(57)【要約】  ＳＴＩＮＧの調節によって影響を受ける疾患、症候群又は障害を治療するための、化合物、組成物及び方法が開示される。このような化合物は次の式（Ｉ）：    【化１】2020514316.tif 000048  ［式中、Ｒ１Ａ、Ｒ１Ｂ、Ｒ１Ｃ、Ｒ１Ｄ、Ｂ１、Ｒ２Ａ、Ｒ２Ｂ、Ｒ２Ｃ、Ｒ２Ｄ、及びＲ２Ｅは本明細書で定義される］、及び式（ＩＩ）    【化２】2020514316.tif 000049  ［式中、Ｒ１Ｈ、Ｒ１Ｋ、Ｒ１Ｊ、及びＲ２Ｌは、本明細書で定義される］で表される。
2020514316.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物
【化１】
2020514316.tif 000040
［式中、Ｒ１Ａ、Ｒ２Ａ、Ｒ１Ｄ、Ｒ２Ｄ、及びＲ２Ｅは、各々独立して、前記Ｒ１Ａ、Ｒ２Ａ、Ｒ１Ｄ、Ｒ２Ｄ、及びＲ２Ｅのうちの１つがメチルとなるように、水素又はメチルから選択され、
Ｒ１Ｂは、水素、ヒドロキシ又はフルオロであり、
又は、Ｒ１Ｂは−Ｏ−であり、Ｒ１ＤはＣＨ２であり、Ｒ１Ｂと、Ｒ１Ｄと、これらが結合する原子とが、５員環を形成し、
Ｒ１Ｃは、ヒドロキシ、チオール、及びＢＨ３−からなる群から選択され、
Ｂ１は、環ｂ１及びｂ２からなる群から選択され、
【化２】
2020514316.tif 000041
Ｒ２Ｂは、ヒドロキシ、フルオロ、及びメトキシからなる群から選択され、
Ｒ２Ｃは、ヒドロキシ、チオール及びＢＨ３−からなる群から選択される］、
又はそのエナンチオマー、ジアステレオマー、若しくは医薬的に許容される塩形態。
【請求項２】
Ｒ１Ｂが、水素又はフルオロである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１Ｂが−Ｏ−であり、Ｒ１ＤがＣＨ２であり、Ｒ１Ｂと、Ｒ１Ｄと、これらが結合する原子とが、５員環を形成する、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１Ｃが、ヒドロキシ及びチオールからなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１Ｄが水素である、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ｂ１が、環ｂ２
【化３】
2020514316.tif 000042
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ２Ａが水素である、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ２Ｃが、ヒドロキシ及びチオールからなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ２Ｄが水素である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
式（Ｉ）の化合物
【化４】
2020514316.tif 000043
［式中、Ｒ１Ａ、Ｒ２Ａ、Ｒ１Ｄ、Ｒ２Ｄ、及びＲ２Ｅは、各々独立して、前記Ｒ１Ａ、Ｒ２Ａ、Ｒ１Ｄ、Ｒ２Ｄ、及びＲ２Ｅのうちの１つがメチルとなるように、水素又はメチルから選択され、
Ｒ１Ｂは、水素、ヒドロキシ又はフルオロであり、
又は、Ｒ１Ｂは−Ｏ−であり、Ｒ１ＤはＣＨ２であり、Ｒ１Ｂと、Ｒ１Ｄと、これらが結合する原子とが、５員環を形成し、
Ｒ１Ｃは、ヒドロキシ及びチオールからなる群から選択され、
Ｂ１は環ｂ２であり、
【化５】
2020514316.tif 000044
Ｒ２Ｂは、ヒドロキシ、フルオロ、及びメトキシからなる群から選択され、
Ｒ２Ｃは、ヒドロキシ及びチオールからなる群から選択される］、
又はそのエナンチオマー、ジアステレオマー、若しくは医薬的に許容される塩形態。
【請求項１１】
化合物１〜３：
【化６】
2020514316.tif 000045
からなる群から選択される、式（Ｉ）の化合物、
又はその医薬的に許容される塩形態。
【請求項１２】
請求項１〜１１に記載の化合物と、医薬的に許容される担体、医薬的に許容される賦形剤、及び医薬的に許容される希釈剤のうちの少なくとも１つとを含む、医薬組成物。
【請求項１３】
前記組成物が、固体の経口投与形態である、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記組成物が、シロップ剤、エリキシル剤又は懸濁剤である、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
式（ＩＩ）の化合物
【化７】
2020514316.tif 000046
［式中、Ｒ１Ｈは、フルオロであり；又は、Ｒ１Ｈは−Ｏ−であり、Ｒ１ＪはＣＨ２であり、Ｒ１Ｈと、Ｒ１Ｊと、これらが結合する原子とが、５員環を形成し；
Ｒ１Ｊは、水素又はメチルであり、
Ｒ１Ｋは、ヒドロキシ又はチオールからなる群から選択され、
Ｒ２Ｌは、ヒドロキシ及びチオールからなる群から選択される］、
又はそのエナンチオマー、ジアステレオマー、若しくは医薬的に許容される塩形態。
【請求項１６】
化合物４〜６：
【化８】
2020514316.tif 000047
からなる群から選択される、請求項１５に記載の式（ＩＩ）の化合物、
又はその医薬的に許容される塩形態。
【請求項１７】
請求項１５又は１６に記載の化合物と、医薬的に許容される担体、医薬的に許容される賦形剤、及び医薬的に許容される希釈剤のうちの少なくとも１つとを含む、医薬組成物。
【請求項１８】
前記組成物が、固体の経口投与形態である、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
前記組成物が、シロップ剤、エリキシル剤又は懸濁剤である、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
ＳＴＩＮＧによって調節される疾患、症候群又は状態を治療する方法であって、前記治療を必要とする対象に治療有効量の請求項１又は請求項１５に記載の化合物を投与すること、を含む、方法。
【請求項２１】
疾患、症候群又は状態を治療する方法であって、前記疾患、症候群又は状態が、ＳＴＩＮＧのアゴニスト活性によって影響を受けるものであり、前記治療を必要とする対象に治療有効量の請求項１又は請求項１５に記載の化合物を投与すること、を含む、方法。
【請求項２２】
前記疾患、症候群又は状態が、癌である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記癌が、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌及び線維肉腫からなる群から選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記疾患、症候群又は状態が、ウイルス感染である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２５】
前記ウイルス感染が、Ｂ型肝炎である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
ウイルス感染、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌及び線維肉腫からなる群から選択される疾患、症候群又は状態を治療する方法であって、前記治療を必要とする対象に、治療有効量の請求項１２又は請求項１７に記載の組成物を投与すること、を含む、方法。
【請求項２７】
前記ウイルス感染が、Ｂ型肝炎である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
ウイルス感染、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌及び線維肉腫からなる群から選択される疾患、症候群又は状態の治療を必要とする対象において前記疾患、症候群又は状態を治療するための医薬を調剤するための、請求項１又は請求項１５に記載の化合物の使用。
【請求項２９】
ウイルス感染、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌及び線維肉腫からなる群から選択される疾患、症候群又は状態の治療を必要とする対象において前記疾患、症候群又は状態を治療する方法において使用するための、請求項１又は請求項１５に記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本願は、２０１７年１月２７日に出願された米国特許仮出願第６２／４５１，２８５号、及び２０１７年２月３日に出願された米国特許仮出願第６２／４５４，１３１号に対する優先権を主張するものであり、これらの全容が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、ＳＴＩＮＧ（Ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｇｅｎｅｓ；インターフェロン遺伝子刺激因子）のアゴニストであり、ＳＴＩＮＧタンパク質の調節によって影響を受ける障害の治療に有用な、新規化合物に関する。本発明はまた、かかる化合物のうちの１つ以上を含む医薬組成物、かかる化合物及び組成物の調製プロセス、及び様々な疾患、症候群及び障害を治療するためのかかる化合物又は医薬組成物の使用に関する。本発明は、下流のシグナル伝達経路の活性化に関与していてもよく、更に第２のメッセンジャー及び増殖因子を活性化し、先天性免疫及び適応免疫に関与するインターフェロンの産生に関与し得る。より具体的には、本発明は、限定されないが、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫及び抗ウイルス療法を含む種々の感染、疾患、症候群及び障害の治療のための、かかる化合物又は医薬組成物の使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
ＳＴＩＮＧ（インターフェロン遺伝子刺激因子）は、ＴＭＥＭ１７３、ＭＩＴＡ、ＭＰＹＳ及びＥＲＩＳとしても知られ、細胞内部に位置する膜貫通受容体であり、細胞質核酸の重要なセンサーである（Ｚｈｏｎｇ  Ｂ，ｅｔ  ａｌ．「Ｔｈｅ  Ａｄａｐｔｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ＭＩＴＡ  Ｌｉｎｋｓ  Ｖｉｒｕｓ−Ｓｅｎｓｉｎｇ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｔｏ  ＩＲＦ３  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ｆａｃｔｏｒ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．」Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．２００８．ｖｏｌ．２９：５３８−５５０）。最近の研究により、ＳＴＩＮＧの生物学と、マウスモデルにおいて堅牢な抗腫瘍活性をもたらす先天性免疫反応を動員する際の役割とが明らかになってきた。ＳＴＩＮＧ経路の活性化によって、ＩＲＦ３（インターフェロン調節因子３）経路によるＩ型インターフェロン（主にＩＦＮ−α及びＩＦＮ−β）の産生が誘導される。ＩＲＦ３の活性化はＴＢＫ１によって介在されると考えられており、ＴＢＫ１は、ＩＲＦ３を動員及びリン酸化させることにより、核に移行してＩ型インターフェロン及びその他の遺伝子を転写させ得るＩＲＦ３ホモ二量体を形成させる（Ｌｉｕ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ．「Ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｎａｔｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ａｄａｐｔｏｒ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ＭＡＶＳ，ＳＴＩＮＧ，ａｎｄ  ＴＲＩＦ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ＩＲＦ３  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ」Ｓｃｉｅｎｃｅ．２０１５：２６３０−２６３７）。ＴＢＫ１はまた、癌原性転写因子ＮＦ−κＢを介し活性化Ｂ細胞の核因子κ軽鎖エンハンサーをも活性化させ、これにより炎症促進性サイトカイン（ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＴＮＦ−αなど）の産生が誘導される。これに加えて、ＳＴＩＮＧは、ＳＴＡＴ６（シグナル伝達兼転写活性化因子６）を活性化し、ケモカインＣＣＬ２、ＣＣＬ２０及びＣＣＬ２６を含む種々のサイトカインの産生を誘導し（Ｔｈ２型）、増加させ（ＩＬ−１２）、又は減少させる（ＩＬ−１０）（ＣｈｅｎＨ，ｅｔ  ａｌ．「Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＳＴＡＴ６  ｂｙ  ＳＴＩＮＧ  Ｉｓ  Ｃｒｉｔｉｃａｌ  ｆｏｒ  Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｉｎｎａｔｅ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ」Ｃｅｌｌ．２０１１，ｖｏｌ．１４：４３３−４４６）。活性化時のＳＴＩＮＧのＳｅｒ３６６の直接的なリン酸化もまた、ＴＢＫ１又はＵＬＫ１を介して起こることが報告されている（Ｃｏｒｒａｌｅｓ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ「Ｄｉｒｅｃｔ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＳＴＩＮＧ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｕｍｏｒ  ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ  ｌｅａｄｓ  ｔｏ  ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｄ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｔｕｍｏｒ  ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ」Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐｏｒｔｓ，２０１５，ｖｏｌ．１１：１−１３；Ｋｏｎｎｏ，Ｈ．ｅｔ  ａｌ．「Ｃｙｃｌｉｃ  ｄｉｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ｔｒｉｇｇｅｒ  ＵＬＫ１（ＡＴＧ１）ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＳＴＩＮＧ  ｔｏ  ｐｒｅｖｅｎｔ  ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ｉｎｎａｔｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ」Ｃｅｌｌ，２０１３，ｖｏｌ．１５５：６８８−６９８）。
【０００４】
ＳＴＩＮＧ（２’，３’）環状グアノシンモノホスフェート−アデノシンモノホスフェート（２’，３’−ｃＧＡＭＰ）に結合し、これを活性化させる天然リガンドと、その合成に関与する酵素（ｃＧＡＳ、Ｃ６ｏｒｆ１５０又はＭＢ２１Ｄ１としても知られている）は、この経路を調節する機会を提供することが解明されている。ｃＧＡＭＰは、ＳＴＩＮＧ経路を活性化するための内因性の二次メッセンジャーとして機能する、哺乳動物細胞において産生されるＳＴＩＮＧの高親和性リガンドである。ｃＧＡＭＰは、外因性二本鎖ＤＮＡの存在下（例えば、細菌、ウイルス又は原虫の侵入により放出される）、又は哺乳動物の自己ＤＮＡの存在下でｃＧＡＳによって生成する固有の２’，３’結合を有する環状ジヌクレオチドである（Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３；Ｓｕｎ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．「Ｃｙｃｌｉｃ  ＧＭＰ−ＡＭＰ  Ｓｙｎｔｈａｓｅ  Ｉｓ  ａ  Ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ  ＤＮＡ  Ｓｅｎｓｏｒ  Ｔｈａｔ  Ａｃｔｉｖａｔｅｓ  ｔｈｅ  Ｔｙｐｅ  Ｉ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｐａｔｈｗａｙ」Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１３，ｖｏｌ．３３９：７８６−７９１；Ｂｈａｔ  Ｎ及びＦｉｔｚｇｅｒａｌｄ  ＫＡ．「Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ  ＤＮＡ  ｂｙ  ｃＧＡＳ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ＳＴＩＮＧ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｓｅｎｓｏｒｓ．」Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１４  Ｍａｒ；４４（３）：６３４−４０）。ＳＴＩＮＧ活性化はまた、侵入してきた細菌によって放出される外因性（３’，３）環状ジヌクレオチド（ｃ−ジ−ＧＭＰ、ｃ−ジ−ＡＭＰ及び３’３’−ｃＧＡＭＰ）の結合によって起こり得る（Ｚｈａｎｇ  Ｘ，ｅｔ  ａｌ．「Ｃｙｃｌｉｃ  ＧＭＰ−ＡＭＰ  Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  Ｍｉｘｅｄ  Ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒ  Ｌｉｎｋａｇｅｓ  Ｉｓ  Ａｎ  ＥｎｄｏｇｅｎｏｕｓＨｉｇｈ−Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｌｉｇａｎｄ  ｆｏｒ  ＳＴＩＮＧ」Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｅｌｌ，２０１３，ｖｏｌ．５１：２２６−２３５；Ｄａｎｉｌｃｈａｎｋａ，Ｏ及びＭｅｋａｌａｎｏｓ，ＪＪ．「Ｃｙｃｌｉｃ  Ｄｉｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｉｎｎａｔｅ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ」Ｃｅｌｌ．２０１３．ｖｏｌ．１５４：９６２−９７０）。
【０００５】
ＳＴＩＮＧ経路の活性化は、特異的なキラーＴ細胞を生成する免疫応答を引き起こし、このキラーＴ細胞が、腫瘍を収縮させ、かつ再発しないように長く持続する免疫を与えることができる。前臨床モデルにおいてＳＴＩＮＧアゴニストを用いて得られた顕著な抗腫瘍活性は、この標的について高レベルの興奮を作り出し、ＳＴＩＮＧ経路を調節し得る低分子化合物は、癌を治療するのと、自己免疫疾患を減らすのとの両方の可能性がある。
【０００６】
ＳＴＩＮＧ経路の活性化はまた、抗ウイルス応答にも関与する。細胞又は生物レベルのいずれかでの機能性応答の喪失は、ＳＴＩＮＧが存在しないとウイルス負荷を制御することができないことを示す。ＳＴＩＮＧ経路の活性化が免疫応答のトリガーとなり、その結果、ウイルスに対抗し免疫系の先天性及び適応性のアームを動員する抗ウイルス性及び炎症性サイトカインが得られる。最終的に、長期持続性の免疫が、病原性ウイルスに対して発達する。前臨床モデルにおいてＳＴＩＮＧアゴニストを用いて得られた顕著な抗ウイルス活性は、この標的について高レベルの興奮を作り出し、ＳＴＩＮＧ経路を調節し得る低分子化合物は、慢性ウイルス感染（例えばＢ型肝炎）を治療する可能性がある。
【０００７】
慢性肝炎Ｂ型ウイルス（ＨＢＶ）への感染は重要な世界的健康問題であり、世界人口の５％以上が感染している（患者数は全世界で３億５千万人超、米国内では１２５万人）。ある種のＨＢＶワクチン及び治療が利用可能ではあるが、厄介な慢性ＨＢＶ感染は、発展途上国の大部分では治療選択肢が最適であるとは言えず、また新規感染率が依然として高いことから、重要な未解決の世界的な医療問題であり続けている。現在の治療は、ウイルスポリメラーゼの阻害剤として作用するインターフェロンα及びヌクレオシド類似体といった２種類の薬剤のみに限定されている。しかしながら、これらの療法の中には疾患を治癒するものはなく、かつ薬物耐性、低有効性、及び忍容性についての課題によりその効果が制限される。ＨＢＶの治癒率が低いのは、少なくとも一部では、単一の抗ウイルス剤によりウイルス産生を完全に抑制することが困難であるとの事実に起因する。しかしながら、ＨＢＶ  ＤＮＡの持続的な抑制は、肝臓疾患の進行を遅らせ、肝細胞癌の防止につながる。ＨＢＶ感染患者の現在の治療目標は、血清中のＨＢＶのＤＮＡを低いレベル、又は検出不能なレベルにまで低減させ、最終的には肝硬変及び肝細胞癌の発症を低下又は防止することにある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
したがって、ウイルス産生の抑制を高めることができ、ＨＢＶ感染を治療、寛解、又は予防することができる治療剤が当該技術分野で必要とされている。単独療法として、又は他のＨＢＶ治療若しくは補助的治療との併用で、ＨＢＶ感染した患者に対しかかる治療剤を投与することによって、ウイルス量の大幅な減少、予後の改善、疾患進行の減少、及びセロコンバージョン率の向上がもたらされ得る。
【０００９】
先天性免疫及び適応免疫の両方を強化する潜在的な治療効果は、ＳＴＩＮＧを、それ自体による刺激活性を示し、他の免疫療法と組み合わせることもできる、魅力的な治療標的にする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、式（Ｉ）の化合物：
【００１１】
【化１】
2020514316.tif 000003
［式中、Ｒ１Ａ、Ｒ２Ａ、Ｒ１Ｄ、Ｒ２Ｄ、及びＲ２Ｅは、各々独立して、当該Ｒ１Ａ、Ｒ２Ａ、Ｒ１Ｄ、Ｒ２Ｄ、及びＲ２Ｅうちの１つがメチルであるように、水素又はメチルから選択され、
Ｒ１Ｂは、水素、ヒドロキシ、又はフルオロであり、
又は、Ｒ１Ｂは−Ｏ−であり、Ｒ１ＤはＣＨ２であり、Ｒ１Ｂと、Ｒ１Ｄと、これらが結合する原子とが、５員環を形成し、
Ｒ１Ｃは、ヒドロキシ、チオール、及びＢＨ３−からなる群から選択され、
Ｂ１は、環ｂ１及びｂ２からなる群から選択され、
【００１２】
【化２】
2020514316.tif 000004
Ｒ２Ｂは、ヒドロキシ、フルオロ、及びメトキシからなる群から選択され、
Ｒ２Ｃは、ヒドロキシ、チオール及びＢＨ３−からなる群から選択される］、
又はそのエナンチオマー、ジアステレオマー、若しくは医薬的に許容される塩形態に関する。
【００１３】
本発明はまた、医薬的に許容される担体、医薬的に許容される賦形剤、及び／又は医薬的に許容される希釈剤と、式（Ｉ）の化合物又はその医薬的に許容される塩形態とを含む、それらからなる、及び／又はそれらから本質的になる、医薬組成物も提供する。
【００１４】
更に、式（Ｉ）の化合物と、医薬的に許容される担体、医薬的に許容される賦形剤、及び／又は医薬的に許容される希釈剤とを混合すること、を含む、それからなる、及び／又は本質的にそれからなる、医薬組成物を製造するためのプロセスが提供される。
【００１５】
本発明は更に、式（Ｉ）の化合物を用い、ウイルス感染、疾患、症候群又は状態がＳＴＩＮＧのアゴニスト活性によって影響を受ける、哺乳動物及び／又はヒトを含む対象においてウイルス感染、疾患、症候群又は状態を治療するか、又は寛解させるための方法を提供する。
【００１６】
本発明は更に、式（Ｉ）の化合物を用い、哺乳動物及び／又はヒトを含む対象においてウイルス感染、疾患、症候群又は状態を治療するか、又は寛解させるための方法を提供する。
【００１７】
本発明は更に、式（Ｉ）の化合物を用い、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫及びＢ型肝炎からなる群から選択される、ウイルス感染、疾患、症候群又は状態がＳＴＩＮＧのアゴニスト活性によって影響を受ける、哺乳動物及び／又はヒトを含む対象においてウイルス感染、疾患、症候群又は状態を治療するか、又は寛解させるための方法を提供する。
【００１８】
本発明は更に、式（Ｉ）の化合物を用い、哺乳動物及び／又はヒトを含む対象において、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫及びＢ型肝炎からなる群から選択される、ウイルス感染、疾患、症候群又は状態を治療するか、又は寛解させるための方法を提供する。
【００１９】
本発明はまた、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫及びＢ型肝炎からなる群から選択される、ＳＴＩＮＧのアゴニスト活性によって影響を受けるウイルス感染、疾患、症候群又は状態の治療を必要とする対象において当該疾患、症候群又は状態を治療するための医薬が調剤される、医薬の調剤における、本明細書に記載のいずれかの化合物の使用に関する。
【００２０】
本発明はまた、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫及びＢ型肝炎からなる群から選択される、ウイルス感染、疾患、症候群又は状態の治療を必要とする対象において当該疾患、症候群又は状態を治療するための医薬が調剤される、医薬の調剤における、本明細書に記載のいずれかの化合物の使用に関する。
【００２１】
本発明はまた、ＳＴＩＮＧの選択的なアゴニストとして作用する置換環状ジヌクレオチド誘導体の調製に関する。
【００２２】
本発明の例示は、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫及びＢ型肝炎からなる群から選択される、ＳＴＩＮＧによって調節されるウイルス感染、疾患、症候群又は状態を治療する方法であって、当該治療を必要とする対象に、治療有効量の上述の化合物又は医薬組成物のいずれかを投与すること、を含む、方法である。
【００２３】
本発明の例示は、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫及びＢ型肝炎からなる群から選択されるウイルス感染、疾患、症候群又は状態を治療する方法であって、当該治療を必要とする対象に、治療有効量の上述の化合物又は医薬組成物のいずれかを投与すること、を含む、方法である。
【００２４】
別の実施形態では、本発明は、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫及びＢ型肝炎からなる群から選択される、ＳＴＩＮＧのアゴニスト活性によって影響を受けるウイルス感染、疾患、症候群又は状態の治療に使用するための、式（Ｉ）の化合物に関する。
【００２５】
別の実施形態では、本発明は、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫及びＢ型肝炎からなる群から選択されるウイルス感染、疾患、症候群又は状態の治療のための、式（Ｉ）の化合物を含む組成物に関する。
【００２６】
本発明は、式（ＩＩ）の化合物式
【００２７】
【化３】
2020514316.tif 000005
［式中、Ｒ１Ｈは、フルオロであり；又は、Ｒ１Ｈは−Ｏ−であり、Ｒ１ＪはＣＨ２であり、Ｒ１Ｈと、Ｒ１Ｊと、これらが結合する原子とが、５員環を形成し；
Ｒ１Ｊは、水素又はメチルであり、
Ｒ１Ｋは、ヒドロキシ又はチオールからなる群から選択され、
Ｒ２Ｌは、ヒドロキシ及びチオールからなる群から選択される］、
又はそのエナンチオマー、ジアステレオマー、若しくは医薬的に許容される塩形態に関する。
【００２８】
本発明はまた、医薬的に許容される担体、医薬的に許容される賦形剤、及び／又は医薬的に許容される希釈剤と、式（ＩＩ）の化合物又はその医薬的に許容される塩形態とを含む、又はそれらからなる、及び／又はそれらから本質的になる、医薬組成物も提供する。
【００２９】
更に、式（ＩＩ）の化合物と、医薬的に許容される担体、医薬的に許容される賦形剤、及び／又は医薬的に許容される希釈剤とを混合すること、を含む、それからなる、及び／又は本質的にそれからなる、医薬組成物を製造するためのプロセスが提供される。
【００３０】
本発明は更に、式（ＩＩ）の化合物を用い、ウイルス感染、疾患、症候群又は状態がＳＴＩＮＧのアゴニスト活性によって影響を受ける、哺乳動物及び／又はヒトを含む対象においてウイルス感染、疾患、症候群又は状態を治療するか、又は寛解させるための方法を提供する。
【００３１】
本発明は更に、式（ＩＩ）の化合物を用い、哺乳動物及び／又はヒトを含む対象においてウイルス感染、疾患、症候群又は状態を治療するか、又は寛解させるための方法を提供する。
【００３２】
本発明は更に、式（ＩＩ）の化合物を用い、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫及びＢ型肝炎からなる群から選択される、ウイルス感染、疾患、症候群又は状態がＳＴＩＮＧのアゴニスト活性によって影響を受ける、哺乳動物及び／又はヒトを含む対象においてウイルス感染、疾患、症候群又は状態を治療するか、又は寛解させるための方法を提供する。
【００３３】
本発明は更に、式（ＩＩ）の化合物を用い、哺乳動物及び／又はヒトを含む対象において、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫及びＢ型肝炎からなる群から選択される、ウイルス感染、疾患、症候群又は状態を治療するか、又は寛解させるための方法を提供する。
【００３４】
本発明はまた、ＳＴＩＮＧの選択的なアゴニストとして作用する式（ＩＩ）の置換環状ジヌクレオチド誘導体の調製に関する。
【００３５】
本発明の例示は、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫及びＢ型肝炎からなる群から選択される、ＳＴＩＮＧによって調節されるウイルス感染、疾患、症候群又は状態を治療する方法であって、当該治療を必要とする対象に、治療有効量の式（ＩＩ）の化合物又はその医薬組成物のいずれかを投与すること、を含む、方法である。
【００３６】
本発明の例示は、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫及びＢ型肝炎からなる群から選択されるウイルス感染、疾患、症候群又は状態を治療する方法であって、当該治療を必要とする対象に、治療有効量の式（ＩＩ）の化合物又はその医薬組成物を投与すること、を含む、方法である。
【００３７】
別の実施形態では、本発明は、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫及びＢ型肝炎からなる群から選択される、ＳＴＩＮＧのアゴニスト活性によって影響を受けるウイルス感染、疾患、症候群又は状態の治療に使用するための、式（ＩＩ）の化合物に関する。
【００３８】
別の実施形態では、本発明は、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫及びＢ型肝炎からなる群から選択されるウイルス感染、疾患、症候群又は状態の治療のための、式（ＩＩ）の化合物を含む組成物に関する。
【発明を実施するための形態】
【００３９】
置換基に関連して用いられる「独立して」という用語は、２個以上の置換基が存在し得る場合に、それらの置換基が互いに同じであっても異なってもよい状況を意味する。
【００４０】
単独で用いられるか又は置換基の一部として用いられるかによらず、「アルキル」という用語は、１〜８個の炭素原子を有する、直鎖状及び分岐鎖状の炭素鎖を意味する。したがって、指定された炭素原子の数（例えば、Ｃ１〜８）は、独立して、アルキル部分又はより大きなアルキル含有置換基のアルキル部の炭素原子数を意味する。複数のアルキル基を有する置換基、例えば、（Ｃ１〜６アルキル）２アミノ−において、ジアルキルアミノのＣ１〜６アルキル基は、同じであっても異なってもよい。
【００４１】
「アルコキシ」という用語は、「アルキル」という用語を上記で定義されるものとして−Ｏ−アルキル基を意味する。
【００４２】
「アルケニル」及び「アルキニル」という用語は、２〜８個の炭素原子を有する、直鎖状及び分岐鎖状の炭素鎖を意味し、アルケニル鎖は、少なくとも１つの二重結合を含み、アルキニル鎖は、少なくとも１つの三重結合を含む。
【００４３】
「シクロアルキル」という用語は、飽和又は部分的に飽和の、単環式又は多環式の、３〜１４個の炭素原子の炭化水素環を意味する。このような環の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、及びアダマンチルが挙げられる。
【００４４】
「ヘテロシクリル」という用語は、少なくとも１つの炭素原子とＮ、Ｏ及びＳから独立して選択される１〜４個のヘテロ原子とを含む３〜１０個の環員を有する非芳香族の単環系又は二環系を意味する。ヘテロシクリルという用語の範囲には、１〜２員がＮである５〜７員の非芳香族環、又は０、１若しくは２員がＮであり、２員以下がＯ若しくはＳであり、少なくとも１員がＮ、Ｏ若しくはＳのいずれかでなければならない５〜７員の非芳香族環が含まれる。環は、所望により、０〜１個の不飽和結合を含んでいてよく、環が６又は７員である場合、所望により、２個以下の不飽和結合を含んでいてよい。ヘテロシクリルの環を構成する炭素原子の環員は、完全に飽和していても部分的に飽和していてもよい。「ヘテロシクリル」という用語はまた、架橋されることで二環式環を形成する２個の５員の単環式ヘテロシクロアルキル基も含む。このような基は、完全に芳香族性とはみなされず、ヘテロアリール基とは称されない。ヘテロシクリルが二環式の場合、ヘテロシクリルの両環は、非芳香環であり、かつ、少なくとも一方の環はヘテロ原子の環員を含む。ヘテロシクリル基の例としては、限定するものではないが、ピロリニル（２Ｈ−ピロール、２−ピロリニル又は３−ピロリニルを含む）、ピロリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、ピペリジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、及びピペラジニルが挙げられる。特に断らない限り、ヘテロシクリルは、そのペンダント基と、安定な構造をもたらす任意のヘテロ原子又は炭素原子で結合している。
【００４５】
「アリール」という用語は、６〜１０個の炭素員からなる、不飽和、芳香族性の単環又は二環式環を意味する。アリール環の例としては、フェニル及びナフタレニルが挙げられる。「ヘテロアリール」という用語は、炭素原子と、Ｎ、Ｏ及びＳからなる群から独立して選択される１〜４個のヘテロ原子とを含む５〜１０個の環員を有する芳香族性の単環式又は二環式の芳香環系を指す。ヘテロアリールという用語の範囲には、５又は６員の芳香環が含まれ、ただし環は炭素原子からなり、少なくとも１つのヘテロ原子の環員を有する。適切なヘテロ原子としては、窒素、酸素、及び硫黄が挙げられる。５員環の場合、ヘテロアリール環は、好ましくは、１員の窒素、酸素又は硫黄を含み、更に３個以下の更なる窒素を含む。６員環の場合、ヘテロアリール環は、好ましくは１〜３個の窒素原子を含む。６員環が３個の窒素原子を有する場合では、最大で２個の窒素原子が隣り合う。ヘテロアリール基の例としては、フリル、チエニル、ピロリル、オキサゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル、オキサジアゾリル、トリアゾリル、チアジアゾリル、ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、インドリル、イソインドリル、ベンゾフリル、ベンゾチエニル、インダゾリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンズイソオキサゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾトリアゾリル、キノリニル、イソキノリニル及びキナゾリニルが挙げられる。特に断らない限り、ヘテロアリールは、そのペンダント基と、安定な構造をもたらす任意のヘテロ原子又は炭素原子で結合している。
【００４６】
「ハロゲン」又は「ハロ」という用語は、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素原子を指す。
【００４７】
「アルキル」若しくは「アリール」という用語又はこれらの接頭辞の語根のいずれかが、置換基の名称中に現れる場合（例えば、アリールアルキル、アルキルアミノ）、名称は、「アルキル」及び「アリール」について上記に与えられた限定を含むものとして解釈されるものとする。指定される炭素原子数（例えば、Ｃ１〜Ｃ６）は、アルキル部分、アリール部分、又は、アルキルがその接頭辞の語根として現れる、より大きな置換基のアルキル部分の炭素原子数を独立して指す。アルキル及びアルコキシ置換基について、指定される炭素原子数は、指定された所定の範囲内に含まれる全ての独立した構成員を含む。例えば、Ｃ１〜６アルキルには、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル及びヘキシルを個々に含むだけでなく、それらの下位の組み合わせ（例えば、Ｃ１〜２、Ｃ１〜３、Ｃ１〜４、Ｃ１〜５、Ｃ２〜６、Ｃ３〜６、Ｃ４〜６、Ｃ５〜６、Ｃ２〜５など）も含まれる。
【００４８】
一般的に、本開示全体で使用される標準的な命名法の規則の下では、指定される側鎖の末端部分が最初に記載され、続けて結合点の方向に隣接する官能基が記載される。したがって、例えば、「Ｃ１〜Ｃ６アルキルカルボニル」置換基は下式の基：
【００４９】
【化４】
2020514316.tif 000006
を意味する。
【００５０】
立体中心における「Ｒ」という用語は、当該技術分野で定義されているように、その立体中心が純粋にＲ−配置であることを示す。同様に、用語「Ｓ」は、純粋にＳ−配置であることを意味する。本願明細書で使用する場合、立体中心における「＊Ｒ」又は「＊Ｓ」という用語は、その立体中心が純粋なものであるが、どちらの配置であるか不明であることを指定するのに使用される。本願明細書で使用する場合、「ＲＳ」という用語は、Ｒ−及びＳ−配置の混合物として存在する立体中心を意味する。同様に、「＊ＲＳ」又は「＊ＳＲ」という用語は、Ｒ配置及びＳ配置の混合物として存在し、その分子内の別の立体中心に関してその配置が不明である立体中心を意味する。
【００５１】
１個の立体中心を有する化合物であって、立体化学的結合の指定なしで図示されているものは、２つのエナンチオマーの混合物である。２個の立体中心を有する化合物であって、両方とも立体化学的結合の指定なしで図示されているものは、４つのジアステレオマーの混合物である。「ＲＳ」の両方で標識された２個の立体中心を有する化合物であって、立体化学的結合の指定を付して図示されているものは、図示されている相対的な立体化学を有する２成分混合物である。「＊ＲＳ」の両方で標識された２個の立体中心を有する化合物であって、立体化学的結合の指定を付して図示されているものは、相対的な立体化学が不明である２成分混合物である。立体化学的結合の指定なしで図示されている未標識の立体中心は、Ｒ−配置とＳ−配置との混合である。立体化学的結合の指定を付して図示されている未標識の立体中心は、その絶対的な立体化学は図示されたとおりのものである。
【００５２】
特に断らない限り、分子内の特定の位置における任意の置換基又はその変形物の定義は、その分子内の他の位置におけるその定義とは独立であることが意図されている。本発明の化合物における置換基及び置換パターンは、化学的に安定であり、かつ当技術分野において周知の技術及び本明細書で説明される方法により容易に合成できる化合物を提供するために、当業者が選択することができると理解される。
【００５３】
「対象」という用語は、治療、観察又は試験の対象となっている動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトを指す。
【００５４】
「治療有効量」という用語は、治療される疾患、症候群、状態又は障害の症状の緩和若しくは部分的緩和を含む、研究者、獣医、医師、又は他の臨床専門家が得ようとする生物学的又は医薬的応答を組織系、動物又はヒトにおいて誘導する、本発明の化合物を含む活性化合物又は医薬品の量を指す。
【００５５】
「組成物」という用語は、治療有効量の特定の成分を含む生成物、並びに特定の量の特定の成分の組み合わせから直接又は間接的にもたらされる任意の生成物を意味する。
【００５６】
「ＳＴＩＮＧアゴニスト」という用語は、ＳＴＩＮＧに結合することによってＳＴＩＮＧに作用し、ＳＴＩＮＧ機能に関連する分子の活性化によって特徴付けられる下流のシグナル伝達を誘導する、化合物を包含することを意図している。この用語には、ＳＴＩＮＧ、ＩＲＦ３及び／又はＮＦ−ＫＢの直接リン酸化反応も含まれ、ＳＴＡＴ６も含まれ得る。ＳＴＩＮＧ経路活性化によって、Ｉ型インターフェロン（主にＩＦＮ−α及びＩＦＮ−β）の産生及びインターフェロン刺激遺伝子の発現が増加する（ＣｈｅｎＨ，ｅｔ  ａｌ．「Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＳＴＡＴ６  ｂｙ  ＳＴＩＮＧ  Ｉｓ  Ｃｒｉｔｉｃａｌ  ｆｏｒ  Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｉｎｎａｔｅ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．」Ｃｅｌｌ．２０１１，ｖｏｌ．１４：４３３−４４６；ａｎｄ  Ｌｉｕ  Ｓ−Ｙ，ｅｔ  ａｌ．「Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｙｐｅ  Ｉ  ａｎｄ  ｔｙｐｅ  ＩＩ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ａｎｔｉｖｉｒａｌ  ｆａｃｔｏｒｓ」．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．２０１２：ｖｏｌ．１０９  ４２３９−４２４４）。
【００５７】
「ＳＴＩＮＧ調節された」という用語は、限定されないが、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫及びＢ型肝炎感染などのウイルス感染、疾患又は状態を含む、ＳＴＩＮＧによって直接、又はＳＴＩＮＧ経路を介して影響を受ける状態を指すために用いられる。
【００５８】
本明細書で使用するとき、特に断りがない限り、「ＳＴＩＮＧによって調節される障害」という用語は、ウイルス感染、疾患、障害又は状態のうち、その特徴的な症状の少なくとも１つがＳＴＩＮＧアゴニストで治療すると緩和するか、又は除去されることを特徴とするものを意味する。好適な例としては、限定されないが、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫及びＢ型肝炎が挙げられる。
【００５９】
本明細書で使用される場合、特に断らない限り、（ＳＴＩＮＧのアゴニスト活性により影響を受けるウイルス感染、疾患、症候群、状態又は障害に言及する場合の）「影響する」又は「影響される」という用語は、当該ウイルス感染、疾患、症候群、状態又は障害の１つ以上の症状又は所見の頻度及び／又は重症度の低下を含み、並びに／又は、当該ウイルス感染、疾患、症候群、状態若しくは障害の１つ以上の症状若しくは所見の進行の予防、又は、ウイルス感染、疾患、状態、症候群又は障害の進行の予防を含む。
【００６０】
本発明の化合物は、ＳＴＩＮＧのアゴニスト活性により影響を受けるウイルス感染、疾患、症候群、状態又は障害を治療又は寛解させるための方法に有用である。このような方法は、対象、例えば、このような治療、寛解及び／又は予防を必要とする動物、哺乳類及びヒトに、治療有効量の式（Ｉ）若しくは式（ＩＩ）の化合物又はそのエナンチオマー、ジアステレオマー、溶媒和物若しくは医薬的に許容される塩を投与すること、を含み、それからなり、及び／又は本質的にそれからなる。
【００６１】
特に、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）の化合物又はそのエナンチオマー、ジアステレオマー、溶媒和物若しくは医薬的に許容される塩形態は、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫及びＢ型肝炎感染などの疾患、症候群、状態又は障害を治療するか、又は寛解させるのに有用である。
【００６２】
より具体的には、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）の化合物、又はそのエナンチオマー、ジアステレオマー、溶媒和物、若しくは医薬的に許容される塩形態は、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫及びＢ型肝炎感染などを治療するか、又は寛解させるのに有用であり、当該治療又は寛解を必要とする対象に、治療有効量の本明細書で定義した式（Ｉ）又は式（ＩＩ）の化合物、又はそのエナンチオマー、ジアステレオマー、溶媒和物、若しくは医薬的に許容される塩形態を投与すること、を含む。
【００６３】
本明細書に開示されるいくつかの実施形態は、ヘパドナウイルス（Hepadnaviridaee）（例えばＢ型肝炎ウイルス、すなわちＨＢＶ）によって引き起こされる感染を含むウイルス感染を寛解させ、及び／又は治療する方法に関する。この方法は、ウイルス感染症を患っていると特定された対象に、有効量の式（Ｉ）若しくは式（ＩＩ）の１種類以上の化合物、又はその医薬的に許容される塩形態、又は式（Ｉ）若しくは式（ＩＩ）の１種類以上の化合物若しくはその医薬的に許容される塩形態を含む医薬組成物を投与すること、を含んでいてもよい。
【００６４】
本明細書に開示される他の実施形態は、ウイルス感染を寛解させ、及び／又は治療する方法であって、ウイルスに感染した細胞と、有効量の本明細書に記載の１種類以上の化合物（例えば、式（Ｉ）若しくは式（ＩＩ）の化合物、又はその医薬的に許容される塩形態）、又は本明細書に記載の１種類以上の化合物若しくはその医薬的に許容される塩形態を含む医薬組成物とを接触させること、を含んでいてもよい、方法に関する。本明細書に記載される更に他の実施形態は、ウイルス感染を寛解させ、及び／又は治療するための医薬の製造において、式（Ｉ）若しくは式（ＩＩ）の１種類以上の化合物、又はその医薬的に許容される塩形態を使用することに関する。
【００６５】
本明細書に記載されるなおも更に他の実施形態は、ウイルス感染を寛解させ、及び／又は治療するために使用可能な、式（Ｉ）若しくは式（ＩＩ）の１種類以上の化合物、又はその医薬的に許容される塩形態、又は式（Ｉ）若しくは式（ＩＩ）の１種類以上の化合物若しくはその医薬的に許容される塩形態を含む医薬組成物に関する。本明細書に開示されるいくつかの実施形態は、ウイルスの複製を阻害する方法であって、ウイルスに感染した細胞と、有効量の式（Ｉ）若しくは式（ＩＩ）の１種類以上の化合物、又はその医薬的に許容される塩形態、又は本明細書に記載の１種類以上の化合物若しくはその医薬的に許容される塩形態を含む医薬組成物とを接触させること、を含んでいてもよい、方法に関する。
【００６６】
本明細書に記載される他の実施形態は、ウイルスの複製を阻害するための医薬の製造において、式（Ｉ）若しくは式（ＩＩ）の１種類以上の化合物、又はその医薬的に許容される塩形態を使用することに関する。本明細書に記載される更に他の実施形態は、ウイルスの複製を阻害するために使用可能な、本明細書に記載の１種類以上の化合物（例えば、式（Ｉ）若しくは式（ＩＩ）の化合物、又はその医薬的に許容される塩形態）、又は本明細書に記載の１種類以上の化合物若しくはその医薬的に許容される塩形態を含む医薬組成物に関する。
【００６７】
いくつかの実施形態では、ウイルス感染は、Ｂ型肝炎ウイルス感染であってもよい。この方法は、ＨＢＶを患っていると特定された対象に、有効量の式（Ｉ）若しくは式（ＩＩ）の１種類以上の化合物、又はその医薬的に許容される塩形態、又は式（Ｉ）若しくは式（ＩＩ）の１種類以上の化合物若しくはその医薬的に許容される塩形態を含む医薬組成物を投与すること、を含んでいてもよい。
【００６８】
本明細書に開示される他の実施形態は、ウイルス感染を寛解させ、及び／又は治療する方法であって、ＨＢＶに感染した細胞と、有効量の式（Ｉ）若しくは式（ＩＩ）の１種類以上の化合物、又はその医薬的に許容される塩形態、又は式（Ｉ）若しくは式（ＩＩ）の１種類以上の化合物若しくはその医薬的に許容される塩形態を含む医薬組成物とを接触させること、を含んでいてもよい、方法に関する。本明細書に記載される更に他の実施形態は、ＨＢＶを寛解させ、及び／又は治療するための医薬の製造において、式（Ｉ）若しくは式（ＩＩ）の１種類以上の化合物若しくはその医薬的に許容される塩形態を使用することに関する。
【００６９】
本明細書に記載されるなおも更に他の実施形態は、ＨＢＶを寛解させ、及び／又は治療するために使用可能な、式（Ｉ）若しくは式（ＩＩ）の１種類以上の化合物、又はその医薬的に許容される塩形態、又は式（Ｉ）若しくは式（ＩＩ）の１種類以上の化合物若しくはその医薬的に許容される塩形態を含む医薬組成物に関する。本明細書に開示されるいくつかの実施形態は、ＨＢＶの複製を阻害する方法であって、ウイルスに感染した細胞と、有効量の式（Ｉ）若しくは式（ＩＩ）の１種類以上の化合物、又はその医薬的に許容される塩形態、又は式（Ｉ）若しくは式（ＩＩ）の１種類以上の化合物若しくはその医薬的に許容される塩形態を含む医薬組成物とを接触させること、を含んでいてもよい、方法に関する。
【００７０】
本明細書に記載される他の実施形態は、ＨＢＶの複製を阻害するための医薬の製造において、式（Ｉ）若しくは式（ＩＩ）の１種類以上の化合物、又はその医薬的に許容される塩を使用することに関する。本明細書に記載される更に他の実施形態は、ＨＢＶの複製を阻害するために使用可能な、式（Ｉ）若しくは式（ＩＩ）の１種類以上の化合物、又はその医薬的に許容される塩、又は式（Ｉ）若しくは式（ＩＩ）の１種類以上の化合物若しくはその医薬的に許容される塩形態を含む医薬組成物に関する。
【００７１】
本発明の実施形態は、式（Ｉ）の化合物、
【００７２】
【化５】
2020514316.tif 000007
［式中、
ＡＡ）Ｒ１Ｂは、ヒドロキシ若しくはフルオロであり、Ｒ１Ｄは水素であり、
ＢＢ）Ｒ１Ｂは−Ｏ−であり、Ｒ１ＤはＣＨ２であり、Ｒ１Ｂと、Ｒ１Ｄと、これらが結合する原子とが、５員環を形成し、
ＣＣ）Ｒ１Ｃは、ヒドロキシ及びチオールからなる群から選択され、
ＤＤ）Ｂ１は環ｂ２であり、
【００７３】
【化６】
2020514316.tif 000008
ＥＥ）Ｒ２Ｃは、ヒドロキシ及びチオールからなる群から選択され、
上記の実施形態ＡＡ）〜ＥＥ）の任意の組み合わせは、Ｒ１Ａ、Ｒ２Ａ、Ｒ１Ｄ、Ｒ２Ｄ、及びＲ２Ｅのうちの１つがメチルになるようなものであり、ただし、同じ置換基の異なる実施形態が組み合わされる組み合わせが除外されると理解される］、
又はそのエナンチオマー、ジアステレオマー、若しくは医薬的に許容される塩形態に関する。
【００７４】
本発明の一実施形態は、式（Ｉ）の化合物、
【００７５】
【化７】
2020514316.tif 000009
［式中、Ｒ１Ａ、Ｒ２Ａ、Ｒ１Ｄ、Ｒ２Ｄ、及びＲ２Ｅは、各々独立して、当該Ｒ１Ａ、Ｒ２Ａ、Ｒ１Ｄ、Ｒ２Ｄ、及びＲ２Ｅのうちの１つがメチルとなるように、水素又はメチルから選択され、
Ｒ１Ｂは、水素、ヒドロキシ又はフルオロであり、
又は、Ｒ１Ｂは−Ｏ−であり、Ｒ１ＤはＣＨ２であり、Ｒ１Ｂと、Ｒ１Ｄと、これらが結合する原子とが、５員環を形成し、
Ｒ１Ｃは、ヒドロキシ及びチオールからなる群から選択され、
Ｂ１は環ｂ２であり、
【００７６】
【化８】
2020514316.tif 000010
Ｒ２Ｂは、ヒドロキシ、フルオロ、及びメトキシからなる群から選択され、
Ｒ２Ｃは、ヒドロキシ及びチオールからなる群から選択される］、
又はそのエナンチオマー、ジアステレオマー、若しくは医薬的に許容される塩形態に関する。
【００７７】
本発明の実施形態は、本明細書に定義される式（Ｉ）の化合物、又はそのエナンチオマー、ジアステレオマー、溶媒和物、若しくは医薬的に許容されるその塩形態を含み、本明細書に定義される可変部の１つ以上から選択される置換基（例えば、Ｒ１Ａ、Ｒ１Ｂ、Ｒ１Ｃ、Ｒ１Ｄ、Ｂ１、Ｒ２Ａ、Ｒ２Ｂ、Ｒ２Ｃ、Ｒ２Ｄ、及びＲ２Ｅ）は、独立して、以下の表１のリストに例示されるものからの任意の個々の置換基又は任意の置換基のサブセットであるように選択される。
【００７８】
【表１】
2020514316.tif 000011
【００７９】
本発明の更なる実施形態は、化合物１〜３から選択される式（Ｉ）の化合物、
【００８０】
【化９】
2020514316.tif 000012
又はその医薬的に許容される塩形態に関する。
【００８１】
本発明の実施形態は、本明細書に定義される式（ＩＩ）の化合物、又はそのエナンチオマー、ジアステレオマー、溶媒和物、若しくは医薬的に許容されるその塩形態を含み、本明細書に定義される可変部の１つ以上から選択される置換基（例えば、Ｒ１Ｈ、Ｒ１Ｋ、Ｒ１Ｊ、及びＲ２Ｌ）は、独立して、以下の表２のリストに例示されるものからの任意の個々の置換基又は任意の置換基のサブセットであるように選択される。
【００８２】
【表２】
2020514316.tif 000013
【００８３】
本発明の更なる実施形態は、式（ＩＩ）の化合物４〜６、
【００８４】
【化１０】
2020514316.tif 000014
又はその医薬的に許容される塩形態に関する。
【００８５】
医薬における使用に関して、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）の化合物の塩は、非毒性の「医薬的に許容される塩」を意味する。ただし、他の塩が、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）の化合物又はその医薬的に許容される塩形態の調製に有用である場合がある。式（Ｉ）及び式（ＩＩ）の化合物の適切な医薬的に許容される塩としては、例えば、当該化合物の溶液を、医薬的に許容される酸、例えば、塩酸、硫酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酢酸、安息香酸、クエン酸、酒石酸、炭酸又はリン酸の溶液と混合することにより形成され得る酸付加塩が挙げられる。更に、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）の化合物が酸性部分を有する場合、その適切な医薬的に許容される塩としては、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩及びカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウム塩又はマグネシウム塩）、及び適切な有機リガンドと形成される塩（例えば、第四級アンモニウム塩）を挙げることができる。すなわち、代表的な医薬的に許容される塩としては、酢酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重炭酸塩、重硫酸塩、重酒石酸塩、ホウ酸塩、臭化物、カルシウムエデト酸塩、カンシル酸塩、炭酸塩、塩化物、クラブラン酸塩、クエン酸塩、二塩酸塩、エデト酸塩、エジシル酸塩、エストレート、エシラート、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリコリルアルサニレート、ヘキシルレゾルシネート、ハイドラバミン、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヒドロキシナフトエート、ヨウ化物、イソチオネート、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メチル臭化物、メチル硝酸塩、メチル硫酸塩、ムチン酸塩、ナプシル酸塩、硝酸塩、Ｎ−メチルグルカミンアンモニウム塩、オレイン酸塩、パモン酸塩（エンボナート）、パルミチン酸塩、パントテン酸塩、リン酸塩／二リン酸塩、ポリガラクツロン酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、硫酸塩、塩基性酢酸塩、コハク酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、テオクル酸塩、トシル酸塩、トリエチオジド、及び吉草酸塩が挙げられる。
【００８６】
医薬的に許容される塩の調製に使用することができる代表的な酸及び塩基としては、酢酸、２，２−ジクロロ酢酸、アシル化アミノ酸、アジピン酸、アルギン酸、アスコルビン酸、Ｌ−アスパラギン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、４−アセトアミド安息香酸、（＋）−樟脳酸、カンファースルホン酸、（＋）−（１Ｓ）−カンファー−１０−スルホン酸、カプリン酸、カプロン酸、カプリル酸、ケイ皮酸、クエン酸、シクラミン酸、ドデシル硫酸、エタン−１，２−ジスルホン酸、エタンスルホン酸、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸、ギ酸、フマル酸、ガラクタル酸、ゲンチジン酸、グルコヘプトン酸、Ｄ−グルコン酸、Ｄ−グルクロン酸、Ｌ−グルタミン酸、α−オキソ−グルタル酸、グリコール酸、馬尿酸、臭化水素酸、塩化水素酸、（＋）−Ｌ−乳酸、（±）−ＤＬ−乳酸、ラクトビオン酸、マレイン酸、（−）−Ｌ−リンゴ酸、マロン酸、（±）−ＤＬ−マンデル酸、メタンスルホン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、１−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸、ニコチン酸、硝酸、オレイン酸、オロチン酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸、リン酸、Ｌ−ピログルタミン酸、サリチル酸、４−アミノ−サリチル酸、セバシン酸、ステアリン酸、コハク酸、硫酸、タンニン酸、（＋）−Ｌ−酒石酸、チオシアン酸、ｐ−トルエンスルホン酸及びウンデシレン酸を含む酸、並びに、アンモニア、Ｌ−アルギニン、ベネタミン（benethamine）、ベンザチン、水酸化カルシウム、コリン、デアノール、ジエタノールアミン、ジエチルアミン、２−（ジエチルアミノ）−エタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−メチル−グルカミン、ヒドラバミン、１Ｈ−イミダゾール、Ｌ−リジン、水酸化マグネシウム、４−（２−ヒドロキシエチル）−モルホリン、ピペラジン、水酸化カリウム、１−（２−ヒドロキシエチル）−ピロリジン、水酸化ナトリウム、トリエタノールアミン、トロメタミン、及び水酸化亜鉛を含む塩基が挙げられる。
【００８７】
本発明の実施形態は、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）の化合物のプロドラッグを含む。一般的には、このようなプロドラッグは、インビボで必要な化合物へと容易に変換可能な化合物の、機能的誘導体である。したがって、本発明の治療又は予防の方法の実施形態において、「投与すること」という用語には、具体的に開示された化合物による、又は具体的には開示されていない場合もあるが患者への投与後にインビボで特定の化合物へと変換される化合物による、記載された様々な疾患、状態、症候群及び障害の治療又は予防が包含される。適切なプロドラッグ誘導体の選択及び調製に関する通常の手順は、例えば、「Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ」，ｅｄ．Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，１９８５に記載されている。
【００８８】
本発明の実施形態に基づく化合物が少なくとも１個のキラル中心を有する場合、それに応じて化合物はエナンチオマーとして存在し得る。化合物が２つ以上のキラル中心を有する場合、ジアステレオマーとして追加的に存在してもよい。かかる異性体及びその混合物は全て、本発明の範囲内に包含されると理解される。更に、化合物の結晶型の中には、多形として存在できるものもあり、そのような多形も本発明に含まれることが意図される。加えて、化合物の中には、水との溶媒和物（すなわち、水和物）又は一般的な有機溶媒との溶媒和物を形成できるものもあり、このような溶媒和物もまた、本発明の範囲に包含されることが意図される。当業者は、本明細書で使用する場合、「化合物」という用語が、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）の化合物の溶媒和物を含むことを意味すると理解するであろう。
【００８９】
本発明の特定の実施形態に基づく化合物の調製プロセスにより立体異性体の混合物を生じる場合、これらの異性体は、分取クロマトグラフィーなどの従来技術により分離することができる。化合物はラセミ体で調製されてもよく、又は個々のエナンチオマーをエナンチオ選択的合成若しくは分解のいずれかにより調製することもできる。化合物は、例えば、（−）−ジ−ｐ−トルオイル−ｄ−酒石酸及び／又は（＋）−ジ−ｐ−トルオイル−ｌ−酒石酸などの光学活性酸と塩を形成させた後に、分別結晶化を行い、遊離塩基を再生させることによりジアステレオマー対を形成させるなどの標準的技術により、それら化合物の成分であるエナンチオマーに分割することができる。化合物はまた、ジアステレオマーのエステル又はアミドを形成した後、クロマトグラフィー分離を行い、キラル補助基を除去することにより、分解することもできる。あるいは、化合物はキラルＨＰＬＣカラムを用いて分割してもよい。
【００９０】
本発明の一実施形態は、式（Ｉ）又は式（ＩＩ）の化合物の（＋）−エナンチオマーを含む、それからなる、及び／又は本質的にそれからなる組成物、例えば、医薬組成物に関し、組成物は、当該化合物の（−）−異性体を実質的に含まない。本文脈において、実質的に含まないとは、下式で算出される（−）−異性体が、約２５％未満、好ましくは約１０％、より好ましくは約５％、更により好ましくは約２％未満、及び更により好ましくは約１％未満であることを意味する。
【００９１】
【数１】
2020514316.tif 000015
【００９２】
本発明の別の実施形態は、式（Ｉ）又は式（ＩＩ）の化合物の（−）−エナンチオマーを含む、それからなる、及び本質的にそれからなる組成物、例えば、医薬組成物であり、当該組成物は、化合物の（＋）−異性体を実質的に含まない。本文脈において、実質的に含まないとは、下式で算出される（＋）−異性体が、約２５％未満、好ましくは約１０％未満、より好ましくは約５％未満、更により好ましくは約２％未満、更により好ましくは約１％未満であることを意味する。
【００９３】
【数２】
2020514316.tif 000016
【００９４】
本発明の種々の実施形態の化合物を調製するための任意のプロセスの最中、関連する分子のいずれかにおける感受性基又は反応性基を保護することが必要である、及び／又は望ましい場合がある。これは、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊ．Ｆ．Ｗ．ＭｃＯｍｉｅ，Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ，１９７３；Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ＆  Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９１；及びＴ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ＆  Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９９などに記載されるような従来の保護基を用いることによって達成され得る。保護基は、その後の好都合な段階において、当該技術分野で周知の方法を用いて除去することができる。
【００９５】
本発明の実施形態の化合物（その医薬的に許容される塩及び医薬的に許容される溶媒和物を含む）は単独で投与することができるが、これらの化合物は、一般的には、意図された投与経路及び標準的な製薬学的又は獣医学的な慣行の観点から選ばれ得る、医薬的に許容される担体、医薬的に許容される賦形剤及び／又は医薬的に許容される希釈剤との混合物として投与される。このため、本発明の特定の実施形態は、式（Ｉ）及び／又は（ＩＩ）の化合物と、少なくとも１つの医薬的に許容される担体、医薬的に許容される賦形剤及び／又は医薬的に許容される希釈剤とを含む、医薬組成物及び獣医学的組成物に関する。
【００９６】
一例として、本発明の実施形態の医薬組成物では、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）の化合物は、任意の適切な結合剤、潤滑剤、懸濁化剤、コーティング剤、可溶化剤及びそれらの組み合わせと混合されてもよい。
【００９７】
本発明の化合物を含む固体の経口投与形態、例えば、錠剤又はカプセルを、必要に応じて１回につき少なくとも１つの投与形態で投与することができる。持続放出性製剤で化合物を投与することも可能である。
【００９８】
本発明の化合物が投与され得る追加の経口形態としては、エリキシル剤、液剤、シロップ剤及び懸濁剤が挙げられる。各々は、任意選択的に香味剤及び着色剤を含有する。
【００９９】
あるいは、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）の化合物を、吸入（気管内又は経鼻的に）により、又は、坐剤若しくはペッサリーの形態で投与することができ、又は、それらを、ローション、液剤、クリーム、軟膏若しくは散布剤の形態で局所的に適用することができる。例えば、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）の化合物は、ポリエチレングリコール又は流動パラフィンの水性エマルジョンを含む、それからなる、及び／又は本質的にそれからなるクリームに添加することができる。式（Ｉ）及び式（ＩＩ）の化合物は、クリームの約１重量％〜約１０重量％の濃度で、必要に応じて任意の安定剤及び保存剤と共にワックス又は軟パラフィン基剤を含む、それからなる、及び／又はそれから本質的になる軟膏に添加することもできる。投与の代替手段としては、皮膚又は経皮貼付剤を使用することによる経皮投与が挙げられる。
【０１００】
本発明の医薬組成物（本発明の化合物単独と同様に）は、非経口的に、例えば、陰茎海綿体内、静脈内、筋肉内、皮下、皮内、又は髄腔内に注入することができる。この場合、組成物はまた、適切な担体、適切な賦形剤、及び適切な希釈剤のうちの少なくとも１つを含む。
【０１０１】
非経口投与について、本発明の医薬組成物は、他の物質、例えば、溶液を血液と等張に保つうえで充分な塩及び単糖を含んでもよい滅菌水溶液の形態で最も良好に使用される。
【０１０２】
癌の治療のための上述の投与経路に加えて、医薬組成物は、腫瘍内又は腫瘍周囲への注射による投与に適合され得る。このように免疫系を活性化して、離れた部位で腫瘍を死滅させることは、アブスコパル効果として一般的に知られており、多数の治療法を用いて動物において実証されている（ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｊｅｕｇｈｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ，２０１５，６（３），１３５９−１３８１）。局所投与又は腫瘍内若しくは腫瘍周囲への投与の更なる利点は、はるかに低用量で同等の有効性を達成し、ひいては高用量の場合に観察され得る有害事象を最小限に抑えるか又は排除するという能力である（Ｍａｒａｂｅｌｌｅ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０１４，２０（７），１７４７−１７５６）。
【０１０３】
口腔又は舌下投与では、本発明の医薬組成物を錠剤又はトローチ剤の形態で投与してもよく、これは従来法で製剤することができる。
【０１０４】
更なる例として、少なくとも１つの式（Ｉ）及び式（ＩＩ）の化合物を活性成分として含む医薬組成物は、従来の医薬配合技術に基づいて、化合物を、医薬的に許容される担体、医薬的に許容される希釈剤及び／又は医薬的に許容される賦形剤と混合することにより、調製され得る。担体、賦形剤、及び希釈剤は、所望の投与経路（例えば、経口、非経口など）に応じ、広範な形態を取ることができる。したがって、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤及び液剤などの液体経口製剤の場合、適切な担体、賦形剤及び希釈剤としては、水、グリコール、油、アルコール、着香剤、防腐剤、安定剤、着色剤及びこれらに類するものが挙げられ、散剤、カプセル剤及び錠剤などの固体経口製剤の場合、適切な担体、賦形剤及び希釈剤としては、デンプン、糖類、希釈剤、造粒剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤及びこれらに類するものが挙げられる。吸収及び崩壊の主要部位を調節するために、固体経口製剤を糖などの物質で任意選択的にコーティングするか、又は腸溶性コーティングを施すことができる。非経口投与の場合、担体、賦形剤及び希釈剤は、通常、滅菌水を含み、組成物の溶解度及び保存性を高めるために他の成分を添加してもよい。注射用懸濁剤又は液剤はまた、水性担体を、適切な添加剤、例えば、可溶化剤及び保存剤と共に使用して、調剤することもできる。
【０１０５】
式（Ｉ）若しくは式（ＩＩ）の化合物又はその医薬組成物の治療有効量は、平均的な（７０ｋｇの）ヒトについて１日当たり、約１〜約４回のレジメンで、約０．０１ｍｇ〜約３０００ｍｇの用量範囲、又はこれに含まれる任意の特定の量若しくは範囲、特に、約０．０５ｍｇ〜約１０００ｍｇ、又はこれに含まれる任意の特定の量若しくは範囲、又は更に特定的には、約０．０５ｍｇ〜約２５０ｍｇ、又はこれに含まれる任意の特定の量若しくは範囲の活性成分を含むが、式（Ｉ）若しくは式（ＩＩ）の化合物の治療有効量は、治療される疾患、症候群、状態及び障害によって異なることが当業者には明らかである。
【０１０６】
経口投与については、医薬組成物は、好ましくは、約１．０、約１０、約５０、約１００、約１５０、約２００、約２５０、及び約５００ｍｇの式（Ｉ）又は式（ＩＩ）の化合物を含む、錠剤の形態において提供される。
【０１０７】
有利なことに、式（Ｉ）又は式（ＩＩ）の化合物は、一日量を１回に投与してもよいし、又は、１日あたりの総用量を、２回、３回又は４回に分割した用量で１日のうちに投与してもよい。
【０１０８】
投与される式（Ｉ）又は式（ＩＩ）の化合物の最適な用量は、容易に決定することができ、使用される具体的な化合物、投与方法、製剤の強度、及び疾患、症候群、状態又は障害の進行によって変化するであろう。加えて、治療される具体的な対象に関連する要因、例えば、対象の性別、年齢、体重、食事及び投与タイミングにより、適切な治療レベル及び所望の治療効果を得るために用量を調節する必要が生じる。したがって、上記の投与量は平均的な場合の例である。当然、これより高いか低い用量範囲が有効である個々の例が存在することができ、これらも本発明の範囲内に含まれる。
【０１０９】
式（Ｉ）及び式（ＩＩ）の化合物は、式（Ｉ）又は式（ＩＩ）の化合物の使用が、それを必要とする対象に必要とされる場合には、上記組成物及び投与レジメン又は当技術分野で確立された組成物及び投与レジメンのいずれかで投与され得る。
【０１１０】
ＳＴＩＮＧタンパク質アゴニストとして、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）の化合物は、ＳＴＩＮＧタンパク質の調節（アゴニスト活性を含む）によってウイルス感染、疾患、症候群、状態又は障害が影響を受ける、動物、哺乳類及びヒトなどの対象における、ウイルス感染、疾患、症候群、状態又は障害を治療又は予防するための方法において有用である。このような方法は、このような処置又は予防を必要とする対象、例えば、動物、哺乳動物及びヒトに治療有効量の式（Ｉ）若しくは式（ＩＩ）の化合物、塩、又は溶媒和物を投与すること、を含み、それからなり、及び／又は本質的にそれからなる。
【０１１１】
一実施形態では、本発明は、癌、並びに癌疾患及び状態、又はウイルス感染の治療における使用のための、式（Ｉ）若しくは式（ＩＩ）の化合物、又はその医薬的に許容される塩形態に関する。
【０１１２】
式（Ｉ）若しくは式（ＩＩ）の化合物又はその医薬的に許容される塩若しくは溶媒和物が有益な抗腫瘍効果を潜在的に有し得る癌疾患及び状態の例としては、限定されるものではないが、肺、骨、膵臓、皮膚、頭部、頸部、子宮、卵巣、胃、結腸、乳房、食道、小腸、腸、内分泌系、甲状腺、副甲状腺、副腎、尿道、前立腺、陰茎、精巣、尿管、膀胱、腎臓又は肝臓の癌、直腸癌、肛門部分の癌、卵管、子宮内膜、子宮頸管、膣、外陰部、腎盂、腎細胞の癌、軟組織の肉腫、粘液腫、横紋筋腫、線維腫、脂肪腫、奇形腫、胆管癌、肝芽腫、血管肉腫、血管腫、肝癌、線維肉腫、軟骨肉腫、骨髄腫、慢性白血病又は急性白血病、リンパ球性リンパ腫、原発性中枢神経リンパ腫、中枢神経系の腫瘍形成、脊髄軸腫瘍、扁平上皮細胞癌、滑膜肉腫、悪性胸骨上皮腫、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、気管支腺腫、軟骨性過誤腫（chondromatous hanlartoma）、中皮腫（inesothelioma）、ホジキン病、又は前述の癌のうちの１つ以上の組み合わせが挙げられる。好適には、本発明は、脳（神経膠腫）、膠芽腫、星状細胞腫、多型性グリオブラストーマ、Ｂａｎｎａｙａｎ−Ｚｏｎａｎａ症候群、カウデン病、レルミット・ダクロス病、ウィルムス腫瘍、ユーイング肉腫、横紋筋肉腫、上衣腫、髄芽腫、頭頸部、腎臓、肝臓、黒色腫、卵巣、膵臓、腺癌、導管腺癌、腺扁平上皮癌、腺房細胞癌、グルカゴノーマ、インスリノーマ、前立腺、肉腫、骨肉腫、骨の巨細胞腫瘍、甲状腺、リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性好中球性白血病、急性リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、形質細胞腫、免疫芽球性大細胞白血病、マントル細胞白血病、多発性骨髄腫、巨核芽球性白血病、多発性骨髄腫、急性巨核芽球性白血病、前骨髄球性白血病、赤白血病、悪性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、リンパ芽球性Ｔ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、神経芽細胞腫、膀胱癌、尿路上皮癌、外陰癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、腎癌、中皮腫、食道癌、唾液腺癌、肝細胞癌、胃癌、上咽頭癌、口腔癌、口の癌、ＧＩＳＴ（消化管間質腫瘍）及び精巣癌からなる群から選択される癌を治療するか、又は重篤度を下げるための方法に関する。
【０１１３】
別の実施形態では、本発明は、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫及びＢ型肝炎からなる群から選択される、ＳＴＩＮＧのアゴニスト活性によって影響を受ける障害の治療に使用するための式（Ｉ）又は式（ＩＩ）の化合物、又はその医薬的に許容される塩形態に関する。
【０１１４】
開示される式（Ｉ）若しくは式（ＩＩ）の化合物は、ＨＢＶ感染の治療に有用な１種以上の追加の化合物と併用するのに有用であり得る。これらの追加の化合物は、他の開示される化合物、及び／又はＨＢＶ感染の症状又は影響を治療、予防、若しくは低減することが公知である化合物を含み得る。そのような化合物としては、限定されないが、ＨＢＶポリメラーゼ阻害剤、インターフェロン、ウイルス侵入阻害剤、ウイルス成熟阻害剤、文献記載のカプシドアセンブリ調節因子、逆転写酵素阻害剤、免疫調節因子、ＴＬＲ−アゴニスト、及びＨＢＶのライフサイクルに影響を及ぼす、又はＨＢＶ感染症の転帰に影響を及ぼす、異なる又は未知の機序を伴う他の薬剤が挙げられる。
【０１１５】
非限定的な例では、開示される化合物は、次のものを含む群から選択される１つ以上の薬物（又はその塩）と併用され得る：
ラミブジン（３ＴＣ、Ｚｅｆｆｉｘ、Ｈｅｐｔｏｖｉｒ、Ｅｐｉｖｉｒ、及びＥｐｉｖｉｒ−ＨＢＶ）、エンテカビル（Ｂａｒａｃｌｕｄｅ、Ｅｎｔａｖｉｒ）、アデフォビルジピボキシル（Ｈｅｐｓａｒａ、Ｐｒｅｖｅｏｎ、ｂｉｓ−ＰＯＭ  ＰＭＥＡ）、テノホビルジソプロキシルフマレート（Ｖｉｒｅａｄ、ＴＤＦ又はＰＭＰＡ）を含むがこれらに限定されないＨＢＶ逆転写酵素阻害剤、並びにＤＮＡ及びＲＮＡポリメラーゼ阻害剤；
インターフェロンアルファ（ＩＦＮ−α）、インターフェロンベータ（ＩＦＮ−β）、インターフェロンラムダ（ＩＦＮ−λ）、及びインターフェロンガンマ（ＩＦＮ−γ）を含むがこれらに限定されないインターフェロン；
ウイルス侵入阻害剤；
ウイルス成熟阻害剤；
カプシドアセンブリ調節因子、例えば、限定されないが、ＢＡＹ４１−４１０９；
逆転写酵素阻害剤；
ＴＬＲ−アゴニストなどの免疫調節因子；及び
異なる又は未知の機序を伴う薬剤、例えば、限定されないが、ＡＴ−６１（（Ｅ）−Ｎ−（１−クロロ−３−オキソ−１−フェニル−３−（ピペリジン−１−イル）プロパ−１−エン−２−イル）ベンズアミド）、ＡＴ−１３０（（Ｅ）−Ｎ−（１−ブロモ−１−（２−メトキシフェニル）−３−オキソ−３−（ピペリジン−１−イル）プロパ−１−エン−２−イル）−４−ニトロベンズアミド）及びこれらの類似体。
【０１１６】
一実施形態では、追加の治療剤はインターフェロンである。「インターフェロン」又は「ＩＦＮ」という用語は、ウイルス複製及び細胞増殖を阻害し、免疫応答を調節する、高度に相同な種特異的タンパク質のファミリーの任意のメンバーを指す。例えば、ヒトインターフェロンは、インターフェロンアルファ（ＩＦＮ−α）、インターフェロンベータ（ＩＦＮ−β）、及びインターフェロンオメガ（ＩＦＮ−ω）を含むＩ型、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ−γ）を含むＩＩ型、並びにインターフェロンラムダ（ＩＦＮ−λ）を含むＩＩＩ型の３つに分類される。開発され、市販されている組換え型のインターフェロンは、本明細書で使用する用語「インターフェロン」により包含される。化学修飾されたインターフェロン又は変異導入されたインターフェロンなどのインターフェロンのサブタイプも、本明細書で使用する用語「インターフェロン」に包含される。化学修飾インターフェロンとしては、ペグ化インターフェロン及びグリコシル化インターフェロンを挙げてよい。インターフェロンの例としては、インターフェロンアルファ２ａ、インターフェロンアルファ２ｂ、インターフェロンアルファｎ１、インターフェロン−ベータ１ａ、インターフェロンベータ１ｂ、インターフェロンラムダ１、インターフェロンラムダ２、及びインターフェロンラムダ３も挙げられるが、これらに限定されない。ペグ化インターフェロンの例としては、ペグ化インターフェロンアルファ２ａ及びペグ化インターフェロンアルファ２ｂが挙げられる。
【０１１７】
したがって、一実施形態では、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）の化合物は、インターフェロンアルファ（ＩＦＮ−α）、インターフェロンベータ（ＩＦＮ−β）、インターフェロンラムダ（ＩＦＮ−λ）及びインターフェロンガンマ（ＩＦＮ−γ）からなる群から選択されるインターフェロンと併用投与することができる。特定の一実施形態では、インターフェロンは、インターフェロンアルファ２ａ、インターフェロンアルファ２ｂ、又はインターフェロンアルファｎ１である。別の特定の実施形態では、インターフェロンアルファ２ａ又はインターフェロンアルファ２ｂはペグ化されている。好ましい実施形態では、インターフェロンアルファ２ａはペグ化インターフェロンアルファ２ａ（ＰＥＧＡＳＹＳ）である。別の実施形態では、追加の治療剤は、インターフェロンクラスに属する生物学的薬剤を含む、免疫調節療法又は免疫刺激剤療法から選択される。
【０１１８】
更に、追加の治療剤は、他の必須ウイルスタンパク質又はＨＢＶ複製若しくは持続に要求される宿主タンパク質の機能を破壊する薬剤であってもよい。
【０１１９】
別の実施形態では、追加の治療剤は、ウイルスの侵入若しくは成熟をブロックする、又はヌクレオシド若しくはヌクレオチド若しくは非ヌクレオシ（チ）ドポリメラーゼ阻害剤などのＨＢＶポリメラーゼを標的とする抗ウイルス剤である。併用療法の更なる実施形態では、逆転写酵素阻害剤又はＤＮＡ若しくはＲＮＡポリメラーゼ阻害剤は、ジドブジン、ジダノシン、ザルシタビン、ｄｄＡ、スタブジン、ラミブジン、アバカビル、エムトリシタビン、エンテカビル、アプリシタビン、アテビラピン、リバビリン、アシクロビル、ファムシクロビル、バラシクロビル、ガンシクロビル、バルガンシクロビル、テノホビル、アデフォビル、ＰＭＰＡ、シドフォビル、エファビレンツ、ネビラピン、デラビルジン、又はエトラビリンである。
【０１２０】
一実施形態では、追加の治療剤は、無関係のウイルスに対して免疫応答の誘導をもたらす、天然の限定された免疫応答を誘導する免疫調節剤である。換言すれば、免疫調節剤は、抗原提示細胞の成熟、Ｔ細胞の増殖、及びサイトカイン放出（例えば、とりわけＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＩＦＮ−α、β、及びγ並びにＴＮＦ−α）に影響を及ぼし得る。
【０１２１】
更なる実施形態では、追加の治療剤は、ＴＬＲ調節因子又はＴＬＲアゴニスト、例えばＴＬＲ−７アゴニスト若しくはＴＬＲ−９アゴニストである。併用療法の更なる実施形態において、ＴＬＲ−７アゴニストは、ＳＭ３６０３２０（９−ベンジル−８−ヒドロキシ−２−（２−メトキシ−エトキシ）アデニン）及びＡＺＤ８８４８（メチル［３−（｛［３−（６−アミノ−２−ブトキシ−８−オキソ−７，８−ジヒドロ−９Ｈ−プリン−９−イル）プロピル］［３−（４−モルホリニル）プロピル］アミノ｝メチル）フェニル］アセテート）からなる群から選択される。
【０１２２】
本明細書で提供する方法のいずれかにおいて、方法は、少なくとも１つのＨＢＶワクチン、ヌクレオシドＨＢＶ阻害剤、インターフェロン、又はそれらの任意の組み合わせを個体に投与すること、を更に含み得る。一実施形態では、ＨＢＶワクチンは、ＲＥＣＯＭＢＩＶＡＸＨＢ、ＥＮＧＥＲＩＸ−Ｂ、ＥＬＯＶＡＣ  Ｂ、ＧＥＮＥＶＡＣ−Ｂ、又はＳＨＡＮＶＡＣ  Ｂのうちの少なくとも１つである。
【０１２３】
一実施形態では、本明細書に記載の方法は、ヌクレオチド／ヌクレオシド類似体、侵入阻害剤、融合阻害剤、及びこれらの又は他の抗ウイルス機序の任意の組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの追加の治療剤を投与すること、を更に含む。
【０１２４】
別の態様では、治療有効量の開示される化合物を単独で、又は逆転写酵素阻害剤と組み合わせて個体に投与することと、治療有効量のＨＢＶワクチンを個体に更に投与してＨＢＶウイルス負荷を低減させることと、を含む、ＨＢＶ感染を治療する必要がある個体においてＨＢＶ感染を治療する方法を本明細書で提供する。逆転写酵素阻害剤は、ジドブジン、ジダノシン、ザルシタビン、ｄｄＡ、スタブジン、ラミブジン、アバカビル、エムトリシタビン、エンテカビル、アプリシタビン、アテビラピン、リバビリン、アシクロビル、ファムシクロビル、バラシクロビル、ガンシクロビル、バルガンシクロビル、テノホビル、アデフォビル、ＰＭＰＡ、シドフォビル、エファビレンツ、ネビラピン、デラビルジン、又はエトラビリンのうち少なくとも１つであり得る。
【０１２５】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、ＨＢＶ感染の治療を必要としている個体においてＨＢＶ感染を治療する方法であって、治療有効量の開示される化合物を単独で、又は、ＨＢＶ核酸を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチド又はＲＮＡ干渉剤と組み合わせて個体に投与することと、治療有効量のＨＢＶワクチンを個体に更に投与することとによって、ＨＢＶウイルス負荷を低下させること、を含む、治療方法である。アンチセンスオリゴヌクレオチド又はＲＮＡ干渉剤は、ウイルスゲノムの複製、ウイルスＲＮＡの転写、又はウイルスタンパク質の翻訳を阻害するため、標的のＨＢＶ核酸に対する十分な相補性を有する。
【０１２６】
別の実施形態では、開示される化合物と少なくとも１種類の更なる治療薬とは同時配合される。更なる別の実施形態では、開示される化合物と少なくとも１種類の更なる治療薬とは同時投与される。本明細書に記載される任意の併用療法では、適切な方法、例えばＳｉｇｍｏｉｄ−Ｅｍａｘ式（Ｈｏｌｆｏｒｄ  ＆  Ｓｃｈｅｉｎｅｒ，１９９８１，Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔ．６：４２９−４５３）、Ｌｏｅｗｅ加法の式（Ｌｏｅｗｅ  ＆  Ｍｕｉｓｃｈｎｅｋ，１９２６，Ａｒｃｈ．Ｅｘｐ．Ｐａｔｈｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１１４：３１３−３２６）、及びメジアン効果式（Ｃｈｏｕ  ＆  Ｔａｌａｌａｙ，１９８４，Ａｄｖ．Ｅｎｚｙｍｅ  Ｒｅｇｕｌ．２２：２７−５５）などを使用し、相乗効果を計算することができる。上記に挙げた各式に実験データを代入し、対応するグラフを生成して、薬物併用の効果を評価する助けとすることができる。上記の方程式と関連付けられる対応するグラフは、それぞれ濃度−効果曲線、アイソボログラム曲線、及び組み合わせ指標曲線である。
【０１２７】
本明細書において提供する併用療法を施す方法のいずれかの実施形態では、この方法は、対象のＨＢＶウイルス負荷のモニタリング又は検出を更に含むことができ、方法は、一定期間、例えばＨＢＶウイルスが検出不可となるまで実施される。
【０１２８】
本明細書、特にスキーム及び実施例で使用される略語は、以下のとおりである。
【０１２９】
【表３】
2020514316.tif 000017
【０１３０】
具体的実施例
【０１３１】
（実施例１）
【０１３２】
【化１１】
2020514316.tif 000018
【０１３３】
【化１２】
2020514316.tif 000019
【０１３４】
工程１：化合物１ｂの調製
１ａ（５ｇ、１６．８２ｍｍｏｌ）のピリジン（１００ｍＬ）溶液に、ｔｅｒｔ−ブチルクロロジメチルシラン（１６．４ｇ、１５１．４ｍｍｏｌ）を室温で滴下した。１時間後、塩化イソブチリル（５．３８ｇ、５０．５ｍｍｏｌ）を室温で滴下した。最終混合物を室温で２時間撹拌した。混合物を、水（１５０ｍＬ）を用いて０℃でクエンチし、ＮＨ４ＯＨ（５０ｍＬ）を０℃で滴下した。１０分後、混合物を室温で０．５時間撹拌した。混合物を濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ＝１０：１）により精製して、１ｂ（３．８ｇ、６３．９％）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝３６８．０［Ｍ＋１］＋。
【０１３５】
工程２：化合物１ｃの調製
１ｂ（３．７ｇ、１０．０７ｍｍｏｌ）及びＤＭＴｒＣｌ（５．１２ｇ、１５．１１ｍｍｏｌ）のピリジン（１０ｍＬ）溶液を、室温で一晩撹拌した。混合物を水（５００ｍＬ）でクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２（３００ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過して、濾液を濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ＝１５：１、Ｒｆ＝０．５）により精製して、１ｃ（５．７ｇ、８４％）を淡黄色固体として得た。
【０１３６】
工程３：１ｅの調製
１ｃ（７．６ｇ、１１．３５ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（８．８０ｇ、６８．０９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３０ｍＬ）溶液に、３−（（クロロ（ジイソプロピルアミノ）ホスフィノ）オキシ）プロパンニトリル１ｄ（８．０６ｇ、３４．０４ｍｍｏｌ）を室温で添加した。混合物を室温で１時間撹拌し、ＭｅＯＨでクエンチした。混合物をＥｔＯＡｃで抽出し、合わせた有機層をブラインで２回洗浄した。この有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過して、濾液を濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ＝２０：１，Ｒｆ＝０．６）により精製して、化合物１ｅ（９．５ｇ，９６．２３％）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝７８７．５［Ｍ＋１］＋。
【０１３７】
工程４：化合物１ｆの調製
１ｅ（９．５ｇ、１０．９２ｍｍｏｌ）及び水（３９３．４６４ｍｇ、２１．８４ｍｍｏｌ）の乾燥ＣＨ３ＣＮ（３８ｍＬ）溶液に、ピリジニウムトリフルオロアセテート（２．５３１ｇ、１３．１０ｍｍｏｌ）を室温で添加した。ｔ−ブチルアミン（３８ｍＬ）を添加した。得られた混合物を１５℃で２０分間撹拌した。混合物を濃縮して、１ｆ（８．８７６ｇ、粗生成物）を白色固体として得た。この粗生成物を、次の工程に直接使用した。
【０１３８】
工程５：１ｇの調製
化合物１ｆ（８．８７６ｇ、１０．９２ｍｍｏｌ）及び水（１．９６７ｇ、１０９．２ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（８０ｍＬ）溶液に、ジクロロ酢酸（４．７２ｇ、３６．６２ｍｍｏｌ）を室温で１．５時間かけて添加した。ピリジン（１．５３ｇ、２１．８４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を濃縮し、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ＝５：１）により精製して、１ｇ（３．５ｇ、６２．７９％）を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）８．２７（ｓ，１Ｈ），７．２８−７．２２（ｍ，５Ｈ），５．９２−５．８８（ｍ，１Ｈ），５．０４−４．９９（ｍ，１Ｈ），３．９９−３．９６（ｍ，２Ｈ），３．７８（ｍ，２Ｈ），３．４３（ｓ，３Ｈ），２．８７−２．７５（ｍ，１Ｈ），１．１３−１．１２（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，６Ｈ）；３１Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）２．２７（ｓ，１Ｐ），０．３４（ｓ，１Ｐ）；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝４３１．９［Ｍ＋１］＋。
【０１３９】
工程６：１ｊの調製
１ｇ（５００ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ）及び４Å  ＭＳ（０．５ｇ）を入れたＣＨ３ＣＮ（３５ｍＬ）溶液を室温、アルゴン雰囲気下で３分間撹拌した。イミダゾール過塩素酸塩（３．３０ｇ、１９．５９ｍｍｏｌ）を添加した。１０分後、ＣＨ３ＣＮ（５ｍＬ）中の１ｈ（１ｇ、１．１３ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を２６℃で１時間撹拌した。ｔ−ブチルヒドロパーオキシド（０．９８ｍＬ、４．９０ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を２６℃で１時間撹拌した。混合物を濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣにより精製して、１ｊ（３８．５ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ、ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ９３０．４（Ｍ＋１））、及びＤＭＴｒカチオンで汚染された１ｊ（１０００ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ、０．９１４％、ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ９３０．４（Ｍ＋１））を白色固体として得た。
【０１４０】
工程２：１ｋ及び１ｌの調製
１ｊ（３８．５ｍｇ、０．０４１ｍｍｏｌ）及びモレキュラーシーブを入れたピリジン（２０ｍＬ）溶液に、ＤＭＯＣＰ（２２．９３ｍｇ、０．１２４ｍｍｏｌ）を、アルゴン雰囲気下、室温で添加した。混合物を２６℃で１時間撹拌した。水（７．４６ｍｇ、０．４１４ｍｍｏｌ）及びＩ２（５２．５５ｍｇ、０．２０７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２６℃で１時間撹拌した。反応をＮａ２ＳＯ３水溶液でクエンチした。混合物を濾過し、濾液を濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を分取ＨＰＬＣにより精製して、２ｌ（７．５ｍｇ、０．００８ｍｍｏｌ、ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ８７５．３）及び１ｋ（１３．５ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ、ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ９２７．９（Ｍ＋１））を白色固体として得た。
【０１４１】
工程３：化合物４、アンモニウム塩の調製
化合物１ｌ（７．５ｍｇ、０．００８ｍｍｏｌ）を、ＭｅＮＨ２のＥｔＯＨ溶液（３３％、３ｍＬ）で処理し、室温で１時間撹拌して、化合物４の第１の粗生成物バッチを作製した。
【０１４２】
化合物１ｋ（１３．５ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）を、ＭｅＮＨ２のＥｔＯＨ（５ｍＬ）溶液で処理し、室温で１時間撹拌して、化合物４の第２の粗生成物バッチを作製した。２つの粗生成物バッチを合わせ、濃縮乾固させ、分取ＨＰＬＣにより精製して、化合物４アンモニウム塩（６．８ｍｇ、０．０１０ｍｍｏｌ）を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）８．１４（ｓ，１Ｈ），７．９２（ｓ，１Ｈ），７．６９（ｓ，１Ｈ），６．０３（ｓ，１Ｈ），５．７７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），５．６０（ｓ，１Ｈ），４．８１（ｓ，２Ｈ），４．３２（ｓ，２Ｈ），４．１９（ｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，１Ｈ），４．０８−３．９９（ｍ，４Ｈ），３．８９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），３．４０（ｓ，３Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳｍ／ｚ  ７０１．１（Ｍ＋１）．
【０１４３】
工程４：化合物４ナトリウム塩の調製
体積８ｍＬのＤｏｗｅｘ  ５０Ｗ×８，２００−４００（Ｈ形態）をビーカー（６．８ｍｇの化合物４アンモニウム塩用）に添加し、脱イオン水で洗浄した（２回）。次いで、樹脂に１５％Ｈ２ＳＯ４−脱イオン水溶液（５０ｍＬ）を添加し、混合物を１５分間撹拌し、デカンテーションした（１回）。樹脂を、１５％Ｈ２ＳＯ４−脱イオン水溶液の入ったカラムに移し、１５％Ｈ２ＳＯ４で洗浄し（少なくとも４ＣＶ）、次いで、中性になるまで脱イオン水で洗浄した。樹脂をビーカーに戻し、１５％ＮａＯＨ−脱イオン水溶液（５０ｍＬ）を添加し、混合物を１５分間撹拌し、デカンテーションした（１回）。樹脂をカラムに移し、１５％ＮａＯＨ−脱イオン水溶液で洗浄し（少なくとも４ＣＶ）、次いで、中性になるまで水で洗浄した（少なくとも４ＣＶ）。Ａを脱イオン水に溶解し（５ｍＬ中６．８ｍｇ）、カラムの上部に添加し、脱イオン水で溶出させた。ＴＬＣ（ＵＶ）によって検出されるように、化合物４は、初期の画分に溶出した。生成物を凍結乾燥し、化合物４ナトリウム塩（５．６ｍｇ、０．００８ｍｍｏｌ）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）８．１４（ｓ，１Ｈ），７．８９（ｓ，１Ｈ），７．７６（ｓ，１Ｈ），６．０４（ｓ，１Ｈ），５．８４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），５．７６−５．６７（ｍ，１Ｈ），４．９７（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），４．８４（ｓ，１Ｈ），４．４７−４．３４（ｍ，２Ｈ），４．２４（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．１８（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ），４．０９（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，３Ｈ），３．９５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），３．４７（ｓ，３Ｈ）．３１Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）−１．５１，−２．２０；ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ７００．８（Ｍ＋１）。
【０１４４】
（実施例２）
【０１４５】
【化１３】
2020514316.tif 000020
【０１４６】
【化１４】
2020514316.tif 000021
【０１４７】
工程１：化合物２ａの調製
化合物１ｅ（１．２ｇ、１．３８ｍｍｏｌ）及びＨ２Ｏ（０．０５ｍＬ）のＣＨ３ＣＮ（７．２ｍＬ）溶液に、ピリジニウムトリフルオロアセテート（０．３２ｇ、１．６６ｍｍｏｌ）を２５℃で添加した。２分後、ＴＬＣ（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ＝１５：１、Ｒｆ＝０．５）が出発物質の消費を示したので、ｔ−ブチルアミン（７．２ｍＬ）を添加した。最終混合物を２５℃で１０分間撹拌した。粗生成物をＭｅＣＮ（５ｍＬ）で濃縮し（３回）、粗化合物２ａ（粗生成物、１．２ｇ）を白色固体として得た。粗生成物は、精製せずに次の工程に直接使用した。
【０１４８】
工程２：化合物２ｂの調製
粗化合物２ａ（１．２ｇ、１．４７６ｍｍｏｌ、粗生成物）及び水（１４．７６４ｍｍｏｌ、０．２６６ｍＬ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）溶液に、ジクロロ酢酸（ＣＨ２Ｃｌ２中６％、６ｍＬ）を２５℃で２０分間添加した。２０分後、ピリジン（２３３．５６ｍｇ、２．９５３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣を得た。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１００／１〜３／１）により精製して、化合物２ｂ（４４０ｍｇ、収率５８％）を白色泡状物として得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝４３２．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１４９】
工程３：化合物２ｅ＋２ｆの調製
化合物２ｂ（４４０ｍｇ、０．８６２ｍｍｏｌ）及び４Åモレキュラーシーブ（１ｇ）を入れた乾燥ＣＨ３ＣＮ（１０ｍＬ）溶液を、窒素下、１５℃で１０分間撹拌した。１０分後、１Ｈ−イミダゾール過塩素酸塩（２．７０ｇ、１６．０２６ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を２５℃で１０分間撹拌した。１０分後、化合物２ｃ（９８１．５６ｍｇ、１．１２ｍｍｏｌ）の乾燥ＣＨ３ＣＮ（５ｍＬ）溶液を添加した。混合物を２５℃で５０分間撹拌した。５０分後、ｔｅｒｔ−ブチルヒドロパーオキシド（ヘキサン中５．５Ｍ、０．７８４ｍＬ、４．３１０ｍｍｏｌ）を添加した。最終混合物を１５℃で１時間撹拌した。混合物を濃縮して残渣を得た後、この残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｇｅｍｉｎｉ  Ｃ１８  ２５０＊５０  １０ｕ；条件：水（１０ｍＭ  ＮＨ４ＨＣＯ３）−ＡＣＮ；Ｂの開始：４８；Ｂの終了：７８；流速（ｍＬ／分）：２２）により精製して、化合物２ｅ＋２ｆ（１２０ｍｇ、収率１５％）を白色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ  ９２１．１，４６０．９［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１５０】
工程４：化合物２ｇ＋２ｈの調製
化合物２ｅ＋２ｆ（１２０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）及び４Åモレキュラーシーブ（１ｇ）を入れたピリジン（５０ｍＬ）溶液に、２−クロロ−５，５−ジメチル−１，３，２−ジオキサホスフィナン２−オキシド（７２．２４２ｍｇ、０．３９１ｍｍｏｌ）を２５℃で添加した。この溶液を２５℃で１時間撹拌した。１時間後、化合物２ｇ＋２ｈ（５０ｍＬ、粗生成物）の溶液を、更に精製せずに次の工程に直接使用した。
【０１５１】
工程５：化合物２ｉ＋２ｊの調製
化合物２ｇ＋２ｈ（５０ｍＬ、粗生成物）の溶液に水（０．０２ｍＬ）を添加し、次いで、Ｉ２（１４０．７ｍｇ、０．５５６ｍｍｏｌ）を２５℃で添加した。この溶液を２５℃で１時間撹拌した。１時間後、反応液をＮａ２ＳＯ３（水溶液）でクエンチした。混合物を濾過し、濃縮して残渣を得、これを分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｂｏｓｔｏｎ  Ｇｒｅｅｎ  ＯＤＳ  １５０＊３０  ５ｕ；移動相：水（１０ｍＭ  ＮＨ４ＨＣＯ３）−ＡＣＮ、流速：２５ｍＬ／分）により精製して、白色固体として化合物２ｉ（１０ｍｇ、収率１０％）（ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ  ９１８．２［Ｍ＋Ｈ］＋）と、白色固体として化合物２ｊ（４５ｍｇ、収率４７％）（ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ  ８６５．２［Ｍ＋Ｈ］＋）と、を得た。
【０１５２】
工程６：化合物５アンモニウム塩の調製
化合物２ｊ（３０ｍｇ、０．０３５ｍｍｏｌ）を、ＭｅＮＨ２のＥｔＯＨ溶液（３３％、２ｍＬ）で処理し、得られた混合物を２時間撹拌した。次いで、溶液を減圧下で濃縮して、白色固体を得て、これを逆相分取ＨＰＬＣ（カラム：Ａｇｅｌａ  Ｄｕｒａｓｈｅｌｌ  Ｃ１８  １５０×２５μ  ５μＭ；移動相：水（０．０５％アンモニア水酸化物ｖ／ｖ）−ＡＣＮ、流速：３５ｍＬ／分）により精製し、化合物５アンモニウム塩（１８ｍｇ）を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ），８．３２（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），８．１７（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．８１（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），６．３９（ｂｒ，ｄ，Ｊ＝１４．１Ｈｚ，１Ｈ），５．８６（ｂｒ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），５．７２（ｂｒ，ｓ，１Ｈ），５．５５−５．３２（ｍ，１Ｈ），５．１５−４．９６（ｍ，１Ｈ），４．４９（ｂｒ，ｓ，２Ｈ），４．３８（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），４．２０（ｂｒ，ｄ，Ｊ＝１９．８Ｈｚ，３Ｈ），４．０７（ｂｒ，ｓ，１Ｈ），３．５５（ｓ，３Ｈ）．ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ  ６９１．１，３４５．９［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１５３】
工程７：化合物５ナトリウム塩の調製
Ｄｏｗｅｘ  ５０Ｗ×８，２００−４００（Ｈ形態、５ｍＬ）をビーカー（１８ｍｇの化合物５アンモニウム塩用）に添加し、脱イオン水で洗浄した（２回）。次いで、樹脂に１５％Ｈ２ＳＯ４−脱イオン水溶液（５０ｍＬ）を添加し、混合物を１５分間撹拌し、デカンテーションした（１回）。樹脂を、１５％Ｈ２ＳＯ４−脱イオン水溶液の入ったカラムに移し、１５％Ｈ２ＳＯ４で洗浄し（少なくとも４ＣＶ）、次いで、中性になるまで脱イオン水で洗浄した。樹脂をビーカーに戻し、１５％ＮａＯＨ水溶液（５０ｍＬ）を添加し、混合物を１５分間撹拌し、デカンテーションした（１回）。樹脂をカラムに移し、１５％ＮａＯＨ水溶液で洗浄し（少なくとも４ＣＶ）、次いで、中性になるまで水で洗浄した（少なくとも４ＣＶ）。化合物５アンモニウム塩を脱イオン水に溶解し（２ｍＬ中１８ｍｇ）、カラムの上部に添加し、脱イオン水で溶出させた。ＴＬＣ（ＵＶ）によって検出されるように、変換されたナトリウム塩は、初期の画分に溶出した。生成物を凍結乾燥し、化合物５ナトリウム塩（１４．８ｍｇ、収率７７％）を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ），８．２３（ｂｒ，ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），７．８２（ｓ，１Ｈ），６．４２（ｂｒ，ｄ，Ｊ＝１４．２Ｈｚ，１Ｈ），５．８７（ｂｒ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），５．６７（ｂｒ，ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ），５．５９−５．４２（ｍ，１Ｈ），５．１８−５．０５（ｍ，１Ｈ），４．５７−４．５０（ｍ，２Ｈ），４．４６（ｂｒ，ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．２１（ｂｒ，ｓ，３Ｈ），４．１３（ｂｒ，ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，１Ｈ），３．５５（ｓ，３Ｈ）；１９Ｆ  ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）−２０２．９４６；３１Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）−１．４２２，−２．６１８；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ  ６９０．８［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１５４】
バッチ２：
工程６：化合物５アンモニウム塩の調製
化合物２ｊ（１５ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ）を、ＭｅＮＨ２のＥｔＯＨ溶液（３３％、１ｍＬ）で処理し、得られた溶液を５時間撹拌した。５時間後、溶液を減圧下で濃縮して残渣を得、これを逆相分取ＨＰＬＣ（カラム：Ａｇｅｌａ  Ｄｕｒａｓｈｅｌｌ  Ｃ１８  １５０×２５  ５μＭ；移動相：水（０．０５％アンモニア水酸化物ｖ／ｖ）−ＡＣＮ、流速：３５ｍＬ／分）により精製して、化合物５アンモニウム塩（８ｍｇ、収率６７％）を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）８．２４（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），７．８２（ｓ，１Ｈ），６．４３（ｄ，Ｊ＝１４．１Ｈｚ，１Ｈ），５．８８（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），５．７０−５．６４（ｍ，１Ｈ），５．５９−５．４４（ｍ，１Ｈ），５．１９−５．０６（ｍ，１Ｈ），４．５６−４．５０（ｍ，２Ｈ），４．４７（ｂｒ，ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，１Ｈ），４．２２（ｂｒ，ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，３Ｈ），４．１３（ｂｒ，ｄ，Ｊ＝１２．３Ｈｚ，１Ｈ），３．５５（ｓ，２Ｈ），３．５８−３．５３（ｍ，１Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ  ６９０．８［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１５５】
工程７：化合物５ナトリウム塩の調製
Ｄｏｗｅｘ  ５０Ｗ×８，２００−４００（Ｈ形態）をビーカー（８ｍｇの化合物５アンモニウム塩用）に添加し、脱イオン水で洗浄した（２回）。次いで、樹脂に１５％Ｈ２ＳＯ４−脱イオン水溶液（５０ｍＬ）を添加し、混合物を１５分間撹拌し、デカンテーションした（１回）。樹脂を、１５％Ｈ２ＳＯ４−脱イオン水溶液の入ったカラムに移し、１５％Ｈ２ＳＯ４で洗浄し（少なくとも４ＣＶ）、次いで、中性になるまで脱イオン水で洗浄した。樹脂をビーカーに戻し、１５％ＮａＯＨ水溶液（５０ｍＬ）を添加し、混合物を１５分間撹拌し、デカンテーションした（１回）。樹脂をカラムに移し、１５％ＮａＯＨ水溶液で洗浄し（少なくとも４ＣＶ）、次いで、中性になるまで水で洗浄した（少なくとも４ＣＶ）。化合物５を脱イオン水に溶解し（２ｍＬ中８ｍｇ）、カラムの上部に添加し、脱イオン水で溶出させた。ＴＬＣ（ＵＶ）によって検出されるように、変換されたナトリウム塩は、初期の画分に溶出した。生成物を凍結乾燥して、化合物５を得たＭＨｚ，Ｄ２Ｏ），８．２０（ｂｒ，ｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，２Ｈ），７．７８（ｓ，１Ｈ），６．４０（ｂｒ，ｄ，Ｊ＝１４．１Ｈｚ，１Ｈ），５．８５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），５．６２（ｂｒ，ｄ，Ｊ＝４．３Ｈｚ，１Ｈ），５．５７−５．４１（ｍ，１Ｈ），５．１６−５．０２（ｍ，１Ｈ），４．５３−４．４６（ｍ，２Ｈ），４．４２（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１３．３Ｈｚ，１Ｈ），４．１８（ｂｒ，ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，３Ｈ），４．１０（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，１Ｈ），３．５１（ｓ，３Ｈ）．１９Ｆ  ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）−２０２．９５４；３１Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）−１．４５８，−２．５８２；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝６９０．８［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１５６】
（実施例３）
【０１５７】
【化１５】
2020514316.tif 000022
【０１５８】
【化１６】
2020514316.tif 000023
【０１５９】
【化１７】
2020514316.tif 000024
【０１６０】
工程１：化合物３ｂの調製
化合物３ａ（５０．０ｇ、１０８．１２ｍｍｏｌ、１．０当量）のＭｅＣＮ（５００ｍＬ）溶液に、ＩＢＸ（４５．４１３ｇ、１６２．１８ｍｍｏｌ、１．５当量）を添加した。混合物を８０℃で１２時間撹拌した。反応混合物を室温まで冷却し、濾過した。混合物を濃縮乾固させて粗化合物３ｂを得（５７．０ｇ、淡黄色油）、それを更に精製せずに次の工程に使用した。
【０１６１】
工程２：化合物３ｃの調製
化合物３ｂを無水トルエンと３回共蒸発させて、水を除去した。次いで、ＭｅＭｇＢｒ（７６ｍＬ、２２８．０４７ｍｍｏｌ、Ｅｔ２Ｏ中３Ｍ、３．０当量）の溶液を、化合物３ｂ（３５ｇ、粗生成物）のＴＨＦ（４００ｍＬ）溶液に−７８℃で２０分かけて滴下し、得られた混合物を−７８℃で約２時間撹拌した。ドライアイス−アセトン冷却浴を外し、混合物をＮＨ４Ｃｌ（３００ｍＬ）の飽和溶液に撹拌しながら注ぎ入れた。２５℃まで加温した後、混合物をＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）で抽出し、珪藻土で濾過し、ブラインで洗浄した（３００ｍＬ×３回）。合わせた有機抽出物を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して粗生成物３ｃ（３２ｇ、褐色油）を得て、これを更に精製せずに次の工程に使用した。
【０１６２】
工程３：化合物３ｄの調製
化合物３ｃ（３２ｇ、粗生成物）、ＤＭＡＰ（１６．４１ｇ、１３４．３２ｍｍｏｌ、２．０当量）、Ｅｔ３Ｎ（２０．３９ｇ、２０１．４８ｍｍｏｌ、３．０当量）のＣＨ２Ｃｌ２（５００ｍＬ）溶液に、ＢｚＣｌ（２８．３２ｇ、２０１．４８ｍｍｏｌ、３．０当量）を０℃で添加した。混合物を２５℃で１２時間撹拌した。反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）で希釈し、次いで飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１００ｍＬ）で洗浄した。水相をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）で抽出し、合わせた有機抽出物をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で乾燥するまで蒸発させて、黒色油状物を得た。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝１０／１〜ＥｔＯＡｃ）により精製して、化合物３ｄ（１９．０ｇ、収率４９％）を白色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ６０３．１（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０１６３】
工程４：化合物３ｅの調製
化合物３ｄ及び６−クロロ−９Ｈ−プリンを無水トルエンと共蒸発させて（３回）、水を除去した。化合物３ｄ（１７．０ｇ、２９．２８１ｍｍｏｌ、１．０当量）及び６−クロロ−９Ｈ−プリン（９．０５１ｇ、５８．５６２ｍｍｏｌ、２．０当量）を撹拌した乾燥ＭｅＣＮ（３００ｍＬ）懸濁液に、ＤＢＵ（２６．７４６ｇ、１７５．６８６ｍｍｏｌ、６．０当量）を０℃で添加した。混合物を０℃で１５分間撹拌した後、ＴＭＳＯＴｆ（５２．０６４ｇ、２３４．２４８ｍｍｏｌ、８．０当量）を０℃で滴下した。添加後、透明な溶液が得られるまで、混合物を０℃で１５分間撹拌した。次いで、混合物を７０℃まで加熱し、１２時間撹拌した。反応物を室温まで冷却し、ＣＨ２Ｃｌ２（２００ｍＬ）で希釈した。溶液に飽和ＮａＨＣＯ３（１００ｍＬ）を添加し、有機層をブラインで洗浄し（１００ｍＬ×２回）、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮して残渣を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝１０／１〜５／１）により精製して、化合物３ｅ（１５．０ｇ、収率８４％）を白色固体として得た。
【０１６４】
工程５：化合物３ｆの調製
化合物３ｄ（４．６ｇ、７．５０４ｍｍｏｌ）及びＮＨ３（７０．０ｍＬ、ＭｅＯＨ中７Ｍ）を５０℃で２４時間撹拌した。溶液を減圧下で濃縮し、残渣を得た。溶液を減圧下で濃縮し、残渣を得た。粗生成物をＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ＝１０／１（３０ｍＬ）から結晶化させて、化合物３ｆ（収率７６％）を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）８．４６（ｓ，１Ｈ），８．１４（ｓ，１Ｈ），７．２９（ｓ，２Ｈ），５．９４（ｓ，１Ｈ），５．２４（ｓ，３Ｈ），４．０７（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），３．９６−３．７８（ｍ，２Ｈ），３．６９（ｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，１Ｈ），０．７６（ｓ，３Ｈ）．
【０１６５】
工程６：化合物３ｇの調製
化合物３ｆ（３．０ｇ、１０．６６６ｍｍｏｌ、１．０当量）のピリジン（３０．０ｍＬ）溶液に、ＴＭＳＣｌ（６．９５３ｇ、６３．９９６ｍｍｏｌ、６．０当量）を０℃で添加した。次に、混合物を２５℃で２時間撹拌した。反応混合物（Ｐｙ中０．３５６Ｍ、３０ｍＬ）を精製せずに次の工程に使用した。
【０１６６】
ＢｚＣｌ（２．９９９ｇ、２１．３３２ｍｍｏｌ、２．０当量）を溶液に添加した。反応混合物を２５℃で１２時間撹拌した。この溶液にＮＨ３・Ｈ２Ｏ（１．８６９ｇ、５３．３３ｍｍｏｌ、５．０当量）を加えた後、反応混合物を２５℃で３時間撹拌した。溶液を圧力下で濃縮して残渣を得、これをフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ＝１００／１〜１０／１）により精製して、化合物３ｇ（３．２ｇ、収率７８％）を白色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝３８６．０（Ｍ＋１）＋。
【０１６７】
工程７：化合物３ｈの調製
化合物３ｇ（１．３ｇ、３．３７３ｍｍｏｌ、１．０当量）のＤＭＦ（２０ｍＬ）溶液に、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルシランジイルビス（トリフルオロメタンスルホネート）（１．６３４ｇ、３．７１１ｍｍｏｌ、１．１当量）を０℃で滴下した。混合物を０℃で２時間撹拌した。この反応混合物に、１Ｈ−イミダゾール（１．１４８ｇ、１６．８６７ｍｍｏｌ、５．０当量）を０℃で添加し、反応物を２５℃で３０分間撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で希釈し、ブラインで洗浄し（５０ｍＬ×３回）、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、圧力下で濃縮して残渣を得た。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝１０／１〜１／１）により精製して、化合物３ｈ（１．３２ｇ、収率７４％）を白色固体として得た。
【０１６８】
工程８：化合物３ｉの調製
化合物３ｈ（６２０ｍｇ、１．１７９ｍｍｏｌ、１．０当量）及び３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン（０．９９２ｇ、１１．７９４ｍｍｏｌ、１０．０当量）のＣＨ２Ｃｌ２（８ｍＬ）溶液に、トリフルオロ酢酸（２０１．７２５ｍｇ、１．７６９ｍｍｏｌ、１．５当量）を０℃で添加した。次いで、反応混合物を２５℃で１６時間撹拌した。反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）で希釈し、Ｅｔ３Ｎ（１ｍＬ）でクエンチした。次いで、溶液をブラインで洗浄し（１０ｍＬ×２回）、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して残渣を得、これをシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝１０／１〜３／１）により精製して、化合物３ｉ（５５２ｍｇ、収率７７％）を白色発泡体として得た。
【０１６９】
工程９：化合物３ｊの調製
ピリジン塩酸塩（３２６．２３ｕＬ、３．６２１ｍｍｏｌ、４．０当量）をピリジン（１．５ｍＬ）で慎重に希釈し、次いで化合物３ｉ（５５２ｍｇ、０．９０５ｍｍｏｌ、１．０当量）のＴＨＦ（５ｍＬ）溶液に０℃で滴下した。混合物を２５℃まで加温し、５分間撹拌した。ピリジン（１．５ｍＬ）を添加して反応混合物をクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）で希釈した。混合物をブラインで洗浄し（１０ｍＬ×２）、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濾液を圧力下で濃縮して残渣を得た。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝１０／１〜０／１）により精製して、化合物３ｊ（収率９３．７９％）を白色泡状物として得た。
【０１７０】
工程１０：化合物３ｋの調製
化合物３ｊ（７３６ｍｇ、１．５６８ｍｍｏｌ、１．０当量）のピリジン（１０．０ｍＬ）溶液に、ＤＭＴｒＣｌ（７９６．７４８ｍｇ、２．３５１ｍｍｏｌ、１．５当量）を２５℃で添加した。溶液を２５℃で２時間撹拌した。ＭｅＯＨ（２．０ｍＬ）を添加して反応混合物をクエンチし、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で希釈し、ブラインで洗浄した（１０ｍＬ×３回）。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濾液を減圧下で濃縮して残渣を得て、これをシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝１０／１〜０／１）によって精製して、化合物３ｋ（１．１３ｇ、収率９３％）を白色固体として得た。
【０１７１】
工程１１：化合物３ｌの調製
化合物３ｋ（１．１３ｇ、１．４６４ｍｍｏｌ、１．０当量）のＴＨＦ（８．０ｍＬ）溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１．１３５ｇ、８．７８４ｍｍｏｌ、６．０当量）及び２−シアノエチルＮ，Ｎ−ジイソプロピルクロロホスホラミダイト（１．０３９ｇ、４．３９２ｍｍｏｌ、３．０当量）を、アルゴン雰囲気下、０℃で素早く添加した。次いで、反応混合物を２５℃まで加温し、２時間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で希釈し、ブライン（２×２０ｍＬ）で洗浄し、有機相をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。得られた残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝１０／１〜３／１）により精製して、化合物３ｌ（１．２５ｇ、収率８８％）を白色泡状物として得た。３１Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）１５１．２４２，１５０．７８３，１４９．６５６，１４９．２０９；ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ８８９．２（Ｍ−Ｎ（ｉＰｒ）２＋１７）＋。
【０１７２】
工程１２：化合物３ｎの調製
化合物３ｍ（１．０ｇ、１．０３１ｍｍｏｌ、１．０当量）及び水（３７．１３８ｍｇ、２．０６１ｍｍｏｌ、２．０当量）のＭｅＣＮ（５．０ｍＬ）溶液に、ピリジニウムトリフルオロアセテート（２３８．８７２ｍｇ、１．２３７ｍｍｏｌ、１．２当量）を２５℃で添加した。反応混合物を２５℃で５分間撹拌した。５分後、ｔ−ブチルアミン（５．０ｍＬ）を添加した。反応混合物を２５℃で１５分間撹拌した。次いで、混合物を減圧下で濃縮して発泡体を形成した。残渣をＣＨ３ＣＮ（５．０ｍＬ）に溶解し、減圧下で濃縮して、再び発泡体を得た。このプロセスを更に１回繰り返して、化合物３ｎ（８５９．７９ｍｇ、粗生成物）を白色発泡体として得た。粗生成物は、更に精製せずに次の工程に直接使用した。
【０１７３】
工程１３：化合物３ｏの調製
化合物３ｎ（８５９．７９ｍｇ、１．０３１ｍｍｏｌ、１．０当量）及び水（１８５．７３８ｍｇ、１０．３１ｍｍｏｌ、１０当量）のＣＨ２Ｃｌ２（１２ｍＬ）溶液に、ジクロロ酢酸（ＣＨ２Ｃｌ２中６％、１２ｍＬ）を０℃で添加した。混合物を２５℃で１時間撹拌した。ピリジン（２．０ｍＬ）を添加して反応液をクエンチした。反応混合物を２５℃で３０分間撹拌した。反応混合物を圧力下で濃縮して残渣を得て、これをシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１０／１〜５／１）によって精製して、化合物３ｏ（４９５ｍｇ、収率９０％）を白色泡状物として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）８．１８（ｓ，１Ｈ），７．８２（ｓ，２Ｈ），５．７８−５．７０（ｍ，１Ｈ），５．０７（ｓ，１Ｈ），４．９０（ｓ，１Ｈ），４．２３（ｓ，１Ｈ），３．７８（ｓ，１Ｈ），３．６９−３．５７（ｍ，１Ｈ），３．５０−３．３１（ｍ，２Ｈ），２．７１−２．５７（ｍ，２Ｈ），０．９９（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ），０．７７（ｓ，９Ｈ），０．０１（ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，６Ｈ）；３１Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）０．２６０（ｓ，１Ｐ），−１．１２７（ｓ，１Ｐ）；ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ５３２．１（Ｍ＋１）＋。
【０１７４】
工程１４：化合物３ｐの調製
化合物３ｏ（６５０ｍｇ、１．２２３ｍｍｏｌ、１．０当量）及び４Åモレキュラーシーブを入れたＭｅＣＮ（乾燥、４０ｍＬ）溶液を、室温、Ｎ２雰囲気下で５分間撹拌した。１Ｈ−イミダゾール過塩素酸塩（２．０８５ｇ、１２．２２８ｍｍｏｌ、１０．０当量）を添加した。１０分後、化合物３ｌ（１．２４８ｇ、１．２８４ｍｍｏｌ、１．０５当量）をＭｅＣＮ（２０．０ｍＬ）に添加した。混合物を２５℃で５０分間撹拌した後、この反応混合物（ＭｅＣＮ中０．０２Ｍ、６０ｍＬ）を、更に精製せずに次の工程に使用した。
【０１７５】
工程１５：化合物３ｑ＋３ｒの調製
化合物３ｐ（ＭｅＣＮ中０．０２Ｍ、６０ｍＬ）の溶液に、ｔｅｒｔ−ブチルヒドロパーオキシド（１．１１２ｍＬ、６．１１５ｍｍｏｌ、５．０当量）を２５℃で添加した。反応混合物を２５℃で１時間撹拌した。反応混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮して残渣を得、これを逆相分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ｘｂｒｉｄｇｅ  １５０×２５  ５μＭ；移動相：水（１０ｍＭ  ＮＨ４ＨＣＯ３）−ＡＣＮ、Ｂ％：３７％〜６７％）により精製して、化合物３ｑ＋３ｒの混合物（３ｑを３６０ｍｇ及び３ｒを１３０ｍｇ）を白色固体として得た。３１Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）３．９０４，２．５５３，−２．１３９，−２．２４２；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝１１１６．５［Ｍ＋１］＋。
【０１７６】
工程１６：化合物３ｓ＋３ｔの調製
化合物３ｑ＋３ｒの混合物（１２０ｍｇ、０．１０８ｍｍｏｌ、１．０当量）及び４Åモレキュラーシーブを入れたピリジン（４０ｍＬ）溶液に、ＤＭＯＣＰ（５９．５３ｍｇ、０．３２３ｍｍｏｌ、３．０当量）を２５℃で添加した。混合物を２５℃で１時間撹拌した後、反応混合物（Ｐｙ中０．００２７Ｍ、４０ｍＬ）を次の工程に直接使用した。
【０１７７】
工程１７：化合物３ｕ＋３ｖの調製
化合物３ｓ＋３ｔ（０．００２７Ｍ、４０ｍＬ）の溶液に、水（１９．４５７ｍｇ、１．０８ｍｍｏｌ、１０．０当量）及びＩ２（１３７．０５７ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ、５．０当量）を２５℃で添加した。混合物を２５℃で１時間撹拌した。反応物をＮａ２ＳＯ３（１０ｍＬ水溶液）でクエンチした。混合物を濾過し、濾液を圧力下で濃縮して残渣を得、これを逆相分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ｘｂｒｉｄｇｅ  １５０×２５  ５μＭ；移動相：水（１０ｍＭ  ＮＨ４ＨＣＯ３）−ＡＣＮ、Ｂ％：２０％〜４０％、流速：２５ｍＬ／分）により精製し、化合物３ｕ＋３ｖの混合物（２５ｍｇ、収率２１％）を白色固体として得た。３１Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）−１．９４（ｓ，１Ｐ），−１．９８（ｓ，１Ｐ）。
【０１７８】
工程１８：化合物３ｗの調製
化合物３ｕ＋３ｖの混合物を、ＭｅＮＨ２のＥｔＯＨ（３３％、３ｍＬ）溶液で処理し、反応物を２５℃で１６時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、粗生成物（２６．８ｍｇ）を白色固体として得て、これを更に精製せずに次の工程に使用した。
【０１７９】
水（２ｍＬ）中の粗生成物に、ＡｃＯＨ（１０％水溶液、２ｍＬ）を添加した。反応混合物を２５℃で５時間撹拌した。反応混合物をＥｔ３Ｎで中和し、粗生成物を凍結乾燥して、化合物３ｗ（３０．５ｍｇ）を黄色固体として得た。粗生成物を更に精製せずに次の工程に使用した。
【０１８０】
工程１９：化合物１アンモニウム塩の調製
化合物３ｗ（３０．５ｍｇ、０．０３８ｍｍｏｌ、１．０当量）のＰｙ（２ｍＬ）溶液に、Ｅｔ３Ｎ（３８４．４９ｍｇ、３．８ｍｍｏｌ、１００当量）及びＥｔ３Ｎ−３ＨＦ（３０６．２７１ｍｇ、１．９ｍｍｏｌ、５０当量）を２５℃で添加した。反応混合物を５０℃で１０時間撹拌した。混合物をＴＨＦ（３ｍＬ）に溶解し、イソプロポキシトリメチルシラン（５０２．６０７ｍｇ、３．８ｍｍｏｌ、１００当量）を２５℃で添加し、１時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮して残渣を得、これを逆相分取ＨＰＬＣ（カラム：Ａｇｅｌａ  Ｄｕｒａｓｈｅｌｌ  Ｃ１８  １５０×２５  ５μＭ；移動相：水（０．０５％アンモニア水酸化物ｖ／ｖ）−ＡＣＮを０％〜１０％、流量：３５ｍＬ／分）により精製して、化合物１アンモニウム塩（１８ｍｇ、収率６９％）を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）８．４４（ｓ，１Ｈ），８．１８（ｓ，１Ｈ），７．９７（ｓ，１Ｈ），５．８０（ｄ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，２Ｈ），５．６２（ｓ，１Ｈ），４．６１−４．５５（ｍ，１Ｈ），４．５２（ｓ，１Ｈ），４．４１（ｓ，１Ｈ），４．３５−４．１０（ｍ，４Ｈ），３．９２（ｄ，Ｊ＝１１．９Ｈｚ，１Ｈ），１．１３（ｓ，３Ｈ）；３１Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）−０．６１２（ｓ，１Ｐ）。
【０１８１】
工程２０：化合物１ナトリウム塩の調製
化合物１アンモニウム塩を高真空下で乾燥させて、白色固体（１５ｍｇ）を得た。Ｄｏｗｅｘ  ５０Ｗ×８，２００−４００（Ｈ形態、３ｍＬ）をビーカー（１５ｍｇの化合物７用）に添加し、脱イオン水で洗浄した（２回）。次いで、樹脂に１５％Ｈ２ＳＯ４−脱イオン水溶液（５０ｍＬ）を添加し、混合物を１５分間撹拌し、デカンテーションした（１回）。樹脂を、１５％Ｈ２ＳＯ４−脱イオン水溶液の入ったカラムに移し、１５％Ｈ２ＳＯ４で洗浄し（少なくとも４ＣＶ）、次いで、中性になるまで脱イオン水で洗浄した。樹脂をビーカーに戻し、１５％ＮａＯＨ−脱イオン水溶液（５０ｍＬ）を添加し、混合物を１５分間撹拌し、デカンテーションした（１回）。樹脂をカラムに移し、１５％ＮａＯＨ−脱イオン水溶液で洗浄し（少なくとも４ＣＶ）、次いで、中性になるまで脱イオン水で洗浄した（少なくとも４ＣＶ）。化合物１を脱イオン水に溶解し（２ｍＬ中１５ｍｇ）、カラムの上部に添加し、脱イオン水で溶出させた。ＴＬＣ（ＵＶ）によって検出されるように、変換されたナトリウム塩は、初期の画分に溶出した。生成物を凍結乾燥して、白色固体として化合物７ナトリウム塩（４．９ｍｇ、収率３１％）の第１バッチと、白色固体として化合物１ナトリウム塩（６．２ｍｇ、収率３７％）の第２バッチとを得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）８．０４（ｓ，１Ｈ），８．０２（ｓ，１Ｈ），７．９０（ｓ，１Ｈ），５．９４（ｓ，１Ｈ），５．８９（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），５．３０（ｄｔ，Ｊ＝４．０，８．８Ｈｚ，１Ｈ），４．５６（ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），４．５１（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），４．３３−４．２４（ｍ，３Ｈ），４．１３−４．０１（ｍ，３Ｈ），１．００（ｓ，３Ｈ）；３１Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）−１．１２５（ｓ，１Ｐ），−２．０６６（ｓ，１Ｐ）。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝６８８．９（Ｍ＋１）＋。
【０１８２】
実施例４に示される反応スキームでは、本発明の化合物２及びその医薬的に許容される塩形態を調製可能な、一経路を記載する。
【０１８３】
（実施例４）
【０１８４】
【化１８】
2020514316.tif 000025
【０１８５】
【化１９】
2020514316.tif 000026
【０１８６】
【化２０】
2020514316.tif 000027
【０１８７】
実施例５に示される反応スキームでは、本発明の化合物３及びその医薬的に許容される塩形態を調製可能な、一経路を記載する。
【０１８８】
（実施例５）
【０１８９】
【化２１】
2020514316.tif 000028
【０１９０】
【化２２】
2020514316.tif 000029
【０１９１】
【化２３】
2020514316.tif 000030
【０１９２】
（実施例６）
【０１９３】
【化２４】
2020514316.tif 000031
【０１９４】
【化２５】
2020514316.tif 000032
【０１９５】
【化２６】
2020514316.tif 000033
【０１９６】
工程１：化合物１ｆの調製
化合物１ｅ（４．６ｇ、５．２８８ｍｍｏｌ）及び水（１９０．５２０ｍｇ、１０．５７５ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（２０ｍＬ）溶液に、ピリジニウムトリフルオロアセテート（１．２２５ｇ、６．３４５ｍｍｏｌ）を１５℃で添加した。０．５時間後、ｔ−ブチルアミン（２０ｍＬ）を添加した。混合物を２時間濃縮して、粗生成物１ｆ（３．９６ｇ、粗生成物）を白色固体として得た。
【０１９７】
この粗生成物を、次の工程に直接使用した。
【０１９８】
工程２：１ｇの調製
化合物１ｆ（３．３５９ｇ、４．５７８ｍｍｏｌ）及び水（８２４．６８８ｍｇ、４５．７７７ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍＬ）溶液に、ジクロロ酢酸（４０ｍＬ、ＣＨ２Ｃｌ２中６％）を１５℃で添加した。１時間後、ピリジン（７２４．１９２ｍｇ、９．１５５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を濃縮し、残渣をフラッシュクロマトグラフィーにより精製し（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ＝５：１、Ｒｆ＝０．５）、粗生成物１ｇ（１．５ｇ）を白色固体として得た。
【０１９９】
工程３：化合物６ｆ＋６ｇの調製
化合物１ｇ（１．９５９ｇ、１．３５２ｍｍｏｌ）及び
【０２００】
【数３】
2020514316.tif 000034
ＭＳ（３ｇ）を入れた脱水ＣＨ３ＣＮ（４０ｍＬ）溶液を、窒素下、１５℃で１０分間撹拌した。１Ｈ−イミダゾール過塩素酸塩（６．６８３ｇ、３９．１８２ｍｍｏｌ）を添加した。１０分後、ＣＨ３ＣＮ（２０ｍＬ）中の化合物２ｃ（２．０５９ｇ、２．３５１ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で１時間撹拌した。（Ｅ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ’−（３−チオキソ−３Ｈ−１，２，４−ジチアゾール−５−イル）ホルムイミダミド（ＤＤＴＴ、５．１７６ｇ、２５．２１１ｍｍｏｌ）を添加した。最終混合物を１５℃で１時間撹拌した。混合物を濾過し、濾液を濃縮した。残渣を逆相分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｋｉｎｅｔｅｘ  ＸＢ−Ｃ１８  １５０ｍｍ×３０ｍｍ，５μｍ；条件：水（１０ｍＭ  ＮＨ４ＨＣＯ３）−ＡＣＮ；Ｂの開始：２０；Ｂの終了：５０；流速（ｍＬ／分）：２５）により精製し、化合物６ｆ＋６ｇの混合物（２６０ｍｇ）を白色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝９３７．１。
【０２０１】
工程４：化合物６ｈの調製
化合物６ｆ＋６ｇの混合物（２６０ｍｇ、０．２７８ｍｍｏｌ）及びモレキュラーシーブ（０．３ｇ）を入れたピリジン（３０ｍＬ）溶液に、１６℃でＤＭＯＣＰ（１５３．８３６ｍｇ、０．８３４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を１６℃で１時間撹拌した。水（５０．０５５ｍｇ、２．７７８ｍｍｏｌ）及びＢｅａｕｃａｇｅ試薬（２７８．１７３ｍｇ、１．３８９ｍｍｏｌ）を添加し、室温で１．５時間撹拌した。混合物を濾過し、濾液を濃縮した。残渣を逆相分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｓｙｎｅｒｇｉ  Ｃ１８  ２５０×２１．２ｍｍ  ４μｍ；条件：水（１０ｍＭ  ＮＨ４ＨＣＯ３）−ＡＣＮ；Ｂの開始：１０；Ｂの終了：４０；流速（ｍＬ／分）：２５）により精製して、異性体の混合物（１５０ｍｇ）（４１．４５％の６ｉ）として化合物６ｈ及び６ｉを白色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝９５０．２。
【０２０２】
工程５：アンモニウム塩としての化合物６ａ、６ｂ、６ｃ及び６ｄの調製
化合物６ｈ及び６ｉのＭｅＮＨ２−ＥｔＯＨ溶液（３３％、１５ｍＬ）を１５℃で２時間撹拌した。混合物を濃縮し、残渣を水（３ｍＬ）で希釈し、逆相分取ＨＰＬＣ（カラム：Ａｇｅｌａ  Ｄｕｒａｓｈｅｌｌ  Ｃ１８  １５０×２５  ５μｍ、条件：水（０．０５％アンモニア水酸化物ｖ／ｖ）−ＡＣＮ；Ｂの開始：０；Ｂの終了：２０；流速（ｍＬ／分）：３５）により精製して、白色固体として６ａ（２０．９ｍｇ）、白色固体として６ｂ（２３．０ｍｇ）、白色固体として６ｃ（１３．９ｍｇ）、及び白色固体として６ｂ（９．９ｍｇ）、を得た。
【０２０３】
化合物６ａ：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）８．３６（ｓ，１Ｈ），８．１１（ｓ，１Ｈ），７．８３（ｓ，１Ｈ），６．３４（ｄ，Ｊ＝１４．８Ｈｚ，１Ｈ），５．８１−５．７９（ｍ，１Ｈ），５．７８−５．６４（ｍ，１Ｈ），５．６１−５．５７（ｍ，１Ｈ），５．１０−５．０３（ｍ，１Ｈ），４．４５−４．４４（ｍ，２Ｈ），４．４１−４．３８（ｍ，１Ｈ），４．１１−４．１０（ｍ，３Ｈ），４．０２−３．９９（ｍ，１Ｈ），３．４６（ｓ，３Ｈ）；１９Ｆ  ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）−２０２．０８（ｓ，１Ｆ）；３１Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）５４．０７（ｓ，１Ｐ），５２．５１（ｓ，１Ｐ）。
【０２０４】
化合物６ｂ：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）８．２７（ｓ，１Ｈ），７．７８（ｓ，１Ｈ），６．３６（ｄ，Ｊ＝１４．８Ｈｚ，１Ｈ），５．８０−５．７５（ｍ，２Ｈ），５．３９−５．２６（ｍ，１Ｈ），５．１７−５．１２（ｍ，１Ｈ），４．４４−４．３０（ｍ，４Ｈ），４．０７（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），４．００−３．９３（ｍ，２Ｈ），３．４６（ｓ，３Ｈ）；１９Ｆ  ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）−２０１．８７（ｓ，１Ｆ）；３１Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）５６．０４（ｓ，１Ｐ）。
【０２０５】
化合物６ｃ：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）８．２５（ｓ，１Ｈ），８．０１（ｓ，１Ｈ），７．７２（ｓ，１Ｈ），６．２８（ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，１Ｈ），５．７２−５．６９（ｍ，１Ｈ），５．５６（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），４．９５−４．８８（ｍ，１Ｈ），４．４６（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），４．３８−４．３５（ｍ，２Ｈ），４．０９（ｓ，３Ｈ），３．８８−３．８６（ｍ，１Ｈ），３．４４（ｓ，３Ｈ）；３１Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）５２．０６（ｓ，１Ｐ），５１．３７（ｓ，１Ｐ）。
【０２０６】
化合物６ｄ：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）８．２７−８．２３（ｍ，２Ｈ），７．８０（ｓ，１Ｈ），６．３６（ｄ，Ｊ＝１６．４Ｈｚ，１Ｈ），５．７６（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），５．３７−５．２５（ｍ，２Ｈ），４．４７−４．３６（ｍ，４Ｈ），４．１０−４．０５（ｍ，２Ｈ），３．９２（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），３．４６（ｓ，３Ｈ）。
【０２０７】
工程６：化合物６ａナトリウム塩の調製
体積１０ｍＬのＤｏｗｅｘ  ５０Ｗｘ８，２００−４００（Ｈ形態）をビーカー（２０．９ｍｇの白色固体用）に添加し、脱イオン水で洗浄した（２回）。次いで、樹脂に１５％Ｈ２ＳＯ４−脱イオン水溶液（５０ｍＬ）を添加し、混合物を１５分間撹拌し、デカンテーションした（１回）。樹脂を、１５％Ｈ２ＳＯ４−脱イオン水溶液の入ったカラムに移し、１５％Ｈ２ＳＯ４で洗浄し（少なくとも４ＣＶ）、次いで、中性になるまで脱イオン水で洗浄した。樹脂をビーカーに戻し、１５％ＮａＯＨ−脱イオン水溶液（５０ｍＬ）を添加し、混合物を１５分間撹拌し、デカンテーションした（１回）。樹脂をカラムに移し、１５％ＮａＯＨ−脱イオン水溶液で洗浄し（少なくとも４ＣＶ）、次いで、中性になるまで水で洗浄した（少なくとも４ＣＶ）。化合物６ａアンモニウム塩（２０．９ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ）を脱イオン水（３ｍＬ）に溶解し、カラムの上部に添加し、脱イオン水で溶出させた。ＴＬＣ（ＵＶ）によって検出されるように、化合物６ａは、初期の画分に溶出した。生成物を凍結乾燥し、化合物６ａナトリウム塩（１０．７ｍｇ）を白色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝７２２．８；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）８．２９（ｓ，１Ｈ），８．０６（ｓ，１Ｈ），７．８３（ｓ，１Ｈ），６．３０（ｄ，Ｊ＝１４．８Ｈｚ，１Ｈ），５．７９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），５．７５−５．６１（ｍ，１Ｈ），５．５９−５．５６（ｍ，１Ｈ），５．０７−５．０１（ｍ，１Ｈ），４．４５−４．３７（ｍ，３Ｈ），４．１１−４．１０（ｍ，３Ｈ），３．９９（ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，１Ｈ），３．４５（ｓ，３Ｈ）；３１Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）５４．２３（ｓ，１Ｐ），５２．７６（ｓ，１Ｐ）；１９Ｆ  ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）−２０２．００（ｓ，１Ｆ）。
【０２０８】
化合物６ｂナトリウム塩の調製
体積１０ｍＬのＤｏｗｅｘ  ５０Ｗｘ８，２００−４００（Ｈ形態）をビーカー（２３．０ｍｇの白色固体用）に添加し、脱イオン水で洗浄した（２回）。次いで、樹脂に１５％Ｈ２ＳＯ４−脱イオン水溶液（５０ｍＬ）を添加し、混合物を１５分間撹拌し、デカンテーションした（１回）。樹脂を、１５％Ｈ２ＳＯ４−脱イオン水溶液の入ったカラムに移し、１５％Ｈ２ＳＯ４で洗浄し（少なくとも４ＣＶ）、次いで、中性になるまで脱イオン水で洗浄した。樹脂をビーカーに戻し、１５％ＮａＯＨ−脱イオン水溶液（５０ｍＬ）を添加し、混合物を１５分間撹拌し、デカンテーションした（１回）。樹脂をカラムに移し、１５％ＮａＯＨ−脱イオン水溶液で洗浄し（少なくとも４ＣＶ）、次いで、中性になるまで水で洗浄した（少なくとも４ＣＶ）。化合物６ｂアンモニウム塩（２３．０ｍｇ、０．０３０ｍｍｏｌ）を脱イオン水（３ｍＬ）に溶解し、カラムの上部に添加し、脱イオン水で溶出させた。
【０２０９】
ＴＬＣ（ＵＶ）によって検出されるように、化合物６ｂは、初期の画分に溶出した。生成物を凍結乾燥し、化合物６ｂナトリウム塩（１２．７ｍｇ）を白色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝７２２．７；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）８．３９（ｓ，１Ｈ），８．０９（ｓ，１Ｈ），７．７１（ｓ，１Ｈ），６．３１（ｄ，Ｊ＝１４．０Ｈｚ，１Ｈ），５．７９−５．７３（ｍ，２Ｈ），５．４１−５．２７（ｍ，１Ｈ），５．２４−５．１４（ｍ，１Ｈ），４．４３−４．３８（ｍ，３Ｈ），４．３２−４．３０（ｍ，１Ｈ），４．０８（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），４．００−３．９７（ｍ，２Ｈ），３．４５（ｓ，３Ｈ）；３１Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）５５．８８（ｓ，１Ｐ），５３．４５（ｓ，１Ｐ）；１９Ｆ  ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）−２０１．９７（ｓ，１Ｆ）。
【０２１０】
６ｃナトリウム塩の調製
体積１０ｍＬのＤｏｗｅｘ  ５０Ｗｘ８，２００−４００（Ｈ形態）をビーカー（１３．９ｍｇの白色固体用）に添加し、脱イオン水で洗浄した（２回）。次いで、樹脂に１５％Ｈ２ＳＯ４−脱イオン水溶液（５０ｍＬ）を添加し、混合物を１５分間撹拌し、デカンテーションした（１回）。樹脂を、１５％Ｈ２ＳＯ４−脱イオン水溶液の入ったカラムに移し、１５％Ｈ２ＳＯ４で洗浄し（少なくとも４ＣＶ）、次いで、中性になるまで脱イオン水で洗浄した。樹脂をビーカーに戻し、１５％ＮａＯＨ−脱イオン水溶液（５０ｍＬ）を添加し、混合物を１５分間撹拌し、デカンテーションした（１回）。樹脂をカラムに移し、１５％ＮａＯＨ−脱イオン水溶液で洗浄し（少なくとも４ＣＶ）、次いで、中性になるまで水で洗浄した（少なくとも４ＣＶ）。化合物６ｃアンモニウム塩（１３．９ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ）を脱イオン水（３ｍＬ）に溶解し、カラムの上部に添加し、脱イオン水で溶出させた。ＴＬＣ（ＵＶ）によって検出されるように、６ｃは、初期の画分に溶出した。生成物を凍結乾燥し、化合物６ｃナトリウム塩（４．８ｍｇ）を白色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝７２２．８；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）８．０９（ｓ，１Ｈ），８．０２（ｓ，１Ｈ），７．８４（ｓ，１Ｈ），６．３０（ｄ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ，１Ｈ），５．８０−５．６４（ｍ，２Ｈ），５．４７−５．４１（ｍ，１Ｈ），４．９９−４．９３（ｍ，１Ｈ），４．４７−４．４１（ｍ，３Ｈ），４．２４（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），４．１０（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），４．０５−４．０２（ｍ，１Ｈ），３．４３（ｓ，３Ｈ）；
３１Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）５２．４６（ｓ，１Ｐ），５２．００（ｓ，１Ｐ）；１９Ｆ  ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）−２０１．９１（ｓ，１Ｆ）。
【０２１１】
６ｄナトリウム塩の調製
体積１０ｍＬのＤｏｗｅｘ  ５０Ｗｘ８，２００−４００（Ｈ形態）をビーカー（９．９ｍｇの白色固体用）に添加し、脱イオン水で洗浄した（２回）。次いで、樹脂に１５％Ｈ２ＳＯ４−脱イオン水溶液（５０ｍＬ）を添加し、混合物を１５分間撹拌し、デカンテーションした（１回）。樹脂を、１５％Ｈ２ＳＯ４−脱イオン水溶液の入ったカラムに移し、１５％Ｈ２ＳＯ４で洗浄し（少なくとも４ＣＶ）、次いで、中性になるまで脱イオン水で洗浄した。樹脂をビーカーに戻し、１５％ＮａＯＨ−脱イオン水溶液（５０ｍＬ）を添加し、混合物を１５分間撹拌し、デカンテーションした（１回）。樹脂をカラムに移し、１５％ＮａＯＨ−脱イオン水溶液で洗浄し（少なくとも４ＣＶ）、次いで、中性になるまで水で洗浄した（少なくとも４ＣＶ）。化合物６ｄアンモニウム塩（９．９ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ）を脱イオン水（３ｍＬ）に溶解し、カラムの上部に添加し、脱イオン水で溶出させた。ＴＬＣ（ＵＶ）によって検出されるように、化合物６ｄは、初期の画分に溶出した。生成物を凍結乾燥し、化合物６ｄナトリウム塩（１．０ｍｇ）を白色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝７２２．８；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）８．１４（ｓ，１Ｈ），８．１２（ｓ，１Ｈ），７．７１（ｓ，１Ｈ），６．３３（ｄ，Ｊ＝１３．６  Ｈｚ，１Ｈ），５．７６（ｄ，Ｊ＝８．４  Ｈｚ，１Ｈ），５．６５−５．６２（ｍ，１Ｈ），５．４７−５．３４（ｍ，１Ｈ），５．２１−５．１３（ｍ，１Ｈ），４．４６−４．４３（ｍ，３Ｈ），４．３２−４．２９（ｍ，１Ｈ），４．１８（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），４．０２−３．９９（ｍ，２Ｈ），３．４３（ｓ，３Ｈ）；３１Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）５５．６８（ｓ，１Ｐ），５１．７７（ｓ，１Ｐ）；１９Ｆ  ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）−２０２．２０（ｓ，１Ｆ）。
【０２１２】
生物学的実施例
インビトロ・アッセイ
（実施例１）
ＳＴＩＮＧ  ＳＰＡ結合アッセイ
ヒトＳＴＩＮＧ  ＳＰＡ結合アッセイは、トリチウム標識された２’，３’ｃＧＡＭＰ（環状（グアノシン−（２’→５’）−モノホスフェート−アデノシン−（３’→５’）−モノホスフェート）から、ビオチン化ＳＴＩＮＧタンパク質への置換を測定する。４つの膜貫通ドメインを欠いており、２３２位にＲを有する（Ｈ２３２Ｒ）Ｑ８６ＷＶ６の残基１３９−３７９を含む、可溶化態様の組み替えＳＴＩＮＧを、大腸菌内で発現させた。集団について対立遺伝子頻度が５８％であることに基づき、Ｈ２３２Ｒは、野生型であると考えられる（Ｙｉ，ｅｔ．ａｌ．，「Ｓｉｎｇｌｅ  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  ＳＴＩＮＧ  ｃａｎ  ａｆｆｅｃｔ  ｉｎｎａｔｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｃｙｃｌｉｃ  ｄｉｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ」ＰＬＯＳ  ＯＮＥ．２０１３，８（１０），ｅ７７８４６）。ＳＴＩＮＧコンストラクトは、Ｎ末端にＨＩＳタグを有しており、それに続き、ＴＥＶプロテアーゼ切断部位及びＡＶＩタグを有しており、ＢｉｒＡビオチンリガーゼによる選択的ビオチン化を可能にする（Ｂｅｃｋｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ａ  ｍｉｎｉｍａｌ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｓｕｂｓｔｒａｔｅ  ｉｎ  ｂｉｏｔｉｎＨｏｌｏｅｎｚｙｍｅ  ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ−ｃａｔａｌｙｚｅｄ  ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｉｏｎ．（１９９９）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ８，９２１−９２９）。精製後、かつビオチン化の前に、ＨＩＳタグを切断させる。
【０２１３】
８ｎＭの［３Ｈ］−２’３’−ｃＧＡＭＰ及び４０ｎＭビオチン−ＳＴＩＮＧタンパク質をアッセイバッファー［２５ｍＭＨＥＰＥＳ（Ｃｏｒｎｉｎｇ  ２５−０６０−Ｃ１）ｐＨ７．５、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ（Ｓｉｇｍａ  Ｓ５１５０）、０．５ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡ（Ｇｉｂｃｏ  １５２６０−０３７）、０．００１％Ｔｗｅｅｎ−２０（Ｓｉｇｍａ  Ｐ７９４９）、分子生物学グレードの水（Ｃｏｒｎｉｎｇ  ４６−０００−ＣＭ）］に加え、ウェルあたりの合計体積８μＬで、１５３６ウェルプレートでアッセイを行った。試験化合物（８０ｎＬ）を、アコースティックディスペンサー（ＥＤＣ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて１００％ＤＭＳＯに加え、最終アッセイ濃度を１％ＤＭＳＯとした。プレートを１分間遠心分離し、室温で６０分間インキュベートした。最後に、（２μＬ）ポリスチレンストレプトアビジンＳＰＡビーズ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  ＲＰＮＱ０３０６）を加え、プレートを密封し、室温で１分間遠心分離した。プレートを２時間暗所で適応させ、プレート当たり１２分間ＶｉｅｗＬｕｘ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）で読み取った。［３Ｈ］−２’３’−ｃＧＡＭＰに関する飽和結合曲線は、ＳＴＩＮＧに対する結合について、天然リガンドについて報告されている値に匹敵する３．６±０．３のＫＤを示した（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｙｃｌｉｃ  ＧＭＰ−ＡＭＰ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｍｉｘｅｄ  ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒ  ｌｉｎｋａｇｅｓ  ｉｓ  ａｎ  ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓＨｉｇｈ−ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｌｉｇａｎｄ  ｆｏｒ  ＳＴＩＮＧ。
【０２１４】
環状ジ−ＧＭＰを含む他の天然リガンドもまた、予想される範囲内で、このアッセイにおいて値を返した。参照化合物はｃＧＡＭＰであり、結果は、阻害率及びＩＣ５０値として報告される。マウスＳＴＩＮＧに対する結合は、Ｑ３ＴＢＴ３の残基１３８−３７８を含有する上述のものと類似のコンストラクトを使用した。
【０２１５】
完全長ヒトＳＴＩＮＧ結合アッセイ
２３２位にＲを有し（Ｈ２３２Ｒ）、Ｎ末端に６ＨＩＳタグを有し、それに続きＦＬＡＧタグ、ＴＥＶプロテアーゼ開裂部位及びビオチン化のためのＡＶＩタグを有する、Ｑ８６ＷＶ６の残基１−３７９由来のヒトＳＴＩＮＧを、ＨＥＫ２９３−ＥＸＰＩ細胞内で組換え発現した。これらの細胞から精製膜を調製し、ＳＴＩＮＧ発現を確認し、免疫ブロットにより定量した。Ｇｒｅｉｎｅｒ  ３８４ウェルアッセイプレート中でＳＴＩＮＧ含有膜を試験化合物と合わせ、ＳＴＩＮＧ  ＳＰＡ結合アッセイに使用したのと同じアッセイバッファー中、室温で１時間インキュベートした。次に、［３Ｈ］−２’３’−ｃＧＡＭＰを加え、プレートを室温で３０分間インキュベートした。反応物を予め洗浄したＰａｌｌ  ５０７３フィルタープレートに移し、各ウェルを５０μＬのアッセイバッファーで３回洗浄した。フィルタープレートを５０℃で１時間乾燥させた。各ウェルに、１０μＬのＭｉｃｒｏｓｃｉｎｔシンチレーション流体を加え、プレートを密封し、ウェル当たり１分間ＴｏｐＣｏｕｎｔ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）で読み取った。
【０２１６】
ＳＴＩＮＧ  ＳＰＲ結合アッセイ
化合物を、Ｓ２００  ｂｉａｃｏｒｅ  ＳＰＲ装置（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ）で分析した。大腸菌に産生させた切断型ＳＴＩＮＧタンパク質を、ビオチン捕捉（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ＃ＢＲ１００５３１）により一連のＳストレプトアビジンチップ上に固定化した。化合物を、スクリーニングバッファー（１０ｍＭＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、０．００５％Ｐ２０、１ｍＭ  ＴＥＣＥＰ）により１００ｕＭ〜０．１９５ｕＭまで１：２希釈し、スクリーニングした。１：１結合モデルを用いて定常状態の親和性及び動態評価を行った（ＳＴＩＮＧはダイマーとして処理した）。実験パラメータは以下のとおりであった。ＩＦＭ化合物については６０秒オン、３００秒オフ、環状ジ−ＧＭＰ（６０秒オン／６０秒オフ）、チオール異性体１（６０秒オン／３００秒オフ）、及びｃＧＡＭＰ（６０秒オン／１２００ｓｅｃオフ）、流速５０μＬ／ｍｉｎ及び２５℃、４０Ｈｚでのデータ収集。
【０２１７】
ＳＴＩＮＧヒト細胞レポーターアッセイ
ヒトＳＴＩＮＧ経路のアゴニスト活性は、インターフェロン調節因子（ＩＲＦ）により誘導可能なＳＥＡＰレポーターコンストラクトの安定な組み込みによって、ヒトＴＨＰ１単球細胞株由来のＴＨＰ１−ＩＳＧ細胞（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ，カタログ番号ｔｈｐ−ｉｓｇ）において評価される。ＴＨＰ１  Ｂｌｕｅ  ＩＳＧ細胞は、５つのインターフェロン（ＩＦＮ）刺激応答配列と共に、ＩＳＧ５４ミニマルプロモーターの制御下で、分泌型胚性アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）レポーター遺伝子を発現する。結果として、ＴＨＰ１  Ｂｌｕｅ  ＩＳＧ細胞により、ＳＥＡＰ活性を測定してＩＲＦ活性化をモニタリングすることが可能になる。細胞培養上清中のＩＲＦ誘導性ＳＥＡＰのレベルは、アルカリホスファターゼ検出培地、ＳＥＡＰ検出試薬によって容易に評価される。これらの細胞は、ゼオシン耐性である。このアッセイにおいて、陽性対照として２’３’ｃＧＡＭＰを使用した。アッセイを行うために、６０，０００個の細胞を、白色で底が不透明の組織培養処理された３８４ウェルプレートに３０μＬ／ウェルで分注した。
【０２１８】
試験化合物を１０μＬの体積で添加した（最終濃度１％ＤＭＳＯ）。最初に化合物を１００％ＤＭＳＯ中で調製し、中間希釈プレート上にスポットし、その後、移す前に培地で希釈した。アッセイを３７℃、５％ＣＯ２で２４時間インキュベートした後、プレートを１２００ｒｐｍ（１２０ｘｇ）で５分間遠心分離した。最後のインキュベートの後、９０μＬのアルカリホスファターゼ検出培地基質を新しい３８４ウェル透明プレートの各ウェルに加え、Ｂｉｏｍｅｋ  ＦＸを使用して、１０μＬの細胞上清をアッセイプレートから新しいアルカリホスファターゼ検出培地プレートに移し、４回混合した。プレートを室温で２０分間インキュベートした後、６５５ｎｍでの吸光度をＴｅｃａｎ  Ｓａｆｉｒｅ  ２で測定した。
【０２１９】
ＳＴＩＮＧマウス細胞レポーターアッセイ
マウスＳＴＩＮＧ経路のアゴニスト活性は、インターフェロン誘導性Ｌｕｃｉａルシフェラーゼレポーターコンストラクトの安定な組み込みによって、マウスＲＡＷ−２６４．７マクロファージ細胞株由来のＲＡＷ  Ｌｕｃｉａ細胞（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、カタログ番号ｒａｗｌ−ｉｓｇ）において評価される。ＲＡＷ  Ｌｕｃｉａ細胞は、５つのインターフェロン（ＩＦＮ）刺激応答配列と共に、ＩＳＧ５４ミニマルプロモーターの制御下で、分泌型ルシフェラーゼレポーター遺伝子を発現する。結果として、ＲＡＷ  Ｌｕｃｉａ細胞により、ルシフェラーゼの活性を測定してＩＲＦ活性化をモニタリングすることが可能になる。細胞培養上清中のＩＲＦ誘導性ルシフェラーゼのレベルは、ルシフェラーゼ検出試薬ＱＵＡＮＴＩ−Ｌｕｃ（登録商標）を用いて容易に評価される。これらの細胞は、ゼオシン耐性である。このアッセイにおいて、陽性対照として２’３’ｃＧＡＭＰを使用する。アッセイを行うために、組織培養物処理された９６ウェル透明平底プレートに９０μＬ／ウェルで１００，０００個の細胞を分注した。試験化合物を１０μＬの体積で添加した。このアッセイを、３７℃、５％ＣＯ２で、２４時間及び４８時間インキュベートした。インキュベート後、アッセイプレートから２０μＬの細胞上清を新しい９６ウェル白色プレートに移し、５０ｕＬのＱＵＡＮＴＩ−Ｌｕｃ基質を加えた。プレートをインキュベートし、室温で５分間振盪した後、０．１秒の積分時間で発光をＥｎＶｉｓｉｏｎ  ２１０４で読み取った。
【０２２０】
ヒトインターフェロン−β誘導アッセイ
ＴＨＰ１  Ｂｌｕｅ  ＩＳＧ細胞を使用して、ＳＴＩＮＧ経路活性化後の培養上清へのＩＮＦ−βの分泌を測定する。アッセイを行うために、抗ＩＮＦ−β捕捉抗体を９６ウェルＭｕｌｔｉＡｒｒａｙプレート（Ｍｅｓｏｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）上にコーティングした。１時間のインキュベート後、プレートを洗浄し、このコーティングされたプレート内で、ＳＴＩＮＧヒト細胞レポーターアッセイプレート由来の５０μＬの上清又はＩＦＮ−β標準を、Ｓｕｌｆｏｔａｇを付加した２０μＬの共役検出抗体と混合した。プレートをインキュベートし、２時間振盪し、洗浄し、読み取りバッファーを加えた。電気化学発光をＳｅｃｔｏｒＩｍａｇｅｒで測定した。
【０２２１】
ＳＴＩＮＧ細胞シグナル伝達経路の評価
ＳＴＩＮＧ経路のアゴニスト活性は、ホスホ−ＳＴＩＮＧ（Ｓ３６６）、ホスホ−ＴＢＫ１（Ｓ１７２）及びホスホ−ＩＲＦ３（Ｓ３９６）のウェスタンブロットによって、ＴＨＰ１  ＢＬＵＥ  ＩＳＧ細胞において測定された。簡潔に述べると、９０μＬのヌクレオフェクション（商標）バッファー中の５百万個の細胞を、１０μＬの試験化合物と混合した。これらの混合物を、Ａｍａｘａ  Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ（Ｌｏｎｚａ）上でプログラムＶ−００１を用いてエレクトロポレーションした。細胞を新鮮な培地を入れた１２ウェルプレートに移し、３７℃、５％ＣＯ２で１時間回復させた。次いで、細胞を冷ＨＢＳＳで洗浄し、ＲＩＰＡバッファーに溶解させた。サンプルは、総タンパク質を正規化し、ＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅサンプルバッファー又はＬＤＳローディングバッファーのいずれかで希釈した。サンプルを９５℃で５分間加熱変性した後、ＰｅｇｇｙＳｕｅ（ＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅ）を使用してホスホ−及び総ＳＴＩＮＧ及びＩＲＦ３を測定し、一方、ＮｕＰＡＧＥ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）システムを使用してＴＢＫ１を測定した。データを、Ｃｏｍｐａｓｓ又はＬｉｃｏｒ  Ｏｄｙｇｓｅｙソフトウェアを使用してそれぞれ分析した。
【０２２２】
ＳＴＩＮＧインビボ活性
全ての試験において、雌性Ｂａｌｂ／ｃマウスはＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）から得て、６〜８週齢になり、体重が約２０ｇになったときに使用した。全ての動物を、実験での使用前に最低５日間、あらゆる輸送関連ストレスから順応及び回復させた。逆浸透処理し塩素を添加した水及び照射された食品（Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｕｔｏｃｌａｖａｂｌｅ  Ｒｏｄｅｎｔ  Ｄｉｅｔ  ５０１０、Ｌａｂ  Ｄｉｅｔ）を不断給餌で与え、動物を１２時間の明暗サイクルに維持した。使用前にケージ及び床敷きをオートクレーブ処理し、毎週交換した。全ての実験は、Ｔｈｅ  Ｇｕｉｄｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌｓに従って行い、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｆ  Ｊａｎｓｓｅｎ  Ｒ  ＆  Ｄ（ＳｐｒｉｎｇＨｏｕｓｅ，ＰＡ）により承認された。各実験群には、８匹のマウスが含まれていた。５００，０００個のＣＴ２６結腸癌腫瘍細胞をＢａｌｂ／ｃマウスに皮下移植し、腫瘍を１００〜３００ｍｍ３に成長させることによって、マウスＣＴ２６腫瘍モデルにおけるインビボ有効性を決定した。化合物を、リン酸緩衝生理食塩水中で、１回の注入当たり０．１ｍＬの体積で処方し、腫瘍内注射した。３日おきに、合計３回の用量として０．０５ｍｇを、マウスに投与した。次式：（（Ｃ−Ｔ）／（Ｃ））＊１００（全ての対照動物が試験下にある場合）により、対照腫瘍体積（Ｃ）に対する、治療した腫瘍体積（Ｔ）のサイズの減少によって計算される腫瘍増殖阻害率（ＴＧＩ）として、有効性を評価した。治癒は、最後の用量を投与した後に、１０腫瘍体積倍加時間（ＴＶＤＴ）を測定可能な腫瘍が検出されなかった動物の数であると定義された。
【０２２３】
得られたデータを表３に示す。
【０２２４】
【表４】
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【０２２５】
ＮＤ−実施せず。ヒトＩＦＮ−βのランク付け値は、ＴＨＰ−１  Ｂｌｕｅ細胞において試験した投与範囲（０．７８〜５０ｕＭ）にわたる全累積ＩＦＮ−β誘導によって決定されるランク付け値によって決定される。
【０２２６】
生物学的実施例２
ＳＴＩＮＧ初代ヒトＰＢＭＣサイトカイン誘導アッセイ
ヒト全血由来の初代ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）においてヒトＳＴＩＮＧ経路のアゴニスト活性を評価する。１パイント（約４２０ｍＬ）の新鮮なドナー血液（ＡｌｌＣｅｌｌｓ  Ｉｎｃ．（Ａｌａｍｅｄａ，ＣＡ））を、リンパ球分離培地（１．０７７〜１．０８０ｇ／ｍｌ、Ｃｏｒｎｉｎｇ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ））上に層状に配置し、次いで、破壊することなく、室温、５００ｇで２０分間遠心分離する。血清とリンパ球分離培地との間の界面で集めたＰＢＭＣを採取し、洗浄し、次いで計測する。ＰＢＭＣは、Ｂ細胞、Ｔ細胞などのリンパ球及び単球のサブタイプから構成され、文献において、これらのサブタイプは、異なるレベルのＳＴＩＮＧタンパク質を発現するとして特徴付けられている。２’３’−ｃＧＡＭＰなどのＳＴＩＮＧアゴニストに応答して、これらの細胞が活性化され、様々な炎症性及び抗ウイルス性サイトカインの発現が誘導される。また、ＳＴＩＮＧアゴニストで刺激すると、これらの細胞は、活性化マーカーを上方調節する。サイトカイン誘導レベルは、ＥＬＩＳＡ、Ｌｕｍｉｎｅｘ及びＭＳＤを含む様々な方法によって測定することができる。活性化マーカーのアップレギュレーションのレベルは、フローサイトメトリーによって測定することができる。
【０２２７】
アッセイを行うために、組織培養処理された９６ウェル平底プレートに２２５μＬ／ウェルで１，０００，０００個の細胞を分注した。試験化合物を、１０倍濃度で、２５μＬの体積で添加した。一部の化合物を１００％ＤＭＳＯに溶解し、これらの化合物を投与する培養物におけるＤＭＳＯの最終濃度は１％とした。このアッセイを、３７℃、５％ＣＯ２で４８時間インキュベートした。プレートの底部の細胞を乱さないように２００μＬの上清を採取し、次いで、Ｌｕｍｉｎｅｘ測定の時間まで−２０℃で凍結させた。ＭＩＬＬＩＰＬＥＸ  ＭＡＰ  Ｈｕｍａｎ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ／Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  Ｍａｇｎｅｔｉｃ  Ｂｅａｄ  Ｐａｎｅｌ−Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ  ＡｓｓａｙキットからのＧ−ＣＳＦ、ＩＦＮα２、ＩＦＮγ、ＩＬ−１ｂ、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２（ｐ４０）、ＩＬ−１２（ｐ７０）、ＴＮＦα、及びＭＩＬＬＩＰＬＥＸ  ＭＡＰＨｕｍａｎ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ／Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  Ｍａｇｎｅｔｉｃ  Ｂｅａｄ  Ｐａｎｅｌ  ＩＶキット（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、ＭＡ）からのＩＦＮβ１検体を用い、製造業者のプロトコルに従って、Ｌｕｍｉｎｅｘアッセイを行った。サイトカイン誘導は、Ｌｕｍｉｎｅｘ  ＦｌｅｘＭＡＰ  ３Ｄ（登録商標）装置（Ｌｕｍｉｎｅｘ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｒａｄｎｏｒ、ＰＡ））を使用して測定した。収集されたＬｕｍｉｎｅｘデータの分析は、ＭＩＬＬＩＰＬＥＸ  Ａｎａｌｙｓｔソフトウェア（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して行った。
【０２２８】
ＳＴＩＮＧ活性化された初代ヒトＰＢＭＣからの馴化培地を使用したＰＨＨ細胞におけるＨＢＶウイルスの抑制
初代ヒト肝細胞は、Ｂ型肝炎ウイルスに感染し得るものであり、感染中は、ＥＬＩＳＡによって検出可能なＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇなどのウイルスタンパク質を産生する。エンテカビルなどの化合物による治療処置は、ＨＢＶ複製を抑制することができ、この抑制は、ウイルスタンパク質の産生の減少によって評価することができる。組織培養処理された２４ウェル平底プレートに、５００μＬ／ウェルで、（細胞数）４×１０５個／ウェルの初代ヒト肝細胞（ＢｉｏＲｅｃｌａｍａｔｉｏｎ、ウェストベリー、ＮＹ）を分注した。２４時間後、細胞を３０〜７５ｍｏｉのＨＢＶに感染させた。翌日、ＰＨＨを３回洗浄し、新鮮な維持培地を細胞に添加した。同時に、ＰＢＭＣを、上述のとおり単離した。ＰＢＭＣを刺激するために、組織培養物処理された２４ウェル平底プレートに４００μＬ／ウェルで１０，０００，０００１０，０００，０００個の細胞を分注した。試験化合物を体積１００μＬで添加した後、培養物を３７℃、５％ＣＯ２で４８時間インキュベートした。上清を回収した。フローサイトメトリーを使用して、活性化マーカーのアップレギュレーションについて細胞を測定した。簡潔に述べると、細胞を、ＣＤ５６、ＣＤ１９、ＣＤ３、ＣＤ８ａ、ＣＤ１４、ＣＤ６９、ＣＤ５４、ＣＤ１６１、ＣＤ４及びＣＤ８０を対象とする蛍光標識抗体で染色した。Ａｔｔｕｎｅ  ＮｘＴフローサイトメーター（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）でサンプルを分析した。
【０２２９】
刺激したＰＢＭＣ培養物から、上述のとおり、Ｌｕｍｉｎｅｘによるサイトカイン検出のために上清の一部を確保した。残りの上清を半分に分割し、アッセイのｄ８で使用するために１つのアリコートを４℃で保存した。上清の他のアリコートを２ＸＰＨＨ培地で１：１に希釈した後、ｄ４感染したＰＨＨ細胞に添加した。９６時間後、使用済み培地を交換し、上清に、２ＸＰＨＨ培地を添加し１：１希釈した。この時点で、ＨＢｓＡｇ  ＥＬＩＳＡキット（Ｗａｎｔａｉ  Ｂｉｏ  ｐｈａｒｍ、北京、中国）を使用してＨＢｓＡｇの仮測定を行った。９６時間後、培地を回収し、ＨＢｓＡｇを測定した。
【０２３０】
表４：ＣＤＮ化合物で刺激したＰＢＭＣ培養におけるサイトカインの誘導倍率。誘導倍率は、約２０μＭの化合物で４８時間後に誘導されたサイトカインの濃度を測定し、次いで、ＰＢＳで誘導された細胞のサイトカイン産生のベースラインレベルで除算することによって計算される。データは、３つの実験にわたる複数のドナーの平均である。ｎｔ＝試験せず。
【０２３１】
【表５】
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【０２３２】
表５：より高濃度のＣＤＮ化合物で刺激したＰＢＭＣ培養におけるサイトカインの誘導倍率。誘導倍率は、指定の濃度の化合物で４８時間後に誘導されたサイトカインの濃度を測定し、次いで、ＰＢＳで誘導された細胞のサイトカイン産生のベースラインレベルで除算することによって計算される。データは、３つの実験にわたる複数のドナーの平均である。ｎｔ＝試験せず。
【０２３３】
【表６】
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【０２３４】
表６．ＣＤＮで刺激されたＰＢＭＣからの馴化培地は、ＨＢＶ感染したＰＨＨ細胞のウイルス負荷を抑制することができる。ＰＢＭＣを、記載のＣＤＮを用いて２０、４、０．８μＭで４８時間刺激した。上澄み液を新鮮な培地と１：１の比率で混合した後、ＨＢＶ感染したＰＨＨ細胞に添加した。ＨＢｓＡｇ産生は、８日後に測定した。データは、２名の独立したドナーの平均である。
【０２３５】
【表７】
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【０２３６】
表７．ＣＤＮはＰＢＭＣを活性化する。ＰＢＭＣを２０μＭのＣＤＮで４８時間刺激した。細胞を、単球上のＣＤ５４のアップレギュレーションについて、フローサイトメトリーによって評価した。平均蛍光強度の増加倍率は、休止細胞のレベルに対して計算した。データは、２名の独立したドナーの平均である。
【０２３７】
【表８】
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【０２３８】
上記の明細書は、説明を目的として与えられる実施例と共に本発明の原理を教示するものであるが、本発明の実施には、以下の特許請求の範囲及びその均等物の範囲内に含まれる全ての通常の変形例、適合例及び／又は改変例が包含される点が理解されるであろう。
【国際調査報告】
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