ）：
【化６３】
2020517623.tif 000078
を含むことができ、式中、Ｌ２が、特定の架橋剤に特異的であり得るスペーサ基を表し、「薬物」が、治療的に有益な方法で少なくとも１つの生物学的に関連する標的を調節する、少なくとも１つの第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性分子を表す。
【０２２６】
一実施形態において、スペーサＬ２が、表５に示される任意の種を含む。
【０２２７】
【表１２】
2020517623.tif 000079
【０２２８】
別の実施形態において、薬物送達システムは、薬物がブロルシズマブである式（ＸＶ）：
【化６４】
2020517623.tif 000080
を含み得る。
【０２２９】
別の実施形態において、薬物送達システムは、薬物がブロルシズマブである式（ＸＶＩ）：
【化６５】
2020517623.tif 000081
を含み得る。
【０２３０】
別の実施形態において、薬物送達システムは、薬物がブロルシズマブである式（ＸＶＩＩ）：
【化６６】
2020517623.tif 000082
を含み得る。
【０２３１】
別の実施形態において、薬物送達システムは、薬物がブロルシズマブである式（ＸＶＩＩＩ）：
【化６７】
2020517623.tif 000083
を含み得る。
【０２３２】
別の実施形態において、薬物送達システムは、薬物がブロルシズマブである式（ＸＶＩＩＩａ）：
【化６８】
2020517623.tif 000084
を含み得る。
【０２３３】
別の実施形態において、薬物送達システムは、薬物がブロルシズマブである式（ＸＶＩＩＩｂ）：
【化６９】
2020517623.tif 000085
を含み得る。
【０２３４】
別の実施形態において、薬物送達システムは、薬物がブロルシズマブである式（ＸＶＩＩＩｃ）：
【化７０】
2020517623.tif 000086
を含み得る。
【０２３５】
別の実施形態において、薬物送達システムは、薬物がブロルシズマブである式（ＸＶＩＩＩｄ）：
【化７１】
2020517623.tif 000087
を含み得る。
【０２３６】
別の実施形態において、薬物送達システムは、薬物がブロルシズマブである式（ＸＶＩＩＩｅ）：
【化７２】
2020517623.tif 000088
を含み得る。
【０２３７】
別の実施形態において、薬物送達システムは、薬物がブロルシズマブである式（ＸＶＩＩＩｆ）：
【化７３】
2020517623.tif 000089
を含み得る。
【０２３８】
別の実施形態において、薬物送達システムは、薬物がＤ２である式（ＸＩＸ）：
【化７４】
2020517623.tif 000090
を含み得る。
【０２３９】
別の実施形態において、薬物送達システムは、薬物がＤ２である式（ＸＸ）：
【化７５】
2020517623.tif 000091
を含み得る。
【０２４０】
別の実施形態において、薬物送達システムは、薬物がＤ２である式（ＸＸＩ）：
【化７６】
2020517623.tif 000092
を含み得る。
【０２４１】
別の実施形態において、薬物送達システムは、薬物がＤ２である式（ＸＸＩＩ）：
【化７７】
2020517623.tif 000093
を含み得る。
【０２４２】
別の実施形態において、薬物送達システムは、薬物がＤ４である式（ＸＸＩＩＩ）：
【化７８】
2020517623.tif 000094
を含み得る。
【０２４３】
本明細書に記載される別の実施形態は、本明細書に記載される薬物送達システムを用いて疾病又は疾患を治療するための方法である。本明細書に記載される別の実施形態は、薬剤として使用するための、式（Ｉ）によって表されるＤ−Ｒを含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩に関する。別の実施形態は、心疾患、筋骨格系疾患、眼疾患（滲出型加齢性黄斑変性症、黄斑浮腫、網膜分枝静脈閉塞症、網膜中心静脈閉塞症、緑内障、遺伝性出血性毛細血管拡張症（ＨＨＴ）、増殖性糖尿病網膜症、ブドウ膜炎、発作性夜間血色素尿症（ＰＮＨ）、地図状萎縮、萎縮型加齢性黄斑変性症、血管新生、糖尿病性黄斑浮腫又は中年齢性黄斑変性症を含むがこれらに限定されない）の治療のための薬剤のための、式（Ｉ）によって表されるＤ−Ｒを含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩の使用である。一態様において、本明細書に記載される薬物送達システムの医薬組成物は、注射によってそれを必要とする対象に投与され得る。一態様において、投与は、注射又は外科的移植によって行われ得る。
【０２４４】
本明細書に記載される一実施形態は、滲出型加齢性黄斑変性症、黄斑浮腫、網膜分枝静脈閉塞症、網膜中心静脈閉塞症、緑内障、遺伝性出血性毛細血管拡張症（ＨＨＴ）、増殖性糖尿病網膜症、ブドウ膜炎、発作性夜間血色素尿症（ＰＮＨ）、地図状萎縮、萎縮型加齢性黄斑変性症、血管新生、糖尿病性黄斑浮腫又は中年齢性黄斑変性症を含むがこれらに限定されない眼の疾患を治療するための方法であって、本明細書に記載される薬物送達システムＤ−Ｒ（ここで、Ｄが、ラニビズマブ、ベバシズマブ、ブロルシズマブ（配列番号４）、５−（５，６，７，８−テトラヒドロ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルオキシ）−インドール−１−カルボン酸［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−アミド；５−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［３，４ｄ］ピリミジン−４−イルオキシ）−インドール−１−カルボン酸［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−アミド；Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド；（Ｓ）−５−（６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルオキシ）−Ｎ−（５−（１−メチルシクロプロピル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド、又はそれらの組合せを含む）を投与する工程を含む方法である。一態様において、組成物は、眼内に注射される溶液又は懸濁液である。一態様において、注射は、眼内注射（例えば硝子体内注射）である。別の態様において、組成物は、外科的手段を用いて又は注射によって眼内に埋め込まれるゲル又は半固体組成物である。
【０２４５】
本明細書に記載される別の実施形態は、軟骨再生、腱治癒、創傷治癒、又は球脊髄性筋萎縮症を含むがこれらに限定されない筋骨格系疾患を治療するための方法であって、本明細書に記載される薬物送達システムＤ−Ｒ（ここで、Ｄが、Ｄ２（配列番号５）、Ｄ２のＰＥＧ化形態、例えば、Ｄ３（配列番号６）、又はそれらの組合せを含む）を投与する工程を含む方法である。
【０２４６】
本明細書に記載される別の実施形態は、心疾患、筋骨格系疾患又は眼疾患（滲出型加齢性黄斑変性症、黄斑浮腫、網膜分枝静脈閉塞症、網膜中心静脈閉塞症、緑内障、遺伝性出血性毛細血管拡張症（ＨＨＴ）、増殖性糖尿病網膜症、ブドウ膜炎、発作性夜間血色素尿症（ＰＮＨ）、地図状萎縮、萎縮型加齢性黄斑変性症、血管新生、糖尿病性黄斑浮腫又は中年齢性黄斑変性症を含むがこれらに限定されない）の治療に使用するための、式（Ｉ）によって表されるＤ−Ｒ（ここで、Ｄが、Ｄ２（配列番号５）、Ｄ２のＰＥＧ化形態、例えば、Ｄ３（配列番号６）、又はそれらの組合せを含む）を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩に関する。一態様において、組成物は、関節内に注射される溶液又は懸濁液である。別の態様において、組成物は、外科的手段を用いて又は外径の大きい針による注射（ｌａｒｇｅ−ｂｏｒｅ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）によって関節内に埋め込まれるゲル又は半固体組成物である。別の態様において、組成物は、関節内又は関節の近傍に注射される粒子の形態である。別の態様において、組成物は、最終的に吸収されるか又はその場で処理される生分解性メッシュ又はガーゼとして関節内又は関節の周囲に埋め込まれる。別の態様において、組成物は、外傷又は疾病後に腱、靱帯、軟骨、骨、又は他の関節構成要素を再付着又は修復するための外科手術中に用いられる、縫合糸、ステープル、プレート、メッシュ、又は同様の物品に含浸される。
【０２４７】
本明細書に記載される別の実施形態は、心不全、急性非代償性心不全（ＡＤＨＦ）、慢性心不全、肺高血圧症、心房細動、ブルガダ症候群、心室頻拍、アテローム性動脈硬化症、高血圧症、再狭窄、虚血性心血管疾患、心筋症、心筋繊維化、不整脈、水分貯留、糖尿病（妊娠糖尿病を含む）、肥満、末梢動脈疾患、脳血管発作、一過性脳虚血発作、外傷性脳損傷、筋萎縮性側索硬化症、熱傷（日焼けを含む）又は子癇前症などの心疾患を治療するための方法であって、本明細書に記載される薬物送達システムＤ−Ｒ（ここで、Ｄが、Ｄ４（配列番号７）を含む）を投与する工程を含む方法である。一態様において、組成物は、静脈内に、動脈内に、皮下に、筋肉内に、又は腹腔内に送達される溶液又は懸濁液である。別の態様において、組成物は、外科的手段又は外径の大きい針による注射を用いて埋め込まれるゲル又は半固体組成物である。別の態様において、組成物は、皮膚創傷に局所的に又は直接適用されるゲル又は半固体組成物である。
【０２４８】
一実施形態において、本明細書に記載される薬物送達システムは、特定の放出速度で生物学的活性薬剤を放出する。一態様において、放出速度は、トレースレスリンカーＲの「トリガー」構成要素によって調整又は調節され得る。何らかの理論によって制約されるものではないが、生理的条件下でのトリガーの反応により、求核官能基、例えば、分子内の方式で、薬物を薬物送達システムに結合するアミド結合を切断するヒドロキシル官能基が生成されるものと考えられる。一実施形態において、トリガーの反応は、加水分解反応であり、ヒドロキシル官能基の形成をもたらす。何らかの理論によって制約されるものではないが、トリガー部分の立体障害が、トリガーのより遅い反応に相関され、電子求引基の存在及び近接が、トリガーのより速い反応に相関されるものと考えられる。
【０２４９】
一実施形態において、生物学的活性部分の放出の半減期は、約０．５時間、約１時間、約２時間、約４時間、約６時間、約８時間、約１０時間、約１２時間、約１４時間、約１６時間、約１８時間、約２０時間、約２２時間、約２４時間、約１日、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、約７日、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１か月、約２か月、約３か月、約４か月、約５か月、約６か月、約７か月、約８か月、約９か月、約１０か月、約１１か月、約１２か月、約１年間、約１．５年間、約２年間、約２．５年間、約３年間、約３．５年間、約４、又は４年間超である。一態様において、生物学的活性部分放出半減期は、約２．５日、約４．５日、約７日、約１０日、約１１日、約１２日、約１４日、約１５日、約２１日、約２８日、約３０日、約３１日、約３２日、約４０日、約５８日、約６０日、約６５日、約７０日、約８０日、約１２５日、約１６５日、約３８０日、約９４０日、或いはより長い。
【０２５０】
一実施形態において、トレースレスリンカートリガーエステル加水分解の半減期は、約０．５時間、約１時間、約２時間、約４時間、約６時間、約８時間、約１０時間、約１２時間、約１４時間、約１６時間、約１８時間、約２０時間、約２２時間、約２４時間、約１日、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、約７日、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１か月、約２か月、約３か月、約４か月、約５か月、約６か月、約７か月、約８か月、約９か月、約１０か月、約１１か月、約１２か月、約１年間、約１．５年間、約２年間、約２．５年間、約３年間、約３．５年間、約４、又は４年間超である。一態様において、トレースレスリンカートリガーエステル加水分解半減期は、約１日、約１．５日、約２日、約２．５日、約４日、約５日、約１０日、約１２日、約１５日、約２０日、約３０日、約３２日、約３５日、約４０日、約５５日、約６０日、約９０日、約１２０日、約１５０日、約１８０日、約２００日、約３００日、約４００日、或いはより長い。
【０２５１】
別の実施形態において、薬物送達システムを投与した組織、器官、又は区画からの薬物Ｄの放出後の薬物送達システムＲ−Ｒ１１のクリアランスの半減期（例えば、Ｄ−Ｒ−Ｒ１１→Ｒ−Ｒ１１＋Ｄ）は、約０．５時間、約１時間、約２時間、約４時間、約６時間、約８時間、約１０時間、約１２時間、約１４時間、約１６時間、約１８時間、約２０時間、約２２時間、約２４時間、約１日、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、約７日、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１か月、約２か月、約３か月、約４か月、約５か月、約６か月、約７か月、約８か月、約９か月、約１０か月、約１１か月、約１２か月、約１年間、約１．５年間、約２年間、約２．５年間、約３年間、約３．５年間、約４、又は４年間超である。
【０２５２】
本明細書に記載される他の実施形態は、本明細書に記載される薬物送達システムＤ−Ｒ−Ｒ１１を含む医薬組成物である。一態様において、医薬組成物は、それを必要とする対象における注射又は移植に好適である。
【０２５３】
注射又は移植による投与に好適な医薬組成物は、滅菌注射用溶液又は分散体の即時調製のための、滅菌水溶液、懸濁液、又は分散体及び滅菌粉末又は凍結乾燥物を含む。
【０２５４】
静脈内投与のために、好適な担体としては、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、生理食塩水、リンゲル液、又は注射用蒸留水が挙げられる。全ての場合、組成物は、滅菌であるべきであり、容易な注射針通過が存在する程度に流体であるべきである。好ましい医薬製剤は、製造及び貯蔵の条件下で安定しており、細菌及び真菌などの微生物の汚染作用から保護されなければならない。一般に、関連する担体は、例えば、水、緩衝液、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコールなど）、並びにそれらの好適な混合物を含有する溶媒又は分散媒であり得る。適切な流動性が、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散体の場合、必要とされる粒径の維持によって、及び界面活性剤の使用によって維持され得る。微生物の作用の防止は、様々な抗菌薬及び抗真菌薬、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどによって達成され得る。多くの場合、組成物中に等張剤、例えば、糖、マンニトールなどの多価アルコール、アミノ酸、ソルビトール、塩化ナトリウム、又はそれらの組合せを含むことが好ましいであろう。注射用組成物の持続的吸収は、吸収を遅らせる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを組成物中に含むことによってもたらされ得る。
【０２５５】
特定の注射用組成物は、水性等張溶液又は懸濁液であり、坐薬は、脂肪エマルジョン又は懸濁液から有利に調製される。前記組成物は、滅菌されてもよく、及び／又は保存剤、安定化剤、湿潤剤若しくは乳化剤、溶解促進剤、浸透圧を調節するための塩及び／又は緩衝液などの補助剤を含有し得る。さらに、それらは、他の治療的に有益な物質も含有し得る。前記組成物は、従来の混合、造粒又はコーティング方法にしたがってそれぞれ調製され、約０．１〜７５％の活性成分を含有するか、又は約１〜５０％の活性成分を含有する。
【０２５６】
滅菌した注射用溶液又は懸濁液は、必要に応じて、１つの成分又は成分の組合せとともに適切な溶液中に必要な量の薬物送達システムを組み込んだ後、ろ過滅菌によって調製され得る。一般に、溶液又は懸濁液は、滅菌ＰＢＳ及び任意の賦形剤などの滅菌ビヒクル中に活性化合物を組み込むことによって調製される。滅菌した注射用溶液の調製のための滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は、既に滅菌ろ過されたその溶液から、活性成分の粉末及び任意のさらなる所望の成分を生じる真空乾燥及び凍結乾燥である。
【０２５７】
経粘膜又は経皮投与手段も可能である。経皮適用に好適な組成物は、好適な担体とともに有効量の生物学的活性薬剤を含む。経皮送達に好適な担体は、宿主の皮膚を通過するのを助けるために、吸収可能な薬理学的に許容できる溶媒を含む。例えば、経皮デバイスは、バッキング部材と、任意選択的に担体とともに化合物を含むリザーバと、任意選択的に、長期間にわたって制御された所定の速度で宿主の皮膚の化合物を送達する速度制御障壁と、デバイスを皮膚に固定する手段とを含む包帯の形態である。
【０２５８】
例えば、皮膚、眼、又は関節への局所適用に好適な組成物は、水溶液、懸濁液、軟膏、クリーム、ゲル又は噴霧可能な製剤、例えばエアロゾルなどによる送達用のものを含む。このような局所送達系は、皮膚適用に特に適切であろう。したがって、それらは、当該技術分野において周知の局所製剤（化粧用を含む）に使用するのに特に適している。このような系は、可溶化剤、安定剤、等張性増強剤、緩衝液、又は保存剤を含有し得る。
【０２５９】
本明細書において使用される際、局所適用はまた、吸入又は鼻内適用に関するものであり得る。それらは、乾燥粉末吸入器からの乾燥粉末（単独で、混合物、例えばラクトースとの乾燥ブレンドとして、又は例えばリン脂質との混合成分粒子として）の形態、又は好適な噴射剤を用いて若しくは用いずに、加圧容器、ポンプ、スプレー、アトマイザ又はネブライザからのエアロゾルスプレーの提示の形態で好都合に送達され得る。
【０２６０】
活性成分としての本明細書に記載される組成物が分解する速度を低下させる１つ以上の薬剤を含む医薬組成物及び剤形も本明細書に記載される。本明細書において「安定剤」と呼ばれるこのような薬剤としては、限定はされないが、アスコルビン酸などの酸化防止剤、ｐＨ緩衝液、又は塩緩衝液などが挙げられる。
【０２６１】
治療的に用いられる医薬組成物の有効量は、例えば、治療の状況及び目的に応じて決まる。治療のための適切な投与量レベルが、部分的に、薬物送達システムに組み込まれる治療剤、薬物送達システムが使用されている適応症、投与経路、並びに患者のサイズ（体重、体表面、又は器官のサイズ）及び状態（年齢及び全体的な健康）に応じて変化することを当業者は理解するであろう。したがって、臨床医は、最適な治療効果を得るために、投与量を滴定し、投与経路を調節することができる。
【０２６２】
投与の頻度は、使用されている薬物送達システムに組み込まれる治療剤の薬物動態パラメータに応じて決まる。典型的に、臨床医は、所望の効果を達成する投与量に達するまで組成物を投与する。したがって、組成物は、単回用量として、時間をかけて２回以上の用量（同じ量の所望の分子を含有しても若しくは含有しなくてもよい）として、又は埋め込みデバイス若しくはカテーテルによる持続注入として投与され得る。適切な投与量のさらなる調整は、当業者によって日常的に行われ、当業者によって日常的に行われる作業の範囲内である。適切な投与量は、適切な用量反応データの使用によって確認され得る。
【０２６３】
薬物送達システムは、微粒子の溶液又は懸濁液として調製され得る。一態様において、担体は、標準的なシリンジによって標的組織に投与され得る（例えば、皮下、硝子体内、関節内、腱内、又は筋肉内への投与）微粒子へと形成される。このような粒子は、１μｍ〜５０００μｍの平均粒径分布を有し得る。他の態様は、本明細書に記載される薬物送達システムが含侵された生分解性ガーゼ、メッシュ、又は縫合糸を含む。
【０２６４】
ある実施形態において、本明細書に記載される薬物送達システムの微粒子は、乳化重合、リソグラフィ、スピニング、成形、噴霧乾燥、ミリング、押し出し、機械的粉砕、又は当該技術分野において公知の同様の手順によって製造され得る。一実施形態において、本明細書に記載される薬物送達システム、担体ポリマー、又はヒドロゲルは、メッシュ又はスクリーンを通した押し出しによって微粒子に分割され得る。一態様において、押し出しは、所望の粒子分布サイズを達成するために、複数回及び／又は連続的により小さいメッシュに通して繰り返され得る。
【０２６５】
一実施形態において、粒径を測定するためのレーザー回折に基づいて、薬物送達システムは、等張水性製剤緩衝液中で懸濁した際に、１μｍ〜５０００μｍの平均粒径分布を有する。ある態様において、薬物送達システムは、等張緩衝液中で懸濁した際に、１０μｍ〜１０００μｍの平均粒径分布を有する。別の態様において、薬物送達システムは、等張水性緩衝液中で懸濁した際に、５０μｍ〜５００μｍの平均粒径分布を有する。別の態様において、薬物送達システムは、等張水性緩衝液中で懸濁した際に、１００μｍ〜３００μｍの平均粒径分布を有する。別の態様において、薬物送達システムは、等張水性緩衝液に懸濁した際に、２００μｍ〜３００μｍの平均粒径分布を有する。ある実施形態において、平均粒径分布は、約１０μｍ、約５０μｍ、約１００μｍ、約１５０μｍ、約２００μｍ、約２５０μｍ、約３００μｍ、約３５０μｍ、約４００μｍ、約４５０μｍ、約５００μｍ、約７５０μｍ、約１０００μｍ、約１５００μｍ、約２０００μｍ、約２５００μｍ、又は約５０００μｍを含む。
【０２６６】
粒径は、当業者に公知の標準的な技術を用いて決定され得る。薬物送達システム粒子の粒径分布を測定するのに使用され得る例示的な技術としては、レーザー回折分析、光散乱（例えば、動的光散乱）、微細粒子画像解析、水簸、又はエアロゾル質量分析法が挙げられる。薬物送達システム粒子の試料は、乾燥試料又は湿潤試料として測定され得る。製造業者の使用説明書にしたがって、推奨される操作手順にしたがって、Ｃｉｌａｓ；Ｂｒｏｏｋｈａｖｅｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ；Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ；Ｈｏｒｉｂａ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；又はＷｙａｔｔ製の機器を含む、粒径を測定するための任意の市販の機器が使用され得る。
【０２６７】
本明細書に記載される技術を用いて測定される粒径は、平均径、中央径（例えば、質量中央径）、及び粒径のモードによる正規分布又は非正規分布で導かれる直径として表され得る。粒径分布は、直径数分布、表面積分布、又は粒子体積分布として表され得る。粒径分布の平均は、体積平均直径（Ｄ［４，３］又はｄ４３）、平均表面積直径（Ｄ［３，２］又はｄ３２）又は平均数粒径（Ｄ［１，０］又はｄ１０）などの様々な方法で計算され、表され得る。粒径分布値が、測定方法及び分布の表し方に応じて変化するため、異なる平均粒径分布の比較は、正確な比較を行うために、同じ方法によって計算されなければならない。例えば、体積平均直径の測定及び計算値を有する試料は、理想的には、同じ条件下で同じ測定機器を用いて測定された、体積平均直径の測定及び計算値を有する第２の試料と比較されなければならない。したがって、本明細書に記載される特定の粒径分布は、粒径分布（例えば、直径数分布、表面積分布、又は粒子体積分布）を測定又は計算するためのいずれか１つのタイプの方法に限定されることは意図されず、本明細書に記載される粒径を測定する各方法について粒径値及びその分布を示すことが意図される。
【０２６８】
一実施形態において、薬物送達システムは、０．６ｍｍ未満の内径（例えば、２０ゲージ）の針を通した、好ましくは、０．３ｍｍ未満の内径（例えば、２５ゲージ）の針を通した、より好ましくは、０．２５ｍｍ未満の内径（例えば、２７ゲージ）の針を通した、さらにより好ましくは、０．２ｍｍ未満の内径（例えば、２８ゲージ）の針を通した、最も好ましくは、０．１６ｍｍ未満の内径（例えば、３０ゲージ）の針を通した注射によって投与され得る。一実施形態において、薬物送達システムが、眼内に又は硝子体内に投与される場合、０．１６ｍｍ未満の内径（例えば、３０〜３４ゲージ）の針が好ましい。例えば、１００μｍ〜３００μｍの粒径分布の薬物送達システムが注射される場合、２０ゲージ針が、送達のために最適であり得る。しかしながら、粒子形態は可撓性であるため、薬物送達システム粒径より狭い針のサイズが、首尾よく使用され得る。
【０２６９】
「注射によって投与され得る」、「注射用」、又は「注射可能性（ｉｎｊｅｃｔａｂｉｌｉｔｙ）」という語句及び用語は、特定の濃度（ｗ／ｖ）及び特定の温度で、液体中で膨潤する本明細書に記載される薬物送達システムを含むシリンジのプランジャに加えられる特定の力、このようなシリンジの出口に接続される所与の内径の針、及び針を通してシリンジから特定の体積の薬物送達システムを押し出すのに必要とされる時間などの要因の組合せを指す。
【０２７０】
一実施形態において、注射可能性の測定は、約０．１％〜約２０％（ｗ／ｖ）（規定のパーセンテージ範囲内の全ての整数を含む）の濃度になるまでＰＢＳ又は生理食塩水中で懸濁された薬物送達システムについて行われる。
【０２７１】
結果として、薬物送達システムは、放出される薬物Ｄ−Ｈに関して制御された放出速度の有益な効果を示す。好ましくは、持続放出速度が得られる。持続放出は、それぞれの本明細書に記載される薬物送達システムの投与間隔が、薬物送達システムの非存在下での薬物の投与と比較して延長されることを意味する。例えば、一般的に１日に１回又は数回投与される薬物に基づく薬物送達システムは、少なくとも３日間、少なくとも１週間、少なくとも１か月、数か月、又は数年間にわたって治療的に有効なレベルを提供する。
【０２７２】
本明細書に記載される別の実施形態は、本明細書に記載される薬物送達システムの医薬組成物である。医薬組成物は、以下のものなどの１つ以上の賦形剤を含み得る：
（ｉ）緩衝剤：ｐＨを所望の範囲内で維持するための生理学的に許容できる緩衝剤、例えば、リン酸ナトリウム、重炭酸塩、コハク酸塩、ヒスチジン、クエン酸塩及び酢酸塩、硫酸塩、硝酸塩、塩化物、ピルビン酸塩。Ｍｇ（ＯＨ）２又はＺｎＣＯ３などの制酸薬も使用され得る。緩衝能力は、ｐＨ安定性に最も感受性の条件に一致するように調整され得る。
【０２７３】
（ｉｉ）等張性調節剤：注射デポーでの浸透圧差に起因する細胞損傷から生じ得る疼痛を最小限に抑えるためのもの。グリセリン及び塩化ナトリウムが例である。有効濃度は、血清についての２８５〜３１５ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇの仮定モル浸透圧濃度を用いて浸透圧法によって決定され得る。
【０２７４】
（ｉｉｉ）保存剤及び／又は抗菌剤：複数回投与用非経口製剤は、注射により感染する対象のリスクを最小限に抑えるのに十分な濃度の保存剤の添加を必要とすることがあり、対応する規制要件は確立されている。典型的な保存剤としては、ｍ−クレゾール、フェノール、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、ブチルパラベン、クロロブタノール、ベンジルアルコール、硝酸フェニル水銀、チメロサール、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、安息香酸、クロロクレゾール、及び塩化ベンザルコニウムが挙げられる。
【０２７５】
（ｉｖ）安定剤：安定化は、タンパク質安定化力の強化によって、変性状態の不安定化によって、又はタンパク質への賦形剤の直接の結合によって達成される。安定剤は、アミノ酸、例えば、アラニン、アルギニン、アスパラギン酸、グリシン、ヒスチジン、リジン、プロリン、糖、例えば、グルコース、スクロース、トレハロース、ポリオール、例えば、グリセロール、マンニトール、ソルビトール、塩、例えば、リン酸カリウム、硫酸ナトリウム、キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ、ヘキサホスフェート、リガンド、例えば、二価金属イオン（亜鉛、カルシウムなど）、他の塩又は有機分子、例えば、フェノール誘導体であり得る。さらに、オリゴマー又はポリマー、例えば、シクロデキストリン、デキストラン、デンドリマー、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、プロタミン、若しくはヒト血清アルブミンが使用され得る。
【０２７６】
（ｖ）抗吸着剤：主に、イオン性若しくは非イオン性界面活性剤又は他のタンパク質又は可溶性ポリマー、例えば、ポロキサマー（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−６８）、ＰＥＧドデシルエーテル（Ｂｒｉｊ  ３５）、ポリソルベート２０及び８０、デキストラン、ポリエチレングリコール、ＰＥＧ−ポリヒスチジン、ＢＳＡ及びＨＳＡ並びにゼラチンが、組成物の容器の内面を被覆するか又は競合的に吸着するために使用される。賦形剤の選択される濃度及びタイプは、回避されるべき作用に応じて決まるが、典型的に、ＣＭＣ値の直ぐ上で界面活性剤の単層が界面に形成される。
【０２７７】
（ｖｉ）凍結乾燥又は凍結保護剤：凍結又は噴霧乾燥中、賦形剤は、水素結合破壊及び水分除去に起因する不安定効果を中和し得る。このために、糖及びポリオールが使用され得るが、対応するプラスの効果が、界面活性剤、アミノ酸、非水性溶媒、及び他のペプチドについても観察されている。トレハロースは、水分に誘発される凝集を低減するのに特に効率的であり、水へのタンパク質疎水性基の曝露に起因する可能性がある熱安定性も改善する。マンニトール及びスクロースも、単独の凍結乾燥／凍結保護剤として、又はマンニトール又はスクロースのより高い比率が凍結乾燥ケークの物理的安定性を促進することが知られている場合に互いに組み合わせて使用され得る。マンニトールはまた、トレハロースと組み合わされ得る。トレハロースはまた、ソルビトールと組み合わされ得、又はソルビトールが、単独の保護剤として使用され得る。デンプン又はデンプン誘導体も使用され得る。
【０２７８】
（ｖｉｉ）酸化保護剤：酸化防止剤、例えば、アスコルビン酸、エクトイン、メチオニン、グルタチオン、モノチオグリセロール、モリン、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、没食子酸プロピル、ビタミンＥ、キレート剤、例えば、クエン酸、ＥＤＴＡ、ヘキサホスフェート、チオグリコール酸。
【０２７９】
（ｖｉｉｉ）増粘剤又は粘度増強剤：バイアル及びシリンジ中で粒子が沈降するのを遅延させ、粒子の混合及び再懸濁を容易にし、懸濁液を容易に注射できる（すなわち、シリンジプランジャに対して小さい力で）ようにするために使用される。好適な増粘剤又は粘度増強剤は、例えば、カルボマー増粘剤、例えばＣａｒｂｏｐｏｌ  ９４０、Ｃａｒｂｏｐｏｌ  Ｕｌｔｒｅｚ  １０、セルロース誘導体、例えばヒドロキシプロピルメチルセルロース（ヒプロメロース、ＨＰＭＣ）又はジエチルアミノエチルセルロース（ＤＥＡＥ又はＤＥＡＥ−Ｃ）、コロイド状ケイ酸マグネシウム（Ｖｅｅｇｕｍ）又はケイ酸ナトリウム、ヒドロキシアパタイトゲル、リン酸三カルシウムゲル、キサンタン、カラギーナン、例えばＳａｔｉａｇｕｍ  ＵＴＣ  ３０、脂肪族ポリ（ヒドロキシ酸）、例えばポリ（Ｄ，Ｌ−又はＬ−乳酸）（ＰＬＡ）及びポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）及びそれらのコポリマー（ＰＬＧＡ）、Ｄ，Ｌ−ラクチド、グリコリド及びカプロラクトンのターポリマー、ポロキサマー、ポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）−ポリ（オキシエチレン）のトリブロック（例えば、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ．（商標））を構成するための親水性ポリ（オキシエチレン）ブロック及び疎水性ポリ（オキシプロピレン）ブロック、ポリエーテルエステルコポリマー、例えばポリエチレングリコールテレフタレート／ポリブチレンテレフタレートコポリマー、イソ酪酸酢酸スクロース（ＳＡＩＢ）、デキストラン又はそれらの誘導体、デキストラン及びＰＥＧの組合せ、ポリジメチルシロキサン、コラーゲン、キトサン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）及び誘導体、ポリアルキルイミド、ポリ（アクリルアミド−コ−ジアリルジメチルアンモニウム（ＤＡＤＭＡ））、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）、例えばデルマタン硫酸、コンドロイチン硫酸、ケラタン硫酸、ヘパリン、ヘパラン硫酸、ヒアルロナン、疎水性Ａ−ブロック、例えばポリラクチド（ＰＬＡ）又はポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）と、親水性Ｂ−ブロック、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）又はポリビニルピロリドンとから構成されるＡＢＡトリブロック又はＡＢブロックコポリマーである。このようなブロックコポリマー並びに上記のポロキサマーは、逆熱ゲル化挙動を示し得る（投与を容易にするために室温で流体状態であり、注射後に体温でのゾル−ゲル転移温度超でゲル状態である）。
【０２８０】
（ｉｘ）拡散剤：結合組織の細胞間隙に見られる、限定はされないが、ヒアルロン酸、多糖などの間質腔中の細胞外基質の成分の加水分解によって、結合組織の浸透性を調節する。限定はされないが、ヒアルロニダーゼなどの展着剤は、細胞外基質の粘度を一時的に低下させ、注入された薬物の拡散を促進する。
【０２８１】
（ｘ）他の助剤：例えば湿潤剤、粘度調整剤、抗生物質、ヒアルロニダーゼ。塩酸及び水酸化ナトリウムなどの酸及び塩基は、製造の際のｐＨ調整に必要な助剤である。
【０２８２】
薬物送達システムは、液体、懸濁液として、又は乾燥組成物として提供され得る。
【０２８３】
一実施形態において、薬物送達システムは、乾燥組成物である。好適な乾燥方法は、例えば、噴霧乾燥及び凍結乾燥（フリーズドライ）である。一態様において、薬物送達システムは、凍結乾燥によって乾燥される。
【０２８４】
一実施形態において、薬物送達システムは、１回の適用で少なくとも１２時間にわたって治療有効量の生物学的活性薬剤を提供するのに十分に組成物中で投与される。一態様において、約１日、約２日、約３日、約４日、約５日、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、１か月、２か月、３か月、４か月、６か月、９か月、１年間、２年間、３年間、４年間、或いはより長い期間にわたって、薬物送達システムの１回の適用で十分である。
【０２８５】
一実施形態において、薬物送達システムは、単回投与として提供され、これは、それを供給する容器が１回の薬剤用量を含むことを意味する。
【０２８６】
別の実施形態において、組成物は、複数回投与組成物として提供され、これは、それが２回以上の治療用量を含むことを意味する。好ましくは、複数回投与組成物は、少なくとも２回の用量を含む。このような複数回投与薬物送達システムは、それを必要とする異なる対象に使用され得るか、又は１人の対象に使用することが意図され、残りの用量は、第１の用量の適用後、必要になるまで貯蔵される。
【０２８７】
別の実施形態において、薬物送達システムは、１つ以上の容器に含まれる。液体又は懸濁液組成物については、容器は、好ましくは、シングルチャンバシリンジである。乾燥組成物については、好ましくは、容器は、デュアルチャンバシリンジである。乾燥組成物が、デュアルチャンバシリンジの第１のチャンバ中に提供され、再構成溶液が、デュアルチャンバシリンジの第２のチャンバ中に提供される。
【０２８８】
乾燥薬物送達システムを、それを必要とする対象に適用する前に、乾燥組成物は、再構成される。再構成は、バイアル、シリンジ、デュアルチャンバシリンジ、アンプル、及びカートリッジなどの、乾燥薬物送達システムが提供される容器中で行われ得る。再構成は、所定の量の再構成溶液を、乾燥組成物に加えることによって行われる。再構成溶液は、滅菌液、例えばリン酸緩衝生理食塩水、等張食塩水、注射用蒸留水、又は他の緩衝液であり、これらは、保存剤及び／又は例えば、ベンジルアルコール及びクレゾールなどの抗菌剤などのさらなる賦形剤を含有し得る。好ましくは、再構成溶液は、滅菌リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）又は生理食塩水である。或いは、再構成溶液は、注射用滅菌水である。
【０２８９】
別の実施形態は、治療有効量の薬物送達システム、及び任意選択的に１つ以上の薬学的に許容できる賦形剤を含む、再構成された組成物を調製する方法であって、組成物を、ある体積の再構成ビヒクルと接触させる工程を含む方法である。次に、再構成された薬物送達システムは、注射又は他の経路によって投与され得る。
【０２９０】
別の実施形態は、治療有効量の薬物送達システム、再構成ビヒクル、及び任意選択的に１つ以上の薬学的に許容できる賦形剤を含む、再構成された組成物である。
【０２９１】
別の実施形態は、治療有効量の薬物送達システム、及び任意選択的に１つ以上の薬学的に許容できる賦形剤を含む溶液又は懸濁液を含むプレフィルドシリンジである。一態様において、シリンジに、約０．０１ｍＬ〜約５ｍＬの本明細書に記載される薬物送達システムが充填される。一態様において、シリンジに、約０．０５ｍＬ〜約５ｍＬ、約１ｍＬ〜約２ｍＬ、約０．１ｍＬ〜約０．１５ｍＬ、約０．１ｍＬ、約０．５ｍＬの間、約０．１５ｍＬ〜約０．１７５ｍＬ、又は約０．５〜約５ｍＬが充填される。一実施形態において、シリンジに、０．１６５ｍＬの本明細書に記載される薬物送達システムが充填される。ある態様において、シリンジに、約０．０１ｍＬ、約０．０２ｍＬ、約０．０３ｍＬ、約０．０４ｍＬ、約０．０５ｍＬ、約０．０６ｍＬ、約０．０７ｍＬ、約０．０８ｍＬ、約０．０９ｍＬ、約０．１ｍＬ、約０．２ｍＬ、約０．３ｍＬ、約０．４ｍＬ、約０．５ｍＬ、約０．６ｍＬ、約０．７ｍＬ、約０．８ｍＬ、約０．９ｍＬ、約１ｍＬ、約１．２ｍＬ、約１．５ｍＬ、約１．７５ｍＬ、約２ｍＬ、約２．５ｍＬ、約３ｍＬ、約４ｍＬ、又は約５ｍＬの本明細書に記載される薬物送達システムが充填される。シリンジ及び針内の「デッドスペース」に起因する損失を考慮して、患者に投与されるべき所望の用量より多くシリンジに充填されることが多い。シリンジが患者に注射できる状態になるように医師によって準備される場合も、所定の量の損失があり得る。
【０２９２】
一実施形態において、シリンジに、本明細書に記載される薬物送達システムの注射の経路に応じて約０．０１ｍＬ〜約５ｍＬ（例えば、約０．０１ｍＬ〜約０．１ｍＬ、約０．１ｍＬ〜約０．５ｍＬ、約０．２ｍＬ〜約２ｍＬ、約０．５ｍＬ〜約５ｍＬ、又は約１ｍＬ〜約５ｍＬ）の投与体積（すなわち、患者への送達を意図される薬剤の体積）が充填される。硝子体内注射を意図される一実施形態において、シリンジに、本明細書に記載されるように１ｍｇ／ｍＬ〜４０ｍｇ／ｍＬの薬物濃度を有する薬物送達システム溶液又は懸濁液の約０．０１ｍＬ〜約０．１ｍＬの投与体積が充填される。関節内注射を意図される一実施形態において、シリンジに、本明細書に記載されるように１ｍｇ／ｍＬ〜４０ｍｇ／ｍＬの薬物濃度を有する薬物送達システム溶液又は懸濁液の約０．０５ｍＬ〜約５．０ｍＬの投与体積が充填される。皮下注射を意図される一実施形態において、シリンジに、本明細書に記載されるように０．１ｍｇ／ｍＬ〜４０ｍｇ／ｍＬの薬物濃度を有する薬物送達システム溶液又は懸濁液の約０．１ｍＬ〜約５．０ｍＬの投与体積が充填される。他の経路による注射を意図される他の実施形態において、シリンジに、本明細書に記載されるように０．１ｍｇ／ｍＬ〜４０ｍｇ／ｍＬの薬物濃度を有する薬物送達システム溶液又は懸濁液の約０．０１ｍＬ〜約５．０ｍＬの投与体積が充填される。ある態様において、シリンジに、約０．０１ｍＬ、約０．０２ｍＬ、約０．０３ｍＬ、約０．０４ｍＬ、約０．０５ｍＬ、約０．０６ｍＬ、約０．０７ｍＬ、約０．０８ｍＬ、約０．０９ｍＬ、約０．１ｍＬ、約０．２ｍＬ、約０．３ｍＬ、約０．４ｍＬ、約０．５ｍＬ、約０．６ｍＬ、約０．７ｍＬ、約０．８ｍＬ、約０．９ｍＬ、約１ｍＬ、約１．２ｍＬ、約１．５ｍＬ、約１．７５ｍＬ、約２ｍＬ、約２．５ｍＬ、約３ｍＬ、約４ｍＬ、又は約５ｍＬの、それを必要とする患者への送達用の本明細書に記載される薬物送達システムが充填される。
【０２９３】
シリンジが薬剤溶液を含む際、出口が、薬剤の滅菌状態を維持するために可逆的に密封され得る。この密封は、ルアーロック又は不正開封防止シールなどの、当該技術分野において公知のような密封デバイスによって達成され得る。
【０２９４】
別の実施形態は、本明細書に記載される１つ以上の薬物送達システムの溶液又は懸濁液を含む１つ以上のプレフィルドシリンジを含むキットである。一実施形態において、このようなキットは、ブリスターパック又は密封スリーブ中に本明細書に記載される薬物送達システムを含むプレフィルドシリンジを含む。ブリスターパック又はスリーブは、内部が滅菌状態であり得る。一態様において、本明細書に記載されるプレフィルドシリンジは、滅菌、例えば最終滅菌を行う前に、このようなブリスターパック又はスリーブの内部に入れられ得る。
【０２９５】
このようなキットは、本明細書に記載される薬物送達システムの投与のための１つ以上の針をさらに含み得る。薬物送達システムが硝子体内に投与される場合、３０ゲージ×１／２インチ針を使用するのが典型的であるが、３１ゲージ又は３２ゲージ針が使用されてもよい。硝子体内投与については、３３ゲージ又は３４ゲージ針が代わりに使用され得る。このようなキットは、使用説明書、薬物ラベル、禁忌、警告、又は他の関連情報をさらに含み得る。本明細書に記載される一実施形態は、ブリスターパック内に含まれる本明細書に記載される１つ以上の薬物送達システムを含む１つ以上のプレフィルドシリンジ、針、及び任意選択的に、投与のための使用説明書、薬物ラベル、禁忌、警告、又は他の関連情報を含む、カートン又はパッケージである。
【０２９６】
最終滅菌プロセスが、シリンジを滅菌するのに使用されてもよく、このようなプロセスは、エチレンオキシド又は過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）滅菌プロセスなどの公知のプロセスを使用し得る。シリンジとともに使用される針は、本明細書に記載されるキットと同様に、同じ方法によって滅菌され得る。一態様において、シリンジの外側が滅菌状態になるまで、パッケージが、滅菌に曝される。このようなプロセスの後、シリンジの外面は、最大で６か月、９か月、１２か月、１５か月、１８か月、２４か月以上にわたって（そのブリスターパック中で）滅菌状態に保たれ得る。したがって、一実施形態において、本明細書に記載されるプレフィルドシリンジ（そのブリスターパック中で）は、最大で６か月、９か月、１２か月、１５か月、１８か月、２４か月、或いはそれより長い貯蔵寿命を有し得る。一実施形態において、１００万分の１未満のシリンジが、１８か月の貯蔵後にシリンジの外側に検出可能な微生物の存在を有する。一態様において、プレフィルドシリンジは、少なくとも１０−６の無菌性保証水準（Ｓｔｅｒｉｌｉｔｙ  Ａｓｓｕｒａｎｃｅ  Ｌｅｖｅｌ）を有するエチレンオキシドを用いて滅菌されている。別の態様において、プレフィルドシリンジは、少なくとも１０−６の無菌性保証水準を有する過酸化水素を用いて滅菌されている。かなりの量の滅菌ガスが、シリンジの可変体積チャンバに入ってはならない。「かなりの量」という用語は、本明細書において使用される際、可変体積チャンバ内の薬物送達システム溶液又は懸濁液の許容できない変性を引き起こし得るガスの量を指す。一実施形態において、滅菌プロセスは、薬物送達システムの≦１０％（好ましくは、≦５％、≦３％、≦１％）のアルキル化を引き起こす。一実施形態において、プレフィルドシリンジは、エチレンオキシドを用いて滅菌されているが、シリンジの外面は、≦１ｐｐｍ、好ましくは、≦０．２ｐｐｍのエチレンオキシド残渣を有する。一実施形態において、プレフィルドシリンジは、過酸化水素を用いて滅菌されているが、シリンジの外面は、≦１ｐｐｍ、好ましくは、≦０．２ｐｐｍの過酸化水素残渣を有する。別の実施形態において、プレフィルドシリンジは、エチレンオキシドを用いて滅菌されているが、シリンジの外側及びブリスターパックの内側に見られる総エチレンオキシド残渣は、≦０．１ｍｇである。別の実施形態において、プレフィルドシリンジは、過酸化水素を用いて滅菌されているが、シリンジの外側及びブリスターパックの内側に見られる総過酸化水素残渣は、≦０．１ｍｇである。
【０２９７】
別の態様は、パーツのキットである。液体及び懸濁液組成物については、投与デバイスが単に皮下シリンジである場合、キットは、シリンジ、針及びシリンジとともに使用するための薬物送達システム組成物を含む容器を含み得る。乾燥組成物の場合、容器は、乾燥薬物送達システム組成物を含む１つのチャンバ、及び再構成溶液を含む第２のチャンバを有し得る。一実施形態において、注射デバイスは、使用の際、容器内の液体若しくは懸濁液又は再構成された乾燥組成物注射デバイスの出口と流体連通するように、薬物送達システム組成物を含む別個の容器が注射デバイスと係合し得るように構成された皮下シリンジである。投与デバイスの例としては、限定はされないが、皮下シリンジ及びペンインジェクタデバイスが挙げられる。特に好ましい注射デバイスは、ペンインジェクタであり、その場合、容器は、カートリッジ、好ましくは、使い捨てカートリッジである。
【０２９８】
別の実施形態は、針、及び薬物送達システム組成物を含む容器を含み、任意選択的に、再構成溶液をさらに含むキットを含み、容器は、針とともに使用するように構成されている。一態様において、容器は、プレフィルドシリンジである。別の態様において、容器は、デュアルチャンバシリンジである。
【０２９９】
別の実施形態は、ペンインジェクタデバイスとともに使用するための、本明細書において上述される薬物送達システムの組成物を含むカートリッジである。カートリッジは、単回用量又は複数回用量の薬物送達システムを含み得る。
【０３００】
別の実施形態において、薬物送達システム溶液又は懸濁液は、薬物送達システム及び１つ以上の賦形剤、及びさらに他の生物学的活性薬剤を、それらの遊離形態で又は薬物として又はＰＥＧ化薬物若しくはヒドロゲル結合薬物など、他の薬物送達システムと組み合わせて含む。一態様において、このようなさらなる１つ以上の生物学的活性薬剤は、遊離形態薬物又は第２の薬物送達システムである。
【０３０１】
別の実施形態において、１つ以上の薬物送達システムは、同時に投与され、各薬物送達システムは、別個の又は関連する生物学的活性のいずれかを有する。
【０３０２】
代替的な実施形態において、薬物送達システムは、薬物送達システムがそれを必要とする対象にまず投与された後、第２の化合物の投与が続くように、第２の生物学的活性化合物と組み合わされる。或いは、薬物送達システム組成物は、別の化合物が同じ対象に投与された後、それを必要とする対象に投与される。
【０３０３】
別の実施形態は、薬剤として使用するための、式（Ｉ）によって表されるＤ−Ｒを含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩である。
【０３０４】
別の実施形態は、筋骨格系疾患の治療に使用するための、式（Ｉ）によって表されるＤ−Ｒを含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩である。
【０３０５】
別の実施形態は、筋骨格系疾患の治療のための薬剤の製造のための、式（Ｉ）によって表されるＤ−Ｒを含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩の使用である。
【０３０６】
別の実施形態は、薬物送達システム、又は薬物送達システムから放出される生物学的活性部分によって治療され得る疾病又は疾患を治療又は予防する方法に使用するための医薬組成物である。
【０３０７】
別の実施形態は、薬物送達システムの溶液又は懸濁液組成物を製造する方法である。一実施形態において、このような組成物は、
（ｉ）薬物送達システムを１つ以上の賦形剤と混合し；
（ｉｉ）単回又は複数回用量に相当する量の液体又は懸濁液組成物を好適な容器中に移し；
（ｉｉｉ）容器を密封する
ことによって作製される。
【０３０８】
別の実施形態は、薬物送達システムの乾燥組成物を製造する方法である。一実施形態において、このような組成物は、
（ｉ）薬物送達システムを１つ以上の賦形剤と混合し；
（ｉｉ）単回又は複数回用量に相当する量を好適な容器中に移し；
（ｉｉｉ）前記容器中の組成物を乾燥させ；
（ｉｖ）容器を密封する
ことによって作製される。
【０３０９】
好適な容器は、バイアル、シリンジ、デュアルチャンバシリンジ、アンプル、及びカートリッジである。
【０３１０】
別の実施形態は、上に定義される薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩の合成のための方法である。薬物送達システム又は薬物送達システムの前駆体は、公知の方法によって、又は後述される一連の反応にしたがって調製され得る。薬物送達システムの調製（合成）又はその手順に使用される出発材料は、公知であるか若しくは市販されており、又は公知の方法によって若しくは後述されるように調製され得る。
【０３１１】
本明細書に記載される組成物、方法、及び応用に対する好適な変更及び改変が、その任意の実施形態又は態様の範囲から逸脱せずに行われ得ることが、関連技術の当業者に容易に明らかになるであろう。提供される組成物及び方法は、例示的なものであり、記載される実施形態のいずれかの範囲を限定することは意図されていない。本明細書に開示される様々な実施形態、態様、及び選択肢の全ては、あらゆる形態で又は反復して組み合わされ得る。本明細書に記載される組成物、製剤、方法、及びプロセスの範囲は、本明細書に記載される実施形態、態様、選択肢、例、及び選好の全ての実際の又は潜在的な組合せを含む。
【実施例】
【０３１２】
略語
Ａｃ      アセチル
ＡＣＮ      アセトニトリル
ＡｃＯＨ      酢酸
Ａｃ２Ｏ      無水酢酸
ａｑ．      水溶液
ａｔｍ      雰囲気
Ｂｏｃ、ＢＯＣ      第三級ブチルカルボキシ
Ｂｏｃ−無水物      二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル
（Ｂｏｃ）２Ｏ、（ＢＯＣ）２Ｏ      二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル
ｂｒ．      ブロード
ＢＳＡ      ウシ血清アルブミン
ＢｕＯＨ      ブタノール
ＣＡＤ      荷電化粒子検出器
ｃａｌｃｄ．      計算値
Ｃａｔ、ｃａｔ      触媒
ＣＢＺ、Ｃｂｚ      カルボベンジルオキシ
Ｃｕ（ＯＴｆ）２      トリフルオロメタンスルホン酸銅（ＩＩ）
ｄ      二重項
ｄｄ      二重項の二重項
ＤＣＭ      ジクロロメタン
ＤＩＡＤ      アゾジカルボン酸ジイソプロピル
ＤＩＰＥＡ、ＤＩＥＡ      Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡＰ      ４，４−ジメチルアミノピリジン
ＤＭＦ      Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ      ジメチルスルホキシド
ＤＯＳＹ−ＮＭＲ      一次元拡散秩序化ＮＭＲ
ＥＣＬ      電気化学発光
Ｅｌｅｍ．Ａｎａｌ．      元素分析
ＥＬＳＤ      蒸発光散乱検出器
ＥＤＣ・ＨＣｌ      Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩
ＥＳＩ      エレクトロスプレーイオン化
ＥｔＯＡｃ、ＡｃＯＥｔ      酢酸エチル
Ｅｔ      エチル
ＥｔＯＨ      エタノール
ＦＣＣ      フラッシュカラムクロマトグラフィー
ＦＩＴＣ      フルオレセインイソチオシアネート
ｇ      グラム
Ｇ      ゲージ
ｈ      時間
ＨＡＴＵ      ２−（１Ｈ−７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェートメタンアミニウム
ＨＣ      ＨＰＬＣ条件
ＨＰＬＣ      高速液体クロマトグラフィー
ＩＰＡ      ２−プロパノール
ＩＲ      赤外分光法
ｉ又はイソ      イソ
ＩＶＴ、ｉｖｔ      硝子体内
Ｋ２ＣＯ３      炭酸カリウム
ｋＤ、ｋＤａ      キロダルトン
Ｌ      リットル
ＬＣＭＳ      液体クロマトグラフィー−質量分光法
Ｍ      モル
ＭＨｚ      メガヘルツ
ｍ      多重項
Ｍｅ      メチル
ＭｅＣＮ      アセトニトリル
ＭｅＯＨ      メタノール
ＭＥＳ      ２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸
ｍｇ      ミリグラム
μｇ      マイクログラム
ｍＭ      ミリモル
ｍｍ      ミリメートル
ｍｉｎ      分
ｍＬ      ミリリットル
ｍｍｏｌ      ミリモル
μＬ      マイクロリットル
μｍｏｌ      マイクロモル
ＭＯＰＳ      ３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸
ＭＳ      質量分光法
ＭｓＣｌ      塩化メタンスルホニル
ＭｓＯＨ      メタンスルホン酸
ＭＷＣＯ      分子量カットオフ
ｍ／ｚ      質量対電荷比
Ｎ      ノルマル
ＮＡ      該当なし
ＮａＢＨ４      水素化ホウ素ナトリウム
ＮａＢＨ３ＣＮ      シアノ水素化ホウ素ナトリウム
Ｎａ（ＡｃＯ）３ＢＨ      トリ酢酸水素化ホウ素ナトリウム
ｎｇ      ナノグラム
ＮＨ４Ｃｌ      塩化アンモニウム
ＮＨＳ      Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド
ｎＭ      ナノモル
ＮＭＲ      核磁気共鳴
ＯＭｅ      メトキシ
ＰＢＳ      リン酸緩衝生理食塩水
１×ＰＢＳ      リン酸緩衝生理食塩水、典型的に約１０ｍＭのＰＯ４３−
Ｐｄ／Ｃ      パラジウム炭素
Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２      １，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン−パラジウム（ＩＩ）ジクロリド
Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２・ＣＨ２Ｃｌ２付加物      １，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン−パラジウム（ＩＩ）ジクロリドジクロロメタン錯体
Ｐｄ（ＰＰｈ３）４      テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）
Ｐｈ      フェニル
ｐｐｍ      百万分率
ｐｓｉ      ポンド毎平方インチ
ｒａｃ      ラセミ
ｒｃｆ      相対遠心力
ＲＰ      逆相
ｒｔ、ＲＴ      室温
ｓ      一重項
ｓａｔ．      飽和
ＳＤＳ−ｐａｇｅ      ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動
ＳＥＣ      サイズ排除クロマトグラフィー
ＳＦＣ      超臨界流体クロマトグラフィー
ｔ      三重項
ｔ−Ｂｕ、ｔＢｕ      第三級ブチル
ｔ１／２      半減期
ｔｒ又はｒｅｔ．ｔｉｍｅ      保持時間
ＴＢＡＦ      フッ化テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム
ＴＢＳＣｌ、ＴＢＤＭＳＣｌ      ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリド
ＴＥＡ、Ｅｔ３Ｎ、ＮＥｔ３      トリエチルアミン
ｔｅｒｔ−      第三級
ＴＦＡ      トリフルオロ酢酸
Ｔｆ２Ｏ      トリフルオロメタンスルホン酸無水物
ＴＨＦ      テトラヒドロフラン
ＴＬＣ      薄層クロマトグラフィー
ＴＭＳ      トリメチルシリル
ＴＭＳＯＴｆ      トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル
トリス      トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン
Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００      ｔ−オクチルフェノキシポリエトキシエタノール（ＣＡＳ９００２−９３−１）
Ｔｓ      ｐ−トルエンスルホニル
ＴｓＯＨ      ｐ−トルエンスルホン酸
Ｔｗｅｅｎ２０      ポリソルベート２０、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート
ＵＰＬＣ      超高速液体クロマトグラフィー
ＵＶ      紫外線
ＶＥＧＦ      血管内皮増殖因子
ｖ／ｖ      体積／体積
ｗ／ｖ      重量／体積
ｗ／ｗ      重量／重量
【０３１３】
これらの実施例に記載される以下の薬物は、以下のように略記される。
Ｄ１：ブロルシズマブ（配列番号４）；
Ｄ２：（配列番号５）；
Ｄ３：（配列番号６）；及び
Ｄ４：（配列番号７）。
【０３１４】
方法
いくつかの以下の実施例に使用される（（１Ｒ，８Ｓ，９ｓ）−ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル）メチル（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）カーボネート
【化７９】
2020517623.tif 000095
の合成が、Ａ．Ｍ．Ｊａｗａｌｅｋａｒ，ｅｔ  ａｌ；Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，２０１３，１８，７３４６−７３６３によって記載された。
【０３１５】
いくつかの以下の実施例に使用される（（１Ｒ，８Ｓ，９ｓ）−ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル）メチル（４−ニトロフェニル）カーボネート
【化８０】
2020517623.tif 000096
の合成が、Ｊ．Ｄｏｍｍｅｒｈｏｌｔ，ｅｔ  ａｌ；Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．２０１０，４９，９４２２−９４２５によって記載された。
【０３１６】
本明細書において合成される際に特に説明されていない全ての他の中間体及び試薬は、市販されており、供給されたままの状態で使用した。
【０３１７】
ＬＣＭＳ方法
方法１
カラムＳｕｎＦｉｒｅ  Ｃ１８  ３．５μｍ  ３．０×３０ｍｍ；カラム温度４０℃；流量２．０ｍＬ／分；停止時間２．２０分；ｐＨ２．２；溶離剤Ａ１  水中０．０５％のＴＦＡ；溶離剤Ｂ１  アセトニトリル；グラジエント時間（分）／％Ａ（溶離剤Ａ１）：％Ｂ（溶離剤Ｂ１）；０．００／９５：５；１．７０／５：９５；２．００／５：９５；２．１０／９５：５。
【０３１８】
方法２
カラムＡｃＱｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８  １．７μｍ  ２．１×３０ｍｍ；カラム温度５０℃；流量１．０ｍＬ／分；停止時間２．００分；ｐＨ２．６；溶離剤Ａ１  水中０．１％のギ酸；溶離剤Ｂ１  アセトニトリル中０．１％のギ酸；グラジエント時間（分）／％Ａ（溶離剤Ａ１）：％Ｂ（溶離剤Ｂ１）
０．００／９８：２；０．１０／９８：２；１．５０／２：９８；１．８０／２：９８；１．９０／９８：２；２．００／９８：２。
【０３１９】
方法３
カラム：Ｋｉｎｅｔｅｘ  ２．６μｍ  Ｃ１８  １００Ａ（１００×４．６ｍｍ）；移動相Ａ（水中０．１％のギ酸）、Ｂ（アセトニトリル）；勾配（時間（分）／％Ｂ）：０／５、１／３０、３／９５、４／９５、４．１／５、６／５。
【０３２０】
方法４
カラム：ＡｃＱｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８  １．７μｍ  ２．１×３０ｍｍ；カラム温度５０℃；流量１．０ｍＬ／分；停止時間：２．００分；ｐＨ２．６；溶離剤Ａ１  水中０．１％のギ酸；溶離剤Ｂ１  アセトニトリル中０．１％のギ酸；グラジエント時間（分）／％Ａ（溶離剤Ａ１）：％Ｂ（溶離剤Ｂ１）；０．００／９８：２；０．１０／９８：２；１．５０／２：９８；１．８０／２：９８；１．９０／９８：２；２．００／９８：２。
【０３２１】
方法５
カラム：ＳｕｎＦｉｒｅ  Ｃ１８  ３．５μｍ  ３．０×３０ｍｍ；カラム温度４０℃；流量２．０ｍＬ／分；停止時間２．２０分；ｐＨ２．２；溶離剤Ａ１  水中５ｍＭの水酸化アンモニウム；溶離剤Ｂ１  アセトニトリル；グラジエント時間（分）／％Ａ（溶離剤Ａ１）：％Ｂ（溶離剤Ｂ１）；０．００／９５：５；１．７０／５：９５；２．００／５：９５；２．１０／９５：５。
【０３２２】
方法６
カラム：Ｋｉｎｅｔｅｘ  ２．６μｍ  Ｃ１８  １００Ａ、（１００×４．６０ｍｍ）；勾配／（時間（分）／％Ｂ）０／５、１／３０、３／９５、４／９５、４．１／５、６／５；移動相：水中０．１％のギ酸（Ａ）／アセトニトリル（Ｂ）；流量：１．４ｍＬ／分；カラム温度：４０℃。
【０３２３】
方法７
カラム：Ｓｙｎｅｒｇｉ  ２．５μｍ  ＭＡＸ−ＲＰ  １００Ａ  Ｍｅｒｃｕｒｙ（１００×４．６ｍｍ）；移動相Ａ（水中０．１％のギ酸）、Ｂ（アセトニトリル）；勾配（時間（分）／％Ｂ）：０／３０、０．５／３０、１．５／９５、２．４／９５、２．５／３０、３．０／３０。
【０３２４】
方法８
カラム：Ｋｉｎｅｔｅｘ  ２．６μｍ  Ｃ１８  １００Ａ（１００×４．６ｍｍ）；移動相Ａ（水中０．１％のギ酸）、Ｂ（アセトニトリル）；勾配（時間（分）／％Ｂ）：０／５０、１／７０、２／１００、４／１００、４．１／５０、６／５０。ＥＳＩ−ＭＳデータを、Ａｃｑｕｉｔｙ  Ｇ２  Ｘｅｖｏ−ＱＴＯＦ−ＭＳにおいて記録した。正イオン質量スペクトルを、ＭａｓｓＬｙｎｘソフトウェアパッケージにおけるＭａｘＥｎｔ  １プログラムを用いてデコンボリュートした。
【０３２５】
方法９
カラム：Ｐｒｏｓｗｉｆｔ  Ｍｏｎｏｌｉｔｈ（４．６ｘ５０ｍｍ）；移動相Ａ（水中０．１％のギ酸）、Ｂ（アセトニトリル中０．１％のギ酸）；勾配（時間（分）／％Ｂ）：０／２、０．７／２、２／９８、２．１／９８、２．３／２、３．３／２。ＥＳＩ−ＭＳデータを、Ａｃｑｕｉｔｙ  Ｇ２  Ｘｅｖｏ−ＱＴＯＦ−ＭＳにおいて記録した。正イオン質量スペクトルを、ＭａｓｓＬｙｎｘソフトウェアパッケージにおけるＭａｘＥｎｔ  １プログラムを用いてデコンボリュートした。（Ｍ＋Ｈ）＋についてのデコンボリュートされたｍ／ｚを報告した。
【０３２６】
実施例１
トレースレスリンカー
この実施例は、アミン含有薬物及び担体の両方にコンジュゲートされることが可能ないくつかのトレースレスリンカーの合成を説明している。
【０３２７】
【表１３】
2020517623.tif 000097
【０３２８】
【表１４】
2020517623.tif 000098
【０３２９】
【表１５】
2020517623.tif 000099
【０３３０】
【表１６】
2020517623.tif 000100
【０３３１】
トレースレスリンカーの合成
一般的な中間体：Ｌ−ＩＮＴ−１ｃ
【化８１】
2020517623.tif 000101
Ｌ−ＩＮＴ−１ｂ．１−（Ｎ−Ｃｂｚ−β−アラニル）−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン
【化８２】
2020517623.tif 000102
テトラヒドロフラン（３０ｍＬ）中の市販のＮ−Ｃｂｚ−β−アラニン（ＳＭ−１、２．５ｇ、１１．２ｍｍｏｌ）の０℃の溶液に、トリエチルアミン（１．１３ｇ、１１．２ｍｍｏｌ）及びクロロギ酸エチル（１．２１ｇ、１１．２ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を０℃で２時間撹拌して、Ｎ−Ｃｂｚ−β−アラニンエチル炭酸無水物（Ｌ−ＩＮＴ−１ａ）のインサイチュ形成を得た。この反応混合物を、水（３０ｍＬ）中の２−（ヒドロキシメチル）ピペラジン（ＳＭ−２、１．９５ｇ、１６．８ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１．１３ｇ、１１．２ｍｍｏｌ）の溶液に加え、得られた混合物を室温で１２時間撹拌した。炭酸ナトリウム溶液（２Ｍ、１ｍＬ）を用いて溶液を塩基性にした。塩水（２ｍＬ）を加え、水性相を濃縮して、粗固体を得た。カラムクロマトグラフィー（塩基性アルミナ、３〜１５％のメタノール：ジクロロメタンで溶離される）による精製により、Ｌ−ＩＮＴ−１ｂを得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ３２２．２（Ｍ＋Ｈ）．
【０３３２】
Ｌ−ＩＮＴ−１ｃ．１−（Ｂｏｃ）−２−（ヒドロキシメチル）−４−（Ｎ−Ｃｂｚ−β−アラニル）ピペラジン
【化８３】
2020517623.tif 000103
ジクロロメタン（２０ｍＬ）中のＬ−ＩＮＴ−１ｂ（１ｇ、３．１ｍｍｏｌ）の０℃の溶液に、トリエチルアミン（０．５０４ｇ、４．９８ｍｍｏｌ）及び二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（６１１ｍｇ、２．８ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を室温で２時間撹拌した。反応混合物を水で処理し、ジクロロメタンで抽出した。有機層を乾燥させ（硫酸ナトリウム）、蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、２：９８のメタノール：ジクロロメタンで溶離される）による精製により、Ｌ−ＩＮＴ−１ｃを得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ４２２．２（Ｍ＋Ｈ）．
【０３３３】
リンカー中間体Ｌ−ＩＮＴ−１．
【化８４】
2020517623.tif 000104
Ｌ−ＩＮＴ−１ｄ．１−（Ｂｏｃ）−２−（２’−メトキシアセトキシメチル）−４−（Ｎ−Ｃｂｚ−β−アラニル）ピペラジン
【化８５】
2020517623.tif 000105
ジクロロメタン（１５ｍＬ）中のＬ−ＩＮＴ−１ｃ（１ｇ、２．３７ｍｍｏｌ）の０℃の溶液に、トリエチルアミン（０．６０ｇ、５．９３ｍｍｏｌ）を加えた。次に、メトキシアセチルクロリド（３０７ｍｇ、２．８５ｍｍｏｌ）を滴下して加え、溶液を室温で１２時間撹拌した。反応混合物を水で処理し、ジクロロメタンで抽出した。有機層を乾燥させ（硫酸ナトリウム）、蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、１〜２％のメタノール：ジクロロメタンで溶離される）による精製により、Ｌ−ＩＮＴ−１ｄを得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ４９４．２（Ｍ＋Ｈ）．
【０３３４】
Ｌ−ＩＮＴ−１ｅ．１−（Ｎ−Ｃｂｚ−β−アラニル）−３−（２’−メトキシアセトキシメチル）ピペラジン、トリフルオロ酢酸塩
【化８６】
2020517623.tif 000106
ジクロロメタン（２６ｍＬ）中のＬ−ＩＮＴ−１ｄ（１ｇ、２．０２ｍｍｏｌ）の０℃の溶液に、トリフルオロ酢酸（７ｍＬ）を加えた。溶液を室温で３時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、ペンタンで洗浄し、高真空下で乾燥させて、トリフルオロ酢酸塩Ｌ−ＩＮＴ−１ｅを得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ３９４（Ｍ＋Ｈ）．
【０３３５】
Ｌ−ＩＮＴ−１．２−（２’−メトキシアセトキシメチル）−４−（Ｎ−Ｃｂｚ−β−アラニル）−１−ピペラジン酢酸ｔ−ブチルエステル
【化８７】
2020517623.tif 000107
アセトニトリル（２５ｍＬ）中のＬ−ＩＮＴ−１ｅ（１．０ｇ、２．５４ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（１．０５ｇ、７．６３ｍｍｏｌ）の０℃の混合物に、ブロモ酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（０．７４４ｇ、３．８２ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。溶液を室温で２４時間撹拌した。反応混合物を水で処理し、酢酸エチルで抽出した。有機層を乾燥させ（硫酸ナトリウム）、蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、１〜２％のメタノール：ジクロロメタンで溶離される）による精製により、Ｌ−ＩＮＴ−１を無色の粘着性の固体として得た。ＬＣＭＳ（方法８）：保持時間＝３．４３分；ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ５０８．３（Ｍ＋Ｈ）．１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）７．３５−７．２８（ｍ，５Ｈ）、５．５８−５．５２（ｍ，１Ｈ）、５．０８（ｓ，２Ｈ）、４．３８−４．２２（ｍ，１Ｈ）、４．２０−４．０８（ｍ，１Ｈ）、４．１０−４．００（ｍ，３Ｈ）、４．００−３．９０（ｍ，１Ｈ）、３．７０−３．６０（ｍ，１Ｈ）、３．６０−３．５４（ｍ，１Ｈ）、３．５０−３．４９（ｄ，Ｊ＝４、４Ｈ）、３．４５（ｓ，３Ｈ）、３．４２−３．３８（ｍ，１Ｈ）、３．３３（ｓ，１Ｈ）、３．３２−３．２９（ｍ，１Ｈ）、３．２８−３．２０（ｍ，１Ｈ）、３．１８−３．１０（ｍ，１Ｈ）、３．１０−３．００（ｍ，１Ｈ）、２．８６−２．７２（ｍ，２Ｈ）、２．５３−２．５１（ｔ，Ｊ＝４、２Ｈ），１．４６（ｓ，９Ｈ）．
【０３３６】
表７に示される種は、Ｌ−ＩＮＴ−１の合成に使用される方法と類似の方法を用いて調製した。
【０３３７】
【表１７】
2020517623.tif 000108
【０３３８】
Ｌ−ＩＮＴ−５．２−（１’−メチルシクロプロピルカルボニルオキシメチル）−４−（Ｎ−Ｃｂｚ−β−アラニル）−１−ピペラジン酢酸ｔ−ブチルエステル
【化８８】
2020517623.tif 000109
Ｌ−ＩＮＴ−５ａ．１−（Ｂｏｃ）−２−（１’−メチルシクロプロピルカルボニルオキシメチル）−４−（Ｎ−Ｃｂｚ−β−アラニル）ピペラジン
【化８９】
2020517623.tif 000110
トルエン（２０ｍＬ）中のＬ−ＩＮＴ−１ｃ（１．０ｇ、２．３７ｍｍｏｌ）、１−メチルシクロプロパンカルボン酸（０．４７５ｇ、４．７５ｍｍｏｌ）及び２−クロロ−１−メチル−ピリジニウムヨージド（１．２１ｇ、４．７５ｍｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（５．０ｍＬ）を加え、得られた反応物を１１０℃で２４時間撹拌した。反応混合物を水で処理し、酢酸エチルで抽出した。有機相を塩水で洗浄し、乾燥させ（硫酸ナトリウム）、蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、１〜２％のメタノール：ジクロロメタンで溶離される）による精製により、Ｌ−ＩＮＴ−５ａを得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ５０４．２（Ｍ＋Ｈ）．
【０３３９】
Ｌ−ＩＮＴ−５．２−（１’−メチルシクロプロピルカルボニルオキシメチル）−４−（Ｎ−Ｃｂｚ−β−アラニル）−１−ピペラジン酢酸ｔ−ブチルエステル
【化９０】
2020517623.tif 000111
Ｌ−ＩＮＴ−１ｅ及びＬ−ＩＮＴ−１の合成について記載される一般的な方法にしたがって、Ｌ−ＩＮＴ−５を、Ｌ−ＩＮＴ−５ａから２工程で調製した。Ｌ−ＩＮＴ−５：ＬＣＭＳ（方法８）：保持時間＝３．８４分；ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ５１８．３  １Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）７．３５−７．３０（ｍ，５Ｈ）、５．５（ｓ  １Ｈ）、５．０８（ｓ，２Ｈ）、４．２８−４．１２（ｍ，２Ｈ）、４．０６−３．８８（ｍ，２Ｈ）、３．６７−３．４９（ｍ，３Ｈ）、３．４１−３．２８（ｍ，３Ｈ）、３．２６−３．１７（ｍ，１Ｈ）、３．１２−３．０５（ｍ，１Ｈ）、３．０３−２．９０（ｍ，１Ｈ）、２．７８−２．７４（ｍ，２Ｈ）、２．５３−２．５０（ｔ，Ｊ＝８、２Ｈ）、１．４５（ｓ，９Ｈ）、１．２９（ｓ，３Ｈ）、１．２５−１．２０（ｍ，２Ｈ）、０．７３−０．６８（ｍ，２Ｈ）．
【０３４０】
Ｌ−ＩＮＴ−６及びＬ−ＩＮＴ−７。２−（アセトキシメチル）−４−（Ｎ−Ｃｂｚ−β−アラニル）−１−ピペラジン酢酸ｔ−ブチルエステルのキラル分離
【化９１】
2020517623.tif 000112
Ｌ−ＩＮＴ−２の個々の鏡像異性体を、以下の組成（定組成）：５５％のｎ−ヘキサン、４５％の７０：３０のエタノール：イソプロパノール及び０．１％のジエチルアミンで２０ｍＬ／分の移動相で溶離する、Ｌ−ＩＮＴ−２（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｘアミロース−２カラム、５μｍ、２５０ｍｍ×２１．２ｍｍ）の分取キラルＨＰＬＣ精製によって単離した。生成物含有画分を蒸発させ、クロロホルムに溶解させ、水で洗浄し、乾燥させ（硫酸ナトリウム）、蒸発させて、立体異性体Ｌ−ＩＮＴ−６及びＬ−ＩＮＴ−７を得た。
Ｌ−ＩＮＴ−６：ＬＣＭＳ（方法８）：保持時間＝１．９３分；ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ４７８．３（Ｍ＋Ｈ）。キラルＨＰＬＣ（以下の方法）：保持時間＝８．０１８分；９８．３％の純度）。
Ｌ−ＩＮＴ−７：ＬＣＭＳ（方法８）：保持時間＝１．９２分；ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ４７８．３（Ｍ＋Ｈ）。キラルＨＰＬＣ（以下の方法）：保持時間＝９．６９４分；９４．４％の純度）。
【０３４１】
キラルＨＰＬＣ方法：カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｘアミロース−２、５μｍ、２５０ｍｍ×４．６０ｍｍ；カラム温度２５℃；流量１．０ｍＬ／分；移動相：Ａ＝ヘキサン、Ｂ＝エタノール：メタノール１：１；溶離：定組成３０：７０のＡ：Ｂ。
【０３４２】
トレースレスリンカー；Ｌ１〜Ｌ７
【化９２】
2020517623.tif 000113
Ｌ−２ａ．２−（アセトキシメチル）−４−（β−アラニル）−１−ピペラジン酢酸ｔ−ブチルエステル
【化９３】
2020517623.tif 000114
Ｌ−ＩＮＴ−２（１８５．５ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）を、メタノール（１２ｍＬ）に溶解させ、フロー水素化分解（パラジウム炭素カートリッジ、５気圧のＨ２、３５℃、１ｍＬ／分の流量で１時間）に供した。溶液を蒸発させて、表題化合物Ｌ−２ａを得た。ＬＣＭＳ（方法１）：保持時間＝０．７２分；ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ３４４．１（Ｍ＋Ｈ）．
【０３４３】
Ｌ−２ｂ：２−（アセトキシメチル）−４−（β−アラニル）−１−ピペラジン酢酸、ビストリフルオロ酢酸塩
【化９４】
2020517623.tif 000115
Ｌ−２ａ（１２３．２ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（５ｍＬ）及びトリフルオロ酢酸（１ｍＬ）に溶解させた。反応物を室温で一晩撹拌し、次に、蒸発させて、粗表題材料（Ｌ−２ｂ）を得た。ＬＣＭＳ（方法１）：保持時間＝０．１０分；ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ２８８．０（Ｍ＋Ｈ）．
【０３４４】
Ｌ２．２−（アセトキシメチル）−４−（Ｎ−（（（１Ｒ，８Ｓ，９ｓ）−ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル）メトキシカルボニル）−β−アラニル）−１−ピペラジン酢酸
【化９５】
2020517623.tif 000116
粗Ｌ−２ｂ（１６３ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン及びアセトニトリルに取り込んで、わずかに濁った混合物を得た。トリエチルアミン（０．４０ｍＬ、２．８４ｍｍｏｌ）及び（（１Ｒ，８Ｓ，９ｓ）−ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル）メチル（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）カーボネート（１８２ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）の添加により溶液を得て、それを０．５時間後に蒸発させた。粗材料を、６ｍＬの３：１のアセトニトリル：水に溶解させ、ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ  ＢＥＨ  ５μｍ  １９×１５０ｍｍ；方法：３０ｍＬ／分の水中１５〜３０％のアセトニトリルの１０分の勾配（１０ｍＭの水酸化アンモニウム））によって精製した。画分を蒸発させ、急速冷凍し、凍結乾燥させて、Ｌ２を得た。ＬＣＭＳ（方法１）：保持時間＝０．９７分；ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ４６４．１（Ｍ＋Ｈ）．１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ、ｐｐｍ）（試料は、微量の残留トリエチルアミンを含有する）：４．１７（ｍ，４Ｈ）；４．００（ｍ，１Ｈ）、３．７５（ｍ，１Ｈ）、３．５−３．３２（ｍ，５Ｈ）、３．０６（ｍ，１Ｈ）、２．９１（ｍ，１Ｈ）、２．７９（ｍ，１Ｈ）、２．６０（ｔ，２Ｈ）、２．１９（ｍ，６Ｈ）、２．０５（ｍ，３Ｈ）、１．５９（ｍ，２Ｈ）、１．３８（ｍ，１Ｈ）、０．９６（ｍ，２Ｈ）．
【０３４５】
表８に示される種は、Ｌ２の合成に使用される方法と類似の方法を用いて調製した。
【０３４６】
【表１８】
2020517623.tif 000117
【０３４７】
【表１９】
2020517623.tif 000118
【０３４８】
トレースレスリンカーＬ８．２−（２’−メトキシアセトキシメチル）−４−（６’−アジドヘキサノイル）−１−ピペラジン酢酸
【化９６】
2020517623.tif 000119
Ｌ−８ａ．１−（Ｂｏｃ）−２−（ヒドロキシメチル）−４−（６’−アジドヘキサノイル）ピペラジン
【化９７】
2020517623.tif 000120
６−アジドヘキサン酸（７４３ｍｇ、４．７３ｍｍｏｌ）及びＮ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩（１．０ｇ、５．２２ｍｍｏｌ）を、丸底フラスコに量り入れ、ジクロロメタン（２０ｍＬ）に溶解させた。５分後、固体ｔｅｒｔ−ブチル２−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボキシレート（０．９８ｇ、４．５３ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（１．０ｍＬ、５．７３ｍｍｏｌ）を加え、溶液を室温で一晩貯蔵した。翌日、反応混合物を、１００ｍＬのジクロロメタンで希釈し、１ＭのＨＣｌ（２×５０ｍＬ）、１ＭのＮａＯＨ（１×５０ｍＬ）、及び塩水（１×５０ｍＬ）で洗浄した。有機相を濃縮して、Ｌ−８ａを得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ３５６．３（Ｍ＋Ｈ）．
【０３４９】
Ｌ−８ｂ．１−（Ｂｏｃ）−２−（２’−メトキシアセトキシメチル）−４−（６’’−アジドヘキサノイル）ピペラジン
【化９８】
2020517623.tif 000121
Ｌ−８ａ（９５９ｍｇ、２．７０ｍｍｏｌ）を、丸底フラスコ中でジクロロメタン（１２ｍＬ）に溶解させた。撹拌子及びジイソプロピルエチルアミン（１ｍＬ、５．７３ｍｍｏｌ）、続いて２−メトキシアセチルクロリド（０．３２ｍＬ、３．５１ｍｍｏｌ）を加え、フラスコに蓋をした。反応物を室温で撹拌した。６時間後、１００μＬのさらなる２−メトキシアセチルクロリドを加えた。３０分後、反応混合物を９０ｍＬの酢酸エチルで希釈し、１ＭのＨＣｌ（２×２５ｍＬ）及び塩水（１×２０ｍＬ）で洗浄した。有機相を、ロータリーエバポレータ（ｒｏｔｏｅｖａｐｏｒａｔｏｒ）を用いて濃縮した。生成物を、酢酸エチル：ヘプタン勾配を用いたシリカにおけるフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製した。生成物含有画分を組み合わせて、濃縮して、Ｌ−８ｂを得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ＝４２８．３（Ｍ＋Ｈ）．
【０３５０】
Ｌ−８ｃ．１−（６’−アジドヘキサノイル）−３−（２’’−メトキシアセトキシメチル）ピペラジン、トリフルオロ酢酸塩
【化９９】
2020517623.tif 000122
Ｌ−８ｂ（８４６ｍｇ、１．９７９ｍｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸（１０ｍＬ、１３０ｍｍｏｌ）及びジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解させた。溶液を室温で撹拌した。１時間後、ロータリーエバポレータを用いて溶媒を除去し、生成物を減圧下で乾燥させて、Ｌ−８ｃを得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ３２８．２（Ｍ＋Ｈ）．
【０３５１】
Ｌ−８ｄ．２−（２’−メトキシアセトキシメチル）−４−（６’’−アジドヘキサノイル）−１−ピペラジン酢酸ｔ−ブチルエステル
【化１００】
2020517623.tif 000123
Ｌ−８ｃ（４３９ｍｇ、０．９９４ｍｍｏｌ）を、撹拌子を備えたガラスバイアル中でジメチルホルムアミド（５ｍＬ）に溶解させた。ブロモ酢酸ｔ−ブチル（０．２２０ｍＬ、１．４９１ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（０．８６８ｍＬ、４．９７ｍｍｏｌ）を加え、バイアルに蓋をした。反応物を５０℃で一晩撹拌した。翌日、反応混合物を熱源から取り外し、翌日の精製まで−２０℃で貯蔵した。反応混合物を、ヘプタン：酢酸エチル勾配を用いたシリカにおけるフラッシュカラムクロマトグラフィーによる抽出後処理を用いずに精製した。生成物含有画分を組み合わせて、濃縮して、Ｌ−８ｄを得た。ＭＳ（ＥＳＩ−）ｍ／ｚ＝４８６．５（Ｍ＋ホルメート）．
【０３５２】
Ｌ８．２−（２’−メトキシアセトキシメチル）−４−（６’’−アジドヘキサノイル）−１−ピペラジン酢酸
【化１０１】
2020517623.tif 000124
Ｌ−８ｄ（１５０ｍｇ、０．３１７ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（５ｍＬ）及びトリフルオロ酢酸（５ｍＬ）に溶解させ、反応物を室温で一晩撹拌した。翌日、溶液を、ロータリーエバポレータを用いて濃縮し、残渣を、４ｍＬのアセトニトリルに再溶解させた。溶液をろ過し、質量に基づく画分収集（以下の方法）を用いた分取逆相ＨＰＬＣによって精製した。生成物含有画分をプールし、冷凍し、凍結乾燥させて、Ｌ８を得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ＝３８６．５（Ｍ＋Ｈ）．分取ＨＰＬＣ条件：Ｗａｔｅｒｓ  Ｓｕｎｆｉｒｅ  Ｃ１８；粒径：５μｍ；カラムサイズ：３０×５０ｍｍ；溶離剤／勾配：１０％のＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ／０．７分、１０〜３０％のＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ／３．５分、３０〜９５％のＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ  ０．５分（０．１％のＴＦＡを含有するＣＨ３ＣＮ及びＨ２Ｏ）；流量：７５ｍＬ／分；カラム温度：室温；収集ｍ／ｚ：＋３８５。
【０３５３】
トレースレスリンカー：Ｌ９〜Ｌ１１
【化１０２】
2020517623.tif 000125
Ｌ−９ａ．２−（プロパノイルオキシメチル）−４−（Ｎ−Ｃｂｚ−β−アラニル）−１−ピペラジン酢酸、トリフルオロ酢酸塩
【化１０３】
2020517623.tif 000126
Ｌ−ＩＮＴ−３（２５０ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）を、０℃でジクロロメタン（５ｍＬ）に溶解させ、次に、トリフルオロ酢酸（２．５ｍＬ）で処理し、アルゴン下で、室温で６時間撹拌した。反応物を蒸発させ、ペンタンで洗浄し、乾燥させて、粗Ｌ−９ａをトリフルオロ酢酸塩として得た。ＬＣＭＳ（方法５）：保持時間＝０．２６２分；ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ４３６．２（Ｍ＋Ｈ）．
【０３５４】
Ｌ−９ｂ．２−（プロパノイルオキシメチル）−４−（β−アラニル）−１−ピペラジン酢酸
【化１０４】
2020517623.tif 000127
Ｌ−９ａ（２５０ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）を、エタノール（５ｍＬ）に溶解させ、それに、１０％のパラジウム炭素（２５ｍｇ）を加えた。溶液を、６時間にわたって水素ガスのバルーン下で撹拌し、次に、エタノールで洗浄しながら、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）に通してろ過した。組み合わされたろ液を蒸発させて、化合物Ｌ−９ｂを得た。ＬＣＭＳ（方法５）：保持時間＝０．７７４分；ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ３０２．２（Ｍ＋Ｈ）．
【０３５５】
Ｌ９．
【化１０５】
2020517623.tif 000128
０℃で酢酸エチル（５ｍＬ）中のＬ−９ｂ（１００ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）及び５−アジドペンタン酸（５７ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）を、ジイソプロピルエチルアミン（１０７ｍｇ、０．８３ｍｍｏｌ）及びプロピルホスホン酸無水物（酢酸エチル中５０％の溶液、１５８ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）で処理した。反応物を、アルゴン下で、室温で１６時間撹拌し、次に、水でクエンチし、蒸発させた。最初のフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、１０％のメタノール：ジクロロメタン）の後、分取ＨＰＬＣ（カラム：ｚｏｒｂａｘ  Ｃ−１８  ４．６×１５０ｍｍ；移動相Ａ＝：メタノール（１：１）水中０．０１％のＴＦＡ、移動相Ｂ＝アセトニトリル：メタノール（１：１）；時間＝０分：３０％のＢ；１分：７０％のＢ；６分：１００％のＢ；１ｍＬ／分）を行って、Ｌ９を得た。ＬＣＭＳ（方法５）：保持時間＝０．１８分；ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ４２７．１（Ｍ＋Ｈ）．１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ、ｐｐｍ）（全ての割り当ては一時的である）４．２３−４．１７（ｍ，２Ｈ）、４．１６−３．９８（ｍ，１Ｈ）、３．７８−３．６２（ｍ，１Ｈ）、３．５４（ｓ，２Ｈ）、３．４６−３．４３（ｔ，Ｊ＝４、３Ｈ）、３．２６−３．２０（ｍ，１Ｈ）、３．１８−３．０５（ｍ，１Ｈ）、３．０３−２．７６（ｍ，２Ｈ）、２．６４−２．６１（ｔ，Ｊ＝８，２Ｈ）、２．４３−２．３６（ｍ，２Ｈ）、２．２４−２．２１（ｔ，Ｊ＝８、２Ｈ）、１．７５−１．５８（ｍ，４Ｈ）、１．１５−１．１２（ｔ，Ｊ＝８、３Ｈ）．
【０３５６】
表９に示される種は、Ｌ−９：
【化１０６】
2020517623.tif 000129
の合成に使用される方法と類似の方法を用いて調製した。
【０３５７】
【表２０】
2020517623.tif 000130
【０３５８】
トレースレスリンカー：Ｌ１２及びＬ１３
【化１０７】
2020517623.tif 000131
Ｌ−１２ａ．１−（Ｂｏｃ）−２−（ヒドロキシメチル）−４−（Ｎ−マレオイル−β−アラニル）ピペラジン
【化１０８】
2020517623.tif 000132
ｔｅｒｔ−ブチル２−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボキシレート（２００ｍｇ、０．９３ｍｍｏｌ）を、０℃でジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解させた。ジイソプロピルエチルアミン（３５９ｍｇ、２．７８ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（４２２ｍｇ、１．１１ｍｍｏｌ）を加え、溶液を０℃で１５分間撹拌した。３−マレイミドプロピオン酸（１８７ｍｇ、１．１１ｍｍｏｌ）を加え、次に、反応物を、アルゴン下で、室温で１２時間撹拌した。反応物を水で希釈し、ジクロロメタンで抽出した。有機層を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（中性アルミナ、２％のメタノール：酢酸エチルによる精製により、表題材料Ｌ−１２ａを得た。ＬＣＭＳ（方法６）：保持時間＝２．８７分。
【０３５９】
Ｌ−１２ｂ．１−（Ｂｏｃ）−２−（アセトキシメチル）−４−（Ｎ−マレオイル−β−アラニル）ピペラジン
【化１０９】
2020517623.tif 000133
アルゴン下で、０℃でジクロロメタン（４ｍＬ）中のＬ−１２ａ（３００ｍｇ、０．８２ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（３３０ｍｇ、３．２７ｍｍｏｌ）に、塩化アセチル（１２５ｍｇ、１．６４ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。反応物を室温で３時間撹拌し、次に、水で処理し、ジクロロメタンで抽出した。有機層を乾燥させ（硫酸ナトリウム）、濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（中性アルミナ、２％のメタノール：酢酸エチル）によって精製して、表題材料Ｌ−１２ｂを得た。ＬＣＭＳ（方法６）：保持時間＝３．２分。
【０３６０】
Ｌ−１２ｃ．１−（Ｎ−マレオイル−β−アラニル）−３−（アセトキシメチル）ピペラジン、トリフルオロ酢酸塩
【化１１０】
2020517623.tif 000134
Ｌ−１２ｂ（２００ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）を、０℃でジクロロメタン（５ｍＬ）に溶解させ、次に、トリフルオロ酢酸（０．４ｍＬ）で滴下して処理し、アルゴン下で、室温で３時間撹拌した。反応物を蒸発させ、ペンタンで洗浄し、乾燥させて、粗表題材料Ｌ−１２ｃを得た。ＬＣＭＳ（方法６）：保持時間＝１．７０９分；ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ３１０（Ｍ＋Ｈ）．
【０３６１】
Ｌ１２．２−（アセトキシメチル）−４−（Ｎ−マレオイル−β−アラニル）−１−ピペラジン酢酸ｔ−ブチルエステル
【化１１１】
2020517623.tif 000135
０℃でアセトニトリル（５ｍＬ）中のＬ−１２ｃ（１４０ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（１５６ｍｇ、１．１３ｍｍｏｌ）に、ブロモ酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（１００ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。反応物を１０〜１５℃に温め、次に、アルゴン下で、室温で１２時間撹拌させた。反応物を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層を乾燥させ（硫酸ナトリウム）、濃縮し、分取ＨＰＬＣ（カラム：ｚｏｒｂａｘ  ｅｃｌｉｐｓｅ  ＸＤＢ  Ｃ１８、２１．２×１５０ｍｍ、５μｍ；移動相Ａ＝水、移動相Ｂ＝アセトニトリル；時間＝０分：３０％のＢ；２分：４０％のＢ；１０分：６０％のＢ）によって精製して、Ｌ１２を得た。ＬＣＭＳ（方法６）：保持時間＝３．０８分；ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ４２４（Ｍ＋Ｈ）．１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、ｐｐｍ）６．６９（ｓ，２Ｈ）、４．２５−４．１４（ｍ，２Ｈ）、４．０９−３．９６（ｍ，２Ｈ）、３．８８−３．８３（ｔ，Ｊ＝９、２Ｈ）、３．６５−３．５４（ｍ，１Ｈ）、３．４６−３．３３（ｍ，２Ｈ）、３．３１−３．１７（ｍ，２Ｈ）、３．０５−２．９８（ｍ  ，２Ｈ）、２．８４−２．７５（ｍ，２Ｈ）、２．６８−２．６３（ｔ，Ｊ＝９，２Ｈ）、２．０９−２．０７（ｄ，Ｊ＝６、３Ｈ）、１．４５（ｓ，９Ｈ）．
【０３６２】
Ｌ１３は、Ｌ１２の合成に使用される方法と類似の方法を用いて調製した：
Ｌ１３．２−（２’−メトキシアセトキシメチル）−４−（Ｎ−マレオイル−β−アラニル）−１−ピペラジン酢酸ｔ−ブチルエステル（１−（２−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−２−オキソエチル）−４−（３−（マレイミジル）プロパノイル）ピペラジン−２−イル）メチル２−メトキシアセテート
【化１１２】
2020517623.tif 000136
Ｌ１３．ＬＣＭＳ（方法６）：保持時間＝３．０４分；ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ４５４．５（Ｍ＋Ｈ）．１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、ｐｐｍ）６．７０（ｓ，２Ｈ）、４．４０−４．２４（ｍ，１Ｈ）、４．２０−４．１０（ｍ，１Ｈ）、４．０７−４．６０（ｄ，Ｊ＝４、２Ｈ）、４．０２−３．９４（ｍ，１Ｈ）、３．８７−３．８３（ｔ，Ｊ＝８、２Ｈ）、３．７０−３．６０（ｍ，１Ｈ）、３．６８−３．６０（ｍ，１Ｈ），３．５８−３．５１（ｍ，１Ｈ）、３．４５（ｓ，３Ｈ）、３．４１−３．３９（ｄ，Ｊ＝８、１Ｈ）、３．３６−３．３２（ｓ，１Ｈ）、３．３２−３．２８（ｓ，１Ｈ）、３．１８−３．１０（ｍ，１Ｈ）、３．０４−２．９７（ｍ，１Ｈ）、２．８３−２．８１（ｔ，Ｊ＝４、１Ｈ）、２．７９−２．７５（ｍ，１Ｈ）、２．６７−２．６４（ｔ，Ｊ＝８、２Ｈ）、１．４６（ｓ，９Ｈ）．
【０３６３】
トレースレスリンカー；Ｌ１４〜Ｌ１６
【化１１３】
2020517623.tif 000137
Ｌ１４ａ．１−（Ｂｏｃ）−２−（ヒドロキシメチル）−４−（３’−（２’’−（２’’’−（２’’’’−（（Ｎ−Ｃｂｚ）−アミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）プロパノイル）ピペラジン
【化１１４】
2020517623.tif 000138
０℃でジクロロメタン（２０ｍＬ）に溶解されたｔｅｒｔ−ブチル２−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボキシレート（１．０ｇ、４．６３ｍｍｏｌ）に、ジイソプロピルエチルアミン（１．７９ｇ、１３．９ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（２．１０ｇ、５．５５ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を０℃で１５分間撹拌した。３−（２’−（２’’−（２’’’−（（Ｎ−Ｃｂｚ）−アミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）プロパン酸（１．６４ｇ、４．６３ｍｍｏｌ）を加え、反応物を、アルゴン下で、室温で１６時間撹拌した。反応物を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、１〜４％のメタノール：ジクロロメタン）による精製により、表題材料Ｌ−１４ａを得た。ＬＣＭＳ（方法５）：保持時間＝１．２７分；ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ５５４．３（Ｍ＋Ｈ）．
【０３６４】
Ｌ−１４ｂ．１−（Ｂｏｃ）−２−（アセトキシメチル）−４−（３’−（２’’−（２’’’−（２’’’’−（（Ｎ−Ｃｂｚ）−アミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）プロパノイル）ピペラジン
【化１１５】
2020517623.tif 000139
０℃でジクロロメタン（２０ｍＬ）に溶解されたＬ−１４ａ（５００ｍｇ、０．９０ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（２２８ｍｇ、２．２６ｍｍｏｌ）に、塩化アセチル（８３ｍｇ、１．０８ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。反応物を、１６時間にわたってアルゴン下で、室温で撹拌した。反応物を水で希釈し、ジクロロメタンで抽出した。組み合わされた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濃縮し、次に、フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、１〜４％のメタノール：ジクロロメタン）によって精製して、表題材料Ｌ−１４ｂを得た。ＬＣＭＳ（方法７）：保持時間＝１．５４分；ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ５９５．８（Ｍ＋Ｈ）．
【０３６５】
Ｌ−１４ｃ．１−（３’−（２’’−（２’’’−（２’’’’−（（Ｎ−Ｃｂｚ）−アミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）プロパノイル）−３−（アセトキシメチル）ピペラジン、トリフルオロ酢酸塩
【化１１６】
2020517623.tif 000140
Ｌ−１４ｂ（５００ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）を、０℃でジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解させ、次に、トリフルオロ酢酸（３ｍＬ）で滴下して処理し、アルゴン下で、室温で３時間撹拌した。反応物を蒸発させ、ペンタンで洗浄し、乾燥させて、粗表題材料Ｌ−１４ｃを得て、それを、さらなる精製又は分析なしで次の反応に持ち越した。
【０３６６】
Ｌ１４．２−（アセトキシメチル）−４−（３’−（２’’−（２’’’−（２’’’’−（（Ｎ−Ｃｂｚ）−アミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）プロパノイル）−１−ピペラジン酢酸ｔ−ブチルエステル
【化１１７】
2020517623.tif 000141
０℃でアセトニトリル（１０ｍＬ）中のＬ−１４ｃ（５００ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（４１８ｍｇ、３．０３ｍｍｏｌ）に、ブロモ酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（２９５ｍｇ、１．５１ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。反応物を、アルゴン下で、室温で２０時間撹拌した。反応物を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層を乾燥させ（硫酸ナトリウム）、濃縮し、最初のフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、１〜５％のメタノール：ジクロロメタン）、続いて分取ＨＰＬＣ（カラム：ｚｏｒｂａｘ  ｅｃｌｉｐｓｅ  ＸＤＢ  Ｃ１８、４．６×１５０ｍｍ、５μｍ；移動相Ａ＝水中０．０１％のＴＦＡ、移動相Ｂ＝アセトニトリル：メタノール（１：１）、１ｍＬ／分；時間＝０分：３０％のＢ；１分：７０％のＢ；６分：１００％のＢ）によって精製して、Ｌ１４を得た。ＬＣＭＳ（方法５）：保持時間＝３．４３分；ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ６１０．３５（Ｍ＋Ｈ）．１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、ｐｐｍ）７．３６−７．３１（ｍ，５Ｈ）、５．４９（ｓ，１Ｈ）、５．０９（ｓ，２Ｈ）、４．２６−４．１６（ｍ，１Ｈ）、４．０７−３．９８（ｍ，１Ｈ）、３．７８−３．７４（ｔ，Ｊ＝６、２Ｈ）、３．６０−３．５３（ｍ，１１Ｈ）、３．３９−３．３２（ｍ，４Ｈ）、２．８４−２．７２（ｍ，２Ｈ）、２．６１−２．５７（ｔ，Ｊ＝３、２Ｈ）、２．０８−２．０６（ｄ，Ｊ＝６、２Ｈ）、１．４５（ｓ，９Ｈ）．
【０３６７】
表１０に示される種は、Ｌ１４：
【化１１８】
2020517623.tif 000142
の合成に使用される方法と類似の方法を用いて調製した。
【０３６８】
【表２１】
2020517623.tif 000143
【０３６９】
【表２２】
2020517623.tif 000144
【０３７０】
【表２３】
2020517623.tif 000145
【０３７１】
【表２４】
2020517623.tif 000146
【０３７２】
【表２５】
2020517623.tif 000147
【０３７３】
実施例２
生物学的活性部分とのトレースレスリンカーの付加物
この実施例は、同様に担体にコンジュゲートされることが可能な、いくつかのトレースレスリンカー−薬物付加物の合成を説明している。
【０３７４】
【表２６】
2020517623.tif 000148
【０３７５】
【表２７】
2020517623.tif 000149
【０３７６】
【表２８】
2020517623.tif 000150
【０３７７】
付加物の合成
トレースレスリンカーによる生物学的活性部分のアシル化：
Ｌ４−ＮＨＳ．２−（イソブタノイルオキシメチル）−４−（Ｎ−（（（１Ｒ’，８’Ｓ，９’ｓ）−ビシクロ［６．１．０］ノナ−４’−イン−９’−イル）メトキシカルボニル）−β−アラニル）−１−ピペラジン酢酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル
【化１１９】
2020517623.tif 000151
ジクロロメタン（５ｍＬ）中のＬ４（２２ｍｇ、０．０４５ｍｍｏｌ）の懸濁液を、トリエチルアミン（０．００６２ｍＬ、０．０４５ｍｍｏｌ）、ジメチルアミノピリジン（０．５５ｍｇ、０．００４５ｍｍｏｌ）及び炭酸Ｎ，Ｎ’−ジスクシンイミジル（１０．９ｍｇ、０．０４３ｍｍｏｌ）で処理し、室温で２時間撹拌し、次に、蒸発させ、さらに精製せずに直ぐにそのまま使用した。ＬＣＭＳ（方法１）：保持時間＝１．３３分；ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ５８９．６（Ｍ＋Ｈ）．
【０３７８】
表１３中の種は、Ｌ４−ＮＨＳの合成に使用される方法と類似の方法を用いて調製した。
【０３７９】
【表２９】
2020517623.tif 000152
【０３８０】
Ｌ４−ブロルシズマブ（Ｌ４Ｄ１ｂ）
【化１２０】
2020517623.tif 000153
ｐＨ６．２５で、２０ｍＭのクエン酸三ナトリウム二水和物、１２５ｍＭの塩化ナトリウム、０．０１ｍｇ／ｍＬのＴｗｅｅｎ  ２０からなる緩衝液中のブロルシズマブ（１０ｍＬ、０．０２３ｍｍｏｌ）の６０ｍｇ／ｍＬの溶液を、１×ＰＢＳ（１０ｍＬ、ｐＨ７．４）で希釈して、３０ｍｇ／ｍＬの溶液を得て、次に、それを、ＤＭＳＯ（０．６５ｍＬ、０．０２３ｍｍｏｌ）中のＬ４−ＮＨＳの３８ｍＭの溶液でゆっくりと処理し、ボルテックスし、１時間にわたって室温に保持した。１×ＰＢＳで（４回）洗浄しながら、超遠心分離法（Ｖｉｖａｓｐｉｎ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｏｒｓ、１０ｋＤａのＭＷＣＯ）による精製により、残留小分子不純物を除去し、Ｌ４Ｄ１及び非修飾ブロルシズマブ（Ｄ１）の混合物を得た。ＭＳ（方法９）デコンボリュートされたｍ／ｚ  ２６３１２（ブロルシズマブ、Ｍ＋Ｈ）；デコンボリュートされたｍ／ｚ  ２６７８６（Ｌ４Ｄ１、Ｍ＋Ｈ、予測ＭＷ＝ＭＷ（ブロルシズマブ）＋４７３）。
【０３８１】
重要な分析パラメータは、（非修飾ブロルシズマブ、ｎ＝０）：（モノアシル化ブロルシズマブ、ｎ＝１）：（ポリアシル化ブロルシズマブ、ｎ＞１）の比率の決定である。質量スペクトル中の様々な種についての相対ピーク高さの比較により、生成物の比率の推定を行うことが可能になるが、様々な生成物がＭＳ分析において同様のモル応答係数を有さないことがあるため、この比率は正確でないことがある。この実施例において：ＭＳ分析は、［（ｎ＝０）：（ｎ＝１）：（ｎ＝２）］約５：１：０の生成物の比率を示した（方法９）。
【０３８２】
反応生成物の比率を推定するためのさらなる方法は、誘導体化反応生成物のＳＥＣ（サイズ排除クロマトグラフィー）又はＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動）分析を用いて；誘導体化が、反応生成物の分離を達成するために必要とされる。
【０３８３】
Ｌ４Ｄ１ｂ誘導体化反応
【化１２１】
2020517623.tif 000154
【化１２２】
2020517623.tif 000155
３０ｍｇ／ｍＬのＬ４Ｄ１ｂ反応混合物（０．００５ｍＬ、０．００５７μｍｏｌ）の反応溶液からのアリコートを、Ｍｎ約５ｋＤａのメトキシ−ＰＥＧ−アジド（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、６８９４７５、１０μＬの、１×ＰＢＳ中１００ｍｇ／ｍＬの溶液、０．２０μｍｏｌ）で処理し、ボルテックスし、次に、３７℃で４５分間振とうした。
【０３８４】
Ｌ４Ｄ１ｂ−誘導体の分析
ＳＥＣ：（カラム：Ａｇｉｌｅｎｔ  ＡｄｖａｎｃｅＢｉｏＳＥＣ  ３００Ａ  ２．７μｍ  ４．６×１５０ｍｍ；移動相：５％のイソプロパノールを含む水中１５０ｍＭのリン酸カリウム（定組成）；高速方法：０．２ｍＬ／分で１３分間；低速方法：０．１ｍＬ／分で２５分間；検出：２１０ｎｍ）。（非修飾ブロルシズマブ、ｎ＝０、保持時間＝１２．７４分（低速方法））：（モノアシル化ブロルシズマブ、ｎ＝１、保持時間＝１１．２６分（低速方法））：（ビスアシル化ブロルシズマブ、ｎ＝２、保持時間＝１０．３６分（低速方法））＝［（ｎ＝０）：（ｎ＝１）：（ｎ＝２）］＝８１：１８：１の比率のＬ４Ｄ１ｂ−誘導体決定。
【０３８５】
ＳＤＳ−Ｐａｇｅ：（ＭＯＰＳ泳動用緩衝液；ＮｕＰａｇｅ（登録商標）Ｎｏｖｅｘ（登録商標）４−１２％のビス−トリスゲル；Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ  Ｂｌｕｅ  ｓｔａｉｎ；Ｂｉｏ−Ｒａｄ  ＣｈｅｍｉＤｏｃ  ｉｍａｇｅｒ；Ｉｍａｇｅ  Ｌａｂ  ５．２．１分析ソフトウェア）：（非修飾ブロルシズマブ、ｎ＝０）：（モノアシル化ブロルシズマブ、ｎ＝１）：（ポリアシル化ブロルシズマブ、ｎ＝２）＝［（ｎ＝０）：（ｎ＝１）：（ｎ＝２）］約６７：３３：微量の比率のＬ４Ｄ１ｂ−誘導体決定。
【０３８６】
表１４及び表１５に示される付加物は、Ｌ４Ｄ１ｂの合成に使用される方法と類似の方法を用いて調製した。付加物を調製するのに使用される反応条件が、表１４に記載され；付加物の特徴が、表１５に記載される。
【０３８７】
【表３０】
2020517623.tif 000156
【０３８８】
【表３１】
2020517623.tif 000157
【０３８９】
Ｌ８Ｄ４
【化１２３】
2020517623.tif 000158
Ｌ８（４３．４ｍｇ、０．１１３ｍｍｏｌ）を、ジメチルホルムアミド（２．５５ｍＬ）、続いてＥＤＣ・ＨＣｌ（２１．２ｍｇ、０．１１１ｍｍｏｌ）及びＮ−ヒドロキシフタルイミド（１８．６ｍｇ、０．１１４ｍｍｏｌ）に溶解させた。溶液を室温で一晩撹拌した（約１６時間）。この溶液に、１．５ｍＬのジメチルホルムアミド及び１．５ｍＬの１００ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ６．５）に溶解されたＤ４（３５ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）を加えた。２時間後、反応物を４ｍＬのアセトニトリルで希釈し、ろ過し、質量に基づく画分収集（以下の方法）を用いた分取逆相ＨＰＬＣによって精製した。生成物含有画分をプールし、冷凍し、凍結乾燥させて、Ｌ８Ｄ４を得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ＝９５２．５（Ｍ＋２Ｈ）２＋．
【０３９０】
分取ＨＰＬＣ条件：Ｗａｔｅｒｓ  ＸＳｅｌｅｃｔ  ＣＳＨ  ＯＢＤ；粒径：５μｍ；カラムサイズ：１９×１５０ｍｍ；溶離剤／勾配：２４％のＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ／１．６５分、２４〜３４％のＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ／８．３５分（０．１％のＴＦＡを含有するＣＨ３ＣＮ及びＨ２Ｏ）；流量：３０ｍＬ／分；カラム温度：室温；収集ｍ／ｚ：＋９５１．７。
【０３９１】
実施例３
ヒアルロン酸の官能化
この実施例は、官能化ヒアルロン酸の合成を説明し、官能化ヒアルロン酸は、それ自体が担体であってもよく、又は架橋部分と反応されて、ヒドロゲルを形成してもよい。
【０３９２】
ヒアルロン酸中間体［ＨＡ−Ｎ３］の合成：
【化１２４】
2020517623.tif 000159
ヒアルロン酸ナトリウム塩は、４０１．３Ｄａの繰返し単位分子量を有する、グルクロン酸及びＮ−アセチルガラクトサミンの繰返し二量体単位からなる直鎖状ポリマーである。この実施例において、報告されるヒアルロン酸のモルは、繰返し単位のモルを指し、ヒアルロン酸との反応に使用される試薬の当量は、ヒアルロン酸繰返し単位のモルに対して報告される。ポリマーの平均分子量は、ポリマー鎖当たりの繰返し単位の平均数を決定する。供給業者、Ｌｉｆｅｃｏｒｅ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ（ＨＡ２００Ｋ，Ｃｈａｓｋａ，ＭＮ）によって、２００ｋＤａの公称平均分子量を有するとラベル付けされたヒアルロン酸ナトリウム塩は、粘度測定によって決定した際に、バッチ間で１５１〜３００ｋＤａの範囲で変動し得る。この実施例において、２００ｋＤａの仮定公称平均分子量を有するヒアルロン酸ナトリウム塩のこのような分子は、約５００モノマー単位の平均長さを有するであろう。
【０３９３】
［ＨＡ−Ｎ３］−２３％の合成
ヒアルロン酸、ナトリウム塩（公称平均分子量２００ｋＤ；２５０．１ｍｇ、０．６２３ｍｍｏｌ；Ｌｉｆｅｃｏｒｅ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ，ＬＬＣ；製品番号ＨＡ２００Ｋ）の溶液を、２５ｍＬのＭＥＳ緩衝液（５０ｍＭ、ｐＨ５．５）に完全に溶解させた。この溶液に、４−（４’，６’−ジメトキシ−１’，３’，５’−トリアジン−２’−イル）−４−メチルモルホリン−４−イウムクロリド（ＤＭＴＭＭ、２９５ｍｇ、１．０７ｍｍｏｌ、１．７１当量）を加えた後、５分後に、１１−アジド−３，６，９−トリオキサウンデカン−１−アミン（Ｎ３−ＰＥＧ３−ＮＨ２、１９６ｍｇ、０．９０ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を一晩撹拌し、次に、２５ｍＬの０．２５ＭのＮａＣｌ溶液で希釈し、タンジェンシャルフローろ過によって精製した。
【０３９４】
タンジェンシャルフローろ過を、４００ｍＬの０．２５ＭのＮａＣｌ溶液、次に４００ｍＬの水で溶離しながら、Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ製の３０ｋＤａのＭＷＣＯ  Ｖｉｖａｆｌｏｗ−５０Ｒ  ｈｙｄｒｏｓａｒｔカートリッジを用いて行った。
【０３９５】
生成物を急速冷凍し、凍結乾燥させて、表題材料［ＨＡ−Ｎ３］−２３％を得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）δ  ４．４５（ｂｓ、２Ｈ）、４．０−３．１（ｍ，１５．５Ｈ）、１．９５（ｓ，３Ｈ）．
【０３９６】
ＤＯＳＹ−ＮＭＲ。一次元拡散秩序化ＮＭＲスペクトル（ＤＯＳＹ）を、５ｍｍのＤＣＨクライオプローブを備えたＢｒｕｋｅｒ  ＡＶＡＮＣＥ  ＩＩＩ  ４００ＭＨｚ（１Ｈについて）機器において１つの傾斜磁場パルスシーケンス（ｓｔｅｇｐ１ｓ１ｄ）で刺激されたエコーを用いて収集した。拡散時間及び拡散グラジエント時間を、それぞれ５０ｍｓ及び４ｍｓに設定した。２つのスペクトルを、２％及び９５％に設定された勾配強度（ｇｐｚ６）で収集した。２つのスペクトルの比較は、溶媒ピークを別として差を示さず、これは、小分子不純物がポリマー中に存在しなかったことを示す。
Ｅｌｅｍ．Ａｎａｌ：Ｃ：４０．０５％：Ｈ：５．６７％；Ｎ：５．７０％。
【０３９７】
［ＨＡ−Ｎ３］の置換度は、カルボキシレート部分が示されるアミドを得るために反応を起こした繰返し単位の％として定義される。元素分析を用いて、置換度を決定した。精製された試料の元素分析によって決定される［％Ｃ／％Ｎ］比が、下式に代入されて、置換度が得られる。ｙ＝［（％Ｃ）／（％Ｎ）］）である場合：
【数４】
2020517623.tif 000160
【０３９８】
この実施例において、［ＨＡ−Ｎ３］の置換度（ＤＳ）は２３％であった。
【０３９９】
２３％のアジドリンカーで官能化されたこの２００ｋＤａヒアルロン酸は、［ＨＡ−Ｎ３］−２３％とラベル付けされる。
【０４００】
実施例の残りの部分では、Ｘ％のアジドリンカーで官能化された２００ｋＤａのヒアルロン酸が、［ＨＡ−Ｎ３］−Ｘ％とラベル付けされる。
【０４０１】
表１６中の種は、［ＨＡ−Ｎ３］−２３％の合成に使用される方法と類似の方法を用いて調製し、特性評価した。本発明者らは、達成される置換度が、使用されるＤＭＴＭＭ試薬の所与のストックに左右され、特異的であり得ることを見出した。一般に、ＤＭＴＭＭの所与のストックでは、置換度は、使用されるＤＭＴＭＭの当量数が増加するにつれて増加し、置換度は、使用されるＤＭＴＭＭの当量数が減少するにつれて減少する。［ＨＡ−Ｎ３］中間体のいくつかは、タンジェンシャルフローろ過の代わりに透析によって精製された（［ＨＡ−Ｎ３］−２３％ｂ、［ＨＡ−Ｎ３］−３７％）。これらの場合、粗反応混合物を、再生されたセルロース透析膜（ＭＷＣＯ  １〜２５ｋＤ）中に充填し、透析溶液を数回交換しながら、０．２５Ｍ〜１ＭのＮａＣｌに対して１〜３日間透析し、続いて、同様に透析溶液を複数回交換しながら、脱イオン水に対して１〜３日間透析した。完了したら、試料を透析管から取り出し、急速冷凍し、凍結乾燥させた。
【０４０２】
【表３２】
2020517623.tif 000161
【０４０３】
実施例４
ＰＥＧポリマー、ＸＬ−１−ＸＬ−１０の調製
この実施例は、他の官能化ポリマーと反応されて、ヒドロゲルを形成し得る架橋剤の合成を説明している。
【０４０４】
ＰＥＧベースの架橋ポリマー
一般的な構造１．
【化１２５】
2020517623.tif 000162
一般的な構造２．
【化１２６】
2020517623.tif 000163
【０４０５】
【表３３】
2020517623.tif 000164
【０４０６】
ＸＬ−８の構造：
【化１２７】
2020517623.tif 000165
出発ＰＥＧのＭＷ：Ｍｎ約１０，０００ｋＤａ。
【０４０７】
ＰＥＧベースの架橋ポリマーの合成
置換度は、ＰＥＧ由来の架橋剤の重要なパラメータであり、所望の導入された官能基で置換されるＰＥＧ末端基のパーセンテージとして定義される。置換度を、ＰＥＧ末端基に特異的なメチレン基の積分を、導入された官能基に特異的なプロトンの積分と比較するために、１Ｈ−ＮＭＲを用いて決定した。ＸＬ−１〜ＸＬ−６については、ＰＥＧ部分に特異的なメチレン基は、エステル又はカルバメートメチレン
【化１２８】
2020517623.tif 000166
であり、これを、ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン部分におけるプロトンの積分と比較した。置換度＝（（１Ｈ−ＮＭＲによる導入された官能基のモル）／（１Ｈ−ＮＭＲによるＰＥＧ末端基のモル））×１００。
【０４０８】
ＸＬ−１．ＰＥＧ（２０００）−ビス−［３−（（（（（１Ｒ，８Ｓ，９ｓ）−ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパノエート］
【化１２９】
2020517623.tif 000167
ＸＬ−１ａ．ＰＥＧ（２０００）−ビス−［３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）プロパノエート］
【化１３０】
2020517623.tif 000168
３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）プロパン酸（１．８９２ｇ、１０．００ｍｍｏｌ）及びＭｎ約２ｋＤａのＰＥＧ（５ｇ、２．５００ｍｍｏｌ）を、５０ｍＬのジクロロメタンに溶解させた。ジメチルアミノピリジン（０．１５３ｇ、１．２５０ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ・ＨＣｌ（１．９２２ｇ、１０．０３ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で一晩撹拌した。粗生成物を、０〜１５％のジクロロメタン：メタノール勾配を用いたシリカにおけるフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製した。生成物含有画分を組み合わせて、乾固するまで減少させて、ＸＬ−１ａを得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ  ４．２３（ｍ，４Ｈ）、３．７０（ｍ，４Ｈ）、３．６３（ｂｒ  ｓ，１６７Ｈ）、２．５２（ｍ，４Ｈ）、１．４３（ｂｒ  ｓ，１８Ｈ）．
【０４０９】
ＸＬ−１ｂ．ＰＥＧ（２０００）−ビス−［３−（アミノ）プロパノエート］、ビス−トリフルオロ酢酸
【化１３１】
2020517623.tif 000169
ＸＬ−１ａ（６００ｍｇ、０．２６１ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（６ｍＬ）に溶解させた。トリフルオロ酢酸を加え（２ｍＬ）、反応混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を減圧下で除去した。粗生成物を、Ｅｔ２Ｏで２回研和し、次に、減圧下で乾燥させて、ＸＬ−１ｂを得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ  ４．３３（ｍ，４Ｈ）、３．７３（ｍ，４Ｈ）、３．６４（ｂｒ  ｓ，１８３Ｈ）、２．８０（ｍ，４Ｈ）．
【０４１０】
ＸＬ−１−１．ＰＥＧ（２０００）−ビス−［３−（（（（（１Ｒ，８Ｓ，９ｓ）−ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパノエート］
【化１３２】
2020517623.tif 000170
ＸＬ−１ｂ（２００ｍｇ、０．０８６ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル（３ｍＬ）に溶解させた。トリエチルアミン（０．５９９ｍＬ、４．３０ｍｍｏｌ）、続いて（（１Ｒ，８Ｓ，９ｓ）−ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル）メチル（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）カーボネート（２００ｍｇ、０．６８８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で４時間撹拌した。反応混合物を、ＥＬＳＤによる画分収集（以下の方法）を用いた分取逆相ＨＰＬＣによって直接精製した。生成物含有画分をプールし、冷凍し、凍結乾燥させて、ＸＬ−１−１を得た。貯蔵のために、ＸＬ−１−１を、アセトニトリル、ＤＭＳＯ、又はメタノール溶液として冷凍庫に保存した。分析ＨＰＬＣ−ＣＡＤ（以下の方法）：保持時間＝１１．９３分。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ  ４．２３（ｍ，４Ｈ）、４．１４（ｍ，４Ｈ）、３．６３（ｂｒ  ｓ，１７５Ｈ）、２．５４（ｍ，４Ｈ）、２．２２（ｍ，１２Ｈ）、１．６０（ｍ，４Ｈ）、１．３７（ｍ，２Ｈ）、０．９４（ｍ，４Ｈ）．
【０４１１】
分取ＨＰＬＣ条件：Ｗａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８；粒径：５μｍ；カラムサイズ：１９×２５０ｍｍ；溶離剤／勾配：５％のＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ／０．５分、５〜９５％のＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ／１２．５分、９５％のＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ／３分；流量：３０ｍＬ／分；カラム温度：室温。
【０４１２】
分析ＨＰＬＣ−ＣＡＤ条件：Ｗａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ  ＢＥＨ３００  Ｃ１８；粒径：３．５μｍ；カラムサイズ：４．６×１００ｍｍ；溶離剤／勾配：２％のＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ／０．５分、２〜９８％のＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ／１７．５分（０．０５％のＴＦＡを含有するＣＨ３ＣＮ及び０．１％のＴＦＡを含有するＨ２Ｏ）；流量：１ｍＬ／分；カラム温度：５０℃。
【０４１３】
分析ＨＰＬＣ−ＣＡＤ条件（方法１０）：Ｗａｔｅｒｓ  ＡＣＱＵＩＴＹ  ＢＥＨ  Ｃ１８；粒径：１．７μｍ；細孔径：１３０Å；カラムサイズ：２．１×５０ｍｍ；溶離剤／勾配：５％のＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ／１．２分、５〜９５％のＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ／１．８分（０．１％のＴＦＡを含有するＣＨ３ＣＮ及び０．１％のＴＦＡを含有するＨ２Ｏ）；流量：１ｍＬ／分；カラム温度：４５℃。
【０４１４】
或いは、反応混合物を、フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、０〜１０％のメタノール：ジクロロエタン）によって直接精製して、純度の低いバッチＸＬ−１−２を得た。
【０４１５】
表１８中の種は、ＸＬ−１（ＸＬ−１−２を除く）：
【化１３３】
2020517623.tif 000171
の合成に使用される方法と類似の方法を用いて調製した。
【０４１６】
【表３４】
2020517623.tif 000172
【０４１７】
ＰＥＧベースの架橋ポリマーの合成に使用される中間体：
【化１３４】
2020517623.tif 000173
【０４１８】
【表３５】
2020517623.tif 000174
【０４１９】
ＸＬ−５．ＰＥＧ（２０００）−ビス−［３−（（（（（１Ｒ，８Ｓ，９ｓ）−ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル）メチルカルバモイル］
【化１３５】
2020517623.tif 000175
Ｍｎ約２ｋＤａのＰＥＧジアミン塩酸塩（ＪｅｎＫｅｍ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、３００ｍｇ、０．１４８ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル（３ｍＬ）に溶解させた。トリエチルアミン（０．４１３ｍＬ、２．９６ｍｍｏｌ）、続いて（（１Ｒ，８Ｓ，９ｓ）−ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル）メチル（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）カーボネート（３４５ｍｇ、１．１８４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で４時間撹拌した。反応混合物を、ＥＬＳＤによる画分収集（以下の方法）を用いて分取逆相ＨＰＬＣによって直接精製した。生成物含有画分をプールし、冷凍し、凍結乾燥させて、ＸＬ−５を得た。貯蔵のために、ＸＬ−５を、アセトニトリル、ＤＭＳＯ、又はメタノール溶液として冷凍庫に保存した。分析ＨＰＬＣ−ＣＡＤ（以下の方法）：保持時間＝１１．８５分。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ  ４．１４（ｍ，４Ｈ）、３．６３（ｂｒ  ｓ，１８６Ｈ）、３．５４（ｍ，４Ｈ）、２．２２（ｍ，１２Ｈ）、１．６１（ｍ，４Ｈ）、１．３８（ｍ，２Ｈ）、０．９４（ｍ，４Ｈ）．
【０４２０】
分取ＨＰＬＣ条件：Ｗａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８；粒径：５μｍ；カラムサイズ：１９×２５０ｍｍ；溶離剤／勾配：５％のＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ／０．５分、５〜９５％のＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ／１２．５分、９５％のＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ／３分；流量：３０ｍＬ／分；カラム温度：室温。
【０４２１】
分析ＨＰＬＣ−ＣＡＤ条件：Ｗａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ  ＢＥＨ３００  Ｃ１８；粒径：３．５μｍ；カラムサイズ：４．６×１００ｍｍ；溶離剤／勾配：２％のＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ／０．５分、２〜９８％のＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ／１７．５分（０．０５％のＴＦＡを含有するＣＨ３ＣＮ及び０．１％のＴＦＡを含有するＨ２Ｏ）；流量：１ｍＬ／分；カラム温度：５０℃。
【０４２２】
ＸＬ−６．ＰＥＧ（１００００）−テトラ−［３−（（（（（１Ｒ，８Ｓ，９ｓ）−ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル）メチルカルバモイル］
【化１３６】
2020517623.tif 000176
Ｍｎ約１０ｋＤａの４アームＰＥＧアミン塩酸塩（ペンタエリトリトールコア、ＪｅｎＫｅｍ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、５００ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（１５ｍＬ）に溶解させた。トリエチルアミン（０．５５４ｍＬ、４．００ｍｍｏｌ）、続いて（（１Ｒ，８Ｓ，９ｓ）−ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル）メチル（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）カーボネート（１７５ｍｇ、０．６００ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物を、２ｋＤａのＭＷＣＯスペクトル／Ｐｏｒ  ６再生セルロース透析膜（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ，Ｉｎｃ．）を用いたメタノールに対する透析によって直接精製した。分析及びさらなる反応への利用のために、ＸＬ−６を、ロータリーエバポレータを用いた濃縮によって単離した。貯蔵のために、化合物を、メタノール溶液として室温で保存した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ  ４．１４（ｍ，８Ｈ）、３．６３（ｂｒ  ｓ，９９５Ｈ）、２．２２（ｍ，２４Ｈ）、１．６１（ｍ，８Ｈ）、１．３８（ｍ，４Ｈ）、０．９４（ｍ，８Ｈ）．
【０４２３】
ＸＬ−８．
【化１３７】
2020517623.tif 000177
Ｍｎ約１０ｋＤａの８アームＰＥＧアミン塩酸塩（ヘキサグリセロールコア、ＪｅｎＫｅｍ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、８００ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（５ｍＬ）に溶解させた。トリエチルアミン（０．８８７ｍＬ、６．４０ｍｍｏｌ）、続いて（（１Ｒ，８Ｓ，９ｓ）−ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル）メチル（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）カーボネート（８０７ｍｇ、２．５６ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で５時間撹拌した。反応混合物を、ロータリーエバポレータを用いて濃縮し、次に、メタノールに溶解させ、２ｋＤａのＭＷＣＯスペクトル／Ｐｏｒ  ６再生セルロース透析膜（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ，Ｉｎｃ．）を用いたメタノールに対する透析によって精製した。分析及びさらなる反応への利用のために、ＸＬ−８を、ロータリーエバポレータを用いた濃縮によって単離したが、貯蔵のために、ＸＬ−８を、メタノール溶液として室温で保存した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ  ４．１４（ｍ，１６Ｈ）、３．６３（ｂｒ  ｓ，９３５Ｈ）、２．２３（ｍ，４８Ｈ）、１．６１（ｍ，１６Ｈ）、１．３８（ｍ，８Ｈ）、０．９５（ｍ，１６Ｈ）．
【０４２４】
実施例５
この実施例は、適切に官能化されたポリマーを架橋剤と反応させることによって調製されたヒドロゲルの合成を説明している。
【０４２５】
ヒアルロン酸ヒドロゲル：Ｈ１ａの合成
【化１３８】
2020517623.tif 000178
【化１３９】
2020517623.tif 000179
［ＨＡ−Ｎ３］−２３％ｂ（６０ｍｇ、１３６μｍｏｌ、置換度＝２３％）を、５ｍＬのエッペンドルフ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）チューブ中で３０分間にわたって、室温で３．８ｍＬの滅菌した１×ＰＢＳ緩衝液、ｐＨ７．４に溶解させた。非置換カルボキシレートナトリウム塩繰返し二量体単位の分子量は、４０１．３Ｄａである。アジド化繰返し二量体単位のＭＷは、５７９．６Ｄａである。［ＨＡ−Ｎ３］−２３％ｂのナトリウム塩形態の二量体単位の平均ＭＷは、４４２．３Ｄａ＝（（４０１．３×０．７７）＋（５７９．６×０．２３））である。ナトリウム塩二量体単位の平均ＭＷを用いて、繰返し二量体単位の総モルは１３６μｍｏｌであり、アジド化繰返し二量体単位のモル数は３１μｍｏｌである。
【０４２６】
この溶液に、ＸＬ−１−１（０．２１５ｍＬ、２５００ＤａのＭＷを仮定する４．３０μｍｏｌの試薬、８．６０μｍｏｌの反応性官能基）の５０ｍｇ／ｍＬの溶液を加えた。これにより、［ＨＡ−Ｎ３］−２３％ｂに対して１．５％  ｗ／ｖである溶液が得られ、６．３％の［ＨＡ−Ｎ３］−２２％ｂ繰返し単位が、ＸＬ−１−１］によって架橋されることが予測された（（８．６０μｍｏｌ［ＸＬ−１−１−反応性官能基］／１３６μｍｏｌ［ＨＡ−単位）×１００＝６．３％）。
【０４２７】
混合物を短時間ボルテックスして混合し、次に、２つの３ｍＬのシリンジに分配し、それに蓋をし、一晩３７℃に保持して、Ｈ１ａを得た。目視検査（内がえし試験（ｉｎｖｅｒｓｉｏｎ  ｔｅｓｔ））は、成功したゲル化を示した。
【０４２８】
ヒアルロン酸ベースのヒドロゲル粒子の調製
Ｈ１ａ、２ｍＬを、１００メッシュステンレス鋼スクリーンディスクに押し通して、５ｍＬのシリンジに入れて、粗いゲル粒子を得た。このシリンジに、１ｍＬの１×ＰＢＳを加えた後、ボルテックスして混合した。シリンジを６時間にわたって室温に保持して、ヒドロゲルを膨潤させた。これにより、［ＨＡ−Ｎ３］−２３％ｂに対して１．０％である混合物が得られた。Ｈ１ａの膨潤された粗いゲル粒子を、２００−メッシュステンレス鋼スクリーンディスクに２０回押し通して、微細なゲル粒子を最終生成物として得た。
【０４２９】
表２０に列挙されたヒアルロン酸ベースのヒドロゲル（及び対応するヒドロゲル粒子）を、Ｈ１ａと類似の方法で調製した。ヒドロゲルは、架橋反応において使用される［ＨＡ−Ｎ３］成分及びその濃度、並びに使用されるＰＥＧ架橋剤及び骨格ポリマーへの架橋を形成することが予測される程度（架橋％）によって定義される。
【０４３０】
【表３６】
2020517623.tif 000180
【０４３１】
実施例６
ヒドロゲル−薬物コンジュゲートの合成
この実施例は、薬物がトレースレスリンカーを介して担体にコンジュゲートされた、ヒドロゲル−薬物コンジュゲートの合成を説明している。
【０４３２】
インビボ投与のために試料を調製する場合、蓋をされなかった材料又は溶液の全ての操作は、無菌条件下で、クリーンベンチ中で行った。使用された全ての消耗品は、事前に開封されておらず、「滅菌」とラベル付けされた。
【０４３３】
Ｃ４ｂ（Ｈ１ａ−Ｌ４Ｄ１）
【化１４０】
2020517623.tif 000181
【化１４１】
2020517623.tif 000182
Ｈ１ａのヒドロゲル粒子懸濁液（２．５ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、２３ｍＭの総二量体繰返し単位）を、Ｌ４Ｄ１ｂの溶液（１４．５ｍＬの、１×ＰＢＳ中４２ｍｇ／ｍＬの溶液）で処理し、ボルテックスし、一晩３７℃に保持した。反応管を遠心分離し（１０００ｒｃｆ、５分）、上清を、針及びシリンジを用いて管から除去した。新鮮な１×ＰＢＳ（１０〜１５ｍＬ）を管に加え、それを振とうして、ゲルを再懸濁させた。遠心分離、上清の除去、新鮮な緩衝液による希釈を繰り返した。ブロルシズマブが上清中で検出されなくなるまで洗浄を続けた（２８０ｎｍにおける吸光度の検出に使用されるＮａｎｏｄｒｏｐ分光光度計、合計で約６５ｍＬのＰＢＳ洗浄）。残りのヒドロゲルペレット、［Ｃ４ｂ］を、貯蔵及び分配のためにシリンジに移した。
【０４３４】
ヒドロゲル−薬物コンジュゲートの主な記述子は、ヒドロゲルの体積当たり充填される薬物の量（＝薬物充填量）である。薬物がタンパク質である場合、充填量を決定するためのいくつかの方法がある。
【０４３５】
ヒドロゲルのタンパク質充填量を、公知の体積のヒドロゲルからのコンジュゲートされたタンパク質の強制放出、続いて、放出されたタンパク質の定量化によって決定した。この実施例において、３７．３μｇの［Ｃ４ｂ］を、反応管に量り入れた（これは、このヒドロゲルの密度が約１ｇ／ｍＬであると仮定して、３７．３μＬの試料に相当する）。試料を、１ＭのトリスＨＣｌ緩衝液、ｐＨ９．５（１ｍＬ）で処理し、ボルテックスし、３７℃で４８時間振とうした（又は測定される濃度が定常状態に達するまで）。放出された薬物（ブロルシズマブ）の濃度（Ｎａｎｏｄｒｏｐ分光光度計）が、この試料中で０．４８ｍｇ／ｍＬであることが測定され、これは、［Ｃ４ｂ］中の１３．３５ｍｇのブロルシズマブ／ｍＬのヒドロゲルに相当する（（０．０４８ｍｇ／ｍＬ／０．０３７３ｍＬ）×（１．０３７３ｍＬの総体積）＝１３．３５ｍｇ／ｍＬ）。この分析を、トリプリケートで行った。希釈前の［Ｃ４ｂ］の決定された平均タンパク質充填量は、１３．９ｍｇのブロルシズマブ／ｍＬのヒドロゲルであった。
【０４３６】
タンパク質充填量を決定する代替的な方法は、差分計算によるものである。この方法では、ヒドロゲル洗浄中に回収された測定された（Ｎａｎｏｄｒｏｐ分光光度計）ブロルシズマブが、既知の加算された総タンパク質（例えば：ブロルシズマブ＋Ｌ４Ｄ１）から差し引かれる。差分は、総ヒドロゲルの体積に基づいてブロルシズマブ充填量を示す。
【０４３７】
表２１中のヒドロゲルは、Ｃ４ｂの合成に使用される方法と類似の方法を用いて調製した。
【０４３８】
【表３７】
2020517623.tif 000183
【０４３９】
ヒドロゲル−薬物コンジュゲートを、１×ＰＢＳで希釈して、投与のための所望の最終薬物濃度を得た。加えられる１×ＰＢＳの量を、下式によって計算した：（ＰＢＳ希釈剤（ｍＬ））＝［（総薬物（ｍｇ）／所望の薬物充填量（ｍｇ／ｍＬ）］−（コンジュゲートの初期体積（ｍＬ））。
【０４４０】
上述されるように調製されたコンジュゲートＣ４ｂ（２ｍＬのヒドロゲルコンジュゲート、１３．９ｍｇ／ｍＬのブロルシズマブ、総ブロルシズマブ＝２７．８ｍｇ）を、１×ＰＢＳ（０．８ｍＬ）の添加によって希釈した。シリンジに蓋をし、激しく振とうして、均質化した。これにより、タンパク質充填量＝２７．８ｍｇのブロルシズマブ／２．８ｍＬ＝９．９３ｍｇ／ｍＬのブロルシズマブを有する２．８ｍＬの総試料体積が得られた。
【０４４１】
プランジャを取り外し、所望の体積のＣ４ｂを充填することによって、コンジュゲートＣ４ｂを、３０Ｇ針が取り付けられた０．５ｍＬのインスリンシリンジ中に投与のために分配した。
【０４４２】
ヒドロゲル−薬物コンジュゲートを、４℃で貯蔵した。
【０４４３】
ヒドロゲル薬物コンジュゲート：Ｃ１３の合成
【化１４２】
2020517623.tif 000184
リンカー−薬物付加物Ｌ８Ｄ４（トリストリフルオロ酢酸塩、１９．９ｍｇ、８．８６μｍｏｌ）を、ＸＬ−８の溶液（０．１５７ｍＬの、ＤＭＳＯ中２００ｍｇ／ｍＬの溶液）で処理し、振とうし、８０分間保持し、その時点で、ＨＰＬＣ分析は、ＸＬ−８へのＬ８Ｄ４の完全なコンジュゲーションを示した。この溶液に、ＸＬ−７の溶液（０．１５４ｍＬの、ＤＭＳＯ中２００ｍｇ／ｍＬの溶液）を加えた。反応物を振とうし、４時間にわたって室温に保持した。
【０４４４】
バルクゲルを、１００メッシュステンレス鋼スクリーンディスクに押し通して、３ｍＬのシリンジに入れて、粗いゲル粒子を得た。このシリンジに、２ｍＬのＤＭＳＯを加えた後、ボルテックスして混合した。シリンジを１時間にわたって室温に保持して、ヒドロゲルを膨潤させた。膨潤された粗いゲル粒子を、２００メッシュステンレス鋼スクリーンディスクに２０回押し通して、微細なゲル粒子を得た。
【０４４５】
微細なゲル粒子懸濁液（蓋をしたシリンジ中）を、２０００ｒｃｆで５分間遠心分離して、ゲルをペレット化した。上清を、針及びシリンジを用いて除去し、ペレットを低温１×ＰＢＳ、ｐＨ６．５で洗浄し、次のとおりに、コンジュゲートされていない種をゲルから除去した。懸濁液を、２０００ｒｃｆで５分間遠心分離して、ゲルをペレット化した。上清を、針及びシリンジを用いてシリンジから除去し、新鮮な１×ＰＢＳ、ｐＨ６．５を加えて、シリンジに充填し、蓋をしたシリンジを振とうして、ゲルを再懸濁させた。遠心分離、上清の除去、及び新鮮な緩衝液による希釈を、さらに４回繰り返した。最終的な遠心分離及び緩衝液の除去の後、上清を内毒素について検査し、洗浄されたゲルペレットを、１×ＰＢＳ、ｐＨ６．５で、１．４ｍＬの最終的な総体積になるまで希釈した。希釈された粒子懸濁液をボルテックスして混合し、生成物、Ｃ１３を４℃で貯蔵した。
【０４４６】
Ｃ１３（１００％のコンジュゲーションを仮定する）中のＤ４の濃度は、１０．３ｍｇ／ｍＬであった。
【０４４７】
実施例７
この実施例は、一連のモデルトレースレスリンカー−薬物コンジュゲートの調製を説明し、ここで、モデル「薬物」は、低分子量アミン含有化合物、最も高い頻度でｐ−メトキシベンジルアミンである。化合物Ｍ１〜Ｍ２７は、ポリマー、ヒドロゲル又は他の担体にコンジュゲートされていない。化合物Ｍ１〜Ｍ２７からの低分子量アミン含有化合物のインビトロ放出試験は、いくつかの異なる放出トリガーの評価を可能にした。
【０４４８】
【表３８】
2020517623.tif 000185
【０４４９】
【表３９】
2020517623.tif 000186
【０４５０】
【表４０】
2020517623.tif 000187
【０４５１】
【表４１】
2020517623.tif 000188
【０４５２】
【表４２】
2020517623.tif 000189
【０４５３】
モデル化合物の合成：
Ｍ１．（４−（３’−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）プロパノイル）−１−（２’’−（（４’’’−メトキシベンジル）アミノ）−２’’−オキソエチル）ピペラジン−２−イル）メチルプロピオネート
【化１４３】
2020517623.tif 000190
Ｍ１．（４−（３’−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）プロパノイル）−１−（２’’−（（４’’’−メトキシベンジル）アミノ）−２’’−オキソエチル）ピペラジン−２−イル）メチルプロピオネート
【化１４４】
2020517623.tif 000191
ジクロロメタン（３ｍＬ）中のＬ−ＩＮＴ−３（６１．７ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）の溶液を、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）で処理し、室温で一晩撹拌し、次に蒸発させた。粗中間体を、ジクロロメタン（３ｍＬ）に溶解させ、ジイソプロピルエチルアミン（０．０６６ｍＬ、０．３８ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（５７．３ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）及びｐ−メトキシベンジルアミン（０．０１７ｍＬ、０．１３ｍｍｏｌ）で処理し、１時間撹拌し、次に蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、０〜１５％のメタノール：ジクロロメタン）による精製により、Ｍ１を得た。ＬＣＭＳ（方法１）：保持時間＝１．１６分；ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ５５５．２（Ｍ＋Ｈ）．１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）７．２５（ｍ，５Ｈ）、７．１２（ｍ，２Ｈ）、６．８０（ｍ，２Ｈ）、５．４３（ｍ，１Ｈ）、５．０１（ｍ，２Ｈ）、４．３３（ｄ，２Ｈ）、４．０２（ｔｄｔ，２Ｈ）、３．７３（ｓ，３Ｈ）、３．５５−３．２（ｍ，７Ｈ）、３．０９（ｍ，１Ｈ）、２．７２（ｍ，２Ｈ）、２．４１（ｄｑ、３Ｈ）、２．１８（ｍ，２Ｈ）、１．０４（ｄｔ、３Ｈ）．
【０４５４】
Ｍ２．（４−（３’−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）プロパノイル）−１−（２’’−（（４’’’−メトキシベンジル）アミノ）−２’’−オキソエチル）ピペラジン−２−イル）メチルアセテート
【化１４５】
2020517623.tif 000192
Ｍ２は、Ｍ１を合成するのに使用される方法と類似の方法を用いて中間体（Ｌ−ＩＮＴ−２）から調製した。ＬＣＭＳ（方法１）：保持時間＝１．１０分：ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ５４１．１（Ｍ＋Ｈ）．ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）７．３５（ｍ，５Ｈ）、７．２０（ｍ，２Ｈ）、６．８８（ｍ，２Ｈ）、５．５３（ｍ，１Ｈ）、５．０９（ｍ，２Ｈ）、４．４１（ｄ，２Ｈ）、４．１０（ｔｄｔ，２Ｈ）、３．８１（ｓ，３Ｈ）、３．５５−３．２（ｍ，７Ｈ）、３．１７（ｄｄ，１Ｈ）、２．７９（ｍ，２Ｈ）、２．４９（ｄｑ、３Ｈ）、２．０（ｍ，３Ｈ）．
【０４５５】
Ｍ３．（４−（３’−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）プロパノイル）−１−（２’’−（（４’’’−メトキシベンジル）アミノ）−２’’−オキソエチル）ピペラジン−２−イル）メチルメトキシアセテート
【化１４６】
2020517623.tif 000193
Ｍ３は、Ｍ１を合成するのに使用される方法と類似の方法を用いて中間体（Ｌ−ＩＮＴ−１）から調製した。ＬＣＭＳ（方法１）：保持時間＝１．１１分。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ５７１．２（Ｍ＋Ｈ）．ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）７．３７（ｍ，５Ｈ）、７．２１（ｍ，２Ｈ）、６．９０（ｍ，２Ｈ）、５．４９（ｍ，１Ｈ）、５．１０（ｍ，２Ｈ）、４．４２（ｄ，２Ｈ）、４．２３（ｔｄｄ、２Ｈ）、３．８３（ｓ，３Ｈ）、３．５５−３．２（ｍ，９Ｈ）、３．２０（ｄｄ，１Ｈ）、２．８３（ｄ，２Ｈ）、２．５２（ｍ，３Ｈ）．
【０４５６】
Ｍ４．（４−（３’−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）プロパノイル）−１−（２’’−（（４’’’−メトキシベンジル）（メチル）アミノ）−２’’−オキソエチル）ピペラジン−２−イル）メチル２−メトキシアセテート
【化１４７】
2020517623.tif 000194
Ｍ４は、ｐ−メトキシベンジルアミンの代わりにＮ−メチル−ｐ−メトキシベンジルアミンを用いることを除いて、Ｍ１を合成するのに使用される方法と類似の方法を用いて中間体（Ｌ−ＩＮＴ−１）から調製した。ＬＣＭＳ（方法１）：保持時間＝１．０４分。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ５８５．２（Ｍ＋Ｈ）．ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）７．３５（ｍ，５Ｈ）、７．２０（ｍ，２Ｈ）、６．８０（ｍ，２Ｈ）、５．４３（ｍ，１Ｈ）、５．１３（ｍ，２Ｈ）、４．７−３．９（ｍ，７Ｈ）、３．８２（ｍ，３Ｈ）、３．８−３．２（ｍ，１０Ｈ）、２．８（ｍ，３Ｈ）、２．７（ｍ，３Ｈ）、２．６（ｍ，２Ｈ）．
【０４５７】
Ｍ５．（４−（３’−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）プロパノイル）−１−（２’’−（（４’’’−メトキシフェニル）アミノ）−２’’−オキソエチル）ピペラジン−２−イル）メチル２’’’’−メトキシアセテート
【化１４８】
2020517623.tif 000195
Ｍ５は、ｐ−メトキシベンジルアミンの代わりに４−メトキシアニリンを用いたことを除いて、Ｍ１を合成するのに使用される方法と類似の方法を用いて中間体（Ｌ−ＩＮＴ−１）から調製した。ＬＣＭＳ（方法１）：保持時間＝１．１４分。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ５５７．１（Ｍ＋Ｈ）．ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）８．７（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、７．４（ｄ，２Ｈ）、７．３７（ｍ，５Ｈ）、６．８（ｍ，２Ｈ）、５．５（ｍ，１Ｈ）、５．１（ｍ，２Ｈ）、４．３（ｍ，２Ｈ）、４．０（ｍ，２Ｈ）、３．８（ｓ，４Ｈ）、３．７−３．２（ｍ，１１Ｈ）、３．２（ｍ，１Ｈ）、２．８（ｍ，２Ｈ）、２．５（ｍ，２Ｈ）、２．１８（ｍ，３Ｈ）．
【０４５８】
Ｍ６．（４−アセチル−１−（２−（（４−メトキシベンジル）アミノ）−２−オキソエチル）ピペラジン−２−イル）メチルアセテート
【化１４９】
2020517623.tif 000196
Ｍ６ａ．１−Ｎ−アセチル−３−ヒドロキシメチルピペラジン
【化１５０】
2020517623.tif 000197
アルゴン下で、０℃で水（２５ｍＬ）中の２−（ヒドロキシメチル）ピペラジン（２ｇ、１７．２ｍｍｏｌ）の溶液を、トリエチルアミン（３．５ｍＬ、２５ｍｍｏｌ）で滴下して処理し、１０分間撹拌し、次に、水（１５ｍＬ）中の無水酢酸（１．６４ｍＬ、１７．３ｍｍｏｌ）の溶液で滴下して処理した。反応物を室温で２時間撹拌し、次に、２Ｍの炭酸ナトリウム（１０ｍＬ）及び飽和塩化ナトリウム（２０ｍＬ）で処理した。水性相を蒸発させ、残渣を、フラッシュクロマトグラフィー（塩基性アルミナ、３％のメタノール：ジクロロメタン）によって精製して、Ｍ６ａを得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  １５９．０（Ｍ＋Ｈ）．
【０４５９】
Ｍ６ｂ．ｔｅｒｔ−ブチル４−アセチル−２−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボキシレート
【化１５１】
2020517623.tif 000198
アルゴン下で、０℃でジクロロメタン（２０ｍＬ）中のＭ６ａ（１．４ｇ、８．８４ｍｍｏｌ）の溶液を、トリエチルアミン（１．７８ｇ、１７．６ｍｍｏｌ）で滴下して処理し、１０分間撹拌し、次に、二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（２．１２ｇ、９．７３ｍｍｏｌ）で滴下して処理した。反応物を室温で１２時間撹拌し、次に、ジクロロメタンで希釈し、塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィー（塩基性アルミナ、３％のメタノール：ジクロロメタン）による精製により、Ｍ６ｂを得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ２５９．０（Ｍ＋Ｈ）．
【０４６０】
Ｍ６ｃ．ｔｅｒｔ−ブチル２−（アセトキシメチル）−４−アセチルピペラジン−１−カルボキシレート
【化１５２】
2020517623.tif 000199
アルゴン下で、０℃でジクロロメタン（５ｍＬ）中のＭ６ｂ（０．２０ｇ、０．７７ｍｍｏｌ）の溶液を、トリエチルアミン（０．２０ｇ、１．９４ｍｍｏｌ）で滴下して処理し、１０分間撹拌し、次に、塩化アセチル（０．０７２ｇ、０．９３ｍｍｏｌ）で滴下して処理した。反応物を室温で４時間撹拌し、次に、ＤＣＭで希釈し、塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィー（塩基性アルミナ、３％のメタノール：ジクロロメタン）による精製により、Ｍ６ｃを得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ３０１．１（Ｍ＋Ｈ）．
【０４６１】
Ｍ６．（４−アセチル−１−（２’−（（４’’−メトキシベンジル）アミノ）−２’−オキソエチル）ピペラジン−２−イル）メチルアセテート
【化１５３】
2020517623.tif 000200
アルゴン下で、０℃でジクロロメタン（５ｍＬ）中のＭ６ｃ（０．１５ｇ、０．４９ｍｍｏｌ）の溶液を、トリフルオロ酢酸（２．０ｍＬ）で滴下して処理し、室温で４時間撹拌し、次に蒸発させた。この材料を、アセトニトリル（１０ｍＬ）に溶解させ、アルゴン下で０℃に保持し、次に、炭酸カリウム（０．４１４ｇ、２．９９ｍｍｏｌ）及び２−ブロモ−Ｎ−（４−メトキシベンジル）アセトアミド（０．２３２ｇ、０．８９ｍｍｏｌ）で処理した。反応物を室温で１２時間撹拌し、次に蒸発させた。粗混合物をジクロロメタンで抽出し、それを塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィー（塩基性アルミナ、５％のメタノール：ジクロロメタン）、続いて分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｚｏｒｂａｘ  Ｅｃｌｉｐｓｅ  ＸＤＢ  Ｃ１８（１５０×２１．５ｍｍ＊５ｍｍ）；移動相：Ａ＝水、Ｂ＝アセトニトリル；勾配：０〜２分：１０％のＢ；２〜８分：２０％のＢ；８分から最後まで：４０％のＢ；）による精製により、Ｍ６を得た。ＬＣＭＳ（方法８）：保持時間＝２．６７分；ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ３７８．２（Ｍ＋Ｈ）．
【０４６２】
Ｍ７．メチル４−アセチル−１−（２’−（（４’’−メトキシベンジル）アミノ）−２’−オキソエチル）ピペラジン−２−カルボキシレート
【化１５４】
2020517623.tif 000201
Ｍ７ａ．メチル４−アセチルピペラジン−２−カルボキシレート、トリフルオロ酢酸塩
【化１５５】
2020517623.tif 000202
アルゴン下で、０℃でジクロロメタン（４ｍＬ）中の１−（ｔｅｒｔ−ブチル）２−メチルピペラジン−１，２−ジカルボキシレート（０．２０ｇ、０．８２ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（０．３３ｇ、３．２７ｍｍｏｌ）の溶液を、塩化アセチル（０．１２５ｍｇ、２５ｍｍｏｌ）で滴下して処理し、次に、室温で２時間撹拌した。反応物を水で希釈し、ジクロロメタンで抽出し、有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィー（塩基性アルミナ、２％のメタノール：酢酸エチル）による精製により、中間生成物：ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ２８７（Ｍ＋Ｈ）を得た。この材料を、０℃でジクロロメタン（５ｍＬ）に溶解させ、トリフルオロ酢酸で滴下して処理し、次に、室温で３時間撹拌した。反応混合物を蒸発させ、ペンタンで洗浄し、乾燥させて、Ｍ７ａをトリフルオロ酢酸塩として得て、それをさらに精製せずに使用した。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  １８７（Ｍ＋Ｈ）。
【０４６３】
Ｍ７ｂ．メチル４−アセチル−１−（２’−（ベンジルオキシ）−２’−オキソエチル）ピペラジン−２−カルボキシレート
【化１５６】
2020517623.tif 000203
アルゴン下で、０℃でアセトニトリル（５ｍＬ）中のＭ７ａ（０．１６ｇ、０．８６ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（０．３０ｍｇ、２．１５ｍｍｏｌ）の混合物を、ブロモ酢酸ベンジル（０．２３４ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ）で滴下して処理し、ゆっくりと室温にし、次に、室温で１２時間撹拌した。反応物を水で希釈し、酢酸エチルで抽出し、有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィー（中性アルミナ、１％のメタノール：酢酸エチル）による精製により、Ｍ７ｂを得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ３３５（Ｍ＋Ｈ）．
【０４６４】
Ｍ７ｃ．２−（４’−アセチル−２’−（メトキシカルボニル）ピペラジン−１’−イル）酢酸
【化１５７】
2020517623.tif 000204
Ｍ７ｂ（０．２８５ｇ、０．８５ｍｍｏｌ）の溶液に、１０％のパラジウム炭素（０．０２ｇ）を加え、次に、室温で１２時間にわたってバルーン水素圧力下で撹拌した。反応物を、Ｃｅｌｉｔｅに通してろ過し、メタノールで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、蒸発させた。Ｍ７ｃをさらに精製せずに使用した。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ２４５（Ｍ＋Ｈ）．
【０４６５】
Ｍ７．メチル４−アセチル−１−（２’−（（４’’−メトキシベンジル）アミノ）−２’−オキソエチル）ピペラジン−２−カルボキシレート
【化１５８】
2020517623.tif 000205
アルゴン下で、０℃でジクロロメタン（５ｍＬ）中のＭ７ｃ（０．２１ｇ、０．８６ｍｍｏｌ）の溶液を、ジイソプロピルエチルアミン（０．２７５ｇ、２．１４ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（０．３９ｇ、１．０３ｍｍｏｌ）で、次に、１５分後、４−メトキシベンジルアミン（０．１１７ｇ、０．８６ｍｍｏｌ）で処理した。反応物を室温で１２時間撹拌し、次に、水で処理し、ジクロロメタンで抽出し、それを塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、蒸発させた。分取ＨＰＬＣ（カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ（１５０×１９ｍｍ）；移動相：Ａ＝（水中０．０１％のＴＦＡ）、Ｂ＝アセトニトリル；勾配：０〜２分：２０％のＢ；２〜８分：２０％のＢ；８分から最後まで：８０％のＢ）による精製により、Ｍ７を得た。ＬＣＭＳ（方法３）：保持時間＝２．８５分；ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ３６４（Ｍ＋Ｈ）．
【０４６６】
Ｍ８．（４−アセチル−１−（２’−（（４’’−メトキシベンジル）アミノ）−２’−オキソエチル）ピペラジン−２−イル）メチルメチルカーボネート
【化１５９】
2020517623.tif 000206
Ｍ８ａ（４−アセチル−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボキシル）ピペラジン−２−イル）メチルメチルカーボネート
【化１６０】
2020517623.tif 000207
アルゴン下で、０℃でジクロロメタン（５ｍＬ）中のＭ６ｂ（０．３０ｇ、１．１６ｍｍｏｌ）の溶液を、トリエチルアミン（０．２０ｇ、１．９４ｍｍｏｌ）で滴下して処理し、１０分間撹拌し、次に、クロロギ酸メチル（０．５４ｇ、５．８ｍｍｏｌ）で滴下して処理した。反応物を室温で７２時間撹拌し、次に、ジクロロメタンで希釈し、塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィー（塩基性アルミナ、３％のメタノール：ジクロロメタン）による精製により、Ｍ８ａを得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ３１７．１（Ｍ＋Ｈ）．
【０４６７】
Ｍ８．（４−アセチル−１−（２’−（（４’’−メトキシベンジル）アミノ）−２’−オキソエチル）ピペラジン−２−イル）メチルメチルカーボネート
【化１６１】
2020517623.tif 000208
アルゴン下で、０℃でジクロロメタン（５ｍＬ）中のＭ８ａ（０．０９ｇ、０．２８ｍｍｏｌ）の溶液を、トリフルオロ酢酸（２．０ｍＬ）で滴下して処理し、室温で４時間撹拌し、次に蒸発させた。この材料を、アセトニトリル（１０ｍＬ）に溶解させ、アルゴン下で０℃に保持し、次に、炭酸カリウム（０．２３ｇ、１．６６ｍｍｏｌ）及び２−ブロモ−Ｎ−（４−メトキシベンジル）アセトアミド（０．１２８ｇ、０．４９ｍｍｏｌ）で処理した。反応物を室温で１２時間撹拌し、次に蒸発させた。粗混合物をジクロロメタンで抽出し、それを塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィー（塩基性アルミナ、５％のメタノール：ジクロロメタン）、続いて分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｚｏｒｂａｘ  Ｅｃｌｉｐｓｅ  ＸＤＢ  Ｃ１８（１５０×２１．５ｍｍ＊５ｍｍ）；移動相：Ａ＝水、Ｂ＝アセトニトリル；勾配：０〜２分：１０％のＢ；２〜１０分：２０％のＢ；１０分から最後まで：５０％のＢ；）による精製により、Ｍ８を得た。ＬＣＭＳ（方法７）：保持時間＝０．２４分；ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ３９４．２（Ｍ＋Ｈ）．
【０４６８】
Ｍ９．１−（４’−アセチル−１’−（２’’−（（４’’’−メトキシベンジル）アミノ）−２’’−オキソエチル）ピペラジン−２’−イル）メチルＮ−メチルカルバメート
【化１６２】
2020517623.tif 000209
Ｍ９ａ．１−（４’−アセチル−１’−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペラジン−２’−イル）メチルＮ−メチルカルバメート
【化１６３】
2020517623.tif 000210
アルゴン下で、０℃でジクロロメタン（５ｍＬ）中のＭ６ｂ（０．３０ｇ、１．１６ｍｍｏｌ）の溶液を、トリエチルアミン（０．３０ｍｇ、２．９０ｍｍｏｌ）で滴下して処理し、１０分間撹拌した。カルバミン酸メチル塩化物（０．１１ｇ、１．２７ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温で７２時間撹拌した。反応物をジクロロメタンで希釈し、塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィー（塩基性アルミナ、３％のメタノール：酢酸エチル）による精製により、Ｍ９ａを得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ３１６．１（Ｍ＋Ｈ）．
【０４６９】
Ｍ９．１−（４’−アセチル−１’−（２’’−（（４’’’−メトキシベンジル）アミノ）−２’’−オキソエチル）ピペラジン−２’−イル）メチルＮ−メチルカルバメート
【化１６４】
2020517623.tif 000211
アルゴン下で、０℃でジクロロメタン（５ｍＬ）中のＭ９ａ（０．１２ｇ、０．３８ｍｍｏｌ）の溶液を、トリフルオロ酢酸（２．０ｍＬ）で滴下して処理し、室温で４時間撹拌し、次に、蒸発させ、さらに精製せずに使用した。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ２１６．１（Ｍ＋Ｈ）。この材料を、アセトニトリル（１０ｍＬ）に溶解させ、アルゴン下で０℃に保持し、次に、炭酸カリウム（０．３８５ｇ、２．７８ｍｍｏｌ）及び２−ブロモ−Ｎ−（４−メトキシベンジル）アセトアミド（０．２１５ｇ、０．８３ｍｍｏｌ）で処理した。反応物を室温で１２時間撹拌し、次に蒸発させた。粗混合物をジクロロメタンで抽出し、それを塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィー（塩基性アルミナ、５％のメタノール：ジクロロメタン）、続いて分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｚｏｒｂａｘ  Ｅｃｌｉｐｓｅ  ＸＤＢ  Ｃ１８（１５０×２１．５ｍｍ＊５ｍｍ）；移動相：Ａ＝水、Ｂ＝アセトニトリル；勾配：０〜２分：１０％のＢ；２〜８分：２０％のＢ；８分から最後まで：５０％のＢ）による精製により、Ｍ９を得た。ＬＣＭＳ（方法３）：保持時間＝２．６１分；ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ３９３．２（Ｍ＋Ｈ）．
【０４７０】
Ｍ１０．２−（４’−アセチル−２’−（（（テトラヒドロ−２’’Ｈ−ピラン−２’’−イル）オキシ）メチル）ピペラジン−１’−イル）−Ｎ−（４’’’−メトキシベンジル）アセトアミド
【化１６５】
2020517623.tif 000212
Ｍ１０ａ．２−（４’−アセチル−２’−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１’−イル）−Ｎ−（４’’−メトキシベンジル）アセトアミド
【化１６６】
2020517623.tif 000213
アセトニトリル（２０ｍＬ）中のＭ６ａ（１．０ｇ、６．３２ｍｍｏｌ）の溶液を、アルゴン下で０℃に保持し、次に、炭酸カリウム（２．６２ｇ、１９．０ｍｍｏｌ）及び２−ブロモ−Ｎ−（４’−メトキシベンジル）アセトアミド（１．４ｇ、５．６８ｍｍｏｌ）で処理した。反応物を室温で１６時間撹拌し、次に、水で処理し、酢酸エチルで抽出し、組み合わされた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、１〜２％のメタノール：ジクロロメタン）による精製により、Ｍ１０ａを得た。ＬＣＭＳ（方法８）：保持時間＝２．６１分；ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ３３６．３（Ｍ＋Ｈ）．
【０４７１】
Ｍ１０．２−（４’−アセチル−２’−（（（テトラヒドロ−２’’Ｈ−ピラン−２’’−イル）オキシ）メチル）ピペラジン−１’−イル）−Ｎ−（４’’’−メトキシベンジル）アセトアミド
【化１６７】
2020517623.tif 000214
アルゴン下で、０℃でジクロロメタン（５ｍＬ）中のＭ１０ａ（０．１０ｇ、０．３０ｍｍｏｌ）の溶液を、３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン（０．０５ｇ、０．６０ｍｍｏｌ）で処理し、次に、ｐ−トルエンスルホン酸（０．０３０ｇ、０．８９ｍｍｏｌ）を少しずつ加え、反応物を室温で４時間撹拌した。反応物を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で処理し、ジクロロメタンで抽出し、それを塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、１〜２％のメタノール：ジクロロメタン）による精製により、Ｍ１０を得た。ＬＣＭＳ（方法８）：保持時間＝２．７８分；ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ４２０．３（Ｍ＋Ｈ）．
【０４７２】
Ｍ１１．２−（４’−アセチル−２’−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）ピペラジン−１’−イル）−Ｎ−（４’’’−メトキシベンジル）アセトアミド
【化１６８】
2020517623.tif 000215
Ｍ１１．２−（４’−アセチル−２’−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）ピペラジン−１’−イル）−Ｎ−（４’’’−メトキシベンジル）アセトアミド
【化１６９】
2020517623.tif 000216
アルゴン下で、０℃でジクロロメタン（５ｍＬ）中のＭ１０ａ（０．１０ｇ、０．３０ｍｍｏｌ）の溶液を、イミダゾール（０．０６１ｇ、０．８９ｍｍｏｌ）で処理し、次に、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルクロロシラン（０．０５４ｇ、０．３６ｍｍｏｌ）を滴下して加え、反応物を室温で２時間撹拌した。反応物を飽和塩化アンモニウム水溶液で処理し、ジクロロメタンで抽出し、それを塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、蒸発させた。分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｚｏｒｂａｘ  Ｅｃｌｉｐｓｅ  ＸＤＢ  Ｃ１８（１５０×２１．５ｍｍ＊５ｍｍ）；移動相：Ａ＝水、Ｂ＝アセトニトリル；勾配：０〜２分：３０％のＢ；２〜８分：４０％のＢ；８分から最後まで：９０％のＢ；）による精製により、Ｍ１１を得た。ＬＣＭＳ（方法８）：保持時間＝３．４８分；ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ４５０．３（Ｍ＋Ｈ）．
【０４７３】
Ｍ１７．１−（４’−アセチル−１’−（２’’−オキソ−２’’−（ピリジン−２’’’−イルアミノ）エチル）ピペラジン−２’−イル）メチルアセテート
【化１７０】
2020517623.tif 000217
Ｍ１７ａ  １−（４’−アセチルピペラジン−２’−イル）メチルアセテート、トリフルオロ酢酸塩
【化１７１】
2020517623.tif 000218
アルゴン下で、０℃でＤＭＦ（７ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボキシレート（０．７０ｇ、３．２３ｍｍｏｌ）の溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（１．６５ｍＬ、２．７６ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（０．００７ｇ）及び塩化アセチル（０．５７ｍＬ、８．０９ｍｍｏｌ）を加え、室温で１６時間撹拌した。反応物を水で処理し、酢酸エチルで抽出した。組み合わされた有機層を水及び塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィー（塩基性アルミナ、５０％の酢酸エチル：ヘキサン）による精製により、中間化合物を得て、それをさらに精製せずに使用した。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ３２３（Ｍ＋Ｎａ）．この材料を、０℃でジクロロメタン（２ｍＬ）に溶解させ、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）で処理し、室温で１６時間撹拌し、次に蒸発させた。残渣をペンタンで洗浄し、高真空下で乾燥させて、Ｍ１７ａをトリフルオロ酢酸塩として得て、それをさらに精製せずに使用した。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ２０１（Ｍ＋Ｈ）。
【０４７４】
Ｍ１７ｂ．ベンジル２−（２’−（アセトキシメチル）−４’−アセチルピペラジン−１’−イル）アセテート
【化１７２】
2020517623.tif 000219
アルゴン下でアセトニトリル（８ｍＬ）中のＭ１７ａ（０．７５ｇ、３．７３ｍｍｏｌ）の溶液を、炭酸カリウム（１．５４ｇ、１１．９ｍｍｏｌ）及び２−ブロモ酢酸ベンジル（０．５９ｍＬ、３．７３ｍｍｏｌ）で処理し、室温で１６時間撹拌した。反応物を濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（塩基性アルミナ、１％のメタノール：ジクロロメタン）によって精製して、Ｍ１７ｂを得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ３４９（Ｍ＋Ｈ）．
【０４７５】
Ｍ１７ｃ．２−（２’−（アセトキシメチル）−４’−アセチルピペラジン−１’−イル）酢酸
【化１７３】
2020517623.tif 000220
エタノール（６ｍＬ）中のＭ１７ｂ（０．３０ｇ、０．８６ｍｍｏｌ）の溶液に、５％のパラジウム炭素（０．０６０ｇ）を加え、反応物を、１６時間にわたってバルーン圧力水素下で撹拌した。反応物を濃縮し、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｚｏｒｂａｘ  Ｅｃｌｉｐｓｅ  ＸＤＢ  Ｃ１８（１５０×２１．５ｍｍ＊５ｍｍ）；移動相：Ａ＝水、Ｂ＝アセトニトリル；勾配：０〜２分：１０％のＢ；２〜１０分：２０％のＢ；１０分から最後まで：４０％のＢ）によって精製して、Ｍ１７ｃを得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ２５９（Ｍ＋Ｈ）．
【０４７６】
Ｍ１７．１−（４’−アセチル−１’−（２’’−オキソ−２’’−（ピリジン−２’’’−イルアミノ）エチル）ピペラジン−２’−イル）メチルアセテート
【化１７４】
2020517623.tif 000221
アルゴン下でジクロロメタン（１ｍＬ）中のＭ１７ｃ（０．０７０ｇ、０．２７ｍｍｏｌ）の溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（０．０３９ｍＬ、０．８１ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（０．３５ｇ、０．９０ｍｍｏｌ）及び２−アミノピリジン（０．０２８ｇ、０．２９ｍｍｏｌ）を加え、室温で１６時間撹拌した。反応物を水で処理し、ジクロロメタンで抽出した。組み合わされた有機層を塩水で洗浄し、蒸発させた。分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｚｏｒｂａｘ  Ｅｃｌｉｐｓｅ  ＸＤＢ  Ｃ１８（１５０×２１．５ｍｍ＊５ｍｍ）；移動相：Ａ＝水、Ｂ＝アセトニトリル；勾配：０〜２分：１０％のＢ；２〜６分：２０％のＢ；６分から最後まで：７０％のＢ）による精製により、Ｍ１７を得た。ＬＣＭＳ（方法３）：保持時間＝２．３５分；ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ３３５．２（Ｍ＋Ｈ）．
【０４７７】
Ｍ１８．１−（４’−メチル−１’−（２’’−オキソ−２’’−（ピリジン−２’’’−イルアミノ）エチル）ピペラジン−２’−イル）メチルアセテート
【化１７５】
2020517623.tif 000222
Ｍ１８ａ．３−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−１−メチルピペラジン
【化１７６】
2020517623.tif 000223
アルゴン下でジクロロメタン（７ｍＬ）中の（４−メチルピペラジン−２−イル）メタノール（０．６０ｇ、４．６ｍｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（１．０８ｍＬ、７．８２ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（０．０１ｇ）を加え、次に、滴下して、ジクロロメタン（２０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチルジメチルクロロシラン（１ｇ、６．９１ｍｍｏｌ）の溶液を加え、室温で１６時間撹拌した。さらなるトリエチルアミン（０．６当量）及びｔｅｒｔ−ブチルジメチルクロロシラン（０．６当量）を溶液に加え、それを室温で２時間撹拌した。反応物を水で処理し、ジクロロメタンで抽出した。組み合わされた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィー（塩基性アルミナ、１％のメタノール：ジクロロメタン）による精製により、Ｍ１８ａを得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ２４５（Ｍ＋Ｈ）．
【０４７８】
Ｍ１８ｃ．ベンジル２−（２’−（アセトキシメチル）−４’−メチルピペラジン−１’−イル）アセテート
【化１７７】
2020517623.tif 000224
アルゴン下でアセトニトリル（１２ｍＬ）中のＭ１８ａ（１．２ｇ、４．９１ｍｍｏｌ）の溶液を、炭酸カリウム（１．６９ｇ、１２．３ｍｍｏｌ）及び２−ブロモ酢酸ベンジル（０．７ｍＬ、４．４２ｍｍｏｌ）で処理し、室温で１６時間撹拌した。反応物を水で処理し、酢酸エチルで抽出した。組み合わされた有機層を水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（塩基性アルミナ、１％のメタノール：ジクロロメタン）による精製により、中間体Ｍ１８ｂを得た。（アルゴンで）脱気されたジクロロメタン（１２ｍＬ）中のＭ１８ｂ（０．４９ｇ、１．２５ｍｍｏｌ）の溶液に、トリフルオロメタンスルホン酸銅（ＩＩ）（０．４５ｇ、１．２５ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を再度脱気し（１０分）、続いて無水酢酸（０．３１ｇ、３．０ｍｍｏｌ）を加え、第３の脱気（１０分）を行い、室温で４８時間にわたってアルゴン下で撹拌した。反応物を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で処理し、ジクロロメタンで抽出した。組み合わされた有機層を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（中性アルミナ、０．２５％のメタノール：ジクロロメタン）による精製により、Ｍ１８ｃを得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ３２１（Ｍ＋Ｈ）
【０４７９】
Ｍ１８ｄ．２−（２’−（アセトキシメチル）−４’−メチルピペラジン−１’−イル）酢酸
【化１７８】
2020517623.tif 000225
エタノール（５ｍＬ）中のＭ１８ｃ（０．２２５ｇ、０．７０ｍｍｏｌ）の溶液に、５％のパラジウム炭素（０．０４５ｇ）を加え、反応物を、５時間にわたってバルーン圧力水素下で撹拌した。反応物を、Ｃｅｌｉｔｅに通してろ過し、ろ液を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濃縮して、Ｍ１８ｄを得て、それをさらに精製せずに使用した。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ２３１．２（Ｍ＋Ｈ）
【０４８０】
Ｍ１８．１−（４’−メチル−１’−（２’’−オキソ−２’’−（ピリジン−２’’’−イルアミノ）エチル）ピペラジン−２’−イル）メチルアセテート
【化１７９】
2020517623.tif 000226
アルゴン下で、０℃でジクロロメタン（５ｍＬ）中のＭ１８ｄ（０．０６０ｇ、０．２６ｍｍｏｌ）の溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（０．１０ｇ、０．７８ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（０．１４６ｇ、０．３９ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を１０分間撹拌し、次に、２−アミノピリジン（０．０２９ｇ、０．３１ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で１６時間撹拌し、次に、水で処理し、ジクロロメタンで抽出した。組み合わされた有機層を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、１０〜１２％のメタノール：ジクロロメタン）、続いて分取ＨＰＬＣ（カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ（１５０×１９ｍｍ）；移動相：Ａ＝（水中０．１％のＴＦＡ）、Ｂ＝（ＣＡＮ：メタノール）；勾配：０〜２分：１０％のＢ；２〜８分：２０％のＢ；８分から最後まで：５０％のＢ）による精製により、Ｍ１８を得た。ＬＣＭＳ（方法８）：保持時間＝２．１２分；ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ３０７．１（Ｍ＋Ｈ）．
【０４８１】
Ｍ１９．１−（４’−エチル−１’−（２’’−オキソ−２’’−（ピリジン−２’’’−イルアミノ）エチル）ピペリジン−２’−イル）メチルアセテート
【化１８０】
2020517623.tif 000227
Ｍ１９ｂ．１−（４’−エチルピペリジン−２’−イル）メタノール
【化１８１】
2020517623.tif 000228
脱気したトルエン（２０ｍＬ）中の１−（４’−ブロモピリジン−２’−イル）メタノール（２ｇ、１０．６ｍｍｏｌ）の溶液に、トリブチルビニルスズ（４．４４ｇ、１６．０ｍｍｏｌ）及びＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）２（０．７４６ｇ、１．０６ｍｍｏｌ）を加えた後、第２の１０分間の脱気を行った。反応物を、５０℃で１８時間にわたってアルゴンで撹拌し、次に、さらなる分量のトリブチルビニルスズ（０．５当量）及びＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）２（０．０５当量）で処理した後、８０℃で１８時間撹拌した。反応物を蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、３０％の酢酸エチル：ヘキサン）による精製により、中間体Ｍ１９ａを得た。メタノール（５４ｍＬ）及び水（３６ｍＬ）中の、Ｍ１９ａ（１．４ｇ、１０．４ｍｍｏｌ）、酸化白金（０．９４１ｇ、４．１５ｍｍｏｌ）及び酢酸（０．６２２ｇ、１０．４ｍｍｏｌ）の混合物を、８０ｐｓｉの水素圧力で３６時間にわたってＰａｒｒ振とう器中で保持した。反応物を、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）に通してろ過し、濃縮した。残渣を水で処理し、酢酸エチルで抽出した。水性層を濃縮して、Ｍ１９ｂを得て、それをさらに精製せずに使用した。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  １４４（Ｍ＋Ｈ）．
【０４８２】
Ｍ１９ｃ．２−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−４−エチルピペリジン
【化１８２】
2020517623.tif 000229
ジクロロメタン（８ｍＬ）中のＭ１９ｂ（０．４ｇ、２．７９ｍｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（０．８５ｇ、８．４ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（０．０１ｇ）を加え、次に、滴下して、ジクロロメタン（４ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチルジメチルクロロシラン（１．２６ｇ、８．４ｍｍｏｌ）の溶液を加え、室温で１６時間撹拌した。反応物を水で処理し、ジクロロメタンで抽出した。組み合わされた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィー（中性アルミナ、１０％の酢酸エチル：ヘキサン）による精製により、Ｍ１９ｃを得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ２５８．６（Ｍ＋Ｈ）．
【０４８３】
Ｍ１９ｅ．ベンジル２−（２’−（アセトキシメチル）−４’−エチルピペリジン−１’−イル）アセテート
【化１８３】
2020517623.tif 000230
アルゴン下で、０℃でアセトニトリル（１０ｍＬ）中のＭ１９ｃ（０．５０ｇ、１．９４ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（０．６７ｇ、４．８６ｍｍｏｌ）の溶液を、２−ブロモ酢酸ベンジル（０．５３ｇ、２．３３ｍｍｏｌ）で滴下して処理し、室温で６時間撹拌した。反応物を飽和塩化アンモニウム水溶液で処理し、酢酸エチルで抽出した。組み合わされた有機層を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、１０％の酢酸エチル：ヘキサン）による精製により、中間体Ｍ１９ｄを得た。（アルゴンで）脱気されたジクロロメタン（１２ｍＬ）中のＭ１９ｄ（０．３０ｇ、０．７４ｍｍｏｌ）の溶液に、トリフルオロメタンスルホン酸銅（ＩＩ）（０．２６７ｇ、０．７４ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を再度脱気し（１０分）、続いて無水酢酸（０．１８ｇ、１．７８ｍｍｏｌ）を加え、第３の脱気（１０分）を行い、アルゴン下で、室温で２４時間撹拌した。反応物を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で処理し、ジクロロメタンで抽出した。組み合わされた有機層を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、１５％の酢酸エチル：ヘキサン）による精製により、Ｍ１９ｅを得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ３３４．０（Ｍ＋Ｈ）．
【０４８４】
Ｍ１９ｆ．２−（２’−（アセトキシメチル）−４’−エチルピペリジン−１’−イル）酢酸
【化１８４】
2020517623.tif 000231
エタノール（８ｍＬ）中のＭ１９ｅ（０．４０ｇ、１．２ｍｍｏｌ）の溶液に、５％のパラジウム炭素（０．０８ｇ）を加え、反応物を、５時間にわたってバルーン圧力水素下で撹拌した。反応物を、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）に通してろ過した。ろ液を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濃縮して、Ｍ１９ｆを得て、それをさらに精製せずに使用した。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ２４４．１（Ｍ＋Ｈ）．
【０４８５】
Ｍ１９．１−（４’−エチル−１’−（２’’−オキソ−２’’−（ピリジン−２’’’−イルアミノ）エチル）ピペリジン−２’’−イル）メチルアセテート
【化１８５】
2020517623.tif 000232
アルゴン下で、０℃でジクロロメタン（５ｍＬ）中のＭ１９ｆ（０．１０ｇ、０．４１ｍｍｏｌ）の溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（０．１６ｇ、１．２３ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（０．１８７ｇ、０．３９ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を１５分間撹拌し、次に、２−アミノピリジン（０．０４６ｇ、０．４９ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で１６時間撹拌し、次に、水で処理し、ジクロロメタンで抽出した。組み合わされた有機層を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、２５〜３０％の酢酸エチル：ヘキサン）による精製により、Ｍ１９を得た。ＬＣＭＳ（方法８）：保持時間＝２．５８分；ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ３２０．５（Ｍ＋Ｈ）．
【０４８６】
Ｍ２０．ベンジルＮ−（３−（３’−（（（ジエチル（イソプロポキシ）シリル）オキシ）メチル）−４’−（２’’−（（４’’’−メトキシベンジル）アミノ）−２’’−オキソエチル）ピペラジン−１’−イル）−３−オキソプロピル）カルバメート
【化１８６】
2020517623.tif 000233
Ｍ２０ａ．ベンジル（３−（３−（ヒドロキシメチル）−４−（２−（（４−メトキシベンジル）アミノ）−２−オキソエチル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）カルバメート
【化１８７】
2020517623.tif 000234
Ｌ−ＩＮＴ−１ｂ（３４２ｍｇ、１．０６５ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル（５ｍＬ）に溶解させ、０℃に冷却した。反応物を、炭酸カリウム（４０２ｍｇ、２．９１ｍｍｏｌ）及び２−ブロモ−Ｎ−（４−メトキシベンジル）アセトアミド（２５０ｍｇ、０．９６９ｍｍｏｌ）で処理し、室温で一晩撹拌した。反応混合物を水で処理し、酢酸エチルで抽出した。有機相を塩水で洗浄し、乾燥させ（硫酸ナトリウム）、蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、０〜１０％のメタノール：ジクロロメタンで溶離される）による精製により、Ｍ２０ａを得た。ＬＣＭＳ（方法１）：保持時間＝０．９１分；ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ４９９．４（Ｍ＋Ｈ）．
【０４８７】
Ｍ２０ｂ．ベンジルＮ−（３−（３’−（（（クロロジエチルシリル）オキシ）メチル）−４’−（２’’−（（４’’’−メトキシベンジル）アミノ）−２’’−オキソエチル）ピペラジン−１’−イル）−３−オキソプロピル）カルバメート
【化１８８】
2020517623.tif 000235
Ｍ２０ａ（４０ｍｇ、０．０８０ｍｍｏｌ）及びイミダゾール（２７３ｍｇ、４．０１ｍｍｏｌ）を、室温でテトラヒドロフラン（２ｍＬ）に溶解させ、約−５０℃でジメチルホルムアミド（１ｍＬ）及びテトラヒドロフラン（１ｍＬ）中のジクロロジエチルシラン（０．１２０ｍＬ、０．８０２ｍｍｏｌ）の溶液に、数分間にわたって滴下して加えた。得られた溶液を、冷浴から取り出し、室温で１時間撹拌して、Ｍ２０ｂを得て、それをさらに精製せずに使用した。ＬＣＭＳ（方法５）：保持時間＝１．１３分；ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ６０１．３（加水分解されたＭ２０ｂのＭ＋Ｈ）．
【０４８８】
Ｍ２０．ベンジルＮ−（３−（３’−（（（ジエチル（イソプロポキシ）シリル）オキシ）メチル）−４’−（２’’−（（４’’’−メトキシベンジル）アミノ）−２’’−オキソエチル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）カルバメート
【化１８９】
2020517623.tif 000236
２−プロパノール（０．０６１ｍＬ、０．８０２ｍｍｏｌ）を、上記で調製されたＤＭＦ／ＴＨＦ中の粗Ｍ２０ｂの溶液に、室温で滴下して加えた。溶液を室温で２時間撹拌し、次に、濃縮した。分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ  ５μｍ  ３０×５０ｍｍ；方法：７５ｍＬ／分で３．５分の勾配にわたって４５％〜７０％のアセトニトリル／Ｈ２Ｏ及び１０ｍＭのＮＨ４ＯＨ）による精製により、複数の画分を得て、それを濃縮し、急速冷凍し、凍結乾燥させて、Ｍ２０を得た。ＬＣＭＳ（方法５）：保持時間＝１．３５分；ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ６４３．３（Ｍ＋Ｈ）．１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ、ｐｐｍ）：δ：７．２５−７．３９（ｍ，５Ｈ）、７．２２（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）、６．８５−６．９０（ｍ，２Ｈ）、５．０６（ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ、２Ｈ）、４．２７−４．４２（ｍ，２Ｈ）、４．０８−４．１２（ｍ，１Ｈ）、３．７０−３．８４（ｍ，５Ｈ）、３．６１−３．６６（ｍ，１Ｈ）、３．４４−３．５５（ｍ，１Ｈ）、３．３４−３．４３（ｍ，４Ｈ）、３．０３−３．１９（ｍ，２Ｈ）、２．７４−２．８５（ｍ，１Ｈ）、２．３９−２．６６（ｍ，４Ｈ）、１．１５（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ、６Ｈ）、０．９２−０．９８（ｍ，６Ｈ）、０．５２−０．６３（ｍ，４Ｈ）．
【０４８９】
表２３中の種は、Ｍ２０：
【化１９０】
2020517623.tif 000237
の合成に使用される方法と類似の方法を用いて調製した。
【０４９０】
【表４３】
2020517623.tif 000238
【０４９１】
【表４４】
2020517623.tif 000239
【０４９２】
【表４５】
2020517623.tif 000240
【０４９３】
【表４６】
2020517623.tif 000241
【０４９４】
実施例８
インビトロ薬物放出試験
８−１．ヒドロゲル−薬物コンジュゲートからのブロルシズマブの放出
【化１９１】
2020517623.tif 000242
式中、Ｙが、以下の表２から選択される。
【０４９５】
ヒドロゲルコンジュゲートＣ１ａ、Ｃ２ａ、Ｃ３ａ、及びＣ４ａからのブロルシズマブの放出が、図４Ａに示されるように起こる。この試験において、一連のヒドロゲル−ブロルシズマブ−コンジュゲートを、１×ＰＢＳ中で３７℃に保持して、トレースレスリンカー切断反応後の薬物の放出を評価した。これらの反応物を、様々な時点で採取し、分析して、上清中の放出されたブロルシズマブの濃度を決定した。
【０４９６】
各ヒドロゲル（約５０μＬ；秤量によって決定される正確な量、ヒドロゲルの仮定密度＝１ｇ／ｍＬ）を、Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ（登録商標）インサート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｉｎｃ；ポリカーボネート膜、１０μｍの厚さ、６．５ｍｍの直径、０．４μｍの細孔径）に加えた。プレートのウェルに１ｍＬ１×ＰＢＳを充填し、ヒドロゲル含有インサートをウェルに入れた。３つのウェルを、各ヒドロゲル試料のために準備した。プレートにしっかりと蓋をし、湿潤環境中で３７℃に保持した。
【０４９７】
収集緩衝液の試料を、最大で１８０日間にわたって様々な時点でウェルから取り出した。各時点で及び各ウェルについて、Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ（登録商標）インサートを、ウェルから取り出し、収集緩衝液の全体積を清浄な管に移し、秤量し、次に、ある時点の試料を、収集緩衝液（０．１０ｍＬ）から取り出し、最終的な分析まで４℃で貯蔵した。収集緩衝液に１×ＰＢＳを補充して、収集緩衝液体積を１ｍＬに戻し、次に、収集緩衝液をウェルに戻した。次に、インサートを、そのウェルに戻し入れ、プレートをインキュベータに戻した。
【０４９８】
試験の完了時に、その時点の試料のタンパク質濃度（その時点での各ウェルにおけるタンパク質濃度を表す）を、ブロルシズマブから生成される標準曲線とともにタンパク質アッセイキット（ＤＣ（商標）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ  ＩＩ、ＢｉｏＲａｄ  ５０００１１２）を用いて決定した。各時点の試料を、デュプリケートで分析し、結果を平均した。所与の時点での所与のウェル中のタンパク質の総量を、その時点でのタンパク質濃度に、測定された体積（１ｇ／ｍＬの仮定密度）を乗算することによって計算した。所与の時点で所与のウェルから取り出されたタンパク質の量を、その時点でのタンパク質濃度に、取り出された体積（０．１０ｍＬ）を乗算することによって計算した。その時点まで各ヒドロゲルから各ウェル中に放出された累積ブロルシズマブを、各時点でのウェル中のブロルシズマブの総量を、その時点の前に各時点でそのウェルから取り出されたブロルシズマブの累積量に加算することによって計算した。所与の時点までコンジュゲートＣ１ａ、Ｃ２ａ、Ｃ３ａ、及びＣ４ａから放出されたタンパク質の累積パーセントが、図４Ｂに示される。放出されたブロルシズマブの累積パーセントが、所与の時点で放出された累積ブロルシズマブを、最初のヒドロゲル試料中に存在する総ブロルシズマブで除算し、１００を乗算することによって計算される。プラトー値に達した、測定された放出された薬物の量を１００％と設定することによって、データが正規化される。図４Ｂから明らかであるように、担体からのブロルシズマブの放出が、数か月の期間にわたって持続され、放出速度が、コンジュゲートに使用されるトレースレスリンカーの構造によって影響される。
【０４９９】
時点ｔでのウェル中のタンパク質の濃度：
［Ｐ］（ｔ）
時点ｔでのウェル中の総体積：
Ｖ（ｔ）
時点ｔでのウェル中の総タンパク質：
Ｐｗｅｌｌ（ｔ）＝［Ｐ］（ｔ）×Ｖ（ｔ）
時点ｔでウェルから取り出されたタンパク質：
Ｒ（ｔ）＝［Ｐ］（ｔ）×０．１ｍＬ
時点ｔまでヒドロゲルから放出された累積タンパク質：
【数５】
2020517623.tif 000243
【０５００】
８−２．ヒドロゲル−薬物コンジュゲートからのＤ２の放出
インビトロ放出アッセイを、６．５ｍｍのＴｒａｎｓｗｅｌｌ（登録商標）インサート（８μｍの細孔径、Ｃｏｒｎｉｎｇ）において行った。薬物結合ＨＡヒドロゲルの１００μＬのアリコートを、１００μＬのウシ滑液（ＢＳＦ、Ｂｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎ  ＩＶＴ製、以下の抗菌剤：１００Ｕ／ｍＬのペニシリン、１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）及び１％のファンギゾン（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）が補充されている）又は１００μＬのＰＢＳと共に各Ｔｒａｎｓｗｅｌｌインサートに加えた。インサート中のゲル及び放出培地の最初の総体積は、２００μＬであった。ＢＳＦ（プラス抗菌剤）又はＰＢＳのいずれか９００μＬを、Ｔｒａｎｓｗｅｌｌプレートのウェルにピペットで入れ、ヒドロゲル含有インサートをウェルに入れ、プレートを、３７℃、５％のＣＯ２で、加湿されたインキュベータ中でインキュベートした（２つのインサートを、各ヒドロゲル試料について準備した）。各時点で、Ｔｒａｎｓｗｅｌｌインサートを、１０００μＬの新鮮なＢＳＦ（プラス抗菌剤）又はＰＢＳが充填された新しいウェルに移し、古いウェルの内容物を取り出し、アッセイするまで−８０℃で貯蔵した。
【０５０１】
放出されたＤ２の定量化を、サンドイッチＥＬＩＳＡによって決定した。プロトコルは、以下の修正を伴いヒトＩＧＦ−１  ＤｕｏＳｅｔ  Ｅｌｉｓａ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｓｙｓｔｅｍ（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ）において記載されるものと同様である：プレート準備のために、９６ウェルフォーマットプレート（Ｃｏｓｔａｒ）を、ＢｕｐＨ  Ｃａｒｂｏｎａｔｅ−Ｂｉｃａｒｂｏｎａｔｅ  Ｂｕｆｆｅｒ  Ｐａｃｋ（Ｔｈｅｒｍｏｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）中で希釈された捕捉抗体（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）で被覆し、４℃で一晩インキュベートした。全ての他の試薬は、ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ）、洗浄緩衝液ＫＰＬ（Ｋｉｒｋｅｇａａｒｄ  ＆  Ｐｅｒｒｙ）及びブロッキング溶液ＫＰＬ乳希釈剤／ブロッキング（Ｋｉｒｋｅｇａａｒｄ  ＆  Ｐｅｒｒｙ）を除いてＲ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ製であった。検出抗体を１．５時間インキュベートした。ＰＢＳ又はＢＳＦを伴うインキュベーション中にヒドロゲルＣ１０、Ｃ１１、及びＣ１２から放出されたタンパク質の累積量が図５に示される。所与の時点でウェル中に放出されたタンパク質の量を、その時点での放出培地（ＢＳＦ又はＰＢＳ）中のタンパク質濃度に、放出培地の総体積（１．１ｍＬ）を乗算することによって計算した。所与の時点まで各ヒドロゲルから放出された累積タンパク質を、その時点で放出されたタンパク質の量（各ヒドロゲルについての２つのウェルからの平均値）を、その時点の前に各時点で放出されたタンパク質の累積量に加算することによって計算した。図５から明らかであるように、担体からのＤ２の放出は、数週間の期間にわたって持続され、放出速度は、コンジュゲートに使用されるトレースレスリンカーの構造によって影響される。
【０５０２】
Ｄ２は、ヒトＩＧＦ−１受容体を過剰発現するＮＩＨ３Ｔ３細胞内のＩＧＦ１受容体のリン酸化を引き起こす薬物である。放出されたＤ２の生物学的活性を、ヒトＩＧＦ−１受容体を過剰発現するＮＩＨ３Ｔ３細胞を個々の時点（上述されるように収集された）から薬物含有放出培地を用いてインキュベートした際に引き起こされたＩＧＦ１受容体のリン酸化を定量化することによって評価した。ＩＧＦ−１受容体リン酸化のレベルを、細胞を溶解させ、溶解物をＥＬＩＳＡに供することによって決定した。細胞を、ＤＭＥＭ高グルコース、１０％のＦＣＳ、１％のピルビン酸ナトリウム、２ｍＭのＬ−グルタミン、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン、及び１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン中で、６０００個の細胞／ウェル（９６ウェルプレートフォーマット）で播種し、５％のＣＯ２で、加湿されたインキュベータ中３７℃で一晩インキュベートした。次に、細胞を、３７℃、５％のＣＯ２で１．５時間にわたって飢餓培地（ＤＭＥＭ高グルコース、０．１％のＢＳＡ、１％のピルビン酸ナトリウム、２ｍＭのＬ−グルタミン、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン、１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン）中で血清飢餓状態にしてから、３７℃、５％のＣＯ２で１時間にわたって新鮮なＤ２標準又は薬物含有放出培地を用いてインキュベートした。活性の低下がないものと仮定して、標準曲線の範囲内のＤ２濃度を達成するために、細胞の添加前に、薬物含有放出培地を飢餓培地で希釈した。各試料の適切な希釈係数を、上の段落に記載される方法を用いてサンドイッチＥＬＩＳＡによって予め測定された放出培地中のＤ２濃度に基づいて決定した。細胞を、４℃で水平シェーカーにおいて３０〜４５分間にわたって１×トリス−緩衝生理食塩水（５０ｍＭのトリスＨＣｌ、ｐＨ７．５、１５０ｍＭのＮａＣｌ）、１％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、５ｍＭのＥＤＴＡ、１×プロテアーゼホスファターゼ阻害剤（Ｔｈｅｒｍｏｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）中で溶解させた。試料を−８０℃で一晩貯蔵した。ＩＧＦ−１Ｒリン酸化レベルを、以下の修正を伴いＤｕｏＳｅｔ  ＩＣヒトリン酸化ＩＧＦ−１Ｒ（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ）を用いてＥＬＩＳＡによって分析した：捕捉抗体（Ｒ＆Ｄ  ＭＡＢ３９１）を、ＰＢＳ中で４ｕｇ／ｍｌに希釈し、ウェルを、３００ｕｌ／ウェルのＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、５２４６５３）で洗浄し、ウェルを、２００ｕｌ／ウェルの、ＰＢＳ中１％のＢＳＡでブロックし、リン酸化を、抗体ＨＲＰ−抗ホスホチロシン（Ｒ＆Ｄ、ＨＡＭ１６７６）を用いて検出し、発光シグナルを、化学発光基質（Ｐｉｅｒｃｅ、３７０６９）を用いて検出した。放出されたＤ２で処理された細胞内の測定されたＩＧＦ−１Ｒリン酸化レベルを達成するのに必要な新鮮なＤ２の当量濃度を、標準曲線から内挿し、次に、希釈に対して補正した。コンジュゲートＣ８からＢＳＦ放出培地中に放出されたＤ２について図９に示される得られた値は、細胞内のＩＧＦ−１Ｒリン酸化の観察されたレベルを示し得る新鮮なＤ２の当量濃度を表す。図９から明らかであるように、コンジュゲートＣ８からの生物学的活性Ｄ２の放出は、７日間の期間にわたって持続される��
【０５０３】
８−３．リンカー−薬物付加物：Ｌ８Ｄ４からのＤ４の放出
【化１９２】
2020517623.tif 000244
Ｌ８Ｄ４の１ｍｇ／ｍＬの溶液を、１×ＰＢＳ中で調製した。付加物溶液のｐＨを測定し、６．９であることが分かった。溶液を６００ｒｐｍで振とうしながら４０℃のＴｈｅｒｍｏｍｉｘｅｒに入れた。アリコートを、溶解後の以下の時点でＨＰＬＣ分析のために取り出した：０時間、２時間、４時間、２１．５時間、２８．５時間、４３．５時間、６７．５時間、１００．５時間、１８０．５時間、及び２６６．５時間。
【０５０４】
溶液の組成物を、ＨＰＬＣ（以下の方法）によって各時点で評価した。親（Ｌ８Ｄ４、（Ｍ＋２Ｈ）２＋についてｍ／ｚ＝＋９５２．２）、中間体（Ｌ８Ｄ４−ＩＮＴ、（Ｍ＋２Ｈ）２＋についてｍ／ｚ＝＋９１６．４）、及び放出された薬物（Ｄ４、Ｍ＋Ｈについてｍ／ｚ＝＋１５３７．９）ピークを、ＭＳ検出によって割り当て、各種の相対量を、２１４ｎｍにおけるＵＶ吸光度を用いて生成されるクロマトグラムからのピークの積分によって決定した。溶液中に存在する各種のパーセンテージを、それぞれのピーク面積（Ｌ８Ｄ４、Ｌ８Ｄ４−ＩＮＴ又はＤ４のいずれか）を、Ｌ８Ｄ４、Ｌ８Ｄ４−ＩＮＴ、及びＤ４についての３つのピーク面積の和で除算し、結果に１００を乗算することによって計算した。溶液中に存在する各種のパーセントを、時間に対してプロットし（図６）、親Ｌ８Ｄ４についての分解の半減期（１日）及びＤ４についての放出の半減期（８日）を、放出及び分解の一次速度則を仮定して、曲線適合ソフトウェアを用いて推定した。図６から明らかであるように、トレースレスリンカーからのＤ４の放出は、１１日の期間にわたって持続される。観察される反応生成物は、図１に示されるトレースレスリンカー切断機構と一致している。
【０５０５】
分析ＨＰＬＣ−ＭＳ条件：ＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８；粒径：１．７μｍ；カラムサイズ：２．１×５０ｍｍ；溶離剤／勾配：２〜９８％のＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ／４．４分（０．１％のギ酸を含有するＣＨ３ＣＮ及び０．１％のギ酸を含有するＨ２Ｏ）；流量：１．０ｍＬ／分；カラム温度：５０℃。
【０５０６】
８−４ａ．インビトロのＭ１〜Ｍ１９モデルトレースレスリンカー−薬物コンジュゲートについての放出試験プロトコル
この試験において、薬物が低分子量アミン含有化合物である、一連のモデルトレースレスリンカー−薬物コンジュゲートを、１×ＰＢＳ中で３７℃に保持した。これらの反応物を、様々な時点で採取し、分析して、残っている出発化合物の濃度、並びに放出されたアミン含有薬物（ｐ−メトキシベンジルアミン、２−アミノ−ピリジン、ｐ−メトキシアニリン、又はＮ−メチル−ｐ−メトキシベンジルアミン）の濃度を決定した。親の分解についての半減期及びアミン含有薬物についての放出の半減期を計算した。
【０５０７】
Ｍ１〜Ｍ１９からのアミン含有薬物放出速度の推定のための方法
放出されたアミン含有薬物（４−メトキシベンジルアミン、２−アミノピリジン、ｐ−メトキシアニリン、及びＮ−メチル−ｐ−メトキシベンジルアミン）についての一連の標準溶液と同様に、各化合物Ｍ１〜Ｍ１９を、ＤＭＦ中の０．１Ｍのストック溶液として調製した。各溶液の３５μＬのアリコートを、３．４６５ｍＬのＰＢＳに加えて、各コンジュゲート又はアミン含有薬物の１ｍＭの溶液を得た。各１ｍＭの溶液の１５０μＬのアリコートを、ポリプロピレンインサートを備えたＬＣＭＳバイアル中に分配し；２つのバイアルを、各時点での各化合物のために準備した。
【０５０８】
バイアルを、３７℃でインキュベートした。各時点（例えば、０、１、５、７、１４、２１、２８、３５、４９、及び５６日）で、各コンジュゲートの２つのバイアルを、インキュベータから取り出し、さらなる加水分解を避けるために−２０℃で冷凍した。全ての試料を解凍し、後述される分析ＨＰＬＣ方法を用いて、放出試験の完了後に１つのバッチにおいて分析した。各試料を２回分析した。アミン含有薬物の対照溶液を、分析の前に調製し、３７℃での事前のインキュベーションなしの状態で分析した。
【０５０９】
試験８．４ａのための分析ＨＰＬＣ−ＭＳ条件
ＨＰＬＣ：Ｔｈｅｒｍｏ  Ａｃｃｅｌａ  ＨＰＬＣ及びオートサンプラ；オートサンプラトレー温度：８℃；注入量：２０μＬ；カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｋｉｎｅｔｅｘ  Ｃ１８、２．１×５０ｍｍ、２．６μｍ。カラム温度：周囲；移動相：Ａ＝水中０．１％のギ酸；Ｂ＝アセトニトリル中０．１％のギ酸；流量：２００μＬ／分。勾配（時間／％Ｂ）：０／０、３／０、１０／８０、１５／８０、１５．１／０、１８／０。
【０５１０】
ＵＶ：Ｔｈｅｒｍｏ  Ａｃｃｅｌａ  ＰＤＡ；走査範囲：２００〜４００ｎｍ；波長ステップ：１ｎｍ；サンプルレート：２０Ｈｚ；フィルタ帯域幅：９ｎｍ；ＭＳ：Ｔｈｅｒｍｏ  ＬＴＱ  ＸＬ；イオン化モード：ＥＳＩ；スプレー電圧：時間０〜１分で０Ｖ、次に４ｋＶに切り替える；キャピラリー温度：２５０℃；分流弁：ＬＣ溶出液を時間０〜１分で廃棄し、次に分流ＭＳ；質量範囲：１２０〜８００Ｄａ。
【０５１１】
溶液の組成物を、ＨＰＬＣを用いて各時点で評価した。親、中間体及び放出されたアミン含有薬物ピークを、ＭＳ検出によって割り当て、各種の相対量を、２７２ｎｍにおけるＵＶ吸光度検出を用いて生成されるクロマトグラムからのピークの積分によって決定した。０日目の各化合物Ｍ１〜Ｍ１９についての平均ピーク面積に、１００の正規化値を割り当てた。放出されるアミン含有薬物（例えば、ｐ−メトキシベンジルアミン）の標準については、各標準の平均ピーク面積に、１００の正規化値を割り当てた。検出される各種についての曲線下絶対面積を、これらの値と比較した。試行毎の（ｒｕｎ−ｔｏ−ｒｕｎ）ピーク面積の再現性は、典型的に、強いシグナルについては２０％以内であり、弱いシグナルについてはかなり悪くなるため、１００を超える正規化シグナルが、１００又は１００に近い値（おそらく、実験誤差の範囲内で９０〜１００）に相当するようである。溶液中に存在する親及びアミン含有薬物のパーセンテージを、関連するピーク面積を、同じ種について１００の正規化値を割り当てられた平均面積で除算し、結果に１００を乗算することによって計算した。溶液中に存在する親及びアミン含有薬物のパーセンテージを、時間に対してプロットし、親についての分解の半減期及びアミン含有薬物についての放出の半減期を、一次速度則を仮定して、曲線適合ソフトウェアを用いて推定した。１日単位で四捨五入した計算された半減期が、表２５に報告される。
【０５１２】
８−４ｂ．Ｍ２０〜Ｍ２７インビトロ放出試験
この試験において、一連のモデルトレースレスリンカー−薬物コンジュゲートＭ２０〜Ｍ２７を、水溶液中で３７℃に保持した。これらの反応物を様々な時点で採取し、分析して、残っている出発化合物の濃度を決定した。分析方法は、アミン含有薬物の濃度を決定するように最適化されていなかった。親についての分解の半減期を計算した。
【０５１３】
Ｍ２０〜Ｍ２７についてのコンジュゲート分解速度の推定のための方法
各化合物Ｍ２０〜Ｍ２７を、ＤＭＦ中の０．１Ｍのストック溶液として調製した。各溶液の３５μＬのアリコートを、３．４６５ｍＬの２：１のＤＭＦ：ＰＢＳ（化合物Ｍ２４については：３：１のＤＭＦ：ＰＢＳ）に加えて、各化合物Ｍ２０〜Ｍ２７の１ｍＭの溶液を得た。反応バイアルを３７℃に保持した。各時点（例えば、０、１、３、８、１４、２１、２８、３５、４９、５６、７０、９２日）で、分析試料を、各１ｍＭの溶液から１５０μＬを収集し、７５μＬのＤＭＦで希釈することによって調製した。２つの分析試料を、各時点で各反応バイアルから収集し、４℃で貯蔵した。全ての試料を、放出試験の完了後に１つのバッチにおいて分析した。各試料を、後述される分析ＨＰＬＣ方法を用いて２回分析した。
【０５１４】
反応溶液の組成物を、ＨＰＬＣを用いて各時点で評価した。化合物Ｍ２０〜Ｍ２７ピークをＭＳ検出によって割り当て、２７２ｎｍにおけるＵＶ吸光度検出を用いて生成されるクロマトグラムからのピークの積分を決定した。０日目の各化合物Ｍ２０〜Ｍ２７についての平均ピーク面積に、１００の正規化値を割り当てた。各時点における曲線下絶対面積を、これらの値と比較した。試行毎のピーク面積の再現性は、典型的に、強いシグナルについては２０％以内であり、弱いシグナルについてはかなり悪くなるため、１００を超える正規化シグナルが、１００又は１００に近い値（おそらく、実験誤差の範囲内で９０〜１００）に相当するようである。溶液中に残っている化合物Ｍ２０〜Ｍ２７のパーセンテージを、関連するピーク面積を、１００の正規化値を割り当てられた平均面積で除算し、結果に１００を乗算することによって計算した。溶液中に存在する化合物Ｍ２０〜Ｍ２７のパーセンテージを、時間に対してプロットし、分解の半減期を、一次速度則を仮定して、曲線適合ソフトウェアを用いて推定した。１日単位で四捨五入した計算された半減期が、表２５に報告される。
【０５１５】
試験８．４ｂのための分析ＨＰＬＣ−ＭＳ条件
全ての設定は、以下を除いて試験８．４ａについての分析ＨＰＬＣ−ＭＳ条件と同じである：移動相：Ａ＝水中の５ｍＭの水酸化アンモニウム；Ｂ＝アセトニトリル中の５ｍＭの水酸化アンモニウム；流量：４００μＬ／分：勾配（時間／％Ｂ）：０／１０、０．５／１０、４／８０、８／８０、８．１／１０、１２／１０。分流弁は、試料注入後０．５分の時点で切り替えた。
【０５１６】
【表４７】
2020517623.tif 000245
【０５１７】
実施例９
９−１．ヒドロゲル−薬物コンジュゲートからのブロルシズマブの放出
これらの実施例において、ヒドロゲル薬物コンジュゲートを、２つの異なる用量でウサギの硝子体内に投与し、続いて３２日後にＶＥＧＦ投与を行った。３４日後、ウサギの眼をイメージングによって調べて、網膜血管漏出の阻害の程度を評価した。眼の硝子体の液体部分におけるブロルシズマブの最終的な曝露も決定した。
【０５１８】
ブロルシズマブの１０．２ｍｇ／ｍＬの充填量で調製されたヒドロゲル−薬物コンジュゲートＣ２ｂを、投与前に希釈して、６ｍｇ／ｍＬ（Ｃ２ｂ１）及び０．６ｍｇ／ｍＬ（Ｃ２ｂ２）のブロルシズマブ充填量を有する試料を得た。加えられる１×ＰＢＳの量を、下式によって計算した：（ＰＢＳ希釈剤（ｍＬ））＝［（総薬物（ｍｇ）／所望の薬物充填量（ｍｇ／ｍＬ）］−（コンジュゲートの初期体積（ｍＬ）。
【０５１９】
６ｍｇ／ｍＬ（Ｃ２ｂ１）のブロルシズマブ充填量を有するコンジュゲートを調製するために：３ｍＬのシリンジ中の０．９ｍＬのＣ２ｂに、０．６３ｍＬの１×ＰＢＳを加えた。シリンジに蓋をし、激しく振とうして、均質化した。これにより、Ｃ２ｂ１中のタンパク質充填量＝９．１８ｍｇのブロルシズマブ／１．５３ｍＬ＝６．０ｍｇ／ｍＬのブロルシズマブを有する１．５３ｍＬの総試料体積が得られた。
【０５２０】
プランジャを取り外し、所望の体積のＣ２ｂ１を充填することによって、コンジュゲートＣ２ｂ１を、３０Ｇ針が取り付けられた０．５ｍＬのインスリンシリンジ中に投与のために分配した。シリンジの穏やかな操作によって気泡を取り除いた。
【０５２１】
０．６ｍｇ／ｍＬ（Ｃ２ｂ２）のブロルシズマブ充填量を有するコンジュゲートを調製するために：３ｍＬのシリンジ中の０．１ｍＬのＣ２ｂ１に、０．９ｍＬの１×ＰＢＳを加えた。シリンジに蓋をし、激しく振とうして、均質化した。これにより、Ｃ２ｂ２中のタンパク質充填量＝０．６０ｍｇのブロルシズマブ／１．０ｍＬ＝０．６ｍｇ／ｍＬのブロルシズマブを有する１．０ｍＬの総試料体積が得られた。
【０５２２】
プランジャを取り外し、所望の体積のＣ２ｂ２を充填することによって、コンジュゲートＣ２ｂ２を、３０Ｇ針が取り付けられた０．５ｍＬのインスリンシリンジ中に投与のために分配した。シリンジの穏やかな操作によって気泡を取り除いた。
【０５２３】
雄ダッチベルテッド種ウサギ（体重約１．６〜２ｋｇ）の眼への４００ｎｇ／眼のヒトＶＥＧＦ（ｈＶＥＧＦ）の硝子体内投与により、処理の４８時間後に最大漏出が生じた。この血管漏出は、ラニビズマブ、ベバシズマブ又はブロルシズマブなどの抗ＶＥＧＦ分子の事前のＩＶＴ投与によって完全に阻害され得る。抗ＶＥＧＦ分子の投与とｈＶＥＧＦ接種との間の間隔は、抗ＶＥＧＦ分子の作用の持続時間を決定する。この試験において、ｈＶＥＧＦ接種の３２日前（イメージングの３４日前）に、抗ＶＥＧＦ担体（溶液中で又はヒドロゲル−コンジュゲートとしてのいずれか）又はブランクヒドロゲル（陰性対照）を、硝子体内に注射した。各ウサギコホートは、同じ抗体／構築物を同時に注射される３〜５匹の動物（６〜１０の眼）からなっていた。各抗ＶＥＧＦ構築物によって誘発される血管漏出の阻害が、ブランクヒドロゲル処理群において観察される血管漏出と比べて計算される。
【０５２４】
雄ダッチベルテッド種ウサギ（体重約１．６〜２ｋｇ）の眼を、局所的な１％のシクロペントレート及び２．５％のフェニレフリンで拡張させ、角膜に、局所的な０．５％のプロパラカインで麻酔をかけた。次に、ウサギに、ケタミン／キシラジン混合物（１７．５〜３５及び２．５〜５ｍｇ／ｋｇ）の筋肉内注射によって麻酔をかけた。外科用顕微鏡による直接可視化で、５０μＬの処理剤を硝子体内に注射した。３０ゲージ針を、硝子体の中央に縁から約２ｍｍ上外側に挿入した。ウサギの眼を、注射による合併症（例えば、出血、網膜剥離又はレンズ損傷）について調べ、次に、手順を他眼において繰り返した。全ての試験について抗生物質軟膏を両眼に適用した。ヒドロゲル−薬物コンジュゲートの最初の注射の３２日後の時点で、４００ｎｇの組み換えｈＶＥＧＦを、ウサギの眼の硝子体内に注射した。ヒトＶＥＧＦ（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ；ｃａｔ  ＡＦ  １００−２０、Ｌｏｔ  ０５０８ＡＦ１０）を、滅菌した０．９％の生理食塩水で希釈した。ＶＥＧＦ接種の硝子体内注射の４８時間後、ウサギ網膜血管系を、後述されるようにイメージングした。
【０５２５】
ヒトＶＥＧＦに誘発される網膜血管変化を、静脈内蛍光色素投与後の網膜血管の画像の取得によって定量化した。フルオレセイン送達後に取得した画像を用いて、血管透過性を決定した。定量的なフルオレセイン漏出値の生成はまた、血管を標識するために選択される蛍光色素（フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）コンジュゲートデキストラン）のイメージングを必要とした。眼の画像を、ＶＥＧＦの４８時間後に取得した。画像は、視神経に隣接する鼻の髄腔（ｎａｓａｌ  ｍｅｄｕｌｌａｒｙ  ｒａｙ）に対して３０度レンズを用いて取得された、平均最大で４０の登録された走査型レーザー検眼鏡（ＳＬＯ）画像であった。６モードのＳｐｅｃｔｒａｌｉｓ（登録商標）（Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ）からのフルオレセインチャネルを、全ての画像取得に使用した。イメージングの前に、ウサギに、１〜２滴の１％のシクロペントレート及び１〜２滴の２．５％のフェニレフリンを拡張のために局所投与し；０．５％のプロパラカインも、局所麻酔として適用した。その後、ウサギに、上述されるように麻酔をかけた。血管を、画像取得の約５分前に、辺縁耳静脈中へのＦＩＴＣコンジュゲート２０００ｋＤデキストラン（ＳＩＧＭＡ（登録商標））の１ｍＬの溶液の静脈注射で標識した。使用されるＦＩＴＣ−デキストランの濃度（３５〜７０ｍｇ／ｍＬ）を、高品質画像を生成するのに必要な蛍光シグナルに基づいて各ロットについて経験的に選択した。その後、標識された網膜血管系の画像を取得した。次に、網膜血管透過性を、辺縁耳静脈中への０．３ｍＬの１０％のフルオレセイン溶液の注射によって評価した。次に、画像を、片眼についてＩＶ注射の３分後に取得し、続いて他眼についてＩＶフルオレセイン注射の約４〜６分後に画像を取得した。
【０５２６】
血管透過性に対するＶＥＧＦの影響を、３〜６分のフルオレセイン画像から評価した。分析を、ＭＡＴＬＡＢ（登録商標）（Ｍａｔｈｗｏｒｋｓ（登録商標））を用いてこの目的のために開発された特注設計のソフトウェアにより定量的に行った。不十分な画像品質の場合、顕著な炎症があった場合、又は注射による問題があった場合、脱マスキングの前に除外を行った。
【０５２７】
フルオレセイン漏出を、後述される方法を用いた画像処理技術を用いて定量化した。
【０５２８】
まず、ＶＥＧＦ後のＦＩＴＣ−デキストラン及びフルオレセイン画像を、両方の画像に共通の血管特徴を用いて互いに整列し、次に：
１．次に、髄腔の外側の領域を、分析のために不十分な画像品質を有する局部的な領域とともに、共登録された（ｃｏ−ｒｅｇｉｓｔｅｒｅｄ）画像から切り取った。
２．網膜血管内の対象とするいくつかの領域を、両方の画像において描写し、１つの画像の強度を、対象とする領域内のシグナルが両方の画像において等しくなるまで増加させた（正規化）。
３．整列されたＦＩＴＣ−デキストラン画像を、溢出したフルオレセインで構成される画像を生じるフルオレセイン漏出画像から引いた。
４．フルオレセイン漏出を、溢出した色素画像において対象とする切り取られた領域に含まれる画素の平均強度として各眼について報告した。
【０５２９】
各群におけるフルオレセイン漏出の阻害を、陰性対照群に対して計算した。統計的分析を、ダネットの多重比較検定とともに一元配置分散分析を用いて行った。
【０５３０】
測定された蛍光シグナルは、血管漏出に比例する。有効性が、生理食塩水又は他の陰性対照（ブランクヒドロゲルなど）注射を投与された動物において観察されるシグナルと比べた測定された蛍光シグナル強度の低下として定義される。平均蛍光シグナルのより低い値は、漏出のより高い阻害、ひいてはより高い有効性に相当する。
【０５３１】
図７Ａに示されるこの試験からのデータは、陰性対照（ヒドロゲルＨ１ｂ）と比較して、ヒドロゲル−薬物コンジュゲートＣ２ｂの両方の投与（Ｃ２ｂ１及びＣ２ｂ２）によりフルオレセイン漏出の強い阻害を示す。同様の強い阻害は、陽性対照（１０００μｇ／眼のブロルシズマブ）についても観察される。より低い用量のブロルシズマブ（３００μｇ／眼）は、用量を合わせたヒドロゲル−薬物コンジュゲート（Ｃ２ｂ１）又は１０倍低い用量のヒドロゲル−薬物コンジュゲート（Ｃ２ｂ２）のいずれかよりかなり低い、フルオレセイン漏出の部分的な阻害を示したに過ぎなかった。
【０５３２】
９−２．ウサギ硝子体における薬物曝露
Ｃ２ｂ１及びＣ２ｂ２を投与された前のＶＥＧＦ接種試験からのウサギを用いて、硝子体液中の最終的な薬物レベルを評価した。
【０５３３】
血清及び眼を、最終的な時点でウサギから収集した。ウサギの眼を解剖して、硝子体液を単離した。試料を、さらなる処理又は分析の前に、−８０℃で貯蔵した。硝子体液を、以下のような「液体」及び「ゲル」硝子体液画分へとさらに分離した。硝子体液を解凍し、固体様のゲル硝子体液は、プラスチック製の１０００μＬのピペット先端を用いて、試料からの液体硝子体液から物理的に分離した。残りの体積は、硝子体液の「液体」画分と見なされ、その分析が、図７Ｂに示される。
【０５３４】
Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）３８４ウェルＥＬＩＳＡプレート（カタログ番号Ｌ２１ＸＡ−４）を、ＰＢＳ中のブロルシズマブＶＨ及びＶＬを結合するリンカーに対する１５μＬ（１μｇ／ｍＬ）のウサギモノクローナル抗体で被覆し、４℃で一晩インキュベートした。プレートを、８０μＬのＴＢＳＴ（トリス−緩衝生理食塩水、ｐＨ７．５、０．０５％のＴｗｅｅｎ  ２０）で３回洗浄し、４０μＬのブロッキングバッファー（ＰＢＳ中５％のＢＳＡ）でブロックした。ＢＳＡは、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ（カタログ番号８２０４５２）又はＲｏｃｈｅ（カタログ番号０３  １１６  ９６４  ００１）のいずれかから購入した。ブロッキングのためのインキュベーション時間は、室温で２時間又は４℃で一晩であった。次に、プレートを８０μＬのＴＢＳＴで３回洗浄した。試料を、希釈剤（トリス−緩衝生理食塩水、ｐＨ７．５中の２％のＢＳＡ、０．１％のＴｗｅｅｎ−２０、０．１％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００）と混合し、次に、試料の１５μＬのアリコートを、穏やかに振とうしながら室温で１時間にわたってＭＳＤ  ＥＬＩＳＡプレートにおいてインキュベートした。次に、プレートを、ＴＢＳＴで３回洗浄した。検出抗体、ブロルシズマブＶＨ（配列番号２）及びＶＬ（配列番号１）を結合するリンカー（配列番号３）に対するスルホタグ化ウサギモノクローナル抗体の１５μＬ（０．５μｇ／ｍＬ）のアリコートを、穏やかに振とうしながら室温で１時間にわたって各ウェルに加えた。スルホタグを、ＭＳＤ標識キット（ＭＳＤ  Ｇｏｌｄ  Ｓｕｌｆｏ−ｔａｇ  ＮＨＳ−Ｅａｓｔｅｒ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ  Ｐａｃｋ  １カタログＲ３１ＡＡ−１）におけるプロトコルと同様に、ブロルシズマブＶＨ及びＶＬを結合するリンカーに対するウサギモノクローナル抗体にコンジュゲートした。１時間後、プレートを、８０ｍＬのＴＢＳＴで３回洗浄した。ＭＳＤリード緩衝液Ｔ（ＭＳＤカタログ番号Ｒ９２ＴＣ−２）を、水で１×濃度に希釈し、３７．５μＬの１×ＭＳＤリード緩衝液Ｔを、各ウェルに加えた。プレートをＭｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｍ６０００検出器において読み取った。ヒドロゲルからのブロルシズマブ回収レベルを定量化するために、精製されたブロルシズマブを標準として使用した。
【０５３５】
精製されたブロルシズマブを用いた標準曲線が、以下のように生成された。１２点標準曲線が、５００ｎｇ／ｍＬの出発濃度で、ブロルシズマブをＥＬＩＳＡ希釈剤中で２倍に希釈することによって生成された。Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ分析ソフトウェア（Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ４．０）を、データ分析に用いた。未加工電気化学発光（ＥＣＬ）シグナル及びブロルシズマブ濃度を、ｘ軸上にブロルシズマブの濃度のｌｏｇ及びｙ軸上に未加工ＥＣＬ単位のｌｏｇをプロットすることによって標準曲線を生成するように変換した。最終的なブロルシズマブ濃度を、標準曲線から内挿されたブロルシズマブ値に、適切な希釈係数を乗算することによって決定した。標準曲線の線形範囲内のＥＣＬシグナル値のみを使用した。
【０５３６】
図７Ｂ中の結果は、陰性対照（Ｈ１ｂ）及び溶液投与ブロルシズマブの両方の用量と比較して、ヒドロゲル−薬物コンジュゲートＣ２ｂ（Ｃ２ｂ１及びＣ２ｂ２）の両方の用量を投与されたウサギからの液体硝子体液中で有意に高いレベルのブロルシズマブを示す。（グラフ表示の目的のため、０．１ｎｇ／ｍＬの値を、薬物検出がゼロの試料に割り当てたことに留意されたい）。
【０５３７】
９−３．コンジュゲートＣ１３からのＤ４のインビボ放出
げっ歯類モデルにおいてヒドロゲル薬物コンジュゲートＣ１３から放出されたインビボペプチドの評価。
全ての試験を、ＮＩＢＲに承認された動物管理使用プロトコル（Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ）にしたがって行った。Ｃ５７ＢＬ／６マウス（雄、１〜１１週齢）を、Ｅｎｖｉｇｏから入手した。１×ＰＢＳ、ｐＨ６．５中のＣ１３（Ｄ４含量＝１０ｍｇ／ｍＬ）を、２７ゲージ針が固定されたインスリンシリンジに移した。製剤を、５ｍＬ／ｋｇ（５０ｍｇ／ｋｇのＤ４）の用量体積でマウスの背部中点の皮下に注射した。２つの群の動物、それぞれｎ＝３に投与した。５０μＬの血液試料を、抗凝固剤としてＥＤＴＡを投与した後の時点で尾切断によって取った。血液試料を、２０分間にわたって４０００×ｇで遠心分離して、２０μＬの血漿上清を得た。
【０５３８】
血漿試料中のＤ４の濃度を、ＬＣ／ＭＳ方法によって決定した。１５０μＬの抽出溶媒（アセトニトリル：メタノール：水：ギ酸；１：１：１：０．００３）を、２０μＬの血漿に加え、９６ウェルディープウェルプレートにおいて３０秒間にわたってボルテックスした。これを１０分間にわたって４０００×ｇで遠心分離した。上清の１５０μＬのアリコートを、新しいディープウェルプレートに移した。Ｄ４の標準曲線を、１０，０００から０．５ｎｇ／ｍＬのＤ４のＥＤＴＡ血漿中のＤ４の連続希釈によって調製し、未知試料で共抽出した。未知試料及び標準曲線試料を、７００μＬ／分の流量でＡｇｉｌｅｎｔ  １２９０  ＨＰＬＣにおいてＡＣＥ  Ｃ１８  ＬＣカラム（３０×２．１、３μｍ）に注入した（１０μＬ、ＣＴＣ  ＰＡＬ  ＨＴＳオートサンプラ）。カラムを、９５％の緩衝液Ａ（水中０．１％のギ酸）、５％の緩衝液Ｂ（アセトニトリル中０．１％のギ酸）で予め平衡にした。Ｄ４を、１．３分間にわたって５〜９８％の緩衝液Ｂの勾配によって溶離した。溶出液を、ＥＳＩモード（４５０℃、ＣＥ＝１５、ＤＰ＝５０）で動作するＳｃｉｅｘ  ６５００  ＭＳに注入した。３７８．０（親）から１６７．０（娘）のｍ／ｚ移行を、定量化のためにモニターした。投与の最大で７日後の時点で血漿中の放出されたＤ４の濃度を決定した。図８から明らかであるように、Ｄ４の長期の曝露が、本明細書に記載されるトレースレスリンカーＬ８を用いて例示される、ヒドロゲル−薬物コンジュゲートとして投与される際に達成される。
【０５３９】
実施例１０
ヒドロゲルの組織耐性の比較
この試験は、様々なヒドロゲルの単回皮下注射を与えた際に肉芽腫性免疫応答を誘発するＣ５７ＢＬ／６マウスの能力を調べ、７日後に調べた。被験物質は、Ｈ９（チオール官能化ヒアルロン酸とアクリレート官能化ＰＥＧとの間の反応によって架橋されたヒアルロン酸ベースのヒドロゲル粒子）、Ｈ１ｆ（アジド官能化ヒアルロン酸とアルキン修飾ＰＥＧとの間の反応によって架橋されたヒアルロン酸ベースのヒドロゲル粒子）、及び変形性膝関節症の疼痛の治療のためのＳｙｎｖｉｓｃ−Ｏｎｅ（登録商標）ヒアルロン酸ベースの注射用溶液（Ｓａｎｏｆｉ）であった。
【０５４０】
Ｈ９の調製
チオール官能化ヒアルロン酸ＧＬＹＣＯＳＩＬ（商標）（ＥｓｉＢｉｏ（Ａｌａｍｅｄａ，ＣＡ）から市販されている）を用いて、Ｈ９を調製した。公開された参考文献（Ｓｈｕ，Ｘ．Ｚ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ｍａｔｅｒ  Ｒｅｓ  Ａ，２００６，７９（４）：９０２−１２；Ｓｈｕ，Ｘ．Ｚ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ，２００４，２５：１３３９−１３４８）に基づいて、ＧＬＹＣＯＳＩＬ（商標）は、１５８〜１８７ｋＤａの分子量及びチオール含有部分による４２〜４５％の官能化を有するチオール官能化ヒアルロン酸ポリマーであることが理解される。ゲル化反応において反応基の濃度の計算するために、置換度は４５％であると仮定した。非置換カルボキシレートナトリウム塩繰返し二量体単位の分子量は、４０１．３Ｄａである。刊行物に示される構造を有するチオール化繰返し二量体単位の分子量は、４８１．５Ｄａである。仮定された４５％の置換度を有するＧＬＹＣＯＳＩＬ（商標）のナトリウム塩形態の二量体単位の平均ＭＷは、４３７．５Ｄａ＝（（４０１．３×０．５５）＋（４８１．５×０．４５））である。
【０５４１】
ＧＬＹＣＯＳＩＬ（商標）（１０ｍｇ、２２．９μｍｏｌ）を、元の試料バイアル中で４０分間にわたって室温で１ｍＬの１×ＰＢＳ、ｐＨ７．４に溶解させた。ナトリウム塩二量体単位の平均分子量を用いて、繰返し二量体単位の総モルが、２２．９μｍｏｌであると計算し、チオール化繰返し二量体単位のモル数が１０．３μｍｏｌであると計算した。この溶液に、１×ＰＢＳ（０．７７５ｍＬ）及びポリエチレングリコールジアクリレート、５ｋＤａの１００ｍｇ／ｍＬ（ＰＢＳ中）の溶液（０．１２５ｍＬ、１２．５ｍｇ、０．００２５ｍｍｏｌの試薬、０．００５ｍｍｏｌの反応性官能基、Ｃｒｅａｔｉｖｅ  ＰＥＧｗｏｒｋｓを加えた。得られた溶液は、ＧＬＹＣＯＳＩＬ（商標）に対して５．３ｍｇ／ｍＬの濃度を有し、ＧＬＹＣＯＳＩＬ（商標）繰返し単位の２２％が、ポリエチレングリコールジアクリレート、５ｋＤａ（（０．００５ｍｍｏｌ［ポリエチレングリコールジアクリレート、５ｋＤａの反応性官能基］／０．０２２９ｍｍｏｌ［ＨＡ−単位］）×１００＝２２％）によって架橋されていた。
【０５４２】
混合物を短時間ボルテックスして混合し、３ｍＬのシリンジに移し、それに蓋をし、一晩室温に保持して、Ｈ９を得た。目視検査（内がえし試験）は、成功したゲル化を示した。
【０５４３】
Ｈ９のヒアルロン酸ベースのヒドロゲル粒子を、等体積のＰＢＳを、最初の押し出し後に粒子に加えたことを除いて、Ｈ１ａについて記載されるように調製した。これにより、ＧＬＹＣＯＳＩＬ（商標）に対して２．６５ｍｇ／ｍＬであるヒドロゲル粒子懸濁液が得られた。プランジャを取り外し、所望の体積のＨ９を充填することによって、Ｈ９のヒドロゲル粒子を、３０Ｇ針が取り付けられた０．５ｍＬのインスリンシリンジ中に投与のために分配した。シリンジの穏やかな操作によって気泡を取り除いた。
【０５４４】
Ｈ１ｆの調製
Ｈ１ｆのヒアルロン酸ベースのヒドロゲル粒子を、半分の体積のＰＢＳを、最初の押し出し後に粒子に加えたことを除いて、Ｈ１ａについて記載されるように調製した。これにより、［ＨＡ−Ｎ３］−２３％のｂに対して６．７ｍｇ／ｍＬであるヒドロゲル粒子懸濁液が得られた。プランジャを取り外し、所望の体積のＨ１ｆを充填することによって、Ｈ１ｆのヒドロゲル粒子を、３０Ｇ針が取り付けられた０．５ｍＬのインスリンシリンジ中に投与のために分配した。シリンジの穏やかな操作によって気泡を取り除いた。
【０５４５】
Ｓｙｎｖｉｓｃ−Ｏｎｅ（登録商標）
Ｓｙｎｖｉｓｃ−Ｏｎｅ（登録商標）を購入し、入手したままの状態で使用した。
【０５４６】
皮下移植
雄Ｃ５７ＢＬ／６マウス（被験物質当たり５匹）に、皮下注射（肩甲骨間領域）によって６０μＬの被験物質を投与した（表２６）。さらなる５匹の未処理マウスを対照として用いた。生存中の観察を、投与日（投与前及び投与の約４時間後）に２回得て、その後、解剖まで毎日少なくとも１回得た。体重を週に２回測定した。
【０５４７】
【表４８】
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【０５４８】
７日後、動物を、第１の形態の安楽死としてＣＯ２で安楽死させ、第２の形態の安楽死として開胸を行った。肉眼的異常を記録しながら、解剖を行った。プロトコル組織の代表的な試料を、全ての動物から収集した。試験片の固定及び貯蔵を、１０％の中性緩衝ホルマリン中で行った。所定の組織を、パラフィンブロックへと処理し、その後、対照及び全ての生存している投与された動物において、動物のヘマトキシリン及びエオシンで染色した組織切片へと処理した。
【０５４９】
臨床的観察：
注射部位を、毎日触診し、観察を記録した。Ｈ９ヒドロゲル粒子、Ｓｙｎｖｉｓｃ−Ｏｎｅ（登録商標）、及びＨ１ｆヒドロゲル粒子を投与されたマウスの全てが、注射の時点で注射部位の皮下組織に瘤を生じていた。Ｓｙｎｖｉｓｃ−Ｏｎｅ（登録商標）、及びＨ１ｆヒドロゲル粒子を投与されたマウスは、４日目まで縮退した瘤を有していた一方、Ｈ９ヒドロゲル粒子を投与されたマウスの全ては、８日目まで硬い瘤を依然として保持していた。４日目から開始してＨ９を投与された２匹の動物の瘤上の皮膚にかさぶたが観察され、６日目まで観察された。他の顕著な臨床的観察はなかった。体重は、群間で有意差はなかった。
【０５５０】
顕微鏡観察
Ｈ９ヒドロゲル粒子を投与された全てのマウスは、注射部位の皮下組織に著しい局所的に広範囲の肉芽腫を有していた。肉芽腫は、多くの好中球の濃い縁に囲まれた、好酸球性顆粒デブリ及び変性好中球と混合された硝子状物質のコアを含み、同様にマクロファージ及び線維芽細胞の層を含む、約４ｍｍの境界明瞭な皮下腫瘤を特徴としていた。
【０５５１】
Ｓｙｎｖｉｓｃ−Ｏｎｅ（登録商標）又はＨ１ｆヒドロゲル粒子を投与されたマウスは、注射部位の皮下組織に最小ないしわずかな局所的な混合細胞及び／又は小さい薄壁嚢胞を有していた（表２７）。
【０５５２】
【表４９】
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【０５５３】
結論
ヒアルロン酸ベースのヒドロゲルの皮下注射を受けたマウスにおける顕微鏡的所見は、投与されるヒドロゲルの組成に応じて異なる。Ｓｙｎｖｉｓｃ−Ｏｎｅ（登録商標）又はＨ１ｆを投与されたマウスは、注射部位の皮下組織に顕微鏡的所見を有さないか又は局所的な混合細胞浸潤及び／又は小さい薄壁嚢胞を有するかのいずれかであった一方、Ｈ９は、顕著な肉芽腫性免疫応答を誘発した。
【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
2020517623.tif 000281
【図３Ｂ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６】
2020517623.tif 000287
【図７Ａ】
2020517623.tif 000288
【図７Ｂ】
2020517623.tif 000289
【図８】
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【図９】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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