(57)【要約】  本発明は、妊娠糖尿病を治療又は予防するためのラクトバシルス・ラムノサスＨＮ００１又はその誘導体を含む使用、組成物、及び医薬に加えて、ラクトバシラス・ラムノサスＨＮ００１又はその誘導体を投与することによって妊娠糖尿病を治療又は予防する方法を提供する。
2020502247.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体における妊娠糖尿病（ＧＤＭ）又は少なくとも１種のＧＤＭ関連リスクもしくはＧＤＭの続発症を治療又は予防する方法であって、１９９７年８月１８日付けのＡＧＡＬ寄託番号ＮＭ９７／０９５１４のラクトバシルス・ラムノサスＨＮ００１又はその誘導体の、それを必要とする被験体への投与を含む、上記方法。
【請求項２】
胎児、新生児、乳児、又は小児被験体における少なくとも１種のＧＤＭ関連リスクもしくはＧＤＭの続発症を予防する方法であって、１９９７年８月１８日付けのＡＧＡＬ寄託番号ＮＭ９７／０９５１４のラクトバシルス・ラムノサスＨＮ００１又はその誘導体の、それを必要とする胎児、新生児、乳児、又は小児被験体の母親への投与を含む、上記方法。
【請求項３】
前記エル・ラムノサスＨＮ００１が、生理学的に許容し得る希釈剤、補助剤、担体、又は賦形剤を含む組成物で投与される、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記エル・ラムノサスＨＮ００１が食品を含む組成物で投与される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記食品が、培養乳、ヨーグルト、チーズ、乳飲料、及び粉ミルクから選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記エル・ラムノサスＨＮ００１が、医薬的に許容し得る希釈剤、補助剤、担体、又は賦形剤を含む医薬組成物で投与される、請求項１又は３に記載の方法。
【請求項７】
前記エル・ラムノサスＨＮ００１が、母体調製乳、母体サプリメント、ダイエット製品、乳児用調製乳、フォローオン調製乳、及び成長期調製乳の少なくとも１種で投与される、請求項１又は３に記載の方法。
【請求項８】
前記エル・ラムノサスＨＮ００１が生殖能力がある形態である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記エル・ラムノサスＨＮ００１が、死滅、溶解、分画、又は弱毒化されている、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記被験体、又は前記胎児、新生児、乳児、もしくは小児被験体の母親が、ＧＤＭの高いリスクを有する、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記被験体又は母親が以前ＧＤＭに罹患したことがある、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記被験体又は３５才を超えている母親における、請求項１０又は１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記被験体又は母親が以前妊娠したことがある、請求項１０〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
妊娠の最初の３ヵ月の後にＨＮ００１の投与を開始することを含む、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
ＨＮ００１の投与が妊娠１４〜１６週の間に始まる、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
被験体、又は胎児、新生児、乳児、もしくは小児被験体の母親における空腹時平均血中グルコースレベルを低下させることを含む、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
空腹時平均血中グルコースレベルが約４．３５ｍｍｏｌ／ｌ未満に低減される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
ＧＤＭを治療又は予防するための、又は１種又はそれ以上のＧＤＭ関連リスク又は１種又はそれ以上のＧＤＭの続発症を治療又は予防するための、１９９７年８月１８日付けのＡＧＡＬ寄託番号ＮＭ９７／０９５１４のエル・ラムノサスＨＮ００１、又はその誘導体。
【請求項１９】
ＧＤＭの治療又は予防における使用のための、あるいは１種もしくはそれ以上のＧＤＭ関連リスク又は１種もしくはそれ以上のＧＤＭの続発症の治療又は予防のための、１９９７年８月１８日付けのＡＧＡＬ寄託番号ＮＭ９７／０９５１４のエル・ラムノサスＨＮ００１、又はその誘導体の組成物。
【請求項２０】
生理学的に許容し得る希釈剤、補助剤、担体、又は賦形剤を含む、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
食品を含む、請求項１９又は２０に記載の組成物。
【請求項２２】
前記食品が、培養乳、ヨーグルト、チーズ、乳飲料、及び粉ミルクから選択される、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
医薬的に許容し得る希釈剤、補助剤、担体、又は賦形剤を含む医薬組成物である、請求項１９又は２０に記載の組成物。
【請求項２４】
母体サプリメント、ダイエット製品、乳児用調製乳、フォローオン調製乳、及び成長期調製乳から選択される母体調製乳である、請求項１９又は２０に記載の組成物。
【請求項２５】
前記エル・ラムノサスＨＮ００１が生殖能力がある形態である、請求項１９〜２４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２６】
前記エル・ラムノサスＨＮ００１が死滅、溶解、分画、又は弱毒化されている、請求項１９〜２４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２７】
ＧＤＭの治療又は予防のための、あるいは１種もしくはそれ以上のＧＤＭ関連リスク又は１種もしくはそれ以上のＧＤＭの続発症の治療又は予防のための組成物の製造における、１９９７年８月１８日付けのＡＧＡＬ寄託番号ＮＭ９７／０９５１４のエル・ラムノサスＨＮ００１、又はその誘導体の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、妊娠糖尿病（ＧＤＭ）を治療又は予防するためのプロバイオティクス細菌の使用、特に乳酸菌株の使用に関する。細菌及び細菌を含む組成物を使用する方法もまた提供される。
【背景技術】
【０００２】
経済発展に伴う食物消費のパターンの変化などのライフスタイル要因が、ニュージーランド（ＮＺ）（１）及びその他の先進国（２）における妊娠糖尿病（ＧＤＭ）を含む、肥満及び関連疾患の広く認識されかつ増大する問題をもたらした。
【０００３】
妊娠前の体重過多及び肥満はＧＤＭの４６％（３）を占めることが証明されており（３）、妊娠中の過剰な体重増加、以前のＧＤＭ、糖尿病の家族歴、多嚢胞性卵巣症候群（ＰＣＯＳ）、高齢、及びより高い出産歴も危険因子として特定されている（４）。ＧＤＭ自体は、子癇前症、流産、早産、巨大児、分娩誘発、及び帝王切開のリスクを高める（２、３）。ＧＤＭはまた、後期の母と児の肥満、及びそれに続く２型糖尿病のリスクも増加させる（５）。
【０００４】
現在、ＧＤＭの診断基準について国際的な合意はない。国際糖尿病・妊娠学会（the International Association of Diabetes and Pregnancy Study Group：ＩＡＤＰＳＧ）による１つの診断基準は、経口グルコース負荷試験閾値が≧５．１ｍｍｏｌ／Ｌ（空腹時血漿グルコース）、又は７５ｇ投与後１時間のグルコースレベルが≧１０ｍｍｏｌ／Ｌ又は２時間後に≧８．５ｍｍｏｌ／Ｌである。ＧＤＭに対するニュージーランド保健省（The New Zealand Ministry of Health）ガイドラインの定義では、より高いベースラインと２時間のグルコース試験閾値（空腹時血漿グルコース≧５．５ｍｍｏｌ／Ｌ又は７５ｇ投与後２時間のグルコースレベル≧９ｍｍｏｌ／Ｌ）が指定されている（１）。
【０００５】
ＧＤＭの現在の治療又は予防は、一般に被験体の健康的なライフスタイルの維持に基づいている。ＧＤＭの予防には、食事制限や定期的な運動を通して、妊娠中の健康な体重と血糖を維持することが含まれる。治療はまた、毎日の血中グルコース検査及びインスリン注射も含む。食事カウンセリングは、ＧＤＭを予防するために現在使用されている別の方法である。
【０００６】
肥満及び関連疾患、特にＧＤＭを治療又は予防するのに有用な方法及び組成物、特に他の乳酸菌を利用するか又はこれを含む方法及び組成物が依然として必要とされている。また、食事の変更及びカウンセリングに依存しない、ＧＤＭを治療又は予防するための方法及び組成物も必要とされている。ＧＤＭ関連リスク又はＧＤＭの続発症を予防又は改善するための方法及び組成物もまた望ましい。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の目的は、これらの必要条件のうちの１つ又はそれ以上を何らかの方法で達成すること、又は少なくとも国民に有用な選択を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
第１の態様において本発明は、被験体におけるＧＤＭを治療又は予防する方法であって、必要とする被験体への、１９９７年８月１８日付けのラクトバシルス・ラムノサス（Lactobacillus rhamnosus）ＨＮ００１、ＡＧＡＬ寄託番号ＮＭ９７／０９５１４の投与を含む方法を提供する。
【０００９】
１つの実施態様において、エル・ラムノサス（L. rhamnosus）ＨＮ００１は、生理学的に許容し得る希釈剤、補助剤、担体、又は賦形剤との組成物の形態で投与される。
【００１０】
１つの実施態様において、ＨＮ００１は、投与される唯一のプロバイオティクス細菌である。
【００１１】
１つの実施態様において、ＨＮ００１は、１種又はそれ以上のプレバイオティクスと共に投与される。
【００１２】
１つの実施態様において、前記生理学的に許容し得る希釈剤、補助剤、担体、又は賦形剤は食品である。１つの実施態様において、前記食品は、培養乳（cultured milk）、ヨーグルト、チーズ、乳飲料、又は粉ミルクである。
【００１３】
あるいは前記組成物は医薬組成物であり、前記賦形剤又は希釈剤は医薬的に許容し得る希釈剤、補助剤、担体、又は賦形剤である。
【００１４】
別の態様において本発明は、被験体における１種又はそれ以上のＧＤＭ関連リスク又は１種又はそれ以上のＧＤＭの続発症を治療又は予防する方法であって、必要とする被験体への、１９９７年８月１８日付けのラクトバシルス・ラムノサス（Lactobacillus rhamnosus）ＨＮ００１、ＡＧＡＬ寄託番号ＮＭ９７／０９５１４の投与を含む方法を提供する。
【００１５】
被験体が胎児被験体である実施態様において、１種又はそれ以上のＧＤＭ関連リスク又は１種又はそれ以上のＧＤＭの続発症を治療又は予防する方法は、胎児被験体に、エル・ラムノサスＨＮ００１又はエル・ラムノサスＨＮ００１を含む組成物を投与することを含む。そのような実施態様において、被験体への投与は間接投与と見なすことができることは理解されるであろう。１つの実施態様において、組成物は、母体調製乳（maternal formula）又は母体サプリメントである。
【００１６】
被験体が新生児、乳児、又は小児被験体である特定の実施態様において、１種又はそれ以上のＧＤＭ関連リスク又は１種又はそれ以上のＧＤＭの続発症を治療又は予防する方法は、エル・ラムノサスＨＮ００１を含む組成物を被験体に投与することを含む。そのような実施態様において、被験体への投与は直接投与と見なすことができることは理解されるであろう。
【００１７】
被験体が母乳育児中の新生児、乳児、又は小児被験体であるような他の実施態様において、１種又はそれ以上のＧＤＭ関連リスク又は１種又はそれ以上のＧＤＭの続発症を治療又は予防する方法は、エル・ラムノサスＨＮ００１又はエル・ラムノサスＨＮ００１を含む組成物を被験体の母親に投与することを含む。そのような実施態様において、被験体への投与は直接投与と見なすことができることは理解されるであろう。
【００１８】
組成物は、調製乳、例えば、そのような組成物の低アレルギー性の実施態様を含む、母体調製乳、フォローオン調製乳（follow-on formula）、成長期調製乳（growing-up formula）、又はダイエット製品であり得る。
【００１９】
被験体が成人被験体である好適な実施態様において、方法はエル・ラムノサスＨＮ００１を含む組成物を被験体に投与することを含む。好ましくは、組成物はサプリメント、調製乳、ダイエット製品、又は食品である。
【００２０】
特定の実施態様において、エル・ラムノサスＨＮ００１は生殖能力がある形態、好ましくは生殖能力がある形態及び量である。他の実施態様において、エル・ラムノサスＨＮ００１は、死滅、溶解、分画（fractionated）、又は弱毒化されている。
【００２１】
本発明はさらに、ＧＤＭを治療又は予防するための、あるいは１種又はそれ以上のＧＤＭ関連リスク、又は１種又はそれ以上のＧＤＭの続発症を治療又は予防するためのエル・ラムノサスＨＮ００１又はその誘導体を、及びＧＤＭを治療又は予防するための、又は１種又はそれ以上のＧＤＭ関連リスク、又は１種又はそれ以上のＧＤＭの続発症を治療又は予防するための組成物の製造における、エル・ラムノサスＨＮ００１又はその誘導体を提供する。組成物は、例えば食品又は医薬品を含む、下記のような組成物であり得る。
【００２２】
本発明はまた、本発明の組成物、例えば被験体におけるＧＤＭを治療又は予防するための組成物の、製造におけるエル・ラムノサスＨＮ００１の使用も企図することが理解されるであろう。
【００２３】
１つの実施態様において、組成物は経口投与に適している。他の実施態様において、組成物は非経口投与に適している。胎児被験体における１種又はそれ以上のＧＤＭ関連リスク又は１種又はそれ以上のＧＤＭの続発症を予防することに関する実施態様において、組成物は妊娠中の母親への経口投与に適している。
【００２４】
様々な実施態様において、本方法は、ＧＤＭの高いリスクを有する被験体におけるＧＤＭを治療又は予防する方法である。一例ではこの方法は、以前ＧＤＭに罹患したことのある被験体におけるＧＤＭを治療又は予防する方法である。一例ではこの方法は、３５才を超える被験体、例えば受胎時に３５才を超える被験体におけるＧＤＭを治療又は予防する方法である。別の例においてこの方法は、以前妊娠したことのある被験体におけるＧＤＭを治療又は予防する方法である。
【００２５】
様々な実施態様において、被験体は３０ｋｇ／ｍ２未満のＢＭＩを有する。
【００２６】
１つの実施態様において、この方法は、有効量のＨＮ００１又はその誘導体をそれを必要とする被験体に投与することを含む、以前ＧＤＭに罹患したことがある被験体におけるＧＤＭの再発を予防する方法である。
【００２７】
１つの実施態様において、この方法は、妊娠の最初の3カ月間の後にＨＮ００１の投与を開始することを含む。１つの実施態様において、ＨＮ００１の投与は妊娠１４〜１６週の間に始まる。
【００２８】
１つの態様において、本発明は、有効量のＨＮ００１又はその誘導体をそれを必要とする被験体に投与することを含む、被験体における空腹時平均血中グルコースレベルを低下させる方法に関する。
【００２９】
１つの実施態様において、空腹時平均血中グルコースレベルは約４．３５ｍｍｏｌ／Ｌ未満である。
【００３０】
本発明はまた、広義には、個別に又は集合的な、本願明細書において参照されるか又は示される部分、要素、及び特徴に、ならびに任意の２つまたはそれ以上の前記部分、要素、又は特徴の任意の又はすべての組み合わせにあると言うことができ、そして、本発明が関連する技術分野において既知の等価物を有する特定の整数が本明細書に記載されている場合、そのような既知の等価物は、それらがあたかも個々に記載されているかのように本明細書に組み込まれるとみなされる。
【００３１】
本明細書で使用される「含む」という用語は、「少なくとも一部は〜からなる」を意味する。「含む」という用語を含む本明細書中の各記載を解釈するとき、この用語が対象とする特徴以外の特徴も存在することができる。「含む（comprise）」及び「含む（comprises）」などの関連用語も同様に解釈されるべきである。
【００３２】
特許明細書、他の外部文書、又は他の情報源を参照した本明細書では、これは一般に、本発明の特徴を論じるための文脈を提供することを目的としている。特に明記しない限り、そのような外部文書への言及は、そのような文書又はそのような情報源がいかなる法域においても、そのような外部文書が、先行技術であること、又は当技術分野における一般常識の一部をなすことの承認として解釈されるべきではない。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１】図１は、試験を通しての試験参加者の状態の図である。
【図２】図２は、ＨＮ００１と、Ａ）年齢３５才以上対３５才未満、Ｂ）ＢＭＩ  ３０ｋｇ／ｍ２以上対３０ｋｇ／ｍ２未満、Ｃ）ＧＤＭの病歴、Ｄ）登録以来の全身性抗生物質の使用、で層別されたＧＤＭとの関連を示す。
【図３】図３は、サブグループ毎にＧＤＭ罹患率のプロットを示す。左のプロットは、妊娠経験のある被験体対妊娠未経験の被験体に対するＨＮ００１投与の効果（出産歴（parity）、左）を示し、そして右のプロットは、３５才を超える被験体対３５才未満の被験体に対するＨＮ００１投与の効果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
本発明は、ＧＤＭの発症率及び重症度に対する乳酸菌エル・ラムノサスＨＮ００１の投与の有益な効果を初めて認識している。
【００３５】
従って第１の態様において本発明は、１９９７年８月１８日付けのＡＧＡＬ寄託番号ＮＭ９７／０９５１４のラクトバシルス・ラムノサスＨＮ００１又はその誘導体の、それを必要とする被験体への投与を含む、被験体のＧＤＭを治療又は予防する方法を提供する。
【００３６】
さらなる態様において本発明はまた、それを必要とする被験体へのラクトバシルス・ラムノサスＨＮ００１又はその誘導体の投与を含む、被験体におけるＧＤＭ関連リスク又はＧＤＭの続発症を治療又は予防する方法を提供する。妊娠被験体におけるＧＤＭ関連リスクは、例えば、特に限定されるものではないが、高血圧、尿路感染症、帝王切開、及び２型糖尿病のリスク上昇である。胎児(fetal)、新生児(neonatal)、乳児（infant）、小児(child)、又は成人の被験体（特に、その母親が子宮内で期間中にＧＤＭに罹患していた被験体）におけるＧＤＭ関連リスク又はＧＤＭの続発症は、例えば、特に限定されるものではないが、早産、肩甲難産、巨大児、先天性欠損症、及び新生児の合併症、例えば低血糖、黄疸、及び呼吸困難、２型糖尿病、心血管疾患、肥満、及び代謝の問題である。
【００３７】
様々な投与経路及び投与方法が考えられるが、経口投与に適した組成物中などのエル・ラムノサスＨＮ００１の経口投与が現在好ましい。当然のことながら、特定の状況において他の投与経路及び投与方法が利用され得るか又は好ましい場合があることが理解されるであろう。例えば、死滅した又は弱毒化されたエル・ラムノサスＨＮ００１又はその誘導体を含む組成物には、非経口経路が利用され得る。
【００３８】
用語「経口投与」は、経口投与、口腔内投与、腸内投与、及び胃内投与を含む。
【００３９】
用語「非経口投与」は、特に限定されるものではないが、局所投与（任意の皮膚、表皮、又は粘膜表面への投与を含む）、皮下投与、静脈内投与、腹腔内投与、及び筋肉内投与を含む。
【００４０】
「被験体」は、動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくは哺乳動物の伴侶動物、又はヒトである。好ましい伴侶動物には、猫、犬、及び馬が含まれる。１つの実施態様において、ヒトは、成人、小児、乳児、新生児、又は胎児である。様々な実施態様において、ヒトの小児、乳児、又は新生児は、母乳育児の小児、乳児、又は新生児である。
【００４１】
「治療する」という用語及びその派生語は、それらの可能な限り広い意味で解釈されるべきである。この用語は、被験体が完全に回復するまで治療されることを意味すると解釈されるべきではない。すなわち「治療する」は、症状の発症又は特定の状態の重症度の改善及び／又は予防を広く含む。
【００４２】
治療は予防的治療を含むこと、例えば予想された又は確立されたＧＤＭの高いリスクを有する被験体、及び／又は妊娠しようとしているかもしくは最近妊娠した被験体などの被験体の予防的治療を含み、又は本発明の組成物を胎児被験体の母親に投与することによる組成物の間接投与による、胎児被験体における１種又はそれ以上のＧＤＭ関連リスク又は１種又はそれ以上のＧＤＭの続発症の予防的治療を含む、ことは理解されるであろう。
【００４３】
別の例において、１種又はそれ以上のＧＤＭ関連リスク又は１種又はそれ以上のＧＤＭの続発症の予防的治療は、本発明の組成物を被験体の母乳育児の母親に投与することによる、組成物の間接投与による、新生児、乳児、又は小児被験体の予防的治療である。
【００４４】
治療は、例えば本発明の組成物を被験体の母親に投与することによる組成物の間接投与による、新生児、乳児、又は小児被験体の治療を含む、ＧＤＭ又はＧＤＭに関連するリスクの１種又はそれ以上のリスクの治療などの、治療的治療を含むことがさらに理解されるであろう。
【００４５】
従って本発明は、妊娠被験体へのエル・ラムノサスＨＮ００１又はエル・ラムノサスＨＮ００１を含む組成物の投与を含む、妊娠被験体におけるＧＤＭを治療又は予防する方法を提供する。
【００４６】
特定の実施態様において、妊娠被験体は、高齢、例えば３５才以上である。
【００４７】
特定の実施態様において、妊娠被験体はＧＤＭの病歴を有する。
【００４８】
特定の実施態様において、エル・ラムノサスＨＮ００１又はエル・ラムノサスＨＮ００１を含む組成物は、妊娠１４週〜１６週から出産まで投与される。
【００４９】
特定の実施態様において、エル・ラムノサスＨＮ００１又はエル・ラムノサスＨＮ００１を含む組成物は、妊娠１４〜１６週から分娩後６ヶ月まで投与される。
【００５０】
従って本発明は、エル・ラムノサスＨＮ００１又はエル・ラムノサスＨＮ００１を含む組成物を被験体の母親に投与することを含む、胎児被験体における１種又はそれ以上のＧＤＭ関連リスク又は１種又はそれ以上のＧＤＭの続発症を予防する方法を提供する。
【００５１】
また、エル・ラムノサスＨＮ００１又はＬ．ラムノサスＨＮ００１を含む組成物を被験者の母親に投与することを含む、新生児、乳児、又は小児被験体における１種又はそれ以上のＧＤＭ関連リスク又は１種又はそれ以上のＧＤＭの続発症を治療又は予防する方法も提供される。
【００５２】
また、エル・ラムノサスＨＮ００１からなるか又は本質的になる組成物を投与することを含む、乳児又は小児被験体における１種又はそれ以上のＧＤＭ関連リスク又は１種又はそれ以上のＧＤＭの続発症を治療する方法も企図される。
【００５３】
特定の実施態様において、乳児又は小児は１才以上の年齢である。
【００５４】
特定の実施態様において、乳児又は小児は、食物感作された乳児又は小児である。
【００５５】
特定の実施態様において、乳児又は小児は、乳児又は小児の母親における以前のＧＤＭの発症のために、１種又はそれ以上のＧＤＭ関連リスク又は１種又はそれ以上のＧＤＭの続発症のリスクがあると見なされる。
【００５６】
１  ラクトバシルス・ラムノサスＨＮ００１
出願人のＰＣＴ国際出願ＰＣＴ／ＮＺ９８／００１２２（ＷＯ９９／１０４７６として公開され、その全体が本明細書に組み込まれる）に記載されているように、ラクトバシルス・ラムノサスＨＮ００１の凍結乾燥培養物は、オーストラリア政府分析研究所（the Australian Government Analytical Laboratories：ＡＧＡＬ）であるニューサウスウェールズ地域研究所（The New South Wales Regional Laboratory, 1 Suakin Street, Pymble, NSW 2073）に、１９９７年８月１８日に寄託され、寄託番号ＮＭ９７／０９５１４を付与された。このブダペスト条約で認定された寄託機関は、現在はＡＧＡＬとは呼ばれず、オーストラリア国立測定研究所（the National Measurement Institute of Australia：ＮＭＩＡ）と呼ばれる。エル・ラムノサスＨＮ００１のゲノム配列は、受け入れ番号ＮＺ＿ＡＢＷＪ００００００００でジーンバンク（GeneBank）から入手可能である。
【００５７】
１．１  形態学的性質
エル・ラムノサスＨＮ００１の形態学的性質を以下に記載する。
【００５８】
ＭＲＳブロス中で増殖させた場合、鎖状に四角い端部を有する、通常０．７×１．１×２．０〜４．０μｍの短〜中ロッド。
【００５９】
グラム陽性、非運動性、非胞子形成性、カタラーゼ陰性通性嫌気性桿菌であり、最適生育温度は３７±１℃で至適ｐＨは６．０〜６．５である。これらはヘテロ発酵性の通性嫌気性細菌であり、グルコースからガスは産生されない。
【００６０】
１．２  発酵性
ＡＰＩ  ５０  ＣＨ糖発酵キットを使用して、エル・ラムノサスＨＮ００１の炭水化物発酵パターンを決定し、５７５７１７７のスコアを得た（２２の顕著な糖のスコアに基づく−ＰＣＴ／ＮＺ９８／００１２２参照）。
【００６１】
１．３  さらなる特性評価
エル・ラムノサスＨＮ００１株は、ヒト腸管上皮細胞に接着するその能力を含む、ＰＣＴ／ＮＺ９８／００１２２に開示されている機能的属性により、及び食物摂取によって誘発された食細胞機能、抗体応答、ナチュラルキラー細胞活性、リンパ球増殖の改善又はインビトロモデル系によって、さらに特性評価することができる。エル・ラムノサスＨＮ００１の本体を確認するために使用することができる当業者に公知で利用可能な多種多様な方法があり、例示的な方法には、ＤＮＡフィンガープリント法、ゲノム分析、配列決定、ならびに関連するゲノム技術及びプロテオミクス技術が含まれることは、理解されるであろう。
【００６２】
本明細書に記載されるように、本発明の特定の実施態様は、生きたエル・ラムノサスＨＮ００１を利用する。他の実施態様において、エル・ラムノサスＨＮ００１誘導体が利用される。
【００６３】
本明細書で使用される用語「誘導体」及びその文法的等価物は、細菌（エル・ラムノサスＨＮ００１などの特定の細菌株に関する使用を含む）に関して使用される場合、細菌の又は細菌由来の変異体及びホモログ、死滅又は弱毒化された細菌、例えば、特に限定されるものではないが、加熱滅菌、溶解、分画、加圧滅菌、放射線照射、及びＵＶ又は光処理された細菌など、及び細菌由来の材料、例えば、特に限定されるものではないが、細菌細胞壁組成物、細菌細胞溶解物、凍結乾燥細菌、細菌由来のプロバイオティクス因子などを企図し、ここで誘導体はプロバイオティクス活性を保持している。このような誘導体、例えば、特に限定されるものではないが、エル・ラムノサスＨＮ００１の１種又はそれ以上の突然変異体、又は１種又はそれ以上のプロバイオティクス因子、及び特に被験体への投与に適した誘導体（例えば組成物）を製造する方法は当該分野で公知である。
【００６４】
上記のようなエル・ラムノサスＨＮ００１を同定するのに適した方法は、例えばエル・ラムノサスＨＮ００１の変異体又はホモログ、又は例えばエル・ラムノサスＨＮ００１由来のプロバイオティクス因子を含む、エル・ラムノサスＨＮ００１の誘導体を同定するのに同様に適していることが理解されるであろう。
【００６５】
「プロバイオティクス因子」という用語は、プロバイオティクス活性の仲介に関与する細菌性分子を指し、特に限定されるものではないが、細菌性ＤＮＡモチーフ、表面タンパク質、低分子有機酸、多糖類、又はリポテイコ酸、及びペプチドグリカンなどの細胞壁成分、又はこれらの任意の２つ以上の混合物を含む。上記のように、これらの分子は明確には同定されておらず、そしていかなる理論にも拘束されることを望むものではないが、プロバイオティクス生物が存在する場合にはこのような分子が存在するであろう。
【００６６】
「プロバイオティクス活性」という用語は、特定の微生物が免疫系を刺激する能力を指す。プロバイオティクス微生物の種類及び活性レベルの測定は当業者に公知である。例えば、Mercenierら (2004)、Leyerら (2004)、またはCummingsら (2004)を参照されたい。例えば、プロバイオティクス活性は、ＰＢＭＣサイトカイン分泌アッセイによって評価することができる。
【００６７】
プロバイオティクス活性を保持することについての言及は、プロバイオティクス微生物の変異体もしくはホモログ、又は弱毒化もしくは死滅したプロバイオティクス微生物のようなプロバイオティクス微生物の誘導体が、なお有用なプロバイオティクス活性を有すること、又はプロバイオティクス微生物又はその誘導体を含む組成物が、有用なプロバイオティクス活性の維持を支持することができることを意味することを意図する。プロバイオティクス活性の仲介に関与する細菌性分子は明確には同定されていないが、可能性のある候補として提案されている分子には、細菌性ＤＮＡモチーフ、表面タンパク質、低分子有機酸、多糖類、及び細胞壁成分（例えばリポテイコ酸及びペプチドグリカン）が含まれる。これらは宿主免疫系の成分と相互作用して免疫調節効果をもたらすと考えられてきた。好ましくは保持された活性は、未処理の（すなわち、生きた又は非弱毒化）対照の活性の、少なくとも約３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９９、又は１００％であり、有用な範囲は、これらの値のいずれかの間で選択することができる（例えば、約３５〜約１００％、約５０〜約１００％、約６０〜約１００％、約７０〜約１００％、約８０〜約１００％、及び約９０〜約１００％）。
【００６８】
当技術分野で公知の従来の固体基質及び液体発酵技術を使用して、本明細書で企図されるようなエル・ラムノサスＨＮ００１を使用を可能にするのに十分な量で増殖させることができる。例えばエル・ラムノサスＨＮ００１は、例えばＷＯ９９／１０４７６に記載されているような条件下で、栄養膜又は深部培養増殖技術を使用して、配合するためのバルクで製造することができる。簡単に述べると増殖は、生物の増殖に十分な任意の温度で好気的条件下で行われる。例えばエル・ラムノサスＨＮ００１については、３０〜４０℃の温度範囲、好ましくは３７℃が好適である。増殖培地のｐＨはわずかに酸性、好ましくは約６．０〜６．５である。インキュベーション時間は、単離物が定常増殖期に達するのに十分である。
【００６９】
エル・ラムノサスＨＮ００１細胞は、当技術分野で公知の方法、例えば、従来の濾過法又は沈降法（例えば、遠心分離法）によって回収することができるか、又はサイクロンシステムを使用して乾式で回収することができる。エル・ラムノサスＨＮ００１細胞は、直ちに使用するか、又は標準的な技術を使用して必要に応じて、−２０℃〜６℃、好ましくは−４℃で凍結乾燥又は冷蔵することによって保存することができる。
【００７０】
２  組成物
本明細書で有用な組成物は、食品、飲料、食品添加物、飲料添加物、栄養補助食品、栄養製品、医療用食品、経腸又は非経口栄養製品、食事代替品、薬用化粧品、機能性食品、又は医薬品として配合することができる。適切な配合物は、本明細書の技術及び教示に関して、当業者によって調製され得る。
【００７１】
１つの実施態様において、本明細書で有用な組成物は、細菌又は細菌誘導体を担持することができる任意の食用消費者製品を含む。適切な食用消費者製品の例としては、粉末、液体、菓子製品、例えば、粉末または液体の形態の、チョコレート、ゲル、アイスクリーム、再構成フルーツ製品、スナックバー、フードバー、ミューズリーバー、スプレッド、ソース、ディップ、乳製品、例えばヨーグルト及びチーズ、乳製品及び非乳製品の飲料を含む飲料（乳飲料やヨーグルト飲料など）、粉ミルク、乳製品及び非乳製品サプリメントを含むスポーツサプリメント、プロテインスプリンクルなどの食品添加物、毎日のサプリメント錠剤を含む栄養補助食品、離乳食やヨーグルト、および母体調製乳などの調製乳が挙げられ、そのような組成物の低アレルギー性例を含む。この実施態様内で、本明細書で有用な好ましい組成物は、粉末又は液体形態の母体調製乳であり得る。本明細書で有用な適切な機能性食品組成物は同様の形態で提供されてもよい。
【００７２】
粉末又は液体形態の母体調製乳などの調製乳の例には、以下のものが含まれる。以下の配合物は単なる例示であり、そのような製品を配合するための既知の原理に従って変更がなされてもよいことは理解されるべきである。例えば、列記された乳製品タンパク質に非乳製品源のタンパク質を補足することができる。同様に、これらの製品の、タンパク質源が完全に又は部分的に加水分解されている低アレルギー性例が提供され得る。そのような加水分解物は当技術分野において公知である。本明細書で有用な母体調製乳の一例は、以下を含む（ｗ／ｗ）：
３０〜６０％の乳糖、
１５〜３５％の植物油、
０〜４０％の脱脂粉乳、
０〜４０％の乳清タンパク質、例えばＷＰＣ又はＷＰＩ、好ましくは８０％のＷＰＣ（ＷＰＣ８０）、
０．００１〜５０％のエル・ラムノサスＨＮ００１。
【００７３】
本明細書で有用な母体調製乳の別の例は、以下を含む（Ｗ／Ｗ）：
４０〜６０％の乳糖、
２０〜３０％の植物油、
１０〜１５％の脱脂粉乳、
６〜８％の乳清蛋白質、好ましくはＷＰＣ８０、
０．００１〜１０％のエル・ラムノサスＨＮ００１。
【００７４】
母体調製乳の別の例は、本明細書では以下を含む（Ｗ／Ｗ）：
４０〜６０％の乳糖、
２０〜３０％の植物油、
１０〜１５％の脱脂粉乳、
６〜８％の乳清蛋白質、好ましくはＷＰＣ８０、
０．００１〜５％のエル・ラムノサスＨＮ００１。
【００７５】
本明細書で有用な母体調製乳の別の例は、以下を含む（Ｗ／Ｗ）：
４０〜６０％の乳糖、
２０〜３０％の植物油、
１０〜１５％の脱脂粉乳、
６〜８％の乳清蛋白質、好ましくはＷＰＣ８０
０．００１〜２％のエル・ラムノサスＨＮ００１。
【００７６】
これらの調製乳のいずれも、０．１〜４％ｗ／ｗ、好ましくは２〜４％ｗ／ｗの１種又はそれ以上のビタミンプレミックス、ミネラルプレミックス、レシチン、１種又はそれ以上の酸化防止剤、１種又はそれ以上の安定剤、１種又はそれ以上のヌクレオチド、又はこれらの任意の２種以上の組み合わせを含んでもよい。いくつかの実施態様において、これらの乳児用調製乳は、２７００〜３０００ｋＪ／Ｌを提供するように配合することができる。
【００７７】
乳製品ベースの飲料（例えば乳飲料及びヨーグルト飲料）などの本発明の食用消費者製品の例は、エル・ラムノサスＨＮ００１又はその誘導体に加えて、典型的にはタンパク質源（例えば乳製品タンパク質源）、脂質源、炭水化物源を含み、及びこれらから構成されてよい。当業者によく知られているような香味剤、着色剤、及び他の添加剤、担体、又は賦形剤も含まれ得る。
【００７８】
本発明での使用に適した食用消費者製品のさらなる例は、ＰＣＴ国際出願ＰＣＴ／ＡＵ２００７／０００２６５（ＷＯ２００７／０９８５６４として公開）及びＰＣＴ国際出願ＰＣＴ／ＡＵ２００７／００１６９８（ＷＯ２００８／０５５２９６として公開）（これらの各々は、その全体が本明細書に組み込まれる）に記載されているようなUnistraw（商標）送達システム（Unistraw International Limited, Australia）である。当業者であれば、エル・ラムノサスＨＮ００１及びその誘導体を、場合により１種またはそれ以上の追加のプロバイオティクス因子又はプロバイオティクス物質と一緒に、そのような送達システムで使用するための基材（例えば水溶性ビーズ）上にコーティングすることができることを理解するであろう。
【００７９】
代替の実施態様において、本明細書で有用な組成物は、特に限定されるものではないが、経口又は非経口投与（局所、皮下、筋肉内、及び静脈内投与を含む）を含む任意の選択された経路による被験体への投与を可能にするように配合され得る。
【００８０】
例えば、本発明に係る使用のための機能性食品組成物は、栄養補助食品（例えばカプセル剤、ミニバッグ、又は錠剤）又は食品（例えば、牛乳、ジュース、ソフトドリンク、ハーブティーバッグ、または菓子）でもよい。組成物はまた、タンパク質、炭水化物、ビタミン、ミネラル、又はアミノ酸などの他の栄養素も含み得る。組成物は、例えば錠剤、硬もしくは軟カプセル、水性もしくは油性懸濁液、又はシロップなどの経口使用に適した形態でも、又はプロピレングリコール水溶液若しくは緩衝水溶液などの非経口用途に適した形態でもよい。機能性組成物中の活性成分の量は、大部分は被験体の具体的な必要性に依存する。当業者によって認識されるように、この量は、投与経路、及び他のプロバイオティクス因子又はプロバイオティクス物質の可能性のある共使用に依存して変化する。
【００８１】
ある実施態様において本発明の組成物は、所望のカロリー含有量になるように、例えば所望の量のエネルギー又は１日の推奨エネルギー摂取量の所望の割合を送達するように、配合することができることは、理解されるであろう。例えば食用消費者製品は、１食当たり約２００〜約２０００ｋＪ、又は１食当たり約５００ｋＪ〜約２０００ｋＪ、又は１食当たり約１０００〜約２０００ｋＪを提供するように配合することができる。
【００８２】
従って本発明に係る有用な医薬組成物は、意図する投与経路及び標準的な薬学的慣習を考慮して選択された適切な医薬的に許容し得る担体（賦形剤、希釈剤、補助剤、及びこれらの組み合わせを含む）を用いて配合し得る。例えば、本発明に係る有用な組成物は、粉末、液剤、錠剤、又はカプセル剤として経口的に、あるいは軟膏、クリーム、又はローションとして局所的に投与することができる。適切な製剤は、必要に応じて、乳化剤、抗酸化剤、香味剤、又は着色剤などの追加の薬剤を含むことができ、そして即時放出、遅延放出、調節放出、持続放出、パルス放出、又は制御放出に適合するように改変すれることができる。
【００８３】
「医薬的に許容し得る担体」という用語は、特に限定されるものではないが、賦形剤、希釈剤、又は補助剤を含む担体を指すことを意図しており、医薬的に許容し得る担体は溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、及び等張剤及び吸収遅延剤、又はこれらの組み合わせを含み、これらは、本明細書に記載の化合物又は組成物の有効量を送達するのに十分な用量で投与した場合、組成物の活性を低下させることはなく毒性ではない本明細書に記載の組成物の成分として、被験体に投与することができる。製剤は、経口的、経鼻的、又は非経口的に（局所的、筋肉内、腹腔内、皮下、及び静脈内を含む）投与することができる。
【００８４】
特定の実施態様において、本発明の組成物（例えば、本発明の機能性食品組成物又は医薬組成物など）は、カプセル剤として提供され得る。カプセル剤は、ゼラチン又はセルロースなどの任意の標準的な医薬上許容し得る材料を含み得る。錠剤は従来の手順に従って、活性成分と固体担体及び滑沢剤との混合物を圧縮することにより配合することができる。固体担体の例としては、デンプン及び糖ベントナイトが挙げられる。活性成分はまた、例えば乳糖又はマンニトールなどの結合剤、従来の充填剤、及び錠剤化剤を含有するハードシェル錠剤又はカプセル剤の形態で投与することもできる。医薬組成物はまた、非経口経路によって投与することもできる。非経口剤形の例には、活性物質の水溶液、等張食塩水、もしくは５％グルコース、または他の公知の医薬的に許容し得る賦形剤が含まれる。シクロデキストリン又は当業者に公知の他の可溶化剤を、治療物質を送達するための賦形剤として利用することができる。
【００８５】
特定の実施態様において本発明の組成物は、生きているエル・ラムノサスＨＮ００１を含む。そのような組成物を製造する方法は当技術分野において公知であり、そのような方法の１つが本明細書の実施例に例示される。
【００８６】
他の実施態様において本発明の組成物は、１種又はそれ以上のエル・ラムノサスＨＮ００１誘導体を含む。再度、そのような組成物を製造する方法は当技術分野において公知であり、そして標準的な微生物学的及び薬学的慣習を利用し得る。
【００８７】
そのような組成物には、例えば細菌の生存能力を改善又は維持するため、又はエル・ラムノサスＨＮ００１又は１種又はそれ以上のエル・ラムノサスＨＮ００１誘導体の治療効力を高めるために、広範囲の添加剤又は担体が含まれてもよいことは理解されるであろう。例えば界面活性物質、湿潤剤、保湿剤、粘着剤、分散剤、安定剤、浸透剤などの添加剤、及び細菌細胞の活力、増殖、複製、及び生存能力を改善するための、いわゆるストレス添加剤（例えば塩化カリウム、グリセロール、塩化ナトリウム、及びグルコース）、ならびにマルトデキストリンなどの抗凍結剤が含まれてもよい。添加剤はまた、長期保存中の微生物の生存能力を維持するのを助ける組成物、例えば未精製コーン油、又は外側に油及びワックスの混合物を含み内側に水、アルギン酸ナトリウム、び細菌を含む「反転」エマルジョンを含み得る。
【００８８】
特定の実施態様において、エル・ラムノサスＨＮ００１は生殖能力がある形態及び量である。
【００８９】
組成物は、例えばスクロース、フルクトース、グルコース、又はデキストロースを含む二糖などの炭水化物源を含み得る。好ましくは炭水化物源は、エル・ラムノサスＨＮ００１によって好気的又は嫌気的に利用され得るものである。
【００９０】
このような実施態様において、組成物は、好ましくは約２週間を超えて、好ましくは約１ヶ月を超える、約２ヶ月を超える、約３ヶ月を超える、約４ヶ月を超える、約５ヶ月を超える、より好ましくは約６ヶ月を超える、最も好ましくは少なくとも約２年〜約３年以上の期間、エル・ラムノサスＨＮ００１の生殖能力を支持することができる。
【００９１】
特定の実施態様において、ＧＤＭ又はＧＤＭ関連のリスク又はＧＤＭの続発症を治療又は予防するための組成物は、エル・ラムノサスＨＮ００１と、プレバイオティック、例えばフルクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、人乳オリゴ糖、及びこれらの組み合わせとを含むプロバイオティクス物質を含む。
【００９２】
別の実施態様において、被験体におけるＧＤＭ又はＧＤＭ関連のリスク又はＧＤＭの続発症を治療及び予防する方法は、エル・ラムノサスＨＮ００１とプレバイオティック物質、例えばフルクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、人乳オリゴ糖、及びこれらの組み合わせとを含む組成物の有効量を、個体に投与することを含む。特定の実施態様において経口組成物は、摂取されたときに、被験体の消化管に集団を確立するのに十分な量のエル・ラムノサスＨＮ００１の投与を可能にするように配合される。確立された集団は、一時的な又は恒久的な集団であり得る。
【００９３】
理論的には、１コロニー形成単位（ｃｆｕ）が、被験体におけるエル・ラムノサスＨＮ００１の集団を確立するのに十分であるはずであるが、実際の状況では、そうするために最小数の単位が必要とされる。従って、生存活性のある生きたプロバイオティクス細菌の集団に依存する治療メカニズムについては、被験体に投与される単位の数が治療効果に影響を与えるであろう。
【００９４】
本明細書の実施例に示されるように、本出願人は、１日につき６×１０９ｃｆｕのエル・ラムノサスＨＮ００１の投与量割合が、ヒト被験体の消化管において集団を確立するのに十分であると決定した。従って一例では、投与用に配合された組成物は、１日あたり少なくとも約６ｘ１０９ｃｆｕのエル・ラムノサスＨＮ００１を提供するのに十分であろう。
【００９５】
被験体の消化管におけるエル・ラムノサスＨＮ００１などの腸内細菌叢の集団の存在を判定するための方法は当技術分野において公知であり、そのような方法の例は本明細書に提示されている。特定の実施態様において、エル・ラムノサスＨＮ００１の集団の存在は、例えば被験体から得られた１つ又はそれ以上の試料を分析し、前記試料中のエル・ラムノサスＨＮ００１の存在又は量を測定することによって直接決定することができる。他の実施態様において、エル・ラムノサスＨＮ００１の集団の存在は、例えば被験体から得られた試料中のＧＤＭ症状の低下、又は他の腸内細菌叢の数の減少を観察することによって、間接的に決定することができる。そのような方法の組み合わせもまた想定される。
【００９６】
本発明に係る有用な組成物の有効性は、インビトロ及びインビボの両方で評価することができる。例えば、以下の例を参照のこと。簡単に説明すると組成物は、ＧＤＭを予防又は治療する能力、又は耐糖能を調節する能力について試験することができる。インビボ試験のためには、組成物を動物モデル（例えばマウス）に給餌もしくは注射するか、又はヒト被験体（妊娠女性を含む）に投与することができ、そして、次にＧＤＭ又は耐糖能及び関連症状の発症率及び重症度に対するその効果が評価される。その結果に基づいて、適切な投与量範囲及び投与経路を決定することができる。
【００９７】
適切な用量を計算する方法は、組成物中の活性物質の性質に依存し得る。例えば組成物が、生きているエル・ラムノサスＨＮ００１を含む場合、用量は、存在する生きた細菌の数を参照して計算することができる。例えば、本明細書の実施例に記載されるように、１日に投与されるコロニー形成単位（ｃｆｕ）の数を参照することによって、用量を設定することができる。組成物が１種又はそれ以上のエル・ラムノサスＨＮ００１誘導体を含む例では、存在するエル・ラムノサスＨＮ００１誘導体の量又は濃度を参照することによって、用量を計算することができる。例えば、エル・ラムノサスＨＮ００１細胞溶解物を含む組成物の場合、組成物中に存在するエル・ラムノサスＨＮ００１細胞溶解物の濃度を参照することによって、用量を計算することができる。
【００９８】
一般的な例として、１日につき体重１ｋｇ当たり約１×１０６ｃｆｕ〜約１×１０１２ｃｆｕのエル・ラムノサスＨＮ００１、好ましくは約１×１０６ｃｆｕ〜約１×１０１１ｃｆｕ／ｋｇ／日、約１×１０６ｃｆｕ〜約１×１０１０ｃｆｕ／ｋｇ／日、約１×１０６ｃｆｕ〜約１×１０９ｃｆｕ／ｋｇ／日、約１×１０６ｃｆｕ〜約１×１０８ｃｆｕ／ｋｇ／日、約１×１０６ｃｆｕ〜約５×１０７ｃｆｕ／ｋｇ／日、又は約１×１０６ｃｆｕ〜約１×１０７ｃｆｕ／ｋｇ／日の投与が考えられる。好ましくは、１日につき体重１ｋｇ当たり約５×１０６ｃｆｕ〜約５×１０８ｃｆｕのエル・ラムノサスＨＮ００１、好ましくは約５×１０６ｃｆｕ〜約４×１０８ｃｆｕ／ｋｇ／日、約５×１０６ｃｆｕ〜約３×１０８ｃｆｕ／ｋｇ／日、約５×１０６ｃｆｕ〜約２×１０８ｃｆｕ／ｋｇ／日、約５×１０６ｃｆｕ〜約１×１０８ｃｆｕ／ｋｇ／日、約５×１０６ｃｆｕ〜約９×１０７ｃｆｕ／ｋｇ／日、約５×１０６ｃｆｕ／ｋｇ／日〜約８×１０７ｃｆｕ／ｋｇ／日、約５×１０６ｃｆｕ／ｋｇ／日〜約７×１０７ｃｆｕ／ｋｇ／日、約５×１０６ｃｆｕ／ｋｇ／日〜約６×１０７ｃｆｕ／ｋｇ／日、約５×１０６ｃｆｕ／ｋｇ／日〜約５×１０７ｃｆｕ／ｋｇ／日、約５×１０６ｃｆｕ〜約４×１０７ｃｆｕ／ｋｇ／日、約５×１０６ｃｆｕ〜約３×１０７ｃｆｕ、約５×１０６ｃｆｕ〜約２×１０７ｃｆｕ／ｋｇ／日、又は約５×１０６ｃｆｕ〜約１×１０７ｃｆｕ／ｋｇ／日の投与が考えられる。
【００９９】
特定の実施態様において、定期的用量は、被験体の体重又は他の特徴によって変化する必要はない。そのような例では、１日につき約１×１０６ｃｆｕ〜約１×１０１３ｃｆｕのエル・ラムノサスＨＮ００１、好ましくは約１×１０６ｃｆｕ〜約１×１０１２ｃｆｕ／日、約１×１０６ｃｆｕ〜約１×１０１１ｃｆｕ、約１×１０６ｃｆｕ〜約１×１０１０ｃｆｕ／日、約１×１０６ｃｆｕ〜約１×１０９ｃｆｕ／日、約１×１０６ｃｆｕ〜約１×１０８ｃｆｕ／日、約１×１０６ｃｆｕ〜約５×１０７ｃｆｕ／日、又は約１×１０６ｃｆｕ〜約１×１０７ｃｆｕ／日の投与が考えられる。好ましくは、１日につき体重１ｋｇ当たり約５×１０７ｃｆｕ〜約５×１０１０ｃｆｕのエル・ラムノサスＨＮ００１、好ましくは約５×１０７ｃｆｕ〜約４×１０１０ｃｆｕ／日、約５×１０７ｃｆｕ〜約３×１０１０ｃｆｕ／日、約５×１０７ｃｆｕ〜約２×１０１０ｃｆｕ／日、約５×１０７ｃｆｕ〜約１×１０１０ｃｆｕ／日、約５×１０７ｃｆｕ〜約９×１０９ｃｆｕ／日、約５×１０７ｃｆｕ〜約８×１０９ｃｆｕ／日、約５×１０７ｃｆｕ〜約７×１０９ｃｆｕ／日、約５×１０７ｃｆｕ〜約６×１０９ｃｆｕ／日、約５×１０７ｃｆｕ〜約５×１０９ｃｆｕ／日、約５×１０７ｃｆｕ〜約４×１０９ｃｆｕ／日、約５×１０７ｃｆｕ〜約３×１０９ｃｆｕ／日、約５×１０７ｃｆｕ〜約２×１０９ｃｆｕ／日、又は約５×１０７ｃｆｕ〜約１×１０９ｃｆｕ／日の投与が考えられる。
【０１００】
例えば、本明細書の実施例に示されるように、凍結乾燥されたエル・ラムノサスＨＮ００１の有効用量は、１日につき６×１０９ｃｆｕであると決定された。
【０１０１】
組成物は、好ましくは有効量のエル・ラムノサスＨＮ００１又は１種又はそれ以上のその誘導体の有効な用量の投与を可能にするように配合されることは理解されるであろう。投与される組成物の用量、投与期間、及び一般的な投与計画は、被験体の症状の重篤度、治療される障害の種類、選択された投与方法、及び被験体の年齢、性別、及び／又は全身の健康状態などの変量に応じて、被験体間で異なり得る。さらに上記のように、適切な用量は、組成物中の活性物質の性質及び配合の方法に依存し得る。例えば、組成物が生きているエル・ラムノサスＨＮ００１を含む場合、用量は、存在する生きた細菌の数を参照して計算することができる。例えば、本明細書の実施例に記載されるように、用量は、１日につき投与されるコロニー形成単位（ｃｆｕ）の数を参照することによって設定することができる。組成物が１種又はそれ以上のエル・ラムノサスＨＮ００１誘導体を含む例では、用量は、１日につき投与されるエル・ラムノサスＨＮ００１誘導体の量又は濃度を参照することによって計算することができる。例えば、エル・ラムノサスＨＮ００１細胞溶解物を含む組成物の場合、用量は、組成物中に存在するエル・ラムノサスＨＮ００１細胞溶解物の濃度を参照することによって計算することができる。
【０１０２】
好ましい組成物は、便利な形態及び量で有効量を提供するように配合されることは理解されるであろう。特に限定されるものではないが、定期的な用量が被験体の体重又は他の特徴によって変化する必要のない実施態様などの特定の実施態様において、組成物は単位投与に配合することができる。投与は、毎日１回の投与又は多数回の分割量の投与を含み得ることは理解されるであろう。例えば本明細書の実施例に示すように、有効量のエル・ラムノサスＨＮ００１を、経口投与用のカプセルに配合することができる。
【０１０３】
しかしながら、一般的な例として本発明者らは、１日につき本明細書で有用な組成物を体重１ｋｇ当たり約１ｍｇ〜約１０００ｍｇ、好ましくは約５０〜約５００ｍｇ／ｋｇ／日、あるいは約１５０〜約４１０ｍｇ／ｋｇ／日、又は約１１０〜約３１０ｍｇ／ｋｇ／日の投与を企図している。１つの実施態様において本発明者らは、本明細書で有用な組成物の体重１ｋｇあたり約０．０５ｍｇ〜約２５０ｍｇの投与を企図している。
【０１０４】
乳児用調製乳、フォローオン調製乳、又は成長期調製乳の例を本明細書に提示する。これらのような組成物は、組成物中に存在するエル・ラムノサスＨＮ００１の濃度が、容易に測定可能な量の組成物を用いて有効用量を調製できるように、配合することができる。例えば組成物が乳児用調製乳である場合などの特定の実施態様において、エル・ラムノサスＨＮ００１は、例えば一般的に乳児用調製乳で提供されているように、計量スプーンなどを用いて投与用の調製乳を調製する場合、親又は世話する者によって容易に測定され得る量の調製乳中で有効量を供給するのに十分な濃度で提供される。そのような組成物に使用するためのエル・ラムノサスＨＮ００１の例示的で非限定的な濃度は、調製乳１グラム当たり約５×１０５ｃｆｕ〜調製乳１グラム当たり約１０９ｃｆｕ、又は調製乳１グラム当たり約１０６ｃｆｕ〜調製乳１グラム当たり約１０８ｃｆｕを含む。
【０１０５】
１つの実施態様において、本明細書で有用な組成物は、少なくとも約０．１、０．２、０．５、１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９９、９９．５、９９．８又は９９．９重量％のエル・ラムノサスＨＮ００１又はその誘導体を含むか、これらから本質的になるか、又はこれらからなり、有用な範囲は、これらの前述の値のいずれかの間で選択されてもよい（例えば、約０．１〜約５０％、約０．２〜約５０％、約０．５〜約５０％、約１〜約５０％、約１〜約５０％、約５〜約５０％、約１０〜約５０％、約１５〜約５０％、約２０〜約５０％、約２５〜約５０％、約３０〜約５０％、約３５〜約５０％、約４０〜約５０％、約４５〜約５０％、約０．１〜約６０％、約０．２〜約６０％、約０．５〜約６０％、約１〜約６０％、約５〜約６０％、約１０〜約６０％、約１５〜約６０％、約２０〜約６０％、約２５〜約６０％、約３０〜約６０％、約３５〜約６０％、約４０〜約６０％、約４５〜約６０％、約０．１〜約７０％、約０．２〜約７０％、約０．５〜約７０％、約１〜約７０％、約５〜約７０％、約１０〜約７０％、約１５〜約７０％、約２０〜約７０％、約２５〜約７０％、約３０〜約７０％、約３５〜約７０％、約４０〜約７０％、約４５〜約７０％、約０．１〜約８０％、約０．２〜約８０％、約０．５〜約８０％、約１〜約８０％、約５〜約８０％、約１０〜約８０％、約１５〜約８０％、約２０〜約８０％、約２５〜約８０％、約３０〜約８０％、約３５〜約８０％、約４０〜約８０％、約４５〜約８０％、約０．１〜約９０％、約０．２〜約９０％、約０．５〜約９０％、約１〜約９０％、約５〜約９０％、約１０〜約９０％、約１５〜約９０％、約２０〜約９０％、約２５〜約９０％、約３０〜約９０％、約３５〜約９０％、約４０〜約９０％、約４５〜約９０％、約０．１〜約９９％、約０．２〜約９９％、約０．５〜約９９％、約１〜約９９％、約５〜約９９％、約１０〜約９９％、約１５〜約９９％、約２０〜約９９％、約２５〜約９９％、約３０〜約９９％、約３５〜約９９％、約４０〜約９９％、及び約４５〜約９９％）。
【０１０６】
１つの実施態様において、本明細書で有用な組成物は、少なくとも約０．００１、０．０１、０．０５、０．１、０．１５、０．２、０．３、０．４、０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、又は１９グラムのエル・ラムノサスＨＮ００１又はその誘導体を含むか、これらから本質的になるか、又はこれらからなり、有用な範囲は、これらの前述の値のうちのいずれかの間で選択されてよい（例えば、約０．０１〜約１グラム、約０．０１〜約１０グラム、約０．０１〜約１９グラム、約０．１〜約１グラム、約０．１〜約１０グラム、約０．１〜約１９グラム、約１〜約５グラム、約１〜約１０グラム、約１〜約１９グラム、約５〜約１０グラム、及び約５〜約１９グラム）。
【０１０７】
１つの実施態様において、エル・ラムノサスＨＮ００１又はその誘導体を含む本明細書で有用な組成物は、さらに、約０．１、０．５、１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９７、９９、又は９９．９重量％の新鮮な全乳又は乳誘導体を含み、有用な範囲は、これらの前述の値のいずれかの間で選択されてよい（例えば、約０．１〜約５０％、約０．２〜約５０％、約０．５〜約５０％、約１〜約５０％、約５〜約５０％、約１０〜約５０％、約１５〜約５０％、約２０％〜約５０％、約２５％〜約５０％、約３０％〜約５０％、約３５％〜約５０％、約４０％〜約５０％、及び約４５％〜約５０％）。好ましくは乳誘導体は、再結合、粉末化、又は新鮮な脱脂粉乳、再結合又は再構成された全乳又は脱脂粉乳、脱脂粉乳濃縮物、脱脂粉乳残留物、濃縮乳、限外ろ過乳残留物、乳タンパク質濃縮物（ＭＰＣ）、乳タンパク質分離物（ＭＰＩ）、カルシウム欠乏乳タンパク質濃縮物（ＭＰＣ）、低脂肪乳、低脂肪乳タンパク質濃縮物（ＭＰＣ）、カゼイン、カゼイン酸塩、乳脂肪、クリーム、バター、ギー、無水乳脂肪（ＡＭＦ）、バターミルク、バターセーラム、ベータセーラム、硬乳脂肪画分、軟乳脂肪画分、スフィンゴ脂質画分、乳脂肪球状膜画分、乳脂肪球状膜脂質画分、リン脂質画分、複合脂質画分、初乳、初乳画分、初乳タンパク質濃縮物（ＣＰＣ）、初乳乳清、初乳由来の免疫グロブリン画分、乳清（スイート乳清、乳酸乳清、鉱酸乳清、又は再構成乳清粉末を含む）、乳清タンパク質分離物（ＷＰＩ）、乳清タンパク質濃縮物（ＷＰＣ）、乳又は初乳処理流に由来する組成物、任意の乳又は初乳処理流の限外濾過又は精密濾過により得られる保持液又は透過液に由来する組成物、乳又は初乳処理流のクロマトグラフィー（特に限定されるものではないが、イオンクロマトグラフィー及びゲル浸透クロマトグラフィーを含む）分離により得られる破過物又は吸着画分に由来する組成物、多段階分画、分別結晶化、溶媒分別、超臨界分別、近臨界分別、蒸留、遠心分別、修飾物（例えば石鹸又は乳化剤）による分別、により調製される抽出物を含むこれらの乳誘導体のいずれかの抽出物、これらの誘導体のいずれかの加水分解物、及び加水分解物の画分、及び加水分解物の画分及び／又は非加水分解画分の組み合わせを含むこれらの誘導体の任意の２種以上の任意の組み合わせ、から選択される。これらの誘導体の供給源は、乳又は初乳又はこれらの組み合わせであり得ることを理解すべきである。
【０１０８】
投与用に配合された組成物中のエル・ラムノサスＨＮ００１又はその１種又はそれ以上の誘導体の濃度は、例えば流通又は貯蔵用に配合された組成物中の濃度よりも低くてもよく、そして保存及びその後の投与に適した組成物への配合のために配合された組成物は、治療的に有効な用量で投与され得るように、投与のための前記組成物を十分に濃縮させるのにも充分でなければならないことは、明らかであろう。
【０１０９】
本明細書で有用な組成物は、単独で又は１種又はそれ以上の他の治療物質と組み合わせて使用することができる。治療物質は、食品、飲料、食品添加物、飲料添加物、食品成分、飲料成分、栄養補助食品、栄養製品、医療用食品、機能性食品、薬剤、又は医薬品であり得る。治療物質は、プロバイオティクス物質又はプロバイオティクス因子であり得、そして好ましくは、ＧＤＭ、又は１種又はそれ以上のＧＤＭの症状、又は１種又はそれ以上のＧＤＭ関連リスク、又は１種又はそれ以上のＧＤＭの続発症を治療、予防、又は軽減するのに有効である。
【０１１０】
別の治療物質と組み合わせて使用される場合、本明細書で有用な組成物及び他の治療物質の投与は、同時又は逐次的でもよい。同時投与は、全成分を含む単一剤形の投与又は別々の剤形の実質的に同時の投与を含む。逐次投与は、好ましくは本明細書で有用な組成物及び他の治療物質が提供される期間に重複があるように、異なるスケジュールによる投与を含む。
【０１１１】
本明細書で有用な組成物を別々に、同時に、又は逐次的に投与することができる適切な物質には、１種又はそれ以上のプロバイオティクス物質、１種又はそれ以上のプレバイオティック物質１種又はそれ以上のリン脂質、１種又はそれ以上のガングリオシド、当技術分野において公知の他の適切な物質、そしてこれらの組合せが含まれる。有用なプレバイオティクス物質には、ガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）、短鎖ＧＯＳ、長鎖ＧＯＳ、フルクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、人乳オリゴ糖（ＨＭＯ）、短鎖ＦＯＳ、長鎖ＦＯＳ、イヌリン、ガラクタン、フルクタン、ラクツロース、及びこれらの任意の２つまたはそれ以上の混合物が含まれる。いくつかのプレバイオティクス物質は、Boehm G and Moro G (Structural and Functional Aspects of Prebiotics Used in Infant Nutrition, J. Nutr. (2008) 138(9):1818S-1828S)（参照により本明細書に組み入れられる）による総説がある。他の有用な物質は、完全に又は部分的に不溶性又は消化しにくい食物繊維などの食物繊維を含み得る。従って、１つの実施態様において、エル・ラムノサスＨＮ００１又はその誘導体は、１種又はそれ以上のプロバイオティクス物質、１種又はそれ以上のプレバイオティクス物質、１種又はそれ以上の食物繊維源、１種又はそれ以上のガラクトオリゴ糖、１種又はそれ以上の短鎖ガラクトオリゴ糖、１種又はそれ以上の長鎖ガラクトオリゴ糖、１種又はそれ以上のフルクトオリゴ糖、１種又はそれ以上の短鎖フルクトオリゴ糖、１種又はそれ以上の長鎖フルクトオリゴ糖、１種又はそれ以上の人乳オリゴ糖、イヌリン、１種又はそれ以上のガラクタン、１種又はそれ以上のフルクタン、ラクツロース、又はこれらの任意の２つ以上の任意の混合物から選択される１種又はそれ以上の物質とともに、別々に、同時に、又は逐次的に投与され得る。
【０１１２】
１つの実施態様において、本明細書で有用な組成物は、乳清タンパク質、乳清タンパク質画分（酸性もしくは塩基性乳清タンパク質画分又はこれらの組み合わせを含む）、グリコマクロペプチド、ラクトフェリン、鉄−ラクトフェリン、機能性ラクトフェリン変種、機能性ラクトフェリン断片、ビタミンＤもしくはカルシウム、又はこれらの組合せなどの乳成分を含むか、又はこれらと同時に又は逐次的に投与される。有用な乳成分含有組成物は、食品、飲料、食品添加物、飲料添加物、栄養補助食品、栄養製品、医療用食品、又は機能性食品などの組成物を含む。これらの成分が濃縮された乳画分もまた使用することができる。有用なラクトフェリン、断片、及び組成物は、国際特許出願ＷＯ０３／０８２９２１及びＷＯ２００７／０４３９００に記載されており、両方とも参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０１１３】
上記に列記された追加の治療物質（食品ベースの物質及び医薬物質の両方）もまた、本発明に係る方法において使用することができ、本明細書で有用な組成物と、別々に、同時に、又は逐次的に投与されることは、理解されたい。
【０１１４】
１つの実施態様において、本明細書で有用な組成物は医薬的に許容し得る担体をさらに含む。別の実施態様において、組成物は、食品、飲料、食品添加物、飲料添加物、栄養補助食品、栄養製品、医療用食品、経腸栄養製品、非経口栄養製品、食事代替品、薬用化粧品、機能性食品、薬剤、又は医薬品であるか、これらとして配合される。１つの実施態様において組成物は、錠剤、カプレット剤、丸剤、硬もしくは軟カプセル剤、又はトローチ剤の形態である。１つの実施態様において組成物は、カシェ剤、散剤、調合可能な散剤、顆粒剤、懸濁剤、エリキシル剤、液剤、又は食品又は飲料（例えば水、牛乳、フルーツジュースを含む）に添加することができる任意の他の形態である。１つの実施態様において、組成物は、保存中又は投与後の組成物の分解を防止又は低減する１種又はそれ以上の成分（抗酸化剤など）をさらに含む。これらの組成物は、細菌又は細菌誘導体を運ぶことができる任意の食用消費者製品を含むことができ、加熱滅菌、加圧殺菌、溶解ＵＶ又は光処理、放射線照射、分画、又は他の方法で死滅又は弱毒化させた細菌を含む。適切な食用消費者製品の例には、水性製品、焼き菓子、チョコレートを含む菓子製品、ゲル、アイスクリーム、再構成フルーツ製品、スナックバー、フードバー、ミューズリーバー、スプレッド、ソース、ディップ、乳製品（ヨーグルト及びチーズを含む）、飲料（乳製品及び非乳製品ベースの飲料を含む）、牛乳、粉ミルク、スポーツサプリメント（乳製品及び非乳製品ベースのスポーツサプリメントを含む）、フルーツジュース、タンパク質スプリンクルなどの食品添加物、毎日のサプリメントタブレットを含む栄養補助食品、離乳食及びヨーグルト、及び粉末又は液体形態の調製乳（乳児用調製乳、フォローオン調製乳、又は成長期調製乳）が挙げられる。本明細書で有用な適切な機能性食品組成物は同様の形態で提供することができる。
【０１１５】
特定の被験体群への投与を目的として、本発明の様々な組成物を配合することができることは理解されるであろう。例えば、（例えば、胎児被験体又は母乳育児中の新生児、乳児、もしくは小児被験体に間接投与するための）妊娠中の母親に投与するのに適した組成物の配合物は、被験体に直接投与される組成物の配合物とは異なってもよい。予防的に投与される組成物の配合物は、ＧＤＭ又はＧＤＭの１つ又はそれ以上の症状が存在する場合、投与用に配合される組成物の製剤とは異なり得ることもまた理解されるべきである。
【０１１６】
１つの実施態様において、予防的使用のための組成物は、ラクトバシルス・ラムノサスＧＧ、ラクトバシルス・アシドフィルス（Lactobacillus acidophilus）（例えば、ラクトバシルス・アシドフィルス（ＬＡＶＲＩ−Ａ１）、ラクトバシルス・ロイテリ（Lactobacillus reuteri）（例えば、ラクトバシルス・ロイテリＡＴＣＣ５５７３０）、又はビフィドバクテリア・ラクチス（Bifidobacteria lactis）（例えば、ビフィドバクテリア・ラクチスＨＮ０１９株又はビフィドバクテリウム・ラクチスＢｂ１２）、又はこれらの任意の２種以上の組み合わせなどのプロバイオティクス物質をさらに含むか、又はエル・ラムノサスＨＮ００１はこれらと組合せて使用し得る。
【０１１７】
１つの実施態様において、予防的投与、特に予防的間接投与のための組成物は、ラクトバシルス・ラムノサスＧＧ、ラクトバシルス・アシドフィルス（Lactobacillus acidophilus）（例えば、ラクトバシルス・アシドフィルス（ＬＡＶＲＩ−Ａ１）、ラクトバシルス・ロイテリ（Lactobacillus reuteri）（例えば、ラクトバシルス・ロイテリＡＴＣＣ５５７３０）、又はビフィドバクテリア・ラクチス（Bifidobacteria lactis）（例えば、ビフィドバクテリア・ラクチスＨＮ０１９株）、又はこれらの任意の２種以上の組み合わせなどのプロバイオティクス物質をさらに含むか、又はエル・ラムノサスＨＮ００１はこれらと組合せて使用し得る。
【０１１８】
本明細書で使用される用語「予防的」及び文法的等価物は、ＧＤＭ又はＧＤＭの症状が明らかになる前の治療、使用、投与などを企図することは理解されるであろう。
【０１１９】
ＧＤＭ又は１種又はそれ以上のＧＤＭの症状を有する被験体の治療における使用のための実施態様において、組成物は、ラクトバシルス・ラムノサスＧＧ、ラクトバシルス・アシドフィルス（Lactobacillus acidophilus）（例えば、ラクトバシルス・アシドフィルス（ＬＡＶＲＩ−Ａ１）、ラクトバシルス・ロイテリ（Lactobacillus reuteri）（例えば、ラクトバシルス・ロイテリＡＴＣＣ５５７３０）、又はビフィドバクテリア・ラクチス（Bifidobacteria lactis）（例えば、ビフィドバクテリア・ラクチスＨＮ０１９株）、又はこれらの任意の２種以上の組み合わせなどのプロバイオティクス物質をさらに含むか、又はエル・ラムノサスＨＮ００１はこれらと組合せて使用し得る。
【０１２０】
本明細書で使用される用語「治療的」及び文法的等価物は、ＧＤＭ又はＧＤＭの症状が存在する場合の治療、使用、又は投与を企図する。
【０１２１】
本明細書に開示されている数字の範囲（例えば、１〜１０）への言及はまた、その範囲内の全ての有理数（例えば、１、１．１、２、３、３．９、４、５、６、６．５、７、８、９、１０）への言及、及びその範囲内の任意の有理数の範囲（例えば２〜８、１．５〜５．５、及び３．１〜４．７）も取り込むことが意図されており、従って、本明細書に明示的に開示されているすべての範囲のすべての部分範囲は、本明細書に明示的に開示されている。これらは具体的に意図されていることの単なる例であり、列記された最低値と最高値との間の数値の全ての可能な組み合わせは、本出願において同様に明示的に述べられているとみなされるべきである。
【０１２２】
３  妊娠糖尿病
肥満の世界的な傾向に伴い、妊娠糖尿病（ＧＤＭ）の比率も先進国と発展途上国の両方で増加している（１０）。ＧＤＭは一般に、国や民族により妊娠全体の９％〜２６％の間で発症する。場合によっては、ＧＤＭの罹患率は３６％にもなる。ＩＡＤＰＳＧ（１１）の診断基準を用いると、米国の妊婦の１８％が妊娠中にＧＤＭを発症する（１０）。過去２０年間で罹患率が増加するという強い傾向がある。
【０１２３】
ＧＤＭは、女性及び乳児の両方に対する短期及び長期の有害転帰（adverse outcomes）と関連しており、これには、母親の妊娠高血圧症、羊水過多症、子癇前症、発育過剰胎児の出産、器械的又は帝王切開分娩、及び母親の死亡が含まれる（１０、１２）。
【０１２４】
乳児の有害転帰には、早産、肩甲難産、巨大児、先天性欠損症、及び新生児の合併症、例えば低血糖、黄疸、及び呼吸困難などのが含まれる（１０）。さらに、長期的には、ＧＤＭの女性はメタボリックシンドローム（１３）、２型糖尿病、及び心血管疾患のリスクが高くなる。ＧＤＭの女性の子孫は、乳児の体重にかかわらず、インスリン分泌の変化及び脂質プロファイルの変化の証拠を伴って、糖尿病、肥満、及び代謝の問題のリスクが高くなる（１４）。
【０１２５】
食事、体重減少、及び運動に関するＧＤＭを予防するためのライフスタイルへの介入は、しばしば失敗する（１０、１５）。そのため、ＧＤＭの一次予防は、多世代にわたる健康と経済的な利益をもたらすであろう。
【０１２６】
以下の実施例を参照することにより、本発明の様々な態様を非限定的に説明する。
【実施例】
【０１２７】
妊娠初期の妊娠中の母親によって摂取されたプロバイオティクスラクトバシルス・ラムノサスＨＮ００１（ＨＮ００１）が、妊娠２６〜２８週までのＧＤＭの罹患率を減少させることができるかどうかを調べるために、二重盲検無作為プラセボ対照並行試験を行った。
【０１２８】
材料と方法
ニュージーランドのオークランド及びウェリントンの妊娠中の女性を、保健専門家及び妊娠パックに入れた試験情報を介して、試験に募集した。女性が妊娠１６週未満で、英語を話し、母乳育児を予定していて、女性又は胎児の生物学的父親のいずれかが、投薬を必要とする喘息、花粉症、又は湿疹の治療歴がある場合、女性は適格と見なされた。女性が、年齢が１６才未満で、試験期間中に試験センターの区域外に引っ越すことを計画しており、免疫障害又は投薬、心臓弁膜症の病歴を有し、体外受精を必要としたことがあり、重大な胎児異常の経験があり、プロバイオティクス飲料又はサプリメントを使用していたことがあり、別の無作為化比較試験（ＲＣＴ）に参加していて、彼女らの臨床介護者への通知を拒否したことがあり、牛乳アレルギーについてアドレナリンを有していたことがあり、移植又はＨＩＶの履歴があり、少なくとも３ヶ月間連続抗生物質療法を使用したことがあり、スクリーニングと登録の間に流産したか、又はその他の理由で不適切と見なされた場合、女性は試験から除外された。適格な女性は妊娠１４〜１６週で試験に登録され、ここで妊娠は妊娠の初期３ヵ月間のスキャンに基づいており、これが利用できない場合は、最終月経日に基づいていた。
【０１２９】
試験計画
参加する女性は無作為に割り付けられ、登録から妊娠中を通して、母乳育児をしている場合は出産の最大６ヵ月後までの間、ＨＮ００１（６×１０９コロニー形成単位（ｃｆｕ））又はプラセボ（トウモロコシ由来マルトデキストリン、外観と臭いはプロバイオティクス物質と同一）のいずれかを含むカプセルを、毎日投与された。ＨＮ００１粉末は、既に記載されているように（８）、無菌発酵、濃縮、及び凍結乾燥を使用してFonterra Co-operative Group Ltdによって製造された。プラセボ粉末であるトウモロコシ由来マルトデキストリンは、Grain Processing Corp. Oregon, USAにより製造された。女性はカプセルを冷蔵庫に保管し、熱い食べ物や飲み物を消費してから１０分以内は服用しないように指示された。
【０１３０】
Fonterraは、内容物の経時的な生存性を確実にするために、カプセルの試料を４０℃で保持し、毎月検査した。現場から戻された未使用のカプセルを選択して、内容物の生存活性を月に３回検査した。生存率の低下は０．１  ｌｏｇ未満であり、計数法の不確実性の範囲内であった。
【０１３１】
カプセルの無作為化は、試験の責任医師又は参加者と接触していないFonterraの統計専門家によって行われた。無作為化は試験センターによって層別化され、コンピューターにより生成された無作為化スケジュール及び１：１の配分比に従って、２０のブロックで行われた。研究スタッフは参加者を選別し登録し、適格な参加者に次に利用可能な連番のカプセル容器を提供した。すべての研究者、実験室スタッフ、及び参加者は、試験の割り当てを知らされなかった。
【０１３２】
収集されたベースライン情報には、年齢、民族、出産歴、多嚢胞性卵巣症候群（ＰＣＯＳ）の病歴、肥満度指数（ＢＭＩ）（体重（ｋｇ）／身長（ｍ）２）、腹囲、妊娠中であるが登録前の抗生物質使用、参加者又は一親等血縁者の２型糖尿病が含まれた。以前の妊娠が２０週を超える女性の間で、我々はまた、以前のＧＤＭの病歴及び以前の新生児の出生時体重も収集した。
【０１３３】
転帰（outcome）の測定値
ＧＤＭの転帰は、ＩＡＤＰＳＧ勧告（６）に従って主にＧＤＭの診断として先験的に定義された：空腹時血漿グルコース≧５．１ｍｍｏｌ／Ｌ、又は７５ｇのグルコース負荷後１時間で≧１０ｍｍｏｌ／ｌ、又は２時間で≧８．５ｍｍｏｌ／ｌ。ＧＤＭ（１）を定義するために、空腹時≧５．５ｍｍｏｌ／ｌ又は２時間後に≧９ｍｍｏｌ／ｌのＮＺ閾値を用いて２次分析を行った。
【０１３４】
ＧＤＭについての評価は、妊娠２４〜３０週に一晩の１２時間の絶食の後に、地域の実験室で行われた耐糖能試験（ＧＴＴ）を使用して行った。妊娠前に糖尿病を患っていない女性のみがＧＴＴ試験を開始した。ＧＴＴ試験の前にＧＴＴに基づいてＧＤＭの診断を受けた女性は、早期の陰性試験の証拠があって、糖尿病が妊娠が原因であることを確認された場合にのみ、試験結果に含めた。妊娠後期に（臨床目的で）繰り返しＧＴＴを実施した場合、妊娠２４〜３０週に完了した試験でＧＤＭ試験の状態が確定した。
【０１３５】
ＧＤＭを有する女性は、出産後少なくとも３ヶ月目に、分娩後ＨｂＡ１ｃを測定するように求められた。分娩後ＨｂＡ１ｃレベル≧６．５％（４８ｍｍｏｌ／ｍｏｌ）又は分娩後空腹時グルコース≧７ｍｍｏｌ／ｌ及び／又は２時間目グルコース≧１１．１ｍｍｏｌ／ｌが、共存する２型糖尿病の存在を示すために使用された。女性がこれらの基準を満たした場合、彼女らはＧＤＭ分析から除外された。
【０１３６】
他の結果は、出産後４〜７日目に収集され、母体の体重（ｋｇ）、腹囲（ｃｍ）、妊娠（週）、未熟児（＜３７週）が含まれた。５分での幼児アプガースコア及び出生時体重を医療記録から収集した。乳児の身長（ｃｍ）、ポンデラル指数（ＰＩ）（出生時体重（ｋｇ）／身長（ｍ）３）、頭囲（ｃｍ）、出産タイプ（膣又は帝王切開）、及び新生児集中治療室（ＮＩＣＵ）への入院が、生後４〜７日に研究者により評価された。
【０１３７】
服薬コンプライアンス
３ヶ月分以上のカプセル（ｎ＝１０５）を各瓶に入れた。妊娠２６〜２８週目と出産時に瓶を交換し、出生後６ヶ月までの期間をカバーするために、２本の瓶を母親に与えた。返却された瓶は、服薬コンプライアンスの尺度として、試験評価に関与していないスタッフによって数えられた。
【０１３８】
検出力
フィンランドの研究（８）で見出されたようなプロバイオティクス物質による６３％の減少であるＧＤＭの罹患率１５％と、各群における試料サイズ１９５を仮定すると、この試験は５％の有意水準で８７％の検出力を有するであろう。
【０１３９】
統計解析
分析は、ＳＡＳ９．３及び９．４（SAS Institute, Cary, NC）を用いて行った。すべての解析は治療企図解析であった。ＧＤＭの罹患率と二分法による出生転帰との治療群間の差は、相対発症率（ＲＲ）及び９５％ＣＩを用いて推定した。事前に特定されていないが、我々は、ＧＤＭと有意に関連した因子（母親の年齢、ＢＭＩ、ＧＤＭの病歴）によって、そしてＧＴＴ前の試験中の抗生物質使用によって層別化したＧＤＭの分析を、対数リンクと二項分布を用いる一般的線形モデルを使用して行った。連続変数の場合、治療群間の差は、ｔ検定を使用して比較した平均の差（９５％ＣＩ）、又は対数ベースライン測定値について調整した対数値の共分散分析を使用して比較した幾何平均（９５％ＣＩ）の比率の差として報告する。他の差はウィルコクソンの順位和検定を用いて比較した。アプガースコアは、順序ロジスティック回帰を用いて群間で比較した。検定は両側検定であり、Ｐ＜０．０５を統計的に有意と見なした。
【０１４０】
欠けているＧＴＴ測定値は、治療、空腹時、１時間及び２時間の測定値、民族、年齢、登録時のＢＭＩ、一親等血縁者における糖尿病の家族歴、以前の多嚢胞性卵巣症候群、及び以前のＧＤＭと以前の＞２０週間の妊娠数との組合せ（以前の妊娠なし、ＧＤＭを伴う１回の以前の妊娠、ＧＤＭを伴わない１回の以前の妊娠、ＧＤＭを伴う２回以上の以前の妊娠、又はＧＤＭを伴わない２回以上の以前の妊娠）を使用する、１，０００の多重補完を用いて推定した。ＧＤＭと診断され、妊娠初期からインスリンを処方されていたためにＧＴＴのなかった１人の参加者は、全ての補完においてＧＤＭを患っていると仮定された。
【０１４１】
この試験は、ヘルシンキ宣言に定められたガイドラインに従って行われ、ヒト被験体を含むすべての手順は、多地域健康と障害倫理委員会（the Multi-Region Health and Disability Ethics Committee）によって承認された。書面によるインフォームドコンセントが全被験者から得られた。この試験は、オーストラリアＮＺ臨床試験登録簿に登録された：ACTRN12612000196842, https://www.anzctr.org.au/Trial/Registration/TrialReview.aspx?id=362049&isReview=true。
【０１４２】
結果
参加者（ｎ＝４２３）は、２０１２年１２月から２０１４年１１月の間に、週平均４．２の割合で、ＨＮ００１群（ｎ＝２１２）又はプラセボ群（ｎ＝２１１）に無作為化された。妊娠糖尿病の評価は２０１５年２月までに完了し、最終新生児は２０１５年５月に生まれた。追跡調査喪失率は試験群間で同様であったが、ＨＮ００１群のより多くの参加者が、ＧＴＴの前に介入を中止した（図１）。対照的に、プラセボ群ではＧＴＴと出産来院との間にほとんどの参加者が追跡調査に喪失し、両方の試験群で少数の参加者は介入を中止した。プラセボ群では、クモ膜下出血のために１人の妊産婦死亡があった。
【０１４３】
無作為化された参加者のうち、２４〜３０週のＧＴＴの結果は、ＨＮ００１群の参加者１８４人（８７％）、そしてプラセボ群の１８９人（９０％）で、３時点すべて（ＩＡＤＰＳＧガイドラインの定義により必要とされる空腹時、１時間値、及び２時間値）を含み、それぞれ平均２７．７週（ＳＤ４．６）及び２８．０週（ＳＤ＝８．６）の妊娠であった。追加の１０人のＨＮ００１参加者及び１１人のプラセボ参加者は、空腹時及び２時間時点のみのＧＴＴ結果が利用可能であり、これは標準ＮＺガイドラインによるＧＤＭの診断に十分であった。ＨＮ００１群の１９４人（９２％）とプラセボ群の２００人（９５％）がいずれかのＧＴＴ評価に参加し、その全員が、ＮＺガイドラインに基づく分析にデータを提供することができた。
【０１４４】
登録時のいかなる母親の特徴（年齢、民族、出産歴、体重、腹囲、ＢＭＩ、登録前の妊娠中の抗生物質使用、糖尿病の家族歴、世帯収入）においても、及び以前に出産の経験、最大新生児の体重、及びＧＤＭの病歴を有する母親の間においても、試験群間に実質的な差はなかった（表１）。
【表１】
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【０１４５】
ＨＮ００１群におけるＧＤＭの罹患率（ＩＡＤＰＳＧ基準を用いて定義される）は、プラセボ群におけるよりも低かったが、その差は統計的に有意ではなかった（表２）。ただし、より特異的なＮＺ定義を使用すると、ＧＤＭの罹患率はＨＮ００１群で有意に低かった。欠損値について補完結果を用いてこれらの分析を繰り返したが、ＲＲ推定値にはほとんど変化がなかった。ＩＡＤＰＳＧガイドラインを使用すると、補完ＲＲ＝０．６４（９５％ＣＩ  ０．３６、１．１２）、そしてＮＺガイドラインを使用すると、補完ＲＲ＝０．３９（９５％ＣＩ  ０．１４、１．０７）であった。
【０１４６】
ベースラインの、及び１時間後と２時間後の平均血中グルコースレベルは、プラセボと比較してＨＮ００１群においてわずかに低かったが、ベースライン時にのみ有意であった（表２）。
【表２】
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【０１４７】
ＮＺガイドライン又はＩＡＤＰＳＧガイドラインに従ってＧＤＭと診断された４４人の参加者のうち、４０人の参加者は出産後１〜１５ヶ月の間にＨｂＡ１ｃが測定され、５．０％（３１ｍｍｏｌ／ｍｏｌ）〜６．４％（４６ｍｍｏｌ／ｍｏｌ）の間の値であった。１人は出産後ＧＴＴを有し、値は正常範囲内であった。３人の参加者は、１人は辞退し、１人は試験を中止し、１人は死亡したため、出産後ＨｂＡ１ｃはなかった。
【０１４８】
表３は、母親の年齢、ＢＭＩ、及びＧＤＭの病歴を有することが、この試験においてＧＤＭと有意に関連していたことを示す。次に、ＧＤＭのＩＡＤＰＳＧ定義のみを使用して、これらの要因を使用して分析を層別化した（図２）。年齢（連続変数として）別処理の有意な相互作用（ｐ＝０．００５）及び二分した年齢（３５才以上対３５才未満）による有意差のない相互作用（ｐ＝０．０６）があった。
【０１４９】
高齢群では、ＨＮ００１は、プラセボ群の女性の罹患率と比較して、ＧＤＭの罹患率の３倍の減少と関連していた（ＲＲ＝０．３１（９５％ＣＩ  ０．１２、０．８１）、ｐ＝０．００９）。３５才未満の女性では、各試験群の罹患率は類似していた（ＲＲ＝１．０４（９５％ＣＩ  ０．４５、２．３９））。ＢＭＩが３０ｋｇ／ｍ２以上（ＲＲ＝０．８６（９５％ＣＩ  ０．３７〜１．９６））であるか又は３０ｋｇ／ｍ２未満（ＲＲ＝０．５１（９５％ＣＩ  ０．２２〜１．１７）であるかによっても、効果に有意差はなかった。ＧＤＭはＧＤＭの病歴のあるＨＮ００１参加者のいずれにも再発しなかったため、相互作用は試験できなかった。
【０１５０】
ＧＤＭの病歴を有する女性のうち、ＨＮ００１はＧＤＭの再発に対して防御し、ＲＲ＝０．００（９５％ＣＩ  ０．００〜０．６６）であり、ＧＤＭの病歴のない女性については、ＲＲ＝０．５０、（９５％ＣＩ  ０．２０〜１．２７）であった。ＧＤＭの病歴のある３人の女性（２０％）は、ＩＡＤＳＰＧガイドラインに従うＧＴＴを完了していなかった。すべての補完法で、彼女らはＧＤＭ陽性であり、補完ＲＲ＝０．３８（（９５％ＣＩ  ０．０５〜１．００）ｐ＝０．０４３、バーナードの正確度検定）を与えた。ＧＤＭに対するＨＮ００１の効果は、試験登録とＧＴＴ検査の間に抗生物質を使用しなかった参加者の間では有意に防御的であったが、この期間中に抗生物質を使用した女性に対して、ＨＮ００１の有意な効果はなかった。
【０１５１】
図３に示す罹患率プロットは、ＨＮ００１投与と母体年齢についての有意な相互作用を示し（図３、右のプロット）、ここで３５才以上の女性が若い母親よりもＨＮ００１からより多くの恩恵を受け、ならびにＨＮ００１投与と以前の妊娠について相互作用も示し（図３、出産歴、左のプロット）、ここで、女性が以前２０週を超えた妊娠があったかいなかに依存して、妊娠糖尿病に対するＨＮ００１の効果は有意に異なっていた。以前妊娠した女性では、ＨＮ００１の女性はプラセボの女性と比較してＧＤの割合が約３分の１であった。
【表３】
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【０１５２】
同様に、抗生物質を使用していない女性のうち、空腹時平均血中グルコースレベルは、プラセボ群（４．４２、９５％ＣＩ  ４．３５〜４．４８）と比較して、ＨＮ００１群（４．２８、９５％ＣＩ  ４．２３〜４．３３）において有意に（ｐ＝０．００１）低かった。グルコース負荷後１時間及び２時間での平均グルコースレベルの差もまたより低かったが、有意ではなかった。１時間では、血中グルコースレベルは、ＨＮ００１群で６．６３（９５％ＣＩ  ６．３７〜６．８９）、プラセボ群で６．８８（９５％ＣＩ  ６．６０〜７．１６）、ｐ＝０．２０であり、２時間ではＨＮ００１群では６．５６（９５％ＣＩ  ５．３８〜５．７３）、プラセボ群で５．７７（９５％ＣＩ  ５．５３〜６．０１）、ｐ＝０．１５であった。
【０１５３】
ＨＮ００１は、（ベースライン測定値の調整後の）母親の身体測定値、又は出産児体重、妊娠、帝王切開、又はＮＩＣＵへの入院、又は出産後４〜７日で、乳児の身長、ＰＩ、又は頭囲と有意に関連していなかった。母親がＨＮ００１群に属していた乳児は、プラセボ群の乳児よりも５分アプガースコアが有意に高かった（表４）。
【表４】
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【０１５４】
ＩＡＤＰＳＧ勧告に従って定義された母親のＧＤＭは、出産後のより高い母親の体重（ｐ＝０．０００２）、腹囲（ｐ＜０．０００１）、及びＢＭＩ（ｐ＜０．０００１）と関連していたが、いかなる乳児の人体計測、妊娠、帝王切開分娩、ＮＩＣＵ入院、又は５分アプガースコア（データは示さず）とも関連していなかった。
【０１５５】
考察
本出願人の知る限り、これは、ＧＤＭのリスクに基づいて選択されていない女性の間でのＧＤＭの予防における、プロバイオティクスの役割を報告する最初の研究である。本出願人のデータは、６×１０９ｃｆｕ／日の用量のプロバイオティクスＨＮ００１が、ＧＤＭの割合を、ＩＡＤＰＳＧガイドライン（６）を用いると１３．８％から８．２％に４０％の低下、又はＮＺのガイドラインを用いると６．５％から２．１に６８％低下させ得ることを示唆する。
【０１５６】
この研究は、ＧＤＭを定義するために、ＩＡＤＰＳＧ閾値よりもＮＺグルコース閾値を用いると、ＨＮ００１効果がより強いことを示し、この効果がより重度のＧＤＭを予防することにおいてより大きいことを示唆する。
【０１５７】
消化管微生物叢は、妊娠の３つの３ヵ月の期間中に、より多様性の低い状態に向かって大きく変化し、最も枯渇した微生物叢はＧＤＭを有する女性において見出される（９）。肥満関連の腸内細菌叢とは対照的に、妊娠後期の腸内細菌叢は、妊娠の初期と比較して、便中へのより多量のアネルギーの喪失に関連しており、宿主の脂肪症及び宿主のグルコース代謝への妊娠中の腸内細菌叢の変化の影響が、必ずしも同じではないことを示している（９）。いかなる理論にも束縛されることを望むものではないが、本出願人らは、ＨＮ００１補給が、宿主に対するインスリン感受性及び炎症の改善に有利になるように腸内細菌叢の組成及び機能を変化させ、これがＧＤＭに対する性向を低下させたと考えている。
【０１５８】
出産転帰に対するいかなる有害な影響もないことは、妊娠早期（妊娠１４〜１６週）から取るべき安全な介入としてＨＮ００１を支持し、これはまた、アプガースコアによって反映されるように、乳児にとって有益であり得る。これらの知見は、妊娠早期のプロバイオティクス介入の効果に関する利用可能なデータが少ないことを考えると、重要である。
【０１５９】
体重管理プログラム又は食事療法を通して妊娠中の良好な健康を促進することは、一部は介入のコンプライアンスが不十分であるために、ほとんど効果が得られていない。この研究は、エル・ラムノサスＨＮ００１が、特により高齢の母親とＧＤＭの病歴を有する母親の、ＧＤＭの罹患率を低下させるための効果的な介入であるという証拠を提供する。
【産業上の利用可能性】
【０１６０】
本発明は、特にＧＤＭの治療又は予防における、プロバイオティクス細菌、特にLactobacillus rhamnosus ＨＮ００１又はその誘導体の使用に関する。前記細菌及び前記細菌を含む組成物の使用方法もまた提供される。
【０１６１】
参考文献
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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