(57)【要約】本発明は、癌の処置又は予防を、それを必要とする対象において行う方法であって、治療有効量の本発明の化合物を投与するステップを含む方法に関する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌の処置又は予防を、それを必要とする対象において行う方法であって、治療有効量の、化合物１若しくは２：
【化１１】
2020510009.tif 000012
又はその薬学的に許容される塩若しくはアミノ酸抱合体から選択されるＦＸＲアゴニストを投与するステップを含む方法。
【請求項２】
前記癌は、肝細胞癌、胆管癌、膵癌、腎臓癌、前立腺癌、食道癌、乳癌、胃癌、腎癌、唾液腺癌、卵巣癌、子宮体癌、膀胱癌及び肺癌から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記癌は、肝細胞癌である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記肝細胞癌は、初期段階肝細胞癌、非転移性肝細胞癌、原発性肝細胞癌、進行肝細胞癌、局所進行肝細胞癌、転移性肝細胞癌、寛解期の肝細胞癌又は再発肝細胞癌からなる群から選択される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記ＦＸＲアゴニストは、化合物１又はその薬学的に許容される塩である、請求項１〜４の何れか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記ＦＸＲアゴニストは、化合物１のナトリウム塩である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記ＦＸＲアゴニストは、化合物１のＮ，Ｎ−ジエタンアミン塩である、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記ＦＸＲアゴニストは、化合物２又はその薬学的に許容される塩若しくはアミノ酸抱合体である、請求項１〜４の何れか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記ＦＸＲアゴニストは、化合物２のグリシン抱合体である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＦＸＲアゴニストは、化合物２のタウリン抱合体である、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＦＸＲアゴニストは、化合物２のサルコシン抱合体である、請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
癌の処置又は予防を、それを必要とする対象において行うための、化合物１若しくは２：
【化１２】
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又はその薬学的に許容される塩若しくはアミノ酸抱合体から選択されるＦＸＲアゴニストと、薬学的に許容される添加剤とを含む医薬組成物。
【請求項１３】
癌の処置又は予防を、それを必要とする対象において行うためのキットであって、化合物１若しくは化合物２：
【化１３】
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又はその薬学的に許容される塩若しくはアミノ酸抱合体を含むキット。
【請求項１４】
癌の処置又は予防を、それを必要とする対象において行うための医薬品の製造における、化合物１若しくは２：
【化１４】
2020510009.tif 000015
又はその薬学的に許容される塩若しくはアミノ酸抱合体から選択されるＦＸＲアゴニストの使用。
【請求項１５】
前記癌は、胆管癌である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＦＸＲアゴニストは、化合物１又はその薬学的に許容される塩である、請求項１５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
癌は、主として、一定の正常組織に由来する異常細胞の数の増加、その異常細胞による隣接組織への浸潤又は悪性細胞の所属リンパ節及び遠隔部位へのリンパ性若しくは血行性の拡散（転移）を特徴とする。臨床データ及び分子生物学的な研究は、癌が新生物発生前の軽微な変化から始まり、それが特定条件下で新形成に進行し得る多段階プロセスであることを示す。
【０００２】
原発性肝癌は、世界中で最もよく見られる癌の形態の１つである。肝癌には主な２つの種類、即ち、肝細胞癌（ＨＣＣ）（別名、悪性ヘパトーマ）及び胆管細胞癌（別名、胆管癌（ＣＣＡ））がある。ＨＣＣは、原発性肝癌の最も一般的な形態であり、肝細胞内で発症する。ＨＣＣは、ほとんどの場合において男性及び肝硬変に罹患している患者で生じる。ＨＣＣは、世界中で最もよく見られる癌の１つであり、癌関連死因では３番目に多い。この疾患は、多くの場合、臨床症状の経過の後期に診断される。その結果、治癒手術の候補となるのは、患者のわずか１０〜１５％にすぎない。ＨＣＣ患者の大多数について、全身化学治療又は支持治療が処置選択肢の主力である。
【０００３】
対照的に、主に肝臓内の細胆管上皮細胞（即ち胆管細胞）で発症するのは、胆管細胞癌又は胆管癌である。この型の癌は、女性に多く見られる。胆管癌（ＣＣＡ）の発生率は、世界中で増加しており、既に２番目に多い原発性肝癌となっている。ＣＣＡ患者は、診断が遅く、この腫瘍が治療抵抗性であるため、予後が思わしくない。
【０００４】
現在まで、ＨＣＣ及び／又はＣＣＡなどの癌を効果的に処置できる薬物の数は、限られている。例えば、転移性肝細胞癌又は肝細胞癌の患者は、局所処置に失敗した場合、通常、３〜４カ月程度の余命を維持するのみである。転移性肝細胞癌又は肝細胞癌は、局所処置に失敗した場合、主に全身治療を施される。ドキソルビシンの使用、ドキソルビシンと併用したタモキシフェンの高投与量の使用又はＥＡ−ＰＦＬ（エトポキシド、アドリマイシン、シスプラチン、フルオロウラシル及びロイコボリン）の使用は、効果的な例である。これらの薬物による寛解率は、１５〜３０％のレベルに達し得る。しかしながら、肝細胞癌の患者は、通常、肝硬変の合併症及び他の合併症（白血球減少症、血小板減少症又は肝機能障害など）を発症するため、全身化学治療を受けることができない。さらに、大部分の化学治療剤の有効性は、限定的であり、患者の生存期間を著しく改善することができていない。努力が続けられているが、大部分の癌患者の臨床経過の悪化は、より有効な化学治療の必要性を明らかに示している。
【０００５】
胆管癌は、腺癌（腺を形成するか又はかなりの量のムチンを分泌する癌）として分類される比較的まれな新生物である。その年間発生率は、西欧諸国で１００，０００人あたり１〜２症例であるが、胆管癌の率は、ここ数十年にわたり世界中で上昇している。胆管癌は、原発腫瘍と何れかの転移の両方が手術によって完全に除去され得ない限り、不治の急速に死に至る癌であると考えられている。治癒する可能性のある処置は、手術以外にはないが、大多数の人が症状に気づくと疾患の進行期であり、診断時には手術不能である。胆管癌の人々は、一般に、治癒ではなく、化学治療、放射線治療及び他の緩和ケア措置で管理される。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、これらのニーズに対処するものである。したがって、本発明の目的は、肝細胞癌及び胆管癌などの癌を処置又は予防する改善型の方法を提供することである。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１Ａ】多剤耐性タンパク質２（Ｍｄｒ２−／−）ノックアウトマウスにおける肝腫瘍の数に対する化合物１−Ｎａ及び対照飼料の影響を示す棒グラフである。＊対照群に対してｐ＜０．０１。
【図１Ｂ】Ｍｄｒ２−／−マウスにおける腫瘍（＞直径５ｍｍ）のパーセント減少に対する化合物１−Ｎａ及び対照飼料の影響を示す棒グラフである。
【図２Ａ】Ｍｄｒ２−／−ノックアウトマウスにおける肝腫瘍の数に対するＯＣＡ（化合物２）及び対照飼料の影響を示す棒グラフである。
【図２Ｂ】Ｍｄｒ２−／−マウスにおける腫瘍（＞直径５ｍｍ）のパーセント減少に対するＯＣＡ及び対照飼料の影響を示す棒グラフである。
【図３Ａ】ファルネソイドＸ受容体（ＦＸＲ−／−）マウスにおける肝腫瘍の数に対する化合物１−Ｎａ及び対照飼料の影響を示す棒グラフである。
【図３Ｂ】ＦＸＲ−／−マウスにおける腫瘍（＞直径５ｍｍ）のパーセント減少に対する化合物１−Ｎａ及び対照飼料の影響を示す棒グラフである。
【図４】ＦＸＲ−／−マウスにおける肝腫瘍の数のパーセント減少に対する化合物１−Ｎａ及び対照飼料の影響を示す棒グラフである。
【図５Ａ】Ｍｄｒ２−／−マウスにおける肝臓／体重の重量比のパーセント減少に対する化合物１−Ｎａ及び対照飼料の影響を示す棒グラフである。＊対照群に対してｐ＜０．０１。
【図５Ｂ】ＦＸＲ−／−マウスにおける肝臓／体重の重量比のパーセント減少に対する化合物１−Ｎａ及び対照飼料の影響を示す棒グラフである。
【図６Ａ】Ｍｄｒ２−／−マウス及びＦＸＲ−／−マウスにおけるアラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）レベルに対する化合物１−Ｎａ及び対照飼料の影響を示す棒グラフである。＊対照群に対してｐ＜０．０１。
【図６Ｂ】Ｍｄｒ２−／−マウス及びＦＸＲ−／−マウスにおけるアスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）レベルに対する化合物１−Ｎａ及び対照飼料の影響を示す棒グラフである。＊対照群に対してｐ＜０．０１。
【図７Ａ】Ｍｄｒ２−／−マウス及びＦＸＲ−／−マウスにおける線維芽細胞増殖因子１５（Ｆｇｆ１５）の回腸遺伝子発現に対する化合物１−Ｎａ及び対照飼料の影響を示す棒グラフである。＊対照群に対してｐ＜０．０１。
【図７Ｂ】Ｍｄｒ２−／−マウス及びＦＸＲ−／−マウスにおける低分子ヘテロ二量体パートナー（Ｓｈｐ）の回腸遺伝子発現に対する化合物１−Ｎａ及び対照飼料の影響を示す棒グラフである。＊対照群に対してｐ＜０．０１。
【図８】Ｍｄｒ２−／−マウス及びＦＸＲ−／−マウスにおけるコレステロール７αヒドロキシラーゼ（ｃｙｐ７ａ１）の発現低下に対する化合物１−Ｎａ及び対照飼料の影響を示す棒グラフである。＊対照群に対してｐ＜０．０１。
【図９Ａ】Ｍｄｒ２−／−マウス及びＦＸＲ−／−マウスにおける低分子ヘテロ二量体パートナー（Ｓｈｐ）の肝臓遺伝子発現に対する化合物１−Ｎａ及び対照飼料の影響を示す棒グラフである。＊対照群に対してｐ＜０．０１。
【図９Ｂ】Ｍｄｒ２−／−マウス及びＦＸＲ−／−マウスにおける胆汁酸塩排出ポンプ（Ｂｓｅｐ）の肝臓遺伝子発現に対する化合物１−Ｎａ及び対照飼料の影響を示す棒グラフである。＊対照群に対してｐ＜０．０１。
【図１０Ａ】Ｍｄｒ２−／−マウスにおける総血清胆汁酸量に対する化合物１−Ｎａ及び対照飼料の影響を示す棒グラフである。＊対照群に対してｐ＜０．０１。
【図１０Ｂ】ＦＸＲ−／−マウスにおける総血清胆汁酸量に対する化合物１−Ｎａ３及び対照飼料の影響を示す棒グラフである。
【図１１Ａ】ヒト周辺組織と比較した際のＣＣＡ腫瘍の全組織におけるＦＸＲ  ｍＲＮＡマイクロアレイ発現を示す。
【図１１Ｂ】腫瘍分化度によりグループ化したＣＣＡ腫瘍の全組織におけるＦＸＲ  ｍＲＮＡマイクロアレイ発現を示す。
【図１１Ｃ】正常ヒト肝臓組織及びヒト肝臓周辺組織と比較した際のＣＣＡ腫瘍におけるＦＸＲ  ｍＲＮＡ発現（ｑＰＣＲ）を示す。
【図１１Ｄ】対応するヒト肝臓周辺組織と比較した際のＣＣＡ腫瘍におけるＦＸＲ  ｍＲＮＡ発現（ｑＰＣＲ）を示す。
【図１２Ａ】ヒト周辺組織と比較した際のＣＣＡ腫瘍の全組織におけるＴＧＲ  ｍＲＮＡマイクロアレイ発現を示す。
【図１２Ｂ】臨床病理学的パラメータ、即ち解剖学的部位及び神経周囲の浸潤による、ＣＣＡ腫瘍の全組織におけるＴＧＲ５  ｍＲＮＡマイクロアレイ発現を示す。
【図１２Ｃ】ヒト肝臓周辺組織と比較した際のＣＣＡ腫瘍におけるＴＧＲ５  ｍＲＮＡ発現（ｑＰＣＲ）を示す。
【図１２Ｄ】対応するヒト肝臓周辺組織と比較した際のＣＣＡ腫瘍におけるＴＧＲ５  ｍＲＮＡ発現（ｑＰＣＲ）を示す。
【図１３Ａ】正常ヒト胆管細胞及びＣＣＡ細胞株におけるＦＸＲ  ｍＲＮＡ発現（ｑＰＣＲ）を示す。
【図１３Ｂ】正常ヒト胆管細胞及びＣＣＡ細胞株におけるＴＧＲ５  ｍＲＮＡ発現（ｑＰＣＲ）を示す。
【図１４Ａ】無処置の対照マウス、ＯＣＡで処置したマウス及び化合物４で処置したマウスの代表的なＭＲＩ画像及び肝臓の画像を示す。
【図１４Ｂ】ＭＲＩで定量化した腫瘍容積倍率変化を示す棒グラフである。
【図１４Ｃ】肝臓同所性ＣＣＡ腫瘍における増殖マーカー（即ちＫｉ６７及びＰＣＮＡ）、胆汁性マーカー（即ちＣＫ１９）及び上皮性マーカー（即ちＺＯ−１）のｍＲＮＡ発現レベルを示す。
【図１４Ｄ】無処置の又はＯＣＡ若しくは化合物４で処置したマウスの肝臓同所性ＣＣＡ腫瘍における増殖マーカー（即ちＫｉ６７及びＰＣＮＡ）の代表的な免疫組織化学画像を示す。
【図１５Ａ】フローサイトメトリーにより、ＣＦＳＥ細胞増殖染料染色を使用して実施した、無処置の対照細胞と比較した際の、ＯＣＡでの処置後の増殖マーカーのｍＲＮＡ発現レベル及び１０又は２５μＭのＯＣＡで４８時間処置したＣＣＡ細胞（即ちＥＧＩ１）の増殖を示す。
【図１５Ｂ】ＣＣＡ細胞（即ちＥＧＩ１）における遊走アッセイ及び創傷治癒アッセイの代表的な顕微鏡画像、対応する定量化及び２４時間時点でのｔｒａｎｓｗｅｌｌ遊走チャンバーの代表的な顕微鏡画像を示す。
【図１５Ｃ】ＣＣＡ細胞（即ちＥＧＩ１）においてミトコンドリアのストレス試験キットを使用したＳｅａｈｏｒｓｅによる酸素消費速度（ＯＣＲ）及びＯＣＲ測定後に計算した代謝パラメータの棒グラフを示す。
【図１５Ｄ】無処置の又は１０若しくは２５μＭのＯＣＡで処置したＣＣＡ細胞（即ちＥＧＩ１）における、アネキシンＶ及びヨウ化プロピジウム染色による、フローサイトメトリーに基づくアポトーシスアッセイ並びに代表的なヒストグラム及び対応するプールデータの定量化を示す。
【図１６Ａ】無処置の対照細胞と比較した際の、化合物４で処置した後の増殖マーカーのｍＲＮＡ発現レベル及び１０又は２５μＭの化合物３で４８時間処置したＣＣＡ細胞（即ちＥＧＩ１）の増殖を示す。
【図１６Ｂ】ＣＣＡ細胞（即ちＥＧＩ１）における遊走アッセイ、創傷治癒アッセイの代表的な顕微鏡画像及び対応する定量化並びに無処置の及び化合物４で処置した細胞における２４時間時点でのｔｒａｎｓｗｅｌｌ遊走チャンバーの代表的な顕微鏡画像及び対応する定量化を示す。
【図１６Ｃ】無処置の又は化合物４（２５μＭ）で処置したＣＣＡ細胞（即ちＥＧＩ１）においてミトコンドリアのストレス試験キットを使用したＳｅａｈｏｒｓｅによる酸素消費速度（ＯＣＲ）及びＯＣＲ測定後に計算した代謝パラメータの棒グラフを示す。
【図１７】肝臓同所性ＣＣＡ腫瘍における増殖マーカー（即ちＣｄｃ２５ａ、サイクリンＤ１及びサイクリンＤ３）のｍＲＮＡ発現レベルを示す。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
本願は、癌の処置又は予防を、それを必要とする対象において行う方法であって、治療有効量のファルネソイドＸ受容体（ＦＸＲ）アゴニストを投与するステップを含む方法に関する。一実施形態では、ＦＸＲアゴニストは、化合物１若しくは化合物２：
【化１】
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又はその薬学的に許容される塩若しくはアミノ酸抱合体である。
【０００９】
一実施形態では、癌は、肝細胞癌、膵癌、腎臓癌、前立腺癌、食道癌、乳癌、胃癌、腎癌、唾液腺癌、卵巣癌、子宮体癌、膀胱癌及び肺癌からなる群から選択される。一実施形態では、癌は、肝細胞癌である。一実施形態では、癌は、膵癌である。一実施形態では、癌は、腎臓癌である。一実施形態では、癌は、前立腺癌である。一実施形態では、癌は、食道癌である。一実施形態では、癌は、乳癌である。一実施形態では、癌は、胃癌である。一実施形態では、癌は、腎癌である。一実施形態では、癌は、唾液腺癌である。一実施形態では、癌は、卵巣癌である。一実施形態では、癌は、子宮体癌である。一実施形態では、癌は、肺癌である。
【００１０】
一実施形態では、ＦＸＲアゴニストは、化合物１又はその薬学的に許容される塩である。別の実施形態では、ＦＸＲアゴニストは、化合物１のナトリウム塩（即ち化合物１−Ｎａ）である。さらに別の実施形態では、ＦＸＲアゴニストは、化合物１のＮ，Ｎ−ジエタンアミン塩（即ち化合物１−ＤＥＡ）である。
【００１１】
別の実施形態では、ＦＸＲアゴニストは、化合物２又はその薬学的に許容される塩若しくはアミノ酸抱合体である。一実施形態では、ＦＸＲアゴニストは、化合物２のグリシン抱合体である。一実施形態では、ＦＸＲアゴニストは、化合物２のタウリン抱合体である。一実施形態では、ＦＸＲアゴニストは、化合物２のサルコシン抱合体である。
【００１２】
本発明は、癌の処置又は予防を、それを必要とする対象において行うための医薬品の製造における、化合物１若しくはその薬学的に許容される塩又は化合物２若しくはその薬学的に許容される塩若しくはアミノ酸抱合体の使用にさらに関する。
【００１３】
本発明は、癌の処置又は予防を、それを必要とする対象において行うことにおける使用のための、化合物１又はその薬学的に許容される塩及び化合物２又はその薬学的に許容される塩若しくはアミノ酸抱合体にさらに関する。
【００１４】
本発明は、癌の処置又は予防を、それを必要とする対象において行うための、化合物１又はその薬学的に許容される塩及び化合物２又はその薬学的に許容される塩若しくはアミノ酸抱合体と、薬学的に許容される添加剤とを含む医薬組成物にも関する。
【００１５】
本発明は、癌の処置又は予防を、それを必要とする対象において行うためのキットであって、化合物１又はその薬学的に許容される塩及び化合物２又はその薬学的に許容される塩若しくはアミノ酸抱合体を含むキットにさらに関する。
【００１６】
本発明は、化合物１及び化合物２が、癌の予測となる動物モデルにおける癌の処置において有効であったという発見に少なくとも部分的に基づいている。下記の実施例に記載のように、本発明者らは、自然発症型肝臓癌形成のマウスモデルにおいて本発明の化合物が腫瘍増殖を抑制したことを発見した。
【００１７】
定義
便宜上、本明細書、実施例及び添付の特許請求の範囲において使用される特定の用語がここに集められている。
【００１８】
「癌」という用語は、本明細書で使用する場合、対象における癌性組織の存在を特徴とする疾患の何れかを指す。
【００１９】
本明細書で使用する場合、「癌性組織」は、悪性新生細胞を含んで細胞の異常増殖及び／又は過剰増殖細胞を発現する組織を指す。癌性組織は、発生組織又は発生器官から生じる原発性悪性腫瘍であり得るか、又は原発腫瘍の源ではなかった体組織において増殖する転移性悪性腫瘍であり得る。
【００２０】
本明細書で使用する場合、「腫瘍」という用語は、固形腫瘍又は造血系起源の癌を含み得る。幾つかの実施形態では、腫瘍は、周辺組織に浸潤する能力、体の他の部分に転移する能力及び／又は血管新生活性を特徴とし得る。例示的な腫瘍は、肝細胞癌、胃癌、腎癌、前立腺癌、副腎癌、膵癌、乳癌、膀胱癌、唾液腺癌、卵巣癌、子宮体癌及び肺癌から生じる。
【００２１】
本明細書で使用する場合、「浸潤性の」という用語は、細胞、細胞の集団又は悪性腫瘍がある部位から隣接部位に拡散するプロセスを指す。
【００２２】
「転移性の」という用語は、本明細書で使用する場合、細胞、細胞の集団又は悪性腫瘍がある部位から当初の部位に隣接していない部位に拡散するプロセスを指す。
【００２３】
本明細書で使用する場合、「肝細胞癌」、「ＨＣＣ」及び「悪性ヘパトーマ」は、互換的に使用され、肝臓組織から生じる原発腫瘍及び続発性（転移した）腫瘍を指す。「治療抵抗性肝細胞癌」という用語は、本明細書で使用する場合、抗新生物処置に対して有利に応答できない肝細胞癌を指す。したがって、「処置に対して抵抗性の肝細胞癌」は、本明細書で使用する場合、処置に対して有利に応答できないか若しくは耐性を示す肝細胞癌、又は代わりに処置に対して有利に応答した後に再発若しくは再発生する肝細胞癌を指す。
【００２４】
本明細書で使用する場合、「胆管癌」、即ち「ＣＣＡ」若しくは「胆管細胞癌」又は胆管癌は、胆汁を肝臓から小腸に排出する胆管において生じる、変異した上皮細胞（又は上皮性分化の特徴を示す細胞）から構成される癌の形態である。ＣＣＡの割合は、肝臓が胆汁うっ滞性の状態において上昇する。胆汁酸が肝内に蓄積しても、発癌を直接的に誘発しないが、胆管細胞増殖及び炎症を促進することにより、及びＦＸＲに依存する化学防護を低減することにより、発癌補助作用を助長することがある。
【００２５】
本明細書で使用する場合、「化合物１」という用語は、
【化２】
2020510009.tif 000004
を指し、これは、６α−エチル−３α，７α，２３−トリヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−水素スルフェートとしても知られている。６α−エチル−３α，７α，２３−トリヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−スルフェートナトリウム」としても知られている「化合物１−Ｎａ」又は「１−Ｎａ」は、互換的に使用され、化合物１のナトリウム塩を指す。本明細書で使用する場合、６α−エチル−３α，７α，２３−トリヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−スルフェートＮ，Ｎ−ジエチルエタンアミン」としても知られている「化合物１−ＤＥＡ」又は「１−ＤＥＡ」は、互換的に使用され、化合物１のＮ，Ｎ−ジエチルエタンアミン塩を指す。化合物１−Ｎａ及び化合物１−ＤＥＡの構造を以下に示す。
【化３】
2020510009.tif 000005
【００２６】
「化合物２」は、本明細書で使用する場合、
【化４】
2020510009.tif 000006
を指し、これは、オベチコール酸（ＯＣＡ）、６−ＥＣＤＣＡ、６−α−エチルケノデオキシコール酸又は６α−エチル−３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−酸としても知られている。
【００２７】
本明細書で使用する場合、「化合物３」は、
【化５】
2020510009.tif 000007
を指し、これは、３α，７α，１１β−トリヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−酸としても知られている。
【００２８】
本明細書で使用する場合、「化合物４」は、
【化６】
2020510009.tif 000008
を指し、これは、６α−エチル−２３（Ｓ）−メチル−３α，７α，１２α−トリヒドロキシ−５β−コラン−２４−酸としても知られている。米国特許第８，１１４，８６２号明細書に記載されている化合物４は、ＴＧＲ５モジュレーターである。実施形態の１つでは、ＴＧＲ５モジュレーターは、アゴニストである。
【００２９】
「ＴＧＲ５モジュレーター」という用語は、ＴＧＲ５受容体と相互作用する任意の化合物を意味する。相互作用は、ＴＧＲ５受容体のアンタゴニスト、アゴニスト、部分的アゴニスト又は逆アゴニストとして作用する化合物に限定されない。
【００３０】
一般に、「アゴニスト」という用語は、別の分子又は受容体部位の活性を増強する化合物を意味する。アゴニストは、古典的な定義では、オルソステリックアゴニストでも、アロステリックアゴニストでも、逆アゴニストでも、コアゴニストでも、受容体に結合する性質を有し、その受容体の状態を変化させ、生物学的作用をもたらす。したがって、アゴニズムとは、生物学的作用を生じさせるアゴニスト又はリガンドの性質と定義される。より特定すると、ＴＧＲ５アゴニストは、ＴＧＲ５に結合する受容体リガンド又は化合物であり、受容体を発現する細胞において環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）の濃度を少なくとも２０％増加させる。
【００３１】
「本発明の化合物」という表現は、本明細書で使用する場合、化合物１、１−Ｎａ、１−ＤＥＡ、２及び３又はその薬学的に許容される塩若しくはアミノ酸抱合体を包含する。
【００３２】
「処置すること」という用語は、本明細書で使用する場合、処置における奏効又は癌の寛解の任意の徴候を指す。処置することには、例えば、癌の１つ又は複数の症状の重症度を低減又は緩和することを含めることができるか、又は疾患、欠損、障害若しくは不都合な病態などの症状を患者が体験する頻度を低減することを含めることができる。「処置すること」は、細胞、組織又は体液、例えば血液などの体の一部の病態を減少させるか又は排除することも指し得る。
【００３３】
本明細書で使用する場合、「予防すること」という用語は、個体若しくは集団又は細胞、組織若しくは体液（例えば、血液）などの体の一部における癌の部分的又は完全な予防を指す。「予防」という用語は、個体又は個体の細胞、組織若しくは体液の、処置される集団の全体における疾患又は病態の完全な予防のための要件を確立していない。「処置又は予防する」という用語は、癌のあるレベルの処置又は寛解をもたらす方法を指すために本明細書で使用され、癌の予防を含むが、これに完全に限定されない、その目的に向けられた様々な結果を企図する。
【００３４】
「治療有効量」という用語は、本明細書で使用する場合、腫瘍を縮小させ、且つ／若しくは腫瘍の増殖速度を低下させるか（腫瘍増殖を抑制するなど）、又は癌における他の望ましくない細胞増殖を予防若しくは遅延させるのに十分な量を含む有効量を指す。幾つかの実施形態では、有効量は、癌の発症を遅延させるのに十分な量である。幾つかの実施形態では、有効量は、再発を予防するか又は遅延させるのに十分な量である。有効量は、１回又は複数回の投与で投与することができる。ＨＣＣ又はＣＲＣの場合、有効量の薬物又は組成物は、（ｉ）腫瘍細胞の数を減少させ得；（ｉｉ）腫瘍サイズを縮小させ得；（ｉｉｉ）末梢器官への癌細胞浸潤をある程度阻害し得、遅延させ得、緩徐化し得、好ましくは停止させ得；（ｉｖ）腫瘍転移を阻害し得（即ちある程度緩徐化し得、好ましくは停止させ得）；（ｖ）腫瘍増殖を阻害し得；（ｖｉ）腫瘍の発生及び／又は再発を予防し得るか又は遅延させ得；且つ／又は（ｖｉｉ）癌に関連する症状の１つ又は複数をある程度軽減し得る。
【００３５】
「レジメン」という用語は、本明細書で使用する場合、癌を処置するための本発明の化合物の投与及び／又は投与時間決定のためのプロトコルを指す。レジメンには、当技術分野で公知のとおり、積極的投与の期間と休止の期間とを含めることができる。積極的投与期間は、定義された時間経過における本発明の化合物の投与を含み、例えば組成物の投薬の回数及び時間を含む。幾つかのレジメンでは、化合物が積極的に投与されない１回又は複数回の休止期間を含めることができ、場合により、このような化合物の有効性が最小限であり得る期間が含まれる。
【００３６】
本明細書で使用する場合、「併用治療」とは、本発明の化合物が別の治療剤と併用して投与され得ることを指す。「〜と併用して」は、１つの処置様式を別の処置様式に加えて投与すること、例えば同じ対象に対して、本明細書に記載の本発明の化合物を別の治療剤の投与に加えて投与することなどを指す。このため、「〜と併用して」は、対象に１つの処置様式を第２の処置様式の送達前、送達中又は送達後に投与することを指す。
【００３７】
本明細書で使用する場合、「薬学的に許容される」とは、生物学的に又は他の点で不都合でない材料を指し、例えば、その材料は、患者に投与される医薬組成物中に組み入れることができ、重大で望ましくない生物学的影響をもたらさず、それが含有されている組成物の他の構成成分の何れとも害を及ぼすような相互作用をしない。薬学的に許容される担体又は添加剤は、毒性試験及び製造試験の必要な基準を満たしており、且つ／又は米国食品医薬品局（Ｕ．Ｓ．Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）が作成したＩｎａｃｔｉｖｅ  Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ  Ｇｕｉｄｅに含まれる。
【００３８】
「約」という用語は、量及び時間の長さなど、測定可能な値に言及する場合に本明細書で使用され、開示されている方法を実施するために、又は開示されている化合物を作製し、使用するために、且つ特許請求される方法においてそのような変動が適切であるように、特定した値から±２０％又は±１０％、幾つかの実施形態では±５％、幾つかの実施形態では±１％及び幾つかの実施形態では±０．１％の変動を包含するものとする。
【００３９】
癌を処置する方法
本発明は、本発明の化合物が、ヒトの癌の予測となるマウスモデルにおける癌の処置に有効であるという発見に少なくとも部分的に基づいている。したがって、本願は、癌の処置又は予防を、それを必要とする対象において行う方法であって、治療有効量の、化合物１、１−Ｎａ、１−ＤＥＡ、２及び３：
【化７】
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又はその薬学的に許容される塩若しくはアミノ酸抱合体からなる群から選択されるＦＸＲアゴニストを投与するステップを含む方法に関する。一実施形態では、ＦＸＲアゴニストは、化合物１である。一実施形態では、ＦＸＲアゴニストは、化合物１−Ｎａである。別の実施形態では、ＦＸＲアゴニストは、化合物１−ＤＥＡである。一実施形態では、ＦＸＲアゴニストは、化合物２である。一実施形態では、ＦＸＲアゴニストは、化合物３である。
【００４０】
本明細書に記載の方法において、例示的な癌は、肝細胞癌、胆管癌、膵癌、前立腺癌、食道癌、乳癌、胃癌、腎癌、唾液腺癌、卵巣癌、子宮体癌、膀胱癌及び肺癌からなる群から選択される。癌の適切な処置レジメンは、腫瘍が由来する細胞の型、悪性腫瘍のステージ及び重症度並びに腫瘍の一因となっている遺伝的異常に依存する。
【００４１】
癌病期分類システムは、癌の進行程度を示す。一般に、病期分類システムは、癌の広がり具合を表し、予後及び処置が類似している患者を同一の病期分類群に入れる。一般に、浸潤性になった又は転移した腫瘍では予後が思わしくない。病期分類システムの一種において、症例は、ローマ数字のＩ〜ＩＶで表される４つのステージに分類される。ステージＩでは、癌は、限局的であることが多く、通常、治癒可能である。ステージＩＩ及びＩＩＩＡの癌は、通常、より進行しており、周辺組織に浸潤し、リンパ節に広がっている場合がある。ステージＩＶの癌は、リンパ節の外の部位に広がった転移性癌を含む。
【００４２】
別の病期分類システムは、カテゴリー、即ち腫瘍、リンパ節及び転移の略語であるＴＮＭ病期分類である。このシステムでは、悪性腫瘍は、各カテゴリーの重症度に従って表される。例えば、Ｔは、原発腫瘍の程度を０〜４で分類し、０は、浸潤性活性のない悪性腫瘍を表し、４は、原発部位からの広がりによって他の器官に浸潤した悪性腫瘍を表す。Ｎは、リンパ節転移の程度を分類し、０は、リンパ節転移のない悪性腫瘍を表し、４は、広範囲のリンパ節転移のある悪性腫瘍を表す。Ｍは、転移の程度を０と１とに分類し、０は、転移のない悪性腫瘍を表し、１は、転移した悪性腫瘍を表す。
【００４３】
これらの病期分類システム若しくはこれらの病期分類システムの変形又は他の好適な病期分類システムを、腫瘍を表すために使用することができる。癌のステージ及び特徴によっては、癌の処置に利用可能な選択肢はわずかである。処置には、手術、ソラフェニブでの処置及び標的治療が含まれる。一般に、手術は、初期ステージの限局的な癌の処置の第一選択である。さらなる全身的処置は、浸潤性及び転移性の腫瘍を処置するために使用することができる。
【００４４】
本発明の一態様によれば、肝細胞癌（又は悪性ヘパトーマ）を処置する方法が提供される。具体的には、方法は、肝細胞癌を有し、その処置を必要とする対象を治療有効量の本発明の化合物で処置するステップを含む。即ち、本発明は、肝細胞癌を有すると同定又は診断された肝細胞癌患者を処置するための医薬品を製造するための本発明の化合物の使用を対象とする。別の実施形態では、処置方法は、患者を、肝細胞癌を有すると診断又は同定するステップを任意選択により含む。同定された患者は、次に、治療有効量の本発明の化合物で処置されるか又はそれを投与される。肝細胞癌は、超音波、ＣＴスキャン、ＭＲＩ、α−フェトプロテイン検査、デス−γカルボキシプロトロンビンスクリーニング及び生検を含む、当技術分野において公知の任意の従来の診断法で診断することができる。
【００４５】
本発明は、治療抵抗性肝細胞癌を有すると同定された患者を治療有効量の本発明の化合物で処置するステップを含む、治療抵抗性肝細胞癌を処置する方法も提供する。特定の実施形態では、患者は、ソラフェニブ、レゴラフェニブ、アントラサイクリン類（例えば、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシン）、白金製剤（例えば、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ピコプラチン）、５−ＦＵ及びカペシタビンからなる群から選択される１種又は複数の薬物を含む処置に対して治療抵抗性である肝細胞癌を有する。本発明は、治療抵抗性肝細胞癌、例えばソラフェニブ、レゴラフェニブ、アントラサイクリン類（例えば、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシン）、白金製剤（シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ピコプラチン）、５−ＦＵ及びカペシタビンから選択される１種又は複数の薬物に治療抵抗性の肝細胞癌を処置するための医薬品を製造するための本発明の化合物の使用も対象とする。
【００４６】
治療抵抗性肝細胞癌を検出するために、初期処置を受けている患者は、耐性、非応答性又は肝細胞癌の再発の徴候を慎重にモニターされ得る。これは、例えば、ソラフェニブ、レゴラフェニブ、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシン、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ピコプラチン、５−ＦＵ、テガフール及びカペシタビンからなる群から選択される１種又は複数の薬物を含み得る初期処置に対する患者の癌の応答をモニターすることによって実現することができる。初期処置に対する応答、応答の欠如又は癌の再発生は、当技術分野で実施される任意の好適な方法によって判定することができる。例えば、これは、腫瘍サイズ及び腫瘍数の評価によって実現することができる。腫瘍サイズの増大又は代わりに腫瘍数の増加は、腫瘍が化学治療に応答していないか又は再発生が生じたことを示す。判定は、Ｔｈｅｒａｓｓｅ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．９２：２０５−２１６（２０００）に詳述されている「ＲＥＣＩＳＴ」基準に従って行うことができる。
【００４７】
本発明のさらに別の態様によれば、肝細胞癌（又は肝細胞癌）の発症を予防するか若しくは遅延させるか又は肝細胞癌の再発を予防するか若しくは遅延させる方法が提供され、方法は、予防又は遅延を必要とする患者を予防有効量の本発明の化合物で処置するステップを含む。
【００４８】
Ｂ型肝炎又はＣ型肝炎に感染しているか又は肝硬変を有する対象は、肝細胞癌を発症するリスクが高いことが知られている。加えて、急性及び慢性の肝性ポルフィリン症（急性間欠性ポルフィリン症、晩発性皮膚ポルフィリン症、遺伝性コプロポルフィリン症、多様性ポルフィリン症）並びに高チロシン血症Ｉ型を有する人々も肝細胞癌を発症するリスクが高い。これらの人々は、全て予防有効量の本発明の化合物を使用して肝細胞癌の発症を予防するか又は遅延させる本発明の方法に対する候補となり得る。加えて、肝細胞癌の家族歴のある患者を、肝細胞癌の発症を予防するか又は遅延させる本発明の方法の適用のために同定することもできる。肝細胞癌の再発を予防するか又は遅延させるために、処置を受けて寛解期にあるか又は安定状態若しくは進行のない状態にある肝細胞癌患者を予防有効量の本発明の化合物で処置して、肝細胞癌の再発又は再発生を効果的に予防するか又は遅延させることができる。
【００４９】
本開示の一態様によれば、胆管癌（ＣＣＡ）を処置する方法が提供される。具合的には、方法は、胆管癌を有し、その処置を必要とする対象を治療有効量の本発明の化合物で処置するステップを含む。即ち、本発明は、胆管癌を有すると同定又は診断された胆管癌患者を処置するための医薬品を製造するための本発明の化合物の使用を対象とする。別の実施形態では、処置方法は、患者を、胆管癌を有すると診断又は同定するステップを任意選択により含む。同定された患者は、次に、治療有効量の本発明の化合物で処置されるか又はそれを投与される。胆管癌は、超音波、ＣＴスキャン、ＭＲＩ、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）及び糖鎖抗原１９−９（ＣＡ１９−９）スクリーニング並びに生検を含む、当技術分野において公知の任意の従来の診断法で診断することができる。
【００５０】
本発明のさらに別の態様によれば、胆管癌の発症を予防するか若しくは遅延させるか又は胆管癌の再発を予防するか若しくは遅延させる方法が提供され、方法は、予防又は遅延を必要とする患者を予防有効量の本発明の化合物で処置するステップを含む。
【００５１】
胆管癌の再発を予防するか又は遅延させるために、処置を受けて寛解期にあるか又は安定状態若しくは進行のない状態にある胆管癌患者を予防有効量の本発明の化合物で処置して、胆管癌の再発又は再発生を効果的に予防するか又は遅延させることができる。
【００５２】
本発明の別の態様によれば、ＣＣＡ細胞の増殖及び遊走をＦＸＲアゴニストで阻害する方法が提供される。
【００５３】
本発明の別の態様によれば、ＣＣＡ細胞の増殖及び遊走を治療有効量の本発明の化合物で阻害する方法が提供される。本発明の別の態様によれば、ＣＣＡの進行を阻害する方法が提供され、方法は、その阻害を必要とする患者を治療有効量の本発明の化合物で処置するステップを含む。
【００５４】
一実施形態は、治療有効量の本発明の化合物を投与することによって膵癌を処置する方法である。別の実施形態は、治療有効量の本発明の化合物を投与することによって前立腺癌を処置する方法である。別の実施形態は、治療有効量の本発明の化合物を投与することによって腎臓癌を処置する方法である。別の実施形態は、治療有効量の本発明の化合物を投与することによって前立腺癌を処置する方法である。さらに別の実施形態は、治療有効量の本発明の化合物を投与することによって食道癌を処置する方法である。さらに別の実施形態は、治療有効量の本発明の化合物を投与することによって乳癌を処置する方法である。一実施形態は、治療有効量の本発明の化合物を投与することによって胃癌を処置する方法である。別の実施形態は、治療有効量の本発明の化合物を投与することによって腎癌を処置する方法である。さらに別の実施形態は、治療有効量の本発明の化合物を投与することによって唾液腺癌を処置する方法である。さらに別の実施形態は、治療有効量の本発明の化合物を投与することによって卵巣癌を処置する方法である。一実施形態は、治療有効量の本発明の化合物を投与することによって子宮体癌を処置する方法である。別の実施形態は、治療有効量の本発明の化合物を投与することによって膀胱癌を処置する方法である。さらに別の実施形態は、治療有効量の本発明の化合物を投与することによって肺癌を処置する方法である。
【００５５】
本発明の化合物が、本明細書に記載されている癌の処置に有用である場合、このような化合物を第２の薬剤と併用投与することができる。本明細書で提供される癌を処置する方法において有用な第２の薬剤には、任意の既知のクラスの抗癌剤、例えば放射線治療、手術、アルキル化剤、代謝拮抗剤、アントラサイクリン類、カンポテシン類、ビンカアルカロイド類、タキサン類又は白金類及び当技術分野で公知の他の抗新生物剤を含めることができる。このような抗癌剤及び抗新生物剤の分類は、当技術分野において公知であり、その明白な通常の意味に従って使用される。
【００５６】
例示的な抗癌剤としては、以下に限定されるものではないが、アブラキサン；アビラテロン；ａｃｅ−１１；アクラルビシン；アシビシン；アコダゾール塩酸塩；アクロニン；アクチノマイシン；アシルフルベン；アデシペノール；アドゼレシン；アドリアマイシン；アルデスロイキン；ａｌｌ−ｔｒａｎｓ−レチノイン酸（ＡＴＲＡ）；アルトレタミン；アンバムスチン；アンボマイシン；酢酸アメタントロン；アミドックス；アミホスチン；アミノグルテチミド；アミノレブリン酸；アムルビシン；アムサクリン；アナグレリド；アナストロゾール；アンドログラホリド；アンタレリクス；アントラマイシン；グリシン酸アフィジコリン；アプリン酸；ａｒａ−ＣＤＰ−ＤＬ−ＰＴＢＡ；アルギニンデアミナーゼ；ＡＲＲＹ−１６２；ＡＲＲＹ−３００；ＡＲＲＹ−１４２２６６；ＡＳ７０３０２６；アスパラギナーゼ；アスペルリン；アスラクリン；アタメスタン；アトリムスチン；アバスチン；アキシナスタチン１；アキシナスタチン２；アキシナスタチン３；アザセトロン；アザトキシン；アザチロシン；アザシチジン；ＡＺＤ８３３０；アゼテパ；アゾトマイシン；バラノール；バチマスタット；ＢＡＹ  １１−７０８２；ＢＡＹ  ４３−９００６；ＢＡＹ  ８６９７６６；ベンダムスチン；ベンゾクロリンス；ベンゾデパ；ベンゾイルスタウロスポリン；β−アレチン；βクラマイシンＢ；ベツリン酸；ｂ−ＦＧＦ阻害剤；ビカルタミド；ビサントレン；ビスアジリジニルスペルミン；ビスナフィド；ジメシル酸ビスナフィド；ビストラテンＡ；ビサントレン塩酸塩；ブレオマイシン；ブレオマイシン硫酸塩；ブスルファン；ビセレシン；ブレフレート；ボルテゾミブ；ブレキナルナトリウム；ブロピリミン；ブドチタン；ブチオニンスルホキシミン；ブリオスタチン；カクチノマイシン；カルステロン；カルシポトリオール；カルホスチンＣ；カンプトテシン誘導体；カペシタビン；カルボキサミド−アミノ−トリアゾール；カルボキシアミドトリアゾール；ＣａＲｅｓｔ  Ｍ３；ＣＡＲＮ  ７００；カラセミド；カルベチマー；カルボプラチン；カルムスチン；カルビシン塩酸塩；カルゼレシン；カスタノスペルミン；セクロピンＢ；セデフィンゴール；セレコキシブ；セトロレリクス；クロリンス；クロロキノキサリンスルホンアミド；シカプロスト；クロラムブシル；クロロフシン；シロレマイシン；シスプラチン；ＣＩ−１０４０；ｃｉｓ−ポルフィリン；クラドリビン；クロミフェン類似体；クロトリマゾール；コリスマイシンＡ；コリスマイシンＢ；コンブレタスタチンＡ４；コンブレタスタチン類似体；コナゲニン；クラムベシジン８１６；クリスナトール；メシル酸クリスナトール；クリプトフィシン８；クリプトフィシンＡ誘導体；クラシンＡ；シクロペンタアントラキノン類；シクロプラタム（ｃｙｃｌｏｐｌａｔａｍ）；シペマイシン；シクロホスファミド；シタラビン；シタラビンオクホスフェート；細胞溶解因子；サイトスタチン；ダカルバジン；ダクチノマイシン；ダウノルビシン；ダウノルビシン塩酸塩；デカルバジン；ダクリキシマブ；ダサチニブ；デシタビン；デヒドロジデムニンＢ；デスロレリン；デキサメタゾン；デキシホスファミド（ｄｅｘｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）；デキスラ���キサン；デクスベラパミル；デキソルマプラチン；デザグアニン；メシル酸デザグアニン；ジアジコン；ジデムニンＢ；ジドックス；ジエチルノルスペルミン；ジヒドロ５アザシチジン；ジヒドロタキソール；９−ジオキサマイシン；ジフェニルスピロムスチン；ドコサノール；ドラセトロン；ドセタキセル；ドキソルビシン；ドキソルビシン塩酸塩；ドキシフルリジン；ドロロキシフェン；ドロロキシフェンクエン酸塩；プロピオン酸ドロモスタノロン；ドロナビノール；デュアゾマイシン；デュオカルマイシンＳＡ；エブセレン；エコムスチン；エデルホシン；エドレコロマブ；エダトレキサート；エフロルニチン塩酸塩；エフロルニチン；エレメネ；エミテフル；エルサミトルシン；エンロプラチン；エンプロマート；エピプロピジン；エピルビシン；エピルビシン塩酸塩；エプリステリド；エルブロゾール；エリブリン；エソルビシン塩酸塩；エストラムスチン；リン酸エストラムスチンナトリウム；エタニダゾール；エトポシド；リン酸エトポシド；エトプリン；エキセメスタン；ファドロゾール；ファドロゾール塩酸塩；ファザラビン；フェンレチニド；フィルグラスチム；フィナステリド；フラボピリドール；フレゼラスチン；フルアステロン；フロクスウリジン；フルダラビンリン酸エステル；フルダラビン；フルオロダウノルビシン塩酸塩；ホルフェニメックス；ホルメスタン；フルオロウラシル；フロキソウリジン（ｆｌｏｘｏｕｒｉｄｉｎｅ）；フルロシタビン；ホスキドン；ホストリエシンナトリウム；ホストリエシン；ホテムスチン；ガドリニウムテキサフィリン；硝酸ガリウム；ガロシタビン；ガニレリクス；ゼラチナーゼ阻害剤；ゲムシタビン；ゲルダナマイシン；ゴシポール；ＧＤＣ−０９７３；ＧＳＫ１１２０２１２／トラメチニブ；ハーセプチン；ヒドロキシウレア；ヘプスルファム；ヘレグリン；ヘキサメチレンビスアセトアミド；ヒペリシン；イバンドロン酸；イブルチニブ；イダルビシン；イダルビシン塩酸塩；イホスファミド；カンホスファミド；イルモホシン；イプロプラチン；イドキシフェン；イドラマントン；イルモホシン；イロマスタット；イミダゾアクリドン類；イマチニブ（例えば、グリベック）；イミキモド；イニパリブ（ＢＳＩ  ２０１）；ヨーベングアン；ヨードドキソルビシン；イポメアノール；イリノテカン；イリノテカン塩酸塩；イルソグラジン；イソベンガゾール（ｉｓｏｂｅｎｇａｚｏｌｅ）；イソホモハリコンドリンＢ；イタセトロン；イイモホシン（ｉｉｍｏｆｏｓｉｎｅ）；インターロイキンＩＬ−２（組換えインターロイキンＩＩ；又はｒｌＬ．ｓｕｂ．２を含む）；インターフェロンアルファ−２ａ；インターフェロンアルファ−２ｂ；インターフェロンアルファ−ｎ１；インターフェロンアルファ−ｎ３；インターフェロンベータ−１ａ；インターフェロンガンマ−１ｂ；ジャスプラキノリド；カハラリドＦ；ラメラリンＮトリアセテート；ランレオチド；レイナマイシン；レノグラスチム；硫酸化レンチナン；レプトルスタチン；レトロゾール；リュープロレリン；レバミソール；レナリドミド；レンバチニブ；リアロゾール；リッソクリナミド７；ロバプラチン；ロンブリシン；ロメトレキソール；ロニダミン；ロソキサントロン；ロ��スタチン；ロキソリビン；ルルトテカン；ルテチウムテキサフィリン；リソフィリン（ｌｙｓｏｆｙｌｌｉｎｅ）；ランレオチド酢酸塩；ラパチニブ；レトロゾール；ロイコボリン；酢酸ロイプロリド；リアロゾール塩酸塩；ロメトレキソールナトリウム；ロムスチン；ロソキサントロン塩酸塩；ポマリドミド；ＬＹ２９４００２；マイタンシン；マンノスタチンＡ；マリマスタット；マソプロコール；マスピン；マトリライシン阻害剤；メノガリル；メルバロン；メテレリン；メチオニナーゼ；メトクロプラミド；ＭＩＦ阻害剤；ミフェプリストン；ミルテホシン；ミリモスチム；ミトグアゾン；ミトラクトール；ミトナフィド；ミトキサントロン；モファロテン；モルグラモスチム；モピダモール；ミカペルオキシドＢ；ミリアポロン；メイタンシン；メクロレタミン塩酸塩；酢酸メゲストロール；酢酸メレンゲストロール；メルファラン；メルカプトプリン；メトトレキサート；メトトレキサートナトリウム；メトプリン；メツレデパ；ミチンドミド；ミトカルシン；ミトクロミン；ミトギリン；ミトマルシン；マイトマイシン；ミトスペル；ミトタン；ミトキサントロン塩酸塩；ミコフェノール酸；ナファレリン；ナグレスチプ（ｎａｇｒｅｓｔｉｐ）；ナパビン；ナフテルピン；ナルトグラスチム；ネダプラチン；ネモルビシン；ネリドロン酸；ニルタミド；ニサマイシン；一酸化窒素モジュレーター；ニトロキシド抗酸化剤；ニトルリン（ｎｉｔｒｕｌｌｙｎ）；ノコダゾール；ノガラマイシン；オブリメルセン（ゲナセンス）；オクトレオチド；オキセノン；オラパリブ（リムパーザ）；オリゴヌクレオチド類；オナプリストン；オンダンセトロン；オラシン；経口サイトカイン誘導剤；オルマプラチン；オキシスラン；オキサロプラチン；オサテロン；オキサリプラチン；オキサウノマイシン；パラウアミン；パルミトイルリゾキシン；パミドロン酸；パナキシトリオール；パノミフェン；パラバクチン；ＰＡＲＰ（ポリＡＤＰリボースポリメラーゼ）阻害剤；パゼリプチン；ペガスパルガーゼ；ペルデシン；ペントサンポリ硫酸ナトリウム；ペントスタチン；ペントロゾール（ｐｅｎｔｒｏｚｏｌｅ）；ペルフルブロン；ペルホスファミド；ペリリルアルコール；フェナジノマイシン；フェニルアセテート；ホスファターゼ阻害剤；ピシバニール；ピロカルピン塩酸塩；ピラルビシン；ピリトレキシム；プラセチンＡ；プラセチンＢ；ポルフィロマイシン；プレドニゾン；プロスタグランジンＪ２；ピラゾロアクリジン；パクリタキセル；ＰＤ０３５９０１；ＰＤ１８４３５２；ＰＤ３１８０２６；ＰＤ９８０５９；ペリオマイシン；ペンタムスチン；ペプロマイシン硫酸塩；ＰＫＣ４１２；ピポブロマン；ピポスルファン；ピロキサントロン塩酸塩；プリカマイシン；プロメスタン；ポドフィロトキシン；ポリフェノールＥ；ポルフィマーナトリウム；ポルフィロマイシン；プレドニムスチン；プロカルバジン；プロカルバジン塩酸塩；ピューロマイシン；ピューロマイシン塩酸塩；ピラゾフリン；ラルチトレキセド；ラモセトロン；脱メチル化レテリプチン；リゾキシン；リツキシマブ；ＲＩＩレチンアミド；ログレチミド；ロヒツキン；ロムルチド；ロキニメクス；ルビギノンＢ１；ルボキシル；リボプリ��；ロミデプシン；ルカパリブ；サフィンゴール；サフィンゴール塩酸塩；サイントピン；サルコフィトールＡ；サルグラモスチム；セムスチン；シゾフィラン；ソブゾキサン；ナトリウムボロカプテート；フェニル酢酸ナトリウム；ソルベロール（ｓｏｌｖｅｒｏｌ）；ソネルミン；ソラフェニブ；スニチニブ；スパルホス酸；スピカマイシンＤ；スピロムスチン；スプレノペンチン；スポンギスタチン１；スポンギスタチン２；スポンギスタチン３；スポンギスタチン４；スポンギスタチン５；スポンギスタチン６；スポンギスタチン７；スポンギスタチン８；及びスポンギスタチン９；スクアラミン；スチピアミド；ストロメライシン阻害剤；スルフィノシン；スラジスタ；スラミン；スワインソニン；ＳＢ２３９０６３；セルメチニブ／ＡＺＤ６２４４；シムトラゼン；ＳＰ６００１２５；スパルホセートナトリウム；スパルソマイシン；スピロゲルマニウム塩酸塩；スピロプラチン；ストレプトニグリン；ストレプトゾシン；スロフェヌル；タリムスチン；タモキシフェンメチオジド；タラゾパリブ（ＢＭＮ  ６７３）；タウロムスチン；タザロテン；テコガランナトリウム；テガフール；テルラピリリウム；テモポルフィン；テモゾロミド；テニポシド；テトラクロロデカオキシド；テトラゾミン；タリブラスチン；チオコラリン；トロンボポエチン；サイマルファシン；サイモポエチン受容体アゴニスト；サイモトリナン；チラパザミン；チタノセン二塩化物；トプセンチン；トレミフェン；トレチノイン；トリアセチルウリジン；トリシリビン；トリメトレキサート；トリプトレリン；トロピセトロン；ツロステリド；チルホスチン類；タリソマイシン；ＴＡＫ−７３３；タキソテール；テガフール；テロキサントロン塩酸塩；テロキシロン；テストラクトン；チアミプリン；チオグアニン；チオテパ；チアゾフリン；チラパザミン；トレミフェンクエン酸塩；トラスツズマブ；トレストロンアセテート；リン酸トリシリビン；トリメトレキサート；グルクロン酸トリメトレキサート；トリプトレリン；ツブロゾール塩酸塩；腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘発リガンド（ＴＲＡＩＬ）；ＵＢＣ阻害剤；ウベニメクス；Ｕ０１２６；ウラシルマスタード；ウレデパ；バプレオチド；バリオリンＢ；ベラレソール；ベリパリブ（ＡＢＴ−８８８）；ベラミン；ベルテポルフィン；ビノレルビン；ビンキサルチン（ｖｉｎｘａｌｔｉｎｅ）；ビタキシン；ビンブ
ラスチン；硫酸ビンブラスチン；硫酸ビンクリスチン；ビンデシン；硫酸ビンデシン；硫酸ビネピジン；硫酸ビングリシネート；硫酸ビンロイロシン；ビノレルビン酒石酸塩；硫酸ビンロシジン；硫酸ビンゾリジン；ボロゾール；ウォルトマンニン；ＸＬ５１８；ザノテロン；ゼニプラチン；ジラスコルブ；ジノスタチンスチマラマー；ジノスタチン；及びゾルビシン塩酸塩が挙げられる。
【００５７】
他の例示的な抗癌剤としては、エルブロゾール（例えば、Ｒ−５５１０４）；ドラスタチン１０（例えば、ＤＬＳ−１０及びＮＳＣ−３７６１２８）；イセチオン酸ミボブリン（例えば、ＣＩ−９８０）；ＮＳＣ−６３９８２９；ジスコデルモリド（例えば、ＮＶＰ−ＸＸ−Ａ−２９６）；ＡＢＴ−７５１（Ａｂｂｏｔｔ；例えば、Ｅ−７０１０）；アルトルヒルチン（Ａｌｔｏｒｈｙｒｔｉｎ）Ａ；アルトルヒルチン（Ａｌｔｏｒｈｙｒｔｉｎ）Ｃ；セマドチン塩酸塩（例えば、ＬＵ−１０３７９３及びＮＳＣ−Ｄ−６６９３５６）；ＣＥＰ９７２２；エポチロンＡ；エポチロンＢ；エポチロンＣ；エポチロンＤ；エポチロンＥ；エポチロンＦ；エポチロンＢ  Ｎ−オキシド；エポチロンＡ  Ｎ−オキシド；１６−アザ−エポチロンＢ；２１−アミノエポチロンＢ；２１−ヒドロキシエポチロンＤ；２６−フルオロエポチロン；アウリスタチンＰＥ（例えば、ＮＳＣ−６５４６６３）；ソブリドチン（例えば、ＴＺＴ−１０２７）；ＬＳ−４５５９−Ｐ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ；例えば、ＬＳ−４５７７）；ＬＳ−４５７８（Ｐｈａｒｍａｃｉａ；例えば、ＬＳ−４７７−Ｐ）；ＬＳ−４４７７（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）；ＬＳ−４５５９（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）；ＲＰＲ−１１２３７８（Ａｖｅｎｔｉｓ）；ＤＺ−３３５８（第一三共株式会社）；ＦＲ−１８２８７７（藤沢薬品工業株式会社；例えば、ＷＳ−９２６５Ｂ）；ＧＳ−１６４（武田薬品工業株式会社）；ＧＳ−１９８（武田薬品工業株式会社）；ＫＡＲ−２（Ｈｕｎｇａｒｉａｎ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）；ＢＳＦ−２２３６５１（ＢＡＳＦ；例えば、ＩＬＸ−６５１及びＬＵ−２２３６５１）；ＳＡＨ−４９９６０（Ｌｉｌｌｙ／Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；ＳＤＺ−２６８９７０（Ｌｉｌｌｙ／Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；ＡＭ−９７（Ａｒｍａｄ／協和発酵キリン株式会社）；ＡＭ−１３２（Ａｒｍａｄ）；ＡＭ−１３８（Ａｒｍａｄ／協和発酵キリン株式会社）；ＩＤＮ−５００５（Ｉｎｄｅｎａ）；クリプトフィシン５２（例えば、ＬＹ−３５５７０３）；ＡＣ−７７３９（味の素製薬株式会社；例えば、ＡＶＥ−８０６３Ａ及びＣＳ−３９．ＨＣｌ）；ＡＣ−７７００（味の素製薬株式会社；例えば、ＡＶＥ−８０６２；ＡＶＥ−８０６２Ａ；ＣＳ−３９−Ｌ−Ｓｅｒ．ＨＣｌ；及びＲＰＲ−２５８０６２Ａ）；ビチレブアミド（Ｖｉｔｉｌｅｖｕａｍｉｄｅ）；ツブリシンＡ；カナデンソール；ＣＡ−１７０（Ｃｕｒｉｓ，Ｉｎｃ．）；センタウレイジン（例えば、ＮＳＣ−１０６９６９）；Ｔ−１３８０６７（Ｔｕｌａｒｉｋ；例えば、Ｔ−６７；ＴＬ−１３８０６７及びＴＩ−１３８０６７）；ＣＯＢＲＡ−１（Ｐａｒｋｅｒ  Ｈｕｇｈｅｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ；例えば、ＤＤＥ−２６１及びＷＨＩ−２６１）；Ｈ１０（Ｋａｎｓａｓ  Ｓｔａｔｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）；Ｈ１６（Ｋａｎｓａｓ  Ｓｔａｔｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）；オンコシジンＡ１（例えば、ＢＴＯ−９５６及びＤＩＭＥ）；ＤＤＥ−３１３（Ｐａｒｋｅｒ  Ｈｕｇｈｅｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）；フィジアノリドＢ；ラウリマリド；ＳＰＡ−２（Ｐａｒｋｅｒ  Ｈｕｇｈｅｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）；ＳＰＡ−１（Ｐａｒｋｅｒ  Ｈｕｇｈｅｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ；例え��、ＳＰＩＫＥＴ−Ｐ）；３−ＩＡＡＢＵ（Ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ／Ｍｔ．Ｓｉｎａｉ  Ｓｃｈｏｏｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ；例えば、ＭＦ−５６９）；ナルコシン（例えば、ＮＳＣ−５３６６）；ナスカピン（Ｎａｓｃａｐｉｎｅ）；Ｄ−２４８５１（Ａｓｔａ  Ｍｅｄｉｃａ）；Ａ−１０５９７２（Ａｂｂｏｔｔ）；ヘミアステルリン；３−ＢＡＡＢＵ（Ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ／Ｍｔ．Ｓｉｎａｉ  Ｓｃｈｏｏｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ；例えば、ＭＦ−１９１）；ＴＭＰＮ（Ａｒｉｚｏｎａ  Ｓｔａｔｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）；バナドセンアセチルアセトネート；Ｔ−１３８０２６（Ｔｕｌａｒｉｋ）；モンサトロール（Ｍｏｎｓａｔｒｏｌ）；イナノシン（ｌｎａｎｏｃｉｎｅ）（例えば、ＮＳＣ−６９８６６６）；３−ＩＡＡＢＥ（Ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ／Ｍｔ．Ｓｉｎａｉ  Ｓｃｈｏｏｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）；Ａ−２０４１９７（Ａｂｂｏｔｔ）；Ｔ−６０７（Ｔｕｌａｒｉｋ；例えば、Ｔ−９００６０７）；ＲＰＲ−１１５７８１（Ａｖｅｎｔｉｓ）；エロイテロビン類（例えば、デスメチルエロイテロビン；デスアエチルエロイテロビン（Ｄｅｓａｅｔｙｌｅｌｅｕｔｈｅｒｏｂｉｎ）；イソエロイテロビンＡ；及びＺ−エロイテロビン）；カリベオシド；カリベオリン；ハリコンドリンＢ；Ｄ−６４１３１（Ａｓｔａ  Ｍｅｄｉｃａ）；Ｄ−６８１４４（Ａｓｔａ  Ｍｅｄｉｃａ）；ジアゾナミドＡ；Ａ−２９３６２０（Ａｂｂｏｔｔ）；ＮＰＩ−２３５０（Ｎｅｒｅｕｓ）；タッカロノリドＡ；ＴＵＢ−２４５（Ａｖｅｎｔｉｓ）；Ａ−２５９７５４（Ａｂｂｏｔｔ）；ジオゾスタチン（Ｄｉｏｚｏｓｔａｔｉｎ）；（−）−フェニルアヒスチン（例えば、ＮＳＣＬ−９６Ｆ０３７）；Ｄ−６２６３８（Ａｓｔａ  Ｍｅｄｉｃａ）；Ｄ−６２６３６（Ａｓｔａ  Ｍｅｄｉｃａ）；ミオセベリンＢ；Ｄ−４３４１１（Ｚｅｎｔａｒｉｓ；例えば、Ｄ−８１８６２）；Ａ−２８９０９９（Ａｂｂｏｔｔ）；Ａ−３１８３１５（Ａｂｂｏｔｔ）；ＨＴＩ−２８６（例えば、ＳＰＡ−１１０；トリフルオロ酢酸塩）（Ｗｙｅｔｈ）；Ｄ−８２３１７（Ｚｅｎｔａｒｉｓ）；Ｄ−８２３１８（Ｚｅｎｔａｒｉｓ）；ＳＣ−１２９８３（ＮＣＩ）；レスベラスタチンリン酸ナトリウム；ＢＰＲ−ＯＹ−００７（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ）；及びＳＳＲ−２５０４１１（Ｓａｎｏｆｉ））；ゴセレリン；ロイプロリド；トリプトリド；ホモハリングトニン；トポテカン；イトラコナゾール；デオキシアデノシン；セルトラリン；ピタバスタチン；クロファミジン；５−ノニルオキシトリプタミン；ベムラフェニブ；ダブラフェニブ；ゲフィチニブ（イレッサ）；エルロチニブ（タルセバ）；セツキシマブ（アービタックス）；ラパチニブ（タイケルブ）；パニツムマブ（ベクティビックス）；バンデタニブ（カプレルサ）；アファチニブ／ＢＩＢＷ２９９２；ＣＩ−１０３３／カネルチニブ；ネラチニブ／ＨＫＩ−２７２；ＣＰ−７２４７１４；ＴＡＫ−２８５；ＡＳＴ−１３０６；ＡＲＲＹ３３４５４３；ＡＲＲＹ−３８０；ＡＧ−１４７８；ダコミチニブ／ＰＦ２９９８０４；ＯＳＩ−４２０／デスメチルエルロチニブ；ＡＺＤ８９３１；ＡＥＥ７２６；ペリチニブ／ＥＫＢ−５６９；ＣＵＤＣ−１０１；ＷＺ８０４０；ＷＺ４００２；ＷＺ３１４６；ＡＧ−４９０；ＸＬ６４７；ＰＤ１５３０３５；５−アザチオプリン；５−アザ−２’−デオキシシチジン；１７−Ｎ−アリルアミノ−１７−デメトキシゲルダナマイシン（１７−ＡＡＧ）；２０−エピ−１，２５ジヒドロキシビタミンＤ３；５エチニルウラシル；並びにＢＭＳ−５９９６２６が挙げられる。
【００５８】
一実施形態は、本発明の化合物をカペシタビン及び／又はＰＬＸ４０３２（Ｐｌｅｘｘｉｋｏｎ）と併用して投与することにより、肝細胞癌（任意選択により治療抵抗性）の患者を処置する方法である。
【００５９】
別の実施形態は、本発明の化合物をカペシタビン、ゼローダ及び／又はＣＰＴ−１１を併用して投与することにより、肝細胞癌（任意選択により治療抵抗性）を処置する方法である。
【００６０】
別の実施形態は、本発明の化合物をカペシタビン、ゼローダ及び／又はＣＰＴ−１１と併用して投与することにより、肝細胞癌（任意選択により治療抵抗性）を処置する方法である。
【００６１】
別の実施形態は、本発明の化合物をカペシタビン及びイリノテカンと併用して投与することにより、肝細胞癌（任意選択により治療抵抗性）の患者又は切除不能な若しくは転移性の肝細胞癌の患者を処置する方法である。
【００６２】
別の実施形態は、本発明の化合物をインターフェロンアルファ又はカペシタビンと併用して投与することにより、切除不能な又は転移性の肝細胞癌の患者を処置する方法である。
【００６３】
別の実施形態は、本発明の化合物をゲムシタビンと併用して投与することにより、膵癌の患者を処置する方法である。
【００６４】
実施形態の１つは、本発明の化合物を別の１種の薬剤又は複数の薬剤若しくはそれらの組合せと併用して投与することにより、ＣＣＡの患者を処置する方法である。
【００６５】
実施形態の１つは、本発明の化合物をゲムシタビン、シスプラチン又はそれらの組合せと併用することにより、ＣＣＡの患者を処置する方法である。
【００６６】
医薬組成物
「医薬組成物」とは、本発明の化合物を対象への投与に好適な形態で含有する製剤である。一実施形態では、医薬組成物は、バルク又は単位剤形である。投与を容易にし、投与量を均一にするために、組成物を投薬単位形に製剤化することが有利であり得る。投薬単位形の仕様は、活性試薬に特有の特徴及び実現されるべき特定の治療効果によって決定され、それらに直接依存する。
【００６７】
候補の製剤としては、経口、舌下、バッカル、非経口（例えば、皮下、筋肉内又は静脈内）、経直腸、局所（経皮を含む）、鼻腔内及び吸入の各投与に好適なものが挙げられる。特定の患者に対する最適な投与手段は、処置される疾患の性質及び重症度又は使用される治療の性質及び活性化合物の性質に依存することになるが、可能な場合、経口投与を癌の予防及び処置に使用し得る。経口投与に好適な製剤は、錠剤、カプセル剤、カシェ剤、トローチ剤など、各々が所定量の活性化合物を含有する別個の単位として、散剤若しくは顆粒剤として、水性若しくは非水性液中の溶液剤若しくは懸濁剤として又は水中油若しくは油中水の乳剤として提供され得る。
【００６８】
舌下又はバッカル投与に好適な製剤としては、本発明の化合物と、通常、糖及びアラビアゴム又はトラガントなどの香味基剤とを含むトローチ剤並びに活性化合物をゼラチン及びグリセリン又はスクロースアラビアゴムなどの不活性基剤中に含むパステル剤が挙げられる。
【００６９】
非経口投与に好適な製剤は、通常、所定濃度の活性化合物を含有する滅菌水溶液を含み、この溶液は、対象とするレシピエントの血液と等張とすることができる。非経口投与に好適な別の製剤には、生理学的に好適な共溶媒並びに／又は界面活性剤及びシクロデキストリンなどの錯化剤を含有する製剤が含まれる。水中油乳剤も非経口製剤に好適な製剤である。このような溶液は、静脈内に投与することができるが、皮下注射又は筋肉内注射によって投与することもできる。
【００７０】
経直腸投与に好適な製剤は、本発明の化合物を、坐剤基剤を形成する１種又は複数の固体担体、例えばカカオ脂などの中に含む単位用量の坐剤として提供され得る。
【００７１】
局所適用又は鼻腔内適用に好適な製剤としては、軟膏剤、クリーム剤、ローション剤、ペースト剤、ゲル剤、スプレー剤、エアゾール剤及び油剤が挙げられる。このような製剤に好適な担体としては、ワセリン、ラノリン、ポリエチレングリコール、アルコール及びこれらの組合せが挙げられる。
【００７２】
本発明の製剤は、任意の好適な方法によって（通常、本発明の化合物を液体若しくは微粉化固体担体又はその両方と必要な割合で均一及び緊密に混合し、次いで必要に応じて、得られた混合物を所望の形状に成形することによって）調製することができる。
【００７３】
例えば、錠剤は、粉末又は顆粒の活性成分と、１種又は複数の任意選択の成分、例えば結合剤、滑沢剤、不活性希釈剤又は界面活性分散剤などとを含む均質混合物を圧縮することにより、又は粉末化活性成分と不活性液体希釈剤との均質混合物を鋳型成形することにより調製することができる。吸入による投与に好適な製剤には、様々な種類の定量加圧エアゾール、噴霧器又は吸入器を用いて生成することができる微粒子粉剤又はミスト剤が含まれる。
【００７４】
経口による肺内投与では、粉末又は液滴の粒径は、気管支樹内への送達を確実にするために、通常、約０．５〜１０μｍ又は１〜５μｍの範囲である。鼻腔投与では、鼻腔内での滞留を確実にするために、約１０〜５００μｍの範囲の粒径を使用することができる。
【００７５】
定量吸入器は、典型的には、本発明の化合物を液化噴射剤に入れた懸濁製剤又は溶液製剤を含有する加圧エアゾールディスペンサーである。使用時、これらのデバイスは、計量された体積、通常、約１０〜１５０μｍを送達するようになされたバルブを通して製剤を吐出して、活性成分を含有する微粒子スプレーを生成する。好適な噴射剤としては、一定のクロロフルオロカーボン化合物、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン及びこれらの混合物が挙げられる。製剤は、１種又は複数の共溶媒、例えばオレイン酸又はトリオレイン酸ソルビタンなどのエタノール界面活性剤、抗酸化剤及び好適な香味剤をさらに含有し得る。
【００７６】
噴霧器は、圧縮ガス（通常、空気又は酸素）を狭いベンチュリオリフィスに通して加速することにより又は超音波撹拌により、活性成分の溶液又は懸濁液を治療用エアゾールミストに変換する市販のデバイスである。噴霧器中での使用に好適な製剤は、液体担体に入れた活性成分からなり、製剤の約４０％ｗ／ｗまでを含み、約２０％ｗ／ｗ未満を含み得る。担体は、通常、水又は希釈水性アルコール溶液であり、好ましくは例えば塩化ナトリウムを添加して体液と等張にされている。任意選択の添加物としては、製剤が滅菌に調製されていない場合には防腐剤（例えばヒドロキシ−安息香酸メチル）、抗酸化剤、香味剤、揮発性油、緩衝剤及び界面活性剤が挙げられる。
【００７７】
通気法による投与に好適な製剤としては、吸入器を用いて又は鼻から吸い込む方法で鼻腔内に取り込まれて送達され得る微粉砕粉末が挙げられる。吸入器中において、粉末は、通常、ゼラチン又はプラスチックで作製されたカプセル又はカートリッジ内に含有されており、カプセル又はカートリッジは、その場で孔を開けられるか又は開封され、吸入すると又は手動操作のポンプを用いると、引き込まれてデバイスを通過する空気によって粉末が送達される。吸入器中に使用される粉末は、専ら活性成分のみ又は活性成分と、ラクトースなどの好適な粉末希釈剤と、任意選択の界面活性剤とを含む粉末ブレンドの何れかからなる。活性成分は、通常、製剤の約０．１〜１００％ｗ／ｗを構成する。
【００７８】
さらなる実施形態では、本発明は、活性成分として本発明の化合物を少なくとも１種の医薬担体又は希釈剤と合わせて及び／又はそれらと混合して含む医薬組成物を提供する。
【００７９】
担体は、薬学的に許容され、組成物中の他の成分と適合性がなければならず、即ち組成物中の他の成分に悪影響を及ぼしてはならない。担体は、固体又は液体であり得、好ましくは単位用量製剤、例えば約０．０５〜９５重量％の活性成分を含有することができる錠剤として製剤化される。所望の場合、他の生理学的に活性な成分も本発明の医薬組成物中に組み入れ得る。
【００８０】
上記で具体的に述べた成分に加えて、本発明の製剤は、対象の製剤のタイプに配慮した上で、薬学分野の当業者に公知の他の薬剤を含み得る。例えば、経口投与に好適な製剤は香味剤を含み得、鼻腔内投与に好適な製剤は、香料を含み得る。
【００８１】
一実施形態では、医薬組成物は、本発明の化合物を約０．１〜１５００ｍｇ、０．２〜１２００ｍｇ、０．３〜１０００ｍｇ、０．４〜８００ｍｇ、０．５〜６００ｍｇ、０．６〜５００ｍｇ、０．７〜４００ｍｇ、０．８〜３００ｍｇ、１〜２００ｍｇ、１〜１００ｍｇ、１〜５０ｍｇ、１〜３０ｍｇ、４〜２６ｍｇ、５〜２５ｍｇ又は５〜１０ｍｇの１日総量で含む剤形で投与される。
【００８２】
本発明の化合物は、肝細胞癌を処置する他の薬物（抗癌性の化学治療薬、ホルモン類、生物学的応答調節物質及び他の血管新生阻害剤など）と併用して又は免疫治療若しくは遺伝子治療と併用して使用することができる。
【実施例】
【００８３】
実施例１．化合物１の合成
化合物１は、当技術分野において公知の方法（例えば、米国特許第７，９３２，２４４号明細書に記載の方法）によって調製することができる。例えば、化合物１は、スキーム１に示され、国際公開第２０１４／０６６８１９号パンフレットに開示されているプロセスによって調製することができる。
【化８】
2020510009.tif 000010
【００８４】
ステップ１は、化合物２をエステル化して、化合物４を得るステップである。ステップ２は、化合物４から化合物５を形成する反応である。ステップ３は、化合物５のＣ３位のヒドロキシ基を保護して、化合物６を得るステップである。ステップ４は、化合物６の酸化的開裂により化合物７を得るステップである。ステップ５は、化合物７を還元して化合物８を得るステップである。ステップ６は、化合物８をスルホン化して、化合物１のナトリウム塩（１−Ｎａ）を得るステップである。化合物１のナトリウム塩は、当技術分野において公知の手順に従い、その遊離酸形態（即ち化合物１）又は他の塩形態（例えば、化合物１−ＤＥＡ又は化合物１のＮ，Ｎ−ジエタンアミン塩）に変換することができる。
【００８５】
実施例２．化合物２の合成
化合物２は、従来の方法（例えば、米国特許出願公開第２００９／００６２５２６号明細書、米国特許第７，１３８，３９０号明細書及び国際公開第２００６／１２２９７７号パンフレットに記載の方法）により、例えば以下のスキーム２に示される生成物化合物１（オベチコール酸又はＯＣＡ）に続く６ステップの合成によって調製することができる。
【化９】
2020510009.tif 000011
【００８６】
上記プロセスは、６ステップの合成である。ステップ１は、酸性触媒及び熱の存在下でメタノールを使用して、７−ケトリトコール酸（ＫＬＣＡ）のＣ−２４カルボン酸をエステル化し、メチルエステル化合物７を生成するステップである。ステップ２は、強塩基を使用し、次いでクロロシランで処理することによって化合物ａから化合物８を生成するシリルエノールエーテル形成である。ステップ３は、化合物８のシリルエノールエーテルとアセトアルデヒドとをアルドール縮合反応させて化合物１０を生成するステップである。ステップ４は、化合物１０のＣ−２４メチルエステルを鹸化して化合物１１を生成するステップである。ステップ５は、化合物１１の６−エチリデン部分を水素化して化合物１２を生成するステップである。ステップ６は、化合物１２の７−ケト基を７α−ヒドロキシ基に選択的に還元して化合物１を生成するステップである。
【００８７】
実施例３．Ｍｄｒ２−／−マウス及びＦＸＲ−／−マウスにおける肝臓癌形成
多剤耐性タンパク質２（Ａｂｃｂ４）は、ＡＴＰ結合カセット（ＡＢＣ）トランスポーターのスーパーファミリーのメンバーである。多剤耐性タンパク質２遺伝子ノックアウトマウス（Ｍｄｒ２−／−）は、自然発症型肝臓癌形成のインビボモデルになる（Ｋａｔｚｅｎｅｌｌｅｎｇｏｂｅｎ，ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００７，５，１１，１１５９−１１７０）。多剤耐性タンパク質２遺伝子によってコードされるＡｂｃ４タンパク質を欠損しているマウスは、慢性の胆管周囲性炎症及び胆汁うっ滞性肝疾患を発症し、その結果、肝細胞癌を発症する。
【００８８】
ファルネソイドＸ受容体タンパク質（ＦＸＲ）は、胆汁酸ホメオスタシスを調節する胆汁酸センサーとして機能する核内受容体である。この受容体は、肝臓及び他の器官において高度に発現する。ＦＸＲノックアウト（ＦＸＲ−／−）マウスは、１５カ月齢後に肝細胞腺腫及び肝細胞癌を発症する（Ｙａｎｇ，ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，２００７，６７，８６３）。
【００８９】
Ｍｄｒ２−／−マウス及びＦＸＲ−／−マウスにおける肝細胞癌の発症に対するＯＣＡ、化合物１−Ｎａ及び対照飼料の影響を評価した。ＯＣＡは、ＦＸＲアゴニストであり、化合物１−Ｎａは、ＦＸＲ／ＴＧＲ５デュアルアゴニストである。化合物１−ＮａのＦＸＲに対する効力は、ＯＣＡより約１０倍強力である。
【００９０】
試験設計
Ｍｄｒ２−／−マウス及びＦＸＲ−／−マウスを無作為に３つの実験群に分けた。マウスに、特定の齧歯類用飼料、即ちＯＣＡ、化合物１−Ｎａ又は対照飼料を添加した飼料を１５カ月間与えた。全てのマウスを、温度調節した部屋（２３℃）において、１２時間の明／暗周期で、病原体が存在しない条件のもとで飼育し、自由飲水させた。バーリ大学の倫理委員会（Ｅｔｈｉｃａｌ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｂａｒｉ）がこの実験構成を承認し、この実験構成は、国際的に認められた動物飼育のためのガイドラインに従ってイタリア保健省（Ｉｔａｌｉａｎ  Ｍｉｎｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ）にも認可された。１６カ月後、マウスを処分し、血清、肝臓及び腸を採取した。肝腫瘍の総数を計数し、各腫瘍の直径を測定した。
【００９１】
処置群
群１：対照飼料
マウス（ｎ＝４）に対照飼料を１５カ月間与えた。
群２：ＯＣＡ
マウス（ｎ＝８）に、ＯＣＡを１０ｍｇ／ｋｇの用量で添加した対照飼料を１５カ月間与えた。
群３：化合物１−Ｎａ
マウス（ｎ＝１５）に、化合物１−Ｎａを１０ｍｇ／ｋｇの用量で添加した対照飼料を１５カ月間与えた。
【００９２】
結果
Ｍｄｒ２−／−マウスにおいて胆汁酸塩によって引き起こされる肝臓炎症及び毒性により、肝細胞異形成が発症する。１６カ月齢までにほぼ１００％のＭｄｒ２−／−対照マウスが肝臓腫瘍を発症した。１６カ月齢のＦＸＲ−／−マウスは、自然発症型肝細胞癌を発症した。
【００９３】
腫瘍の減少及びサイズ
図１Ａ及び２Ａは、Ｍｄｒ２−／−マウスにおける腫瘍数の減少に対する化合物１−Ｎａ、ＯＣＡ及び対照の影響を示す。化合物１−Ｎａは、この試験において、対照と比較して肝細胞癌の発症を明らかに予防した。統計的有意性は、化合物１−Ｎａ群についてほぼ観察された（ｐ＝０．０５５）が、この試験に使用した対照動物の数が少ない（ｎ＝２）ために達成されなかった。Ｍｄｒ２−／−対照マウス及びＯＣＡで処置したマウスには、明らかに特定可能な肝臓腫瘍が認められたが、化合物１−Ｎａ群に認められたのは、微小腫瘍であった。図１Ｂ及び２Ｂは、直径５ｍｍを超える腫瘍のパーセント減少に対する化合物１−Ｎａ、ＯＣＡ及び対照の影響を示す。ＯＣＡ群及び対照群で認められた腫瘍のほぼ８０％は、Ｍｄｒ２−／−マウスにおいて直径が５ｍｍを超えた。反対に、化合物１−Ｎａ、ＯＣＡ及び対照で処置されたＦＸＲ−／−マウスには、幾つかの大型の肝臓腫瘍が認められ、これは、肝細胞癌の発症の予防がほとんどＦＸＲに依存していることを示す（図３Ａ、３Ｂ及び４）。
【００９４】
肝重量／体重（ＬＷ／ＢＷ）
図５Ａ及び５Ｂは、肝重量及び体重のパーセント比に対する化合物１−Ｎａ及び対照の影響を説明する。以前に生成したデータと一致し、化合物１−Ｎａで処置したＭｄｒ２−／−マウスは、対照及びＯＣＡで処置したＭｄｒ２−／−マウスと比較してＬＷ／ＢＷ比が有意に減少した。ＦＸＲ−／−群では、ＬＷ／ＢＷ比の差は、観察されなかった。
【００９５】
生化学的パラメータ
Ｍｄｒ２−／−マウス及びＦＸＲ−／−マウスにおける肝損傷を評価するために、肝臓酵素であるアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）のレベルに対する化合物１−Ｎａ及び対照の影響を分析した。図６Ａ及び６Ｂに示されるように、化合物１−Ｎａでの処置により、Ｍｄｒ２−／−マウスにおいてＡＬＴ及びＡＳＴのレベルは、有意に減少した。しかし、ＦＸＲ−／−処置したマウスでは、ＡＬＴ及びＡＳＴのレベルの差は、観察されなかった。
【００９６】
回腸のＦＸＲ標的遺伝子発現
肝細胞癌の予防におけるＦＸＲの関与を実証するために、回腸のＦＸＲ標的遺伝子発現に対する化合物１−Ｎａ及び対照の影響を評価した。予想どおり、ＯＣＡと化合物１−Ｎａの両方が、Ｍｄｒ２−／−群においてのみ、線維芽細胞増殖因子１５（Ｆｇｆ１５）及び低分子ヘテロ二量体パートナー（Ｓｈｐ）の遺伝子発現を刺激した（図７Ａ及び７Ｂ）。
【００９７】
肝臓のＦＸＲ標的遺伝子発現
コレステロール７α−ヒドロキシラーゼ（ｃｙｐ７ａ１）は、コレステロールを胆汁酸に変換する古典的生合成経路における律速酵素である。化合物１−ＮａとＯＣＡの両方が、Ｍｄｒ２−／−マウスにおいてのみ、Ｃｙｐ７ａ１遺伝子発現を阻害した（図８）。胆汁酸塩排出ポンプ（Ｂｓｅｐ）は、ＡＴＰ加水分解のエネルギーを使用して胆汁酸塩を能動輸送する膜タンパク質である。図９Ａ及び９Ｂに示されるように、化合物１−Ｎａの投与は、Ｍｄｒ２−／−マウスにおいて肝臓のＢｓｅｐ活性化を誘導した。ＯＣＡは、肝臓のＢｓｅｐ誘導を促進しなかったが、これは、腸及び肝臓でＦＸＲを効率的に活性化する化合物１−Ｎａとは対照的に、ＯＣＡがＭｄｒ２−／−マウスにおいて肝臓活性を有しにくいことを示唆している。
【００９８】
総血清胆汁酸
化合物１−Ｎａは、Ｍｄｒ２−／−マウスにおいて血清胆汁酸レベルを有意に減少させた（図１０Ａ）。この所見のＦＸＲ依存性を、ＦＸＲ−／−マウスにおいて減少が発生しないことを観察することによって確認した（図１０Ｂ）。
【００９９】
実施例４．胆管癌進行におけるＦＸＲ又はＴＧＲ５の活性化の異なる影響
方法
ＦＸＲ及びＴＧＲ５発現を、ＣＣＡヒト生検試料及び対照において、２つの手法（ｍＲＮＡマイクロアレイ及びｑＰＣＲ）及び２つの異なる患者のコホート（Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ及びＳａｎ  Ｓｅｂａｓｔｉａｎ）を使用して、且つ異なるヒトＣＣＡ細胞株において、正常ヒト胆管細胞（ＮＨＣ）（ｑＰＣＲによる）と比較して判定した。免疫不全のマウスにおける同所性モデルのヒトＣＣＡの増殖を、特定のＦＸＲアゴニスト又はＴＧＲ５アゴニスト（それぞれＯＣＡ又は化合物４；固形飼料中０，０３％を２カ月間；Ｉｎｔｅｒｃｅｐｔ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）を連続投与しながら磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）によって評価した。ＦＸＲ又はＴＧＲ５の活性化の異なる影響もＣＣＡ細胞及びＮＨＣ細胞の増殖、遊走及びミトコンドリアのエネルギー代謝についてインビトロで評価した。
【０１００】
結果
ＣｏｐｅｎｈａｇｅｎコホートとＳａｎ  Ｓｅｂａｓｔｉａｎコホート（それぞれｍＲＮＡマイクロアレイ及びｑＰＣＲによる）との両方において、ヒトＣＣＡ組織試料では、正常な肝臓周辺組織及び正常な肝内胆管と比較してＦＸＲが下方制御され、ＴＧＲ５が上方制御される。増殖、遊走及びミトコンドリアのエネルギー代謝を制御することにより、ＦＸＲの活性化は、ＣＣＡ進行を阻害するが、ＴＧＲ５の活性化は、ＣＣＡ進行を促進し得る。ＦＸＲ及びＴＧＲ５の活性の制御は、ＣＣＡの治療戦略として可能性がある。インビトロでも、異なるヒトＣＣＡ細胞株において、ＮＨＣと比較してＦＸＲが下方制御され、ＴＧＲ５が上方制御されることが認められた。
【０１０１】
図１１Ａ〜１１Ｄに示すように、ＦＸＲ発現は、ＣＣＡ腫瘍において減少し、腫瘍分化度に相関する：図１１Ａは、ヒト周辺組織（ｎ＝６０）と比較した際のＣＣＡ腫瘍の全組織（ｎ＝１０４）におけるＦＸＲ  ｍＲＮＡマイクロアレイ発現（Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎコホート）（マン・ホイットニー検定）を表し；図１１Ｂは、腫瘍分化度：高分化型（ｎ＝１０）、中分化型（ｎ＝３４）又は低分化型（ｎ＝９）によりグループ化したＣＣＡ腫瘍の全組織におけるＦＸＲ  ｍＲＮＡマイクロアレイ発現（Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎコホート）（マン・ホイットニー検定）を表し；図１１Ｃは、正常ヒト肝臓組織（ｎ＝２０）及びヒト肝臓周辺組織（ｎ＝７）と比較した際のＣＣＡ腫瘍（ｎ＝５）におけるＦＸＲ  ｍＲＮＡ発現（ｑＰＣＲ）（Ｓａｎ  Ｓｅｂａｓｔｉａｎコホート）（マン・ホイットニー検定）を表し；及び図１１Ｄは、対応するヒト肝臓周辺組織（ｎ＝４）と比較した際のＣＣＡ腫瘍におけるＦＸＲ  ｍＲＮＡ発現（ｑＰＣＲ）（Ｓａｎ  Ｓｅｂａｓｔｉａｎコホート）（対応のあるｔ検定）を表す。
【０１０２】
図１２Ａ〜１２Ｄに示すように、ＴＧＲ５発現は、ＣＣＡ腫瘍において増加し、肺門周囲ＣＣＡの方が肝内ＣＣＡより高く、神経周囲の浸潤に相関する（図１２Ａ）。図１２Ｂは、ヒト周辺組織（ｎ＝６０）と比較した際のＣＣＡ腫瘍の全組織（ｎ＝１０４）におけるＴＧＲ５  ｍＲＮＡマイクロアレイ発現（Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎコホート）（マン・ホイットニー検定）を表す。図１２Ｃは、臨床病理学的パラメータ、即ち解剖学的部位［肺門周囲（ｎ＝３６）又は肝内（ｎ＝６８）］及び神経周囲の浸潤［陰性（ｎ＝５０）又は陽性（ｎ＝４２）］による、ＣＣＡ腫瘍の全組織におけるＴＧＲ５  ｍＲＮＡマイクロアレイ発現（Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎコホート）（マン・ホイットニー検定）を示す。図１２Ｃは、ヒト肝臓周辺組織（ｎ＝２７）と比較した際のＣＣＡ腫瘍（ｎ＝１５）におけるＴＧＲ５  ｍＲＮＡ発現（ｑＰＣＲ）（Ｓａｎ  Ｓｅｂａｓｔｉａｎコホート）（マン・ホイットニー検定）を表す。対応するヒト肝臓周辺組織（ｎ＝１１）と比較した際のＣＣＡ腫瘍におけるＴＧＲ５  ｍＲＮＡ発現（ｑＰＣＲ）（Ｓａｎ  Ｓｅｂａｓｔｉａｎコホート）（ウィルコクソンのマッチドペア符号順位検定）が図１２Ｄに示されている。
【０１０３】
図１３Ａ及び１３Ｂに示すように、ＣＣＡ細胞株において、正常ヒト胆管細胞と比較した際に、ＦＸＲ発現は、減少し、ＴＧＲ５発現は、増加する：図１３Ａは、正常ヒト胆管細胞（ｎ＝６）及びＣＣＡ細胞株（それぞれｎ＝５及び６）におけるＦＸＲ  ｍＲＮＡ発現（ｑＰＣＲ）（マン・ホイットニー検定又は対応のないｔ検定）を示し、図１３Ｂは、正常ヒト胆管細胞（ｎ＝６）及びＣＣＡ細胞株（それぞれｎ＝５及び４）におけるＴＧＲ５  ｍＲＮＡ発現（ｑＰＣＲ）（対応のないｔ検定又はマン・ホイットニー検定）を示す。
【０１０４】
同所性ＣＣＡマウスモデルにＦＸＲアゴニストであるＯＣＡを連続投与すると、無処置の動物と比較して腫瘍増殖が阻害された。この影響は、処置した動物の腫瘍内でのＰＣＮＡ及びＫｉ６７の発現の減少と関連するものであった。図１４Ａ〜１４Ｄに示すように、ＦＸＲアゴニストであるオベチコール酸（ＯＣＡ）は、インビボで腫瘍増殖を阻害した。これは、増殖マーカー、胆汁性マーカー及び上皮性マーカーの発現の減少と関連するものであった。ＥＧＩ１細胞を雄ＣＤ１ヌードマウスに皮下注射した。腫瘍が増殖すると、腫瘍を雄ＣＤ１ヌードマウスの肝臓に同所性移植した。２週間後、ＭＲＩ分析を実施し、飼料に入れて処置投与を開始した。１カ月時点及び２カ月時点でＭＲＩにより腫瘍増殖をモニターした。図１４Ａは、無処置の対照マウス、ＯＣＡで処置したマウス及び化合物４で処置したマウスの代表的なＭＲＩ画像及び肝臓の画像を示す。図１４Ｂの棒グラフは、ＭＲＩで定量化した腫瘍容積倍率変化（対照ｎ＝８、ＯＣＡ  ｎ＝６及び化合物４  ｎ＝９（マン・ホイットニー検定、片側）を示す。図１４Ｃは、肝臓同所性ＣＣＡ腫瘍における増殖マーカー（即ちＫｉ６７及びＰＣＮＡ）、胆汁性マーカー（即ちＣＫ１９）及び上皮性マーカー（即ちＺＯ−１）のｍＲＮＡ発現レベルを表す。ｎ＝５〜８（マン・ホイットニー又は対応のないｔ検定、片側）。無処置の又はＯＣＡ若しくは化合物４で処置したマウスの肝臓同所性ＣＣＡ腫瘍における増殖マーカー（即ちＫｉ６７及びＰＣＮＡ）の代表的な免疫組織化学画像が図１４Ｄに示されている。対照的に、ＴＧＲ５アゴニストである化合物４で連続的に処置した動物では、ＣＣＡ腫瘍増殖に対する影響は、観察されなかった。
【０１０５】
図１７は、肝臓ゼノグラフ（ｘｅｎｏｇｒａｐｈ）腫瘍の増殖マーカーの発現におけるＯＣＡ及び化合物４の影響を示す。肝臓同所性ＣＣＡ腫瘍における増殖マーカー（即ちＣｄｃ２５ａ、サイクリンＤ１及びサイクリンＤ３）のｍＲＮＡ発現レベル。ｎ＝５〜８（マン・ホイットニー又は対応のないｔ検定、片側）。
【０１０６】
インビトロでＯＣＡを用いてＦＸＲを活性化すると、ＣＣＡ細胞の増殖及び遊走が阻害された。これらの現象は、対照と比較した際のミトコンドリアのエネルギー代謝の低下（即ち基礎呼吸、最大呼吸及びＡＴＰ産生関連呼吸の低下）に関連するものであった。他方で、ＦＸＲ活性化は、ＣＣＡ細胞の生存に影響しなかった。図１５Ａ〜１５Ｄに示すように、ＦＸＲアゴニストであるＯＣＡは、ＣＣＡ細胞増殖を用量依存的に阻害し、ＣＣＡ細胞遊走を阻害する（これらは、ＣＣＡ細胞中のミトコンドリアの代謝の低下に関連する）が、アポトーシスを誘導しない。図１５Ａは、フローサイトメトリーにより、ＣＦＳＥ細胞増殖染料染色を使用して実施した、無処置の対照細胞（ｎ＝４）と比較した際の、１０又は２５μＭのＯＣＡで４８時間処置したＣＣＡ細胞（即ちＥＧＩ１）（ｎ＝５）の増殖を示す（対応のないｔ検定）。このアッセイは、少なくとも３回の別個の試験で実施した。無処置の対照細胞と比較した際の、ＯＣＡ（２５μＭ）で３〜６〜１２時間処置したＣＣＡ細胞（即ちＥＧＩ１）における増殖マーカー（即ちＫｉ６７、ＰＣＮＡ、サイクリンＤ１及びサイクリンＤ３）のｍＲＮＡ発現。ｎ＝５〜６、無処置の対照に対する、対応のないｔ検定。図１５Ｂは、ＣＣＡ細胞（即ちＥＧＩ１）における遊走アッセイの結果を示す。指示した時点及び条件での創傷治癒アッセイ（即ち無処置の対照又はＯＣＡで処置）の代表的な顕微鏡画像及び対応する定量化（各条件につきｎ＝６）（対応のないｔ検定）。アッセイは、２回の別個の試験で実施した。無処置の細胞及びＯＣＡで処置した細胞における２４時間時点でのｔｒａｎｓｗｅｌｌ遊走チャンバーの代表的な顕微鏡画像。このアッセイは、１回実施した。図１５Ｃは、前処理を３時間して、無処置の又はＯＣＡ（２５μＭ）で処置したＣＣＡ細胞（即ちＥＧＩ１）におけるミトコンドリアのストレス試験キットを使用したＳｅａｈｏｒｓｅによる酸素消費速度（ＯＣＲ）を示す。ＯＣＲ測定後に計算した代謝パラメータの棒グラフ。各群につきｎ＝１１〜１２（対応のないｔ検定）。このアッセイは、少なくとも３回の別個の試験で実施した。図１５Ｄは、無処置の又は１０若しくは２５μＭのＯＣＡで処置したＣＣＡ細胞（即ちＥＧＩ１）における、アネキシンＶ及びヨウ化プロピジウム染色による、フローサイトメトリーに基づくアポトーシスアッセイを表す。２回の別個の試験からの代表的なヒストグラム及び対応するプールデータの定量化、総数ｎ＝６〜７（対応のないｔ検定）。このアッセイは、３回の別個の試験で実施した。
【０１０７】
対照的に、化合物４でＴＧＲ５を活性化すると、ＣＣＡ細胞の増殖及び遊走が刺激された。これらの現象は、対照と比較した際のミトコンドリアのエネルギー代謝の増加（即ち基礎呼吸、プロトンリーク及びＡＴＰ産生関連呼吸の増加）に関連するものであった。図１６Ａ〜１６Ｃに示すように、ＴＧＲ５アゴニストである化合物４は、ＣＣＡ細胞の増殖、遊走及びミトコンドリアの代謝をわずかに刺激する。図１６Ａは、フローサイトメトリーにより、ＣＦＳＥ細胞増殖染料染色を使用して分析した、無処置の対照細胞と比較した際の、１０又は２５μＭの化合物４で４８時間処置したＣＣＡ細胞（即ちＥＧＩ１）の増殖を示す。ｎ＝５〜６（対応のないｔ検定）。このアッセイは、３回の別個の試験で実施した。無処置の対照細胞と比較した際の、化合物４（２５μＭ）で３〜６〜１２時間処置したＣＣＡ細胞（即ちＥＧＩ１）における増殖マーカー（即ちＫｉ６７、ＰＣＮＡ、サイクリンＤ１及びサイクリンＤ３）のｍＲＮＡ発現。ｎ＝６（無処置の対照に対する対応のないｔ検定又はマン・ホイットニー検定）。図１６Ｂは、ＣＣＡ細胞（即ちＥＧＩ１）における遊走アッセイを表す。指示した時点及び条件での創傷治癒アッセイ（即ち無処置の対照又は化合物４で処置）の代表的な顕微鏡画像及び対応する定量化。２回の別個の実験（総数ｎ＝９及び６）からのプールデータ（対応のないｔ検定）。このアッセイは、少なくとも３回の別個の試験で実施した。無処置の又は化合物４で処置した細胞における２４時間時点でのｔｒａｎｓｗｅｌｌ遊走チャンバーの代表的な顕微鏡画像及び対応する定量化（ｎ＝４及び２）。このアッセイは、３回の別個の試験で実施した。図１６Ｃは、前処理を３時間して、無処置の又は化合物４（２５μＭ）で処置したＣＣＡ細胞（即ちＥＧＩ１）における、ミトコンドリアのストレス試験キットを使用したＳｅａｈｏｒｓｅによる酸素消費速度（ＯＣＲ）を示す。ＯＣＲ測定後に計算した代謝パラメータの棒グラフ。各群につきｎ＝１１〜１２（対応のないｔ検定）。このアッセイは、少なくとも３回の別個の試験で実施した。
【図１Ａ】
2020510009.tif 000016
【図１Ｂ】
2020510009.tif 000017
【図２Ａ】
2020510009.tif 000018
【図２Ｂ】
2020510009.tif 000019
【図３Ａ】
2020510009.tif 000020
【図３Ｂ】
2020510009.tif 000021
【図４】
2020510009.tif 000022
【図５Ａ】
2020510009.tif 000023
【図５Ｂ】
2020510009.tif 000024
【図６Ａ】
2020510009.tif 000025
【図６Ｂ】
2020510009.tif 000026
【図７Ａ】
2020510009.tif 000027
【図７Ｂ】
2020510009.tif 000028
【図８】
2020510009.tif 000029
【図９Ａ】
2020510009.tif 000030
【図９Ｂ】
2020510009.tif 000031
【図１０Ａ】
2020510009.tif 000032
【図１０Ｂ】
2020510009.tif 000033
【図１１Ａ】
2020510009.tif 000034
【図１１Ｂ】
2020510009.tif 000035
【図１１Ｃ】
2020510009.tif 000036
【図１１Ｄ】
2020510009.tif 000037
【図１２Ａ】
2020510009.tif 000038
【図１２Ｂ】
2020510009.tif 000039
【図１２Ｃ】
2020510009.tif 000040
【図１２Ｄ】
2020510009.tif 000041
【図１３Ａ】
2020510009.tif 000042
【図１３Ｂ】
2020510009.tif 000043
【図１４Ａ】
2020510009.tif 000044
【図１４Ｂ】
2020510009.tif 000045
【図１４Ｃ】
2020510009.tif 000046
【図１４Ｄ】
2020510009.tif 000047
【図１５Ａ】
2020510009.tif 000048
【図１５Ｂ】
2020510009.tif 000049
【図１５Ｃ】
2020510009.tif 000050
【図１５Ｄ】
2020510009.tif 000051
【図１６Ａ】
2020510009.tif 000052
【図１６Ｂ】
2020510009.tif 000053
【図１６Ｃ】
2020510009.tif 000054
【図１７】
2020510009.tif 000055
【国際調査報告】
2020510009.tif 000056
2020510009.tif 000057
2020510009.tif 000058