(57)【要約】本発明は、抗がん抗体を使用するがん療法の分野に関する。相乗的抗がん有効性を示す、ＥｒｂＢ受容体ファミリーの阻害剤と組み合わせた抗ＭＵＣ１抗体の医療上の使用が提供される。第１の態様においては、本発明は、ＥｒｂＢファミリーの受容体の阻害剤（ＥｒｂＢ阻害剤）と組み合わせた、がんの処置における使用のためのＭＵＣ１に対する抗体（抗ＭＵＣ１抗体）を提供する。第２の態様においては、本発明は、ＭＵＣ１に対する抗体と組み合わせた、がんの処置における使用のためのＥｒｂＢファミリーの受容体の阻害剤を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＥｒｂＢファミリーの受容体の阻害剤と組み合わせた、がんの処置における使用のためのＭＵＣ１に対する抗体。
【請求項２】
前記がんが、前記ＥｒｂＢファミリーの受容体を発現する、請求項１に記載のがんの処置における使用のためのＭＵＣ１に対する抗体。
【請求項３】
前記がんが、肺がん、結腸がん、乳がんおよび卵巣がんからなる群より選択される、請求項１または２に記載のがんの処置における使用のためのＭＵＣ１に対する抗体。
【請求項４】
ＭＵＣ１の細胞外リピートに対する抗体である、請求項１から３のいずれか一項に記載のがんの処置における使用のためのＭＵＣ１に対する抗体。
【請求項５】
ＴＡ−ＭＵＣ１に対する抗体である、請求項１から４のいずれか一項に記載のがんの処置における使用のためのＭＵＣ１に対する抗体。
【請求項６】
Ｎ−アセチルガラクトサミンまたはガラクトースβ１−３  Ｎ−アセチルガラクトサミンを含むＭＵＣ１の細胞外タンデムリピート領域におけるエピトープに特異的に結合する、請求項１から５のいずれか一項に記載のがんの処置における使用のためのＭＵＣ１に対する抗体。
【請求項７】
前記エピトープが、ＭＵＣ１タンデムリピートの少なくとも１つのＰＤＴＲ配列（配列番号１９）またはＰＤＴＲＰ配列（配列番号２０）を含み、Ｎ−アセチルガラクトサミンまたはガラクトースβ１−３  Ｎ−アセチルガラクトサミンによりＰＤＴＲ配列（配列番号１９）またはＰＤＴＲＰ配列（配列番号２０）のトレオニンでグリコシル化される、請求項６に記載のがんの処置における使用のためのＭＵＣ１に対する抗体。
【請求項８】
ＰａｎｋｏＭａｂである、請求項１から７のいずれか一項に記載のがんの処置における使用のためのＭＵＣ１に対する抗体。
【請求項９】
抗ＭＵＣ１抗体が、重鎖可変領域のＣＤＲが配列番号１、３および５のアミノ酸配列を有し、かつ軽鎖可変領域のＣＤＲが配列番号１０、１２および１４のアミノ酸配列を有するか、または重鎖可変領域のＣＤＲが配列番号２、４および６のアミノ酸配列を有し、かつ軽鎖可変領域のＣＤＲが配列番号１１、１３および１５のアミノ酸配列を有する１組のＣＤＲを含む、請求項８に記載のがんの処置における使用のためのＭＵＣ１に対する抗体。
【請求項１０】
前記重鎖可変領域が、配列番号７、８もしくは９のアミノ酸配列または前記配列のうちの１つと少なくとも７５％同一であるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号１６、１７もしくは１８のアミノ酸配列または前記配列のうちの１つと少なくとも７５％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項９に記載のがんの処置における使用のためのＭＵＣ１に対する抗体。
【請求項１１】
前記抗ＭＵＣ１抗体が、以下の特徴：
（ｉ）抗体集団中の前記抗ＭＵＣ１抗体のＦｃ部分に結合したグリカンの総量の少なくとも１％の二分岐Ｎ−アセチルグルコサミン（ビスＧｌｃＮＡｃ）を担持するグリカンの相対量；
（ｉｉ）抗体集団中の前記抗ＭＵＣ１抗体のＦｃ部分に結合したグリカンの総量の４０％もしくはそれ未満の少なくとも１つのシアル酸を担持するグリカンの相対量；および／または
（ｉｉｉ）抗体集団中の前記抗ＭＵＣ１抗体のＦｃ部分に結合したグリカンの総量の少なくとも３０％の少なくとも１つのガラクトース残基を担持するグリカンの相対量
のうちの１つまたは複数を有するＦｃ部分でのグリコシル化パターンを有する、請求項１から１０のいずれか一項に記載のがんの処置における使用のためのＭＵＣ１に対する抗体。
【請求項１２】
細胞毒素にカップリングされている、請求項１から１１のいずれか一項に記載のがんの処置における使用のためのＭＵＣ１に対する抗体。
【請求項１３】
前記細胞毒素が、オーリスタチン、マイタンシンまたはマイタンシノイドである、請求項１２に記載のがんの処置における使用のためのＭＵＣ１に対する抗体。
【請求項１４】
前記細胞毒素が、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）である、請求項１３に記載のがんの処置における使用のためのＭＵＣ１に対する抗体。
【請求項１５】
モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）にカップリングされたＰａｎｋｏＭａｂである、請求項１から１４のいずれか一項に記載のがんの処置における使用のためのＭＵＣ１に対する抗体。
【請求項１６】
前記ＥｒｂＢファミリーの受容体が、ＥＧＦＲまたはＨＥＲ２である、請求項１から１５のいずれか一項に記載のがんの処置における使用のためのＭＵＣ１に対する抗体。
【請求項１７】
前記ＥｒｂＢファミリーの受容体が、ＥＧＦＲである、請求項１６に記載のがんの処置における使用のためのＭＵＣ１に対する抗体。
【請求項１８】
ＥｒｂＢ阻害剤が、小分子または抗体である、請求項１から１７のいずれか一項に記載のがんの処置における使用のためのＭＵＣ１に対する抗体。
【請求項１９】
前記ＥｒｂＢファミリーの受容体が、ＥＧＦＲであり、前記ＥｒｂＢ阻害剤が、アファチニブ、エルロチニブおよびセツキシマブからなる群より選択される、請求項１から１８のいずれか一項に記載のがんの処置における使用のためのＭＵＣ１に対する抗体。
【請求項２０】
前記処置が、前記ＭＵＣ１に対する抗体の投与前の前記ＥｒｂＢ阻害剤の投与を含む、請求項１から１９のいずれか一項に記載のがんの処置における使用のためのＭＵＣ１に対する抗体。
【請求項２１】
前記ＥｒｂＢ阻害剤の投与が、前記抗ＭＵＣ１抗体の投与が開始される少なくとも１日前に開始される、請求項２０に記載のがんの処置における使用のためのＭＵＣ１に対する抗体。
【請求項２２】
前記ＥｒｂＢ阻害剤の投与が、前記抗ＭＵＣ１抗体の投与が開始される少なくとも２日前に開始される、請求項２１に記載のがんの処置における使用のためのＭＵＣ１に対する抗体。
【請求項２３】
前記組み合わせが、相乗効果をもたらす、請求項１から２２のいずれか一項に記載のがんの処置における使用のためのＭＵＣ１に対する抗体。
【請求項２４】
ＭＵＣ１に対する抗体と組み合わせた、がんの処置における使用のためのＥｒｂＢファミリーの受容体の阻害剤。
【請求項２５】
請求項２から２３に記載されるフィーチャのうちの１つまたは複数を有する、請求項２４に記載のがんの処置における使用のためのＥｒｂＢファミリーの受容体の阻害剤。
【請求項２６】
がんの処置を必要とする患者にＥｒｂＢファミリーの受容体の阻害剤とＭＵＣ１に対する抗体とを投与することを含む、がんの処置方法。
【請求項２７】
請求項２から２３に記載されるフィーチャのうちの１つまたは複数を有する、請求項２６に記載のがんの処置方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、がんに対する新規組み合わせ療法に関する。ＥＧＦＲなどのＥｒｂＢファミリーの受容体の阻害剤とＭＵＣ１に対する抗体との組み合わせは、がん処置において改善された効果をもたらす。したがって、本発明は、がんの処置のための組み合わせた２つの治療剤の使用を提供する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
抗体は、医療および研究の分野で広く使用されている作用物質である。医療では、これらは、多くの異なる分野において、特に、様々な疾患、特に、がんなどの新生物疾患の処置および予防における治療剤として用途を見出す。しかし、がん患者の抗体療法によって得られる治療結果は、高度に多様である。抗がん抗体を使用する療法のかなりのパーセンテージが、疾患の軽減をまったく示さないか、またはほんのわずかの軽減を示し、特定の患者群に限定されることもある
【０００３】
興味深く、重要な抗体の群は、ムチンタンパク質に対する抗体の群である。ムチンは、脊椎動物において多くの上皮組織により生成される高分子量、高グリコシル化タンパク質のファミリーである。それらは、細胞膜中での保持に有利である疎水性膜貫通ドメインと粘膜表面上へと分泌されるか、または分泌されて唾液成分になるムチンとの存在のために、膜結合型のムチンタンパク質に細分することができる。ヒトムチンタンパク質ファミリーは、少なくともファミリーメンバーＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＣ３Ａ、ＭＵＣ３Ｂ、ＭＵＣ４、ＭＵＣ５ＡＣ、ＭＵＣ５Ｂ、ＭＵＣ６、ＭＵＣ７、ＭＵＣ８、ＭＵＣ１２、ＭＵＣ１３、ＭＵＣ１５、ＭＵＣ１６、ＭＵＣ１７、ＭＵＣ１９およびＭＵＣ２０からなり、ＭＵＣ１、ＭＵＣ３Ａ（アイソフォーム１）、ＭＵＣ３Ｂ、ＭＵＣ４およびＭＵＣ１６は、膜結合型である。
【０００４】
膵がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、結腸がんなどを含む多くの腺癌において、ムチン生成の増大が起こる。ムチンはまた、肺疾患、例えば、喘息、気管支炎、慢性閉塞性肺疾患または嚢胞性線維症において過剰発現される。２つの膜ムチン、ＭＵＣ１およびＭＵＣ４は、疾患過程におけるそれらの病理学的関連に関して広範に研究されてきた。さらに、ムチンはまた、診断マーカーとしてのそれらの可能性について調査されている。
【０００５】
ムチンタンパク質、特に、ＭＵＣ１に対するいくつかの抗体が、当該分野で公知である。それらのいくつかは、医療適用について既に認可されている。
【０００６】
別の確立されたがん標的は、ＥｒｂＢファミリーの受容体、特に、ＥＧＦＲ（上皮増殖因子受容体）およびＨＥＲ２に対する抗体である。ＥｒｂＢ受容体は、細胞膜に固定される受容体チロシンキナーゼである。ＥｒｂＢ受容体の細胞外ドメインへのリガンドである上皮増殖因子（ＥＧＦ）またはトランスフォーミング増殖因子アルファ（ＴＧＦα）の結合は、受容体の（ホモまたはヘテロ）二量体化およびその細胞内タンパク質チロシンキナーゼ活性の刺激をもたらす。活性受容体二量体により開始されるシグナル伝達カスケードは、細胞移動、接着、および増殖を制御する。ＥｒｂＢ受容体タンパク質は、前記タンパク質を発現するがんに対する療法のための有用な標的であると考えられる。例えば、ＥＧＦＲは、限定されるものではないが、結腸直腸がん、肺がん、膵臓がんおよび頭頸部がんなどのいくつかのがんにおいて過剰発現される。ＥＧＦＲまたはファミリーメンバーの変異、増幅または誤調節は、全ての上皮がんの約３０％に関与し、予後不良と関連する。
【０００７】
低分子キナーゼ阻害剤および抗体を含むＥｒｂＢ受容体の阻害剤は、確立された抗がん薬物である。これらの抗ＥｒｂＢ抗体は、ＥｒｂＢシグナル伝達を阻害することができるため、がんの処置において有効である。それらはＥｒｂＢ受容体の細胞外ドメインに結合し、ＥＧＦおよびＴＧＦαなどの天然活性化リガンドの結合を防止することによって、受容体の二量体化および活性化ならびにその下流のシグナル伝達カスケードを阻害する。キナーゼ阻害剤は、ＥｒｂＢ受容体が二量体化後に互いにリン酸化することを防止する。受容体のリン酸化は、下流のシグナリングパートナーの結合に重要である。
【０００８】
これらの作用機構は、増殖に関してＥｒｂＢ受容体の活性化に依存する腫瘍についてのみ関連することに留意する必要がある。しかしながら、特に、結腸直腸がんにおいては、大部分の腫瘍が、Ｋｉｒｓｔｅｎ  Ｒａｓ遺伝子（ＫＲＡＳ）中に変異を含み、Ｋ−Ｒａｓタンパク質を定常的に活性なものにする。Ｋ−Ｒａｓは、ＥＧＦＲの下流のシグナル伝達カスケードの重要なメンバーであり、ＥＧＦＲシグナル伝達の阻害は一般に、Ｋ−Ｒａｓが定常的に活性である腫瘍に対する効果を有さない。このため、ＥｒｂＢ受容体を標的化するいくつかの薬物は、ＫＲＡＳ野生型転移性結腸直腸がんの処置についてのみ承認されている。
【０００９】
多種多様ながんと、既存の処置の公知の限界を考慮すると、より高い有効性を有し、有害な副作用がより少ないさらなるがん処置についての不断の要求が存在している。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
ＥＧＦＲまたはＨＥＲ２などのＥｒｂＢ受容体を発現する腫瘍の、それぞれの受容体の阻害剤による処置は、ＭＵＣ１に対する抗体との組み合わせで相乗効果を示した。受容体阻害剤は、ＭＵＣ１の発現の増大を誘導し、これは抗ＭＵＣ１抗体により有効に標的化することができた。腫瘍細胞上のより高いＭＵＣ１レベルは、抗ＭＵＣ１抗体の有効性の増大をもたらした。抗ＭＵＣ１抗体が受容体阻害剤のいくらか後、特に、その約１〜６日後に添加された場合に、最適な結果が得られた。
【００１１】
第１の態様においては、本発明は、ＥｒｂＢファミリーの受容体の阻害剤（ＥｒｂＢ阻害剤）と組み合わせた、がんの処置における使用のためのＭＵＣ１に対する抗体（抗ＭＵＣ１抗体）を提供する。
【００１２】
第２の態様においては、本発明は、ＭＵＣ１に対する抗体と組み合わせた、がんの処置における使用のためのＥｒｂＢファミリーの受容体の阻害剤を提供する。
【００１３】
さらに、本発明は同様に、第１および／または第２の態様による処置方法を提供する。特に、本発明は、それを必要とする患者にＥｒｂＢファミリーの受容体の阻害剤とＭＵＣ１に対する抗体とを投与することを含む、がんの処置方法を提供する。本発明の第１および第２の態様についての本明細書に記載のすべての実施形態およびフィーチャも同様に、本発明による処置方法に適用される。
【００１４】
上記態様を組み合わせることができる。本発明の他の目的、フィーチャ、利点、および態様は、以下の記載および添付の特許請求の範囲から当業者に明らかとなる。しかし、本願の好適な実施形態を示す以下の記載、添付の特許請求の範囲、および具体例は、実例としてのみ示されていることが理解されるべきである。開示した発明の趣旨および範囲内の様々な変更および改変は、以下を読むことから当業者に容易に明らかとなる。
【００１５】
定義
本明細書において使用する場合、以下の表現は一般に、これらが使用されている脈絡が別段に示す程度を除き、以下に示す意味を好ましくは有するように意図されている。
【００１６】
表現「含む」は、本明細書において使用する場合、その文字通りの意味に加えて、表現「から本質的になる」および「からなる」も含み、具体的に指す。したがって、表現「含む」は、具体的に列挙されたエレメントを「含む」主題がさらなるエレメントを包含する場合があり、かつ／または実際に包含する実施形態、ならびに具体的に列挙されたエレメントを「含む」主題がさらなるエレメントを含まない実施形態を指す。同様に、表現「有する」は、表現「含む」として理解されるべきであり、表現「から本質的になる」および「からなる」も含み、具体的に指す。
【００１７】
用語「抗体」は、特に、ジスルフィド結合によって接続された少なくとも２本の重鎖および２本の軽鎖を含むタンパク質を指す。各重鎖は、重鎖可変領域（ＶＨ）および重鎖定常領域（ＣＨ）から構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（ＶＬ）および軽鎖定常領域（ＣＬ）から構成される。重鎖定常領域は、３つ、またはＩｇＭもしくはＩｇＥタイプの抗体の場合では、４つの重鎖定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４）を含み、第１の定常ドメインＣＨ１は、可変領域に隣接しており、ヒンジ領域によって第２の定常ドメインＣＨ２に接続されている場合がある。軽鎖定常領域は、１つの定常ドメインのみからなる。可変領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域とともに散在した相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域にさらに細分することができ、各可変領域は、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲを含む。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合性ドメインを含有する。重鎖定常領域は、γ−、δ−、α−、μ−またはε−型重鎖などの任意の型のものであってもよい。好ましくは、抗体の重鎖は、γ−鎖である。さらに、軽鎖定常領域はまた、κ−またはλ−型軽鎖などの任意の型のものであってもよい。好ましくは、抗体の軽鎖は、κ−鎖である。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の第１の成分（Ｃ１ｑ）を含めた宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介することができる。抗体は、例えば、ヒト化、ヒト、またはキメラ抗体であり得る。抗体は、ＡＤＣＣを誘導することができ得る。
【００１８】
抗体の抗原結合性部分は、通常、抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体の全長または１つもしくは複数の断片を指す。抗体の抗原結合機能は、全長抗体の断片によって果たされ得ることが示されている。抗体の結合性断片の例としては、Ｆａｂ断片、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、およびＣＨ１ドメインからなる一価の断片；Ｆ（ａｂ）２断片、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された、それぞれが同じ抗原に結合する２つのＦａｂ断片を含む二価の断片；ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片；およびＶＨドメインからなるｄＡｂ断片が含まれる。
【００１９】
抗体の「Ｆａｂ部分」は特に、重鎖および軽鎖可変領域（ＶＨおよびＶＬ）、ならびに重鎖および軽鎖定常領域の第１のドメイン（ＣＨ１およびＣＬ）を含む抗体の部分を指す。抗体がこれらの領域のすべてを含まない場合では、用語「Ｆａｂ部分」は、抗体中に存在する領域ＶＨ、ＶＬ、ＣＨ１、およびＣＬのもののみを指す。好ましくは、「Ｆａｂ部分」は、抗体の抗原結合性活性を含有する、パパインで天然抗体を消化することによって得られる断片に対応する抗体の部分を指す。特に、抗体のＦａｂ部分は、抗原結合部位またはその抗原結合能を包含する。好ましくは、Ｆａｂ部分は、抗体の少なくともＶＨ領域を含む。
【００２０】
抗体の「Ｆｃ部分」は特に、重鎖定常領域２、３、および適用可能な場合、４（ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４）を含む抗体の部分を指す。特に、Fc部分は、これらの領域のそれぞれのうちの２つを含む。抗体がこれらの領域のすべてを含まない場合では、用語「Ｆｃ部分」は、抗体中に存在する領域ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４のもののみを指す。好ましくは、Ｆｃ部分は、抗体の少なくともＣＨ２領域を含む。好ましくは、「Ｆｃ部分」は、抗体の抗原結合性活性を含有しない、パパインで天然抗体を消化することによって得られる断片に対応する抗体の部分を指す。特に、抗体のＦｃ部分は、Ｆｃ受容体に結合することができ、したがって例えば、Ｆｃ受容体結合部位またはＦｃ受容体結合能を含む。
【００２１】
本発明によれば、用語「キメラ抗体」は特に、定常領域がヒト抗体またはヒト抗体コンセンサス配列に由来し、少なくとも一方、好ましくは両方の可変領域が非ヒト抗体、例えば、マウス抗体などのげっ歯類抗体に由来する抗体を指す。
【００２２】
本発明によれば、用語「ヒト化抗体」は特に、ヒト定常領域と、ヒトの身体に投与された場合に抗体の免疫原性を低減させるようにアミノ酸配列が改変された可変領域とを含む非ヒト抗体を指す。ヒト化抗体を構築するための例示的方法は、非ヒト抗体のＣＤＲまたは特異性決定残基（ＳＤＲ）をヒト由来フレームワーク領域と組み合わせるＣＤＲ移植である。必要に応じて、ヒトフレームワーク領域のいくつかの残基を、例えば、抗原結合親和性を増加させるか、または回復させるために、親非ヒト抗体の残基に復帰変異させてもよい。他のヒト化方法としては、例えば、リサーフェシング（resurfacing）、超ヒト化（ｓｕｐｅｒｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎ）、およびヒトストリング内容最適化（human  string  content  optimization）が挙げられる。リサーフェシング法においては、抗体の表面に位置する非ヒトフレームワーク領域の残基のみを、前記位置で対応するヒト抗体配列中に存在する残基により置き換える。超ヒト化は、本質的にはＣＤＲ移植に対応する。しかしながら、ＣＤＲ移植中に、ヒトフレームワーク領域は通常、非ヒトフレームワーク領域に対するその相同性に基づいて選択されるが、超ヒト化においては、それは選択されるヒトフレームワーク領域に基づくＣＤＲの類似性である。ヒトストリング内容最適化においては、非ヒト抗体配列のヒト生殖系列配列との差異をスコア化した後、抗体を変異させて前記スコアを最小化する。さらに、ヒト化抗体を、ヒトフレームワーク領域またはヒト抗体の大きいライブラリーを使用して複数の抗体ヒト化候補を作製した後、最も有望な候補をスクリーニング方法により決定する経験的方法により取得することもできる。また、上記の合理的アプローチを用いて、いくつかのヒト化抗体候補を作製した後、例えば、その抗原結合についてスクリーニングすることができる。
【００２３】
本明細書で使用される用語「ヒト抗体」は、フレームワーク領域とＣＤＲ領域の両方がヒト起源の配列に由来する可変領域を有する抗体を含むことが意図される。
【００２４】
本明細書で使用される用語「抗体」は、ある特定の実施形態においては、同じ種類の抗体の集団を指す。特に、抗体集団の全ての抗体が、抗体を定義するために使用されるフィーチャを示す。ある特定の実施形態においては、抗体の集団中の全ての抗体が、同じアミノ酸配列を有する。抗ＭＵＣ１抗体などの、特定の種類の抗体に対する参照は、特に、この種類の抗体の集団を指す。
【００２５】
本明細書で使用される用語「抗体」はまた、前記抗体の断片および誘導体を含む。抗体の「断片または誘導体」は、特に、前記抗体に由来し、その抗体と同じ抗原に、特に、同じエピトープに結合することができるタンパク質または糖タンパク質である。かくして、本明細書で抗体の断片または誘導体は一般に、機能的断片または誘導体を指す。特に好ましい実施形態においては、抗体の断片または誘導体は、重鎖可変領域を含む。抗体の抗原結合機能は、全長抗体の断片またはその誘導体によって果たされ得ることが示されている。抗体の断片または誘導体の例としては、（ｉ）Ｆａｂ断片、重鎖および軽鎖各々の可変領域および第１の定常ドメインからなる一価の断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ）２断片、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価の断片；（ｉｉｉ）重鎖の可変領域および第１の定常ドメインＣＨ１からなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一アームの重鎖および軽鎖可変領域からなるＦｖ断片；（ｖ）ｓｃＦｖ断片、単一のポリペプチド鎖からなるＦｖ断片；（ｖｉ）共に共有結合された２つのＦｖ断片からなる（Ｆｖ）２断片；（ｖｉｉ）重鎖可変ドメイン；ならびに（ｖｉｉｉ）重鎖および軽鎖可変領域の会合が分子間でのみ生じることができ、分子内では生じ得ないような様式で共に共有結合された重鎖可変領域および軽鎖可変領域からなるマルチボディ（ｍｕｌｔｉｂｏｄｙ）がある。これらの抗体断片および誘導体は、当業者に公知の従来技術を使用して得られる。
【００２６】
標的アミノ酸配列が、その全長にわたって、少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の参照アミノ酸配列の対応する部分と相同性または同一性を共有する場合、標的アミノ酸配列は、参照アミノ酸配列に「由来する」または「対応する」。「対応する部分」は、例えば、標的抗体の重鎖可変領域のフレームワーク領域１（ＦＲＨ１）が参照抗体の重鎖可変領域のフレームワーク領域１に対応することを意味する。特定の実施形態では、参照アミノ酸配列に「由来する」または「対応する」標的アミノ酸配列は、その全長にわたって、参照アミノ酸配列の対応する部分と１００％相同、または特に、１００％同一である。アミノ酸配列またはヌクレオチド配列の「相同性」または「同一性」は、参照配列の全長にわたって、または相同性もしくは同一性が定義される配列に対応する参照配列の対応する部分の全長にわたって、本発明によって好ましくは決定される。
【００２７】
本明細書で使用される用語「抗体」はまた、多価および多特異的抗体、すなわち、各々同じエピトープに結合する２つよりも多い結合部位を有する抗体構築物と、第１のエピトープに結合する１つまたは複数の結合部位および第２のエピトープに結合する１つまたは複数の結合部位ならびに必要に応じて、さらなるエピトープに結合するまたさらなる結合部位を有する抗体構築物とを指す。
【００２８】
「特異的結合」は、好ましくは、抗体などの作用物質が、別の標的への結合性と比較して特異的であるエピトープなどの標的により強く結合することを意味する。作用物質は、これが第２の標的の解離定数（Ｋｄ）より低い解離定数で第１の標的に結合する場合、第２の標的と比較して第１の標的により強く結合する。好ましくは、作用物質が特異的に結合する標的の解離定数は、作用物質が特異的に結合しない標的の解離定数より１００倍超、２００倍、５００倍、または１０００倍超低い。さらに、用語「特異的結合」は特に、少なくとも１０６Ｍ−１、好ましくは少なくとも１０７Ｍ−１、より好ましくは少なくとも１０８Ｍ−１のＫａを有する結合パートナー間の結合親和性を示す。ある特定の抗原に特異的な抗体とは、特に、少なくとも１０６Ｍ−１、好ましくは少なくとも１０７Ｍ−１、より好ましくは少なくとも１０８Ｍ−１の親和性定数Ｋａを有する親和性で前記抗原に結合することができる抗体を指す。例えば、用語「抗ＭＵＣ１抗体」とは、ＭＵＣ１に特異的に結合する抗体を指し、好ましくは、少なくとも１０６Ｍ−１、好ましくは少なくとも１０７Ｍ−１、より好ましくは少なくとも１０８Ｍ−１のＫａを有する親和性でＭＵＣ１に結合することができる。
【００２９】
本明細書で使用される用語「ＰａｎｋｏＭａｂ」は、特に、ＷＯ２０１１／０１２３０９  Ａ１で開示される抗体ＰａｎｋｏＭａｂの、またはそのヒト化バージョンのアミノ酸配列を有する抗体を指す。
【００３０】
本発明によれば、用語「グリコシル化部位」は特に、天然グリコシル化酵素、特に、グリコシルトランスフェラーゼ、好ましくは天然に存在する哺乳動物またはヒトグリコシルトランスフェラーゼによって特異的に認識およびグリコシル化され得るアミノ酸配列を指す。特に、用語「グリコシル化部位」は、炭水化物が結合されている、または結合されうるアスパラギン残基を含む、Ｎ−グリコシル化部位を指す。特に、グリコシル化部位は、アミノ酸配列Ａｓｎ−Ｘａａ−Ｓｅｒ／Ｔｈｒ／Ｃｙｓを有するＮ−グリコシル化部位であり、Ｘａａは、任意のアミノ酸残基である。好ましくは、ＸａａはＰｒｏでない。
【００３１】
本発明による「グリカンの相対量」は、抗体集団の、または抗体を含む組成物中の、それぞれ、抗体に結合したグリカンの特定のパーセンテージまたはパーセンテージ範囲を指す。特に、グリカンの相対量は、抗体中に含まれ、かくして、抗体集団中の、または抗体を含む組成物中の、抗体ポリペプチド鎖に結合したすべてのグリカンの特定のパーセンテージまたはパーセンテージ範囲を指す。グリカンの１００％は、抗体集団の、または抗体を含む組成物中の、それぞれ、抗体に結合したすべてのグリカンを指す。特定の実施形態においては、抗体の特異的グリコシル化部位に結合したグリカンのみが考慮される。例えば、抗体のＦｃ部分に結合したグリカンの相対量は、抗体集団の、または抗体を含む組成物中の、それぞれ、抗体のＦｃ部分のグリコシル化部位に結合したグリカンのみを指す。
【００３２】
例えば、２０％の二分岐ＧｌｃＮＡｃを担持するグリカンの相対量は、前記抗体組成物中の抗体のグリコシル化部位に結合したすべてのグリカンの２０％が、二分岐ＧｌｃＮＡｃ残基を含むが、前記抗体集団中の抗体のグリコシル化部位に結合したすべてのグリカンの８０％が、二分岐ＧｌｃＮＡｃ残基を含まない、抗体集団を指す。
【００３３】
Ｆｃ領域などの特定の領域中に、特定のパーセンテージ値または範囲のフコース、ガラクトース、２個のガラクトース、バイセクト型ＧｌｃＮＡｃ、シアル酸または２個のシアル酸などの特定のサッカリド単位またはフィーチャを担持するグリカンの相対量を有する抗体は、特に、集団の全ての前記抗体の前記特定の領域に結合した全てのグリカンの前記パーセンテージまたはパーセンテージ範囲が、前記特定のサッカリド単位を含むか、または前記フィーチャを満たす、全て同じアミノ酸配列を有する抗体の集団を指す。本明細書で使用される用語「炭水化物鎖」、「炭水化物構造」、「グリカン」および「グリカン構造」は、同じ意味を有し、互換的に使用される。
【００３４】
本発明によれば、特異的抗体のＦｃ部分およびかくして、ＣＨ２ドメイン中のフコースの（パーセンテージ）量は、特に、フコース残基を含む特異的抗体の集団中の抗体のＣＨ２ドメイン中の対応するグリコシル化部位に結合した全ての炭水化物鎖のパーセンテージを指す。前記炭水化物鎖は、構造的に、またはＩｇＧ型抗体の重鎖のＫａｂａｔ番号付けによるアミノ酸２９７位とのアミノ酸配列相同性により対応するグリコシル化部位に結合した炭水化物鎖を含む。Ａｓｎ２９７でのＮ結合グリコシル化は、哺乳動物ＩｇＧならびに他の抗体アイソタイプの相同領域中で保存される。抗体は通常、２本の重鎖と２本の軽鎖を含み、したがって、そのＦｃ部分中の各ＣＨ２ドメイン中に１つの、２つのグリコシル化部位を有する。疑いを避けるために、抗体のＣＨ２ドメイン中の両グリコシル化部位が炭水化物鎖を担持しなければならないのは必須ではないことが規定される。２つのＣＨ２ドメイン中の２つのグリコシル化部位間は区別されず、ＣＨ２ドメイン中のグリコシル化ドメインに対する参照はまた、両方のＣＨ２ドメイン中の両方のグリコシル化部位を指す。好ましくは、炭水化物鎖の還元末端のＧｌｃＮＡｃ残基にα１，６結合により結合するフコース残基のみが考慮される。特定の抗体種のＣＨ２ドメイン中のフコースの量に言及する場合、組成物中の前記特定の抗体種の集団の抗体分子のＣＨ２ドメインのグリコシル化部位に結合した炭水化物鎖のみが、フコースのパーセンテージ量、すなわち、フコースを担持する炭水化物鎖の量を決定するために考慮される。存在する場合、抗体のＦａｂ部分中のグリコシル化部位に結合した炭水化物鎖、ならびに目的の抗体と一緒に組成物中に存在する場合、他の抗体に結合した炭水化物鎖は、目的の抗体のＣＨ２ドメイン中のフコースの量を決定するために考慮されない。抗体のＦａｂ部分およびＦｃ部分に結合した炭水化物を、Ｆａｂ部分およびＦｃ部分中で抗体を最初に消化し、部分を互いに分離し、各部分のグリコシル化フィーチャを個別に決定することにより、別々に決定することができる。同様に、抗体のＣＨ２ドメインに結合した、他のサッカリド残基または構造エレメント、例えば、二分岐Ｎ−アセチルグルコサミン（ビスＧｌｃＮＡｃ）、（少なくとも１個または少なくとも２個の）ガラクトース、（少なくとも１個または少なくとも２個の）シアル酸の（パーセンテージ）量は、特に、前記サッカリド残基または構造エレメントを含む集団中のすべての抗体のＣＨ２ドメインのグリコシル化部位に結合した、すべての炭水化物鎖のパーセンテージを指す。
【００３５】
用語「シアル酸」は、特に、ノイラミン酸の任意のＮ−またはＯ−置換誘導体を指す。それは、５−Ｎ−アセチルノイラミン酸および５−Ｎ−グリコリルノイラミン酸の両方を指す場合があるが、好ましくは５−Ｎ−アセチルノイラミン酸のみを指す。シアル酸、特に、５−Ｎ−アセチルノイラミン酸は、好ましくは２，３−または２，６−結合により炭水化物鎖に結合する。好ましくは、本明細書に記載の抗体調製物において、２，３−および２，６−結合シアル酸の両方が存在する。用語「ビスＧｌｃＮＡｃ」または「二分岐ＧｌｃＮＡｃ」は、二分岐Ｎ−アセチルグルコサミン残基、すなわち、複合体型Ｎ−グリカン中の中心マンノース残基に結合したＮ−アセチルグルコサミン残基を指す。
【００３６】
本明細書で与えられる数値、特に、特異的グリコシル化特性の相対量は、好ましくは概数として理解されるべきである。特に、数値は、好ましくは最大で１０％高い、および／または低い、特に、最大で９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％または１％高い、および／または低い場合がある。
【００３７】
「コンジュゲート」において、２種またはそれより多くの化合物が一緒に連結されている。ある特定の実施形態では、各化合物由来の性質の少なくともいくつかがコンジュゲート内で保持されている。連結は、共有結合または非共有結合によって実現され得る。好ましくは、コンジュゲートの化合物は、共有結合によって連結されている。コンジュゲートの異なる化合物は、化合物の原子同士間の１つまたは複数の共有結合を介して互いに直接結合され得る。代わりに、化合物は、リンカー分子などの化学部分を介して互いに結合されている場合があり、リンカーは、化合物の原子に共有結合性に結合している。コンジュゲートが２つを超える化合物から構成される場合、これらの化合物は、例えば、１つの化合物が次の化合物に結合した鎖コンホメーションで連結されてもよく、またはいくつかの化合物はそれぞれ、１つの中心の化合物に結合されてもよい。
【００３８】
用語「ＭＵＣ１」は、タンパク質ＭＵＣ１またはムチン１を指す。特に、それは、ヒトＭＵＣ１タンパク質を指す。ＭＵＣ１は、その細胞外ドメインの広範なＯ−結合グリコシル化を伴う糖タンパク質である。ＭＵＣ１は、肺、胃、腸、眼およびいくつかの他の器官の上皮細胞の頂端膜側を裏打ちする。ＭＵＣ１の過剰発現および特に、上皮細胞の基底面へのその局在化は、結腸がん、乳がん、卵巣がん、肺がんおよび膵がんと関連付けられることが多い。
【００３９】
用語「ＥｒｂＢ受容体」は、特に、ＥｒｂＢ受容体ファミリーの、特に、ヒトＥｒｂＢ受容体ファミリーのメンバー、特に、ＥＧＦＲ／ＨＥＲ１、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３および／またはＨＥＲ４のいずれかおよび／またはすべてを指す。ＥｒｂＢ受容体は、細胞外リガンド結合ドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞内キナーゼドメインを含む受容体チロシンキナーゼである。そのリガンド（例えば、上皮増殖因子（ＥＧＦ）およびトランスフォーミング増殖因子α（ＴＧＦα））の結合の際に、ＥｒｂＢ受容体はホモ二量体または他のＥｒｂＢ受容体とのヘテロ二量体を形成し、そのキナーゼ機能が活性化され、細胞内ドメインのいくつかのチロシンの自己リン酸化をもたらす。本発明による用語「ＥＧＦＲ」は、特に、ヒト上皮増殖因子受容体１を指し、ＥｒｂＢ−１またはＨＥＲ１としても公知である。
【００４０】
本発明による用語「阻害剤」は、その標的、特に、受容体に結合し、その活性、特に、リガンドの存在下でのその活性を遮断するまたは低下させる分子である。受容体の阻害剤は、受容体へのリガンドの結合、受容体二量体などの活性複合体の形成、受容体への下流のパートナーの結合、リン酸化などの受容体の修飾および／またはキナーゼ活性などの受容体の酵素活性を防止または減少させ得る。阻害剤は、１つの標的、例えば、ＥＧＦＲについて特異的であってもよく、特定の標的群、例えば、ＥｒｂＢファミリーのメンバーについて特異的であってもよく、特定の標的クラス、例えば、受容体チロシンキナーゼについて特異的であってもよい。
【００４１】
用語「患者」は特に、ヒトを指す。
【００４２】
本発明による用語「がん」は、特に、白血病、精上皮腫、黒色腫、奇形腫、リンパ腫、神経芽細胞腫、神経膠腫、直腸がん、子宮内膜がん、腎がん、副腎がん、甲状腺がん、血液のがん、皮膚がん、脳のがん、子宮頸がん、腸がん（ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｃａｎｃｅｒ）、肝がん、結腸がん、胃がん、腸がん（ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ  ｃａｎｃｅｒ）、頭頸部がん、胃腸がん、リンパ節がん、食道がん、結腸直腸がん、膵がん、耳鼻咽喉（ＥＮＴ）がん、乳がん、前立腺がん、子宮がん、卵巣がんおよび肺がんならびにそれらの転移を含む。その例としては、肺癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、結腸癌、腎細胞癌、子宮頸癌または上記のがん型もしくは腫瘍の転移がある。本発明による用語がんはまた、がん転移を含む。
【００４３】
「腫瘍」とは、誤調節された細胞増殖により形成される細胞群または組織を意味する。腫瘍は、構造的組織化および正常組織との機能的協調の部分的または完全な欠如を示し、通常、明確な組織塊を形成する場合があり、それは、良性である場合も、悪性である場合もある。
【００４４】
「転移」または「複数の転移」とは、身体のその元の部位（例えば、原発性腫瘍部位）から別の部分へのがん細胞の拡散を意味する。脈絡が別段示す場合を除き、単数形と複数形の「転移」の間は区別されない。転移の形成は非常に複雑なプロセスであり、通常、原発性腫瘍からのがん細胞の剥離、体内循環への進入および身体の他の場所の正常組織内で定着して増殖することを含む。腫瘍細胞が転移する場合、新しい腫瘍は、続発性または転移性腫瘍と呼ばれ、その細胞は通常、元の腫瘍内の細胞に似ている。このことは、例えば、乳がんが肺へと転移した場合、続発性腫瘍は、異常な乳房細胞から構成されており、異常な肺細胞から構成されているわけではないことを意味する。そこで、肺における腫瘍は、転移性乳がんと呼ばれ、肺がんとは呼ばれない。転移は、新生物疾患またはがんの実施形態として見られる。
【００４５】
本発明による用語「ＥｒｂＢ陽性がん」は、特に、細胞がＥｒｂＢファミリーの１つまたは複数のメンバーを発現している新生物疾患、がん、腫瘍および／または転移を指す。ＥｒｂＢ陽性がんは、ＥｒｂＢファミリーの１つまたは複数のメンバーを発現するがん細胞を含む。ある特定の実施形態においては、腫瘍、転移またはその他は、ある特定のパーセンテージの含まれる細胞がＥｒｂＢファミリーの少なくとも１つのメンバーを発現する場合、ＥｒｂＢ陽性と分類される。例えば、先行技術においては、腫瘍は通常、少なくとも１％の腫瘍細胞がＥｒｂＢファミリーの少なくとも１つのメンバーを発現する場合、ＥｒｂＢ陽性と分類されている。それが、ＥｒｂＢファミリーの特定のメンバー、例えば、ＥＧＦＲまたはＨＥＲ２について言及される場合、同様のことがこの特定のＥｒｂＢ受容体に適用される。例えば、ＥＧＦＲ陽性がんは、ＥＧＦＲを発現するがん細胞、特に、ある特定のパーセンテージ、例えば少なくとも１％のがん細胞を含む。
【００４６】
ＥｒｂＢ陽性がんとしては、限定されるものではないが、悪性上皮腫瘍、乳がん、胃がん、消化管のがん、癌、結腸がん、膀胱がん、尿路上皮腫瘍、子宮がん、食道がん、胃食道接合部のがん、卵巣がん、肺がん、子宮内膜がん、腎臓がん、膵臓がん、甲状腺がん、結腸直腸がん、前立腺がん、脳のがん、子宮頸がん、腸がんおよび肝臓がんが挙げられる。好ましくは、処置されるＥrbB陽性がんは、結腸がん（盲腸がんおよび直腸がんを含む）、肺がん、乳がん、腎臓がん、胃がん、子宮内膜がん、尿路上皮がん、子宮頸がん、特に、扁平上皮非小細胞肺がん（ｓＮＳＣＬＣ）、および非扁平上皮非小細胞肺がん（ｎｓＮＳＣＬＣ）などの非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）から選択される。
【００４７】
本発明による用語「手術」は特に、腫瘍、特に、乳房の腫瘍などの原発性腫瘍および／または１つもしくは複数の転移のすべて、または一部を含む組織の外科的除去（切除またはエクトミー）を指す。
【００４８】
「アジュバント療法」は特に、手術後のがんの処置を指す。
【００４９】
「ネオアジュバント療法」は特に、手術前のがんの処置を指す。
【００５０】
「緩和療法」は特に、がんを著しく低減することを予期することなく症状管理に対処するために特に与えられるがん療法を指す。緩和ケアは、治療不能ながんに付随する症状を改善することを対象とする。緩和ケアの主目的は、患者の生活の残りの質を改善することである。痛みは、がんに付随する一般的な症状の１つである。末期がん患者のおよそ７５％が痛みを有する。痛みは主観的な症状であり、したがってこれは、技術的な手法を使用して測定することができない。がん患者の大部分は、隣接する神経、骨、もしくは軟組織を圧迫する腫瘍塊の結果として、または直接的な神経傷害（神経因性疼痛）から痛みを経験する。痛みは、肋骨、筋肉、および腹部などの内部構造における影響を受けた神経から起こり得る（閉塞に付随するけいれんタイプの痛み）。多くの患者は、追跡検査、処置（手術、放射線、および化学療法）、ならびに診断手順（すなわち、生検）の直接的な結果として様々なタイプの痛みも経験する。治療的に有用な緩和療法は、痛みを低減することができる。
【００５１】
用語「放射線治療（ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ）」は、放射線療法（ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ）としても知られ、特に、悪性細胞を制御し、または死滅させるためのイオン化放射線の医療上の使用を意味する。放射線治療は、例えば、手術後の腫瘍再発を防止するため、または原発性腫瘍もしくは転移を除去するために、アジュバント療法および／もしくはネオアジュバント療法として手術と組み合わせて、または手術を伴わないで使用することができる。
【００５２】
用語「医薬組成物」および同様の用語は特に、ヒトに投与するのに適した組成物、すなわち、薬学的に許容される成分を含有する組成物を指す。好ましくは、医薬組成物は、担体、希釈剤、または薬学的賦形剤、例えば、緩衝剤、または張度修飾物質などと一緒に、活性化合物、またはその塩を含む。一実施形態によれば、医薬組成物は保存剤を含まない。
【００５３】
用語「抗体組成物」および「抗体を含む組成物」は、脈絡が別段に示さない場合、本明細書では互換的に使用される。また、本明細書で使用される用語「抗体」は、ある特定の実施形態においては、抗体組成物を指す場合がある。抗体組成物は、流体または固体組成物であってもよく、また、凍結乾燥された、または再構成された抗体組成物を含む。好ましくは、流体組成物、より好ましくは、水性組成物が使用される。ある特定の実施形態においては、それは水、ｐＨ値を調整および維持するためのバッファー、ならびに必要に応じて、抗体を安定化させるため、または抗体の分解を防止するためのさらなる作用物質などの溶媒をさらに含む。抗体組成物は、好ましくは、合理的な量の抗体、特に、少なくとも１ｆｍｏｌ、好ましくは、少なくとも１ｐｍｏｌ、少なくとも１ｎｍｏｌまたは少なくとも１μｍｏｌの抗体を含む。ある特定の実施形態においては、抗体組成物は、医薬組成物である。
【発明を実施するための形態】
【００５４】
本発明者らは、ＭＵＣ１に対する抗体とＥｒｂＢファミリーの受容体の阻害剤との組み合わせ使用が、腫瘍細胞の破壊において、したがって、がんの処置において改善した効果をもたらすことを示した。この理論に束縛されるものではないが、ＥｒｂＢ受容体の阻害は、腫瘍細胞においてＭＵＣ１の発現を誘導すると考えられる。これによって、抗ＭＵＣ１抗体の有効性は、増強される。したがって、本発明は、がんの処置における抗ＭＵＣ１抗体とＥｒｂＢ受容体の阻害剤との組み合わせ使用に関する。
【００５５】
本発明は、ＥｒｂＢファミリーの受容体の阻害剤と組み合わせた、がんの処置における使用のためのＭＵＣ１に対する抗体を提供する。
【００５６】
同様に、本発明は、ＭＵＣ１に対する抗体と組み合わせた、がんの処置における使用のためのＥｒｂＢファミリーの受容体の阻害剤を提供する。
【００５７】
本発明の好ましい実施形態を、続いて、およびそれが言及される特許請求の範囲において記載する。
【００５８】
抗ＭＵＣ１抗体
ＭＵＣ１に対する抗体または抗ＭＵＣ１抗体は、ＭＵＣ１を特異的に認識および結合することができる抗体である。
【００５９】
ＭＵＣ１またはムチン−１は、ムチンファミリーのメンバーであり、グリコシル化膜貫通リンタンパク質である。このタンパク質は、膜貫通ドメインによって多くの上皮細胞の頂端膜側に固定されている。細胞外ドメインは、２０個のアミノ酸の可変数タンデムリピート（ＶＮＴＲ）ドメインを含み、リピート数は、異なる個体において２０〜１２０で変動する。これらのリピートは、セリン、トレオニンおよびプロリン残基を豊富に含み、これらは高Ｏ−グリコシル化を可能にする。
【００６０】
ある特定の実施形態においては、抗ＭＵＣ１抗体は、ＭＵＣ１の細胞外領域のエピトープ、特に、タンデムリピートドメインのエピトープに対する抗体である。ある特定の実施形態においては、抗ＭＵＣ１抗体は、コンフォメーション依存的、かつ／またはグリコシル化依存的様式で、ＭＵＣ１に結合する。特に、抗ＭＵＣ１抗体は、前記タンデムリピートがＮ−アセチルガラクトサミン（Ｔｎ）、シアリルα２−６Ｎ−アセチルガラクトサミン（ｓＴｎ）、ガラクトースβ１−３  Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＴＦ）またはガラクトースβ１−３（シアリルα２−６）Ｎ−アセチルガラクトサミン（ｓＴＦ）により、好ましくはＴｎまたはＴＦにより、トレオニン残基でグリコシル化された場合、より強く結合する。好ましくは、炭水化物部分は、α−Ｏ−グリコシド結合によってトレオニン残基に結合される。
【００６１】
特定の実施形態においては、抗体は、アミノ酸配列ＰＤＴＲ（配列番号１９）またはＰＤＴＲＰ（配列番号２０）を含むＭＵＣ１のタンデムリピートドメインのエピトープに特異的に結合することができる。このエピトープへの結合は、好ましくは、上記のように、グリコシル化依存的であり、特に、上記の炭水化物部分が、それぞれ、配列ＰＤＴＲまたはＰＤＴＲＰのトレオニン残基に結合している場合、結合が増大する。
【００６２】
ある特定の実施形態においては、抗ＭＵＣ１抗体は、腫瘍関連ＭＵＣ１エピトープ（ＴＡ−ＭＵＣ１）に対する抗体である。ＴＡ−ＭＵＣ１エピトープは、特に、腫瘍細胞上に存在するが、正常細胞上には存在しない、かつ／または腫瘍細胞上に存在する場合のみ宿主循環中の抗体によってアクセス可能であるが、正常細胞上に存在する場合アクセス可能でない、ＭＵＣ１のエピトープを指す。上記のエピトープ、特に、ＭＵＣ１のタンデムリピートドメインに存在するエピトープは、腫瘍関連ＭＵＣ１エピトープであり得る。ある特定の実施形態においては、抗ＭＵＣ１抗体の、ＴＡ−ＭＵＣ１エピトープを発現する細胞への結合は、正常な非腫瘍ＭＵＣ１を発現する細胞への結合より強い。好ましくは、前記結合は、少なくとも１．５倍強く、好ましくは少なくとも２倍強く、少なくとも５倍強く、少なくとも１０倍強く、または少なくとも１００倍強い。特に、ＴＡ−ＭＵＣ１は、その細胞外タンデムリピート領域において少なくとも１つのＮ−アセチルガラクトサミン（Ｔｎ）またはガラクトースβ１−３  Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＴＦ）によりグリコシル化される。ある特定の実施形態においては、抗ＭＵＣ１抗体は、Ｎ−アセチルガラクトサミン（Ｔｎ）またはガラクトースβ１−３  Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＴＦ）を含むＴＡ−ＭＵＣ１の細胞外タンデムリピート領域のこのエピトープに特異的に結合する。特に、前記エピトープは、ＭＵＣ１タンデムリピートの少なくとも１つのＰＤＴＲ配列（配列番号１９）またはＰＤＴＲＰ配列（配列番号２０）を含み、好ましくはα−Ｏ−グリコシド結合を介して、Ｎ−アセチルガラクトサミン（Ｔｎ）またはガラクトースβ１−３  Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＴＦ）によりＰＤＴＲ配列（配列番号１９）またはＰＤＴＲＰ配列（配列番号２０）のトレオニンでグリコシル化される。ＴＡ−ＭＵＣ１結合について、抗ＭＵＣ１抗体は、結合強度が、同一の長さおよび同一のペプチド配列の非グリコシル化ペプチドへの結合と比較して、少なくとも２倍、好ましくは４倍または１０倍、最も好ましくは２０倍増大するように、好ましくはグリコシル化ＭＵＣ１腫瘍エピトープに特異的に結合する。
【００６３】
抗ＭＵＣ１抗体は、好ましくはモノクローナル抗体である。さらに、抗ＭＵＣ１抗体は、好ましくはヒト、マウス、ヤギ、霊長類もしくはラクダ抗体であるか、またはそれらに由来する。それは、キメラまたはヒト化抗体であってもよい。それは、任意のアイソタイプまたはそのサブクラスの、特にＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥまたはＩｇＤアイソタイプまたはそのサブクラス、例えばＩｇＧ１の抗体であってもよい。抗ＭＵＣ１抗体は、さらに、例えば、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ）２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ断片、（Ｆｖ）２断片およびマルチボディからなる群より選択される、抗体の断片または誘導体であり得る。抗体誘導体である抗ＭＵＣ１抗体の例としては、抗体または抗体断片を含む融合タンパク質、および保存されたＦｃグリコシル化部位を欠く変異体などの変異抗体がある。
【００６４】
抗ＭＵＣ１抗体に含まれる重鎖可変領域は、好ましくは配列番号１または２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号３または４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２および配列番号５または６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３からなる群より選択される少なくとも１つのＣＤＲ、好ましくは少なくとも配列番号１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を包含する。特に、それは、ＣＤＲ１が配列番号１のアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ２が配列番号３のアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ３が配列番号５のアミノ酸配列を有するか、またはＣＤＲ１が配列番号２のアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ２が配列番号４のアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ３が配列番号６のアミノ酸配列を有する１組のＣＤＲを含み得る。
【００６５】
一実施形態によれば、重鎖可変領域は、配列番号７、８もしくは９のアミノ酸配列または前記配列のうちの１つと少なくとも７５％、特に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％もしくは少なくとも９７％相同もしくは同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態においては、抗ＭＵＣ１抗体の重鎖可変領域は、（ｉ）ＣＤＲ１が配列番号１のアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ２が配列番号３のアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ３が配列番号５のアミノ酸配列を有するか、またはＣＤＲ１が配列番号２のアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ２が配列番号４のアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ３が配列番号６のアミノ酸配列を有する１組のＣＤＲを含み、（ｉｉ）配列番号７、８および９のうちのいずれか１つと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％同一である、アミノ酸配列を含む。
【００６６】
抗ＭＵＣ１抗体は、配列番号１０または１１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１２または１３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２および配列番号１４または１５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３からなる群より選択される少なくとも１つのさらなる相補性決定領域をさらに含む場合があり、前記少なくとも１つのさらなる相補性決定領域は、好ましくは軽鎖可変領域内に存在する。特に、抗ＭＵＣ１抗体は、好ましくは、重鎖可変領域のＣＤＲが配列番号１、３および５のアミノ酸配列を有し、かつ軽鎖可変領域のＣＤＲが配列番号１０、１２および１４のアミノ酸配列を有するか、または重鎖可変領域のＣＤＲが配列番号２、４および６のアミノ酸配列を有し、かつ軽鎖可変領域のＣＤＲが配列番号１１、１３および１５のアミノ酸配列を有する１組のＣＤＲを含む。前記軽鎖可変領域は、配列番号１６、１７もしくは１８のアミノ酸配列または前記配列のうちの１つと少なくとも７５％、特に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％もしくは少なくとも９７％相同もしくは同一であるアミノ酸配列を含み得る。ある特定の実施形態においては、抗ＭＵＣ１抗体の軽鎖可変領域は、（ｉ）ＣＤＲ１が配列番号１０のアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ２が配列番号１２のアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ３が配列番号１４のアミノ酸配列を有するか、またはＣＤＲ１が配列番号１１のアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ２が配列番号１３のアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ３が配列番号１５のアミノ酸配列を有する１組のＣＤＲを含み、（ｉｉ）配列番号１６、１７および１８のうちのいずれか１つと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％同一である、アミノ酸配列を含む。
【００６７】
特に好ましい実施形態においては、本発明による抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。さらなる実施形態においては、抗体は、上記の配列のうちの１つまたは複数を含む抗体に由来する。
【００６８】
ある特定の実施形態においては、抗ＭＵＣ１抗体は、そのキメラもしくはヒト化バージョンのＰａｎｋｏＭａｂまたはそれに由来する抗体である。ＰａｎｋｏＭａｂ由来の抗体は、特に、ＰａｎｋｏＭａｂと同じエピトープに結合し、かつ／またはＰａｎｋｏＭａｂとの交差特異性を示す。
【００６９】
ある特定の実施形態においては、本発明による抗ＭＵＣ１抗体は、グリコシル化されている。特に、抗ＭＵＣ１抗体は、重鎖の第２の定常ドメイン（ＣＨ２）中にグリコシル化部位を有する、ＩｇＧ抗体、好ましくは、ＩｇＧ１抗体である。抗体は通常、同一のアミノ酸配列を有する２本の重鎖を有する。したがって、抗ＭＵＣ１抗体は、好ましくは、その２つのＣＨ２ドメインの各々に１つの、少なくとも２つのグリコシル化部位を有する。このグリコシル化部位は、特に、Ｋａｂａｔの番号付けによる重鎖のアミノ酸２９７位に対応するアミノ酸位置にあり、アミノ酸配列モチーフＡｓｎ  Ｘａａ  Ｓｅｒ／Ｔｈｒ（式中、Ｘａａはプロリン以外の任意のアミノ酸であってもよい）を有する。Ａｓｎ２９７のＮ結合グリコシル化は、哺乳動物ＩｇＧならびに他の抗体アイソタイプの相同領域において保存されている。可変領域または他の配列改変の中に存在してもよい必要に応じたさらなるアミノ酸のため、この保存されたグリコシル化部位の実際の位置は、抗体のアミノ酸配列中で変化してもよい。好ましくは、抗ＭＵＣ１抗体に結合したグリカンは、好ましくは、少なくとも以下の構造：
Ａｓｎ−ＧｌｃＮＡｃ−ＧｌｃＮＡｃ−Ｍａｎ−（Ｍａｎ−ＧｌｃＮＡｃ）２
（式中、Ａｓｎは抗体のポリペプチド部分のアスパラギン残基であり；ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミンであり、Ｍａｎはマンノースである）
を含む、二分岐型複合型Ｎ−結合炭水化物構造である。末端のＧｌｃＮＡｃ残基は、必要に応じてシアル酸残基を担持してもよい、ガラクトース残基をさらに担持してもよい。さらなるＧｌｃＮＡｃ残基（バイセクト型ＧｌｃＮＡｃと命名される）を、ポリペプチドに最も近いＭａｎに結合させることができる。フコースを、Ａｓｎに結合したＧｌｃＮＡｃに結合することができる。
【００７０】
ある特定の実施形態においては、抗ＭＵＣ１抗体は、以下の特徴：
（ｉ）抗体集団中の前記抗ＭＵＣ１抗体のＦｃ部分に結合したグリカンの総量の少なくとも１％、特に少なくとも２％または少なくとも５％の二分岐Ｎ−アセチルグルコサミン（ビスＧｌｃＮＡｃ）を担持するグリカンの相対量；
（ｉｉ）抗体集団中の前記抗ＭＵＣ１抗体のＦｃ部分に結合したグリカンの総量の４０％もしくはそれ未満、特に３５％もしくはそれ未満または３０％もしくはそれ未満の少なくとも１つのシアル酸を担持するグリカンの相対量；および／または
（ｉｉｉ）抗体集団中の前記抗ＭＵＣ１抗体のＦｃ部分に結合したグリカンの総量の少なくとも３０％、特に少なくとも４０％または少なくとも５０％の少なくとも１つのガラクトース残基を担持するグリカンの相対量
のうちの１つまたは複数を有するＦｃ部分でのグリコシル化パターンを有する。
【００７１】
好ましくは、グリコシル化パターンは、フィーチャ（ｉ）、（ｉｉ）および（ｉｉｉ）のうちの少なくとも２つ（特に、フィーチャ（ｉ）および（ｉｉ）、（ｉ）および（ｉｉｉ）または（ｉｉ）および（ｉｉｉ））、より好ましくはフィーチャ（ｉ）、（ｉｉ）および（ｉｉｉ）のすべてを含む。
【００７２】
好ましい実施形態においては、抗ＭＵＣ１抗体は、Ｎ−グリコリルノイラミン酸（ＮｅｕＧｃ）または検出可能な量のＮｅｕＧｃを含まない。さらに、抗ＭＵＣ１抗体はまた、好ましくはＧａｌｉｌｉエピトープ（Ｇａｌα１，３−Ｇａｌ構造）または検出可能な量のＧａｌｉｌｉエピトープを含まない。特に、ＮｅｕＧｃおよび／またはＧａｌα１，３−Ｇａｌ構造を担持するグリカンの相対量は、抗体集団中の抗ＭＵＣ１抗体のＦｃ部分に結合したグリカンの総量の０．１％未満またはさらには０．０２％未満である。
【００７３】
特に、抗ＭＵＣ１抗体は、ヒトグリコシル化パターンを有する。これらのグリコシル化特性のために、副作用を誘導する外来性免疫原性非ヒト構造は存在せず、このことは、ある特定の外来糖構造、例えば両方ともげっ歯類生成系について公知の免疫原性非ヒトシアル酸（ＮｅｕＧｃ）もしくはＧａｌｉｌｉエピトープ（Ｇａｌ−Ｇａｌ構造）、または例えば酵母系から公知の免疫原性高マンノース構造のような他の構造により引き起こされることが公知の、望ましくない副作用または不利益が避けられることを意味する。
【００７４】
ある特定の実施形態においては、抗ＭＵＣ１抗体のＦｃ部分のグリコシル化パターンは、以下の特徴：
（ｉ）抗体集団中の前記抗ＭＵＣ１抗体のＦｃ部分に結合したグリカンの総量の２％〜３０％の範囲の二分岐Ｎ−アセチルグルコサミン（ビスＧｌｃＮＡｃ）を担持するグリカンの相対量；
（ｉｉ）抗体集団中の前記抗ＭＵＣ１抗体のＦｃ部分に結合したグリカンの総量の２％〜３０％の範囲の少なくとも１つのシアル酸を担持するグリカンの相対量；および／または
（ｉｉｉ）抗体集団中の前記抗ＭＵＣ１抗体のＦｃ部分に結合したグリカンの総量の４０％〜９５％の範囲の少なくとも１つのガラクトース残基を担持するグリカンの相対量
のうちの１つまたは複数、好ましくは全てを含む。
【００７５】
抗ＭＵＣ１抗体は、Ｆｃグリコシル化において高い量のフコースを有し得る。これらの実施形態においては、抗ＭＵＣ１抗体は、抗体集団中の抗ＭＵＣ１抗体のＦｃ部分に結合したグリカンの総量の少なくとも６０％、特に少なくとも７０％または少なくとも８０％のフコースを担持するグリカンの相対量を有する、Ｆｃ部分でのグリコシル化パターンを有する。代替の実施形態においては、抗ＭＵＣ１抗体は、Ｆｃグリコシル化において低い量のフコースを有する。これらの実施形態においては、抗ＭＵＣ１抗体は、抗体集団中の抗ＭＵＣ１抗体のＦｃ部分に結合したグリカンの総量の５０％もしくはそれ未満、特に４０％もしくはそれ未満または３０％もしくはそれ未満のフコースを担持するグリカンの相対量を有する、Ｆｃ部分でのグリコシル化パターンを有する。特に、抗ＭＵＣ１抗体は、抗体集団中の抗ＭＵＣ１抗体のＦｃ部分に結合したグリカンの総量の２５％もしくはそれ未満、２０％もしくはそれ未満または１５％もしくはそれ未満のフコースを担持するグリカンの相対量を有する、Ｆｃ部分でのグリコシル化パターンを有する。
【００７６】
抗ＭＵＣ１抗体は、好ましくは宿主細胞において組換え生成される。したがって、抗ＭＵＣ１抗体は、特に、モノクローナル抗体である。抗ＭＵＣ１抗体の生成に使用される宿主細胞は、抗体生成に使用され得る任意の宿主細胞であり得る。好適な宿主細胞は、特に、真核生物宿主細胞、特に、哺乳動物宿主細胞である。宿主細胞の例としては、Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ細胞株などの酵母細胞、ＳＦ９およびＳＦ２１細胞株などの昆虫細胞、植物細胞、ＥＢ６６アヒル細胞株などの鳥類細胞、ＣＨＯ、ＮＳ０、ＳＰ２／０およびＹＢ２／０細胞株などのげっ歯類細胞ならびにＨＥＫ２９３、ＰＥＲ．Ｃ６、ＣＡＰ−Ｔ、Ｍｕｔｚ−３およびＫＧ１細胞株などのヒト細胞がある。
【００７７】
ある特定の実施形態においては、抗ＭＵＣ１抗体は、ヒト血液細胞株において、特に、ヒト骨髄性白血病細胞株において組換え生成される。抗ＭＵＣ１抗体の生成に使用され得る好ましいヒト細胞株および好適な生成手技は、ＷＯ  ２００８／０２８６８６  Ａ２で説明されている。特定の実施形態においては、抗ＭＵＣ１抗体は、ＮＭ−Ｈ９Ｄ８、ＮＭ−Ｈ９Ｄ８−Ｅ６、ＮＭ−Ｈ９Ｄ８−Ｅ６Ｑ１２およびＧＴ−５Ｓからなる群より選択されるヒト骨髄性白血病細胞株における発現により得られる。これらの細胞株は、Ｇｌｙｃｏｔｏｐｅ  ＧｍｂＨ、Ｒｏｂｅｒｔ−Ｒｏｅｓｓｌｅ−Ｓｔｒ．１０、１３１２５  Ｂｅｒｌｉｎ（ＤＥ）によりＤｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ｕｎｄ  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ（ＤＳＭＺ）、Ｉｎｈｏｆｆｅｎｓｔｒａｓｓｅ  ７Ｂ、３８１２４  Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ（ＤＥ）にブダペスト条約の要件に従って、受託番号ＤＳＭ  ＡＣＣ２８０６（ＮＭ−Ｈ９Ｄ８；２００６年９月１５日に寄託された）、ＤＳＭ  ＡＣＣ２８０７（ＮＭ−Ｈ９Ｄ８−Ｅ６；２００６年１０月５日に寄託された）、ＤＳＭ  ＡＣＣ２８５６（ＮＭ−Ｈ９Ｄ８−Ｅ６Ｑ１２；２００７年８月８日に寄託された）およびＤＳＭ  ＡＣＣ３０７８（ＧＴ−５ｓ；２０１０年７月２８日に寄託された）の下で寄託された。他の好適な細胞株としては、米国培養細胞系統保存機関に存在するヒト骨髄性白血病細胞株であるＫ５６２（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−２４３）および上記の細胞株に由来する細胞株がある。
【００７８】
ある特定の実施形態においては、抗ＭＵＣ１抗体は、そのＦａｂ断片において、特に、重鎖可変領域ＶＨにおいて追加のグリコシル化部位を含む。好ましい実施形態においては、抗ＭＵＣ１抗体は、同一のアミノ酸配列を有する２つの重鎖と、同一のアミノ酸配列を有する２つの軽鎖とを含む。したがって、抗ＭＵＣ１抗体は、ある特定の実施形態においては、２つの追加のグリコシル化部位、特に、その２つのＶＨドメインの各々におけるものを含む。
【００７９】
抗ＭＵＣ１抗体のＦａｂ部分でのグリコシル化パターンは、抗体集団中の抗ＭＵＣ１抗体のＦａｂ部分に結合したグリカンの総量の少なくとも１０％、好ましくは少なくとも１５％または少なくとも２０％のビスＧｌｃＮＡｃを担持するグリカンの相対量を含み得る。Ｆａｂグリコシル化におけるビスＧｌｃＮＡｃの量は、好ましくは２０％〜８５％の範囲である。
【００８０】
さらに、抗ＭＵＣ１抗体のＦａｂ部分でのグリコシル化パターンは、抗体集団中の抗ＭＵＣ１抗体のＦａｂ部分に結合したグリカンの総量の少なくとも６０％、好ましくは少なくとも７０％または少なくとも８０％の少なくとも１つのガラクトース残基を担持するグリカンの相対量を含み得る。
【００８１】
さらに、抗ＭＵＣ１抗体のＦａｂ部分でのグリコシル化パターンは、抗体集団中の抗ＭＵＣ１抗体のＦａｂ部分に結合したグリカンの総量の少なくとも４０％、好ましくは少なくとも５０％または少なくとも６０％の少なくとも１つのシアル酸を担持するグリカンの相対量を含み得る。
【００８２】
特に、Ｆａｂ部分のこれらのグリコシル化特徴は、上記のＦｃ部分のグリコシル化特徴との組み合わせで抗ＭＵＣ１抗体において存在する。
【００８３】
上記のｂｉｓＧｌｃＮＡｃ、ガラクトースおよびシアル酸を含むグリコシル化は、ヒトグリコシル化パターンにとって特徴的であり、上記のヒト細胞株中で抗ＭＵＣ１抗体を発現させることにより取得することができる。好ましくは、本明細書に記載のシアル酸とは、好ましくは、α２，６−、α２，３−またはα２，８−結合を介してガラクトースにカップリングされる、Ｎ−アセチルノイラミン酸を指す。好ましい実施形態によれば、抗ＭＵＣ１抗体は、検出可能な量のα２，６−結合Ｎ−アセチルノイラミン酸（ＮｅｕＡｃ）を含む。
【００８４】
別の実施形態においては、抗ＭＵＣ１抗体は、グリコシル化されていない。特定の実施形態においては、抗ＭＵＣ１抗体は、グリコシル化部位、特に、ＣＨ２ドメインにおける保存されたＮ−グリコシル化部位を含まない。
【００８５】
抗ＭＵＣ１抗体は、好ましくはＩｇＧ抗体、より好ましくはＩｇＧ１抗体である。それは、その標的エピトープを特異的に結合する能力と、Ｆｃγ受容体に、特に、Ｆｃγ受容体ＩＩＩａに結合する能力とを有する。抗ＭＵＣ１抗体は、抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）反応を誘導することができる。
【００８６】
特定の実施形態では、抗ＭＵＣ１抗体は、治療的活性物質などのさらなる作用物質とコンジュゲートした抗体を含むコンジュゲートとして提供される。抗ＭＵＣ１抗体は、１つまたは複数のさらなる作用物質とコンジュゲートすることができる。１つを超えるさらなる作用物質がコンジュゲートにおいて存在する場合、これらのさらなる作用物質は、同一であっても、異なっていてもよく、特に、すべて同一である。抗ＭＵＣ１抗体へのさらなる作用物質のコンジュゲーションは、当該分野で公知の任意の方法を使用して達成することができる。さらなる作用物質は、特に、融合もしくは化学的カップリングによって共有結合的に、または非共有結合的に抗体に結合され得る。ある特定の実施形態においては、さらなる作用物質は、特に、リンカー部分を介して、抗ＭＵＣ１抗体に共有結合される。リンカー部分は、抗ＭＵＣ１抗体にさらなる作用物質を結合するために好適な任意の化学的実体であり得る。
【００８７】
さらなる作用物質は、抗ＭＵＣ１抗体の任意の好適な位置にカップリングされ得る。カップリングは、ランダムであっても、部位特異的であってもよい。例えば、さらなる作用物質は、リシン、メチオニンまたはシステインなどの特定のアミノ酸にカップリングしてもよく、抗体のポリペプチド鎖のうちの１つまたは複数のＮ末端またはＣ末端にカップリングしてもよい。さらに、さらなる作用物質は、人工アミノ酸を含む、アミノ酸配列に特異的に導入されたアミノ酸にカップリングしてもよい。さらに、さらなる作用物質は、天然炭水化物鎖および人工的に導入した炭水化物鎖を含む、抗体の炭水化物鎖にカップリングしてもよい。
【００８８】
さらなる作用物質は、好ましくは、がんの療法および／または監視において有用である。例えば、さらなる作用物質は、放射性核種、化学療法剤、抗体または抗体断片、特に、抗ＭＵＣ１抗体と異なる種および／または異なる特異性のもの、酵素、相互作用ドメイン、検出可能標識、毒素、細胞溶解性成分、免疫調節剤、免疫エフェクター、ＭＨＣクラスＩまたはクラスＩＩ抗原、ならびにリポソームからなる群より選択することができる。特定の好適なさらなる作用物質は、放射性核種、またはがん細胞を死滅させることができる細胞傷害性剤、例えば、化学療法剤である。ある特定の好ましい実施形態においては、化学療法剤は、抗ＭＵＣ１抗体に結合してコンジュゲートを形成する。
【００８９】
さらなる作用物質としてコンジュゲートされ得る化学療法剤の具体例としては、シスプラチンなどのアルキル化剤、代謝拮抗剤、植物性アルカロイドおよびテルペノイド、ビンカアルカロイド、ポドフィロトキシン、タキソールなどのタキサン、トポイソメラーゼ阻害剤、例えば、イリノテカンおよびトポテカン、ドキソルビシンなどの抗新生物薬、またはオーリスタチンおよびマイタンシン/マイタンシノイドなどの微小管阻害剤が挙げられる。
【００９０】
化学療法剤は、特に、Ｖ−ＡＴＰアーゼ阻害剤、アポトーシス促進剤、Ｂｃｌ２阻害剤、ＭＣＬ１阻害剤、ＨＳＰ９０阻害剤、ＩＡＰ阻害剤、ｍＴｏｒ阻害剤、微小管安定化剤、微小管不安定化剤（ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ  ｄｅｓｔａｂｉｌｉｚｅｒ）、オーリスタチン、ドラスタチン、マイタンシン（ｍａｙｔａｎｓｉｎ）、マイタンシノイド、アマトキシン、メチオニンアミノペプチダーゼ、タンパク質ＣＲＭ１の核外移行の阻害剤、ＤＰＰＩＶ阻害剤、プロテアソーム阻害剤、ミトコンドリアにおけるリン酸転移反応（ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌ  ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｒｅａｃｔｉｏｎ）の阻害剤、タンパク質合成阻害剤、キナーゼ阻害剤、ＣＤＫ２阻害剤、ＣＤＫ９阻害剤、キネシン阻害剤、ＨＤＡＣ阻害剤、トポイソメラーゼＩ阻害剤、ＤＮＡ傷害剤、ＤＮＡアルキル化剤、ＤＮＡインターカレータ、ＤＮＡ副溝結合剤およびＤＨＦＲ阻害剤からなる群より選択され得る。特定の実施形態においては、抗ＭＵＣ１抗体に結合した化学療法剤は、オーリスタチン、マイタンシノイド、トポイソメラーゼＩ阻害剤、ＤＮＡ傷害剤、ＤＮＡアルキル化剤およびＤＮＡ副溝結合剤からなる群より選択される。
【００９１】
一部の実施形態においては、化学療法剤は、マイタンシンまたはマイタンシノイドである。コンジュゲーションに有用なマイタンシノイドの特定の例としては、マイタンシノール、Ｎ２’−デアセチル−Ｎ２’−（３−メルカプト−１−オキソプロピル）−マイタンシン（ＤＭ１）、Ｎ２’−デアセチル−Ｎ２’−（４−メルカプト−１−オキソペンチル）−マイタンシン（ＤＭ３）およびＮ２’−デアセチル−Ｎ２’−（４−メチル−４−メルカプト−１−オキソペンチル）−マイタンシン（ＤＭ４）がある。特に、ＤＭ１またはＤＭ４は、抗ＭＵＣ１抗体に結合する。一部の実施形態においては、抗ＭＵＣ１抗体に結合した化学療法剤は、オーリスタチン、特に、モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）またはオーリスタチンＴである。一部の実施形態においては、抗ＭＵＣ１抗体に結合した化学療法剤は、ＤＮＡ副溝結合剤、特に、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）、ピロロベンゾジアゼピン二量体（ＰＢＤ二量体）、デュオカルマイシン、デュオカルマイシン−ヒドロキシベンズアミド−アザインドール（ＤＵＢＡ）、セコ−デュオカルマイシン−ヒドロキシベンズアミド−アザインドール（セコ−ＤＵＢＡ）またはドキソルビシンである。一部の実施形態においては、抗ＭＵＣ１抗体に結合した化学療法剤は、ＤＮＡアルキル化剤、特に、インドリノベンゾジアゼピンまたはオキサゾリジノベンゾジアゼピンである。一部の実施形態においては、抗ＭＵＣ１抗体に結合した化学療法剤は、ＤＮＡ傷害剤、特に、カリチアマイシンである。一部の実施形態においては、抗ＭＵＣ１抗体に結合した化学療法剤は、トポイソメラーゼＩ阻害剤、特に、カンプトテシンおよびその誘導体、例えば、７−エチル−１０−ヒドロキシ−カンプトテシン（ＳＮ−３８）、（Ｓ）−９−ジメチルアミノメチル−１０−ヒドロキシカンプトテシン（トポテカン）および（１Ｓ，９Ｓ）−１−アミノ−９−エチル−５−フルオロ−１，２，３，９，１２，１５−ヘキサヒドロ−９−ヒドロキシ−４−メチル−１０Ｈ，１３Ｈ−ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−１０，１３−ジオン（Ｅｘａｔｅｃａｎ（ＤＸ−８９５１ｆ））である。好適な抗体薬物コンジュゲートはまた、本明細書で明白に参照されるＥＰ  １６  １５１  ７７４．３およびＬＵ  ９２６５９で説明されている。
【００９２】
本発明のさらなる実施形態においては、ＭＵＣ１に、特に、ＴＡ−ＭＵＣ１に特異的に結合する結合剤は、抗ＭＵＣ１抗体の代わりに使用される。結合剤は、特に、上記の治療活性物質、特に、細胞毒素にコンジュゲートされる。それぞれの結合剤の好適な例としては、アンチカリンがある。
【００９３】
ＥｒｂＢファミリーの受容体の阻害剤
ＥｒｂＢファミリーの受容体の阻害剤（「ＥｒｂＢ阻害剤」）は、ＥｒｂＢ受容体ファミリーのうちの１つまたは複数のメンバーの活性を減少または除去することができる阻害剤である。
【００９４】
本明細書で使用されるＥｒｂＢファミリーまたはＥｒｂＢ受容体ファミリーは、特に、ヒトＥｒｂＢ受容体を指す。ヒトＥｒｂＢ受容体ファミリーは、ＨＥＲ受容体ファミリーとしても公知であり、ＥＧＦＲ（ＨＥＲ１、ＥｒｂＢ１）、ＨＥＲ２（ＥｒｂＢ２、Ｎｅｕ）、ＨＥＲ３（ＥｒｂＢ３）およびＨＥＲ４（ＥｒｂＢ４）を含む。ＥｒｂＢファミリーのこれらのメンバーは、膜貫通受容体チロシンキナーゼである。それらは、ＥＧＦおよびＴＧＦ−αなどのその天然リガンドに結合することができる場合がある細胞外部分を含む。さらに、それらは、膜貫通ドメインおよび細胞内部分を含む。リガンド結合の際に、ＥｒｂＢ受容体は、ホモ二量体として、または別のＥｒｂＢファミリーメンバーとのヘテロ二量体として二量体化する。その後、細胞内部分の自己リン酸化が、キナーゼドメインを介して起こる。Ｒａｓ、ＰＩ３Ｋ、ＳＴＡＴおよびＰＬＣ−γを含む特定のタンパク質は、リン酸化された受容体に結合し、細胞内の下流のシグナリングを開始し、これは、がん細胞においては、細胞生存および増殖、侵襲、転移ならびに血管新生を引き起こし得る。特定の実施形態においては、ＥｒｂＢファミリーの受容体は、ＥＧＦＲまたはＨＥＲ２、特に、ＥＧＦＲである。
【００９５】
ＥｒｂＢファミリーの受容体の阻害剤は、ＥｒｂＢ受容体ファミリーの１つのメンバーのみの機能を阻害する場合もあり、ＥｒｂＢ受容体ファミリーのメンバーのうちの２つまたはそれよりも多いメンバー、例えばすべてのメンバーの機能を阻害する場合もある。特定の実施形態においては、阻害剤は、ＥＧＦＲおよび／またはＨＥＲ２、特に、ＥＧＦＲまたはＨＥＲ２、特に、ＥＧＦＲを阻害する。ある特定の実施形態においては、阻害剤は、それが阻害する１つまたは複数のＥｒｂＢ受容体ファミリーメンバーに特異的である。このことは、それがヒトの身体に投与された場合、他の受容体を有意には阻害しないことを意味する。
【００９６】
ＥｒｂＢ受容体の阻害剤は、様々な機構によって受容体の機能を阻害し得る。例えば、阻害剤は、例えば、受容体上の結合部位を遮断することによって、受容体へのリガンドの結合を防止する場合もあり、あるいは阻害剤は、例えば、他の受容体が結合する相互作用部位を遮断することによって、または他の受容体への結合を立体的に妨害することによって、受容体の二量体化を防止する場合もあり、あるいは阻害剤は、例えば、受容体のキナーゼドメインを遮断することによって、または受容体のリン酸化部位を遮断することによって、受容体のリン酸化を防止する場合もある。
【００９７】
ＥｒｂＢファミリーの受容体の阻害剤は、本明細書に記載の治療適用に好適な任意の物質であり得る。ある特定の実施形態においては、阻害剤は、小分子、すなわち、２，０００ダルトンまたはそれ未満、特に、１，５００ダルトンもしくはそれ未満または１，０００ダルトンもしくはそれ未満の分子量を有する化合物である。ＥｒｂＢファミリーの受容体の小分子阻害剤の好適な例としては、アファチニブ、エルロチニブ、ロシレチニブ、ラパチニブ、ゲフィチニブ（Gefintinib）、ダコミチニブ、バンデタニブ、ＡＺＤ９２９１、ネラチニブ、ブリガチニブ、イコチニブ、ＡＺＤ８９３１およびカネルチニブがある。これらの阻害剤は、特に、ＥＧＦＲおよび／またはＨＥＲ２を阻害する。本明細書に記載の小分子阻害剤は、特に、ＥｒｂＢファミリーのうちの１つまたは複数のメンバーのキナーゼドメインの阻害剤である。
【００９８】
他の実施形態においては、阻害剤は、タンパク質、特に、抗体である。ＥｒｂＢファミリーの受容体の抗体阻害剤の好適な例としては、ＥＧＦＲ阻害剤であるセツキシマブ、パニツムマブ、ザルツムマブ、ニモツズマブ、マツズマブおよびネシツムマブ、ならびにＨＥＲ２阻害剤であるトラスツズマブおよびペルツズマブがある。抗体である阻害剤は、特に、ＥｒｂＢファミリーのうちの１つまたは複数のメンバー、例えばＥＧＦＲおよび／またはＨＥＲ２の活性化と干渉するか、またはそれを妨害する抗体である。例えば、それらは、受容体へのリガンド結合および／または受容体の二量体化を減少または防止し得る。
【００９９】
ある特定の実施形態においては、ＥｒｂＢファミリーの受容体の阻害剤は、特に、セツキシマブ、エルロチニブおよびアファチニブからなる群より選択される、ＥＧＦＲの阻害剤である。
【０１００】
処置されるがん
ＥｒｂＢファミリーの受容体の阻害剤と抗ＭＵＣ１抗体とを使用する組み合わせ療法は、がん患者において予想外に高い治療有効性を示す。特に、処置されるがんは、ＥｒｂＢ陽性である、すなわち、それは、阻害剤により標的化されるＥｒｂＢファミリーメンバーのうちの少なくとも１つについて陽性である。ある特定の実施形態においては、がんは、ＥＧＦＲ陽性であり、阻害剤は、ＥＧＦＲの阻害剤である。別の実施形態においては、がんは、ＨＥＲ２陽性であり、阻害剤は、ＨＥＲ２の阻害剤である。別の実施形態においては、がんは、ＨＥＲ３陽性であり、阻害剤は、ＨＥＲ３の阻害剤である。別の実施形態においては、がんは、ＨＥＲ４陽性であり、阻害剤は、ＨＥＲ４の阻害剤である。
【０１０１】
がんは、さらに、ＥｒｂＢ阻害剤での処置前にＭＵＣ１発現について陽性であっても、陰性であってもよい。ある特定の実施形態においては、がんは、ＥｒｂＢ陽性、特に、ＥＧＦＲ陽性、かつＭＵＣ１陰性である。他の実施形態においては、がんは、ＥｒｂＢ陽性、特に、ＥＧＦＲ陽性、かつＭＵＣ１陽性である。
【０１０２】
転移を含むがんの様々な形態は、本発明による組み合わせ療法で処置することができる。がんは、特に、結腸がん、肺がん、卵巣がん、乳がん、子宮頸がん、子宮内膜がん、胃腸がん、腎がん、頭頸部がんおよび尿路上皮がんからなる群より選択され得る。処置することができるがんの特定例は、結腸癌、非小細胞肺癌、扁平上皮肺癌、頭頸部の扁平上皮癌、腎細胞癌、食道腺癌、胃腺癌、胃食道接合部腺癌、子宮内膜癌または肉腫および子宮頸癌であり、それらの転移型を含む。さらなるがんとしては、扁平上皮非小細胞肺がん（ｓＮＳＣＬＣ）、および非扁平上皮非小細胞肺がん（ｎｓＮＳＣＬＣ）、特に、腺癌および大細胞癌などの非小細胞肺がん；小細胞肺がん（ＳＣＬＣ）；ならびに腺癌、特に、管状腺癌、乳頭状腺癌および粘液腺癌、印環細胞癌、アデノイド−扁平上皮癌、扁平上皮癌、髄様胃癌、小細胞胃癌、および未分化胃癌などの胃がんが挙げられる。胃がんは、幽門洞、胃体部もしくは胃底部に位置してもよく、または胃全体のびまん性胃がんであってもよい。ある特定の実施形態においては、がんは転移がんである。がんは、皮膚転移、リンパ節転移、肺転移、肝臓転移、腹膜転移、胸膜転移および／または脳転移などの任意の型の転移を含んでもよい。ある特定の実施形態においては、がんは、炎症性表現型を有する。これらの実施形態においては、上記のがん型のいずれかは、炎症性がんであり得る。
【０１０３】
好ましくは、がんは、阻害剤によって標的化されるＥｒｂBファミリーメンバーの少なくとも１つの検出可能な発現、好ましくは、免疫組織化学またはｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションにより検出可能な発現を有する。それは特に、免疫組織化学またはｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションにより検出可能であるＥｒｂB発現を有する細胞を含む。特に、阻害剤によって標的化されるＥｒｂBファミリーメンバーの少なくとも１つの遺伝子増幅は、好ましくは、蛍光ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）、銀ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＳＩＳＨ）または色原体ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＣＩＳＨ）などのｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションにより検出可能である。ある特定の実施形態に従って、患者のＥｒｂＢ受容体ファミリーメンバーのうちの１つまたは複数の状態、特に、ＥＧＦＲ状態および／またはＨＥＲ２状態が、処置前に決定される。
【０１０４】
がんは、処置前に、検出可能なレベルのＭＵＣ１またはＴＡ−ＭＵＣ１発現を有する場合もあり、有しない場合もある。ある特定の実施形態においては、がんは、処置前に、検出可能なＭＵＣ１発現または検出可能な量のＴＡ−ＭＵＣ１を有しない。これらの実施形態においては、ＭＵＣ１発現またはＴＡ−ＭＵＣ１の存在は、ＥｒｂＢ阻害剤による処置によってのみ誘導される。がんは、抗ＭＵＣ１抗体の投与前に、ＭＵＣ１またはＴＡ−ＭＵＣ１レベルについて試験され得る。
【０１０５】
ある特定の実施形態においては、がんは、ＫＲＡＳ変異、特に、構成的に活性なＫ−Ｒａｓタンパク質をもたらす変異を有する細胞を含む。それぞれのＫ−Ｒａｓ変異体の例は、Ｋ−Ｒａｓ  Ｇ１２Ｖ、Ｋ−Ｒａｓ  Ｇ１２Ｄ、Ｋ−Ｒａｓ  Ｇ１２Ｃ、Ｋ−Ｒａｓ  Ｇ１２Ｓ、Ｋ−Ｒａｓ  Ｇ１２ＡおよびＫ−Ｒａｓ  Ｇ１２Ｒなどのアミノ酸番号１２に変異を有するＫ−Ｒａｓ；Ｋ−Ｒａｓ  Ｇ１３ＤおよびＫ−Ｒａｓ  Ｇ１３Ｒなどのアミノ酸番号１３に変異を有するＫ−Ｒａｓ；ならびにＫ−Ｒａｓ  Ｑ６１Ｈ、Ｋ−Ｒａｓ  Ｑ６１ＫおよびＫ−Ｒａｓ  Ｑ６１Ｌなどのアミノ酸番号６１に変異を有するＫ−Ｒａｓである。さらなる実施形態においては、がんは、ＫＲＡＳ野生型である、すなわち、それは、ＫＲＡＳ変異を有する細胞を含まない。
【０１０６】
さらなる実施形態においては、がんは、阻害剤によって標的化されるＥｒｂＢファミリーメンバーにおける変異、特にＥＧＦＲ変異を有する細胞を含む。特に、変異は、受容体のチロシンキナーゼドメインにあり、キナーゼドメインの過剰活性化をもたらし得る。ＥＧＦＲの変異の例としては、Ｇ７１９Ｘ、Ｓ７６８Ｉ、Ｔ７９０Ｍ、Ｌ８５８Ｒ、Ｌ８６１Ｑ、エクソン１９欠失または挿入およびエクソン２０挿入がある。同様の変異は、他のＥｒｂＢファミリーメンバーのうちの１つに存在し得る。
【０１０７】
ＥｒｂＢファミリーの受容体の阻害剤と抗ＭＵＣ１抗体とを使用する本発明による組み合わせ療法はまた、がんが患者の治療的利益をさらに改善するために化学療法剤またはさらなる抗がん抗体などの１つまたは複数のさらなる抗がん治療剤によりさらに処置される別の療法との組み合わせで使用することができる。
【０１０８】
ある特定の実施形態においては、本発明による組み合わせ療法は、ＥｒｂＢファミリーの受容体の阻害剤とは異なる化学療法剤および／または抗ＭＵＣ１抗体とは異なる１つもしくは複数のさらなる抗体などの、１つまたは複数の抗がん剤とのさらなる組み合わせで使用される。ここで、また、ＥｒｂＢファミリーの阻害剤について確立される組み合わせ療法を使用することができる。処置を、放射線治療および／または手術と組み合わせることもできる。
【０１０９】
阻害剤および抗ＭＵＣ１抗体と組み合わせて使用することができる抗がん剤を、任意の化学療法剤、特に、ＥｒｂＢ陽性がんの処置にとって有効であることが公知の化学療法剤から選択することができる。化学療法剤の種類は、処置されるがんにも依存する。組み合わせパートナーは、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ）、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ）およびＳＢ−Ｔ−１２１４などのタキサン；シクロホスファミド；イマチニブ；パゾパニブ；カペシタビン；シタラビン；ビノレルビン；ゲムシタビン；ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、バルルビシンおよびミトキサントロンなどのアントラサイクリン；アミノグルテチミド、テストラクトン（Ｔｅｓｌａｃ）、アナストロゾール（Ａｒｉｍｉｄｅｘ）、レトロゾール（Ｆｅｍａｒａ）、エキセメスタン（Ａｒｏｍａｓｉｎ）、ボロゾール（Ｒｉｖｉｚｏｒ）、ホルメスタン（Ｌｅｎｔａｒｏｎ）、ファドロゾール（Ａｆｅｍａ）、４−ヒドロキシアンドロステンジオン、１，４，６−アンドロスタトリエン−３，１７−ジオン（ＡＴＤ）および４−アンドロステン−３，６，１７−トリオン（６−ＯＸＯ）などのアロマターゼ阻害剤；イリノテカン、トポテカン、カンプトテシン、ラメラリンＤ、エトポシド（ＶＰ−１６）、テニポシド、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ミトキサントロン、アムサクリン、エリプチシン、アウリントリカルボン酸およびＨＵ−３３１などのトポイソメラーゼ阻害剤；ｃｉｓ−ジアンミンジクロロ白金（ＩＩ）（シスプラチン）、ｃｉｓ−ジアンミン（１，１−シクロブタンジカルボキシラト）白金（ＩＩ）（カルボプラチン）および［（１Ｒ，２Ｒ）−シクロヘキサン−１，２−ジアミン］（エタンジオアト−Ｏ，Ｏ’）白金（ＩＩ）（オキサリプラチン）などの白金系化学療法剤、ならびに代謝拮抗剤、特に、メトトレキサート、ペメトレキセド、ラルチトレキセドおよびプララトレキサートなどの葉酸拮抗薬、フルオロウラシル、ゲムシタビン、フロクスウリジン、５−フルオロウラシルおよびテガフル−ウラシルなどのピリミジン類似体、ならびにプリン類似体、選択的エストロゲン受容体モジュレーターおよびエストロゲン受容体下方調節剤からなる群より選択することができる。
【０１１０】
さらに、治療抗体を、さらなる組み合わせパートナーとして使用することもできる。それは、抗ＭＵＣ１抗体およびＥｒｂＢ阻害剤とは異なるがん療法において有用である任意の抗体であってもよい。特に、さらなる抗体が、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）、欧州医薬品庁（ＥＭＡ、以前はＥＭＥＡ）および独連邦医薬品・医学製品研究所（ＢｆＡｒＭ）などの行政当局により、がん処置のために承認されている。組み合わせ処置のために使用することができるさらなる抗体の例は、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ）などの抗ＶＥＧＦ抗体；アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ）などの抗ＣＤ５２抗体；ブレンツキシマブ（Ａｄｃｅｔｒｉｓ）などの抗ＣＤ３０抗体；ゲムツズマブ（Ｍｙｌｏｔａｒｇ）などの抗ＣＤ３３抗体；ならびにリツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ、Ｍａｂｔｈｅｒａ）、トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ）およびイブリツモマブ（Ｚｅｖａｌｉｎ）などの抗ＣＤ２０抗体である。本明細書に記載のがん療法との組み合わせに好適な、さらなる例示的な抗体としては、ＣＤ４４、葉酸受容体α、ＮｅｕＧｃ−ＧＭ３ガングリオシド、ＤＬＬ−３、ＲＡＮＫＬ、ＰＴＫ７、Ｎｏｔｃｈ−３、Ｅｐｈｒｉｎ  Ａ４、インスリン様増殖因子受容体１、アクチビン受容体様キナーゼ１、クローディン−６、ジシアロガングリオシドＧＤ２、エンドグリン、膜貫通糖タンパク質ＮＭＢ、ＣＤ５６、腫瘍関連カルシウムシグナルトランスデューサー２、組織因子、エクトヌクレオチドピロホスファターゼ／ホスホジエステラーゼ３、ＣＤ７０、Ｐ−カドヘリン、メソセリン、ＳＴＥＡＰ１（前立腺６回膜貫通上皮抗原（ｓｉｘ  ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｒｏｓｔａｔｅ）１）、ＣＥＡＣＡＭ５（癌胎児抗原関連細胞接着分子（ｃａｒｃｉｎｏｅｍｂｒｙｏｎｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｃｅｌｌ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ）５）、ネクチン４、グアニリルシクラーゼＣ、ＳＬＣ４４Ａ４（溶質輸送体ファミリー４４メンバー（ｓｏｌｕｔｅ  ｃａｒｒｉｅｒ  ｆａｍｉｌｙ  ４４  ｍｅｍｂｅｒ）４）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、亜鉛トランスポーターＺＩＰ６（ＬＩＶ１（ＺＩＰ６））、ＳＬＩＴＲＫ６（ＳＬＩＴおよびＮＴＲＫ様タンパク質（ＳＬＩＴ  ａｎｄ  ＮＴＲＫ−ｌｉｋｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ）６）、栄養膜糖タンパク質（ＴＰＢＧ；５Ｔ４）、Ｆｙｎ３、炭酸脱水酵素９、ＮａＰｉ２ｂ、フィブロネクチンエキストラドメインＢ、エンドセリン受容体ＥＴＢ、ＶＥＧＦＲ２（ＣＤ３０９）、テネイシンｃ、コラーゲンＩＶおよびペリオスチンからなる群より選択される抗原に対する抗体がある。
【０１１１】
本明細書に記載の組み合わせ療法は、チェックポイント抗体、すなわち、免疫調節性標的を遮断または活性化する抗体とさらに組み合わせることができる。それによって、免疫応答のための阻害性シグナルを遮断することができ、かつ／または活性化シグナルを誘発することができる。それぞれの標的の例としては、活性化標的としてＣＤ４０、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＧＩＴＲおよびＣＤ２７、阻害性標的としてＣＴＬＡ４、ＰＤ１、ＣＤ８０、ＣＤ２４４およびホスファチジルセリンならびにそれらの対応するリガンドがある。
【０１１２】
さらなる実施形態においては、本明細書に記載の組み合わせ療法は、ケモカイン、サイトカイン、増殖因子およびワクチンなどの免疫調節性化合物による処置と組み合わせることができる。この点において好適なサイトカインとしては、インターフェロン、例えば、インターフェロンα、インターフェロンβおよびインターフェロンγ、ならびにインターロイキン、例えば、インターロイキン２、インターロイキン６、インターロイキン７、インターロイキン１２、インターロイキン１５、インターロイキン１８およびインターロイキン２１がある。好適な増殖因子としては、Ｇ−ＣＳＦおよびＧＭ−ＣＳＦがある。
【０１１３】
本明細書に提供される組み合わせ療法は、好ましくは、原発性腫瘍、再発性腫瘍および／またはそのような腫瘍の転移の処置のためのものであり、特に、手術の前、間または後の処置にとって、また、転移の防止または処置にとって有用である。本明細書に提供される組み合わせ療法は、特に、アジュバント療法としての患者の処置用である。ある特定の実施形態では、本明細書に提供される組み合わせ療法は、ネオアジュバント療法としての、または組み合わせたネオアジュバント−アジュバント療法における患者の処置用である。さらに、本明細書に提供される組み合わせ療法は、緩和療法としての患者の処置用である。
【０１１４】
本明細書に提供される組み合わせ療法は、好ましくは、腫瘍増殖の阻害、特に、腫瘍サイズの減少をもたらす。さらに、前記処置により、さらなる転移の発生が防止される、および／またはその数が減少する。前記処置は、好ましくは、無進行生存期間の増加；および／または寿命、かくして、全生存の増加をもたらす。
【０１１５】
医薬組成物および投与スキーム
抗ＭＵＣ１抗体およびＥｒｂＢファミリーの受容体の阻害剤は、同じ医薬組成物中に存在してもよく、別々の医薬組成物中に存在してもよい。ある特定の実施形態においては、抗ＭＵＣ１抗体およびＥｒｂＢファミリーの受容体の阻害剤は、別々の医薬組成物中に存在する。前記医薬組成物は、特に、静脈内注射または経口消費に好適であり得る。それらは、抗体および／もしくは阻害剤を含む水溶液、または静脈内注射に好適な組成物を調製するのに使用され得る組成物、例えば、凍結乾燥組成物であり得る。医薬組成物は、１つまたは複数のさらなる成分、例えば、溶媒、希釈剤および／または賦形剤をさらに含み得る。組成物の成分は、好ましくはすべて薬学的に許容される。組成物は、固体または流体組成物、特に、（好ましくは水性の）溶液、エマルジョン、懸濁物、凍結乾燥粉末、錠剤または丸剤であり得る。医薬組成物としての抗体および小分子などの治療物質を調製するための製剤は、先行技術において周知であり、したがっていかなる詳細な説明も必要としない。
【０１１６】
抗ＭＵＣ１抗体および／またはＥｒｂＢ阻害剤を含む医薬組成物は、任意の好適な投与経路によって、特に、経口で、または静脈内注射によって、患者に投与され得る。抗ＭＵＣ１抗体およびＥｒｂＢ阻害剤の公知の投与レジメンは、本組み合わせ療法において使用され得る。しかしながら、組み合わせ療法の相乗効果のために、抗ＭＵＣ１抗体および／またはＥｒｂＢ阻害剤の用量は、公知の用量と比較して減少することができる。当業者は、個々の治療剤に好適な投与レジメンを決定することができる。
【０１１７】
抗ＭＵＣ１抗体およびＥｒｂＢ阻害剤は、同時に、または逐次的に投与され得る。例えば、２つの治療物質のうちの１つ、特に、ＥｒｂＢ阻害剤は、最初に投与される場合があり、他方がその後に投与される場合がある。２つの投与スキームは、重複してもよく、第１の治療物質、特に、ＥｒｂＢ阻害剤の投与は、第２の治療物質、特に、抗ＭＵＣ１抗体が投与される前に停止してもよい。ある特定の実施形態においては、抗ＭＵＣ１抗体およびＥｒｂＢ阻害剤による処置は、抗ＭＵＣ１抗体の投与前のＥｒｂＢ阻害剤の投与を含む。特に、処置は、最初のＥｒｂＢ阻害剤およびその後の抗ＭＵＣ１抗体の逐次投与を含み得る。特定の実施形態においては、ＥｒｂＢ阻害剤の投与は、抗ＭＵＣ１抗体の投与が開始される少なくとも１２時間前に開始される。特に、ＥｒｂＢ阻害剤の投与は、抗ＭＵＣ１抗体の投与が開始される少なくとも１日、特に、少なくとも１日と半日、少なくとも２日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日または少なくとも７日、好ましくは少なくとも２日または少なくとも３日前に開始される。
【０１１８】
さらに、治療処置は、２つまたはそれよりも多い投与サイクルからなる場合があり、各サイクルにおいて、上記の投与スキームが使用され得る。特に、各サイクルにおいて、ＥｒｂＢ阻害剤の投与は、抗ＭＵＣ１抗体の投与が開始される前に開始される。
【０１１９】
ある特定の実施形態においては、組み合わせは、受容体阻害剤とＭＵＣ１に対する抗体との相乗効果をもたらす。特に、本明細書に記載の組み合わせ療法は、抗ＭＵＣ１抗体またはＥｒｂＢ阻害剤単独による処置より有効である。
【０１２０】
さらなる治療適用
第２の態様においては、本発明は、ＭＵＣ１に対する抗体と組み合わせた、がんの処置における使用のためのＥｒｂＢファミリーの受容体の阻害剤を提供する。さらなる態様においては、本発明は、がんの処置における使用のためのＥｒｂＢファミリーの受容体の阻害剤を含む医薬組成物とＭＵＣ１に対する抗体を含む別の医薬組成物とを含む部分のキットを提供する。
【０１２１】
上記の本明細書に記載の実施形態、フィーチャおよび実施例はまた、本発明のこの態様に適用される。特に、ＥｒｂＢファミリーの受容体の阻害剤は、本明細書に記載される通りであり得、がんは、本明細書に記載される通りであり得、ＭＵＣ１に対する抗体は、本明細書に記載される通りであり得る。
【０１２２】
特に、処置されるがんは、ＥｒｂＢファミリーの受容体の阻害剤によって阻害されるＥｒｂＢファミリーの受容体を発現する。ＥｒｂＢファミリーの受容体は、特に、ＥＧＦＲまたはＨＥＲ２である。ＥｒｂＢ阻害剤は、小分子または抗体であってもよく、特に、アファチニブ、エルロチニブおよびセツキシマブからなる群より選択される。
【０１２３】
ある特定の実施形態においては、ＭＵＣ１に対する抗体は、ＭＵＣ１の細胞外リピートに対する抗体、特に、ＴＡ−ＭＵＣ１に対する抗体、例えば、ＰａｎｋｏＭａｂである。抗ＭＵＣ１抗体は、特に、細胞毒素、例えば、オーリスタチン、マイタンシンまたはマイタンシノイドにカップリングされ得る。
【０１２４】
特定の実施形態においては、処置は、ＭＵＣ１に対する抗体の投与前のＥｒｂＢ阻害剤の投与を含む。特に、ＥｒｂＢ阻害剤の投与は、抗ＭＵＣ１抗体の投与が開始される少なくとも１日前、特に少なくとも１日前に開始される。ＥｒｂＢ阻害剤と抗ＭＵＣ１抗体との組み合わせは、特に、相乗効果をもたらし得る。
【０１２５】
さらに、本発明は、同様に、本発明の他の態様による処置方法を提供する。特に、本発明は、その必要のある患者にＥｒｂＢファミリーの受容体の阻害剤とＭＵＣ１に対する抗体とを投与することを含む、がんの処置方法を提供する。本発明の第１および第２の態様についての本明細書に記載のすべての実施形態およびフィーチャはまた、同様に、本発明による処置方法に適用される。
【０１２６】
本明細書に記載の数値範囲は、範囲を定義する数値を含む。本明細書に提供される表題は、全体として本明細書を参照することによって読むことができる本発明の様々な態様または実施形態の限定ではない。一実施形態によれば、方法の場合に、ある特定のステップを含むとして、または組成物の場合に、ある特定の成分を含むとして本明細書に記載される主題は、それぞれのステップまたは成分からなる主題を指す。本明細書に記載の好適な態様および実施形態を選択し、組み合わせることは好適であり、好適な実施形態のそれぞれの組み合わせから生じる特定の主題も本開示に属する。
【図面の簡単な説明】
【０１２７】
【図１】図１は、各々それらのそれぞれのＩＣ５０濃度で使用される、ＥＧＦＲ阻害剤アファチニブ、セツキシマブ（ＣＭ／Ｅｒｂｉｔａｘ）またはエルロチニブによる処置後の、様々ながん細胞株Ａ５４９（肺がん細胞株）、ＤＵ１４５（前立腺がん細胞株）、ＨＳＣ４（舌扁平上皮細胞癌細胞株）およびＨＣＣ３６６（肺がん細胞株）に対する抗ＴＡ−ＭＵＣ１抗体ＰａｎｋｏＭａｂについての、細胞当たりの抗体結合部位の数における増大を示す。培地：ＥＧＦＲ阻害剤による処置を伴わない対照実験。
【０１２８】
【図２ＡＢ】図２は、ＥＧＦＲ阻害剤による前処置後の、腫瘍細胞に対する細胞毒素にコンジュゲートしたＰａｎｋｏＭａｂを使用する例示的な増殖阻害アッセイを示す。ＨＳＣ４（Ａ、Ｂ）およびＤＵ１４５（Ｃ、Ｄ）細胞を、ＥＧＦＲ阻害剤（エルロチニブ（Ｅｒｌｏ）について１μＭおよびアファチニブ（Ａｆａｔ）について０．１μｇ／ｍｌ）と共に３日間事前インキュベートした。３日後、フローサイトメトリーによって抗原発現を確認し、細胞を、細胞毒素（ＳＭ）にコンジュゲートしたＰａｎｋｏＭａｂを使用する４日間の増殖アッセイにおいて設定した。非コンジュゲートＰａｎｋｏＭａｂおよびアイソタイプ適合ＡＤＣを、陰性対照として使用した。培地対照（Ａ、Ｃ）に対して、増殖を計算した。前処置ありまたはなしの曲線から計算したＩＣ５０値を、パネルＢ、Ｄに示す。
【図２ＣＤ】図２は、ＥＧＦＲ阻害剤による前処置後の、腫瘍細胞に対する細胞毒素にコンジュゲートしたＰａｎｋｏＭａｂを使用する例示的な増殖阻害アッセイを示す。ＨＳＣ４（Ａ、Ｂ）およびＤＵ１４５（Ｃ、Ｄ）細胞を、ＥＧＦＲ阻害剤（エルロチニブ（Ｅｒｌｏ）について１μＭおよびアファチニブ（Ａｆａｔ）について０．１μｇ／ｍｌ）と共に３日間事前インキュベートした。３日後、フローサイトメトリーによって抗原発現を確認し、細胞を、細胞毒素（ＳＭ）にコンジュゲートしたＰａｎｋｏＭａｂを使用する４日間の増殖アッセイにおいて設定した。非コンジュゲートＰａｎｋｏＭａｂおよびアイソタイプ適合ＡＤＣを、陰性対照として使用した。培地対照（Ａ、Ｃ）に対して、増殖を計算した。前処置ありまたはなしの曲線から計算したＩＣ５０値を、パネルＢ、Ｄに示す。
【０１２９】
【図３ＡＢ】図３は、ｐＨｒｏｄｏ  ｒｅｄにコンジュゲートしたＰａｎｋｏＭａｂとＥＧＦＲ阻害剤による前処置後の様々な標的細胞とを使用する例示的な内在化アッセイを示す。ＤＵ１４５（Ａ、Ｂ）およびＨＣＣ３６６（Ｃ、Ｄ）細胞を、ＥＧＦＲ阻害剤（エルロチニブについて１μＭ、アファチニブについて０．１μＭおよびセツキシマブ（ＣＭ）について１０μｇ／ｍｌ）と共に３日間事前インキュベートした。３日後、酸性細胞内区画への内在化についてのモニターとしてｐＨｒｏｄｏ  ｒｅｄにコンジュゲートしたＰａｎｋｏＭａｂを使用する内在化アッセイに、細胞を供した。３７℃で４時間のインキュベーション後に、フローサイトメトリーによって細胞を測定した。４℃でのインキュベーションを陰性対照として使用した。
【図３ＣＤ】図３は、ｐＨｒｏｄｏ  ｒｅｄにコンジュゲートしたＰａｎｋｏＭａｂとＥＧＦＲ阻害剤による前処置後の様々な標的細胞とを使用する例示的な内在化アッセイを示す。ＤＵ１４５（Ａ、Ｂ）およびＨＣＣ３６６（Ｃ、Ｄ）細胞を、ＥＧＦＲ阻害剤（エルロチニブについて１μＭ、アファチニブについて０．１μＭおよびセツキシマブ（ＣＭ）について１０μｇ／ｍｌ）と共に３日間事前インキュベートした。３日後、酸性細胞内区画への内在化についてのモニターとしてｐＨｒｏｄｏ  ｒｅｄにコンジュゲートしたＰａｎｋｏＭａｂを使用する内在化アッセイに、細胞を供した。３７℃で４時間のインキュベーション後に、フローサイトメトリーによって細胞を測定した。４℃でのインキュベーションを陰性対照として使用した。
【実施例】
【０１３０】
（実施例１：ＥＧＦＲ阻害剤処置によるＴＡ−ＭＵＣ１発現のアップレギュレーション）
以下においては、ＥＧＦＲ阻害剤によるがん細胞の処置が、腫瘍抗原ＴＡ−ＭＵＣ１の発現の増大を誘導することが実証された。
【０１３１】
細胞培養
ヒト腫瘍細胞株ＤＵ１４５（前立腺）、ＭＤＡ−ＭＢ−４６８（乳房）およびＨＣＣ３６６（肺）を、１０％ウシ胎仔血清および１％  Ｌ−グルタミンを補充したＲＰＭＩ  １６４０を使用して慣例的に培養した。Ａ５４９（肺）およびＨＳＣ４（頭頸部）を、１０％ウシ胎仔血清および２％  Ｌ−グルタミン（すべてＢｉｏｃｈｒｏｍから）を補充したＤＭＥＭを使用して培養した。すべての標的細胞は、中程度のレベルのＥＧＦＲを発現し（２＋）、基底ＴＡ−ＭＵＣ１レベルは、ＤＵ１４５、Ａ５４９について１＋、ＨＳＣ４およびＭＤＡ−ＭＢ−４６８について２＋、ＨＣＣ３６６について３＋である。
【０１３２】
フローサイトメトリー
ＥＧＦＲ阻害剤（抗ＥＧＦＲ抗体セツキシマブならびにチロシンキナーゼ阻害剤エルロチニブおよびアファチニブ）による処置ありまたはなしの細胞のＴＡ−ＭＵＣ１抗原発現を、ＱＩＦＩＫＩＴ（登録商標）（Ｄａｋｏ）を使用する定量的フローサイトメトリー分析によって製造業者のプロトコールにより処置の開始後のいくつかの時点で評価した。簡単に説明すると、慣例的に培養した細胞を回収し、ＰＢＳ中に再懸濁し、ＰａｎｋｏＭａｂ（ｍＩｇＧ１）または適切なアイソタイプ対照を、１００μｇ／ｍｌの最終濃度になるように添加した。４℃で３０分間のインキュベーション後、細胞をＰＢＳ、１％  ＢＳＡおよび１５ｍＭ  ＮａＮ３を含有する洗浄緩衝液により３回洗浄した。並行して、設定および較正ビーズ（ＱＩＦＩＫＩＴ（登録商標）に含まれる）を洗浄緩衝液による洗浄により調製した。ＦＩＴＣコンジュゲート（ＱＩＦＩＫＩＴ（登録商標）で提供される）を、ＰＢＳ中に１：５０で希釈し、細胞およびビーズに４５分間添加した。４℃でのインキュベーション後、細胞およびビーズを３回洗浄し、洗浄緩衝液中に再懸濁した。ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏ  ＩＩを使用して、フローサイトメトリー分析を実施した。ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｄｉｖａソフトウェアを使用して、ビーズおよび分析した細胞のＦＩＴＣ平均蛍光強度（ＭＦＩ）を決定した。製造業者の指示にしたがって抗原結合能（ＡＢＣ）を計算し、陰性対照（ｍＩｇＧ１）のＡＢＣを引くことによりバックグラウンドを補正した。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して計算を行った。
【０１３３】
結果
ＥＧＦＲ阻害剤での処置に際しての腫瘍細胞によるＴＡ−ＭＵＣ１発現における顕著な増大が観察された。抗ＴＡ−ＭＵＣ１抗体Ｐａｎｋｏｍａｂについての細胞当たりの抗体結合部位の数の増大は、最大で１０倍であった（図１を参照されたい）。アッセイにおいては、２または３日目に開始するＴＡ−ＭＵＣ１の顕著なアップレギュレーションが観察された。効果は濃度依存的であり、より高い阻害剤濃度によって、より強いアップレギュレーションがあった。したがって、様々なＥＧＦＲ阻害剤が、様々ながん細胞株についてＴＡ−ＭＵＣ１発現を増大させることができることが示された。
【０１３４】
（実施例２：ＥＧＦＲ阻害剤処置後の抗ＭＵＣ１抗体によるがん細胞増殖の阻害）
この研究においては、ＥＧＦＲ阻害剤によるがん細胞の以前の処置に依存した、がん細胞増殖に対する細胞毒素にカップリングしたＰａｎｋｏＭａｂの効果を決定した。
【０１３５】
細胞傷害性アッセイ
毒素として微小管阻害剤を伴うＰａｎｋｏＭａｂのＡＤＣ形式であるＳｅｅｌｏＭａｂを使用して、ＴＡ−ＭＵＣ１標的化抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の潜在的細胞傷害性を調査した。したがって、細胞を、最適濃度のＥＧＦＲ阻害剤と共に３日間事前インキュベートした。最適濃度は、以前のフローサイトメトリーアッセイから得、エルロチニブ、アファチニブまたはセツキシマブについて、それぞれ、１μＭ、０．１μＭまたは１０μｇ／ｍｌであった。３日後、フローサイトメトリーによって抗原発現を確認し、細胞を等しい細胞密度（細胞５０００個／ウェル）でマイクロタイタープレートのウェルに播種した。細胞を、様々な濃度のＳｅｅｌｏＭａｂ、アイソタイプ適合対照ＡＤＣおよび陰性対照として使用した非コンジュゲートＰａｎｋｏＭａｂと共にインキュベートした。４日後、Ｃｅｌｌｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏ  Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して細胞生存度を測定し、パーセント増殖を培地対照と比較して計算した。
【０１３６】
結果
抗ＴＡ−ＭＵＣ１  ＡＤＣ代用物（ｓｕｒｒｏｇａｔｅ）の添加後に、がん細胞増殖の減少が観察された（図２を参照されたい）。がん細胞をセツキシマブまたはエルロチニブなどのＥＧＦＲ阻害剤で前処置した場合、減少は顕著に、より強かった。ＰａｎｋｏＭａｂ−ＡＤＣのＩＣ５０値（５０％阻害効果に達する濃度）の低下から、様々ながん細胞株についてＥＧＦＲ阻害剤とＰａｎｋｏＭａｂ−ＡＤＣとの組み合わせの効力を計算した：
【表１】
2020514304.tif 000002
結果は、ＥＧＦＲ阻害剤によるがん細胞の前処置は、ＰａｎｋｏＭａｂ−ＡＤＣの有効性を顕著に増強することを実証した。
【０１３７】
（実施例３：ＥＧＦＲ阻害剤処置後のがん細胞による抗ＭＵＣ１抗体の内在化の増大）
ｐＨｒｏｄｏ  ｒｅｄにコンジュゲートしたＰａｎｋｏＭａｂを使用して、内在化を測定した。ｐＨｒｏｄｏは、ｐＨ感受性蛍光色素であり、中性ｐＨでは非蛍光であり、色素が内在化され、酸性リソソーム区画へと移行したときシグナルの増大を示す。したがって、最大ＴＡ−ＭＵＣ１発現を得るために、細胞を最適濃度のＥＧＦＲ阻害剤と共に３日間事前インキュベートした。最適濃度は、以前のフローサイトメトリーアッセイから得、エルロチニブ、アファチニブまたはセツキシマブについて、それぞれ、１μＭ、０．１μＭまたは１０μｇ／ｍＬであった。３日後、細胞を回収し、様々な抗体濃度に４℃で１時間供した。細胞を洗浄し、３７℃で４時間さらにインキュベートして、能動的内在化を可能にした。４℃でインキュベートした細胞を陰性対照として使用した。洗浄および７−ＡＡＤによる死細胞の対比染色後、ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏ  ＩＩフローサイトメーターを使用して、ｐＨｒｏｄｏ蛍光を測定した。図３は、標的細胞としてＤＵ１４５またはＨＣＣ３６６を使用する代表的なアッセイを示す。両方の細胞株について、３７℃では、ｐＨｒｏｄｏ蛍光細胞の濃度依存的増大が観察された一方で、４℃では、最小限の染色のみが観察され、能動的内在化を示した。ＥＧＦＲ阻害剤により前処置した細胞は、４時間のインキュベーション後に２〜３倍高いパーセンテージの陽性細胞を示した。この結果は、ＴＡ−ＭＵＣ１アップレギュレーションが、ＰａｎｋｏＭａｂ内在化および腫瘍標的細胞への毒素送達の可能性に関連することを確認した。
【０１３８】
寄託された生体材料の識別
細胞株ＤＳＭ  ＡＣＣ  ２８０６、ＤＳＭ  ＡＣＣ  ２８０７、ＤＳＭ  ＡＣＣ  ２８５６およびＤＳＭ  ＡＣＣ  ３０７８は、以下の表に示す日付に、Ｇｌｙｃｏｔｏｐｅ  ＧｍｂＨ、Ｒｏｂｅｒｔ−Ｒｏｅｓｓｌｅ−Ｓｔｒ．１０、１３１２５  Ｂｅｒｌｉｎ（ＤＥ）によりＤＳＭＺ−Ｄｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ｕｎｄ  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ  ＧｍｂＨ、Ｉｎｈｏｆｆｅｎｓｔｒａｓｓｅ  ７Ｂ、３８１２４  Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ（ＤＥ）に寄託された。
【表２】
2020514304.tif 000003
【図１】
2020514304.tif 000004
【図２ＡＢ】
2020514304.tif 000005
【図２ＣＤ】
2020514304.tif 000006
【図３ＡＢ】
2020514304.tif 000007
【図３ＣＤ】
2020514304.tif 000008
【配列表】
2020514304000001.app
【国際調査報告】
2020514304.tif 000009
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