(57)【要約】本願は、医薬品化学分野に関し、ステロイド系誘導体ＦＸＲアゴニストの製造方法及び関連の中間体に関する。具体的に、本願は、式Ｉの化合物の製造方法に関する。当該方法は、式８の化合物と式９の化合物とを反応させて式１０の化合物を得ることと、式１０の化合物から反応を経て式１１の化合物を得ることと、式１１の化合物から反応を経て式Ｉの化合物を得ることとを含む。本願はさらに、使用される中間体、中間体の製造方法及び中間体の使用にも関する。本願に係る製造方法は、反応が温和な条件で行われ、一部のステップで複数の官能基を同時に変換して、効果的にステップを減少できるため、産業化された生産に適する。2020528068.tif 000045
2020528068.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式８の化合物と式９の化合物とを反応させて式１０の化合物を得る、ステップａ）と、
【化１】
2020528068.tif 000031
式１０の化合物から反応を経て式１１の化合物を得る、ステップｂ）と、
【化２】
2020528068.tif 000032
式１１の化合物から反応を経て式Ｉの化合物を得る、ステップｃ）とを含み、
【化３】
2020528068.tif 000033
ただし、Ｒ１はＨ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＦから選択され、
Ｐ１及びＰ２はそれぞれヒドロキシ保護基から独立して選択され、
Ｍは金属陽イオンから選択される、以下の式Ｉの化合物の製造方法。
【化４】
2020528068.tif 000034
【請求項２】
前記Ｐ１及びＰ２はそれぞれ、アルカリ性条件下で上記ステロイド化合物の３位及び／又は７位に連結された酸素原子との連結を保持するヒドロキシ保護基から独立して選択され、好ましくは、前記Ｐ１及びＰ２はそれぞれ、ｐＨ  ７．５以上の条件で上記ステロイ
ド化合物の３位及び／又は７位に連結された酸素原子との連結を保持するヒドロキシ保護基から独立して選択される、請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
前記Ｐ１はシリルエーテル系保護基、アルキルエーテル系保護基、アルコキシメチルエーテル系保護基又はエステル系保護基から選択され、好ましくは、前記Ｐ１はトリメチルシリル基、トリエチルシリル基、ｔ−ブチルジメチルシリル基、ｔ−ブチルジフェニルシリル基、ベンジル基、ｐ−メトキシベンジル基、３，４−ジメトキシベンジル基、メチルエーテル、ｔ−ブチル基、トリチル基、４，４’−ジメトキシトリチル基、メトキシメチル基、ベンジルオキシメチル基、テトラヒドロフリル基、ホルミル基、アセチル基、クロロアセチル基、メトキシアセチル基又はピバロイル基から選択される、請求項１に記載の製造方法。
【請求項４】
前記Ｐ２はシリルエーテル系保護基から選択され、好ましくは、前記Ｐ２はトリメチルシリル基、トリエチルシリル基、ｔ−ブチルジメチルシリル基又はｔ−ブチルジフェニルシリル基から選択される、請求項１に記載の製造方法。
【請求項５】
前記Ｍはアルカリ金属陽イオン又はアルカリ土類金属陽イオンから選択され、好ましくは、前記ＭはＬｉ＋、Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｃａ２＋又はＭｇ２＋から選択される、請求項１に記載の製造方法。
【請求項６】
ステップａ）で、反応は塩基の存在下で行われ、好ましくは、前記塩基はｐＫａ  １２以上の塩基から選択される、請求項１に記載の製造方法。
【請求項７】
ステップｂ）で、反応は塩基の存在下で行われ、好ましくは、前記塩基はｐＫａ  １２以上の塩基から選択される、請求項１に記載の製造方法。
【請求項８】
ステップｃ）で、反応は酸の存在下で行われ、好ましくは、前記酸により反応はｐＨ  ６以下の条件で行われる、請求項１に記載の製造方法。
【請求項９】
式４の化合物を原料として、アルコールとのエステル化反応により式５の化合物を得る、ステップｄ）と、
【化５】
2020528068.tif 000035
式５の化合物の３位のヒドロキシ基に保護基を連結して式６の化合物を得る、ステップｅ）と、
【化６】
2020528068.tif 000036
式６の化合物から反応を経て式７の化合物を得る、ステップｆ）と、
【化７】
2020528068.tif 000037
式７の化合物の７位及び２３位のヒドロキシ基に保護基Ｐ２を連結して式１２の化合物を得る、ステップｇ−１）と、式１２の化合物から反応を経て２３位のヒドロキシ保護基Ｐ２を除去して式８の化合物を得る、ステップｇ−２）とをさらに含み、
【化８】
2020528068.tif 000038
ただし、Ｒ２はＣ１−６アルキル基から選択される、請求項１〜請求項８のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項１０】
前記Ｒ２はＣ１−４アルキル基から選択され、好ましくは、メチル基、エチル基、プロピル基又はブチル基から選択される、請求項９に記載の製造方法。
【請求項１１】
式４の化合物を原料として、アルコールとのエステル化反応により式５の化合物を得る、ステップｄ）と、
【化９】
2020528068.tif 000039
式５の化合物の３位のヒドロキシ基に保護基を連結して式６の化合物を得る、ステップｅ）と、
【化１０】
2020528068.tif 000040
式６の化合物から反応を経て式７の化合物を得る、ステップｆ）と、
【化１１】
2020528068.tif 000041
式７の化合物の７位及び２３位のヒドロキシ基に保護基Ｐ２を連結して式１２の化合物を得る、ステップｇ−１）と、式１２の化合物から反応を経て２３位のヒドロキシ保護基Ｐ２を除去して式８の化合物を得る、ステップｇ−２）とを含み、
【化１２】
2020528068.tif 000042
ただし、Ｐ１及びＰ２はそれぞれヒドロキシ保護基から独立して選択され、
Ｒ２はＣ１−６アルキル基から選択される、式８の化合物の製造方法。
【請求項１２】
前記Ｐ１及びＰ２はそれぞれ、非酸性条件で上記ステロイド化合物の３位及び／又は７位のヒドロキシ基を効果的に保護できる保護基から独立して選択され、好ましくは、前記Ｐ１及びＰ２はそれぞれ、ｐＨ  ７以上の条件で上記ステロイド化合物の３位及び／又は７位に連結された酸素原子との連結を保持するヒドロキシ保護基から独立して選択される、請求項１１に記載の製造方法。
【請求項１３】
前記Ｐ１はシリルエーテル系保護基、アルキルエーテル系保護基、アルコキシメチルエーテル系保護基又はエステル系保護基から選択され、好ましくは、前記Ｐ１はトリメチルシリル基、トリエチルシリル基、ｔ−ブチルジメチルシリル基、ｔ−ブチルジフェニルシリル基、ベンジル基、ｐ−メトキシベンジル基、３，４−ジメトキシベンジル基、メチルエーテル、ｔ−ブチル基、トリチル基、４，４’−ジメトキシトリチル基、メトキシメチル基、ベンジルオキシメチル基、テトラヒドロフリル基、ホルミル基、アセチル基、クロロアセチル基、メトキシアセチル基又はピバロイル基から選択される、請求項１１に記載の製造方法。
【請求項１４】
前記Ｐ２はシリルエーテル系保護基から選択され、好ましくは、前記Ｐ２はトリメチルシリル基、トリエチルシリル基、ｔ−ブチルジメチルシリル基又はｔ−ブチルジフェニルシリル基から選択される、請求項１１に記載の製造方法。
【請求項１５】
前記Ｒ２はＣ１−４アルキル基から選択され、好ましくはメチル基、エチル基、プロピル基又はブチル基から選択される、請求項１１〜請求項１４のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項１６】
以下に示す化合物において、
【化１３】
2020528068.tif 000043
Ｒ１はＨ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＦから選択され、
Ｒ２はメチル基、エチル基、プロピル基又はブチル基から選択され、
Ｐ１はシリルエーテル系保護基、アルキルエーテル系保護基、アルコキシメチルエーテル系保護基又はエステル系保護基から選択され、
Ｐ２はシリルエーテル系保護基から選択され、
Ｍは金属陽イオンから選択される、化合物。
【請求項１７】
前記Ｐ１はトリメチルシリル基、トリエチルシリル基、ｔ−ブチルジメチルシリル基、ｔ−ブチルジフェニルシリル基、ベンジル基、ｐ−メトキシベンジル基、３，４−ジメトキシベンジル基、メチルエーテル、ｔ−ブチル基、トリチル基、４，４’−ジメトキシトリチル基、メトキシメチル基、ベンジルオキシメチル基、テトラヒドロフリル基、ホルミル基、アセチル基、クロロアセチル基、メトキシアセチル基又はピバロイル基から選択される、請求項１６に記載の化合物。
【請求項１８】
前記Ｐ２はトリメチルシリル基、トリエチルシリル基、ｔ−ブチルジメチルシリル基又はｔ−ブチルジフェニルシリル基から選択される、請求項１６に記載の化合物。
【請求項１９】
前記Ｍはアルカリ金属陽イオン又はアルカリ土類金属陽イオンから選択され、好ましくはＬｉ＋、Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｃａ２＋又はＭｇ２＋から選択され、より好ましくはＮａ＋又はＫ＋から選択される、請求項１６に記載の化合物。
【請求項２０】
【化１４】
2020528068.tif 000044
から選択される請求項１６に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、医薬品化学分野に関し、具体的に、本願は、ステロイド系誘導体ＦＸＲアゴニストの製造方法及び関連の中間体に関する。
【背景技術】
【０００２】
ファルネソイドＸ受容体（ＦＸＲ）はラット肝臓ｃＤＮＡライブラリーに同定されたオーファン核内受容体であり（BM. Forman,et al.,Cell 81:687-693(1995)）、昆虫脱皮ホ
ルモン受容体と密接に関係する。ＦＸＲはステロイド、レチノイド、甲状腺ホルモン受容体を含むリガンド−活性化転写因子核内受容体ファミリーのメンバーである（DJ.Mangelsdorf,et al.,Cell 83:841-850(1995)）。ノーザンブロッティング及びインサイチュ分析
によって、肝臓、腸、腎臓及び副腎におけるＦＸＲの大量発現が確認された（BM. Forman,et al.,Cell 81:687-693(1995)、W. Seol,et al.,Mol. Endocrinnol,9:72-85(1995)）。ＦＸＲは９−シス型レチノイン酸受容体（ＲＸＲ）とヘテロ二量体を形成してＤＮＡと結合する。ＦＸＲ／ＲＸＲヘテロ二量体はＡＧ（Ｇ／Ｔ）ＴＣＡを共有する２コピーの核内受容体ハーフサイトからなる成分と優先的に結合して、逆方向の反復を形成して単一ヌクレオチドによって分離される（ＩＲ−１モチーフ）（BM. Forman,et al.,Cell 81:687-693(1995)）。しかしながら、これらの化合物はマウス及びヒトのＦＸＲを活性化できない
ため、内因性ＦＸＲリガンドが自然由来であるかどうかは決定できない。一部の自然発生したコール酸は生理的濃度でＦＸＲとの結合後に活性化させる（国際出願第２０００３７０７７（Ａ１）号、２０００年６月２９日公表））。従って、ＦＸＲリガンドとしてのコール酸はケノデオキシコール酸（ＣＤＣＡ）、デオキシコール酸（ＤＣＡ）、リトコール酸（ＬＣＡ）、これらのコール酸のタウリンとグリシン共役物を含む。
【発明の概要】
【０００３】
本願の一つの態様は、式Ｉの化合物の製造方法を提供し、
【化１】
2020528068.tif 000003
式８の化合物と式９の化合物とを反応させて式１０の化合物を得る、ステップａ）と、
【化２】
2020528068.tif 000004
式１０の化合物から反応を経て式１１の化合物を得る、ステップｂ）と、
【化３】
2020528068.tif 000005
式１１の化合物から反応を経て式Ｉの化合物を得る、ステップｃ）とを含み、
【化４】
2020528068.tif 000006
ただし、Ｒ１はＨ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＦから選択され、
Ｐ１及びＰ２はそれぞれヒドロキシ保護基から独立して選択され、
Ｍは金属陽イオンから選択される。
【０００４】
本願のもう一つの態様は、式８の化合物的製造方法を提供し、
式４の化合物を原料として、アルコールとのエステル化反応により式５の化合物を得る、ステップｄ）と、
【化５】
2020528068.tif 000007
式５の化合物の３位のヒドロキシ基に保護基を連結して式６の化合物を得る、ステップｅ）と、
【化６】
2020528068.tif 000008
式６の化合物から反応を経て式７の化合物を得る、ステップｆ）と、
【化７】
2020528068.tif 000009
式７の化合物の７位及び２３位のヒドロキシ基に保護基Ｐ２を連結して式１２の化合物を得る、ステップｇ−１）と、式１２の化合物から反応を経て２３位のヒドロキシ保護基Ｐ２を除去して式８の化合物を得る、ステップｇ−２）とを含むステップｇ）とを含み、
【化８】
2020528068.tif 000010
ただし、Ｒ２はＣ１−６アルキル基から選択され、
Ｐ１及びＰ２はそれぞれヒドロキシ保護基から独立して選択される。
【０００５】
いくつかの実施形態において、前記Ｐ１及びＰ２はそれぞれ、アルカリ性条件で上記ステロイド化合物の３位及び／又は７位に連結された酸素原子との連結を保持するヒドロキシ保護基から独立して選択され、好ましくはｐＨ  ７．５以上、ｐＨ  ８以上、ｐＨ  ８．５以上、ｐＨ  ９以上、ｐＨ  ９．５以上、ｐＨ  １０以上、ｐＨ  １０．５以上、ｐＨ  １１以上、ｐＨ  １１．５以上又はｐＨ  １２以上の条件で上記ステロイド化合物の３位及び／又は７位に連結された酸素原子との連結を保持するヒドロキシ保護基から選択される。
【０００６】
いくつかの実施形態において、前記Ｐ１及びＰ２はそれぞれ、塩基及び／又はプロトン性溶媒の存在下で上記ステロイド化合物の３位及び／又は７位に連結された酸素原子との連結を保持するヒドロキシ保護基から独立して選択される。いくつかの実施形態において、前記塩基はｐＫａ  ５以上、好ましくはｐＫａ  以上６、ｐＫａ  ８以上５０以下、ｐＫａ  １０以上５０以下、又はｐＫａ  １０以上４０以下の塩基から選択され、又は好ましくは、前記塩基はトリエチルアミン（ＴＥＡ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）、１，８−ジアザビシクロウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）、ピリジン、２，６−ジメチルピリジン、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、イミダゾール、ＮａＯＨ、ＫＯＨ、ＬｉＯＨ、Ｍｇ（ＯＨ）２、Ｃａ（ＯＨ）２、ＮａＨ、ＫＨ、ナトリウムメトキシド、カリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、カリウムエトキシド、ナトリウムｔ−ブトキシド、カリウムｔ−ブトキシド、ＫＨＭＤＳ、ＮａＨＭＤＳ、Ｎａ、Ｋ、ＫＨＣＯ３、ＮａＨＣＯ３、Ｋ２ＣＯ３又はＮａ２ＣＯ３から選択される。いくつかの実施形態において、前記プロトン性溶媒はＣ１−６アルコール又は水から選択され、好ましくはイソプロパノール、エタノール、メタノール、ｎ−プロパノール、ｎ−ブタノール、ｔ−ブタノール又は水から選択される。
【０００７】
いくつかの実施形態において、前記Ｐ１はシリルエーテル系保護基、アルキルエーテル系保護基、アルコキシメチルエーテル系保護基又はエステル系保護基から選択され、好ま
しくはトリメチルシリル基（ＴＭＳ）、トリエチルシリル基（ＴＥＳ）、ｔ−ブチルジメチルシリル基（ＴＢＤＭＳ）、ｔ−ブチルジフェニルシリル基（ＴＢＤＰＳ）、ベンジル基、ｐ−メトキシベンジル基、３，４−ジメトキシベンジル基、メチルエーテル、ｔ−ブチル基、トリチル基、４，４’−ジメトキシトリチル基（ＤＭＴｒ）、メトキシメチル基（ＭＯＭ）、ベンジルオキシメチル基（ＢｎＯＭ）、テトラヒドロフリル基（ＴＨＰ）、ホルミル基、アセチル基（Ａｃ）、クロロアセチル基（ＣＡｃ）、メトキシアセチル基（ＭＡｃ）又はピバロイル基（Ｐｖ）から選択され、より好ましくはトリメチルシリル基（ＴＭＳ）、トリエチルシリル基（ＴＥＳ）、ｔ−ブチルジメチルシリル基（ＴＢＤＭＳ）、ｔ−ブチルジフェニルシリル基（ＴＢＤＰＳ）又はメトキシメチル基（ＭＯＭ）から選択される。
【０００８】
いくつかの実施形態において、前記Ｐ２はシリルエーテル系保護基から選択され、好ましくはトリメチルシリル基（ＴＭＳ）、トリエチルシリル基（ＴＥＳ）、ｔ−ブチルジメチルシリル基（ＴＢＤＭＳ）又はｔ−ブチルジフェニルシリル基（ＴＢＤＰＳ）から選択され、より好ましくはトリメチルシリル基（ＴＭＳ）に選択される。
【０００９】
いくつかの実施形態において、前記Ｍはアルカリ金属陽イオン又はアルカリ土類金属陽イオンから選択され、好ましくはＬｉ＋、Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｃａ２＋又はＭｇ２＋から選択され、より好ましくはＮａ＋又はＫ＋から選択される。
【００１０】
いくつかの実施形態において、前記Ｒ２はＣ１−４アルキル基から選択され、好ましくはメチル基、エチル基、プロピル基又はブチル基から選択される。
【００１１】
いくつかの実施形態において、ステップａ）で、反応は塩基の存在下で行われる。いくつかの実施形態において、前記塩基はｐＫａ  １２以上の塩基から選択され、好ましくはｐＫａ  １５以上の塩基、ｐＫａ  １５以上５０以下の塩基、ｐＫａ  １５以上４０以下の塩基又はｐＫａ  １５以上３５以下の塩基から選択され、又は好ましくは、前記塩基はＮａＯＨ、ＫＯＨ、ＬｉＯＨ、ＮａＨ、ＫＨ、ナトリウムメトキシド、カリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、カリウムエトキシド、ナトリウムｔ−ブトキシド、カリウムｔ−ブトキシド、ＫＨＭＤＳ、ＮａＨＭＤＳ、Ｎａ又はＫから選択され、より好ましくはナトリウムｔ−ブトキシド、カリウムｔ−ブトキシド、ＫＨＭＤＳ、ＮａＨＭＤＳ、ＮａＨ、ＫＨ又はＮａから選択され、さらに好ましくはナトリウムｔ−ブトキシド又はカリウムｔ−ブトキシドから選択される。
【００１２】
いくつかの実施形態において、ステップａ）で、反応に使用される溶媒は、非プロトン性溶媒から選択され、好ましくは、エーテル系、ケトン系、ニトリル系、アミド系、スルホン系、ピリジン系の溶媒から選択され、より好ましくは、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、メチルt−ブチルエーテル、ジブチルエーテル、１，２−ジエトキシ-エタン、ジエチレングリコールジメチルエーテル、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、アセトン、エチルメチルケトン、メチルイソプロピルケトン、シクロヘキサノン、２−オクタノン、アセトニトリル、プロパンニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、ヘキサメチルリン酸トリアミド、ジメチルスルホキシド又はピリジンから選択され、さらに好ましくは、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド又はアセトニトリルから選択される。
【００１３】
いくつかの実施形態において、ステップａ）で、反応温度は比較的広い範囲から選択できる。いくつかの実施形態において、反応温度は−３０〜１００℃から選択され、好ましくは、−２０〜８０℃から選択され、より好ましくは−１５〜７０℃から選択され、さらに好ましくは−１０〜６０℃から選択される。
【００１４】
いくつかの実施形態において、ステップｂ）で、反応は塩基の存在下で行われる。いくつかの実施形態において、前記塩基はｐＫａ  １２以上の塩基から選択され、好ましくは、ｐＫａ  １５以上の塩基、ｐＫａ  １５以上５０以下の塩基、ｐＫａ  １５以上４０以下の塩基又はｐＫａ  １５以上３５以下の塩基から選択され、又は好ましくは、前記塩基はＮａＯＨ、ＫＯＨ、ＬｉＯＨ、Ｍｇ（ＯＨ）２、Ｃａ（ＯＨ）２、ＮａＨ、ＫＨ、ナトリウムメトキシド、カリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、カリウムエトキシド、ナトリウムｔ−ブトキシド、カリウムｔ−ブトキシド、ＫＨＭＤＳ又はＮａＨＭＤＳから選択され、より好ましくは、ＮａＯＨ、ＫＯＨ、ＬｉＯＨ又はナトリウムメトキシドから選択される。いくつかの実施形態において、ステップｂ）で、前記式１０の化合物と前記塩基との投入量（ｍｏｌ量で計算）の比は１：５〜６０から選択され、好ましくは１：１０〜５０から選択され、より好ましくは１：１５〜４０から選択され、さらに好ましくは１：１５〜３０から選択される、又は好ましくは、前記式１０の化合物と前記塩基との投入量（ｍｏｌ量で計算）の比は１：５、１：１０、１：１５、１：２０、１：２５、１：３５、１：４０、１：４５、１：５０、１：５５又は１：６０から選択される。
【００１５】
いくつかの実施形態において、ステップｂ）で、反応はプロトン性溶媒の存在下で行われ、前記プロトン性溶媒はＣ１−６アルコール又は水から選択され、好ましくは、イソプロパノール、エタノール、メタノール、ｎ−プロパノール、ｎ−ブタノール、ｔ−ブタノール又は水から選択され、より好ましくは、エタノール又は水から選択される。
【００１６】
いくつかの実施形態において、ステップｂ）で、反応温度は２０〜１８０℃から選択され、好ましくは、４０〜１６０℃から選択され、より好ましくは６０〜１４０℃から選択される。
【００１７】
いくつかの実施形態において、ステップｃ）で、反応は酸の存在下で行われる。いくつかの実施形態において、前記酸により反応はｐＨ  ６以下の条件で行われ、好ましくは、ｐＨ  ５．５以下、ｐＨ  ５以下、ｐＨ  ４．５以下又はｐＨ  ４以下の条件で行われる。いくつかの実施形態において、ステップｃ）で、前記酸はプロトン酸から選択され、好ましくは、塩酸、臭化水素酸、フッ化水素酸、硫酸、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸又はｐ−トルエンスルホン酸から選択され、より好ましくは塩酸、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸又はｐ−トルエンスルホン酸から選択される。
【００１８】
いくつかの実施形態において、ステップｃ）で、反応に使用される溶媒は、比較的広い範囲から選択できる。例えば、プロトン性及び／又は非プロトン性の溶媒から選択され、好ましくはテトラヒドロフラン、ジクロロメタン、アセトニトリル、１，４−ジオキサン又はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、ｔ−ブタノール又は水から選択される。
【００１９】
いくつかの実施形態において、ステップｃ）で、反応温度は−３０〜１００℃から選択され、好ましくは−１５〜８０℃から選択される。
【００２０】
いくつかの実施形態において、ステップｄ）で、前記アルコールはＣ１−６のアルコールから選択され、好ましくは、Ｃ１−４のアルコールから選択され、より好ましくはメタノール、エタノール、プロパノール又はブタノールから選択される。
【００２１】
いくつかの実施形態において、ステップｄ）で、反応は酸の存在下で行われる。いくつかの実施形態において、前記酸はプロトン酸又はルイス酸から選択され、好ましくは、塩酸、臭化水素酸、フッ化水素酸、硫酸、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ＡｌＣｌ３、ＦｅＣｌ３又はＢＦ３から選択され、より好ましくは、塩酸、硫酸又はｐ−トルエンスルホン酸から選択される。
【００２２】
いくつかの実施形態において、ステップｄ）で、反応温度は４０〜１２０℃から選択され、好ましくは６０〜１００℃から選択される。
【００２３】
いくつかの実施形態において、ステップｅ）で、反応は塩基の存在下で行われる。いくつかの実施形態において、前記塩基はトリエチルアミン（ＴＥＡ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）、１，８−ジアザビシクロウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）、ピリジン、２，６−ジメチルピリジン、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、イミダゾール、Ｎａ２ＣＯ３、Ｋ２ＣＯ３、Ｃｓ２ＣＯ３、ＮａＨ又はＫＨから選択され、好ましくはＴＥＡ、ＤＩＰＥＡ、ＤＢＵ、ピリジン、イミダゾール、Ｎａ２ＣＯ３又はＫ２ＣＯ３から選択される。いくつかの実施形態において、ステップｅ）で、前記式５の化合物と前記塩基との投入量（ｍｏｌ量で計算）の比は１：０．５〜１０から選択され、好ましくは１：０．８〜８から選択され、より好ましく１：１〜６から選択される。
【００２４】
いくつかの実施形態において、ステップｅ）で、反応に使用される溶媒は、非プロトン性溶媒から選択され、好ましくは、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、メチルt−ブチルエーテル、ジブチルエーテル、１，２−ジエトキシ-エタン、ジエチレングリコールジメチルエーテル、ＴＨＦ、１，４−ジオキサン、ＤＣＭ、酢酸エチル、ＣＨ３ＣＮ、トルエン、キシレン、アセトン、エチルメチルケトン、メチルイソプロピルケトン、シクロヘキサノン、２−オクタノン、ＤＭＦ又はＤＭＳＯから選択され、より好ましくはＴＨＦ、ＤＣＭ、酢酸エチル、ＣＨ３ＣＮ、トルエン、アセトン又はＤＭＦから選択される。
【００２５】
いくつかの実施形態において、ステップｅ）で、反応温度は−１０〜１００℃から選択され、好ましくは０〜６０℃から選択される。
【００２６】
いくつかの実施形態において、ステップｆ）で、反応は還元剤の存在下で行われる。いくつかの実施形態において、前記還元剤は水素化リチウムアルミニウム、水素化ジイソブチルアルミニウム（ＤＩＢＡＬ−Ｈ）、水素化ビス（２−メトキシエトキシ）アルミニウムナトリウム（Ｒｅｄ−Ａｌ）、ＢＨ３、ＮａＢＨ４、ＫＢＨ４又はＺｎ（ＢＨ４）２から選択され、好ましくは水素化リチウムアルミニウムに選択される。
【００２７】
いくつかの実施形態において、ステップｆ）で、反応に使用される溶媒は、プロトン性又は非プロトン性の溶媒から選択され、好ましくはＴＨＦ、ジオキサン、メタノール、エタノール又はｔ−ブチルメチルエーテルから選択される。
【００２８】
いくつかの実施形態において、ステップｆ）で、反応温度は−３０〜８０℃から選択され、好ましくは−１５〜６０℃から選択される。
【００２９】
いくつかの実施形態において、ステップｇ−１）で、反応は塩基の存在下で行われる。いくつかの実施形態において、前記塩基はｐＫａ  ５以上の塩基から選択され、好ましくは、ｐＫａ  ６以上、ｐＫａ  ８以上、ｐＫａ  １０以上、ｐＫａ  ５以上３０以下、ｐＫａ  ５以上２０以下、ｐＫａ  ６以上３０以下、ｐＫａ  ８以上３０以下、ｐＫａ  １０以上３０以下、ｐＫａ  ６以上２０以下、ｐＫａ  ８以上２０以下、ｐＫａ  １０以上２０以下の塩基から選択され、いくつかの実施形態において、前記塩基は、トリエチルアミン（ＴＥＡ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）、１，８−ジアザビシクロウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）、ピリジン、２，６−ジメチルピリジン、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）又はイミダゾールから選択され、好ましくは、トリエチルアミン（ＴＥＡ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）、ピリジン又はイミダゾールから選択される。
【００３０】
いくつかの実施形態において、ステップｇ−２）で、反応はｐＨ  ７以上の条件で行われる。いくつかの実施形態において、好ましくは、前記反応はｐＨ  ７．５以上、ｐＨ  ８以上又はｐＨ  ８．５以上の条件で行われる。いくつかの実施形態において、ｐＨを調節するための塩基は、ＫＨＣＯ３、ＮａＨＣＯ３、Ｋ２ＣＯ３又はＮａ２ＣＯ３から選択され、好ましくは、Ｋ２ＣＯ３又はＮａ２ＣＯ３から選択される。いくつかの実施形態において、ステップｇ−２）で、ｐＨを調節するための前記塩基の投入量は、反応が適切なｐＨ条件で行われていれば、比較的広い範囲から選択できる。いくつかの実施形態において、前記式７の化合物と、ｐＨを調節するための塩基との投入量（ｍｏｌ量で計算）の比は、１：０．５〜１０から選択され、好ましくは１：１〜８から選択され、より好ましくは１：２〜６から選択される。
【００３１】
いくつかの実施形態において、ステップｇ−１）で、反応に使用される溶媒は、非プロトン性溶媒から選択され、好ましくは、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、メチルt−ブチルエーテル、ジブチルエーテル、１，２−ジエトキシ-エタン、ジエチレングリコールジメチルエーテル、ＴＨＦ、１，４−ジオキサン、ＤＣＭ、酢酸エチル、ＣＨ３ＣＮ、トルエン、キシレン、アセトン、エチルメチルケトン、メチルイソプロピルケトン、シクロヘキサノン、２−オクタノン、ＤＭＦ、ＤＭＳＯ、ｎ−ヘキサン又はシクロヘキサンから選択され、より好ましくは、ＤＣＭ、ＴＨＦ、トルエン、ｎ−ヘキサン又はシクロヘキサンから選択される。
【００３２】
いくつかの実施形態において、ステップｇ−２）で、反応はプロトン性溶媒の存在下で行われ、前記プロトン性溶媒は、Ｃ１−６アルコール又は水から選択され、好ましくは、イソプロパノール、エタノール、メタノール、ｎ−プロパノール、ｎ−ブタノール、ｔ−ブタノール又は水から選択される、より好ましくは、メタノール又はエタノールから選択される。
【００３３】
中間体
本願のもう一つの態様は、以下の式６の化合物、式７の化合物、式８の化合物、式１０の化合物及び式１１の化合物を提供し、
【化９】
2020528068.tif 000011
ただし、Ｒ１はＨ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＦから選択され、
Ｒ２はメチル基、エチル基、プロピル基又はブチル基から選択され、
Ｐ１はシリルエーテル系保護基、アルキルエーテル系保護基、アルコキシメチルエーテ
ル系保護基又はエステル系保護基から選択され、
Ｐ２はシリルエーテル系保護基から選択され、
Ｍは金属陽イオンから選択される。
【００３４】
本願のもう一つの態様は、式８の化合物又は式Ｉの化合物を製造するための、以下の式６の化合物及び式７の化合物の使用を提供し、
【化１０】
2020528068.tif 000012
ただし、前記Ｒ１はＨ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＦから選択され、
前記Ｒ２はメチル基、エチル基、プロピル基又はブチル基から選択され、
前記Ｐ１はシリルエーテル系保護基、アルキルエーテル系保護基、アルコキシメチルエーテル系保護基又はエステル系保護基から選択され、
前記Ｐ２はシリルエーテル系保護基から選択される。
【００３５】
本願のもう一つの態様は、式Ｉの化合物を製造するための、以下の式８の化合物、式１０の化合物及び式１１の化合物の使用を提供し、
【化１１】
2020528068.tif 000013
ただし、前記Ｒ１はＨ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＦから選択され、
前記Ｐ１はシリルエーテル系保護基、アルキルエーテル系保護基、アルコキシメチルエ
ーテル系保護基又はエステル系保護基から選択され、
前記Ｐ２はシリルエーテル系保護基から選択され、
前記Ｍは金属陽イオンから選択される。
【００３６】
いくつかの実施形態において、上記中間体又はその使用で、前記Ｍはアルカリ金属陽イオン又はアルカリ土類金属陽イオンから選択され、好ましくは、Ｌｉ＋、Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｃａ２＋又はＭｇ２＋から選択され、より好ましくは、Ｎａ＋又はＫ＋から選択される。
【００３７】
いくつかの実施形態において、上記中間体又はその使用で、前記Ｐ１はシリルエーテル系保護基、アルキルエーテル系保護基、アルコキシメチルエーテル系保護基又はエステル系保護基から選択され、好ましくは、トリメチルシリル基（ＴＭＳ）、トリエチルシリル基（ＴＥＳ）、ｔ−ブチルジメチルシリル基（ＴＢＤＭＳ）、ｔ−ブチルジフェニルシリル基（ＴＢＤＰＳ）、ベンジル基、ｐ−メトキシベンジル基、３，４−ジメトキシベンジル基、メチルエーテル、ｔ−ブチル基、トリチル基、４，４’−ジメトキシトリチル基（ＤＭＴｒ）、メトキシメチル基（ＭＯＭ）、ベンジルオキシメチル基（ＢｎＯＭ）、テトラヒドロフリル基（ＴＨＰ）、ホルミル基、アセチル基（Ａｃ）、クロロアセチル基（ＣＡｃ）、メトキシアセチル基（ＭＡｃ）又はピバロイル基（Ｐｖ）から選択され、より好ましくは、トリメチルシリル基（ＴＭＳ）、トリエチルシリル基（ＴＥＳ）、ｔ−ブチルジメチルシリル基（ＴＢＤＭＳ）、ｔ−ブチルジフェニルシリル基（ＴＢＤＰＳ）又はメトキシメチル基（ＭＯＭ）から選択される。
【００３８】
いくつかの実施形態において、上記中間体又はその使用で、前記Ｐ２はシリルエーテル系保護基から選択され、好ましくは、トリメチルシリル基（ＴＭＳ）、トリエチルシリル基（ＴＥＳ）、ｔ−ブチルジメチルシリル基（ＴＢＤＭＳ）又はｔ−ブチルジフェニルシリル基（ＴＢＤＰＳ）から選択され、より好ましくは、トリメチルシリル基（ＴＭＳ）に選択される。
【００３９】
本願のいくつかの実施形態において、前記式６の化合物は、以下の化合物に選択される。
【化１２】
2020528068.tif 000014
【００４０】
本願のいくつかの実施形態において、前記式７の化合物は、以下の化合物に選択される。
【化１３】
2020528068.tif 000015
【００４１】
本願のいくつかの実施形態において、前記式８の化合物は、以下の化合物に選択される。
【化１４】
2020528068.tif 000016
【００４２】
本願のいくつかの実施形態において、前記式１０の化合物は、以下の化合物に選択される。
【化１５】
2020528068.tif 000017
【００４３】
本願のいくつかの実施形態において、前記式１１の化合物は、以下の化合物に選択される。
【化１６】
2020528068.tif 000018
【００４４】
定義と用語
特に説明された場合を除き、本明細書で使用されている用語及び表現は、以下記載の意味を有する。特定の用語又は表現は、特に定義された場合を除き、不明確又は不明瞭なものとしてではなく、本分野通常の意味で理解されるべきである。本明細書に商品名が記載された場合、対応する製品又はその有効成分を指す。
【００４５】
本願において、用語「アルキル基」は、その全ての異性体の形態を含む。例えば、プロピル基は、ｎ−プロピル基、イソプロピル基を含み、ブチル基は、１−ブチル基、２−ブチル基、イソブチル基、ｔ−ブチル基を含む。
【００４６】
本願において、保護基及びその連結又は除去の方法は、本分野の通常方法によって実現できる。当該方法は、１ステップだけの反応でもよければ、複数のステップの反応でもよい。例えば、Ｗｉｌｅｙ社出版の「Greene’s Protective Groups in Organic Synthesis
- 4th Edition」又は化学工業出版社による「保護基化学」を参照できるが、これらに限定されない。
【００４７】
本発明に係る化合物には、特定の幾何異性体又は立体異性体の形態が存在してもよい。本発明に関連するこのような化合物は、シス異性体とトランス異性体、（−）−エナンチオマーと（＋）−エナンチオマー、（Ｒ）−エナンチオマーと（Ｓ）−エナンチオマー、ジアステレオマー、（Ｄ）−異性体、（Ｌ）−異性体、及びラセミ混合物と他の混合物、例えばエナンチオマー又はジアステレオマーを大量に含有する混合物を含み、これらの混合物はいずれも本発明の範囲に含まれる。アルキル基などの置換基には、他にも不斉炭素原子が存在してもよい。上記全ての異性体及びそれらの混合物は、いずれも本発明の範囲に含まれる。
【００４８】
本願において、用語「ｐＫａ」は、酸から水素イオンが放出される能力を表す酸解離定数である。本分野の常識によれば、塩基のｐＫａの数値は、その共役酸によって測定される。
【００４９】
本願において、本分野の常識に従ってステロイド化合物の各原子に番号を付けることができる。例えば、高等教育出版社によるケイ其毅著「基礎有機化学−第三版」を非限定的に参照できる。本願に係る式７の化合物を例にとり、以下に示すように、３位、７位、２３位の原子を注記する。
【化１７】
2020528068.tif 000019
【発明の効果】
【００５０】
本願に係る製造方法によれば、反応は温和な条件で行われ、例えば常圧下でも行えるため、反応温度をコントロールしやすい。また、本願に係る製造方法において、一部のステップで複数の官能基を同時に変換して、効果的にステップを減少できるため、産業化された生産に適する。
【実施例】
【００５１】
以下、本発明の内容をよりよく理解できるように、具体的な実施例を踏まえて更なる説明をするが、記載されている具体的な実施形態は、本発明の内容に対する制限ではない。
【００５２】
製造実施例１：式８ａの化合物の製造
ステップ１−１  式５ａの化合物の製造
【化１８】
2020528068.tif 000020
２５℃で、メタノール（３３Ｌ）を５０Ｌ反応器に加え、基質４（３．３３０ｋｇ、８．２３ｍｏｌ）を反応器に加えて、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（１５６．６ｇ、０．８２３ｍｏｌ）を加え、反応液を６０℃に加熱して、当該温度で１２時間攪拌した。ＴＬＣによって反応を監視して、原料が消失したことが示され、ＨＰＬＣによって約１００％の産物が生成したことが示された。反応液を室温に冷却して、飽和炭酸水素ナトリウム溶液でｐＨ値を約９に調節して、溶液を遠心脱水して粗生成物を得て、酢酸エチル（３０Ｌ）で粗生成物を溶解し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液（９Ｌ）と、水（９Ｌ）と、飽和食塩水（９Ｌ）とを順に使用して洗浄した。有機相を遠心脱水して製品を得た。産物の性状は褐色の油状液体である。
【００５３】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ３．６６（ｓ，３Ｈ），３．６１−３．４９（ｍ，１Ｈ），２．７４−２．６６（ｍ，１Ｈ），２．４８−２．３３（ｍ，２Ｈ），２．２４−２．１５（ｍ，１Ｈ），２．０７−１．６１（ｍ，１３Ｈ），１．５４−１．４０（ｍ，３Ｈ），１．３１−１．０７（ｍ，６Ｈ），１．０２−０．７７（ｍ，９Ｈ），０．６９（ｓ，３Ｈ）。
【００５４】
ステップ１−２  式６ａの化合物の製造
【化１９】
2020528068.tif 000021
ジクロロメタン（３０Ｌ）で式５ａの化合物（３１００ｇ）を溶解して、イミダゾール（５２９．４ｇ）と、トリエチルアミン（７８６．８ｇ）とを順に加え、反応器内で冷却した（内部温度は５℃）。当該温度でＴＢＤＰＳＣｌ（２１４０ｇ）を徐々に滴下し、滴下する過程で温度が１０℃を超えないように注意し、滴下完了後に室温で反応液を攪拌して１６時間反応させた。ＴＬＣによって原料が完全に反応したことが示されると、反応液に水１５Ｌを徐々に滴下して、反応をクエンチした。静置して、反応液が分層すると、下層のジクロロメタン相を取り出して、飽和食塩水（１０Ｌ）でジクロロメタン相を洗浄し、有機相を濃縮させて産物を得た。産物の性状は褐色の油状液体である。
【００５５】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．６９−７．６３（ｍ，４Ｈ），７．４５−７．３４（ｍ，６Ｈ），３．７７（ｂｒ  ｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，１Ｈ），３．６９（ｓ，３Ｈ），３．５４−３．４４（ｍ，１Ｈ），２．５７（ｑ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，１Ｈ），２．４６（ｂｒ  ｄｄ，Ｊ＝３．０，１４．６Ｈｚ，１Ｈ），２．３６−２．２１（ｍ，２Ｈ），２．０８−１．６７（ｍ，９Ｈ），１．６２−１．１７（ｍ，１２Ｈ），１．１２−０．８７（ｍ，１４Ｈ），０．７０−０．６２（ｍ，６Ｈ）。
【００５６】
ステップ１−３  式７ａの化合物の製造
【化２０】
2020528068.tif 000022
１５℃で、テトラヒドロフラン（１０Ｌ）を５０Ｌ反応器に加え、Ｎ２で保護して反応器にＬｉＡｌＨ４（２３５ｇ、６．２ｍｏｌ）を加えて、反応液を内部温度が５℃になるまで冷却した。テトラヒドロフランで式６ａの化合物（２．０４ｋｇ）を溶解して、ＬｉＡｌＨ４のテトラヒドロフラン溶液に徐々に滴下して、約２時間３０分で滴下を完了した。１５℃で反応液を２時間攪拌し、ＴＬＣによって反応を監視して、原料が消失したことが示された。反応液にＨ２Ｏ（２３５ｍＬ）を徐々に滴下して反応をクエンチして、さらにテトラヒドロフラン溶液（２０Ｌ）を加え、１５％ＮａＯＨ溶液（２３５ｍＬ）を反応液に徐々に滴下して、１２時間攪拌した。反応液を濾過して、ジクロロメタン（３Ｌ）でフィルターケーキを洗浄して、濾液を遠心脱水して、油状物質を得た。ＤＣＭ（１５Ｌ）で油状物質を溶解して、水（５Ｌ）及び飽和食塩水（５Ｌ）で有機相をそれぞれ１回洗浄し、濾液を遠心脱水して、白色固体（１．８ｋｇ）を得た。反応液を室温（約１６℃）に冷却して、飽和炭酸水素ナトリウム溶液でｐＨ値を約９に調節し、溶液を（少量が残るように）遠心脱水して粗生成物を得て、酢酸エチル（３０Ｌ）で粗生成物を溶解し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液（９Ｌ）と、水（９Ｌ）と、飽和食塩水（９Ｌ）とで順に洗浄した。有機相を遠心脱水して製品を得た。産物の性状は褐色の油状液体である。
【００５７】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．６４−７．５８（ｍ，４Ｈ），７．３７−７．２５（ｍ，６Ｈ），３．６８−３．５２（ｍ，３Ｈ），３．３８−３．２８（ｍ，１Ｈ），１．９１−１．０３（ｍ，２５Ｈ），１．０２−０．９３（ｍ，１１Ｈ），０．８８（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，３Ｈ），０．７２−０．６４（ｍ，６Ｈ），０．５７（ｓ，３Ｈ）。
【００５８】
ステップ１−４  式８ａの化合物の製造
【化２１】
2020528068.tif 000023
式７ａの化合物（３．５２ｋｇ、５．５８ｍｏｌ）の無水ジクロロメタン（３５Ｌ）溶
液にイミダゾール（１．１４ｋｇ、１６．７３ｍｏｌ）を加えた。５℃で、反応系にクロロトリメチルシラン（１７７０ｍＬ、１３．９５ｍｏｌ）を滴下して、２時間で適加を完了した。１５℃で反応系を３時間攪拌した。ＴＬＣによって反応がほぼ完了したことを検出した。１５℃で反応系に水１０Ｌを加えて、攪拌し、分液した。水１０Ｌと、飽和食塩水１０Ｌとを順に使用してそれぞれ有機相を１回洗浄した。
【００５９】
有機相を約５Ｌに濃縮させて、溶液にエタノール３０Ｌを加えた。１５℃で、溶液に炭酸カリウム（１．９３ｋｇ、１３．９５ｍｏｌ）を加えた。１５℃で反応系を１４時間攪拌した。ＴＬＣによって反応がほぼ完了したことを検出した。反応液を濾過して、ジクロロメタン３Ｌでフィルターケーキをリンスした。濾液を濃縮させて、油状物質を得た。ジクロロメタン２０Ｌで油状物質を溶解して、水１０Ｌと、飽和食塩水１０Ｌとを順に使用してそれぞれ１回洗浄した。無水硫酸ナトリウム３ｋｇで有機相を乾燥させて、濾過した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（１００〜２００メッシュ、２３０ｍｍ×８００ｍｍ）によって精製し、ｎ−ヘプタン：酢酸エチル＝３０：１〜２０：１にて溶出した。目的化合物８ａを得た（３．２０ｋｇ、収率８２％、純度８７％）。
【００６０】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．７７−７．６４（ｍ，４Ｈ），７．４５−７．３２（ｍ，６Ｈ），３．７８−３．５６（ｍ，３Ｈ），３．４３−３．３１（ｍ，１Ｈ），１．９８−１．１３（ｍ，２４Ｈ），１．０７（ｓ，９Ｈ），０．９７（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，３Ｈ），０．８３−０．７４（ｍ，４Ｈ），０．６８−０．５５（ｍ，６Ｈ），０．１７−０．０５（ｍ，９Ｈ）。
【００６１】
製造実施例２：式Ｉ−Ｃｌの化合物の製造
ステップ２−１  式１０ａの化合物の製造
【化２２】
2020528068.tif 000024
反応器に式８ａの化合物（２４９８．０ｇ、３．１０ｍｏｌ）を加えて、ＴＨＦ（１２．５Ｌ）で溶解し、内部温度を５〜１０℃に制限して、徐々にｔ−ＢｕＯＮａ（６１４．２ｇ、６．２０ｍｏｌ）を加え、約４０分間で加え終えたら、１０分間攪拌して、２０〜２３℃に昇温して１時間３０分攪拌して、５〜１０℃に冷却した。内部温度を保持して、反応液に式９ａの化合物のＴＨＦ溶液（１２．５Ｌ、６．２０ｍｏＬ、１０７３．１ｇ）を滴下して、６０℃に昇温した。１時間３０分攪拌して、ＴＬＣ及びＨＰＬＣによって完全に反応したことが検出されると、２０℃に冷却した。水２５Ｌを加えてクエンチし、酢酸エチルで（２５Ｌ×２）抽出して、有機相を合わせて、飽和食塩水で（２５Ｌ×３）洗浄した。遠心脱水して油状の粗生成物を得た。粗生成物をアセトン２．５Ｌに溶解して、３つの１０Ｌ三口フラスコに合計で６．６×３Ｌのメタノールを加えた。内部温度を−１０〜−１５℃に制限して、粗生成物溶液を徐々に滴下して、攪拌すると、大量の固体が析出した。濾過し、メタノール３．０Ｌでフィルターケーキを洗浄して、黄色の固体を得た（乾燥されていない）。黄色固体にメタノール１８．０Ｌを加えて、一晩スラリー化させた。濾過して、メタノール３．０Ｌでフィルターケーキを洗浄して、黄色の固体を得て（乾燥されていない）、黄色固体にメタノール１８．０Ｌを加え、一晩スラリー化させて濾過して、メタノール２．０Ｌでフィルターケーキを洗浄した。２４時間真空乾燥させて、黄色固体２５２２．０ｇ、すなわち式１０ａの化合物を得た（２５２２．０ｇ、収率９０％、純度９２．９％）。
【００６２】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ＝８．２５（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．７３（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６３−７．５１（ｍ，４Ｈ），７．３３−７．２１（ｍ，６Ｈ），４．４８−４．２７（ｍ，２Ｈ），３．５０（ｓ，１Ｈ），３．３１−３．１８（ｍ，１Ｈ），１．９８−１．０３（ｍ，２７Ｈ），０．９５（ｓ，９Ｈ），０．７３−０．６４（ｍ，４Ｈ），０．５８−０．４６（ｍ，６Ｈ），０．００（ｓ，９Ｈ）。
【００６３】
ステップ２−２  式１１ａの化合物の製造
【化２３】
2020528068.tif 000025
反応器（２０Ｌ）に式１０ａの化合物（２５２０．０ｇ、２．７９ｍｏｌ）と、ＥｔＯＨ（１３．０Ｌ）とを加え、攪拌して溶解させ、内部温度を１０℃以内に制限して、ＮａＯＨ（２２３２．０ｇ、５５．８ｍｏｌ）の水溶液（１３．０Ｌ）を数回に分けて加えた。温度を１０５℃に上げ、２時間４８分攪拌した。ＴＬＣ及びＨＰＬＣによって完全に反応したことが検出されると、反応液を１０℃に冷却して、２時間静置し、底部に固体が析出した。上清から１９．５Ｌを除去して、反応液に水３９．０Ｌを加えて、内部温度を１２℃に制限して、３６時間攪拌した。濾過して、水６．０Ｌと、アセトニトリル６．０Ｌとで固体を洗浄して、アセトニトリル１０．０Ｌで２時間スラリー化させて、濾過すると、固体を得た。アセトン１２．０Ｌで１６時間スラリー化させ、濾過して、固体を得た。アセトン１２．０Ｌで再度１６時間スラリー化させた。濾過して、製品を乾燥させて、白色固体２３３２．３ｇの式１１ａの化合物を得た。（２３３２．３ｇ、収率９４．７％、純度９９．７％）。
【００６４】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）δ＝８．４８（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），８．０７（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５５（ｂｒ  ｄｄ，Ｊ＝６．５，１２．５Ｈｚ，４Ｈ），７．４１−７．１１（ｍ，６Ｈ），４．５２−４．１５（ｍ，２Ｈ），３．５４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），３．３４−３．２２（ｍ，１Ｈ），２．０４−１．１４（ｍ，２８Ｈ），０．９３（ｓ，９Ｈ），０．６９（ｓ，４Ｈ），０．６０−０．４３（ｍ，６Ｈ），０．００（ｓ，９Ｈ）。
【００６５】
ステップ２−３  式Ｉ−Ｃｌの化合物の製造
【化２４】
2020528068.tif 000026
反応器（５０Ｌ）に式１１ａの化合物（２３３０．３ｇ、２．６５ｍｍｏｌ）を加え、ＴＨＦ（２４．０Ｌ）を加えて溶解させた。内部温度を１０℃に制限して、濃ＨＣｌ（１０．０Ｌ、１２０．００ｍｏｌ）を徐々に滴下して、２時間で１３℃に昇温させて（室温
）で９０時間攪拌した。ＴＬＣによって検出して、８〜１０℃で水酸化ナトリウム溶液７５Ｌ（６０００ｇ）を徐々に滴下してｐＨを１０に調節し、半時間攪拌してメチルｔ−ブチルエーテルで（３０Ｌ×４）抽出し、濃ＨＣｌ（３０００ｍＬ）でｐＨを５に調節して、酢酸エチルで（３０Ｌ×２）抽出し、水で有機相を（３０Ｌ×４）洗浄し、有機相を濃縮させて、固体１３５０ｇを得た。酢酸エチル２．０Ｌとｎ−ヘプタン５．０Ｌの混合溶媒で当該固体を一晩スラリー化させ、濾過して、固体１２８０ｇを得た。酢酸エチル９．０Ｌを加えて加熱して（８０℃）清澄化させた後、徐々に室温（１０℃）に冷却した。濾過して、目的化合物１２２２ｇを得た。
【００６６】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）δ＝８．６９（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），８．２３（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．６７−４．３０（ｍ，２Ｈ），３．６７（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），３．３４−３．２２（ｍ，１Ｈ），２．１０−１．１１（ｍ，２５Ｈ），１．０９−０．９７（ｍ，３Ｈ），０．９６−０．８６（ｍ，６Ｈ），０．７３（ｓ，３Ｈ）。
【００６７】
下記化合物に関する薬理学又は薬物動態学の研究を行った。
【化２５】
2020528068.tif 000027
【００６８】
実験例１：インビトロアッセイ
ＦＸＲ生化学実験
実験目的：
化学増幅型ルミネッセンスプロキシミティホモジニアスアッセイ（ａｌｐｈａｓｃｒｅｅｎ）により化合物のＦＸＲ結合反応に対する活性化作用を検出する。
【００６９】
実験材料：
１．タンパク質：グルタチオン−Ｓ−転移酵素で標識されたＦＸＲヒトタンパク質（インビトロジェン社提供）
２．共活性化因子：ビオチンで標識されたステロイド受容体補助因子（アナスペック社提供）
３．検出試薬：化学増幅型ルミネッセンスプロキシミティホモジニアスアッセイ（ａｌｐｈａｓｃｒｅｅｎ）検出キット（パーキンエルマー社提供）
【００７０】
実験方法：
１．化合物の希釈：被験化合物の４０μＭのＤＭＳＯ溶液を調製して、化合物を３倍希釈して１０の濃度を設定した。参照化合物の４００μＭのＤＭＳＯ溶液を調製して、１．５倍希釈して１０の濃度を設定した。希釈されたＤＭＳＯ溶液を各ウェル１５０ｎＬで３８４マイクロプレートのウェルに加えた。
【００７１】
２．グルタチオン−Ｓ−転移酵素で標識されたＦＸＲヒトタンパク質及びビオチンで標識されたステロイド受容体補助因子をそれぞれ、濃度０．４ｎＭ及び濃度３０ｎＭの混合溶液として調製した。各ウェル１５μＬで３８４マイクロプレートのウェルに加えた。室温で１時間インキュベートした。
【００７２】
４．化学増幅型ルミネッセンスプロキシミティホモジニアスアッセイ（ａｌｐｈａｓｃｒｅｅｎ）検出キット内の受容体ビーズ混合液を１２５倍希釈して、各ウェル７．５μＬで３８４マイクロプレートのウェルに加えた。実験過程において暗所条件で操作した。室温で１時間インキュベートした。
【００７３】
５．化学増幅型ルミネッセンスプロキシミティホモジニアスアッセイ（ａｌｐｈａｓｃｒｅｅｎ）検出キット内の供与体ビーズ混合液を１２５倍希釈して、各ウェル７．５μＬで３８４マイクロプレートのウェルに加えた。実験過程において暗所条件で操作した。室温で１時間インキュベートした。
【００７４】
６．ＥＣ５０測定：Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーを使用して波長６８０ｎｍにて励起させ、５２０〜６２０ｎｍにおける吸収信号を読み取った。
【００７５】
７．データ分析：Ｐｒｉｓｍ  ５．０でデータを分析して、化合物の活性化作用ＥＣ５０値を算出した。化合物の最大信号値と参照化合物の最大信号値との比値を、化合物の活性化効力パーセンテージ（Ｅｆｆｉｃａｃｙ）とした。
【００７６】
ＦＸＲ細胞実験
実験目的：
β−ラクタマーゼレポーター遺伝子を利用して化合物の細胞機能活性に対する影響を検出する。
【００７７】
実験材料：
１．細胞株：ＦＸＲ  ＨＥＫ  ２９３Ｔ  ＤＡ
２．細胞培地：ＤＭＥＭ培地に１０％血清及びペニシリン／ストレプトマイシン（１×）添加
３．検出試薬：ＧｅｎｅＢＬＡｚｅｒ（登録商標）レポーター遺伝子検出キット（インビトロジェン社提供）
【００７８】
実験方法：
１．化合物の希釈：被験化合物の１００μＭのＤＭＳＯ溶液を調製して、化合物を３倍希釈して１０の濃度を設定した。参照化合物の１００μＭのＤＭＳＯ溶液を調製して、１．３倍希釈して１０の濃度を設定した。希釈されたＤＭＳＯ溶液を各ウェル２００ｎＬで３８４マイクロプレートのウェルに加えた。
【００７９】
２．細胞接種：ＦＸＲ  ＨＥＫ  ２９３Ｔ  ＤＡ細胞を蘇生させて、培地で再懸濁させ、密度が５×１０５個／ｍＬになるように希釈して、各ウェル４０μＬで３８４マイクロプレートのウェルに加えた。
【００８０】
３．  ３７℃と５％ＣＯ２の条件において、３８４マイクロプレートを１６時間培養した。
【００８１】
４．１ｍＭのＬｉｖｅＢＬＡｚｅｒ（登録商標）−ＦＲＥＴ  Ｂ／Ｇ（ＣＣＦ４−ＡＭ）基質６μＬをＢ溶液６０μＬ及びＣ溶液９３４μＬと混合させて、各ウェル８μＬで３８４マイクロプレートのウェルに加えた。
【００８２】
５．室温下の暗所条件で、３８４マイクロプレートを２時間インキュベートした。
【００８３】
６．ＥＣ５０測定：Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーを使用して波長４０９ｎｍにて励起させ、４６０ｎｍ及び５３０ｎｍにおける吸収信号を読み取った。
【００８４】
７．データ分析：Ｐｒｉｓｍ  ５．０でデータを分析して、化合物の活性化作用ＥＣ５０値を算出した。被験化合物の最大信号値と参照化合物（ケノデオキシコール酸、ＣＤＣＡ）の最大信号値との比値を、化合物の活性化効力パーセンテージ（Ｅｆｆｉｃａｃｙ）とした。
【００８５】
【表１】
2020528068.tif 000028
結論：本願化合物はＦＸＲ受容体に対し顕著なアゴニスト作用を有し、細胞レベルにおいてもＦＸＲ受容体に対して比較的顕著なアゴニスト作用を有する。
【００８６】
実験例２：インビボアッセイ
単独投与マウスの薬物動態学研究：
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雄マウス１２匹を、１群６匹でランダムに２群に分けた。群１は静脈投与群として、２ｍｇ／ｋｇ、２ｍＬ／ｋｇ尾静脈注射投与した（溶媒は１０％ＨＰｂＣＤ水溶液で、医薬の溶解度が好ましくない場合は、共溶媒を加える）。群２は経口投与群として、１０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍＬ／ｋｇ胃内投与した（溶媒は０．５％ＨＰＭＣ水溶液）。静脉投与群は投与後０．０８３、０．２５、０．５、１、２、４、６、８、２４時間に血漿試料を採取した（Ｋ２−ＥＤＴＡで抗凝固）。経口投与群は投与後０．２５、０．５、１、２、４、６、８、２４時間に血漿試料を採取した。各群の６匹の動物に対し、同一の時刻には３匹の血液サンプルを採取し、１回目の３匹の採取と２回目の３匹の採取は交互に実施した。ＬＣ−ＭＳ／ＭＳを利用して血漿試料分析を行った。血漿濃度と時間の関係性を示すグラスをプロットし、Ｐｈｏｅｎｉｘ  ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ  ６．３でＰＫパラメータを算出した。
【００８７】
【表２】
2020528068.tif 000029
結論：表２に示すように、同一用量の経口投与後、式Ｉ−Ｈの化合物の最高血中濃度は参照化合物オベチコール酸に近く、血中濃度時間曲線下面積は参照化合物オベチコール酸を上回っている。同一用量の経口投与後、式Ｉ−Ｃｌの化合物の最高血中濃度は参照化合物オベチコール酸を上回り、血中濃度時間曲線下面積も参照化合物オベチコール酸を上回っている。
【００８８】
カセットドージング法によるマウス肝臓と血漿の比較実験：
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雄マウス６匹を１群とした。経口投与群として、５種類の被験医薬を含める製剤を２ｍｇ／ｋｇ／化合物（溶媒は０．５％ＨＰＭＣ水溶液）で胃内投与した。５種類の化合物はそれぞれ溶媒に溶解して、超音波処理又はボルテックスによってそれぞれ１ｍｇ／ｍＬ溶液（澄清溶液又は懸濁液）を形成し、続いて５種類の化合物溶液を等体積（１：１：１：１：１、ｖ：ｖ：ｖ：ｖ：ｖ）でガラス瓶において混合した。胃内投与後、３匹の動物は投与後３０分間に血漿と肝組織の試料を採取し、残り３匹の動物は投与後３時間に、同様のように試料を採取した。肝組織の採取後、氷冷緩衝液（メタノール：１５ｍＭ  ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４）＝１：２、ｖ：ｖ）を使用して肝組織の重量：緩衝液の体積＝１：３にてホモジネートした。予め開発した５種類の機能を統合したＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析方法を利用して血漿と肝組織の試料の分析を行って、血漿濃度及び肝組織ホモジネート濃度を得て、Ｅｘｃｅｌで肝組織濃度と血漿濃度との比値を算出した。
【００８９】
【表３】
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【００９０】
結論：表３に示すように、本願化合物の同一用量の経口投与後、式Ｉ−Ｈの化合物は０．５時間及び３時間における肝臓中薬物濃度がいずれも参照化合物を上回り、０．５時間及び３時間における肝臓／血漿濃度比も参照化合物を上回っている。
【国際調査報告】
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