(57)【要約】  新鮮なクロレラ飲料の製造方法及び使用が提供される。本発明の製造方法によれば、クロレラの無菌培養及び凍結させたクロレラの急速な熱処理によって、クロレラを細胞変異させることなく培養期間を短縮することができるとともに、クロレラ中の重金属を減少させることができ、そして抗癌治療での使用を実現することができる。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
培養物中のクロレラを３日以内で撹拌しつつ無菌培養し、クロレラ濃度が０．０５重量％を超えた後、６時間以内に上記クロレラを収集して収集培養物を得る工程と、
上記収集培養物を凍結状態にならないように１℃未満に急速冷却し、さらに上記冷却した収集培養物を遠心分離し、かつ上記冷却した収集培養物に滅菌水を添加してクロレラ濃度が２．５ｍｇ／ｍｌから１２．５ｍｇ／ｍｌのクロレラ懸濁液を得る工程と、
上記クロレラ懸濁液を０℃以下の温度で１２時間から２４時間冷やして完全に凍結させた状態にした後、１０分以内に温度を４０℃から５０℃に上げて新鮮なクロレラ飲料を得る工程とを備える新鮮なクロレラ飲料の製造方法。
【請求項２】
上記培養物中のクロレラを撹拌しつつ無菌培養する際に、上記培養物を撹拌するための水の流速が３ｍ／分から２０ｍ／分である請求項１に記載の新鮮なクロレラ飲料の製造方法。
【請求項３】
上記培養物中のクロレラを撹拌しつつ無菌培養する際に、上記クロレラの炭素吸収を促進するための光が提供され、
上記培養物のｐＨ値が６．８に達した直後、上記クロレラの撹拌を停止して上記クロレラを上記培養物中で静的に浮遊させ、
上記培養物のｐＨ値が７．０以上になった後、撹拌を再開して上記クロレラの炭素吸収を促進する請求項２に記載の新鮮なクロレラ飲料の製造方法。
【請求項４】
上記クロレラ懸濁液を０℃以下の温度で１２時間から２４時間冷やして完全に凍結させた状態にした後、１０分以内に温度を４０℃から５０℃に上げて新鮮なクロレラ飲料を得る工程において、上記温度をマイクロ波又は赤外線によって上昇させる請求項１に記載の新鮮なクロレラ飲料の製造方法。
【請求項５】
上記クロレラ懸濁液を０℃以下の温度で１２時間から２４時間冷やして完全に凍結させた状態にした後、１０分以内に温度を４０℃から５０℃に上げて新鮮なクロレラ飲料を得る工程において、上記凍結温度が−１℃から−２１℃の範囲である請求項１に記載の新鮮なクロレラ飲料の製造方法。
【請求項６】
上記クロレラ懸濁液を０℃以下の温度で１２時間から２４時間冷やして完全に凍結させた状態にした後、１０分以内に温度を４０℃から５０℃に上げて新鮮なクロレラ飲料を得る工程において、上記温度を上昇させる時間が３分から１０分である請求項１に記載の新鮮なクロレラ飲料の製造方法。
【請求項７】
請求項１から請求項６のいずれか１項に記載の新鮮なクロレラ飲料の製造方法によって得られる新鮮なクロレラ飲料。
【請求項８】
癌の治療のための医薬組成物の製造における請求項７に記載の新鮮なクロレラ飲料の使用であって、上記新鮮なクロレラ飲料を含む上記医薬組成物が、抗癌効能を得るために対象者に投与される使用。
【請求項９】
上記新鮮なクロレラ飲料の治療上有効量が、上記対象者の体重１キログラム当たり１０ｍｇから２００ｍｇの固体クロレラである請求項８に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新鮮なクロレラ飲料の製造方法に関し、特に無菌培養による新鮮なクロレラ飲料の製造方法に関する。本発明はまた、上記方法により得られる新鮮なクロレラ飲料に関し、特に細胞変異のないクロレラを含有する新鮮なクロレラ飲料に関する。本発明はさらに、特に癌の治療のための新鮮なクロレラ飲料の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
クロレラは浮遊生物（プランクトン）である。クロレラ群の濃度が高すぎる場合、クロレラ細胞は、クロレラ群の優れた生存と繁殖環境を維持するために自己消化を行う。ただし、自己消化性のクロレラ細胞は有害な物質及び悪臭も生成する。クロレラは他の生物種にとって非常に栄養価の高い天然物質であるため、自然環境において他の生物種の宿主になることが多い。クロレラ細胞は、寄生された場合、予測できない細胞の変異を受ける。加えて、クロレラは、重金属、農薬、化学的毒素、ポリ塩化ビフェニル、ダイオキシン、放射線及びその他の毒素を効果的に吸着することができる。毒素がクロレラ細胞に蓄積することにより、その細胞自体もまた変異する。
【０００３】
研究によると、浮遊性藻類は急速な流れの中では生存及び繁殖することができない。図３に示すように、従来のクロレラの培養方法は、強い水流の撹拌、発酵培養及びクロレラ細胞を浮遊させ続けるためのオープンポンド培養（通気培養）に依存している。水流が穏やかである限り、クロレラ細胞は沈殿して死滅する。したがって、市販のクロレラ製品のクロレラ細胞は、細胞変異を受けており、もはや元のクロレラ細胞ではない。加えて、５０℃以上の温度での熱処理、水のない状態での熱処理（噴霧乾燥又は凍結乾燥）、高温での細胞壁の破壊、０℃以上の温度での６時間を超える保管等の条件のいずれか及び２時間以上の静置は、クロレラ細胞の沈殿又はクロレラ細胞の変異を誘発する。さらに、台湾における中国国家標準（ＣＮＳ）によるクロレラ製品の重金属レベルの定量的制限は、５ｐｐｍ未満から２０ｐｐｍ未満に変更されている。したがって、従来のクロレラ培養法によって得られるクロレラ細胞は変性しており、かつ環境毒素で汚染されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、従来のクロレラ培養の培養時間が長すぎること、そして加熱及び細胞壁の破壊が、クロレラ細胞に変性、退化、環境毒素の含有、沈殿及び死滅を引き起こすことに鑑みなされたものであって、無菌培養、凍結、その後の急速加熱によって、クロレラ細胞の変異なしで培養期間を短縮することが可能であり、かつ重金属の含有量を低く抑制することが可能な新鮮なクロレラ飲料の製造方法を提供することと目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
上記目的を達成するために、本発明は、新鮮なクロレラ飲料の製造方法を提供する。
【０００６】
培養物中のクロレラを３日以内で撹拌しつつ無菌培養し、クロレラ濃度が０．０５重量％を超えた後、６時間以内に上記クロレラを収集して収集培養物を得る。
【０００７】
上記収集培養物を、凍結状態にならないように１℃未満に急速冷却し、さらに上記冷却した収集培養物を遠心分離し、かつ上記冷却した収集培養物に滅菌水を添加してクロレラ懸濁液を得る。上記クロレラ懸濁液のクロレラ濃度は、２．５ｍｇ／ｍｌから１２．５ｍｇ／ｍｌである。
【０００８】
上記クロレラ懸濁液を０℃以下の温度で１２時間から２４時間冷やして完全に凍結させた状態にした後、１０分以内に温度を４０℃から５０℃に上げて新鮮なクロレラ飲料を得る。
【０００９】
好ましくは、上記クロレラはクロレラ・ピレノイドサである。
【００１０】
好ましくは、上記培養物中のクロレラを撹拌しつつ無菌培養する工程の間、上記培養物を撹拌するための水の流速は３ｍ／分から２０ｍ／分である。
【００１１】
好ましくは、上記培養物中のクロレラを撹拌しつつ無菌培養するする工程の間、上記クロレラの炭素吸収を促進するための光が提供され、上記培養物のｐＨ値が６．８に達した直後、上記クロレラの撹拌を停止して上記クロレラを上記培養物中で（沈殿なしで）静的に浮遊させ、上記培養物のｐＨ値が７．０以上になった後、撹拌を再開して上記クロレラの炭素吸収を促進する。
【００１２】
好ましくは、上記クロレラ懸濁液を０℃以下の温度で１２時間から２４時間冷やして完全に凍結させた状態にした後、１０分以内に温度を４０℃から５０℃に上げて新鮮なクロレラ飲料を得る工程において、上記温度はマイクロ波又は赤外線によって上昇させることができる。
【００１３】
好ましくは、上記クロレラ懸濁液を０℃以下の温度で１２時間から２４時間冷やして完全に凍結させた状態にした後、１０分以内に温度を４０℃から５０℃に上げて新鮮なクロレラ飲料を得る工程において、上記凍結温度は−１℃から−２１℃の範囲である。
【００１４】
好ましくは、上記クロレラ懸濁液を０℃以下の温度で１２時間から２４時間冷やして完全に凍結させた状態にした後、１０分以内に温度を４０℃から５０℃に上げて新鮮なクロレラ飲料を得る工程において、上記温度を上昇させる時間は３分から１０分である。
【００１５】
本発明は、上述の方法により得られる新鮮なクロレラ飲料をさらに提供し、この新鮮なクロレラ飲料は、クロレラが元々有する生物を健康にするという効果を保持するクロレラを含んでいる。従来のクロレラ製品を本発明の新鮮なクロレラ飲料と比較すると、大きな違いは次の通りである。（１）従来のクロレラ製品は悪臭を有するが、本発明の新鮮なクロレラ飲料は味が良好で無臭である。（２）上記新鮮なクロレラ飲料は、細胞壁の破壊という製造処理をすることなく人体に完全に吸収されるが、従来のクロレラ製品は、細胞壁の破壊によって処理されない限り、人体が消化することはできない。（３）本発明に係る方法により得られる新鮮なクロレラ飲料のクロレラ成長因子（ＣＧＦ）の含有量は、通常、従来のクロレラ製品のＣＧＦ含有量よりも多く、２倍以上である。（４）上記新鮮なクロレラ飲料にはクロロフィルの効能が保存されているが、従来のクロレラ製品のクロロフィルの効能は高温熱処理後に低下する。
【００１６】
本発明によれば、クロレラ成長因子（ＣＧＦ）は、ＣＮＳ４２０２、Ｎ５１３４の食用緑藻類に従い測定され、ＣＧＦの量は、藻熱水抽出物値の４．５セクションによって決定され、本発明に係る方法によって得られた新鮮なクロレラ飲料の指標値は３．８から４．９であった。
【００１７】
ＣＮＳ４２０２、Ｎ５１３４の食用緑藻類に従うと、本発明に係る方法により得られた新鮮なクロレラ飲料のクロロフィルの量は３８００ｍｇ％から４９００ｍｇ％であった。
【００１８】
本発明はさらに、癌の治療のための医薬組成物の製造における上述の新鮮なクロレラ飲料の使用を提供する。上記新鮮なクロレラ飲料を含む医薬組成物は、抗癌効能を得るために対象者に投与される。
【００１９】
本発明によれば、本明細書内で使用される「癌の治療」という用語は、癌の治療、抑制又は緩和を意味する。
【００２０】
好ましくは、上記新鮮なクロレラ飲料の治療上有効量は、上記対象者の体重１キログラム当たりの上記新鮮なクロレラ飲料に含まれる固体クロレラの重量によって計算され、１０ｍｇ／ｋｇから２００ｍｇ／ｋｇである。
【００２１】
本発明によれば、本明細書内で使用される「治療上有効量」という用語は、必要な期間内に癌の進行を軽減又は抑制するのに有効な用量を意味する。本発明によれば、上記治療上有効量は、乳房腫瘍の成長を減速又は阻止させるのに有効な用量、又は乳房腫瘍の死滅の誘発にさえ有効な用量である。本発明によって例示されるように、上記新鮮なクロレラ飲料を含む特定の用量の上記医薬品を投与して、特定の期間内で上記腫瘍の体積を測定することにより、乳癌腫瘍を軽減又は抑制するのに有効な用量を決定することができる。
【００２２】
好ましくは、上記医薬組成物の剤形には液体が含まれるが、これに限定されるものではない。
【００２３】
本発明の方法により、発酵又は屋外培養を行わずに製造された新鮮なクロレラ飲料は、培養時間を短縮するだけでなく、上記新鮮なクロレラ飲料に含まれる重金属の量も低減させることができる。加えて、本発明に係る方法は、低流速において、クロレラ細胞の沈殿を抑制し、かつクロレラの細胞変異を引き起こさない。本発明に係る方法は、高温での細胞壁の破壊、高温での熱処理を伴う噴霧乾燥又は極低温での凍結乾燥を行わない。これにより、クロレラ細胞の細胞変異が抑制されるので、この方法で得られた新鮮なクロレラ飲料は、より高いクロレラ成長因子とクロロフィルを含有するだけでなく、抗癌効能も有する。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】図１は、本発明に係る新鮮なクロレラ飲料の製造方法のフローチャートである。
【図２Ａ】図２Ａは、癌細胞を抑制するために使用された本発明の方法によって得られた新鮮なクロレラ飲料を投与されて１５日目に測定した腫瘍の体積を示すグラフである。
【図２Ｂ】図２Ｂは、癌細胞を抑制するために使用された本発明の方法によって得られた新鮮なクロレラ飲料を投与されて２２日目に測定した腫瘍の体積を示すグラフである。
【図３】図３は、クロレラ製品を製造するための従来の方法のフローチャートである。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
本発明は、発明のカテゴリー及び技術的特徴をより明確に示すために、以下の実施例を参照してより詳細に説明されるが、以下の実施例は、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。
【００２６】
〔製造例１：新鮮なクロレラ飲料の製造〕
図１を参照すると、本発明に係る新鮮なクロレラ飲料の製造方法は、以下の工程を備える。
【００２７】
（１）クロレラを準備する。クロレラはクロレラ・ピレノイドサである。
【００２８】
（２）培養物中のクロレラを撹拌しつつ無菌培養する。上記培養物において、炭素源は濾過した滅菌空気を含み、上記培養物を撹拌するための水の流速は毎分２０メートル以下であり、上記クロレラの炭素吸収を促進するための光が提供され、かつ、上記培養物のｐＨ値が６．８に達した直後、上記クロレラの撹拌を停止する。このとき、上記クロレラは培養物中で（沈殿なしで）静的に浮遊する。そして上記培養物のｐＨ値が７．０以上になった後、撹拌を再開して、上記クロレラの炭素吸収を促進する。上記培養期間は、収集培養物を得るために３日以内である。上記培養物（上記培養物中の固体クロレラ）の濃度が０．０５重量％を超えた後、上記クロレラの培養物を６時間以内に収集して、収集培養物を得る。さもなければ、クロレラは自己消化を起こす。
【００２９】
（３）上記収集培養物を１℃未満に急速冷却し（凍結させない）、滅菌遠心分離によってその培地を除去し、同じ温度の滅菌水で洗浄後、この水を除去し、上記固体クロレラを５％に定量化するために滅菌水を再び添加して、クロレラ懸濁液を得る。
【００３０】
（４）上記クロレラ懸濁液を−２０℃で２４時間保存し、次にこの凍結したクロレラ懸濁液をマイクロ波又は赤外線によって１０分以内で４０℃から５０℃に温め、これにより、上記クロレラ細胞が再生できないようにし、かつ、人間に摂取された後にクロレラの消化及び吸収を促進するための高温の熱処理、機械的又は化学的方法によるさらなる細胞壁の破壊を必要としないようにする。上記クロレラ懸濁液は、上記新鮮なクロレラ飲料を得るために滅菌水で適切な濃度に希釈され、上記新鮮なクロレラ飲料は保存のために−２０℃で急速凍結される。（クロレラの摂取に関する４年間の臨床実験の結果は、非冷凍状態で保存された場合、クロレラはその効能が徐々に低下して消失することを示している。）
【００３１】
〔比較例１：従来のクロレラ製品の製造〕
図３を参照すると、従来のクロレラ製品を製造するための従来の方法は、発酵培養であり、従来のクロレラ懸濁液を形成するためにクロレラのオープンポンド培養を行っている。発酵培養のための炭素源はグルコースであり、撹拌速度は５０ｒｐｍから１００ｒｐｍの範囲であり、培養期間は５日から１０日の範囲である。したがって、発酵培養から得られるクロレラ細胞は、まったく浮遊性藻類ではなく、いったん撹拌が停止すると沈殿して死滅するクロレラ変異体である。オープンポンド培養のための炭素源は酢酸であり、撹拌による水の流速は１０ｍ／秒を超え、必要な培養期間は２週間から８週間である。オープンポンド培養で得られたクロレラ細胞もまた、いったん撹拌が停止すると沈殿して死滅するクロレラ変異体である。さらに、オープンポンド培養は、環境毒素の蓄積及び細菌の汚染につながる。
【００３２】
発酵培養又はオープンポンド培養で得られた従来のクロレラ懸濁液には、その後、遠心分離及び細胞壁の破壊が行われ、クロレラ濃縮物が得られる。細胞壁の破壊処理は、１１５℃から１２５℃の温度で行われ、これにより、クロレラの抗癌効能が完全に破壊される。
【００３３】
細胞壁が破壊された後のクロレラ濃縮物は、さらに噴霧乾燥又は凍結乾燥されて、クロレラ粉末が形成される。噴霧乾燥の温度は１５５℃から１８０℃であり、これにより、クロレラの抗癌効能が完全に破壊される。
【００３４】
比較例１はオープンポンド培養を採用しており、噴霧乾燥によって得られたクロレラ粉末をａグループ、凍結乾燥によって得られたクロレラ粉末をｂグループと呼ぶ。製造例１で製造した上記新鮮なクロレラ飲料をｃグループと呼ぶ。
【００３５】
〔実施例１：癌の治療の使用のための新鮮なクロレラ飲料〕
２４匹のＢＡＬＢ／ｃマウス（５週齢の雌マウス）を、対照グループ、Ａグループ、Ｂグループ及びＣグループの４つのグループに分けた。ＭＤＡ−ＭＢ−２３１乳癌細胞（１×１０６細胞／１００μｌ、ＰＢＳで希釈）を同所モデルの０日目として各マウスの乳腺に注入した。４日目に腫瘍が５８ｍｍ３に成長したとき、以下の投与量をそれぞれ飼料に混ぜて６時間ごとに適用した。マウスの体重１キログラム当たりＰＢＳ１ｍｌを１日に２回対照グループに投与（毎回１ｍｌ／ｋｇ）。マウスの体重１キログラム当たりａグループと呼ばれるクロレラ粉末１０ｍｇを１日に２回Ａグループに投与（毎回１０ｍｇ／ｋｇ）。マウスの体重１キログラム当たりｂグループと呼ばれるクロレラ粉末１０ｍｇを１日に２回Ｂグループに投与（毎回１０ｍｇ／ｋｇ）。マウスの体重１キログラム当たりｃグループ（ｃグループの濃度は１０ｍｇ／ｍｌ）と呼ばれる新鮮なクロレラ飲料１ｍｌを１日２回Ｃグループに投与（毎回１ｍｌ／ｋｇ）。腫瘍の体積を、それぞれ１５日目と２２日目に測定した。
【００３６】
図２Ａを参照すると、Ｃグループの腫瘍の成長速度は、対照グループ、Ａグループ及びグＢループの成長速度より明らかに遅かった。図２Ｂを参照すると、Ｃグループの腫瘍の体積は減少し、縮小したが、対照グループ、Ａグループ及びＢグループの腫瘍の体積はすべて増加した。
【００３７】
〔実施例２：クロレラ成長因子（ＣＧＦ）の測定〕
クロレラ成長因子（ＣＧＦ）は、ＣＮＳ４２０２、Ｎ５１３４の食用緑藻類に従い測定されたため、上記新鮮なクロレラ飲料のＣＧＦの量は、藻熱水抽出物値の４．５セクションによって決定され、市販されている関連製品の値と比較される。
【００３８】
３つの市販の緑藻類製品ブランド、ブランドＴ、ブランドＧ並びにブランドＶ、及び本発明の新鮮なクロレラ飲料を上記の方法によって測定した。得られた指標値は、１．７（ブランドＴ）、２．３（ブランドＧ）、１．６（ブランドＶ）、３．８から４．９（本発明の新鮮なクロレラ飲料）であった。したがって、これらの結果は、本発明の方法で得られた新鮮なクロレラ飲料のクロレラ成長因子の量が、市販の緑藻類製品のクロレラ成長因子の量の２倍以上であることを示している。
【００３９】
〔実施例３：クロロフィルの測定〕
クロロフィルは、不適当な生産、加工及び保管中に容易に分解される。したがって、クロロフィルはクロレラ品質の安定性を代表するものである。この実施形態では、クロロフィルの量を、食用緑藻類のＣＮＳ４２０２、Ｎ５１３４に従って測定し、市販されている関連製品の値と比較した。ＣＮＳ４２０２、Ｎ５１３４の規格は、クロロフィルの量を１５００ｍｇ％以上にすることを要求している。上記新鮮なクロレラ飲料のクロロフィルの量は３８００ｍｇ％から４９００ｍｇ％であったが、関連製品のククロロフィルの量はすべて、測定後は２００ｍｇ％以下であった。したがって、本発明の方法で得られた新鮮なクロレラ飲料のクロロフィルの量は、市販の緑藻類製品のクロロフィルの量の２倍以上である。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【国際調査報告】
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