(57)【要約】  本発明は、必要とする対象、例えば、必要とするヒトにおいて癌を処置する方法であって、ヒト由来のサンプルにおいて、５−メチルチオアデノシンホスホリラーゼ（ＭＴＡＰ）ポリヌクレオチドもしくはポリペプチドのレベルまたはＭＴＡＰにおける突然変異の存在もしくは不存在を決定すること、ならびにＭＴＡＰポリヌクレオチドもしくはポリペプチドのレベルが参照値に比べて低下している場合またはＭＴＡＰポリヌクレオチドもしくはポリペプチドに突然変異が存在する場合に、そのヒトに有効量のＩ型タンパク質アルギニンメチルトランスフェラーゼ（Ｉ型ＰＲＭＴ）阻害剤を投与し、それにより、ヒトにおける癌を処置することを含んでなる方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
必要とするヒトにおいて癌を処置する方法であって、
前記ヒト由来のサンプルにおいて
ａ．５−メチルチオアデノシンホスホリラーゼ（ＭＴＡＰ）ポリヌクレオチドもしくはポリペプチドのレベルまたは
ｂ．ＭＴＡＰ中の突然変異の存在もしくは不存在
を決定すること、および
前記ＭＴＡＰポリヌクレオチドもしくはポリペプチドのレベルが対照に比べて低下しているか、またはＭＴＡＰポリヌクレオチドもしくはポリペプチドに突然変異が存在する場合に、前記ヒトに有効量のＩ型タンパク質アルギニンメチルトランスフェラーゼ（Ｉ型ＰＲＭＴ）阻害剤を投与し、それにより、前記ヒトにおいて癌を処置すること
を含んでなる、方法。
【請求項２】
必要とするヒトにおいて癌細胞の増殖を阻害する方法であって、前記ヒトに有効量のＩ型タンパク質アルギニンメチルトランスフェラーゼ（Ｉ型ＰＲＭＴ）阻害剤を投与し、それにより、前記ヒトにおいて癌細胞の増殖を阻害することを含んでなり、ここで、前記癌細胞は５−メチルチオアデノシンホスホリラーゼ（ＭＴＡＰ）に突然変異を有し、かつ／または対照に比べてＭＴＡＰポリヌクレオチドもしくはポリペプチドのレベルが低下している、方法。
【請求項３】
癌を有するヒトがＩ型タンパク質アルギニンメチルトランスフェラーゼ（Ｉ型ＰＲＭＴ）阻害剤による処置に感受性があるかどうかを予測する方法であって、
前記ヒト由来のサンプルにおいて
ａ．５−メチルチオアデノシンホスホリラーゼ（ＭＴＡＰ）ポリヌクレオチドもしくはポリペプチドのレベルまたは
ｂ．ＭＴＡＰにおける突然変異の存在もしくは不存在
を決定することを含んでなり、対照に比べてのＭＴＡＰポリヌクレオチドもしくはポリペプチドのレベルの低下またはＭＴＡＰにおける突然変異の存在が、前記ヒトがＩ型ＰＲＭＴ阻害剤による処置に感受性があることを示す、方法。
【請求項４】
奏効者として分類されたヒトにおいて癌の処置に使用するためのＩ型ＰＲＭＴ阻害剤であって、奏効者は前記ヒト由来のサンプルにおいて５−メチルチオアデノシンホスホリラーゼ（ＭＴＡＰ）における突然変異の存在または対照に比べてのＭＴＡＰポリヌクレオチドもしくはポリペプチドのレベルの低下を特徴とする、Ｉ型ＰＲＭＴ阻害剤。
【請求項５】
前記Ｉ型ＰＲＭＴ阻害剤が、タンパク質アルギニンメチルトランスフェラーゼ１（ＰＲＭＴ１）阻害剤、タンパク質アルギニンメチルトランスフェラーゼ３（ＰＲＭＴ３）阻害剤、タンパク質アルギニンメチルトランスフェラーゼ４（ＰＲＭＴ４）阻害剤、タンパク質アルギニンメチルトランスフェラーゼ６（ＰＲＭＴ６）阻害剤、またはタンパク質アルギニンメチルトランスフェラーゼ８（ＰＲＭＴ８）阻害剤である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記Ｉ型ＰＲＭＴ阻害剤が、式（Ｉ）：
【化１】
2020510618.tif 000028
［式中、
ＸはＮであり、ＺはＮＲ４であり、かつ、ＹはＣＲ５であるか；または
ＸはＮＲ４であり、ＺはＮであり、かつ、ＹはＣＲ５であるか；または
ＸはＣＲ５であり、ＺはＮＲ４であり、かつ、ＹはＮであるか；または
ＸはＣＲ５であり、ＺはＮであり、かつ、ＹはＮＲ４であり；
ＲＸは、置換されていてもよいＣ１−４アルキルまたは置換されていてもよいＣ３−４シクロアルキルであり；
Ｌ１は、結合、−Ｏ−、−Ｎ（ＲＢ）−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＢ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＢ）Ｎ（ＲＢ）−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＢ）−、−ＮＲＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲＢＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＢ）−、−ＮＲＢＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＢ）Ｎ（ＲＢ）−、−ＮＲＢＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＳＣ（Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲＢ）−、−Ｃ（＝ＮＮＲＢ）−、−Ｃ（＝ＮＯＲＡ）−、−Ｃ（＝ＮＲＢ）Ｎ（ＲＢ）−、−ＮＲＢＣ（＝ＮＲＢ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＢ）−、−ＮＲＢＣ（Ｓ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｏ−、−ＳＯ２−、−Ｎ（ＲＢ）ＳＯ２−、−ＳＯ２Ｎ（ＲＢ）−、または置換されていてもよいＣ１−６飽和もしくは不飽和炭化水素鎖であり、ここで、前記炭化水素鎖の１以上のメチレン単位は、独立に、−Ｏ−、−Ｎ（ＲＢ）−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＢ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＢ）Ｎ（ＲＢ）−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＢ）−、−ＮＲＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲＢＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＢ）−、−ＮＲＢＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＢ）Ｎ（ＲＢ）−、−ＮＲＢＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＳＣ（Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲＢ）−、−Ｃ（＝ＮＮＲＢ）−、−Ｃ（＝ＮＯＲＡ）−、−Ｃ（＝ＮＲＢ）Ｎ（ＲＢ）−、−ＮＲＢＣ（＝ＮＲＢ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＢ）−、−ＮＲＢＣ（Ｓ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｏ−、−ＳＯ２−、−Ｎ（ＲＢ）ＳＯ２−、または−ＳＯ２Ｎ（ＲＢ）−で置換されていてもよく；
各ＲＡは独立に、水素、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル、置換されていてもよいアルキニル、置換されていてもよいカルボシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、酸素原子と結合している場合には酸素保護基、および硫黄原子と結合している場合には硫黄保護基からなる群から選択され；
各ＲＢは独立に、水素、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル、置換されていてもよいアルキニル、置換されていてもよいカルボシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、および窒素保護基からなる群から選択されるか、または同じ窒素原子上のＲＢとＲＷは、間にある窒素と一緒に置換されていてもよい複素環式環を形成してもよく；
ＲＷは、水素、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル、置換されていてもよいアルキニル、置換されていてもよいカルボシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、または置換されていてもよいヘテロアリールであり；ただし、Ｌ１が結合である場合には、ＲＷは、水素、置換されていてもよいアリール、または置換されていてもよいヘテロアリールでなく；
Ｒ３は、水素、Ｃ１−４アルキル、またはＣ３−４シクロアルキルであり；
Ｒ４は、水素、置換されていてもよいＣ１−６アルキル、置換されていてもよいＣ２−６アルケニル、置換されていてもよいＣ２−６アルキニル、置換されていてもよいＣ３−７シクロアルキル、置換されていてもよい４〜７員のヘテロシクリル；または置換されていてもよいＣ１−４アルキル−Ｃｙであり；
Ｃｙは、置換されていてもよいＣ３−７シクロアルキル、置換されていてもよい４〜７員のヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、または置換されていてもよいヘテロアリールであり；かつ、
Ｒ５は、水素、ハロ、−ＣＮ、置換されていてもよいＣ１−４アルキル、または置換されていてもよいＣ３−４シクロアルキルである］
の化合物またはその薬学上許容可能な塩である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記Ｉ型ＰＲＭＴ阻害剤が、式（ＩＩ）：
【化２】
2020510618.tif 000029
の化合物またはその薬学上許容可能な塩である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記Ｉ型ＰＲＭＴ阻害剤が、−Ｌ１−ＲＷが置換されていてもよいカルボシクリルである式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物である、請求項６または７に記載の方法。
【請求項９】
前記Ｉ型ＰＲＭＴ阻害剤が、化合物Ａ：
【化３】
2020510618.tif 000030
またはその薬学上許容可能な塩である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記突然変異がＭＴＡＰ欠失である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記サンプルが癌細胞を含んでなる、請求項１および３〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記癌が固形腫瘍または血液癌である、請求項１および３〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記癌細胞が固形腫瘍癌細胞または血液癌細胞である、請求項２および５〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記癌がリンパ腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、腎臓癌、黒色腫、乳癌、膀胱癌、結腸癌、肺癌、または前立腺癌である、請求項１および３〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記癌細胞がリンパ腫細胞、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞、腎臓癌細胞、黒色腫細胞、乳癌細胞、膀胱癌細胞、結腸癌細胞、肺癌細胞、または前立腺癌細胞である、請求項２、５〜１０および１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
ＭＴＡＰポリヌクレオチドもしくはポリペプチドのレベルの低下またはＭＴＡＰにおける突然変異が、癌細胞においてメチルチオアデノシン（ＭＴＡ）のレベルを上昇させ、その結果、タンパク質アルギニンメチルトランスフェラーゼ５（ＰＲＭＴ５）の活性が阻害される、請求項２、５〜１０、１３および１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
癌細胞におけるＭＴＡＰポリヌクレオチドもしくはポリペプチドのレベルの低下またはＭＴＡＰにおける突然変異が１型ＰＲＭＴ阻害剤に対する癌細胞の感受性を増強する、請求項２、５〜１０、１３および１５〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
ａとｂの両方が決定される、請求項１、３、５〜１２および１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
１以上の付加的抗新生物薬を投与することをさらに含んでなる、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
請求項１、３、５〜１２、１４および１８のいずれか一項に記載のａおよびｂの１つまたは複数を決定するためのキットと、請求項１、３、５〜１２、１４および１８のいずれか一項に記載のａまたはｂの１つまたは複数を決定するための手段とを含んでなる、癌の処置のためのキット。
【請求項２１】
前記手段がプライマー、プローブおよび抗体からなる群から選択される、請求項２０に記載のキット。
【請求項２２】
ヒトにおいて癌の処置に使用するための、Ｉ型ＰＲＭＴ阻害剤またはその薬学上許容可能な塩を含んでなる医薬組成物であって、前記ヒト由来の少なくとも第１のサンプルが、ＭＴＡＰに突然変異を有すること、対照に比べてＭＴＡＰポリヌクレオチドもしくはポリペプチドのレベルが低下していること、または両方が決定される、医薬組成物。
【請求項２３】
ヒトにおける癌の処置のための薬剤の製造におけるＩ型ＰＲＭＴ阻害剤の使用であって、前記ヒト由来の１以上のサンプルが、ＭＴＡＰに突然変異を有すること、対照に比べてＭＴＡＰポリヌクレオチドもしくはポリペプチドのレベルが低下していること、または両方が決定される、使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、必要とする対象において癌を処置する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
癌を含む過剰増殖性疾患の有効な治療は、腫瘍学分野において継続的な目標である。一般に、癌は、細胞の分裂、分化およびアポトーシス細胞死を制御する正常なプロセスの調節解除に起因し、制限されない成長、局部的拡大および全身転移の能力を有する悪性細胞の増殖を特徴とする。正常なプロセスの調節解除としては、シグナル伝達経路の異常および正常細胞に見られるものとは異なる因子への応答が含まれる。
【０００３】
癌治療の標的化療法の開発および使用の拡大は、重要な発癌経路、およびこれらの経路の標的化摂動が臨床奏効にいかに相当するかという理解の深まりを表している。標的化療法の有効性を予測する難しさは、おそらく、経路の脱調節の原因機構（例えば、活性化突然変異、増幅）に関する包括的知見が限定されていることの結果である。腫瘍学療法の前臨床橋渡し研究の検討では、どの腫瘍種および遺伝子型が治療から利益を得る可能性が最も高いかを決定することに着目する。選択された患者集団をターゲットにすることは、治療の可能性を最大限にする助けとなり得る。腫瘍モデルの前臨床細胞応答プロファイリングは、新規な癌治療薬の開発の基礎となっている。
【０００４】
アルギニンのメチル化は、遺伝子調節、ＲＮＡプロセシング、ＤＮＡ損傷応答、およびシグナル伝達などの多様な細胞プロセスに関与するタンパク質における重要な翻訳後修飾である。メチル化アルギニンを含有するタンパク質は核および細胞質画分の両方に存在し、アルギニン上へのメチル基の転移を触媒する酵素もまたこれらの細胞下コンパートメントに存在することが示唆される（Yang, Y. & Bedford, M. T. Protein arginine methyltransferases and cancer. Nat Rev Cancer 13, 37-50, doi:10.1038/nrc3409 (2013); Lee, Y. H. & Stallcup, M. R. Minireview: protein arginine methylation of nonhistone proteins in transcriptional regulation. Mol Endocrinol 23, 425-433, doi:10.1210/me.2008-0380 (2009)に総説）。哺乳動物細胞において、メチル化アルギニンは、ω−ＮＧ−モノメチル−アルギニン（ＭＭＡ）、ω−ＮＧ，ＮＧ−非対称性ジメチルアルギニン（ＡＤＭＡ）、またはω−ＮＧ，Ｎ’Ｇ−対称性ジメチルアルギニン（ＳＤＭＡ）の３つの主要な形態で存在する。各メチル化状態は、タンパク質間相互作用に異なる影響を及ぼし、従って、基質の生物活性に明瞭に異なる機能的結果を与える能力を持つ(Yang, Y. & Bedford, M. T. Protein arginine methyltransferases and cancer. Nat Rev Cancer 13, 37-50, doi:10.1038/nrc3409 (2013))。
【０００５】
アルギニンのメチル化は、主として、メチル基をＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン（ＳＡＭ）から基質であるアルギニン側鎖に転移してＳ−アデノシル−ホモシステイン（ＳＡＨ）およびメチル化アルギニンを生成するタンパク質アルギニンメチルトランスフェラーゼ（ＰＲＭＴ）ファミリーの活性を介して、グリシンリッチ、アルギニンリッチ（ＧＡＲ）モチーフの配列要素に生じる。このタンパク質ファミリーは１０種のメンバーからなり、そのうち９種が酵素活性を有することが示されている(Bedford, M. T. & Clarke, S. G. Protein arginine methylation in mammals: who, what, and why. Mol Cell 33, 1-13, doi:10.1016/j.molcel.2008.12.013 (2009))。ＰＲＭＴファミリーは、酵素反応の生成物によって４つのサブタイプ（Ｉ〜ＩＶ型）に類別される。ＩＶ型酵素は、内部グアニジノ窒素をメチル化し、酵母でのみ記載があり(Fisk, J. C. & Read, L. K. Protein arginine methylation in parasitic protozoa. Eukaryot Cell 10, 1013-1022, doi:10.1128/EC.05103-11 (2011))；Ｉ〜ＩＩＩ型酵素は、単一のメチル化事象によってモノメチル−アルギニン（ＭＭＡ、Ｒｍｅ１）を生じる。ＭＭＡ中間体は、比較的存在量の少ない中間体と考えられているが、ＰＲＭＴ７の主要ＩＩＩ型活性の選択基質はモノメチル化型に留まり、一方、Ｉ型およびＩＩ型酵素はＭＭＡからそれぞれ非対称性ジメチルアルギニン（ＡＤＭＡ、Ｒｍｅ２ａ）または対称性ジメチルアルギニン（ＳＤＭＡ、Ｒｍｅ２ｓ）への進行を触媒する。ＩＩ型ＰＲＭＴにはＰＲＭＴ５とＰＲＭＴ９が含まれるが、ＰＲＭＴ５は、対称性ジメチル化の形成を担う主要な酵素である。Ｉ型酵素にはＰＲＭＴ１、ＰＲＭＴ３、ＰＲＭＴ４、ＰＲＭＴ６およびＰＲＭＴ８が含まれる。ＰＲＭＴ１、ＰＲＭＴ３、ＰＲＭＴ４、およびＰＲＭＴ６は遍在発現するが、ＰＲＭＴ８は主として脳に限られる（Bedford, M. T. & Clarke, S. G. Protein arginine methyla
tion in mammals: who, what, and why. Mol Cell 33, 1-13, doi:10.1016/j.molcel.2008.12.013 (2009)に総説）。
【０００６】
ＰＲＭＴ１の誤調節および過剰発現は、いくつかの固形癌および造血系癌と関連が見出されている(Yang, Y. & Bedford, M. T. Protein arginine methyltransferases and cancer. Nat Rev Cancer 13, 37-50, doi:10.1038/nrc3409 (2013); Yoshimatsu, M. et al. Dysregulation of PRMT1 and PRMT6, Type I arginine methyltransferases, is involved in various types of human cancers. Int J Cancer 128, 562-573, doi:10.1002/ijc.25366 (2011))。ＰＲＭＴ１と癌の生物学との関連は、主として、関連基質上に見られるアルギニン残基のメチル化の調節を介したものであった。いくつかの腫瘍種で、ＰＲＭＴ１は、ヒストンＨ４のメチル化を介して(Takai, H. et al. 5-Hydroxymethylcytosine plays a critical role in glioblastomagenesis by recruiting the CHTOP-methylosome complex. Cell Rep 9, 48-60, doi:10.1016/j.celrep.2014.08.071 (2014); Shia, W. J. et al. PRMT1 interacts with AML1-ETO to promote its transcriptional activation and progenitor cell proliferative potential. Blood 119, 4953-4962, doi:10.1182/blood-2011-04-347476 (2012); Zhao, X. et al. Methylation of RUNX1 by PRMT1 abrogates SIN3A binding and potentiates its transcriptional activity. Genes Dev 22, 640-653, doi:10.110
1/gad.1632608 (2008)、ならびに非ヒストン基質に対するその活性を介して(Wei, H., Mundade, R., Lange, K. C. & Lu, T. Protein arginine methylation of non-histone proteins and its role in diseases. Cell Cycle 13, 32-41, doi:10.4161/cc.27353 (2014))、異常な発癌プログラムの発現を駆動し得る。これらの実験系の多くでは、その基質のＰＲＭＴ１依存性ＡＤＭＡ修飾の混乱が癌細胞の増殖能を低下させる(Yang, Y. & Bedford, M. T. Protein arginine methyltransferases and cancer. Nat Rev Cancer 13, 37-50, doi:10.1038/nrc3409 (2013))。
【０００７】
癌の治療に有用な１型ＰＲＭＴ阻害剤は、引用することにより本明細書の一部とされるＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０２９７１０に報告されている。これらの化合物に応答する可能性の高い遺伝子型を同定することが望ましい。
【発明の概要】
【０００８】
一つの実施形態では、本発明は、必要とするヒトにおいて癌を処置する方法であって、前記ヒト由来のサンプルにおいて
ａ．５−メチルチオアデノシンホスホリラーゼ（ＭＴＡＰ）ポリヌクレオチドもしくはポリペプチドのレベルまたは
ｂ．ＭＴＡＰ中の突然変異の存在もしくは不存在
を決定すること、および
前記ＭＴＡＰポリヌクレオチドもしくはポリペプチドのレベルが対照に比べて低下しているか、またはＭＴＡＰポリヌクレオチドもしくはポリペプチドに突然変異が存在する場合に、前記ヒトに有効量のＩ型タンパク質アルギニンメチルトランスフェラーゼ（Ｉ型ＰＲＭＴ）阻害剤を投与し、それにより、前記ヒトにおいて癌を処置することを含んでなる方法を提供する。
【０００９】
一つの実施形態では、本発明は、必要とするヒトにおいて癌細胞の増殖を阻害する方法であって、前記ヒトに有効量のＩ型タンパク質アルギニンメチルトランスフェラーゼ（Ｉ型ＰＲＭＴ）阻害剤を投与し、それにより、前記ヒトにおいて癌細胞の増殖を阻害することを含んでなり、ここで、前記癌細胞は５−メチルチオアデノシンホスホリラーゼ（ＭＴＡＰ）に突然変異を有し、かつ／または対照に比べてＭＴＡＰポリヌクレオチドもしくはポリペプチドのレベルが低下している方法を提供する。
【００１０】
一つの実施形態では、本発明は、癌を有するヒトがＩ型タンパク質アルギニンメチルトランスフェラーゼ（Ｉ型ＰＲＭＴ）阻害剤による処置に感受性があるかどうかを予測する方法であって、前記ヒト由来のサンプルにおいて
ａ．５−メチルチオアデノシンホスホリラーゼ（ＭＴＡＰ）ポリヌクレオチドもしくはポリペプチドのレベルまたは
ｂ．ＭＴＡＰにおける突然変異の存在もしくは不存在
を決定することを含んでなり、対照に比べてのＭＴＡＰポリヌクレオチドもしくはポリペプチドのレベルの低下またはＭＴＡＰにおける突然変異の存在が、前記ヒトがＩ型ＰＲＭＴ阻害剤による処置に感受性があることを示す方法を提供する。
【００１１】
一つの実施形態では、本発明は、癌の処置のためのキットを提供し、そのキットは、５−メチルチオアデノシンホスホリラーゼ（ＭＴＡＰ）ポリヌクレオチドまたはポリペプチドと特異的に結合する薬剤を含んでなる。
【００１２】
一つの実施形態では、ヒトにおいて癌の処置に使用するための、Ｉ型ＰＲＭＴ阻害剤またはその薬学上許容可能な塩を含んでなる医薬組成物であって、前記ヒト由来の少なくとも第１のサンプルが、ＭＴＡＰに突然変異を有すること、対照に比べてＭＴＡＰポリヌクレオチドもしくはポリペプチドのレベルが低下していること、または両方が決定される医薬組成物が提供される。
【００１３】
一つの実施形態では、本発明は、ヒトにおける癌の処置のための薬剤の製造におけるＩ型ＰＲＭＴ阻害剤の使用であって、前記ヒト由来の１以上のサンプルが、ＭＴＡＰに突然変異を有すること、対照に比べてＭＴＡＰポリヌクレオチドもしくはポリペプチドのレベルが低下していること、または両方が決定される使用を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】図１：アルギニン残基上のメチル化の種類。Yang, Y. & Bedford, M. T. Protein arginine methyltransferases and cancer. Nat Rev Cancer 13, 37-50, doi:10.1038/nrc3409 (2013)より。
【図２】図２：癌関連ＰＲＭＴ１基質の機能的クラス。ＰＲＭＴ１の既知の基質およびそれらの癌関連生物学との関連(Yang, Y. & Bedford, M. T. Protein arginine methyltransferases and cancer. Nat Rev Cancer 13, 37-50, doi:10.1038/nrc3409 (2013); Shia, W. J. et al. PRMT1 interacts with AML1-ETO to promote its transcriptional activation and progenitor cell proliferative potential. Blood 119, 4953-4962, doi:10.1182/blood-2011-04-347476 (2012); Wei, H., Mundade, R., Lange, K. C. & Lu, T. Protein arginine methylation of non-histone proteins and its role in diseases. Cell Cycle 13, 32-41, doi:10.4161/cc.27353 (2014); Boisvert, F. M., Rhie, A., Richard, S. & Doherty, A. J. The GAR motif of 53BP1 is arginine methylated by PRMT1 and is necessary for 53BP1 DNA binding activity. Cell Cycle 4, 1834-1841, doi:10.4161/cc.4.12.2250 (2005); Boisvert, F. M., Dery, U., Masson, J. Y. & Richard, S. Arginine methylation of MRE11 by PRMT1 is required for DNA damage checkpoint control. Genes Dev 19, 671-676, doi:10.1101/gad.1279805 (2005); Zhang, L. et al. Cross-talk between PRMT1-mediated methylation and ubiquitylation on RBM15 controls RNA splicing. Elife 4, doi:10.7554/eLife.07938 (2015); Snijders, A. P. et al. Arginine methylation and citrullination of splicing factor proline- and glutamine-rich (SFPQ/PSF) regulates its association with mRNA. RNA 21, 347-359, doi:10.1261/rna.045138.114 (2015); Liao, H. W. et al. PRMT1-mediated methylation of the EGF receptor regulates signaling and cetuximab response. J Clin Invest 125, 4529-4543, doi:10.1172/JCI82826 (2015); Ng, R. K. et al. Epigenetic dysregulation of leukaemic HOX code in MLL-rearranged leukaemia mouse model. J Pathol 232, 65-74, doi:10.1002/path.4279 (2014); Bressan, G. C. et al. Arginine methylation analysis of the splicing-associated SR protein SFRS9/SRP30C. Cell Mol Biol Lett 14, 657-669, doi:10.2478/s11658-009-0024-2 (2009))。
【図３】図３：化合物Ｄで処理した細胞株のメチルスキャン評価。メチル化変化を有するタンパク質のパーセント（変化の方向性には依存しない）は、示されているように官能基によって類別される。
【図４】図４：化合物ＡによるＰＲＭＴ１に対する阻害の様式。ＩＣ５０値は、１８分のＰＲＭＴ１反応および３パラメーター用量応答式へのデータの当てはめの後に決定した。（Ａ）非競合的阻害の式ＩＣ５０＝Ｋｉ／（１＋（Ｋｍ／［Ｓ］））に当てはめ、［ＳＡＭ］／Ｋｍａｐｐの関数としてプロットした化合物ＡのＩＣ５０値を示す代表的実験。（Ｂ）［ペプチド］／Ｋｍａｐｐの関数としてプロットしたＩＣ５０値を示す代表的実験。挿入図は、ペプチドＨ４  １−２１基質に関するＰＲＭＴ１の化合物Ａ阻害を評価するために混合型阻害の式（ｖ＝最大反応速度＊［Ｓ］／（Ｋｍ＊（１＋［Ｉ］／Ｋｉ）＋［Ｓ］＊（１＋［Ｉ］／Ｋ’）））に当てはめたデータを示す。α値（α＝Ｋｉ’／Ｋｉ）＞０．１ただし＜１０は、混合型阻害剤の指標となる。
【図５】図５：ＰＲＭＴ１に対する化合物Ａの効力。ＰＲＭＴ１活性を、ＳＡＭからＨ４  １−２１ペプチドへの３Ｈの移動を測定する、平衡条件下（Ｋｍａｐｐに相当する基質濃度）で行う放射活性アッセイを用いてモニタリングした。ＩＣ５０値は、データを３パラメーター用量応答式に当てはめることによって決定した。（Ａ）ＰＲＭＴ１：ＳＡＭ：化合物Ａ−３ＨＣｌプレインキュベーション時間の関数としてプロットしたＩＣ５０値。白丸および黒丸は２回の独立した実験を表す（０．５ｎＭ  ＰＲＭＴ１）。挿入図は、６０分のＰＲＭＴ１：ＳＡＭ：化合物Ａ−３ＨＣｌプレインキュベーション後のＰＲＭＴ１活性の化合物Ａ−３ＨＣｌ阻害に関する代表的なＩＣ５０曲線を示す。（Ｂ）塩型により類別されるＰＲＭＴ１の化合物Ａ阻害。ＩＣ５０値は、６０分のＰＲＭＴ１：ＳＡＭ：化合物Ａプレインキュベーションおよび２０分の反応の後に決定した。
【図６】図６：化合物Ａ（橙）およびＳＡＨ（紫）との複合体中のＰＲＭＴ１に関して２．４８Åで解像した結晶構造。挿入図から、化合物がペプチド結合ポケット内に結合し、ＰＲＭＴ１の側鎖と重要な相互作用をなしていることが明らかである。
【図７】図７：化合物ＡによるＰＲＭＴ１相同分子種の阻害。ＰＲＭＴ１活性を、ＳＡＭからＨ４  １−２１ペプチドへの３Ｈの移動を測定する、平衡条件下（Ｋｍａｐｐに相当する基質濃度）で行う放射活性アッセイを用いてモニタリングした。ＩＣ５０値は、データを３パラメーター用量応答式に当てはめることによって決定した。（Ａ）ラット（○）およびイヌ（●）相同分子種に関してＰＲＭＴ１：ＳＡＭ：化合物Ａプレインキュベーション時間の関数としてプロットしたＩＣ５０値。（Ｂ）ラット（○）、イヌ（●）またはヒト（□）ＰＲＭＴ１濃度の関数としてプロットしたＩＣ５０値。（Ｃ）ＩＣ５０値は、６０分のＰＲＭＴ１：ＳＡＭ：化合物Ａプレインキュベーションおよび２０分の反応の後に決定した。データは、化合物Ａの複数の塩型の試験からの平均である。Ｋｉ＊ａｐｐ値は、非競合的阻害剤に関する式Ｋｉ＝ＩＣ５０／（１＋（Ｋｍ／［Ｓ］））およびＩＣ５０の決定がＥＳＩ＊立体配座に代表的なものであるという仮定に基づいて計算した。
【図８】図８：ＰＲＭＴファミリーメンバーに対する化合物Ａの効力。ＰＲＭＴ活性を、６０分のＰＲＭＴ：ＳＡＭ：化合物Ａプレインキュベーションの後に、平衡条件下（Ｋｍａｐｐにおける基質濃度）で行う放射活性アッセイを用いてモニタリングした。化合物ＡのＩＣ５０値は、データを３パラメーター用量応答式に当てはめることによって決定した。（Ａ）データは、化合物Ａの複数の塩型の試験からの平均である。Ｋｉ＊ａｐｐ値は、非競合的阻害剤に関する式Ｋｉ＝ＩＣ５０／（１＋（Ｋｍ／［Ｓ］））およびＩＣ５０の決定がＥＳＩ＊立体配座に代表的なものであるという仮定に基づいて計算した。（Ｂ）ＰＲＭＴ３（●）、ＰＲＭＴ４（○）、ＰＲＭＴ６（黒四角）またはＰＲＭＴ８（□）：ＳＡＭ：化合物Ａプレインキュベーション時間の関数としてプロットしたＩＣ５０値。
【図９】図９：ＭＭＡ細胞内ウエスタン。ＲＫＯ細胞を化合物Ａ−３ＨＣｌ（「化合物Ａ−Ａ」）、化合物Ａ−１ＨＣｌ（「化合物Ａ−Ｂ」）、化合物Ａ−遊離塩基（「化合物Ａ−Ｃ」）、および化合物Ａ−２ＨＣｌ（「化合物Ａ−Ｄ」）で７２時間処理した。細胞を固定し、ＭＭＡを検出するために抗Ｒｍｅ１ＧＧで、シグナルを正規化するために抗チューブリンで染色し、Ｏｄｙｓｓｅｙイメージングシステムを用いて画像化した。チューブリンに対するＭＭＡを化合物濃度に対してプロットし、ＧｒａｐｈＰａｄにて二相曲線フィット式を用いて曲線フィット（Ａ）を作成した。ＥＣ５０（第１変曲点）、標準偏差、およびＮを（Ｂ）に示す。
【図１０】図１０：腫瘍におけるＰＲＭＴ１発現。ｍＲＮＡ発現レベルはｃＢｉｏＰｏｒｔａｌ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓから入手した。ＡＣＴＢレベルおよびＴＹＲは、それぞれ遍在発現する遺伝子と発現が制限される遺伝子に相当するレベルの発現を示すことが示される。
【図１１】図１１：細胞培養における化合物Ａの抗増殖活性。６日増殖アッセイにおいて１９６のヒト癌細胞株の化合物Ａに対する感受性を評価した。（Ａ）に示されるように、各細胞株のｇＩＣ５０値を推定されるヒト暴露とともに棒グラフで示す。（Ｂ）では細胞傷害性の尺度Ｙｍｉｎ−Ｔ０を棒グラフとしてプロットし、各細胞株のｇＩＣ１００値を赤い点で示す。ラット１４日ＭＴＤから計算したＣａｖｅ（１５０ｍｇ／ｋｇ、Ｃａｖｅ＝２．１μＭ）を赤い破線で示す。
【図１２】図１２：培養細胞におけるアルギニンメチル化マークに対する化合物Ａの影響の経時的推移。（Ａ）化合物Ａで処理したＴｏｌｅｄｏ  ＤＬＢＣＬ細胞におけるＡＤＭＡ、ＳＤＭＡ、およびＭＭＡの変化。メチル化の変化は、チューブリン±ＳＥＭ（ｎ＝３）に対して正規化したものを示す。（Ｂ）アルギニンメチル化マークの代表的ウエスタンブロット。定量した領域をゲルの右に黒いバーで示す。
【図１３】図１３：アルギニンメチル化に対する化合物Ａの用量応答。（Ａ）Ｕ２９３２細胞株における化合物Ａ用量応答からのＭＭＡおよびＡＤＭＡの代表的ウエスタンブロット像。（Ｂ）に関して定量した領域をゲルの左に黒いバーで示す。（Ｂ）７２時間の暴露後に５種のリンパ腫細胞株でＭＭＡの最大誘導の５０％または５０％最大低下ＡＤＭＡに必要とされる最小有効化合物Ａ濃度±標準偏差（ｎ＝２）。６日増殖細胞死アッセイにおける対応するｇＩＣ５０値を赤で示す。
【図１４】図１４：リンパ腫細胞における化合物Ａに応答したアルギニンメチル化マークの持続性。（Ａ）化合物Ａとともに培養したＴｏｌｅｄｏ  ＤＬＢＣＬ細胞株におけるＡＤＭＡ、ＳＤＭＡ、およびＭＭＡに対する変化の安定性。メチル化の変化は、チューブリン±ＳＥＭ（ｎ＝３）に対して正規化したものを示す。（Ｂ）アルギニンメチル化マークの代表的ウエスタンブロット。（Ａ）に関して定量した領域をゲルの横に黒いバーで示す。
【図１５】図１５：リンパ腫細胞株の増殖の経時的推移。細胞増殖は、Ｔｏｌｅｄｏ（Ａ）およびＤａｕｄｉ（Ｂ）細胞株（各細胞株ｎ＝２）で１０日の経時的推移にわたって評価した。一回の生物学的反復の代表的データを示す。
【図１６】図１６：６日目および１０日目におけるリンパ腫細胞株での化合物Ａの抗増殖効果。（Ａ）リンパ腫細胞株における６日（薄い青）および１０日（濃い青）増殖アッセイからの平均ｇＩＣ５０値。（Ｂ）６日（薄い青）および１０日（濃い青）のＹｍｉｎ−Ｔ０と対応するｇＩＣ１００（赤い点）。
【図１７】図１７：サブタイプにより分類されるリンパ腫細胞株における化合物Ａの抗増殖効果。（Ａ）各細胞株のｇＩＣ５０値を棒グラフで示す。（Ｂ）では、細胞傷害性の尺度Ｙｍｉｎ−Ｔ０を棒グラフとしてプロットし、各細胞株のｇＩＣ１００値を赤い点で示す。サブタイプ情報はＡＴＣＣまたはＤＳＭＺ細胞株リポジトリーから収集した。
【図１８】図１８：ヒトリンパ腫細胞株における細胞周期のヨウ化プロピジウムＦＡＣＳ分析。３種のリンパ腫細胞株Ｔｏｌｅｄｏ（Ａ）、Ｕ２９３２（Ｂ）、およびＯＣＩ−Ｌｙ１（Ｃ）を１０日間０、１、１０、１００、１０００、および１０，０００ｎＭの化合物Ａで処理し、処理後３、５、７、１０日目にサンプルを採取した。データは生物学的反復ｎ＝２の平均±ＳＥＭを示す。
【図１９】図１９：化合物Ａで処理したリンパ腫細胞株におけるカスパーゼ−３／７の活性化。アポトーシスを、Ｔｏｌｅｄｏ（Ａ）およびＤａｕｄｉ（Ｂ）細胞株で１０日の経時的推移にわたって評価した。カスパーゼ３／７の活性化は、ＤＭＳＯ処理細胞に対する誘導倍率として示す。各細胞株につき２回の独立した反復を行った。それぞれの代表的データを示す。
【図２０】図２０：Ｔｏｌｅｄｏ異種移植片を担持するマウスにおける化合物Ａの有効性。マウスに、２８日（Ａ）または２４日（Ｂ）の期間にわたり、化合物ＡでＱＤ（３７．５、７５、１５０、３００、４５０、または６００ｍｇ／ｋｇ）経口処置または７５ｍｇ／ｋｇでのＢＩＤ処置（Ｂ）を施し、腫瘍体積を週２回測定した。
【図２１】図２１：６日目および１０日目のＡＭＬ細胞株における化合物Ａの効果。（Ａ）ＡＭＬ細胞株における６日（薄い青）および１０日（濃い青）の増殖アッセイからの平均ｇＩＣ５０値。（Ｂ）６日目（薄い青）および１０日目（濃い青）のＹｍｉｎ−Ｔ０と対応するｇＩＣ１００（赤い点）。
【図２２】図２２：化合物Ａを伴うｃｃＲＣＣ細胞株(cines)のｉｎ  ｖｉｔｒｏ増殖の経時的推移。（Ａ）２つのｃｃＲＣＣ細胞株の対照（ＤＭＳＯ）に比べた増殖。一回反復からの代表的曲線を示す。（Ｂ）経時的推移中のｃｃＲＣＣ細胞株のｇＩＣ５０および増殖阻害率％の概要（平均±ＳＤ；各細胞株ｎ＝２）。
【図２３】図２３：ＡＣＨＮ異種移植片における化合物Ａの有効性。２８日の期間にわたって毎日、マウスに化合物Ａの経口処置を施し、腫瘍体積を週２回測定した。
【図２４】図２４：乳癌細胞株における化合物Ａの抗増殖効果。６日増殖アッセイにおける化合物Ａを用いて割り出した乳癌細胞株のｇＩＣ５０の棒グラフおよび増殖阻害率（％）（赤い丸）。トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）を呈する細胞株を橙で示し、その他のサブタイプは青である。
【図２５】図２５：７日目および１２日目の乳癌細胞株における化合物Ａの効果。乳癌細胞株における７日（薄い青）および１０日（濃い青）の増殖アッセイからの平均増殖阻害率（％）値と対応するｇＩＣ５０（赤い点）。乳癌での長期増殖アッセイで見られた効力および阻害率パーセントの増大は、リンパ腫またはＡＭＬ細胞株では見られず、抗増殖活性が完全に現れるためには、ある種の腫瘍種が化合物Ａに長期間曝される必要があることが示唆される。
【図２６】図２６：培養系における癌細胞株のＭＴＡＰの状態および化合物Ａに対する感受性。ＭＴＡＰ遺伝子座の欠失またはＭＴＡＰ  ＲＮＡの下方調節を示す細胞株を「低」と分類した（白丸）。コピー数および発現のデータはＣＣＬＥからダウンロードした。
【図２７】図２７：乳癌細胞株における化合物Ａの効力に及ぼす外因性ＭＴＡの影響。化合物Ａおよび固定濃度のＭＴＡを用いた場合の６日増殖アッセイからのＥＣ５０、ｇＩＣ１００、Ｙｍｉｎ−Ｔ０。ＭＴＡＰの状態を上に示す。ＮＤ−パラメーターを決定するにはこの濃度のＭＴＡでは不十分な増殖ウインドウ。
【図２８】図２８：外因性ＭＴＡと組み合わせた化合物Ａの効力の増強。薄いグレーの強調は、＞５倍、濃いグレーは＞１０倍の効力増を示す。ＮＤ−パラメーターを決定するにはこの濃度のＭＴＡでは不十分な増殖ウインドウ。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
発明の詳細な説明
本明細書で使用する場合、「Ｉ型タンパク質アルギニンメチルトランスフェラーゼ阻害剤」または「Ｉ型ＰＲＭＴ阻害剤」は、以下：タンパク質アルギニンメチルトランスフェラーゼ１（ＰＲＭＴ１）、タンパク質アルギニンメチルトランスフェラーゼ３（ＰＲＭＴ３）、タンパク質アルギニンメチルトランスフェラーゼ４（ＰＲＭＴ４）、タンパク質アルギニンメチルトランスフェラーゼ６（ＰＲＭＴ６）阻害剤、およびタンパク質アルギニンメチルトランスフェラーゼ８（ＰＲＭＴ８）のうちいずれか１以上を阻害する薬剤を意味する。いくつかの実施形態では、Ｉ型ＰＲＭＴ阻害剤は、小分子化合物である。いくつかの実施形態では、Ｉ型ＰＲＭＴ阻害剤は、以下：タンパク質アルギニンメチルトランスフェラーゼ１（ＰＲＭＴ１）、タンパク質アルギニンメチルトランスフェラーゼ３（ＰＲＭＴ３）、タンパク質アルギニンメチルトランスフェラーゼ４（ＰＲＭＴ４）、タンパク質アルギニンメチルトランスフェラーゼ６（ＰＲＭＴ６）阻害剤、およびタンパク質アルギニンメチルトランスフェラーゼ８（ＰＲＭＴ８）のうちいずれか１以上を選択的に阻害する。いくつかの実施形態では、Ｉ型ＰＲＭＴ阻害剤は、ＰＲＭＴ１、ＰＲＭＴ３、ＰＲＭＴ４、ＰＲＭＴ６、およびＰＲＭＴ８の選択的阻害剤である。
【００１６】
アルギニンメチルトランスフェラーゼは、多様な生体プロセスの調節において与えられたそれらの役割を変調するために魅力的な標的である。今般、本明細書に記載の化合物および薬学上許容可能な塩およびそれらの組成物が、アルギニンメチルトランスフェラーゼの阻害剤(inhibitors or arginine methyltransferases)として有効であることが判明した。
【００１７】
特定の官能基および化学用語の定義を以下にさらに詳細に説明する。化学元素はHandbook of Chemistry and Physics, 第75版の見返しの元素の周期表ＣＡＳバージョンに従って特定され、特定の官能基は一般にそこに記載されているように定義される。加えて、有機化学の一般原則、ならびに特定の官能部分および反応性は、Thomas Sorrell, Organic Chemistry, University Science Books, Sausalito, 1999; Smith and March, March's Advanced Organic Chemistry, 第5版, John Wiley & Sons, Inc., New York, 2001; Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers, Inc., New York, 1989;およびCarruthers, Some Modern Methods of Organic Synthesis, 第3版, Cambridge University Press, Cambridge, 1987に記載されている。
【００１８】
本明細書に記載の化合物は１以上の不斉中心を含んでなり得るので、種々の異性形、例えば、鏡像異性体および／またはジアステレオマーで存在し得る。例えば、本明細書に記載の化合物は、個々の鏡像異性体、ジアステレオマーもしくは幾何異性体の形態であり得、またはラセミ混合物および１以上の立体異性体が富化された混合物を含む、立体異性体の混合物の形態であり得る。異性体は、キラル高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）ならびにキラル塩の形成および結晶化を含む、当業者に既知の方法によって混合物から単離することができ；または好ましい異性体が不斉合成によって製造され得る。例えば、Jacques et al., Enantiomers, Racemates and Resolutions (Wiley Interscience, New York, 1981); Wilen et al., Tetrahedron 33:2725 (1977); Eliel, Stereochemistry of Carbon Compounds (McGraw- Hill, NY, 1962);およびWilen, Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions p. 268 (E.L. Eliel, Ed., Univ. of Notre Dame Press, Notre Dame, IN 1972)参照。本開示はさらに、本明細書に記載の化合物を、他の異性体を実質的に含まない個々の異性体として、あるいは種々の異性体の混合物として包含する。
【００１９】
本発明の化合物は種々の互変異性体として描写され得ることが理解されるべきである。また、化合物が互変異性形を有する場合には、総ての互変異性形が本発明の範囲内に含まれるものとし、本明細書に記載のいずれの化合物の命名(namin)もいずれの互変異性形も除外しないことも理解されるべきである。
【化１】
2020510618.tif 000002
【００２０】
そうではないことが述べられない限り、本明細書に描写される構造はまた、１以上の同位元素が富化された原子が存在することでのみ異なる化合物を含むことも意味する。例えば、水素の重水素またはトリチウムによる置換、１９Ｆの１８Ｆによる置換、または炭素の１３Ｃ−または１４Ｃ−富化炭素による置換以外は本構造を有する化合物は本開示の範囲内にある。このような化合物は、例えば、分析ツールまたは生物学的アッセイにおけるプローブとして有用である。
【００２１】
値の範囲が挙げられている場合には、各値およびその範囲内の下位範囲を包含するものとする。例えば、「Ｃ１−６アルキル」は、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ１−６、Ｃ１−５、Ｃ１−４、Ｃ１−３、Ｃ１−２、Ｃ２−６、Ｃ２−５、Ｃ２−４、Ｃ２−３、Ｃ３−６、Ｃ３−５、Ｃ３−４、Ｃ４−６、Ｃ４−５、およびＣ５−６アルキルを包含するものとする。
【００２２】
「ラジカル」は、特定の基上の結合点を指す。ラジカルには、特定の基の二価ラジカルが含まれる。
【００２３】
「アルキル」は、１〜２０個の炭素原子（「Ｃ１−２０アルキル」）を有する直鎖または分岐飽和炭化水素基のラジカルを指す。いくつかの実施形態では、アルキル基は、１〜１０個の炭素原子を有する（「Ｃ１−１０アルキル」）。いくつかの実施形態では、アルキル基は、１〜９個の炭素原子を有する（「Ｃ１−９アルキル」）。いくつかの実施形態では、アルキル基は、１〜８個の炭素原子を有する（「Ｃ１−８アルキル」）。いくつかの実施形態では、アルキル基は、１〜７個の炭素原子を有する（「Ｃ１−７アルキル」）。いくつかの実施形態では、アルキル基は、１〜６個の炭素原子を有する（「Ｃ１−６アルキル」）。いくつかの実施形態では、アルキル基は、１〜５個の炭素原子を有する（「Ｃ１−５アルキル」）。いくつかの実施形態では、アルキル基は、１〜４個の炭素原子を有する（「Ｃ１−４アルキル」）。いくつかの実施形態では、アルキル基は、１〜３個の炭素原子を有する（「Ｃ１−３アルキル」）。いくつかの実施形態では、アルキル基は、１〜２個の炭素原子を有する。（「Ｃ１−２アルキル」）。いくつかの実施形態では、アルキル基は、１個の炭素原子を有する（「Ｃ１アルキル」）。いくつかの実施形態では、アルキル基は、２〜６個の炭素原子を有する（「Ｃ２−６アルキル」）。Ｃ１−６アルキル基の例としては、メチル（Ｃ１）、エチル（Ｃ２）、ｎ−プロピル（Ｃ３）、イソプロピル（Ｃ３）、ｎ−ブチル（Ｃ４）、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｃ４）、ｓｅｃ−ブチル（Ｃ４）、イソ−ブチル（Ｃ４）、ｎ−ペンチル（Ｃ５）、３−ペンタニル（Ｃ５）、アミル（Ｃ５）、ネオペンチル（Ｃ５）、３−メチル−２−ブタニル（Ｃ５）、第三級アミル（Ｃ５）、およびｎ−ヘキシル（Ｃ６）が挙げられる。アルキル基のさらなる例としては、ｎ−ヘプチル（Ｃ７）、およびｎ−オクチル（Ｃ８）などが挙げられる。特定の実施形態では、アルキル基の各例は、独立に、１以上の置換基で場合により置換されてもよく、例えば、非置換型（「非置換アルキル」）または置換型（「置換アルキル」）である。特定の実施形態では、アルキル基は、非置換Ｃ１−１０アルキル（例えば、−ＣＨ３）である。特定の実施形態では、アルキル基は、置換Ｃ１−１０アルキルである。
【００２４】
いくつかの実施形態では、アルキル基は１以上のハロゲンで置換されている。「ペルハロアルキル」は、水素原子の総てが独立にハロゲン、例えば、フルオロ、ブロモ、クロロ、またはヨードで置換されている、本明細書で定義されるような置換アルキル基である。いくつかの実施形態では、アルキル部分は、１〜８個の炭素原子を有する（「Ｃ１−８ペルハロアルキル」）。いくつかの実施形態では、アルキル部分は、１〜６個の炭素原子を有する（「Ｃ１−６ペルハロアルキル」）。いくつかの実施形態では、アルキル部分は、１〜４個の炭素原子を有する（「Ｃ１−４ペルハロアルキル」）。いくつかの実施形態では、アルキル部分は、１〜３個の炭素原子を有する（「Ｃ１−３ペルハロアルキル」）。いくつかの実施形態では、アルキル部分は、１〜２個の炭素原子を有する（「Ｃ１−２ペルハロアルキル」）。いくつかの実施形態では、水素原子の総てがフルオロで置換されている。いくつかの実施形態では、水素原子の総てがクロロで置換されている。ペルハロアルキル基の例としては、−ＣＦ３、−ＣＦ２ＣＦ３、−ＣＦ２ＣＦ２ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＦＣｌ２、および−ＣＦ２Ｃｌなどが挙げられる。
【００２５】
「アルケニル」は、２〜２０個の炭素原子と１個以上の炭素−炭素二重結合（例えば、１、２、３、または４個の二重結合）、および場合により１以上の三重結合（例えば、１、２、３、または４個の三重結合）を有する直鎖または分岐炭化水素基のラジカル（「Ｃ２−２０アルケニル」）を指す。特定の実施形態では、アルケニルは、三重結合を含まない。いくつかの実施形態では、アルケニル基は、２〜１０個の炭素原子を有する（「Ｃ２−１０アルケニル」）。いくつかの実施形態では、アルケニル基は、２〜９個の炭素原子を有する（「Ｃ２−９アルケニル」）。いくつかの実施形態では、アルケニル基は、２〜８個の炭素原子を有する（「Ｃ２−８アルケニル」）。いくつかの実施形態では、アルケニル基は、２〜７個の炭素原子を有する（「Ｃ２−７アルケニル」）。いくつかの実施形態では、アルケニル基は、２〜６個の炭素原子を有する（「Ｃ２−６アルケニル」）。いくつかの実施形態では、アルケニル基は、２〜５個の炭素原子を有する（「Ｃ２−５アルケニル」）。いくつかの実施形態では、アルケニル基は、２〜４個の炭素原子を有する（「Ｃ２−４アルケニル」）。いくつかの実施形態では、アルケニル基は、２〜３個の炭素原子を有する（「Ｃ２−３アルケニル」）。いくつかの実施形態では、アルケニル基は、２個の炭素原子を有する（「Ｃ２アルケニル」）。１個以上の炭素−炭素二重結合は、内部にあっても（例えば、２−ブテニル）または末端にあってもよい（例えば、１−ブテニル）。Ｃ２−４アルケニル基の例としては、エテニル（Ｃ２）、１−プロペニル（Ｃ３）、２−プロペニル（Ｃ３）、１−ブテニル（Ｃ４）、２−ブテニル（Ｃ４）、およびブタジエニル（Ｃ４）などが挙げられる。Ｃ２−６アルケニル基の例としては、前述のＣ２−４アルケニル基ならびにペンテニル（Ｃ５）、ペンタジエニル（Ｃ５）、およびヘキセニル（Ｃ６）などが挙げられる。アルケニルのさらなる例としては、ヘプテニル（Ｃ７）、オクテニル（Ｃ８）、およびオクタトリエニル（Ｃ８）などが挙げられる。特定の実施形態では、アルケニル基の各例は、独立に、１以上の置換基で場合により置換されてもよく、例えば、非置換型（「非置換アルケニル」）または置換型（「置換アルケニル」）である。特定の実施形態では、アルケニル基は、非置換Ｃ２−１０アルケニルである。特定の実施形態では、アルケニル基は、置換Ｃ２−１０アルケニルである。
【００２６】
「アルキニル」は、２〜２０個の炭素原子と１個以上の炭素−炭素三重結合（例えば、１、２、３、または４個の三重結合）、および場合により１個以上の二重結合（例えば、１、２、３、または４個の二重結合）を有する直鎖または分岐炭化水素基のラジカル（「Ｃ２−２０アルキニル」）を指す。特定の実施形態では、アルキニルは、二重結合を含まない。いくつかの実施形態では、アルキニル基は、２〜１０個の炭素原子を有する（「Ｃ２−１０アルキニル」）。いくつかの実施形態では、アルキニル基は、２〜９個の炭素原子を有する（「Ｃ２−９アルキニル」）。いくつかの実施形態では、アルキニル基は、２〜８個の炭素原子を有する（「Ｃ２−８アルキニル」）。いくつかの実施形態では、アルキニル基は、２〜７個の炭素原子を有する（「Ｃ２−７アルキニル」）。いくつかの実施形態では、アルキニル基は、２〜６個の炭素原子を有する（「Ｃ２−６アルキニル」）。いくつかの実施形態では、アルキニル基は、２〜５個の炭素原子を有する（「Ｃ２−５アルキニル」）。いくつかの実施形態では、アルキニル基は、２〜４個の炭素原子を有する（「Ｃ２−４アルキニル」）。いくつかの実施形態では、アルキニル基は、２〜３個の炭素原子を有する（「Ｃ２−３アルキニル」）。いくつかの実施形態では、アルキニル基は、２個の炭素原子を有する（「Ｃ２アルキニル」）。１以上の炭素炭素三重結合は、内部にあっても（例えば、２−ブチニル）または末端にあってもよい（例えば、１−ブチニル）。Ｃ２−４アルキニル基の例としては、限定されるものではないが、エチニル（Ｃ２）、１−プロピニル（Ｃ３）、２−プロピニル（Ｃ３）、１−ブチニル（Ｃ４）、および２−ブチニル（Ｃ４）などが挙げられる。Ｃ２−６アルケニル基の例としては、前述のＣ２−４アルキニル基ならびにペンチニル（Ｃ５）、およびヘキシニル（Ｃ６）などが挙げられる。アルキニルのさらなる例としては、へプチニル（Ｃ７）、およびオクチニル（Ｃ８）などが挙げられる。特定の実施形態では、アルキニル基の各例は、独立に、１以上の置換基で場合により置換されてもよく、例えば、非置換型（「非置換アルキニル」）または置換型（「置換アルキニル」）である。特定の実施形態では、アルキニル基は、非置換Ｃ２−１０アルキニルである。特定の実施形態では、アルキニル基は、置換Ｃ２−１０アルキニルである。
【００２７】
「縮合」または「オルト縮合」は、本明細書では互換的に使用され、一般に２個の原子と１個の結合を有する２個の環、例えば、下式を指す。
【化２】
2020510618.tif 000003
【００２８】
「架橋された」とは、（１）同じ環の隣接しない２箇所以上の位置を接続する橋頭原子もしくは原子の群；または（２）ある環系の異なる環の２箇所以上の位置を接続する橋頭原子もしくは原子の群を含む環系を指し、それにより、オルト縮合環、例えば、下式を形成しない。
【化３】
2020510618.tif 000004
【００２９】
「スピロ」または「スピロ融合」は、炭素環式または複素環式環系の同じ原子に接続する（ジェミナルアタッチメント）、それにより環、例えば、下式を形成する原子の群を指す。
【化４】
2020510618.tif 000005
【００３０】
橋頭原子におけるスピロ融合も企図される。
【００３１】
「カルボシクリル」または「炭素環式」は、非芳香環系に３〜１４個の環炭素原子（「Ｃ３−１４カルボシクリル」）を有し、ヘテロ原子を有さない非芳香族環式炭化水素基のラジカルを指す。特定の実施形態では、カルボシクリル基は、非芳香環系に３〜１０個の環炭素原子を有し（Ｃ３−１０カルボシクリル」）、ヘテロ原子を有さない非芳香族環式炭化水素基のラジカルを指す。いくつかの実施形態では、カルボシクリル基は、３〜８個の環炭素原子を有する（「Ｃ３−８カルボシクリル」）。いくつかの実施形態では、カルボシクリル基は、３〜６個の環炭素原子（「Ｃ３−６カルボシクリル」）を有する。いくつかの実施形態では、カルボシクリル基は、３〜６個の環炭素原子を有する（「Ｃ３−６カルボシクリル」）。いくつかの実施形態では、カルボシクリル基は、５〜１０個の環炭素原子を有する（「Ｃ５−１０カルボシクリル」）。例示的Ｃ３−６カルボシクリル基としては、限定されるものではないが、シクロプロピル（Ｃ３）、シクロプロペニル（Ｃ３）、シクロブチル（Ｃ４）、シクロブテニル（Ｃ４）、シクロペンチル（Ｃ５）、シクロペンテニル（Ｃ５）、シクロヘキシル（Ｃ６）、シクロヘキセニル（Ｃ６）、およびシクロヘキサジエニル（Ｃ６）などが挙げられる。例示的Ｃ３−８カルボシクリル基としては、限定されるものではないが、前述のＣ３−６カルボシクリル基ならびにシクロヘプチル（Ｃ７）、シクロヘプテニル（Ｃ７）、シクロヘプタジエニル（Ｃ７）、シクロヘプタトリエニル（Ｃ７）、シクロオクチル（Ｃ８）、シクロオクテニル（Ｃ８）、ビシクロ［２．２．１］ヘプタニル（Ｃ７）、およびビシクロ［２．２．２］オクタニル（Ｃ８）などが挙げられる。例示的Ｃ３−１０カルボシクリル基としては、限定されるものではないが、前述のＣ３＿８カルボシクリル基ならびにシクロノニル（Ｃ９）、シクロノネニル（Ｃ９）、シクロデシル（Ｃ１０）、シクロデセニル（Ｃ１０）、オクタヒドロ−ｌＨ−インデニル（Ｃ９）、デカヒドロナフタレニル（Ｃ１０）、およびスピロ［４．５］デカニル（Ｃ１０）などが挙げられる。以上の例が説明するように、特定の実施形態では、カルボシクリル基は単環式（「単環式カルボシクリル」）であるか、または二環式系（「二環式カルボシクリル」）など縮合、架橋またはスピロ縮合環系であり、飽和されていてもまたは部分的に不飽和であってもよい。「カルボシクリル」にはまた、上記に定義されるようなカルボシクリル環が１以上のアリール基またはヘテロアリール基と縮合されている環系も含まれ、ここで、その結合点はカルボシクリル環上にあり、このような場合には、炭素の数はその炭素環系内の炭素の数を示し続ける。特定の実施形態では、カルボシクリル基の各例は、独立に、１以上の置換基で場合により置換されてよく、例えば、非置換型（非置換カルボシクリル」）または置換型（「置換カルボシクリル」）である。特定の実施形態では、カルボシクリル基は、非置換Ｃ３−１０カルボシクリルである。特定の実施形態では、カルボシクリル基は、置換Ｃ３−１０カルボシクリルである。
【００３２】
いくつかの実施形態では、「カルボシクリル」は、３〜１４個の環炭素原子を有する単環式、飽和カルボシクリル基（「Ｃ３−１４シクロアルキル」）である。いくつかの実施形態では、「カルボシクリル」は、３〜１０個の環炭素原子を有する単環式、飽和カルボシクリル基（「Ｃ３−１０シクロアルキル」）である。いくつかの実施形態では、シクロアルキル基は、３〜８個の環炭素原子を有する（「Ｃ３−８シクロアルキル」）。いくつかの実施形態では、シクロアルキル基は、３〜６個の環炭素原子を有する（「Ｃ３−６シクロアルキル」）。いくつかの実施形態では、シクロアルキル基は、５〜６個の環炭素原子を有する（「Ｃ５−６シクロアルキル」）。いくつかの実施形態では、シクロアルキル基は、５〜１０個の環炭素原子を有する（「Ｃ５−１０シクロアルキル」）。Ｃ５−６シクロアルキル基の例としては、シクロペンチル（Ｃ５）およびシクロヘキシル（Ｃ５）が挙げられる。Ｃ３−６シクロアルキル基の例としては、前述のＣ５−６シクロアルキル基ならびにシクロプロピル（Ｃ３）およびシクロブチル（Ｃ４）が挙げられる。Ｃ３−８シクロアルキル基の例としては、前述のＣ３−６シクロアルキル基ならびにシクロヘプチル（Ｃ７）およびシクロオクチル（Ｃ８）が挙げられる。特定の実施形態では、シクロアルキル基の各例は、独立に、非置換型であるか（「非置換シクロアルキル」）または１以上の置換基で置換されている（「置換シクロアルキル」）。特定の実施形態では、シクロアルキル基は、非置換Ｃ３−１０シクロアルキルである。特定の実施形態では、シクロアルキル基は、置換Ｃ３−１０シクロアルキルである。
【００３３】
「ヘテロシクリル」または「複素環式」は、環炭素原子と１〜４個の環ヘテロ原子を有し、各ヘテロ原子は独立に窒素、酸素、および硫黄から選択される、３〜１４員非芳香環系のラジカル（「３〜１４員ヘテロシクリル」）を指す。特定の実施形態では、ヘテロシクリルまたは複素環式は、環炭素原子と１〜４個の環ヘテロ原子を有し、各ヘテロ原子は独立に窒素、酸素、および硫黄から選択される３〜１０員非芳香環系のラジカル（「３〜１０員ヘテロシクリル」）を指す。１個以上の窒素原子を含むヘテロシクリル基では、その結合点は、原子価が許す限り、炭素または窒素原子であり得る。ヘテロシクリル基は、単環式（「単環式ヘテロシクリル」）または二環式系（「二環式ヘテロシクリル」）などの縮合、架橋もしくはスピロ縮合環系であり得、飽和されていてもまたは部分的に不飽和であってもよい。ヘテロシクリル二環式環系は、一方または両方の環に１以上のヘテロ原子を含み得る。「ヘテロシクリル」にはまた、上記に定義されるようなヘテロシクリル環が１以上のカルボシクリル基と縮合され、その結合点がカルボシクリルまたはヘテロシクリル環上にある環系も含まれ、このような場合には、環員の数はそのヘテロシクリル環系内の環員の数を示し続ける。特定の実施形態では、ヘテロシクリルの各例は、独立に、１以上の置換基で場合により置換されてよく、例えば、非置換型（「非置換ヘテロシクリル」）または置換型（置換ヘテロシクリル」）である。特定の実施形態では、ヘテロシクリル基は、非置換３〜１０員ヘテロシクリルである。特定の実施形態では、ヘテロシクリル基は、置換３〜１０員ヘテロシクリルである。
【００３４】
いくつかの実施形態では、ヘテロシクリル基は、環炭素原子と１〜４個の環ヘテロ原子を有し、各ヘテロ原子は独立に窒素、酸素、および硫黄から選択される５〜１０員非芳香環系（「５〜１０員ヘテロシクリル」）である。いくつかの実施形態では、ヘテロシクリル基は、環炭素原子と１〜４個の環ヘテロ原子を有し、各ヘテロ原子は独立に窒素、酸素、および硫黄から選択される５〜８員非芳香環系（「５〜８員ヘテロシクリル」）である。いくつかの実施形態では、ヘテロシクリル基は、環炭素原子と１〜４個の環ヘテロ原子を有し、各ヘテロ原子は独立に窒素、酸素、および硫黄から選択される５〜６員非芳香環系（「５〜６員ヘテロシクリル」）である。いくつかの実施形態では、５〜６員ヘテロシクリルは、独立に窒素、酸素、および硫黄から選択される１〜３個の環ヘテロ原子を有する。いくつかの実施形態では、５〜６員ヘテロシクリルは、独立に窒素、酸素、および硫黄から選択される１〜２個の環ヘテロ原子を有する。いくつかの実施形態では、５〜６員ヘテロシクリルは、窒素、酸素、および硫黄から選択される１個の環ヘテロ原子を有する。
【００３５】
１個のヘテロ原子を含む例示的３員ヘテロシクリル基としては、限定されるものではないが、アジルジニル(azirdinyl)、オキシラニル、およびチイラニルが挙げられる。１個のヘテロ原子を含む例示的４員ヘテロシクリル基としては、限定されるものではないが、アゼチジニル、オキセタニル、およびチエタニルが挙げられる。１個のヘテロ原子を含む例示的５員ヘテロシクリル基としては、限定されるものではないが、テトラヒドロフラニル、ジヒドロフラニル、テトラヒドロチオフェニル、ジヒドロチオフェニル、ピロリジニル、ジヒドロピロリル、およびピロリル−２，５−ジオンが挙げられる。２個のヘテロ原子を含む例示的５員ヘテロシクリル基としては、限定されるものではないが、ジオキソラニル、オキサスルフラニル、ジスルフラニル、およびオキサゾリジン−２−オンが挙げられる。３個のヘテロ原子を含む例示的５員ヘテロシクリル基としては、限定されるものではないが、トリアゾリニル、オキサジアゾリニル、およびチアジアゾリニルが挙げられる。１個のヘテロ原子を含む例示的６員ヘテロシクリル基としては、限定されるものではないが、ピペリジニル、テトラヒドロピラニル、ジヒドロピリジニル、およびチアニルが挙げられる。２個のヘテロ原子を含む例示的６員ヘテロシクリル基としては、限定されるものではないが、ピペラジニル、モルホリニル、ジチアニル、およびジオキサニルが挙げられる。３個のヘテロ原子を含む例示的６員ヘテロシクリル基としては、限定されるものではないが、トリアジナニル(triazinanyl)が挙げられる。１個のヘテロ原子を含む例示的７員ヘテロシクリル基としては、限定されるものではないが、アゼパニル、オキセパニルおよびチエパニルが挙げられる。１個のヘテロ原子を含む例示的８員ヘテロシクリル基としては、限定されるものではないが、アゾカニル(azocanyl)、オキセカニル(oxecanyl)、およびチオカニル(thiocanyl)が挙げられる。Ｃ６アリール環と縮合された例示的５員ヘテロシクリル基（本明細書ではまた５，６−二環式複素環式環とも呼ばれる）としては、限定されるものではないが、インドリニル、イソインドリニル、ジヒドロベンゾフラニル、ジヒドロベンゾチエニル、およびベンゾキサゾリノニルなどが挙げられる。アリール環に縮合された例示的６員ヘテロシクリル基（本明細書では６，６−二環式複素環式環とも呼ばれる）としては、限定されるものではないが、テトラヒドロキノリニル、およびテトラヒドロイソキノリニルが挙げられる。
【００３６】
「アリール」は、芳香環系中に提供される、６〜１４個の環炭素原子を有し、ヘテロ原子を有さない単環式または多環式（例えば、二環式または三環式）４ｎ＋２芳香環系（例えば、環状配置で共有される６、１０、または１４個のπ電子を有する）のラジカル（「Ｃ６−１４アリール」）を指す。いくつかの実施形態では、アリール基は、６個の環炭素原子を有する（「Ｃ６アリール」；例えば、フェニル）。いくつかの実施形態では、アリール基は、１０個の環炭素原子を有する（「Ｃ１０アリール」；例えば、１−ナフチルおよび２−ナフチルなどのナフチル）。いくつかの実施形態では、アリール基は、１４個の環炭素原子を有する（「Ｃ１４アリール」；例えば、アントラシル）。「アリール」としてはまた、上記に定義されるようなアリール環が１以上のカルボシクリル基またはヘテロシクリル基と縮合し、そのラジカルまたは結合点がアリール環上にある環系が含まれ、このような場合には、炭素原子の数はそのアリール環系内の炭素原子の数を示し続ける。特定の実施形態では、アリール基の各例は、独立に、１以上の置換基で場合により置換されてよく、例えば、非置換型（「非置換アリール」）または置換型（「置換アリール」）である。特定の実施形態では、アリール基は、非置換Ｃ６−１４アリールである。特定の実施形態では、アリール基は、置換Ｃ６−１４アリールである。
【００３７】
「ヘテロアリール」は、芳香環系中に提供される環炭素原子と１〜４個の環ヘテロ原子を有し、各ヘテロ原子が独立に窒素、酸素、および硫黄から選択される５〜１４員単環式または多環式（例えば、二環式または三環式）４ｎ＋２芳香環系（例えば、環状配置で共有される６または１０個のπ電子を有する）のラジカル（「５〜１４員ヘテロアリール」）を指す。特定の実施形態では、ヘテロアリールは、芳香環系中に提供される環炭素原子と１〜４個の環ヘテロ原子を有し、各ヘテロ原子が独立に窒素、酸素および硫黄から選択される５〜１０員単環式または二環式４ｎ＋２芳香環系のラジカル（「５−１０員ヘテロアリール」）を指す。１以上の窒素原子を含むヘテロアリール基では、その結合点は、原子価が許容する限り、炭素原子または窒素原子であり得る。ヘテロアリール二環式環系は、一方または両方の環に１以上のヘテロ原子を含み得る。「ヘテロアリール」としては、上記に定義されるようなヘテロアリー環が１以上のカルボシクリル基またはヘテロシクリル基と縮合し、その結合点がヘテロアリール環上にある環系が含まれ、このような場合には、環員の数はそのヘテロアリール環系内の環員の数を示し続ける。「ヘテロアリール」としてはまた、上記に定義されるようなヘテロアリール環が１以上のアリール基と縮合し、その結合点がアリール環上またはヘテロアリール環上のいずれかにある環系も含まれ、このような場合には、環員の数はその縮合（アリール／ヘテロアリール）環系内の環員の数を示し続ける。一方の環がヘテロ原子を含まない二環式ヘテロアリール基（例えば、インドリル、キノリニル、およびカルバゾリルなど）において、結合点はいずれの環にあってもよく、例えば、ヘテロ原子を担持する環（例えば、２−インドリル）またはヘテロ原子を含まない環（例えば、５−インドリル）のいずれにあってもよい。
【００３８】
いくつかの実施形態では、ヘテロアリール基は、芳香環系中に提供される環炭素原子と１〜４個の環ヘテロ原子を有し、各ヘテロ原子が独立に窒素、酸素、および硫黄から選択される５〜１４員芳香環系（「５〜１４員ヘテロアリール」）である。いくつかの実施形態では、ヘテロアリール基は、芳香環系中に提供される環炭素原子と１〜４個の環ヘテロ原子を有し、各ヘテロ原子が独立に窒素、酸素、および硫黄から選択される５〜１０員芳香環系（「５〜１０員ヘテロアリール」）である。いくつかの実施形態では、ヘテロアリール基は、芳香環系中に提供される環炭素原子と１〜４個の環ヘテロ原子を有し、各ヘテロ原子が独立に窒素、酸素、および硫黄から選択される５〜８員芳香環系（「５〜８員ヘテロアリール」）である。いくつかの実施形態では、ヘテロアリール基は、芳香環系中に提供される環炭素原子と１〜４個の環ヘテロ原子を有し、各ヘテロ原子が独立に窒素、酸素、および硫黄から選択される５〜６員芳香環系（「５〜６員ヘテロアリール」）である。いくつかの実施形態では、５〜６員ヘテロアリールは、独立に窒素、酸素、および硫黄から選択される１〜３個の環ヘテロ原子を有する。いくつかの実施形態では、５〜６員ヘテロアリールは、独立に窒素、酸素、および硫黄から選択される１〜２個の環ヘテロ原子を有する。いくつかの実施形態では、５〜６員ヘテロアリールは、窒素、酸素、および硫黄から選択される１個の環ヘテロ原子を有する。特定の実施形態では、ヘテロアリール基の各例は、独立に、１以上の置換基で場合により置換されてよく、例えば、非置換型（「非置換ヘテロアリール」）または置換型（「置換ヘテロアリール」）である。特定の実施形態では、ヘテロアリール基は、非置換５〜１４員ヘテロアリールである。特定の実施形態では、ヘテロアリール基は、置換５〜１４員ヘテロアリールである。
【００３９】
１個のヘテロ原子を含む例示的５員ヘテロアリール基としては、限定されるものではないが、ピロリル、フラニルおよびチオフェニルが挙げられる。２個のヘテロ原子を含む例示的５員ヘテロアリール基としては、限定されるものではないが、イミダゾリル、ピラゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリル、およびイソチアゾリルが挙げられる。３個のヘテロ原子を含む例示的５員ヘテロアリール基としては、限定されるものではないが、トリアゾリル、オキサジアゾリル、およびチアジアゾリルが挙げられる。４個のヘテロ原子を含む例示的５員ヘテロアリール基としては、限定されるものではないが、テトラゾリルが挙げられる。１個のヘテロ原子を含む例示的６員ヘテロアリール基としては、限定されるものではないが、ピリジニルが挙げられる。２個のヘテロ原子を含む例示的６員ヘテロアリール基としては、限定されるものではないが、ピリダジニル、ピリミジニル、およびピラジニルが挙げられる。３個または４個のヘテロ原子を含む例示的６員ヘテロアリール基としては、限定されるものではないが、それぞれトリアジニルおよびテトラジニルが挙げられる。１個のヘテロ原子を含む例示的７員ヘテロアリール基としては、限定されるものではないが、アゼピニル、オキセピニル、およびチエピニルが挙げられる。例示的６，６−二環式ヘテロアリール基としては、限定されるものではないが、ナフチリジニル、プテリジニル、キノリニル、イソキノリニル、シンノリニル、キノキサリニル、フタラジニル、およびキナゾリニルが挙げられる。例示的５，６−二環式ヘテロアリール基としては、限定されるものではないが、下式のいずれか一つが挙げられる：
【化５】
2020510618.tif 000006
2020510618.tif 000007
2020510618.tif 000008
【００４０】
単環式または二環式ヘテロアリール基のいずれにおいても、結合点は、原子価が許容する限り、いずれの炭素原子または窒素原子であってもよい。
【００４１】
「部分的に不飽和」は、少なくとも一つの二重結合または三重結合を含む基を指す。「部分的に不飽和」という用語は、複数の不飽和部位を有する環を包含することを意図するが、本明細書で定義されるような芳香族基（例えば、アリールまたはヘテロアリール基）を含むことは意図されない。同様に、「飽和」は、二重結合または三重結合を含まない、すなわち、総て単結合を含む基を指す。
【００４２】
いくつかの実施形態では、本明細書で定義されるようなアルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、およびヘテロアリール基は、場合により置換されてよい（例えば、「置換」もしくは「非置換」アルキル、「置換」もしくは「非置換」アルケニル、「置換」もしくは「非置換」アルキニル、「置換」もしくは「非置換」カルボシクリル、「置換」もしくは「非置換」ヘテロシクリル、「置換」もしくは「非置換」アリールまたは「置換」もしくは「非置換」ヘテロアリール基）。一般に、「置換」という用語は、「場合により」という用語が先行していてもいなくても、基（例えば、炭素または窒素原子）上に存在する少なくとも１個の水素が許容される置換基、例えば、置換時に、安定な化合物、例えば、転位、環化、脱離、またはその他の反応によるなどの変換を自発的に受けない化合物を生じる置換基で置換されることを意味する。特に断りのない限り、「置換」基は、基の１以上の置換可能な位置に置換基を有し、任意の所与の構造中の２箇所以上の位置が置換される場合、置換基は各位置において同じかまたは異なる。「置換」という用語は、安定な化合物の形成をもたらす本明細書に記載される置換基のいずれかを含む、有機化合物の総ての許容される置換基による置換を含むことが企図される。本開示は、安定な化合物に到達するためにあらゆるこのような組合せを企図する。本開示の趣旨では、窒素などのヘテロ原子は、水素置換基および／またはヘテロ原子の原子価を満たし、安定な部分の形成をもたらす本明細書に記載される任意の好適な置換基を有し得る。
【００４３】
例示的炭素原子置換基としては、限定されるものではないが、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｎ３、−ＳＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＯＨ、−ＯＲａａ、−ＯＮ（Ｒｂｂ）２、−Ｎ（Ｒｂｂ）２、−Ｎ（Ｒｂｂ）３＋Ｘ、−Ｎ（ＯＲｃｃ）Ｒｂｂ、−ＳＨ、−ＳＲａａ、−ＳＳＲＣＣ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒａａ、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＨＯ、−Ｃ（ＯＲｃｃ）２、−ＣＯ２Ｒａａ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒａａ、−ＯＣＯ２Ｒａａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｂｂ）２、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｂｂ）２、−ＮＲｂｂＣ（＝Ｏ）Ｒａａ、−ＮＲｂｂＣＯ２Ｒａａ、−ＮＲｂｂＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｂｂ）２、−Ｃ（＝ＮＲｂｂ）Ｒａａ、−Ｃ（＝ＮＲｂｂ）ＯＲａａ、−ＯＣ（＝ＮＲｂｂ）Ｒａａ、−ＯＣ（＝ＮＲｂｂ）ＯＲａａ、−Ｃ（＝ＮＲｂｂ）Ｎ（Ｒｂｂ）２、−ＯＣ（＝ＮＲｂｂ）Ｎ（Ｒｂｂ）２、−ＮＲｂｂＣ（＝ＮＲｂｂ）Ｎ（Ｒｂｂ）２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｂｂＳＯ２Ｒａａ、−ＮＲｂｂＳＯ２Ｒａａ、−ＳＯ２Ｎ（Ｒｂｂ）２、−ＳＯ２Ｒａａ、−ＳＯ２ＯＲａａ、−ＯＳＯ２Ｒａａ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒａａ、−ＯＳ（＝Ｏ）Ｒａａ、−Ｓｉ（Ｒａａ）３、−ＯＳｉ（Ｒａａ）３、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｒｂｂ）２、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲａａ、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＲａａ、−ＳＣ（＝Ｓ）ＳＲａａ、−ＳＣ（＝Ｏ）ＳＲａａ、−ＯＣ（＝Ｏ）ＳＲａａ、−ＳＣ（＝Ｏ）ＯＲａａ、−ＳＣ（＝Ｏ）Ｒａａ、−Ｐ（＝Ｏ）２Ｒａａ、−ＯＰ（＝Ｏ）２Ｒａａ、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒａａ）２、−ＯＰ（＝Ｏ）（Ｒａａ）２、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲｃｃ）２、−Ｐ（＝Ｏ）２Ｎ（Ｒｂｂ）２、−ＯＰ（＝Ｏ）２Ｎ（Ｒｂｂ）２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＮＲｂｂ）２、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＮＲｂｂ）２、−ＮＲｂｂＰ（＝Ｏ）（ＯＲｃｃ）２、−ＮＲｂｂＰ（＝Ｏ）（ＮＲｂｂ）２、−Ｐ（Ｒｃｃ）２、−Ｐ（Ｒｃｃ）３、−ＯＰ（Ｒｃｃ）２、−ＯＰ（Ｒｃｃ）３、−Ｂ（Ｒａａ）２、−Ｂ（ＯＲｃｃ）２、−ＢＲａａ（ＯＲｃｃ）、Ｃ１−１０アルキル、Ｃ１−１０ペルハロアルキル、Ｃ２−１０アルケニル、Ｃ２−１０アルキニル、Ｃ３−１０カルボシクリル、３〜１４員ヘテロシクリル、Ｃ６−１４アリール、および５〜１４員ヘテロアリールが挙げられ、ここで、各アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、およびヘテロアリールは独立に、０、１、２、３、４、または５個のＲｄｄ基で置換され；
あるいは炭素原子上の２個のジェミナル水素は、基＝Ｏ、＝Ｓ、＝ＮＮ（Ｒｂｂ）２、＝ＮＮＲｂｂＣ（＝Ｏ）Ｒａａ、＝ＮＮＲｂｂＣ（＝Ｏ）ＯＲａａ、＝ＮＮＲｂｂＳ（＝Ｏ）２Ｒａａ、＝ＮＲｂｂ、または＝ＮＯＲｃｃで置換され；
Ｒａａの各例は、独立に、Ｃ１−１０アルキル、Ｃ１−１０ペルハロアルキル、Ｃ２−１０アルケニル、Ｃ１−１０アルキニル、Ｃ３−１０カルボシクリル、３〜１４員ヘテロシクリル、Ｃ６−１４アリール、および５〜１４員ヘテロアリールから選択されるか、または２個のＲａａ基は結合して３〜１４員ヘテロシクリルもしくは５〜１４員ヘテロアリール環を形成し、ここで、各アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、およびヘテロアリールは、独立に、０、１、２、３、４、または５個のＲｄｄ基で置換され；
Ｒｂｂの各例は、独立に、水素、−ＯＨ、−ＯＲａａ、−Ｎ（Ｒｃｃ）２、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒａａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｃｃ）２、−ＣＯ２Ｒａａ、−ＳＯ２Ｒａａ、−Ｃ（＝ＮＲｃｃ）ＯＲａａ、−Ｃ（＝ＮＲｃｃ）Ｎ（Ｒｃｃ）２、−ＳＯ２Ｎ（Ｒｃｃ）２、−ＳＯ２Ｒｃｃ、−ＳＯ２ＯＲｃｃ、−ＳＯＲａａ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｒｃｃ）２、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲｃｃ、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＲｃｃ、−Ｐ（＝Ｏ）２Ｒａａ、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒａａ）２、−Ｐ（＝Ｏ）２Ｎ（Ｒｃｃ）２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＮＲｃｃ）２、Ｃ１−１０アルキル、Ｃ１−１０ペルハロアルキル、Ｃ２−１０アルケニル、Ｃ２−１０アルキニル、Ｃ３−１０カルボシクリル、３〜１４員ヘテロシクリル、Ｃ６−１４アリール、および５〜１４員ヘテロアリールから選択されるか、または２個のＲｂｂ基は結合して３〜１４員ヘテロシクリルもしくは５〜１４員ヘテロアリール環を形成し、ここで、各アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、およびヘテロアリールは、独立に、０、１、２、３、４、または５個のＲｄｄ基で置換され；
Ｒｃｃの各例は、独立に、水素、Ｃ１−１０アルキル、Ｃ１−１０ペルハロアルキル、Ｃ２−１０アルケニル、Ｃ２−１０アルキニル、Ｃ３−１０カルボシクリル、３〜１４員ヘテロシクリル、Ｃ６−１４アリール、および５〜１４員ヘテロアリールから選択されるか、または２個のＲｃｃ基は結合して３〜１４員ヘテロシクリルもしくは５〜１４員ヘテロアリール環を形成し、ここで、各アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、およびヘテロアリールは、独立に、０、１、２、３、４、または５個のＲｄｄ基で置換され；
Ｒｄｄの各例は、独立に、ハロゲン、−ＣＮ、−Ｎ０２、−Ｎ３、−ＳＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＯＨ、−ＯＲｅｅ、−ＯＮ（Ｒｆｆ）２、−Ｎ（Ｒｆｆ）２、−Ｎ（Ｒｆｆ）３＋Ｘ、−Ｎ（ＯＲｅｅ）Ｒｆｆ、−ＳＨ、−ＳＲｅｅ、−ＳＳＲｅｅ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｅｅ、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２Ｒｅｅ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒｅｅ、−ＯＣＯ２Ｒｅｅ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｆｆ）２、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｆｆ）２、−ＮＲｆｆＣ（＝Ｏ）Ｒｅｅ、−ＮＲｆｆＣＯ２Ｒｅｅ、−ＮＲｆｆＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｆｆ）２、−Ｃ（＝ＮＲｆｆ）ＯＲｅｅ、−ＯＣ（＝ＮＲｆｆ）Ｒｅｅ、−ＯＣ（＝ＮＲｆｆ）ＯＲｅｅ、−Ｃ（＝ＮＲｆｆ）Ｎ（Ｒｆｆ）２、−ＯＣ（＝ＮＲｆｆ）Ｎ（Ｒｆｆ）２、−ＮＲｆｆＣ（＝ＮＲｆｆ）Ｎ（Ｒｆｆ）２、−ＮＲｆｆＳＯ２Ｒｅｅ、−ＳＯ２Ｎ（Ｒｆｆ）２、−ＳＯ２Ｒｅｅ、−ＳＯ２ＯＲｅｅ、−ＯＳＯ２Ｒｅｅ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒｅｅ、−Ｓｉ（Ｒｅｅ）３、−ＯＳｉ（Ｒｅｅ）３、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｒｆｆ）２、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲｅｅ、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＲｅｅ、−ＳＣ（＝Ｓ）ＳＲｅｅ、−Ｐ（＝Ｏ）２Ｒｅｅ、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒｅｅ）２、−ＯＰ（＝Ｏ）（Ｒｅｅ）２、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲｅｅ）２、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ペルハロアルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ３−１０カルボシクリル、３〜１０員ヘテロシクリル、Ｃ６−１０アリール、５〜１０員ヘテロアリールから選択され、ここで、各アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、およびヘテロアリールは、独立に、０、１、２、３、４、または５個のＲｇｇ基で置換されるか、または２個のジェミナルＲｄｄ置換基は結合して＝Ｏもしくは＝Ｓを形成し；
Ｒｅｅの各例は、独立に、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ペルハロアルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ３−１０カルボシクリル、Ｃ６−１０アリール、３〜１０員ヘテロシクリル、および３〜１０員ヘテロアリールから選択され、ここで、各アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、およびヘテロアリールは、独立に、０、１、２、３、４、または５個のＲｇｇ基で置換され；
Ｒｆｆの各例は、独立に、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ペルハロアルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ３−１０カルボシクリル、３〜１０員ヘテロシクリル、Ｃ６−１０アリールおよび５〜１０員ヘテロアリールから選択されるか、または２個のＲｆｆ基は結合して３〜１４員ヘテロシクリルもしくは５〜１４員ヘテロアリール環を形成し、ここで、各アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、およびヘテロアリールは、独立に、０、１、２、３、４、または５個のＲｇｇ基で置換され；かつ、
Ｒｇｇの各例は、独立に、ハロゲン、−ＣＮ、−Ｎ０２、−Ｎ３、−ＳＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＯＨ、−ＯＣ１−６アルキル、−ＯＮ（Ｃ１−６アルキル）２、−Ｎ（Ｃ１−６アルキル）２、−Ｎ（Ｃ１−６アルキル）３＋Ｘ−、−ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）２＋Ｘ−、−ＮＨ２（Ｃ１−６アルキル）  ＋Ｘ−、−ＮＨ３＋Ｘ、−Ｎ（ＯＣ１−６アルキル）（Ｃ１−６アルキル）、−Ｎ（ＯＨ）（Ｃ１−６アルキル）、−ＮＨ（ＯＨ）、−ＳＨ、−ＳＣ１−６アルキル、−ＳＳ（Ｃ１−６アルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２（Ｃ１−６アルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−ＯＣＯ２（Ｃ１−６アルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｃ１−６アルキル）２、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−Ｎ（Ｃ１−６アルキル）Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−ＮＨＣＯ２（Ｃ１−６アルキル）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｃ１−６アルキル）２、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（＝ＮＨ）Ｏ（Ｃ１−６アルキル）、−ＯＣ（＝ＮＨ）（Ｃ１−６アルキル）、−ＯＣ（＝ＮＨ）ＯＣ１−６アルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）Ｎ（Ｃ１−６アルキル）２、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−ＯＣ（＝ＮＨ）Ｎ（Ｃ１−６アルキル）２、−ＯＣ（ＮＨ）ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）、−ＯＣ（ＮＨ）ＮＨ２、−ＮＨＣ（ＮＨ）Ｎ（Ｃ１−６アルキル）２、−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２（Ｃ１−６アルキル）、−ＳＯ２Ｎ（Ｃ１−６アルキル）２、−ＳＯ２ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）、−ＳＯ２ＮＨ２，−ＳＯ２Ｃ１−６アルキル、−ＳＯ２ＯＣ１−６アルキル、−ＯＳＯ２Ｃ１−６アルキル、−ＳＯＣ１−６アルキル、−Ｓｉ（Ｃ１−６アルキル）３、−ＯＳｉ（Ｃ１−６アルキル）３  −Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｃ１−６アルキル）２、Ｃ（＝Ｓ）ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）、Ｃ（＝Ｓ）ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｓ（Ｃ１−６アルキル）、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＣ１−６アルキル、−ＳＣ（＝Ｓ）ＳＣ１−６アルキル、−Ｐ（＝Ｏ）２（Ｃ１−６アルキル）、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）２、−ＯＰ（＝Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）２、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＣ１−６アルキル）２、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ペルハロアルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ３−１０カルボシクリル、Ｃ６−１０アリール、３〜１０員ヘテロシクリル、５〜１０員ヘテロアリールであるか；または２個のジェミナルＲｇｇ置換基は結合して＝Ｏもしくは＝Ｓを形成することができ；ここで、Ｘは対イオンである。
【００４４】
「対イオン」または「アニオン性対イオン」は、電子的中立性を維持するために、カチオン性第四級アミノ基と結合される負電荷を有する基である。例示的対イオンとしては、ハロゲン化物イオン（例えば、Ｆ−、ＣＩ−、Ｂｒ−、Ｉ−）、Ｎ０３−、ＣＩＯ４−、ＯＨ−、Ｈ２ＰＯ４−、ＨＳＯ４−、スルホン酸イオン（例えば、メタンスルホン酸イオン、トリフルオロメタンスルホン酸イオン、ｐ−トルエンスルホン酸イオン、ベンゼンスルホン酸イオン、１０−カンファースルホン酸イオン、ナフタレン−２−スルホン酸イオン、ナフタレン−１−スルホン酸−５−スルホン酸イオン、およびエタン−１−スルホン酸−２−スルホン酸イオンなど）、ならびにカルボン酸イオン（例えば、酢酸イオン、エタン酸イオン、プロパン酸イオン、安息香酸イオン、グリセリン酸イオン、乳酸イオン、酒石酸イオン、およびグリコール酸イオンなど）が挙げられる。
【００４５】
「ハロ」または「ハロゲン」は、フッ素（フルオロ、−Ｆ）、塩素（クロロ、−ＣＩ）、臭素（ブロモ、−Ｂｒ）、またはヨウ素（ヨード、−Ｉ）を指す。
【００４６】
窒素原子は、原子価が許容する限り、置換または非置換であり得、第一級、第二級、第三級、および第四級窒素原子を含み得る。例示的窒素原子置換基(substitutents)としては、限定されるものではないが、水素、−ＯＨ、−ＯＲａａ、−Ｎ（Ｒｃｃ）２、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒａａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｃｃ）２、−ＣＯ２Ｒａａ、−ＳＯ２Ｒａａ、−Ｃ（＝ＮＲｂｂ）Ｒａａ、−Ｃ（＝ＮＲｃｃ）ＯＲａａ、−Ｃ（＝ＮＲｃｃ）Ｎ（Ｒｃｃ）２、−ＳＯ２Ｎ（Ｒｃｃ）２、−ＳＯ２Ｒｃｃ、−ＳＯ２ＯＲｃｃ、−ＳＯＲａａ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｒｃｃ）２、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲｃｃ、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＲｃｃ、−Ｐ（＝Ｏ）２Ｒａａ、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒａａ）２、−Ｐ（＝Ｏ）２Ｎ（Ｒｃｃ）２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＮＲｃｃ）２、Ｃ１−１０アルキル、Ｃ１−１０ペルハロアルキル、Ｃ２−１０アルケニル、Ｃ２−１０アルキニル、Ｃ３−１０カルボシクリル、３〜１４員ヘテロシクリル、Ｃ６−１４アリール、および５〜１４員ヘテロアリールが挙げられるか、または窒素原子と結合している２個のＲｃｃ基は結合して３〜１４員ヘテロシクリルもしくは５〜１４員ヘテロアリール環を形成し、ここで、各アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、およびヘテロアリールは、独立に、０、１、２、３、４、または５個のＲｄｄ基で置換され、かつ、Ｒａａ、Ｒｂｂ、ＲｃｃおよびＲｄｄは上記で定義される通りである。
【００４７】
特定の実施形態では、窒素原子上に存在する置換基は、窒素保護基（アミノ保護基とも呼ばれる）である。窒素保護基としては、限定されるものではないが、−ＯＨ、−ＯＲａａ、−Ｎ（Ｒｃｃ）２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒａａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｃｃ）２、−ＣＯ２Ｒａａ、−ＳＯ２Ｒａａ、−Ｃ（＝ＮＲｃｃ）Ｒａａ、−Ｃ（＝ＮＲｃｃ）ＯＲａａ、−Ｃ（＝ＮＲｃｃ）Ｎ（Ｒｃｃ）２、−ＳＯ２Ｎ（Ｒｃｃ）２、−ＳＯ２Ｒｃｃ、−ＳＯ２ＯＲｃｃ、−ＳＯＲａａ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｒｃｃ）２、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲｃｃ、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＲｃｃ、Ｃ１−１０アルキル（例えば、アラルキル、へテロアラルキル）、Ｃ２−１０アルケニル、Ｃ２−１０アルキニル、Ｃ３−１０カルボシクリル、３〜１４員ヘテロシクリル、Ｃ６−１４アリール、および５〜１４員ヘテロアリール基が挙げられ、ここで、各アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アラルキル、アリール、およびヘテロアリールは、独立に、０、１、２、３、４、または５個のＲｄｄ基で置換され、かつ、Ｒａａ、Ｒｂｂ、Ｒｃｃ、およびＲｄｄは、本明細書で定義される通りである。窒素保護基は当技術分野で周知であり、引用することにより本明細書の一部とされるProtecting Groups in Organic Synthesis, T. W. Greene and P. G. M. Wuts, 第3版, John Wiley & Sons, 1999に詳細に記載されているものが含まれる。
【００４８】
アミド窒素保護基（例えば、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒａａ）としては、限定されるものではないが  ホルムアミド、アセトアミド、クロロアセトアミド、トリクロロアセトアミド、トリフルオロアセトアミド、フェニルアセトアミド、３−フェニルプロパンアミド、ピコリンアミド、３−ピリジルカルボキサミド、Ｎ−ベンゾイルフェニルアラニル誘導体、ベンズアミド、ｐ−フェニルベンズアミド、ｏ−ニトロフェニルアセトアミド(o-nitophenylacetamide)、ｏ−ニトロフェノキシアセトアミド、アセトアセトアミド、（Ｎ’−ジチオベンジルオキシアシルアミノ）アセトアミド、３−（ｐ−ヒドロキシフェニル）プロパンアミド、３−（ｏ−ニトロフェニル）プロパンアミド、２−メチル−２−（ｏ−ニトロフェノキシ）プロパンアミド、２−メチル−２−（ｏ−フェニルアゾフェノキシ）プロパンアミド、４−クロロブタンアミド、３−メチル−３−ニトロブタンアミド、ｏ−ニトロシンナミド、Ｎ−アセチルメチオニン、ｏ−ニトロベンズアミド、およびｏ−（ベンゾイルオキシメチル）ベンズアミドが挙げられる。
【００４９】
カルバミン酸窒素保護基（例えば、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲａａ）としては、限定されるものではないが、メチルカルバマート、エチルカルバマート(ethyl carbamante)、９−フルオレニルメチルカルバマート（Ｆｍｏｃ）、９−（２−スルホ）フルオレニルメチルカルバマート、９−（２，７−ジブロモ）フルオロエニルメチルカルバマート、２，７−ジ−ｔ−ブチル−［９−（１０，１０−ジオキソ−１０、１０，１０，１０−テトラヒドロチオキサンチル）］メチルカルバマート（ＤＢＤ−Ｔｍｏｃ）、４−メトキシフェナシルカルバマート（Ｐｈｅｎｏｃ）、２，２，２−トリクロロエチルカルバマート（Ｔｒｏｃ）、２−トリメチルシリルエチル（Ｔｅｏｃ）カルバマート、２−フェニルエチルカルバマート（ｈＺ）、１−（１−アダマンチル）−１−メチルエチルカルバマート（Ａｄｐｏｃ）、１，１−ジメチル−２−ハロエチルカルバマート、１，１−ジメチル−２，２−ジブロモエチルカルバマート（ＤＢ−ｔ−ＢＯＣ）、１，１−ジメチル−２，２，２−トリクロロエチルカルバマート（ＴＣＢＯＣ）、１−メチル−１−（４−ビフェニリル）エチルカルバマート（Ｂｐｏｃ）、１−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−１−メチルエチルカルバマート（ｔ−Ｂｕｍｅｏｃ）、２−（２’−および４’−ピリジル）エチルカルバマート（Ｐｙｏｃ）、２−（Ｎ，Ｎ−ジシクロヘキシルカルボキサミド）エチルカルバマート、ｔ−ブチルカルバマート（ＢＯＣ）、１−アダマンチルカルバマート（Ａｄｏｃ）、ビニルカルバマート（Ｖｏｃ）、アリルカルバマート（Ａｌｌｏｃ）、１−イソプロピルアリルカルバマート（Ｉｐａｏｃ）、シンナミルカルバマート（Ｃｏｃ）、４−ニトロシンナミルカルバマート（Ｎｏｃ）、８−キノリルカルバマート、Ｎ−ヒドロキシピペリジニルカルバマート、アルキルジチオカルバマート、ベンジルカルバマート（Ｃｂｚ）、ｐ−メトキシベンジルカルバマート（Ｍｏｚ）、ｐ−ニトロベンジルカルバマート(p-nitobenzyl carbamate)、ｐ−ブロモベンジルカルバマート、ｐ−クロロベンジルカルバマート、２，４−ジクロロベンジルカルバマート、４−メチルスルフィニルベンジルカルバマート（Ｍｓｚ）、９−アントリルメチルカルバマート、ジフェニルメチルカルバマート、２−メチルチオエチルカルバマート、２−メチルスルホニルエチルカルバマート、２−（ｐ−トルエンスルホニル）エチルカルバマート、［２−（１，３−ジチアニル）］メチルカルバマート（Ｄｍｏｃ）、４−メチルチオフェニルカルバマート（Ｍｔｐｃ）、２，４−ジメチルチオフェニルカルバマート（Ｂｍｐｃ）、２−ホスホニオエチルカルバマート（Ｐｅｏｃ）、２−トリフェニルホスホニオイソプロピルカルバマート（Ｐｐｏｃ）、１，１−ジメチル−２−シアノエチルカルバマート、ｍ−クロロ−ｐ−アシルオキシベンジルカルバマート、ｐ−（ジヒドロキシボリル）ベンジルカルバマート、５−ベンズイソキサゾリルメチルカルバマート、２−（トリフルオロメチル）−６−クロモニルメチルカルバマート（Ｔｃｒｏｃ）、ｍ−ニトロフェニルカルバマート、３，５−ジメトキシベンジルカルバマート、ｏ−ニトロベンジルカルバマート、３，４−ジメトキシ−６−ニトロベンジルカルバマート、フェニル（ｏ−ニトロフェニル）メチルカルバマート、ｔ−アミルカルバマート、Ｓ−ベンジルチオカルバマート、ｐ−シアノベンジルカルバマート、シクロブチルカルバマート、シクロヘキシルカルバマート、シクロペンチルカルバマート、シクロプロピルメチルカルバマート、ｐ−デシルオキシベンジルカルバマート、２，２−ジメトキシアシルビニルカルバマート、ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジメチルカルボキサミド）ベンジルカルバマート、１，１−ジメチル−３−（Ｎ，Ｎ−ジメチルカルボキサミド）プロピルカルバマート、１，１−ジメチルプロピニルカルバマート、ジ（２−ピリジル）メチルカルバマート、２−フラニルメチルカルバマート、２−ヨードエチルカルバマート、イソボルニルカルバマート(isoborynl carbamate)、イソブチルカルバマート、イソニコチニルカルバマート、ｐ−（ｐ’−メトキシフェニルアゾ）ベンジルカルバマート、１−メチルシクロブチルカルバマート、１−メチルシクロヘキシルカルバマート、１−メチル−１−シクロプロピルメチルカルバマート、１−メチル−１−（３，５−ジメトキシフェニル）エチルカルバマート、１−メチル−１−（ｐ−フェニルアゾフェニル）エチルカルバマート、１−メチル−１−フェニルエチルカルバマート、１−メチル−１−（４−ピリジル）エチルカルバマート、フェニルカルバマート、ｐ−（フェニルアゾ）ベンジルカルバマート、２，４，６−トリ−ｔ−ブチルフェニルカルバマート、４−（トリメチルアンモニウム）ベンジルカルバマート、および２，４，６−トリメチルベンジルカルバマートが挙げられる。
【００５０】
スルホンアミド窒素保護基（例えば、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒａａ）としては、限定されるものではないが、ｐ−トルエンスルホンアミド（Ｔｓ）、ベンゼンスルホンアミド、２，３，６，−トリメチル−４−メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｍｔｒ）、２，４，６−トリメトキシベンゼンスルホンアミド（Ｍｔｂ）、２，６−ジメチル−４−メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｐｍｅ）、２，３，５、６−テトラメチル−４−メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｍｔｅ）、４−メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｍｂｓ）、２，４，６−トリメチルベンゼンスルホンアミド（Ｍｔｓ）、２，６−ジメトキシ−４−メチルベンゼンスルホンアミド（ｉＭｄｓ）、２，２，５，７、８−ペンタメチルクロマン−６−スルホンアミド（Ｐｍｃ）、メタンスルホンアミド（Ｍｓ）、β−トリメチルシリルエタンスルホンアミド（ＳＥＳ）、９−アントラセンスルホンアミド、４−（４’，８’−ジメトキシナフチルメチル）ベンゼンスルホンアミド（ＤＮＭＢＳ）、ベンジルスルホンアミド、トリフルオロメチルスルホンアミド、およびフェナシルスルホンアミドが挙げられる。
【００５１】
他の窒素保護基としては、限定されるものではないが、フェノチアジニル−（１０）−アシル誘導体、Ｎ’−ｐ−トルエンスルホニルアミノアシル誘導体、Ｎ’−フェニルアミノチオアシル誘導体、Ｎ−ベンゾイルフェニルアラニル誘導体、Ｎ−アセチルメチオニン誘導体、４，５−ジフェニル−３−オキサゾリン−２−オン、Ｎ−フタルイミド、Ｎ−ジチアスクシンイミド（Ｄｔｓ）、Ｎ−２，３−ジフェニルマレイミド、Ｎ−２，５−ジメチルピロール、Ｎ−１，１，４，４−テトラメチルジシリルアザシクロペンタン付加物（ＳＴＡ塩基）、５−置換１，３−ジメチル−１，３，５−トリアザシクロヘキサン−２−オン、５−置換１，３−ジベンジル−１，３，５−トリアザシクロヘキサン−２−オン、１−置換３，５−ジニトロ−４−ピリドン、Ｎ−メチルアミン、Ｎ−アリルアミン、Ｎ−［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチルアミン（ＳＥＭ）、Ｎ−３−アセトキシプロピルアミン、Ｎ−（１−イソプロピル−４−ニトロ−２−オキソ−３−プロオリン(pyroolin)−３−イル）アミン、第四級アンモニウム塩、Ｎ−ベンジルアミン、Ｎ−ジ（４−メトキシフェニル）メチルアミン、Ｎ−５−ジベンゾスベリルアミン、Ｎ−トリフェニルメチルアミン（Ｔｒ）、Ｎ−［（４−メトキシフェニル）ジフェニルメチル］アミン（ＭＭＴｒ）、Ｎ−９−フェニルフルオレニルアミン（ＰｈＦ）、Ｎ−２，７−ジクロロ−９−フルオレニルメチレンアミン、Ｎ−フェロセニルメチルアミノ（Ｆｃｍ）、Ｎ−２−ピコリルアミノＮ’−オキシド、Ｎ−１，１−ジメチルチオメチレンアミン、Ｎ−ベンジリデンアミン、Ｎ−ｐ−メトキシベンジリデンアミン、Ｎ−ジフェニルメチレンアミン、Ｎ−［（２−ピリジル）メシチル］メチレンアミン、Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノメチレン）アミン、Ｎ，Ｎ’−イソプロピリデンジアミン、Ｎ−ｐ−ニトロベンジリデンアミン、Ｎ−サリチリデンアミン、Ｎ−５−クロロサリチリデンアミン、Ｎ−（５−クロロ−２−ヒドロキシフェニル）フェニルメチレンアミン、Ｎ−シクロヘキシリデンアミン、Ｎ−（５，５−ジメチル−３−オキソ−１−シクロヘキセニル）アミン、Ｎ−ボラン誘導体、Ｎ−ジフェニルボリン酸誘導体、Ｎ−［フェニル（ペンタアシルクロム−またはタングステン）アシル］アミン、Ｎ−銅キレート、Ｎ−亜鉛キレート、Ｎ−ニトロアミン、Ｎ−ニトロソアミン、アミンＮ−オキシド、ジフェニルホスフィンアミド（Ｄｐｐ）、ジメチルチオホスフィンアミド（Ｍｐｔ）、ジフェニルチオホスフィンアミド（Ｐｐｔ）、ジアルキルホスホルアミダート、ジベンジルホスホルアミダート、ジフェニルホスホルアミダート、ベンゼンスルフェンアミド、ｏ−ニトロベンゼンスルフェンアミド（Ｎｐｓ）、２，４−ジニトロベンゼンスルフェンアミド、ペンタクロロベンゼンスルフェンアミド、２−ニトロ−４−メトキシベンゼンスルフェンアミド、トリフェニルメチルスルフェンアミド、および３−ニトロピリジンスルフェンアミド（Ｎｐｙｓ）が挙げられる。
【００５２】
特定の実施形態では、酸素原子上に存在する置換基は、酸素保護基（ヒドロキシル保護基とも呼ばれる）である。酸素保護基としては、限定されるものではないが、−Ｒａａ、−Ｎ（Ｒｂｂ）２、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲａａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒａａ、−ＣＯ２Ｒａａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｂｂ）２、−Ｃ（＝ＮＲｂｂ）Ｒａａ、−Ｃ（＝ＮＲｂｂ）ＯＲａａ、−Ｃ（＝ＮＲｂｂ）Ｎ（Ｒｂｂ）２、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒａａ、−ＳＯ２Ｒａａ、−Ｓｉ（Ｒａａ）３、−Ｐ（Ｒｃｃ）２、−Ｐ（Ｒｃｃ）３、−Ｐ（＝Ｏ）２Ｒａａ、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒａａ）２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲｃｃ）２、−Ｐ（＝Ｏ）２Ｎ（Ｒｂｂ）２、および−Ｐ（＝Ｏ）（ＮＲｂｂ）２が挙げられ、ここで、Ｒａａ、Ｒｂｂ、およびＲｃｃは本明細書で定義される通りである。酸素保護基は当技術分野で周知であり、引用することにより本明細書の一部とされるProtecting Groups in Organic Synthesis, T. W. Greene and P. G. M. Wuts, 第3版, John Wiley & Sons, 1999に詳細に記載されているものが含まれる。
【００５３】
例示的酸素保護基としては、限定されるものではないが、メチル、メトキシルメチル（ＭＯＭ）、メチルチオメチル（ＭＴＭ）、ｔ−ブチルチオメチル、（フェニルジメチルシリル）メトキシメチル（ＳＭＯＭ）、ベンジルオキシメチル（ＢＯＭ）、ｐ−メトキシベンジルオキシメチル（ＰＭＢＭ）、（４−メトキシフェノキシ）メチル（ｐ−ＡＯＭ）、グアイアコールメチル（ＧＵＭ）、ｔ−ブトキシメチル、４−ペンテニルオキシメチル（ＰＯＭ）、シロキシメチル、２−メトキシエトキシメチル（ＭＥＭ）、２，２，２−トリクロロエトキシメチル、ビス（２−クロロエトキシ）メチル、２−（トリメチルシリル）エトキシメチル（ＳＥＭＯＲ）、テトラヒドロピラニル（ＴＨＰ）、３−ブロモテトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、１−メトキシシクロヘキシル、４−メトキシテトラヒドロピラニル（ＭＴＨＰ）、４−メトキシテトラヒドロチオピラニル、４−メトキシテトラヒドロチオピラニルＳ，Ｓ−ジオキシド、１−［（２−クロロ−４−メチル）フェニル］−４−メトキシピペリジン−４−イル（ＣＴＭＰ）、１，４−ジオキサン−２−イル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチオフラニル、２，３，３ａ，４，５，６，７，７ａ−オクタヒドロ−７，８，８−トリメチル−４，７−メタノベンゾフラン−２−イル、１−エトキシエチル、１−（２−クロロエトキシ）エチル、１−メチル−１−メトキシエチル、１−メチル−１−ベンジルオキシエチル、１−メチル−１−ベンジルオキシ−２−フルオロエチル、２，２，２−トリクロロエチル、２−トリメチルシリルエチル、２−（フェニルセレニル）エチル、ｔ−ブチル、アリル、ｐ−クロロフェニル、ｐ−メトキシフェニル、２，４−ジニトロフェニル、ベンジル（Ｂｎ）、ｐ−メトキシベンジル、３，４−ジメトキシベンジル、ｏ−ニトロベンジル、ｐ−ニトロベンジル、ｐ−ハロベンジル、２，６−ジクロロベンジル、ｐ−シアノベンジル、ｐ−フェニルベンジル、２−ピコリル、４−ピコリル、３−メチル−２−ピコリルＮ−オキシド、ジフェニルメチル、ｐ，ｐ’−ジニトロベンズヒドリル、５−ジベンゾスベリル、トリフェニルメチル、α−ナフチルジフェニルメチル、ｐ−メトキシフェニルジフェニルメチル、ジ（ｐ−メトキシフェニル）フェニルメチル、トリ（ｐ−メトキシフェニル）メチル、４−（４’−ブロモフェナシルオキシフェニル）ジフェニルメチル、４，４’，４”−トリス（４，５−ジクロロフタルイミドフェニル）メチル、４，４’，４”−トリス（レブリノイルオキシフェニル）メチル、４，４’，４”−トリス（ベンゾイルオキシフェニル）メチル、３−（イミダゾール−１−イル）ビス（４’，４”−ジメトキシフェニル）メチル、１，１−ビス（４−メトキシフェニル）−１’−ピレニルメチル、９−アントリル、９−（９−フェニル）キサンテニル、９−（９−フェニル−１０−オキソ）アントリル、１，３−ベンゾジスルフラン−２−イル、ベンズイソチアゾリルＳ，Ｓ−ジオキシド、トリメチルシリル（ＴＭＳ）、トリエチルシリル（ＴＥＳ）、トリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）、ジメチルイソプロピルシリル（ＩＰＤＭＳ）、ジエチルイソプロピルシリル（ＤＥＩＰＳ）、ジメチルテキシ���シリル、ｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、ｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、トリベンジルシリル、トリ−ｐ−キシリルシリル、トリフェニルシリル、ジフェニルメチルシリル（ＤＰＭＳ）、ｔ−ブチルメトキシフェニルシリル（ＴＢＭＰＳ）、ホルマート、ベンゾイルホルマート、アセタート、クロロアセタート、ジクロロアセタート、トリクロロアセタート、トリフルオロアセタート、メトキシアセタート、トリフェニルメトキシアセタート、フェノキシアセタート、ｐ−クロロフェノキシアセタート、３−フェニルプロピオナート、４−オキソペンタノアート（レブリナート）、４，４−（エチレンジチオ）ペンタノアート（レブリノイルジチオアセタール）、ピバロアート、アダマントアート、クロトナート、４−メトキシクロトナート、ベンゾアート、ｐ−フェニルベンゾアート、２，４，６−トリメチルベンゾアート（メシトアート）、ｔ−ブチルカルボナート（ＢＯＣ）、アルキルメチルカルボナート、９−フルオレニルメチルカルボナート（Ｆｍｏｃ）、アルキルエチルカルボナート、アルキル２，２，２−トリクロロエチルカルボナート（Ｔｒｏｃ）、２−（トリメチルシリル）エチルカルボナート（ＴＭＳＥＣ）、２−（フェニルスルホニル）エチルカルボナート（Ｐｓｅｃ）、２−（トリフェニルホスホニオ）エチルカルボナート（Ｐｅｏｃ）、アルキルイソブチルカルボナート、アルキルビニルカルボナート、アルキルアリルカルボナート、アルキルｐ−ニトロフェニルカルボナート、アルキルベンジルカルボナート、アルキルｐ−メトキシベンジルカルボナート、アルキル３，４−ジメトキシベンジルカルボナート、アルキルｏ−ニトロベンジルカルボナート、アルキルｐ−ニトロベンジルカルボナート、アルキルＳ−ベンジルチオカルボナート、４−エトキシ−１−ナフチルカルボナート、メチルジチオカルボナート、２−ヨードベンゾアート、４−アジドブチラート、４−ニトロ−４−メチルペンタノアート、ｏ−（ジブロモメチル）ベンゾアート、２−ホルミルベンゼンスルホナート、２−（メチルチオメトキシ）エチル、４−（メチルチオメトキシ）ブチラート、２−（メチルチオメトキシメチル）ベンゾアート、２，６−ジクロロ−４−メチルフェノキシアセタート、２，６−ジクロロ−４−（１，１，３，３−テトラメチルブチル）フェノキシアセタート、２，４−ビス（１，１−ジメチルプロピル）フェノキシアセタート、クロロジフェニルアセタート、イソブチラート、モノスクシノアート、（Ｅ）−２−メチル−２−ブテノアート、ｏ−（メトキシアシル）ベンゾアート、α−ナフトアート、ニトラート、アルキルΝ，Ν，Ν’，Ν’−テトラメチルホスホロジアミダート、アルキルＮ−フェニルカルバマート、ボラート、ジメチルホスフィノチオイル、アルキル２，４−ジニトロフェニルスルフェナート、スルファート、メタンスルホナート（メシラート）、ベンジルスルホナート、およびトシラート（Ｔｓ）が挙げられる。
【００５４】
特定の実施形態では、硫黄原子上に存在する置換基は、硫黄保護基（チオール保護基とも呼ばれる）。硫黄保護基としては、限定されるものではないが、−Ｒａａ、−Ｎ（Ｒｂｂ）２、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲａａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒａａ、−ＣＯ２Ｒａａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｂｂ）２、−Ｃ（＝ＮＲｂｂ）Ｒａａ、−Ｃ（＝ＮＲｂｂ）ＯＲａａ、−Ｃ（＝ＮＲｂｂ）Ｎ（Ｒｂｂ）２、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒａａ、−ＳＯ２Ｒａａ、−Ｓｉ（Ｒａａ）３−Ｐ（Ｒｃｃ）２、−Ｐ（Ｒｃｃ）３、−Ｐ（＝Ｏ）２Ｒａａ、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒａａ）２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲｃｃ）２、−Ｐ（＝Ｏ）２Ｎ（Ｒｂｂ）２、および−Ｐ（＝Ｏ）（ＮＲｂｂ）２が挙げられ、ここで、Ｒａａ、Ｒｂｂ、およびＲｃｃは本明細書で定義される通りである。硫黄保護基は当技術分野で周知であり、引用することにより本明細書の一部とされるProtecting Groups in Organic Synthesis, T. W. Greene and P. G. M. Wuts, 第3版, John Wiley & Sons, 1999に詳細に記載されているものが含まれる。
【００５５】
「薬学上許容可能な塩」は、妥当な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応などを伴わずにヒトおよび他の動物の組織と接触した状態で使用するのに好適であり、かつ妥当なベネフィット／リスク比に見合う塩を指す。薬学的上許容可能な塩は、当技術分野において周知である。例えば、BergeらがJ. Pharmaceutical Sciences (1977) 66: 1-19において薬学上許容可能な塩を詳細に説明している。本明細書に記載される化合物の薬学上許容可能な塩は、好適な無機および有機酸および塩基から誘導されるものを含む。薬学的に許容可能な非毒性酸付加塩の例は、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸および過塩素酸などの無機酸とともに、または酢酸、シュウ酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸、もしくはマロン酸などの有機酸とともに、またはイオン交換などの当技術分野で使用される他の方法を使用することによって形成されるアミノ基の塩がある。他の薬学上許容可能な塩としては、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、カンファースルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、グルコン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、および吉草酸塩、などが挙げられる。適当な塩基から誘導される塩としては、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、アンモニウム塩およびＮ＋（Ｃ１−４アルキル）４塩が挙げられる。代表的なアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩としては、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、およびマグネシウムなどが挙げられる。さらなる薬学上許容可能な塩としては、適当であれば、第四級塩が挙げられる。
【００５６】
本発明は、Ｉ型ＰＲＭＴ阻害剤を提供する。一つの実施形態では、Ｉ型ＰＲＭＴ阻害剤は式（Ｉ）の化合物：
【化６】
2020510618.tif 000009
［式中、
ＸはＮであり、ＺはＮＲ４であり、かつ、ＹはＣＲ５であるか；または
ＸはＮＲ４であり、ＺはＮであり、かつ、ＹはＣＲ５であるか；または
ＸはＣＲ５であり、ＺはＮＲ４であり、かつ、ＹはＮであるか；または
ＸはＣＲ５であり、ＺはＮであり、かつ、ＹはＮＲ４であり；
ＲＸは、場合により置換されていてもよいＣ１−４アルキルまたは場合により置換されていてもよいＣ３−４シクロアルキルであり；
Ｌ１は、結合、−Ｏ−、−Ｎ（ＲＢ）−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＢ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＢ）Ｎ（ＲＢ）−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＢ）−、−ＮＲＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲＢＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＢ）−、−ＮＲＢＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＢ）Ｎ（ＲＢ）−、−ＮＲＢＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＳＣ（Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲＢ）−、−Ｃ（＝ＮＮＲＢ）−、−Ｃ（＝ＮＯＲＡ）−、−Ｃ（＝ＮＲＢ）Ｎ（ＲＢ）−、−ＮＲＢＣ（＝ＮＲＢ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＢ）−、−ＮＲＢＣ（Ｓ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｏ−、−ＳＯ２−、−Ｎ（ＲＢ）ＳＯ２−、−ＳＯ２Ｎ（ＲＢ）−、または場合により置換されていてもよいＣ１−６飽和もしくは不飽和炭化水素鎖であり、ここで、前記炭化水素鎖の１以上のメチレン単位は場合により、かつ、独立に、−Ｏ−、−Ｎ（ＲＢ）−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＢ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＢ）Ｎ（ＲＢ）−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＢ）−、−ＮＲＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲＢＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＢ）−、−ＮＲＢＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＢ）Ｎ（ＲＢ）−、−ＮＲＢＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＳＣ（Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲＢ）−、−Ｃ（＝ＮＮＲＢ）−、−Ｃ（＝ＮＯＲＡ）−、−Ｃ（＝ＮＲＢ）Ｎ（ＲＢ）−、−ＮＲＢＣ（＝ＮＲＢ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＢ）−、−ＮＲＢＣ（Ｓ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｏ−、−ＳＯ２−、−Ｎ（ＲＢ）ＳＯ２−、または−ＳＯ２Ｎ（ＲＢ）−で置換され；
各ＲＡは独立に、水素、場合により置換されていてもよいアルキル、場合により置換されていてもよいアルケニル、場合により置換されていてもよいアルキニル、場合により置換されていてもよいカルボシクリル、場合により置換されていてもよいヘテロシクリル、場合により置換されていてもよいアリール、場合により置換されていてもよいヘテロアリール、酸素原子と結合している場合には酸素保護基、および硫黄原子と結合している場合には硫黄保護基からなる群から選択され；
各ＲＢは独立に、水素、場合により置換されていてもよいアルキル、場合により置換されていてもよいアルケニル、場合により置換されていてもよいアルキニル、場合により置換されていてもよいカルボシクリル、場合により置換されていてもよいヘテロシクリル、場合により置換されていてもよいアリール、場合により置換されていてもよいヘテロアリール、および窒素保護基からなる群から選択されるか、または同じ窒素原子上のＲＢとＲＷは、間にある窒素と一緒に場合により置換されていてもよい複素環式環を形成してもよく；
ＲＷは、水素、場合により置換されていてもよいアルキル、場合により置換されていてもよいアルケニル、場合により置換されていてもよいアルキニル、場合により置換されていてもよいカルボシクリル、場合により置換されていてもよいヘテロシクリル、場合により置換されていてもよいアリール、または場合により置換されていてもよいヘテロアリールであり；ただし、Ｌ１が結合である場合には、ＲＷは、水素、場合により置換されていてもよいアリール、または場合により置換されていてもよいヘテロアリールでなく；
Ｒ３は、水素、Ｃ１−４アルキル、またはＣ３−４シクロアルキルであり；
Ｒ４は、水素、場合により置換されていてもよいＣ１−６アルキル、場合により置換されていてもよいＣ２−６アルケニル、場合により置換されていてもよいＣ２−６アルキニル、場合により置換されていてもよいＣ３−７シクロアルキル、場合により置換されていてもよい４〜７員のヘテロシクリル；または場合により置換されていてもよいＣ１−４アルキル−Ｃｙであり；
Ｃｙは、場合により置換されていてもよいＣ３−７シクロアルキル、場合により置換されていてもよい４〜７員のヘテロシクリル、場合により置換されていてもよいアリール、または場合により置換されていてもよいヘテロアリールであり；かつ、
Ｒ５は、水素、ハロ、−ＣＮ、場合により置換されていてもよいＣ１−４アルキル、または場合により置換されていてもよいＣ３−４シクロアルキルである］
またはその薬学上許容可能な塩である。一つの側面において、Ｒ３は、Ｃ１−４アルキルである。一つの側面において、Ｒ３は、メチルである。一つの側面において、Ｒ４は、水素である。一つの側面において、Ｒ５は、水素である。一つの側面において、Ｌ１は、結合である。
【００５７】
一つの実施形態では、Ｉ型ＰＲＭＴ阻害剤は、−Ｌ１−ＲＷが場合により置換されていてもよいカルボシクリルである式（Ｉ）の化合物である。
【００５８】
一つの実施形態では、Ｉ型ＰＲＭＴ阻害剤は、式（Ｖ）の化合物
【化７】
2020510618.tif 000010
［式中、環Ａは場合により置換されていてもよいカルボシクリル、場合により置換されていてもよいヘテロシクリル、場合により置換されていてもよいアリール、または場合により置換されていてもよいヘテロアリールである］
またはその薬学上許容可能な塩である。一つの側面において、環Ａは、場合により置換されていてもよいカルボシクリルである。一つの側面において、Ｒ３は、Ｃ１−４アルキルである。一つの側面において、Ｒ３は、メチルである。一つの側面において、Ｒｘは、非置換Ｃ１−４アルキルである。一つの側面において、Ｒｘは、メチルである。一つの側面において、Ｌ１は、結合である。
【００５９】
一つの実施形態では、Ｉ型ＰＲＭＴ阻害剤は、式（ＶＩ）の化合物
【化８】
2020510618.tif 000011
またはその薬学上許容可能な塩である。一つの側面において、環Ａは、場合により置換されていてもよいカルボシクリルである。一つの側面において、Ｒ３は、Ｃ１−４アルキルである。一つの側面において、Ｒ３は、メチルである。一つの側面において、Ｒｘは、非置換Ｃ１−４アルキルである。一つの側面において、Ｒｘは、メチルである。
【００６０】
一つの実施形態では、Ｉ型ＰＲＭＴ阻害剤は、式（ＩＩ）の化合物：
【化９】
2020510618.tif 000012
またはその薬学上許容可能な塩である。一つの側面において、−Ｌ１−ＲＷは、場合により置換されていてもよいカルボシクリルである。一つの側面において、Ｒ３は、Ｃ１−４アルキルである。一つの側面において、Ｒ３は、メチルである。一つの側面において、Ｒｘは、非置換Ｃ１−４アルキルである。一つの側面において、Ｒｘは、メチルである。一つの側面において、Ｒ４は、水素である。
【００６１】
一つの実施形態では、Ｉ型ＰＲＭＴ阻害剤は、化合物Ａ：
【化１０】
2020510618.tif 000013
またはその薬学上許容可能な塩である。化合物Ａおよび化合物Ａを製造する方法は、ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０２９７１０の少なくとも第１７１頁（化合物１５８）および第２６６頁、段落［００３３１］に開示されている。
【００６２】
一つの実施形態では、Ｉ型ＰＲＭＴ阻害剤は、化合物Ａ−３ＨＣｌ、すなわち、化合物Ａの３ＨＣｌ塩である。別の実施形態では、Ｉ型ＰＲＭＴ阻害剤は、化合物Ａ−１ＨＣｌ、すなわち、化合物Ａの１ＨＣｌ塩である。さらに別の実施形態では、Ｉ型ＰＲＭＴ阻害剤は、化合物Ａ−遊離塩基、すなわち、化合物Ａの遊離塩基型である。さらに別の実施形態では、Ｉ型ＰＲＭＴ阻害剤は、化合物Ａ−２ＨＣｌ、すなわち、化合物Ａの２ＨＣｌ塩である。
【００６３】
一つの実施形態では、Ｉ型ＰＲＭＴ阻害剤は、化合物Ｄ：
【化１１】
2020510618.tif 000014
またはその薬学上許容可能な塩である。
【００６４】
Ｉ型ＰＲＭＴ阻害剤はさらに、引用することにより本明細書の一部とされるＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０２９７１０に開示されている。例示的Ｉ型ＰＲＭＴ阻害剤は、ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０２９７１０の表１Ａおよび表１Ｂに開示され、Ｉ型ＰＲＭＴ阻害剤を製造する方法は、ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０２９７１０の少なくとも第２２６頁段落［００２７４］〜第３２８頁段落［０００５０］に記載されている。
【００６５】
一つの実施形態では、必要とするヒトにおいて癌を処置する方法であって、前記ヒト由来のサンプルにおいて、ａ．５−メチルチオアデノシンホスホリラーゼ（ＭＴＡＰ）ポリヌクレオチドまたはポリペプチドのレベル、ｂ．ＭＴＡＰにおける突然変異の存在または不存在、およびｃ．メチルチオアデノシン（ＭＴＡ）のレベルのうちいずれか１以上を決定すること、ならびにＭＴＡＰポリヌクレオチドもしくはポリペプチドのレベルが対照に比べて低下し、かつ／またはメチルチオアデノシン（ＭＴＡ）のレベルが対照に比べて上昇し、かつ／またはＭＴＡＰポリヌクレオチドもしくはポリペプチドに突然変異が存在する場合に前記ヒトに有効量のＩ型タンパク質アルギニンメチルトランスフェラーゼ（Ｉ型ＰＲＭＴ）阻害剤を投与し、それにより、前記ヒトにおける癌を処置することを含んでなる方法が提供される。一つの側面において、突然変異はＭＴＡＰ欠失である。一つの側面において、サンプルは、癌細胞を含んでなる。別の側面では、ａおよびｂの両方が決定される。一つの側面において、前記方法は、１以上の付加的抗新生物薬を投与することをさらに含んでなる。別の側面において、癌は、固形腫瘍または血液癌である。一つの側面において、癌は、リンパ腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、腎臓癌、黒色腫、乳癌、膀胱癌、結腸癌、肺癌、または前立腺癌である。一つの側面において、Ｉ型ＰＲＭＴ阻害剤は、式Ｉ、ＩＩ、Ｖ、またはＶＩの化合物である。一つの側面において、Ｉ型ＰＲＭＴ阻害剤は、化合物Ａである。別の側面において、Ｉ型ＰＲＭＴ阻害剤は、化合物Ｄである。一つの実施形態では、必要とするヒトにおいて癌を処置する方法であって、前記ヒト由来のサンプルにおいて、ａ．５−メチルチオアデノシンホスホリラーゼ（ＭＴＡＰ）ポリヌクレオチドまたはポリペプチドのレベル、ｂ．ＭＴＡＰにおける突然変異の存在または不存在、およびｃ．メチルチオアデノシン（ＭＴＡ）のレベルのうちいずれか１以上を決定すること、ならびにＭＴＡＰポリヌクレオチドもしくはポリペプチドのレベルが対照に比べて低下し、かつ／またはメチルチオアデノシン（ＭＴＡ）のレベルが対照に比べて上昇し、かつ／またはＭＴＡＰポリヌクレオチドもしくはポリペプチドに突然変異が存在する場合に、前記ヒトに有効量の化合物Ａを投与し、それにより、前記ヒトを処置することを含んでなる方法が提供される。別の実施形態では、必要とするヒトにおいて癌を処置する方法であって、前記ヒト由来のサンプルにおいて、ａ．５−メチルチオアデノシンホスホリラーゼ（ＭＴＡＰ）ポリヌクレオチドもしくはポリペプチドのレベル、またはｂ．ＭＴＡＰにおける突然変異の存在もしくは不存在を決定すること、ＭＴＡＰポリヌクレオチドもしくはポリペプチドのレベルが対照に比べて低下しているか、またはＭＴＡＰポリヌクレオチドもしくはポリペプチドに突然変異が存在する場合に前記ヒトに有効量の化合物Ａを投与し、それにより、前記ヒトにおいて癌を処置することを含んでなる方法が提供される。いくつかの側面では、ＭＴＡＰポリヌクレオチドまたはポリペプチドのレベルは、対照に比べて少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％低下している。いくつかの他の側面では、ＭＴＡのレベルは、対照に比べて少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、３０倍、少なくとも約３５倍、少なくとも約４０倍、少なくとも約４５倍、または少なくとも約５０倍上昇している。
【００６６】
別の実施形態では、必要とするヒトにおいて癌細胞の増殖を阻害する方法であって、前記ヒトに有効量のＩ型タンパク質アルギニンメチルトランスフェラーゼ（Ｉ型ＰＲＭＴ）阻害剤を投与し、それにより、前記ヒトにおける癌細胞の増殖を阻害することを含んでなる方法が提供され、ここで、癌細胞は、５−メチルチオアデノシンホスホリラーゼ（ＭＴＡＰ）に突然変異を有し、かつ／または対照に比べてＭＴＡＰポリヌクレオチドもしくはポリペプチドのレベルが低下し、かつ／または対照に比べてメチルチオアデノシン（ＭＴＡ）のレベルが上昇している。一つの側面において、突然変異は、ＭＴＡＰ欠失である。一つの側面において、ＭＴＡＰポリヌクレオチドもしくはポリペプチドのレベルの低下またはＭＴＡＰにおける突然変異は、癌細胞においてメチルチオアデノシン（ＭＴＡ）のレベルを上昇させ、その結果、タンパク質アルギニンメチルトランスフェラーゼ５（ＰＲＭＴ５）の活性が阻害される。一つの側面において、癌細胞におけるＭＴＡＰポリヌクレオチドもしくはポリペプチドのレベルの低下またはＭＴＡＰにおける突然変異は、Ｉ型ＰＲＭＴ阻害剤に対する癌細胞の感受性を高める。一つの側面において、癌細胞は、固形腫瘍癌細胞または血液癌細胞である。別の側面において、癌細胞は、リンパ腫細胞、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞、腎臓癌細胞、黒色腫細胞、乳癌細胞、膀胱癌細胞、結腸癌細胞、肺癌細胞、または前立腺癌細胞である。一つの側面において、Ｉ型ＰＲＭＴ阻害剤は、式Ｉ、ＩＩ、Ｖ、またはＶＩの化合物である。一つの側面において、Ｉ型ＰＲＭＴ阻害剤は、化合物Ａである。別の側面において、Ｉ型ＰＲＭＴ阻害剤は、化合物Ｄである。別の実施形態では、必要とするヒトにおいて癌細胞の増殖を阻害する方法であって、前記ヒトに有効量の化合物Ａを投与し、それにより、前記ヒトにおける癌細胞の増殖を阻害することを含んでなる方法が提供され、ここで、癌細胞は、５−メチルチオアデノシンホスホリラーゼ（ＭＴＡＰ）に突然変異を有し、かつ／または対照に比べてＭＴＡＰポリヌクレオチドもしくはポリペプチドのレベルが低下し、かつ／または対照に比べてメチルチオアデノシン（ＭＴＡ）のレベルが上昇している。いくつかの側面では、ＭＴＡＰポリヌクレオチドまたはポリペプチドのレベルは、対照に比べて少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％低下している。いくつかの他の側面では、ＭＴＡのレベルは、対照に比べて少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、３０倍、少なくとも約３５倍、少なくとも約４０倍、少なくとも約４５倍、または少なくとも約５０倍上昇している。
【００６７】
さらに別の実施形態では、本発明は、癌を有するヒトがＩ型タンパク質アルギニンメチルトランスフェラーゼ（Ｉ型ＰＲＭＴ）阻害剤による処置に感受性があるかどうかを予測する方法であって、前記ヒト由来のサンプルにおいて、ａ．５−メチルチオアデノシンホスホリラーゼ（ＭＴＡＰ）ポリヌクレオチドもしくはポリペプチドのレベル、またはｂ．ＭＴＡＰにおける突然変異の存在もしくは不存在を決定することを含んでなる方法を提供し、対照に比べてＭＴＡＰポリヌクレオチドもしくはポリペプチドのレベルの低下、またはＭＴＡＰにおける突然変異の存在が、前記ヒトがＩ型ＰＲＭＴ阻害剤による処置に感受性があることを示す。別の実施形態では、本発明は、癌を有するヒトがＩ型タンパク質アルギニンメチルトランスフェラーゼ（Ｉ型ＰＲＭＴ）阻害剤による処置に感受性があるかどうかを予測する方法であって、前記ヒト由来のサンプルにおいて、ａ．５−メチルチオアデノシンホスホリラーゼ（ＭＴＡＰ）ポリヌクレオチドまたはポリペプチドのレベル、ｂ．ＭＴＡＰにおける突然変異の存在または不存在、およびｃ．メチルチオアデノシン（ＭＴＡ）のレベルのうちいずれか１以上を決定することを含んでなる方法を提供し、ここで、対照に比べてのＭＴＡＰポリヌクレオチドもしくはポリペプチドのレベルの低下および／またはＭＴＡＰにおける突然変異の存在および／または対照に比べてのＭＴＡレベルの上昇は、前記ヒトがＩ型ＰＲＭＴ阻害剤による処置に感受性があることを示す。一つの側面において、突然変異は、ＭＴＡＰ欠失である。一つの側面において、サンプルは、癌細胞を含んでなる。一つの側面では、ａおよびｂの両方が決定される。別の側面では、前記方法は、１以上の付加的抗新生物薬を投与することをさらに含んでなる。一つの側面において、癌は、固形腫瘍または血液癌である。一つの側面において、癌は、リンパ腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、腎臓癌、黒色腫、乳癌、膀胱癌、結腸癌、肺癌、または前立腺癌である。一つの側面において、Ｉ型ＰＲＭＴ阻害剤は、式Ｉ、ＩＩ、Ｖ、またはＶＩの化合物である。一つの側面において、Ｉ型ＰＲＭＴ阻害剤は、化合物Ａである。別の側面において、Ｉ型ＰＲＭＴ阻害剤は、化合物Ｄである。いくつかの側面では、ＭＴＡＰポリヌクレオチドまたはポリペプチドのレベルは、対照に比べて少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％低下している。いくつかの他の側面では、ＭＴＡのレベルは、対照に比べて少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、３０倍、少なくとも約３５倍、少なくとも約４０倍、少なくとも約４５倍、または少なくとも約５０倍上昇している。
【００６８】
別の実施形態では、奏効者として分類されたヒトにおいて癌の処置に使用するためのＩ型ＰＲＭＴ阻害剤が提供され、奏効者は前記ヒト由来のサンプルにおいて５−メチルチオアデノシンホスホリラーゼ（ＭＴＡＰ）における突然変異の存在、または対照に比べてのＭＴＡＰポリヌクレオチドもしくはポリペプチドのレベルの低下、または対照に比べてのメチルチオアデノシン（ＭＴＡ）のレベルの上昇を特徴とする。一つの側面において、突然変異は、ＭＴＡＰ欠失である。一つの側面において、サンプルは、癌細胞を含んでなる。一つの側面において、奏効者は、５−メチルチオアデノシンホスホリラーゼ（ＭＴＡＰ）における突然変異の存在を特徴とする。別の側面において、奏効者は、５−メチルチオアデノシンホスホリラーゼ（ＭＴＡＰ）における突然変異の存在および対照に比べてのＭＴＡＰポリヌクレオチドまたはポリペプチドのレベルの低下を特徴とする。さらに別の側面では、奏効者は、前記ヒト由来のサンプルにおいて、５−メチルチオアデノシンホスホリラーゼ（ＭＴＡＰ）における突然変異の存在、対照に比べてのＭＴＡＰポリヌクレオチドまたはポリペプチドのレベルの低下、ならびに対照に比べてのメチルチオアデノシン（ＭＴＡ）のレベルの低下を特徴とする。いくつかの側面では、ＭＴＡＰポリヌクレオチドまたはポリペプチドのレベルは、対照に比べて少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％低下している。いくつかの他の側面では、ＭＴＡのレベルは、対照に比べて少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、３０倍、少なくとも約３５倍、少なくとも約４０倍、少なくとも約４５倍、または少なくとも約５０倍上昇している。別の側面において、前記方法は、１以上の付加的抗新生物薬を投与することをさらに含んでなる。一つの側面において、癌は、固形腫瘍または血液癌である。一つの側面において、癌は、リンパ腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、腎臓癌、黒色腫、乳癌、膀胱癌、結腸癌、肺癌、または前立腺癌である。一つの側面において、Ｉ型ＰＲＭＴ阻害剤は、式Ｉ、ＩＩ、Ｖ、またはＶＩの化合物である。一つの側面において、Ｉ型ＰＲＭＴ阻害剤は、化合物Ａである。別の側面において、Ｉ型ＰＲＭＴ阻害剤は、化合物Ｄである。一つの実施形態では、奏効者として分類されたヒトにおいて癌の処置に使用するための化合物Ａが提供され、ここで、奏効者は、前記ヒト由来のサンプルにおいて、５−メチルチオアデノシンホスホリラーゼ（ＭＴＡＰ）における突然変異の存在、または対照に比べてのＭＴＡＰポリヌクレオチドもしくはポリペプチドのレベルの低下、または対照に比べてのメチルチオアデノシン（ＭＴＡ）のレベルの低下を特徴とする。一つの実施形態では、奏効者として分類されたヒトにおいて癌の処置に使用するための化合物Ａが提供され、ここで、奏効者は、前記ヒト由来のサンプルにおいて、ＭＴＡＰ欠失の存在を特徴とする。
【００６９】
別の実施形態では、本発明は、Ｉ型ＰＲＭＴ阻害剤に応答する癌の治療／診断においてバイオマーカーとして使用するための５−メチルチオアデノシンホスホリラーゼ（ＭＴＡＰ）における突然変異を提供する。一つの実施形態では、本発明は、Ｉ型ＰＲＭＴ阻害剤に応答する癌の治療／診断においてバイオマーカーとして使用するためのＭＴＡＰ欠失突然変異を提供する。別の実施形態では、本発明は、化合物Ａに応答する癌の治療／診断においてバイオマーカーとして使用するための５−メチルチオアデノシンホスホリラーゼ（ＭＴＡＰ）における突然変異を提供する。一つの実施形態では、本発明は、化合物Ａに応答する癌の治療／診断においてバイオマーカーとして使用するためのＭＴＡＰ欠失突然変異を提供する。
【００７０】
別の実施形態では、本発明は、診断法において使用するための５−メチルチオアデノシンホスホリラーゼ（ＭＴＡＰ）の突然変異を提供する。一つの実施形態では、本発明は、診断法において使用するためのＭＴＡＰ欠失突然変異を提供する。別の実施形態では、本発明は、療法において使用するための５−メチルチオアデノシンホスホリラーゼ（ＭＴＡＰ）における突然変異を提供する。一つの実施形態では、本発明は、療法において使用するためのＭＴＡＰ欠失突然変異を提供する。
【００７１】
用語「ポリペプチド」および「タンパク質」は互換的に使用され、本明細書では、天然タンパク質、フラグメント、ペプチド、またはポリペプチド配列の類似体を指す一般用語として使用される。ゆえに、天然タンパク質、フラグメント、および類似体は、ポリペプチド属の種である。
【００７２】
用語「ポリヌクレオチド」は、本明細書に言及される場合、少なくとも１０塩基長のポリマー形態のヌクレオチド、リボヌクレオチドもしくはデオキシヌクレオチドのいずれかまたはいずれかのタイプのヌクレオチドの修飾形態を意味する。この用語には一本鎖形態および二本鎖形態のＤＮＡが含まれる。
【００７３】
本明細書で使用する場合、「ＭＴＡＰ」または「５−メチルチオアデノシンホスホリラーゼ」は、メチルチオアデノシン（ＭＴＡ）のアデニンおよび５−メチルチオリボース−１−リン酸への可逆的リン酸化を触媒するタンパク質（受託番号：ＵｎｉｐｒｏｔＫＢ−Ｑ１３１２６（ＭＴＡＰ＿ＨＵＭＡＮ））である。ＵｎｉｐｒｏｔＫＢ−Ｑ１３１２６−１（アイソフォーム１）に示されるＭＴＡＰの配列を以下に再現する。
【化１２】
2020510618.tif 000015
【００７４】
本明細書で使用する場合、「ＭＴＡＰポリヌクレオチド」は、ＭＴＡＰポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを意味する。例示的ＭＴＡＰポリヌクレオチド配列は、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００２４５１．３に見出すことができる。ＮＭ＿００２４５１．３に示されている配列を以下に再現する。
【化１３】
2020510618.tif 000016
2020510618.tif 000017
2020510618.tif 000018
【００７５】
「メチルチオアデノシン」または「ＭＴＡ」もしくは「５−メチルチオアデノシン」は、以下に示される構造を有する化合物を意味する。
【化１４】
2020510618.tif 000019
【００７６】
サンプル中のＭＴＡのレベルは、当技術分野で周知のいくつかの方法によって測定することができる。例えば、サンプルのＭＴＡレベルは、液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ−ＭＳ）を用いて測定することができる。ＬＣ−ＭＳを用いたＭＴＡレベルの測定は、Mavrakis, K. J. et al., Disordered methionine metabolism in MTAP/CDKN2A-deleted cancers leads to dependence on PRMT5. Science 351, 1208-1213, doi:10.1126/science.aad5944 (2016)に記載されている。
【００７７】
ポリペプチドまたはポリペプチドをコードする遺伝子における「突然変異」およびその文法的な変形形態は、１以上の対立遺伝子変異体、スプライス変異体、誘導体変異体、置換変異体、欠失変異体、および／または挿入変異体、融合ポリペプチド、相同分子種、および／または種間同族体を有する、ポリペプチドまたはポリペプチドをコードする遺伝子を意味する。例として、ＭＴＡＰの少なくとも１つの突然変異は、ポリペプチドもしくはそのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの配列の一部または全部(part of all)が存在しないか、または細胞内で産生されるＭＴＡＰタンパク質のうち少なくとも１種類が細胞内で発現されないＭＴＡＰを含むと考えられる。例えば、ＭＴＡＰタンパク質は細胞により末端切断型で産生されてもよく、末端切断型の配列は、末端切断の配列に関して野生型であり得る。欠失は、遺伝子または遺伝子によりコードされるタンパク質の全部または一部の不存在を意味し得る。ＭＴＡＰ突然変異はまた、ポリヌクレオチドの一塩基、または単一アミノ酸置換における突然変異も意味する。加えて、細胞内で発現される、または細胞により発現されるタンパク質には、例えば単一アミノ酸において突然変異を受けているものがあるが、同じ細胞内で産生される同じタンパク質の他のコピーは野生型であり得る。
【００７８】
突然変異は、ポリヌクレオチドまたは翻訳されたタンパク質において、当技術分野で周知のいくつかの方法によって検出することができる。これらの方法には、限定されるものではないが、シークエンシング、ＲＴ−ＰＣＲ、およびｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション、例えば、蛍光ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）、抗体検出、タンパク質分解シークエンシングなどが含まれる。ＭＴＡＰにおいて突然変異、例えば、ＭＴＡＰ欠失を検出する方法は当業者に周知であり、本明細書の詳細な説明および実施例に記載される。ＭＴＡＰポリヌクレオチドまたはポリペプチドのレベルの低下を決定する方法は当技術分野で周知であり、実施例に示される。これらの方法は、ＭＴＡＰポリヌクレオチドに特異的なプライマーまたはＭＴＡＰポリペプチドに特異的な抗体の使用を含み得る。
【００７９】
１以上の突然変異を検査または決定するためのサンプル、例えば、生体サンプルは、タンパク質、ヌクレオチド、細胞ブレブまたは成分、血清、細胞、血液、血液成分、尿および唾液の群から選択することができる。突然変異の検査は、当技術分野で公知であり、かつ／または本明細書に記載されるいくつかの技術によって行うことができる。いくつかの実施形態では、サンプルは、１以上の癌細胞を含有する。
【００８０】
対照は、ヒト由来の匹敵細胞、ヒト由来の匹敵組織、腫瘍と同じ起源であるが野生型ＭＴＡＰを有することが知られている細胞、または同じ起源の非癌性細胞もしくは野生型ＭＴＡＰを有する細胞に見られるものと相関がある考案対照など、当業者が選択するであろういずれのものであってもよい。
【００８１】
遺伝子もしくはＰＣＲ産物またはそのフラグメントまたは一部を含む核酸の配列は、当技術分野で公知のいずれの方法によって配列決定してもよい（例えば、化学シークエンシングまたは酵素シークエンシング）。ＤＮＡの「化学シークエンシング」は、個々の塩基特異的反応を用いてＤＮＡがランダムに切断されるMaxam and Gilbert (1977) (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74:560)の方法などの方法を表し得る。ＤＮＡの「酵素シークエンシング」は、Sanger (Sanger, et al., (1977) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74:5463)の方法などの方法を表し得る。
【００８２】
従来の分子生物学、微生物学、およびシークエンシング技術を含む組換えＤＮＡ技術は当業者に周知である。このような技術は文献で十分に説明されている。例えば、Sambrook, Fritsch & Maniatis, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 第2版 (1989) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (本明細書では、「Sambrook, et al., 1989」); DNA Cloning: A Practical Approach, Volumes I and II (D. N. Glover ed. 1985); Oligonucleotide Synthesis (M. J. Gait ed. 1984); Nucleic Acid Hybridization (B. D. Hames & S. J. Higgins編 (1985)); Transcription And Translation (B. D. Hames & S. J. Higgins編(1984)); Animal Cell Culture (R. I. Freshney編(1986)); Immobilized Cells And Enzymes (IRL Press, (1986)); B. Perbal, A Practical Guide To Molecular Cloning (1984); F. M. Ausubel, et al. (編), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc. (1994)参照。
【００８３】
ペプチド核酸（ＰＮＡ）親和性アッセイは、伝統的なハイブリダイゼーションアッセイの派生法である(Nielsen et al., Science 254:1497-1500 (1991); Egholm et al., J. Am. Chem. Soc. 114:1895-1897 (1992); James et al., Protein Science 3:1347-1350 (1994))。ＰＮＡは、ワトソン−クリック塩基対形成規則に従う構造的ＤＮＡ模倣物であり、標準的なＤＮＡハイブリダイゼーションアッセイで使用される。ＰＮＡは、ＰＮＡ／ＤＮＡのミスマッチはＤＮＡ／ＤＮＡのミスマッチよりも脱安定化が大きく、相補的ＰＮＡ／ＤＮＡ鎖は相補的ＤＮＡ／ＤＮＡ鎖よりも強い結合を形成するので、ハイブリダイゼーションアッセイにより高い特異性を示す。
【００８４】
ＤＮＡマイクロアレイは、遺伝子のバリエーションおよび多形を検出するために開発された(Taton et al., Science 289:1757-60, 2000; Lockhart et al., Nature 405:827-836 (2000); Gerhold et al., Trends in Biochemical Sciences 24:168-73 (1999); Wallace, R. W., Molecular Medicine Today 3:384-89 (1997); Blanchard and Hood, Nature Biotechnology 149:1649 (1996))。ＤＮＡマイクロアレイは、高速ロボット工学によってガラスまたはナイロン基質上に組み立てられ、既知の特性を有するＤＮＡフラグメント（「プローブ」）を含む。マイクロアレイは、伝統的な塩基対合規則に基づいて既知のＤＮＡフラグメントと未知のＤＮＡフラグメント（「標的」）をマッチさせるために使用される。
【００８５】
一つの実施形態では、請求項１のａおよびｂのうち１または複数を検出するためのキットと、請求項１のａまたはｂのうち１つまたは複数を決定するための手段とを含んでなる癌の処置のためのキットが提供される。一つの側面において、それらの手段は、プライマー、プローブ、および抗体からなる群から選択される。
【００８６】
オリゴヌクレオチドプローブ、またはプローブは、一般に約８ヌクレオチド〜数百ヌクレオチドの長さの範囲の核酸分子である。このような分子は一般に、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で標的核酸配列とハイブリダイズすることによってサンプル中のそのような標的核酸配列を同定するために使用される。
【００８７】
本明細書に言及される用語「オリゴヌクレオチド」は、天然型および非天然型オリゴヌクレオチド結合によって相互に連結された天然型および修飾型のヌクレオチドを含む。オリゴヌクレオチドは、一般に２００塩基以下の長さを含んでなるポリヌクレオチドサブセットである。好ましくは、オリゴヌクレオチドは、１０〜６０塩基長、最も好ましくは、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０〜４０塩基長である。オリゴヌクレオチドは通常、例えばプローブ用には一本鎖であるが、例えば遺伝子突然変異体の構築に使用するためには、オリゴヌクレオチドは二本鎖であってよい。オリゴヌクレオチドは、センスまたはアンチセンスオリゴヌクレオチドのいずれかであり得る。
【００８８】
ＰＣＲプライマーもまた核酸配列であるが、ＰＣＲプライマーは一般に、ポリメラーゼ連鎖反応に使用されるかなり短いオリゴヌクレオチドである。ＰＣＲプライマーおよびハイブリダイゼーションプローブは、標的配列からの配列情報を用い、当業者により容易に開発および作製が可能である（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，前掲またはＧｌｉｃｋら，前掲参照）。
【００８９】
一つの実施形態では、本発明は、ヒトにおける癌の処置に使用するためのＩ型ＰＲＭＴ阻害剤またはその薬学上許容可能な塩を含んでなる医薬組成物を提供し、ここで、前記ヒト由来の少なくとも第１のサンプルが、ＭＴＡＰにおいて突然変異を有すること、対照に比べてＭＴＡＰポリヌクレオチドもしくはポリペプチドのレベルが低下していること、または両方が決定される。
【００９０】
一つの実施形態では、ヒトにおける癌の知慮のための薬剤の製造におけるＩ型ＰＲＭＴ阻害剤の使用が提供され、ここで、前記ヒト由来の１以上のサンプルが、ＭＴＡＰにおいて突然変異を有すること、対照に比べてＭＴＡＰポリヌクレオチドもしくはポリペプチドのレベルが低下していること、または両方が決定される。
【００９１】
一つの側面において、癌は、頭頸部癌、乳癌、肺癌、結腸癌、卵巣癌、前立腺癌、神経膠腫、膠芽腫、星状細胞腫、多形性膠芽腫、バナヤン−ゾナナ症候群、カウデン病、レルミット−デュクロス病、炎症性乳癌、ウィルムス腫瘍、ユーイング肉腫、横紋筋肉腫、脳室上衣細胞腫、髄芽細胞腫、腎臓癌、肝臓癌、黒色腫、膵臓癌、肉腫、骨肉腫、骨の巨細胞腫瘍、甲状腺癌、リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、慢性骨髄性(myelogenous)白血病、慢性リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性(myelogenous)白血病、ＡＭＬ、慢性好中球性白血病、急性リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、形質細胞腫、免疫芽球性大細胞白血病、マントル細胞白血病、多発性骨髄腫  巨核芽球性白血病、多発性骨髄腫、急性巨核球性白血病、前骨髄球性白血病、赤白血病、悪性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、リンパ芽球性Ｔ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、神経芽腫、膀胱癌、尿路上皮癌、外陰癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、中皮腫、食道癌、唾液腺癌、肝細胞癌、胃癌、鼻咽頭癌、頬粘膜癌、口腔癌、ＧＩＳＴ（消化管間質腫瘍）、および精巣癌から選択される。
【００９２】
一つの側面において、本発明の方法は、１以上の付加的抗新生物薬を前記ヒトに投与することをさらに含んでなる。
【００９３】
一つの側面において、前記ヒトは固形腫瘍を有する。一つの側面において、腫瘍は、頭頸部癌、胃癌、黒色腫、腎細胞癌（ＲＣＣ）、食道癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、大腸癌、卵巣癌および膵臓癌から選択される。別の側面において、前記ヒトは、びまん性大Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、多発性骨髄腫、慢性リンパ芽球性白血病(chronic lyphomblastic leukemia)（ＣＬＬ）、濾胞性リンパ腫、急性骨髄性白血病および慢性骨髄性白血病などの液性腫瘍を有する。
【００９４】
本開示はまた、脳癌（神経膠腫）、膠芽腫、バナヤン−ゾナナ症候群、カウデン病、レルミット−デュクロス病、乳癌、炎症性乳癌、ウィルムス腫瘍、ユーイング肉腫、横紋筋肉腫、脳室上衣細胞腫、髄芽細胞腫、結腸癌、頭頸部癌、腎臓癌、肺癌、肝臓癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、肉腫、骨肉腫、骨の巨細胞腫瘍、甲状腺癌、リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性好中球性白血病、急性リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、形質細胞腫、免疫芽球性大細胞白血病、マントル細胞白血病、多発性骨髄腫  巨核芽球性白血病、多発性骨髄腫、急性巨核球性白血病、前骨髄球性白血病、赤白血病、悪性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、リンパ芽球性Ｔ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、神経芽腫、膀胱癌、尿路上皮癌、肺癌、外陰癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、中皮腫、食道癌、唾液腺癌、肝細胞癌、胃癌、鼻咽頭癌、頬粘膜癌、口腔癌、ＧＩＳＴ（消化管間質腫瘍）および精巣癌から選択される癌を処置するまたはその重篤度を軽減するための方法に関する。
【００９５】
「処置する」およびその文法上の変形は、本明細書で使用する場合、治療的療法を意味する。特定の病態に関して、処置するとは、（１）病態、もしくは病態の生物学的徴候の１以上の寛解または予防、（２）（ａ）病態に繋がる、もしくは病態の原因となる生物学的カスケードの１以上の点への、または（ｂ）病態の生物学的徴候の１以上への干渉、（３）病態もしくはその処置に関連する症状、影響もしくは副作用の１以上の軽減、または（４）病態、もしくは病態の生物学的徴候の１以上の進行の遅延を意味する。予防的療法もまた、企図される療法である。当業者は、「予防」が絶対的な用語ではないことを認識するであろう。医学では、「予防」は、病態またはその生物学的徴候の可能性もしくは重篤度を実質的に引き下げるため、またはそのような病態もしくはその生物学的徴候の発症を遅延させるための薬物の予防的投与を指すと理解される。予防的療法は、例えば、対象が癌を発症する高いリスクがあると考えられる場合、例えば、対象が癌の強い家族歴を有する場合または対象が発癌物質に曝されていた場合に適当である。
【００９６】
「有効量」は、例えば、研究者または医師により求められる組織、系、動物またはヒトの生物学的または医学的応答を惹起する薬物または医薬剤の量を意味する。さらに、用語「治療上有効な量」は、そのような量を受容しなかった対応する対照に比べて、治療、治癒、予防の改善、または疾患、障害、もしくは副作用の改善、または疾患もしくは障害の進行速度の低減をもたらすいずれの量も意味する。この用語はまた、正常な生理学的機能を増進するために有効な量もその範囲内に含む。
【００９７】
本明細書で使用する場合、「癌」、「新生物」および「腫瘍」という用語は、単数形または複数のいずれかで互換的に使用され、それらを宿主生物に対して病的にする悪性化を受けた細胞を指す。原発性癌細胞は、十分に確立された技術、特に、組織学的検査によって非癌性細胞から容易に識別することができる。癌細胞の定義は、本明細書で使用する場合、原発性癌細胞だけでなく、癌細胞祖先に由来するいずれの細胞も含む。これには、転移癌細胞、ならびに癌細胞に由来するｉｎ  ｖｉｔｒｏ培養物および細胞株が含まれる。通常固形腫瘍として発現する癌の種類に言及する場合、「臨床上検出可能な」腫瘍は、例えば、コンピューター断層撮影法（ＣＴ）スキャン、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、Ｘ線、超音波もしくは身体検査時の触診、および／または患者から取得可能なサンプル中の１以上の癌特異的抗原の発現のための検出可能であるものなどの手段によって、腫瘍塊に基づいて検出可能なものである。腫瘍は、造血系（または血液性または血液のまたは血液関連）癌、例えば、血液細胞もしくは免疫細胞由来の癌であり得、これは「液性腫瘍」とも呼ばれることがある。血液性腫瘍に基づく臨床病態の特定の例としては、慢性骨髄球性白血病、急性骨髄球性白血病、慢性リンパ球性白血病および急性リンパ球性白血病などの白血病；多発性骨髄腫、ＭＧＵＳおよびワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症などの形質細胞悪性腫瘍；非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫などのリンパ腫などが挙げられる。
【００９８】
癌は、異常な数の芽細胞または望まれない細胞増殖が存在するか、またはリンパ性および骨髄性(myeloid)悪性腫瘍の両方を含む血液癌として診断されるいずれの癌であってもよい。骨髄性(Myeloid)悪性腫瘍としては、限定されるものではないが、急性骨髄性(myeloid)（または骨髄球性または骨髄性(myelogenous)または骨髄芽球性）白血病（未分化型または分化型）、急性前骨髄性（promyeloid）（または前骨髄球性または前骨髄性(promyelogenous)または前骨髄芽球性）白血病、急性骨髄単球性（または骨髄単芽球性）白血病、急性単球性（または単芽球性）白血病、赤白血病および巨核球性（または巨核芽球性）白血病が挙げられる。これらの白血病は、急性骨髄性(myeloid)（または骨髄球性または骨髄性(myelogenous)）白血病（ＡＭＬ）と総称される場合がある。骨髄性悪性腫瘍としてはまた、限定されるものではないが、慢性骨髄性(myelogenous)（または骨髄性(myeloid)）白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、本態性血小板血症（または血小板増加症）、および真性赤血球増加症(polcythemia vera)（ＰＣＶ）を含む骨髄増殖性疾患（ＭＰＤ）が含まれる。骨髄性(Myeloid)悪性腫瘍にはまた、難治性貧血（ＲＡ）、芽球増加を伴う難治性貧血（ＲＡＥＢ）、および移行期の芽球増加を伴う難治性貧血（ＲＡＥＢＴ）とも呼ばれる骨髄異形成（または骨髄異形成症候群またはＭＤＳ）；ならびに特発性骨髄化生を伴うまたは伴わない骨髄線維症（ＭＦＳ）も含まれる。
【００９９】
造血系癌としてはまた、リンパ節、脾臓、骨髄、末梢血、および／または節外部位に影響を及ぼし得るリンパ性悪性腫瘍が含まれる。リンパ性癌としては、限定されるものではないが、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（Ｂ−ＮＨＬ）を含むＢ細胞悪性腫瘍が含まれる。Ｂ−ＮＨＬは、インドレント（または低悪性度）、中悪性度（またはアグレッシブ）または高悪性度（高度アグレッシブ）であり得る。インドレントＢ細胞リンパ腫には、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）；小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）；辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）（節性ＭＺＬ、節外性ＭＺＬ、脾ＭＺＬおよび絨毛リンパ球を伴う脾ＭＺＬを含む)；リンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＰＬ）ならびに粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴまたは節外性辺縁帯）リンパ腫が含まれる。中悪性度Ｂ−ＮＨＬとしては、白血病性浸潤を伴うまたは伴わないマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、びまん性大細胞型リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性大細胞（またはグレード３またはグレード３Ｂ）リンパ腫、および原発性縦隔リンパ腫（ＰＭＬ）が含まれる。高悪性度Ｂ−ＮＨＬとしては、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、バーキット様リンパ腫、小型非切れ込み核細胞性リンパ腫（ＳＮＣＣＬ）およびリンパ芽球性リンパ腫が含まれる。その他のＢ−ＮＨＬとしては、免疫芽球性リンパ腫（または免疫細胞腫）、原発性滲出液リンパ腫、ＨＩＶ関連（またはＡＩＤＳ関連）リンパ腫、および移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）またはリンパ腫が含まれる。Ｂ細胞悪性腫瘍にはまた、限定されるものではないが、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、前リンパ球性白血病（ＰＬＬ）、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症（ＷＭ）、有毛細胞白血病（ＨＣＬ）、大顆粒リンパ球（ＬＧＬ）白血病、急性リンパ性（またはリンパ球性またはリンパ芽球性）白血病、およびキャッスルマン病も含まれる。ＮＨＬにはまた、限定されるものではないが、非特定型Ｔ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＯＳ）、末梢性Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ）、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）、血管免疫芽球性リンパ性障害（ＡＩＬＤ）、鼻型ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞／Ｔ細胞リンパ腫、ガンマ／デルタリンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、菌状息肉腫、およびセザリー症候群を含むＴ細胞非ホジキンリンパ腫（Ｔ−ＮＨＬ）も含まれ得る。
【０１００】
造血系癌にはまた、古典的ホジキンリンパ腫、結節性硬化型ホジキンリンパ腫、混合細胞型ホジキンリンパ腫、リンパ球優位型（ＬＰ）ホジキンリンパ腫、結節性ＬＰホジキンリンパ腫、およびリンパ球減少型ホジキンリンパ腫を含むホジキンリンパ腫（または疾患）も含まれる。造血系癌にはまた、くすぶり型ＭＭを含む多発性骨髄腫（ＭＭ）、意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症(monoclonal gammopathy of undetermined (or unknown or unclear) significance)（ＭＧＵＳ）、形質細胞腫（骨、髄外）、リンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＰＬ）、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症、形質細胞白血病、および原発性アミロイドーシス（ＡＬ）などの形質細胞疾患または癌も含まれる。造血系癌にはまた、多形核白血球（または好中球）、好塩基球、好酸球、樹状細胞、血小板、赤血球およびナチュラルキラー細胞を含むさらなる造血系細胞のその他の癌も含まれ得る。本明細書で「造血系細胞組織」と呼ばれる造血系細胞を含む組織としては、骨髄；末梢血；胸腺；および末梢リンパ組織、例えば、脾臓、リンパ節、粘膜に関連するリンパ組織（例えば、消化管関連リンパ組織）、扁桃、パイエル板および虫垂、ならびに他の粘膜、例えば、気管支内膜に関連するリンパ組織が含まれる。
【０１０１】
一般に、処置される感受性腫瘍に対して活性を有するいずれの抗新生物薬も、本発明における癌の処置において併用投与され得る。このような薬剤の例は、Cancer Principles and Practice of Oncology by V.T. Devita, T.S. Lawrence, and S.A. Rosenberg (編者), 第10版(2014年12月5日), Lippincott Williams & Wilkins Publishersに見出すことができる。当業者は、薬物および関与する癌の特定の特徴に基づいてどの薬剤組合せが有用であるかを識別することができる。本発明において有用な典型的な抗新生物薬としては、限定されるものではないが、ジテルペノイドおよびビンカアルカロイドなどの抗微小管薬または有糸分裂阻害剤；白金錯体；ナイトロジェンマスタード、オキサザホスホリン、アルキルスルホネート、ニトロソ尿素、およびトリアゼンなどのアルキル化剤；アクチノマイシン、アントラサイクリン、およびブレオマイシンなどの抗生剤；カンプトテシンなどのトポイソメラーゼＩ阻害剤；エピポドフィロトキシンなどのトポイソメラーゼＩＩ阻害剤；プリンおよびピリミジン類似体ならびに葉酸拮抗化合物などの代謝拮抗物質；ホルモンおよびホルモン類似体；シグナル伝達経路阻害剤；非受容体型チロシンキナーゼ血管新生阻害剤；免疫療法薬；アポトーシス促進薬；細胞周期シグナル伝達阻害剤；プロテアソーム阻害剤；熱ショックタンパク質阻害剤；癌代謝阻害剤；ならびに遺伝子改変Ｔ細胞などの癌遺伝子療法薬が含まれる。
【０１０２】
本方法または組合せとの組合せまたは併用投与に使用するためのさらなる１または複数の有効成分の例として抗新生物薬がある。抗新生物薬の例としては、限定されるものではないが、化学療法薬；免疫調節剤(immuno-modulatory agents)；免疫調節剤(immune-modulators)；および免疫刺激性アジュバントが挙げられる。
【０１０３】
微小管阻害剤または有糸分裂阻害剤は、細胞周期のＭ期、すなわち有糸分裂期の間に腫瘍細胞の微小管に対して活性である細胞周期特異的薬剤である。微小管阻害剤の例としては、限定されるものではないが、ジテルペノイドおよびビンカアルカロイドが挙げられる。
【０１０４】
ジテルペノイドは、天然源に由来し、細胞周期のＧ２／Ｍ期に作用する細胞周期特異的抗癌剤である。ジテルペノイドは、微小管のβ−チューブリンサブユニットと結合することによりこのタンパク質を安定化させると考えられている。その後、タンパク質の分解が阻害され、有糸分裂が停止し、細胞死をたどると思われる。ジテルペノイドの例としては、限定されるものではないが、パクリタキセルおよびその類似体であるドセタキセルが挙げられる。
【０１０５】
パクリタキセル、５β，２０−エポキシ−１，２α，４，７β，１０β，１３α−ヘキサ−ヒドロキシタクス−１１−エン−９−オン４，１０−ジアセテート２−ベンゾエートの（２Ｒ，３Ｓ）−Ｎ−ベンゾイル−３−フェニルイソセリンとの１３−エステルは、タイヘイヨウイチイ(Taxus brevifolia)から単離された天然ジテルペン生成物であり、注射液タキソール(TAXOL)（登録商標）として市販されている。パクリタキセルは、テルペンのタキサンファミリーのメンバーである。パクリタキセルは、１９７１年にWani M.C., et al., J. Am. Chem. Soc., 93(9): 2325-2327 (1971)によって初めて単離され、彼らは化学的方法およびＸ線結晶学的方法によってその構造を同定した。その活性の一つの機序は、チューブリンと結合し、それにより癌細胞増殖を阻害する能力に関する(Schiff P.B. and Horwitz S.B., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77: 1561-1565 (1980); Schiff P.B., et al., Nature, 277: 665-667 (1979); Kumar N., J. Biol. Chem., 256: 10435-10441 (1981))。数種のパクリタキセル誘導体の合成および抗癌活性に関する総説としては、D. G. I. Kingston et al., Studies in Organic Chemistry vol. 26, entitled “New Trends in Natural Products Chemistry 1986”, Atta-ur-Rahman, P.W. Le Quesne, Eds. (Elsevier, Amsterdam, 1986) pp 219-235を参照。
【０１０６】
パクリタキセルは、米国において難治性卵巣癌の治療(Markman M., Yale J. Biol. Med., 64(6): 583-590 (1991); McGuire W.P., et al., Ann. Intern. Med., 111(4): 273-279 (1989))および乳癌の治療(Holmes F.A., et al., J. Natl. Cancer Inst., 83(24): 1797-1805 (1991))を目的とした臨床使用に承認されている。パクリタキセルは、皮膚癌(Einzig A.I., et. al., Cancer Treat. Res., 58: 89-100 (1991))および頭頸部癌(Forastiere A.A., Semin. Oncol., 20(4 Suppl. 3): 56-60 (1993)における新生物の治療のための潜在的候補である。この化合物はまた、多発性嚢胞腎疾患(Woo D.D., et. al., Nature, 368(6473): 750-753 (1994))、肺癌およびマラリアの治療の可能性も示す。パクリタキセルによる患者の治療は、閾値濃度（５０ｎＭ）を超える投与期間に関連して(Kearns, C.M., et. al., Semin. Oncol., 22(3 Suppl. 6): 16-23 (1995))骨髄抑制をもたらす(Ignoffo R.J. et. al, Cancer Chemotherapy Pocket Guide, (1998))。
【０１０７】
ドセタキセル、（２Ｒ，３Ｓ）−Ｎ−カルボキシ−３−フェニルイソセリン，Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルエステルの５β−２０−エポキシ−１，２α，４，７β，１０β，１３α−ヘキサヒドロキシタクス−１１−エン−９−オン４−アセテート２−ベンゾエートとの１３−エステルの三水和物は、注射液としてタキソテール(TAXOTERE)（登録商標）として市販されている。ドセタキセルは、乳癌の治療に指示される。ドセタキセルは、ヨーロッパイチイの針葉から抽出した天然の前駆物質１０−デアセチル−バッカチンＩＩＩを使用して製造された、パクリタキセルの半合成誘導体である。ドセタキセル治療の主要な用量制限毒性は、好中球減少症である。
【０１０８】
ビンカアルカロイドは、ニチニチソウ植物由来の細胞周期特異的抗新生物薬である。ビンカアルカロイドは、チューブリンと特異的に結合することによって細胞周期のＭ期（有糸分裂）に作用する。その結果、結合されたチューブリン分子は、重合して微小管になることができない。有糸分裂は中期で停止し、細胞死をたどると考えられている。ビンカアルカロイドの例としては、限定されるものではないが、ビンブラスチン、ビンクリスチン、およびビノレルビンが挙げられる。
【０１０９】
ビンブラスチン、硫酸ビンカロイコブラスチンは、注射液としてベルバン(VELBAN)（登録商標）として市販されている。ビンブラスチンは、種々の固形腫瘍の第二選択療法として指示される可能性があるが、精巣癌、ならびにホジキン病、リンパ球性および組織球性リンパ腫を含む種々のリンパ腫の治療に主として指示される。骨髄抑制がビンブラスチンの用量制限副作用である。
【０１１０】
ビンクリスチン、ビンカロイコブラスチンの２２−オキソ−硫酸塩は、注射液としてオンコビン(ONCOVIN)（登録商標）として市販されている。ビンクリスチンは、急性白血病の治療に指示されており、ホジキンおよび非ホジキン悪性リンパ腫の治療計画の中でも使用されている。脱毛症および神経作用がビンクリスチンの最も一般的な副作用であり、より程度は低いが、骨髄抑制および消化管粘膜炎作用が起こる。
【０１１１】
酒石酸ビノレルビンの注射液（ナベルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ）（登録商標））として市販されているビノレルビン、３’，４’−ジデヒドロ−４’−デオキシ−Ｃ’−ノルビンカロイコブラスチン［Ｒ−（Ｒ＊，Ｒ＊）−２，３−ジヒドロキシブタン二酸（１：２）（塩）］は、半合成ビンカアルカロイドである。ビノレルビンは、種々の固形腫瘍、特に、非小細胞肺癌、進行乳癌、およびホルモン不応性前立腺癌の治療に単剤として、またはシスプラチンなどの他の化学療法薬と組み合わせて指示される。骨髄抑制がビノレルビンの最も一般的な用量制限副作用である。
【０１１２】
白金配位錯体は、非細胞周期特異的抗癌剤であり、ＤＮＡと相互作用する。白金錯体は、腫瘍細胞に侵入し、アクア化を受け、ＤＮＡとの鎖内架橋および鎖間架橋を形成し、腫瘍に対して有害な生物学的作用を引き起こす。白金配位錯体の例としては、限定されるものではないが、シスプラチンおよびカルボプラチンが挙げられる。
【０１１３】
シスプラチン、シス−ジアンミンジクロロ白金は、注射液としてプラチノール(PLATINOL)（登録商標）として市販されている。シスプラチンは、主として転移性の精巣癌および卵巣癌ならびに進行膀胱癌の治療に指示される。シスプラチンの主要な用量制限副作用は腎毒性（これは水分補給および利尿により管理できる）、および耳毒性である。
【０１１４】
カルボプラチン、白金、ジアンミン［１，１−シクロブタン−ジカルボキシレート（２−）−Ｏ，Ｏ’］は、注射液としてパラプラチン(PARAPLATIN)（登録商標）として市販されている。カルボプラチンは、主として進行卵巣癌の第一選択および第二選択治療に指示される。骨髄抑制がカルボプラチンの用量制限毒性である。
【０１１５】
アルキル化剤は、非細胞周期特異的抗癌剤(non-phase anti-cancer specific agents)であり、かつ、強力な求電子試薬である。一般に、アルキル化剤は、アルキル化によって、リン酸基、アミノ基、スルフヒドリル基、ヒドロキシル基、カルボキシル基、およびイミダゾール基などのＤＮＡ分子の求核部分を介してＤＮＡと共有結合を形成する。このようなアルキル化によって核酸機能が破壊され細胞死に至る。アルキル化剤の例としては、限定されるものではないが、シクロホスファミド、メルファラン、およびクロラムブシルなどのナイトロジェンマスタード；ブスルファンなどのスルホン酸アルキル；カルムスチンなどのニトロ尿素；ならびにダカルバジンなどのトリアゼンが挙げられる。
【０１１６】
シクロホスファミド、２−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］テトラヒドロ−２Ｈ−１，３，２−オキシアザホスホリン２−オキシド一水和物は、注射液または錠剤としてシトキサン(CYTOXAN)（登録商標）として市販されている。シクロホスファミドは、単剤として、または他の化学療法薬と組み合わせて、悪性リンパ腫、多発性骨髄腫、および白血病の治療に指示される。脱毛症、悪心、嘔吐および白血球減少症がシクロホスファミドの最も一般的な用量制限副作用である。
【０１１７】
メルファラン、４−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］−Ｌ−フェニルアラニンは、注射液または錠剤としてアルケラン(ALKERAN)（登録商標）として市販されている。メルファランは、多発性骨髄腫および切除不能な卵巣上皮癌の待期療法に指示される。骨髄抑制がメルファランの最も一般的な用量制限副作用である。
【０１１８】
クロラムブシル、４−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］ベンゼンブタン酸は、ロイケラン(LEUKERAN)（登録商標）錠剤として市販されている。クロラムブシルは、慢性リンパ性白血病、ならびにリンパ肉腫、巨大濾胞性リンパ腫、およびホジキン病などの悪性リンパ腫の待期療法に指示される。骨髄抑制がクロラムブシルの最も一般的な用量制限副作用である。
【０１１９】
ブスルファン、ジメタンスルホン酸１，４−ブタンジオールは、マイレラン(MYLERAN)（登録商標）錠剤として市販されている。ブスルファンは、慢性骨髄性白血病の待期療法に指示される。骨髄抑制がブスルファンの最も一般的な用量制限副作用である。
【０１２０】
カルムスチン、１，３−［ビス（２−クロロエチル）−１−ニトロソ尿素は、ＢｉＣＮＵ（登録商標）として凍結乾燥物質の単一バイアルとして市販されている。カルムスチンは、脳腫瘍、多発性骨髄腫、ホジキン病、および非ホジキンリンパ腫用に、単剤として、または他の薬剤と組み合わせて、待期療法に指示される。遅延型骨髄抑制がカルムスチンの最も一般的な用量制限副作用である。
【０１２１】
ダカルバジン、５−（３，３−ジメチル−１−トリアゼノ）−イミダゾール−４−カルボキサミドは、材料の単一バイアルとしてＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標）として市販されている。ダカルバジンは、転移性悪性黒色腫の治療、およびホジキン病の第二選択治療に他の薬剤と組み合わせて指示される。悪心、嘔吐、および食欲不振症がダカルバジンの最も一般的な用量制限副作用である。
【０１２２】
抗生物質系抗新生物薬は、非細胞周期特異的薬剤であり、ＤＮＡと結合するかまたはＤＮＡにインターカレートする。このような作用は核酸の通常の機能を破壊し、細胞死に至る。抗生物質系抗新生物薬の例としては、限定されるものではないが、ダクチノマイシンなどのアクチノマイシン；ダウノルビシンおよびドキソルビシンなどのアントラサイクリン；ならびにブレオマイシンが挙げられる。
【０１２３】
ダクチノマイシンは、アクチノマイシンＤとしても知られ、注射液の形態でコスメゲン(COSMEGEN)（登録商標）として市販されている。ダクチノマイシンは、ウィルムス腫瘍および横紋筋肉腫の治療に指示される。悪心、嘔吐、および食欲不振症がダクチノマイシンの最も一般的な用量制限副作用である。
【０１２４】
ダウノルビシン、（８Ｓ−シス−）−８−アセチル−１０−［（３−アミノ−２，３，６−トリデオキシ−α−Ｌ−リクソ−ヘキソピラノシル）オキシ］−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６，８，１１−トリヒドロキシ−１−メトキシ−５，１２ナフタセンジオン塩酸塩は、リポソーム注射形態としてダウノキソーム(DAUNOXOME)（登録商標）として、または注射液としてセルビジン(CERUBIDINE)（登録商標）として市販されている。ダウノルビシンは、急性非リンパ球性白血病および進行ＨＩＶ関連カポジ肉腫の治療における寛解導入に指示される。骨髄抑制がダウノルビシンの最も一般的な用量制限副作用である。
【０１２５】
ドキソルビシン、（８Ｓ，１０Ｓ）−１０−［（３−アミノ−２，３，６−トリデオキシ−α−Ｌ−リクソ−ヘキソピラノシル）オキシ］−８−グリコロイル，７，８，９，１０−テトラヒドロ−６，８，１１−トリヒドロキシ−１−メトキシ−５，１２ナフタセンジオン塩酸塩は、注射可能な形態としてルベックス(RUBEX)（登録商標）またはアドリアマイシンＲＤＦ(ADRIAMYCIN RDF)（登録商標）として市販されている。ドキソルビシンは、主として急性リンパ芽球性白血病および急性骨髄芽球性白血病の治療に指示されるが、いくつかの固形腫瘍およびリンパ腫の治療における有用成分でもある。骨髄抑制がドキソルビシンの最も一般的な用量制限副作用である。
【０１２６】
ブレオマイシン、ストレプトミセス・ヴェルチシルス(Streptomyces verticillus)の株から単離された細胞傷害性グリコペプチド系抗生物薬の混合物は、ベレノキサン(BLENOXANE)（登録商標）として市販されている。ブレオマイシンは、単剤として、または他の薬剤と組み合わせて、扁平上皮癌、リンパ腫、および精巣癌の待期療法に指示される。
肺および皮膚毒性がブレオマイシンの最も一般的な用量制限副作用である。
【０１２７】
トポイソメラーゼＩ阻害剤としては、限定されるものではないが、カンプトテシンが挙げられる。カンプトテシンの細胞傷害活性は、そのトポイソメラーゼＩ阻害活性に関連すると考えられている。カンプトテシンの例としては、限定されるものではないが、イリノテカン、トポテカン、および７−（４−メチルピペラジノ−メチレン）−１０，１１−エチレンジオキシ−２０−カンプトテシンの種々の光学形態が挙げられる。
【０１２８】
イリノテカン、（４Ｓ）−４，１１−ジエチル−４−ヒドロキシ−９−［（４−ピペリジノピペリジノ）カルボニルオキシ］−１Ｈ−ピラノ［３’，４’，６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−３，１４（４Ｈ，１２Ｈ）−ジオン塩酸塩は、注射液カンプトサール(CAMPTOSAR)（登録商標）として市販されている。イリノテカンは、その活性代謝物ＳＮ−３８とともにトポイソメラーゼＩ−ＤＮＡ複合体と結合する、カンプトテシンの誘導体である。細胞傷害性は、トポイソメラーゼＩ：ＤＮＡ：イリノテカンまたはＳＮ−３８の三元複合体と複製酵素との相互作用により引き起こされる回復不能な二本鎖切断の結果として生じると考えられている。イリノテカンは、結腸または直腸の転移性癌の治療に指示される。イリノテカンの用量制限副作用は、好中球減少症を含む骨髄抑制、および下痢を含むＧＩ効果である。
【０１２９】
トポテカン、（Ｓ）−１０−［（ジメチルアミノ）メチル］−４−エチル−４，９−ジヒドロキシ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’，６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−３，１４−（４Ｈ，１２Ｈ）−ジオン一塩酸塩は、注射液ハイカムチン(HYCAMTIN)（登録商標）として市販されている。トポテカンは、トポイソメラーゼＩ−ＤＮＡ複合体と結合して、ＤＮＡ分子のねじれ歪みに応答してトポイソメラーゼＩにより引き起こされる一本鎖切断の再連結を妨げるカンプトテシンの誘導体である。トポテカンは、転移性の卵巣癌および小細胞肺癌の第二選択治療に指示される。トポテカンの用量制限副作用は骨髄抑制、主として好中球減少症である。
【０１３０】
また、ラセミ混合物（Ｒ，Ｓ）形態ならびにＲおよびＳ鏡像異性体を含む、現在開発中の下式Ａ’のカンプトテシン誘導体も注目され、
【化１５】
2020510618.tif 000020
化学名７−（４−メチルピペラジノ−メチレン）−１０，１１−エチレンジオキシ−２０（Ｒ，Ｓ）−カンプトテシン（ラセミ混合物）または７−（４−メチルピペラジノ−メチレン）−１０，１１−エチレンジオキシ−２０（Ｒ）−カンプトテシン（Ｒ鏡像異性体）または７−（４−メチルピペラジノ−メチレン）−１０，１１−エチレンジオキシ−２０（Ｓ）−カンプトテシン（Ｓ鏡像異性体）として知られる。このような化合物ならびに関連化合物は、製造方法を含め、米国特許第６，１００，２７３号、同第６，０６３，９２３号；同第５，３４２，９４７号；同第５，５５９，２３５号；および同第５，４９１，２３７号に記載されている。
【０１３１】
トポイソメラーゼＩＩ阻害剤としては、限定されるものではないが、エピポドフィロトキシンが挙げられる。エピポドフィロトキシンは、マンドレイク植物由来の細胞周期特異的抗新生物薬である。エピポドフィロトキシンは、一般に、トポイソメラーゼＩＩとＤＮＡとの三元複合体を形成してＤＮＡ鎖の切断を引き起こすことによって、細胞周期のＳ期およびＧ２期において細胞に影響を及ぼす。この鎖切断が蓄積し、細胞死をたどる。エピポドフィロトキシンの例としては、限定されるものではないが、エトポシドおよびテニポシドが挙げられる。エピポドフィロトキシンの例としては、限定されるものではないが、エトポシドおよびテニポシドが挙げられる。
【０１３２】
エトポシド、４’−デメチル−エピポドフィロトキシン９［４，６−０−（Ｒ）−エチリデン−β−Ｄ−グルコピラノシド］は、注射液またはカプセル剤としてベプシド(VePESID)（登録商標）として市販されており、一般にＶＰ−１６として知られている。エトポシドは、単剤として、または他の化学療法薬と組み合わせて、精巣癌および非小細胞肺癌の治療に指示される。白血球減少症の罹患率は血小板減少症よりも重篤である傾向がある。
【０１３３】
テニポシド、４’−デメチル−エピポドフィロトキシン９［４，６−０−（Ｒ）−テニリデン−β−Ｄ−グルコピラノシド］は、注射液としてブモン(VUMON)（登録商標）として市販されており、一般にＶＭ−２６として知られている。テニポシドは、単剤として、または他の化学療法薬と組み合わせて、小児における急性白血病の治療に指示される。骨髄抑制がテニポシドの最も一般的な用量制限副作用である。テニポシドは、白血球減少症および血小板減少症の両方を誘発し得る。
【０１３４】
代謝拮抗性抗新生物薬は、ＤＮＡ合成を阻害すること、またはプリンもしくはピリミジン塩基の合成を阻害し、それによりＤＮＡ合成を制限することによって細胞周期のＳ期（ＤＮＡ合成）に作用する、細胞周期特異的抗新生物薬である。その結果、Ｓ期は進行せず、細胞死をたどる。代謝拮抗性抗新生物薬の例としては、限定されるものではないが、フルオロウラシル、メトトレキサート、シタラビン、メルカプトプリン、チオグアニン、およびゲムシタビンが挙げられる。
【０１３５】
５−フルオロウラシル、５−フルオロ−２，４−（１Ｈ，３Ｈ）ピリミジンジオンは、フルオロウラシルとして市販されている。５−フルオロウラシルを投与すると、チミジル酸合成が阻害され、またＲＮＡおよびＤＮＡの両方に組み込まれる。その結果は一般に細胞死である。５−フルオロウラシルは、単剤として、または他の化学療法薬と組み合わせて、乳癌、結腸癌、直腸癌、胃癌、および膵癌の治療に指示される。骨髄抑制および粘膜炎が５−フルオロウラシルの用量制限副作用である。他のフルオロピリミジン類似体としては、５−フルオロデオキシウリジン（フロクスウリジン）および５−フルオロデオキシウリジン一リン酸が挙げられる。
【０１３６】
メトトレキサート、Ｎ−［４［［（２，４−ジアミノ−６−プテリジニル）メチル］メチルアミノ］ベンゾイル］−Ｌ−グルタミン酸は、メトトレキサートナトリウムとして市販されている。メトトレキサートは、プリンヌクレオチドおよびチミジル酸の合成に必要とされるジヒドロ葉酸レダクターゼの阻害を介して、ＤＮＡの合成、修復、および／または複製を阻害することによって、特にＳ期に細胞周期作用を示す。メトトレキサートは、単剤として、または他の化学療法薬と組み合わせて、絨毛癌、髄膜白血病、非ホジキンリンパ腫、ならびに乳癌、頭部癌、頸部癌、卵巣癌、および膀胱癌の治療に指示される。骨髄抑制（白血球減少症、血小板減少症、および貧血）および粘膜炎がメトトレキサート投与の予想される副作用である。
【０１３７】
シタラビン、４−アミノ−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−２（１Ｈ）−ピリミジノンは、シトサール−Ｕ(CYTOSAR-U)（登録商標）として市販されており、一般にＡｒａ−Ｃとして知られている。シタラビンは、成長中のＤＮＡ鎖へのシタラビンの末端組み込みによってＤＮＡ鎖の伸長を阻害することにより、Ｓ期で細胞期特異性を示すと考えられている。シタラビンは、単剤として、または他の化学療法薬と組み合わせて、急性白血病の治療に指示される。他のシチジン類似体としては、５−アザシチジンおよび２’，２’−ジフルオロデオキシシチジン（ゲムシタビン）が挙げられる。シタラビンには、白血球減少症、血小板減少症、および粘膜炎が含まれる。
【０１３８】
メルカプトプリン、１，７−ジヒドロ−６Ｈ−プリン−６−チオン一水和物は、プリントール(PURINETHOL)（登録商標）として市販されている。メルカプトプリンは、現時点でまだ特定されていないメカニズムによってＤＮＡ合成を阻害することにより、Ｓ期で細胞期特異性を示す。メルカプトプリンは、単剤として、または他の化学療法薬と組み合わせて、急性白血病の治療に指示される。骨髄抑制および消化管粘膜炎が高用量でのメルカプトプリンの予想される副作用である。有用なメルカプトプリン類似体はアザチオプリンである。
【０１３９】
チオグアニン、２−アミノ−１，７−ジヒドロ−６Ｈ−プリン−６−チオンは、タブロイド(TABLOID)（登録商標）として市販されている。チオグアニンは、現時点でまだ特定されていないメカニズムによってＤＮＡ合成を阻害することにより、Ｓ期で細胞期特異性を示す。チオグアニンは、単剤として、または他の化学療法薬と組み合わせて、急性白血病の治療に指示される。白血球減少症、血小板減少症、および貧血を含む骨髄抑制がチオグアニン投与の最も一般的な用量制限副作用である。しかしながら、消化管副作用も起こり、用量制限となり得る。他のプリン類似体としては、ペントスタチン、エリスロヒドロキシノニルアデニン、リン酸フルダラビン、およびクラドリビンが挙げられる。
【０１４０】
ゲムシタビン、２’−デオキシ−２’，２’−ジフルオロシチジン一塩酸塩（β−異性体）は、ジェムザール(GEMZAR)（登録商標）として市販されている。ゲムシタビンは、Ｓ期にて、またＧ１／Ｓ境界を通る細胞の進行を遮断することによって、細胞期特異性を示す。ゲムシタビンは、シスプラチンと組み合わせて局所進行非小細胞肺癌の治療に指示され、また単独で局所進行膵癌の治療に指示される。白血球減少症、血小板減少症、および貧血を含む骨髄抑制がゲムシタビン投与の最も一般的な用量制限副作用である。
【０１４１】
ホルモンおよびホルモン類似体は、ホルモンと癌の増殖および／または増殖の欠如との間に関係がある癌を処置するために有用な化合物である。癌処置に有用なホルモンおよびホルモン類似体の例としては、限定されるものではないが、小児の悪性リンパ腫および急性白血病の処置において有用なプレドニゾンおよびプレドニゾロンなどの副腎皮質ステロイド；副腎皮質癌およびエストロゲン受容体を含むホルモン依存性乳癌の処置において有用な、アミノグルテチミドおよびその他のアロマターゼ阻害剤、例えば、アナストロゾール、レトラゾール、ボラゾール、およびエキセメスタン；ホルモン依存性乳癌および子宮内膜癌の処置において有用な酢酸メゲストロールなどのプロゲクチン；前立腺癌および良性前立腺肥大の処置において有用なエストロゲン、アンドロゲン、および抗アンドロゲン作用薬、例えば、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、酢酸シプロテロンおよび５α−レダクターゼ、例えば、フィナステリドおよびデュタステライド；ホルモン依存性乳癌およびその他の感受性癌の処置において有用なタモキシフェン、トレミフェン、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、ヨードキシフェンなどの抗エストロゲン作用薬、ならびに米国特許第５，６８１，８３５号、同第５，８７７，２１９号、および同第６，２０７，７１６号に記載されているものなどの選択的エストロゲン受容体調節薬（ＳＥＲＭＳ）；ならびに前立腺癌の処置のために黄体形成ホルモン（ＬＨ）および／または卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の放出を刺激するゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）およびその類似体、例えば、ＬＨＲＨアゴニストおよびアンタゴニスト、例えば、酢酸ゴセレリンおよびルプロリドが挙げられる。
【０１４２】
シグナル伝達経路阻害剤は、細胞内変化を引き起こす化学プロセスを遮断または阻害する阻害剤である。本明細書で使用する場合、この変化は細胞増殖または分化である。本発明において有用なシグナル伝達阻害剤としては、限定されるものではないが、受容体チロシンキナーゼ、非受容体型チロシンキナーゼ、ＳＨ２／ＳＨ３ドメイン遮断剤、セリン／トレオニンキナーゼ、ホスファチジルイノシトール−３キナーゼ、ミオイノシトールシグナル伝達およびＲａｓ癌遺伝子の阻害剤が挙げられる。
【０１４３】
いくつかのタンパク質チロシンキナーゼは、細胞増殖の調節に関与する種々のタンパク質の特定のチロシル残基のリン酸化を触媒する。このようなタンパク質チロシンキナーゼは、大きく受容体または非受容体型キナーゼとして分類することができる。
【０１４４】
受容体チロシンキナーゼは、細胞外リガンド結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびチロシンキナーゼドメインを有する膜貫通タンパク質である。受容体チロシンキナーゼは細胞増殖の調節に関与し、一般に、成長因子受容体と呼ばれる。これらのキナーゼの多くの不適当なまたは制御を欠いた活性化、すなわち、例えば、過剰発現または突然変異による異常なキナーゼ成長因子受容体活性は、制御を欠いた細胞増殖をもたらすことが示されている。よって、このようなキナーゼの異常な活性は悪性組織増殖に関連付けられている。結果として、このようなキナーゼの阻害剤は癌治療法を提供することができる。成長因子受容体には、例えば、上皮細胞成長因子受容体（ＥＧＦｒ）、血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦｒ）、ｅｒｂＢ２、ｅｒｂＢ４、血管内皮成長因子受容体（ＶＥＧＦＲ）、免疫グロブリン様および上皮細胞成長因子同一性ドメインを有するチロシンキナーゼ(tyrosine kinase with immunoglobulin-like and epidermal growth factor homology domains)（ＴＩＥ−２）、インスリン成長因子−Ｉ（ＩＧＦＩ）受容体、マクロファージコロニー刺激因子（Ｃｆｍｓ）、ＢＴＫ、ｃｋｉｔ、ｃｍｅｔ、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）受容体、Ｔｒｋ受容体（ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、およびＴｒｋＣ）、エフリン（ｅｐｈ）受容体、およびＲＥＴ癌原遺伝子が挙げられる。増殖受容体のいくつかの阻害剤が開発下にあり、リガンドアンタゴニスト、抗体、チロシンキナーゼ阻害剤およびアンチセンスオリゴヌクレオチドが含まれる。成長因子受容体および成長因子受容体機能を阻害する薬剤は、例えば、Kath J.C., Exp. Opin. Ther. Patents, 10(6):803-818 (2000); Shawver L.K., et al., Drug Discov. Today, 2(2): 50-63 (1997);およびLofts, F. J. and Gullick W.J., “Growth factor receptors as targets.” in New Molecular Targets for Cancer Chemotherapy, Kerr D.J. and Workman P. (edit
ors), (June 27, 1994), CRC Pressに記載されている。成長因子受容体阻害剤の限定されない例としては、パゾパニブおよびソラフェニブが挙げられる。
【０１４５】
パゾパニブ、５−［［４−［（２，３−ジメチル−２Ｈ−インダゾール−６−イル）メチルアミノ］−２−ピリミジニル］アミノ］−２−メチルベンゼンスルホンアミドはＶＥＧＦＲ阻害剤であり、ボトリエント（登録商標）錠として市販されている。パゾパニブは、国際出願日２００１年１２月１９日、国際公開第０２／０５９１１０号および国際公開日２００２年８月１日の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ０１／４９３６７号に開示および特許請求され、その全開示は引用することにより本明細書の一部とされる。パゾパニブは、進行腎細胞癌および進行軟組織肉腫の治療に指示される。グレード３疲労および高血圧症がパゾパニブの最も一般的な用量制限副作用である。
【０１４６】
ソラフェニブ、４−［４−［［４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］カルバモイルアミノ］フェノキシ］−Ｎ−メチル−ピリジン−２−カルボキサミドはマルチキナーゼ阻害剤であり、ネクサバール(NEXAVAR)（登録商標）錠として市販されている。ソラフェニブは、腎細胞癌、肝細胞癌、および特定の分化型甲状腺癌の治療に指示される。
【０１４７】
成長因子受容体キナーゼでないチロシンキナーゼは、非受容体型チロシンキナーゼである。抗癌薬の標的または潜在的標的となる、本発明において有用な非受容体型チロシンキナーゼには、ｃＳｒｃ、Ｌｃｋ、Ｆｙｎ、Ｙｅｓ、Ｊａｋ、ｃＡｂｌ、ＦＡＫ（接着斑キナーゼ）、ブルトン型チロシンキナーゼ、およびＢｃｒ−Ａｂｌが含まれる。このような非受容体型キナーゼおよび非受容体型チロシンキナーゼ機能を阻害する薬剤は、Sinha S. and Corey S.J., J. Hematother. Stem Cell Res., 8(5): 465-480 (2004) and Bolen, J.B., Brugge, J.S., Annu. Rev. Immunol., 15: 371-404 (1997)に記載されている。
【０１４８】
ＳＨ２／ＳＨ３ドメイン遮断剤は、ＰＩ３−Ｋ  ｐ８５サブユニット、Ｓｒｃファミリーキナーゼ、アダプター分子（Ｓｈｃ、Ｃｒｋ、Ｎｃｋ、Ｇｒｂ２）およびＲａｓ−ＧＡＰをはじめとする、様々な酵素またはアダプタータンパク質においてＳＨ２またはＳＨ３ドメイン結合を混乱させる薬剤である。抗癌薬の標的としてのＳＨ２／ＳＨ３ドメインは、Smithgall T.E., J. Pharmacol. Toxicol. Methods, 34(3): 125-32 (1995)に記載されている。
【０１４９】
セリン／トレオニンキナーゼの阻害剤としては、限定されるものではないが、Ｒａｆキナーゼ（ｒａｆｋ）、マイトジェンまたは細胞外調節キナーゼ(Mitogen or Extracellular Regulated Kinase)（ＭＥＫ）、および細胞外調節キナーゼ（ＥＲＫ）の遮断剤を含むＭＡＰキナーゼカスケード遮断剤；ＰＫＣ（α、β、γ、ε、μ、λ、ι、ζ）の遮断剤を含むタンパク質キナーゼＣファミリーメンバー遮断剤；ＩｋＢキナーゼ（ＩＫＫａ、ＩＫＫｂ）；ＰＫＢファミリーキナーゼ；ＡＫＴキナーゼファミリーメンバー；ＴＧＦβ受容体キナーゼ；限定されるものではないが、ラパマイシン（ＦＫ５０６）およびラパログ、ＲＡＤ００１またはエベロリムス（アフィニトール）、ＣＣＩ−７７９またはテムシロリムス、ＡＰ２３５７３、ＡＺＤ８０５５、ＷＹＥ−３５４、ＷＹＥ−６００、ＷＹＥ−６８７およびＰｐ１２１を含む、ラパマイシン（ｍＴＯＲ）阻害剤の哺乳動物標的が挙げられる。セリン／トレオニンキナーゼの阻害剤の例としては、限定されるものではないが、トラメチニブ、ダブラフェニブ、ならびにＡｋｔ阻害剤アフレセルチブおよびＮ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３，４−ジフルオロフェニル）メチル］エチル｝−５−クロロ−４−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−２−フランカルボキサミドが挙げられる。
【０１５０】
トラメチニブ、Ｎ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）−６，８−ジメチル−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドはＭＥＫ阻害剤である、メキニスト(MEKINIST)（登録商標）錠として市販されている。トラメチニブは、国際出願日１０、２００５年６月１０日；国際公開第２００５／１２１１４２号および国際公開日２００５年１２月２２日の国際出願第ＰＣＴ／ＪＰ２００５／０１１０８２号に開示および特許請求され、その全開示は引用することにより本明細書の一部とされる。トラメチニブは、一部の切除不能転移性黒色腫の治療に指示される。
【０１５１】
ダブラフェニブ、Ｎ−｛３−［５−（２−アミノ−４−ピリミジニル）−２−（１，１−ジメチルエチル）−１，３−チアゾール−４−イル］−２−フルオロフェニル｝−２，６−ジフルオロベンゼンスルホンアミドはＢ−Ｒａｆ阻害剤であり、タフィンラー(TAFINLAR)（登録商標）カプセルとして市販されている。ダブラフェニブは、国際出願日２００９年５月４日の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０４２６８２号に開示および特許請求され、その全開示は引用することにより本明細書の一部とされる。ダブラフェニブは、一部の切除不能転移性黒色腫の治療に指示される。
【０１５２】
アフレセルチブ、Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−５−クロロ−４−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−２−チオフェンカルボキサミドまたはその薬学上許容可能な塩はＡｋｔ阻害剤であり、国際出願日２００８年２月７日；国際公開第２００８／０９８１０４号および国際公開日２００８年８月１４日の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０５３２６９号に開示および特許請求され、その全開示は引用することにより本明細書の一部とされる。アフレセルチブは、国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０５３２６９号に記載されるように製造することができる。
【０１５３】
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３，４−ジフルオロフェニル）メチル］エチル｝−５−クロロ−４−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−２−フランカルボキサミドまたはその薬学上許容可能な塩はＡｋｔ阻害剤であり、国際出願日２００８年２月７日；国際公開第２００８／０９８１０４号および国際公開日２００８年８月１４日の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０５３２６９号に開示および特許請求され、その全開示は引用することにより本明細書の一部とされる。Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３，４−ジフルオロフェニル）メチル］エチル｝−５−クロロ−４−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−２−フランカルボキサミドは、国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０５３２６９号に記載されるように製造することができる。
【０１５４】
ＰＩ３−キナーゼ、ＡＴＭ、ＤＮＡ−ＰＫ、およびＫｕの遮断薬を含むホスファチジルイノシトール３−キナーゼファミリーメンバーの阻害剤も本発明に有用である。このようなキナーゼは、Abraham R.T., Curr. Opin. Immunol., 8(3): 412-418 (1996); Canman C.E., and Lim D.S., Oncogene, 17(25): 3301-3308 (1998); Jackson S.P., Int. J. Biochem. Cell Biol., 29(7): 935-938 (1997);およびZhong H., et al., Cancer Res., 60(6): 1541-1545 (2000)に考察されている。
【０１５５】
また、本発明において、ホスホリパーゼＣ遮断薬およびミオイノシトール類似体などのミオイノシトールシグナル伝達阻害剤も有用である。このようなシグナル阻害剤は、Powis G., and Kozikowski A., “Inhibitors of Myo-Inositol Signaling.” in New Molecular Targets for Cancer Chemotherapy, Kerr D.J. and Workman P. (editors), (June 27, 1994), CRC Pressに記載されている。
【０１５６】
シグナル伝達経路阻害剤の別の群として、Ｒａｓ癌遺伝子の阻害剤がある。このような阻害剤としては、ファルネシルトランスフェラーゼ、ゲラニル−ゲラニルトランスフェラーゼ、およびＣＡＡＸプロテアーゼの阻害剤、ならびにアンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイムおよびその他の免疫療法薬が含まれる。このような阻害剤は、野生型突然変異体を含有する細胞においてｒａｓの活性化を遮断し、それにより、抗増殖薬として作用することが示されている。Ｒａｓ癌遺伝子の阻害は、Scharovsky O.G., et al., J. Biomed. Sci., 7(4): 292-298 (2000); Ashby M.N., Curr. Opin. Lipidol., 9(2): 99-102 (1998); and Bennett C.F. and Cowsert L.M., Biochim. Biophys. Acta., 1489(1): 19-30 (1999)に考察されている。
【０１５７】
受容体キナーゼリガンド結合に対するアンタゴニストは、シグナル伝達阻害剤としても働き得る。この群のシグナル伝達経路阻害剤には、受容体チロシンキナーゼの細胞外リガンド結合ドメインに対するヒト化抗体またはその他のアンタゴニストの使用が含まれる。受容体キナーゼリガンド結合に対する抗体またはその他のアンタゴニストの例としては、限定されるものではないが、セツキシマブ（エルビタックス(ERBITUX)（登録商標））；トラスツズマブ（ハーセプチン(HERCEPTIN)（登録商標））；トラスツズマブエメタシン（カドサイラ(KADCYLA)（登録商標））；ペルツズマブ（パージェタ(PERJETA)（登録商標））；ラパチニブ、エルロチニブ、およびゲフィチニブを含むＥｒｂＢ阻害剤；ならびに２Ｃ３  ＶＥＧＦＲ２特異的抗体（Brekken R.A., et al., Cancer Res., 60(18): 5117-5124 (2000)参照）。
【０１５８】
セツキシマブは、エルビタックス（登録商標）として市販されているキメラマウスヒト抗体である。セツキシマブは、上皮細胞増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）を阻害する。セツキシマブ(Ceteximab)は放射線療法と組み合わせて頭頸部の扁平上皮癌の治療に指示され、一部の結腸直腸癌の治療にも指示される。
【０１５９】
トラスツズマブは、ハーセプチン（登録商標）として市販されているヒト化モノクローナル抗体である。トラスツズマブは、ＨＥＲ２（ＥｒｂＢ２としても知られる）受容体と結合する。トラスツズマブの原初の適応は、ＨＥＲ２陽性乳癌である。
【０１６０】
トラスツズマブエメタシンは、モノクローナル抗体トラスツズマブ（ハーセプチン（登録商標））と細胞傷害性薬剤エメタシン（ＤＭ１）が連結されたものからなる抗体−薬物複合体であり、注射液カドサイラ（登録商標）として市販されている。トラスツズマブエメタシンは、一部のＨＥＲ２陽性転移性乳癌の治療に指示される。
【０１６１】
ペルツズマブは、パージェタ(PERJETA)（登録商標）として市販されているモノクローナル抗体である。ペルツズマブは、ＨＥＲ２と結合してそれが他のＨＥＲ受容体と二量体を形成することを阻害し、これが腫瘍成長の緩徐化をもたらすと仮定されるＨＥＲ二量体形成阻害剤である。ペルツズマブは、トラスツズマブ（ハーセプチン（登録商標））およびドセタキセル（タキソテール（登録商標））と組み合わせて、一部のＨＥＲ２陽性転移性乳癌の治療に指示される。
【０１６２】
ラパチニブ、Ｎ−（３−クロロ−４−｛［（３−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−６−［５−（｛［２−（メチルスルホニル）エチル］アミノ｝メチル）−２−フラニル］−４−キナゾリンアミンは、ＥｒｂＢ−１とＥｒｂＢ−２（ＥＧＦＲとＨＥＲ２）チロシンキナーゼの二重阻害剤であり、タイケルブ(TYKERB)（登録商標）錠として市販されている。ラパチニブは、カペシタビン（ゼローダ(XELODA)（登録商標））と組み合わせてＨＥＲ２陽性転移性乳癌の治療に指示される。
【０１６３】
エルロチニブ、Ｎ−（３−エチニルフェニル）−６，７−ビス｛［２−（メチルオキシ）エチル］オキシ｝−４−キナゾリンアミンはＥｒｂＢ阻害剤であり、タルセバ(TARCEVA)（登録商標）錠として市販されている。エルロチニブは、一部の局所進行性または転移性非小細胞肺癌の治療に、また一部の局所進行型、切除不能転移性膵臓癌の治療に、ゲムシタビンと組み合わせて指示される。
【０１６４】
ゲフィチニブ、Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニル）−７−メトキシ−６−（３−モルホリン−４−イルプロポキシ）キナゾリン−４−アミンはＥｒｂＢ−１阻害剤であり、イレッサ(IRESSA)（登録商標）錠として市販されている。ゲフィチニブは、局所進行型または転移性の非小細胞肺癌を有する患者の治療に、白金系化学療法およびドセタキセル化学療法の両方が不奏効であった後に単剤療法として指示される。
【０１６５】
非受容体型キナーゼ血管新生阻害剤もまた、本発明において使用を見出すことができる。血管新生関連のＶＥＧＦＲおよびＴＩＥ２の阻害剤は、シグナル伝達阻害剤に関して上記に述べられている（両受容体とも受容体チロシンキナーゼである）。ｅｒｂＢ２およびＥＧＦＲの阻害剤は血管新生、主として、ＶＥＧＦの発現を阻害することが示されていることから、血管新生は一般にｅｒｂＢ２／ＥＧＦＲシグナル伝達に関連付けられている。よって、非受容体型チロシンキナーゼ阻害剤は、本発明のＥＧＦＲ／ｅｒｂＢ２阻害剤と併用することができる。例えば、ＶＥＧＦＲ（受容体チロシンキナーゼ）を認識しないがリガンドと結合する抗ＶＥＧＦ抗体；血管新生を阻害するインテグリン（αｖβ３）の小分子阻害剤；エンドスタチンおよびアンギオスタチン（非ＲＴＫ）もまた、開示されている化合物と組み合わせると有用であることが分かり得る（Bruns C.J., et al., Cancer Res., 60(11): 2926-2935 (2000); Schreiber A.B., et al., Science, 232(4755): 1250-1253 (1986); Yen L., et al., Oncogene, 19(31): 3460-3469 (2000)参照）。
【０１６６】
免疫療法計画で使用される薬剤もまた式（Ｉ）の化合物と組み合わせると有用であり得る。ｅｒｂＢ２またはＥＧＦＲに対する免疫応答を生じさせるには、いくつかの免疫学的戦略がある。これらの戦略は一般に腫瘍ワクチン接種の領域にある。免疫学的アプローチの有効性は、小分子阻害剤を用いたｅｒｂＢ２／ＥＧＦＲシグナル伝達経路の組合せ阻害によって大幅に増強され得る。ｅｒｂＢ２／ＥＧＦＲに対する免疫学的／腫瘍ワクチンアプローチの考察は、Reilly R.T., et al., Cancer Res., 60(13): 3569-3576 (2000); and Chen Y., et al., Cancer Res., 58(9): 1965-1971 (1998)に見出せる。
【０１６７】
アポトーシス誘導計画に使用される薬剤（例えば、Ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴヌクレオチド）もまた、本発明の組合せにおいて使用可能である。Ｂｃｌ−２ファミリータンパク質のメンバーはアポトーシスを遮断する。従って、Ｂｃｌ−２の上方調節は化学耐性に関連付けられている。研究によれば、上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）はＢｃｌ−２ファミリーの抗アポトーシスメンバー（すなわち、Ｍｃｌ−１）を刺激することが示されている。従って、腫瘍においてＢｃｌ−２の発現を下方調節するように設計された戦略は、実証された臨床利益を有する。Ｂｃｌ−２に対するアンチセンスオリゴヌクレオチド戦略を使用するこのようなアポトーシス誘導戦略は、Waters J.S., et al., J. Clin. Oncol., 18(9): 1812-1823 (2000);およびKitada S., et al., Antisense Res. Dev., 4(2): 71-79 (1994)に考察されている。
【０１６８】
細胞周期シグナル伝達阻害剤は、細胞周期の制御に関与する分子を阻害する。サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）と呼ばれるタンパク質キナーゼファミリーおよびそれらとサイクリンと呼ばれるタンパク質ファミリーとの相互作用が、真核細胞周期の進行を制御している。細胞周期の正常な進行には、種々のサイクリン／ＣＤＫ複合体の協調した活性化および不活化が不可欠である。細胞周期シグナル伝達のいくつかの阻害剤が開発下にある。例えば、ＣＤＫ２、ＣＤＫ４、およびＣＤＫ６をはじめとするサイクリン依存性キナーゼおよびそれらの阻害剤の例は、例えば、Rosania G.R., and Chang Y.T., Exp. Opin. Ther. Patents, 10(2): 215-230 (2000)に記載されている。さらに、ｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１は、サイクリン依存性キナーゼ（Ｃｄｋ）の強力かつ普遍的な阻害剤として記載されている(Ball K.L., Prog. Cell Cycle Res., 3: 125-134 (1997))。ｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１の発現を誘導することが知られる化合物は、細胞増殖の抑制において、腫瘍抑制活性を有するとして関連付けられており(Richon V.M., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 97(18): 10014-10019 (2000))、細胞周期シグナル伝達阻害剤として含まれる。ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤は、ｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１の転写活性化に関連し(Vigushin D.M., and Coombes R.C., Anticancer Drugs, 13(1): 1-13 (2002))、本明細書において併用するために好適な細胞周期シグナル伝達阻害剤である。このようなＨＤＡＣ阻害剤の例としては、限定されるものではないが、ボリノスタット、ロミデプシン、パノビスタット、バルプロ酸、およびモセチノスタットが挙げられる。
【０１６９】
ボリノスタット、Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ’−フェニル−オクタンジアミドはＨＤＡＣ阻害剤であり、ゾリンザ(ZOLINZA)（登録商標）カプセルとして市販されている。ボリノスタットは、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）の治療に指示される。
【０１７０】
ロミデプシン、（１Ｓ，４Ｓ，７Ｚ，１０Ｓ，１６Ｅ，２１Ｒ）−７−エチリデン−４，２１−ジ（プロパン−２−イル）−２−オキサ−１２，１３−ジチア−５，８，２０，２３−テトラアザビシクロ［８．７．６］トリコス−１６−エン−３，６，９，１９，２２−ペントンはＨＤＡＣ阻害剤であり、イストダックス(ISTODAX)（登録商標）として、注射液として市販されている。ロミデプシンは、ＣＴＣＬの治療に指示される。
【０１７１】
パノビスタット、（２Ｅ）−Ｎ−ヒドロキシ−３−［４−（｛［２−（２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル）エチル］アミノ｝メチル）フェニル］アクリルアミドは非選択性ＨＤＡＣ阻害剤であり、ファリーダック(FARYDAK)（登録商標）カプセルとして市販されている。パノビスタットは、ボルテゾミブおよびデキサメタゾンと組み合わせて多発性骨髄腫の治療に指示される。 
【０１７２】
バルプロ酸、２−プロピルペンタン酸はＨＤＡＣ阻害剤であり、とりわけ、デパケン(DEPAKENE)（登録商標）カプセルとして市販されている。バルプロ酸は、一部の発作の治療に単剤療法および補助療法として指示され、種々の癌の治療に関して探究されている。
【０１７３】
モセチノスタット、Ｎ−（２−アミノフェニル）−４−［［（４−ピリジン−３−イルピリミジン−２−イル）アミノ］メチル］ベンズアミドはベンズアミドＨＤＡＣ阻害剤である。モセチノスタット(Mecetinostat)は、種々の癌の治療に関して現在臨床試験下にある。
【０１７４】
プロテアソーム阻害剤は、ｐ５３タンパク質などの、タンパク質を分解する細胞複合体であるプロテアソームの作用を遮断する薬物である。いくつかのプロテアソーム阻害剤が市販され、または癌の治療に関して研究されている。本明細書において併用するために好適なプロテアソーム阻害剤としては、限定されるものではないが、ボルテゾミブ、ジスルフィラム、没食子酸エピガロカテキン、サリノスポラミドＡ、およびカルフィルゾミブが挙げられる。
【０１７５】
ボルテゾミブ、［（１Ｒ）−３−メチル−１−（｛（２Ｓ）−３−フェニル−２−［（ピラジン−２−イルカルボニル）アミノ］プロパノイル｝アミノ）ブチル］ボロン酸はプロテアソーム阻害剤であり、ベルケード(VELCADE)（登録商標）として、注射液として市販されている。ボルテゾミブは、多発性骨髄腫およびマントル細胞リンパ腫の治療に指示される。
【０１７６】
ジスルフィラム、１，１’，１’’，１’’’−［ジスルファンジイルビス（カルボノチオイルニトリロ）］テトラエタンは、アンタビュース(ANTABUSE)（登録商標）錠として市販されている。ジスルフィラムは、選択された慢性アルコール患者の禁酒の管理の補助として指示される。ジスルフィラムが金属と複合体を形成してジチオカルバミン酸複合体となると、これはプロテアソーム阻害剤であり、このようなジチオカルバミン酸複合体は種々の癌の治療に関して探究されている(Cheriyan V.T., et al., PLoS One, 9(4): e93711 (2014))。
【０１７７】
没食子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧ）、［（２Ｒ，３Ｒ）−５，７−ジヒドロキシ−２−（３，４，５−トリヒドロキシフェニル）クロマン−３−イル］３，４，５−トリヒドロキシベンゾエートは、緑茶に最も豊富なカテキンであり、プロテアソーム阻害剤である。ＥＧＣＧは種々の癌の治療に関して探究されている(Yang H., et al., Curr. Cancer Drug Targets, 11(3): 296-306 (2011))。
【０１７８】
サリノスポラミドＡ、（４Ｒ，５Ｓ）−４−（２−クロロエチル）−１−（（１Ｓ）−シクロヘキサ−２−エニル（ヒドロキシ）メチル）−５−メチル−６−オキサ−２−アザビシクロ［３．２．０］ヘプタン−３，７−ジオン、マリゾミブとしても知られ、プロテアソーム阻害剤である。サリノスポラミドＡは種々の癌の治療に関して探究されている。
【０１７９】
カルフィルゾミブ、（２Ｓ）−４−メチル−Ｎ−［（２Ｓ）−１−［［（２Ｓ）−４−メチル−１−［（２Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−イル］−１−オキソペンタン−２−イル］アミノ］−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］−２−［［（２Ｓ）−２−［（２−モルホリン−４−イルアセチル）アミノ］−４−フェニルブタノイル］アミノ］ペンタンアミドは選択的プロテアソーム阻害剤であり、カイプロリス(KYPROLIS)（登録商標）として、注射液として市販されている。カルフィルゾミブは、ある種の多発性骨髄腫の治療に指示される。
【０１８０】
７０キロダルトン熱ショックタンパク質（Ｈｓｐ７０ｓ）および９０キロダルトン熱ショックタンパク質（Ｈｓｐ９０）は、遍在発現する熱ショックタンパク質のファミリーである。Ｈｓｐ７０およびＨｓｐ９０は、特定の癌種で過剰発現される。いくつかのＨｓｐ７０およびＨｓｐ９０阻害剤が癌の治療において研究されている。本明細書で併用するためのＨｓｐ７０およびＨｓｐ９０阻害剤の例としては、限定されるものではないが、タネスピマイシンおよびラディシコールが挙げられる。
【０１８１】
タネスピマイシン、１７−Ｎ−アリルアミノ−１７−デメトキシゲルダナマイシンは抗生物質ゲルダナマイシンの誘導体であり、かつ、Ｈｓｐ９０阻害剤である。タネスピマイシン(Tanespimyicn)は種々の癌の治療に関して探究されている。
【０１８２】
ラディシコール、［１ａＳ−（１ａＲ＊，２Ｚ，４Ｅ，１４＊，１５ａＲ＊）］−８−クロロ−１ａ，１４，１５，１５ａ−テトラヒドロ−９，１１−ジヒドロキシ−１４−メチル−６Ｈ−オキシレノ［ｅ］［２］ベンゾキサシクロテトラデシン−６，１２（７Ｈ）−ジオンは、モノルデンとしても知られ、Ｈｓｐ９０阻害剤である。ラディシコールは、種々の癌の治療に関して探究されている。
【０１８３】
多くの腫瘍細胞は、正常組織とは著しく異なる代謝を示す。例えば、グルコースをピルビン酸に変換する代謝プロセスである解糖の速度が高まり、生成したピルビン酸は、トリカルボン酸（ＴＣＡ）サイクルを介してミトコンドリアでさらに酸化されるよりも乳酸へ還元される。この作用は好気条件下でも見られることが多く、ワールブルク効果として知られる。
【０１８４】
筋肉細胞で発現される乳酸デヒドロゲナーゼのアイソフォームである乳酸デヒドロゲナーゼＡ（ＬＤＨ−Ａ）は、ピルビン酸から乳酸への還元を行うことによって腫瘍細胞代謝に中枢的役割を果たし、これはその後細胞外に輸送される。この酵素は、多くの腫瘍種で上方調節されることが示されている。ワールブルク効果に記載されているグルコース代謝の変化は、癌細胞の成長および増殖に重要であり、ＲＮＡ−ｉを用いたノックインダウンＬＤＨ−Ａは、異種移植モデルにおいて細胞増殖および腫瘍成長の低下をもたらすことが示されている(Tennant D.A., et al., Nat. Rev. Cancer, 10(4): 267-277 (2010); Fantin V.R., et al., Cancer Cell, 9(6): 425-434 (2006))。
【０１８５】
高レベルの脂肪酸シンターゼ（ＦＡＳ）が癌前駆体病巣に見出されている。ＦＡＳの薬理学的阻害は癌の発生と維持の両方に関与する重要な癌遺伝子の発現に影響を及ぼす。Alli P.M., et al., Oncogene, 24(1): 39-46 (2005)。
【０１８６】
ＬＤＨ−Ａの阻害剤および脂肪酸生合成の阻害剤（またはＦＡＳ阻害剤）を含む癌代謝の阻害剤は、本明細書で併用するために好適である。
【０１８７】
癌遺伝子療法は、治療目的に求める癌を改変するためにウイルスまたは非ウイルス遺伝子送達ベクターを用いた組換えＤＮＡ／ＲＮＡの選択的移入を含む。癌遺伝子療法の例としては、限定されるものではないが、自殺遺伝子療法および腫瘍溶解性遺伝子療法、ならびに養子Ｔ細胞療法が挙げられる。
【０１８８】
本方法または組合せと組み合わせて使用するための、または併用投与される１または複数のさらなる有効成分（抗新生物薬）のさらなる例として、ＣＤ２０に対する抗体またはその他のアンタゴニスト、レチノイド、またはその他のキナーゼ阻害剤がある。このような抗体またはアンタゴニストの例としては、限定されるものではないが、リツキシマブ（リツキサン(RITUXAN)（登録商標）およびマブセラ(MABTHERA)（登録商標））、オファツムマブ  （アルゼラ(ARZERRA)（登録商標））、およびベキサロテン（ターグレチン(TARGRETIN)（登録商標））が挙げられる。
【０１８９】
リツキシマブは、リツキサン（登録商標）およびマブセラ（登録商標）として市販されていれるキメラモノクローナル抗体である。リツキシマブは、Ｂ細胞上のＣＤ２０と結合し、細胞アポトーシスを引き起こす。リツキシマブは静脈投与され、関節リウマチおよびＢ細胞非ホジキンリンパ腫の治療に関して承認されている。
【０１９０】
オファツムマブは、アルゼラ（登録商標）として市販されている完全ヒトモノクローナル抗体である。オファツムマブは、Ｂ細胞上のＣＤ２０と結合し、フルダラビン（フルダラ(FLUDARA)（登録商標））およびアレムツズマブ（キャンパス(CAMPATH)（登録商標））による治療に不応の成人において慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ；白血球の癌の一種）を治療するために使用されている。
【０１９１】
ベキサロテン、４−［１−（５，６，７，８−テトラヒドロ−３，５，５，８，８−ペンタメチル−２−ナフタレニル）エテニル］安息香酸は、ターグレチン（登録商標）カプセルとして市販されている。ベキサロテンは、レチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）を選択的に活性化するレチノイドのサブクラスのメンバーである。これらのレチノイド受容体は、レチノイン酸受容体（ＲＡＲ）とは明瞭に異なる生物活性を有する。ベキサロテンは、特定のＣＴＣＬの治療に指示される。
【０１９２】
本方法または組合せと組み合わせて使用するための、または併用投与される１または複数のさらなる有効成分（抗新生物薬）のさらなる例として、Ｔｏｌｌ様受容体４（ＴＬＲ４）アンタゴニストがある。
【０１９３】
アミノアルキルグルコサミニドリン酸（ＡＧＰ）は、サイトカイン産生を刺激するため、マクロファージを活性化するため、自然免疫応答を促進するため、および免疫動物で抗体産生を増進するためにワクチンアジュバントおよび免疫刺激薬として有用であることが知られている。アミノアルキルグルコサミニドリン酸（ＡＧＰ）は、Ｔｏｌｌ様受容体４（ＴＬＲ４）の合成リガンドである。ＡＧＰおよびＴＬＲ４を介したそれらの免疫調節作用は、ＷＯ２００６０１６９９７、ＷＯ２００１０９０１２９、および／または米国特許第６，１１３，９１８号などの特許公報に開示され、文献でも報告されている。さらなるＡＧＰ誘導体は、米国特許第７，１２９，２１９号、同第６，９１１，４３４号、および同第６，５２５，０２８号に開示されている。ある種のＡＧＰはＴＬＲ４のアゴニストとして働き、他のものはＴＬＲ４アンタゴニストとして認識されている。
【０１９４】
本方法または組合せとともに併用可能な選択抗新生物薬としては、限定されるものではないが、アバレリクス、アベマシクリブ、アビラテロン、アファチニブ、アフリバーセプト、アルドキソルビシン、アレクチニブ、アレムツズマブ、三酸化ヒ素、アスパラギナーゼ、アキシチニブ、ＡＺＤ−９２９１、ベリノスタット、ベンダムスチン、ベバシズマブ、ブリナツモマブ、ボスチニブ］、ブレンツキシマブ  ベドチン、カバジタキセル、カボザンチニブ、カペシタビン、セリチニブ、クロファラビン、コビメチニブ、クリゾチニブ、ダラツムマブ、ダサチニブ、デガレリクス、デノスマブ、ジヌツキシマブ、ドセタキセル、エロツズマブ、エンチノスタット、エンザルタミド、エピルビシン、エリブリン、フィルグラスチム、フルマチニブ、フルベストラント、フルキンチニブ、ゲムツズマブ・オゾガマイシン、イブリツモマブ、イブルチニブ、イデラリシブ、イマチニブ、イリノテカン、イキサベピロン、イキサゾミブ、レナリドマイド、レンバチニブ、ロイコボリン、メクロレタミン、ネシツムマブ、ネララビン、ネツピタント、ニロチニブ、オビヌツズマブ、オラパリブ、オマセタキシン、オシメルチニブ、オキサリプラチン、パクリタキセル、パルボシクリブ、パロノセトロン、パニツムマブ、ペグフィルグラスチム、ペグインターフェロンα−２ｂ、ペメトレキセド、プレリキサフォル、ポマリドミド、ポナチニブ、プララトレキサート、キザルチニブ、ラジウム−２２３、ラムシルマブ、レゴラフェニブ、ロラピタント、ルカパリブ、シプロイセル−Ｔ、ソニデジブ、スニチニブ、タリモジーン・ラハーパレプベック、チピラシル、トポテカン、トラベクテジン、トリフルリジン、トリプトレリン、ウリジン、バンデタニブ、ベリパリブ、ベムラフェニブ、ベネトクラックス、ビンクリスチン、ビスモデギブ、およびゾレンドロン酸が挙げられる。
【実施例】
【０１９５】
以下、実施例により、本発明の種々の限定されない態様を説明する。
【０１９６】
実施例１
アルギニンのメチル化およびＰＲＭＴ
アルギニンのメチル化は、遺伝子調節、ＲＮＡプロセシング、ＤＮＡ損傷応答、およびシグナル伝達などの多様な細胞プロセスに関与するタンパク質における重要な翻訳後修飾である。メチル化アルギニンを含有するタンパク質は核および細胞質画分の両方に存在し、アルギニン上へのメチル基の転移を触媒する酵素もまたこれらの細胞下コンパートメントに存在することが示唆される（Yang, Y. & Bedford, M. T. Protein arginine methyltransferases and cancer. Nat Rev Cancer 13, 37-50, doi:10.1038/nrc3409 (2013); Lee, Y. H. & Stallcup, M. R. Minireview: protein arginine methylation of nonhistone proteins in transcriptional regulation. Mol Endocrinol 23, 425-433, doi:10.1210/me.2008-0380 (2009)に総説）。哺乳動物細胞において、メチル化アルギニンは、ω−ＮＧ−モノメチル−アルギニン（ＭＭＡ）、ω−ＮＧ，ＮＧ−非対称性ジメチルアルギニン（ＡＤＭＡ）、またはω−ＮＧ，Ｎ’Ｇ−対称性ジメチルアルギニン（ＳＤＭＡ）の３つの主要な形態で存在する。各メチル化状態は、タンパク質間相互作用に異なる影響を及ぼし、従って、基質の生物活性に明瞭に異なる機能的結果を与える能力を持つ(Yang, Y. & Bedford, M. T. Protein arginine methyltransferases and cancer. Nat Rev Cancer 13, 37-50, doi:10.1038/nrc3409 (2013))。
【０１９７】
アルギニンのメチル化は、主として、メチル基をＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン（ＳＡＭ）から基質であるアルギニン側鎖に転移してＳ−アデノシル−ホモシステイン（ＳＡＨ）およびメチル化アルギニンを生成するタンパク質アルギニンメチルトランスフェラーゼ（ＰＲＭＴ）ファミリーの活性を介して、グリシンリッチ、アルギニンリッチ（ＧＡＲ）モチーフの配列要素に生じる（図１）。このタンパク質ファミリーは１０種のメンバーからなり、そのうち９種が酵素活性を有することが示されている(Bedford, M. T. & Clarke, S. G. Protein arginine methylation in mammals: who, what, and why. Mol Cell 33, 1-13, doi:10.1016/j.molcel.2008.12.013 (2009))。ＰＲＭＴファミリーは、酵素反応の生成物によって４つのサブタイプ（Ｉ〜ＩＶ型）に類別される（図１）。ＩＶ型酵素は、内部グアニジノ窒素をメチル化し、酵母でのみ記載があり(Fisk, J. C. & Read, L. K. Protein arginine methylation in parasitic protozoa. Eukaryot Cell 10, 1013-1022, doi:10.1128/EC.05103-11 (2011))；Ｉ〜ＩＩＩ型酵素は、単一のメチル化事象によってモノメチル−アルギニン（ＭＭＡ、Ｒｍｅ１）を生じる。ＭＭＡ中間体は、比較的存在量の少ない中間体と考えられているが、ＰＲＭＴ７の主要ＩＩＩ型活性の選択基質はモノメチル化型に留まり、一方、Ｉ型およびＩＩ型酵素はＭＭＡからそれぞれ非対称性ジメチルアルギニン（ＡＤＭＡ、Ｒｍｅ２ａ）または対称性ジメチルアルギニン（ＳＤＭＡ、Ｒｍｅ２ｓ）への進行を触媒する。ＩＩ型ＰＲＭＴにはＰＲＭＴ５とＰＲＭＴ９が含まれるが、ＰＲＭＴ５は、対称性ジメチル化の形成を担う主要な酵素である。Ｉ型酵素にはＰＲＭＴ１、ＰＲＭＴ３、ＰＲＭＴ４、ＰＲＭＴ６およびＰＲＭＴ８が含まれる。ＰＲＭＴ１、ＰＲＭＴ３、ＰＲＭＴ４、およびＰＲＭＴ６は遍在発現するが、ＰＲＭＴ８は主として脳に限られる（Bedford, M. T. & Clarke, S. G. Protein arginine
methylation in mammals: who, what, and why. Mol Cell 33, 1-13, doi:10.1016/j.molcel.2008.12.013 (2009)に総説）。
【０１９８】
ＰＲＭＴ１は、多くの細胞基質上でＭＭＡおよびＡＤＭＡの形成を触媒し得る主要１型酵素である(Bedford, M. T. & Clarke, S. G. Protein arginine methylation in mammals: who, what, and why. Mol Cell 33, 1-13, doi:10.1016/j.molcel.2008.12.013 (2009))。多くの場合で、ＰＲＭＴ１依存性ＡＤＭＡ修飾がその基質の生物活性および輸送に必要とされ(Nicholson, T. B., Chen, T. & Richard, S. The physiological and pathophysiological role of PRMT1-mediated protein arginine methylation. Pharmacol Res 60, 466-474, doi:10.1016/j.phrs.2009.07.006 (2009))、ＰＲＭＴ１の活性は細胞ＡＤＭＡレベルの約８５％を占める(Dhar, S. et al. Loss of the major Type I arginine methyltransferase PRMT1 causes substrate scavenging by other PRMTs. Sci Rep 3, 1311, doi:10.1038/srep01311 (2013); Pawlak, M. R., Scherer, C. A., Chen, J., Roshon, M. J. & Ruley, H. E. Arginine N-methyltransferase 1 is required for early postimplantation mouse development, but cells deficient in the enzyme are viable. Mol Cell Biol 20, 4859-4869 (2000))。ＰＲＭＴ１の完全なノックアウトは、多くの基質にわたってＭＭＡの顕著な増加をもたらし、ＰＲＭＴ１の主要な生物学的機能がＭＭＡをＡＤＭＡに変換することであり、他のＰＲＭＴはＭＭＡを確立および維持可能であることが示唆される(Dhar, S. et al. Loss of the major Type I arginine methyltransferase PRMT1 causes substrate scavenging by other PRMTs. Sci Rep 3, 1311, doi:10.1038/srep01311 (2013))。加えて、恐らくはＡＤＭＡの減少および対応する、ＳＤＭＡ生成ＩＩ型ＰＲＭＴの基質として働き得るＭＭＡの増加の結果であるＰＲＭＴ１の減少時にＳＤＭＡレベルが上昇する。Ｉ型ＰＲＭＴの阻害は、ＡＤＭＡの減少、ＭＭＡの増加、あるいはＳＤＭＡに関連する明瞭に異なるメチル化パターンへの切り替えによって基質機能の変更をもたらし得る(Dhar, S. et al. Loss of the major Type I arginine methyltransferase PRMT1 causes substrate scavenging by other PRMTs. Sci Rep 3, 1311, doi:10.1038/srep01311 (2013))。
【０１９９】
マウスにおけるＰｒｍｔ１遺伝子座の破壊は早期胚性致死をもたらし、同型接合胚は、正常な発生においてＰＲＭＴ１要求を示すＥ６．５を超える発達ができない(Pawlak, M. R., Scherer, C. A., Chen, J., Roshon, M. J. & Ruley, H. E. Arginine N-methyltransferase 1 is required for early postimplantation mouse development, but cells deficient in the enzyme are viable. Mol Cell Biol 20, 4859-4869 (2000); Yu, Z., Chen, T., Hebert, J., Li, E. & Richard, S. A mouse PRMT1 null allele defines an essential role for arginine methylation in genome maintenance and cell proliferation. Mol Cell Biol 29, 2982-2996, doi:10.1128/MCB.00042-09 (2009))。成体においてＰＲＭＴ１の役割をより良く理解するには条件付きまたは組織特異的ノックアウトが必要となろう。Ｐｒｍｔ１ヌルマウスに由来するマウス胚線維芽細胞は、ＤＮＡ損傷応答タンパク質ＭＲＥ１１の低メチル化に関連した成長停止、倍数化、染色体脱安定化、および自発的ＤＮＡ損傷を受け、ゲノムの維持および細胞増殖におけるＰＲＭＴ１の役割が示唆される(Yu, Z., Chen, T., Hebert, J., Li, E. & Richard, S. A mouse PRMT1 null allele defines an essential role for arginine methylation in genome maintenance and cell proliferation. Mol Cell Biol 29, 2982-2996, doi:10.1128/MCB.00042-09 (2009))。ＲＭＴ１タンパク質およびｍＲＮＡは、広範囲の胚組織および成体組織で検出することができ、細胞のアルギニンメチル化の大部分を担う酵素としてのその機能と一致する。ＰＲＭＴはそれ自体翻訳後修飾を受け、相互作用調節タンパク質に関連するが、ＰＲＭＴ１は、さらなる修飾の必要なく基礎活性を維持する（Yang, Y. & Bedford, M. T. Protein arginine methyltransferases and cancer. Nat Rev Cancer 13, 37-50, doi:10.1038/nrc3409 (2013)に総説）。
【０２００】
ＰＲＭＴ１および癌
ＰＲＭＴ１の誤調節および過剰発現は、いくつかの固形癌および造血系癌と関連が見出されている(Yang, Y. & Bedford, M. T. Protein arginine methyltransferases and cancer. Nat Rev Cancer 13, 37-50, doi:10.1038/nrc3409 (2013); Yoshimatsu, M. et al. Dysregulation of PRMT1 and PRMT6, Type I arginine methyltransferases, is involved in various types of human cancers. Int J Cancer 128, 562-573, doi:10.1002/ijc.25366 (2011))。ＰＲＭＴ１と癌の生物学との関連は、主として、関連基質上に見られるアルギニン残基のメチル化の調節を介したものであった（図２）。いくつかの腫瘍種で、ＰＲＭＴ１は、ヒストンＨ４のメチル化を介して(Takai, H. et al. 5-Hydroxymethylcytosine plays a critical role in glioblastomagenesis by recruiting the CHTOP-methylosome complex. Cell Rep 9, 48-60, doi:10.1016/j.celrep.2014.08.071 (2014); Shia, W. J. et al. PRMT1 interacts with AML1-ETO to promote its transcriptional activation and progenitor cell proliferative potential. Blood 119, 4953-4962, doi:10.1182/blood-2011-04-347476 (2012); Zhao, X. et al. Methylation of RUNX1 by PRMT1 abrogates SIN3A binding and potentiates its transcriptional activity. Genes Dev 22, 640-653, doi:10
.1101/gad.1632608 (2008))、ならびに非ヒストン基質に対するその活性を介して(Wei, H., Mundade, R., Lange, K. C. & Lu, T. Protein arginine methylation of non-histone proteins and its role in diseases. Cell Cycle 13, 32-41, doi:10.4161/cc.27353 (2014))、異常な発癌プログラムの発現を駆動し得る。これらの実験系の多くでは、その基質のＰＲＭＴ１依存性ＡＤＭＡ修飾の混乱が癌細胞の増殖能を低下させる(Yang, Y. & Bedford, M. T. Protein arginine methyltransferases and cancer. Nat Rev Cancer 13, 37-50, doi:10.1038/nrc3409 (2013))。
【０２０１】
いくつかの研究によって、ＰＲＭＴ１が血液腫瘍および固形腫瘍の発達に関連付けられている。ＰＲＭＴ１は、発現経路の活性化をもたらす、ＭＬＬおよびＡＭＬ１−ＥＴＯ融合物などの重要な駆動因子のメチル化を介して白血病の発症に関連付けられている(Shia, W. J. et al. PRMT1 interacts with AML1-ETO to promote its transcriptional activation and progenitor cell proliferative potential. Blood 119, 4953-4962, doi:10.1182/blood-2011-04-347476 (2012); Cheung, N. et al. Targeting Aberrant Epigenetic Networks Mediated by PRMT1 and KDM4C in Acute Myeloid Leukemia. Cancer Cell 29, 32-48, doi:10.1016/j.ccell.2015.12.007 (2016))。ＡＭＬ１−ＥＴＯ発現マウスに由来する骨髄細胞におけるＰＲＭＴ１のノックダウンはクローン形成能を抑制し、このモデルにおける白血病表現型の維持におけるＰＲＭＴ１の決定的な必要性を実証した(Shia, W. J. et al. PRMT1 interacts with AML1-ETO to promote its transcriptional activation and progenitor cell proliferative potential. Blood 119, 4953-4962, doi:10.1182/blood-2011-04-347476 (2012))。ＰＲＭＴ１はまた、ＭＬＬ融合複合体の成分でもあり、Ｈ４Ｒ３のメチル化に関連する異常な転写活性化を促進し、ＰＲＭＴ１のノックダウンはＭＬＬ−ＥＥＮにより媒介される造血幹細胞の悪性移行を抑制することができる(Cheung, N., Chan, L. C., Thompson, A., Cleary, M. L. & So, C. W. Protein arginine-methyltransferase-dependent oncogenesis. Nat Cell Biol 9, 1208-1215, doi:10.1038/ncb1642 (2007))。乳癌患者では、高いＰＲＭＴ１発現がより短い無病生存期間および進行した組織学的異型度の腫瘍と相関があることが見出された(Mathioudaki, K. et al. Clinical evaluation of PRMT1 gene expression in breast cancer. Tumour Biol 32, 575-582, doi:10.1007/s13277-010-0153-2 (2011))。この目的で、ＰＲＭＴ１は、転移および癌細胞浸潤の促進に関連付けられ(Gao, Y. et al. The dual function of PRMT1 in modulating epithelial-mesenchymal transition and cellular senescence in breast cancer cells through regulation of ZEB1. Sci Rep 6, 19874, doi:10.1038/srep19874 (2016); Avasarala, S. et al. PRMT1 Is a Novel Regulator of Epithelial-Mesenchymal-Transition in Non-small Cell Lung Cancer. J Biol Chem 290, 13479-13489, doi:10.1074/jbc.M114.636050 (2015))、ＰＲＭＴ１により媒介されるエストロゲン受容体α（ＥＲα）のメチル化は、成長促進シグナル伝達経路を増強することができる。このメチル化駆動機構は、抗エストロゲン作用薬の存在下でさえ、乳癌細胞に成長利益を提供し得る(Le Romancer, M. et al. Regulation of estrogen rapid signaling through arginine methylation by PRMT1. Mol Cell 31, 212-221, doi:10.1016/j.molcel.2008.05.025 (2008))。加えて、ＰＲＭＴ１は、相同組換えおよび非相同末端の末端結合ＤＮＡ修復経路の両方の調節を介してゲノムの安定性およびＤＮＡ傷害剤耐性を増強する(Boisvert, F. M., Rhie, A., Richard, S. & Doherty, A. J. The GAR motif of 53BP1 is arginine methylated by PRMT1 and is necessary for 53BP1 DNA binding activity. Cell Cycle 4, 1834-1841, doi:10.4161/cc.4.12.2250 (2005); Boisvert, F. M., Dery, U., Masson, J. Y. & Richard, S. Arginine methylation of MRE11 by PRMT1 is required for DNA damage checkpoint control. Genes Dev 19, 671-676, doi:10.1101/gad.1279805 (2005))。従って、ＰＲＭＴ１の阻害は、特に、ＤＮＡ修復機構が突然変異によって損なわれている可能性のある腫瘍において（乳癌におけるＢＲＣＡ１など）、ＤＮＡ傷害剤に対して癌を増感させ得る(O'Donovan, P. J. & Livingston, D. M. BRCA1 and BRCA2: breast/ovarian cancer susceptibility gene products and participants in DNA double-strand break repair. Carcinogenesis 31, 961-967, doi:10.1093/carcin/bgq069 (2010))。これらの所見を考え合わせると、腫瘍生物学の臨床的に関連のある側面においてＰＲＭＴ１の重要な役割が示され、ＤＮＡ損傷を促進するものなどの療法との組合せを探索する理論的根拠が示唆される。
【０２０２】
ＲＮＡ結合タンパク質およびスプライシング装置は主要なクラスのＰＲＭＴ１基質であり、それらの生物学的機能ならびに白血病における再発性突然変異を介して癌の生物学に関連付けられている(Bressan, G. C. et al. Arginine methylation analysis of the splicing-associated SR protein SFRS9/SRP30C. Cell Mol Biol Lett 14, 657-669, doi:10.2478/s11658-009-0024-2 (2009); Sveen, A., Kilpinen, S., Ruusulehto, A., Lothe, R. A. & Skotheim, R. I. Aberrant RNA splicing in cancer; expression changes and driver mutations of splicing factor genes. Oncogene 35, 2413-2427, doi:10.1038/onc.2015.318 (2016); Hsu, T. Y. et al. The spliceosome is a therapeutic vulnerability in MYC-driven cancer. Nature 525, 384-388, doi:10.1038/nature14985 (2015))。最近の研究で、ＰＲＭＴ１は、急性巨核球性白血病においてＲＮＡ結合タンパク質ＲＢＭ１５をメチル化することが示された(Zhang, L. et al. Cross-talk between PRMT1-mediated methylation and ubiquitylation on RBM15 controls RNA splicing. Elife 4, doi:10.7554/eLife.07938 (2015))。ＰＲＭＴ１により媒介されるＲＢＭ１５のメチル化は、その発現を調節し、その結果、ＡＭＬ細胞株におけるＰＲＭＴ１の過剰発現は、ＲＢＭ１５の下方調節、それによる分化に重要な遺伝子のプレｍＲＮＡイントロン領域と結合するその能力の妨げによって分化を遮断することが示された。推定ＰＲＭＴ１基質を同定するために、プロテオミクスアプローチ（メチルスキャン、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を用いて、ツールとしてのＰＲＭＴ１阻害剤である化合物Ｄに応答してアルギニンのメチル化状態に変化を有するタンパク質を同定した。化合物Ｄで処理した、またＤＳＭＯで処理した細胞抽出物からタンパク質フラグメントを、メチルアルギニン特異的抗体（ＡＤＭＡ、ＭＭＡ、ＳＤＭＡ）を用いて免疫沈降させ、質量分析によってペプチドを同定した。多くのタンパク質がアルギニンメチル化に変化を受けているが、ツール化合物で処理したＡＭＬ細胞株において同定された基質の大多数は転写レギュレーターおよびＲＮＡプロセシングタンパク質であった（図３）。
【０２０３】
まとめると、癌関連経路に及ぼすＰＲＭＴ１の影響は、阻害が抗腫瘍活性をもたらし、ＡＭＬ、リンパ腫、および固形腫瘍適応の処置に新規な治療機構を提供し得ることを示唆している。新たな文献に記載されているように、白血病におけるＡＭＬ−ＥＴＯにより駆動される発癌の阻害、乳癌における増殖促進シグナル伝達の阻害、ならびにＲＮＡ結合タンパク質およびスプライセオソーム装置のメチル化を介したスプライシングの調節を含むいくつかの機構が、血液腫瘍および固形腫瘍におけるＰＲＭＴ１阻害剤の使用の理論的根拠を裏づける。ＰＲＭＴ１を含むＩ型ＰＲＭＴの阻害は、異常な癌細胞の増殖および生存を抑制するための扱いやすい戦略と言える。
【０２０４】
生化学
Ｉ型ＰＲＭＴに対する効力および阻害機構を特徴付けるために化合物Ａを用いて詳細なｉｎ  ｖｉｔｒｏ生化学研究を行った。
【０２０５】
阻害機構
ＰＲＭＴ１に対する化合物Ａの阻害機構を基質競合試験によって調べた。阻害モダリティは、化合物ＡのＩＣ５０値を基質濃度をそのＫｍａｐｐで割った商の関数としてプロットし、得られたプロットを競合、不競合、および非競合的阻害に関するチェン・プルソフの関係と比較することによって検討した(Copeland, R. A. Evaluation of enzyme inhibitors in drug discovery. A guide for medicinal chemists and pharmacologists. Methods Biochem Anal 46, 1-265 (2005))。化合物ＡのＩＣ５０値はＳＡＭ濃度の上昇とともに低下し、このことは、化合物ＡによるＰＲＭＴ１の阻害は、非競合的阻害の式に当てはめた場合に１５ｎＭのＫｉａｐｐ値で、ＳＡＭに関して非競合的であったことを示す（図４Ａ）。化合物ＡのＩＣ５０値をＨ４  １−２１ペプチドの関数としてプロットした場合には、明確なモダリティ傾向が見られず（図４Ｂ）、混合型の阻害が示唆された。大域解析を用いてさらなる分析を行ったところ、３．７のα値が得られ、混合型としてのペプチド機構が確認され、１９ｎＭのＫｉａｐｐ値が得られた（図４Ｂ、挿入図）。
【０２０６】
時間依存性および可逆性
様々なＳＡＭ：ＰＲＭＴ１：化合物Ａプレインキュベーション時間および２０分の反応の後にＩＣ５０値を測定することにより化合物Ａの時間依存的阻害を評価した。ＳＡＭと非競合的である阻害機構は、化合物Ａの結合を支持するためにはＳＡＭ：ＰＲＭＴ１複合体の生成が必要であることを暗示し、従って、プレインキュベーション中にＳＡＭ（Ｋｍａｐｐで保持）を含めた。化合物Ａは、より長いプレインキュベーション時間での効力の増大により、ＰＲＭＴ１メチル化事象の時間依存的阻害を示した（図５Ａ）。時間依存的阻害が見られたことから、化合物効力のより良い提示を得るために、さらなるＩＣ５０決定には６０分のＳＡＭ：ＰＲＭＴ１：化合物Ａプレインキュベーションと４０分の反応時間を含んだ。これらの条件では３．１±０．４ｎＭ（ｎ＝２９）のＩＣ５０、すなわち、このアッセイの理論的強結合限界（０．２５ｎＭ）の１０倍を超える。種々のＰＲＭＴ１濃度でＩＣ５０値を調べると、実際の強結合限界が恐らくは低活性画分のために０．２５ｎＭよりも有意に低くなることが明らかであった（図５Ｂ）。化合物Ａの塩形態は、ＰＲＭＴ１に対して決定されたＩＣ５０値に有意な影響を及ぼさなかった（図５Ｂ）。
【０２０７】
時間依存的阻害に関する２つの説明は、遅い結合可逆的阻害と不可逆的阻害である。これらの２つの機構を識別するために、親和性選択質量分析（ＡＳＭＳ）を用いて化合物ＡとＰＲＭＴ１の結合を調べた。ＡＳＭＳはまず、非結合リガンドから結合リガンドを分離し、次に、可逆的に結合したリガンドをＭＳにより検出する。ＰＲＭＴ１：ＳＡＭと化合物Ａとの２時間のプレインキュベーションを用いて、図５Ａに示されるプロフィールに基づいて時間依存的複合体（ＥＳＩ＊）が完全に形成されたことを確認し、ここでは、最大効力は２０分のプレインキュベーション後に見られた。これらの条件下、化合物Ａは、ＡＳＭＳを用いて検出可能であった。このことは、ＡＳＭＳが不可逆的に結合した化合物Ａを検出できないであろうことから、この基本的機構が本来可逆的であることを示唆する。解離速度解析を含む最終的な可逆性試験はまだ行われておらず、この機構はさらに確認されるであろう。
【０２０８】
結晶学
阻害剤結合様式を決定するために、ＰＲＭＴ１およびＳＡＨに結合した化合物Ａの共結晶構造を決定した（分解能２．４８Å）（図６）。ＳＡＨは、ＰＲＭＴ１によるＳＡＭからのメチル基の除去時に形成される生成物であり；従って、ＳＡＨおよびＳＡＭは同様にＰＲＭＴ１の同じポケットを占有するはずである。阻害剤は、ＳＡＨポケットに直接隣接する基質ペプチドによって通常占有されるクレフト内で結合し、そのジアミン側鎖は推定アルギニン基質部位を占有する。末端メチルアミンは、ＳＡＨのチオエーテルから３．６ÅにあるＧｌｕ１６２側鎖残基と水素結合を形成し、ＳＡＨ結合ポケットはＴｙｒ５７およびＭｅｔ６６によって化合物Ａに架橋される。化合物Ａは化合物Ａのピラゾール窒素のプロトンとＧｌｕ６５の酸性側鎖の間の水素結合の形成を介してＰＲＭＴ１と結合し、ジエトキシ分岐シクロヘキシル部分は、Ｔｙｒ５７、Ｉｌｅ６２、Ｔｙｒ１６６およびＴｙｒ１７０によって形成される疎水性の溝内の溶媒露出面に沿って存在する。ＳＡＨと阻害剤結合の間の空間的分離、ならびにＴｙｒ５７などの残基との相互作用は、酵素的研究で明らかになったＳＡＭ非競合的機構を裏づけ得る。化合物Ａが基質ペプチドポケット内で結合し、ジアミン側鎖は基質アルギニン残基のアミンを模倣し得るという所見は、阻害剤モダリティがペプチドと競合し得ることを暗示する。生化学様式の阻害研究は、化合物Ａがペプチドに対する混合型阻害剤であることを裏づける（図４Ｂ）。化合物Ａの時間依存的挙動ならびにペプチドクレフト外の基質ペプチドの非活性部位結合の可能性は両方とも、ペプチドと競合しない阻害様式をもたらす可能性があり、構造研究および生化学研究によって示唆されたモダリティの違いを説明する。
【０２０９】
相同分子種
毒性学研究の解釈を助けるために、化合物Ａの効力を、ＰＲＭＴ１のラットおよびイヌ相同分子種に対して評価した。ヒトＰＲＭＴ１を用いた場合と同様に、化合物ＡはラットおよびイヌＰＲＭＴ１に対して時間依存的阻害を明らかにし、ＩＣ５０値はプレインキュベーションの延長に伴って低下した（図７Ａ）。さらに、一定の範囲の酵素濃度（０．２５〜３２ｎＭ）で化合物Ａの効力の変化は見られず、測定されたＩＣ５０値はヒト、ラットまたはイヌのアッセイの強結合限界に近づくことはなかったことが示唆される（図７Ｂ）。ＩＣ５０値は、ヒトＰＲＭＴ１を評価するために使用したものと同じ条件を用いて決定し、化合物Ａの効力は総ての種で２倍未満の変動であったことが明らかになった（図７Ｃ）。
【０２１０】
選択性
化合物Ａの選択性を、ＰＲＭＴファミリーメンバーのパネルで評価した。代表的Ｉ型ファミリーメンバー（ＰＲＭＴ３、ＰＲＭＴ４、ＰＲＭＴ６およびＰＲＭＴ８）およびＩＩ型ファミリーメンバー（ＰＲＭＴ５／ＭＥＰ５０およびＰＲＭＴ９）に対して、６０分のＳＡＭ：酵素：化合物Ａプレインキュベーション後にＩＣ５０値を決定した。化合物Ａは、総てのＩ型ＰＲＭＴの活性を様々な効力で阻害したが、ＴｙｐｅＩＩファミリーメンバーの阻害はできなかった（図８Ａ）。Ｉ型ＰＲＭＴのさらなる特徴は、増加する酵素：ＳＡＭ：化合物Ａプレインキュベーション時間の後に見られた効力の増大のために、化合物ＡはＰＲＭＴ４、ＰＲＭＴ６およびＰＲＭＴ８の時間依存的阻害剤であったことを明らかにしたが、ＰＲＭＴ３は時間依存的挙動を示さなかった（図８Ｂ）。
【０２１１】
化合物Ａの選択性をさらに特徴付けるために、２１種のメチルトランスフェラーゼの阻害を化合物Ａの単一濃度（１０μＭ、Ｒｅａｃｔｉｏｎ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）で評価した。最高程度の阻害１８％はＰＲＤＭ９に対して見られた。全体的に見れば、化合物Ａは、供試したメチルトランスフェラーゼの最小阻害を示し、それがＩ型ＰＲＭＴの選択的阻害剤であることが示唆される（表１）。さらなる選択性アッセイは、安全性の節で記載される。
【０２１２】
【表１】
2020510618.tif 000021
【０２１３】
まとめると、化合物Ａは、３〜５ｎＭの範囲のＩＣ５０値で、ＰＲＭＴ１、ＰＲＭＴ６およびＰＲＭＴ８に対して同等の生化学的効力を示すＩ型ＰＲＭＴファミリーメンバーの強力、可逆的、選択的阻害剤である。化合物Ａとの複合体におけるＰＲＭＴ１の結晶構造より、化合物Ａはペプチドポケット内で結合することが明らかであり、結晶構造ならびに酵素的研究の両方がＳＡＭの非競合的機構と一致する。
【０２１４】
生物学
細胞機構の影響
ＰＲＭＴ１の阻害は、ＭＭＡおよびＳＤＭＡの並行増加を伴って、ヒストンＨ４のアルギニン３（Ｈ４Ｒ３ｍｅ２ａ）を含む細胞ＰＲＭＴ１基質に対するＡＤＭＡの減少をもたらすと推定される(Dhar, S. et al. Loss of the major Type I arginine methyltransferase PRMT1 causes substrate scavenging by other PRMTs. Sci Rep 3, 1311, doi:10.1038/srep01311 (2013))。アルギニンのメチル化に対する化合物Ａの効果を評価するために、ＭＭＡの増加に関連する用量応答を、ＭＭＡを検出するための抗体を用いて細胞内ウエスタンアッセイで評価し、細胞機構的ＥＣ５０を１０．１±４．４ｎＭと決定した（図９）。用量応答は、恐らくはＩ型ＰＲＭＴ間の活性の違いまたは特定の基質サブセットに対する効力の違いのために、二相を示した。二相曲線を記述する式を用いてデータの当てはめを行い、供試濃度の範囲で第２変曲点に関連する明白なプラトーが存在しなかったために、第１変曲点が報告された。このアッセイ形式で種々の塩形態を試験し、総てが同等のＥＣ５０値を示し、従って、総ての生物学的試験で互換的であると見なされる（図９）。以下に示すような選択腫瘍種において他のメチル化状態に対する時機、持続性、および影響を調べるためにさらなる研究を行った。ＭＭＡの誘導に対する化合物Ａの効力は、化合物Ａが、細胞内の１型ＰＲＭＴの阻害に関連する生物学的機構を検討するために使用可能であることを示す。
【０２１５】
癌におけるＩ型ＰＲＭＴの発現
癌ゲノムアトラス（ＴＣＧＡ）を介して１００を超える癌から収集された複数の腫瘍種およびｃＢｉｏＰｏｒｔａｌに提示されているその他の原発腫瘍データベースからの遺伝子発現データの解析は、ＰＲＭＴ１が癌で高度に発現され、他の固形腫瘍および血液悪性腫瘍に比べてリンパ腫（びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ＤＬＢＣＬ）で最高レベルであることを示す（図１０）。一般的なハウスキーピング遺伝子であるＡＣＴＢおよび皮膚で選択的に発現される遺伝子であるＴＹＲの発現もまた、それぞれ高い遍在発現または組織限定発現に関連する範囲を特徴付けるために調べた。他の癌の中でもリンパ腫での高い発現から、化合物Ａ阻害の標的が前臨床試験で評価された細胞株に相当する原発腫瘍に存在するというさらなる信頼が得られる。ＰＲＭＴ３、４、および６も一定範囲の腫瘍種で発現されるが、ＰＲＭＴ８発現は、その組織特異的発現を考慮して予想されるように、より限定されると見られる(Lee, J., Sayegh, J., Daniel, J., Clarke, S. & Bedford, M. T. PRMT8, a new membrane-bound tissue-specific member of the protein arginine methyltransferase family. J Biol Chem 280, 32890-32896, doi:10.1074/jbc.M506944200 (2005))。
【０２１６】
細胞表現型効果
化合物Ａを、細胞数の代わりにＡＴＰを定量するＣｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いた６日増殖−細胞死アッセイで、培養腫瘍細胞株増殖を阻害するその能力に関して分析した。全６日アッセイにわたって増殖を許容した条件を特定するために、総ての細胞株の増殖を広範な播種密度で経時的に評価した。細胞を最適な播種密度で播種し、一晩のインキュベーション後に、２０点２倍漸増の化合物を加え、プレートを６日間インキュベートした。反復プレートの細胞を化合物の添加時に採取して開始細胞数（Ｔ０）を定量した。６日の処理後に得られた値をＴ０値の関数として表し、化合物濃度に対してプロットした。Ｔ０値を１００％に対して正規化し、化合物添加時の細胞数を表す。データを４パラメーター式に当てはめて濃度反応曲線を作成し、増殖ＩＣ５０（ｇＩＣ５０）を求めた。ｇＩＣ５０は「増殖ウインドウ」の中点、すなわち、化合物添加時の細胞数（Ｔ０）と６日後の細胞数（ＤＭＳＯ対照）との差である。増殖−細胞死アッセイは正味の集団変化を定量するために使用でき、明らかに、細胞死（細胞傷害性）を化合物添加時の数（Ｔ０）に比べて少ない細胞として定義する。負のＹｍｉｎ−Ｔ０値は細胞死を示し、ｇＩＣ１００値は、１００％の増殖阻害に必要とされる化合物の濃度を表す。化合物Ａの増殖阻害効果を、固形および血液悪性腫瘍に相当する１９６のヒト癌細胞株でこのアッセイを用いて評価した（図１１）。
【０２１７】
化合物Ａは、ほとんどの細胞株で完全に近いまたは完全な増殖阻害を誘導し、一部が負のＹｍｉｎ−Ｔ０値で示されるような細胞傷害性応答を示した（図１１Ｂ）。この効果は、ＡＭＬおよびリンパ腫癌細胞株で最も顕著であり、それぞれ細胞株の５０および５４％が細胞傷害性応答を示した。ラット１４日ＭＴＤ（１５０ｍｇ／ｋｇ、Ｃａｖｅ＝２．１μＭ）から計算した総ＡＵＣまたは暴露（Ｃａｖｅ）を、感受性の評価のための化合物Ａの臨床関連濃度の推定値として用いた。リンパ腫細胞株は２．１μＭ未満のｇＩＣ１００値で細胞傷害性を示したが、評価したあらゆる腫瘍種にわたる多くの細胞株はｇＩＣ５０値≦２．１μＭを示し、患者において抗腫瘍活性に関連する濃度が達成可能であることが示唆される。イヌ２１日ＭＴＤはやや高く（２５ｍｇ／ｋｇ；総ＡＵＣまたはＣａｖｅ＝３．２μＭ）、従って、ラットからのより低い濃度を、細胞株感受性を評価するためのより保存的な標的とする。リンパ腫細胞株はＩ型ＰＲＭＴ阻害に感受性が高く、ｇＩＣ５０中央値は０．５７μＭであり、５４％に細胞傷害性が見られた。固形腫瘍種のうち、黒色腫および腎臓癌細胞株（主として明細胞腎臓癌腫を表す）で化合物Ａの強力な抗増殖活性が見られたが、このアッセイ形式では、応答は圧倒的に細胞増殖抑制であった（図１１、表２）。
【０２１８】
【表２】
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【０２１９】
化合物Ａの抗増殖効果の評価は、ＰＲＭＴ１の阻害が一定範囲の固形および血液悪性腫瘍を表す細胞株にわたって強力な抗腫瘍活性をもたらすことを示す。これらのデータを考え合わせると、固形および血液悪性腫瘍における臨床開発が正当であることが示唆される。優先される適応としては、以下が含まれる。
・リンパ腫：細胞株の５４％で細胞傷害性
・ＡＭＬ：細胞株の５０％で細胞傷害性
・腎細胞癌：細胞株の６０％でｇＩＣ５０≦２．１μＭ
・黒色腫：細胞株の７１％でｇＩＣ５０≦２．１μＭ
・ＴＮＢＣを含む乳癌：細胞株の４１％でｇＩＣ５０≦２．１μＭ
【０２２０】
リンパ腫の生物学
細胞機構的効果
リンパ腫におけるアルギニンのメチル化に対する化合物Ａの効果を評価するために、ヒトＤＬＢＣＬ細胞株（Ｔｏｌｅｄｏ）を０．４μＭの化合物Ａまたはビヒクルで最大１２０時間処理し、その後、タンパク質溶解液を、種々のアルギニンメチル化状態に対する抗体を用いてウエスタン分析により評価した。予想されるように、化合物暴露時にＡＤＭＡのメチル化は低下したが、ＭＭＡは増加した（図１２）。また、ＳＤＭＡレベルの増加も見られ、ＭＭＡの増加がＳＤＭＡ形成の主要な触媒であるＰＲＭＴ５の潜在的基質のプールに蓄積をもたらしたことが示唆された。多くの基質が様々な動態で検出されたことおよびＤＭＳＯ処理サンプル間でＡＤＭＡレベルに変動があることを考えれば、全レーンおよび顕著な４５ｋＤａバンドの両方がＡＤＭＡを評価するための特徴であった。ＭＭＡの増加は２４時間で明らかになり、４８時間でほぼ最大となったが、４５ｋＤａのＡＤＭＡバンドの低下は、最大効果を達成するために７２〜９６時間を要した。ＳＤＭＡの増加は化合物暴露の４８時間後に明らかとなったが、１２０時間増加し続け、Ｉ型ＰＲＭＴによるＭＭＡのＡＤＭＡへの変換からＩＩ型ＰＲＭＴによるＳＤＭＡへの潜在的スイッチと一致する（図１２）。
【０２２１】
アルギニンのメチル化（ＭＭＡ、ＡＤＭＡ、ＳＤＭＡ）に対する化合物Ａの効果に関連する用量応答を、リンパ腫細胞株のパネルで決定した（図１３）。ＡＤＭＡ低下を全レーンで、および評価した総ての細胞株で検出不能なレベルにまで低下した単一の４５ｋＤａバンドで評価した。全体的に見れば、最大効果の５０％を達成するために必要とされる濃度は細胞株間で同等であり、６日増殖細胞死アッセイでのｇＩＣ５０には相当せず、この感受性の欠如は不十分な標的結合によっては説明されないことが示唆された。
【０２２２】
化合物Ａに応答したアルギニンのメチル化における大域変化の持続期間を決定するために、化合物のウォッシュアウト後に化合物Ａで処理した細胞でＡＤＭＡ、ＳＤＭＡ、およびＭＭＡレベルを評価した（図１４）。Ｔｏｌｅｄｏ細胞を０．４μＭの化合物Ａとともに７２時間培養して、アルギニンメチル化マークに対するロバストな効果を確立した。次に、細胞を洗浄し、化合物Ａ不含培地で培養し、サンプルを１２０時間で毎日採取し、アルギニンのメチル化レベルをウエスタン分析によって調べた。ＭＭＡレベルは急速に低下し、化合物Ａのウォッシュアウト後２４時間でベースラインに戻ったが、ＡＤＭＡおよびＳＤＭＡはそれぞれ２４時間および９６時間でベースラインに戻った。特に、４５ｋＤａ  ＡＤＭＡバンドの回復は、ＡＤＭＡウエスタンブロットで、他のほとんどの種よりも遅れて見られ、化合物Ａによるアルギニンのメチル化変化の持続期間は基質によって変動し得ることが示唆された。ＳＤＭＡは、６時間のウォッシュアウトの後であっても増加し続けると思われた。このことは、ウォッシュアウト後になおベースラインに戻っていなかったＭＭＡの持続的増加と相まって、明確なプラトー無く１２０時間にわたって見られた継続的な増加と一致する（図１２）。各修飾の持続期間は一般に、化合物Ａによってもたらされたアルギニンのメチル化変化の動態を反映し、ＭＭＡが最も急速であった。
【０２２３】
細胞表現型効果
化合物Ａによる増殖阻害に関連する経時的推移を評価するために、リンパ腫細胞株のサブセットで延長期間増殖−細胞死アッセイを行った。従前に記載した６日増殖アッセイと同様に、アッセイの期間中に増殖を確保するために播種密度を最適化し、３〜１０日目から始めて選択された時点でＣＴＧにより細胞数を評価した。ＴｏｌｅｄｏおよびＤａｕｄｉリンパ腫細胞株では、増殖阻害は早ければ６日で見られ、８日で最大となった（図１５）。
【０２２４】
化合物Ａへの延長暴露の効果を測定し、６日のアッセイで細胞増殖抑制応答を示した細胞株がその後の時点で細胞傷害性を受け得るかどうかを決定するために、細胞株のより大きなセットを６日目および１０日目に評価した。化合物Ａに対する暴露の時間延長は、評価したリンパ腫細胞株で効力（ｇＩＣ５０）または細胞傷害性（Ｙｍｉｎ−Ｔ０）に対して最小の効果しかなく（図１６）、６日増殖評価は感受性の評価に利用できることを示す。
【０２２５】
増殖阻害が６日目に見られ、暴露の延長が効力または阻害率％に最小の影響しか持たなかったことを考えて、ホジキンおよび非ホジキンサブタイプを表すリンパ腫細胞株の広域パネルを６日増殖−細胞死アッセイ形式で評価した（図１７）。この形式で総てのサブタイプに同等に感受性が見られ、多くの細胞株が、分類とは非依存的に細胞傷害性を受け（負のＹｍｉｎ−Ｔ０により示される）、化合物Ａは評価したリンパ腫の総てのサブタイプで抗腫瘍効果を有することが示唆された。
【０２２６】
この増殖アッセイ結果は、ＰＲＭＴ１の阻害はリンパ腫細胞株のサブセットで明らかな細胞傷害性を誘導することを示唆する。この効果をさらに解明するために、化合物Ａで処理したリンパ腫細胞株の細胞周期分布を、ヨウ化プロピジウム染色とその後のフローサイトメトリーを用いて評価した。６日増殖アッセイで一定範囲のＹｍｉｎ−Ｔ０およびｇＩＣ５０値を示した細胞株を、アッセイの期間に対数増殖を可能とするように低密度で播種し、様々な濃度の化合物Ａで処理した。増殖−細胞死アッセイ結果と一致して、Ｔｏｌｅｄｏ細胞で、濃度≧１０００ｎＭの化合物Ａでの処理３日後に始まる時間および用量依存的様式で、細胞死の指標であるＧ１未満（＜Ｇ１）での細胞蓄積が見られた（図１８）。濃度≧１００ｎＭでは、７日目までに、Ｇ１未満集団の増加が見られた。６日増殖アッセイで明らかな細胞増殖阻害を受けたＵ２９３２およびＯＣＩ−Ｌｙ１細胞株では、この効果は１０μＭの化合物Ａで顕著であるだけであった。このアッセイ形式では、他の細胞周期での顕著な効果は見られなかった。
【０２２７】
細胞周期のＦＡＣＳ分析を確認するために、カスパーゼ切断の評価を、１０日の経時的推移中のアポトーシスの付加的測定として行った。アッセイ期間中に一貫した増殖を確保するために播種密度を最適化し、発光性カスパーゼ−Ｇｌｏ  ３／７アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いてカスパーゼの活性化を評価した。カスパーゼ−Ｇｌｏ  ３／７シグナルを細胞数（ＣＴＧにより評価）に対して正規化し、対照（ＤＭＳＯ処理）細胞に対する誘導倍率として示した。カスパーゼ３／７活性を、化合物Ａへの細胞傷害性応答（Ｔｏｌｅｄｏ）および細胞増殖抑制応答（Ｄａｕｄｉ）を示すＤＬＢＣＬ細胞株において１０日の経時的推移中、モニタリングした（図１９）。増殖−細胞死アッセイで見られたプロフィールと一致して、Ｔｏｌｅｄｏ細胞株は、総ての時点で細胞数の減少を伴うロバストなカスパーゼの活性化を示したが、Ｄａｕｄｉ細胞株でのカスパーゼ活性の誘導はあまり顕著でなく、最高濃度の化合物Ａに限定されていた。
【０２２８】
これらのデータは、細胞周期プロフィールと考え合わせると、化合物ＡはＴｏｌｅｄｏ  ＤＬＢＣＬ細胞株においてカスパーゼにより媒介されるアポトーシスを誘導することを示し、他のリンパ腫細胞株で見られた細胞傷害性は化合物Ａによるアポトーシス経路の活性化を反映し得ることが示唆される。細胞傷害性に関連する予測バイオマーカーを同定するために、化合物Ａ処置時に細胞傷害性応答を受けた細胞株と細胞増殖抑制応答を受けた細胞株の間で、遺伝子発現パターンおよび体細胞変異を比較した。この分析により明確な相関は確認されなかったが、合理的な組合せを探索するためのアプローチとともに文献調査を行ったところ、細胞傷害性の潜在的マーカーとしての５−メチルチオアデノシンホスホリラーゼ（ＭＴＡＰ）遺伝子の欠失が特定された。
【０２２９】
マウス異種移植片における抗腫瘍効果
腫瘍増殖に対する化合物Ａの効果をＴｏｌｅｄｏ（ヒトＤＬＢＣＬ）異種移植モデルで評価した。皮下Ｔｏｌｅｄｏ腫瘍を担持する雌ＳＣＩＤマウスの体重を測定し、腫瘍をカリパスで測定し、マウスを腫瘍サイズに従って１０個体ずつの処置群に乱塊法で割り付けた。マウスにビヒクルまたは化合物Ａ（１５０ｍｇ／ｋｇ〜６００ｍｇ／ｋｇ）のいずれかを２８日間毎日経口投与した。試験中、週に２回、マウスの体重を測定し、腫瘍測定を行った。総ての用量で有意な腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）が見られ、≧３００ｍｇ／ｋｇの用量で退縮が見られた（図２０、表５）。いずれの用量群でも有意な体重低下は無かった。
【０２３０】
評価した総ての用量で完全なＴＧＩが見られたことを考えて、より低用量の化合物Ａの抗腫瘍効果を試験するため、ならびに毎日（ＱＤ）に対して１日２回（ＢＩＤ）の投与を比較するために第２の試験を行った。この第２の試験では、マウスにビヒクルまたは化合物Ａ（３７．５ｍｇ／ｋｇ〜１５０ｍｇ／ｋｇ）のいずれかを２４日間ＱＤまたは７５ｍｇ／ｋｇのＢＩＤで経口投与した。この試験で、７５ｍｇ／ｋｇのＢＩＤ投与は、１５０ｍｇ／ｋｇと同じＴＧＩ（それぞれ９５％および９６％）をもたらし、一方、≦７５ｍｇ／ｋｇのＱＤは部分的ＴＧＩ（≦７９％）をもたらした（図２０、表５）。いずれの用量群でも有意な体重低下は無かった。これらのデータは、同じ総一日用量でのＢＩＤまたはＱＤ投与はいずれも同等の有効性をもたらすはずであることを示唆する。
【０２３１】
さらなる腫瘍種
ＡＭＬ
リンパ腫細胞株に加え、化合物Ａは、６日増殖アッセイで検討したＡＭＬ細胞株のサブセットに強力な細胞傷害活性を示した（表３）。１０中８の細胞株が＜２μＭのｇＩＣ５０値を有し、化合物Ａは５つの細胞株で細胞傷害性を誘導した。ＰＲＭＴ１は、Ｍ２  ＡＭＬサブタイプに特徴的なＡＭＬ−ＥＴＯ融合と相互作用するが(Shia, W. J. et al. PRMT1 interacts with AML1-ETO to promote its transcriptional activation and progenitor cell proliferative potential. Blood 119, 4953-4962, doi:10.1182/blood-2011-04-347476 (2012))、この融合タンパク質を保有する細胞株（Ｋａｓｕｍｉ−１およびＳＫＮＯ−１）は、ｇＩＣ５０により測定されるような、または細胞傷害性を受けた、化合物Ａに対して感受性を示す唯一の細胞株ではなく（表３、図２１）、従って、この発癌性融合タンパク質の存在は、化合物Ａに対するＡＭＬ細胞株の感受性を排他的に予測するものではない。
【０２３２】
【表３】
2020510618.tif 000023
【０２３３】
リンパ腫での研究と同様に、化合物Ａへの暴露延長の効果を測定するため、および６日アッセイで細胞増殖抑制応答を示したＡＭＬ細胞株がその後の時点で細胞傷害性を受け得るかどうかを決定するために、細胞株のセットを６日目および１０日目に評価した。リンパ腫の結果と一致して、化合物Ａへの暴露時間の延長は、評価したＡＭＬ細胞株で効力（ｇＩＣ５０）または細胞傷害性（Ｙｍｉｎ−Ｔ０）に最小の影響しか持たなかった（図２１）。
【０２３４】
腎細胞癌
腎細胞癌細胞株は、他の固形腫瘍種と比較して最低のｇＩＣ５０中央値を有した。供試した細胞株に化合物Ａでの処理時に細胞傷害性応答を示したものは無かったが、総てが完全な増殖阻害を示し、１０のうち６の細胞株がｇＩＣ５０値≦２μＭを有した（表４）。プロファイルした１０のうち７の細胞株が腎臓癌の主要な臨床サブタイプである淡明細胞型腎細胞癌（ｃｃＲＣＣ）を表す。
【０２３５】
【表４】
2020510618.tif 000024
【０２３６】
化合物Ａによる腎臓癌細胞株における増殖阻害の経時的推移を評価するために、４種のｃｃＲＣＣ細胞株のパネルで、３、４、５、および６日目にＣＴＧによって細胞増殖を評価した（図２２）。活性の最大変化は３〜４日目に見られ、総ての細胞株がｇＩＣ５０値の低下と増殖阻害の増加を示した。化合物Ａの効力（ｇＩＣ５０により評価）は４つのうち３つの細胞株で４日目までに最大となり、６日のアッセイ期間中、さらなる変化は無かった。加えて、増殖阻害パーセントは評価した総ての細胞株で１００％に達した。よって、ｃｃＲＣＣ細胞株における最大増殖阻害は、細胞株スクリーニング法で用いた６日増殖ウインドウ内に明らかに認められた。
【０２３７】
カスパーゼの活性化を増殖の経時的推移中に評価したところ、Ｙｍｉｎ−Ｔ０値により示されるような明白な細胞傷害性の欠如と一致し、カスパーゼ切断は最高濃度（３０μＭ）でのみ見られ、このことより、アポトーシスはｃｃＲＣＣ細胞株において化合物Ａにより誘導された全体的な増殖阻害効果に最小の寄与しか持たない可能性があることを示す。
【０２３８】
腫瘍増殖に対する化合物Ａの効果を、ヒト腎細胞癌異種移植片（ＡＣＨＮ）を担持するマウスで評価した。皮下ＡＣＨＮ細胞株腫瘍を担持する雌ＳＣＩＤマウスの体重を測定し、腫瘍をカリパスで測定し、腫瘍サイズに従って１０個体ずつの処置群に乱塊法で割り付けた。マウスにビヒクルまたは化合物Ａ（１５０ｍｇ／ｋｇ〜６００ｍｇ／ｋｇ）のいずれかを最大５９日間毎日経口投与した。試験中、週に２回、マウスの体重を測定し、腫瘍測定を行った。総ての用量で有意な腫瘍増殖阻害が見られ、≧３００ｍｇ／ｋｇの用量で退縮が見られた。毎日６００ｍｇ／ｋｇで処置した動物に有意な体重低下が見られ、従って、その投与群は３１日目を終了とした（図２３、表５）。
【０２３９】
【表５】
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【０２４０】
これらのデータを考え合わせると、ヒト固形腫瘍および血液腫瘍の皮下異種移植において、同等の用量で１００％のＴＧＩが達成され得ることが示唆される。
【０２４１】
乳癌
乳癌細胞株は化合物Ａに対して一定範囲の感受性を示し、多くの場合、６日増殖アッセイで部分的増殖阻害を示した（図２４）。トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）を表す細胞株は、非ＴＮＢＣ細胞株と比較してやや低いｇＩＣ５０中央値を有した（ＴＮＢＣおよび非ＴＮＢＣに関してそれぞれ３．６μＭおよび６．８μＭ）。
【０２４２】
化合物Ａによる増殖に対する効果は細胞増殖抑制であり、乳癌細胞株の大部分で完全な増殖阻害をもたらさなかったので、化合物Ａに対する感受性が暴露の延長に伴って増加するかどうかを決定するために延長期間増殖−細胞死アッセイを行った。供試した７／１７細胞株で、≧１０％までの最大阻害パーセントの増加およびｇＩＣ５０の２分の１以下への低下が見られた（図２５）。暴露延長アッセイでは、１１／１７細胞株がｇＩＣ５０≦２μＭ（６５％）を有したが、７日アッセイ形式では、７／１７（４１％）がこの判定基準を満たした。
【０２４３】
黒色腫
固形腫瘍種間で、化合物Ａは、黒色腫細胞株に最も強力な抗増殖効果を有した（図１１）。評価した７のうち６細胞株が２μＭ未満のｇＩＣ５０値を有した（表６）。総ての黒色腫細胞株で、ｇＩＣ５０値とは無関係に、化合物Ａの効果は細胞増殖抑制性であった。
【０２４４】
【表６】
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【０２４５】
実施例２
予測バイオマーカー
化合物Ａに対する細胞株の感受性の、ｇＩＣ５０および体細胞変異または遺伝子発現との関連による順位は、Ｃｅｌｌ  Ｌｉｎｅ  Ｅｎｃｙｌｏｐｅｄｉａ（ＣＣＬＥ）で利用可能なゲノムデータを用いて調べた。さらに、リンパ腫株は、化合物Ａに対して細胞傷害性応答を受けるそれらの能力によって層化した。このアプローチを用いた場合、おそらく細胞培養における化合物Ａの活性が幅広いために、いずれの癌関連変化にも明らかな相関は決定できなかった。よって、ＰＲＭＴ５阻害で見られた組合せ活性に基づいて合理的アプローチを検討した。
【０２４６】
最近の研究では、５−メチルチオアデノシンホスホリラーゼ（ＭＴＡＰ）遺伝子の欠失が腫瘍細胞において内因性ＰＲＭＴ５を阻害し得ることが記載されている。ＭＴＡＰ遺伝子は、膠芽腫の４０％、黒色腫および膵臓腺癌の２５％、ならびに非小細胞肺癌の１５％を含む癌で、高頻度に欠失していた(Mavrakis, K. J. et al., Disordered methionine metabolism in MTAP/CDKN2A-deleted cancers leads to dependence on PRMT5. Science 351, 1208-1213, doi:10.1126/science.aad5944 (2016); Marjon, K. et al., MTAP Deletions in Cancer Create Vulnerability to Targeting of the MAT2A/PRMT5/RIOK1 Axis. Cell Rep 15, 574-587, doi:10.1016/j.celrep.2016.03.043 (2016); Kryukov, G. V. et al., MTAP deletion confers enhanced dependency on the PRMT5 arginine methyltransferase in cancer cells. Science 351, 1214-1218, doi:10.1126/science.aad5214 (2016))。ＭＴＡＰの欠失は、代謝産物メチルチオアデノシン（ＭＴＡ）のレベルの上昇をもたらし、ＰＲＭＴ５生化学活性を阻害してＳＤＭＡの細胞レベルの低下をもたらすことが示されている(Mavrakis, K. J. et al., Disordered methionine metabolism in MTAP/CDKN2A-deleted cancers leads to dependence on PRMT5. Science 351, 1208-1213, doi:10.1126/science.aad5944 (2016); Marjon, K. et al., MTAP Deletions in Cancer Create Vulnerability to Targeting of the MAT2A/PRMT5/RIOK1 Axis. Cell Rep 15, 574-587, doi:10.1016/j.celrep.2016.03.043 (2016); Kryukov, G. V. et al., MTAP deletion confers enhanced dependency on the PRMT5 arginine methyltransferase in cancer cells. Science 351, 1214-1218, doi:10.1126/science.aad5214 (2016))。癌細胞株の成長阻害に対する化合物ＡおよびＰＲＭＴ５阻害剤の複合効果を考えれば、ＭＴＡＰ欠失は、内因性ＰＲＭＴ５が部分的阻害され、それにより、細胞をＰＲＭＴ１阻害に増感させ、有効性に必要とされる化合物Ａの濃度を低下させるという筋書きを示し得る。腫瘍種非依存的に見れば、ＭＴＡＰ欠損は、化合物Ａ感受性と相関しなかった。しかしながら、リンパ腫および黒色腫細胞株において化合物Ａ処置に関連するより低いｇＩＣ５０中央値がＭＴＡＰ欠失と相関していた（ＭＴＡＰ非欠損細胞株と＞５倍の差）（図２６）。これらの差は、一つには選択腫瘍種内の数（Ｎ）が少ないために統計的に有意ではなかったが、これらの所見は、予測バイオマーカー仮説の開発に寄与した。さらに、リンパ腫では、ＭＴＡＰ欠失を有する細胞株は、正から負へのＹｍｉｎ−Ｔ０の変化によって示されされるように（表７）、化合物Ａに応答して細胞傷害性を受ける。
【０２４７】
【表７】
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【０２４８】
また、ＭＴＡがＰＲＭＴ５を阻害し得る機序を強調する最近の刊行物でも、培養細胞におけるＭＴＡのレベルが評価されている。ＭＴＡＰ非欠損株および欠損株にはいつかのバリエーションがあるものの、全体的なＭＴＡレベルは培養系で経時的に増加すると思われた(Kamatani, N. & Carson, D. A. Abnormal regulation of methylthioadenosine and polyamine metabolism in methylthioadenosine phosphorylase-deficient human leukemic cell lines. Cancer Res 40, 4178-4182 (1980))。これは、ＭＴＡＰの発現と化合物Ａに対する感受性の間の関係を検討するために使用した６日増殖アッセイが、ＭＴＡレベルがアッセイ経過中にＰＲＭＴ５を阻害するのに必要とされるレベルに達していなければ相関が十分に明らかにならないことがあるという仮説につながる。癌細胞増殖を阻害するために高いＭＴＡレベルを化合物Ａと組み合わせることができるかどうかをさらに検討するために、固定濃度の外因性ＭＴＡ（１、１０、５０、または１００μＭ）を６日増殖アッセイにて化合物Ａの２０点漸増法で試験した。ＭＴＡＰ欠損による化合物Ａに対する感受性の上昇を示さなかった６種類の乳癌細胞株を選択した。増殖ウインドウに及ぼす最高濃度のＭＴＡの影響のために、ｇＩＣ５０よりもＥＣ５０値を効力の比較に使用した。化合物ＡのＥＣ５０における低下（＞１０倍）が、少なくとも１種類の濃度のＭＴＡで評価した総ての細胞株で明白であった（図２７）。加えて、細胞増殖抑制を有していたか、またはいずれの単剤にも応答しなかった５つのうち３つの細胞株で細胞増殖抑制から細胞傷害性への移行（負のＹｍｉｎ−Ｔ０）が見られた（図２８）。
【０２４９】
考え合わせると、このデータは、腫瘍特異的なＭＴＡＰ欠損がＰＲＭＴ５の内因性阻害剤の増加による化合物Ａに対する感受性の増強を明らかにできることを示唆する。ＭＴＡＰ欠失腫瘍におけるＭＴＡレベルの上昇はＰＲＭＴ５を阻害すると考えられるので、ＭＴＡＰ欠失は、化合物Ａ感受性の予測バイオマーカーとして潜在的有用性を持ち得る。ＭＴＡレベルがＭＴＡＰヌル腫瘍においてＰＲＭＴ５を阻害するのに十分な濃度を達成するかどうかを判定するために、ＭＴＡＰ欠失を有する細胞株ならびに原発腫瘍でＭＴＡレベルの評価を現在実施している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
2020510618.tif 000037
【図８】
2020510618.tif 000038
【図９】
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【図１０】
2020510618.tif 000040
【図１１】
2020510618.tif 000041
【図１２】
2020510618.tif 000042
【図１３】
2020510618.tif 000043
【図１４】
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【図１５】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【図１７】
2020510618.tif 000048
【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１Ａ】
2020510618.tif 000052
【図２１Ｂ】
2020510618.tif 000053
【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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