(57)【要約】本発明は、例えば、病理学的血管新生に関連する障害（例えば、眼障害）の治療のための、ポリマー（例えば、ヒアルロン酸（ＨＡ）ポリマー）に共有結合した抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ抗体）を含む抗体コンジュゲート、システイン操作抗体、その薬学的組成物、及びその使用を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）抗体及び（ｉｉ）前記抗体に共有結合したヒアルロン酸（ＨＡ）ポリマーを含む抗体コンジュゲートであって、前記ＨＡポリマーが、１．１以下の多分散性指数（ＰＤＩ）を有する、前記抗体コンジュゲート。
【請求項２】
前記ＨＡポリマーが、１．０〜１．１のＰＤＩを有する、請求項１に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項３】
前記ＨＡポリマーが、１．０〜約１．０５のＰＤＩを有する、請求項２に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項４】
前記ＨＡポリマーが、約１．０００１〜約１．０５のＰＤＩを有する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項５】
前記ＨＡポリマーが、約１．００１のＰＤＩを有する、請求項４に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項６】
前記ＨＡポリマーが、約１メガダルトン（ＭＤａ）以下の分子量を有する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項７】
前記ＨＡポリマーが、約２５ｋＤａ〜約５００ｋＤａの分子量を有する、請求項６に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項８】
前記ＨＡポリマーが、約１００ｋＤａ〜約２５０ｋＤａの分子量を有する、請求項７に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項９】
前記ＨＡポリマーが、約１５０ｋＤａ〜約２００ｋＤａの分子量を有する、請求項８に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項１０】
前記ＨＡポリマーが、直鎖状ＨＡポリマーである、請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項１１】
前記抗体コンジュゲートが、約１０ｎｍ〜約６０ｎｍの流体力学的半径を有する、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項１２】
前記抗体コンジュゲートが、約２５ｎｍ〜約３５ｎｍの流体力学的半径を有する、請求項１１に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項１３】
前記流体力学的半径が、約２０ｎｍ〜約３０ｎｍである、請求項１２に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項１４】
前記抗体コンジュゲートが、前記ＨＡポリマーに共有結合していない参照抗体と比較して増加した眼半減期を有する、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項１５】
前記眼半減期が、前記参照抗体と比較して少なくとも約２倍増加する、請求項１４に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項１６】
前記眼半減期が、前記参照抗体と比較して少なくとも約４倍増加する、請求項１５に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項１７】
前記眼半減期が、硝子体半減期である、請求項１４〜１６のいずれか１項に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項１８】
前記参照抗体が、前記抗体コンジュゲートの前記抗体と同一である、請求項１４〜１７のいずれか１項に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項１９】
前記抗体が、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−１３、ＩＬ−１３Ｒ、ＰＤＧＦ、アンジオポエチン、アンジオポエチン２、Ｔｉｅ２、Ｓ１Ｐ、インテグリンαｖβ３、αｖβ５、及びα５β１、ベータセルリン、アペリン／ＡＰＪ、エリスロポエチン、補体Ｄ因子、ＴＮＦα、ＨｔｒＡ１、ＶＥＧＦ受容体、ＳＴ−２受容体、ならびにＡＭＤリスクと遺伝的に関連するタンパク質からなる群から選択される生物学的分子に特異的に結合する、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項２０】
前記ＶＥＧＦ受容体が、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＶＥＧＦＲ３、ｍｂＶＥＧＦＲ、またはｓＶＥＧＦＲである、請求項１９に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項２１】
前記ＡＭＤリスクと遺伝的に関連するタンパク質が、補体経路成分Ｃ２、Ｂ因子、Ｈ因子、ＣＦＨＲ３、Ｃ３ｂ、Ｃ５、Ｃ５ａ、及びＣ３ａ、ＨｔｒＡ１、ＡＲＭＳ２、ＴＩＭＰ３、ＨＬＡ、ＩＬ−８、ＣＸ３ＣＲ１、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＣＥＴＰ、ＬＩＰＣ、ＣＯＬ１０Ａ１、ならびにＴＮＦＲＳＦ１０Ａからなる群から選択される、請求項１９に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項２２】
前記抗体が、ＶＥＧＦに特異的に結合する、請求項１９に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項２３】
前記抗体が、以下の６つの超可変領域（ＨＶＲ）、
（ａ）ＤＹＷＩＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（ｂ）ＧＸ１ＴＰＸ２ＧＧＸ３Ｘ４Ｘ５ＹＸ６ＤＳＶＸ７Ｘ８（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２（式中、Ｘ１がＩｌｅまたはＨｉｓであり、Ｘ２がＡｌａまたはＡｒｇであり、Ｘ３がＴｙｒまたはＬｙｓであり、Ｘ４がＴｈｒまたはＧｌｕであり、Ｘ５が、Ａｒｇ、Ｔｙｒ、Ｇｌｎ、またはＧｌｕであり、Ｘ６がＡｌａまたはＧｌｕであり、Ｘ７がＬｙｓまたはＧｌｕであり、Ｘ８がＧｌｙまたはＧｌｕである）、
（ｃ）ＦＶＦＦＬＰＹＡＭＤＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
（ｄ）ＲＡＳＱＸ１ＶＳＴＡＶＡ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１（式中、Ｘ１がＡｓｐまたはＡｒｇである）、
（ｅ）Ｘ１ＡＳＦＬＹＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２（式中、Ｘ１がＳｅｒまたはＭｅｔである）、及び
（ｆ）Ｘ１ＱＧＹＧＸ２ＰＦＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３（式中、Ｘ１が、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、またはＴｈｒであり、Ｘ２が、Ａｌａ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、またはＡｒｇである）を含む、請求項２２に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項２４】
前記抗体が、以下の６つのＨＶＲ、
（ａ）ＤＹＷＩＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（ｂ）ＧＩＴＰＡＧＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号７）、ＧＩＴＰＡＧＧＹＥＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２１）、またはＧＩＴＰＡＧＧＹＥＹＹＡＤＳＶＥＧ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（ｃ）ＦＶＦＦＬＰＹＡＭＤＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び
（ｆ）ＱＱＧＹＧＡＰＦＴ（配列番号１０）またはＱＱＧＹＧＮＰＦＴ（配列番号２３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項２３に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項２５】
前記抗体が、以下の６つのＨＶＲ、
（ａ）ＤＹＷＩＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（ｂ）ＧＩＴＰＡＧＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（ｃ）ＦＶＦＦＬＰＹＡＭＤＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び
（ｆ）ＱＱＧＹＧＡＰＦＴ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項２３または２４に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項２６】
前記抗体が、以下の重鎖可変（ＶＨ）ドメインフレームワーク領域（ＦＲ）、
（ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＩＳ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、
（ｂ）ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、
（ｃ）ＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＲＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号１５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び
（ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４をさらに含む、請求項２３〜２５のいずれか１項に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項２７】
前記抗体が、以下の軽鎖可変（ＶＬ）ドメインＦＲ、
（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、
（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、
（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＡＡＴＹＹＣ（配列番号１９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び
（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４をさらに含む、請求項２３〜２６のいずれか１項に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項２８】
前記抗体が、以下の６つのＨＶＲ、
（ａ）ＤＹＷＩＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（ｂ）ＧＩＴＰＡＧＧＹＥＹＹＡＤＳＶＥＧ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（ｃ）ＦＶＦＦＬＰＹＡＭＤＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び
（ｆ）ＱＱＧＹＧＮＰＦＴ（配列番号２３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項２３または２４に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項２９】
前記抗体が、以下のＶＬドメインＦＲ、
（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、
（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、
（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号２４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び
（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４をさらに含む、請求項２８に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項３０】
前記抗体が、以下の６つのＨＶＲ、
（ａ）ＤＹＷＩＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（ｂ）ＧＩＴＰＡＧＧＹＥＹＹＡＤＳＶＥＧ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（ｃ）ＦＶＦＦＬＰＹＡＭＤＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び
（ｆ）ＱＱＧＹＧＡＰＦＴ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項２３または２４に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項３１】
前記抗体が、以下のＶＬドメインＦＲ、
（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１７）、ＤＩＱＭＴＱＳＰＥＳＬＳＡＳＶＧＤＥＶＴＩＴＣ（配列番号２５）、またはＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＥＶＴＩＴＣ（配列番号２６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、
（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号１８）またはＷＹＱＱＫＰＧＥＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号２７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、
（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＡＡＴＹＹＣ（配列番号１９）またはＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＥＳＬＱＰＥＤＡＡＴＹＹＣ（配列番号２８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び
（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４をさらに含む、請求項３０に記載の抗体。
【請求項３２】
前記抗体が、以下のＶＨドメインＦＲ、
（ａ）ＥＥＱＬＶＥＥＧＧＧＬＶＱＰＧＥＳＬＥＬＳＣＡＡＳＧＦＥＩＳ（配列番号２９）またはＥＥＱＬＶＥＥＧＧＧＬＶＱＰＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＥＩＳ（配列番号５２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、
（ｂ）ＷＶＲＱＥＰＧＥＧＬＥＷＶＡ（配列番号３０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、
（ｃ）ＲＦＴＩＳＡＤＴＳＥＮＴＡＹＬＱＭＮＥＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号３１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び
（ｄ）ＷＧＱＧＥＬＶＴＶＳＳ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４をさらに含む、請求項２８〜３１のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項３３】
前記抗体が、（ａ）配列番号１１、４０、もしくは４２のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、（ｂ）配列番号１２、４１、もしくは４６のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む、請求項２２に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項３４】
前記ＶＨドメインが、以下のＦＲ、
（ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＩＳ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、
（ｂ）ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（配列番号１４）またはＷＶＲＱＥＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（配列番号３９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、
（ｃ）ＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＲＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号１５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び
（ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４をさらに含む、請求項３３に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項３５】
前記ＶＨドメインが、配列番号１１のアミノ酸配列を含む、請求項３４に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項３６】
前記ＶＬドメインが、以下のＦＲ、
（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１７）またはＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＤＣ（配列番号４５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、
（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、
（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＡＡＴＹＹＣ（配列番号１９）、ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＳＡＴＹＹＣ（配列番号４４）、またはＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣ（配列番号５４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び
（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２０）またはＦＧＱＧＴＫＶＥＶＫ（配列番号５５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４をさらに含む、請求項３３〜３５のいずれか１項に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項３７】
前記ＶＬドメインが、配列番号１２のアミノ酸配列を含む、請求項３６に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項３８】
前記抗体が、（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、請求項３３に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項３９】
前記抗体が、（ａ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、請求項３３に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項４０】
前記抗体が、（ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、請求項３３に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項４１】
前記抗体が、（ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、請求項３３に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項４２】
前記抗体が、（ａ）配列番号３３もしくは５１のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、（ｂ）配列番号１２、３４、３５、３６、３７、もしくは３８のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む、請求項２２に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項４３】
前記抗体が、以下のＦＲ、
（ａ）ＥＥＱＬＶＥＥＧＧＧＬＶＱＰＧＥＳＬＥＬＳＣＡＡＳＧＦＥＩＳ（配列番号２９）またはＥＥＱＬＶＥＥＧＧＧＬＶＱＰＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＥＩＳ（配列番号５２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、
（ｂ）ＷＶＲＱＥＰＧＥＧＬＥＷＶＡ（配列番号３０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、
（ｃ）ＲＦＴＩＳＡＤＴＳＥＮＴＡＹＬＱＭＮＥＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号３１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び
（ｄ）ＷＧＱＧＥＬＶＴＶＳＳ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４をさらに含む、請求項４２に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項４４】
前記ＶＨドメインが、配列番号３３のアミノ酸配列を含む、請求項４３に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項４５】
前記ＶＨドメインが、配列番号５１のアミノ酸配列を含む、請求項４３に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項４６】
前記抗体が、以下のＦＲ、
（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１７）、ＤＩＱＭＴＱＳＰＥＳＬＳＡＳＶＧＤＥＶＴＩＴＣ（配列番号２５）、またはＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＥＶＴＩＴＣ（配列番号２６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、
（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号１８）またはＷＹＱＱＫＰＧＥＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号２７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、
（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＡＡＴＹＹＣ（配列番号１９）、ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号２４）、またはＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＥＳＬＱＰＥＤＡＡＴＹＹＣ（配列番号２８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び
（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４をさらに含む、請求項４２〜４５のいずれか１項に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項４７】
前記ＶＬドメインが、配列番号３４のアミノ酸配列を含む、請求項４６に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項４８】
前記ＶＬドメインが、配列番号３５のアミノ酸配列を含む、請求項４６に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項４９】
前記ＶＬドメインが、配列番号３６のアミノ酸配列を含む、請求項４６に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項５０】
前記ＶＬドメインが、配列番号３７のアミノ酸配列を含む、請求項４６に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項５１】
前記ＶＬドメインが、配列番号１２のアミノ酸配列を含む、請求項４６に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項５２】
前記ＶＬドメインが、配列番号３８のアミノ酸配列を含む、請求項４６に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項５３】
前記抗体が、（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、請求項４２に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項５４】
前記抗体が、（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、請求項４２に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項５５】
前記抗体が、（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、請求項４２に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項５６】
前記抗体が、（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、請求項４２に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項５７】
前記抗体が、（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、請求項４２に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項５８】
前記抗体が、（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、請求項４２に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項５９】
前記抗体が、（ａ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、請求項４２に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項６０】
前記抗体が、（ａ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、請求項４２に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項６１】
前記抗体が、（ａ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、請求項４２に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項６２】
前記抗体が、（ａ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、請求項４２に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項６３】
前記抗体が、（ａ）配列番号４８のアミノ酸配列を含む重鎖及び（ｂ）配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項４２に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項６４】
前記抗体が、（ａ）配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖及び（ｂ）配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項４２に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項６５】
前記抗体が、ＶＥＧＦのＶＥＧＦ受容体への結合を阻害することができる、請求項２２〜６４のいずれか１項に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項６６】
前記ＶＥＧＦ受容体が、ＶＥＧＦ受容体１（Ｆｌｔ−１）である、請求項６５に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項６７】
前記ＶＥＧＦ受容体が、ＶＥＧＦ受容体２（ＫＤＲ）である、請求項６５に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項６８】
前記抗体が、約２ｎＭ以下のＫｄでヒトＶＥＧＦ（ｈＶＥＧＦ）に結合する、請求項２２〜６７のいずれか１項に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項６９】
前記抗体が、約７５ｐＭ〜約２ｎＭのＫｄでｈＶＥＧＦに結合する、請求項６８に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項７０】
前記抗体が、約７５ｐＭ〜約６００ｐＭのＫｄでｈＶＥＧＦに結合する、請求項６９に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項７１】
前記抗体が、約７５ｐＭ〜約５００ｐＭのＫｄでｈＶＥＧＦに結合する、請求項７０に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項７２】
前記抗体が、約６０ｐＭのＫｄでｈＶＥＧＦに結合する、請求項７１に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項７３】
前記抗体が、約８３．５℃を超える融解温度（Ｔｍ）を有する、請求項２３〜２７、３３〜４１、及び６３〜７２のいずれか１項に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項７４】
前記抗体が、約８５℃〜約９１℃のＴｍを有する、請求項７３に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項７５】
前記抗体が、約８９℃のＴｍを有する、請求項７４に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項７６】
前記抗体が、８未満の等電点（ｐＩ）を有する、請求項２３、２４、２８〜３２、４２〜６２のいずれか１項に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項７７】
前記抗体が、約５〜約７のｐＩを有する、請求項７６に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項７８】
前記抗体が、約５〜約６のｐＩを有する、請求項７７に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項７９】
前記抗体が、モノクローナル、ヒト、ヒト化、またはキメラである、請求項１〜７８のいずれか１項に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項８０】
前記抗体が、抗原結合抗体断片である、請求項１〜７９のいずれか１項に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項８１】
前記抗体断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ−Ｃ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及び（Ｆａｂ’）２断片からなる群から選択される、請求項８０に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項８２】
前記抗体断片が、Ｆａｂである、請求項８１に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項８３】
前記抗体が、単一特異性抗体である、請求項１〜８２のいずれか１項に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項８４】
前記抗体が、多重特異性抗体である、請求項１〜８２のいずれか１項に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項８５】
前記多重特異性抗体が、二重特異性抗体である、請求項８４に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項８６】
前記二重特異性抗体が、ＶＥＧＦと、ＩＬ−１β、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、インターロイキン−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）、インターロイキン−１３（ＩＬ−１３）、ＩＬ−１３受容体（ＩＬ−１３Ｒ）、ＰＤＧＦ、アンジオポエチン、アンジオポエチン２、Ｔｉｅ２、Ｓ１Ｐ、インテグリンαｖβ３、αｖβ５、及びα５β１、ベータセルリン、アペリン／ＡＰＪ、エリスロポエチン、補体Ｄ因子、ＴＮＦα、ＨｔｒＡ１、ＶＥＧＦ受容体、ＳＴ−２受容体、ならびに加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）リスクと遺伝的に関連するタンパク質からなる群から選択される第２の生物学的分子とに結合する、請求項８５に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項８７】
前記ＶＥＧＦ受容体が、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＶＥＧＦＲ３、膜結合型ＶＥＧＦ受容体（ｍｂＶＥＧＦＲ）、または可溶性ＶＥＧＦ受容体（ｓＶＥＧＦＲ）である、請求項８６に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項８８】
前記ＡＭＤリスクと遺伝的に関連するタンパク質が、補体経路成分Ｃ２、Ｂ因子、Ｈ因子、ＣＦＨＲ３、Ｃ３ｂ、Ｃ５、Ｃ５ａ、及びＣ３ａ、ＨｔｒＡ１、ＡＲＭＳ２、ＴＩＭＰ３、ＨＬＡ、インターロイキン−８（ＩＬ−８）、ＣＸ３ＣＲ１、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＣＥＴＰ、ＬＩＰＣ、ＣＯＬ１０Ａ１、ならびにＴＮＦＲＳＦ１０Ａからなる群から選択される、請求項８６に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項８９】
前記抗体が、システイン操作抗体である、請求項１〜８８のいずれか１項に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項９０】
前記システイン操作抗体が、ＨＣ−Ａ１１８Ｃ、ＨＣ−Ａ１４０Ｃ、及びＨＣ−Ｌ１７４Ｃ（ＥＵ番号付け）からなる群から選択される重鎖におけるシステイン突然変異、またはＬＣ−Ｋ１４９Ｃ及びＬＣ−Ｖ２０５Ｃ（Ｋａｂａｔ番号付け）からなる群から選択される軽鎖におけるシステイン突然変異を含む、請求項８９に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項９１】
前記重鎖におけるシステイン突然変異が、ＨＣ−Ａ１１８Ｃ（ＥＵ番号付け）である、請求項９０に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項９２】
前記重鎖におけるシステイン突然変異が、ＨＣ−Ａ１４０Ｃ（ＥＵ番号付け）である、請求項９０に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項９３】
前記重鎖におけるシステイン突然変異が、ＨＣ−Ｌ１７４Ｃ（ＥＵ番号付け）である、請求項９０に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項９４】
前記軽鎖におけるシステイン突然変異が、ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ（Ｋａｂａｔ番号付け）である、請求項９０に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項９５】
前記軽鎖におけるシステイン突然変異が、ＬＣ−Ｖ２０５Ｃ（Ｋａｂａｔ番号付け）である、請求項９０に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項９６】
前記ＨＡポリマーが、前記システイン突然変異で前記抗体に共有結合している、請求項９０〜９５のいずれか１項に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項９７】
薬剤としての使用のための、請求項１〜９６のいずれか１項に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項９８】
対象における眼障害を治療するための薬剤の製造における使用のための、請求項１〜９６のいずれか１項に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項９９】
眼障害を有する対象における血管新生の低減または抑制における使用のための、請求項１〜９６のいずれか１項に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項１００】
対象における眼障害の治療における使用のための、請求項１〜９６のいずれか１項に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項１０１】
前記眼障害が、加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）、黄斑変性症、黄斑浮腫、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）（中心窩に及ばない限局性ＤＭＥ及び中心窩に及ぶびまん性ＤＭＥを含む）、網膜症、糖尿病性網膜症（ＤＲ）（増殖性ＤＲ（ＰＤＲ）、非増殖性ＤＲ（ＮＰＤＲ）、及び高所ＤＲを含む）、他の虚血関連網膜症、未熟児網膜症（ＲＯＰ）、網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）（網膜中心静脈（ＣＲＶＯ）型及び網膜分岐静脈（ＢＲＶＯ）型を含む）、ＣＮＶ（近視性ＣＮＶを含む）、角膜血管新生、角膜血管新生に関連する疾患、網膜血管新生、網膜／脈絡膜血管新生に関連する疾患、病理学的近視、フォン・ヒッペル・リンドウ病、眼のヒストプラスマ症、家族性滲出性硝子体網膜症（ＦＥＶＲ）、コーツ病、ノリエ病、骨粗鬆症偽網膜膠腫症候群（ＯＰＰＧ）、結膜下出血、ルベオーシス、眼血管新生疾患、血管新生緑内障、網膜色素変性症（ＲＰ）、高血圧性網膜症、網膜血管腫増殖、黄斑毛細血管拡張症、虹彩血管新生、眼内血管新生、網膜変性、類嚢胞黄斑浮腫（ＣＭＥ）、血管炎、乳頭浮腫、網膜炎、結膜炎（感染性結膜炎及び非感染性（例えば、アレルギー性）結膜炎を含む）、レーバー先天性黒内障、ブドウ膜炎（感染性及び非感染性ブドウ膜炎を含む）、脈絡膜炎、眼ヒストプラスマ症、眼瞼炎、ドライアイ、外傷性眼損傷、及びシェーグレン病からなる群から選択される、請求項９８〜１００のいずれか１項に記載の使用のための抗体コンジュゲート。
【請求項１０２】
前記眼障害が、ＡＭＤ、ＤＭＥ、ＤＲ、またはＲＶＯである、請求項１０１に記載の使用のための抗体コンジュゲート。
【請求項１０３】
前記眼障害が、ＡＭＤである、請求項１０１または１０２に記載の使用のための抗体コンジュゲート。
【請求項１０４】
前記ＡＭＤが、滲出型ＡＭＤである、請求項１０１〜１０３のいずれか１項に記載の使用のための抗体コンジュゲート。
【請求項１０５】
前記眼障害が、ＤＭＥである、請求項１０１または１０２に記載の使用のための抗体コンジュゲート。
【請求項１０６】
請求項１〜９６のいずれか１項に記載の抗体コンジュゲートと、薬学的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤と、を含む、薬学的組成物。
【請求項１０７】
第２の薬剤をさらに含み、前記第２の薬剤が、抗体、抗血管新生剤、サイトカイン、サイトカインアンタゴニスト、コルチコステロイド、鎮痛剤、及び第２の生物学的分子に結合する化合物からなる群から選択される、請求項１０６に記載の薬学的組成物。
【請求項１０８】
前記抗血管新生剤が、ＶＥＧＦアンタゴニストである、請求項１０７に記載の薬学的組成物。
【請求項１０９】
前記ＶＥＧＦアンタゴニストが、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＶＥＧＦ受容体抗体、可溶性ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質、アプタマー、抗ＶＥＧＦ  ＤＡＲＰｉｎ（登録商標）、またはＶＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤である、請求項１０８に記載の薬学的組成物。
【請求項１１０】
前記抗ＶＥＧＦ抗体が、ラニビズマブ（ＬＵＣＥＮＴＩＳ（登録商標））、ＲＴＨ−２５８、または二重特異性抗ＶＥＧＦ抗体である、請求項１０９に記載の薬学的組成物。
【請求項１１１】
前記二重特異性抗ＶＥＧＦ抗体が、抗ＶＥＧＦ／抗Ａｎｇ２抗体である、請求項１１０に記載の薬学的組成物。
【請求項１１２】
前記抗ＶＥＧＦ／抗Ａｎｇ２抗体が、ＲＧ−７７１６である、請求項１１１に記載の薬学的組成物。
【請求項１１３】
前記可溶性ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質が、アフリベルセプト（ＥＹＬＥＡ（登録商標））である、請求項１０９に記載の薬学的組成物。
【請求項１１４】
前記アプタマーが、ペガプタニブ（ＭＡＣＵＧＥＮ（登録商標））である、請求項１０９に記載の薬学的組成物。
【請求項１１５】
前記抗ＶＥＧＦ  ＤＡＲＰｉｎ（登録商標）が、アビシパルペゴルである、請求項１０９に記載の薬学的組成物。
【請求項１１６】
前記ＶＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤が、４−（４−ブロモ−２−フルオロアニリノ）−６−メトキシ−７−（１−メチルピペリジン−４−イルメトキシ）キナゾリン（ＺＤ６４７４）、４−（４−フルオロ−２−メチルインドール−５−イルオキシ）−６−メトキシ−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）キナゾリン（ＡＺＤ２１７１）、バタラニブ（ＰＴＫ７８７）、セマキサミニブ（ｓｅｍａｘａｍｉｎｉｂ）（ＳＵ５４１６）、及びＳＵＴＥＮＴ（登録商標）（スニチニブ）からなる群から選択される、請求項１０９に記載の薬学的組成物。
【請求項１１７】
前記第２の生物学的分子が、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−１３、ＩＬ−１３Ｒ、ＰＤＧＦ、アンジオポエチン、アンジオポエチン２、Ｔｉｅ２、Ｓ１Ｐ、インテグリンαｖβ３、αｖβ５、及びα５β１、ベータセルリン、アペリン／ＡＰＪ、エリスロポエチン、補体Ｄ因子、ＴＮＦα、ＨｔｒＡ１、ＶＥＧＦ受容体、ＳＴ−２受容体、ならびにＡＭＤリスクと遺伝的に関連するタンパク質からなる群から選択される、請求項１０７に記載の薬学的組成物。
【請求項１１８】
前記ＶＥＧＦ受容体が、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＶＥＧＦＲ３、ｍｂＶＥＧＦＲ、またはｓＶＥＧＦＲである、請求項１１７に記載の薬学的組成物。
【請求項１１９】
前記ＡＭＤリスクと遺伝的に関連するタンパク質が、補体経路成分Ｃ２、Ｂ因子、Ｈ因子、ＣＦＨＲ３、Ｃ３ｂ、Ｃ５、Ｃ５ａ、及びＣ３ａ、ＨｔｒＡ１、ＡＲＭＳ２、ＴＩＭＰ３、ＨＬＡ、ＩＬ−８、ＣＸ３ＣＲ１、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＣＥＴＰ、ＬＩＰＣ、ＣＯＬ１０Ａ１、ならびにＴＮＦＲＳＦ１０Ａからなる群から選択される、請求項１１７に記載の薬学的組成物。
【請求項１２０】
前記第２の生物学的分子に結合する化合物が、抗体またはその抗原結合断片である、請求項１０７及び１１７〜１１９のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項１２１】
前記抗原結合抗体断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ−Ｃ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及び（Ｆａｂ’）２断片からなる群から選択される、請求項１２０に記載の薬学的組成物。
【請求項１２２】
薬剤としての使用のための、請求項１０６〜１２１のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項１２３】
対象における眼障害を治療するための薬剤の製造における使用のための、請求項１０６〜１２１のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項１２４】
眼障害を有する対象における血管新生の低減または抑制における使用のための、請求項１０６〜１２１のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項１２５】
対象における眼障害の治療における使用のための、請求項１０６〜１２１のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項１２６】
前記眼障害が、加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）、黄斑変性症、黄斑浮腫、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）（中心窩に及ばない限局性ＤＭＥ及び中心窩に及ぶびまん性ＤＭＥを含む）、網膜症、糖尿病性網膜症（ＤＲ）（増殖性ＤＲ（ＰＤＲ）、非増殖性ＤＲ（ＮＰＤＲ）、及び高所ＤＲを含む）、他の虚血関連網膜症、未熟児網膜症（ＲＯＰ）、網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）（網膜中心静脈（ＣＲＶＯ）型及び網膜分岐静脈（ＢＲＶＯ）型を含む）、ＣＮＶ（近視性ＣＮＶを含む）、角膜血管新生、角膜血管新生に関連する疾患、網膜血管新生、網膜／脈絡膜血管新生に関連する疾患、病理学的近視、フォン・ヒッペル・リンドウ病、眼のヒストプラスマ症、家族性滲出性硝子体網膜症（ＦＥＶＲ）、コーツ病、ノリエ病、骨粗鬆症偽網膜膠腫症候群（ＯＰＰＧ）、結膜下出血、ルベオーシス、眼血管新生疾患、血管新生緑内障、網膜色素変性症（ＲＰ）、高血圧性網膜症、網膜血管腫増殖、黄斑毛細血管拡張症、虹彩血管新生、眼内血管新生、網膜変性、類嚢胞黄斑浮腫（ＣＭＥ）、血管炎、乳頭浮腫、網膜炎、結膜炎（感染性結膜炎及び非感染性（例えば、アレルギー性）結膜炎を含む）、レーバー先天性黒内障、ブドウ膜炎（感染性及び非感染性ブドウ膜炎を含む）、脈絡膜炎、眼ヒストプラスマ症、眼瞼炎、ドライアイ、外傷性眼損傷、及びシェーグレン病からなる群から選択される、請求項１２３〜１２５のいずれか１項に記載の使用のための薬学的組成物。
【請求項１２７】
前記眼障害が、ＡＭＤ、ＤＭＥ、ＤＲ、またはＲＶＯである、請求項１２６に記載の使用のための薬学的組成物。
【請求項１２８】
前記眼障害が、ＡＭＤである、請求項１２６または１２７に記載の使用のための薬学的組成物。
【請求項１２９】
前記ＡＭＤが、滲出型ＡＭＤである、請求項１２６〜１２８のいずれか１項に記載の使用のための薬学的組成物。
【請求項１３０】
前記眼障害が、ＤＭＥである、請求項１２６または１２７に記載の使用のための薬学的組成物。
【請求項１３１】
眼障害を有する対象における血管新生を低減または抑制する方法であって、前記対象に、請求項１〜９６のいずれか１項に記載の抗体コンジュゲートまたは請求項１０６〜１２１のいずれか１項に記載の薬学的組成物の有効量を投与することを含み、それにより、前記対象における血管新生を低減または抑制する、前記方法。
【請求項１３２】
眼障害を治療する方法であって、かかる治療を必要とする対象に、請求項１〜９６のいずれか１項に記載の抗体コンジュゲートまたは請求項１０６〜１２１のいずれか１項に記載の薬学的組成物の有効量を投与することを含む、前記方法。
【請求項１３３】
前記眼障害が、加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）、黄斑変性症、黄斑浮腫、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）（中心窩に及ばない限局性ＤＭＥ及び中心窩に及ぶびまん性ＤＭＥを含む）、網膜症、糖尿病性網膜症（ＤＲ）（増殖性ＤＲ（ＰＤＲ）、非増殖性ＤＲ（ＮＰＤＲ）、及び高所ＤＲを含む）、他の虚血関連網膜症、未熟児網膜症（ＲＯＰ）、網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）（網膜中心静脈（ＣＲＶＯ）型及び網膜分岐静脈（ＢＲＶＯ）型を含む）、ＣＮＶ（近視性ＣＮＶを含む）、角膜血管新生、角膜血管新生に関連する疾患、網膜血管新生、網膜／脈絡膜血管新生に関連する疾患、病理学的近視、フォン・ヒッペル・リンドウ病、眼のヒストプラスマ症、家族性滲出性硝子体網膜症（ＦＥＶＲ）、コーツ病、ノリエ病、骨粗鬆症偽網膜膠腫症候群（ＯＰＰＧ）、結膜下出血、ルベオーシス、眼血管新生疾患、血管新生緑内障、網膜色素変性症（ＲＰ）、高血圧性網膜症、網膜血管腫増殖、黄斑毛細血管拡張症、虹彩血管新生、眼内血管新生、網膜変性、類嚢胞黄斑浮腫（ＣＭＥ）、血管炎、乳頭浮腫、網膜炎、結膜炎（感染性結膜炎及び非感染性（例えば、アレルギー性）結膜炎を含む）、レーバー先天性黒内障、ブドウ膜炎（感染性及び非感染性ブドウ膜炎を含む）、脈絡膜炎、眼ヒストプラスマ症、眼瞼炎、ドライアイ、外傷性眼損傷、及びシェーグレン病からなる群から選択される、請求項１３１または１３２に記載の方法。
【請求項１３４】
前記眼障害が、ＡＭＤ、ＤＭＥ、ＤＲ、またはＲＶＯである、請求項１３３に記載の方法。
【請求項１３５】
前記眼障害が、ＡＭＤである、請求項１３３または１３４に記載の方法。
【請求項１３６】
前記ＡＭＤが、滲出型ＡＭＤである、請求項１３３〜１３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３７】
前記眼障害が、ＤＭＥである、請求項１３３または１３４に記載の方法。
【請求項１３８】
前記対象に第２の薬剤の有効量を投与することをさらに含み、前記第２の薬剤が、抗体、抗血管新生剤、サイトカイン、サイトカインアンタゴニスト、コルチコステロイド、鎮痛剤、及び第２の生物学的分子に結合する化合物からなる群から選択される、請求項１３１〜１３７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３９】
前記抗血管新生剤が、ＶＥＧＦアンタゴニストである、請求項１３８に記載の方法。
【請求項１４０】
前記ＶＥＧＦアンタゴニストが、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＶＥＧＦ受容体抗体、可溶性ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質、アプタマー、抗ＶＥＧＦ  ＤＡＲＰｉｎ（登録商標）、またはＶＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤である、請求項１３９に記載の方法。
【請求項１４１】
前記抗ＶＥＧＦ抗体が、ラニビズマブ（ＬＵＣＥＮＴＩＳ（登録商標））、ＲＴＨ−２５８、または二重特異性抗ＶＥＧＦ抗体である、請求項１４０に記載の方法。
【請求項１４２】
前記二重特異性抗ＶＥＧＦ抗体が、抗ＶＥＧＦ／抗Ａｎｇ２抗体である、請求項１４１に記載の方法。
【請求項１４３】
前記抗ＶＥＧＦ／抗Ａｎｇ２抗体が、ＲＧ−７７１６である、請求項１４２に記載の方法。
【請求項１４４】
前記可溶性ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質が、アフリベルセプト（ＥＹＬＥＡ（登録商標））である、請求項１４０に記載の方法。
【請求項１４５】
前記アプタマーが、ペガプタニブ（ＭＡＣＵＧＥＮ（登録商標））である、請求項１４０に記載の方法。
【請求項１４６】
前記抗ＶＥＧＦ  ＤＡＲＰｉｎ（登録商標）が、アビシパルペゴルである、請求項１４０に記載の方法。
【請求項１４７】
前記ＶＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤が、４−（４−ブロモ−２−フルオロアニリノ）−６−メトキシ−７−（１−メチルピペリジン−４−イルメトキシ）キナゾリン（ＺＤ６４７４）、４−（４−フルオロ−２−メチルインドール−５−イルオキシ）−６−メトキシ−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）キナゾリン（ＡＺＤ２１７１）、バタラニブ（ＰＴＫ７８７）、セマキサミニブ（ＳＵ５４１６）、及びＳＵＴＥＮＴ（登録商標）（スニチニブ）からなる群から選択される、請求項１４０に記載の方法。
【請求項１４８】
前記第２の生物学的分子が、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−１３、ＩＬ−１３Ｒ、ＰＤＧＦ、アンジオポエチン、アンジオポエチン２、Ｔｉｅ２、Ｓ１Ｐ、インテグリンαｖβ３、αｖβ５、及びα５β１、ベータセルリン、アペリン／ＡＰＪ、エリスロポエチン、補体Ｄ因子、ＴＮＦα、ＨｔｒＡ１、ＶＥＧＦ受容体、ＳＴ−２受容体、ならびにＡＭＤリスクと遺伝的に関連するタンパク質からなる群から選択される、請求項１３８に記載の方法。
【請求項１４９】
前記ＶＥＧＦ受容体が、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＶＥＧＦＲ３、ｍｂＶＥＧＦＲ、またはｓＶＥＧＦＲである、請求項１４８に記載の方法。
【請求項１５０】
前記ＡＭＤリスクと遺伝的に関連するタンパク質が、補体経路成分Ｃ２、Ｂ因子、Ｈ因子、ＣＦＨＲ３、Ｃ３ｂ、Ｃ５、Ｃ５ａ、及びＣ３ａ、ＨｔｒＡ１、ＡＲＭＳ２、ＴＩＭＰ３、ＨＬＡ、ＩＬ−８、ＣＸ３ＣＲ１、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＣＥＴＰ、ＬＩＰＣ、ＣＯＬ１０Ａ１、ならびにＴＮＦＲＳＦ１０Ａからなる群から選択される、請求項１４９に記載の方法。
【請求項１５１】
前記第２の生物学的分子に結合する化合物が、抗体またはその抗原結合断片である、請求項１３８及び１４８〜１５０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５２】
前記抗原結合抗体断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ−Ｃ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及び（Ｆａｂ’）２断片からなる群から選択される、請求項１５１に記載の方法。
【請求項１５３】
前記抗体コンジュゲートまたは前記薬学的組成物が、硝子体内、眼、眼内、強膜近傍、テノン嚢下、脈絡膜上、局所、静脈内、筋肉内、皮内、経皮（ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓｌｙ）、動脈内、腹腔内、病巣内、頭蓋内、関節内、前立腺内、胸膜内、気管内、髄腔内、鼻腔内、膣内、直腸内、局所、腫瘍内、腹腔内、腹膜、脳室内、皮下、結膜下、小胞内、粘膜、心膜内、臍内、眼窩内、経口、経皮（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌｌｙ）、吸入により、注射により、点眼薬により、埋め込みにより、注入により、持続注入により、局所灌流浴により標的細胞に直接、カテーテルにより、洗浄により、クリーム剤で、または液体組成物で投与される、請求項１３１〜１５２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５４】
前記抗体コンジュゲートまたは前記薬学的組成物が、硝子体内、眼、眼内、強膜近傍、テノン嚢下、脈絡膜上、または局所投与される、請求項１５３に記載の方法。
【請求項１５５】
前記抗体コンジュゲートまたは前記薬学的組成物が、注射により硝子体内投与される、請求項１５３または１５４に記載の方法。
【請求項１５６】
前記抗体コンジュゲートまたは前記薬学的組成物が、点眼薬または軟膏により局所投与される、請求項１５３または１５４に記載の方法。
【請求項１５７】
前記抗体コンジュゲートまたは前記薬学的組成物が、ポート送達デバイスにより投与される、請求項１５３または１５４に記載の方法。
【請求項１５８】
前記対象が、ヒトである、請求項１３１〜１５７のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
配列表
本出願には、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出され、かつ参照によりその全体が本明細書に組み込まれる配列表が含まれる。２０１８年３月２２日に作成されたこのＡＳＣＩＩのコピーは、５０４７４−１６０ＷＯ３＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ＿３．２２．１８＿ＳＴ２５という名前であり、５７，６７１バイトのサイズである。
【０００２】
本発明は、概して、抗体コンジュゲート、システイン操作抗体、その組成物（例えば、薬学的組成物）、及びその使用方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
血管新生は、新たな血管が既存の血管から生じる厳重に規制された過程である。血管新生が適切な血液循環を確実にするために発達中に重要であるが、多くの障害は、眼障害（例えば、加齢性黄斑変性症、ＡＭＤ）及び細胞増殖性障害（例えば、がん）等の病理学的血管新生に関連している。血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）は、血管新生の臨床的に確証された促進因子であり、（例えば、抗ＶＥＧＦ遮断抗体を使用した）ＶＥＧＦの中和を使用して、病理学的血管新生に関連する障害を治療することができる。
【０００４】
病理学的血管新生に関連する眼障害（例えば、ＡＭＤ（例えば、滲出型ＡＭＤ）、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）、糖尿病性網膜症（ＤＲ）、及び網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ））の治療の現在のアプローチは、典型的には、ＶＥＧＦアンタゴニスト（例えば、抗ＶＥＧＦ  Ｆａｂラニビズマブ）の硝子体内注射を伴う。抗ＶＥＧＦ  Ｆａｂの作用部位が眼の網膜の後ろにあり、Ｆａｂが眼内で比較的短い滞留時間を有し得るため、抗ＶＥＧＦ  Ｆａｂからの最大患者利益は、典型的には、硝子体内注射による比較的頻繁な投薬（例えば、４週間毎（Ｑ４Ｗ））によって得られる。眼障害用の抗ＶＥＧＦ抗体または抗体断片（例えば、Ｆａｂ）の長時間作用型送達が、少なくとも部分的に、投薬頻度を減少させるのに望ましくあり得、これにより、患者利便性及び服薬遵守が改善され得る。
【０００５】
眼障害（例えば、ＡＭＤ（例えば、滲出型ＡＭＤ）、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）、糖尿病性網膜症（ＤＲ）、及び網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ））の治療のための長時間作用型送達用の抗体組成物が依然として必要とされている。
【発明の概要】
【０００６】
本発明は、抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ抗体）に共有結合した単分散ポリマー（例えば、単分散ヒアルロン酸（ＨＡ）ポリマー）を含む抗体コンジュゲート、システイン操作抗体（例えば、抗体コンジュゲートを調製する際に使用され得る）、抗体コンジュゲートを含む組成物（例えば、薬学的組成物）、ならびにその作製及び使用方法（例えば、治療的使用のため）を提供する。
【０００７】
一態様では、本発明は、（ｉ）抗体及び（ｉｉ）その抗体に共有結合したヒアルロン酸（ＨＡ）ポリマーを含む抗体コンジュゲートを特色とし、ＨＡポリマーは、１．１以下の多分散性指数（ＰＤＩ）を有する。いくつかの実施形態では、ＨＡポリマーは、１．０〜１．１のＰＤＩを有する。いくつかの実施形態では、ＨＡポリマーは、１．０〜約１．０５のＰＤＩを有する。いくつかの実施形態では、ＨＡポリマーは、約１．０００１〜約１．０５のＰＤＩを有する。いくつかの実施形態では、ＨＡポリマーは、約１．００１のＰＤＩを有する。いくつかの実施形態では、ＨＡポリマーは、約１メガダルトン（ＭＤａ）以下の分子量を有する。いくつかの実施形態では、ＨＡポリマーは、約２５ｋＤａ〜約５００ｋＤａの分子量を有する。いくつかの実施形態では、ＨＡポリマーは、約１００ｋＤａ〜約２５０ｋＤａの分子量を有する。いくつかの実施形態では、ＨＡポリマーは、約１５０ｋＤａ〜約２００ｋＤａの分子量を有する。いくつかの実施形態では、ＨＡポリマーは、直鎖状ＨＡポリマーである。いくつかの実施形態では、抗体コンジュゲートは、約１０ｎｍ〜約６０ｎｍの流体力学的半径を有する。いくつかの実施形態では、抗体コンジュゲートは、約２５ｎｍ〜約３５ｎｍの流体力学的半径を有する。いくつかの実施形態では、流体力学的半径は、約２０ｎｍ〜約３０ｎｍである。
【０００８】
前述の態様のいくつかの実施形態では、抗体コンジュゲートは、ＨＡポリマーに共有結合していない参照抗体と比較して増加した眼半減期を有する。いくつかの実施形態では、眼半減期は、参照抗体と比較して少なくとも約２倍増加する。いくつかの実施形態では、眼半減期は、参照抗体と比較して少なくとも約４倍増加する。いくつかの実施形態では、眼半減期は、硝子体半減期である。いくつかの実施形態では、参照抗体は、抗体コンジュゲートの抗体と同一である。
【０００９】
前述の態様のいくつかの実施形態では、抗体は、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−１３、ＩＬ−１３Ｒ、ＰＤＧＦ、アンジオポエチン、アンジオポエチン２、Ｔｉｅ２、Ｓ１Ｐ、インテグリンαｖβ３、αｖβ５、及びα５β１、ベータセルリン、アペリン／ＡＰＪ、エリスロポエチン、補体Ｄ因子、ＴＮＦα、ＨｔｒＡ１、ＶＥＧＦ受容体、ＳＴ−２受容体、ならびにＡＭＤリスクと遺伝的に関連するタンパク質からなる群から選択される生物学的分子に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ受容体は、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＶＥＧＦＲ３、ｍｂＶＥＧＦＲ、またはｓＶＥＧＦＲである。いくつかの実施形態では、ＡＭＤリスクと遺伝的に関連するタンパク質は、補体経路成分Ｃ２、Ｂ因子、Ｈ因子、ＣＦＨＲ３、Ｃ３ｂ、Ｃ５、Ｃ５ａ、及びＣ３ａ、ＨｔｒＡ１、ＡＲＭＳ２、ＴＩＭＰ３、ＨＬＡ、ＩＬ−８、ＣＸ３ＣＲ１、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＣＥＴＰ、ＬＩＰＣ、ＣＯＬ１０Ａ１、ならびにＴＮＦＲＳＦ１０Ａからなる群から選択される。
【００１０】
前述の態様のいくつかの実施形態では、抗体は、ＶＥＧＦに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、以下の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：（ａ）ＤＹＷＩＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＧＸ１ＴＰＸ２ＧＧＸ３Ｘ４Ｘ５ＹＸ６ＤＳＶＸ７Ｘ８（配列番号２）（式中、Ｘ１がＩｌｅまたはＨｉｓであり、Ｘ２がＡｌａまたはＡｒｇであり、Ｘ３がＴｙｒまたはＬｙｓであり、Ｘ４がＴｈｒまたはＧｌｕであり、Ｘ５が、Ａｒｇ、Ｔｙｒ、Ｇｌｎ、またはＧｌｕであり、Ｘ６がＡｌａまたはＧｌｕであり、Ｘ７がＬｙｓまたはＧｌｕであり、Ｘ８がＧｌｙまたはＧｌｕである）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＦＶＦＦＬＰＹＡＭＤＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＸ１ＶＳＴＡＶＡ（配列番号４）（式中、Ｘ１がＡｓｐまたはＡｒｇである）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）Ｘ１ＡＳＦＬＹＳ（配列番号５）（式中、Ｘ１がＳｅｒまたはＭｅｔである）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）Ｘ１ＱＧＹＧＸ２ＰＦＴ（配列番号６）（式中、Ｘ１が、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、またはＴｈｒであり、Ｘ２が、Ａｌａ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、またはＡｒｇである）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）ＤＹＷＩＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＧＩＴＰＡＧＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号７）、ＧＩＴＰＡＧＧＹＥＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２１）、またはＧＩＴＰＡＧＧＹＥＹＹＡＤＳＶＥＧ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＦＶＦＦＬＰＹＡＭＤＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＧＹＧＡＰＦＴ（配列番号１０）またはＱＱＧＹＧＮＰＦＴ（配列番号２３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【００１１】
上記の態様のいくつかの実施形態では、抗体は、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）ＤＹＷＩＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＧＩＴＰＡＧＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＦＶＦＦＬＰＹＡＭＤＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＧＹＧＡＰＦＴ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、以下の重鎖可変（ＶＨ）ドメインフレームワーク領域（ＦＲ）：（ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＩＳ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、（ｂ）ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＲＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号１５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４をさらに含む。いくつかの実施形態では、抗体は、以下の軽鎖可変（ＶＬ）ドメインＦＲ：（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＡＡＴＹＹＣ（配列番号１９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４をさらに含む。
【００１２】
上記の態様のいくつかの実施形態では、抗体は、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）ＤＹＷＩＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＧＩＴＰＡＧＧＹＥＹＹＡＤＳＶＥＧ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＦＶＦＦＬＰＹＡＭＤＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＧＹＧＮＰＦＴ（配列番号２３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、以下のＶＬドメインＦＲ：（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号２４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４をさらに含む。
【００１３】
上記の態様のいくつかの実施形態では、抗体は、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）ＤＹＷＩＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＧＩＴＰＡＧＧＹＥＹＹＡＤＳＶＥＧ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＦＶＦＦＬＰＹＡＭＤＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＧＹＧＡＰＦＴ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、以下のＶＬドメインＦＲ：（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１７）、ＤＩＱＭＴＱＳＰＥＳＬＳＡＳＶＧＤＥＶＴＩＴＣ（配列番号２５）、またはＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＥＶＴＩＴＣ（配列番号２６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号１８）またはＷＹＱＱＫＰＧＥＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号２７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＡＡＴＹＹＣ（配列番号１９）またはＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＥＳＬＱＰＥＤＡＡＴＹＹＣ（配列番号２８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４をさらに含む。いくつかの実施形態では、抗体は、以下のＶＨドメインＦＲ：（ａ）ＥＥＱＬＶＥＥＧＧＧＬＶＱＰＧＥＳＬＥＬＳＣＡＡＳＧＦＥＩＳ（配列番号２９）またはＥＥＱＬＶＥＥＧＧＧＬＶＱＰＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＥＩＳ（配列番号５２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、（ｂ）ＷＶＲＱＥＰＧＥＧＬＥＷＶＡ（配列番号３０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＦＴＩＳＡＤＴＳＥＮＴＡＹＬＱＭＮＥＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号３１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＥＬＶＴＶＳＳ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４をさらに含む。
【００１４】
上記の態様のいくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号１１、４０、もしくは４２のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、（ｂ）配列番号１２、４１、もしくは４６のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＶＨドメインは、以下のＦＲ：（ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＩＳ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、（ｂ）ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（配列番号１４）またはＷＶＲＱＥＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（配列番号３９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＲＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号１５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号１１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬドメインは、以下のＦＲ：（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１７）またはＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＤＣ（配列番号４５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＡＡＴＹＹＣ（配列番号１９）、ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＳＡＴＹＹＣ（配列番号４４）、またはＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣ（配列番号５４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２０）またはＦＧＱＧＴＫＶＥＶＫ（配列番号５５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号１２のアミノ酸配列を含む。
【００１５】
上記の態様のいくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
【００１６】
上記の態様のいくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
【００１７】
上記の態様のいくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
【００１８】
上記の態様のいくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
【００１９】
上記の態様のいくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号３３もしくは５１のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、（ｂ）配列番号１２、３４、３５、３６、３７、もしくは３８のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、以下のＦＲ：（ａ）ＥＥＱＬＶＥＥＧＧＧＬＶＱＰＧＥＳＬＥＬＳＣＡＡＳＧＦＥＩＳ（配列番号２９）またはＥＥＱＬＶＥＥＧＧＧＬＶＱＰＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＥＩＳ（配列番号５２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、（ｂ）ＷＶＲＱＥＰＧＥＧＬＥＷＶＡ（配列番号３０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＦＴＩＳＡＤＴＳＥＮＴＡＹＬＱＭＮＥＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号３１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＥＬＶＴＶＳＳ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号３３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号５１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、以下のＦＲ：（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１７）、ＤＩＱＭＴＱＳＰＥＳＬＳＡＳＶＧＤＥＶＴＩＴＣ（配列番号２５）、またはＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＥＶＴＩＴＣ（配列番号２６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号１８）またはＷＹＱＱＫＰＧＥＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号２７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＡＡＴＹＹＣ（配列番号１９）、ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号２４）、またはＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＥＳＬＱＰＥＤＡＡＴＹＹＣ（配列番号２８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号３４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号３５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号３６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号３７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号１２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号３８のアミノ酸配列を含む。
【００２０】
上記の態様のいくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
【００２１】
上記の態様のいくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
【００２２】
上記の態様のいくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
【００２３】
上記の態様のいくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
【００２４】
上記の態様のいくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
【００２５】
上記の態様のいくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
【００２６】
上記の態様のいくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
【００２７】
上記の態様のいくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
【００２８】
上記の態様のいくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
【００２９】
上記の態様のいくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
【００３０】
上記の態様のいくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号４８のアミノ酸配列を含む重鎖及び（ｂ）配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００３１】
上記の態様のいくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖及び（ｂ）配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００３２】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、抗体は、ＶＥＧＦのＶＥＧＦ受容体への結合を阻害することができる。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ受容体は、ＶＥＧＦ受容体１（Ｆｌｔ−１）である。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ受容体は、ＶＥＧＦ受容体２（ＫＤＲ）である。
【００３３】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、抗体は、約２ｎＭ以下のＫｄでヒトＶＥＧＦ（ｈＶＥＧＦ）に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、約７５ｐＭ〜約２ｎＭのＫｄでｈＶＥＧＦに結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、約７５ｐＭ〜約６００ｐＭのＫｄでｈＶＥＧＦに結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、約７５ｐＭ〜約５００ｐＭのＫｄでｈＶＥＧＦに結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、約８０ｐＭのＫｄでｈＶＥＧＦに結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、約６０ｐＭのＫｄでｈＶＥＧＦに結合する。
【００３４】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、抗体は、約８３．５℃を超える融解温度（Ｔｍ）を有する。いくつかの実施形態では、抗体は、約８５℃〜約９１℃のＴｍを有する。いくつかの実施形態では、抗体は、約８９℃のＴｍを有する。
【００３５】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、抗体は、８未満の等電点（ｐＩ）を有する。いくつかの実施形態では、抗体は、約５〜約７のｐＩを有する。いくつかの実施形態では、抗体は、約５〜約６のｐＩを有する。
【００３６】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、抗体は、モノクローナル、ヒト、ヒト化、またはキメラである。
【００３７】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、抗体は、ＶＥＧＦに結合する抗体断片である。いくつかの実施形態では、抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ−Ｃ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及び（Ｆａｂ’）２断片からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、抗体断片は、Ｆａｂである。
【００３８】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、抗体は、単一特異性抗体である。前述の態様のいずれかの他の実施形態では、抗体は、多重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、二重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、ＶＥＧＦと、インターロイキン１β（ＩＬ−１β）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、インターロイキン−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）、インターロイキン−１３（ＩＬ−１３）、ＩＬ−１３受容体（ＩＬ−１３Ｒ）、ＰＤＧＦ、アンジオポエチン、アンジオポエチン２、Ｔｉｅ２、Ｓ１Ｐ、インテグリンαｖβ３、αｖβ５、及びα５β１、ベータセルリン、アペリン／ＡＰＪ、エリスロポエチン、補体Ｄ因子、ＴＮＦα、ＨｔｒＡ１、ＶＥＧＦ受容体、ＳＴ−２受容体、ならびに加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）リスクと遺伝的に関連するタンパク質からなる群から選択される第２の生物学的分子とに結合する。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ受容体は、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＶＥＧＦＲ３、膜結合型ＶＥＧＦ受容体（ｍｂＶＥＧＦＲ）、または可溶性ＶＥＧＦ受容体（ｓＶＥＧＦＲ）である。いくつかの実施形態では、ＡＭＤリスクと遺伝的に関連するタンパク質は、補体経路成分Ｃ２、Ｂ因子、Ｈ因子、ＣＦＨＲ３、Ｃ３ｂ、Ｃ５、Ｃ５ａ、及びＣ３ａ、ＨｔｒＡ１、ＡＲＭＳ２、ＴＩＭＰ３、ＨＬＡ、インターロイキン−８（ＩＬ−８）、ＣＸ３ＣＲ１、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＣＥＴＰ、ＬＩＰＣ、ＣＯＬ１０Ａ１、ならびにＴＮＦＲＳＦ１０Ａからなる群から選択される。
【００３９】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、抗体は、システイン操作抗体である。いくつかの実施形態では、システイン操作抗体は、ＨＣ−Ａ１１８Ｃ、ＨＣ−Ａ１４０Ｃ、及びＨＣ−Ｌ１７４Ｃ（ＥＵ番号付け）からなる群から選択される重鎖におけるシステイン突然変異、またはＬＣ−Ｋ１４９Ｃ及びＬＣ−Ｖ２０５Ｃ（Ｋａｂａｔ番号付け）からなる群から選択される軽鎖におけるシステイン突然変異を含む。いくつかの実施形態では、重鎖におけるシステイン突然変異は、ＨＣ−Ａ１１８Ｃ（ＥＵ番号付け）である。いくつかの実施形態では、重鎖におけるシステイン突然変異は、ＨＣ−Ａ１４０Ｃ（ＥＵ番号付け）である。いくつかの実施形態では、重鎖におけるシステイン突然変異は、ＨＣ−Ｌ１７４Ｃ（ＥＵ番号付け）である。いくつかの実施形態では、軽鎖におけるシステイン突然変異は、ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ（Ｋａｂａｔ番号付け）である。いくつかの実施形態では、軽鎖におけるシステイン突然変異は、ＬＣ−Ｖ２０５Ｃ（Ｋａｂａｔ番号付け）である。いくつかの実施形態では、ＨＡポリマーは、システイン突然変異で抗体に共有結合している。
【００４０】
別の態様では、前述の抗体コンジュゲートのいずれも、薬剤として使用され得る。
【００４１】
別の態様では、前述の抗体コンジュゲートのいずれも、対象における眼障害を治療するための薬剤の製造に使用され得る。
【００４２】
別の態様では、前述の抗体コンジュゲートのいずれも、眼障害を有する対象における血管新生の低減または抑制に使用され得る。
【００４３】
別の態様では、前述の抗体コンジュゲートのいずれも、対象における眼障害の治療に使用され得る。
【００４４】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、眼障害は、加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）、黄斑変性症、黄斑浮腫、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）（中心窩に及ばない限局性ＤＭＥ及び中心窩に及ぶびまん性ＤＭＥを含む）、網膜症、糖尿病性網膜症（ＤＲ）（増殖性ＤＲ（ＰＤＲ）、非増殖性ＤＲ（ＮＰＤＲ）、及び高所ＤＲを含む）、他の虚血関連網膜症、未熟児網膜症（ＲＯＰ）、網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）（網膜中心静脈（ＣＲＶＯ）型及び網膜分岐静脈（ＢＲＶＯ）型を含む）、ＣＮＶ（近視性ＣＮＶを含む）、角膜血管新生、角膜血管新生に関連する疾患、網膜血管新生、網膜／脈絡膜血管新生に関連する疾患、病理学的近視、フォン・ヒッペル・リンドウ病、眼のヒストプラスマ症、家族性滲出性硝子体網膜症（ＦＥＶＲ）、コーツ病、ノリエ病、骨粗鬆症偽網膜膠腫症候群（ＯＰＰＧ）、結膜下出血、ルベオーシス、眼血管新生疾患、血管新生緑内障、網膜色素変性症（ＲＰ）、高血圧性網膜症、網膜血管腫増殖、黄斑毛細血管拡張症、虹彩血管新生、眼内血管新生、網膜変性、類嚢胞黄斑浮腫（ＣＭＥ）、血管炎、乳頭浮腫、網膜炎、結膜炎（感染性結膜炎及び非感染性（例えば、アレルギー性）結膜炎を含む）、レーバー先天性黒内障、ブドウ膜炎（感染性及び非感染性ブドウ膜炎を含む）、脈絡膜炎、眼ヒストプラスマ症、眼瞼炎、ドライアイ、外傷性眼損傷、及びシェーグレン病からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、眼障害は、ＡＭＤ、ＤＭＥ、ＤＲ、またはＲＶＯである。いくつかの実施形態では、眼障害は、ＡＭＤである。いくつかの実施形態では、ＡＭＤは、滲出型ＡＭＤである。いくつかの実施形態では、眼障害は、ＤＭＥである。
【００４５】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の抗体コンジュゲートのうちのいずれかと、薬学的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤と、を含む薬学的組成物を特色とする。いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、第２の薬剤をさらに含み、第２の薬剤は、抗体、抗血管新生剤、サイトカイン、サイトカインアンタゴニスト、コルチコステロイド、鎮痛剤、及び第２の生物学的分子に結合する化合物からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、抗血管新生剤は、ＶＥＧＦアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦアンタゴニストは、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＶＥＧＦ受容体抗体、可溶性ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質、アプタマー、抗ＶＥＧＦ  ＤＡＲＰｉｎ（登録商標）、またはＶＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤である。いくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体は、ラニビズマブ（ＬＵＣＥＮＴＩＳ（登録商標））、ＲＴＨ−２５８、または二重特異性抗ＶＥＧＦ抗体である。いくつかの実施形態では、二重特異性抗ＶＥＧＦ抗体は、抗ＶＥＧＦ／抗Ａｎｇ２抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦ／抗Ａｎｇ２抗体は、ＲＧ−７７１６である。いくつかの実施形態では、可溶性ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質は、アフリベルセプト（ＥＹＬＥＡ（登録商標））である。いくつかの実施形態では、アプタマーは、ペガプタニブ（ＭＡＣＵＧＥＮ（登録商標））である。いくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦ  ＤＡＲＰｉｎ（登録商標）は、アビシパルペゴルである。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤は、４−（４−ブロモ−２−フルオロアニリノ）−６−メトキシ−７−（１−メチルピペリジン−４−イルメトキシ）キナゾリン（ＺＤ６４７４）、４−（４−フルオロ−２−メチルインドール−５−イルオキシ）−６−メトキシ−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）キナゾリン（ＡＺＤ２１７１）、バタラニブ（ＰＴＫ７８７）、セマキサミニブ（ｓｅｍａｘａｍｉｎｉｂ）（ＳＵ５４１６）、及びＳＵＴＥＮＴ（登録商標）（スニチニブ）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第２の生物学的分子は、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−１３、ＩＬ−１３Ｒ、ＰＤＧＦ、アンジオポエチン、アンジオポエチン２、Ｔｉｅ２、Ｓ１Ｐ、インテグリンαｖβ３、αｖβ５、及びα５β１、ベータセルリン、アペリン／ＡＰＪ、エリスロポエチン、補体Ｄ因子、ＴＮＦα、ＨｔｒＡ１、ＶＥＧＦ受容体、ＳＴ−２受容体、ならびにＡＭＤリスクと遺伝的に関連するタンパク質からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ受容体は、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＶＥＧＦＲ３、ｍｂＶＥＧＦＲ、またはｓＶＥＧＦＲである。いくつかの実施形態では、ＡＭＤリスクと遺伝的に関連するタンパク質は、補体経路成分Ｃ２、Ｂ因子、Ｈ因子、ＣＦＨＲ３、Ｃ３ｂ、Ｃ５、Ｃ５ａ、及びＣ３ａ、ＨｔｒＡ１、ＡＲＭＳ２、ＴＩＭＰ３、ＨＬＡ、ＩＬ−８、ＣＸ３ＣＲ１、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＣＥＴＰ、ＬＩＰＣ、ＣＯＬ１０Ａ１、ならびにＴＮＦＲＳＦ１０Ａからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第２の生物学的分子に結合する化合物は、抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態���は、抗原結合抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ−Ｃ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及び（Ｆａｂ’）２断片からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、抗原結合抗体断片は、Ｆａｂである。
【００４６】
別の態様では、前述の薬学的組成物のいずれも、薬剤として使用され得る。
【００４７】
別の態様では、前述の薬学的組成物のいずれも、対象における眼障害を治療するための薬剤の製造に使用され得る。
【００４８】
別の態様では、前述の薬学的組成物のいずれも、眼障害を有する対象における血管新生の低減または抑制に使用され得る。
【００４９】
別の態様では、前述の薬学的組成物のいずれも、対象における眼障害の治療に使用され得る。
【００５０】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、眼障害は、加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）、黄斑変性症、黄斑浮腫、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）（中心窩に及ばない限局性ＤＭＥ及び中心窩に及ぶびまん性ＤＭＥを含む）、網膜症、糖尿病性網膜症（ＤＲ）（増殖性ＤＲ（ＰＤＲ）、非増殖性ＤＲ（ＮＰＤＲ）、及び高所ＤＲを含む）、他の虚血関連網膜症、未熟児網膜症（ＲＯＰ）、網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）（網膜中心静脈（ＣＲＶＯ）型及び網膜分岐静脈（ＢＲＶＯ）型を含む）、ＣＮＶ（近視性ＣＮＶを含む）、角膜血管新生、角膜血管新生に関連する疾患、網膜血管新生、網膜／脈絡膜血管新生に関連する疾患、病理学的近視、フォン・ヒッペル・リンドウ病、眼のヒストプラスマ症、家族性滲出性硝子体網膜症（ＦＥＶＲ）、コーツ病、ノリエ病、骨粗鬆症偽網膜膠腫症候群（ＯＰＰＧ）、結膜下出血、ルベオーシス、眼血管新生疾患、血管新生緑内障、網膜色素変性症（ＲＰ）、高血圧性網膜症、網膜血管腫増殖、黄斑毛細血管拡張症、虹彩血管新生、眼内血管新生、網膜変性、類嚢胞黄斑浮腫（ＣＭＥ）、血管炎、乳頭浮腫、網膜炎、結膜炎（感染性結膜炎及び非感染性（例えば、アレルギー性）結膜炎を含む）、レーバー先天性黒内障、ブドウ膜炎（感染性及び非感染性ブドウ膜炎を含む）、脈絡膜炎、眼ヒストプラスマ症、眼瞼炎、ドライアイ、外傷性眼損傷、及びシェーグレン病からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、眼障害は、ＡＭＤ、ＤＭＥ、ＤＲ、またはＲＶＯである。いくつかの実施形態では、眼障害は、ＡＭＤである。いくつかの実施形態では、ＡＭＤは、滲出型ＡＭＤである。いくつかの実施形態では、眼障害は、ＤＭＥである。
【００５１】
別の態様では、本発明は、眼障害を有する対象における血管新生を低減または抑制する方法であって、対象に、本明細書に記載の抗体コンジュゲートのうちのいずれかまたは本明細書に記載の薬学的組成物のうちのいずれかの有効量を投与することを含み、それにより、対象における血管新生を低減または抑制する、方法を特色とする。
【００５２】
別の態様では、本発明は、眼障害を治療する方法であって、かかる治療を必要とする対象に、本明細書に記載の抗体コンジュゲートのうちのいずれかまたは本明細書に記載の薬学的組成物のうちのいずれかの有効量を投与することを含む、方法を特色とする。
【００５３】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、眼障害は、加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）、黄斑変性症、黄斑浮腫、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）（中心窩に及ばない限局性ＤＭＥ及び中心窩に及ぶびまん性ＤＭＥを含む）、網膜症、糖尿病性網膜症（ＤＲ）（増殖性ＤＲ（ＰＤＲ）、非増殖性ＤＲ（ＮＰＤＲ）、及び高所ＤＲを含む）、他の虚血関連網膜症、未熟児網膜症（ＲＯＰ）、網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）（網膜中心静脈（ＣＲＶＯ）型及び網膜分岐静脈（ＢＲＶＯ）型を含む）、ＣＮＶ（近視性ＣＮＶを含む）、角膜血管新生、角膜血管新生に関連する疾患、網膜血管新生、網膜／脈絡膜血管新生に関連する疾患、病理学的近視、フォン・ヒッペル・リンドウ病、眼のヒストプラスマ症、家族性滲出性硝子体網膜症（ＦＥＶＲ）、コーツ病、ノリエ病、骨粗鬆症偽網膜膠腫症候群（ＯＰＰＧ）、結膜下出血、ルベオーシス、眼血管新生疾患、血管新生緑内障、網膜色素変性症（ＲＰ）、高血圧性網膜症、網膜血管腫増殖、黄斑毛細血管拡張症、虹彩血管新生、眼内血管新生、網膜変性、類嚢胞黄斑浮腫（ＣＭＥ）、血管炎、乳頭浮腫、網膜炎、結膜炎（感染性結膜炎及び非感染性（例えば、アレルギー性）結膜炎を含む）、レーバー先天性黒内障、ブドウ膜炎（感染性及び非感染性ブドウ膜炎を含む）、脈絡膜炎、眼ヒストプラスマ症、眼瞼炎、ドライアイ、外傷性眼損傷、及びシェーグレン病からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、眼障害は、ＡＭＤ、ＤＭＥ、ＤＲ、またはＲＶＯである。いくつかの実施形態では、眼障害は、ＡＭＤである。いくつかの実施形態では、ＡＭＤは、滲出型ＡＭＤである。いくつかの実施形態では、眼障害は、ＤＭＥである。
【００５４】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、対象に第２の薬剤の有効量を投与することをさらに含み、第２の薬剤は、抗体、抗血管新生剤、サイトカイン、サイトカインアンタゴニスト、コルチコステロイド、鎮痛剤、及び第２の生物学的分子に結合する化合物からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、抗血管新生剤は、ＶＥＧＦアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦアンタゴニストは、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＶＥＧＦ受容体抗体、可溶性ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質、アプタマー、抗ＶＥＧＦ  ＤＡＲＰｉｎ（登録商標）、またはＶＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤である。いくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体は、ラニビズマブ（ＬＵＣＥＮＴＩＳ（登録商標））、ＲＴＨ−２５８、または二重特異性抗ＶＥＧＦ抗体である。いくつかの実施形態では、二重特異性抗ＶＥＧＦ抗体は、抗ＶＥＧＦ／抗Ａｎｇ２抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦ／抗Ａｎｇ２抗体は、ＲＧ−７７１６である。いくつかの実施形態では、可溶性ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質は、アフリベルセプト（ＥＹＬＥＡ（登録商標））である。いくつかの実施形態では、アプタマーは、ペガプタニブ（ＭＡＣＵＧＥＮ（登録商標））である。いくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦ  ＤＡＲＰｉｎ（登録商標）は、アビシパルペゴルである。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤は、４−（４−ブロモ−２−フルオロアニリノ）−６−メトキシ−７−（１−メチルピペリジン−４−イルメトキシ）キナゾリン（ＺＤ６４７４）、４−（４−フルオロ−２−メチルインドール−５−イルオキシ）−６−メトキシ−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）キナゾリン（ＡＺＤ２１７１）、バタラニブ（ＰＴＫ７８７）、セマキサミニブ（ＳＵ５４１６）、及びＳＵＴＥＮＴ（登録商標）（スニチニブ）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第２の生物学的分子は、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−１３、ＩＬ−１３Ｒ、ＰＤＧＦ、アンジオポエチン、アンジオポエチン２、Ｔｉｅ２、Ｓ１Ｐ、インテグリンαｖβ３、αｖβ５、及びα５β１、ベータセルリン、アペリン／ＡＰＪ、エリスロポエチン、補体Ｄ因子、ＴＮＦα、ＨｔｒＡ１、ＶＥＧＦ受容体、ＳＴ−２受容体、ならびにＡＭＤリスクと遺伝的に関連するタンパク質からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ受容体は、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＶＥＧＦＲ３、ｍｂＶＥＧＦＲ、またはｓＶＥＧＦＲである。いくつかの実施形態では、ＡＭＤリスクと遺伝的に関連するタンパク質は、補体経路成分Ｃ２、Ｂ因子、Ｈ因子、ＣＦＨＲ３、Ｃ３ｂ、Ｃ５、Ｃ５ａ、及びＣ３ａ、ＨｔｒＡ１、ＡＲＭＳ２、ＴＩＭＰ３、ＨＬＡ、ＩＬ−８、ＣＸ３ＣＲ１、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＣＥＴＰ、ＬＩＰＣ、ＣＯＬ１０Ａ１、ならびにＴＮＦＲＳＦ１０Ａからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第２の生物学的分子に結合する化合物は、抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、抗原結合抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ−Ｃ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及び（Ｆａｂ’）２断片からなる群から選択される。
【００５５】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、抗体コンジュゲートまたは薬学的組成物は、硝子体内、眼、眼内、強膜近傍、テノン嚢下、脈絡膜上、局所、静脈内、筋肉内、皮内、経皮（ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓｌｙ）、動脈内、腹腔内、病巣内、頭蓋内、関節内、前立腺内、胸膜内、気管内、髄腔内、鼻腔内、膣内、直腸内、局所、腫瘍内、腹腔内、腹膜、脳室内、皮下、結膜下、小胞内、粘膜、心膜内、臍内、眼窩内、経口、経皮（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌｌｙ）、吸入により、注射により、点眼薬により、埋め込みにより、注入により、持続注入により、局所灌流浴により標的細胞に直接、カテーテルにより、洗浄により、クリーム剤で、または液体組成物で投与される。いくつかの実施形態では、抗体コンジュゲートまたは薬学的組成物は、硝子体内、眼、眼内、強膜近傍、テノン嚢下、脈絡膜上、または局所投与される。いくつかの実施形態では、抗体コンジュゲートまたは薬学的組成物は、注射により硝子体内投与される。いくつかの実施形態では、抗体コンジュゲートまたは薬学的組成物は、点眼薬または軟膏により局所投与される。いくつかの実施形態では、抗体コンジュゲートまたは薬学的組成物は、ポート送達デバイスにより投与される。
【００５６】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。
【図面の簡単な説明】
【００５７】
【図１−１】図１Ａは、代表的な試料である２００ｋＤａのＨＡにおける分子量（モル質量の観点で）の母集団分布を示すグラフである。図１Ｂは、各酸基が５％の修飾機会を有する確率論的修飾のモンテカルロシミュレーションから得られた２００ｋＤａのＨＡ鎖上のマレイミドの数の母集団分布を示すグラフである。図１Ｃは、４０ｋＤａ、２００ｋＤａ、及び６００ｋＤａのＨＡポリマーの多分散性を示すグラフである。以下の表のグラフは、示される試料の数平均分子量（Ｍｎ）、重量平均分子量（Ｍｗ）、多分散性指数（ＰＤＩ）、及び分子量（ＭＷ）範囲（Ｍｗの観点で）を示す。
【図１−２】図１Ａは、代表的な試料である２００ｋＤａのＨＡにおける分子量（モル質量の観点で）の母集団分布を示すグラフである。図１Ｂは、各酸基が５％の修飾機会を有する確率論的修飾のモンテカルロシミュレーションから得られた２００ｋＤａのＨＡ鎖上のマレイミドの数の母集団分布を示すグラフである。図１Ｃは、４０ｋＤａ、２００ｋＤａ、及び６００ｋＤａのＨＡポリマーの多分散性を示すグラフである。以下の表のグラフは、示される試料の数平均分子量（Ｍｎ）、重量平均分子量（Ｍｗ）、多分散性指数（ＰＤＩ）、及び分子量（ＭＷ）範囲（Ｍｗの観点で）を示す。
【図２】ＨＡ−Ｇ６．３１．ＡＡＲＲコンジュゲートが、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）に屈折率（ＲＩ）及び多角度光散乱（ＭＡＬＳ）検出器を連結したＳＥＣ−ＲＩ−ＭＡＬＳによって評価された生理学的に適切なストレス条件下での物理的安定性に差があることを示す一連のグラフである。この一連のラベルは、ＨＡ骨格分子量（４０ｋＤａ（「４０Ｋ」）、２００ｋＤａ（「２００Ｋ」）、及び６００ｋＤａ（「６００Ｋ」）、ならびにＦａｂ負荷レベルを指す。
【図３】ＨＡ４０Ｋ−Ｇ６．３１．ＡＡＲＲ−４．７％（左側パネル）、ＨＡ２００Ｋ−Ｇ６．３１．ＡＡＲＲ−４．７％（中央パネル）、及びＨＡ６００Ｋ−Ｇ６．３１．ＡＡＲＲ−２．１％（右側パネル）のＳＥＣ保持プロファイルの経時的な変化を示す一連のグラフであり、ＳＥＣ保持時間がより遅い時間にシフトし（より小さい流体力学的サイズ）、このシフトの程度がＨＡ骨格分子量に依存することを示す。
【図４】ＨＡ４０Ｋ−Ｇ６．３１．ＡＡＲＲ−４．７％（左側パネル）、ＨＡ２００Ｋ−Ｇ６．３１．ＡＡＲＲ−４．７％（中央パネル）、及びＨＡ６００Ｋ−Ｇ６．３１．ＡＡＲＲ−２．１％（右側パネル）の累積重量分率としてプロットされたＳＥＣ−ＲＩ−ＭＡＬＳデータを示す一連のグラフである。
【図５】市販の多分散ＨＡ（黒色）及び単分散ＨＡ（灰色）のＳＥＣ−ＲＩ−ＭＡＬＳ特徴付けの結果を示すグラフであり、これらの２つの生産技法間の質量分布の差を示す。右側パネルの表は、この分析によって決定されたＭｎ、Ｍｗ、及びＰＤＩ値を示す。
【図６】多分散ＨＡ２００Ｋ−Ｇ６．３１．ＡＡＲＲ（黒色）及び単分散ＨＡ１５０Ｋ−Ｇ６．３１．ＡＡＲＲ（灰色）のＳＥＣ−ＲＩ−ＭＡＬＳ特徴付けの結果を示すグラフであり、質量分布の差を示す。右側パネルの表は、この分析によって決定されたＭｎ、Ｍｗ、及びＰＤＩ値を示す。
【図７】標準Ｆａｂ−Ｃ型式の分子が標準Ｆａｂヒンジペプチド配列を第１または第２のヒンジジスルフィドシステインまで伸長させることによってコンジュゲーションに有用な遊離システイン残基を含むように設計されていることを示す概略図である。鎖間ジスルフィドとこの遊離システイン残基との間のスクランブリングを最小限に抑えるか、または阻止するために、システインを、代わりに、鎖間ジスルフィドから空間的により遠くに分離された位置のＦａｂ表面上に突然変異させることができる（本明細書で「ＴｈｉｏＦａｂ」と称される）。
【図８】図８Ａ〜図８Ｃは、ヒンジ配列の可動性及び空間的近接が３つの可能なジスルフィド状態への再編成をもたらし、３つの異なるシステイン残基をコンジュゲーションに利用可能にすることができることを示す一連の概略図である。図８Ａは、ヒンジ配列システインが還元されてコンジュゲーションに利用可能になる目的とする配置を示す。図８Ｂは、ヒンジシステインが、通常は鎖間ジスルフィド結合の一部であるＨＣシステイン残基とジスルフィド結合を形成し、軽鎖（ＬＣ）鎖間ジスルフィドシステインをコンジュゲーションに利用可能にする環化重鎖（ＨＣ）バリアントを示す。図８Ｃは、ヒンジシステインが、通常は鎖間ジスルフィド結合の一部を形成するＬＣシステインとジスルフィド結合を形成し、ＨＣ鎖間ジスルフィドシステインをコンジュゲーションに利用可能にするＬＣバリアントを示す。
【図９】Ｇ６．３１．ＡＡＲＲ．Ｆａｂ−Ｃで行われ、かつ逆相超高速液体クロマトグラフィー飛行時間（ＲＰ−ＵＰＬＣ−ＴＯＦ）質量分析によって分析された一連のマレイミドキャッピング及び限定Ｌｙｓ−Ｃ消化実験の結果を示す一連のグラフを示す。ピーク上の数字は、そのピークの総イオン数であり、ピーク面積の尺度である。
【図１０】図１０Ａ及び１０Ｂは、ＨＡ−Ｇ６．３１．ＡＡＲＲコンジュゲートの限定Ｌｙｓ−Ｃ（図１０Ａ）及びヒアルロニダーゼ（ＨＡａｓｅ）（図１０Ｂ）酵素消化物の結果を示す一連のグラフであり、通常は鎖間ジスルフィドによって占有されている両システインを介したコンジュゲーションに関連するコンジュゲーションバリアントの存在を裏付ける。
【図１１】Ｇ６．３１．ＡＡＲＲ  ＴｈｉｏＦａｂのＨＡ２００Ｋ−マレイミドへのコンジュゲーションがＧ６．３１．ＡＡＲＲ．Ｆａｂ−Ｃと比較して正常に進んだことを示す一連のグラフであるが、Ｆａｂのコンジュゲートへの変換は、ＴｈｉｏＦａｂ試料の場合はより低い。
【図１２】ＲＰ−ＵＰＬＣ−ＴＯＦによって評価された３７℃のＰＢＳ＋２ｍＭ酸化グルタチオン（ＧＳＳＧ）中での異なる型式のＧ６．３１．ＡＡＲＲ由来のモデルポリエチレングリコール（ＰＥＧ）−マレイミドポリマーの脱コンジュゲーションを示すグラフである。
【図１３Ａ】４Ｄ５軽鎖のＫａｂａｔ番号付けスキームを示す。
【図１３Ｂ−１】４Ｄ５抗体のＫａｂａｔ番号付けスキーム（中央列）及びＥＵ番号付けスキーム（右側列）と比較したＮ末端から始まる順次番号付けスキーム（左側列）を示す。
【図１３Ｂ−２】４Ｄ５抗体のＫａｂａｔ番号付けスキーム（中央列）及びＥＵ番号付けスキーム（右側列）と比較したＮ末端から始まる順次番号付けスキーム（左側列）を示す。
【図１３Ｂ−３】４Ｄ５抗体のＫａｂａｔ番号付けスキーム（中央列）及びＥＵ番号付けスキーム（右側列）と比較したＮ末端から始まる順次番号付けスキーム（左側列）を示す。
【図１４】単分散ＨＡから産生されたＨＡ−Ｇ６．３１．ＡＡＲＲコンジュゲートが、多分散ＨＡから産生された同様のサイズのＨＡ−Ｇ６．３１．ＡＡＲＲコンジュゲートと比較して、４週間時点で、生理学的ストレス下で改善された物理的安定性を示すことを示すグラフである。右側パネルの表は、０週間、２週間、及び４週間時点でのＭｗ（ｋＤａ）を示す。
【発明を実施するための形態】
【００５８】
Ｉ．定義
本明細書で使用される「約」という用語は、当業者に容易に理解されるそれぞれの値の通常の誤差範囲を指す。本明細書における「約」値またはパラメータへの言及は、その値またはパラメータ自体を対象とする実施形態を含む（かつ説明する）。
【００５９】
本明細書における目的のための「アクセプターヒトフレームワーク」とは、以下で定義されるように、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークに由来する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワークまたは重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレーム「に由来する」アクセプターヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含み得るか、またはアミノ酸配列変化を含み得る。いくつかの実施形態では、アミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、または２以下である。いくつかの実施形態では、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、配列の点でＶＬヒト免疫グロブリンフレームワーク配列またはヒトコンセンサスフレームワーク配列と同一である。
【００６０】
「親和性」とは、分子（例えば、抗体）とその結合パートナー（例えば、抗原）との単一結合部位間の非共有結合相互作用の合計の強度を指す。別途指示されない限り、本明細書で使用されるとき、「結合親和性」とは、結合対のメンバー（例えば、抗体及び抗原）間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（Ｋｄ）で表され得る。親和性は、本明細書に記載の方法を含む当該技術分野で既知の一般的な方法によって測定され得る。結合親和性を測定するための具体的な例証的及び例示的な実施形態が以下に記載される。
【００６１】
「親和性成熟」抗体とは、改変を有しない親抗体と比較して、１つ以上の超可変領域（ＨＶＲ）及び／またはフレームワーク領域（ＦＲ）に１つ以上の改変を有し、かかる改変により抗体の抗原に対する親和性の改善がもたらされる抗体を指す。
【００６２】
「血管内皮成長因子」または「ＶＥＧＦ」という用語は、配列番号４７によって例示される血管内皮成長因子タンパク質Ａを指す（Ｓｗｉｓｓ  Ｐｒｏｔ受入番号Ｐ１５６９２、遺伝子ＩＤ（ＮＣＢＩ）：７４２２も参照のこと）。「ＶＥＧＦ」という用語は、配列番号４７のアミノ酸配列を有するタンパク質、ならびにその相同体及びアイソフォームを包含する。「ＶＥＧＦ」という用語は、既知のアイソフォーム、例えば、ＶＥＧＦのスプライスアイソフォーム、例えば、ＶＥＧＦ１１１、ＶＥＧＦ１２１、ＶＥＧＦ１４５、ＶＥＧＦ１６５、ＶＥＧＦ１８９、及びＶＥＧＦ２０６も、その天然に存在する対立遺伝子形態及びプロセシングされた形態とともに包含し、これらには、Ｆｅｒｒａｒａ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｃｅｌｌ．２１：６８７（２０１０）、Ｌｅｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４６：１３０６（１９８９）、及びＨｏｕｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎ．，５：１８０６（１９９１）に記載される、ＶＥＧＦ１６５のプラスミン切断によって生成される１１０個のアミノ酸のヒト血管内皮細胞成長因子が含まれる。「ＶＥＧＦ」という用語は、マウス、ラット、または霊長類等の非ヒト種由来のＶＥＧＦも指す。特定の種由来のＶＥＧＦは、例えば、ヒトＶＥＧＦの場合はｈＶＥＧＦ、マウスＶＥＧＦの場合はｍＶＥＧＦ等の用語によって示されることもある。「ＶＥＧＦ」という用語も、１６５個のアミノ酸のヒト血管内皮細胞成長因子のアミノ酸８〜１０９または１〜１０９を含むポリペプチドの切断形態を指すために使用される。ＶＥＧＦのいずれのかかる形態への言及も、本出願において、例えば、「ＶＥＧＦ１０９」、「ＶＥＧＦ（８−１０９）」、「ＶＥＧＦ（１−１０９）」または「ＶＥＧＦ１６５」によって特定され得る。「切断型」天然ＶＥＧＦのアミノ酸位置は、天然ＶＥＧＦ配列に示されるように番号付けされる。例えば、切断型天然ＶＥＧＦにおけるアミノ酸１７位（メチオニン）は、天然ＶＥＧＦでも１７位（メチオニン）である。切断型天然ＶＥＧＦは、ＫＤＲ及びＦｌｔ−１受容体に対して天然ＶＥＧＦと同等の結合親和性を有する。本明細書で使用される「ＶＥＧＦバリアント」という用語は、天然ＶＥＧＦ配列に１つ以上のアミノ酸突然変異を含むＶＥＧＦポリペプチドを指す。任意に、１つ以上のアミノ酸突然変異は、アミノ酸置換（複数可）を含む。本明細書に記載のＶＥＧＦバリアントを簡潔に表記するために、数字が、推定上の天然ＶＥＧＦ（Ｌｅｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（上記参照）及びＨｏｕｃｋ  ｅｔ  ａｌ．（上記参照）で提供される）のアミノ酸配列に沿ったアミノ酸残基の位置を指すことに留意する。別途特定されない限り、本明細書で使用される「ＶＥＧＦ」という用語は、ＶＥＧＦ−Ａを示す。
【００６３】
「抗ＶＥＧＦ抗体」、「ＶＥＧＦに結合する抗体」、及び「ＶＥＧＦに特異的に結合する抗体」という用語は、抗体がＶＥＧＦを標的とする際に診断薬及び／または治療薬として有用であるように、十分な親和性でＶＥＧＦに結合することができる抗体を指す。一実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体の無関係の非ＶＥＧＦタンパク質への結合の程度は、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定される、抗体のＶＥＧＦへの結合の約１０％未満である。ある特定の実施形態では、ＶＥＧＦに結合する抗体は、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．０１ｎＭ以下、または０．００１ｎＭ以下（例えば１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。ある特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体は、異なる種由来のＶＥＧＦ間で保存されるＶＥＧＦのエピトープに結合する。
【００６４】
本明細書における「抗体」という用語は、最も広義に使用され、それらが所望の抗原結合活性を呈する限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体断片を含むが、これらに限定されない様々な抗体構造を包含する。
【００６５】
「抗体断片」とは、インタクト抗体が結合する抗原に結合するインタクト抗体の一部分を含むインタクト抗体以外の分子を指す。抗体断片の例としては、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ−Ｃ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、ダイアボディ、直鎖状抗体、一本鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）、及び抗体断片から形成される多重特異性抗体が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの例では、抗体断片の例としては、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、ダイアボディ、直鎖状抗体、一本鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）、及び抗体断片から形成される多重特異性抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６６】
抗体のパパイン消化により、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗原結合断片と、容易に結晶化する能力を反映して表記される１つの残留「Ｆｃ」断片とが産生される。Ｆａｂ断片は、重（Ｈ）鎖の可変領域ドメイン（ＶＨ）とともに全軽（Ｌ）鎖、及び１つの重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）からなる。抗体のペプシン処理により、単一の大きいＦ（ａｂ’）２断片が産出され、これは、概して、二価の抗原結合活性を有する２つのジスルフィド結合Ｆａｂ断片に対応し、依然として抗原に架橋することができる。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域由来の１つ以上のシステインを含むＣＨ１ドメインのカルボキシ末端にさらに数個の残基を有する点でＦａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ−Ｃ分子は、配列が第１のヒンジシステインで切断されるように発現したＦａｂ分子であり、発現時に直接遊離システインを有するＦａｂをもたらす（例えば、Ｓｈａｔｚ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ  ２０１６；ＰｕｂＭｅｄ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ（ＰＭＩＤ）２７２４４４７４を参照のこと）。例えば、Ｆａｂ−Ｃ分子は、重鎖のＣｙｓ２２７位に遊離システインを有し得る。他の例では、Ｆａｂ−Ｃ分子は、重鎖のＣｙｓ２２９位に遊離システインを有し得る。Ｆａｂ’−ＳＨとは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を持つＦａｂ’の本明細書における表記である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、元来、間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片の対として産生されたものであった。抗体断片の他の化学的結合も既知である。
【００６７】
本明細書における「Ｆｃ領域」という用語は、定常領域の少なくとも一部分を含む免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。この用語は、天然配列Ｆｃ領域及びバリアントＦｃ領域を含む。一実施形態では、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６から、またはＰｒｏ２３０から、重鎖のカルボキシル末端まで伸長する。しかしながら、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は、存在する場合もあれば、存在しない場合もある。本明細書で別途特定されない限り、Ｆｃ領域または定常領域におけるアミノ酸残基の番号付けは、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）に記載されるＥＵ指数とも呼ばれるＥＵ番号付けシステムに従う。
【００６８】
「Ｆｖ」は、密接な非共有結合にある１つの重鎖可変領域ドメイン及び１つの軽鎖可変領域ドメインの二量体からなる。これらの２つのドメインの折り畳みから、抗原結合のためのアミノ酸残基に寄与し、かつ抗体に抗原結合特異性を付与する６つの超可変ループ（Ｈ鎖及びＬ鎖から各々３つのループ）が生じる。しかしながら、多くの場合、全結合部位よりも低い親和性であるが、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的なＨＶＲを３つしか含まないＦｖの半分）でさえも、抗原を認識してそれに結合する能力を有する。
【００６９】
「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」とも省略される「一本鎖Ｆｖ」は、単一のポリペプチド鎖に結合したＶＨ抗体ドメイン及びＶＬ抗体ドメインを含む抗体断片である。好ましくは、ｓＦｖポリペプチドは、ｓＦｖが抗原結合に望ましい構造を形成することを可能にするポリペプチドリンカーをＶＨドメインとＶＬドメインとの間にさらに含む。ｓＦｖの概説については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ  ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ、及びＭｏｏｒｅ  ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）を参照されたい。
【００７０】
「ダイアボディ」という用語は、鎖内ではなく鎖間のＶドメイン対合が達成され、二価断片、すなわち、２つの抗原結合部位を有する断片がもたらされるように、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間に短いリンカー（約５〜１０個の残基）を用いてｓＦｖ断片（前の段落を参照のこと）を構築することによって調製された小さい抗体フラグメントを指す。二重特異性ダイアボディは、２つの抗体のＶＨドメイン及びＶＬドメインが異なるポリペプチド鎖上に存在する２つの「交差」ｓＦｖ断片のヘテロ二量体である。ダイアボディについては、例えば、ＥＰ４０４，０９７、ＷＯ９３／１１１６１、及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）にさらに詳述されている。
【００７１】
「遮断」抗体または「アンタゴニスト」抗体とは、それが結合する抗原の生物学的活性を阻害または低減する抗体である。ある特定の遮断抗体またはアンタゴニスト抗体は、抗原の生物学的活性を実質的にまたは完全に阻害する。
【００７２】
参照抗体と「同じエピトープに結合する抗体」とは、競合アッセイにおいて参照抗体のその抗原への結合を５０％以上遮断する抗体を指し、逆に、参照抗体は、競合アッセイにおいて抗体のその抗原への結合を５０％以上遮断する。例示的な競合アッセイが本明細書で提供される。
【００７３】
「キメラ」抗体という用語は、重鎖及び／または軽鎖の一部分が特定の源または種に由来する一方で、重鎖及び／または軽鎖の残りが異なる源または種に由来する抗体を指す。
【００７４】
抗体の「クラス」とは、その重鎖が有する定常ドメインまたは定常領域の種類を指す。抗体には５つの主要なクラス、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭが存在し、これらのうちのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２にさらに分類され得る。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。
【００７５】
「システイン操作抗体」または「システイン操作抗体バリアント」とは、抗体の１つ以上の残基がシステイン残基で置換されている抗体である。ある特定の例では、システイン操作抗体は、ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体またはＴｈｉｏＦａｂ抗体と称され得る。システイン操作抗体のチオール基（複数可）は、他の部分、例えば、ポリマー（例えば、単分散ＨＡポリマーを含むＨＡポリマー）にコンジュゲートされ得る。具体的な実施形態では、置換された残基は、抗体の到達可能な部位で生じる。それらの残基をシステインで置換することによって、反応性チオール基は、それにより抗体の到達可能な部位に位置付けられ、抗体をポリマー（例えば、ＨＡポリマー）等の他の部分にコンジュゲートするために使用され得る。例えば、システイン操作抗体は、軽鎖における非システイン天然残基のシステインへの単一突然変異（例えば、Ｋａｂａｔ番号付けによるＬＣ−Ｇ６４Ｃ、ＬＣ−Ｉ１０６Ｃ、ＬＣ−Ｒ１０８Ｃ、ＬＣ−Ｒ１４２Ｃ、もしくはＬＣ−Ｋ１４９Ｃ）、または重鎖における非システイン天然残基のシステインへの単一突然変異（例えば、Ｋａｂａｔ番号付けによるＨＣ−Ｄ１０１Ｃ、ＨＣ−Ｖ１８４Ｃ、もしくはＨＣ−Ｔ２０５Ｃ、またはＥＵ番号付けによるＨＣ−Ｔ１１４Ｃ、ＨＣ−Ａ１４０Ｃ、ＨＣ−Ｌ１７４Ｃ、ＨＣ−Ｌ１７９Ｃ、ＨＣ−Ｔ１８７Ｃ、ＨＣ−Ｔ２０９Ｃ、ＨＣ−Ｖ２６２Ｃ、ＨＣ−Ｇ３７１Ｃ、ＨＣ−Ｙ３７３Ｃ、ＨＣ−Ｅ３８２Ｃ、ＨＣ−Ｓ４２４Ｃ、ＨＣ−Ｎ４３４Ｃ、及びＨＣ−Ｑ４３８Ｃ（すなわち、Ｋａｂａｔ番号付けによるＨＣ−Ａ１３６Ｃは、ＥＵ番号付けによるＨＣ−Ａ１４０Ｃである））を有する抗体であり得る（図１３Ａ及び図１３Ｂを参照のこと）。具体的な例では、システイン操作抗体は、ＨＣ−Ａ１１８Ｃ、ＨＣ−Ａ１４０Ｃ、及びＨＣ−Ｌ１７４Ｃ（ＥＵ番号付け）からなる群から選択される重鎖におけるシステイン突然変異、またはＬＣ−Ｖ２０５Ｃ及びＬＣ−Ｋ１４９Ｃ（Ｋａｂａｔ番号付け）からなる群から選択される軽鎖におけるシステイン突然変異を含み得る。いくつかの例では、システイン操作抗体は、各全長抗体（すなわち、２つの重鎖及び２つの軽鎖を有する抗体）が２つの操作システイン残基を有し、各Ｆａｂ断片が１つの操作システイン残基を有するように、重鎖または軽鎖のいずれかに単一システイン突然変異を有する。他の例では、システイン操作抗体は、１つより多くのシステイン突然変異（例えば、２、３、４、または５つのシステイン突然変異）を有する。
【００７６】
「遊離システインアミノ酸」とは、親抗体に操作されており、チオール官能基（−ＳＨ）を有し、かつ分子内または分子間ジスルフィド架橋として対合していないシステインアミノ酸残基を指す。
【００７７】
「チオール反応性値」という用語は、遊離システインアミノ酸の反応性の定量的特徴付けである。チオール反応性値は、チオール反応性試薬と反応する遊離システインアミノ酸のシステイン操作抗体における割合であり、最大値１に変換される。例えば、１００％の収率でビオチン−マレイミド試薬等のチオール反応性試薬と反応してビオチン標識抗体を形成するシステイン操作抗体上の遊離システインアミノ酸は、１．０のチオール反応性値を有する。９０％の収率でチオール反応性試薬と反応する同じまたは異なる親抗体に操作された別のシステインアミノ酸は、約０．９のチオール反応性値を有する。８０％の収率でチオール反応性試薬と反応する同じまたは異なる親抗体に操作された別のシステインアミノ酸は、約０．８のチオール反応性値を有する。７０％の収率でチオール反応性試薬と反応する同じまたは異なる親抗体に操作された別のシステインアミノ酸は、約０．７のチオール反応性値を有する。６０％の収率でチオール反応性試薬と反応する同じまたは異なる親抗体に操作された別のシステインアミノ酸は、約０．６のチオール反応性値を有する。５０％の収率でチオール反応性試薬と反応する同じまたは異なる親抗体に操作された別のシステインアミノ酸は、約０．５のチオール反応性値を有する。４０％の収率でチオール反応性試薬と反応する同じまたは異なる親抗体に操作された別のシステインアミノ酸は、約０．４のチオール反応性値を有する。３０％の収率でチオール反応性試薬と反応する同じまたは異なる親抗体に操作された別のシステインアミノ酸は、約０．３のチオール反応性値を有する。２０％の収率でチオール反応性試薬と反応する同じまたは異なる親抗体に操作された別のシステインアミノ酸は、約０．２のチオール反応性値を有する。１０％の収率でチオール反応性試薬と反応する同じまたは異なる親抗体に操作された別のシステインアミノ酸は、約０．１のチオール反応性値を有する。チオール反応性試薬と全く反応することができない同じまたは異なる親抗体に操作された別のシステインアミノ酸は、０のチオール反応性値を有する。特定のシステインのチオール反応性値の決定は、ＥＬＩＳＡアッセイ（例えば、本明細書に記載のＰＨＥＳＥＬＥＣＴＯＲアッセイ）、質量分析、液体クロマトグラフィー、オートラジオグラフィー、または他の定量的分析試験によって行われ得る。
【００７８】
「親抗体」とは、１つ以上のアミノ酸残基が１つ以上のシステイン残基によって置換されたアミノ酸配列を含む抗体である。親抗体は、天然配列または野生型配列を含み得る。親抗体は、抗体の他の天然、野生型、または修飾形態と比較して、既存のアミノ酸配列修飾（付加、欠失、及び／または置換等）を有し得る。親抗体は、目的とする標的抗原、例えば、ＶＥＧＦ等の生物学的に重要なポリペプチドを対象とするものであり得る。本明細書に記載の抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ抗体）のうちのいずれも親抗体であり得る。
【００７９】
「エフェクター機能」とは、抗体のアイソタイプによって異なる抗体のＦｃ領域に起因する生物学的活性を指す。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、食作用、細胞表面受容体（例えばＢ細胞受容体）の下方調節、及びＢ細胞活性化が挙げられる。
【００８０】
「フレームワーク」または「フレームワーク領域」または「ＦＲ」とは、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、一般に、４つのＦＲドメイン：ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４からなる。
【００８１】
「全長抗体」、「インタクト抗体」、及び「全抗体」という用語は、天然抗体の構造と実質的に同様の構造を有するか、または本明細書で定義されるＦｃ領域を含む重鎖を有する抗体を指すために本明細書で同義に使用され得る。
【００８２】
「ヒト抗体」とは、ヒトもしくはヒト細胞によって産生された抗体、またはヒト抗体レパートリーもしくは他のヒト抗体コード配列を利用する非ヒト源に由来する抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有するものである。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を明確に除外する。
【００８３】
「ヒトコンセンサスフレームワーク」とは、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般に存在するアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般に、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列の下位群からである。一般に、配列の下位群は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ９１−３２４２，Ｂｅｔｈｅｓｄａ  ＭＤ（１９９１），ｖｏｌｓ．１−３．にあるような下位群である。一実施形態では、ＶＬの場合、下位群は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（上記参照）にあるような下位群カッパＩである。一実施形態では、ＶＨの場合、下位群は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（上記参照）にあるような下位群ＩＩＩである。
【００８４】
非ヒト（例えば、齧歯類）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト抗体に由来する最小限の配列を含むキメラ抗体である。ほとんどの場合、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域由来の残基が、所望の抗体特異性、親和性、及び能力を有するマウス、ラット、ウサギ、または非ヒト霊長類等の非ヒト種（ドナー抗体）の超可変領域由来の残基によって置換される、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。いくつかの例では、ヒト免疫グロブリンのＦＲ残基は、対応する非ヒト残基によって置換される。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見られない残基を含み得る。これらの修飾は、抗体の能力をさらに洗練するために行われる。一般に、ヒト化抗体は、超可変ループの全てまたは実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンの超可変ループに対応し、ＦＲの全てまたは実質的に全てがヒト免疫グロブリン配列のＦＲである、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むであろう。ヒト化抗体は、任意に、免疫グロブリンの定常領域（Ｆｃ）、典型的には、ヒト免疫グロブリンのＦｃの少なくとも一部分も含むであろう。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５（１９８６）、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９（１９８８）、及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６（１９９２）を参照されたい。
【００８５】
「可変」という用語は、可変ドメインのある特定のセグメントの配列が抗体間で広範囲にわたって異なるという事実を指す。可変または「Ｖ」ドメインは、抗原結合を媒介し、特定の抗体のその特定の抗原に対する特異性と定義する。しかしながら、可変性は、可変ドメインの全長にわたって均等には分布していない。代わりに、Ｖ領域は、各９〜１２アミノ酸長の「超可変領域」と呼ばれる極度の可変性のより短い領域によって分離された１５〜３０アミノ酸のフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる比較的不変の一続きからなる。「超可変領域」または「ＨＶＲ」という用語は、本明細書で使用されるとき、抗原結合に関与する抗体のアミノ酸残基を指す。超可変領域は、一般に、例えば、ＶＬでは残基約２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）、及び８９〜９７（Ｌ３）、ＶＨでは残基約２６〜３５（Ｈ１）、４９〜６５（Ｈ２）、及び９５〜１０２（Ｈ３）（一実施形態では、Ｈ１は、残基約３１〜３５である）（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１））由来のアミノ酸残基、及び／または「超可変ループ」（例えば、ＶＬでは残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）、及び９１〜９６（Ｌ３）、ＶＨでは２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）、及び９６〜１０１（Ｈ３）（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７））由来の残基を含む。天然重鎖及び軽鎖の可変ドメインは各々、ベータシート構造を連結し、かついくつかの場合にはその一部を形成するループを形成する、３つの超可変領域によって連結されたベータシート配置を主に採用する４つのＦＲを含む。各鎖における超可変領域は、ＦＲによって近接近して一緒に保持され、他方の鎖由来の超可変領域とともに、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１）を参照のこと）。したがって、ＨＶＲ及びＦＲ配列は、概して、ＶＨ（またはＶＬ）において以下の配列に出現する：ＦＲ１−Ｈ１（Ｌ１）−ＦＲ２−Ｈ２（Ｌ２）−ＦＲ３−Ｈ３（Ｌ３）−ＦＲ４。定常ドメインは、抗体の抗原への結合に直接関与しないが、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）への抗体の関与等の様々なエフェクター機能を呈する。
【００８６】
「Ｋａｂａｔにあるような可変ドメイン残基番号付け」または「Ｋａｂａｔにあるようなアミノ酸位置番号付け」という用語、及びそれらの変形は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（上記参照）における抗体の編集の重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインに使用される番号付けシステムを指す。この番号付けシステムを使用して、実際の直鎖状アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲまたはＨＶＲの短縮またはそれへの挿入に対応するより少ないアミノ酸または追加のアミノ酸を含み得る。例えば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２の後に単一のアミノ酸挿入（Ｋａｂａｔによる残基５２ａ）、及び重鎖ＦＲ残基８２の後に挿入された残基（例えば、Ｋａｂａｔによる残基８２ａ、８２ｂ、及び８２ｃ等）を含み得る。残基のＫａｂａｔ番号付けは、抗体の配列の相同性領域での「標準の」Ｋａｂａｔにより番号付けされた配列との整列によって所与の抗体について決定され得る。
【００８７】
Ｋａｂａｔ番号付けシステムは、一般に、可変ドメイン内の残基（およそ軽鎖の残基１〜１０７及び重鎖の残基１〜１１３）を参照するときに使用される（例えば、参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ．５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）を参照のこと）。「ＥＵ番号付けシステム」または「ＥＵ指数」は、一般に、免疫グロブリン重鎖定常領域内の残基を参照するときに使用される（例えば、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（上記参照）で報告されているＥＵ指数）。「ＫａｂａｔにあるようなＥＵ指数」とは、ヒトＩｇＧ１  ＥＵ抗体の残基番号付けを指す。本明細書に別途述べられない限り、抗体の可変ドメイン内の残基番号への言及は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムによる残基番号付けを意味する。本明細書に別途述べられない限り、抗体の定常ドメイン内の残基番号への言及は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１に記載される、ＥＵ指数とも呼ばれるＥＵ番号付けシステムによる残基番号付けを意味する。
【００８８】
別途示されない限り、可変ドメイン内のＨＶＲ残基及び他の残基（例えば、ＦＲ残基）は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（上記参照）に従って本明細書で番号付けされる。
【００８９】
「単離された抗体」という用語は、本明細書に開示される様々な抗体を説明するために使用されるとき、抗体が発現した細胞または細胞培養物から特定され、かつそれから分離及び／または回収された抗体を意味する。その天然環境の混入成分は、典型的にはポリペプチドの診断的または治療的使用を妨害する材料であり、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質性または非タンパク質性溶質を含み得る。いくつかの実施形態では、抗体は、例えば、電気泳動（例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）またはクロマトグラフ（例えば、イオン交換または逆相ＨＰＬＣ）によって決定される、９５％または９９％を超える純度に精製される。抗体純度の評価法の概説については、例えば、Ｆｌａｔｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ  ８４８：７９−８７（２００７）を参照されたい。好ましい実施形態では、抗体は、（１）スピニングカップシークエネーター（ｓｐｉｎｎｉｎｇ  ｃｕｐ  ｓｅｑｕｅｎａｔｏｒ）を使用してＮ末端もしくは内部アミノ酸配列の少なくとも１５個の残基を得るのに十分な程度まで、または（２）クマシーブルー染色もしくは好ましくは銀染色を使用して非還元条件もしくは還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥによって均質になるまで精製される。単離された抗体には、組換え細胞内のインサイツの抗体が含まれるが、これは、ポリペプチド天然環境の少なくとも１つの成分が存在しないためである。しかしながら、通常、単離されたポリペプチドは、少なくとも１つの精製ステップによって調製される。
【００９０】
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に同種の抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、その集団を構成する個々の抗体は、同一である、及び／または同じエピトープに結合するが、例えば、天然に存在する突然変異を含むか、またはモノクローナル抗体調製物の産生中に生じる可能なバリアント抗体を除き、かかるバリアントは、一般に、少量で存在する。典型的には異なる決定基（エピトープ）を対象とする異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基を対象とする。したがって、「モノクローナル」という修飾語は、実質的に同種の抗体集団から得られるという抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものと解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座の全てまたは一部を含むトランスジェニック動物を利用する方法を含むが、これらに限定されない様々な技法によって作製され得、モノクローナル抗体を作製するためのかかる方法及び他の例示的な方法が、本明細書に記載される。
【００９１】
「多重特異性抗体」という用語は、最も広義に使用され、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）−軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）ユニットがポリエピトープ特異性を有する（すなわち、１つの生物学的分子上の２つの異なるエピトープに、または異なる生物学的分子上の各エピトープに結合することができる）、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗体を具体的に網羅する。かかる多重特異性抗体には、全長抗体、２つ以上のＶＬ及びＶＨドメインを有する抗体、抗体断片、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ−Ｃ、Ｆｖ、ｄｓＦｖ、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、二重特異性ダイアボディ及びトリアボディ、共有結合または非共有結合した抗体断片が含まれるが、これらに限定されない。「ポリエピトープ特異性」とは、同じまたは異なる標的（複数可）上の２つ以上の異なるエピトープに特異的に結合する能力を指す。「デュアル特異性（ｄｕａｌ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）」または「二重特異性（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）」とは、同じまたは異なる標的（複数可）上の２つの異なるエピトープに特異的に結合する能力を指す。しかしながら、二重特異性抗体とは対照的に、デュアル特異性抗体は、アミノ酸配列が同一である２つの抗原結合アームを有し、各Ｆａｂアームは、２つの抗原を認識することができる。デュアル特異性により、抗体が高い親和性で単一のＦａｂまたはＩｇＧ分子として２つの異なる抗原と相互作用することが可能になる。一実施形態によれば、ＩｇＧ１形態の多重特異性抗体は、５μＭ〜０．００１ｐＭ、３μＭ〜０．００１ｐＭ、１μＭ〜０．００１ｐＭ、０．５μＭ〜０．００１ｐＭ、または０．１μＭ〜０．００１ｐＭの親和性で各エピトープに結合する。「単一特異性」とは、１つのエピトープのみに結合する能力を指す。
【００９２】
「天然抗体」とは、異なる構造を有する天然に存在する免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合している２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖から構成される、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端まで、各重鎖は、可変重ドメインまたは重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）を有し、その後に３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）が続く。同様に、Ｎ末端からＣ末端まで、各軽鎖は、可変軽ドメインまたは軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）を有し、その後に定常軽（ＣＬ）ドメインが続く。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２つのタイプの一方に割り当てられ得る。
【００９３】
抗体の標的分子への結合に関して、特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチド標的上のエピトープへの「特異的結合」またはそれ「に特異的に結合する」またはそれ「に特異的な」という用語は、非特異的相互作用とは測定可能に異なる結合を意味する。特異的結合は、例えば、分子の結合を対照分子の結合と比較して決定することによって測定され得る。例えば、特異的結合は、標的と同様の対照分子、例えば、過剰な非標識標的との競合によって決定され得る。この場合、特異的結合は、標識標的のプローブへの結合が過剰な非標識標的によって競合的に阻害される場合に示される。本明細書で使用される特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチド標的上のエピトープへの「特異的結合」またはそれ「に特異的に結合する」またはそれ「に特異的な」という用語は、例えば、１０−４Ｍ以下、あるいは１０−５Ｍ以下、あるいは１０−６Ｍ以下、あるいは１０−７Ｍ以下、あるいは１０−８Ｍ以下、あるいは１０−９Ｍ以下、あるいは１０−１０Ｍ以下、あるいは１０−１１Ｍ以下、あるいは１０−１２Ｍ以下の標的に対するＫｄ、または１０−４Ｍ〜１０−６Ｍまたは１０−６Ｍ〜１０−１０Ｍまたは１０−７Ｍ〜１０−９Ｍの範囲のＫｄを有する分子によって示され得る。当業者に理解されるように、親和性及びＫｄ値は、反比例する。抗原に対する高い親和性は、低いＫｄ値によって測定される。一実施形態では、「特異的結合」という用語は、分子が、いずれの他のポリペプチドまたはポリペプチドエピトープにも実質的に結合することなく、特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチド上のエピトープに結合する結合を指す。
【００９４】
「抗ＶＥＧＦ抗体をコードする核酸」とは、抗体重鎖及び軽鎖（またはその断片）をコードする１つ以上の核酸分子を指し、これには、単一のベクターまたは別個のベクター中のかかる核酸分子（複数可）、及び宿主細胞中の１つ以上の位置に存在するかかる核酸分子（複数可）が含まれる。
【００９５】
本明細書で使用される「ベクター」という用語は、それが結合している別の核酸を伝播することができる核酸分子を指す。この用語には、自己複製核酸構造としてのベクター、ならびにそれが導入されている宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターが含まれる。ある特定のベクターは、それらが作動可能に連結された核酸の発現を誘導することができる。かかるベクターは、本明細書で「発現ベクター」と称される。
【００９６】
「宿主細胞」、「宿主細胞株」、及び「宿主細胞培養物」という用語は、同義に使用され、外因性核酸が導入されている細胞（かかる細胞の子孫を含む）を指す。宿主細胞としては、「形質転換体」及び「形質転換細胞」が含まれ、これらには、初代形質転換細胞及び継代の数にかかわらずそれに由来する子孫が含まれる。子孫は、核酸含有量が親細胞と完全に同一ではない場合があるが、突然変異を含み得る。最初に形質転換された細胞についてスクリーニングまたは選択されたものと同じ機能または生物学的活性を有する変異子孫が、本明細書に含まれる。
【００９７】
参照ポリペプチド配列に対する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、最大配列同一性パーセントを達成するように、配列を整列させ、必要に応じてギャップを導入した後の、いずれの保存的置換も配列同一性の一部と見なさない、参照ポリペプチド配列内のアミノ酸残基と同一の候補配列内のアミノ酸残基のパーセンテージと定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定するための整列は、当該技術分野の技術の範囲内の様々な方法で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェア等の公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して達成され得る。当業者であれば、比較される配列の全長にわたって最大整列を達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、配列を整列させるための適切なパラメータを決定することができる。しかしながら、本明細書における目的のために、アミノ酸配列同一性％値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ−２を使用して生成される。ＡＬＩＧＮ−２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．が作成したものであり、ソースコードは、米国著作権局（Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｄ．Ｃ．，２０５５９）にユーザ文書とともに申請されており、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７で登録されている。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａから公的に入手可能であるか、またはソースコードからコンパイルされ得る。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、デジタルＵＮＩＸ  Ｖ４．０Ｄを含むＵＮＩＸオペレーティングシステムでの使用のためにコンパイルされるべきである。全ての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ−２プログラムによって設定されており、変動しない。
【００９８】
ＡＬＩＧＮ−２がアミノ酸配列比較のために用いられる状況下では、所与のアミノ酸配列Ａの、所与のアミノ酸配列Ｂへの、所与のアミノ酸配列Ｂとの、または所与のアミノ酸配列Ｂに対するアミノ酸配列同一性％（あるいは、これは、所与のアミノ酸配列Ｂへの、所与のアミノ酸配列Ｂとの、または所与のアミノ酸配列Ｂに対するある特定のアミノ酸配列同一性％を有するか、または含む所与のアミノ酸配列Ａと表現され得る）は、以下のように計算される：１００×分数Ｘ／Ｙ（式中、Ｘが、配列整列プログラムＡＬＩＧＮ−２によってＡ及びＢのそのプログラムの整列において完全な一致とスコア化されるアミノ酸残基の数であり、Ｙが、Ｂ内のアミノ酸残基の総数である）。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、ＡのＢに対するアミノ酸配列同一性％は、ＢのＡに対するアミノ酸配列同一性％と等しくないことが理解される。別途具体的に述べられていない限り、本明細書で使用される全てのアミノ酸配列同一性％値は、直前の段落に記載されるようにＡＬＩＧＮ−２コンピュータプログラムを使用して得られる。
【００９９】
本明細書で使用されるとき、「投与する」とは、化合物（例えば、本発明の抗体（例えば、システイン操作抗ＶＥＧＦ抗体）もしくは抗体コンジュゲート（例えば、単分散ＨＡコンジュゲート））または組成物（例えば、薬学的組成物、例えば、本発明の抗体もしくは抗体コンジュゲートを含む薬学的組成物）のある投薬量を対象に与える方法を意味する。本明細書に記載の方法で利用される組成物は、例えば、硝子体内（例えば、硝子体内注射により）、点眼薬により、筋肉内、静脈内、皮内、経皮（ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓｌｙ）、動脈内、腹腔内、病巣内、頭蓋内、関節内、前立腺内、胸膜内、気管内、髄腔内、鼻腔内、膣内、直腸内、局所、腫瘍内、腹膜、皮下、結膜下、小胞内、粘膜、心膜内、臍内、眼内、眼窩内、経口、局所、経皮（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌｌｙ）、吸入により、注射により、埋め込みにより、注入により、持続注入により、局所灌流浴により標的細胞に直接、カテーテルにより、洗浄により、クリーム剤で、または液体組成物で投与され得る。本明細書に記載の方法で利用される組成物は、全身または局所投与される場合もある。投与方法は、様々な要因（例えば、投与される化合物または組成物及び治療される状態、疾患、または障害の重症度）によって異なり得る。
【０１００】
「血管新生」とは、新たな血管が既存の血管から生じる過程を指す。血管新生は、中胚葉細胞前駆体由来の内皮細胞のデノボ形成である脈管形成とは異なる。病理学的血管新生に関連する障害は、本発明の組成物及び方法によって治療され得る。例示的な病理学的血管新生に関連する障害には、眼状態が含まれるが、これらに限定されない（非限定的な眼状態には、例えば、増殖性糖尿病性網膜症を含む網膜症、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）、加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）、糖尿病性及び他の虚血関連網膜症、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）、病理学的近視、フォン・ヒッペル・リンドウ病、眼ヒストプラスマ症、網膜静脈閉塞症（網膜中心静脈（ＣＲＶＯ）型及び網膜分岐静脈（ＢＲＶＯ）型を含む）、角膜血管新生、網膜血管新生、未熟児網膜症（ＲＯＰ）、家族性滲出性硝子体網膜症（ＦＥＶＲ）、コーツ病、ノリエ病、骨粗鬆症偽網膜膠腫症候群（ＯＰＰＧ）、結膜下出血、ルベオーシス、眼血管新生疾患、血管新生緑内障、及び高血圧性網膜症が含まれる）。さらなる眼障害が、以下に記載される。
【０１０１】
本明細書で使用される「眼障害」という用語は、病理学的血管新生に関連する任意の眼障害（本明細書で同義に「眼状態」とも称される）を含む。眼障害は、新たな血管の網膜または角膜等の眼組織の構造への改変されたまたは制御されていない増殖及び／または浸潤を特徴とし得る。非限定的な眼障害には、例えば、ＡＭＤ（例えば、滲出型ＡＭＤ、乾燥ＡＭＤ、中等度ＡＭＤ、進行性ＡＭＤ、及び地図状萎縮（ＧＡ））、黄斑変性症、黄斑浮腫、ＤＭＥ（例えば、中心窩に及ばない限局性ＤＭＥ及び中心窩に及ぶびまん性ＤＭＥ）、網膜症、糖尿病性網膜症（ＤＲ）（例えば、増殖性ＤＲ（ＰＤＲ）、非増殖性ＤＲ（ＮＰＤＲ）、及び高所ＤＲ）、他の虚血関連網膜症、ＲＯＰ、網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）（例えば、網膜中心静脈（ＣＲＶＯ）型及び網膜分岐静脈（ＢＲＶＯ）型）、ＣＮＶ（例えば、近視性ＣＮＶ）、角膜血管新生、角膜血管新生に関連する疾患、網膜血管新生、網膜／脈絡膜血管新生に関連する疾患、病理学的近視、フォン・ヒッペル・リンドウ病、眼ヒストプラスマ症、ＦＥＶＲ、コーツ病、ノリエ病、ＯＰＰＧ、結膜下出血、ルベオーシス、眼血管新生疾患、血管新生緑内障、網膜色素変性症（ＲＰ）、高血圧性網膜症、網膜血管腫増殖、黄斑毛細血管拡張症、虹彩血管新生、眼内血管新生、網膜変性、類嚢胞黄斑浮腫（ＣＭＥ）、血管炎、乳頭浮腫、網膜炎、結膜炎（例えば、感染性結膜炎及び非感染性（例えば、アレルギー性）結膜炎）、レーバー先天性黒内障（別名、レーバー先天性黒内障またはＬＣＡ）、ブドウ膜炎（感染性及び非感染性ブドウ膜炎を含む）、脈絡膜炎（例えば、多巣性脈絡膜炎）、眼ヒストプラスマ症、眼瞼炎、ドライアイ、外傷性眼損傷、シェーグレン病、及び疾患または障害が、眼血管新生、血管漏出、及び／または網膜浮腫に関連する他の眼疾患が含まれる。さらなる例示的な眼障害には、ルベオーシス（角度血管新生）に関連する疾患、及び増殖性硝子体網膜症の全ての形態を含む線維血管性組織または線維性組織の異常増殖によって引き起こされる疾患が含まれる。
【０１０２】
例示的な角膜血管新生に関連する疾患には、流行性角結膜炎、ビタミンＡ欠乏症、コンタクトレンズ過剰装着、アトピー性角膜炎、上縁角膜炎、翼状片乾燥角膜炎、シェーグレン症候群、酒さ性座瘡、フリクテン症、梅毒、マイコバクテリア感染症、脂質変性、化学熱傷、細菌性潰瘍、真菌性潰瘍、単純ヘルペス感染症、帯状ヘルペス感染症、原虫感染症、カポジ肉腫、モーレン潰瘍、テリエン辺縁変性、辺縁角質溶解、リウマチ性関節炎、全身性狼瘡、多発動脈炎、外傷、ヴェグナーサルコイドーシス、強膜炎、スティーブンス・ジョンソン症候群、類天疱瘡放射状角膜切除術、及び角膜移植片拒絶反応が含まれるが、これらに限定されない。
【０１０３】
例示的な網膜／脈絡膜血管新生に関連する疾患には、糖尿病性網膜症、黄斑変性症、鎌状赤血球貧血、サルコイド、梅毒、弾性線維性仮性黄色腫、パジェット病、静脈閉塞、動脈閉塞、頸動脈閉塞性疾患、慢性ブドウ膜炎／硝子体炎、マイコバクテリア感染症、ライム病、全身性紅斑性狼瘡、未熟児網膜症、網膜色素変性症、網膜浮腫（黄斑浮腫を含む）、イールズ病、ベーチェット病、網膜炎または脈絡膜炎（例えば、多巣性脈絡膜炎）を引き起こす感染症、推定眼ヒストプラスマ症、ベスト病（卵黄様黄斑変性症）、近視、視窩、スタルガルト病、扁平部炎、網膜剥離（例えば、慢性網膜剥離）、過粘稠度症候群、トキソプラズマ症、外傷、及びレーザー術後合併症が含まれるが、これらに限定されない。
【０１０４】
「血管新生因子または血管新生剤」とは、血管の発生を刺激する、例えば、血管新生、内皮細胞成長、血管の安定性、及び／または脈管形成等を促進する成長因子である。例えば、血管新生因子には、例えば、ＶＥＧＦ及びＶＥＧＦファミリーメンバー、ＰｌＧＦ、ＰＤＧＦファミリー、線維芽細胞成長因子ファミリー（ＦＧＦ）、ＴＩＥリガンド（アンジオポエチン）、エフリン、Ｄｅｌ−１、線維芽細胞成長因子（酸性（ａＦＧＦ）及び塩基性（ｂＦＧＦ））、ホリスタチン、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、肝細胞成長因子（ＨＧＦ）／散乱因子（ＳＦ）、インターロイキン−８（ＩＬ−８）、レプチン、ミッドカイン、胎盤成長因子、血小板由来内皮細胞成長因子（ＰＤ−ＥＣＧＦ）、血小板由来成長因子、特にＰＤＧＦ−ＢＢまたはＰＤＧＦＲ−ベータ、プレイオトロフィン（ＰＴＮ）、プログラニュリン、プロリフェリン、形質転換成長因子成長因子−アルファ（ＴＧＦ−アルファ）、形質転換成長因子−ベータ（ＴＧＦ−ベータ）、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−アルファ）、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）／血管透過因子（ＶＰＦ）等が含まれるが、これらに限定されない。これには、創傷治癒を促進する因子、例えば、成長ホルモン、インスリン様成長因子−Ｉ（ＩＧＦ−Ｉ）、ＶＩＧＦ、表皮成長因子（ＥＧＦ）、ＣＴＧＦ及びそのファミリーメンバー、ならびにＴＧＦ−アルファ及びＴＧＦ−ベータも含まれる。例えば、Ｋｌａｇｓｂｒｕｎ  ａｎｄ  Ｄ’Ａｍｏｒｅ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，５３：２１７−３９（１９９１）、Ｓｔｒｅｉｔ  ａｎｄ  Ｄｅｔｍａｒ，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２２：３１７２−３１７９（２００３）、Ｆｅｒｒａｒａ  ＆  Ａｌｉｔａｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ５（１２）：１３５９−１３６４（１９９９）、Ｔｏｎｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２２：６５４９−６５５６（２００３）（例えば、既知の血管新生因子を列記する表１）、及びＳａｔｏ，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．，８：２００−２０６（２００３）を参照されたい。
【０１０５】
「抗血管新生剤」または「血管新生阻害剤」とは、血管新生、脈管形成、または望ましくない血管透過を直接的または間接的のいずれかで阻害する、低分子量物質、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、単離されたタンパク質、組換えタンパク質、抗体、またはそれらのコンジュゲートもしくは融合タンパク質を指す。抗血管新生剤には、血管新生因子またはその受容体に結合し、それらの血管新生活性を遮断する薬剤が含まれることを理解されたい。例えば、抗血管新生剤は、上で定義される血管新生剤に対する抗体または他のアンタゴニスト、例えば、ＶＥＧＦアンタゴニスト（例えば、ＶＥＧＦ−ＡまたはＶＥＧＦ−Ａ受容体（例えば、ＫＤＲ受容体またはＦｌｔ−１受容体）に対する抗体）、ＰＤＧＦアンタゴニスト（例えば、ＧＬＥＥＶＥＣ（商標）（Ｉｍａｔｉｎｉｂ  Ｍｅｓｙｌａｔｅ）等の抗ＰＤＧＦＲ阻害剤）である。抗血管新生剤には、天然血管新生阻害剤、例えば、アンギオスタチン、エンドスタチン等も含まれる。例えば、Ｋｌａｇｓｂｒｕｎ  ａｎｄ  Ｄ’Ａｍｏｒｅ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，５３：２１７−３９（１９９１）、Ｓｔｒｅｉｔ  ａｎｄ  Ｄｅｔｍａｒ，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２２：３１７２−３１７９（２００３）（例えば、悪性黒色腫における抗血管新生療法を列記する表３）、Ｆｅｒｒａｒａ  ＆  Ａｌｉｔａｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ５（１２）：１３５９−１３６４（１９９９）、Ｔｏｎｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２２：６５４９−６５５６（２００３）（例えば、既知の抗血管新生因子を列記する表２）、及びＳａｔｏ  Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．，８：２００−２０６（２００３）（例えば、臨床試験に使用される抗血管新生剤を列記する表１）を参照されたい。
【０１０６】
本明細書で使用される「ＶＥＧＦアンタゴニスト」という用語は、ＶＥＧＦに結合するか、ＶＥＧＦ発現レベルを低減するか、またはＶＥＧＦ生物学的活性（１つ以上のＶＥＧＦ受容体へのＶＥＧＦ結合、ＶＥＧＦシグナル伝達、ならびにＶＥＧＦ媒介血管新生及び内皮細胞生存もしくは増殖を含むが、これらに限定されない）を中和、遮断、阻害、抑制、低減、もしくは妨害することができる分子を指す。例えば、ＶＥＧＦ生物学的活性を中和、遮断、阻害、抑制、低減、または妨害することができる分子は、１つ以上のＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦＲ）（例えば、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＶＥＧＦＲ３、膜結合型ＶＥＧＦ受容体（ｍｂＶＥＧＦＲ）、または可溶性ＶＥＧＦ受容体（ｓＶＥＧＦＲ））への結合によってその効果を発揮することができる。本発明の方法に有用なＶＥＧＦアンタゴニストとして、ＶＥＧＦに特異的に結合するポリペプチド、抗ＶＥＧＦ抗体及びその抗原結合断片、ＶＥＧＦに特異的に結合し、それにより、１つ以上の受容体へのその結合を隔離する受容体分子及び誘導体、融合タンパク質（例えば、ＶＥＧＦ−Ｔｒａｐ（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ））、及びＶＥＧＦ１２１−ゲロニン（Ｐｅｒｅｇｒｉｎｅ）が含まれる。ＶＥＧＦアンタゴニストには、ＶＥＧＦポリペプチドのアンタゴニストバリアント、ＶＥＧＦポリペプチドをコードする核酸分子の少なくとも１つの断片に相補的なアンチセンス核酸塩基オリゴマー、ＶＥＧＦポリペプチドをコードする核酸分子の少なくとも１つの断片に相補的な小ＲＮＡ、ＶＥＧＦを標的とするリボザイム、ＶＥＧＦに対するペプチボディ、及びＶＥＧＦアプタマーも含まれる。ＶＥＧＦアンタゴニストには、ＶＥＧＦＲに結合するポリペプチド、抗ＶＥＧＦＲ抗体及びその抗原結合断片、ならびにＶＥＧＦＲに結合し、それにより、ＶＥＧＦ生物学的活性（例えば、ＶＥＧＦシグナル伝達）を遮断、阻害、抑制、低減、または妨害する誘導体、または融合タンパク質も含まれる。ＶＥＧＦアンタゴニストには、ＶＥＧＦまたはＶＥＧＦＲに結合し、ＶＥＧＦ生物学的活性を遮断、阻害、抑制、低減、または妨害することができる非ペプチド小分子も含まれる。したがって、「ＶＥＧＦ活性」という用語は、ＶＥＧＦのＶＥＧＦ媒介生物学的活性を具体的に含む。ある特定の実施形態では、ＶＥＧＦアンタゴニストは、ＶＥＧＦの発現レベルまたは生物学的活性を少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれ以上低減または阻害する。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ特異的アンタゴニストによって阻害されるＶＥＧＦは、ＶＥＧＦ（８−１０９）、ＶＥＧＦ（１−１０９）、またはＶＥＧＦ１６５である。
【０１０７】
本明細書で使用されるとき、ＶＥＧＦアンタゴニストには、抗ＶＥＧＦＲ２抗体及び関連分子（例えば、ラムシルマブ、タニビルマブ、アフリベルセプト）、抗ＶＥＧＦＲ１抗体及び関連分子（例えば、イクルクマブ、アフリベルセプト（ＶＥＧＦ  Ｔｒａｐ−Ｅｙｅ、ＥＹＬＥＡ（登録商標））、及びジブ−アフリベルセプト（ＶＥＧＦ  Ｔｒａｐ、ＺＡＬＴＲＡＰ（登録商標）））、二重特異性ＶＥＧＦ抗体（例えば、ＭＰ−０２５０、バヌシズマブ（ＶＥＧＦ−ＡＮＧ２）、及びＵＳ２００１／０２３６３８８に開示される二重特異性抗体）、抗ＶＥＧＦ、抗ＶＥＧＦＲ１、及び抗ＶＥＧＦＲ２アームのうちの２つの組み合わせを含む二重特異性抗体、抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、ベバシズマブ、セバシズマブ、及びラニビズマブ）、及び非ペプチド小分子ＶＥＧＦアンタゴニスト（例えば、パゾパニブ、アキシチニブ、バンデタニブ、スチバーガ、カボザンチニブ、レンバチニブ、ニンテダニブ、オランチニブ、テラチニブ、ドビチニグ、セジラニブ、モテサニブ、スルファチニブ、アパチニブ、フォレチニブ、ファミチニブ、及びチボザニブ）が含まれ得るが、これらに限定されない。さらなるＶＥＧＦアンタゴニストが、以下に記載される。
【０１０８】
薬剤、例えば、薬学的製剤の「有効量」とは、必要な投薬量で必要な期間にわたって所望の治療的または予防的結果を達成するのに有効な量を指す。
【０１０９】
「個体」または「対象」は、哺乳動物である。哺乳動物には、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、及びウマ）、霊長類（例えば、ヒト及びサル等の非ヒト霊長類）、ウサギ、及び齧歯類（例えば、マウス及びラット）が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、個体または対象は、ヒトである。「対象」は、「患者」であり得る。
【０１１０】
「障害」とは、本抗体での治療から恩恵を受けるであろう任意の状態である。例えば、異常な血管新生（過度の、不適切な、または制御不能な血管新生）に罹患しているか、またはそれに対する予防を必要とする哺乳動物。これには、哺乳動物を問題の障害にかかりやすくする病理学的状態を含む慢性及び急性障害または疾患が含まれる。本明細書で治療される障害の非限定的な例としては、病理学的血管新生に関連する障害（例えば、眼障害）が挙げられる。
【０１１１】
「添付文書」という用語は、適応症、用法、投薬量、投与、併用療法、禁忌、及び／または治療製品の使用に関する警告についての情報を含む、かかる治療製品の商用パッケージに習慣的に含まれる使用説明書を指すために使用される。
【０１１２】
「薬学的に許容される担体」とは、対象に非毒性の活性成分以外の薬学的製剤中の成分を指す。薬学的に許容される担体には、緩衝液、賦形剤、安定剤、または防腐剤が含まれるが、これらに限定されない。
【０１１３】
「薬学的製剤」という用語は、中に含まれる活性成分（例えば、抗体コンジュゲート）の生物学的活性が有効になるような形態であり、かつ製剤が投与される対象に許容できない程度に毒性のさらなる成分を含まない調製物を指す。
【０１１４】
本明細書で使用されるとき、「治療」（及び「治療する」または「治療すること」等のその文法的変形）とは、治療される個体の自然経過を変化させるための臨床的介入を指し、予防のために、または臨床病理学の経過中のいずれかで行われ得る。望ましい治療効果には、疾患の発生または再発の予防、症状の緩和、疾患のいずれの直接的または間接的病理学的帰結の軽減、疾患進行速度の低下、病状の改善または苦痛緩和、及び寛解または予後改善が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本発明の抗体コンジュゲートまたは本発明の抗体コンジュゲートを含む他の組成物（例えば、薬学的製剤）は、疾患の発症を遅延させるか、または疾患の進行を遅らせるために使用される。
【０１１５】
「単離された」核酸分子とは、核酸の天然源において通常会合している少なくとも１つの混入核酸分子から特定及び分離される核酸分子である。単離された核酸分子は、天然に見られる形態または状況以外のものである。したがって、単離された核酸分子は、天然細胞に存在する核酸分子と区別される。しかしながら、単離された核酸分子には、例えば、核酸分子が天然細胞の染色体位置とは異なる染色体位置にある抗体を通常発現する細胞に含まれる核酸分子が含まれる。
【０１１６】
「制御配列」という表現は、特定の宿主生物における作動可能に連結されたコード配列の発現に必要なＤＮＡ配列を指す。原核生物に好適な制御配列には、例えば、プロモーター、任意にオペレーター配列、及びリボソーム結合部位が含まれる。真核細胞は、プロモーター、ポリアデニル化シグナル、及びエンハンサーを利用することで知られている。
【０１１７】
核酸は、別の核酸配列と機能的な関係に置かれたときに「作動可能に連結される」。例えば、プレ配列または分泌リーダーのＤＮＡは、ポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現したときにポリペプチドのＤＮＡに作動可能に連結されるか、プロモーターまたはエンハンサーは、配列の転写に影響を及ぼしたときにコード配列に作動可能に連結されるか、またはリボソーム結合部位は、翻訳を促進するように位置付けられたときにコード配列に作動可能に連結される。一般に、「作動可能に連結される」とは、連結されるＤＮＡ配列が隣接しており、分泌リーダーの場合、隣接しており、かつリーディング段階にあることを意味する。しかしながら、エンハンサーは隣接している必要はない。連結は、簡便な制限部位でのライゲーションによって達成される。かかる部位が存在しない場合、合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーが従来の慣例に従って使用される。
【０１１８】
本明細書で使用されるとき、「細胞」、「細胞株」、及び「細胞培養物」という表現は、同義に使用され、全てのかかる表記は、子孫を含む。したがって、「形質転換体」及び「形質転換細胞」という語は、移入の数にかかわらず、初代対象細胞及びそれに由来する培養物を含む。意図的または偶発的な突然変異により、全ての子孫のＤＮＡ含有量が正確に同一ではない場合があることも理解される。最初に形質転換された細胞においてスクリーニングされた機能または生物学的活性と同じ機能または生物学的活性を有する突然変異体子孫が含まれる。別個の表記が意図される場合、それは文脈から明確になるであろう。
【０１１９】
出発または参照ポリペプチド（例えば、参照抗体またはその可変ドメイン（複数可）／ＨＶＲ（複数可））の「バリアント」または「突然変異体」とは、（１）出発または参照ポリペプチドのアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を有し、（２）天然突然変異誘発または人工（人為的）突然変異誘発のいずれかにより出発または参照ポリペプチドから導かれたポリペプチドである。かかるバリアントには、例えば、本明細書で「アミノ酸残基改変」と称される、目的とするポリペプチドのアミノ酸配列内の残基からの欠失、及び／またはそれへの挿入、及び／またはその置換が含まれる。したがって、バリアントＨＶＲとは、出発または参照ポリペプチド配列（供給源抗体または抗原結合断片のもの等）に対してバリアント配列を含むＨＶＲを指す。アミノ酸残基改変は、この文脈では、出発または参照ポリペプチド配列（参照抗体またはその断片のもの等）における対応する位置のアミノ酸とは異なるアミノ酸を指す。欠失、挿入、及び置換の任意の組み合わせを行って、最終バリアントまたは突然変異体構築物に到達することができるが、但し、最終構築物が所望の機能的特性を有することを条件とする。グリコシル化部位の数または位置の変化等のアミノ酸変化も、ポリペプチドの翻訳後プロセスを改変することができる。
【０１２０】
「野生型（ＷＴ）」もしくは「参照」配列または「野生型」もしくは「参照」タンパク質／ポリペプチドの配列、例えば、参照抗体のＨＶＲまたは可変ドメインは、バリアントポリペプチドが突然変異の導入により導かれる参照配列であり得る。一般に、所与のタンパク質の「野生型」配列は、自然界で最も一般的な配列である。同様に、「野生型」遺伝子配列は、自然界で最も一般的に見られる遺伝子の配列である。突然変異は、天然プロセスまたは人為的手段のいずれかにより「野生型」遺伝子（ひいてはそれがコードするタンパク質）に導入され得る。かかるプロセスの産物は、最初の「野生型」タンパク質または遺伝子の「バリアント」または「突然変異体」形態である。
【０１２１】
「等電点（ｐＩ）」とは、分子（例えば、抗体等のタンパク質）が正味電荷を帯びていないｐＨを意味し、当該技術分野で「ｐＨ（Ｉ）」または「ＩＥＰ」とも称される。
【０１２２】
本明細書で使用されるとき、「抗体コンジュゲート」とは、１つ以上のポリマーに共有結合した抗体である。任意の好適なポリマーが、抗体、例えば、親水性ポリマー（例えば、ヒアルロン酸（ＨＡ）もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ））または疎水性ポリマー（例えば、乳酸グリコール酸コポリマー（ＰＬＧＡ））にコンジュゲートされ得る。具体的な実施形態では、ポリマーは、ＨＡである（本明細書で「ＨＡコンジュゲート」とも称される）。
【０１２３】
本明細書で使用されるとき、「ポリマー」という用語は、直鎖状、環状、分岐状、架橋、またはデンドリマー様式、またはそれらの組み合わせで、化学結合によって結合された繰り返し構造単位（すなわち、単量体）を含む分子を意味する。ポリマーは、合成であるか、天然に存在するか、またはそれらの組み合わせであり得る。「ポリマー」という用語が、２つ以上の異なる単量体を含むポリマーであるコポリマーを包含することを理解されたい。ポリマーは、一種類の単量体のみを含むポリマーであるホモポリマーでもあり得る。
【０１２４】
「多分散性指数（ＰＤＩ）」という用語は、ポリマーの分子量分布の幅広さの程度を指す。ＰＤＩは、当該技術分野で「分散性指数」、「不均一性指数」、または
2020514376.tif 000002
とも称される。ポリマー試料のＰＤＩは、
2020514376.tif 000003
を使用して計算され得、式中、Ｍｗは、重量平均モル質量であり、Ｍｎは、数平均モル質量である。別途示されない限り、ＰＤＩは、等式（Ｉ）に従って計算される。
【０１２５】
ポリマー試料は、「単分散」（当該技術分野で別名「均一」）または「多分散」（当該技術分野で別名「不均一」）と見なされ得る。本明細書で使用されるとき、ＨＡポリマーまたはＨＡコンジュゲート試料に関して「単分散」という用語は、ＨＡポリマーまたはＨＡコンジュゲート試料が、約１．１以下のＰＤＩ、例えば、約１．００１、約１．０２、約１．０３、約１．０４、約１．０５、約１．０６、約１．０７、約１．０８、約１．０９、または約１．１のＰＤＩを有することを意味する。例えば、単分散ＨＡポリマーまたはＨＡコンジュゲート試料は、１．０〜約１．１（例えば、１〜約１．１、１〜約１．０９、１〜約１．０８、１〜約１．０７、１〜約１．０６、１〜約１．０５、１〜約１．０４、１〜約１．０３、１〜約１．０２、１〜約１．０１、１〜約１．００５、約１．００１〜約１．１、約１．００１〜約１．１、約１．００１〜約１．０９、約１．００１〜約１．０８、約１．００１〜約１．０７、約１．００１〜約１．０６、約１．００１〜約１．０５、約１．００１〜約１．０４、約１．００１〜約１．０３、約１．００１〜約１．０２、約１．００１〜約１．０１、約１．００１〜約１．００５、約１．００１〜約１．００４、約１．００１〜約１．００３、約１．００１〜約１．００２、約１．０００１〜約１．１、約１．０００１〜約１．０９、約１．０００１〜約１．０８、約１．０００１〜約１．０７、約１．０００１〜約１．０６、約１．０００１〜約１．０５、約１．０００１〜約１．０４、約１．０００１〜約１．０３、約１．０００１〜約１．０２、約１．０００１〜約１．０１、約１．０００１〜約１．００５、約１．０００１〜約１．００４、約１．０００１〜約１．００３、約１．０００１〜約１．００２、または約１．０００１〜約１．００５）のＰＤＩを有し得る。
【０１２６】
対照的に、「多分散」という用語は、ＨＡポリマーまたはＨＡコンジュゲート試料が、１．１を超えるＰＤＩ、例えば、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、またはそれ以上のＰＤＩを有することを意味する。例えば、いくつかの実施形態では、多分散ＨＡポリマーまたはＨＡコンジュゲート試料は、約１．３〜約２、約１．４〜約２、約１．５〜約２、約１．６〜約２、約１．７〜約２、約１．８〜約２、または約１．９〜約２のＰＤＩを有する。
【０１２７】
本明細書で同義に使用される「ヒアルロン酸」、「ヒアルラノン（ｈｙａｌｕｒａｎｏｎ）」、及び「ＨＡ」という用語は、Ｎ−アセチルグルコサミン及びグルクロン酸の繰り返し二糖単位を含むポリマーグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）を指す。ＨＡは、例えば、細胞外マトリックス（例えば、眼の硝子体内）、結合組織、上皮組織、及び神経組織に見られ得るアニオン性非硫酸化ＧＡＧである。
【０１２８】
本明細書で使用される「ポリエチレングリコール」または「ＰＥＧ」という用語は、その分子量に応じて、ポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）またはポリオキシエチレン（ＰＯＥ）としても既知のポリエーテル化合物を指す。ＰＥＧは、Ｈ−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｎ−ＯＨの構造を有し得、式中、ｎは、任意の好適な整数である。ＰＥＧは、分岐状ＰＥＧ、星状ＰＥＧ、または櫛状ＰＥＧであり得る。ＰＥＧは、例えば、ＰＥＧ四量体、ＰＥＧ六量体、またはＰＥＧ八量体であり得る。
【０１２９】
本明細書で使用される「クリアランス」という用語は、単位時間当たりの区画（例えば、眼（例えば、硝子体））から排除された物質（例えば、抗ＶＥＧＦ抗体、抗体コンジュゲート、融合タンパク質（例えば、Ｆａｂ融合タンパク質）、またはポリマー製剤）の体積を指す。
【０１３０】
「半減期」という用語は、物質（例えば、抗ＶＥＧＦ抗体、抗体コンジュゲート、融合タンパク質（例えば、Ｆａｂ融合タンパク質）、またはポリマー製剤）の濃度がインビボ（例えば、眼（例えば、硝子体）内）またはインビトロで半減するのに必要な時間を指す。
【０１３１】
ＩＩ．組成物及び方法
本発明は、抗体（例えば、本明細書に記載のいずれの抗ＶＥＧＦ抗体も含む抗ＶＥＧＦ抗体）に結合したポリマー（例えば、単分散ＨＡポリマーを含む単分散ポリマー）を含む抗体コンジュゲート、例えば抗体コンジュゲートの調製に使用され得るシステイン操作抗体、抗体コンジュゲートを含む組成物（例えば、薬学的組成物）、ならびに例えば治療的使用（例えば、眼障害の治療）のためにそれを作製及び使用する方法を提供する。
【０１３２】
Ａ．本発明のコンジュゲートに使用するための例示的な抗体
本発明は、ポリマー（例えば、単分散ポリマー）に共有結合した抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ抗体）を含む抗体コンジュゲートを提供する。任意の好適な抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ抗体）が使用され得る。例えば、抗体は、ＶＥＧＦ、インターロイキン−１ベータ（ＩＬ−１β）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、インターロイキン−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）、インターロイキン−１３（ＩＬ−１３）、ＩＬ−１３受容体（ＩＬ−１３Ｒ）、ＰＤＧＦ（例えば、ＰＤＧＦ−ＢＢ）、アンジオポエチン、アンジオポエチン２（Ａｎｇ２）、Ｔｉｅ２、Ｓ１Ｐ、インテグリンαｖβ３、αｖβ５、及びα５β１、ベータセルリン、アペリン／ＡＰＪ、エリスロポエチン、補体Ｄ因子、ＴＮＦα、ＨｔｒＡ１、ＶＥＧＦ受容体（例えば、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＶＥＧＦＲ３、膜結合型ＶＥＧＦ受容体（ｍｂＶＥＧＦＲ）、または可溶性ＶＥＧＦ受容体（ｓＶＥＧＦＲ））、ＳＴ−２受容体、ならびに加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）リスクと遺伝的に関連するタンパク質（例えば、補体経路成分Ｃ２、Ｂ因子、Ｈ因子、ＣＦＨＲ３、Ｃ３ｂ、Ｃ５、Ｃ５ａ、及びＣ３ａ、ＨｔｒＡ１、ＡＲＭＳ２、ＴＩＭＰ３、ＨＬＡ、インターロイキン−８（ＩＬ−８）、ＣＸ３ＣＲ１、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＣＥＴＰ、ＬＩＰＣ、ＣＯＬ１０Ａ１、ならびにＴＮＦＲＳＦ１０Ａ）からなる群から選択される抗原に特異的に結合し得る。かかる抗体は、例えば、血管新生の低減、及び／または病理学的血管新生に関連する障害（例えば、眼障害）の治療もしくはその進行の遅延に有用であり得る。本発明の抗体コンジュゲートに使用され得る例示的かつ非限定的な抗ＶＥＧＦ抗体は、以下にさらに記載される。
【０１３３】
いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、（ａ）ＤＹＷＩＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＧＸ１ＴＰＸ２ＧＧＸ３Ｘ４Ｘ５ＹＸ６ＤＳＶＸ７Ｘ８（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２（式中、Ｘ１がＩｌｅまたはＨｉｓであり、Ｘ２がＡｌａまたはＡｒｇであり、Ｘ３がＴｙｒまたはＬｙｓであり、Ｘ４がＴｈｒまたはＧｌｕであり、Ｘ５が、Ａｒｇ、Ｔｙｒ、Ｇｌｎ、またはＧｌｕであり、Ｘ６がＡｌａまたはＧｌｕであり、Ｘ７がＬｙｓまたはＧｌｕであり、Ｘ８がＧｌｙまたはＧｌｕである）、（ｃ）ＦＶＦＦＬＰＹＡＭＤＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＸ１ＶＳＴＡＶＡ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１（式中、Ｘ１がＡｓｐまたはＡｒｇである）、（ｅ）Ｘ１ＡＳＦＬＹＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２（式中、Ｘ１がＳｅｒまたはＭｅｔである）、及び（ｆ）Ｘ１ＱＧＹＧＸ２ＰＦＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３（式中、Ｘ１が、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、またはＴｈｒであり、Ｘ２が、Ａｌａ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、またはＡｒｇである）から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲ、または上記のＨＶＲのうちの１つ以上の組み合わせ及び配列番号１〜６のうちのいずれか１つと少なくとも約８０％の配列同一性（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性）を有する１つ以上のそれらのバリアントを含み得る。
【０１３４】
例えば、抗ＶＥＧＦ抗体は、（ａ）ＤＹＷＩＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＧＩＴＰＡＧＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号７）、ＧＩＴＰＡＧＧＹＥＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２１）、またはＧＩＴＰＡＧＧＹＥＹＹＡＤＳＶＥＧ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＦＶＦＦＬＰＹＡＭＤＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＧＹＧＡＰＦＴ（配列番号１０）またはＱＱＧＹＧＮＰＦＴ（配列番号２３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲ、または上記のＨＶＲのうちの１つ以上の組み合わせ及び配列番号１、３、７〜１０、または２１〜２３のうちのいずれか１つと少なくとも約８０％の配列同一性（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性）を有する１つ以上のそれらのバリアントを含み得る。
【０１３５】
例えば、いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、（ａ）ＤＹＷＩＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＧＩＴＰＡＧＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＦＶＦＦＬＰＹＡＭＤＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＧＹＧＡＰＦＴ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲ、または上記のＨＶＲのうちの１つ以上の組み合わせ及び配列番号１、３、または７〜１０のうちのいずれか１つと少なくとも約８０％の配列同一性（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性）を有する１つ以上のそれらのバリアントを含み得る。具体的な例では、いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）ＤＹＷＩＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＧＩＴＰＡＧＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＦＶＦＦＬＰＹＡＭＤＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＧＹＧＡＰＦＴ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１３６】
いくつかの例では、前述の抗ＶＥＧＦ抗体のいずれも、以下の重鎖可変ドメインフレームワーク領域（ＦＲ）：（ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＩＳ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、（ｂ）ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＲＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号１５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４のうちの１つ、２つ、３つ、または４つを含み得る。
【０１３７】
いくつかの例では、前述の抗ＶＥＧＦ抗体のいずれも、以下の軽鎖可変ドメインＦＲ：（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＡＡＴＹＹＣ（配列番号１９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４のうちの１つ、２つ、３つ、または４つを含み得る。
【０１３８】
例えば、いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）ＤＹＷＩＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＧＩＴＰＡＧＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＦＶＦＦＬＰＹＡＭＤＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＧＹＧＡＰＦＴ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、以下の４つの重鎖可変ドメインＦＲ：（ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＩＳ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、（ｂ）ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＲＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号１５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を含む。さらなる例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、以下の４つの軽鎖可変ドメインＦＲ：（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＡＡＴＹＹＣ（配列番号１９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を含む。いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１３９】
例えば、いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、（ａ）ＤＹＷＩＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＧＩＴＰＡＧＧＹＥＹＹＡＤＳＶＥＧ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＦＶＦＦＬＰＹＡＭＤＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＧＹＧＮＰＦＴ（配列番号２３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲ、または上記のＨＶＲのうちの１つ以上の組み合わせ及び配列番号１、３、８、９、２２、または２３のうちのいずれか１つと少なくとも約８０％の配列同一性（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性）を有する１つ以上のそれらのバリアントを含み得る。具体的な例では、いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）ＤＹＷＩＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＧＩＴＰＡＧＧＹＥＹＹＡＤＳＶＥＧ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＦＶＦＦＬＰＹＡＭＤＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＧＹＧＮＰＦＴ（配列番号２３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１４０】
いくつかの例では、前述の抗ＶＥＧＦ抗体のいずれも、以下の重鎖可変ドメインフレームワーク領域（ＦＲ）：（ａ）ＥＥＱＬＶＥＥＧＧＧＬＶＱＰＧＥＳＬＥＬＳＣＡＡＳＧＦＥＩＳ（配列番号２９）またはＥＥＱＬＶＥＥＧＧＧＬＶＱＰＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＥＩＳ（配列番号５２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、（ｂ）ＷＶＲＱＥＰＧＥＧＬＥＷＶＡ（配列番号３０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＦＴＩＳＡＤＴＳＥＮＴＡＹＬＱＭＮＥＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号３１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＥＬＶＴＶＳＳ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４のうちの１つ、２つ、３つ、または４つを含み得る。
【０１４１】
いくつかの例では、前述の抗ＶＥＧＦ抗体のいずれも、以下の軽鎖可変ドメインＦＲ：（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号２４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４のうちの１つ、２つ、３つ、または４つを含み得る。
【０１４２】
例えば、いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）ＤＹＷＩＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＧＩＴＰＡＧＧＹＥＹＹＡＤＳＶＥＧ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＦＶＦＦＬＰＹＡＭＤＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＧＹＧＮＰＦＴ（配列番号２３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、以下の４つの重鎖可変ドメインＦＲ：（ａ）ＥＥＱＬＶＥＥＧＧＧＬＶＱＰＧＥＳＬＥＬＳＣＡＡＳＧＦＥＩＳ（配列番号２９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、（ｂ）ＷＶＲＱＥＰＧＥＧＬＥＷＶＡ（配列番号３０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＦＴＩＳＡＤＴＳＥＮＴＡＹＬＱＭＮＥＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号３１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＥＬＶＴＶＳＳ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を含む。さらなる例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、以下の４つの軽鎖可変ドメインＦＲ：（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号２４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を含む。いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１４３】
いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）ＤＹＷＩＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＧＩＴＰＡＧＧＹＥＹＹＡＤＳＶＥＧ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＦＶＦＦＬＰＹＡＭＤＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＧＹＧＮＰＦＴ（配列番号２３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、以下の４つの重鎖可変ドメインＦＲ：（ａ）ＥＥＱＬＶＥＥＧＧＧＬＶＱＰＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＥＩＳ（配列番号５２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、（ｂ）ＷＶＲＱＥＰＧＥＧＬＥＷＶＡ（配列番号３０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＦＴＩＳＡＤＴＳＥＮＴＡＹＬＱＭＮＥＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号３１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＥＬＶＴＶＳＳ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を含む。さらなる例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、以下の４つの軽鎖可変ドメインＦＲ：（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号２４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を含む。いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、（ａ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１４４】
例えば、いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、（ａ）ＤＹＷＩＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＧＩＴＰＡＧＧＹＥＹＹＡＤＳＶＥＧ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＦＶＦＦＬＰＹＡＭＤＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＧＹＧＡＰＦＴ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲ、または上記のＨＶＲのうちの１つ以上の組み合わせ及び配列番号１、３、８〜１０、または２２のうちのいずれか１つと少なくとも約８０％の配列同一性（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性）を有する１つ以上のそれらのバリアントを含み得る。具体的な例では、いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）ＤＹＷＩＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＧＩＴＰＡＧＧＹＥＹＹＡＤＳＶＥＧ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＦＶＦＦＬＰＹＡＭＤＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＧＹＧＡＰＦＴ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１４５】
いくつかの例では、前述の抗ＶＥＧＦ抗体のいずれも、以下の重鎖可変ドメインフレームワーク領域（ＦＲ）：（ａ）ＥＥＱＬＶＥＥＧＧＧＬＶＱＰＧＥＳＬＥＬＳＣＡＡＳＧＦＥＩＳ（配列番号２９）またはＥＥＱＬＶＥＥＧＧＧＬＶＱＰＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＥＩＳ（配列番号５２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、（ｂ）ＷＶＲＱＥＰＧＥＧＬＥＷＶＡ（配列番号３０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＦＴＩＳＡＤＴＳＥＮＴＡＹＬＱＭＮＥＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号３１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＥＬＶＴＶＳＳ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４のうちの１つ、２つ、３つ、または４つを含み得る。
【０１４６】
いくつかの例では、前述の抗ＶＥＧＦ抗体のいずれも、以下の軽鎖可変ドメインＦＲ：（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１７）、ＤＩＱＭＴＱＳＰＥＳＬＳＡＳＶＧＤＥＶＴＩＴＣ（配列番号２５）、またはＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＥＶＴＩＴＣ（配列番号２６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号１８）またはＷＹＱＱＫＰＧＥＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号２７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＡＡＴＹＹＣ（配列番号１９）またはＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＥＳＬＱＰＥＤＡＡＴＹＹＣ（配列番号２８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４のうちの１つ、２つ、３つ、または４つを含み得る。
【０１４７】
例えば、いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）ＤＹＷＩＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＧＩＴＰＡＧＧＹＥＹＹＡＤＳＶＥＧ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＦＶＦＦＬＰＹＡＭＤＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＧＹＧＡＰＦＴ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、以下の４つの重鎖可変ドメインＦＲ：（ａ）ＥＥＱＬＶＥＥＧＧＧＬＶＱＰＧＥＳＬＥＬＳＣＡＡＳＧＦＥＩＳ（配列番号２９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、（ｂ）ＷＶＲＱＥＰＧＥＧＬＥＷＶＡ（配列番号３０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＦＴＩＳＡＤＴＳＥＮＴＡＹＬＱＭＮＥＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号３１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＥＬＶＴＶＳＳ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を含む。さらなる例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、以下の４つの軽鎖可変ドメインＦＲ：（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＥＳＬＳＡＳＶＧＤＥＶＴＩＴＣ（配列番号２５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＡＡＴＹＹＣ（配列番号１９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を含む。いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１４８】
例えば、他の例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）ＤＹＷＩＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＧＩＴＰＡＧＧＹＥＹＹＡＤＳＶＥＧ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＦＶＦＦＬＰＹＡＭＤＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＧＹＧＡＰＦＴ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、以下の４つの重鎖可変ドメインＦＲ：（ａ）ＥＥＱＬＶＥＥＧＧＧＬＶＱＰＧＥＳＬＥＬＳＣＡＡＳＧＦＥＩＳ（配列番号２９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、（ｂ）ＷＶＲＱＥＰＧＥＧＬＥＷＶＡ（配列番号３０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＦＴＩＳＡＤＴＳＥＮＴＡＹＬＱＭＮＥＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号３１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＥＬＶＴＶＳＳ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を含む。さらなる例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、以下の４つの軽鎖可変ドメインＦＲ：（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＥＶＴＩＴＣ（配列番号２６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＥＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号２７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＥＳＬＱＰＥＤＡＡＴＹＹＣ（配列番号２８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を含む。いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１４９】
例えば、他の例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）ＤＹＷＩＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＧＩＴＰＡＧＧＹＥＹＹＡＤＳＶＥＧ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＦＶＦＦＬＰＹＡＭＤＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＧＹＧＡＰＦＴ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、以下の４つの重鎖可変ドメインＦＲ：（ａ）ＥＥＱＬＶＥＥＧＧＧＬＶＱＰＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＥＩＳ（配列番号５２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、（ｂ）ＷＶＲＱＥＰＧＥＧＬＥＷＶＡ（配列番号３０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＦＴＩＳＡＤＴＳＥＮＴＡＹＬＱＭＮＥＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号３１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＥＬＶＴＶＳＳ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を含む。さらなる例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、以下の４つの軽鎖可変ドメインＦＲ：（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＥＶＴＩＴＣ（配列番号２６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＥＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号２７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＥＳＬＱＰＥＤＡＡＴＹＹＣ（配列番号２８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を含む。いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、（ａ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１５０】
例えば、さらに他の例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）ＤＹＷＩＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＧＩＴＰＡＧＧＹＥＹＹＡＤＳＶＥＧ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＦＶＦＦＬＰＹＡＭＤＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＧＹＧＡＰＦＴ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、以下の４つの重鎖可変ドメインＦＲ：（ａ）ＥＥＱＬＶＥＥＧＧＧＬＶＱＰＧＥＳＬＥＬＳＣＡＡＳＧＦＥＩＳ（配列番号２９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、（ｂ）ＷＶＲＱＥＰＧＥＧＬＥＷＶＡ（配列番号３０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＦＴＩＳＡＤＴＳＥＮＴＡＹＬＱＭＮＥＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号３１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＥＬＶＴＶＳＳ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を含む。さらなる例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、以下の４つの軽鎖可変ドメインＦＲ：（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＥＳＬＳＡＳＶＧＤＥＶＴＩＴＣ（配列番号２５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＥＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号２７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＡＡＴＹＹＣ（配列番号１９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を含む。いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１５１】
例えば、なおさらなる例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）ＤＹＷＩＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＧＩＴＰＡＧＧＹＥＹＹＡＤＳＶＥＧ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＦＶＦＦＬＰＹＡＭＤＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＧＹＧＡＰＦＴ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、以下の４つの重鎖可変ドメインＦＲ：（ａ）ＥＥＱＬＶＥＥＧＧＧＬＶＱＰＧＥＳＬＥＬＳＣＡＡＳＧＦＥＩＳ（配列番号２９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、（ｂ）ＷＶＲＱＥＰＧＥＧＬＥＷＶＡ（配列番号３０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＦＴＩＳＡＤＴＳＥＮＴＡＹＬＱＭＮＥＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号３１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＥＬＶＴＶＳＳ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を含む。さらなる例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、以下の４つの軽鎖可変ドメインＦＲ：（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＥＶＴＩＴＣ（配列番号２６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＡＡＴＹＹＣ（配列番号１９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を含む。いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１５２】
他の例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）ＤＹＷＩＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＧＩＴＰＡＧＧＹＥＹＹＡＤＳＶＥＧ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＦＶＦＦＬＰＹＡＭＤＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＧＹＧＡＰＦＴ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、以下の４つの重鎖可変ドメインＦＲ：（ａ）ＥＥＱＬＶＥＥＧＧＧＬＶＱＰＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＥＩＳ（配列番号５２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、（ｂ）ＷＶＲＱＥＰＧＥＧＬＥＷＶＡ（配列番号３０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＦＴＩＳＡＤＴＳＥＮＴＡＹＬＱＭＮＥＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号３１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＥＬＶＴＶＳＳ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を含む。さらなる例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、以下の４つの軽鎖可変ドメインＦＲ：（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＥＶＴＩＴＣ（配列番号２６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＡＡＴＹＹＣ（配列番号１９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を含む。いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、（ａ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１５３】
例えば、他の例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）ＤＹＷＩＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＧＩＴＰＡＧＧＹＥＹＹＡＤＳＶＥＧ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＦＶＦＦＬＰＹＡＭＤＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＧＹＧＡＰＦＴ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、以下の４つの重鎖可変ドメインＦＲ：（ａ）ＥＥＱＬＶＥＥＧＧＧＬＶＱＰＧＥＳＬＥＬＳＣＡＡＳＧＦＥＩＳ（配列番号２９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、（ｂ）ＷＶＲＱＥＰＧＥＧＬＥＷＶＡ（配列番号３０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＦＴＩＳＡＤＴＳＥＮＴＡＹＬＱＭＮＥＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号３１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＥＬＶＴＶＳＳ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を含む。さらなる例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、以下の４つの軽鎖可変ドメインＦＲ：（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＡＡＴＹＹＣ（配列番号１９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を含む。いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１５４】
他の例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）ＤＹＷＩＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＧＩＴＰＡＧＧＹＥＹＹＡＤＳＶＥＧ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＦＶＦＦＬＰＹＡＭＤＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＧＹＧＡＰＦＴ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、以下の４つの重鎖可変ドメインＦＲ：（ａ）ＥＥＱＬＶＥＥＧＧＧＬＶＱＰＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＥＩＳ（配列番号５２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、（ｂ）ＷＶＲＱＥＰＧＥＧＬＥＷＶＡ（配列番号３０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＦＴＩＳＡＤＴＳＥＮＴＡＹＬＱＭＮＥＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号３１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＥＬＶＴＶＳＳ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を含む。さらなる例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、以下の４つの軽鎖可変ドメインＦＲ：（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＡＡＴＹＹＣ（配列番号１９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を含む。いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、（ａ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１５５】
いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、（ａ）配列番号１１、４０、もしくは４２のうちのいずれか１つと、またはその配列と少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号１２、４１、もしくは４６のうちのいずれか１つと、またはその配列と少なくとも９０％の配列（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む。例えば、いくつかの例では、抗体は、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの例では、抗体は、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの例では、抗体は、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの例では、抗体は、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号４１のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの例では、抗体は、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号４６のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１５６】
いくつかの例では、前述の抗ＶＥＧＦ抗体のいずれも、以下の重鎖可変ドメインフレームワーク領域（ＦＲ）：（ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＩＳ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、（ｂ）ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（配列番号１４）またはＷＶＲＱＥＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（配列番号３９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＲＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号１５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４のうちの１つ、２つ、３つ、または４つを含み得る。
【０１５７】
いくつかの例では、前述の抗ＶＥＧＦ抗体のいずれも、以下の軽鎖可変ドメインＦＲ：（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１７）またはＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＤＣ（配列番号４５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＡＡＴＹＹＣ（配列番号１９）、ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＳＡＴＹＹＣ（配列番号４４）、またはＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣ（配列番号５４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２０）またはＦＧＱＧＴＫＶＥＶＫ（配列番号５５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４のうちの１つ、２つ、３つ、または４つを含み得る。
【０１５８】
いくつかの例では、抗体は、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及びＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＱＱＧＹＧＮＰＦＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号５９）のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１５９】
いくつかの例では、抗体は、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及びＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＱＱＧＹＧＮＰＦＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号５９）のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１６０】
いくつかの例では、抗体は、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及びＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＱＱＧＹＧＮＰＦＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号５９）のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１６１】
いくつかの例では、抗体は、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及びＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＱＱＧＹＧＮＰＦＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号５９）のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１６２】
いくつかの例では、抗体は、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及びＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＱＱＧＹＧＮＰＦＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号５９）のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１６３】
いくつかの例では、抗体は、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及びＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＱＱＧＹＧＡＰＦＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号６０）のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１６４】
いくつかの例では、抗体は、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及びＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＱＱＧＹＧＡＰＦＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号６０）のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１６５】
いくつかの例では、抗体は、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及びＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＱＱＧＹＧＡＰＦＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号６０）のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１６６】
いくつかの例では、抗体は、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及びＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＱＱＧＹＧＡＰＦＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号６０）のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１６７】
いくつかの例では、抗体は、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及びＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＱＱＧＹＧＡＰＦＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号６０）のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。例えば、いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、（ａ）配列番号１１と、またはその配列と少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、（ｂ）配列番号１１と、またはその配列と少なくとも９０％の配列（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む。いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、（ａ）ＤＹＷＩＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＧＩＴＰＡＧＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＦＶＦＦＬＰＹＡＭＤＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＧＹＧＡＰＦＴ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み得る。いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、以下の重鎖フレームワーク領域：（ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＩＳ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、（ｂ）ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＲＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号１５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を含む。いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、以下の軽鎖フレームワーク領域：（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＡＡＴＹＹＣ（配列番号１９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を含む。いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む。いくつかの例では、例示的な抗ＶＥＧＦは、Ｎ９４Ａ．Ｆ８３Ａ．Ｎ８２ａＲ．Ｙ５８Ｒ（Ｇ６．３１  ＡＡＲＲまたはＧ６．３１．ＡＡＲＲとも称される）である。
【０１６８】
いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、（ａ）配列番号３３または５１と、またはその配列と少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、（ｂ）配列番号１２、３４、３５、３６、３７、または３８のうちのいずれか１つと、またはその配列と少なくとも９０％の配列（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む。例えば、いくつかの例では、抗体は、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの例では、抗体は、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの例では、抗体は、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの例では、抗体は、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの例では、抗体は、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの例では、抗体は、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号３８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの例では、抗体は、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号３８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの例では、抗体は、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの例では、抗体は、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの例では、抗体は、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１６９】
いくつかの例では、前述の抗ＶＥＧＦ抗体のいずれも、以下の重鎖可変ドメインフレームワーク領域（ＦＲ）：ＥＥＱＬＶＥＥＧＧＧＬＶＱＰＧＥＳＬＥＬＳＣＡＡＳＧＦＥＩＳ（配列番号２９）またはＥＥＱＬＶＥＥＧＧＧＬＶＱＰＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＥＩＳ（配列番号５２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、（ｂ）ＷＶＲＱＥＰＧＥＧＬＥＷＶＡ（配列番号３０）またはＷＶＲＱＥＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（配列番号３９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＦＴＩＳＡＤＴＳＥＮＴＡＹＬＱＭＮＥＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号３１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＥＬＶＴＶＳＳ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４のうちの１つ、２つ、３つ、または４つを含み得る。
【０１７０】
いくつかの例では、前述の抗ＶＥＧＦ抗体のいずれも、以下の軽鎖可変ドメインＦＲ：（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１７）、ＤＩＱＭＴＱＳＰＥＳＬＳＡＳＶＧＤＥＶＴＩＴＣ（配列番号２５）、またはＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＥＶＴＩＴＣ（配列番号２６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号１８）またはＷＹＱＱＫＰＧＥＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号２７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＡＡＴＹＹＣ（配列番号１９）、ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号２４）、またはＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＥＳＬＱＰＥＤＡＡＴＹＹＣ（配列番号２８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４のうちの１つ、２つ、３つ、または４つを含み得る。
【０１７１】
いくつかの例では、本発明は、（ａ）配列番号４８のアミノ酸配列を含む重鎖及び／または（ｂ）配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を提供する。ある特定の実施形態では、この抗体は、Ｆａｂ型式で表現されるＧ６．３１  ＡＡＲＲである。
【０１７２】
いくつかの例では、本発明は、（ａ）配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖及び／または（ｂ）配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を提供する。ある特定の実施形態では、この抗体は、抗ヒトＩｇＧに対する反応性を欠くＧ６．３１  ＡＡＲＲのバリアントバージョンである。
【０１７３】
さらなる態様では、上記の実施形態のいずれかに従う抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ抗体）は、以下の第１節〜第８節に記載の特徴のうちのいずれかを、単独または組み合わせで組み込み得る。
【０１７４】
１．抗体親和性
ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．０１ｎＭ以下、または０．００１ｎＭ以下（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。例えば、いくつかの例では、本明細書で提供される抗体は、約１０ｎＭ以下のＫｄで抗原（例えば、ヒトＶＥＧＦ（ｈＶＥＧＦ））に結合する。いくつかの例では、本明細書で提供される抗体は、約５ｎＭ以下のＫｄで抗原（例えば、ｈＶＥＧＦ）に結合する。いくつかの例では、本明細書で提供される抗体は、約２ｎＭ以下のＫｄでｈＶＥＧＦに結合する。例えば、いくつかの例では、抗体は、約２５ｐＭ〜約２ｎＭ（例えば、約２５ｐＭ、約５０ｐＭ、約７５ｐＭ、約１００ｐＭ、約１２５ｐＭ、約１５０ｐＭ、約１７５ｐＭ、約２００ｐＭ、約２２５ｐＭ、約２５０ｐＭ、約２７５ｐＭ、約３００ｐＭ、約３２５ｐＭ、約３５０ｐＭ、約３７５ｐＭ、約４００ｐＭ、約４２５ｐＭ、約４５０ｐＭ、約４７５ｐＭ、約５００ｐＭ、約５２５ｐＭ、約５５０ｐＭ、約５７５ｐＭ、約６００ｐＭ、約６２５ｐＭ、約６５０ｐＭ、約６７５ｐＭ、約７００ｐＭ、約７２５ｐＭ、約７５０ｐＭ、約７７５ｐＭ、約８００ｐＭ、約８２５ｐＭ、約８５０ｐＭ、約８７５ｐＭ、約９００ｐＭ、約９２５ｐＭ、約９５０ｐＭ、約９７５ｐＭ、約１ｎＭ、約１．１ｎＭ、約１．２ｎＭ、約１．３ｎＭ、約１．４ｎＭ、約１．５ｎＭ、約１．６ｎＭ、約１．７ｎＭ、約１．８ｎＭ、約１．９ｎＭ、または約２ｎＭ）のＫｄで抗原（例えば、ｈＶＥＧＦ）に結合する。いくつかの例では、抗体は、約７５ｐＭ〜約６００ｐＭ（例えば、約７５ｐＭ、約１００ｐＭ、約１２５ｐＭ、約１５０ｐＭ、約１７５ｐＭ、約２００ｐＭ、約２２５ｐＭ、約２５０ｐＭ、約２７５ｐＭ、約３００ｐＭ、約３２５ｐＭ、約３５０ｐＭ、約３７５ｐＭ、約４００ｐＭ、約４２５ｐＭ、約４５０ｐＭ、約４７５ｐＭ、約５００ｐＭ、約５２５ｐＭ、約５５０ｐＭ、約５７５ｐＭ、約６００ｐＭ）のＫｄで抗原（例えば、ｈＶＥＧＦ）に結合する。いくつかの例では、抗体は、約７５ｐＭ〜約５００ｐＭのＫｄで抗原（例えば、ｈＶＥＧＦ）に結合する。いくつかの例では、抗体は、約７５ｐＭ〜約４００ｐＭのＫｄで抗原（例えば、ｈＶＥＧＦ）に結合する。いくつかの例では、抗体は、約７５ｐＭ〜約３００ｐＭのＫｄで抗原（例えば、ｈＶＥＧＦ）に結合する。いくつかの例では、抗体は、約７５ｐＭ〜約２００ｐＭのＫｄで抗原（例えば、ｈＶＥＧＦ）に結合する。いくつかの例では、抗体は、約７５ｐＭ〜約１５０ｐＭのＫｄで抗原（例えば、ｈＶＥＧＦ）に結合する。いくつかの例では、抗体は、約７５ｐＭ〜約１２５ｐＭのＫｄで抗原（例えば、ｈＶＥＧＦ）に結合する。いくつかの例では、抗体は、約７５ｐＭ〜約１００ｐＭのＫｄで抗原（例えば、ｈＶＥＧＦ）に結合する。いくつかの例では、抗体は、約８０ｐＭのＫｄで抗原（例えば、ｈＶＥＧＦ）に結合する。いくつかの例では、抗体は、約６０ｐＭのＫｄで抗原（例えば、ｈＶＥＧＦ）に結合する。いくつかの例では、抗体は、約４０ｐＭのＫｄで抗原（例えば、ｈＶＥＧＦ）に���合する。
【０１７５】
一実施形態では、Ｋｄは、放射性標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって測定される。一実施形態では、ＲＩＡは、目的とする抗体及びその抗原のＦａｂバージョンを用いて行われる。例えば、抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性は、Ｆａｂを、非標識抗原の滴定系列の存在下で、最小濃度の（１２５Ｉ）標識抗原で平衡化し、その後、結合した抗原を抗Ｆａｂ抗体コーティングプレートで捕捉することによって測定される。（例えば、Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照のこと）。このアッセイのための条件を確立するために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マルチウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）が５０ｍＭ炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）中５μｇ／ｍＬの捕捉抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ  Ｌａｂｓ）で一晩コーティングされ、その後、室温（およそ２３℃）で２〜５時間にわたってリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中２ｗ／ｖ％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）で遮断される。非吸着プレート（Ｎｕｎｃ番号２６９６２０）中で、１００ｐＭまたは２６ｐＭ［１２５Ｉ］−抗原が目的とするＦａｂの連続希釈液と混合される（例えば、Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５７：４５９３−４５９９（１９９７）における抗ＶＥＧＦ抗体Ｆａｂ−１２の評価と一貫する）。その後、目的とするＦａｂが一晩インキュベートされるが、このインキュベーションは、平衡に到達することを確実にするために、より長い期間（例えば、約６５時間）にわたって継続し得る。その後、室温での（例えば、１時間にわたる）インキュベーションのために、混合物が捕捉プレートに移される。その後、溶液が除去され、プレートがＰＢＳ中０．１％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（登録商標））で８回洗浄される。プレートが乾燥した時点で、１５０μＬ／ウェルのシンチラント（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ−２０（商標）、Ｐａｃｋａｒｄ）が添加され、プレートがＴＯＰＣＯＵＮＴ（商標）ガンマ計数器（Ｐａｃｋａｒｄ）で１０分間にわたって計数される。２０％以下の最大結合をもたらす各Ｆａｂの濃度が、競合的結合アッセイにおける使用のために選択される。
【０１７６】
別の実施形態によれば、Ｋｄは、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）表面プラズモン共鳴アッセイを使用して測定される。例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−２０００またはＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を使用したアッセイは、約１０の応答単位（ＲＵ）で固定化抗原ＣＭ５チップを用いて２５℃で行われる。一実施形態では、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ（ＣＭ５、ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．）は、供給業者の指示に従って、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）で活性化される。抗原が１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ４．８）で５μｇ／ｍＬ（約０．２μＭ）に希釈された後、５μＬ／分の流量で注入して、およそ１０の応答単位（ＲＵ）のカップリングされたタンパク質を達成する。抗原注入後、１Ｍエタノールアミンが注入されて、未反応基を遮断する。動態測定のために、Ｆａｂの２倍連続希釈液（０．７８ｎＭ〜５００ｎＭ）が、２５℃の０．０５％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（商標））界面活性剤を有するＰＢＳ（ＰＢＳＴ）中におよそ２５μＬ／分の流量で注入される。会合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）が、会合センサグラムと解離センサグラムを同時にフィッティングすることによって、単純１対１ラングミュア結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）評価ソフトウェアバージョン３．２）を使用して計算される。平衡解離定数（Ｋｄ）が、ｋｏｆｆ／ｋｏｎ比として計算される。例えば、Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照されたい。上記の表面プラズモン共鳴アッセイによるｏｎ速度が１０６Ｍ−１ｓ−１を超える場合、ｏｎ速度は、ストップフローを装備した分光光度計（Ａｖｉｖ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）または撹拌キュベットを備えた８０００シリーズＳＬＭ−ＡＭＩＮＣＯ（商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）等の分光計で測定される、増加濃度の抗原の存在下で２５℃のＰＢＳ（ｐＨ７．２）中２０ｎＭ抗抗原抗体（Ｆａｂ形態）の蛍光発光強度（励起２９５ｎｍ、発光３４０ｎｍ、帯域通過１６ｎｍ）の増加または減少を測定する蛍光消光技法を使用することによって決定され得る。
【０１７７】
２．抗体安定性
いくつかの例では、本発明の抗体コンジュゲートまたはその組成物に使用される抗体は、例えば、抗ＶＥＧＦ抗体、例えば、Ｇ６．３１と比較して、向上した安定性を有する（例えば、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第７，７５８，８５９号及び国際出願公開第ＷＯ２００５／０１２３５９号を参照のこと）。抗体の安定性は、当該技術分野で既知のいずれかの方法、例えば、示差走査蛍光定量法（ＤＳＦ）、円偏光二色性（ＣＤ）、内在性タンパク質蛍光、示差走査熱量測定、分光法、光散乱（例えば、動的光散乱（ＤＬＳ）及び静的光散乱（ＳＬＳ）、自己相互作用クロマトグラフィー（ＳＩＣ）を使用して決定され得る。抗ＶＥＧＦ抗体は、例えば、抗ＶＥＧＦ抗体、例えば、Ｇ６．３１と比較して、向上した融解温度（Ｔｍ）、凝集温度（Ｔａｇｇ）、または安定性の他の測定基準を有し得る。
【０１７８】
ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、約８０℃以上（例えば、約８１℃、約８２℃、約８３℃、約８４℃、約８５℃、約８６℃、約８７℃、約８８℃、約８９℃、約９０℃、約９１℃、約９２℃、または約９３℃）のＴｍを有する。例えば、いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、約８３．５℃以上（例えば、約８３．５℃、約８４℃、約８５℃、約８６℃、約８７℃、約８８℃、約８９℃、約９０℃、約９１℃、約９２℃、または約９３℃）のＴｍを有する。いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、約８２℃〜約９２℃（例えば、約８２℃、約８３℃、約８４℃、約８５℃、約８６℃、約８７℃、約８８℃、約８９℃、約９０℃、約９１℃、または約９２℃）のＴｍを有する。いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、約８２℃のＴｍを有する。いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ抗体の前述のＴｍ値のうちのいずれも、ＤＳＦを使用して決定される。いくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体のＴｍ値は、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０５３４５４号の実施例１に記載されるように決定される。
【０１７９】
３．抗体断片
ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、抗体断片である。抗体断片には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ−Ｃ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ断片、ならびに以下に記載の他の断片が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の抗体断片の概説については、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）を参照されたい。ｓｃＦｖ断片の概説については、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ（Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ  ｅｄｓ．，（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ），ｐｐ．２６９−３１５（１９９４））を参照されたく、ＷＯ９３／１６１８５、ならびに米国特許第５，５７１，８９４号及び同第５，５８７，４５８号も参照されたい。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、かつ増加したインビボ半減期を有するＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片の議論については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照されたい。
【０１８０】
ダイアボディは、二価または二重特異性であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、ＥＰ４０４，０９７、ＷＯ１９９３／０１１６１、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）、及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照されたい。トリアボディ及びテトラボディもＨｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）に記載されている。
【０１８１】
単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全てまたは一部分または軽鎖可変ドメインの全てまたは一部分を含む抗体断片である。ある特定の実施形態では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ、例えば、米国特許第６，２４８，５１６Ｂ１号を参照のこと）。
【０１８２】
抗体断片は、本明細書に記載されるように、インタクト抗体のタンパク質消化、ならびに組換え宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉまたはファージ）による産生を含むが、これらに限定されない様々な技法によって作製され得る。
【０１８３】
４．キメラ及びヒト化抗体
ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、キメラ抗体である。ある特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、及びＭｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５（１９８４）に記載されている。一例では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、またはサル等の非ヒト霊長類に由来する可変ドメイン）及びヒト定常ドメインを含む。さらなる例では、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のクラスまたはサブクラスから変化した「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合断片を含む。
【０１８４】
ある特定の実施形態では、キメラ抗体は、ヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体は、親非ヒト抗体の特異性及び親和性を保持しながらヒトに対する免疫原性を低減するようにヒト化される。一般に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ、例えば、ＣＤＲ（またはその一部分）が非ヒト抗体に由来し、かつＦＲ（またはその一部分）がヒト抗体配列に由来する１つ以上の可変ドメインを含む。ヒト化抗体は、任意に、ヒト定常領域の少なくとも一部分を含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体におけるいくつかのＦＲ残基は、例えば、抗体特異性または親和性を回復させるか、または改善するために、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）由来の対応する残基で置換される。
【０１８５】
ヒト化抗体及びそれらを作製する方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）に概説されており、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９（１９８８）、Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：１００２９−１００３３（１９８９）、米国特許第５，８２１，３３７号、同第７，５２７，７９１号、同第６，９８２，３２１号、及び同第７，０８７，４０９号、Ｋａｓｈｍｉｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：２５−３４（２００５）（特異性決定領域（ＳＤＲ）グラフティングについて記載する）、Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９−４９８（１９９１）（「リサーフェイシング」について記載する）、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：４３−６０（２００５）（「ＦＲシャフリング」について記載する）、ならびにＯｓｂｏｕｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：６１−６８（２００５）及びＫｌｉｍｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８３：２５２−２６０（２０００）（ＦＲシャフリングへの「誘導選択」アプローチについて記載する）にさらに記載されている。
【０１８６】
ヒト化のために使用され得るヒトフレームワーク領域には、「最良適合」法を使用して選択されるフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）を参照のこと）、軽鎖または重鎖可変領域の特定の下位群のヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）、及びＰｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３）を参照のこと）、ヒト成熟（体細胞突然変異した）フレームワーク領域またはヒト生殖細胞系列フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）を参照のこと）、及びＦＲライブラリのスクリーニングに由来するフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４（１９９７）及びＲｏｓｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１−２２６１８（１９９６）を参照のこと）が含まれるが、これらに限定されない。
【０１８７】
５．ヒト抗体
ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当該技術分野で既知の様々な技法を使用して産生され得る。ヒト抗体は、概して、ｖａｎ  Ｄｉｊｋ  ａｎｄ  ｖａｎ  ｄｅ  Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８−７４（２００１）及びＬｏｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０−４５９（２００８）に記載されている。
【０１８８】
ヒト抗体は、抗原曝露に応答してインタクトヒト抗体またはヒト可変領域を有するインタクト抗体を産生するように修飾されたトランスジェニック動物に免疫原を投与することによって調製され得る。かかる動物は、典型的には、内因性免疫グロブリン遺伝子座を置き換えるか、あるいは染色体外に存在するか、または動物の染色体にランダムに組み込まれるヒト免疫グロブリン遺伝子座の全てまたは一部分を含む。かかるトランスジェニックマウスにおいて、内因性免疫グロブリン遺伝子座は、一般に、不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の概説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７−１１２５（２００５）を参照されたい。例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術について記載する米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，５８４号、ＨＵＭＡＢ（登録商標）技術について記載する米国特許第５，７７０，４２９号、Ｋ−Ｍ  ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術について記載する米国特許第７，０４１，８７０号、ならびにＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）技術について記載する米国特許出願公開第ＵＳ２００７／００６１９００号も参照されたい。かかる動物によって生成されたインタクト抗体由来のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることによってさらに修飾され得る。
【０１８９】
ヒト抗体は、ハイブリドーマに基づく方法によっても作製され得る。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株について記載されている（例えば、ＫｏｚｂｏｒＪ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）、Ｂｒｏｄｅｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８７）、及びＢｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：８６（１９９１）を参照のこと）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術により生成されたヒト抗体についても、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７−３５６２（２００６）に記載されている。さらなる方法には、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞株からのモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生について記載する）及びＮｉ，Ｘｉａｎｄａｉ  Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ，２６（４）：２６５−２６８（２００６）（ヒト−ヒトハイブリドーマについて記載する）に記載の方法が含まれる。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）についても、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２０（３）：９２７−９３７（２００５）、及びＶｏｌｌｍｅｒｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｆｉｎｄｉｎｇｓ  ｉｎ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２７（３）：１８５−９１（２００５）に記載されている。
【０１９０】
ヒト抗体は、ヒト由来のファージディスプレイライブラリから選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによっても生成され得る。その後、かかる可変ドメイン配列は、所望のヒト定常ドメインと組み合わせられ得る。抗体ライブラリからヒト抗体を選択するための技法が、以下に記載される。
【０１９１】
６．ライブラリ由来の抗体
本発明の抗体は、所望の活性（複数可）を有する抗体についてコンビナトリアルライブラリをスクリーニングすることによって単離され得る。例えば、ファージディスプレイライブラリを生成し、所望の結合特性を有する抗体についてかかるライブラリをスクリーニングするための様々な方法が当該技術分野で既知である。かかる方法は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１）に概説されており、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４、Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８（１９９１）、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９２）、Ｍａｒｋｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｄｂｕｒｙ，ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２４８：１６１−１７５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３）、Ｓｉｄｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９−３１０（２００４）、Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３−１０９３（２００４）、Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０１（３４）：１２４６７−１２４７２（２００４）、及びＬｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８４（１−２）：１１９−１３２（２００４）にさらに記載されている。
【０１９２】
ある特定のファージディスプレイ法において、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーがポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって別々にクローニングされ、ファージライブラリ内でランダムに組換えられ、その後、Ｗｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２：４３３−４５５（１９９４）に記載されるように、抗原結合ファージについてスクリーニングされ得る。ファージは、典型的には、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片またはＦａｂ断片のいずれかとして抗体断片をディスプレイする。免疫化源由来のライブラリは、ハイブリドーマの構築を必要とすることなく、高親和性抗体を免疫原に提供する。あるいは、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ，１２：７２５−７３４（１９９３）によって説明されるように、ナイーブレパートリーがクローニングされて（例えば、ヒト由来）、いかなる免疫化も伴うことなく、単一の抗体源を、様々な非自己抗原に提供し、かつ自己抗原にも提供することができる。最後に、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１−３８８（１９９２）によって説明されるように、ナイーブライブラリは、幹細胞由来の再編成されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングし、かつランダム配列を含むＰＣＲプライマーを使用して、高度可変ＣＤＲ３領域をコードし、インビトロでの再編成を達成することによっても合成的に作製され得る。ヒト抗体ファージライブラリについて記載する特許公報には、例えば、米国特許第５，７５０，３７３号、ならびに米国特許公開第２００５／００７９５７４号、同第２００５／０１１９４５５号、同第２００５／０２６６０００号、同第２００７／０１１７１２６号、同第２００７／０１６０５９８号、同第２００７／０２３７７６４号、同第２００７／０２９２９３６号、及び同第２００９／０００２３６０号が含まれる。
【０１９３】
抗体または抗体断片は、国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０５３４５４号に記載のファージライブラリに由来し得る。
【０１９４】
ヒト抗体ライブラリから単離された抗体または抗体断片は、本明細書においてヒト抗体またはヒト抗体断片と見なされる。
【０１９５】
７．多重特異性抗体
ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、多重特異性抗体、例えば、二重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる部位に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。ある特定の実施形態では、結合特異性の一方は、ＶＥＧＦに対し、他方は、任意の他の抗原（例えば、第２の生物学的分子、例えば、インターロイキン−１ベータ（ＩＬ−１β）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、インターロイキン−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）、インターロイキン−１３（ＩＬ−１３）、ＩＬ−１３受容体（ＩＬ−１３Ｒ）、ＰＤＧＦ（例えば、ＰＤＧＦ−ＢＢ）、アンジオポエチン、アンジオポエチン２（Ａｎｇ２）、Ｔｉｅ２、Ｓ１Ｐ、インテグリンαｖβ３、αｖβ５、及びα５β１、ベータセルリン、アペリン／ＡＰＪ、エリスロポエチン、補体Ｄ因子、ＴＮＦα、ＨｔｒＡ１、ＶＥＧＦ受容体（例えば、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＶＥＧＦＲ３、膜結合型ＶＥＧＦ受容体（ｍｂＶＥＧＦＲ）、または可溶性ＶＥＧＦ受容体（ｓＶＥＧＦＲ））、ＳＴ−２受容体、ならびに加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）リスクと遺伝的に関連するタンパク質、例えば、補体経路成分Ｃ２、Ｂ因子、Ｈ因子、ＣＦＨＲ３、Ｃ３ｂ、Ｃ５、Ｃ５ａ、及びＣ３ａ、ＨｔｒＡ１、ＡＲＭＳ２、ＴＩＭＰ３、ＨＬＡ、インターロイキン−８（ＩＬ−８）、ＣＸ３ＣＲ１、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＣＥＴＰ、ＬＩＰＣ、ＣＯＬ１０Ａ１、及びＴＮＦＲＳＦ１０Ａに対する。したがって、二重特異性抗体は、ＶＥＧＦ及びＩＬ−１β、ＶＥＧＦ及びＩＬ−６、ＶＥＧＦ及びＩＬ−６Ｒ、ＶＥＧＦ及びＩＬ−１３、ＶＥＧＦ及びＩＬ−１３Ｒ、ＶＥＧＦ及びＰＤＧＦ（例えば、ＰＤＧＦ−ＢＢ）、ＶＥＧＦ及びアンジオポエチン、ＶＥＧＦ及びＡｎｇ２、ＶＥＧＦ及びＴｉｅ２、ＶＥＧＦ及びＳ１Ｐ、ＶＥＧＦ及びインテグリンαｖβ３、ＶＥＧＦ及びインテグリンαｖβ５、ＶＥＧＦ及びインテグリンα５β１、ＶＥＧＦ及びベータセルリン、ＶＥＧＦ及びアペリン／ＡＰＪ、ＶＥＧＦ及びエリスロポエチン、ＶＥＧＦ及び補体Ｄ因子、ＶＥＧＦ及びＴＮＦα、ＶＥＧＦ及びＨｔｒＡ１、ＶＥＧＦ及びＶＥＧＦ受容体（例えば、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＶＥＧＦＲ３、ｍｂＶＥＧＦＲ、またはｓＶＥＧＦＲ）、ＶＥＧＦ及びＳＴ−２受容体、ＶＥＧＦ及びＣ２、ＶＥＧＦ及びＢ因子、ＶＥＧＦ及びＨ因子、ＶＥＧＦ及びＣＦＨＲ３、ＶＥＧＦ及びＣ３ｂ、ＶＥＧＦ及びＣ５、ＶＥＧＦ及びＣ５ａ、ＶＥＧＦ及びＣ３ａ、ＶＥＧＦ及びＡＲＭＳ２、ＶＥＧＦ及びＴＩＭＰ３、ＶＥＧＦ及びＨＬＡ、ＶＥＧＦ及びＩＬ−８、ＶＥＧＦ及びＣＸ３ＣＲ１、ＶＥＧＦ及びＴＬＲ３、ＶＥＧＦ及びＴＬＲ４、ＶＥＧＦ及びＣＥＴＰ、ＶＥＧＦ及びＬＩＰＣ、ＶＥＧＦ及びＣＯＬ１０Ａ１、またはＶＥＧＦ及びＴＮＦＲＳＦ１０Ａに対する結合特異性を有し得る。ある特定の実施形態では、二重特異性抗体は、ＶＥＧＦの２つの異なるエピトープに結合し得る。二重特異性抗体は、ＶＥＧＦを発現する細胞に細胞傷害性剤を局在化させるために使用され得る。二重特異性抗体は、全長抗体または抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、またはＦａｂ−Ｃ断片）として調製され得る。
【０１９６】
いくつかの例では、二重特異性抗体は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許出願第ＵＳ２０１４／００１７２４４号に開示される二重特異性抗ＶＥＧＦ／抗アンジオポエチン２（Ａｎｇ２）抗体である。例えば、抗ＶＥＧＦ／抗Ａｎｇ２二重特異性抗体は、ＶＥＧＦ（例えば、本明細書に記載の抗ＶＥＧＦ抗体のいずれか）に結合する第１の結合ドメインと、Ａｎｇ２に結合し、かつ（ａ）ＧＹＹＭＨ（配列番号６２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＷＩＮＰＮＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号６３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＳＰＮＰＹＹＹＤＳＳＧＹＹＹＰＧＡＦＤＩ（配列番号６４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＧＧＮＮＩＧＳＫＳＶＨ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＤＤＳＤＲＰＳ（配列番号６６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＶＷＤＳＳＳＤＨＷＶ（配列番号６７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、または上記のＨＶＲのうちの１つ以上の組み合わせ及び配列番号６２〜６７のうちのいずれか１つと少なくとも約８０％の配列同一性（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性）を有する１つ以上のそれらのバリアントを含む第２の結合ドメインとを含み得る。
【０１９７】
いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ／抗Ａｎｇ２二重特異性抗体は、ＶＥＧＦ（例えば、本明細書に記載の抗ＶＥＧＦ抗体のいずれか）に結合する第１の結合ドメインと、Ａｎｇ２に結合し、かつ（ａ）配列番号６８と、またはその配列と少なくとも８０％の配列同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、（ｂ）配列番号６９と、またはその配列と少なくとも８０％の配列同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む第２の結合ドメインとを含み得る。いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ／抗Ａｎｇ２二重特異性抗体は、ＶＥＧＦ（例えば、本明細書に記載の抗ＶＥＧＦ抗体のいずれか）に結合する第１の結合ドメイン及びＡｎｇ２に特異的に結合する第２の結合ドメインを含み得、第２の結合ドメインは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる国際特許出願公開第ＷＯ２０１０／０６９５３２号に記載のいずれかの抗体結合ドメイン、またはそれらのバリアントである。
【０１９８】
他の例では、抗ＶＥＧＦ／抗Ａｎｇ２二重特異性抗体は、国際特許出願公開第ＷＯ２０１６／０７３１５７号に記載のいずれかの抗ＶＥＧＦ／抗Ａｎｇ２二重特異性抗体である。
【０１９９】
いくつかの例では、二重特異性抗体は、二重特異性抗ＶＥＧＦ／抗ＩＬ−６抗体である。いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ／抗ＩＬ−６二重特異性抗体は、ＶＥＧＦ（例えば、本明細書に記載の抗ＶＥＧＦ抗体のいずれか）に結合する第１の結合ドメイン及びＩＬ−６に結合する第２の結合ドメインを含み得る。第２の結合ドメインは、当該技術分野で既知のいずれかの抗ＩＬ−６抗体の結合ドメイン、例えば、ＥＢＩ−０３１（Ｅｌｅｖｅｎ  Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、例えば、参照により全体が本明細書に組み込まれるＷＯ２０１６／０７３８９０を参照のこと）、シルツキシマブ（ＳＹＬＶＡＮＴ（登録商標））、オロキズマブ、クラザキズマブ、シルクマブ、エルシリモマブ、ゲリリムズマブ、ＯＰＲ−００３、ＭＥＤＩ−５１１７、ＰＦ−０４２３６９２１、またはそれらのバリアントであり得る。
【０２００】
いくつかの例では、二重特異性抗体は、二重特異性抗ＶＥＧＦ／抗ＩＬ−６Ｒ抗体である。いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ／抗ＩＬ−６Ｒ二重特異性抗体は、ＶＥＧＦ（例えば、本明細書に記載の抗ＶＥＧＦ抗体のいずれか）に結合する第１の結合ドメイン及びＩＬ−６Ｒに結合する第２の結合ドメインを含み得る。第２の結合ドメインは、当該技術分野で既知のいずれかの抗ＩＬ−６Ｒ抗体の結合ドメイン、例えば、トシリズマブ（ＡＣＴＥＭＲＡ（登録商標））（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＷＯ１９９２／０１９５７９を参照のこと）、サリルマブ、ボバリリズマブ（ＡＬＸ−００６１）、ＳＡ−２３７、またはそれらのバリアントであり得る。
【０２０１】
多重特異性抗体を作製するための技法には、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の組換え共発現（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ  ３０５：５３７（１９８３））、ＷＯ９３／０８８２９、及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯＪ．１０：３６５５（１９９１）を参照のこと）、及び「ノブ・イン・ホール」操作（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号を参照のこと）が含まれるが、これらに限定されない。多重特異性抗体は、静電ステアリング効果を操作して抗体Ｆｃ−ヘテロ二量体分子を作製すること（ＷＯ２００９／０８９００４Ａ１）、２つ以上の抗体または断片を架橋すること（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号、及びＢｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）を参照のこと）、ロイシンジッパーを使用して二重特異性抗体を産生すること（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）を参照のこと）、二重特異性抗体断片を作製するための「ダイアボディ」技術を使用すること（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照のこと）、及び一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体を使用すること（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）を参照のこと）、及び三重特異性抗体を調製する（例えば、Ｔｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）に記載されるように）ことによっても作製され得る。
【０２０２】
「オクトパス抗体」を含む３つ以上の機能的抗原結合部位を有する操作された抗体も、本明細書に含まれる（例えばＵＳ２００６／００２５５７６Ａ１を参照のこと）。
【０２０３】
本明細書における抗体または断片は、ＶＥＧＦ、ならびに別の異なる抗原に結合する抗原結合部位を含む「二重作用ＦＡｂ」または「ＤＡＦ」も含む（例えば、ＵＳ２００８／００６９８２０を参照のこと）。
【０２０４】
８．抗体バリアント
ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体のアミノ酸配列バリアント（例えば、１つ以上のアミノ酸残基改変を含む抗体バリアント）が企図される。例えば、抗体の結合親和性及び／または他の生物学的特性を改善することが望ましくあり得る。抗体のアミノ酸配列バリアントは、抗体をコードするヌクレオチド配列に適切な修飾を導入することによって、またはペプチド合成によって調製され得る。かかる修飾には、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失、及び／またはそれへの挿入、及び／またはその置換が含まれる。欠失、挿入、及び置換の任意の組み合わせを行って、最終構築物に到達することができるが、但し、最終構築物が所望の特性、例えば、抗原結合を有することを条件とする。
【０２０５】
ａ）置換、挿入、及び欠失バリアント
ある特定の実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換を有する抗体バリアントが提供される。置換突然変異誘発の目的とする部位には、ＨＶＲ及びＦＲが含まれる。保存的置換は、表１の「好ましい置換」という見出しの下に示される。より実質的な変化は、表１の「例示的な置換」という見出しの下に提供され、アミノ酸側鎖クラスを参照して以下にさらに記載される。アミノ酸置換は、目的とする抗体に導入され得、産物は、所望の活性、例えば、保持／改善された抗原結合、低減された免疫原性、または改善されたＡＤＣＣもしくはＣＤＣについてスクリーニングされ得る。
表１
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【０２０６】
アミノ酸は、一般的な側鎖特性に従って分類され得る。
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ
（５）鎖配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ
【０２０７】
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーの別のクラスとの交換を伴う。
【０２０８】
一種の置換バリアントは、親抗体（例えば、ヒト化またはヒト抗体）の１つ以上の超可変領域残基及び／またはＦＲ残基の置換を伴う。一般に、さらなる研究のために選択される結果として得られたバリアント（複数可）は、親抗体と比較してある特定の生物学的特性の修正（例えば、改善）（例えば、増加した親和性、増加した安定性、増加した発現量、変化したｐＩ、及び／または低減された免疫原性）を有し、及び／または親抗体の実質的に保持されたある特定の生物学的特性を有する。例示的な置換バリアントは、例えば、本明細書に記載の技法等のファージディスプレイに基づく親和性成熟技法を使用して簡便に生成され得る親和性成熟抗体である。簡潔には、１つ以上のＨＶＲ残基が突然変異し、バリアント抗体がファージ上にディスプレイされ、特定の生物学的活性（例えば結合親和性）についてスクリーニングされる。
【０２０９】
改変（例えば、置換）は、例えば、抗体親和性を改善するために、ＨＶＲで行われ得る。かかる改変は、ＨＶＲ「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟過程中に高頻度で突然変異を経るコドンによってコードされた残基（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７：１７９−１９６（２００８）を参照のこと）、及び／または抗原と接触する残基で行われ得、結果として得られたバリアントＶＨまたはＶＬが、結合親和性について試験される。二次ライブラリの構築及びそれからの再選択による親和性成熟は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，（２００１））に記載されている。親和性成熟のいくつかの実施形態では、様々な方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャフリング、またはオリゴヌクレオチド指向性突然変異誘発）のうちのいずれかによって、多様性が、成熟のために選択された可変遺伝子に導入される。その後、二次ライブラリが作成される。その後、ライブラリがスクリーニングされて、所望の親和性を有するいずれの抗体バリアントも特定する。多様性を導入する別の方法は、いくつかのＨＶＲ残基（例えば、一度に４〜６個の残基）がランダム化されるＨＶＲ指向性アプローチを伴う。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング突然変異誘発またはモデリングを使用して、具体的に特定され得る。特にＣＤＲ−Ｈ３及びＣＤＲ−Ｌ３が、多くの場合、標的とされる。
【０２１０】
ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、かかる改変が抗原に結合する抗体の能力を実質的に低下させない限り、１つ以上のＨＶＲ内に生じ得る。例えば、結合親和性を実質的に低減しない保存的改変（例えば、本明細書で提供される保存的置換）がＨＶＲで行われ得る。かかる改変は、例えば、ＨＶＲ内の抗原接触残基の外側であり得る。上で提供されるバリアントＶＨ及びＶＬ配列のある特定の実施形態では、各ＨＶＲは、改変されていないか、または１つ、２つ、もしくは３つ以下のアミノ酸置換を含むかのいずれかである。
【０２１１】
ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、かかる改変が抗原に結合する抗体の能力を実質的に低下させない限り、１つ以上のＦＲ内で生じ得る。かかる改変は、例えば、抗体親和性及び／または安定性（例えば、上昇した融解温度によって評価される）を改善し得る。
【０２１２】
突然変異誘発の標的とされ得る抗体の残基または領域の特定に有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１−１０８５によって説明される「アラニンスキャニング突然変異誘発」と呼ばれる。この方法では、標的残基の残基または基（例えば、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、及びＧｌｕ等の荷電残基）が特定され、中性または負に荷電したアミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）によって置換されて、抗体と抗原との相互作用に影響が及ぼされたかを決定する。さらなる置換は、最初の置換に対する機能的感受性を示すアミノ酸位置に導入され得る。あるいは、または加えて、抗原−抗体複合体の結晶構造は、抗体と抗原との間の接触点を特定する。かかる接触残基及び隣接する残基は、置換の候補として標的とされ得るか、または排除され得る。バリアントがスクリーニングされて、それらが所望の特性を有するかを決定することができる。
【０２１３】
アミノ酸配列挿入には、長さが１残基から１００残基以上を含むポリペプチドの範囲であるアミノ末端及び／またはカルボキシル末端融合、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入バリアントには、抗体のＮ末端またはＣ末端の、抗体の血清半減期を増加させる酵素（例えば、ＡＤＥＰＴのための）またはポリペプチドへの融合が含まれる。
【０２１４】
ｂ）グリコシル化バリアント
ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増加または減少させるように改変される。グリコシル化部位の抗体への付加または欠失は、１つ以上のグリコシル化部位が作製または除去されるようにアミノ酸配列を改変することによって簡便に達成され得る。
【０２１５】
抗体がＦｃ領域を含む場合、それに結合した炭水化物が改変され得る。哺乳類細胞によって産生された天然抗体は、典型的には、一般にＮ結合によってＦｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７に結合される分岐状の二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ  ｅｔ  ａｌ．，ＴＩＢＴＥＣＨ  １５：２６−３２（１９９７）を参照されたい。オリゴ糖には、様々な炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、及びシアル酸、ならびに二分岐オリゴ糖構造の「幹」におけるＧｌｃＮＡｃに結合したフコースが含まれ得る。いくつかの実施形態では、本発明の抗体におけるオリゴ糖の修飾が、ある特定の改善された特性を有する抗体バリアントを作製するために行われ得る。
【０２１６】
一実施形態では、Ｆｃ領域に（直接的または間接的に）結合したフコースを欠く炭水化物構造を有する抗体バリアントが提供される。例えば、かかる抗体中のフコースの量は、１％〜８０％、１％〜６５％、５％〜６５％または２０％〜４０％であり得る。フコースの量は、例えば、ＷＯ２００８／０７７５４６に記載されるように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析によって測定される、Ａｓｎ２９７に結合した全ての糖構造（例えば、複合体、ハイブリッド、及び高マンノース構造）の合計に対する、Ａｓｎ２９７における糖鎖内のフコースの平均量を計算することによって決定される。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域内の約２９７位（Ｆｃ領域残基のＥｕ番号付け）に位置するアスパラギン残基を指すが、しかしながら、Ａｓｎ２９７は、抗体内のわずかな配列変異のため、２９７位から約±３アミノ酸上流または下流、すなわち、２９４位と３００位との間に位置する場合もある。かかるフコシル化バリアントは、改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。例えば、米国特許公開第ＵＳ２００３／０１５７１０８、同第ＵＳ２００４／００９３６２１号を参照されたい。「脱フコシル化」または「フコース欠損」抗体バリアントに関する刊行物の例としては、ＵＳ２００３／０１５７１０８、ＷＯ２０００／６１７３９、ＷＯ２００１／２９２４６、ＵＳ２００３／０１１５６１４、ＵＳ２００２／０１６４３２８、ＵＳ２００４／００９３６２１、ＵＳ２００４／０１３２１４０、ＵＳ２００４／０１１０７０４、ＵＳ２００４／０１１０２８２、ＵＳ２００４／０１０９８６５、ＷＯ２００３／０８５１１９、ＷＯ２００３／０８４５７０、ＷＯ２００５／０３５５８６、ＷＯ２００５／０３５７７８、ＷＯ２００５／０５３７４２、ＷＯ２００２／０３１１４０、Ｏｋａｚａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９−１２４９（２００４）、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）が挙げられる。脱フコシル化抗体を産生することができる細胞株の例としては、タンパク質フコシル化を欠損しているＬｅｃ１３  ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３−５４５（１９８６）、米国特許出願第ＵＳ２００３／０１５７１０８Ａ１号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ）、及びＷＯ２００４／０５６３１２Ａ１（Ａｄａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．、特に実施例１１））、及びノックアウト細胞株、例えば、アルファ−１，６−フコシル化トランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）、Ｋａｎｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，９４（４）：６８０−６８８（２００６）、及びＷＯ２００３／０８５１０７を参照のこと）が挙げられる。
【０２１７】
例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分される、二分されたオリゴ糖を有する抗体バリアントがさらに提供される。かかる抗体バリアントは、低減されたフコシル化及び／または改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。かかる抗体バリアントの例は、例えば、ＷＯ２００３／０１１８７８、米国特許第６，６０２，６８４号、及びＵＳ２００５／０１２３５４６（Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．）に記載されている。オリゴ糖内の少なくとも１つのガラクトース残基がＦｃ領域に結合した抗体バリアントも提供される。かかる抗体バリアントは、改善されたＣＤＣ機能を有し得る。かかる抗体バリアントは、例えば、ＷＯ１９９７／３００８７、ＷＯ１９９８／５８９６４、及びＷＯ１９９９／２２７６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）に記載されている。
【０２１８】
ｃ）Ｆｃ領域バリアント
ある特定の実施形態では、１つ以上のアミノ酸修飾は、本明細書で提供される抗体のＦｃ領域に導入され、それにより、Ｆｃ領域バリアントを生成することができる。Ｆｃ領域バリアントは、１つ以上のアミノ酸位置にアミノ酸残基改変（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４  Ｆｃ領域）を含み得る。ある特定の実施形態では、本発明は、全てではないが、いくつかのエフェクター機能を有し、それにより、抗体のインビボでの半減期が重要であるが、ある特定のエフェクター機能（補体及びＡＤＣＣ等）が不要または有害である用途の望ましい候補になる、抗体バリアントを企図する。インビトロ及び／またはインビボ細胞傷害性アッセイを行って、ＣＤＣ及び／またはＡＤＣＣ活性の低減／欠乏を確認することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを行って、抗体がＦｃγＲ結合を欠く（故に、ＡＤＣＣ活性を欠く可能性が高い）が、ＦｃＲｎ結合能力を保持することを確実にすることができる。ＡＤＣＣを媒介するための初代細胞であるＮＫ細胞がＦｃγＲＩＩＩのみを発現する一方で、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞におけるＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−４９２（１９９１）の４６４貢の表３に要約されている。
【０２１９】
目的とする分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号に記載されている（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８３：７０５９−７０６３（１９８６）及びＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：１４９９−１５０２（１９８５）、米国特許第５，８２１，３３７号、ならびにＢｒｕｇｇｅｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ.Ｍｅｄ．１６６：１３５１−１３６１（１９８７）を参照のこと）。あるいは、非放射性アッセイ法が用いられ得る（例えば、フローサイトメトリーのためのＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，ＣＡ、及びＣＹＴＯＴＯＸ  ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を参照のこと）。かかるアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。あるいは、または加えて、目的とする分子のＡＤＣＣ活性は、インビボで、例えば、動物モデル、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９５：６５２−６５６（１９９８）に開示される動物モデルにおいて評価され得る。Ｃ１ｑ結合アッセイを実行して、抗体がＣ１ｑに結合することができず、故にＣＤＣ活性を欠くことを確認することもできる。例えば、ＷＯ２００６／０２９８７９及びＷＯ２００５／１００４０２におけるＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイが行われ得る（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ.Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０２：１６３（１９９６）、Ｃｒａｇｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １０１：１０４５−１０５２（２００３）、及びＣｒａｇｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １０３：２７３８−２７４３（２００４）を参照のこと）。ＦｃＲｎ結合及びインビボクリアランス／半減期決定も、当該技術分野で既知の方法を使用して行われ得る（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９−１７６９（２００６）を参照のこと）。
【０２２０】
低下したエフェクター機能を有する抗体には、Ｆｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７及び３２９のうちの１つ以上の置換を有するものが含まれる（米国特許第６，７３７，０５６号）。かかるＦｃ突然変異体には、残基２６５及び２９７のアラニンへの置換を有するいわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ突然変異体を含む、アミノ酸２６５位、２６９位、２７０位、２９７位、及び３２７位のうちの２つ以上での置換を有するＦｃ突然変異体を含む（米国特許第７，３３２，５８１号）。
【０２２１】
ＦｃＲへの結合が改善または低減されたある特定の抗体バリアントが記載されている（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号、ＷＯ２００４／０５６３１２、及びＳｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１−６６０４（２００１）を参照のこと）。
【０２２２】
ある特定の実施形態では、抗体バリアントは、ＡＤＣＣを改善する１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２９８位、３３３位、及び／または３３４位（残基のＥＵ番号付け）での置換を有するＦｃ領域を含む。
【０２２３】
いくつかの実施形態では、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、ＷＯ９９／５１６４２、及びＩｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８−４１８４（２０００）に記載されるように、Ｃ１ｑ結合及び／または補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）の改変（すなわち、改善または低減のいずれか）をもたらす改変が、Ｆｃ領域で行われる。
【０２２４】
増加した半減期、及び母体ＩｇＧの胎児への移行に関与する新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への改善された結合を有する抗体（Ｇｕｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）及びＫｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））が、ＵＳ２００５／００１４９３４Ａ１（Ｈｉｎｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．）に記載されている。それらの抗体は、Ｆｃ領域のＦｃＲｎへの結合を改善する１つ以上の置換を内部に有するＦｃ領域を含む。かかるＦｃバリアントには、Ｆｃ領域残基２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４、または４３４のうちの１つ以上での置換、例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換を有するものが含まれる（米国特許第７，３７１，８２６号）。Ｆｃ領域バリアントの他の例に関して、Ｄｕｎｃａｎ  ＆  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  ３２２：７３８−４０（１９８８）、米国特許第５，６４８，２６０号、米国特許第５，６２４，８２１号、及びＷＯ９４／２９３５１も参照されたい。
【０２２５】
ｄ）システイン操作抗体バリアント
本発明は、野生型または親抗体（例えば、本明細書に記載のいずれの抗ＶＥＧＦ抗体も含む抗ＶＥＧＦ抗体）の１つ以上のアミノ酸がシステインアミノ酸（すなわち、「操作システイン」）で置き換えられる（すなわち、「置換される」または「突然変異する」）システイン操作抗体を提供する。抗体のいずれの形態もそのように操作され得る、すなわち、突然変異し得る。例えば、親モノクローナル抗体が操作されて、「ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体」を形成し得る。ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体の一例は、操作システインを有する抗体断片（すなわち、Ｆａｂ）である。このＦａｂ  ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体は、「ＴｈｉｏＦａｂ」とも称され得る。単一部位突然変異によりＴｈｉｏＦａｂに単一の操作システイン残基が生じる一方で、ＩｇＧ抗体の二量体性質のため、単一部位突然変異により、ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体に２つの操作システイン残基が生じることに留意されたい。
【０２２６】
操作システイン（Ｃｙｓ）残基を有する突然変異体は、新たに導入された操作システインチオール基の反応性について評価され得る。チオール反応性値は、０〜１．０の範囲の相対的数値であり、任意のシステイン操作抗体について測定され得る。本発明のシステイン操作抗体のチオール反応性値は、０．０〜１．０の範囲である。具体的には、本発明のシステイン操作抗体のチオール反応性値は、０．１〜１．０の範囲である。ある特定の実施形態では、本発明のシステイン操作抗体のチオール反応性値は、０．０〜０．１、０．１〜０．５、０．１〜０．６、０．１〜０．７、０．１〜０．８、０．１〜０．９、または０．１〜１．０の範囲である。ある特定の実施形態では、本発明のシステイン操作抗体のチオール反応性値は、０．２〜１．０、０．３〜１．０、０．４〜１．０、０．５〜１．０、０．６〜１．０、０．７〜１．０、または０．８〜１．０の範囲である。ある特定の実施形態では、本発明のシステイン操作抗体のチオール反応性値は、０．６〜１．０の範囲である。ある特定の実施形態では、本発明のシステイン操作抗体のチオール反応性値は、０．７〜１．０の範囲である。ある特定の実施形態では、本発明のシステイン操作抗体のチオール反応性値は、０．８〜１０の範囲である。ある特定の実施形態では、本発明のシステイン操作抗体のチオール反応性値は、０．５〜０．８の範囲である。ある特定の実施形態では、本発明のシステイン操作抗体のチオール反応性値は、０．５〜０．９の範囲である。ある特定の実施形態では、本発明のシステイン操作抗体のチオール反応性値は、０．５〜０．７の範囲である。ある特定の実施形態では、本発明のシステイン操作抗体のチオール反応性値は、０．５〜１．０の範囲である。
【０２２７】
本発明は、求電子性官能基と反応するシステイン操作抗体を産生するための設計、選択、及び調製方法を提供する。これらの方法は、例えば、ポリマー部分が指定され設計された選択的な部位でコンジュゲートされる抗体−ポリマーコンジュゲート等の抗体コンジュゲート化合物をさらに可能にする。抗体表面の反応性システイン残基により、マレイミドまたはハロアセチル等のチオール反応性基を介してポリマーに特異的にコンジュゲートすることが可能になる。マレイミド基に対するＣｙｓ残基のチオール官能基の求核反応性は、リジン残基のアミノ基またはＮ末端アミノ基等のタンパク質中の任意の他のアミノ酸官能基と比較して、約１０００倍高い。ヨードアセチル及びマレイミド試薬中のチオール特異的官能基は、アミン基と反応し得るが、より高いｐＨ（９．０超）及びより長い反応時間が必要とされる（Ｇａｒｍａｎ，１９９７，Ｎｏｎ−Ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ  Ｌａｂｅｌｌｉｎｇ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ）。
【０２２８】
本発明のシステイン操作抗体は、好ましくは、それらの野生型親抗体対応物の抗原結合能力を保持する。したがって、システイン操作抗体は、抗原に、好ましくは特異的に、結合することができる。例示的かつ非限定的な抗原には、ＶＥＧＦ、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−１３、ＩＬ−１３Ｒ、ＰＤＧＦ（例えば、ＰＤＧＦ−ＢＢ）、アンジオポエチン、アンジオポエチン２（Ａｎｇ２）、Ｔｉｅ２、Ｓ１Ｐ、インテグリンαｖβ３、αｖβ５、及びα５β１、ベータセルリン、アペリン／ＡＰＪ、エリスロポエチン、補体Ｄ因子、ＴＮＦα、ＨｔｒＡ１、ＶＥＧＦ受容体（例えば、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＶＥＧＦＲ３、ｍｂＶＥＧＦＲ、またはｓＶＥＧＦＲ）、ＳＴ−２受容体、ならびにＡＭＤリスクと遺伝的に関連するタンパク質（例えば、補体経路成分Ｃ２、Ｂ因子、Ｈ因子、ＣＦＨＲ３、Ｃ３ｂ、Ｃ５、Ｃ５ａ、及びＣ３ａ、ＨｔｒＡ１、ＡＲＭＳ２、ＴＩＭＰ３、ＨＬＡ、ＩＬ−８、ＣＸ３ＣＲ１、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＣＥＴＰ、ＬＩＰＣ、ＣＯＬ１０Ａ１、及びＴＮＦＲＳＦ１０Ａ）が含まれる。
【０２２９】
本明細書に記載の抗体のいずれか（例えば、上述の抗ＶＥＧＦ抗体のいずれか）は、システイン操作抗体を生成するために使用される親抗体であり得る。本明細書に記載の例示的な方法が、本明細書に記載の設計ステップ及びスクリーニングステップの適用により、概して、抗体の特定及び産生に適用され得る。
【０２３０】
本発明のシステイン操作抗体は、チオール反応性試薬と部位特異的かつ効率的にカップリングされ得る。チオール反応性試薬は、例えば、クリアランス改変剤、例えば、ポリマー（例えば、ポリエチレングリコールのＨＡポリマーもしくは様々な異性体）、第３の成分に結合するペプチド、または別の炭水化物もしくは親油性薬剤、多官能性リンカー試薬、捕捉、すなわち、親和性標識試薬（例えば、ビオチン−リンカー試薬）、検出標識（例えば、フルオロフォア試薬）、固相固定化試薬（例えば、ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（商標）、ポリスチレン、またはガラス）、または薬物−リンカー中間体であり得る。チオール反応性試薬の一例は、Ｎ−エチルマレイミド（ＮＥＭ）である。例示的な実施形態では、ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体のビオチン−リンカー試薬との反応により、ビオチン化ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体が提供され、それにより、操作システイン残基の存在及び反応性が検出及び測定され得る。ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体の多官能性リンカー試薬との反応により、ポリマー、薬物部分試薬、または他の標識とさらに反応し得る官能化リンカーを有するＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体が提供される。ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体の薬物−リンカー中間体との反応により、ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体−薬物コンジュゲートが提供される。ある特定の実施形態では、ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体は、ＴｈｉｏＦａｂである。
【０２３１】
システイン操作抗体は、反応基が、例えば、マレイミド、ヨードアセトアミド、ピリジルジスルフィド、または他のチオール反応性コンジュゲーションパートナーである、チオール反応性剤にコンジュゲートされ得る（例えば、Ｈａｕｇｌａｎｄ，２００３，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｐｒｏｂｅｓ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｂｒｉｎｋｌｅｙ，１９９２，ＢｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅＣｈｅｍ．３：２、Ｇａｒｍａｎ，１９９７，Ｎｏｎ−Ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ  Ｌａｂｅｌｌｉｎｇ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ、Ｍｅａｎｓ（１９９０）ＢｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅＣｈｅｍ．１：２、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．ｉｎ  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（１９９６）Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ｐｐ．４０−５５，６４３−６７１を参照のこと）。パートナーは、細胞傷害性剤（例えば、ドキソルビシンまたは百日咳毒素等の毒素）、フルオレセインもしくはローダミンのような蛍光色素等のフルオロフォア、イメージング用キレート剤もしくは放射線治療用金属、ペプチジルまたは非ペプチジル標識もしくは検出タグ、またはクリアランス改変剤、例えば、ポリマー（例えば、ポリエチレングリコールのＨＡポリマーもしくは様々な異性体）、第３の成分に結合するペプチド、または別の炭水化物もしくは親油性薬剤であり得る。
【０２３２】
ＰＨＥＳＥＬＥＣＴＯＲ（反応性チオールの選択のためのファージＥＬＩＳＡ）アッセイにより、ＥＬＩＳＡファージ型式での抗体中の反応性システイン基の検出が可能になる。参照により全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第７，５２１，５４１号及び米国特許公開第２０１１／０３０１３３４号を参照されたい。具体的には、ＰＨＥＳＥＳＬＥＣＴＯＲアッセイは、目的とするタンパク質（例えば、抗体）をウェル表面でコーティングし、続いて、ファージ粒子とインキュベートし、その後、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）標識二次抗体とインキュベートして、吸光度を検出するプロセスを含む。ファージ上にディスプレイされた突然変異タンパク質が、迅速かつロバストなハイスループット様式でスクリーニングされ得る。システイン操作抗体のライブラリが生成され、同じアプローチを使用して結合選択に供されて、抗体または他のタンパク質のランダムタンパク質−ファージライブラリから、遊離Ｃｙｓ組み込みの適切に反応性の部位を特定することができる。この技法は、ファージ上にディスプレイされたシステイン突然変異タンパク質を、チオール反応性でもある親和性試薬またはレポーター基と反応させることを含む。
【０２３３】
ある特定の実施形態では、ＰＨＥＳＥＬＥＣＴＯＲアッセイは、以下のステップを含む。（１）ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、標的タンパク質（例えば、ＶＥＧＦ）の一部または全部、及びストレプトアビジン（２μｇ／ｍＬの１００μＬ）がＭＡＸＩＳＯＲＢ（登録商標）９６ウェルプレート上に別々にコーティングされ、（２）０．５％ＴＷＥＥＮ（登録商標）−２０（ＰＢＳ中）で遮断した後、ビオチン化及び非ビオチン化ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体−ファージ（２×１０１０個のファージ粒子）が室温で１時間インキュベートされ、（３）ファージとインキュベートした後に、ＨＲＰ標識二次抗体（抗Ｍ１３ファージコーティングタンパク質、ｐＶＩＩＩタンパク質抗体）とインキュベートし、（４）標準ＨＲＰ反応が実行され、吸光度が４５０ｎｍで測定され、（５）チオール反応性値１がシステインチオールの完全なビオチン化を示すように、チオール反応性が、ストレプトアビジンのＯＤ４５０／標的タンパク質（例えば、ＶＥＧＦ）のＯＤ４５０比を計算することによって測定される。
【０２３４】
システイン操作抗体をコードするＤＮＡは、従来の手技を使用して（例えば、マウス抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）容易に単離及び配列決定される。ハイブリドーマ細胞は、かかるＤＮＡの源として機能する。単離されると、ＤＮＡは、発現ベクター内に配置され得、その後、ＤＮＡは、抗体タンパク質をさもなければ産生しない宿主細胞、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞、または他の哺乳類宿主細胞、例えば、骨髄腫細胞（米国特許第５，８０７，７１５号、ＵＳ２００５／００４８５７２、ＵＳ２００４／０２２９３１０）にトランスフェクトされて、組換え宿主細胞におけるモノクローナル抗体の合成が達成される。多くの場合、システイン操作抗体の収率は、野生型抗体と同様である。
【０２３５】
設計及び選択後、反応性の高い不対Ｃｙｓ残基を有するシステイン操作抗体、例えば、ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体が、（ｉ）細菌系、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ系、または哺乳類細胞培養系（ＷＯ０１／００２４５）、例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）またはＨＥＫ２９３細胞（例えば、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞）での発現、及び（ｉｉ）一般的なタンパク質精製技法を使用した精製（例えば、Ｌｏｗｍａｎ  ｅｔ  ａｌ（１９９１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６６（１７）：１０９８２−１０９８８）によって産生され得る。特定の実施形態では、ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体は、哺乳類細胞発現系で発現する。特定の実施形態では、哺乳類細胞発現系は、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞である。
【０２３６】
重鎖及び軽鎖の操作Ｃｙｓ残基の構造位置は、順次番号付けシステムに従って番号付けされ得る。この順次番号付けシステムは、図１３Ａ及び図１３Ｂの４Ｄ５抗体についてＫａｂａｔ番号付けシステム（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．）と相関している。Ｋａｂａｔ番号付けシステムを使用して、実際の直鎖状アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲもしくはＣＤＲの短縮、またはそれへの挿入に対応するより少ないまたは追加のアミノ酸を含み得る。システイン操作重鎖バリアント部位及び軽鎖バリアント部位は、図１３Ａ及び図１３Ｂの順次番号付け及びＫａｂａｔ番号付けによって特定される。
【０２３７】
チオール反応性は、軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）及び重鎖定常ドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３等の抗体のある特定のドメインに一般化される場合もある。約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、及び０．９５以上のチオール反応性値をもたらすシステイン置換は、それぞれ、インタクト抗体ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ（ＩｇＧサブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、及びＩｇＡ２を含む）の重鎖定常ドメインα、δ、ε、γ、及びμで行われ得る。
【０２３８】
システイン操作抗体は、例えば、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第７，５２１，５４１号または国際特許公開第ＷＯ２００６／０３４４８８号に記載されるように生成され得る。いくつかの実施形態では、システイン操作抗体バリアントは、米国特許第７，５２１，５４１号または国際特許公開第ＷＯ２００６／０３４４８８号に記載のシステイン操作抗体バリアントである。いくつかの例では、システイン操作抗体バリアントは、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、国際特許出願公開第ＷＯ２０１１／１５６３２８号または米国特許第９，０００，１３０号に記載のシステイン操作抗体バリアントである。いくつかの実施形態では、システイン操作抗体バリアントは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、国際特許出願公開第ＷＯ２０１６／０４０８５６号、例えば、同第ＷＯ２０１６／０４０８５６号の表１〜４に記載のシステイン操作抗体バリアントである。
【０２３９】
例えば、ある特定の実施形態では、システイン突然変異は、ＨＣ−Ｉ１９５Ｃ、ＨＣ−Ｓ４２０Ｃ、ＨＣ−Ｙ４３２Ｃ、及びＬＣ−Ｇ６４Ｃ（Ｋａｂａｔ番号付けによる）からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、システイン突然変異は、ＨＣ−Ｙ４３２Ｃ及びＬＣ−Ｇ６４Ｃ（Ｋａｂａｔ番号付けによる）からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、システイン突然変異は、重鎖突然変異であり、Ｙ３３Ｃ、Ｇ１６２Ｃ、Ｖ１８４Ｃ、Ｉ１９５Ｃ、Ｓ４２０Ｃ、Ｙ４３２Ｃ、及びＱ４３４Ｃ（Ｋａｂａｔ番号付けによる）からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、システイン突然変異は、重鎖突然変異であり、Ｒ１９Ｃ、Ｅ４６Ｃ、Ｔ５７Ｃ、Ｙ５９Ｃ、Ａ６０Ｃ、Ｍ１００ｃＣ、Ｗ１０３Ｃ、Ｇ１６２Ｃ、Ｉ１９５Ｃ、Ｖ２５８Ｃ、Ｓ４２０Ｃ、Ｈ４２５Ｃ、及びＮ４３０Ｃ（Ｋａｂａｔ番号付けによる）からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、システイン突然変異は、重鎖突然変異であり、Ｙ３３Ｃ、Ｇ１６２Ｃ、Ｖ１８４Ｃ、及びＩ１９５Ｃ（Ｋａｂａｔ番号付けによる）からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、システイン突然変異は、重鎖突然変異であり、Ｒ１９Ｃ、Ｅ４６Ｃ、Ｙ５９Ｃ、Ａ６０Ｃ、Ｍ１００ｃＣ、Ｗ１０３Ｃ、Ｖ２５８Ｃ、Ｈ４２５Ｃ、及びＮ４３０Ｃ（Ｋａｂａｔ番号付けによる）からなる群から選択される。
【０２４０】
ある特定の実施形態では、システイン突然変異は、軽鎖突然変異であり、Ｙ５５Ｃ、Ｇ６４Ｃ、Ｔ８５Ｃ、Ｔ１８０Ｃ、及びＮ４３０Ｃ（Ｋａｂａｔ番号付けによる）からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、システイン突然変異は、軽鎖突然変異であり、Ｔ３１Ｃ、Ｓ５２Ｃ、Ｇ６４Ｃ、Ｒ６６Ｃ、Ａ１９３Ｃ、及びＮ４３０Ｃ（Ｋａｂａｔ番号付けによる）からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、システイン突然変異は、軽鎖突然変異であり、Ｇ６４Ｃ、Ｔ８５Ｃ、Ｔ１８０Ｃ、及びＮ４３０Ｃ（Ｋａｂａｔ番号付けによる）からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、システイン突然変異は、軽鎖突然変異であり、Ｓ５２Ｃ、Ｇ６４Ｃ、Ｒ６６Ｃ、Ａ１９３Ｃ、及びＮ４３０Ｃ（Ｋａｂａｔ番号付けによる）からなる群から選択される。特定の実施形態では、軽鎖におけるシステイン突然変異は、ＬＣ−Ｉ１０６Ｃ、ＬＣ−Ｒ１０８Ｃ、ＬＣ−Ｒ１４２Ｃ、及びＬＣ−Ｋ１４９Ｃ（Ｋａｂａｔ番号付けによる）を含むシステイン突然変異の群から選択される（図１３Ａ、表２を参照のこと）。具体的な実施形態では、軽鎖におけるシステイン突然変異は、ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ（Ｋａｂａｔ番号付けによる）である（図１３Ａを参照のこと）。具体的な実施形態では、軽鎖におけるシステイン突然変異は、ＬＣ−Ｖ２０５Ｃ（Ｋａｂａｔ番号付けによる）である。
表２：例示的な軽鎖システイン突然変異
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【０２４１】
具体的な実施形態では、重鎖におけるシステイン突然変異は、ＨＣ−Ｔ１１４Ｃ、ＨＣ−Ａ１４０Ｃ、ＨＣ−Ｌ１７４Ｃ、ＨＣ−Ｌ１７９Ｃ、ＨＣ−Ｔ１８７Ｃ、ＨＣ−Ｔ２０９Ｃ、ＨＣ−Ｖ２６２Ｃ、ＨＣ−Ｇ３７１Ｃ、ＨＣ−Ｙ３７３Ｃ、ＨＣ−Ｅ３８２Ｃ、ＨＣ−Ｓ４２４Ｃ、ＨＣ−Ｎ４３４Ｃ、及びＨＣ−Ｑ４３８Ｃ（ＥＵ番号付けによる）からなるシステイン突然変異の群から選択される（図１３Ｂ、表３を参照のこと）。具体的な実施形態では、重鎖におけるシステイン突然変異は、Ｋａｂａｔ番号付けによるＨＣ−Ａ１４３Ｃ（すなわち、ＥＵ番号付けによるＨＣ−Ａ１４０Ｃ）である（図１３Ｂ、表３を参照のこと）。具体的な実施形態では、重鎖におけるシステイン突然変異は、ＥＵ番号付けによるＨＣ−Ａ１７４Ｃである（図１３Ｂ、表３を参照のこと）。具体的な実施形態では、重鎖におけるシステイン突然変異は、ＥＵ番号付けによるＨＣ−Ａ１１８Ｃ（すなわち、Ｋａｂａｔ番号付けによるＨＣ−Ａ１１４Ｃ）である。
【０２４２】
具体的な実施形態では、本明細書に記載のいずれのシステイン操作抗体も、以下のシステイン突然変異：Ｋａｂａｔ番号付けによるＬＣ−Ｋ１４９Ｃ及びＥＵ番号付けによるＨＣ−Ａ１４０Ｃ（表２及び表３ならびに図１３Ａ及び図１３Ｂを参照のこと）のうちの１つを有する。
表３：例示的な重鎖システイン突然変異
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【０２４３】
ある特定の実施形態では、以下の残基のうちのいずれか１つ以上：軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔ番号付け）、重鎖のＡ１１８（ＥＵ番号付け）、及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ番号付け）が、システインで置換され得る。
【０２４４】
ある特定の実施形態では、システイン操作抗体は、Ｖ２Ｃ、Ｌ４Ｃ、Ｖ５Ｃ、Ｌ１１Ｃ、Ｒ１９Ｃ、Ｆ２７Ｃ、Ｉ２９Ｃ、Ｔ３２Ｃ、Ｙ３３Ｃ、Ｑ３９Ｃ、Ａ４０Ｃ、Ｋ４３Ｃ、Ｌ４５Ｃ、Ｅ４６Ｃ、Ｔ５３Ｃ、Ｇ５５Ｃ、Ｔ５７Ｃ、Ｒ５８Ｃ、Ｙ５９Ｃ、Ａ６０Ｃ、Ｔ６８Ｃ、Ｎ７６Ｃ、Ｙ７９Ｃ、Ｑ８１Ｃ、Ｗ９５Ｃ、Ｇ９６Ｃ、Ｄ１０１Ｃ、Ｗ１０３Ｃ、Ｔ１１６Ｃ、Ｋ１１７Ｃ、Ｔ１３５Ｃ、Ｎ１５５Ｃ、Ａ１５８Ｃ、Ｇ１６２Ｃ、Ｇ１７４Ｃ、Ｌ１７５Ｃ、Ｔ１８３Ｃ、Ｖ１８４Ｃ、Ｉ１９５Ｃ、Ｎ１９９Ｃ、Ｓ２０３Ｃ、Ｆ２３９Ｃ、Ｍ２４８Ｃ、Ｅ２５４Ｃ、Ｖ２５８Ｃ、Ｎ２７２Ｃ、Ｖ２７８Ｃ、Ｌ３０５Ｃ、Ｔ３３１Ｃ、Ｓ３３３Ｃ、Ｒ３４０Ｃ、Ｑ３４３Ｃ、Ｋ３５６Ｃ、Ｅ３８４Ｃ、Ｓ３９９Ｃ、Ｋ４１０Ｃ、Ｑ４１４Ｃ、Ｇ４１６Ｃ、Ｎ４１７Ｃ、Ｙ４３２Ｃ、Ｔ４３３Ｃ、Ｋ４３５Ｃ、Ｓ４３８Ｃ、Ｌ４３９Ｃ、Ｍ１００ｃＣ、及びＮ８２ａＣ（Ｋａｂａｔ番号付けによる）からなる群から選択される１つ以上の重鎖システイン突然変異を含み得る。国際特許出願第ＷＯ２０１６／０４０８５６号の表３も参照されたい。
【０２４５】
ある特定の実施形態では、システイン操作抗体は、Ｓ１２Ｃ、Ｓ１４Ｃ、Ｇ１６Ｃ、Ｒ１８Ｃ、Ｔ２２Ｃ、Ｒ２４Ｃ、Ｑ２７Ｃ、Ｔ３１Ｃ、Ａ３２Ｃ、Ｑ３８Ｃ、Ｋ３９Ｃ、Ｇ４１Ｃ、Ｋ４２Ｃ、Ｐ４４Ｃ、Ｙ４９Ｃ、Ｓ５０Ｃ、Ｓ５２Ｃ、Ｆ５３Ｃ、Ｌ５４Ｃ、Ｙ５５Ｃ、Ｓ６３Ｃ、Ｇ６４Ｃ、Ｒ６６Ｃ、Ｄ７０Ｃ、Ｔ７２Ｃ、Ｔ７４Ｃ、Ｓ７６Ｃ、Ｑ７９Ｃ、Ｔ８５Ｃ、Ｈ９１Ｃ、Ｙ９２Ｃ、Ｐ９５Ｃ、Ｔ９７Ｃ、Ｆ９８Ｃ、Ｋ１０３Ｃ、Ｅ１０５Ｃ、Ｋ１０７Ｃ、Ｐ１１９Ｃ、Ｋ１２６Ｃ、Ｔ１２９Ｃ、Ｓ１３１Ｃ、Ｑ１４７Ｃ、Ｗ１４８Ｃ、Ａ１５３Ｃ、Ｑ１５５Ｃ、Ｓ１５６Ｃ、Ｓ１５９Ｃ、Ｑ１６０Ｃ、Ｓ１６２Ｃ、Ｑ１６６Ｃ、Ｔ１７２Ｃ、Ｔ１８０Ｃ、Ｖ１９１Ｃ、Ａ１９３Ｃ、Ｅ１９５Ｃ、Ｖ２０５Ｃ、Ｔ２０６Ｃ、及びＮ２１０Ｃ（Ｋａｂａｔ番号付けによる）からなる群から選択される１つ以上の軽鎖システイン突然変異を含み得る。国際特許出願第ＷＯ２０１６／０４０８５６号の表４も参照されたい。
【０２４６】
ある特定の実施形態では、システイン操作抗体は、ＨＣ−Ｉ１９５Ｃ、ＨＣ−Ｓ４２０Ｃ、ＨＣ−Ｙ４３２Ｃ、及びＬＣ−Ｇ６４Ｃ（Ｋａｂａｔ番号付けによる）からなる群から選択される１つ以上のシステイン突然変異を含み得る。国際特許出願第ＷＯ２０１６／０４０８５６号の表５も参照されたい。
【０２４７】
ある特定の実施形態では、システイン操作抗体は、ＬＣ−Ｔ２２Ｃ、ＬＣ−Ｋ３９Ｃ、ＬＣ−Ｙ４９Ｃ、ＬＣ−Ｙ５５Ｃ、ＬＣ−Ｔ８５Ｃ、ＬＣ−Ｔ９７Ｃ、ＬＣ−Ｉ１０６Ｃ、ＬＣ−Ｒ１０８Ｃ、ＬＣ−Ｒ１４２Ｃ、ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ、及びＬＣ−Ｖ２０５Ｃ（Ｋａｂａｔ番号付けによる）からなる部位の群から選択される軽鎖システイン突然変異を含む。
【０２４８】
システイン操作抗体は、任意の好適な数の操作システイン残基、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５個、またはそれ以上の操作システイン残基を含み得る。いくつかの実施形態では、システイン操作抗体は、１〜３、１〜４、１〜５、１〜６、１〜７、１〜８、１〜９、または１〜１０個の操作システイン残基を含み得る。いくつかの実施形態では、システイン操作抗体は、１個の操作システイン残基を含み得る。いくつかの実施形態では、システイン操作抗体は、２個の操作システイン残基を含み得る。いくつかの実施形態では、システイン操作抗体は、３個の操作システイン残基を含み得る。
【０２４９】
前述の実施形態のいずれにおいても、システイン操作抗体は、上述のシステイン突然変異のうちのいずれかと同等の位置に操作システインを含み得る。例えば、抗体が天然セリンを１１８位（ＥＵ番号付け）に含む場合、セリンは、システインに突然変異して、Ｓ１１８Ｃ突然変異を形成することができる。
【０２５０】
例えば、本発明は、ＨＣ−Ａ１１８Ｃ、ＨＣ−Ａ１４０Ｃ、及びＨＣ−Ｌ１７４Ｃ（ＥＵ番号付け）からなる群から選択される重鎖におけるシステイン突然変異、またはＬＣ−Ｖ２０５Ｃ及びＬＣ−Ｋ１４９Ｃ（Ｋａｂａｔ番号付け）からなる群から選択される軽鎖におけるシステイン突然変異を含むシステイン操作抗ＶＥＧＦ抗体を提供し、抗ＶＥＧＦ抗体は、本明細書に記載のいずれかの抗ＶＥＧＦ抗体、例えば、表８〜１０に記載のいずれかの抗ＶＥＧＦ抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体は、Ｎ９４Ａ．Ｆ８３Ａ．Ｎ８２ａＲ．Ｙ５８Ｒ（Ｇ６．３１  ＡＡＲＲ）である。いくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体は、Ｇ６．３１  ＷＴである。いくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体は、ＬＣ−Ｎ９４Ａである。いくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体は、ＬＣ−Ｎ９４Ａ．ＬＣ−Ｆ８３Ａである。いくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体は、ＬＣ−Ｎ９４Ａ．ＬＣ−Ｆ８３Ａである。いくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体は、ＨＣ−Ａ４０Ｅ．ＨＣ−Ｔ５７Ｅ（Ｇ６．３１  ＡＡＥＥ）である。いくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体は、ＨＣｃｏｍｂｏである。いくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体は、ＨＣＬＣ２である。いくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体は、ＨＣＬＣ４である。いくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体は、ＨＣＬＣ５である。いくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体は、ＨＣＬＣ３である。いくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体は、ＨＣＬＣ１である。いくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体は、Ｒ１９ＨＣｃｏｍｂｏである。いくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体は、Ｒ１９ＨＣＬＣ２である。いくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体は、Ｒ１９ＨＣＬＣ４である。いくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体は、Ｒ１９ＨＣＬＣ５である。
【０２５１】
具体的な例では、本発明は、ＨＣ−Ａ１１８Ｃ、ＨＣ−Ａ１４０Ｃ、及びＨＣ−Ｌ１７４Ｃ（ＥＵ番号付け）からなる群から選択される重鎖におけるシステイン突然変異、またはＬＣ−Ｖ２０５Ｃ及びＬＣ−Ｋ１４９Ｃ（Ｋａｂａｔ番号付け）からなる群から選択される軽鎖におけるシステイン突然変異を含むシステイン操作抗ＶＥＧＦ抗体を提供し、この抗体は、以下の６つのＨＶＲ、（ａ）ＤＹＷＩＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＧＩＴＰＡＧＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＦＶＦＦＬＰＹＡＭＤＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＧＹＧＡＰＦＴ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの例では、システイン操作抗ＶＥＧＦ抗体は、以下の４つの重鎖可変ドメインＦＲ：（ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＩＳ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、（ｂ）ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＲＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号１５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を含む。さらなる例では、システイン操作抗ＶＥＧＦ抗体は、以下の４つの軽鎖可変ドメインＦＲ：（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＡＡＴＹＹＣ（配列番号１９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を含む。いくつかの例では、システイン操作抗ＶＥＧＦ抗体は、（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの例では、親抗体は、Ｇ６．３１  ＡＡＲＲである。いくつかの実施形態では、システイン突然変異は、ＨＣ−Ａ１１８Ｃである。他の実施形態では、システイン突然変異は、ＨＣ−Ａ１４０Ｃである。さらに他の実施形態では、システイン突然変異は、ＨＣ−Ｌ１７４Ｃ（ＥＵ番号付け）である。他の実施形態では、システイン突然変異は、ＬＣ−Ｖ２０５Ｃ（Ｋａｂａｔ番号付け）である。他の実施形態では、システイン突然変異は、ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ（Ｋａｂａｔ番号付け）である。
【０２５２】
いくつかの例では、本発明は、（ａ）配列番号９０のアミノ酸配列を含む重鎖及び／または（ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を提供する。
【０２５３】
いくつかの例では、本発明は、（ａ）配列番号９２のアミノ酸配列を含む重鎖及び／または（ｂ）配列番号９１のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を提供する。
【０２５４】
いくつかの例では、本発明は、（ａ）配列番号９４のアミノ酸配列を含む重鎖及び／または（ｂ）配列番号９３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を提供する。
【０２５５】
ｅ）抗体誘導体
ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、当該技術分野で既知であり、かつ容易に入手可能な追加の非タンパク質性部分を含むようにさらに修飾され得る。抗体の誘導体化に好適な部分には、水溶性ポリマーが含まれるが、これらに限定されない。水溶性ポリマーの非限定的な例としては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１、３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）、及びデキストランまたはポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロプロピレングリコールホモポリマー、プロリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、ならびにそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性のため、製造に有利であり得る。ポリマーは、任意の分子量のものであり得、分岐状であっても非分岐状であってもよい。抗体に結合しているポリマーの数は異なり得、１つより多くのポリマーが結合している場合、それらは、同じ分子であっても異なる分子であってもよい。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数及び／または種類は、改善されるべき抗体の特定の特性または機能、抗体誘導体が定義された条件下である療法に使用されるか等を含むが、これらに限定されない考慮すべき事項に基づいて決定され得る。さらなる抗体コンジュゲートが、本明細書、例えば、以下のＧ節ならびに実施例１及び実施例２に記載される。
【０２５６】
別の実施形態では、放射線への曝露によって選択的に加熱され得る抗体及び非タンパク質性部分のコンジュゲートが提供される。一実施形態では、非タンパク質性部分は、カーボンナノチューブである（Ｋａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０２：１１６００−１１６０５（２００５））。放射線は、任意の波長のものであり得、通常の細胞に害を及ぼさないが、抗体−非タンパク質性部分の近位の細胞が死滅する温度まで非タンパク質性部分を加熱する波長が含まれるが、これに限定されない。
【０２５７】
ｆ）等電点バリアント
本発明は、改変された等電点を有する抗体バリアントを提供する。例えば、本発明は、例えば、抗ＶＥＧＦ抗体、例えば、Ｇ６．３１と比較して、低下した等電点（ｐＩ）を有する抗体バリアントを提供する。いくつかの例では、表面電荷は、生理学的ｐＨで減少する。いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、約８以下（例えば、約８、約７、約６、約５、または約４）のｐＩを有する。いくつかの例では、抗体は、約４〜約８（例えば、約４、約５、約６、約７、または約８）のｐＩを有する。いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、約５〜約７（例えば、約５、約６、または約７）のｐＩを有する。いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、約５〜約６（例えば、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４、約５．５、約５．６、約５．７、約５．８、約５．９、または約６）のｐＩを有する。
【０２５８】
本発明の抗体は、例えば、所与の位置の野生型アミノ酸残基をより低いｐＩを有するアミノ酸で置換することによって、低下したｐＩを有するように操作され得る。アミノ酸のｐＩは、当該技術分野で既知のアミン（−ＮＨ２）、カルボン酸（−ＣＯＯＨ）、及びアミノ酸の側鎖のｐＫａ値に基づいて決定され得る。いくつかの実施形態では、表面露出アミノ酸残基が置換されて、抗体のｐＩを低下させることができる。一実施形態では、表面露出アミノ酸残基は、グルタミン酸（Ｅ）で置換され得る。一実施形態では、表面露出アミノ酸残基は、アスパラギン酸（Ｄ）で置換され得る。
【０２５９】
Ｂ．組換え方法及び組成物
本明細書に記載の抗体（例えば、システイン操作抗ＶＥＧＦ抗体を含む抗ＶＥＧＦ抗体）のいずれも、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載の組換え方法及び組成物を使用して産生され得る。一実施形態では、本明細書に記載の抗ＶＥＧＦ抗体をコードする単離された核酸が提供される。かかる核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び／またはＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／または重鎖）をコードし得る。さらなる実施形態では、かかる核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。さらなる実施形態では、かかる核酸を含む宿主細胞が提供される。１つのかかる実施形態では、宿主細胞は、（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、または（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクター及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクターを含む（例えば、それで形質転換されている）。一実施形態では、宿主細胞は、真核細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、またはリンパ球系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体を作製する方法が提供され、この方法は、上で提供される抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を抗体の発現に好適な条件下で培養することと、任意に、抗体を宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から回収することとを含む。
【０２６０】
抗体（例えば、システイン操作抗ＶＥＧＦ抗体を含む抗ＶＥＧＦ抗体）の組換え産生のために、抗体、例えば、上述の抗体をコードする核酸が単離され、宿主細胞でのさらなるクローニング及び／または発現のために１つ以上のベクターに挿入される。かかる核酸は、従来の手技を使用して（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）容易に単離及び配列決定され得る。
【０２６１】
抗体をコードするベクターのクローニングまたは発現に好適な宿主細胞には、本明細書に記載の原核細胞または真核細胞が含まれる。例えば、抗体は、特にグリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要とされない場合に、細菌中で産生され得る。抗体断片及びポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、同第５，７８９，１９９号、及び同第５，８４０，５２３号を参照されたい。Ｅ．ｃｏｌｉでの抗体断片の発現について記載するＣｈａｒｌｔｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ.Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３），ｐｐ．２４５−２５４も参照されたい。発現後、抗体は、可溶性画分中の細菌細胞ペーストから単離され得、さらに精製され得る。
【０２６２】
原核生物に加えて、糸状菌または酵母等の真核微生物は、グリコシル化経路が「ヒト化」されており、部分的または完全なヒトグリコシル化パターンを有する抗体の産生をもたらす菌及び酵母株を含む、抗体をコードするベクターに好適なクローニングまたは発現宿主である。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９−１４１４（２００４）、及びＬｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０−２１５（２００６）を参照されたい。
【０２６３】
グリコシル化抗体の発現に好適な宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）にも由来する。無脊椎動物細胞の例としては、植物細胞及び昆虫細胞が挙げられる。特にＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞のトランスフェクションのために昆虫細胞と併せて使用され得る多数のバキュロウイルス株が特定されている。
【０２６４】
植物細胞培養も宿主として利用され得る。例えば、米国特許第５，９５９，１７７号、同第６，０４０，４９８号、同第６，４２０，５４８号、同第７，１２５，９７８号、及び同第６，４１７，４２９号（トランスジェニック植物において抗体を産生するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術について記載する）を参照されたい。
【０２６５】
脊椎動物細胞も宿主として使用され得る。例えば、懸濁液中で成長するように適合された哺乳類細胞株が有用であり得る。有用な哺乳類宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ−７）、ヒト胚腎臓株（例えば、Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）に記載の２９３または２９３細胞）、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）、マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３−２５１（１９８０）に記載のＴＭ４細胞）、サル腎臓細胞（ＣＶ１）、アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６）、ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ  ３Ａ）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８）、ヒト肝細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２）、マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ  ０６０５６２）、例えば、Ｍａｔｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ  Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４−６８（１９８２）に記載のＴＲＩ細胞、ＭＲＣ  ５細胞、及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳類宿主細胞株には、ＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４２１６（１９８０））を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ならびにＹ０、ＮＳ０、及びＳｐ２／０等の骨髄腫細胞株が含まれる。抗体産生に好適なある特定の哺乳類宿主細胞株の概説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ  ａｎｄ  Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ.Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ），ｐｐ．２５５−２６８（２００３）を参照されたい
【０２６６】
Ｃ.アッセイ
抗体（例えば、システイン操作抗ＶＥＧＦ抗体を含む本明細書に記載の抗ＶＥＧＦ抗体）、ならびに抗体コンジュゲート（例えば、抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、本明細書で提供されるいずれかの抗ＶＥＧＦ抗体）を含む抗体コンジュゲート）は、当該技術分野で既知の様々なアッセイによって特定されるか、それらの物理的／化学的特性及び／または生物学的活性についてスクリーニングされるか、または特徴付けられ得る。
【０２６７】
１．結合アッセイ及び他のアッセイ
一態様では、抗体（例えば、システイン操作抗ＶＥＧＦ抗体を含む抗ＶＥＧＦ抗体）またはその抗体コンジュゲートは、例えば、既知の方法、例えば、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット等によって、その抗原結合活性について試験される。
【０２６８】
別の態様では、競合アッセイを使用して、抗原（例えば、ＶＥＧＦ）への結合において本明細書に記載の抗体またはその抗体コンジュゲートと競合する抗体を特定することができる。ある特定の実施形態では、かかる競合抗体は、本明細書に記載の抗体によって結合される同じエピトープ（例えば、直鎖状または立体配座エピトープ）に結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための詳細な例示的な方法が、Ｍｏｒｒｉｓ（１９９６）“Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，”ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｖｏｌ．６６（Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ）で提供されている。
【０２６９】
例示的な競合アッセイでは、固定化ＶＥＧＦが、ＶＥＧＦに結合する第１の標識抗体と、ＶＥＧＦへの結合において第１の抗体と競合するその能力について試験される第２の非標識抗体とを含む溶液中でインキュベートされる。第２の抗体は、ハイブリドーマ上清中に存在し得る。対照として、固定化ＶＥＧＦが、第１の標識抗体を含むが、第２の非標識抗体を含まない溶液中でインキュベートされる。第１の抗体のＶＥＧＦへの結合に許容的な条件下でインキュベートした後、過剰な非結合抗体が除去され、固定化ＶＥＧＦと会合した標識の量が測定される。試験試料における固定化ＶＥＧＦと会合した標識の量が対照試料と比較して実質的に減少した場合、それは、第２の抗体がＶＥＧＦへの結合において第１の抗体と競合していることを示す。同様のアッセイが他の抗原に行われ得る。Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ｃｈ．１４（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ）を参照されたい。
【０２７０】
２．活性アッセイ
一態様では、生物学的活性を有する抗体（例えば、システイン操作抗ＶＥＧＦ抗体を含む抗ＶＥＧＦ抗体）またはその抗体コンジュゲートを特定するためのアッセイが提供される。生物学的活性には、例えば、インビボ、インビトロ、またはエクスビボのいずれかでの抗原（例えば、ＶＥＧＦ（例えば、血流中のＶＥＧＦ））またはそのペプチド断片への結合が含まれ得る。ある特定の実施形態では、生物学的活性には、抗原の遮断または中和が含まれ得る。例えば、ある特定の実施形態では、生物学的活性には、ＶＥＧＦの遮断もしくは中和、またはＶＥＧＦのリガンド、例えば、ＫＤＲもしくはＦｌｔ−１等の受容体への結合の阻止が含まれ得る。インビボ及び／またはインビトロでかかる生物学的活性を有する抗体またはその抗体コンジュゲートも提供される。ある特定の実施形態では、本発明の抗体またはその抗体コンジュゲートは、かかる生物学的活性について試験される。
【０２７１】
３．安定性アッセイ
一態様では、抗体（例えば、システイン操作抗ＶＥＧＦ抗体を含む抗ＶＥＧＦ抗体）またはその抗体コンジュゲートの安定性（例えば、熱安定性）を決定するためのアッセイが提供される。例えば、抗体またはその抗体コンジュゲートの安定性は、当該技術分野で既知の任意の方法、例えば、示差走査蛍光定量法（ＤＳＦ）、円偏光二色性（ＣＤ）、内在性タンパク質蛍光、示差走査熱量測定、分光法、光散乱（例えば、動的光散乱（ＤＬＳ）及び静的光散乱（ＳＬＳ）、自己相互作用クロマトグラフィー（ＳＩＣ）を使用して決定され得る。抗体またはその抗体コンジュゲートの安定性は、本明細書に記載されるように、例えば、国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０５３４５４号の実施例１及び実施例２に記載されるように、例えば、ＤＳＦを使用して決定され得る。いくつかの例では、抗体コンジュゲートの安定性は、例えば、実施例１に記載されるように、屈折率及び多角度光散乱検出器（ＳＥＣ−ＲＩ−ＭＡＬＳ）を連結したサイズ排除クロマトグラフィーによって決定され得る。
【０２７２】
Ｄ．薬学的製剤
本明細書で提供される抗体（例えば、システイン操作抗ＶＥＧＦ抗体を含む抗ＶＥＧＦ抗体）またはその抗体コンジュゲートの薬学的製剤は、所望の純度を有するかかる抗体または抗体コンジュゲートを、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で、１つ以上の任意の薬学的に許容される担体（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））と混合することによって調製される。薬学的に許容される担体は、一般に、用いられる投薬量及び濃度ではレシピエントに非毒性であり、これらには、リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液、及び他の有機酸緩衝液等の緩衝液；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（例えば、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル、またはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチルまたはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール、及びｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジン；単糖、二糖、及び他の炭水化物、例えば、グルコース、マンノース、またはデキストリン；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロース、またはソルビトール；塩形成対イオン、例えば、ナトリウム；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）、及び／または非イオン性界面活性剤、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が含まれるが、これらに限定されない。本明細書における例示的な薬学的に許容される担体は、介在性薬物分散剤、例えば、可溶性中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ヒト可溶性ＰＨ−２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）をさらに含む。ｒＨｕＰＨ２０を含むある特定の例示的なｓＨＡＳＥＧＰ及び使用方法が、米国特許公開第２００５／０２６０１８６号及び同第２００６／０１０４９６８号に記載されている。一態様では、ｓＨＡＳＥＧＰは、コンドロイチナーゼ等の１つ以上の追加のグリコサミノグリカナーゼと組み合わせられる。
【０２７３】
例示的な凍結乾燥抗体製剤が、米国特許第６，２６７，９５８号に記載されている。水性抗体製剤には、米国特許第６，１７１，５８６号及びＷＯ２００６／０４４９０８に記載のものが含まれ、後者の製剤は、ヒスチジン酢酸緩衝液を含む。
【０２７４】
本明細書における製剤は、治療される特定の適応症のために必要に応じて１つより多くの活性化合物、好ましくは、互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を有する活性化合物も含有し得る。例えば、免疫抑制剤をさらに提供することが望ましくあり得る。かかる分子は、意図される目的に有効な量で、組み合わせで好適に存在する。
【０２７５】
活性成分は、例えば、液滴形成技法または界面重合によって調製されたマイクロカプセル（例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチンマイクロカプセル及びポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセル）中、コロイド薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子、及びナノカプセル）中、またはマクロエマルション中に封入され得る。かかる技法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）に開示されている。
【０２７６】
インビボ投与に使用される製剤は、一般に、滅菌である。滅菌は、例えば、滅菌濾過膜を通した濾過によって容易に達成され得る。
【０２７７】
ある特定の実施形態では、薬学的製剤は、１つ以上の追加の化合物を含む。ある特定の実施形態では、追加の化合物は、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−１３、ＩＬ−１３Ｒ、ＰＤＧＦ、アンジオポエチン、アンジオポエチン２、Ｔｉｅ２、Ｓ１Ｐ、インテグリンαｖβ３、αｖβ５、及びα５β１、ベータセルリン、アペリン／ＡＰＪ、エリスロポエチン、補体Ｄ因子、ＴＮＦα、ＨｔｒＡ１、ＶＥＧＦ受容体、ＳＴ−２受容体、ならびに加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）リスクと遺伝的に関連するタンパク質、例えば、補体経路成分Ｃ２、Ｂ因子、Ｈ因子、ＣＦＨＲ３、Ｃ３ｂ、Ｃ５、Ｃ５ａ、及びＣ３ａ、ＨｔｒＡ１、ＡＲＭＳ２、ＴＩＭＰ３、ＨＬＡ、ＩＬ−８、ＣＸ３ＣＲ１、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＣＥＴＰ、ＬＩＰＣ、ＣＯＬ１０Ａ１、ならびにＴＮＦＲＳＦ１０Ａからなる群から選択される第２の生物学的分子に結合する。ある特定の実施形態では、追加の化合物は、抗体またはその抗原結合断片である。
【０２７８】
例えば、いくつかの例では、追加の化合物は、二重特異性抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ／抗Ａｎｇ２二重特異性抗体、例えば、ＲＧ−７７１６、またはＷＯ２０１０／０６９５３２もしくはＷＯ２０１６／０７３１５７に開示されるいずれかの二重特異性抗ＶＥＧＦ／抗Ａｎｇ２二重特異性抗体である。
【０２７９】
別の例では、いくつかの例では、追加の化合物は、抗ＩＬ−６抗体、例えば、ＥＢＩ−０３１（Ｅｌｅｖｅｎ  Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、例えば、ＷＯ２０１６／０７３８９０を参照のこと）、シルツキシマブ（ＳＹＬＶＡＮＴ（登録商標））、オロキズマブ、クラザキズマブ、シルクマブ、エルシリモマブ、ゲリリムズマブ、ＯＰＲ−００３、ＭＥＤＩ−５１１７、ＰＦ−０４２３６９２１、またはそれらのバリアントである。
【０２８０】
なおさらなる例では、いくつかの例では、追加の化合物は、抗ＩＬ−６Ｒ抗体、例えば、トシリズマブ（ＡＣＴＥＭＲＡ（登録商標））（例えば、ＷＯ１９９２／０１９５７９を参照のこと）、サリルマブ、ボバリリズマブ（ＡＬＸ−００６１）、ＳＡ−２３７、またはそれらのバリアントである。
【０２８１】
Ｅ．治療法及び組成物
本明細書で提供される抗体（例えば、システイン操作抗ＶＥＧＦ抗体を含む抗ＶＥＧＦ抗体）またはその抗体コンジュゲート（例えば、単分散ＨＡコンジュゲート）のいずれも、治療法で使用され得る。
【０２８２】
一態様では、薬剤として使用するための抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、操作システイン抗ＶＥＧＦ抗体）が提供される。別の態様では、薬剤として使用するための抗体コンジュゲート（例えば、単分散ＨＡコンジュゲート）が提供される。さらなる態様では、本発明は、病理学的血管新生に関連する障害の治療に使用するための抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、操作システイン抗ＶＥＧＦ抗体）を提供する。別の態様では、本発明は、病理学的血管新生に関連する障害の治療に使用するための抗体コンジュゲート（例えば、単分散ＨＡコンジュゲート）を提供する。いくつかの実施形態では、病理学的血管新生に関連する障害は、眼障害である。いくつかの例では、眼障害は、ＡＭＤ（例えば、滲出型ＡＭＤ、乾燥ＡＭＤ、中等度ＡＭＤ、進行性ＡＭＤ、または地図状萎縮（ＧＡ））、黄斑変性症、黄斑浮腫、ＤＭＥ（例えば、中心窩に及ばない限局性ＤＭＥまたは中心窩に及ぶびまん性ＤＭＥ）、網膜症、糖尿病性網膜症（ＤＲ）（例えば、増殖性ＤＲ（ＰＤＲ）、非増殖性ＤＲ（ＮＰＤＲ）、または高所ＤＲ）、他の虚血関連網膜症、ＲＯＰ、網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）（例えば、網膜中心静脈（ＣＲＶＯ）型及び網膜分岐静脈（ＢＲＶＯ）型）、ＣＮＶ（例えば、近視性ＣＮＶ）、角膜血管新生、角膜血管新生に関連する疾患、網膜血管新生、網膜／脈絡膜血管新生に関連する疾患、病理学的近視、フォン・ヒッペル・リンドウ病、眼ヒストプラスマ症、ＦＥＶＲ、コーツ病、ノリエ病、ＯＰＰＧ、結膜下出血、ルベオーシス、眼血管新生疾患、血管新生緑内障、網膜色素変性症（ＲＰ）、高血圧性網膜症、網膜血管腫増殖、黄斑毛細血管拡張症、虹彩血管新生、眼内血管新生、網膜変性、類嚢胞黄斑浮腫（ＣＭＥ）、血管炎、乳頭浮腫、網膜炎、結膜炎（例えば、感染性結膜炎及び非感染性（例えば、アレルギー性）結膜炎）、レーバー先天性黒内障、ブドウ膜炎（感染性及び非感染性ブドウ膜炎を含む）、脈絡膜炎（例えば、多巣性脈絡膜炎）、眼ヒストプラスマ症、眼瞼炎、ドライアイ、外傷性眼損傷、またはシェーグレン病である。
【０２８３】
別の態様では、治療法に使用するための抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、操作システイン抗ＶＥＧＦ抗体）が提供される。別の態様では、治療法に使用するための抗体コンジュゲート（例えば、単分散ＨＡコンジュゲート）が提供される。ある特定の例では、本発明は、個体に抗ＶＥＧＦ抗体の有効量を投与することを含む、病理学的血管新生に関連する障害を有する対象を治療する方法に使用するための抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、操作システイン抗ＶＥＧＦ抗体）を提供する。本発明は、個体に抗体コンジュゲートの有効量を投与することを含む、病理学的血管新生に関連する障害を有する対象を治療する方法に使用するための抗体コンジュゲート（例えば、単分散ＨＡコンジュゲート）も提供する。いくつかの例では、病理学的血管新生に関連する障害は、眼障害である。いくつかの例では、眼障害は、ＡＭＤ（例えば、滲出型ＡＭＤ、乾燥ＡＭＤ、中等度ＡＭＤ、進行性ＡＭＤ、または地図状萎縮（ＧＡ））、黄斑変性症、黄斑浮腫、ＤＭＥ（例えば、中心窩に及ばない限局性ＤＭＥまたは中心窩に及ぶびまん性ＤＭＥ）、網膜症、糖尿病性網膜症（ＤＲ）（例えば、増殖性ＤＲ（ＰＤＲ）、非増殖性ＤＲ（ＮＰＤＲ）、または高所ＤＲ）、他の虚血関連網膜症、ＲＯＰ、網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）（例えば、網膜中心静脈（ＣＲＶＯ）型及び網膜分岐静脈（ＢＲＶＯ）型）、ＣＮＶ（例えば、近視性ＣＮＶ）、角膜血管新生、角膜血管新生に関連する疾患、網膜血管新生、網膜／脈絡膜血管新生に関連する疾患、病理学的近視、フォン・ヒッペル・リンドウ病、眼ヒストプラスマ症、ＦＥＶＲ、コーツ病、ノリエ病、ＯＰＰＧ、結膜下出血、ルベオーシス、眼血管新生疾患、血管新生緑内障、網膜色素変性症（ＲＰ）、高血圧性網膜症、網膜血管腫増殖、黄斑毛細血管拡張症、虹彩血管新生、眼内血管新生、網膜変性、類嚢胞黄斑浮腫（ＣＭＥ）、血管炎、乳頭浮腫、網膜炎、結膜炎（例えば、感染性結膜炎及び非感染性（例えば、アレルギー性）結膜炎）、レーバー先天性黒内障、ブドウ膜炎（感染性及び非感染性ブドウ膜炎を含む）、脈絡膜炎（例えば、多巣性脈絡膜炎）、眼ヒストプラスマ症、眼瞼炎、ドライアイ、外傷性眼損傷、またはシェーグレン病である。
【０２８４】
いくつかの例では、本発明は、対象における血管新生の低減または抑制に使用するための抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、操作システイン抗ＶＥＧＦ抗体）を提供する。別の態様では、対象における血管新生の低減または抑制に使用するための抗体コンジュゲート（例えば、単分散ＨＡコンジュゲート）が提供される。ある特定の実施形態では、本発明は、個体に抗ＶＥＧＦ抗体の有効を投与して、血管新生を低減または抑制することを含む、対象における血管新生を低減または抑制する方法に使用するための抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、操作システイン抗ＶＥＧＦ抗体）を提供する。本発明は、個体に抗体コンジュゲートの有効量を投与することを含む、対象における血管新生を低減または抑制する方法に使用するための抗体コンジュゲート（例えば、単分散ＨＡコンジュゲート）も提供する。上記の使用のいずれかによる「対象」は、ヒトであり得る。
【０２８５】
本発明は、薬剤の製造または調製における抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、操作システイン抗ＶＥＧＦ抗体）の使用を提供する。本発明は、薬剤の製造または調製における抗体コンジュゲート（例えば、単分散ＨＡコンジュゲート）の使用も提供する。例えば、一例では、薬剤は、病理学的血管新生に関連する障害の治療のためのものである。さらなる例では、薬剤は、病理学的血管新生に関連する障害を有する対象に薬剤の有効量を投与することを含む、病理学的血管新生に関連する障害を治療する方法に使用するためのものである。いくつかの例では、病理学的血管新生に関連する障害は、眼障害である。いくつかの例では、眼障害は、ＡＭＤ（例えば、滲出型ＡＭＤ、乾燥ＡＭＤ、中等度ＡＭＤ、進行性ＡＭＤ、または地図状萎縮（ＧＡ））、黄斑変性症、黄斑浮腫、ＤＭＥ（例えば、中心窩に及ばない限局性ＤＭＥまたは中心窩に及ぶびまん性ＤＭＥ）、網膜症、糖尿病性網膜症（ＤＲ）（例えば、増殖性ＤＲ（ＰＤＲ）、非増殖性ＤＲ（ＮＰＤＲ）、または高所ＤＲ）、他の虚血関連網膜症、ＲＯＰ、網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）（例えば、網膜中心静脈（ＣＲＶＯ）型及び網膜分岐静脈（ＢＲＶＯ）型）、ＣＮＶ（例えば、近視性ＣＮＶ）、角膜血管新生、角膜血管新生に関連する疾患、網膜血管新生、網膜／脈絡膜血管新生に関連する疾患、病理学的近視、フォン・ヒッペル・リンドウ病、眼ヒストプラスマ症、ＦＥＶＲ、コーツ病、ノリエ病、ＯＰＰＧ、結膜下出血、ルベオーシス、眼血管新生疾患、血管新生緑内障、網膜色素変性症（ＲＰ）、高血圧性網膜症、網膜血管腫増殖、黄斑毛細血管拡張症、虹彩血管新生、眼内血管新生、網膜変性、類嚢胞黄斑浮腫（ＣＭＥ）、血管炎、乳頭浮腫、網膜炎、結膜炎（例えば、感染性結膜炎及び非感染性（例えば、アレルギー性）結膜炎）、レーバー先天性黒内障、ブドウ膜炎（感染性及び非感染性ブドウ膜炎を含む）、脈絡膜炎（例えば、多巣性脈絡膜炎）、眼ヒストプラスマ症、眼瞼炎、ドライアイ、外傷性眼損傷、またはシェーグレン病である。さらなる例では、薬剤は、対象における血管新生を低減または抑制するためのものである。さらなる例では、薬剤は、対象に薬剤の有効量を投与して、血管新生を低減または抑制することを含む、対象における血管新生を低減または抑制する方法に使用するためのものである。薬剤の前述の使用のいずれにおいても、方法は、個体に、例えば、以下に記載の少なくとも１つの追加の治療薬の有効量を投与することを含み得る。
【０２８６】
本発明は、病理学的血管新生に関連する障害を治療するための方法を提供する。一実施形態では、方法は、病理学的血管新生に関連する障害を有する個体に、抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、操作システイン抗ＶＥＧＦ抗体）の有効量を投与することを含む。別の例では、方法は、病理学的血管新生に関連する障害を有する個体に、抗体コンジュゲート（例えば、単分散ＨＡコンジュゲート）の有効量を投与することを含む。いくつかの例では、病理学的血管新生に関連する障害は、眼障害である。いくつかの例では、眼障害は、ＡＭＤ（例えば、滲出型ＡＭＤ、乾燥ＡＭＤ、中等度ＡＭＤ、進行性ＡＭＤ、または地図状萎縮（ＧＡ））、黄斑変性症、黄斑浮腫、ＤＭＥ（例えば、中心窩に及ばない限局性ＤＭＥまたは中心窩に及ぶびまん性ＤＭＥ）、網膜症、糖尿病性網膜症（ＤＲ）（例えば、増殖性ＤＲ（ＰＤＲ）、非増殖性ＤＲ（ＮＰＤＲ）、または高所ＤＲ）、他の虚血関連網膜症、ＲＯＰ、網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）（例えば、網膜中心静脈（ＣＲＶＯ）型及び網膜分岐静脈（ＢＲＶＯ）型）、ＣＮＶ（例えば、近視性ＣＮＶ）、角膜血管新生、角膜血管新生に関連する疾患、網膜血管新生、網膜／脈絡膜血管新生に関連する疾患、病理学的近視、フォン・ヒッペル・リンドウ病、眼ヒストプラスマ症、ＦＥＶＲ、コーツ病、ノリエ病、ＯＰＰＧ、結膜下出血、ルベオーシス、眼血管新生疾患、血管新生緑内障、網膜色素変性症（ＲＰ）、高血圧性網膜症、網膜血管腫増殖、黄斑毛細血管拡張症、虹彩血管新生、眼内血管新生、網膜変性、類嚢胞黄斑浮腫（ＣＭＥ）、血管炎、乳頭浮腫、網膜炎、結膜炎（例えば、感染性結膜炎及び非感染性（例えば、アレルギー性）結膜炎）、レーバー先天性黒内障、ブドウ膜炎（感染性及び非感染性ブドウ膜炎を含む）、脈絡膜炎（例えば、多巣性脈絡膜炎）、眼ヒストプラスマ症、眼瞼炎、ドライアイ、外傷性眼損傷、またはシェーグレン病である。さらなる例では、方法は、個体に、以下に記載の少なくとも１つの追加の治療薬の有効量を投与することをさらに含む。上記の方法のいずれかによる「対象」は、ヒトであり得る。
【０２８７】
本発明の抗体（例えば、システイン操作抗ＶＥＧＦ抗体）または抗体コンジュゲート（例えば、単分散ＨＡコンジュゲート）を使用して、哺乳動物を治療することができることが企図される。一実施形態では、抗体（例えば、システイン操作抗ＶＥＧＦ抗体）または抗体コンジュゲート（例えば、単分散ＨＡコンジュゲート）は、例えば、前臨床データを得るために、非ヒト哺乳動物に投与される。治療される例示的な非ヒト哺乳動物には、前臨床研究が行われる非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、齧歯類（例えば、マウス及びラット）、ならびに他の哺乳動物が含まれる。かかる哺乳動物は、抗体で治療される疾患の確立された動物モデルであり得るか、または目的とする抗体の毒性もしくは薬物動態を研究するために使用され得る。これらの実施形態の各々では、用量漸増試験が哺乳動物に行われ得る。抗体（例えば、システイン操作抗ＶＥＧＦ抗体）または抗体コンジュゲート（例えば、単分散ＨＡコンジュゲート）は、例えば、固形腫瘍モデルで宿主齧歯類に投与され得る。抗体または抗体コンジュゲートは、例えば、硝子体内投与（例えば、硝子体内注射）によって、またはポート送達デバイスを使用して、眼薬物動態研究のために宿主（例えば、齧歯類、例えば、ウサギ）に投与され得る。
【０２８８】
さらなる態様では、本発明は、例えば、上記の治療法のいずれかに使用するための、本明細書で提供される抗体（例えば、システイン操作抗ＶＥＧＦ抗体）または抗体コンジュゲート（例えば、単分散ＨＡコンジュゲート）のうちのいずれかを含む薬学的製剤を提供する。一実施形態では、薬学的製剤は、本明細書で提供される抗体（例えば、システイン操作抗ＶＥＧＦ抗体）または抗体コンジュゲート（例えば、単分散ＨＡコンジュゲート）のうちのいずれかと、薬学的に許容される担体とを含む。別の実施形態では、薬学的製剤は、本明細書で提供される抗体（例えば、システイン操作抗ＶＥＧＦ抗体）または抗体コンジュゲート（例えば、単分散ＨＡコンジュゲート）のうちのいずれかと、例えば、以下に記載の少なくとも１つの追加の治療薬とを含む。ある特定の実施形態では、薬学的製剤は、１つ以上の追加の化合物を含む。ある特定の実施形態では、追加の化合物は、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−１３、ＩＬ−１３Ｒ、ＰＤＧＦ、アンジオポエチン、Ａｎｇ２、Ｔｉｅ２、Ｓ１Ｐ、インテグリンαｖβ３、αｖβ５、及びα５β１、ベータセルリン、アペリン／ＡＰＪ、エリスロポエチン、補体Ｄ因子、ＴＮＦα、ＨｔｒＡ１、ＶＥＧＦ受容体、ＳＴ−２受容体、ならびに加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）リスクと遺伝的に関連するタンパク質、例えば、補体経路成分Ｃ２、Ｂ因子、Ｈ因子、ＣＦＨＲ３、Ｃ３ｂ、Ｃ５、Ｃ５ａ、及びＣ３ａ、ＨｔｒＡ１、ＡＲＭＳ２、ＴＩＭＰ３、ＨＬＡ、インターロイキン−８（ＩＬ−８）、ＣＸ３ＣＲ１、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＣＥＴＰ、ＬＩＰＣ、ＣＯＬ１０Ａ１、ならびにＴＮＦＲＳＦ１０Ａからなる群から選択される第２の生物学的分子に結合する。ある特定の実施形態では、追加の化合物は、抗体またはその抗原結合断片である。例えば、いくつかの例では、追加の化合物は、二重特異性抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ／抗Ａｎｇ２二重特異性抗体、例えば、ＲＧ−７７１６、またはＷＯ２０１０／０６９５３２もしくはＷＯ２０１６／０７３１５７に開示されるいずれかの二重特異性抗ＶＥＧＦ／抗Ａｎｇ２二重特異性抗体、またはそれらのバリアントである。別の例では、いくつかの例では、追加の化合物は、抗ＩＬ−６抗体、例えば、ＥＢＩ−０３１（Ｅｌｅｖｅｎ  Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、例えば、ＷＯ２０１６／０７３８９０を参照のこと）、シルツキシマブ（ＳＹＬＶＡＮＴ（登録商標））、オロキズマブ、クラザキズマブ、シルクマブ、エルシリモマブ、ゲリリムズマブ、ＯＰＲ−００３、ＭＥＤＩ−５１１７、ＰＦ−０４２３６９２１、またはそれらのバリアントである。なおさらなる例では、いくつかの例では、追加の化合物は、抗ＩＬ−６Ｒ抗体、例えば、トシリズマブ（ＡＣＴＥＭＲＡ（登録商標））（例えば、ＷＯ１９９２／０１９５７９を参照のこと）、サリルマブ、ボバリリズマブ（ＡＬＸ−００６１）、ＳＡ−２３７、またはそれらのバリアントである。
【０２８９】
抗体（例えば、システイン操作抗ＶＥＧＦ抗体）または抗体コンジュゲート（例えば、単分散ＨＡコンジュゲート）は、単独でまたは他の薬剤と組み合わせてのいずれかで、療法に使用され得る。例えば、抗体（例えば、システイン操作抗ＶＥＧＦ抗体）または抗体コンジュゲート（例えば、単分散ＨＡコンジュゲート）は、少なくとも１つの追加の治療薬と同時投与され得る。ある特定の実施形態では、追加の治療薬は、別の抗体、抗血管新生剤、免疫抑制剤、サイトカイン、サイトカインアンタゴニスト、コルチコステロイド、制吐薬、がんワクチン、鎮痛剤、またはそれらの組み合わせである。
【０２９０】
例えば、ある特定の実施形態では、前述の方法のいずれかは、１つ以上の追加の化合物を投与することをさらに含む。ある特定の実施形態では、抗体（例えば、システイン操作抗ＶＥＧＦ抗体）または抗体コンジュゲート（例えば、単分散ＨＡコンジュゲート）は、追加の化合物（複数可）と同時に投与される。ある特定の実施形態では、抗体または抗体コンジュゲートは、追加の化合物（複数可）の前または後に投与される。ある特定の実施形態では、追加の化合物は、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−１３、ＩＬ−１３Ｒ、ＰＤＧＦ、アンジオポエチン、Ａｎｇ２、Ｔｉｅ２、Ｓ１Ｐ、インテグリンαｖβ３、αｖβ５、及びα５β１、ベータセルリン、アペリン／ＡＰＪ、エリスロポエチン、補体Ｄ因子、ＴＮＦα、ＨｔｒＡ１、ＶＥＧＦ受容体、ＳＴ−２受容体、ならびにＡＭＤリスクと遺伝的に関連するタンパク質、例えば、補体経路成分Ｃ２、Ｂ因子、Ｈ因子、ＣＦＨＲ３、Ｃ３ｂ、Ｃ５、Ｃ５ａ、及びＣ３ａ、ＨｔｒＡ１、ＡＲＭＳ２、ＴＩＭＰ３、ＨＬＡ、インターロイキン−８（ＩＬ−８）、ＣＸ３ＣＲ１、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＣＥＴＰ、ＬＩＰＣ、ＣＯＬ１０Ａ１、ならびにＴＮＦＲＳＦ１０Ａからなる群から選択される第２の生物学的分子に結合する。ある特定の実施形態では、追加の化合物は、抗体またはその抗原結合断片である。
【０２９１】
上の実施形態のいずれかに従う（またはいずれかに適用される）ある特定の実施形態では、眼障害は、増殖性網膜症、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）、加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）、糖尿病性及び他の虚血関連網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、病理学的近視、フォン・ヒッペル・リンドウ病、眼ヒストプラスマ症、ＣＲＶＯ及びＢＲＶＯを含む網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）、角膜血管新生、網膜血管新生、及び未熟児網膜症（ＲＯＰ）からなる群から選択される眼内血管新生疾患である。例えば、いくつかの例では、追加の化合物は、二重特異性抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ／抗Ａｎｇ２二重特異性抗体、例えば、ＲＧ−７７１６、またはＷＯ２０１０／０６９５３２もしくはＷＯ２０１６／０７３１５７に開示されるいずれかの二重特異性抗ＶＥＧＦ／抗Ａｎｇ２二重特異性抗体、またはそれらのバリアントである。別の例では、いくつかの例では、追加の化合物は、抗ＩＬ−６抗体、例えば、ＥＢＩ−０３１（Ｅｌｅｖｅｎ  Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、例えば、ＷＯ２０１６／０７３８９０を参照のこと）、シルツキシマブ（ＳＹＬＶＡＮＴ（登録商標））、オロキズマブ、クラザキズマブ、シルクマブ、エルシリモマブ、ゲリリムズマブ、ＯＰＲ−００３、ＭＥＤＩ−５１１７、ＰＦ−０４２３６９２１、またはそれらのバリアントである。なおさらなる例では、いくつかの例では、追加の化合物は、抗ＩＬ−６Ｒ抗体、例えば、トシリズマブ（ＡＣＴＥＭＲＡ（登録商標））（例えば、ＷＯ１９９２／０１９５７９を参照のこと）、サリルマブ、ボバリリズマブ（ＡＬＸ−００６１）、ＳＡ−２３７、またはそれらのバリアントである。
【０２９２】
いくつかの例では、本発明の抗体（例えば、システイン操作抗ＶＥＧＦ抗体）または抗体コンジュゲート（例えば、単分散ＨＡコンジュゲート）は、眼障害、例えば、本明細書に記載の眼障害（例えば、ＡＭＤ（例えば、滲出型ＡＭＤ）、ＤＭＥ、ＤＲ、またはＲＶＯ）の治療のための少なくとも１つの追加の治療薬と組み合わせて投与され得る。眼障害を治療するための併用療法のための例示的な追加の治療薬には、抗血管新生剤、例えば、ＶＥＧＦアンタゴニスト（例えば、抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ  Ｆａｂ  ＬＵＣＥＮＴＩＳ（登録商標）（ラニビズマブ））、可溶性受容体融合タンパク質（例えば、組換え可溶性受容体融合タンパク質ＥＹＬＥＡ（登録商標）（アフリベルセプト、別名、ＶＥＧＦ  Ｔｒａｐ  Ｅｙｅ、Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ／Ａｖｅｎｔｉｓ））、アプタマー（例えば、抗ＶＥＧＦペグ化アプタマーＭＡＣＵＧＥＮ（登録商標）（ペガプタニブナトリウム、ＮｅＸｓｔａｒ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ／ＯＳＩ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ））、及びＶＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（例えば、４−（４−ブロモ−２−フルオロアニリノ）−６−メトキシ−７−（１−メチルピペリジン−４−イルメトキシ）キナゾリン（ＺＤ６４７４）、４−（４−フルオロ−２−メチルインドール−５−イルオキシ）−６−メトキシ−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）キナゾリン（ＡＺＤ２１７１）、バタラニブ（ＰＴＫ７８７）、セマキサミニブ（ＳＵ５４１６、ＳＵＧＥＮ）、及びＳＵＴＥＮＴ（登録商標）（スニチニブ））を含む）、トリプトファニル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＴｒｐＲＳ）、スクアラミン、ＲＥＴＡＡＮＥ（登録商標）（デポー懸濁液用のアネコルタブ酢酸、Ａｌｃｏｎ，Ｉｎｃ．）、コンブレタスタチンＡ４プロドラッグ（ＣＡ４Ｐ）、ＭＩＦＥＰＲＥＸ（登録商標）（ミフェプリストン−ｒｕ４８６）、テノン嚢下トリアムシノロンアセトニド、硝子体内結晶性トリアムシノロンアセトニド、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤（例えば、Ｐｒｉｎｏｍａｓｔａｔ（ＡＧ３３４０、Ｐｆｉｚｅｒ））、フルオシノロンアセトニド（例えば、フルオシノロン眼内インプラント、Ｂａｕｓｃｈ  ＆  Ｌｏｍｂ／Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、リノミド、インテグリンβ３機能阻害剤、アンギオスタチン、ならびにそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。本発明の抗体コンジュゲートと組み合わせて投与され得るこれら及び他の治療薬は、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許出願第ＵＳ２０１４／００１７２４４号に記載されている。
【０２９３】
眼障害（例えば、ＡＭＤ、ＤＭＥ、ＤＲ、またはＲＶＯ）を治療するために本発明の抗体（例えば、システイン操作抗ＶＥＧＦ抗体）または抗体コンジュゲート（例えば、単分散ＨＡコンジュゲート）と組み合わせて使用され得る追加の治療薬のさらなる例としては、ＶＩＳＵＤＹＮＥ（登録商標）（ベルテポルフィン、典型的には非熱的レーザーを用いた光線力学療法と併せて使用される光活性化薬物）、ＰＫＣ４１２、Ｅｎｄｏｖｉｏｎ（ＮＳ  ３７２８、ＮｅｕｒｏＳｅａｒｃｈ  Ａ／Ｓ）、神経栄養因子（例えば、グリア由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）及び毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ））、ジルチアゼム、ドルゾラミド、ＰＨＯＴＯＴＲＯＰ（登録商標）、９−シス−レチナール、目薬（例えば、ヨウ化ホスホリン、エコチオフェート、または炭酸脱水酵素阻害剤）、ベオバスタット（ｖｅｏｖａｓｔａｔ）（ＡＥ−９４１、ＡＥｔｅｒｎａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）、Ｓｉｒｎａ−０２７（ＡＧＦ−７４５、Ｓｉｍａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．）、ニューロトロフィン（例えば、ほんの一例として、ＮＴ−４／５、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、Ｃａｎｄ５（Ａｃｕｉｔｙ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＩＮＳ−３７２１７（Ｉｎｓｐｉｒｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、インテグリンアンタゴニスト（例えば、Ｊｅｒｉｎｉ  ＡＧ及びＡｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ製のもの）、ＥＧ−３３０６（Ａｒｋ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  Ｌｔｄ．）、ＢＤＭ−Ｅ（ＢｉｏＤｉｅｍ  Ｌｔｄ．）、サリドマイド（例えば、ＥｎｔｒｅＭｅｄ，Ｉｎｃ．によって使用されるもの）、カルジオトロフィン−１（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、２−メトキシエストラジオール（Ａｌｌｅｒｇａｎ／Ｏｃｕｌｅｘ）、ＤＬ−８２３４（Ｔｏｒａｙ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ）、ＮＴＣ−２００（Ｎｅｕｒｏｔｅｃｈ）、テトラチオモリブデート（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｍｉｃｈｉｇａｎ）、ＬＹＮ−００２（Ｌｙｎｋｅｕｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）、微細藻類化合物（Ａｑｕａｓｅａｒｃｈ／Ａｌｂａｎｙ、Ｍｅｒａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、Ｄ−９１２０（Ｃｅｌｌｔｅｃｈ  Ｇｒｏｕｐ  ｐｌｃ）、ＡＴＸ−Ｓ１０（Ｈａｍａｍａｔｓｕ  Ｐｈｏｔｏｎｉｃｓ）、ＴＧＦ−ベータ２（Ｇｅｎｚｙｍｅ／Ｃｅｌｔｒｉｘ）、チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、Ａｌｌｅｒｇａｎ、ＳＵＧＥＮ、またはＰｆｉｚｅｒ製のもの）、ＮＸ−２７８−Ｌ（ＮｅＸｓｔａｒ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ／Ｇｉｌｅａｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、Ｏｐｔ−２４（ＯＰＴＩＳ  Ｆｒａｎｃｅ  ＳＡ）、網膜細胞神経節神経保護剤（Ｃｏｇｅｎｔ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、Ｎ−ニトロピラゾール誘導体（Ｔｅｘａｓ  Ａ＆Ｍ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｓｙｓｔｅｍ）、ＫＰ−１０２（Ｋｒｅｎｉｔｓｋｙ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、シクロスポリンＡ（光線力学療法に使用される治療薬）（例えば、ＶＩＳＵＤＹＮＥ（登録商標）、受容体標的ＰＤＴ（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ，Ｃｏ．）、ＰＤＴでの注射用ポルフィマーナトリウム、ベルテポルフィン（ＱＬＴ  Ｉｎｃ．）、ＰＤＴでのロスタポルフィン（Ｍｉｒａｖｅｎｔ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏ��ｉｅｓ）、ＰＤＴでのタラポルフィンナトリウム（Ｎｉｐｐｏｎ  Ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ）、及びモテキサフィンルテチウム（Ｐｈａｒｍａｃｙｃｌｉｃｓ，Ｉｎｃ．））、アンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、一例として、Ｎｏｖａｇａｌｉ  Ｐｈａｒｍａ  ＳＡによって試験された製品及びＩＳＩＳ−１３６５０、Ｉｓｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ならびにそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２９４】
本発明の抗体（例えば、システイン操作抗ＶＥＧＦ抗体）または抗体コンジュゲート（例えば、単分散ＨＡコンジュゲート）は、例えば、レーザー光凝固術（例えば、汎網膜光凝固術（ＰＲＰ））、ドルーゼンレーザー処置、黄斑円孔手術、黄斑移動手術、埋め込み型小型望遠鏡、ＰＨＩ運動血管造影（別名、マイクロレーザー療法及びフィーダー血管治療）、陽子ビーム療法、微小刺激療法、網膜剥離及び硝子体手術、強膜バックル、黄斑下手術、経瞳孔温熱療法、光化学系Ｉ療法、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）の使用、体外レオフェレーシス（別名、膜分別濾過及びレオセラピー）、マイクロチップ埋め込み、幹細胞療法、遺伝子置換療法、リボザイム遺伝子療法（低酸素応答要素に対する遺伝子療法（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａ）、Ｌｅｎｔｉｐａｋ（Ｇｅｎｅｔｉｘ）、及びＰＤＥＦ遺伝子療法（ＧｅｎＶｅｃ）を含む）、光受容体／網膜細胞移植術（移植可能な網膜上皮細胞（Ｄｉａｃｒｉｎ，Ｉｎｃ．）、網膜細胞移植片（Ｃｅｌｌ  Ｇｅｎｅｓｙｓ，Ｉｎｃ．）を含む）、鍼療法、及びそれらの組み合わせを含む、眼障害（例えば、ＡＭＤ、ＤＭＥ、ＤＲ、またはＲＶＯ）の治療のための療法または外科的手技と組み合わせて投与され得る。
【０２９５】
いくつかの例では、本発明の抗体（例えば、システイン操作抗ＶＥＧＦ抗体）または抗体コンジュゲート（例えば、単分散ＨＡコンジュゲート）は、眼障害（例えば、ＡＭＤ、ＤＭＥ、ＤＲ、またはＲＶＯ）の治療のための抗血管新生剤と組み合わせて投与され得る。Ｃａｒｍｅｌｉｅｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  ４０７：２４９−２５７，２０００に列記されるものを含むが、これらに限定されない任意の好適な抗血管新生剤が、本発明の抗体（例えば、システイン操作抗ＶＥＧＦ抗体）または抗体コンジュゲートと組み合わせて使用され得る。いくつかの実施形態では、抗血管新生剤は、抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ  Ｆａｂ  ＬＵＣＥＮＴＩＳ（登録商標）（ラニビズマブ）、ＲＴＨ−２５８（以前のＥＳＢＡ−１００８、抗ＶＥＧＦ一本鎖抗体断片、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、または二重特異性抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ／抗アンジオポエチン２二重特異性抗体、例えば、ＲＧ−７７１６（Ｒｏｃｈｅ））、可溶性組換え受容体融合タンパク質（例えば、ＥＹＬＥＡ（登録商標）（アフリベルセプト））、ＶＥＧＦバリアント、可溶性ＶＥＧＦＲ断片、ＶＥＧＦを遮断することができるアプタマー（例えば、ペガプタニブ）またはＶＥＧＦＲ、中和抗ＶＥＧＦＲ抗体、ＶＥＧＦＲチロシンキナーゼ小分子阻害剤、抗ＶＥＧＦ  ＤＡＲＰｉｎ（登録商標）（例えば、アビシパルペゴル）、ＶＥＧＦまたはＶＥＧＦＲの発現を阻害する低分子干渉ＲＮＡ、ＶＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（例えば、４−（４−ブロモ−２−フルオロアニリノ）−６−メトキシ−７−（１−メチルピペリジン−４−イルメトキシ）キナゾリン（ＺＤ６４７４）、４−（４−フルオロ−２−メチルインドール−５−イルオキシ）−６−メトキシ−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）キナゾリン（ＡＺＤ２１７１）、バタラニブ（ＰＴＫ７８７）、セマキサミニブ（ＳＵ５４１６（ＳＵＧＥＮ））、及びＳＵＴＥＮＴ（登録商標）（スニチニブ））、ならびにそれらの組み合わせを含むが、これらに限定されないＶＥＧＦアンタゴニストである。いくつかの例では、二重特異性抗ＶＥＧＦ抗体は、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−６Ｒ、ＰＤＧＦ（例えば、ＰＤＧＦ−ＢＢ）、アンジオポエチン、アンジオポエチン２、Ｔｉｅ２、Ｓ１Ｐ、インテグリンαｖβ３、αｖβ５、及びα５β１、ベータセルリン、アペリン／ＡＰＪ、エリスロポエチン、補体Ｄ因子、ＴＮＦα、ＨｔｒＡ１、ＶＥＧＦ受容体（例えば、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＶＥＧＦＲ３、ｍｂＶＥＧＦＲ、またはｓＶＥＧＦＲ）、ＳＴ−２受容体、ならびに加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）リスクと遺伝的に関連するタンパク質、例えば、補体経路成分Ｃ２、Ｂ因子、Ｈ因子、ＣＦＨＲ３、Ｃ３ｂ、Ｃ５、Ｃ５ａ、及びＣ３ａ、ＨｔｒＡ１、ＡＲＭＳ２、ＴＩＭＰ３、ＨＬＡ、ＩＬ−８、ＣＸ３ＣＲ１、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＣＥＴＰ、ＬＩＰＣ、ＣＯＬ１０Ａ１、ならびにＴＮＦＲＳＦ１０Ａを含むが、これらに限定されない第２の生物学的分子に結合する。例えば、いくつかの例では、追加の化合物は、二重特異性抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ／抗Ａｎｇ２二重特異性抗体、例えば、ＲＧ−７７１６、またはＷＯ２０１０／０６９５３２もしくはＷＯ２０１６／��７３１５７に開示されるいずれかの二重特異性抗ＶＥＧＦ／抗Ａｎｇ２二重特異性抗体、またはそれらのバリアントである。
【０２９６】
眼障害（例えば、ＡＭＤ、ＤＭＥ、ＤＲ、またはＲＶＯ）の治療のために本発明の抗体（例えば、システイン操作抗ＶＥＧＦ抗体）または抗体コンジュゲート（例えば、単分散ＨＡコンジュゲート）と組み合わせて投与され得る他の好適な抗血管新生剤には、コルチコステロイド、アンギオスタチックステロイド、アネコルタブ酢酸、アンギオスタチン、エンドスタチン、チロシンキナーゼ阻害剤、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害剤、インスリン様成長因子結合タンパク質３（ＩＧＦＢＰ３）、ストロマ細胞由来因子（ＳＤＦ−１）アンタゴニスト（例えば、抗ＳＤＦ−１抗体）、色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）、ガンマ−セクレターゼ、デルタ様リガンド４、インテグリンアンタゴニスト、低酸素誘導因子（ＨＩＦ）−１αアンタゴニスト、タンパク質キナーゼＣＫ２アンタゴニスト、血管新生部位への幹細胞（例えば、内皮前駆細胞）ホーミングを阻害する薬剤（例えば、抗血管内皮カドヘリン（ＣＤ−１４４）抗体及び／または抗ＳＤＦ−１抗体）、ならびにそれらの組み合わせが含まれる。
【０２９７】
さらなる例では、いくつかの例では、本発明の抗体（例えば、システイン操作抗ＶＥＧＦ抗体）または抗体コンジュゲート（例えば、単分散ＨＡコンジュゲート）は、眼障害（例えば、ＡＭＤ、ＤＭＥ、ＤＲ、またはＲＶＯ）の治療のための血管新生に対する活性を有する薬剤、例えば、抗炎症薬、哺乳類ラパマイシン標的（ｍＴＯＲ）阻害剤（例えば、ラパマイシン、ＡＦＩＮＩＴＯＲ（登録商標）（エベロリムス）、及びＴＯＲＩＳＥＬ（登録商標）（テムシロリムス））、シクロスポリン、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）アンタゴニスト（例えば、抗ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片（例えば、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブペゴル、及びゴリムマブ）または可溶性受容体融合タンパク質（例えば、エタネルセプト））、抗補体剤、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、またはそれらの組み合わせと組み合わせて投与され得る。
【０２９８】
なおさらなる例では、いくつかの例では、本発明の抗体（例えば、システイン操作抗ＶＥＧＦ抗体）または抗体コンジュゲート（例えば、単分散ＨＡコンジュゲート）は、神経保護的であり、かつ乾燥ＡＭＤから滲出型ＡＭＤへの進行を軽減する可能性のある薬剤、例えば、デヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ）（商標名ＰＲＡＳＴＥＲＡ（商標）及びＦＩＤＥＬＩＮ（登録商標））、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、ならびに硫酸プレグネノロン等の薬物を含む「ニューロステロイド」と呼ばれる薬物のクラスと組み合わせて投与され得る。
【０２９９】
任意の好適なＡＭＤ治療薬は、眼障害（例えば、ＡＭＤ、ＤＭＥ、ＤＲ、またはＲＶＯ）の治療のために、ＶＥＧＦアンタゴニスト、例えば、抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、ＬＵＣＥＮＴＩＳ（登録商標）（ラニビズマブ）、ＲＴＨ−２５８（以前のＥＳＢＡ−１００８、抗ＶＥＧＦ一本鎖抗体断片、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、または二重特異性抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ／抗アンジオポエチン２二重特異性抗体、例えば、ＲＧ−７７１６、Ｒｏｃｈｅ）、可溶性ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、ＥＹＬＥＡ（登録商標）（アフリベルセプト））、抗ＶＥＧＦ  ＤＡＲＰｉｎ（登録商標）（例えば、アビシパルペゴル、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐａｒｔｎｅｒｓ  ＡＧ／Ａｌｌｅｒｇａｎ）、または抗ＶＥＧＦアプタマー（例えば、ＭＡＣＵＧＥＮ（登録商標）（ペガプタニブナトリウム））、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）アンタゴニスト、例えば、抗ＰＤＧＦ抗体、抗ＰＤＧＦＲ抗体（例えば、ＲＥＧＮ２１７６−３）、抗ＰＤＧＦ−ＢＢペグ化アプタマー（例えば、ＦＯＶＩＳＴＡ（登録商標）、Ｏｐｈｔｈｏｔｅｃｈ／Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、可溶性ＰＤＧＦＲ受容体融合タンパク質、または二重ＰＤＧＦ／ＶＥＧＦアンタゴニスト（例えば、小分子阻害剤（例えば、ＤＥ−１２０（Ｓａｎｔｅｎ）もしくはＸ−８２（ＴｙｒｏｇｅｎｅＸ））、または二重特異性抗ＰＤＧＦ／抗ＶＥＧＦ抗体））、光線力学療法と組み合わせたＶＩＳＵＤＹＮＥ（登録商標）（ベルテポルフィン）、抗酸化剤、補体系アンタゴニスト、例えば、補体因子Ｃ５アンタゴニスト（例えば、小分子阻害剤（例えば、ＡＲＣ−１９０５、Ｏｐｔｈｏｔｅｃｈ）または抗Ｃ５抗体（例えば、ＬＦＧ−３１６、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、プロパージンアンタゴニスト（例えば、抗プロパージン抗体、例えば、ＣＬＧ−５６１、Ａｌｃｏｎ）、または補体Ｄ因子アンタゴニスト（例えば、抗補体Ｄ因子抗体、例えば、ランパリズマブ、Ｒｏｃｈｅ））、視覚サイクル修正剤（例えば、エミクススタト塩酸塩）、スクアラミン（例えば、ＯＨＲ−１０２、Ｏｈｒ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）、ビタミン及びミネラル補助剤（例えば、加齢性眼疾患研究１（ＡＲＥＤＳ１、亜鉛及び／または抗酸化剤）及び加齢性眼疾患研究２（ＡＲＥＤＳ２、亜鉛、抗酸化剤、ルテイン、ゼアキサンチン、及び／またはオメガ−３脂肪酸）に記載のもの）、細胞に基づく療法、例えば、ＮＴ−５０１（Ｒｅｎｅｘｕｓ）、ＰＨ−０５２０６３８８（Ｐｆｉｚｅｒ）、ｈｕＣＮＳ−ＳＣ細胞移植（ＳｔｅｍＣｅｌｌｓ）、ＣＮＴＯ−２４７６（Ｊａｎｓｓｅｎ）、ＯｐＲｅｇｅｎ（Ｃｅｌｌ  Ｃｕｒｅ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、またはＭＡ０９−ｈＲＰＥ細胞移植（Ｏｃａｔａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、組織因子アンタゴニスト（例えば、ｈＩ−ｃｏｎ１、Ｉｃｏｎｉｃ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、アルファ−アドレナリン作動性受容体アゴニスト（例えば、酒石酸ブリモニジン）、ペプチドワクチン（例えば、Ｓ−６４６２４０、Ｓｈｉｏｎｏｇｉ）、アミロイドベータアンタゴニスト（例えば、抗ベータアミロイドモノクローナル抗体、例えば、ＧＳＫ−９３３７７６）、Ｓ１Ｐアンタゴニスト（例えば、抗Ｓ１Ｐ抗体、例えば、ｉＳＯＮＥＰ（商��）、Ｌｐａｔｈ  Ｉｎｃ）、ＲＯＢＯ４アンタゴニスト（例えば、抗ＲＯＢＯ４抗体、例えば、ＤＳ−７０８０ａ、Ｄａｉｉｃｈｉ  Ｓａｎｋｙｏ）、エンドスタチン及びアンギオスタチンを発現するレンチウイルスベクター（例えば、ＲｅｔｉｎｏＳｔａｔ）、ならびにそれらの任意の組み合わせを含むが、これらに限定されない追加の治療薬として、本発明の抗体（例えば、システイン操作抗ＶＥＧＦ抗体）または抗体コンジュゲート（例えば、単分散ＨＡコンジュゲート）と組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、ＡＭＤ治療薬（前述のＡＭＤ治療薬のいずれも含む）が共製剤化され得る。例えば、抗ＰＤＧＦＲ抗体ＲＥＧＮ２１７６−３は、アフリベルセプト（ＥＹＬＥＡ（登録商標））と共製剤化され得る。いくつかの例では、かかる共製剤は、本発明の抗体と組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、眼障害は、ＡＭＤ（例えば、滲出型ＡＭＤ）である。
【０３００】
本発明の抗体（例えば、システイン操作抗ＶＥＧＦ抗体）または抗体コンジュゲート（例えば、単分散ＨＡコンジュゲート）は、眼障害（例えば、ＡＭＤ、ＤＭＥ、ＤＲ、またはＲＶＯ）の治療のために、ＬＵＣＥＮＴＩＳ（登録商標）（ラニビズマブ）と組み合わせて投与され得る。ＬＵＣＥＮＴＩＳ（登録商標）（ラニビズマブ）は、例えば、硝子体内注射により０．３ｍｇ／眼または０．５ｍｇ／眼で、例えば、毎月投与され得る。いくつかの例では、眼障害は、ＡＭＤ（例えば、滲出型ＡＭＤ）である。
【０３０１】
本発明の抗体（例えば、システイン操作抗ＶＥＧＦ抗体）または抗体コンジュゲート（例えば、単分散ＨＡコンジュゲート）は、眼障害（例えば、ＡＭＤ、ＤＭＥ、ＤＲ、またはＲＶＯ）の治療のために、ＥＹＬＥＡ（登録商標）（アフリベルセプト）と組み合わせて投与され得る。ＥＹＬＥＡ（登録商標）（アフリベルセプト）は、例えば、硝子体内注射により２ｍｇ／眼で、例えば、４週間毎（Ｑ４Ｗ）に、または最初の３ヶ月間にわたってＱ４Ｗに、その後、維持のために注射により２ヶ月毎に投与され得る。いくつかの例では、眼障害は、ＡＭＤ（例えば、滲出型ＡＭＤ）である。
【０３０２】
本発明の抗体（例えば、システイン操作抗ＶＥＧＦ抗体）または抗体コンジュゲート（例えば、単分散ＨＡコンジュゲート）は、眼障害（例えば、ＡＭＤ、ＤＭＥ、ＤＲ、またはＲＶＯ）の治療のために、ＭＡＣＵＧＥＮ（登録商標）（ペガプタニブナトリウム）と組み合わせて投与され得る。ＭＡＣＵＧＥＮ（登録商標）（ペガプタニブナトリウム）は、例えば、０．３ｍｇ／眼で硝子体内注射により６週間毎に投与され得る。いくつかの例では、眼障害は、ＡＭＤ（例えば、滲出型ＡＭＤ）である。
【０３０３】
本発明の抗体（例えば、システイン操作抗ＶＥＧＦ抗体）または抗体コンジュゲート（例えば、単分散ＨＡコンジュゲート）は、眼障害（例えば、ＡＭＤ、ＤＭＥ、ＤＲ、またはＲＶＯ）の治療のために、光線力学療法と組み合わせたＶＩＳＵＤＹＮＥ（登録商標）（ベルテポルフィン）と組み合わせて投与され得る。ＶＩＳＵＤＹＮＥ（登録商標）は、例えば、静脈内注入により、任意の好適な用量（例えば、６ｍｇ／ｍ２（体表面積））で投与され、３ヶ月毎に送達され得る（例えば、１０分間にわたる注入）。いくつかの例では、眼障害は、ＡＭＤ（例えば、滲出型ＡＭＤ）である。
【０３０４】
本発明の抗体（例えば、システイン操作抗ＶＥＧＦ抗体）または抗体コンジュゲート（例えば、単分散ＨＡコンジュゲート）は、眼障害（例えば、ＡＭＤ、ＤＭＥ、ＤＲ、またはＲＶＯ）の治療のために、ＰＤＧＦアンタゴニストと組み合わせて投与され得る。本発明の抗体と組み合わせて使用され得る例示的なＰＤＧＦアンタゴニストには、抗ＰＤＧＦ抗体、抗ＰＤＧＦＲ抗体、小分子阻害剤（例えば、スクアラミン）、抗ＰＤＧＦ−Ｂペグ化アプタマー、例えば、ＦＯＶＩＳＴＡ（登録商標）（Ｅ１００３０、Ｏｐｈｔｈｏｔｅｃｈ／Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、または二重ＰＤＧＦ／ＶＥＧＦアンタゴニスト（例えば、小分子阻害剤（例えば、ＤＥ−１２０（Ｓａｎｔｅｎ）もしくはＸ−８２（ＴｙｒｏｇｅｎｅＸ））、または二重特異性抗ＰＤＧＦ／抗ＶＥＧＦ抗体）が含まれる。例えば、ＦＯＶＩＳＴＡ（登録商標）は、本発明の抗体の補助療法剤として投与され得る。ＦＯＶＩＳＴＡ（登録商標）は、任意の好適な用量で、例えば、０．１ｍｇ／眼〜２．５ｍｇ／眼、例えば、０．３ｍｇ／眼または１．５ｍｇ／眼で、例えば、硝子体内注射により、例えば、４週間毎（Ｑ４Ｗ）に投与され得る。ＯＨＲ−１０２（乳酸スクアラミン点眼液、０．２％）は、点眼薬により、例えば、１日２回投与され得る。ＯＨＲ−１０２は、ＬＵＣＥＮＴＩＳ（登録商標）またはＥＹＬＥＡ（登録商標）等のＶＥＧＦアンタゴニストと組み合わせて投与され得る。いくつかの実施形態では、本発明の抗体コンジュゲートは、ＯＨＲ−１０２、ＬＵＣＥＮＴＩＳ（登録商標）、及び／またはＥＹＬＥＡ（登録商標）と組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、眼障害は、ＡＭＤ（例えば、滲出型ＡＭＤ）である。
【０３０５】
本発明の抗体（例えば、システイン操作抗ＶＥＧＦ抗体）または抗体コンジュゲート（例えば、単分散ＨＡコンジュゲート）は、眼障害（例えば、ＡＭＤ、ＤＭＥ、ＤＲ、またはＲＶＯ）の治療のために、ＲＴＨ−２５８と組み合わせて投与され得る。ＲＴＨ−２５８は、例えば、硝子体内注射または眼注入により投与され得る。硝子体内注射の場合、ＲＴＨ−２５８は、任意の好適な用量（例えば、３ｍｇ／眼または６ｍｇ／眼）で、例えば、負荷量として最初の３ヶ月間にわたって４週間毎（Ｑ４Ｗ）に、その後、維持のために注射により１２週間毎（Ｑ１２Ｗ）または８週間毎（Ｑ８Ｗ）に投与され得る。いくつかの例では、眼障害は、ＡＭＤ（例えば、滲出型ＡＭＤ）である。
【０３０６】
本発明の抗体（例えば、システイン操作抗ＶＥＧＦ抗体）または抗体コンジュゲート（例えば、単分散ＨＡコンジュゲート）は、眼障害（例えば、ＡＭＤ、ＤＭＥ、ＤＲ、またはＲＶＯ）の治療のために、アビシパルペゴルと組み合わせて投与され得る。アビシパルペゴルは、例えば、硝子体内注射により投与され得る。アビシパルペゴルは、任意の好適な用量（例えば、１ｍｇ／眼、２ｍｇ／眼、３ｍｇ／眼、４ｍｇ／眼、または４．２ｍｇ／眼）で、例えば、負荷量として最初の３ヶ月間にわたって４週間毎（Ｑ４Ｗ）に、その後、維持のために注射により１２週間毎（Ｑ１２Ｗ）または８週間毎（Ｑ８Ｗ）に投与され得る。いくつかの例では、眼障害は、ＡＭＤ（例えば、滲出型ＡＭＤ）である。
【０３０７】
ＶＥＧＦアンタゴニスト（例えば、ＬＵＣＥＮＴＩＳ（登録商標）もしくはＥＹＬＥＡ（登録商標））、コルチコステロイド（例えば、コルチコステロイドインプラント（例えば、ＯＺＵＲＤＥＸ（登録商標）（デキサメタゾン硝子体内インプラント）もしくはＩＬＵＶＩＥＮ（登録商標）（フルオシノロンアセトニド硝子体内インプラント））、または硝子体内注射による投与のために製剤化されたコルチコステロイド（例えば、トリアムシノロンアセトニド））、またはそれらの組み合わせを含むが、これらに限定されない任意の好適なＤＭＥ及び／またはＤＲ治療薬が、眼障害（例えば、ＡＭＤ、ＤＭＥ、ＤＲ、またはＲＶＯ）の治療のために、本発明の抗体（例えば、システイン操作抗ＶＥＧＦ抗体）抗体コンジュゲート（例えば、単分散ＨＡコンジュゲート）と組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、眼障害は、ＤＭＥ及び／またはＤＲである。
【０３０８】
本発明の抗体（例えば、システイン操作抗ＶＥＧＦ抗体）または抗体コンジュゲート（例えば、単分散ＨＡコンジュゲート）は、ＤＭＥ及び／またはＤＲ（例えば、ＮＰＤＲまたはＰＤＲ）の治療のために、ＬＵＣＥＮＴＩＳ（登録商標）（ラニビズマブ）と組み合わせて投与され得る。ＬＵＣＥＮＴＩＳ（登録商標）（ラニビズマブ）は、例えば、硝子体内注射により０．３ｍｇ／眼または０．５ｍｇ／眼で、例えば、４週間毎（Ｑ４Ｗ）に投与され得る。
【０３０９】
本発明の抗体（例えば、システイン操作抗ＶＥＧＦ抗体）または抗体コンジュゲート（例えば、単分散ＨＡコンジュゲート）は、ＤＭＥ及び／またはＤＲ（例えば、ＮＰＤＲまたはＰＤＲ）の治療のために、ＥＹＬＥＡ（登録商標）（アフリベルセプト）と組み合わせて投与され得る。ＥＹＬＥＡ（登録商標）（アフリベルセプト）は、例えば、硝子体内注射により２ｍｇ／眼で、例えば、４週間毎（Ｑ４Ｗ）に、または最初の５ヶ月間にわたってＱ４Ｗに、その後、維持のために注射により８週間毎（Ｑ８Ｗ）に投与され得る。
【０３１０】
本発明の抗体（例えば、システイン操作抗ＶＥＧＦ抗体）または抗体コンジュゲート（例えば、単分散ＨＡコンジュゲート）は、ＤＭＥ及び／またはＤＲの治療のために、ＯＺＵＲＤＥＸ（登録商標）（デキサメタゾン硝子体内インプラント）と組み合わせて投与され得る。ＯＺＵＲＤＥＸ（登録商標）は、最長６ヶ月毎に投与され得る０．７ｍｇデキサメタゾン硝子体内インプラントとして投与され得る。
【０３１１】
本発明の抗体（例えば、システイン操作抗ＶＥＧＦ抗体）または抗体コンジュゲート（例えば、単分散ＨＡコンジュゲート）は、ＤＭＥ及び／またはＤＲの治療のために、ＩＬＵＶＩＥＮ（登録商標）（デキサメタゾン硝子体内インプラント）と組み合わせて投与され得る。ＯＺＵＲＤＥＸ（登録商標）は、０．２５μｇ／日の速度で溶出し得、かつ最長約３６ヶ月間持続し得る０．１９ｍｇフルオシノロンアセトニド硝子体内インプラントとして投与され得る。
【０３１２】
いくつかの場合、ＴＡＯ／ＰＲＮ治療レジメンまたはＴＡＥ治療レジメンが、ＡＭＤ治療薬（例えば、ラニビズマブまたはアフリベルセプト）を本発明の抗体（例えば、システイン操作抗ＶＥＧＦ抗体）または抗体コンジュゲート（例えば、単分散ＨＡコンジュゲート）と組み合わせて投与するために使用され得る。ＴＡＯ／ＰＲＮレジメンの場合、４週間毎（Ｑ４Ｗ）の（典型的には、約３ヶ月間にわたる）最初の硝子体内注射後、対象は、月１回または２ヶ月毎に（またはさらにより長い間隔で）監視され、注射は、疾患活動性の証拠（例えば、光コヒーレンストモグラフィー（ＯＣＴ）での視力低下または体液減少）が見られた際に投与される。ＴＡＥレジメンの場合、対象は、４週間毎（Ｑ４Ｗ）に治療され、その後、その後の各々の来診について、最長間隔（例えば、６週間毎、８週間毎、１０週間毎、または１２週間毎）まで固定週数（例えば、＋２週間）だけ治療間隔を長くしてもよい。疾患活動性の証拠が見られなくても、来診する度に眼（複数可）は観察され、治療され得る。黄斑が湿って見える（例えば、ＯＣＴにより）場合、注射間隔は、黄斑が再び乾燥して見えるようになるまで、短くされてもよい（例えば、−２週間）。いくつかの例では、眼障害は、ＡＭＤ（例えば、滲出型ＡＭＤ）である。
【０３１３】
上述のかかる併用療法は、併用投与（この場合、２つ以上の治療薬が同じまたは別個の製剤中に含まれている）、及び別個の投与（この場合、本発明の抗体または抗体コンジュゲートの投与が、追加の治療薬または薬剤の投与前に、投与と同時に、及び／または投与後に起こる）を包含する。一実施形態では、抗体または抗体コンジュゲートの投与及び追加の治療薬の投与は、各々の投与の約１、２、３、４、もしくは５ヶ月以内、または約１、２、もしくは３週間以内、または約１、２、３、４、５、もしくは６日以内に起こる。
【０３１４】
眼疾患または状態の予防または治療のための本発明の抗体（例えば、システイン操作抗ＶＥＧＦ抗体）または抗体コンジュゲート（例えば、単分散ＨＡコンジュゲート）（及び任意の追加の治療薬）は、点眼薬及び／または軟膏の形態で、例えば、眼、眼内、及び／または硝子体内注射、及び／または強膜近傍注射、及び／またはテノン嚢下注射、及び／または脈絡膜上注射、及び／または局所投与を含むが、これらに限定されない任意の好適な手段によって投与され得る。かかる抗体または抗体コンジュゲートは、様々な方法によって、例えば、Ｉｎｔｒａｏｃｕｌａｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，Ｊａｆｆｅ，Ｊａｆｆｅ，Ａｓｈｔｏｎ，ａｎｄ  Ｐｅａｒｓｏｎ，ｅｄｉｔｏｒｓ，Ｔａｙｌｏｒ  ＆  Ｆｒａｎｃｉｓ（Ｍａｒｃｈ  ２００６）等の参考文献に記載のものを含む、化合物の硝子体内への持続放出を可能にするデバイス及び／またはデポーとして硝子体内に送達され得る。一例では、デバイスは、長期間にわたって化合物を放出する小型ポンプ及び／またはマトリックス及び／または受動拡散系及び／またはカプセル化細胞の形態であり得る（Ｉｎｔｒａｏｃｕｌａｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，Ｊａｆｆｅ，Ｊａｆｆｅ，Ａｓｈｔｏｎ，ａｎｄ  Ｐｅａｒｓｏｎ，ｅｄｉｔｏｒｓ，Ｔａｙｌｏｒ  ＆  Ｆｒａｎｃｉｓ（Ｍａｒｃｈ  ２００６）。使用され得るさらなるアプローチが、以下のＧ節に記載される。
【０３１５】
眼、眼内、または硝子体内投与のための製剤は、当該技術分野で既知の方法によって、かつ当該技術分野で既知の賦形剤を使用して調製され得る。効率的な治療に重要な特徴は、眼への適切な浸透である。薬物が局所送達され得る眼の前部の疾患とは異なり、網膜疾患は、典型的には、より部位特異的なアプローチから恩恵を受け得る。点眼薬及び軟膏は眼の後部にはほとんど浸透せず、血液−眼関門が全身投与された薬物の眼組織への浸透を妨げる。したがって、ＡＭＤ及びＣＮＶ等の網膜疾患を治療するための薬物送達の選択方法は、典型的には、直接硝子体内注射である。硝子体内注射は、通常、患者の状態、ならびに送達される薬物の特性及び半減期に依存する間隔で繰り返される。使用され得るさらなるアプローチが、以下のＧ節に記載される。
【０３１６】
特定の眼障害または状態の治療に有効な抗体または抗体コンジュゲートの量は、障害または状態の性質に依存し、標準の臨床技法によって決定され得る。可能な場合、ヒトにおいて試験する前に、最初にインビトロで、その後、有用な動物モデル系において、用量反応曲線及び本発明の薬学的組成物を決定することが望ましい。
【０３１７】
追加の好適な投与手段には、非経口、肺内、及び鼻腔内が含まれ、局所治療が所望される場合、病巣内投与が含まれる。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与が含まれる。投薬は、投与が短期間であるか長期間であるかに部分的に応じて、任意の好適な経路、例えば、静脈内注射または皮下注射等の注射によるものであり得る。単回投与または様々な時点にわたる複数回投与、ボーラス投与、及びパルス注入を含むが、これらに限定されない様々な投薬スケジュールが、本明細書で企図される。いくつかの例では、本発明の抗体コンジュゲートは、静脈内、筋肉内、皮内、経皮（ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓｌｙ）、動脈内、腹腔内、病巣内、頭蓋内、関節内、前立腺内、胸膜内、気管内、髄腔内、鼻腔内、膣内、直腸内、局所、腫瘍内、腹腔内、腹膜、脳室内、皮下、結膜下、小胞内、粘膜、心膜内、臍内、眼窩内、経口、局所、経皮（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌｌｙ）、吸入により、注射により、埋め込みにより、注入により、持続注入により、局所灌流浴により標的細胞に直接、カテーテルにより、洗浄により、クリーム剤で、または液体組成物で投与され得る。
【０３１８】
疾患の予防または治療について、本発明の抗体（例えば、システイン操作抗ＶＥＧＦ抗体）または抗体コンジュゲート（例えば、単分散ＨＡコンジュゲート）の適切な投薬量（単独でまたは１つ以上の他の追加の治療薬と組み合わせて使用される場合）は、治療される疾患の種類、抗体の種類、疾患の重症度及び経過、抗体が予防目的または治療目的のために投与されるか、以前の療法、患者の病歴、及び抗体への応答、ならびに主治医の裁量に依存する。抗体（例えば、システイン操作抗ＶＥＧＦ抗体）または抗体コンジュゲート（例えば、単分散ＨＡコンジュゲート）は、一度に、または一連の治療にわたって患者に好適に投与される。疾患の種類及び重症度に応じて、例えば、１回以上の別個の投与であるか、持続注入によるかにかかわらず、約１μｇ／ｋｇ〜１５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇ）の抗体または抗体コンジュゲートが、患者への投与のための初期候補投薬量であり得る。いくつかの実施形態では、使用される抗体または抗体コンジュゲートは、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約４５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約３５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ、または約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇである。抗体コンジュゲートの場合、投薬は、コンジュゲートの抗体成分の重量に基づき得る。１つの典型的な１日投薬量は、上述の要因に応じて、約１μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ以上の範囲であり得る。数日間またはそれ以上にわたる繰り返し投与の場合、状態に応じて、治療は、一般に、所望の疾患症状抑制が生じるまで維持される。
【０３１９】
いくつかの実施形態では、方法は、追加の療法をさらに含み得る。追加の療法は、放射線療法、手術、化学療法、遺伝子療法、ＤＮＡ療法、ウイルス療法、ＲＮＡ療法、免疫療法、骨髄移植、ナノ療法、モノクローナル抗体療法、または前述の組み合わせであり得る。追加の療法は、アジュバント療法またはネオアジュバント療法の形態であり得る。いくつかの実施形態では、追加の療法は、小分子酵素阻害剤または抗転移剤の投与である。いくつかの実施形態では、追加の療法は、副作用制限剤（例えば、治療の副作用の発生を減少させ、及び／または重症度を低減するよう意図された薬剤、例えば、制嘔吐剤等）の投与である。いくつかの実施形態では、追加の療法は、放射線療法である。いくつかの実施形態では、追加の療法は、手術である。いくつかの実施形態では、追加の療法は、放射線療法と手術との組み合わせである。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ガンマ照射である。いくつかの実施形態では、追加の療法は、上述の治療薬のうちの１つ以上の別個の投与であり得る。
【０３２０】
上記の製剤または治療法のいずれも、抗ＶＥＧＦ抗体の代わりに、またはそれに加えて、本発明のイムノコンジュゲートを使用して実行され得ることが理解される。
【０３２１】
上記の製剤または治療法のいずれも、本発明の抗体コンジュゲート（例えば、本明細書、例えば、以下のＧ節に記載のいずれのもの）を使用して実行され得ることが理解される。
【０３２２】
Ｆ．製品
本発明の別の態様では、上述の障害の治療及び／または予防に有用な材料を含む製品が提供される。製品は、容器と、容器上のまたは容器に関連するラベルまたは添付文書とを含む。好適な容器には、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ溶液バッグ等が含まれる。容器は、ガラスまたはプラスチック等の様々な材料から形成され得る。容器は、単独で、または別の組成物と組み合わせで、状態の治療、予防、及び／または診断に有効な組成物を保持し、滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、静脈注射用溶液バッグまたは皮下注射針によって穿孔可能な栓を有するバイアルであり得る）。組成物中の少なくとも１つの活性薬剤は、本発明の抗体組成物（例えば、抗体（例えば、システイン操作抗ＶＥＧＦ抗体）またはその抗体コンジュゲート）である。ラベルまたは添付文書は、組成物が選択される状態を治療するために使用されることを示す。さらに、製品は、（ａ）組成物を内部に収容する第１の容器（この組成物は、本発明の抗体またはその抗体組成物を含む）と、任意に（ｂ）組成物を内部に収容する第２の容器（この組成物は、追加の治療薬を含む）とを含み得る。本発明のこの実施形態における製品は、組成物（複数可）が特定の状態を治療するために使用され得ることを示す添付文書をさらに含み得る。あるいは、または加えて、製品は、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー溶液、及びデキストロース溶液等の薬学的に許容される緩衝液を含む第２（または第３）の容器をさらに含み得る。製品は、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、及びシリンジを含む、商業的観点及び使用者の観点から望ましい他の材料をさらに含み得る。
【０３２３】
上記の製品のいずれも、本明細書に記載の抗体またはその抗体コンジュゲート及び／または任意の追加の治療薬のうちのいずれかを含み得ることが理解される。
【０３２４】
Ｇ．眼長時間作用型送達アプローチ
本発明は、抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ抗体（Ｇ６．３１  ＡＡＲＲ等の本明細書に記載のいずれの抗ＶＥＧＦ抗体も含む））の眼への長時間作用型送達のために使用され得る眼障害の治療のための組成物を提供する。例えば、本発明は、本明細書に記載の抗ＶＥＧＦ抗体を含む抗体コンジュゲート（例えば、単分散ＨＡコンジュゲート）（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ−Ｃ、またはシステイン操作抗体（例えば、ＴｈｉｏＦａｂ）コンジュゲート）を提供する。本発明は、本明細書に記載の抗体または抗体コンジュゲートの眼投与のために使用され得るデバイスも提供する。本発明は、本明細書に記載の抗体または抗体コンジュゲートを含む薬学的組成物をさらに提供する。これらの組成物は、本明細書に記載の治療法、例えば、眼障害（例えば、ＡＭＤ（例えば、滲出型ＡＭＤ）、ＤＭＥ、ＤＲ（例えば、ＮＰＤＲもしくはＰＤＲ）、またはＲＶＯ（例えば、ＣＲＶＯもしくはＢＲＶＯ））を治療する方法のいずれでも使用され得る。
【０３２５】
１．抗体コンジュゲート
本発明は、抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ抗体）及び抗体に共有結合した単分散ポリマーを含む抗体コンジュゲートを提供する。抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ抗体）は、不可逆的様式または可逆的様式で単分散ポリマーに共有結合していてもよい。本明細書に記載のものまたは当該技術分野で既知の他のものを含む任意の好適な単分散ポリマーが使用され得る。
【０３２６】
本発明は、抗体及び抗体に共有結合した単分散ポリマー（例えば、単分散ＨＡポリマー）を含む抗体コンジュゲートを提供する。ポリマーは、約１．１以下の多分散性指数（ＰＤＩ）を有し得る。ＰＤＩ値が、抗体コンジュゲートを調製するために使用されるポリマーのＰＤＩ値を指し得ることを理解されたい。例えば、いくつかの実施形態では、ポリマーは、１．０〜約１．１（例えば、１〜約１．１、１〜約１．０９、１〜約１．０８、１〜約１．０７、１〜約１．０６、１〜約１．０５、１〜約１．０４、１〜約１．０３、１〜約１．０２、１〜約１．０１、１〜約１．００５、約１．００１〜約１．１、約１．００１〜約１．１、約１．００１〜約１．０９、約１．００１〜約１．０８、約１．００１〜約１．０７、約１．００１〜約１．０６、約１．００１〜約１．０５、約１．００１〜約１．０４、約１．００１〜約１．０３、約１．００１〜約１．０２、約１．００１〜約１．０１、約１．００１〜約１．００５、約１．００１〜約１．００４、約１．００１〜約１．００３、約１．００１〜約１．００２、約１．０００１〜約１．１、約１．０００１〜約１．０９、約１．０００１〜約１．０８、約１．０００１〜約１．０７、約１．０００１〜約１．０６、約１．０００１〜約１．０５、約１．０００１〜約１．０４、約１．０００１〜約１．０３、約１．０００１〜約１．０２、約１．０００１〜約１．０１、約１．０００１〜約１．００５、約１．０００１〜約１．００４、約１．０００１〜約１．００３、約１．０００１〜約１．００２、または約１．０００１〜約１．００５）のＰＤＩを有する。
【０３２７】
例えば、いくつかの実施形態では、単分散ポリマー（例えば、単分散ＨＡポリマー）は、１．００１、約１．０００１、約１．００００１、約１．０００００１、約１．００００００１以下のＰＤＩを有する。いくつかの実施形態では、単分散ポリマー（例えば、単分散ＨＡポリマー）は、１．０、約１．００１、約１．００２、約１．００３、約１．００４、約１．００５、約１．００６、約１．００７、約１．００８、約１．００９、約１．０１、約１．０１１、約１．０１２、約１．０１３、約１．０１４、約１．０１５、約１．０１６、約１．０１７、約１．０１８、約１．０１９、約１．０２、約１．０２１、約１．０２２、約１．０２３、約１．０２４、約１．０２５、約１．０２６、約１．０２７、約１．０２８、約１．０２９、約１．０３、約１．０３１、約１．０３２、約１．０３３、約１．０３４、約１．０３５、約１．０３６、約１．０３７、約１．０３８、約１．０３９、約１．０４、約１．０４１、約１．０４２、約１．０４３、約１．０４４、約１．０４５、約１．０４６、約１．０４７、約１．０４８、約１．０４９、約１．０５、約１．０５１、約１．０５２、約１．０５３、約１．０５４、約１．０５５、約１．０５６、約１．０５７、約１．０５８、約１．０５９、約１．０６、約１．０６１、約１．０６２、約１．０６３、約１．０６４、約１．０６５、約１．０６６、約１．０６７、約１．０６８、約１．０６９、約１．０７、約１．０７１、約１．０７２、約１．０７３、約１．０７４、約１．０７５、約１．０７６、約１．０７７、約１．０７８、約１．０７９、約１．０８、約１．０８１、約１．０８２、約１．０８３、約１．０８４、約１．０８５、約１．０８６、約１．０８７、約１．０８８、約１．０８９、約１．０９、約１．０９１、約１．０９２、約１．０９３、約１．０９４、約１．０９５、約１．０９６、約１．０９７、約１．０９８、約１．０９９、または約１．１のＰＤＩを有する。いくつかの実施形態では、ポリマー（例えば、ＨＡポリマー）は、約１．００１のＰＤＩを有する。
【０３２８】
単分散ポリマーは、親水性ポリマーまたは疎水性ポリマーであり得る。親水性ポリマーは水溶性ポリマーであり得ることを理解されたい。任意の好適な親水性ポリマー、例えば、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、国際特許出願公開第ＷＯ２０１１／０６６４１７号及び／またはＰｅｌｅｇｒｉ−Ｏ’Ｄａｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１３６：１４３２３−１４３３２，２０１４に記載の親水性ポリマーが使用され得る。使用され得る例示的かつ非限定的な親水性ポリマーには、ヒアルロン酸（ＨＡ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ、別名、ポリ（エチレングリコール））（例えば、直鎖状ＰＥＧ、分岐状ＰＥＧ、櫛状ＰＥＧ、及び樹枝状ＰＥＧ）、ポリ［エチレンオキシド）−コ−（メチレンエチレンオキシド）］、ポリ（エチレングリコール）メチルエーテルメタクリレート）（ｐＰＥＧＭＡ）、アガロース、アルギン酸塩、カラギーナン、カルボキシメチルセルロース、セルロース、セルロース誘導体、キトサン、コンドロイチン硫酸、コラーゲン、デルマタン硫酸、デキストラン、硫酸デキストラン、フィブリン、フィブリノゲン、フィブロネクチン、フコイダン、ゼラチン、グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）、糖ポリマー、ヘパリン、ヘパリン硫酸、高度分岐多糖（例えば、ガラクトースデンドリマー）、ケラタン硫酸、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ポリ（Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド）（ｐＨＰＭＡ）、ペクチン、ペクチン誘導体、ペントサン多硫酸、デンプン、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、スチレン、ビトロネクチン、ポリ（アクリル酸）、ポリ（メタクリル酸）、ポリ（アクリルアミド）、ポリ（アクリル酸）、ポリ（アミン）、ポリ（アミノ酸）、ポリ（カルボキシベタイン）（ＰＣＢ）、高分子電解質、ポリ（グルタミン酸）（ＰＧＡ）、ポリ（グリセロール）（ＰＧ）（例えば、直鎖状、中程度官能性（ｍｉｄｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ）、超分岐状、または直鎖状超分岐状ＰＧ）、ポリ（マレイン酸）、ポリ（２−オキサゾリン）（ＰＯＺ）、ポリ（２−エチル−２−オキサゾリン、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、ポリスチレン、ポリスチレン誘導体（例えば、荷電ポリスチレン誘導体）、ポリ（スチレンスルホン酸−コ−ＰＥＧＭＡ）、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ポリ（Ｎ−アクリロイルモルホリン）（ｐＮＡｃＭ）、及びそれらのコポリマーが含まれる。いくつかの例では、ポリマーは、疎水性ポリマー、例えば、乳酸グリコール酸コポリマー（ＰＬＧＡ）、ポリラクチド（ＰＬＡ）、及びポリグリコリド（ＰＧＡ）である。ポリマーは、生分解性及び／または生体適合性であり得る。具体的な実施形態では、ポリマーは、ＨＡである。
【０３２９】
一例として、単分散ポリマー（例えば、ＨＡポリマー）は、任意の好適な数の単量体、例えば、２〜約１×１０４個の単量体（例えば、約１０、約５０、約１００、約２００、約３００、約４００、約５００、約６００、約７００、約８００、約９００、約１０００、約２０００、約３０００、約４０００、約５０００、約６０００、約７０００、約８０００、約９０００、または約１×１０４個の単量体）、またはそれ以上の単量体を含み得る。例えば、ポリマー（例えば、ＨＡポリマー）は、約５０〜約２５０個の単量体、約５０〜約５００個の単量体、約５０〜約１０００個の単量体、約５０〜約２０００個の単量体、約５０〜約３０００個の単量体、約５０〜約４０００個の単量体、約５０〜約５０００個の単量体、約５０〜約６０００個の単量体、約５０〜約７０００個の単量体、約５０〜約８０００個の単量体、約５０〜約９０００個の単量体、約５０〜約１００００個の単量体、約１００〜約２５０個の単量体、約１００〜約５００個の単量体、約１００〜約１０００個の単量体、約１００〜約２０００個の単量体、約１００〜約３０００個の単量体、約１００〜約４０００個の単量体、約１００〜約５０００個の単量体、約１００〜約６０００個の単量体、約１００〜約７０００個の単量体、約１００〜約８０００個の単量体、約１００〜約９０００個の単量体、約１００〜約１００００個の単量体、約２５０〜約５００個の単量体、約２５０〜約１０００個の単量体、約２５０〜約２０００個の単量体、約２５０〜約３０００個の単量体、約２５０〜約４０００個の単量体、約２５０〜約５０００個の単量体、約２５０〜約６０００個の単量体、約２５０〜約７０００個の単量体、約２５０〜約８０００個の単量体、約２５０〜約９０００個の単量体、約２５０〜約１００００個、約５００〜約１０００個の単量体、約５００〜約２０００個の単量体、約５００〜約３０００個の単量体、約５００〜約４０００個の単量体、約５００〜約５０００個の単量体、約５００〜約６０００個の単量体、約５００〜約７０００個の単量体、約５００〜約８０００個の単量体、約５００〜約９０００個の単量体、または約５００〜約１００００個の単量体の単量体を含み得る。いくつかの例では、ポリマー（例えば、ＨＡポリマー）は、約５００個の単量体を含み得る。
【０３３０】
本発明は、単分散ＨＡポリマーに共有結合した抗体（例えば、Ｇ６．３１  ＡＡＲＲ等の抗ＶＥＧＦ抗体）を含む抗体コンジュゲートを提供する。かかる抗体コンジュゲートは、本明細書で「単分散ＨＡコンジュゲート」と称されることもある。単分散ＨＡポリマーは、約１．１以下の多分散性指数（ＰＤＩ）を有し得る。例えば、いくつかの実施形態では、単分散ＨＡポリマーは、１．０〜約１．１（例えば、１〜約１．１、１〜約１．０９、１〜約１．０８、１〜約１．０７、１〜約１．０６、１〜約１．０５、１〜約１．０４、１〜約１．０３、１〜約１．０２、１〜約１．０１、１〜約１．００５、約１．００１〜約１．１、約１．００１〜約１．１、約１．００１〜約１．０９、約１．００１〜約１．０８、約１．００１〜約１．０７、約１．００１〜約１．０６、約１．００１〜約１．０５、約１．００１〜約１．０４、約１．００１〜約１．０３、約１．００１〜約１．０２、約１．００１〜約１．０１、約１．００１〜約１．００５、約１．００１〜約１．００４、約１．００１〜約１．００３、約１．００１〜約１．００２、約１．０００１〜約１．１、約１．０００１〜約１．０９、約１．０００１〜約１．０８、約１．０００１〜約１．０７、約１．０００１〜約１．０６、約１．０００１〜約１．０５、約１．０００１〜約１．０４、約１．０００１〜約１．０３、約１．０００１〜約１．０２、約１．０００１〜約１．０１、約１．０００１〜約１．００５、約１．０００１〜約１．００４、約１．０００１〜約１．００３、約１．０００１〜約１．００２、または約１．０００１〜約１．００５）のＰＤＩを有する。
【０３３１】
例えば、いくつかの実施形態では、単分散ＨＡポリマーは、１．００１、約１．０００１、約１．００００１、約１．０００００１、約１．００００００１以下のＰＤＩを有する。いくつかの実施形態では、単分散ＨＡポリマーは、１．０、約１．００１、約１．００２、約１．００３、約１．００４、約１．００５、約１．００６、約１．００７、約１．００８、約１．００９、約１．０１、約１．０１１、約１．０１２、約１．０１３、約１．０１４、約１．０１５、約１．０１６、約１．０１７、約１．０１８、約１．０１９、約１．０２、約１．０２１、約１．０２２、約１．０２３、約１．０２４、約１．０２５、約１．０２６、約１．０２７、約１．０２８、約１．０２９、約１．０３、約１．０３１、約１．０３２、約１．０３３、約１．０３４、約１．０３５、約１．０３６、約１．０３７、約１．０３８、約１．０３９、約１．０４、約１．０４１、約１．０４２、約１．０４３、約１．０４４、約１．０４５、約１．０４６、約１．０４７、約１．０４８、約１．０４９、約１．０５、約１．０５１、約１．０５２、約１．０５３、約１．０５４、約１．０５５、約１．０５６、約１．０５７、約１．０５８、約１．０５９、約１．０６、約１．０６１、約１．０６２、約１．０６３、約１．０６４、約１．０６５、約１．０６６、約１．０６７、約１．０６８、約１．０６９、約１．０７、約１．０７１、約１．０７２、約１．０７３、約１．０７４、約１．０７５、約１．０７６、約１．０７７、約１．０７８、約１．０７９、約１．０８、約１．０８１、約１．０８２、約１．０８３、約１．０８４、約１．０８５、約１．０８６、約１．０８７、約１．０８８、約１．０８９、約１．０９、約１．０９１、約１．０９２、約１．０９３、約１．０９４、約１．０９５、約１．０９６、約１．０９７、約１．０９８、約１．０９９、または約１．１のＰＤＩを有する。いくつかの実施形態では、単分散ＨＡポリマーは、約１．００１のＰＤＩを有する。
【０３３２】
いくつかの例では、単分散ＨＡポリマーは、約２．５メガダルトン（ＭＤａ）以下（例えば、約２．５ＭＤａ以下、約２．４ＭＤａ以下、約２．３ＭＤａ以下、約２．２ＭＤａ以下、約２．１ＭＤａ以下、約２．０ＭＤａ以下、約１．９ＭＤａ以下、約１．８ＭＤａ以下、約１．７ＭＤａ以下、約１．６ＭＤａ以下、約１．５ＭＤａ以下、約１．４ＭＤａ以下、約１．３ＭＤａ以下、約１．２ＭＤａ以下、約１．１ＭＤａ以下、約１．０ＭＤａ以下、約９００ｋＤａ以下、約８００ｋＤａ以下、約７００ｋＤａ以下、約６００ｋＤａ以下、約５００ｋＤａ以下、約４００ｋＤａ以下、約３００ｋＤａ以下、約２００ｋＤａ以下、または約１００ｋＤａ以下）の分子量を有する。いくつかの例では、ＨＡポリマーは、約１ＭＤａ以下（例えば、約１．０ＭＤａ以下、約９００ｋＤａ以下、約８００ｋＤａ以下、約７００ｋＤａ以下、約６００ｋＤａ以下、約５００ｋＤａ以下、約４００ｋＤａ以下、約３００ｋＤａ以下、約２００ｋＤａ以下、または約１００ｋＤａ以下）の分子量を有する。いくつかの例では、ＨＡポリマーは、約２５ｋＤａ〜約２．５ＭＤａ（例えば、約２５ｋＤａ〜約２．５ｍＤａ、約２５ｋＤａ〜約２ＭＤａ、約２５ｋＤａ〜約１．５ＭＤａ、約２５ｋＤａ〜約１ＭＤａ、約２５ｋＤａ〜約９００ｋＤａ、約２５ｋＤａ〜約８００ｋＤａ、約２５ｋＤａ〜約７００ｋＤａ、約２５ｋＤａ〜約６００ｋＤａ、約２５ｋＤａ〜約５００ｋＤａ、約１００ｋＤａ〜約２．５ｍＤａ、約１００ｋＤａ〜約２ＭＤａ、約１００ｋＤａ〜約１．５ＭＤａ、約１００ｋＤａ〜約１ＭＤａ、約１００ｋＤａ〜約９００ｋＤａ、約１００ｋＤａ〜約８００ｋＤａ、約１００ｋＤａ〜約７００ｋＤａ、約１００ｋＤａ〜約６００ｋＤａ、約１００ｋＤａ〜約５００ｋＤａ、約２５０ｋＤａ〜約２．５ＭＤａ、約２５０ｋＤａ〜約２ＭＤａ、約２５０ｋＤａ〜約１．５ＭＤａ、約２５０ｋＤａ〜約１ＭＤａ、約２５０ｋＤａ〜約９００ｋＤａ、約２５０ｋＤａ〜約８００ｋＤａ、約２５０ｋＤａ〜約７００ｋＤａ、約２５０ｋＤａ〜約６００ｋＤａ、約２５０ｋＤａ〜約５００ｋＤａ、約５００ｋＤａ〜約２．５ＭＤａ、約５００ｋＤａ〜約２ＭＤａ、約５００ｋＤａ〜約１．５ＭＤａ、約５００ｋＤａ〜約１ＭＤａ、約５００ｋＤａ〜約９００ｋＤａ、約５００ｋＤａ〜約８００ｋＤａ、約５００ｋＤａ〜約７００ｋＤａ、約５００ｋＤａ〜約６００ｋＤａ、約１ＭＤａ〜約２．５ＭＤａ、約１ＭＤａ〜約２ＭＤａ、約１ＭＤａ〜約１．５ＭＤａ、約１ＭＤａ〜約１．２５ＭＤａ、約１．２５ＭＤａ〜約２．５ＭＤａ、約１．２５ＭＤａ〜約２ＭＤａ、約１．２５ＭＤａ〜約１．５ＭＤａ、約１．５ＭＤａ〜約２．５ＭＤａ、約１．５ＭＤａ〜約２ＭＤａ、約１．５ＭＤａ〜約１．７５ＭＤａ、または１．７５ＭＤａ〜約２．５ＭＤａ）の分子量を有する。
【０３３３】
いくつかの例では、単分散ＨＡポリマーは、約２５ｋＤａ〜約５００ｋＤａ（例えば、約２５ｋＤａ〜約５００ｋＤａ、約２５ｋＤａ〜約４５０ｋＤａ、約２５ｋＤａ〜約４００ｋＤａ、約２５ｋＤａ〜約３５０ｋＤａ、約２５ｋＤａ〜約３００ｋＤａ、約２５ｋＤａ〜約３００ｋＤａ、約２５ｋＤａ〜約２５０ｋＤａ、約２５ｋＤａ〜約２００ｋＤａ、約２５ｋＤａ〜約１５０ｋＤａ、約２５ｋＤａ〜約１００ｋＤａ、約２５ｋＤａ〜約５０ｋＤａ、約４０ｋＤａ〜約５００ｋＤａ、約４０ｋＤａ〜約４５０ｋＤａ、約４０ｋＤａ〜約４００ｋＤａ、約４０ｋＤａ〜約３５０ｋＤａ、約４０ｋＤａ〜約３００ｋＤａ、約４０ｋＤａ〜約３００ｋＤａ、約４０ｋＤａ〜約２５０ｋＤａ、約４０ｋＤａ〜約２００ｋＤａ、約４０ｋＤａ〜約１５０ｋＤａ、約４０ｋＤａ〜約１００ｋＤａ、約４０ｋＤａ〜約５０ｋＤａ、約５０ｋＤａ〜約５００ｋＤａ、約５０ｋＤａ〜約４５０ｋＤａ、約５０ｋＤａ〜約４００ｋＤａ、約５０ｋＤａ〜約３５０ｋＤａ、約５０ｋＤａ〜約３００ｋＤａ、約５０ｋＤａ〜約３００ｋＤａ、約５０ｋＤａ〜約２５０ｋＤａ、約５０ｋＤａ〜約２００ｋＤａ、約５０ｋＤａ〜約１５０ｋＤａ、約５０ｋＤａ〜約１００ｋＤａ、約５０ｋＤａ〜約７５ｋＤａ、約１００ｋＤａ〜約５００ｋＤａ、約１００ｋＤａ〜約４５０ｋＤａ、約１００ｋＤａ〜約４００ｋＤａ、約１００ｋＤａ〜約３５０ｋＤａ、約１００ｋＤａ〜約３００ｋＤａ、約１００ｋＤａ〜約３００ｋＤａ、約１００ｋＤａ〜約２５０ｋＤａ、約１００ｋＤａ〜約２００ｋＤａ、約１００ｋＤａ〜約１５０ｋＤａ、約１５０ｋＤａ〜約５００ｋＤａ、約１５０ｋＤａ〜約４５０ｋＤａ、約１５０ｋＤａ〜約４００ｋＤａ、約１５０ｋＤａ〜約３５０ｋＤａ、約１５０ｋＤａ〜約３００ｋＤａ、約１５０ｋＤａ〜約３００ｋＤａ、約１５０ｋＤａ〜約２５０ｋＤａ、約１５０ｋＤａ〜約２００ｋＤａ、約１７５ｋＤａ〜約５００ｋＤａ、約１７５ｋＤａ〜約４５０ｋＤａ、約１７５ｋＤａ〜約４００ｋＤａ、約１７５ｋＤａ〜約３５０ｋＤａ、約１７５ｋＤａ〜約３００ｋＤａ、約１７５ｋＤａ〜約３００ｋＤａ、１７５  ２００ｋＤａ〜約２５０ｋＤａ、約１７５ｋＤａ〜約２２５ｋＤａ、約２００ｋＤａ〜約５００ｋＤａ、約２００ｋＤａ〜約４５０ｋＤａ、約２００ｋＤａ〜約４００ｋＤａ、約２００ｋＤａ〜約３５０ｋＤａ、約２００ｋＤａ〜約３００ｋＤａ、約２００ｋＤａ〜約３００ｋＤａ、約２００ｋＤａ〜約２５０ｋＤａ、または約２００ｋＤａ〜約２２５ｋＤａ）の分子量を有する。
【０３３４】
いくつかの例では、単分散ＨＡポリマーは、約１００ｋＤａ〜約２５０ｋＤａ（例えば、約１００ｋＤａ、約１１０ｋＤａ、約１２０ｋＤａ、約１３０ｋＤａ、約１４０ｋＤａ、約１５０ｋＤａ、約１６０ｋＤａ、約１７０ｋＤａ、約１８０ｋＤａ、約１９０ｋＤａ、約２００ｋＤａ、約２１０ｋＤａ、約２２０ｋＤａ、約２３０ｋＤａ、約２４０ｋＤａ、または約２５０ｋＤａ）の分子量を有する。具体的な例では、ＨＡポリマーは、約２００ｋＤａの分子量を有する。
【０３３５】
前述の分子量のいずれも、重量平均分子量（別名、重量平均モル質量）であり得る。
【０３３６】
いくつかの例では、前述の単分散ＨＡポリマーのいずれも、直鎖状である、すなわち、架橋していない。
【０３３７】
他の例では、本発明は、単分散ＰＥＧポリマーに共有結合した抗体（例えば、Ｇ６．３１  ＡＡＲＲ等の抗ＶＥＧＦ抗体）を含む抗体コンジュゲートを提供する。かかる抗体コンジュゲートは、本明細書で「ＰＥＧコンジュゲート」と称されることもある。任意の好適な単分散ＰＥＧポリマーが使用され得る。単分散ＰＥＧポリマーが、単分散ＨＡポリマーと比較して異なるＰＤＩ値を有し得ることを理解されたい。例えば、市販のＰＥＧポリマーは、１．１未満のＰＤＩを有し得、それ故に、単分散ＰＥＧポリマーは、単分散ＨＡポリマーと比較して異なる範囲のＰＤＩ値によって定義されるであろう。例えば、単分散ＰＥＧポリマーは、約１〜約１．０２のＰＤＩ（例えば、１、約１．００１、約１．００２、約１．００３、約１．００４、約１．００５、約１．００６、約１．００７、約１．００８、約１．００９、約１．０１、約１．０１１、約１．０１２、約１．０１３、約１．０１４、約１．０１５、約１．０１６、約１．０１７、約１．０１８、約１．０１９、または約１．０２のＰＤＩ）を有し得る。ＰＥＧは、分岐状ＰＥＧ、星状ＰＥＧ、または櫛状ＰＥＧであり得る。ＰＥＧポリマーは、例えば、ＰＥＧ四量体、ＰＥＧ六量体、またはＰＥＧ八量体であり得る。いくつかの例では、抗体コンジュゲートは、ＰＥＧデンドリマーに共有結合した抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、Ｇ６．３１  ＡＡＲＲ等の本明細書に記載の抗ＶＥＧＦ抗体）を含む。ＰＥＧポリマーは、例えば、ＪｅｎＫｅｍ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｑｕａｎｔａ  ＢｉｏＤｅｓｉｇｎ、ＮＯＦ  Ａｍｅｒｉｃａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、及び他の業者から市販されている。
【０３３８】
いくつかの例では、単分散ＰＥＧポリマーは、約１ｋＤａ〜約５００ｋＤａ（例えば、約１ｋＤａ〜約５００ｋＤａ、約１ｋＤａ〜約４５０ｋＤａ、約１ｋＤａ〜約４００ｋＤａ、約１ｋＤａ〜約３５０ｋＤａ、約１ｋＤａ〜約３００ｋＤａ、約１ｋＤａ〜約３００ｋＤａ、約１ｋＤａ〜約２５０ｋＤａ、約１ｋＤａ〜約２００ｋＤａ、約１ｋＤａ〜約１５０ｋＤａ、約１ｋＤａ〜約１００ｋＤａ、約１ｋＤａ〜約５０ｋＤａ、約１０ｋＤａ〜約５００ｋＤａ、約１０ｋＤａ〜約４５０ｋＤａ、約１０ｋＤａ〜約４００ｋＤａ、約１０ｋＤａ〜約３５０ｋＤａ、約１０ｋＤａ〜約３００ｋＤａ、約１０ｋＤａ〜約３００ｋＤａ、約１０ｋＤａ〜約２５０ｋＤａ、約１０ｋＤａ〜約２００ｋＤａ、約１０ｋＤａ〜約１５０ｋＤａ、約１０ｋＤａ〜約１００ｋＤａ、約１０ｋＤａ〜約５０ｋＤａ、約２０ｋＤａ〜約５００ｋＤａ、約２０ｋＤａ〜約４５０ｋＤａ、約２０ｋＤａ〜約４００ｋＤａ、約２０ｋＤａ〜約３５０ｋＤａ、約２０ｋＤａ〜約３００ｋＤａ、約２０ｋＤａ〜約３００ｋＤａ、約２０ｋＤａ〜約２５０ｋＤａ、約２０ｋＤａ〜約２００ｋＤａ、約２０ｋＤａ〜約１５０ｋＤａ、約２０ｋＤａ〜約１００ｋＤａ、約２０ｋＤａ〜約７５ｋＤａ、約３０ｋＤａ〜約５００ｋＤａ、約３０ｋＤａ〜約４５０ｋＤａ、約３０ｋＤａ〜約４００ｋＤａ、約３０ｋＤａ〜約３５０ｋＤａ、約３０ｋＤａ〜約３００ｋＤａ、約３０ｋＤａ〜約３００ｋＤａ、約３０ｋＤａ〜約２５０ｋＤａ、約３０ｋＤａ〜約２００ｋＤａ、約３０ｋＤａ〜約１５０ｋＤａ、約４０ｋＤａ〜約５００ｋＤａ、約４０ｋＤａ〜約４５０ｋＤａ、約４０ｋＤａ〜約４００ｋＤａ、約４０ｋＤａ〜約３５０ｋＤａ、約４０ｋＤａ〜約３００ｋＤａ、約４０ｋＤａ〜約３００ｋＤａ、約４０ｋＤａ〜約２５０ｋＤａ、約４０ｋＤａ〜約２００ｋＤａ、約５０ｋＤａ〜約５００ｋＤａ、約５０ｋＤａ〜約４５０ｋＤａ、約５０ｋＤａ〜約４００ｋＤａ、約５０ｋＤａ〜約３５０ｋＤａ、約５０ｋＤａ〜約３００ｋＤａ、約５０ｋＤａ〜約３００ｋＤａ、５０  ２００ｋＤａ〜約２５０ｋＤａ、または約５０ｋＤａ〜約２２５ｋＤａ）の分子量を有する。
【０３３９】
いくつかの例では、単分散ＰＥＧポリマーは、約５ｋＤａ〜約２５０ｋＤａ（例えば、約１ｋＤａ、約５ｋＤａ、約１０ｋＤａ、約１５ｋＤａ、約２０ｋＤａ、約２５ｋＤａ、約３０ｋＤａ、約３５ｋＤａ、約４０ｋＤａ、約５０ｋＤａ、約６０ｋＤａ、約７０ｋＤａ、約８０ｋＤａ、約９０ｋＤａ、１００ｋＤａ、約１１０ｋＤａ、約１２０ｋＤａ、約１３０ｋＤａ、約１４０ｋＤａ、約１５０ｋＤａ、約１６０ｋＤａ、約１７０ｋＤａ、約１８０ｋＤａ、約１９０ｋＤａ、約２００ｋＤａ、約２１０ｋＤａ、約２２０ｋＤａ、約２３０ｋＤａ、約２４０ｋＤａ、または約２５０ｋＤａ）の分子量を有する。具体的な例では、ＰＥＧポリマーは、約２０ｋＤａの分子量を有する。他の例では、ＰＥＧポリマーは、約４０ｋＤａの分子量を有する。
【０３４０】
前述の分子量のいずれも、重量平均分子量（別名、重量平均モル質量）であり得る。
【０３４１】
いくつかの例では、単分散ＰＥＧポリマーは、ＰＥＧ四量体である。ＰＥＧ四量体、例えば、ＮＯＦ  Ａｍｅｒｉｃａ  ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ（登録商標）ＰＴＥ−４００ＭＡ、ＰＴＥ−２００ＭＡ、ＰＴＥ−１００ＭＡ、及びＪｅｎＫｅｍ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ＵＳＡ  ４アームＰＥＧマレイミド（カタログ番号４ＡＲＭ−ＭＡＬ）が市販されている。いくつかの例では、ＰＥＧ四量体は、ペンタエリスリトールコアを有する。例えば、いくつかの例では、ＰＥＧ四量体は、式（Ｉ）（式中、ｎが、独立して、任意の好適な整数である）の構造を含む。
式Ｉ：
2020514376.tif 000007
【０３４２】
別の例では、いくつかの例では、単分散ＰＥＧポリマーは、ＰＥＧ六量体である。ＰＥＧ六量体、例えば、ＪｅｎＫｅｍ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ＵＳＡ  ６アームＰＥＧアミン（カタログ番号６ＡＲＭ（ＤＰ）−ＮＨ２ＨＣｌ）、またはＱｕａｎｔａ  ＢｉｏＤｅｓｉｇｎのＰＥＧ六量体が市販されている。いくつかの例では、ＰＥＧ六量体は、ジペンチルエリスリトールコアを含む。
【０３４３】
いくつかの例では、単分散ＰＥＧポリマーは、ＰＥＧ八量体である。ＰＥＧ八量体、例えば、ＮＯＦ  Ａｍｅｒｉｃａ  ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ（登録商標）ＨＧＥＯシリーズまたはＪｅｎＫｅｍ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ＵＳＡ  ８アームＰＥＧマレイミド（カタログ番号８ＡＲＭ（ＴＰ）−ＭＡＬ）が市販されている。いくつかの例では、ＰＥＧ八量体は、トリペンタエリスリトールコアを含み得る。例えば、いくつかの例では、ＰＥＧ八量体は、式（ＩＩ）（式中、ｎが、独立して、任意の好適な整数である）の構造を含む。
式ＩＩ：
2020514376.tif 000008
【０３４４】
さらに別の例では、いくつかの例では、ＰＥＧ八量体は、トリペンタエリスリトールコアを含む。
【０３４５】
本明細書に記載のもの及び当該技術分野で既知の他のものを含む任意の好適なコンジュゲーションアプローチが、本発明の抗ＶＥＧＦ抗体を単分散ポリマーにコンジュゲートするために使用され得ることを理解されたい。例えば、単分散ポリマーは、第一級アミン基、カルボキシル基、スルフヒドリル基、またはカルボニル基を含む任意の好適なタンパク質官能基にコンジュゲートされ得る。任意の好適な化学反応基を使用して、タンパク質官能基、例えば、カルボジイミド（例えば、ＥＤＣ）、ＮＨＳエステル、イミドエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、ヒドロキシメチルホスフィン、マレイミド、ハロアセチル（例えば、ブロモアセチルもしくはヨードアセチル）、ピリジルジスルフィド、チオ硫酸塩、ビニルスルホン、ヒドラジン、アルコキシアミン、ジアジリン、アリールアジド、イソシアン酸塩、または当該技術分野で既知の他のものを標的とすることができる。例えば、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，２０１３を参照されたい。具体的な実施形態では、ＨＡ（例えば、単分散ＨＡ）がマレイミド基で修飾され（ＨＡ−マレイミド）、次いで、例えば、実施例１に記載されるように、システイン上に遊離チオールを含む抗体（例えば、Ｆａｂ−Ｃまたはシステインバリアント（例えば、ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）またはＴｈｉｏＦａｂ））がＨＡ−マレイミドと反応して、共有結合的ＨＡ−Ｆａｂコンジュゲートを形成する。
【０３４６】
前述の抗体コンジュゲートのいずれも、約５ｎｍ〜約２００ｎｍ（例えば、約５ｎｍ、約１０ｎｍ、約２０ｎｍ、約３０ｎｍ、約４０ｎｍ、約５０ｎｍ、約６０ｎｍ、約７０ｎｍ、約８０ｎｍ、約９０ｎｍ、約１００ｎｍ、約１１０ｎｍ、約１２０ｎｍ、約１３０ｎｍ、約１４０ｎｍ、約１５０ｎｍ、約１６０ｎｍ、約１７０ｎｍ、約１８０ｎｍ、約１９０ｎｍ、または約２００ｎｍ）の流体力学的半径を有し得る。いくつかの例では、抗体コンジュゲートは、約５ｎｍ〜約１５０ｎｍ（例えば、約５ｎｍ、約１０ｎｍ、約２０ｎｍ、約３０ｎｍ、約４０ｎｍ、約５０ｎｍ、約６０ｎｍ、約７０ｎｍ、約８０ｎｍ、約９０ｎｍ、約１００ｎｍ、約１１０ｎｍ、約１２０ｎｍ、約１３０ｎｍ、約１４０ｎｍ、または約１５０ｎｍ）の流体力学的半径を有する。いくつかの例では、抗体コンジュゲートは、約５ｎｍ〜約１００ｎｍ（例えば、約５ｎｍ、約１０ｎｍ、約２０ｎｍ、約３０ｎｍ、約４０ｎｍ、約５０ｎｍ、約６０ｎｍ、約７０ｎｍ、約８０ｎｍ、約９０ｎｍ、または約１００ｎｍ）の流体力学的半径を有する。いくつかの例では、抗体コンジュゲートは、約５ｎｍ〜約６０ｎｍ（例えば、約５ｎｍ、約１０ｎｍ、約２０ｎｍ、約３０ｎｍ、約４０ｎｍ、約５０ｎｍ、または約６０ｎｍ）の流体力学的半径を有する。いくつかの例では、抗体コンジュゲートは、約２５ｎｍ〜約３５ｎｍ（例えば、約２５ｎｍ、約２６ｎｍ、約２７ｎｍ、約２８ｎｍ、約２９ｎｍ、約３０ｎｍ、約３１ｎｍ、約３２ｎｍ、約３３ｎｍ、約３４ｎｍ、または約３５ｎｍ）の流体力学的半径を有する。いくつかの例では、流体力学的半径は、約２８ｎｍである。
【０３４７】
いくつかの例では、抗体コンジュゲートは、約１０ｎｍ〜約２００ｎｍ、約１０ｎｍ〜約１８０ｎｍ、約１０ｎｍ〜約１６０ｎｍ、約１０ｎｍ〜約１４０ｎｍ、約１０ｎｍ〜約１２０ｎｍ、約１０ｎｍ〜約１００ｎｍ、約１０ｎｍ〜約８０ｎｍ、約１０ｎｍ〜約６０ｎｍ、約１０ｎｍ〜約５０ｎｍ、約１０ｎｍ〜約４０ｎｍ、約１０ｎｍ〜約３０ｎｍ、約２０ｎｍ〜約２００ｎｍ、約２０ｎｍ〜約１８０ｎｍ、約２０ｎｍ〜約１６０ｎｍ、約２０ｎｍ〜約１４０ｎｍ、約２０ｎｍ〜約１２０ｎｍ、約２０ｎｍ〜約１００ｎｍ、約２０ｎｍ〜約８０ｎｍ、約２０ｎｍ〜約６０ｎｍ、約２０ｎｍ〜約５０ｎｍ、約２０ｎｍ〜約４０ｎｍ、約２０ｎｍ〜約３０ｎｍ、約３０ｎｍ〜約２００ｎｍ、約３０ｎｍ〜約１８０ｎｍ、約３０ｎｍ〜約１６０ｎｍ、約３０ｎｍ〜約１４０ｎｍ、約３０ｎｍ〜約１２０ｎｍ、約３０ｎｍ〜約１００ｎｍ、約３０ｎｍ〜約８０ｎｍ、約３０ｎｍ〜約６０ｎｍ、約３０ｎｍ〜約５０ｎｍ、約３０ｎｍ〜約４０ｎｍ、約４０ｎｍ〜約２００ｎｍ、約４０ｎｍ〜約１８０ｎｍ、約４０ｎｍ〜約１６０ｎｍ、約４０ｎｍ〜約１４０ｎｍ、約４０ｎｍ〜約１２０ｎｍ、約４０ｎｍ〜約１００ｎｍ、約４０ｎｍ〜約８０ｎｍ、約４０ｎｍ〜約６０ｎｍ、約４０ｎｍ〜約５０ｎｍ、約５０ｎｍ〜約２００ｎｍ、約５０ｎｍ〜約１８０ｎｍ、約５０ｎｍ〜約１６０ｎｍ、約５０ｎｍ〜約１４０ｎｍ、約５０ｎｍ〜約１２０ｎｍ、約５０ｎｍ〜約１００ｎｍ、約５０ｎｍ〜約８０ｎｍ、約５０ｎｍ〜約６０ｎｍ、約６０ｎｍ〜約２００ｎｍ、約６０ｎｍ〜約１８０ｎｍ、約６０ｎｍ〜約１６０ｎｍ、約６０ｎｍ〜約１４０ｎｍ、約６０ｎｍ〜約１２０ｎｍ、約６０ｎｍ〜約１００ｎｍ、または約６０ｎｍ〜約８０ｎｍの流体力学的半径を有する。
【０３４８】
前述の抗体コンジュゲートのいずれかにおいても、抗体は、ＶＥＧＦに結合する抗体断片、例えば、ＶＥＧＦに結合する本明細書に記載の抗ＶＥＧＦ抗体の抗体断片であり得る。いくつかの例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、本明細書に記載のシステイン操作抗ＶＥＧＦ抗体である（例えば、上の第１節（８）（ｄ）を参照のこと）。いくつかの例では、抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ−Ｃ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及び（Ｆａｂ’）２断片からなる群から選択される。具体的な例では、抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、またはＦａｂ−Ｃである。いくつかの例では、抗体断片は、Ｆａｂ−Ｃである。
【０３４９】
前述の抗体コンジュゲートのいずれも、ポリマー（例えば、親水性ポリマー）に共有結合していない参照抗体と比較して増加した眼半減期を有し得る。いくつかの例では、眼半減期は、参照抗体と比較して少なくとも約２倍（例えば、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍、約１０倍、約１２倍、約１４倍、約１６倍、約１８倍、約２０倍、またはそれ以上）増加する。いくつかの例では、眼半減期は、参照抗体と比較して少なくとも約４倍増加する。いくつかの例では、眼半減期は、硝子体半減期である。いくつかの例では、参照抗体は、抗体コンジュゲートの抗体と同一である。他の場合には、参照抗体は、抗体コンジュゲートの抗体と同一ではない。
【０３５０】
前述の抗体コンジュゲートのいずれも、ポリマー（例えば、親水性ポリマー）に共有結合していない参照抗体と比較して減少した眼クリアランスを有し得る。いくつかの例では、クリアランスは、参照抗体と比較して少なくとも約２倍（例えば、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍、約１０倍、約１２倍、約１４倍、約１６倍、約１８倍、約２０倍、またはそれ以上）減少する。いくつかの例では、クリアランスは、参照抗体と比較して少なくとも約４倍減少する。いくつかの例では、クリアランスは、硝子体からのクリアランスである。いくつかの例では、参照抗体は、抗体コンジュゲートの抗体と同一である。他の場合には、参照抗体は、抗体コンジュゲートの抗体と同一ではない。
【０３５１】
いくつかの例では、前述の抗体コンジュゲート（例えば、ＨＡコンジュゲート）のうちのいずれかの２つの眼内投与（例えば、硝子体内注射による）間の期間は、少なくとも１ヶ月、例えば、少なくとも１ヶ月、少なくとも５週間、少なくとも６週間、少なくとも７週間、少なくとも８週間、少なくとも９週間、少なくとも１０週間、少なくとも１１週間、少なくとも１２週間、少なくとも１３週間、少なくとも１４週間、少なくとも１５週間、少なくとも１６週間、少なくとも２０週間、少なくとも２４週間、少なくとも２８週間、少なくとも３２週間、少なくとも３６週間、少なくとも４０週間、少なくとも４４週間、少なくとも４８週間、少なくとも５２週間、またはそれ以上である。いくつかの場合、２つの眼内投与間の最長期間は、４年未満、例えば、３年未満、２年未満、または１年未満である。抗体コンジュゲートは、例えば、２〜１２ヶ月毎、例えば、４〜１０ヶ月毎に投与され得る。いくつかの例では、抗体コンジュゲートは、６ヶ月毎に投与される。
【０３５２】
本発明は、上述の抗体コンジュゲートのうちのいずれかを含む組成物（例えば、薬学的組成物）も提供する。ある特定の実施形態では、組成物は、１つ以上の追加の化合物を含む。ある特定の実施形態では、追加の化合物は、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−６Ｒ、ＰＤＧＦ、アンジオポエチン、アンジオポエチン２、Ｔｉｅ２、Ｓ１Ｐ、インテグリンαｖβ３、αｖβ５、及びα５β１、ベータセルリン、アペリン／ＡＰＪ、エリスロポエチン、補体Ｄ因子、ＴＮＦα、ＨｔｒＡ１、ＶＥＧＦ受容体、ＳＴ−２受容体、ならびに加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）リスクと遺伝的に関連するタンパク質、例えば、補体経路成分Ｃ２、Ｂ因子、Ｈ因子、ＣＦＨＲ３、Ｃ３ｂ、Ｃ５、Ｃ５ａ、及びＣ３ａ、ＨｔｒＡ１、ＡＲＭＳ２、ＴＩＭＰ３、ＨＬＡ、インターロイキン−８（ＩＬ−８）、ＣＸ３ＣＲ１、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＣＥＴＰ、ＬＩＰＣ、ＣＯＬ１０Ａ１、ならびにＴＮＦＲＳＦ１０Ａからなる群から選択される第２の生物学的分子に結合する。ある特定の実施形態では、追加の化合物は、抗体またはその抗原結合断片である。例えば、いくつかの例では、追加の化合物は、二重特異性抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ／抗Ａｎｇ２二重特異性抗体、例えば、ＲＧ−７７１６、またはＷＯ２０１０／０６９５３２もしくはＷＯ２０１６／０７３１５７に開示されるいずれかの二重特異性抗ＶＥＧＦ／抗Ａｎｇ２二重特異性抗体、またはそれらのバリアントである。別の例では、いくつかの例では、追加の化合物は、抗ＩＬ−６抗体、例えば、ＥＢＩ−０３１（Ｅｌｅｖｅｎ  Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、例えば、ＷＯ２０１６／０７３８９０を参照のこと）、シルツキシマブ（ＳＹＬＶＡＮＴ（登録商標））、オロキズマブ、クラザキズマブ、シルクマブ、エルシリモマブ、ゲリリムズマブ、ＯＰＲ−００３、ＭＥＤＩ−５１１７、ＰＦ−０４２３６９２１、またはそれらのバリアントである。なおさらなる例では、いくつかの例では、追加の化合物は、抗ＩＬ−６Ｒ抗体、例えば、トシリズマブ（ＡＣＴＥＭＲＡ（登録商標））（例えば、ＷＯ１９９２／０１９５７９を参照のこと）、サリルマブ、ボバリリズマブ（ＡＬＸ−００６１）、ＳＡ−２３７、またはそれらのバリアントである。
【０３５３】
本発明は、上述の抗体コンジュゲートのうちのいずれか及び追加のＶＥＧＦアンタゴニストを含む組成物（例えば、薬学的組成物）をさらに提供する。
【０３５４】
２．デバイス
本明細書に記載の抗体（例えば、システイン操作抗ＶＥＧＦ抗体）または抗体コンジュゲート（例えば、単分散ＨＡコンジュゲート）のいずれも、ポート送達デバイスを使用して眼に投与され得る。ポート送達デバイスは、数ヶ月間（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２ヶ月間、またはそれ以上）にわたって治療薬（例えば、抗ＶＥＧＦ抗体コンジュゲート）を放出することができる埋め込み型の再充填可能なデバイスである。使用され得る例示的なポート送達デバイスには、例えば、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、国際特許出願公開第ＷＯ２０１０／０８８５４８号、同第ＷＯ２０１５／０８５２３４号、同第ＷＯ２０１３／１１６０６１号、同第ＷＯ２０１２／０１９１７６号、同第ＷＯ２０１３／０４０２４７号、及び同第ＷＯ２０１２／０１９０４７号に記載される、ＦｏｒＳｉｇｈｔ  Ｌａｂｓ、ＬＬＣ、及び／またはＦｏｒＳｉｇｈｔ  ＶＩＳＩＯＮ４のデバイスが含まれる。
【０３５５】
例えば、本発明は、本明細書に記載の抗体または抗体コンジュゲートのうちのいずれかを収容するリザーバを含むポート送達デバイスを提供する。ポート送達デバイスは、近位領域、リザーバと流体連通している近位領域に連結された管状本体、及びリザーバと流体連通しており、かつ組成物を眼内に放出するように構成された１つ以上の出口をさらに含み得る。管状本体は、約０．５ｍｍ以下の眼内の切開または開口部を通じて挿入されるように構成された外径を有し得る。デバイスは、約１ｍｍ〜約１５ｍｍ長（例えば、約１ｍｍ、約２ｍｍ、約４ｍｍ、約５ｍｍ、約６ｍｍ、約７ｍｍ、約９ｍｍ、約１１ｍｍ、約１３ｍｍ、または約１５ｍｍ長）であり得る。リザーバは、任意の好適な体積を有し得る。いくつかの例では、リザーバは、約１μＬ〜約１００μＬ（例えば、約１μＬ、約５μＬ、約１０μＬ、約２０μＬ、約５０μＬ、約７５μＬ、または約１００μＬ）の体積を有する。デバイスまたはその構成部品は、任意の好適な材料、例えば、ポリイミドで作製され得る。
【０３５６】
いくつかの例では、ポート送達デバイスは、本明細書に記載の抗体または抗体コンジュゲートのうちのいずれか及び１つ以上の追加の化合物を収容するリザーバを含む。ある特定の実施形態では、追加の化合物は、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−６Ｒ、ＰＤＧＦ、アンジオポエチン、アンジオポエチン２、Ｔｉｅ２、Ｓ１Ｐ、インテグリンαｖβ３、αｖβ５、及びα５β１、ベータセルリン、アペリン／ＡＰＪ、エリスロポエチン、補体Ｄ因子、ＴＮＦα、ＨｔｒＡ１、ＶＥＧＦ受容体、ＳＴ−２受容体、ならびにＡＭＤリスクと遺伝的に関連するタンパク質、例えば、補体経路成分Ｃ２、Ｂ因子、Ｈ因子、ＣＦＨＲ３、Ｃ３ｂ、Ｃ５、Ｃ５ａ、及びＣ３ａ、ＨｔｒＡ１、ＡＲＭＳ２、ＴＩＭＰ３、ＨＬＡ、ＩＬ−８、ＣＸ３ＣＲ１、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＣＥＴＰ、ＬＩＰＣ、ＣＯＬ１０Ａ１、ならびにＴＮＦＲＳＦ１０Ａからなる群から選択される第２の生物学的分子に結合する。ある特定の実施形態では、追加の化合物は、抗体またはその抗原結合断片である。例えば、いくつかの例では、追加の化合物は、二重特異性抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ／抗Ａｎｇ２二重特異性抗体、例えば、ＲＧ−７７１６、またはＷＯ２０１０／０６９５３２もしくはＷＯ２０１６／０７３１５７に開示されるいずれかの二重特異性抗ＶＥＧＦ／抗Ａｎｇ２二重特異性抗体、またはそれらのバリアントである。別の例では、いくつかの例では、追加の化合物は、抗ＩＬ−６抗体、例えば、ＥＢＩ−０３１（Ｅｌｅｖｅｎ  Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、例えば、ＷＯ２０１６／０７３８９０を参照のこと）、シルツキシマブ（ＳＹＬＶＡＮＴ（登録商標））、オロキズマブ、クラザキズマブ、シルクマブ、エルシリモマブ、ゲリリムズマブ、ＯＰＲ−００３、ＭＥＤＩ−５１１７、ＰＦ−０４２３６９２１、またはそれらのバリアントである。なおさらなる例では、いくつかの例では、追加の化合物は、抗ＩＬ−６Ｒ抗体、例えば、トシリズマブ（ＡＣＴＥＭＲＡ（登録商標））（例えば、ＷＯ１９９２／０１９５７９を参照のこと）、サリルマブ、ボバリリズマブ（ＡＬＸ−００６１）、ＳＡ−２３７、またはそれらのバリアントである。
【０３５７】
いくつかの例では、ポート送達デバイスは、本明細書に記載の抗体または抗体コンジュゲートのうちのいずれか及び追加のＶＥＧＦアンタゴニストを含む。
【実施例】
【０３５８】
以下は、本発明の方法及び組成物の実施例である。上で提供される概要を考慮して、様々な他の実施形態が実施され得ることが理解される。
【０３５９】
実施例１：改善された安定性のために単分散ＨＡから調製された直鎖状ヒアルロン酸（ＨＡ）抗体コンジュゲート
Ｆａｂのバイオポリマーヒアルロン酸（ＨＡ）へのコンジュゲーションは、例えば、Ｆａｂの拡散を遅らせ、それにより、硝子体液からのクリアランスを遅らせることによって、眼内でのＦａｂの保持時間を著しく改善することができる。ＨＡ−Ｆａｂコンジュゲート産生のために、最初に、市販のＨＡをマレイミド基で修飾し（ＨＡ−マレイミド）、次いで、Ｆａｂ−Ｃ（システイン上に遊離チオールを有するＦａｂ）をＨＡ−マレイミドと反応させて、共有結合的ＨＡ−Ｆａｂコンジュゲートを形成する二段階プロセスが用いられている。
【０３６０】
典型的な手段で産生された場合、ＨＡ−タンパク質コンジュゲートは、２つの直交変動成分を有する。第１の変動源は、多分散性であり、ＨＡ骨格の多分散性によって寄与される（図１Ａ）。第２の源は、不均一性であり、所与のＨＡ鎖に結合したＦａｂ分子の数の差によって寄与される。この第２の変動源は、ＨＡコンジュゲーションプロセスの第１のステップにおけるＨＡ鎖のマレイミド修飾の確率的性質によって決定付けられる。図１Ｂは、２００ｋＤａのＨＡ鎖の各酸基にマレイミド含有リンカーと反応する５％の機会を与え、１０００個の独立したＨＡ鎖で繰り返したモンテカルロシミュレーションの結果を示す。結果は、シミュレーションにわたる１つのＨＡ鎖当たりのマレイミドの平均数が２４．７の期待値であったが、絶対範囲は１１〜４２であったことを示唆する。
【０３６１】
抗体コンジュゲート（例えば、直鎖状ＨＡ及び抗ＶＥＧＦ抗体Ｇ６．３１  ＡＡＲＲを含む抗体コンジュゲート、本明細書でＨＡ−Ｇ６．３１．ＡＡＲＲ抗体コンジュゲートと称される）の物理的及びコロイド安定性を水相中及び硝子体液中で維持することが望ましくあり得る。上述のシミュレーションに部分的に基づいて、ＨＡ骨格分子量及びＦａｂ負荷レベルが物理的安定性に重要なパラメータであり得ると考えられる。Ｆａｂ負荷レベルは、各ＨＡ鎖に結合した抗体（例えば、Ｇ６．３１．ＡＡＲＲ）分子の平均数を指し、Ｆａｂ部分で共有結合的に修飾されているＨＡ骨格上の酸基のパーセントで表される（各ＨＡ繰り返し単位は、グルクロン酸糖上に１つの修飾可能な酸基を含む）。他のパラメータがコンジュゲート安定性（例えば、正味荷電、表面電荷分布、疎水性を含むＦａｂの特定の特性）に寄与し得る一方で、それらは、一般に、この特定の分子内で制御不能である。
【０３６２】
ＨＡ−Ｇ６．３１．ＡＡＲＲ物理的安定性について、ＨＡ  ＭＷ及びＦａｂ負荷レベルの影響を評価するために、コンジュゲートを、３つの異なるＨＡ出発ＭＷ（およそ４０ｋＤａ、２００ｋＤａ、及び６００ｋＤａ）、ならびに様々なＦａｂ負荷レベルで調製し、生理学的条件下に置き、物理的安定性について数ヶ月間にわたって監視して、生物学的曝露を模倣した。
【０３６３】
（Ａ）材料及び方法
（ｉ）材料
３つの異なる分子量のヒアルロン酸ナトリウム（ＨＡ、Ｌｉｆｅｃｏｒｅ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ，Ｃｈａｓｋａ，ＭＮ）をこの研究に使用した。屈折率及び多角度光散乱検出器（ＳＥＣ−ＲＩ−ＭＡＬＳ）を連結したサイズ排除クロマトグラフィーによって評価されたそれらの特性を表４に要約する。Ｍｎは、数平均分子量を指し、Ｍｗは、重量平均分子量を指し、ＰＤＩは、多分散性指数を指し、ＲＨは、流体力学的半径を指す。表５は、ＳＥＣ−ＲＩ−ＭＡＬＳによって決定された単分散試料と比較した様々な多分散ＨＡ試料のＭｎ、Ｍｗ、及びＰＤＩのデータを示す。表４及び表５のデータは、異なる多分散性を有したＨＡ−２００Ｋの２つの異なるロットのものである。
表４：この研究に使用したＨＡの特性
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表５：単分散試料と比較した多分散ＨＡ試料の特性
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【０３６４】
（ｉｉ）マレイミド官能化ＨＡ（ＨＡ−ｍａｌ）の合成
カップリング試薬である４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−塩化メチルモルホリニウム（ＤＭＴＭＭ）及びリンカーであるＮ−（２−アミノエチル）マレイミドトリフルオロ酢酸塩（ＡＥＭ）との水性反応を使用して、ＨＡをマレイミド基で修飾した。ＨＡを２．５ｍｇ／ｍＬで１００ｍＭの２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）（ｐＨ５．５）中に溶解させ、この溶液にＤＭＴＭＭ及びＡＥＭを撹拌下で添加した。添加したＤＭＴＭＭ及びＡＥＭの量は変動し、２〜１０％の範囲の異なるレベルのマレイミド官能化を標的とするために選択した。反応物を２時間にわたって７０℃に加熱した。
【０３６５】
過剰なＡＥＭ及びＤＭＴＭＭを脱塩手技により反応物から除去した。ＨＩＰＲＥＰ（商標）２６／１０脱塩カラムをＡＫＴＡ（商標）精製システム（ＧＥ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）に取り付け、１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ４．０）１５０ｍＭ  ＮａＣｌで平衡化した。反応物を未希釈でカラムに注入し、ＨＡ−ｍａｌピークを３０２ｎｍでの吸光度に従って収集し、遠心限外濾過デバイスを使用５ｍｇ／ｍＬ超に濃縮した。ＨＡ−ｍａｌ原液中のマレイミドの濃度を、紫外線可視分光光度計を使用して３０２ｎｍでの吸光度によって測定し、１本のＨＡ鎖当たりのマレイミド基のモル比を、多角度光散乱検出器を備えたサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ−ＭＡＬＳ）で評価した。
【０３６６】
（ｉｉｉ）Ｆａｂ−ＣのＨＡ−ｍａｌへのコンジュゲーション
１Ｍリン酸（ｐＨ６．５）を使用してＦａｂ−Ｃ溶液のｐＨを６．５に調整して、最終リン酸濃度を５０ｍＭにし、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を添加して、２．５ｍＭの最終濃度にした。Ｆａｂ−Ｃ溶液を撹拌し、これに、１０ｍＭリン酸（ｐＨ６．５）、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、及び２．５ｍＭ  ＥＤＴＡで構成された反応緩衝液中で希釈したＨＡ−ｍａｌを添加した。化学量論を、最終反応物中のマレイミド１モル当たりＦａｂ−Ｃ  １．２モルに設定し、体積を、１ｍｇ／ｍＬの最終タンパク質濃度をもたらすように設定した。コンジュゲーション反応を、撹拌下で、室温で行った。３時間時点で、メルカプトエタノールをマレイミド１モル当たり２モルで添加して、未反応マレイミド基をキャップした。３０分間後、反応物を１０ｍＭリン酸（ｐＨ６．５）で５０ｍＭ未満のＮａＣｌに希釈した。
【０３６７】
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を使用して精製を実行して、コンジュゲートから遊離Ｆａｂ−Ｃ及びＦａｂ二量体を分離した。ＨＩＬＯＡＤ（登録商標）２６／６００  ＳＵＰＥＲＤＥＸ（登録商標）２００ｐｇカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を１０ｍＭ  ＨｉｓＨＣｌ（ｐＨ５．５）１５０ｍＭ  ＮａＣｌで平衡化し、反応物を未希釈で注入した。コンジュゲート、Ｆａｂ二量体、及びＦａｂ単量体に関連するピークが別々に溶出し、コンジュゲートピークを収集した。
【０３６８】
（ｉｖ）ＳＥＣ−ＲＩ−ＭＡＬＳによるＨＡ−Ｆａｂコンジュゲートの分析
残留遊離Ｆａｂ含有量、全コンジュゲートモル質量、及びタンパク質質量分率を、Ｗｙａｔｔ  ＯＰＴＩＬＡＢ（登録商標）Ｔ−ｒＥＸ（商標）屈折率（ＲＩ）検出器及びＷｙａｔｔ  ＨＥＬＥＯＳ（商標）−ＩＩ多角度光散乱（ＭＡＬＳ）検出器を連結したＡｇｉｌｅｎｔ  １２００  ＨＰＬＣ上でのＳＥＣ−ＲＩ−ＭＡＬＳ−ＱＥＬＳ（サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、屈折率（ＲＩ）多角度光散乱（ＭＡＬＳ）、及び準弾性光散乱（ＱＥＬＳ）の組み合わせ）によって評価した。ＳＥＣのために、２つのカラム：ＡＣＣＬＡＩＭ（商標）７．８×１５０ｍｍ（細孔径１０００Å）、その後、ＡＣＣＬＡＩＭ（商標）７．８×１５０ｍｍ（細孔径３００Å）を直列にランさせ、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（ｐＨ７．４）をランニング緩衝液として用いた。ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）対照を使用して、ＭＡＬＳ検出器を正規化し、検出器の帯域広がりを補正した。遊離Ｆａｂ含有量を、Ｆａｂ及びＨＡ−Ｆａｂコンジュゲートに対応するＵＶ  Ａ２８０ピークを統合することによって測定した。コンジュゲートモル質量を、コンジュゲートピークの重量平均分子量（Ｍｗ）と見なした。タンパク質質量分率を、示差屈折率（ｄＲＩ）及びＵＶ  Ａ２８０シグナルを使用したタンパク質コンジュゲート分析を使用して計算した。
【０３６９】
（ｖ）ＨＡ−Ｇ６．３１．ＡＡＲＲコンジュゲート生理学的ストレス及び分析
精製したコンジュゲートをＰＢＳに緩衝液交換し、２ｍＭアジ化ナトリウム及び０．０１％ポリソルベート２０を添加した（ＰＢＳＴＮ）。最終濃度は、Ｆａｂに基づいておよそ５ｍｇ／ｍＬであった。試料を密封し、３７℃でインキュベートした。この条件は、硝子体液の代替物（硝子体のｐＨ、温度、及びイオン強度を模倣するもの）として機能する。５ｍｇ／ｍＬ濃度は、硝子体中での沈殿傾向を評価するための「ストレス性」濃度を表す（４ｍＬヒト硝子体中２ｍｇ用量は、０．５ｍｇ／ｍＬのＦａｂと同等である）。特定の時点で、試料を取り出し、０．０１％ポリソルベート２０及び１０ｗ／ｖ％トレハロースで、１０ｍＭ  ＨｉｓＨＣｌ（ｐＨ５．５）中で１ｍｇ／ｍＬに希釈し、可溶性タンパク質濃度（Ａ２８０）、濁度（Ａ４５０）、ＳＥＣ保持時間、及び分子量（上記のＳＥＣ−ＲＩ−ＭＡＬＳによるＭｎ及びＭｗ）についてアッセイした。
【０３７０】
（Ｂ）結果
（ｉ）材料の特徴付け
表６は、この研究に使用した９つのコンジュゲートのＳＥＣ−ＲＩ−ＭＡＬＳ特徴付け結果を列記する。コンジュゲートは、ＨＡ骨格ＭＷ（４０ｋＤａ、２００ｋＤａ、または６００ｋＤａ）及びＦａｂ負荷レベルの両方の点で異なる。試料名は、ＨＡ骨格ＭＷ（ｋＤＡ）の後にＦａｂ負荷レベル（％）が続く。
表６：ＨＡ−Ｇ６．３１．ＡＡＲＲ出発材料のＳＥＣ−ＲＩ−ＭＡＬＳ特徴付け結果
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【０３７１】
ＨＡ−Ｇ６．３１．ＡＡＲＲコンジュゲートの多分散性を、ＳＥＣ−ＲＩ−ＭＡＬＳ（図１Ｃ）を使用して実験的に評価した。ＨＡ４０Ｋ、ＨＡ２００Ｋ、及びＨＡ６００Ｋコンジュゲートの多分散性指数は、それぞれ、１．５８、１．７８、及び１．４１であった。
【０３７２】
（ｉｉ）生理学的ストレス下でのコンジュゲート安定性
生理学的ストレス条件下で、いくつかのＨＡ−Ｇ６．３１．ＡＡＲＲコンジュゲートは、ＰＢＳＴＮ中での長時間のインキュベーションにわたって著しい物理的変化を示した。この変化は、図２に示されるように、経時的な平均分子量（Ｍｗ、重量平均分子量）のシフトから最も明らかである。いくつかの試料のＭｗは１２週間の研究にわたって変化しなかった一方で、変化した試料の全てが、Ｍｗの経時的な減少を示した。Ｍｗ減少の程度は、ＨＡ骨格分子量及びＦａｂ負荷レベルの両方に依存した。概して、沈殿が、ＨＡ分子量及びＦａｂ負荷がより高い試料中で生じたことが観察された。
【０３７３】
このＭｗシフトを理解するために、インキュベートしたＨＡ−Ｇ６．３１．ＡＡＲＲコンジュゲートのＳＥＣ保持プロファイルの分析を行った。ＳＥＣ保持時間が長時間のインキュベーション時により遅い時点にシフトし、コンジュゲートの平均集団が経時的に徐々に小さくなったことを示す（図３）。ＳＥＣ保持時間が（及びＦａｂ負荷によってではなく）骨格ＨＡ分子量によって完全に定義されるため、この観察は、（ａ）コンジュゲート分子の全集団が経時的に小さくなったこと、または（ｂ）より高分子量の部分集団が溶液から沈殿しており、より小さいコンジュゲートへの明らかなシフトをもたらすことのいずれかを示す。これらのデータを、研究開始時（Ｔ０）及び１２週間時点での保持時間間の差を示す表７にも要約する。
表７：研究開始時及び生理学的条件への曝露後１２週間時点でのＨＡ−Ｇ６．３１．ＡＡＲＲ安定性試料のＳＥＣ保持時間
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【０３７４】
ＳＥＣ及びＭＡＬＳによって測定されたこれらの変化は、より高いＨＡ骨格分子量及びより高いＦａｂ負荷の試料がより遅い時点で可視沈殿物を含んだという目視観察に類似した。この観察は、ＳＥＣ保持プロファイルにおいて観察されたシフトについての後者の説明を支持し、すなわち、より高分子量のＨＡ部分集団が沈殿し、溶液中に残存する平均集団のシフトをもたらす。
【０３７５】
図４に示される、分子量に対するＨＡ−Ｇ６．３１．ＡＡＲＲコンジュゲートの分布を試験するＳＥＣ−ＲＩ−ＭＡＬＳデータの再分析が、この仮説をさらに支持する。４０ＫのＨＡ骨格試料の場合（左側パネル）、分子量に対するコンジュゲート分子の全分布は、生理学的条件への長時間曝露時に認識できる程度には変化しなかった。６００ＫのＨＡ骨格試料の場合（右側パネル）、全ての集団画分がより低分子量に連続してシフトし、広範なコンジュゲート分子集団が溶液から沈殿したことを示す。２００ＫのＨＡ骨格試料の場合（中央パネル）、集団画分のシフトが主により高分子量のコンジュゲート分子に起こった。これは、２００ＫのＨＡ骨格試料では、比較的安定したコンジュゲート分子と比較的不安定なコンジュゲート分子との混合集団が存在したことを示す。経時的に、より高分子量のコンジュゲート分子（比較的不安定な部分集団）が溶液から沈殿し、溶液中に残存する比較的安定した部分集団のみを残した。
【０３７６】
（ｉｉｉ）単分散ＨＡコンジュゲート
多分散ＨＡ２００Ｋ−Ｇ６．３１．ＡＡＲＲ集団内で、より高ＭＷの部分集団のみが物理的不安定性及び沈殿を促進するという理解に基づいて、我々は、多分散ＨＡ骨格から単分散ＨＡ骨格への切り替えにより、より安定した抗体コンジュゲートがもたらされると仮定した。
【０３７７】
市販の標準ＨＡを、（ａ）ＨＡを細菌発酵によって合成して極めて高いＭＷのＨＡ（Ｍｗ１〜４ＭＤａ）をもたらし、（ｂ）ＨＡを細胞培養から精製し、（ｃ）ＨＡを制御された様式で化学的に分解してＨＡ分子のランダム分断をもたらすという多段階プロセスによって産生する。このプロセスの最終ステップは、さもなければ発酵のみでは実現不可能なより低分子量のＨＡの産生に絶対不可欠である。しかしながら、ランダム分断による分解プロセスによっても、ＨＡ分子量の広範な（すなわち、多分散）分布がもたらされる。
【０３７８】
ＨＡを、同期化学−酵素プロセスにより商業規模で合成することもできる（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｊｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９：４２３４５−４２３４９，２００４、Ｊｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３５５：１８３−１８８，２００６、及び米国特許第８，０８８，６０４号を参照のこと）。このプロセスでは、精製したヒアルロナンシンターゼ酵素を、低分子ＨＡオリゴ糖（典型的には、ＨＡ四量体、ＨＡ４）とウリジン二リン酸（ＵＤＰ）糖であるＵＤＰ−グルクロン酸及びＵＤＰ−Ｎ−アセチルグルコサミンとの混合物に添加する。ヒアルロナンシンターゼ酵素は、利用可能な糖を使用してオリゴ糖断片を交互様式で伸長させ、ＨＡの同期重合をもたらす。結果として得られたＨＡポリマーの分子量は、開始反応におけるＨＡ基質（例えばＨＡ４）の糖に対する比率によって制御され得る。このプロセスの結果は、高単分散ＨＡポリマーである。
【０３７９】
比較のために、同様のサイズの市販の多分散ＨＡ及び単分散ＨＡのＳＥＣ−ＲＩ−ＭＡＬＳ特徴付けを図５で比較した。最も注目すべき点は多分散性指数の差であり、多分散ＨＡ２００Ｋの場合は１．７７９であり、単分散ＨＡ１５０Ｋの場合は１．００１であった。単分散ＨＡのこのより低い多分散性レベルにより、ＨＡ−タンパク質コンジュゲートの観点からいくつかの主要な利点：（ａ）より容易な分析的特徴付け（ＨＡ多分散性の排除によりタンパク質負荷レベルの差が試料における不均一性の唯一の源になるため）、（ｂ）全集団におけるより低分子量及びより高分子量のＨＡ骨格の排除（Ａ−Ｇ６．３１．ＡＡＲＲコンジュゲート内のより高分子量のＨＡ骨格部分集団において観察された不安定性及び沈殿を排除し得る）、及び（ｃ）製剤化されたＨＡ−抗体コンジュゲートの粘度の低減の可能性が提供されると見なされる。
【０３８０】
多分散ＨＡ及び単分散ＨＡ出発材料を使用したＧ６．３１．ＡＡＲＲコンジュゲートの調製との関連で、多分散性に同じ差が観察され、多分散ＨＡ２００Ｋ−Ｇ６．３１．ＡＡＲＲが１．２２８の多分散性指数を有した一方で、単分散ＨＡ１５０Ｋ−Ｇ６．３１．ＡＡＲＲは１．００３の多分散性指数を有した（図６）。多分散ＨＡ−Ｇ６．３１．ＡＡＲＲコンジュゲートの生理学的ストレス下で観察された不安定性及び沈殿に関与すると推定されるより高いＨＡ骨格分子量の部分集団の不在のため、この単分散性がＨＡ−Ｇ６．３１．ＡＡＲＲコンジュゲートの安定性を改善することが予想される。
【０３８１】
実施例２：直鎖状ＨＡ抗体コンジュゲートの最適化されたＦａｂ負荷及びシステイン操作部位
モノクローナル抗体（ｍＡｂ）または抗体断片（Ｆａｂ）のポリマー足場への共有結合的コンジュゲーションを、アミン化学反応（溶媒露出リジン残基による直接アミド化）からトランスグルタミナーゼ等の基質認識酵素を使用した化学−酵素コンジュゲーションに及ぶ様々な化学反応により行うことができる。近年、チオール−マレイミドコンジュゲーション化学反応は、他のアプローチに優るいくつかの主要な利点：（ａ）それが部位選択的であること（還元された溶媒露出システイン残基とのみ反応する）、（ｂ）非常に速い反応であること、（ｃ）マレイミド含有リンカーが容易に入手可能であり、典型的には合成的に容易に入手されること、（ｄ）典型的にはシステイン残基をタンパク質構造に容易に組み込むことができること、及び（ｅ）チオール−マレイミドコンジュゲーションを水性条件下で中性に近いｐＨで行うことができることを提供するため、大きな関心を集めている。
【０３８２】
マレイミドコンジュゲーションに従順なＦａｂを産生するために、重鎖配列がヒンジペプチドを介して第１または第２のヒンジジスルフィドシステイン位置のいずれかまで伸長し、そのシステイン残基で切断されるＦａｂ−Ｃを産生することが１つの戦略である（図７）。実際には、このアプローチは、ポリマー足場へのコンジュゲーションに影響を及ぼすいくつかの複雑な事態を招く可能性がある。この遊離システイン残基の鎖間ジスルフィド結合との空間的近接によってもたらされる主な結果は、これらの３つの隣接するシステイン残基が３つの可能なジスルフィド配置を形成し得るチオールスクランブリングである。これらの３つの可能なジスルフィド配置を、図８Ａ〜８Ｃで絵を用いて例証する。各配置では、異なるシステイン残基が還元され、マレイミド含有ポリマー骨格への潜在的なコンジュゲーション部位になる。これによってもたらされる結果は、ＦａｂとＨＡ骨格との間の結合部位の不均一性であり、これは、コンジュゲート材料の製品品質、Ｆａｂ安定性、または安全性の観点から影響を及ぼし得る。
【０３８３】
我々は、遊離システイン残基を可動性の空間的に近位のヒンジ配列からＦａｂ上のより遠い表面位置に再配置することにより、これらのコンジュゲーションバリアントを低減または排除することができると仮定した。このアプローチの性質は、表面残基が後のコンジュゲーションのためにシステインに突然変異するＴＨＩＯＭＡＢ（商標）システイン操作モノクローナル抗体によって用いられるアプローチの性質と同様であった。Ｆａｂ型式で、我々は、表面突然変異システイン含有Ｆａｂを「ＴｈｉｏＦａｂ」と命名する。
【０３８４】
チオール−マレイミド化学反応を使用して産生されたタンパク質−ポリマーコンジュゲートは、逆マイケル付加反応によるタンパク質のポリマー骨格からの脱コンジュゲーションにも悩まされ得る。これにより、ｐＨ及び温度依存的様式での遊離タンパク質のポリマー骨格からの持続放出がもたらされ得る。この挙動は、システイン残基周辺の局所化学環境及びマレイミド含有リンカーの構造（例えば、電子求引基またはアミンの存在）にも影響される。ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）開発における異なるシステイン位置の逆マイケル感受性に関する所見（Ｓｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３０：１８４−１８９，２０１２を参照のこと）に基づいて、我々は、遊離システインをヒンジペプチドから表面位置に移動させることにより、ポリマー骨格からの逆マイケル遊離Ｆａｂ放出の速度が低下することも予測した。我々は、生理学的条件下でのＦａｂ−Ｃ及びＴｈｉｏＦａｂ型式分子におけるモデルポリエチレングリコール（ＰＥＧ）−マレイミドポリマーの逆マイケル脱コンジュゲーションの速度も調査した。
【０３８５】
（Ａ）材料及び方法
（ｉ）材料
Ｌｙｓ−Ｃ酵素をＰｒｏｍｅｇａから購入し（カタログ番号Ｖ１６７１、Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）、ヒアルロニダーゼ（組換えヒトＰＨ２０、ＨＡａｓｅとも称される）酵素をＨａｌｏｚｙｍｅ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から購入し、Ｎ−エチルマレイミド（ＮＥＭ）をＳｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）から購入した。規定メトキシポリエチレングリコールマレイミド（ｄ−ｍＰＥＧ４−Ｍａｌ、部品番号１０７４５）をＱｕａｎｔａ  Ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ（Ｐｌａｉｎ  Ｃｉｔｙ，ＯＨ）から購入した。
【０３８６】
（ｉｉ）Ｇ６．３１．ＡＡＲＲ．Ｆａｂ−Ｃの限定Ｌｙｓ−Ｃ消化
限定Ｌｙｓ−Ｃ消化をＧ６．３１．ＡＡＲＲ．Ｆａｂ−Ｃ試料で行った。より伝統的なタンパク質のＬｙｓ−Ｃ消化と比較して、「限定」Ｌｙｓ−Ｃ消化は、低減した量のＬｙｓ−Ｃ酵素を用いて非変性条件下で行われる。これにより、リジン残基の後で切断されるＧ６．３１．ＡＡＲＲ．Ｆａｂ−Ｃ分子のヒンジペプチド部分（ＫＴＨＴＣ（配列番号６１））の選択的消化がもたらされる。Ｇ６．３１．ＡＡＲＲ．Ｆａｂ−Ｃの４つの試料：（ａ）ＮＥＭあり、消化なし、（ｂ）ＮＥＭあり、消化あり、（ｃ）ＮＥＭなし、消化あり、及び（ｄ）ＮＥＭなし、消化なしを、異なる条件で試験した。
【０３８７】
各試料について、５００μＬの１０ｍＭヒスチジン酢酸＋１５０ｍＭ塩化ナトリウム（ｐＨ５．５）中５００μｇのＦａｂ−Ｃに、５０μＬの１Ｍトリス＋１０ｍＭ  ＮＥＭ（ｐＨ７．５）を添加し、ＮＥＭなし試料ではＮＥＭを除いた。試料を３７℃で３０分間インキュベートして、いずれの遊離チオールもキャップした。その後、Ｌｙｓ−Ｃ酵素を１：５００のＬｙｓ−Ｃ：Ｆａｂ−Ｃ質量比でＬｙｓ−Ｃあり試料に添加した。試料を３７℃で３０分間インキュベートした。消化後、試料を凍結させて反応をクエンチし、ＲＰ−ＵＰＬＣ−ＴＯＦによって分析した。
【０３８８】
（ｉｉｉ）ＨＡ２００Ｋ−Ｇ６．３１．ＡＡＲＲの限定Ｌｙｓ−Ｃ消化
５００μＬの１０ｍＭヒスチジン酢酸＋１５０ｍＭの塩化ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）中５００μｇ（タンパク質に基づく）のＨＡ２００Ｋ−Ｇ６．３１．ＡＡＲＲに、５０μＬの１Ｍトリス（ｐＨ７．５）を添加した。Ｌｙｓ−Ｃ酵素を１：５００のＬｙｓ−Ｃ：Ｆａｂ−Ｃ質量比で添加した。試料を３７℃で一晩インキュベートした。消化後、試料を凍結させて反応をクエンチし、ＲＰ−ＵＰＬＣ−ＴＯＦによって分析した。
【０３８９】
（ｉｖ）ＨＡ２００Ｋ−Ｇ６．３１．ＡＡＲＲのヒアルロニダーゼ消化物
５００μｇ（タンパク質に基づく）のＨＡ２００Ｋ−Ｇ６．３１．ＡＡＲＲを５００μＬの１０ｍＭヒスチジン酢酸＋１５０ｍＭ塩化ナトリウム（ｐＨ５．５）中で希釈した。ＨＡａｓｅをコンジュゲート中ＨＡ１μｇ当たり１０単位（Ｕ）で添加した。反応混合物を３７℃で４時間インキュベートした。消化後、試料を凍結させて反応をクエンチし、ＲＰ−ＵＰＬＣ−ＴＯＦによって分析した。
【０３９０】
（ｖ）モデルＧ６．３１．ＡＡＲＲ−ＰＥＧコンジュゲートの逆マイケル媒介脱コンジュゲーション
Ｇ６．３１．ＡＡＲＲ．Ｆａｂ−Ｃ、Ｇ６．３１．ＡＡＲＲ．Ａ１４０Ｃ、Ｇ６．３１．ＡＡＲＲ．Ｌ１７４Ｃ、及びＧ６．３１．ＡＡＲＲ．Ｋ１４９Ｃを、０．２〜０．５ｍｇ／ｍＬで１０ｍＭリン酸（ｐＨ６．５）１５０ｍＭ  ＮａＣｌ  ２．５ｍＭ  ＥＤＴＡに緩衝液交換し、ｄ−ｍＰＥＧ４−Ｍａｌを２０倍モル過剰で添加した。反応物を室温で２時間インキュベートし、続いて、ＰＤ−１０カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡ）上で脱塩することによって精製して、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）に入れた。その後、コンジュゲートを遠心限外濾過によって１ｍｇ／ｍＬに濃縮し、酸化グルタチオン（ＧＳＳＧ）を添加して、２ｍＭの最終濃度にした。構築物を３７℃でインキュベートし、試料をＲＰ−ＵＰＬＣ−ＴＯＦによる分析のために定期的に引き出した。
【０３９１】
（ｖｉ）逆相超高速液体クロマトグラフィー飛行時間（ＲＰ−ＵＰＬＣ−ＴＯＦ）質量分析（ＭＳ）分析
試料のインタクト質量を、Ａｇｉｌｅｎｔ  １２９０超高速液体クロマトグラフィー（ＵＰＬＣ）システムを連結したＡｇｉｌｅｎｔ  ６２３０エレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）−飛行時間（ＴＯＦ）質量分析計を使用した液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ／ＭＳ）分析によって得た。およそ２．５μｇのタンパク質を試料毎に注入し、直接オンラインＭＳ分析のために逆相超高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＵＰＬＣ）によって脱塩した。結果として得られたスペクトルを、ＭａｓｓＨｕｎｔｅｒワークステーションソフトウェア／質的分析（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ．，Ｓａｎｔａ  Ｃｌａｒａ，ＣＡ）を使用してゼロ電荷状態にデコンボリュートした。
【０３９２】
（Ｂ）結果
（ｉ）Ｇ６．３１．ＡＡＲＲ．Ｆａｂ−Ｃにおけるジスルフィド状態
図８Ａ〜８Ｃに示される３つのジスルフィド状態がＧ６．３１．ＡＡＲＲ．Ｆａｂ−Ｃに存在し、かつ動的熱力学的平衡で維持されるかを確認するために、我々は、ＮＥＭ及び限定Ｌｙｓ−Ｃ消化物を使用してマレイミドキャッピングを使用した一連の実験を行って、３つのシステイン残基の瞬時状態及び動的に再編成するそれらの能力の両方をプローブした。
【０３９３】
第１の実験では、Ｇ６．３１．ＡＡＲＲ．Ｆａｂ−ＣをＮＥＭ（いずれの遊離チオールの排除によりジスルフィド状態を不動化する）でキャップし、その後、限定Ｌｙｓ−Ｃ消化に供して、目的とする遊離システイン残基の前の重鎖ヒンジペプチド配列を切断した（図９、第２のクロマトグラム）。ＲＰ−ＵＰＬＣ−ＴＯＦの変性分析時に、図８Ａ〜８Ｃに提示される３つのジスルフィド状態に関連する種：（ａ）インタクトＦａｂ−ヒンジペプチド（図８Ａに関連する）、（ｂ）軽鎖＋ＮＥＭ及び環化重鎖（図８Ｂに関連する）、及び（ｃ）軽鎖＋ヒンジペプチド及び重鎖−ヒンジペプチド＋ＮＥＭ（図８Ｃに関連する）が観察された。この実験は、Ｇ６．３１．ＡＡＲＲ．Ｆａｂ−Ｃが同種状態では存在しないが、異なるジスルフィド配置を有し、その結果として、反応性システイン残基を有する３つの別個の種を含むことを具体的に実証した。
【０３９４】
第２の実験では、Ｇ６．３１．ＡＡＲＲ．Ｆａｂ−ＣをＮＥＭキャッピングなしで限定Ｌｙｓ−Ｃ消化に供し、システインが動的に再編成する可能性を残した（図９、第３のクロマトグラム）。この実験では、ＲＰ−ＵＰＬＣ−ＴＯＦで分析したタンパク質のほぼ全てが同じ状態：Ｆａｂ−ヒンジペプチドであった。第１の実験の所見を考慮して、この第２の組のデータは、３つの遊離システインが動的に、かつ比較的速い時間スケールで（３０分間の実験持続時間）再編成したことを示す。Ｌｙｓ−Ｃによるヒンジペプチドの切断後、３つの可能なジスルフィド状態は、３つのシステイン残基間で動的に「スクランブル」する。ある時点で、正しい鎖間ジスルフィドが形成され、ヒンジペプチド配列は、Ｌｙｓ−Ｃによって以前に切断されたため、溶液中に放出されている。結果として、試料が、この再編成プロセスにより完全な正しく形成された鎖間ジスルフィドに誘導される。
【０３９５】
これらの２つの実験により、Ｇ６．３１．ＡＡＲＲ．Ｆａｂ−Ｃが３つの近位システイン残基に関して３つの別個の状態で存在し得、それらの相対的存在量が動的熱力学的平衡によって定義されることが確認された。この後者の所見は、いずれの短期間も考慮して、３つのシステインが再スクランブルして第１の実験で観察された３つのバリアントを形成するため、いずれの再プロセスステップもこれらの２つの誤ったジスルフィド配置を完全に排除することができないことを示すという理由により、重要である。
【０３９６】
（ｉｉ）ＨＡ−Ｇ６．３１．ＡＡＲＲ．Ｆａｂ−Ｃコンジュゲートにおけるコンジュゲーションバリアント
これらの３つのジスルフィドバリアントがＧ６．３１．ＡＡＲＲ．Ｆａｂ−Ｃにおいて存在する一方で、それらがＨＡ−Ｇ６．３１．ＡＡＲＲコンジュゲートにおけるバリアントとしても存在することが依然として示されていない。個々のＧ６．３１．ＡＡＲＲ．Ｆａｂ−Ｃ分子のＨＡ−マレイミドへのコンジュゲーションの正しい位置を解明するために、我々は、２つの酵素消化手技を使用した。第１の限定Ｌｙｓ−Ｃ消化により、Ｇ６．３１．ＡＡＲＲを、目的とする遊離重鎖システイン残基の前のヒンジペプチドで切断した。正しくコンジュゲートされたＧ６．３１．ＡＡＲＲ分子において、この処理は、遊離インタクトＧ６．３１．ＡＡＲＲを溶液中に放出するはずである。しかしながら、変性ＲＰ−ＵＰＬＣ−ＴＯＦによる消化された試料の分析により、溶液中に追加の種：遊離軽鎖＋切断ヒンジペプチドが特定された（図１０Ａ）。この種の存在により、Ｇ６．３１．ＡＡＲＲ．Ｆａｂ−Ｃ集団が、恐らく図８Ｃに示されるジスルフィドバリアントが起源である通常は鎖間ジスルフィドによって占有されている重鎖システインを介してＨＡにコンジュゲートされたことが確認された。
【０３９７】
第２の酵素消化手技により、全てのコンジュゲーションがインタクトな状態に保たれたが、ヒアルロニダーゼ（ＨＡａｓｅ）を使用してＨＡ骨格を徹底的に消化した。これにより、溶液中の遊離分子の分析のみならず、低分子ＨＡオリゴ糖が共有結合したコンジュゲートされたタンパク質の分析も可能になった。この方法により、コンジュゲートされた種の個別の直接観察が可能になった。この実験では、目的とする重鎖末端システインを介してＨＡに正しくコンジュゲートされたＧ６．３１．ＡＡＲＲ分子が観察されたが、図８Ｂに示されるジスルフィドバリアントを介するコンジュゲーションの直接的証拠も見出された。これは、２つの観察：（ａ）溶液中の遊離環化重鎖分子の存在、及び（ｂ）共有結合したマレイミドリンカー＋軽鎖を有するＨＡオリゴ糖の存在によって支持された（図１０Ｂ）。これらの種の存在により、Ｇ６．３１．ＡＡＲＲ．Ｆａｂ−Ｃ集団が、恐らく図８Ｂに示されるジスルフィドバリアントが起源である通常は鎖間ジスルフィドによって占有されている軽鎖システインを介してＨＡにコンジュゲートされたことが確認された。
【０３９８】
これらの２つの消化実験により、ジスルフィド再編成が、Ｇ６．３１．ＡＡＲＲ．Ｆａｂ−ＣとＨＡ−マレイミドとの間の結合部位の変動をもたらさないことが確認された。この観察により、コンジュゲーションに使用したいずれのマレイミド含有ポリマー骨格及び３つのシステイン残基のこの配置を近接近して含むいずれのＦａｂ−Ｃにも適用されることが予想される。
【０３９９】
（ｉｉｉ）より同種のコンジュゲーションのための遊離システイン含有Ｆａｂの設計
上述のデータは、Ｆａｂ−Ｃ分子をマレイミド含有ポリマー骨格に結合させたときに３つのコンジュゲーションバリアントが存在することを示す。このコンジュゲーション不均一性は、熱力学的平衡状態にある３つの別個のジスルフィド配置の存在によって引き起こされ、各配置は、異なるシステイン残基がコンジュゲーションに影響を及ぼすことを可能にする。これらの３つのジスルフィド配置が可能であることは、目的とする遊離ヒンジシステイン残基の鎖間ジスルフィドへの近接性及び遊離システインが結合しているヒンジペプチド配列の可動性を含むいくつかの要因に影響される可能性が高い。
【０４００】
遊離システインが鎖間ジスルフィドとスクランブルしないように、我々は、遊離システインを鎖間ジスルフィドからより遠くに移動させることを想定した。したがって、我々は、標準のＦａｂ型式分子の典型のようにヒンジ配列を切断し、Ｆａｂの表面残基をシステイン残基に突然変異させた。これらの部位を、それらが抗原結合に悪影響を及ぼさないようにＨＶＲから十分に遠くなるように、かつスクランブリングを阻止するように鎖間ジスルフィドから十分に遠くなるように選択した。
【０４０１】
初期スクリーニング研究のために、３つの位置：ＬＣ−Ｋ１４９（ＥＵ番号付け）、ＨＣ−Ａ１４０（ＥＵ番号付け）、及びＨＣ−Ｌ１７４（ＥＵ番号付け）を、これらの基準を満たすために、ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）開発の以前の報告に基づいて選択した。各部位をシステイン残基に突然変異させ、ヒンジペプチドを第１のヒンジジスルフィドシステインの直前（すなわち、ＫＴＨＴ、配列番号８７）で終結させた。
【０４０２】
これらのシステイン部位がＨＡ−マレイミドに依然として反応性を示すことを確認するために、我々は、典型的な条件（１０ｍＭリン酸（ｐＨ６．５）、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、及び２．５ｍＭ  ＥＤＴＡ）下でパイロットコンジュゲーションを行い、一晩のインキュベーション後のＳＥＣ−ＲＩ−ＭＡＬＳによる産物を評価した。コンジュゲーションは、Ｇ６．３１．ＡＡＲＲ．Ｆａｂ−Ｃコンジュゲーション反応対照と比較して、正しい保持時間でＨＡ−Ｇ６．３１．ＡＡＲＲコンジュゲートの生成を正常に続行した（図１１）。ＴｈｉｏＦａｂ試料において留意すべき唯一の大きな違いは、Ｆａｂのコンジュゲートへの変換がより低いことであった。これは、ＴｈｉｏＦａｂ操作システイン残基のｐＨと比較して、ヒンジシステインのｐＫａにより適している場合があるコンジュゲーション反応の比較的低いｐＨ（ｐＨ６．５）によって引き起こされる可能性が高い。コンジュゲーション反応のｐＨを上昇させることにより、ＴｈｉｏＦａｂコンジュゲーションの収率が改善されることが予想される。
【０４０３】
（ｉｖ）Ｆａｂ−Ｃ及びＴｈｉｏＦａｂ型式の逆マイケル付加感受性
Ｆａｂ−Ｃ及びＴｈｉｏＦａｂ型式のＧ６．３１．ＡＡＲＲをモデルＰＥＧ−マレイミド構築物にコンジュゲートし、遊離チオールトラップとしての機能を果たす（すなわち、ＰＥＧ−マレイミドで放出された遊離チオールの逆マイケル付加を阻止する）ように３７℃のＰＢＳ中でＧＳＳＧとインキュベートし、その後、ＲＰ−ＵＰＬＣ−ＴＯＦによって周期的に分析した。Ｆａｂ−Ｃ−ＰＥＧ構築物において、著しい逆マイケル脱コンジュゲーションが最初の７日間にわたって観察され、インタクトコンジュゲートの９．８％損失をもたらした（図１２）。ＴｈｉｏＦａｂコンジュゲートは、Ｆａｂ−Ｃにおいて可変レベルの改善を示し、Ａ１４０Ｃバリアントは、１４日目までほぼ脱コンジュゲーションなしを示し、同じ期間で、Ｌ１７４Ｃバリアントは、５．９％の脱コンジュゲーションを示し、Ｋ１４９Ｃバリアントは、７．１％の脱コンジュゲーションを示した。これらのデータは、システイン突然変異バリアントが、逆マイケル媒介タンパク質脱コンジュゲーションから保護され得、インタクトタンパク質−ポリマーコンジュゲートの保持においてＦａｂ−Ｃ型式に優る著しい利点を提供し得ることを示唆する。
【０４０４】
実施例３：本発明の抗体コンジュゲートに使用するための例示的な抗ＶＥＧＦ抗体
本明細書に記載の抗ＶＥＧＦ抗体のうちのいずれかを使用して、実施例１及び実施例２に記載の抗体コンジュゲートを調製することができる。例えば、国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０５３４５４号に記載のいずれかの抗ＶＥＧＦ抗体が使用され得る。表８は、使用され得る例示的な抗ＶＥＧＦ抗体、ならびに各抗体のＶＨ及びＶＬドメインのアミノ酸配列を記載する。表９は、表８に記載の抗ＶＥＧＦ抗体のＶＬ  ＨＶＲアミノ酸配列を記載する。表１０は、表８に記載の抗ＶＥＧＦ抗体のＶＨ  ＨＶＲアミノ酸配列を記載する。具体的な実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体Ｇ６．３１  ＡＡＲＲ（本明細書で「Ｇ６．３１．ＡＡＲＲ」とも称される）を使用する。
表８：例示的な抗ＶＥＧＦ抗体のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列
2020514376.tif 000013
表９：表８の抗体のＶＬ  ＨＶＲ配列
2020514376.tif 000014
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表１０：表８の抗体のＶＨ  ＨＶＲ配列
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2020514376.tif 000017
【０４０５】
上記の抗体のうちのいずれか、例えば、Ｇ６．３１  ＡＡＲＲのＦａｂ重鎖の上部ヒンジ領域を突然変異させて、文献で報告されている抗ＩｇＧ１ヒンジ自己抗体に対する反応性を除去することができる。例えば、Ｂｒｅｚｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８１：３１８３−３１９２，２００８、及びＢｒｅｚｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，ｍＡｂｓ  ２：３，２１２−２２０，２０１０を参照されたい。したがって、Ｇ６．３１  ＡＡＲＲ重鎖のＣ末端アミノ酸は、Ｔ（野生型（ＷＴ）バージョン）またはＬ（抗ヒトＩｇＧ  Ｆａｂに対する反応性を欠くバリアントバージョン）のいずれかであり得る。野生型Ｇ６．３１  ＡＡＲＲの全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号４８である。抗ヒトＩｇＧ  Ｆａｂに対する反応性を欠くバリアントバージョンの全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号４９である。Ｇ６．３１  ＡＡＲＲ及び抗ヒトＩｇＧ  Ｆａｂに対する反応性を欠くバリアントバージョンの両方の全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号５０である。
【０４０６】
Ｇ６．３１．ＡＡＲＲ．ＬＣ−Ｋ１４９Ｃシステイン操作抗体バリアント軽鎖及び重鎖のアミノ酸配列を以下に示す（ＬＣ−Ｃ１４９は太字の下線付きフォントである）。
軽鎖（ＬＣ）：
2020514376.tif 000018
重鎖（ＨＣ）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＩＳＤＹＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＧＩＴＰＡＧＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＲＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＦＶＦＦＬＰＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴ（配列番号９０）。
【０４０７】
Ｇ６．３１ＡＡＲＲ．ＨＣ−Ａ１４０Ｃシステイン操作抗体バリアント軽鎖及び重鎖のアミノ酸配列を以下に示す（ＨＣ−Ｃ１４０は太字の下線付きフォントである）。
ＬＣ：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＧＹＧＡＰＦＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号９１）。
ＨＣ：
2020514376.tif 000019
【０４０８】
Ｇ６．３１ＡＡＲＲ．ＨＣ−Ｌ１７４Ｃシステイン操作抗体バリアント軽鎖及び重鎖のアミノ酸配列を以下に示す（ＨＣ−Ｃ１７４は太字の下線付きフォントである）。
ＬＣ：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＧＹＧＡＰＦＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号９３）。
ＨＣ：
2020514376.tif 000020
【０４０９】
実施例４：単分散ＨＡから産生されたＨＡ−Ｇ６．３１．ＡＡＲＲコンジュゲートは、多分散ＨＡから産生されたＨＡ−Ｇ６．３１．ＡＡＲＲコンジュゲートと比較して、生理学的ストレス下で改善された物理的安定性を示す。
（Ａ）材料及び方法
Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ  ｍｕｌｔｏｃｉｄａヒアルロナンシンターゼ（ＰｍＨＡＳ）を使用して化学酵素手段によって合成された単分散ＨＡは、Ｈｙａｌｏｓｅ（Ｏｋｌａｈｏｍａ  Ｃｉｔｙ，ＯＫ）製のものであった。全ての他の化学物質及び試薬は、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）製のものであった。
【０４１０】
単分散ＨＡ（ｍｏｎｏＨＡ、Ｍｗ１３７ｋＤａ、ＲＨ２１．２ｎｍ）を、４．０％マレイミド基を含むように前述のようにＮ−（２−アミノエチルマレイミド）で修飾した。その後、Ｇ６．３１．ＡＡＲＲ．Ｆａｂ−Ｃを、前述のようにｍｏｎｏＨＡ−マレイミド骨格にコンジュゲートし、ｐＨ７．４のＰＢＳ泳動緩衝液を用いたＨＩＬＯＡＤ（登録商標）ＳＵＰＥＲＤＥＸ（登録商標）２００ｐｇカラムでのＳＥＣによって精製した。コンジュゲート画分をプールし、ＳＥＣ−ＲＩ−ＭＡＬＳによって確認した。
【０４１１】
精製したｍｏｎｏＨＡ−Ｇ６．３１．ＡＡＲＲを限外濾過によってＰＢＳ中で５ｍｇ／ｍＬ（Ｆａｂに基づく）に濃縮し、アジ化ナトリウム及びポリソルベート２０（ＰＳ２０）を添加して、それぞれ、２ｍＭ及び０．０１％の最終濃度にし、３７℃でインキュベートした。試料採取時点で、試料を取り出し、１０ｍＭ  Ｈｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ５．５）、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１０ｗ／ｖ％トレハロース、及び０．０１％ポリソルベート２０を含有する緩衝液中で１ｍｇ／ｍＬに希釈し、その後、可溶性タンパク質濃度（Ａ２８０）、濁度（Ａ４５０）、ＳＥＣ保持時間、及び分子量（ＳＥＣ−ＲＩ−ＭＡＬＳによるＭｎ及びＭｗ）についてアッセイした。
【０４１２】
（Ｂ）結果
単分散ＨＡを使用して産生したＨＡ−Ｇ６．３１．ＡＡＲＲコンジュゲートは、同じＦａｂ負荷レベルで同様のサイズの多分散ＨＡを使用して産生したＨＡ−Ｇ６．３１．ＡＡＲＲコンジュゲートと比較して、４週目まで非常に改善された物理的安定性を示した（図１４）。ｍｏｎｏＨＡ−Ｇ６．３１．ＡＡＲＲの分子量（Ｍｗ）は、０週目から２週目及び４週目までわずかに減少したが、この損失を、チオール−マレイミドコンジュゲートタンパク質で一般に観察されるように、逆マイケル脱コンジュゲーションによる遊離Ｆａｂの損失によって完全に説明することができた。ｍｏｎｏＨＡ−Ｇ６．３１．ＡＡＲＲのＳＥＣ保持時間にも識別可能なシフトがなく、コンジュゲートの物理的サイズが経時的に変化しなかったことを示す。
【０４１３】
これらの結果は、多分散ＨＡ出発材料から産生されたＨＡ−Ｇ６．３１．ＡＡＲＲコンジュゲート集団内で、高分子量のＨＡに基づく部分集団が、生理学的ストレス後に観察された物理的不安定性に関与するという仮説を明確に支持する。ＨＡ出発（すなわち、単分散ＨＡから出発する）材料を均質化することによってこの部分集団を除去することにより、生理学的ストレス条件下で沈殿する傾向がより低いより安定したコンジュゲート分子がもたらされる。これらのデータは、インビボ使用のための治療薬として単分散ＨＡ材料から産生されたＨＡ−Ｇ６．３１．ＡＡＲＲコンジュゲートを使用することをさらに支持する。
【０４１４】
前述の発明が理解の明確化のために例証及び例としていくらか詳細に記載されているが、これらの説明及び例は、本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。本明細書で引用される全ての特許及び科学文献の開示は、参照によりそれらの全体が明確に組み込まれる。
【図１−１】
2020514376.tif 000021
【図１−２】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
2020514376.tif 000026
【図６】
2020514376.tif 000027
【図７】
2020514376.tif 000028
【図８】
2020514376.tif 000029
【図９】
2020514376.tif 000030
【図１０】
2020514376.tif 000031
【図１１】
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【図１２】
2020514376.tif 000033
【図１３Ａ】
2020514376.tif 000034
【図１３Ｂ−１】
2020514376.tif 000035
【図１３Ｂ−２】
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【図１３Ｂ−３】
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【図１４】
2020514376.tif 000038
【配列表】
2020514376000001.app
【国際調査報告】
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2020514376.tif 000040
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