(57)【要約】本開示は、自閉症スペクトラム障害の処置のための方法を提供する。より詳細には、本開示は、自閉症スペクトラム障害の処置のために臍帯血を使用する方法に関する。自閉症スペクトラム障害疾患が処置されるように治療上有効な量の臍帯血を投与することを含む、自閉症スペクトラム障害に罹患している患者を処置する方法。本発明により、自閉症スペクトラム障害に罹患している患者への臍帯血処置の治療効果を評価する方法もまた提供される。
2020510049.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
自閉症スペクトラム障害疾患が処置されるように治療上有効な量の臍帯血を投与することを含む、自閉症スペクトラム障害に罹患している患者を処置する方法。
【請求項２】
前記臍帯血が全身投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記臍帯血が静脈内注入によって投与される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記臍帯血が自家臍帯血である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
組成物が単回投与または複数回投与で投与される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
投与される前記組成物の量が、臍帯血細胞製剤を約２．５×１０７〜約２×１０８細胞／ｋｇの量で提供するのに十分である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
自閉症スペクトラム障害に罹患している患者への臍帯血処置の治療効果を評価する方法であって、
ａ．１または複数の適切な試験を前記患者に実施して、１または複数の行動のベースラインスコアおよびバイオマーカーのベースラインスコアを確立するステップと、
ｂ．有効量の臍帯血を前記患者に投与するステップと、
ｃ．（ａ）に述べたものと同じ１または複数の行動試験およびバイオマーカー試験について、臍帯血の投与後の１または複数の時点で前記患者を再評価するステップと、
ｄ．前記（ｃ）の結果と、（ａ）で確立した前記１または複数のベースラインスコアを比較するステップと
を含む、方法。
【請求項８】
前記（ａ）および（ｃ）で実施される１または複数の行動試験が、Ｖｉｎｅｌａｎｄ適応行動尺度−ＩＩ（ＶＡＢＳ−ＩＩ）、臨床全般印象尺度（ＣＧＩ）、広汎性発達障害行動インベントリ（ＰＤＤＢＩ）、表出性一単語絵画語彙試験−４（ＥＯＷＰＶＴ−４）、子供の行動評価−社会的スキル下位尺度、異常行動チェックリスト、感覚経験質問表、反復的行動尺度、知能尺度（初期学習のミューレン尺度、またはスタンフォード−ビネ）、言語環境分析、未就学期精神医学的評価、異常行動チェックリスト、ＡＴＮ  ＧＩ症状インベントリ、および育児ストレス指数のうちの１または複数を含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記（ａ）および（ｃ）で実施される１または複数のバイオマーカー試験が、社会的刺激の視線追跡（ＥＧＴ）、脳波（ＥＥＧ）、および脳磁気共鳴画像（ＭＲＩ）のうちの１または複数を含む、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
（ｃ）における前記患者の再評価が、投与後の３カ月、６カ月、９カ月、１２カ月、１８カ月、および２４カ月を含む１または複数の時点で実施される、請求項７〜９のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１７年３月１３日に出願された米国仮特許出願第６２／４７０，４３１の便益を主張し、この出願は、参照により全体として本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明の背景
本発明の分野
本開示は、自閉症スペクトラム障害の処置のための方法を提供する。より詳細には、本開示は、自閉症スペクトラム障害を処置するために臍帯血を使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
関連技術の説明
自閉症、または自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）とは、社会的スキル、反復的行動、発話および非言語的コミュニケーションによる課題、ならびに社会的コミュニケーションにおける障害および反復的かつ制限された範囲の活動の存在を特徴とする一連の状態をさし、人生の早期に発症する。ＡＳＤは、遺伝的および環境的な影響の様々な組合せによって引き起こされ得る、特定の行動症状の存在に基づく臨床診断である。用語「スペクトラム」は、自閉症を持つ各人が抱える課題と強度の幅広い多様性を反映する。
【０００４】
米国疾病管理予防センター（ＣＤＣ）は、ＡＳＤの有病率が米国で６８人の子供に１人であると推定する（ＭＭＷＲ  Ｓｕｒｖｅｉｌｌ  Ｓｕｍｍ  ２０１４；６３：１−２１）。これには、男子４２人に１人、女子１８９人に１人が含まれる。ＡＳＤを持つ個人の大半は独立して生活することができず、生涯にわたる支援または収容施設を必要とする。したがって、ＡＳＤを持つ個人を支援する生涯コストは、１４０万ドルと推定される。この推定費用は、知的障害も有する人では２４０万ドルに上昇する。（Ｂｕｅｓｃｈｅｒ  ＡＳら，ＪＡＭＡ  Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ  ２０１４；  １６８：７２１−７２８）。毎年、推定５０，０００人の自閉症の１０代の若者が成人になり、学校ベースの自閉症サービスを失う。自閉症の人の約３分の１は非言語的にとどまる。自閉症の人の約４０パーセントは知的障害を有する。特定の医学的および精神的な健康の問題がしばしば自閉症に付随して起こる。それらには、胃腸（ＧＩ）障害、発作、睡眠障害、注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）、不安および恐怖症が含まれる。ＡＳＤの現在の処置アプローチには、薬物療法、行動療法、作業療法および言語療法、ならびに専門の教育的および職業的な支援が含まれる。早期の集中的な行動介入は、転帰の大幅な改善に関連している（Ｄａｗｓｏｎ  Ｇら，Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ  ２０１０；１２５：ｅ１７−ｅ２３）が、そのような介入を行ったとしても、多くのＡＳＤを持つ個人には依然として著しい障害が残る。現在の処置は支持的であるが、理学療法、薬物療法、および手術による続発症の管理に焦点を合わせている。現在利用可能な医学的処置、例えば向精神薬は、関連する併存症状、例えば易刺激性などを寛解させることを目的としているが、中心的なＡＳＤの症状に対処していない。これに照らして、ＡＳＤの中心的症状を標的とする、新規で効果的な処置に対する未だ対処されていない必要性が大いにある。
【０００５】
遺伝子的要因と環境的要因の両方が、ＡＳＤの病因に寄与する（ｄｅ  ｌａ  Ｔｏｒｒｅ−Ｕｂｉｅｔａ  Ｌら，Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ２０１６；２２：３４５−３６１；Ｍａｎｄｙ  Ｗ，Ｌａｉ  ＭＣ．Ｊ．Ｃｈｉｌｄ  Ｐｓｙｃｈｏｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ２０１６；５７：２７１−２９２；Ｓａｈｉｎ  Ｍ，Ｓｕｒ  Ｍ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２０１５；３５０）。正確な病態生理は不明であるが、観察には、脳の領域における異常なシナプス機能（Ｇａｏ  Ｒ，Ｐｅｎｚｅｓ  Ｐ．Ｃｕｒｒ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ  ２０１５；１５：１４６−１６７；Ｖｏｌｋ  Ｌら，Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ２０１５；３８：１２７−１４９）、白質異常（Ｗｏｌｆｆ  ＪＪら，Ａｍ  Ｊ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ２０１２；１６９：５８９−６００）、および神経炎症（Ｙｏｕｎｇ  ＡＭＨら，Ｍｏｌ  Ａｕｔｉｓｍ  ２０１６；７：１−８）が含まれていた。ＡＳＤの患者の脳における免疫病理学的な病因は、免疫関連遺伝子ネットワークの過剰発現（Ｖｏｉｎｅａｇｕ  Ｉら，Ｎａｔｕｒｅ  ２０１１；４７４：３８０−３８４）、胎児脳組織への移行抗体の存在（Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ  Ｄ，ら  Ｔｒａｎｓｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ２０１３；３：ｅ２７７）、脳脊髄液における非定型レベルの炎症誘発性サイトカイン（ＩＬ−６、ＴＮＦ−α）（Ｖａｒｇａｓ  ＤＬら，Ａｎｎ  Ｎｅｕｒｏｌ  ２００５；５７：６７−８１）、および異常な神経結合経路をもたらす過度のミクログリアの活性化（Ｍｏｒｇａｎ  ＪＴら，Ｂｉｏｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ２０１０；６８：３６８−３７６；Ｓｕｚｕｋｉ  Ｋら，ＪＡＭＡ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ２０１３；７０：４９−５８）による可能性がある。したがって、免疫調節または神経結合性の調整に影響を及ぼす治療的アプローチは、この集団の新規な処置の論理的標的である。前臨床モデルは、臍帯血が、傍分泌シグナル伝達を通じて脳の結合性を変化させ、炎症を抑制する働きもするエフェクター細胞を含有することを示した（Ｂａｃｈｓｔｅｔｔｅｒ  ＡＤら，ＢＭＣ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ２００８；９：２２；Ｓｈａｈａｄｕｚｚａｍａｎ  Ｍら，Ａｇｅ（Ｄｏｒｄｒ）  ２０１３；３５：２０７１−２０８７）。自家臍帯血細胞の注入は、脳性麻痺およびその他の後天性脳損傷の患者において安全であることが示されている（Ｓｕｎ  Ｊら，Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ  ２０１０；５０：１９８０−１９８７；Ｃｏｔｔｏｎ  ＣＭら，Ｊ  Ｐｅｄｉａｔｒ  ２０１４；１６４：９７３−９７９；Ｓｕｎ  ＪＭら，Ｐｅｄｉａｔｒ  Ｒｅｓ  ２０１５；７８：７１２−７１６）。
【０００６】
ミクログリアは、中枢神経系（ＣＮＳ）の損傷の伝播と消散において、重要であるが不完全に理解された役割を果たす。これらの細胞は、神経炎症を調節し、アストロサイト、オリゴデンドロサイト、およびニューロンの活性を調節する因子を産生し、破片を除去して、オリゴデンドロサイトがニューロンを再ミエリン化し始める環境を提供する。マウスにおいて、ミクログリアは、胎児の発達初期の胚外卵黄嚢に元来由来する脳内の複製前駆体の特有のプールから発生する。骨髄由来の循環血液単球は、ＣＮＳ損傷を悪化または寛解させ得る浸潤性食細胞の別の潜在的供給源を構成する。リンパ液と脳実質と間の単球の循環経路が最近記載されているが、多数の循環単球は無傷の成体マウス脳には入らないが、脳照射、化学療法または傷害、脱ミエリン化状態、または慢性ストレスなどの傷害後にＣＮＳに浸潤する可能性がある。一部のモデルでは、これらの浸潤性血液単球は、炎症を活性化させ、脱ミエリン化イベントに関与する可能性がある。その他のモデルでは、血液単球が再ミエリン化を促進することがある。
早期診断と行動療法の進歩にもかかわらず、ＡＳＤを持つ子供のためのより効果的な処置が必要とされている。臍帯血由来細胞療法は、脳における炎症プロセスを調節することにより、ＡＳＤの症状を緩和する可能性を有し得る。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】ＭＭＷＲ  Ｓｕｒｖｅｉｌｌ  Ｓｕｍｍ  ２０１４；６３：１−２１
【非特許文献２】Ｂｕｅｓｃｈｅｒ  ＡＳら，ＪＡＭＡ  Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ  ２０１４；  １６８：７２１−７２８
【非特許文献３】Ｄａｗｓｏｎ  Ｇら，Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ  ２０１０；１２５：ｅ１７−ｅ２３
【非特許文献４】ｄｅ  ｌａ  Ｔｏｒｒｅ−Ｕｂｉｅｔａ  Ｌら，Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ２０１６；２２：３４５−３６１
【非特許文献５】Ｍａｎｄｙ  Ｗ，Ｌａｉ  ＭＣ．Ｊ．Ｃｈｉｌｄ  Ｐｓｙｃｈｏｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ２０１６；５７：２７１−２９２
【非特許文献６】Ｓａｈｉｎ  Ｍ，Ｓｕｒ  Ｍ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２０１５；３５０
【非特許文献７】Ｇａｏ  Ｒ，Ｐｅｎｚｅｓ  Ｐ．Ｃｕｒｒ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ  ２０１５；１５：１４６−１６７
【非特許文献８】Ｖｏｌｋ  Ｌら，Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ２０１５；３８：１２７−１４９
【非特許文献９】Ｗｏｌｆｆ  ＪＪら，Ａｍ  Ｊ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ２０１２；１６９：５８９−６００
【非特許文献１０】Ｙｏｕｎｇ  ＡＭＨら，Ｍｏｌ  Ａｕｔｉｓｍ  ２０１６；７：１−８
【非特許文献１１】Ｖｏｉｎｅａｇｕ  Ｉら，Ｎａｔｕｒｅ  ２０１１；４７４：３８０−３８４
【非特許文献１２】Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ  Ｄ，ら  Ｔｒａｎｓｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ２０１３；３：ｅ２７７
【非特許文献１３】Ｖａｒｇａｓ  ＤＬら，Ａｎｎ  Ｎｅｕｒｏｌ  ２００５；５７：６７−８１
【非特許文献１４】Ｍｏｒｇａｎ  ＪＴら，Ｂｉｏｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ２０１０；６８：３６８−３７６
【非特許文献１５】Ｓｕｚｕｋｉ  Ｋら，ＪＡＭＡ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ２０１３；７０：４９−５８
【非特許文献１６】Ｂａｃｈｓｔｅｔｔｅｒ  ＡＤら，ＢＭＣ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ２００８；９：２２
【非特許文献１７】Ｓｈａｈａｄｕｚｚａｍａｎ  Ｍら，Ａｇｅ（Ｄｏｒｄｒ）  ２０１３；３５：２０７１−２０８７
【非特許文献１８】Ｓｕｎ  Ｊら，Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ  ２０１０；５０：１９８０−１９８７
【非特許文献１９】Ｃｏｔｔｏｎ  ＣＭら，Ｊ  Ｐｅｄｉａｔｒ  ２０１４；１６４：９７３−９７９
【非特許文献２０】Ｓｕｎ  ＪＭら，Ｐｅｄｉａｔｒ  Ｒｅｓ  ２０１５；７８：７１２−７１６
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本開示の一態様は、自閉症スペクトラム障害に罹患している患者を処置する方法を提供する。そのような方法には、疾患が処置されるような治療上有効な量の臍帯血を患者に投与することが含まれる。
【０００９】
本開示の別の態様は、自閉症スペクトラム障害に罹患している患者への臍帯血処置の治療効果を評価する方法を提供する。そのような方法には、（ａ）１または複数の適切な試験を患者に実施して、１または複数の行動のベースラインスコアおよびバイオマーカーのベースラインスコアを確立すること；（ｂ）有効量の臍帯血を患者に投与すること；（ｃ）（ａ）に述べたものと同じ１または複数の行動試験およびバイオマーカー試験について、臍帯血の投与後の１または複数の時点で患者を再評価すること；ならびに（ｄ）（ｃ）の結果と、（ａ）で確立した１または複数のベースラインスコアを比較することが含まれる。
【００１０】
図面の簡単な説明
添付の図面は、本開示の方法のさらなる理解を提供するために含められ、本明細書に組み込まれ、本明細書の一部を構成する。図面は、本開示の１または複数の実施形態を示し、説明と一緒に、本開示の原理および操作を説明するのに役立つ。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１は、注入に関連する有害事象（ＡＥ）と注入に無関係のＡＥの両方を含むＡＥの頻度を評価することによる、神経障害を持つ子供における自家臍帯血注入の安全性を示す。重篤なＡＥはどの参加者においても報告されなかった。２３名の参加者で合計９２件のＡＥが報告され、中央値は参加者あたり３事象であった（範囲：１〜１５）。事象を報告する患者の数は、頻度の隣の括弧内に列挙されている。全ての事象は軽度（７１事象）または中程度（２１事象）に段階分けされた。
【００１２】
【図２】図２は、ＶＡＢＳ−ＩＩ社会性標準スコアを示す。（Ａ）は、全ての参加者における経時的なＶＡＢＳ−ＩＩ社会性標準スコアの分布を示す。統計学的に有意な標準スコアの増加が、ベースラインから６カ月まで観察された。この変化は、６カ月から１２カ月まで安定していた。（Ｂ）は、非言語ＩＱ（ＮＶＩＱ）によって層別化されたＶＡＢＳ−ＩＩ社会性スコアの分布を示す。ＮＶＩＱ＜７０（Ｎ＝１２）の個人はまとめて示され、円（ｏ）で表される；ＮＶＩＱ＞７０（Ｎ−１２）の個人はまとめて示され、プラス（＋）で表される。２Ａの変化は、社会性（ｒｓ＝０．５７、９５％  ＣＩ：０．２０〜０．７９、Ｐ＝０．００４）および適応行動（ｒｓ＝０．４２、９５％  ＣＩ：０．０１〜０．７０、Ｐ＝０．０４）領域において、非言語ＩＱを含む２Ｂと正の相関があるが、コミュニケーション領域（ｒｓ＝０．２２、９５％  ＣＩ：−０．２１〜０．５７、Ｐ＝０．３１）では相関しない。ＶＡＢＳ−ＩＩ社会性領域の標準スコア、およびＮＶＩＱによって層別化されたスコアの両方は、ベースライン（臍帯血注入の直前）、注入後６カ月および１２カ月の３つの時点の全てで評価を完了した全ての参加者（ｎ＝２４）について決定された。
【００１３】
【図３Ａ】図３は、ＣＧＩ−ＳおよびＣＧＩ−Ｉの臨床医評価測定による、ＡＳＤの中心的な症状の重症度および重症度の変化を示す。（Ａ）は、ベースライン（臍帯血注入の直前）、注入後６カ月および１２カ月の各時点で完全に評価された２２名の参加者における経時的なＣＧＩ−Ｓ重症度の分布を示す。（Ｂ）は、注入後６カ月および１２カ月の同じ２２名の参加者におけるＣＧＩ−Ｉの分布を示す。各時点で測定された改善はベースラインに関連している。注入後１２カ月のＣＧＩ−Ｉは、非言語ＩＱに関連していたが、年齢または注入された細胞投与量には関連していなかった（図示せず）。
【図３Ｂ】図３は、ＣＧＩ−ＳおよびＣＧＩ−Ｉの臨床医評価測定による、ＡＳＤの中心的な症状の重症度および重症度の変化を示す。（Ａ）は、ベースライン（臍帯血注入の直前）、注入後６カ月および１２カ月の各時点で完全に評価された２２名の参加者における経時的なＣＧＩ−Ｓ重症度の分布を示す。（Ｂ）は、注入後６カ月および１２カ月の同じ２２名の参加者におけるＣＧＩ−Ｉの分布を示す。各時点で測定された改善はベースラインに関連している。注入後１２カ月のＣＧＩ−Ｉは、非言語ＩＱに関連していたが、年齢または注入された細胞投与量には関連していなかった（図示せず）。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
発明の詳細な説明
開示される方法および材料が説明される前に、本明細書で説明される態様は、特定の実施形態、装置、または構成に限定されず、したがって、当然ながら変化し得ることを理解されたい。また、本明細書で使用される用語は、特定の態様を説明するためだけのものであり、本明細書で特に定義されない限り、限定を意図するものでないことも理解されたい。
【００１５】
また、文脈によって明確に別に示されていない限り、本発明の一つの態様または実施形態について開示された実施形態は、本発明の他の態様または実施形態において同様に、そして／あるいは本発明の同じまたは他の態様で開示された実施形態と組み合わせて、使用され得ることも理解されたい。従って、本開示は、そのような組合せが明示的に描写されていない場合でも、そのような組合せを含むことを意図しており、本発明はそのような組合せを含む。
【００１６】
定義
本明細書を通して、文脈上別の意味に解釈するべき場合を除いて、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」および「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」という語および変化形（例えば、「ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ」、「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」、「ｉｎｃｌｕｄｅｓ」、「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ」）は、述べた成分、特徴、要素、またはステップ、あるいは成分、特徴、要素またはステップの群を含めるが、その他のいかなる整数またはステップあるいは整数またはステップの群をも除外しないことを意味すると理解される。
【００１７】
本明細書および添付される特許請求の範囲で使用される、単数形の「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈上明らかに別に示されている場合を除き、複数の指示対象を含む。
【００１８】
本明細書では、範囲は、「約」ある特定の値から、かつ／または「約」別の特定の値までとして表すことができる。そのような範囲が表される場合、別の態様は、１つの特定の値から、かつ／または他の特定の値までを含む。同様に、先行詞「約」を使用して値が近似値として表される場合、特定の値が別の態様を形成することが理解される。各範囲のエンドポイントは、他のエンドポイントとの関連でも、そして他のエンドポイントとは無関係でも、重要であることはさらに理解される。
【００１９】
本明細書において使用される用語「接触する」には、少なくとも１つの物質と別の物質との物理的接触が含まれる。
【００２０】
本明細書において使用される「処置」、「治療」および／または「治療計画」とは、患者に現れたか、または患者の罹りやすい疾患、障害、または生理学的状態（例えば、自閉症スペクトラム障害）に応答してなされる臨床介入をさす。処置の目的には、症状の軽減または予防、疾患、障害、または状態の進行または悪化の緩徐化または停止、ならびに／あるいは、疾患、障害または状態（例えば、自閉症スペクトラム障害）の緩解が含まれる。
【００２１】
用語「有効量」または「治療上有効な量」とは、有益または望ましい生物学的および／または臨床的な結果をもたらすのに十分な量をさす。
【００２２】
本明細書において使用される、用語「対象」および「患者」は、本明細書において互換的に使用され、ヒトおよび非ヒト動物の両方をさす。本開示の用語「非ヒト動物」には、全ての脊椎動物、例えば、哺乳動物および非哺乳動物、例えば、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ニワトリ、両生類、爬虫類などが含まれる。好ましくは、対象は、自閉症スペクトラム障害を有するか、またはそれに罹患しているヒト患者である。
【００２３】
本明細書において使用される、用語「自閉症スペクトラム障害」および「自閉症」は、互換的に使用され、一般に幼児期から存在するあらゆる範囲の精神状態をさし、他の人とコミュニケーションをとり、関係を形成することと、言語および抽象的な概念を使用することとが困難であることを特徴とする。
臍帯血または臍帯血成分による自閉症スペクトラム障害の処置
【００２４】
本開示を考慮して、本明細書に記載される方法は、当業者によって所望の必要性を満たすように構成され得る。概して、開示される材料、方法、および装置は、自閉症スペクトラム障害が処置されるように、治療上有効な量の臍帯血および／またはその１成分もしくは複数の成分の混合物を対象に投与することを含む、それからなる、またはそれから本質的になる、自閉症スペクトラム障害に罹患している対象を処置する方法を提供する。
【００２５】
特に明記されない限り、本明細書において使用される用語「臍帯血」は、具体的にそう述べられているかどうかに関わらず、任意の形式の臍帯血、および／またはその１成分もしくは複数の成分の混合物を包含することを意味することは理解される。
【００２６】
一部の実施形態では、臍帯血は自家性である、すなわち患者自身の臍帯血である。
【００２７】
患者は任意のヒトまたは非ヒト動物であってよい。一実施形態では、患者はヒトである。別の実施形態では、患者は１８歳未満、またはこのより広い年齢範囲内のあらゆる年齢範囲のヒトの子供である。限定されない例では、患者は、１歳〜１０歳、１歳〜８歳、１歳〜６歳、１歳〜４歳、２歳〜１０歳、２歳〜８歳、２歳〜６歳、２歳〜４歳、３歳〜１０歳、３歳〜８歳、３歳〜６歳、４歳〜１０歳、４歳〜８歳、または４歳〜６歳であってよい。
【００２８】
臍帯血は、当分野で公知の方法により、投与のために保存および調製されることができる。臍帯血は、全身送達を含む当技術分野で公知のあらゆる技法によって対象に投与されてよい。投与経路には、限定されるものではないが、静脈内投与が含まれる。一部の実施形態では、臍帯血は全身投与される。さらなる実施形態では、臍帯血は静脈内（ＩＶ）注射によって投与される。
【００２９】
本発明者らは、自家臍帯血細胞の注入がＡＳＤの処置に重要な役割を果たし得ると仮定し、単一施設、非盲検、第１相の、安全性治験および実現可能性治験を若い小児参加者で実施した。この研究は、ＡＳＤを持つ幼児における（１）自家臍帯血の単回静脈内注入の安全性、および（２）いくつかの異なる評価ツールの変化に対する感度および投与の実現可能性に焦点を合わせた。年齢中位数が４．６歳（範囲２．２６〜５．９７）の、ＡＳＤの診断が確定され、認定されたバンク保存の自家臍帯血ユニットを有する２５名の子供を登録した。臍帯血注入の直前（ベースライン）ならびに６カ月後および１２カ月後に、子供を一連の行動試験および機能試験で評価した。１２ヶ月間にわたる有害事象の評価は、処置が安全で忍容性が高いことを示した。子供の行動の有意な改善は、社会的コミュニケーションスキルおよび自閉症症状の親の報告に基づく測定（ｐａｒｅｎｔ−ｒｅｐｏｒｔ  ｍｅａｓｕｒｅｓ）、全体的な自閉症症状の重症度および改善の程度の臨床医による評価、表出語彙の標準的な測定、および社会的刺激に対する子供の注意の客観的な視線追跡測定において観察され、この有意な改善は、これらの測定が将来の研究の有用なエンドポイントである可能性があることを示す。行動の改善は、注入後の最初の６カ月の間に観察され、より高いベースラインの非言語ＩＱを持つ子供でより大きかった。
【００３０】
臍帯血の投与
臍帯血の投与経路は、処置される疾患および望ましい結果に基づいて当業者によって選択されてよい。従って、特定の実施形態では、臍帯血は末梢静脈内（ＩＶ）注入によって投与される。
【００３１】
本開示の臍帯血は、単回投与で投与されてよい。本開示の臍帯血は、期間（例えば、数時間、または数日、または数カ月）にわたる複数回投与（例えば、処置あたり２、３、またはそれ以上の単回投与）で投与されてもよい。ある種の実施形態では、本開示の臍帯血は、約１分〜約６０分の範囲の期間にわたって、例えば、約６０秒〜約１２０秒にわたって、または約９０秒〜約１２０秒にわたって、または約６０秒〜約１８０秒にわたって、または約９０秒〜約１８０秒にわたって、または約２分〜約６０分にわたって、または約２分〜約５０分にわたって、または約２分〜約４０分にわたって、または約２分〜約３０分にわたって、または約２分〜約２０分にわたって、または約２分〜約１０分にわたって、または約２分〜約５分にわたって、または約１０分〜約６０分にわたって、または約１０分〜約５０分にわたって、または約１０分〜約４０分にわたって、または約１０分〜約３０分にわたって、または約１０分〜約２０分にわたって投与されてよい。
【００３２】
臍帯血細胞は、治療上有効な濃度で存在してよい。ある種の実施形態では、臍帯血細胞の濃度は、投与の時点で約１×１０７〜約５×１０８細胞／ｋｇ体重；例えば、約１×１０７〜約３×１０８細胞／ｋｇ、または約１×１０７〜約２．５×１０８細胞／ｋｇ、または約２×１０７〜約３×１０８細胞／ｋｇ、約２×１０７〜約２．５×１０８細胞／ｋｇ、または約２×１０７〜約２×１０８細胞／ｋｇ、または約２．５×１０７〜約３×１０８細胞／ｋｇ、または約２．５×１０７〜約２×１０８細胞／ｋｇである。当業者であれば、適した投与量が望ましい投与経路に基づいて選択されてよいことを認識するであろう。例えば、静脈内投与は、約１０ｍＬ〜約５０ｍＬ；例えば、約１０ｍＬ〜約４０ｍＬ、または約１０ｍＬ〜約３０ｍＬ、または約１０ｍＬ〜約２０ｍＬ、または約１０ｍＬ〜約１５ｍＬ、または約２０ｍＬ〜約５０ｍＬ、または約２０ｍＬ〜約４０ｍＬ、または約２０ｍＬ〜約３０ｍＬ、または約３０ｍＬ〜約５０ｍＬ、または約３０ｍＬ〜約４０ｍＬ、または約４０ｍＬ〜約５０ｍＬの範囲内の投与量を使用してよい。
【００３３】
末梢ＩＶ投与が使用される特定の実施形態では、静脈内輸液（ＩＶ  ｆｌｕｉｄ）は、維持の約１．０〜約２．０倍で投与されてよい。例えば、静脈内輸液は、注入後に維持の約１．０〜約１．５倍、または維持の約１．５〜約２．０倍で投与されてよい。維持用の静脈内輸液は、臍帯血注入後に約２０分〜約３時間投与されてよい。例えば、維持用の静脈内輸液は、注入後に、例えば、約３０分〜約３時間、または約３０分〜約２．５時間、または約３０分〜約２時間、または約３０分〜約１．５時間、または約３０分〜約１時間、または約３０分〜約４５分、または約１時間〜約３時間、または約１時間〜約２．５時間、または約１時間〜約２時間、または約１時間〜約１．５時間投与されてよい。
【００３４】
任意の適した静脈内輸液が、臍帯血注入後の維持のために使用されてよい。特定の実施形態では、維持用の静脈内輸液は、生理食塩水または乳酸リンゲル液である。特定の実施形態では、維持用の静脈内輸液は、０．２５％の通常の生理食塩水である。特定の実施形態では、維持用の静脈内輸液は、０．５％の通常の生理食塩水である。
【００３５】
将来の第２相および第３相臨床治験のためのエンドポイントとして複数の評価を利用し、投与の実現可能性および有用性の両方を決定した。これらの評価または試験には、行動試験とバイオマーカー試験の両方が含まれた。一部の実施形態では、実行または実施される行動試験としては、限定されるものではないが、Ｖｉｎｅｌａｎｄ適応行動尺度−ＩＩ（ＶＡＢＳ−ＩＩ）、臨床全般印象尺度（ＣＧＩ）、広汎性発達障害行動インベントリ（ＰＤＤＢＩ）、表出性一単語絵画語彙試験−４（Ｅｘｐｒｅｓｓｉｖｅ  Ｏｎｅ−Ｗｏｒｄ  Ｐｉｃｔｕｒｅ  Ｖｏｃａｂｕｌａｒｙ  Ｔｅｓｔ−４）（ＥＯＷＰＶＴ−４）、子供の行動評価−社会的スキル下位尺度（Ｂｅｈａｖｉｏｒ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｆｏｒ  Ｃｈｉｌｄｒｅｎ−Ｓｏｃｉａｌ  Ｓｋｉｌｌｓ  ｓｕｂｓｃａｌｅ）、異常行動チェックリスト、感覚経験質問表（Ｓｅｎｓｏｒｙ  Ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅｓ  Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ）、反復的行動尺度、知能尺度（初期学習のミューレン尺度またはスタンフォード−ビネ）、言語環境分析、未就学期精神医学的評価（Ｐｒｅｓｃｈｏｏｌ  Ａｇｅ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ）、異常行動チェックリスト、ＡＴＮ  ＧＩ症状インベントリ、および育児ストレス指数が挙げられる。一部の実施形態では、実施される客観的バイオマーカー試験には、限定されるものではないが、社会的刺激の視線追跡（ＥＧＴ）、脳波（ＥＥＧ）、および脳磁気共鳴画像（ＭＲＩ）が含まれる。
【００３６】
一部の実施形態では、有効量の臍帯血を投与する前に、１または複数の行動試験および客観的バイオマーカー試験をＡＳＤを持つ患者に実施して、ベースラインの行動スコアおよびバイオマーカースコアを確立する。一部の実施形態では、患者は、有効量の臍帯血の投与後に、同じ１または複数の行動試験および客観的バイオマーカー試験について再評価される。一部の実施形態では、臍帯血の投与後に実施された試験の結果は、臍帯血の投与前に実施された同じ試験のベースライン結果と比較される。一部の実施形態では、ＶＡＢＳ−ＩＩ社会性下位尺度の標準スコアは主要な行動エンドポイントである。一部の実施形態では、ＣＧＩ、ＰＤＤＢＩおよびＥＯＷＰＶＴは重要な副次的行動エンドポイントである。一部の実施形態では、客観的バイオマーカー試験は、ＥＧＴである。
【００３７】
一部の実施形態では、患者は有効量の臍帯血の投与後の１または複数の時点で再評価され、それには、限定されるものではないが、臍帯血の投与後３カ月、６カ月、９カ月、１２カ月、１８カ月、および２４カ月が含まれる。一部の実施形態では、患者は、有効量の臍帯血の投与後３カ月に再評価される。一部の実施形態では、患者は、有効量の臍帯血の投与後６カ月に再評価される。一部の実施形態では、患者は、有効量の臍帯血の投与後９カ月に再評価される。一部の実施形態では、患者は、有効量の臍帯血の投与後１２カ月に再評価される。一部の実施形態では、患者は、有効量の臍帯血の投与後１８カ月に再評価される。一部の実施形態では、患者は、有効量の臍帯血の投与後２４カ月に再評価される。一部の実施形態では、患者は、有効量の臍帯血の投与後３カ月、６カ月、９カ月および１２カ月に再評価される（ｒｅｖａｌｕａｔｅｄ）。
【００３８】
本開示の特定の態様を、これから以下の限定されない例によってさらに説明する。
【実施例】
【００３９】
実施例１：  臍帯血の注入は、自閉症スペクトラム障害の幼児に安全かつ実現可能である
材料および方法
研究デザインおよび概要
自家臍帯血の単回静脈内注入の第１相単一施設非盲検治験を、ＡＳＤを持つ２５人の子供に対して実施した。全ての子供を最初にスクリーニングプロトコールに登録し、各子供のバンク保存臍帯血ユニットに関する医療記録と情報を取得した。すべての参加者の介護者は、研究前のスクリーニング面接を電話で完了し、治験への適格性を判断するために、研究チームによる審査のための医療記録およびビデオを提供した。ＡＳＤの確定診断と、認定されたバンク保存自家臍帯血を有する子供が参加に適格であった。書面によるインフォームドコンセントを、治験のスクリーニング期と処置期の両方について得た。この治験は、ＩＮＤ  ＃１５９４９の下で実施されたデューク病院治験審査委員会によって承認された。
【００４０】
参加者およびその介護者は、研究への参加の一部としてデューク大学を３回訪問した。彼らのベースライン訪問時に、各参加者は評価され、１回の静脈内自己臍帯血注入を受けた。注入後６カ月および１２カ月に、参加者はフォローアップ臨床評価のために戻ってきた。追加の介護者インタビューおよび質問表は、注入後３ヶ月および９ヶ月に収集された。
【００４１】
参加者
精神障害の診断・統計マニュアル、第５版（ＤＳＭ−５）（ＤＳＭ−５．Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ２０１３；Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．）に基づくＡＳＤの臨床診断の判定基準を満たす２歳〜５歳の参加者は、研究への組み入れに適格であった。ＡＳＤのＤＳＭ−５診断は、専門の臨床医によって確立され、自閉症診断観察スケジュール、第２版（ＡＤＯＳ−２）（Ｌｏｒｄ  Ｃら，ＡＤＯＳ−２．Ｔｏｒｒｅｎｃｅ，ＣＡ：Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｐｓｙｃｈｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ  ２０１２）および自閉症診断インタビュー、改訂版（ＡＤＩ−Ｒ）（Ｒｕｔｔｅｒ  Ｍら，ＡＤＩ−Ｒ．Ｔｏｒｒｅｎｃｅ，ＣＡ：Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｐｓｙｃｈｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ  ２００５）によって通知された。さらなる組み入れ基準には、（１）幼児期用のスタンフォード−ビネ知能尺度、第５版（Ｒｏｉｄ  ＧＨ．ＳＢ５．Ｉｔａｓｃａ，ＩＬ：Ｒｉｖｅｒｓｉｄｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  ２００３）または初期学習のミューレン尺度（Ｍｕｌｌｅｎ  Ｅ．ＡＧＳ  ｅｄ．Ｂｌｏｏｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＮ：ＮＣＳ  Ｐｅａｒｓｏｎ  Ｉｎｃ．  １９９５）で３５以上の非言語知能指数（ＩＱ）、（２）認定された自家臍帯血ユニットが入手可能なこと、（３）参加者が注入前の少なくとも２カ月間、現在の薬物療法で安定していたこと、（４）デューク大学に３回訪問できること（ベースライン、およびベースライン後６カ月および１２カ月）、ならびに（５）両親が英語を話すことが含まれた。除外基準には、（１）以前の細胞治療の履歴、（２）静脈内免疫グロブリン（ＩＶＩＧ）または他の抗炎症薬の使用（ＮＳＡＩＤを除く）、（３）既知の遺伝的（例えば、脆弱Ｘ）またはその他の重大な医学的併存疾患、（４）遺伝的症候群を示唆する明白な身体的異形症、（５）制御されない発作性障害、（６）腎または肝機能の著しい障害、および（７）全血球数（ＣＢＣ）の臨床的に重大な異常が含まれた。
【００４２】
臍帯血ユニット
全ての参加者は、家族向きのまたは公共の臍帯血バンクで保存された利用可能な自家臍帯血ユニットを有する必要があった。スクリーニングの間、有望な参加者の臍帯血レポートを審査して、それらが以下の凍結前保存基準、（１）総有核細胞数（ＴＮＣＣ）≧１ｘ１０７／ｋｇ、（２）無菌培養が実施され、陰性であった、（３）母体ドナーまたは臍帯血製剤で試験された陰性の母体感染症マーカー（Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ヒトＴリンパ好性ウイルス（ＨＴＬＶ）、および梅毒を最低限含む）、および（４）同一性および効力を確認するための追加の試験に利用可能な試験用試料、を満たしていることを確認した。参加者とその臍帯血ユニットが適格である可能性が高かった場合、臍帯血ユニットの試料が効力試験のためにデュークに出荷された。（Ｓｈｏｕｌａｒｓ  Ｋら，Ｂｌｏｏｄ  ２０１６；１２：２３４６−２３５４）。低分解能のヒト白血球抗原（ＨＬＡ）試験を同一性確認のために参加者および臍帯血ユニット試料の両方で実施した。試験試料でＣＤ４５生存率が＞４０％であり、ＨＬＡ同一性が確認された場合、凍結保存された臍帯血ユニットがドライシッパーでデューク幹細胞移植研究所に出荷され、そこで臍帯血ユニットは注入日まで液体窒素下で保存された。
【００４３】
手順：自家臍帯血の注入
注入の日に、臍帯血を解凍し、デキストラン４０＋５％アルブミン（ＤＡ）で洗浄し、投与のために１．２５ｍＬ／ｋｇ  ＤＡの中に入れた（Ｒｕｂｉｎｓｔｅｉｎ  Ｐら，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １９９５；９２：１０１１９−１０１２２）。解凍したＣＢＵを、ＴＮＣＣの数え上げ、生存ＣＤ３４＋細胞、コロニー形成単位（ＣＦＵ）、トリパンブルーによる細胞生存率、および無菌培養について試験した。自家臍帯血注入を、鎮静下脳ＭＲＩの後に実施した。静脈内（ＩＶ）アクセスは小児麻酔科医が取得した。ＭＲＩが終了すると、子供たちは、注入のために、外来処置センターであるデューク子供保健センターデイホスピタル（Ｄｕｋｅ  Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｃｅｎｔｅｒ  Ｄａｙ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ）に入院した。ベナドリル（０．５ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ）、ソルメドロール（０．５ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ）、および、子供が起きていて経口薬を飲むことができる場合には、タイレノール（１０ｍｇ／ｋｇ  ＰＯ）で前投薬した後、参加者は、１〜５×１０７細胞／ｋｇを送達するように調節された参加者の臍帯血ユニットの一部または全部のいずれかを、２０〜３０分にわたり末梢ＩＶ注入によって受容した。静脈内輸液は、臍帯血注入後に維持の１．５倍で３０分〜２時間投与された。バイタルサインおよびパルスオキシメトリを、注入中および子供が鎮静から覚醒するまで継続的に監視した。
【００４４】
安全性評価基準
参加者は注入の間観察され、注入反応を監視された。さらなる有害事象（ＡＥ）は、注入後７〜１０日目、３カ月、および９カ月に参加者の親／保護者との電話インタビューによって、そして直接にベースライン、６カ月および１２カ月の診療所訪問日に特定された。分析用に、逐語的なＡＥ用語を、有害事象共通用語基準（ＣＴＣＡＥ）バージョン４．０によって定義された標準用語にマッピングし、調査者によって判断された重症度および介入に対する関係に従って要約した。
【００４５】
臨床評価
将来の第２相および第３相の臨床治験のエンドポイントとして複数の評価を利用し、投与の実現可能性および有用性の両方を決定した。これらには、Ｖｉｎｅｌａｎｄ適応行動尺度−ＩＩ（ＶＡＢＳ−ＩＩ）、臨床全般印象尺度（ＣＧＩ）、広汎性発達障害行動インベントリ（ＰＤＤＢＩ）、表出性一単語絵画語彙試験−４（ＥＯＷＰＶＴ−４）、子供の行動評価−社会的スキル下位尺度、異常行動チェックリスト、感覚経験質問表、反復的行動尺度、知能尺度（初期学習のミューレン尺度またはスタンフォード−ビネ）、言語環境分析、未就学期精神医学的評価、異常行動チェックリスト、ＡＴＮ  ＧＩ症状インベントリ、および育児ストレス指数が含まれる。さらに、３つの客観的バイオマーカー：社会的刺激の視線追跡（ＥＧＴ）、ＥＥＧ、および脳ＭＲＩを収集した。ＥＥＧおよび脳ＭＲＩの知見は、別々に報告されることになる。主要な行動エンドポイントとして先験的に選択された測定の結果（ＶＡＢＳ−ＩＩ社会性下位尺度の標準スコア）、および重要な副次的行動エンドポイントとして先験的に選択された測定の結果（ＣＧＩ、ＰＤＤＢＩ、ＥＯＷＰＶＴ）、ならびにＥＧＴバイオマーカーの結果がこのレポートに含まれる。
【００４６】
Ｖｉｎｅｌａｎｄ適応行動尺度−ＩＩ（ＶＡＢＳ−ＩＩ）（Ｓｐａｒｒｏｗ  Ｓら，Ｖｉｎｅｌａｎｄ  ＩＩ：２ｎｄ  ｅｄ．Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ：ＮＣＳ  Ｐｅａｒｓｏｎ  Ｉｎｃ；２００５）は、幅広い分野にわたる子供の適応行動を評価するために使用される介護者アンケートである。ＶＡＢＳ−ＩＩは、強い信頼性および有効性を備えた、十分に標準化された測定であり（Ｂａｌｂｏｎｉ  Ｇら，Ｊ  Ａｕｔｉｓｍ  Ｄｅｖ  Ｄｉｓｏｒｄ  ２０１６；４６：４２−５２；Ｐｅｒｒｙ  Ａら，Ｊ  Ａｕｔｉｓｍ  Ｄｅｖ  Ｄｉｓｏｒｄ  ２００９；３９：１０６６−１０７８；Ｙａｎｇ  Ｓら，Ｊ  Ａｕｔｉｓｍ  Ｄｅｖ  Ｄｉｓｏｒｄ  ２０１６；４６：６４−７３；Ｓｐａｒｒｏｗ  Ｓら，Ｖｉｎｅｌａｎｄ  Ｓｕｒｖｅｙ  Ｆｏｒｍｓ  Ｍａｎｕａｌ．２ｎｄ  ｅｄ．Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ；ＮＣＳ  Ｐｅａｒｓｏｎ  Ｉｎｃ；２００５）、全体的な総合スコア、ならびに次の領域：社会性、コミュニケーション、日常生活スキル、および運動スキルにおける下位尺度の標準スコアを生成する。ＶＡＢＳ−ＩＩは、ベースラインおよび６カ月および１２カ月の訪問時に各参加者の主な介護者から収集した。社会性下位尺度を用いて社会行動の中心的なＡＳＤ症状の改善を測定した。
【００４７】
臨床全般印象尺度（ＣＧＩ）は、症状の重症度および処置応答または時点間の行動の変化を測定する、よく使用される評価尺度である。ＣＧＩの２つのバージョン：ＣＧＩ−重症度（ＣＧＩ−Ｓ）およびＣＧＩ−改善度（ＣＧＩ−Ｉ）を使用した。ＣＧＩ−Ｓは、専門の評価者の過去の経験と、同じ診断を受けた参加者とを比較した、評価時の各参加者のＡＳＤの症状の重症度を示す７段階評価である。専門の評価者の生涯にわたる臨床経験および全ての利用可能な情報に基づいて、各参加者を、１：症状なし（ＡＳＤなし）、２：ＡＳＤ症状はかろうじて明白、３：軽度のＡＳＤ症状、４：中程度のＡＳＤ症状、５：中程度に重度のＡＳＤ症状、６：重度のＡＳＤ症状、または７：極めて重度のＡＳＤ症状、として評価した。各参加者には、ベースラインおよび６カ月および１２カ月の訪問時にＣＧＩ−Ｓの評価が割り当てられた。ＣＧＩ−Ｉは、ベースラインと比較したＡＳＤ症状の改善または悪化の程度を示す７段階評価である。全ての利用可能な情報に基づいて、各参加者を、１：非常に改善された、２：改善された、３：少し改善された、４：変化なし、５：少し悪化した、６：悪化した、または７：非常に悪化した、として評価した。各参加者には、６カ月および１２カ月の訪問時にＣＧＩ−Ｉの評価が割り当てられ、それぞれ、ベースラインと比較した改善または悪化の程度を参照した。全てのＣＧＩ−ＳおよびＣＧＩ−Ｉ評価は、ＡＳＤの専門知識を持つ経験豊富な臨床医によって行われた。
【００４８】
広汎性発達障害行動インベントリ（ＰＤＤＢＩ）（Ｃｏｈｅｎ  ＩＬ，Ｓｕｄｈａｌｔｅｒ  Ｖ．ＰＤＤＢＩ．Ｌｕｔｚ，ＦＬ：Ｐｓｙｃｈｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ  Ｉｎｃ；２００５）は、一般にＡＳＤの影響を受ける領域にある社会的行動、適応機能、および不適応機能を測定するように設計されている介護者質問表である。ＰＤＤＢＩは、さまざまな人種的、民族的、および社会経済的な背景をもつＡＳＤの子供の、介護者および教師のサンプルによって標準化された（Ｃｏｈｅｎ  ＩＬ，Ｓｕｄｈａｌｔｅｒ  Ｖ．ＰＤＤ  Ｂｅｈａｖｉｏｒａｌ  Ｉｎｖｅｎｔｏｒｙ  Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ  Ｍａｎｕａｌ．Ｌｕｔｚ，ＦＬ：Ｐｓｙｃｈｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ  Ｉｎｃ；２００５）。ＰＤＤＢＩは、各参加者の主な介護者から、ベースライン、６カ月および１２カ月の訪問時に、ならびにベースライン後３カ月および９カ月に間接的に収集された。
【００４９】
表出性一単語画像絵画語彙試験−４（ＥＯＷＰＶＴ−４）（Ｍａｒｔｉｎ  ＮＡ，Ｂｒｏｗｎｅｌｌ  Ｒ．ＥＯＷＰＶＴ−４．４ｔｈ  ｅｄ．Ｎｏｖａｔｏｒ，ＣＡ：Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｔｈｅｒａｐｙ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｉｎｃ；２０１１）は、話し言葉を物、動き、または概念の絵と照合する個人の能力を測定する、臨床医により実施される評価である。ＥＯＷＰＶＴ−４は、ベースラインおよび６カ月および１２カ月の訪問時に各子供に対して実施された。
【００５０】
視線追跡（ＥＧＴ）によって社会的刺激と非社会的刺激に対する視覚的注意を測定するように設計されたタスクが、実施された。ＥＧＴは、幼児期から成人期までの個人の視線パターンの定量化を可能にする技術である。ＥＧＴハードウェア（Ｔｏｂｉｉ  ＴＸ３００．Ｄａｎｄｅｒｙｄ，Ｓｗｅｄｅｎ：Ｔｏｂｉｉ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；２０１４）は、赤外線発光ダイオードと赤外線カメラを使用して角膜反射を測定し、角膜反射は視線方向の計算に使用される。ＥＧＴタスクの間、参加者は動的な社会的刺激の４分間のビデオを視聴し、これには共同注意を得ようと努力を示す女優のエピソードが含まれる（Ｃｈａｗａｒｓｋａ  Ｋら，Ｊ  Ｃｈｉｌｄ  Ｐｓｙｃｈｏｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ２０１２；５３：９０３−９１３）。これらの刺激を使用して、以前の研究では、ＡＳＤの幼児は、シーン全体に対しても共同注意を得ようと努力している女優の顔に対しても注意の低下を示すことが見出された。シーン全体に対する注意の低下は、自閉症症状の重症度とも相関していた（Ｃｈａｗａｒｓｋａ  Ｋら．Ｊ  Ｃｈｉｌｄ  Ｐｓｙｃｈｏｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ２０１２；５３：９０３−９１３）。ＥＧＴタスクは、ベースライン、６カ月および１２カ月の訪問時に各子供に提示された。
【００５１】
行動療法、言語療法、作業療法、およびその他の行動療法に子供が関与した時間数ならびにその子供が受けた教育サービスについての情報を、親との構造化された介入履歴インタビュー（ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｄ  Ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ  Ｈｉｓｔｏｒｙ  Ｉｎｔｅｒｖｉｅｗ）によって、ベースラインからベースライン後１２カ月まで３カ月ごとに評価した。
【００５２】
統計的手法
分析は、主に、コホートのベースライン特性の要約から始まる記述的方法に頼った。ボックスプロットを作製して、継続的転帰測定の分布を経時的に示した。各時点の順序転帰測定の頻度を、棒グラフを使用してプロットした。継続的転帰および順序転帰の変化についての統計学的有意性を、３カ月時点の節点を持つ固定効果線形スプラインを使用してモデル化されたＰＤＤＢＩを除いて、ウィルコクソンの符号順位検定を使用して評価した。このモデルは、赤池情報基準（ＡＩＣ）を用いて、その他の縦断的な固定効果モデルおよびランダム効果モデルより選択された。ＥＧＴは、ロジットリンク、二項誤差構造、および交換可能または非構造的な作業相関を有する一般化推定方程式（ＧＥＥ）を使用して分析された。ベースラインの年齢、非言語ＩＱ、および注入した細胞投与量と経時的変化との関連を各分析で調査した。性別による変化のパターンを調査するのに十分な数の女性は登録されていなかった。最後に、本発明者らは、Ｂｅｎｊａｍｉｎｉ−Ｈｏｃｈｂｅｒｇ偽陽性率（ＦＤＲ）手順をベースラインから６カ月および６カ月から１２カ月のフォローアップ期間の観察結果に適用することによって、偽陽性結果の可能性を評価した。
【００５３】
結果
研究参加者および自家臍帯血ユニットの特性
２５名の参加者が本研究に登録し、自家臍帯血の初回注入を受けた（ｎ＝２５）。２５名の参加者のうち、２１名が男性であり、その大半が白人（ｎ＝２３）で、１名がアジア人であり、２名の参加者が混血であった。参加者の年齢中位数は４．６２歳（範囲２．２６〜５．９７）、非言語ＩＱの中央値は６５（範囲２２〜１２３）であった。研究参加時の参加者のＡＤＯＳ比較スコアの中央値は８．０（範囲６〜１０）であり、７２％が中程度に重度または重度のＡＳＤ症状を有していた（表１）。全ての参加者がベースラインおよび６カ月評価を完了した。３名の参加者は１２カ月評価を完了しなかった。
【表１】
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【００５４】
臍帯血注入
自家臍帯血ユニットは、２つの米国の家族向け臍帯血バンクと１つの公共バンク（ｎ＝１）から回収した。すべてがデュアルコンパートメントバッグに保存されていた。１〜５×１０７ＴＮＣ／ｋｇの標的細胞投与量を達成するために、臍帯血ユニット全体を６名の参加者で利用した。１９名の参加者において、臍帯血ユニットの８０％の区画は解凍されて注入用に使用され、残りの２０％の部分は凍結保存状態で維持され、潜在的な将来の使用に備えて両親の許可を得て保存された。全ての患者がその臍帯血注入を終えた。患者に投与された、解凍された臍帯血製剤の特性は表１に示される。注入されたＴＮＣＣ中央値および生存ＣＤ３４細胞の投与量は、それぞれ２．６×１０７／ｋｇ（範囲１〜８×１０７）および０．３×１０５／ｋｇ（範囲０．１〜４．２×１０５）であった。注入されたＣＦＵ中央値は１２２５．５／ｋｇ（範囲８５．５〜４６２０）であった。この研究で利用した投薬基準は、民間バンクに保存された臍帯血ユニットを利用する本発明者らの以前の研究と一致したが、これらのＴＮＣＣ、ＣＤ３４、およびＣＦＵ値は本発明者らの以前の経験よりも低い。（Ｓｕｎ  Ｊら，Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ  ２０１０；５０：１９８０−１９８７）。バンクによって報告された凍結保存前の無菌培養が陰性であったにもかかわらず、１ユニットはデュークでの解凍後試料からコアグラーゼ陰性ブドウ球菌を増殖させた。
【００５５】
自家臍帯血注入の安全性
この非盲検第１相治験の主要なエンドポイントは安全性であった（図１）。本発明者らの以前の神経疾患を有する子供における自家臍帯血注入の安全性研究（Ｓｕｎ  Ｊら，Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ  ２０１０；５０：１９８０−１９８７）で既に報告されたように、自家臍帯血注入は忍容性が高かった。重篤なＡＥは、どの参加者においても報告されなかった。２３名の参加者で合計９２件のＡＥが報告され（図１）、中央値は参加者あたり３事象であった（範囲：１〜１５）。全ての事象は軽度（７１事象）または中程度（２１事象）に段階分けされた。１２の事象（１３％）が注入に関連すると考えられ、最も一般的であるのは、注入の日に蕁麻疹（ｕｒｔｉｃａｒｔｉａ）および／または咳が生じることによって現れるアレルギー反応であった（４名の参加者で５事象；全て軽度；２事象はＩＶベナドリルの追加投与が必要）。最も一般的な無関係のＡＥは、興奮、皮膚の変化、および典型的な小児期感染であり、注入後２日から１年の間に報告された。注入に関連する感染または血流感染または重篤な感染はどの患者にも認められなかった。
【００５６】
行動試験
投与の実現可能性も試験され、ＡＳＤの子供の行動転帰を評価するために一般に使用されるいくつかの測定の結果が説明された。複数の親評価および臨床医評価の測定を評価した。行動転帰はベースラインＩＱと相関したが、年齢または細胞投与量とは相関しなかった。行動の変化は、行動介入、言語療法、作業療法の時間数、または研究期間中に子供が受けた教育時間の時間数とも相関しなかった。選択された測定、主要行動エンドポイントおよび重要な副次的行動エンドポイント（ＶＡＢＳ−ＩＩ、ＣＧＩ−Ｓ、ＣＧＩ−Ｉ、ＰＤＤＢＩ、ＥＯＷＰＢＴ）、およびＥＧＴバイオマーカーは全ての実証された改善を測定し、以下に説明される。
【００５７】
ＶＡＢＳ−ＩＩは、社会性、コミュニケーションおよび適応行動を評価する、親の報告に基づく測定である。図２は、３つの時点の全てで評価を完了した２４名の参加者のＶＡＢＳ−ＩＩ社会性領域について、全ての患者（パネルＡ）およびＩＱにより層別化された患者（パネルＢ）の標準スコアの分布を示す。標準スコアの統計学的に有意な増加がベースラインから６カ月まで観察された。この変化は、６カ月から１２カ月まで安定していた。変化は、社会性（ｒｓ＝０．５７、９５％  ＣＩ：０．２０〜０．７９、Ｐ＝０．００４）および適応行動（ｒｓ＝０．４２、９５％  ＣＩ：０．０１〜０．７０、Ｐ＝０．０４）領域において非言語ＩＱと正の相関があったが、コミュニケーション領域（ｒｓ＝０．２２、９５％  ＣＩ：−０．２１〜０．５７、Ｐ＝０．３１）では相関しなかった。
【００５８】
ＣＧＩ−ＳおよびＣＧＩ−Ｉは、ＡＳＤの中心的な症状の重症度および重症度の変化を経時的に評価するために使用される臨床医評価測定である。図３は、全ての時点で完全に評価可能であった２２名の参加者におけるＣＧＩ−Ｓ（パネルＡ）およびＣＧＩ−Ｉ（パネルＢ）の分布を示す。ＣＧＩ−Ｓにおいて、ベースラインで、参加者の大半は中程度に重度（４３．５％）または重度（２６．１％）と分類され、残りの参加者は中程度またはかろうじて明白なＡＳＤ症状（各１３．６％）と分類された。６カ月で、中程度に重度および重度の症状を持つ参加者の割合は低下し（各２２．７％）、残りの参加者は中程度（３１．８％）、軽度（１３．６％）、またはかろうじて明白（９．１％）と分類された。図３Ｂは、６カ月および１２カ月でのＣＧＩ−Ｉの分布を示す。これらの時点の各々で測定された改善はベースラインに関連している。６カ月で、９名の参加者（４０．９％）が何も変化を示さなかったが、２名（９．１％）が少し改善され、８名（３６．４％）が改善され、３名（１３．６％）が非常に改善された（Ｐ＜０．００１）。１２カ月でのＣＧＩ−Ｉは同様であったが（Ｐ＝０．００１）、２名の参加者（１３．６％）は、ベースラインよりも少し悪化したと評価され、その一方でどの参加者も６カ月評価では、このカテゴリーにいなかった。１２カ月のＣＧＩ−Ｉは、非言語ＩＱに関連していたが、年齢または注入された細胞投与量には関連していなかった（図示せず）。
【００５９】
ＰＤＤＢＩ−自閉症総合Ｔスコア（Ａｕｔｉｓｍ  Ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ  Ｔ−Ｓｃｏｒｅ）は、ＡＳＤ症状を評価する、親に報告される測定である。ＰＤＤＢＩは、ベースライン、３、６、９、および１２カ月に実施された（表２）。自閉症総合Ｔスコアは経時的に低下し、ＡＳＤ症状の改善を示唆する。変化の大半はベースラインから３カ月までの合間に生じ、予測された平均低下は７．５２ポイントであった（９５％  ＣＩ：−１２．３８、−２．６７；Ｐ＝０．００４）。３カ月から１２カ月には有意な変化はなかった（平均：０．７２、９５％  ＣＩ：−１．１４、２．５７；Ｐ＝０．４３）。
【表２】
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【００６０】
ＥＯＷＰＶＴは、臨床医に実施される、話し言葉と画像を一致させる能力の評価である。ＥＯＷＰＶＴ素点は、ベースラインと６カ月の間に患者の５６％で改善され、６〜１２カ月の間に患者の６８％で改善された（表２）。ＥＯＷＰＶＴ素点の変化は、非言語ＩＱに関連していた（ベースライン〜６カ月：ｒｓ＝０．５９、９５％  ＣＩ：０．２３、０．８０、Ｐ＝０．００３；６〜１２カ月：ｒｓ＝０．５５、９５％  ＣＩ：０．１５、０．７８、Ｐ＝０．００９）が、年齢または注入した細胞投与量には関連していなかった（全てについてＰ＞０．０５）。
【００６１】
視線追跡は、様々な社会と関係のない刺激に囲まれた、自然主義的で動的な社会的刺激（関わりを得ようと努力している女優）を対象がモニターで見ている間に、その参加者の眼の動きをコンピュータが追跡する、コンピュータ化された試験である。注意は、４つのターゲット（女優の目、口、顔および上半身）に対して測定され、別々のＧＥＥモデルを各ターゲットに当てはめた。各モデルには２１名の参加者が含まれ、ベースライン、６、および１２カ月で測定された。これらのモデルは、時間とともに、女優の目を凝視するオッズにおいて２０％の増加を示した（ＯＲ＝１．２０、９５％  ＣＩ：１．００、１．４３；Ｐ＝０．０４８）。他の３つのターゲットでは、視線に大きな変化はなかった（表３）。視線追跡とＶＡＢＳ−ＩＩ社会性標準スコアとの間の関係を調べることにより、ＶＡＢＳ−ＩＩ社会性標準スコアの７点の変化が、女優を凝視するオッズの１４％の増加に関連していることが明らかになった（ＯＲ＝１．１４、９５％  ＣＩ：１．７、１．２１；Ｐ＜０．００１）。
【表３】
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【００６２】
複数の試験の調整
この研究では多数の行動試験が行われているため、本発明者らは、偽陽性率法を１回目と２回目の６カ月のフォローアップ期間に別々に適用することにより、９つの行動転帰測定間の偽陽性結果の可能性を調査した（表４）。最初の６カ月のフォローアップ中に有意な結果を示した全ての転帰測定は、Ｐ値のＦＤＲ調節後も統計学的に有意なままであった。６〜１２カ月の期間中、ＥＯＷＰＶＴおよびＣＧＩ−Ｉは、ＦＤＲ手順の適用後も統計学的に有意なままであった。
【表４】
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【００６３】
考察
この第１相非盲検研究では、ＡＳＤを持つ幼児における自家臍帯血の単回静脈内注入の安全性および実現可能性が評価された。将来の細胞治療治験のエンドポイントとして使用するために最適となりうる測定がどれであるかを定めるため、様々な行動転帰測定および機能転帰測定の変化も記載された。注入後１２ヶ月間にわたる有害事象の評価は、臍帯血注入が安全で忍容性が高いことを示した。全ての関連事象が想定内とみなされ、後遺症なく解決された。最も一般的な無関係のＡＥは、興奮、皮膚の変化、および典型的な小児期感染であった。特に、興奮は、本発明者らの以前の研究である他の後天性神経学的状態を持つ子供における自家臍帯血注入において一般的な副作用ではなかったので、ＡＳＤを持つ子供に特有でありうる。本研究において、参加者は、その臍帯血注入の直前にＭＲＩのために鎮静剤を使用された。従って、興奮の頻度の増加は、鎮静から覚醒することと、ＡＳＤを持つ子供にＩＶとパルスオキシメーターを設置することという課題を反映している可能性があり、そのため、その基礎疾患に関連している可能性がある。
【００６４】
行動の著しい改善は、本研究の広範囲の転帰測定にわたって見出された。これらには、親の報告する測定（ＶＡＢＳ−ＩＩの社会性、コミュニケーション、および適応行動のスコア、ならびにＰＤＤＢＩを含む）、および臨床医評価（ＣＧＩ−Ｓ、ＣＧＩ−Ｉ、およびＥＯＷＰＶＴを含む）、ならびに客観的視線追跡測定の改善が含まれた。観察された行動変化の大部分は最初の６カ月の間に起こり、注入後（ｐｏｓｔ−ｉｎｆｌａｔｉｏｎ）６カ月から１２カ月の間で持続した。断固たる知見は、子供の非言語ＩＱが転帰測定の大半の変化と相関していて、非言語ＩＱが高いほど、行動のより大きな改善に関連していることであった。
【００６５】
注目すべきことに、本研究の参加者の大半は白人であり、資源を有し、赤ちゃんの臍帯血を民間バンクに預けることを選択する可能性が高いという米国の人口統計を反映していた。しかし、ＡＳＤは全ての人口学的背景をもつ子供に生じるので、臍帯血療法が有効であるならば、自家細胞だけが使用される場合には民間バンクの資源をもつ家族にアクセスが限定されることになる。したがって、将来の研究は、有効であることが見出された場合に、すべての罹患する子供のためのこの治療法へのアクセスを拡大するための基盤を築くために、最も利用可能なドナー（自家または同種）をプラセボに対して試験することになる。
【００６６】
これらの結果はＡＳＤにおける臍帯血由来の治療法を用いる将来の研究にいくらかの見込みを提供するが、この研究の限界に注意することが重要である。制御されない非盲検試験であるので、観察された行動の変化が処置によるものか、未就学期の間の自然な発達過程を反映するものなのかを判断することは不可能である。さらに、標本サイズが小さいため、交絡変数の寄与を完全に評価することが困難となる。この研究は、行動の変化と年齢、行動介入サービスの量または注入された細胞投与量との間の相関を特定しなかったが、限られた標本サイズならびに制限された年齢および投薬範囲は、そのような関連性を検出する能力を低下させる可能性がある。
【００６７】
上で説明した各転帰測定は、変化に対する感度を示し、より大きな治験での潜在的有用性を示した。さらに、これらの測定の不履行による減少は最小減であり、これらの測定がこの年齢範囲のＡＳＤの子供に実現可能であることを示唆している。この研究の結果をガイドとして使用して、本発明者らは、ＶＡＢＳ社会性標準スコアを、親の期待効果を減らすために、訓練された臨床医による実施を伴う、本発明者らの次の研究の主な転帰測定として選択した。このスコアは、現在の研究で６カ月の期間にわたる変化に対する感度を示した、自閉症に関連する中心的な社会的行動の有効な測定を提供するものであり、より大きな臨床治験で実現可能である。欧州医薬品庁の自閉症臨床治験の設計に関する最近のガイダンス案（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｍａ．ｅｕｒｏｐａ．ｅｕ／ｄｏｃｓ／ｅｎ＿ＧＢ／ｄｏｃｕｍｅｎｔ＿ｌｉｂｒａｒｙ／Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ＿ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ／２０１６／０３／ＷＣ５００２０２６５０．ｐｄｆ．のＡＳＤ−Ｄｒａｆｔ（２０１６））と一致して、単一の治療が全ての自閉症症状を改善することはできず、従って、全体的な機能改善が、自閉症の有効性評価の重要な構成要素である。そのため、臨床医評価ＣＧＩおよびさらなる測定が副次的エンドポイントとして、ＡＳＤの中心的な症状の改善における臍帯血注入の有効性を正式に評価するように設計された、将来の第２相二重盲検無作為臨床治験でさらに評価される必要がある。
【００６８】
本開示は、ＡＳＤを持つ幼児における自家臍帯血の静脈内注入が安全かつ実現可能であることを実証する。本開示は、この結論を裏付ける非盲検第１相治験が、注入後最初の６ヶ月で観察された行動の著しい改善と、これらの著しい改善が注入後１２ヶ月で持続していたことを説明することを示す。高いベースライン非言語ＩＱほど、高い改善度に関連していた。この開示は、実現可能であり、変化に対する感度があり、発達上適切である転帰測定であって、従って将来の臨床治験および治療環境で、ＡＳＤを持つ幼児の処置のための臍帯血療法の有効性を試験するための使用に適している転帰測定を特定する。
【００６９】
本明細書に記載される実施例および実施形態は、例示目的のためだけのものであり、それに照らして様々な変更または変化が当業者に示唆され、本願の趣旨および範囲ならびに添付される特許請求の範囲内で組み込まれうることは当然理解される。本明細書において引用される全ての刊行物、特許、および特許出願は、あらゆる目的において参照により本明細書に組み込まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【国際調査報告】
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