(57)【要約】  化合物（２２Ｅ）−（２４Ｒ）−２−メチレン−２２−デヒドロ−１α，２４，２５−トリヒドロキシ−１９−ノル−ビタミンＤ3を精製して、結晶形態の化合物を得る方法を開示する。方法は概して、酢酸エチルおよびヘキサンを含む溶媒に（２２Ｅ）−（２４Ｒ）−２−メチレン−２２−デヒドロ−１α，２４，２５−トリヒドロキシ−１９−ノル−ビタミンＤ3を溶解して溶液を形成するステップと、（２２Ｅ）−（２４Ｒ）−２−メチレン−２２−デヒドロ−１α，２４，２５−トリヒドロキシ−１９−ノル−ビタミンＤ3の結晶を形成させ、溶液から沈澱させるステップと、（２２Ｅ）−（２４Ｒ）−２−メチレン−２２−デヒドロ−１α，２４，２５−トリヒドロキシ−１９−ノル−ビタミンＤ3の結晶を溶液から回収するステップとを含む。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
（２２Ｅ）−（２４Ｒ）−２−メチレン−２２−デヒドロ−１α，２４，２５−トリヒドロキシ−１９−ノル−ビタミンＤ3という名称の、次式を有する結晶形態の化合物。
【化１】
2020537664.tif 000042
【請求項２】
空間群Ｐ２1および単位格子寸法：ａ＝１６．３０５８（９）Å；ｂ＝１０．０４６１（６）Å；ｃ＝２６．０５２７（１５）Å；α＝９０°；β＝１０９．００１（３）°；γ＝９０°によって規定される分子充填配列を有する、（２２Ｅ）−（２４Ｒ）−２−メチレン−２２−デヒドロ−１α，２４，２５−トリヒドロキシ−１９−ノル−ビタミンＤ3の結晶形態。
【請求項３】
請求項２に記載の分子充填配列によって規定される、（２２Ｅ）−（２４Ｒ）−２−メチレン−２２−デヒドロ−１α，２４，２５−トリヒドロキシ−１９−ノル−ビタミンＤ3の３次元構造。
【請求項４】
（２２Ｅ）−（２４Ｒ）−２−メチレン−２２−デヒドロ−１α，２４，２５−トリヒドロキシ−１９−ノル−ビタミンＤ3を精製する方法であって、
（ａ）（２２Ｅ）−（２４Ｒ）−２−メチレン−２２−デヒドロ−１α，２４，２５−トリヒドロキシ−１９−ノル−ビタミンＤ3を、溶媒としての所定量の酢酸エチルに溶解して、（２２Ｅ）−（２４Ｒ）−２−メチレン−２２−デヒドロ−１α，２４，２５−トリヒドロキシ−１９−ノル−ビタミンＤ3の溶液を調製するステップと、
（ｂ）該溶液に、所定量のヘキサンを、好ましくは飽和点に到達するまで滴下して加えて、
溶媒としての酢酸エチルとヘキサンとの混合物中の（２２Ｅ）−（２４Ｒ）−２−メチレン−２２−デヒドロ−１α，２４，２５−トリヒドロキシ−１９−ノル−ビタミンＤ3の溶液を形成し、そこで（２２Ｅ）−（２４Ｒ）−２−メチレン−２２−デヒドロ−１α，２４，２５−トリヒドロキシ−１９−ノル−ビタミンＤ3の結晶を形成させ、該溶液から沈殿させるステップと、
（ｃ）該溶液から、（２２Ｅ）−（２４Ｒ）−２−メチレン−２２−デヒドロ−１α，２４，２５−トリヒドロキシ−１９−ノル−ビタミンＤ3結晶を分離するステップと
を含む方法。
【請求項５】
溶媒としての酢酸エチルとヘキサンとの混合物中の（２２Ｅ）−（２４Ｒ）−２−メチレン−２２−デヒドロ−１α，２４，２５−トリヒドロキシ−１９−ノル−ビタミンＤ3の溶液が室温下に置かれ、そこで（２２Ｅ）−（２４Ｒ）−２−メチレン−２２−デヒドロ−１α，２４，２５−トリヒドロキシ−１９−ノル−ビタミンＤ3の結晶が形成され、溶液から沈殿する、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
分離するステップが、混合物と沈澱とを濾別して、結晶を得るステップを含む、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
ステップ（ｃ）から回収された（２２Ｅ）−（２４Ｒ）−２−メチレン−２２−デヒドロ−１α，２４，２５−トリヒドロキシ−１９−ノル−ビタミンＤ3の結晶をステップ（ａ）で使用して、ステップ（ａ）〜（ｃ）を繰り返すステップを含む、さらなるステップ（ｄ）を含む、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
酢酸エチルとヘキサンとの混合物が、約２０〜３０体積％の酢酸エチルおよび約７０〜８０体積％のヘキサンを含む、請求項４に記載の方法。
【請求項９】
有効量の請求項１に記載の化合物および薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項１０】
それを必要とする対象において皮膚の疾患、障害または病態を処置または予防する方法であって、有効量の結晶形態の請求項１に記載の化合物を対象に投与するステップを含む方法。
【請求項１１】
皮膚の疾患、障害または病態が乾癬である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
それを必要とする対象において細胞増殖性疾患または障害を処置または予防する方法であって、有効量の請求項１に記載の化合物を対象に投与するステップを含む方法。
【請求項１３】
細胞増殖性疾患または障害が、白血病、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、黒色腫、結腸がん、乳がん、および前立腺がんからなる群から選択される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
それを必要とする対象において自己免疫疾患または障害を処置または予防する方法であって、有効量の請求項１に記載の化合物又は有効量の結晶形態の請求項１に記載の化合物を投与するステップを含む方法。
【請求項１５】
自己免疫疾患または障害が、多発性硬化症、糖尿病、狼瘡、宿主対移植片反応、および移植片の拒絶反応からなる群から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
それを必要とする対象において炎症性疾患または障害を処置または予防する方法であって、有効量の結晶形態の請求項１に記載の化合物を対象に投与するステップを含む方法。
【請求項１７】
炎症性疾患または障害が、関節リウマチ、喘息、および炎症性腸疾患からなる群から選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
炎症性疾患または障害が、クローン病および潰瘍性大腸炎からなる群から選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
それを必要とする対象において、肥満症を処置もしくは予防する、脂肪細胞分化を阻害する、ＳＣＤ−１遺伝子転写を阻害する、および／または体脂肪を低減する方法であって、有効量の結晶形態の請求項１に記載の化合物を対象に投与するステップを含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、米国特許法第１１９条（ｅ）に基づき、２０１７年１０月１７日に出願された米国特許仮出願第６２／５７３，３８７号への優先権の利益を主張し、その内容は全体として参照により本明細書に組み込まれる。
本発明の分野は、ビタミンＤ化合物に関し、さらに詳細には（２２Ｅ）−２−メチレン−２２−デヒドロ−１α，２４，２５−トリヒドロキシ−１９−ノル−ビタミンＤ3類似体およびそれらの医薬品としての使用に関する。特に、本発明の分野は、（２２Ｅ）−（２４Ｒ）−２−メチレン−２２−デヒドロ−１α，２４，２５−トリヒドロキシ−１９−ノル−ビタミンＤ3などのビタミンＤ化合物を結晶化する手順に関する。
【背景技術】
【０００２】
有機化合物、特に医薬品としての使用に指定された有機化合物の精製は、そのような化合物を合成する化学者にとってかなり重要である。化合物の調製は、通常多くの合成ステップを必要とし、したがって最終生成物は、手順の最後の合成ステップに由来する副生物だけでなく、先行ステップにおいて形成された化合物で汚染されていることがある。クロマトグラフィー精製は、非常に効率的であるものの比較的時間のかかるプロセスであるが、それでさえ、通常、薬物として使用できるほど純度の高い化合物をもたらさない。
【０００３】
１α−ヒドロキシビタミンＤ化合物を合成するのに使用される方法に応じて、様々な微量の望ましくない化合物が最終生成物に付随することがある。したがって、例えば、ビタミンＤの５，６−トランス幾何異性体の直接Ｃ−１ヒドロキシル化が行われ、次にＳｅＯ2／ＮＭＯ酸化および光化学的照射が行われる場合（Andrews et al., J. Org. Chem. 51, 1635 (1986);Calverley et al., Tetrahedron 43, 4609 (1987);Choudry et al., J. Org. Chem. 58, 1496 (1993)を参照のこと）、最終の１α−ヒドロキシビタミンＤ生成物が、１β−ヒドロキシ−および５，６−トランス異性体で汚染されていることがある。方法が、プレビタミンＤ化合物の４−フェニル−１，２，４−トリアゾリン−３，５−ジオン付加体のＣ−１アリル型酸化と、その後の修飾された付加体の塩基性条件下における逆環化とからなる場合(Nevinckx et al., Tetrahedron 47, 9419 (1991);Vanmaele et al., Tetrahedron 41, 141 (1985) and 40, 1179 (1994);Vanmaele et al., Tetrahedron Lett. 23. 995 (1982)を参照のこと）、所望の１α−ヒドロキシビタミンが、プレビタミン５（１０）、６，８−トリエンおよび１β−ヒドロキシ異性体で汚染されていることがあると予想することができる。非常に幅広い範囲および多数の用途を有する、最も有用なＣ−１ヒドロキシル化方法の１つは、Paaren et al., J. Org. Chem. 45, 3253 (1980);およびProc. Natl. Acad. Sci U.S.A. 75, 2080 (1978)によって詳しく述べられた実験的に簡単な手順である。この方法は、ビタミンＤトシレートの緩衝化加溶媒分解から容易に得られた３，５−シクロビタミンＤ誘導体のＳｅＯ2／ｔ−ＢｕＯＯＨを使ったアリル型酸化と、その後の所望の１α−ヒドロキシ化合物への酸触媒逆環化とからなる。この合成経路を考慮すると、最終生成物が、１α−ヒドロキシエピマー、５，６−トランス異性体およびプレビタミンＤ形で汚染されていることがあると想定するのは合理的である。１α−ヒドロキシビタミンＤ4は、ビタミンＤ2またはエルゴステロールから合成された１α−ヒドロキシビタミンＤ化合物中で見られるもう１つの望ましくない汚染物質である。１α−ヒドロキシビタミンＤ4は、同様に市販のエルゴステロール材料の汚染に由来するビタミンＤ4のＣ−１酸化に起因する。典型的に、最終生成物は、最高で約１．５質量％の１α−ヒドロキシビタミンＤ4を含み得る。したがって、最終生成物中の１α−ヒドロキシビタミンＤ4を除去し、またはその量を約０．１〜０．２％未満に実質的に低減する精製技法があれば極めて望ましい。
ビタミンＤ共役トリエン系は、感熱性および感光性であるだけでなく、酸化も起こしやすく、高極性化合物の複合混合物をもたらす。酸化は、通常ビタミンＤ化合物が長時間貯蔵されたとき起こる。ビタミンＤ化合物の部分分解を導くことのできるプロセスの他のタイプは、いくつかの水脱離反応からなる。これらの反応の推進力は、ヒドロキシ基のアリル（１α−）位およびホモアリル（３β−）位である。上記のそのような酸化および脱離生成物の存在は、薄層クロマトグラフィーにより容易に検出することができる。
【０００４】
通常、１α−ヒドロキシル化手順はすべて、少なくとも１つのクロマトグラフィー精製を必要とする。しかし、クロマトグラフィー精製された１α−ヒドロキシビタミンＤ化合物は、均質性を示唆する一貫した分光学的データを示すが、それらでさえ、経口、非経口または経皮投与することができる治療剤のために必要とされる純度基準を満たさない。
したがって、結晶化手順などビタミンＤ化合物の改良精製手順が望ましい。ここで、本発明者らは、（２２Ｅ）−（２４Ｒ）−２−メチレン−２２−デヒドロ−１α，２４，２５−トリヒドロキシ−１９−ノル−ビタミンＤ3を結晶化する手順を開示する。
【発明の概要】
【０００５】
（２２Ｅ）−（２４Ｒ）−２−メチレン−２２−デヒドロ−１α，２４，２５−トリヒドロキシ−１９−ノル−ビタミンＤ3、別名「ＷＴ−５１」を結晶化によって精製して、結晶形態のＷＴ−５１を得る手順が本明細書に開示される。
開示された結晶化手順は、溶媒を利用して、ＷＴ−５１を溶解する。溶媒は、結晶化手順において重要な役割を果たし、典型的に個々の液体物質または異なる液体の好適な混合物である。ＷＴ−５１を結晶化するために、最も適切な溶媒および／または溶媒系は以下の因子を特徴とする：（１）低毒性；（２）低沸点（例えば、約１００、９０、または８０℃未満）；（３）温度に対する溶解特性の著しい依存性（満足のいく結晶化収率を実現するのに必要な条件）；および（４）比較的低いコスト。
興味深いことに、酢酸エチルとヘキサンとの混合物が、ＷＴ−５１の結晶化に好適な溶媒であることがわかった。特に、約２０％（ｖ／ｖ）〜約３０％（ｖ／ｖ）の酢酸エチルと約８０％（ｖ／ｖ）〜約７０％（ｖ／ｖ）のヘキサンとの混合物がＷＴ−５１の結晶化に好適な溶媒であると決定された。開示された方法において、ＷＴ−５１をまず酢酸エチルに溶解し、ヘキサンを飽和点に到達するまで滴下して加えた。室温下に置いた後、ＷＴ−５１の結晶が約１時間後に成長し始めた。酢酸エチル／ヘキサン溶媒混合物は、蒸発または他の公知の方法により除去することも容易である。沈澱した結晶は、濾過または他の手段によるそれらの回収を保証できるほど大きく、したがってＸ線回折分析に適していた。
【０００６】
したがって、本発明は、次式を有する結晶形態の化合物を提供する。
【化１】
2020537664.tif 000002
さらに詳細には、化合物は、結晶形態の（２２Ｅ）−（２４Ｒ）−２−メチレン−２２−デヒドロ−１α，２４，２５−トリヒドロキシ−１９−ノル−ビタミンＤ3または「ＷＴ−５１」と呼ばれることもある。
【０００７】
ＷＴ−５１の結晶形態は、ＷＴ−５１の結晶形態と好適な担体を含む医薬組成物として製剤化されることもある。医薬組成物は、それを必要とする対象に、ビタミンＤ化合物によって処置および／または予防される様々な病態を処置するために投与することができる。
一部の実施形態において、本明細書に開示されるＷＴ−５１の結晶形態は、それを必要とする対象において皮膚の疾患、障害、および病態を処置および／または予防する方法において利用することができる。これらの疾患、障害、および病態は、乾癬、ざ瘡、十分な皮膚の張りの欠如、十分な皮膚の保水の欠如、および不十分な皮脂分泌を含み得るが、これらに限定されない。
別の実施形態において、本明細書に開示されるＷＴ−５１の結晶形態は、それを必要とする対象においてがんなどの細胞増殖性疾患または障害を処置および／または予防する方法において利用することができる。これらの疾患または障害は、白血病、結腸がん、乳がん、皮膚がん、および前立腺がんを含み得るが、これらに限定されない。
【０００８】
さらに別の実施形態において、本明細書に開示されるＷＴ−５１の結晶形態は、それを必要とする対象において自己免疫疾患および障害を処置および／または予防する方法において利用することができる。これらの疾患および障害は、多発性硬化症、糖尿病、狼瘡、宿主対移植片反応、および移植片の拒絶反応を含み得るが、これらに限定されない。
さらに別の実施形態において、本明細書に開示されるＷＴ−５１の結晶形態は、炎症性疾患の処置および／または予防をする方法において利用することができる。これらの疾患は、関節リウマチ、喘息、および炎症性腸疾患を含み得るが、これらに限定されない。ＷＴ−５１の結晶形態は、具体的には、クローン病および潰瘍性大腸炎を含む炎症性腸疾患を処置または予防する方法において利用することができる。
さらに別の実施形態において、本明細書に開示されるＷＴ−５１の結晶形態は、肥満症を処置および／もしくは予防する、脂肪細胞分化を阻害する、ＳＣＤ−１遺伝子転写を阻害する、および／または体脂肪を低減する方法において利用することができる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】見出され、本明細書に記載された原子位置パラメーターによって規定されるＷＴ−５１分子の三次元構造の一実施形態を示す図である。
【図２】見出され、本明細書に記載された原子位置パラメーターによって規定されるＷＴ−５１分子の三次元構造の一実施形態を示す図である。
【図３】見出され、本明細書に記載された原子位置パラメーターによって規定されるＷＴ−５１分子の三次元構造の一実施形態を示す図である。
【図４】見出され、本明細書に記載された原子位置パラメーターによって規定されるＷＴ−５１分子の三次元構造を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
開示された主題を、以下に規定する用語を利用してさらに説明することができる。
文脈によって別段の明示または表示がない限り、用語「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、「１つまたは複数」を意味する。例えば、「化合物（ａ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）」および「類似体（ａｎ  ａｎａｌｏｇ）」という語句は、それぞれ「１つまたは複数の化合物」および「１つまたは複数の類似体」を意味すると解釈されるべきである。
本明細書では「約」、「およそ」、「実質的に」、および「著しく」は、当業者によって理解され、それらが使用されている文脈においてある程度異なる。用語が使用されている文脈を考慮して、当業者に明瞭でない用語の使用がある場合、「約」および「およそ」は、特定の用語のプラスまたはマイナス≦１０％を意味し、「実質的に」および「著しく」は、特定の用語のプラスまたはマイナス＞１０％を意味する。
【００１１】
本明細書では用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」および「含んでいる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」は、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」および「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」と同じ意味を有する。移行用語「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、「オープンエンド」であると解釈されるべきであり、用語「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」を利用している請求項は、記載された構成要素を必要とするが、他の追加の構成要素を含むことが許されると解釈されるべきである。移行用語「〜から本質的になる」は、「部分クローズド」であると解釈されるべきであり、用語「〜から本質的になる」を利用している請求項は、記載された構成要素を必要とし、特許請求された主題の基本的かつ新規の特性に実質的に影響を及ぼすことのない他の追加の構成要素のみを容認すると解釈されるべきである。移行用語「〜からなる」は、「クローズド」と解釈されるべきであり、用語「〜からなる」を利用している請求項は、記載された構成要素を必要とし、他の追加の構成要素を容認しないと解釈されるべきである。
本明細書では用語「天然のホルモン」と「１α，２５（ＯＨ）2Ｄ3」は同義に使用することができる。
【００１２】
本明細書では化合物「ＷＴ−５１」は、（２２Ｅ）−（２４Ｒ）−２−メチレン−２２−デヒドロ−１α，２４，２５−トリヒドロキシ−１９−ノル−ビタミンＤ3を指す。ＷＴ−５１を合成する方法が、例えば米国特許第９，４１６，１０２号に開示されており、当該特許の内容は全体として参照により本明細書に組み込まれる。
本明細書に開示されるように、ＷＴ−５１の結晶形態を利用して、それを必要とする対象において疾患または障害を処置および／または予防することができる。用語「対象」、「患者」、および「個体」は、本明細書で同義に使用することができる。
それを必要とする対象には、任意の動物を含むことができる。動物は、ヒト、家畜、例えばイヌもしくはネコ、または農業用動物、特にヒトの食用の肉を供給する動物、例えば、ニワトリ、シチメンチョウ、キジまたはウズラのような家禽、およびウシ、ヒツジ、ヤギ、またはブタの動物。
それを必要とする対象は、ビタミンＤ活性に関連する疾患または障害を有するまたはそれらのリスクがある対象を指すことができる。例えば、それを必要とする対象は、骨粗鬆症（例えば、老人性骨粗鬆症、閉経後骨粗鬆症、ステロイド誘発性骨粗鬆症、および低骨代謝回転骨粗鬆症）、骨減少症、および骨軟化症などの骨量の増加が望ましい代謝性骨疾患および障害を含み得る骨疾患および障害を有する、またはそれらのリスクがある対象を含むことができる。それを必要とする対象は、骨強度の増加を必要とする対象も含むことができる。
それを必要とする対象は、皮膚の疾患、障害、および病態を有するまたはこれらを発症するリスクがある対象を含み得る。これらの疾患、障害、および病態は、乾癬、ざ瘡、十分な皮膚の張りの欠如、十分な皮膚の保水の欠如、および不十分な皮脂分泌を含み得るが、これらに限定されない。
【００１３】
それを必要とする対象は、がんなどの細胞増殖性疾患または障害を有するまたはこれらを発症するリスクがある対象を含み得る。これらの疾患または障害は、白血病、結腸がん、乳がん、皮膚がん、および前立腺がんを含み得るが、これらに限定されない。
それを必要とする対象は、自己免疫疾患および障害を有するまたはこれらを発症するリスクがある対象を含み得る。これらの疾患および障害は、多発性硬化症、糖尿病、狼瘡、宿主対移植片反応、および移植片の拒絶反応を含み得るが、これらに限定されない。
それを必要とする対象は、炎症性疾患または障害を有するまたはこれらを発症するリスクがある対象を含み得る。これらの疾患または障害は、関節リウマチ、喘息、および炎症性腸疾患を含み得るが、これらに限定されない。それを必要とする対象は、クローン病および潰瘍性大腸炎を有するまたはこれらを発症するリスクがある対象を含み得る。
それを必要とする対象は、肥満症を有するまたはそれを発症するリスクがある対象を含み得る。それを必要とする対象は、脂肪細胞分化の阻害、ＳＣＤ−１遺伝子転写の阻害、および／または体脂肪の低減を必要とするまたはそれを望む対象を含み得る。
それを必要とする対象は、二次性副甲状腺機能亢進症を有するまたはそれを発症するリスクがある対象を含むことができる。特に、それを必要とする対象は、腎性骨異栄養症の二次性副甲状腺機能亢進症を有するまたはそれを発症するリスクがある対象を含み得る。
【００１４】
予防および／または処置の目的で、ＷＴ−５１の結晶形態を、医薬品用途向けに、当技術分野において公知の定法に従って無害な溶媒中の溶液、または好適な溶媒もしくは担体中の乳濁液、懸濁液もしくは分散液、または固体担体と一緒にした丸剤、錠剤もしくはカプセル剤として製剤化することができる。任意のそのような製剤はまた、他の薬学的に許容される無毒性の賦形剤、例えば、安定剤、抗酸化剤、結合剤、着色剤または乳化剤もしくは矯味剤も含み得る。
ＷＴ−５１の結晶形態は、経口、局所、非経口、直腸、経鼻、舌下または経皮投与することができる。化合物は、注射によって、または静脈内への輸液もしくは好適な無菌溶液によって、または消化管経由の液体もしくは固体用量の形で、またはクリーム剤、軟膏剤、貼付剤、もしくは経皮適用に適している同様の媒体の形で投与されることが有利である。
１日当たり０．０１μｇ〜１０００μｇ、好ましくは１日当たり約０．１μｇ〜約５００μｇの用量のＷＴ−５１の結晶形態が、予防および／または処置の目的に適しており、そのような用量は、当技術分野においてよく理解されているように処置対象の疾患、その重症度および対象の応答によって調整される。化合物は作用の特異性を示すので、それぞれ好適には単独投与、または様々な程度の骨塩動員およびカルシウム輸送刺激が有利であることがわかっているような状況では、段階的用量の別の活性ビタミンＤ化合物（例えば、１α−ヒドロキシビタミンＤ2もしくはＤ3、または１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3）と共に投与し得る。
【００１５】
上記の処置における使用のための組成物は、活性成分としての有効量のＷＴ−５１の結晶形態と好適な担体とを含む。本発明に従って使用するための有効量のそのような化合物は、組成物１ｇ当たり約０．０１μｇ〜約１０００μｇ、好ましくは組成物１ｇ当たり約０．１μｇ〜約５００μｇであり、約０．０１μｇ／日〜約１０００μｇ／日、好ましくは約０．１μｇ／日〜約５００μｇ／日の投与量で局所、経皮、経口、直腸、経鼻、舌下、または非経口投与することができる。
本発明の製剤は、活性成分を薬学的に許容される担体と共に含み、したがって、任意選択で他の治療成分を含む。担体は、製剤の他の成分と相性がよく、そのレシピエントに有害でないという意味で「許容される」ものでなければならない。
経口投与に適している本発明の製剤は、カプセル、分包、錠剤または薬用キャンディーとして別個の単位の形をとることができ、それぞれ、活性成分の所定量を例えば結晶質粉末または結晶質顆粒の形で含む。
製剤は、好都合なことに投与単位形態で提供することができ、薬学技術分野において公知の方法のいずれかによって調製することができる。用語「投与単位」とは、活性成分をそのまま、または活性成分と固体もしくは液体の医薬用希釈剤もしくは担体との混合物として含む物理的および化学的に安定な単位用量として対象に投与することができる単位、すなわち単回用量を意味する。
【実施例】
【００１６】
以下の実施例は、例示であって、特許請求された主題の範囲を限定するものではない。
（実施例１）
（２２Ｅ）−（２４Ｒ）−２−メチレン−２２−デヒドロ−１α，２４，２５−トリヒドロキシ−１９−ノル−ビタミンＤ3（ＷＴ−５１）の調製
（２２Ｅ）−（２４Ｒ）−２−メチレン−２２−デヒドロ−１α，２４，２５−トリヒドロキシ−１９−ノル−ビタミンＤ3（ＷＴ−５１）を、以前に記載した通りに合成した（米国特許第９，４１６，１０２号を参照のこと、当該特許の内容は全体として参照により本明細書に組み込まれる）。
【００１７】
（２２Ｅ）−デス−Ａ，Ｂ−８β−ベンゾイルオキシ−２４−オキソ−２５−［（トリエチルシリル）オキシ］−２２−デヒドロコレスタン（３）。２（スキーム１；２５０ｍｇ；０．６４ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（１．５ｍｌ）溶液を撹拌し、その溶液に１Ｍリチウムヘキサメチルジシラジドのテトラヒドロフラン溶液（７００μｌ；０．７０ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。１時間後、１1（２００ｍｇ；０．６４ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（１．５ｍｌ）溶液をカニューレ経由で加えた。反応混合物を３日間撹拌した。次いで、ＮＨ4Ｃｌの飽和水性溶液（２ｍｌ）、塩水（２ｍｌ）および水（５ｍｌ）を０℃で加え、得られた混合物を二塩化メチレン（３回×５０ｍｌ）で抽出した。有機相を無水Ｎａ2ＳＯ4で脱水し、減圧下で濃縮し、残留物をカラムクロマトグラフィー（２〜５％酢酸エチル／ヘキサン）により精製して、２００ｍｇ（０．３９ｍｍｏｌ；収率６１％）の３を得た。［α］D＝＋９４．３（ｃ  １．１、ＣＨＣｌ3）；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 0.60 (6H, q, J = 7.9 Hz), 0.95 (9H, t, J = 7.9 Hz), 1.10 (3H, s), 1.12 (3H, d, J = 6.6 Hz), 1.34 (6H, s), 2.04 (2H, m) 2.32 (1H, m), 5.42 (1H, br d, J = 1.9 Hz), 6.71 (1H, d, J = 15.4 Hz), 6.84 (1H, dd, J = 15.4 Hz, J = 8.6 Hz), 7.45 (2H, t, J = 7.4 Hz), 7.56 (1H, t, J = 7.4 Hz), 8.05 (2H, d, J = 7.4 Hz); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 6.5, 7.0, 13.8, 18.0, 19.2, 22.6, 27.0, 27.1, 27.2, 30.5, 39.8, 42.2, 51.4, 55.4, 72.0, 78.8, 121.7, 128.4, 129.5, 132.7, 153.2, 166.4, 203.2;正確な質量（ＥＳＩ）  Ｃ31Ｈ49Ｏ4Ｓｉ（［Ｍ＋Ｈ］+）の計算値５１３．３３９５、測定値５１３．３４０５。
【００１８】
（２２Ｅ）−デス−Ａ，Ｂ−８β−ベンゾイルオキシ−２４−ヒドロキシ−２５−［（トリエチルシリル）オキシ］−２２−デヒドロコレスタン（４、２４−異性体の混合物）。３（２００ｍｇ；０．３９ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（１．５ｍｌ）およびエタノール（４．５ｍｌ）溶液を撹拌し、その溶液にＣｅＣｌ3・７Ｈ2Ｏ（２９８ｍｇ；０．８０ｍｍｏｌ）およびＮａＢＨ4（４６ｍｇ；１．２０ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。３０分後、ＮＨ4Ｃｌの飽和水性溶液（２ｍｌ）および水（５ｍｌ）を加え、混合物を二塩化メチレン（３回×４０ｍｌ）で抽出した。有機相を無水Ｎａ2ＳＯ4で脱水し、減圧下で濃縮し、残留物をカラムクロマトグラフィー（５〜１５％酢酸エチル／ヘキサン）により精製して、１８０ｍｇ（０．３５ｍｍｏｌ；収率９０％）の４を２４−ジアステレオマーの混合物として得た。正確な質量（ＥＳＩ）  Ｃ31Ｈ50Ｏ4ＳｉＮａ（［Ｍ＋Ｎａ］+）の計算値５３７．３３７１、測定値５３７．３３８０。
（２２Ｅ）−デス−Ａ，Ｂ−８β−ベンゾイルオキシ−２４，２５−ジ−［（トリエチルシリル）オキシ］−２２−デヒドロコレスタン（５、２４−異性体の混合物）。４（１５０ｍｇ；０．２９ｍｍｏｌ）および２，６−ルチジン（６７μｌ；６２ｍｇ；０．５８ｍｍｏｌ）の二塩化メチレン（１ｍｌ）溶液を撹拌し、その溶液にトリエチルシリルトリフルオロメタンスルホネート（７９μｌ；９２ｍｇ；０．３５ｍｍｏｌ）を−５０℃で滴下して加えた。２０分後、湿二塩化メチレン（１ｍｌ）および水（５ｍｌ）を加え、混合物を二塩化メチレン（３回×２５ｍｌ）で抽出した。有機相を無水Ｎａ2ＳＯ4で脱水し、減圧下で濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン〜３％酢酸エチル／ヘキサン）により精製して、１６５ｍｇ（０．２６ｍｍｏｌ；収率９０％）の５を得た。正確な質量（ＥＳＩ）  Ｃ37Ｈ64Ｏ4Ｓｉ2Ｎａ（［Ｍ＋Ｎａ］+）の計算値６５１．４２３６、測定値６５１．４２３４。
【００１９】
（２２Ｅ）−デス−Ａ，Ｂ−２４，２５−ジ−［（トリエチルシリル）オキシ］−２２−デヒドロコレスタン−８β−オール（６、２４−異性体の混合物）。５（１６０ｍｇ；０．２５ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（３ｍｌ）溶液を３Ｍメチルマグネシウムブロミドのジエチルエーテル溶液（７５０μｌ；２．２５ｍｍｏｌ）を用いて０℃で５時間処理した。ＮＨ4Ｃｌの飽和水性溶液（２ｍｌ）、塩水（２ｍｌ）および水（５ｍｌ）を慎重に加え、混合物を二塩化メチレン（３回×２５ｍｌ）で抽出した。有機相を無水Ｎａ2ＳＯ4で脱水し、減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルＳｅｐ−Ｐａｃｋカートリッジ（５〜１５％酢酸エチル／ヘキサン）で精製して、１０６ｍｇ（０．２０ｍｍｏｌ；収率８１％）の６を得た。正確な質量（ＥＳＩ）  Ｃ30Ｈ60Ｏ3Ｓｉ2Ｎａ（［Ｍ＋Ｎａ］+）の計算値５４７．３９７４、測定値５４７．３９５７。
【００２０】
（２２Ｅ）−デス−Ａ，Ｂ−２４，２５−ジ−［（トリエチルシリル）オキシ］−２２−デヒドロコレスタン−８−オン（７、２４−異性体の混合物）。６（６５ｍｇ；１２０μｍｏｌ）およびｐ−トルエンスルホン酸ピリジニウム（２つの結晶）の二塩化メチレン（６ｍｌ）溶液を二クロム酸ピリジニウム（１５０ｍｇ；４００μｍｏｌ）で３時間処理した。混合物をシリカゲルＳｅｐ−Ｐａｃｋカートリッジ（３〜７％酢酸エチル／ヘキサン）で精製して、５４ｍｇ（１０３μｍｏｌ；８６％）の７を得た。正確な質量（ＥＳＩ）  Ｃ30Ｈ58Ｏ3Ｓｉ2Ｎａ（［Ｍ＋Ｎａ］+）の計算値５４５．３８１７、測定値５４５．３８１７。
【００２１】
（２２Ｅ）−（２４Ｒ）−２−メチレン−２２−デヒドロ−１α，２４，２５−トリヒドロキシ−１９−ノルビタミンＤ3（１０、ＷＴ−５１）および（２２Ｅ）−（２４Ｓ）−２−メチレン−２２−デヒドロ−１α，２４，２５−トリヒドロキシ−１９−ノルビタミンＤ3（１１、ＷＴ−５２）。８（８７ｍｇ；１５０μｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（１．５ｍｌ）溶液を撹拌し、その溶液に１．８Ｍフェニルリチウムのジ−ｎ−ブチルエーテル溶液２滴を−２５℃で加え、溶液が濃橙色に変化した。次いで、フェニルリチウム溶液の化学量論量（７８μｌ；１４０μｍｏｌ）を滴下して加えた。２０分後、混合物を−７８℃に冷却し、７（５３ｍｇ；１０１μｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（０．７５ｍｌ）溶液をカニューレ経由で移した。混合物を２時間撹拌し、０℃まで温め、次いで２時間撹拌した。ＮＨ4Ｃｌの飽和水性溶液（１ｍｌ）、塩水（１ｍｌ）および水（５ｍｌ）を慎重に加え、混合物をヘキサン（３回×２５ｍｌ）で抽出した。有機相をＮａ2ＳＯ4で脱水し、減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルＳｅｐ−Ｐａｃｋカートリッジ（ヘキサン〜２％酢酸エチル／ヘキサン）で精製して、９０ｍｇの粗製９を得た。粗製９をアセトニトリル（２ｍｌ）に溶解し、（±）−カンファー−１０−スルホン酸（４０ｍｇ；１７２μｍｏｌ）で２日間処理した。混合物を、トリエチルアミン１０滴で事前に処理したシリカゲルＳｅｐ−Ｐａｃｋカートリッジ（１０〜３０％２−プロパノール／ヘキサン）で精製して、２８ｍｇ（６５μｍｏｌ；７からの収率６４％）の１０および１１をジアステレオマーの混合物として得た。混合物をＨＰＬＣ（１５％水／メタノール；Ｚｏｒｂａｘ−Ｅｃｌｉｐｓｅ  ＸＤＢ  Ｃ１８  ５μｍ；３．５ｍｌ／分；１０ではＲt＝５．３０分、１１ではＲt＝５．８０分）で分離して、９．５ｍｇ（２２μｍｏｌ；７からの収率２２％）の１０および１３．５ｍｇ（３１μｍｏｌ；７からの収率３１％）の１１を得た。１１のＸ線分析（図７）は、２４Ｓ立体配置を示した。１０：ＵＶ（エタノール）  λmax＝２４５、２５２、２６２ｎｍ；1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 0.60 (3H, s), 1.07 (3H, d, J = 6.6 Hz), 2 x 1.13 (3H 各々, s), 2.25-2.31 (2H, m), 2.48 (1H, dd, J = 13.4 Hz, J = 3.8 Hz), 2.66 (1H, dd, J = 13.2 Hz, J = 4.3 Hz), 2.85 (1H, dd, J = 12.2 Hz, J = 3.8 Hz), 3.73 (1H, d, J = 7.4 Hz), 4.37 (1H, m), 4.41 (1H, m), 5.04 (1H, s), 5.05 (1H, s), 5.43 (1H, dd, J = 15.4 Hz, J = 7.5 Hz), 5.52 (1H, dd, J = 15.4 Hz, J = 8.6 Hz), 5.90 (1H, d, J = 11.1 Hz), 6.26 (1H, d, J = 11.1 Hz);１１：ＵＶ（エタノール）  λmax＝２４４、２５２、２６１ｎｍ；1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 0.60 (3H, s), 1.06 (3H, d, J = 6.6 Hz), 1.12 (3H, s), 1.13 (3H, s), 1.65-1.70 (2H, m), 1.79-1.83 (1H, m), 1.93-2.07 (2H, m), 2.13 (1H, m), 2.25-2.31 (2H, m), 2.48 (1H, dd, J = 13.3 Hz, J = 3.9 Hz), 2.67 (1H, dd, J = 13.2 Hz, J = 4.3 Hz), 2.85 (1H, dd, J = 12.2 Hz, J = 3.7 Hz), 3.75 (1H, d, J = 6.7 Hz), 4.37 (1H, m), 4.41 (1H, m), 5.04 (1H, s), 5.06 (1H, s), 5.45 (1H, dd, J = 15.4 Hz, J = 6.9 Hz), 5.57 (1H, dd, J = 15.4 Hz, J = 8.4 Hz), 5.90 (1H, d, J = 11.1 Hz), 6.26 (1H, d, J = 11.1 Hz); MS (EI) m/z 430 (M+, 10), 396 (7), 253 (22), 91 (100);正確な質量（ＥＳＩ）  Ｃ27Ｈ42Ｏ4Ｎａ（［Ｍ＋Ｎａ］+）の計算値４５３．２９７６、測定値４５３．２９７７。
【００２２】
スキームＩ
【化２】
2020537664.tif 000003
【００２３】
スキームＩ（続き）
【化３】
2020537664.tif 000004
【００２４】
（実施例２）
１−（ジメトキシホスホリル）−３−メチル−３−［（トリエチルシリル）オキシ］−２−ブタノンの調製
３−メチル−３−［（トリエチルシリル）オキシ］−２−ブタノン（１３）。３−ヒドロキシ−３−メチル−２−ブタノン（スキーム２；１．２０ｍｌ；１．１６ｇ；１１．４ｍｍｏｌ）および２，６−ルチジン（１．８６ｍｌ；１．７１ｇ；１６．０ｍｍｏｌ）の二塩化メチレン（３０ｍｌ）溶液を撹拌し、その溶液にトリエチルシリルトリフルオロメタンスルホネート（３．１１ｍｌ；３．６１ｇ；１３．７ｍｍｏｌ）を−５０℃で滴下して加えた。２０分後、湿二塩化メチレン（５ｍｌ）および水（５０ｍｌ）を加え、混合物を二塩化メチレン（３回×１００ｍｌ）で抽出した。有機相を無水Ｎａ2ＳＯ4で脱水し、減圧下で濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン〜３％酢酸エチル／ヘキサン）により精製して、２．４０ｇ（１０．４ｍｍｏｌ；収率９１％）の１３を得た。1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 0.63 (6H, q, J = 7.9 Hz), 0.97 (9H, t, J = 7.9 Hz), 1.33 (6H, s), 2.23 (3H, s); 13C NMR (126 MHz, CDCl3) δ 6.5, 7.0, 27.0, 27.7, 79.7, 214.0; MS (EI) m/z 216 ([M - Et]+, 100), 173 (81), 172 (30) 115 (68), 87 (67);正確な質量  Ｃ9Ｈ19Ｏ2Ｓｉ（［Ｍ−Ｅｔ］+）の計算値１８７．１１４９、測定値１８７．１１４４。
【００２５】
１−ブロモ−３−メチル−３−［（トリエチルシリル）オキシ］−２−ブタノン（１４）。１３（２．４０ｇ；１０．４ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（２．９２ｍｌ；２．１２ｇ；２１．０ｍｍｏｌ）の二塩化メチレン（５０ｍｌ）溶液を撹拌し、その溶液にトリエチルシリルトリフルオロメタンスルホネート（２．３７ｍｌ；２．７５ｇ；１０．４ｍｍｏｌ）を０℃で滴下して加えた。１５分後、Ｎ−ブロモスクシンイミド（２．０５ｇ；１１．５ｍｍｏｌ）を加え、冷却浴を脱した。３０分後、ＮＨ4Ｃｌの飽和水性溶液（１０ｍｌ）および水（５０ｍｌ）を加え、混合物を二塩化メチレン（３回×１００ｍｌ）で抽出した。有機相を無水Ｎａ2ＳＯ4で脱水し、減圧下で濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン〜５％酢酸エチル／ヘキサン）により精製して、１．５５ｇ（５．２５ｍｍｏｌ；収率５０％）の１４を得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 0.64 (6H, q, J = 7.9 Hz), 0.97 (9H, t, J = 7.9 Hz), 1.41 (6H, s), 4.44 (2H, s); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 6.5, 7.0, 27.8, 33.6, 80.4, 206.2; MS (EI) m/z 294および296 ([M - Et]+, 24および23), 187 (45), 173 (100);正確な質量  Ｃ9Ｈ18Ｏ2ＢｒＳｉ（［Ｍ−Ｅｔ］+）の計算値２６５．０２５４、測定値２６５．０２４７。
【００２６】
１−（ジメトキシホスホリル）−３−メチル−３−［（トリエチルシリル）オキシ］−２−ブタノン（２）。１４（１．５５ｇ；５．２５ｍｍｏｌ）および亜リン酸トリメチル（５１４μｌ；７８２ｍｇ；６．３１ｍｍｏｌ）のトルエン（２０ｍｌ）溶液を３日間還流した。混合物をカラムクロマトグラフィー（５〜１５％  ２−プロパノール／ヘキサン）により精製して、１．５４ｇ（４．７５ｍｍｏｌ；収率９０％）の２を得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 0.65 (6H, q, J = 7.9 Hz), 0.98 (9H, t, J = 7.9 Hz), 1.36 (6H, s), 3.40 (2H, d, JH-P = 20.7 Hz) 3.80 (6H, d, JH-P = 11.2 Hz); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 6.4, 6.9, 26.8, 33.7 (d, JC-P = 137.8 Hz), 52.8 (d, JC-P = 6.7 Hz) 80.0, 207.1 (d, JC-P = 6.0 Hz); MS (EI) m/z 324 ([M - Et]+, 98), 238 (65), 211 (61), 173 (100);正確な質量  Ｃ11Ｈ24Ｏ5ＰＳｉ（［Ｍ−Ｅｔ］+）の計算値２９５．１１２６、測定値２９５．１１２６。
【００２７】
スキームＩＩ
【化４】
2020537664.tif 000005
【００２８】
（実施例３）
（２２Ｅ）−（２４Ｒ）−２−メチレン−２２−デヒドロ−１α，２４，２５−トリヒドロキシ−１９−ノル−ビタミンＤ3（ＷＴ−５１）の結晶化およびＸ線回折分析
酢酸エチル／ヘキサンからの（２２Ｅ）−（２４Ｒ）−２−メチレン−２２−デヒドロ−１α，２４，２５−トリヒドロキシ−１９−ノル−ビタミンＤ3（ＷＴ−５１）の結晶化。ＷＴ−５１（１５ｍｇ）を４ｍＬのバイアルに入れ、酢酸エチル（０．３ｍＬ）に溶解した。次に、ヘキサン（１ｍＬ）を飽和点に到達するまで滴下して加えた。次いで、バイアルを封止し、室温下に置いた。約１時間後、結晶が成長し始め、混合物を次いで２日間室温下に置き、結晶を得た。得られた結晶を濾別し、少量の酢酸エチル／ヘキサンで洗浄し、乾燥して、結晶質のＷＴ−５１を得た。
【００２９】
実験の部。こうして得られた結晶はＸ線回折分析に適したものであり、したがって分析した（例えば、米国特許第９，２１２，１３７号；同第９，０４０，７２９号；同第８，９４０，９１６号；同第８，８８４，０３９号；同第８，５１９，１６９号；同第８，４２０，８３９号；および同第８，４０４，８７４号を参照のこと；これらの内容は、これらの全体として参照により本明細書に組み込まれる）。結晶データおよび構造精密化を表１に記載する。原子座標（Å×１０4）および等価等方性変位パラメーター（equivalent isotropic displacement parameters）（Å2×１０3）を表２に記載する。結合長さ［Å］および角度［°］を表３に記載する。異方性変位パラメーター（Å2×１０3）を表４に記載する。水素座標（Å×１０4）および等方性変位パラメーター（Å2×１０3）を表５に記載する。ねじれ角［°］を表６に記載する。表１〜６に開示された物理的データおよび原子位置パラメーターによって規定されるＷＴ−５１の３次元構造を図１〜４に示す。
【００３０】
上述の説明において、本明細書に開示される本発明に対する様々な置換および改変を、本発明の範囲および趣旨から逸脱することなしに行えることは当業者にとって一目瞭然であろう。本明細書に好適に例示的に記載された本発明は、具体的に本明細書に開示されていない任意の要素、限界なしに実施することができよう。採用されてきた用語および表現は、説明の用語として使用されるのであって、限定の用語として使用されるのではなく、そのような用語および表現の使用において、示され、説明された特徴のいずれの等価物またはそれらの一部を排除する意図はなく、様々な改変が本発明の範囲内で可能であることが認識されている。したがって、本発明を具体的な実施形態およびオプションの特徴によって説明してきたが、本明細書に開示されている概念の改変および／または変形は、当業者が行うことができること、そのような改変および変形は、本発明の範囲内であると考えられることと理解されたい。
【００３１】
いくつかの参考文献の引用が本明細書で行われている。引用された参考文献は、それらの全体として参照により本明細書に組み込まれる。本明細書における用語の定義を引用された参考文献における用語の定義と比べて矛盾がある場合、用語は本明細書における定義に基づいて解釈されるべきである。
【００３２】
【表１】
2020537664.tif 000006
【００３３】
【表２−１】
2020537664.tif 000007
【表２−２】
2020537664.tif 000008
【表２−３】
2020537664.tif 000009
【００３４】
【表３−１】
2020537664.tif 000010
【表３−２】
2020537664.tif 000011
【表３−３】
2020537664.tif 000012
【表３−４】
2020537664.tif 000013
【表３−５】
2020537664.tif 000014
【表３−６】
2020537664.tif 000015
【表３−７】
2020537664.tif 000016
【表３−８】
2020537664.tif 000017
【表３−９】
2020537664.tif 000018
【表３−１０】
2020537664.tif 000019
【表３−１１】
2020537664.tif 000020
【表３−１２】
2020537664.tif 000021
【表３−１３】
2020537664.tif 000022
【表３−１４】
2020537664.tif 000023
【表３−１５】
2020537664.tif 000024
【表３−１６】
2020537664.tif 000025
【表３−１７】
2020537664.tif 000026
【表３−１８】
2020537664.tif 000027
【表３−１９】
2020537664.tif 000028
【００３５】
【表４−１】
2020537664.tif 000029
【表４−２】
2020537664.tif 000030
【表４−３】
2020537664.tif 000031
【００３６】
【表５−１】
2020537664.tif 000032
【表５−２】
2020537664.tif 000033
【表５−３】
2020537664.tif 000034
【表５−４】
2020537664.tif 000035
【００３７】
【表６−１】
2020537664.tif 000036
【表６−２】
2020537664.tif 000037
【表６−３】
2020537664.tif 000038
【表６−４】
2020537664.tif 000039
【表６−５】
2020537664.tif 000040
【表６−６】
2020537664.tif 000041
【図１】
2020537664.tif 000043
【図２】
2020537664.tif 000044
【図３】
2020537664.tif 000045
【図４】
2020537664.tif 000046
【国際調査報告】
2020537664.tif 000047
2020537664.tif 000048