(57)【要約】  線維性疾患、自己免疫疾患または自己炎症性疾患などの疾患の治療に使用するための免疫調節化合物の抗体コンジュゲートおよび薬学的組成物が本明細書に開示される。開示されるコンジュゲートは、とりわけ、例えばＴＧＦβＲ１、ＴＧＦβＲ２、ＴＮＫＳ、ＴＮＩＫまたはｍＴＯＲを調節することにより、線維性疾患、自己免疫疾患または自己炎症性疾患の治療で有用である。【選択図】図１Ａ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）星細胞、筋線維芽細胞、滑膜線維芽細胞、上皮細胞、有足細胞および免疫細胞から選択される細胞に対して活性を有する免疫調節化合物と；
ｂ）第１の抗原結合ドメインおよびＦｃドメインを含む抗体コンストラクトであって、
第１の抗原結合ドメインが第１の抗原に特異的に結合し、第１の抗原が、ＬＲＲＣ１５、カドヘリン１１、ＰＤＰＮ、インテグリンα４β７、インテグリンα２β１、ＭＡＤＣＡＭ、ネフリン、ポドシン、ＩＦＮＡＲ１、ＢＤＣＡ２、ＣＤ３０、ｃ−ＫＩＴ、ＦＡＰ、ＣＤ７３、ＣＤ３８、ＰＤＧＦＲβ、インテグリンαｖβ１、インテグリンαｖβ３、インテグリンαｖβ８、ＧＡＲＰ、エンドシアリン、ＣＴＧＦ、インテグリンαｖβ６、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＴＮＦＲ２、ＤＥＣ２０５、ＤＣＩＲ、ＣＤ８６、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ４５ＲＯ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＣＤ２５、ＭＭＰ１４、ＧＰＸ８およびＦ２ＲＬ２からなる群から選択される抗原との少なくとも８０％の配列同一性を有する
抗体コンストラクトと；
ｃ）抗体コンストラクトを免疫調節化合物に結合するリンカーであって、抗体コンストラクトと共有結合的に結合しており、免疫調節化合物と共有結合的に結合しており、場合により免疫調節化合物対抗体コンストラクトのモル比が８未満であるリンカーと
を含むコンジュゲート。
【請求項２】
ａ）星細胞、筋線維芽細胞、滑膜線維芽細胞、上皮細胞、有足細胞および免疫細胞から選択される細胞に対して活性を有する免疫調節化合物と；
ｂ）第２の化合物と；
ｃ）免疫調節化合物および活性を有する第２の化合物に共有結合的に結合した１〜１００個の直鎖非水素原子を含むスペーサーと；
ｄ）第１の抗原結合ドメインおよびＦｃドメインを含む抗体コンストラクトであって、
ｉ）第１の抗原結合ドメインが第１の抗原に特異的に結合し、第１の抗原が、ＬＲＲＣ１５、カドヘリン１１、ＰＤＰＮ、インテグリンα４β７、インテグリンα２β１、ＭＡＤＣＡＭ、ネフリン、ポドシン、ＩＦＮＡＲ１、ＢＤＣＡ２、ＣＤ３０、ｃ−ＫＩＴ、ＦＡＰ、ＣＤ７３、ＣＤ３８、ＰＤＧＦＲβ、インテグリンαｖβ１、インテグリンαｖβ３、インテグリンαｖβ８、ＧＡＲＰ、エンドシアリン、ＣＴＧＦ、インテグリンαｖβ６、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＴＮＦＲ２、ＤＥＣ２０５、ＤＣＩＲ、ＣＤ８６、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ４５ＲＯ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＣＤ２５、ＭＭＰ１４、ＧＰＸ８およびＦ２ＲＬ２からなる群から選択される抗原との少なくとも８０％の配列同一性を有する
抗体コンストラクトと；
ｅ）抗体コンストラクトを免疫調節化合物、第２の化合物またはスペーサーに結合するリンカーであって、抗体コンストラクトと共有結合的に結合しており、免疫調節化合物、第２の化合物またはスペーサーと共有結合的に結合しており；場合により免疫調節化合物対抗体コンストラクトのモル比が８未満であるリンカーと
を含むコンジュゲート。
【請求項３】
第２の化合物がＥ３ユビキチンリガーゼに結合する、請求項２に記載のコンジュゲート。
【請求項４】
第２の化合物が第２の免疫調節化合物である、請求項２に記載のコンジュゲート。
【請求項５】
第２の免疫調節化合物と免疫調節化合物が同じである、請求項４に記載のコンジュゲート。
【請求項６】
ａ）星細胞、筋線維芽細胞、滑膜線維芽細胞、上皮細胞、有足細胞および免疫細胞から選択される細胞に対して活性を有する免疫調節化合物と；
ｂ）第１の抗原結合ドメインおよびＦｃドメインを含む抗体コンストラクトであって、
ｉｉ）第１の抗原結合ドメインが第１の抗原に特異的に結合し、第１の抗原がタンパク質複合体、タンパク質コンフォーマー、転写後修飾または翻訳後修飾を含む
抗体コンストラクトと；
ｃ）抗体コンストラクトを免疫調節化合物に結合するリンカーであって、抗体コンストラクトと共有結合的に結合しており、免疫調節化合物と共有結合的に結合しており、場合により免疫調節化合物対抗体コンストラクトのモル比が８未満であるリンカーと
を含むコンジュゲート。
【請求項７】
第１の抗原が、スプライスバリアントから生じる融合タンパク質の転写後修飾を含む、請求項６に記載のコンジュゲート。
【請求項８】
第１の抗原が、翻訳後修飾またはタンパク質コンフォーマー、場合によりＣＤ４５ＲＢスプライスバリアントまたはＣＤ４５ＲＯスプライスバリアントである、請求項６に記載のコンジュゲート。
【請求項９】
第１の抗原がインテグリンペアのタンパク質複合体である、請求項６に記載のコンジュゲート。
【請求項１０】
インテグリンペアがαｖβ６である、請求項９に記載のコンジュゲート。
【請求項１１】
免疫調節化合物が、タンパク質標的に結合する第１の部分と、Ｅ３ユビキチンリガーゼに結合する第２の部分とを含む、請求項１または６から１０のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項１２】
第１の部分が、１〜２５個または５〜２０個の直鎖非水素原子を含むスペーサーを介して第２の部分に共有結合的に結合している、請求項１１に記載のコンジュゲート。
【請求項１３】
第１の抗原結合ドメインと第１の抗原の結合についてのコンジュゲートのＫｄが、約１００ｎＭ未満であり、第１の抗原結合ドメインと第１の抗原の結合についての非コンジュゲート抗体コンストラクトのＫｄの約１００倍以下である、請求項１から１２のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項１４】
ＦｃドメインとＦｃγ受容体の結合についてのコンジュゲートのＫｄが、ＦｃドメインとＦｃγ受容体の結合についての非コンジュゲート抗体コンストラクトのＫｄの２倍、５倍または１０倍以下である、請求項１から１３のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項１５】
ＦｃドメインとＦｃγ受容体の結合についてのコンジュゲートのＫｄが、Ｆｃγ受容体の結合についての非コンジュゲート抗体コンストラクトのＫｄの１００倍超であり、ＦｃドメインとＦｃＲｎ受容体の結合についてのコンジュゲートのＫｄが、ＦｃドメインとＦｃＲｎ受容体の結合についての非コンジュゲート抗体コンストラクトのＫｄの約２倍、５倍または１０倍以下である、請求項１から１３のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項１６】
ＦｃドメインとＦｃＲｎ受容体の結合についてのコンジュゲートのＫｄが、ＦｃドメインとＦｃＲｎ受容体の結合についての非コンジュゲート抗体コンストラクトについてのＫｄの約２倍、５倍または１０倍以下である、請求項１から１４のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項１７】
ＦｃドメインがＦｃヌルである、請求項１から１３のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項１８】
抗体コンストラクトが、第２の抗原に結合する第２の結合ドメインをさらに含む、請求項１から１７のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項１９】
コンジュゲートに結合した免疫調節化合物が、細胞表面上で第１の抗原、第２の抗原または両方を発現している細胞内のタンパク質標的の活性を低下させる、請求項１１から１８のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項２０】
コンジュゲートの免疫調節化合物が、細胞表面上で第１の抗原、第２の抗原または両方を発現している細胞内のタンパク質標的の分解を増加させることによって、タンパク質標的の活性を低下させる、請求項１１から１９のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項２１】
コンジュゲートの免疫調節化合物が、細胞表面上で第１の抗原、第２の抗原または両方を発現している細胞内のタンパク質標的の活性を増加させる、請求項１１から１８のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項２２】
コンジュゲートの免疫調節化合物が、細胞表面上で第１の抗原、第２の抗原または両方を発現している細胞内のタンパク質標的の活性を変化させる、請求項１１から１８のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項２３】
コンジュゲートの免疫調節化合物が、細胞表面上で第１の抗原、第２の抗原または両方を発現していない細胞と比較して、細胞表面上で第１の抗原、第２の抗原または両方を発現している細胞内のタンパク質標的の活性を変化させる、請求項１１から１８のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項２４】
コンジュゲートが、細胞表面上で第１の抗原、第２の抗原または両方を発現している細胞内のタンパク質標的の活性を増加させ、第１の部分がＡ２ａＲ、ＰＰ２Ａ、ＰＰＡＲｇ、ビタミンＤ受容体（ＶＤＲ）またはＫＣＡ３．１のアゴニストである、請求項１１から１８または２２から２３のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項２５】
コンジュゲートが、細胞表面上で第１の抗原、第２の抗原または両方を発現している細胞内のタンパク質標的の活性を低下させ、第１の部分がキナーゼ阻害剤、イオンチャネルアンタゴニストまたはＰＡＲＰ１阻害剤である、請求項１１から１９または２２から２３のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項２６】
コンジュゲートが、細胞表面上で第１の抗原、第２の抗原または両方を発現している細胞内の標的タンパク質分解を増加させることによって、タンパク質標的の活性を低下させ、第１の部分がキナーゼ阻害剤、イオンチャネルアンタゴニストまたはＰＡＲＰ１阻害剤である、請求項１１から１９または２２から２３のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項２７】
免疫調節化合物が、星細胞または筋線維芽細胞の線維形成活性を低下させる、請求項１１から１９または２２から２３のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項２８】
免疫調節化合物が、免疫細胞の活性化を低下させる、または１つもしくは複数の炎症促進メディエーターの産生を減少させる、請求項１１から１９または２２から２３のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項２９】
免疫細胞の免疫抑制活性または免疫寛容原性活性を増加させる、請求項１１から１８または２２から２３のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項３０】
免疫調節化合物がＴＧＦβＲＩ、ＴＧＦβＲＩＩ、ＴＮＫＳまたはＴＮＩＫの阻害剤である、請求項１から５、１２から１９または２２から２３のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項３１】
第２の抗原が、免疫細胞免疫調節標的のアンタゴニストまたは免疫細胞もしくは組織上の免疫チェックポイント標的のアゴニストである、請求項１７から３０のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項３２】
第２の抗原が、ＴＮＦＲ２、ＣＤ４０、ＣＤ８６、ＰＤ−１、ＴＩＭ３、ＢＴＬＡ、ＤＥＣ２０５、ＤＣＩＲ、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ４５ＲＯ、ＨＬＡ  ＤＲ、ＣＤ３８、ＣＤ７３、ＧＡＲＰ、ＢＤＣＡ２、ＰＤ−Ｌ１またはＣＤ３０との少なくとも８０％の配列同一性を含む、請求項１７から３１のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項３３】
第２の結合ドメインが、ＦｃドメインのＣ末端で抗体コンストラクトに結合している、請求項１７から３１のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項３４】
第２の結合ドメインが、抗体コンストラクトの軽鎖のＣ末端に結合している、請求項１７から３１のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項３５】
第１の抗原が、カドヘリン１１、ＬＲＲＣ１５およびＦＡＰからなる群から選択される、請求項１から３４のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項３６】
免疫調節化合物が、ＴＧＦβＲＩ、ＴＧＦβＲＩＩ、ＴＮＫＳまたはＴＮＩＫの阻害剤である、請求項３５に記載のコンジュゲート。
【請求項３７】
ＦｃドメインがＦｃヌルである、請求項３５から３６のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項３８】
第２の抗原がＣＤ４０またはＰＤ−Ｌ１である、請求項１７から３７のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項３９】
第１の抗原結合ドメインがＣＤ４０アンタゴニストである、請求項１から５または１０から２１のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項４０】
第２の結合ドメインが、
ａ）Ｆｃドメイン−第２の結合ドメイン融合タンパク質として；
ｂ）軽鎖−第２の結合ドメイン融合タンパク質として；または
ｃ）第１のポリペプチドリンカーを介したコンジュゲーションによって、
Ｆｃドメインまたは第１の抗原結合ドメインの軽鎖に結合している、請求項１８から３２または３５から３９のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項４１】
Ｆｃドメインが、
ａ）Ｆｃドメイン−第１の抗原結合ドメイン融合タンパク質として；または
ｂ）第２のポリペプチドリンカーを介したコンジュゲーションによって、
第１の抗原結合ドメインに結合している、請求項１から４０のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項４２】
Ｆｃドメインが、第２の結合ドメイン−Ｆｃドメイン−第１の抗原結合ドメイン融合タンパク質として、第２の結合ドメインと第１の抗原結合ドメインの両方に結合している、請求項１７から４０のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項４３】
第１の抗原結合ドメインが、第２の結合ドメイン−第１の抗原結合ドメイン−Ｆｃドメイン融合タンパク質として、Ｆｃドメインと第２の結合ドメインの両方に結合している、請求項１７から４０のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項４４】
ａ）第１の抗原結合ドメインおよびＦｃドメインが抗体を構成し、第２の結合ドメインが単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を構成する；または
ｂ）第２の結合ドメインおよびＦｃドメインが抗体を構成し、第１の抗原結合ドメインが単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を構成する、
請求項１７から４０のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項４５】
Ｆｃドメインが、Ｆｃドメインの野生型配列と比較して少なくとも１つのアミノ酸残基変化を含むＦｃドメイン変異体である、請求項１から４４のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項４６】
Ｆｃドメイン変異体が、野生型Ｆｃドメインと比較して変化した親和性でＦｃ受容体に結合する、請求項４５に記載のコンジュゲート。
【請求項４７】
Ｆｃドメイン変異体が、野生型Ｆｃドメインと比較して低下した親和性でＦｃ受容体に結合する、請求項４５に記載のコンジュゲート。
【請求項４８】
ＦｃＲｎ受容体に対するＦｃドメイン変異体の親和性が、ＦｃＲｎ受容体に対する野生型Ｆｃドメインの親和性の１０分の１未満ではない、請求項４５に記載のコンジュゲート。
【請求項４９】
Ｆｃドメインが、
ａ）カバット番号付けのＥＵインデックスにおいて、および配列番号４３７に対してＮ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｇ、Ｎ２９７ＱまたはＮ２９７Ｇ；
ｂ）カバット番号付けのＥＵインデックスにおいて、および配列番号４３７に対してＫ３２２Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ；
ｃ）カバット番号付けのＥＵインデックスにおいて、および配列番号４３７に対してＬ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ  Ｎ２９６Ａ；および
ｄ）カバット番号付けのＥＵインデックスにおいて、および配列番号４３７に対してＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ
からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基変化を含む、請求項１から４８のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項５０】
Ｆｃドメインが、カバット番号付けにおいてＳ２２８Ｐ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３２９Ｇを含むＩｇＧ４  Ｆｃドメインを含む、請求項１から４８のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項５１】
免疫調節化合物が、ＰＩ３Ｋ阻害剤、カルシニューリン阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＢＴＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、ＣＲＡＣ阻害剤、ＰＡＲＰ１アンタゴニスト、ＰＰＡＲｇアゴニスト、Ｋｖ１．３アンタゴニスト、ＫＣａ３．１アンタゴニスト、ＰＰ２Ａアゴニスト、ＩＲＡＫ４阻害剤、ＭＹＤ８８阻害剤、ＢＣＬ−２アンタゴニスト、Ａ２ａＲアゴニスト、ＴＬＲ７アンタゴニスト、ｃ−ＫＩＴキナーゼ阻害剤、ＫＣＡ３．１アゴニスト、ＡＣＣアンタゴニスト、ＡＳＫ１アンタゴニスト、ＧＬＩ１アンタゴニスト、ＴＧＦβＲＩ阻害剤、ＴＧＦβＲＩＩ阻害剤、ＴＮＫＳアンタゴニストまたはＴＮＩＫアンタゴニストである、請求項１から２３および２７から５０のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項５２】
免疫調節化合物が、タクロリムス、ラパマイシン、エベロリムス、ＡＺＤ８０５５、フィルゴチニブ、トファシチニブ（ｔｏｆａｃｉｔｎｉｂ）、セロンセルチブ、ＡＭＧ１、ＡＭＧ２、ロシグリタゾン、ロベグリタゾンまたは非ＰＯ４受容フィンゴリモドアナログである、請求項１から２３または２６から５１のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項５３】
第１の抗原結合ドメインが、第１の抗原に特異的に結合する抗体由来の単鎖可変断片を含む、請求項１から５２のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項５４】
第１の抗原結合ドメインが、表１に示される配列のセットとの少なくとも８０％の配列同一性を有する６つのＣＤＲのセットを含む、請求項１から５３のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項５５】
第１の抗原結合ドメインが、
ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｃ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｄ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｅ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号３０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｆ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｇ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｈ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｉ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｊ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号５６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号５８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号５９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｋ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号６４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号６５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号６６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｌ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号７０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号７１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号７２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｍ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号７５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号７６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号７７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号７８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｎ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号８２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号８３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号８４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｏ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号８８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号８９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号９０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｐ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号９４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号９５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号９６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｑ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１００のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｒ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｓ）配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｔ）配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｕ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｖ）配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｗ）配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｘ）配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｙ）配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｚ）配列番号１４８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１５０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１５１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１５２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１５３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ａａ）配列番号１５４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１５６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１５７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１５８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１５９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｂｂ）配列番号１６０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１６１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１６２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１６４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１６５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｃｃ）配列番号１６６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１６７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１６８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１６９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１７０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１７１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｄｄ）配列番号１７２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１７３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１７４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１７５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１７６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１７７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｅｅ）配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１８０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１８１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１８２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１８３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｆｆ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１８５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１８６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１８７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１８８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１８９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｇｇ）配列番号１９０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１９１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１９２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１９３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１９４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１９５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｈｈ）配列番号１９６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１９７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１９８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１９９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２００のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２０１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｉｉ）配列番号２０２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２０４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２０５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２０７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｊｊ）配列番号２０８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２０９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２１０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２１１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２１２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２１３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｋｋ）配列番号２１４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２１５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２１６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２１７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２１８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２１９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｌｌ）配列番号２２０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２２１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２２２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２２３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２２４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２２５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｍｍ）配列番号２２６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２２７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２２８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２２９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２３０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２３１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｎｎ）配列番号２３２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２３４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２３５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２３６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２３７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２３８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｏｏ）配列番号２３９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２４０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２４１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２４２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２４３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２４４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｐｐ）配列番号２４５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２４６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２４７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２４８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２４９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２５０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｑｑ）配列番号２５１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２５２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２５３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２５４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２５５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２５６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｒｒ）配列番号２５７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２５８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２５９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２６０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２６１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２６２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｓｓ）配列番号２６３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２６４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２６５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２６６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２６７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２６８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｔｔ）配列番号２６９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２７０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２７１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２７２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２７３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２７４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｕｕ）配列番号２７５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２７６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２７７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２７８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２７９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２８０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｖｖ）配列番号２８１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２８２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２８３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２８４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２８５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２８６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｗｗ）配列番号２８７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２８８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２８９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２９０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２９１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２９２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｘｘ）配列番号２９３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２９４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２９５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２９６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２９７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２９８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｙｙ）配列番号４４０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４４１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号４４２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号４４３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４４４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４４５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｚｚ）配列番号４４６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４４７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号４４８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号４４９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４５０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４５１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ａａａ）配列番号４５２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４５３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号４５４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号４５５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４５６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４５７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｂｂｂ）配列番号４５８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４５９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号４６０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号４６１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４６２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４６３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｃｃｃ）配列番号４６４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４６５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号４６６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号４６７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４６８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４６９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｄｄｄ）配列番号４７０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４７１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号４７２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号４７３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４７４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４７５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；または
ｅｅｅ）配列番号４７６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４７７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号４７８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号４７９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４８０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４８１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３
との少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲのセットを含む、請求項１から５４のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項５６】
第２の結合ドメインが、第２の抗原に特異的な抗体由来の単鎖可変断片を含む、請求項１８から５５のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項５７】
第２の結合ドメインが、配列番号８５〜配列番号２９８として表１に示されるＣＤＲのセットとの少なくとも８０％の配列を有する６つのＣＤＲのセットを含む、請求項１８から５６のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項５８】
第２の抗原結合ドメインが、
ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号８８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号８９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号９０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｂ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号９４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号９５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号９６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｃ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１００のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｄ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｅ）配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｆ）配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｇ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｈ）配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｉ）配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｊ）配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｋ）配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｌ）配列番号１４８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１５０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１５１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１５２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１５３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｍ）配列番号１５４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１５６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１５７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１５８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１５９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｎ）配列番号１６０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１６１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１６２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１６４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１６５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｏ）配列番号１６６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１６７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１６８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１６９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１７０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１７１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｐ）配列番号１７２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１７３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１７４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１７５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１７６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１７７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｑ）配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１８０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１８１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１８２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１８３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｒ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１８５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１８６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１８７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１８８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１８９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｓ）配列番号１９０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１９１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１９２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１９３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１９４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１９５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｔ）配列番号１９６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１９７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１９８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１９９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２００のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２０１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｕ）配列番号２０２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２０４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２０５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２０７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｖ）配列番号２０８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２０９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２１０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２１１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２１２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２１３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｗ）配列番号２１４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２１５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２１６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２１７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２１８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２１９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｘ）配列番号２２０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２２１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２２２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２２３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２２４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２２５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｙ）配列番号２２６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２２７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２２８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２２９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２３０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２３１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｚ）配列番号２３２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２３４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２３５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２３６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２３７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２３８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ａａ）配列番号２３９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２４０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２４１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２４２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２４３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２４４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｂｂ）配列番号２４５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２４６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２４７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２４８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２４９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２５０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｃｃ）配列番号２５１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２５２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２５３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２５４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２５５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２５６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｄｄ）配列番号２５７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２５８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２５９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２６０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２６１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２６２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｅｅ）配列番号２６３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２６４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２６５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２６６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２６７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２６８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｆｆ）配列番号２６９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２７０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２７１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２７２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２７３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２７４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｇｇ）配列番号２７５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２７６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２７７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２７８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２７９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２８０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｈｈ）配列番号２８１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２８２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２８３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２８４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２８５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２８６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
ｉｉ）配列番号２８７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２８８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２８９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２９０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２９１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２９２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；または
ｊｊ）配列番号２９３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２９４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２９５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２９６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２９７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２９８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３
との少なくとも８０％の配列同一性を有する６つのＣＤＲのセットを含む、請求項１８から５７のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項５９】
第１の抗原結合ドメインが、表２に示される重鎖可変領域および軽鎖可変領域のペアとの少なくとも８０％の配列同一性を有する抗体重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、請求項１から５または１２から５８のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項６０】
第１の抗原結合ドメインが、
ａ）配列番号３００のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号２９９のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｂ）配列番号３０１のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号２９９のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｃ）配列番号３０２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３０３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｄ）配列番号３０４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３０５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｅ）配列番号３０６のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３０７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｆ）配列番号３０８のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３０９のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｇ）配列番号３１０のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３１１のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｈ）配列番号３１２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３１３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｉ）配列番号３１４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３１５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｊ）配列番号３１６のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３１７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｋ）配列番号３１８のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３２０のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｌ）配列番号３１９のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３２０のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｍ）配列番号３２１のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３２２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｎ）配列番号３２３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３２４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｏ）配列番号３２５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３２６のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｐ）配列番号３２７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３２８のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｑ）配列番号３２９のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３３０のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｒ）配列番号３３１のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３３４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｓ）配列番号３３１のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３３５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｔ）配列番号３３２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３３４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｕ）配列番号３３２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３３５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｖ）配列番号３３３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３３４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｗ）配列番号３３３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３３５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｘ）配列番号３３６のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３３７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｙ）配列番号３３８のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３３９のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｚ）配列番号３４０のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３４１のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ａａ）配列番号３４２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３４３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｂｂ）配列番号３４４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３４５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｃｃ）配列番号３４６のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３４７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｄｄ）配列番号３４８のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３４９のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｅｅ）配列番号３５０のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３５１のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｆｆ）配列番号３５２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３５３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｇｇ）配列番号３５４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３５５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｈｈ）配列番号３５６のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３５７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｉｉ）配列番号３５８のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３５９のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｊｊ）配列番号３５８のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３６０のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｋｋ）配列番号３６１のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３６２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｌｌ）配列番号３６３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３６４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｍｍ）配列番号３６５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３６６のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｎｎ）配列番号３６７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３６８のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｏｏ）配列番号３６７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３６９のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｐｐ）配列番号３６７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３７０のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｑｑ）配列番号３６７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３７１のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｒｒ）配列番号３６７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３７２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｓｓ）配列番号３７４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３７３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｔｔ）配列番号３７５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３７６のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｕｕ）配列番号３７７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３７８のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｖｖ）配列番号３７９のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３８０のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｗｗ）配列番号３８１のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３８２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｘｘ）配列番号３８４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３８３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｙｙ）配列番号３８５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３８６のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｚｚ）配列番号３８７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３８８のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ａａａ）配列番号３８９のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３９０のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｂｂｂ）配列番号３９１のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３９２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｃｃｃ）配列番号３９３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３９４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｄｄｄ）配列番号３９５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３９６のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｅｅｅ）配列番号３９７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３９８のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｆｆｆ）配列番号３９９のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４００のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｇｇｇ）配列番号４０１のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４０２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｈｈｈ）列番号４０３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４０４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｉｉｉ）配列番号４０５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４０６のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｊｊｊ）配列番号４０７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４０８のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｋｋｋ）配列番号４０９のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４１０のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｌｌｌ）配列番号４１１のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４１２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｍｍｍ）配列番号４１３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４１４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｎｎｎ）配列番号４１５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４１６のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｏｏｏ）配列番号４１７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４１８のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｐｐｐ）配列番号４１９のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４２０のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｑｑｑ）配列番号４２１のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４２２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｒｒｒ）配列番号４２３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４２４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｓｓｓ）配列番号４２５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４２６のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｔｔｔ）配列番号４２７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４２８のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｕｕｕ）配列番号４２９のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４３０のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｖｖｖ）配列番号４３１のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４３２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｗｗｗ）配列番号４３３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４３４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｘｘｘ）配列番号４３５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４３６のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｙｙｙ）配列番号４８２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４８３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｚｚｚ）配列番号４８４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４８５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ａａａａ）配列番号４８６のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４８７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｂｂｂｂ）配列番号４８８のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４８９のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；または
ｃｃｃｃ）配列番号４９０のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４９１のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列
を含む、請求項１から５または１２から５９のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項６１】
第２の結合ドメインが、配列番号３５２〜配列番号４３６として表２に示される重鎖可変領域および軽鎖可変領域のペアとの少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、請求項１８から６０のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項６２】
第２の抗原結合ドメインが、
ａ）配列番号３５２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３５３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｂ）配列番号３５４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３５５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｃ）配列番号３５６のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３５７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｄ）配列番号３５８のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３５９のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｅ）配列番号３５８のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３６０のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｆ）配列番号３６１のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３６２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｇ）配列番号３６３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３６４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｈ）配列番号３６５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３６６のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｉ）配列番号３６７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３６８のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｊ）配列番号３６７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３６９のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｋ）配列番号３６７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３７０のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｌ）配列番号３６７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３７１のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｍ）配列番号３６７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３７２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｎ）配列番号３７４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３７３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｏ）配列番号３７５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３７６のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｐ）配列番号３７７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３７８のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｑ）配列番号３７９のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３８０のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｒ）配列番号３８１のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３８２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｓ）配列番号３８４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３８３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｔ）配列番号３８５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３８６のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｕ）配列番号３８７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３８８のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｖ）配列番号３８９のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３９０のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｗ）配列番号３９１のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３９２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｘ）配列番号３９３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３９４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｙ）配列番号３９５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３９６のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｚ）配列番号３９７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３９８のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ａａ）配列番号３９９のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４００のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｂｂ）配列番号４０１のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４０２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｃｃ）配列番号４０３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４０４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｄｄ）配列番号４０５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４０６のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｅｅ）配列番号４０７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４０８のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｆｆ）配列番号４０９のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４１０のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｇｇ）配列番号４１１のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４１２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｈｈ）配列番号４１３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４１４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｉｉ）配列番号４１５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４１６のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｊｊ）配列番号４１７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４１８のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｋｋ）配列番号４１９のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４２０のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｌｌ）配列番号４２１のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４２２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｍｍ）配列番号４２３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４２４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｎｎ）配列番号４２５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４２６のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｏｏ）配列番号４２７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４２８のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｐｐ）配列番号４２９のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４３０のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｑｑ）配列番号４３１のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４３２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；
ｒｒ）配列番号４３３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４３４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；または
ｓｓ）配列番号４３５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４３６のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列
を含む、請求項１８から６１のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項６３】
ａ）第２の結合ドメイン−Ｆｃドメイン−第１の抗原結合ドメイン融合タンパク質の第１の抗原結合ドメインが、配列番号１〜配列番号２９８として表１に示されるＣＤＲのセットまたは配列番号２９９〜配列番号４３６として表２に示される重鎖可変領域および軽鎖可変領域のペアとの少なくとも８０％の配列同一性を有する６つのＣＤＲのセットを含み；
ｂ）第２の結合ドメイン−Ｆｃドメイン−第１の抗原結合ドメイン融合タンパク質の第２の結合ドメインが、配列番号８５〜配列番号２９９として表に示されるＣＤＲのセットまたは配列番号３５２〜配列番号４３６として表２に示される重鎖可変領域および軽鎖可変領域のペアとの少なくとも８０％の配列同一性を有する６つのＣＤＲのセットを含み；
ｃ）第２の結合ドメイン−Ｆｃドメイン−第１の抗原結合ドメイン融合タンパク質のＦｃドメインが、
ｉ．（ｉ）配列番号４３７〜配列番号４３９のいずれか１つとの少なくとも８０％の配列同一性；または
ｉｉ．ａ）カバット番号付けのＥＵインデックスにおいて、および配列番号４３７に対してＮ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｇ、Ｎ２９７ＱまたはＮ２９７Ｇ；
ｂ）カバット番号付けのＥＵインデックスにおいて、および配列番号４３７に対してＫ３２２Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ；
ｃ）カバット番号付けのＥＵインデックスにおいて、および配列番号４３７に対してＬ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ  Ｎ２９６Ａ；
ｄ）カバット番号付けのＥＵインデックスにおいて、および配列番号４３７に対してＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ；および
ｅ）カバット番号付けにおいてＳ２２８Ｐ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３２９Ｇを含むＩｇＧ４  Ｆｃドメイン
からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基変化
を含む、
請求項４２に記載の第２の結合ドメイン−Ｆｃドメイン−第１の抗原結合ドメイン融合タンパク質。
【請求項６４】
ａ）第２の結合ドメイン−第１の抗原結合ドメイン−Ｆｃドメイン融合タンパク質の第１の抗原結合ドメインが、配列番号１〜配列番号２９９として表１に示されるＣＤＲのセットまたは配列番号２９９〜配列番号４３６として表２に示される重鎖可変領域および軽鎖可変領域のペアとの少なくとも８０％の配列同一性を有する６つのＣＤＲのセットを含み；
ｂ）第２の結合ドメイン−第１の抗原結合ドメイン−Ｆｃドメイン融合タンパク質の第２の結合ドメインが、配列番号８５〜配列番号２９９として表１に示されるＣＤＲのセットまたは配列番号３５２〜配列番号４３６として表２に示される重鎖可変領域および軽鎖可変領域のペアとの少なくとも８０％の配列同一性を有する６つのＣＤＲのセットを含み；
ｃ）第２の結合ドメイン−第１の抗原結合ドメイン−Ｆｃドメイン融合タンパク質のＦｃドメインが、
ｉ．（ｉ）配列番号４３７〜配列番号４３９のいずれか１つとの少なくとも８０％の配列同一性；または
ｉｉ．ａ）カバット番号付けのＥＵインデックスにおいて、および配列番号４３７に対してＮ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｇ、Ｎ２９７ＱまたはＮ２９７Ｇ；
ｂ）カバット番号付けのＥＵインデックスにおいて、および配列番号４３７に対してＫ３２２Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ；
ｃ）カバット番号付けのＥＵインデックスにおいて、および配列番号４３７に対してＬ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ  Ｎ２９６Ａ；
ｄ）カバット番号付けのＥＵインデックスにおいて、および配列番号４３７に対してＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ；および
ｅ）カバット番号付けにおいてＳ２２８Ｐ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３２９Ｇを含むＩｇＧ４  Ｆｃドメイン
からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基変化
を含む、
請求項４３に記載の第２の結合ドメイン−第１の抗原結合ドメイン−Ｆｃドメイン融合タンパク質。
【請求項６５】
第１の抗原が、星細胞、有足細胞または筋線維芽細胞によって発現される抗原である、請求項１から６４のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項６６】
第２の抗原が、星細胞、有足細胞または筋線維芽細胞によって発現される抗原である、請求項１８から６５のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項６７】
請求項１から６６のいずれか一項に記載のコンジュゲートと、薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物。
【請求項６８】
それを必要とする対象のための治療方法であって、治療的有効用量の請求項１から６６のいずれか一項に記載のコンジュゲートまたは請求項６７に記載の薬学的組成物を投与することを含む方法。
【請求項６９】
対象が自己免疫疾患、炎症性疾患または線維性疾患を有する、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
コンジュゲートが、静脈内投与、皮膚投与、皮下投与される、または患部で注射される、請求項６８から６９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７１】
対象へのコンジュゲートの投与後、対象において炎症が減少する、請求項６８から７０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７２】
対象へのコンジュゲートの投与後、対象において線維症が減少する、請求項６８から７０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７３】
対象へのコンジュゲートの投与後、対象において免疫抑制が増加する、請求項６８から７０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７４】
対象へのコンジュゲートの投与後、対象において免疫寛容が増加する、請求項６８から７０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７５】
第１の抗原が、カドヘリン１１、ＬＲＲＣ１５およびＦＡＰからなる群から選択される、請求項７２に記載の方法。
【請求項７６】
免疫調節化合物が、ＴＧＦβＲＩ、ＴＧＦβＲＩＩ、ＴＮＫＳまたはＴＮＩＫの阻害剤である、請求項７２または７５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７７】
ＦｃドメインがＦｃヌルである、請求項６８から７６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７８】
薬学的に許容される投与単位の薬学的有効量の請求項１から６６のいずれか一項に記載のコンジュゲートまたは請求項６７に記載の薬学的組成物を含むキット。
【請求項７９】
線維性疾患を有する対象を治療する方法であって、
ａ）ＴＧＦβＲＩ、ＴＧＦβＲＩＩ、ＴＮＫＳまたはＴＮＩＫの阻害剤またはアンタゴニストから選択される免疫調節化合物と；
ｂ）第１の抗原結合ドメインおよびＦｃドメインを含む抗体コンストラクトであって、第１の抗原結合ドメインが第１の抗原に特異的に結合し、第１の抗原が、ＬＲＲＣ１５、ＰＤＧＦＲβ、インテグリンαｖβ１、インテグリンαｖβ３、インテグリンαｖβ６、インテグリンαｖβ８、エンドシアリン、ＦＡＰ、ＡＤＡＭ１２、ＭＭＰ１４、ＰＤＰＮ、ＣＤＨ１１およびＦ２ＲＬ２からなる群から選択される抗体コンストラクトと；
ｃ）抗体コンストラクトを免疫調節化合物に結合するリンカーであって、抗体コンストラクトと共有結合的に結合しており、免疫調節化合物と共有結合的に結合しており、免疫調節化合物対抗体コンストラクトのモル比が２０未満であるリンカーと
を含むコンジュゲートを含む治療的有効用量の薬学的組成物を対象に投与することを含む方法。
【請求項８０】
ＦｃドメインがＦｃヌルである、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
線維性疾患を有する対象を治療する方法であって、
ａ）免疫調節化合物と；
ｂ）第２の化合物と；
ｃ）免疫調節化合物および活性を有する第２の化合物に共有結合的に結合した１〜１００個の直鎖非水素原子を含むスペーサーと；
ｄ）第１の抗原結合ドメインおよびＦｃドメインを含む抗体コンストラクトであって、第１の抗原結合ドメインが第１の抗原に特異的に結合し、第１の抗原が、ＬＲＲＣ１５、ＰＤＧＦＲβ、インテグリンαｖβ１、インテグリンαｖβ３、インテグリンαｖβ６、インテグリンαｖβ８、エンドシアリン、ＦＡＰ、ＡＤＡＭ１２、ＭＭＰ１４、ＰＤＰＮ、ＣＤＨ１１およびＦ２ＲＬ２からなる群から選択される抗体コンストラクトと；
ｅ）抗体コンストラクトを免疫調節化合物、第２の化合物またはスペーサーに結合するリンカーであって、抗体コンストラクトと共有結合的に結合しており、免疫調節化合物、第２の化合物またはスペーサーと共有結合的に結合しているリンカーと
を含むコンジュゲートを含む治療的有効用量の薬学的組成物を対象に投与することを含む方法。
【請求項８２】
ＦｃドメインがＦｃヌルである、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
第２の化合物がＥ３ユビキチンリガーゼに結合する、請求項８１から８２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８４】
Ｅ３ユビキチンリガーゼが、Ｖｏｎ  Ｈｉｐｐｅｌ−Ｌｉｎｄａｕｅ  Ｅ３ユビキチンリガーゼ（ＶＨＬ）、セレブロン、マウス二重微小染色体２ホモログ（ＭＤＭ２）、ＡＭＦＲ、ＡＰＣ／Ｃｄｃ２０、ＡＰＣ／Ｃｄｈ１、Ｃ６ｏｒｆ１５７、Ｃｂｌ、ＣＢＬＬ１、ＣＨＦＲ、ＣＨＩＰ、ＤＴＬ（Ｃｄｔ２）、Ｅ６−ＡＰ、ＨＡＣＥ１、ＨＥＣＴＤ１、ＨＥＣＴＤ２、ＨＥＣＴＤ３、ＨＥＣＷ１、ＨＥＣＷ２、ＨＥＲＣ２、ＨＥＲＣ３、ＨＥＲＣ４、ＨＥＲＣ５、ＨＵＷＥ１、ＨＹＤ、ＩＴＣＨ、ＬＮＸ１、マホグニン（ｍａｈｏｇｕｎｉｎ）、ＭＡＲＣＨ−Ｉ、ＭＡＲＣＨ−ＩＩ、ＭＡＲＣＨ−ＩＩＩ、ＭＡＲＣＨ−ＩＶ、ＭＡＲＣＨ−ＶＩ、ＭＡＲＣＨ−ＶＩＩ、ＭＡＲＣＨ−ＶＩＩＩ、ＭＡＲＣＨ−Ｘ、ＭＥＫＫ１、ＭＩＢ１、ＭＩＢ２、ＭｙｃＢＰ２、ＮＥＤＤ４、ＮＥＤＤ４Ｌ、パーキン、ＰＥＬＩ１、Ｐｉｒｈ２、ＰＪＡ１、ＰＪＡ２、ＲＦＦＬ、ＲＦＷＤ２、Ｒｉｃｔｏｒ、ＲＮＦ５、ＲＮＦ８、ＲＮＦ１９、ＲＮＦ１９０、ＲＮＦ２０、ＲＮＦ３４、ＲＮＦ４０、ＲＮＦ１２５、ＲＮＦ１２８、ＲＮＦ１３８、ＲＮＦ１６８、ＳＣＦ／？−ＴｒＣＰ、ＳＣＦ／ＦＢＷ７、ＳＣＦ／Ｓｋｐ２、ＳＨＰＲＨ、ＳＩＡＨ１、ＳＩＡＨ２、ＳＭＵＲＦ１、ＳＭＵＲＦ２、ＴＯＰＯＲＳ、ＴＲＡＦ６、ＴＲＡＦ７、ＴＲＩＭ６３、ＵＢＥ３Ｂ、ＵＢＥ３Ｃ、ＵＢＲ１、ＵＢＲ２、ＵＨＲＦ２、ＷＷＰ１、ＷＷＰ２またはＺＮＲＦ１からなる群から選択される、請求項８３に記載の方法。
【請求項８５】
Ｅ３ユビキチンリガーゼがＶＨＬまたはセレブロンである、請求項８４に記載の方法。
【請求項８６】
第１の抗原がカドヘリン１１、ＬＲＲＣ１５またはＦＡＰである、請求項８１から８５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８７】
線維性疾患が、癒着性関節包炎、動脈壁硬化、関節線維症、心房線維症、硬変、クローン病、膠原性線維腫、嚢胞性線維症、デスモイド型線維腫症、デュピュイトラン拘縮、弾性線維腫、心内膜心筋線維症、腱鞘線維腫、グリア瘢痕、突発性肺線維症、ケロイド、縦隔線維症、骨髄線維症、項部線維腫、腎性全身性線維症、陳旧性心筋梗塞、ペイロニー病、肺線維症、進行性塊状線維症、放射線誘発性肺障害、後腹膜線維症、瘢痕および強皮症／全身性硬化症からなる群から選択される、請求項７９から８６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８８】
免疫調節化合物が、ＴＧＦβＲ１アンタゴニストまたはＴＧＦβＲ２アンタゴニストである、請求項７９から８７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８９】
抗体コンストラクトが抗体である、請求項７９から８８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９０】
抗体がＬＲＲＣ１５またはＦＡＰに特異的に結合する、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
抗体が、配列番号３１８〜配列番号３３５または配列番号４８２〜配列番号４９１として示される重軽可変領域配列のペアから選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、請求項９０に記載の方法。
【請求項９２】
自己免疫疾患、炎症性疾患または線維症を治療するための医薬の調製における請求項１から６６のいずれか一項に記載のコンジュゲートの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
優先権
本出願は、その全内容が本明細書に参照により援用される、２０１７年６月７日に出願された米国仮特許出願第６２／５１６６３８号に基づく米国特許法第１１９条（ｅ）の下での優先権の利益を主張するものである。
【背景技術】
【０００２】
自己免疫疾患および自己炎症性疾患は、体の正常な部分に対する免疫系の異常な応答から生じ得る。自己免疫疾患では、適応免疫系が体自身の組織を攻撃し得る。例えば、自己免疫疾患の１つの特徴は、患者の正常な組織での抗原に対する自己抗体の産生であり得る。持続性炎症が自己免疫疾患の別の症状であり、関節リウマチ、炎症性腸疾患、全身性エリテマトーデスおよび多発性硬化症などの一般的な自己免疫疾患の発病において役割を果たし得る。自己免疫疾患の治療は、一般的に免疫系の活動を低下させることに焦点を当てるが、多くの患者は、現在の治療法に反応できないまたは疾患が治療に抵抗性になる。よって、新たなより耐久性のある治療が必要である。
【０００３】
線維症は、修復または反応過程での臓器または組織における過剰な線維性結合組織または瘢痕組織の形成であり得る。線維症は、典型的には炎症または損傷の結果として、肺、腎臓、肝臓、心臓および脳を含み得る体内の多くの組織で起こり得る。瘢痕組織は動脈をブロックし、関節を固定化し、内臓に損傷を与え、これが生体機能を維持する体の能力に悪影響を及ぼし得る。毎年、線維症の損傷効果により、数百万人が入院している。しかしながら、線維性疾患を治療するための現在の治療法は不足しているまたは欠点を有する。よって、線維性疾患のための代替のまたは改善された治療がかなり必要とされている。
【発明の概要】
【０００４】
種々の態様では、免疫調節化合物と；第１の抗原結合ドメインおよびＦｃドメインを含む抗体コンストラクトであって、第１の抗原結合ドメインが第１の抗原に特異的に結合し、第１の抗原が、カドヘリン１１、ＰＤＰＮ、インテグリンα４β７、インテグリンα２β１、ＭＡＤＣＡＭ、ネフリン、ポドシン、ＩＦＮＡＲ１、ＢＤＣＡ２、ＣＤ３０、ｃ−ＫＩＴ、ＦＡＰ、ＣＤ７３、ＣＤ３８、ＰＤＧＦＲβ、インテグリンαｖβ１、インテグリンαｖβ３、インテグリンαｖβ８、ＧＡＲＰ、エンドシアリン、ＣＴＧＦ、インテグリンαｖβ６、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＴＮＦＲ２、ＤＥＣ２０５、ＤＣＩＲ、ＣＤ８６、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ４５ＲＯ、ＭＨＣクラスＩＩおよびＣＤ２５、ならびにこれらの断片からなる群から選択される抗原との少なくとも８０％の配列同一性を有する抗体コンストラクトと；抗体コンストラクトを免疫調節化合物に結合するリンカーであって、抗体コンストラクトと共有結合的に結合しており、免疫調節化合物と共有結合的に結合しており、場合により免疫調節化合物対抗体コンストラクトのモル比が８未満であるリンカーとを含むコンジュゲートの組成物が提供される。いくつかの態様では、第１の抗原が、ＬＲＲＣ１５、カドヘリン１１、ＰＤＰＮ、インテグリンα４β７、インテグリンα２β１、ＭＡＤＣＡＭ、ネフリン、ポドシン、ＩＦＮＡＲ１、ＢＤＣＡ２、ＣＤ３０、ｃ−ＫＩＴ、ＦＡＰ、ＣＤ７３、ＣＤ３８、ＰＤＧＦＲβ、インテグリンαｖβ１、インテグリンαｖβ３、インテグリンαｖβ８、ＧＡＲＰ、エンドシアリン、ＣＴＧＦ、インテグリンαｖβ６、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＴＮＦＲ２、ＤＥＣ２０５、ＤＣＩＲ、ＣＤ８６、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ４５ＲＯ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＣＤ２５、ＭＭＰ１４、ＧＰＸ８およびＦ２ＲＬ２から選択される。いくつかの態様では、第１の抗原がＦＡＰ、ＬＲＲＣ１５、カドヘリン１１（ＣＤＨ１１）およびＴＮＦＲ２から選択される。いくつかの態様では、免疫調節化合物が、星細胞、筋線維芽細胞、滑膜線維芽細胞、上皮細胞、有足細胞または免疫細胞に対して活性を有する。いくつかの態様では、免疫調節化合物が、星細胞、筋線維芽細胞または免疫細胞に対して活性を有する。
【０００５】
種々の態様では、コンジュゲートが、免疫調節化合物と；第２の化合物と；免疫調節化合物および第２の化合物に共有結合的に結合した１〜１００個の直鎖非水素原子を含むスペーサーと；第１の抗原結合ドメインおよびＦｃドメインを含む抗体コンストラクトであって、第１の抗原結合ドメインが第１の抗原に特異的に結合し、第１の抗原が、カドヘリン１１、ＰＤＰＮ、ＬＲＲＣ１５、インテグリンα４β７、インテグリンα２β１、ＭＡＤＣＡＭ、ネフリン、ポドシン、ＩＦＮＡＲ１、ＢＤＣＡ２、ＣＤ３０、ｃ−ＫＩＴ、ＦＡＰ、ＣＤ７３、ＣＤ３８、ＰＤＧＦＲβ、インテグリンαｖβ１、インテグリンαｖβ３、インテグリンαｖβ８、ＧＡＲＰ、エンドシアリン、ＣＴＧＦ、インテグリンαｖβ６、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＴＮＦＲ２、ＤＥＣ２０５、ＤＣＩＲ、ＣＤ８６、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ４５ＲＯ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＣＤ２５、ＬＲＲＣ１５、ＭＭＰ１４、ＧＰＸ８およびＦ２ＲＬ２、ならびにこれらの断片からなる群から選択される抗原との少なくとも８０％の配列同一性を有する抗体コンストラクトと；抗体コンストラクトを免疫調節化合物、第２の化合物またはスペーサーに結合するリンカーであって、抗体コンストラクトと共有結合的に結合しており、免疫調節化合物、第２の化合物またはスペーサーと共有結合的に結合しているリンカーとを含む。いくつかの態様では、第２の化合物がＥ３ユビキチンリガーゼに結合する。いくつかの態様では、第２の化合物が第２の免疫調節化合物である。いくつかの態様では、第２の免疫調節化合物と免疫調節化合物が同じである。いくつかのさらなる態様では、第１の抗原が、カドヘリン１１、ＰＤＰＮ、インテグリンα４β７、インテグリンα２β１、ＭＡＤＣＡＭ、ネフリン、ポドシン、ＩＦＮＡＲ１、ＢＤＣＡ２、ＣＤ３０、ｃ−ＫＩＴ、ＦＡＰ、ＣＤ７３、ＣＤ３８、ＰＤＧＦＲβ、インテグリンαｖβ１、インテグリンαｖβ３、インテグリンαｖβ８、ＧＡＲＰ、エンドシアリン、ＣＴＧＦ、インテグリンαｖβ６、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＴＮＦＲ２、ＤＥＣ２０５、ＤＣＩＲ、ＣＤ８６、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ４５ＲＯ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＣＤ２５およびＬＲＲＣ１５から選択される。いくつかの態様では、第１の抗原が、ＦＡＰ、ＬＲＲＣ１５、カドヘリン１１およびＴＮＦＲ２から選択される。いくつかの態様では、免疫調節化合物が、星細胞、筋線維芽細胞、滑膜線維芽細胞、上皮細胞、有足細胞または免疫細胞に対して活性を有する。いくつかの態様では、免疫調節化合物が、星細胞、筋線維芽細胞または免疫細胞に対して活性を有する。
【０００６】
種々の態様では、コンジュゲートが、免疫調節化合物と；第１の抗原結合ドメインおよびＦｃドメインを含む抗体コンストラクトであって、第１の抗原結合ドメインが第１の抗原に特異的に結合し、第１の抗原がタンパク質複合体、タンパク質コンフォーマー、転写後修飾または翻訳後修飾を含む抗体コンストラクトと；抗体コンストラクトを免疫調節化合物に結合するリンカーであって、抗体コンストラクトと共有結合的に結合しており、免疫調節化合物と共有結合的に結合しており、免疫調節化合物対抗体コンストラクトのモル比が８未満であるリンカーとを含む。いくつかの態様では、第１の抗原が、翻訳後修飾またはタンパク質コンフォーマー、例えばＣＤ４５ＲＢスプライスバリアントまたはＣＤ４５ＲＯスプライスバリアントである。いくつかの態様では、第１の抗原がインテグリンペアのタンパク質複合体である。いくつかの態様では、インテグリンペアがαｖβ６を含む。
【０００７】
いくつかの態様では、免疫調節化合物が、タンパク質標的に結合する第１の部分と、Ｅ３ユビキチンリガーゼに結合する第２の部分とを含む。いくつかの態様では、第１の部分が、５〜２０個の直鎖非水素原子を含むスペーサーを介して第２の部分に共有結合的に結合している。いくつかの態様では、免疫調節化合物の存在下（免疫調節化合物が抗体コンストラクトに結合している場合）での第１の抗原結合ドメインと第１の抗原の結合についてのＫｄが、約１００ｎＭ未満であり、免疫調節化合物の非存在下（すなわち、免疫調節化合物が抗体コンストラクトに結合していない）での第１の抗原結合ドメインと第１の抗原の結合についてのＫｄの約１００倍以下である。いくつかの態様では、免疫調節化合物の存在下（すなわち、免疫調節化合物が抗体コンストラクトに結合している）でのＦｃドメインとＦｃγ受容体の結合についてのＫｄが、免疫調節化合物の非存在下（すなわち、免疫調節化合物が抗体コンストラクトに結合していない）でのＦｃドメインとＦｃγ受容体の結合についてのＫｄの２倍、５倍または１０倍に等しいまたはそれ以下である。いくつかの態様では、ＦｃドメインとＦｃγ受容体の結合についてのＫｄが、免疫調節化合物の非存在下でのＩｇＧ１  ＦｃドメインとＦｃγ受容体の結合についてのＫｄの１００倍超であり、免疫調節化合物の存在下でのＦｃドメインとＦｃＲｎ受容体の結合についてのＫｄが、免疫調節化合物の非存在下でのＦｃドメインとＦｃＲｎ受容体の結合についてのＫｄの約２倍、５倍または１０倍に少なくとも等しいまたは少なくともそれ以下である。いくつかの態様では、免疫調節化合物の存在下でのＦｃドメインとＦｃＲｎ受容体の結合についてのＫｄが、免疫調節化合物の非存在下でのＦｃドメインとＦｃＲｎ受容体の結合についてのＫｄの約２倍、５倍または１０倍に少なくとも等しいまたは少なくともそれ以下である。いくつかの実施形態では、ＦｃドメインがＦｃヌルである。
【０００８】
いくつかの態様では、抗体コンストラクトが、第２の結合ドメインをさらに含む。いくつかの態様では、コンジュゲートの免疫調節化合物が、細胞表面上で第１の抗原、第２の抗原または両方を発現している細胞内のタンパク質標的の活性を低下させる。いくつかの態様では、コンジュゲートが、細胞表面上で第１の抗原、第２の抗原または両方を発現している細胞内の標的タンパク質分解を増加させることによって、タンパク質標的の活性を低下させる。いくつかの態様では、コンジュゲートが、細胞表面上で第１の抗原、第２の抗原または両方を発現している細胞内のタンパク質標的の活性を増加させる。いくつかの態様では、コンジュゲートが、細胞表面上で第１の抗原、第２の抗原または両方を発現している細胞内のタンパク質標的の活性を変化させる。いくつかの態様では、コンジュゲートが、細胞表面上で第１の抗原、第２の抗原または両方を発現していない細胞と比較して、細胞表面上で第１の抗原、第２の抗原または両方を発現している細胞内のタンパク質標的の活性を変化させる。いくつかの態様では、コンジュゲートが、細胞表面上で第１の抗原、第２の抗原または両方を発現している細胞内のタンパク質標的の活性を増加させ、第１の部分がＡ２ａＲ、ＰＰ２Ａ、ＰＰＡＲｇ、ビタミンＤ受容体（ＶＤＲ）またはＫＣＡ３．１のアゴニストである。いくつかの態様では、コンジュゲートが、細胞表面上で第１の抗原、第２の抗原または両方を発現している細胞内のタンパク質標的の活性を低下させ、第１の部分がキナーゼ阻害剤、イオンチャネルアンタゴニストまたはＰＡＲＰ１阻害剤である。いくつかの態様では、コンジュゲートが、細胞表面上で第１の抗原、第２の抗原または両方を発現している細胞内の標的タンパク質分解を増加させることによって、タンパク質標的の活性を低下させ、第１の部分がキナーゼ阻害剤、イオンチャネルアンタゴニストまたはＰＡＲＰ１阻害剤である。いくつかの態様では、コンジュゲートが、星細胞または筋線維芽細胞の線維形成活性を低下させる。いくつかの態様では、コンジュゲートが、活性化免疫細胞の活性化を低下させる、または１つもしくは複数の炎症促進メディエーターの産生を減少させる。いくつかの態様では、コンジュゲートが、免疫細胞の免疫抑制活性または免疫寛容原性活性を増加させる。いくつかの態様では、第２の結合ドメインが第２の抗原に特異的に結合する。いくつかの態様では、第２の抗原が、免疫細胞免疫調節標的のアンタゴニストまたは免疫細胞もしくは組織上の免疫チェックポイント標的のアゴニストである。いくつかの態様では、第２の抗原が、ＴＮＦＲ２、ＣＤ４０、ＣＤ８６、ＰＤ−１、ＴＩＭ３、ＢＴＬＡ、ＤＥＣ２０５、ＤＣＩＲ、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ４５ＲＯ、ＨＬＡ  ＤＲ、ＣＤ３８、ＣＤ７３、ＧＡＲＰ、ＢＤＣＡ２またはＣＤ３０との少なくとも８０％の配列同一性を含む。いくつかの態様では、第２の抗原が、ＴＮＦＲ２、ＣＤ４０、ＣＤ８６、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＴＩＭ３、ＢＴＬＡ、ＤＥＣ２０５、ＤＣＩＲ、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ４５ＲＯ、ＨＬＡ  ＤＲ、ＣＤ３８、ＣＤ７３、ＧＡＲＰ、ＢＤＣＡ２またはＣＤ３０との少なくとも８０％の配列同一性を含む。いくつかの態様では、第２の結合ドメ��ンが、ＦｃドメインのＣ末端で抗体コンストラクトに結合している。いくつかの態様では、第２の結合ドメインが、抗体コンストラクトの軽鎖のＣ末端に結合している。いくつかの態様では、対象へのコンジュゲートの投与後、対象において炎症が減少する。いくつかの態様では、対象へのコンジュゲートの投与後、対象において線維症が減少する。いくつかの態様では、対象へのコンジュゲートの投与後、対象において免疫抑制が増加する。いくつかの態様では、対象へのコンジュゲートの投与後、対象において免疫寛容が増加する。いくつかの態様では、第１の抗原結合ドメインがＣＤ４０アンタゴニストである。いくつかの態様では、第２の結合ドメインが、ａ）Ｆｃドメイン−第２の結合ドメイン融合タンパク質として；ｂ）軽鎖−第２の結合ドメイン融合タンパク質として；またはｃ）第１のリンカーを介したコンジュゲーションによって、Ｆｃドメインまたは第１の抗原結合ドメインの軽鎖に結合している。
【０００９】
いくつかの態様では、Ｆｃドメインが、ａ）Ｆｃドメイン−第１の結合ドメイン融合タンパク質として；またはｂ）第２のリンカーを介したコンジュゲーションによって、第１の抗原結合ドメインに結合している。
【００１０】
いくつかの態様では、Ｆｃドメインが、第２の結合ドメイン−Ｆｃドメイン−第１の抗原結合ドメイン融合タンパク質として、第２の結合ドメインと第１の抗原結合ドメインの両方に結合している。いくつかの態様では、第１の抗原結合ドメインが、第２の結合ドメイン−第１の抗原結合ドメイン−Ｆｃドメイン融合タンパク質として、Ｆｃドメインと第２の結合ドメインの両方に結合している。いくつかの態様では、ａ）第１の抗原結合ドメインおよびＦｃドメインが抗体を構成し、第２の結合ドメインが単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を構成する；または（ｂ）第２の抗原結合ドメインおよびＦｃドメインが抗体を構成し、第１の抗原結合ドメインが単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を構成する。いくつかの態様では、Ｆｃドメインが、Ｆｃドメインの野生型配列と比較して少なくとも１つのアミノ酸残基変化を含むＦｃドメイン変異体である。いくつかの態様では、Ｆｃドメイン変異体が、野生型Ｆｃドメインと比較して変化した親和性でＦｃ受容体に結合する。いくつかの態様では、Ｆｃドメイン変異体が、野生型Ｆｃドメインと比較して低下した親和性でＦｃ受容体に結合する。いくつかの態様では、ＦｃＲｎ受容体に対するＦｃドメイン変異体の親和性が、ＦｃＲｎ受容体に対する野生型Ｆｃドメインの親和性と少なくとも同等の親和性である、またはその１０分の１ではない。いくつかの態様では、Ｆｃドメインが、ａ）カバット番号付けにおいて、および配列番号４３７に対してＮ２９７Ａ；ｂ）カバット番号付けにおいて、および配列番号４３７に対してＮ２９６Ｇ  Ｎ２９７Ａ；ｃ）カバット番号付けにおいて、および配列番号４３７に対してＫ３２２Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ  Ｎ２９６Ａ；ｄ）カバット番号付けにおいて、および配列番号４３７に対してＬ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ  Ｎ２９６Ａからなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基変化を含む。いくつかの態様では、Ｆｃドメインが、カバット番号付けにおいてＳ２２８Ｐ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３２９Ｇを含むＩｇＧ４  Ｆｃドメインを含む。
【００１１】
いくつかの態様では、免疫調節化合物の存在下での第１の抗原結合ドメインと第１の抗原の結合についてのＫｄが、免疫調節化合物の非存在下での第１の抗原結合ドメインと第１の抗原の結合についてのＫｄの約２倍、５倍、１０倍または５０倍以下である。いくつかの態様では、免疫調節化合物の存在下でのＦｃドメインとＦｃ受容体の結合についてのＫｄが、免疫調節化合物の非存在下でのＦｃドメインとＦｃ受容体の結合についてのＫｄの約２倍、５倍、１０倍または５０倍以下である。いくつかの態様では、免疫調節化合物の存在下での第２の抗原結合ドメインと第２の抗原の結合についてのＫｄが、免疫調節化合物の非存在下での第２の結合ドメインと第２の抗原の結合についてのＫｄの約２倍、５倍、１０倍または５０倍以下である。いくつかの態様では、免疫調節化合物が、ＰＩ３Ｋ阻害剤、カルシニューリン阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＢＴＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、ＣＲＡＣ阻害剤、ＰＡＲＰ１アンタゴニスト、ＰＰＡＲｇアゴニスト、Ｋｖ１．３アンタゴニスト、ＫＣａ３．１アンタゴニスト、ＰＰ２Ａアゴニスト、ＩＲＡＫ４阻害剤、ＭＹＤ８８阻害剤、ＢＣＬ−２アンタゴニスト、Ａ２ａＲアゴニスト、ＴＬＲ７アンタゴニスト、ｃ−ＫＩＴキナーゼ阻害剤、ＫＣＡ３．１アゴニスト、ＴＧＦβＲ阻害剤（例えば、ＴＧＦβＲ１および／またはＴＧＦβＲ２阻害剤）、ＡＣＣアンタゴニスト、ＡＳＫ１アンタゴニスト、ＧＬＩ１アンタゴニスト、タンキラーゼ（ＴＮＫＳ）アンタゴニストまたはＴＮＩＫアンタゴニストである。いくつかの態様では、免疫調節化合物が、タクロリムス、ラパマイシン、エベロリムス、ＡＺＤ８０５５、フィルゴチニブ、トファシチニブ（Ｔｏｆａｃｉｔｎｉｂ）、セロンセルチブ、ＡＭＧ１、ＡＭＧ２、ロシグリタゾン、ロベグリタゾンまたは非ＰＯ４受容フィンゴリモドアナログである。いくつかの態様では、第１の抗原結合ドメインが、第１の抗原に特異的な抗体由来の単鎖可変断片を含む。いくつかの態様では、抗体コンストラクトの第１の抗原結合ドメインが、ＣＤＲ残基の割り当てがＩＭＧＴ（国際免疫遺伝学情報システム）により定義される表１に示されるＣＤＲのセットとの少なくとも８０％の配列同一性を有する６つのＣＤＲのセットを含む。いくつかの態様では、第１の抗原結合ドメインが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号３０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号５６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号５８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号５９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号６４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号６５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号６６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号７０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号７１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号７２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号７５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号７６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号７７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号７８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号８２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号８３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号８４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号８８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号８９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号９０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号９４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号９５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号９６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１００のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、
配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号１４８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１５０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１５１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１５２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１５３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号１５４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１５６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１５７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１５８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１５９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号１６０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１６１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１６２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１６４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１６５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号１６６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１６７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１６８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１６９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１７０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１７１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号１７２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１７３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１７４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１７５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１７６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１７７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１８０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１８１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１８２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１８３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号１８４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１８５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１８６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１８７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１８８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１８９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号１９０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１９１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１９２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１９３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１９４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１９５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号１９６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１９７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１９８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１９９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２００のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２０１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号２０２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２０４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２０５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２０７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号２０８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２０９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２１０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２１１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２１２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２１３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号２１４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２１５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２１６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２１７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２１８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２１９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号２２０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２２１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２２２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２２３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２２４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２２５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号２２６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２２７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２２８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２２９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２３０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２３１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号２３２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２３４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２３５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２３６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２３７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２３８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号２３９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２４０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２４１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２４２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２４３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２４４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号２４５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２４６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２４７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２４８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２４９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２５０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号２５１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２５２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２５３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２５４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２５５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２５６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号２５７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２５８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２５９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２６０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２６１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２６２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号２６３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２６４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２６５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２６６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２６７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２６８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号２６９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２７０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２７１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２７２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２７３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２７４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号２７５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２７６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２７７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２７８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２７９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２８０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号２８１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２８２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２８３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２８４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２８５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２８６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号２８７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２８８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２８９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２９０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２９１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２９２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；または配列番号２９３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２９４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２９５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２９６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２９７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２９８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号４４０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４４１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号４４２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号４４３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４４４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４４５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号４４６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４４７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号４４８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号４４９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４５０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４５１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号４５２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４５３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号４５４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号４５５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４５６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４５７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号４５８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４５９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号４６０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号４６１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４６２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４６３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号４６４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４６５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号４６６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号４６７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４６８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４６９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号４７０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４７１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号４７２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号４７３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４７４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４７５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；または配列番号４７６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４７７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号４７８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号４７９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４８０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４８１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３との少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲのセットを含む。
【００１２】
いくつかの態様では、第２の結合ドメインが、第２の抗原に特異的な抗体由来の単鎖可変断片を含む。いくつかの態様では、第２の結合ドメインが、配列番号８５〜配列番号２９８として表１に示されるＣＤＲのセットとの少なくとも８０％の配列同一性を有する６つのＣＤＲのセットを含む。いくつかの態様では、第２の結合ドメインが、配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号８８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号８９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号９０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号９４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号９５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号９６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１００のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号１４８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１５０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１５１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１５２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１５３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号１５４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１５６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１５７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１５８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１５９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号１６０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１６１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１６２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１６４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１６５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号１６６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１６７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１６８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１６９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１７０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１７１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号１７２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１７３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１７４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１７５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１７６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１７７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１８０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１８１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１８２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１８３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号１８４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１８５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１８６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１８７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１８８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１８９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号１９０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１９１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１９２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１９３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１９４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１９５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号１９６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１９７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１９８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１９９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２００のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２０１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号２０２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２０４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２０５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２０７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号２０８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２０９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２１０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２１１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２１２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２１３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号２１４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２１５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２１６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２１７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２１８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２１９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号２２０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２２１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２２２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２２３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２２４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２２５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号２２６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２２７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２２８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２２９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２３０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２３１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号２３２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２３４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２３５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２３６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２３７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２３８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号２３９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２４０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２４１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２４２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２４３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２４４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号２４５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２４６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２４７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２４８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２４９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２５０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号２５１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２５２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２５３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２５４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２５５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２５６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号２５７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２５８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２５９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２６０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２６１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２６２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号２６３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２６４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２６５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２６６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２６７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２６８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号２６９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２７０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２７１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２７２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２７３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２７４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号２７５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２７６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２７７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、
配列番号２７８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２７９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２８０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号２８１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２８２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２８３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２８４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２８５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２８６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；配列番号２８７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２８８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２８９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２９０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２９１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２９２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；または配列番号２９３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２９４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２９５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２９６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２９７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２９８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３との少なくとも８０％の配列同一性を含む。
【００１３】
いくつかの態様では、第１の抗原結合ドメインが、表２に示される可変領域重鎖および可変領域軽鎖のペアとの少なくとも８０％の配列同一性を有する可変領域重鎖および可変領域軽鎖を含む。いくつかの態様では、第１の抗原結合ドメインが、表２に示される可変領域重鎖および可変領域軽鎖のペアとの少なくとも８０％の配列同一性を有する可変領域重鎖および可変領域軽鎖のペアを含む。いくつかの態様では、第１の抗原結合ドメインが、表２に示される可変領域重鎖および可変領域軽鎖のペアの非ＣＤＲ領域との少なくとも８０％の配列同一性を有する可変領域重鎖および可変領域軽鎖のペアを含む。
【００１４】
いくつかの態様では、第１の抗原結合ドメインが、配列番号３００のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号２９９のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３０１のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号２９９のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３０２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３０３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３０４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３０５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３０６のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３０７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３０８のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３０９のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３１０のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３１１のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３１２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３１３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３１４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３１５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３１６のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３１７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３１８のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３２０のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３１９のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３２０のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３２１のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３２２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３２３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３２４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３２５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３２６のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３２７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３２８のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３２９のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３３０のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３３１のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３３４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３３１のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３３５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３３２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３３４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３３２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３３５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３３３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３３４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３３３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３３５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３３６のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３３７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３３８のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３３９のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３４０のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３４１のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３４２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３４３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３４４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３４５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３４６のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３４７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３４８のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３４９のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３５０のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３５１のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３５２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３５３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３５４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３５５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３５６のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３５７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３５８のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３５９のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３５８のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３６０のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３６１のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３６２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３６３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３６４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３６５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３６６のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３６７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３６８のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３６７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３６９のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３６７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３７０のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３６７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３７１のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３６７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３７２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３７４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３７３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３７５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３７６のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３７７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３７８のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３７９のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３８０のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３８１のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３８２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３８４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３８３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３８５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３８６のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３８７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３８８のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３８９のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３９０のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３９１のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３９２のアミノ酸配列と
の少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３９３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３９４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３９５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３９６のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３９７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３９８のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３９９のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４００のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号４０１のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４０２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号４０３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４０４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号４０５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４０６のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号４０７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４０８のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号４０９のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４１０のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号４１１のアミノ酸配列との
少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４１２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号４１３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４１４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号４１５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４１６のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号４１７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４１８のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号４１９のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４２０のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号４２１のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４２２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号４２３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４２４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号４２５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４２６のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号４２７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４２８のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号４２９のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４３０のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号４３１のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４３２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号４３３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４３４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号４３５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４３６のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号４８２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４８３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号４８４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４８５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号４８６のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４８７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号４８８のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４８９のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；または配列番号４９０のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４９１のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列を含む。
【００１５】
いくつかの態様では、第２の結合ドメインが、配列番号３５２〜配列番号４３６として表２に示される可変領域重鎖および可変領域軽鎖のペアとの少なくとも８０％の配列同一性を有する可変領域重鎖および可変領域軽鎖を含む。いくつかの態様では、第２の結合ドメインが、配列番号３５２〜配列番号４３６として表２に示される可変領域重鎖および可変領域軽鎖のペアのＣＤＲ配列との少なくとも８０％の配列同一性を有する可変領域重鎖および可変領域軽鎖を含む。いくつかの態様では、第２の結合ドメインが、配列番号３５２〜配列番号４３６として表２に示される可変領域重鎖および可変領域軽鎖のペアから選択される配列を有する可変領域重鎖および可変領域軽鎖を含む。
【００１６】
いくつかの態様では、第２の抗原結合ドメインが、配列番号３５２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３５３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３５４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３５５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３５６のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３５７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３５８のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３５９のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３５８のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３６０のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３６１のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３６２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３６３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３６４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３６５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３６６のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３６７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３６８のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３６７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３６９のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３６７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３７０のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３６７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３７１のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３６７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３７２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３７４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３７３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３７５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３７６のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３７７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３７８のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３７９のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３８０のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３８１のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３８２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３８４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３８３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３８５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３８６のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３８７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３８８のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３８９のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３９０のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３９１のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３９２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３９３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３９４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３９５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３９６のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３９７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号３９８のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号３９９のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４００のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号４０１のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４０２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号４０３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４０４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号４０５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４０６のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号４０７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４０８のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号４０９のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４１０のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号４１１のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４１２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号４１３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４１４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号４１５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４１６のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号４１７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４１８のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号４１９のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４２０のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号４２１のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４２２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号４２３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４２４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号４２５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４２６のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号４２７のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４２８のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号４２９のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４３０のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号４３１のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４３２のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；配列番号４３３のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４３４のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列；または配列番号４３５のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＨ配列および配列番号４３６のアミノ酸配列との少なくとも８０％の配列同一性を有するＶＬ配列を含む。
【００１７】
いくつかの態様では、第２の結合ドメイン−Ｆｃドメイン−第１の抗原結合ドメイン融合タンパク質が、配列番号１〜配列番号４３６または配列番号４４０〜配列番号４８１のいずれか１つとの少なくとも８０％の配列同一性を含む第２の結合ドメイン−Ｆｃドメイン−第１の抗原結合ドメイン融合タンパク質の第１の抗原結合ドメイン；配列番号８５〜配列番号２９９、配列番号３５２〜配列番号４３６のいずれか１つとの少なくとも８０％の配列同一性を含む第２の結合ドメイン−Ｆｃドメイン−第１の抗原結合ドメイン融合タンパク質の第２の結合ドメイン；および配列番号４３７〜配列番号４３９もしくはそのいずれかの断片、または本明細書に記載されるＦｃドメインもしくはその断片のいずれか１つとの少なくとも８０％の配列同一性を含む第２の結合ドメイン−Ｆｃドメイン−第１の抗原結合ドメイン融合タンパク質のＦｃドメインを含む。
【００１８】
いくつかの態様では、本明細書に記載される特許請求の範囲の第２の結合ドメイン−第１の抗原結合ドメイン−Ｆｃドメイン融合タンパク質が、配列番号１〜配列番号４３６または配列番号４４０〜配列番号４８１として表１に示されるＣＤＲのセットとの少なくとも８０％の配列同一性を有する６つのＣＤＲのセットを含む第２の結合ドメイン−第１の抗原結合ドメイン−Ｆｃドメイン融合タンパク質の第１の抗原結合ドメイン；配列番号８５〜配列番号２９９、配列番号３５２〜配列番号４３６またはそのいずれかの断片として表１に示されるＣＤＲのセットとの少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲのセットを含む第２の結合ドメイン−第１の抗原結合ドメイン−Ｆｃドメイン融合タンパク質の第２の結合ドメイン；および配列番号４３７〜配列番号４３９もしくはそのいずれかの断片、または本明細書に記載されるＦｃドメインもしくはその断片のいずれか１つとの少なくとも８０％の配列同一性を含む第２の結合ドメイン−第１の抗原結合ドメイン−Ｆｃドメイン融合タンパク質のＦｃドメインを含む。
【００１９】
いくつかの態様では、第１の抗原が、星細胞、筋線維芽細胞、滑膜線維芽細胞、上皮細胞、有足細胞または免疫細胞によって発現される抗原である。いくつかの態様では、第１の抗原が、星細胞、筋線維芽細胞、滑膜線維芽細胞、上皮細胞または有足細胞によって発現される抗原である。いくつかの態様では、第１の抗原が、星細胞または筋線維芽細胞によって発現される抗原である。いくつかの態様では、第１の抗原が、星細胞、筋線維芽細胞または有足細胞によって発現される抗原である。いくつかの態様では、第２の抗原が、星細胞または筋線維芽細胞によって発現される抗原である。
【００２０】
種々の態様では、本明細書に記載されるいずれかの抗体コンストラクトまたは部分のアミノ酸配列をコードする単離核酸が提供される。
【００２１】
いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体コンストラクトをコードする核酸を含むベクターが提供される。
【００２２】
いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体コンストラクトをコードする核酸を含むベクターを含む宿主細胞が提供される。
【００２３】
いくつかの態様では、哺乳動物細胞である宿主細胞が提供される。
【００２４】
種々の態様では、コンジュゲートを作製する方法であって、抗体コンストラクトが産生されるように宿主細胞を培養することと、次いで、少なくとも１つの免疫調節化合物およびリンカーを抗体コンストラクトに結合してコンジュゲートを形成することとを含む方法が提供される。
【００２５】
種々の態様では、本明細書に記載されるいずれかのコンジュゲートと、薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物が提供される。
【００２６】
種々の態様では、それを必要とする対象のための治療方法であって、治療的有効用量の本明細書に記載されるコンジュゲートまたは本明細書に記載される薬学的組成物を投与することを含む方法が提供される。いくつかの態様では、対象が線維性疾患、自己免疫疾患または炎症性疾患を有する。いくつかの態様では、薬学的組成物またはコンジュゲートが、静脈内投与、皮膚投与、皮下投与される、または患部で注射される。いくつかの態様では、薬学的組成物またはコンジュゲートが静脈内投与される。いくつかの態様では、薬学的組成物またはコンジュゲートが皮下投与される。
【００２７】
種々の態様では、キットが、薬学的に許容される投与単位の薬学的有効量の本明細書に記載されるいずれかのコンジュゲートまたは本明細書に記載されるいずれかの薬学的組成物を含む。
【００２８】
参照による援用
本明細書で言及される全ての刊行物、特許および特許出願は、あたかも各個々の刊行物、特許または特許出願が参照により援用されることが具体的かつ個別的に示されているのと同程度に本明細書に参照により援用される。
【００２９】
本開示の新規な特徴は、添付の特許請求の範囲に詳細に示される。本開示の原理が利用される例示的な態様を示す以下の詳細な説明、および付随する図面を参照することによって、本開示の特徴および利点のより良い理解が得られるだろう。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１Ａ】抗体コンストラクト、リンカー（Ｌ）、免疫調節化合物（Ｃ１）、スペーサー（Ｓ）および第２の化合物（Ｃ２）を含むコンジュゲートのいくつかのフォーマットを示す図である。
【図１Ｂ】抗体コンストラクト、リンカー（Ｌ）、免疫調節化合物（Ｃ１）、スペーサー（Ｓ）および第２の化合物（Ｃ２）を含むコンジュゲートのいくつかのフォーマットを示す図である。
【図１Ｃ】抗体コンストラクト、リンカー（Ｌ）、免疫調節化合物（Ｃ１）、スペーサー（Ｓ）および第２の化合物（Ｃ２）を含むコンジュゲートのいくつかのフォーマットを示す図である。
【図２】コントロール抗体のみおよび抗ジゴキシンコンジュゲートコントロールと比較した、ＬＲＲＣ１５コンジュゲート（切断可能なリンカーを介してＴＧＦβＲ阻害剤に結合したＬＲＲＣ１５抗体）によるＴＧＦβ／ＳＭＡＤシグナル伝達経路の阻害を示す図である。
【図３Ａ】ＴＧＦβＲ２−ＶＨＬ  ＰＲＯＴＡＣ抗ＨＥＲ２抗体コンジュゲートによるＴＦＧβＲ２の分解についてのアッセイの結果を示す図である。
【図３Ｂ】ＴＧＦβＲ２−ＶＨＬ  ＰＲＯＴＡＣ抗ＨＥＲ２抗体コンジュゲートによるＴＦＧβＲ２の分解についてのアッセイの結果を示す図である。
【図３Ｃ】ＴＧＦβＲ２−ＶＨＬ  ＰＲＯＴＡＣ抗ＨＥＲ２抗体コンジュゲートによるＴＦＧβＲ２の分解についてのアッセイの結果を示す図である。
【図４Ａ】ＶＨＬまたはセレブロンＥ３結合部分を有するＰＲＯＴＡＣを含む抗体コンジュゲートによるＴＦＧβＲ２の抗原標的化分解についてのアッセイの結果を示す図である。
【図４Ｂ】ＶＨＬまたはセレブロンＥ３結合部分を有するＰＲＯＴＡＣを含む抗体コンジュゲートによるＴＦＧβＲ２の抗原標的化分解についてのアッセイの結果を示す図である。
【図５Ａ】プロテアソーム阻害剤を添加したまたは添加しない、ＴＧＦβＲ２／ＴＧＦβＲ１−ＶＨＬ  ＰＲＯＴＡＣの存在下でのＴＧＦβＲ２およびＴＧＦβＲ１の細胞レベルについてのアッセイの結果を示す図である。
【図５Ｂ】プロテアソーム阻害剤を添加したまたは添加しない、ＴＧＦβＲ２／ＴＧＦβＲ１−ＶＨＬ  ＰＲＯＴＡＣの存在下でのＴＧＦβＲ２およびＴＧＦβＲ１の細胞レベルについてのアッセイの結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
本発明の好ましい実施形態を本明細書で示し、記載してきたが、このような実施形態は単なる例として提供されることが当業者に明らかである。ここで、本発明から逸脱することなく、多数の変動、変化および置換が当業者に思い浮かぶだろう。本明細書に記載される本発明の実施形態の種々の代替を本発明の実施に使用してもよいことが理解されるべきである。以下の特許請求の範囲が本発明の範囲を定義し、これらの特許請求の範囲の範囲内の方法および構造ならびにこれらの均等物がそれによって網羅されることが意図されている。
【００３２】
毎年、線維症、自己免疫疾患および自己炎症性疾患の損傷効果により、数百万人が入院している。線維症は、修復または反応過程での臓器または組織における過剰な線維性結合組織または瘢痕組織の形成である。線維症は、典型的には炎症または損傷の結果として、肺、肝臓、腎臓、心臓および脳を含む体内の多くの組織で起こり得る。瘢痕組織は動脈をブロックし、関節を固定化し、内臓に損傷を与え、生体機能を維持する体の能力に大きな被害をもたらす。自己免疫疾患および自己炎症性疾患は、体の正常な部分に対する免疫系の異常な応答、または例えば、感染症に対する免疫応答の欠如から生じ得る。自己免疫疾患では、免疫系が、戦う感染症または外来侵入物の代わりに、体自身の組織を攻撃する自己抗体を産生し得る。移植臓器または組織の急性または慢性免疫媒介拒絶反応は、未だ対処されていない必要性がある別の領域である。移植片拒絶反応は、移植レシピエントの免疫系が、移植臓器または組織を外来物とみなし、移植臓器または組織を攻撃し、移植臓器または組織の不全をもたらし得る過程である。線維症、自己免疫疾患、自己炎症性疾患および移植のための市販の治療が存在するが、これらの治療は、これらの治療は限られた効率を有する。よって、線維性疾患、自己免疫疾患、自己炎症性疾患および移植片拒絶反応のための代替のまたは改善された治療がかなり必要とされている。
【００３３】
本開示は、自己免疫疾患、自己炎症性疾患および／または線維性疾患の治療または予防に使用するための抗体コンストラクト免疫調節化合物コンジュゲート（「コンジュゲート」または「抗体コンジュゲート」とも呼ばれる）および薬学的組成物を提供する。特定の実施形態では、抗体コンストラクト免疫調節化合物コンジュゲートおよび薬学的組成物が、線維性疾患の治療または予防に使用される。特定の実施形態では、抗体コンストラクト免疫調節化合物コンジュゲートおよび薬学的組成物が、自己免疫疾患の治療または予防に使用される。特定の実施形態では、抗体コンストラクト免疫調節化合物コンジュゲートおよび薬学的組成物が、自己炎症性疾患の治療または予防に使用される。
【００３４】
標的化薬物療法を開発することの課題には、主要な薬理的標的に対する高い選択性を達成すること、および毒性を最小化しながら、疾患の、長期の標的阻害または調節を維持することが含まれる。これらの２つの課題の克服で、最大の治療有効性および最小の全身毒性を有する薬学的製品を開発することが可能である。これらの２つの課題に対処する１つの手法は、コンジュゲートした薬物の活性を妨害することなく、薬物を局所的領域または標的化組織に送達することができるコンジュゲートを開発することである。いくつかの実施形態では、コンジュゲートの標的化態様が、線維性疾患、自己免疫疾患、自己炎症性疾患または移植片拒絶反応をさらに阻害または調節することができる。
【００３５】
線維性疾患、自己免疫疾患、自己炎症性疾患または移植片拒絶反応を阻害または調節することができる治療法が現在必要とされているので、本開示は、この必要性および関連する必要性に対処するコンジュゲート、薬学的組成物および方法を提供する。
【００３６】
定義
特に定義しない限り、本明細書に使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する当該技術分野で当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書で参照される全ての特許および刊行物が、参照により援用される。
【００３７】
本明細書および特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈上明白に他の意味に解釈すべき場合を除いて、複数指示対象を含む。
【００３８】
本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、特異的抗原に、特異的に結合する、または免疫学的に反応性である免疫グロブリン分子を指す。抗体は、例えば、遺伝子操作された、ポリクローナル、モノクローナル、およびこれらの抗原結合断片を含むことができる。抗体は、例えば、マウス、キメラ、ヒト化、ヘテロコンジュゲート（ｈｅｔｅｒｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ）、二重特異性、ダイアボディ、トリアボディまたはテトラボディであることができる。抗原結合断片は、例えば、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｒＩｇＧおよびｓｃＦｖを含むことができる。
【００３９】
本明細書で使用される場合、「抗原結合ドメイン」は、抗原に特異的に結合する分子の領域を指す。抗原結合ドメインは、抗体または抗体断片の抗原結合部分であり得る。抗原結合ドメインは、抗原に特異的に結合する能力を保持することができる抗体の１つまたは複数の断片であり得る。抗原結合ドメインは、抗原結合断片であり得る。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインが、単一抗原を認識することができる。抗原結合ドメインは、例えば、２つまたは３つの抗原を認識することができる。
【００４０】
本明細書で使用される場合、「標的結合ドメイン」は、抗体または抗原に結合することができる非抗体由来の抗原結合ドメインを含むコンストラクトを指す。
【００４１】
「標的化部分」という用語は、他の非標的分子と比較して標的分子に対する選択的親和性を有する構造を指す。標的化部分は標的分子に結合する。標的化部分は、例えば、抗体、ペプチド、リガンド、受容体またはこれらの結合部分を含み得る。標的分子は、生物学的受容体または細胞の他の構造などの抗原であり得る。
【００４２】
「リンカーペイロード」または「ＬＰ」は、リンカーに結合した免疫調節化合物（複数可）を指す。
【００４３】
本明細書で使用される場合、「Ｆｃドメイン」は、抗体またはＦｃ受容体に結合することができる非抗体由来のＦｃドメインであり得る。
【００４４】
本明細書で使用される場合、「Ｆｃヌル（ｎｕｌｌ）」は、Ｆｃγ受容体のいずれかとの弱い結合を示す〜結合を全く示さないドメインを指す。いくつかの実施形態では、Ｆｃヌルドメインまたは領域が、１０００分の１以下への、Ｆｃγ受容体に対する結合親和性の減少（例えば、Ｋｄの増加）を示す。
【００４５】
本明細書で使用される場合、抗体相互作用に関する「認識する」は、抗体またはその部分の抗原結合ドメインと抗原との間の特異的会合または結合を指す。
【００４６】
本明細書で使用される場合、「配列同一性」、「同一性」および「同一」は、文脈に従って、それぞれ、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ヌクレオチド、アミノ酸またはタンパク質配列と別のＤＮＡ、ＲＮＡ、ヌクレオチド、アミノ酸またはタンパク質配列との間の同一性を指す。配列同一性は、第１の配列と第２の配列の配列同一性の割合に関して表され得る。参照ＤＮＡ配列に関するパーセント（％）配列同一性は、配列を整列させ、必要に応じてギャップを導入した後の参照ＤＮＡ配列のＤＮＡヌクレオチドと同一である候補配列のＤＮＡヌクレオチドの割合である。参照アミノ酸配列に関するパーセント（％）配列同一性は、配列を整列させ、必要に応じてギャップを導入して最大のパーセント配列同一性を達成した後の参照アミノ酸配列のアミノ酸残基と同一である候補配列のアミノ酸残基の割合であり、いずれの保存的置換も配列同一性の一部とみなさない。
【００４７】
本明細書で使用される場合、天然Ｌ−鏡像異性的アミノ酸についての略語は慣用的なものであり、以下の通りであり得る：アラニン（Ａ、Ａｌａ）；アルギニン（Ｒ、Ａｒｇ）；アスパラギン（Ｎ、Ａｓｎ）；アスパラギン酸（Ｄ、Ａｓｐ）；システイン（Ｃ、Ｃｙｓ）；グルタミン酸（Ｅ、Ｇｌｕ）；グルタミン（Ｑ、Ｇｌｎ）；グリシン（Ｇ、Ｇｌｙ）；ヒスチジン（Ｈ、Ｈｉｓ）；イソロイシン（Ｉ、Ｉｌｅ）；ロイシン（Ｌ、Ｌｅｕ）；リジン（Ｋ、Ｌｙｓ）；メチオニン（Ｍ、Ｍｅｔ）；フェニルアラニン（Ｆ、Ｐｈｅ）；プロリン（Ｐ、Ｐｒｏ）；セリン（Ｓ、Ｓｅｒ）；スレオニン（Ｔ、Ｔｈｒ）；トリプトファン（Ｗ、Ｔｒｐ）；チロシン（Ｙ、Ｔｙｒ）；バリン（Ｖ、Ｖａｌ）。特に指定しない限り、Ｘはいずれかのアミノ酸を示すことができる。いくつかの態様では、Ｘがアスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、ヒスチジン（Ｈ）、リジン（Ｋ）またはアルギニン（Ｒ）であり得る。
【００４８】
「塩」または「薬学的に許容される塩」という用語は、当該技術分野で周知の種々の有機対イオンおよび無機対イオンから誘導される塩を指す。薬学的に許容される酸付加塩は、無機酸および有機酸で形成され得る。塩を誘導することができる無機酸には、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などが含まれる。塩を誘導することができる有機酸には、例えば、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸などが含まれる。薬学的に許容される塩基付加塩は、無機塩基および有機塩基で形成され得る。塩を誘導することができる無機塩基には、例えば、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅、マンガン、アルミニウムなどが含まれる。塩を誘導することができる有機塩基には、例えば、一級、二級および三級アミン、天然に存在する置換アミンを含む置換アミン、環状アミン、塩基性イオン交換樹脂など、具体的には例えばイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミンおよびエタノールアミンが含まれる。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩基付加塩が、アンモニウム、カリウム、ナトリウム、カルシウムおよびマグネシウム塩から選択される。
【００４９】
「Ｃｘ〜ｙ」という用語は、アルキル、アルケニルまたはアルキニルなどの化学部分と併せて使用される場合、鎖内にｘ〜ｙ個の炭素を含む基を含むことを意図している。例えば、「Ｃｘ〜ｙアルキル」という用語は、トリフルオロメチルおよび２，２，２−トリフルオロエチル等などのハロアルキル基を含む、鎖内にｘ〜ｙ個の炭素を含む直鎖アルキルおよび分岐鎖アルキル基を含む、置換または非置換飽和炭化水素基を指す。
【００５０】
「Ｃｘ〜ｙアルケニル」および「Ｃｘ〜ｙアルキニル」という用語は、上記のアルキルと長さおよび可能な置換が類似であるが、それぞれ少なくとも１つの二重結合または三重結合を含む置換または非置換不飽和脂肪族基を指す。
【００５１】
本明細書で使用される「炭素環」という用語は、環の各原子が炭素である飽和、不飽和または芳香環を指す。炭素環には、３〜１０員単環式環、６〜１２員二環式環および６〜１２員架橋環が含まれる。二環式炭素環の各環は、飽和、不飽和および芳香環から選択され得る。例示的実施形態では、芳香環、例えばフェニルが、飽和または不飽和環、例えばシクロヘキサン、シクロペンタンまたはシクロヘキセンと縮合していてもよい。二環式炭素環には、原子価が許す飽和、不飽和および芳香族二環式環のいずれの組み合わせも含まれる。二環式炭素環には、４−５縮合環系、５−５縮合環系、５−６縮合環系および６−６縮合環系などの環サイズのいずれの組み合わせも含まれる。例示的炭素環には、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、アダマンチル、フェニル、インダニルおよびナフチルが含まれる。
【００５２】
本明細書で使用される「複素環」という用語は、１個または複数のヘテロ原子を含む飽和、不飽和または芳香環を指す。例示的ヘテロ原子には、Ｎ、Ｏ、Ｓｉ、Ｐ、ＢおよびＳ原子が含まれる。複素環には、３〜１０員単環式環、６〜１２員二環式環および６〜１２員架橋環が含まれる。二環式複素環には、原子価が許す飽和、不飽和および芳香族二環式環のいずれの組み合わせも含まれる。例示的実施形態では、芳香環、例えばピリジルが、飽和または不飽和環、例えばシクロヘキサン、シクロペンタン、モルホリン、ピペリジンまたはシクロヘキセンと縮合していてもよい。二環式複素環には、４−５縮合環系、５−５縮合環系、５−６縮合環系および６−６縮合環系などの環サイズのいずれの組み合わせも含まれる。
【００５３】
「ヘテロアリール」という用語は、その環構造が少なくとも１個のヘテロ原子、好ましくは１〜４個のヘテロ原子、より好ましくは１個または２個のヘテロ原子を含む芳香族単環構造、好ましくは５〜７員環、より好ましくは５〜６員環を含む。「ヘテロアリール」という用語はまた、２個以上の炭素が、環の少なくとも１つが複素芳香族である、例えば他の環式環が芳香族であっても非芳香族炭素環であっても複素環であってもよい２つの隣接環と共通である２つ以上の環式環を有する多環式環系を含む。ヘテロアリール基には、例えば、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリダジンおよびピリミジンなどが含まれる。
【００５４】
「置換された」という用語は、化合物の１つまたは複数の炭素または置換可能なヘテロ原子、例えばＮＨまたはＮＨ２上の水素に取って代わる置換基を有する部分を指す。「置換」または「〜で置換された」は、このような置換が、置換された原子および置換基の許容される原子価に従っており、置換が安定な化合物、すなわち、転位、環化、脱離等などによる変換を自発的に受けない化合物をもたらすという暗黙の条件を含むことが理解される。特定の実施形態では、置換されたが、単一炭素上の２個の水素原子のオキソ、イミノまたはチオキソ基による置換などの、同じ炭素原子上の２個の水素原子に取って代わる置換基を有する部分を指す。本明細書で使用される場合、「置換された」という用語は、有機化合物の全ての許容される置換基を含むと考えられる。広範な態様では、許容される置換基に、有機化合物の非環式および環状の、分岐および非分岐の、炭素環式および複素環式の、芳香族および非芳香族の置換基が含まれる。許容される置換基は、適切な有機化合物について１つであっても複数であってもよく、同じであっても異なっていてもよい。
【００５５】
いくつかの実施形態では、置換基が、本明細書に記載されるいずれかの置換基、例えば：ハロゲン、ヒドロキシ、オキソ（＝Ｏ）、チオキソ（＝Ｓ）、シアノ（−ＣＮ）、ニトロ（−ＮＯ２）、イミノ（＝Ｎ−Ｈ）、オキシモ（＝Ｎ−ＯＨ）、ヒドラジノ（＝Ｎ−ＮＨ２）、−Ｒｂ−ＯＲａ、−Ｒｂ−ＯＣ（Ｏ）−Ｒａ、−Ｒｂ−ＯＣ（Ｏ）−ＯＲａ、−Ｒｂ−ＯＣ（Ｏ）−Ｎ（Ｒａ）２、−Ｒｂ−Ｎ（Ｒａ）２、−Ｒｂ−Ｃ（Ｏ）Ｒａ、−Ｒｂ−Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、−Ｒｂ−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）２、−Ｒｂ−Ｏ−Ｒｃ−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）２、−Ｒｂ−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、−Ｒｂ−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（Ｏ）Ｒａ、−Ｒｂ−Ｎ（Ｒａ）Ｓ（Ｏ）ｔＲａ（式中、ｔは１または２である）、−Ｒｂ−Ｓ（Ｏ）ｔＲａ（式中、ｔは１または２である）、−Ｒｂ−Ｓ（Ｏ）ｔＯＲａ（式中、ｔは１または２である）および−Ｒｂ−Ｓ（Ｏ）ｔＮ（Ｒａ）２（式中、ｔは１または２である）；ならびにそのいずれもアルキル、アルケニル、アルキニル、ハロゲン、ハロアルキル、ハロアルケニル、ハロアルキニル、オキソ（＝Ｏ）、チオキソ（＝Ｓ）、シアノ（−ＣＮ）、ニトロ（−ＮＯ２）、イミノ（＝Ｎ−Ｈ）、オキシモ（＝Ｎ−ＯＨ）、ヒドラジン（＝Ｎ−ＮＨ２）、−Ｒｂ−ＯＲａ、−Ｒｂ−ＯＣ（Ｏ）−Ｒａ、−Ｒｂ−ＯＣ（Ｏ）−ＯＲａ、−Ｒｂ−ＯＣ（Ｏ）−Ｎ（Ｒａ）２、−Ｒｂ−Ｎ（Ｒａ）２、−Ｒｂ−Ｃ（Ｏ）Ｒａ、−Ｒｂ−Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、−Ｒｂ−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）２、−Ｒｂ−Ｏ−Ｒｃ−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）２、−Ｒｂ−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、−Ｒｂ−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（Ｏ）Ｒａ、−Ｒｂ−Ｎ（Ｒａ）Ｓ（Ｏ）ｔＲａ（式中、ｔは１または２である）、−Ｒｂ−Ｓ（Ｏ）ｔＲａ（式中、ｔは１または２である）、−Ｒｂ−Ｓ（Ｏ）ｔＯＲａ（式中、ｔは１または２である）および−Ｒｂ−Ｓ（Ｏ）ｔＮ（Ｒａ）２（式中、ｔは１または２である）によって置換されていてもよいアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、アラルケニル、アラルキニル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、ヘテロアリールおよびヘテロアリールアルキル（式中、各Ｒａは、水素、アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、ヘテロアリールまたはヘテロアリールアルキルから独立に選択され、各Ｒａは、原子価が許せば、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロゲン、ハロアルキル、ハロアルケニル、ハロアルキニル、オキソ（＝Ｏ）、チオキソ（＝Ｓ）、シアノ（−ＣＮ）、ニトロ（−ＮＯ２）、イミノ（＝Ｎ−Ｈ）、オキシモ（＝Ｎ−ＯＨ）、ヒドラジン（＝Ｎ−ＮＨ２）、−Ｒｂ−ＯＲａ、−Ｒｂ−ＯＣ（Ｏ）−Ｒａ、−Ｒｂ−ＯＣ（Ｏ）−ＯＲａ、−Ｒｂ−ＯＣ（Ｏ）−Ｎ（Ｒａ）２、−Ｒｂ−Ｎ（Ｒａ）２、−Ｒｂ−Ｃ（Ｏ）Ｒａ、−Ｒｂ−Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、−Ｒｂ−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）２、−Ｒｂ−Ｏ−Ｒｃ−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）２、−Ｒｂ−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、−Ｒｂ−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（Ｏ）Ｒａ、−Ｒｂ−Ｎ（Ｒａ）Ｓ（Ｏ）ｔＲａ（式中、ｔは１または２である）、−Ｒｂ−Ｓ（Ｏ）ｔＲａ（式中、ｔは１または２である）、−Ｒｂ−Ｓ（Ｏ）ｔＯＲａ（式中、ｔは１または２である）および−Ｒｂ−Ｓ（Ｏ）ｔＮ（Ｒａ）２（式中、ｔは１または２である）で置換されていてもよく；各Ｒｂは直接結合、または直鎖もしくは分岐アルキレン、アルケニレンもしくはアルキニレン鎖から独立に選択され、各Ｒｃは直鎖もしくは分岐アルキレン、アルケニレンまたはアルキニレン鎖である）を含み得る。
【００５６】
適切な場合、置換基自体が置換されていてもよいことが当業者によって理解されるだろう。「非置換である」と特に明記されていない限り、本明細書における化学部分への言及は、置換変異体を含むと理解される。例えば、「ヘテロアリール」基または部分への言及は、特に指定しない限り、置換変異体と非置換変異体の両方を暗に含む。
【００５７】
炭素−炭素二重結合または炭素−窒素二重結合を有する化学実体は、Ｚ形態またはＥ形態（またはシス形態もしくはトランス形態）で存在し得る。さらに、いくつかの化学実体は、種々の互変異性形態で存在し得る。特に指定しない限り、本明細書に記載される化学実体は、全てのＺ形態、Ｅ形態および互変異性形態も含むことを意図している。
【００５８】
「互変異性体」は、分子のある原子から同分子の別の原子へのプロトン移動が可能な分子を指す。本明細書に提示される化合物が、特定の実施形態では、互変異性体として存在する。互変異性が可能な状況では、互変異性体の化学平衡が存在する。互変異性体の正確な比は、物理状態、温度、溶媒およびｐＨを含むいくつかの因子に依存する。互変異性平衡のいくつかの例として以下が挙げられる：
2020523319.tif 000003
【００５９】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される化合物が、例えば、２Ｈ、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｃおよび／または１４Ｃの含有量が濃縮された、異なる濃縮同位体形態で使用される。１つの特定の実施形態では、化合物が少なくとも１つの位置で重水素化される。このような重水素化形態は、米国特許第５８４６５１４号および同第６３３４９９７号に記載される手順によって生成することができる。米国特許第５８４６５１４号および同第６３３４９９７号に記載されるように、重水素化により、代謝安定性およびまたは有効性が改善され、よって薬物の作用持続時間が増加し得る。
【００６０】
別途指定のない限り、本明細書に示される構造は、１つまたは複数の同位体濃縮原子の存在においてのみ異なる化合物を含むことを意図している。例えば、重水素またはトリチウムによる水素の置換、または１３Ｃ−もしくは１４Ｃ−濃縮炭素による炭素の置換を除いて本構造を有する化合物は、本開示の範囲内にある。
【００６１】
本開示の化合物は、場合によりこのような化合物を構成する１つまたは複数の原子で、非天然割合の原子同位体を含む。例えば、化合物は、例えば、重水素（２Ｈ）、トリチウム（３Ｈ）、ヨウ素−１２５（１２５Ｉ）または炭素−１４（１４Ｃ）などの同位体で標識され得る。２Ｈ、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｃ、１２Ｎ、１３Ｎ、１５Ｎ、１６Ｎ、１６Ｏ、１７Ｏ、１４Ｆ、１５Ｆ、１６Ｆ、１７Ｆ、１８Ｆ、３３Ｓ、３４Ｓ、３５Ｓ、３６Ｓ、３５Ｃｌ、３７Ｃｌ、７９Ｂｒ、８１Ｂｒ、１２５Ｉによる同位体置換が全て考えられる。本発明の化合物の全ての同位体変種が、放射性であろうとなかろうと、本発明の範囲内に包含される。
【００６２】
特定の実施形態では、本明細書に開示される化合物が、いくつかまたは全ての２Ｈ原子で置換された１Ｈ原子を有する。重水素含有化合物についての合成方法は、当該技術分野で知られており、単なる非限定的な例として、以下の合成方法を含む。
【００６３】
重水素置換化合物は、Ｄｅａｎ，Ｄｅｎｎｉｓ  Ｃ．；編者．Ｒｅｃｅｎｔ  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．［Ｉｎ：Ｃｕｒｒ．，Ｐｈａｒｍ．Ｄｅｓ．、２０００；６（１０）］２０００、１１０頁；ＧｅｏｒｇｅＷ．；Ｖａｒｍａ，Ｒａｊｅｎｄｅｒ  Ｓ．Ｔｈｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ｖｉａ  Ｏｒｇａｎｏｍｅｔａｌｌｉｃ  Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅｓ、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、１９８９、４５（２１）、６６０１〜２１；およびＥｖａｎｓ，Ｅ．Ａｎｔｈｏｎｙ．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ、Ｊ．Ｒａｄｉｏａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．、１９８１、６４（１〜２）、９〜３２に記載されるような種々の方法を使用して合成される。
【００６４】
重水素化出発物質は、容易に入手可能であり、本明細書に記載される合成方法を受けて、重水素含有化合物の合成を提供する。多数の重水素含有試薬およびビルディングブロックが、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．などの化学販売業者から市販されている。
【００６５】
本発明で有用な化合物には、これらの化合物の結晶および非晶質形態、薬学的に許容される塩、ならびに例えば、多形、擬多形（ｐｓｅｕｄｏｐｏｌｙｍｏｒｐｈ）、溶媒和物、水和物、非溶媒和多形（無水物を含む）、立体配座多形および化合物の非晶質形態を含む同じ活性型を有するこれらの化合物の活性代謝産物、ならびにこれらの混合物も含まれる。
【００６６】
本明細書で使用される「非経口投与」および「非経口投与される」という句は、通常注射による、経腸および局所投与以外の投与様式を意味し、限定されないが、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、嚢下、くも膜下、脊髄内および胸骨内注射ならびに点滴を含む。
【００６７】
「薬学的に許容される」という句は、健全な医学的判断の範囲内で、適度なベネフィット／リスク比に相応して、過度の毒性、刺激、アレルギー反応または他の問題もしくは合併症なしにヒトおよび動物の組織と接触して使用するのに適している化合物、材料、組成物および／または剤形を指すために本明細書で使用される。
【００６８】
本明細書で使用される「薬学的に許容される賦形剤」または「薬学的に許容される担体」という句は、液体もしくは固体の充填剤、希釈剤、賦形剤、溶媒またはカプセル化材料などの薬学的に許容される材料、組成物またはビヒクルを意味する。各担体は、製剤の他の成分と適合性であり、患者に有害でないという意味で「許容され」なければならない。薬学的に許容される担体として働くことができる材料のいくつかの例としては、以下が挙げられる：（１）ラクトース、グルコースおよびスクロースなどの糖類；（２）コーンスターチおよびジャガイモデンプンなどのデンプン；（３）セルロース、ならびにカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロースなどのその誘導体；（４）粉末状トラガカント；（５）麦芽；（６）ゼラチン；（７）タルク；（８）カカオ脂および坐剤ワックスなどの賦形剤；（９）落花生油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油および大豆油などの油；（１０）プロピレングリコールなどのグリコール；（１１）グリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコールなどのポリオール；（１２）オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチルなどのエステル；（１３）寒天；（１４）水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウムなどの緩衝剤；（１５）アルギン酸；（１６）発熱性物質除去蒸留水；（１７）等張生理食塩水；（１８）リンゲル液；（１９）エチルアルコール；（２０）リン酸バッファー溶液；および（２１）薬学的製剤に使用される他の非毒性適合性物質。
【００６９】
本明細書で使用される場合、「結合した」は、２つ以上の基の間の結合、すなわち共有結合を指す。あるいは、「結合した」は、リンカー、例えば抗原結合ドメインをＦｃドメインに結合して抗体コンストラクトを形成するリンカーを介した、２つ以上の基の会合を指し得る。融合は、インフレームで発現される２つの別個のドメインの核酸配列を指し得る。例えば、結合ドメインは、融合として、または抗体コンストラクトを形成するリンカーを介したコンジュゲーションによって結合され得る。例えば、抗体コンストラクトの一部を第２の結合ドメインと融合して、融合タンパク質として第２の結合ドメインを含む抗体コンストラクトを作製することができる。融合タンパク質は、抗体コンストラクトの残りをコードする核酸配列とインフレームで発現される第２の結合ドメインをコードする核酸配列の結果であり得る。融合タンパク質は、抗体コンストラクトの一部を結合ドメインと結合する結合ドメインまたは近接するタンパク質配列を含む、抗体コンストラクトをコードするインフレーム遺伝子ヌクレオチド配列の結果であり得る。別の例として、第２の結合ドメインをリンカーを介して抗体コンストラクトに結合することができ、ここではリンカーが結合ドメインに結合（例えば、コンジュゲート）しており、リンカーが抗体コンストラクトの残りに結合（例えば、コンジュゲート）している。結合ドメインを化学コンジュゲーションによってリンカーに結合することができ、抗体コンストラクトの残りを化学コンジュゲーションによってリンカーに結合することができる。結合ドメインは、本明細書に記載される第２の結合ドメインおよび／または第３の結合ドメインであり得る。さらに、結合ドメインは、Ｆｃドメインに結合して、Ｆｃドメインとの融合として第１の抗原結合ドメインを産生し得る本明細書に記載される抗体コンストラクトを産生する第１の抗原結合ドメインであり得、第１の抗原結合ドメインはリンカーに結合することができ、リンカーはＦｃドメインに結合することができる。本明細書で使用される場合、「免疫調節化合物」は、標的に結合する小分子または実体を指し得る。免疫調節化合物は、標的に結合することができ、標的の機能を活性化し得る実体、または標的に結合し、標的の機能を阻害することができる実体であり得る。標的はタンパク質標的であり得る。タンパク質標的の機能の阻害は、ユビキチン媒介分解の増加の結果であり得る。ユビキチン媒介分解は、タンパク質標的のユビキチン媒介分解であり得る。免疫調節化合物は、炎症を減少させ、免疫応答を減少させ、線維症を減少させ得る、またはこれらのいずれかの組み合わせであり得る。
【００７０】
抗体コンストラクト免疫調節化合物コンジュゲートの抗体コンストラクト
コンジュゲートで免疫調節化合物と共に使用され得る抗体コンストラクトが本明細書に開示される。特定の実施形態では、本開示の免疫調節化合物を、直接またはリンカー基を介して免疫調節化合物に結合（例えば、コンジュゲート）して、抗体コンジュゲートを形成する。特定の実施形態では、抗体コンジュゲートが、以下の式：
2020523319.tif 000004
（式中、Ａは抗体コンストラクトであり、Ｌはリンカーであり、Ｄは１つまたは複数の免疫調節化合物、例えば１、２、３または４つの化合物であり、ｎは１〜２０である）
によって表される。特定の実施形態では、ｎが１〜１０、例えば１〜９、例えば１〜８、例えば２〜８、例えば１〜６、例えば３〜５または例えば約２である。特定の実施形態では、ｎが４である。いくつかの実施形態では、ｎが平均である。
【００７１】
本明細書に開示される免疫調節化合物と共に使用され得る抗体コンストラクトも本明細書に開示される。特定の実施形態では、免疫調節化合物を直接またはリンカー基を介して本開示の抗体コンストラクトに結合して、抗体コンジュゲートを形成する。特定の実施形態では、抗体コンジュゲートが、以下の式：
2020523319.tif 000005
（式中、
2020523319.tif 000006
は抗体コンストラクトであり、Ｌはリンカーであり、Ｄは免疫調節化合物であり、ｘは１〜２０であり得（各このようなｘは異なる免疫調節化合物を表す）、ｎは１〜２０であり得、ｚは１〜２０であり得る）
によって表され得る。
【００７２】
いくつかの実施形態では、ｘが１であり得、ｎが１であり得、ｚが１〜１０、例えば１〜９、例えば１〜８、例えば２〜８、例えば１〜６、例えば３〜５または例えば約２であり得る。特定の実施形態では、ｚが４であり得る。
【００７３】
いくつかの実施形態では、Ｄが免疫調節化合物（ＩＭＣ）であり得、ｘが１〜２０であり得、ｎが１〜２０であり得、ｚが１〜２０であり得る。
【００７４】
特定の実施形態では、抗体コンジュゲートが、以下の式：
2020523319.tif 000007
（式中、
2020523319.tif 000008
は抗体コンストラクトであり、Ｌはリンカーであり、Ｓはスペーサーであり、Ｄは免疫調節化合物であり、ｘは１〜２０であり得（各ｘは別個の免疫調節化合物を表す）、ｎは１〜２０であり得、ｗは１〜２０であり得、ｙは１〜２０であり得、ｚは１〜２０であり得る）
によって表され得る。
【００７５】
いくつかの実施形態では、ｘが１であり得、ｎが２であり、ｙが１であり得、ｚが１〜１０、例えば１〜９、例えば１〜８、例えば２〜８、例えば１〜６、例えば３〜５または例えば２であり得る。特定の実施形態では、ｚが４であり得る。
【００７６】
いくつかの実施形態では、Ｄが免疫調節化合物（ＩＭＣ）であり得、ｘが１〜２０であり得、ｎが１〜２０であり得、ｗが１〜２０であり得、ｙが１〜２０であり得、ｚが１〜２０であり得る。
【００７７】
いくつかの実施形態では、Ｄが、式：
2020523319.tif 000009
によって表される、スペーサー（Ｓ）を介してＥ３ユビキチンリガーゼ結合部分（ＵＬＭ）に共有結合的に結合され得る免疫調節化合物（ＩＭＣ）を含み得、リンカー（Ｌ）がスペーサー（Ｓ）に共有結合的に結合され得、ｎが１〜２０であり得、ｚが１〜２０であり得るタンパク質分解標的化キメラ（ＰＲＯＴＡＣ）であり得る。
【００７８】
いくつかの実施形態では、Ｄが、式：
2020523319.tif 000010
によって表される、スペーサー（Ｓ）を介してＥ３ユビキチンリガーゼ結合部分（ＵＬＭ）に共有結合的に結合され得る免疫調節化合物（ＩＭＣ）を含み得、リンカー（Ｌ）が免疫調節化合物（ＩＭＣ）に共有結合的に結合され得、ｎが１〜２０であり得、ｚが１〜２０であり得るタンパク質分解標的化キメラ（ＰＲＯＴＡＣ）であり得る。
【００７９】
いくつかの実施形態では、Ｄが、式：
2020523319.tif 000011
によって表される、スペーサー（Ｓ）を介してＥ３ユビキチンリガーゼ結合部分（ＵＬＭ）に共有結合的に結合され得る免疫調節化合物（ＩＭＣ）を含み得、リンカーＬがユビキチンＥ３リガーゼ部分（ＵＬＭ）に共有結合的に結合され得、ｎが１〜２０であり得、ｚが１〜２０であり得るタンパク質分解標的化キメラ（ＰＲＯＴＡＣ）であり得る。
【００８０】
いくつかの実施形態では、免疫調節化合物を直接またはリンカー基を介して抗体コンストラクトにコンジュゲートして、抗体コンジュゲート（「コンジュゲート」）を形成し、これが、これらの参考文献の各々全体が本明細書に参照により援用される、米国特許第９２５４３３９号、米国特許第９１４４６１５号、米国特許第８８２１８５０号、米国特許第８８０８６７９号、米国特許第８６８５３８３号、米国特許第８５２４２１４号または米国特許出願公開第２０１１／０２４３８９２号（米国出願番号第１３／１６３０８０号）に開示されるいずれかのコンジュゲートの形をとり得る。本明細書で使用される場合、「力価」は、一般的に測定された生理活性であり得、ＥＣ５０またはＩＣ５０として定量化され得る。力価は、効果を及ぼすために必要とされるコンジュゲートまたは化合物の量を指し得る。例えば、異なる免疫調節化合物と比較して、効果を達成するのに必要とする免疫調節化合物の量が少ない免疫調節化合物の力価を、より大きい力価を有するとみなすことができる。さらに、異なる免疫調節化合物は、反応を生み出すのにより多量の異なる免疫調節化合物を要するので、低い力価とみなすことができる。生理活性組成物の力価はある濃度範囲にわたって測定され得、測定される生物応答の一定割合を誘発または阻害するのに必要とされるモル濃度として報告することができる。例えば、アッセイで観察される最大活性の５０％を刺激するのに必要とされる濃度は有効濃度５０（ＥＣ５０）として、９０％活性を刺激するのに必要とされる濃度はＥＣ９０として、または１０％活性を刺激するのに必要とされる濃度はＥＣ１０として報告され得る。例えば、生物活性の５０％最大阻害をもたらすのに必要とされるアンタゴニストの濃度は阻害濃度５０（ＩＣ５０）として、９０％を阻害するのに必要とされる濃度はＩＣ９０として、または１０％を阻害するのに必要とされる濃度はＩＣ１０として報告され得る。これは、所与のバイオアッセイについてそのＥＣまたはＩＣ値の比較により、モルベースで生理活性化合物の力価の比較を可能にし得る。例えば、コントロールのＥＣ５０またはＩＣ５０より３００倍以上大きいＥＣ５０またはＩＣ５０を有する免疫調節化合物は、５０％生物応答を達成するためにコントロールと比較して３００倍高いまたは３００倍超高い濃度を必要とし、コントロールの３００分の１以下の力価を有する。そのため、コントロール化合物のＥＣ５０またはＩＣ５０の約３００倍以下のＥＣ５０またはＩＣ５０を有する免疫調節化合物は、５０％最大生物応答を達成するためにコントロール化合物より３００倍以下高い濃度を必要とし、ＥＣ５０またはＩＣ５０の１００倍以下は、１００倍以下高い濃度を必要とし、ＥＣ５０またはＩＣ５０の１０倍以下は、コントロールの濃度の１０倍以下を必要とする。免疫調節化合物の力価は、コントロールの力価の３００倍以上、１００倍以上または１０倍以上にあり得る。
【００８１】
本明細書で使用される場合、「コントロール化合物」は、リンカー結合および抗体コンジュゲーション前の免疫調節化合物を指す、またはＥ３ユビキチンリガーゼ結合部分を含むコンジュゲートの場合、コントロール化合物は、ｃ）Ｅ３ユビキチンリガーゼ部分に結合したｂ）第２のリンカーに結合したａ）免疫調節化合物を指す。いくつかの実施形態では、コンジュゲート中の免疫調節化合物の力価またはタンパク質結合が保持され得る、または増加し得る。いくつかの実施形態では、コンジュゲートとしての免疫調節化合物のタンパク質標的についてのＫｄが、コントロール化合物の１００倍、２５倍、１０倍または２倍以下である。いくつかの実施形態では、コンジュゲートとしての免疫調節化合物のＥＣ５０またはＩＣ５０が、コントロール化合物の３００倍、５０倍、１０倍または２倍以下である。いくつかの実施形態では、ＥＣ５０またはＩＣ５０がコントロール化合物と等しいまたはそれより低く、コンジュゲートによる免疫調節の力価増加を示す。
【００８２】
本開示の抗体コンストラクトは、例えば２、３、４、５、６、７、８、９、１０個またはそれ以上の抗原結合ドメインを含み得る。抗体コンストラクトは、各抗原結合ドメインが同じ抗原を認識することができる２つの抗原結合ドメインを含み得る。抗体コンストラクトは、各抗原結合ドメインが異なる抗原を認識することができる２つの抗原結合ドメインを含み得る。抗原結合ドメインは、抗原結合ドメインのための支持フレームワークである足場にあり得る。抗原結合ドメインは非抗体足場にあり得る。抗原結合ドメインは抗体足場にあり得る。抗体コンストラクトは足場中に抗原結合ドメインを含み得る。抗体コンストラクトはＦｃ融合タンパク質産物を含み得る。いくつかの実施形態では、抗体コンストラクトがＦｃ融合タンパク質産物である。抗原結合ドメインは、線維性疾患、自己免疫疾患または自己炎症性疾患に関連する抗原に特異的に結合し得る。抗原結合ドメインは、線維性疾患、自己免疫疾患または自己炎症性疾患に関連する抗原と少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％同一である抗原に特異的に結合し得る。抗原結合ドメインは、抗原提示細胞上の抗原に特異的に結合し得る。抗原結合ドメインは、抗原提示細胞上の抗原と少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％同一である抗原に特異的に結合し得る。抗原結合ドメインは、Ｔ細胞上の抗原に特異的に結合し得る。抗原結合ドメインは、Ｔ細胞上の抗原と少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％同一である抗原に特異的に結合し得る。
【００８３】
本明細書に記載されるコンジュゲートは、例えば免疫調節化合物と、抗体コンストラクトと、抗体コンストラクトを免疫調節化合物に結合するリンカーとを含むことができる。コンジュゲートの抗体コンストラクトは、例えば第１の抗原結合ドメインおよびＦｃドメインを含むことができ、第１の抗原結合ドメインは第１の抗原に結合する。第１の抗原は、例えばカドヘリン１１、ＰＤＰＮ、インテグリンα４β７、インテグリンα２ｂ１、ＭＡＤＣＡＭ、ネフリン、ポドシン、ＩＦＮＡＲ１、ＢＤＣＡ、ＣＤ３０、ｃ−ＫＩＴ、ＦＡＰ、ＣＤ７３、ＣＤ３８、ＰＤＧＦＲＢ、インテグリンαｖβ１、インテグリンαｖβ３、インテグリンαｖβ８、ＧＡＲＰ、エンドシアリン、ＣＴＧＦ、インテグリンαｖβ６、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＴＮＦＲ２、ＤＥＣ２０５、ＤＣＩＲ、ＣＤ８６、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ４５ＲＯ、ＭＨＣクラスＩＩまたはＣＤ２５との約５０％、約６０％、約７０％、約８０％または約９０％または約１００％の配列同一性を有することができる。いくつかの態様では、第１の抗原が、カドヘリン１１、ＰＤＰＮ、インテグリンα４β７、インテグリンα２β１、ＭＡＤＣＡＭ、ネフリン、ポドシン、ＩＦＮＡＲ１、ＢＤＣＡ２、ＣＤ３０、ｃ−ＫＩＴ、ＦＡＰ、ＣＤ７３、ＣＤ３８、ＰＤＧＦＲβ、インテグリンαｖβ１、インテグリンαｖβ３、インテグリンαｖβ８、ＧＡＲＰ、エンドシアリン、ＣＴＧＦ、インテグリンαｖβ６、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＴＮＦＲ２、ＤＥＣ２０５、ＤＣＩＲ、ＣＤ８６、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ４５ＲＯ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＣＤ２５、ＬＲＲＣ１５およびカドヘリン１１から選択される。いくつかの実施形態では、第１の抗原が、カドヘリン１１、ＰＤＰＮ、ＬＲＲＣ１５、インテグリンα４β７、インテグリンα２β１、ＭＡＤＣＡＭ、ネフリン、ポドシン、ＩＦＮＡＲ１、ＢＤＣＡ２、ＣＤ３０、ｃ−ＫＩＴ、ＦＡＰ、ＣＤ７３、ＣＤ３８、ＰＤＧＦＲβ、インテグリンαｖβ１、インテグリンαｖβ３、インテグリンαｖβ８、ＧＡＲＰ、エンドシアリン、ＣＴＧＦ、インテグリンαｖβ６、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＴＮＦＲ２、ＤＥＣ２０５、ＤＣＩＲ、ＣＤ８６、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ４５ＲＯ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＣＤ２５、ＭＭＰ１４、ＧＰＸ８およびＦ２ＲＬ２から選択される。いくつかの実施形態では、第１の抗原が、カドヘリン１１、ＦＡＰ、ＴＮＦＲ２またはＬＲＲＣ１５から選択される。いくつかの態様では、第１の抗原が、ＬＲＲＣ１５、ＦＡＰ、カドヘリン１１およびＴＮＦＲ２から選択される。
【００８４】
特定の実施形態では、第１の抗原結合ドメインが、免疫細胞、例えばＴ細胞、Ｂ細胞およびＡＰＣ、星細胞、内皮細胞、上皮細胞、腫瘍細胞、線維芽細胞、線維細胞、有足細胞、筋線維芽細胞、滑膜線維芽細胞または線維症の発病に関連する他の細胞上の抗原と少なくとも８０％同一である抗原に特異的に結合する。特定の実施形態では、第１の抗原結合ドメインが、Ｔ細胞、ＡＰＣおよび／またはＢ細胞上の抗原と少なくとも８０％同一である抗原に特異的に結合する。特定の実施形態では、第１の抗原結合ドメインが、ＰＤ−１、ＧＡＲＰ、ＣＤ２５、ＰＤ−Ｌ１またはＴＮＦＲ２からなる群から選択される抗原と少なくとも８０％同一である抗原に特異的に結合し得る。特定の実施形態では、第１の抗原結合ドメインが、星細胞、内皮細胞、線維芽細胞、線維細胞、筋線維芽細胞、滑膜線維芽細胞、有足細胞または線維症の発病に関連する細胞上の抗原と少なくとも８０％同一である抗原に特異的に結合する。特定の実施形態では、第１の抗原結合ドメインが、ＰＤＧＦＲβ、インテグリンαｖβ１、インテグリンαｖβ３、インテグリンαｖβ６、インテグリンαｖβ８、エンドシアリン、ＦＡＰ、ＡＤＡＭ１２、ＬＲＲＣ１５、ＭＭＰ１４、ＰＤＰＮ、ＣＤＨ１１およびＦ２ＲＬ２からなる群から選択される抗原と少なくとも８０％同一である抗原に特異的に結合し得る。特定の実施形態では、第１の抗原結合ドメインが、ＦＡＰ、ＡＤＡＭ１２、ＬＲＲＣ１５、ＭＭＰ１４、ＰＤＰＮ、ＣＤＨ１１およびＦ２ＲＬ２からなる群から選択される抗原と少なくとも８０％同一である抗原に特異的に結合し得る。
【００８５】
特定の実施形態では、第１の抗原結合ドメインが、Ｔ細胞、Ｂ細胞、星細胞、内皮細胞、腫瘍細胞、ＡＰＣ、線維芽細胞、線維細胞、筋線維芽細胞、滑膜線維芽細胞、有足細胞または線維症の発病に関連する他の細胞上の抗原に特異的に結合する。特定の実施形態では、第１の抗原結合ドメインが、Ｔ細胞、ＡＰＣおよび／またはＢ細胞上の抗原に特異的に結合する。特定の実施形態では、第１の抗原結合ドメインが、ＰＤ−１、ＧＡＲＰ、ＣＤ２５、ＰＤ−Ｌ１またはＴＮＦＲ２からなる群から選択される抗原に特異的に結合し得る。特定の実施形態では、第１の抗原結合ドメインが、星細胞、内皮細胞、線維芽細胞、線維細胞、筋線維芽細胞、滑膜線維芽細胞、有足細胞または線維症の発病に関連する細胞上の抗原に特異的に結合する。特定の実施形態では、第１の抗原結合ドメインが、ＰＤＧＦＲβ、インテグリンαｖβ１、インテグリンαｖβ３、インテグリンαｖβ６、インテグリンαｖβ８、エンドシアリン、ＦＡＰ、ＡＤＡＭ１２、ＬＲＲＣ１５、ＭＭＰ１４、ＰＤＰＮ、ＣＤＨ１１およびＦ２ＲＬ２からなる群から選択される抗原に特異的に結合し得る。特定の実施形態では、第１の抗原結合ドメインが、ＦＡＰ、ＡＤＡＭ１２、ＬＲＲＣ１５、ＭＭＰ１４、ＰＤＰＮ、ＣＤＨ１１およびＦ２ＲＬ２からなる群から選択される抗原に特異的に結合する。
【００８６】
抗体コンストラクトの結合ドメインは、抗原上の特定のアミノ酸配列に結合することができるだけではなく、特定のタンパク質複合体、タンパク質コンフォメーション、タンパク質コンフォーマー、転写後修飾または翻訳後修飾についての特異性を示すこともできる。例えば、コンジュゲートの結合ドメインの抗原は、スプライスジャンクション、タンパク質複合体、タンパク質コンフォーマーまたは翻訳後修飾を含むことができる。結合ドメインによって特異的に認識され得るスプライスバリアント抗原の非限定的な例は、ＥＧＦＲｖｉｉｉスライスバリアントの結合ドメインである。翻訳後修飾またはタンパク質コンフォーマーによって産生される特異的抗原の結合ドメインのいくつかの非限定的な例は、ＣＤ４５ＲＢまたはＣＤ４５ＲＯのスプライスバリアントの結合ドメインであり得る。タンパク質複合体に結合することができる結合ドメインの非限定的な例は、αｖβ６などの特異的インテグリンペアに結合することができる結合ドメインであり得る。例えば、結合ドメインは、αｖβ６に密に結合することができるが、個々のサブユニットまたは異なるサブユニットとペアリングした一方のサブユニットには弱くしか結合できないまたは全く結合できない。これらの種類の結合ドメインのいくつかの追加の非限定的な例としては、抗ＣＤ４５ＲＢ抗体、抗ＣＤ４５ＲＯ抗体、抗αｖβ６抗体および抗αｖβ８抗体を挙げることができる。
【００８７】
抗原はＰＤＣＤ１であり得る。ＰＤＣＤ１遺伝子は、Ｔ細胞炎症活性を抑制することによって免疫系を下方制御し、自己寛容を促進することにおいて重要な役割を果たす細胞表面受容体を担う細胞表面受容体である、ＰＤ−１およびＣＤ２７９（分化抗原群２７９）としても知られる、プログラム細胞死タンパク質１をコードする。ＰＤ−１は、免疫グロブリンスーパーファミリーに属する細胞表面受容体であり、Ｔ細胞およびプロＢ細胞上で発現される。ＰＤ−１は、免疫チェックポイントであり、リンパ節で抗原特異的Ｔ細胞のアポトーシス（プログラム細胞死）を促進しながら、同時に調節性Ｔ細胞（抗炎症性、抑制性Ｔ細胞）のアポトーシスを減少させる二重の機構によって自己免疫を防ぐ。
【００８８】
抗原はＴＮＦＲＳＦ４であり得る。ＴＮＦＲＳＦ４遺伝子は、ＣＤ２８とは異なり、休止ナイーブＴ細胞上で構成的に発現されない受容体のＴＮＦＲスーパーファミリーのメンバーである、ＴＮＦＲＳＦ４（腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー、メンバー４）としても知られる、ＯＸ４０をコードする。ＯＸ４０は、活性化後２４〜７２時間後に発現される二次共刺激免疫チェックポイント分子であり；そのリガンドであるＯＸ４０Ｌも、休止抗原提示細胞では発現されないが、活性化後に発現される。ＯＸ４０の発現は、Ｔ細胞の完全活性化に依存する；ＣＤ２８がなければ、ＯＸ４０の発現は遅延し、４分の１のレベルとなる。
【００８９】
抗原はＣＤ２７であり得る。ＣＤ２７は、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーのメンバーである。この遺伝子によってコードされるタンパク質は、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーのメンバーである。この受容体は、Ｔ細胞免疫の生成および長期維持に必要とされる。これはリガンドＣＤ７０に結合し、Ｂ細胞活性化および免疫グロブリン合成の調節で重要な役割を果たす。この受容体は、ＮＦ−κＢおよびＭＡＰＫ８／ＪＮＫの活性化をもたらすシグナルを変換する。アダプタータンパク質ＴＲＡＦ２およびＴＲＡＦ５は、この受容体のシグナル伝達プロセスを媒介することが示されている。アポトーシス促進タンパク質であるＣＤ２７結合タンパク質（ＳＩＶＡ）がこの受容体に結合することができ、この受容体によって誘導されるアポトーシスで重要な役割を果たすと考えられている。
【００９０】
抗原はＩＬ２ＲＡであり得る。ＩＬ２ＲＡ遺伝子は、活性化Ｔ細胞、活性化Ｂ細胞、いくつかの胸腺細胞、骨髄前駆体および乏突起膠細胞上に存在するＩ型膜貫通タンパク質である、ＩＬ２ＲＡ（インターロイキン２受容体α鎖）としても知られる、ＣＤ２５をコードする。ＩＬ２ＲＡは、ほとんどのＢ細胞腫瘍、いくつかの急性非リンパ性白血病、神経芽細胞腫、肥満細胞症および腫瘍浸潤リンパ球で発現される。これはＨＴＬＶ−１の受容体として機能し、結果として成人Ｔ細胞リンパ腫／白血病の腫瘍性細胞上で発現される。ｓＩＬ−２Ｒと呼ばれるその可溶型形態がこれらの疾患で上昇する場合があり、時折疾患進行を追跡するために使用される。
【００９１】
抗原はＴＮＦＲＳＦ１８であり得る。ＴＮＦＲＳＦ１８遺伝子は、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦ−Ｒ）スーパーファミリーのメンバーであるタンパク質である、ＴＮＦＲＳＦ１８（腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１８）およびＡＩＴＲ（活性化誘導性ＴＮＦＲファミリー受容体）としても知られる、ＧＩＴＲ（グルココルチコイド誘導ＴＮＦＲ関連タンパク質）をコードする。ＧＩＴＲ（グルココルチコイド誘導腫瘍壊死因子受容体）は、Ｔ調節性細胞の抑制活性の阻害およびＴエフェクター細胞の生存の延長に関与することが示されている表面受容体分子である。
【００９２】
抗原はＬＡＧ−３であり得る。ＬＡＧ−３（リンパ球活性化遺伝子３）遺伝子は、Ｔ細胞機能に対する多様な生物学的効果を有する細胞表面分子をコードする。ＬＡＧ−３は免疫チェックポイント受容体である。免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーに属するＬＡＧ３タンパク質は、Ｄ１〜Ｄ４と呼ばれる４つの細胞外Ｉｇ様ドメインを有する５０３アミノ酸Ｉ型膜貫通タンパク質を含む。ＬＡＧ−３は、活性化Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、Ｂ細胞および形質細胞様樹状細胞上で発現される。
【００９３】
抗原はＧＡＲＰであり得る。ＧＡＲＰ（糖タンパク質Ａ反復優勢）は、刺激されたＴｒｅｇクローンの表面上に存在するが、Ｔｈクローン上には存在しないロイシンリッチリピートを含む膜貫通タンパク質である。
【００９４】
抗原は４−１ＢＢであり得る。４−１ＢＢは、活性化Ｔリンパ球上で発現される、ＴＮＦスーパーファミリーに属する２型膜貫通糖タンパク質である。４−１ＢＢは、活性化Ｔ細胞によって発現され得る。４−１ＢＢ発現は、樹状細胞、Ｂ細胞、濾胞性樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、顆粒球および炎症部位の血管壁の細胞上に見られ得る。
【００９５】
抗原はＩＣＯＳであり得る。ＩＣＯＳ（誘導Ｔ細胞共刺激因子）遺伝子は、活性化Ｔ細胞上で発現されるＣＤ２８スーパーファミリー共刺激分子をコードする。この遺伝子によってコードされるタンパク質は、ＣＤ２８およびＣＴＬＡ−４細胞表面受容体ファミリーに属する。ＩＣＯＳはホモダイマーを形成し、細胞−細胞シグナル伝達、免疫応答および細胞増殖の調節で重要な役割を果たす。
【００９６】
抗原はＣＤ７０であり得る。ＣＤ７０は、Ｔ細胞リンパ腫およびＢ細胞リンパ腫などの高度に活性化されたリンパ球上で発現される。ＣＤ７０は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）リガンドファミリーに属するサイトカインである。このサイトカインはＴＮＦＲＳＦ２７／ＣＤ２７のリガンドである。これは、活性化ＴおよびＢリンパ球上の表面抗原であって、休止ＴおよびＢリンパ球上の表面抗原ではない。ＣＤ７０は、共刺激Ｔ細胞の増殖を誘導し、細胞溶解性Ｔ細胞の産生を増強し、Ｔ細胞活性化に寄与する。このサイトカインはまた、Ｂ細胞活性化、ナチュラルキラー細胞の細胞傷害性機能および免疫グロブリン合成の調節で役割を果たすことも報告されている。
【００９７】
抗原はＰＤＧＦＲβであり得る。ＰＤＧＦＲβ（β型血小板由来増殖因子受容体）遺伝子は、細胞外リガンド結合ドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞内チロシンキナーゼドメインからなる膜貫通タンパク質である、典型的な受容体チロシンキナーゼをコードする。成熟グリコシル化ＰＤＧＦＲβタンパク質の分子質量は約１８０ｋＤＡである。
【００９８】
抗原はＣＤ７３であり得る。エクト−５’−ヌクレオチダーゼ（エクト−５’−ＮＴ、ＥＣ３．１．３．５）として知られる、ＣＤ７３（分化抗原群７３）は、ほとんどの組織に見られるグリコシル−ホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）結合７０ｋＤａ細胞表面酵素である。ＣＤ７３は一般的にＡＭＰをアデノシンに変換するよう働く。エクト−５’−ヌクレオチダーゼ（５’−リボヌクレオチドホスホヒドロラーゼ；ＥＣ３．１．３．５）は、中性ｐＨで、プリン５’モノヌクレオチドのヌクレオシドへの変換を触媒し、好ましい基質はＡＭＰである。酵素は、原形質膜の外面にグリコシルホスファチジルイノシトール結合によって結合した２つの同一の７０ｋＤサブユニットのダイマーからなる。酵素はリンパ球分化のマーカーとして使用される。
【００９９】
抗原はＣＤ３８であり得る。サイクリックＡＤＰリボースヒドロラーゼとしても知られる、ＣＤ３８（分化抗原群３８）は、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、Ｂリンパ球およびナチュラルキラー細胞を含む多くの免疫細胞（白血球）の表面上に見られる糖タンパク質である。ＣＤ３８はまた、細胞接着、シグナル伝達およびカルシウムシグナル伝達でも機能する。ＣＤ３８機能の喪失は、免疫応答障害、代謝障害、およびおそらく自閉症に関連する社会的健忘症を含む行動修飾に関連している。ＣＤ３８タンパク質は細胞活性化のマーカーである。これは、ＨＩＶ感染症、白血病、骨髄腫、固形腫瘍、ＩＩ型糖尿病および骨代謝、ならびにいくつかの遺伝的に決定される状態と結び付けられている。ＣＤ３８は、中枢神経系内のオキシトシンの放出を調節する酵素を産生する。
【０１００】
抗原はインテグリンαｖβ３であり得る。インテグリンαｖβ３は、ビトロネクチンの受容体である種類のインテグリンである。インテグリンαｖβ３は、インテグリンαＶおよびインテグリンβ３（ＣＤ６１）の２つの成分からなり、血小板によって発現される。インテグリンαｖβ３は、マクロファージまたは樹状細胞上の食作用のための受容体である。
【０１０１】
抗原はインテグリンαｖβ８であり得る。ＶＮ受容体であるインテグリンαｖβ８は、細胞増殖の潜在的な負の制御因子として特定される。β８の細胞質ドメインは、配列が多様であり、他のαｖ関連インテグリンβサブユニット（β１、β３、β５およびβ６）の高度に相同な細胞質ドメインとの全てのアミノ酸配列同一性を欠く。β８細胞質ドメインは、機能が多様である。αｖβ８は、分布が制限されており、非増殖細胞型で最も高度に発現される。
【０１０２】
抗原はＣＤ２４８であり得る。ＣＤ２４８はエンドシアリンをコードする。エンドシアリンは、細胞−細胞接着プロセスだけでなく、宿主防御でも役割を果たすＣ型レクチン膜貫通受容体の新規なファミリーである「第ＸＩＶ群」のメンバーである。エンドシアリンは、胚、子宮の血管新生ならびに腫瘍発生および増殖に関連している。
【０１０３】
抗原はＦＡＰであり得る。ＦＡＰ（線維芽細胞活性化タンパク質α）は、ヒトではＦＡＰ遺伝子によってコードされる１７０ｋＤａメラノーマ膜結合ゼラチナーゼタンパク質である。この遺伝子によってコードされるタンパク質は、セリンプロテアーゼファミリーに属するホモダイマー膜内在性ゼラチナーゼである。これは、上皮がんの反応性間質線維芽細胞、治癒している創傷の肉芽組織、ならびに骨肉腫および軟組織肉腫の悪性細胞で選択的に発現される。このタンパク質は、発達、組織修復および上皮発癌中の線維芽細胞増殖または上皮−間葉系相互作用の制御に関与していると考えられている。
【０１０４】
抗原はＬＲＲＣ１５であり得る。１５含有ロイシンリッチリピートまたはＬＩＢとしても知られる、ＬＲＲＣ１５は、１型１回膜貫通タンパク質である。
【０１０５】
抗原はＡＤＡＭ１２であり得る。ＡＤＡＭ１２は、ディスインテグリンおよびメタロプロテアーゼである。これは、特に細胞融合の初めで、骨格筋再生に関与することが報告されている。これは、α−アクチニン−２およびシンデカンおよびＲＡＣＫ１と相互作用する；この相互作用は、ＡＤＡＭ１２の細胞膜へのＰＫＣ依存性移行に必要とされる。
【０１０６】
抗原はＭＭＰ１４であり得る。ＭＭＰ１４は、コラーゲンなどの細胞外マトリックスの種々の成分を分解するエンドペプチダーゼである。これは、プロゼラチナーゼＡを活性化する。ＭＭＰ１４は、ＰＴＫ７を切断することによって、アクチン細胞骨格認識に関与し得る。ＭＭＰ１４は、ＭＭＰ１５の活性化を介して細胞増殖および移動遊走の正の制御因子として作用し、プロＭＭＰ２と会合して血管結合組織の形成に関与する。
【０１０７】
抗原はＦ２ＲＬ２であり得る。Ｆ２ＲＬ２は、ホスホイノシチド加水分解を刺激するＧタンパク質に共役した活性化トロンビンの受容体である。
【０１０８】
抗原はインテグリンαｖであり得る。インテグリンαｖサブユニットは、５つのインテグリンβサブユニット、β１、β３、β５、β６またはβ８のうちの１つと会合して、５つの異なるαＶβヘテロダイマーを形成する。細胞表面上のインテグリンαＶβヘテロダイマーは、コラーゲン、フィブリノーゲン、フィブロネクチンおよびビトロベクチンなどの細胞接着タンパク質と相互作用する。これらの相互作用は、細胞接着または遊走、特に腫瘍転移で重要な役割を果たす。
【０１０９】
抗原はインテグリンαｖβ６であり得る。インテグリンαｖβ６は、ＴＧＦ−βの細胞外マトリックス（ＥＣＭ）タンパク質フィブロネクチン、ビトロネクチン、テネイシンおよび潜在関連ペプチド（ＬＡＰ）の受容体である上皮特異的インテグリンである。インテグリンαｖβ６は、健康な成人上皮では発現されないが、創傷治癒中およびがんで上方制御される。インテグリンαｖβ６は、侵入を調節し、アポトーシスを阻害し、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）の発現を調節し、ＴＧＦ−β１を活性化することが示されている。
【０１１０】
抗原はカドヘリン１１であり得る。カドヘリン１１は、カルシウム依存性細胞−細胞接着を媒介する膜内在性タンパク質であるカドヘリンスーパーファミリーのＩＩ型古典的カドヘリンである。成熟カドヘリンタンパク質は、大きなＮ末端細胞外ドメイン、１回膜貫通ドメイン、および小さな高度に保存されたＣ末端細胞質ドメインで構成される。ＩＩ型（非定型）カドヘリンは、Ｉ型カドヘリンに特異的なＨＡＶ細胞接着認識配列の欠如に基づいて定義される。カドヘリン１１は、骨芽細胞株で発現され、骨芽細胞分化中に上方制御される。
【０１１１】
抗原はＰＤＰＮであり得る。ＰＤＰＮ（ポドプラニン）は、ヒト組織中での多様な分布を有するＩ型膜内在性糖タンパク質である。ＰＤＰＮの生理的機能をそのムチン型特性に関連付けることができる。あるいは、異なるアイソフォームをコードするスプライシング転写変異体が特定されている。
【０１１２】
抗原はＭＡＤＣＡＭであり得る。ＭＡＤＣＡＭ（粘膜血管アドレシン細胞接着分子）は、骨髄細胞上の白血球β７インテグリンＬＰＡＭ−１（α４β７）、Ｌ−セレクチンおよびＶＬＡ−４（α４β１）と相互作用して、白血球を粘膜および炎症組織に向ける内皮細胞接着分子である。ＭＡＤＣＡＭは、免疫グロブリンファミリーのメンバーである。
【０１１３】
抗原はネフリンであり得る。ネフリンは、腎臓の糸球体濾過障壁で機能する、細胞接着分子の免疫グロブリンファミリーのメンバーである。ネフリンは、腎臓組織で発現され、このタンパク質は、糸球体有足細胞のスリット膜（ｓｌｉｔ  ｄｉａｐｈｒａｇｍ）で見られる１型膜貫通タンパク質である。スリット膜は、尿の形成でアルブミンおよび他の血漿高分子を排除することができる限外濾過膜である。ネフリンをコードする遺伝子の突然変異は、重度のタンパク尿ならびにスリット膜および足突起の喪失を特徴とする、フィンランド型先天性ネフローゼ１をもたらし得る。
【０１１４】
抗原はポドシンであり得る。ポドシン（ＮＰＨＳ２）は、糸球体透過性を調節することができるタンパク質である。ポドシンをコードする遺伝子の突然変異は、ステロイド抵抗性ネフローゼ症候群を引き起こし得る。
【０１１５】
抗原はＩＦＮＡＲ１であり得る。ＩＦＮＡＲ１（インターフェロンαおよびβ受容体サブユニット１）は、インターフェロンαおよびβの受容体の２つの鎖の一方を形成するＩ型膜タンパク質である。ＩＦＮＡＲ１の結合および活性化はヤヌスプロテインキナーゼを刺激し、これが今度はＳＴＡＴ１およびＳＴＡＴ２を含むいくつかのタンパク質をリン酸化する。ＩＦＮＡＲ１はまた、抗ウイルス因子としても機能することができる。
【０１１６】
抗原はＢＤＣＡ２であり得る。ＢＤＣＡ２（インターフェロンαおよびβ受容体サブユニット１）は、形質細胞様樹状細胞（ＰＤＣ）上で選択的に発現されるＩＩ型Ｃ型レクチン受容体であり、抗原捕捉およびインターフェロンＩ型の産生の調節に関与する。
【０１１７】
抗原はＣＤ３０であり得る。ＣＤ３０（ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー８）は、活性化ＴおよびＢ細胞によって発現されるが、休止ＴおよびＢ細胞によっては発現されない。ＴＲＡＦ２およびＴＲＡＦ５がＣＤ３０と相互作用し、ＮＦ−κＢの活性化をもたらすシグナル伝達を媒介することができる。ＣＤ３０は、アポトーシスの正の制御因子であり、自己反応性ＣＤ８エフェクターＴ細胞の増殖能力を制限し、体を自己免疫から保護することも示されている。ＣＤ３０をコードする遺伝子の２つの選択的スプライシング転写変異体が、ＣＤ３０の異なるアイソフォームの翻訳をもたらすことが報告されている。
【０１１８】
抗原はｃ−ＫＩＴであり得る。ｃ−ＫＩＴ（ＫＩＴがん原遺伝子受容体チロシンキナーゼ／ＣＤ１１７）は、ＭＧＦ（幹細胞因子としても知られる、マスト細胞増殖因子）の３型膜貫通受容体である。ｃ−ＫＩＴをコードする遺伝子の突然変異は、消化管間質腫瘍、マスト細胞疾患、急性骨髄性白血病および限局性白皮症と関連している。異なるアイソフォームをコードする複数の転写変異体が、ｃ−ＫＩＴをコードする遺伝子で見出されている。
【０１１９】
抗原はＣＴＧＦであり得る。ＣＴＧＦ（結合組織増殖因子）は、血管内皮細胞によって分泌されるマイトジェンである。ＣＴＧＦは、軟骨細胞増殖および分化、多くの細胞型での細胞接着で役割を果たし、血小板由来増殖因子に関連している。ＣＴＧＦをコードする遺伝子における一定の多型は、全身性硬化症の高い発生率と関連付けられている。
【０１２０】
抗原はＣＤ４０であり得る。分化抗原群４０（ＣＤ４０）は、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦ−Ｒ）ファミリーのメンバーである。ＣＤ４０は、単球、マクロファージ、Ｂリンパ球、樹状細胞、内皮細胞、平滑筋細胞、線維芽細胞および上皮などの正常細胞、ならびにＢ細胞リンパ腫および多くの種類の固形腫瘍を含む腫瘍細胞で構成的に発現され得る５０ｋＤａ細胞表面糖タンパク質であり得る。ＣＤ４０の発現は、ＩＬ−１βｐ、ＩＦＮ−γ、ＧＭ−ＣＳＦおよびＬＰＳ誘導シグナル伝達イベントに応じて抗原提示細胞で増加し得る。
【０１２１】
抗原はＴＩＭ−３であり得る。ＴＩＭ−３（Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン含有−３）は、Ｔ細胞抑制性受容体として機能することができる。Ｔｉｍ−３のガレクチン９誘導は、Ｔｉｍ−３＋  Ｔｈ１細胞で細胞死を誘導し、実験的自己免疫性脳脊髄炎を改善することができる。Ｔｉｍ−３欠損マウスとＴｉｍ−３−Ｉｇ融合タンパク質で処置したマウスの両方が、抗原特異性寛容の誘導の欠損を示すので、Ｔｉｍ−３はまた、寛容の誘導にも必要とされ得る。概して、ＴＩＭ−３は、Ｔｈ１およびＴｃ１  Ｔ細胞応答の持続時間および大きさを制限するよう特異的に機能する免疫チェックポイント受容体である。
【０１２２】
抗原はＴＮＦＲ２であり得る。ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ（腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー１Ｂ）およびＣＤ１２０ｂとしても知られる、ＴＮＦＲ２（腫瘍壊死因子受容体２）は、Ｉ型１回膜貫通タンパク質および４システインリッチドメイン（ＣＲＤ）リピートを含むＴＮＦＲスーパーファミリーのメンバーである。完全長膜アンカー形態に加えて、可溶型ＴＮＦＲ２は、（１）完全膜アンカー形態のタンパク質分解処理を介した脱落、および（２）ＴＮＦＲ２の細胞外ドメインをコードする選択的スプライシングメッセージからの翻訳の２つの異なる機構を介して生成され得る。ＴＮＦＲ２は、ＴＮＦαに対する高い親和性およびホモトリマーリンホトキシンαに対する約５分の１の親和性を有する受容体である。ＴＮＦＲ２（腫瘍壊死因子受容体ＩＩ型）およびＴＮＦ受容体１は、Ｅ３ユビキチンリガーゼ活性を有する２つの抗アポトーシスタンパク質、ｃ−ＩＡＰ１およびｃ−ＩＡＰ２の動員を媒介するヘテロ複合体を形成する。ｃ−ＩＡＰ１は、抗アポトーシスシグナルを媒介するＴＮＦ受容体関連因子２のユビキチン化および分解によってＴＮＦ誘導アポトーシスを増強することができる。マウスにおけるノックアウト試験が、抗酸化経路を刺激することによってニューロンをアポトーシスから保護することにおけるＴＮＦＲ２の役割を示唆している。
【０１２３】
抗原はＤＥＣ２０５であり得る。ＤＥＣ２０５は、主に樹状細胞によって発現されるＩ型細胞表面タンパク質である。ＤＥＣ２０５は、リンパ組織のＴ細胞領域の指状嵌入樹状細胞、骨髄由来ＤＣ、ランゲルハンス細胞上で、ならびにマクロファージおよびＴ細胞上で低レベルで見られる。ＤＥＣ２０５は、樹状細胞の成熟中に上方制御され得る。ＤＥＣ−２０５はまた、Ｂ細胞によって中程度に発現されることも示されており、プレＢ細胞からＢ細胞への移行中に上方制御され得る。構造的に、ＤＥＣ２０５ファミリーは、システインリッチＮ末端ドメイン、引き続いてフィブロネクチンＩＩ型ドメインおよび複数の糖鎖認識ドメイン（ＣＲＤ）を特徴とする。ＤＥＣ２０５は１０個のＣＲＤを有する。１回膜貫通ドメインに、短い細胞質側末端が続く。
【０１２４】
抗原はＤＣＩＲであり得る。ＤＣＩＲ（樹状細胞免疫受容体／ＣＬＥＣ４Ａ）は、Ｃ型レクチン／Ｃ型レクチン様ドメイン（ＣＴＬ／ＣＴＬＤ）スーパーファミリーのメンバーである。ＤＣＩＲは、細胞接着、細胞−細胞シグナル伝達、糖タンパク質代謝回転などの多様な機能、ならびに炎症および免疫応答における役割を有することができる。コードされる２型膜貫通タンパク質は、炎症および免疫応答で役割を果たすことができる。異なるアイソフォームをコードする複数の転写変異体が、ＤＣＩＲをコードする遺伝子で特定されている。
【０１２５】
抗原はＣＤ８６であり得る。ＣＤ８６（分化抗原群８６）は、免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーであるＩ型膜タンパク質である。ＣＤ８６は、抗原提示細胞によって発現され、Ｔ細胞の細胞表面の２つのタンパク質、ＣＤ２８抗原および細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４のリガンドである。ＣＤ８６とＣＤ２８抗原の結合は、Ｔ細胞の活性化のための共刺激シグナルである。ＣＤ８６タンパク質と細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４の結合は、Ｔ細胞活性化を負に調節し、免疫応答を減少させる。
【０１２６】
抗原はＣＤ４５ＲＢまたＣＤ４５ＲＢ／ＲＯであり得る。ＣＤ４５ＲＢは、エクソン５スプライシングによるＣＤ４５のアイソフォームである。ＣＤ４５ＲＢは、末梢Ｂ細胞、ナイーブＴ細胞、胸腺細胞、マクロファージおよび樹状細胞上で発現される２２０ｋＤ糖タンパク質である。ＣＤ４５ＲＢは、ＴＣＲおよびＢＣＲシグナル伝達で役割を果たすことができる。Ｔ細胞が活性化し、ナイーブからメモリー細胞に進行するので、ＣＤ４５ＲＢ発現が下方制御される。さらに、異なるサイトカインプロファイルを分泌する機能的に異なるＣＤ４＋Ｔ細胞サブセットを、ＣＤ４５ＲＢ強度によって分離することができる。ＣＤ４５の主なリガンドはガレクチン−１、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４およびＴｈｙ−１である。ＣＤ４５ＲＢと対照的に、ＣＤ４５ＲＯは、ＣＤ４５ＡおよびＣＤ４５Ｂアイソフォームを下方制御するので、エフェクターまたはメモリーＴ細胞上で発現される抗原アイソフォームである。
【０１２７】
抗体の抗原結合ドメインは、１つまたは複数の軽鎖（Ｌ）ＣＤＲと、１つまたは複数の重鎖（Ｈ）ＣＤＲとを含み得る。例えば、抗体の抗体結合ドメインは、以下のうちの１つまたは複数を含み得る：軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＤＲ２）または軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＤＲ３）。別の例については、抗体結合ドメインが、以下のうちの１つまたは複数を含み得る：重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣＤＲ２）または重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）。追加の例として、抗体の抗体結合ドメインは、以下のうちの１つまたは複数を含み得る：ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３。別の例として、抗体の抗体結合ドメインは、以下の６つ全てを含み得る：ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３。
【０１２８】
抗体コンストラクトの抗原結合ドメインは、それだけに限らないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体もしくはその機能的（抗原結合）断片、例えば重鎖可変ドメイン（ＶＨ）および軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗原に特異的に結合するいずれかのドメインから選択され得る、またはＤＡＲＰｉｎ、アフィマー（ａｆｆｉｍｅｒ）、アビマー（ａｖｉｍｅｒ）、ノッチン、モノボディ、アフィニティークランプ（ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｃｌａｍｐ）、外部ドメイン、受容体外部ドメイン、受容体、サイトカイン、リガンド、免疫サイトカイン、Ｔ細胞受容体、二環式ペプチド、フィノマー（ｆｙｎｏｍｅｒ）もしくは組換えＴ細胞受容体であり得る。
【０１２９】
抗体コンストラクトの抗原結合ドメインは、抗原に結合する特定の抗原結合ドメインであって、それだけに限らないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体もしくはその機能的断片、例えば重鎖可変ドメイン（ＶＨ）および軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）から選択される抗原結合ドメインと少なくとも８０％同一であり得る、またはＤＡＲＰｉｎ、アフィマー、アビマー、ノッチン、モノボディ、アフィニティークランプ、外部ドメイン、受容体外部ドメイン、受容体、サイトカイン、リガンド、免疫サイトカイン、Ｔ細胞受容体、二環式ペプチド、フィノマー、アンチカリン（ａｎｔｉｃａｌｉｎ）、ＶＮＡＲもしくは組換えＴ細胞受容体であり得る。
【０１３０】
特定の実施形態では、抗体コンストラクトが、Ｆｃ受容体と相互作用するＦｃ領域の部分であり得るＦｃドメインを含むＦｃ領域を含む。抗体コンストラクトのＦｃドメインは、免疫細胞上に見られるＦｃ受容体（ＦｃＲ）と相互作用し得る。Ｆｃドメインはまた、エフェクター分子と細胞との間の相互作用を媒介し、免疫系の活性化をもたらすことができる。Ｆｃ領域は、ＩｇＧ、ＩｇＡまたはＩｇＤ抗体アイソタイプに由来してもよく、抗体の重鎖の第２および第３の定常ドメインに由来する２つの同一のタンパク質断片を含み得る。ＩｇＧ抗体アイソタイプに由来するＦｃ領域では、Ｆｃ領域が、ＦｃＲ媒介下流効果に必須であり得る高度に保存されたＮ−グリコシル化部位を含み得る。Ｆｃ領域はＩｇＭまたはＩｇＥ抗体アイソタイプに由来してもよく、Ｆｃ領域は３つの重鎖定常ドメインを含み得る。
【０１３１】
Ｆｃドメインは異なる種類のＦｃＲと相互作用し得る。異なる種類のＦｃＲには、例えばＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、ＦｃγＲＩＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＩＢ、ＦｃαＲＩ、ＦｃμＲ、ＦｃεＲＩ、ＦｃεＲＩＩおよびＦｃＲｎが含まれ得る。ＦｃＲは、例えばＢリンパ球、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、好中球、濾胞性樹状細胞、好酸球、好塩基球、血小板およびマスト細胞を含む一定の免疫細胞の膜上に位置し得る。いったんＦｃＲがＦｃドメインによって会合されると、ＦｃＲは、例えば受容体媒介エンドサイトーシスを介した抗原−抗体複合体のクリアランス、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞媒介性食作用（ＡＤＣＰ）、ならびに分泌、エキソサイトーシスおよび細胞代謝の変化をもたらし得る原形質膜を通したシグナルのリガンド誘発伝達を含む機能を開始し得る。ＦｃＲは、細胞表面で抗体および多価抗原によって凝集されると、シグナルを伝達し得る。ＦｃＲと免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）の凝集は、ＳＲＣファミリーチロシンキナーゼおよびＳＹＫファミリーチロシンキナーゼを順次活性化し得る。ＩＴＡＭは、２回反復ＹｘｘＬ配列が隣接している７個の可変残基を含む。ＳＲＣおよびＳＹＫキナーゼは、伝達シグナルを一般的な活性化経路と結び付け得る。
【０１３２】
いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインまたは領域が、１つまたは複数のＦｃ受容体に対する減少した結合親和性を示すことができる。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインまたは領域が、１つまたは複数のＦｃγ受容体に対する減少した結合親和性を示すことができる。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインまたは領域が、ＦｃＲｎ受容体に対する減少した結合親和性を示すことができる。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインまたは領域が、Ｆｃγ受容体およびＦｃＲｎ受容体に対する減少した結合親和性を示すことができる。いくつかの実施形態では、ＦｃドメインがＦｃヌルドメインまたは領域である。本明細書で使用される場合、「Ｆｃヌル」は、Ｆｃγ受容体のいずれかに対して弱い結合を示すまたは全く結合を示さないドメインを指す。いくつかの実施形態では、Ｆｃヌルドメインまたは領域が、１０００分の１への、Ｆｃγ受容体に対する結合親和性の減少（例えば、ｋｄの増加）を示す。
【０１３３】
Ｆｃドメインは、１つまたは複数、２つ以上、３つ以上、または４つ以上の、Ｆｃドメインとｆｃ受容体の結合を減少させるアミノ酸置換を有し得る。特定の実施形態では、Ｆｃドメインが、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）、ＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ）またはこれらのいずれかの組み合わせとの減少した結合を示す。Ｆｃ受容体に対するＦｃドメインまたは領域の結合親和性を減少させるために、Ｆｃドメインまたは領域は、Ｆｃ受容体に対するＦｃドメインまたは領域の親和性を減少させる効果を有する１つまたは複数の置換を含み得る。特定の実施形態では、１つまたは複数の置換が、カバット番号付けのＥＵインデックスによるＥ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、ΔＧ２３６、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ、Ｋ３２０Ａ、Ｋ３２２Ａ、Ａ３２７Ｇ、Ａ３３０ＳまたはＰ３３１Ｓに対応するＩｇＧ１重鎖突然変異のうちのいずれか１つまたは複数を含む。
【０１３４】
いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインまたは領域が、野生型ＩｇＧ１配列から修飾されたＩｇＧ１アイソフォームの配列を含むことができる。修飾は、カバット番号付けのＥＵインデックスによるＬ２３５Ｖ／Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｐ３９６Ｌ（ＩｇＧ１ＶＬＰＬＬ）を含む５つの異なるアミノ酸残基などの２つ以上のアミノ酸残基での置換を含むことができる。修飾は、カバット番号付けのＥＵインデックスによるＳ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ（ＩｇＧ１ＤＥ）を含む２つの異なるアミノ酸残基などの２つ以上のアミノ酸残基での置換を含むことができる。修飾は、カバット番号付けのＥＵインデックスによるＳ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ（ＩｇＧ１ＡＡＡ）を含む３つの異なるアミノ酸残基などの２つ以上のアミノ酸残基での置換を含むことができる。
【０１３５】
いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインまたは領域が、野生型ＩｇＧ配列から修飾されたＩｇＧアイソフォームの配列を含むことができる。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインまたは領域が、野生型ＩｇＧ１配列から修飾されたＩｇＧ１アイソフォームの配列を含むことができる。いくつかの実施形態では、修飾が、全てのＦｃγ受容体に対するＩｇＧ  Ｆｃドメインまたは領域の結合親和性を減少させる１つまたは複数のアミノ酸の置換を含む。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５ＡまたはＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／ΔＧ２３６などのＥ２３３、Ｌ２３４およびＬ２３５の置換であり得る。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＬ２３５Ｖ／Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｐ３９６Ｌ（ＩｇＧ１ＶＬＰＬＬ）などのＬ２３５、Ｆ２４３、Ｒ２９２、Ｙ３００およびＰ３９６の置換であり得る。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＰ２３８ＡなどのＰ２３８の置換であり得る。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＤ２６５ＡなどのＤ２６５の置換であり得る。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＮ２９７ＡなどのＮ２９７の置換であり得る。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＡ３２７ＱなどのＡ３２７の置換であり得る。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＰ２３９ＡなどのＰ３２９の置換であり得る。
【０１３６】
いくつかの実施形態では、ＩｇＧ  Ｆｃドメインまたは領域が、野生型または参照ＩｇＧ  Ｆｃドメインと比較して、ＦｃγＲ１に対する結合親和性を減少させる少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＦ２４１ＡなどのＦ２４１の置換を含むことができる。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＦ２４３ＡなどのＦ２４３の置換を含むことができる。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＶ２６４ＡなどのＶ２６４の置換を含むことができる。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＤ２６５ＡなどのＤ２６５の置換を含むことができる。
【０１３７】
いくつかの実施形態では、ＩｇＧ  Ｆｃドメインまたは領域が、野生型または参照ＩｇＧ  Ｆｃドメインと比較して、ＦｃγＲ１に対する結合親和性を増加させる少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＡ３２７Ｑ／Ｐ３２９ＡなどのＡ３２７およびＰ３２９の置換を含むことができる。
【０１３８】
いくつかの実施形態では、修飾が、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩＡ受容体に対するＩｇＧ  Ｆｃドメインまたは領域の結合親和性を減少させる１つまたは複数のアミノ酸の置換を含む。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＤ２７０ＡなどのＤ２７０の置換であり得る。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＱ２９５ＡなどのＱ２９５の置換であり得る。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＡ２３７ＳなどのＡ３２７の置換であり得る。
【０１３９】
いくつかの実施形態では、修飾が、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩＡ受容体に対するＩｇＧ  Ｆｃドメインまたは領域の結合親和性を増加させる１つまたは複数のアミノ酸の置換を含む。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＴ２５６ＡなどのＴ２５６の置換であり得る。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＫ２９０ＡなどのＫ２９０の置換であり得る。
【０１４０】
いくつかの実施形態では、修飾が、ＦｃγＲＩＩ受容体に対するＩｇＧ  Ｆｃドメインまたは領域の結合親和性を増加させる１つまたは複数のアミノ酸の置換を含む。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＲ２５５ＡなどのＲ２５５の置換であり得る。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＥ２５８ＡなどのＥ２５８の置換であり得る。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＳ２６７ＡなどのＳ２６７の置換であり得る。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＥ２７２ＡなどのＥ２７２の置換であり得る。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＮ２７６ＡなどのＮ２７６の置換であり得る。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＤ２８０ＡなどのＤ２８０の置換であり得る。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＨ２８５ＡなどのＨ２８５の置換であり得る。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＮ２８６ＡなどのＮ２８６の置換であり得る。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＴ３０７ＡなどのＴ３０７の置換であり得る。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＬ３０９ＡなどのＬ３０９の置換であり得る。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＮ３１５ＡなどのＮ３１５の置換であり得る。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＫ３２６ＡなどのＫ３２６の置換であり得る。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＰ３３１ＡなどのＰ３３１の置換であり得る。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＳ３３７ＡなどのＳ３３７の置換であり得る。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＡ３７８ＡなどのＡ３７８の置換であり得る。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＥ４３０などのＥ４３０の置換であり得る。
【０１４１】
いくつかの実施形態では、修飾が、ＦｃγＲＩＩ受容体に対するＩｇＧ  Ｆｃドメインまたは領域の結合親和性を増加させ、ＦｃγＲＩＩＩＡ受容体に対する結合親和性を減少させる１つまたは複数のアミノ酸の置換を含む。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＨ２６８ＡなどのＨ２６８の置換であり得る。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＲ３０１ＡなどのＲ３０１の置換であり得る。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＫ３２２ＡなどのＫ３２２の置換であり得る。
【０１４２】
いくつかの実施形態では、修飾が、ＦｃγＲＩＩ受容体に対するＩｇＧ  Ｆｃドメインまたは領域の結合親和性を減少させるが、ＦｃγＲＩＩＩＡ受容体に対する結合親和性に影響を及ぼさない１つまたは複数のアミノ酸の置換を含む。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＲ２９２ＡなどのＲ２９２の置換であり得る。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＫ４１４ＡなどのＫ４１４の置換であり得る。
【０１４３】
いくつかの実施形態では、修飾が、ＦｃγＲＩＩ受容体に対するＩｇＧ  Ｆｃドメインまたは領域の結合親和性を減少させ、ＦｃγＲＩＩＩＡ受容体に対する結合親和性を増加させる１つまたは複数のアミノ酸の置換を含む。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＳ２９８ＡなどのＳ２９８の置換であり得る。修飾は、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０ＬなどのＳ２３９、Ｉ３３２およびＡ３３０の置換であり得る。修飾は、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２ＥなどのＳ２３９およびＩ３３２の置換であり得る。
【０１４４】
いくつかの実施形態では、修飾が、ＦｃγＲＩＩＩＡ受容体に対するＩｇＧ  Ｆｃドメインまたは領域の結合親和性を減少させるが、ＦｃγＲＩＩ受容体に対する結合親和性に影響を及ぼさない１つまたは複数のアミノ酸の置換を含む。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＳ２３９ＡなどのＳ２３９の置換であり得る。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＥ２６９ＡなどのＥ２６９の置換であり得る。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＥ２９３ＡなどのＥ２９３の置換であり得る。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＹ２９６ＦなどのＹ２９６の置換であり得る。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＶ３０３ＡなどのＶ３０３の置換であり得る。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＡ３２７ＧなどのＡ３２７の置換であり得る。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＫ３３８ＡなどのＫ３３８の置換であり得る。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＤ３７６ＡなどのＤ３７６の置換であり得る。
【０１４５】
いくつかの実施形態では、修飾が、ＦｃγＲＩＩＩＡ受容体に対するＩｇＧ  Ｆｃドメインまたは領域の結合親和性を増加させるが、ＦｃγＲＩＩ受容体に対する結合親和性に影響を及ぼさない１つまたは複数のアミノ酸の置換を含む。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＥ３３３ＡなどのＥ３３３の置換であり得る。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＫ３３４ＡなどのＫ３３４の置換であり得る。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＡ３３９ＴなどのＡ３３９の置換であり得る。修飾は、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２ＥなどのＳ２３９およびＩ３３２の置換であり得る。
【０１４６】
いくつかの実施形態では、ＩｇＧ  Ｆｃドメインまたは領域が、野生型または参照ＩｇＧ  Ｆｃドメインと比較して、ＦｃＲｎに対する結合親和性を減少させる少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＨ４３５ＡなどのＨ４３５の置換を含むことができる。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＩ２５３ＡなどのＩ２５３の置換を含むことができる。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＨ３１０ＡなどのＨ３１０の置換を含むことができる。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＩ２５３Ａ／Ｈ３１０Ａ／Ｈ４３５ＡなどのＩ２５３、Ｈ３１０およびＨ４３５の置換を含むことができる。
【０１４７】
修飾は、野生型または参照ＩｇＧ  Ｆｃドメインに対して、ＦｃＲｎに対するＩｇＧ  Ｆｃドメインの結合親和性を増加させる１つのアミノ酸残基の置換を含むことができる。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＶ３０８ＰなどのＶ３０８の置換を含むことができる。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＭ４２８ＬなどのＭ４２８の置換を含むことができる。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＮ４３４ＡまたはカバットのＥＵインデックスによるＮ４３４ＨなどのＮ４３４の置換を含むことができる。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＴ２５０ＱおよびＭ４２８ＬなどのＴ２５０およびＭ４２８の置換を含むことができる。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＭ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ、Ｎ４３４ＡまたはＮ４３４ＨなどのＭ４２８およびＮ４３４の置換を含むことができる。修飾は、カバットのＥＵインデックスによるＭ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６ＥなどのＭ２５２、Ｓ２５４およびＴ２５６の置換を含むことができる。修飾は、Ｐ２５７Ｌ、Ｐ２５７Ｎ、Ｐ２５７Ｉ、Ｖ２７９Ｅ、Ｖ２７９Ｑ、Ｖ２７９Ｙ、Ａ２８１Ｓ、Ｅ２８３Ｆ、Ｖ２８４Ｅ、Ｌ３０６Ｙ、Ｔ３０７Ｖ、Ｖ３０８Ｆ、Ｑ３１１Ｖ、Ｄ３７６ＶおよびＮ４３４Ｈから選択される１つまたは複数のアミノ酸の置換であり得る。ＦｃＲｎとの相互作用に影響を及ぼすＩｇＧ  Ｆｃドメインの他の置換は、米国特許第９８０３０２３号（その開示が本明細書に参照により援用される）に開示されている。
【０１４８】
本開示の抗体は、全てジスルフィド結合によって共有結合的に結合された２つの同一の軽タンパク質鎖および２つの同一の重タンパク質鎖からなり得る。軽鎖および重鎖のＮ末端領域が一緒になって抗体の抗原認識部位を形成し得る。構造的には、抗体の種々の機能は、離散したタンパク質ドメイン（すなわち、領域）に限定され得る。抗原を認識し、これに結合することができる部位は、重鎖および軽鎖のＮ末端の可変重鎖領域および可変軽鎖領域内にあり得る３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）である。定常ドメインは、抗体の一般的なフレームワークを提供し、抗体と抗原の結合に直接的には関与しない可能性があるが、抗体依存性細胞傷害への抗体の参加などの種々のエフェクター機能に関与し、Ｆｃ受容体に結合し得る。定常ドメインはＦｃ領域を形成し得る。定常ドメインはＦｃドメインを含み得る。天然軽鎖可変領域および天然重鎖可変領域のドメインは同じ一般的な構造を有し得、各可変ドメインは、ＣＤＲによって接続された、その配列がいくぶん保存され得る４つのフレームワーク領域を含み得る。４つのフレームワーク領域は、βシートコンフォメーションを大いにとり、ＣＤＲは、βシート構造を接続し、いくつかの態様では、その一部を形成するループを形成することができる。各鎖のＣＤＲは、フレームワーク領域によって近位に保持され得、他の鎖のＣＤＲと共に、抗原結合部位の形成に寄与し得る。
【０１４９】
抗体コンストラクトは、天然または元のアミノ酸配列に対するアミノ酸配列の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の修飾、および特定の実施形態では、４０、３５、３０、２５、２０、１５または１０個以下の修飾を有するアミノ酸配列の軽鎖を含み得る。抗体コンストラクトは、天然または元のアミノ酸配列に対するアミノ酸配列の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の修飾、および特定の実施形態では、４０、３５、３０、２５、２０、１５または１０個以下の修飾を有するアミノ酸配列の重鎖を含み得る。抗体コンストラクトの抗体は、異なる免疫グロブリンのクラス、例えばＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭに割り当てられ得るいずれかの種類の抗体を含み得る。いくつかの異なるクラスは、アイソタイプ、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２にさらに分割され得る。抗体は、軽鎖および重鎖、通常２つ以上の鎖をさらに含み得る。野生型ＩｇＧ４−ヒンジ領域とペアリングしたＩｇＧ４  Ｆｃドメインを有する抗体は、鎖交換を受けることができ、二価抗体の一方のアームが解離し、異なる抗原特異性を有する別のＩｇＧ４抗体の鎖とペアリングする。鎖交換は、ＩｇＧ４  ＦｃドメインとＩｇＧ４ヒンジのＳ２２８Ｐ突然変異をペアリングすることによって防止され得る。
【０１５０】
参照抗体の例示的重鎖配列を使用して、残基変異体および突然変異体を特定することができる。ヒトＩｇＧ１重鎖の例示的重鎖配列は、ヒトＩｇＧ１抗体のものであり、以下を含むことができる：ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号４３７）。ヒトＩｇＧ２重鎖の例示的重鎖参照配列は、以下を含むことができる：ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号４３８）。ヒトＩｇＧ４重鎖の例示的重鎖参照配列は、以下を含むことができる：ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号４３９）。
【０１５１】
異なるクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖定常領域（Ｆｃ）は、それぞれα、δ、ε、γおよびμであり得る。軽鎖は、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいてカッパ（κ）またはラムダ（λ）のいずれかのうちの一方であり得る。Ｆｃ領域は、Ｆｃドメインを含み得る。Ｆｃ受容体は、Ｆｃドメインに結合し得る。Ｆｃドメインは、配列番号４３７に含まれる、ヒトＩｇＧ１のアミノ酸残基２１６〜４４７を含むことができる。Ｆｃドメインは、配列番号４３８に含まれる、ヒトＩｇＧ２のアミノ酸残基２１６〜４４２を含むことができる。Ｆｃドメインは、配列番号４３９に含まれる、ＩｇＧ４のアミノ酸残基２１６〜４４を含むことができる。
【０１５２】
抗体コンストラクトは、抗原結合抗体断片を含み得る。抗体断片は、（ｉ）Ｆａｂ断片、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片；および（ｉｉｉ）抗体の単一アームのＶＬドメインおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片を含み得る。Ｆｖ断片の２つのドメイン、ＶＬおよびＶＨは、別個の遺伝子によってコードされ得るが、合成リンカーによって連結されて、ＶＬ領域およびＶＨ領域がペアリングして一価抗体を形成する単一タンパク質鎖として作製され得る。
【０１５３】
Ｆ（ａｂ’）２およびＦａｂ’部分は、組換え的に、または免疫グロブリン（例えば、モノクローナル抗体）をペプシンおよびパパインなどのプロテアーゼで処理することによって産生され得、２つのＨ鎖の各々のヒンジ領域間に存在するジスルフィド結合の近くで免疫グロブリンを消化することによって産生される抗体断片を含み得る。Ｆａｂ断片はまた、軽鎖の定常ドメインおよび重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）を含み得る。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域の１つまたは複数のシステインを含む重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシル末端に数個の残基が付加されている点がＦａｂ断片とは異なり得る。
【０１５４】
Ｆｖは、完全な抗原認識および抗原結合部位を含む最小の抗体断片であり得る。この領域は、密な非共有結合会合の１つの重鎖可変ドメインおよび１つの軽鎖可変ドメインのダイマーからなり得る。この配置では、各可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用して、ＶＨ−ＶＬダイマーの表面上の抗原結合部位を規定し得る。結合は結合部位全体の親和性よりも低い親和性となり得るが、単一可変ドメイン（または抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）は抗原を認識し、これに結合し得る。
【０１５５】
抗体は、Ｆｃドメインを含むＦｃ領域を含み得る。抗体のＦｃドメインは、免疫細胞上に見られるＦｃＲと相互作用し得る。Ｆｃドメインはまた、エフェクター分子と細胞との間の相互作用を媒介し、免疫系の活性化をもたらし得る。ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＤ抗体アイソタイプでは、Ｆｃ領域が、抗体の重鎖の第２の定常ドメインおよび第３の定常ドメインに由来し得る２つの同一のタンパク質断片を含み得る。ＩｇＭおよびＩｇＥ抗体アイソタイプでは、Ｆｃ領域が、３つの重鎖定常ドメインを含み得る。ＩｇＧ抗体アイソタイプでは、Ｆｃ領域が、ＦｃＲ媒介下流効果に重要となり得る高度に保存されたＮ−グリコシル化部位を含み得る。
【０１５６】
本明細書で使用される抗体は、「キメラ」または「ヒト化」であり得る。キメラまたはヒト化形態の非ヒト（例えば、マウス）抗体は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小の配列を含み得るキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖またはその断片（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２または抗体の他の標的結合サブドメインなど）であり得る。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み得、ＣＤＲ領域の全てまたは実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのものに相当し、フレームワーク領域の全てまたは実質的に全てがヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものを含み得る。
【０１５７】
本明細書に記載される抗体はヒト抗体であり得る。本明細書で使用される場合、「ヒト抗体」は、例えばヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有する抗体を含むことができ、ヒト免疫グロブリンライブラリーからまたは内因性の免疫グロブリンを発現しない１つもしくは複数のヒト免疫グロブリンについてトランスジェニックな動物から単離された抗体を含み得る。ヒト抗体は、機能的内因性免疫グロブリンを発現することができないが、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現し得るトランスジェニックマウスを使用して産生され得る。選択されたエピトープを認識する完全ヒト抗体は、誘導選択を使用して産生され得る。この手法では、選択された非ヒトモノクローナル抗体、例えばマウス抗体を使用して、同じエピトープを認識する完全ヒト抗体の選択を誘導し得る。
【０１５８】
本明細書に記載される抗体は二重特異性抗体または二重可変ドメイン抗体（ＤＶＤ）であり得る。二重特異性抗体およびＤＶＤ抗体は、少なくとも２つの異なる抗原に対する結合特異性を有することができる、モノクローナルの、通常はヒトまたはヒト化、抗体であり得る。
【０１５９】
本明細書に記載される抗体は、誘導体化抗体であり得る。例えば、誘導体化抗体は、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、既知の保護／ブロッキング基による誘導体化、タンパク質切断、細胞リガンドまたは他のタンパク質との結合によって修飾され得る。
【０１６０】
本明細書に記載される抗体は、対応する野生型配列に対して、少なくとも１つの定常領域媒介生物学的エフェクター機能を変化させるよう修飾された配列を有し得る。例えば、いくつかの実施形態では、抗体を、非修飾抗体に対して、少なくとも１つの定常領域媒介生物学的エフェクター機能を減少させる、例えばＦｃ受容体（ＦｃＲ）との結合を減少させるよう修飾することができる。ＦｃＲ結合は、例えばＦｃＲ相互作用に必要な特定の領域で抗体の免疫グロブリン定常領域セグメントを突然変異させることによって減少させられ得る。
【０１６１】
本明細書に記載される抗体またはＦｃドメインは、非修飾抗体またはＦｃドメインに対して少なくとも１つの定常領域媒介生物学的エフェクター機能を獲得または改善する、例えばＦｃγＲ相互作用を増強するよう修飾され得る。例えば、対応する野生型定常領域よりも高い親和性でＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢおよび／またはＦｃγＲＩＩＩＡに結合する定常領域を有する抗体は、本明細書に記載される方法により産生され得る。対応する野生型Ｆｃドメインよりも高い親和性でＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢおよび／またはＦｃγＲＩＩＩＡに結合するＦｃドメインは、本明細書に記載される方法により産生され得る。
【０１６２】
抗体コンストラクトは、少なくとも１つのアミノ酸残基の修飾を有する抗体を含み得る。修飾は、置換、付加、突然変異、欠失などであり得る。抗体修飾は、非天然アミノ酸の挿入であり得る。
【０１６３】
抗体コンストラクトは、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞もしくはＡＰＣ）、星細胞、上皮細胞、線維芽細胞、線維細胞、筋線維芽細胞、滑膜線維芽細胞、有足細胞または線維症の発病に関連する他の細胞などの免疫細胞上の抗原に特異的に結合する抗原結合ドメインを含み得る。抗体コンストラクトは、抗原との特異的結合を促進する１つまたは複数のＣＤＲを含む抗原結合ドメインを含み得る。抗原結合ドメインは、それぞれ表１または表２に示されるＣＤＲのセットまたは可変領域のペアとの少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲのセットまたは可変領域のペアを含み得る。
【０１６４】
抗体コンストラクトは、抗原に結合する抗原結合ドメインであって、表１に示されるＣＤＲのセットとの少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＣＤＲのセットを含む抗原結合ドメインを含み得る。抗体コンストラクトは、抗原に結合する抗原結合ドメインであって、ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｃ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｄ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｅ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号３０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｆ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｇ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｈ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｉ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｊ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号５６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号５８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号５９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｋ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号６４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号６５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号６６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｌ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号７０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号７１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号７２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｍ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号７５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号７６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号７７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号７８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｎ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号８２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、
配列番号８３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号８４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｏ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号８８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号８９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号９０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｐ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号９４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号９５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号９６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｑ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１００のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｒ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｓ）配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｔ）配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｕ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｖ）配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｗ）配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｘ）配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｙ）配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｚ）配列番号１４８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１５０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１５１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１５２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１５３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ａａ）配列番号１５４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１５６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１５７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１５８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１５９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｂｂ）配列番号１６０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１６１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１６２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１６４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１６５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｃｃ）配列番号１６６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１６７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１６８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１６９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１７０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１７１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｄｄ）配列番号１７２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１７３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１７４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１７５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１７６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１７７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｅｅ）配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１８０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１８１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１８２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１８３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｆｆ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１８５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１８６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１８７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１８８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１８９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｇｇ）配列番号１９０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１９１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１９２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１９３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１９４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１９５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｈｈ）配列番号１９６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１９７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１９８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１９９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２００のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２０１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｉｉ）配列番号２０２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２０４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２０５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２０７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｊｊ）配列番号２０８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２０９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２１０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２１１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２１２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２１３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｋｋ）配列番号２１４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２１５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２１６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２１７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２１８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２１９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｌｌ）配列番号２２０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２２１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２２２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２２３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２２４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２２５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｍｍ）配列番号２２６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２２７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２２８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２２９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２３０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２３１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｎｎ）配列番号２３２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２３４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２３５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２３６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２３７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２３８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｏｏ）配列番号２３９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２４０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２４１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２４２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２４３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２４４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｐｐ）配列番号２４５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２４６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２４７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２４８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２４９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２５０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｑｑ）配列番号２５１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２５２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２５３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２５４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２５５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２５６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｒｒ）配列番号２５７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２５８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２５９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２６０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２６１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２６２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｓｓ）配列番号２６３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２６４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２６５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２６６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２６７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２６８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｔｔ）配列番号２６９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２７０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２７１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２７２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２７３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２７４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｕｕ）配列番号２７５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２７６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２７７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２７８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２７９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２８０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｖｖ）配列番号２８１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２８２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２８３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２８４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２８５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２８６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｗｗ）配列番号２８７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２８８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２８９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２９０のアミノ酸
配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２９１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２９２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｘｘ）配列番号２９３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２９４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２９５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２９６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２９７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２９８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｙｙ）配列番号４４０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４４１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号４４２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号４４３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４４４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４４５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｚｚ）配列番号４４６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４４７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号４４８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号４４９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４５０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４５１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ａａａ）配列番号４５２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４５３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号４５４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号４５５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４５６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４５７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｂｂｂ）配列番号４５８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４５９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号４６０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号４６１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４６２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４６３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｃｃｃ）配列番号４６４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４６５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号４６６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号４６７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４６８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４６９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｄｄｄ）配列番号４７０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４７１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号４７２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、
配列番号４７３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４７４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４７５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；またはｅｅｅ）配列番号４７６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４７７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号４７８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号４７９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４８０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４８１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を含む抗原結合ドメインを含み得る。
【０１６５】
抗体コンストラクトは、１つまたは複数の可変ドメインを含む抗原結合ドメインを含み得る。抗体コンストラクトは、軽鎖可変ドメイン（ＶＬドメイン）を含む抗原結合ドメインを含み得る。結合ドメインは、表２に示されるいずれかのＶＬ配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含み得る。抗体コンストラクトは、重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）を含む抗原結合ドメインを含み得る。抗原結合ドメインは、表２に示されるいずれかのＶＨ配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有する重鎖可変領域を含み得る。抗原結合ドメインは、表２に示される可変領域のペアとの少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域および軽鎖可変領域のペアを含むことができる。抗原結合ドメインは、表２に示される可変領域のペアの非ＣＤＲ領域との少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域および軽鎖可変領域のペアを含むことができる。
【０１６６】
抗体コンストラクトは、抗原に特異的に結合する抗原結合ドメインであって、ａ）配列番号３００のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号２９９のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｂ）配列番号３０１のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号２９９のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｃ）配列番号３０２のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３０３のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｄ）配列番号３０４のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３０５のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｅ）配列番号３０６のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３０７のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｆ）配列番号３０８のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３０９のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｇ）配列番号３１０のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３１１のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｈ）配列番号３１２のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３１３のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｉ）配列番号３１４のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３１５のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｊ）配列番号３１６のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３１７のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｋ）配列番号３１８のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３２０のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｌ）配列番号３１９のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３２０のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｍ）配列番号３２１のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３２２のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｎ）配列番号３２３のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３２４のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｏ）配列番号３２５のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３２６のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｐ）配列番号３２７のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３２８のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｑ）配列番号３２９のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３３０のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｒ）配列番号３３１のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３３４のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｓ）配列番号３３１のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３３５のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｔ）配列番号３３２のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３３４のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｕ）配列番号３３２のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３３５のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｖ）配列番号３３３のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３３４のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｗ）配列番号３３３のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３３５のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｘ）配列番号３３６のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３３７のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｙ）配列番号３３８のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、
少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３３９のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｚ）配列番号３４０のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３４１のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ａａ）配列番号３４２のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３４３のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｂｂ）配列番号３４４のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３４５のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｃｃ）配列番号３４６のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３４７のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｄｄ）配列番号３４８のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３４９のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｅｅ）配列番号３５０のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３５１のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｆｆ）配列番号３５２のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３５３のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｇｇ）配列番号３５４のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３５５のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｈｈ）配列番号３５６のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３５７のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｉｉ）配列番号３５８のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３５９のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｊｊ）配列番号３５８のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３６０のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｋｋ）配列番号３６１のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３６２のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｌｌ）配列番号３６３のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３６４のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｍｍ）配列番号３６５のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３６６のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｎｎ）配列番号３６７のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３６８のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｏｏ）配列番号３６７のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３６９のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｐｐ）配列番号３６７のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３７０のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｑｑ）配列番号３６７のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３７１のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｒｒ）配列番号３６７のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３７２のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｓｓ）配列番号３７４のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３７３のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｔｔ）配列番号３７５のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３７６のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｕｕ）配列番号３７７のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３７８のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｖｖ）配列番号３７９のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３８０のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｗｗ）配列番号３８１のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、
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０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｗｗｗ）配列番号４３１のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号４３２のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｘｘｘ）配列番号４３３のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号４３４のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｙｙｙ）配列番号４３５のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号４３６のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｚｚｚ）配列番号４８２のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号４８３のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ａａａａ）配列番号４８４のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号４８５のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｂｂｂｂ）配列番号４８６のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号４８７のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｃｃｃｃ）配列番号４８８のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号４８９のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；またはｄｄｄｄ）配列番号４９０のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号４９１のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列を含む抗原結合ドメインを含み得る。
【０１６７】
本明細書に記載される抗体コンストラクトは、表１および／または表２の配列を含み得る。抗体コンストラクトは、表１に示されるＣＤＲセットのセレット（ｓｅｌｅｔ）から選択される６つのＣＤＲのセットを含み得る。抗体コンストラクトは、表２に示される可変領域のペアから選択される可変領域のペアを含み得る。
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【０１６８】
いくつかの実施形態では、結合ドメインが、その抗原に結合することによって免疫応答を調節することができる。結合ドメインは、細胞型または組織の抗原に結合することによって、細胞型または組織の活性を調節することができる。その抗原に結合することによって免疫応答を調節することができる結合ドメインのいくつかの非限定的な例は、樹状細胞の免疫活性を調節することができるＤＥＣ−２０５結合ドメインもしくはＤＣＩＲ結合ドメイン、または線維化組織部位の筋線維芽細胞の免疫活性を調節することができるＦＡＰ結合ドメインである。結合ドメインの他の非限定的な例は、ＬＲＲＣ１５結合ドメイン、ＴＮＦＲ２結合ドメインまたはカドヘリン１１結合ドメインである。
【０１６９】
種々の実施形態では、結合ドメインが、本明細書に記載される抗体コンストラクトの第１の抗原結合ドメインであり得る。第１の抗原結合ドメインは、疾患組織上の抗原に結合することができ、それによって体内の疾患部位に結合または連結した免疫調節化合物を標的化することができる。いくつかの実施形態では、第１の抗原結合ドメインが、線維症の部位の星細胞または筋線維芽細胞上で発現される抗原を認識することができる。いくつかの実施形態では、第１の抗原結合ドメインが、滑膜線維芽細胞、腸上皮細胞および有足細胞などの、組織特異的炎症および自己免疫の部位の細胞上で発現される抗原を認識することができる。いくつかの実施形態では、第１の抗原結合ドメインが、移植された臓器の細胞上で発現される抗原を認識することができる。いくつかの実施形態では、第１の抗原結合ドメインの抗原、例えばカドヘリン１１、ＰＤＰＮ、インテグリンα４β７、インテグリンα２β、ネフリン、ポドシン、ＦＡＰ、ＣＤ７３、ＣＤ３８、ＰＤＧＦＲβ、インテグリンαｖβ１、インテグリンαｖβ３、ＧＡＲＰ、エンドシアリン、ＣＴＧＦ、ｃ−ＫＩＴまたはインテグリンαｖβ６が、星細胞、筋線維芽細胞、滑膜線維芽細胞、上皮細胞または有足細胞上に見られ得る。いくつかの実施形態では、第１の抗原結合ドメインの抗原、例えばカドヘリン１１、ＬＲＲＣ１５、ＰＤＰＮ、インテグリンα４β７、インテグリンα２β、ネフリン、ポドシン、ＦＡＰ、ＣＤ７３、ＣＤ３８、ＰＤＧＦＲβ、インテグリンαｖβ１、インテグリンαｖβ３、ＧＡＲＰ、エンドシアリン、ＣＴＧＦ、ｃ−ＫＩＴまたはインテグリンαｖβ６が、星細胞、筋線維芽細胞、滑膜線維芽細胞、上皮細胞または有足細胞上に見られ得る。いくつかの実施形態では、第１の抗原結合ドメインの抗原、例えばカドヘリン１１、ＬＲＲＣ１５、ＰＤＰＮ、インテグリンα４β７、インテグリンα２β、ネフリン、ポドシン、ＦＡＰ、ＣＤ７３、ＣＤ３８、ＰＤＧＦＲβ、インテグリンαｖβ１、インテグリンαｖβ３、ＧＡＲＰ、エンドシアリン、ＣＴＧＦ、ｃ−ＫＩＴ、インテグリンαｖβ６、ＭＭＰ１４、ＧＰＸ８またはＦ２ＲＬ２が、星細胞、筋線維芽細胞、滑膜線維芽細胞、上皮細胞または有足細胞上に見られ得る。いくつかの実施形態では、第１の抗原結合ドメインの抗原がカドヘリン１１、ＬＲＲＣ１５またはＦＡＰである。いくつかの実施形態では、第１の抗原結合ドメインの抗原がＴＮＦＲ２である。他の実施形態では、第１の抗原結合ドメインが、ＢＤＣＡ２、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＴＮＦＲ２、ＤＥＣ２０５、ＤＣＩＲ、ＣＤ８６、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ４５ＲＯ、ＭＨＣクラスＩＩまたはＣＤ２５などの免疫細胞上の抗原に結合することができる。
【０１７０】
第２の抗原結合ドメイン
本明細書に記載されるコンジュゲートは、第１の抗原結合ドメインと第２の抗原結合ドメインとを含む抗体コンストラクトを含むことができる。第２の抗原結合ドメインは、第１の抗原結合ドメインが結合した抗原と同じまたはこれとは異なる抗原に結合することができる。第２の抗原結合ドメインは、抗体または抗体断片の抗原結合部分であり得る。第２の抗原結合ドメインは、抗原に特異的に結合する能力を保持することができる抗体の１つまたは複数の断片であり得る。第２の抗原結合ドメインは、いずれかの抗原結合断片であり得る。第２の抗原結合ドメインは、第２の抗原結合ドメインのための支持フレームワークである足場中にあり得る。第２の抗原結合ドメインは、足場中の第２の抗原結合ドメインを含み得る。
【０１７１】
いくつかの実施形態では、第２の抗原が、ＴＮＦＲ２、ＣＤ４０、ＣＤ８６、ＰＤ−１、ＴＩＭ３、ＢＴＬＡ、ＤＥＣ２０５、ＤＣＩＲ、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ４５ＲＯ、ＨＬＡ  ＤＲ、ＣＤ３８、ＣＤ７３、ＧＡＲＰ、ＢＤＣＡ２またはＣＤ３０から選択される。いくつかの実施形態では、第２の抗原が、ＴＮＦＲ２、ＣＤ４０、ＣＤ８６、ＰＤ−１、ＴＩＭ３、ＢＴＬＡ、ＤＥＣ２０５、ＤＣＩＲ、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ４５ＲＯ、ＨＬＡ  ＤＲ、ＣＤ３８、ＣＤ７３、ＧＡＲＰ、ＢＤＣＡ２、ＰＤ−Ｌ１またはＣＤ３０から選択される。
【０１７２】
第２の抗原結合ドメインは、例えばＴＮＦＲ２との約５０％、約６０％、約７０％、約８０％または約９０％の配列同一性を有し得る。第２の抗原結合ドメインは、例えば免疫細胞免疫調節標的のアンタゴニスト、例えば免疫細胞上に見られ得る、または免疫細胞型、例えば抗原提示細胞および免疫組織上の細胞表面抗原の内部移行を媒介することができる免疫チェックポイント標的のアゴニストであり得る。第２の抗原結合ドメインは、例えばＣＤ４０、ＣＤ８６のアンタゴニスト、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３もしくはＢＴＬＡのアゴニスト、またはＤＥＣ−２０５との結合ドメインであり得る。第２の抗原結合ドメインは、例えばＣＤ４０、ＣＤ８６もしくはＰＤ−Ｌ１のアンタゴニスト、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３もしくはＢＴＬＡのアゴニスト、またはＤＥＣ−２０５との結合ドメインとの約５０％、約６０％、約７０％、約８０％または約９０％の配列同一性を有し得る。第２の抗原結合ドメインは、抗体コンストラクトおよび第１の抗原結合ドメインをコードする単一コンストラクトから発現され得る。
【０１７３】
第２の抗原結合ドメインは、抗原認識部分、すなわち、抗原、すなわち、エピトープなどの標的に抗原認識部分の認識および結合を付与するのに十分な抗体の抗原決定可変領域を含む抗体の部分を指し得る抗原結合ドメインを含み得る。第２の抗原結合ドメインは、抗体の抗原結合ドメインを含み得る。
【０１７４】
Ｆｖは、完全な抗原認識および抗原結合部位を含む最小の抗体断片であり得る。この領域は、密な非共有結合会合の１つの重鎖可変ドメインおよび１つの軽鎖可変ドメインのダイマーからなり得る。この配置では、各可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用して、ＶＨ−ＶＬダイマーの表面上の抗原結合部位を規定し得る。結合部位全体の親和性よりも低い親和性であるが、単一可変ドメイン（または抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）は抗原を認識し、これに結合し得る。
【０１７５】
第２の抗原結合ドメインは、それだけに限らないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体もしくはその機能的断片、例えば重鎖可変ドメイン（ＶＨ）および軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ＤＡＲＰｉｎ、アフィマー、アビマー、ノッチン、モノボディ、アフィニティークランプ、外部ドメイン、受容体外部ドメイン、受容体、サイトカイン、リガンド、免疫サイトカイン、Ｔ細胞受容体、アンチカリン、ＶＮＡＲ、二環式ペプチドまたは組換えＴ細胞受容体から選択される特異的抗原結合ドメインと少なくとも８０％同一であり得る。
【０１７６】
第２の抗原結合ドメインを抗体コンストラクトに結合することができる。例えば、抗体コンストラクトの一部を第２の抗原結合ドメインと融合して、融合タンパク質として第２の抗原結合ドメインを含む抗体コンストラクトを作製することができる。融合タンパク質は、抗体コンストラクトの残りをコードする核酸配列とインフレームで発現される第２の抗原結合ドメインをコードする核酸配列の結果であり得る。融合タンパク質は、抗原結合ドメインを含む抗体コンストラクトをコードするインフレーム遺伝子ヌクレオチド配列または抗原結合ドメインを含む抗体コンストラクトの近接するタンパク質配列の結果であり得る。別の例として、第２の抗原結合ドメインを抗体コンストラクトの一部に結合することができる。第２の抗原結合ドメインを、化学的コンジュゲーションによって抗体コンストラクトの一部に結合することができる。第２の抗原結合ドメインをＦｃ領域の末端に結合することができる。第２の抗原結合ドメインをＦｃドメインの末端に結合することができる。第２の抗原結合ドメインを抗体コンストラクトの一部の末端に結合することができる。第２の抗原結合ドメインを抗体の末端に結合することができる。第２の抗原結合ドメインを抗体の軽鎖に結合することができる。第２の抗原結合ドメインを抗体の軽鎖の末端に結合することができる。第２の抗原結合ドメインを抗体の重鎖に結合することができる。第２の抗原結合ドメインを抗体の重鎖の末端に結合することができる。末端はＣ末端であり得る。抗体コンストラクトを１、２、３および／または４つの第２の抗原結合ドメインに結合することができる。第２の抗原結合ドメインは、抗体コンストラクトを、例えば特定の細胞または細胞型に向け得る。抗原、例えば免疫細胞上で発現される抗原、または線維性疾患、自己免疫疾患もしくは自己炎症性疾患に関連する抗原を認識するために、抗体コンストラクトの第２の抗原結合ドメインを選択することができる。抗原はペプチドまたはその断片であり得る。抗原は、免疫細胞上で発現され得る。抗原は抗原提示細胞上で発現され得る。抗原は樹状細胞、マクロファージまたはＢ細胞上で発現され得る。複数の第２の抗原結合ドメインを抗体コンストラクトに結合する場合、第２の抗原結合ドメインは同じ抗原に結合し得る。複数の第２の抗原結合ドメインが抗体コンストラクトの一部である場合、第２の抗原結合ドメインは異なる抗原（複数可）に結合し得る。
【０１７７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体コンストラクトが、免疫細胞に特異的な第２の抗原に対する第２の結合ドメインを含むことができる。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインが、第２の結合ドメインを有さない本明細書に記載されるコンジュゲートと比較して、コンジュゲートの免疫調節活性をさらに増加させることができる。第２の結合ドメインのいくつかの非限定的な例は、ＣＤ４０とのＣＤ４０Ｌの結合をブロックすることができる非活性化ＣＤ４０結合ドメイン、またはＰＤ−１とのＰＤ−Ｌ１もしくはＰＤ−Ｌ２の結合をブロックすることなくＰＤ−１シグナルを増加させることができるＰＤ−１結合ドメインであり得る。
【０１７８】
いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインが、ＴＮＦＲＳＦ結合ドメイン上の結合を保持して、適切な免疫調節で標的化を可能にしながら、抗体コンストラクトのＦｃドメインのＣ末端または第１の抗原結合ドメインの軽鎖のＣ末端でｓｃＦｖとしてＴＮＦＲＳＦメンバーに結合して、アゴニズムの欠如を付与することができる。
【０１７９】
第２の結合ドメインは、配列番号８５〜配列番号２９８として表１に示されるＣＤＲのセットとの少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有する６つのＣＤＲのセットを含むことができる。第２の結合ドメインは、ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号８８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号８９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号９０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｂ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号９４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号９５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号９６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｃ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１００のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｄ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｅ）配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｆ）配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｇ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｈ）配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｉ）配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｊ）配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｋ）配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｌ）配列番号１４８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１５０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１５１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１５２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１５３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｍ）配列番号１５４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１５６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１５７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１５８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１５９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｎ）配列番号１６０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１６１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１６２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１６４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１６５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｏ）配列番号１６６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１６７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１６８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１６９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１７０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１７１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｐ）配列番号１７２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１７３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１７４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１７５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１７６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１７７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｑ）配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１８０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１８１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１８２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１８３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｒ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１８５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１８６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１８７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１８８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１８９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｓ）配列番号１９０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１９１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１９２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１９３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１９４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１９５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｔ）配列番号１９６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１９７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１９８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１９９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２００のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２０１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｕ）配列番号２０２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２０４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２０５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２０７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｖ）配列番号２０８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２０９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２１０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２１１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２１２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２１３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｗ）配列番号２１４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２１５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２１６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２１７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２１８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２１９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｘ）配列番号２２０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２２１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２２２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２２３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２２４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２２５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｙ）配列番号２２６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２２７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２２８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２２９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２３０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２３１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｚ）配列番号２３２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２３４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２３５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２３６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２３７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２３８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ａａ）配列番号２３９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２４０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２４１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２４２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２４３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２４４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｂｂ）配列番号２４５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２４６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２４７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２４８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２４９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２５０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｃｃ）配列番号２５１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２５２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２５３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２５４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２５５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２５６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｄｄ）配列番号２５７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２５８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２５９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２６０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２６１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２６２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｅｅ）配列番号２６３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２６４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２６５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２６６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２６７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２６８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｆｆ）配列番号２６９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、
配列番号２７０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２７１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２７２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２７３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２７４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｇｇ）配列番号２７５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２７６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２７７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２７８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２７９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２８０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｈｈ）配列番号２８１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２８２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２８３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２８４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２８５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２８６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；ｉｉ）配列番号２８７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２８８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２８９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２９０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２９１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２９２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；またはｊｊ）配列番号２９３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２９４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２９５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２９６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２９７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２９８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＣＤＲのセットを含むことができる。
【０１８０】
抗体コンストラクトは、抗原に特異的に結合する第２の結合ドメインであって、配列番号３５２〜配列番号４３６として表２に示される可変領域のペアとの少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有する可変領域のペアを含む第２の結合ドメインを含み得る。抗体コンストラクトは、抗原に特異的に結合する第２の結合ドメインであって、ａ）配列番号３５２のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３５３のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｂ）配列番号３５４のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３５５のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｃ）配列番号３５６のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３５７のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｄ）配列番号３５８のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３５９のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｅ）配列番号３５８のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３６０のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｆ）配列番号３６１のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３６２のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｇ）配列番号３６３のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３６４のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｈ）配列番号３６５のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３６６のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｉ）配列番号３６７のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３６８のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｊ）配列番号３６７のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３６９のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｋ）配列番号３６７のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、
少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３７０のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｌ）配列番号３６７のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３７１のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｍ）配列番号３６７のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３７２のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｎ）配列番号３７４のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３７３のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｏ）配列番号３７５のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３７６のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｐ）配列番号３７７のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３７８のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｑ）配列番号３７９のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３８０のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｒ）配列番号３８１のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３８２のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｓ）配列番号３８４のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３８３のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｔ）配列番号３８５のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３８６のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｕ）配列番号３８７のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３８８のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｖ）配列番号３８９のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３９０のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｗ）配列番号３９１のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３９２のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｘ）配列番号３９３のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３９４のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｙ）配列番号３９５のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３９６のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｚ）配列番号３９７のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号３９８のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ａａ）配列番号３９９のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号４００のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｂｂ）配列番号４０１のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号４０２のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｃｃ）配列番号４０３のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号４０４のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｄｄ）配列番号４０５のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号４０６のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｅｅ）配列番号４０７のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号４０８のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｆｆ）配列番号４０９のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号４１０のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｇｇ）配列番号４１１のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号４１２のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｈｈ）配列番号４１３のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号４１４のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｉｉ）配列番号４１５のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号４１６のアミノ酸配列との少なくとも８０％、
少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｊｊ）配列番号４１７のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号４１８のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｋｋ）配列番号４１９のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号４２０のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｌｌ）配列番号４２１のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号４２２のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｍｍ）配列番号４２３のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号４２４のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｎｎ）配列番号４２５のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号４２６のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｏｏ）配列番号４２７のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号４２８のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｐｐ）配列番号４２９のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号４３０のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｑｑ）配列番号４３１のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号４３２のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｒｒ）配列番号４３３のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号４３４のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列；またはｓｓ）配列番号４３５のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＨ配列、および配列番号４３６のアミノ酸配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を有するＶＬ配列を含む第２の結合ドメインを含み得る。
【０１８１】
抗体コンストラクトへのリンカーの結合
抗体コンストラクト免疫調節化合物コンジュゲートはまた、抗体コンジュゲートとも呼ばれ得る。本明細書に記載される抗体コンジュゲートは、リンカー、例えばペプチドリンカーを含み得る。本明細書に記載されるコンジュゲートおよび方法のリンカーは、コンジュゲートの活性部分（例えば、活性部分には、抗原結合ドメイン、Ｆｃドメイン、標的化結合ドメイン、抗体、免疫モジュレーター、阻害剤などが含まれる）と、抗原などの同族結合パートナーであり得る標的の結合に影響を及ぼさない可能性がある。リンカーは、コンジュゲートの異なる部分間、例えば抗体コンストラクトと本開示の化合物（免疫調節化合物）との間の結合を形成することができる。特定の実施形態では、抗体コンジュゲートが複数のリンカーを含む。抗体コンジュゲートが複数のリンカーを含む特定の実施形態では、リンカーが同じリンカーであっても異なるリンカーであってもよい。
【０１８２】
リンカーは、抗体コンストラクトとリンカーとの間の結合によって、抗体コンストラクトと結合、すなわち共有結合的に結合され得る。リンカーは、抗線維症関連抗原抗体コンストラクトとリンカーとの間の結合によって抗線維症関連抗原抗体コンストラクトと共有結合的に結合され得る。リンカーは、抗自己免疫関連抗原抗体コンストラクトとリンカーとの間の結合によって抗自己免疫関連抗原抗体コンストラクトと共有結合的に結合され得る。リンカーは、抗自己炎症性関連抗原抗体コンストラクトとリンカーとの間の結合によって抗自己炎症性関連抗原抗体コンストラクトと共有結合的に結合され得る。リンカーは、抗ＡＰＣ（抗原提示細胞）分子抗体とリンカーとの間の結合によって抗ＡＰＣ分子抗体と共有結合的に結合され得る。例えば、リンカーは、抗体コンストラクトのアミノ酸配列の末端と共有結合的に結合され得る、または抗体コンストラクトの側鎖修飾、例えばリジン、セリン、スレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン酸、非天然アミノ酸残基、グルタミンもしくはグルタミン酸残基の側鎖と共有結合的に結合され得るだろう。リンカーは、抗体コンストラクトのＦｃ領域のアミノ酸配列の末端と共有結合的に結合され得る、または抗体コンストラクトのＦｃ領域の側鎖修飾、例えばリジン、セリン、スレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン酸、非天然アミノ酸残基、グルタミンもしくはグルタミン酸残基の側鎖と共有結合的に結合され得る。リンカーは、抗体コンストラクトのＦｃドメインのアミノ酸配列の末端と共有結合的に結合され得る、または抗体コンストラクトのＦｃドメインの側鎖修飾、例えばリジン、セリン、スレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン酸、非天然アミノ酸残基、グルタミンもしくはグルタミン酸残基の側鎖と共有結合的に結合され得る。
【０１８３】
リンカーは、ヒンジシステインで抗体コンストラクトと共有結合的に結合され得る。リンカーは、軽鎖定常ドメインリジンで抗体コンストラクトと共有結合的に結合され得る。リンカーは、軽鎖の操作されたシステインで抗体コンストラクトと共有結合的に結合され得る。リンカーは、Ｆｃ領域リジンで抗体コンストラクトと共有結合的に結合され得る。リンカーは、Ｆｃドメインリジンで抗体コンストラクトと共有結合的に結合され得る。リンカーは、Ｆｃ領域システインで抗体コンストラクトと共有結合的に結合され得る。リンカーは、Ｆｃドメインシステインで抗体コンストラクトと共有結合的に結合され得る。リンカーは、操作された軽鎖グルタミンで抗体コンストラクトと共有結合的に結合され得る。リンカーは、軽鎖内で操作された非天然アミノ酸で抗体コンストラクトと共有結合的に結合され得る。リンカーは、重鎖内で操作された非天然アミノ酸で抗体コンストラクトと共有結合的に結合され得る。リンカーは、重鎖のリジンで抗体コンストラクトと共有結合的に結合され得る。リンカーは、重鎖の操作されたシステインで抗体コンストラクトと共有結合的に結合され得る。アミノ酸は、例えばコンジュゲートのリンカーの結合で、本明細書に記載される抗体コンストラクトのアミノ酸配列中で操作され得る。操作されたアミノ酸を既存のアミノ酸の配列に付加してもよい。操作されたアミノ酸を、アミノ酸の配列の１つまたは複数の既存のアミノ酸と置換してもよい。
【０１８４】
リンカーは、スルフヒドリル基を介して抗体コンストラクトにコンジュゲートされ得る。リンカーは、一級アミンを介して抗体コンストラクトにコンジュゲートされ得る。リンカーは、ケトン基を免疫調節化合物上のアルコキシアミンで修飾することによって形成されたオキシム基と反応する抗体コンストラクト上の非天然アミノ酸との間に作り出される結合であり得る。
【０１８５】
いくつかの実施形態では、操作されたシステインが、リンカーをこのような操作されたシステインに結合することができるように、抗体コンストラクトに導入される。例えば、操作されたシステインを、カバットのＥＵ番号付けによるＴ１１４（重鎖）、Ａ１４０（重鎖）、Ｌ１７４（重鎖）、Ｌ１７９（重鎖）、Ｔ１８７（重鎖）、Ｔ２０９（重鎖）、Ｓ２３９（重鎖）、Ｖ２６２（重鎖）、Ｇ３７１（重鎖）、Ｙ３７３（重鎖）、Ｅ３８２（重鎖）、Ｓ４００（重鎖）、Ｓ４２４（重鎖）、Ｎ４３４（重鎖）、Ｑ４３８（重鎖）、Ｉ１０６（軽鎖）、Ｒ１０８（軽鎖）、Ａ１１８（重鎖）、Ｒ１４２（軽鎖）、Ｋ１４９（軽鎖）および／またはＶ２０５（軽鎖）でＩｇＧ（典型的にはＩｇＧ１）に導入することができる。
【０１８６】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数のリンカーが本明細書に記載される部位で抗体コンストラクトと共有結合的に結合している場合、抗体コンストラクトのＦｃドメインがＦｃ受容体に結合することができる。特定の実施形態では、リンカーと結合した抗体コンストラクトまたはＴＧＦβＲ１阻害剤と結合したリンカーと結合した抗体コンストラクトが、抗体のＦｃドメインがＦｃ受容体と結合する能力を保持する。特定の実施形態では、リンカーと結合した抗体コンストラクトまたはＴＧＦβＲ２阻害剤と結合したリンカーと結合した抗体コンストラクトが、抗体のＦｃドメインがＦｃ受容体と結合する能力を保持する。特定の実施形態では、リンカーと結合した抗体コンストラクトまたはＴＮＫＳ阻害剤と結合したリンカーと結合した抗体コンストラクトが、抗体のＦｃドメインがＦｃ受容体と結合する能力を保持する。特定の実施形態では、リンカーと結合した抗体コンストラクトまたはＴＮＩＫと結合したリンカーと結合した抗体コンストラクトが、抗体のＦｃドメインがＦｃ受容体と結合する能力を保持する。特定の実施形態では、リンカーが本明細書に記載される部位で抗体コンストラクトと結合している場合、リンカーと結合した抗体コンストラクトまたは免疫調節化合物と結合したリンカーと結合した抗体コンストラクトの抗原結合ドメインが、その抗原に結合することができる。特定の実施形態では、リンカーが本明細書に記載される部位で抗体コンストラクトと結合している場合、リンカーと結合した抗体コンストラクトまたは免疫調節化合物と結合したリンカーと結合した抗体コンストラクトの第２の抗原結合ドメインが、その抗原に結合することができる。
【０１８７】
特定の実施形態では、リンカーまたは本明細書に開示される免疫調節化合物と結合したリンカーが、２２１、２２４、２２７、２２８、２３０、２３１、２２３、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４３、２４４、２４５、２４７、２４９、２５０、２５８、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、２６７、２６８、２６９、２７０、２７１、２７２、２７３、２７５、２７６、２７８、２８０、２８１、２８３、２８５、２８６、２９１、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３０２、３０５、３１３、３１８、３２３、３２４、３２５、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１、３３２、３３３、３３５、３３６、３９６、または４２８（Ｆｃドメインのアミノ酸残基の番号付けは、カバットのＥＵインデックスに従う）から選択されるＩｇＧ１  Ｆｃドメインのアミノ酸残基に結合していなくてもよい。
【０１８８】
特定の実施形態では、リンカーまたは本明細書に開示される免疫調節化合物と結合したリンカーが、２２１、２２４、２２７、２２８、２３０、２３１、２２３、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４３、２４４、２４５、２４７、２４９、２５０、２５８、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、２６７、２６８、２６９、２７０、２７１、２７２、２７３、２７５、２７６、２７８、２８０、２８１、２８３、２８５、２８６、２９１、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３０２、３０５、３１３、３１８、３２３、３２４、３２５、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１、３３２、３３３、３３５、３３６、３９６、または４２８（Ｆｃドメインのアミノ酸残基の番号付けは、カバットのＥＵインデックスに従う）から選択されるＩｇＧ１  Ｆｃドメインのアミノ酸残基に結合していてもよい。
【０１８９】
いくつかの実施形態では、免疫調節化合物と結合したリンカーが抗体コンストラクトと結合している場合、第１の抗原に対する第１の抗原結合ドメインのＫｄが保持され得る。免疫調節化合物の存在下での抗体コンストラクト免疫調節化合物コンジュゲートの第１の抗原結合ドメインと第１の抗原の結合についてのＫｄは、免疫調節化合物の非存在下での抗体コンストラクトの第１の抗原結合ドメインと第１の抗原の結合についてのＫｄより約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍、約１０倍、約１５倍、約２０倍、約２５倍、約３０倍、約３５倍、約４０倍、約４５倍、約５０倍、約６０倍、約７０倍、約８０倍、約９０倍、約１００倍、約１１０倍または約１２０倍大きくなり得る。免疫調節化合物の存在下での抗体コンストラクト免疫調節化合物コンジュゲートの第１の抗原結合ドメインと第１の抗原の結合についてのＫｄは、１０ｎＭ未満であり得る。免疫調節化合物の存在下での抗体コンストラクト免疫調節化合物コンジュゲートの第１の抗原結合ドメインと第１の抗原の結合についてのＫｄは、１００ｎＭ未満、５０ｎＭ未満、２０ｎＭ未満、５ｎＭ未満、１ｎＭ未満または０．１ｎＭ未満であり得る。
【０１９０】
免疫調節化合物と結合したリンカーが抗体コンストラクトと結合している場合、第２の抗原に対する第２の抗原結合ドメインのＫｄが保持され得る。免疫調節化合物の存在下での抗体コンストラクト免疫調節化合物コンジュゲートの第２の抗原結合ドメインと第２の抗原の結合についてのＫｄは、免疫調節化合物の非存在下での抗体コンストラクトの第２の抗原結合ドメインと第２の抗原の結合についてのＫｄより約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍、約１０倍、約１５倍、約２０倍、約２５倍、約３０倍、約３５倍、約４０倍、約４５倍、約５０倍、約６０倍、約７０倍、約８０倍、約９０倍、約１００倍、約１１０倍または約１２０倍大きくなり得る。免疫調節化合物の存在下での抗体コンストラクト免疫調節化合物コンジュゲートの第２の抗原結合ドメインと第２の抗原の結合についてのＫｄは、１０ｎＭ未満であり得る。免疫調節化合物の存在下での抗体コンストラクト免疫調節化合物コンジュゲートの第２の抗原結合ドメインと第２の抗原の結合についてのＫｄは、１００ｎＭ未満、５０ｎＭ未満、２０ｎＭ未満、５ｎＭ未満、１ｎＭ未満または０．１ｎＭ未満であり得る。
【０１９１】
免疫調節化合物と結合したリンカーが抗体コンストラクトと結合している場合、第１の抗原についての第１の抗原結合ドメインのＫｄは保持され得、第２の抗原についての第２の抗原結合ドメインのＫｄは保持され得る。免疫調節化合物の存在下での抗体コンストラクト免疫調節化合物コンジュゲートの第１の抗原結合ドメインと第１の抗原の結合についてのＫｄは、免疫調節化合物の非存在下での抗体コンストラクトの第１の抗原結合ドメインと第１の抗原の結合についてのＫｄより約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍、約１０倍、約１５倍、約２０倍、約２５倍、約３０倍、約３５倍、約４０倍、約４５倍、約５０倍、約６０倍、約７０倍、約８０倍、約９０倍、約１００倍、約１１０倍または約１２０倍大きくなり得、免疫調節化合物の存在下での抗体コンストラクト免疫調節化合物コンジュゲートの第２の抗原結合ドメインと第２の抗原の結合についてのＫｄは、免疫調節化合物の非存在下での抗体コンストラクトの第２の抗原結合ドメインと第２の抗原の結合についてのＫｄより約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍、約１０倍、約１５倍、約２０倍、約２５倍、約３０倍、約３５倍、約４０倍、約４５倍、約５０倍、約６０倍、約７０倍、約８０倍、約９０倍、約１００倍、約１１０倍または約１２０倍大きくなり得る。免疫調節化合物の存在下での抗体コンストラクト免疫調節化合物コンジュゲートの第１の抗原結合ドメインと第１の抗原の結合についてのＫｄは１０ｎＭ未満であり得、免疫調節化合物の存在下での抗体コンストラクト免疫調節化合物コンジュゲートの第２の抗原結合ドメインと第２の抗原の結合についてのＫｄは１０ｎＭ未満であり得る。免疫調節化合物の存在下での抗体コンストラクト免疫調節化合物コンジュゲートの第１の抗原結合ドメインと第１の抗原の結合についてのＫｄは、１００ｎＭ未満、５０ｎＭ未満、２０ｎＭ未満、５ｎＭ未満、１ｎＭ未満または０．１ｎＭ未満であり得、免疫調節化合物の存在下での抗体コンストラクト免疫調節化合物コンジュゲートの第２の抗原結合ドメインと第２の抗原の結合についてのＫｄは、１００ｎＭ未満、５０ｎＭ未満、２０ｎＭ未満、５ｎＭ未満、１ｎＭ未満または０．１ｎＭ未満であり得る。
【０１９２】
免疫調節化合物の存在下での抗体コンストラクト免疫調節化合物コンジュゲートのＦｃドメインとＦｃ受容体の結合についてのＫｄは、免疫調節化合物の非存在下でのＦｃドメインとＦｃ受容体の結合についてのＫｄより約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍、約１０倍、約１５倍、約２０倍、約２５倍、約３０倍、約３５倍、約４０倍、約４５倍、約５０倍、約６０倍、約７０倍、約８０倍、約９０倍、約１００倍、約１１０倍または約１２０倍大きくなり得る。免疫調節化合物の存在下での抗体コンストラクト免疫調節化合物コンジュゲートのＦｃドメインとＦｃ受容体の結合についてのＫｄは、１０ｎＭ未満であり得る。免疫調節化合物の存在下での抗体コンストラクト免疫調節化合物コンジュゲートのＦｃドメインとＦｃ受容体の結合についてのＫｄは、１０μＭ未満、１μＭ未満、１００ｎＭ未満、５０ｎＭ未満、２０ｎＭ未満、５ｎＭ未満、１ｎＭ未満または０．１ｎＭ未満であり得る。
【０１９３】
免疫調節化合物の存在下での抗体コンストラクト免疫調節化合物コンジュゲートのＦｃドメインとＦｃγ受容体の結合についてのＫｄは、免疫調節化合物の非存在下でのＦｃドメインとＦｃγ受容体の結合についてのＫｄと等しいまたはその２倍、５倍もしくは１０倍以上となり得る。免疫調節化合物の存在下での抗体コンストラクト免疫調節化合物コンジュゲートのＦｃドメインとＦｃγ受容体の結合についてのＫｄは、免疫調節化合物の非存在下でのＦｃドメインとＦｃγ受容体の結合についてのＫｄの約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍、約１０倍、約１５倍、約２０倍、約２５倍、約３０倍、約３５倍、約４０倍、約４５倍、約５０倍、約６０倍、約７０倍、約８０倍、約９０倍、約１００倍、約１１０倍または約１２０倍以上となり得る。免疫調節化合物の存在下での抗体コンストラクト免疫調節化合物コンジュゲートのＦｃドメインとＦｃγ受容体の結合についてのＫｄは、１０ｎＭ未満であり得る。免疫調節化合物の存在下での抗体コンストラクト免疫調節化合物コンジュゲートのＦｃドメインとＦｃγ受容体の結合についてのＫｄは、１０μＭ未満、１μＭ未満、１００ｎＭ未満、５０ｎＭ未満、２０ｎＭ未満、５ｎＭ未満、１ｎＭ未満または０．１ｎＭ未満であり得る。
【０１９４】
免疫調節化合物の存在下での抗体コンストラクト免疫調節化合物コンジュゲートのＦｃドメインとＦｃＲｎ受容体の結合についてのＫｄは、免疫調節化合物の非存在下でのＦｃドメインとＦｃＲｎ受容体の結合についてのＫｄと少なくとも等しいまたは少なくともその約２倍、５倍もしくは１０倍以下となり得る。免疫調節化合物の存在下での抗体コンストラクト免疫調節化合物コンジュゲートのＦｃドメインとＦｃＲｎ受容体の結合についてのＫｄは、免疫調節化合物の非存在下でのＦｃドメインとＦｃＲｎ受容体の結合についてのＫｄと少なくとも等しいまたは少なくともその約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍、約１０倍、約１５倍、約２０倍、約２５倍、約３０倍、約３５倍、約４０倍、約４５倍、約５０倍、約６０倍、約７０倍、約８０倍、約９０倍、約１００倍、約１１０倍もしくは約１２０倍以下となり得る。免疫調節化合物の存在下での抗体コンストラクト免疫調節化合物コンジュゲートのＦｃドメインとＦｃＲｎ受容体の結合についてのＫｄは、１０ｎＭ未満であり得る。免疫調節化合物の存在下での抗体コンストラクト免疫調節化合物コンジュゲートのＦｃドメインとＦｃＲｎ受容体の結合についてのＫｄは、１０μＭ未満、１μＭ未満、１００ｎＭ未満、５０ｎＭ未満、２０ｎＭ未満、５ｎＭ未満、１ｎＭ未満または０．１ｎＭ未満であり得る。
【０１９５】
いくつかの実施形態では、免疫調節化合物と抗体コンストラクトの共有結合的結合後、Ｆｃドメイン活性（例えば、Ｆｃ受容体の特異的プロファイルとの結合）が保持され得る。種々の実施形態では、Ｆｃドメインが、ＦｃＲｎについての保持されたＫｄ、または動物におけるコンジュゲートによる半減期の保持によって決定して、ＦｃＲｎとの結合を保持することができる。いくつかの実施形態では、抗体コンストラクトのＦｃドメインが、Ｆｃγ受容体についての保持されたＫｄ、またはＦｃγ受容体の特異的セットを発現している細胞でＦｃγ受容体媒介活性をもたらす保持された能力によって決定して、Ｆｃγ受容体との結合を保持することができるが、コンジュゲートの結合ドメインの抗原はそうではない。
【０１９６】
いくつかの実施形態では、コンジュゲートの抗体コンストラクトのＦｃドメインを、Ｆｃγ受容体との結合を欠くよう選択することができ、これは結合アッセイ、細胞ベースのアッセイまたはこれらの組み合わせによってこの結合の欠如を保持することが示され得る。
【０１９７】
リジンベースのバイオコンジュゲーション
抗体コンストラクトを、リジンベースのバイオコンジュゲーション（ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ）を介してリンカーにコンジュゲートすることができる。抗体コンストラクトを、適切なバッファー、例えば約２ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬの濃度のリン酸塩、ホウ酸塩、ＰＢＳ、ヒスチジン、トリス−酢酸塩中で交換することができる。本明細書に記載される、適切な当量数のアミノ−ピラジンカルボキサミド化合物およびリンカー、リンカーペイロードのコンストラクトを、攪拌しながら溶液として添加することができる。リンカーペイロードの物理特性に応じて、リンカーペイロードの添加前に、共溶媒を導入して、溶解度を促進することができる。観察される反応性に応じて、反応物を室温で２時間〜約１２時間攪拌することができる。反応の進行をＬＣ−ＭＳによって監視することができる。いったん反応が完了していると思われたら、残っているリンカーペイロードを適用可能な方法によって除去し、抗体コンジュゲートを所望の製剤バッファー中で交換することができる。以下のスキームＡ（コンジュゲート＝抗体コンジュゲート）に従って、ａｂ抗体（ｍＡｂ）およびリンカーペイロード、例えば１０当量で始めて、リジン結合コンジュゲートを合成することができる。モノマー含有量および薬物−抗体コンストラクト比（モル比）は、本明細書に記載される方法によって決定することができる。
スキームA.
2020523319.tif 000031
【０１９８】
システインベースのバイオコンジュゲーション
抗体コンストラクトを、システインベースのバイオコンジュゲーションを介してリンカーにコンジュゲートすることができる。抗体コンストラクトを、適切な当量数の還元剤、例えばジチオトレイトールまたはトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィンを用いて、適切なバッファー、例えば約２ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬの濃度のリン酸塩、ホウ酸塩、ＰＢＳ、ヒスチジン、トリス−酢酸塩中で交換することができる。結果として生じた溶液を、所望の還元をもたらすのに適した量の時間および温度で攪拌することができる。アミノ−ピラジンカルボキサミド化合物およびリンカーのコンストラクトを、攪拌しながら溶液として添加することができる。リンカーペイロードの物理特性に応じて、リンカーペイロードの添加前に、共溶媒を導入して、溶解度を促進することができる。観察される反応性に応じて、反応物を室温で約１時間〜約１２時間攪拌することができる。反応の進行を液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ−ＭＳ）によって監視することができる。いったん反応が完了していると思われたら、残っている遊離リンカーペイロードを適用可能な方法によって除去し、抗体コンジュゲートを所望の製剤バッファー中で交換することができる。以下のスキームＢ（コンジュゲート＝抗体コンジュゲート）に記載される条件を使用して、抗体（ｍＡｂ）およびリンカーペイロード、例えば７当量で始めて、このようなシステインベースのコンジュゲートを合成することができる。モノマー含有量および薬物−抗体比は、本明細書に記載される方法によって決定することができる。
スキームB.
2020523319.tif 000032
【０１９９】
免疫調節化合物
免疫調節化合物は、タンパク質標的に結合し、タンパク質標的の機能を活性化することができる小分子、大分子もしくは他の分子、またはタンパク質標的に結合し、タンパク質標的の機能を阻害することができる実体などの化合物であり得る。いくつかの実施形態では、免疫調節化合物が核酸ではない。いくつかの実施形態では、免疫調節化合物が、細胞内タンパク質標的に結合する。
【０２００】
いくつかの実施形態では、免疫調節化合物を、ユビキチン媒介タンパク質標的破壊を増加させるように設計することができる。増加したユビキチン媒介タンパク質標的破壊は、Ｅ３ユビキチンリガーゼのタンパク質サブユニットに結合する小分子（複数可）を使用することができる。細胞のユビキチンプロテアソーム媒介タンパク質分解系は、複数のユビキチン分子と標的タンパク質上のリジン残基の共有結合を含み、それによって細胞プロテアソームによる分解のために標的タンパク質を標識する。ユビキチン分子をタンパク質標的に結合する方法は、典型的には、１）ユビキチンを活性化するＥ１酵素と、２）Ｅ２酵素（これは次の３）に活性化ユビキチンを転移する）と、３）標的タンパク質へのユビキチン結合を触媒するマルチサブユニットＥ３酵素リガーゼとの３つの酵素およびステップを含む：。
【０２０１】
特異的Ｅ３リガーゼのサブユニットタンパク質に結合することができる小分子のいくつかの例を「ＰＲＯＴＡＣ」と呼ぶことができ、これらは治療用途でユビキチンプロテアソーム系を利用して選択されたタンパク質標的を分解することができる。ＰＲＯＴＡＣは、タンパク質標的に結合する小分子を含むことができ、リンカーによって、Ｅ３リガーゼサブユニットに結合することができる小分子と共有結合的に結合していることがある。ユビキチンプロテアソーム経路の酵素的機構を利用することによって、タンパク質標的阻害の力価を増加させることができる。しかしながら、現在のＰＲＯＴＡＣは、２つの課題に直面し得る：１）そのサイズが細胞内への効率的送達をより困難にするおそれがあり、２）強力なタンパク質標的阻害の全身送達が、薬物によって通常示されるオンターゲットまたはオフターゲット毒性を悪化させるおそれがある。本明細書に開示されるコンジュゲートを、ユビキチンプロテアソーム経路を利用するという利益を維持しながら、これらの困難を克服するよう設計することができる。
【０２０２】
免疫調節化合物は、例えば免疫応答を寛容化する、抑制する、阻止する、迂回させる、または患者組織、患者細胞もしくは患者抗原に対する炎症反応を低下させることができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される免疫調節化合物が、例えばＰＩ３Ｋ阻害剤、カルシニューリン阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＢＴＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、ＣＲＡＣ阻害剤、ＰＡＲＰ１アンタゴニスト、ＰＰＡＲｇアゴニスト、Ｋｖ１．３アンタゴニスト、ＫＣａ３．１アンタゴニスト、ＰＰ２Ａアゴニスト、ＩＲＡＫ４阻害剤、ＭＹＤ８８阻害剤、ＢＣＬ−２アンタゴニスト、Ａ２ａｒアゴニスト、ＴＬＲ７アンタゴニスト、ｃ−ＫＩＴキナーゼ阻害剤、ＫＣＡ３．１アゴニスト、ＴＧＦβＲ１阻害剤、ＴＧＦβＲ２阻害剤、ＡＣＣアンタゴニスト、ＡＳＫ１アンタゴニスト、ＧＬＩ１阻害剤、ＴＮＫＳアンタゴニストまたはＴＮＩＫアンタゴニストであり得る。
【０２０３】
いくつかの実施形態では、免疫調節化合物が、例えばＰＩ３Ｋ阻害剤、カルシニューリン阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＢＴＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、ＣＲＡＣ（ＯＲＡ１１）阻害剤、ＰＡＲＰ１アンタゴニスト、ＰＰＡＲγアゴニスト、Ｋｖ１．３アンタゴニスト、ＫＣａ３．１アンタゴニスト、ＰＰ２Ａアゴニスト、ＩＲＡＫ４阻害剤、ＭＹＤ８８阻害剤、ＢＣＬ−２、Ａ２ａＲアゴニスト、ビタミンＤ受容体（ＶＤＲ）アゴニストまたはＧＬＩ１阻害剤であり得る。
【０２０４】
いくつかの実施形態では、免疫調節化合物が、ＴＧＦβＲ１阻害剤、ＴＧＦβＲ２阻害剤、ＴＮＫＳアンタゴニストまたはＴＮＩＫアンタゴニストである。
【０２０５】
いくつかの実施形態では、ＴＧＦβＲ１キナーゼの阻害剤が、その開示が本明細書に参照により援用される、米国特許出願公開第２０１８／０１２７４２６号、米国特許第８０８０５６８号、国際公開第２０１２／００２６８０号、国際公開第２００９／００９０５９号、国際公開第２００７／０７６１２７号、国際公開第２００７０７６０８６号、国際公開第２００６０２６３０６号、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、２０１４、２２、２７２４〜２７３２およびＪ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１４、５７、４２１３〜４２３８に開示されるものを含む。
【０２０６】
いくつかの実施形態では、ＴＧＦβＲ２キナーゼの阻害剤が、その開示が本明細書に参照により援用される、国際公開第２０１５／１３６０７３号、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、２０１３、２３、３２４８〜３２５２、Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔ．、２０１６、Ｄ７２、６５８〜６７４、国際公開第２０１６／０２０８６４号、米国特許出願公開第２０１４／０２４９１３５号、米国特許出願公開第２０１２０２２５０６１号に開示されるもの、および３−アミノ−６−（４−（アミノメチル）フェニル）−Ｎ−（４−モルホリノピリジン−３−イル）ピラジン−２−カルボキサミドなどの化合物を含む。
【０２０７】
いくつかの実施形態では、ＴＮＫＳの阻害剤が、その開示が本明細書に参照により援用される、中国特許第１０７２２６８０８号、欧州特許第３３１３１７７号、米国特許第９５０５７４９号、米国特許出願公開第２０１５／００４５３６８号、国際公開第２０１４／０３６０２２号、国際公開第２０１７／０７６４８４号、国際公開第２０１８／０４６９３３号、国際公開第２０１８／００３９６２号、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、２０１７、１４２、５０６〜５２２に開示されるものを含む。
【０２０８】
いくつかの実施形態では、ＴＮＩＫの阻害剤が、その開示が本明細書に参照により援用される、米国特許出願公開第２０１６／０２６４５５５号、国際公開第２０１５／０８３８３３号、米国特許出願公開第２０１０／０２１６７９５号、米国特許出願公開第２０１００１３７３８６号、Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．、２０１５、６、１５６４〜１５７２およびＢｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、２０１３、２３、５６９〜５７３に開示されるものを含む。
【０２０９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体コンジュゲートを使用して、全身性エリテマトーデスを治療することができる。いくつかの実施形態では、抗体コンジュゲートにコンジュゲートした化合物がＴＬＲ７アンタゴニストであり得る。
【０２１０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体コンジュゲートを使用して、肥満細胞症／色素性蕁麻疹（ｕｔｉｃａｒｉａ  ｐｉｇｍｅｎｔｏｓａ）を治療することができる。いくつかの実施形態では、抗体コンストラクトにコンジュゲートしてコンジュゲートを形成する化合物がｃ−ＫＩＴキナーゼ阻害剤であり得る。
【０２１１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体コンジュゲートを使用して、本明細書に記載される線維性疾患を治療することができる。いくつかの実施形態では、抗体コンストラクトにコンジュゲートしてコンジュゲートを形成する化合物がＫＣａ３．１アゴニストであり得る。いくつかの実施形態では、抗体コンストラクトにコンジュゲートしてコンジュゲートを形成する化合物が、ＧＳ−０９７６などのＡＣＣ阻害剤であり得る。いくつかの実施形態では、抗体コンストラクトにコンジュゲートしてコンジュゲートを形成する化合物がＡＳＫ１阻害剤であり得る。いくつかの実施形態では、抗体コンストラクトにコンジュゲートしてコンジュゲートを形成する化合物がＴＧＦβＲ１阻害剤であり得る。いくつかの実施形態では、抗体コンストラクトにコンジュゲートしてコンジュゲートを形成する化合物がＴＧＦβＲ２阻害剤であり得る。いくつかの実施形態では、抗体コンストラクトにコンジュゲートしてコンジュゲートを形成する化合物がＴＮＫＳ阻害剤であり得る。いくつかの実施形態では、抗体コンストラクトにコンジュゲートしてコンジュゲートを形成する化合物がＴＮＩＫ阻害剤であり得る。いくつかの実施形態では、抗体コンストラクトにコンジュゲートしてコンジュゲートを形成する化合物がＧＬＩ１阻害剤であり得る。
【０２１２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体コンジュゲートを使用して、多発性硬化症を治療することができる。いくつかの実施形態では、抗体コンストラクトにコンジュゲートしてコンジュゲートを形成する化合物がフィンゴリモドであり得る。
【０２１３】
免疫調節化合物とその標的または標的タンパク質の結合によって、筋線維芽細胞、免疫細胞または両方で発現されるタンパク質の活性が増加し得る。いくつかの非限定的な例としては、ＣＧＳ−２１６８０などのアデノシン受容体Ａ２Ｒａのアゴニスト、またはＦＴＹ７２０および誘導されたアナログなどのホスファターゼＰＰ２Ａの活性を増加させるスフィンゴシン−１アナログである免疫調節化合物が挙げられる。
【０２１４】
免疫調節化合物とその標的またはタンパク質標的の結合によって、筋線維芽細胞、免疫細胞または両方で発現されるタンパク質標的の機能が阻害され得る。免疫調節化合物のいくつかの非限定的な例としては、免疫細胞におけるラパマイシン、ＬＩＳＴなどのｍＴＯＲキナーゼのプロテインキナーゼ阻害剤；筋線維芽細胞、免疫細胞または両方における３−アミノ−６−（４−（アミノメチル）フェニル）−Ｎ−（４−モルホリノピリジン−３−イル）ピラジン−２−カルボキサミドなどのＴＧＦβＲ２キナーゼの阻害剤；免疫細胞におけるデュベリシブ、ＴＧ１００７１３およびＰＦ０４６９１５０２などのＰＩ３ＫγとＰＩ３Ｋδの一方または両方の阻害剤；ならびに筋線維芽細胞、免疫細胞または両方におけるＫＹ−０５００９およびＮＣＢ−０８４６［４−（（２−（（４−（アミノメチル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−６−イル）アミノ）キナゾリン−８−イル）オキシ）シクロヘキサン−１−オール］などのＴＮＩＫの阻害剤が挙げられる。
【０２１５】
免疫調節化合物は、標的または標的タンパク質との共有結合によって標的阻害を媒介することができる。標的タンパク質を阻害することができる免疫調節化合物の非限定的な例は、ＴＧＦβＲ１キナーゼの活性部位に結合することができる化合物であり得る。標的タンパク質を阻害することができる免疫調節化合物の非限定的な例は、ＴＧＦβＲ２キナーゼの活性部位に結合することができる化合物であり得る。標的タンパク質を阻害することができる免疫調節化合物の非限定的な例は、ＴＮＫＳの活性部位に結合することができる化合物であり得る。標的タンパク質を阻害することができる免疫調節化合物の非限定的な例は、ＴＮＩＫの活性部位に結合することができる化合物であり得る。
【０２１６】
免疫調節化合物は、タンパク質標的に結合することができ、筋線維芽細胞、免疫細胞または両方で発現される標的タンパク質の分解を媒介することによって、タンパク質標的の機能を阻害することができる。免疫調節化合物の非限定的な例としては、上記のＴＧＦβＲ１、ＴＧＦβＲ２、ＴＮＫＳおよびＴＮＩＫの阻害剤が挙げられる。免疫調節化合物の非限定的な例としては、（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ１−（４−（５−アミノ−６−（（４−モルホリノピリジン−３−イル）カルバモイル）ピラジン−２−イル）ベンジル）−Ｎ５−（２−（３−（（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，４Ｒ）−４−ヒドロキシ−２−（（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）ベンジル）カルバモイル）ピロリジン−１−イル）−３，３−ジメチル−１−オキソブタン−２−イル）アミノ−３−オキソプロポキシ）エチル）ペンタンジアミド（化合物１．１）などのＶＨＬ結合部分または３−アミノ−６−（４−（２−（（２Ｓ）−２−アミノ−６−（２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミド）ヘキサンアミド）エチル）フェニル）−Ｎ−（４−モルホリノピリジン−３−イル）ピラジン−２−カルボキサミド（化合物１．２）などのセレブロン結合部分などのＥ３ユビキチンリガーゼ結合部分と共有結合的に結合したまたは結合した上記のＴＧＦβＲ１、ＴＧＦβＲ２、ＴＮＫＳおよびＴＮＩＫの阻害剤がさらに挙げられる。ＶＨＬに結合する他の化合物は、国際公開第２０１３／１０６６４３号に開示されるものなどのヒドロキシプロリン化合物、ならびに米国特許出願公開第２０１６／００４５６０７号、国際公開第２０１４／１８７７７７号、米国特許出願公開第２０１４／０３５６３２２号および米国特許第９２４９１５３号に開示される他の化合物であり得る。セレブロンに結合する他の化合物には、サリドマイド、レナリドミド、ポマリドミドおよびこれらのアナログが含まれる。セレブロンに結合する他の小分子化合物、例えば米国特許出願公開第２０１６／００５８８７２号および米国特許出願公開第２０１５／０２９１５６２号に開示される化合物も知られている。
【０２１７】
いくつかの実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合部分が第２の部分であり得る。いくつかの実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合部分が、Ｖｏｎ  Ｈｉｐｐｅｌ−Ｌｉｎｄａｕｅ  Ｅ３ユビキチンリガーゼ（ＶＨＬ）、セレブロン、マウス二重微小染色体２ホモログ（ＭＤＭ２）、ＡＭＦＲ、ＡＰＣ／Ｃｄｃ２０、ＡＰＣ／Ｃｄｈ１、Ｃ６ｏｒｆ１５７、Ｃｂｌ、ＣＢＬＬ１、ＣＨＦＲ、ＣＨＩＰ、ＤＴＬ（Ｃｄｔ２）、Ｅ６−ＡＰ、ＨＡＣＥ１、ＨＥＣＴＤ１、ＨＥＣＴＤ２、ＨＥＣＴＤ３、ＨＥＣＷ１、ＨＥＣＷ２、ＨＥＲＣ２、ＨＥＲＣ３、ＨＥＲＣ４、ＨＥＲＣ５、ＨＵＷＥ１、ＨＹＤ、ＩＴＣＨ、ＬＮＸ１、マホグニン、ＭＡＲＣＨ−Ｉ、ＭＡＲＣＨ−ＩＩ、ＭＡＲＣＨ−ＩＩＩ、ＭＡＲＣＨ−ＩＶ、ＭＡＲＣＨ−ＶＩ、ＭＡＲＣＨ−ＶＩＩ、ＭＡＲＣＨ−ＶＩＩＩ、ＭＡＲＣＨ−Ｘ、ＭＥＫＫ１、ＭＩＢ１、ＭＩＢ２、ＭｙｃＢＰ２、ＮＥＤＤ４、ＮＥＤＤ４Ｌ、パーキン、ＰＥＬＩ１、Ｐｉｒｈ２、ＰＪＡ１、ＰＪＡ２、ＰＦＦＬ、ＲＦＷＤ２、Ｒｉｃｔｏｒ、ＲＮＦ５、ＲＮＦ８、ＲＮＦ１９、ＲＮＦ１９０、ＲＮＦ２０、ＲＮＦ３４、ＲＮＦ４０、ＲＮＦ１２５、ＲＮＦ１２８、ＲＮＦ１３８、ＲＮＦ１６８、ＳＣＦ／β−ＴｒＣＰ、ＳＣＦ／ＦＢＷ７、ＳＣＦ／Ｓｋｐ２、ＳＨＰＲＨ、ＳＩＡＨ１、ＳＩＡＨ２、ＳＭＵＲＦ１、ＳＭＵＲＦ２、ＴＯＰＯＲＳ、ＴＲＡＦ６、ＴＲＡＦ７、ＴＲＩＭ６３、ＵＢＥ３Ｂ、ＵＢＥ３Ｃ、ＵＢＲ１、ＵＢＲ２、ＵＨＲＦ２、ＷＷＰ１、ＷＷＰ２、またはＺＮＲＦ１などのＥ３ユビキチンリガーゼに結合することができる。
【０２１８】
本明細書に記載されるコンジュゲートは、標的細胞内の免疫調節化合物のタンパク質標的の活性を変化させることができる。
【０２１９】
種々の実施形態では、コンジュゲートが、第１の抗原結合ドメイン、第２の抗原結合ドメインまたはこれらの組み合わせを含む細胞内の免疫調節化合物のタンパク質標的の活性を増加させることができる。
【０２２０】
種々の実施形態では、コンジュゲートが、第１の抗原結合ドメイン、第２の抗原結合ドメインまたはこれらの組み合わせを含む細胞内の免疫調節化合物のタンパク質標的の活性を低下させることができる。コンジュゲートは、第１の抗原結合ドメイン、第２の抗原結合ドメインまたはこれらの組み合わせを含む細胞内の標的タンパク質分解を増加させることによって、免疫調節化合物のタンパク質標的の活性を低下させることができる。
【０２２１】
免疫細胞、筋線維芽細胞または炎症組織へのコンジュゲートの抗原標的化送達によって、免疫調節化合物の全身毒性を低下させることができる。いくつかの非限定的な例は、ＴＧＦβＲ１、ＴＧＦβＲ２またはｍＴＯＲキナーゼを阻害することができる免疫調節化合物である。免疫細胞または筋線維芽細胞へのコンジュゲートの抗原標的化送達によって、免疫調節の力価を増加させることができる。いくつかの非限定的な例は、より大きな非結合免疫調節化合物または第１の部分の比較的低い細胞透過性により、第２の部分またはＥ３ユビキチンリガーゼ結合部分と結合した免疫調節化合物または第１の部分を使用して標的タンパク質分解を促進することができるコンジュゲートで構成され得る。
【０２２２】
いくつかの態様では、本開示は、線維症を治療する方法であって、本明細書に記載される免疫調節化合物または塩を、それを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。いくつかの態様では、本開示は、線維症を治療する方法であって、本明細書に記載される免疫調節化合物または塩を含むコンジュゲートを、それを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。
【０２２３】
本明細書に記載される免疫調節化合物の塩、特に薬学的に許容される塩が本開示に含まれる。十分に酸性の官能基、十分に塩基性の官能基または両方の官能基を有する本開示の免疫調節化合物は、いくつかの無機塩基、ならびに無機および有機酸のいずれかと反応して塩を形成し得る。あるいは、本質的に帯電している免疫調節化合物、例えば四級窒素を有するものは、適切な対イオン、例えば臭化物、塩化物またはフッ化物、特に臭化物などのハロゲン化物と塩を形成し得る。
【０２２４】
本明細書に記載される免疫調節化合物は、いくつかの場合、ジアステレオマー、光学異性体または他の立体異性形態として存在し得る。本明細書に提示される免疫調節化合物は、全てのジアステレオマー、光学異性体およびエピマー形態ならびにこれらの適切な混合物を含む。立体異性体の分離は、クロマトグラフィーにより、またはジアステレオマーを形成し、再結晶もしくはクロマトグラフィーにより分離することにより、またはこれらのいずれかの組み合わせにより行われ得る。（この開示について本明細書に参照により援用される、Ｊｅａｎ  Ｊａｃｑｕｅｓ、Ａｎｄｒｅ  Ｃｏｌｌｅｔ、Ｓａｍｕｅｌ  Ｈ．Ｗｉｌｅｎ、「Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ，Ｒａｃｅｍａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ」、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  Ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、１９８１）。立体異性体は立体選択的合成によっても得ることができる。
【０２２５】
本明細書に記載される方法およびコンジュゲートおよび組成物は、免疫調節化合物の非晶質形態ならびに結晶形態（多形としても知られる）の使用を含む。本明細書に記載される免疫調節化合物は、薬学的に許容される塩の形態であり得る。さらに、同じ種類の活性を有するこれらの免疫調節化合物の活性代謝産物が本開示の範囲に含まれる。さらに、本明細書に記載される免疫調節化合物は、非溶媒和形態ならびに水、エタノールなどの薬学的に許容される溶媒による溶媒和形態で存在し得る。本明細書に提示される免疫調節化合物の溶媒和形態も本明細書に開示されるとみなされる。
【０２２６】
特定の実施形態では、免疫調節化合物または塩が、例えば親化合物のヒドロキシルがエステルもしくは炭酸塩として提供される、または親化合物に存在するカルボン酸がエステルとして提供されるプロドラッグであり得る。「プロドラッグ」という用語は、生理的条件下で、本開示の薬学的薬剤に変換される化合物を包含することを意図している。プロドラッグを作製する１つの方法は、生理的条件下で加水分解されて所望の分子を明らかにする１つまたは複数の選択された部分を含めることである。他の実施形態では、プロドラッグが、宿主動物の特異的標的細胞などの宿主動物の酵素活性によって変換される。例えば、エステルまたは炭酸塩（例えば、アルコールまたはカルボン酸のエステルまたは炭酸塩およびホスホン酸のエステル）が、本開示の好ましいプロドラッグである。
【０２２７】
プロドラッグがインビボで代謝されて免疫調節化合物を生成する、本明細書に記載される化合物のプロドラッグ形態が、特許請求の範囲内に含まれる。いくつかの場合、本明細書に記載される免疫調節化合物のいくつかが別の誘導体または活性化合物のプロドラッグであり得る。
【０２２８】
プロドラッグは通常、いくつかの状況で、親薬物よりも投与するのが容易であり得るので、有用である。プロドラッグは、例えば経口投与によって生体利用可能となり得るが、親はそうではない。プロドラッグは、親薬物に対して化合物の細胞透過性を増強するのを助け得る。プロドラッグはまた、親薬物よりも改善した薬学的組成物への溶解度を有し得る。プロドラッグは、部位特異的組織への薬物輸送を増強するまたは細胞内での薬物滞留を増加させる修飾剤として使用するための可逆性薬物誘導体として設計され得る。
【０２２９】
特定の実施形態では、プロドラッグが、細胞内の条件下で、例えば酵素的または化学的に、親化合物に変換され得る。特定の実施形態では、親化合物が、細胞内の条件下で帯電され得る、例えばプロドラッグの加水分解から生じる、酸性部分を含む。特定の実施形態では、プロドラッグが、いったん細胞膜を通過して細胞内に行くと、親化合物に変換される。特定の実施形態では、親化合物が、減少した親油性および増加した親水性などの、プロドラッグに対して減少した細胞膜透過性特性を有する。
【０２３０】
特定の実施形態では、酸性部分を有する親化合物が、酸性部分を有さない同化合物よりも長い持続時間、細胞内に保持される。
【０２３１】
酸性部分を有する親化合物は、酸性部分を有さない同化合物に対して、細胞内に保持され得る、すなわち、薬物滞留が１０％以上、例えば１５％以上、例えば２０％以上、例えば２５％以上、例えば３０％以上、例えば３５％以上、例えば４０％以上、例えば４５％以上、例えば５０％以上、例えば５５％以上、例えば６０％以上、例えば６５％以上、例えば７０％以上、例えば７５％以上、例えば８０％以上、例えば８５％以上、または９０％以上でさえあり得る。
【０２３２】
いくつかの実施形態では、プロドラッグの設計が、薬学的薬剤の親油性を増加させる。いくつかの実施形態では、プロドラッグの設計が有効な水溶解度を増加させる。例えば、その開示について全てが本明細書により援用される、Ｆｅｄｏｒａｋら、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．、２６９：Ｇ２１０〜２１８（１９９５）；ＭｃＬｏｅｄら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ、１０６：４０５〜４１３（１９９４）；Ｈｏｃｈｈａｕｓら、Ｂｉｏｍｅｄ．Ｃｈｒｏｍ．、６：２８３〜２８６（１９９２）；Ｊ．ＬａｒｓｅｎおよびＨ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ、３７、８７（１９８７）；Ｊ．Ｌａｒｓｅｎら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ、４７、１０３（１９８８）；Ｓｉｎｋｕｌａら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．、６４：１８１〜２１０（１９７５）；Ｔ．ＨｉｇｕｃｈｉおよびＶ．Ｓｔｅｌｌａ、Ｐｒｏ−ｄｒｕｇｓ  ａｓ  Ｎｏｖｅｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ａ．Ｃ．Ｓ．  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓの第１４巻；およびＥｄｗａｒｄ  Ｂ．Ｒｏｃｈｅ、Ｂｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ、１９８７を参照されたい。別の実施形態によると、本開示は、上に定義される化合物を生成する方法を提供する。化合物は従来技術を使用して合成され得る。有利には、これらの化合物は、容易に入手可能な出発物質から簡便に合成される。
【０２３３】
本明細書に記載される化合物の合成に有用な合成化学変換および方法は、当該技術分野で知られており、例えば、Ｒ．Ｌａｒｏｃｋ、Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ（１９８９）；Ｔ．Ｗ．ＧｒｅｅｎｅおよびＰ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第２版（１９９１）；Ｌ．ＦｉｅｓｅｒおよびＭ．Ｆｉｅｓｅｒ、Ｆｉｅｓｅｒ  ａｎｄ  Ｆｉｅｓｅｒ’ｓ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（１９９４）；およびＬ．Ｐａｑｕｅｔｔｅ編、Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（１９９５）に記載されるものを含む。
【０２３４】
リンカー
本明細書に記載される免疫調節化合物および塩は、リンカー、例えば切断可能なリンカーまたは非切断可能なリンカーと共有結合的に結合している。特定の実施形態では、リンカーが、抗体とも共有結合的に結合しており、抗体コンジュゲートまたはコンジュゲートと呼ばれる。本明細書に記載されるコンジュゲートのリンカーは、コンジュゲートまたは抗体コンストラクトの活性部分、例えば第１の抗原結合ドメイン、Ｆｃドメイン、第２の抗原結合ドメイン、抗体、免疫調節化合物、アンタゴニスト、アゴニストなどと、抗原などの同族結合パートナーであり得る標的の結合に影響を及ぼさない可能性がある。コンジュゲートは複数のリンカーを含むことができる。これらのリンカーは同じリンカーであっても異なるリンカーであってもよい。本明細書に記載されるリンカーは、２つの小分子結合部分を結合し、結合した小分子を抗体に結合する多機能性リンカーであり得る。
【０２３５】
リンカーは、短い、柔軟性、剛性、切断可能、非切断可能、親水性または疎水性であり得る。リンカーは、柔軟性のセグメントまたは剛性のセグメントなどの異なる特性を有するセグメントを含むことができる。リンカーは、細胞外環境に対して化学的に安定である、例えば血流中で化学的に安定であることができる、または安定でない結合を含み得る。リンカーは、細胞内で特異的にまたは非特異的に切断されるおよび／または破壊するまたは崩壊するよう設計された結合を含むことができる。切断可能なリンカーは、酵素に感受性であり得る。切断可能なリンカーは、プロテアーゼなどの酵素によって切断され得る。切断可能なリンカーは、バリン−シトルリンペプチドまたはバリン−アラニンペプチドを含むことができる。バリン−シトルリンまたはバリンアラニン含有リンカーは、ペンタフルオロフェニル基を含むことができる。バリン−シトルリンまたはバリン−アラニン含有リンカーは、スクシンイミド基を含むことができる。バリン−シトルリンまたはバリン−アラニン含有リンカーは、パラアミノ安息香酸（ＰＡＢＡ）基を含むことができる。バリン−シトルリン、バリン−アラニン（ＶＡ）またはグリシン−グリシン−フェニルアラニン−グリシン（ＧＧＦＧ）テトラぺプチドを含むリンカーは、ＰＡＢＡ基およびペンタフルオロフェニル基を含むことができる。ペプチドベースのリンカーは、ＰＡＢＡ基およびスクシンイミド基を含むことができる。
【０２３６】
非切断可能なリンカーはプロテアーゼ非感受性であり得る。非切断可能なリンカーは、マレイミドカプロイルリンカーであり得る。マレイミドカプロイルリンカーは、Ｎ−マレイミドメチルシクロヘキサン−１−カルボキシレートを含むことができる。マレイミドカプロイルリンカーは、スクシンイミド基を含むことができる。リンカーはマレイミドカプロイル基および１つまたは複数のポリエチレングリコール分子の組み合わせであり得る。リンカーはマレイミド−ＰＥＧ４リンカーであり得る。リンカーは、スクシンイミド基を含むマレイミドカプロイルリンカーおよび１つまたは複数のポリエチレングリコール分子の組み合わせであり得る。リンカーは、ポリエチレングリコール分子に結合したマレイミドを含むことができ、ポリエチレングリコールがより多くのリンカー柔軟性を可能にすることができる、または使用され得る。
【０２３７】
リンカーはまた、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、ポリエーテル、ポリエステルまたはポリアミド基（複数可）を含むことができる、ならびに／あるいはポリアミノ酸、ポリペプチド、切断可能なペプチドまたはアミノベンジルカルバメートを含むことができる。リンカーは、一端にマレイミド、他端にＮ−ヒドロキシスクシンイミジルエステルを含むことができる。リンカーは、アセチル化されたＮ末端アミンを有するリジン、およびバリン−シトルリン切断部位を含むことができる。リンカーは、微生物トランスグルタミナーゼによって作り出される結合であり得、この結合は、グルタミン側鎖のアシル基とリジン鎖の一級アミンとの間の結合形成を触媒する酵素の結果として、アミン含有部分と、グルタミンを含むよう操作された部分との間に作り出され得る。リンカーは反応性一級アミンを含むことができる。リンカーは、ソルターゼＡリンカーであり得る。ソルターゼＡリンカーは、ＬＰＸＴＧ（配列番号４９２）認識モチーフをＮ末端ＧＧＧモチーフと融合して天然アミド結合を再生するソルターゼＡ酵素によって作り出され得る。そのため、作り出されたリンカーは、ＬＰＸＴＧ認識モチーフに結合した部分を、Ｎ末端ＧＧＧモチーフに結合した部分と結合することができる。
【０２３８】
本明細書に記載されるコンジュゲートでは、免疫調節化合物または塩が、リンカーによって抗体コンストラクトに結合している。化合物または塩をコンジュゲートの抗体に結合するリンカーは、短い、長い、疎水性、親水性、柔軟性もしくは剛性であり得る、またはそれぞれ独立に、リンカーが異なる特性を有するセグメントを含み得るように上記特性のうちの１つまたは複数を有するセグメントで構成され得る。リンカーは、２つ以上の化合物または塩を抗体上の単一部位と共有結合的に結合するよう多価であっても、単一化合物または塩を抗体上の単一部位と共有結合的に結合するように一価であってもよい。
【０２３９】
当業者によって認識されるように、リンカーは、リンカーと抗体コンストラクトと化合物との間の共有結合によって免疫調節化合物を抗体に結合し得る。本明細書で使用される場合、「リンカー」という表現は、（ｉ）リンカーを免疫調節化合物に共有結合的に結合することができる官能基およびリンカーを抗体に共有結合的に結合することができる官能基を含む非コンジュゲート形態のリンカー；（ｉｉ）リンカーを抗体コンストラクトに共有結合的に結合することができる官能基を含み、免疫調節化合物と共有結合的に結合している、またはその逆である部分的にコンジュゲートした形態のリンカー；および（ｉｉｉ）免疫調節化合物と抗体コンストラクトの両方と共有結合的に結合している完全にコンジュゲートした形態のリンカーを含むことを意図している。一実施形態は、細胞表面受容体または腫瘍細胞上で発現される腫瘍関連抗原に結合する抗体を、リンカーまたはリンカー−免疫調節化合物が抗体に共有結合的に結合する条件下で、本明細書に記載されるリンカーまたはリンカー−免疫調節化合物と接触させることによって形成されるコンジュゲートに関する。一実施形態は、リンカーまたはリンカー−免疫調節化合物が抗体と共有結合的に結合する条件下で、本明細書に記載されるリンカーまたはリンカー−免疫調節化合物を接触させることによって形成されるコンジュゲートを作製する方法に関する。
【０２４０】
多くの免疫調節化合物を抗体コンストラクト（例えば、抗体）に結合するために使用され得る例示的多価リンカーが記載される。例えば、Ｆｌｅｘｉｍｅｒ（登録商標）リンカー技術は、優れた物理化学特性を有する高ＤＡＲ  ＡＤＣを可能にする能力を有する。以下に示されるように、Ｆｌｅｘｉｍｅｒ（登録商標）リンカー技術は、エステル結合の配列を介して、薬物分子を可溶化ポリアセタール骨格に組み込むことに基づく。この方法は、優れた物理化学特性を維持しながら、高負荷コンジュゲート（ＤＡＲ最大２０）を与える。
2020523319.tif 000033
【０２４１】
上のスキームに示されるＦｌｅｘｉｍｅｒ（登録商標）リンカー技術を利用するために、脂肪族アルコールが免疫調節化合物に存在することができる、または脂肪族アルコールを免疫調節化合物に導入することができる。次いで、アルコール部分をアラニン部分にコンジュゲートし、次いで、これをＦｌｅｘｉｍｅｒ（登録商標）リンカーに合成的に組み込む。インビトロでのＡＤＣのリポソームプロセシングによって、親アルコール含有薬物が放出される。
【０２４２】
例として、および限定されないが、本明細書に記載されるコンジュゲートに含まれ得るいくつかの切断可能なリンカーおよび非切断可能なリンカーを以下に記載する。
【０２４３】
切断可能なリンカーは、インビトロおよびインビボで切断可能であり得る。切断可能なリンカーは、化学的または酵素的に不安定または分解可能な結合を含むことができる。切断可能なリンカーは、細胞質中での還元、リソソーム中での酸性条件への曝露、または細胞内の特異的プロテアーゼもしくは他の酵素による切断などの細胞内の過程に依存して、免疫調節化合物を遊離することができる。切断可能なリンカーは、化学的または酵素的に切断可能である１つまたは複数の化学結合を組み込むことができるが、リンカーの残りは非切断可能であり得る。
【０２４４】
リンカーは、ヒドラゾンおよび／またはジスルフィド基などの化学的に不安定な基を含むことができる。化学的に不安定な基を含むリンカーは、血漿といくつかの細胞質画分との間で異なる特性を利用することができる。ヒドラゾン含有リンカーについて免疫調節化合物放出を促進することができる細胞内条件は、エンドソームおよびリソソームの酸性環境であり得るが、ジスルフィド含有リンカーは、高いチオール濃度、例えばグルタチオンを含むことができるサイトゾルで還元され得る。化学的に不安定な基を含むリンカーの血漿安定性は、化学的に不安定な基の近くに置換基を使用して立体障害を導入することによって増加され得る。
【０２４５】
ヒドラゾンなどの酸に不安定な基は、血液の中性ｐＨ環境（ｐＨ７．３〜７．５）で全身循環中インタクトなままであることができ、いったん抗体コンストラクト免疫調節化合物コンジュゲートが細胞の穏やかに酸性のエンドソーム（ｐＨ５．０〜６．５）およびリソソーム（ｐＨ４．５〜５．０）画分に内部移行すると、加水分解を受けて、免疫調節化合物を放出することができる。このｐＨ依存性放出機構は、薬物の非特異的放出に関連し得る。リンカーのヒドラゾン基の安定性を増加させるために、化学修飾、例えば置換によってリンカーを変化させて、循環中での最小限の損失でリソソーム中でのより効率的な放出を達成するよう調整することを可能にすることができる。
【０２４６】
ヒドラゾン含有リンカーは、追加の酸に不安定な切断部位および／または酵素的に不安定な切断部位などの追加の切断部位を含むことができる。例示的ヒドラゾン含有リンカーを含む抗体コンストラクト免疫調節化合物コンジュゲートは、例えば以下の構造を含むことができる：
2020523319.tif 000034
（式中、それぞれ、Ｄは免疫調節化合物であり、Ａｂは抗体コンストラクトであり、ｎは抗体コンストラクトと結合したリンカー（ＬＰ）と結合した化合物の数を表す）。リンカー（Ｉａ）などの一定のリンカーでは、リンカーが２つの切断可能な基−ジスルフィドおよびヒドラゾン部分を含むことができる。このようなリンカーについては、非修飾遊離免疫調節化合物の有効な放出が、酸性ｐＨまたはジスルフィド還元と酸性ｐＨを必要とし得る。（Ｉｂ）および（Ｉｃ）などのリンカーは、単一ヒドラゾン切断部位で有効であり得る。
【０２４７】
リンカーに含まれ得る他の酸に不安定な基には、シス−アコニチル含有リンカーが含まれる。シス−アコニチル化学は、アミド結合と並置されたカルボン酸を使用して、酸性条件下でアミド加水分解を加速することができる。
【０２４８】
切断可能なリンカーはまた、ジスルフィド基を含むことができる。ジスルフィドは、生理的ｐＨで熱力学的に安定であることができ、サイトゾルが細胞外環境と比較して有意に多い還元環境を提供し得る細胞内への内部移行で免疫調節化合物を放出するよう設計することができる。ジスルフィド含有リンカーが循環中で適度に安定であり、サイトゾルで免疫調節化合物を選択的に放出することができるように、ジスルフィド結合の切断は（還元型）グルタチオン（ＧＳＨ）などの細胞質チオール補助因子の存在を必要とし得る。細胞内酵素タンパク質ジスルフィドイソメラーゼまたはジスルフィド結合を切断することができる同様の酵素も、細胞内でのジスルフィド結合の優先的な切断に寄与することができる。ＧＳＨは、約５μＭという有意に低濃度の循環中の最も豊富な低分子量チオールであるＧＳＦまたはシステインと比較して０．５〜１０ｍＭの濃度範囲で細胞中に存在することができる。不規則な血流が低酸素状態をもたらし得る腫瘍細胞は、還元酵素の増強した活性、それゆえ、いっそう高いグルタチオン濃度をもたらし得る。ジスルフィド含有リンカーのインビボ安定性は、リンカーの化学修飾、例えばジスルフィド結合に隣接した立体障害の使用によって増強され得る。
【０２４９】
例示的ジスルフィド含有リンカーを含む抗体コンジュゲートは、以下の構造を含むことができる：
2020523319.tif 000035
（式中、それぞれ、Ｄは免疫調節化合物であり、Ａｂは抗体コンストラクトであり、ｎは抗体コンストラクトと結合したリンカー（ＬＰ）と結合した化合物の数を表し、Ｒは各出現で、例えば水素またはアルキルから独立に選択される）。ジスルフィド結合に隣接した立体障害を増加させることによって、リンカーの安定性を増加させることができる。
【０２５０】
使用することができる別の種類のリンカーは、酵素によって特異的に切断されるリンカーである。例えば、リンカーは、リソソーム酵素によって切断され得る。このようなリンカーはペプチドベースであり得る、または酵素の基質として作用することができるペプチド性領域を含むことができる。ペプチドベースのリンカーは、化学的に不安定なリンカーよりも血漿および細胞外環境で安定であり得る。
【０２５１】
リソソームタンパク質分解酵素は、内因性阻害剤およびリソソームと比較して不利に高い血液のｐＨ値のために血液中で極めて低い活性を有し得るので、ペプチド結合は優れた血清安定性を有することができる。抗体コンストラクトからの免疫調節化合物の放出は、リソソームプロテアーゼ、例えばカテプシンおよびプラスミンの作用によって起こることができる。これらのプロテアーゼは、一定の腫瘍組織中で高レベルで存在し得る。リンカーはリソソーム酵素によって切断可能であり得る。リソソーム酵素は、例えばカテプシンＢ、β−グルクロニダーゼまたはβ−ガラクトシダーゼであり得る。
【０２５２】
切断可能なペプチドは、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙなどのテトラペプチド、またはＶａｌ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−ＡｌａおよびＰｈｅ−Ｌｙｓなどのジペプチドから選択され得る。ジペプチドは、より長いペプチドと比較して低い疎水性を有することができる。
【０２５３】
種々のジペプチドベースの切断可能なリンカーを本明細書に記載される抗体コンストラクト免疫調節化合物コンジュゲートに使用することができる。
【０２５４】
酵素的に切断可能なリンカーは、免疫調節化合物を酵素切断部位から空間的に分離する自壊性スペーサーを含むことができる。免疫調節化合物とペプチドリンカーの直接結合によって、免疫調節化合物のアミノ酸付加物のタンパク質分解性放出がもたらされ、それによってその活性が損なわれ得る。自壊性スペーサーの使用によって、アミド結合加水分解で完全に活性な化学的に修飾されていない免疫調節化合物の脱離が可能になり得る。
【０２５５】
ある自壊性スペーサーは二官能性パラ−アミノベンジルアルコール基であり得、これがアミノ基を介してペプチドに結合して、アミド結合を形成することができ、一方、アミン含有免疫調節化合物を、カルバメート官能基を介してリンカーのベンジル性ヒドロキシル基に結合（してｐ−アミノベンジルカルバメート、ＰＡＢＣをもたらす）することができる。得られたプロ免疫調節化合物は、プロテアーゼ媒介切断で活性化されて、１，６−脱離反応をもたらし、非修飾免疫調節化合物、二酸化炭素およびリンカー基の残遺物を放出することができる。以下のスキームは、ｐ−アミノベンジルカルバメートの断片化および免疫調節化合物の放出を示している：
2020523319.tif 000036
（式中、Ｘ−Ｄは非修飾免疫調節化合物を表す）。
【０２５６】
この自壊性基の複素環式変異体も記載されている。
【０２５７】
酵素的に切断可能なリンカーはβ−グルクロン酸ベースのリンカーであり得る。免疫調節化合物の容易な放出は、リソソーム酵素β−グルクロニダーゼによるβ−グルクロニドグルコシド結合の切断を介して実現され得る。この酵素はリソソーム内に豊富に存在し、いくつかの腫瘍型では過剰発現され得るが、細胞外での酵素活性は低くなり得る。β−グルクロン酸ベースのリンカーを使用して、β−グルクロニドの親水性の性質により、抗体コンストラクト免疫調節化合物コンジュゲートが凝集を受ける傾向を回避することができる。特定の実施形態では、β−グルクロン酸ベースのリンカーが、抗体コンストラクトを疎水性免疫調節化合物に結合することができる。以下のスキームは、β−グルクロン酸ベースのリンカーを含む抗体コンストラクト（Ａｂ）免疫調節化合物コンジュゲートからの免疫調節化合物（Ｄ）の放出を示している：
2020523319.tif 000037
【０２５８】
オーリスタチン、カンプトテシンおよびドキソルビシンアナログ、ＣＢＩマイナーグルーブバインダーおよびサイムベリン（ｐｓｙｍｂｅｒｉｎ）などの薬物を抗体に結合するのに有用な種々の切断可能なβ−グルクロン酸ベースのリンカーが記載されている。これらのβ−グルクロン酸ベースのリンカーが、本明細書に記載されるコンジュゲートに使用され得る。特定の実施形態では、酵素的に切断可能なリンカーがβ−ガラクトシドベースのリンカーである。β−ガラクトシドはリソソーム内に豊富に存在するが、細胞外での酵素活性は低い。
【０２５９】
さらに、フェノール基を含む化合物を、フェノール性酸素を介してリンカーと共有結合的に結合することができる。１つのこのようなリンカーは、ジアミノ−エタン「スペースリンク（Ｓｐａｃｅ  Ｌｉｎｋ）」を伝統的な「ＰＡＢＯ」ベースの自壊性基と併せて使用する方法に依存して、フェノールを送達する。
【０２６０】
切断可能なリンカーは非切断可能な部分もしくはセグメントを含むことができる、および／または切断可能なセグメントもしくは部分を非切断可能なリンカーに含めてこれを切断可能にすることができる。単なる例として、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）および関連するポリマーは、ポリマー骨格に切断可能な基を含むことができる。例えば、ポリエチレングリコールまたはポリマーリンカーは、ジスルフィド、ヒドラゾンまたはジペプチドなどの１つまたは複数の切断可能な基を含むことができる。
【０２６１】
リンカーに含めることができる他の分解可能な結合は、ＰＥＧカルボン酸または活性化ＰＥＧカルボン酸と免疫調節化合物上のアルコール基の反応によって形成されるエステル結合を含むことができ、このようなエステル基は生理的条件下で加水分解して免疫調節化合物を放出することができる。加水分解的に分解可能な結合は、それだけに限らないが、ポリマーの末端およびオリゴヌクレオチドの５’ヒドロキシル基に、それだけに限らないが、炭酸結合；アミンとアルデヒドの反応から得られるイミン結合；アルコールとリン酸基の反応によって形成されるリン酸エステル結合；アルデヒドとアルコールの反応生成物であるアセタール結合；ホルメートとアルコールの反応生成物であるオルトエステル結合；およびホスホロアミデートによって形成されるオリゴヌクレオチド結合を含むことができる。
【０２６２】
リンカーは、酵素的に切断可能なペプチド部分を含むことができる、例えば構造式（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）、（ＩＩＩｃ）もしくは（ＩＩＩｄ）：
2020523319.tif 000038
またはその塩（式中、ペプチドはリソソーム酵素によって切断可能なペプチド（Ｎ→Ｃと示される、ペプチドはアミノおよびカルボキシ「末端」を含む）を表し；Ｔは１つまたは複数のエチレングリコール単位またはアルキレン鎖またはこれらの組み合わせを含むポリマーを表し；Ｒａは水素、アルキル、スルホネートおよびメチルスルホネートから選択され；Ｒｙは水素またはＣ１〜４アルキル−（Ｏ）ｒ−（Ｃ１〜４アルキレン）ｓ−Ｇ１またはＣ１〜４アルキル−（Ｎ）−［（Ｃ１〜４アルキレン）−Ｇ１］２であり；ＲｚはＣ１〜４アルキル−（Ｏ）ｒ−（Ｃ１〜４アルキレン）ｓ−Ｇ２であり；Ｇ１はＳＯ３Ｈ、ＣＯ２Ｈ、ＰＥＧ４〜３２または糖部分であり；Ｇ２はＳＯ３Ｈ、ＣＯ２ＨまたはＰＥＧ４〜３２部分であり；ｒは０または１であり；ｓは０または１であり；ｐは０〜５の範囲の整数であり；ｑは０または１であり；ｘは０または１であり；ｙは０または１であり；
2020523319.tif 000039
はリンカーと免疫調節化合物またはその塩の結合点を表し；＊はリンカーの残りとの結合点を表す）
を含むリンカーである。
【０２６３】
特定の実施形態では、ペプチドがトリペプチドまたはジペプチドから選択され得る。特定の実施形態では、ジペプチドがＶａｌ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ｖａｌ；Ａｌａ−Ａｌａ；Ａｌａ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ａｌａ；Ａｓｎ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ａｓｎ；Ｃｉｔ−Ｃｉｔ；Ｖａｌ−Ｇｌｕ；Ｇｌｕ−Ｖａｌ；Ｓｅｒ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ｓｅｒ；Ｌｙｓ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ｌｙｓ；Ａｓｐ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ａｓｐ；Ａｌａ−Ｖａｌ；Ｖａｌ−Ａｌａ；Ｐｈｅ−Ｌｙｓ；Ｌｙｓ−Ｐｈｅ；Ｖａｌ−Ｌｙｓ；Ｌｙｓ−Ｖａｌ；Ａｌａ−Ｌｙｓ；Ｌｙｓ−Ａｌａ；Ｐｈｅ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ｐｈｅ；Ｌｅｕ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ｌｅｕ；Ｉｌｅ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ｉｌｅ；Ｐｈｅ−Ａｒｇ；Ａｒｇ−Ｐｈｅ；Ｃｉｔ−Ｔｒｐ；およびＴｒｐ−Ｃｉｔ、またはその塩から選択され得る。
【０２６４】
本明細書に記載されるコンジュゲートに含めることができる構造式（ＩＩＩａ）によるリンカーの例示的実施形態は、以下に示されるリンカーを含むことができる（示されるように、リンカーは、リンカーを抗体コンストラクトに共有結合的に結合するのに適した基を含む）：
2020523319.tif 000040
2020523319.tif 000041
（式中、
2020523319.tif 000042
はリンカーと免疫調節化合物またはその塩の結合点を表す）。
【０２６５】
本明細書に記載されるコンジュゲートに含めることができる構造式（ＩＩＩｂ）、（ＩＩＩｃ）または（ＩＩＩｄ）によるリンカーの例示的実施形態は、以下に示されるリンカーを含むことができる（示されるように、リンカーは、リンカーを抗体コンストラクトに共有結合的に結合するのに適した基を含むことができる）：
2020523319.tif 000043
2020523319.tif 000044
2020523319.tif 000045
2020523319.tif 000046
2020523319.tif 000047
2020523319.tif 000048
2020523319.tif 000049
（式中、
2020523319.tif 000050
はリンカーと免疫調節化合物またはその塩の結合点を表す）。
【０２６６】
リンカーは、酵素的に切断可能な糖部分を含むことができる、例えば構造式（ＩＶａ）、（ＩＶｂ）、（ＩＶｃ）、（ＩＶｄ）または（ＩＶｅ）：
2020523319.tif 000051
2020523319.tif 000052
またはその塩（式中、ｑは０または１であり；ｒは０または１であり；Ｘ１はＣＨ２、ＯまたはＮＨであり；
2020523319.tif 000053
はリンカーと免疫調節化合物またはその塩の結合点を表し；＊はリンカーの残りとの結合点を表す）
を含むリンカーである。
【０２６７】
本明細書に記載される抗体コンストラクト免疫調節化合物コンジュゲートに含まれ得る構造式（ＩＶａ）によるリンカーの例示的実施形態は、以下に示されるリンカーを含むことができる（示されるように、リンカーは、リンカーを抗体コンストラクトに共有結合的に結合するのに適した基を含む）：
2020523319.tif 000054
2020523319.tif 000055
2020523319.tif 000056
（式中、
2020523319.tif 000057
はリンカーと免疫調節化合物またはその塩の結合点を表す）。
【０２６８】
本明細書に記載されるコンジュゲートに含まれ得る構造式（ＩＶｂ）によるリンカーの例示的実施形態は、以下に示されるリンカーを含むことができる（示されるように、リンカーは、リンカーを抗体コンストラクトに共有結合的に結合するのに適した基を含む）：
2020523319.tif 000058
2020523319.tif 000059
2020523319.tif 000060
（式中、
2020523319.tif 000061
はリンカーと免疫調節化合物またはその塩の結合点を表す）。
【０２６９】
本明細書に記載されるコンジュゲートに含まれ得る構造式（ＩＶｃ）によるリンカーの例示的実施形態は、以下に示されるリンカーを含む（示されるように、リンカーは、リンカーを抗体コンストラクトに共有結合的に結合するのに適した基を含む）：
2020523319.tif 000062
2020523319.tif 000063
2020523319.tif 000064
（式中、
2020523319.tif 000065
はリンカーと免疫調節化合物またはその塩の結合点を表す）。
【０２７０】
本明細書に記載されるコンジュゲートに含まれ得る構造式（ＩＶｄ）によるリンカーの例示的実施形態は、以下に示されるリンカーを含む（示されるように、リンカーは、リンカーを抗体に共有結合的に結合するのに適した基を含む）：
2020523319.tif 000066
2020523319.tif 000067
（式中、
2020523319.tif 000068
はリンカーと免疫調節化合物またはその塩の結合点を表す）。
【０２７１】
本明細書に記載されるコンジュゲートに含まれ得る構造式（ＩＶｅ）によるリンカーの例示的実施形態は、以下に示されるリンカーを含む（示されるように、リンカーは、リンカーを抗体コンストラクトに共有結合的に結合するのに適した基を含む）：
2020523319.tif 000069
（式中、
2020523319.tif 000070
はリンカーと免疫調節化合物またはその塩の結合点を表す）。
【０２７２】
切断可能なリンカーは一定の利点を提供することができるが、本明細書に記載されるコンジュゲートに含まれるリンカーは切断可能である必要はない。非切断可能なリンカーについては、免疫調節化合物放出は、血漿といくつかの細胞質画分との間の異なる特性に依存しない可能性がある。免疫調節化合物の放出は、抗原媒介エンドサイトーシスを介した抗体コンストラクト免疫調節化合物コンジュゲートの内部移行、および抗体コンストラクトが細胞内タンパク質分解を介してアミノ酸レベルまで分解され得るリソソーム画分への送達後に起こることができる。この過程によって、免疫調節化合物によって形成される免疫調節化合物誘導体、リンカー、およびリンカーが共有結合的に結合していたアミノ酸残基が放出され得る。非切断可能なリンカーを含む抗体コンストラクト免疫調節化合物コンジュゲートからの免疫調節化合物誘導体は、切断可能なリンカーを含む抗体コンストラクト免疫調節化合物コンジュゲートと比較して親水性で、膜透過性が小さく、小さなバイスタンダー効果および少ない非特異的毒性をもたらし得る。非切断可能なリンカーを含む抗体コンストラクト免疫調節化合物コンジュゲートは、切断可能なリンカーを含む抗体コンストラクト免疫調節化合物コンジュゲートよりも循環中でより大きな安定性を有することができる。非切断可能なリンカーは、アルキレン鎖であり得る、あるいは例えばポリアルキレングリコールポリマー、アミドポリマーに基づくようなポリマーであり得る、あるいはアルキレン鎖、ポリアルキレングリコールおよび／またはアミドポリマーのセグメントを含むことができる。リンカーは、１〜６個のエチレングリコール単位を有するポリエチレングリコールセグメントを含むことができる。
【０２７３】
リンカーは、インビボで非切断可能であり得る、例えば、以下の式：
2020523319.tif 000071
またはその塩（式中、Ｒａは水素、アルキル、スルホネートおよびメチルスルホネートから選択され；ＲＸはリンカーを抗体コンストラクトに共有結合的に結合することができる官能基を含む部分であり；
2020523319.tif 000072
はリンカーと免疫調節化合物またはその塩の結合点を表す）
によるリンカーであり得る。
【０２７４】
本明細書に記載されるコンジュゲートに含まれ得る構造式（Ｖａ）〜（Ｖｅ）によるリンカーの例示的実施形態は、以下に示されるリンカーを含む（示されるように、リンカーは、リンカーを抗体コンストラクトに共有結合的に結合するのに適した基を含み、
2020523319.tif 000073
は免疫調節化合物またはその塩との結合点を表す：
2020523319.tif 000074
2020523319.tif 000075
（式中、
2020523319.tif 000076
はリンカーと免疫調節化合物またはその塩の結合点を表す）。
【０２７５】
リンカーを抗体に結合するために使用される結合基は求電子性であり、例えば、マレイミド基、活性化ジスルフィド、活性エステル、例えばＮＨＳエステルおよびＨＯＢｔエステル、ハロホルメート、酸ハロゲン化物、アルキルおよびベンジルハロゲン化物、例えばハロアセトアミドを含むことができる。本開示により使用することができる「自己安定化」マレイミドおよび「架橋ジスルフィド」に関連する最先端技術も存在する。
【０２７６】
抗体コンジュゲーション条件下で自発的に加水分解して改善した安定性を有するコンジュゲートをもたらす「自己安定化」マレイミド基の一例を以下の概略図に示す。よって、マレイミド結合基を抗体のスルフヒドリルと反応させて、中間体スクシンイミド環を得る。結合基の加水分解形態は、血漿タンパク質の存在下での脱コンジュゲーション（ｄｅｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ）に耐性である。
2020523319.tif 000077
【０２７７】
天然ヒンジジスルフィド結合の還元から誘導されるスルフヒドリル基のペアを架橋する方法が開示されており、これを以下の概略図に示す。この方法の利点は、ＩｇＧの完全な還元（スルフヒドリルの４つのペアをもたらす）、引き続いて４当量のアルキル化剤との反応によって、均質なＤＡＲ４コンジュゲートを合成することができることである。「架橋ジスルフィド」を含むコンジュゲートも増加した安定性を有することが主張されている。
2020523319.tif 000078
【０２７８】
同様に、以下に示されるように、スルフヒドリル基のペアを架橋することができるマレイミド誘導体が開発されている。
2020523319.tif 000079
【０２７９】
結合部分は、以下の構造式（ＶＩａ）、（ＶＩｂ）もしくは（ＶＩｃ）：
2020523319.tif 000080
またはその塩（式中、ＲｑはＨまたは−Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１１−ＣＨ３であり；ｘは０または１であり；ｙは０または１であり；Ｇ２は−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＳＯ３Ｈまたは−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１１−ＣＨ３であり；Ｒｗは−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２ＳＯ３Ｈまたは−ＮＨ（ＣＯ）−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１２−ＣＨ３であり；＊はリンカーの残りとの結合点を表す）
を含むことができる。
【０２８０】
本明細書に記載されるコンジュゲートに含めることができる構造式（ＶＩａ）および（ＶＩｂ）によるリンカーの例示的実施形態は、以下に示されるリンカーを含むことができる（示されるように、リンカーは、リンカーを抗体コンストラクトに共有結合的に結合するのに適した基を含むことができる）：
2020523319.tif 000081
2020523319.tif 000082
2020523319.tif 000083
2020523319.tif 000084
（式中、
2020523319.tif 000085
はリンカーと免疫調節化合物またはその塩の結合点を表す）。
【０２８１】
本明細書に記載される抗体コンストラクト免疫調節化合物コンジュゲートに含めることができる構造式（ＶＩｃ）によるリンカーの例示的実施形態は、以下に示されるリンカーを含むことができる（示されるように、リンカーは、リンカーを抗体コンストラクトに共有結合的に結合するのに適した基を含むことができる）：
2020523319.tif 000086
2020523319.tif 000087
（式中、
2020523319.tif 000088
はリンカーと免疫調節化合物または塩の結合点を表す）。
【０２８２】
当業者によって知られているように、特定のコンジュゲートのために選択されたリンカーは、それだけに限らないが、抗体との結合部位（例えば、リジン、システインまたは他のアミノ酸残基）、ファーマコフォアおよび薬物の親油性を含む種々の因子によって影響を及ぼされ得る。コンジュゲートのために選択された特異的リンカーは、特異的抗体／薬物組み合わせのためにこれらの異なる因子のバランスをとろうとするべきである。
【０２８３】
例えば、細胞傷害性化合物のコンジュゲートは、抗原陽性腫瘍細胞の近くに存在するバイスタンダー抗原陰性細胞の死滅をもたらすことが観察されている。コンジュゲートによるバイスタンダー細胞死滅の機構は、コンジュゲートの細胞内プロセシング中に形成される代謝産物が役割を果たし得ることを示した。抗原陽性細胞でコンジュゲートの代謝によって産生される中性細胞傷害性代謝産物がバイスタンダー細胞死滅で役割を果たすように思われるが、荷電代謝産物が膜を通って培地中に拡散するのが防がれ得るので、バイスタンダー死滅に影響を及ぼすことができない。特定の実施形態では、リンカーが、コンジュゲートの細胞代謝産物によって引き起こされる放出免疫調節化合物またはその誘導体によって引き起こされるバイスタンダー効果を弱めるように選択される。特定の実施形態では、リンカーが、免疫調節化合物のバイスタンダー効果を増加させるように選択される。特定の実施形態では、リンカーが、同じプロセスであるが、免疫調節化合物代謝産物に適用されるプロセスから得られるバイスタンダー効果を増加させるよう選択される。増加されたバイスタンダー効果は、線維性疾患、自己免疫疾患または自己炎症性疾患を治療するための周囲細胞に対する増加された効果であり得る。
【０２８４】
リンカーの特性は、使用および／または貯蔵の条件下でのコンジュゲートの凝集にも影響を及ぼし得る。典型的には、文献で報告されるコンジュゲートは、１抗体分子当たり３〜４個以下の薬物分子を含む。特に、薬物とリンカーの両方が疎水性であった場合、コンジュゲートの凝集により、より高い薬物抗体比（「ＤＡＲ」）を得ようとする試みは通常失敗した。多くの例では、３〜４より高いＤＡＲは、力価を増加させる手段として有益となり得た。免疫調節化合物が疎水性の性質である例では、特に３〜４超のＤＡＲが望まれる例で、コンジュゲート凝集を減少させる手段として、比較的親水性であるリンカーを選択することが望ましくなり得る。よって、特定の実施形態では、リンカーが、貯蔵および／または使用中にコンジュゲートの凝集を減少させる化学部分を組み込む。リンカーは、荷電基または生理的ｐＨ下で帯電する基などの極性または親水性基を組み込んで、コンジュゲートの凝集を減少させ得る。例えば、リンカーは、生理的ｐＨで脱プロトン化する塩もしくは基、例えばカルボキシレート、またはプロトン化する塩もしくは基、例えばアミンなどの荷電基を組み込み得る。
【０２８５】
特定の実施形態では、貯蔵または使用中のコンジュゲートの凝集が、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって決定すると、約４０％未満である。特定の実施形態では、貯蔵または使用中のコンジュゲートの凝集が、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって決定すると、３５％未満、例えば約３０％未満、例えば約２５％未満、例えば約２０％未満、例えば約１５％未満、例えば約１０％未満、例えば約５％未満、例えば約４％未満またはそれ以下である。
【０２８６】
特定の実施形態では、ユビキチンリガーゼ結合部分または第２の部分を、本明細書に記載されるコンジュゲートの免疫調節化合物または第１の部分に結合することができる。ユビキチンリガーゼ結合部分を、１〜２０の範囲の直鎖非水素原子数を有するスペーサーを介して、免疫調節化合物に結合することができる。ユビキチンリガーゼ結合部分を、エーテル、アミド、アルカン、アルケン、アルキン、ケトン、ヒドロキシル、カルボン酸、チオエーテル、スルホキシドおよびスルホンなどの官能基を有するスペーサーを介して、免疫調節化合物に結合することができる。ユビキチンリガーゼ結合部分を、芳香族、複素芳香族、環式、二環式および／または三環式部分を含むリンカーによって、免疫調節化合物に結合することができる。
【０２８７】
リンカーおよびリンカーと免疫調節化合物のリンカー共有結合部位は切断可能であっても非切断可能であってもよい。リンカーは、Ｋｄ測定、細胞ベースのアッセイでの変化した標的タンパク質機能、または両方によって決定して、免疫調節化合物が標的結合を喪失しない可能性があり、免疫調節活性を喪失しない可能性がある部位で免疫調節化合物に結合した非切断可能なリンカーであり得る。リンカー長は、標的タンパク質についてのコンジュゲートの免疫調節化合物の活性を最適化するよう変化させることができる。このようなリンカーは短い、柔軟性、剛性、疎水性または親水性であり得る。リンカーは、柔軟性のセグメントまたは剛性のセグメントなどの異なる特性を有するセグメントを含むことができる。リンカーは細胞外環境に対して化学的に安定であり得る。非限定的な例はマレイミドカプロイルリンカーであり得る。マレイミドカプロイルリンカーはＮ−マレイミドメチルシクロヘキサン−１−カルボキシレートを含むことができる。リンカーは、マレイミドカプロイル基と１つまたは複数のポリエチレングリコール分子の組み合わせであり得る。
【０２８８】
リンカー（Ｌ）は、抗体コンストラクト（例えば、抗体）と共有結合的に結合していてもよい５〜１００個の直鎖非水素原子を含むことができ、ａ）免疫調節化合物と共有結合的に結合していてもよい；ｂ）第２の化合物（Ｃ２）と共有結合的に結合していてもよい５〜１００個の直鎖非水素原子を含むスペーサー（Ｓ）と共有結合的に結合していてもよい免疫調節化合物（Ｃ１）と共有結合的に結合していてもよい（図１Ｃ）；ｃ）免疫調節化合物（Ｃ１）と共有結合的に結合していてもよい５〜１００個の直鎖非水素原子を含むスペーサー（Ｓ）と共有結合的に結合していてもよい第２の化合物（Ｃ２）と共有結合的に結合していてもよい（図１Ｂ）；またはｄ）Ｃ１およびＣ２と共有結合的に結合していてもよいスペーサーと共有結合的に結合していてもよい（図１Ａ）。ｂ）〜ｄ）のいくつかの実施形態では、Ｃ２がＥ３ユビキチンリガーゼ結合部分であり得る。第２の化合物は、結合活性、免疫調節活性または異なる生物活性などの活性を有する。
【０２８９】
リンカー（Ｌ）は、抗体コンストラクト（Ａ）（抗体など）と共有結合的に結合していてもよく、
ｉ）
2020523319.tif 000089
のように疫調節化合物（Ｃ１）と共有結合的に結合していてもよい、または
ｉｉ）
2020523319.tif 000090
のように第２の免疫調節化合物（Ｃ２）と共有結合的に結合した５〜１００個の直鎖非水素原子を含むスペーサー（Ｓ）とそれ自体が共有結合的に結合していてもよい免疫調節化合物（Ｃ１）と共有結合的に結合していてもよい、または
ｉｉｉ）
2020523319.tif 000091
のように第１の免疫調節化合物（Ｃ１）と共有結合的に結合した５〜１００個の直鎖非水素原子を含むスペーサー（Ｓ）と共有結合的に結合していてもよい免疫調節化合物（Ｃ２）と共有結合的に結合していてもよい、または
ｉｖ）
2020523319.tif 000092
のように２つの免疫調節化合物（Ｃ１およびＣ２）と共有結合的に結合した５〜１００個の直鎖非水素原子を含むスペーサー（Ｓ）と共有結合的に結合していてもよい
５〜１００個の直鎖非水素原子を含むことができる。
【０２９０】
いくつかの実施形態では、Ｃ２は、Ｃ１−Ｓ−Ｃ２が一緒になってタンパク質分解標的化キメラ（ＰＲＯＴＡＣ）複合体（タンパク質分解標的化モジュールまたはＰＴＭとも呼ばれる）を形成することができるようなＥ３ユビキチンリガーゼ結合部分である。
【０２９１】
いくつかの実施形態では、式：
2020523319.tif 000093
によって表されるように、免疫調節化合物（ＩＭＣ）などのタンパク質標的化部分が、スペーサー（Ｓ）を介してＥ３ユビキチンリガーゼ結合部分（ＵＬＭ）と共有結合的に結合しており、リンカー（Ｌ）がスペーサー（ｓ）と共有結合的に結合しており、ｎが１〜２０であり、ｚが１〜２０である。
【０２９２】
いくつかの実施形態では、Ｌが切断可能なリンカーである。切断可能なリンカーは、リンカーの節で上に記載されるペプチドリンカーまたは他の切断可能なリンカーであり得る。いくつかの実施形態では、Ｌが非切断可能なリンカーである。いくつかの実施形態では、コンジュゲートのＦｃドメインがＦｃヌルである。いくつかの実施形態では、ＦｃドメインがＦｃγ受容体に結合することができる野生型ＩｇＧである。いくつかの実施形態では、ＦｃドメインがＦｃ受容体に結合することができ、コンジュゲートのＦｃドメインとＦｃ受容体の結合についてのＫｄが、コントロール抗体コンストラクトとＦｃ受容体の結合についてのＫｄの約１００倍以下であり、コントロール抗体コンストラクトが非コンジュゲート抗体コンストラクトである。いくつかの実施形態では、コンジュゲートのＩＭＣとタンパク質活性部位の結合についてのＫｄが、コントロール化合物とタンパク質活性部位の結合についてのＫｄの１００倍以下である、またはコンジュゲートのＩＭＣのＩＣ５０がコントロール化合物のＩＣ５０の３００倍以下であり、コントロール化合物が遊離ＩＭＣである。
【０２９３】
いくつかの実施形態では、式：
2020523319.tif 000094
によって表されるように、免疫調節化合物（ＩＭＣ）などのタンパク質標的化部分が、スペーサー（Ｓ）を介してＥ３ユビキチンリガーゼ結合部分（ＵＬＭ）と共有結合的に結合しており、リンカー（Ｌ）がタンパク質標的化部分と共有結合的に結合しており、ｎが１〜２０であり、ｚが１〜２０である。
【０２９４】
いくつかの実施形態では、Ｌが切断可能なリンカーである。切断可能なリンカーは、リンカーの節で上に記載されるペプチドリンカーまたは他の切断可能なリンカーであり得る。いくつかの実施形態では、Ｌが非切断可能なリンカーである。いくつかの実施形態では、コンジュゲートのＦｃドメインがＦｃヌルである。いくつかの実施形態では、ＦｃドメインがＦｃγ受容体に結合することができる野生型ＩｇＧである。いくつかの実施形態では、ＦｃドメインがＦｃ受容体に結合することができ、コンジュゲートのＦｃドメインとＦｃ受容体の結合についてのＫｄが、コントロール抗体コンストラクトとＦｃ受容体の結合についてのＫｄの約１００倍以下であり、コントロール抗体コンストラクトが非コンジュゲート抗体コンストラクトである。いくつかの実施形態では、コンジュゲートのＩＭＣとタンパク質活性部位の結合についてのＫｄが、コントロール化合物とタンパク質活性部位の結合についてのＫｄの１００倍以下である、またはコンジュゲートのＩＭＣのＩＣ５０がコントロール化合物のＩＣ５０の３００倍以下であり、コントロール化合物が遊離ＩＭＣである。
【０２９５】
いくつかの実施形態では、式：
2020523319.tif 000095
によって表されるように、免疫調節化合物（ＩＭＣ）などのタンパク質標的化部分が、スペーサー（Ｓ）を介してＥ３ユビキチンリガーゼ結合部分（ＵＬＭ）と共有結合的に結合しており、リンカーＬがユビキチンＥ３リガーゼ部分（ＵＬＭ）と共有結合的に結合しており、ｎが１〜２０であり、ｚが１〜２０である。
【０２９６】
いくつかの実施形態では、Ｌが切断可能なリンカーである。切断可能なリンカーは、リンカーの節で上に記載されるペプチドリンカーまたは他の切断可能なリンカーであり得る。いくつかの実施形態では、Ｌが非切断可能なリンカーである。いくつかの実施形態では、コンジュゲートのＦｃドメインがＦｃヌルである。いくつかの実施形態では、ＦｃドメインがＦｃγ受容体に結合することができる野生型ＩｇＧである。いくつかの実施形態では、ＦｃドメインがＦｃ受容体に結合することができ、コンジュゲートのＦｃドメインとＦｃ受容体の結合についてのＫｄが、コントロール抗体コンストラクトとＦｃ受容体の結合についてのＫｄの約１００倍以下であり、コントロール抗体コンストラクトが非コンジュゲート抗体コンストラクトである。いくつかの実施形態では、コンジュゲートのＩＭＣとタンパク質活性部位の結合についてのＫｄが、コントロール化合物とタンパク質活性部位の結合についてのＫｄの１００倍以下である、またはコンジュゲートのＩＭＣのＩＣ５０がコントロール化合物のＩＣ５０の３００倍以下であり、コントロール化合物が遊離ＩＭＣである。
【０２９７】
特定の実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合部分が、スペーサーを介して、本明細書に記載されるコンジュゲートの免疫調節化合物などのタンパク質標的化部分と結合している。特定の実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合部分を、１〜２５または１〜２０の範囲の直鎖非水素原子数を有するスペーサーを介してタンパク質標的化部分に結合することができる。特定の実施形態では、スペーサーが、５〜２０個または５〜１５個の直鎖非水素原子を有する。スペーサーは、典型的には非切断可能である。
【０２９８】
Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合部分を、エーテル、アミド、アルカン、アルケン、アルキン、ケトン、ヒドロキシル、カルボン酸、チオエーテル、スルホキシドおよびスルホンなどの官能基を有するタンパク質標的化部分のスペーサーに結合することができる。Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合部分を、芳香族、複素芳香族、環式、二環式および／または三環式部分を含むスペーサーを介して、タンパク質標的化部分のスペーサーに結合することができる。
【０２９９】
スペーサー長は、標的タンパク質についてのタンパク質標的化部分の活性を最適化するよう変化させることができる。いくつかの実施形態では、スペーサーが非切断可能であり、１〜２５、１〜２０、１〜１５、５〜２５、５〜２０または５〜１５の直鎖非水素原子長を有する、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、−（ＣＨ２Ｏ）−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）−、−（ＣＨ２ＯＣＨ２）−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＨ−および−Ｏ−のセグメントを含む。スペーサーは場合により、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル、−（ＣＨ２Ｏ）ｎ１Ｈ、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ１Ｈ、−（ＣＨ２Ｏ）ｎ１ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＯＨまたは−ＮＨ２（式中、ｎ１は１〜８である）で置換されていてもよく、場合によりさらに反応基ＲＸを含んで、エーテル、アミド、アルカン、アルケン、アルキン、ケトン、ヒドロキシル、カルボン酸、チオエーテル、スルホキシドおよびスルホンなどの官能基を形成して、リンカー（Ｌ）との結合を形成してもよい。いくつかの実施形態では、スペーサーが非置換ではない。いくつかの実施形態では、スペーサーがＲＸで置換されている。
【０３００】
スペーサーはＣ１〜２５アルキレンまたは置換されていてもよいＣ１〜２５ヘテロアルキレンであり得、ヘテロアルキレンは、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ２−および−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−から独立に選択される１つまたは複数の基が散在したＣ１〜２４アルキレン鎖である。スペーサーはまた場合により、アミド結合、エステル結合、エーテル結合、カルボネート結合、カルバメート結合またはチオエーテル結合などの官能基を形成することができる反応性基ＲＸで置換されていてもよく；このような反応性基は、例えばアミノ基；カルボキシル基；アルデヒド基；アジド基；アルキンおよびアルケン基；ケトン；カルボネート；シアノおよびスクシンイミジルなどの脱離基と結合したカルボニル官能基ならびにヒドロキシル基であり得る。いくつかの実施形態では、ＲＸが−ＮＨ２−、−Ｓまたはマレイミドであり得る。いくつかの実施形態では、ＲＸが−ＮＨ２である。スペーサーはまた場合により、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル、−（ＣＨ２Ｏ）ｎ１Ｈ、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ１Ｈ、−（ＣＨ２Ｏ）ｎ１ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＯＨまたは−ＮＨ２（式中、ｎ１は１〜８である）で置換されていてもよい。いくつかの実施形態では、スペーサーが非置換ではない。いくつかの実施形態では、スペーサーがＲＸで置換されている。
【０３０１】
特定の実施形態では、スペーサー（Ｓ）が、式−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１００）Ｒ１０１Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１００）−、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０１Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０１Ｎ（Ｒ１００）−、−Ｎ（Ｒ１００）Ｒ１０１Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ１００）Ｃ（Ｏ）Ｒ１０１Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ１００）Ｃ（Ｏ）Ｒ１０１Ｎ（Ｒ１００）−、−Ｎ（Ｒ１００）Ｒ１０１Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１００）−、−Ｎ（Ｒ１００）Ｃ（Ｏ）Ｒ１０１Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１００）−、−Ｎ（Ｒ１００）Ｃ（Ｏ）Ｒ１０１Ｎ（Ｒ１００）Ｃ（Ｏ）−および−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１００）Ｒ１０１Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１００）−を有し；各Ｒ１００がＨまたはＣ１〜Ｃ３アルキルから独立に選択され、Ｒ１０１が、各場合で、リンカー（Ｌ）との結合のために反応性部分ＲＸで置換されていてもよい、−Ｃ１〜Ｃ２５アルキレン−、−Ｃ１〜Ｃ２５アルケニレン−、−Ｃ１〜Ｃ２５アルキンレン−、−Ｃ１〜Ｃ１２アルキレン（ＣＨ２Ｏ）ｎＣ１〜Ｃ１５アルキレン−、−Ｃ１〜Ｃ１２アルキレン（（ＣＨ２ＯＣＨ２）ｎＣ１〜Ｃ１２アルキレン−、−Ｃ１〜Ｃ１２アルキレン（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＣ１〜Ｃ１２アルキレン−、−Ｃ１〜Ｃ１２アルケニレン−（（ＣＨ２Ｏ）ｎＣ１〜Ｃ１２アルキレン−、−Ｃ１〜Ｃ１２アルケニレン−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＣ１〜Ｃ１２アルキレン−、−Ｃ１〜Ｃ１２アルケニレン−（（ＣＨ２ＯＣＨ２）ｎＣ１〜Ｃ１２アルキレン−、−Ｃ１〜Ｃ１２アルキレン−（ＣＨ２Ｏ）ｎＣ１〜Ｃ１２アルケニレン−、−Ｃ１〜Ｃ１２アルキレン−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＣ１〜Ｃ１２アルケニレン−、−Ｃ１〜Ｃ１２アルキレン−（ＣＨ２ＯＣＨ２）ｎＣ１〜Ｃ１２アルケニレン−、−Ｃ１〜Ｃ１２アルキニレン−（ＣＨ２Ｏ）ｎＣ１〜Ｃ１２アルキレン−、−Ｃ１〜Ｃ１２アルキニレン−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＣ１〜Ｃ１２アルキレン−、−Ｃ１〜Ｃ１２アルキニレン−（ＣＨ２ＯＣＨ２）ｎＣ１〜Ｃ１２アルキレン−、−Ｃ１〜Ｃ１２アルキニレン−（ＣＨ２Ｏ）ｎＣ１〜Ｃ１２アルケニレン−、−Ｃ１〜Ｃ１２アルキニレン−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＣ１〜Ｃ１２アルケニレン−、−Ｃ１〜Ｃ１２アルキニレン−（ＣＨ２ＯＣＨ２）ｎＣ１〜Ｃ１２アルケニレン−、−Ｃ１〜Ｃ１２アルキニレン−（ＣＨ２Ｏ）ｎＣ１〜Ｃ１２アルキニレン−、−Ｃ１〜Ｃ１２アルキニレン−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＣ１〜Ｃ１２アルキニレン−、−Ｃ１〜Ｃ１２アルキニレン−（ＣＨ２ＯＣＨ２）ｎＣ１〜Ｃ１２アルキニレン−であり、ｎが０〜８である。ＲＸは、アミド結合、エステル結合、エーテル結合、カルボネート結合、カルバメート結合またはチオエーテル結合を形成することができる反応性基であり得；このような反応性基は、例えばアミノ基；カルボキシル基；アルデヒド基；アジド基；アルキンおよびアルケン基；ケトン；カルボネート；シアノおよびスクシンイミジルなどの脱離基と結合したカルボニル官能基ならびにヒドロキシル基であり得る。いくつかの実施形態では、ＲＸが−ＮＨ２−、−Ｓまたはマレイミドであり得る。いくつかの実施形態では、ＲＸが−ＮＨ２である。
【０３０２】
特定の実施形態では、スペーサー（Ｓ）が、グルタメート、グリシン−グルタメートジペプチド、グリシン−ＰＥＧ１−グルタメート、グリシン−ＰＥＧ２−グルタメート、グリシン−ＰＥＧ３−グルタメート、グリシン−ＰＥＧ４−グルタメートまたはグリシン−ＰＥＧ５−グルタメートを含み、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合部分およびタンパク質標的化部分がアミド結合を介してスペーサーと結合している。
【０３０３】
Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合部分は、Ｖｏｎ  Ｈｉｐｐｅｌ−Ｌｉｎｄａｕｅ  Ｅ３ユビキチンリガーゼ（ＶＨＬ）、セレブロン、マウス二重微小染色体２ホモログ（ＭＤＭ２）、ＡＭＦＲ、ＡＰＣ／Ｃｄｃ２０、ＡＰＣ／Ｃｄｈ１、Ｃ６ｏｒｆ１５７、Ｃｂｌ、ＣＢＬＬ１、ＣＨＦＲ、ＣＨＩＰ、ＤＴＬ（Ｃｄｔ２）、Ｅ６−ＡＰ、ＨＡＣＥ１、ＨＥＣＴＤ１、ＨＥＣＴＤ２、ＨＥＣＴＤ３、ＨＥＣＷ１、ＨＥＣＷ２、ＨＥＲＣ２、ＨＥＲＣ３、ＨＥＲＣ４、ＨＥＲＣ５、ＨＵＷＥ１、ＨＹＤ、ＩＴＣＨ、ＬＮＸ１、マホグニン、ＭＡＲＣＨ−Ｉ、ＭＡＲＣＨ−ＩＩ、ＭＡＲＣＨ−ＩＩＩ、ＭＡＲＣＨ−ＩＶ、ＭＡＲＣＨ−ＶＩ、ＭＡＲＣＨ−ＶＩＩ、ＭＡＲＣＨ−ＶＩＩＩ、ＭＡＲＣＨ−Ｘ、ＭＥＫＫ１、ＭＩＢ１、ＭＩＢ２、ＭｙｃＢＰ２、ＮＥＤＤ４、ＮＥＤＤ４Ｌ、パーキン、ＰＥＬＩ１、Ｐｉｒｈ２、ＰＪＡ１、ＰＪＡ２、ＲＦＦＬ、ＲＦＷＤ２、Ｒｉｃｔｏｒ、ＲＮＦ５、ＲＮＦ８、ＲＮＦ１９、ＲＮＦ１９０、ＲＮＦ２０、ＲＮＦ３４、ＲＮＦ４０、ＲＮＦ１２５、ＲＮＦ１２８、ＲＮＦ１３８、ＲＮＦ１６８、ＳＣＦ／β−ＴｒＣＰ、ＳＣＦ／ＦＢＷ７、ＳＣＦ／Ｓｋｐ２、ＳＨＰＲＨ、ＳＩＡＨ１、ＳＩＡＨ２、ＳＭＵＲＦ１、ＳＭＵＲＦ２、ＴＯＰＯＲＳ、ＴＲＡＦ６、ＴＲＡＦ７、ＴＲＩＭ６３、ＵＢＥ３Ｂ、ＵＢＥ３Ｃ、ＵＢＲ１、ＵＢＲ２、ＵＨＲＦ２、ＷＷＰ１、ＷＷＰ２、またはＺＮＲＦ１などのＥ３ユビキチンリガーゼに結合することができる。
【０３０４】
他の実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合部分が、Ｖｏｎ  Ｒｉｐｐｅｌ−Ｌｉｎｄａｕ（ＶＨＬ）、セレブロン、ＸＩＡＰ、Ｅ３Ａ、ＭＤＭ２、後期促進複合体（ＡＰＣ）、ＵＢＲ５（ＥＤＤＩ）、ＳＯＣＳ／ＢＣ−ｂｏｘ／ｅｌｏＢＣ／ＣＵＬ５／ＲＩＮＧ、ＬＮＸｐ８０、ＣＢＸ４、ＣＢＬＬＩ、ＨＡＣＥＩ、ＨＥＣＴＤＩ、ＨＥＣＴＤ２、ＨＥＣＴＤ３、ＨＥＣＷＩ、ＨＥＣＷ２、ＨＥＲＣＩ、ＨＥＲＣ２、ＨＥＲＣ３、ＨＥＲＣ４、ＨＵＷＥＩ、ＩＴＣＨ、ＮＥＤＤ４、ＮＥＤＤ４Ｌ、ＰＰＩＬ２、ＰＲＰＦＩ９、ＰＩＡＳＩ、ＰＩＡＳ２、ＰＩＡＳ３、ＰＩＡＳ４、ＲＡＮＢＰ２、ＲＮＦ４、ＲＢＸＩ、ＳＭＵＲＦＩ、ＳＭＵＲＦ２、ＳＴＵＢ  Ｉ、ＴＯＰＯＲＳ、ＴＲＩＰＩ２、ＵＢＥ３Ａ、ＵＢＥ３Ｂ、ＵＢＥ３Ｃ、ＵＢＥ４Ａ、ＵＢＥ４Ｂ、ＵＢＯＸ５、ＵＢＲ５、ＷＷＰＩ、ＷＷＰ２、パーキン、Ａ２０／ＴＮＦＡＩＰ３、ＡＭＦＲ／ｇｐ７８、ＡＲＡ５４、β−ＴｒＣＰＩ／ＢＴＲＣ、ＢＲＣＡＩ、ＣＢＬ、ＣＨＩＰ／ＳＴＵＢ  Ｉ、Ｅ６、Ｅ６ＡＰ／ＵＢＥ３Ａ、Ｆボックスタンパク質Ｉ５／ＦＢＸＯＩ５、ＦＢＸＷ７／Ｃｄｃ４、ＧＲＡＩＬ／ＲＮＦＩ２８、ＨＯＩＰ／ＲＮＦ３  Ｉ、ｃＩＡＰ−Ｉ／ＨＩＡＰ−２、ｃＩＡＰ−２／ＨＩＡＰ−Ｉ、ｃＩＡＰ（ｐａｎ）、ＩＴＣＨ／ＡＩＰ４、ＫＡＰＩ、ＭＡＲＣＨ８、Ｍｉｎｄ  Ｂｏｍｂ  Ｉ／ＭＩＢＩ、Ｍｉｎｄ  Ｂｏｍｂ  ２／ＭＩＢ２、ＭｕＲＦＩ／ＴＲＩＭ６３、ＮＤＦＩＰＩ、ＮＥＤＤ４、ＮｌｅＬ、パーキン、ＲＮＦ２、ＲＮＦ４、ＲＮＦ８、ＲＮＦＩ６８、ＲＮＦ４３、ＳＡＲＴＩ、Ｓｋｐ２、ＳＭＵＲＦ２、ＴＲＡＦ−Ｉ、ＴＲＡＦ−２、ＴＲＡＦ−３、ＴＲＡＦ−４、ＴＲＡＦ−５、ＴＲＡＦ−６、ＴＲＩＭＳ、ＴＲＩＭ２Ｉ、ＴＲＩＭ３２、ＵＢＲ５およびＺＮＲＦ３から選択されるＥ３ユビキチンリガーゼから選択され得る。
【０３０５】
さらなる実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼが、以下の型から選択され得る：ＨＥＣＴ型、ＲＩＮＧ型、パーキンフィンガー型、ＲＩＮＧ変異体型、Ｕボックス型、Ａ２０フィンガー型、ＰＩＡＳフィンガー型、ＰＨＤフィンガー型、Ｓｋｐ１様型、カリン型、Ｆボックス型、ＳＯＣＳボックス型、ＢＴＢ型、ＤＤＢ１様型およびＡＰＣ／サイクロソーム型。
【０３０６】
Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合部分は、（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ１−（４−（５−アミノ−６−（（４−モルホリノピリジン−３−イル）カルバモイル）ピラジン−２−ｙｌ）ベンジル）−Ｎ５−（２−（３−（（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，４Ｒ）−４−ヒドロキシ−２−（（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）ベンジル）カルバモイル）ピロリジン−１−イル）−３，３−ジメチル−１−オキソブタン−２−イル）アミノ）−３−オキソプロポキシ）エチル）ペンタンジアミド（実施例１）などのＶＨＬ結合部分または３−アミノ−６−（４−（２−（（２Ｓ）−２−アミノ−６−（２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミド）ヘキサンアミド）エチル）フェニル）−Ｎ−（４−モルホリノピリジン−３−イル）ピラジン−２−カルボキサミド（実施例２）などのセレブロン結合部分であり得る。
【０３０７】
特定の実施形態では、リンカー（Ｌ）が、スペーサーの反応性部位ＲＸでＰＴＭと結合している。特定の実施形態では、リンカー（Ｌ）が、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合部分の結合部位を介してＰＴＭと結合している。特定の実施形態では、リンカー（Ｌ）が、タンパク質標的化部分の結合部位を介してＰＴＭと結合している。
【０３０８】
リンカー（Ｌ）および／またはリンカー（Ｌ）とタンパク質分解標的化モジュールの共有結合部位（複数可）は切断可能であっても非切断可能であってもよい。特定の実施形態では、リンカーが切断可能である。特定の実施形態では、リンカーが非切断可能である。いくつかの実施形態では、リンカーが非切断可能であり、タンパク質標的化部分がそのタンパク質標的に結合することができ、活性である場合、Ｋｄ測定、細胞ベースのアッセイでの変化した標的タンパク質機能または両方によって決定して、免疫調節活性を喪失しない部位でタンパク質分解標的化モジュールと結合している。リンカー長は、標的タンパク質についてのタンパク質標的化部分の活性を最適化するよう変化させることができる。このようなリンカーは短い、柔軟性、剛性、親水性または疎水性であり得る。リンカーは、柔軟性のセグメントまたは剛性のセグメントなどの異なる特性を有するセグメントを含むことができる。リンカーは細胞外環境に対して化学的に安定であり得る。非限定的な例はマレイミドカプロイルリンカーであり得る。マレイミドカプロイルリンカーはＮ−マレイミドメチルシクロヘキサン−１−カルボキシレートを含むことができる。
【０３０９】
いくつかの実施形態では、リンカー（Ｌ）が切断可能なリンカーであり、上に示される式ＩＩａ、ＩＩｂ、ＩＩｃ、ＩＩＩａ、ＩＩＩｂ、ＩＩＩｃ、ＩＩＩｄ、ＩＶａ、ＩＶｂ、ＩＶｃ、ＩＶｄおよびＩＶｅならびにその中の特定の構造のリンカーから選択され得る。
【０３１０】
リンカー（Ｌ）は、マレイミドカプロイル基と１つまたは複数のポリエチレングリコール分子の組み合わせであり得る。
【０３１１】
リンカー（Ｌ）は、抗体コンストラクトと共有結合的に結合していてもよい５〜１００個の直鎖非水素原子を含み得る。
【０３１２】
いくつかの実施形態では、タンパク質分解標的化モジュールのタンパク質標的化部分が、ＰＩ３Ｋ阻害剤、カルシニューリン阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＢＴＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、ＣＲＡＣ阻害剤、ＰＡＲＰ１アンタゴニスト、ＰＰＡＲｇアゴニスト、Ｋｖ１．３アンタゴニスト、ＫＣａ３．１アンタゴニスト、ＰＰ２Ａアゴニスト、ＩＲＡＫ４阻害剤、ＭＹＤ８８阻害剤、ＢＣＬ−２アンタゴニスト、Ａ２ａＲアゴニスト、ＴＬＲ７アンタゴニスト、ｃ−ＫＩＴキナーゼ阻害剤、ＫＣＡ３．１アゴニスト、ＴＧＦβＲ１阻害剤、ＴＧＦβＲ２阻害剤、ＡＣＣアンタゴニスト、ＡＳＫ１アンタゴニスト、ＧＬＩ１阻害剤、ＴＮＫＳアンタゴニストもしくはＴＮＩＫアンタゴニスト、またはこれらのいずれかの組み合わせなどのアンタゴニストであり得る。
【０３１３】
いくつかの実施形態では、タンパク質標的化部分が、ＣＳＦＲ１、ＲＯＮ／ＭＳＴ１、ＰＩ３Ｋｄ、ＰＩ３Ｋｇ、ＰＡＲＰ１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＰ２Ａ、Ａ２ａｒ、ＴＹＲＯ３、ＡＸＬまたはＭＥＲに結合する。特定の実施形態では、タンパク質標的化部分が、ＣＳＦＲ１、ＲＯＮ／ＭＳＴ１、ＰＩ３Ｋｄ、ＰＩ３Ｋｇ、ＰＡＲＰ１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＰ２Ａ、Ａ２ａｒ、ＴＹＲＯ３、ＡＸＬまたはＭＥＲのアンタゴニストまたは阻害剤である。
【０３１４】
他の実施形態では、タンパク質標的化部分が、ＰＡＭＰ分子またはＤＡＭＰ分子などのパターン認識受容体（ＰＲＲ）アゴニストであり得る。いくつかの実施形態では、タンパク質標的化部分が、Ｔｏｌｌ様受容体アゴニスト、ＲＩＧ−Ｉアゴニスト、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＧＰＣＲアゴニスト、イオンチャネルアゴニスト、膜輸送体アゴニストまたはＥＲタンパク質アゴニストであり得る。
【０３１５】
特定の実施形態では、抗体コンストラクト（抗体など）が、カドヘリン１１、ＰＤＰＮ、インテグリンα４β７、インテグリンα２ｂ１、ＭＡＤＣＡＭ、ネフリン、ポドシン、ＩＦＮＡＲ１、ＢＤＣＡ、ＣＤ３０、ｃ−ＫＩＴ、ＦＡＰ、ＣＤ７３、ＣＤ３８、ＰＤＧＦＲβ、インテグリンαｖβ１、インテグリンαｖβ３、インテグリンαｖβ８、ＧＡＲＰ、エンドシアリン、ＣＴＧＦ、インテグリンαｖβ６、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＴＮＦＲ２、ＤＥＣ２０５、ＤＣＩＲ、ＣＤ８６、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ４５ＲＯ、ＭＨＣクラスＩＩおよびＣＤ２５から選択される第１の抗原に特異的に結合する。いくつかの態様では、第１の抗原が、カドヘリン１１、ＰＤＰＮ、インテグリンα４β７、インテグリンα２β１、ＭＡＤＣＡＭ、ネフリン、ポドシン、ＩＦＮＡＲ１、ＢＤＣＡ２、ＣＤ３０、ｃ−ＫＩＴ、ＦＡＰ、ＣＤ７３、ＣＤ３８、ＰＤＧＦＲβ、インテグリンαｖβ１、インテグリンαｖβ３、インテグリンαｖβ８、ＧＡＲＰ、エンドシアリン、ＣＴＧＦ、インテグリンαｖβ６、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＴＮＦＲ２、ＤＥＣ２０５、ＤＣＩＲ、ＣＤ８６、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ４５ＲＯ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＣＤ２５、ＬＲＲＣ１５およびカドヘリン１１から選択される。いくつかの実施形態では、抗体コンストラクトが、カドヘリン１１、ＰＤＰＮ、ＬＲＲＣ１５、インテグリンα４β７、インテグリンα２β１、ＭＡＤＣＡＭ、ネフリン、ポドシン、ＩＦＮＡＲ１、ＢＤＣＡ２、ＣＤ３０、ｃ−ＫＩＴ、ＦＡＰ、ＣＤ７３、ＣＤ３８、ＰＤＧＦＲβ、インテグリンαｖβ１、インテグリンαｖβ３、インテグリンαｖβ８、ＧＡＲＰ、エンドシアリン、ＣＴＧＦ、インテグリンαｖβ６、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＴＮＦＲ２、ＤＥＣ２０５、ＤＣＩＲ、ＣＤ８６、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ４５ＲＯ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＣＤ２５、ＭＭＰ１４、ＧＰＸ８およびＦ２ＲＬ２から選択される第１の抗原に結合する。いくつかの実施形態では、抗体コンストラクトが、カドヘリン１１、ＦＡＰ、ＴＮＦＲ２またはＬＲＲＣ１５から選択される第１の抗原に結合する。いくつかの態様では、抗体コンストラクトが、ＦＡＰおよびカドヘリン１１から選択される第１の抗原に結合する。いくつかの態様では、抗体コンストラクトが、ＬＲＲＣ１５から選択される第１の抗原に結合する。
【０３１６】
特定の実施形態では、抗体コンストラクトが、Ｔ細胞、Ｂ細胞、星細胞、内皮細胞、腫瘍細胞、ＡＰＣ、線維芽細胞、線維細胞、筋線維芽細胞、滑膜線維芽細胞、有足細胞または線維症の発病に関連する細胞上の抗原に特異的に結合する。特定の実施形態では、抗体コンストラクトが、Ｔ細胞、ＡＰＣおよび／またはＢ細胞上の抗原に特異的に結合する。特定の実施形態では、抗体コンストラクトが、ＰＤ−１、ＧＡＲＰ、ＣＤ２５、ＰＤ−Ｌ１またはＴＮＦＲ２からなる群から選択される抗原に特異的に結合する。特定の実施形態では、抗体コンストラクトが、星細胞、内皮細胞、線維芽細胞、線維細胞、有足細胞または線維症の発病に関与する細胞上の抗原に特異的に結合する。特定の実施形態では、抗体コンストラクトが、ＰＤＧＦＲβ、インテグリンαｖβ１、インテグリンαｖβ３、インテグリンαｖβ６、インテグリンαｖβ８、エンドシアリン、ＦＡＰ、ＡＤＡＭ１２、ＬＲＲＣ１５、ＭＭＰ１４、ＰＤＰＮ、ＣＤＨ１１およびＦ２ＲＬ２からなる群から選択される抗原に特異的に結合する。特定の実施形態では、抗体コンストラクトが、ＦＡＰ、ＡＤＡＭ１２、ＬＲＲＣ１５、ＭＭＰ１４、ＰＤＰＮ、ＣＤＨ１１およびＦ２ＲＬ２からなる群から選択される抗原に特異的に結合する。
【０３１７】
薬学的製剤
本明細書に記載されるコンジュゲートおよび方法は、それを必要とする対象に投与するための薬学的組成物として有用であるとみなされ得る。薬学的組成物は、少なくとも本明細書に記載されるコンジュゲートと、１つまたは複数の薬学的に許容される担体、希釈剤、賦形剤、安定剤、分散剤、懸濁剤および／または増粘剤とを含み得る。薬学的組成物は、抗体コンストラクトと、リンカーと、ＰＩ３Ｋ阻害剤、カルシニューリン阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＢＴＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、ＣＲＡＣ阻害剤、ＰＡＲＰ１アンタゴニスト、ＰＰＡＲｇアゴニスト、Ｋｖ１．３アンタゴニスト、ＫＣａ３．１アンタゴニスト、ＰＰ２Ａアゴニスト、ＩＲＡＫ４阻害剤、ＭＹＤ８８阻害剤、ＢＣＬ−２アンタゴニスト、Ａ２ａＲアゴニスト、ＴＬＲ７アンタゴニスト、ｃ−ＫＩＴキナーゼ阻害剤、ＫＣＡ３．１アゴニスト、ＴＧＦβＲ１阻害剤、ＴＧＦβＲ２阻害剤、ＡＣＣアンタゴニスト、ＡＳＫ１アンタゴニスト、ＧＬＩ１阻害剤、ＴＮＫＳアンタゴニストまたはＴＮＩＫアンタゴニストとを有するコンジュゲートを含み得る。薬学的組成物は、抗体コンストラクトと、リンカーと、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβＲ１またはＴＧＦβＲ２阻害剤とを有するコンジュゲートを含み得る。薬学的組成物は、抗体コンストラクトと、リンカーと、ＴＧＦβＲ１またはＴＧＦβＲ２阻害剤とを有するコンジュゲートを含み得る。薬学的組成物は、抗体コンストラクトと、リンカーと、ＴＧＦβＲ１阻害剤とを有するコンジュゲートを含み得る。薬学的組成物は、抗体コンストラクトと、リンカーと、ＴＧＦβＲ２阻害剤とを有するコンジュゲートを含み得る。薬学的組成物は、第２の抗原結合ドメインを含む抗体コンストラクトと、リンカーと、ＰＩ３Ｋ阻害剤、カルシニューリン阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＢＴＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、ＣＲＡＣ阻害剤、ＰＡＲＰ１アンタゴニスト、ＰＰＡＲｇアゴニスト、Ｋｖ１．３アンタゴニスト、ＫＣａ３．１アンタゴニスト、ＰＰ２Ａアゴニスト、ＩＲＡＫ４阻害剤、ＭＹＤ８８阻害剤、ＢＣＬ−２アンタゴニスト、Ａ２ａｒアゴニスト、ＴＬＲ７アンタゴニスト、ｃ−ＫＩＴキナーゼ阻害剤、ＫＣＡ３．１アゴニスト、ＴＧＦβＲ１阻害剤、ＴＧＦβＲ２阻害剤、ＡＣＣアンタゴニスト、ＡＳＫ１アンタゴニスト、ＧＬＩ１阻害剤、ＴＮＫＳアンタゴニストまたはＴＮＩＫアンタゴニストとを有するコンジュゲートを含み得る。薬学的組成物は、第２の抗原結合ドメインを含む抗体コンストラクトと、リンカーと、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβＲ１またはＴＧＦβＲ２阻害剤とを有するコンジュゲートを含み得る。薬学的組成物は、第２の抗原結合ドメインを含む抗体コンストラクトと、リンカーと、ＴＧＦβＲ２阻害剤とを有するコンジュゲートを含み得る。薬学的組成物は、本明細書に記載されるいずれかのコンジュゲートを含み得る。抗体コンストラクトは抗ＬＲＲＣ１５抗体であり得る。抗体コンストラクトは抗ＦＡＰ抗体であり得る。抗体コンストラクトは抗ＣＤＨ１１抗体であり得る。抗体コンストラクトは抗ＴＮＦＲ２抗体であり得る。抗体コンストラクトは、所望の抗原に対する抗原結合特異性を付与する、それぞれ表１および／または表２の配列のセットまたはペアを含み得る。コンジュゲートは、所望の抗原に対する抗原結合特異性を付与する、それぞれ表１および／または表２の配列のセットまたはペアを含む抗体コンストラクトと、リンカーと、ＰＩ３Ｋ阻害剤、カルシニューリン阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＢＴＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、ＣＲＡＣ阻害剤、ＰＡＲＰ１アンタゴニスト、ＰＰＡＲｇアゴニスト、Ｋｖ１．３アンタゴニスト、ＫＣａ３．１アンタゴニスト、ＰＰ２Ａアゴニスト、ＩＲＡＫ４阻害剤、ＭＹＤ８８阻害剤、ＢＣＬ−２アンタゴニスト、Ａ２ａｒアゴニスト、ＴＬＲ７アンタゴニスト、ｃ−ＫＩＴキナーゼ阻害剤、ＫＣＡ３．１アゴニスト、ＴＧＦβＲ１阻害剤、ＴＧＦβＲ２阻害剤、ＡＣＣアンタゴニスト、ＡＳＫ１アンタゴニスト、ＧＬＩ１阻害剤、ＴＮＫＳアンタゴニストまたはＴＮＩＫアンタゴニストとを含み得る。コンジュゲートは、所望の抗原に対する抗原結合特異性を付与する、それぞれ表１および／または表２の配列のセットまたはペアを含む抗原結合ドメイン（複数可）を含む抗体コンストラクトと、リンカーと、ＰＩ３Ｋ阻害剤、カルシニューリン阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＢＴＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、ＣＲＡＣ阻害剤、ＰＡＲＰ１アンタゴニスト、ＰＰＡＲｇアゴニスト、Ｋｖ１．３アンタゴニスト、ＫＣａ３．１アンタゴニスト、ＰＰ２Ａアゴニスト、ＩＲＡＫ４阻害剤、ＭＹＤ８８阻害剤、ＢＣＬ−２アンタゴニスト、Ａ２ａｒアゴニスト、ＴＬＲ７アンタゴニスト、ｃ−ＫＩＴキナーゼ阻害剤、ＫＣＡ３．１アゴニスト、ＴＧＦβＲ１阻害剤、ＴＧＦβＲ２阻害剤、ＡＣＣアンタゴニスト、ＡＳＫ１アンタゴニスト、ＧＬＩ１阻害剤、ＴＮＫＳアンタゴニストまたはＴＮＩＫアンタゴニストとを含み得る。薬学的組成物は場合によりさらに、バッファー、抗生物質、ステロイド、炭水化物、薬物（例えば、化学療法薬物）、ポリペプチド、キレート剤、アジュバントおよび／または防腐剤を含み得る。
【０３１８】
薬学的組成物は、賦形剤および補助剤を含む１つまたは複数の生理学的に許容される担体を使用して製剤化され得る。製剤は、選択された投与経路に応じて修飾され得る。本明細書に記載されるコンジュゲートを含む薬学的組成物は、例えばコンジュゲートを凍結乾燥させる、コンジュゲートを混合する、溶解する、乳化する、カプセル化するまたは捕捉することによって製造され得る。薬学的組成物はまた、遊離塩基形態または薬学的に許容される塩形態で本明細書に記載されるコンジュゲートを含み得る。
【０３１９】
コンジュゲートを製剤化して本明細書に記載される薬学的組成物を形成する方法は、１つまたは複数の不活性な薬学的に許容される賦形剤または担体を用いてコンジュゲートのいずれかを製剤化して、固体、半固体または液体組成物を形成することを含み得る。固体組成物は、例えば粉末、錠剤、分散性顆粒およびカプセル剤を含んでよく、いくつかの態様では、固体組成物が、非毒性補助物質、例えば湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤、および他の薬学的に許容される添加剤をさらに含有する。あるいは、本明細書に記載される薬学的組成物は、凍結乾燥され得る、または使用前に適切なビヒクル、例えば滅菌発熱性物質除去蒸留水で再構成するための粉末形態であり得る。
【０３２０】
本明細書に記載されるコンジュゲートの薬学的組成物は、少なくとも有効成分をさらに含み得る。有効成分は、例えばコアセルベーション技術もしくは界面重合（例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロースもしくはゼラチンマイクロカプセルおよびポリ（メチルメタクリレート）マイクロカプセル）によって調製されるマイクロカプセル、コロイド薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子およびナノカプセル）またはマクロエマルジョンに捕捉され得る。
【０３２１】
本明細書に記載される薬学的組成物は通常、治療される特定の適応症に必要な２つ以上の活性化合物をさらに含み得る。活性化合物は、互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を有し得る。例えば、組成物は、化学療法剤、細胞傷害剤、サイトカイン、増殖阻害剤、抗ホルモン剤、抗血管新生剤および／または心臓保護剤を含み得る。このような分子は、意図した目的に有効な量で組み合わせて存在し得る。
【０３２２】
組成物および製剤は滅菌され得る。滅菌は、滅菌濾過による濾過によって達成され得る。
【０３２３】
本明細書に記載されるコンジュゲートは、注射として投与するために製剤化され得る。注射用の製剤の非限定的な例としては、油性または水性ビヒクル中の滅菌懸濁液、溶液またはエマルジョンが挙げられる。適切な油性ビヒクルには、それだけに限らないが、脂肪酸または合成脂肪酸エステルまたはリポソームなどの親油性溶媒またはビヒクルが含まれ得る。水性注射懸濁液は、懸濁液の粘度を増加させる物質を含有し得る。懸濁液はまた、適切な安定剤を含有し得る。注射は、ボーラス注射または連続的注入用に製剤化され得る。あるいは、本明細書に記載される薬学的組成物は凍結乾燥され得る、または使用前に適切なビヒクル、例えば滅菌発熱性物質除去蒸留水で再構成するための粉末形態であり得る。
【０３２４】
非経口投与のために、コンジュゲートは薬学的に許容される非経口ビヒクルと共に単位投薬注射可能形態（例えば、溶液、懸濁液、エマルジョン）に製剤化され得る。このようなビヒクルは本質的に非毒性で、非治療的であり得る。ビヒクルは、水、生理食塩水、リンゲル液、デキストローズ溶液および５％ヒト血清アルブミンであり得る。不揮発性油およびオレイン酸エチルなどの非水性ビヒクルも使用され得る。リポソームが担体として使用され得る。ビヒクルは、等張性および化学安定性を増強する物質（例えば、バッファーおよび防腐剤）などの微量の添加剤を含有し得る。
【０３２５】
徐放性調製物も調製され得る。徐放性調製物の例としては、コンジュゲートを含有し得る固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが挙げられ、これらのマトリックスは成形品（例えば、フィルムまたはマイクロカプセル）の形態であり得る。徐放性マトリックスの例としては、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）またはポリ（ビニルアルコール））、ポリ乳酸、Ｌ−グルタミン酸とγエチル−Ｌ−グルタメートの共重合体、非分解性エチレン−酢酸ビニル、分解性乳酸−グリコール酸共重合体、例えばＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯ（商標）（すなわち、乳酸−グリコール酸共重合体と酢酸ロイプロリドで構成される注射可能なミクロスフェア）およびポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸が挙げられる。
【０３２６】
本明細書に記載されるコンジュゲートの薬学的製剤は、コンジュゲートを薬学的に許容される担体、賦形剤および／または安定剤と混合することによって貯蔵用に調製され得る。この製剤は、凍結乾燥製剤または水溶液であり得る。許容される担体、賦形剤および／または安定剤は、使用される投与量および濃度でレシピエントに非毒性であり得る。許容される担体、賦形剤および／または安定剤には、リン酸塩、クエン酸および他の有機酸などのバッファー；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤、ポリペプチド；血清アルブミンまたはゼラチンなどのタンパク質；親水性ポリマー；アミノ酸；単糖類、二糖類、およびグルコース、マンノースまたはデキストリンを含む炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトールなどの糖類；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体；ならびに／あるいは非イオン性界面活性剤またはポリエチレングリコールが含まれ得る。
【０３２７】
治療用途
本開示の薬学的組成物、コンジュゲートおよび方法は、それだけに限らないが、哺乳動物、ヒト、非ヒト哺乳動物、飼育動物（例えば、実験室動物、家庭用ペットまたは家畜）、非飼育動物（例えば、野生生物）、イヌ、ネコ、げっ歯類、マウス、ハムスター、ウシ、鳥、ニワトリ、魚、ブタ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、ウサギおよびこれらのいずれかの組み合わせを含む複数の異なる対象に有用であり得る。
【０３２８】
本明細書に記載される組成物、コンジュゲートおよび方法は、治療薬、例えばそれを必要とする対象に投与され得る治療薬として有用であり得る。本開示の治療効果は、それだけに限らないが、その症状を含む疾患状態の減少、抑制、寛解または根絶によって対象で得られ得る。疾患もしくは状態を有する、または疾患もしくは状態にかかりやすい、または疾患もしくは状態を有し始めている対象における治療効果は、状態もしくは疾患、または前状態もしくは前疾患状態の減少、抑制、予防（例えば、再発の）、寛解または根絶によって得られ得る。
【０３２９】
本明細書に記載される方法の実施では、治療的有効量の本明細書に記載される薬学的組成物またはコンジュゲートは、通常その状態または進行を治療および／または予防するために、それを必要とする対象に投与され得る。薬学的組成物は、免疫系、炎症反応または他の生理的効果などの対象の生理学に影響を及ぼし得る。治療的有効量は、疾患の重症度、対象の年齢および相対的健康、使用される化合物の力価ならびに他の因子に応じて広く変化し得る。
【０３３０】
治療するおよび／または治療することとは、治療の成功または疾患もしくは状態の改善の成功のいずれかの兆候を指し得る。治療することは、例えば疾患または状態の１つまたは複数の症状の重症度を減少させる、遅延させるまたは緩和することを含み得る、あるいはこれは、疾患、欠損、障害または有害状態などの症状が患者によって経験される頻度を減らすことを含み得る。治療は、本明細書では、疾患または状態のあるレベルの治療または改善をもたらす方法を指し、それだけに限らないが、状態の予防または再発の予防を含むその終了を目指した結果の範囲を想起し得る。
【０３３１】
予防する、予防することなどは、患者における疾患または状態、例えば線維症の進行の予防を指し得る。例えば、線維症、自己免疫疾患または自己炎症性疾患を発症するリスクがある個体が本開示の方法で治療され、後に線維症、自己免疫疾患または自己炎症性疾患を発症しない場合、疾患はその個体で少なくとも一定期間にわたって予防されている。予防する、予防することなどはまた、既に治療された個体の再発を予防することを指し得る。
【０３３２】
治療的有効量は、有益な効果を提供する、または組成物もしくはコンジュゲートが投与された個体にとって有害な有益でない事象を減少させるのに十分な組成物またはコンジュゲートの量であり得る。治療的有効用量は、そのために投与されている１つまたは複数の所望のまたは望ましい（例えば、有益な）効果をもたらす用量であり得、このような投与は所与の期間にわたって１回または複数回行われる。正確な用量は、治療の目的に依存し、既知の技術を使用して当業者によって確認され得る。
【０３３３】
治療に使用され得る本明細書に記載される薬学的組成物およびコンジュゲートは、治療される障害、個々の患者の状態、組成物またはコンジュゲートの送達部位、投与方法および施術者に知られている他の因子を考慮して、医学行動規範と一致した様式で製剤化され、投与量が確立され得る。本明細書に記載されるコンジュゲートは、本明細書に記載される調製の説明に従って調製され得る。
【０３３４】
本明細書に記載されるコンジュゲートおよび方法で有用とみなされ得る薬学的組成物は、対象に罹患している疾患または状態のための治療法として適したものとなり得る当業者に知られている技術を使用して、それを必要とする対象に投与され得る。当業者は、本明細書に記載される薬学的組成物のそれを必要とする対象への投与の量、持続期間および頻度が、例えばそれだけに限らないが、対象の健康、患者の特定の疾患または状態、患者の特定の疾患または状態のグレードまたはレベル、対象が投与されているまたは投与されていた追加の治療薬などを含むいくつかの因子に依存することを理解するだろう。
【０３３５】
本明細書に記載される方法および組成物およびコンジュゲートは、それを必要とする対象に投与するためのものであり得る。通常、本明細書に記載される組成物およびコンジュゲートの投与は、その非限定的な例として、静脈内、動脈内、皮下、硬膜下、筋肉内、頭蓋内、胸骨内、腫瘍内または腹腔内が挙げられる投与経路を含み得る。さらに、薬学的組成物は、追加の投与経路、例えば吸入、経口、皮膚、鼻腔内または髄腔内投与によって、対象に投与され得る。
【０３３６】
本開示の組成物およびコンジュゲートは、第１の投与で、および１回または複数回の追加の投与で、それを必要とする対象に投与され得る。投与は、例えば第１の投与の２１日後、１４日後、１０日後、７日後、４日後または１日後のサイクルで、それを必要とする対象に投与され得る。１回または複数回の追加の投与はまた、第１の投与の数分後、数時間後、数日後、数週間後または数か月後にそれを必要とする対象に投与され得る。追加の投与のうちのいずれか１回は、第１の投与の２１日未満後、または１４日未満後、１０日未満後、７日未満後、４日未満後または１日未満後にそれを必要とする対象に投与され得る。１回または複数回の投与は、１日に２回以上、１週間に２回以上または１カ月に２回以上行われ得る。
【０３３７】
治療方法
本明細書で提供される組成物、コンジュゲートおよび方法は、対象における複数の疾患、状態の治療、疾患もしくは状態の予防、またはそれを必要とする対象のための他の治療用途に有用であり得る。通常、本明細書で提供される組成物、コンジュゲートおよび方法は、自己免疫疾患、炎症性疾患または線維性疾患などの治療に有用であり得る。本明細書で提供される組成物、コンジュゲートおよび方法は、線維性疾患、自己免疫疾患または自己炎症性疾患に関連する細胞および／または組織を特異的に標的化するのに有用であり得る。本明細書で提供される組成物、コンジュゲートおよび方法は、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβＲ１またはＴＧＦβＲ２を特異的に標的化するのに有用であり得る。本明細書で提供される組成物、コンジュゲートおよび方法は、ＴＧＦβＲ１またはＴＧＦβＲ２を阻害するのに有用であり得る。一実施形態では、コンジュゲートがＴＧＦβＲ１阻害剤として役立ち得る。別の実施形態では、本開示のコンジュゲートがＴＧＦβＲ２阻害剤として役立ち得る。本明細書に開示される状態は、本明細書に記載される疾患に関連する特異的細胞上の抗原の発現に関連し得る。通常、細胞によって発現される抗原は、コンジュゲートの抗体コンストラクトによる認識が可能な細胞外部分を含み得る。細胞によって発現される抗原は、本明細書に記載される抗体コンストラクトによって認識され得る抗原であり得る。コンジュゲートまたは組成物の抗体コンストラクトは、線維症関連抗原、自己免疫関連抗原または自己炎症性関連抗原を認識し得る。例えば、抗原は、カドヘリン１１、ＰＤＰＮ、インテグリンα４β７、インテグリンα２β１、ＭＡＤＣＡＭ、ネフリン、ポドシン、ＩＦＮＡＲ１、ＢＤＣＡ２、ＣＤ３０、ｃ−ＫＩＴ、ＦＡＰ、ＣＤ７３、ＣＤ３８、ＰＤＧＦＲβ、インテグリンαｖβ１、インテグリンαｖβ３、インテグリンαｖβ８、ＧＡＲＰ、エンドシアリン、ＣＴＧＦ、インテグリンαｖβ６、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＴＮＦＲ２、ＤＥＣ２０５、ＤＣＩＲ、ＣＤ８６、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ４５ＲＯ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＣＤ２５またはこれらのいずれかの断片であり得る。抗原は、カドヘリン１１、ＬＲＲＣ１５、ＰＤＰＮ、インテグリンα４β７、インテグリンα２β１、ＭＡＤＣＡＭ、ネフリン、ポドシン、ＩＦＮＡＲ１、ＢＤＣＡ２、ＣＤ３０、ｃ−ＫＩＴ、ＦＡＰ、ＣＤ７３、ＣＤ３８、ＰＤＧＦＲβ、インテグリンαｖβ１、インテグリンαｖβ３、インテグリンαｖβ８、ＧＡＲＰ、エンドシアリン、ＣＴＧＦ、インテグリンαｖβ６、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＴＮＦＲ２、ＤＥＣ２０５、ＤＣＩＲ、ＣＤ８６、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ４５ＲＯ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＣＤ２５またはこれらのいずれかの断片であり得る。抗原は、カドヘリン１１、ＬＲＲＣ１５またはＦＡＰであり得る。抗原は、カドヘリン１１、ＴＮＦＲ２またはＦＡＰであり得る。抗原はＴＮＦＲ２であり得る。
【０３３８】
本明細書に記載されるように、コンジュゲートの抗原結合ドメイン部分は、例えば疾患抗原などの疾患細胞によって発現される抗原を認識するよう構成され得る。通常、このような抗原は、当業者に知られている、またはこのような状態に関連している、このような状態と一般的に関連しているおよび／またはこのような状態に特異的であることが新たに分かっている。例えば、疾患抗原は、それだけに限らないが、カドヘリン１１、ＰＤＰＮ、インテグリンα４β７、インテグリンα２β１、ＭＡＤＣＡＭ、ネフリン、ポドシン、ＩＦＮＡＲ１、ＢＤＣＡ２、ＣＤ３０、ｃ−ＫＩＴ、ＦＡＰ、ＣＤ７３、ＣＤ３８、ＰＤＧＦＲβ、インテグリンαｖβ１、インテグリンαｖβ３、インテグリンαｖβ８、ＧＡＲＰ、エンドシアリン、ＣＴＧＦ、インテグリンαｖβ６、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＴＮＦＲ２、ＤＥＣ２０５、ＤＣＩＲ、ＣＤ８６、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ４５ＲＯ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＣＤ２５またはこれらのいずれかの断片である。疾患抗原はまた、カドヘリン１１、ＬＲＲＣ１５、ＰＤＰＮ、インテグリンα４β７、インテグリンα２β１、ＭＡＤＣＡＭ、ネフリン、ポドシン、ＩＦＮＡＲ１、ＢＤＣＡ２、ＣＤ３０、ｃ−ＫＩＴ、ＦＡＰ、ＣＤ７３、ＣＤ３８、ＰＤＧＦＲβ、インテグリンαｖβ１、インテグリンαｖβ３、インテグリンαｖβ８、ＧＡＲＰ、エンドシアリン、ＣＴＧＦ、インテグリンαｖβ６、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＴＮＦＲ２、ＤＥＣ２０５、ＤＣＩＲ、ＣＤ８６、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ４５ＲＯ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＣＤ２５またはこれらのいずれかの断片であり得る。疾患抗原はまた、ＦＡＰ、ＬＲＲＣ１５またはカドヘリン１１であり得る。疾患抗原は、カドヘリン１１、ＴＮＦＲ２またはＦＡＰであり得る。疾患抗原はＴＮＦＲ２であり得る。
【０３３９】
線維症または線維性疾患の非限定的な例としては、癒着性関節包炎、動脈壁硬化、関節線維症、心房線維症、硬変、クローン病、膠原性線維腫、嚢胞性線維症、デスモイド型線維腫症、デュピュイトラン拘縮、弾性線維腫、心内膜心筋線維症、腱鞘線維腫、グリア瘢痕、突発性肺線維症、ケロイド、縦隔線維症、骨髄線維症、項部線維腫、腎性全身性線維症、陳旧性心筋梗塞、ペイロニー病、肺線維症、進行性塊状線維症、放射線誘発性肺障害、後腹膜線維症、瘢痕および強皮症／全身性硬化症が挙げられる。
【０３４０】
本開示による方法を使用して治療することができる疾患の非限定的な例としては、急性散在性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）、急性壊死性出血性白質脳炎、アジソン病、無ガンマグロブリン血症、脱毛症、アミロイドーシス、強直性脊椎炎（ＡＳ）、抗ＧＢＭ／抗ＴＢＭ腎炎、抗リン脂質症候群（ＡＰＳ）、関節炎、自己免疫性血管浮腫、自己免疫性再生不良性貧血、自己免疫性自律神経失調症、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性高脂血症、自己免疫性免疫不全、自己免疫性内耳疾患（ＡＩＥＤ）、自己免疫性心筋炎、自己免疫性卵巣炎、自己免疫性膵炎、自己免疫性網膜症、自己免疫性血小板減少性紫斑病（ＡＴＰ）、自己免疫性甲状腺疾患、自己免疫性じん麻疹、無腐性壊死（骨壊死）＼背部痛、急性運動性軸索型ニューロパチー（ＡＭＡＮ）、バロー病、ベーチェット病、滑液包炎および他の軟組織疾患、水疱性類天疱瘡、心筋症、手根管症候群、キャッスルマン病（ＣＤ）、セリアック病、シャーガス病、慢性疲労症候群、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー（ＣＩＤＰ）、慢性再発性多巣性骨髄炎（ＣＲＭＯ）、チャーグ・ストラウス、瘢痕性類天疱瘡／良性粘膜類天疱瘡、コーガン症候群、寒冷凝集素症、先天性心ブロック、コクサッキー心筋炎、ＣＲＥＳＴ症候群、膠原血管病、ＣＰＤＤ（ピロリン酸カルシウム二水和物結晶沈着症）、クローン病、脱髄性ニューロパチー、変形性関節症、疱疹状皮膚炎、皮膚筋炎、デビック病（視神経脊髄炎）、糖尿病（Ｉ型）、円板状狼瘡、ＤＩＳＨ（びまん性特発性骨増殖症）、ドレスラー症候群、子宮内膜症、好酸球性食道炎（ＥｏＥ）、好酸球性筋膜炎、結節性紅斑、本態性混合型クリオグロブリン血症、デュピュイトラン、ＥＤＳ（エーラス・ダンロス症候群）、ＥＭＳ（好酸球増多筋痛症候群）、エバンス症候群、実験的アレルギー性脳脊髄炎、フェルティ症候群、線維筋痛症、線維筋炎、線維性肺胞炎、巨細胞動脈炎（側頭動脈炎）、巨細胞心筋炎、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、痛風、多発血管炎性肉芽腫症、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本甲状腺炎、溶血性貧血、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病（ＨＳＰ）、妊娠ヘルペスまたは妊娠性類天疱瘡（ＰＧ）、低ガンマグロブリン血症、突発性肺線維症、突発性血小板減少性紫斑病、ＩｇＡ腎症、ＩｇＧ４関連硬化性疾患、免疫調節性リポタンパク質、封入体筋炎（ＩＢＭ）、感染性関節炎、炎症性腸疾患、間質性膀胱炎（ＩＣ）、ＪＨ（関節過度可動性）、関節の炎症、若年性関節リウマチ、若年性関節炎−他の種類および関連する状態、若年性皮膚筋炎、若年性糖尿病（１型糖尿病）、若年性特発性関節炎（ＪＩＡ）、若年性筋炎（ＪＭ）、若年性非炎症性障害、若年性乾癬性関節炎、若年性強皮症、若年性脊椎関節症症候群、若年性全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、若年性脈管炎、川崎病、レダーホース病（足のデュピュイトラン）、ランバート・イートン症候群、白血球破壊性脈管炎、扁平苔癬、硬化性苔癬、木質性結膜炎、線状ＩｇＡ病（ＬＡＤ）、狼瘡、円板状紅斑性狼瘡、ライム病、マルファン症候群、ＭＣＴＤ（混合性結合組織病）、メニエール病、顕微鏡的多発血管炎（ＭＰＡ）、混合性結合組織病（ＭＣＴＤ）、モーレン潰瘍、ムッハ・ハーベルマン病、多発性硬化症、重症筋無力症、心筋炎、筋筋膜痛、ナルコレプシー、視神経脊髄炎、好中球減少症、眼部瘢痕性類天疱瘡、視神経炎、変形性関節症、骨形成不全症、骨壊死（無腐性壊死）、骨粗鬆症、ページェット病、回帰性リウマチ（ＰＲ）、ＰＡＮＤＡＳ（小児自己免疫性溶連菌関連性精神神経障害）、傍腫瘍性小脳変性症（ＰＣＤ）、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、Ｐａｒｒｙ−Ｒｏｍｂｅｒｇ症候群、パーソネージ・ターナー症候群、毛様体扁平部炎（周辺性ブドウ膜炎）、天疱瘡、天疱瘡／類天疱瘡、末梢性ニューロパチー、静脈周囲脳脊髄炎、悪性貧血、ペイロニー病、ＰＯＥＭＳ症候群（多発ニューロパチー、臓器肥大、内分泌疾患、単クローン性ガンマグロブリン血症、皮膚変化）、ＰＭＲ（リウマチ性多発筋痛症）、結節性多発動脈炎、多発性関節炎、リウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎、心筋梗塞後症候群、心膜切開後症候群、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、プロゲステロン皮膚炎、偽痛風、弾性線維性仮性黄色腫（ＰＸＥ）、乾癬性関節炎、乾癬、赤芽球癆（ＰＲＣＡ）、壊疽性膿皮症、レイノー病、反応性関節炎、ライター症候群（反応性関節炎）、再発性多発性軟骨炎、後腹膜線維症、リウマチ熱、関節リウマチ、ＰＬＤ（下肢静止不能症候群）、ＲＳＤ（反射性交感神経性ジストロフィー）、サルコイドーシス、シュミット症候群、強膜炎、シェーグレン症候群、軟組織疾患、精子および精巣自己免疫、脊柱管狭窄、全身硬直症候群（ＳＰＳ）、スティル病、亜急性細菌性心内膜炎（ＳＢＥ）、スザック症候群、交感性眼炎（ＳＯ）、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞動脈炎、血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、トロサ・ハント症候群（ＴＨＳ）、横断性脊髄炎、側頭動脈炎、ＴＭＪ（顎関節の）問題、甲状腺炎、Ｉ型、ＩＩ型およびＩＩＩ型多腺性自己免疫症候群、潰瘍性大腸炎、未分化結合組織疾患（ＵＣＴＤ）、未分化脊椎関節症、ブドウ膜炎、ウェゲナー肉芽腫症、脈管炎、水疱性皮膚病および白斑が挙げられる。
【０３４１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるコンジュゲートを使用して関節リウマチが治療される。いくつかの実施形態では、抗体コンジュゲートが、カドヘリン１１に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗体コンジュゲートがＰＤＰＮに特異的に結合する。
【０３４２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体コンジュゲートを使用して、炎症性腸疾患、例えばクローン病および潰瘍性大腸炎が治療される。いくつかの実施形態では、抗体コンジュゲートがインテグリンα４β７に結合する。いくつかの実施形態では、抗体コンジュゲートがインテグリンα２β１に結合する。いくつかの実施形態では、抗体コンジュゲートがＭＡＤＣＡＭに結合する。
【０３４３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体コンジュゲートを使用して、全身性エリテマトーデスが治療される。いくつかの実施形態では、抗体コンジュゲートがネフリンに結合する。いくつかの実施形態では、抗体コンジュゲートがポドシンに結合する。いくつかの実施形態では、抗体コンジュゲートがＰＤＰＮに結合する。いくつかの実施形態では抗体コンジュゲートがＩＦＮＡＲ１に結合する。いくつかの実施形態では、抗体コンジュゲートがＢＤＣＡ２に結合する。いくつかの実施形態では、抗体がＣＤ３０に結合する。
【０３４４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体コンジュゲートを使用して、肥満細胞症または色素性じん麻疹が治療される。いくつかの実施形態では、抗体コンジュゲートがｃ−ＫＩＴに結合する。
【０３４５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体コンジュゲートを使用して、多発性硬化症が治療される。
【０３４６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体コンジュゲートを使用して、強皮症または全身性硬化症が治療される。
【０３４７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体コンジュゲートを使用して、移植片対宿主病および移植片拒絶反応が治療される。
【０３４８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体コンジュゲートを使用して、喘息が治療される。
【０３４９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体コンジュゲートを使用して、強直性脊椎炎が治療される。
【０３５０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体コンジュゲートを使用して、乾癬が治療される。
【０３５１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体コンジュゲートを使用して、１型糖尿病が治療される。
【０３５２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体コンジュゲートを使用して、線維症が治療される。いくつかの実施形態では、抗体コンジュゲートが、ＦＡＰ、ＬＲＲＣ１５またはカドヘリン１１に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗体コンジュゲートがＦＡＰに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗体コンジュゲートがＬＲＲＣ１５に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗体コンジュゲートがＴＮＦＲ２に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗体コンジュゲートがカドヘリン１１に特異的に結合する。
【０３５３】
本発明は、治療によってヒトまたは動物の体を治療する方法に使用するための本明細書に開示されるいずれかの治療化合物またはコンジュゲートを提供する。治療は、免疫系の刺激などの本明細書に開示されるいずれかの機構により得る。本発明は、例えば免疫応答を増強することを含む、免疫系の刺激、ワクチン接種または免疫療法に使用するための本明細書に開示されるいずれかの治療化合物またはコンジュゲートを提供する。本発明はさらに、本明細書に開示されるいずれかの状態、例えばがん、自己免疫疾患、炎症、敗血症、アレルギー、喘息、移植片拒絶反応、移植片対宿主病、免疫不全または感染性疾患（典型的には、感染性病原体によって引き起こされる）を予防または治療するための本明細書に開示されるいずれかの治療化合物またはコンジュゲートを提供する。本発明はまた、インビボで腫瘍細胞を減少させるなどの、本明細書に開示されるいずれかの状態について本明細書に開示されるいずれかの臨床成績を得るための本明細書に開示されるいずれかの治療化合物またはコンジュゲートを提供する。本発明はまた、本明細書に開示されるいずれかの状態を予防または治療するための医薬の製造における本明細書に開示されるいずれかの治療化合物またはコンジュゲートの使用を提供する。
【０３５４】
一般的スキーム
免疫刺激化合物−リンカーおよび免疫調節化合物−リンカーコンストラクトの合成
リンカーと免疫刺激化合物または免疫調節化合物（ＩＳＣと呼ぶ）のコンストラクトを、種々の方法によって合成することができる。例えば、ＩＳＣ−リンカーコンストラクトはスキームＢ１に示されるように合成することができる。
スキームB1:
2020523319.tif 000096
【０３５５】
アミド結合形成のために活性化されたペグ化カルボン酸（ｉ）を、適切に置換されたアミン含有免疫刺激化合物と反応させて、中間体アミドを得ることができる。ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）などのカップリング剤の存在下で、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドまたはペンタフルオロフェノールなどの試薬を使用して、中間体アミド含有カルボン酸を反応させて、化合物（ｉｉ）を得ることによって、活性化エステル（ｉｉ）の形成を達成することができる。
【０３５６】
ＩＳＣ−リンカーコンストラクトをスキームＢ２に示されるように合成することができる。
スキームB2:
2020523319.tif 000097
【０３５７】
（ｉ）などの活性化カーボネートを適切に置換されたアミン含有免疫刺激化合物と反応させて、カルバメート（ｉｉ）を得て、これを、Ｒ３エステル基の性質に基づいて標準的な方法を使用して脱保護することができる。次いで、得られたカルボン酸（ｉｉｉ）をＮ−ヒドロキシスクシンイミドまたはペンタフルオロフェノールなどの活性化剤とカップリングして化合物（ｉｖ）を得ることができる。
【０３５８】
ＩＳＣ−リンカーコンストラクトをスキームＢ３に示されるように合成することができる。
スキームB3:
2020523319.tif 000098
【０３５９】
（ｉ−ａ）などの活性化カルボン酸エステルを、適切に置換されたアミン含有免疫刺激化合物と反応させて、アミド（ｉｉ）を得ることができる。あるいは、（ｉ−ｂ）型のカルボン酸を、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）などのアミド結合形成剤の存在下で適切に置換されたアミン含有免疫刺激化合物とカップリングして、所望のＩＳＣを得ることができる。
【０３６０】
ＩＳＣ−リンカーコンストラクトを、スキームＢ４に示されるような種々の方法によって合成することができる。
スキームB4:
2020523319.tif 000099
【０３６１】
（ｉ）などの活性化カーボネートを、適切に置換されたアミン含有免疫刺激化合物と反応させて、標的ＩＳＣとしてのカルバメート（ｉｉ）を得ることができる。
【０３６２】
ＩＳＣリンカーコンストラクトをスキームＢ５に示されるように合成することもできる。
スキームB5: 
2020523319.tif 000100
【０３６３】
（ｉ−ａ、ｉ−ｂ、ｉ−ｃ）などの活性化カルボン酸を、適切に置換されたアミン含有免疫刺激化合物と反応させて、標的リンカー免疫刺激化合物としてのアミド（ｉｉ−ａ、ｉｉ−ｂ、ｉｉ−ｃ）を得ることができる。
【０３６４】
ＰＲＯＴＡＣを含有する免疫調節コンジュゲートを合成するための一般的スキーム
本明細書に記載されるＰＲＯＴＡＣ（またはＰＴＭ）を含有する免疫調節コンジュゲートは、リンカー（Ｌ）を介してＰＲＯＴＡＣと共有結合的に結合した抗体コンストラクトＡｂ（抗体など）を含むことができ、ＰＲＯＴＡＣは、ユビキチンＥ３リガーゼ結合基（Ｅ；ＵＬＭとも呼ばれる）、スペーサー（Ｓ）および免疫調節化合物（Ｋ；ＩＭＣとも呼ばれる）（キナーゼ阻害剤など）を含む。一般式は、Ａｂ−（Ｌ−（Ｃ１−Ｓ−Ｃ２））ｎ（式中、Ａｂは抗体コンストラクトであり、Ｃ１−Ｓ−Ｃ２はＰＲＯＴＡＣまたはＰＴＭであり、Ｃ２は、Ｃ１、免疫調節化合物（ＥまたはＩＭＣ）と共有結合的に結合したスペーサー基（ｓ）と共有結合的に結合したＥ３ユビキチンリガーゼ結合基（ＥまたはＬＵＭ）であり、Ｌは抗体コンストラクトおよびＰＲＯＴＡＣと共有結合的に結合したリンカーであり；ｎは約１〜約８の値である）である。
【０３６５】
以下の例示的スキームでは、免疫調節化合物（このスキームではＥ）がキナーゼ阻害剤である。
スキーム1:
2020523319.tif 000101
【０３６６】
遊離アミン官能基を含むキナーゼ阻害剤を、アミン塩基を含有するＤＭＦ中ＨＡＴＵなどの標準的なアミド結合カップリング反応を使用して、アスパルテートまたはグルタメートなどの多官能性アミノ酸誘導体でアシル化して、中間体（ｉｉ）を得ることができる。Ｒ＝Ｂｎである場合、水素化などのカルボン酸エステルをカルボン酸に変換するための既知の方法を使用した化合物（ｉｉ）の脱保護によって、化合物（ｉｉｉ）を得ることができ、これを、ＶＨＬまたはセレブロンに結合する基などのＥ３ユビキチンリガーゼにカップリングして、ＰＲＯＴＡＣ（ｉｖ）を得ることができる。ＶＨＬに結合する化合物は、国際公開第２０１３／１０６６４３号に開示されるようなヒドロキシプロリン化合物、ならびに米国特許出願公開第２０１６／００４５６０７号、国際公開第２０１４／１８７７７７号、米国特許出願公開第２０１４／０３５６３２２号および米国特許第９２４９１５３号に記載される他の化合物であり得る。セレブロンに結合する化合物は、サリドマイド、レナリドミド、ポマリドミドおよびこれらのアナログを含む。セレブロンに結合する他の小分子化合物も知られており、例えば米国特許出願公開第２０１６／００５８８７２号および米国特許出願公開第２０１５／０２９１５６２号に開示されている化合物がある。ＰＧ＝Ｂｏｃである場合、ＴＦＡなどの適切な試薬を使用して、アミン保護基を中間体（ｖ）に変換することができる。活性化リンカー試薬（Ｘ＊＝ＮＨＳ）または直接アミド結合カップリングによるアミン（ｖ）のアシル化によって、結合−ＰＲＯＴＡＣ（Ｌ−Ｃ）化合物（ｖｉ）を得ることができ、その後、これを本明細書に記載される既知の方法を使用して抗体にコンジュゲートすることができる。
スキーム2:
2020523319.tif 000102
【０３６７】
あるいは、遊離アミン官能基を含むキナーゼ阻害剤を、アミン塩基を含有するＤＭＦ中ＨＡＴＵなどの標準的なアミド結合カップリング反応を使用して、リジンなどの多官能性アミノ酸誘導体でアシル化して、中間体（ｖｉｉ）を得ることができる。Ｒ＝Ｃｂｚである場合、水素化などの既知の方法を使用した化合物（ｖｉｉ）の脱保護によって、化合物（ｉｘ）を得ることができ、これをＥ３ユビキチンリガーゼにカップリングして、ＰＲＯＴＡＣ（ｘ）を得ることができる。ＰＧ＝Ｂｏｃである場合、ＴＦＡなどの適切な試薬を使用して、第２のアミン保護基（ＰＧ２）を中間体（ｖ）に変換することができる。活性化リンカー試薬（Ｘ＊＝ＮＨＳ）または直接アミド結合カップリングによるアミン（ｘｉ）のアシル化によって、結合−ＰＲＯＴＡＣ化合物（ｘｉｉ）を得ることができ、その後、これを本明細書に記載される既知の方法を使用して抗体にコンジュゲートすることができる。
【０３６８】
図面の説明
図１Ａは、抗体コンストラクトと、リンカー（Ｌ）と、免疫調節化合物（Ｃ１；黒色星）と、スペーサー（Ｓ）と、第２の化合物（Ｃ２；灰色星）とを含む例示的コンジュゲートを示す。コンジュゲートの灰色部分は抗体の重鎖であり、コンジュゲートの白色部分は抗体の軽鎖である。リンカーとスペーサーとの間、およびスペーサーとＣ１およびＣ２との間の暗実線は共有結合を示す。
【０３６９】
図１Ｂは、抗体コンストラクトと、リンカー（Ｌ）と、免疫調節化合物（Ｃ１；黒色星）と、スペーサー（Ｓ）と、第２の化合物（Ｃ２；灰色星）とを含む例示的コンジュゲートを示す。コンジュゲートの灰色部分は抗体の重鎖であり、コンジュゲートの白色部分は抗体の軽鎖である。リンカーとＣ２との間、およびスペーサーとＣ１との間の暗実線は共有結合を示す。
【０３７０】
図１Ｃは、抗体コンストラクトと、リンカー（Ｌ）と、免疫調節化合物（Ｃ１；黒色星）と、スペーサー（Ｓ）と、第２の化合物（Ｃ２；灰色星）とを含む例示的コンジュゲートを示す。コンジュゲートの灰色部分は抗体の重鎖であり、コンジュゲートの白色部分は抗体の軽鎖である。リンカーとＣ１との間、およびスペーサーとＣ２との間の暗実線は共有結合を示す。
【０３７１】
図２は、コントロール抗体のみおよび抗ジゴキシンコンジュゲート（切断可能なリンカーを介してＴＧＦβＲに結合した抗ジゴキシン抗体）コントロールと比較した、ＬＲＲＣ１５コンジュゲート（切断可能なリンカーを介してＴＧＦβＲ阻害剤に結合したＬＲＲＣ１５抗体）によるＴＧＦβ／ＳＭＡＤシグナル伝達経路の阻害を示す。結果は、ＬＲＲＣ１５−ＴＧＦβＲ阻害剤コンジュゲートが、ＴＧＦβによる誘導後にＴＧＦβ／ＳＭＡＤシグナル伝達経路を阻害した（最も暗い線；三角形）が、ＬＲＲＣ１５コントロール抗体（中央の線；中黒丸）および抗ジゴキシン抗体−ＴＧＦβＲ阻害剤コントロールコンジュゲート（上の最も明るい灰色の線；白色丸）はこのシグナル伝達経路を有意には阻害しなかったことを示している。ｙ軸は誘導倍率について５の間隔で０〜２５として標識される。ｘ軸は、薬物（ｎＭ）について対数間隔で１〜１０００として標識される。
【０３７２】
図３Ａは、ＴＧＦβＲ２−ＶＨＬ  ＰＲＯＴＡＣ抗ＨＥＲ２抗体コンジュゲートによるＴＦＧβＲ２の分解についてのアッセイの結果を示している。ＨＥＲ２を発現しているプラスミドを、ＨＥＫ２９３細胞にトランスフェクトし、細胞をＤＭＳＯ、ＰＲＯＴＡＣ  Ｔ−２０、ＨＥＲ２抗体（ＩｇＧ１）またはＨｅｒ２抗体−Ｐｒｏｔａｃコンジュゲート（０５０−Ｔ１１０２０）で処理した。細胞全体溶解物を２時間（左ブロット）、２４時間（中央ブロット）または４８時間（右ブロット）のインキュベーション後に細胞から調製し、ＢＣＡアッセイで定量化した。等量の溶解物をタンパク質ゲルに流し、ＰＶＤＦに転写し、ＴＧＦβＲ２（上）、ＴＧＦβＲ１（中央）またはコントロールアクチン（下）を市販の試薬を使用して検出した。両試験濃度のコンジュゲートで、０５０−Ｔ１１０２０を含有するレーンのＴＧＦβＲ２の減少したシグナルによって実証されるように、２４時間および４８時間の処理で標的ＴＧＦβＲ２のレベルが減少した。２時間ブロットについては、左から右に、レーンがＤＭＳＯ；Ｔ−２０  ５μＭ；０５０  ＩｇＧ  １μＭ；０５０−Ｔ１１０２０  １μＭ；および０５０−Ｔ１１０２０  ０．５μＭを表す。２４時間ブロットについては、左から右に、レーンがＤＭＳＯ；Ｔ−２０  ５μＭ；０５０  ＩｇＧ  ０．５μＭ；０５０  ＩｇＧ  １μＭ；０５０−Ｔ１１０２０  ０．５μＭ；および０５０−Ｔ１１０２０  １μＭを表す。４８時間ブロットについては、左から右に、レーンがＰＢＳ；０５０  ＩｇＧ  １μＭ；０５０−Ｔ１１０２０  １μＭ；および０５０−Ｔ１１０２０  ０．５μＭを表す。
【０３７３】
図３Ｂは、図３Ａに示されるＴＧＦβＲ２についてのウエスタンブロットデータの定量化を提供する。タンパク質分解の量を定量化するために、ウエスタンブロットのシグナルを、アクチンローディングコントロールに調整し、データを、２０の間隔で０〜１４０で標識されるｙ軸に一致したコントロールの％として提示した。黒色太線は１００％を示す。各データセットの左の中程度の灰色のバーは、２時間の処理で得られたデータを表す。各データセットの中央の最も濃い灰色のバーは、２４時間で得られたデータを表す。各データセットの右の最も淡い灰色のバーは、４８時間で得られたデータを表す。ｘ軸では、左から右に、データセットがＴ２０  ５μＭ；０５０−１１０２０  ０．５μＭ；および０５０−１１０２０  １μＭである。
【０３７４】
図３Ｃは、ＴＧＦβＲ１についてのウエスタンブロットデータの定量化を提供する。タンパク質分解の量を定量化するために、ウエスタンブロットのシグナルを、アクチンローディングコントロールに調整し、データを、２０の間隔で０〜２００として標識されるｙ軸に一致したコントロールの％として提示した。各データセットの左の中程度の灰色のバーは、２時間の処理で得られたデータを表す。各データセットの中央の最も濃い灰色のバーは、２４時間で得られたデータを表す。各データセットの右の最も淡い灰色のバーは、４８時間で得られたデータを表す。ｘ軸では、左から右に、データセットがＴ２０  ５μＭ；０５０−１１０２０  ０．５μＭ；および０５０−１１０２０  １μＭである。ウエスタンブロットデータと一致して、ＴＧＦβＲ１タンパク質の量は、処理期間の間中かなり一定のままであった。
【０３７５】
図４Ａおよび図４Ｂは、ＶＨＬまたはセレブロン  Ｅ３結合部分を有するＰＲＯＴＡＣを含む抗体コンジュゲートによるＴＧＦβＲ２の抗原標的化分解についてのアッセイの結果を示している。ＢＴ４７４細胞を蒔き、翌日、ＰＲＯＴＡＣ（Ｔ−１５もしくはＴ−２０）、ＨＥＲ２抗体−ＴＧＦβＲ２−ＶＨＬ結合ＰＲＯＴＡＣのコンジュゲート（０５０−Ｔ０５０２０；Ｔ２０  ＰＲＯＴＡＣ）、ＨＥＲ２抗体−ＴＧＦβＲ２−セレブロン結合ＰＲＰＴＡＣのコンジュゲート（０５０−Ｔ０５０１５；Ｔ−１５  ＰＲＯＴＡＣ）またはＴＲＯＰ２抗体−ＴＧＦβＲ２−ＶＨＬ結合ＰＲＯＴＡＣのコンジュゲート（１３０−Ｔ０５０２０；Ｔ−２０  ＰＲＯＴＡＣ）で処理した。細胞全体溶解物を処理の２４時間後に調製し、ＢＣＡアッセイで定量化した。等量の溶解物をタンパク質ゲルに流し、ＰＶＤＦに転写し、ＴＧＦβＲ２およびアクチンを、市販の試薬を使用して検出した。図４Ａは、ＴＧＦβＲ２タンパク質の保持シグナルによって示されるように（上のブロット；アクチンコントロールは下のブロットである）、ＨＥＲ２抗原特異的分解が両方のＨＥＲ２結合ＰＲＯＴＡＣコンジュゲートで見られたが、コントロールＴＲＯＰ２結合ＰＲＯＴＡＣコンジュゲートでもＴ−１５またはＴ２０  ＰＲＯＴＡＣ単独でも見られなかったことを示している。レーンは、左から右に、ＤＭＳＯ；Ｔ−１５  ３００ｎＭ；Ｔ−２０  ３００ｎＭ；ＰＢＳ；非標識；０５０−Ｔ０５０１５  ０．５ｍＭ；０５０−Ｔ０５０２０  ０．５μＭ；および１３０−Ｔ０５０２０  ０．５μＭを表す。
【０３７６】
図４Ｂは、図４ＡのＴＧＦβＲ２タンパク質レベルの定量化を提供し、ＴＧＦβＲ２シグナルをアクチンローティングコントロールに正規化することによって決定された。データを、２０の間隔で０〜１２０として標識されるｙ軸上にビヒクルコントロール（１００％）の％として提示する。ｘ軸は、左から右に、Ｔ−１５  ３００ｎＭ；Ｔ−２０  ３００ｎＭ；０５０−Ｔ０５０１５；０５０−Ｔ０５２０；および１３０−Ｔ０５０２０を表す。黒色太線は、ｙ軸の１００％である。
【０３７７】
図５Ａおよび図５Ｂは、プロテアソーム阻害剤を添加したまたは添加しない、ＴＧＦβＲ２／ＴＧＦβＲ１−ＶＨＬ  ＰＲＯＴＡＣの存在下での、ＴＧＦβＲ２およびＴＧＦβＲ１の細胞レベルについてのアッセイの結果を示す。正常ヒト肺線維芽細胞を、プロテアソーム阻害剤ＭＧ−１３２で処理してまたはしないで、引き続いてＤＭＳＯまたはＰＲＯＴＡＣ  Ｔ−２０を添加した。細胞全体溶解物を調製し、次いで、ＢＣＡアッセイで定量化した。等量の溶解物をタンパク質ゲルに流し、ＰＶＤＦ膜に転写し、ＴＧＦβＲ１、ＴＧＦβＲ２およびアクチンを市販の試薬を使用して検出した。図５Ａはアッセイのウエスタンブロット結果を提供する。結果は、ＰＲＯＴＡＣ  Ｔ−２０の存在下でのＭＧ−１３２の添加によるＴＧＦβＲ２およびＴＧＦβＲ２シグナルの救済によって示されるように、プロテアソーム阻害剤の添加によって、Ｔ−２０によって誘導される分解からＴＧＦβＲ１およびＴＧＦβＲ２が保護されたことを示している。ＴＧＦβＲ２は上の行であり、ＴＧＦβＲ１は中央の行であり、アクチンは下の行である。左のブロットレーンは、左から右に、ＤＭＳＯを添加した０（−として示される）；１０および５０のＭＧ１３２濃度を表す。右のブロットは、左から右に、５μＭ  Ｔ−２０を添加した０（−として示される）；１０；および５０μＭのＭＧ１３２濃度を表す。
【０３７８】
図５Ｂは、図５Ａの結果の定量化を提供し、ウエスタンシグナルをアクチンローティングコントロールに調整することによって得られた。データを、１０の間隔で０〜１００に標識されたｙ軸に、一致したビヒクルコントロールの％として提示する。淡い灰色のバーは、ＴＧＦβＲ２についてのデータを表し、暗い灰色のバーは、ＴＧＦβＲ１についてのデータを表す。ｘ軸は、左から右に、Ｔ−２０；Ｔ−２０＋１０μＭ  ＭＧ１３２；およびＴ−２０＋５０μＭ  ＭＧ１３２として標識される。
【実施例】
【０３７９】
以下の実施例は、本明細書に記載される免疫調節化合物、リンカー、免疫調節化合物とリンカーのリンカーペイロード（ＬＰ）、およびコンジュゲートを作製する種々の方法を示す。当業者であれば、同様の方法によって、または当業者に知られている他の方法を組み合わせることによって、これらの化合物、ＬＰおよびコンジュゲートを作製することができることが理解される。当業者であれば、適切な出発物質を使用し、必要に応じて合成経路を修飾することによって、以下に記載されるのと同様の様式で作製することができるであろうことも理解される。一般に、出発物質および試薬は、供給業者から得ることができる、または当業者に知られている供給源によって合成することができる、または本明細書に記載されるように調製することができる。
【０３８０】
実施例１
免疫調節化合物、リンカーペイロードおよびコンジュゲートの合成
リンカーを、ＰＩ３Ｋ阻害剤、カルシニューリン阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＢＴＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、ＣＲＡＣ阻害剤、ＰＡＲＰ１アンタゴニスト、ＰＰＡＲｇアゴニスト、Ｋｖ１．３アンタゴニスト、ＫＣａ３．１アンタゴニスト、ＰＰ２Ａアゴニスト、ＩＲＡＫ４阻害剤、ＭＹＤ８８阻害剤、ＢＣＬ−２アンタゴニスト、Ａ２ａＲアゴニスト、ＴＬＲ７アンタゴニスト、ｃ−ＫＩＴキナーゼ阻害剤、ＫＣＡ３．１アゴニスト、ＴＧＦβＲ１阻害剤、ＴＧＦβＲ２阻害剤、ＡＣＣアンタゴニスト、ＡＳＫ１アンタゴニスト、ＧＬＩ１阻害剤、ＴＮＫＳアンタゴニストまたはＴＮＩＫアンタゴニストなどの免疫調節化合物と結合する。免疫調節化合物に結合しているリンカーが、リンカー−免疫調節化合物（ＬＰ）を形成する。その後、ＬＰを抗体などの抗体コンストラクトにコンジュゲートして、抗体コンストラクト免疫調節化合物コンジュゲートまたはコンジュゲートを形成する。
【０３８１】
ＴＧＦβＲ２の阻害剤
実施例１．１  （Ｓ）−Ｎ１−（４−（５−アミノ−６−（（４−モルホリノピリジン−３−イル）カルバモイル）ピラジン−２−イル）ベンジル）−２−（６−（４−（（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）メチル）−シクロヘキサン−１−カルボキサミド）ヘキサンアミド）−Ｎ５−（２−（３−（（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，４Ｒ）−４−ヒドロキシ−２−（（４−（４−メチルチアゾール−５−ｙｌ）ベンジル）カルバモイル）ピロリジン−１−イル）−３，３−ジメチル−１−オキソブタン−２−イル）アミノ）−３−オキソプロポキシ）エチル）ペンタンジアミド（化合物１−１）の合成
2020523319.tif 000103
【０３８２】
ステップＡ：中間体１Ｂ−１の調製
2020523319.tif 000104
ＨＡＴＵ（３．５４ｇ、９．３６ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ２５ｍＬ中３−アミノ−６−ブロモピラジン−２−カルボン酸１．６４ｇ（７．５ｍｍｏｌ）を含有する溶液に添加した。反応物を５分間攪拌した後、Ｎ−メチルモルホリン２．５ｍＬ（２２．５ｍｍｏｌ）および４−モルホリノピリジン−３−アミン１．６８ｇ（９．３６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１６時間攪拌し、次いで、飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液１０ｍＬ、次いで水１０ｍＬでクエンチした。混合物をＥｔＯＡｃで３回抽出した；合わせた有機相をブラインで洗浄し、次いで、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。次いで、溶媒をエバポレートし、残渣をクロマトグラフィーにかけると（０％〜２０％ＣＨ３ＯＨ／ジクロロメタン）、中間体１Ｂ−１が黄色個体として得られた。
【０３８３】
ステップＢ：中間体１Ｂ−２の調製
2020523319.tif 000105
ジオキサン２５ｍＬおよび２Ｎ  Ｎａ２ＣＯ３  ４．０ｍＬ（８．０ｍｍｏｌ）中３−アミノ−６−ブロモ−Ｎ−（４−モルホリノピリジン−３−イル）ピラジン−２−カルボキサミド１．５ｇ（４．０ｍｍｏｌ）および（４−（２−（（（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニル）−アミノ）メチル）フェニル）ボロン酸１．１ｇ（４．４ｍｍｏｌ）を含有する溶液を脱気し、窒素を３回逆充填した。ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）２９５ｍｇ（０．４ｍｍｏｌ）を添加し、反応容器を窒素で２回脱気した。次いで、反応混合物を９０℃で３時間加熱し、次いで、冷却し、一晩攪拌し、次いで、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）プラグを通して濾過した。濾液をＥｔＯＡｃで希釈し、水、次いでブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。次いで、溶媒をエバポレートし、残渣をクロマトグラフィーにかけると（０％〜２０％ＭｅＯＨ／ジクロロメタン）、化合物中間体１Ｂ−２  １．３ｇが白色固体として得られた。LCMS (M+H) = 506.
【０３８４】
ステップＣ：中間体１Ｂ−３の調製
2020523319.tif 000106
ＥｔＯＡｃ２５ｍＬ中、中間体１Ｂ−２  １．２ｇ（２．４ｍｍｏｌ）を含有する溶液に室温でジオキサン中４Ｎ  ＨＣｌ  １０ｍＬを添加した。反応物を３時間攪拌し、溶媒をエバポレートした。得られた固体を、トルエンで３回粉砕すると、所望のアミン塩が得られ、これを精製することなく使用した。LCMS (M+H) = 406.
【０３８５】
ステップＤ：中間体１Ｂ−４の調製
2020523319.tif 000107
ＤＭＦ２ｍＬ中、中間体１Ｂ−３  １１２ｍｇ（０．２７６ｍｍｏｌ）およびＢｏｃ−Ｌ−グルタミン酸５−ベンジルエステル９３ｍｇ（０．２７６ｍｍｏｌ）を含有する溶液に、ＨＡＴＵ１０５ｍｇ（０．２７６ｍｍｏｌ）およびＮ−メチルモルホリン０．０６ｍＬ（０．５５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１６時間攪拌し、次いで、飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液１ｍＬおよび水１ｍＬでクエンチした。混合物をＥｔＯＡｃで３回抽出した；合わせた有機相をブラインで洗浄し、次いで、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。次いで、溶媒をエバポレートし、残渣をクロマトグラフィーにかけると（０％〜２０％ＣＨ３ＯＨ／ジクロロメタン）、化合物中間体１Ｂ−４  １６０ｍｇが黄色固体として得られた。LCMS (M+H) = 725.
【０３８６】
ステップＥ：中間体１Ｂ−５の調製
2020523319.tif 000108
１：１  ＴＨＦ−ＥｔＯＨ  ２０ｍＬ中、中間体１Ｂ−４  １００ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ）を含有する溶液を脱気し、窒素を３回逆充填した。２０％Ｐｄ（ＯＨ）２  １００ｍｇを添加し、混合物をさらに２回脱気した。反応混合物を６時間攪拌し、次いで、ＥｔＯＡｃを用いてＣｅｌｉｔｅを通して濾過した。溶媒の除去およびトルエンによる粉砕によって、中間体１Ｂ−５  ７５ｍｇが得られ、これを次のステップに直接使用した。LCMS (M+H) = 635.
【０３８７】
ステップＦ：中間体１Ｂ−６の調製
2020523319.tif 000109
ＤＭＦ１．０ｍＬ中、中間体１Ｂ−５  ７５ｍｇ（０．１２ｍｍｏｌ）および（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｓ）−２−（３−（２−アミノエトキシ）プロパンアミド）−３，３−ジメチルブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）ベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド８２ｍｇ（０．１５ｍｍｏｌ）を含有する溶液に、ＢＯＰ試薬６６ｍｇ（０．１５ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン０．０２６ｍＬ（０．２４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１６時間攪拌し、次いで、飽和ＮａＨＣＯ３溶液１ｍＬおよび水１ｍＬでクエンチした。混合物をＥｔＯＡｃで３回抽出した；合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、次いで、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。次いで、溶媒をエバポレートし、残渣をクロマトグラフィーにかけると（０％〜２０％ＣＨ３ＯＨ／ジクロロメタン）、所望の化合物５８ｍｇが黄色固体として得られ、これを直ちにＥｔＯＡｃ  ５ｍＬに溶解し、次いで、室温で、ジオキサン中４Ｎ  ＨＣｌ  １ｍＬで処理し、反応物を３時間攪拌した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をトルエンと３回共沸混合し、次いで、エーテルと攪拌し、濾過すると、（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ１−（４−（５−アミノ−６−（（４−モルホリノピリジン−３−イル）カルバモイル）ピラジン−２−イル）ベンジル）−Ｎ５−（２−（３−（（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，４Ｒ）−４−ヒドロキシ−２−（（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）ベンジル）カルバモイル）ピロリジン−１−イル）−３，３−ジメチル−１−オキソブタン−２−イル）アミノ）−３−オキソプロポキシ）−エチル）ペンタンジアミドトリヒドロクロリド４３ｍｇが淡黄色結晶固体として得られた。LCMS (M+H) = 1062.
【０３８８】
中間体１Ｂ−６はＰＲＯＴＡＣ  Ｔ−０１５である
【０３８９】
ステップＧ：化合物１−１の調製
2020523319.tif 000110
（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ１−（４−（５−アミノ−６−（（４−モルホリノピリジン−３−イル）カルバモイル）ピラジン−２−イル）ベンジル）−Ｎ５−（２−（３−（（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，４Ｒ）−４−ヒドロキシ−２−（（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）ベンジル）カルバモイル）ピロリジン−１−イル）−３，３−ジメチル−１−オキソブタン−２−イル）アミノ）−３−オキソプロポキシ）エチル）ペンタンジアミドトリヒドロクロリド４３ｍｇ（０．０３７ｍｍｏｌ）を含有する溶液を、ＤＣＭ１．５ｍＬおよびＤＩＰＥＡ（０．０６４ｍＬ、０．３６ｍｍｏｌ）中ＬＣ−ｓｍｃｃ（スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシ−（６−アミドカプロエート））（１６ｍｇ、０．０３７ｍｍｏｌ）と合わせた。一晩攪拌した後、反応物は濁り、ＬＣＭＳは、生成物の存在を示した。反応物を濃縮し、次いで、最小量のＴＨＦおよび水に溶解した。混合物を飽和ＮａＨＣＯ３で中和し、混合物をクロマトグラフィーにかけると（３０ｇ、Ｃ１８、Ｈ２ＯからＣＨ３ＣＮ、液体ローディング）、ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏからの凍結乾燥後、化合物１−１（３１．８ｍｇ）が黄色固体として得られた。1H NMR (CD3OD) δ 9.46 (s, 1H), 8.84 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.26 (d, J=8.5Hz, 1H), 8.03 (d, J=8.5Hz, 2H), 7.44 (d, J=8.5Hz, 2H), 7.41 (d, J=8.4Hz, 2H), 7.35 (d, J=8.4Hz, 2H), 7.26 (d, J=5.5Hz, 1H), 6.78 (s, 2H), 4.66 (s, 1H), 4.59 (m, 2H), 4.46 (t, J=7.0Hz, 4H), 4.37 (m, 2H), 3.88 (d, J=11.5Hz, 1H), 3.81-3.70 (m, 5H), 3.69 (t, J=5.5Hz, 2H), 3.55-3.49 (m, 3H), 3.11 (t, J=11.5Hz, 2H), 3.10-3.01 (m, 5H), 2.50 (t, J=15.0Hz, 2H), 2.33 (s, 3H), 2.35-2.22 (m, 6H), 2.11-2.01 (m, 4H), 1.94 (m, 1H), 1.76-1.58 (m, 8H), 1.50-1.25 (m, 8H), 1.11 (s, 9H), 1.05-0.95 (m, 4H).  LCMS (M+H) = 1395.6.
【０３９０】
表３、表４および表５の以下の化合物を、ステップＢの適切なアリールボロン酸およびステップＥのＥ３リガーゼリガンド／スペーサー基を置換することによって、化合物１−１の合成について記載されるのと同様の様式で調製した。
2020523319.tif 000111
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【０３９１】
実施例１．２  ３−アミノ−６−（４−（２−（（２Ｓ）−２−（６−（４−（（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）メチル）シクロヘキサン−１−カルボキサミド）ヘキサンアミド）−６−（２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミド）ヘキサンアミド）エチル）フェニル）−Ｎ−（４−モルホリノピリジン−３−イル）ピラジン−２−カルボキサミド（化合物２−１）の合成
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【０３９２】
ステップＡ：中間体７Ｂ−１の調製
2020523319.tif 000115
ジオキサン５０ｍＬおよび２Ｎ  Ｎａ２ＣＯ３  ８ｍＬ（１６．０ｍｍｏｌ）中３−アミノ−６−ブロモ−Ｎ−（４−モルホリノピリジン−３−イル）ピラジン−２−カルボキサミド３．０ｇ（８．０ｍｍｏｌ）および（４−（２−（（（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニル）−アミノ）エチル）フェニル）ボロン酸２．６ｇ（８．８ｍｍｏｌ）を含有する溶液を脱気し、窒素を３回逆充填した。ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）６００ｍｇ（０．８ｍｍｏｌ）を添加し、反応容器を窒素で２回脱気した。次いで、反応混合物を９０℃で３時間加熱し、次いで、冷却し、一晩攪拌し、次いで、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）プラグを通して濾過した。濾液をＥｔＯＡｃで希釈し、水、次いでブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。次いで、溶媒をエバポレートし、残渣をクロマトグラフィーにかけると（０％〜２０％ＭｅＯＨ／ジクロロメタン）、化合物中間体１．２ａ  ２．５ｇが褐色固体として得られた。物質を１：１ＴＨＦ：ＥｔＯＨ  １００ｍＬに溶解し、脱気し、窒素を３回逆充填した。２０％Ｐｄ（ＯＨ）２  ５００ｍｇを添加し、混合物をさらに２回脱気した。反応混合物を１６時間攪拌し、次いで、ＥｔＯＡｃを用いてＣｅｌｉｔｅを通して濾過した。溶媒を除去すると、中間体７Ｂ−１  ２．０ｇが得られ、これを次のステップに直接使用した。LCMS (M+H) = 420.
【０３９３】
ステップＢ：中間体７Ｂ−２の調製
2020523319.tif 000116
ＤＭＦ５ｍＬ中Ｂｏｃ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｚ）−ＯＨ  ２２８ｍｇ（０．６０ｍｍｏｌ）を含有する溶液に、ＨＡＴＵ２２８ｍｇ（０．６０ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を５分間攪拌した後、中間体７Ｂ−１  ２１０ｍｇ（０．５０ｍｍｏｌ）およびＮ−メチルモルホリン１２１ｍｇ（１．２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を３時間攪拌し、次いで、飽和ＮａＨＣＯ３溶液５ｍＬおよび水２ｍＬでクエンチした。混合物をＥｔＯＡｃで３回抽出した；合わせた有機相をブラインで洗浄し、次いで、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。次いで、溶媒をエバポレートし、残渣をクロマトグラフィーにかけると（０％〜２０％ＣＨ３ＯＨ／ジクロロメタン）、化合物中間体７Ｂ−２  １９０ｍｇが黄色固体として得られた。LCMS (M+H) = 782.
【０３９４】
ステップＣ：中間体７Ｂ−３の調製
2020523319.tif 000117
メタノール１０ｍＬ中、中間体７Ｂ−２  １６４ｍｇ（０．２１ｍｍｏｌ）を含有する溶液を３回脱気しながら、窒素を逆充填した後、５％Ｐｄ／Ｃ  ５０ｍｇを添加した。水素バルーンを添加し、反応物を３時間攪拌し、次いで、ＥｔＯＡｃを用いてＣｅｌｉｔｅを通して濾過した。溶媒を除去すると、中間体７Ｂ−３  ４０ｍｇが黄色固体として得られた。1H NMR (CD3OD) δ9.48 (s, 1H), 8.77 (s, 1H), 8.28 (d, J=5.6Hz, 1H), 8.02 (d, J=8.0Hz, 2H), 7.40 (d, J=8.0Hz, 2H), 7.28 (d, J=5.2Hz, 1H), 3.98-3.79 (m, 5H), 3.51 (m, 2H), 3.04 (t, J=4.8Hz, 4H), 2.90 (t, J=5.1Hz, 2H), 2.62 (t, J=7.2Hz, 2H), 1.68 (m, 1H), 1.51 (s, 9H), 1.44-1.22 (m, 5H).  LCMS (M+H) = 648.3.
【０３９５】
ステップＤ：中間体７Ｂ−４の調製
2020523319.tif 000118
ＤＭＦ１ｍＬ中、中間体７Ｂ−３  ５８ｍｇ（０．０９ｍｍｏｌ）および２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）酢酸３０ｍｇ（０．０９ｍｍｏｌ）を含有する溶液に、ＢＯＰ試薬４８ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン０．０４７ｍＬ（０．２７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１６時間攪拌し、次いで、飽和ＮａＨＣＯ３溶液１ｍＬおよび水１ｍＬでクエンチした。混合物をＥｔＯＡｃで３回抽出し、合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、次いで、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。次いで、溶媒をエバポレートし、残渣をクロマトグラフィーにかけると（０％〜２０％ＣＨ３ＯＨ／ジクロロメタン）、所望の化合物６０ｍｇが得られ、これを直ちにＥｔＯＡｃ４ｍＬおよびメタノール１ｍＬに溶解し、次いで、室温で、ジオキサン中４Ｎ  ＨＣｌ  ２ｍＬで処理し、反応物を２時間攪拌した。溶媒を減圧下で除去し、黄色固体をジエチルエーテルから３回エバポレートすると、中間体７Ｂ−４  ４９ｍｇが淡黄色結晶固体として得られた。LCMS (M+H) = 862.
【０３９６】
中間体７Ｂ−４はＰＲＯＴＡＣ  Ｔ−２０である。
【０３９７】
ステップＥ：化合物２−１の調製
2020523319.tif 000119
淡黄色結晶固体として（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ１−（４−（５−アミノ−６−（（４−モルホリノピリジン−３−イル）カルバモイル）ピラジン−２−イル）ベンジル）−Ｎ５−（２−（３−（（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，４Ｒ）−４−ヒドロキシ−２−（（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）ベンジル）カルバモイル）ピロリジン−１−イル）−３，３−ジメチル−１−オキソブタン−２−イル）アミノ）−３−オキソプロポキシ）エチル）ペンタンジアミドトリヒドロクロリド４３ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を含有する溶液を、ＤＣＭ３ｍＬおよびＤＩＰＥＡ（０．１３ｍＬ、０．７ｍｍｏｌ）中ＬＣ−ｓｍｃｃ（スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシ−（６−アミドカプロエート））（３２ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）と合わせた。一晩攪拌した後、反応物が濁り、ＬＣＭＳが生成物の存在を示した。反応物を濃縮し、次いで、最小量のＴＨＦおよび水に溶解した。混合物を飽和ＮａＨＣＯ３で中和し、混合物をクロマトグラフィーにかけると（３０ｇ、Ｃ１８、Ｈ２ＯからＣＨ３ＣＮ、液体ローディング）、ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏからの凍結乾燥後に、化合物２−１が黄色固体として得られた。LCMS (M+H) = 1194.3.
【０３９８】
実施例２
抗体とのコンジュゲーションのための中間体の合成
ＴＲＡＦ２およびＮＣＫ相互作用キナーゼ（ＴＮＩＫ）阻害剤
実施例２．１
４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル（（６−（（８−（（（１ｓ，４ｓ）−４−ヒドロキシ−シクロヘキシル）オキシ）キナゾリン−２−イル）アミノ）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−４−イル）メチル）カルバメート（化合物２．１）の合成
2020523319.tif 000120
【０３９９】
ステップＡ：中間体２．１ａの調製
2020523319.tif 000121
４−ブロモ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−６−アミン（９０３ｍｇ、４．２６ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ１５ｍＬ、Ｈ２Ｏ  ８ｍＬおよびＭｅＯＨ  ２０ｍＬの混合物に溶解した。固体ＮａＨＣＯ３（７１６ｍｇ、８．５２ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を１５分間攪拌した後、Ｂｏｃ２Ｏ  １．４ｇ（６．３９ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を濃縮し、ＭｅＯＨで覆うと、微細暗色懸濁液が得られた。次いで、シリカゲルを添加し、混合物を濃縮乾固した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ１２５ｇ、ＤＣＭから２０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって、所望の物質（１．１ｇ）が黄色固体として得られた。1H NMR (CDCl3) δ8.48 (s, 1H), 8.41 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 1.69 (s, 9H).
【０４００】
ステップＢ：中間体２．１ｂの調製
2020523319.tif 000122
ＤＭＦ２５ｍＬ中、中間体２．１ａ（０．９７９ｇ、２．３７ｍｍｏｌ）を含有する混合物に、４，５−ビス（ジフェニルホスフィノ）−９，９−ジメチルキサンテン（０．１３７ｇ、０．２３７ｍｍｏｌ）およびＺｎ（ＣＮ）２（０．４１８ｇ、３．５６ｍｍｏｌ）を添加した。混合物をＮ２で１０分間パージした。次いで、酢酸パラジウム（ＩＩ）（０．０５３ｇ、０．２３７ｍｍｏｌ）を添加し、混合物をＮ２で１０分間パージし、次いで、８０℃に加熱した。５時間後、反応物を冷却し、ＥｔＯＡｃで希釈し、Ｃｅｌｉｔｅを通して濾過した。クロマトグラフィー（２４ｇ  Ｇｏｌｄシリカ、ＤＣＭから２０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって、ｔｅｒｔ−ブチル（４−シアノ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−６−イル）カルバメートが得られ、所望の生成物が淡ピンク色固体として得られ、これを次のステップに直接使用した。
【０４０１】
ステップＣ：中間体２．１ｃの調製
2020523319.tif 000123
Ｈ  Ｃｕｂｅ：３０％濃ＮＨ４ＯＨ  ２２ｍＬをＭｅＯＨで２００ｍＬに希釈した。この溶液の半分を使用してプライミングし、Ｈ−ｃｕｂｅラインを洗浄し、ＭｅＯＨ中２Ｎ  ＮＨ４ＯＨ（８８ｍｌ）を使用して試料を溶解した。７０×４ｍｍ  Ｒａ−Ｎｉカラム、６０℃、１０ｐｓｉ、１ｍｌ／分、ＮＨ４ＯＨ／ＭｅＯＨ中０．０２６モル濃度、Ｈ−ｃｕｂｅ機器で４時間（再循環）を使用すると、ＬＣＭＳは、いくらかのＳＭが残っていながら生成物を示した。試料を濃縮し、高真空下で１６時間置いた。クロマトグラフィー（４０ｇシリカ、Ｇｏｌｄ、ＤＣＭから８０：１８：２  ＤＣＭ：ＭｅＯＨ：ＮＨ４ＯＨ）によって、部分的分離が得られ、所望の生成物４４０ｍｇが白色固体として得られ、これをさらに精製することなく次のステップに直接使用した。LCMS (M+H) = 263.
【０４０２】
ステップＤ：中間体２．１ｄの調製
2020523319.tif 000124
ＴＨＦ１７ｍＬ中、中間体２．１ｃと飽和ＮａＨＣＯ３  ３ｍＬの氷冷混合物に、クロロギ酸ベンジル（０．２９ｍＬ、２．０ｍｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を３時間攪拌し、次いで、濃縮し、ＥｔＯＡｃで覆い、Ｎａ２ＳＯ４を通して濾過し、シリカゲルで濃縮し、２４ｇシリカＧｏｌｄカートリッジ上に乾燥ローディングした。１００％ヘプタンから１００％ＥｔＯＡｃによる溶出によって、中間体２．１ｄ  ４５０ｍｇは白色固体として得られた。1H NMR (CDCl3) d 8.52 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.6-7.3 (m, 11H), 6.60 (bs, 1H), 5.55 (s, 2H), 5.25 (s, 2H), 4.61 (s, 2H), 1.56 (s, 9H).
【０４０３】
ステップＥ：中間体２．１ｅの調製
2020523319.tif 000125
ベンジル４−（（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）メチル）−６−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−１−カルボキシレート（１６１ｍｇ、０．３０３ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ  １０ｍＬ中懸濁液に、Ｋ２ＣＯ３（８４ｍｇ、０．６０６ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で１時間攪拌すると、ＴＬＣは反応が完了したことを示した。クロマトグラフィー（４ｇシリカ、Ｇｏｌｄ、ＤＣＭから２０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって、非脱保護化合物（１４１．８ｍｇ）が白色固体として得られた。この物質をＤＣＭ  ９ｍＬに溶解し、ＴＦＡ  １ｍＬで処理した。反応物を室温で１時間攪拌し、次いで、濃縮した。残渣をＤＣＭに溶解し、Ｅｔ３Ｎ  １ｍＬで処理した。反応物を濃縮し、クロマトグラフィーにかけると（４ｇシリカゲル、Ｇｏｌｄ、ＤＣＭから８０：１８：２ＤＣＭ：ＭｅＯＨ：ＮＨ４ＯＨ）、中間体２．１ｅ  １１５ｍｇが淡黄色半固体として得られた。1H NMR (CDCl3) δ7.70 (s, 1H), 7.25 (m, 5H), 6.72 (s, 1H), 6.42 (s, 1H), 5.87 (bs, 1H), 5.05 (s, 2H), 4.44 (s, 2H).
【０４０４】
ステップＦ：中間体２．１ｆの調製
2020523319.tif 000126
イソプロパノール２ｍＬ中、中間体２．１ｅ  ５６ｍｇ（０．１８８ｍｍｏｌ）および８−（（（１ｓ，４ｓ）−４−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）シクロヘキシル）オキシ）−２−クロロキナゾリン９６ｍｇ（０．２４４ｍｍｏｌ）を含有する混合物をマイクロ波管中１５０℃で２時間加熱した。反応物を冷却し、水０．５ｍＬを添加した。テトラブチルアンモニウムフルオリド（５６４μｌ、０．５６４ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を２時間攪拌した。溶媒を濃縮し、次いで、ＥｔＯＡｃとＮａＨＣＯ３に分配した。ＥｔＯＡｃを水、次いでブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。物質を、ＤＣＭを使用してシリカゲル上に吸着させ、次いで、濃縮した。クロマトグラフィー（２４ｇシリカゲル、Ｇｏｌｄ、ＤＣＭから１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって、中間体２．１ｆ  ４１ｍｇが黄色固体として得られた。1H NMR (CD3OD) δ9.12 (s, 1H), 9.05 (bs, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.41-7.06 (m, 9H), 5.13 (s, 2H), 4.89 (s, 1H), 4.71 (bs, 2H), 3.86 (bs, 1H), 2.20-2.07 (m, 4H), 1.89-1.80 (m, 2H), 1.73 (t, J=12Hz, 2H).  LCMS (M+H) = 539.6.
【０４０５】
ステップＧ：化合物２．１ｇの調製
2020523319.tif 000127
ベンジル（（６−（（８−（（（１ｓ，４ｓ）−４−ヒドロキシシクロヘキシル）オキシ）キナゾリン−２−イル）アミノ）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−４−イル）メチル）カルバメート（１８１ｍｇ、０．３３６ｍｍｏｌ）を含有する混合物を、マイクロ波管中、水（２ｍｌ）およびジオキサン中４Ｎ  ＨＣｌ（２ｍｌ）と合わせ、次いで、マイクロ波中１００℃で２時間加熱した。溶媒を減圧下で除去し、飽和ＮａＨＣＯ３を添加して遊離塩基を生成した。この混合物を、最小のＭｅＯＨを使用して１００ｇ  Ｃ１８カラムにローディングして、ローディングを終了した。Ｈ２ＯからＣＨ３ＣＮ（ＴＦＡ修飾剤）で溶出すると、ＤＣＭおよびヘプタンとのコエバポレーション後に中間体２．１ｇ  １２１ｍｇが黄色固体として得られた。1H NMR (D2O) δ9.12 (s, 1H), 8.97 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 7.48 (d, J=2.0Hz, 1H), 7.42 (dd, J=2.0, 8.0Hz, 1H), 7.34 (d, J=8.0Hz, 1H), 7.30 (m, 3H), 4.70 (s, 1H), 4.44 (s, 2H), 3.80 (m, 1H), 1.94 (m, 2H), 1.67 (m, 6H).  LCMS (M+H) = 405.3.
【０４０６】
ステップＨ：化合物２．１の調製
2020523319.tif 000128
ＤＭＦ１ｍＬ中４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル（４−ニトロフェニル）カーボネート（４５．６ｍｇ、０．０６２ｍｍｏｌ）を含有する溶液に、（１ｓ，４ｓ）−４−（（２−（（４−（アミノメチル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−６−イル）アミノ）キナゾリン−８−イル）オキシ）シクロヘキサン−１−オール（６１８μＬ、０．０６２ｍｍｏｌ）の０．１Ｍ溶液６１８μＬおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２１．５３μｌ、０．１２４ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を１６時間攪拌し、次いで、濃縮した。残渣をクロマトグラフィーにかけると（３０ｇ  Ｃ１８、Ｈ２ＯからＣＨ３ＣＮ、ＴＨＦ、飽和ＮａＨＣＯ３（水溶液）およびＨ２Ｏの混合物を使用して液体ローティング）、化合物２．１  ２５ｍｇが黄色固体として得られた。1H NMR (CD3OD) δ9.12 (s, 1H), 9.07 (bs, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.56 (d, J=8.0Hz, 2H), 7.40 (d, J=8.0Hz, 1H), 7.33-7.22 (m, 4H), 7.12 (bs, 1H), 6.76 (s, 2H), 5.08 (s, 2H), 4.89 (m, 1H), 4.82 (s, 2H), 4.72 (m, 2H), 4.49 (m, 1H), 4.15 (d, J=7.5Hz, 1H), 3.86 (bs, 1H), 3.44 (m, 3H), 3.22-3.08 (m, 4H), 2.26 (t, J=7.5Hz, 2H), 2.18-2.03 (m, 6H), 1.89 (m, 3H), 1.73 (m, 3H), 1.65-1.51 (m, 7H), 1.30 (3H), 0.96 (m, 6H).  LCMS (M+H) = 1003.9.
【０４０７】
ＴＧＦβＲ２阻害剤
実施例２．２
以下の化合物を化合物２．１について記載されるのと同様の様式で調製する：
【０４０８】
化合物２．３  ４２−Ｏ−（アミノエチル）ラパマイシンのＬＰ
2020523319.tif 000129
【０４０９】
実施例３
非操作抗体の天然鎖内ジスルフィド結合の部分的還元による抗体−ＴＧＦｂ阻害剤コンジュゲートの作製
ｍＡｂ（ＰＢＳ中３〜８ｍｇ／ｍＬ）を、分子量カットオフ遠心濾過（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、３０ｋＤａ）を介して、ＨＥＰＥＳ（１００ｍＭ、ｐＨ７．０、１ｍＭ  ＤＴＰＡ）に交換した。結果として生じたｍＡｂ溶液を風袋引き５０ｍＬ円錐管に移した。ｍＡｂ濃度は、Ａ２８０によって３〜８ｍｇ／ｍＬと決定された。ｍＡｂ溶液に、ＴＣＥＰ（２．０〜４．０当量、１ｍＭストック）を室温で添加し、結果として生じた混合物を、穏やかに振盪しながら、３７℃で３０〜９０分間インキュベートした。室温に冷却したら、攪拌棒を反応管に添加した。攪拌しながら、実施例１および２からのリンカーペイロード（５〜１０当量、１０ｍＭ  ＤＭＳＯ）を滴下した。結果として生じた反応混合物を常温で３０〜６０分間攪拌させ、その時点で、Ｎ−エチルマレイミド（３．０当量、１００ｍＭ  ＤＭＡ）を添加した。さらに１５分間攪拌した後、Ｎ−アセチルシステイン（６．０〜１１．０当量、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ）を添加した。次いで、粗ＡＤＣをＰＢＳに交換し、移動相としてＰＢＳを使用して、分取ＳＥＣ（例えば、ＨｉＬｏａｄ  ２６／６００、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ２００ｐｇ）によって精製した。純粋な画分を、分子量カットオフ遠心濾過（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、３０ｋＤａ）を介して濃縮し、滅菌濾過し、１５ｍＬ円錐管に移した。以下の実施例４に記載される方法によって、薬物−抗体コンストラクト比（モル比）を決定した。
【０４１０】
実施例４
薬物−抗体コンストラクト比を決定するための一般的手順
疎水性相互作用クロマトグラフィー
コンジュゲートの６ｍｇ／ｍＬ溶液１０μＬを、ＴＯＳＯＨ  ＴＳＫｇｅｌ  Ｂｕｔｙｌ−ＮＲＰ（商標）疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）カラム（２．５μＭ粒径、４．６ｍｍ×３５ｍｍ）を取り付けたＨＰＬＣ系セットアップに注入した。次いで、１８分間にわたって、１２分間にわたる１００％移動相Ａから１００％移動相Ｂ、引き続いて６分間の１００％移動相Ａでの再平衡化で移動相勾配を実行する方法を実行する。流速は０．８ｍＬ／分であり、検出器を２８０ｎＭに設定する。移動相Ａは１．５Ｍ硫酸アンモニウム、２５ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７）である。移動相Ｂは２５ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７）中２５％イソプロパノールである。実行後、クロマトグラムを積分し、加重ピーク面積を合計することによってモル比を決定する。
質量分析
抗体コンジュゲート（抗体コンストラクト免疫調節化合物コンジュゲート）１μｇを、Ａｇｉｌｅｎｔ  １２９０  Ｉｎｆｉｎｉｔｙ  ＵＨＰＬＣ系と連結したＡｇｉｌｅｎｔ  Ｄｕａｌ  Ｊｅｔ  Ｓｔｒｅａｍ  ＥＳＩ源を備えたＡｇｉｌｅｎｔ  ６５５０  ｉＦｕｎｎｅｌ  Ｑ−ＴＯＦなどのＬＣ／ＭＳに注入した。生データを得て、Ｍａｘｉｍｕｍ  Ｅｎｔｒｏｐｙデコンボリューションアルゴリズムを使用してＢｉｏＣｏｎｆｉｒｍを備えたＡｇｉｌｅｎｔ  ＭａｓｓＨｕｎｔｅｒ  Ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅなどのソフトウェアでデコンボリューションする。インタクトな抗体コンジュゲートの平均質量を、計算のために２５％のトップピーク高さを使用したソフトウェアによって計算する。次いで、このデータを、Ａｇｉｌｅｎｔモル比計算機などの別のプログラムにインポートして、抗体コンジュゲートのモル比を計算する。
【０４１１】
実施例５
ＴＧＦβレポーターアッセイ
材料および一般的手順。ＴＧＦβ／ＳＭＡＤシグナル伝達経路ＳＢＥレポーター細胞株をＢＰＳ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅから得た。増殖培地をＧｅｎｅｔｉｃｉｎを含むＤＭＥＭ−Ｃ（１０％ウシ胎児血清、１×ＮＥＡＡ、１ｍＭピルベート、２ｍＭグルタミン、５０μｇ／ｍＬペニシリン、５０Ｕ／ｍＬストレプトマイシンおよび４００μｇ／ｍＬのＧｅｎｅｔｉｃｉｎを補足したＤＭＥＭ）に交換することを除いて、供給業者の指示に従って、細胞を継代し、増殖させ、液体窒素に貯蔵した。アッセイ培地は、０．５％ウシ胎児血清、１×ＮＥＡＡ、１ｍＭピルベート、５０μｇ／ｍＬペニシリンおよび５０Ｕ／ｍＬストレプトマイシンを補足したＭＥＭとした。
【０４１２】
インビトロ小分子スクリーニングの一般的手順。試験試料（アッセイ培地に希釈した所望の濃度）を、１ウェル当たり２０μＬで９６ウェルアッセイプレートに添加した。レポーター細胞を、フラスコ中の培地を除去した後、少量のＰＢＳ中３７℃で２分間のインキュベーションによって組織培養フラスコから収穫し、細胞をＰＢＳですすぐ。細胞を計数し、アッセイ培地に約０．５×１０６個細胞／ｍＬに希釈し、次いで、８０μＬ／ウェルの細胞を、２０μＬ／ウェルの試験試料（または培地のみ）を含有するアッセイプレートに添加し、５％ＣＯ２加湿インキュベーター中３７℃で約５〜６時間インキュベートした。その時間の後、アッセイ培地中１２ｎｇ／ｍＬに希釈したＴＧＦβ  １５μＬをプレートに添加した。コントロールは、阻害剤を含まず、培地のみ（細胞も、阻害剤も、ＴＧＦβも含まない）を含むＴＧＦβ滴定（５０〜０ｎｇ／ｍＬ）を含んでいた。プレートを５％ＣＯ２加湿インキュベーター中３７℃で１８時間インキュベートした。その後、ルシフェラーゼ基質溶液を１ウェル当たり１００μＬで添加し、暗所中、室温で１５分間インキュベートし、ルミノメーターを使用して発光を測定する。
【０４１３】
実施例６
Ｋｄ値の決定
約１０反応単位（ＲＵ）で固定化抗原ＣＭ５チップと共に２５℃でＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−２０００またはＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ．Ｊ．）を使用した表面プラズモン共鳴アッセイを使用して、Ｋｄを測定する。手短に述べれば、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ（ＣＭ５、ＢＩＡＣＯＲＥ，Ｉｎｃ．）を、供給業者の指示に従って、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）で活性化する。抗原を１０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ４．８で５μｇ／ｍＬ（約０．２μＭ）に希釈した後、５μＬ／分の流速で注入して約１０反応単位（ＲＵ）のカップリングタンパク質を達成する。抗原を注入した後、１Ｍエタノールアミンを注入して、未反応基をブロックする。動態測定のために、２倍系列希釈のＦａｂ（０．７８ｎＭ〜５００ｎＭ）を、約２５μＬ／分の流速で、２５℃で０．０５％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（商標））界面活性剤（ＰＢＳＴ）を含むＰＢＳに注入する。会合センサーグラムと解離センサーグラムを同時に適合させることによって、単純な一対一ラングミュア結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅバージョン３．２）を使用して、会合速度（ｋｏｎ）および解離速度（ｋｏｆｆ）を計算する。比ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして、平衡解離定数（Ｋｄ）を計算する。例えば、Ｃｈｅｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５〜８８１（１９９９）を参照されたい。会合速度が上記の表面プラズモン共鳴アッセイにより１０６Ｍ−１ｓ−１を超える場合、会合速度を、攪拌キュベットを備えた、流動停止を備えた分光光度計（Ａｖｉｖ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）または８０００シリーズＳＬＭ−ＡＭＩＮＣＯ（商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）などの分光光度計で測定される、増加する濃度の抗原の存在下で、ＰＢＳ、ｐＨ７．２中２０ｎＭ抗抗原抗体（Ｆａｂ形態）の２５℃での蛍光放出強度（励起＝２９５ｎｍ、放出＝３４０ｎｍ、１６ｎｍ帯域通過）の増加または減少を測定する蛍光消光技術を使用することによって決定することができる。
【０４１４】
実施例７
ＦＡＰ−ＴＧＦβＲ２標的化コンジュゲートはＴＧＦβシグナルを阻害した
線維芽細胞機能に対するＴＧＦβ媒介効果の阻害を調査するために、ＦＡＰ発現ＧＭ０５３８９肺線維芽細胞を、血清の非存在下で一晩培養した。翌日、細胞を滴定濃度のＦＡＰ抗体とＴＧＦβＲ２免疫調節化合物ＬＰのコンジュゲート（ＦＡＰ−ＴＧＦβＲ２コンジュゲート）で１時間処理した。次いで、細胞を１０ｎｇ／ｍＬ  ＴＧＦβで刺激し、次いで、さらに７２時間培養した。上清を収穫し、ＣＯＬ１Ａ１  αＬＩＳＡまたは比色Ｓｉｒｃｏｌ  Ｃｏｌｌａｇｅｎ  Ａｓｓａｙを使用して、可溶型コラーゲン濃度を決定した。いくつかの条件について、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ  Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙを使用して、線維芽細胞増殖を定量化した。ａ−ＳＭＡ（平滑筋アクチン）誘導を分析するために、ＧＭ０５３８９細胞を４％ＰＦＡを使用して固定し、透過処理し、ＰＥコンジュゲート抗ａ−ＳＭＡ抗体を使用して細胞内で染色した。次いで、フローサイトメトリー解析を使用して、ａ−ＳＭＡ発現レベルを決定した。ＭＦＩはコンジュゲート処理細胞で低く、ＴＧＦβＲ２媒介シグナル伝達が低いことを示した。
【０４１５】
実施例８
ＦＡＰ−ＴＧＦｂＲ２コンジュゲートは、処理細胞でＴＧＦｂＲ２分解を増加させる
線維芽細胞での標的化ＴＧＦβＲ２分解を、以下の通り一部がＥ３ユビキチンリガーゼセレブロンのための結合部分で構成される免疫調節化合物で構成されるＦＡＰ−ＴＧＦβＲ２コンジュゲートについて実証する。ＦＡＰ発現ＧＭ０５３８９肺線維芽細胞を、６ウェル組織培養プレートで血清の非存在下で一晩培養する。次いで、免疫調節化合物がＥ３ユビキチン結合部分を含有するものおよびＥ３ユビキチンリガーゼ結合部分を欠くもの、滴定濃度の２つのＦＡＰ−ＴＧＦβＲ２コンジュゲートで細胞を２４時間処理する。追加のコントロールは、ＧＭ０５３８９細胞上の抗原を認識しない結合ドメインを有するコンジュゲートによる処理である。インキュベーション後、培地を吸引によって除去し、細胞を温ＰＢＳバッファーで洗浄し、吸引によって除去し、細胞を、プロテアーゼ阻害剤カクテルを含有する１×Ｃｅｌｌ  Ｌｙｓｉｓ  Ｂｕｆｆｅｒ（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．）１００μｌを添加することによって溶解し、氷上でインキュベーションし、プレートシェーカーに２分間入れ、上下ピペット操作によって均質化した後回収する。アリコートを除去し、溶解物タンパク質濃度を、ＢＳＡを使用した標準的な手順を使用してＢＣＡによって決定して標準曲線を作成する。溶解物の残りを以下の通りＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル電気泳動およびウエスタンブロット分析に供する：１）標準４×ＳＤＳ試料バッファーを使用し、１００℃で加熱することによって、ＳＤＳ  ＰＡＧＥ用に溶解物を調製する、２）各溶解物について等しい溶解物タンパク質量をレーンに添加し、電気泳動によって分離する、３）分離したタンパク質をＩｍｍｏｂｉｌｏｎ−ＦＬ  ＰＶＤＦ膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｉｎｃ．）に転写する、４）特異的抗ＴＧＦβＲ２マウス抗体を標準的ブロッキングバッファー中膜に添加し、引き続いてインキュベートし、次いで、洗浄する；５）ＨＲＰ−標識抗マウスＩｇＧ抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．）を添加し、膜とインキュベートし、引き続いて洗浄する；および６）ＨＲＰ酵素アッセイキットを使用して、化学発光シグナルを生成し、これをＢｉｏＲａｄ  Ｃｈｅｍｉ  Ｌａｂリーダーによって定量化した。コントロールレーンについてのシグナルと比較して、Ｅ３ユビキチン結合部分を含有するＦＡＰ−ＴＧＦβＲ２コンジュゲートの添加するレベルを増加させると見られる化学発光レベルの減少は、処理細胞におけるコンジュゲート低下ＴＧＦβＲ２レベルによって実証される。
【０４１６】
実施例９
ＬＲＲＣ１５−ＴＧＦβＲ２阻害剤コンジュゲートは、ＴＧＦβ／ＳＭＡＤシグナル伝達経路を阻害した
リンカーを介してＴＧＦβＲ２阻害剤に結合したＬＲＲＣ１５抗体のコンジュゲートが、ＴＧＦβ誘導後、活性であり、ＴＧＦβ／ＳＭＡＤシグナル伝達経路を阻害することができることを実証するために、レポーター細胞株を使用してアッセイを行った。
【０４１７】
材料および一般的手順：親ＴＧＦβ／ＳＭＡＤシグナル伝達経路レポーター細胞株を、１０％ウシ胎児血清、１×ＮＥＡＡ、１ｍＭピルベート、２ｍＭグルタミン、５０μｇ／ｍＬペニシリン、５０Ｕ／ｍＬストレプトマイシンおよび４００μｇ／ｍＬのＧｅｎｅｔｉｃｉｎを補足したＤＭＥＭ中で維持した。レポーター細胞を６ウェルプレートに蒔き、翌日、製造業者の指示に従ってＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ３０００を使用してこれらにトランスフェクトすることによって、レポーター細胞株に、ＬＲＲＣ１５レポーターをコードするベクターを一過的にトランスフェクトした。トランスフェクションの２４時間後、トランスフェクトしたＬＲＲＣ１５＋レポーター細胞およびコントロールレポーター細胞（ＬＲＲＣ１５を発現していない）を、フラスコ中の培地を除去した後、少量のＶｅｒｓｅｎｓｅ中室温で３〜５分間インキュベートすることによって組織培養フラスコから収穫し、細胞をＰＢＳで洗浄した。細胞を計数し、約０．８×１０６個細胞／ｍＬでアッセイ培地に希釈し、次いで、５０μＬ／ウェルを９６ウェルアッセイプレートに添加した。（アッセイ培地は、０．５％ウシ胎児血清、１×ＮＥＡＡ、１ｍＭピルベート、５０μｇ／ｍＬペニシリンおよび５０Ｕ／ｍＬストレプトマイシンを補足したＭＥＭであった）。一定体積の５０μＬ／ウェルの試験試料（アッセイ培地に希釈した所望の濃度）を、細胞を含有するアッセイプレートに添加し、５％ＣＯ２加湿インキュベーター中３７℃で５〜６時間インキュベートした。その時間の後、アッセイ培地に１２．５ｎｇ／ｍＬに希釈したＴＧＦβ  １５μＬをプレートに添加した。コントロールは、ＬＲＲＣ１５抗体のみ、抗ジゴキシン−ＴＧＦβＲ２阻害剤コンジュゲート、ＴＧＦβ滴定、ＴＧＦβ処理のみの細胞、および培地のみ（細胞も阻害剤もＴＧＦβも含まない）を含んでいた。プレートを５％ＣＯ２加湿インキュベーター中３７℃で２４時間インキュベートした。その後、ルシフェラーゼ基質溶液を１ウェル当たり７５μＬで添加し、室温で１０分間振盪しながら暗所でインキュベートし、ルミノメーターを使用して発光を測定した。
【０４１８】
図２を参照すると、結果は、ＬＲＲＣ１５−ＴＧＦβＲ２阻害剤コンジュゲートがＴＧＦβ／ＳＭＡＤシグナル伝達経路によるシグナル伝達を減少させることができたことを示している。図中、Ｘ軸は添加したコンジュゲートまたは抗体の濃度を示している。
【０４１９】
実施例１０
ＤＥＣ２０５−ラパマイシンコンジュゲートは、アロＭＬＲ反応の樹状細胞刺激を低下させる
ＤＥＣ−２０５−ラパマイシンコンジュゲートが、樹状細胞がＴ細胞を刺激する能力を低下させることができることを実証するために、ヒト樹状細胞をＤＥＣ２０５−ラパマイシンコンジュゲートで処理し、次いで、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）において同種異系Ｔ細胞を活性化する能力について評価する。１０００Ｕ／ｍＬ組換えヒト（ｒｈ）ＧＭ−ＣＳＦ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）および２５ｎｇ／ｍＬ  ｒｈ  ＩＬ−４（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を補足した１０％（ｖ／ｖ）熱不活性化ウシ胎児血清（ＦＣＳ）、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、５０Ｕ／ｍｌペニシリンおよび５０μｇ／ｍＬストレプトマイシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を補足したＲＰＭＩ−１６４０培地中で５日間培養することによって、末梢血から単離した単球から樹状細胞を分化させる。ｒｈＧＭ−ＣＳＦおよびｒｈＩＬ−４を含有する新鮮な培地を３日目に添加する（０．５体積）。未成熟ＤＣを収穫し、ＲＰＭＩで広範に洗浄し、次いで、完全ＲＰＭＩ培地中２４ウェルプレートに再度蒔く。ＤＥＣ２０５−ラパマイシンコンジュゲートを、２００ｍＭ〜０．１ｎＭの濃度範囲にわたって樹状細胞に添加し、樹状細胞およびコンジュゲートを３７℃で２４時間インキュベートする。未処理のＤＥＣ−２０５ｍＡｂおよびラパマイシン小分子などのコントロール処理を実験に含める。２４時間後、樹状細胞を収穫し、洗浄し、９６ウェルプレート中ＣＦＳＥ標識Ｔ細胞と１：１の比で再度蒔く。３〜５日間の期間の後、Ｔ細胞増殖を、フローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｅｎｓｏｎ、Ｆｏｒｔｅｓｓａ）でＣＦＳＥ希釈によって評価する。ＤＥＣ２０５−ラパマイシンコンジュゲートの濃度が増加すると、Ｔ細胞増殖のレベル減少が観察される。
【０４２０】
実施例１１
タンパク質分解標的化モジュールを含有するコンジュゲートによるタンパク質分解を決定するための一般的手順
タンパク質分解標的モジュール（ＰＴＭ）および免疫調節化合物を上記のように調製する。ＰＴＭと抗体コンストラクトのコンジュゲートを、鎖間ジスルフィドコンジュゲーションについて実施例３に記載されるように調製する。平均ＤＡＲは約４である。
【０４２１】
細胞を蒔き、接着させ、ＭＧ−１３２などのプロテアーゼ阻害剤の存在下または非存在下、ビヒクル、阻害剤、ＰＲＯＴＡＣまたはコンジュゲートで処理する。処理後、培地を吸引し、細胞を氷冷ＰＢＳですすぐ。ホスファターゼおよびプロテアーゼ阻害剤を含有する氷冷溶解バッファー（２０ｍＭ  トリスＨＣｌ  ｐＨ７．５、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、２ｍＭ  ＥＤＴＡおよび１０％グリセロール）をウェルに添加し、細胞を、セルスクレーパを使用してプレートから除去する。溶解物を、１．５ｍｌ管に移し、約１５分毎にボルテックスして４℃で１時間揺動した。管を８５００×ｇで１０分間回転させ、上清をインスリン針に２回引き入れる。細胞溶解物を−８０℃で凍結する。ＢＣＡアッセイを使用してタンパク質濃度を決定し、等量の試料を還元ローティングバッファーと沸騰させる。次いで、試料を４〜２０％ポリアクリルアミドゲルで電気泳動に供し、次いで、これをＰＶＤＦ膜に転写する。０．０５％Ｔｗｅｅｎ  ２０を含む５％ｗ／ｖ豆乳ＰＢＳでブロッキングおよび染色を行い、０．０５％Ｔｗｅｅｎを含むＰＢＳを使用して洗浄する。ＴＧＦβＲ２を標的化するＰＲＯＴＡＣおよびそのコンジュゲートについては、ブロットを１：２００一次抗ＴＧＦβＲ２抗体（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ、ｓｃ−１７７９１）と４℃で揺動して一晩インキュベートする。ＴＧＦβＲ１を標的化するＰＲＯＴＡＣおよびそのコンジュゲートについては、ブロットを１：３０００一次抗ＴＧＦβＲ１抗体（Ｒ＆Ｄ、ＭＡＢ５８７１）と４℃で揺動して一晩インキュベートする。ローディングコントロールを、揺動しながら室温で１時間、１：１５０００希釈一次抗体インキュベーションで検出する（チューブリン−Ａｂｃａｍ、ａｂ７２９１；アクチン−Ａｂｃａｍ、ａｂ８２２４）。二次抗体を１：１００００希釈し、ブロットを揺動しながら室温で１時間インキュベートする（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、１１５−０３５−００３または１１２−０３５−００３）。ＥＣＬ試薬を使用してシグナルを検出し、ＣｈｅｍｉＤｏｃ  ＭＰ（Ｂｉｏｒａｄ）を使用してブロットを画像化する。ＩｍａｇｅＬａｂソフトウェアを使用してデンシトメトリーの解析を行い、ローディングコントロールに基づいてシグナルを調整する。
【０４２２】
実施例１２
抗ＨＥＲ２抗体とコンジュゲートしたＴＧＦβＲ２−ＶＨＬ  ＰＲＯＴＡＣによるＴＧＦβＲ２の分解
Ｐｒｏｔａｃ  Ｔ−２０を実施例１に記載されるように調製した。ペルツズマブをＨｅｒ２抗体として使用した。概して鎖間システインコンジュゲーションについての実施例３のプロトコルに従って、マレイミドメチルシクロヘキサン−１−カルボキシレートリンカーをＴ−２０に結合してリンカー−Ｔ−２０コンストラクト（Ｔ１１０２０）を形成し、引き続いてＴ１１０２０をＨｅｒ２抗体とコンジュゲーションすることによって、Ｈｅｒ２抗体−Ｐｒｏｔａｃコンジュゲート（０５０−Ｔ１１０２０；化合物２−１（実施例１））を調製した。平均薬物負荷は約４であった。
【０４２３】
ＨＥＲ２を発現しているプラスミドを、市販の材料および条件を使用して、ＨＥＫ２９３細胞にトランスフェクトした。トランスフェクションの２４時間後、細胞をＤＭＳＯ、ＰＲＯＴＡＣ  Ｔ−２０、ＨＥＲ２抗体（ＩｇＧ１）またはＨｅｒ２抗体−Ｐｒｏｔａｃコンジュゲート（０５０−Ｔ１１０２０）で処理した。細胞全体溶解物を、インキュベーションの２時間後、２４時間後または４８時間後の細胞から調製し、ＢＣＡアッセイで定量化した。等量の溶解物をタンパク質ゲルに流し、ＰＶＤＦに転写し、市販の試薬を使用して、ＴＧＦβＲ２を検出した。タンパク質分解の量を定量化するため、ウエスタンブロットのシグナルをアクチンローティングコントロールに調整し、データを一致したコントロールの％として提示する。図３Ａ、図３Ｂおよび図３Ｃを参照すると、０．５μＭおよび１μＭのコンジュゲートの両試験濃度で、標的ＴＧＦβＲ２のレベルが２４時間および４８時間の処理で減少した一方、ＴＧＦβＲ２。
【０４２４】
実施例１３
ＶＨＬおよびセレブロンＥ３結合部分を有する抗体コンジュゲートによるＴＧＦβＲ２の抗原標的化分解
ＨＥＲ２抗原陽性、ＴＲＯＰ２抗原陰性細胞株ＢＴ４７４を使用してＰＲＯＴＡＣコンジュゲートの抗原特異的送達を実証した。
【０４２５】
Ｐｒｏｔａｃ  Ｔ−１５およびＴ−２０を実施例１で上に記載されるように調製した。ペルツズマブをＨｅｒ２抗体として使用した。サシツズマブ（Ｓａｃｉｔｕｚｕｍａｂ）をＴｒｏｐ２抗体として使用した。概して鎖間システインコンジュゲーションについての実施例３のプロトコルに従って、ＭＣ−ＶＣ−ＰＡＢリンカーをＴ−１５またはＴ−２０に結合して、それぞれＴ０５０１５およびＴ０５０２０コンストラクトを形成し、引き続いてＨｅｒ２抗体とコンジュゲーションすることによって、Ｈｅｒ２抗体−Ｐｒｏｔａｃコンジュゲート（０５０−Ｔ０５０１５および０５０−Ｔ０５０２０）を調製した。平均薬物負荷は約４であった。Ｔｒｏｐ２−Ｐｒｏｔａｃコンジュゲート（１３０−Ｔ０５０２０）を同様に調製した。
【０４２６】
ＢＴ４７４細胞を蒔き、翌日、小分子（Ｔ−１５もしくはＴ−２０）、ＨＥＲ２抗体ＴＧＦβＲ２−ＶＨＬ結合ＰＲＯＴＡＣのコンジュゲート（０５０−Ｔ０５０２０）、ＨＥＲ２抗体ＴＧＦβＲ２−セレブロン結合ＰＲＯＴＡＣのコンジュゲート（０５０−Ｔ０５０１５）またはＴＲＯＰ２抗体ＴＧＦβＲ２−ＶＨＬ結合ＰＲＯＴＡＣのコンジュゲート（１３０−Ｔ０５０２０）で処理した。細胞全体溶解物を処理の２４時間後に調製し、ＢＣＡアッセイで定量化した。等量の溶解物をタンパク質ゲルに流し、ＰＶＤＦに転写し、市販の試薬を使用して、ＴＧＦβＲ２およびアクチンを検出した。タンパク質バンドの定量化を行い、ウエスタンシグナルをアクチンローティングコントロールに調整し、データをビヒクルコントロールの％として提示する。図４Ａおよび図４Ｂを参照すると、ＨＥＲ２抗原特異的分解が、両ＨＥＲ２結合ＰＲＯＴＡＣコンジュゲートで見られたが、コントロールＴＲＯＰ２結合ＰＲＯＴＡＣコンジュゲートでは見られなかった。
【０４２７】
実施例１４
ＴＧＦβＲ２／ＴＧＦβＲ１−ＶＨＬ  ＰＲＯＴＡＣによるＴＧＦβＲ２およびＴＧＦβＲ１の細胞レベル低下はプロテアソーム阻害剤感受性である
正常なヒト肺線維芽細胞をプロテアソーム阻害剤ＭＧ−１３２で処理しまたは処理しないで、引き続いてＤＭＳＯまたはＴ−２０を添加した。細胞全体溶解物を調製し、次いで、ＢＣＡアッセイで定量化した。等量の溶解物をタンパク質ゲルに流し、ＰＶＤＦ膜に転写した。市販の試薬を使用して、ＴＧＦβＲ１、ＴＧＦβＲ２およびアクチンを検出した。ウエスタンシグナルをアクチンローティングコントロールに調整し、データを一致したビヒクルコントロールの％として提示する。図５Ａおよび図５Ｂを参照すると、プロテアソーム阻害剤の添加によって、ＴＧＦβＲ１およびＴＧＦβＲ２がＴ−２０によって誘導される分解から保護された。
【０４２８】
本開示の態様を本明細書に示し、記載してきたが、このような態様は例としてのみ提供されることが当業者に明らかであるだろう。本開示から逸脱することなく、多数の変動、変化および置換がここで当業者に思い浮かぶだろう。本明細書に記載される開示の態様の種々の代替が、本開示の実施に使用され得ることが理解されるべきである。以下の特許請求の範囲は、本開示の範囲を定義し、これらの特許請求の範囲内の方法および構造ならびにその均等物がそれによって網羅されることが意図されている。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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