(57)【要約】  本発明は、一般に、それらの活性形態において、ＣＤ７１に結合する活性化可能コンジュゲート抗体並びにこれらの活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体を作り、様々な治療適応、診断適応及び予防適応において使用する方法に関する。
2020537649.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
2020537649.tif 000052
［式中、
（ａ）
（ｉ）ＡＢは、ヒトＣＤ７１に特異的に結合し、
ｉ．配列番号９を含むＣＤＲＨ１配列、配列番号１０を含むＣＤＲＨ２配列及び配列番号１１を含むＣＤＲＨ３配列を含む重鎖可変領域、並びに
ｉｉ．配列番号１２又は配列番号１３を含むＣＤＲＬ１配列、配列番号１４を含むＣＤＲＬ２配列及び配列番号１５を含むＣＤＲＬ３配列を含む軽鎖可変領域
を含む抗体であり、
（ｉｉ）ＭＭは、配列番号１８のアミノ酸配列を含むマスキング部分であり、ここで、活性化可能なコンジュゲート抗体が非切断状態にある場合に、ＭＭは、ＡＢの、ヒトＣＤ７１への結合を阻害し、
（ｉｉｉ）ＬＰ１は、配列番号２０７のアミノ酸配列を含む、第１の連結部分であり、
（ｉｖ）ＣＭは、配列番号１５６の配列を含む切断可能部分であり、ここで、ＣＭは、プロテアーゼに対する基質として機能するポリペプチドであり、
（ｖ）ＬＰ２は、配列番号３８のアミノ酸配列を含む、第２の連結部分であり、
（ｂ）「ｎ」は２である。］
の構造又はその塩を含む、活性化可能なコンジュゲート抗体。
【請求項２】
ＡＢが、ＩｇＧ１アイソタイプを含む、請求項１に記載の活性化可能なコンジュゲート抗体。
【請求項３】
ＡＢが、重鎖定常領域を有する抗体であり、ここで、重鎖定常領域のＣ末端残基が、リシンではない、請求項１又は２に記載の活性化可能なコンジュゲート抗体。
【請求項４】
式（Ｉ）：
【化２】
2020537649.tif 000053
［式中、
（ａ）
（ｉ）ＡＢは、ヒトＣＤ７１に特異的に結合し、配列番号５の配列を含む重鎖可変領域及び配列番号７の配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体であり、
（ｉｉ）ＭＭは、配列番号１８のアミノ酸配列を含むマスキング部分であり、ここで、活性化可能なコンジュゲート抗体が非切断状態にある場合に、ＭＭは、ＡＢの、ヒトＣＤ７１への結合を阻害し、
（ｉｉｉ）ＬＰ１は、配列番号２０７のアミノ酸配列を含む、第１の連結部分であり、
（ｉｖ）ＣＭは、配列番号１５６の配列を含む切断可能部分であり、ここで、ＣＭは、プロテアーゼに対する基質として機能するポリペプチドであり、
（ｖ）ＬＰ２は、配列番号３８のアミノ酸配列を含む、第２の連結部分であり、
（ｂ）「ｎ」は２である。］
の構造又はその塩を含む、活性化可能なコンジュゲート抗体。
【請求項５】
ＡＢが、ＩｇＧ１アイソタイプを含む、請求項４に記載の活性化可能なコンジュゲート抗体。
【請求項６】
ＡＢが、重鎖定常領域を有する抗体であり、ここで、重鎖定常領域のＣ末端残基が、リシンではない、請求項４又は５に記載の活性化可能なコンジュゲート抗体。
【請求項７】
式（Ｉ）：
【化３】
2020537649.tif 000054
［式中、
（ａ）
（ｉ）ＡＢは、ヒトＣＤ７１に特異的に結合し、配列番号１６７の配列を含む重鎖及び配列番号１９の配列を含む軽鎖を含む抗体であり、
（ｉｉ）ＭＭは、配列番号１８のアミノ酸配列を含むマスキング部分であり、ここで、活性化可能なコンジュゲート抗体が非切断状態にある場合に、ＭＭは、ＡＢの、ヒトＣＤ７１への結合を阻害し、
（ｉｉｉ）ＬＰ１は、配列番号２０７のアミノ酸配列を含む、第１の連結部分であり、
（ｉｖ）ＣＭは、配列番号１５６の配列を含む切断可能部分であり、ここで、ＣＭは、プロテアーゼに対する基質として機能するポリペプチドであり、
（ｖ）ＬＰ２は、配列番号３８のアミノ酸配列を含む、第２の連結部分であり、
（ｂ）「ｎ」は２である。］
の構造又はその塩を含む、活性化可能なコンジュゲート抗体。
【請求項８】
ＡＢが、ＩｇＧ１アイソタイプを含む、請求項７に記載の活性化可能なコンジュゲート抗体。
【請求項９】
ＡＢが、重鎖定常領域を有する抗体であり、ここで、重鎖定常領域のＣ末端残基が、リシンではない、請求項７又は８に記載の活性化可能なコンジュゲート抗体。
【請求項１０】
式（Ｉ）：
【化４】
2020537649.tif 000055
［式中、ＭＭ−ＬＰ１−ＣＭ−ＬＰ２−ＡＢは、活性化可能な抗体であり、ここで、ＡＢは、ヒトＣＤ７１に特異的に結合する抗体であり、
活性化可能な抗体は、配列番号１６７の配列を含む重鎖及び配列番号１７０の配列を含む軽鎖を含み、
「ｎ」は２である。］
の構造又はその塩を含む、活性化可能なコンジュゲート抗体。
【請求項１１】
ＡＢが、ＩｇＧ１アイソタイプを含む、請求項１０に記載の活性化可能なコンジュゲート抗体。
【請求項１２】
ＡＢが、重鎖定常領域を有する抗体であり、ここで、重鎖定常領域のＣ末端残基が、リシンではない、請求項１０又は１１に記載の活性化可能なコンジュゲート抗体。
【請求項１３】
式（ＩＩ）：
【化５】
2020537649.tif 000056
［式中、
（ａ）
（ｉ）ＡＢは、ヒトＣＤ７１に特異的に結合し、
ｉ．配列番号９を含むＣＤＲＨ１配列、配列番号１０を含むＣＤＲＨ２配列及び配列番号１１を含むＣＤＲＨ３配列を含む重鎖可変領域、並びに
ｉｉ．配列番号１２又は配列番号１３を含むＣＤＲＬ１配列、配列番号１４を含むＣＤＲＬ２配列及び配列番号１５を含むＣＤＲＬ３配列を含む軽鎖可変領域
を含む抗体であり、
（ｉｉ）ＭＭは、配列番号１８のアミノ酸配列を含むマスキング部分であり、ここで、活性化可能なコンジュゲート抗体が非切断状態にある場合に、ＭＭは、ＡＢの、ヒトＣＤ７１への結合を阻害し、
（ｉｉｉ）ＣＭは、配列番号１５６の配列を含む切断可能部分であり、ここで、ＣＭは、プロテアーゼに対する基質として機能するポリペプチドであり、
（ｂ）「ｎ」は２である。］
の構造又はその塩を含む、活性化可能なコンジュゲート抗体。
【請求項１４】
ＡＢが、ＩｇＧ１アイソタイプを含む、請求項１３に記載の活性化可能なコンジュゲート抗体。
【請求項１５】
ＡＢが、重鎖定常領域を有する抗体であり、ここで、重鎖定常領域のＣ末端残基が、リシンではない、請求項１３又は１４に記載の活性化可能なコンジュゲート抗体。
【請求項１６】
式（ＩＩ）：
【化６】
2020537649.tif 000057
［式中、
（ａ）
（ｉ）ＡＢは、ヒトＣＤ７１に特異的に結合し、配列番号５の配列を含む重鎖可変領域及び配列番号７の配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体であり、
（ｉｉ）ＭＭは、配列番号１８のアミノ酸配列を含むマスキング部分であり、ここで、活性化可能なコンジュゲート抗体が非切断状態にある場合に、ＭＭは、ＡＢの、ヒトＣＤ７１への結合を阻害し、
（ｉｉｉ）ＣＭは、配列番号１５６の配列を含む切断可能部分であり、ここで、ＣＭは、プロテアーゼに対する基質として機能するポリペプチドであり、
（ｂ）「ｎ」は２である。］
の構造又はその塩を含む、活性化可能なコンジュゲート抗体。
【請求項１７】
ＡＢが、ＩｇＧ１アイソタイプを含む、請求項１６に記載の活性化可能なコンジュゲート抗体。
【請求項１８】
ＡＢが、重鎖定常領域を有する抗体であり、ここで、重鎖定常領域のＣ末端残基が、リシンではない、請求項１６又は１７に記載の活性化可能なコンジュゲート抗体。
【請求項１９】
式（ＩＩ）：
【化７】
2020537649.tif 000058
［式中、
（ａ）
（ｉ）ＡＢは、ヒトＣＤ７１に特異的に結合し、配列番号１６７の配列を含む重鎖及び配列番号１９の配列を含む軽鎖を含む抗体であり、
（ｉｉ）ＭＭは、配列番号１８のアミノ酸配列を含むマスキング部分であり、ここで、活性化可能なコンジュゲート抗体が非切断状態にある場合に、ＭＭは、ＡＢの、ヒトＣＤ７１への結合を阻害し、
（ｉｉｉ）ＣＭは、配列番号１５６の配列を含む切断可能部分であり、ここで、ＣＭは、プロテアーゼに対する基質として機能するポリペプチドであり、
（ｂ）「ｎ」は２である。］
の構造又はその塩を含む、活性化可能なコンジュゲート抗体。
【請求項２０】
ＡＢが、ＩｇＧ１アイソタイプを含む、請求項１９に記載の活性化可能なコンジュゲート抗体。
【請求項２１】
ＡＢが、重鎖定常領域を有する抗体であり、ここで、重鎖定常領域のＣ末端残基が、リシンではない、請求項１９又は２０に記載の活性化可能なコンジュゲート抗体。
【請求項２２】
式（ＩＩ）：
【化８】
2020537649.tif 000059
［式中、ＭＭ−ＣＭ−ＡＢは、活性化可能な抗体であり、ここで、ＡＢは、ヒトＣＤ７１に特異的に結合する抗体であり、
活性化可能な抗体は、配列番号１６７の配列を含む重鎖及び配列番号１６９の配列を含む軽鎖を含み、
「ｎ」は２である。］
の構造又はその塩を含む、活性化可能なコンジュゲート抗体。
【請求項２３】
ＡＢが、ＩｇＧ１アイソタイプを含む、請求項２２に記載の活性化可能なコンジュゲート抗体。
【請求項２４】
ＡＢが、重鎖定常領域を有する抗体であり、ここで、重鎖定常領域のＣ末端残基が、リシンではない、請求項２２又は２３に記載の活性化可能なコンジュゲート抗体。
【請求項２５】
式（Ｉ）：
【化９】
2020537649.tif 000060
［式中、
（ａ）
（ｉ）ＡＢは、ヒトＣＤ７１に特異的に結合し、
ｉ．配列番号９を含むＣＤＲＨ１配列、配列番号１０を含むＣＤＲＨ２配列及び配列番号１１を含むＣＤＲＨ３配列を含む重鎖可変領域、並びに
ｉｉ．配列番号１２又は配列番号１３を含むＣＤＲＬ１配列、配列番号１４を含むＣＤＲＬ２配列及び配列番号１５を含むＣＤＲＬ３配列を含む軽鎖可変領域
を含む抗体であり、
（ｉｉ）ＭＭは、配列番号１８のアミノ酸配列を含むマスキング部分であり、ここで、活性化可能なコンジュゲート抗体が非切断状態にある場合に、ＭＭは、ＡＢの、ヒトＣＤ７１への結合を阻害し、
（ｉｉｉ）ＬＰ１は、配列番号２０７のアミノ酸配列を含む、第１の連結部分であり、
（ｉｖ）ＣＭは、配列番号１５６の配列を含む切断可能部分であり、ここで、ＣＭは、プロテアーゼに対する基質として機能するポリペプチドであり、
（ｖ）ＬＰ２は、配列番号３８のアミノ酸配列を含む、第２の連結部分であり、
「ｎ」は２である。］
の構造又はその塩を含む、活性化可能なコンジュゲート抗体を作製する方法であって、
（ｂ）
（ｉ）ＭＭ−ＬＰ１−ＣＭ−ＬＰ２−ＡＢを含む活性化可能な抗体を、還元剤により還元すること、及び
（ｉｉ）１つ以上のｖｃＭＭＡＥを、還元された活性化可能な抗体へとコンジュゲートさせること
を含む方法。
【請求項２６】
式（ＩＩ）：
【化１０】
2020537649.tif 000061
［式中、
（ａ）
（ｉ）ＡＢは、ヒトＣＤ７１に特異的に結合し、
ｉ．配列番号９を含むＣＤＲＨ１配列、配列番号１０を含むＣＤＲＨ２配列及び配列番号１１を含むＣＤＲＨ３配列を含む重鎖可変領域、並びに
ｉｉ．配列番号１２又は配列番号１３を含むＣＤＲＬ１配列、配列番号１４を含むＣＤＲＬ２配列及び配列番号１５を含むＣＤＲＬ３配列を含む軽鎖可変領域
を含む抗体であり、
（ｉｉ）ＭＭは、配列番号１８のアミノ酸配列を含むマスキング部分であり、ここで、活性化可能なコンジュゲート抗体が非切断状態にある場合に、ＭＭは、ＡＢの、ヒトＣＤ７１への結合を阻害し、
（ｉｉ）ＣＭは、配列番号１５６の配列を含む切断可能部分であり、ここで、ＣＭは、プロテアーゼに対する基質として機能するポリペプチドであり、
「ｎ」は２である。］
の構造又はその塩を含む活性化可能なコンジュゲート抗体を作製する方法であって、
（ｂ）
（ｉ）ＭＭ−ＣＭ−ＡＢを含む活性化可能な抗体を、還元剤により還元すること、及び
（ｉｉ）１つ以上のｖｃＭＭＡＥを、還元された活性化可能な抗体へとコンジュゲートさせること
を含む方法。
【請求項２７】
請求項１〜２４のいずれか一項に記載の活性化可能なコンジュゲート抗体、及び
任意選択的に、薬学的に許容される担体
を含む医薬組成物。
【請求項２８】
対象におけるがんを処置する、その症状を緩和する又はその進行を遅延させる方法であって、胃がん、卵巣がん、食道がん、非小細胞肺がん、ＥＲ＋乳がん、トリプルネガティブ乳がん、結腸直腸がん、黒色腫、前立腺がん、多発性骨髄腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、頭頸部小細胞癌、膵臓がん、中皮腫、非ホジキンリンパ腫、肝細胞癌及び神経膠芽腫からなる群から選択されるがんのために、治療有効量の、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の活性化可能なコンジュゲート抗体又は請求項２７に記載の医薬組成物を、がんを処置する、その症状を緩和する又はその進行を遅延させることを必要とする対象へと投与することを含む方法。
【請求項２９】
医薬としての使用のための、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の活性化可能なコンジュゲート抗体又は請求項２７に記載の医薬組成物。
【請求項３０】
任意選択的に、胃がん、卵巣がん、食道がん、非小細胞肺がん、ＥＲ＋乳がん、トリプルネガティブ乳がん、結腸直腸がん、黒色腫、前立腺がん、多発性骨髄腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、頭頸部小細胞癌、膵臓がん、中皮腫、非ホジキンリンパ腫、肝細胞癌及び神経膠芽腫からなる群から選択される、がんの処置における使用のための、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の活性化可能なコンジュゲート抗体又は請求項２７に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、その内容を、その全体において参照により本明細書に組み込む、２０１７年１０月１４日に出願された、米国仮特許出願第６２／５７２，４６７号の利益を主張する。
【０００２】
配列表の参照
本出願は、３７  Ｃ．Ｆ．Ｒ．１．８２１に従い、ファイル名を「ＣＹＴＭ０５６００１ＵＳ＿１２ＯＣＴ２０１８＿ＦＩＮＡＬ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」としてＥＦＳ−Ｗｅｂを介して、コンピュータで読取り可能な形態（ＣＦＲ）において、本明細書と共に電子的に提出されている「配列表」を、その全体において参照により本明細書に組み込む。配列表の電子コピーは、２０１８年１０月１２日に作成され、ディスクサイズは、９６キロバイトである。
【０００３】
発明の分野
本発明は、一般に、活性化状態においてＣＤ７１に結合する活性化可能抗体薬物コンジュゲート（ＡＡＤＣ）並びにこれらの活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体を作り、様々な治療適応、診断適応及び予防適応において使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
抗体ベースの療法は、いくつかの疾患に対して、有効な処置であることが実証されているが、場合によって、広範な標的発現に起因する毒性は、これらの治療有効性を制限している。加えて、抗体ベースの治療剤は、投与後における循環からの急速なクリアランスなど、他の制限も呈示している。
【０００５】
低分子治療剤の領域において、活性の化学的実体によるプロドラッグをもたらす戦略が開発されている。このようなプロドラッグは、比較的不活性の（又は著しく小さな活性の）形態において投与される。投与されると、プロドラッグは、インビボにおいて、活性化合物へと代謝される。このようなプロドラッグ戦略は、薬物の、その意図された標的に対する選択性の増大及び有害作用の軽減をもたらし得る。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
したがって、抗体ベースの治療剤の分野において、低分子プロドラッグの所望の特徴を模倣する抗体が、引き続き必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
（発明の要旨）
本開示は、トランスフェリン受容体タンパク質１（ＴｆＲ１）としてもまた公知のＣＤ７１に特異的に結合する活性化可能コンジュゲート抗体を提示する。
【０００８】
本発明のある態様において、式（Ｉ）：
【０００９】
【化１】
2020537649.tif 000003
［式中、（ｉ）ＡＢは、ヒトＣＤ７１に特異的に結合し、配列番号９を含むＣＤＲＨ１配列、配列番号１０を含むＣＤＲＨ２配列及び配列番号１１を含むＣＤＲＨ３配列を含む重鎖可変領域；並びに配列番号１２又は配列番号１３を含むＣＤＲＬ１配列、配列番号１４を含むＣＤＲＬ２配列及び配列番号１５を含むＣＤＲＬ３配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体であり；（ｉｉ）ＭＭは、配列番号１８のアミノ酸配列を含むマスキング部分であり、ここで、活性化可能コンジュゲート抗体が非切断状態にある場合に、ＭＭは、ＡＢの、ヒトＣＤ７１への結合を阻害し；（ｉｉｉ）ＬＰ１は、配列番号２０７のアミノ酸配列を含む、第１の連結部分であり；（ｉｖ）ＣＭは、配列番号１５６の配列を含む切断可能部分であり、ここで、ＣＭは、プロテアーゼに対する基質として機能するポリペプチドであり；（ｖ）ＬＰ２は、配列番号３８のアミノ酸配列を含む、第２の連結部分であり；（ｂ）「ｎ」は２である。］の構造又はその塩を含む、活性化可能なコンジュゲート抗体が本明細書において提示されている。一部の実施形態において、ＡＢが、ＩｇＧ１アイソタイプを含む、式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体。一部の実施形態において、ＡＢが、重鎖定常領域を有する抗体であり、ここで、重鎖定常領域のＣ末端残基が、リシンではない、式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体。一部の実施形態において、重鎖上及び／又は軽鎖上のＮ末端グルタメートが、任意選択的に、ピログルタメートである又はピログルタメートへと翻訳後修飾されている、式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体。
【００１０】
本発明の関連する態様において、（ｉ）ＡＢが、ヒトＣＤ７１に特異的に結合し、配列番号５の配列を含む重鎖可変領域及び配列番号７の配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体であり；（ｉｉ）ＭＭが、配列番号１８のアミノ酸配列を含むマスキング部分であり、ここで、活性化可能コンジュゲート抗体が非切断状態にある場合に、ＭＭが、ＡＢの、ヒトＣＤ７１への結合を阻害し；（ｉｉｉ）ＬＰ１が、配列番号２０７のアミノ酸配列を含む、第１の連結部分であり；（ｉｖ）ＣＭが、配列番号１５６の配列を含む切断可能部分であり、ここで、ＣＭが、プロテアーゼに対する基質として機能するポリペプチドであり；（ｖ）ＬＰ２が、配列番号３８のアミノ酸配列を含む、第２の連結部分であり；（ｂ）「ｎ」が２である、式（Ｉ）の構造又はその塩を含む、活性化可能なコンジュゲート抗体が本明細書において提示されている。一部の実施形態において、ＡＢが、ＩｇＧ１アイソタイプを含む、式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体。一部の実施形態において、ＡＢが、重鎖定常領域を有する抗体であり、ここで、重鎖定常領域のＣ末端残基が、リシンではない、式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体。一部の実施形態において、重鎖上及び／又は軽鎖上のＮ末端グルタメートが、任意選択的に、ピログルタメートである又はピログルタメートへと翻訳後修飾されている、式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体。
【００１１】
本発明の関連する態様において、（ｉ）ＡＢが、ヒトＣＤ７１に特異的に結合し、配列番号１６７の配列を含む重鎖及び配列番号１９の配列を含む軽鎖を含む抗体であり；（ｉｉ）ＭＭが、配列番号１８のアミノ酸配列を含むマスキング部分であり、ここで、活性化可能コンジュゲート抗体が非切断状態にある場合に、ＭＭが、ＡＢの、ヒトＣＤ７１への結合を阻害し；（ｉｉｉ）ＬＰ１が、配列番号２０７のアミノ酸配列を含む、第１の連結部分であり；（ｉｖ）ＣＭが、配列番号１５６の配列を含む切断可能部分であり、ここで、ＣＭが、プロテアーゼに対する基質として機能するポリペプチドであり；（ｖ）ＬＰ２が、配列番号３８のアミノ酸配列を含む、第２の連結部分であり；（ｂ）「ｎ」が２である、式（Ｉ）の構造又はその塩を含む、活性化可能なコンジュゲート抗体が本明細書において提示されている。一部の実施形態において、ＡＢが、ＩｇＧ１アイソタイプを含む、式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体。一部の実施形態において、ＡＢが、重鎖定常領域を有する抗体であり、ここで、重鎖定常領域のＣ末端残基が、リシンではない、式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体。一部の実施形態において、重鎖上及び／又は軽鎖上のＮ末端グルタメートが、任意選択的に、ピログルタメートである又はピログルタメートへと翻訳後修飾されている、式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体。
【００１２】
本発明の関連する態様において、ＭＭ−ＬＰ１−ＣＭ−ＬＰ２−ＡＢが、活性化可能抗体であり、ここで、ＡＢが、ヒトＣＤ７１に特異的に結合する抗体であり、活性化可能抗体が、配列番号１６７の配列を含む重鎖及び配列番号１６９の配列を含む軽鎖を含み、「ｎ」が２である、式（Ｉ）の構造又はその塩を含む、活性化可能なコンジュゲート抗体が本明細書において提示されている。一部の実施形態において、ＡＢが、ＩｇＧ１アイソタイプを含む、式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体。一部の実施形態において、ＡＢが、重鎖定常領域を有する抗体であり、ここで、重鎖定常領域のＣ末端残基が、リシンではない、式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体。一部の実施形態において、重鎖上及び／又は軽鎖上のＮ末端グルタメートが、任意選択的に、ピログルタメートである又はピログルタメートへと翻訳後修飾されている、式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体。
【００１３】
本発明の関連する態様において、ＭＭ−ＬＰ１−ＣＭ−ＬＰ２−ＡＢが、活性化可能抗体であり、ここで、ＡＢが、ヒトＣＤ７１に特異的に結合する抗体であり、活性化可能抗体が、配列番号１６７の配列を含む重鎖及び配列番号１７０の配列を含む軽鎖を含み、「ｎ」が２である、式（Ｉ）の構造又はその塩を含む、活性化可能なコンジュゲート抗体が本明細書において提示されている。一部の実施形態において、ＡＢが、ＩｇＧ１アイソタイプを含む、式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体。一部の実施形態において、ＡＢが、重鎖定常領域を有する抗体であり、ここで、重鎖定常領域のＣ末端残基が、リシンではない、式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体。一部の実施形態において、重鎖上及び／又は軽鎖上のＮ末端グルタメートが、任意選択的に、ピログルタメートである又はピログルタメートへと翻訳後修飾されている、式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体。
【００１４】
本発明の関連する態様において、式（ＩＩ）：
【００１５】
【化２】
2020537649.tif 000004
［式中、（ｉ）ＡＢは、ヒトＣＤ７１に特異的に結合し、配列番号９を含むＣＤＲＨ１配列、配列番号１０を含むＣＤＲＨ２配列及び配列番号１１を含むＣＤＲＨ３配列を含む重鎖可変領域；並びに配列番号１２又は配列番号１３を含むＣＤＲＬ１配列、配列番号１４を含むＣＤＲＬ２配列及び配列番号１５を含むＣＤＲＬ３配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体であり；（ｉｉ）ＭＭは、配列番号１８のアミノ酸配列を含むマスキング部分であり、ここで、活性化可能コンジュゲート抗体が非切断状態にある場合に、ＭＭは、ＡＢの、ヒトＣＤ７１への結合を阻害し；（ｉｉｉ）ＣＭは、配列番号１５６の配列を含む切断可能部分であり、ここで、ＣＭは、プロテアーゼに対する基質として機能するポリペプチドであり；（ｂ）「ｎ」は２である。］の構造又はその塩を含む、活性化可能なコンジュゲート抗体が本明細書において提示されている。一部の実施形態において、ＡＢが、ＩｇＧ１アイソタイプを含む、式（ＩＩ）の活性化可能コンジュゲート抗体。一部の実施形態において、ＡＢが、重鎖定常領域を有する抗体であり、ここで、重鎖定常領域のＣ末端残基が、リシンではない、式（ＩＩ）の活性化可能コンジュゲート抗体。一部の実施形態において、重鎖上及び／又は軽鎖上のＮ末端グルタメートが、任意選択的に、ピログルタメートである又はピログルタメートへと翻訳後修飾されている、式（ＩＩ）の活性化可能コンジュゲート抗体。
【００１６】
本発明の関連する態様において、（ｉ）ＡＢが、ヒトＣＤ７１に特異的に結合し、配列番号５の配列を含む重鎖可変領域及び配列番号７の配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体であり；（ｉｉ）ＭＭが、配列番号１８のアミノ酸配列を含むマスキング部分であり、ここで、活性化可能コンジュゲート抗体が非切断状態にある場合に、ＭＭが、ＡＢの、ヒトＣＤ７１への結合を阻害し；（ｉｉｉ）ＣＭが、配列番号１５６の配列を含む切断可能部分であり、ここで、ＣＭが、プロテアーゼに対する基質として機能するポリペプチドであり；（ｂ）「ｎ」が２である、式（ＩＩ）の構造又はその塩を含む、活性化可能なコンジュゲート抗体が本明細書において提示されている。一部の実施形態において、ＡＢが、ＩｇＧ１アイソタイプを含む、式（ＩＩ）の活性化可能コンジュゲート抗体。一部の実施形態において、ＡＢが、重鎖定常領域を有する抗体であり、ここで、重鎖定常領域のＣ末端残基が、リシンではない、式（ＩＩ）の活性化可能コンジュゲート抗体。一部の実施形態において、重鎖上及び／又は軽鎖上のＮ末端グルタメートが、任意選択的に、ピログルタメートである又はピログルタメートへと翻訳後修飾されている、式（ＩＩ）の活性化可能コンジュゲート抗体。
【００１７】
本発明の関連する態様において、（ｉ）ＡＢが、ヒトＣＤ７１に特異的に結合し、配列番号１６７の配列を含む重鎖及び配列番号１９の配列を含む軽鎖を含む抗体であり；（ｉｉ）ＭＭが、配列番号１８のアミノ酸配列を含むマスキング部分であり、ここで、活性化可能コンジュゲート抗体が非切断状態にある場合に、ＭＭが、ＡＢの、ヒトＣＤ７１への結合を阻害し；（ｉｉｉ）ＣＭが、配列番号１５６の配列を含む切断可能部分であり、ここで、ＣＭが、プロテアーゼに対する基質として機能するポリペプチドであり；（ｂ）「ｎ」が２である、式（ＩＩ）の構造又はその塩を含む、活性化可能なコンジュゲート抗体が本明細書において提示されている。一部の実施形態において、ＡＢが、ＩｇＧ１アイソタイプを含む、式（ＩＩ）の活性化可能コンジュゲート抗体。一部の実施形態において、ＡＢが、重鎖定常領域を有する抗体であり、ここで、重鎖定常領域のＣ末端残基が、リシンではない、式（ＩＩ）の活性化可能コンジュゲート抗体。一部の実施形態において、重鎖上及び／又は軽鎖上のＮ末端グルタメートが、任意選択的に、ピログルタメートである又はピログルタメートへと翻訳後修飾されている、式（ＩＩ）の活性化可能コンジュゲート抗体。
【００１８】
本発明の関連する態様において、ＭＭ−ＬＰ１−ＣＭ−ＬＰ２−ＡＢが、活性化可能抗体であり、ここで、ＡＢが、ヒトＣＤ７１に特異的に結合する抗体であり、活性化可能抗体が、配列番号１６７の配列を含む重鎖及び配列番号１６９の配列を含む軽鎖を含み、「ｎ」が２である、式（ＩＩ）の構造又はその塩を含む、活性化可能なコンジュゲート抗体が本明細書において提示されている。一部の実施形態において、ＡＢが、ＩｇＧ１アイソタイプを含む、式（ＩＩ）の活性化可能コンジュゲート抗体。一部の実施形態において、ＡＢが、重鎖定常領域を有する抗体であり、ここで、重鎖定常領域のＣ末端残基が、リシンではない、式（ＩＩ）の活性化可能コンジュゲート抗体。一部の実施形態において、重鎖上及び／又は軽鎖上のＮ末端グルタメートが、任意選択的に、ピログルタメートである又はピログルタメートへと翻訳後修飾されている、式（ＩＩ）の活性化可能コンジュゲート抗体。
【００１９】
本発明の関連する態様において、ＭＭ−ＬＰ１−ＣＭ−ＬＰ２−ＡＢが、活性化可能抗体であり、ここで、ＡＢが、ヒトＣＤ７１に特異的に結合する抗体であり、活性化可能抗体が、配列番号１６７の配列を含む重鎖及び配列番号１７０の配列を含む軽鎖を含み、「ｎ」が２である、式（ＩＩ）の構造又はその塩を含む、活性化可能なコンジュゲート抗体が本明細書において提示されている。一部の実施形態において、ＡＢが、ＩｇＧ１アイソタイプを含む、式（ＩＩ）の活性化可能コンジュゲート抗体。一部の実施形態において、ＡＢが、重鎖定常領域を有する抗体であり、ここで、重鎖定常領域のＣ末端残基が、リシンではない、式（ＩＩ）の活性化可能コンジュゲート抗体。一部の実施形態において、重鎖上及び／又は軽鎖上のＮ末端グルタメートが、任意選択的に、ピログルタメートである又はピログルタメートへと翻訳後修飾されている、式（ＩＩ）の活性化可能コンジュゲート抗体。
【００２０】
本発明の別の態様において、（ｉ）ＡＢが、ヒトＣＤ７１に特異的に結合し、配列番号９を含むＣＤＲＨ１配列、配列番号１０を含むＣＤＲＨ２配列及び配列番号１１を含むＣＤＲＨ３配列を含む重鎖可変領域；並びに配列番号１２又は配列番号１３を含むＣＤＲＬ１配列、配列番号１４を含むＣＤＲＬ２配列及び配列番号１５を含むＣＤＲＬ３配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体であり；（ｉｉ）ＭＭが、配列番号１８のアミノ酸配列を含むマスキング部分であり、ここで、活性化可能コンジュゲート抗体が非切断状態にある場合に、ＭＭが、ＡＢの、ヒトＣＤ７１への結合を阻害し；（ｉｉｉ）ＬＰ１が、配列番号２０７のアミノ酸配列を含む、第１の連結部分であり；（ｉｖ）ＣＭが、配列番号１５６の配列を含む切断可能部分であり、ここで、ＣＭが、プロテアーゼに対する基質として機能するポリペプチドであり；（ｖ）ＬＰ２が、配列番号３８のアミノ酸配列を含む、第２の連結部分であり；（ｂ）「ｎ」が２である、式（Ｉ）の構造又はその塩を含む、活性化可能なコンジュゲート抗体を製造する方法であって、（ｉ）ＭＭ−ＬＰ１−ＣＭ−ＬＰ２−ＡＢを含む活性化可能抗体を、還元剤により還元すること；及び（ｉｉ）１つ以上のｖｃＭＭＡＥを、還元された活性化可能抗体へとコンジュゲートさせることを含む方法が本明細書において提示されている。一部の実施形態において、ＡＢが、ＩｇＧ１アイソタイプを含む、式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体。一部の実施形態において、ＡＢが、重鎖定常領域を有する抗体であり、ここで、重鎖定常領域のＣ末端残基が、リシンではない、式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体。一部の実施形態において、重鎖上及び／又は軽鎖上のＮ末端グルタメートが、任意選択的に、ピログルタメートである又はピログルタメートへと翻訳後修飾されている、式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体。
【００２１】
本発明の別の態様において、（ｉ）ＡＢが、ヒトＣＤ７１に特異的に結合し、配列番号５の配列を含む重鎖可変領域及び配列番号７の配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体であり；（ｉｉ）ＭＭが、配列番号１８のアミノ酸配列を含むマスキング部分であり、ここで、活性化可能コンジュゲート抗体が非切断状態にある場合に、ＭＭが、ＡＢの、ヒトＣＤ７１への結合を阻害し；（ｉｉｉ）ＬＰ１が、配列番号２０７のアミノ酸配列を含む、第１の連結部分であり；（ｉｖ）ＣＭが、配列番号１５６の配列を含む切断可能部分であり、ここで、ＣＭが、プロテアーゼに対する基質として機能するポリペプチドであり；（ｖ）ＬＰ２が、配列番号３８のアミノ酸配列を含む、第２の連結部分であり；（ｂ）「ｎ」が２である、式（Ｉ）の構造又はその塩を含む、活性化可能なコンジュゲート抗体を製造する方法であって、（ｉ）ＭＭ−ＬＰ１−ＣＭ−ＬＰ２−ＡＢを含む活性化可能抗体を、還元剤により還元すること；及び（ｉｉ）１つ以上のｖｃＭＭＡＥを、還元された活性化可能抗体へとコンジュゲートさせることを含む方法が本明細書において提示されている。一部の実施形態において、ＡＢが、ＩｇＧ１アイソタイプを含む、式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体。一部の実施形態において、ＡＢが、重鎖定常領域を有する抗体であり、ここで、重鎖定常領域のＣ末端残基が、リシンではない、式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体。一部の実施形態において、重鎖上及び／又は軽鎖上のＮ末端グルタメートが、任意選択的に、ピログルタメートである又はピログルタメートへと翻訳後修飾されている、式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体。
【００２２】
本発明の別の態様において、（ｉ）ＡＢが、ヒトＣＤ７１に特異的に結合し、配列番号１６７の配列を含む重鎖及び配列番号１９の配列を含む軽鎖を含む抗体であり；（ｉｉ）ＭＭが、配列番号１８のアミノ酸配列を含むマスキング部分であり、ここで、活性化可能コンジュゲート抗体が非切断状態にある場合に、ＭＭが、ＡＢの、ヒトＣＤ７１への結合を阻害し；（ｉｉｉ）ＬＰ１が、配列番号２０７のアミノ酸配列を含む、第１の連結部分であり；（ｉｖ）ＣＭが、配列番号１５６の配列を含む切断可能部分であり、ここで、ＣＭが、プロテアーゼに対する基質として機能するポリペプチドであり；（ｖ）ＬＰ２が、配列番号３８のアミノ酸配列を含む、第２の連結部分であり；（ｂ）「ｎ」が２である、式（Ｉ）の構造又はその塩を含む、活性化可能なコンジュゲート抗体を製造する方法であって、（ｉ）ＭＭ−ＬＰ１−ＣＭ−ＬＰ２−ＡＢを含む活性化可能抗体を、還元剤により還元すること；及び（ｉｉ）１つ以上のｖｃＭＭＡＥを、還元された活性化可能抗体へとコンジュゲートさせることを含む方法が本明細書において提示されている。一部の実施形態において、ＡＢが、ＩｇＧ１アイソタイプを含む、式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体。一部の実施形態において、ＡＢが、重鎖定常領域を有する抗体であり、ここで、重鎖定常領域のＣ末端残基が、リシンではない、式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体。一部の実施形態において、重鎖上及び／又は軽鎖上のＮ末端グルタメートが、任意選択的に、ピログルタメートである又はピログルタメートへと翻訳後修飾されている、式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体。
【００２３】
本発明の別の態様において、ＭＭ−ＬＰ１−ＣＭ−ＬＰ２−ＡＢが、活性化可能抗体であり、ここで、ＡＢが、ヒトＣＤ７１に特異的に結合する抗体であり、活性化可能抗体が、配列番号１６７の配列を含む重鎖及び配列番号１６９の配列を含む軽鎖を含み；（ｂ）「ｎ」が２である、式（Ｉ）の構造又はその塩を含む、活性化可能なコンジュゲート抗体を製造する方法であって、（ｉ）ＭＭ−ＬＰ１−ＣＭ−ＬＰ２−ＡＢを含む活性化可能抗体を、還元剤により還元すること；及び（ｉｉ）１つ以上のｖｃＭＭＡＥを、還元された活性化可能抗体へとコンジュゲートさせることを含む方法が本明細書において提示されている。一部の実施形態において、ＡＢが、ＩｇＧ１アイソタイプを含む、式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体。一部の実施形態において、ＡＢが、重鎖定常領域を有する抗体であり、ここで、重鎖定常領域のＣ末端残基が、リシンではない、式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体。一部の実施形態において、重鎖上及び／又は軽鎖上のＮ末端グルタメートが、任意選択的に、ピログルタメートである又はピログルタメートへと翻訳後修飾されている、式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体。
【００２４】
本発明の別の態様において、ＭＭ−ＬＰ１−ＣＭ−ＬＰ２−ＡＢが、活性化可能抗体であり、ここで、ＡＢが、ヒトＣＤ７１に特異的に結合する抗体であり、活性化可能抗体が、配列番号１６７の配列を含む重鎖及び配列番号１７０の配列を含む軽鎖を含み；（ｂ）「ｎ」が２である、式（Ｉ）の構造又はその塩を含む、活性化可能なコンジュゲート抗体を製造する方法であって、（ｉ）ＭＭ−ＬＰ１−ＣＭ−ＬＰ２−ＡＢを含む活性化可能抗体を、還元剤により還元すること；及び（ｉｉ）１つ以上のｖｃＭＭＡＥを、還元された活性化可能抗体へとコンジュゲートさせることを含む方法が本明細書において提示されている。一部の実施形態において、ＡＢが、ＩｇＧ１アイソタイプを含む、式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体。一部の実施形態において、ＡＢが、重鎖定常領域を有する抗体であり、ここで、重鎖定常領域のＣ末端残基が、リシンではない、式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体。一部の実施形態において、重鎖上及び／又は軽鎖上のＮ末端グルタメートが、任意選択的に、ピログルタメートである又はピログルタメートへと翻訳後修飾されている、式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体。
【００２５】
本発明の別の態様において、（ｉ）ＡＢが、ヒトＣＤ７１に特異的に結合し、配列番号９を含むＣＤＲＨ１配列、配列番号１０を含むＣＤＲＨ２配列及び配列番号１１を含むＣＤＲＨ３配列を含む重鎖可変領域；並びに配列番号１２又は配列番号１３を含むＣＤＲＬ１配列、配列番号１４を含むＣＤＲＬ２配列及び配列番号１５を含むＣＤＲＬ３配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体であり；（ｉｉ）ＭＭが、配列番号１８のアミノ酸配列を含むマスキング部分であり、ここで、活性化可能コンジュゲート抗体が非切断状態にある場合に、ＭＭが、ＡＢの、ヒトＣＤ７１への結合を阻害し；（ｉｉｉ）ＣＭが、配列番号１５６の配列を含む切断可能部分であり、ここで、ＣＭが、プロテアーゼに対する基質として機能するポリペプチドであり；（ｂ）「ｎ」が２である、式（ＩＩ）の構造又はその塩を含む、活性化可能なコンジュゲート抗体を製造する方法であって、（ｉ）ＭＭ−ＬＰ１−ＣＭ−ＬＰ２−ＡＢを含む活性化可能抗体を、還元剤により還元すること；及び（ｉｉ）１つ以上のｖｃＭＭＡＥを、還元された活性化可能抗体へとコンジュゲートさせることを含む方法が本明細書において提示されている。一部の実施形態において、ＡＢが、ＩｇＧ１アイソタイプを含む、式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体。一部の実施形態において、ＡＢが、重鎖定常領域を有する抗体であり、ここで、重鎖定常領域のＣ末端残基が、リシンではない、式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体。一部の実施形態において、重鎖上及び／又は軽鎖上のＮ末端グルタメートが、任意選択的に、ピログルタメートである又はピログルタメートへと翻訳後修飾されている、式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体。
【００２６】
本発明の別の態様において、（ｉ）ＡＢが、ヒトＣＤ７１に特異的に結合し、配列番号５の配列を含む重鎖可変領域及び配列番号７の配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体であり；（ｉｉ）ＭＭが、配列番号１８のアミノ酸配列を含むマスキング部分であり、ここで、活性化可能コンジュゲート抗体が非切断状態にある場合に、ＭＭが、ＡＢの、ヒトＣＤ７１への結合を阻害し；（ｉｉｉ）ＣＭが、配列番号１５６の配列を含む切断可能部分であり、ここで、ＣＭが、プロテアーゼに対する基質として機能するポリペプチドであり；（ｂ）「ｎ」が２である、式（ＩＩ）の構造又はその塩を含む、活性化可能なコンジュゲート抗体を製造する方法であって、（ｉ）ＭＭ−ＬＰ１−ＣＭ−ＬＰ２−ＡＢを含む活性化可能抗体を、還元剤により還元すること；及び（ｉｉ）１つ以上のｖｃＭＭＡＥを、還元された活性化可能抗体へとコンジュゲートさせることを含む方法が本明細書において提示されている。一部の実施形態において、ＡＢが、ＩｇＧ１アイソタイプを含む、式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体。一部の実施形態において、ＡＢが、重鎖定常領域を有する抗体であり、ここで、重鎖定常領域のＣ末端残基が、リシンではない、式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体。一部の実施形態において、重鎖上及び／又は軽鎖上のＮ末端グルタメートが、任意選択的に、ピログルタメートである又はピログルタメートへと翻訳後修飾されている、式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体。
【００２７】
本発明の別の態様において、（ｉ）ＡＢが、ヒトＣＤ７１に特異的に結合し、配列番号１６７の配列を含む重鎖及び配列番号１９の配列を含む軽鎖を含む抗体であり；（ｉｉ）ＭＭが、配列番号１８のアミノ酸配列を含むマスキング部分であり、ここで、活性化可能コンジュゲート抗体が非切断状態にある場合に、ＭＭが、ＡＢの、ヒトＣＤ７１への結合を阻害し；（ｉｉｉ）ＣＭが、配列番号１５６の配列を含む切断可能部分であり、ここで、ＣＭが、プロテアーゼに対する基質として機能するポリペプチドであり；（ｂ）「ｎ」が２である、式（ＩＩ）の構造又はその塩を含む、活性化可能なコンジュゲート抗体を製造する方法であって、（ｉ）ＭＭ−ＬＰ１−ＣＭ−ＬＰ２−ＡＢを含む活性化可能抗体を、還元剤により還元すること；及び（ｉｉ）１つ以上のｖｃＭＭＡＥを、還元された活性化可能抗体へとコンジュゲートさせることを含む方法が本明細書において提示されている。一部の実施形態において、ＡＢが、ＩｇＧ１アイソタイプを含む、式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体。一部の実施形態において、ＡＢが、重鎖定常領域を有する抗体であり、ここで、重鎖定常領域のＣ末端残基が、リシンではない、式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体。一部の実施形態において、重鎖上及び／又は軽鎖上のＮ末端グルタメートが、任意選択的に、ピログルタメートである又はピログルタメートへと翻訳後修飾されている、式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体。
【００２８】
本発明の別の態様において、ＭＭ−ＬＰ１−ＣＭ−ＬＰ２−ＡＢが、活性化可能抗体であり、ここで、ＡＢが、ヒトＣＤ７１に特異的に結合する抗体であり、活性化可能抗体が、配列番号１６７の配列を含む重鎖及び配列番号１６９の配列を含む軽鎖を含み；（ｂ）「ｎ」が２である、式（ＩＩ）の構造又はその塩を含む、活性化可能なコンジュゲート抗体を製造する方法であって、（ｉ）ＭＭ−ＬＰ１−ＣＭ−ＬＰ２−ＡＢを含む活性化可能抗体を、還元剤により還元すること；及び（ｉｉ）１つ以上のｖｃＭＭＡＥを、還元された活性化可能抗体へとコンジュゲートさせることを含む方法が本明細書において提示されている。一部の実施形態において、ＡＢが、ＩｇＧ１アイソタイプを含む、式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体。一部の実施形態において、ＡＢが、重鎖定常領域を有する抗体であり、ここで、重鎖定常領域のＣ末端残基が、リシンではない、式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体。一部の実施形態において、重鎖上及び／又は軽鎖上のＮ末端グルタメートが、任意選択的に、ピログルタメートである又はピログルタメートへと翻訳後修飾されている、式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体。
【００２９】
本発明の別の態様において、ＭＭ−ＬＰ１−ＣＭ−ＬＰ２−ＡＢが、活性化可能抗体であり、ここで、ＡＢが、ヒトＣＤ７１に特異的に結合する抗体であり、活性化可能抗体が、配列番号１６７の配列を含む重鎖及び配列番号１７０の配列を含む軽鎖を含み；（ｂ）「ｎ」が２である、式（ＩＩ）の構造又はその塩を含む、活性化可能なコンジュゲート抗体を製造する方法であって、（ｉ）ＭＭ−ＬＰ１−ＣＭ−ＬＰ２−ＡＢを含む活性化可能抗体を、還元剤により還元すること；及び（ｉｉ）１つ以上のｖｃＭＭＡＥを、還元された活性化可能抗体へとコンジュゲートさせることを含む方法が本明細書において提示されている。一部の実施形態において、ＡＢが、ＩｇＧ１アイソタイプを含む、式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体。一部の実施形態において、ＡＢが、重鎖定常領域を有する抗体であり、ここで、重鎖定常領域のＣ末端残基が、リシンではない、式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体。一部の実施形態において、重鎖上及び／又は軽鎖上のＮ末端グルタメートが、任意選択的に、ピログルタメートである又はピログルタメートへと翻訳後修飾されている、式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体。
【００３０】
本発明の別の態様において、式（Ｉ）又は式（ＩＩ）の１回の反復による活性化可能コンジュゲート抗体を含む医薬組成物が本明細書において提示されている。一部の実施形態において、医薬組成物は、薬学的に許容される担体を含み得る。
【００３１】
本発明の別の態様において、対象におけるがんを処置する、その症状を緩和する又はその進行を遅延させる方法であって、胃がん、卵巣がん、食道がん、非小細胞肺がん、ＥＲ＋乳がん、トリプルネガティブ乳がん、結腸直腸がん、黒色腫、前立腺がん、多発性骨髄腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、頭頸部小細胞癌、膵臓がん、中皮腫、非ホジキンリンパ腫、肝細胞癌及び神経膠芽腫からなる群から選択されるがんのために、治療有効量の、式（Ｉ）若しくは式（ＩＩ）の活性化可能コンジュゲート抗体又は式（Ｉ）若しくは式（ＩＩ）の１回の反復による活性化可能コンジュゲート抗体を含む医薬組成物及び、任意選択的に、薬学的に許容される担体を、これを必要とする対象へと投与することを含む方法が本明細書において提示されている。
【００３２】
本発明の別の態様において、（ａ）非切断状態において、Ｎ末端からＣ末端へと、ＭＭ−ＣＭ−ＡＢ［配置中、（ｉ）ＡＢは、哺乳動物ＣＤ７１に特異的に結合し、配列番号５の重鎖可変領域配列及び配列番号７の軽鎖可変領域配列を含む抗体であり；（ｉｉ）ＭＭは、配列番号１８のアミノ酸配列を含むマスキング部分であり、ここで、活性化可能コンジュゲート抗体が非切断状態にある場合に、ＡＢへとカップリングされたＭＭは、ＡＢの、ＣＤ７１への結合を阻害し；（ｉｉｉ）ＣＭは、ＡＢへとカップリングされた配列番号１５６の配列を含む切断可能部分であり、ここで、ＣＭは、プロテアーゼに対する基質として機能するポリペプチドである。］の構造的配置を含む活性化可能抗体（ＡＡ）；並びに（ｂ）活性化可能抗体が２当量のモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）へとコンジュゲートされた、ＭＭＡＥを含む活性化可能コンジュゲート抗体が本明細書において提示されている。一部の実施形態において、ＡＢが、重鎖定常領域を有する抗体であり、ここで、重鎖定常領域のＣ末端残基が、リシンではない、活性化可能コンジュゲート抗体。一部の実施形態において、重鎖上及び／又は軽鎖上のＮ末端グルタメートが、任意選択的に、ピログルタメートである又はピログルタメートへと翻訳後修飾されている、活性化可能コンジュゲート抗体。
【００３３】
本発明の別の態様において、式ＡＡ−（ＡＧ）ｐ［式中、（ａ）ＡＡは、非切断状態において、Ｎ末端からＣ末端へと、ＭＭ−ＣＭ−ＡＢ［配置中、（ｉ）ＡＢは、哺乳動物ＣＤ７１に特異的に結合し、配列番号５の重鎖可変領域配列及び配列番号７の軽鎖可変領域配列を含む抗体であり；（ｉｉ）ＭＭは、配列番号１８のアミノ酸配列を含むマスキング部分であり、ここで、活性化可能コンジュゲート抗体が非切断状態にある場合に、ＡＢへとカップリングされたＭＭは、ＡＢの、ＣＤ７１への結合を阻害し；（ｉｉｉ）ＣＭは、ＡＢへとカップリングされた配列番号１５６の配列を含む切断可能部分であり、ここで、ＣＭは、プロテアーゼに対する基質として機能するポリペプチドである。］の構造的配置を含む活性化可能抗体であり；（ｂ）ＡＧは、ＡＡへとコンジュゲートさせた薬剤であり、ここで、薬剤はＭＭＡＥであり、ｐは２である。］を有する、活性化可能コンジュゲート抗体が本明細書において提示されている。一部の実施形態において、ＡＢが、重鎖定常領域を有する抗体であり、ここで、重鎖定常領域のＣ末端残基が、リシンではない、活性化可能コンジュゲート抗体。一部の実施形態において、重鎖上及び／又は軽鎖上のＮ末端グルタメートが、任意選択的に、ピログルタメートである又はピログルタメートへと翻訳後修飾されている、活性化可能コンジュゲート抗体。
【００３４】
本発明の別の態様において、活性化可能コンジュゲート抗体を製造する方法であって、（ａ）少なくとも１つのＭＭＡＥを、活性化可能抗体（ＡＡ）へとコンジュゲートさせ、これにより、ＡＡ−（ＭＭＡＥ）ｐ［式中、ｐは１〜８である。］を含む組成物を作製すること；及び（ｂ）組成物を、ｐが２である、活性化可能コンジュゲート抗体分子種について強化することを含み、ＡＡが、非切断状態において、Ｎ末端からＣ末端へと、ＭＭ−ＣＭ−ＡＢ［配置中、ＡＢは、哺乳動物ＣＤ７１に特異的に結合し、配列番号５の重鎖可変領域配列及び配列番号７の軽鎖可変領域配列を含む抗体であり；（ｉｉ）ＭＭは、配列番号１８のアミノ酸配列を含むマスキング部分であり、ここで、活性化可能コンジュゲート抗体が非切断状態にある場合に、ＡＢへとカップリングされたＭＭは、ＡＢの、ＣＤ７１への結合を阻害し；（ｉｉｉ）ＣＭは、ＡＢへとカップリングされた配列番号１５６の配列を含む切断可能部分であり、ここで、ＣＭは、プロテアーゼに対する基質として機能するポリペプチドである。］の構造的配置を含み；（ｂ）ＡＧは、ＡＡへとコンジュゲートされた薬剤であり、ここで、薬剤はＭＭＡＥであり、ｐは２である、方法が本明細書において提示されている。一部の実施形態において、ＡＢが、重鎖定常領域を有する抗体であり、ここで、重鎖定常領域のＣ末端残基が、リシンではない、活性化可能コンジュゲート抗体。一部の実施形態において、重鎖上及び／又は軽鎖上のＮ末端グルタメートが、任意選択的に、ピログルタメートである又はピログルタメートへと翻訳後修飾されている、活性化可能コンジュゲート抗体。
【００３５】
本発明の別の態様において、医薬としての使用のための、本明細書において開示されている、任意の活性化可能コンジュゲート抗体又は医薬組成物が本明細書において提示されている。
【００３６】
本発明の別の態様において、任意選択的に、胃がん、卵巣がん、食道がん、非小細胞肺がん、ＥＲ＋乳がん、トリプルネガティブ乳がん、結腸直腸がん、黒色腫、前立腺がん、多発性骨髄腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、頭頸部小細胞癌、膵臓がん、中皮腫、非ホジキンリンパ腫、肝細胞癌及び神経膠芽腫からなる群から選択されるがんの処置における使用のための、本明細書において開示されている、任意の活性化可能コンジュゲート抗体又は医薬組成物が本明細書において提示されている。
【００３７】
本発明の別の態様において、本明細書において開示されている、少なくとも１つの活性化可能抗体を含むキットが本明細書において提示されている。キットは、１つ以上のｖｃＭＭＡＥ及び／又は還元剤をさらに含み得る。
【図面の簡単な説明】
【００３８】
【図１】実施例５において論じられている通り、多様な原発がん組織型内及び転移性がん組織型内の、ＣＤ７１発現レベルを決定する、例示的な免疫組織化学（ＩＨＣ）アッセイを描示する図である。この図及び例において示されている例示的な結果は、ＣＤ７１が、様々なヒトがんの原発腫瘍内において、高レベルで発現されていることを示した。
【図２】実施例５において論じられている通り、ＣＤ７１の、複数の患者に由来する転移性がん試料中の発現レベルについての例示的な研究を描示する図である。この図及び例において示されている例示的な結果は、ＣＤ７１が、様々なヒトがんの転移性腫瘍内において、高レベルで発現されていることを示した。
【図３Ａ】実施例４において論じられている通り、活性化可能抗体が、無傷である又はタンパク質分解的に活性化されている（「ＡＣＴ」と表記される）場合に、本開示の、非コンジュゲート活性化可能抗ＣＤ７１抗体及びコンジュゲート活性化可能抗ＣＤ７１抗体が、ヒトの組換えＣＤ７１に結合する能力についての、例示的なインビトロアッセイを描示する図である。この図及び例において示されている例示的な結果は、活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体が、その非コンジュゲート活性化可能抗ＣＤ７１抗体対応物と同等なレベルにおいて、ＣＤ７１に結合し、また、プロテアーゼを活性化させると、ＣＤ７１に、アフィニティーを同等に増大させて結合することを示した。
【図３Ｂ】実施例４において論じられている通り、活性化可能抗体が、無傷である又はタンパク質分解的に活性化されている（「ＡＣＴ」と表記される）場合に、本開示の、非コンジュゲート活性化可能抗ＣＤ７１抗体及びコンジュゲート活性化可能抗ＣＤ７１抗体が、カニクイザルの組換えＣＤ７１に結合する能力についての、例示的なインビトロアッセイを描示する図である。この図及び例において示されている例示的な結果は、活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体が、その非コンジュゲート活性化可能抗ＣＤ７１抗体対応物と同等なレベルにおいて、ＣＤ７１に結合し、また、プロテアーゼを活性化させると、ＣＤ７１に、アフィニティーを同等に増大させて結合することを示した。
【図３Ｃ】実施例４において論じられている通り、活性化可能抗体が、無傷である又はタンパク質分解的に活性化されている（「ＡＣＴ」と表記される）場合に、本開示の、非コンジュゲート活性化可能抗ＣＤ７１抗体及びコンジュゲート活性化可能抗ＣＤ７１抗体が、ヒトの、細胞表面上のＣＤ７１に結合する能力についての、例示的なインビトロアッセイを描示する図である。この図及び例において示されている例示的な結果は、活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体が、その非コンジュゲート活性化可能抗ＣＤ７１抗体対応物と同等なレベルにおいて、細胞表面ＣＤ７１に結合し、また、プロテアーゼを活性化させると、細胞表面ＣＤ７１に、アフィニティーを同等に増大させて結合することを示した。
【図３Ｄ】実施例４において論じられている通り、活性化可能抗体が、無傷である又はタンパク質分解的に活性化されている（「ＡＣＴ」と表記される）場合に、本開示の、非コンジュゲート活性化可能抗ＣＤ７１抗体及びコンジュゲート活性化可能抗ＣＤ７１抗体が、カニクイザルの、細胞表面上のＣＤ７１に結合する能力についての、例示的なインビトロアッセイを描示する図である。この図及び例において示されている例示的な結果は、活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体が、その非コンジュゲート活性化可能抗ＣＤ７１抗体対応物と同等なレベルにおいて、細胞表面ＣＤ７１に結合し、また、プロテアーゼを活性化させると、細胞表面ＣＤ７１に、アフィニティーを同等に増大させて結合することを示した。
【図４Ａ】実施例６において論じられている通り、マウス異種移植片モデルにおける、本開示の活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体（ＡＡＤＣ）についての、例示的な有効性研究（抗ＣＤ７１  ＴＦ０１−３０１１−ＭＭＡＥ対抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ＭＭＡＥ）を描示する図である。これらの例示的な結果が示したところによると、この図及び例において、低アフィニティーのマスキング部分を伴うＡＡＤＣ（ＴＦ０２．１３）が、高アフィニティーのマスキング部分を伴うＡＡＤＣ（ＴＦ０１）より、大きな有効性を示す。
【図４Ｂ】実施例６において論じられている通り、マウス異種移植片モデルにおける、本開示の活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体（ＡＡＤＣ）についての、例示的な有効性研究（抗ＣＤ７１  ＴＦ０１−３０１１−ＭＭＡＥ対抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ＭＭＡＥ）を描示する図である。これらの例示的な結果が示したところによると、この図及び例において、低アフィニティーのマスキング部分を伴うＡＡＤＣ（ＴＦ０２．１３）が、高アフィニティーのマスキング部分を伴うＡＡＤＣ（ＴＦ０１）より、大きな有効性を示す。
【図４Ｃ】実施例６において論じられている通り、マウス異種移植片モデルにおける、本開示の活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体（ＡＡＤＣ）についての、例示的な有効性研究（抗ＣＤ７１  ＴＦ０１−３０１１−ＭＭＡＥ対抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ＭＭＡＥ）を描示する図である。これらの例示的な結果が示したところによると、この図及び例において、低アフィニティーのマスキング部分を伴うＡＡＤＣ（ＴＦ０２．１３）が、高アフィニティーのマスキング部分を伴うＡＡＤＣ（ＴＦ０１）より、大きな有効性を示す。
【図５】実施例７において論じられている通り、マウス異種移植片モデルにおける、本開示の活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体（ＡＡＤＣ）についての、例示的な有効性研究を描示する図である。この図及び例において示されている例示的な結果は、切断可能性がより低い基質を伴う、表示のＡＡＤＣ（抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ）の有効性が、図４Ｂ及び４Ｃにおいて示されている、切断可能性がより高い基質を伴うＡＡＤＣ（抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−３０１１−ｖｃＭＭＡＥ）の有効性と実質的に同じであることを裏付けている。
【図６Ａ】実施例８において論じられている通り、マウス異種移植片モデルにおける、本開示の、ＤＡＲ（ＤＡＲを約３とする抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ対ＤＡＲを約２とする抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２）が異なる活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体（ＡＡＤＣ）についての、例示的な有効性研究を描示する図である。この図及び例において示されている例示的な結果は、異なるＤＡＲを有する、用量をマッチさせたＡＡＤＣ（抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ）の有効性が、同等な有効性を示したことを裏付けている。
【図６Ｂ】実施例８において論じられている通り、マウス異種移植片モデルにおける、本開示の、ＤＡＲ（ＤＡＲを約３とする抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ対ＤＡＲを約２とする抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２）が異なる活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体（ＡＡＤＣ）についての、例示的な有効性研究を描示する図である。この図及び例において示されている例示的な結果は、異なるＤＡＲを有する、用量をマッチさせたＡＡＤＣ（抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ）の有効性が、同等な有効性を示したことを裏付けている。
【図６Ｃ】実施例８において論じられている通り、マウス異種移植片モデルにおける、本開示の、ＤＡＲ（ＤＡＲを約３とする抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ対ＤＡＲを約２とする抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２）が異なる活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体（ＡＡＤＣ）についての、例示的な有効性研究を描示する図である。この図及び例において示されている例示的な結果は、異なるＤＡＲを有する、用量をマッチさせたＡＡＤＣ（抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ）の有効性が、同等な有効性を示したことを裏付けている。
【図６Ｄ】実施例８において論じられている通り、マウス異種移植片モデルにおける、本開示の、ＤＡＲ（ＤＡＲを約３とする抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ対ＤＡＲを約２とする抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２）が異なる活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体（ＡＡＤＣ）についての、例示的な有効性研究を描示する図である。この図及び例において示されている例示的な結果は、異なるＤＡＲを有する、用量をマッチさせたＡＡＤＣ（抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ）の有効性が、同等な有効性を示したことを裏付けている。
【図７Ａ】実施例９において論じられている通り、本開示の活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体（ＡＡＤＣ）の投与から生じる代謝産物について解析するための、例示的な概略的ワークフローを示す図である。
【図７Ｂ】実施例９において論じられる通り、本開示の活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体（ＡＡＤＣ）の投与から生じる代謝産物について解析するための、例示的な概略的ワークフローを示す図である。
【図７Ｃ】実施例９において論じられる通り、本開示の活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体（ＡＡＤＣ）の投与から生じる代謝産物について解析するための、例示的な概略的ワークフローを示す図である。
【図８】実施例１１〜１４において論じられている通り、動物モデルにおける、本開示の活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体（ＡＡＤＣ）投与後における、代謝副産物の例示的な時間経過を描示する図である。この図及び例において示されている例示的な結果は、本開示の完全無傷のＡＡＤＣ（抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２）の量が、動物内において、投与を通じて、用量に比例する量で維持され、活性化可能抗体へとコンジュゲートされたＭＭＡＥの量が、投与を通じて、全ての投与レベルにおいて、非コンジュゲートＭＭＡＥの量より実質的に高量であることを裏付ける。
【図９】実施例１１〜１４において論じられている通り、動物モデルにおける、本開示の活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体（ＡＡＤＣ）投与後における、代謝副産物の例示的な時間経過を描示する図である。この図及び例において示されている例示的な結果は、本開示の完全無傷のＡＡＤＣ（抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２）の量が、動物内において、投与を通じて、用量に比例する量で維持され、活性化可能抗体へとコンジュゲートされたＭＭＡＥの量が、投与を通じて、全ての投与レベルにおいて、非コンジュゲートＭＭＡＥの量より実質的に高量であることを裏付ける。
【図１０】実施例１１〜１４において論じられている通り、動物モデルにおける、本開示の活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体（ＡＡＤＣ）投与後における、代謝副産物の例示的な時間経過を描示する図である。この図及び例において示されている例示的な結果は、本開示の完全無傷のＡＡＤＣ（抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２）の量が、動物内において、投与を通じて、用量に比例する量で維持され、活性化可能抗体へとコンジュゲートされたＭＭＡＥの量が、投与を通じて、全ての投与レベルにおいて、非コンジュゲートＭＭＡＥの量より実質的に高量であることを裏付ける。
【図１１】実施例１１〜１４において論じられている通り、動物モデルにおける、本開示の活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体（ＡＡＤＣ）投与後における、代謝副産物の例示的な時間経過を描示する図である。この図及び例において示されている例示的な結果は、本開示の完全無傷のＡＡＤＣ（抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２）の量が、動物内において、投与を通じて、用量に比例する量で維持され、活性化可能抗体へとコンジュゲートされたＭＭＡＥの量が、投与を通じて、全ての投与レベルにおいて、非コンジュゲートＭＭＡＥの量より実質的に高量であることを裏付ける。
【図１２】実施例１７において論じられている通り、表示の被験物質の、ｉＣ３ｂタンパク質断片に対する、例示的な滴定であって、補体カスケードを活性化させる、それらの能力を表す滴定を描示する図である。この図及び例において示されている例示的な結果は、本開示のＡＡＤＣ（抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２）が、補体活性化について、その非コンジュゲート活性化可能抗体と比較した低能力を示したことを裏付けている。
【図１３】実施例１９において論じられている通り、ヒト結腸直腸細胞株を使用するマウス異種移植片モデルにおける、本開示のＡＡＤＣ（抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２）の、例示的な有効性を描示する図である。この図及び例において示されている例示的な結果は、本開示のＡＡＤＣが、全ての投与量において、有意な腫瘍増殖の阻害を示し、最高投与量において観察された完全退縮を伴ったことを裏付けている。
【図１４】実施例２０において論じられている通り、ヒト患者由来腫瘍（ＤＬＢＣＬ）を使用する、マウス異種移植片モデルにおける、本開示のＡＡＤＣ（抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２）の、例示的な有効性を描示する図である。この図及び例において示されている例示的な結果は、本開示のＡＡＤＣが、単回投与の後において、有意な腫瘍増殖の阻害を示し、場合によって、完全奏効も観察されたことを裏付けている。
【図１５Ａ】実施例２１において論じられている通り、患者由来マウス異種移植片（ＰＤＸ）モデルにおける、本開示のＡＡＤＣ（抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２）の、例示的な有効性を描示する図である。この図及び例において示されている例示的な結果は、本開示のＡＡＤＣが、様々なヒトがん型に由来するＰＤＸモデルにおいて、場合によって、完全奏効も含む有効性を示したことを裏付けている。
【図１５Ｂ】実施例２１において論じられている通り、患者由来マウス異種移植片（ＰＤＸ）モデルにおける、本開示のＡＡＤＣ（抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２）の、例示的な有効性を描示する図である。この図及び例において示されている例示的な結果は、本開示のＡＡＤＣが、様々なヒトがん型に由来するＰＤＸモデルにおいて、場合によって、完全奏効も含む有効性を示したことを裏付けている。
【図１５Ｃ】実施例２１において論じられている通り、患者由来マウス異種移植片（ＰＤＸ）モデルにおける、本開示のＡＡＤＣ（抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２）の、例示的な有効性を描示する図である。この図及び例において示されている例示的な結果は、本開示のＡＡＤＣが、様々なヒトがん型に由来するＰＤＸモデルにおいて、場合によって、完全奏効も含む有効性を示したことを裏付けている。
【図１６】実施例２２において論じられている通り、患者由来マウス異種移植片モデルにおける、本開示のＡＡＤＣ（抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２）の、例示的な有効性を描示する図である。この図及び例において示されている例示的な結果は、本開示のＡＡＤＣが、ＰＤＸ膵臓がんモデルに対して、場合によって、完全奏効も含む有効性を示したことを裏付けている。
【図１７】実施例１０において論じられている通り、本開示の、毒素をコンジュゲートさせた活性化可能抗ヒトＣＤ７１抗体（ＡＡＤＣ）（抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２）は、カニクイザルにおける高相対用量においてもなお、対応する親抗ＣＤ７１抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）と比較して、忍容性が良好であり、安定であり、基質の切断能力が大きく、高ＤＡＲを有することを示す結果をまとめる図である。
【図１８Ａ】実施例２７において論じられている通り、非精製抗ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ中に存在する分子種についての、ＨＩＣにより分離されたプロファイルを示す図である。この図及び例は、抗ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２が、単一のコンジュゲート分子種として泳動されることを示す。
【図１８Ｂ】実施例２７において論じられている通り、精製抗ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２中に存在する分子種についての、ＨＩＣにより分離されたプロファイルを示す図である。この図及び例は、抗ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２が、単一のコンジュゲート分子種として泳動されることを示す。
【図１８Ｃ】実施例２７において論じられている通り、マウスにおける、非精製抗ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ中及び精製抗ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２中に存在する分子種のクリアランス速度を示す図である。この図及び例は、抗ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２が、低クリアランス速度を有することを示す。
【発明を実施するための形態】
【００３９】
本開示は、活性化状態にあるＣＤ７１に特異的に結合する活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体を提示する。ＣＤ７１はまた、トランスフェリン受容体タンパク質１（ＴｆＲ１）としても公知である。一般に、本開示は、マスキング部分、切断可能部分、ｖｃリンカー及びＭＭＡＥ毒素を含む活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体を対象とする。マスキング部分（ＭＭ）は、活性化可能抗体が非切断状態にある場合に、抗体結合性部位が、このＣＤ７１標的抗原に結合する能力を低減し；切断可能部分（ＣＭ）は、腫瘍微小環境において切断された結果として、マスキング部分の除去及び抗ＣＤ７１ターゲティングＣＤＲの共時的な活性化をもたらす、プロテアーゼにより活性化可能な基質である。具体的に、本開示は、それが、低アフィニティーのマスキング部分、切断可能性がより低い部分基質及び薬物ローディングを２とする低薬物ロードの固有の組合せであって、総体として、マウス腫瘍モデルにおいて、有意に改善された有効性及び忍容性を結果としてもたらす組合せを有するために、当技術分野において公知である、他の形における、他の活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲートモノクローナル抗体より優れた有効性及び忍容性を有する活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲートモノクローナル抗体の選択について記載している。加えて、驚くべきことに、活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲートモノクローナル抗体はまた、野生型ＩｇＧ１  Ｆｃを含有する他の抗体と異なり、阻害性ＦｃγＲＩＩｂ受容体に結合する能力も欠くが、このような受容体への結合は、ＦｃγＲＩＩｂ受容体が活性化された場合いずれも有効性の低下を結果としてもたらすことが予測される脱顆粒、食作用、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）、サイトカイン放出及び炎症促進性の活性化などのカルシウム依存性過程を阻害することが公知であるため、この欠如は重要である。
【００４０】
ＣＤ７１とは、がん細胞を含む分裂細胞上において発現されている細胞表面受容体である。ＣＤ７１は、多種多様ながん細胞型内において高レベルで発現され、内部化されているので、抗体により方向付けられたコンジュゲート毒素を使用するがん治療のターゲティングのための、魅力的な標的となっている。高アフィニティー及び低アフィニティーを有するマスキング部分（ＭＭ）のほか、切断能力が小さい又は大きい切断可能部分（ＣＭ）が同定され、様々な活性化可能抗体を構築し、次いで、ｖｃＭＭＡＥコンジュゲート抗体（すなわち、活性化可能抗体薬物コンジュゲート又はＡＡＤＣ）を構築するのに使用された。マウス異種移植片モデルにおける、これらの活性化可能コンジュゲート抗体についての、例示的な有効性研究が示したところによれば、高アフィニティーのマスキング部分を伴うＡＡＤＣ（例えば、ＣＤ７１−ＴＦ０１−３０１１−ｖｃＭＭＡＥ）が、低アフィニティーマスク（例えば、ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−３０１１−ｖｃＭＭＡＥ）を伴うＡＡＤＣより小さな有効性を示す。さらに、同じ低アフィニティーマスクを有するが、切断能力が異なる基質を伴うＡＡＤＣを使用する、他の有効性研究は、有効性が同じ場合、非ヒト霊長動物において、切断可能性が低い基質を伴うＡＡＤＣ（ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ）が、切断可能性が高い基質を伴うＡＡＤＣ（ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−３０１１−ｖｃＭＭＡＥ）と比較して、忍容が良好であり、活性化形態にある循環ＡＡＤＣのレベルも低く、したがって、高度な治療指数をもたらすことを示した。さらに、研究は、薬物対活性化可能抗体比が小さいＡＡＤＣ（例えば、ＤＡＲが２であるＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−３０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２）は、ＤＡＲが大きい（すなわち、ＤＡＲ≒３）、同じ活性化可能コンジュゲート抗体と比較して、投与量が高いほど忍容されることを示した。さらに、ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−３０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２は、ヒトがんについての、様々なＣＤＸマウスモデル及びＰＤＸマウスモデルにおいて、高ＤＡＲ  ＡＡＤＣと用量をマッチさせた投与量により、同等の有効性を示した。最後に、ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−３０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２は、低用量においてもなお忍容されなかった、その非マスキング対応物に対して、有意な忍容性を示した。
【００４１】
一部の実施形態において、活性化可能コンジュゲートモノクローナル抗体は、ＣＤ７１含有細胞により内部化されている。「ＣＤ７１」という用語の使用は、非限定例として述べると、ＣＤ−７１及び／又はＣＤ  ７１など、この任意の変化形を対象とすることが意図され、全ての変化形は、本明細書において、互換的に使用される。
【００４２】
ＣＤ７１は、トランスフェリンに主に結合する膜貫通糖タンパク質である。ＣＤ７１は、細胞のホメオスタシスに不可欠である。ＣＤ７１は、リガンド媒介性エンドサイトーシスを介して、持続的に再利用されており、ここで、主要なリガンドは、トランスフェリンである。ＣＤ７１はまた、分裂細胞上において、遍在的に発現されていることも公知である。
【００４３】
ＣＤ７１及びＣＤ７１と関連するシグナル伝達の、異常な発現及び／又は活性は、がんなど、多くの疾患及び障害の発症機序に関与している。ＣＤ７１は、固形がん及び血液がんの両方を含む、多くのがんにおいて、過剰発現されている。ＣＤ７１は、広範な細胞表面発現を有する。悪性細胞内のＣＤ７１は、細胞分裂に要求される、高度な鉄の取込みを媒介する。ＣＤ７１はまた、白血病における予後不良とも関連する。ＣＤ７１は、複数のがん適応にわたり蔓延するため、所望の標的である。
【００４４】
本開示は、ＣＤ７１の異常な発現及び／又は活性と関連している疾患又は障害を処置する、阻止する、その進行を遅延させる、その症状を改善及び／又は緩和する方法において有用な、コンジュゲート活性化可能抗ＣＤ７１抗体を提示する。例えば、活性化可能抗ＣＤ７１抗体は、がん又は他の新生物性状態を処置する、阻止する、その進行を遅延させる、その症状を改善及び／又は緩和する方法において使用される。
【００４５】
本開示は、ＣＤ７１を発現する細胞と関連している疾患又は障害を処置する、阻止する、その進行を遅延させる、その症状を改善及び／又は緩和する方法において有用な、抗コンジュゲート活性化可能抗ＣＤ７１抗体を提示する。一部の実施形態において、細胞は、ＣＤ７１の異常な発現及び／又は活性と関連している。一部の実施形態において、細胞は、ＣＤ７１の正常な発現及び／又は活性と関連している。例えば、活性化可能抗ＣＤ７１抗体は、がん又は他の新生物性状態を処置する、阻止する、その進行を遅延させる、その症状を改善及び／又は緩和する方法において使用される。
【００４６】
本開示は、罹患細胞がＣＤ７１を発現する疾患又は障害を処置する、阻止する、その進行を遅延させる、その症状を改善及び／又は緩和する方法において有用な、コンジュゲート活性化可能抗ＣＤ７１抗体を提示する。一部の実施形態において、罹患細胞は、ＣＤ７１の異常な発現及び／又は活性と関連している。一部の実施形態において、罹患細胞は、ＣＤ７１の正常な発現及び／又は活性と関連している。例えば、活性化可能抗ＣＤ７１抗体は、がん又は他の新生物性状態を処置する、阻止する、その進行を遅延させる、その症状を改善及び／又は緩和する方法において使用される。
【００４７】
コンジュゲート活性化可能抗ＣＤ７１抗体は、マスキング部分（ＭＭ）のカップリングが、抗体又はこの抗原結合性断片がＣＤ７１に結合する能力を低減するように、ＭＭへとカップリングさせた、ＣＤ７１に特異的に結合する抗体又はこの抗原結合性断片を含む。一部の実施形態において、ＭＭは、プロテアーゼ、例えば、対象の処置部位におけるＣＤ７１と共局在化しているプロテアーゼに対する基質を含む配列を介して、カップリングされている。
【００４８】
本発明の例示的な活性化可能抗ＣＤ７１抗体は、例えば、下記に示されている重鎖可変配列及び軽鎖可変配列（ＣＤＲ配列は、太字及び下線により示されている。）である又はこれに由来する重鎖及び軽鎖を含む活性化可能抗体を含む。
【００４９】
【化３】
2020537649.tif 000005
2020537649.tif 000006
【００５０】
本発明の例示的な活性化可能抗ＣＤ７１抗体は、例えば、可変重鎖相補性決定領域１（本明細書において、ＣＤＲＨ１ともまた言及されるＶＨ  ＣＤＲ１）配列、可変重鎖相補性決定領域２（本明細書において、ＣＤＲＨ２ともまた言及されるＶＨ  ＣＤＲ２）配列、可変重鎖相補性決定領域３（本明細書において、ＣＤＲＨ３ともまた言及されるＶＨ  ＣＤＲ３）配列、可変軽鎖相補性決定領域１（本明細書において、ＣＤＲＬ１ともまた言及されるＶＬ  ＣＤＲ１）配列、可変軽鎖相補性決定領域２（本明細書において、ＣＤＲＬ２ともまた言及されるＶＬ  ＣＤＲ２））配列及び可変軽鎖相補性決定領域３（本明細書において、ＣＤＲＬ３ともまた言及されるＶＬ  ＣＤＲ３）配列の組合せを含む活性化可能抗体を含み、ここで、少なくとも１つのＣＤＲ配列は、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＳＹＷＭＨ（配列番号９）を含むＶＨ  ＣＤＲ１配列；アミノ酸配列ＡＩＹＰＧＮＳＥＴＧ（配列番号１０）を含むＶＨ  ＣＤＲ２配列；アミノ酸配列ＥＮＷＤＰＧＦＡＦ（配列番号１１）を含むＶＨ  ＣＤＲ３配列；アミノ酸配列ＳＡＳＳＳＶＹＹＭＹ（配列番号１２）又はＣＲＡＳＳＳＶＹＹＭＹ（配列番号１３）を含むＶＬ  ＣＤＲ１配列；アミノ酸配列ＳＴＳＮＬＡＳ（配列番号１４）を含むＶＬ  ＣＤＲ２配列及びアミノ酸配列ＱＱＲＲＮＹＰＹＴ（配列番号１５）を含むＶＬ  ＣＤＲ３配列からなる群から選択される。
【００５１】
一部の実施形態において、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体の、抗体又はこの抗原結合性断片は、ＶＨ  ＣＤＲ１配列、ＶＨ  ＣＤＲ２配列、ＶＨ  ＣＤＲ３配列、ＶＬ  ＣＤＲ１配列、ＶＬ  ＣＤＲ２配列及びＶＬ  ＣＤＲ３配列の組合せを含み、ここで、少なくとも１つのＣＤＲ配列は、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＳＹＷＭＨ（配列番号９）を含むＶＨ  ＣＤＲ１配列と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上同一である配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１配列；アミノ酸配列ＡＩＹＰＧＮＳＥＴＧ（配列番号１０）を含むＶＨ  ＣＤＲ２配列と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上同一である配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２配列；アミノ酸配列ＥＮＷＤＰＧＦＡＦ（配列番号１１）を含むＶＨ  ＣＤＲ３配列と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上同一である配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３配列；アミノ酸配列ＡＳＳＳＶＹＹＭＹ（配列番号１２）又はＣＲＡＳＳＳＶＹＹＭＹ（配列番号１３）を含むＶＬ  ＣＤＲ１配列と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上同一である配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１配列；アミノ酸配列ＳＴＳＮＬＡＳ（配列番号１４を含むＶＬ  ＣＤＲ２配列と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上同一である配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２配列；及びアミノ酸配列ＱＱＲＲＮＹＰＹＴ（配列番号１５）を含むＶＬ  ＣＤＲ３配列と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上同一である配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３配列からなる群から選択される。
【００５２】
一部の実施形態において、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体の、抗体又はこの抗原結合性断片は、ＶＨ  ＣＤＲ１配列、ＶＨ  ＣＤＲ２配列、ＶＨ  ＣＤＲ３配列、ＶＬ  ＣＤＲ１配列、ＶＬ  ＣＤＲ２配列及びＶＬ  ＣＤＲ３配列の組合せを含み、ここで、ＶＨ  ＣＤＲ１配列は、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＳＹＷＭＨ（配列番号９）を含み；ＶＨ  ＣＤＲ２配列は、アミノ酸配列ＡＩＹＰＧＮＳＥＴＧ（配列番号１０）を含み；ＶＨ  ＣＤＲ３配列は、アミノ酸配列ＥＮＷＤＰＧＦＡＦ（配列番号１１）を含み；ＶＬ  ＣＤＲ１配列は、アミノ酸配列ＳＡＳＳＳＶＹＹＭＹ（配列番号１２）又はＣＲＡＳＳＳＶＹＹＭＹ（配列番号１３）を含み；ＶＬ  ＣＤＲ２配列は、アミノ酸配列ＳＴＳＮＬＡＳ（配列番号１４）を含み；ＶＬ  ＣＤＲ３配列は、アミノ酸配列ＱＱＲＲＮＹＰＹＴ（配列番号１５）を含む。
【００５３】
一部の実施形態において、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体の、抗体又はこの抗原結合性断片は、ＶＨ  ＣＤＲ１配列、ＶＨ  ＣＤＲ２配列、ＶＨ  ＣＤＲ３配列、ＶＬ  ＣＤＲ１配列、ＶＬ  ＣＤＲ２配列及びＶＬ  ＣＤＲ３配列の組合せを含み、ここで、ＶＨ  ＣＤＲ１配列は、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＳＹＷＭＨ（配列番号９）と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上同一である配列を含み；ＶＨ  ＣＤＲ２配列は、アミノ酸配列ＡＩＹＰＧＮＳＥＴＧ（配列番号１０）と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上同一である配列を含み；ＶＨ  ＣＤＲ３配列は、アミノ酸配列ＥＮＷＤＰＧＦＡＦ（配列番号１１）と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上同一である配列を含み；ＶＬ  ＣＤＲ１配列は、アミノ酸配列ＳＡＳＳＳＶＹＹＭＹ（配列番号１２）又はＣＲＡＳＳＳＶＹＹＭＹ（配列番号１３）と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上同一である配列を含み；ＶＬ  ＣＤＲ２配列は、アミノ酸配列ＳＴＳＮＬＡＳ（配列番号１４）と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上同一である配列を含み；ＶＬ  ＣＤＲ３配列は、アミノ酸配列ＱＱＲＲＮＹＰＹＴ（配列番号１５）と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上同一である配列を含む。
【００５４】
一部の実施形態において、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体の抗体は、ＣＤ７１に特異的に結合する抗体を含む。一部の実施形態において、活性化可能コンジュゲート抗体は、ＣＤ７１に結合するモノクローナル抗体を含む。一部の実施形態において、ＣＤ７１に結合するこのようなモノクローナル抗体は、ヒト化モノクローナル抗体又は完全ヒトモノクローナル抗体である。
【００５５】
一部の実施形態において、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体の、抗体又はこの抗原結合性断片は、配列番号５を含む、重鎖可変領域のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体の、抗体又はこの抗原結合性断片は、配列番号７を含む、軽鎖可変領域のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体の、抗体又はこの抗原結合性断片は、配列番号５を含む、重鎖可変領域のアミノ酸配列及び配列番号７を含む、軽鎖可変領域又はこの抗原結合性断片のアミノ酸配列のアミノ酸配列を含む。
【００５６】
一部の実施形態において、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体の、抗体又はこの抗原結合性断片は、配列番号５を含むアミノ酸配列と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一である、重鎖可変領域のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体の、抗体又はこの抗原結合性断片は、配列番号７を含むアミノ酸配列と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一である、軽鎖可変領域のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体の、抗体又はこの抗原結合性断片は、配列番号１及び３〜５を含むアミノ酸配列と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一である、重鎖可変領域のアミノ酸配列並びに配列番号７を含むアミノ酸配列と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一である、軽鎖可変領域のアミノ酸配列を含む。
【００５７】
一部の実施形態において、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体の、抗体又はこの抗原結合性断片は、配列番号５を含むアミノ酸配列を含む、重鎖アミノ酸配列をコードしている核酸配列を含む核酸配列によりコードされている。一部の実施形態において、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体の、抗体又はこの抗原結合性断片は、配列番号７を含むアミノ酸配列を含む、軽鎖アミノ酸配列をコードしている核酸配列を含む核酸配列によりコードされている。一部の実施形態において、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体の、抗体又はこの抗原結合性断片は、配列番号５を含むアミノ酸配列を含む、重鎖アミノ酸配列をコードしている核酸配列及び配列番号７を含むアミノ酸配列を含む、軽鎖アミノ酸配列をコードしている核酸配列を含む核酸配列によりコードされている。
【００５８】
一部の実施形態において、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体の、抗体又はこの抗原結合性断片は、配列番号５を含むアミノ酸配列を含む、重鎖アミノ酸配列をコードしている核酸配列と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一である核酸配列を含む核酸配列によりコードされている。一部の実施形態において、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体の、抗体又はこの抗原結合性断片は、配列番号７を含むアミノ酸配列を含む、軽鎖アミノ酸配列をコードしている核酸配列と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一である核酸配列を含む核酸配列によりコードされている。一部の実施形態において、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体の、抗体又はこの抗原結合性断片は、配列番号５を含むアミノ酸配列を含む、重鎖アミノ酸配列をコードしている核酸配列と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一である核酸配列及び配列番号７を含むアミノ酸配列を含む、軽鎖アミノ酸配列をコードしている核酸配列と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一である核酸配列を含む核酸配列によりコードされている。
【００５９】
本開示はまた、細胞を、活性化可能抗体の発現をもたらす条件下において培養することにより、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体の活性化可能抗体を作製するための方法も提示するが、ここで、細胞は、本開示の核酸分子又は本開示のベクターを含む。
【００６０】
本開示はまた、マスキング部分（ＭＭ）のカップリングが、抗体又はこの抗原結合性断片がＣＤ７１に結合する能力を低減するように、ＭＭへとカップリングさせた、ＣＤ７１に特異的に結合する抗体又はこの抗原結合性断片を含む活性化可能コンジュゲート抗体も提示する。一部の実施形態において、ＭＭは、プロテアーゼ、例えば、罹患組織内において活性であるプロテアーゼ及び／又は対象の処置部位におけるＣＤ７１と共局在化しているプロテアーゼに対する基質を含む配列を介してカップリングされている。本明細書において、活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体又はＣＤ７１活性化可能コンジュゲート抗体としても互換的に称される、本明細書において提示されているコンジュゲート活性化可能抗ＣＤ７１抗体は、循環中において安定であり、意図された、治療及び／又は診断の部位において活性化されているが、処置及び／又診断の標的とされない正常組織、例えば、健常組織若しくは他の組織において活性化されておらず、活性化されると、本明細書において親抗体とも称される、対応する非修飾抗体と少なくとも同等な、ＣＤ７１への結合を呈する。
【００６１】
本発明はまた、ＣＤ７１に結合する活性化可能コンジュゲート抗体、特に、ＣＤ７１に結合し、ＣＤ７１及び／又はＣＤ７１媒介性シグナル伝達の少なくとも１つの生物学的活性を中和する又は他の形において阻害する活性化可能コンジュゲート抗体を使用して、対象における、ＣＤ７１の異常な発現及び／又は活性と関連している症状を処置する、この発症若しくは進行を阻止及び／若しくは遅延させる又はこれを緩和する方法も提供する。
【００６２】
本発明はまた、ＣＤ７１に結合する活性化可能コンジュゲート抗体、特に、ＣＤ７１を発現しつつある細胞又はＣＤ７１を異常に発現しつつある細胞に結合する、それらの細胞を標的とする、中和する、死滅させる又はそれらの細胞の少なくとも１つの生物学的活性を他の形において阻害する活性化可能抗体を使用して、対象における、ＣＤ７１を発現しつつある細胞又はＣＤ７１を異常に発現しつつある細胞の存在、増殖（ｇｒｏｗｔｈ）、増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）、転移及び／又は活性と関連している症状を処置する、この発症若しくは進行を阻止及び／若しくは遅延させる又はこれを緩和する方法も提供する。
【００６３】
本発明はまた、ＣＤ７１に結合する活性化可能コンジュゲート抗体、特に、ＣＤ７１を発現しつつある細胞に結合する、それらの細胞を標的とする、中和する、死滅させる又はそれらの細胞の少なくとも１つの生物学的活性を他の形において阻害する活性化可能抗体を使用して、対象における、ＣＤ７１を発現しつつある細胞の存在、増殖（ｇｒｏｗｔｈ）、増殖（、ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）、転移及び／又は活性と関連している症状を処置する、この発症若しくは進行を阻止及び／若しくは遅延させる又はこれを緩和する方法も提供する。
【００６４】
本発明はまた、ＣＤ７１に結合する活性化可能コンジュゲート抗体、特に、ＣＤ７１を異常に発現しつつある細胞に結合する、それらの細胞を標的とする、中和する、死滅させる又はそれらの細胞の少なくとも１つの生物学的活性を他の形において阻害する活性化可能コンジュゲート抗体を使用して、対象における、ＣＤ７１を異常に発現しつつある細胞の存在、増殖（ｇｒｏｗｔｈ）、増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）、転移及び／又は活性と関連している症状を処置する、この発症若しくは進行を阻止及び／若しくは遅延させる又はこれを緩和する方法も提供する。
【００６５】
活性化状態にある活性化可能コンジュゲート抗体は、ＣＤ７１に結合し、（ｉ）ＣＤ７１に特異的に結合する抗体（ＡＢ）；（ｉｉ）活性化可能抗体が非切断状態にある場合に、ＡＢの、ＣＤ７１への結合を阻害するマスキング部分（ＭＭ）；及び（ｃ）ＡＢへとカップリングされており、プロテアーゼに対する基質として機能するポリペプチドである、切断可能部分（ＣＭ）を含む。
【００６６】
一部の実施形態において、非切断状態にある活性化可能コンジュゲート抗体は、Ｎ末端からＣ末端へと、ＭＭ−ＣＭ−ＡＢ又はＡＢ−ＣＭ−ＭＭの構造的配置を有する。
【００６７】
一部の実施形態において、活性化可能コンジュゲート抗体は、ＭＭとＣＭとの間に連結ペプチドを含む。
【００６８】
一部の実施形態において、活性化可能コンジュゲート抗体は、ＣＭとＡＢとの間に連結ペプチドを含む。
【００６９】
一部の実施形態において、活性化可能コンジュゲート抗体は、第１の連結ペプチド（ＬＰ１）及び第２の連結ペプチド（ＬＰ２）を含み、ここで、非切断状態にある活性化可能コンジュゲート抗体は、Ｎ末端からＣ末端へと、ＭＭ−ＬＰ１−ＣＭ−ＬＰ２−ＡＢ又はＡＢ−ＬＰ２−ＣＭ−ＬＰ１−ＭＭの構造的配置を有する。一部の実施形態において、２つの連結ペプチドは、互いと同一である必要はない。
【００７０】
一部の実施形態において、ＬＰ１又はＬＰ２のうちの少なくとも１つは、（ＧＳ）ｎ、（ＧＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ（配列番号２４）及び（ＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２５）［配列中、ｎは、少なくとも１の整数である。］からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００７１】
一部の実施形態において、ＬＰ１又はＬＰ２のうちの少なくとも１つは、ＧＧＳＧ（配列番号２６）、ＧＧＳＧＧ（配列番号２７）、ＧＳＧＳＧ（配列番号２８）、ＧＳＧＧＧ（配列番号２９）、ＧＧＧＳＧ（配列番号３０）及びＧＳＳＳＧ（配列番号３１）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００７２】
一部の実施形態において、ＬＰ１は、アミノ酸配列ＧＧＧＳＳＧＧＳ（配列番号２０７）、ＧＳＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧ（配列番号３２）、ＧＳＳＧＧＳＧＧＳＧＧ（配列番号３３）、ＧＳＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号３４）、ＧＳＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号３５）、ＧＳＳＧＧＳＧＧＳＧ（配列番号３６）、ＧＳＳＧＧＳＧＧＳＧＳ（配列番号３７）を含む。
【００７３】
一部の実施形態において、ＬＰ２は、アミノ酸配列ＧＳＳ、ＧＧＳ、ＧＧＧＳ（配列番号３８）、ＧＳＳＧＴ（配列番号３９）又はＧＳＳＧ（配列番号４０）を含む。
【００７４】
一部の実施形態において、ＡＢは、哺乳動物ＣＤ７１への結合について、約１００ｎＭ以下の解離定数を有する。一部の実施形態において、ＡＢは、哺乳動物ＣＤ７１への結合について、約１０ｎＭ以下の解離定数を有する。一部の実施形態において、ＡＢは、ＣＤ７１への結合について、約５ｎＭ以下の解離定数を有する。一部の実施形態において、ＡＢは、ＣＤ７１への結合について、約１ｎＭ以下の解離定数を有する。一部の実施形態において、ＡＢは、ＣＤ７１への結合について、約０．５ｎＭ以下の解離定数を有する。一部の実施形態において、ＡＢは、ＣＤ７１への結合について、約０．１ｎＭ以下の解離定数を有する。一部の実施形態において、ＡＢは、哺乳動物ＣＤ７１への結合について、０．０１ｎＭ〜１００ｎＭ、０．０１ｎＭ〜１０ｎＭ、０．０１ｎＭ〜５ｎＭ、０．０１ｎＭ〜１ｎＭ、０．０１〜０．５ｎＭ、０．０１ｎｍ〜０．１ｎＭ、０．０１ｎｍ〜０．０５ｎＭ、０．０５ｎＭ〜１００ｎＭ、０．０５ｎＭ〜１０ｎＭ、０．０５ｎＭ〜５ｎＭ、０．０５ｎＭ〜１ｎＭ、０．０５〜０．５ｎＭ、０．０５ｎｍ〜０．１ｎＭ、０．１ｎＭ〜１００ｎＭ、０．１ｎＭ〜１０ｎＭ、０．１ｎＭ〜５ｎＭ、０．１ｎＭ〜１ｎＭ、０．１〜０．５ｎＭ、０．５ｎＭ〜１００ｎＭ、０．５ｎＭ〜１０ｎＭ、０．５ｎＭ〜５ｎＭ、０．５ｎＭ〜１ｎＭ、１ｎＭ〜１００ｎＭ、１ｎＭ〜１０ｎＭ、１ｎＭ〜５ｎＭ、５ｎＭ〜１００ｎＭ、５ｎＭ〜１０ｎＭ、又は１０ｎＭ〜１００ｎＭの解離定数を有する。
【００７５】
一部の実施形態において、非切断状態にある活性化可能コンジュゲート抗体は、哺乳動物ＣＤ７１に、１ｎＭ以下、５ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１５ｎＭ以下、２０ｎＭ以下、２５ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、１００ｎＭ以下、１５０ｎＭ以下、２５０ｎＭ以下、５００ｎＭ以下、７５０ｎＭ以下、１０００ｎＭ以下及び／又は２０００ｎＭ以下の解離定数で、特異的に結合する。
【００７６】
一部の実施形態において、非切断状態にある活性化可能コンジュゲート抗体は、哺乳動物ＣＤ７１に、１ｎＭ〜２０００ｎＭ、１ｎＭ〜１０００ｎＭ、１ｎＭ〜７５０ｎＭ、１ｎＭ〜５００ｎＭ、１ｎＭ〜２５０ｎＭ、１ｎＭ〜１５０ｎＭ、１ｎＭ〜１００ｎＭ、１ｎＭ〜５０ｎＭ、１ｎＭ〜２５ｎＭ、１ｎＭ〜１５ｎＭ、１ｎＭ〜１０ｎＭ、１ｎＭ〜５ｎＭ、５ｎＭ〜２０００ｎＭ、５ｎＭ〜１０００ｎＭ、５ｎＭ〜７５０ｎＭ、５ｎＭ〜５００ｎＭ、５ｎＭ〜２５０ｎＭ、５ｎＭ〜１５０ｎＭ、５ｎＭ〜１００ｎＭ、５ｎＭ〜５０ｎＭ、５ｎＭ〜２５ｎＭ、５ｎＭ〜１５ｎＭ、５ｎＭ〜１０ｎＭ、１０ｎＭ〜２０００ｎＭ、１０ｎＭ〜１０００ｎＭ、１０ｎＭ〜７５０ｎＭ、１０ｎＭ〜５００ｎＭ、１０ｎＭ〜２５０ｎＭ、１０ｎＭ〜１５０ｎＭ、１０ｎＭ〜１００ｎＭ、１０ｎＭ〜５０ｎＭ、１０ｎＭ〜２５ｎＭ、１０ｎＭ〜１５ｎＭ、１５ｎＭ〜２０００ｎＭ、１５ｎＭ〜１０００ｎＭ、１５ｎＭ〜７５０ｎＭ、１５ｎＭ〜５００ｎＭ、１５ｎＭ〜２５０ｎＭ、１５ｎＭ〜１５０ｎＭ、１５ｎＭ〜１００ｎＭ、１５ｎＭ〜５０ｎＭ、１５ｎＭ〜２５ｎＭ、２５ｎＭ〜２０００ｎＭ、２５ｎＭ〜１０００ｎＭ、２５ｎＭ〜７５０ｎＭ、２５ｎＭ〜５００ｎＭ、２５ｎＭ〜２５０ｎＭ、２５ｎＭ〜１５０ｎＭ、２５ｎＭ〜１００ｎＭ、２５ｎＭ〜５０ｎＭ、５０ｎＭ〜２０００ｎＭ、５０ｎＭ〜１０００ｎＭ、５０ｎＭ〜７５０ｎＭ、５０ｎＭ〜５００ｎＭ、５０ｎＭ〜２５０ｎＭ、５０ｎＭ〜１５０ｎＭ、５０ｎＭ〜１００ｎＭ、１００ｎＭ〜２０００ｎＭ、１００ｎＭ〜１０００ｎＭ、１００ｎＭ〜７５０ｎＭ、１００ｎＭ〜５００ｎＭ、１００ｎＭ〜２５０ｎＭ、１００ｎＭ〜１５０ｎＭ、１５０ｎＭ〜２０００ｎＭ、１５０ｎＭ〜１０００ｎＭ、１５０ｎＭ〜７５０ｎＭ、１５０ｎＭ〜５００ｎＭ、１５０ｎＭ〜２５０ｎＭ、２５０ｎＭ〜２０００ｎＭ、２５０ｎＭ〜１０００ｎＭ、２５０ｎＭ〜７５０ｎＭ、２５０ｎＭ〜５００ｎＭ、５００ｎＭ〜２０００ｎＭ、５００ｎＭ〜１０００ｎＭ、５００ｎＭ〜７５０ｎＭ、５００ｎＭ〜５００ｎＭ、５００ｎＭ〜２５０ｎＭ、５００ｎＭ〜１５０ｎＭ、５００ｎＭ〜１００ｎＭ、５００ｎＭ〜５０ｎＭ、７５０ｎＭ〜２０００ｎＭ、７５０ｎＭ〜１０００ｎＭ、又は１０００ｎＭ〜２０００ｎＭの範囲の解離定数で、特異的に結合する。
【００７７】
一部の実施形態において、活性化状態にある活性化可能コンジュゲート抗体は、哺乳動物ＣＤ７１に、０．０１ｎＭ、０．０５ｎＭ、０．１ｎＭ、０．５ｎＭ、１ｎＭ、５ｎＭ又は１０ｎＭ以下の解離定数で、特異的に結合する。
【００７８】
一部の実施形態において、活性化状態にある活性化可能コンジュゲート抗体は、哺乳動物ＣＤ７１に、０．０１ｎＭ〜１００ｎＭ、０．０１ｎＭ〜１０ｎＭ、０．０１ｎＭ〜５ｎＭ、０．０１ｎＭ〜１ｎＭ、０．０１〜０．５ｎＭ、０．０１ｎｍ〜０．１ｎＭ、０．０１ｎｍ〜０．０５ｎＭ、０．０５ｎＭ〜１００ｎＭ、０．０５ｎＭ〜１０ｎＭ、０．０５ｎＭ〜５ｎＭ、０．０５ｎＭ〜１ｎＭ、０．０５〜０．５ｎＭ、０．０５ｎｍ〜０．１ｎＭ、０．１ｎＭ〜１００ｎＭ、０．１ｎＭ〜１０ｎＭ、０．１ｎＭ〜５ｎＭ、０．１ｎＭ〜１ｎＭ、０．１〜０．５ｎＭ、０．５ｎＭ〜１００ｎＭ、０．５ｎＭ〜１０ｎＭ、０．５ｎＭ〜５ｎＭ、０．５ｎＭ〜１ｎＭ、１ｎＭ〜１００ｎＭ、１ｎＭ〜１０ｎＭ、１ｎＭ〜５ｎＭ、５ｎＭ〜１００ｎＭ、５ｎＭ〜１０ｎＭ、又は１０ｎＭ〜１００ｎＭの範囲の解離定数で、特異的に結合する。
【００７９】
一部の実施形態において、哺乳動物ＣＤ７１は、ヒトＣＤ７１、マウスＣＤ７１、ラットＣＤ７１及びカニクイザルＣＤ７１からなる群から選択される。一部の実施形態において、ＡＢは、ヒトＣＤ７１、マウスＣＤ７１又はカニクイザルＣＤ７１に、１ｎＭ未満の解離定数で、特異的に結合する。一部の実施形態において、哺乳動物ＣＤ７１は、ヒトＣＤ７１である。
【００８０】
一部の実施形態において、ＡＢは、以下の特徴：（ａ）ＡＢが、ヒトＣＤ７１に特異的に結合すること；及び（ｂ）ＡＢが、ヒトＣＤ７１及びカニクイザルＣＤ７１に特異的に結合することのうちの１つ以上を有する。
【００８１】
一部の実施形態において、ＡＢは、以下の特徴：（ａ）ＡＢが、ヒトＣＤ７１及びカニクイザルＣＤ７１に特異的に結合すること；（ｂ）ＡＢが、トランスフェリンの、哺乳動物ＣＤ７１への結合を阻害すること；（ｃ）ＡＢが、ヒトトランスフェリンの、ヒトＣＤ７１への結合を阻害すること；及び（ｄ）ＡＢが、カニクイザルトランスフェリンの、カニクイザルＣＤ７１への結合を阻害することのうちの１つ以上を有する。
【００８２】
一部の実施形態において、ＡＢは、天然リガンドが、哺乳動物ＣＤ７１に、５ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、１００ｎＭ以下、５００ｎＭ以下及び／又は１０００ｎＭ以下のＥＣ５０により結合する能力を遮断する。一部の実施形態において、ＡＢは、トランスフェリンが、哺乳動物ＣＤ７１に、５ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、１００ｎＭ以下、５００ｎＭ以下及び／又は１０００ｎＭ以下のＥＣ５０により結合する能力を遮断する。一部の実施形態において、ＣＤ７１の天然リガンドは、トランスフェリンである。
【００８３】
一部の実施形態において、ＡＢは、天然リガンドが、哺乳動物ＣＤ７１に、５ｎＭ〜１０００ｎＭ、５ｎＭ〜５００ｎＭ、５ｎＭ〜１００ｎＭ、５ｎＭ〜５０ｎＭ、５ｎＭ〜１０ｎＭ、１０ｎＭ〜１０００ｎＭ、１０ｎＭ〜５００ｎＭ、１０ｎＭ〜１００ｎＭ、１０ｎＭ〜５０ｎＭ、５０ｎＭ〜１０００ｎＭ、５０ｎＭ〜５００ｎＭ、５０ｎＭ〜１００ｎＭ、１００ｎＭ〜１０００ｎＭ、１００ｎＭ〜５００ｎＭ、５００ｎＭ〜１０００ｎＭのＥＣ５０により結合する能力を遮断する。一部の実施形態において、ＡＢは、トランスフェリンが、哺乳動物ＣＤ７１に、５ｎＭ〜１０００ｎＭ、５ｎＭ〜５００ｎＭ、５ｎＭ〜１００ｎＭ、５ｎＭ〜５０ｎＭ、５ｎＭ〜１０ｎＭ、１０ｎＭ〜１０００ｎＭ、１０ｎＭ〜５００ｎＭ、１０ｎＭ〜１００ｎＭ、１０ｎＭ〜５０ｎＭ、５０ｎＭ〜１０００ｎＭ、５０ｎＭ〜５００ｎＭ、５０ｎＭ〜１００ｎＭ、１００ｎＭ〜１０００ｎＭ、１００ｎＭ〜５００ｎＭ、５００ｎＭ〜１０００ｎＭのＥＣ５０により結合する能力を遮断する。一部の実施形態において、ＣＤ７１の天然リガンドは、トランスフェリンである。
【００８４】
一部の実施形態において、本開示のＡＢは、哺乳動物ＣＤ７１を発現する細胞の増殖（ｇｒｗｏｔｈ）、増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）及び／又は転移を阻害又は低減する。いかなる理論にも束縛される意図はないが、本開示のＡＢは、ＣＤ７１に特異的に結合し、天然リガンドの、哺乳動物ＣＤ７１への結合を阻害、遮断及び／又は阻止することにより、哺乳動物ＣＤ７１を発現する細胞の増殖（ｇｒｗｏｔｈ）、増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）及び／又は転移を阻害又は低減し得る。一部の実施形態において、哺乳動物ＣＤ７１の天然リガンドは、トランスフェリンである。
【００８５】
一部の実施形態において、ＭＭは、ＡＢの、ＣＤ７１に対する解離定数より大きい、ＡＢへの結合についての解離定数を有する。
【００８６】
一部の実施形態において、ＭＭは、ＡＢの、ＣＤ７１に対する解離定数以下である、ＡＢへの結合についての解離定数を有する。
【００８７】
一部の実施形態において、ＭＭは、ＡＢの、ＣＤ７１に対する解離定数未満である、ＡＢへの結合についての解離定数を有する。
【００８８】
一部の実施形態において、ＭＭの、ＡＢに対する解離定数（Ｋｄ）は、ＡＢの、標的に対する解離定数の、２、３、４、５、１０、２５、５０、１００、２５０、５００、１，０００、２，５００、５，０００、１０，０００、５０，０００、１００，０００、５００，０００、１，０００，０００、５，０００，０００、１０，０００，０００、５０，０００，０００倍以上又は１〜５、５〜１０、１０〜１００、１０〜１，０００、１０〜１０，０００、１０〜１００，０００、１０〜１，０００，０００、１０〜１０，０００，０００、１００〜１，０００、１００〜１０，０００、１００〜１００，０００、１００〜１，０００，０００、１００〜１０，０００，０００、１，０００〜１０，０００、１，０００〜１００，０００、１，０００〜１，０００，０００、１０００〜１０，０００，０００、１０，０００〜１００，０００、１０，０００〜１，０００，０００、１０，０００〜１０，０００，０００、１００，０００〜１，０００，０００若しくは１００，０００〜１０，０００，０００倍以上である。
【００８９】
一部の実施形態において、ＭＭは、活性化可能抗体が切断状態にある場合に、ＣＤ７１への結合について、ＡＢに干渉しない又はこれと競合しない。
【００９０】
一部の実施形態において、ＭＭは、約２〜４０アミノ酸の長さのポリペプチドである。一部の実施形態において、ＭＭは、最長において、約４０アミノ酸の長さのポリペプチドである。
【００９１】
一部の実施形態において、ＭＭポリペプチド配列は、ＣＤ７１のポリペプチド配列と異なる。一部の実施形態において、ＭＭポリペプチド配列は、ＡＢの、任意の天然結合パートナーと、５０％以下同一である。一部の実施形態において、ＭＭポリペプチド配列は、ＣＤ７１のポリペプチド配列と異なり、ＡＢの、任意の天然結合パートナーと、４０％、３０％、２５％、２０％、１５％又は１０％以下同一である。
【００９２】
一部の実施形態において、ＭＭの、ＡＢへのカップリングは、ＭＭへとカップリングさせた場合のＡＢの、ＣＤ７１に対する解離定数（Ｋｄ）が、ＭＭへとカップリングさせなかった場合のＡＢの、ＣＤ７１に対するＫｄの少なくとも２倍となるように、ＡＢがＣＤ７１に結合する能力を低減する。
【００９３】
一部の実施形態において、ＭＭの、ＡＢへのカップリングは、ＭＭへとカップリングさせた場合のＡＢの、ＣＤ７１に対する解離定数（Ｋｄ）が、ＭＭへとカップリングさせなかった場合のＡＢの、ＣＤ７１に対するＫｄの少なくとも５倍となるように、ＡＢがＣＤ７１に結合する能力を低減する。
【００９４】
一部の実施形態において、ＭＭの、ＡＢへのカップリングは、ＭＭへとカップリングさせた場合のＡＢの、ＣＤ７１に対する解離定数（Ｋｄ）が、ＭＭへとカップリングさせなかった場合のＡＢの、ＣＤ７１に対するＫｄの少なくとも１０倍となるように、ＡＢがＣＤ７１に結合する能力を低減する。
【００９５】
一部の実施形態において、ＭＭの、ＡＢへのカップリングは、ＭＭへとカップリングさせた場合のＡＢの、ＣＤ７１に対する解離定数（Ｋｄ）が、ＭＭへとカップリングさせなかった場合のＡＢの、ＣＤ７１に対するＫｄの少なくとも２０倍となるように、ＡＢがＣＤ７１に結合する能力を低減する。
【００９６】
一部の実施形態において、ＭＭの、ＡＢへのカップリングは、ＭＭへとカップリングさせた場合のＡＢの、ＣＤ７１に対する解離定数（Ｋｄ）が、ＭＭへとカップリングさせなかった場合のＡＢの、ＣＤ７１に対するＫｄの少なくとも４０倍となるように、ＡＢがＣＤ７１に結合する能力を低減する。
【００９７】
一部の実施形態において、ＭＭの、ＡＢへのカップリングは、ＭＭへとカップリングさせた場合のＡＢの、ＣＤ７１に対する解離定数（Ｋｄ）が、ＭＭへとカップリングさせなかった場合のＡＢの、ＣＤ７１に対するＫｄの少なくとも１００倍となるように、ＡＢがＣＤ７１に結合する能力を低減する。
【００９８】
一部の実施形態において、ＭＭの、ＡＢへのカップリングは、ＭＭへとカップリングさせた場合のＡＢの、ＣＤ７１に対する解離定数（Ｋｄ）が、ＭＭへとカップリングさせなかった場合のＡＢの、ＣＤ７１に対するＫｄの少なくとも１０００倍となるように、ＡＢがＣＤ７１に結合する能力を低減する。
【００９９】
一部の実施形態において、ＭＭの、ＡＢへのカップリングは、ＭＭへとカップリングさせた場合のＡＢの、ＣＤ７１に対する解離定数（Ｋｄ）が、ＭＭへとカップリングさせなかった場合のＡＢの、ＣＤ７１に対するＫｄの少なくとも１０，０００倍となるように、ＡＢがＣＤ７１に結合する能力を低減する。
【０１００】
一部の実施形態において、例えば、その内容を、その全体において参照により本明細書に組み込む、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１０／０８１１７３号において記載されたアッセイなどの標的置換アッセイを使用して、インビトロにおいてアッセイすると、ＣＤ７１の存在下において、ＣＭが切断されていない場合、ＣＭが切断されている場合と比較して、ＭＭは、ＡＢがＣＤ７１に結合する能力を少なくとも９０％低減する。
【０１０１】
一部の実施形態において、ＭＭは、配列番号１６又は１８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０１０２】
一部の実施形態において、ＣＭを切断するプロテアーゼは、罹患組織内において、活性である、例えば、上方調節されている又は他の形において無調節であり、プロテアーゼは、活性化可能抗体がプロテアーゼへと曝露されると、活性化可能抗体内のＣＭを切断する。
【０１０３】
一部の実施形態において、プロテアーゼは、組織内のＣＤ７１と共局在化され、プロテアーゼは、活性化可能抗体がプロテアーゼへと曝露されると、活性化可能コンジュゲート抗体内のＣＭを切断する。
【０１０４】
一部の実施形態において、活性化可能コンジュゲート抗体が非切断状態にある場合、活性化可能コンジュゲート抗体のＣＤ７１への結合は、低減されて、非修飾ＡＢの、ＣＤ７１への結合の解離定数の少なくとも２倍の解離定数で生じるのに対し、切断状態では（すなわち、活性化可能コンジュゲート抗体が切断状態にある場合）、ＡＢがＣＤ７１に結合するように、ＣＭは、活性化可能コンジュゲート抗体内に配置される。
【０１０５】
一部の実施形態において、活性化可能コンジュゲート抗体が非切断状態にある場合、活性化可能抗体のＣＤ７１への結合は、低減されて、非修飾ＡＢの、ＣＤ７１への結合の解離定数の少なくとも５倍の解離定数で生じるのに対し、切断状態では（すなわち、活性化可能コンジュゲート抗体が切断状態にある場合）、ＡＢがＣＤ７１に結合するように、ＣＭは、活性化可能コンジュゲート抗体内に配置される。
【０１０６】
一部の実施形態において、活性化可能コンジュゲート抗体が非切断状態にある場合、活性化可能抗体のＣＤ７１への結合は、低減されて、非修飾ＡＢの、ＣＤ７１への結合の解離定数の少なくとも１０倍の解離定数で生じるのに対し、切断状態では（すなわち、活性化可能コンジュゲート抗体が切断状態にある場合）、ＡＢがＣＤ７１に結合するように、ＣＭは、活性化可能コンジュゲート抗体内に配置される。
【０１０７】
一部の実施形態において、活性化可能コンジュゲート抗体が非切断状態にある場合、活性化可能コンジュゲート抗体のＣＤ７１への結合は、低減されて、非修飾ＡＢの、ＣＤ７１への結合の解離定数の少なくとも２０倍の解離定数で生じるのに対し、切断状態では（すなわち、活性化可能コンジュゲート抗体が切断状態にある場合）、ＡＢがＣＤ７１に結合するように、ＣＭは、活性化可能コンジュゲート抗体内に配置される。
【０１０８】
一部の実施形態において、活性化可能コンジュゲート抗体が非切断状態にある場合、活性化可能コンジュゲート抗体のＣＤ７１への結合は、低減されて、非修飾ＡＢの、ＣＤ７１への結合の解離定数の少なくとも４０倍の解離定数で生じるのに対し、切断状態では、ＡＢがＣＤ７１に結合するように、ＣＭは、活性化可能コンジュゲート抗体内に配置される。
【０１０９】
一部の実施形態において、活性化可能コンジュゲート抗体が非切断状態にある場合、活性化可能コンジュゲート抗体のＣＤ７１への結合は、低減されて、非修飾ＡＢの、ＣＤ７１への結合の解離定数の少なくとも５０倍の解離定数で生じるのに対し、切断状態では、ＡＢがＣＤ７１に結合するように、ＣＭは、活性化可能コンジュゲート抗体内に配置される。
【０１１０】
一部の実施形態において、活性化可能コンジュゲート抗体が非切断状態にある場合、活性化可能コンジュゲート抗体のＣＤ７１への結合は、低減されて、非修飾ＡＢの、ＣＤ７１への結合の解離定数の少なくとも１００倍の解離定数で生じるのに対し、切断状態では、ＡＢがＣＤ７１に結合するように、ＣＭは、活性化可能コンジュゲート抗体内に配置される。
【０１１１】
一部の実施形態において、活性化可能コンジュゲート抗体が非切断状態にある場合、活性化可能コンジュゲート抗体のＣＤ７１への結合は、低減されて、非修飾ＡＢの、ＣＤ７１への結合の解離定数の少なくとも２００倍の解離定数で生じるのに対し、切断状態では、ＡＢがＣＤ７１に結合するように、ＣＭは、活性化可能コンジュゲート抗体内に配置される。
【０１１２】
一部の実施形態において、ＣＭは、最長において、１５アミノ酸の長さのポリペプチドである。
【０１１３】
一部の実施形態において、ＣＭは、少なくとも１つのマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）に対する基質である、第１の切断可能部分（ＣＭ１）及び少なくとも１つのセリンプロテアーゼ（ＳＰ）に対する基質である、第２の切断可能部分（ＣＭ２）を含むポリペプチドである。一部の実施形態において、ＣＭ１−ＣＭ２基質のうちの、ＣＭ１基質配列及びＣＭ２基質配列の各々は、独立に、最長において、１５アミノ酸の長さのポリペプチドである。
【０１１４】
一部の実施形態において、ＣＭは、がんにおいて上方調節されている、若しくは他の形において無調節である又はこのようであると考えられる、少なくとも１つのプロテアーゼに対する基質である。
【０１１５】
一部の実施形態において、ＣＭは、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）、トロンビン、好中球エラスターゼ、システインプロテアーゼ、レグマイン並びにセリンプロテアーゼ、例えばマトリプターゼ（ＭＴ−ＳＰ１）及びウロキナーゼ（ｕＰＡ）からなる群から選択される少なくとも１つのプロテアーゼに対する基質である。理論に束縛されるわけではないが、これらのプロテアーゼは、がんのうちの少なくとも１つにおいて上方調節されている又は他の形において無調節であることが考えられる。
【０１１６】
一部の実施形態において、ＣＭは、特異的なプロテアーゼ、例えば、活性化可能抗体の標的と共局在化させることが既知のプロテアーゼを伴う使用のために選択される。
【０１１７】
一部の実施形態において、ＣＭは、少なくとも１つのＭＭＰに対する基質である。一部の実施形態において、ＣＭは、ＭＭＰ９、ＭＭＰ１４、ＭＭＰ１、ＭＭＰ３、ＭＭＰ１３、ＭＭＰ１７、ＭＭＰ１１及びＭＭＰ１９からなる群から選択されるプロテアーゼに対する基質である。一部の実施形態において、ＣＭは、ＭＭＰ９に対する基質である。一部の実施形態において、ＣＭは、ＭＭＰ１４に対する基質である。
【０１１８】
一部の実施形態において、ＣＭは、配列ＴＧＲＧＰＳＷＶ（配列番号４１）；ＳＡＲＧＰＳＲＷ（配列番号４２）；ＴＡＲＧＰＳＦＫ（配列番号４３）；ＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号４４）；ＧＧＷＨＴＧＲＮ（配列番号４５）；ＨＴＧＲＳＧＡＬ（配列番号４６）；ＰＬＴＧＲＳＧＧ（配列番号４７）；ＡＡＲＧＰＡＩＨ（配列番号４８）；ＲＧＰＡＦＮＰＭ（配列番号４９）；ＳＳＲＧＰＡＹＬ（配列番号５０）；ＲＧＰＡＴＰＩＭ（配列番号５１）；ＲＧＰＡ（配列番号５２）；ＧＧＱＰＳＧＭＷＧＷ（配列番号５３）；ＦＰＲＰＬＧＩＴＧＬ（配列番号５４）；ＶＨＭＰＬＧＦＬＧＰ（配列番号５５）；ＳＰＬＴＧＲＳＧ（配列番号５６）；ＳＡＧＦＳＬＰＡ（配列番号５７）；ＬＡＰＬＧＬＱＲＲ（配列番号５８）；ＳＧＧＰＬＧＶＲ（配列番号５９）；ＰＬＧＬ（配列番号６０）；ＬＳＧＲＳＧＮＨ（配列番号１７５）；ＳＧＲＳＡＮＰＲＧ（配列番号１７６）；ＬＳＧＲＳＤＤＨ（配列番号１７７）；ＬＳＧＲＳＤＩＨ（配列番号１７８）；ＬＳＧＲＳＤＱＨ（配列番号１７９）；ＬＳＧＲＳＤＴＨ（配列番号１８０）；ＬＳＧＲＳＤＹＨ（配列番号１８１）；ＬＳＧＲＳＤＮＰ（配列番号１８２）；ＬＳＧＲＳＡＮＰ（配列番号１８３）；ＬＳＧＲＳＡＮＩ（配列番号１８４）；ＬＳＧＲＳＤＮＩ（配列番号１８５）；ＭＩＡＰＶＡＹＲ（配列番号１８６）；ＲＰＳＰＭＷＡＹ（配列番号１８７）；ＷＡＴＰＲＰＭＲ（配列番号１８８）；ＦＲＬＬＤＷＱＷ（配列番号１８９）；ＩＳＳＧＬ（配列番号１９０）；ＩＳＳＧＬＬＳ（配列番号１９１）；及び／又はＩＳＳＧＬＬ（配列番号１９２）を含む基質である。
【０１１９】
一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号４４）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＴＧＲＧＰＳＷＶ（配列番号４１）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＰＬＴＧＲＳＧＧ（配列番号４７）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＧＧＱＰＳＧＭＷＧＷ（配列番号５３）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＦＰＲＰＬＧＩＴＧＬ（配列番号５４）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＶＨＭＰＬＧＦＬＧＰ（配列番号５５）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＰＬＧＬ（配列番号６０）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＳＡＲＧＰＳＲＷ（配列番号４２）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＴＡＲＧＰＳＦＫ（配列番号４３）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＧＧＷＨＴＧＲＮ（配列番号４５）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＨＴＧＲＳＧＡＬ（配列番号４６）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＡＡＲＧＰＡＩＨ（配列番号４８）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＲＧＰＡＦＮＰＭ（配列番号４９）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＳＳＲＧＰＡＹＬ（配列番号５０）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＲＧＰＡＴＰＩＭ（配列番号５１）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＲＧＰＡ（配列番号５２）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＬＳＧＲＳＧＮＨ（配列番号１７５）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＳＧＲＳＡＮＰＲＧ（配列番号１７６）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＬＳＧＲＳＤＤＨ（配列番号１７７）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＬＳＧＲＳＤＩＨ（配列番号１７８）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＬＳＧＲＳＤＱＨ（配列番号１７９）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＬＳＧＲＳＤＴＨ（配列番号１８０）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＬＳＧＲＳＤＹＨ（配列番号１８１）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＬＳＧＲＳＤＮＰ（配列番号１８２）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＬＳＧＲＳＡＮＰ（配列番号１８３）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＬＳＧＲＳＡＮＩ（配列番号１８４）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＬＳＧＲＳＤＮＩ（配列番号１８５）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＭＩＡＰＶＡＹＲ（配列番号１８６）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＲＰＳＰＭＷＡＹ（配列番号１８７）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＷＡＴＰＲＰＭＲ（配列番号１８８）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＦＲＬＬＤＷＱＷ（配列番号１８９）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＩＳＳＧＬ（配列番号１９０）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＩＳＳＧＬＬＳ（配列番号１９１）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列及び／又はＩＳＳＧＬＬ（配列番号１９２）を含む。
【０１２０】
一部の実施形態において、ＣＭは、ＭＭＰに対する基質であり、配列ＩＳＳＧＬＳＳ（配列番号６１）；ＱＮＱＡＬＲＭＡ（配列番号６２）；ＡＱＮＬＬＧＭＶ（配列番号６３）；ＳＴＦＰＦＧＭＦ（配列番号６４）；ＰＶＧＹＴＳＳＬ（配列番号６５）；ＤＷＬＹＷＰＧＩ（配列番号６６）、ＩＳＳＧＬＬＳＳ（配列番号６７）、ＬＫＡＡＰＲＷＡ（配列番号６８）；ＧＰＳＨＬＶＬＴ（配列番号６９）；ＬＰＧＧＬＳＰＷ（配列番号７０）；ＭＧＬＦＳＥＡＧ（配列番号７１）；ＳＰＬＰＬＲＶＰ（配列番号７２）；ＲＭＨＬＲＳＬＧ（配列番号７３）；ＬＡＡＰＬＧＬＬ（配列番号７４）；ＡＶＧＬＬＡＰＰ（配列番号７５）；ＬＬＡＰＳＨＲＡ（配列番号７６）；及び／又はＰＡＧＬＷＬＤＰ（配列番号７７）を含む。
【０１２１】
一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＩＳＳＧＬＳＳ（配列番号６１）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＱＮＱＡＬＲＭＡ（配列番号６２）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＡＱＮＬＬＧＭＶ（配列番号６３）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＳＴＦＰＦＧＭＦ（配列番号６４）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＰＶＧＹＴＳＳＬ（配列番号６５）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＤＷＬＹＷＰＧＩ（配列番号６６）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＩＳＳＧＬＬＳＳ（配列番号６７）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＬＫＡＡＰＲＷＡ（配列番号６８）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＧＰＳＨＬＶＬＴ（配列番号６９）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＬＰＧＧＬＳＰＷ（配列番号７０）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＭＧＬＦＳＥＡＧ（配列番号７１）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＳＰＬＰＬＲＶＰ（配列番号７２）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＲＭＨＬＲＳＬＧ（配列番号７３）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＬＡＡＰＬＧＬＬ（配列番号７４）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＡＶＧＬＬＡＰＰ（配列番号７５）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＬＬＡＰＳＨＲＡ（配列番号７６）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＰＡＧＬＷＬＤＰ（配列番号７７）を含む。
【０１２２】
一部の実施形態において、ＣＭは、トロンビンに対する基質である。一部の実施形態において、ＣＭは、トロンビンに対する基質であり、配列ＧＰＲＳＦＧＬ（配列番号７８）又はＧＰＲＳＦＧ（配列番号７９）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＧＰＲＳＦＧＬ（配列番号７８）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＧＰＲＳＦＧ（配列番号７９）を含む。
【０１２３】
一部の実施形態において、ＣＭは、ＮＴＬＳＧＲＳＥＮＨＳＧ（配列番号８０）；ＮＴＬＳＧＲＳＧＮＨＧＳ（配列番号８１）；ＴＳＴＳＧＲＳＡＮＰＲＧ（配列番号８２）；ＴＳＧＲＳＡＮＰ（配列番号８３）；ＶＡＧＲＳＭＲＰ（配列番号８４）；ＶＶＰＥＧＲＲＳ（配列番号８５）；ＩＬＰＲＳＰＡＦ（配列番号８６）；ＭＶＬＧＲＳＬＬ（配列番号８７）；ＱＧＲＡＩＴＦＩ（配列番号８８）；ＳＰＲＳＩＭＬＡ（配列番号８９）；及びＳＭＬＲＳＭＰＬ（配列番号９０）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０１２４】
一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＮＴＬＳＧＲＳＥＮＨＳＧ（配列番号８０）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＮＴＬＳＧＲＳＧＮＨＧＳ（配列番号８１）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＴＳＴＳＧＲＳＡＮＰＲＧ（配列番号８２）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＴＳＧＲＳＡＮＰ（配列番号８３）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＶＡＧＲＳＭＲＰ（配列番号８４）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＶＶＰＥＧＲＲＳ（配列番号８５）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＩＬＰＲＳＰＡＦ（配列番号８６）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＭＶＬＧＲＳＬＬ（配列番号８７）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＱＧＲＡＩＴＦＩ（配列番号８８）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＳＰＲＳＩＭＬＡ（配列番号８９）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、アミノ酸配列ＳＭＬＲＳＭＰＬ（配列番号９０）を含む。
【０１２５】
一部の実施形態において、ＣＭは、好中球エラスターゼに対する基質である。一部の実施形態において、ＣＭは、セリンプロテアーゼに対する基質である。一部の実施形態において、ＣＭは、ｕＰＡに対する基質である。一部の実施形態において、ＣＭは、レグマインに対する基質である。一部の実施形態において、ＣＭは、マトリプターゼに対する基質である。一部の実施形態において、ＣＭは、システインプロテアーゼに対する基質である。一部の実施形態において、ＣＭは、カテプシンなどのシステインプロテアーゼに対する基質である。
【０１２６】
一部の実施形態において、ＣＭは、ＣＭ１−ＣＭ２基質であり、配列ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号９１）；ＩＳＳＧＬＬＳＳＧＧＳＧＧＳＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号９２）；ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＴＳＴＳＧＲＳＡＮＰＲＧ（配列番号９３）；ＴＳＴＳＧＲＳＡＮＰＲＧＧＧＡＶＧＬＬＡＰＰ（配列番号９４）；ＶＨＭＰＬＧＦＬＧＰＧＧＴＳＴＳＧＲＳＡＮＰＲＧ（配列番号９５）；ＴＳＴＳＧＲＳＡＮＰＲＧＧＧＶＨＭＰＬＧＦＬＧＰ（配列番号９６）；ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号９７）；ＬＳＧＲＳＤＮＨＧＧＡＶＧＬＬＡＰＰ（配列番号９８）；ＶＨＭＰＬＧＦＬＧＰＧＧＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号９９）；ＬＳＧＲＳＤＮＨＧＧＶＨＭＰＬＧＦＬＧＰ（配列番号１００）；ＬＳＧＲＳＤＮＨＧＧＳＧＧＳＩＳＳＧＬＬＳＳ（配列番号１０１）；ＬＳＧＲＳＧＮＨＧＧＳＧＧＳＩＳＳＧＬＬＳＳ（配列番号１０２）；ＩＳＳＧＬＬＳＳＧＧＳＧＧＳＬＳＧＲＳＧＮＨ（配列番号１０３）；ＬＳＧＲＳＤＮＨＧＧＳＧＧＳＱＮＱＡＬＲＭＡ（配列番号１０４）；ＱＮＱＡＬＲＭＡＧＧＳＧＧＳＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号１０５）；ＬＳＧＲＳＧＮＨＧＧＳＧＧＳＱＮＱＡＬＲＭＡ（配列番号１０６）；ＱＮＱＡＬＲＭＡＧＧＳＧＧＳＬＳＧＲＳＧＮＨ（配列番号１０７）；ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＧＮＨ（配列番号１０８）；ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＡＮＰＲＧ（配列番号１４８）；ＡＶＧＬＬＡＰＰＴＳＧＲＳＡＮＰＲＧ（配列番号１４９）；ＡＶＧＬＬＡＰＰＳＧＲＳＡＮＰＲＧ（配列番号１５０）；ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＤＨ（配列番号１５１）；ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＩＨ（配列番号１５２）；ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＱＨ（配列番号１５３）；ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＴＨ（配列番号１５４）；ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＹＨ（配列番号１５５）；ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＮＰ（配列番号１５６）；ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＡＮＰ（配列番号１５７）；ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＡＮＩ（配列番号１５８）；ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＤＨ（配列番号１５９）；ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＩＨ（配列番号１６０）；ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＱＨ（配列番号１６１）；ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＴＨ（配列番号１６２）；ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＹＨ（配列番号１６３）；ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＮＰ（配列番号１６４）；ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＡＮＰ（配列番号１６５）；ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＡＮＩ（配列番号１６６）、ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＮＩ（配列番号１７１）；ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＮＩ（配列番号１７２）；ＧＬＳＧＲＳＤＮＨＧＧＡＶＧＬＬＡＰＰ（配列番号１９３）；及び／又はＧＬＳＧＲＳＤＮＨＧＧＶＨＭＰＬＧＦＬＧＰ（配列番号１９４）を含む。
【０１２７】
一部の実施形態において、ＣＭ１−ＣＭ２基質は、本明細書において基質２００１とも称される、配列ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号９１）を含む。一部の実施形態において、ＣＭ１−ＣＭ２基質は、本明細書において基質１００１／ＬＰ’／０００１とも称される、配列ＩＳＳＧＬＬＳＳＧＧＳＧＧＳＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号９２）を含み、このＣＭ１−ＣＭ２基質内において使用されているＬＰ’は、アミノ酸配列ＧＧＳＧＧＳ（配列番号２０５）である。一部の実施形態において、ＣＭ１−ＣＭ２基質は、本明細書において基質２０１５及び／又は基質１００４／ＬＰ’／０００３とも称される、配列ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＴＳＴＳＧＲＳＡＮＰＲＧ（配列番号９３）を含み、このＣＭ１−ＣＭ２基質内において使用されているＬＰ’は、アミノ酸配列ＧＧである。一部の実施形態において、ＣＭ１−ＣＭ２基質は、本明細書において基質０００３／ＬＰ’／１００４とも称される、配列ＴＳＴＳＧＲＳＡＮＰＲＧＧＧＡＶＧＬＬＡＰＰ（配列番号９４）を含み、このＣＭ１−ＣＭ２基質内において使用されているＬＰ’は、アミノ酸配列ＧＧである。一部の実施形態において、ＣＭ１−ＣＭ２基質は、本明細書において基質１００３／ＬＰ’／０００３とも称される、配列ＶＨＭＰＬＧＦＬＧＰＧＧＴＳＴＳＧＲＳＡＮＰＲＧ（配列番号９５）を含み、このＣＭ１−ＣＭ２基質内において使用されているＬＰ’は、アミノ酸配列ＧＧである。一部の実施形態において、ＣＭ１−ＣＭ２基質は、本明細書において基質０００３／ＬＰ’／１００３とも称される、配列ＴＳＴＳＧＲＳＡＮＰＲＧＧＧＶＨＭＰＬＧＦＬＧＰ（配列番号９６）を含み、このＣＭ１−ＣＭ２基質内において使用されているＬＰ’は、アミノ酸配列ＧＧである。一部の実施形態において、ＣＭ１−ＣＭ２基質は、本明細書において基質３００１及び／又は基質１００４／ＬＰ’／０００１とも称される、配列ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号９７）を含み、このＣＭ１−ＣＭ２基質内において使用されているＬＰ’は、アミノ酸配列ＧＧである。一部の実施形態において、ＣＭ１−ＣＭ２基質は、本明細書において基質０００１／ＬＰ’／１００４とも称される、配列ＬＳＧＲＳＤＮＨＧＧＡＶＧＬＬＡＰＰ（配列番号９８）を含み、このＣＭ１−ＣＭ２基質内において使用されているＬＰ’は、アミノ酸配列ＧＧである。一部の実施形態において、ＣＭ１−ＣＭ２基質は、本明細書において基質１００３／ＬＰ’／０００１とも称される、配列ＶＨＭＰＬＧＦＬＧＰＧＧＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号９９）を含み、このＣＭ１−ＣＭ２基質内において使用されているＬＰ’は、アミノ酸配列ＧＧである。一部の実施形態において、ＣＭ１−ＣＭ２基質は、本明細書において基質０００１／ＬＰ’／１００３とも称される、配列ＬＳＧＲＳＤＮＨＧＧＶＨＭＰＬＧＦＬＧＰ（配列番号１００）を含み、このＣＭ１−ＣＭ２基質内において使用されているＬＰ’は、アミノ酸配列ＧＧである。一部の実施形態において、ＣＭ１−ＣＭ２基質は、本明細書において基質０００１／ＬＰ’／１００１とも称される、配列ＬＳＧＲＳＤＮＨＧＧＳＧＧＳＩＳＳＧＬＬＳＳ（配列番号１０１）を含み、このＣＭ１−ＣＭ２基質内において使用されているＬＰ’は、アミノ酸配列ＧＧＳＧＧＳ（配列番号２０５）である。一部の実施形態において、ＣＭ１−ＣＭ２基質は、本明細書において基質０００２／ＬＰ’／１００１とも称される、配列ＬＳＧＲＳＧＮＨＧＧＳＧＧＳＩＳＳＧＬＬＳＳ（配列番号１０２）を含み、このＣＭ１−ＣＭ２基質内において使用されているＬＰ’は、アミノ酸配列ＧＧＳＧＧＳ（配列番号２０５）である。一部の実施形態において、ＣＭ１−ＣＭ２基質は、本明細書において基質１００１／ＬＰ’／０００２とも称される、配列ＩＳＳＧＬＬＳＳＧＧＳＧＧＳＬＳＧＲＳＧＮＨ（配列番号１０３）を含み、このＣＭ１−ＣＭ２基質内において使用されているＬＰ’は、アミノ酸配列ＧＧＳＧＧＳ（配列番号２０５）である。一部の実施形態において、ＣＭ１−ＣＭ２基質は、本明細書において基質０００１／ＬＰ’／１００２とも称される、配列ＬＳＧＲＳＤＮＨＧＧＳＧＧＳＱＮＱＡＬＲＭＡ（配列番号１０４）を含み、このＣＭ１−ＣＭ２基質内において使用されているＬＰ’は、アミノ酸配列ＧＧＳＧＧＳ（配列番号２０５）である。一部の実施形態において、ＣＭ１−ＣＭ２基質は、本明細書において基質１００２／ＬＰ’／０００１とも称される、配列ＱＮＱＡＬＲＭＡＧＧＳＧＧＳＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号１０５）を含み、このＣＭ１−ＣＭ２基質内において使用されているＬＰ’は、アミノ酸配列ＧＧＳＧＧＳ（配列番号２０５）である。一部の実施形態において、ＣＭ１−ＣＭ２基質は、本明細書において基質０００２／ＬＰ’／１００２とも称される、配列ＬＳＧＲＳＧＮＨＧＧＳＧＧＳＱＮＱＡＬＲＭＡ（配列番号１０６）を含み、このＣＭ１−ＣＭ２基質内において使用されているＬＰ’は、アミノ酸配列ＧＧＳＧＧＳ（配列番号２０５）である。一部の実施形態において、ＣＭ１−ＣＭ２基質は、本明細書において基質１００２／ＬＰ’／０００２とも称される、配列ＱＮＱＡＬＲＭＡＧＧＳＧＧＳＬＳＧＲＳＧＮＨ（配列番号１０７）を含み、このＣＭ１−ＣＭ２基質内において使用されているＬＰ’は、アミノ酸配列ＧＧＳＧＧＳ（配列番号２０５）である。一部の実施形態において、ＣＭ１−ＣＭ２基質は、本明細書において基質２００２とも称される、配列ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＧＮＨ（配列番号１０８）を含む。一部の実施形態において、ＣＭ１−ＣＭ２基質は、本明細書において基質２００３とも称される、配列ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＡＮＰＲＧ（配列番号１４８）を含む。一部の実施形態において、ＣＭ１−ＣＭ２基質は、本明細書において基質２００４とも称される、配列ＡＶＧＬＬＡＰＰＴＳＧＲＳＡＮＰＲＧ（配列番号１４９）を含む。一部の実施形態において、ＣＭ１−ＣＭ２基質は、本明細書において基質２００５とも称される、配列ＡＶＧＬＬＡＰＰＳＧＲＳＡＮＰＲＧ（配列番号１５０）を含む。一部の実施形態において、ＣＭ１−ＣＭ２基質は、本明細書において基質２００６とも称される、配列ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＤＨ（配列番号１５１）を含む。一部の実施形態において、ＣＭ１−ＣＭ２基質は、本明細書において基質２００７とも称される、配列ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＩＨ（配列番号１５２）を含む。一部の実施形態において、ＣＭ１−ＣＭ２基質は、本明細書において基質２００８とも称される、配列ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＱＨ（配列番号１５３）を含む。一部の実施形態において、ＣＭ１−ＣＭ２基質は、本明細書において基質２００９とも称される、配列ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＴＨ（配列番号１５４）を含む。一部の実施形態において、ＣＭ１−ＣＭ２基質は、本明細書において基質２０１０とも称される、配列ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＹＨ（配列番号１５５）を含む。一部の実施形態において、ＣＭ１−ＣＭ２基質は、本明細書において基質２０１１とも称される、配列ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＮＰ（配列番号１５６）を含む。一部の実施形態において、ＣＭ１−ＣＭ２基質は、本明細書において基質２０１２とも称される、配列ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＡＮＰ（配列番号１５７）を含む。一部の実施形態において、ＣＭ１−ＣＭ２基質は、本明細書において基質２０１３とも称される、配列ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＡＮＩ（配列番号１５８）を含む。一部の実施形態において、ＣＭ１−ＣＭ２基質は、本明細書において基質３００６とも称される、配列ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＤＨ（配列番号１５９）を含む。一部の実施形態において、ＣＭ１−ＣＭ２基質は、本明細書において基質３００７とも称される、配列ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＩＨ（配列番号１６０）を含む。一部の実施形態において、ＣＭ１−ＣＭ２基質は、本明細書において基質３００８とも称される、配列ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＱＨ（配列番号１６１）を含む。一部の実施形態において、ＣＭ１−ＣＭ２基質は、本明細書において基質３００９とも称される、配列ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＴＨ（配列番号１６２）を含む。一部の実施形態において、ＣＭ１−ＣＭ２基質は、本明細書において基質３０１０とも称される、配列ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＹＨ（配列番号１６３）を含む。一部の実施形態において、ＣＭ１−ＣＭ２基質は、本明細書において基質３０１１とも称される、配列ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＮＰ（配列番号１６４）を含む。一部の実施形態において、ＣＭ１−ＣＭ２基質は、本明細書において基質３０１２とも称される、配列ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＡＮＰ（配列番号１６５）を含む。一部の実施形態において、ＣＭ１−ＣＭ２基質は、本明細書において基質３０１３とも称される、配列ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＡＮＩ（配列番号１６６）を含む。一部の実施形態において、ＣＭ１−ＣＭ２基質は、本明細書において基質２０１４とも称される、配列ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＮＩ（配列番号１７１）を含む。一部の実施形態において、ＣＭ１−ＣＭ２基質は、本明細書において基質３０１４とも称される、配列ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＮＩ（配列番号１７２）を含む。一部の実施形態において、ＣＭ１−ＣＭ２基質は、本明細書において基質０００１／ＬＰ’／１０１４とも称される、配列ＧＬＳＧＲＳＤＮＨＧＧＡＶＧＬＬＡＰＰ（配列番号１９３）を含み、このＣＭ１−ＣＭ２基質内において使用されているＬＰ’は、アミノ酸配列ＧＧである。一部の実施形態において、ＣＭ１−ＣＭ２基質は、本明細書において基質０００１／ＬＰ’／１００３とも称される、配列ＧＬＳＧＲＳＤＮＨＧＧＶＨＭＰＬＧＦＬＧＰ（配列番号１９４）を含み、このＣＭ１−ＣＭ２基質内において使用されているＬＰ’は、アミノ酸配列ＧＧである。
【０１２８】
一部の実施形態において、ＣＭは、少なくとも２つのプロテアーゼに対する基質である。一部の実施形態において、ＣＭは、ＭＭＰ、トロンビン、好中球エラスターゼ、システインプロテアーゼ、ｕＰＡ、レグマイン及びマトリプターゼからなる群から選択される少なくとも２つのプロテアーゼに対する基質である。
【０１２９】
一部の実施形態において、活性化可能コンジュゲート抗体は、少なくとも第１のＣＭ及び第２のＣＭを含む。一部の実施形態において、第１のＣＭ及び第２のＣＭは、１５アミノ酸長以下の各ポリペプチドである。一部の実施形態において、非切断状態にある活性化可能コンジュゲート抗体内の、第１のＣＭ及び第２のＣＭは、Ｎ末端からＣ末端へと、ＭＭ−ＣＭ１−ＣＭ２−ＡＢ又はＡＢ−ＣＭ２−ＣＭ１−ＭＭの構造的配置を有する。一部の実施形態において、第１のＣＭ及び第２のＣＭのうちの少なくとも１つは、ＭＭＰ、トロンビン、好中球エラスターゼ、システインプロテアーゼ、ｕＰＡ、レグマイン及びマトリプターゼからなる群から選択されるプロテアーゼに対する基質として機能するポリペプチドである。一部の実施形態において、第１のＣＭは、標的組織内の、ＭＭＰ、トロンビン、好中球エラスターゼ、システインプロテアーゼ、ｕＰＡ、レグマイン及びマトリプターゼからなる群から選択される第１の切断剤により切断され、第２のＣＭは、標的組織内の、第２の切断剤により切断される。一部の実施形態において、他のプロテアーゼは、表（Ｉ）に示されているプロテアーゼからなる群から選択される。一部の実施形態において、第１の切断剤及び第２の切断剤は、ＭＭＰ、トロンビン、好中球エラスターゼ、システインプロテアーゼ、ｕＰＡ、レグマイン及びマトリプターゼからなる群から選択される同じプロテアーゼであり、第１のＣＭ及び第２のＣＭは、酵素の異なる基質である。一部の実施形態において、第１の切断剤及び第２の切断剤は、表（Ｉ）に示されているプロテアーゼからなる群から選択される同じプロテアーゼである。一部の実施形態において、第１の切断剤及び第２の切断剤は、異なるプロテアーゼである。一部の実施形態において、第１の切断剤及び第２の切断剤は、標的組織内に共局在化している。一部の実施形態において、第１のＣＭ及び第２のＣＭは、標的組織内の、少なくとも１つの切断剤により切断される。
【０１３０】
一部の実施形態において、プロテアーゼがＣＭを切断した後の、活性化状態又は切断状態において、活性化コンジュゲート抗体が、ＬＰ２配列及び／又はＣＭ配列のうちの少なくとも一部を含む軽鎖アミノ酸配列を含むように、活性化可能コンジュゲート抗体は、プロテアーゼへと曝露され、これにより切断される。
【０１３１】
一部の実施形態において、活性化可能抗体は、１当量以上の薬剤へとコンジュゲートされている。一部の実施形態において、活性化可能抗体は、１当量の薬剤へとコンジュゲートされている。一部の実施形態において、活性化可能抗体は、２、３又は４当量の薬剤へとコンジュゲートされている。一部の実施形態において、活性化可能抗体は、均一当量数のコンジュゲート剤を有する、活性化可能抗体の混合物の一部である。一部の実施形態において、活性化可能抗体は、不均一当量数のコンジュゲート剤を有する、活性化可能抗体の混合物の一部である。一部の実施形態において、活性化可能抗体の混合物は、各活性化可能抗体へとコンジュゲートされた薬剤の平均数が、０〜１、１〜２、２〜３又は３〜４であるような混合物である。一部の実施形態において、活性化可能抗体の混合物は、各活性化可能抗体へとコンジュゲートされた薬剤の平均数が、１、２、３又は４であるような混合物である。
【０１３２】
一部の実施形態において、活性化可能抗体は、リシン残基及び／又はシステイン残基の数が、活性化可能抗体の元のアミノ酸配列に照らして増大又は減少するように、１つ以上の部位特異的なアミノ酸配列の修飾を含むので、これに応じて、一部の実施形態において、活性化可能抗体へとコンジュゲートされ得る薬剤の数を増大若しくは減少させている又は一部の実施形態において、薬剤の活性化可能抗体へのコンジュゲーションを、部位特異的に限定している。一部の実施形態において、修飾活性化可能抗体は、１つ以上の非天然アミノ酸により、部位特異的に修飾され、したがって、一部の実施形態において、薬剤のコンジュゲーションを、非天然アミノ酸の部位だけに限定している。
【０１３３】
本明細書において開示されている活性化可能コンジュゲート抗体は、抗体の構成に応じて、少なくとも部分的に、コンジュゲーションを実施するのに使用された方法に応じて、薬物分子及び抗体部分を、多様な化学量論モル比で含み得る。
【０１３４】
「薬物ロード」又は「薬物ローディング」という用語は、個々の活性化可能コンジュゲート抗体内の、抗体１つ当たりの薬物分子のモル比を指す。ある特定の実施形態において、薬物ローディングは、１つ〜４つの薬物分子、２つ〜４つの薬物分子、１つ〜３つの薬物分子、２つ〜３つの薬物分子又は１つ〜２つの薬物分子を含み得る。ある特定の実施形態において、薬物ローディングは、１つの薬物分子、２つの薬物分子、３つの薬物分子又は４つの薬物分子を含み得る。
【０１３５】
本発明の目的のために、当業者は、「薬物ローディング」と「薬物対抗体比」（ＤＡＲとも称される）とは、同じではないことを理解する。ＤＡＲとは、少なくとも２つの活性化可能コンジュゲート抗体分子の集団内の、抗体１つ当たりの薬物分子の平均モル比を指すが、ここで、薬物ローディングは、個々の活性化可能コンジュゲート抗体分子内の、抗体１つ当たりの薬物分子のモル比を指す。薬物ローディングが、主に、活性化可能コンジュゲート抗体の構築及びデザインに関与するのに対し、ＤＡＲは、主に、患者へと投与される、治療用活性化可能コンジュゲート抗体の医薬組成物に関与する。
【０１３６】
一部の実施形態において、本発明の活性化可能抗体は、狭いＤＡＲ分布を有する活性化可能コンジュゲート抗体の、比較的均質な調製物を作出するようにコンジュゲートされ得る。一部の実施形態において、活性化可能コンジュゲート抗体調製物は、そのＤＡＲ分布に照らして、実質的に均質であり得るが、これは、調製物中に、特定のＤＡＲを伴う（例えば、ＤＡＲを２及び／又は４とする）、部位特異的なＡＤＣの主要な分子種が存在することを意味する。一部の実施形態において、実質的に均質な活性化可能コンジュゲート抗体調製物はまた、ローディングの部位（すなわち、遊離システイン上の）に照らしても、均質であり得る。
【０１３７】
一部の実施形態において、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体のＤＡＲは、約２及び／又は４となる。この文脈において、「約」という用語は、凝集物中に、８０％より大きい２つの主要な分子種であって、２及び４に等しいＤＡＲを有する分子種を、ほぼ同等な分布（例えば、各々、４０％より大きい）により含有し、残りは、他のＤＡＲ分子種からなる、活性化可能コンジュゲート抗体調製物を意味するように解釈されるべきである。
【０１３８】
一部の実施形態において、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体のＤＡＲは、約２となるように強化される。この文脈において、「約」という用語は、約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％±０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９％より大きな比率を含有する、活性化可能コンジュゲート抗体調製物を意味するように解釈されるべきである。
【０１３９】
一部の実施形態において、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体のＤＡＲは、約２となるように強化され、「約」という用語は、約９４％±０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９％より大きな比率を含有する、活性化可能コンジュゲート抗体調製物を意味するように解釈される。
【０１４０】
一部の実施形態において、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体のＤＡＲは、約２となるように強化され、「約」という用語は、約９５％±０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９％より大きな比率を含有する、活性化可能コンジュゲート抗体調製物を意味するように解釈される。
【０１４１】
一部の実施形態において、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体のＤＡＲは、約２となるように強化され、「約」という用語は、約９６％±０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９％より大きな比率を含有する、活性化可能コンジュゲート抗体調製物を意味するように解釈される。
【０１４２】
一部の実施形態において、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体のＤＡＲは、約２となるように強化され、「約」という用語は、約９７％±０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９％より大きな比率を含有する、活性化可能コンジュゲート抗体調製物を意味するように解釈される。
【０１４３】
一部の実施形態において、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体のＤＡＲは、約２となるように強化され、「約」という用語は、約９８％±０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９％より大きな比率を含有する、活性化可能コンジュゲート抗体調製物を意味するように解釈される。
【０１４４】
一部の実施形態において、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体のＤＡＲは、約２となるように強化され、「約」という用語は、約９９％±０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９％より大きな比率を含有する、活性化可能コンジュゲート抗体調製物を意味するように解釈される。
【０１４５】
一部の実施形態において、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体のＤＡＲは、約２及び／又は４となる。この文脈において、「約」という用語は、凝集物中に、８０％より大きい２つの主要な分子種であって、２及び４に等しいＤＡＲを有する分子種を、ほぼ同等な分布（例えば、各々、４０％より大きい）により含有し、残りは、他のＤＡＲ分子種からなる、活性化可能コンジュゲート抗体調製物を意味するように解釈されるべきである。
【０１４６】
一部の実施形態において、部位特異的活性化可能抗体並びに／又は選択的還元及びコンジュゲーションの使用を介して、所望の均質性を達成することが可能である。一部の実施形態において、所望の均質性は、選択的還元と組み合わせた、部位特異的構築物の使用を介して達成され得る。一部の実施形態において、調製物は、解析用クロマトグラフィー法又は調製用クロマトグラフィー法を使用することなどにより、さらに精製され得る。これらの実施形態において、活性化可能コンジュゲート抗体調製物の均質性は、質量分析、ＨＰＬＣ（例えば、サイズ除外ＨＰＬＣ、ＲＰ−ＨＰＬＣ、ＨＩＣ−ＨＰＬＣなど）又はキャピラリー電気泳動を含むがこれらに限定されない、当技術分野において公知の多様な技法を使用して解析され得る。
【０１４７】
活性化可能コンジュゲート抗体調製物の精製に関して、所望の純度を得るのに、標準的な医薬調製法が利用され得ることが理解される。本明細書において論じられている通り、逆相（ＲＰ）クロマトグラフィー及び疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）などの液体クロマトグラフィー法は、薬物ローディング値により、混合物中の化合物を分離し得る。場合によって、イオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＣ）又は混合モードクロマトグラフィー（ＭＭＣ）もまた、特異的な薬物ロードを伴う分子種を単離するのに使用され得る。
【０１４８】
一部の実施形態において、比較的高レベルの薬物ロード均質性を伴う、所与のＤＡＲを有する本開示の活性化可能コンジュゲート抗体調製物は、実のところ、ある範囲又は分布の薬物ロードを伴うコンジュゲートの混合物を含み得るが、ここで、薬物ロードの、混合物中の分布は、平均ＤＡＲ値の近傍を中心とする（又はこの重み付け平均を有する）。したがって、一部の実施形態において、活性化可能コンジュゲート抗体調製物は、混合物の平均ＤＡＲが、各々±０．５とする、約１、２又は３である、コンジュゲートの混合物を含む。ある特定の好ましい実施形態において、範囲又は偏差は、０．４未満であり得ることが理解される。したがって、他の実施形態において、組成物は、各々±０．３とする、約１、２又は３の平均ＤＡＲを含む。
【０１４９】
一部の実施形態において、コンジュゲーション反応に由来する、活性化可能コンジュゲート抗体の調製物中の、抗体１つ当たりの薬物の分布は、ＵＶ−Ｖｉｓ分光光度法、逆相ＨＰＬＣ、ＨＩＣ、質量分析、ＥＬＩＳＡ及び電気泳動など、従来の手段により特徴付けられ得る。
【０１５０】
一部の実施形態において、異なる薬物ロードを有するコンジュゲートの混合物を含む、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体の混合物は、特異的な薬物ロードを有するコンジュゲートの、１つ以上の分子種について、精製又は強化され得る。例えば、薬物ロードを０、２、４、６及び８とするＡＡＤＣの混合物を含む活性化可能コンジュゲート抗体混合物は、薬物ロードを２とする活性化可能コンジュゲート抗体について強化又は精製され得る。一部の実施形態において、混合物は、薬物ロードを４とする活性化可能コンジュゲート抗体の分子種だけについて精製又は強化され得る。一部の実施形態において、混合物は、薬物ロードを２及び４とする活性化可能コンジュゲート抗体の分子種だけについて精製又は強化され得る。本明細書において使用される場合、薬物ロードを２とするコンジュゲート分子種の分子種の比較的均質な調製物を有する、調製物若しくは精製物又は活性化可能コンジュゲート抗体は、「Ｅ２」と称され、これは、ＤＡＲを約２とする。本明細書において使用される場合、薬物ロードを４とするコンジュゲート分子種の比較的均質な調製物を有する、調製物若しくは精製物又は活性化可能コンジュゲート抗体は、「Ｅ４」と称される。本明細書において使用される場合、「ＤＥ」（ＤＡＲ強化型）と称され、ＤＡＲを約３とする、薬物ロードを２又は４とするコンジュゲート分子種の混合物を有する、調製物若しくは精製物又は活性化可能コンジュゲート抗体。この文脈において、「約」という用語は、禁止量の、±０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９又は１．０を意味するように解釈される。
【０１５１】
一部の実施形態において、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体は、式：
ＡＡ−（ＡＧ）ｐ
［式中、ＡＡは、非切断状態において、Ｎ末端からＣ末端へと、ＭＭ−ＣＭ−ＡＢの構造的配置を有する活性化可能抗体である。ＡＢは、哺乳動物ＣＤ７１に特異的に結合し、配列番号５の重鎖可変領域配列及び配列番号７の軽鎖可変領域配列を含む抗体である。ＭＭは、配列番号１８のアミノ酸配列を含むマスキング部分であり、ＭＭは、ＡＢへとカップリングされており、ＡＡが非切断状態にある場合に、ＡＢの、ＣＤ７１への結合を阻害する。ＣＭは、配列番号１５６の配列を含む切断可能部分であり、ＣＭは、ＡＢへとカップリングされており、ＣＭは、プロテアーゼに対する基質として機能するポリペプチドである。ＡＧは、ＡＡ−（ＡＧ）ｐの場合の、ＡＡへとコンジュゲートさせた薬剤である。］により表され得る。一部の実施形態において、ｐは、０、１、２、３、４、５、６、７又は８である。一部の実施形態において、本開示の組成物は、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体の混合物を含み、ここで、各活性化可能コンジュゲート抗体は、式ＡＡ−（ＡＧ）ｐ［式中、ｐは０〜８の整数である。］により表される。一部の実施形態において、組成物は、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体の混合物を含み、ここで、分子種のうちの少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％又は少なくとも９８％は、活性化可能コンジュゲート抗体であり、ｐは２である。
【０１５２】
一部の実施形態において、具体的な薬物ロードを伴う、所与の分子種のコンジュゲートについて精製又は強化された活性化可能コンジュゲート抗体の調製物は、少なくともある特定の百分率の所与の薬物ロード分子種を含む。例えば、一部の実施形態において、Ｅ２活性化可能コンジュゲート抗体の調製物は、少なくとも５０％の、薬物ロードを２とする活性化可能コンジュゲート抗体を含む。一部の実施形態において、Ｅ２活性化可能コンジュゲート抗体の調製物は、少なくとも７５％の、薬物ロードを２とする活性化可能コンジュゲート抗体を含む。一部の実施形態において、Ｅ２活性化可能コンジュゲート抗体の調製物は、少なくとも８５％の、薬物ロードを２とする活性化可能コンジュゲート抗体を含む。一部の実施形態において、Ｅ２活性化可能コンジュゲート抗体の調製物は、少なくとも９０％の、薬物ロードを２とする活性化可能コンジュゲート抗体を含む。一部の実施形態において、Ｅ２活性化可能コンジュゲート抗体の調製物は、少なくとも９５％の、薬物ロードを２とする活性化可能コンジュゲート抗体を含む。一部の実施形態において、Ｅ２活性化可能コンジュゲート抗体の調製物は、少なくとも９８％の、薬物ロードを２とする活性化可能コンジュゲート抗体を含む。
【０１５３】
一部の実施形態において、所与の薬物ロード分子種について精製又は強化された、活性化可能コンジュゲート抗体の調製物は、他の全ての薬物ロード分子種が組み合わされた総モル当量より大きなモル当量の、所与の薬物ロード分子種を含む。例えば、一部の実施形態において、Ｅ２活性化可能コンジュゲート抗体の調製物は、薬物ロードが２ではない組成物の活性化可能コンジュゲート抗体分子種の各々の組合せ当量が、薬物ロードが２である活性化可能コンジュゲート抗体の当量未満であるような調製物である。一部の実施形態において、Ｅ４活性化可能コンジュゲート抗体の調製物は、薬物ロードが４ではない組成物の活性化可能コンジュゲート抗体分子種の各々の組合せ当量が、薬物ロードが４である活性化可能コンジュゲート抗体の当量未満であるような調製物である。一部の実施形態において、ＤＥ活性化可能コンジュゲート抗体の調製物は、薬物ロードが２又は４ではない組成物の活性化可能コンジュゲート抗体分子種の各々の組合せ当量が、薬物ロードを２又は４とする活性化可能コンジュゲート抗体の当量未満であるような調製物である。
【０１５４】
一部の実施形態において、所与のＤＡＲ分子種（例えば、本明細書において論じられているＥ２又はＥ４）について精製又は強化された活性化可能コンジュゲート抗体の調製物は、ある特定の百分率未満の、所与の薬物ロード分子種ではない活性化可能コンジュゲート抗体を含む。例えば、一部の実施形態において、Ｅ２活性化可能コンジュゲート抗体の調製物は、５０％未満の、薬物ロードが２分子種ではない、活性化可能コンジュゲート抗体を含む。例えば、一部の実施形態において、Ｅ２活性化可能コンジュゲート抗体の調製物は、２５％未満の、薬物ロードが２分子種ではない、活性化可能コンジュゲート抗体を含む。例えば、一部の実施形態において、Ｅ２活性化可能コンジュゲート抗体の調製物は、１５％未満の、薬物ロードが２分子種ではない、活性化可能コンジュゲート抗体を含む。例えば、一部の実施形態において、Ｅ２活性化可能コンジュゲート抗体の調製物は、１０％未満の、薬物ロードが２分子種ではない、活性化可能コンジュゲート抗体を含む。例えば、一部の実施形態において、Ｅ２活性化可能コンジュゲート抗体の調製物は、５％未満の、薬物ロードが２分子種ではない、活性化可能コンジュゲート抗体を含む。例えば、一部の実施形態において、Ｅ２活性化可能コンジュゲート抗体の調製物は、２％未満の、薬物ロードが２分子種ではない、活性化可能コンジュゲート抗体を含む。他の一部の実施形態において、又は強化又は精製された調製物（例えば、Ｅ４若しくはＤＥ）は、強化又は精製された活性化可能コンジュゲート抗体組成物中に、５０％未満、２５％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満又は２％未満の、対応する薬物ロードの分子種ではない分子種を有し得る。
【０１５５】
一部の実施形態において、薬剤は、抗炎症剤である。
【０１５６】
一部の実施形態において、コンジュゲート活性化可能抗体はまた、検出可能部分も含む。一部の実施形態において、検出可能部分は、診断剤である。
【０１５７】
一部の実施形態において、活性化可能コンジュゲート抗体はまた、シグナルペプチドも含む。一部の実施形態において、シグナルペプチドは、スペーサーを介して、活性化可能抗体へとコンジュゲートされている。一部の実施形態において、スペーサーは、シグナルペプチドの非存在下において、活性化可能抗体へとコンジュゲートされている。一部の実施形態において、スペーサーは、活性化可能抗体のＭＭへと、直接接続されている。一部の実施形態において、スペーサーは、スペーサー−ＭＭ−ＣＭ−ＡＢの、Ｎ末端からＣ末端への構造的配置において、活性化可能抗体のＭＭへと、直接接続されている。活性化可能抗体のＭＭのＮ末端へと直接接続されているスペーサーの例は、ＱＧＱＳＧＱ（配列番号１０９）である。活性化可能抗体のＭＭのＮ末端へと直接接続されているスペーサーの他の例は、ＱＧＱＳＧＱＧ（配列番号１３８）、ＱＧＱＳＧ（配列番号１３９）、ＱＧＱＳ（配列番号１４０）、ＱＧＱ、ＱＧ及びＱを含む。活性化可能抗体のＭＭのＮ末端へと直接接続されているスペーサーの他の例は、ＧＱＳＧＱＧ（配列番号１４３）、ＱＳＧＱＧ（配列番号１４４）、ＳＧＱＧ（配列番号１４５）、ＧＱＧ及びＧを含む。一部の実施形態において、スペーサーは、ＭＭのＮ末端へと接続されていない。一部の実施形態において、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列ＱＧＱＳＧＱ（配列番号１０９）を含む。一部の実施形態において、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列ＱＧＱＳＧＱＧ（配列番号１３８）を含む。一部の実施形態において、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列ＱＧＱＳＧ（配列番号１３９）を含む。一部の実施形態において、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列ＱＧＱＳ（配列番号１４０）を含む。一部の実施形態において、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列ＱＧＱを含む。一部の実施形態において、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列ＱＧを含む。一部の実施形態において、スペーサーは、少なくともアミノ酸残基Ｑを含む。一部の実施形態において、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列ＧＱＳＧＱＧ（配列番号１４３）を含む。一部の実施形態において、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列ＱＳＧＱＧ（配列番号１４４）を含む。一部の実施形態において、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列ＳＧＱＧ（配列番号１４５）を含む。一部の実施形態において、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列ＧＱＧを含む。一部の実施形態において、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列Ｇを含む。一部の実施形態において、スペーサーは存在しない。
【０１５８】
一部の実施形態において、活性化可能コンジュゲート抗体のＡＢは、天然において、１つ以上のジスルフィド結合を含有する。一部の実施形態において、ＡＢは、１つ以上のジスルフィド結合を含むように操作され得る。
【０１５９】
一部の実施形態において、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体の活性化可能抗体は、配列番号５からなる群から選択される、重鎖可変領域のアミノ酸配列をコードしている核酸配列を含む核酸配列によりコードされている。一部の実施形態において、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体の活性化可能抗体は、配列番号７からなる群から選択される、軽鎖可変領域のアミノ酸配列をコードしている核酸配列を含む核酸配列によりコードされている。一部の実施形態において、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体の活性化可能抗体は、配列番号５からなる群から選択される、重鎖可変領域のアミノ酸配列をコードしている核酸配列及び配列番号７からなる群から選択される、軽鎖可変領域のアミノ酸配列をコードしている核酸配列を含む核酸配列によりコードされている。
【０１６０】
一部の実施形態において、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体の活性化可能抗体は、配列番号５からなる群から選択される、重鎖可変領域のアミノ酸配列をコードしている核酸配列と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一である核酸配列を含む核酸配列によりコードされている。一部の実施形態において、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体の活性化可能抗体は、配列番号７からなる群から選択される、軽鎖可変領域のアミノ酸配列をコードしている核酸配列と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一である核酸配列を含む核酸配列によりコードされている。一部の実施形態において、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体の活性化可能抗体は、配列番号５からなる群から選択される、重鎖可変領域のアミノ酸配列をコードしている核酸配列と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一である核酸配列及び配列番号７からなる群から選択される、軽鎖可変領域のアミノ酸配列をコードしている核酸配列と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一である核酸配列を含む核酸配列によりコードされている。
【０１６１】
本開示はまた、細胞を、活性化可能抗体の発現をもたらす条件下において培養することにより、本開示の活性化可能抗体を作製するための方法も提示するが、ここで、細胞は、本開示の核酸分子又は本開示のベクターを含む。
【０１６２】
本開示はまた、活性化状態において、ＣＤ７１に結合する活性化可能抗体を製造する方法であって、（ａ）活性化可能抗体をコードしている核酸構築物を含む細胞を、本開示の活性化可能抗体を含む活性化可能抗体の発現をもたらす条件下において培養すること；及び（ｂ）活性化可能抗体を回収することを含む方法も提示する。
【０１６３】
一部の実施形態において、活性化可能コンジュゲート抗体の血清半減期は、対応する抗体の血清半減期より長い、例えば、活性化可能コンジュゲート抗体のｐＫは、対応する抗体のｐＫより長い。一部の実施形態において、活性化可能コンジュゲート抗体の血清半減期は、対応する抗体の血清半減期と同等である。一部の実施形態において、活性化可能コンジュゲート抗体の血清半減期は、生物へと投与された場合、少なくとも１５日間である。一部の実施形態において、活性化可能コンジュゲート抗体の血清半減期は、生物へと投与された場合、少なくとも１２日間である。一部の実施形態において、活性化可能コンジュゲート抗体の血清半減期は、生物へと投与された場合、少なくとも１１日間である。一部の実施形態において、活性化可能コンジュゲート抗体の血清半減期は、生物へと投与された場合、少なくとも１０日間である。一部の実施形態において、活性化可能コンジュゲート抗体の血清半減期は、生物へと投与された場合、少なくとも９日間である。一部の実施形態において、活性化可能コンジュゲート抗体の血清半減期は、生物へと投与された場合、少なくとも８日間である。一部の実施形態において、活性化可能コンジュゲート抗体の血清半減期は、生物へと投与された場合、少なくとも７日間である。一部の実施形態において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物へと投与された場合、少なくとも６日間である。一部の実施形態において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物へと投与された場合、少なくとも５日間である。一部の実施形態において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物へと投与された場合、少なくとも４日間である。一部の実施形態において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物へと投与された場合、少なくとも３日間である。一部の実施形態において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物へと投与された場合、少なくとも２日間である。一部の実施形態において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物へと投与された場合、少なくとも２４時間である。一部の実施形態において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物へと投与された場合、少なくとも２０時間である。一部の実施形態において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物へと投与された場合、少なくとも１８時間である。一部の実施形態において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物へと投与された場合、少なくとも１６時間である。一部の実施形態において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物へと投与された場合、少なくとも１４時間である。一部の実施形態において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物へと投与された場合、少なくとも１２時間である。一部の実施形態において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物へと投与された場合、少なくとも１０時間である。一部の実施形態において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物へと投与された場合、少なくとも８時間である。一部の実施形態において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物へと投与された場合、少なくとも６時間である。一部の実施形態において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物へと投与された場合、少なくとも４時間である。一部の実施形態において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物へと投与された場合、少なくとも３時間である。
【０１６４】
本開示はまた、細胞を、ポリペプチドの発現をもたらす条件下において培養することにより、抗ＣＤ７１抗体及び／又は活性化可能抗ＣＤ７１抗体のポリペプチドを作製する方法であって、細胞が、本明細書において記載されている抗体及び／若しくは活性化可能抗体をコードしている単離核酸分子並びに／又はこれらの単離核酸配列を含むベクターを含む、方法も提示する。本開示は、細胞を、抗体及び／又は活性化可能抗体の発現をもたらす条件下において培養することにより、抗体及び／又は活性化可能抗体を作製する方法であって、細胞が、本明細書において記載されている抗体及び／若しくは活性化可能抗体をコードしている単離核酸分子並びに／又はこれらの単離核酸配列を含むベクターを含む、方法を提示する。
【０１６５】
本発明は、治療有効量の、本明細書において記載されているコンジュゲート活性化可能抗ＣＤ７１抗体を、それを必要とする対象へと投与することにより、対象におけるＣＤ７１媒介性疾患を阻止する、その進行を遅延させる、この疾患を処置する、その症状を緩和する又は他の形でこれを改善する方法を提供する。
【０１６６】
本発明はまた、治療有効量の、本明細書において記載されているコンジュゲート活性化可能抗ＣＤ７１抗体を、それを必要とする対象へと投与することにより、対象におけるがんを阻止する、その進行を遅延させる、この疾患を処置する、その症状を緩和する又は他の形でこれを改善する方法も提供する。ＣＤ７１は、非限定例として述べると、腺がん、胆管（胆道）がん、膀胱がん、乳がん、例えば、トリプルネガティブ乳がん及びＨｅｒ２陰性乳がん；カルチノイドがん；子宮頸がん；胆管癌；結腸直腸がん；子宮内膜がん；神経膠腫；頭頸部がん、例えば、頭頸部扁平上皮がん；白血病；肝臓がん；肺がん、例えば、ＮＳＣＬＣ、ＳＣＬＣ；リンパ腫；黒色腫；口腔咽頭がん；卵巣がん；膵臓がん；前立腺がん、例えば、転移性去勢抵抗性前立腺癌；腎臓がん；皮膚がん；扁平上皮がん、胃がん；精巣がん；甲状腺がん；及び尿路上皮がんなど、様々ながんにおいて発現することが公知である。
【０１６７】
一部の実施形態において、がんは、ＣＤ７１発現腫瘍と関連している。一部の実施形態において、がんは、ＣＤ７１発現腫瘍に起因する。
【０１６８】
これらの方法及び使用についての実施形態のうちのいずれかにおいて使用されている、コンジュゲート活性化可能抗ＣＤ７１抗体は、疾患の、任意の病期において投与され得る。例えば、このようなコンジュゲート活性化可能抗ＣＤ７１抗体は、早期〜転移期にわたる、任意の病期のがんを患う患者へと投与され得る。本明細書において、対象及び患者という用語は、互換的に使用される。
【０１６９】
一部の実施形態において、対象は、ヒト又は非ヒト霊長動物などの哺乳動物である。
【０１７０】
コンジュゲート活性化可能抗ＣＤ７１抗体及びこの治療用製剤は、ＣＤ７１の異常な発現及び／又は活性と関連している疾患又は障害を患う又はこれに対して感受性の対象へと投与される。ＣＤ７１の異常な発現及び／又は活性と関連している疾患又は障害を患う又はこれに対して感受性の対象は、当技術分野において公知の様々な方法のうちのいずれかを使用して同定される。例えば、がん又は他の新生物性状態を患う対象は、健康状態を査定するのに、身体検診並びに血液解析、尿解析及び／又は糞便解析など、様々な臨床検査及び／又は検査室検査のうちのいずれかを使用して同定される。例えば、炎症及び／又は炎症性障害を患う対象は、健康状態を査定するのに、身体検診並びに／又は体液解析、例えば、血液解析、尿解析及び／若しくは糞便解析など、様々な臨床検査及び／又は検査室検査のうちのいずれかを使用して同定される。
【０１７１】
コンジュゲート活性化可能抗ＣＤ７１抗体の、ＣＤ７１の異常な発現及び／又は活性と関連している疾患又は障害を患う患者への投与は、様々な検査目的又は臨床目的のうちのいずれかが達成された場合に、成功であると考えられる。例えば、コンジュゲート活性化可能抗ＣＤ７１抗体の、ＣＤ７１の異常な発現及び／又は活性と関連している疾患又は障害を患う患者への投与は、疾患又は障害と関連している症状のうちの１つ以上が、緩和、低減、阻害される又はさらなる状態、すなわち、増悪した状態へと進行しない場合に、成功であると考えられる。コンジュゲート活性化可能抗ＣＤ７１抗体の、ＣＤ７１の異常な発現及び／又は活性と関連している疾患又は障害を患う患者への投与は、疾患又は障害が、寛解に入る又はさらなる状態、すなわち、増悪した状態へと進行しない場合に、成功であると考えられる。
【０１７２】
一部の実施形態において、コンジュゲート活性化可能抗ＣＤ７１抗体及びこの治療用製剤は、対象の罹患細胞がＣＤ７１を発現しつつある、がん又は他の新生物性状態を患う対象など、疾患又は障害を患う又はこれに対して感受性の対象へと投与される。一部の実施形態において、罹患細胞は、ＣＤ７１の異常な発現及び／又は活性と関連している。一部の実施形態において、罹患細胞は、ＣＤ７１の正常な発現及び／又は活性と関連している。対象の罹患細胞がＣＤ７１を発現する疾患又は障害を患う又はこれに対して感受性の対象は、当技術分野において公知の様々な方法のうちのいずれかを使用して同定される。例えば、がん又は他の新生物性状態を患う対象は、健康状態を査定するのに、身体検診並びに血液解析、尿解析及び／又は糞便解析など、様々な臨床検査及び／又は検査室検査のうちのいずれかを使用して同定される。例えば、炎症及び／又は炎症性障害を患う対象は、健康状態を査定するのに、身体検診並びに／又は体液解析、例えば、血液解析、尿解析及び／若しくは糞便解析など、様々な臨床検査及び／又は検査室検査のうちのいずれかを使用して同定される。
【０１７３】
一部の実施形態において、コンジュゲート活性化可能抗ＣＤ７１抗体及びこの治療用製剤は、がん又は他の新生物性状態を患う対象など、ＣＤ７１を発現する細胞又はこのような細胞の、存在、増殖（ｇｒｏｗｔｈ）、増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）、転移及び／若しくは活性と関連している疾患又は障害を患う又はこれに対して感受性の対象へと投与される。一部の実施形態において、細胞は、ＣＤ７１の異常な発現及び／又は活性と関連している。一部の実施形態において、細胞は、ＣＤ７１の正常な発現及び／又は活性と関連している。ＣＤ７１を発現する細胞と関連している疾患又は障害を患う又はこれに対して感受性の対象は、当技術分野において公知の様々な方法のうちのいずれかを使用して同定される。例えば、がん又は他の新生物性状態を患う対象は、健康状態を査定するのに、身体検診並びに血液解析、尿解析及び／又は糞便解析など、様々な臨床検査及び／又は検査室検査のうちのいずれかを使用して同定される。例えば、炎症及び／又は炎症性障害を患う対象は、健康状態を査定するのに、身体検診並びに／又は体液解析、例えば、血液解析、尿解析及び／若しくは糞便解析など、様々な臨床検査及び／又は検査室検査のうちのいずれかを使用して同定される。
【０１７４】
コンジュゲート活性化可能抗ＣＤ７１抗体の、ＣＤ７１を発現する細胞と関連している疾患又は障害を患う患者への投与は、様々な検査目的又は臨床目的のうちのいずれかが達成された場合に、成功であると考えられる。例えば、コンジュゲート活性化可能抗ＣＤ７１抗体の、ＣＤ７１を発現する細胞と関連している疾患又は障害を患う患者への投与は、疾患又は障害と関連している症状のうちの１つ以上が、緩和、低減、阻害される又はさらなる状態、すなわち、増悪した状態へと進行しない場合に、成功であると考えられる。コンジュゲート活性化可能抗ＣＤ７１抗体の、ＣＤ７１を発現する細胞と関連している疾患又は障害を患う患者への投与は、疾患又は障害が、寛解に入る又はさらなる状態、すなわち、増悪した状態へと進行しない場合に、成功であると考えられる。
【０１７５】
本開示はまた、罹患細胞がＣＤ７１を発現する障害又は疾患を処置する、これらの症状を緩和する又はこれらの進行を遅延させる方法であって、治療有効量の、本開示のコンジュゲート抗体又は本開示の抗体を含む医薬組成物又は本開示のコンジュゲート抗体を含む医薬組成物を、これを必要とする対象へと投与することを含む方法も提示する。一部の実施形態において、障害又は疾患は、がんである。
【０１７６】
本開示はまた、ＣＤ７１を発現する細胞と関連している障害又は疾患を処置する、これらの症状を緩和する又はこれらの進行を遅延させる方法であって、治療有効量の、本開示のコンジュゲート抗体又は本開示のコンジュゲート抗体を含む医薬組成物を含む医薬組成物を、これを必要とする対象へと投与することを含む方法も提示する。一部の実施形態において、ＣＤ７１を発現する細胞と関連している障害又は疾患は、がんである。一部の実施形態において、がんは、腺がん、胆管（胆道）がん、膀胱がん、骨がん、乳がん、トリプルネガティブ乳がん、Ｈｅｒ２陰性乳がん、カルチノイドがん、子宮頸がん、胆管癌、結腸直腸がん、結腸がん、子宮内膜がん、神経膠腫、頭頸部がん、頭頸部扁平上皮がん、白血病、肝臓がん、肺がん、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、リンパ腫、黒色腫、口腔咽頭がん、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、転移性去勢抵抗性前立腺癌、腎臓がん、肉腫、皮膚がん、扁平上皮がん、胃がん、精巣がん、甲状腺がん、尿路生殖器がん又は尿路上皮がんである。一部の実施形態において、天然リガンドは、トランスフェリンである。一部の実施形態において、哺乳動物ＣＤ７１の発現及び／又は活性は、異常である。一部の実施形態において、方法は、さらなる薬剤を投与することを含む。一部の実施形態において、さらなる薬剤は、治療剤である。
【０１７７】
本開示はまた、哺乳動物ＣＤ７１を発現する細胞の増殖（ｇｒｏｗｔｈ）、増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）又は転移を阻害又は低減する方法であって、治療有効量の、本開示の抗体又は本開示のコンジュゲート抗体又は本開示の抗体を含む医薬組成物又は本開示のコンジュゲート抗体を含む医薬組成物を、これを必要とする対象へと投与することを含む方法も提示する。一部の実施形態において、天然リガンドは、トランスフェリンである。一部の実施形態において、哺乳動物ＣＤ７１の発現及び／又は活性は、異常である。一部の実施形態において、方法は、さらなる薬剤を投与することを含む。一部の実施形態において、さらなる薬剤は、治療剤である。
【０１７８】
本開示はまた、天然リガンドの、哺乳動物ＣＤ７１への結合を阻害、遮断又は阻止する方法であって、治療有効量の、本開示の抗体又は本開示のコンジュゲート抗体又は本開示の抗体を含む医薬組成物又は本開示のコンジュゲート抗体を含む医薬組成物を、これを必要とする対象へと投与することを含む方法も提示する。一部の実施形態において、天然リガンドは、トランスフェリンである。一部の実施形態において、哺乳動物ＣＤ７１の発現及び／又は活性は、異常である。一部の実施形態において、方法は、さらなる薬剤を投与することを含む。一部の実施形態において、さらなる薬剤は、治療剤である。
【０１７９】
本開示はまた、罹患細胞がＣＤ７１を発現する障害又は疾患を処置する、これらの症状を緩和する又はこれらの進行を遅延させる方法であって、治療有効量の、本開示の活性化可能抗体又は本開示の活性化可能コンジュゲート抗体又は本開示の活性化可能抗体を含む医薬組成物又は本開示の活性化可能コンジュゲート抗体を含む医薬組成物を、これを必要とする対象へと投与することを含む方法も提示する。一部の実施形態において、障害又は疾患は、がんである。
【０１８０】
本開示はまた、ＣＤ７１を発現する細胞と関連している障害又は疾患を処置する、これらの症状を緩和する又はこれらの進行を遅延させる方法であって、治療有効量の、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体又は本開示の活性化可能コンジュゲート抗体を含む医薬組成物を、これを必要とする対象へと投与することを含む方法も提示する。一部の実施形態において、ＣＤ７１を発現する細胞と関連している障害又は疾患は、がんである。一部の実施形態において、がんは、腺がん、胆管（胆道）がん、膀胱がん、骨がん、乳がん、トリプルネガティブ乳がん、Ｈｅｒ２陰性乳がん、カルチノイドがん、子宮頸がん、胆管癌、結腸直腸がん、結腸がん、子宮内膜がん、神経膠腫、頭頸部がん、頭頸部扁平上皮がん、白血病、肝臓がん、肺がん、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、リンパ腫、黒色腫、口腔咽頭がん、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、転移性去勢抵抗性前立腺癌、腎臓がん、肉腫、皮膚がん、扁平上皮がん、胃がん、精巣がん、甲状腺がん、尿路生殖器がん又は尿路上皮がんである。一部の実施形態において、天然リガンドは、トランスフェリンである。一部の実施形態において、哺乳動物ＣＤ７１の発現及び／又は活性は、異常である。一部の実施形態において、方法は、さらなる薬剤を投与することを含む。一部の実施形態において、さらなる薬剤は、治療剤である。
【０１８１】
本開示はまた、哺乳動物ＣＤ７１を発現する細胞の増殖（ｇｒｏｗｔｈ）、増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）又は転移を阻害又は低減する方法であって、治療有効量の、本開示の活性化可能抗体又は本開示の活性化可能コンジュゲート抗体又は本開示の活性化可能抗体を含む医薬組成物又は本開示の活性化可能コンジュゲート抗体を含む医薬組成物を、これを必要とする対象へと投与することを含む方法も提示する。一部の実施形態において、天然リガンドは、トランスフェリンである。一部の実施形態において、哺乳動物ＣＤ７１の発現及び／又は活性は、異常である。一部の実施形態において、方法は、さらなる薬剤を投与することを含む。一部の実施形態において、さらなる薬剤は、治療剤である。
【０１８２】
本開示はまた、天然リガンドの、哺乳動物ＣＤ７１への結合を阻害、遮断又は阻止する方法であって、治療有効量の、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体又は本開示の活性化可能コンジュゲート抗体を含む医薬組成物を、これを必要とする対象へと投与することを含む方法も提示する。一部の実施形態において、天然リガンドは、トランスフェリンである。一部の実施形態において、哺乳動物ＣＤ７１の発現及び／又は活性は、異常である。一部の実施形態において、方法は、さらなる薬剤を投与することを含む。一部の実施形態において、さらなる薬剤は、治療剤である。
【０１８３】
これらの方法及びキットについての、一部の実施形態において、活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体は、検出可能な標識を含む。これらの方法及びキットについての、一部の実施形態において、検出可能な標識は、イメージング剤、造影剤、酵素、蛍光標識、発色団、色素、１つ以上の金属イオン又はリガンドベースの標識を含む。これらの方法及びキットについての、一部の実施形態において、イメージング剤は、放射性同位元素を含む。これらの方法及びキットについての、一部の実施形態において、放射性同位元素は、インジウム又はテクネシウムである。これらの方法及びキットについての、一部の実施形態において、造影剤は、ヨウ素、ガドリニウム又は酸化鉄を含む。これらの方法及びキットについての、一部の実施形態において、酵素は、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ又はβ−ガラクトシダーゼを含む。これらの方法及びキットについての、一部の実施形態において、蛍光標識は、黄色蛍光タンパク質（ＹＦＰ）、シアン蛍光タンパク質（ＣＦＰ）、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、改変赤色蛍光タンパク質（ｍＲＦＰ）、赤色蛍光タンパク質であるｔｄｉｍｅｒ２（ＲＦＰ  ｔｄｉｍｅｒ２）、ＨＣＲＥＤ又はユーロピウム誘導体を含む。これらの方法及びキットについての、一部の実施形態において、発光標識は、Ｎ−メチルアクリジウム誘導体を含む。これらの方法についての、一部の実施形態において、標識は、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６８０又はＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）７５０などのＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）標識を含む。これらの方法及びキットについての、一部の実施形態において、リガンドベースの標識は、ビオチン、アビジン、ストレプトアビジン又は１つ以上のハプテンを含む。
【０１８４】
これらの方法及びキットについての、一部の実施形態において、対象は、哺乳動物である。これらの方法についての、一部の実施形態において、対象は、ヒトである。一部の実施形態において、対象は、非ヒト霊長動物、愛玩動物（例えば、ネコ、イヌ、ウマ）、農場動物、作業動物又は動物園動物などの非ヒト哺乳動物である。一部の実施形態において、対象は、齧歯動物である。
【０１８５】
これらの方法及びキットについての、一部の実施形態において、方法は、インビボ法である。これらの方法についての、一部の実施形態において、方法は、インサイチュー法である。これらの方法についての、一部の実施形態において、方法は、エクスビボ法である。これらの方法についての、一部の実施形態において、方法は、インビトロ法である。
【０１８６】
方法及びキットについての、一部の実施形態において、方法は、本開示の活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体による処置に続く、このコンジュゲート活性化可能抗ＣＤ７１抗体を、これを必要とする対象へと投与することによる処置に適する患者集団を同定する又は他の形において精緻化するのに使用される。例えば、検査により、標的（例えば、ＣＤ７１）及び被験活性化可能抗ＣＤ７１抗体の切断可能部分（ＣＭ）内の基質を切断するプロテアーゼの両方について陽性である患者は、このようなＣＭを含む、このような活性化可能抗ＣＤ７１抗体による処置に適する候補者として同定され、次いで、患者は、治療有効量の、被験活性化可能抗ＣＤ７１抗体及び／又は被験コンジュゲート活性化可能抗ＣＤ７１抗体を投与される。同様に、これらの方法を使用して、検査により、標的（例えば、ＣＤ７１）及び被験活性化可能抗体のＣＭ内の基質を切断するプロテアーゼの一方又は両方について陰性である患者は、別の治療形態に適する候補者として同定され得る。一部の実施形態において、このような患者は、処置に適する活性化可能抗ＣＤ７１抗体（例えば、疾患部位において、患者により切断されるＣＭを含む活性化可能抗ＣＤ７１抗体）が同定されるまで、他の活性化可能抗ＣＤ７１抗体により検査され得る。一部の実施形態において、次いで、患者は、治療有効量の、検査において患者が陽性であった活性化可能抗ＣＤ７１抗体及び／又は活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体を投与される。適切なＡＢ、ＭＭ及び／又はＣＭは、本明細書において開示されているＡＢ、ＭＭ及び／又はＣＭのうちのいずれかを含む。
【０１８７】
本発明に従う医薬組成物は、本発明の抗体及び、任意選択的に、薬学的に許容される担体を含み得る。これらの医薬組成物は、例えば、診断的キットなどのキットに含まれ得る。
【０１８８】
一部の実施形態において、医薬組成物は、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体及び、任意選択的に、薬学的に許容される担体を含む。一部の実施形態において、医薬組成物は、さらなる薬剤を含む。一部の実施形態において、さらなる薬剤は、治療剤である。
【０１８９】
抗ＣＤ７１抗体及び本開示の活性化可能抗体内のＡＢは、例えば、哺乳動物ＣＤ７１及び／又はヒトＣＤ７１などのＣＤ７１標的に特異的に結合する。本開示にはまた、本開示の抗体及び／又は本明細書において記載されている活性化した活性化可能抗体と同じＣＤ７１エピトープに結合する抗ＣＤ７１抗体及びＡＢも含まれる。本開示にはまた、抗ＣＤ７１抗体及び／又は本明細書において記載されている活性化した活性化可能抗ＣＤ７１抗体と、ＣＤ７１標的、例えば、ヒトＣＤ７１への結合について競合する、抗ＣＤ７１抗体及びＡＢも含まれる。本開示にはまた、抗ＣＤ７１抗体及び／又は本明細書において記載されている活性化した活性化可能抗ＣＤ７１抗体と、ＣＤ７１標的、例えば、ヒトＣＤ７１への結合について交差競合する、抗ＣＤ７１抗体及びＡＢも含まれる。
【０１９０】
本明細書において提示されている活性化可能抗ＣＤ７１抗体は、マスキング部分を含む。一部の実施形態において、マスキング部分は、抗ＣＤ７１抗体の、ＣＤ７１に特異的に結合する能力をマスキング部分が低減するように、抗ＣＤ７１抗体へとカップリングされている又は他の形において接合され、活性化可能抗ＣＤ７１抗体構築物内に配置されたアミノ酸配列である。適切なマスキング部分は、公知の様々な技法のうちのいずれかを使用して同定される。例えば、ペプチドによるマスキング部分は、その内容を、その全体において参照により本明細書に組み込む、Ｄａｕｇｈｅｒｔｙらによる、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００９／０２５８４６号において記載された方法を使用して同定される。
【０１９１】
本明細書において提示されている活性化可能抗ＣＤ７１抗体は、切断可能部分を含む。一部の実施形態において、切断可能部分は、プロテアーゼ、通例、細胞外プロテアーゼに対する基質であるアミノ酸配列を含む。適切な基質は、公知の様々な技法のうちのいずれかを使用して同定される。例えば、ペプチド基質は、それらの各々の内容を、それらの全体において参照により本明細書に組み込む、Ｄａｕｇｈｅｒｔｙらによる、米国特許第７，６６６，８１７号；Ｓｔａｇｌｉａｎｏらによる、米国特許第８，５６３，２６９号；Ｌａ  Ｐｏｒｔｅらによる、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１４／０２６１３６号において記載された方法を使用して同定される（また、Ｂｏｕｌｗａｒｅら、「Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ  ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｓｕｂｓｔｒａｔｅｓ  ｆｏｒ  ｐｒｏｔｅａｓｅｓ  ｔｈａｔ  ｅｘｈｉｂｉｔ  ｒａｐｉｄ  ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ  ｋｉｎｅｔｉｃｓ」、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．、１０６．３（２０１０）：３３９〜４６頁も参照されたい）。
【０１９２】
例示的な基質は、これらに限定されないが、表（Ｉ）に列挙された、以下の酵素又はプロテアーゼのうちの１つ以上により切断可能な基質を含む。
【０１９３】
【表１】
2020537649.tif 000007
2020537649.tif 000008
【０１９４】
本明細書において記載されている活性化可能抗ＣＤ７１抗体は、抗体治療剤、特に、インビボにおいて、少なくともある程度毒性であることが公知の抗体治療剤の限界を克服している。標的媒介性毒性は、治療用抗体の開発に対する、大きな限界を構成している。本明細書において提示されている活性化可能抗ＣＤ７１抗体は、従来の治療用抗体により、正常組織内の標的の阻害と関連している毒性に対処するようにデザインされる。これらの活性化可能抗ＣＤ７１抗体は、疾患の部位において、タンパク質分解的に活性化されるまで、マスキングを維持している。親治療用抗体としての抗ＣＤ７１抗体により出発して、本発明の活性化可能抗ＣＤ７１抗体は、プロテアーゼ基質を組み込むリンカーを介して、抗体を、阻害性マスクへとカップリングさせることにより操作された。
【０１９５】
ＡＢがＭＭにより修飾され、標的の存在下にある場合、ＡＢの、その標的への特異的結合は、ＭＭにより修飾されていないＡＢの特異的結合又は親ＡＢの、標的への特異的結合と比較して、低減又は阻害される。
【０１９６】
ＭＭにより修飾されたＡＢの、標的に対するＫｄは、ＭＭにより修飾されていないＡＢ又は親ＡＢの、標的に対するＫｄの少なくとも５、１０、２５、５０、１００、２５０、５００、１，０００、２，５００、５，０００、１０，０００、５０，０００、１００，０００、５００，０００、１，０００，０００、５，０００，０００、１０，０００，０００、５０，０００，０００倍以上又は５〜１０、１０〜１００、１０〜１，０００、１０〜１０，０００、１０〜１００，０００、１０〜１，０００，０００、１０〜１０，０００，０００、１００〜１，０００、１００〜１０，０００、１００〜１００，０００、１００〜１，０００，０００、１００〜１０，０００，０００、１，０００〜１０，０００、１，０００〜１００，０００、１，０００〜１，０００，０００、１０００〜１０，０００，０００、１０，０００〜１００，０００、１０，０００〜１，０００，０００、１０，０００〜１０，０００，０００、１００，０００〜１，０００，０００若しくは１００，０００〜１０，０００，０００倍である。逆に、ＭＭにより修飾されたＡＢの、標的に対する結合アフィニティーは、ＭＭにより修飾されていないＡＢ又は親ＡＢの、標的に対する結合アフィニティーの、少なくとも２、３、４、５、１０、２５、５０、１００、２５０、５００、１，０００、２，５００、５，０００、１０，０００、５０，０００、１００，０００、５００，０００、１，０００，０００、５，０００，０００、１０，０００，０００、５０，０００，０００倍以上又は５〜１０、１０〜１００、１０〜１，０００、１０〜１０，０００、１０〜１００，０００、１０〜１，０００，０００、１０〜１０，０００，０００、１００〜１，０００、１００〜１０，０００、１００〜１００，０００、１００〜１，０００，０００、１００〜１０，０００，０００、１，０００〜１０，０００、１，０００〜１００，０００、１，０００〜１，０００，０００、１０００〜１０，０００，０００、１０，０００〜１００，０００、１０，０００〜１，０００，０００、１０，０００〜１０，０００，０００、１００，０００〜１，０００，０００若しくは１００，０００〜１０，０００，０００分の１である。
【０１９７】
ＭＭの、ＡＢに対する解離定数（Ｋｄ）は、一般に、ＡＢの、標的に対するＫｄより大きい。ＭＭの、ＡＢに対するＫｄは、ＡＢの、標的に対するＫｄの少なくとも５、１０、２５、５０、１００、２５０、５００、１，０００、２，５００、５，０００、１０，０００、１００，０００、１，０００，０００なお又は１０，０００，０００倍であり得る。逆に、ＭＭの、ＡＢに対する結合アフィニティーは、一般に、ＡＢの、標的に対する結合アフィニティーより小さい。ＭＭの、ＡＢに対する結合アフィニティーは、ＡＢの、標的に対する結合アフィニティーの、最大において、５、１０、２５、５０、１００、２５０、５００、１，０００、２，５００、５，０００、１０，０００、１００，０００、１，０００，０００なお又は１０，０００，０００分の１であり得る。
【０１９８】
一部の実施形態において、ＭＭの、ＡＢに対する解離定数（Ｋｄ）は、ＡＢの、標的に対するＫｄとほぼ等しい。一部の実施形態において、ＭＭの、ＡＢに対する解離定数（Ｋｄ）は、ＡＢの、標的に対する解離定数以下である。
【０１９９】
一部の実施形態において、ＭＭの、ＡＢに対する解離定数（Ｋｄ）は、ＡＢの、標的に対する解離定数未満である。
【０２００】
一部の実施形態において、ＭＭの、ＡＢに対する解離定数（Ｋｄ）は、ＡＢの、標的に対する解離定数より大きい。
【０２０１】
一部の実施形態において、ＭＭは、ＡＢへの結合について、ＡＢの、標的への結合についてのＫｄ以下であるＫｄを有する。
【０２０２】
一部の実施形態において、ＭＭは、ＡＢへの結合について、ＡＢの、標的への結合についてのＫｄ以上であるＫｄを有する。
【０２０３】
一部の実施形態において、ＭＭは、ＡＢへの結合について、ＡＢの、標的への結合についてのＫｄとほぼ等しいＫｄを有する。
【０２０４】
一部の実施形態において、ＭＭは、ＡＢへの結合について、ＡＢの、標的への結合についてのＫｄ未満であるＫｄを有する。
【０２０５】
一部の実施形態において、ＭＭは、ＡＢへの結合について、ＡＢの、標的への結合についてのＫｄより大きいＫｄを有する。
【０２０６】
一部の実施形態において、ＭＭは、ＡＢへの結合について、ＡＢの、標的への結合についてのＫｄの、２、３、４、５、１０、２５、５０、１００、２５０、５００又は１，０００倍以下のＫｄを有する。一部の実施形態において、ＭＭは、ＡＢへの結合について、ＡＢの、標的への結合についてのＫｄの、１〜５、２〜５、２〜１０、５〜１０、５〜２０、５〜５０、５〜１００、１０〜１００、１０〜１，０００、２０〜１００、２０〜１０００又は１００〜１，０００倍のＫｄを有する。
【０２０７】
一部の実施形態において、ＭＭは、ＡＢへの結合について、ＡＢの、標的への結合についてのアフィニティー未満であるアフィニティーを有する。
【０２０８】
一部の実施形態において、ＭＭは、ＡＢへの結合について、ＡＢの、標的への結合についてのアフィニティー以下であるアフィニティーを有する。
【０２０９】
一部の実施形態において、ＭＭは、ＡＢへの結合について、ＡＢの、標的への結合についてのアフィニティーとほぼ等しいアフィニティーを有する。
【０２１０】
一部の実施形態において、ＭＭは、ＡＢへの結合について、ＡＢの、標的への結合についてのアフィニティー以上であるアフィニティーを有する。
【０２１１】
一部の実施形態において、ＭＭは、ＡＢへの結合について、ＡＢの、標的への結合についてのアフィニティーより大きいアフィニティーを有する。
【０２１２】
一部の実施形態において、ＭＭは、ＡＢへの結合について、ＡＢの、標的への結合についてのアフィニティーの、２、３、４、５、１０、２５、５０、１００、２５０、５００又は１，０００分の１であるアフィニティーを有する。一部の実施形態において、ＭＭは、ＡＢへの結合について、ＡＢの、標的への結合についてのアフィニティーの、１〜５、２〜５、２〜１０、５〜１０、５〜２０、５〜５０、５〜１００、１０〜１００、１０〜１，０００、２０〜１００、２０〜１０００又は１００〜１，０００分の１のアフィニティーを有する。一部の実施形態において、ＭＭは、ＡＢへの結合について、ＡＢの、標的への結合についてのアフィニティーの、２〜２０分の１であるアフィニティーを有する。一部の実施形態において、ＡＢへと、共有結合的に連結されておらず、ＡＢとモル濃度にないＭＭは、ＡＢの、標的への結合を阻害しない。
【０２１３】
ＡＢが、ＭＭにより修飾され、標的の存在下にある場合、ＡＢの、その標的への特異的結合は、ＭＭにより修飾されていないＡＢの特異的結合又は親ＡＢの、標的への特異的結合と比較して、低減又は阻害される。ＭＭにより修飾されていないＡＢの、標的への結合又は親ＡＢの、標的への結合と比較すると、ＭＭにより修飾された場合に、ＡＢが標的に結合する能力は、インビボにおいて又はインビトロアッセイにおいて測定された場合に、少なくとも２、４、６、８、１２、２８、２４、３０、３６、４８、６０、７２、８４若しくは９６時間又は５、１０、１５、３０、４５、６０、９０、１２０、１５０若しくは１８０日間又は１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１若しくは１２カ月間以上にわたり、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％低減される場合があり、なお１００％も低減され得る。
【０２１４】
ＭＭは、ＡＢの、標的への結合を阻害する。ＭＭは、ＡＢの抗原結合性ドメインに結合し、ＡＢの、標的への結合を阻害する。ＭＭは、ＡＢの、標的への結合を、立体的に阻害し得る。ＭＭは、ＡＢの、その標的への結合を、アロステリックに阻害し得る。これらの実施形態において、ＡＢがＭＭにより修飾される又はこれへとカップリングされ、標的の存在下にある場合、インビボにおいて又はインビトロアッセイにおいて測定された場合に、少なくとも２、４、６、８、１２、２８、２４、３０、３６、４８、６０、７２、８４若しくは９６時間又は５、１０、１５、３０、４５、６０、９０、１２０、１５０若しくは１８０日間又は１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１若しくは１２カ月間以上にわたり、ＭＭにより修飾されていないＡＢ、親ＡＢ又はＭＭへとカップリングされていないＡＢの、標的への結合と比較して、ＡＢの、標的への結合がみられない、若しくはこれが実質的に見られない又は０．００１％、０．０１％、０．１％、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％若しくは５０％以下の結合が見られる。
【０２１５】
ＡＢがＭＭへとカップリングされている又はこれにより修飾されている場合、ＭＭは、ＡＢの、標的への特異的結合を、「マスキングする」又は低減する又は他の形においてこれを阻害する。ＡＢがＭＭへとカップリングされている又はこれにより修飾されている場合、このようなカップリング又は修飾は、ＡＢがその標的に特異的に結合する能力を低減又は阻害する構造的変化をもたらし得る。
【０２１６】
ＭＭへとカップリングされているＡＢ又はＭＭにより修飾されているＡＢは、以下の式（アミノ（Ｎ）末端領域〜カルボキシル（Ｃ）末端領域の順に：
（ＭＭ）−（ＡＢ）
（ＡＢ）−（ＭＭ）
（ＭＭ）−Ｌ−（ＡＢ）
（ＡＢ）−Ｌ−（ＭＭ）
［式中、ＭＭは、マスキング部分であり、ＡＢは、抗体又はこの抗体断片であり、Ｌは、リンカーである。］により表され得る。多くの実施形態において、可撓性をもたらすように、１つ以上のリンカー、例えば、可撓性リンカーを、組成物へと挿入することが所望であり得る。
【０２１７】
ある特定の実施形態において、ＭＭは、ＡＢの、天然の結合パートナーではない。一部の実施形態において、ＭＭは、ＡＢの、任意の天然結合パートナーに対する相同性を含有しない又はこれを実質的に含有しない。一部の実施形態において、ＭＭは、ＡＢの、任意の天然結合パートナーと、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％又は８０％以下同等である。一部の実施形態において、ＭＭは、ＡＢの、任意の天然結合パートナーと、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％又は８０％以下同一である。一部の実施形態において、ＭＭは、ＡＢの、任意の天然結合パートナーと、２５％以下同一である。一部の実施形態において、ＭＭは、ＡＢの、任意の天然結合パートナーと、５０％以下同一である。一部の実施形態において、ＭＭは、ＡＢの、任意の天然結合パートナーと、２０％以下同一である。一部の実施形態において、ＭＭは、ＡＢの、任意の天然結合パートナーと、１０％以下同一である。
【０２１８】
一部の実施形態において、活性化可能抗体は、ＭＭにより修飾されたＡＢを含み、また、１つ以上の切断可能部分（ＣＭ）も含む。このような活性化可能抗体は、ＡＢの標的への活性化可能／切替え可能な結合を呈する。活性化可能抗体は、一般に、マスキング部分（ＭＭ）及び修飾可能又は切断可能部分（ＣＭ）により修飾された又はこれへとカップリングされた、抗体又は抗体断片（ＡＢ）を含む。一部の実施形態において、ＣＭは、少なくとも１つのプロテアーゼに対する基質として用いられるアミノ酸配列を含有する。
【０２１９】
切断（又は相対的活性）状態及び標的の存在下において、ＡＢは標的に結合する一方、活性化可能抗体は、標的の存在下において、非切断（又は相対的不活性）状態にある場合、ＡＢの、その標的への特異的結合が、低減又は阻害されるように、ＭＭ及びＣＭが配置されるように、活性化可能抗体のエレメントは配列される。ＡＢの、その標的への特異的結合は、ＡＢがその標的に特異的に結合する能力の、ＭＭによる阻害又はマスキングに起因して低減され得る。
【０２２０】
ＭＭ及びＣＭにより修飾されたＡＢの、標的に対するＫｄは、ＭＭ及びＣＭにより修飾されていないＡＢ又は親ＡＢの、標的に対するＫｄの、少なくとも５、１０、２５、５０、１００、２５０、５００、１，０００、２，５００、５，０００、１０，０００、５０，０００、１００，０００、５００，０００、１，０００，０００、５，０００，０００、１０，０００，０００、５０，０００，０００倍以上又は５〜１０、１０〜１００、１０〜１，０００、１０〜１０，０００、１０〜１００，０００、１０〜１，０００，０００、１０〜１０，０００，０００、１００〜１，０００、１００〜１０，０００、１００〜１００，０００、１００〜１，０００，０００、１００〜１０，０００，０００、１，０００〜１０，０００、１，０００〜１００，０００、１，０００〜１，０００，０００、１０００〜１０，０００，０００、１０，０００〜１００，０００、１０，０００〜１，０００，０００、１０，０００〜１０，０００，０００、１００，０００〜１，０００，０００若しくは１００，０００〜１０，０００，０００倍である。逆に、ＭＭ及びＣＭにより修飾されたＡＢの、標的に対する結合アフィニティーは、ＭＭ及びＣＭにより修飾されていないＡＢ又は親ＡＢの、標的に対する結合アフィニティーの、少なくとも５、１０、２５、５０、１００、２５０、５００、１，０００、２，５００、５，０００、１０，０００、５０，０００、１００，０００、５００，０００、１，０００，０００、５，０００，０００、１０，０００，０００、５０，０００，０００倍以上又は５〜１０、１０〜１００、１０〜１，０００、１０〜１０，０００、１０〜１００，０００、１０〜１，０００，０００、１０〜１０，０００，０００、１００〜１，０００、１００〜１０，０００、１００〜１００，０００、１００〜１，０００，０００、１００〜１０，０００，０００、１，０００〜１０，０００、１，０００〜１００，０００、１，０００〜１，０００，０００、１０００〜１０，０００，０００、１０，０００〜１００，０００、１０，０００〜１，０００，０００、１０，０００〜１０，０００，０００、１００，０００〜１，０００，０００若しくは１００，０００〜１０，０００，０００分の１である。
【０２２１】
ＡＢが、ＭＭ及びＣＭにより修飾され、標的の存在下にあるが、薬剤（例えば、少なくとも１つのプロテアーゼ）の存在下にない場合、ＡＢの、その標的への特異的結合は、ＭＭ及びＣＭにより修飾されていないＡＢの特異的結合又は親ＡＢの、標的への特異的結合と比較して低減又は阻害される。親ＡＢの、その標的への結合又はＭＭ及びＣＭにより修飾されていないＡＢの、その標的への結合と比較すると、ＭＭ及びＣＭにより修飾された場合に、ＡＢが標的に結合する能力は、インビボにおいて又はインビトロアッセイにおいて測定された場合に、少なくとも２、４、６、８、１２、２８、２４、３０、３６、４８、６０、７２、８４若しくは９６時間又は５、１０、１５、３０、４５、６０、９０、１２０、１５０若しくは１８０日間又は１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１若しくは１２カ月間以上にわたり、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％低減される場合があり、なお１００％も低減され得る。
【０２２２】
本明細書において使用される場合、切断状態という用語は、少なくとも１つのプロテアーゼによる、ＣＭの修飾後における、活性化可能抗体の状態を指す。本明細書において使用される場合、非切断状態という用語は、プロテアーゼによる、ＣＭの切断の非存在下における、活性化可能抗体の状態を指す。上記において論じられた通り、「活性化可能抗体」という用語は、その非切断（天然）状態及びその切断状態の両方における、活性化可能抗体を指すように本明細書において使用される。当業者には、一部の実施形態において、切断された活性化可能抗体が、少なくともＭＭの放出（例えば、ＭＭは、共有結合（例えば、システイン残基間のジスルフィド結合により、活性化可能抗体へと接続されていない）を結果としてもたらす、プロテアーゼによるＣＭの切断に起因して、ＭＭを欠き得ることが明らかである。
【０２２３】
活性化可能又は切替え可能とは、活性化可能抗体が阻害されている、マスキングされている又は切断されていない状態（すなわち、第１のコンフォメーション）にある場合における、標的への結合の第１のレベル、及び阻害されていない、マスキングされていない及び／又は切断された状態（すなわち、第２のコンフォメーション）における、標的への結合の第２のレベルを、活性化可能抗体が呈し、ここで、標的への結合の第２のレベルが、結合の第１のレベルより高レベルであることを意味する。一般に、標的の、活性化可能抗体のＡＢへのアクセスは、ＣＭを切断することが可能な切断剤、すなわち、プロテアーゼの存在下において、このような切断剤の非存在下より大きい。したがって、活性化可能抗体が非切断状態にある場合、ＡＢは、標的結合から阻害され、標的結合からマスキングされ（すなわち、第１のコンフォメーションは、ＡＢが、標的に結合し得ないコンフォメーションである。）、切断状態において、ＡＢは、阻害されていない又は標的への結合に対してマスキングされていない。
【０２２４】
活性化可能抗体のＣＭ及びＡＢは、ＡＢが所与の標的に対する結合部分を表し、ＣＭがプロテアーゼに対する基質を表すように選択される。一部の実施形態において、プロテアーゼは、対象の、処置部位又は診断部位における標的と共局在化されている。本明細書において使用される場合、共局在化されたとは、同じ部位にある又は比較的近接することを指す。一部の実施形態において、プロテアーゼは、ＣＭを切断し、切断部位の近傍に配置された標的に結合する活性化された抗体をもたらす。本明細書において開示されている活性化可能抗体は、例えば、ＣＭ内の部位を切断することが可能なプロテアーゼ、すなわち、プロテアーゼが、処置部位又は診断部位の標的含有組織内に、非処置部位の組織内（例えば、健常組織内）より、比較的高度なレベルにおいて存在する場合に、特に使用される。一部の実施形態において、本開示のＣＭはまた、１つ以上の他のプロテアーゼによっても切断される。一部の実施形態において、インビボにおいて、標的と共に共局在化され、ＣＭの切断の一因となるのは、この１つ以上の他のプロテアーゼである。
【０２２５】
一部の実施形態において、活性化可能抗体は、ＡＢがマスキングされていない又は他の形において、標的への結合から阻害されていない場合に、非処置部位におけるＡＢの結合から生じかねない、毒性及び／又は有害な副作用の軽減をもたらす。
【０２２６】
一般に、活性化可能抗体は、目的のＡＢを選択し、コンフォメーション的に拘束された場合に、ＭＭがＡＢのマスキング又はＡＢの、その標的への結合の低減をもたらすように、活性化可能抗体の残余を構築することによりデザインされ得る。構造的デザインの基準は、この機能的な特色をもたらすように考慮されるものとされ得る。
【０２２７】
非阻害コンフォメーションと対比された、阻害コンフォメーションにおける、標的への結合について所望されるダイナミックレンジの、切替え可能な表現型を呈する活性化可能抗体が提供されている。ダイナミックレンジは、一般に、（ａ）第１のセットの条件下における、パラメータの最大検出レベルの、（ｂ）第２のセットの条件下における、このパラメータの最小検出値に対する比を指す。例えば、活性化可能抗体の文脈において、ダイナミックレンジとは、（ａ）活性化可能抗体のＣＭを切断することが可能な少なくとも１つのプロテアーゼの存在下における、標的タンパク質の、活性化可能抗体への結合の最大検出レベルの、（ｂ）プロテアーゼの非存在下における、標的タンパク質の、活性化可能抗体への結合の最小検出レベルに対する比を指す。活性化可能抗体のダイナミックレンジは、活性化可能抗体切断剤（例えば、酵素）による処理の解離定数の、活性化可能抗体切断剤による処理の解離定数に対する比として計算され得る。活性化可能抗体のダイナミックレンジが大きいほど、活性化可能抗体の切替え可能表現型は良好である。比較的大きなダイナミックレンジ値（例えば、１より大きい）を有する活性化可能抗体は、活性化可能抗体による標的タンパク質への結合が、活性化可能抗体のＣＭを切断することが可能な切断剤（例えば、酵素）の存在下において、切断剤の非存在下より大きな程度において生じる（例えば、卓越して生じる）ような、より所望される切替え表現型を呈する。
【０２２８】
活性化可能抗体は、様々な構造的構成により提供され得る。活性化可能抗体についての例示的な式は、下記に提示されている。とりわけ、Ｎ末端〜Ｃ末端における、ＡＢ、ＭＭ及びＣＭの順序は、活性化可能抗体内において、逆転され得ることが想定される。とりわけ、例えば、ＣＭがＭＭ内に含有されるように、ＣＭとＭＭとが、アミノ酸配列内において重複し得ることもまた想定され得る。
【０２２９】
例えば、活性化可能抗体は、以下の式（アミノ（Ｎ）末端領域〜カルボキシル（Ｃ）末端領域の順に）：
（ＭＭ）−（ＣＭ）−（ＡＢ）
（ＡＢ）−（ＣＭ）−（ＭＭ）
［式中、ＭＭは、マスキング部分であり、ＣＭは、切断可能部分であり、ＡＢは、抗体又はこの断片である。］により表され得る。上記の式において、ＭＭとＣＭとは、顕著に異なる構成要素として指し示されているが、本明細書において開示されている全ての例示的な実施形態（式を含む）において、ＭＭのアミノ酸配列と、ＣＭのアミノ酸配列とは、例えば、ＣＭがＭＭ内に完全に又は部分的に含有されるように、重複し得ることが想定されることに留意されたい。加えて、上記の式は、活性化可能抗体エレメントに対して、Ｎ末端又はＣ末端に配置され得る、さらなるアミノ酸配列も提示する。
【０２３０】
ある特定の実施形態において、ＭＭは、ＡＢの、天然の結合パートナーではない。一部の実施形態において、ＭＭは、ＡＢの、任意の天然結合パートナーに対する相同性を含有しない又はこれを実質的に含有しない。一部の実施形態において、ＭＭは、ＡＢの、任意の天然結合パートナーと、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％又は８０％以下同等である。一部の実施形態において、ＭＭは、ＡＢの、任意の天然結合パートナーと、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％又は８０％以下同一である。一部の実施形態において、ＭＭは、ＡＢの、任意の天然結合パートナーと、５０％以下同一である。一部の実施形態において、ＭＭは、ＡＢの、任意の天然結合パートナーと、２５％以下同一である。一部の実施形態において、ＭＭは、ＡＢの、任意の天然結合パートナーと、２０％以下同一である。一部の実施形態において、ＭＭは、ＡＢの、任意の天然結合パートナーと、１０％以下同一である。
【０２３１】
多くの実施形態において、ＭＭ−ＣＭ接合部、ＣＭ−ＡＢ接合部又はこれらの両方のうちの１つ以上において、可撓性をもたらすように、１つ以上のリンカー、例えば、可撓性リンカーを、活性化可能抗体構築物へと挿入することが所望であり得る。例えば、ＡＢ、ＭＭ及び／又はＣＭは、所望の可撓性をもたらすのに十分な数の残基（例えば、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、とりわけ、Ｇｌｙ及びＳｅｒ、特に、Ｇｌｙ）を含有しない場合がある。このように、このような活性化可能抗体構築物の切替え可能表現型は、可撓性リンカーをもたらすための、１つ以上のアミノ酸の導入から利益を受け得る。加えて、下記で記載されている通り、活性化可能抗体がコンフォメーション的に拘束された構築物として提供される場合、可撓性リンカーは、非切断活性化可能抗体内の、環状構造の形成及び維持を容易とするように、作動可能に挿入され得る。
【０２３２】
例えば、ある特定の実施形態において、活性化可能抗体は、以下の式（下記の式は、アミノ酸配列を、Ｎ末端〜Ｃ末端の方向に又はＣ末端〜Ｎ末端の方向に表す）：
（ＭＭ）−ＬＰ１−（ＣＭ）−（ＡＢ）
（ＭＭ）−（ＣＭ）−ＬＰ２−（ＡＢ）
（ＭＭ）−ＬＰ１−（ＣＭ）−ＬＰ２−（ＡＢ）
［式中、ＭＭ、ＣＭ及びＡＢは、上記において規定された通りであり；ＬＰ１及びＬＰ２は、各々、独立に、かつ任意選択的に、存在する又は存在せず、少なくとも１つの可撓性アミノ酸（例えば、Ｇｌｙ）を含む、同一である又は異なる可撓性リンカーである。］のうちの１つを含む。加えて、上記の式は、活性化可能抗体エレメントに対して、Ｎ末端又はＣ末端に配置され得る、さらなるアミノ酸配列も提示する。例は、これらに限定されないが、ターゲティング部分（例えば、標的組織内に存在する細胞の受容体に対するリガンド）及び血清半減期延長部分（例えば、免疫グロブリン（例えば、ＩｇＧ）又は血清アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミン（ＨＡＳ）などの血清タンパク質に結合するポリペプチド）を含む。
【０２３３】
ＣＭは、少なくとも１つのプロテアーゼにより、約０．００１〜１５００×１０４Ｍ−１Ｓ−１又は少なくとも０．００１、０．００５、０．０１、０．０５、０．１、０．５、１、２．５、５、７．５、１０、１５、２０、２５、５０、７５、１００、１２５、１５０、２００、２５０、５００、７５０、１０００、１２５０若しくは１５００×１０４Ｍ−１ｓ−１の速度において特異的に切断される。一部の実施形態において、ＣＭは、約１００，０００Ｍ−１Ｓ−１の速度において特異的に切断される。一部の実施形態において、ＣＭは、約１×１０Ｅ２〜約１×１０Ｅ６Ｍ−１Ｓ−１（すなわち、約１×１０２〜約１×１０６Ｍ−１Ｓ−１）の速度において特異的に切断される。
【０２３４】
酵素による特異的な切断のために、酵素とＣＭとの接触点が作られる。ＭＭ及びＣＭへとカップリングさせたＡＢを含む活性化可能抗体が標的及び十分な酵素活性の存在下にある場合、ＣＭは、切断され得る。十分な酵素活性とは、酵素がＣＭとの接触点を作り、切断を行う能力を指す場合がある。他の細胞因子又は酵素のタンパク質修飾により、酵素が、ＣＭの近傍にあり得るが、切断が不可能であることが、たやすく想定され得る。
【０２３５】
本明細書において記載されている組成物における使用に適するリンカーは、一般に、ＡＢの、標的への結合の阻害を容易とする、修飾されたＡＢ又は活性化可能抗体の可撓性をもたらすリンカーである。このようなリンカーは、一般に、可撓性リンカーと称される。適するリンカーは、たやすく選択される可能性があり、１アミノ酸（例えば、Ｇｌｙ）〜２０アミノ酸、２アミノ酸〜１５アミノ酸、３アミノ酸〜１２アミノ酸、４アミノ酸〜１０アミノ酸を含み、５アミノ酸〜９アミノ酸、６アミノ酸〜８ミノ酸又は７アミノ酸〜８アミノ酸及び１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０アミノ酸の長さなど、異なる長さの適するリンカーのうちのいずれかであり得る。
【０２３６】
例示的な可撓性リンカーとしては、グリシンポリマー（Ｇ）ｎ、グリシン−セリンポリマー（例えば、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ（配列番号２４）及び（ＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２５）［配列中、ｎは、少なくとも１の整数である。］を含む）、グリシン−アラニンポリマー、アラニン−セリンポリマー及び当技術分野において公知である他の可撓性リンカーが挙げられる。グリシンポリマー及びグリシン−セリンポリマーは、比較的構造化されておらず、したがって、構成要素間の中性のテザーとして用いられる可能性があり得る。グリシンは、アラニンよりなお大きなファイ−プサイ空間に顕著に接近し、側鎖が長い残基より拘束がはるかに小さい（Ｓｃｈｅｒａｇａ、Ｒｅｖ．Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｃｈｅｍ．、１１１７３〜１４２頁（１９９２年）を参照されたい）。例示的な可撓性リンカーとしては、これらに限定されないが、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ（配列番号２６）、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ（配列番号２７）、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ（配列番号２８）、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ（配列番号２９）、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ（配列番号３０）、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ（配列番号３１）などが挙げられる。当業者は、活性化可能抗体のデザインが、リンカーが、可撓性リンカーのほか、所望の活性化可能抗体構造をもたらすように、可撓性の小さな構造を付与する１つ以上の部分を含み得るように、全てが可撓性である又は部分的に可撓性であるリンカーを含み得ることを認識する。
【０２３７】
本開示はまた、ＣＤ７１に特異的に結合する抗体又は抗体断片（ＡＢ）を含む活性化可能抗ＣＤ７１抗体を含む組成物及び方法も提示するが、ここで、ＡＢは、ＡＢの、その標的に結合する能力を減少させるマスキング部分（ＭＭ）へとカップリングされている。一部の実施形態において、活性化可能抗ＣＤ７１抗体は、プロテアーゼに対する基質である切断可能部分（ＣＭ）をさらに含む。本明細書において提示されている組成物及び方法は、活性化可能抗ＣＤ７１抗体の活性（例えば、マスキング、活性化又は結合活性）を損なわずに、１つ以上の薬剤の、ＡＢ内の１つ以上のシステイン残基への接合を可能とする。一部の実施形態において、本明細書において提示されている組成物及び方法は、ＭＭ内の、１つ以上のジスルフィド結合を低減する又は他の形において攪乱することなく、１つ以上の薬剤の、ＡＢ内の１つ以上のシステイン残基への接合を可能とする。本明細書において提示されている組成物及び方法は、例えば、一部の実施形態において、活性化可能抗ＣＤ７１抗体のＭＭへとコンジュゲートされている薬剤（複数可）のうちのいずれかを伴わずに、１つ以上の薬剤、例えば、様々な治療剤、診断剤及び／又は予防剤のうちのいずれかへとコンジュゲートされている活性化可能抗ＣＤ７１抗体をもたらす。本明細書において提示されている組成物及び方法は、ＭＭが、非切断状態にある活性化可能抗体のＡＢを、効果的かつ効率的にマスキングする能力を保持する、コンジュゲート活性化可能抗ＣＤ７１抗体をもたらす。本明細書において提示されている組成物及び方法は、活性化可能抗体がやはり活性化されている、すなわち、ＣＭを切断し得るプロテアーゼの存在下において切断されている、コンジュゲート活性化可能抗ＣＤ７１抗体をもたらす。
【０２３８】
活性化可能抗ＣＤ７１抗体は、薬剤のための、少なくとも１つのコンジュゲーション点を有するが、本明細書において提示されている方法及び組成物において、可能なコンジュゲーション点が全て、薬剤へのコンジュゲーションに利用可能なわけではない。一部の実施形態において、１つ以上のコンジュゲーション点は、ジスルフィド結合に関与している硫黄原子である。一部の実施形態において、１つ以上のコンジュゲーション点は、鎖間ジスルフィド結合に関与している硫黄原子である。一部の実施形態において、１つ以上のコンジュゲーション点は、鎖間スルフィド結合に関与している硫黄原子であるが、鎖内ジスルフィド結合に関与する硫黄原子ではない。一部の実施形態において、１つ以上のコンジュゲーション点は、システイン又は硫黄原子を含有する他のアミノ酸残基の硫黄原子である。このような残基は、抗体構造内で、天然において生じる場合もあり、部位指向突然変異誘発、化学的転換又は非天然アミノ酸の誤組込みにより、抗体へと組み込まれる場合もある。
【０２３９】
また、ＡＢ内の、１つ以上の鎖間ジスルフィド結合及びＭＭ内の、１つ以上の鎖内ジスルフィド結合並びに遊離チオールと反応性の薬物を有する、活性化可能抗ＣＤ７１抗体のコンジュゲートを調製する方法も提供されている。方法は、一般に、活性化可能抗体内の鎖間ジスルフィド結合を、例えば、ＴＣＥＰなどの還元剤により、部分的に還元すること；及び遊離チオールと反応性の薬物を、部分的に還元された活性化可能抗体へとコンジュゲートさせることを含む。本明細書において使用される場合、部分的還元という用語は、活性化可能抗ＣＤ７１抗体が、還元剤と接触され、全てではないジスルフィド結合、例えば、全てではない、可能なコンジュゲーション部位が還元される状況を指す。一部の実施形態において、全ての可能なコンジュゲーション部位のうちの、９９％未満、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％又は５％未満が還元される。
【０２４０】
さらに他の実施形態において、薬剤、例えば、薬物を還元し、これを、活性化可能抗ＣＤ７１抗体へとコンジュゲートさせて、薬剤の配置における選択性を結果としてもたらす方法が提供されている。方法は、一般に、活性化可能抗体のマスキング部分内又は他のＡＢ以外の部分内の、任意のコンジュゲーション部位が還元されないように、活性化可能抗ＣＤ７１抗体を、還元剤により部分的に還元すること及び薬剤を、ＡＢ内の鎖間チオールへとコンジュゲートさせることを含む。コンジュゲーション部位（複数可）は、薬剤の所望の配置を可能として、コンジュゲーションが所望の部位において生じることを可能とするように選択される。還元剤は、例えば、ＴＣＥＰである。例えば、還元剤の、活性化可能抗体に対する比、インキュベーションの長さ、インキュベーション時の温度、還元反応溶液のｐＨなどの還元反応条件は、ＭＭが、非切断状態にある活性化可能抗体のＡＢを、効果的かつ効率的にマスキングする能力を保持する、活性化可能コンジュゲート抗体をもたらす条件を同定することにより決定される。還元剤の、活性化可能抗ＣＤ７１抗体に対する比は、活性化可能抗体に応じて変動する。一部の実施形態において、還元剤の、活性化可能抗ＣＤ７１抗体に対する比は、約２０：１〜１：１、約１０：１〜１：１、約９：１〜１：１、約８：１〜１：１、約７：１〜１：１、約６：１〜１：１、約５：１〜１：１、約４：１〜１：１、約３：１〜１：１、約２：１〜１：１、約２０：１〜１：１．５、約１０：１〜１：１．５、約９：１〜１：１．５、約８：１〜１：１．５、約７：１〜１：１．５、約６：１〜１：１．５、約５：１〜１：１．５、約４：１〜１：１．５、約３：１〜１：１．５、約２：１〜１：１．５、約１．５：１〜１：１．５又は約１：１〜１：１．５の範囲にある。一部の実施形態において、比は、約５：１〜１：１の範囲にある。一部の実施形態において、比は、約５：１〜１．５：１の範囲にある。一部の実施形態において、比は、約４：１〜１：１の範囲にある。一部の実施形態において、比は、約４：１〜１．５：１の範囲にある。一部の実施形態において、比は、約８：１〜約１：１の範囲にある。一部の実施形態において、比は、約２．５：１〜１：１の範囲にある。
【０２４１】
一部の実施形態において、活性化可能抗ＣＤ７１抗体のＡＢ内の鎖間ジスルフィド結合を還元し、薬物などの薬剤、例えば、チオール含有薬剤を、結果として得られる鎖間チオールへとコンジュゲートさせて、薬剤（複数可）を、ＡＢ上に、選択的に配置する方法が提供されている。方法は、一般に、ＡＢを、還元剤により部分的に還元して、活性化可能抗体内において、可能な鎖間チオールを全ては形成せずに、少なくとも２つの鎖間チオールを形成すること；及び薬剤を、部分的に還元されたＡＢの鎖間チオールへとコンジュゲートさせることを含む。例えば、活性化可能抗体のＡＢは、約３７℃、所望の還元剤：活性化可能抗体の比において、約１時間にわたり部分的に還元される。一部の実施形態において、還元剤の、活性化可能抗体に対する比は、約２０：１〜１：１、約１０：１〜１：１、約９：１〜１：１、約８：１〜１：１、約７：１〜１：１、約６：１〜１：１、約５：１〜１：１、約４：１〜１：１、約３：１〜１：１、約２：１〜１：１、約２０：１〜１：１．５、約１０：１〜１：１．５、約９：１〜１：１．５、約８：１〜１：１．５、約７：１〜１：１．５、約６：１〜１：１．５、約５：１〜１：１．５、約４：１〜１：１．５、約３：１〜１：１．５、約２：１〜１：１．５、約１．５：１〜１：１．５又は約１：１〜１：１．５の範囲にある。一部の実施形態において、比は、約５：１〜１：１の範囲にある。一部の実施形態において、比は、約５：１〜１．５：１の範囲にある。一部の実施形態において、比は、約４：１〜１：１の範囲にある。一部の実施形態において、比は、約４：１〜１．５：１の範囲にある。一部の実施形態において、比は、約８：１〜約１：１の範囲にある。一部の実施形態において、比は、約２．５：１〜１：１の範囲にある。
【０２４２】
チオール含有試薬は、例えば、システイン又はＮ−アセチルシステインであり得る。還元剤は、例えば、ＴＣＥＰであり得る。一部の実施形態において、還元された活性化可能抗体は、例えば、カラムクロマトグラフィー、透析又は透析濾過を使用して、コンジュゲーションの前に精製され得る。代替的に、還元された抗体は、部分的還元の後であり、かつコンジュゲーションの前に精製されない。
【０２４３】
本発明はまた、活性化可能抗体内の、少なくとも１つの鎖間ジスルフィド結合が、活性化可能抗体内の、鎖内ジスルフィド結合を攪乱せずに、還元剤により還元されている、部分的に還元された活性化可能抗ＣＤ７１抗体も提示するが、ここで、活性化可能抗体は、ＣＤ７１に特異的に結合する抗体又はこの抗原結合性断片（ＡＢ）、非切断状態にある活性化可能抗体のＡＢの、ＣＤ７１への結合を阻害するマスキング部分（ＭＭ）及びＡＢへとカップリングされており、プロテアーゼに対する基質として機能するポリペプチドである、切断可能部分（ＣＭ）を含む。一部の実施形態において、ＭＭは、ＣＭを介して、ＡＢへとカップリングされている。一部の実施形態において、活性化可能抗体の、１つ以上の鎖内ジスルフィド結合は、還元剤により攪乱されない。一部の実施形態において、活性化可能抗体内のＭＭの、１つ以上の鎖内ジスルフィド結合は、還元剤により攪乱されない。一部の実施形態において、非切断状態にある活性化可能抗体は、Ｎ末端からＣ末端へと、ＭＭ−ＣＭ−ＡＢ又はＡＢ−ＣＭ−ＭＭの構造的配置を有する。一部の実施形態において、還元剤は、ＴＣＥＰである。
【０２４４】
さらに他の実施形態において、リシン残基及び／又はシステイン残基の、規定された数及び位置を伴う、活性化可能抗ＣＤ７１抗体をもたらすことにより、薬剤、例えば、薬物を還元し、これを、活性化可能抗ＣＤ７１抗体へとコンジュゲートさせて、薬剤の配置における選択性を結果としてもたらす方法。一部の実施形態において、リシン残基及び／又はシステイン残基の規定された数は、親抗体又は活性化可能抗体のアミノ酸配列内の、対応する残基の数より大きい又は小さい。一部の実施形態において、リシン残基及び／又はシステイン残基の、規定された数は、抗ＣＤ７１抗体又は活性化可能抗ＣＤ７１抗体へとコンジュゲートされ得る、規定された当量数の薬剤を結果としてもたらし得る。一部の実施形態において、リシン残基及び／又はシステイン残基の規定された数は、抗ＣＤ７１抗体又は活性化可能抗ＣＤ７１抗体へとコンジュゲートされ得る、規定された当量数の薬剤を、部位特異的に、結果としてもたらし得る。一部の実施形態において、修飾活性化可能抗体は、１つ以上の非天然アミノ酸により、部位特異的に修飾され、したがって、一部の実施形態において、薬剤のコンジュゲーションを、非天然アミノ酸の部位だけに限定している。一部の実施形態において、リシン残基及び／又はシステイン残基の規定された数及び位置を伴う、活性化可能抗体のマスキング部分内又は他のＡＢ以外の部分内の、任意のコンジュゲーション部位が還元されないように、抗ＣＤ７１抗体又は活性化可能抗ＣＤ７１抗体は、本明細書において論じられているように還元剤により部分的に還元し、薬剤を、ＡＢ内の鎖間チオールへとコンジュゲートさせることができる。
【０２４５】
本開示はまた、活性化可能抗体内の少なくとも１つの鎖間ジスルフィド結合が、活性化可能抗体内の鎖内ジスルフィド結合を攪乱せずに、還元剤により還元されている、部分的に還元された活性化可能抗体も提示するが、ここで、活性化可能抗体は、標的、例えば、ＣＤ７１に特異的に結合する抗体又はこの抗原結合性断片（ＡＢ）、非切断状態にある活性化可能抗体のＡＢの、標的への結合を阻害するマスキング部分（ＭＭ）及びＡＢへとカップリングされた切断可能部分（ＣＭ）を含み、ＣＭは、少なくとも１つのプロテアーゼに対する基質として機能するポリペプチドである。一部の実施形態において、ＭＭは、ＣＭを介して、ＡＢへとカップリングされている。一部の実施形態において、活性化可能抗体の１つ以上の鎖内ジスルフィド結合は、還元剤により攪乱されない。一部の実施形態において、活性化可能抗体内のＭＭの、１つ以上の鎖内ジスルフィド結合は、還元剤により攪乱されない。一部の実施形態において、非切断状態にある活性化可能抗体は、Ｎ末端からＣ末端へと、ＭＭ−ＣＭ−ＡＢ又はＡＢ−ＣＭ−ＭＭの構造的配置を有する。一部の実施形態において、還元剤は、ＴＣＥＰである。
【０２４６】
一部の実施形態において、本明細書において記載されている活性化可能抗体はまた、活性化可能抗体へとコンジュゲートされた薬剤も含む。一部の実施形態において、コンジュゲート剤は、抗炎症剤及び／又は抗新生物剤などの治療剤である。このような実施形態において、例えば、炭水化物部分が活性化可能抗体内の抗体又は抗原結合性断片の、抗原結合性領域の外部に配置された一部の実施形態において、薬剤は、活性化可能抗体の炭水化物部分へとコンジュゲートされている。一部の実施形態において、薬剤は、活性化可能抗体内の抗体又は抗原結合性断片のスルフヒドリル基へとコンジュゲートされている。
【０２４７】
一部の実施形態において、薬剤は、毒素（例えば、細菌由来、真菌由来、植物由来又は動物由来の、酵素的に活性の毒素若しくはこれらの断片）又は放射性同位元素（すなわち、ラジオコンジュゲート）などの細胞傷害剤である。
【０２４８】
一部の実施形態において、薬剤は、例えば、標識又は他のマーカーなどの検出可能部分である。一部の実施形態において、検出可能部分は、診断剤である。例えば、薬剤は、放射性標識されたアミノ酸、マーキングされたアビジン（例えば、光学法若しくは熱量法により検出され得る、蛍光マーカー若しくは酵素活性を含有するストレプトアビジン）により検出され得る、１つ以上のビオチニル部分、１つ以上の放射性同位元素又は放射性核種、１つ以上の蛍光標識、１つ以上の酵素標識及び／又は１つ以上の化学発光剤である又はこれを含む。一部の実施形態において、検出可能部分は、スペーサー分子により接合されている。
【０２４９】
本開示はまた、毒素（例えば、細菌由来、真菌由来、植物由来又は動物由来の、酵素的に活性の毒素又はこれらの断片）又は放射性同位元素（すなわち、ラジオコンジュゲート）などの細胞傷害剤へとコンジュゲートされた抗体を含むイムノコンジュゲートにも関する。適切な細胞傷害剤としては、例えば、ドラスタチン及びこの誘導体（例えば、アウリスタチンＥ、ＡＦＰ、ＭＭＡＦ、ＭＭＡＥ、ＭＭＡＤ、ＤＭＡＦ、ＤＭＡＥ）が挙げられる。例えば、薬剤は、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）又はモノメチルアウリスタチンＤ（ＭＭＡＤ）である。一部の実施形態において、薬剤は、ドラスタチンである。一部の実施形態において、薬剤は、アウリスタチン又はこの誘導体である。一部の実施形態において、薬剤は、アウリスタチンＥ又はこの誘導体である。一部の実施形態において、薬剤は、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）である。一部の実施形態において、薬剤は、モノメチルアウリスタチンＤ（ＭＭＡＤ）である。一部の実施形態において、薬剤は、マイタンシノイド又はマイタンシノイド誘導体である。
【０２５０】
一部の実施形態において、ＡＢへとコンジュゲートさせたリンカー及び毒素は、ＳＰＤＢ−ＤＭ４部分、ｖｃ−ＭＭＡＤ部分、ｖｃ−ＭＭＡＥ部分、ｖｃ−デュオカルマイシン又はＰＥＧ２−ｖｃ−ＭＭＡＤ部分を含む。一部の実施形態において、リンカーは、切断可能リンカーである。一部の実施形態において、リンカーは、非切断可能リンカーである。一部の実施形態において、薬剤は、検出可能部分である。
【０２５１】
一部の実施形態において、薬剤は、マレイミドカプロイル−バリン−シトルリンリンカー又はマレイミドＰＥＧ−バリン−シトルリンリンカーを使用して、ＡＢへと連結される。一部の実施形態において、薬剤は、マレイミドカプロイル−バリン−シトルリンリンカーを使用して、ＡＢへと連結される。一部の実施形態において、薬剤は、マレイミドカプロイル−バリン−シトルリンリンカーを使用して、ＡＢへと連結された、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）であり、このリンカーペイロード構築物は、本明細書において、「ｖｃ−ＭＭＡＥ」と称される。一部の実施形態において、薬剤は、マレイミドＰＥＧ−バリン−シトルリンリンカーを使用して、ＡＢへと連結される。一部の実施形態において、薬剤は、マレイミドテトラ−ＰＥＧ−バリン−シトルリン−パラ−アミノベンジルオキシカルボニルリンカーを使用して、ＡＢへと連結された、モノメチルアウリスタチンＤ（ＭＭＡＤ）であり、このリンカーペイロード構築物は、本明細書において、「ＰＥＧ４−ｖｃ−ＭＭＡＤ」と称される。一部の実施形態において、薬剤は、マレイミドテトラ−ＰＥＧ−バリン−シトルリン−パラ−アミノベンジルオキシカルボニルリンカーを使用して、ＡＢへと連結された、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）であり、このリンカーペイロード構築物は、本明細書において、「ＰＥＧ４−ｖｃ−ＭＭＡＥ」と称される。一部の実施形態において、薬剤は、マレイミドＰＥＧ−バリン−シトルリンリンカーを使用して、ＡＢへと連結される。一部の実施形態において、薬剤は、マレイミドビス−ＰＥＧ−バリン−シトルリン−パラ−アミノベンジルオキシカルボニルリンカーを使用して、ＡＢへと連結された、モノメチルアウリスタチンＤ（ＭＭＡＤ）であり、このリンカーペイロード構築物は、本明細書において、「ＰＥＧ２−ｖｃ−ＭＭＡＤ」と称される。ＰＥＧ４−ｖｃ−ＭＭＡＤ、ＰＥＧ４−ｖｃ−ＭＭＡＥ、ＰＥＧ２−ｖｃ−ＭＭＡＤ及びｖｃ−ＭＭＡＥの構造は、下記に示されている。
【０２５２】
【化４】
2020537649.tif 000009
【０２５３】
本開示はまた、ｖａｌ−ｃｉｔ（ｖｃ）リンカーを伴うモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）ペイロードである、ｖｃＭＭＡＥへと連結された活性化可能抗体であって、標的に特異的に結合する抗体（ＡＢ）、ＡＢへとカップリングされたマスキング部分（ＭＭ）であって、活性化可能コンジュゲート抗体が非切断状態にある場合に、ＡＢの、標的への結合を阻害するＭＭ及びＡＢへとカップリングされた切断可能部分（ＣＭ）を含み、ＣＭはプロテアーゼに対する基質として機能するポリペプチドである、活性化可能抗体を含む活性化可能コンジュゲート抗体も提示する。一部の実施形態において、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体は、式（Ｉ）：
【０２５４】
【化５】
2020537649.tif 000010
［式中、ＡＢは、標的に特異的に結合し、重鎖可変領域、重鎖及び／又は１つ以上の重鎖ＣＤＲ（ＣＤＲＨ）領域を含む抗体である。］の構造又はその塩を有する。ＡＢはまた、軽鎖可変領域、軽鎖及び／又は１つ以上の軽鎖ＣＤＲ（ＣＤＲＬ）領域も含む。式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体はまた、活性化可能コンジュゲート抗体が非切断状態にある場合に、ＡＢの、その標的への結合を阻害するマスキング部分（ＭＭ）、第１の連結部分（ＬＰ１）、切断可能部分（ＣＭ）及び第２の連結部分（ＬＰ２）も含む。式（Ｉ）についての、特定の実施形態において、「ｎ」は２である。一部の実施形態において、ＡＢが、ＩｇＧ１アイソタイプを含む、式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体。一部の実施形態において、ＡＢが、重鎖定常領域を有する抗体であり、ここで、重鎖定常領域のＣ末端残基が、リシンではない、式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体。一部の実施形態において、重鎖上及び／又は軽鎖上のＮ末端グルタメートが、任意選択的に、ピログルタメートである又はピログルタメートへと翻訳後修飾されている、式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体。
【０２５５】
一部の実施形態において、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体は、式（ＩＩ）：
【０２５６】
【化６】
2020537649.tif 000011
［式中、ＡＢは、標的に特異的に結合し、重鎖可変領域、重鎖及び／又は１つ以上の重鎖ＣＤＲ（ＣＤＲＨ）領域を含む抗体である。］の構造又はその塩を有する。ＡＢはまた、軽鎖可変領域、軽鎖及び／又は１つ以上の軽鎖ＣＤＲ（ＣＤＲＬ）領域も含む。式（Ｉ）の活性化可能コンジュゲート抗体はまた、活性化可能コンジュゲート抗体が非切断状態にある場合に、ＡＢの、その標的への結合を阻害するマスキング部分（ＭＭ）及び切断可能部分（ＣＭ）も含む。式（ＩＩ）についての、特定の実施形態において、「ｎ」は２である。一部の実施形態において、ＡＢが、ＩｇＧ１アイソタイプを含む、式（ＩＩ）の活性化可能コンジュゲート抗体。一部の実施形態において、ＡＢが、重鎖定常領域を有する抗体であり、ここで、重鎖定常領域のＣ末端残基が、リシンではない、式（ＩＩ）の活性化可能コンジュゲート抗体。一部の実施形態において、重鎖上及び／又は軽鎖上のＮ末端グルタメートが、任意選択的に、ピログルタメートである又はピログルタメートへと翻訳後修飾されている、式（ＩＩ）の活性化可能コンジュゲート抗体。
【０２５７】
式（Ｉ）又は（ＩＩ）の、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体についての、一部の実施形態において、標的は、哺乳動物ＣＤ７１である。式（Ｉ）又は（ＩＩ）の、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体についての、一部の実施形態において、標的は、ヒトＣＤ７１である。
【０２５８】
式（Ｉ）又は（ＩＩ）の、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体についての、一部の実施形態において、ＡＢは、配列番号９を含むＣＤＲＨ１配列、配列番号１０を含むＣＤＲＨ２配列及び配列番号１１を含むＣＤＲＨ３配列を含む重鎖可変領域並びに配列番号１２又は配列番号１３を含むＣＤＲＬ１配列、配列番号１４を含むＣＤＲＬ２配列及び配列番号１５を含むＣＤＲＬ３配列を含む軽鎖可変領域を含み、ＭＭは、配列番号１８のアミノ酸配列を含み、ＣＭは、配列番号１５６の配列を含み、「ｎ」は２である。式（Ｉ）の、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体についての、一部の実施形態において、ＡＢは、配列番号９を含むＣＤＲＨ１配列、配列番号１０を含むＣＤＲＨ２配列及び配列番号１１を含むＣＤＲＨ３配列を含む重鎖可変領域並びに配列番号１２又は配列番号１３を含むＣＤＲＬ１配列、配列番号１４を含むＣＤＲＬ２配列及び配列番号１５を含むＣＤＲＬ３配列を含む軽鎖可変領域を含み、ＭＭは、配列番号１８のアミノ酸配列を含み、ＬＰ１は、配列番号２０７のアミノ配列を含み、ＣＭは、配列番号１５６の配列を含み、ＬＰ２は、配列番号３８のアミノを含み、「ｎ」は２である。
【０２５９】
式（Ｉ）又は（ＩＩ）の、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体についての、一部の実施形態において、ＡＢは、配列番号５の配列を含む重鎖可変領域及び配列番号７の配列を含む軽鎖可変領域を含み、ＭＭは、配列番号１８のアミノ酸配列を含み、ＣＭは、配列番号１５６の配列を含み、「ｎ」は２である。式（Ｉ）の、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体についての、一部の実施形態において、ＡＢは、配列番号５の配列を含む重鎖可変領域及び配列番号７の配列を含む軽鎖可変領域を含み、ＭＭは、配列番号１８のアミノ酸配列を含み、ＬＰ１は、配列番号２０７のアミノ配列を含み、ＣＭは、配列番号１５６の配列を含み、ＬＰ２は、配列番号３８のアミノ配列を含み、「ｎ」は２である。
【０２６０】
式（Ｉ）又は（ＩＩ）の、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体についての、一部の実施形態において、ＡＢは、配列番号１６７の配列を含む重鎖及び配列番号１９の配列を含む軽鎖を含み、ＭＭは、配列番号１８のアミノ酸配列を含み、ＣＭは、配列番号１５６の配列を含み、「ｎ」は２である。式（Ｉ）の、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体についての、一部の実施形態において、ＡＢは、配列番号１６７の配列を含む重鎖及び配列番号１９の配列を含む軽鎖を含み、ＭＭは、配列番号１８のアミノ酸配列を含み、ＬＰ１は、配列番号２０７のアミノ配列を含み、ＣＭは、配列番号１５６の配列を含み、ＬＰ２は、配列番号３８のアミノ配列を含み、「ｎ」は２である。
【０２６１】
式（Ｉ）又は（ＩＩ）の、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体についての、一部の実施形態において、ＡＢは、配列番号１６７の配列を含む重鎖及び配列番号１６９の配列を含む軽鎖を含み、「ｎ」は２である。式（Ｉ）の、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体についての、一部の実施形態において、ＡＢは、配列番号１６７の配列を含む重鎖及び配列番号１６９の配列を含む軽鎖を含み、「ｎ」は２である。式（Ｉ）又は（ＩＩ）の、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体についての、一部の実施形態において、ＡＢは、配列番号１６７の配列を含む重鎖及び配列番号２０１の配列を含む軽鎖を含み、「ｎ」は２である。
【０２６２】
式（Ｉ）又は（ＩＩ）の、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体についての、一部の実施形態において、ＡＢは、配列番号５の配列を含む重鎖可変領域及び配列番号７の配列を含む軽鎖可変領域を含む。式（Ｉ）又は（ＩＩ）の、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体についての、一部の実施形態において、ＡＢは、配列番号５の配列を含む重鎖可変領域及び配列番号７の配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【０２６３】
本開示はまた、モノメチルアウリスタチンＤ（ＭＭＡＤ）ペイロードへと連結された活性化可能抗体を含む活性化可能コンジュゲート抗体も提示するが、ここで、活性化可能抗体は、標的に特異的に結合する抗体又はこの抗原結合性断片（ＡＢ）、非切断状態にある活性化可能抗体のＡＢの、標的への結合を阻害するマスキング部分（ＭＭ）及びＡＢへとカップリングされた切断可能部分（ＣＭ）を含み、ＣＭは、少なくとも１つのＭＭＰプロテアーゼに対する基質として機能するポリペプチドである。
【０２６４】
一部の実施形態において、ＭＭＡＤ−活性化可能コンジュゲート抗体は、薬剤を、ＡＢへと接合させるための：（ａ）ＡＢの炭水化物部分への接合又は（ｂ）ＡＢのスルフヒドリル基への接合又は（ｃ）ＡＢのアミノ基への接合又は（ｄ）ＡＢのカルボン酸基への接合のためのいくつかの方法のうちのいずれかを使用してコンジュゲートされ得る。
【０２６５】
一部の実施形態において、ＭＭＡＤペイロードは、リンカーを介して、ＡＢへとコンジュゲートされている。一部の実施形態において、ＭＭＡＤペイロードは、リンカーを介して、ＡＢ内のシステインへとコンジュゲートされている。一部の実施形態において、ＭＭＡＤペイロードは、リンカーを介して、ＡＢ内のリシンへとコンジュゲートされている。一部の実施形態において、ＭＭＡＤペイロードは、リンカーを介して、本明細書において開示されている残基など、ＡＢの別の残基へとコンジュゲートされている。一部の実施形態において、リンカーは、チオール含有リンカーである。一部の実施形態において、リンカーは、切断可能リンカーである。一部の実施形態において、リンカーは、非切断可能リンカーである。一部の実施形態において、リンカーは、表（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）に示されているリンカーからなる群から選択される。一部の実施形態において、活性化可能抗体とＭＭＡＤペイロードとは、マレイミドカプロイル−バリン−シトルリンリンカーを介して連結される。一部の実施形態において、活性化可能抗体とＭＭＡＤペイロードとは、マレイミドＰＥＧ−バリン−シトルリンリンカーを介して連結される。一部の実施形態において、活性化可能抗体とＭＭＡＤペイロードとは、マレイミドカプロイル−バリン−シトルリン−パラ−アミノベンジルオキシカルボニルリンカーを介して連結される。一部の実施形態において、活性化可能抗体とＭＭＡＤペイロードとは、マレイミドＰＥＧ−バリン−シトルリン−パラ−アミノベンジルオキシカルボニルリンカーを介して連結される。一部の実施形態において、ＭＭＡＤペイロードは、本明細書において開示されている部分的還元及びコンジュゲーション技術を使用して、ＡＢへとコンジュゲートされている。
【０２６６】
一部の実施形態において、本開示のリンカーのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）構成要素は、２つのエチレングリコール単量体、３つのエチレングリコール単量体、４つのエチレングリコール単量体、５つのエチレングリコール単量体、６つのエチレングリコール単量体、７つのエチレングリコール単量体８つのエチレングリコール単量体、９つのエチレングリコール単量体又は少なくとも１０のエチレングリコール単量体から形成される。本開示の一部の実施形態において、ＰＥＧ構成要素は、分枝状ポリマーである。本開示の一部の実施形態において、ＰＥＧ構成要素は、非分枝状ポリマーである。一部の実施形態において、ＰＥＧポリマー構成要素は、アミノ基若しくはこの誘導体、カルボキシル基若しくはこの誘導体又はアミノ基若しくはこの誘導体及びカルボキシル基若しくはこの誘導体の両方により官能化されている。
【０２６７】
一部の実施形態において、本開示のリンカーのＰＥＧ構成要素は、アミノテトラエチレングリコールカルボキシル基又はこの誘導体である。一部の実施形態において、本開示のリンカーのＰＥＧ構成要素は、アミノトリエチレングリコールカルボキシル基又はこの誘導体である。一部の実施形態において、本開示のリンカーのＰＥＧ構成要素は、アミノジエチレングリコールカルボキシル基又はこの誘導体である。一部の実施形態において、アミノ誘導体は、アミノ基と、それがコンジュゲートされたカルボキシル基とのアミド結合の形成である。一部の実施形態において、カルボキシル誘導体は、カルボキシル基と、それがコンジュゲートされたアミノ基とのアミド結合の形成である。一部の実施形態において、カルボキシル誘導体は、カルボキシル基と、それがコンジュゲートされたヒドロキシル基とのエステル結合の形成である。
【０２６８】
酵素的に活性である、有用な毒素及びこの断片としては、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、外毒素Ａ鎖（シュードモナス・エルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）に由来する）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデクシンＡ鎖、アルファ−サルシン、アレウリテス・フォルディイ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉ）のタンパク質、ジアンチンタンパク質、フィトラカ・アメリカーナ（Ｐｈｙｔｏｌａｃａ  ａｍｅｒｉｃａｎａ）のタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ及びＰＡＰ−Ｓ）、モモルディカ・カランティア（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａ）による阻害剤、クルシン、クロチン、サポナリア・オフィキナリス（ｓａｐａｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）による阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン及びトリコテセンが挙げられる。放射性コンジュゲート抗体を作製するために、様々な放射性同位元素が利用可能である。例しては、２１２Ｂｉ、１３１Ｉ、１３１Ｉｎ、９０Ｙ及び１８６Ｒｅが挙げられる。
【０２６９】
抗体と細胞傷害剤とのコンジュゲートは、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオール）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（アジプイミド酸ジメチルＨＣＬなど）、活性エステル（スベリン酸ジスクシンイミジルなど）、アルデヒド（グルタルアルデヒド（ｇｌｕｔａｒｅｌｅｄｅｈｙｄｅ））など）、ビス−アジド化合物（ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビス−ジアゾニウム誘導体（ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミンなど）、ジイソシアン酸（トルエン（ｔｏｌｙｅｎｅ）２，６−ジイソシアン酸など）及び活性のビス−フッ素化合物（１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼンなど）など、様々な二官能性タンパク質のカップリング剤を使用して作られる。例えば、リシン免疫毒素は、Ｖｉｔｅｔｔａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３８：１０９８（１９８７年）において記載された通りに調製され得る。炭素１４標識された１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミン五酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、放射性核種の、抗体へのコンジュゲーションのための例示的なキレート剤である（ＷＯ９４／１１０２６を参照されたい）。
【０２７０】
当業者は、多種多様な可能部分が、結果として得られる本開示の抗体へとカップリングされ得ることを認識する（例えば、その全内容を、参照により本明細書に組み込む、「Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ」、Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎｓ  ｔｏ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．Ｍ．Ｃｒｕｓｅ及びＲ．Ｅ．Ｌｅｗｉｓ，Ｊｒ（編）、Ｃａｒｇｅｒ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８９年）を参照されたい）。
【０２７１】
カップリングは、抗体及び他の部分がこれらのそれぞれの活性を保持する限りにおいて、２つの分子を結合させる、任意の化学反応により達せられ得る。この連結は、多くの化学機構、例えば、共有結合、アフィニティー結合、挿入、配位結合及び錯体化を含み得る。しかし、一部の実施形態において、結合は、共有結合である。共有結合は、存在する側鎖の直接的縮合又は外部の架橋分子の組込みにより達成され得る。多くの二価連結剤又は多価連結剤は、本開示の抗体などのタンパク質分子を、他の分子へとカップリングさせるのに有用である。例えば、代表的なカップリング剤としては、チオエステル、カルボジイミド、スクシンイミドエステル、ジイソシアン酸、グルタルアルデヒド、ジアゾベンゼン及びヘキサメチレンジアミンなどの有機化合物が挙げられ得る。この列挙は、当技術分野において公知のカップリング剤の多様なクラスについて網羅的なものではなく、より一般的なカップリング剤について例示的であることが意図される（Ｋｉｌｌｅｎ及びＬｉｎｄｓｔｒｏｍ、Ｊｏｕｒ．Ｉｍｍｕｎ．、１３３：１３３５〜２５４９（１９８４年）；Ｊａｎｓｅｎら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ、６２：１８５〜２１６（１９８２年）；並びにＶｉｔｅｔｔａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３８：１０９８（１９８７年）を参照されたい。
【０２７２】
一部の実施形態において、本明細書において提示されている組成物及び方法に加えて、活性化可能コンジュゲート抗体はまた、活性化可能抗体配列内に挿入された又は他の形において含まれた修飾アミノ酸配列を介する、部位特異的コンジュゲーションのためにも修飾され得る。これらの修飾されたアミノ酸配列は、活性化可能コンジュゲート抗体内のコンジュゲート剤の、配置及び／又は投与量の制御を可能とするようにデザインされている。例えば、活性化可能抗体は、軽鎖上及び重鎖上の位置におけるシステイン置換であって、反応性のチオール基をもたらすが、タンパク質のフォールディング及びアセンブリーに、負の影響を与えたり、抗原への結合を変更したりしないシステイン置換を含むように操作され得る。一部の実施形態において、活性化可能抗体は、活性化可能抗体内に、１つ以上の非天然アミノ酸残基を含む又は他の形においてこれらを導入して、コンジュゲーションに適する部位をもたらすように操作され得る。一部の実施形態において、活性化可能抗体は、活性化可能抗体配列内に、酵素的に活性化可能なペプチド配列を含む又は他の形においてこれらを導入するように操作され得る。
【０２７３】
適するリンカーについては、文献において記載されている（例えば、ＭＢＳ（Ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル）の使用について記載している、Ｒａｍａｋｒｉｓｈｎａｎ，Ｓ．ら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、４４：２０１〜２０８（１９８４年）を参照されたい。また、オリゴペプチドリンカーにより、抗体へとカップリングされた、ハロゲン化アセチルヒドラジド誘導体の使用について記載している、米国特許第５，０３０，７１９号も参照されたい。一部の実施形態において、適するリンカーとしては、（ｉ）ＥＤＣ（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノ−プロピル）カルボジイミド塩酸塩；（ｉｉ）ＳＭＰＴ（４−スクシンイミジルオキシカルボニル−アルファ−メチル−アルファ−（２−ピリジル−ジチオ）−トルエン（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．Ｃａｔ．２１５５８Ｇ）；（ｉｉｉ）ＳＰＤＰ（スクシンイミジル−６［３−（２−ピリジルジチオ）プロピオンアミド］ヘキサン酸塩（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．Ｃａｔ．＃２１６５１Ｇ）；（ｉｖ）スルホ−ＬＣ−ＳＰＤＰ（スルホスクシンイミジル６［３−（２−ピリジルジチオ）−プロピオン（ｐｒｏｐｉａｎ）アミド］ヘキサン酸塩（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．Ｃａｔ．＃２１６５−Ｇ）；及び（ｖ）ＥＤＣへとコンジュゲートされた、スルホ−ＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシスルホ−スクシンイミド：Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．Ｃａｔ．＃２４５１０）が挙げられる。さらなるリンカーとしては、これらに限定されないが、ＳＭＣＣ（（スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボン酸塩）、スルホ−ＳＭＣＣ（スルホスクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボン酸塩）、ＳＰＤＢ（Ｎ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルジチオ）ブタン酸塩）又はスルホ−ＳＰＤＢ（Ｎ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルジチオ）−２−スルホブタン酸塩）が挙げられる。
【０２７４】
上記で記載されたリンカーは、異なる属性を有し、したがって、異なる生理化学的特性を伴うコンジュゲートをもたらす構成要素を含有する。例えば、カルボン酸アルキルのスルホ−ＮＨＳエステルは、芳香族カルボン酸のスルホ−ＮＨＳエステルより安定である。リンカーを含有するＮＨＳ−エステルは、スルホ−ＮＨＳエステルより、可溶性が小さい。さらに、リンカーであるＳＭＰＴは、立体障害型ジスルフィド結合を含有しており、安定性を増大させたコンジュゲートを形成し得る。ジスルフィド連結は、インビトロにおいて切断されるため、一般に、他の連結より安定性が小さく、利用可能なコンジュゲートの減少を結果としてもたらす。スルホ−ＮＨＳは、特に、カルボジイミドカップリングの安定性を増強し得る。カルボジイミドカップリング（ＥＤＣなど）は、スルホ−ＮＨＳと共に使用されると、カルボジイミドカップリング反応単独よりも、加水分解に対する抵抗性が大きいエステルを形成する。
【０２７５】
一部の実施形態において、リンカーは、切断可能である。一部の実施形態において、リンカーは、切断可能でない。一部の実施形態において、２つ以上のリンカーが存在する。この２つ以上のリンカーは、全て同じである、すなわち、切断可能である若しくは切断可能でない又は２つ以上のリンカーは、異なる、すなわち、少なくとも１つは切断可能であり、少なくとも１つは切断可能でない。
【０２７６】
本開示は、薬剤を、ＡＢへと接合させるための：（ａ）ＡＢの炭水化物部分への接合又は（ｂ）ＡＢのスルフヒドリル基への接合又は（ｃ）ＡＢのアミノ基への接合又は（ｄ）ＡＢのカルボン酸基への接合のためのいくつかの方法を用いる。本開示に従い、ＡＢは、１つはＡＢと反応し、１つは薬剤と反応する、少なくとも２つの反応性基を有する中間リンカーを介して、薬剤へと共有結合的に接合され得る。任意の適合性の有機化合物を含み得るリンカーは、ＡＢ（又は薬剤）との反応が、ＡＢの反応性及び選択性に有害な影響を及ぼさないように選び出され得る。さらに、リンカーの、薬剤への接合は、薬剤の活性を破壊しない場合がある。酸化抗体又は酸化抗体断片との反応に適するリンカーとしては、一級アミン基、二級アミン基、ヒドラジン基、ヒドラジド基、ヒドロキシルアミン基、フェニルヒドラジン基、セミカルバジド基及びチオセミカルバジド基からなる群から選択されるアミンを含有するリンカーが挙げられる。このような反応性官能基は、リンカー構造の一部として存在する場合もあり、このような基を含有しないリンカーの、適切な化学修飾により導入される場合もある。
【０２７７】
本開示に従い、還元されたＡＢへの接合に適するリンカーは、還元された抗体又は断片のスルフヒドリル基との反応が可能な、ある特定の反応性基を有するリンカーを含む。このような反応性基は、これらに限定されないが、反応性のハロアルキル基（例えば、ハロアセチル基を含む）、ｐ−安息香酸水銀基及びマイケル型付加反応が可能な基を含む（例えば、マレイミド並びにＭｉｔｒａ及びＬａｗｔｏｎ、１９７９年、Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、１０１：３０９７〜３１１０頁により記載された種類の基を含む）。
【０２７８】
本開示に従い、酸化も還元もされていないＡｂへの接合に適するリンカーは、Ａｂの非修飾リシン残基内に存在する一級アミノ基との反応が可能な、ある特定の官能基を有するリンカーを含む。このような反応性基は、これらに限定されないが、ＮＨＳのカルボン酸エステル又は炭酸エステル、スルホ−ＮＨＳのカルボン酸エステル又は炭酸エステル、４−ニトロフェニルのカルボン酸エステル又は炭酸エステル、ペンタフルオロフェニルのカルボン酸エステル又は炭酸エステル、アシルイミダゾール、イソシアネート及びイソチオシアネートを含む。
【０２７９】
本開示に従い、酸化も還元もされていないＡｂへの接合に適するリンカーは、適切な試薬により活性化されたＡｂのアスパラギン酸残基又はグルタメート残基内に存在するカルボン酸基との反応が可能な、ある特定の官能基を有するリンカーを含む。適切な活性化試薬は、ＮＨＳ又はスルホ−ＮＨＳ及びカルボキサミドの形成のために用いられる他の脱水剤の付加を伴う又は伴わないＥＤＣを含む。これらの場合、適切なリンカー内に存在する官能基は、一次アミン及び二次アミン、ヒドラジン、ヒドロキシルアミン並びにヒドラジドを含む。
【０２８０】
薬剤は、リンカーが、ＡＢへと接合される前又は後に、リンカーへと接合され得る。ある特定の適用において、まず、リンカーが薬剤を会合させていない、ＡＢ−リンカー中間体を作製することが所望であり得る。次いで、特定の適用に応じて、特異的な薬剤が、リンカーへと共有結合的に接合され得る。一部の実施形態において、ＡＢは、まず、ＭＭ、ＣＭ及び会合されたリンカーへと接合され、次いで、コンジュゲーションを目的として、リンカーへと接合される。
【０２８１】
分枝状リンカー：具体的な実施形態において、薬剤の接合のための、複数の部位を有する分枝状リンカーが用いられている。複数部位リンカーについて、ＡＢへの、単一の共有接合は、多数の部位において、薬剤に結合することが可能なＡＢ−リンカー中間体を結果としてもたらす。部位は、薬剤が接合され得る、アルデヒド基若しくはスルフヒドリル基又は任意の化学的部位であり得る。
【０２８２】
一部の実施形態において、高度な特異的活性（又は高度な、薬剤の、ＡＢに対する比）は、単一部位リンカーの、ＡＢ上の複数部位における接合により達成され得る。この複数部位は、２つの方法のうちの一方により、ＡＢへと導入され得る。第１に、同じＡＢ内に、複数のアルデヒド基及び／又はスルフヒドリル基を作出することができる。第２に、その後のリンカーへの接合のために、ＡＢの、アルデヒド又はスルフヒドリルへと、複数の機能的部位を有する、「分枝状リンカー」を接合させることができる。分枝状リンカー又は複数部位リンカーの機能的部位は、アルデヒド基又はスルフヒドリル基の場合もあり、リンカーが接合され得る任意の化学的部位の場合もある。これらの２つの手法を組み合わせること、すなわち、ＡＢ上のいくつかの部位において、複数部位リンカーを接合させることにより、さらに高度な特異的活性が得られ得る。
【０２８３】
切断可能リンカー：本開示の一実施形態において、ｕ−プラスミノーゲン活性化因子、組織プラスミノーゲン活性化因子、トリプシン、プラスミン又はタンパク質分解活性を有する別の酵素などであるがこれらに限定されない、補体系の酵素による切断を受けやすいペプチドリンカーが使用され得る。本開示の一方法に従い、薬剤は、補体による切断を受けやすいリンカーを介して接合されている。抗体は、補体を活性化させ得るクラスから選択される。こうして、抗体−薬剤コンジュゲートは、補体カスケードを活性化させ、標的部位において、薬剤を放出する。本開示の別の方法に従い、薬剤は、ｕ−プラスミノーゲン活性化因子、組織プラスミノーゲン活性化因子、プラスミン又はトリプシンなど、タンパク質分解活性を有する酵素による切断を受けやすいリンカーを介して接合されている。
【０２８４】
切断可能リンカー配列の非限定例は、表（ＩＩ）において提示されている。
【０２８５】
【表２】
2020537649.tif 000012
2020537649.tif 000013
【０２８６】
加えて、薬剤は、ジスルフィド結合（例えば、システイン分子上のジスルフィド結合）を介して、ＡＢへと接合され得る。多くの腫瘍は天然において、高レベルのグルタチオン（還元剤）を放出するので、これは、送達の部位における、その後の薬剤の放出により、ジスルフィド結合を還元し得る。一部の実施形態において、ＣＭを修飾する還元剤はまた、活性化可能コンジュゲート抗体のリンカーも修飾する。
【０２８７】
スペーサー及び切断可能エレメント：一部の実施形態において、薬剤と、活性化可能抗体のＡＢとの間隔を最適化するように、リンカーを構築することが必要であり得る。これは、一般構造：
Ｗ−（ＣＨ２）ｎ−Ｑ
［式中、
Ｗは、−ＮＨ−ＣＨ２−又は−ＣＨ２−であり；
Ｑは、アミノ酸、ペプチドであり；
ｎは、０〜２０の整数である。］
のリンカーの使用により達せられ得る。
【０２８８】
一部の実施形態において、リンカーは、スペーサーエレメント及び切断可能エレメントを含み得る。スペーサーエレメントは、切断可能エレメントの、切断の一因となる酵素へのアクセス可能性が大きくなるように、切断可能エレメントを、ＡＢのコアから隔てて配置するのに用いられる。上記において記載された分枝状リンカーのうちの、ある特定のものは、スペーサーエレメントとして用いられ得る。
【０２８９】
この議論を通して、リンカーの、薬剤への接合（又はスペーサーエレメントの、切断可能エレメントへの接合又は切断可能エレメントの、薬剤への接合）は、特定の接合方式又は反応方式である必要がないことを理解されたい。適切な安定性及び生物学的適合性を有する生成物をもたらす、任意の反応が許容可能である。
【０２９０】
血清補体及びリンカーの選択：本開示の一方法に従い、薬剤の放出が所望される場合、補体を活性化させ得るクラスの抗体であるＡＢが使用され得る。結果として得られるコンジュゲートは、抗原に結合する能力及び補体カスケードを活性化させる能力の両方を保持している。したがって、本開示のこの実施形態に従い、薬剤は、切断可能リンカー又は切断可能エレメントの一方の末端へと接続され、リンカー基の他の末端は、ＡＢ上の特異的な部位へと接合されている。例えば、薬剤がヒドロキシ基又はアミノ基を有する場合、薬剤は、それぞれ、エステル結合又はアミド結合を介して、ペプチド、アミノ酸又は他の適切に選び出されたリンカーのカルボキシ末端へと接合され得る。例えば、このような薬剤は、カルボジイミド反応を介して、リンカーペプチドへと接合され得る。薬剤が、リンカーへの接合に干渉する官能基を含有する場合、これらの干渉性官能基は、接合の前にブロッキングされ、生成物のコンジュゲート又は中間体が作られたら、デブロッキングされ得る。次いで、リンカーの反対側の末端又はアミノ末端が、直接又はさらなる修飾の後に、補体を活性化させることが可能なＡＢへの結合のために使用される。
【０２９１】
リンカー（又はリンカーのスペーサーエレメント）は、任意の所望の長さであることが可能であり、その１つの末端は、活性化可能抗体のＡＢ上における特異的な部位へと共有結合的に接合され得る。リンカー又はスペーサーエレメントの他方の末端は、アミノ酸又はペプチドリンカーへと接合され得る。
【０２９２】
したがって、これらのコンジュゲートが補体の存在下において、抗原に結合する場合、薬剤をリンカーへと接合させるアミド結合又はエステル結合が切断される結果として、この活性形態にある薬剤の放出がもたらされる。これらのコンジュゲートは、対象へと投与されると、標的部位における、薬剤の送達及び放出を達成し、特に、医薬剤、抗生剤、抗代謝物、抗増殖剤などのインビボ送達に有効である。
【０２９３】
補体の活性化を伴わない放出のためのリンカー：ターゲティングされた送達の、さらに別の適用において、補体カスケードの活性化は、最終的に標的細胞を溶解させるので、補体の活性化を伴わない薬剤の放出が所望される。よって、この手法は、薬剤の送達及び放出が、標的細胞を死滅させずに達せられるべきである場合に、有用である。ホルモン、酵素、コルチコステロイド、神経伝達物質、遺伝子又は酵素など、細胞メディエーターの、標的細胞への送達が所望される場合の目標は、このようである。これらのコンジュゲートは、血清プロテアーゼによる切断を、微弱に受けやすいリンカーを介して、補体を活性化させることが可能ではない薬剤を、ＡＢへと接合させることにより調製され得る。このコンジュゲートが個体へと投与される場合、抗原−抗体間複合体が迅速に形成される一方、薬剤の切断は、緩徐に生じる結果として、標的部位における、化合物の放出がもたらされる。
【０２９４】
生化学的架橋剤：一部の実施形態において、活性化可能抗体は、ある特定の生化学的架橋剤を使用して、１つ以上の治療剤へとコンジュゲートされ得る。架橋形成試薬は、２つの異なる分子の官能基を結び合わせる、分子架橋を形成する。２つの異なるタンパク質を、段階的に連結するために、望ましくないホモポリマーの形成をなくす、ヘテロ二官能性架橋剤が使用され得る。
【０２９５】
リソソームプロテアーゼにより切断可能なペプチジルリンカー、例えば、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ａｌａ又は他のジペプチドもまた、有用である。加えて、リソソームの、低ｐＨ環境において切断可能な、酸不安定性リンカー、例えば、ビス−シアリルエーテルも使用され得る。他の適切なリンカーは、カテプシン不安定性基質、特に、酸性ｐＨにおいて、最適の機能を示す基質を含む。
【０２９６】
例示的なヘテロ二官能性架橋剤は、表（ＩＩＩ）において参照される。
【０２９７】
【表３】
2020537649.tif 000014
【０２９８】
非切断可能リンカー又は直接的接合：本開示の一部の実施形態において、コンジュゲートは、薬剤が標的へと送達されるが、放出されないように、デザインされ得る。これは、薬剤を、ＡＢへと、直接又は非切断可能リンカーを介して接合させることにより達せられ得る。
【０２９９】
これらの非切断可能リンカーは、その後、本明細書において記載されている方法により、ＡＢへの接合において用いられ得る官能基を含むように修飾され得る、アミノ酸、ペプチド、Ｄ−アミノ酸又は他の有機化合物を含み得る。このような有機リンカーについての一般式は、
Ｗ−（ＣＨ２）ｎ−Ｑ
［式中、
Ｗは、−ＮＨ−ＣＨ２−又は−ＣＨ２−であり；
Ｑは、アミノ酸、ペプチドであり；
ｎは、０〜２０の整数である。］
であり得る。
【０３００】
非切断可能コンジュゲート：一部の実施形態において、化合物は、補体を活性化させないＡＢへと接合され得る。補体の活性化が可能でないＡＢを使用する場合、この接合は、活性化された補体による切断を受けやすいリンカーを使用して達せられる場合もあり、活性化された補体による切断を受けやすくないリンカーを使用して達せられる場合もある。
【０３０１】
定義：
そうでないことが規定されない限りにおいて、本開示との関連において使用されている科学技術用語は、当業者により一般に理解される意味を有するものとする。「ある（ａ）」実体又は「ある（ａｎ）」実体とは、この実体のうちの１つ以上を指す。例えば、化合物（ａ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）は、１つ以上の化合物を指す。このように、「ある（ａ）」、「ある（ａｎ）」、「１つ以上の」及び「少なくとも１つの」という用語は、互換的に使用され得る。さらに、文脈により、そうでないことが要求されない限りにおいて、単数形の用語は、複数形を含むものとし、複数形の用語は、単数形を含むものとする。一般に、本明細書において記載されている細胞及び組織の培養、分子的生物学並びにタンパク質及びオリゴヌクレオチド化学又はポリヌクレオチド化学並びにハイブリダイゼーションとの関連において用いられている用語法及びこれらの技法において用いられている用語法は、当技術分野において周知であり、一般に使用されている用語法である。標準的技法は、組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成並びに組織の培養及び形質転換（例えば、電気穿孔、リポフェクション）のために使用されている。酵素反応法及び精製法は、製造元の仕様に従い又は当技術分野において、一般に達せられた通りに又は本明細書において記載された通りに実施される。前出の技法及び手順は、一般に、当技術分野において周知である、従来の方法に従い実施され、本明細書を通じて引用され、論じられた、多様で一般的な参考文献及びより具体的な参考文献において記載された通りに実施される。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（２版、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．（１９８９年））を参照されたい。本明細書において記載されている分析化学、有機合成化学及び創薬化学及び医薬品化学との関連において用いられている用語法並びにこれらの検査室手順及び技法において用いられている用語法は、当技術分野において周知であり、一般に使用されている用語法である。標準的技法は、化学合成、化学分析、医薬調製物、製剤及び送達並びに患者の処置のために使用されている。
【０３０２】
本開示に従い用いられる場合、以下の用語は、そうでないことが指し示されない限りにおいて、以下の意味を有すると理解されるものとする：
本明細書において使用される場合、「抗体」という用語は、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン（Ｉｇ）分子の免疫学的活性部分、すなわち、抗原に特異的に結合する（抗原と免疫反応する）抗原結合性部位を含有する分子を指す。「〜に特異的に結合する」又は「〜と免疫反応する」又は「〜に免疫特異的に結合する」とは、抗体が、所望の抗原の、１つ以上の抗原決定基と反応し、他のポリペプチドと反応しない又ははるかに低度のアフィニティー（Ｋｄ＞１０−６）で、これに結合することを意味する。
【０３０３】
基礎的な抗体構造単位は、四量体を含むことが公知である。各四量体は、各対が１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）及び１つの「重」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）を有する、ポリペプチド鎖の、２つの同一の対から構成される。各鎖のアミノ末端部分は、主に、抗原認識の一因となる、約１００〜１１０アミノ酸以上の可変領域を含む。各鎖のカルボキシ末端部分は、主に、エフェクター機能の一因となる、定常領域を規定する。一般に、ヒトから得られた抗体分子は、分子内に存在する重鎖の性質により、互いと異なる、クラスＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ及びＩｇＤのうちのいずれかに関する。ある特定のクラスは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２及び他のサブクラスなどのサブクラスも有する。さらに、ヒトにおいて、軽鎖は、カッパ鎖の場合もあり、ラムダ鎖の場合もある。
【０３０４】
本明細書において使用される場合、「モノクローナル抗体」（ｍＡｂ）又は「モノクローナル抗体組成物」という用語は、固有の軽鎖遺伝子産物及び固有の重鎖遺伝子産物からなる抗体分子のうちの、１つの分子種だけを含有する、抗体分子の集団を指す。特に、モノクローナル抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）は、集団の全ての分子において同一である。ｍＡｂは、それに対する固有の結合アフィニティーにより特徴づけられた抗原の特定のエピトープと免疫反応することが可能な、抗原結合性部位を含有する。
【０３０５】
「抗原結合性部位」又は「結合性部分」という用語は、抗原への結合に参与する、免疫グロブリン分子の部分を指す。抗原結合性部位は、重（「Ｈ」）鎖及び軽（「Ｌ」）鎖のＮ末端可変（「Ｖ」）領域のアミノ酸残基により形成される。「超可変領域」と称される、重鎖及び軽鎖のＶ領域内の、高度に多様な３つの連なりが、「フレームワーク領域」又は「ＦＲ」として公知の、より保存的な隣接する連なりの間に挟まれている。したがって、「ＦＲ」という用語は、天然の免疫グロブリン内の超可変領域の間において見出され、これらと隣接するアミノ酸配列を指す。抗体分子において、軽鎖の３つの超可変領域及び重鎖の３つの超可変領域は、三次元空間内において、抗原結合性表面を形成するように、互いと関連して配置される。抗原結合性表面は、結合した抗原の三次元表面と相補的であり、重鎖及び軽鎖の各々の３つの超可変領域は、「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」と称される。各ドメインへの、アミノ酸の割当ては、Ｋａｂａｔ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（１９８７年及び１９９１年））又はＣｈｏｔｈｉａ及びＬｅｓｋ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１９６：９０１〜９１７頁（１９８７年）、Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｎａｔｕｒｅ、３４２：８７８〜８８３頁（１９８９年）による定義に従う。
【０３０６】
本明細書において使用される場合、「エピトープ」という用語は、免疫グロブリン、ｓｃＦｖ又はＴ細胞受容体への特異的結合が可能な、任意のタンパク質決定基を含む。「エピトープ」という用語は、免疫グロブリン又はＴ細胞受容体への特異的結合が可能な、任意のタンパク質決定基を含む。エピトープの決定基は、通例、アミノ酸又は糖側鎖など、化学的に活性の表面分子群からなり、通例、特異的な三次元構造特徴のほか、特異的な電荷特徴を有する。例えば、抗体は、ポリペプチドのＮ末端ペプチド又はＣ末端ペプチドに対して惹起され得る。抗体は、解離定数が、≦１μＭ、一部の実施形態において、≦１００ｎＭである場合に、一部の実施形態において、≦１０ｎＭである場合に、抗原に特異的に結合すると言われる。
【０３０７】
本明細書において使用される場合、「特異的結合」、「免疫学的結合」及び「免疫学的結合特性」という用語は、免疫グロブリン分子と、免疫グロブリンが特異的である抗原との間において生じる種類の、非共有結合的相互作用を指す。免疫学的結合相互作用の強度又はアフィニティーは、相互作用の解離定数（Ｋｄ）との関係において表される場合があり、ここで、Ｋｄが小さいほど、より大きなアフィニティーを表す。選択されたポリペプチドの、免疫学的結合特性は、当技術分野において周知の方法を使用して定量され得る。１つのこのような方法は、抗原結合性部位／抗原複合体の形成及び解離の速度を測定することを伴うが、ここで、これらの速度は、複合体パートナーの濃度、相互作用のアフィニティー及び速度に、両方の方向において、同等に影響を及ぼす幾何学的パラメータに依存している。したがって、「オン速度定数」（Ｋｏｎ）及び「オフ速度定数」（Ｋｏｆｆ）のいずれも、濃度並びに会合及び解離の実際の速度の計算により決定され得る（Ｎａｔｕｒｅ、３６１：１８６〜８７頁（１９９３年）を参照されたい）。Ｋｏｆｆ／Ｋｏｎの比は、アフィニティーと関連しない、全てのパラメータの相殺を可能とし、解離定数Ｋｄと等しい（一般に、Ｄａｖｉｅｓら（１９９０年）、Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖ  Ｂｉｏｃｈｅｍ、５９：４３９〜４７３頁を参照されたい）。本開示の抗体は、結合定数（Ｋｄ）が、放射性リガンド結合アッセイ又は当業者に公知である同様のアッセイなどのアッセイにより測定して、≦１μＭ、一部の実施形態において、≦１００ｎＭ、一部の実施形態において、≦１０ｎＭ、一部の実施形態において、≦１００ｐＭ〜約１ｐＭである場合に、標的に特異的に結合すると言われる。
【０３０８】
本明細書において使用される通り、「単離ポリヌクレオチド」という用語は、ゲノム由来、ｃＤＮＡ由来若しくは合成由来のポリヌクレオチド又はこれらの一部の組合せを意味するものとし、ここで、「単離ポリヌクレオチド」は、その由来により、（１）「単離ポリヌクレオチド」が、天然において見出されるポリヌクレオチドの全部又は一部と会合せず、（２）天然において連結されないポリヌクレオチドに、作動可能に連結されている又は（３）より大型の配列の一部として天然に存在しない。本開示に従うポリヌクレオチドは、本明細書において示されている重鎖免疫グロブリン分子をコードしている核酸分子及び本明細書において示されている軽鎖免疫グロブリン分子をコードしている核酸分子を含む。
【０３０９】
本明細書において言及されている「単離タンパク質」という用語は、ｃＤＮＡ由来、組換えＲＮＡ由来若しくは合成由来のタンパク質又はこれらの一部の組合せを意味し、ここで、「単離タンパク質」は、その由来又は導出の供給源により、（１）天然において見出されるタンパク質と会合しない、（２）同じ供給源に由来する他のタンパク質を含まない、例えば、マウスタンパク質を含まない、（３）異なる種に由来する細胞により発現されている又は（４）天然に存在しない。
【０３１０】
本明細書において、「ポリペプチド」という用語は、天然タンパク質、断片又はポリペプチド配列の類似体を指す、総称用語として使用される。よって、天然タンパク質の断片及び類似体は、ポリペプチド属の分子種である。本開示に従うポリペプチドは、本明細書において示されている重鎖免疫グロブリン分子及び本明細書において示されている軽鎖免疫グロブリン分子のほか、重鎖免疫グロブリン分子を、カッパ軽鎖免疫グロブリン分子などの軽鎖免疫グロブリン分子と共に含む組合せ及びこの逆の組合せにより形成された抗体分子のほか、これらの断片及び類似体を含む。
【０３１１】
目的物へと適用される、本明細書において使用される場合の「天然に存在する」という用語は、目的物が、天然において見出され得るという事実を指す。例えば、生物（ウイルスを含む）において存在し、天然の供給源から単離される場合があり、実験室において、人手により、意図的に又は他の形において修飾されていないポリペプチド配列又はポリヌクレオチド配列は、天然に存在する。
【０３１２】
本明細書において使用される場合、「作動可能に連結されている」という用語は、そのように記載された構成要素が、これらの意図された形において機能することを可能とする関係にあるこれらの位置を指す。コード配列に「作動可能に連結されている」制御配列は、コード配列の発現が、制御配列と適合性の条件下で達成されるようにライゲーションされている。
【０３１３】
本明細書において使用される場合、「制御配列」という用語は、それらがライゲーションされるコード配列の発現及びプロセシングを実行するのに必要な、ポリヌクレオチド配列を指す。原核生物において、このような制御配列の性質は、宿主生物に応じて異なり、真核生物において、このような制御配列は、一般に、プロモーター、リボソーム結合性部位及び転写終結配列を含み、一般に、このような制御配列は、プロモーター及び転写終結配列を含む。「制御配列」という用語は、最小限において、それらの存在が、発現及びプロセシングに不可欠である、全ての構成要素を含むことが意図され、また、それらの存在が有利である、さらなる構成要素、例えば、リーダー配列及び融合パートナー配列も含み得る。本明細書において言及されている、「ポリヌクレオチド」という用語は、リボヌクレオチド若しくはデオキシヌクレオチド又はヌクレオチドのいずれかの種類の修飾形態である、少なくとも１０塩基の長さのヌクレオチドを意味する。用語は、ＤＮＡの、一本鎖形態及び二本鎖形態を含む。
【０３１４】
本明細書において言及されている、オリゴヌクレオチドという用語は、天然に存在するオリゴヌクレオチド連結及び天然に存在しないオリゴヌクレオチド連結により一体に連結された、天然に存在するヌクレオチド及び修飾ヌクレオチドを含む。オリゴヌクレオチドは、２００塩基以下の長さを一般に含む、ポリヌクレオチドのサブセットである。一部の実施形態において、オリゴヌクレオチドは１０〜６０塩基の長さであり、一部の実施形態において、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０〜４０塩基の長さである。オリゴヌクレオチドは、通例、例えば、プローブのための一本鎖であるが、オリゴヌクレオチドは、例えば、遺伝子突然変異体の構築における使用のための二本鎖であり得る。本開示のオリゴヌクレオチドは、センスオリゴヌクレオチド又はアンチセンスオリゴヌクレオチドである。
【０３１５】
本明細書において言及されている、「天然に存在するヌクレオチド」という用語は、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドを含む。本明細書において言及されている、「修飾ヌクレオチド」という用語は、糖基が修飾又は置換されたヌクレオチドなどを含む。本明細書において言及されている、「オリゴヌクレオチド連結」という用語は、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロセレルロエート、ホスホロジセレノエート、ホスホロアニロチオエート、ホスホルアニラデート（ｐｈｏｓｐｈｏｒａｎｉｌａｄａｔｅ）、ホスホルオムニデートなどなどのオリゴヌクレオチド連結を含む。例えば、ＬａＰｌａｎｃｈｅら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、１４：９０８１頁（１９８６年）；Ｓｔｅｃら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、１０６：６０７７頁（１９８４年）；Ｓｔｅｉｎら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、１６：３２０９頁（１９８８年）；Ｚｏｎら、Ａｎｔｉ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ、６：５３９頁（１９９１年）；Ｚｏｎら、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ、８７〜１０８頁（Ｆ．Ｅｃｋｓｔｅｉｎ編、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｅｎｇｌａｎｄ（１９９１年））；Ｓｔｅｃら、米国特許第５，１５１，５１０号；Ｕｈｌｍａｎｎ及びＰｅｙｍａｎ、Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ、９０：５４３頁（１９９０年）を参照されたい。オリゴヌクレオチドは、所望の場合、検出のための標識を含み得る。
【０３１６】
本明細書において使用される場合、２０の従来型アミノ酸及びそれらの略記法は、従来型の用法に従う。Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ−Ａ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（２版、Ｅ．Ｓ．Ｇｏｌｕｂ及びＤ．Ｒ．Ｇｒｅｅｎ編、Ｓｉｎａｕｅｒ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ、Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ、Ｍａｓｓ．（１９９１年））を参照されたい。２０の従来型アミノ酸の立体異性体（例えば、Ｄ−アミノ酸）、α−アミノ酸、α−二置換アミノ酸、Ｎ−アルキルアミノ酸、乳酸及び他の従来型ではないアミノ酸などの非天然アミノ酸もまた、本開示のポリペプチドに適する構成要素であり得る。非従来型アミノ酸の例としては、４ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタメート、ε−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルリシン、ε−Ｎ−アセチルリシン、Ｏ−ホスホセリン、Ｎ−アセチルセリン、Ｎ−ホルミルメチオニン、３−メチルヒスチジン、５−ヒドロキシリシン、σ−Ｎ−メチルアルギニン並びに他の類似のアミノ酸及びイミノ酸（例えば、４−ヒドロキシプロリン）が挙げられる。本明細書において使用されているポリペプチド表記において、標準的な使用及び慣例に従い、左手方向が、アミノ末端方向であり、右手方向が、カルボキシ末端方向である。
【０３１７】
同様に、そうでないことが指定されない限り、一本鎖ポリヌクレオチド配列の左手末端は、５’末端であり、二本鎖ポリヌクレオチド配列の左手方向は、５’方向と称される。５’から３’への、新生ＲＮＡ転写物の付加方向は転写方向と称され、ＲＮＡと同じ配列を有する、ＤＮＡ鎖上の、ＲＮＡ転写物の５’末端に対して５’側にある配列領域は、「上流配列」と称され、ＲＮＡと同じ配列を有する、ＤＮＡ鎖上のＲＮＡ転写物の３’末端に対して３’側にある配列領域は、「下流配列」と称される。
【０３１８】
ポリペプチドに適用される場合、「実質的な同一性」という用語は、デフォルトのギャップ重みを使用するプログラムである、ＧＡＰ又はＢＥＳＴＦＩＴなどにより、最適にアライメントされた場合の、２つのペプチド配列が、少なくとも８０パーセントの配列同一性、一部の実施形態において、少なくとも９０パーセントの配列同一性、一部の実施形態において、少なくとも９５パーセントの配列同一性及び一部の実施形態において、少なくとも９９パーセント配列同一性を共有することを意味する。
【０３１９】
一部の実施形態において、同一でない残基位置は、保存的アミノ酸置換により異なる。
【０３２０】
本明細書において論じられている通り、抗体又は免疫グロブリン分子のアミノ酸配列のわずかな変動は、アミノ酸配列の変動が、少なくとも７５％、一部の実施形態において、少なくとも８０％、９０％、９５％であり、一部の実施形態において、９９％を維持することを条件として、本開示により包含されるものとして想定される。特に、保存的なアミノ酸の置きかえが想定される。保存的置きかえとは、それらの側鎖内の、類縁のアミノ酸のファミリー内において生じる置きかえである。遺伝子によりコードされたアミノ酸は、一般に、以下のファミリーに分けられる：（１）酸性アミノ酸は、アスパルテート、グルタメートであり；（２）塩基性アミノ酸は、リシン、アルギニン、ヒスチジンであり；（３）非極性アミノ酸は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファンであり、（４）非帯電極性アミノ酸は、グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、トレオニン、チロシンである。親水性アミノ酸は、アルギニン、アスパラギン、アスパルテート、グルタミン、グルタメート、ヒスチジン、リシン、セリン及びトレオニンを含む。疎水性アミノ酸は、アラニン、システイン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、トリプトファン、チロシン及びバリンを含む。アミノ酸の他のファミリーは、（ｉ）脂肪族ヒドロキシファミリーであるセリン及びトレオニン；（ｉｉ）アミド含有ファミリーであるアスパラギン及びグルタミン；（ｉｉｉ）脂肪族ファミリーであるアラニン、バリン、ロイシン及びイソロイシン；及び（ｉｖ）芳香族ファミリーであるフェニルアラニン、トリプトファン及びチロシンを含む。例えば、とりわけ、置きかえがフレームワーク部位内のアミノ酸を伴わない場合、ロイシンの、イソロイシン又はバリンによる単独の置きかえ、アスパルテートの、グルタメートによる単独の置きかえ、トレオニンの、セリンによる単独の置きかえ又はアミノ酸の、構造的に類縁のアミノ酸による、同様の置きかえが、結果として得られる分子の結合又は特性に対して、大きな影響を及ぼさないことを予期することが妥当である。アミノ酸変化が、機能的なペプチドを結果としてもたらすのかどうかは、ポリペプチド誘導体の特異的な活性をアッセイすることにより、たやすく決定され得る。アッセイについては、本明細書に、詳細に記載されている。抗体又は免疫グロブリン分子の断片又は類似体は、当業者により、たやすく調製され得る。断片又は類似体の、適切なアミノ末端及びカルボキシ末端は、機能的ドメインの境界部の近傍において生じる。構造機能的ドメインは、ヌクレオチド及び／又はアミノ酸の配列データの、公開された配列データベース又は特許権のある配列データベースに照らした比較により同定され得る。一部の実施形態において、コンピュータ化された比較法は、公知の構造及び／又は機能を有する、他のタンパク質内において生じる、配列モチーフ又は予測されたタンパク質コンフォメーションドメインを同定するのに使用される。公知の三次元構造へとフォールディングするタンパク質配列を同定する方法は、公知である。ＢｏｗｉｅらＳｃｉｅｎｃｅ  ２５３：１６４���（１９９１年）。したがって、前出の例は、当業者が、本開示に従う構造機能的ドメインを規定するのに使用され得る、配列モチーフ及び構造的コンフォメーションを認識し得ることを裏付ける。
【０３２１】
適切なアミノ酸置換は、（１）タンパク質分解の受けやすさを低減するアミノ酸置換、（２）酸化の受けやすさを低減するアミノ酸置換、（３）タンパク質複合体を形成するための結合アフィニティーを変更するアミノ酸置換、（４）結合アフィニティーを変更するアミノ酸置換及び（５）このような類似体の、他の物理化学的特性又は機能的な特性を付与又は修飾するアミノ酸置換である。類似体は、天然に存在するペプチド配列以外の配列の、多様なムテインを含み得る。例えば、単一又は複数のアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換）が、天然に存在する配列内に（例えば、分子間接触点を形成している、ドメイン（複数可）の外部のポリペプチドの部分内に施され得る。保存的アミノ酸置換は、親配列の構造的特徴を、実質的に変化させるべきではない（例えば、置きかえによるアミノ酸は、親配列内に生じる螺旋を切断する又は親配列を特徴付ける他の種類の二次構造を破壊する傾向をもつべきではない）。当技術分野において認知されたポリペプチド二次構造及び三次構造の例については、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ（Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ編、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８４年））；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｃ．Ｂｒａｎｄｅｎ  ａｎｄ  Ｊ．Ｔｏｏｚｅ編、Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．（１９９１年））；及びＴｈｏｒｎｔｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３５４：１０５頁（１９９１年）において記載されている。
【０３２２】
本明細書において使用される場合、「ポリペプチド断片」という用語は、アミノ末端及び／若しくはカルボキシ末端における欠失並びに／又は１つ以上の内部欠失を有するが、残りのアミノ酸配列は、例えば、全長ｃＤＮＡ配列から推測された、天然に存在する配列内の、対応する位置と同一であるポリペプチドを指す。断片は、典型的に、少なくとも５、６、８又は１０アミノ酸長、一部の実施形態において、少なくとも１４アミノ酸長、一部の実施形態において、少なくとも２０アミノ酸長、通例、少なくとも５０アミノ酸長であり、一部の実施形態において、少なくとも７０アミノ酸長である。本明細書において使用される場合、「類似体」という用語は、推測されたアミノ酸配列の一部に対して、実質的な同一性を有し、適切な結合条件下において、標的への特異的結合を有する、少なくとも２５アミノ酸のセグメントから構成されるポリペプチドを指す。典型的に、ポリペプチド類似体は、天然に存在する配列に照らした、保存的アミノ酸置換（又は付加若しくは欠失）を含む。類似体は、典型的に、少なくとも２０アミノ酸長、一部の実施形態において、少なくとも５０アミノ酸長又はこれより長く、しばしば、天然に存在する全長ポリペプチドと同じ長さである。
【０３２３】
本明細書において、「薬剤」という用語は、化合物、化合物の混合物、生体高分子又は生物学的素材から作られた抽出物を描示するのに使用される。
【０３２４】
本明細書において使用される場合、「標識」又は「標識された」という用語は、例えば、放射性標識されたアミノ酸の組込み又はマーキングされたアビジン（例えば、光学法又は熱量法により検出され得る、蛍光マーカー又は酵素活性を含有するストレプトアビジン）により検出され得るビオチニル部分のポリペプチドへの接合による、検出可能なマーカーの組込みを指す。ある特定の状況において、標識又はマーカーはまた、治療的でもあり得る。当技術分野において、ポリペプチド及び糖タンパク質を標識付けする多様な方法が公知であり、使用され得る。ポリペプチドのための標識の例としては、これらに限定されないが、以下：放射性同位元素又は放射性核種（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、１５Ｎ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ，１３１Ｉ）、蛍光標識（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミン、ランタニド蛍光体）、酵素標識（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、ｐ−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）、化学発光基、ビオチニル基、二次レポーター（例えば、ロイシンジッパー対合配列、二次抗体の結合性部位、金属結合性ドメイン、エピトープタグ）により認識される、所定のポリペプチドエピトープを含む。一部の実施形態において、標識は、多様な長さのスペーサーアームにより、潜在的な立体障害を低減するように接合されている。本明細書において使用される場合の「医薬剤又は医薬物」という用語は、患者へと、適性に投与された場合に、所望の治療効果を誘導することが可能な、化合物又は組成物を指す。
【０３２５】
本明細書における他の化学用語は、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｅｒｍｓ（Ｐａｒｋｅｒ，Ｓ．編、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ、Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ（１９８５年））により例示されている通り、当技術分野における従来の使用に従い使用されている。
【０３２６】
本明細書において使用される場合、「実質的に純粋な」とは、目的物の分子種が、存在する、主要な分子種であり（すなわち、モルべースにおいて、組成物中の、他の任意の個々の分子種より豊富であり）、一部の実施形態において、実質的に精製された画分が、存在する全ての高分子種のうちの、少なくとも約５０パーセント（モルベースにおいて）を、目的物の分子種が構成する組成物であることを意味する。
【０３２７】
一般に、実質的に純粋な組成物は、約８０パーセント超の、組成物中に存在する全高分子種、一部の実施形態において、約８５％、９０％、９５％及び９９％超を含む。一部の実施形態において、目的物の分子種は、組成物が単一の高分子種から本質的になる、本質的な均質性（夾雑分子種が、従来の検出法により、組成物中に検出され得ない。）へと精製される。
【０３２８】
患者という用語は、ヒト対象及び獣医学的対象を含む。
【０３２９】
本開示の抗体及び／又は活性化可能抗体は、所与の標的、例えば、ヒトＣＤ７１などのヒト標的タンパク質に特異的に結合する。本開示にはまた、本明細書において記載されている抗体及び／又は活性化可能抗体と同じエピトープに結合する抗体及び／又は活性化可能抗体も含まれる。本開示にはまた、ＣＤ７１、例えば、ヒトＣＤ７１への結合について、本明細書において記載されている抗ＣＤ７１抗体及び／又は活性化可能抗ＣＤ７１抗体と競合する抗体及び／又は抗体活性化可能抗体も含まれる。本開示にはまた、ＣＤ７１、例えば、ヒトＣＤ７１への結合について、本明細書において記載されている抗ＣＤ７１抗体及び／又は活性化可能抗ＣＤ７１抗体と交差競合する、抗体及び／又は活性化可能抗体も含まれる。
【０３３０】
当業者は、前者が、後者の、標的への結合を阻止するのかどうかを確認することにより、不要な実験を伴わずに、モノクローナル抗体（例えば、マウスモノクローナル抗体又はヒト化抗体）が、本明細書において記載された方法において使用されたモノクローナル抗体と同じ特異性を有するのかどうかを決定することが可能であると認識する。本開示のモノクローナル抗体による結合の減少により示される通り、被験モノクローナル抗体が、本開示のモノクローナル抗体と競合する場合、２つのモノクローナル抗体は、同じエピトープ又は近縁のエピトープに結合する。モノクローナル抗体が、本開示のモノクローナル抗体の特異性を有するのかどうかを決定するための代替的な方法は、本開示のモノクローナル抗体を、標的と共にプレインキュベートし、次いで、被験モノクローナル抗体を添加して、被験モノクローナル抗体が標的に結合するその能力において阻害されるのかどうかを決定することである。被験モノクローナル抗体が阻害された場合、ほぼ確実に、それは、本開示のモノクローナル抗体と同じである又は機能的に同等である、エピトープ特異性を有する。
【０３３１】
活性化可能コンジュゲート抗体の使用
本開示に従う治療用実体の投与は、移入、送達、忍容性などの改善をもたらすように、製剤へと組み込まれた、適切な、薬学的に許容される担体、賦形剤及び他の薬剤と共に投与されることが理解される。
【０３３２】
非限定例として、活性化可能コンジュゲート抗体を含む、本開示の治療用製剤は、標的の異常な発現及び／又は活性と関連している疾患又は障害を防止する、処置する又は他の形において改善するのに使用される。例えば、活性化可能コンジュゲート抗体を含む、本開示の治療用製剤は、がん若しくは他の新生物性状態、炎症、炎症性障害及び／又は自己免疫疾患を処置する又は他の形において改善するのに使用される。一部の実施形態において、がんは、標的が発現されている、充実性腫瘍又は血液悪性腫瘍である。一部の実施形態において、がんは、標的が発現されている、充実性腫瘍である。一部の実施形態において、がんは、標的が発現されている、血液悪性腫瘍である。一部の実施形態において、標的は、実質（例えば、がんにおいて、臓器又は組織の機能（複数可）を果たすことが多い、臓器又は組織の一部）において発現されている。一部の実施形態において、標的は、細胞、組織又は臓器において発現されている。一部の実施形態において、標的は、間質（すなわち、細胞、組織又は臓器の結合支持骨格）において発現されている。一部の実施形態において、標的は、骨芽細胞において発現されている。一部の実施形態において、標的は、上皮（血管系）において発現されている。一部の実施形態において、標的は、がん幹細胞において発現されている。一部の実施形態において、抗体及び／又は活性化可能抗体がコンジュゲートされている薬剤は、微小管阻害剤である。一部の実施形態において、抗体及び／又は活性化可能抗体がコンジュゲートされている薬剤は、核酸損傷剤である。
【０３３３】
防止、改善又は処置の有効性は、例えば、標的の異常な発現及び／又は活性など、標的の発現及び／又は活性と関連している疾患又は障害を診断又は処置するための、任意の公知の方法との関連において決定される。対象の生存を延長する又は対象における標的の発現及び／又は活性、例えば、標的の異常な発現及び／又は活性と関連している、疾患又は障害の進行を、他の形において遅延させることは、抗体、コンジュゲート抗体、活性化可能抗体及び／又は活性化可能コンジュゲート抗体が、臨床利益を付与することを指し示す。
【０３３４】
抗体、コンジュゲート抗体、活性化可能抗体及び／又は活性化可能コンジュゲート抗体は、医薬組成物の形態において投与され得る。抗体断片が使用される、一部の実施形態において、標的タンパク質の結合性ドメインに特異的に結合する最小の断片が選択される。例えば、標的タンパク質配列に結合する能力を保持する、抗体の可変領域配列に基づき、ペプチド分子がデザインされ得る。このようなペプチドは、化学的に合成される場合もあり、かつ／又は組換えＤＮＡ技術により作製される場合もある（例えば、Ｍａｒａｓｃｏら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：７８８９〜７８９３頁（１９９３年）を参照されたい）。
【０３３５】
インビボ投与のために使用される製剤は、滅菌でなければならない。これは、滅菌濾過膜を介する濾過により、たやすく達せられる。
【０３３６】
一部の実施形態において、抗体、コンジュゲート抗体、活性化可能抗体及び／又は活性化可能コンジュゲート抗体は、検出可能な標識を含有する。無傷抗体又はこの断片（例えば、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ又はＦ（ａｂ）２）が使用される。プローブ又は抗体に関する、「標識された」という用語は、検出可能な物質を、プローブ又は抗体へとカップリングすること（すなわち、物理的に連結すること）による、プローブ又は抗体の、直接的な標識付けのほか、直接的に標識された、別の試薬との反応性によるプローブ又は抗体の、間接的な標識付けを包含することが意図される。間接的な標識付けの例は、蛍光標識された二次抗体を使用する、一次抗体の検出及びＤＮＡプローブの、ビオチンによる、それが、蛍光標識されたストレプトアビジンにより検出され得るような、末端標識付けを含む。「生物学的試料」という用語は、対象から単離された、組織、細胞及び生物学的流体のほか、対象の内部に存在する、組織、細胞及び流体を含むことが意図される。したがって、「生物学的試料」という用語の使用の中に、血液及び血清、血漿若しくはリンパを含む、血液の画分又は成分が含まれる。すなわち、本開示の検出法は、インビトロ及びインビボにおいて、生物学的試料中の解析物である、ｍＲＮＡ、タンパク質又はゲノムＤＮＡを検出するのに使用され得る。例えば、解析物であるｍＲＮＡを検出するためのインビトロ法は、ノーザンハイブリダイゼーション及びインサイチューハイブリダイゼーションを含む。解析物であるタンパク質を検出するためのインビトロ法は、酵素免疫測定アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ウェスタンブロット、免疫沈降、免疫化学染色及び免疫蛍光を含む。解析物であるゲノムＤＮＡを検出するためのインビトロ法は、サザンハイブリダイゼーションを含む。イムノアッセイを行うための手順については、例えば、「ＥＬＩＳＡ：Ｔｈｅｏｒｙ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」、４２巻、Ｊ．Ｒ．Ｃｒｏｗｔｈｅｒ（編）、Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ、１９９５年；「Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ」、Ｅ．Ｄｉａｍａｎｄｉｓ及びＴ．Ｃｈｒｉｓｔｏｐｏｕｌｕｓ、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、１９９６年；並びに「Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ａｎｄ  Ｔｈｅｏｒｙ  ｏｆ  Ｅｎｚｙｍｅ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ」、Ｐ．Ｔｉｊｓｓｅｎ、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ａｍｓｔｅｒｄａｍ、１９８５年において記載されている。さらに、解析物であるタンパク質を検出するためのインビボ法は、対象へと、標識された抗解析物タンパク質抗体を導入することを含む。例えば、抗体は、対象における、その存在及び場所が、標準的なイメージング法により検出され得る、放射性マーカーにより標識され得る。
【０３３７】
本開示の抗体、コンジュゲート抗体、活性化可能抗体及び／又は活性化可能コンジュゲート抗体はまた、様々な診断用製剤及び予防用製剤においても有用である。一実施形態において、活性化可能コンジュゲート抗体は、前述の障害のうちの１つ以上を発症する危険性がある患者へと投与される。前述の障害のうちの１つ以上に対する、患者又は臓器の素因は、遺伝子型マーカー、血清学的マーカー又は生化学的マーカーを使用して決定され得る。
【０３３８】
本開示の一部の実施形態において、活性化可能コンジュゲート抗体は、前述の障害のうちの１つ以上と関連している臨床適応を伴うと診断されたヒト個体へと投与される。診断されると、活性化可能コンジュゲート抗体は、臨床適応の影響を、和らげる又は抑制するように投与される。
【０３３９】
本開示の抗体、コンジュゲート抗体、活性化可能抗体及び／又は活性化可能コンジュゲート抗体はまた、標的の、患者試料中の検出においても有用であり、したがって、診断法として有用である。例えば、本開示の抗体及び／又は活性化可能抗体並びにこれらのコンジュゲート形は、標的の、患者試料中レベルを検出するように、インビトロアッセイ、例えば、ＥＬＩＳＡにおいて使用される。
【０３４０】
一実施形態において、本開示の抗体、コンジュゲート抗体、活性化可能抗体及び／又は活性化可能コンジュゲート抗体は、固体支持体（例えば、マイクロ滴定プレートのウェル（複数可））上に固定化されている。固定化された抗体、コンジュゲート抗体、活性化可能抗体及び／又は活性化可能コンジュゲート抗体は、被験試料中に存在し得る、任意の標的のための捕捉抗体として用いられる。固定化された抗体及び／若しくは活性化可能抗体並びに／又はこれらのコンジュゲート形を、患者試料と接触させる前に、固体支持体は、すすがれ、解析物の非特異的な吸着を防止するように、ミルクタンパク質又はアルブミンなどのブロッキング剤により処理される。
【０３４１】
その後、ウェルは、抗原を含有することが疑われる被験試料又は標準量の抗原を含有する溶液により処理される。このような試料は、例えば、病態について診断的であると考えられるレベルの循環抗原を有することが疑われる対象に由来する血清試料である。被験試料又は標準物質をすすいだ後に、固体支持体は、検出可能に標識された二次抗体により処理される。標識された二次抗体は、検出抗体として用いられる。検出可能な標識のレベルは測定され、標的抗原の、被験試料中濃度は、標準試料から開発された検量線との比較により決定される。
【０３４２】
本開示の抗体及び活性化可能抗体並びにこれらのコンジュゲート形を、インビトロ診断アッセイにおいて使用して得られた結果に基づき、標的抗原の発現レベルに基づいて、対象における疾患を病期分類することが可能であると理解される。所与の疾患について、血液試料が、疾患の進行の多様な病期及び／又は疾患の治療的処置の多様な時点にあると診断された対象から採取される。進行又は治療の各病期又は各段階について、統計学的に有意な結果をもたらす試料の集団を使用して、各病期に特徴的であると考えられ得る抗原濃度の範囲が指定される。
【０３４３】
抗体、コンジュゲート抗体、活性化可能抗体及び／又は活性化可能コンジュゲート抗体はまた、診断法及び／又はイメージング法においても使用され得る。一部の実施形態において、このような方法は、インビトロ法である。一部の実施形態において、このような方法は、インビボ法である。一部の実施形態において、このような方法は、インサイチュー法である。一部の実施形態において、このような方法は、エクスビボ法である。例えば、酵素的に切断可能なＣＭを有する活性化可能抗体は、ＣＭを切断することが可能な酵素の存在又は非存在を検出するのに使用され得る。このような活性化可能抗体は、所与の宿主生物の、所与の細胞内又は組織内の、活性化された抗体（すなわち、活性化可能抗体の切断から生じる抗体）の蓄積の測定を介する酵素活性（又は、一部の実施形態において、ジスルフィド結合の還元をもたらし得る環境など、還元の潜在的可能性を増大させた環境）のインビボ検出（例えば、定性的又は定量的）を含み得る診断法において使用され得る。活性化された抗体のこのような蓄積は、組織が、酵素活性（又はＣＭの性質次第では、還元の潜在的可能性の増大）を発現するだけでなく、また、活性化された抗体が結合する標的も発現することを指し示す。
【０３４４】
例えば、ＣＭは、生物学的に閉止された部位（例えば、膿瘍内、臓器内など）における、腫瘍部位、ウイルス感染又は細菌感染の部位などにおいて見出された、少なくとも１つのプロテアーゼに対する基質であるように選択され得る。ＡＢは、標的抗原に結合するＡＢであり得る。本明細書において開示されている方法又は、適切な場合、当業者が精通している方法を使用して、検出可能な標識（例えば、蛍光標識又は放射性標識又は放射性トレーサー）は、ＡＢ又は抗体及び／若しくは活性化可能抗体の他の領域へとコンジュゲートされ得る。上記のスクリーニング法の文脈において、適切な検出可能な標識が論じられており、さらなる具体的な例が、下記に提示されている。疾患状態についてのタンパク質又はペプチドに特異的なＡＢを、その活性が、目的の疾患組織内において上昇している少なくとも１つのプロテアーゼと共に使用すると、活性化可能抗体は、ＣＭ特異的な酵素が検出可能なレベルにおいて存在していない又は疾患組織内より低レベルにおいて存在する又は不活性である組織（例えば、チモーゲン形態にある又は阻害剤と複合させた）と比べた、疾患組織への結合速度の増大を呈する。小型タンパク質及びペプチドは、腎濾過系により、血液から急速にクリアランスされるので、かつＣＭに特異的な酵素が検出可能なレベルで存在していない（又は非疾患組織内の低レベルにおいて存在する又は不活性コンフォメーションにおいて存在する）ため、活性化された抗体の疾患組織内での蓄積は、非疾患組織と比べて増強される。
【０３４５】
別の例において、活性化可能抗体は、切断剤の、試料中の存在又は非存在を検出するのに使用され得る。例えば、活性化可能抗体が酵素による切断を受けやすいＣＭを含有する場合、活性化可能抗体は、酵素の、試料中の存在を検出する（定性的に又は定量的に）のに使用され得る。活性化可能抗体が還元剤による切断を受けやすいＣＭを含有する、別の例において、活性化可能抗体は、還元条件の、試料中の存在を検出する（定性的に又は定量的に）のに使用され得る。これらの方法における解析を容易とするために、活性化可能抗体は、検出可能に標識される場合があり、支持体（例えば、スライド又はビーズなどの固体支持体）に結合され得る。検出可能な標識は、切断後において放出されない活性化可能抗体の一部に配置される場合があり、例えば、検出可能な標識は、切断が生じるまで、検出可能ではない、クエンチングされた蛍光標識又は他の標識であり得る。アッセイは、例えば、固定化させた、検出可能に標識された活性化可能抗体を、酵素及び／又は還元剤を含有することが疑われる試料と、切断が生じるのに十分な時間にわたり接触させ、次いで、過剰な試料及び夾雑物を除去するように洗浄することにより行われ得る。次いで、切断剤（例えば、酵素又は還元剤）の、試料中の存在又は非存在は、試料と接触させる前における、活性化可能抗体の、検出可能なシグナルの変化、例えば、試料中の切断剤による活性化可能抗体の切断に起因する、検出可能なシグナルの存在及び／又は増大により評価される。
【０３４６】
このような検出法は、切断された場合に、活性化可能抗体のＡＢへの結合が可能な標的の存在又は非存在の検出もまた、もたらすように適応され得る。したがって、アッセイは、切断剤の存在又は非存在及び目的の標的の存在又は非存在について評価するように適応され得る。切断剤の存在又は非存在は、上記で記載した通り、活性化可能抗体の、検出可能な標識の存在及び／又は増大により検出される場合があり、標的の存在又は非存在は、標的−ＡＢ複合体の検出により、例えば、検出可能に標識された抗標的抗体の使用により検出され得る。
【０３４７】
活性化可能抗体は、例えば、プロテアーゼの切断及び特定の標的への結合による、活性化可能抗体の活性化のバリデーションのための、インサイチューイメージングにおいてもまた有用である。インサイチューイメージングは、タンパク質分解活性及び標的の、細胞培養物又は組織切片など、生物学的試料中の位置特定を可能とする技法である。この技法を使用して、検出可能な標識（例えば、蛍光標識）の存在に基づき、所与の標的への結合及びタンパク質分解活性の両方を確認することが可能である。
【０３４８】
これらの技法は、疾患部位（例えば、腫瘍組織）又は健常組織に由来する、任意の凍結細胞又は凍結組織に対して有用である。これらの技法はまた、新鮮な細胞試料又は組織試料に対しても有用である。
【０３４９】
これらの技法において、活性化可能抗体は、検出可能な標識により標識される。検出可能な標識は、蛍光色素、（例えば、フルオロフォア、イソチオシアン酸フルオレセイン（ＦＩＴＣ）、イソチオシアン酸ローダミン（ＴＲＩＴＣ）、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）標識）、近赤外（ＮＩＲ）色素（例えば、Ｑｄｏｔ（登録商標）ナノ結晶）、コロイド状金属、ハプテン、放射性マーカー、ビオチン及びストレプトアビジンなどの増幅試薬又は酵素（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ又はアルカリホスファターゼ）であり得る。
【０３５０】
標識された、活性化可能抗体と共にインキュベートされた試料中の標識の検出は、試料が標的を含有し、活性化可能抗体のＣＭに特異的なプロテアーゼを含有することを指し示す。一部の実施形態において、プロテアーゼの存在は、本明細書において記載されているものなど、広域スペクトルのプロテアーゼ阻害剤を使用して、かつ／又はプロテアーゼに特異的な薬剤、例えば、プロテアーゼマトリプターゼに特異的であり、マトリプターゼのタンパク質分解性活性を阻害する、Ａ１１などの抗体を使用することにより確認され得る。例えば、２０１０年１１月１１日に公開された、国際公開第ＷＯ２０１０／１２９６０９号を参照されたい。本明細書において記載されているものなど、広域スペクトルのプロテアーゼ阻害剤を使用し、かつ／又はより選択的な阻害性薬剤を使用することによる、同じ手法は、活性化可能抗体のＣＭに特異的なプロテアーゼを同定するのに使用され得る。一部の実施形態において、標的の存在は、標的に特異的な薬剤を使用して確認される場合がある、例えば、別の抗体又は検出可能な標識は、非標識の標的と競合され得る。一部の実施形態において、非標識の活性化可能抗体は、標識された二次抗体又はより複雑な検出システムによる検出と共に使用され得る。
【０３５１】
同様の技法もまた、対象、例えば、ヒトを含む哺乳動物における蛍光のシグナルの検出が、疾患部位が標的を含有し、活性化可能抗体のＣＭに特異的なプロテアーゼを含有する、インビボイメージングに有用である。
【０３５２】
これらの技法はまた、活性化可能抗体内の、プロテアーゼ特異的ＣＭに基づく、様々な細胞、組織及び生物における、プロテアーゼ活性の、検出、同定又は特徴付けのためのキットにおいて、かつ／又は試薬としても有用である。
【０３５３】
本開示は、様々な診断適応及び／又は予防適応において、抗体及び／又は活性化可能抗体を使用する方法を提示する。例えば、本開示は、（ｉ）対象又は試料を、活性化可能抗体と接触させることであって、活性化可能抗体が、マスキング部分（ＭＭ）、切断剤、例えば、プロテアーゼにより切断される切断可能部分（ＣＭ）及び目的の標的に特異的に結合する抗原結合性ドメイン又はこの断片（ＡＢ）を含み、ここで、活性化可能抗体が、切断されていない非活性化状態において、Ｎ末端からＣ末端へと、ＭＭ−ＣＭ−ＡＢ又はＡＢ−ＣＭ−ＭＭ［式中、（ａ）ＭＭは、ＡＢの、標的への結合を阻害するペプチドであり、ここで、ＭＭは、ＡＢの、天然に存在する結合パートナーのアミノ酸配列を有さず、ＡＢの、天然の結合パートナーの修飾形態ではなく；かつ（ｂ）切断されていない非活性化状態において、ＭＭは、ＡＢの、標的への特異的結合に干渉するが、切断された活性化状態において、ＭＭは、ＡＢの、標的への特異的結合に干渉しない又はこれと競合しない。］の構造的配置を含む、接触させること；及び（ｉｉ）対象又は試料における、活性化した活性化可能抗体のレベルを測定することであって、対象又は試料における、活性化した活性化可能抗体の、検出可能なレベルが、切断剤及び標的が対象又は試料において存在することを指し示し、対象又は試料における、活性化した活性化可能抗体の検出可能なレベルが見られないことが、切断剤、標的又は切断剤及び標的の両方が対象又は試料において存在していない、かつ／又は十分に存在していないことを指し示す、測定することにより、対象又は試料における、切断剤及び目的の標的の存在又は非存在を検出する方法を提示する。一部の実施形態において、活性化可能抗体は、治療剤がコンジュゲートされた活性化可能抗体である。一部の実施形態において、活性化可能抗体は、薬剤へとコンジュゲートされていない。一部の実施形態において、活性化可能抗体は、検出可能な標識を含む。一部の実施形態において、検出可能な標識は、ＡＢ上に配置される。一部の実施形態において、対象又は試料における、活性化可能抗体のレベルを測定することは、活性化された抗体に特異的に結合する二次試薬を使用して達せられ、ここで、試薬は、検出可能な標識を含む。一部の実施形態において、二次試薬は、検出可能な標識を含む抗体である。
【０３５４】
本開示はまた、（ｉ）対象又は試料を、目的の標的、例えば、その標的の存在下において、活性化可能抗体と接触させることであって、活性化可能抗体が、マスキング部分（ＭＭ）、切断剤、例えば、プロテアーゼにより切断される切断可能部分（ＣＭ）及び目的の標的に特異的に結合する抗原結合性ドメイン又はこの断片（ＡＢ）を含み、ここで、活性化可能抗体が、切断されていない非活性化状態において、Ｎ末端からＣ末端へと、ＭＭ−ＣＭ−ＡＢ又はＡＢ−ＣＭ−ＭＭ［式中、（ａ）ＭＭは、ＡＢの、標的への結合を阻害するペプチドであり、ここで、ＭＭは、ＡＢの、天然に存在する結合パートナーのアミノ酸配列を有さず、ＡＢの、天然の結合パートナーの修飾形態ではなく；かつ（ｂ）切断されていない非活性化状態において、ＭＭは、ＡＢの、標的への特異的結合に干渉するが、切断された活性化状態において、ＭＭは、ＡＢの、標的への特異的結合に干渉しない又はこれと競合しない。］の構造的配置を含む、接触させること；及び（ｉｉ）対象又は試料における、活性化した活性化可能抗体のレベルを測定することであって、対象又は試料における、活性化した活性化可能抗体の検出可能なレベルが、切断剤が対象又は試料において存在することを指し示し、対象又は試料における、活性化した活性化可能抗体の検出可能なレベルが見られないことが、切断剤が対象又は試料において存在していない、かつ／又は十分に存在していないことを指し示す、測定することにより、対象又は試料における、切断剤の存在又は非存在を検出する方法も提示する。一部の実施形態において、活性化可能抗体は、治療剤がコンジュゲートされた活性化可能抗体である。一部の実施形態において、活性化可能抗体は、薬剤へとコンジュゲートされていない。一部の実施形態において、活性化可能抗体は、検出可能な標識を含む。一部の実施形態において、検出可能な標識は、ＡＢ上に配置される。一部の実施形態において、対象又は試料における、活性化可能抗体のレベルを測定することは、活性化された抗体に特異的に結合する二次試薬を使用して達せられ、ここで、試薬は、検出可能な標識を含む。一部の実施形態において、二次試薬は、検出可能な標識を含む抗体である。
【０３５５】
本開示はまた、対象又は試料における、切断剤及び標的の存在又は非存在を検出する方法における使用のためのキットであって、マスキング部分（ＭＭ）、切断剤、例えば、プロテアーゼにより切断される切断可能部分（ＣＭ）及び目的の標的に特異的に結合する抗原結合性ドメイン又はこの断片（ＡＢ）を含む活性化可能抗体であって、ここで、活性化可能抗体は、切断されていない非活性化状態において、Ｎ末端からＣ末端へと、ＭＭ−ＣＭ−ＡＢ又はＡＢ−ＣＭ−ＭＭ［式中、（ａ）ＭＭは、ＡＢの、標的への結合を阻害するペプチドであり、ここで、ＭＭは、ＡＢの、天然に存在する結合パートナーのアミノ酸配列を有さず、ＡＢの、天然の結合パートナーの修飾形態ではなく；かつ（ｂ）切断されていない非活性化状態において、ＭＭは、ＡＢの、標的への特異的結合に干渉するが、切断された活性化状態において、ＭＭは、ＡＢの、標的への特異的結合に干渉しない又はこれと競合しない。］の構造的配置を含む活性化可能抗体を少なくとも含むキット；及び（ｉｉ）対象又は試料における、活性化した活性化可能抗体のレベルを測定することであって、対象又は試料における、活性化した活性化可能抗体の検出可能なレベルが、切断剤が対象又は試料において存在することを指し示し、対象又は試料における、活性化した活性化可能抗体の検出可能なレベルが見られないことが、切断剤が対象又は試料において存在していない、かつ／又は十分に存在していないことを指し示す、測定することも提示する。一部の実施形態において、活性化可能抗体は、治療剤がコンジュゲートされた活性化可能抗体である。一部の実施形態において、活性化可能抗体は、薬剤へとコンジュゲートされていない。一部の実施形態において、活性化可能抗体は、検出可能な標識を含む。一部の実施形態において、検出可能な標識は、ＡＢ上に配置される。一部の実施形態において、対象又は試料における、活性化可能抗体のレベルを測定することは、活性化された抗体に特異的に結合する二次試薬を使用して達せられ、ここで、試薬は、検出可能な標識を含む。一部の実施形態において、二次試薬は、検出可能な標識を含む抗体である。
【０３５６】
本開示はまた、（ｉ）対象又は試料を、活性化可能抗体と接触させることであって、活性化可能抗体が、マスキング部分（ＭＭ）、切断剤、例えば、プロテアーゼにより切断される切断可能部分（ＣＭ）、標的に特異的に結合する抗原結合性ドメイン（ＡＢ）及び検出可能な標識を含み、ここで、活性化可能抗体が、切断されていない非活性化状態において、Ｎ末端からＣ末端へと、ＭＭ−ＣＭ−ＡＢ又はＡＢ−ＣＭ−ＭＭ［式中、ＭＭは、ＡＢの、標的への結合を阻害するペプチドであり、ここで、ＭＭは、ＡＢの、天然に存在する結合パートナーのアミノ酸配列を有さず、ＡＢの、天然の結合パートナーの修飾形態ではなく；切断されていない非活性化状態において、ＭＭは、ＡＢの、標的への特異的結合に干渉するが、切断された活性化状態において、ＭＭは、ＡＢの、標的への特異的結合に干渉しない又はこれと競合せず；ＣＭの切断後において放出される検出可能な標識が、活性化可能抗体の部分に配置されている。］の構造的配置を含む、接触させること；及び（ｉｉ）対象又は試料における、検出可能な標識のレベルを測定することであって、対象又は試料における、検出可能な標識の検出可能なレベルが、切断剤が対象又は試料において存在していない、かつ／又は十分に存在していないことを指し示し、対象又は試料における、検出可能な標識の検出可能なレベルが見られないことが、切断剤が対象又は試料において存在することを指し示す、測定することにより、対象又は試料における、切断剤の存在又は非存在を検出する方法も提示する。一部の実施形態において、活性化可能抗体は、治療剤がコンジュゲートされた活性化可能抗体である。一部の実施形態において、活性化可能抗体は、薬剤へとコンジュゲートされていない。一部の実施形態において、活性化可能抗体は、検出可能な標識を含む。一部の実施形態において、検出可能な標識は、ＡＢ上に配置される。一部の実施形態において、対象又は試料における、活性化可能抗体のレベルを測定することは、活性化された抗体に特異的に結合する二次試薬を使用して達せられ、ここで、試薬は、検出可能な標識を含む。一部の実施形態において、二次試薬は、検出可能な標識を含む抗体である。
【０３５７】
本開示はまた、対象又は試料における、切断剤及び標的の存在又は非存在を検出する方法における使用のためのキットであって、対象又は生物学的試料を接触させることにおける使用のための、少なくとも、本明細書において記載されている活性化可能抗体及び／又は活性化可能コンジュゲート抗体（例えば、治療剤がコンジュゲートされた活性化可能抗体）並びに活性化した活性化可能抗体及び／又は活性化可能コンジュゲート抗体の、対象又は生物学的試料におけるレベルを検出するための手段を含み、対象又は生物学的試料における、活性化した活性化可能抗体の検出可能なレベルが、切断剤及び標的が対象又は生物学的試料において存在することを指し示し、対象又は試料における、活性化した活性化可能抗体の検出可能なレベルが見られないことが、切断剤、標的又は切断剤及び標的の両方が、対象又は生物学的試料において存在していない、かつ／又は十分に存在しておらず、その結果、活性化可能抗体の、標的への結合及び／又はプロテアーゼによる切断が対象又は生物学的試料において検出され得ないことを指し示す、キットも提示する。
【０３５８】
本開示はまた、（ｉ）対象又は生物学的試料を、標的の存在下において、活性化可能抗体と接触させること；及び（ｉｉ）対象又は生物学的試料における、活性化した活性化可能抗体のレベルを測定することであって、対象又は生物学的試料における、活性化した活性化可能抗体の検出可能なレベルが、切断剤が対象又は生物学的試料において存在することを指し示し、対象又は生物学的試料における、活性化した活性化可能抗体の検出可能なレベルが見られないことが、切断剤が、対象又は生物学的試料の検出可能なレベルで存在していない、かつ／又は十分に存在しておらず、その結果、活性化可能抗体のプロテアーゼによる切断が対象又は生物学的試料において検出され得ないことを指し示す、測定することにより、対象又は試料における、切断剤の存在又は非存在を検出する方法も提示する。このような活性化可能抗体は、マスキング部分（ＭＭ）、切断剤、例えば、プロテアーゼにより切断される切断可能部分（ＣＭ）及び標的に特異的に結合する抗原結合性ドメイン又はこの断片（ＡＢ）を含み、ここで、非切断（すなわち、非活性化）状態にある活性化可能抗体は、Ｎ末端からＣ末端へと、ＭＭ−ＣＭ−ＡＢ又はＡＢ−ＣＭ−ＭＭ［式中、（ａ）ＭＭは、ＡＢの、標的への結合を阻害するペプチドであり、ここで、ＭＭは、ＡＢの、天然に存在する結合パートナーのアミノ酸配列を有さず；かつ（ｂ）非切断状態にある活性化可能抗体のＭＭは、ＡＢの、標的への特異的結合に干渉するが、切断された（すなわち、活性化された）状態にある活性化可能抗体のＭＭは、ＡＢの、標的への特異的結合に干渉しない又はこれと競合しない。］の構造的配置を含む。一部の実施形態において、活性化可能抗体は、治療剤がコンジュゲートされた活性化可能抗体である。一部の実施形態において、活性化可能抗体は、薬剤へとコンジュゲートされていない。一部の実施形態において、検出可能な標識は、マスキング部分へと接合されている。一部の実施形態において、検出可能な標識は、プロテアーゼ切断部位に対してＮ末端側の切断可能部分へと接合されている。一部の実施形態において、ＡＢの単一の抗原結合性部位がマスキングされている。本開示の抗体が少なくとも２つの抗原結合性部位を有する、一部の実施形態において、少なくとも１つの抗原結合性部位が、マスキングされ、少なくとも１つの抗原結合性部位が、マスキングされていない。一部の実施形態において、全ての抗原結合性部位がマスキングされている。一部の実施形態において、測定することは、検出可能な標識を含む二次試薬の使用を含む。
【０３５９】
本開示はまた、対象又は試料における、切断剤及び標的の存在又は非存在を検出する方法における使用のためのキットであって、対象又は生物学的試料を、標的の存在下において、活性化可能抗体と接触させることにおける使用のための、少なくとも、本明細書において記載されている活性化可能抗体及び／又は活性化可能コンジュゲート抗体並びに対象又は生物学的試料における、活性化した活性化可能抗体のレベルを測定することであって、対象又は生物学的試料における、活性化した活性化可能抗体の検出可能なレベルが、切断剤が対象又は生物学的試料において存在することを指し示し、対象又は生物学的試料における、活性化した活性化可能抗体の検出可能なレベルが見られないことが、切断剤が、対象又は生物学的試料の検出可能なレベルにおいて存在していない、かつ／又は十分に存在しておらず、その結果、活性化可能抗体のプロテアーゼによる切断が対象又は生物学的試料において検出され得ないことを指し示す、測定することを含むキットも提示する。このような活性化可能抗体は、マスキング部分（ＭＭ）、切断剤、例えば、プロテアーゼにより切断される切断可能部分（ＣＭ）及び標的に特異的に結合する抗原結合性ドメイン又はこの断片（ＡＢ）を含み、ここで、非切断（すなわち、非活性化）状態にある活性化可能抗体は、Ｎ末端からＣ末端へと、ＭＭ−ＣＭ−ＡＢ又はＡＢ−ＣＭ−ＭＭ［式中、（ａ）ＭＭは、ＡＢの、標的への結合を阻害するペプチドであり、ここで、ＭＭは、ＡＢの、天然に存在する結合パートナーのアミノ酸配列を有さず；かつ（ｂ）非切断状態にある活性化可能抗体のＭＭは、ＡＢの、標的への特異的結合に干渉するが、切断された（すなわち、活性化された）状態にある活性化可能抗体のＭＭは、ＡＢの、標的への特異的結合に干渉しない又はこれと競合しない。］の構造的配置を含む。一部の実施形態において、活性化可能抗体は、治療剤がコンジュゲートされた活性化可能抗体である。一部の実施形態において、活性化可能抗体は、薬剤へとコンジュゲートされていない。一部の実施形態において、検出可能な標識は、マスキング部分へと接合されている。一部の実施形態において、検出可能な標識は、プロテアーゼ切断部位に対してＮ末端側の切断可能部分へと接合されている。一部の実施形態において、ＡＢの単一の抗原結合性部位がマスキングされている。本開示の抗体が少なくとも２つの抗原結合性部位を有する、一部の実施形態において、少なくとも１つの抗原結合性部位が、マスキングされ、少なくとも１つの抗原結合性部位が、マスキングされていない。一部の実施形態において、全ての抗原結合性部位がマスキングされている。一部の実施形態において、測定することは、検出可能な標識を含む二次試薬の使用を含む。
【０３６０】
本開示はまた、対象又は試料における、切断剤の存在又は非存在を検出する方法における使用のためのキットであって、対象又は生物学的試料を接触させることにおける使用のための、少なくとも、本明細書において記載されている活性化可能抗体及び／又は活性化可能コンジュゲート抗体並びに活性化した活性化可能抗体及び／又は活性化可能コンジュゲート抗体の、対象又は生物学的試料におけるレベルを検出するための手段を含み、活性化可能抗体が、活性化可能抗体の部分に配置された検出可能な標識であり、ＣＭの切断後において放出される標識を含み、ここで、対象又は生物学的試料における、活性化した活性化可能抗体の検出可能なレベルが、切断剤が、対象又は生物学的試料において存在していない、かつ／又は十分に存在しておらず、その結果、活性化可能抗体の標的への結合及び／又はプロテアーゼによる切断が対象又は生物学的試料において検出され得ないことを指し示し、対象又は生物学的試料における、活性化した活性化可能抗体の検出可能なレベルが見られないことが、切断剤が対象又は生物学的試料の検出可能なレベルにおいて存在することを指し示す、キットも提示する。
【０３６１】
本開示は、（ｉ）対象又は生物学的試料を、活性化可能抗体と接触させることであって、活性化可能抗体が、活性化可能抗体の部分に配置された検出可能な標識であり、ＣＭの切断後において放出される標識を含む、接触させること；及び（ｉｉ）対象又は生物学的試料における、活性化した活性化可能抗体のレベルを測定することであって、対象又は生物学的試料における、活性化した活性化可能抗体の検出可能なレベルが、切断剤、標的又は切断剤及び標的の両方が、対象又は生物学的試料において存在していない、かつ／又は十分に存在しておらず、その結果、活性化可能抗体の標的への結合及び／又はプロテアーゼによる切断が対象又は生物学的試料において検出され得ないことを指し示し、対象又は生物学的試料における、活性化した活性化可能抗体の検出可能なレベルの低減が、切断剤及び標的が対象又は生物学的試料において存在することを指し示す、測定することにより、対象又は試料における、切断剤及び標的の存在又は非存在を検出する方法を提示する。検出可能な標識のレベルの低減は、例えば、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％及び／又は約１００％の低減である。このような活性化可能抗体は、マスキング部分（ＭＭ）、切断剤により切断される切断可能部分（ＣＭ）及び標的に特異的に結合する抗原結合性ドメイン又はこの断片（ＡＢ）を含み、ここで、非切断（すなわち、非活性化）状態にある活性化可能抗体は、Ｎ末端からＣ末端へと、ＭＭ−ＣＭ−ＡＢ又はＡＢ−ＣＭ−ＭＭ［式中、（ａ）ＭＭは、ＡＢの、標的への結合を阻害するペプチドであり、ここで、ＭＭは、ＡＢの、天然に存在する結合パートナーのアミノ酸配列を有さず；かつ（ｂ）非切断状態にある活性化可能抗体のＭＭは、ＡＢの、標的への特異的結合に干渉するが、切断された（すなわち、活性化された）状態にある活性化可能抗体のＭＭは、ＡＢの、標的への特異的結合に干渉しない又はこれと競合しない。］の構造的配置を含む。一部の実施形態において、活性化可能抗体は、治療剤がコンジュゲートされた活性化可能抗体である。一部の実施形態において、活性化可能抗体は、薬剤へとコンジュゲートされていない。一部の実施形態において、活性化可能抗体は、検出可能な標識を含む。一部の実施形態において、検出可能な標識は、ＡＢ上に配置される。一部の実施形態において、対象又は試料における、活性化可能抗体のレベルを測定することは、活性化された抗体に特異的に結合する二次試薬を使用して達せられ、ここで、試薬は、検出可能な標識を含む。一部の実施形態において、二次試薬は、検出可能な標識を含む抗体である。
【０３６２】
本開示はまた、対象又は試料における、切断剤及び標的の存在又は非存在を検出する方法における使用のためのキットであって、対象又は生物学的試料を接触させることにおける使用のための、少なくとも、本明細書において記載されている活性化可能抗体及び／又は活性化可能コンジュゲート抗体並びに活性化した活性化可能抗体及び／又は活性化可能コンジュゲート抗体の、対象又は生物学的試料におけるレベルを検出するための手段を含み、対象又は生物学的試料における、活性化した活性化可能抗体の検出可能なレベルが、切断剤、標的又は切断剤及び標的の両方が、対象又は生物学的試料において存在していない、かつ／又は十分に存在しておらず、その結果、活性化可能抗体の標的への結合及び／又はプロテアーゼによる切断が対象又は生物学的試料において検出され得ないことを指し示し、対象又は生物学的試料における、活性化した活性化可能抗体の検出可能なレベルの低減が、切断剤及び標的が対象又は生物学的試料において存在することを指し示す、キットも提示する。検出可能な標識のレベルの低減は、例えば、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％及び／又は約１００％の低減である。
【０３６３】
本開示はまた、（ｉ）対象又は生物学的試料を、活性化可能抗体と接触させることであって、活性化可能抗体が、活性化可能抗体の部分に配置された検出可能な標識であり、ＣＭの切断後において放出される標識を含む、接触させること；及び（ｉｉ）対象又は生物学的試料における、検出可能な標識のレベルを測定することであって、対象又は生物学的試料における、検出可能な標識の検出可能なレベルが、切断剤が、対象又は生物学的試料の検出可能なレベルにおいて、存在していない、かつ／又は十分に存在しておらず、その結果、活性化可能抗体のプロテアーゼによる切断が対象又は生物学的試料において検出され得ないことを指し示し、対象又は生物学的試料における、検出可能な標識の検出可能なレベルの低減が、切断剤が対象又は生物学的試料において存在することを指し示す測定することにより、対象又は試料における、切断剤の存在又は非存在を検出する方法も提示する。検出可能な標識のレベルの低減は、例えば、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％及び／又は約１００％の低減である。このような活性化可能抗体は、マスキング部分（ＭＭ）、切断剤により切断される切断可能部分（ＣＭ）及び標的に特異的に結合する抗原結合性ドメイン又はこの断片（ＡＢ）を含み、ここで、非切断（すなわち、非活性化）状態にある活性化可能抗体は、Ｎ末端からＣ末端へと、ＭＭ−ＣＭ−ＡＢ又はＡＢ−ＣＭ−ＭＭ［式中、（ａ）ＭＭは、ＡＢの、標的への結合を阻害するペプチドであり、ここで、ＭＭは、ＡＢの、天然に存在する結合パートナーのアミノ酸配列を有さず；かつ（ｂ）非切断状態にある活性化可能抗体のＭＭは、ＡＢの、標的への特異的結合に干渉するが、切断された（すなわち、活性化された）状態にある活性化可能抗体のＭＭは、ＡＢの、標的への特異的結合に干渉しない又はこれと競合しない。］の構造的配置を含む。一部の実施形態において、活性化可能抗体は、治療剤がコンジュゲートされた活性化可能抗体である。一部の実施形態において、活性化可能抗体は、薬剤へとコンジュゲートされていない。一部の実施形態において、活性化可能抗体は、検出可能な標識を含む。一部の実施形態において、検出可能な標識は、ＡＢ上に配置される。一部の実施形態において、対象又は試料における、活性化可能抗体のレベルを測定することは、活性化された抗体に特異的に結合する二次試薬を使用して達せられ、ここで、試薬は、検出可能な標識を含む。一部の実施形態において、二次試薬は、検出可能な標識を含む抗体である。
【０３６４】
本開示はまた、対象又は試料における、目的の切断剤の存在又は非存在を検出する方法における使用のためのキットであって、対象又は生物学的試料を接触させることにおける使用のための、少なくとも、本明細書において記載されている活性化可能抗体及び／又は活性化可能コンジュゲート抗体並びに活性化した活性化可能抗体及び／又は活性化可能コンジュゲート抗体の、対象又は生物学的試料におけるレベルを検出するための手段を含み、活性化可能抗体が、活性化可能抗体の部分に配置された検出可能な標識であり、ＣＭの切断後において放出される標識を含み、ここで、対象又は生物学的試料における、検出可能な標識の検出可能なレベルが、切断剤、標的又は切断剤及び標的の両方が、対象又は生物学的試料において存在していない、かつ／又は十分に存在しておらず、その結果、活性化可能抗体の標的への結合及び／又はプロテアーゼによる切断が対象又は生物学的試料において検出され得ないことを指し示し、対象又は生物学的試料における、検出可能な標識の検出可能なレベルの低減が、切断剤及び標的が対象又は生物学的試料において存在することを指し示す、キットも提示する。検出可能な標識のレベルの低減は、例えば、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％及び／又は約１００％の低減である。
【０３６５】
これらの方法及びキットについての、一部の実施形態において、活性化可能抗体は、検出可能な標識を含む。これらの方法及びキットについての、一部の実施形態において、検出可能な標識は、イメージング剤、造影剤、酵素、蛍光標識、発色団、色素、１つ以上の金属イオン又はリガンドベースの標識を含む。これらの方法及びキットについての、一部の実施形態において、イメージング剤は、放射性同位元素を含む。これらの方法及びキットについての、一部の実施形態において、放射性同位元素は、インジウム又はテクネシウムである。これらの方法及びキットについての、一部の実施形態において、造影剤は、ヨウ素、ガドリニウム又は酸化鉄を含む。これらの方法及びキットについての、一部の実施形態において、酵素は、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ又はβ−ガラクトシダーゼを含む。これらの方法及びキットについての、一部の実施形態において、蛍光標識は、黄色蛍光タンパク質（ＹＦＰ）、シアン蛍光タンパク質（ＣＦＰ）、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、改変赤色蛍光タンパク質（ｍＲＦＰ）、赤色蛍光タンパク質であるｔｄｉｍｅｒ２（ＲＦＰ  ｔｄｉｍｅｒ２）、ＨＣＲＥＤ又はユーロピウム誘導体を含む。これらの方法及びキットについての、一部の実施形態において、発光標識は、Ｎ−メチルアクリジウム誘導体を含む。これらの方法についての、一部の実施形態において、標識は、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６８０又はＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）７５０などのＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）標識を含む。これらの方法及びキットについての、一部の実施形態において、リガンドベースの標識は、ビオチン、アビジン、ストレプトアビジン又は１つ以上のハプテンを含む。
【０３６６】
これらの方法及びキットについての、一部の実施形態において、対象は、哺乳動物である。これらの方法及びキットについての、一部の実施形態において、対象は、ヒトである。一部の実施形態において、対象は、非ヒト霊長動物、愛玩動物（例えば、ネコ、イヌ、ウマ）、農場動物、作業動物又は動物園動物などの非ヒト哺乳動物である。一部の実施形態において、対象は、齧歯動物である。
【０３６７】
これらの方法についての、一部の実施形態において、方法は、インビボ法である。これらの方法についての、一部の実施形態において、方法は、インサイチュー法である。これらの方法についての、一部の実施形態において、方法は、エクスビボ法である。これらの方法についての、一部の実施形態において、方法は、インビトロ法である。
【０３６８】
一部の実施形態において、インサイチューイメージング及び／又はインビボイメージングは、処置すべき患者を同定する方法において、有用である。例えば、インサイチューイメージングにおいて、活性化可能抗体は、患者試料をスクリーニングして、適切な場所、例えば、腫瘍部位において、適切なプロテアーゼ（複数可）及び標的（複数可）を有する患者を同定するのに使用される。
【０３６９】
一部の実施形態において、インサイチューイメージングは、本開示の活性化可能抗体による処置に適する患者集団を同定する又は他の形において精緻化するのに使用される。例えば、検査により、標的（例えば、標的）及び被験活性化可能抗体の切断可能部分（ＣＭ）内の基質を切断するプロテアーゼの両方について陽性である（例えば、活性化された抗体を、疾患部位において蓄積させる）患者は、このようなＣＭを含む、このような活性化可能抗体による処置に適する候補者として同定される。同様に、これらの方法を使用して、検査により、標的（例えば、標的）及び被験活性化可能抗体のＣＭ内の基質を切断するプロテアーゼの一方又は両方について陰性である患者は、別の治療形態に適する候補者として同定され得る。一部の実施形態において、検査により、第１の活性化可能抗体に関して陰性である、このような患者は、処置に適する活性化可能抗体（例えば、疾患部位において、患者により切断されるＣＭを含む活性化可能抗体）が同定されるまで、異なるＣＭを含む、他の活性化可能抗体により検査され得る。一部の実施形態において、次いで、患者は、検査において、患者が陽性であった治療有効量の活性化可能抗体を投与される。
【０３７０】
一部の実施形態において、インビボイメージングは、本開示の活性化可能抗体による処置に適する患者集団を同定する又は他の形において精緻化するのに使用される。例えば、検査により、標的（例えば、標的）及び被験活性化可能抗体の切断可能部分（ＣＭ）内の基質を切断するプロテアーゼの両方について陽性である（例えば、活性化された抗体を、疾患部位において蓄積させる）患者は、このようなＣＭを含む、このような活性化可能抗体による処置に適する候補者として同定される。同様に、検査により陰性である患者は、別の治療形態に適する候補者として同定され得る。一部の実施形態において、検査により、第１の活性化可能抗体に関して陰性である、このような患者は、処置に適する活性化可能抗体（例えば、疾患部位において、患者により切断されるＣＭを含む活性化可能抗体）が同定されるまで、異なるＣＭを含む、他の活性化可能抗体により検査され得る。一部の実施形態において、次いで、患者は、検査において、患者が陽性であった治療有効量の活性化可能抗体を投与される。
【０３７１】
方法及びキットについての、一部の実施形態において、方法又はキットは、本開示の活性化可能抗体による処置に適する患者集団を同定する又は他の形において精緻化するのに使用される。例えば、これらの方法において、検査により、標的（例えば、標的）及び被験活性化可能抗体の切断可能部分（ＣＭ）内の基質を切断するプロテアーゼの両方について陽性である患者は、このようなＣＭを含む、このような活性化可能抗体による処置に適する候補者として同定される。同様に、これらの方法を使用して、検査により、標的（例えば、標的）及び被験活性化可能抗体のＣＭ内の基質を切断するプロテアーゼの両方について陰性である患者は、別の治療形態に適する候補者として同定され得る。一部の実施形態において、このような患者は、処置に適する活性化可能抗体（例えば、疾患部位において、患者により切断されるＣＭを含む活性化可能抗体）が同定されるまで、他の活性化可能抗体により検査され得る。一部の実施形態において、検査により、標的（例えば、標的）の一方について陰性である患者は、このようなＣＭを含む、このような活性化可能抗体による処置に適する候補者として同定される。一部の実施形態において、検査により、標的（例えば、標的）の一方について陰性である患者は、このようなＣＭを含む、このような活性化可能抗体による処置に適さない候補者として同定される。一部の実施形態において、このような患者は、処置に適する活性化可能抗体（例えば、疾患部位において、患者により切断されるＣＭを含む活性化可能抗体）が同定されるまで、他の活性化可能抗体により検査され得る。一部の実施形態において、活性化可能抗体は、治療剤がコンジュゲートされた活性化可能抗体である。一部の実施形態において、活性化可能抗体は、薬剤へとコンジュゲートされていない。一部の実施形態において、活性化可能抗体は、検出可能な標識を含む。一部の実施形態において、検出可能な標識は、ＡＢ上に配置される。一部の実施形態において、対象又は試料における、活性化可能抗体のレベルを測定することは、活性化された抗体に特異的に結合する二次試薬を使用して達せられ、ここで、試薬は、検出可能な標識を含む。一部の実施形態において、二次試薬は、検出可能な標識を含む抗体である。
【０３７２】
一部の実施形態において、方法又はキットは、本開示の活性化可能抗標的抗体及び／又は活性化可能抗標的コンジュゲート抗体（例えば、治療剤がコンジュゲートされた活性化可能抗体）による処置に続く、この活性化可能抗体及び／又は活性化可能コンジュゲート抗体を、これを必要とする対象へと投与することによる処置に適する患者集団を同定する又は他の形において精緻化するのに使用される。例えば、これらの方法において、検査により、標的（例えば、標的）及び被験活性化可能抗体及び／又は被験活性化可能コンジュゲート抗体の切断可能部分（ＣＭ）内の基質を切断するプロテアーゼの両方について陽性である患者は、このような抗体及び／又はこのようなＣＭを含むこのような活性化可能コンジュゲート抗体による処置に適する候補者として同定され、次いで、患者は、治療有効量の、被験活性化可能抗体及び／又は被験活性化可能コンジュゲート抗体を投与される。同様に、これらの方法を使用して、検査により、標的（例えば、標的）及び被験活性化可能抗体のＣＭ内の基質を切断するプロテアーゼの一方又は両方について陰性である患者は、別の治療形態に適する候補者として同定され得る。一部の実施形態において、このような患者は、処置に適する抗体及び／又は活性化可能コンジュゲート抗体（例えば、疾患部位において、患者により切断されるＣＭを含む活性化可能抗体及び／又は活性化可能コンジュゲート抗体）が同定されるまで、他の抗体及び／又は活性化可能コンジュゲート抗体により検査され得る。一部の実施形態において、次いで、患者は、治療有効量の、検査において、患者が陽性であった活性化可能抗体及び／又は活性化可能コンジュゲート抗体を投与される。
【０３７３】
これらの方法及びキットについての、一部の実施形態において、ＭＭは、約４〜４０アミノ酸の長さを有するペプチドである。これらの方法及びキットについての、一部の実施形態において、活性化可能抗体は、リンカーペプチドを含み、ここで、リンカーペプチドは、ＭＭとＣＭとの間に配置される。これらの方法及びキットについての、一部の実施形態において、活性化可能抗体は、リンカーペプチドを含み、ここで、リンカーペプチドは、ＡＢとＣＭとの間に配置される。これらの方法及びキットについての、一部の実施形態において、活性化可能抗体は、第１のリンカーペプチド（ＬＰ１）及び第２のリンカーペプチド（ＬＰ２）を含み、ここで、第１のリンカーペプチドは、ＭＭとＣＭとの間に配置され、第２のリンカーペプチドは、ＡＢとＣＭとの間に配置される。これらの方法及びキットについての、一部の実施形態において、ＬＰ１及びＬＰ２の各々は、約１〜２０アミノ酸の長さのペプチドであり、ここで、ＬＰ１及びＬＰ２の各々は、同じリンカーである必要がない。これらの方法及びキットについての、一部の実施形態において、ＬＰ１及びＬＰ２の一方又は両方は、グリシン−セリンポリマーを含む。これらの方法及びキットについての、一部の実施形態において、ＬＰ１及びＬＰ２のうちの少なくとも１つは、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ（配列番号２４）及び（ＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２５）［配列中、ｎは、少なくとも１の整数である。］からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。これらの方法及びキットについての、一部の実施形態において、ＬＰ１及びＬＰ２のうちの少なくとも１つは、式（ＧＧＳ）ｎ［配列中、ｎは、少なくとも１の整数である。］を有するアミノ酸配列を含む。これらの方法及びキットについての、一部の実施形態において、ＬＰ１及びＬＰ２のうちの少なくとも１つは、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ（配列番号２６）、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ（配列番号２７）、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ（配列番号２８）、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ（配列番号２９）、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ（配列番号３０）及びＧｌｙ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ（配列番号３１）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０３７４】
これらの方法及びキットについての、一部の実施形態において、ＡＢは、本明細書において提示されている交差反応性の抗体配列から選択される抗体配列又は抗体断片配列を含む。これらの方法及びキットについての、一部の実施形態において、ＡＢは、Ｆａｂ断片、ｓｃＦｖ又は単鎖抗体（ｓｃＡｂ）を含む。
【０３７５】
これらの方法及びキットについての、一部の実施形態において、切断剤は、対象又は試料において、標的と共に共局在化するプロテアーゼであり、ＣＭは、プロテアーゼに対する基質として機能するポリペプチドであり、ここで、プロテアーゼは、活性化可能抗体がプロテアーゼへと曝露されると、活性化可能抗体内のＣＭを切断する。これらの方法及びキットについての、一部の実施形態において、ＣＭは、最長において、１５アミノ酸の長さのポリペプチドである。これらの方法及びキットについての、一部の実施形態において、ＣＭは、ＡＢのＮ末端へとカップリングされている。これらの方法及びキットについての、一部の実施形態において、ＣＭは、ＡＢのＣ末端へとカップリングされている。これらの方法及びキットについての、一部の実施形態において、ＣＭは、ＡＢのＶＬ鎖のＮ末端へとカップリングされている。
【０３７６】
本発明の抗体ポリペプチド鎖のＮ末端及びＣ末端は、一般に観察された翻訳後修飾に起因して、本明細書において記載されている配列と異なり得る。例えば、Ｃ末端のリシン残基は、抗体重鎖から逸失していることが多い。Ｄｉｃｋら（２００８年）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．、１００：１１３２頁。Ｎ末端のグルタミン残基及び、これより低度において、グルタメート残基は、しばしば、治療用抗体の軽鎖上及び重鎖上の両方における、ピログルタメート残基へと転換される。Ｄｉｃｋら（２００７年）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．、９７：５４４頁；Ｌｉｕら（２０１１年）ＪＢＣ、２８６１１２１１；Ｌｉｕら（２０１１年）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２８６：１１２１１。したがって、式（Ｉ）及び／又は式（ＩＩ）の活性化可能コンジュゲート抗体は、重鎖定常領域のＣ末端残基が末端において、１つ以上のアミノ酸を欠く、Ｃ末端のリシンを欠く、翻訳後プロセシングに起因してＣ末端のリシンが除去される又はＣ末端のリシンがリシン以外のアミノ酸である、抗体（ＡＢ）を有し得る。重鎖定常領域のＣ末端残基がリシン以外のアミノ酸である場合、一実施形態において、それは、一般に、ジスルフィド結合を形成するのに適さない又は他の形において、細胞傷害剤とのコンジュゲーションに適さないアミノ酸である。
【０３７７】
ある特定の実施形態において、式（Ｉ）及び／又は式（ＩＩ）の活性化可能コンジュゲート抗体は、重鎖上及び／又は軽鎖上のＮ末端グルタメートが、任意選択的に、ピログルタメートである又はピログルタメートへと翻訳後修飾されている抗体（ＡＢ）を有し得る。
【０３７８】
ある特定の実施形態において、式（Ｉ）及び／又は式（ＩＩ）の活性化可能コンジュゲート抗体の重鎖定常領域は、Ｃ末端において、リシン又は別のアミノ酸を含む、例えば、重鎖定常領域は、以下の最後のアミノ酸：重鎖のためのＰＧＫを含む。ある特定の実施形態において、重鎖定常領域は、Ｃ末端において、１つ以上のアミノ酸を欠いており、例えば、Ｃ末端の配列である、ＰＧ又はＰを有する。
【０３７９】
ある特定の実施形態において、式（Ｉ）及び／又は式（ＩＩ）の活性化可能コンジュゲート抗体の重鎖可変領域及び／又は軽鎖可変領域は、Ｎ末端において、アミノ酸である、グルタメート又はピログルタメートを含む、例えば、重鎖可変領域及び／又は軽鎖可変領域は、以下の最後のアミノ酸：軽鎖のためのｐＱＧＱ及び／又は重鎖のためのｐＱＶＱ［配列中、「ｐＱ」は、ピログルタメートを表す。］を含む。
【０３８０】
本開示の抗体、コンジュゲート抗体、活性化可能抗体及び／又は活性化可能コンジュゲート抗体は、診断用製剤及び予防用製剤において使用される。一実施形態において、活性化可能抗体は、前述の、炎症、炎症性障害、がん又は他の障害のうちの１つ以上を発症する危険性がある患者へと投与される。
【０３８１】
前述の障害のうちの１つ以上に対する、患者又は臓器の素因は、遺伝子型マーカー、血清学的マーカー又は生化学的マーカーを使用して決定され得る。
【０３８２】
本開示の一部の実施形態において、抗体、コンジュゲート抗体、活性化可能抗体及び／又は活性化可能コンジュゲート抗体は、前述の障害のうちの１つ以上と関連している臨床適応を伴うと診断されたヒト個体へと投与される。診断されると、抗体、コンジュゲート抗体、活性化可能抗体及び／又は活性化可能コンジュゲート抗体は、臨床適応の影響を、和らげる又は抑制するように投与される。
【０３８３】
本開示の抗体、コンジュゲート抗体、活性化可能抗体及び／又は活性化可能コンジュゲート抗体はまた、標的の、患者試料中の検出においても有用であり、したがって、診断法として有用である。例えば、本開示の抗体、コンジュゲート抗体、活性化可能抗体及び／又は活性化可能コンジュゲート抗体は、標的の、患者試料中レベルを検出するように、インビトロアッセイ、例えば、ＥＬＩＳＡにおいて使用される。
【０３８４】
一実施形態において、本開示の抗体及び／又は活性化可能抗体は、固体支持体（例えば、マイクロ滴定プレートのウェル（複数可））上に固定化されている。固定化された抗体及び／又は活性化可能抗体は、被験試料中に存在し得る、任意の標的のための捕捉抗体として用いられる。固定化された抗体及び／又は活性化可能抗体を、患者試料と接触させる前に、固体支持体は、すすがれ、解析物の非特異的な吸着を防止するように、ミルクタンパク質又はアルブミンなどのブロッキング剤により処理される。
【０３８５】
その後、ウェルは、抗原を含有することが疑われる被験試料又は標準量の抗原を含有する溶液により処理される。このような試料は、例えば、病態について診断的であると考えられるレベルの循環抗原を有することが疑われる対象に由来する血清試料である。被験試料又は標準物質をすすいだ後に、固体支持体は、検出可能に標識された二次抗体により処理される。標識された二次抗体は、検出抗体として用いられる。検出可能な標識のレベルは測定され、標的抗原の、被験試料中濃度は、標準試料から開発された検量線との比較により決定される。
【０３８６】
本開示の抗体及び／又は活性化可能抗体を、インビトロ診断アッセイにおいて使用して得られた結果に基づき、標的抗原の発現レベルに基づいて、対象における疾患を病期分類することが可能であると理解される。所与の疾患について、血液試料が、疾患の進行の多様な病期及び／又は疾患の治療的処置の多様な時点にあると診断された対象から採取される。進行又は治療の各病期又は各段階について、統計学的に有意な結果をもたらす試料の集団を使用して、各病期に特徴的であると考えられ得る抗原濃度の範囲が指定される。
【０３８７】
抗体、コンジュゲート抗体、活性化可能抗体及び／又は活性化可能コンジュゲート抗体はまた、診断法及び／又はイメージング法においても使用され得る。一部の実施形態において、このような方法は、インビトロ法である。一部の実施形態において、このような方法は、インビボ法である。一部の実施形態において、このような方法は、インサイチュー法である。一部の実施形態において、このような方法は、エクスビボ法である。例えば、酵素的に切断可能なＣＭを有する活性化可能抗体は、ＣＭを切断することが可能な酵素の存在又は非存在を検出するのに使用され得る。このような活性化可能抗体は、所与の宿主生物の、所与の細胞内又は組織内の、活性化された抗体（すなわち、活性化可能抗体の切断から生じる抗体）の蓄積の測定を介する酵素活性（又は、一部の実施形態において、ジスルフィド結合の還元をもたらし得る環境など、還元の潜在的可能性を増大させた環境）のインビボ検出（例えば、定性的又は定量的）を含み得る診断法において使用され得る。活性化された抗体の、このような蓄積は、組織が、酵素活性（又はＣＭの性質次第では、還元の潜在的可能性の増大）を発現するだけでなく、また、活性化された抗体が結合する標的も発現することを指し示す。
【０３８８】
例えば、ＣＭは、生物学的に閉止された部位（例えば、膿瘍内、臓器内など）における、腫瘍部位、ウイルス感染又は細菌感染の部位などにおいて見出されたプロテアーゼに対する、プロテアーゼ基質であるように選択され得る。ＡＢは、標的抗原に結合するＡＢであり得る。当業者が精通している方法を使用して、検出可能な標識（例えば、蛍光標識又は放射性標識又は放射性トレーサー）は、ＡＢ又は活性化可能抗体の他の領域へとコンジュゲートされ得る。上記のスクリーニング法の文脈において、適切な検出可能な標識が論じられており、さらなる具体的な例が、下記に提示されている。疾患状態についてのタンパク質又はペプチドに特異的なＡＢを、その活性が、目的の疾患組織内において上昇しているプロテアーゼと共に使用すると、活性化可能抗体は、ＣＭ特異的な酵素が検出可能なレベルにおいて存在していない又は疾患組織内より低レベルにおいて存在する又は不活性である組織（例えば、チモーゲン形態にある又は阻害剤と複合させた）と比べた、疾患組織への結合速度の増大を呈する。小型タンパク質及びペプチドは、腎濾過系により、血液から急速にクリアランスされるので、かつＣＭに特異的な酵素は検出可能なレベルにおいて存在しない（又は非疾患組織内の低レベルにおいて存在する又は不活性コンフォメーションにおいて存在する）ため、活性化された抗体の、疾患組織内の蓄積は、非疾患組織と比べて増強される。
【０３８９】
別の例において、活性化可能抗体は、切断剤の、試料中の存在又は非存在を検出するのに使用され得る。例えば、活性化可能抗体が、酵素による切断を受けやすいＣＭを含有する場合、活性化可能抗体は、酵素の、試料中の存在を検出する（定性的に又は定量的に）のに使用され得る。活性化可能抗体が還元剤による切断を受けやすいＣＭを含有する、別の例において、活性化可能抗体は、還元条件の、試料中の存在を検出する（定性的に又は定量的に）のに使用され得る。これらの方法における解析を容易とするために、活性化可能抗体は、検出可能に標識される場合があり、支持体（例えば、スライド又はビーズなどの固体支持体）に結合され得る。検出可能な標識は、切断後において放出されない活性化可能抗体の一部に配置される場合があり、例えば、検出可能な標識は、切断が生じるまで、検出可能ではない、クエンチングされた蛍光標識又は他の標識であり得る。アッセイは、例えば、固定化させた、検出可能に標識された活性化可能抗体を、酵素及び／又は還元剤を含有することが疑われる試料と、切断が生じるのに十分な時間にわたり接触させ、次いで、過剰な試料及び夾雑物を除去するように洗浄することにより行われ得る。次いで、切断剤（例えば、酵素又は還元剤）の、試料中の存在又は非存在は、試料と接触させる前における、活性化可能抗体の、検出可能なシグナルの変化、例えば、試料中の切断剤による活性化可能抗体の切断に起因する、検出可能なシグナルの存在及び／又は増大により評価される。
【０３９０】
このような検出法は、切断された場合に、活性化可能抗体のＡＢへの結合が可能な標的の存在又は非存在の検出もまた、もたらすように適応され得る。したがって、アッセイは、切断剤の存在又は非存在及び目的の標的の存在又は非存在について評価するように適応され得る。切断剤の存在又は非存在は、上記で記載した通り、活性化可能抗体の、検出可能な標識の存在及び／又は増大により検出される場合があり、標的の存在又は非存在は、標的−ＡＢ複合体の検出により、例えば、検出可能に標識された抗標的抗体の使用により検出され得る。
【０３９１】
活性化可能抗体は、例えば、プロテアーゼの切断及び特定の標的への結合による、活性化可能抗体の活性化のバリデーションのための、インサイチューイメージングにおいてもまた有用である。インサイチューイメージングは、タンパク質分解活性及び標的の、細胞培養物又は組織切片など、生物学的試料中の位置特定を可能とする技法である。この技法を使用して、検出可能な標識（例えば、蛍光標識）の存在に基づき、所与の標的への結合及びタンパク質分解活性の両方を確認することが可能である。
【０３９２】
これらの技法は、疾患部位（例えば、腫瘍組織）又は健常組織に由来する、任意の凍結細胞又は凍結組織に対して有用である。これらの技法はまた、新鮮な細胞試料又は組織試料に対しても有用である。
【０３９３】
これらの技法において、活性化可能抗体は、検出可能な標識により標識される。検出可能な標識は、蛍光色素（例えば、イソチオシアン酸フルオレセイン（ＦＩＴＣ）、イソチオシアン酸ローダミン（ＴＲＩＴＣ）、近赤外（ＮＩＲ）色素（例えば、Ｑｄｏｔ（登録商標）ナノ結晶）、コロイド状金属、ハプテン、放射性マーカー、ビオチン及びストレプトアビジンなどの増幅試薬又は酵素（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ又はアルカリホスファターゼ）であり得る。
【０３９４】
標識された、活性化可能抗体と共にインキュベートされた試料中の標識の検出は、試料が標的を含有し、活性化可能抗体のＣＭに特異的なプロテアーゼを含有することを指し示す。一部の実施形態において、プロテアーゼの存在は、本明細書において記載されているものなど、広域スペクトルのプロテアーゼ阻害剤を使用して、かつ／又はプロテアーゼに特異的な薬剤、例えば、プロテアーゼマトリプターゼに特異的であり、マトリプターゼのタンパク質分解性活性を阻害する、Ａ１１などの抗体を使用することにより確認され得る。例えば、２０１０年１１月１１日に公開された、国際公開第ＷＯ２０１０／１２９６０９号を参照されたい。本明細書において記載されているものなど、広域スペクトルのプロテアーゼ阻害剤を使用し、かつ／又はより選択的な阻害性薬剤を使用することによる、同じ手法は、活性化可能抗体のＣＭに特異的なプロテアーゼ又はプロテアーゼのクラスを同定するのに使用され得る。一部の実施形態において、標的の存在は、標的に特異的な薬剤を使用して確認される場合がある、例えば、別の抗体又は検出可能な標識は、非標識の標的と競合され得る。一部の実施形態において、非標識の活性化可能抗体は、標識された二次抗体又はより複雑な検出システムによる検出と共に使用され得る。
【０３９５】
同様の技法もまた、対象、例えば、ヒトを含む哺乳動物における蛍光のシグナルの検出が、疾患部位が標的を含有し、活性化可能抗体のＣＭに特異的なプロテアーゼを含有する、インビボイメージングに有用である。
【０３９６】
これらの技法はまた、活性化可能抗体内の、プロテアーゼ特異的ＣＭに基づく、様々な細胞、組織及び生物における、プロテアーゼ活性の、検出、同定又は特徴付けのための、キットにおいて、かつ／又は試薬としても有用である。
【０３９７】
一部の実施形態において、インサイチューイメージング及び／又はインビボイメージングは、処置すべき患者を同定する方法において、有用である。例えば、インサイチューイメージングにおいて、活性化可能抗体は、患者試料をスクリーニングして、適切な場所、例えば、腫瘍部位において、適切なプロテアーゼ（複数可）及び標的（複数可）を有する患者を同定するのに使用される。
【０３９８】
一部の実施形態において、インサイチューイメージングは、本開示の活性化可能抗体による処置に適する患者集団を同定する又は他の形において精緻化するのに使用される。例えば、検査により、標的及び被験活性化可能抗体の切断可能部分（ＣＭ）内の基質を切断するプロテアーゼの両方について陽性である（例えば、活性化された抗体を、疾患部位において蓄積させる）患者は、このようなＣＭを含む、このような活性化可能抗体による処置に適する候補者として同定される。同様に、これらの方法を使用して、検査により、標的及び被験活性化可能抗体のＣＭ内の基質を切断するプロテアーゼの一方又は両方について陰性である患者は、別の治療形態に適する（すなわち、被験活性化可能抗体による処置に適さない）候補者として同定される。一部の実施形態において、検査により、第１の活性化可能抗体に関して陰性である、このような患者は、処置に適する活性化可能抗体（例えば、疾患部位において、患者により切断されるＣＭを含む活性化可能抗体）が同定されるまで、異なるＣＭを含む、他の活性化可能抗体により検査され得る。
【０３９９】
一部の実施形態において、インビボイメージングは、本開示の活性化可能抗体による処置に適する患者集団を同定する又は他の形において精緻化するのに使用される。例えば、検査により、標的及び被験活性化可能抗体の切断可能部分（ＣＭ）内の基質を切断するプロテアーゼの両方について陽性である（例えば、活性化された抗体を、疾患部位において蓄積させる）患者は、このようなＣＭを含む、このような活性化可能抗体による処置に適する候補者として同定される。同様に、検査により陰性である患者は、別の治療形態に適する（すなわち、被験活性化可能抗体による処置に適さない）候補者として同定される。一部の実施形態において、検査により、第１の活性化可能抗体に関して陰性である、このような患者は、処置に適する活性化可能抗体（例えば、疾患部位において、患者により切断されるＣＭを含む活性化可能抗体）が同定されるまで、異なるＣＭを含む、他の活性化可能抗体により検査され得る。
【０４００】
医薬組成物
本開示の抗体、コンジュゲート抗体、活性化可能抗体及び／又は活性化可能コンジュゲート抗体（本明細書において、「活性化合物」とも称される）並びにこれらの誘導体、断片、類似体及び相同体は、投与に適する医薬組成物へと組み込まれ得る。
【０４０１】
投与の容易さ及び投与量の均一性のために、経口組成物又は非経口組成物を、単位剤形において製剤化することが、とりわけ有利である。本明細書において使用される場合、単位剤形とは、処置される対象のための単位投与量として適する、物理的に個別の単位を指し、各単位は、要求された、薬学的に許容される担体との関連において、所望の治療的効果を及ぼすように計算された、所定数量の活性化合物を含有する。本開示の単位剤形の仕様は、活性化合物の固有の特徴及び達成される特定の治療効果及び個体の処置のために、このような活性化合物を調合する上での、当技術分野に固有の限界により必然的に決まり、これらに直接依存する。
【０４０２】
医薬組成物は、投与のための指示書と併せて、容器内、パック内又は分注器内に含まれ得る。
【０４０３】
本発明は、以下に列挙されている実施形態及び実施例において、さらに記載されるが、これらは、特許請求の範囲において記載されている、本発明の範囲を限定するものではない。
【０４０４】
実施形態の列挙
本発明は、以下に列挙されている、例示的な実施形態の参照により規定され得る。
【０４０５】
セットＩ
Ｉ−１．活性化可能コンジュゲート抗体であって、
（ａ）非切断状態において、Ｎ末端からＣ末端へと、ＭＭ−ＣＭ−ＡＢ［配置中、
（ｉ）ＡＢは、哺乳動物ＣＤ７１に特異的に結合し、配列番号５の重鎖可変領域配列及び配列番号７の軽鎖可変領域配列を含む抗体であり；
（ｉｉ）ＭＭは、配列番号１８のアミノ酸配列を含むマスキング部分であり、ここで、活性化可能コンジュゲート抗体が非切断状態にある場合に、ＡＢへとカップリングされたＭＭは、ＡＢの、ＣＤ７１への結合を阻害し；
（ｉｉｉ）ＣＭは、ＡＢへとカップリングされた配列番号１５６の配列を含む切断可能部分であり、ここで、ＣＭは、プロテアーゼに対する基質として機能するポリペプチドである。］
の構造的配置を含む活性化可能抗体（ＡＡ）；並びに
（ｂ）活性化可能抗体が２当量のモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）へとコンジュゲートされた、ＭＭＡＥ
を含む活性化可能コンジュゲート抗体。
【０４０６】
Ｉ−２．式ＡＡ−（ＡＧ）ｐ［式中、
（ａ）ＡＡは、非切断状態において、Ｎ末端からＣ末端へと、ＭＭ−ＣＭ−ＡＢ［配置中、
（ｉ）ＡＢは、哺乳動物ＣＤ７１に特異的に結合し、配列番号５の重鎖可変領域配列及び配列番号７の軽鎖可変領域配列を含む抗体であり；
（ｉｉ）ＭＭは、配列番号１８の配列を含むマスキング部分であり、ここで、活性化可能コンジュゲート抗体が非切断状態にある場合に、ＡＢへとカップリングされたＭＭは、ＡＢの、ＣＤ７１への結合を阻害し；
（ｉｉｉ）ＣＭは、ＡＢへとカップリングされた配列番号１５６の配列を含む切断可能部分であり、ここで、ＣＭは、プロテアーゼに対する基質として機能するポリペプチドである。］
の構造的配置を含む活性化可能抗体であり；
（ｂ）ＡＧは、ＡＡへとコンジュゲートさせた薬剤であり、ここで、薬剤は、ＭＭＡＥであり、ｐは２である。］
を有する、活性化可能コンジュゲート抗体を含む組成物。
【０４０７】
Ｉ−３．活性化可能コンジュゲート抗体を製造する方法であって、少なくとも１つのＭＭＡＥを、活性化可能抗体（ＡＡ）へとコンジュゲートさせ、これにより、ＡＡ−（ＭＭＡＥ）ｐ［式中、ｐは１〜８である。］を含む組成物を作製すること；及び組成物を、ｐが２である、活性化可能コンジュゲート抗体分子種について強化することを含み、ＡＡが、非切断状態において、Ｎ末端からＣ末端へと、ＭＭ−ＣＭ−ＡＢ［配置中、
（ｉ）ＡＢは、哺乳動物ＣＤ７１に特異的に結合し、配列番号５の重鎖可変領域配列及び配列番号７の軽鎖可変領域配列を含む抗体であり；
（ｉｉ）ＭＭは、配列番号１８のアミノ酸配列を含むマスキング部分であり、ここで、活性化可能コンジュゲート抗体が非切断状態にある場合に、ＡＢへとカップリングされたＭＭは、ＡＢの、ＣＤ７１への結合を阻害し；
（ｉｉｉ）ＣＭは、ＡＢへとカップリングされた、配列番号１５６の配列を含む切断可能部分であり、ここで、ＣＭは、プロテアーゼに対する基質として機能するポリペプチドである。］
の構造的配置を含む、方法。
【０４０８】
Ｉ−４．ＡＢが、配列番号２０の重鎖配列を含む、実施形態Ｉ−１に記載の活性化可能コンジュゲート抗体又は実施形態Ｉ−２に記載の組成物又は実施形態Ｉ−３に記載の方法。
【０４０９】
Ｉ−５．ＡＢが、配列番号１６７の重鎖配列を含む、実施形態Ｉ−１に記載の活性化可能コンジュゲート抗体又は実施形態Ｉ−２に記載の組成物又は実施形態Ｉ−３に記載の方法。
【０４１０】
Ｉ−６．ＡＢが、配列番号１９の軽鎖配列を含む、実施形態Ｉ−１、Ｉ−４及びＩ−５のいずれか一項に記載の活性化可能コンジュゲート抗体又は実施形態Ｉ−２、Ｉ−４及びＩ−５のいずれか一項に記載の組成物又は実施形態Ｉ−３〜Ｉ−５のいずれか一項に記載の方法。
【０４１１】
Ｉ−７．ＡＡが、ＡＢとＭＭとの間に連結ペプチドＬＰ１を含む、実施形態Ｉ−１及びＩ−４〜Ｉ−６のいずれか一項に記載の活性化可能コンジュゲート抗体又は実施形態Ｉ−２及びＩ−４〜Ｉ−６のいずれか一項に記載の組成物又は実施形態Ｉ−３〜６のいずれか一項に記載の方法。
【０４１２】
Ｉ−８．ＬＰ１が、ＧＧＧＳＳＧＧＳ（配列番号２０７）のアミノ酸配列を含む、実施形態Ｉ−７に記載の活性化可能コンジュゲート抗体又は組成物又は方法。
【０４１３】
Ｉ−９．ＡＡが、ＡＢとＣＭとの間に連結ペプチドＬＰ２を含む、実施形態Ｉ−１及び４〜８のいずれか一項に記載の活性化可能コンジュゲート抗体又は実施形態Ｉ−２及びＩ−４〜Ｉ−８のいずれか一項に記載の組成物又は実施形態Ｉ−３〜Ｉ−８のいずれか一項に記載の方法。
【０４１４】
Ｉ−１０．ＬＰ２が、ＧＧＧＳ（配列番号３８）のアミノ酸配列を含む、実施形態Ｉ−９に記載の活性化可能コンジュゲート抗体又は組成物又は方法。
【０４１５】
Ｉ−１１．ＡＡが、第１の連結ペプチド（ＬＰ１）及び第２の連結ペプチド（ＬＰ２）を含み、ここで、非切断状態にあるＡＡが、Ｎ末端からＣ末端へと、ＭＭ−ＬＰ１−ＣＭ−ＬＰ２−ＡＢの構造的配置を有する、実施形態Ｉ−１及びＩ−４〜Ｉ−１０のいずれか一項に記載の活性化可能コンジュゲート抗体又は実施形態Ｉ−２及びＩ−４〜Ｉ−１０のいずれか一項に記載の組成物又は実施形態Ｉ−３〜Ｉ−１０のいずれか一項に記載の方法。
【０４１６】
Ｉ−１２．活性化可能抗体が、配列番号１３８及び１４３〜１４５並びにＧＱＧからなる群から選択されるスペーサー配列を含む軽鎖を含む、実施形態Ｉ−１及びＩ−４〜Ｉ−１１のいずれか一項に記載の活性化可能コンジュゲート抗体又は実施形態Ｉ−２及びＩ−４〜Ｉ−１１のいずれか一項に記載の組成物又は実施形態Ｉ−３〜Ｉ−１１のいずれか一項に記載の方法。
【０４１７】
Ｉ−１３．スペーサー配列が、ＭＭに対してＮ末端側である、実施形態Ｉ−１２に記載の活性化可能コンジュゲート抗体又は組成物又は方法。
【０４１８】
Ｉ−１４．活性化可能抗体が、配列番号２０１の軽鎖可変領域配列を含む、実施形態Ｉ−１及びＩ−４〜Ｉ−１３のいずれか一項に記載の活性化可能コンジュゲート抗体又は実施形態Ｉ−２及びＩ−４〜Ｉ−１３のいずれか一項に記載の組成物又は実施形態Ｉ−３〜Ｉ−１３のいずれか一項に記載の方法。
【０４１９】
Ｉ−１５．活性化可能抗体が、配列番号２０２の軽鎖可変領域配列を含む、実施形態Ｉ−１及びＩ−４〜Ｉ−１３のいずれか一項に記載の活性化可能コンジュゲート抗体又は実施形態Ｉ−２及びＩ−４〜Ｉ−１３のいずれか一項に記載の組成物又は実施形態Ｉ−３〜Ｉ−１３のいずれか一項に記載の方法。
【０４２０】
Ｉ−１６．活性化可能抗体が、配列番号１６９の軽鎖配列を含む、実施形態Ｉ−１及びＩ−４〜Ｉ−１３のいずれか一項に記載の活性化可能コンジュゲート抗体又は実施形態Ｉ−２及びＩ−４〜Ｉ−１３のいずれか一項に記載の組成物又は実施形態Ｉ−３〜Ｉ−１３のいずれか一項に記載の方法。
【０４２１】
Ｉ−１７．活性化可能抗体が、配列番号１７０の軽鎖配列を含む、実施形態Ｉ−１及びＩ−４〜Ｉ−１３のいずれか一項に記載の活性化可能コンジュゲート抗体又は実施形態Ｉ−２及びＩ−４〜Ｉ−１３のいずれか一項に記載の組成物又は実施形態Ｉ−３〜Ｉ−１３のいずれか一項に記載の方法。
【０４２２】
Ｉ−１８．ＡＢが、ヒトＣＤ７１及びカニクイザルＣＤ７１に特異的に結合する、実施形態Ｉ−１及びＩ−４〜Ｉ−１７のいずれか一項に記載の活性化可能コンジュゲート抗体又は実施形態Ｉ−２及びＩ−４〜Ｉ−１７のいずれか一項に記載の組成物又は実施形態Ｉ−３〜Ｉ−１７のいずれか一項に記載の方法。
【０４２３】
Ｉ−１９．ＭＭが、ＡＢの、ＣＤ７１に対する解離定数より大きい、ＡＢへの結合についての解離定数を有する、実施形態Ｉ−１及びＩ−４〜Ｉ−１８のいずれか一項に記載の活性化可能コンジュゲート抗体又は実施形態Ｉ−２及び４〜１８のいずれか一項に記載の組成物又は実施形態Ｉ−３〜Ｉ−１８のいずれか一項に記載の方法。
【０４２４】
Ｉ−２０．ＭＭが、活性化可能抗体が切断状態にある場合に、ＣＤ７１への結合について、ＡＢに干渉しない又はこれと競合しない、実施形態Ｉ−１及びＩ−４〜Ｉ−１９のいずれか一項に記載の活性化可能コンジュゲート抗体又は実施形態Ｉ−２及びＩ−４〜Ｉ−１９のいずれか一項に記載の組成物又は実施形態Ｉ−３〜Ｉ−１９のいずれか一項に記載の方法。
【０４２５】
Ｉ−２１．ＭＭが、４０アミノ酸以下の長さのポリペプチドである、実施形態Ｉ−１及びＩ−４〜Ｉ−２０のいずれか一項に記載の活性化可能コンジュゲート抗体又は実施形態Ｉ−２及びＩ−４〜Ｉ−２０のいずれか一項に記載の組成物又は実施形態Ｉ−３〜Ｉ−２０のいずれか一項に記載の方法。
【０４２６】
Ｉ−２２．ＣＭが、罹患組織内で活性のプロテアーゼに対する基質である、実施形態Ｉ−１及びＩ−４〜Ｉ−２１のいずれか一項に記載の活性化可能コンジュゲート抗体又は実施形態Ｉ−２及びＩ−４〜Ｉ−２１のいずれか一項に記載の組成物又は実施形態Ｉ−３〜Ｉ−２１のいずれか一項に記載の方法。
【０４２７】
Ｉ−２３．薬剤が、リンカーを介して、ＡＢへとコンジュゲートされている、実施形態Ｉ−１及びＩ−４〜Ｉ−２２のいずれか一項に記載の活性化可能コンジュゲート抗体又は実施形態Ｉ−２及びＩ−４〜Ｉ−２２のいずれか一項に記載の組成物又は実施形態Ｉ−３〜Ｉ−２２のいずれか一項に記載の方法。
【０４２８】
Ｉ−２４．薬剤がＡＢへとコンジュゲートされている場合のリンカーが、バリン−シトルリン部分を含む、実施形態Ｉ−１及びＩ−４〜Ｉ−２３のいずれか一項に記載の活性化可能コンジュゲート抗体又は実施形態Ｉ−２及びＩ−４〜Ｉ−２３のいずれか一項に記載の組成物又は実施形態Ｉ−３〜Ｉ−２３のいずれか一項に記載の方法。
【０４２９】
Ｉ−２５．薬剤がＡＢへとコンジュゲートされている場合のリンカーが、マレイミドカプロイル−バリン−シトルリン部分を含む、実施形態Ｉ−１及びＩ−４〜Ｉ−２４のいずれか一項に記載の活性化可能コンジュゲート抗体又は実施形態Ｉ−２及びＩ−４〜Ｉ−２４のいずれか一項に記載の組成物又は実施形態Ｉ−３〜Ｉ−２４のいずれか一項に記載の方法。
【０４３０】
Ｉ−２６．薬剤がＡＢへとコンジュゲートされている場合のリンカーが、マレイミドカプロイル−バリン−シトルリンパラアミノベンジルオキシカルボニル部分を含む、実施形態Ｉ−１及びＩ−４〜Ｉ−２５のいずれか一項に記載の活性化可能コンジュゲート抗体又は実施形態Ｉ−２及びＩ−４〜Ｉ−２５のいずれか一項に記載の組成物又は実施形態Ｉ−３〜Ｉ−２５のいずれか一項に記載の方法。
【０４３１】
Ｉ−２７．組成物の活性化可能コンジュゲート抗体のうちの少なくとも５０％が、ｐが２である分子種である、実施形態Ｉ−２及びＩ−４〜Ｉ−２６のいずれか一項に記載の組成物又は実施形態Ｉ−３〜Ｉ−２６のいずれか一項に記載の方法。
【０４３２】
Ｉ−２８．組成物の活性化可能コンジュゲート抗体のうちの少なくとも７５％が、ｐが２である分子種である、実施形態Ｉ−２及びＩ−４〜Ｉ−２６のいずれか一項に記載の組成物又は実施形態Ｉ−３〜Ｉ−２６のいずれか一項に記載の方法。
【０４３３】
Ｉ−２９．組成物の活性化可能コンジュゲート抗体のうちの少なくとも９０％が、ｐが２である分子種である、実施形態Ｉ−２及びＩ−４〜Ｉ−２６のいずれか一項に記載の組成物又は実施形態Ｉ−３〜Ｉ−２６のいずれか一項に記載の方法。
【０４３４】
Ｉ−３０．組成物の活性化可能コンジュゲート抗体のうちの少なくとも９５％が、ｐが２である分子種である、実施形態Ｉ−２及びＩ−４〜Ｉ−２６のいずれか一項に記載の組成物又は実施形態Ｉ−３〜Ｉ−２６のいずれか一項に記載の方法。
【０４３５】
Ｉ−３１．組成物の活性化可能コンジュゲート抗体のうちの少なくとも９８％が、ｐが２である分子種である、実施形態Ｉ−２及びＩ−４〜Ｉ−２６のいずれか一項に記載の組成物又は実施形態Ｉ−３〜Ｉ−２６のいずれか一項に記載の方法。
【０４３６】
Ｉ−３２．ｐが１又は３〜８である、組成物の活性化可能コンジュゲート抗体分子種の各々の当量が、ｐが２である、組成物の活性化可能コンジュゲート抗体分子種の当量未満である、実施形態Ｉ−２及びＩ−４〜Ｉ−２６のいずれか一項に記載の組成物又は実施形態Ｉ−３〜Ｉ−２６のいずれか一項に記載の方法。
【０４３７】
Ｉ−３３．ｐが１又は３〜８である、組成物の活性化可能コンジュゲート抗体分子種が、ｐが２である、組成物の活性化可能コンジュゲート抗体分子種の当量未満である、実施形態Ｉ−２及びＩ−４〜Ｉ−２６のいずれか一項に記載の組成物又は実施形態Ｉ−３〜Ｉ−２６のいずれか一項に記載の方法。
【０４３８】
Ｉ−３４．組成物の活性化可能コンジュゲート抗体分子種のうちの５０％未満が、ｐが１又は３〜８である分子種である、実施形態Ｉ−２及びＩ−４〜Ｉ−２６のいずれか一項に記載の組成物又は実施形態Ｉ−３〜Ｉ−２６のいずれか一項に記載の方法。
【０４３９】
Ｉ−３５．組成物の活性化可能コンジュゲート抗体分子種のうちの２５％未満が、ｐが１又は３〜８である分子種である、実施形態Ｉ−２及びＩ−４〜Ｉ−２６のいずれか一項に記載の組成物又は実施形態Ｉ−３〜Ｉ−２６のいずれか一項に記載の方法。
【０４４０】
Ｉ−３６．組成物の活性化可能コンジュゲート抗体分子種のうちの１０％未満が、ｐが１又は３〜８である分子種である、実施形態Ｉ−２及びＩ−４〜Ｉ−２６のいずれか一項に記載の組成物又は実施形態Ｉ−３〜Ｉ−２６のいずれか一項に記載の方法。
【０４４１】
Ｉ−３７．組成物の活性化可能コンジュゲート抗体分子種のうちの５％未満が、ｐが１又は３〜８である分子種である、実施形態Ｉ−２及びＩ−４〜Ｉ−２６のいずれか一項に記載の組成物又は実施形態Ｉ−３〜Ｉ−２６のいずれか一項に記載の方法。
【０４４２】
Ｉ−３８．組成物の活性化可能コンジュゲート抗体分子種のうちの２％未満が、ｐが１又は３〜８である分子種である、実施形態Ｉ−２及びＩ−４〜Ｉ−２６のいずれか一項に記載の組成物又は実施形態Ｉ−３〜Ｉ−２６のいずれか一項に記載の方法。
【０４４３】
Ｉ−３９．実施形態Ｉ−１及びＩ−４〜Ｉ−２６のいずれか一項に記載の活性化可能コンジュゲート抗体又は実施形態Ｉ−２及びＩ−４〜Ｉ−３８のいずれか一項に記載の組成物；並びに担体
を含む医薬組成物。
【０４４４】
Ｉ−４０．対象におけるがんを処置する、その症状を緩和する又はその進行を遅延させる方法であって、治療有効量の、実施形態Ｉ−１及びＩ−４〜Ｉ−２６のいずれか一項に記載の活性化可能コンジュゲート抗体又は実施形態Ｉ−２及びＩ−４〜Ｉ−３８のいずれか一項に記載の組成物又は実施形態Ｉ−３９に記載の医薬組成物を、これを必要とする対象へと投与することを含む方法。
【０４４５】
Ｉ−４１．がんが、胃がんである、実施形態Ｉ−４０に記載の方法。
【０４４６】
Ｉ−４２．がんが、卵巣がんである、実施形態Ｉ−４０に記載の方法。
【０４４７】
Ｉ−４３．がんが、食道がんである、実施形態Ｉ−４０に記載の方法。
【０４４８】
Ｉ−４４．がんが、非小細胞肺がんである、実施形態Ｉ−４０に記載の方法。
【０４４９】
Ｉ−４５．がんが、乳がんである、実施形態Ｉ−４０に記載の方法。
【０４５０】
Ｉ−４６．がんが、結腸直腸がんである、実施形態Ｉ−４０に記載の方法。
【０４５１】
Ｉ−４７．がんが、黒色腫である、実施形態Ｉ−４０に記載の方法。
【０４５２】
Ｉ−４８．がんが、前立腺がんである、実施形態Ｉ−４０に記載の方法。
【０４５３】
Ｉ−４９．がんが、中皮腫である、実施形態Ｉ−４０に記載の方法。
【０４５４】
セットＩＩ
ＩＩ−１．式（Ｉ）：
【０４５５】
【化７】
2020537649.tif 000015
［式中、
（ａ）
（ｉ）ＡＢは、ヒトＣＤ７１に特異的に結合し、
ｉ．配列番号９を含むＣＤＲＨ１配列、配列番号１０を含むＣＤＲＨ２配列及び配列番号１１を含むＣＤＲＨ３配列を含む重鎖可変領域；並びに
ｉｉ．配列番号１２又は配列番号１３を含むＣＤＲＬ１配列、配列番号１４を含むＣＤＲＬ２配列及び配列番号１５を含むＣＤＲＬ３配列を含む軽鎖可変領域
を含む抗体であり；
（ｉｉ）ＭＭは、配列番号１８のアミノ酸配列を含むマスキング部分であり、ここで、活性化可能コンジュゲート抗体が非切断状態にある場合に、ＭＭは、ＡＢの、ヒトＣＤ７１への結合を阻害し；
（ｉｉｉ）ＬＰ１は、配列番号２０７のアミノ酸配列を含む、第１の連結部分であり；
（ｉｖ）ＣＭは、配列番号１５６の配列を含む切断可能部分であり、ここで、ＣＭは、プロテアーゼに対する基質として機能するポリペプチドであり；
（ｖ）ＬＰ２は、配列番号３８のアミノ酸配列を含む、第２の連結部分であり；
（ｂ）「ｎ」は２である。］
の構造又はその塩を含む、活性化可能なコンジュゲート抗体。
【０４５６】
ＩＩ−２．ＡＢが、ＩｇＧ１アイソタイプを含む、実施形態ＩＩ−１に記載の活性化可能コンジュゲート抗体。
【０４５７】
ＩＩ−３．ＡＢが、重鎖定常領域を有する抗体であり、ここで、重鎖定常領域のＣ末端残基が、リシンではない、実施形態ＩＩ−１又はＩＩ−２に記載の活性化可能コンジュゲート抗体。
【０４５８】
ＩＩ−４．式（Ｉ）：
【０４５９】
【化８】
2020537649.tif 000016
［式中、
（ａ）
（ｉ）ＡＢは、ヒトＣＤ７１に特異的に結合し、配列番号５の配列を含む重鎖可変領域及び配列番号７の配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体であり；
（ｉｉ）ＭＭは、配列番号８のアミノ酸配列を含むマスキング部分であり、ここで、活性化可能コンジュゲート抗体が非切断状態にある場合に、ＭＭは、ＡＢの、ヒトＣＤ７１への結合を阻害し；
（ｉｉｉ）ＬＰ１は、配列番号２０７のアミノ酸配列を含む、第１の連結部分であり；
（ｉｖ）ＣＭは、配列番号１５６の配列を含む切断可能部分であり、ここで、ＣＭは、プロテアーゼに対する基質として機能するポリペプチドであり；
（ｖ）ＬＰ２は、配列番号３８のアミノ酸配列を含む、第２の連結部分であり；
（ｂ）「ｎ」は２である。］
の構造又はその塩を含む、活性化可能なコンジュゲート抗体。
【０４６０】
ＩＩ−５．ＡＢが、ＩｇＧ１アイソタイプを含む、実施形態ＩＩ−４に記載の活性化可能コンジュゲート抗体。
【０４６１】
ＩＩ−６．ＡＢが、重鎖定常領域を有する抗体であり、ここで、重鎖定常領域のＣ末端残基が、リシンではない、実施形態ＩＩ−４又はＩＩ−５に記載の活性化可能コンジュゲート抗体。
【０４６２】
ＩＩ−７．式（Ｉ）：
【０４６３】
【化９】
2020537649.tif 000017
［式中、
（ａ）
（ｉ）ＡＢは、ヒトＣＤ７１に特異的に結合し、配列番号１６７の配列を含む重鎖及び配列番号１９の配列を含む軽鎖を含む抗体であり；
（ｉｉ）ＭＭは、配列番号１８のアミノ酸配列を含むマスキング部分であり、ここで、活性化可能コンジュゲート抗体が非切断状態にある場合に、ＭＭは、ＡＢの、ヒトＣＤ７１への結合を阻害し；
（ｉｉｉ）ＬＰ１は、配列番号２０７のアミノ酸配列を含む、第１の連結部分であり；
（ｉｖ）ＣＭは、配列番号１５６の配列を含む切断可能部分であり、ここで、ＣＭは、プロテアーゼに対する基質として機能するポリペプチドであり；
（ｖ）ＬＰ２は、配列番号３８のアミノ酸配列を含む、第２の連結部分であり；
（ｂ）「ｎ」は、２である。］
の構造又はその塩を含む、活性化可能なコンジュゲート抗体。
【０４６４】
ＩＩ−８．ＡＢが、ＩｇＧ１アイソタイプを含む、実施形態ＩＩ−７に記載の活性化可能コンジュゲート抗体。
【０４６５】
ＩＩ−９．ＡＢが、重鎖定常領域を有する抗体であり、ここで、重鎖定常領域のＣ末端残基が、リシンではない、実施形態ＩＩ−７又はＩＩ−８に記載の活性化可能コンジュゲート抗体。
【０４６６】
ＩＩ−１０．式（Ｉ）：
【０４６７】
【化１０】
2020537649.tif 000018
［式中、ＭＭ−ＬＰ１−ＣＭ−ＬＰ２−ＡＢは、活性化可能抗体であり、ここで、ＡＢは、ヒトＣＤ７１に特異的に結合する抗体であり、
活性化可能抗体は、配列番号１６７の配列を含む重鎖及び配列番号１７０の配列を含む軽鎖を含み、
「ｎ」は２である。］
の構造又はその塩を含む、活性化可能なコンジュゲート抗体。
【０４６８】
ＩＩ−１１．ＡＢが、ＩｇＧ１アイソタイプを含む、実施形態ＩＩ−１０に記載の活性化可能コンジュゲート抗体。
【０４６９】
ＩＩ−１２．ＡＢが、重鎖定常領域を有する抗体であり、ここで、重鎖定常領域のＣ末端残基が、リシンではない、実施形態ＩＩ−１０又はＩＩ−１１に記載の活性化可能コンジュゲート抗体。
【０４７０】
ＩＩ−１３．式（ＩＩ）：
【０４７１】
【化１１】
2020537649.tif 000019
［式中、
（ａ）
（ｉ）ＡＢは、ヒトＣＤ７１に特異的に結合し、
ｉ．配列番号９を含むＣＤＲＨ１配列、配列番号１０を含むＣＤＲＨ２配列及び配列番号１１を含むＣＤＲＨ３配列を含む重鎖可変領域；並びに
ｉｉ．配列番号１２又は配列番号１３を含むＣＤＲＬ１配列、配列番号１４を含むＣＤＲＬ２配列及び配列番号１５を含むＣＤＲＬ３配列を含む軽鎖可変領域
を含む抗体であり；
（ｉｉ）ＭＭは、配列番号１８のアミノ酸配列を含むマスキング部分であり、ここで、活性化可能コンジュゲート抗体が、非切断状態にある場合に、ＭＭは、ＡＢの、ヒトＣＤ７１への結合を阻害し；
（ｉｉｉ）ＣＭは、配列番号１５６の配列を含む切断可能部分であり、ここで、ＣＭは、プロテアーゼに対する基質として機能するポリペプチドであり；
（ｂ）「ｎ」は２である。］
の構造又はその塩を含む、活性化可能なコンジュゲート抗体。
【０４７２】
ＩＩ−１４．ＡＢが、ＩｇＧ１アイソタイプを含む、実施形態ＩＩ−１３に記載の活性化可能コンジュゲート抗体。
【０４７３】
ＩＩ−１５．ＡＢが、重鎖定常領域を有する抗体であり、ここで、重鎖定常領域のＣ末端残基が、リシンではない、実施形態ＩＩ−１３又はＩＩ−１４に記載の活性化可能コンジュゲート抗体。
【０４７４】
ＩＩ−１６．式（ＩＩ）：
【０４７５】
【化１２】
2020537649.tif 000020
［式中、
（ａ）
（ｉ）ＡＢは、ヒトＣＤ７１に特異的に結合し、配列番号５の配列を含む重鎖可変領域及び配列番号７の配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体であり；
（ｉｉ）ＭＭは、配列番号１８のアミノ酸配列を含むマスキング部分であり、ここで、活性化可能コンジュゲート抗体が非切断状態にある場合に、ＭＭは、ＡＢの、ヒトＣＤ７１への結合を阻害し；
（ｉｉｉ）ＣＭは、配列番号１５６の配列を含む切断可能部分であり、ここで、ＣＭは、プロテアーゼに対する基質として機能するポリペプチドであり；
（ｂ）「ｎ」は２である。］
の構造又はその塩を含む、活性化可能なコンジュゲート抗体。
【０４７６】
ＩＩ−１７．ＡＢが、ＩｇＧ１アイソタイプを含む、実施形態ＩＩ−１６に記載の活性化可能コンジュゲート抗体。
【０４７７】
ＩＩ−１８．ＡＢが、重鎖定常領域を有する抗体であり、ここで、重鎖定常領域のＣ末端残基が、リシンではない、実施形態ＩＩ−１６又はＩＩ−１７に記載の活性化可能コンジュゲート抗体。
【０４７８】
ＩＩ−１９．式（ＩＩ）：
【０４７９】
【化１３】
2020537649.tif 000021
［式中、
（ａ）
（ｉ）ＡＢは、ヒトＣＤ７１に特異的に結合し、配列番号１６７の配列を含む重鎖及び配列番号１９の配列を含む軽鎖を含む抗体であり；
（ｉｉ）ＭＭは、配列番号１８のアミノ酸配列を含むマスキング部分であり、ここで、活性化可能コンジュゲート抗体が非切断状態にある場合に、ＭＭは、ＡＢの、ヒトＣＤ７１への結合を阻害し；
（ｉｉｉ）ＣＭは、配列番号１５６の配列を含む切断可能部分であり、ここで、ＣＭは、プロテアーゼに対する基質として機能するポリペプチドであり；
（ｂ）「ｎ」は２である。］
の構造又はその塩を含む、活性化可能なコンジュゲート抗体。
【０４８０】
ＩＩ−２０．ＡＢが、ＩｇＧ１アイソタイプを含む、実施形態ＩＩ−１９に記載の活性化可能コンジュゲート抗体。
【０４８１】
ＩＩ−２１．ＡＢが、重鎖定常領域を有する抗体であり、ここで、重鎖定常領域のＣ末端残基が、リシンではない、実施形態ＩＩ−１９又はＩＩ−２０に記載の活性化可能コンジュゲート抗体。
【０４８２】
ＩＩ−２２．式（ＩＩ）：
【０４８３】
【化１４】
2020537649.tif 000022
［式中、ＭＭ−ＣＭ−ＡＢは、活性化可能抗体であり、ここで、ＡＢは、ヒトＣＤ７１に特異的に結合する抗体であり、
活性化可能抗体は、配列番号１６７の配列を含む重鎖及び配列番号１６９の配列を含む軽鎖を含み、
「ｎ」は２である。］
の構造又はその塩を含む、活性化可能なコンジュゲート抗体。
【０４８４】
ＩＩ−２３．ＡＢが、ＩｇＧ１アイソタイプを含む、実施形態ＩＩ−２２に記載の活性化可能コンジュゲート抗体。
【０４８５】
ＩＩ−２４．ＡＢが、重鎖定常領域を有する抗体であり、ここで、重鎖定常領域のＣ末端残基が、リシンではない、実施形態ＩＩ−２２又はＩＩ−２３に記載の活性化可能コンジュゲート抗体。
【０４８６】
ＩＩ−２５．式（Ｉ）：
【０４８７】
【化１５】
2020537649.tif 000023
［式中、
（ａ）
（ｉ）ＡＢは、ヒトＣＤ７１に特異的に結合し、
ｉ．配列番号９を含むＣＤＲＨ１配列、配列番号１０を含むＣＤＲＨ２配列及び配列番号１１を含むＣＤＲＨ３配列を含む重鎖可変領域；並びに
ｉｉ．配列番号１２又は配列番号１３を含むＣＤＲＬ１配列、配列番号１４を含むＣＤＲＬ２配列及び配列番号１５を含むＣＤＲＬ３配列を含む軽鎖可変領域
を含む抗体であり；
（ｉｉ）ＭＭは、配列番号１８のアミノ酸配列を含むマスキング部分であり、ここで、活性化可能コンジュゲート抗体が非切断状態にある場合に、ＭＭは、ＡＢの、ヒトＣＤ７１への結合を阻害し；
（ｉｉｉ）ＬＰ１は、配列番号２０７のアミノ酸配列を含む、第１の連結部分であり；
（ｉｖ）ＣＭは、配列番号１５６の配列を含む切断可能部分であり、ここで、ＣＭは、プロテアーゼに対する基質として機能するポリペプチドであり；
（ｖ）ＬＰ２は、配列番号３８のアミノ酸配列を含む、第２の連結部分であり；
ここで、「ｎ」は２である。］
の構造又はその塩を含む、活性化可能なコンジュゲート抗体を製造する方法であって、
（ｂ）
（ｉ）ＭＭ−ＬＰ１−ＣＭ−ＬＰ２−ＡＢを含む活性化可能抗体を、還元剤により還元すること；及び
（ｉｉ）１つ以上のｖｃＭＭＡＥを、還元された活性化可能抗体へとコンジュゲートさせること
を含む方法。
【０４８８】
ＩＩ−２６．式（ＩＩ）：
【０４８９】
【化１６】
2020537649.tif 000024
［式中、
（ａ）
（ｉ）ＡＢは、ヒトＣＤ７１に特異的に結合し、
ｉ．配列番号９を含むＣＤＲＨ１配列、配列番号１０を含むＣＤＲＨ２配列及び配列番号１１を含むＣＤＲＨ３配列を含む重鎖可変領域；並びに
ｉｉ．配列番号１２又は配列番号１３を含むＣＤＲＬ１配列、配列番号１４を含むＣＤＲＬ２配列及び配列番号１５を含むＣＤＲＬ３配列を含む軽鎖可変領域
を含む抗体であり；
（ｉｉ）ＭＭは、配列番号１８のアミノ酸配列を含むマスキング部分であり、ここで、活性化可能コンジュゲート抗体が非切断状態にある場合に、ＭＭは、ＡＢの、ヒトＣＤ７１への結合を阻害し；
（ｉｉ）ＣＭは、配列番号１５６の配列を含む切断可能部分であり、ここで、ＣＭは、プロテアーゼに対する基質として機能するポリペプチドであり；
ここで、「ｎ」は２である。］
の構造又はその塩を含む、活性化可能なコンジュゲート抗体を製造する方法であって、
（ｂ）
（ｉ）ＭＭ−ＣＭ−ＡＢを含む活性化可能抗体を、還元剤により還元すること；及び
（ｉｉ）１つ以上のｖｃＭＭＡＥを、還元された活性化可能抗体へとコンジュゲートさせること
を含む方法。
【０４９０】
ＩＩ−２７．実施形態ＩＩ−１〜ＩＩ−２４のいずれか一項に記載の活性化可能コンジュゲート抗体；及び任意選択的に、薬学的に許容される担体
を含む医薬組成物。
【０４９１】
ＩＩ−２８．対象におけるがんを処置する、その症状を緩和する又はその進行を遅延させる方法であって、胃がん、卵巣がん、食道がん、非小細胞肺がん、ＥＲ＋乳がん、トリプルネガティブ乳がん、結腸直腸がん、黒色腫、前立腺がん、多発性骨髄腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、頭頸部小細胞癌、膵臓がん、中皮腫、非ホジキンリンパ腫、肝細胞癌及び神経膠芽腫からなる群から選択されるがんのために、治療有効量の、実施形態ＩＩ−１〜ＩＩ−２４のいずれか一項に記載の活性化可能コンジュゲート抗体又は実施形態ＩＩ−２７に記載の医薬組成物を、これを必要とする対象へと投与することを含む方法。
【０４９２】
ＩＩ−２９．医薬としての使用のための、実施形態ＩＩ−１〜ＩＩ−２４のいずれか一項に記載の活性化可能コンジュゲート抗体又は実施形態ＩＩ−２７に記載の医薬組成物。
【０４９３】
ＩＩ−３０．任意選択的に、胃がん、卵巣がん、食道がん、非小細胞肺がん、ＥＲ＋乳がん、トリプルネガティブ乳がん、結腸直腸がん、黒色腫、前立腺がん、多発性骨髄腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、頭頸部小細胞癌、膵臓がん、中皮腫、非ホジキンリンパ腫、肝細胞癌及び神経膠芽腫からなる群から選択されるがんの処置における使用のための、実施形態ＩＩ−１〜ＩＩ−２４のいずれか一項に記載の活性化可能コンジュゲート抗体又は実施形態ＩＩ−２７に記載の医薬組成物。
【実施例】
【０４９４】
実施例１  活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体（ＡＡＤＣ）
本明細書において提示されている研究は、本開示の活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体のうちの一部を作るためにデザインした。
【０４９５】
その全体において参照により本明細書に組み込む、米国特許出願第ＵＳ２０１６／０３５５５９９Ａ１号において記載される通り、抗ＣＤ７１  Ｍ２１モノクローナル抗体は、当技術分野において公知の技法に従う、マウスハイブリドーマ技術を使用して得た。マウスを、ヒトＣＤ７１細胞外ドメイン（ＥＣＤ）により免疫化し、細胞傷害作用ピギーバックアッセイを使用して、それに続くハイブリドーマをスクリーニングし、このアッセイによる細胞傷害作用陽性クローンが、ヒトＣＤ７１  ＥＣＤポリペプチドに結合することを、ＥＬＩＳＡにより確認し、細胞表面に結合することを、ＦＡＣＳにより確認した。抗ＣＤ７１  Ｍ２１モノクローナル抗体は、配列番号１の重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号２の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
【０４９６】
抗ＣＤ７１マウスモノクローナル抗体Ｍ２１に基づく、以下のヒト化抗ＣＤ７１抗体：Ａｂ２１．１０  ＬｃＢ：ＨｃＡ（配列番号３のＶＨ及び配列番号７のＶＬ）、Ａｂ２１．１１  ＬｃＢ：ＨｃＢ（配列番号４のＶＨ及び配列番号７のＶＬ）、Ａｂ２１．１２  ＬｃＢ：ＨｃＣ（配列番号５のＶＨ及び配列番号７のＶＬ）及びＭ２１（配列番号１のＶＨ及び配列番号２のＶＬ）もまた調べた。本開示の、多様な抗ＣＤ７１抗体の、細胞表面ＣＤ７１に結合する能力は、ＦＡＣＳにより確認した。
【０４９７】
ヒト化抗ＣＤ７１抗体の全ては、ＣＤ７１  Ｍ２１マウス抗体が示した結合と同等な、ヒトＣＤ７１及びカニクイザルＣＤ７１への結合を示した。ヒト化抗ＣＤ７１抗体の結合は、ＦＡＣＳにより、ＢｘＰＣ３細胞株上において確認した。略述すると、ＢｘＰＣ３細胞を、表示の濃度における、マウスモノクローナルＭａｂ２１抗体又はｈｕＣＤ７１（Ａｂ２１．１０、Ａｂ２１．１１及びＡｂ２１．１２）抗体により標識し、その後、それぞれ、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７により標識されたヤギ抗マウスＩｇＧ又は抗ヒトＩｇＧ  Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７により検出した。
【０４９８】
例示的な研究において、抗ＣＤ７１  Ａｂ２１．１２  ＬｃＢ：ＨｃＣ（配列番号５のＶＨ及び配列番号７のＶＬ）の、ヒト、カニクイザル、マウス及びラットの供給源に由来する、組換えＣＤ７１細胞（ＥＬＩＳＡを使用する）及びＣＤ７１発現細胞（フローサイトメトリーを使用する）に対する結合活性を測定した。表１の例示的な結果に示されている通り、ＥＬＩＳＡにより測定したところ、抗ＣＤ７１抗体は、ヒト組換えＣＤ７１及びサル組換えＣＤ７１に、同等なアフィニティーにより結合し、これは、ヒトホロトランスフェリンの、ヒトＣＤ７１に対するアフィニティーと同等であった。フローサイトメトリーにより測定したところ、抗体は、ヒト及びサルのＣＤ７１発現細胞株（それぞれ、ヒトＢｘＰＣ３膵臓がん細胞及びカニクイザル初代腎臓上皮細胞）に、同等なアフィニティーにより結合した。抗ＣＤ７１抗体による、組換えマウスＣＤ７１又はラットＣＤ７１発現細胞株（ラットＨ−４−１１−Ｅ肝がん細胞）への有意な結合は、測定されなかった。
【０４９９】
【表４】
2020537649.tif 000025
【０５００】
実施例２  マスクの発見
本明細書において提示されている研究は、本開示の活性化可能抗ＣＤ７１抗体における使用のためのマスキング部分を同定し、特徴付けるためにデザインした。
【０５０１】
２０１０年７月１５日に公開された、ＰＣＴ国際公開第ＷＯ２０１０／０８１１７３号において記載された方法と同様の方法を使用して、全多様度を６×１０１０とする、Ｘ１５［配列中、Ｘは、任意のアミノ酸である。］ペプチドのランダムライブラリーをスクリーニングするのに、米国特許出願第ＵＳ２０１６／０３５５５９９Ａ１号に記載されている通り、配列番号５のＶＨ及び配列番号７のＶＬを含む、抗ＣＤ７１  ２１．１２抗体を使用した。スクリーニングは、１ラウンドのＭＡＣＳ分取及び５ラウンドのＦＡＣＳ分取からなった。初期ＭＡＣＳ分取は、ｐｒｏｔｅｉｎ−Ａ  Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）及び２００ｎＭの濃度の抗ＣＤ７１  ２１．１２抗体により行った。ＭＡＣＳのために、細胞約１×１０１２個を、結合についてスクリーニングし、細胞１×１０７個を回収した。抗ＣＤ７１  ２１．１２を、ＤｙＬｉｇｈｔ−４８８（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）とコンジュゲートさせ、ＣＤ７１への結合活性を確認し、抗ＣＤ７１  ２１．１２−４８８を、全てのＦＡＣＳラウンドのための蛍光プローブとして使用した。以下の通りに、細菌細胞を染色し、陽性クローンを回収した：ＦＡＣＳラウンド１において回収された細胞１×１０６個を伴う、２０ｎＭの抗ＣＤ７１  ２１．１２−４８８、ＦＡＣＳラウンド２において回収された細胞６．２×１０４個を伴う、５ｎＭの抗ＣＤ７１  ２１．１２−４８８並びにＦＡＣＳラウンド３において回収された、細胞５×１０３個を伴う、５ｎＭの抗ＣＤ７１  ２１．１２−４８８及び細胞５×１０２個を伴う、１ｎＭの抗ＣＤ７１  ２１．１２−４８８、ＦＡＣＳラウンド４及び５において回収された細胞＞２×１０２個を伴う、１ｎＭの抗ＣＤ７１  ２１．１２−４８８。第２のＦＡＣＳラウンドに由来する陽性集団が、抗ＣＤ７１  ２１．１２−４８８抗体の、組換えＣＤ７１タンパク質への結合を阻害することを検証した。個々のペプチドクローンを、ＦＡＣＳラウンド３に由来する、５ｎＭの結合剤並びにＦＡＣＳラウンド３、４及び５に由来する、１ｎＭの結合剤に由来する配列解析により同定した。
【０５０２】
同定されたマスキング部分は、ＴＦ０１（ＱＦＣＰＷＳＹＹＬＩＧＤＣＤＩ；配列番号１６）及びＴＦ０２（ＮＬＣＴＥＨＳＦＡＬＤＣＲＳＹ；配列番号１７）を含む。マスキング効率の異なる、活性化可能抗体のファミリーであって、マスキング部分ＴＦ０２．１３（ＮＬＣＴＥＨＳＡＡＬＤＣＲＳＹ；配列番号１８）を含むファミリーを作出するように、ＴＦ０１マスク及びＴＦ０２マスクを切断し、アラニン走査した。
【０５０３】
これらのマスキングペプチドを使用して、本開示の活性化可能抗ＣＤ７１抗体を作出した。これらの活性化可能抗ＣＤ７１抗体のうちのある特定のものについての配列を、下記の表Ａに示している。一部の実施形態において、これらの活性化可能抗ＣＤ７１抗体は、表示の通り、切断可能部分２００１（ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＮＨ；配列番号９１）、切断可能部分３００１（ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＮＨ；配列番号９７）、切断可能部分２０１１（ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＮＰ；配列番号１５６）又は切断可能部分３０１１（ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＮＰ；配列番号１６４）を含む。
【０５０４】
下記に示されている、ある特定の配列は、配列番号１３８のスペーサー配列を含むが、当業者は、本開示の活性化可能抗ＣＤ７１抗体が、例えば、ＱＧＱＳＧＱＧ（配列番号１３８）、ＱＧＱＳＧＱ（配列番号１０９）、ＱＧＱＳＧ（配列番号１３９）、ＱＧＱＳ（配列番号１４０）、ＱＧＱ、ＱＧ、ＧＱＳＧＱＧ（配列番号１４３）、ＱＳＧＱＧ（配列番号１４４）、ＳＧＱＧ（配列番号１４５）、ＧＱＧ、Ｇ又はＱからなる群から選択されるスペーサー配列など、任意の適切なスペーサー配列を含み得ることを理解する。一部の実施形態において、本開示の活性化可能抗ＣＤ７１抗体は、そのＮ末端へと接続したスペーサー配列を有さない場合がある。
【０５０５】
【表５】
2020537649.tif 000026
2020537649.tif 000027
2020537649.tif 000028
2020537649.tif 000029
2020537649.tif 000030
2020537649.tif 000031
2020537649.tif 000032
【０５０６】
実施例３  活性化可能活性化可能抗ＣＤ７１抗体及び活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体の作出及び特徴付け
本明細書において提示されている研究は、本開示の一部の活性化可能抗ＣＤ７１抗体を作出するためにデザインした。
【０５０７】
マスキング効率（すなわち、活性化可能抗体のＭＭが、活性化可能抗体のＡＢの、その標的への結合を遮断する能力の測定値）が異なる活性化可能抗ＣＤ７１抗体を作出した。ペプチドＴＦ０１及びＴＦ０２を、実施例２に記載されたトランケーション及びアラニン走査により突然変異させた。これらのマスキングペプチド変異体を使用して、ある範囲のマスキング効率を伴う、本開示の活性化可能抗ＣＤ７１抗体のファミリーを作出した。
【０５０８】
本開示の活性化可能抗ＣＤ７１抗体の、ＮＣＩ  Ｈ２９２（本明細書において、Ｈ２９２とも称される）細胞株への結合は、ＦＡＣＳを使用して査定した。略述すると、細胞を、ある範囲の濃度の、ｈｕＣＤ７１抗体又は活性化可能抗体により標識し、その後、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７により標識されたヤギ抗ヒトＩｇＧ二次抗体により検出して、結合曲線を決定した。下記の表２の例示的な結合データにまとめられた通り、本開示の活性化可能抗ＣＤ７１抗体は、親抗ＣＤ７１抗体（ｈｕＣＤ７１  ２１．１２  Ａｂ）と比較して、ある範囲のマスキング効率を示す。
【０５０９】
【表６】
2020537649.tif 000033
【０５１０】
表２における、これらの例示的なデータは、活性化可能抗体が無傷状態又は非切断状態にある場合、どちらのマスク（ＴＦ０１及びＴＦ０２．１３）も、抗ＣＤ７１抗体の、ＣＤ７１への結合を阻害することを示している。これらの例示的なデータはまた、ＴＦ０１マスキング部分が、ＴＦ０２．１３マスキング部分より高度なマスキング効率を示すことも裏付けている。
【０５１１】
実施例４  活性化可能ＣＤ７１抗体及び活性化可能ＣＤ７１コンジュゲート抗体の結合活性の特徴付け
本実施例が示すところによれば、本開示の活性化可能抗ＣＤ７１抗体及び活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体が、これらの無傷の非切断形態にある場合の、これらの対応するプロテアーゼ切断形態と比較して、組換え及び細胞表面のヒトＣＤ７１タンパク質及びカニクイザルＣＤ７１タンパク質への低結合アフィニティーを示した。
【０５１２】
図３Ａ及び３Ｂにおいて示されている通り、固相結合アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を使用して、それらの無傷の非切断形態及びそれらのプロテアーゼ活性化切断形態の両方における、本開示の活性化可能抗ＣＤ７１抗体及び活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体の、組換えＣＤ７１への結合アフィニティーを裏付けた。これらの例において、ＥＬＩＳＡプレートを、組換えカニクイザルタンパク質（図３Ｂ）又は組換えヒトＣＤ７１タンパク質（図３Ａ）（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）により、１μｇ／ｍＬの濃度でコーティングし、次いで、表示濃度の本開示の無傷の非切断活性化可能抗ＣＤ７１抗体（「抗ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１」）又は本開示の無傷の非切断Ｅ２（すなわち、ＤＡＲを約２とする）活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体（「抗ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃ−ＭＭＡＥ  Ｅ２」）と共にインキュベートした。また、活性化可能抗体構成要素のうちの切断可能部分を切断するプロテアーゼによる処理の後における、本開示の活性化可能抗ＣＤ７１抗体（「抗ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１（Ａｃｔ）」）又はＥ２（すなわち、ＤＡＲを約２とする）活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体（「抗ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１（Ａｃｔ）」）についてもアッセイした。
【０５１３】
本明細書において論じられている「Ｅ２」とは、本質的に、各活性化可能抗体分子につき、薬物ロードが、２薬物分子である、活性化可能コンジュゲート抗体の分子種だけを含み、いかなる量又は最小量の、他の可能な分子種（すなわち、薬物ロードが、０、１、３、４、５、６、７、８などである分子種）も、本質的に含まない、所与の本開示の活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体の組成物を指す。本明細書において論じられる場合、「ＤＡＲ」とは、このような活性化可能コンジュゲート抗体の集団内の、薬物（この場合、ＭＭＡＥ）の、活性化可能抗体（すなわち、ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１）に対する平均比を指す。したがって、本実施例において、抗ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃ−ＭＭＡＥ  Ｅ２とは、実施例２６に記載される通り、各活性化可能抗体が、２当量のｖｃ−ＭＭＡＥの薬物ロードを有し、約２のＤＡＲを有した、抗ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１活性化可能抗体だけを含む組成物を指す。
【０５１４】
各試料中の、結合した抗体の量は、インキュベーション及び西洋ワサビペルオキシダーゼへとコンジュゲートされたヤギ抗ヒト抗体による検出及びＵｌｔｒａ  ＴＭＢ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）による検出により検出した。結合アフィニティーの概要を、下記に示す。
【０５１５】
【表７】
2020537649.tif 000034
【０５１６】
図３Ｃ及び３Ｄは、ＦＡＣＳアッセイにおいて、本開示の活性化可能抗ＣＤ７１抗体及び本開示の活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体が、ヒトＣＤ７１（図３Ｃ）及びカニクイザルＣＤ７１（図３Ｄ）を発現する細胞に、対応する、本開示のプロテアーゼにより活性化された活性化可能抗ＣＤ７１抗体又はプロテアーゼにより活性化された活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体の場合より、大きな解離定数及び低度のアフィニティーにより結合するという、例示的な結果を示している。これらの例示的な結果は、本開示の、切断された、プロテアーゼにより活性化された、活性化可能抗ＣＤ７１抗体の結合アフィニティー及び本開示の、切断された、プロテアーゼにより活性化された、活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体が、細胞に、親抗ＣＤ７１抗体のアフィニティーと同等のアフィニティーにおいて結合することを示し、したがって、抗ＣＤ７１の、無傷活性化可能抗体内又は無傷活性化可能コンジュゲート抗体内のその標的への結合の阻害における、マスキング部分の効果を裏付ける。
【０５１７】
図３Ｃ及び３Ｄにおいて示されている例示的な研究において、本開示の抗体の、表示の細胞株への結合は、標準的なＦＡＣＳ標識化法を使用して実施した。略述すると、細胞を、表示の抗体又は本開示の活性化可能抗体：対照抗体（ＡＢ０９５）、ヒト抗ＣＤ７１抗体（配列番号５のＶＨ及び配列番号７のＶＬを有するＡｂ２１．１２）、活性化可能抗ＣＤ７１抗体（抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１）又はＥ２（すなわち、ＤＡＲを約２とする）活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体（抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２）により標識した。加えて、その中の切断可能部分を切断する、プロテアーゼによる活性化の後における、活性化可能抗ＣＤ７１抗体（抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１（Ａｃｔ））及びＥ２（すなわち、ＤＡＲを約２とする）活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体（抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２（Ａｃｔ））の結合アフィニティーについてもアッセイした。各被験物質を、表示の濃度において適用し、その後、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７により標識されたヤギ抗ヒトＩｇＧ二次抗体により検出した。
【０５１８】
下記の表３Ｂは、図３Ｃ〜３Ｄに描示された結合曲線に基づくＥＣ５０値を示している。これらの結果は、無傷活性化可能抗体及び無傷活性化可能コンジュゲート抗体が、その標的に、それらのプロテアーゼにより活性化された対応物よりも低度のアフィニティーにより結合し、プロテアーゼにより活性化された活性化可能抗体が、親抗ＣＤ７１抗体のアフィニティーと同等なアフィニティーによりに結合したことを示している。
【０５１９】
【表８】
2020537649.tif 000035
【０５２０】
同様の例示的な研究において、ＥＬＩＳＡアッセイ及びフローサイトメトリーアッセイを使用して、本開示の抗ＣＤ７１抗体、抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体、活性化可能抗ＣＤ７１抗体（無傷の非切断形態及びプロテアーゼにより活性化された切断形態）並びに活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体（無傷の非切断形態及びプロテアーゼにより活性化された切断形態）の、組換えヒトＣＤ７１及びカニクイザルＣＤ７１並びにヒトＣＤ７１及びカニクイザルＣＤ７１発現細胞株に対する組換えＣＤ７１に対する結合アフィニティーを裏付けた。被験物質は、抗ＣＤ７１  Ａｂ２１．１２抗体（配列番号５のＶＨ及び配列番号７のＶＬ）、コンジュゲート抗体である抗ＣＤ７１  Ａｂ２１．１２−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２（すなわち、ＤＡＲを約２とする）、活性化可能抗体である抗ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１及びＤＡＲ２の活性化可能コンジュゲート抗体である抗ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２（すなわち、ＤＡＲを約２とする）であった。
【０５２１】
ＥＬＩＳＡの例において、ＥＬＩＳＡプレートを、組換えカニクイザルＣＤ７１  ＥＣＤタンパク質又は組換えヒトＣＤ７１  ＥＣＤタンパク質によりコーティングし、次いで、濃度範囲のうちの１つの範囲の本開示の被験物質と共にインキュベートした後、結合した被験物質の量を、二次抗体により測定した。活性化された被験物質は、マトリプターゼプロテアーゼ酵素と共にインキュベートした。各被験物質についての、例示的な見かけのＫｄ値を、表３Ｃに示している。
【０５２２】
表３Ｃにおいてもまた示されている例示的な研究において、本開示の抗体の、表示の細胞株への結合は、標準的なＦＡＣＳ標識化法を使用して実施した。フローサイトメトリー結果は、４つのヒト細胞株（ＨＣＣ１８０６ヒト乳がん、ＨＴ−２９ヒト結腸直腸がん、ＮＣＩ−Ｈ２９２ヒト肺がん及びＮＣＩ−Ｈ５２０ヒト肺がん）及びカニクイザルＣＤ７１を発現する１つのＣＨＯ−Ｋ１細胞株から測定された平均Ｋａｐｐを反映している。各被験物質についての、例示的な見かけのＫｄ値を、表３Ｃに示している。
【０５２３】
【表９】
2020537649.tif 000036
【０５２４】
これらの例示的な結果は、無傷活性化可能抗体及び無傷活性化可能コンジュゲート抗体が、これらの活性化対応物又はこれらの親抗体と比較して、低度の、ＣＤ７１に対する見かけのアフィニティーを示したことを示している。
【０５２５】
実施例５  複数の、患者由来の原発腫瘍及び転移性腫瘍におけるＣＤ７１の発現
本実施例は、抗ＣＤ７１抗体を使用する免疫組織化学（ＩＨＣ）染色により、ＣＤ７１が、多種多様な原発腫瘍型及び転移性腫瘍型において発現されていることを示す。
【０５２６】
図１及び２は、ＣＤ７１が、複数の、患者由来の原発腫瘍及び患者由来の転移性組織マイクロアレイ（ＴＭＡ）に対する、市販の抗ＣＤ７１抗体によるＩＨＣ染色を使用して、多数の原発腫瘍試料中及び転移性腫瘍試料中で、高度に発現されたことを示している。図１は、頭頸部がん（１）、子宮頸がん（２）、乳がん（３）、リンパ節内の非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）（４）、肺がん（５）、膀胱がん（６）、卵巣がん（７）及び食道がん（８）におけるＣＤ７１についてのＩＨＣ染色を示している。図２が示すところによれば、転移性腫瘍に由来するコアからなる、組織マイクロアレイ（ＴＭＡ）におけるＣＤ７１についてのＩＨＣ染色が、大部分のコアにおける、中〜高レベルのＣＤ７１の発現を示した。免疫組織化学（ＩＨＣ）による、ヒト腫瘍試料中の、ＣＤ７１の発現の概要を、表４Ａに示している。
【０５２７】
【表１０】
2020537649.tif 000037
【０５２８】
［実施例６］  ＣＲＣ異種移植片モデルにおける、マスキング効率及び活性化可能抗ＣＤ７１−ＡＡＤＣのインビボ有効性
本実施例は、本開示のコンジュゲート毒素を伴う活性化可能抗ヒトＣＤ７１抗体（ＡＡＤＣ）のマスキング効率が、ＨＴ２９結腸直腸がん（ＣＲＣ）マウス異種移植片モデルにおけるその有効性の因子であることを示す。
【０５２９】
これらの研究において、マウスにおけるＨＴ２９異種移植片腫瘍を、１５０ｍｍ３の平均体積へと増殖させた。次いで、マウスを、群へと無作為化し、１日目に、３ｍｇ／ｋｇ（又は表示の他の形において）ずつの、表示の各被験物質を投与した。平均腫瘍体積±ＳＥＭを、各時点についてプロットした。
【０５３０】
図４Ａが示すところによれば、高アフィニティーマスクを伴う、本開示の例示的な抗ＣＤ７１  ＡＡＤＣ（抗ＣＤ７１  ＴＦ０１−３０１１−ｖｃ−ＭＭＡＥ）が、単回の３ｍｇ／ｋｇの投与の後において、媒体対照と比べた、ある程度の腫瘍増殖の阻害を示した。これと比較して、図４Ｂは、低アフィニティーマスクを伴うが、同じ切断可能基質を伴う、本開示の例示的な抗ＣＤ７１  ＡＡＤＣ（抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−３０１１−ｖｃ−ＭＭＡＥ）が、単回の３ｍｇ／ｋｇの投与の後において、異種移植片の、本質的に完全な退縮を示したことを示した。図４Ｃが示すところによれば、低アフィニティーマスクを伴うが、同じ切断可能基質を伴う、本開示の例示的な抗ＣＤ７１  ＡＡＤＣ（抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−３０１１−ｖｃ−ＭＭＡＥ）がまた、単回の２ｍｇ／ｋｇ又は３ｍｇ／ｋｇのどちらの投与量においても、ＨＴ２９異種移植片の、本質的に完全な退縮も示した。これらの例示的な結果が示すところによれば、低アフィニティーのマスキング部分を伴うＡＡＤＣが、高アフィニティーのマスキング部分を伴うＡＡＤＣより、大きな有効性を示した。
【０５３１】
実施例７  ＣＲＣ異種移植片モデルにおける、切断可能基質及び活性化可能抗ＣＤ７１−ＡＡＤＣのインビボ有効性
本実施例は、マウス異種移植片モデルにおける、本開示の例示的な活性化可能抗ヒトＣＤ７１コンジュゲート抗体（ＡＡＤＣ）の有効性に対する、切断可能基質の効果を示す。
【０５３２】
これらの研究において、マウスにおける、ＨＴ２９（結腸直腸がん由来）異種移植片腫瘍を、１５０ｍｍ３の平均体積へと増殖させた。次いで、マウスを、群へと無作為化し、１日目に、表示量の、表示の被験物質を投与した。平均腫瘍体積±ＳＥＭを、各時点についてプロットした。
【０５３３】
図５は、本開示の例示的な抗ＣＤ７１  ＡＡＤＣ（ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃ−ＭＭＡＥ）が、マウス異種移植片モデルの、２つの異なる投与量において、完全又はほぼ完全な退縮を示すことを示している。これらの例示的なデータは、切断可能性が低い基質を伴う、表示のＡＡＤＣ（抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃ−ＭＭＡＥ）の有効性が、図４Ｂ及び４Ｃにおいて示された、切断可能性が高い基質を伴うＡＡＤＣ（抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−３０１１−ｖｃ−ＭＭＡＥ）の有効性と実質的に同じであることを裏付けている。
【０５３４】
実施例８  複数の異種移植片モデルにおける、活性化可能抗ＣＤ７１−ＡＡＤＣのインビボ有効性
本実施例は、多様なマウス異種移植片モデルの、２つの異なる薬物対抗体比（ＤＡＲ）における、本開示のＡＡＤＣである、抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃ−ＭＭＡＥの有効性を示す。
【０５３５】
これらの研究において、マウスにおける、卵巣がん（ＯＶ−９０；図６Ｂ）、胃がん（ＮＣＩ−Ｎ８７；図６Ａ）、ＥＲ＋乳がん（ＢＴ４７４；図６Ｃ）又はトリプルネガティブ乳がん（ＨＣＣ−７０；図６Ｄ）の異種移植片腫瘍を、１５０ｍｍ３の平均体積へと増殖させた。次いで、マウスを、群へと無作為化し、１日目に、表示の被験物質を投与した。投与される、各ＡＡＤＣの量は、抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃ−ＭＭＡＥ（平均ＤＡＲを約３とする）が、３ｍｇ／ｋｇにおいて投与され、抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃ−ＭＭＡＥ  Ｅ２（平均ＤＡＲを約２とする）が、４．３ｍｇ／ｋｇにおいて投与されるように、ＭＭＡＥ毒素の量に基づき、用量をマッチさせた。平均腫瘍体積±ＳＥＭを、各時点についてプロットした。
【０５３６】
図６Ａ〜６Ｂが示すところによれば、本開示の例示的な抗ＣＤ７１  ＡＡＤＣ（抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃ−ＭＭＡＥ）が、卵巣がん及び胃がんのマウス異種移植片モデルにおいて、完全又はほぼ完全な退縮を示す。各々２当量ずつのＭＭＡＥ毒素を伴う精製ＡＡＤＣを含む、抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃ−ＭＭＡＥ  Ｅ２（すなわち、ＤＡＲを約２とする）もまた、同じモデルにおいて、完全な退縮を示した。図６Ｃ及び６Ｄにおいて示された場合など、完全又はほぼ完全な退縮が観察されなかった場合においても、全ての場合に、Ｅ２（すなわち、ＤＡＲを約２とする）の活性と、高ＤＡＲ  ＡＡＤＣの活性とは、同等又はほぼ同等であった。これらの例示的なデータは、用量をマッチさせたＥ２（すなわち、ＤＡＲを約２とする）ＡＡＤＣ（抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃ−ＭＭＡＥ  Ｅ２）の有効性が、対応する高ＤＡＲ  ＡＡＤＣと同等であることを裏付けている。
【０５３７】
表４Ｂに示されている通り、ＤＡＲを約２とする抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃ−ＭＭＡＥ  Ｅ２  ＡＡＤＣの、様々な患者由来細胞株（ＰＤＸ）又はがん細胞株（ＣＤＸ）に対する有効性を、マウス異種移植片モデルにおいて調べ、６ｍｇ／ｋｇ以下において、このＡＡＤＣを１回又は２回投与した。下記にまとめられている結果が示すところによれば、ＡＡＤＣが、被験モデルのほぼ全てにおいて、退縮〜休眠〜腫瘍増殖の阻害の範囲の、少なくともある程度の有効性を示した。
【０５３８】
【表１１】
2020537649.tif 000038
【０５３９】
実施例９  処置された動物に由来する試料中の、コンジュゲート及び遊離毒素並びに無傷ＡＡＤＣ及び全ＡＡＤＣのレベルを決定する生物解析アッセイ
本実施例は、代謝物の、被験試料中レベルであって、コンジュゲート及び遊離毒素のレベル並びに無傷活性化可能コンジュゲート抗体及び全活性化可能コンジュゲート抗体のレベルを含むレベルを測定するアッセイのための、例示的なワークフローを示す。
【０５４０】
図７Ａ、７Ｂ及び７Ｃは、処置されたサルにおける、無傷活性化可能抗体及び全活性化可能抗体（すなわち、無傷活性化可能抗体と、切断された活性化可能抗体との組合せ）の量のほか、処置されたサルにおける、無傷ＡＡＤＣ（切断されていない毒素を伴う）及び切断された毒素の量を決定する、例示的な生物解析アッセイのための概略的ワークフローを示す。図７Ａに描示されている例示的なアッセイプロトコールを使用して、無傷活性化可能抗体及び切断された活性化可能抗体（例えば、抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−３００１）の試料中総量は、磁気プロテインＡビーズにより捕捉し、その後、変性させ（ＲａｐｉＧｅｓｔ（商標））、ジチオトレイトールにより還元し、アルキル化させ、トリプシン消化することができる。逆相ＬＣ−ＭＳ／ＭＳを使用して、抗体の重鎖及び軽鎖に由来する、特徴的なペプチド断片を同定及び定量することにより、結果として得られるペプチド断片を解析することができる。この特定のアッセイにおいて、無傷活性化可能抗体及び切断された活性化可能抗体の両方の総量を決定するのに、逆相ＬＣ−ＭＳ／ＭＳを使用し、これにより、無傷活性化可能抗体及び切断された活性化可能抗体の試料中総量を測定して、活性化可能抗体又は活性化可能コンジュゲート抗体の抗体部分に特徴的な、１つ以上のペプチドを、同定及び定量することができる。
【０５４１】
同じアッセイにおいて、無傷活性化可能抗体の総量を決定するのに、逆相ＬＣ−ＭＳ／ＭＳを使用し、これにより、無傷活性化可能抗体の試料中総量を測定して、活性化可能抗体（例えば、抗ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１の軽鎖のＮ末端に由来する）、切断されていない切断可能部分（ＣＭ）及びマスキング部分（ＭＭ）に特徴的な、１つ以上のペプチドを、同定及び定量することができる。
【０５４２】
図７Ｂに描示されている例示的なアッセイプロトコールを使用して、試料中において、その毒素（ＭＭＡＥ）へのコンジュゲーションを維持している、ＡＡＤＣ（例えば、抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−３００１−ｖｃ−ＭＭＡＥ）の総量を決定することができる。このアッセイにおいて、コンジュゲート活性化可能抗体及び非コンジュゲート活性化可能抗体の両方の総量を、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ（登録商標）プロテインＡにより捕捉する。この画分を、システインプロテアーゼにより処理して、リンカー−毒素を切断し、これにより、その活性化可能抗体へのコンジュゲーションを維持した、任意の毒素を放出する。システインプロテアーゼにより切断された画分を解析するのに、逆相ＬＣ−ＭＳ／ＭＳを使用して、捕捉された活性化可能抗体へのコンジュゲーションを維持した、特徴的な毒素（ＭＭＡＥ）を同定及び定量し、これにより、コンジュゲート毒素の、試料中量を測定することができる。
【０５４３】
図７Ｃに描示されている例示的なアッセイプロトコールを使用して、毒素の、試料中総量であって、ＡＡＤＣから切断された毒素の、動物における総量を含む総量を決定することができる。図７Ｃに描示されているこの例示的なアッセイにおいて、試料に由来する全タンパク質は、上清中に沈殿され、遊離している、非コンジュゲート毒素（ＭＭＡＥ）である。沈殿されたタンパク質と会合していなかった特徴的な毒素（例えば、ＭＭＡＥ）を同定及び定量するのに、逆相ＬＣ−ＭＳ／ＭＳを使用して、上清を解析し、これにより、非コンジュゲート毒素の、試料中量を測定することができる。これらのアッセイにおいて、定量化を可能とするように、内部標準物質（例えば、ＳＩＬｕ（商標）Ｍａｂ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を組み入れた。
【０５４４】
実施例１０  カニクイザルにおける、抗ＣＤ７１−ＡＡＤＣ及び抗ＣＤ７１ＡＤＣの忍容性及び安定性
本実施例は、本開示のコンジュゲート毒素を伴う活性化可能抗ヒトＣＤ７１抗体（ＡＡＤＣ）が、カニクイザルにおいて、１つ以上の血液学リードアウト及び臨床症状に基づき、対応する親抗ＣＤ７１抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）と比較して、忍容性が良好であることを示す。結果を、下記の表５にまとめ、図１７にまとめている。
【０５４５】
この研究において、１日目及び２１日目において、表示の投与量により表示のＡＡＤＣ又はＡＤＣにより、カニクイザルを、静脈内処置した。抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−３０１１−ｖｃ−ＭＭＡＥ  ＡＡＤＣについて、１回だけの投与が忍容され、抗ＣＤ７１−ｖｃ−ＭＭＡＥ  Ｅ２（すなわち、ＤＡＲを約２とする）ＡＤＣについて、１回だけの投与が実施された。各動物から得られた、活性化可能抗体（すなわち、総活性化可能抗体対無傷活性化可能抗体）の、試料中の安定性は、実施例９に記載された通り、逆相ＬＣ／ＭＳ／ＭＳを使用して実施した）。
【０５４６】
【表１２】
2020537649.tif 000039
【０５４７】
１回目の用量投与後において測定された最小の体重に対して、体重の減少を決定した。ベースラインの好中球カウントは、１μＬ当たり少なくとも１０００であった。
【０５４８】
表５にまとめられている通り、マスキングされていないＥ２（すなわち、ＤＡＲを約２とする）ＡＤＣ（抗ＣＤ７１−ｖｃ−ＭＭＡＥ  Ｅ２）は、初回投与から８日以内に、致死性を示した。
【０５４９】
表５にまとめられている例示的な結果がまた示すところによれば、切断可能性が低い基質を伴うＡＡＤＣ（すなわち、抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃ−ＭＭＡＥ及び抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃ−ＭＭＡＥ  Ｅ２）が、切断可能性が高い基質を伴う、対応するＡＡＤＣ（すなわち、抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−３０１１−ｖｃ−ＭＭＡＥ）より、忍容が良好であり、非ヒト霊長動物において、高レベルの循環安定性を示した。最後に、例示的な結果が示すところによれば、ＡＡＤＣ（抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃ−ＭＭＡＥ  Ｅ２（すなわち、ＤＡＲを約２とする））が、対応する高ＤＡＲ  ＡＡＤＣ（抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃ−ＭＭＡＥ）より、測定可能な形で改善された、非ヒト霊長動物における忍容性を示した。
【０５５０】
実施例１１  カニクイザルにおける、抗ＣＤ７１−ＡＡＤＣの安定性及び薬物動態
本実施例は、カニクイザルにおける、本開示のコンジュゲート毒素を伴う活性化可能抗ヒトＣＤ７１抗体（ＡＡＤＣ）の安定性及び薬物動態を示す。この研究において、
この研究において、その結果について実施例１２〜１４においてさらに詳細に記載される、カニクイザルの４つの群を、表６に示されている表示の用量及びスケジュールによって、表示のＥ２（すなわち、ＤＡＲを約２とする）抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃ−ＭＭＡＥ又は媒体対照により、静脈内処置した。各動物に由来する試料は、表６に表示された日に取得し、これを、全活性化可能抗体及び無傷活性化可能抗体並びにコンジュゲートＭＭＡＥ毒素及び非コンジュゲートＭＭＡＥ毒素について、実施例９に記載された形でアッセイした。
【０５５１】
【表１３】
2020537649.tif 000040
【０５５２】
表６にまとめられた通り、カニクイザルに、示された投与レベル及びスケジュールで、緩徐なＩＶボーラスにより、媒体又は抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃ−ＭＭＡＥ  Ｅ２  ＡＡＤＣのいずれかを投与した。トキシコキネティクス解析のための血液試料は、血漿へと加工し、解析の前に、−８０℃において保管した。血清試料は、投与前及び群１〜３について、２回目の投与の７日後及び群４について、初回投与の２２日後に、抗薬物解析のために得た。全ての群は、３匹の動物（２匹の雄及び１匹の雌）を含有した。
【０５５３】
実施例１２  カニクイザルにおける、抗ＣＤ７１−ＡＡＤＣの安定性
本実施例は、カニクイザルにおける、本開示のコンジュゲート毒素を伴う活性化可能抗ヒトＣＤ７１抗体（ＡＡＤＣ）の安定性を示す。
【０５５４】
表８Ａ及び８Ｂの例示的な結果に示されている通り、投与されたＡＡＤＣの、全活性化可能抗体及び無傷活性化可能抗体（抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１）の血漿濃度を、実施例９及び１１に記載された形において決定した。無傷活性化可能抗体及び全活性化可能抗体のいずれについても、定量下限（ＬＬＯＱ）は、表示の通り、０．６３３ｎＭであった。これらの例示的な結果は、無傷活性化可能抗体の血漿濃度が、一般に、２１日間の投与間隔中、元来投与された用量に比例するレベルで維持されたことを裏付ける。投与の７日後においてもなお、血漿中の活性化可能コンジュゲート抗体（抗ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃ−ＭＭＡＥ  Ｅ２）のうちの約８０％は、無傷の、プロドラッグ形態にあった。
【０５５５】
表９Ａ及び９Ｂの例示的な結果に示されている通り、コンジュゲートＭＭＡＥ毒素及び非コンジュゲートＭＭＡＥ毒素の血漿濃度を、実施例９及び１１に記載された形において決定した。定量下限（ＬＬＯＱ）は、表示の通り、コンジュゲートＭＭＡＥについて、１．７７ｎＭであり、非コンジュゲートＭＭＡＥについて、０．３１ｎＭであった。これらの例示的な結果は、血漿濃度中において測定された全ＭＭＡＥのうちの１％未満が、非コンジュゲート形態にあることを裏付ける。
【０５５６】
実施例１３  カニクイザルにおける、抗ＣＤ７１−ＡＡＤＣの投与後の、薬物の、活性化可能抗体に対する比の変化
本実施例は、カニクイザルへの、本開示のコンジュゲート毒素を伴う活性化可能抗ヒトＣＤ７１抗体（ＡＡＤＣ）の投与の後、血漿中において観察された、薬物（ＭＭＡＥ）の、活性化可能抗体（抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１）比を示す。
【０５５７】
全活性化可能抗体及び無傷活性化可能抗体（抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１）の血漿濃度を、実施例９及び１１に記載された形において決定した。図１０に示されている通り、薬物の、活性化可能抗体に対する比は、表示の各時点において、コンジュゲートＭＭＡＥの濃度（実施例１２及び図９Ａを参照されたい）を、総活性化可能抗体の濃度（実施例１１及び図８Ａを参照されたい）により除することにより計算した。具体的な時点についての平均比及び標準偏差を、表７に示している。これらの例示的な結果は、観察された、ＭＭＡＥ薬物の、活性化可能抗体に対する比が、時間経過にわたり、３回の投与の各々の間の、一貫した形において変化したことを裏付ける。各回の投与において、無傷ＡＡＤＣの計算されたＤＡＲは、投与の直後及び投与から４時間以内において、約２において始まり、この比は、投与の約９６時間（すなわち、約４日）後において、約１へと降下した。
【０５５８】
【表１４】
2020537649.tif 000041
【０５５９】
実施例１４  カニクイザルにおける抗ＣＤ７１−ＡＡＤＣの薬物動態パラメータ
本実施例は、カニクイザルにおける、本開示のコンジュゲート毒素を伴う活性化可能抗ヒトＣＤ７１抗体（ＡＡＤＣ）の薬物動態パラメータを示す。
【０５６０】
全活性化可能抗体及び無傷活性化可能抗体（抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１）の血漿濃度を、実施例９及び１１に記載された形において決定した。表８に示された通り、所与の解析物についての平均Ｃｍａｘは、観察された最大血漿濃度に基づいた。平均ＡＵＣ０−７は、０〜７日目における血漿濃度−時間曲線下面積に基づいた。総活性化可能コンジュゲート抗体、無傷活性化可能コンジュゲート抗体及びコンジュゲートＭＭＡＥについての半減期推定値は、２．５〜６．３日間の範囲であった。半減期推定値は、非コンジュゲートＭＭＡＥについては生成しなかった。
【０５６１】
【表１５】
2020537649.tif 000042
【０５６２】
実施例１５  抗薬物抗体についてのアッセイ
本実施例は、被験動物における抗薬物抗体（ＡＤＡ）の形成についてモニタリングする架橋アッセイの使用について記載する。
【０５６３】
ＡＤＡ解析のための血漿試料を、研究前及び２回目の投与の７日後に回収した。抗薬物抗体を、研究において投与された動物９例中３例において検出した。
【０５６４】
実施例１６  活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体の、インビトロにおける細胞傷害作用
本実施例は、ヒト腫瘍由来細胞株上の、アイソタイプ対照ＡＤＣと比較した、本開示の、無傷の活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体及び活性化された活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体についての、インビトロ細胞傷害作用アッセイについて記載する。
【０５６５】
マトリプターゼによる前処理を伴う又はこれを伴わない、本開示の活性化可能コンジュゲート抗体である、抗ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２（配列番号１６７のＨＣ及び配列番号１６９のＬＣ）の、例示的なインビトロ細胞傷害活性を査定し、アイソタイプ対照である、非ＣＤ７１結合性コンジュゲート抗体（ＤＡＲを２とするＡＢ０９５−ｖｃＭＭＡＥであり、ここで、ＡＢ０９５は、破傷風毒素に特異的である）と比較した。各被験物質を、各細胞株と共に、５日間にわたりインキュベートし、次いで、細胞生存率を、各被験物質の濃度範囲を測定して、各被験物質について、ＥＣ５０を決定することにより、被験物質の細胞傷害作用を、ＨＴ２９（ヒト結腸直腸がん細胞株）、Ｈ２９２（ヒト肺がん細胞株）、Ｈ５２０（ヒト肺がん細胞株）及びＨＣＣ１８０６（ヒト乳がん細胞株）において調べた。結果を、下記の表９にまとめている。
【０５６６】
【表１６】
2020537649.tif 000043
【０５６７】
これらの例示的な結果は、無傷活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体のインビトロ細胞傷害作用が、アイソタイプ（ｉｓｏｔｙｐｃ）対照のインビトロ細胞傷害作用と同等であるが、マトリプターゼによる活性化時に、実質的に増大したことを示す。
【０５６８】
実施例１７  活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体による、Ｆｃへの結合及び補体の活性化
本実施例は、本開示の活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体が、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）など、エフェクター機能ベースの機構を媒介する能力を裏付けた。
【０５６９】
ＩｇＧ抗体のＦｃ（ｆｒａｇｍｅｎｔ  ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｂｌｅ）部分は、それらの一部が、Ｆｃ受容体及びＣ１ｑへの結合を介して生じる、様々な機能を媒介し得る。これらの機能は、サイトカイン誘導、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）、古典的補体系経路の活性化を介する補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）、食作用、及びＩｇＧのリサイクリングを介する抗体のホメオスタシスを含む（Ｒａｖｅｔｃｈら、Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２００１年；１９：２７５〜２９０頁；Ｒｏｏｐｅｎｉａｎら、Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２００７年；７：７１５〜７２５頁）。
【０５７０】
抗体のホメオスタシスは、部分的に、腸上皮細胞上、血管内皮細胞上及びプロフェッショナル抗原提示細胞上に存在する、Ｆｃ関連新生児受容体であるＦｃＲｎにより調節される。細胞内において、ＦｃＲｎは、小胞内に存在するが、酸性エンドソーム内の、低ｐＨにおいて、ＦｃＲｎは、飲作用により取り込まれている、ＩｇＧのＦｃ部分に結合し得る。次いで、エンドソームが、細胞外の中性ｐＨへの曝露の結果として、細胞表面へとリサイクリングされると、ＩｇＧが放出される。この過程は、単層上皮障壁を隔てたＩｇＧトラフィッキングの制御を可能とし、ＩｇＧ分子を、異化から保護し、ＩｇＧの血清半減期を延長する（Ｒｏｏｐｅｎｉａｎ）。実際、低ｐＨにおいて、ＦｃＲｎの結合を増強するが、生理学的ｐＨにおいて、低度の結合を維持する突然変異は、血清半減期の延長をもたらすことが示されている（Ｈｉｎｔｏｎら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．、２００４年；２７９：６２１３〜６２１６頁；Ｈｉｎｔｏｎら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２００６年；１７６：３４６〜３５６頁）。
【０５７１】
ヒトＦｃγＲ系は、活性化（ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ及びＦｃγＲＩＩＩａ）受容体及び阻害性（ＦｃγＲＩＩｂ）受容体の両方から構成される。高アフィニティーのＩｇＧ１受容体であるＦｃγＲＩは、単球系統の細胞により発現されている（Ｌｉら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２００８年；１８１：１０１２〜１０１８頁）。ＦｃγＲＩＩａは、より広く発現されている、低アフィニティーのＩｇＧ受容体であって、免疫複合体に優先的に結合するＩｇＧ受容体である（Ｌｉｔｔａｕａら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９０年；１４４：３１８３〜３１８６頁）。ＦｃγＲＩＩｂは、大半が、単球系統及びＢ細胞において発現されており、低アフィニティーの阻害性ＩｇＧ受容体である。ＦｃγＲＩＩｂが、ＩｇＧ複合体へと結合すると、脱顆粒、食作用、ＡＤＣＣ、サイトカイン放出及び炎症促進性活性化などのカルシウム依存性過程の全てが遮断される（Ｃｌｙｎｅｓら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．、６：４４６〜４４６頁（２０００年）；Ｍｉｎａｒｄ−Ｃｏｌｉｎら、Ｂｌｏｏｄ、１１２：１２０５〜１２１３頁（２００８年）及びＨａｍａｇｕｃｈｉら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、２０３：７４３〜７５３頁（２００６年））。ＦｃγＲＩＩＩａは、ＮＫ細胞のＡＤＣＣ活性の一因となる、低アフィニティーの受容体である（Ｒａｖｅｔｃｈ）。Ｆｃγ受容体の多様性に付け加えると、ＩｇＧ分子に対するアフィニティーの差違を有する、ＦｃγＲＩＩａ（Ｈ１３１対Ｒ１３１）及びＦｃγＲＩＩＩａ（Ｖ１５８対Ｆ１５８）の多型変異体が存在する（Ｂｒｕｈｎｓら、Ｂｌｏｏｄ、２００８年；１１３：３７１６〜３７２５頁）。
【０５７２】
抗体の、ＦｃγＲ又は補体エフェクター系を介する様々な機能を媒介する能力は、ＩｇＧベースの、操作された生物学的薬剤における、意図されない薬理作用の過剰増強の可能性を可能とする。末梢血リンパ球における、未知の交差反応性は、Ｆｃγ受容体の架橋を誘発することが可能である。Ｆｃγ受容体の相互作用を架橋することは、サイトカインの誘導、ＡＤＣＣ及び食作用を含む、様々な機能を媒介する（Ｒａｖｅｔｃｈ）ため、治療用抗体が、血液中又は組織内の意図されない標的に結合する能力を決定することが重要である。
【０５７３】
方法：表面プラズモン共鳴による、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ及びＦｃＲｎの結合アッセイ
表面プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ）により、これらの、抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃ−ＭＭＡＥ、抗ＣＤ７１  Ａｂ２１．１２（ＩｇＧ１／κ）、ＡＢ０９５−ＭＭＡＥ−Ｅ２及びＡＢ０９５（ＩｇＧ１／κ）への結合について評価するのに、６×Ｈｉｓタグを介して、組換えヒトＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩを捕捉した。製造元のプロトコールに従うアミンカップリングにより、マウス抗６×Ｈｉｓ抗体を、ＣＭ５チップ上に、１００００ＲＵの密度まで、直接固定化させた。次いで、ヒトＦｃγＲを、フローセル２、３及び４において捕捉して、２５０〜５００ＲＵの、ＦｃγＲの捕捉レベルを達成した。フローセル１を、基準表面として使用した。ＨＢＳ−ＥＰ＋緩衝液（ＧＥ、Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を、ランニング緩衝液として使用した。抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃ−ＭＭＡＥ  Ｅ２、抗ＣＤ７１  Ａｂ２１．１２（ＩｇＧ１／κ）、ＡＢ０９５−ＭＭＡＥ−Ｅ２、ＡＢ０９５（ＩｇＧ１／κ）及びトラスツズマブ（ＩｇＧ１／κ）を、全てのフローセル上に、５０μＬ／分の流速、ＦｃγＲＩＩについて、４６．９〜１２０００ｎＭ、ＦｃγＲＩＩＩについて、７．８〜４０００ｎＭの範囲の濃度（両方とも、２倍の系列希釈液）で、１〜２分間にわたり（ＦｃγＲＩＩｂ及びＦｃγＲＩＩａ  Ｈ１３１については１分間にわたり、ＦｃγＲＩＩＩａ  Ｆ１５８及びＦｃγＲＩＩＩａ  Ｖ１５８については２分間にわたり）注入した後、１〜５分間の（ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩａ  Ｈ１３１については１分間にわたり、ＦｃγＲＩＩＩａ  Ｆ１５８及びＦｃγＲＩＩＩａ  Ｖ１５８については５分間にわたる）解離時間を施した。チップ表面は、４つ全てのフローセル上、１００μＬ／分の流速において、２秒間にわたる、１００ｍＭのＨＣｌの注入により再生した。全ての種類の実験誤差（計器、表面及び作業者）に対処するように、３つの異なるＣＭ５チップの使用による、３つの実験を、各試料について（各々、２回繰り返して）行った。これらの３つの実験の結果を平均した。
【０５７４】
ＦｃＲｎ結合解析のために、製造元のプロトコールに従うアミンカップリングにより、抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃ−ＭＭＡＥ  Ｅ２、抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１（ｖｃ−ＭＭＡＥを伴わないＩｇＧ１／κ）、ＡＢ０９５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２（ＤＡＲ＝２に強化したＭＭＡＥを含有する、非特異的ヒト抗破傷風トキソイドモノクローナルＩｇＧ１／κ抗体）、ＡＢ０９５（非特異的ヒト抗破傷風トキソイドモノクローナルＩｇＧ１／κ抗体）及びトラスツズマブ（ＩｇＧ１／κ）を、ＣＭ５チップ上に、５００ＲＵの密度まで、直接固定化させた。Ｈｕ  ＦｃＲｎを、全てのフローセル上に、５０μＬ／分の流速、５．５〜１２０００ｎＭの範囲の濃度（３倍の系列希釈液）において、１分間にわたり注入した後、２分間の解離時間を施した。表面は、２秒間にわたる、１００ｍＭのＨＣｌに続く、ＨＢＳ−ＥＰ＋、ｐＨ７．４の注入により再生した。試料を調製し、２つのランニング緩衝液系である、ＭＥＳ−ＥＰ＋ｐＨ６．０中及びＨＢＳ−ＥＰ  ｐＨ７．４中において試行にかけた。計器、表面及び作業者の誤差を考慮して、３つの異なるＣＭ５チップの使用による、３つの実験を、各試料について（各々、２回繰り返して）行った。これらの３つの実験の結果を平均した。
【０５７５】
全ての組換えヒトＦｃγＲＩＩＩａ  Ｖ１５８データ及びＦｃγＲＩＩＩａ  Ｆ１５８データを、捕捉レベルのばらつきを考慮して、Ｒｍａｘを局所に固定した、１：１の結合当てはめモデルへと当てはめた。組換えヒトＦｃγＲＩＩｂ、組換えヒトＦｃγＲＩＩａ  Ｈ１３１及び組換えヒトＦｃＲｎの結合データを、定常状態アフィニティーモデルへと当てはめた。全てのデータを当てはめるのに、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｖｅｒｓｉｏｎ  ２．０を使用した。
【０５７６】
結果
抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃ−ＭＭＡＥ  Ｅ２は、ヒトＩｇＧ１／κアイソタイプＦｃを含有する。抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃ−ＭＭＡＥ  Ｅ２が、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＩＩａ、ＦｃγＩＩｂ、ＦｃγＩＩＩに結合することが予測されたことは、他の野生型ＩｇＧ１／κ抗体と符合した。抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃ−ＭＭＡＥ  Ｅ２の、ＦｃγＲへの結合は、表面プラズモン共鳴、ＦｃγＲＩ競合結合ＥＬＩＳＡ（結果は示されていない）及びＦｃγＲＩＩＩ競合結合ＥＬＩＳＡ（結果は示されていない）により解析し、抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃ−ＭＭＡＥ  Ｅ２の、補体への結合は、ヒト及びカニクイザル補体の機能的活性化アッセイ（結果は示されていない）により解析した。これらのアッセイは、市販のヒト抗体及び社内において作出したヒト抗体をベンチマークとした。トラスツズマブの素材である、臨床グレードのヒト抗ＨＥＲ２  ＩｇＧ１／κを、ＦｃγＲ結合アッセイのための陽性対照として使用した。Ｆｃ受容体及び補体は、野生型ＩｇＧ１抗体に結合することが公知である（Ｒａｖｅｔｃｈ；Ｒｏｏｐｅｎｉａｎ；Ｂｕｒｔｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ．１９８０年；２８８：３３８〜３４４頁；Ｈｕｇｈｅｓ−Ｊｏｎｅｓら、Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９７９年；１６：６９７〜７０１頁；及びＨｅｚａｒｅｈら、Ｊ  Ｖｉｒｏｌ．、２００１年；７５：１２１６１〜１２１６８頁）。抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃ−ＭＭＡＥについての検討は、それが、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＩＩａ  Ｈ１３１、ＦｃγＲＩＩＩ及びＦｃＲｎに結合するが、陽性対照であるトラスツズマブと比較した場合、ＦｃγＲＩＩＩへの結合のわずかな低減（ＳＰＲによる）が観察されることを明らかにした。抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃ−ＭＭＡＥ  Ｅ２の、ＦｃγＲＩＩｂへの結合は、Ｂｉａｃｏｒｅ計器の検出下限である、１．０×１０５のＫＤを下回ったため、微弱過ぎて、決定できなかった（表１０Ａ及び１０Ｂを参照されたい）。
【０５７７】
【表１７】
2020537649.tif 000044
【０５７８】
【表１８】
2020537649.tif 000045
【０５７９】
補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）は、ＣＤＣについてのＥＬＩＳＡにより、ｉＣ３ｂ（ヒト）又はＣ３（カニクイザル）を捕捉することを介して、活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体が、ヒト及びカニクイザルの血清補体を活性化させる能力について評価することにより査定した。
【０５８０】
図１２の例示的な結果に示されている通り、表示の濃度における、表示の被験物質の、ｉＣ３ｂへの結合を、ヒト補体の活性化についてのアッセイとして示す。抗ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２は、ヒト血清中及びカニクイザル血清中両方の補体活性化アッセイにおいてｉＣ３ｂに結合したが、ＣＤＣアッセイにおいて使用した陽性対照である、７Ｃ６抗体より、低度においてであった。表示の突然変異を伴う７Ｃ６．７抗体を、陰性対照として使用した。抗ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２の、ｉＣ３ｂへの結合もまた、その非コンジュゲート活性化可能抗体対応物（抗ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１）より低度であった。
【０５８１】
実施例１８  ヒトＰＢＭＣにおけるサイトカインの放出
本実施例は、抗ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２は、ヒト又はカニクイザルの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）に結合しないが、ＩｇＧ１抗体は、末梢血リンパ球上のＦｃγ受容体を架橋し、これにより、サイトカインの誘導を含む、様々な機能を媒介することが可能であることを示した。
【０５８２】
抗ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２又は抗ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１が、インビトロにおいて、ヒトＰＢＭＣ内のサイトカイン放出を誘導する能力を、以下のサイトカイン：インターロイキン（ＩＬ）−１β、ＩＬ６、ＩＬ２、インターフェロン（ＩＦＮ）γ及び腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）について、可溶性フォーマット又は固相（プレート結合型）フォーマットにおいて査定した。固相実験のために、８例の健常ヒトドナーに由来するＰＢＭＣを、０．９６μｇの被験物質により、あらかじめコーティングされたポリプロピレン製プレートへと添加し、１．５時間後に洗浄した。解析のために、４８時間後に、上清を回収した。トラスツズマブ及び非結合性アイソタイプ対照ＡＤＣであるＡＢ０９５−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２を、陰性対照として使用した。Ｔ細胞刺激抗体である、ＴＧＮ１４１２又はビジリズマブ並びにＢ細胞及び骨髄細胞を刺激するリポ多糖（ＬＰＳ）という、３つの陽性対照を使用した。被験ドナー８例中１例において、測定されたサイトカイン５つ中３つである、ＩＬ−１β、ＩＬ−６及びｄＴＮＦαの実質的な放出が、抗ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２及びＡＢ０９５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２の両方に応答して観察された。さらなるドナー８例中２例において、ＩＬ−６及びＴＮＦαの放出が、抗ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２及びＡＢ０９５−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２の両方に応答して観察された。３例のドナーを、２４時間にわたる、高細胞密度提示アッセイである、可溶性提示アッセイにおいて調べた。
【０５８３】
この研究において、ヒトドナーＰＢＭＣからのサイトカイン放出は、抗ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２及び抗ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１（ＩｇＧ１κ）による、ウェル１つ当たり０．９６μｇのプレコートによる刺激の後において測定した。トラスツズマブを、陰性対照である、ＩｇＧ１κ抗体として使用した。ＡＢ０９５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２及びＡＢ０９５（ＩｇＧ１κ）を、アイソタイプ対照抗体として使用した。ＴＧＮ１４１２、ビジリズマブ及びリポ多糖（ＬＰＳ）を、サイトカイン放出についての陽性対照として追加した。太字の値及び枠囲いされた値は、トラスツズマブによる放出の＞２倍のサイトカイン放出を誘発した被験物質を強調している。
【０５８４】
表１１の例示的な結果に示されている通り、抗ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２は、陰性対照であるトラスツズマブにより誘導されたレベルを上回るサイトカイン放出を誘発しなかった。サイトカイン放出についてはまた、３例のカニクイザルドナーにおいても、以下のサイトカイン：ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−２、ＩＦＮγ、ＩＬ−８及びＩＬ１０について、固相フォーマットにおいて評価した。抗ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２は、被験ドナー３例中１例において、トラスツズマブにより規定されたバックグラウンドレベルをわずかに上回る、ＩＬ−８の産生を誘発した。抗ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２についての、カニクイザル非ＧＬＰ／ＧＬＰ毒性研究において、サイトカイン放出を表す急性臨床症状は、いかなる投与レベルにおいても観察されなかった。
【０５８５】
【表１９】
2020537649.tif 000046
2020537649.tif 000047
【０５８６】
実施例１９  ＳＷ−４８異種移植片マウスモデルにおける、抗ＣＤ７１  ＡＡＤＣの抗腫瘍有効性
本実施例は、ＳＷ−４８細胞（ヒト結腸直腸がん）を使用する、マウス腫瘍異種移植片モデルにおける、本開示の活性化抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体の有効性を示す。
【０５８７】
この例示的な研究において、表示の投与量における、抗ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２（ＡＡＤＣ）の、単回の腹腔内注射を、マウス８匹の群へと投与し、平均腫瘍体積を、時間経過にわたり観察した。図１３及び表１２に示されている通り、２３日目における、全増殖阻害（ＴＧＩ）の、媒体対照と比較した範囲を、全ての投与量において観察したところ、６及び１２ｍｇ／ｋｇの投与量において、完全な腫瘍退縮が観察された。
【０５８８】
【表２０】
2020537649.tif 000048
【０５８９】
実施例２０  ＤＬＢＣＬ  ＰＤＸマウスモデルにおける、抗ＣＤ７１  ＡＡＤＣの抗腫瘍有効性
本実施例は、雌ＳＣＩＤマウス又は雌ＮＯＧマウスにおける、ＨｕＰｒｉｍｅ患者由来びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）を使用する、５匹のマウスによる、患者由来異種移植片（ＰＤＸ）腫瘍モデルにおける、本開示の活性化抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体の有効性を示す。
【０５９０】
この例示的な研究において、マウス３匹の群を、皮下腫瘍（１００〜２００ｍｍ３）により確立し、０及び７日目において、６ｍｇ／ｋｇの抗ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２（ＡＡＤＣ）又は媒体対照を投与した。図１４の例示的な結果に示されている通り、ＡＡＤＣの被験物質は、媒体対照群と比較して、５つのモデル中４つにおいて、＞１００％のＴＧＩを達成し、１つのモデルにおいて、７２％のＴＦＩを達成した。ＬＹ２３４５について、マウス３匹中２匹、モデルＬＹ６９３３について、マウス３匹中３匹、モデルＬＹ６９３４について、マウス３匹中２匹及びモデルＬＹ２３１８について、マウス２又は３匹において、ＡＡＤＣを投与されたモデルにおける完全奏効（すなわち、研究終了における、測定可能な腫瘍の非存在）が観察された。モデルＬＹ３６０４について、完全奏効は観察されなかった。これらの例示的な結果が示すところによれば、本開示のＡＡＤＣが、一部のモデルにおいて、最良の場合に完全奏効である、有効性を示した。
【０５９１】
実施例２１  腫瘍移植片ＰＤＸマウスモデルにおける、抗ＣＤ７１  ＡＡＤＣの抗腫瘍有効性
本実施例は、ヌードマウスにおいて、患者由来ヒト乳がん（ＣＴＧ−０４３７、ＣＴＧ−０８６９、ＣＴＧ−１０５９）、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）（ＣＴＧ−１０８２、ＣＴＧ−０８６０、ＣＴＧ−０１６０、ＣＴＧ−１０１２）及び頭頸部小細胞癌（ＨＮＳＣＣ）（ＣＴＧ−１１４０、ＣＴＧ−１０８２）の腫瘍移植片を使用する、９匹のマウスによる、患者由来異種移植片（ＰＤＸ）腫瘍モデルにおける、本開示の活性化抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体の有効性を示す。
【０５９２】
この例示的な研究において、各ＰＤＸモデルにつき、マウス３匹ずつの群を、皮下腫瘍（１５０〜３００ｍｍ３）により確立し、０日目及び７日目において、６ｍｇ／ｋｇの抗ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２（ＡＡＤＣ）又は媒体対照を投与した。図１５Ａ、１５Ｂ及び１５Ｃの例示的な結果に示されている通り、ＡＡＤＣの被験物質は、９つのモデル中６つにおいて、３つのがん適応にわたり、＞１００％の腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）を達成した。＞１００％のＴＧＩが観察された、これら６つのモデルにおいて、ＡＡＤＣを施されるマウス１８匹中６匹が、完全奏効（すなわち、研究終了における、測定可能な腫瘍の非存在）を達成した。２つのさらなるモデルにおいて、ＨＮＳＣＣ及びＮＳＣＬＣのそれぞれについて、９２％及び７８％のＴＧＩが観察された。１つのＮＳＣＬＣモデルは、ＡＡＤＣに応答しなかった。これらの例示的な結果において示されている通り、本開示のＡＡＤＣは、様々なヒトがん型に由来するＰＤＸモデルにより、場合によって、完全奏効も含む有効性を裏付けた。
【０５９３】
実施例２２  ＨｕＰｒｉｍｅ膵臓ＰＤＸマウスモデルにおける、抗ＣＤ７１  ＡＡＤＣの抗腫瘍有効性
本実施例は、ＳＣＩＤマウスにおいて、ＨｕＰｒｉｍｅ患者由来ヒト膵臓がん（ＰＡ６２３７）を使用する、患者由来異種移植片（ＰＤＸ）マウスモデルにおける、本開示の活性化抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体の有効性を示す。
【０５９４】
この例示的な研究において、マウス３匹ずつの群を、皮下腫瘍（１００〜２００ｍｍ３）により確立し、０日目及び７日目において、３ｍｇ／ｋｇ又は６ｍｇ／ｋｇの抗ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２（ＡＡＤＣ）又は媒体対照を投与した。図１６の例示的な結果に示されている通り、ＡＡＤＣの被験物質は、３ｍｇ／ｋｇ及び６ｍｇ／ｋｇにおいて、＞１００％の腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）を達成した。これらの６ｍｇ／ｋｇ群において、３例中３例の完全奏効が、５９日目まで観察される一方、３ｍｇ／ｋｇ群は、３１日目まで完全奏効を維持した後、腫瘍を再増殖させた。
【０５９５】
実施例２３  活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体についての、非ＧＬＰパイロット毒性研究
本実施例は、３週間ごと（Ｑ３Ｗ）又は２週間ごと（Ｑ２Ｗ）のＩＶボーラス注射の後の、カニクイザル（群１つ当たり性別当たりのサル１〜２匹）における、６〜１８ｍｇ／ｋｇの範囲の投与レベルにおける、本開示の活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体（ＡＡＤＣ）である、抗ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２の、０．６〜６ｍｇ／ｋｇの範囲の投与レベルにおける、抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体（ＡＤＣ）である、Ａｂ２１．１２−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２に対する相対毒性を示す。終了時における剖検は、２９日目に（最終回投与の７日後に）、被験動物に対して実施した。研究時の評価は、臨床徴候、体重、飼料摂取、臨床病理学、解剖病理学、ＴＫ及び免疫原性を含んだ。パイロット毒性研究の概要を、表１３に示す。
【０５９６】
【表２１】
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【０５９７】
重度の毒性は、高用量のＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２（１８ｍｇ／ｋｇ）、６ｍｇ／ｋｇ及び２ｍｇ／ｋｇにおける、ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２（１日目及び１５日目における投与）又は非マスキング親抗ＣＤ７１抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）（Ａｂ２１．１２−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２）の、高頻度の投与を施された群における、猫背の姿勢、活動の減少及び体温上昇により顕示されるものとして観察した。死因を確立し得る場合、それは、薬物関連免疫抑制感染に続発すると決定された。
【０５９８】
被験物質関連所見は、ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２及びＡｂ２１．１２−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２について同様であり、主に、血液毒性からなった。鍵となる所見は、（１）１日目及び１５日目、ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２の、１８ｍｇ／ｋｇにおける単回投与、ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２の、８ｍｇ／ｋｇにおける単回投与又は≧２ｍｇ／ｋｇにおける、ＡＤＣ（Ａｂ２１．１２−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２）の単回投与を施された群において、二次感染に帰せられる死亡を観察したこと、（２）投与の２週間後における、体重の減少、≧１２ｍｇ／ｋｇにおける、ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２の投与の３週間後までの回復、（３）投与の３週間後に、部分的〜完全な回復が観察された、赤血球量及び全ての白血球集団の、用量依存性の減少、（４）投与の２週間後における、血小板レベルの、一過性の上昇、（５）軽度〜中等度の、フィブリノーゲンの増大、アルブミンの減少及びグロブリンの増大、（６）対応する、胸腺及び脾臓の重量の低減を伴う、軽度〜中等度の、骨髄、脾臓及び胸腺の細胞充実度の減少を含んだ。細胞充実度の減少はまた、いくつかのリンパ系組織においても観察された。
【０５９９】
この例示的な研究において、これらの研究における、ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２及びＡｂ２１．１２−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２（対応するＡＤＣ）の最大耐量は、それぞれ、３週間ごと、２回の投与にわたり投与された、１２ｍｇ／ｋｇ及び０．６ｍｇ／ｋｇであった。
【０６００】
実施例２４  活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体についての、ＧＬＰ毒性研究
本実施例は、ＩＶボーラス注射を介する、１日目及び２２日目の、０、２、６又は１２ｍｇ／ｋｇの投与レベルにおける、本開示の活性化可能抗ＣＤ７１コンジュゲート抗体（ＡＡＤＣ）である、抗ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２についての、カニクイザルにおける、ＧＬＰ反復投与毒性研究を示す。投与群を、表１４に示している。
【０６０１】
【表２２】
2020537649.tif 000050
【０６０２】
この例示的な研究において、雄ザル６匹及び雌ザル６匹ずつの各群に、表１４に示された通り、抗ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２又は媒体（１日目及び２２日目における、表示の投与量のＩＶボーラス）を投与した。終了時における剖検は、２９日目に実施し、回復動物の剖検は、６４日目に実施した。毒性評価は、死亡率、臨床徴候、体重の変化、飼料摂取、臨床病理学、解剖病理学、眼科検診並びに心血管系、呼吸器系及び中枢神経系の機能についての評価を含んだ。研究は、ＴＫ解析及びＡＤＡ形成についての評価を含んだ。以下の、例示的な観察を行った。非マスキング抗ＣＤ７１抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）である、Ａｂ２１．１２−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２（ＤＡＲを約２とする）についての、対応する非ＧＬＰ研究と比較した、これもまたＤＡＲを約２とする、抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２についてのＧＬＰ毒性研究から選択した結果の概要を、表１５にまとめている。
【０６０３】
【表２３】
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【０６０４】
体重、飼料摂取、呼吸数、心電図、凝固及び尿検査パラメータに対するＡＡＤＣ関連作用は見られず、神経学的作用も、眼作用も、肉眼病理学所見もみられなかった。
【０６０５】
１２ｍｇ／ｋｇの用量において、ＡＡＤＣ関連の死亡を観察したが、１匹の雌は、１０日目に死亡しているのが見つかり、２匹の雌は、臨床状態が悪化する１１日目に、安楽死させた。これらの動物における、ＡＡＤＣ関連臨床病理学及び顕微鏡所見は、ＡＡＤＣ関連免疫抑制の帰結であると考えられた、細菌感染についての顕微鏡的証拠を例外として、スケジュールされた剖検（２９日目）まで生存した動物において存在するものと同等であった。
【０６０６】
表１５に示されている通り、抗ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２は、Ａｂ２１．１２−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２と比べて、優れた忍容性を示し、検出可能な体重の減少を伴わなかった。示されている通り、Ａｂ２１．１２−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２が、２ｍｇ／ｋｇにおける単回投与から８日間以内に、忍容性を欠いたのに対し、抗ＣＤ７１−ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２は、非マスキングＡｂ２１．１２−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２に対する、≧１０倍の保護をもたらした。
【０６０７】
１２ｍｇ／ｋｇを投与された動物であって、スケジュールされた剖検まで生存した動物におけるＡＡＤＣ関連臨床徴候は、白血球集団の減少及び急性期応答の徴候（アルブミン及びコレステロールの減少並びにグロブリン、総ビリルビン及びトリグリセリドの増大）と相関する感染症と符合する、皮膚病変／創傷であった。
【０６０８】
≧６ｍｇ／ｋｇの、初回投与後における、血液学パラメータの変化は、血小板の増大と共に、赤血球量、網状赤血球及び全ての白血球サブセットの減少からなった。２ｍｇ／ｋｇにおける血液学的変化は、１回目及び２回目の投与後における、血小板のわずかな増大に限定された。
【０６０９】
初回投与後における、臨床化学パラメータのＡＡＤＣ関連変化は、１２ｍｇ／ｋｇにおいて、最も顕著であり、急性期応答（アルブミン及びコレステロールの減少並びにグロブリン、トリグリセリド［雌だけ］、総ビリルビンの増大）並びに尿素窒素（個体だけ）及びクレアチニンの増大並びにリンの減少からなった。６ｍｇ／ｋｇにおける臨床化学変化は、初回投与後だけにおいてみられ、個々の雌における、ビリルビンの最小限の増大及びグロブリンの増大に限定された。
【０６１０】
ＡＡＤＣ関連血液学所見及び臨床化学所見は、回復期の終わりまでに回復した。
【０６１１】
終末の安楽死時におけるＡＡＤＣ関連顕微鏡所見は、投与１回当たり≧６ｍｇ／ｋｇの、胸腺、副腎及び骨髄において存在した。注射部位における所見は、全ての群において観察され、投与手順と関連するものであり、ＡＡＤＣに特異的ではないと解釈された。胸腺重量は、１２ｍｇ／ｋｇを投与された雄ザル及び６ｍｇ／ｋｇを投与された雌ザルにおいて減少したが、これは、組織学的に、特に、胸腺皮質の、細胞充実度の減少と相関している。副腎重量は、１２ｍｇ／ｋｇを投与された雄ザル及び６ｍｇ／ｋｇを投与された雌ザルにおいて増大し、組織学的相関物は、副腎皮質の肥大であった。細胞充実度の減少は、とりわけ、≧６ｍｇ／ｋｇを投与された雄ザルの大腿骨における骨髄において存在した。６週間の無投与間隔の後、胸腺の細胞充実度の減少及び副腎皮質の肥大は存在せず、これらの変化の完全な回復と符合した。骨髄の細胞充実度の増大は、遷延したが、重症度は減少し、部分的回復と符合した。
【０６１２】
実施例２５  ＭＭＡＥの、活性化可能ＣＤ７１抗体へのコンジュゲーション及び結果として得られる活性化可能ＣＤ７１コンジュゲート抗体のＤＡＲを、約３のＤＡＲへと低下させる方法
本実施例は、ＤＡＲを、約３へと強化するのに使用される方法に加えて、ｖｃ−ＭＭＡＥを、活性化可能抗ＣＤ７１抗体である、抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１へとコンジュゲートさせて、各抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１分子につき、２つずつのＭＭＡＥ分子による薬物ロードを含有する、抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃ−ＭＭＡＥを創出するのに使用される方法について概括する。
【０６１３】
コンジュゲーション法
Ｅ２強化型抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃ−ＭＭＡＥ：抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１の溶液（１３．９５ｍｇ／ｍＬ）、３９ｇの溶液、５４４ｍｇ、３．５ナノモル）に、０．５ＭのＥＤＴＡ（０．３９ｍＬ）及びＴＣＥＰ（０．７７ｍＬ、ＷＦＩ中に１０ｍＭ、７．７ナノモル、２．２当量）を、２〜８℃において、一晩にわたり添加した。次いで、還元された抗体を、ＤＭＳＯ（２．２９ｍＬ）により希釈し、ＤＭＳＯ（１７．９ナノモルのＤＭＳＯ中に、９．４９ｍＭのｖｃＭＭＡＥが１．８９ｍＬ、５．１当量）中のｖｃＭＭＡＥにより、室温において、１時間にわたり処理した。コンジュゲート抗体を、Ｎ−アセチルシステイン（２９ナノモルのＷＦＩ中に、１００ｍＭが０．２９ｍＬ、８．２当量）により処理して、過剰なｖｃＭＭＡＥをクエンチングした。クエンチングした溶液を、ＨＩＣ（疎水性相互作用クロマトグラフィー）により、＞Ｅ４のＤＡＲ分子種（高ＤＡＲ分子種、上記の調製物中に２０．９％）について解析した。
【０６１４】
ＤＡＲを低下させるための強化法
コンジュゲーション反応物を、東ソー株式会社から市販されているＨＩＣ樹脂（例としては、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌアルキル）などのＨＩＣ樹脂の一部と共に、室温において、２時間にわたり懸濁させ、高ＤＡＲ分子種を、標的レベル（一般に＜２％）へと低減した。処理された溶液を濾過し、樹脂を、ＰＢＳＥ（１２５ｍＭのリン酸カリウム、１５０ｍＭのＮａＣｌ、６．３ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ７．２、２２ｇ）に続いて、ＰＢＳ（５ｍＭのリン酸カリウム、２００ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７、３５ｇ）により、逐次的に洗浄した。濾液とすすぎ液との組合せを濃縮し、分子量カットオフを３０ｋＤとする遠心分離機フィルターを使用して、緩衝液交換し、次いで、保管のための製剤成分により希釈した。
【０６１５】
結果として得られる産物は、２２８ｍｇ（Ａ２８０：６．５ｍｇ／ｍＬ）を含有し、市販のＨＩＣカラムにより測定したところ、ＤＡＲを約２．９とし、以下の特徴及びＤＡＲ分子種を構成することが示された：ＳＥＣ：９８．７％の単量体、０．２％の高分子量物、１．１％の低分子量物、内毒素＜０．０６ＥＵ／ｍｇ、Ｅ４より大きいＤＡＲ分子種は、２面積％未満であり、ＤＡＲ  Ｅ０は、約６．２面積％であり、ＤＡＲ  Ｅ２は、約４０．７面積％であり、ＤＡＲ  Ｅ４は、約４６．８面積％であった。
【０６１６】
本明細書において記載されている例において、この強化型ＤＡＲ生成物を、「抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃ−ＭＭＡＥ（平均ＤＡＲを約３とする）」と称する。
【０６１７】
実施例２６  ＭＭＡＥの、活性化可能ＣＤ７１抗体へのコンジュゲーション及び結果として得られる活性化可能ＣＤ７１コンジュゲート抗体のＤＡＲを、約２のＤＡＲ（「Ｅ２」）へと強化する方法
本実施例は、ＤＡＲを約２へと強化するのに使用される方法に加えて、ｖｃ−ＭＭＡＥを、活性化可能抗ＣＤ７１抗体である、抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１へとコンジュゲートさせて、各抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１分子につき、２つずつのＭＭＡＥ分子による薬物ロードを含有する、抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃ−ＭＭＡＥを創出するのに使用される方法について概括する。
【０６１８】
コンジュゲーション法
抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃ−ＭＭＡＥ  Ｅ２：抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１（２０．３ｍｇ／ｍＬ）の溶液を、１４５７ｇのＰＢＳＥ（１２５ｍＭのリン酸カリウム、１５０ｍＭのＮａＣｌ、６．３ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ７．７）により希釈し、４℃へと冷却した。冷却された溶液に、ＴＣＥＰ（ＷＦＩ中に１０ｍＭ、３０．２ｍＬ、０．３０ミリモル、１．５当量）を添加し、４℃において、１５時間にわたり維持した。還元された抗体に、ｖｃ−ＭＭＡＥ（１．０５６ｇ、０．８０ミリモル、４当量）の、ＤＭＳＯ（３００ｇ）中溶液を、冷却しながら添加した後、ＤＭＳＯすすぎ液（６５ｇ）を添加し、この後、溶液を、室温へと暖めた。３．５時間後、Ｎ−アセチルシステイン（０．２６２ｇ、１．６０ミリモル、８当量）を添加して、過剰なｖｃ−ＭＭＡＥをクエンチングし、反応混合物を、精製まで、２〜８℃において保管した。
【０６１９】
ＤＡＲを低下させるための強化法
生成物の一部は、ＵＶによる、２８０ｎｍにおけるモニタリングを伴う、ｐＨ７．１の硫酸アンモニウム／リン酸緩衝液による勾配を使用する、ＧＥ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（アルキルＳｅｐｈａｒｏｓｅ）から市販されているＨＩＣ精製カラムなど、市販のＨＩＣ精製カラム上において精製した。Ｐｅｌｌｉｃｏｎ３  Ｕｌｔｒａｃｅｌ  ３０ｋＤ膜を使用して、回収されたＤＡＲ２生成物プール（約９．５ｇ、３０％の収率）を、ｐＨ６．０において、ＴＦＦにより、緩衝液と緩衝液交換し、次いで、保管のための製剤成分により希釈した。
【０６２０】
結果として得られる産物（Ａ２８０：６．４ｍｇ／ｍＬ）は、市販のＨＩＣカラムにより測定したところ、ＤＡＲを約２とし、以下の特徴及びＤＡＲ分子種を構成することが示された：ＳＥＣ：９９．６％の単量体、０．２％のＨＭＷ物、０．２％のＬＭＷ物、内毒素＜０．０６ＥＵ／ｍｇ、ＤＡＲ  Ｅ２は、約９９．０面積％であり、試行間のばらつきは、９４〜９９％のＤＡＲ  Ｅ２であった。
【０６２１】
本明細書において記載されている例において、この強化型（Ｅｎｒｉｃｈｅｄ）ＤＡＲ２（「Ｅ２」）産物を、「抗ＣＤ７１  ＴＦ０２．１３−２０１１−ｖｃＭＭＡＥ  Ｅ２」と称する。
【０６２２】
実施例２７  前臨床マウスモデルにおける、高ＤＡＲ分子種と対比した、Ｅ２分子種の、生物物理的特徴についての評価
本明細書において概括された、標準的な緩衝液及び手順を使用して、ＨＩＣにより精製されていない、実施例２５に記載された方法から得られたコンジュゲート生成物を、ＨＩＣカラムにかけた。図１８Ａに示されている通り、薬物ロードを０〜８とする、多数の分子種を同定した。
【０６２３】
精製された、実施例２６から得られたＥ２生成物を、同じＨＩＣクロマトグラフィーにかけた。図１８Ｂに示されている通り、２の薬物ロードを含有する、単一の分子種だけが観察された。
【０６２４】
非精製のＥ２生成物を、放射性標識し、マウスへと注射して、各生成物の全クリアランス及び毒性について評価した。図１８Ｃに示されている通り、精製Ｅ２生成物は、非精製の高薬物ロード生成物と比べて、クリアランスが顕著に低度であることが示された。
【０６２５】
他の実施形態
本発明について、その詳細な記載と共に記載してきたが、前出の記載は、付属の特許請求の範囲により規定される、本発明の範囲を例示することを意図するものであり、これを限定することを意図するものではない。他の態様、利点及び改変は、以下の範囲内にある。
【図１】
2020537649.tif 000062
【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
2020537649.tif 000065
【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
2020537649.tif 000067
【図４Ａ】
2020537649.tif 000068
【図４Ｂ】
2020537649.tif 000069
【図４Ｃ】
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【図５】
2020537649.tif 000071
【図６Ａ】
2020537649.tif 000072
【図６Ｂ】
2020537649.tif 000073
【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
2020537649.tif 000075
【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
2020537649.tif 000077
【図７Ｃ】
2020537649.tif 000078
【図８】
2020537649.tif 000079
【図９】
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【図１０】
2020537649.tif 000081
【図１１】
2020537649.tif 000082
【図１２】
2020537649.tif 000083
【図１３】
2020537649.tif 000084
【図１４】
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【図１５Ａ】
2020537649.tif 000086
【図１５Ｂ】
2020537649.tif 000087
【図１５Ｃ】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８Ａ】
2020537649.tif 000091
【図１８Ｂ】
2020537649.tif 000092
【図１８Ｃ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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