(57)【要約】  本開示は、概して、ヒトタンパク質プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）及び形質転換増殖因子β（ＴＧＦＰ）を標的にする二機能性タンパク質の、体重に無関係な（ＢＷに無関係な）投薬計画及び投薬形態に関する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
その必要がある対象において癌を治療する又は腫瘍増殖を阻害するための方法であって、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドを含む、少なくとも５００ｍｇの用量のタンパク質を前記対象に投与することを含み、
前記第１のポリペプチドは、（ａ）ヒトタンパク質プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）に結合する抗体の重鎖の少なくとも１つの可変領域；及び（ｂ）ヒト形質転換増殖因子β受容体ＩＩ（ＴＧＦβＲＩＩ）又は形質転換増殖因子β（ＴＧＦβ）に結合することができるその断片を含み、
前記第２のポリペプチドは、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗体の軽鎖の少なくとも１つの可変領域を含み、
前記第１のポリペプチドの前記重鎖及び前記第２のポリペプチドの前記軽鎖は、組み合わせられると、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗原結合部位を形成する、方法。
【請求項２】
前記第１のポリペプチドは、配列番号３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記用量は、５００ｍｇ〜２４００ｍｇである、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記用量は、１２００ｍｇ〜１８００ｍｇである、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項５】
前記用量は、１２００ｍｇである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記用量は、１８００ｍｇである、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項７】
前記用量は、２週間ごとに１回又は３週間ごとに１回、投与される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記タンパク質は、静脈内投与によって投与される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記静脈内投与は、前記タンパク質を含む製剤を含むプレフィルドバッグ、プレフィルドペン、又はプレフィルドシリンジにより実行される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記バッグは、チューブ及び／又は針を含む導管に接続されている、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記癌又は腫瘍は、非小細胞肺癌、黒色腫、膵癌、結腸直腸癌、卵巣癌、膠芽腫、胃癌、胆道癌、食道癌（扁平上皮細胞癌又は腺癌）、頭部又は頸部の腺腫、及び頭部又は頸部の扁平上皮癌からなる群から選択される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記癌又は腫瘍は、結腸直腸、乳、卵巣、膵、胃、前立腺、腎臓、子宮頸部、骨髄腫、リンパ腫、白血病、甲状腺、子宮内膜、子宮、膀胱、神経内分泌、頭頸部、肝臓、鼻咽頭、精巣、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、黒色腫、基底細胞皮膚癌、扁平上皮細胞皮膚癌、隆起性皮膚線維肉腫、メルケル細胞癌、膠芽腫、神経膠腫、肉腫、中皮腫、及び骨髄異形成症候群からなる群から選択される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記腫瘍は、進行固形腫瘍である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記腫瘍は、前の治療に対して難治性及び／又は抵抗性である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドを含む、５００ｍｇ〜２４００ｍｇのタンパク質を含む静脈注射用薬剤送達製剤であって、
前記第１のポリペプチドは、（ａ）ヒトタンパク質プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）に結合する抗体の重鎖の少なくとも１つの可変領域；及び（ｂ）ヒト形質転換増殖因子β受容体ＩＩ（ＴＧＦβＲＩＩ）又は形質転換増殖因子β（ＴＧＦβ）に結合することができるその断片を含み、
前記第２のポリペプチドは、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗体の軽鎖の少なくとも１つの可変領域を含み、
前記第１のポリペプチドの前記重鎖及び前記第２のポリペプチドの前記軽鎖は、組み合わせられると、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗原結合部位を形成する、静脈注射用薬剤送達製剤。
【請求項１６】
前記第１のポリペプチドは、配列番号３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列を含む、請求項１５に記載の静脈注射用薬剤送達製剤。
【請求項１７】
１２００ｍｇの前記タンパク質を含む、請求項１５又は１６に記載の静脈注射用薬剤送達製剤。
【請求項１８】
１２００ｍｇ〜２４００ｍｇの前記タンパク質を含む、請求項１５又は１６に記載の静脈注射用薬剤送達製剤。
【請求項１９】
１８００ｍｇの前記タンパク質を含む、請求項１５又は１６に記載の静脈注射用薬剤送達製剤。
【請求項２０】
前記製剤は、バッグ、ペン、又はシリンジ中に含まれている、請求項１５〜１９のいずれか一項に記載の静脈注射用薬剤送達製剤。
【請求項２１】
前記バッグは、チューブ及び／又は針を含む導管に接続されている、請求項２０に記載の静脈注射用薬剤送達製剤。
【請求項２２】
前記製剤は、凍結乾燥製剤又は液体製剤である、請求項１５〜２１のいずれか一項に記載の静脈注射用薬剤送達製剤。
【請求項２３】
第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドを含む、５００ｍｇ〜２４００ｍｇのタンパク質を含む製剤を含む薬剤送達デバイスであって、
前記第１のポリペプチドは、（ａ）ヒトタンパク質プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）に結合する抗体の重鎖の少なくとも１つの可変領域；及び（ｂ）ヒト形質転換増殖因子β受容体ＩＩ（ＴＧＦβＲＩＩ）又は形質転換増殖因子β（ＴＧＦβ）に結合することができるその断片を含み、
前記第２のポリペプチドは、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗体の軽鎖の少なくとも１つの可変領域を含み、
前記第１のポリペプチドの前記重鎖及び前記第２のポリペプチドの前記軽鎖は、組み合わせられると、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗原結合部位を形成する、薬剤送達デバイス。
【請求項２４】
前記第１のポリペプチドは、配列番号３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列を含む、請求項２３に記載の薬剤送達デバイス。
【請求項２５】
１２００ｍｇの前記タンパク質を含む、請求項２３又は２４に記載の薬剤送達デバイス。
【請求項２６】
１２００ｍｇ〜２４００ｍｇの前記タンパク質を含む、請求項２３又は２４に記載の薬剤送達デバイス。
【請求項２７】
１８００ｍｇの前記タンパク質を含む、請求項２３又は２４に記載の薬剤送達デバイス。
【請求項２８】
前記デバイスは、バッグ、ペン、又はシリンジである、請求項２３〜２７のいずれか一項に記載の薬剤送達デバイス。
【請求項２９】
前記バッグは、チューブ及び／又は針を含む導管に接続されている、請求項２８に記載の薬剤送達デバイス。
【請求項３０】
第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドを含む、５００ｍｇ〜２４００ｍｇのタンパク質を含む製剤を全体として含む、１つ又はそれ以上の容器を含むキットであって、
前記第１のポリペプチドは、（ａ）ヒトタンパク質プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）に結合する抗体の重鎖の少なくとも１つの可変領域；及び（ｂ）ヒト形質転換増殖因子β受容体ＩＩ（ＴＧＦβＲＩＩ）又は形質転換増殖因子β（ＴＧＦβ）に結合することができるその断片を含み、
前記第２のポリペプチドは、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗体の軽鎖の少なくとも１つの可変領域を含み、
前記第１のポリペプチドの前記重鎖及び前記第２のポリペプチドの前記軽鎖は、組み合わせられると、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗原結合部位を形成する、キット。
【請求項３１】
前記第１のポリペプチドは、配列番号３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列を含む、請求項３０に記載のキット。
【請求項３２】
前記容器は、全体として、１２００ｍｇの前記タンパク質を含む、請求項３０又は３１に記載のキット。
【請求項３３】
前記容器は、全体として、１２００ｍｇ〜２４００ｍｇの前記タンパク質を含む、請求項３０又は３１に記載のキット。
【請求項３４】
前記容器は、全体として、１８００ｍｇの前記タンパク質を含む、請求項３０又は３１に記載のキット。
【請求項３５】
前記製剤は、凍結乾燥製剤又は液体製剤である、請求項３０〜３４のいずれか一項に記載のキット。
【請求項３６】
その必要がある対象において癌を治療する又は腫瘍増殖を阻害するのに使用するための、請求項１５〜２２のいずれか一項に記載の静脈注射用薬剤送達製剤、請求項２３〜２９のいずれか一項に記載の薬剤送達デバイス、又は請求項３０〜３５のいずれか一項に記載のキット。
【請求項３７】
前記癌又は腫瘍は、非小細胞肺癌、黒色腫、膵癌、結腸直腸癌、卵巣癌、膠芽腫、胃癌、胆道癌、食道癌（扁平上皮細胞癌又は腺癌）、頭部又は頸部の腺腫、及び頭部又は頸部の扁平上皮癌からなる群から選択される、請求項３６に記載の静脈注射用薬剤送達製剤、薬剤送達デバイス、又はキット。
【請求項３８】
前記癌又は腫瘍は、結腸直腸、乳、卵巣、膵、胃、前立腺、腎臓、子宮頸部、骨髄腫、リンパ腫、白血病、甲状腺、子宮内膜、子宮、膀胱、神経内分泌、頭頸部、肝臓、鼻咽頭、精巣、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、黒色腫、基底細胞皮膚癌、扁平上皮細胞皮膚癌、隆起性皮膚線維肉腫、メルケル細胞癌、膠芽腫、神経膠腫、肉腫、中皮腫、及び骨髄異形成症候群からなる群から選択される、請求項３６に記載の静脈注射用薬剤送達製剤、薬剤送達デバイス、又はキット。
【請求項３９】
前記腫瘍は、進行固形腫瘍である、請求項３６に記載の静脈注射用薬剤送達製剤、薬剤送達デバイス、又はキット。
【請求項４０】
前記腫瘍は、前の治療に対して難治性である、請求項３６に記載の静脈注射用薬剤送達製剤、薬剤送達デバイス、又はキット。
【請求項４１】
前記製剤は、２週間ごとに１回、前記対象に投与される、請求項３６〜４０のいずれか一項に記載の静脈注射用薬剤送達製剤、薬剤送達デバイス、又はキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
[0001]  本出願は、２０１７年１月７日に提出された米国特許出願第６２／４４３，６９８号及び２０１７年１１月６日に提出された米国特許出願第６２／５８１，９７８号の利益及び優先権を主張し、それぞれの内容は、事実上それらの全体が参照によって本明細書中に援用される。
【０００２】
開示の分野
[0002]  本開示は、概して、ヒトタンパク質プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）及び形質転換増殖因子β（ＴＧＦβ）を標的にする二機能性タンパク質の、体重に無関係な（ＢＷに無関係な）投薬計画及び投薬形態に関する。
【背景技術】
【０００３】
背景
[0003]  プログラム死１（ＰＤ−１）／ＰＤ−Ｌ１軸は、腫瘍免疫回避にとって重要なメカニズムである。長期にわたって抗原を検知し続けているエフェクターＴ細胞は、ＰＤ−１発現によって特徴づけられる、疲弊した表現型を持つようになり、このような状況下で、腫瘍細胞は、ＰＤ−Ｌ１をアップレギュレートすることによって交戦してくる。そのうえ、腫瘍微小環境では、骨髄系細胞、マクロファージ、実質細胞、及びＴ細胞は、ＰＤ−Ｌ１をアップレギュレートする。軸の遮断は、これらのＴ細胞におけるエフェクター機能を回復させる。
【０００４】
[0004]  参照によって本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１５０２２５４８３  Ａ１号は、抗プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）抗体をＴＧＦβ中和「トラップ」としての腫瘍増殖因子ベータ受容体ＩＩ型（ＴＧＦβＲＩＩ）の可溶性細胞外ドメインと組み合わせて、単一の分子にした二機能融合タンパク質を記載する。詳細には、タンパク質は、可動性のグリシン−セリンリンカーを介してヒトＴＧＦβＲＩＩの細胞外ドメインに遺伝的に融合された抗ＰＤ−Ｌ１の２つの免疫グロブリン軽鎖及び抗ＰＤ−Ｌ１の重鎖を含む２つの重鎖からなるヘテロ四量体である（図１を参照）。この抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子は、腫瘍微小環境において免疫抑制の２つの重大なメカニズムを標的にするように設計されている。米国特許出願公開第２０１５０２２５４８３  Ａ１号は、患者の体重に基づいた用量でのトラップ分子の投与を記載する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
開示の概要
[0005]  本開示は、ＰＤ−Ｌ１及びＴＧＦβを標的にする二機能性タンパク質の投与のための改善された投薬計画を提供する。詳細には、様々な投薬頻度で投与される少なくとも５００ｍｇの二機能性タンパク質の投与を伴う、体重に無関係な（ＢＷに無関係な）投薬計画及び関係する投薬形態は、抗腫瘍及び抗癌治療薬として使用することができる。ＢＷに無関係な投薬計画は、すべての患者が体重に関係なく、腫瘍部位に十分な薬剤曝露量を有するであろうということを保証する。
【０００６】
[0006]  本開示の二機能性タンパク質（抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子）は、第１及び第２のポリペプチドを含む。第１のポリペプチドは、（ａ）ヒトタンパク質プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）に結合する抗体の重鎖の少なくとも１つの可変領域；及び（ｂ）ヒト形質転換増殖因子β受容体ＩＩ（ＴＧＦβＲＩＩ）又は形質転換増殖因子β（ＴＧＦβ）に結合することができるその断片（たとえば可溶性の断片）を含む。第２のポリペプチドは、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗体の軽鎖の少なくとも１つの可変領域を含み、第１のポリペプチドの重鎖及び第２のポリペプチドの軽鎖は、組み合わせられると、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗原結合部位を形成する（たとえば、本明細書において記載される抗体又は抗体断片のいずれか）。本開示の二機能性タンパク質が２つの標的（１）大部分が膜に結合しているＰＤ−Ｌ１並びに（２）血液及び間質において可溶性であるＴＧＦβに結合するので、ＢＷに無関係な投薬計画は、腫瘍部位でＰＤ−Ｌ１を阻害するのに有効であるだけでなく、ＴＧＦβを阻害するのにも十分な用量を必要とする。
【０００７】
[0007]  一態様では、本開示は、たとえば非小細胞肺癌、黒色腫、膵癌、結腸直腸癌（たとえば治療歴を有する結腸直腸癌（ＣＲＣ））、卵巣癌、膠芽腫、胃癌（たとえば治療歴を有する再発性の又は難治性の切除不能なステージＩＶの胃癌）、胆道癌、食道癌（扁平上皮細胞癌又は腺癌）、頭部又は頸部の腺腫、及び頭部又は頸部の扁平上皮癌の、癌の治療又は腫瘍の阻害を提供する。
【０００８】
[0008]  本開示はまた、癌の治療において使用するための又は腫瘍増殖の阻害において使用するための上記に記載される二機能性タンパク質を特徴づける。癌又は腫瘍は、結腸直腸（たとえば治療歴を有する結腸直腸癌（ＣＲＣ））、乳、卵巣、膵、胃（たとえば治療歴を有する再発性の又は難治性の切除不能なステージＩＶの胃癌）、前立腺、腎臓、子宮頸部、骨髄腫、リンパ腫、白血病、甲状腺、子宮内膜、子宮、膀胱、神経内分泌、頭頸部、肝臓、鼻咽頭、精巣、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、黒色腫、基底細胞皮膚癌、扁平上皮細胞皮膚癌、隆起性皮膚線維肉腫、メルケル細胞癌、膠芽腫、神経膠腫、肉腫、中皮腫、及び骨髄異形成症候群から選択されてもよい。使用は、放射線の投与又は化学療法薬、生物製剤、若しくはワクチンの投与をさらに含んでいてもよい。
【０００９】
[0009]  本開示はまた、ＴＧＦβの局所的な除去を促進するための方法をも特徴づける。方法は、上記に記載されるタンパク質を投与することを含み、タンパク質は、溶液中のＴＧＦβに結合し、細胞表面のＰＤ−Ｌ１に結合し、細胞（たとえば癌細胞）の中に、結合ＴＧＦβを運ぶ。
【００１０】
[0010]  本開示はまた、細胞（たとえば癌細胞又は免疫細胞）におけるＳＭＡＤ３リン酸化を阻害するための方法であって、腫瘍微小環境中の細胞を上記に記載されるタンパク質に曝露することを含む方法をも特徴づける。
【００１１】
[0011]  本開示はまた、腫瘍増殖を阻害する又は癌を治療するための方法をも特徴づける。方法は、腫瘍を、上記に記載されるタンパク質に曝露することを含む。方法は、腫瘍を、放射線に又は化学療法薬、生物製剤、若しくはワクチンに曝露することをさらに含んでいてもよい。ある実施形態では、腫瘍又は癌は、結腸直腸（たとえば治療歴を有する結腸直腸癌（ＣＲＣ））、乳、卵巣、膵、胃（たとえば治療歴を有する再発性の又は難治性の切除不能なステージＩＶの胃癌）、前立腺、腎臓、子宮頸部、骨髄腫、リンパ腫、白血病、甲状腺、子宮内膜、子宮、膀胱、神経内分泌、頭頸部、肝臓、鼻咽頭、精巣、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、黒色腫、基底細胞皮膚癌、扁平上皮細胞皮膚癌、隆起性皮膚線維肉腫、メルケル細胞癌、膠芽腫、神経膠腫、肉腫、中皮腫、及び骨髄異形成症候群から選択される。
【００１２】
[0012]  「ＴＧＦβＲＩＩ」又は「ＴＧＦβ受容体ＩＩ」は、野生型ヒトＴＧＦβ受容体２型アイソフォームＡ配列を有するポリペプチド（たとえばＮＣＢＩ参照配列（ＲｅｆＳｅｑ）受入番号ＮＰ＿００１０２００１８（配列番号８）のアミノ酸配列）又は野生型ヒトＴＧＦβ受容体２型アイソフォームＢ配列を有するポリペプチド（たとえばＮＣＢＩ  ＲｅｆＳｅｑ受入番号ＮＰ＿００３２３３（配列番号９）のアミノ酸配列）又は配列番号８若しくは配列番号９のアミノ酸配列と実質的に同一な配列を有するポリペプチドを意味する。ＴＧＦβＲＩＩは、野生型配列のＴＧＦβ結合活性の少なくとも０．１％、０．５％、１％、５％、１０％、２５％、３５％、５０％、７５％、９０％、９５％、又は９９％を保持してもよい。発現されたＴＧＦβＲＩＩのポリペプチドは、シグナル配列を欠く。
【００１３】
[0013]  「ＴＧＦβに結合することができるＴＧＦβＲＩＩの断片」は、少なくとも２０（たとえば少なくとも３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７５、又は２００）アミノ酸長であり、野生型受容体又は対応する野生型断片の少なくともいくらかのＴＧＦβ結合活性（たとえば少なくとも０．１％、０．５％、１％、５％、１０％、２５％、３５％、５０％、７５％、９０％、９５％、又は９９％）を保持する、ＮＣＢＩ  ＲｅｆＳｅｑ受入番号ＮＰ＿００１０２００１８（配列番号８）若しくはＮＣＢＩ  ＲｅｆＳｅｑ受入番号ＮＰ＿００３２３３（配列番号９）の任意の部分又は配列番号８若しくは配列番号９と実質的に同一な配列を意味する。典型的に、そのような断片は、可溶性の断片である。例示的なそのような断片は、配列番号１０の配列を有するＴＧＦβＲＩＩの細胞外ドメインである。
【００１４】
[0014]  「実質的に同一な」は、参照アミノ酸配列に対して、少なくとも５０％、望ましくは６０％、７０％、７５％、又は８０％、より望ましくは８５％  ９０％、又は９５％、最も望ましくは９９％のアミノ酸配列同一性を示すポリペプチドを意味する。比較配列の長さは、一般に、少なくとも１０アミノ酸、望ましくは少なくとも１５の連続アミノ酸、より望ましくは少なくとも２０、２５、５０、７５、９０、１００、１５０、２００、２５０、３００、又は３５０の連続アミノ酸、最も望ましくは完全長アミノ酸配列であろう。
【００１５】
[0015]  「患者」は、ヒト又は非ヒト動物（たとえば哺乳動物）を意味する。「患者」、「対象」、「その必要がある患者」、及び「その必要がある対象」は、本開示において区別なく使用され、本開示において提供される方法及び組成物を使用する投与によって治療することができる疾患又は状態に罹患している又はそれを起こしやすい生物を指す。
【００１６】
[0016]  用語「治療する」、「治療すること」、又は「治療」及び本開示において使用される他の文法上の等価物は、疾患、状態、若しくは症状を軽減する、緩和する、回復させる、若しくは予防すること、さらなる症状を予防すること、症状の根底にある代謝的な原因を回復させる若しくは予防すること、疾患若しくは状態を阻害すること、たとえば疾患若しくは状態の発症を阻止すること、疾患若しくは状態を和らげること、疾患若しくは状態の後退を引き起こすこと、疾患若しくは状態によって引き起こされる状態を和らげること、又は疾患若しくは状態の症状を停止させることを含み、予防処置を含むことが意図される。用語は、治療上の利益及び／又は予防的な利益を実現することをさらに含む。治療上の利益は、治療されている根底にある障害の根絶又は回復を意味する。さらに、治療上の利益は、根底にある障害に関連する、１つ又はそれ以上の生理学的症状の根絶又は回復により実現され、改善が患者において観察される、それにもかかわらず、患者は、なお、根底にある障害で苦しんでいてもよい。
【００１７】
[0017]  「癌」は、異常に増える細胞の集団を意味する。本明細書において使用されるように、用語「癌」は、哺乳動物において見つけられるすべてのタイプの癌、新生物、悪性腫瘍、又は良性腫瘍を指し、白血病、癌腫、及び肉腫を含む。例示的な癌は、乳癌、卵巣癌、結腸癌、肝臓癌、腎癌、肺癌、膵癌、膠芽腫を含む。さらなる例は、脳癌、肺癌、非小細胞肺癌、黒色腫、肉腫、前立腺癌、子宮頸癌、胃癌、頭頸部癌、子宮癌、中皮腫、転移性骨癌、髄芽腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、神経芽細胞腫、横紋筋肉腫、原発性血小板増加症、原発性マクログロブリン血症、膀胱癌、前悪性皮膚病変、精巣癌、リンパ腫、甲状腺癌、神経芽細胞腫、食道癌、泌尿生殖器癌、悪性高カルシウム血症、子宮内膜癌、副腎皮質癌、並びに膵内分泌部及び膵外分泌部の新生物を含む。
【００１８】
[0018]  本明細書の説明及び請求項の全体にわたって、「含む」という語並びに「含むこと」及び「含む（comprises）」などのようなこの語の他の形態は、〜を含むが、これらに限定されないという意味であり、たとえば他の構成成分を除外するようには意図されない。
【００１９】
[0019]  「同時投与する」によって、本明細書において記載される組成物が、さらなる療法の投与と同時に、その直前に、又はその直後に投与されることを意味する。本開示のタンパク質及び組成物は、患者に単独で投与することができる又は第２、第３、若しくは第４の治療剤と同時投与することができる。同時投与は、個々の又は組み合わせた（２つ以上の治療剤）、タンパク質又は組成物の同時の又は順次の投与を含むことを意味する。
【００２０】
[0020]  用語「１つの」は、単数に限られることを意味するものではない。ある実施形態では、用語「１つの」は、複数形を指してもよい。本開示の全体にわたって使用されるように、単数形「１つの（a）」、「１つの（an）」、及び「その」は、文脈上、明らかに他の意味を示す場合を除き、複数形の指示内容を含む。したがって、たとえば、「組成物」への言及は、単一の組成物だけでなく、複数のそのような組成物を含む。
【００２１】
[0021]  「還元」製剤は、二機能性分子が還元製剤中に溶解するように、水性キャリヤ中に凍結乾燥製剤を溶解することによって調製された製剤である。還元製剤は、その必要がある患者への静脈内投与（ＩＶ）に適している。
【００２２】
[0022]  用語「約」は、製剤の調製において及び疾患又は障害の治療において作用物質の効能を変化させない、作用物質の濃度又は量における任意の最小限の変化を指す。実施形態では、用語「約」は、特定の数値又はデータポイントの±１５％を含んでいてもよい。
【００２３】
[0023]  範囲は、「約」ある特定の値から及び／又は「約」別の特定の値までとして、本開示において表現することができる。そのような範囲が表現される場合、別の態様には、ある特定の値から及び／又は他の特定の値までが含まれる。同様に、値が、先の例の「約」の使用によって近似値として表現される場合、特定の値が、別の態様を形成することが理解される。範囲のそれぞれの終点が、他の終点に関連して及び他の終点と無関係に有効であることがさらに理解される。本開示において開示される多くの値があり、それぞれの値はまた、その値自体に加えて、「約」その特定の値としても開示されることもまた、理解される。本出願の全体にわたって、データは、多くの異なる形式で提供され、このデータは、データポイントの任意の組み合わせについて終点及び起点並びに範囲を示すこともまた、理解される。たとえば、特定のデータポイント「１０」及び特定のデータポイント「１５」が開示される場合、１０及び１５を超える、それを超える又はそれに等しい、それ未満の、それ未満の又はそれに等しい、並びにそれに等しいが、１０及び１５の間と同様に、開示されていると見なされることが理解される。２つの特定の単位量の間のそれぞれの単位量もまた、開示されることもまた、理解される。たとえば、１０及び１５が開示される場合、１１、１２、１３、及び１４もまた、開示される。
【００２４】
[0024]  「等張」製剤は、ヒト血液と本質的に同じ浸透圧を有する製剤である。等張製剤は、一般に、約２５０〜３５０ｍＯｓｍｏｌ／ＫｇＨ２Ｏの浸透圧を有するであろう。用語「高張」は、ヒト血液の浸透圧を上回る浸透圧を有する製剤を記載するために使用される。等張性は、たとえば、蒸気圧又は氷結型浸透圧計を使用して測定することができる。
【００２５】
[0025]  用語「緩衝剤」は、水溶液に追加された場合、酸若しくはアルカリを追加した場合に又は溶媒による希釈に際して、ｐＨの変動から溶液を保護することができる１つ又はそれ以上の構成成分を指す。リン酸バッファーに加えて、グリシン酸、炭酸、クエン酸バッファー、及びその他同種のものを使用することができ、この場合、ナトリウム、カリウム、又はアンモニウムイオンは、対イオンとして果たすことができる。
【００２６】
[0026]  「酸」は、水溶液中で水素イオンを産出する物質である。「薬学的に許容され得る酸」は、それらが製剤される濃度及び手法で無毒な無機酸及び有機酸を含む。
【００２７】
[0027]  「塩基」は、水溶液中でヒドロキシルイオンを産出する物質である。「薬学的に許容され得る塩基」は、それらが製剤される濃度及び手法で無毒性の無機塩基及び有機塩基を含む。
【００２８】
[0028]  「凍結乾燥保護剤（lyoprotectant）」は、関心のあるタンパク質と組み合わせられた場合に、凍結乾燥及び続く保存に際してタンパク質の化学的及び／又は物理的不安定性を予防する又は低下させる分子である。
【００２９】
[0029]  「保存剤」は、細菌作用を低下させ、任意選択で本明細書における製剤に追加されてもよい作用物質である。保存剤の追加は、たとえば、多重使用（複数回投与）製剤の産生を容易にしてもよい。可能性として考えられる保存剤の例は、オクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム（アルキル基が長鎖化合物である塩化アルキルベンジルジメチルアンモニウムの混合物）、及び塩化ベンゼトニウムを含む。他のタイプの保存剤は、フェノール、ブチル、及びベンジルアルコールなどのような芳香族アルコール、メチル又はプロピルパラベンなどのようなアルキルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３ペンタノール、並びにｍ−クレゾールを含む。
【００３０】
[0030]  「界面活性剤」は、疎水性部分（たとえばアルキル鎖）並びに親水性部分（たとえばカルボキシル基及びカルボキシレート基）の両方を含有する表面活性分子である。界面活性剤は、本発明の製剤に追加されてもよい。本発明の製剤において使用するのに適した界面活性剤は、ポリソルベート（たとえばポリソルベート２０又は８０）；ポロキサマー（たとえばポロキサマー１８８）；ソルビタンエステル及び誘導体；Ｔｒｉｔｏｎ；ラウリル硫酸ナトリウム；オクチルグリコシドナトリウム；ラウリル−、ミリスチル−、リノレイル−、又はステアリル−スルホベタイン；ラウリル−、ミリスチル−、リノレイル−、又はステアリル−サルコシン；リノレイル−、ミリスチル−、又はセチル−ベタイン；ラウラミドプロピル−ココアミドプロピル−、リノールアミドプロピル−、ミリスタミドプロピル−、パルミドプロピル（palmidopropyl）−、又はイソステアラミドプロピルベタイン（たとえばラウロアミドプロピル（lauroamidopropyl））；ミリスタミドプロピル−、パルミドプロピル−、又はイソステアラミドプロピル−ジメチルアミン；ココイルメチルタウリン酸ナトリウム又はメチルオレイルタウリン酸二ナトリウム；並びにMONAQUAT（商標）シリーズ（Mona Industries, Inc.、Paterson、N.J.）、ポリエチレングリコール、ポリプロピルグリコール、及びエチレン及びプロピレングリコールのコポリマー（たとえばプルロニック、ＰＦ６８など）を含むが、これらに限定されない。
【００３１】
[0031]  他の実施形態及び本開示の詳細は、本明細書において下記に提供される。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
【図１】[0032]図１は、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）４Ｇｌｙ（配列番号１１）リンカーを介してＴＧＦβ受容体ＩＩの２つの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に融合された１つの抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含む抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子の略図を示す図である。
【図２】[0033]図２は、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップがＰＤ−Ｌ１及びＴＧＦβの両方に同時に結合することを実証するツーステップＥＬＩＳＡを示す図である。
【図３】[0034]図３は、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップが、ＩＬ−２レベルにおける劇的な増加を誘発することを示す図である。
【図４Ａ】[0035]図４Ａは、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップに応じたＴＧＦβ１のインビボにおける除去を示す図である。線グラフは、凡例において示されるように、ナイーブ、アイソタイプコントロール、及び３つの異なる用量を示す。
【図４Ｂ】[0035]図４Ｂは、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップに応じたＴＧＦβ２のインビボにおける除去を示す図である。線グラフは、凡例において示されるように、ナイーブ、アイソタイプコントロール、及び３つの異なる用量を示す。
【図４Ｃ】[0035]図４Ｃは、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップに応じたＴＧＦβ３のインビボにおける除去を示す図である。線グラフは、凡例において示されるように、ナイーブ、アイソタイプコントロール、及び３つの異なる用量を示す。
【図４Ｄ】[0035]図４Ｄは、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップによるＰＤ−Ｌ１の占有率が、ＥＭＴ−６腫瘍系における受容体結合モデルを支持することを示す図である。
【図５】[0036]図５は、Ｄｅｔｒｏｉｔ５６２異種移植モデルにおける抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップコントロール（抗ＰＤ−Ｌ１（ｍｕｔ）／ＴＧＦβ）の抗腫瘍効能を示す図である。
【図６Ａ】[0037]図６Ａは、クリアランス及び体重の間の関係を示す散布図を示す図である。線は、ＣＬ及びＢＷの間の関係を示す回帰線を示す。
【図６Ｂ】[0037]図６Ｂは、分布容積（Ｖ）及び体重の間の関係を示す散布図を示す図である。線は、Ｖ及びＢＷの間の関係を示す回帰線を示す。
【図７Ａ】[0038]図７Ａは、６８ｋｇの体重の中央値のシミュレーション集団における固定（１２００ｍｇ）対ｍｇ／ｋｇベースの投薬（１７．６５ｍｇ／ｋｇ）についての集団全体についてのＣａｖｇ分布のボックスプロットを示す図である。
【図７Ｂ】[0038]図７Ｂは、６８ｋｇの体重の中央値のシミュレーション集団における固定（１２００ｍｇ）対ｍｇ／ｋｇベースの投薬（１７．６５ｍｇ／ｋｇ）についての集団全体についての曝露量ＡＵＣ分布のボックスプロットを示す図である。
【図７Ｃ】[0038]図７Ｃは、６８ｋｇの体重の中央値のシミュレーション集団における固定（１２００ｍｇ）対ｍｇ／ｋｇベースの投薬（１７．６５ｍｇ／ｋｇ）についての集団全体についてのＣｔｒｏｕｇｈ分布のボックスプロットを示す図である。
【図７Ｄ】[0038]図７Ｄは、６８ｋｇの体重の中央値のシミュレーション集団における固定（１２００ｍｇ）対ｍｇ／ｋｇベースの投薬（１７．６５ｍｇ／ｋｇ）についての集団全体についてのＣｍａｘ分布のボックスプロットを示す図である。
【図７Ｅ】[0039]図７Ｅは、６８ｋｇの体重の中央値のシミュレーション集団における固定（５００ｍｇ）対ｍｇ／ｋｇベースの投薬（７．３５ｍｇ／ｋｇ）についての集団全体についてのＣａｖｇ分布のボックスプロットを示す図である。
【図７Ｆ】[0039]図７Ｆは、６８ｋｇの体重の中央値のシミュレーション集団における固定（５００ｍｇ）対ｍｇ／ｋｇベースの投薬（７．３５ｍｇ／ｋｇ）についての集団全体についての曝露量ＡＵＣ分布のボックスプロットを示す図である。
【図７Ｇ】[0039]図７Ｇは、６８ｋｇの体重の中央値のシミュレーション集団における固定（５００ｍｇ）対ｍｇ／ｋｇベースの投薬（７．３５ｍｇ／ｋｇ）についての集団全体についてのＣｔｒｏｕｇｈ分布のボックスプロットを示す図である。
【図７Ｈ】[0039]図７Ｈは、６８ｋｇの体重の中央値のシミュレーション集団における固定（５００ｍｇ）対ｍｇ／ｋｇベースの投薬（７．３５ｍｇ／ｋｇ）についての集団全体についてのＣｍａｘ分布のボックスプロットを示す図である。
【図８Ａ】[0040]図８Ａは、６８ｋｇの体重の中央値のシミュレーション集団における固定（１２００ｍｇ）対ｍｇ／ｋｇ（１７．６５ｍｇ／ｋｇ）ベースの投薬についての体重四分値のＣａｖｇ分布のボックスプロットを示す図である。
【図８Ｂ】[0040]図８Ｂは、６８ｋｇの体重の中央値のシミュレーション集団における固定（１２００ｍｇ）対ｍｇ／ｋｇ（１７．６５ｍｇ／ｋｇ）ベースの投薬についての体重四分値の曝露量ＡＵＣ分布のボックスプロットを示す図である。
【図８Ｃ】[0040]図８Ｃは、６８ｋｇの体重の中央値のシミュレーション集団における固定（１２００ｍｇ）対ｍｇ／ｋｇ（１７．６５ｍｇ／ｋｇ）ベースの投薬についての体重四分値のＣｔｒｏｕｇｈ分布のボックスプロットを示す図である。
【図８Ｄ】[0040]図８Ｄは、６８ｋｇの体重の中央値のシミュレーション集団における固定（１２００ｍｇ）対ｍｇ／ｋｇ（１７．６５ｍｇ／ｋｇ）ベースの投薬についての体重四分値のＣｍａｘ分布のボックスプロットを示す図である。
【図８Ｅ】[0041]図８Ｅは、６８ｋｇの体重の中央値のシミュレーション集団における固定（５００ｍｇ）対ｍｇ／ｋｇ（７．３５ｍｇ／ｋｇ）ベースの投薬についての体重四分値のＣａｖｇ分布のボックスプロットを示す図である。
【図８Ｆ】[0041]図８Ｆは、６８ｋｇの体重の中央値のシミュレーション集団における固定（５００ｍｇ）対ｍｇ／ｋｇ（７．３５ｍｇ／ｋｇ）ベースの投薬についての体重四分値の曝露量ＡＵＣ分布のボックスプロットを示す図である。
【図８Ｇ】[0041]図８Ｇは、６８ｋｇの体重の中央値のシミュレーション集団における固定（５００ｍｇ）対ｍｇ／ｋｇ（７．３５ｍｇ／ｋｇ）ベースの投薬についての体重四分値のＣｔｒｏｕｇｈ分布のボックスプロットを示す図である。
【図８Ｈ】[0041]図８Ｈは、６８ｋｇの体重の中央値のシミュレーション集団における固定（５００ｍｇ）対ｍｇ／ｋｇ（７．３５ｍｇ／ｋｇ）ベースの投薬についての体重四分値のＣｍａｘ分布のボックスプロットを示す図である。
【図９Ａ】[0042]図９Ａは、予測腫瘍容積対観察腫瘍容積を示す、ＰＫ効能モデルについての適合度の散布図を示す図である。
【図９Ｂ】[0042]図９Ｂは、条件付き重み付き残差（ＧＷＲＥＳ）対投与後の時間を示す、ＰＫ効能モデルについての適合度の散布図を示す図である。
【図１０Ａ】[0043]図１０Ａ〜１０Ｃは、マウスにおける腫瘍後退に関連する用量及びスケジュールでの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子の予測ＰＫ及び予測ＰＤ−Ｌ１受容体占有率（「ＲＯ」）を示す図である。図１０Ａは、予測血漿濃度対時間を示す図である。
【図１０Ｂ】[0043]図１０Ａ〜１０Ｃは、マウスにおける腫瘍後退に関連する用量及びスケジュールでの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子の予測ＰＫ及び予測ＰＤ−Ｌ１受容体占有率（「ＲＯ」）を示す図である。図１０Ｂは、ＰＢＭＣにおける予測ＰＤ−Ｌ１  ＲＯ対時間を示す図である。
【図１０Ｃ】[0043]図１０Ａ〜１０Ｃは、マウスにおける腫瘍後退に関連する用量及びスケジュールでの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子の予測ＰＫ及び予測ＰＤ−Ｌ１受容体占有率（「ＲＯ」）を示す図である。図１０Ｃは、腫瘍における予測ＰＤ−Ｌ１  ＲＯ対時間を示す図である。
【図１１Ａ】[0044]図１１Ａ〜１１Ｃは、マウスにおける腫瘍静止に関連する用量及びスケジュールでの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子の予測ＰＫ及び予測ＰＤ−Ｌ１受容体占有率（「ＲＯ」）を示す図である。図１１Ａは、予測血漿濃度対時間を示す図である。
【図１１Ｂ】[0044]図１１Ａ〜１１Ｃは、マウスにおける腫瘍静止に関連する用量及びスケジュールでの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子の予測ＰＫ及び予測ＰＤ−Ｌ１受容体占有率（「ＲＯ」）を示す図である。図１１Ｂは、ＰＢＭＣにおける予測ＰＤ−Ｌ１  ＲＯ対時間を示す図である。
【図１１Ｃ】[0044]図１１Ａ〜１１Ｃは、マウスにおける腫瘍静止に関連する用量及びスケジュールでの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子の予測ＰＫ及び予測ＰＤ−Ｌ１受容体占有率（「ＲＯ」）を示す図である。図１１Ｃは、腫瘍における予測ＰＤ−Ｌ１  ＲＯ対時間を示す図である。
【図１２Ａ】[0045]図１２Ａ〜１２Ｂは、６８ｋｇの体重の中央値のシミュレーション集団における様々な投薬計画についての集団全体についてのシミュレーション曝露量分布のボックスプロットを示す図である（図１２Ａ：Ｃａｖｅｒａｇｅ）。
【図１２Ｂ】[0045]図１２Ａ〜１２Ｂは、６８ｋｇの体重の中央値のシミュレーション集団における様々な投薬計画についての集団全体についてのシミュレーション曝露量分布のボックスプロットを示す図である（図１２Ｂ：Ｃｔｒｏｕｇｈ）。
【図１３】[0046]図１３は、すでに進行性である疾患を有する（第一選択治療抵抗性の（primary refractory）及び獲得抵抗性の疾患の両方の）患者が、有効な疾患安定化を実現したことを実証するスパイダープロットを示す図である。疾患応答及び疾患安定化を有する患者は、本研究を開始する前に多種多様な前治療を有することが特に言及され、さらに、治験をスタートする直前に様々な治療を受けており、前にＰＤｘに曝露された患者の不均一な集団における抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップの臨床活性を示唆する（塗りつぶされた三角形：対象の治療中止；塗りつぶされた菱形：新たな病変の第１の発生）。
【図１４】[0047]図１４は、抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１治療により治療された患者における抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子の効能のヒストグラムを示す図である。抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子の効能が、前の抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１集団に対して難治性（黒色の棒）及び抵抗性（白色の棒）として同定されたいくらかの患者において観察された（直径の合計の変化百分率のおよそゼロ（０）の値又は負の値は、効能を示す）。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
体重に無関係な投薬計画
[0048]  少なくとも５００ｍｇの本明細書において記載される二機能性抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子の投与を伴う体重に無関係な投薬計画を立て、分子についての様々な前臨床及び臨床評価の結果によって特徴づけた。２つの研究が、分子の安全性、耐性、及び薬物動態を調査し、治療された患者の血液から得られた末梢血単核細胞に対するＰＤ−Ｌ１標的占有率の評価並びにＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２、及びＴＧＦβ３の濃度の測定を含んだ。これらの評価は、合計３５０人の対象からのデータに基づいた（固形腫瘍における１、３、１０、及び２０ｍｇ／ｋｇの用量漸増コホート並びに選択した腫瘍タイプにおける３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、５００ｍｇ、及び１２００ｍｇの拡大コホート）。分析時のデータ締め切り日の時点で、治療期間の中央値は、およそ２８日であった。
【００３４】
ＰＫ／効能モデル（マウスモデル）
[0049]  実験はまた、腫瘍モデルにおける抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子の効能を決定するためにも行った。ＥＭＴ−６異種移植からの効能結果は、ＰＫ／効能モデルを確立するために使用した。マウスにおける確立されたＰＫモデルは、効能実験設定のために、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ血漿曝露量をシミュレートするために使用した。推定パラメーターを、表１に報告する。推定ＫＣ５０値は、５５．３μｇ／ｍＬであった。この値は、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子の最大の抗腫瘍活性の５０％を実現することができた平均血漿濃度を示す。
【００３５】
[0050]  モデルの基本的な診断プロットは、モデル誤設計を明らかにしなかった。モデル予測により、腫瘍容積分布をとらえることができる（図９Ａ）。条件付き重み付き残差は、傾向（ｔｒｅｎｄ）なしの平均０及び分散１で正規分布する（図９Ｂ）。次いで、ＰＫ／効能モデルは、様々な用量でのヒト予測濃度−時間プロファイルを使用し、腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）をシミュレートするために使用した。
【００３６】
【表１】
2020514290.tif 000003
【００３７】
ＰＤ−Ｌ１占有率に基づいた応答分析（マウスモデルにおいて）
[0052]  効能実験を使用して、マウスにおける応答について分析し、腫瘍後退又は腫瘍静止のいずれかによってソートし、ＰＫ及びＰＤ−Ｌ１受容体占有率（ＲＯ）を、統合ＰＫ／ＲＯモデルに基づいて予測した。このアプローチは、腫瘍における９５％を上回るＰＤ−Ｌ１  ＲＯに関連する４０及び１００μｇ／ｍＬの間の抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子血漿濃度が、腫瘍後退に達するために必要とされることを実証した（図９Ａ〜９Ｂ）。末梢における９５％を上回るＰＤ−Ｌ１  ＲＯに関連する１０及び４０μｇ／ｍＬの間の抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子の血漿濃度は、腫瘍静止に達するために必要とされる（図１０Ａ〜１０Ｃ）。
【００３８】
[0053]  マウスにおける応答分析及び予測ＰＫ／ＲＯは、図１１Ａ〜１１Ｃを導き、これらは、マウスにおける抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子についてのＰＫ／ＲＯ／効能を要約する。ＰＤ−Ｌ１  ＲＯの９５％は、４０μｇ／ｍＬの血漿濃度で実現され、期待／推定ＴＧＩは、わずか約６５％である。４０μｇ／ｍＬを上回る濃度の増加は、腫瘍増殖阻害においてさらなる増加をもたらす。９５％の腫瘍増殖阻害は、約１００μｇ／ｍＬの平均血漿濃度で実現される。
【００３９】
[0054]  下記に記載される母集団ＰＫモデルに基づくと、２週間ごとに１回投与される少なくとも５００ｍｇの均一の用量が、約１００μｇ／ｍＬの平均濃度を維持するために必要とされ、一方、２週間ごとに１回投与される約１２００ｍｇの均一の用量が、約１００μｇ／ｍＬのＣｔｒｏｕｇｈを維持するために必要とされる。ある実施形態では、約１２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ（たとえば約１２００、約１３００、約１４００、約１５００、約１６００、約１７００、約１８００、約１９００、約２０００、約２１００、約２２００、約２３００、約２４００など）の本開示のタンパク質産物（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）が、対象に投与される。ある実施形態では、約１２００ｍｇの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子は、２週間ごとに１回、対象に投与される。ある実施形態では、約１８００ｍｇの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子は、３週間ごとに１回、対象に投与される。
【００４０】
[0055]  実施形態では、約１２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ（たとえば約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２３００ｍｇ、約２４００ｍｇなど）の、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物が、対象に投与される。
【００４１】
[0056]  ある実施形態では、約１２００ｍｇの、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物は、２週間ごとに１回、対象に投与される。ある実施形態では、約１８００ｍｇの、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物は、３週間ごとに１回、対象に投与される。
【００４２】
ヒトにおける薬物動態学的（ＰＫ）分析サンプリング
[0057]  薬物動態学的（ＰＫ）データ分析のための血清サンプルは、第１の用量のスタートの前に及び第１の用量の後の以下の時点で収集した：１日目の注入直後及び注入のスタートから４時間後；２日目、１日目の注入の終了から少なくとも２４時間後；並びに８日目及び１５日目。選択した続く投薬の時、投与前、注入の終了時、及び注入の終了から２〜８時間後のサンプルを、１５、２９、４３日目に収集した。５７、７１、及び８５日目の後の時点については、投与前のサンプルを収集し、その後、１２週まで６週間ごとに１回のＰＫサンプリング、次いで、１２週間ごとに１回、ＰＫサンプリングを続けた。拡大フェーズでは、まばらなＰＫサンプリングを行った。
【００４３】
体重に無関係な投薬計画の確立
[0058]  臨床及び前臨床データによって特徴づけられるように、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子の投与のための新たな、体重に無関係な投薬計画を、曝露量におけるより少ない変動を実現し、投薬ミスを低下させ、用量の調製に必要な時間を低下させ、かつｍｇ／ｋｇ投薬と比較して薬剤浪費を低下させ、したがって好都合な治療成果を容易にするために作成した。一実施形態によれば、少なくとも５００ｍｇの均一の用量を、患者の体重にかかわらず投与することができる。別の実施形態によれば、少なくとも１２００ｍｇの均一の用量を、患者の体重にかかわらず投与することができる。典型的に、そのような用量は、たとえば２週間ごとに１回又は３週間ごとに１回などのように、繰り返し投与されるであろう。
【００４４】
[0059]  上記に記載される「ヒトにおけるＰＫ分析サンプリング」からのＰＫデータは、母集団ＰＫモデルを生成するために及び実行可能な投薬計画のシミュレーションを実行するために使用した。Gastonguay, M., Full Covariate Models as an Alternative to Methods Relying on Statistical Significance for Inferences about Covariate Effects: A Review of Methodology and 42 Case Studies, (2011) p. 20, Abstract 2229において記載される完全アプローチモデルとして知られているモデリング方法を、母集団モデルに対して適用し、データをシミュレーションから得て、以下の特徴を有するパラメーターを得た：線形消失を有する２−コンパートメントＰＫモデル、ＣＬ、Ｖ１、及びＶ２のＩＩＶ、付加及び比例残差の組み合わせ、ＣＬ及びＶ１の完全共変量モデル。以下のベースライン共変量を最終モデルに含めた：年齢、体重、性別、人種、アルブミン、ＣＲＰ、血小板数、ｅＧＦＲ、肝臓の損傷、ＥＣＯＧスコア、腫瘍の大きさ、腫瘍のタイプ、及び生物製剤による以前の治療。本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）の薬物動態の典型的なパラメーター推定値について以下の推定値を得た：クリアランス（ＣＬ）  ０．０１７７Ｌ／時（６．２％）、中央分布容積（Ｖ１）  ３．６４Ｌ（８．８１％）、末梢分布容積（Ｖ２）  ０．５１３Ｌ（２５．１％）、及びコンパートメント間クリアランス（Ｑ）  ０．００２１９Ｌ／時（１７．８％）。患者間の変動は、ＣＬについては２２％、Ｖ１については２０％、Ｖ２については１３５％であった。体重は、ＣＬ及びＶ１の両方と関係のある共変量であった。均一の投薬アプローチを支持するために、本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）の曝露量変動に対する投薬戦略の影響について調べた。詳細には、シミュレーションは、２週間ごとに１回の１２００ｍｇの均一の投薬アプローチ対２週間ごとに１回の１７．６５ｍｇ／ｋｇ（６８ｋｇの対象については２週間ごとに１回の１２００ｍｇに対応する又は２週間ごとに１回の１５ｍｇ／ｋｇ（８０ｋｇの対象については１２００ｍｇに対応する）のＢＷ調整投薬アプローチを使用し、曝露量分布を比較するために実行した。さらなるシミュレーションは、２週間ごとに１回の５００ｍｇの均一の投薬アプローチ対２週間ごとに１回の７．３５ｍｇ／ｋｇのＢＷ調整投薬アプローチ（６８ｋｇの対象については２週間ごとに１回の５００ｍｇに対応する）を使用し、曝露量分布を比較するために実行した。そのうえ、シミュレーションを、３週間ごとに１回、以下の均一の用量について評価するために実行した：１２００ｍｇ、１４００ｍｇ、１６００ｍｇ、１８００ｍｇ、２０００ｍｇ、２２００ｍｇ、２４００ｍｇ、２６００ｍｇ、２８００ｍｇ、３０００ｍｇ。
【００４５】
[0060]  シミュレーションのために以下の手法を使用した：Ｎ＝２００セットのパラメーター推定値を、最終ＰＫモデル分散共分散行列を使用して、パラメーター推定値の多変量正規分布から得た。各パラメーター推定値について、２００のＩＩＶ推定値を、＄ＯＭＥＧＡ多変量正規分布から得て、合計４００００（２００×２００）の対象がもたらされた。共変量が一致した４００００セットを生成するために、元のデータセット（Ｎ＝３８０）を置き換えにより再サンプリングし、定常状態曝露量測定基準（ＡＵＣ、Ｃａｖｇ、Ｃｔｒｏｕｇｈ、及びＣｍａｘ）を、それぞれの投薬計画について生成した。
【００４６】
[0061]  シミュレーションは、広いＢＷ範囲にわたって、曝露量における変動が、固定投薬と比較してＢＷベースの投薬についてわずかに高いことを示した。６８ｋｇの体重の中央値についての１７．６５ｍｇ／ｋｇ及び１２００ｍｇの均一の用量又は７．３５ｍｇ／ｋｇ及び５００ｍｇの均一の用量の曝露量分布の例をそれぞれ図７Ａ及び図７Ｂに示す。シミュレーションは、さらに、患者集団にわたる体重四分値にわたって曝露量分布における反対の傾向を示した：低体重の患者は、固定投薬でより高い曝露量を有し、高体重の患者は、ＢＷ調整投薬でより高い曝露量を有する。
【００４７】
[0062]  ６８ｋｇの体重の中央値についての１７．６５ｍｇ／ｋｇ及び１２００ｍｇの均一の用量又は７．３５ｍｇ／ｋｇ及び５００ｍｇの均一の用量の体重四分値にわたる曝露量分布の例をそれぞれ図８Ａ及び図８Ｂに示す。
【００４８】
ヒトにおける効果的な用量／投薬計画及び曝露量の確立：抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップの２週間ごとに１回（ｑ２ｗ）の投薬後の２ｎｄライン非小細胞肺癌（２Ｌ  ＮＳＣＬＣ）における予備的用量応答及び曝露量応答
[0063]  一態様では、用量応答及び曝露量応答の評価は、２Ｌ  ＮＳＣＬＣの治療において、２週間ごとに１回（ｑ２ｗ）、５００ｍｇ又は１２００ｍｇの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを投与された８０人の対象（コホート当たりｎ＝４０）からのデータに基づく。対象の用量応答及び曝露量応答を評価した。分析時のデータ締め切りの時点で、合計１７人の対象が、治療を続けており、追跡調査の中央値は、３５．２（範囲、１．３〜４７．３）であった。調査者が評価した未確認奏効率（ＯＲＲ）は、２５．０％であり（５００ｍｇ  ＯＲＲ、２２．５％；１２００ｍｇ  ＯＲＲ、２７．５％）、９人の部分寛解（ＰＲ）が５００ｍｇで見られ、１人の完全寛解（ＣＲ）及び１０人のＰＲが１２００ｍｇで見られた。臨床活性は、ＰＤ−Ｌ１発現レベル全体にわたって観察し、≧８０％  ＰＤ−Ｌ１腫瘍発現を有する患者において１２００ｍｇでの７１．４％のＯＲＲが特に言及された（７人の患者）。最もよく見られた治療に関係する有害事象（ＴＲＡＥ）は、そう痒症（１８．８％）、斑状丘疹状皮疹（１７．５％）、食欲の減少（１２．５％）、及び無力症（１１．３％）であった。グレード≧３  ＴＲＡＥが、２０人の患者（２５％）において生じた。治療に関係する死亡は生じなかった。
【００４９】
[0064]  曝露量応答評価のために、上記に記載される母集団ＰＫモデルを、これらの８０人の患者からの投薬及び共変量についての情報に基づいて第１サイクルの曝露量を予測するために使用した。詳細には、母集団ＰＫパラメーターの経験的ベイズ推定値を使用して、単回投与後のＡＵＣ及びＣｔｒｏｕｇｈをすべての対象について予測した（表２及び３）。
【００５０】
【表２】
2020514290.tif 000004
【００５１】
【表３】
2020514290.tif 000005
【００５２】
[0067]  予測曝露量データを、下記の表４及び表５に示されるように、予測曝露量のそれぞれの四分値の応答率を計算するために、５００ｍｇ  ｑ２ｗ及び１２００ｍｇ  ｑ２ｗコホートについて組み合わせた。これらの予備的データは、１２００ｍｇ  ｑ２ｗが、５００ｍｇ  ｑ２ｗと比較して、より好都合な効能プロファイルを提供するかもしれないことを示唆する。さらに、これらのデータは、１２００ｍｇ  ｑ２ｗ投薬計画により実現された曝露量の範囲が、２Ｌ  ＮＳＣＬＣにおける応答（ＲＥＣＩＳＴ  ｖ１．１による）と関連性があり、この曝露量範囲は、下記の実施例において示されるように、代替の投薬計画を設計するために使用することができることを示唆する（図１２）。
【００５３】
【表４】
2020514290.tif 000006
【００５４】
【表５】
2020514290.tif 000007
【００５５】
様々な投薬頻度による投薬計画の確立
[0070]  様々な投薬頻度によるデータ投与計画を、それほど頻繁でない投与を可能にするために及び／又は併用薬との投薬スケジュールの調和を可能にするために作成した。詳細には、上記に記載される予備的母集団ＰＫモデリング及びシミュレーション手法を、様々な投薬計画についての曝露量をシミュレートするために及び曝露量に基づいた投与計画を比較するために使用した。
【００５６】
[0071]  これらのシミュレーションに基づくと、２週間ごとに１回投与される少なくとも５００ｍｇの均一の用量が、典型的な対象について約１００μｇ／ｍＬの平均濃度を維持するために必要とされ、一方、２週間ごとに１回投与される約１２００ｍｇの均一の用量が、約１００μｇ／ｍＬのＣｔｒｏｕｇｈを維持するために必要とされる。
【００５７】
[0072]  シミュレーションに基づくと、Ｃａｖｇについては、２週間ごとに１回の１２００ｍｇが、３週間ごとに１回の１８００ｍｇに等しく（図１２Ａ）、一方、Ｃｔｒｏｕｇｈについては、２週間ごとに１回の１２００ｍｇが、３週間ごとに１回の２８００ｍｇに等しい（図１２Ｂ）。また、Ｃａｖｇについては、２週間ごとに１回の５００ｍｇが、３週間ごとに１回の７５０ｍｇに等しく、Ｃｔｒｏｕｇｈについては、２週間ごとに１回の５００ｍｇが、３週間ごとに１回の１，１６７ｍｇに等しい。
【００５８】
癌標的としてのＴＧＦβ
[0073]  本開示は、ある腫瘍細胞又は免疫細胞の外部表面に見つけられる細胞免疫チェックポイント受容体を標的にする抗体成分につながれた可溶性サイトカイン受容体（ＴＧＦβＲＩＩ）を使用してＴＧＦβを捕捉することによって、腫瘍微小環境におけるＴＧＦβの局所的な低下を可能にする。免疫チェックポイントタンパク質に対する本開示の抗体成分の例は、抗ＰＤ−Ｌ１である。この二機能性分子は、時に本文書において「抗体−サイトカイントラップ」と呼ばれ、まさに抗受容体抗体及びサイトカイントラップが物理的に連結されているという理由で、有効である。結果として生じる利点（たとえば別々の分子としての抗体及び受容体の投与に対して）は、部分的には、サイトカインがオートクリン及びパラクリン機能によってたいてい局所的な環境において機能するからである。抗体成分は、サイトカイントラップを、サイトカイントラップが局所的な免疫抑制性のオートクリン又はパラクリン効果を中和することによって非常に有効になり得る腫瘍微小環境に向ける。さらに、抗体の標的が抗体結合に際して内部移行される場合に、サイトカイン／サイトカイン受容体複合体のクリアランスにとって有効なメカニズムが提供される。抗体媒介性の標的内部移行は、ＰＤ−Ｌ１について示され、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップは、抗ＰＤ−Ｌ１と同様の内部移行率を有することが示された。第１に、抗ＴＧＦβ抗体が完全には中和していないかもしれず、そして第２に、抗ＴＧＦβ抗体が、サイトカインの半減期を延ばすキャリヤとして作用し得るので、これは、抗ＴＧＦβ抗体の使用にまさる明確な利点である。
【００５９】
[0074]  実際に、下記に記載されるように、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップによる治療は、腫瘍細胞上のＰＤ−Ｌ１及び免疫細胞上のＰＤ−１の間の相互作用の同時の遮断並びに腫瘍微小環境におけるＴＧＦβの中和により、相乗的な抗腫瘍効果を誘起する。理論によって拘束されないが、これは、おそらく、２つの重大な免疫逃避メカニズムの同時の遮断並びにそのうえ単一の分子実体による腫瘍微小環境におけるＴＧＦβの除去から得られる相乗効果によるものである。この除去は、（１）腫瘍細胞の抗ＰＤ−Ｌ１ターゲティング；（２）ＴＧＦβトラップによる腫瘍微小環境におけるオートクリン／パラクリンＴＧＦβの結合；及び（３）ＰＤ−Ｌ１受容体媒介性のエンドサイトーシスによる結合ＴＧＦβの破壊によって実現される。さらに、Ｆｃ（ＩｇＧの結晶化可能断片）のＣ−末端に融合されたＴＧＦβＲＩＩは、ＦｃのＮ−末端にＴＧＦβＲＩＩを置くＴＧＦβＲＩＩ−Ｆｃよりも数倍強力であった。
【００６０】
[0075]  ＴＧＦβは、癌の分子二重人格者としてのその逆説的な役割のために、癌免疫療法において多少疑問の余地のある標的であった（Bierie et al., Nat. Rev. Cancer, 2006; 6:506-20）。他のいくつかのサイトカインのように、ＴＧＦβ活性は発生段階及び状況に依存性である。実際に、ＴＧＦβは、発癌プロモーター又は腫瘍抑制因子として作用することができ、腫瘍イニシエーション、進行、及び転移に影響を与える。ＴＧＦβのこの二重の役割の根底にあるメカニズムは、不明なままである（Yang et al., Trends Immunol. 2010; 31:220-227）。Ｓｍａｄ依存性のシグナル伝達がＴＧＦβシグナル伝達の増殖阻害を媒介し、一方、Ｓｍａｄ非依存性の経路が、その腫瘍促進効果に寄与することが想定されたが、Ｓｍａｄ依存性の経路が腫瘍進行に関係することを示すデータもある（Yang et al., Cancer Res. 2008; 68:9107-11）。
【００６１】
[0076]  ＴＧＦβリガンド及び受容体の両方は、治療標的として徹底的に研究されてきた。３つのリガンドアイソフォーム、ＴＧＦβ１、２、及び３があり、これらはすべて、ホモ二量体として存在する。ＴＧＦβ受容体（ＴＧＦβＲ）も３つあり、これらはＴＧＦβＲ  Ｉ、ＩＩ、及びＩＩＩ型と呼ばれる（Lopez-Casillas et al., J Cell Biol. 1994; 124:557-68）。ＴＧＦβＲＩは、シグナル伝達鎖であり、リガンドに結合することができない。ＴＧＦβＲＩＩは、高い親和性でリガンドＴＧＦβ１及び３に結合するが、ＴＧＦβ２には結合しない。ＴＧＦβＲＩＩ／ＴＧＦβ複合体は、シグナル伝達複合体を形成するためにＴＧＦβＲＩを動員する（Won et al., Cancer Res. 1999; 59:1273-7）。ＴＧＦβＲＩＩＩは、ＴＧＦβのそのシグナル伝達受容体への結合の正の調節因子であり、３つのＴＧＦβアイソフォームすべてに高い親和性で結合する。細胞表面上で、ＴＧＦβ／ＴＧＦβＲＩＩＩ複合体は、ＴＧＦβＲＩＩに結合し、次いでＴＧＦβＲＩを動員し、ＴＧＦβＲＩは、シグナル伝達複合体を形成するためにＴＧＦβＲＩＩＩにとって代わる。
【００６２】
[0077]  ３つの異なるＴＧＦβアイソフォームはすべて、同じ受容体によってシグナル伝達するが、それらは、インビボにおいて違う発現パターン及び重複しない機能を有することが知られている。３つの異なるＴＧＦ−βアイソフォームノックアウトマウスは、異なる表現型を有し、多数の非代償性の機能であることを示す（Bujak et al., Cardiovasc Res. 2007; 74:184-95）。ＴＧＦβ１ヌルマウスは、造血及び脈管形成の欠損を有し、ＴＧＦβ３ヌルマウスは、肺疾患の発症及び口蓋発生（palatogenesis）の欠損を表すが、ＴＧＦβ２ヌルマウスは、様々な発生異常を示し、複数の心奇形が最も顕著である（Bartram et al., Circulation. 2001; 103:2745-52; Yamagishi et al., Anat Rec. 2012; 295:257-67）。さらに、ＴＧＦβは、虚血及び再灌流傷害の後の心筋の損傷の修復において重大な役割を果たすことが示されている。成人の心臓では、心筋細胞は、ＴＧＦβを分泌し、これは、自発的な拍動数を維持するためにオートクリンとして作用する。重要なことには、心筋細胞によって分泌されるＴＧＦβの７０〜８５％は、ＴＧＦβ２である（Roberts et al., J Clin Invest. 1992; 90:2056-62）。ＴＧＦβＲＩキナーゼ阻害剤による治療によって持ち上がった心毒性の問題にもかかわらず、本発明の出願人らは、サルにおいて、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップについて、心毒性を含む毒性がないことを観察した。
【００６３】
[0078]  ＴＧＦβを中和するための治療上のアプローチは、可溶性の受容体トラップ及び中和抗体としてＴＧＦβ受容体の細胞外ドメインを使用することを含む。受容体トラップアプローチのうちで、可溶性のＴＧＦβＲＩＩＩが３つのＴＧＦβリガンドすべてに結合するので、可溶性のＴＧＦβＲＩＩＩが分かり切った選択肢のように思われるかもしれない。しかしながら、７６２アミノ酸残基の細胞外ドメインを有する２８０〜３３０ｋＤグルコサミノグリカン（ＧＡＧ）−糖タンパク質として天然に存在するＴＧＦβＲＩＩＩは、生物療法（biotherapeutic）の開発にとって非常に複雑なタンパク質である。ＧＡＧを欠く可溶性のＴＧＦβＲＩＩＩは、昆虫細胞において産生することができ、強力なＴＧＦβ中和剤であることが示された（Vilchis-Landeros et al, Biochem J 355:215, 2001）。ＴＧＦβＲＩＩＩの２つの別々の結合ドメイン（エンドグリンに関係する及びウロモジュリンに関係する）は、独立して発現させることができたが、それらは、可溶性のＴＧＦβＲＩＩＩよりも２０〜１００倍低い親和性及びはるかに小さな中和活性を有することが示された（Mendoza et al., Biochemistry. 2009; 48:11755-65）。他方では、ＴＧＦβＲＩＩの細胞外ドメインは、長さがわずか１３６のアミノ酸残基であり、２５〜３５ｋＤのグリコシル化タンパク質として産生することができる。組換え可溶性ＴＧＦβＲＩＩは、２００ｐＭのＫＤでＴＧＦβ１に結合することがさらに示され、これは、細胞上の完全長ＴＧＦβＲＩＩに対する５０ｐＭのＫＤにかなり類似している（Lin et al., J Biol Chem. 1995; 270:2747-54）。可溶性のＴＧＦβＲＩＩ−Ｆｃは、抗癌剤として試験され、腫瘍モデルにおいて確立されたマウス悪性中皮腫増殖を阻害することが示された（Suzuki et al., Clin. Cancer Res., 2004; 10:5907-18）。ＴＧＦβＲＩＩは、ＴＧＦβ２に結合せず、ＴＧＦβＲＩＩＩは、ＴＧＦβＲＩＩよりも低い親和性でＴＧＦβ１及び３に結合するので、ＴＧＦβＲＩＩＩのエンドグリンドメイン及びＴＧＦβＲＩＩの細胞外ドメインの融合タンパク質が、細菌において産生され、細胞ベースのアッセイにおいて、ＴＧＦβＲＩＩ又はＲＩＩＩのいずれかよりも有効に、ＴＧＦβ１及び２のシグナル伝達を阻害することが示された（Verona et al., Protein Eng Des Sel. 2008; 21:463-73）。
【００６４】
[0079]  ＴＧＦβリガンドの３つのアイソフォームをすべて中和するさらに別のアプローチは、全部を中和する（pan-neutralizing）抗ＴＧＦβ抗体又はＴＧＦβ１、２、及び３への結合から受容体を遮断する抗受容体抗体についてスクリーニングすることである。ＴＧＦβのすべてのアイソフォームに対して特異的なヒト抗体であるＧＣ１００８は、進行悪性黒色腫又は腎細胞癌を有する患者においてフェーズＩ／ＩＩの研究中であった（Morris et al., J Clin Oncol 2008; 26:9028 (Meeting abstract））。治療は安全で、十分に耐容性を示すことがわかったが、限られた臨床上の効能しか観察されず、よって、免疫学的効果のさらなる特徴付けなしで抗ＴＧＦβ療法の重要性を説明するのは困難であった（Flavell et al., Nat Rev Immunol. 2010; 10:554-67）。さらに、ＴＧＦβアイソフォーム特異的抗体が臨床において試験された。ＴＧＦβ１に対して特異的な抗体であるメテリムマブは、緑内障手術に対して過度の術後の瘢痕を予防する治療としてフェーズ２臨床試験において試験され、また、ＴＧＦβ２に対して特異的な抗体であるレルデリムマブは、フェーズ３研究において眼の手術の後の瘢痕の改善について安全であるが、効果がないことがわかった（Khaw et al., Ophthalmology 2007; 114:1822-1830）。抗ヒトＴＧＦβＲＩＩ抗体ＴＲ１及び抗マウスＴＧＦβＲＩＩ抗体ＭＴ１などのような、３つすべてのＴＧＦβアイソフォームへの結合から受容体を遮断する抗ＴＧＦβＲＩＩ抗体もまた、マウスモデルにおいて、原発性腫瘍増殖及び転移に対するいくらかの治療上の効能を示した（Zhong et al., Clin Cancer Res. 2010; 16:1191-205）。しかしながら、抗体ＴＲ１（ＬＹ３０２２８５９）の最近のフェーズＩの研究において、２５ｍｇ（均一の用量）を超える用量漸増は、予防的な治療にもかかわらず、サイトカイン放出のコントロール不良により、安全でないと見なされた（Tolcher et al., Cancer Chemother Pharmacol 2017; 79:673-680）。現在までのところ、かなり毒性であることが多い、ＴＧＦβシグナル伝達の小分子阻害剤を含むＴＧＦβ標的抗癌治療に関する研究の大部分は、多くは、前臨床ステージにあり、得られた抗腫瘍効能は、限られている（Calone et al., Exp Oncol. 2012; 34:9-16; Connolly et al., Int J Biol Sci. 2012; 8:964-78）。
【００６５】
[0080]  本開示の抗体−ＴＧＦβトラップは、ＴＧＦβに結合することができるヒトＴＧＦβ受容体ＩＩ（ＴＧＦβＲＩＩ）の少なくとも一部分を含有する二機能性タンパク質である。ある実施形態では、ＴＧＦβトラップポリペプチドは、ＴＧＦβに結合することができるヒトＴＧＦβ受容体２型アイソフォームＡ（配列番号８）の可溶性の部分である。ある実施形態では、ＴＧＦβトラップポリペプチドは、配列番号８の少なくともアミノ酸７３〜１８４を含有する。ある実施形態では、ＴＧＦβトラップポリペプチドは、配列番号８のアミノ酸２４〜１８４を含有する。ある実施形態では、ＴＧＦβトラップポリペプチドは、ＴＧＦβに結合することができるヒトＴＧＦβ受容体２型アイソフォームＢ（配列番号９）の可溶性の部分である。ある実施形態では、ＴＧＦβトラップポリペプチドは、配列番号９の少なくともアミノ酸４８〜１５９を含有する。ある実施形態では、ＴＧＦβトラップポリペプチドは、配列番号９のアミノ酸２４〜１５９を含有する。ある実施形態では、ＴＧＦβトラップポリペプチドは、配列番号９のアミノ酸２４〜１０５を含有する。
【００６６】
作用メカニズム
[0081]  治療抗体による脱阻害のためにＴ細胞阻害チェックポイントを標的にするアプローチは、精力的に調査されているエリアである（概説についてはPardoll, Nat Rev Cancer. 2012; 12:253-264を参照）。あるアプローチでは、抗体成分又はその抗原結合断片は、たとえばＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＢＴＬＡ、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、又はＬＡＩＲ１などのような、Ｔ細胞上のＴ細胞阻害チェックポイント受容体タンパク質を標的にする。別のアプローチでは、抗体成分は、たとえばＰＤ−Ｌ１（Ｂ７−Ｈ１）、Ｂ７−ＤＣ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ−４、Ｂ７−Ｈ３、又はＢ７−Ｈ４などのような、抗原提示細胞及び腫瘍細胞（それら自体の免疫回避のためにこれらのカウンターレセプターのうちのいくつかを利用する）上のカウンターレセプターを標的にする。
【００６７】
[0082]  本開示は、抗体成分又はその抗原結合断片により、脱阻害のためにＴ細胞阻害チェックポイントを標的にする抗体ＴＧＦβトラップを企図する。その目的のために、出願人らは、ＴＧＦβトラップを、抗ＰＤ−１、抗ＰＤ−Ｌ１、抗ＴＩＭ−３、及び抗ＬＡＧ３などのような様々なＴ細胞阻害チェックポイント受容体タンパク質を標的にする抗体と組み合わせることについての抗腫瘍効能を試験した。
【００６８】
[0083]  プログラム死１（ＰＤ−１）／ＰＤ−Ｌ１軸は、腫瘍免疫回避にとって重要なメカニズムである。長期にわたって抗原を検知し続けているエフェクターＴ細胞は、ＰＤ−１発現によって特徴づけられる、疲弊した表現型を持つようになり、このような状況下で、腫瘍細胞は、ＰＤ−Ｌ１をアップレギュレートすることによって交戦してくる。そのうえ、腫瘍微小環境では、骨髄系細胞、マクロファージ、実質細胞、及びＴ細胞は、ＰＤ−Ｌ１をアップレギュレートする。軸の遮断は、これらのＴ細胞におけるエフェクター機能を回復させる。抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップはまた、ＴＧＦβ（１、２、及び３アイソフォーム）にも結合し、これは、アポトーシス性好中球、骨髄由来抑制細胞、Ｔ細胞、及び腫瘍を含む細胞によって腫瘍微小環境において産生される阻害性サイトカインである。可溶性のＴＧＦβＲＩＩによるＴＧＦβの阻害は、ＣＤ８＋Ｔ細胞抗腫瘍効果の増加に関連する仕方で悪性中皮腫を低下させた。活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＴｒｅｇ細胞によって産生されるＴＧＦβ１の欠如は、腫瘍増殖を阻害し、自然発生癌からマウスを保護することが示された。したがって、ＴＧＦβは、腫瘍免疫回避にとって重要と思われる。
【００６９】
[0084]  ＴＧＦβは、正常な上皮細胞に対して増殖阻害効果を有し、上皮細胞ホメオスタシスの調節因子として機能し、またＴＧＦβは、初期の発癌現象の間は腫瘍抑制因子として作用する。腫瘍が悪性疾患の方へ進行すると、腫瘍に対するＴＧＦβの増殖阻害効果は、１つ又はそれ以上のＴＧＦβ経路シグナル伝達構成成分における突然変異を介して又は腫瘍形成性の再プログラムによって失われる。ＴＧＦβ阻害に対する感受性の損失と同時に、腫瘍は、高レベルのＴＧＦβを産生し続け、次いで、これは、腫瘍増殖を促進する役目を果たす。ＴＧＦβサイトカインは、様々な癌のタイプで過剰発現され、腫瘍ステージと相関性がある。腫瘍細胞自体、未成熟骨髄系細胞、調節性Ｔ細胞、及び間質性線維芽細胞を含む腫瘍微小環境における多くのタイプの細胞が、ＴＧＦβを産生し、これらの細胞は、集団的に、細胞外マトリックス中にＴＧＦβの大きな貯蔵所を生成する。ＴＧＦβシグナル伝達は、転移を促進し、血管新生を刺激し、自然免疫及び適応抗腫瘍免疫を抑制することによって腫瘍進行に寄与する。広く免疫抑制性の因子として、ＴＧＦβは、活性化された細胞障害性Ｔ細胞及びＮＫ細胞のエフェクター機能を直接ダウンレギュレートし、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞の免疫抑制性調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）表現型への分化を強力に誘発する。そのうえ、ＴＧＦβは、マクロファージ及び好中球を、免疫抑制性のサイトカインの産生に関連する創傷治癒表現型に極性化する。治療上の戦略として、ＴＧＦβ活性の中和は、有効な抗腫瘍免疫を回復させ、転移を遮断し、血管新生を阻害することによって、腫瘍増殖をコントロールする可能性を有する。
【００７０】
[0085]  これらの経路、ＰＤ−１又はＰＤ−Ｌ１及びＴＧＦβを組み合わせることは、抗腫瘍アプローチとして魅力的である。同時に起こるＰＤ−１及びＴＧＦβの遮断は、炎症促進性のサイトカインを回復させることができる。抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップは、たとえば、完全ヒトＩｇＧ１抗ＰＤ−Ｌ１抗体のそれぞれの重鎖のＣ末端にグリシン／セリンリンカーを介して共有結合されたヒトＴＧＦβ受容体ＴＧＦβＲＩＩの細胞外ドメインを含む。応答は明らかであるが、効果量を増加させる余地があるＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１クラスについての明らかになりつつある状況を考慮すれば、補足的な免疫調整ステップを共標的にすることは腫瘍応答を改善するであろうということが仮定される。類似するＴＧＦ標的作用物質であるフレソリムマブは、ＴＧＦβ１、２、及び３を標的にするモノクローナル抗体であり、黒色腫を有する対象におけるフェーズＩ治験において腫瘍応答の最初の証拠を示した。
【００７１】
[0086]  ある実施形態では、本開示は、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ（トラップコントロール「抗ＰＤＬ−１（ｍｕｔ）／ＴＧＦβトラップ」）のＴＧＦβＲＩＩ部分が抗腫瘍活性を誘起することを実証した実験を提供する。たとえば、Ｄｅｔｒｏｉｔ５６２ヒト咽頭癌モデルにおける皮下移植後に、抗ＰＤＬ−１（ｍｕｔ）／ＴＧＦβトラップは、２５μｇ、７６μｇ、又は２２８μｇで投与された場合に、腫瘍容積において用量依存的な低下を誘起した（図５）。
【００７２】
[0087]  ある実施形態では、本開示は、本開示のタンパク質が、ＰＤ−Ｌ１及びＴＧＦβの両方に同時に結合することを実証した実験を提供する（図２）。
【００７３】
[0088]  ある実施形態では、本開示は、本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）が、インビトロにおいてＰＤ−Ｌ１及びＴＧＦβに依存性のシグナル伝達を阻害することを実証した実験を提供する。ある実施形態では、本開示は、本開示のタンパク質が、超抗原刺激後のＩＬ−２誘発アッセイによって測定されるように、ＰＤ−Ｌ１媒介性の免疫阻害の遮断を介してインビトロにおけるＴ細胞エフェクター機能を高めることを実証した実験を提供する（図３）。およそ１００ｎｇ／ｍｌで、本開示のタンパク質は、インビトロにおいてＩＬ−２レベルの劇的な増加を誘発した（図３）。
【００７４】
[0089]  ある実施形態では、本開示は、本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）が、インビボにおいて血液からのＴＧＦβの除去を引き起こすことを実証した実験を提供する。５５μｇ又は１６４μｇ又は４９２μｇの本開示のタンパク質によるＪＨマウスにおける同所移植ＥＭＴ−６乳癌細胞の治療は、ＴＧＦβ１（図４Ａ）、ＴＧＦβ２（図４Ｂ）、及びＴＧＦβ３（図４Ｃ）の効率的で特異的な除去をもたらした。さらに、本開示は、本開示のタンパク質が、ＰＤ−Ｌ１標的をふさぎ、本開示のタンパク質が、ＥＭＴ−６腫瘍系における受容体結合モデルにあてはまるという考えを支持することを実証した実験を提供する（図４Ｄ）。
【００７５】
[0090]  ある実施形態では、本開示は、本開示のタンパク質が、ＰＤ−Ｌ１及びＴＧＦβに効率的に、特異的に、かつ同時に結合し、様々なマウスモデルにおいて強力な抗腫瘍活性を持ち、腫瘍増殖及び転移を抑制する並びに生存を延ばし、長期的な防御抗腫瘍免疫を与えることを実証した実験を提供する。
【００７６】
[0091]  ファーストインヒューマンフェーズＩ用量漸増研究において、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子の薬物動態のモニタリングに加えて、特にＴＧＦβサイトカインに対する作用メカニズムについて調査した。
【００７７】
[0092]  患者は、２週間ごとに１回、約０．３、約１、約３、約１０、又は約２０ｍｇ／ｋｇの５用量レベルで静脈内に投与された抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子により治療され、ＰＫ分析は、８５日目までサンプルから実行した。ＰＤ−Ｌ１標的占有率は、投与前、２日目（Ｄ２）、Ｄ１５、及びＤ４３に収集された患者血液からフローサイトメトリーによってＣＤ３＋ＰＢＭＣにおいて測定した。さらに、ＴＧＦβ１〜３及び炎症促進性のサイトカインの血中レベルを、分析によって検証されたLuminexビーズ及びＥＣＬＩＡベースマルチプレックスイムノアッセイを使用して、Ｄ８でのさらなる時点と共に、これらの時点で測定した。一態様では、患者は、２週間ごとに約３０ｍｇ／ｋｇ又は約４０ｍｇ／ｋｇの用量で、上記に記載されるものを含む６用量レベルで静脈内に投与される抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子により治療することができる。６用量レベルで治療された患者のＰＫ分析は、６番目の用量の後にサンプルから実行されてもよい。ＰＤ−Ｌ１標的占有率もまた、投与前、２日目（Ｄ２）、Ｄ１５、Ｄ４３、及びＤ８５までに収集された患者血液からフローサイトメトリーによってＣＤ３＋ＰＢＭＣにおいて測定されてもよい。さらに、ＴＧＦβ１〜３及び炎症促進性のサイトカインの血中レベルを、分析によって検証されたLuminexビーズ及びＥＣＬＩＡベースマルチプレックスイムノアッセイを使用して、たとえばＤ８でのさらなる時点と共に、これらの時点で測定されてもよい。
【００７８】
[0093]  結果は、第１のサイクルの間の抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子ＰＫ曝露量は、治療の最初の８５日以内に著しい蓄積を伴うことなく、３〜２０ｍｇ／ｋｇの間で、ほぼ用量に比例して増加したことを示した。投薬期間の全体にわたって維持された３ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇでＰＤ−Ｌ１標的占有率は約８０％であった。さらに、０．３〜２０ｍｇ／ｋｇでＩＦＮγの小さい（Ｄ２で１．７倍）が、有意な誘発があった（ｐ＝０．００１、ｎ＝１９）。血液中のＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２、及びＴＧＦβ３のレベルは、用量レベル１〜２０ｍｇ／ｋｇについて最高の時点でそれぞれ最低９９％、９２％、及び９１％低下した。０．３ｍｇ／ｋｇのより低い用量では、ＴＧＦβ１〜３のレベルは、Ｄ２及びＤ８で減少したが、Ｄ１５では減少しなかった。そのうえ、薬剤ＰＫレベル及びＴＧＦβトラッピングの間に強い相関性がさらにあった。したがって、十分なＴＧＦβ１〜３のトラッピングは、１ｍｇ／ｋｇ又はそれを上回る薬剤用量レベルで実現された。
【００７９】
抗ＰＤ−Ｌ１抗体
[0094]  本開示は、当技術分野において記載される任意の抗ＰＤ−Ｌ１抗体又はその抗原結合断片を含むことができる。抗ＰＤ−Ｌ１抗体、たとえば２９Ｅ２Ａ３抗体（Biolegend、カタログ番号３２９７０１）は、市販で入手可能である。抗体は、モノクローナル、キメラ、ヒト化、又はヒト抗体とすることができる。抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、及びＦｖ断片を含み、これらは、下記にさらに詳細に記載される。
【００８０】
[0095]  例示的な抗体は、国際公開第２０１３／０７９１７４号において記載される。これらの抗体は、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３配列を含む重鎖可変領域ポリペプチドを含むことができ、
（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１配列は、Ｘ１ＹＸ２ＭＸ３（配列番号２１）であり、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２配列は、ＳＩＹＰＳＧＧＸ４ＴＦＹＡＤＸ５ＶＫＧ（配列番号２２）であり、
（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３配列は、ＩＫＬＧＴＶＴＴＶＸ６Ｙ（配列番号２３）であり、
さらにＸ１は、Ｋ、Ｒ、Ｔ、Ｑ、Ｇ、Ａ、Ｗ、Ｍ、Ｉ、又はＳであり、Ｘ２は、Ｖ、Ｒ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、又はＩであり、Ｘ３は、Ｈ、Ｔ、Ｎ、Ｑ、Ａ、Ｖ、Ｙ、Ｗ、Ｆ、又はＭであり、Ｘ４は、Ｆ又はＩであり、Ｘ５は、Ｓ又はＴであり、Ｘ６は、Ｅ又はＤである。
【００８１】
[0096]  一実施形態では、Ｘ１は、Ｍ、Ｉ、又はＳであり、Ｘ２は、Ｒ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、又はＩであり、Ｘ３は、Ｆ又はＭであり、Ｘ４は、Ｆ又はＩであり、Ｘ５は、Ｓ又はＴであり、Ｘ６は、Ｅ又はＤである。
【００８２】
[0097]  別の実施形態では、Ｘ１は、Ｍ、Ｉ、又はＳであり、Ｘ２は、Ｌ、Ｍ、又はＩであり、Ｘ３は、Ｆ又はＭであり、Ｘ４は、Ｉであり、Ｘ５は、Ｓ又はＴであり、Ｘ６は、Ｄである。
【００８３】
[0098]  さらに別の実施形態ではＸ１は、Ｓであり、Ｘ２は、Ｉであり、Ｘ３は、Ｍであり、Ｘ４は、Ｉであり、Ｘ５は、Ｔであり、Ｘ６は、Ｄである。
【００８４】
[0099]  別の態様では、ポリペプチドは、式：（ＨＣ−ＦＲ１）−（ＨＶＲ−Ｈ１）−（ＨＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｈ２）−（ＨＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｈ３）−（ＨＣ−ＦＲ４）によるＨＶＲの間に並べられた可変領域重鎖フレームワーク配列をさらに含む。
【００８５】
[00100]  さらに別の態様では、フレームワーク配列は、ヒトコンセンサスフレームワーク配列又はヒト生殖細胞系列フレームワーク配列に由来する。
【００８６】
[00101]  さらなる態様では、フレームワーク配列の少なくとも１つは、以下のとおり：
ＨＣ−ＦＲ１は、ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号２４）であり、
ＨＣ−ＦＲ２は、ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳ（配列番号２５）であり、
ＨＣ−ＦＲ３は、ＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号２６）であり、
ＨＣ−ＦＲ４は、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２７）である。
【００８７】
[00102]  さらなる態様では、重鎖ポリペプチドは、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む可変領域軽鎖とさらに組み合わせられ、
（ａ）ＨＶＲ−Ｌ１配列は、ＴＧＴＸ７Ｘ８ＤＶＧＸ９ＹＮＹＶＳ（配列番号２８）であり、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｌ２配列は、Ｘ１０ＶＸ１１Ｘ１２ＲＰＳ（配列番号２９）であり、
（ｃ）ＨＶＲ−Ｌ３配列は、ＳＳＸ１３ＴＸ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７ＲＶ（配列番号３０）であり、
さらにＸ７は、Ｎ又はＳであり、Ｘ８は、Ｔ、Ｒ、又はＳであり、Ｘ９は、Ａ又はＧであり、Ｘ１０は、Ｅ又はＤであり、Ｘ１１は、Ｉ、Ｎ、又はＳであり、Ｘ１２は、Ｄ、Ｈ、又はＮであり、Ｘ１３は、Ｆ又はＹであり、Ｘ１４は、Ｎ又はＳであり、Ｘ１５は、Ｒ、Ｔ、又はＳであり、Ｘ１６は、Ｇ又はＳであり、Ｘ１７は、Ｉ又はＴである。
【００８８】
[00103]  他の実施形態では、Ｘ７は、Ｎ又はＳであり、Ｘ８は、Ｔ、Ｒ、又はＳであり、Ｘ９は、Ａ又はＧであり、Ｘ１０は、Ｅ又はＤであり、Ｘ１１は、Ｎ又はＳであり、Ｘ１２は、Ｎであり、Ｘ１３は、Ｆ又はＹであり、Ｘ１４は、Ｓであり、Ｘ１５は、Ｓであり、Ｘ１６は、Ｇ又はＳであり、Ｘ１７は、Ｔである。
【００８９】
[00104]  さらに別の実施形態ではＸ７は、Ｓであり、Ｘ８は、Ｓであり、Ｘ９は、Ｇであり、Ｘ１０は、Ｄであり、Ｘ１１は、Ｓであり、Ｘ１２は、Ｎであり、Ｘ１３は、Ｙであり、Ｘ１４は、Ｓであり、Ｘ１５は、Ｓであり、Ｘ１６は、Ｓであり、Ｘ１７は、Ｔである。
【００９０】
[00105]  さらなる態様では、軽鎖は、式：（ＬＣ−ＦＲ１ＭＨＶＲ−Ｌ１）−（ＬＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｌ２）−（ＬＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｌ３）−（ＬＣ−ＦＲ４）によるＨＶＲの間に並べられた可変領域軽鎖フレームワーク配列をさらに含む。
【００９１】
[00106]  さらなる態様では、軽鎖フレームワーク配列は、ヒトコンセンサスフレームワーク配列又はヒト生殖細胞系列フレームワーク配列に由来する。
【００９２】
[00107]  さらなる態様では、軽鎖フレームワーク配列は、ラムダ軽鎖配列である。
【００９３】
[00108]  さらなる態様では、フレームワーク配列の少なくとも１つは、以下のとおり：
ＬＣ−ＦＲ１は、ＱＳＡＬＴＱＰＡＳＶＳＧＳＰＧＱＳＩＴＩＳＣ（配列番号３１）であり、
ＬＣ−ＦＲ２は、ＷＹＱＱＨＰＧＫＡＰＫＬＭＩＹ（配列番号３２）であり、
ＬＣ−ＦＲ３は、ＧＶＳＮＲＦＳＧＳＫＳＧＮＴＡＳＬＴＩＳＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣ（配列番号３３）であり、
ＬＣ−ＦＲ４は、ＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬ（配列番号３４）である。
【００９４】
[00109]  別の実施形態では、本開示は、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体又は抗原結合断片を提供し、
（ａ）重鎖は、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含み、さらに（ｉ）ＨＶＲ−Ｈ１配列は、Ｘ１ＹＸ２ＭＸ３（配列番号２１）であり、（ｉｉ）ＨＶＲ−Ｈ２配列は、ＳＩＹＰＳＧＧＸ４ＴＦＹＡＤＸ５ＶＫＧ（配列番号２２）であり、（ｉｉｉ）ＨＶＲ−Ｈ３配列は、ＩＫＬＧＴＶＴＴＶＸ６Ｙ（配列番号２３）であり、
（ｂ）軽鎖は、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含み、さらに（ｉｖ）ＨＶＲ−Ｌ１配列は、ＴＧＴＸ７Ｘ８ＤＶＧＸ９ＹＮＹＶＳ（配列番号２８）であり、（ｖ）ＨＶＲ−Ｌ２配列は、Ｘ１０ＶＸ１１Ｘ１２ＲＰＳ（配列番号２９）であり、（ｖｉ）ＨＶＲ−Ｌ３配列は、ＳＳＸ１３ＴＸ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７ＲＶ（配列番号３０）であり、Ｘ１は、Ｋ、Ｒ、Ｔ、Ｑ、Ｇ、Ａ、Ｗ、Ｍ、Ｉ、又はＳであり、Ｘ２は、Ｖ、Ｒ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、又はＩであり、Ｘ３は、Ｈ、Ｔ、Ｎ、Ｑ、Ａ、Ｖ、Ｙ、Ｗ、Ｆ、又はＭであり、Ｘ４は、Ｆ又はＩであり、Ｘ５は、Ｓ又はＴであり、Ｘ６は、Ｅ又はＤであり、Ｘ７は、Ｎ又はＳであり、Ｘ８は、Ｔ、Ｒ、又はＳであり、Ｘ９は、Ａ又はＧであり、Ｘ１０は、Ｅ又はＤであり、Ｘ１１は、Ｉ、Ｎ、又はＳであり、Ｘ１２は、Ｄ、Ｈ、又はＮであり、Ｘ１３は、Ｆ又はＹであり、Ｘ１４は、Ｎ又はＳであり、Ｘ１５は、Ｒ、Ｔ、又はＳであり、Ｘ１６は、Ｇ又はＳであり、Ｘ１７は、Ｉ又はＴである。
【００９５】
[00110]  一実施形態では、Ｘ１は、Ｍ、Ｉ、又はＳであり、Ｘ２は、Ｒ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、又はＩであり、Ｘ３は、Ｆ又はＭであり、Ｘ４は、Ｆ又はＩであり、Ｘ５は、Ｓ又はＴであり、Ｘ６は、Ｅ又はＤであり、Ｘ７は、Ｎ又はＳであり、Ｘ８は、Ｔ、Ｒ、又はＳであり、Ｘ９は、Ａ又はＧであり、Ｘ１０は、Ｅ又はＤであり、Ｘ１１は、Ｎ又はＳであり、Ｘ１２は、Ｎであり、Ｘ１３は、Ｆ又はＹであり、Ｘ１４は、Ｓであり、Ｘ１５は、Ｓであり、Ｘ１６は、Ｇ又はＳであり、Ｘ１７は、Ｔである。
【００９６】
[00111]  他の実施形態では、Ｘ１は、Ｍ、Ｉ、又はＳであり、Ｘ２は、Ｌ、Ｍ、又はＩであり、Ｘ３は、Ｆ又はＭであり、Ｘ４は、Ｉであり、Ｘ５は、Ｓ又はＴであり、Ｘ６は、Ｄであり、Ｘ７は、Ｎ又はＳであり、Ｘ８は、Ｔ、Ｒ、又はＳであり、Ｘ９は、Ａ又はＧであり、Ｘ１０は、Ｅ又はＤであり、Ｘ１１は、Ｎ又はＳであり、Ｘ１２は、Ｎであり、Ｘ１３は、Ｆ又はＹであり、Ｘ１４は、Ｓであり、Ｘ１５は、Ｓであり、Ｘ１６は、Ｇ又はＳであり、Ｘ１７は、Ｔである。
【００９７】
[00112]  さらに別の実施形態では、Ｘ１は、Ｓであり、Ｘ２は、Ｉであり、Ｘ３は、Ｍであり、Ｘ４は、Ｉであり、Ｘ５は、Ｔであり、Ｘ６は、Ｄであり、Ｘ７は、Ｓであり、Ｘ８は、Ｓであり、Ｘ９は、Ｇであり、Ｘ１０は、Ｄであり、Ｘ１１は、Ｓであり、Ｘ１２は、Ｎであり、Ｘ１３は、Ｙであり、Ｘ１４は、Ｓであり、Ｘ１５は、Ｓであり、Ｘ１６は、Ｓであり、Ｘ１７は、Ｔである。
【００９８】
[00113]  さらなる態様では、重鎖可変領域は、（ＨＣ−ＦＲ１）−（ＨＶＲ−Ｈ１）−（ＨＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｈ２）−（ＨＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｈ３）−（ＨＣ−ＦＲ４）のようにＨＶＲの間に並べられた１つ又はそれ以上のフレームワーク配列を含み、軽鎖可変領域は、（ＬＣ−ＦＲ１  ＭＨＶＲ−Ｌ１）−（ＬＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｌ２）−（ＬＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｌ３）−（ＬＣ−ＦＲ４）のようにＨＶＲの間に並べられた１つ又はそれ以上のフレームワーク配列を含む。
【００９９】
[00114]  さらなる態様では、フレームワーク配列は、ヒトコンセンサスフレームワーク配列又はヒト生殖細胞系列配列に由来する。
【０１００】
[00115]  さらなる態様では、重鎖フレームワーク配列の１つ又はそれ以上は、以下のとおり：
ＨＣ−ＦＲ１は、ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号２４）であり、
ＨＣ−ＦＲ２は、ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳ（配列番号２５）であり、
ＨＣ−ＦＲ３は、ＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号２６）であり、
ＨＣ−ＦＲ４は、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２７）である。
【０１０１】
[00116]  さらなる態様では、軽鎖フレームワーク配列は、ラムダ軽鎖配列である。
【０１０２】
[00117]  さらなる態様では、軽鎖フレームワーク配列の１つ又はそれ以上は、以下のとおり：
ＬＣ−ＦＲ１は、ＱＳＡＬＴＱＰＡＳＶＳＧＳＰＧＱＳＩＴＩＳＣ（配列番号３１）であり、
ＬＣ−ＦＲ２は、ＷＹＱＱＨＰＧＫＡＰＫＬＭＩＹ（配列番号３２）であり、
ＬＣ−ＦＲ３は、ＧＶＳＮＲＦＳＧＳＫＳＧＮＴＡＳＬＴＩＳＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣ（配列番号３３）であり、
ＬＣ−ＦＲ４は、ＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬ（配列番号３４）である。
【０１０３】
[00118]  さらなる態様では、重鎖可変領域ポリペプチド、抗体、又は抗体断片は、少なくとも１つのＣＨ１ドメインをさらに含む。
【０１０４】
[00119]  より特定の態様では、重鎖可変領域ポリペプチド、抗体、又は抗体断片は、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３ドメインをさらに含む。
【０１０５】
[00120]  さらなる態様では、可変領域軽鎖、抗体、又は抗体断片は、ＣＬドメインをさらに含む。
【０１０６】
[00121]  さらなる態様では、抗体は、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、及びＣＬドメインをさらに含む。
【０１０７】
[00122]  さらに特定の態様では、抗体は、ヒト又はマウス定常領域をさらに含む。
【０１０８】
[00123]  さらなる態様では、ヒト定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４からなる群から選択される。
【０１０９】
[00124]  さらに特定の態様では、ヒト又はマウス定常領域は、ｌｇＧ１である。
【０１１０】
[00125]  さらに別の実施形態では、本開示は、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体を特徴づけ、
（ａ）重鎖は、それぞれＳＹＩＭＭ（配列番号３５）、ＳＩＹＰＳＧＧＩＴＦＹＡＤＴＶＫＧ（配列番号３６）、及びＩＫＬＧＴＶＴＴＶＤＹ（配列番号３７）に対して少なくとも８０％の全体的な配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含み、
（ｂ）軽鎖は、それぞれＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＮＹＶＳ（配列番号３８）、ＤＶＳＮＲＰＳ（配列番号３９）、及びＳＳＹＴＳＳＳＴＲＶ（配列番号４０）に対して少なくとも８０％の全体的な配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１１１】
[00126]  特定の態様では、配列同一性は、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％である。
【０１１２】
[00127]  さらに別の実施形態では、本開示は、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体を特徴づけ、
（ａ）重鎖は、それぞれＭＹＭＭＭ（配列番号４１）、ＳＩＹＰＳＧＧＩＴＦＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４２）、及びＩＫＬＧＴＶＴＴＶＤＹ（配列番号３７）に対して少なくとも８０％の全体的な配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含み、
（ｂ）軽鎖は、それぞれＴＧＴＳＳＤＶＧＡＹＮＹＶＳ（配列番号４３）、ＤＶＳＮＲＰＳ（配列番号３９）、及びＳＳＹＴＳＳＳＴＲＶ（配列番号４０）に対して少なくとも８０％の全体的な配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１１３】
[00128]  特定の態様では、配列同一性は、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％である。
【０１１４】
[00129]  さらなる態様では、本開示による抗体又は抗体断片において、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３の配列と比較して、少なくとも、以下のとおり下線を引くことによって強調されるアミノ酸は、不変のままであり：
（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１において
【化１】
2020514290.tif 000008
、（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２において
【化２】
2020514290.tif 000009
、（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３において
【化３】
2020514290.tif 000010
、さらに、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３の配列と比較して、少なくとも、以下のとおり下線を引くことによって強調されるアミノ酸は、不変のままである：
（ａ）ＨＶＲ−Ｌ１  ＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＮＹＶＳ（配列番号３８）
（ｂ）ＨＶＲ−Ｌ２
【化４】
2020514290.tif 000011
（ｃ）ＨＶＲ−Ｌ３
【化５】
2020514290.tif 000012
。
【０１１５】
[00130]  別の態様では、重鎖可変領域は、（ＨＣ−ＦＲ１）−（ＨＶＲ−Ｈ１）−（ＨＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｈ２）−（ＨＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｈ３）−（ＨＣ−ＦＲ４）のようにＨＶＲの間に並べられた１つ又はそれ以上のフレームワーク配列を含み、軽鎖可変領域は、（ＬＣ−ＦＲ１）−（ＨＶＲ−Ｌ１）−（ＬＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｌ２）−（ＬＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｌ３）−（ＬＣ−ＦＲ４）のようにＨＶＲの間に並べられた１つ又はそれ以上のフレームワーク配列を含む。
【０１１６】
[00131]  さらに別の態様では、フレームワーク配列は、ヒト生殖細胞系列配列に由来する。
【０１１７】
[00132]  さらなる態様では、重鎖フレームワーク配列の１つ又はそれ以上は、以下のとおり：
ＨＣ−ＦＲ１は、ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号２４）であり、
ＨＣ−ＦＲ２は、ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳ（配列番号２５）であり、
ＨＣ−ＦＲ３は、ＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号２６）であり、
ＨＣ−ＦＲ４は、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２７）である。
【０１１８】
[00133]  さらなる態様では、軽鎖フレームワーク配列は、ラムダ軽鎖配列に由来する。
【０１１９】
[00134]  さらなる態様では、軽鎖フレームワーク配列の１つ又はそれ以上は、以下のとおり：
ＬＣ−ＦＲ１は、ＱＳＡＬＴＱＰＡＳＶＳＧＳＰＧＱＳＩＴＩＳＣ（配列番号３１）であり、
ＬＣ−ＦＲ２は、ＷＹＱＱＨＰＧＫＡＰＫＬＭＩＹ（配列番号３２）であり、
ＬＣ−ＦＲ３は、ＧＶＳＮＲＦＳＧＳＫＳＧＮＴＡＳＬＴＩＳＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣ（配列番号３３）であり、
ＬＣ−ＦＲ４は、ＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬ（配列番号３４）である。
【０１２０】
[00135]  さらに特定の態様では、抗体は、ヒト又はマウス定常領域をさらに含む。
【０１２１】
[00136]  さらなる態様では、ヒト定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４からなる群から選択される。
【０１２２】
[00137]  ある実施形態では、本開示は、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体を特徴づけ、
（ａ）重鎖配列は、重鎖配列：
【化６】
2020514290.tif 000013
に対して少なくとも８５％の配列同一性を有し、
（ｂ）軽鎖配列は、軽鎖配列：
【化７】
2020514290.tif 000014
に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する。
【０１２３】
[00138]  特定の態様では、配列同一性は、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％である。
【０１２４】
[00139]  ある実施形態では、本開示は、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体を提供し、
（ａ）重鎖配列は、重鎖配列：
【化８】
2020514290.tif 000015
に対して少なくとも８５％の配列同一性を有し、
（ｂ）軽鎖配列は、軽鎖配列：
【化９】
2020514290.tif 000016
に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する。
【０１２５】
[00140]  特定の態様では、配列同一性は、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％である。
【０１２６】
[00141]  別の実施形態では、抗体は、ヒト、マウス、又はカニクイザルＰＤ−Ｌ１に結合する。特定の態様では、抗体は、ヒト、マウス、又はカニクイザルＰＤ−Ｌ１及びそれぞれのヒト、マウス、又はカニクイザルＰＤ−１受容体の間の相互作用を遮断することができる。
【０１２７】
[00142]  別の実施形態では、抗体は、５×１０−９Ｍ又はそれ以下のＫＤで、好ましくは２×１０−９Ｍ又はそれ以下のＫＤで、さらにより好ましくは１×１０−９Ｍ又はそれ以下のＫＤでヒトＰＤ−Ｌ１に結合する。
【０１２８】
[00143]  さらに別の実施形態では、本開示は、ヒトＰＤ−Ｌ１の残基Ｙ５６及びＤ６１を含む機能的なエピトープに結合する抗ＰＤ−Ｌ１抗体又はその抗原結合断片に関する。
【０１２９】
[00144]  特定の態様では、機能的なエピトープは、ヒトＰＤ−Ｌ１のＥ５８、Ｅ６０、Ｑ６６、Ｒ１１３、及びＭ１１５をさらに含む。
【０１３０】
[00145]  より特定の態様では、抗体は、ヒトＰＤ−Ｌ１の残基５４〜６６及び１１２〜１２２を含む立体エピトープに結合する。
【０１３１】
[00146]  ある実施形態では、本開示は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体又はその抗原結合断片に関し、これは、本明細書において記載される本開示による抗体と、ＰＤ−Ｌ１への結合について交差競合（cross-compete）する。
【０１３２】
[00147]  ある実施形態では、本開示は、少なくとも１つの薬学的に許容され得るキャリヤと組み合わせて上記に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体のいずれかを含むタンパク質及びポリペプチドを特徴づける。
【０１３３】
[00148]  ある実施形態では、本開示は、本明細書において記載されるように、ポリペプチド又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体の軽鎖若しくは重鎖可変領域配列又はその抗原結合断片をコードする単離核酸を特徴づける。ある実施形態では、本開示は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体の軽鎖又は重鎖可変領域配列をコードする単離核酸であって、
（ａ）重鎖は、それぞれＳＹＩＭＭ（配列番号３５）、ＳＩＹＰＳＧＧＩＴＦＹＡＤＴＶＫＧ（配列番号３６）、及びＩＫＬＧＴＶＴＴＶＤＹ（配列番号３７）に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３配列を含む、又は
（ｂ）軽鎖は、それぞれＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＮＹＶＳ（配列番号３８）、ＤＶＳＮＲＰＳ（配列番号３９）、及びＳＳＹＴＳＳＳＴＲＶ（配列番号４０）に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む、単離核酸を提供する。
【０１３４】
[00149]  特定の態様では、配列同一性は、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％である。
【０１３５】
[00150]  さらなる態様では、重鎖の核酸配列は、
【化１０】
2020514290.tif 000017
であり、
軽鎖の核酸配列は、
【化１１】
2020514290.tif 000018
である。
【０１３６】
[00151]  抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップにおいて使用することができるさらなる例示的な抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、米国特許出願公開第２０１０／０２０３０５６号に記載される。本開示の一実施形態では、抗体成分は、ＹＷ２４３．５５Ｓ７０である。本開示の別の実施形態では、抗体成分は、ＭＰＤＬ３２８９Ａである。
【０１３７】
[00152]  ある実施形態では、本開示は、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体成分を特徴づけ、
（ａ）重鎖配列は、重鎖配列：
【化１２】
2020514290.tif 000019
に対して少なくとも８５％の配列同一性を有し、
（ｂ）軽鎖配列は、軽鎖配列：
【化１３】
2020514290.tif 000020
に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する。
【０１３８】
[00153]  ある実施形態では、本開示は、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体成分を特徴づけ、
（ａ）重鎖配列は、重鎖配列：
【化１４】
2020514290.tif 000021
に対して少なくとも８５％の配列同一性を有し、
（ｂ）軽鎖配列は、軽鎖配列：
【化１５】
2020514290.tif 000022
に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する。
【０１３９】
[00154]  抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップにおいて使用することができるさらなる例示的な抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、米国特許第７，９４３，７４３号に記載される。
【０１４０】
[00155]  本開示の一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＭＤＸ−１１０５である。
【０１４１】
[00156]  ある実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＭＥＤＩ−４７３６である。
【０１４２】
定常領域
[00157]  本開示のタンパク質及びペプチドは、免疫グロブリンの定常領域又は定常領域の断片、アナログ、変異体、突然変異体、若しくは誘導体を含むことができる。ある実施形態では、定常領域は、ヒト免疫グロブリン重鎖、たとえばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、又は他のクラスに由来する。ある実施形態では、定常領域は、ＣＨ２ドメインを含む。ある実施形態では、定常領域は、ＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む又はヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含む。その代わりに、定常領域は、ヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、及び／又はＣＨ３ドメインのすべて又は一部分を含むことができる。
【０１４３】
[00158]  一実施形態では、定常領域は、Ｆｃ受容体に対する親和性を低下させる又はＦｃエフェクター機能を低下させる突然変異を含有する。たとえば、定常領域は、ＩｇＧ重鎖の定常領域内のグリコシル化部位を省く突然変異を含有することができる。いくつかの実施形態では、定常領域は、ＩｇＧ１のＬｅｕ２３４、Ｌｅｕ２３５、Ｇｌｙ２３６、Ｇｌｙ２３７、Ａｓｎ２９７、又はＰｒｏ３３１に対応するアミノ酸の位置に突然変異、欠失、又は挿入を含有する（アミノ酸は、ＥＵ命名法に従ってナンバリングされる）。特定の実施形態では、定常領域は、ＩｇＧ１のＡｓｎ２９７に対応するアミノ酸の位置に突然変異を含有する。代替の実施形態では、定常領域は、ＩｇＧ１のＬｅｕ２８１、Ｌｅｕ２８２、Ｇｌｙ２８３、Ｇｌｙ２８４、Ａｓｎ３４４、又はＰｒｏ３７８に対応するアミノ酸の位置に突然変異、欠失、又は挿入を含有する。
【０１４４】
[00159]  いくつかの実施形態では、定常領域は、ヒトＩｇＧ２又はＩｇＧ４重鎖に由来するＣＨ２ドメインを含有する。好ましくは、ＣＨ２ドメインは、ＣＨ２ドメイン内のグリコシル化部位を省く突然変異を含有する。一実施形態では、突然変異は、ＩｇＧ２又はＩｇＧ４重鎖のＣＨ２ドメイン内のＧｌｎ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ（配列番号１５）アミノ酸配列内のアスパラギンを改変する。好ましくは、突然変異は、アスパラギンをグルタミンに変化させる。その代わりに、突然変異は、Ｇｌｎ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ（配列番号１５）アミノ酸配列内のフェニルアラニン及びアスパラギンの両方を改変する。一実施形態では、Ｇｌｎ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ（配列番号１５）アミノ酸配列は、Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ（配列番号１６）アミノ酸配列と交換される。Ｇｌｎ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ（配列番号１５）アミノ酸配列内のアスパラギンは、ＩｇＧ１のＡｓｎ２９７に対応する。
【０１４５】
[00160]  別の実施形態では、定常領域は、ＣＨ２ドメイン及びヒンジ領域の少なくとも一部分を含む。ヒンジ領域は、免疫グロブリン重鎖、たとえばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、又は他のクラスに由来することができる。好ましくは、ヒンジ領域は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、又は他の適したクラスに由来する。より好ましくは、ヒンジ領域は、ヒトＩｇＧ１重鎖に由来する。一実施形態では、ＩｇＧ１ヒンジ領域のＰｒｏ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（配列番号１７）アミノ酸配列におけるシステインは、改変される。ある実施形態では、Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（配列番号１７）アミノ酸配列は、Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（配列番号１８）アミノ酸配列と交換される。ある実施形態では、定常領域は、第１の抗体アイソタイプに由来するＣＨ２ドメイン及び第２の抗体アイソタイプに由来するヒンジ領域を含む。ある実施形態では、ＣＨ２ドメインは、ヒトＩｇＧ２又はＩｇＧ４重鎖に由来し、ヒンジ領域は、改変ヒトＩｇＧ１重鎖に由来する。
【０１４６】
[00161]  Ｆｃ部分及び非Ｆｃ部分の接合部の近くのアミノ酸の改変は、Ｆｃ融合タンパク質の血清半減期を劇的に増加させることができる（国際公開第０１５８９５７号、この開示は、参照によってこれによって組み込まれる）。したがって、本開示のタンパク質又はポリペプチドの接合部領域は、免疫グロブリン重鎖及びエリスロポイエチンの天然に存在する配列に比べて、好ましくは、接合点の約１０アミノ酸内にある改変を含有することができる。これらのアミノ酸変化は、疎水性の増加を引き起こすことができる。一実施形態では、定常領域は、Ｃ−末端リシン残基が交換されたＩｇＧ配列に由来する。好ましくは、ＩｇＧ配列のＣ−末端リシンは、血清半減期をさらに増加させるために、アラニン又はロイシンなどのような非リシンアミノ酸と交換される。別の実施形態では、定常領域は、定常領域のＣ−末端の近くのＬｅｕ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ（配列番号１９）アミノ酸配列が、可能性として考えられる接合部Ｔ細胞エピトープを省くために改変されたＩｇＧ配列に由来する。たとえば、一実施形態では、Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ（配列番号１９）アミノ酸配列は、Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｔｈｒ（配列番号２０）アミノ酸配列と交換される。他の実施形態では、Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ（配列番号１９）セグメント内のアミノ酸は、グリシン又はプロリンなどのような他のアミノ酸と交換される。ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、又は他の免疫グロブリンクラス分子のＣ−末端の近くのＬｅｕ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ（配列番号１９）セグメントのアミノ酸置換を生成する詳細な方法は、米国特許出願公開第２００３０１６６８７７号において記載され、この開示は、参照によってこれによって組み込まれる。
【０１４７】
[00162]  本開示に適したヒンジ領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、及び他の免疫グロブリンクラスに由来することができる。ＩｇＧ１ヒンジ領域は、３つのシステインを有し、このうちの２つは、免疫グロブリンの２つの重鎖の間のジスルフィド結合に関係する。これらの同じシステインは、Ｆｃ部分の間で効率的でしっかりしたジスルフィド結合形成を可能にする。そのため、本開示のヒンジ領域は、ＩｇＧ１、たとえばヒトＩｇＧ１に由来する。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ１ヒンジ領域内の第１のシステインは、別のアミノ酸、好ましくはセリンに突然変異させられる。ＩｇＧ２アイソタイプヒンジ領域は、組換え系における分泌の間にオリゴマー化及び場合により不正確なジスルフィド結合を促進する傾向がある４つのジスルフィド結合を有する。適したヒンジ領域は、ＩｇＧ２ヒンジに由来することができ、最初の２つのシステインは、好ましくは、それぞれ、別のアミノ酸に突然変異させられる。ＩｇＧ４のヒンジ領域は、鎖間ジスルフィド結合を非効率的に形成することが知られている。しかしながら、本開示に適したヒンジ領域は、重鎖由来成分の間のジスルフィド結合の正確な形成を高める突然変異を好ましくは含有するＩｇＧ４ヒンジ領域に由来することができる（Angal S, et al. (1993) Mol. Immunol., 30:105-8）。
【０１４８】
[00163]  本開示に従って、定常領域は、異なる抗体アイソタイプに由来するＣＨ２及び／又はＣＨ３ドメイン並びにヒンジ領域を含有することができる、すなわちハイブリッド定常領域とすることができる。たとえば、一実施形態では、定常領域は、ＩｇＧ２又はＩｇＧ４に由来するＣＨ２及び／又はＣＨ３ドメイン並びにＩｇＧ１に由来する突然変異ヒンジ領域を含有する。その代わりに、別のＩｇＧサブクラスからの突然変異ヒンジ領域が、ハイブリッド定常領域において使用される。たとえば、２つの重鎖の間で効率的なジスルフィド結合を可能にするＩｇＧ４ヒンジの突然変異形態を使用することができる。突然変異ヒンジはまた、最初の２つのシステインが別のアミノ酸にそれぞれ突然変異させられるＩｇＧ２ヒンジに由来することができる。そのようなハイブリッド定常領域のアセンブリーは、米国特許出願公開第２００３００４４４２３号において記載されており、この開示は、参照によってこれによって組み込まれる。
【０１４９】
[00164]  本開示に従って、定常領域は、本明細書において記載される１つ又はそれ以上の突然変異を含有することができる。Ｆｃ部分における突然変異の組み合わせは、二機能性分子の血清半減期の延長及びインビボにおける効力の増加に対して相加的又は相乗的効果を有することができる。したがって、例示的な一実施形態では、定常領域は、（ｉ）Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ（配列番号１９）アミノ酸配列が、Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｔｈｒ（配列番号２０）アミノ酸配列と交換されるＩｇＧ配列に由来する領域；（ｉｉ）リシンの代わりとなるＣ−末端アラニン残基；（ｉｉｉ）異なる抗体アイソタイプに由来するＣＨ２ドメイン及びヒンジ領域、たとえばＩｇＧ２  ＣＨ２ドメイン及び改変ＩｇＧ１ヒンジ領域；並びに（ｉｖ）ＩｇＧ２由来ＣＨ２ドメイン内のグリコシル化部位を省く突然変異、たとえば、ＩｇＧ２由来ＣＨ２ドメイン内のＧｌｎ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ（配列番号１５）アミノ酸配列の代わりとなるＧｌｎ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ（配列番号１６）アミノ酸配列を含有することができる。
【０１５０】
抗体断片
[00165]  本開示のタンパク質及びポリペプチドはまた、抗体の抗原結合性断片を含むこともできる。例示的な抗体断片は、ラクダ科の動物起源のものなどのようなｓｃＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、及び単一ドメインＶＨＨ断片を含む。
【０１５１】
[00166]  単鎖抗体（ｓｃＦｖ）としても知られている単鎖抗体断片は、典型的に抗原又は受容体に結合する組換えポリペプチドであり、これらの断片は、１つ又はそれ以上の相互連結リンカーあり又はなしで抗体可変軽鎖配列（ＶＬ）の少なくとも１つの断片につながれた抗体可変重鎖アミノ酸配列（ＶＨ）の少なくとも１つの断片を含有する。そのようなリンカーは、単鎖抗体断片が由来する抗体全体の標的分子結合特異性を維持するために、一旦ＶＬドメイン及びＶＨドメインが連結するとＶＬドメイン及びＶＨドメインの適切な三次元フォールディングが生じるのを確実にするように選択された短く可動性のペプチドであってもよい。一般に、ＶＬ又はＶＨ配列のカルボキシル末端は、そのようなペプチドリンカーによって相補的なＶＬ及びＶＨ配列のアミノ酸末端に共有結合で連結される。単鎖抗体断片は、分子クローニング、抗体ファージディスプレーライブラリー、又は同様の技術によって生成することができる。これらのタンパク質は、真核細胞又は細菌を含む原核細胞のいずれかにおいて産生することができる。
【０１５２】
[00167]  単鎖抗体断片は、本明細書に記載される抗体全体の可変領域又はＣＤＲの少なくとも１つを有するアミノ酸配列を含有するが、それらの抗体の定常ドメインのうちのいくつか又はすべてを欠いている。これらの定常ドメインは、抗原結合に必要ではないが、抗体全体の構造の大部分を構成する。そのため、単鎖抗体断片は、定常ドメインの一部又はすべてを含有する抗体の使用に関連する問題のうちのいくつかを改善してもよい。たとえば、単鎖抗体断片は、生体分子及び重鎖定常領域の間の望まれない相互作用又は他の不要な生物学的活性がない傾向がある。そのうえ、単鎖抗体断片は、抗体全体よりもかなり小さく、そのため、抗体全体よりも高い毛細血管透過性を有し、単鎖抗体断片が、より効率的に、局在化し、標的抗原結合性部位に結合するのを可能にしてもよい。さらに、抗体断片は、原核細胞において比較的大規模で産生され、したがって、それらの産生を容易にすることができる。さらに、比較的小さなサイズの単鎖抗体断片は、抗体全体よりもレシピエントにおいて免疫応答を引き起こす可能性が低い。
【０１５３】
[00168]  抗体全体の特徴と同じ又は同等の結合性の特徴を有する抗体の断片もまた、存在してもよい。そのような断片は、一方若しくは両方のＦａｂ断片又はＦ（ａｂ’）２断片を含有してもよい。抗体断片は、抗体全体の６つのＣＤＲをすべて含有してもよいが、３、４、又は５つのＣＤＲなどのようにすべてよりも少数のそのような領域を含有する断片もまた、機能的である。
【０１５４】
医薬組成物
[00169]  本開示はまた、治療有効量の本明細書において記載されるタンパク質を含有する医薬組成物をも特徴づける。組成物は、様々な薬剤送達系において使用するために製剤することができる。１つ又はそれ以上の生理学的に許容され得る賦形剤又はキャリヤもまた、適切な製剤のために組成物に含むことができる。本開示において使用するための適した製剤は、Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Philadelphia, Pa., 17th ed., 1985において見つけることができる。薬剤送達のための方法の簡単な概説については、たとえばLanger (Science 249:1527-1533, 1990）を参照されたい。
【０１５５】
[00170]  一態様では、本開示は、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドを含む、５００ｍｇ〜２０００ｍｇのタンパク質を含む静脈注射用薬剤送達製剤であって、第１のポリペプチドは、（ａ）ヒトタンパク質プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）に結合する抗体の重鎖の少なくとも１つの可変領域；及び（ｂ）ヒト形質転換増殖因子β受容体ＩＩ（ＴＧＦβＲＩＩ）又は形質転換増殖因子β（ＴＧＦβ）に結合することができるその断片を含み、第２のポリペプチドは、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗体の軽鎖の少なくとも１つの可変領域を含み、第１のポリペプチドの重鎖及び第２のポリペプチドの軽鎖は、組み合わせられると、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗原結合部位を形成する、静脈注射用薬剤送達製剤を提供する。
【０１５６】
[00171]  ある実施形態では、本開示のタンパク質産物は、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む。
【０１５７】
[00172]  本開示のある実施形態では、静脈注射用薬剤送達製剤は、約５００ｍｇ〜約２４００ｍｇの用量（たとえば約５００ｍｇ〜約２３００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約２２００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約２１００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約２０００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１９００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１８００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１７００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１６００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１５００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１４００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１３００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１２００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１１００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１０００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約９００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約８００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約７００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約６００ｍｇ、約６００ｍｇ〜２４００ｍｇ、約７００ｍｇ〜２４００ｍｇ、約８００ｍｇ〜２４００ｍｇ、約９００ｍｇ〜２４００ｍｇ、約１０００ｍｇ〜２４００ｍｇ、約１１００ｍｇ〜２４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜２４００ｍｇ、約１３００ｍｇ〜２４００ｍｇ、約１４００ｍｇ〜２４００ｍｇ、約１５００ｍｇ〜２４００ｍｇ、約１６００ｍｇ〜２４００ｍｇ、約１７００ｍｇ〜２４００ｍｇ、約１８００ｍｇ〜２４００ｍｇ、約１９００ｍｇ〜２４００ｍｇ、約２０００ｍｇ〜２４００ｍｇ、約２１００ｍｇ〜２４００ｍｇ、約２２００ｍｇ〜２４００ｍｇ、又は約２３００ｍｇ〜２４００ｍｇ）の本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む））を含んでいてもよい。ある実施形態では、静脈注射用薬剤送達製剤は、約５００〜約２０００ｍｇの用量の本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む））を含んでいてもよい。ある実施形態では、静脈注射用薬剤送達製剤は、約５００ｍｇの用量の、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有する本開示のタンパク質産物を含んでいてもよい。ある実施形態では、静脈注射用薬剤送達製剤は、５００ｍｇの用量の本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む））を含んでいてもよい。ある実施形態では、静脈注射用薬剤送達製剤は、約１２００ｍｇの用量の、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有する本開示のタンパク質産物を含んでいてもよい。ある実施形態では、静脈注射用薬剤送達製剤は、１２００ｍｇの用量の本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む））を含んでいてもよい。ある実施形態では、静脈注射用薬剤送達製剤は、約１２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ（たとえば約１２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約���２００ｍｇ〜約２９００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２８００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２７００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２６００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２５００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２３００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２２００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２１００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２０００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１９００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１８００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１７００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１６００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１５００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１３００ｍｇ、約１３００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１４００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１５００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１６００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１７００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１８００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１９００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２０００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２１００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２３００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２４００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２５００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２６００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２７００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２８００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２９００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２３００ｍｇ、約２４００ｍｇ、約２５００ｍｇ、約２６００ｍｇ、約２７００ｍｇ、約２８００ｍｇ、約２９００ｍｇ、又は約３０００ｍｇ）の本開示のタンパク質産物（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）を含んでいてもよい。ある実施形態では、静脈注射用薬剤送達製剤は、約１２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ（たとえば約１２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２９００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２８００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２７００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２６００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２５００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２３００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２２００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２１００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２０００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１９００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１８００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１７００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１６００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１５００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１３００ｍｇ、約１３００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１４００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１５００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１６００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１７００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１８００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１９００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２０００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２１００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２３００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２４００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２５００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２６００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２７００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２８００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２９００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ��約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２３００ｍｇ、約２４００ｍｇ、約２５００ｍｇ、約２６００ｍｇ、約２７００ｍｇ、約２８００ｍｇ、約２９００ｍｇ、又は約３０００ｍｇ）の、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物を含んでいてもよい。
【０１５８】
[00173]  ある実施形態では、静脈注射用薬剤送達製剤は、約５２５ｍｇ、約５５０ｍｇ、約５７５ｍｇ、約６００ｍｇ、約６２５ｍｇ、約６５０ｍｇ、約６７５ｍｇ、約７００ｍｇ、約７２５ｍｇ、約７５０ｍｇ、約７７５ｍｇ、約８００ｍｇ、約８２５ｍｇ、約８５０ｍｇ、約８７５ｍｇ、約９００ｍｇ、約９２５ｍｇ、約９５０ｍｇ、約９７５ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１０２５ｍｇ、約１０５０ｍｇ、約１０７５ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１１２５ｍｇ、約１１５０ｍｇ、約１１７５ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１２２５ｍｇ、約１２５０ｍｇ、約１２７５ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１３２５ｍｇ、約１３５０ｍｇ、約１３７５ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１４２５ｍｇ、約１４５０ｍｇ、約１４７５ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１５２５ｍｇ、約１５５０ｍｇ、約１５７５ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１６２５ｍｇ、約１６５０ｍｇ、約１６７５ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１７２５ｍｇ、約１７５０ｍｇ、約１７７５ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１８２５ｍｇ、約１８５０ｍｇ、約１８７５ｍｇ、約１９００ｍｇ、約１９２５ｍｇ、約１９５０ｍｇ、約１９７５ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２３００ｍｇ、又は約２４００ｍｇの本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）を含んでいてもよい。
【０１５９】
[00174]  本開示の静脈注射用薬剤送達製剤は、バッグ、ペン、又はシリンジ中に含有されてもよい。ある実施形態では、バッグは、チューブ及び／又は針を含む導管に接続されてもよい。ある実施形態では、製剤は、凍結乾燥製剤又は液体製剤であってもよい。ある実施形態では、製剤は、冷凍乾燥されてもよく（凍結乾燥されてもよく）、約１２〜６０本のバイアル中に含有されてもよい。ある実施形態では、製剤は、冷凍乾燥されてもよく、約４５ｍｇの冷凍乾燥製剤は、１本のバイアル中に含有されてもよい。ある実施形態では、約４０ｍｇ〜約１００ｍｇの冷凍乾燥製剤は、１本のバイアル中に含有されてもよい。ある実施形態では、１２、２７、又は４５本のバイアルからの冷凍乾燥された製剤は、静脈注射用薬剤製剤における治療用量のタンパク質を得るために組み合わせられる。ある実施形態では、製剤は、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物の液体製剤であってもよく、約２５０ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル（たとえば約２５０ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約１９００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約１８００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約１７００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約１６００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約１５００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約１４００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約１３００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約１２００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約１１００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約１０００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約９００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約８００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約７００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約６００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約５００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約４００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約３００ｍｇ／バイアル、約３００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、約４００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、約５００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、約６００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、約７００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、約８００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、約９００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、約１０００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、約１１００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、約１２００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、約１３００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、約１４００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、約１５００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、約１６００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、約１７００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、約１８００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、又は約１９００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル）として保存されてもよい。ある実施形態では、製剤は、液体製剤であってもよく、約６００ｍｇ／バイアルとして保存されてもよい。ある実施形態では、製剤は、液体製剤であってもよく、約１２００ｍｇ／バイアルとして保存されてもよい。ある実施形態では、製剤は、液体製剤であってもよく、約１８００ｍｇ／バイアルとして保存されてもよい。ある実施形態では、製剤は、液体製剤であってもよく、約２５０ｍｇ／バイアルとして保存されてもよい。
【０１６０】
[00175]  本開示は、製剤を形成する緩衝液中に治療有効量の本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）を含む液体水性医薬製剤を提供する。
【０１６１】
[00176]  これらの組成物は、従来の滅菌技術によって滅菌されてもよい又は滅菌ろ過されてもよい。結果として生じる水溶液は、そのまま使用するためにパッケージされてもよく又は凍結乾燥されてもよく、凍結乾燥された調製物は、投与前に滅菌水性キャリヤと組み合わせられる。調製物のｐＨは、典型的に、３及び１１の間に、より好ましくは５及び９の間に又は６及び８の間に、最も好ましくは、７〜７．５などのように７及び８の間にあるであろう。固体形態をした結果として生じる組成物は、複数の単回投与単位でパッケージされてもよく、それぞれが、固定量の前述の作用物質を含有する。固体形態をした組成物はまた、数量を柔軟にするためにコンテナーにパッケージすることもできる。
【０１６２】
[00177]  ある実施形態では、本開示は、本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む））を、マンニトール、クエン酸一水和物、クエン酸ナトリウム、リン酸二ナトリウム二水和物、リン酸二水素ナトリウム二水和物、塩化ナトリウム、ポリソルベート８０、水、及び水酸化ナトリウムと組み合わせて含む、長期間にわたる有効期間を有する製剤を提供する。
【０１６３】
[00178]  ある実施形態では、ｐＨ緩衝液中に本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む））を含む水性製剤が、調製される。本発明のバッファーは、約４〜約８、たとえば約４〜約８、約４．５〜約８、約５〜約８、約５．５〜約８、約６〜約８、約６．５〜約８、約７〜約８、約７．５〜約８、約４〜約７．５、約４．５〜約７．５、約５〜約約７．５、約５．５〜約７．５、約６〜約７．５、約６．５〜約７．５、約４〜約７、約４．５〜約７、約５〜約７、約５．５〜約７、約６〜約７、約４〜約６．５、約４．５〜約６．５、約５〜約６．５、約５．５〜約６．５、約４〜約６．０、約４．５〜約６．０、約５〜約６、若しくは約４．８〜約５．５の範囲にわたるｐＨを有していてもよい又は約５．０〜約５．２のｐＨを有していてもよい。上記に詳述されるｐＨの中間にある範囲もまた、本開示の一部であることが意図される。たとえば、上限値及び／又は下限値として上記に詳述される値のいずれかの組み合わせを使用する値に範囲が含まれることが意図される。この範囲内のｐＨをコントロールするだろうバッファーの例は、酢酸（たとえば酢酸ナトリウム）、コハク酸（コハク酸ナトリウムなど）、グルコン酸、ヒスチジン、クエン酸、及び他の有機酸バッファーを含む。
【０１６４】
[00179]  ある実施形態では、製剤は、約４〜約８の範囲にｐＨを維持するためにクエン酸及びリン酸を含有するバッファー系を含む。ある実施形態では、ｐＨ範囲は、約４．５〜約６．０若しくは約ｐＨ４．８〜約５．５であってもよい又は約５．０〜約５．２のｐＨ範囲にあってもよい。ある実施形態では、バッファー系は、クエン酸一水和物、クエン酸ナトリウム、リン酸二ナトリウム二水和物、及び／又はリン酸二水素ナトリウム二水和物を含む。ある実施形態では、バッファー系は、約１．３ｍｇ／ｍｌのクエン酸（たとえば１．３０５ｍｇ／ｍｌ）、約０．３ｍｇ／ｍｌのクエン酸ナトリウム（たとえば０．３０５ｍｇ／ｍｌ）、約１．５ｍｇ／ｍｌのリン酸二ナトリウム二水和物（たとえば１．５３ｍｇ／ｍｌ）、約０．９ｍｇ／ｍｌのリン酸二水素ナトリウム二水和物（たとえば０．８６）、及び約６．２ｍｇ／ｍｌの塩化ナトリウム（たとえば６．１６５ｍｇ／ｍｌ）を含む。ある実施形態では、バッファー系は、約１〜１．５ｍｇ／ｍｌのクエン酸、約０．２５〜約０．５ｍｇ／ｍｌのクエン酸ナトリウム、約１．２５〜約１．７５ｍｇ／ｍｌのリン酸二ナトリウム二水和物、約０．７〜約１．１ｍｇ／ｍｌのリン酸二水素ナトリウム二水和物、及び６．０〜６．４ｍｇ／ｍｌの塩化ナトリウムを含む。ある実施形態では、製剤のｐＨは、水酸化ナトリウムにより調整される。
【０１６５】
[00180]  等張化剤（tonicifier）として作用し、抗体を安定させてもよいポリオールもまた、製剤に含まれてもよい。ポリオールは、製剤の所望の等張性を基準にして変動してもよい量で製剤に追加される。ある実施形態では、水性製剤は、等張であってもよい。追加されるポリオールの量もまた、ポリオールの分子量を基準にして変化させてもよい。たとえば、二糖（トレハロースなど）と比較して、より少ない量の単糖（たとえばマンニトール）が、追加されてもよい。ある実施形態では、等張化剤として製剤中に使用されてもよいポリオールは、マンニトールである。ある実施形態では、マンニトール濃度は、約５〜約２０ｍｇ／ｍｌであってもよい。ある実施形態では、マンニトールの濃度は、約７．５〜約１５ｍｇ／ｍｌであってもよい。ある実施形態では、マンニトールの濃度は、約１０〜約１４ｍｇ／ｍｌであってもよい。ある実施形態では、マンニトールの濃度は、約１２ｍｇ／ｍｌであってもよい。ある実施形態では、ポリオールであるソルビトールが、製剤中に含まれてもよい。
【０１６６】
[00181]  洗浄剤又は界面活性剤もまた、製剤に追加されてもよい。例示的な洗浄剤は、ポリソルベート（たとえばポリソルベート２０、８０など）又はポロキサマー（たとえばポロキサマー１８８）などのような非イオン性洗浄剤を含む。追加される洗浄剤の量は、製剤された抗体の凝集を低下させる及び／又は製剤における粒子の形成を最小限にする及び／又は吸着を低下させるような量である。ある実施形態では、製剤は、ポリソルベートである界面活性剤を含んでいてもよい。ある実施形態では、製剤は、洗浄剤であるポリソルベート８０又はＴｗｅｅｎ８０を含有してもよい。Ｔｗｅｅｎ８０は、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレアートを記載するために使用される用語である（Fiedler, Lexikon der Hilfsstoffe, Editio Cantor Verlag Aulendorf, 4th edi., 1996を参照）。ある実施形態では、製剤は、約０．１ｍｇ／ｍＬ及び約１０ｍｇ／ｍＬの間の又は約０．５ｍｇ／ｍＬ及び約５ｍｇ／ｍＬの間のポリソルベート８０を含有してもよい。ある実施形態では、約０．１％のポリソルベート８０は、製剤中に追加されてもよい。
【０１６７】
凍結乾燥製剤
[00182]  本開示の凍結乾燥製剤は、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子及び凍結乾燥保護剤を含む。凍結乾燥保護剤は、糖、たとえば二糖であってもよい。ある実施形態では、凍結乾燥保護剤は、スクロース又はマルトースであってもよい。凍結乾燥製剤はまた、緩衝剤、界面活性剤、増量剤、及び／又は保存剤の１つ又はそれ以上を含んでいてもよい。
【０１６８】
[00183]  凍結乾燥薬剤製品の安定化に有用なスクロース又はマルトースの量は、少なくとも１：２のタンパク質対スクロース又はマルトースの重量比であってもよい。ある実施形態では、タンパク質対スクロース又はマルトースの重量比は、１：２〜１：５であってもよい。
【０１６９】
[00184]  ある実施形態では、製剤のｐＨは、冷凍乾燥前に、薬学的に許容され得る酸及び／又は塩基の追加によって設定されてもよい。ある実施形態では、薬学的に許容され得る酸は、塩酸であってもよい。ある実施形態では、薬学的に許容され得る塩基は、水酸化ナトリウムであってもよい。
【０１７０】
[00185]  凍結乾燥の前に、本開示のタンパク質を含有する溶液のｐＨは、約６〜約８の間に調整されてもよい。ある実施形態では、凍結乾燥薬剤製品についてのｐＨ範囲は、約７〜約８であってもよい。
【０１７１】
[00186]  ある実施形態では、塩又はバッファー構成成分は、約１０ｍＭ〜約２００ｍＭの量で追加されてもよい。塩及び／又はバッファーは、薬学的に許容され得るものであり、「塩基形成」金属又はアミンと様々な既知の酸（無機及び有機）に由来する。ある実施形態では、バッファーは、リン酸バッファーであってもよい。ある実施形態では、バッファーは、グリシン酸、炭酸、クエン酸バッファーであってもよく、この場合、ナトリウム、カリウム、又はアンモニウムイオンは、対イオンとして果たすことができる。
【０１７２】
[00187]  ある実施形態では、「増量剤」が、追加されてもよい。「増量剤」は、凍結乾燥混合物に対して嵩を増し、凍結乾燥ケークの物理的構造に寄与する（たとえば、開気孔構造を維持する本質的に均一な凍結乾燥ケークの産生を容易にする）化合物である。例示の増量剤は、マンニトール、グリシン、ポリエチレングリコール、及びソルビトールを含む。本発明の凍結乾燥製剤は、そのような増量剤を含有してもよい。
【０１７３】
[00188]  保存剤は、細菌作用を低下させるために本明細書における製剤に任意選択で追加されてもよい。保存剤の追加は、たとえば、多重使用（複数回投与）製剤の産生を容易にしてもよい。
【０１７４】
[00189]  ある実施形態では、凍結乾燥薬剤製品は、水性キャリヤと共に構成されてもよい。本明細書において関心のある水性キャリヤは、薬学的に許容され得るものであり（たとえば、ヒトへの投与に安全であり、無毒性である）、冷凍乾燥後の液体製剤の調製に有用であるキャリヤである。例示の希釈剤は、注射用滅菌水（ＳＷＦＩ）、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝液（たとえばリン酸緩衝食塩水）、滅菌生理食塩水、リンゲル液、又はデキストロース溶液を含む。
【０１７５】
[00190]  ある実施形態では、本開示の凍結乾燥薬剤製品は、注射用滅菌水、ＵＳＰ（ＳＷＦＩ）又は０．９％塩化ナトリウム注射液、ＵＳＰにより還元される。還元の間に、凍結乾燥粉剤は、溶液になる。
【０１７６】
[00191]  ある実施形態では、本開示の凍結乾燥タンパク質産物は、約４．５ｍＬ注射用水にされ、０．９％生理食塩水（塩化ナトリウム溶液）により希釈される。
【０１７７】
液体製剤
[00192]  実施形態では、本開示のタンパク質産物は、液体製剤として製剤される。液体製剤は、ゴム栓により密封され、アルミニウムクリンプシールにより密閉されたＵＳＰ／Ｐｈ  ＥｕｒのいずれかのＩ型５０Ｒバイアル中１０ｍｇ／ｍＬ濃度で提供されてもよい。栓は、ＵＳＰ及びＰｈ  Ｅｕｒに従うエラストマーから作製されてもよい。ある実施形態では、バイアルは、６０ｍＬの抽出可能な容積を可能にするよう、約６１．２ｍＬのタンパク質産物溶液により充填されてもよい。ある実施形態では、液体製剤は、０．９％生理食塩水により希釈されてもよい。ある実施形態では、バイアルは、約２０ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ（たとえば約２０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ、約３５ｍｇ／ｍＬ、約４０ｍｇ／ｍＬ、約４５ｍｇ／ｍＬ、又は約５０ｍｇ／ｍＬ）の約６１．２ｍＬのタンパク質産物（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む））溶液を、約１２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ（たとえば約１２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２９００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２８００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２７００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２６００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２５００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２３００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２２００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２１００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２０００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１９００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１８００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１７００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１６００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１５００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１３００ｍｇ、約１３００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１４００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１５００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１６００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１７００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１８００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１９００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２０００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２１００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２３００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２４００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２５００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２６００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２７００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２８００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２９００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２３００ｍｇ、約２４００ｍｇ、約２５００ｍｇ、約２６００ｍｇ、約２７００ｍｇ、約２８００ｍｇ、約２９００ｍｇ、又は約３０００ｍｇ）のタンパク質産物（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む））を対象に送達するために６０ｍＬの抽出可能な容積を可能にするよう、含有してもよい。
【０１７８】
[00193]  ある実施形態では、バイアルは、約２０ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ（たとえば約２０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ、約３５ｍｇ／ｍＬ、約４０ｍｇ／ｍＬ、約４５ｍｇ／ｍＬ、又は  約５０ｍｇ／ｍＬ）の約６１．２ｍＬのタンパク質産物溶液（配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物）を、約１２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ（たとえば約１２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２９００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２８００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２７００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２６００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２５００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２３００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２２００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２１００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２０００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１９００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１８００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１７００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１６００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１５００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１３００ｍｇ、約１３００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１４００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１５００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１６００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１７００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１８００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１９００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２０００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２１００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２３００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２４００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２５００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２６００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２７００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２８００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２９００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２３００ｍｇ、約２４００ｍｇ、約２５００ｍｇ、約２６００ｍｇ、約２７００ｍｇ、約２８００ｍｇ、約２９００ｍｇ、又は約３０００ｍｇ）のタンパク質産物を対象に送達するために６０ｍＬの抽出可能な容積を可能にするよう、含有してもよい。
【０１７９】
[00194]  ある実施形態では、本開示の液体製剤は、安定レベルの糖と組み合わせて１０ｍｇ／ｍＬ濃度溶液として調製されてもよい。ある実施形態では、液体製剤は、水性キャリヤ中で調製されてもよい。ある実施形態では、安定剤は、静脈内投与にとって望ましくない又は適さない粘性をもたらすかもしれない量以下の量で追加されてもよい。ある実施形態では、糖は、二糖、たとえばスクロースであってもよい。ある実施形態では、液体製剤はまた、緩衝剤、界面活性剤、及び保存剤の１つ又はそれ以上を含んでいてもよい。
【０１８０】
[00195]  ある実施形態では、液体製剤のｐＨは、薬学的に許容され得る酸及び／又は塩基の追加によって設定されてもよい。ある実施形態では、薬学的に許容され得る酸は、塩酸であってもよい。ある実施形態では、塩基は、水酸化ナトリウムであってもよい。
【０１８１】
[00196]  凝集に加えて、脱アミドは、発酵、回収／細胞清澄化、精製、原薬／薬剤製品保存の間に及びサンプル分析の間に生じ得る、ペプチド及びタンパク質の一般的な産物変異体である。脱アミドは、加水分解を受けることができるスクシンイミド中間体を形成する、タンパク質からのＮＨ３の損失である。スクシンイミド中間体は、親ペプチドの１７ｕの質量減少をもたらす。続く加水分解は、１８ｕの質量増加をもたらす。スクシンイミド中間体の単離は、水性条件下での不安定性により困難である。そのため、脱アミドは、１ｕの質量増加として典型的に検出可能である。アスパラギンの脱アミドは、アスパラギン酸又はイソアスパラギン酸をもたらす。脱アミド率に影響を与えるパラメーターは、ｐＨ、温度、溶媒誘電率、イオン強度、一次配列、局所的なポリペプチドコンホメーション、及び三次構造を含む。ペプチド鎖においてＡｓｎに隣接するアミノ酸残基は、脱アミド率に影響を与える。タンパク質配列におけるＡｓｎの後のＧｌｙ及びＳｅｒは、脱アミドに対して、より高い感受性をもたらす。
【０１８２】
[00197]  ある実施形態では、本開示の液体製剤は、タンパク質産物の脱アミノを予防するためのｐＨ及び湿度の条件下で保たれてもよい。
【０１８３】
[00198]  本明細書において関心のある水性キャリヤは、薬学的に許容され得るものであり（ヒトへの投与に安全であり、無毒性である）、液体製剤の調製に有用であるキャリヤである。例示のキャリヤは、注射用滅菌水（ＳＷＦＩ）、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝液（たとえばリン酸緩衝食塩水）、滅菌生理食塩水、リンゲル液、又はデキストロース溶液を含む。
【０１８４】
[00199]  保存剤は、細菌作用を低下させるために本明細書における製剤に任意選択で追加されてもよい。保存剤の追加は、たとえば、多重使用（複数回投与）製剤の産生を容易にしてもよい。
【０１８５】
[00200]  静脈内（ＩＶ）製剤は、患者が移植の後に入院しており、ＩＶルートを介してすべての薬剤を受けている場合などのような特定の場合に、好ましい投与ルートであってもよい。ある実施形態では、液体製剤は、投与の前に０．９％塩化ナトリウム溶液により希釈される。ある実施形態では、注射用の希釈薬剤製品は、等張であり、静脈内注入による投与に適している。
【０１８６】
[00201]  ある実施形態では、塩又はバッファー構成成分は、１０ｍＭ〜２００ｍＭの量で追加されてもよい。塩及び／又はバッファーは、薬学的に許容され得るものであり、「塩基形成」金属又はアミンと様々な既知の酸（無機及び有機）に由来する。ある実施形態では、バッファーは、リン酸バッファーであってもよい。ある実施形態では、バッファーは、グリシン酸、炭酸、クエン酸バッファーであってもよく、この場合、ナトリウム、カリウム、又はアンモニウムイオンは、対イオンとして果たすことができる。
【０１８７】
[00202]  保存剤は、細菌作用を低下させるために本明細書における製剤に任意選択で追加されてもよい。保存剤の追加は、たとえば、多重使用（複数回投与）製剤の産生を容易にしてもよい。
【０１８８】
[00203]  本明細書において関心のある水性キャリヤは、薬学的に許容され得るものであり（ヒトへの投与に安全であり、無毒性である）、液体製剤の調製に有用であるキャリヤである。例示のキャリヤは、注射用滅菌水（ＳＷＦＩ）、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝液（たとえばリン酸緩衝食塩水）、滅菌生理食塩水、リンゲル液、又はデキストロース溶液を含む。
【０１８９】
[00204]  保存剤は、細菌作用を低下させるために本明細書における製剤に任意選択で追加されてもよい。保存剤の追加は、たとえば、多重使用（複数回投与）製剤の産生を容易にしてもよい。
【０１９０】
癌を治療する又は腫瘍増殖を阻害するための方法
[00205]  一態様では、本開示は、その必要がある対象において癌を治療する又は腫瘍増殖を阻害するための方法であって、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドを含む、少なくとも５００ｍｇのタンパク質の用量を対象に投与することを含む、方法を提供する。第１のポリペプチドは、（ａ）ヒトタンパク質プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）に結合する抗体の重鎖の少なくとも１つの可変領域；及び（ｂ）ヒト形質転換増殖因子β受容体ＩＩ（ＴＧＦβＲＩＩ）又は形質転換増殖因子β（ＴＧＦβ）に結合することができるその断片を含む。第２のポリペプチドは、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗体の軽鎖の少なくとも１つの可変領域を含み、第１のポリペプチドの重鎖及び第２のポリペプチドの軽鎖は、組み合わせられると、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗原結合部位を形成する。
【０１９１】
[00206]  ある実施形態では、本開示の、癌を治療する又は腫瘍増殖を阻害するための方法は、２つのペプチドを含むタンパク質を対象に投与することを含み、第１のポリペプチドは、配列番号３のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列を含む。ある実施形態では、タンパク質は、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子である。
【０１９２】
[00207]  ある実施形態では、本開示の、癌を治療する又は腫瘍増殖を阻害するための方法は、タンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む））を、約１２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ（たとえば約１２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２９００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２８００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２７００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２６００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２５００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２３００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２２００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２１００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２０００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１９００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１８００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１７００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１６００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１５００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１３００ｍｇ、約１３００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１４００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１５００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１６００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１７００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１８００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１９００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２０００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２１００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２３００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２４００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２５００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２６００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２７００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２８００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２９００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１２００、約１３００、約１４００、約１５００、約１６００、約１７００、約１８００、約１９００、約２０００、約２１００、約２２００、約２３００、約２４００、約２５００ｍｇ、約２６００ｍｇ、約２７００ｍｇ、約２８００ｍｇ、約２９００ｍｇ、又は約３０００ｍｇ）の用量で対象に投与することを含む。ある実施形態では、約１２００ｍｇの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子は、２週間ごとに１回、対象に投与される。ある実施形態では、約１８００ｍｇの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子は、３週間ごとに１回、対象に投与される。ある実施形態では、約１２００ｍｇの、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物が、２週間ごとに１回、対象に投与される。ある実施形態では、約１８００ｍｇの、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物が、３週間ごとに１回、対象に投与される。
【０１９３】
[00208]  ある実施形態では、用量は、約５００ｍｇ、約５２５ｍｇ、約５５０ｍｇ、約５７５ｍｇ、約６００ｍｇ、約６２５ｍｇ、約６５０ｍｇ、約６７５ｍｇ、約７００ｍｇ、約７２５ｍｇ、約７５０ｍｇ、約７７５ｍｇ、約８００ｍｇ、約８２５ｍｇ、約８５０ｍｇ、約８７５ｍｇ、約９００ｍｇ、約９２５ｍｇ、約９５０ｍｇ、約９７５ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１０２５ｍｇ、約１０５０ｍｇ、約１０７５ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１１２５ｍｇ、約１１５０ｍｇ、約１１７５ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１２２５ｍｇ、約１２５０ｍｇ、約１２７５ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１３２５ｍｇ、約１３５０ｍｇ、約１３７５ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１４２５ｍｇ、約１４５０ｍｇ、約１４７５ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１５２５ｍｇ、約１５５０ｍｇ、約１５７５ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１６２５ｍｇ、約１６５０ｍｇ、約１６７５ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１７２５ｍｇ、約１７５０ｍｇ、約１７７５ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１８２５ｍｇ、約１８５０ｍｇ、１８７５ｍｇ、約１９００ｍｇ、約１９２５ｍｇ、約１９５０ｍｇ、約１９７５ｍｇ、約２０００ｍｇ、２１００ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２３００ｍｇ、又は約２４００ｍｇであってもよい。
【０１９４】
[00209]  ある実施形態では、用量は、２週間ごとに１回、投与されてもよい。ある実施形態では、タンパク質は、たとえばプレフィルドバッグ、プレフィルドペン、又はプレフィルドシリンジにより、静脈内投与によって投与されてもよい。ある実施形態では、タンパク質は、２５０ｍｌの生理的食塩水バッグから静脈内に投与され、静脈内注入は、約１時間（たとえば５０〜８０分間）であってもよい。ある実施形態では、バッグは、チューブ及び／又は針を含む導管に接続される。
【０１９５】
[00210]  ある実施形態では、方法は、たとえば以下の癌を治療する又は腫瘍増殖を阻害する：非小細胞肺癌、黒色腫、膵癌、結腸直腸癌卵巣癌、乳癌、前立腺癌、膠芽腫、胃癌胆道癌、食道癌（扁平上皮細胞癌又は腺癌）、頭部又は頸部の腺腫、頭部又は頸部の扁平上皮癌、前立腺癌、腎臓癌、子宮頸部癌、骨髄腫、リンパ腫、白血病、甲状腺癌、子宮内膜癌、子宮癌、膀胱癌、神経内分泌癌、肝臓癌、鼻咽頭癌、精巣癌、小細胞肺癌、基底細胞皮膚癌、扁平上皮細胞皮膚癌、隆起性皮膚線維肉腫、メルケル細胞癌、神経膠腫、肉腫、中皮腫、及び骨髄異形成症候群。ある実施形態では、方法は、治療歴を有する患者の癌、たとえば治療歴を有する非小細胞肺癌、治療歴を有する黒色腫、治療歴を有する膵癌、治療歴を有する結腸直腸癌、治療歴を有する卵巣癌、治療歴を有する乳癌、治療歴を有する膠芽腫、治療歴を有する再発性の又は難治性の切除不能なステージＩＶの胃癌、治療歴を有する胆道癌、治療歴を有する食道癌（扁平上皮細胞癌又は腺癌）、治療歴を有する頭部又は頸部の腺腫、治療歴を有する頭部又は頸部の扁平上皮癌、治療歴を有する前立腺癌、治療歴を有する腎臓癌、治療歴を有する子宮頸部癌、治療歴を有する骨髄腫、治療歴を有するリンパ腫、治療歴を有する白血病、治療歴を有する甲状腺癌、治療歴を有する子宮内膜癌、治療歴を有する子宮癌、治療歴を有する膀胱癌、治療歴を有する神経内分泌癌、治療歴を有する肝臓癌、治療歴を有する鼻咽頭癌、治療歴を有する精巣癌、治療歴を有する小細胞肺癌、治療歴を有する基底細胞皮膚癌、治療歴を有する扁平上皮細胞皮膚癌、治療歴を有する隆起性皮膚線維肉腫、治療歴を有するメルケル細胞癌、治療歴を有する神経膠腫、治療歴を有する肉腫、治療歴を有する中皮腫、及び治療歴を有する骨髄異形成症候群を治療する。
【０１９６】
[00211]  ある実施形態では、腫瘍は、進行固形腫瘍である。ある実施形態では、腫瘍は、前の治療に対して難治性である。ある実施形態では、進行ＮＳＣＬＣを有し、抗ＰＤ−１又は抗ＰＤ−Ｌ１剤（「ＰＤｘ療法」）により以前に治療され、その結果として、疾患進行と立証された患者は、約１２００ｍｇの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。前のＰＤｘ療法に対する患者の最良総合効果（best overall response）（ＢＯＲ）が、立証された。ある実施形態では、前のＰＤｘ療法後に進行性の疾患（ＰＤ）を有し、したがって、第一選択治療抵抗性と見なされる患者は（すなわち、これらの患者の間で、疾患進行が、ＰＤｘ療法開始後に観察され、治療からいかなる利益も観察されなかった）、約１２００ｍｇ〜約２４００ｍｇ（たとえば約１２００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２３００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２２００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２１００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２０００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１９００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１８００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１７００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１６００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１５００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１３００ｍｇ、約１３００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１４００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１５００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１６００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１７００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１８００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１９００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約２０００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約２１００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約２２００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、又は約２３００ｍｇ〜約２４００ｍｇ）の抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。ある実施形態では、獲得抵抗性として特徴付けられる、すなわち、患者の疾患は、最初のうちは前のＰＤｘ療法に対して応答したが、患者は、最終的に、疾患進行ステージに戻った、という患者は、約１２００ｍｇ〜約２４００ｍｇの、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。前のＰＤｘ療法に対するこれらの患者のＢＯＲは、安定性の疾患（ＳＤ）、部分寛解（ＰＲ）、又は完全寛解（ＣＲ）であり、患者は、その後、続く疾患進行を経験した。これらのＮＳＣＬＣ  ＰＤｘに失敗したサブコホートにおいて抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを使用する論理的根拠は、前のＰＤｘ単独療法に対して応答しなかった患者において臨床応答を刺激する腫瘍免疫活性化を阻害することが知られている分子であるＴＧＦ−βをさらに中和することにある。
【０１９７】
[00212]  ある実施形態では、進行ＮＳＣＬＣを有し、シングルラインのプラチナベースの化学療法中に又はその後に難治性、再発、又は進行性疾患を有した患者は、約１２００ｍｇ〜約２４００ｍｇ（たとえば約１２００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２３００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２２００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２１００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２０００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１９００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１８００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１７００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１６００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１５００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１３００ｍｇ、約１３００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１４００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１５００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１６００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１７００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１８００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１９００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約２０００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約２１００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約２２００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、又は約２３００ｍｇ〜約２４００ｍｇ）の、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。ある実施形態では、進行ＮＳＣＬＣを有し、シングルラインのプラチナベースの化学療法中に又はその後に難治性、再発、又は進行性疾患を有した患者は、２週間ごとに１回、約１２００ｍｇの用量で抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。ある実施形態では、進行ＮＳＣＬＣを有し、シングルラインのプラチナベースの化学療法中に又はその後に難治性、再発、又は進行性疾患を有した患者は、約５００ｍｇ〜約１２００ｍｇ（たとえば約５００ｍｇ〜約１０００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１０００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約９００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約８００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約７００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約６００ｍｇ）の用量で、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。ある実施形態では、進行ＮＳＣＬＣを有し、シングルラインのプラチナベースの化学療法中に又はその後に難治性、再発、又は進行性疾患を有した患者は、２週間ごとに１回、約５００ｍｇの用量で抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。
【０１９８】
[00213]  ある実施形態では、複数の治療歴を有する再発性の又は難治性の切除不能なステージＩＶの胃癌を有する患者は、約１２００ｍｇ〜約２４００ｍｇ（たとえば約１２００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２３００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２２００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２１００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２０００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１９００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１８００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１７００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１６００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１５００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１３００ｍｇ、約１３００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１４００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１５００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１６００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１７００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１８００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１９００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約２０００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約２１００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約２２００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、又は約２３００ｍｇ〜約２４００ｍｇ）の、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。ある実施形態では、複数の治療歴を有する再発性の又は難治性の切除不能なステージＩＶの胃癌を有する患者は、２〜３０週間、２週間ごとに１回、約１２００ｍｇの用量で抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。ある実施形態では、治療される患者は、少なくとも３回、前の抗癌療法を受けた。ある実施形態では、治療される患者は、少なくとも４回、前の抗癌療法を受けた。
【０１９９】
[00214]  ある実施形態では、治療歴を有する結腸直腸癌（ＣＲＣ）を有する患者は、約１２００ｍｇ〜約２４００ｍｇ（たとえば約１２００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２３００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２２００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２１００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２０００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１９００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１８００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１７００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１６００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１５００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１３００ｍｇ、約１３００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１４００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１５００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１６００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１７００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１８００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１９００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約２０００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約２１００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約２２００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、又は約２３００ｍｇ〜約２４００ｍｇ）の、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。ある実施形態では、治療歴を有する結腸直腸癌（ＣＲＣ）を有する患者は、２〜３８週間、２週間ごとに１回、約１２００ｍｇの用量で抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップにより治療される。ある実施形態では、治療される患者は、少なくとも３回、前の抗癌療法を受けた。
【０２００】
送達デバイス
[00215]  一態様では、本開示は、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドを含む、約５００ｍｇ〜約３０００ｍｇのタンパク質を含む製剤を含む薬剤送達デバイスであって、第１のポリペプチドは、（ａ）ヒトタンパク質プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）に結合する抗体の重鎖の少なくとも１つの可変領域；及び（ｂ）ヒト形質転換増殖因子β受容体ＩＩ（ＴＧＦβＲＩＩ）又は形質転換増殖因子β（ＴＧＦβ）に結合することができるその断片を含み、第２のポリペプチドは、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗体の軽鎖の少なくとも１つの可変領域を含み、第１のポリペプチドの重鎖及び第２のポリペプチドの軽鎖は、組み合わせられると、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗原結合部位を形成する、薬剤送達デバイスを提供する。
【０２０１】
[00216]  ある実施形態では、デバイスは、バッグ、ペン、又はシリンジであってもよい。ある実施形態では、バッグは、チューブ及び／又は針を含む導管に接続されてもよい。
【０２０２】
[00217]  本開示のある実施形態では、薬剤送達デバイスは、約５００ｍｇ〜約３０００ｍｇ（たとえば約５００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約２９００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約２８００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約２７００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約２６００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約２５００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約２３００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約２２００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約２１００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約２０００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１９００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１８００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１７００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１６００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１５００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１４００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１３００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１２００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１１００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１０００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約９００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約８００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約７００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約６００ｍｇ、約６００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約７００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約８００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約９００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１０００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１１００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１３００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１４００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１５００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１６００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１７００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１８００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１９００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２０００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２１００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２３００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２４００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２５００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２６００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２７００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２８００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、又は約２９００ｍｇ〜約３０００ｍｇ）の本開示のタンパク質（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）を含んでいてもよい。ある実施形態では、薬剤送達デバイスは、約５００〜約１２００ｍｇの用量の本開示のタンパク質（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）を含んでいてもよい。ある実施形態では、薬剤送達デバイスは、約５００ｍｇの用量の本開示のタンパク質（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）を含んでいてもよい。ある実施形態では、薬剤送達デバイスは、約１２００ｍｇの用量の本開示のタンパク質（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）を含む。ある実施形態では、薬剤送達デバイスは、約１２００ｍｇ又は約１８００ｍｇの用量の、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物を含���。
【０２０３】
[00218]  ある実施形態では、薬剤送達デバイスは、約１２００ｍｇの用量の本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む））を含む。ある実施形態では、薬剤送達デバイスは、約５００ｍｇ、約５２５ｍｇ、約５５０ｍｇ、約５７５ｍｇ、約６００ｍｇ、約６２５ｍｇ、約６５０ｍｇ、約６７５ｍｇ、約７００ｍｇ、約７２５ｍｇ、約７５０ｍｇ、約７７５ｍｇ、約８００ｍｇ、約８２５ｍｇ、約８５０ｍｇ、約８７５ｍｇ、約９００ｍｇ、約９２５ｍｇ、約９５０ｍｇ、約９７５ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１０２５ｍｇ、約１０５０ｍｇ、約１０７５ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１１２５ｍｇ、約１１５０ｍｇ、約１１７５ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１２２５ｍｇ、約１２５０ｍｇ、約１２７５ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１３２５ｍｇ、約１３５０ｍｇ、約１３７５ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１４２５ｍｇ、約１４５０ｍｇ、約１４７５ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１５２５ｍｇ、約１５５０ｍｇ、約１５７５ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１６２５ｍｇ、約１６５０ｍｇ、約１６７５ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１７２５ｍｇ、約１７５０ｍｇ、約１７７５ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１８２５ｍｇ、約１８５０ｍｇ、約１８７５ｍｇ、約１９００ｍｇ、約１９２５ｍｇ、約１９５０ｍｇ、約１９７５ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２３００ｍｇ、又は約２４００ｍｇの本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）を含んでいてもよい。
【０２０４】
キット
[00219]  一態様では、本開示は、約５００ｍｇ〜約２４００ｍｇ（たとえば約５００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約２３００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約２２００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約２１００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約２０００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１９００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１８００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１７００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１６００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１５００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１４００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１３００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１２００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１１００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１０００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約９００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約８００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約７００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約６００ｍｇ、約６００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約７００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約８００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約９００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１０００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１１００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１３００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１４００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１５００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１６００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１７００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１８００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１９００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約２０００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約２１００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約２２００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、又は約２３００ｍｇ〜約２４００ｍｇ）の、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドを含むタンパク質の製剤を全体として含む、１つ又はそれ以上の容器を含むキットであって、第１のポリペプチドは、（ａ）ヒトタンパク質プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）に結合する抗体の重鎖の少なくとも１つの可変領域；及び（ｂ）ヒト形質転換増殖因子β受容体ＩＩ（ＴＧＦβＲＩＩ）又は形質転換増殖因子β（ＴＧＦβ）に結合することができるその断片を含み、第２のポリペプチドは、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗体の軽鎖の少なくとも１つの可変領域を含み、第１のポリペプチドの重鎖及び第２のポリペプチドの軽鎖は、組み合わせられると、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗原結合部位を形成する、キットを提供する。
【０２０５】
[00220]  本開示のある実施形態では、容器は、全体として、約５００ｍｇ〜約２４００ｍｇ（たとえば約５００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約２３００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約２２００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約２１００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約２０００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１９００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１８００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１７００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１６００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１５００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１４００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１３００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１２００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１１００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１０００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約９００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約８００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約７００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約６００ｍｇ、約６００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約７００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約８００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約９００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１０００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１１００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１３００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１４００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１５００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１６００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１７００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１８００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１９００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約２０００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約２１００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約２２００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、又は約２３００ｍｇ〜約２４００ｍｇ）の用量の本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む））を含んでいてもよい。ある実施形態では、容器は、全体として、５００〜１８００ｍｇの用量の本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）を含んでいてもよい。ある実施形態では、容器は、全体として、５００ｍｇの用量の本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）を含んでいてもよい。ある実施形態では、容器は、全体として、１２００ｍｇの用量の本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）を含んでいてもよい。ある実施形態では、容器は、全体として、１８００ｍｇの用量の本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）を含んでいてもよい。ある実施形態では、製剤は、調製され、液体製剤としてパッケージされ、約２５０ｍｇ／バイアル〜約１０００ｍｇ／バイアル（たとえば約２５０ｍｇ／バイアル〜約１０００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約９００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約８００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約７００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約６００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約５００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約４００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約３００ｍｇ／バイアル、約３００ｍｇ／バイアル〜約１０００ｍｇ／バイアル、約４００ｍｇ／バイアル〜約１０００ｍｇ／バイアル、約５００ｍｇ／バイアル〜約１０００ｍｇ／バイアル、約６００ｍｇ／バイアル〜約１０００ｍｇ／バイアル、約７００ｍｇ／バイアル〜約１００��ｍｇ／バイアル、約８００ｍｇ／バイアル〜約１０００ｍｇ／バイアル、又は約９００ｍｇ／バイアル〜約１０００ｍｇ／バイアル）として保存されてもよい。たとえば、ある実施形態では、製剤は、液体製剤であり、約６００ｍｇ／バイアルとして保存される又は約２５０ｍｇ／バイアルとして保存される。
【０２０６】
[00221]  ある実施形態では、容器は、全体として、約１２００ｍｇ又は約１８００ｍｇの用量の、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物を含んでいてもよい。ある実施形態では、製剤は、調製され、液体製剤としてパッケージされ、約２５０ｍｇ／バイアル〜約１２００ｍｇ／バイアル（たとえば約２５０ｍｇ／バイアル〜約１２００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約１１００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約１０００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約９００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約８００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約７００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約６００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約５００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約４００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約３００ｍｇ／バイアル、約３００ｍｇ／バイアル〜約１２００ｍｇ／バイアル、約４００ｍｇ／バイアル〜約１２００ｍｇ／バイアル、約５００ｍｇ／バイアル〜約１２００ｍｇ／バイアル、約６００ｍｇ／バイアル〜約１２００ｍｇ／バイアル、約７００ｍｇ／バイアル〜約１２００ｍｇ／バイアル、約８００ｍｇ／バイアル〜約１２００ｍｇ／バイアル、約９００ｍｇ／バイアル〜約１２００ｍｇ／バイアル、約１０００ｍｇ／バイアル〜約１２００ｍｇ／バイアル、又は約１１００ｍｇ／バイアル〜約１２００ｍｇ／バイアル）の、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物として保存されてもよい。たとえば、ある実施形態では、製剤は、液体製剤であり、約１２００ｍｇ／バイアルほどのものとして保存される又は約６００ｍｇ／バイアルとして保存される又は約２５０ｍｇ／バイアルとして保存される。
【０２０７】
[00222]  ある実施形態では、容器は、全体として、約５００ｍｇ、約５２５ｍｇ、約５５０ｍｇ、約５７５ｍｇ、約６００ｍｇ、約６２５ｍｇ、約６５０ｍｇ、約６７５ｍｇ、約７００ｍｇ、約７２５ｍｇ、約７５０ｍｇ、約７７５ｍｇ、約８００ｍｇ、約８２５ｍｇ、約８５０ｍｇ、約８７５ｍｇ、約９００ｍｇ、約９２５ｍｇ、約９５０ｍｇ、約９７５ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１０２５ｍｇ、約１０５０ｍｇ、約１０７５ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１１２５ｍｇ、約１１５０ｍｇ、約１１７５ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１２２５ｍｇ、約１２５０ｍｇ、約１２７５ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１３２５ｍｇ、約１３５０ｍｇ、約１３７５ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１４２５ｍｇ、約１４５０ｍｇ、約１４７５ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１５２５ｍｇ、約１５５０ｍｇ、約１５７５ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１６２５ｍｇ、約１６５０ｍｇ、約１６７５ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１７２５ｍｇ、約１７５０ｍｇ、約１７７５ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１８２５ｍｇ、約１８５０ｍｇ、約１８７５ｍｇ、約１９００ｍｇ、約１９２５ｍｇ、約１９５０ｍｇ、約１９７５ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２３００ｍｇ、又は約２４００ｍｇの本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む））を含んでいてもよい。
【０２０８】
[00223]  ある実施形態では、容器中の製剤は、凍結乾燥製剤又は液体製剤であってもよい。
【０２０９】
[00224]  ある実施形態では、製剤は、適した数のバイアルを含有するキット中にパックされる。投薬法についての情報が含まれていてもよく、これは、承認済みの提出書類に従う。キットは、温度制御デバイスによりモニターされる輸送保冷コンテナー（２℃〜８℃）において輸送されてもよい。
【０２１０】
[00225]  製剤は、使用まで２℃〜８℃で保存されてもよい。ある実施形態では、冷凍乾燥薬剤製品は、４．５ｍＬの注射用水により還元され、約０．９％生理食塩水（塩化ナトリウム注射液）により希釈されてもよく、一方、液体製剤は、約０．９％生理食塩水により希釈されてもよい。製剤のバイアルは、滅菌され、非発熱性のものであってもよく、静菌性の保存剤を含有していなくてもよい。
【０２１１】
[00226]  ある実施形態では、送達デバイスは、ペン型注射器である。ペン型注射器は、使用者が、皮下に又は筋肉内にあらかじめ測定された用量の医薬品を自己投与するのを可能にするように設計されたデバイスである。ペン型注射器は、ケースを有していてもよく、その内部にカートリッジがある。カートリッジは、医薬品又はその構成成分を含有する１つ又は数個のチャンバーを有していてもよく、針アセンブリーに付けられるのに適している。カートリッジは、あらかじめ混合された液体医薬又は注射前に混合される固体医薬及び液体を保持することができる。ケースは、蓄積エネルギー源、たとえば圧縮ばねと共に作動アセンブリーを収容していてもよい。作動アセンブリーの作動は、一連の動きを引き起こし、それによって、医薬化合物が次いで強制的に針を通って使用者の中に入るように、針がペン型注射器から伸びて使用者の中に入る。注射部位の中にその用量の医薬が送達された後、針は、伸びた位置にとどまってもよい。ペン型注射器が、別々の密閉コンパートメント中に医薬品の複数の構成成分を収容するように設計されたタイプのものである場合、作動アセンブリーが作動した場合に構成成分を強制的に混合する構造が、含まれてもよい。
【０２１２】
タンパク質産生
[00227]  抗体−サイトカイントラップタンパク質は、一般に、タンパク質を発現するように操作された核酸を含有する哺乳動物細胞を使用して、組換えで産生される。適した細胞株及びタンパク質産生方法の１つの例は、米国特許出願公開第２０１５０２２５４８３  Ａ１号の実施例１及び２において記載されるが、種々様々の適したベクター、細胞株、及びタンパク質産生方法が、抗体ベースの生物製剤を産生するために使用されてきており、これらの抗体−サイトカイントラップタンパク質の合成において使用することができた。
【０２１３】
治療上の指標
[00228]  本出願において記載される抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む）は、患者における癌を治療する又は腫瘍増殖を低下させるために使用することができる。例示的な癌は、非小細胞肺癌、黒色腫、膵癌、結腸直腸癌（たとえば治療歴を有する結腸直腸癌（ＣＲＣ））、卵巣癌、膠芽腫、胃癌（たとえば治療歴を有する再発性の又は難治性の切除不能なステージＩＶの胃癌）、胆道癌、食道癌（扁平上皮細胞癌又は腺癌）、頭部又は頸部の腺腫、及び頭部又は頸部の扁平上皮癌を含む。
【０２１４】
[00229]  抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップにより治療される癌又は腫瘍は、腫瘍におけるＰＤ−Ｌ１及びＴＧＦβの発現又は発現の上昇、予後又は疾患進行とのそれらの発現レベルの相関性、並びにＰＤ−Ｌ１及びＴＧＦβを標的にする治療に対する腫瘍の感受性に関する前臨床及び臨床経験に基づいて選択されてもよい。そのような癌又は腫瘍は、結腸直腸、乳、卵巣、膵、胃、前立腺、腎臓、子宮頸部、膀胱、頭頸部、肝臓、非小細胞肺癌、進行非小細胞肺癌、黒色腫、メルケル細胞癌、及び中皮腫を含むが、これらに限定されない。
【実施例】
【０２１５】
実施例
[00230]  ここで全般的に記載されている本開示は、本開示のある態様及び実施形態の例説の目的のために単に含まれる以下の実施例への参照によって、より容易に理解されるであろう、また、決して本開示の範囲を限定するようには意図されない。
【０２１６】
実施例１：静脈注射用薬剤製剤のパッケージ
[00231]  抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップの製剤は、凍結乾燥製剤又は液体製剤として調製する。凍結乾燥製剤の調製のために、４５ｍｇの冷凍乾燥抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを滅菌し、１つのコンテナー中で保存する。次いで、癌又は腫瘍と診断された対象に、特定の体重に無関係な用量を送達するために数個のそのようなコンテナーをキット中にパッケージする。用量の必要量に依存して、キットは、１２〜６０バイアルを含有する。その代わりに、製剤は、液体製剤として調製し、パッケージし、２５０ｍｇ／バイアル〜１０００ｍｇ／バイアルとして保存する。たとえば、製剤は、液体製剤であり、６００ｍｇ／バイアルとして保存する又は２５０ｍｇ／バイアルとして保存する。
【０２１７】
[00232]  製剤は、癌又は腫瘍、たとえば非小細胞肺癌、黒色腫、膵癌、結腸直腸癌（たとえば治療歴を有する結腸直腸癌（ＣＲＣ））、卵巣癌、膠芽腫、胃癌（たとえば治療歴を有する再発性の又は難治性の切除不能なステージＩＶの胃癌）、胆道癌、食道癌（扁平上皮細胞癌又は腺癌）、頭部又は頸部の腺腫、及び頭部又は頸部の扁平上皮癌を治療するために使用される。
【０２１８】
[00233]  そのような癌又は腫瘍と診断された対象に、５００ｍｇ〜２０００ｍｇの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを含有する製剤を静脈内に投与する。たとえば、対象に、５００ｍｇの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ又は１２００ｍｇの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与する。静脈内投与は、生理的食塩水バッグからであり、投与は、２週間に１回である。対象に投与される抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップの量は、対象の体重に無関係である。
【０２１９】
実施例２：ＢＷに無関係な投薬計画
[00234]  例示的な一実施形態では、５００ｍｇ又は１２００ｍｇのＢＷに無関係な用量が、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を有する対象に２週間ごとに１回投与された。投与は、約１時間、静脈内に実行した（−１０分／＋２０分、すなわち５０分〜８０分）。可能性として考えられる、注入に関係する反応を静めるために、抗ヒスタミン薬による及びパラセタモール（アセトアミノフェン）（たとえば２５〜５０ｍｇジフェンヒドラミン及び５００〜６５０ｍｇパラセタモール［アセトアミノフェン］ＩＶ又は経口等価物）による前投薬を、各投与のおよそ３０〜６０分前に、最初の２回の注入について投与した。グレード≧２の注入反応が最初の２回の注入の間に見られた場合、前投薬を停止しなかった。前投薬としてのステロイドは許可しなかった。
【０２２０】
[00235]  抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ療法でＰＲ又はＣＲを実現し、その後、療法を停止させた後に、続いて疾患進行を発症した対象について、１２か月までの同じ用量及びスケジュール及び治療期間での治療の１回の再開コースを認めた。この例では、対象は、≧１８歳であり、組織学的に又は細胞学的に証明された、転移性の又は局部的に進行した固形腫瘍を有し、これに対する有効な標準的な療法は存在しない又は標準的な療法は失敗していた。好ましい対象は、白血球（ＷＢＣ）数≧３×１０９／Ｌ、絶対的好中球数（ＡＮＣ）≧１．５×１０９／Ｌ、リンパ球数≧０．５×１０９／Ｌ、血小板数≧１２０×１０９／Ｌ、及びＨｇｂ≧９ｇ／ｄＬ（輸血のない状態で）によって定義される十分な血液機能；総ビリルビンレベル≦１．５×ＵＬＮ、ＡＳＴレベル≦２．５×ＵＬＮ、及びＡＬＴレベル≦２．５×ＵＬＮによって定義される十分な肝機能；並びにコッククロフト・ゴールト式による又は２４時間の蓄尿からのクレアチニンクリアランスの測定による推定クレアチニンクリアランス＞５０ｍＬ／分によって定義される十分な腎機能を有した。腫瘍中に肝病変を有する対象については、ＡＳＴ≦５．０×ＵＬＮ、ＡＬＴ≦５．０×ＵＬＮ、及びビリルビン≦３．０を許容され得るものとした。
【０２２１】
[00236]  他の実施形態では、ある対象は、
−シングルラインのプラチナベースの化学療法中に又はその後に再発、難治性、又は進行性疾患を有し、併用免疫療法により以前に治療されたことがない、組織学的に又は細胞学的に確認されたステージＩＩＩｂ又はＩＶ  ＮＳＣＬＣ
−治癒的切除を適用可能でない切除不能な又は進行した疾患である組織学的に確認された肝細胞癌であり、１ラインの前のソラフェニブ療法後に進行した（１日当たり少なくとも４００ｍｇのソラフェニブを少なくとも１４日間）又は以前にソラフェニブ不耐性であると見なされた癌
−前の全身抗癌療法なしの、組織学的に確認されたステージＩＶ又は再発性ＮＳＣＬＣ
−単独療法としてプラチナベースの化学療法を受け、それに失敗し、疾患進行しなかった患者における、組織学的に確認されたステージＩＶ又は再発性ＮＳＣＬＣ
−単独療法としてプラチナベースの化学療法を受け、それに失敗し、疾患進行せず、単独療法として抗ＰＤ−１又は抗ＰＤ−Ｌ１を受け、疾患進行しなかった患者における、組織学的に確認されたステージＩＶ又は再発性ＮＳＣＬＣ
−切除不能なステージＩＩＩ又は転移性（ステージＩＶ）黒色腫
−以前の放射線治療なしの、切除不能、進行、及び／又は転移性の、組織学的に確認された膵臓腺癌
−フルオロピリミジン、オキサリプラチン、イリノテカン、及び／又はベバシズマブを含むセカンドラインの全身治療の間に又はその後に進行した結腸又は直腸の組織学的に確認された腺癌
−化学療法の一次治療の間に又はその後に進行したトリプルネガティブ乳癌
−プラチナ系剤及びタキサン系剤を含む少なくとも２つの化学療法投与計画により以前に治療された患者においてプラチナ抵抗性／難治性である切除不能な転移性疾患である、組織学的に確認された卵巣上皮、卵管、又は腹膜癌
−少なくとも１つのプラチナ含有化学療法投与計画を以前に受けた患者における切除不能な（ステージＩＩＩ又はＩＶ）疾患である、組織学的に確認された再発性又は転移性食道腺癌
−放射線治療及びテモゾロミドにより以前に治療された、組織学的に確認されたグレードＩＶ悪性神経膠腫
−補助（すなわち手術後の放射線による）、第一選択治療（すなわち放射線による）、再発性、又は転移性の設定において、プラチナ療法の最後の用量の６か月以内に腫瘍進行又は再発を有する、組織学的に確認された再発性又は転移性頭頸部扁平上皮細胞癌（ＳＣＣＨＮ）（口腔、咽頭、喉頭）、ステージＩＩＩ／ＩＶ
−進行疾患のための全身療法による標準的なケア治療後の、組織学的に確認された再発性又は持続性の扁平上皮細胞癌、腺扁平上皮癌、又は子宮頸部腺癌
−標準的な療法が存在しない又は標準的な療法が失敗した、組織学的に又は細胞学的に確認された、再発性又は難治性の切除不能なステージＩＶの胃腺癌又は胃食道接合部腺癌
−標準的な療法が存在しない又は標準的な療法が失敗した、組織学的に又は細胞学的に確認された食道扁平上皮細胞癌
−ワンラインの全身治療に失敗した又は不耐性である、組織学的に又は細胞学的に確認された胆道癌
を有した。
【０２２２】
[00237]  選択した対象は、免疫賦活性剤を受けた場合に悪化するかもしれない活性な結核又は自己免疫性疾患を有していなかった。
【０２２３】
実施例３：効能評価
[00238]  腫瘍応答評価は、ＣＴスキャン又はＭＲＩによって実行する。ベースラインで実行したスキャンを、続く訪問時に繰り返す。一般に、ベースライン時に検出された病変は、続く腫瘍判定訪問時に、同じ画像手法、好ましくは同じ画像機器を使用して経過観察する。皮膚転移は、それらが標的病変についてＲＥＣＩＳＴ  １．１を満たす場合、キャリパーによる測定を使用し、ＲＥＣＩＳＴ１．１による標的病変として使用することができる。
【０２２４】
実施例４：抗ＰＤ−１又は抗ＰＤ−Ｌ１剤による前の治療に対して難治性又は抵抗性である進行ＮＳＣＬＣ患者の治療
[00239]  目的：単独療法としてプラチナベースの化学療法を受け、それに失敗し、疾患進行せず、単独療法として抗ＰＤ−１又は抗ＰＤ−Ｌ１を受け、疾患進行しなかった患者における、組織学的に確認されたステージＩＶ又は再発性ＮＳＣＬＣを、１２００ｍｇの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ療法による治療のために選択した。これらのＮＳＣＬＣ  ＰＤｘに失敗したサブコホートにおいて抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを使用する論理的根拠は、腫瘍免疫活性化を阻害することが知られている分子であるＴＧＦ−βの同時の中和が、ＰＤｘ単独療法に対して応答しなかった患者において臨床応答を刺激するかもしれないことであった。
【０２２５】
[00240]  概要：進行ＮＳＣＬＣを有し、抗ＰＤ−１又は抗ＰＤ−Ｌ１剤（「ＰＤｘ療法」）により以前に治療され、その結果として、疾患進行と立証された患者を、１２００ｍｇの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップの静脈内投与のために選択した。前のＰＤｘ療法に対する患者の最良総合効果（ＢＯＲ）が、立証された。前のＰＤｘ療法後に進行性の疾患（ＰＤ）を有した患者のサブコホートは、「第一選択治療抵抗性」と見なされた、すなわち、これらの患者の中で、疾患進行が、ＰＤｘ療法開始後に観察され、治療からいかなる利益も観察されなかった。患者の別のサブコホートは、「獲得抵抗性」として特徴付けられた、すなわち、患者の疾患は、最初のうちは前のＰＤｘ療法に対して応答したが、患者は、最終的に、疾患進行ステージに戻った。獲得抵抗性患者は、続く疾患進行前の前のＰＤｘ療法に対して、安定性の疾患（ＳＤ）、部分寛解（ＰＲ）、又は完全寛解（ＣＲ）のＢＯＲにより特徴付けられた。
【０２２６】
[00241]  研究設計及び結果：合計８３人の患者を、２週間ごとに、１２００ｍｇの用量で、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップにより治療した。追跡調査の中央値は、２７．３週間であった。プライマリーエンドポイントは、ＲＥＣＩＳＴ  ｖ１．１によるＢＯＲとし、セカンダリーエンドポイントは、安全性／耐性とする。患者のベースライン特徴は、下記の表に列挙する。要約すると、これは、患者の７４．７％が前の治療投与計画を４つ以上受けていた、多種類の治療歴を有する患者集団であり、様々な年齢及び性別を含んだ。前のＰＤｘ療法に対する応答は、ほぼバランスのとれたものであった（第一選択治療抵抗性、４３．４％；獲得抵抗性、５３％）。そのうえ、患者はみな、治療スタートの２８日以内に生検を受け、大部分（６５．１％）は、Ｄａｋｏ  ７３−１０  ＰＤ−Ｌ１アッセイに基づいて≧１％の腫瘍細胞ＰＤ−Ｌ１発現を有することが特に言及された。
【０２２７】
【表６】
2020514290.tif 000023
【０２２８】
[00243]  分析時のデータ締め切り日の時点で、合計２人の患者（２．４％）が、ＲＥＣＩＳＴ  ｖ１．１により、調査者によって応答が確認された。疾患制御は、２０人の患者（２４．１％）において報告された。独立した放射線学的な調査によって、３人の患者（３．６％）に部分寛解が確認された。そのうえ、さらに１人のＰＲの確認及び１人のＰＲの未確認が、調査者によって報告され、そのため未確認ＯＲＲは４．８％まで増加し、６人の患者は、治療を継続した。応答は、前のＰＤｘ療法に対して第一選択治療抵抗性の疾患を有する患者及び獲得抵抗性を有する患者において生じた。
【０２２９】
[00244]  図１３において示されるように、すでに進行性である疾患を有する（第一選択治療抵抗性及び獲得抵抗性の疾患の両方の）患者は、有効な疾患安定化を実現した。疾患応答及び疾患安定化を有する患者は、本研究を開始する前に多種多様な前治療を有することが特に言及され、さらに、治験をスタートする直前に様々な治療を受けており、前にＰＤｘに曝露された患者の不均一な集団における抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップの臨床活性を示唆する。応答及び疾患制御は、治験スタート時のＰＤ−Ｌ１ステータスに関係なく、高及び低ＰＤ−Ｌ１発現患者の両方において並びにさらに、高又は低循環ＴＧＦ−β１血漿レベルを有する患者において特に言及された。
【０２３０】
[00245]  ＮＳＣＬＣ  ＰＤｘ失敗患者において、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップは、全体として、患者によって十分に耐容性が示され、治療に関係する有害事象（ＴＲＡＥ）率は、他の抗ＰＤ−１又は抗ＰＤ−Ｌ１単独療法により見られたものと同様であった。ほとんどの患者（ｎ＝６０、７２．３％）は、いずれかのＴＲＡＥを経験し、グレード３又はそれ以上の事象を経験した割合は、少なかった（ｎ＝１９、２２．９％）。≧５％の患者におけるＴＲＡＥを示す表を下記に報告する。疲労／無力症は、非常によく見られ（３６．１％、Ｇ３＋  ６．０％）、そう痒（２１．７％、Ｇ３＋  ２．４％）及び食欲の減少（１６．９％、Ｇ３＋  １．２％）が続いた。１人の患者は、治療に関係するＡＥ（Ｇ２、湿疹による班）により研究を中止した。１人の患者は、治療に関係するとして調査者によって評価された肺炎で死亡した。特に言及すべきことに、角化棘細胞腫及び扁平上皮細胞癌を含む皮膚の病変が、５人の患者（６．０％）において生じ（他のＴＧＦ−β阻害性作用物質と同様）、外科的切除によって十分に管理した。
【０２３１】
【表７】
2020514290.tif 000024
【０２３２】
[00247]  要約すると、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップは、２つの免疫抑制性の経路：ＰＤ−Ｌ１及びＴＧＦ−βを同時に標的にするように設計された、革新的なファースト・イン・クラスの二機能性融合タンパク質であることがわかった。ＴＧＦ−β経路の阻害は、そのため、抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１剤の治療の失敗の改善を助ける。抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップによる治療は、抗ＰＤ−１又は抗ＰＤ−Ｌ１療法による前の治療に対して第一選択治療抵抗性又は獲得抵抗性である疾患を有する、多種類の治療歴を有するＮＳＣＬＣを有する患者において最初の臨床活性をもたらした。
【０２３３】
実施例５：治療歴を有する再発性又は難治性ステージＩＶ胃癌患者の治療
[00248]  目的：複数の治療歴を有する再発性の又は難治性の切除不能なステージＩＶの胃癌を有する患者を、１２００ｍｇの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ療法による治療のために選択し、安全性及び効能を評価した。
【０２３４】
[00249]  研究設計及び結果：進行性の疾患、容認できない毒性、又は治験離脱が確認されるまで、合計３１人の患者を、２週間ごとに、１２００ｍｇの用量で、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップにより治療した。コホートは、複数の治療歴を有するアジア人の患者集団からなり、６７．７％が、少なくとも３つの前の抗癌療法を受け、２９．３％が、少なくとも４つの抗癌療法を受けていた。
【０２３５】
[00250]  患者のベースライン特徴を、下記の表８に列挙する。
【０２３６】
【表８】
2020514290.tif 000025
【０２３７】
[00252]  分析時のデータ締め切り日の時点で、患者は、６．１（範囲：２〜３０）週間の期間中央値の間、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを受けた。３１人の評価可能な患者の中で、調査者によって評価されるようにＲＥＣＩＳＴ  ｖ１．１によりＢＯＲとして、５人の患者は、部分寛解が確認され、５人の患者は、安定性の疾患（ＳＤ）を有した。奏効率（ＯＲＲ）は、１６．１％であり、疾患制御率（ＤＣＲ）は、３２．３％であった。
【０２３８】
【表９】
2020514290.tif 000026
【０２３９】
[00254]  抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップは、全体として、患者によって十分に耐容性が示され、治療に関係する有害事象（ＴＲＡＥ）率は、他の抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１単独療法により見られたものと同様であった。１４人の患者（４５．２％）は、治療に関係する有害事象を経験した。４人の患者（１２．９％）は、グレード３のＴＲＡＥを経験した。治療に関係するグレード４のＡＥは、生じなかった。１回のグレード５の事象（合計５回の用量を受けた）は、場合により、治療に関係すると見なしたが、先在する胸部大動脈瘤の破裂の疑いは、調査者によって他の考えられる原因として挙げられた。
【０２４０】
【表１０】
2020514290.tif 000027
【０２４１】
[00256]  要約すると、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップは、２つの免疫抑制性の経路：ＰＤ−Ｌ１及びＴＧＦ−βを同時に標的にするように設計された、革新的なファースト・イン・クラスの二機能性融合タンパク質であることがわかった。ＴＧＦ−β経路の阻害は、抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１剤の治療の失敗の改善を助けるかもしれない。抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップによる治療は、複数の治療歴を有する胃癌を有するアジア人の患者において最初の臨床活性をもたらした。
【０２４２】
実施例６：複数の治療歴を有する結腸直腸癌（ＣＲＣ）を有する患者の治療
[00257]  背景及び目的：ＣＲＣは、世界的に、女性及び男性においてそれぞれ第２位及び第３の非常によく見られる癌である。最近、血管新生、炎症性、及び免疫抑制性の特性によって特徴付けられる予後不良の間葉系ＣＭＳ４グループを含め、ＣＲＣの４つのコンセンサス分子サブグループ（consensus molecular subgroup）（ＣＭＳ）が記載された。ＴＧＦ−βが、この免疫抑制性の表現型を媒介するのに役割を果たすかもしれないことが仮定され、これらの患者において抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを使用する論理的根拠を提供する。抗ＰＤ−Ｌ１療法は、ミスマッチ修復欠損（たとえば高頻度マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ−Ｈ））ＣＲＣを有する患者に対して実質的な活性を示したが、転移性ＣＲＣを有する患者のわずか約４％しか、ＭＳＩ−Ｈ腫瘍を有しておらず、これらの治療は、ミスマッチ修復に欠損がない患者において最小限の活性しか有していなかった。
【０２４３】
[00258]  研究設計及び結果：合計３２人の患者を、２週間ごとに、１２００ｍｇの用量で、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップにより治療した。治療の期間の中央値は、７．１週間（範囲：２〜３８）であり、分析時のデータ締め切り日の時点で、２人の患者が、積極的治療を続けていた。プライマリーエンドポイントは、ＲＥＣＩＳＴ  ｖ１．１によるＢＯＲとし、セカンダリーエンドポイントは、安全性／耐性とする。患者のベースライン特徴を、下記の表に列挙する。要約すると、これは、患者の８７．５％が前の治療投与計画を４つ以上受け、全体として良好な臨床状態（ＰＳ  ０〜１）である多種類の治療歴を有する患者集団であり、様々な年齢及び性別を含んだ。腫瘍のおよそ３４％が、ＫＲＡＳ突然変異しており、大部分の患者（８１．３％）は、Ｄａｋｏ  ７３−１０  ＰＤ−Ｌ１アッセイに基づいて腫瘍細胞上に＜１％のＰＤ−Ｌ１発現を有した。腫瘍の左右（tumor-sidedness）については、将来を見越したデータベースへの収集はなされていなかったが、患者の前の癌手術歴に基づいて決定した。この臨床評価を使用して、腫瘍の４０．６％は、左側に、２８．１％は、右側にあることが特に言及され、３１．３％は、利用可能なデータに基づいて決定することができなかった。
【０２４４】
【表１１】
2020514290.tif 000028
【０２４５】
[00260]  分析時のデータ締め切り日の時点で、１人の患者（３．１％）に部分寛解（ＰＲ）が確認された。さらに１人の患者は、安定性の疾患を有し、２７人の患者は、最良総合効果として進行性の疾患を有した。応答基準は、独立した調査委員会によって判決され、ＲＥＣＩＳＴｖ１．１によって定義された。ＰＲを有する患者は、ミスマッチ修復に欠損がなく（すなわちマイクロサテライト安定性の）、ＣＭＳ４、ＫＲＡＳ突然変異、及びＰＤ−Ｌ１＋（ＩＨＣによって腫瘍細胞においてＰＤ−Ｌ１＞１％）のＣＲＣを有した。この患者は、発明者らのコホートにおいて最も高い腫瘍細胞ＰＤ−Ｌ１発現を有した（２０％）。２０１７年１１月１日時点で、ＰＲを有する患者は、研究を続けており（１２．５か月）、部分寛解は進行中であった。さらなる１人の患者は、１３か月目に治療を続け、治療の５か月目の間に標的病変への対症的なＲＴを受けたことにより疾患が評価可能でない。新たな病変は、その時以来生じておらず、非標的病変は、安定性のままである。この患者のＣＲＣは、ＫＲＡＳ突然変異しており、ＣＭＳ及びマイクロサテライトのステータスは、未決であり、ＰＤ−Ｌ１ステータスは、未知である。
【０２４６】
[00261]  ＣＲＣ患者において、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップは、全体として、患者によって十分に耐容性が示され、治療に関係する有害事象（ＴＲＡＥ）率は、他の抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１単独療法により見られたものと同様であった。ほとんどの患者（ｎ＝２２、６８．８％）は、いずれかのＴＲＡＥを経験し、グレード３の事象を経験した割合は、少なかった（ｎ＝４、１２．５％）。グレード４／５のＴＲＡＥはなかった。≧５％の患者におけるＴＲＡＥを示す表を下記に報告する。貧血症、下痢、注入に関係する反応、及び悪心は、非常によく見られた（すべてｎ＝５、１５．６％）。グレード３の関係する貧血症の事象が１つあった（３．１％）。１つのＴＲＡＥだけが、治療中止に至った（グレード３の腸炎）。事象は、疾患進行と同時に生じた。
【０２４７】
【表１２】
2020514290.tif 000029
【０２４８】
[00263]  要約すると、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップは、２つの免疫抑制性の経路であるＴＧＦ−β及びＰＤ−Ｌ１を同時に標的にするように設計された、革新的なファースト・イン・クラスの二機能性融合タンパク質であることがわかった。抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップによる治療は、進行ＣＲＣを有する、複数の治療歴を有する患者において最初の臨床活性をもたらし、ＢＯＲとして、１人の患者は、永続性のＰＲを有し、１人の患者は、ＳＤを有し、２７人の患者は、ＰＤを有した。８．３か月間、進行中のＰＲを有する患者は、ＭＳＩ、ＣＭＳ４、ＫＲＡＳ突然変異、及びＰＤ−Ｌ１＋のＣＲＣを有した。第２の患者は、健康を維持し、最初の進行性の疾患の１３か月後に再発を伴わなかった。
【０２４９】
実施例７：ヒトにおける効果的な用量／投薬計画及び曝露量の確立：抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップの２週間ごとに１回（ｑ２ｗ）の投薬後の２ｎｄライン非小細胞肺癌（２Ｌ  ＮＳＣＬＣ）における予備的用量応答及び曝露量応答
[00264]  この研究において、進行／再発性ＮＳＣＬＣを有し、プラチナ治療後の、ＰＤ−Ｌ１について未選択の８０人の対象に、疾患進行、容認できない毒性、又は治験離脱まで、２週間ごとに１回（ｑ２ｗ）、５００ｍｇ又は１２００ｍｇの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを投与した（コホート当たりｎ＝４０）。対象の用量応答及び曝露量応答を評価した。分析時のデータ締め切りの時点で、合計１７人の対象が、治療を続けており、追跡調査の中央値は、３５．２（範囲、１．３〜４７．３）であった。調査者が評価した未確認奏効率（ＯＲＲ）は、２５．０％であり（５００ｍｇ  ＯＲＲ、２２．５％；１２００ｍｇ  ＯＲＲ、２７．５％）、９人の部分寛解（ＰＲ）が５００ｍｇで見られ、１人の完全寛解（ＣＲ）及び１０人のＰＲが１２００ｍｇで見られた。臨床活性は、ＰＤ−Ｌ１発現レベル全体にわたって観察した。≧８０％  ＰＤ−Ｌ１腫瘍発現を有する患者において１２００ｍｇでの７１．４％のＯＲＲが特に言及された（７人の患者）。最もよく見られた治療に関係する有害事象（ＴＲＡＥ）は、そう痒症（１８．８％）、斑状丘疹状皮疹（１７．５％）、食欲の減少（１２．５％）、及び無力症（１１．３％）であった。グレード≧３  ＴＲＡＥが、２０人の患者（２５％）において生じた。治療に関係する死亡は生じなかった。
【０２５０】
[00265]  曝露量応答評価のために、母集団ＰＫモデルを、これらの８０人の患者からの投薬及び共変量についての情報に基づいて第１サイクルの曝露量を予測するために使用した。詳細には、母集団ＰＫパラメーターの経験的ベイズ推定値を使用して、単回投与後のＡＵＣ及びＣｔｒｏｕｇｈをすべての対象について予測した（表２及び３を参照）。予測曝露量データを、表４及び表５に示されるように、予測曝露量のそれぞれの四分値の応答率を計算するために、５００ｍｇ  ｑ２ｗ及び１２００ｍｇ  ｑ２ｗコホートについて組み合わせた。
【０２５１】
配列
配列番号１
分泌抗ＰＤ−Ｌ１ラムダ軽鎖のペプチド配列
【化１６】
2020514290.tif 000030
配列番号２
抗ＰＤＬ１の分泌Ｈ鎖のペプチド配列
【化１７】
2020514290.tif 000031
配列番号３
抗ＰＤＬ１／ＴＧＦβトラップの分泌Ｈ鎖のペプチド配列
【化１８】
2020514290.tif 000032
配列番号４
抗ＰＤ−Ｌ１ラムダ軽鎖の翻訳開始コドンから翻訳終止コドンまでのＤＮＡ配列（ＶＬに先行するリーダー配列は、ウロキナーゼプラスミノーゲン活性化因子由来のシグナルペプチドである）
【化１９】
2020514290.tif 000033
配列番号５
翻訳開始コドンから翻訳終止コドンまでのＤＮＡ配列（ｍＶＫ  ＳＰリーダー：下線を引いた小文字；ＶＨ：大文字；ＫからＡへの突然変異を有するＩｇＧ１ｍ３：小文字；（Ｇ４Ｓ）ｘ４−Ｇ（配列番号１１）リンカー：太字の大文字；ＴＧＦβＲＩＩ：太字の下線を引いた小文字；２つの終止コドン：太字の下線を引いた大文字）
【化２０】
2020514290.tif 000034
配列番号６
突然変異Ａ３１Ｇ、Ｄ５２Ｅ、Ｒ９９Ｙを有する抗ＰＤ−Ｌ１（ｍｕｔ）／ＴＧＦβトラップの分泌ラムダ軽鎖のポリペプチド配列
【化２１】
2020514290.tif 000035
配列番号７
抗ＰＤ−Ｌ１（ｍｕｔ）／ＴＧＦβトラップの分泌重鎖のポリペプチド配列
【化２２】
2020514290.tif 000036
配列番号８
ヒトＴＧＦβＲＩＩアイソフォームＡ前駆体ポリペプチド（ＮＣＢＩ  ＲｅｆＳｅｑ受入番号：ＮＰ＿００１０２００１８）
【化２３】
2020514290.tif 000037
配列番号９
ヒトＴＧＦβＲＩＩアイソフォームＢ前駆体ポリペプチド（ＮＣＢＩ  ＲｅｆＳｅｑ受入番号：ＮＰ＿００３２３３）
【化２４】
2020514290.tif 000038
配列番号１０
ヒトＴＧＦβＲＩＩアイソフォームＢ細胞外ドメインポリペプチド
【化２５】
2020514290.tif 000039
配列番号１１
（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）４Ｇｌｙリンカー
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧ
配列番号１２
抗ＰＤ−Ｌ１抗体ＭＰＤＬ３２８９Ａの分泌重鎖可変領域のポリペプチド配列
【化２６】
2020514290.tif 000040
配列番号１３
抗ＰＤ−Ｌ１抗体ＭＰＤＬ３２８９Ａの分泌軽鎖可変領域のポリペプチド配列
【化２７】
2020514290.tif 000041
配列番号１４
抗ＰＤ−Ｌ１抗体ＹＷ２４３．５５Ｓ７０の分泌重鎖可変領域のポリペプチド配列
【化２８】
2020514290.tif 000042
【０２５２】
参照による組み込み
[00266]  本明細書において参照される特許文献及び科学論文のそれぞれの開示の全体は、事実上、参照によって組み込まれる。
【０２５３】
等価物
[00267]  本開示は、その精神又は本質的な特徴から逸脱することなく、他の特定の形態で例示されてもよい。そのため、前述の実施形態は、本明細書において記載される本開示を限定するものではなく、あらゆる点において例示と見なされるべきである。様々な実施形態の様々な構造的要素及び様々な開示される方法のステップは、様々に組み合わせて及び並べ換えて利用されてもよく、そのような変形はすべて、本開示の形態と見なされるべきである。本開示の範囲は、したがって、前述の説明ではなく、添付の請求項によって示され、請求項と同等の意味及び範囲内にある変化はすべて、請求項に包含されることが意図される。
【０２５４】
[00268]  本開示のナンバリングされた実施形態を下記に列挙する。
１．その必要がある対象において癌を治療する又は腫瘍増殖を阻害するための方法であって、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドを含む、少なくとも５００ｍｇの用量のタンパク質を対象に投与することを含み、
第１のポリペプチドは、（ａ）ヒトタンパク質プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）に結合する抗体の重鎖の少なくとも１つの可変領域；及び（ｂ）ヒト形質転換増殖因子β受容体ＩＩ（ＴＧＦβＲＩＩ）又は形質転換増殖因子β（ＴＧＦβ）に結合することができるその断片を含み、
第２のポリペプチドは、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗体の軽鎖の少なくとも１つの可変領域を含み、
第１のポリペプチドの重鎖及び第２のポリペプチドの軽鎖は、組み合わせられると、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗原結合部位を形成する、方法。
２．第１のポリペプチドは、配列番号３のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の方法。
３．用量は、５００ｍｇ〜２４００ｍｇである、請求項１又は２に記載の方法。
４．用量は、１２００ｍｇ〜１８００ｍｇである、請求項１又は２に記載の方法。
５．用量は、１２００ｍｇである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
６．用量は、１８００ｍｇである、請求項１又は２に記載の方法。
７．用量は、２週間ごとに１回又は３週間ごとに１回、投与される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
８．タンパク質は、静脈内投与によって投与される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
９．静脈内投与は、タンパク質を含む製剤を含むプレフィルドバッグ、プレフィルドペン、又はプレフィルドシリンジにより実行される、請求項８に記載の方法。
１０．バッグは、チューブ及び／又は針を含む導管に接続される、請求項９に記載の方法。
１１．癌又は腫瘍は、非小細胞肺癌、黒色腫、膵癌、結腸直腸癌、卵巣癌、膠芽腫、胃癌、胆道癌、食道癌（扁平上皮細胞癌又は腺癌）、頭部又は頸部の腺腫、及び頭部又は頸部の扁平上皮癌からなる群から選択される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
１２．癌又は腫瘍は、結腸直腸、乳、卵巣、膵、胃、前立腺、腎臓、子宮頸部、骨髄腫、リンパ腫、白血病、甲状腺、子宮内膜、子宮、膀胱、神経内分泌、頭頸部、肝臓、鼻咽頭、精巣、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、黒色腫、基底細胞皮膚癌、扁平上皮細胞皮膚癌、隆起性皮膚線維肉腫、メルケル細胞癌、膠芽腫、神経膠腫、肉腫、中皮腫、及び骨髄異形成症候群からなる群から選択される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
１３．腫瘍は、進行固形腫瘍である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
１４．腫瘍は、前の治療に対して難治性及び／又は抵抗性である、請求項１３に記載の方法。
１５．第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドを含む、５００ｍｇ〜２４００ｍｇのタンパク質を含む静脈注射用薬剤送達製剤であって、
第１のポリペプチドは、（ａ）ヒトタンパク質プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）に結合する抗体の重鎖の少なくとも１つの可変領域；及び（ｂ）ヒト形質転換増殖因子β受容体ＩＩ（ＴＧＦβＲＩＩ）又は形質転換増殖因子β（ＴＧＦβ）に結合することができるその断片を含み、
第２のポリペプチドは、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗体の軽鎖の少なくとも１つの可変領域を含み、
第１のポリペプチドの重鎖及び第２のポリペプチドの軽鎖は、組み合わせられると、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗原結合部位を形成する、静脈注射用薬剤送達製剤。
１６．第１のポリペプチドは、配列番号３のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列を含む、請求項１５に記載の静脈注射用薬剤送達製剤。
１７．１２００ｍｇのタンパク質を含む、請求項１５又は１６に記載の静脈注射用薬剤送達製剤。
１８．１２００ｍｇ〜２４００ｍｇのタンパク質を含む、請求項１５又は１６に記載の静脈注射用薬剤送達製剤。
１９．１８００ｍｇのタンパク質を含む、請求項１５又は１６に記載の静脈注射用薬剤送達製剤。
２０．製剤は、バッグ、ペン、又はシリンジ中に含有される、請求項１５〜１９のいずれか一項に記載の静脈注射用薬剤送達製剤。
２１．バッグは、チューブ及び／又は針を含む導管に接続される、請求項２０に記載の静脈注射用薬剤送達製剤。
２２．製剤は、凍結乾燥製剤又は液体製剤である、請求項１５〜２１のいずれか一項に記載の静脈注射用薬剤送達製剤。
２３．第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドを含む、５００ｍｇ〜２４００ｍｇのタンパク質を含む製剤を含む薬剤送達デバイスであって、
第１のポリペプチドは、（ａ）ヒトタンパク質プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）に結合する抗体の重鎖の少なくとも１つの可変領域；及び（ｂ）ヒト形質転換増殖因子β受容体ＩＩ（ＴＧＦβＲＩＩ）又は形質転換増殖因子β（ＴＧＦβ）に結合することができるその断片を含み、
第２のポリペプチドは、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗体の軽鎖の少なくとも１つの可変領域を含み、
第１のポリペプチドの重鎖及び第２のポリペプチドの軽鎖は、組み合わせられると、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗原結合部位を形成する、薬剤送達デバイス。
２４．第１のポリペプチドは、配列番号３のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列を含む、請求項２３に記載の薬剤送達デバイス。
２５．１２００ｍｇのタンパク質を含む、請求項２３又は２４に記載の薬剤送達デバイス。
２６．１２００ｍｇ〜２４００ｍｇのタンパク質を含む、請求項２３又は２４に記載の薬剤送達デバイス。
２７．１８００ｍｇのタンパク質を含む、請求項２３又は２４に記載の薬剤送達デバイス。
２８．デバイスは、バッグ、ペン、又はシリンジである、請求項２３〜２７のいずれか一項に記載の薬剤送達デバイス。
２９．バッグは、チューブ及び／又は針を含む導管に接続される、請求項２８に記載の薬剤送達デバイス。
３０．第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドを含む、５００ｍｇ〜２４００ｍｇのタンパク質を含む製剤を全体として含む、１つ又はそれ以上の容器を含むキットであって、
第１のポリペプチドは、（ａ）ヒトタンパク質プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）に結合する抗体の重鎖の少なくとも１つの可変領域；及び（ｂ）ヒト形質転換増殖因子β受容体ＩＩ（ＴＧＦβＲＩＩ）又は形質転換増殖因子β（ＴＧＦβ）に結合することができるその断片を含み、
第２のポリペプチドは、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗体の軽鎖の少なくとも１つの可変領域を含み、
第１のポリペプチドの重鎖及び第２のポリペプチドの軽鎖は、組み合わせられると、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗原結合部位を形成する、キット。
３１．第１のポリペプチドは、配列番号３のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列を含む、請求項３０に記載のキット。
３２．容器は、全体として、１２００ｍｇのタンパク質を含む、請求項３０又は３１に記載のキット。
３３．容器は、全体として、１２００ｍｇ〜２４００ｍｇのタンパク質を含む、請求項３０又は３１に記載のキット。
３４．容器は、全体として、１８００ｍｇのタンパク質を含む、請求項３０又は３１に記載のキット。
３５．製剤は、凍結乾燥製剤又は液体製剤である、請求項３０〜３４のいずれか一項に記載のキット。
３６．その必要がある対象において癌を治療する又は腫瘍増殖を阻害するのに使用するための、請求項１５〜２２のいずれか一項に記載の静脈注射用薬剤送達製剤、請求項２３〜２９のいずれか一項に記載の薬剤送達デバイス、又は請求項３０〜３５のいずれか一項に記載のキット。
３７．癌又は腫瘍は、非小細胞肺癌、黒色腫、膵癌、結腸直腸癌、卵巣癌、膠芽腫、胃癌、胆道癌、食道癌（扁平上皮細胞癌又は腺癌）、頭部又は頸部の腺腫、及び頭部又は頸部の扁平上皮癌からなる群から選択される、請求項３６に記載の静脈注射用薬剤送達製剤、薬剤送達デバイス、又はキット。
３８．癌又は腫瘍は、結腸直腸、乳、卵巣、膵、胃、前立腺、腎臓、子宮頸部、骨髄腫、リンパ腫、白血病、甲状腺、子宮内膜、子宮、膀胱、神経内分泌、頭頸部、肝臓、鼻咽頭、精巣、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、黒色腫、基底細胞皮膚癌、扁平上皮細胞皮膚癌、隆起性皮膚線維肉腫、メルケル細胞癌、膠芽腫、神経膠腫、肉腫、中皮腫、及び骨髄異形成症候群からなる群から選択される、請求項３６に記載の静脈注射用薬剤送達製剤、薬剤送達デバイス、又はキット。
３９．腫瘍は、進行固形腫瘍である、請求項３６に記載の静脈注射用薬剤送達製剤、薬剤送達デバイス、又はキット。
４０．腫瘍は、前の治療に対して難治性である、請求項３６に記載の静脈注射用薬剤送達製剤、薬剤送達デバイス、又はキット。
４１．製剤は、２週間ごとに１回、対象に投与される、請求項３６〜４０のいずれか一項に記載の静脈注射用薬剤送達製剤、薬剤送達デバイス、又はキット。
【図１】
2020514290.tif 000043
【図２】
2020514290.tif 000044
【図３】
2020514290.tif 000045
【図４Ａ】
2020514290.tif 000046
【図４Ｂ】
2020514290.tif 000047
【図４Ｃ】
2020514290.tif 000048
【図４Ｄ】
2020514290.tif 000049
【図５】
2020514290.tif 000050
【図６Ａ】
2020514290.tif 000051
【図６Ｂ】
2020514290.tif 000052
【図７Ａ】
2020514290.tif 000053
【図７Ｂ】
2020514290.tif 000054
【図７Ｃ】
2020514290.tif 000055
【図７Ｄ】
2020514290.tif 000056
【図７Ｅ】
2020514290.tif 000057
【図７Ｆ】
2020514290.tif 000058
【図７Ｇ】
2020514290.tif 000059
【図７Ｈ】
2020514290.tif 000060
【図８Ａ】
2020514290.tif 000061
【図８Ｂ】
2020514290.tif 000062
【図８Ｃ】
2020514290.tif 000063
【図８Ｄ】
2020514290.tif 000064
【図８Ｅ】
2020514290.tif 000065
【図８Ｆ】
2020514290.tif 000066
【図８Ｇ】
2020514290.tif 000067
【図８Ｈ】
2020514290.tif 000068
【図９Ａ】
2020514290.tif 000069
【図９Ｂ】
2020514290.tif 000070
【図１０Ａ】
2020514290.tif 000071
【図１０Ｂ】
2020514290.tif 000072
【図１０Ｃ】
2020514290.tif 000073
【図１１Ａ】
2020514290.tif 000074
【図１１Ｂ】
2020514290.tif 000075
【図１１Ｃ】
2020514290.tif 000076
【図１２Ａ】
2020514290.tif 000077
【図１２Ｂ】
2020514290.tif 000078
【図１３】
2020514290.tif 000079
【図１４】
2020514290.tif 000080
【配列表】
2020514290000001.app
【国際調査報告】
2020514290.tif 000081
2020514290.tif 000082
2020514290.tif 000083