(57)【要約】  ペプチジル薬のタンパク質分解安定性及び細胞膜透過性の両方を増大させる一般的な可逆的な二環化方法が開示されている。ペプチド薬は、短細胞膜透過モチーフと融合し、一対のジスルフィド結合の形成を介して立体配座的に拘束された二環構造に変換される。得られた二環式ペプチドは、大幅に増強されたタンパク質分解安定性並びに細胞膜透過性を有する。細胞内部では、ジスルフィド結合は、還元されて、直鎖生物活性ペプチドを産生する。この方法を適用して、ＮＥＭＯ−ＩＫＫ相互作用に対する細胞膜透過性二環式ペプチジル阻害剤を生成した。
2020502051.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ又はＩＩを含む二環式ペプチドであって、
【化１】
2020502051.tif 000068
式中、
Ｘｍ及びＸｎは、独立して、１〜２０個のアミノ酸の配列を含み、各ｄは、独立して、１又は２であり、Ｒ１は、ＯＨ、ＯＲ２、又はＮＨＲ２であり、Ｒ２は、Ｃ１〜２０アルキル、Ｃ６〜１０アリール、若しくは５〜２０員ヘテロアリール、アミノ酸、２〜２０個のアミノ酸のペプチド配列、検出可能な部分、又は固体支持体である、二環式ペプチド。
【請求項２】
Ｘｍが細胞膜透過ペプチド配列である、請求項１に記載の二環式ペプチド。
【請求項３】
Ｘｍが長さが４〜１０個のアミノ酸である、請求項１又は２に記載の二環式ペプチド。
【請求項４】
Ｘｍ中の少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は少なくとも３つのアミノ酸が、疎水性側鎖を有する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の二環式ペプチド。
【請求項５】
Ｘｍが、１つ以上のフェニルアラニン、ナフチルアラニン、トリプトファン、又はそれらの類似体若しくは誘導体を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の二環式ペプチド。
【請求項６】
Ｘｍが、少なくとも１つのアルギニン又はその類似体若しくは誘導体を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の二環式ペプチド。
【請求項７】
Ｘｍが、表２に列挙される配列（配列番号６２〜配列番号１４６）を含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の二環式ペプチド。
【請求項８】
Ｘｍが、ＲＲＲＲΦＦ若しくはＦΦＲＲＲＲであるか、又はそれを含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の二環式ペプチド。
【請求項９】
Ｘｎが、表５に列挙される配列（配列番号１４７〜配列番号１５９）を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の二環式ペプチド。
【請求項１０】
前記二環式ペプチドが、表６に列挙される配列（配列番号１６０〜配列番号１６７）を有する、請求項１〜９のいずれか一項に記載の二環式ペプチド。
【請求項１１】
式ＩＩＩを含むペプチド配列であって、
ＢＭＢ−（ＡＡｎ）ｕ
ＩＩＩ
式中、
ｎは４〜２０の整数であり、
各ＡＡｎは、独立して、酸であり、少なくとも２つのＡＡｎは、システイン、ホモシステイン、チオール基を有するアミノ酸からなる群から独立して選択され、
ＢＭＢは、３，５−ビス（メルカプトメチル）安息香酸残基である、ペプチド配列。
【請求項１２】
以下の構造のうちの１つから選択されるペプチド。
【化２】
2020502051.tif 000069
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の二環式ペプチドと、薬学的担体と、を含む、薬学的組成物。
【請求項１４】
炎症性障害の治療方法であって、治療上有効量の請求項１〜１３に記載の化合物のうちのいずれかを、前記障害の治療の必要性を有するものとして識別された被験体に投与する工程を含む、方法。
【請求項１５】
自己免疫障害の治療方法であって、治療上有効量の請求項１〜１３に記載の化合物のうちのいずれかを、前記障害の治療の必要性を有するものとして識別された被験体に投与する工程を含む、方法。
【請求項１６】
制御されていない細胞増殖の障害の治療方法であって、治療上有効量の請求項１〜１３に記載の化合物のうちのいずれかを、前記障害の治療の必要性を有するものとして識別された被験体に投与する工程を含む、方法。
【請求項１７】
二環式ペプチドを作製する方法であって、
（ａ）８〜４０個のアミノ酸を有する固体支持ペプチドを、式ＩＶの化合物と接触させることであって、少なくとも２つのアミノ酸が、システイン、ホモシステイン、及びチオール基を有するアミノ酸からなる群から独立して選択され、
【化３】
2020502051.tif 000070
式中、Ｑ１及びＱ２は、互いに独立してＣＨ又はＮから選択される、接触させることと、
（ｂ）前記ペプチドを前記固体支持体から切断することと、を含む、方法。
【請求項１８】
式Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩ、ＩＸ、Ｘ、若しくはＸＩＩを含む、二環式ペプチド、
【化４】
2020502051.tif 000071
又はその薬学的に許容される塩であって、
式中、
ＡＡ１、ＡＡ２、ＡＡ３、ＡＡ４、ＡＡ５、ＡＡ６、ＡＡ７、ＡＡ８、及びＡＡ９は、各々独立してアミノ酸であり、少なくとも３つのアミノ酸は、アルギニンであり、少なくとも２つのアミノ酸は、疎水性側鎖を独立して含み、
ｍ、ｎ、ｐ、及びｑは、独立して０及び１から選択され、
ＡＡ１０及びＡＡ１１は、各々独立してアミノ酸であり、
ｂ及びｃは、独立して０〜２０の整数であり、
各発生においてＡＡＳは、独立してＪとジスルフィド結合を形成する部分であり、
Ｊは、アルキル、Ｎ−アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、又はヘテロシクリルであり、これらの各々は、独立して、各発生においてＡＡＳとジスルフィド結合を形成する少なくとも２つの置換基で独立して置換されており、
各例においてｓｓは、ジスルフィド結合を表し、
Ｌは、Ｊを、アミノ酸、Ｘｎ、又はそれらの組み合わせに結合する部分であり、
Ｘｎは、１〜２０個のアミノ酸を有するペプチド配列を含むカーゴ部分である、二環式ペプチド。
【請求項１９】
Ｊが、Ｎ−アルキル、アリール、又はヘテロアリールであり、これらの各々は、独立して、各発生においてＡＡＳとジスルフィド結合を形成する少なくとも２つの置換基で独立して置換されている、請求項１８に記載の二環式ペプチド。
【請求項２０】
Ｊが以下である、請求項１８に記載の二環式ペプチド。
【化５】
2020502051.tif 000072
【請求項２１】
Ｌが、結合、アミノ酸、
【化６】
2020502051.tif 000073
であり、式中、ａは、０〜１０の整数である、請求項１８に記載の二環式ペプチド。
【請求項２２】
各ＡＡＳが独立して、
【化７】
2020502051.tif 000074
であり、式中、ＡＡＳのＣ末端は、アミド結合を形成するか、又はＲ１であり、Ｒ１は、ＯＨ、ＯＲ２、又はＮＨＲ２であり、Ｒ２は、アルキル、アリール、ヘテロアリール、アミノ酸、２〜２０個のアミノ酸のペプチド配列、検出可能な部分、又は固体支持体である、請求項１８に記載の二環式ペプチド。
【請求項２３】
以下からなる群から選択される、請求項１８に記載の二環式ペプチド、
【化８】
2020502051.tif 000075
【化９】
2020502051.tif 000076
又はその薬学的に許容される塩であって、
式中、各ｄは、独立して１又は２であり、
式中、Ｒ１はＯＨ、ＯＲ２、ＮＨＲ２であり、Ｒ２は、アルキル、アリール、ヘテロアリール、アミノ酸、２〜２０個のアミノ酸のペプチド配列、検出可能な部分、又は固体支持体である、二環式ペプチド。
【請求項２４】
疎水性側鎖を独立して含む前記少なくとも２つのアミノ酸が、グリシン、フェニルグリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、ノルロイシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ナフチルアラニン、プロリン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択され、フェニルグリシン、フェニルアラニン、トリプトファン、又はナフチルアラニン上の芳香族側鎖が、ハロゲンで各々任意選択で置換されている、請求項１８〜２３のいずれか一項に記載の二環式ペプチド。
【請求項２５】
疎水性側鎖を独立して含む前記少なくとも２つのアミノ酸が、フェニルアラニン、ナフチルアラニン、及びそれらの組み合わせからなる群から独立して選択される、請求項２４に記載の二環式ペプチド。
【請求項２６】
疎水性残基を独立して含む前記少なくとも２つのアミノ酸が、連続アミノ酸である、請求項１８〜２５のいずれか一項に記載の二環式ペプチド。
【請求項２７】
ＡＡ１は、Ｌアルギニンであり、
ＡＡ２は、Ｌ−アルギニンであり、
ＡＡ３は、Ｌ−アルギニンであり、
ＡＡ４は、Ｌ−フェニルアラニンであり、
ＡＡ５は、Ｌフェニルアラニンであり、
ｍ、ｎ、ｐ、及びｑは、各々０である、請求項１８〜２５のいずれか一項に記載の二環式ペプチド。
【請求項２８】
ＡＡ１は、Ｌ−フェニルアラニンであり、
ＡＡ２は、Ｌ−ナフチルアラニンであり、
ＡＡ３は、Ｌ−アルギニンであり、
ＡＡ４は、Ｌ−アルギニンであり、
ＡＡ５は、Ｌ−アルギニンであり、
ｍは、１であり、ＡＡ６は、Ｌ−アルギニンであり、
ｎ、ｐ、及びｑは、各々０である、請求項１８〜２５のいずれか一項に記載の二環式ペプチド。
【請求項２９】
ＡＡ１は、Ｌ−アルギニンであり、
ＡＡ２は、Ｌ−アルギニンであり、
ＡＡ３は、Ｌ−アルギニンであり、
ＡＡ４は、Ｌ−アルギニンであり、
ＡＡ５は、Ｌ−ナフチルアラニンであり、
ｍは、１であり、ＡＡ６は、Ｌ−フェニルアラニンであり、
ｎ、ｐ、及びｑは、各々０である、請求項１８〜２５のいずれか一項に記載の二環式ペプチド。
【請求項３０】
少なくとも３つの連続アミノ酸が、交互のキラリティを有する、請求項１８〜２５のいずれか一項に記載の二環式ペプチド。
【請求項３１】
交互のキラリティを有する前記少なくとも３つの連続アミノ酸が、アルギニンである、請求項３０に記載の二環式ペプチド。
【請求項３２】
ＡＡ１は、Ｄ−フェニルアラニンであり、
ＡＡ２は、Ｌ−ナフチルアラニンであり、
ＡＡ３は、Ｌ−アルギニンであり、
ＡＡ４は、Ｄ−アルギニンであり、
ＡＡ５は、Ｌ−アルギニンであり、
ｍは、１であり、ＡＡ６は、Ｄ−アルギニンであり、
ｎ、ｐ、及びｑは、各々０である、請求項３１に記載の二環式ペプチド。
【請求項３３】
ＡＡ１は、Ｄ−フェニルアラニンであり、
ＡＡ２は、Ｌ−ナフチルアラニンであり、
ＡＡ３は、Ｌ−アルギニンであり、
ＡＡ４は、Ｄ−アルギニンであり、
ＡＡ５は、Ｌ−アルギニンであり、
ｍ及びｎは、各々１であり、ＡＡ６は、Ｄ−アルギニンであり、ＡＡ７は、Ｌ−アルギニンであり、
ｐ及びｑは、各々０である、請求項３１に記載の二環式ペプチド。
【請求項３４】
ＡＡ１は、Ｄ−フェニルアラニンであり、
ＡＡ２は、Ｌ−ナフチルアラニンであり、
ＡＡ３は、Ｌ−アルギニンであり、
ＡＡ４は、Ｄ−アルギニンであり、
ＡＡ５は、Ｌ−アルギニンであり、
ｍ及びｎは、各々１であり、ＡＡ６は、Ｄ−アルギニンであり、ＡＡ７は、Ｌ−フェニルアラニンであり、
ｐ及びｑは、各々０である、請求項３１に記載の二環式ペプチド。
【請求項３５】
Ｘｎ中の前記ペプチド配列が、少なくとも１つのタンパク質−タンパク質相互作用を阻害する、請求項１８〜３４のいずれか一項に記載の二環式ペプチド。
【請求項３６】
前記タンパク質−タンパク質相互作用が、κＢ−キナーゼ（ＩＫＫ）複合体と、調節タンパク質ＮＦ−κＢ必須修飾因子（ＮＥＭＯ）との間の相互作用である、請求項３５に記載の二環式ペプチド。
【請求項３７】
Ｘｎ中の前記ペプチド配列が、Ｒａｓ、ＰＴＰ１  Ｂ、Ｐｉｎ  １、Ｇｒｂ２  ＳＨ２、ＭＤＭ２、又はそれらの組み合わせに対する阻害剤である、請求項３５に記載の二環式ペプチド。
【請求項３８】
Ｘｎ中の前記ペプチド配列が、野生型ペプチジルリガンド又はペプチド模倣体である、請求項１８〜３４のいずれか一項に記載の二環式ペプチド。
【請求項３９】
細胞の細胞質に治療薬剤を送達するための方法であって、請求項１８〜３８のいずれか一項に記載の化合物を投与することを含む、方法。
【請求項４０】
治療を必要とする被験体における疾患を治療する方法であって、請求項１８〜３８のいずれか一項に記載の化合物を投与することを含む、方法。
【請求項４１】
式Ｖ−Ａ、ＶＩ−Ａ、ＶＩＩ−Ａ、ＶＩＩＩ−Ａ、ＩＸ−Ａ、Ｘ−Ａ、若しくはＸＩＩ−Ａ、及びＸＩＩ−Ｂに従う化合物、
【化１０】
2020502051.tif 000077
又はその薬学的に許容される塩であって、
式中、
少なくとも３つのアミノ酸は、アルギニンであり、
少なくとも２つのアミノ酸は、疎水性側鎖を独立して含み、
ｍ、ｎ、ｐ、又はｑは、０及び１から独立して選択され、
各発生においてＡＡＳ’は、独立してチオールを含む部分であり、
Ｊ’は、アルキル、Ｎ−アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、又はヘテロシクリルであり、これらの各々は、少なくとも２つのチオール置換基で独立して置換されており、
Ｌは、ＡＡＳ’をアミノ酸、Ｘｎ、又はそれらの組み合わせに結合する任意選択の部分であり、
Ｘｎは、４〜２０個のアミノ酸を有するペプチド配列を含むカーゴ部分である、化合物。
【請求項４２】
Ｊ’が、Ｎ−アルキル、アリール、又はヘテロアリールである、請求項４１に記載の化合物。
【請求項４３】
Ｊ’が、以下である、請求項４１に記載の化合物。
【化１１】
2020502051.tif 000078
【請求項４４】
Ｌが、存在しないか、アミノ酸、
【化１２】
2020502051.tif 000079
であり、式中、ａは、０〜２０の整数である、請求項４１に記載の化合物。
【請求項４５】
ＡＡＳ’が、各々独立して、以下であり、
【化１３】
2020502051.tif 000080
式中、ＡＡＳ’のＣ末端はアミド結合を形成するか、又はＲ１であり、Ｒ１はＯＨ、ＯＲ２、ＮＨＲ２であり、Ｒ２は、アルキル、アリール、ヘテロアリール、アミノ酸残基、２〜２０個のアミノ酸残基のペプチド配列、検出可能な部分、又は固体支持体である、請求項４１に記載の化合物。
【請求項４６】
【化１４】
2020502051.tif 000081
からなる群から選択される構造を有する、請求項４１〜４５のいずれか一項に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩であって、式中、各ｄは、独立して１又は２である、化合物。
【請求項４７】
疎水性側鎖を独立して含む前記少なくとも２つのアミノ酸が、グリシン、フェニルグリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、ノルロイシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ナフチルアラニン、プロリン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択され、フェニルグリシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ナフチルアラニン上の芳香族残基が、任意選択で置換されている、請求項４１〜４６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項４８】
疎水性側鎖を独立して含む前記少なくとも２つのアミノ酸が、フェニルアラニン、ナフチルアラニン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項４７に記載の化合物。
【請求項４９】
疎水性側鎖を独立して含む前記少なくとも２つのアミノ酸が、連続アミノ酸である、請求項４１〜４８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５０】
ＡＡ１は、Ｌアルギニンであり、
ＡＡ２は、Ｌ−アルギニンであり、
ＡＡ３は、Ｌ−アルギニンであり、
ＡＡ４は、Ｌ−フェニルアラニンであり、
ＡＡ５は、Ｌフェニルアラニンであり、
ｍ、ｎ、ｐ、及びｑは、各々０である、請求項４１〜４９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５１】
ＡＡ１は、Ｌ−フェニルアラニンであり、
ＡＡ２は、Ｌ−ナフチルアラニンであり、
ＡＡ３は、Ｌ−アルギニンであり、
ＡＡ４は、Ｌ−アルギニンであり、
ＡＡ５は、Ｌ−アルギニンであり、
ｍは、１であり、ＡＡ６は、Ｌ−アルギニンであり、
ｎ、ｐ、及びｑは、各々０である、請求項４１〜４９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５２】
ＡＡ１は、Ｌ−アルギニンであり、
ＡＡ２は、Ｌ−アルギニンであり、
ＡＡ３は、Ｌ−アルギニンであり、
ＡＡ４は、Ｌ−アルギニンであり、
ＡＡ５は、Ｌ−ナフチルアラニンであり、
ｍは、１であり、ＡＡ６は、Ｌ−フェニルアラニンであり、
ｎ、ｐ、及びｑは、各々０である、請求項４１〜４９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５３】
少なくとも３つの連続アミノ酸が、交互のキラリティを有する、請求項４１〜４９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５４】
交互のキラリティを有する前記少なくとも３つの連続アミノ酸が、アルギニンである、請求項５３に記載の化合物。
【請求項５５】
ＡＡ１は、Ｄ−フェニルアラニンであり、
ＡＡ２は、Ｌ−ナフチルアラニンであり、
ＡＡ３は、Ｌ−アルギニンであり、
ＡＡ４は、Ｄ−アルギニンであり、
ＡＡ５は、Ｌ−アルギニンであり、
ｍは、１であり、ＡＡ６は、Ｄ−アルギニンであり、
ｎ、ｐ、及びｑは、各々０である、請求項５４に記載の化合物。
【請求項５６】
ＡＡ１は、Ｄ−フェニルアラニンであり、
ＡＡ２は、Ｌ−ナフチルアラニンであり、
ＡＡ３は、Ｌ−アルギニンであり、
ＡＡ４は、Ｄ−アルギニンであり、
ＡＡ５は、Ｌ−アルギニンであり、
ｍ及びｎは、各々１であり、ＡＡ６は、Ｄ−アルギニンであり、ＡＡ７は、Ｌ−アルギニンであり、
ｐ及びｑは、各々０である、請求項５４に記載の化合物。
【請求項５７】
ＡＡ１は、Ｄ−フェニルアラニンであり、
ＡＡ２は、Ｌ−ナフチルアラニンであり、
ＡＡ３は、Ｌ−アルギニンであり、
ＡＡ４は、Ｄ−アルギニンであり、
ＡＡ５は、Ｌ−アルギニンであり、
ｍ及びｎは、各々１であり、ＡＡ６は、Ｄ−アルギニンであり、ＡＡ７は、Ｌ−フェニルアラニンであり、
ｐ及びｑは、各々０である、請求項５４に記載の化合物。
【請求項５８】
Ｘｎ中の前記ペプチド配列が、少なくとも１つのタンパク質−タンパク質相互作用を阻害する、請求項４１〜５７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５９】
前記タンパク質−タンパク質相互作用が、κＢキナーゼ（ＩＫＫ）複合体と、調節タンパク質ＮＦ−κＢ必須修飾因子（ＮＥＭＯ）との間の相互作用である、請求項５８に記載の化合物。
【請求項６０】
Ｘｎ中の前記ペプチド配列が、Ｒａｓ、ＰＴＰ１  Ｂ、Ｐｉｎ  １、Ｇｒｂ２  ＳＨ２、ＭＤＭ２、又はそれらの組み合わせに対する阻害剤である、請求項５８に記載の化合物。
【請求項６１】
Ｘｎ中のペプチド配列が、ペプチジルであり、野生型ペプチドリガンド又はペプチド模倣体である、請求項４１〜５７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６２】
式ＸＩに従う化合物であって、
【化１５】
2020502051.tif 000082
式中、
各例においてＹは、独立してＣＨ、Ｎ、Ｏ、又はＳであり、４個以下のＹが、Ｎ、Ｏ、Ｓ、又はそれらの組み合わせであり、
Ｚは、ＯＲａ、水素、ハロゲン、カルボシクリル、ヘテロシクリル、又はアミノ酸であり、
各例においてＲは、独立してアルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、又はアミノ酸であり、
Ｒａは、独立してＨ、Ｃ（Ｏ）アルキル、アルキル、アルケニル、アルキニル、炭素環、又はヘテロシクリルである、化合物。
【請求項６３】
各Ｙが、独立してＣＨである、請求項６２に記載の化合物。
【請求項６４】
前記化合物が、式ＸＩ−Ａに従う構造を有する、請求項６３に記載の化合物。
【化１６】
2020502051.tif 000083
【請求項６５】
各Ｒが、独立してアリール又はヘテロアリールである、請求項６４に記載の化合物。
【請求項６６】
前記化合物が、式ＸＩ−Ｂに従う構造を有し、
【化１７】
2020502051.tif 000084
式中、各例においてＱは、独立してＣＨ又はＮである、請求項６４に記載の化合物。
【請求項６７】
Ｚが、ＯＨである、請求項６６に記載の化合物。
【請求項６８】
前記化合物が、以下の構造を有する、請求項６６に記載の化合物。
【化１８】
2020502051.tif 000085
【請求項６９】
ＡＡ１、ＡＡ２、ＡＡ３、ＡＡ４、ＡＡ５、ＡＡ６、ＡＡ７、ＡＡ８、及びＡＡ９が、配列番号６２〜配列番号１４６から選択される、請求項１８〜３８又は４１〜６１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７０】
二環式ペプチドであって、（ａ）細胞膜透過ペプチド配列（Ｘｍ）を含む第１の環状ペプチドと、（ｂ）ペプチジルリガンド（Ｘｎ）を含む第２の環状ペプチドと、（ｃ）前記第１の環状ペプチド又は前記第２の環状ペプチドのうちの少なくとも１つを形成する少なくとも１つのジスルフィド結合であって、前記第１の環状ペプチドは、前記第２の環状ペプチドに接合している、ジスルフィド結合と、を含む二環式ペプチド。
【請求項７１】
Ｘｍが、以下のペプチド配列を含み、
−ＡＡ１−ＡＡ２−ＡＡ３−ＡＡ４−ＡＡ５−（ＡＡ６）ｍ−（ＡＡ７）ｎ−（ＡＡ８）ｐ−（ＡＡ９）ｑ−
式中、
ＡＡ１、ＡＡ２、ＡＡ３、ＡＡ４、ＡＡ５、ＡＡ６、ＡＡ７、ＡＡ８、及びＡＡ９は、各々独立して、アミノ酸であり、任意選択で置換されており、少なくとも３つのアミノ酸は、アルギニンであり、少なくとも２つのアミノ酸は、疎水性側鎖を独立して含み、
ｍ、ｎ、ｐ、及びｑは、独立して０及び１から選択される、請求項７０に記載の二環式ペプチド。
【請求項７２】
Ｘｍ及びＸｎに直接又は間接的に接合された結合部分を更に含む、請求項７０に記載の二環式ペプチド。
【請求項７３】
Ｘｍが、前記結合部分を介して環化され、Ｘｎの前記Ｃ末端又はＮ末端が、前記結合部分に接合され、Ｘｎが、前記ジスルフィド結合を介して環化され、それによって前記二環式ペプチドを形成する、請求項７２に記載の二環式ペプチド。
【請求項７４】
前記結合部分が、前記第１の環状ペプチド中のアミノ酸の側鎖に接合され、Ｘｎの前記Ｃ末端又はＮ末端が、前記結合部分に接合され、Ｘｎが、前記ジスルフィド結合を介して環化され、それによって前記二環式ペプチドを形成する、請求項７２に記載の二環式ペプチド。
【請求項７５】
前記二環式ペプチドが、第１のジスルフィド結合及び第２のジスルフィド結合を含む、請求項７２に記載の二環式ペプチド。
【請求項７６】
前記結合部分が、前記第１のジスルフィド結合を形成する第１の置換基と、前記第２のジスルフィド結合を形成する第２置換基とを含む、請求項７５に記載の二環式ペプチド。
【請求項７７】
Ｘｍが前記第１のジスルフィド結合を介して環化され、Ｘｎが前記第２のジスルフィド結合を介して環化され、それによって前記二環式ペプチドを形成する、請求項７６に記載の二環式ペプチド。
【請求項７８】
前記結合部分が、前記第１の環状ペプチドの前記側鎖に接合され、Ｘｎが、前記第１のジスルフィド結合及び前記第２のジスルフィド結合を介して環化され、それによって前記二環式ペプチドを形成する、請求項７６に記載の二環式ペプチド。
【請求項７９】
Ｘｍの前記Ｃ末端又はＮ末端が、前記結合部分に接合され、Ｘｍが、前記第１のジスルフィド結合を介して環化され、Ｘｎの前記Ｃ末端又はＮ末端が、前記結合部分に接合され、Ｘｎが、前記第２のジスルフィド結合を介して環化され、それによって前記二環式ペプチドを形成する、請求項７６に記載の二環式ペプチド。
【請求項８０】
Ｘｎの前記Ｃ末端又はＮ末端が、前記結合部分に接合され、Ｘｍが、前記第１のジスルフィド結合を介して環化され、Ｘｎが、前記第２のジスルフィド結合を介して環化され、それによって前記二環式ペプチドを形成する、請求項７６に記載の二環式ペプチド。
【請求項８１】
前記二環式ペプチドが、第３のジスルフィド結合を含む、請求項７５に記載の二環式ペプチド。
【請求項８２】
リンカー部分が、前記第１のジスルフィド結合を形成する第１の置換基と、前記第２のジスルフィド結合を形成する第２の置換基と、前記第３のジスルフィド結合を形成する第の３置換基と、を含む、請求項８１に記載の二環式ペプチド。
【請求項８３】
Ｘｍが、Ｘｎに融合され、それによって融合Ｘｍ−Ｘｎペプチドを形成し、前記結合部分が、前記第３のジスルフィド結合を介して前記融合Ｘｍ−Ｘｎプレプチドに接合され、Ｘｍが、前記第１のジスルフィド結合を介して環化され、Ｘｎが、前記第２のジスルフィド結合を介して環化され、それによって前記二環式ペプチドを形成する、請求項８２に記載の二環式ペプチド。
【請求項８４】
前記二環式ペプチドが、第４のジスルフィド結合を含む、請求項８１に記載の二環式ペプチド。
【請求項８５】
前記リンカー部分が、前記第１のジスルフィド結合を形成する第１の置換基と、前記第２のジスルフィド結合を形成する第２の置換基と、前記第３のジスルフィド結合を形成する第３の置換基と、第４のジスルフィド結合を形成する第４の置換基と、を含む、請求項８４に記載の二環式ペプチド。
【請求項８６】
Ｘｍが、前記第１のジスルフィド結合及び前記第２のジスルフィド結合を介して環化され、Ｘｎが、前記第３のジスルフィド結合及び前記第４のジスルフィド結合を介して環化され、それによって前記二環式ペプチドを形成する、請求項８５に記載の二環式ペプチド。
【請求項８７】
式１〜１２のうちのいずれかに従う構造を有し、
【表１−１】
2020502051.tif 000086
【表１−２】
2020502051.tif 000087
式中、
各発生においてＡＡＳは、独立してＪとジスルフィド結合を形成する部分であり、
Ｌ−Ｊは、結合部分であり、
Ｊは、存在しないか、又はアルキル、Ｎ−アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、若しくはヘテロシクリルであり、これらの各々は、各発生においてＡＡＳとジスルフィド結合を独立して形成する少なくとも２つの置換基で独立して置換されており、
Ｌは、存在しないか、又はＸｍ、Ｘｎ、若しくはそれらの組み合わせのアミノ酸にＡＡＳを結合する部分であり、
各例においてＳＳは、ジスルフィド結合を表す、請求項７０〜８６のいずれかに記載の二環式ペプチド。
【請求項８８】
前記二環式ペプチドが、式Ｉ、ＩＩ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩ、ＩＸ、Ｘ、及びＸＩＩのうちのいずれかに従う構造を有する、請求項７０〜８７のいずれかに記載の二環式ペプチド。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、２０１６年１１月９日に出願された米国特許出願第６２／４１９，７８１号、２０１６年１１月２２日に出願された米国特許出願第６２／４２５，５５０号、及び２０１６年１２月２２日に出願された米国特許出願第６２／４３８，１４１号の優先権を主張し、これらの各々は、その全体が参照による本明細書に組み込まれる。
【０００２】
（連邦基金研究に関する陳述）
本発明は、国立衛生研究所によって与えられた助成金番号ＧＭ０６２８２０、ＧＭ１１０２０８、及びＧＭ１２２４５９の下、政府支援によってなされた。政府は、本発明において一定の権利を有する。
【０００３】
小分子薬と比較して、ペプチドは、高度に選択的かつ有効であり、同時に比較的安全かつ忍容性が高い。ペプチドの特に刺激的な用途は、タンパク質−タンパク質相互作用（ＰＰＩ）の阻害であり、これは依然として小分子に対する困難な課題である。この結果、医薬の研究開発におけるペプチドへの関心が高まっており、現在約１４０のペプチド治療薬剤が臨床試験で評価されている。しかしながら、ペプチドは、本質的にタンパク質分解を受けやすい。加えて、ペプチドは、一般に細胞膜に対して不透過性であり、それらの用途を細胞外標的に大きく制限する。ペプチド骨格のＮ−メチル化及び分子内水素結合の形成は、特定の環状ペプチドのタンパク質分解安定性及び膜透過性を改善することが示されており（Ｔ．Ｒｅｚａｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００６，１２８，１４０７３）、ペプチド薬の代謝安定性及び細胞膜透過性の両方を増大させるための代替方法が明らかに必要とされている。
【０００４】
ＮＦ−κＢは、免疫、ストレス、炎症反応、細胞増殖、及びアポトーシスに関与する多数の遺伝子産物の発現を制御する転写因子である（Ａ．Ｏｅｃｋｉｎｇｈａｕｓ，Ｓ．Ｇｈｏｓｈ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂ．Ｐｅｒｓｐｅｃｔ．Ｂｉｏｌ．２００９，１，ａ００００３４）．ＮＦ−κＢシグナル伝達の異常な活性化は、とりわけ、多数の自己免疫疾患（例えば、関節リウマチ）及び癌（例えば、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫）に関与している（Ｖ．Ｂａｕｄ，Ｍ．Ｋａｒｉｎ，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．２００９，８，３３、Ｓ．−Ｃ．Ｓｕｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１３，３４，２８２、Ｆ．Ｄ．Ｈｅｒｒｉｎｇｔｏｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｓｃｒｅｅｎ．２０１６，２１，２２３、Ｇ．Ｃｉｌｄｉｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．２０１６，２２，４１４）。古典的なＮＦ−κＢシグナル伝達は、κＢ（ＩκＢ）−キナーゼ（ＩＫＫ）複合体の阻害剤と調節タンパク質ＮＦ−κＢ必須修飾因子（ＮＥＭＯ）との間の相互作用によって媒介される（Ｓ．Ｙａｍａｏｋａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  １９９８，２６，１２３１、Ｄ．Ｍ．Ｒｏｔｈｗａｒｆ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  １９９８，３９５，２９７）。ＮＥＭＯへの結合は、ＩＫＫを活性化し、これは次にリン酸化ＩκＢを活性化し、ＩκＢのプロテアソーム分解及び活性ＮＦ−κＢの放出を促進する。ＮＦ−κＢシグナル伝達経路の様々な工程を標的とする修飾因子が報告されており、それらのいくつかは、臨床へと進歩している（Ｖ．Ｂａｕｄ，Ｍ．Ｋａｒｉｎ，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．２００９，８，３３、Ｓ．−Ｃ．Ｓｕｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１３，３４，２８２、Ｆ．Ｄ．Ｈｅｒｒｉｎｇｔｏｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｓｃｒｅｅｎ．２０１６，２１，２２３、Ｇ．Ｃｉｌｄｉｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．２０１６，２２，４１４、Ｓ．Ｃ．Ｇｕｐｔａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．２０１１，１７９９，７７５、Ｔ．Ｍ．Ｈｅｒｎｄｏｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０１３，１９，４５５９）。ＮＦ−κＢ活性を改善するための１つの魅力的な方法は、ＩＫＫ−ＮＥＭＯ相互作用を選択的に破壊することである。これまでの研究では、弱いＮＥＭＯ阻害剤（ＫＤ〜３７μＭ）、Ａｎｔｐ−ＮＢＤ（表６、ペプチド１）を生成しており、細胞膜透過ペプチド（ＣＰＰ）、Ａｎｔｐ（Ｍ．Ｊ．Ｍａｙ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２０００，２８９，１５５０）に共有結合したＩＫＫβの１１残基ＮＥＭＯ−結合ドメイン（ＮＢＤ）を含有する。興味深いことに、Ａｎｔｐ−ＮＢＤは、異なる炎症誘発性刺激によって刺激されたＩＫＫ活性を遮断するが、基底ＮＦ−κＢ活性に影響を与えないため、したがって異常なＮＦ−κＢ活性を低減するための潜在的に安全かつ有効な機構を提供する（Ｊ．Ｍａｙ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２０００，２８９，１５５０）。いくつかの前臨床研究では、Ａｎｔｐ−ＮＢＤは、マウス及びイヌモデルにおけるデュシェンヌ型筋ジストロフィ及び大細胞型Ｂ細胞リンパ腫の治療に���体内有効性を示した（Ｅ．Ｊｉｍｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．２００４，１０，６１７、Ｓ．Ｄａｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００４，２７９，３７２１９、Ｗ．Ｓｈｉｂａｔａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００７，１７９，２６８１、Ｓ．Ｈ．Ｄａｖｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００７，１７９，７８５２、Ａ．Ｇａｕｒｎｉｅｒ−Ｈａｕｓｓｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０１１，１７，４６６１、Ｊ．Ｍ．Ｐｅｔｅｒｓｏｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．２０１１，１７，５０８、Ｄ．Ａ．Ｄｅｌｆｉｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．２０１１，９，６８、Ｄ．Ｐ．Ｒｅａｙ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．Ｄｉｓ．２０１１，４３，５９８、Ｊ．Ｎ．Ｋｏｒｎｅｇａｙ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｋｅｌｅｔ．Ｍｕｓｃｌｅ  ２０１４，４，１８、Ｇ．Ｈａｂｉｎｅｚａ  Ｎｄｉｋｕｙｅｚｅ，ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ，２０１４，９，ｅ９５４０４）。しかしながら、臨床的有用性を実現するために、Ａｎｔｐ−ＮＢＤは、そのＮＥＭＯ結合親和性、代謝安定性、及び細胞膜透過性の改善から有意に利益をもたらすであろう。したがって、ＮＦ−κＢシグナル伝達を調節するための新しい組成物及び方法が必要とされている。本明細書に開示される組成物及び方法は、これら及び他の必要性に対処する。
【発明の概要】
【０００５】
本明細書に開示されるのは、化合物、組成物、そのような化合物及び組成物の製造及び使用方法である。本明細書に開示される様々な実施形態では、二環式ペプチド、そのような二環式ペプチドを含む組成物、並びにそれらを作製及び使用する方法である。
【０００６】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される二環式ペプチドは、（ａ）細胞膜透過ペプチド配列（Ｘｍ）を含む第１の環状ペプチドと、（ｂ）ペプチジルリガンド（Ｘｎ）を含む第２の環状ペプチドと、前記第１の環状ペプチド又は前記第２の環状ペプチドのうちの少なくとも１つを形成する少なくとも１つのジスルフィド結合であって、第１の環状ペプチドは、第２の環状ペプチドに接合されている、ジスルフィド結合と、を含む。
【０００７】
様々な実施形態では、Ｘｍは、以下のペプチド配列を含み、
−ＡＡ１−ＡＡ２−ＡＡ３−ＡＡ４−ＡＡ５−（ＡＡ６）ｍ−（ＡＡ７）ｎ−（ＡＡ８）ｐ−（ＡＡ９）ｑ−
式中、
ＡＡ１、ＡＡ２、ＡＡ３、ＡＡ４、ＡＡ５、ＡＡ６、ＡＡ７、ＡＡ８、及びＡＡ９は、各々独立して、アミノ酸であり、任意選択で置換されており、少なくとも３つのアミノ酸は、アルギニンであり、少なくとも２つのアミノ酸は、疎水性側鎖を独立して含み、
ｍ、ｎ、ｐ、及びｑは、独立して、０及び１から選択される。
【０００８】
いくつかの実施形態では、二環式ペプチドは、Ｘｍ及びＸｎに直接又は間接的に接合された結合部分を含む。いくつかの実施形態では、Ｘｍは、結合部分を介して環化され、ＸｎのＣ末端又はＮ末端は、結合部分に接合され、Ｘｎは、ジスルフィド結合を介して環化され、それによって二環式ペプチドを形成する。他の実施形態では、結合部分は、第１の環状ペプチド中のアミノ酸の側鎖に接合され、ＸｎのＣ末端又はＮ末端は、結合部分に接合され、Ｘｎは、ジスルフィド結合を介して環化され、それによって二環式ペプチドを形成する。
【０００９】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される二環式ペプチドは、第１のジスルフィド結合及び第２のジスルフィド結合を含む。他の実施形態では、結合部分は、第１のジスルフィド結合を形成する第１の置換基及び第２のジスルフィド結合を形成する第２の置換基を含む。いくつかの実施形態では、Ｘｍは、第１のジスルフィド結合を介して環化され、Ｘｎは、第２のジスルフィド結合を介して環化され、それによって二環式ペプチドを形成する。更に他の実施形態では、結合部分は、第１の環状ペプチドの側鎖に接合され、Ｘｎは、第１のジスルフィド結合及び第２のジスルフィド結合を介して環化され、それによって二環式ペプチドを形成する。更に他の実施形態では、ＸｍのＣ末端又はＮ末端は、結合部分に接合され、Ｘｍは、第１のジスルフィド結合を介して環化され、ＸｎのＣ末端又はＮ末端は、結合部分に接合され、Ｘｎは、第２のジスルフィド結合を介して環化され、それによって二環式ペプチドを形成する。なお更なる実施形態では、ＸｎのＣ末端又はＮ末端は、結合部分に接合され、Ｘｍは、第１のジスルフィド結合を介して環化され、Ｘｎは、第２のジスルフィド結合を介して環化され、それによって二環式ペプチドを形成する。
【００１０】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される二環式ペプチドは、第３のジスルフィド結合を含む。他の実施形態では、リンカー部分は、第１のジスルフィド結合を形成する第１置換基と、第２のジスルフィド結合を形成する第２の置換基と、第３のジスルフィド結合を形成する第３の置換基と、を含む。更に他の実施形態では、Ｘｍが、Ｘｎに融合され、それによって融合Ｘｍ〜Ｘｎペプチドを形成し、結合部分が、第３のジスルフィド結合を介して融合Ｘｍ〜Ｘｎプレペプチドに接合され、Ｘｍは、第１のジスルフィド結合を介して環化され、Ｘｎは、第２のジスルフィド結合を介して環化され、それによって二環式ペプチドを形成する。
【００１１】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される二環式ペプチドは、第４のジスルフィド結合を含む。いくつかの実施形態では、リンカー部分は、第１のジスルフィド結合を形成する第１の置換基と、第２のジスルフィド結合を形成する第２の置換基と、第３のジスルフィド結合を形成する第３の置換基と、第４のジスルフィド結合を形成する第４の置換基と、を含む。他の実施形態では、Ｘｍは、第１のジスルフィド結合及び第２のジスルフィド結合を介して環化され、Ｘｎは、第３のジスルフィド結合及び第４のジスルフィド結合を介して環化され、それによって二環式ペプチドを形成する。
【００１２】
様々な実施形態において、本明細書に開示される二環式ペプチドは、式１〜１２のうちのいずれかに従う構造を有する。
【００１３】
【表１−１】
2020502051.tif 000003
【表１−２】
2020502051.tif 000004
式中、
各発生においてＡＡＳは、独立してＪとジスルフィド結合を形成する部分であり、
Ｌ〜Ｊは、結合部分であり、
Ｊは、存在しないか、又はアルキル、Ｎ−アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、若しくはヘテロシクリルであり、これらの各々は、各発生においてＡＡＳとジスルフィド結合を独立して形成する少なくとも２つの置換基で独立して置換されており、
Ｌは、存在しないか、又はＸｍ、Ｘｎ、若しくはそれらの組み合わせのアミノ酸にＡＡＳを結合する部分であり、
各例においてＳＳは、ジスルフィド結合を表す。
【００１４】
いくつかの実施形態では、上記の二環式ペプチドは、式Ｉ、ＩＩ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩ、ＩＸ、Ｘ、及びＸＩＩのうちのいずれかに従う構造を有し、これらは各々以下により詳細に記載される。
【００１５】
実施形態において、本明細書に開示されるのは、式Ｉ又はＩＩを含む二環式ペプチドであり、
【００１６】
【化１】
2020502051.tif 000005
式中、Ｘｍ及びＸｎは、独立して、１〜２０個のアミノ酸の配列を含み、Ｒ１は、ＯＨ、ＯＲ２、又はＮＨＲ２であり、Ｒ２は、Ｃ１〜２０アルキル、Ｃ６〜１０アリール、若しくはヘテロアリール、アミノ酸、２〜２０個のアミノ酸のペプチド配列、検出可能な部分、又は固体支持体である。
【００１７】
本明細書で使用するとき、Ｘｍは、細胞膜透過ペプチド配列を指す。いくつかの実施形態では、Ｘｍは、長さが５〜１０個のアミノ酸である。更なる実施形態では、Ｘｍ中の少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は少なくとも３つのアミノ酸は、疎水性側鎖を有する。特定の実施形態では、Ｘｍは、１つ以上のフェニルアラニン、ナフチルアラニン、トリプトファン、又はそれらの類似体若しくは誘導体を含む。いくつかの実施形態では、Ｘｍは、少なくとも１つのアルギニン又はその類似体又は誘導体を含む。他の実施形態では、Ｘｍは、表２に列挙される配列（配列番号６２〜配列番号１４６）を含む。特定の実施形態では、Ｘｍは、ＲＲＲＲΦＦ又はＦΦＲＲＲＲであるか、又はそれを含む。
【００１８】
本明細書で使用するとき、Ｘｎは、カーゴ配列を指す。いくつかの実施形態では、Ｘｎは、表５に列挙される配列（配列番号１４７〜配列番号１５９）を含む。いくつかの実施形態では、二環式ペプチドは、表６に列挙される配列（配列番号１６０〜配列番号１６７）を有する。
【００１９】
本明細書に開示される追加の例は、式ＩＩＩのペプチドであり、
ＢＭＢ−（ＡＡｎ）ｕ
ＩＩＩ
式中、Ｎは、５〜２０の整数であり、各ＡＡｎは、独立して、天然又は非天然アミノ酸残基であり、少なくとも２つのＡＡｎ残基がシステインであり、ＢＭＢは、３，５−ビス（メルカプトメチル）安息香酸残基である。いくつかの具体例では、ｕは、４〜２０、５〜９、６〜９、７〜８、又は８〜９である。
【００２０】
本明細書では、様々な実施形態において、二環式ペプチドを作製する方法であり、
（ａ）８〜４０個のアミノ酸を有する固体支持ペプチドを式ＩＶの化合物と接触させることであって、少なくとも２つのアミノ酸が、システイン、ホモシステイン、及びチオール基を有するアミノ酸からなる群から独立して選択され、
【００２１】
【化２】
2020502051.tif 000006
式中、Ｑ１及びＱ２は、互いに独立してＣＨ又はＮから選択される、接触させることと、
（ｂ）前記ペプチドを前記固体支持体から切断することと、を含む。
【００２２】
本開示の他の実施形態は、式Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩ、ＩＸ、Ｘ、若しくはＸＩＩを含む、二環式ペプチド、
【００２３】
【化３】
2020502051.tif 000007
又はその薬学的に許容される塩であって、
式中、
ＡＡ１、ＡＡ２、ＡＡ３、ＡＡ４、ＡＡ５、ＡＡ６、ＡＡ７、ＡＡ８、及びＡＡ９は、各々独立してアミノ酸であり、少なくとも３つのアミノ酸は、アルギニンであり、少なくとも２つのアミノ酸は、疎水性側鎖を独立して含み、
ｎ、ｐ、及びｑは、独立して０及び１から選択され、
ＡＡ１０及びＡＡ１１は、各々独立して任意選択で置換されたアミノ酸であり、
ｂ及びｃは、独立して０〜２０の整数であり、
各発生においてＡＡＳは、独立してＪとジスルフィド結合を形成する部分であり、
Ｊは、アルキル、Ｎ−アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、又はヘテロシクリルであり、これらの各々は、独立して、各発生においてＡＡＳとジスルフィド結合を形成する少なくとも２つの置換基で独立して置換されており、
各例においてｓｓは、ジスルフィド結合を表し、
Ｌは、Ｊを、アミノ酸、Ｘｎ、又はそれらの組み合わせに結合する部分であり、
Ｘｎは、１〜２０個のアミノ酸を有するペプチド配列を含むカーゴ部分である。
【００２４】
いくつかの実施形態では、Ｊは、Ｎ−アルキル、アリール、又はヘテロアリールであり、これらの各々は、独立して、各発生においてＡＡＳとジスルフィド結合を形成する少なくとも２つの置換基で独立して置換される。他の実施形態では、Ｊは以下である。
【００２５】
【化４】
2020502051.tif 000008
【００２６】
いくつかの実施形態では、Ｌは、結合、アミノ酸、
【００２７】
【化５】
2020502051.tif 000009
であり、式中、ａは、０〜１０の整数である。
【００２８】
いくつかの実施形態では、各ＡＡＳは、独立して、
【００２９】
【化６】
2020502051.tif 000010
であり、式中、ＡＡＳのＣ末端は、アミド結合を形成するか、又はＲ１であり、Ｒ１は、ＯＨ、ＯＲ２、又はＮＨＲ２であり、Ｒ２は、アルキル、アリール、ヘテロアリール、アミノ酸、２〜２０個のアミノ酸のペプチド配列、検出可能な部分、又は固体支持体である。
【００３０】
いくつかの実施形態では、以下からなる群から選択される、二環式ペプチド
【００３１】
【化７】
2020502051.tif 000011
【００３２】
【化８】
2020502051.tif 000012
又はその薬学的に許容される塩であって、
式中、各ｄは、独立して１又は２であり、
式中、Ｒ１はＯＨ、ＯＲ２、ＮＨＲ２であり、Ｒ２は、アルキル、アリール、ヘテロアリール、アミノ酸、２〜２０個のアミノ酸のペプチド配列、検出可能な部分、又は固体支持体である。
【００３３】
いくつかの実施形態では、疎水性側鎖を独立して含む少なくとも２つのアミノ酸は、グリシン、フェニルグリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、ノルロイシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ナフチルアラニン、プロリン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択され、フェニルグリシン、フェニルアラニン、トリプトファン、又はナフチルアラニン上の芳香族側鎖は、ハロゲンで各々任意選択で置換されている。他の実施形態では、疎水性側鎖を独立して含む少なくとも２つのアミノ酸は、フェニルアラニン、ナフチルアラニン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。更に他の実施形態では、疎水性残基を独立して含む少なくとも２つのアミノ酸は、連続アミノ酸である。
【００３４】
いくつかの実施形態では、
ＡＡ１は、Ｌアルギニンであり、
ＡＡ２は、Ｌ−アルギニンであり、
ＡＡ３は、Ｌ−アルギニンであり、
ＡＡ４は、Ｌ−フェニルアラニンであり、
ＡＡ５は、Ｌフェニルアラニンであり、
ｍ、ｎ、ｐ、及びｑは、各々０であり、
又は
ＡＡ１は、Ｌ−フェニルアラニンであり、
ＡＡ２は、Ｌ−ナフチルアラニンであり、
ＡＡ３は、Ｌ−アルギニンであり、
ＡＡ４は、Ｌ−アルギニンであり、
ＡＡ５は、Ｌ−アルギニンであり、
ｍは、１であり、ＡＡ６は、Ｌ−アルギニンであり、
ｎ、ｐ、及びｑは、各々０であり、
又は
ＡＡ１は、Ｌ−アルギニンであり、
ＡＡ２は、Ｌ−アルギニンであり、
ＡＡ３は、Ｌ−アルギニンであり、
ＡＡ４は、Ｌ−アルギニンであり、
ＡＡ５は、Ｌ−ナフチルアラニンであり、
ｍは、１であり、ＡＡ６は、Ｌ−フェニルアラニンであり、
ｎ、ｐ、及びｑは、各々０である。
【００３５】
いくつかの実施形態では、少なくとも３つの連続アミノ酸は、交互のキラリティを有する。他の実施形態では、交互のキラリティを有する少なくとも３つの連続アミノ酸は、アルギニンである。
【００３６】
いくつかの実施形態では、
ＡＡ１は、Ｄ−フェニルアラニンであり、
ＡＡ２は、Ｌ−ナフチルアラニンであり、
ＡＡ３は、Ｌ−アルギニンであり、
ＡＡ４は、Ｄ−アルギニンであり、
ＡＡ５は、Ｌ−アルギニンであり、
ｍは、１であり、ＡＡ６は、Ｄ−アルギニンであり、
ｎ、ｐ、及びｑは、各々０であり、
又は
ＡＡ１は、Ｄ−フェニルアラニンであり、
ＡＡ２は、Ｌ−ナフチルアラニンであり、
ＡＡ３は、Ｌ−アルギニンであり、
ＡＡ４は、Ｄ−アルギニンであり、
ＡＡ５は、Ｌ−アルギニンであり、
ｍ及びｎは、各々１であり、ＡＡ６は、Ｄ−アルギニンであり、ＡＡ７は、Ｌ−アルギニンであり、
ｐ及びｑは、各々０であり、
又は
ＡＡ１は、Ｄ−フェニルアラニンであり、
ＡＡ２は、Ｌ−ナフチルアラニンであり、
ＡＡ３は、Ｌ−アルギニンであり、
ＡＡ４は、Ｄ−アルギニンであり、
ＡＡ５は、Ｌ−アルギニンであり、
ｍ及びｎは、各々１であり、ＡＡ６は、Ｄ−アルギニンであり、ＡＡ７は、Ｌ−フェニルアラニンであり、
ｐ及びｑは、各々０である。
【００３７】
他の実施形態では、ＡＡ１、ＡＡ２、ＡＡ３、ＡＡ４、ＡＡ５、ＡＡ６、ＡＡ７、ＡＡ８、及びＡＡ９は、配列番号６２〜配列番号１４６から選択される。
【００３８】
いくつかの実施形態では、Ｘｎ中のペプチド配列は、少なくとも１つのタンパク質−タンパク質相互作用を阻害する。他の実施形態では、タンパク質−タンパク質相互作用は、κＢキナーゼ（ＩＫＫ）複合体と、調節タンパク質ＮＮＦ−κＢ必須修飾剤（ＮＥＭＯ）との間の相互作用である。更に他の実施形態では、Ｘｎ中のペプチド配列は、ＲＡＳ、ＰＴＰ１Ｂ、Ｐｉｎ１、Ｇｒｂ２ＳＨ２、ＭＤＭ２、又はそれらの組み合わせに対する阻害剤である。更に他の実施形態では、Ｘｎ中のペプチド配列は、野生型ペプチジルリガンド又はペプチド模倣体である。
【００３９】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、式Ｖ−Ａ、ＶＩ−Ａ、ＶＩＩ−Ａ、ＶＩＩＩ−Ａ、ＩＸ−Ａ、Ｘ−Ａ、若しくはＸＩＩ−Ａ及びＸＩＩ−Ｂに従う化合物、
【００４０】
【化９】
2020502051.tif 000013
又はその薬学的に許容される塩であって、
式中、
ＡＡ１、ＡＡ２、ＡＡ３、ＡＡ４、ＡＡ５、ＡＡ６、ＡＡ７、ＡＡ８、ＡＡ９、ＡＡ１０、及びＡＡ１１は、アミノ酸から独立して選択され、任意選択で置換されており、少なくとも３つのアミノ酸は、アルギニンであり、少なくとも２つのアミノ酸は、疎水性側鎖を独立して含み、
ｎ、ｐ、又はｑは、独立して、０及び１から選択され、
ｂ及びｃは独立して、０〜２０の整数である。
各発生においてＡＡＳ’は、独立してチオールを含む部分であり、
Ｊ’は、アルキル、Ｎ−アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、又はヘテロシクリルであり、これらは各々、少なくとも２つのチオール置換基で独立して置換されており、
Ｌは、ＡＡＳ’をアミノ酸、Ｘｎ、又はそれらの組み合わせに結合する任意選択の部分であり、
Ｘｎは、４〜２０個のアミノ酸を有するペプチド配列を含むカーゴ部分である。
【００４１】
いくつかの実施形態では、Ｊ’は、Ｎ−アルキル、アリール、又はヘテロアリールである。更なる実施形態では、Ｊ’は以下である。
【００４２】
【化１０】
2020502051.tif 000014
【００４３】
いくつかの実施形態では、Ｌは、存在しないか、アミノ酸、
【００４４】
【化１１】
2020502051.tif 000015
ｎ、ａは、０〜２０の整数である。
【００４５】
いくつかの実施形態では、各ＡＡＳ’が、各々独立しており、
【００４６】
【化１２】
2020502051.tif 000016
式中、ＡＡＳ’のＣ末端はアミド結合を形成するか、又はＲ１であり、Ｒ１はＯＨ、ＯＲ２、ＮＨＲ２であり、Ｒ２は、アルキル、アリール、ヘテロアリール、アミノ酸残基、２〜２０個のアミノ酸残基のペプチド配列、検出可能な部分、又は固体支持体である。
【００４７】
いくつかの実施形態では、
【００４８】
【化１３】
2020502051.tif 000017
又はその薬学的に許容される塩からなる群から選択される構造を有し、各ｄは、独立して１又は０である。
【００４９】
上記化合物の実施形態では、疎水性側鎖を独立して含む少なくとも２つのアミノ酸が、グリシン、フェニルグリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、ノルロイシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ナフチルアラニン、プロリン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択され、フェニルグリシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ナフチルアラニン上の芳香族残基が、任意選択で置換されている。他の実施形態では、疎水性側鎖を独立して含む少なくとも２つのアミノ酸は、フェニルアラニン、ナフチルアラニン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。更に他の実施形態では、疎水性側鎖を独立して含む少なくとも２つのアミノ酸は、連続アミノ酸である。
【００５０】
いくつかの実施形態では、
ＡＡ１は、Ｌアルギニンであり、
ＡＡ２は、Ｌ−アルギニンであり、
ＡＡ３は、Ｌ−アルギニンであり、
ＡＡ４は、Ｌ−フェニルアラニンであり、
ＡＡ５は、Ｌフェニルアラニンであり、
ｍ、ｎ、ｐ、及びｑは、各々０であり、
又は
ＡＡ１は、Ｌ−フェニルアラニンであり、
ＡＡ２は、Ｌ−ナフチルアラニンであり、
ＡＡ３は、Ｌ−アルギニンであり、
ＡＡ４は、Ｌ−アルギニンであり、
ＡＡ５は、Ｌ−アルギニンであり、
ｍは、１であり、ＡＡ６は、Ｌ−アルギニンであり、
ｎ、ｐ、及びｑは、各々０であり、
又は
ＡＡ１は、Ｌ−アルギニンであり、
ＡＡ２は、Ｌ−アルギニンであり、
ＡＡ３は、Ｌ−アルギニンであり、
ＡＡ４は、Ｌ−アルギニンであり、
ＡＡ５は、Ｌ−ナフチルアラニンであり、
ｍは、１であり、ＡＡ６は、Ｌ−フェニルアラニンであり、
ｎ、ｐ、及びｑは、各々０である。
【００５１】
いくつかの実施形態では、少なくとも３つの連続アミノ酸は、交互のキラリティを有する。他の実施形態では、交互のキラリティを有する少なくとも３つの連続アミノ酸は、アルギニンである。
【００５２】
いくつかの実施形態では、
ＡＡ１は、Ｄ−フェニルアラニンであり、
ＡＡ２は、Ｌ−ナフチルアラニンであり、
ＡＡ３は、Ｌ−アルギニンであり、
ＡＡ４は、Ｄ−アルギニンであり、
ＡＡ５は、Ｌ−アルギニンであり、
ｍは、１であり、ＡＡ６は、Ｄ−アルギニンであり、
ｎ、ｐ、及びｑは、各々０であり、
又は
ＡＡ１は、Ｄ−フェニルアラニンであり、
ＡＡ２は、Ｌ−ナフチルアラニンであり、
ＡＡ３は、Ｌ−アルギニンであり、
ＡＡ４は、Ｄ−アルギニンであり、
ＡＡ５は、Ｌ−アルギニンであり、
ｍ及びｎは、各々１であり、ＡＡ６は、Ｄ−アルギニンであり、ＡＡ７は、Ｌ−アルギニンであり、
ｐ及びｑは、各々０であり、
又は
ＡＡ１は、Ｄ−フェニルアラニンであり、
ＡＡ２は、Ｌ−ナフチルアラニンであり、
ＡＡ３は、Ｌ−アルギニンであり、
ＡＡ４は、Ｄ−アルギニンであり、
ＡＡ５は、Ｌ−アルギニンであり、
ｍ及びｎは、各々１であり、ＡＡ６は、Ｄ−アルギニンであり、ＡＡ７は、Ｌ−フェニルアラニンであり、
ｐ及びｑは、各々０である。
【００５３】
他の実施形態では、ＡＡ１、ＡＡ２、ＡＡ３、ＡＡ４、ＡＡ５、ＡＡ６、ＡＡ７、ＡＡ８、及びＡＡ９は、配列番号６２〜配列番号１４６から選択される。
【００５４】
いくつかの実施形態では、Ｘｎ中のペプチド配列は、少なくとも１つのタンパク質−タンパク質相互作用を阻害する。更なる実施形態では、タンパク質−タンパク質相互作用は、κＢ−キナーゼ（ＩＫＫ）複合体と、調節性タンパク質ＮＮＦ−κＢ必須修飾剤（ＮＥＭＯ）との間の相互作用である。他の実施形態では、Ｘｎ中のペプチド配列は、Ｒａｓ、ＰＴＰ１Ｂ、Ｐｉｎ１、Ｇｒｂ２  ＳＨ２、ＭＤＭ２、又はそれらの組み合わせに対する阻害剤である。更に他の実施形態では、Ｘｎ中のペプチド配列はペプチジルであり、野生型ペプチドリガンド又はペプチド模倣体である。
【００５５】
様々な実施形態では、式ＸＩに従う化合物であって、
【００５６】
【化１４】
2020502051.tif 000018
式中、
各例においてＹは、独立してＣＨ、Ｎ、Ｏ、又はＳであり、４個以下のＹが、Ｎ、Ｏ、Ｓ、又はそれらの組み合わせであり、
Ｚは、ＯＲａ、水素、ハロゲン、カルボシクリル、ヘテロシクリル、又はアミノ酸であり、
各例においてＲは、独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、又はアミノ酸であり、
Ｒａは、独立してＨ、Ｃ（Ｏ）アルキル、アルキル、アルケニル、アルキニル、炭素環、又はヘテロシクリルである。
【００５７】
いくつかの実施形態では、Ｙは、独立してＣＨである。他の実施形態では、化合物は、式ＸＩ−Ａに従う構造を有する。
【００５８】
【化１５】
2020502051.tif 000019
【００５９】
いくつかの実施形態では、各Ｒが、独立してアリール又はヘミアリールである。更なる実施形態では、化合物は、式ＸＩ−Ｂに従う構造を有し、
【００６０】
【化１６】
2020502051.tif 000020
式中、各例においてＱは、独立してＣＨ又はＮである。
【００６１】
いくつかの実施形態では、Ｚは、ＯＨである。他の実施形態では、化合物は以下の構造を有する。
【００６２】
【化１７】
2020502051.tif 000021
【００６３】
また、本明細書では、請求項１８〜３８のいずれか一項に記載の化合物を投与することを含む、細胞の細胞質に治療薬剤を送達する方法も開示される。
【００６４】
本明細書に開示されている二環式ペプチド及び薬学的担体を含む薬学的組成物も開示されている。
【００６５】
本明細書に開示される化合物又はその薬学的に許容される塩の有効量を被験体に投与することを含む、ヒトなどの被験体における障害を治療又は予防する方法も、本明細書に開示される。いくつかの例では、被験体はヒトなどの動物である。いくつかの例では、被験体は、障害の治療の必要性を有するものとして識別される。いくつかの例では、方法は障害を治療する。いくつかの例では、障害は、異常なＮＦ−κＢシグナル伝達に関連する。いくつかの例では、障害は、癌などの制御されていない細胞増殖と関連付けられる。いくつかの例では、障害は癌である。いくつかの例では、障害は、過敏性ボウル症候群などの炎症性障害である。いくつかの例では、障害は、リウマチ性関節炎、強直性脊椎炎、クローン病、乾癬、汗腺炎、及び難治性喘息から選択される障害などの自己免疫障害である。いくつかの更なる実施例では、本明細書に開示されるのは、デュシェンヌ型筋ジストロフィ又は大型Ｂ細胞リンパ腫を治療する方法である。
【００６６】
本明細書に開示されるのは、障害の治療のための薬候補を識別するための方法であって、本明細書に開示される化合物、本明細書に開示される方法によって調製された化合物、本明細書に開示されるライブラリ、又は障害に関連する受容体に開示される方法によって調製されたライブラリを曝露する工程と、ｂ）受容体と化合物又はライブラリとの間の反応を検出する工程と、ｃ）受容体と反応する化合物の同一性を決定する工程と、を含む、方法である。
【００６７】
本発明の態様は、システム法定クラスなどの特定の法定クラスに記載及び特許請求することができるが、これは単に便宜上のものであり、当業者は、本発明の各態様が任意の法定クラスで説明及び特許請求することができることを理解するであろう。特に明記しない限り、本明細書に記載される任意の方法は、その工程が特定の順序で実施されることを必要とすると解釈されることを決して意図するものではない。したがって、方法クレームが、その工程がたどる順序を実際に記載しておらず、又はその工程が特定の順序に限定されるべきである旨が特許請求の範囲又は明細書に具体的に明記されていない場合、いかなる点においても順序が推測されることを意図するものではない。これは、工程又は動作フローの配列に関する論理の問題、文法的な組織若しくは句読点に由来する平易な意味、又は本明細書に記載される態様の数若しくは種類を含む、解釈のための任意の可能な非表現型を保持する。
【図面の簡単な説明】
【００６８】
本明細書に組み込まれ、また本明細書の一部を構成する添付の図面は、態様を例証し、以下の説明と共に、方法及びシステムの原理を説明するよう機能する。
【図１Ａ】５μＭのＦＩＴＣ標識ペプチドｃＦΦＲ４（配列番号６８）又は１〜５で２時間処理した後のＨｅＬａ細胞のＭＦＩを示し、フローサイトメトリ分析によって決定される。ブランク、ペプチドなし。
【図１Ｂ】ＨＴＲＦ分析によってモニタされたペプチド１、４、及び５によるＮＥＭＯ−ＩＫＫγ相互作用の阻害を示す。
【図１Ｃ】ペプチド１、４、及び５によるＨＥＫ２９３細胞におけるＮＦ−κＢシグナル伝達のＴＮＦα誘導活性化の用量依存的阻害を示す。
【図１Ｄ】ペプチド１、４、及び６の血清安定性の比較を示す。報告されたデータは、３つの独立した実験の平均±ＳＤである。
【図２】可逆ペプチドの二重化方法である。ＧＳＨ、グルタチオン。
【図３−１】ＦＩＴＣ標識ペプチド２及び３の構造を示す。
【図３−２】ＦＩＴＣ標識ペプチド２及び３の構造を示す。
【図４−１】ペプチド４、５、及び６の構造を示す。
【図４−２】ペプチド４、５、及び６の構造を示す。
【図４−３】ペプチド４、５、及び６の構造を示す。
【図５Ａ】固相合成及びジエチルエーテルでの粉砕後の粗ペプチド４の精製を示す分取逆相ＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図５Ｂ】室温で２時間、リン酸緩衝液（ｐＨ７．４）中の５ｍＭグルタチオンのインキュベートする前後の精製ペプチド４の分析逆相ＨＰＬＣ及びＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＳ分析である。
【図５Ｃ】室温で２時間、リン酸緩衝液（ｐＨ７．４）中の５ｍＭグルタチオンのインキュベートする前後の精製ペプチド４の分析逆相ＨＰＬＣ及びＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＳ分析である。
【図６】ＨＴＲＦ分析によってモニタされるペプチドＲＲＲＲΦＦＣＡＬＤＷＳＷＬＱＣ（ＩＣ５０＝１．４μＭ）（配列番号２１５）及びＲＲＲＲΦＦＴＡＬＤＷＳＷＬＱＴ（ＩＣ５０＝１．６μＭ）（配列番号２１６）によるＮＥＭＯ−ＩＫＫγ相互作用の阻害を示す。
【図７】本研究で使用される他のペプチドの純度を示す分析的逆相ＨＰＬＣである。ペプチドの真正性は、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＳ分析によって確認された。
【図８】二環式ペプチドを含有するトリス−（ジスルフィド）の略図である。
【図９】細胞のサイトソールに侵入すると環状細胞膜透過ペプチドからカーゴを放出する二環式ペプチドを含有するビス−（ジスルフィド）の略図である。
【図１０Ａ】蛍光標識（ＮＦＬ）を有するＫｅａｐ１−Ｎｒｆ２に対するペプチジル阻害剤に接合されたＣＰＰ１２（ＦｆФＲｒＲｒ）を含む環状ペプチドを含む二環式ペプチドの構造を示す。
【図１０Ｂ】環状ＣＰＰの非存在下で蛍光標識（ＮＦＬ）を有するＫｅａｐ１−Ｎｒｆ２に対する直鎖ペプチジル阻害剤の構造を示す。
【図１１】蛍光標識（ＮＦＬ）を有する、Ｐｉｎ１に対するペプチジル阻害剤に接合された環状ＣＰＰ１２（ＦｆФＲｒＲｒ）を含む環状ペプチドを含む二環式ペプチドの構造を示す。
【図１２Ａ】蛍光標識（ＮＦＬ）を有する、ＣＰＰ１２（ＦｆФＲｒＲｒ）を含む環状ＣＰＰ１２（ＦｆФＲｒＲｒ）を含む環状の二環式ペプチドの構造を示す。
【図１２Ｂ】環状ＣＰＰの非存在下で蛍光標識（ＮＦＬ）を有する、ＣＡＬ  ＰＤＺ−ＣＦＴＲ相互作用に対する直鎖ペプチジル阻害剤の構造を示す。
【図１３Ａ】蛍光標識（ＮＦＬ）を有するＭＤＭ２−ｐ５３相互作用（ＰＭＩ）に対してペプチジル阻害剤に接合された環状ＣＰＰ１２（ＦｆФＲｒＲｒ）を含む環状ペプチドを含む二環式ペプチドの構造を示す。
【図１３Ｂ】環状ＣＰＰの非存在下で蛍光標識（ＮＦＬ）を有する、ＰＭＩに対する直鎖ペプチジル阻害剤の構造を示す。
【図１４】環状ＣＰＰペプチド接合体（すなわち、本開示の二環式ペプチド）と比較した、非接合ペプチジル阻害剤の細胞質取り込み効率をグラフで示す。
【図１５Ａ】Ｋｅａｐ１−Ｎｒｆ２に対するペプチジル阻害剤に接合した環状ＣＰＰ１２（ＦｆФＲｒＲｒ）を含む環状を含む二環式ペプチドの構造を示す。
【図１５Ｂ】環状ＣＰＰの非存在下での、Ｋｅａｐ１−Ｎｒｆ２に対する直鎖ペプチジル阻害剤の構造を示す。
【図１６】Ｐｉｎ１に対するペプチジル阻害剤に接合した環状ＣＰＰ１２（ＦｆФＲｒＲｒ）を含む環状を含む二環式ペプチドの構造を示す。
【図１７】ＭＤＭ２−ｐ５３相互作用（ＰＭＩ）に対するペプチジル阻害剤に接合された環状ＣＰＰ１２（ＦｆФＲｒＲｒ）を含む二環式ペプチドの血清安定性を、ＰＭＩに対する直鎖ペプチジル阻害剤の血清安定性と比較してグラフで示す。
【図１８】Ｋｅａｐ１−Ｎｒｆ２相互作用に対するペプチジル阻害剤に接合された環状ＣＰＰ１２（ＦｆФＲｒＲｒ）を含む二環式ペプチドの血清安定性を、Ｋｅａｐ１−Ｎｒｆ２に対する直鎖ペプチジル阻害剤の血清安定性と比較してグラフで示す。
【図１９】Ｐｉｎ−１（Ｐ１）に対するペプチジル阻害剤に接合されたＣＰＰ１２（ＦｆФＲｒＲｒ）を含む二環式ペプチドの血清安定性を、Ｐ１．に対する直鎖ペプチジル阻害剤の血清安定性と比較してグラフで示す。
【発明を実施するための形態】
【００６９】
本発明は、本発明の以下の詳細な説明、並びにその中に含まれる実施例及び図を参照することによって、より容易に理解することができる。
【００７０】
本発明の化合物、組成物、物品、システム、デバイス、及び／又は方法を開示及び説明する前に、これらが特に指定されない限り特定の合成方法に、又は、特に指定されない限り特定の試薬に限定されず、当然ながらそれ自体が変化することができることを理解されたい。本明細書で使用される専門用語は、特定の態様を説明するための目的のものにすぎず、限定することを意図しないことも理解するべきである。本明細書に記載のものと類似又は同等の任意の方法及び材料を本発明の実施又は試験に使用することができるが、例示的な方法及び材料は本明細書に記載されている。
【００７１】
本明細書で言及される全ての刊行物は、刊行物が引用される方法及び／又は材料を開示及び記載するために、本明細書に参照により引用される。本明細書に記載される刊行物は、本出願の出願日前に、それらの開示に対してのみ提供される。本明細書中のいかなるものも、本発明が、先行発明の効力によってそのような開示に対して先行する権利を与えられていないことを認めるものとして解釈されるべきではない。更に、本明細書で提供される刊行物の日付は、実際の出版物の日付と異なる場合があり、これは、独立した確認を必要とする場合がある。
【００７２】
一般的定義
本明細書で使用するとき、有機化合物を含む化合物の命名法は、一般的な名称、ＩＵＰＡＣ、ＩＵＢＭＢ、又は命名法のためのＣＡＳ推奨を使用して与えられ得る。１つ以上の立体化学的特徴が存在する場合、立体化学のためのＣａｈｎ−Ｉｎｇｏｌｄ−Ｐｒｅｌｏｇ規則を採用して、立体化学的優先度、Ｅ／Ｚ仕様などを指定することができる。当業者は、名称が与えられた場合、命名規則を使用して化合物構造を体系的に還元するか、又はＣＨＥＭＤＲＡＷ（商標）（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅｓｏｆｔ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ａ．）などの市販のソフトウェアによって、化合物の構造を容易に確認することができる。
【００７３】
本明細書及び添付の特許請求の範囲において使用されるとき、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、その内容について別段の明確な指示がない限り、複数の指示被験体を包む。したがって、例えば、「官能基」、「アルキル」、又は「残基」への言及は、２つ以上のそのような官能基、アルキル、又は残基などの混合物を含む。
【００７４】
範囲は、「約」１つの特定の値から、及び／又は「約」別の特定の値までとして表することができる。そのような範囲が表されるとき、更なる態様は、１つの特定の値から及び／又は他の特定の値までを含む。同様に、値が、先行詞「約」の使用によって近似として表されるとき、特定の値は別の態様を形成することが理解されるであろう。範囲のそれぞれの端点は、他の端点に関しても、他の端点とは独立しても、この両方において、有意であると更に理解されるであろう。本明細書で多くの値が開示され、各々の値がその値自体に加えて「約」その特定の値として本明細書でもまた開示されることもまた理解される。例えば、値「１０」が開示されている場合、「約１０」もまた開示されている。特定の２つの単位間のそれぞれの単位もまた開示されていることもまた理解される。例えば、１０及び１５が開示されている場合、１１、１２、１３、及び１４もまた開示されている。
【００７５】
本明細書及び特許請求の範囲における組成物中の特定の要素又は成分の重量部への言及は、その要素又は成分と、組成物又は物品中の任意の他の要素又は成分の間との重量関係を意味する。したがって、２重量部の成分Ｘ及び５重量部の成分Ｙを含有する化合物において、Ｘ及びＹは２：５の重量比で存在し、かつその化合物において他の成分が含有されているかどうかに関係なくそのような割合で存在する。
【００７６】
そうでないと具体的に述べられていない限り、成分の重量パーセント（重量％）は、その成分が含まれる配合物又は組成物の総重量に基づく。
【００７７】
本明細書で使用するとき、用語「任意選択の」又は「任意選択に」は、引き続いて記載された事象又は状況が起こり得るあるいは起こり得る又は起こり得ないこと、かつ当該記述が前記事象又は状況が起こる場合及び起こらない場合を含むことを意味する。
【００７８】
本明細書で使用するとき、用語「被験体」は、投与の標的、例えば被験者を指す。したがって、本明細書に開示される方法の被験体は、哺乳動物、魚類、鳥類、爬虫類、又は両生類などの脊椎動物とすることができる。代替的に、本明細書に開示される方法の被験体は、ヒト、非ヒト霊長類、ウマ、ブタ、ウサギ、イヌ、ヒツジ、ヤギ、ウシ、ネコ、モルモット、魚、鳥、又はげっ歯類とすることができる。この用語は、特定の年齢又は性別を意味するものではない。したがって、成人及び新生児の被検者、並びに胎児、男性又は女性のいずれかであっても対象となることを意図している。いくつかの実施形態では、被検体は哺乳動物である。患者は、疾患又は障害に罹患している被験体を指す。用語「患者」は、ヒト及び獣医学的被験体を含む。開示される方法のいくつかの例では、被験体は、投与工程の前に癌の治療の必要性を有すると診断されている。開示された方法のいくつかの例では、被験体は、投与工程の前に癌と診断されている。被験体となる被験体は、動物、例えばヒト、細胞などの細胞も含む。
【００７９】
本明細書で使用するとき、用語「治療」は、疾患、病的状態、又は障害を治癒、寛解、安定化、又は予防することを意図した患者の医学的管理を指す。この用語は、積極的治療、つまり、特に疾病、病的状態、又は障害の改善のために行われる治療を含み、また原因療法、つまり、関連する疾病、病的状態、又は障害の原因の除去のために行われる治療も含む。加えて、この用語は、緩和治療、すなわち、疾患、病的状態、又は障害の治癒ではなく、症状の緩和のために設計された治療を含み、予防治療、すなわち、関連する疾患、病的状態、又は障害の発症を最小化又は部分的若しくは完全に阻害することを目的とする治療、並びに支持療法、すなわち、関連する疾患、病的状態、又は障害の改善を目的とした別の特定の治療を補うために採用される治療と、を含む。いくつかの例では、この用語は、哺乳動物（例えば、ヒト）を含む被験体の任意の治療を含み、（ｉ）疾患に罹患し得るが、まだそれを有すると診断されていない被験体において疾患が発生するのを予防することと、（ｉｉ）疾患を阻害すること、すなわち、その発症を阻止すること、又は（ｉｉｉ）疾患を緩和すること、すなわち、疾患の後退を引き起こすこと、を含む。いくつかの例では、被験体は霊長類などの哺乳動物であり、いくつかの例では、被験体はヒトである。したがって、用語「被検体」には、愛玩動物（例えば、ネコ、イヌなど）、家畜（例えば、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、魚、鳥など）、及び実験動物（例えば、マウス、ウサギ、ラット、モルモット、ミバエなど）を含むことができる。
【００８０】
本明細書で使用するとき、用語「防止する」又は「防止する」は、特に前進作用によって起こる何かを予防する、嫌悪する、排除する、早める、停止する、又は妨げることを指す。低減させる又は防止する、が使用される場合、具体的に明確に指示されない限り、他の単語の使用もまた明示的に開示されることが理解される。
【００８１】
本明細書で使用するとき、用語「診断された」は、当業者、例えば、医師による物理的検査に供され、本明細書に開示される化合物、組成物、又は方法によって診断又は治療することができる状態を有することを意味する。例えば、「癌と診断された」は、当業者、例えば、医師による物理的検査に供され、癌を治療又は予防することができる化合物又は組成物によって診断又は治療することができる状態を有することを意味する。更なる例として、「癌を治療又は予防する必要性を有すると診断された」は、当業者、例えば医師による物理的検査に供され、癌又は、癌の治療若しくは予防が被験体に有益であろう他の疾患によって特徴付けられる状態を有することを意味する。
【００８２】
本明細書で使用するとき、「障害の治療を必要としていると識別される」などという句は、障害の治療の必要性に基づいて被験体を選択することを指す。例えば、被験体は、当業者による早期診断に基づいて障害（例えば、癌に関連する障害）の治療の必要性を有するものとして識別され得、その後、障害の治療に供することができる。識別は、いくつかの例では、診断を行う人とは異なる人物によって実行することができることが想到される。いくつかの例では、投与は、続いて投与を実施した人物によって行うことができることも想到される。
【００８３】
本明細書で使用するとき、用語「投与する」及び「投与」は、被験体に医薬製剤を提供する任意の方法を指す。そのような方法は、当業者には周知であり、経口投与、経皮投与、吸入による投与、鼻腔投与、局所投与、膣内投与、眼内投与、聴覚内投与、静脈内投与、直腸内投与、舌下投与、頬側投与、及び非経口投与を含み、これらに限定されるものではなく、静脈内投与、動脈内投与、筋肉内投与、及び皮下投与などの注射剤を含む。投与は連続的又は断続的とすることができる。いくつかの例では、製剤は、治療上投与することができ、すなわち、既存の疾患又は病状を治療するために投与される。いくつかの例では、製剤は予防的に投与することができ、すなわち、疾患又は病状の予防のために投与される。
【００８４】
本明細書で使用するとき、用語「接触する」は、化合物が標的（例えば、受容体、転写因子、細胞など）の活性に影響を及ぼすことができるような方法で、開示された化合物及び細胞、標的受容体、又は他の生物学的実体を一緒にすることを指し、ここで直接的に、すなわち標的自体と相互作用することによって、又は間接的に、すなわち標的の活性が依存する別の分子、補因子、因子、若しくはタンパク質と相互作用することによって、影響を及ぼすものである。
【００８５】
本明細書で使用するとき、用語「有効量」及び「有効な量」は、所望の結果を実現するのに十分であるか、又は望ましくない状態に影響を及ぼすのに十分な量を指す。例えば、「治療上有効量」とは、所望の治療結果を実現するのに十分であるか、又は望ましくない症状に影響を及ぼすのに十分であるが、有害な副作用を引き起こすには一般的に不十分な量を指す。任意の特定の患者の特定の治療上有効な用量レベルは、治療される障害及び障害の重症度採用した特定の組成物、患者の年齢、体重、一般的な健康状態、性別及び食事、投与時間、投与経路、採用した特定の化合物の排泄速度、治療期間、採用した特定の化合物及び医療技術分野において周知の同様の因子と組み合わせて又は同時に使用される薬、を含む様々な因子に依存するであろう。例えば、所望の治療効果を実現するために必要とされるレベルよりも低いレベルで化合物の投与を開始し、所望の効果が実現されるまで投与量を徐々に増加させることは、当業者には周知である。所望であれば、有効な１日当たり用量は、投与の目的で複数の用量に分割することができる。この結果、単回用量組成物は、そのような量又はその約数を含有して、１日当たり用量を構成することができる。投与量は、いずれかの禁忌がある場合には、個々の医師によって調整することができる。用量は、変更することができ、毎日、１日又は数日間、１つ以上の用量の投与において投与することができる。指針は、所与のクラスの医薬製品に対する適切な用量に関する文献において見出すことができる。いくつかの例では、製剤は、「予防的有効量」で投与することができ、すなわち、疾患又は病状の予防に有効な量である。
【００８６】
本明細書で使用するとき、「ＥＣ５０」は、生物学的プロセスの５０％増強又は活性化に必要とされる物質（例えば、化合物又は薬）の濃度若しくは用量、又はタンパク質、サブユニット、オルガネール、リボ核酸などを含むプロセスの成分を指すことを意図する。ＥＣ５０はまた、本明細書の他の箇所で更に定義されるように、インビボでの５０％増強又は活性化に必要な物質の濃度又は用量を指す。代替的に、ＥＣ５０は、ベースラインと最大反応との間の反応中間体を誘発する化合物の濃度又は用量を指すことができる。反応は、被験体となる生物学的反応に便利かつ適切であるように、インビトロ又はインビボ系で測定することができる。例えば、反応は、培養筋細胞を使用して、又は単離された筋肉線維を有するエックスビボ器官培養系において、インビトロで測定することができる。代替的に、反応は、マウス及びラットを含むげっ歯類などの適切な研究モデルを使用してインビボで測定することができる。マウス又はラットは、肥満又は糖尿病などの目的の表現型特性を有する、近交系とすることができる。必要に応じて、遺伝子又は遺伝子が適宜導入又はノックアウトされて疾患プロセスを複製する、トランスジェニック又はノックアウトマウス又はラットにおいて、反応を測定することができる。
【００８７】
本明細書で使用するとき、「ＩＣ５０」は、タンパク質、サブユニット、オルガネルタンパク質、リボ核酸タンパク質などを含む、生物学的プロセスの５０％阻害若しくは減少に必要とされる物質（例えば、化合物又は薬）の濃度若しくは用量を指すことを意図する。ＩＣ５０はまた、本明細書の他の箇所で更に定義されるように、インビボでの５０％阻害又は減少に必要とされる物質の濃度又は用量を指す。代替的に、ＩＣ５０は、半最大（５０％）阻害濃度（ＩＣ）又は物質の阻害用量を指す。反応は、被験体となる生物学的反応に便利かつ適切であるように、インビトロ又はインビボ系で測定することができる。例えば、反応は、培養筋細胞を使用して、又は単離された筋肉線維を有するエックスビボ器官培養系において、インビトロで測定することができる。あるいは、反応は、マウス及びラットを含むげっ歯類などの適切な研究モデルを使用してインビボで測定することができる。マウス又はラットは、肥満又は糖尿病などの目的の表現型特性を有する、近交系とすることができる。必要に応じて、遺伝子又は遺伝子が適宜導入又はノックアウトされて疾患プロセスを複製する、トランスジェニック又はノックアウトマウス又はラットにおいて、反応を測定することができる。
【００８８】
用語「薬学的に許容される」は、生物学的又はその他の点で望ましくないものではない、すなわち許容できないレベルの望ましくない生物学的効果を引き起こさず又は有害な方法で相互作用することなく、材料を記載する。
【００８９】
本明細書で使用するとき、用語「誘導体」は、親化合物（例えば、本明細書に開示される化合物）の構造に由来する構造を有する化合物を指し、その構造は、本明細書に開示されるものと十分に類似しており、その類似性に基づいて、当業者には、特許請求される化合物と同じ又は類似の活性及び有用性を示すか、又は特許請求される化合物と同じ又は類似の活性及び有用性を前駆体として誘導することが、当業者には予想されるであろう。例示的な誘導体としては、親化合物の塩、エステル、アミド、エステル又はアミドの塩、及びＮ−オキシドが挙げられる。
【００９０】
本明細書で使用するとき、用語「薬学的に許容される担体」は、滅菌水性又は非水性溶液、分散液、懸濁液又はエマルション、並びに使用直前に無菌注射可能な溶液又は分散液に再構成するための無菌粉末を指す。好適な水性及び非水性担体、希釈剤、溶媒又はビヒクルの例としては、水、エタノール、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、カルボキシメチルセルロース、及びそれらの好適な混合物、植物油（オリーブ油など）、並びにオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルが挙げられる。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング材料の使用によって、分散液の場合に必要な粒子サイズの維持によって、及びインターフェース活性剤の使用によって、維持することができる。これらの組成物はまた、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、及び分散剤などの補助剤を含有することができる。微生物の作用の防止は、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などの様々な抗菌剤及び抗真菌剤を含めることによって確実なものとすることができる。糖類、塩化ナトリウムなどの等張剤を含むことも望ましい場合がある。注射可能な医薬形態の持続的吸収は、吸収を遅延させる、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンなどの薬剤を含めることによってもたらすることができる。注射可能なデポー形態は、ポリラクチド−ポリグリコリド、ポリ（オルトエステル）及びポリ（無水物）などの生分解性ポリマー中に薬のマイクロカプセルマトリックスを形成することによって作製される。ポリマーに対する薬の比率及び採用される特定のポリマーの性質に応じて、薬放出の速度を制御することができる。注射可能なデポー製剤はまた、体内組織と適合性のあるポソーム又はマイクロエマルション中に薬を封入することによって調製される。注射可能な製剤は、例えば、細菌保持フィルタを通した濾過によって、又は滅菌水若しくは使用直前に滅菌水若しくは他の滅菌注射可能媒体に溶解若しくは分散することができる滅菌固体組成物の形態の滅菌剤を組み込むことによって、滅菌することができる。好適な不活性担体は、ラクトースなどの糖を含むことができる。望ましくは、活性成分の粒子の少なくとも９５％は、０．０１〜１０マイクロメートルの範囲の有効粒径を有する。
【００９１】
本明細書及び特許請求の範囲で使用される化学種の残基は、その部分が化学種から実際に得られるかどうかにかかわらず、特定の反応スキーム又は後続の製剤又は化学生成物中の化学種の得られた生成物である部分を指す。したがって、ポリエステル中のエチレングリコール残基は、エチレングリコールがポリエステルを調製するために使用されたかどうかにかかわらず、ポリエステル中の１つ以上の−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ−単位を指す。同様に、ポリエステル中のセバシン酸残基は、セバシン酸又はそのエステルを反応させてポリエステルを得られるかどうかにかかわらず、ポリエステル中の１つ以上の−ＣＯ（ＣＨ２）８ＣＯ−部分を指す。別の実施例として、例えばペプチド中のアミノ酸残基は、１つ以上の−ＡＡ−部分を指し、そのような残基は、本明細書では交換可能にアミノ酸又はアミノ酸残基と呼ばれる場合がある。
【００９２】
化学的定義
本明細書で使用するとき、用語「置換された」は、有機化合物の全ての許容される置換基を含むと想到される。いくつかの例では、許容される置換基として、有機化合物の非環式及び環式、分枝部状及び非分枝部状、炭素環式及び複素環式、並びに芳香族及び非芳香族置換基が挙げられる。例示の置換基として、例えば、後述のものが挙げられる。許容される置換基は、適切な有機化合物について１つ以上、かつ同一又は異なってもよい。本開示の目的のため、窒素などのヘテロ原子は、ヘテロ原子の原子価を満たす本明細書に記載の有機化合物の水素置換基及び／又は任意の許容される置換基を有することができる。本開示は、いかなる方法でも有機化合物の許容される置換基によって限定されることを意図しない。また、「置換」又は「置換された」という用語は、そのような置換が置換原子及び置換基の許容される原子価に従うこと、及び置換が安定した化合物、例えば、再構成、環化、脱離などによって自然に形質転換されない化合物などの安定した化合物をもたらすこと、という暗黙の条件を含む。特定の例では、反対に明示的に示されない限り、個々の置換基は、更に任意選択に置換（すなわち、更なる置換又は非置換）され得ると想到される。
【００９３】
様々な用語を定義する際に、「Ａ１」、「Ａ２」、「Ａ３」、及び「Ａ４」は、本明細書において様々な特定の置換基を表す包括的な記号として使用される。これらの記号は、本明細書に開示されるものに限定されない任意の置換基とすることができ、またそれらが一例において特定の置換基であると定義されるとき、それらを別の例において、いくつかの他の置換基として定義することができる。
【００９４】
本明細書で使用するとき、用語「アルキル」は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ｓ−ペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ドデシル、テトラデシル、ヘキサデシル、エイコシル、テトラコシルなどの、１〜２４個の炭素原子の分枝部状又は非分枝部状飽和炭化水素基である。アルキル基は、環状又は非環式とすることができる。アルキル基は分枝部状又は非分枝部状とすることができる。アルキル基はまた、置換又は非置換とすることができる。例えば、アルキル基は、本明細書に記載されるように、アルキル、シクロアルキル、アルコキシ、アミノ、エーテル、ハロゲン化物、ヒドロキシ、ニトロ、シリル、スルホオキソ、又はチオールを含むがこれらに限定されない１つ以上の基で置換することができる。「低級アルキル」基は、１〜６個（例えば、１〜４個）の炭素原子を含有するアルキル基である。
【００９５】
本明細書全体を通して、「アルキル」は、一般に、非置換アルキル基及び置換アルキル基の両方を指すために使用される。しかしながら、置換アルキル基はまた、アルキル基上の特定の置換基（複数可）を識別することによって、本明細書において具体的に言及される。例えば、用語「ハロゲン化アルキル」又は「ハロアルキル」は、具体的には、１つ以上のハロゲン化物、例えば、フッ素、塩素、臭素、又はヨウ素で置換されたアルキル基を指す。用語「アルコキシアルキル」は、具体的には、後述のように１つ以上のアルコキシ基で置換されたアルキル基を指す。用語「アルキルアミノ」は、具体的には、後述のように１つ以上のアミノ基などで置換されたアルキル基を指す。「アルキル」が一例で使用され、「アルキルアルコール」など特定の用語が別で使用されているとき、用語「アルキル」が「アルキルアルコール」などの特定の用語を同様に指さないということを意味するものではない。
【００９６】
このやり方は、本明細書に記載の他の基でも使用される。すなわち、「シクロアルキル」などの用語は、非置換及び置換シクロアルキル部分の両方を指すが、置換部分は、更に、本明細書で具体的に識別することができる。例えば、特定の置換シクロアルキルは、例えば、「アルキルシクロアルキル」と呼ぶことができる。同様に、置換アルコキシは、例えば、具体的には「ハロゲン化アルコキシ」など呼ぶことができ、特定の置換アルケニルは、例えば、「アルケニルアルコール」などと呼ぶことができる。また、「シクロアルキル」などの一般用語及び「アルキルシクロアルキル」などの特定の用語を使用することは、その一般用語が特定の用語を同様に含まないことを意味するものではない。
【００９７】
用語「シクロアルキル」は、本明細書で使用するとき、少なくとも３個の炭素原子からなる非芳香族炭素系環である。シクロアルキル基の例として、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどが挙げられるが、これらに限定されない。用語「ヘテロシクロアルキル」は、上述のようにシクロアルキル基の一種であり、用語「シクロアルキル」の意味に含まれ、環の炭素原子のうち少なくとも１個は、限定するものではないが、窒素、酸素、硫黄、又はリンなどのヘテロ原子で置換されている。シクロアルキル基及びヘテロシクロアルキル基は、置換又は非置換であり得る。シクロアルキル基及びヘテロシクロアルキル基は、本明細書に記載されるように、アルキル、シクロアルキル、アルコキシ、アミノ、エーテル、ハライド、ヒドロキシ、ニトロ、シリル、スルホ−オキソ、又はチオールを含むがこれらに限定されない１つ以上の基で置換することができる。
【００９８】
本明細書で使用するとき、用語「ポリアルキレン基」は、互いに結合した２つ以上のＣＨ２基を有する基である。ポリアルキレン基は、式−（ＣＨ２）ａ−によって表すことができ、式中、「ａ」は、２〜５００の整数である。
【００９９】
本明細書で使用するとき、用語「アルコキシ」及び「アルコキシル」は、エーテル結合を介して結合したアルキル又はシクロアルキル基を指す。すなわち、「アルコキシ」基は、−ＯＡ１として定義することができ、式中、Ａｌは、上記で定義したようにアルキル又はシクロアルキルである。「アルコキシ」はまた、記載されたアルコキシ基のポリマーを含む。すなわち、アルコキシは、−ＯＡ１−ＯＡ２又は−ＯＡ１−（ＯＡ２）ａ−ＯＡ３などのポリエーテルとすることができ、「ａ」は、１〜２００の整数であり、Ａ１、Ａ２、及びＡ３は、アルキル及び／又はシクロアルキル基である。
【０１００】
本明細書で使用するとき、用語「アルケニル」は、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を含有する構造式を有する２〜２４個の炭素原子の炭化水素基である。（Ａ１Ａ２）Ｃ＝Ｃ（Ａ３Ａ４）などの非対称構造は、Ｅ異性体及びＺ異性体の両方を含むように意図される。これは、非対称アルケンが存在する本明細書の構造式で推定され得るか、又は結合記号Ｃ＝Ｃによって明確に示され得る。アルケニル基は、本明細書に記載されるように、アルキル、シクロアルキル、アルコキシ、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、アルデヒド、アミノ、カルボン酸、エステル、エーテル、ハロゲン化物、ヒドロキシ、ケトン、アジド、ニトロ、シリル、スルホ−オキソ、又はチオールが挙げられるが、これらに限定されない１つ以上の基で置換することができる。
【０１０１】
「カルボシクリル」、「炭素環式環」又は「炭素環」は、環を形成する原子が各々炭素である環構造を指す。炭素環は、環中に３〜２０個の炭素原子を含むことができる。炭素環式環としては、本明細書に定義されるアリール及びシクロアルキル、シクロアルケニル、及びシクロアルキニルが挙げられる。炭素環基は、置換又は非置換とすることができる。炭素環基は、アルキル、シクロアルキル、アルコキシ、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、アルデヒド、アミノ、カルボン酸、エステル、エーテル、ハロゲン化物、ヒドロキシ、ケトン、アジド、ニトロ、シリル、スルホ−オキソ、又はチオールが挙げられるが、これらに限定されない１つ以上の基で置換することができる。
【０１０２】
用語「シクロアルケニル」は、本明細書で使用するとき、少なくとも３個の炭素原子からなる非芳香族炭素系環であり、少なくとも１つ炭素−炭素二重結合、すなわち、Ｃ＝Ｃを含有する。シクロアルケニル基の例として、シクロプロペニル、シクロブテニル、シクロペンテニル、シクロペンタジエニル、シクロヘキセニル、シクロヘキサジエニル、ノルボルネニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。用語「ヘテロシクロアルケニル」は、上述のようにシクロアルケニル基の一種であり、用語「シクロアルケニル」の意味に含まれ、環の炭素原子のうち少なくとも１個は、限定するものではないが、窒素、酸素、硫黄、又はリンなどのヘテロ原子で置換されている。シクロアルケニル基及びヘテロシクロアルケニル基は、置換又は非置換であり得る。シクロアルケニル基及びヘテロシクロアルケニル基は、本明細書に記載されるように、アルキル、シクロアルキル、アルコキシ、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、アルデヒド、アミノ、カルボン酸、エステル、エーテル、ハロゲン化物、ヒドロキシ、ケトン、アジド、ニトロ、シリル、スルホ−オキソ、又はチオールが挙げられるがこれらに限定されない１つ以上の基で置換することができる。
【０１０３】
本明細書で使用するとき、用語「アルキニル」は、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を含有する構造式を有する２〜２４個の炭素原子の炭化水素基である。アルキニル基は、非置換とすることができ、又は本明細書に記載されるように、アルキル、シクロアルキル、アルコキシ、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、アルデヒド、アミノ、カルボン酸、エステル、エーテル、ハロゲン化物、ヒドロキシ、ケトン、アジド、ニトロ、シリル、スルホ−オキソ、又はチオールが挙げられるが、これらに限定されない１つ以上の基で置換することができる。
【０１０４】
用語「シクロアルキニル」は、本明細書で使用するとき、少なくとも７個の炭素原子からなる非芳香族炭素系環であり、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を含有する。シクロアルキニル基の例としては、シクロヘプチニル、シクロオクチニル、シクロノニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。用語「ヘテロシクロアルキニル」は、上述のようにシクロアルキニル基の一種であり、用語「シクロアルキニル」の意味に含まれ、環の炭素原子のうち少なくとも１個は、限定するものではないが、窒素、酸素、硫黄、又はリンなどのヘテロ原子で置換されている。シクロアルキニル基及びヘテロシクロアルキニル基は、置換又は非置換とすることができる。シクロアルキニル基及びヘテロシクロアルキニル基は、本明細書に記載されるように、アルキル、シクロアルキル、アルコキシ、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、アルデヒド、アミノ、カルボン酸、エステル、エーテル、ハロゲン化物、ヒドロキシ、ケトン、アジド、ニトロ、シリル、スルホ−オキソ、又はチオールが挙げられるがこれらに限定されない１つ以上の基で置換することができる。
【０１０５】
本明細書で使用するとき、用語「アリール」は、ベンゼン、ナフタレン、フェニル、ビフェニル、フェノキシベンゼンなどを含むがこれらに限定されない、任意の炭素系芳香族基を含有する基である。用語「アリール」はまた、「ヘテロアリール」を含み、芳香族基の環の中に組み込まれた少なくとも１個のヘテロ原子を有する芳香族基を含有する基と定義される。ヘテロ原子の例として、窒素、酸素、硫黄、及びリンが挙げられるが、これらに限定されない。同様に、用語「アリール」にも含まれる用語「非ヘテロアリール」は、ヘテロ原子を含まない芳香族基を含む基を定義する。アリール基は、置換又は非置換とすることができる。アリール基は、アルキル、シクロアルキル、アルコキシ、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、アルデヒド、アミノ、カルボン酸、エステル、エーテル、ハロゲン化物、ヒドロキシ、ケトン、アジド、ニトロ、シリル、スルホ−オキソ、又はチオールが挙げられるが、これらに限定されない１つ以上の基で置換することができる。用語「ビアリール」は、特定の種類のアリール基であり、「アリール」の定義に含まれる。ビアリールは、ナフタレンの場合のように、縮合環状構造を介して一緒に結合されるか、又はビフェニルの場合のように、１つ以上の炭素−炭素間結合を介して結合される、２個のアリール基を指す。
【０１０６】
本明細書で使用するとき、用語「アルデヒド」は、式−Ｃ（Ｏ）Ｈによって表される。この明細書「Ｃ（Ｏ）」は、カルボニル基、すなわちＣ＝Ｏの簡略表記である。
【０１０７】
本明細書で使用するとき、用語「アミン」又は「アミノ」は、式−ＮＡ１Ａ２によって表され、式中、Ａｌ及びＡ２は、独立して、水素、又は本明細書に記載されるアルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、シクロアルキニル、アリール、若しくはヘテロアリール基とすることができる。
【０１０８】
本明細書で使用するとき、用語「アルキルアミノ」は、アルキルが本明細書に記載される式−ＮＨ−（−アルキル）によって表される。代表的な例としては、メチルアミノ基、エチルアミノ基、プロピルアミノ基、イソプロピルアミノ基、ブチルアミノ基、イソブチルアミノ基、（ｓｅｃ−ブチル）アミノ基、（ｔｅｒｔ−ブチル）アミノ基、ペンチルアミノ基、イソペンチルアミノ基、（ｔｅｒｔ−ペンチル）アミノ基、ヘキシルアミノ基などが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０９】
本明細書で使用するとき、用語「ジアルキルアミノ」は、アルキルが本明細書に記載される式−Ｎ（−アルキル）２によって表される。代表的な例としては、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基、ジプロピルアミノ基、ジイソプロピルアミノ基、ジブチルアミノ基、ジイソブチルアミノ基、ジ（ｓｅｃ−ブチル）アミノ基、ジ（ｔｅｒｔ−ブチル）アミノ基、ジペンチルアミノ基、ジイソペンチルアミノ基、ジ（ｔｅｒｔ−ペンチル）アミノ基、ジヘキシルアミノ基、Ｎ−エチル−Ｎ−メチルアミノ基、Ｎ−メチル−Ｎ−プロピルアミノ基、Ｎ−エチル−Ｎ−プロピルアミノ基などが挙げられる。
【０１１０】
用語「カルボン酸」は、本明細書で使用するとき、式−Ｃ（Ｏ）ＯＨにより表される。
【０１１１】
本明細書で使用するとき、用語「エステル」は、式−ＯＣ（Ｏ）Ａ１又は−Ｃ（Ｏ）ＯＡ１によって表され、式中、Ａｌは、本明細書に記載されるアルキル基、シクロアルキル基、アルケニル基、シクロアルケニル基、アルキニル基、シクロアルキニル基、アリール基、又はヘテロアリール基とすることができる。本明細書で使用するとき、用語「ポリエステル」は、式−（Ａ１Ｏ（Ｏ）Ｃ−Ａ２−Ｃ（Ｏ）Ｏ）ａ−又は−（Ａ１Ｏ（Ｏ）Ｃ−Ａ２−ＯＣ（Ｏ））ａ−によって表され、式中、Ａｌ及びＡ２は、独立して、本明細書に記載されるアルキル基、シクロアルキル基、アルケニル基、シクロアルケニル基、アルキニル基、シクロアルキニル基、アリール基、又はヘテロアリール基とすることができ、「ａ」は、１〜５００の整数である。「ポリエステル」は、少なくとも２つのカルボン酸基を有する化合物と、少なくとも２つのヒドロキシル基を有する化合物の反応によって生成される基を記述するために使用される用語である。
【０１１２】
用語「エーテル」は、本明細書で使用するとき、式Ａ１ＯＡ２により表され、式中、Ａｌ及びＡ２は、独立して、本明細書に記載されるアルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、シクロアルキニル、アリール、又はヘテロアリール基とすることができる。本明細書で使用するとき、用語「ポリエーテル」は、式−（Ａ１Ｏ−Ａ２Ｏ）ｎ−により表され、式中、Ａｌ及びＡ２は、独立して、本明細書に記載されるアルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、シクロアルキニル、アリール、又はヘテロアリール基とすることができ、「ａ」は１〜５００の整数である。ポリエーテル基の例としては、ポリエチレンオキシド、ポリプロピレンオキシド、及びポリブチレンオキシドが挙げられる。
【０１１３】
本明細書で使用するとき、用語「ハロゲン化物」は、ハロゲンフッ素、塩素、臭素、及びヨウ素を指す。
【０１１４】
本明細書で使用するとき、用語「複素環」は、環員のうちの少なくとも１つが炭素以外である単環式及び多環式芳香族又は非芳香族環系を指す。複素環としては、アゼチジン、ジオキサン、フラン、イミダゾール、イソチアゾール、イソオキサゾール、モルホリン、オキサゾール、オキサゾールが挙げられ、１，２，３−オキサジアゾール、１，２，５−オキサジアゾール及び１，３，４−オキサジアゾール、ピペラジン、ピペリジン、ピラジン、ピラゾール、ピリダジン、ピリジン、ピリミジン、ピロール、ピロリジン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロピラン、テトラジンが挙げられ、１，２，４，５−テトラジン、テトラゾールが挙げられ、１，２，３，４−テトラゾール及び１，２，４，５−テトラゾール、チアジアゾールが挙げられ、１，２，３−チアジアゾール、１，２，５−チアジアゾール、及び１，３，４−チアジアゾール、チアゾール、チオフェン、トリアジンが挙げられ、１，３，５−トリアジン及び１，２，４−トリアジン、トリアゾールが挙げられ、１，２，３−トリアゾール、１，３，４−トリアゾールなどが挙げられる。
【０１１５】
「Ｎ−アルキル」は、少なくとも１つの窒素を含有する、上で定義されたようなアルキル基を指し、アルキルラジカルの他の分子への結合点は、Ｎ−アルキルラジカルの窒素原子を介している。本明細書において他に具体的に明記しない限り、Ｎ−アルキル基は、任意選択で置換することができる。
【０１１６】
用語「ヒドロキシル」は、本明細書で使用するとき、式−ＯＨにより表される。
【０１１７】
本明細書で使用するとき、用語「ケトン」は、式Ａ１Ｃ（Ｏ）Ａ２によって表され、式中、Ａｌ及びＡ２は、独立して、本明細書に記載されるアルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、シクロアルキニル、アリール、又はヘテロアリール基とすることができる。
【０１１８】
用語「アジド」とは、本明細書で使用するとき、式−Ｎ３により表される。
【０１１９】
用語「ニトロ」は、本明細書で使用するとき、式−ＮＯ２により表される。
【０１２０】
用語「ニトリル」は、本明細書で使用するとき、式−ＣＮにより表される。
【０１２１】
本明細書で使用するとき、用語「シリル」は、式−ＳｉＡ１Ａ２Ａ３によって表され、式中、Ａ１、Ａ２、及びＡ３は、独立して、水素、又は本明細書に記載されるアルキル、シクロアルキル、アルコキシ、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、シクロアルキニル、アリール、若しくはヘテロアリール基とすることができる。
【０１２２】
本明細書で使用するとき、用語「スルホオキソ」は、本明細書に記載されるように、式−Ｓ（Ｏ）Ａ１、−Ｓ（Ｏ）２Ａ１、−ＯＳ（Ｏ）２Ａ１、又は−ＯＳ（Ｏ）２ＯＡ１によって表され、ここで、Ａｌは、水素、又は本明細書に記載されるようなアルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、シクロアルキニル、アリール、若しくはヘテロアリール基とすることができる。本明細書全体を通して、「Ｓ（Ｏ）」は、Ｓ＝Ｏの簡略表記である。用語「スルホニル」は、本明細書では、式−Ｓ（Ｏ）２Ａ１で表されるスルホオキソ基を指し、式中、Ａｌは、水素、又は本明細書に記載されるアルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、シクロアルキニル、アリール、若しくはヘテロアリール基とすることができる。本明細書で使用するとき、用語「スルホン」は、式ＡｌＳ（Ｏ）２Ａ２によって表され、式中、Ａｌ及びＡ２は、独立して、本明細書に記載されるアルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、シクロアルキニル、アリール、又はヘテロアリール基とすることができる。本明細書で使用するとき、用語「スルホキシド」は、式Ａ１Ｓ（Ｏ）Ａ２によって表され、式中、Ａｌ及びＡ２は、独立して、本明細書に記載されるアルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、シクロアルキニル、アリール、又はヘテロアリール基とすることができる。
【０１２３】
用語「チオール」は、本明細書で使用するとき、式−ＳＨにより表される。
【０１２４】
「Ｒ１」、「Ｒ２」、「Ｒ３」、「Ｒｎ」（式中ｎは、整数である）は、本明細書で使用するとき、独立して、上に列挙された基のうちの１つ以上を有することができる。例えば、Ｒ１が、直鎖アルキル基である場合、アルキル基の水素原子のうち１つは、任意選択でヒドロキシル基、アルコキシ基、アミン基、アルキル基、ハロゲン化物などで置換することができる。選択される基に応じて、第１の基は、第２の基の内部に組み込むことができ、又は代替的に、第１の基は、第２の基に対するペンダントとすることができる（すなわち、付着される）。例えば、「アミノ基を含むアルキル基」という句では、アミノ基は、アルキル基の主鎖内に組み込まれている場合がある。代替的に、アミノ基は、アルキル基の主鎖に付着され得る。選択される基（複数可）の種類が、第１の基が第２の基に埋め込まれるか又は付着されるかを決定する。
【０１２５】
本明細書に記載されるように、化合物は、「任意選択で置換された」部分を含有する場合がある。一般に、用語「置換された」は、用語「任意選択的に」であるか否かに関わらず、指定された部分の１つ以上の水素が好適な置換基で置換されていることを意味する。別途記載のない限り、「任意選択で置換された」基は、その基の各置換可能な位置において好適な置換基を有することができ、任意の所与の構造中の２つ以上の位置が、特定の基から選択される２つ以上の置換基で置換することができる場合、置換基は、全ての位置において同一であっても異なる場合がある。本明細書で想定される置換基の組み合わせは、好ましくは安定又は化学的に実現可能な化合物の形成をもたらすものである。いくつかの例では、別途明示的に示されない限り、個々の置換基は、更に任意選択で置換することができる（すなわち、更なる置換又は非置換）ことができることも想到される。
【０１２６】
本明細書で使用するとき、用語「安定した」は、それらの産生、検出、及びいくつかの例では、それらの回収、精製、及び本明細書に開示される目的のうちの１つ以上のための回復、精製、及び使用を可能にする条件にさらされる場合に、実質的に変化しない化合物を指す。
【０１２７】
「任意選択で置換された」基の置換可能な炭素原子上の好適な一価置換基は、独立してハロゲン；−（ＣＨ２）０〜４Ｒ°；−Ｏ（ＣＨ２）０〜４Ｒ°、−Ｏ−（ＣＨ２）０〜４Ｃ（Ｏ）ＯＲ°；−（ＣＨ２）０〜４ＣＨ（ＯＲ°）２；−（ＣＨ２）０〜４ＳＲ°；Ｒ°で置換することができる−（ＣＨ２）０〜４Ｐｈ；Ｒ°で置換することができる−（ＣＨ２）０〜４Ｏ（ＣＨ２）０〜１Ｐｈ；Ｒ°で置換することができる−ＣＨ＝ＣＨＰｈ；Ｒ°で置換することができる−（ＣＨ２）０〜４Ｏ（ＣＨ２）０〜１−ピリジル；−ＮＯ２；−ＣＮ；−Ｎ３；−（ＣＨ２）０〜４Ｎ（Ｒ°）２；−（ＣＨ２）０〜４Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｏ）Ｒ°；−Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｓ）Ｒ°；−（ＣＨ２）０〜４Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｏ）ＮＲ°２；−Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｓ）ＮＲ°２；−（ＣＨ２）０〜４Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｏ）ＯＲ°；−Ｎ（Ｒ°）Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｏ）Ｒ°；−Ｎ（Ｒ°）Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｏ）ＮＲ°２；−Ｎ（Ｒ°）Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｏ）ＯＲ°；−（ＣＨ２）０〜４Ｃ（Ｏ）Ｒ°；−Ｃ（Ｓ）Ｒ°；−（ＣＨ２）０〜４Ｃ（Ｏ）０Ｒ°；−（ＣＨ２）０〜４Ｃ（Ｏ）ＳＲ°；−（ＣＨ２）０〜４Ｃ（Ｏ）ＯＳｉＲ°３；−（ＣＨ２）０〜４ＯＣ（Ｏ）Ｒ°；−ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）０〜４ＳＲ−、ＳＣ（Ｓ）ＳＲ°；−（ＣＨ２）０〜４ＳＣ（Ｏ）Ｒ°；−（ＣＨ２）０〜４Ｃ（Ｏ）ＮＲ°２；−Ｃ（Ｓ）ＮＲ°２；−Ｃ（Ｓ）ＳＲ°；−ＳＣ（Ｓ）ＳＲ°、−（ＣＨ２）０〜４ＯＣ（Ｏ）ＮＲ°２；−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＯＲ°）Ｒ°；−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ°；−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ°；−Ｃ（ＮＯＲ°）Ｒ°；−（ＣＨ２）０〜４ＳＳＲ°；−（ＣＨ２）０〜４Ｓ（Ｏ）２Ｒ°；−（ＣＨ２）０〜４Ｓ（Ｏ）２ＯＲ°；−（ＣＨ２）０〜４ＯＳ（Ｏ）２Ｒ°；−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ°２；−（ＣＨ２）０〜４Ｓ（Ｏ）Ｒ°；−Ｎ（Ｒ°）Ｓ（Ｏ）２ＮＲ°２；−Ｎ（Ｒ°）Ｓ（Ｏ）２Ｒ°；−Ｎ（ＯＲ°）Ｒ°；−Ｃ（ＮＨ）ＮＲ°２；−Ｐ（Ｏ）２Ｒ°；−Ｐ（Ｏ）Ｒ°２；−ＯＰ（Ｏ）Ｒ°２；−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ°）２；ＳｉＲ°３；−（Ｃ１〜４直鎖若しくは分岐鎖アルキレン）Ｏ−Ｎ（Ｒ°）２；又は−（Ｃ１〜４直鎖若しくは分岐鎖アルキレン）Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｎ（Ｒ°）２であり、式中、各Ｒ°は、以下に定義するように置換することができ、独立して、水素、Ｃ１〜６脂肪族、−ＣＨ２Ｐｈ、−Ｏ（ＣＨ２）０〜１Ｐｈ、−ＣＨ２−（５〜６員ヘテロアリール環）、又は窒素から独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する５〜６員飽和、部分不飽和、若しくはアリール環であり、酸素、若しくは硫黄、又は上記定義にかかわらず、Ｒ°の２つの独立した発生は、それらの介在原子（複数可）と一緒になって、窒素、酸素、若しくは硫黄から独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する３〜１２員の飽和、部分不飽和、又はアリール単環又は二環式環を形成し、これらは、以下に定義されるように置換され得る。
【０１２８】
Ｒ°上の好適な一価置換基（又はＲ°の２つの独立した発生をそれらの介在原子と共に取ることによって形成される環）上の好適な一価置換基は、独立して、ハロゲン、−（ＣＨ２）０〜２Ｒ●、−（ハロＲ●）、−（ＣＨ２）０〜２ＯＨ、−（ＣＨ２）Ｏ２ＯＲ●、−（ＣＨ２）０〜２ＣＨ（ＯＲ●）２；−Ｏ（ハロＲ●）、−ＣＮ、−Ｎ３、−（ＣＨ２）０〜２Ｃ（Ｏ）Ｒ●、−（ＣＨ２）０〜２Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）０〜２Ｃ（Ｏ）ＯＲ●、−（ＣＨ２）０〜２ＳＲ●、−（ＣＨ２）０〜２ＳＨ、−（ＣＨ２）０〜２ＮＨ２、−（ＣＨ２）０〜２ＮＨＲ●、−（ＣＨ２）０〜２ＮＲ●２、−ＮＯ２、−ＳｉＲ●３、−ＯＳｉＲ●３、−Ｃ（Ｏ）ＳＲ、−（Ｃ１〜４直鎖若しくは分岐アルキレン）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、又は−ＳＳＲ●であり、式中、各Ｒ●は非置換であるか、又は「ハロ」が先行する場合は１個又は複数のハロゲンでのみ置換されており、かつＣ１〜４脂肪族、−ＣＨ２Ｐｈ、−−Ｏ（ＣＨ２）０〜１Ｐｈ、又は窒素、酸素、若しくは硫黄から独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する５〜６員の飽和、部分不飽和、又はアリール環から選択される。Ｒ°の飽和炭素原子上の好適な二価置換基としては、＝Ｏ及び＝Ｓが挙げられる。
【０１２９】
「任意選択で置換された」基の飽和炭素原子上の好適な二価置換基としては、＝Ｏ、＝Ｓ、＝ＮＮＲ＊２、＝ＮＮＨＣ（Ｏ）Ｒ＊、＝ＮＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ＊、＝ＮＮＨＳ（Ｏ）２Ｒ＊、＝ＮＲ＊、＝ＮＯＲ＊、−Ｏ（Ｃ（Ｒ＊２））２〜３Ｏ−、若しくは−Ｓ（Ｃ（Ｒ＊２））２〜３Ｓ−の飽和炭素原子上の好適な二価置換基が挙げられ、式中、Ｒ＊の各独立した存在は、水素、下記に定義されるように置換され得るＣ１〜６脂肪族、又は非置換の５〜６員飽和、部分不飽和、又は窒素、酸素、若しくは硫黄から独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有するアリール環から選択される。「任意選択で置換された」基のビシナル置換可能炭素に結合している好適な二価置換基としては、−Ｏ（ＣＲ＊２）２〜３Ｏ−が挙げられ、式中、Ｒ＊の各独立した存在は、水素、下記に定義されるように置換され得るＣ１〜６脂肪族、又は非置換の５〜６員飽和、部分不飽和、又は窒素、酸素、若しくは硫黄から独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有するアリール環から選択される。
【０１３０】
Ｒ＊の脂肪族基上の好適な置換基としては、ハロゲン、−Ｒ●、−（ハロＲ●）、−ＯＨ、−ＯＲ●、−Ｏ（ハロＲ●）、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ●、−ＮＨ２、−ＮＨＲ●、−ＮＲ●２又は−ＮＯ２であり、式中、各Ｒ●は非置換であるか、又は「ハロ」が先行する場合、１つ以上のハロゲンでのみ置換されており、独立して、Ｃ１〜４脂肪族、−ＣＨ２Ｐｈ、−Ｏ−（ＣＨ２）０〜１Ｐｈ、又は窒素、酸素、若しくは硫黄から独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する５〜６員の飽和、部分不飽和、又はアリール環である。
【０１３１】
「任意選択で置換される」基の置換可能な窒素上の好適な置換基としては、−Ｒ†、−ＮＲ†２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ†、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ†、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ†、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ†、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ†、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ†２、−Ｃ（Ｓ）ＮＲ†２、−Ｃ（ＮＨ）ＮＲ†２、又は−Ｎ（Ｒ†）Ｓ（Ｏ）２Ｒ†が挙げられ、式中、各Ｒ†は、独立して水素、以下に定義されるように置換され得るＣ１〜６脂肪族、非置換−ＯＰｈ、又は非置換５〜６員飽和、部分不飽和、又は窒素、酸素、若しくは硫黄から独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有するアリール環であり、又は、上記定義にかかわらず、Ｒ†の２つの独立した発生は、それらの介在原子と共に、窒素、酸素、又は硫黄から独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する非置換３〜１２員飽和、部分不飽和、又はアリール単環又は二環式環を形成する。
【０１３２】
Ｒ†の脂肪族基上の好適な置換基は、独立して、ハロゲン、−Ｒ●、−（ハロＲ●）、−ＯＨ、−ＯＲ●、−Ｏ（ハロＲ●）、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ●、−ＮＨ２、−ＮＨＲ●、−ＮＲ●２、又は−ＮＯ２であり、式中、各Ｒ●は非置換であるか、又は「ハロ」が先行する場合は、１つ以上のハロゲンでのみ置換され、独立して、窒素、酸素、又は硫黄から選択される０〜４個のヘテロ原子を有する独立して、Ｃ１〜４脂肪族、−ＣＨ２Ｐｈ、−Ｏ−（ＣＨ２）０〜１Ｐｈ、又は独立して窒素、酸素、若しくは硫黄から選択される０〜４個のヘテロ原子を有する５〜６員飽和、部分不飽和、又はアリール環である。
【０１３３】
用語「脱離基」は、結合電子を用いて、安定な種として変位させることができる電子求引性を有する原子（又は原子の群）を指す。好適な脱離基の例としては、限定するものではないが、トリフラート、メシラート、トシラート、及びブロモレートを含むがこれらに限定されない、ハロゲン化物及びスルホン酸エステルが挙げられる。
【０１３４】
用語「加水分解性基」及び「加水分解性部分」は、例えば塩基性又は酸性条件下で加水分解を受けることができる官能基を指す。加水分解性残基の例としては、限定するものではないが、酸ハロゲン化物、活性化カルボン酸、及び当該技術分野において既知の様々な保護基が挙げられる（例えば、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，」Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，１９９９を参照されたい）。
【０１３５】
用語「有機残基」は、炭素含有残基、すなわち、少なくとも１つの炭素原子を含む残基を定義し、本明細書で上述した炭素含有基、残基、又はラジカルを含むが、これらに限定されない。有機残基は、様々なヘテロ原子を含有することができ、又は酸素、窒素、硫黄、リンなどを含むヘテロ原子を介して別の分子に結合することができる。有機残基の例としては、アルキル又は置換アルキル、アルコキシ又は置換アルコキシ、一置換又は二置換アミノ、アミド基などが挙げられるが、これらに限定されない。有機残基は、好ましくは、１〜１８個の炭素原子、１〜１５個の炭素原子、１〜１２個の炭素原子、１〜８個の炭素原子、１〜６個の炭素原子、又は１〜４個の炭素原子を含むことができる。いくつかの例では、有機残基は、２〜１８個の炭素原子、２〜１５個の炭素原子、２〜１２個の炭素原子、２〜８個の炭素原子、２〜４個の炭素原子、又は２〜４個の炭素原子を含むことができる。
【０１３６】
用語「残基」の非常に近い同義語は、「ラジカル」という用語であり、本明細書及び特許請求の範囲で使用されるとき、分子がどのように調製されるかに関わらず、本明細書に記載される分子の断片、基、又は下位構造を指す。例えば、特定の化合物中の２，４−チアゾリジンジオンラジカルは、チアゾリジンジオンが化合物を調製するために使用されるかどうかにかかわらず、構造を有する。
【０１３７】
【化１８】
2020502051.tif 000022
いくつかの実施形態では、ラジカル（例えば、アルキル）は、それに結合した１つ以上の「置換基ラジカル」によって、更に修飾（すなわち、置換アルキル）することができる。所与のラジカル中の原子数は、本明細書の他の箇所で反対に示されない限り、本明細書に開示される化合物及び組成物にとって重要ではない。
【０１３８】
用語「有機ラジカル」は、本明細書で定義及び使用されるとき、１つ以上の炭素原子を含有する。有機ラジカルは、例えば、１〜２６個の炭素原子、１〜１８個の炭素原子、１〜１２個の炭素原子、１〜８個の炭素原子、１〜６個の炭素原子、又は１〜４個の炭素原子を有することができる。いくつかの例では、有機ラジカルは、２〜２６個の炭素原子、２〜１８個の炭素原子、２〜１２個の炭素原子、２〜８個の炭素原子、２〜６個の炭素原子、又は２〜４個の炭素原子を有することができる。有機ラジカルは、しばしば有機ラジカルの炭素原子の少なくとも一部に結合した水素を有する。無機原子を含むことのない有機ラジカルの一例は、５，６，７，８テトラヒドロ−２−ナフチルラジカルである。いくつかの実施形態では、有機ラジカルは、ハロゲン、酸素、硫黄、窒素、リンなどを含む、それらに又はその中に結合した１〜１０個の無機ヘテロ原子を含有することができる。有機ラジカルの例としては、これらに限定されないが、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、一置換アミノ、二置換アミノ、アシルオキシ、シアノ、カルボキシ、カルボアルコキシ、アルキルカルボキサミド、置換アルキルカルボキサミド、ジアルキルカルボキサミド、置換ジアルキルカルボキサミド、アルキルスルホニル、アルキルスルフィニル、チオアルキル、チオハロアルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、複素環式、又は置換複素環式ラジカルが挙げられ、この用語は本明細書の他の箇所に定義される。ヘテロ原子を含む有機ラジカルのいくつかの非限定的な例としては、アルコキシラジカル、トリフルオロメトキシラジカル、アセトキシラジカル、ジメチルアミノラジカルなどが挙げられる。
【０１３９】
用語「無機ラジカル」は、本明細書で定義及び使用されるとき、炭素原子を含有せず、したがって炭素以外の原子のみを含む。無機ラジカルは、水素、窒素、酸素、珪素、リン、硫黄、セレン、並びにフッ素、塩素、臭素、及びヨウ素などのハロゲンから選択される原子の結合した組み合わせを含み、これらは、化学的に安定な組み合わせで個別に存在又は結合することができる。無機ラジカルは、上記に列挙したように、１０個以下、又は好ましくは１〜６個、又は１〜４個の無機原子を有する。無機ラジカルの例としては、限定するものではないが、アミノ、ヒドロキシ、ハロゲン、ニトロ、チオール、硫酸塩、ホスフェート及び同様に一般に知られている無機ラジカルが挙げられる。無機ラジカルは、その中で周期表の金属元素（アルカリ金属、アルカリ土類金属、遷移金属、ランタニド金属、又はアクチニド金属など）と結合していないが、そのような金属イオンは、硫酸塩、リン酸塩、又はアニオン性無機ラジカルのようなアニオン性無機ラジカルのための薬学的に許容されるカチオンとしての役割を果たすことができる。無機ラジカルは、本明細書の他の箇所で特に具体的に示されない限り、ホウ素、アルミニウム、ガリウム、ゲルマニウム、ヒ素、スズ、鉛、若しくはテルルなどの半金属元素、又は希ガス元素を含むことはない。
【０１４０】
本明細書で使用するとき、記号
【０１４１】
【化１９】
2020502051.tif 000023
（以下、「付着結合点」と呼ぶことができる）は、２つの化学物質間の付着点である結合を示し、そのうちの１つは、付着結合点に付着されているものとして描写され、他方は、付着結合点に取り付けられているものとして描写されていない。例えば、
【０１４２】
【化２０】
2020502051.tif 000024
は、化学物質「ＸＹ」が、付着結合点を介して別の化学物質に結合されていることを示す。更に、描写されていない化学物質への特定の付着点は、推論によって指定することができる。例えば、化合物ＣＨ３−Ｒ３（式中、Ｒ３はＨ又は
【０１４３】
【化２１】
2020502051.tif 000025
）であるとき、付着結合点は、Ｒ３がＣＨ３に結合しているものとして描写されている結合と同じ結合である。
【０１４４】
本明細書に記載の化合物は、１つ以上の二重結合を含有することができ、したがって、シス／トランス（Ｅ／Ｚ）異性体、並びに他の立体配座異性体を生じさせる可能性がある。反対に記載されない限り、本明細書に開示される化合物及び組成物は、そのような可能な異性体全て、並びにそのような異性体の混合物を含む。
【０１４５】
反対に記載されない限り、実線としてのみ示され、かつ楔状の線又は破線として示されていない化学結合を用いた式は、各鏡像異性体及び各ジアステレオマーのような可能な立体異性体、並びにラセミ混合物又はスカレミック混合物のような立体異性体の混合物を想到する。本明細書に記載の化合物は、１つ以上の不斉中心を含有することができ、したがって、ジアステレオマー及び光学異性体を生じさせる可能性がある。反対に記載されない限り、本明細書に開示される化合物及び組成物は、そのような全ての可能なジアステレオマー並びにそれらのラセミ混合物、それらの実質的に純粋な分解鏡像異性体、全ての可能な幾何異性体、及びそれらの立体異性体の薬学的に許容可能な塩、並びに単離された特定の立体異性体も含まれる。そのような化合物を調製するために使用される合成手順の過程で、又は当業者に既知のラセミ化若しくはエピマー化手順を使用する際、かかる手順の生成物は立体異性体の混合物とすることができる。
【０１４６】
多くの有機化合物は、平面偏光の平面を回転させる能力を有する光学活性形態で存在する。光学活性化合物を説明する際、接頭辞Ｄ及びＬ又はＲ及びＳは、そのキラル中心（複数可）の周囲の分子の絶対配置を示すために使用される。接頭辞ｄ及び１又は（＋）及び（−）は、化合物による平面偏光の回転の徴候を示すために採用され、（−）又は化合物が左旋性であることを意味する。（＋）又はｄの接頭辞を付けた化合物は、右旋性である。所与の化学構造については、立体異性体と呼ばれるこれらの化合物は、互いに重ならない鏡像であることを除いて同一である。特定の立体異性体は、鏡像異性体とも呼ばれ、そのような異性体の混合物は、しばしば鏡像異性体混合物と呼ぶことができる。鏡像異性体の５０：５０混合物をラセミ混合物と呼ぶ。本明細書に記載の化合物の多くは、１つ以上のキラル中心を有することができ、したがって、異なる鏡像異性体形態で存在することができる。所望であれば、キラル炭素をアスタリスク（＊）で指定することができる。キラル炭素への結合が開示される式中に直線として描写されている場合、（Ｒ）及び（Ｓ）の両方のキラル炭素の構成、したがって両方の鏡像異性体及びそれらの混合物の両方が、式内に包含されることが理解される。当該技術分野で使用されるように、キラル炭素について絶対配置を特定することが望ましい場合、キラル炭素への結合のうちの１つは、楔（平面上の原子への結合）として描写することができ、他方は、短い平行線の一連又は楔として描写することができる（平面下の原子への結合）。Ｃａｈｎ  Ｉｎｇｌｏｄ−Ｐｒｅｌｏｇシステムを使用して、（Ｒ）又は（Ｓ）構成をキラル炭素に割り当てることができる。
【０１４７】
本明細書に記載の化合物は、それらの天然同位体存在量及び非天然存在量の両方の原子を含む。開示される化合物は、記載された化合物と同一の同位体標識化合物又は同位体置換化合物とすることができるが、１つ以上の原子は、通常自然界で見出される原子質量又は質量数とは異なる原子質量又は質量数を有する原子で置換される。本明細書に開示される化合物に組み込むことができる同位体の例としては、水素、炭素、窒素、酸素、リン、フッ素、及び塩素の同位体、例えば、それぞれ、２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏ、１７Ｏ、３５Ｓ、１８Ｆ及び３６Ｃｌが挙げられる。そのプロドラッグを更に含む化合物、並びに前述の同位体及び／又は他の原子の他の同位体を含有する当該化合物又は当該プロドラッグの薬学的に許容される塩は、本発明の範囲内である。例えば、３Ｈ及び１４Ｃ、などの放射性同位体が組み込まれる特定の同位体標識化合物は、薬物及び／又は基質組織分布分析において有用である。トリチウム化、すなわち３Ｈ、及び炭素１４、すなわち、１４Ｃ、同位体は、調製及び検出可能性の容易さのために特に好ましい。更に、重水素などのより重い同位体、すなわち２Ｈによる置換は、代謝安定性がより高い、例えば、インビボ半減期の増加又は投与量の低減などの特定の治療上の利点をもたらすことができ、したがって、いくつかの状況では好ましい場合がある。同位体標識化合物及びそのプロドラッグは、一般に、容易に入手可能な同位体標識試薬を非同位体標識試薬の代わりに用いて、以下の手順を実施することによって調製することができる。
【０１４８】
本明細書に記載の化合物は、溶媒和物として存在することができる。場合によっては、溶媒和物を調製するために使用される溶媒は水溶液であり、次いで、溶媒和物はしばしば水和物と呼ばれる。化合物は水和物として存在することができ、これは、例えば、溶媒から又は水溶液からの結晶化によって、得ることができる。これに関連して、１つ、２つ、３つ、又は任意の数の溶媒和物又は水分子は、本明細書に開示されている化合物と組み合わせて溶媒和物及び水和物を形成することができる。反対に記載されない限り、そのような可能な溶媒和物は全て、本明細書の考察に含まれる。
【０１４９】
用語「共結晶」は、非共有結合によるそれらの安定性に起因する２つ以上の分子の物理的会合を意味する。この分子複合体の１つ以上の成分は、結晶格子内に安定なフレームワークを提供する。特定の例では、ゲスト分子は、水和物又は溶媒和物として結晶格子に組み込まれており、例えば、「Ｃｒｙｓｔａｌ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｈａｓｅｓ．Ｄｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏ−ｃｒｙｓｔａｌｓ  Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ  ａ  Ｎｅｗ  Ｐａｔｈ  ｔｏ  Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ？」Ａｌｍａｒａｓｓｏｎ，Ｏ．，ｅｔ．ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｒｏｙａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１８８９〜１８９６，２００４を参照されたい。共結晶の例としては、ｐ−トルエンスルホン酸及びベンゼンスルホン酸が挙げられる。
【０１５０】
本明細書に記載される特定の化合物は、互変異性体の平衡として存在することができることも理解される。例えば、α−水素を有するケトンは、ケト形態及びエノール形態の平衡状態で存在することができる。
【０１５１】
【化２２】
2020502051.tif 000026
【０１５２】
同様に、Ｎ−水素を有するアミドは、アミド形態及びイミド酸形態の平衡状態で存在することができる。反対に記載されない限り、全てのそのような可能な互変異性体が本明細書に含まれる。
【０１５３】
化学物質は、多型形態又は修飾と呼ばれる異なる順序で存在する固体を形成することが知られている。多型物質の異なる修飾は、それらの物理的特性において大きく異なる場合がある。化合物は、異なる多型形態で存在することができ、特定の修飾が準安定性であることが可能である。反対に記載されない限り、そのような可能な多型形態は全て含まれる。
【０１５４】
いくつかの例では、化合物の構造は、式
【０１５５】
【化２３】
2020502051.tif 000027
によって表すことができ、式
【０１５６】
【化２４】
2020502051.tif 000028
と同等であると理解され、式中、ｎは、通常整数である。すなわち、Ｒｎは、５個の独立した置換基、Ｒｎ（ａ）、Ｒｎ（ｂ）、Ｒｎ（ｃ）、Ｒｎ（ｄ）、Ｒｎ（ｅ）を表すものと理解される。「独立した置換基」とは、各Ｒ置換基が独立して定義することができることを意味する。例えば、一例では、Ｒｎ（ａ）がハロゲンである場合、その場合、Ｒｎ（ｂ）は必ずしもハロゲンではない。
【０１５７】
本明細書に開示される特定の材料、化合物、組成物、及び成分は、商業的に入手可能であるか、又は当業者に一般に知られている技術を使用して容易に合成することができる。例えば、開示された化合物及び組成物の調製に使用される出発物質及び試薬は、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，Ｗｉｓ．）、Ａｃｒｏｓ  Ｏｒｇａｎｉｃｓ（Ｍｏｒｒｉｓ  Ｐｌａｉｎｓ，Ｎ．Ｊ．）、Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，Ｐａ．）、又はＳｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．）は、Ｆｉｅｓｅｒ  ａｎｄ  Ｆｉｅｓｅｒ’ｓ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｖｏｌｕｍｅｓ  １〜１７（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，１９９１）；Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，Ｗｉｓ．），Ａｃｒｏｓ  Ｏｒｇａｎｉｃｓ（Ｍｏｒｒｉｓ  Ｐｌａｉｎｓ，Ｎ．Ｊ．），Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，Ｐａ．），若しくはＳｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．）のような商業的供給者から入手可能であり、又は、Ｆｉｅｓｅｒ  ａｎｄ  Ｆｉｅｓｅｒ’ｓ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｖｏｌｕｍｅｓ  １〜１７（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，１９９１）；Ｒｏｄｄ’ｓ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｃａｒｂｏｎ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ、Ｖｏｌｕｍｅｓ  １〜５  ａｎｄ  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｌｓ（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１９８９）；Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ、Ｖｏｌｕｍｅｓ  １〜４０（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、１９９１）；Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ）；及びＬａｒｏｃｋ’ｓ  Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ（ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ  Ｉｎｃ．，１９８９）。
【０１５８】
特に明記しない限り、本明細書に記載される任意の方法は、その工程が特定の順序で実施されることを必要とすると解釈されることを決して意図するものではない。したがって、方法クレームが、その工程がたどる順序を実際に記載しておらず、又はその工程が特定の順序に限定されるべきである旨が特許請求の範囲又は明細書に特に明記されていない場合、いかなる点においても順序が推測されることを意図するものではない。これは、工程又は動作フローの配置に関するロジック事項、文法上の編成又は句読点に由来する平易な意味、及び本明細書に記載される実施形態の数又は種類を含む。
【０１５９】
開示される組成物を調製するために使用される成分と、本明細書で開示される方法の範囲内で使用される組成物それ自体が開示される。これら及び他の物質が本明細書で開示されており、これらの物質の組み合わせ、サブセット、相互作用、群などが開示されている場合、これらの化合物の各々の様々な個々及び集合的な組み合わせ及び順列の具体的な言及は、明示的に開示されていない場合があるが、各々が具体的に想到され、本明細書に記載されることが理解される。例えば、特定の化合物が開示及び考察され、かつその化合物を含むいくつかの分子になされ得るいくつかの修飾が考察される場合、化合物のありとあらゆる組み合わせ及び順列、並びにそうでないと具体的に示されていない限り可能である修飾が具体的に想到される。したがって、分子Ａ、Ｂ及びＣの種類が開示されており、同様に分子Ｄ、Ｅ及びＦの種類及び分子Ａ〜Ｄの組み合わせの例が開示されている場合、それぞれが個々に列挙されていない場合であっても、それぞれが個々にかつ集合的に企図され、組み合わせＡ〜Ｅ、Ａ〜Ｆ、Ｂ〜Ｄ、Ｂ〜Ｅ、Ｂ〜Ｆ、Ｃ〜Ｄ、Ｃ〜Ｅ及びＣ〜Ｆが開示されると見なされる。同様に、これらの任意のサブセット又は組み合わせもまた開示される。したがって、例えば、Ａ〜Ｅ、Ｂ〜Ｆ及びＣ〜Ｅのサブグループが開示されていると見なされるであろう。この概念は、本出願の全ての態様に適用され、本明細書に開示される組成物の作製及び使用方法における工程を含むが、これに限定されない。したがって、実施することができる様々な追加の工程がある場合、これらの追加の工程の各々は、本明細書に開示されている方法の任意の特定の実施形態又は実施形態の組み合わせにより実施することができることが理解される。
【０１６０】
本明細書に開示される組成物は、特定の機能を有することが理解される。開示される機能を実行するための特定の構造要件が本明細書に開示され、開示される構造に関連する同じ機能を実行することができる様々な構造があし、これらの構造は通常同じ結果を実現することが理解される。
【０１６１】
本明細書で使用される略号は、Ｃｐａ、Ｌ−４−クロロフェニルアラニン、ｄａｐ、Ｄ−２，３−ジアミノプロピオン酸、Ｄａｐ、Ｌ−２，３−ジアミノプロピオン酸、ＦＩＴＣ、フルオレセインイソチオシアネート、Ｆｐａ、Ｌ−４−フルオロフェニルアラニン、Ｆ２ｐａ，Ｌ−３，４ジフルオロフェニルアラニン、ｆｐａ、Ｄ−２−フルオロフェニルアラニン、ｆ２ｐａ，Ｄ−３，４−ジフルオロフェニルアラニン、Ｎａｌ，Ｌ−２−ナフチルアラニン、Ｎｌｅ、ノルロイシン、Ｐｈｇ、Ｌ−αフェニルグリシン、Ｓａｒ、サルコシン、ＴＮＦα、腫瘍壊死因子−α、ＴＮＦＲ、ＴＮＦα受容体、である。
【０１６２】
化合物
シクロ（ＦΦＲＲＲＲＱ）（ｃＦΦＲ４、式中、Φ  Ｌ−２−ナフチルアラニンである（配列番号７２）は、以前に環状ＣＰＰのクラスの一員として報告されていたＺ．Ｑｉａｎ，ｅｔ  ａｌ．，ＡＣＳＣｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２０１３，８，４２３；Ｚ．Ｑｉａｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２０１４，５３，４０３４）。これらのＣＰＰは、膜リン脂質に直接結合し、エンドサイトーシスによって細胞に侵入し、かつ小さな不安定な小胞の出芽を誘導することによって初期エンドソームからサイトソールへと効率的に逃げる（同上、Ｚ．Ｑｉａｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２０１６，５５，２６０１）。細胞質送達効率（細胞外カーゴ濃度に対する細胞質の比として定義される）で、２０％、ｃＦΦＲ４（配列番号７２）は、Ｔａｔよりも桁違いに活性であり、最も広く使用されているＣＰＰの１つである（同上）。最も重要なことに、ｃＦΦＲ４（配列番号７２）及び他の環状ＣＰＰは、小分子、ペプチド、及びタンパク質を含む様々なカーゴ分子を哺乳動物細胞のサイトソールに効率的に送達することができる。例えば、短ペプチジルカーゴは、ｃＦΦＲ４（配列番号７２）環（環状送達）及び得られた環状ペプチドは、細胞膜透過性であった（同上；Ｐ．Ｕｐａｄｈｙａｙａ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．，Ｉｎｔ．Ｅｄ．２０１５，５４，７６０２；Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．２０１５，１２７，７７１２）ｃＦΦＲ４（配列番号７２）また、５７０万の異なる環状ペプチドと融合させて、細胞膜透過性二環式ペプチド（二環式送達）のライブラリを生成した（Ｔ．Ｂ．Ｔｒｉｎｈ，Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，ＡＣＳ  Ｃｏｍｂ．Ｓｃｉ．２０１６，１８，７５）。しかしながら、多くのペプチドリガンドは、生物学的に活性であるためにそれらの拡張された立体配座になければならず、かつ上記の環化アプローチと適合しないものでなければならない。この目的のために、直鎖ペプチジルリガンドの細胞内送達の可逆的な環化方法が、それらをＦΦＲ４（配列番号７２）と融合させ、かつジスルフィド結合を介した融合ペプチドの合成及び環化によって開発された（Ｚ．Ｑｉａｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．２０１５，５４，５８７４；Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．２０１５，１２７，５９７２）。残念ながら、より長いペプチドの環化が大きな環をもたらすため、その立体配座の可撓性は代謝安定性及び細胞膜透過性の増加を制限するので、以前のアプローチは比較的短いペプチドに限定される（Ｚ．Ｑｉａｎ，ｅｔ  ａｌ．，ＡＣＳ  Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２０１３，８，４２３；Ｚ．Ｑｉａｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２０１４，５３，４０３４）。内部チオール含有部分（例えば、本明細書に開示されるＡＡＳ基）による環化は、より小さい環及びより良好な細胞取り込みをもたらすが、直鎖形態のペプチジルカーゴの一部を残し、タンパク質分解の影響を受けやすい。この制限を克服するために、本明細書に開示されるのは可逆的な二環化方法であり、これは、一対のジスルフィド結合の形成によってＣＰＰ−カーゴ融合全体が二環構造に変換されることを可能にする（図２）。細胞外では、ペプチドは、高度に拘束された二環体として存在��、これは、向上した細胞膜透過性及びタンパク質分解安定性を有する。サイトソールに侵入すると、ジスルフィド結合は、細胞内グルタチオン（ＧＳＨ）により還元されて、直鎖生物活性ペプチドを産生する。二環式系は、最適な細胞取り込みのための小さなＣＰＰ環、及び異なる長さのペプチドを収容するための別個のカーゴ環の形成を可能にする。
【０１６３】
様々な実施形態では、本明細書に記載の可逆的な二環式ペプチドは、第１の環状ペプチド配列及び第２の環状ペプチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の環状ペプチド配列は、細胞膜透過配列（Ｘｍ）を含む。他の実施形態では、第２の環状ペプチド配列は、カーゴペプチド配列（Ｘｎ）を含む。
【０１６４】
いくつかの実施形態では、Ｘｍ及びＸｎは、融合される。いくつかの実施形態では、融合は、ＸｍのＣ末端とＸｎのＮ末端との間で生じる。他の実施形態では、融合は、Ｎ末端ＸｍとＸｎのＣ末端との間で生じる。更なる実施形態では、Ｘｍ及びＸｎを融合させるために、アミノ酸又は結合部分を使用することができる。更に他の実施形態では、Ｘｍ及びＸｎを融合させるために使用されるアミノ酸又は結合部分は、少なくとも１つの分子内ジスルフィド結合を形成し、それによって二環式ペプチド配列を形成する。更なる実施形態では、Ｘｍ及びＸｎを融合するアミノ酸はＡＡＳによって表される。他の実施形態では、結合部分は、本明細書で提供される式中、「Ｌ−Ｊ」によって表され得る。
【０１６５】
いくつかの実施形態では、Ｘｍは、Ｘｎに直接的又は間接的に接合され得る。例えば、いくつかの実施形態では、Ｘｍは、少なくとも２つのＡＡＳ部分を含むことができ、Ｘｎは、少なくとも２つのＡＡＳ部分を含むことができ、Ｘｍは、それぞれ、Ｘｍ及びＸｎ上の対向するＡＡＳ残基間に形成された２つのジスルフィド結合を介して、Ｘｎに直接接合され得る。他の実施形態では、結合部分は、Ｘｍ中のアミノ酸の側鎖に共有結合し、Ｘｎは、少なくとも２つのＡＡＳ部分を含み、これらの各々は結合部分とジスルフィド結合を形成する。結合部分を接合させるのに好適な側鎖を有するアミノ酸としては、アスパラギン、グルタミン、アスパラギン酸、グルタミン酸、及びリシンが挙げられる。更に、アミノ酸は、結合部分の接合のために、適切に修飾され得る。
【０１６６】
上述のように、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の二環式ペプチドは、結合部分を含む。いくつかの実施形態では、Ｘｍは、結合部分を介して環化される。他の実施形態では、Ｘｎは、結合部分を介して環化される。更に他の実施形態では、Ｘｍ及びＸｎの各々は、結合部分を介して独立して環化される。特定の実施形態では、Ｘｎのみが結合部分を介して環化され、Ｘｍは、環状ペプチド配列であり、結合部分は、Ｘｎ及びＸｍを接合し、本明細書に開示される二環式ペプチドを形成する。
【０１６７】
特定の実施形態では、結合部分への前駆体は、少なくとも２つの分子内ジスルフィド結合を形成する少なくとも２つのチオール基を含み、それによって本明細書に開示される二環式ペプチドを形成する。これらの実施形態では、ジスルフィド結合は、細胞内ＧＳＨによって還元されて、Ｘｍ及びＸｎを含む直鎖ペプチド配列を形成し、Ｘｍを含む直鎖配列（この場合、Ｘｎは、環状のままである）、又はＸｎを含む直鎖配列（この場合、Ｘｍは、環状のままである）を放出することができる。特定の実施形態では、細胞のサイトソールへの侵入後、ジスルフィド結合は細胞内ＧＳＨによって還元され、それによって、Ｘｎを含む直鎖配列を放出する。他の実施形態では、細胞内ＧＳＨは、２つのジスルフィド結合を減少させ、それによってＸｍ及びＸｎを含む直鎖配列を放出する。更に他の実施形態では、結合部分への前駆体は、３つのチオール基を含み、本明細書に開示される二環式ペプチド中に３つの分子内ジスルフィド結合を形成する。更に他の実施形態では、結合部分への前駆体は、４つの分子内ジスルフィド結合を形成する４つのチオール基を含む。
【０１６８】
したがって、様々な実施形態において、本明細書に開示されるのは、式１〜１２に従う二環式ペプチドである。
【０１６９】
【表２−１】
2020502051.tif 000029
【表２−２】
2020502051.tif 000030
式中、
Ｘｍ及びＸｎは、独立して、１〜５０（例えば、４〜１０）の天然又は非天然アミノ酸を含み、Ｘｍは、本明細書で定義される細胞膜透過ペプチド（ＣＰＰ）配列に対応し、Ｘｎは、本明細書で定義されるカーゴペプチド配列に対応し、
各発生においてＡＡＳは、独立して、Ｊとジスルフィド結合を形成する部分であり、
Ｊは、存在しないか、又はアルキル、Ｎ−アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、若しくはヘテロシクリルであり、これらの各々は、独立して、各発生においてＡＡＳとジスルフィド結合を形成する少なくとも２つの置換基で独立して置換されており、
各例においてＳＳはジスルフィド結合を表し、
Ｌは、存在しないか、又はＸｍ、Ｘｎ、若しくはそれらの組み合わせのアミノ酸にＡＡＳを結合する部分である。
【０１７０】
上記の式１〜１２に示すように、Ｘｎは、ＸｍのＮ末端又はＣ末端に配置することができる。いくつかの実施形態では、Ｌは存在し、かつＸｍ、Ｘｎ、又はＡＡＳのＮ末端又はＣ末端に結合することができる。他の実施形態では、Ｌは存在し、かつＸｍとＸｎとの間、ＸｍとＡＡＳとの間、及び／又はＸｎとＡＡＳとの間に各々が配置され、それらに結合することができる。いくつかの実施形態では、１つ以上のＡＡＳは、Ｘｎ内に配置することができる。そのような実施形態では、ＡＡＳは、野生型ペプチド配列（すなわち、Ｘｎ）の成分とすることができ、又はＡＡＳは、ペプチド配列（Ｘｎ）に導入され得る。いくつかの実施形態では、カーゴペプチド配列（Ｘｎ）は、２つのＡＡＳ（例えば、式１１）を有し、これにより、化合物がサイトソールに侵入した後にＣＰＰ配列からカーゴペプチド配列が切断されることを可能にする。
【０１７１】
本明細書で使用するとき、「Ｌ」は、ＪとＸｍ、Ｘｎ、又はそれらの組み合わせとの間の接続を指す。例えば、実施形態においては、Ｌは、Ｊの前駆体上の官能基とアミノ酸上のアミン基例えば、Ｘｍ又はＸｎ上）との間に形成される部分を含むことができる。アミン基は、Ｎ末端とすることができ、又はアミノ酸の側鎖上の、例えば、Ｘｍ上のアミン基とすることができる。そのような実施形態では、Ｊの前駆体は、カルボン酸部分又はその誘導体（例えば、ハロケトン）を含むことができ、これにより、アミノ酸又はカーゴ上のＮ末端とアミド結合を形成する。他の実施形態では、Ｌは、Ｊの前駆体上の官能基とアミノ酸上のカルボン酸基との間に形成される部分（例えば、Ｘｍ又はＸｎ上）を含むことができる。カルボン酸基はＣ末端とすることができ、又は、アミノ酸の側鎖上、例えばＸｍ上のカルボン酸基とすることができる。そのような実施形態では、Ｊの前駆体はアミンを含み、それによってアミノ酸又はカーゴのＣ末端とアミド結合を形成する。Ｌの非限定的な例としては、少なくとも１つのアミノ酸、アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボニル、アミド、イミン、エナミン、アルケン、アルキン、ジスルフィド、チオケトン、スルホニルケトン、カルバモイル、カルボニルオキシ、ジスルフィド、チオエーテル、及びトリアゾールが挙げられる。実施形態では、Ｌは、存在しないか、アミノ酸、
【０１７２】
【化２５】
2020502051.tif 000031
である。
【０１７３】
上記で定義したように、様々な実施形態において、Ｊはアルキル、Ｎ−アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、又はヘテロシクリルとすることができ、これらの各々は、独立して、各発生においてＡＡＳとジスルフィド結合を形成する少なくとも２つの置換基で独立して置換される。いくつかの実施形態では、Ｊは、各発生においてＡＡＳとジスルフィド結合を独立して形成する少なくとも２つの置換基を含む。他の実施形態では、Ｊは、各発生においてＡＡＳとジスルフィド結合を独立して形成する少なくとも３つの置換基を含む。更に他の実施形態では、Ｊは、各発生においてＡＡＳとジスルフィド結合を独立して形成する少なくとも４つの置換基を含む。
【０１７４】
いくつかの実施形態では、Ｌは存在せず、Ｊは、各発生においてＡＡＳとジスルフィド結合を独立して形成する３つの置換基を含む。そのような二環式ペプチドの例は、式８及び９に提供される。
【０１７５】
他の実施形態では、Ｌは存在せず、Ｊは、各発生においてＡＡＳとジスルフィド結合を独立して形成する４つの置換基を含む。そのような二環式ペプチドの例は、式１０に提供される。
【０１７６】
いくつかの実施形態では、Ｊは、存在せず、Ｌは、Ｘｍ及びＡＡＳに結合する。
【０１７７】
いくつかの実施形態では、Ｊ及びＬの各々が存在する。いくつかのそのような実施形態では、Ｊ及びＬは、Ｘｎ又はＸｍのＮ末端上に配置することができ、かつ（ジスルフィド結合を形成する前に）以下のうちの少なくとも１つによって表すことができる。
【０１７８】
【化２６】
2020502051.tif 000032
式中、Ｒは、Ｌの一部とすることができるＸｍ又はＸｎを含むペプチド配列の一部とすることができるアミノ酸の側面を表す。
【０１７９】
他のそのような実施形態では、Ｊ及びＬは、ＸｎとＸｍとの間、ＸｍとＸｎとの間、又はＸｎ及びＸｍのいずれかのＣ末端に配置することができ、以下のうちの１つ（ジスルフィド結合を形成する前）によって表すことができる。
【０１８０】
【化２７】
2020502051.tif 000033
【０１８１】
本開示の二環式ペプチドを形成するために、上記構造のチオール基上の水素は、独立して、スルフィン基への結合によって置き換えられる。
【０１８２】
いくつかの実施形態では、各ＡＡｓは、ジスルフィド結合（例えば、ジスルフィド結合を形成する前にチオール基を有するアミノ酸）を形成することができるアミノ酸、又はそれらの類似体又は誘導体である。そのようなアミノ酸、又はそれらの類似体若しくは誘導体の非限定的な例としては、
【０１８３】
【化２８】
2020502051.tif 000034
が挙げられ、ＡＡＳのＣ末端は、アミド結合又はＲ１を形成し、式中、Ｒ１は、ＯＨ、ＯＲ２、ＮＨＲ２であり、Ｒ２は、アルキル、アリール、ヘテロアリール、アミノ酸残基、２〜２０個のアミノ酸残基のペプチド配列、検出可能な部分、又は固体支持体である。
【０１８４】
いくつかの実施形態では、式９の化合物は、以下の式を有する。
【０１８５】
【化２９】
2020502051.tif 000035
【０１８６】
図８は、式９−Ａに従う二環式ペプチドを含有するトリス−ジスルフィドの実施形態を示す。
【０１８７】
いくつかの実施形態では、式１１の化合物は、以下の式を有する。
【０１８８】
【化３０】
2020502051.tif 000036
【０１８９】
いくつかの実施形態では、式１２の化合物は、以下の式を有する。
【０１９０】
【化３１】
2020502051.tif 000037
【０１９１】
本明細書に添付される付録は、本開示の二環式ペプチドの他の例示的な公式を含む。
【０１９２】
特定の態様では、本明細書では、式Ｉの二環式ペプチドが開示される。
【０１９３】
【化３２】
2020502051.tif 000038
式中、Ｒ１は、ＯＨ、ＯＲ２、ＮＨＲ２であり、Ｒ２は、Ｃ１〜２０アルキル、Ｃ６〜１０アリール、若しくはヘテロアリール、アミノ酸残基、２〜２０個のアミノ酸残基のペプチド配列、検出可能な部分、又は固体支持体であり、各ｄは、独立して、１又は２である。２つのペプチド配列Ｘｍ及びＸｎは、中央３，５−（ビスメルカプトメチル）ベンゾイル部分に結合され、配列Ｘｍの細胞膜透過ペプチドループ及び配列Ｘｎのカーゴループを有する二環構造を形成する（図２参照）。上述のように、Ｘｍ及びＸｎは、本明細書に記載の二環式ペプチド中のペプチド配列を表すために使用され、Ｘｍ及びＸｎのＮ末端及びＣ末端は、二環式ペプチドにおけるＸｍ及びＸｎの接続性を示すために、本明細書で提供される様々な式（例えば、上記式Ｉ中）に含まれ得る。Ｘｍ及びＸｎの末端残基（例えば、−ＮＨ−、又は−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−）が式中に提供される場合、そのような残基は、二環式ペプチドによって必要とされる追加の原子を表すものではなく、むしろこれらの残基は、Ｘｍ及び／又はＸｎに含有されるアミノ酸の成分であることを理解されたい。式Ｉの化合物が、それらの非環化形態であるとき、例えば、ジスルフィド架橋を形成する前、又は細胞に侵入しＧＳＨによって作用された後に、それらは、式Ｉ−Ａとして表すことができる。
【０１９４】
【化３３】
2020502051.tif 000039
【０１９５】
更なる態様では、Ｘｍ及びＸｎは、式Ｉに示されるものとは反対の方法で、中央３，５−（ビスメルカプトメチル）ベンゾイル部分に結合することができる。これらの化合物はまた、本明細書に開示され、式ＩＩによって表される。
【０１９６】
【化３４】
2020502051.tif 000040
【０１９７】
また、本明細書では、式ＩＩＩのペプチド配列も開示される。
ＢＭＢ−（ＡＡｎ）ｕ
ＩＩＩ
式中、
ｕは、４〜２０の整数である。
各ＡＡｎは、独立して、システイン、ホモシステイン、チオール基を有するアミノ酸類似体からなる群から独立して選択される少なくとも２つのＡＡｎ残基を有する、天然又は非天然アミノ酸残基であり、
ＢＭＢは、３，５−ビス（メルカプトメチル）安息香酸残基である。
【０１９８】
Ｘｍ及びＸｎ
Ｘｍ及びＸｎは、環化することができる任意の好適な数のアミノ酸を独立して含むことができる。いくつかの実施形態では、Ｘｍ及びＸｎは、１〜５０個のアミノ酸残基（例えば、１〜２０のアミノ酸であって、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１８、１９、及び２０を含み、それらの間の全ての範囲を含む）の配列を含むことができる。いくつかの実施形態では、Ｘｍ及びＸｎ中のアミノ酸の組み合わせ数は、少なくとも８個の残基である。いくつかの例では、Ｘｍ又はＸｎは、独立して、４つ以上のアミノ酸（例えば、５以上、６以上、７以上、８以上、又は９以上）を含むことができる。いくつかの例では、Ｘｍ又はＸｎは、独立して、２０以下のアミノ酸（例えば、１９以下、１８以下、１７以下、１６以下、又は１５以下）を含むことができる。特定の実施形態では、Ｘｍ又はＸｎは、独立して、５〜１０個のアミノ酸を含むことができる。各アミノ酸は、天然若しくは非天然アミノ酸、又はそれらの類似体若しくは誘導体とすることができる。したがって、本明細書で使用するとき、用語「アミノ酸」は、天然及び非天然アミノ酸、並びにそれらの類似体及び誘導体を含む。用語「非天然アミノ酸」は、天然アミノ酸と類似の構造を有することにより、天然アミノ酸の構造及び反応性を模倣するように天然アミノ酸と類似の構造を有するという点で、天然アミノ酸の同族体である有機化合物を指す。非天然アミノ酸は、修飾アミノ酸、及び／又はアミノ酸類似体とすることができ、これは、２０の一般的な天然に発生するアミノ酸又は希少な天然アミノ酸のセレノシステイン若しくはピロリシンのうちの１つではない。好適なアミノ酸の例としては、アラニン、アロソロイシン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、ナフチルアラニン、フェニルアラニン、プロリン、ピログルタミン酸、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリン、誘導体、又はそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。これらは、本明細書で使用される略号と共に、表１に列挙される。
【０１９９】
【表３】
2020502051.tif 000041
＊単一文字略号は、本明細書の大文字で示される場合、Ｌ−アミノ酸形態を示し、本明細書の小文字の場合には、Ｄ−アミノ酸形態を示す。
【０２００】
上述のように、非天然アミノ酸及びＤ−アミノ酸を本明細書で使用することができる。開示される方法及び組成物は、非天然及びＤ−アミノ酸を組み込むのに特に適している。アミノ酸は、ペプチド結合によって結合することができる。各アミノ酸は、アミノ基、カルボキシレート基、又は側鎖の隣接するアミノ酸に結合することができる。
【０２０１】
Ｘｍ
アミノ酸配列Ｘｍは、細胞膜透過ペプチド配列とすることができる。いくつかの実施形態では、Ｘｍは、長さが４〜２０（例えば、５〜１０）のアミノ酸残基である。いくつかの実施形態では、Ｘｍ中の少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は少なくとも３つのアミノ酸は、アルギニンである。いくつかの例では、Ｘｍ中の少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は少なくとも３つのアミノ酸は、疎水性側鎖を有する。疎水性側鎖を有するアミノ酸の非限定的な例としては、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、プロリン、ナフチルアラニン、フェニルグリシン、ホモフェニルアラニン、チロシン、シクロヘキシルアラニン、又はノルロイシンが挙げられる。特定の実施形態では、疎水性側鎖は、疎水性芳香族補助鎖である。いくつかの実施形態では、芳香族疎水性側鎖を有するアミノ酸としては、ナフチルアラニン、フェニルグリシン、ホモフェニルアラニン、フェニルアラニン、トリプトファン、及びチロシンが挙げられる。特定の実施形態では、疎水性を有するアミノ酸は、フェニルアラニン、ナフチルアラニン、トリプトファン、又はそれらの類似体若しくは誘導体である。いくつかの例では、Ｘｍ中の少なくとも１つのアミノ酸は、フェニルアラニン、フェニルグリシン、若しくはヒスチジン、又はそれらの類似体若しくは誘導体を含む。いくつかの例では、Ｘｍは、少なくとも１つのアルギニン又はその類似体若しくは誘導体を含む。
【０２０２】
式Ｉ又はＩＩのいくつかの具体的な例では、Ｘｍは、表２に列挙される配列のいずれかから独立して選択することができる。いくつかの例では、細胞膜透過ペプチドは、表２に列挙される配列のいずれとも逆とすることができる。
【０２０３】
【表４−１】
2020502051.tif 000042
【表４−２】
2020502051.tif 000043
Φ＝Ｌ−ナフチルアラニン；φ＝Ｄ−ナフチルアラニン；Ω＝Ｌ−ノルロイシン、ｒ＝Ｄ−アルギニン；Ｆ＝Ｌ−フェニルアラニン；ｆ＝Ｄ−フェニルアラニン；ｑ＝Ｄ−グルタミン、Χ＝Ｌ−４−フルオロフェニルアラニン；Ｄａｐ＝Ｌ−２，３−ジアミノプロピオン酸。
【０２０４】
いくつかの例では、Ｘｍは、配列番号６４〜配列番号１４６のいずれかとすることができる。いくつかの例では、Ｘｍは、配列番号６４〜配列番号１４６のいずれかに記載の変異体とすることができる。また、表２のペプチドの環状配列も本明細書に開示される。配列６４〜１４６はまた、１つ以上のシステイン残基（又はチオール基を有する他のアミノ酸）を内部又は一方又は両方の末端部（すなわち、Ｃ末端及び／又はＮ末端）に有することによって修飾することができ、これにより、システイン（又はチオール基を有する他のアミノ酸）とジスルフィド結合を形成することによってペプチドの環化を可能にする。
【０２０５】
ペプチド変異体は、当業者により十分に理解されており、アミノ酸配列修飾を含むことができる。例えば、アミノ酸配列修飾は、通常３種類のクラス、すなわち置換、挿入又は欠失変異体のうちの１つ以上に該当する。挿入は、アミノ末端及び／又はカルボキシル末端融合並びに単一又は複数のアミノ酸残基の配列内挿入を含む。挿入は、通常、アミノ末端又はカルボキシル末端融合よりも少ない挿入、例えば、１〜３残基程度となる。欠失は、１つ以上のアミノ酸残基をペプチド配列から除去することを特徴とする。通常、１〜３個以下の残基が、ペプチド内の任意の１つの部位で欠失される。アミノ酸置換は、一般的には単一の残基についてであるが、一度に多数の異なる位置で起こることができ、挿入は、通常、約１〜３個のアミノ酸残基程度となり、欠失は、約１〜３個の残基の範囲となる。欠失又は挿入は、好ましくは、隣接する対において行われ、すなわち、２個の残基の欠失又は２個の残基の挿入である。置換、欠失、挿入又はそれらの任意の組み合わせは、最終構築物に到達するように組み合わせることができる。置換変異体は、少なくとも１つの残基が除去され、異なる残基がその場所に挿入された変異体である。そのような置換は、一般的に、以下の表３に従って行われ、保存的置換と称される。
【０２０６】
【表５】
2020502051.tif 000044
【０２０７】
機能の実質的な変化は、表３の置換よりも保存性の低い置換を選択すること、すなわち、（ａ）例えば、シート又はヘリカル立体配座としての、置換の領域におけるポリペプチド骨格の構造、（ｂ）標的部位での分子の電荷若しくは疎水性、又は（ｃ）側鎖のかさ高さ、を維持するその効果において顕著に異なる残基を選択することによって行われる。一般にタンパク質特性において最大の変化を生じると予想される置換は、（ａ）親水性残基、例えば、セリル若しくはトレオニルが、疎水性残基、例えば、ロイシル、イソロイシル、フェニルアラニル、バリル若しくはアラニルに（又はこれらによって）置換されるか、（ｂ）システイン若しくはプロリンが、任意の他の残基に（又はこれらによって）置換されるか、（ｃ）正電荷側鎖を有する残基、例えば、リシル、アルギニル若しくはヒスチジルが、負電荷残基、例えば、グルタミル若しくはアスパルチルに（又はこれらによって）置換されるか、又は、（ｄ）かさ高い側鎖を有する残基、例えば、フェニルアラニンが、側鎖を有さないアミノ酸、例えば、グリシンに（又はこれによって）置換され、この場合は、（ｅ）硫酸化及び／又はグリコシル化のための部位の数を増加させることによる置換となる。
【０２０８】
例えば、１つのアミノ酸残基を生物学的及び／又は化学的に類似する別のアミノ酸残基と置換することは、保存的置換として当業者に既知である。例えば、保守的置換は、１つの疎水性残基を別の疎水性残基に、又は１つの極性残基を別の極性残基に置換することであると考えられる。置換には、例えば、Ｇｌｙ，Ａｌａ；Ｖａｌ，Ｉｌｅ，Ｌｅｕ；Ａｓｐ，Ｇｌｕ；Ａｓｎ，Ｇｌｎ；Ｓｅｒ，Ｔｈｒ；Ｌｙｓ，Ａｒｇ及びＰｈｅ，Ｔｙｒなどの組み合わせが挙げられる。各々が明示的に開示された配列のそのような保存的に置換された変異体は、本明細書で提供されるポリペプチドの範囲内に含まれる。
【０２０９】
本明細書で開示されるＸｍの変異体を定義する１つの方法は、特定の既知配列に対する相同性／同一性に関して変異体を定義することによると理解される。例えば、配列番号６４〜配列番号１４６は各々が、特定の配列を示す。具体的には、配列番号６４〜配列番号１４６の少なくとも８５％、９０％、９５％、９７％、又は９９％相同性を有するこれらのペプチドの変異体が開示される。当業者は、２つのタンパク質の相同性を判定する方法を容易に理解する。例えば、相同性は、相同性が最も高いレベルになるように２つの配列をアライメントした後に算出することができる。
【０２１０】
配列番号６４〜配列番号１４６に対する変異体に加えて、開示される方法及び組成物においても機能するこれらのペプチドの誘導体がある。誘導体は、残基の側鎖が修飾されている場合、１つ以上の残基を修飾残基で置換することによって形成される。
【０２１１】
特定の例では、Ｘｍは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又はより具体的には、少なくとも３つの隣接するアルギニン（Ｒ又はｒ）残基を含む。更に、これらの構造では、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は少なくとも３つの疎水性残基、例えば、フェニルアラニン、ナフチルアラニン、トリプトファン、又はそれらの類似体若しくは誘導体が存在する。例えば、フェニルアラニン、ナフチルアラニン、トリプトファン、又はそれらの類似体若しくは誘導体のような１つのアルギニン及び５つの疎水性残基、フェニルアラニン、ナフチルアラニン、トリプトファン、又はそれらの類似体若しくは誘導体のような２つのアルギニン及び４つの疎水性残基、フェニルアラニン、ナフチルアラニン、トリプトファン、又はそれらの類似体若しくは誘導体のような３つのアルギニン及び３つの疎水性残基、フェニルアラニン、ナフチルアラニン、トリプトファン、又はそれらの類似体若しくは誘導体のような４つのアルギニン及び２つの疎水性残基、あるいはフェニルアラニン、ナフチルアラニン、トリプトファン、又はそれらの類似体若しくは誘導体のような４つのアルギニン及び１つの疎水性残基が存在することができる。具体例では、本明細書に開示される環状化合物は、フェニルアラニン、ナフチルアラニン、トリプトファン、又はそれらの類似体若しくは誘導体のような３つのアルギニン及び３つの疎水性残基を有する。更に、アルギニン残基はクラスタ化することができ、例えばアルギニンは、別のアルギニン残基の２つのアミノ酸内にある。同様に、疎水性残基は、クラスタ化することができ、例えば、１つの疎水性残基は、別の疎水性残基の２つのアミノ酸である。
【０２１２】
好ましい例では、Ｘｍは、ＲＲＲＲΦＦ、ＦΦＲＲＲＲ、ＦｆФＲｒＲｒ、ｆФＲｒＲｒ、ｆФＲｒＲｒ、ＦφｒＲｒＲ、若しくはＦφｒＲｒＲであるか、又はそれらを含む。
【０２１３】
いくつかの実施形態では、アミノ酸配列Ｘｍは、
ＡＡ１−ＡＡ２−ＡＡ３−ＡＡ４−ＡＡ５−（ＡＡ６）ｍ−（ＡＡ８）ｐ−（ＡＡ９）ｑ
式中、
ＡＡ１、ＡＡ２、ＡＡ３、ＡＡ４、ＡＡ５、ＡＡ６、ＡＡ７、ＡＡ８、及びＡＡ９は、各々独立してアミノ酸であり、
少なくとも３つのアミノ酸がアルギニンであり、
少なくとも２つのアミノ酸が疎水性側鎖を含み、
ｍ、ｎ、ｐ、又はｑは、独立して、０及び１から選択される。
【０２１４】
いくつかの実施形態では、ＡＡ１、ＡＡ２、ＡＡ３、ＡＡ４、ＡＡ５、ＡＡ６、ＡＡ７、ＡＡ８、及びＡＡ９は、配列番号６４〜配列番号１４６の少なくとも１つのアミノ酸配列に対応する。
【０２１５】
本発明の特定の実施形態は、少なくとも４つの連続アミノ酸が交互のキラリティを有するアミノ酸配列を含む。本明細書で使用するとき、キラリティは、アミノ酸の「Ｄ」異性体及び「Ｌ」異性体を指す。本発明の特定の実施形態では、少なくとも４つの連続アミノ酸は、交互のキラリティを有し、残存アミノ酸はＬ−アミノ酸である。他の実施形態では、本発明のペプチドは、Ｄ−Ｌ−Ｄ−Ｌキラリティを有する４つのアミノ酸配列を含む。更に他の実施形態では、本発明のペプチドは、Ｌ−Ｄ−Ｌ−Ｄキラリティを有する４つのアミノ酸配列を含む。
【０２１６】
実施形態では、本発明のペプチドは、２つの連続したＬ−アミノ酸を含む。更なる実施形態では、本発明のペプチドは、２つのＤ−アミノ酸を分離する２つの連続するＬ−アミノ酸を含む。更なる実施形態では、本発明のペプチドは、２つのＤ−アミノ酸を分離する２つの連続するＬ−アミノ酸と、Ｄ−Ｌ−Ｌ−Ｄ−Ｌ−Ｄ又はＬ−Ｄ−Ｌ−Ｌ−Ｄ−Ｌ−Ｄキラリティを有するペプチド配列などであるが、これらに限定されない、交互のキラリティを有する少なくとも４つの連続アミノ酸とを含む。更なる実施形態では、本発明のペプチドは、２つのＤ−アミノ酸を分離する２つの連続したＬ−アミノ酸と、Ｄ−Ｌ−Ｌ−Ｄ−Ｌ−Ｄ−Ｌ又はＬ−Ｄ−Ｌ−Ｌ−Ｄ−Ｌ−Ｄ−Ｌのキラリティを有するペプチド配列などであるが、これらに限定されない、交互のキラリティを有する少なくとも５つの連続アミノ酸とを含む。
【０２１７】
実施形態では、本発明のペプチドは、２つの連続するＤ−アミノ酸を含む。更なる実施形態では、本発明のペプチドは、２つのＬ−アミノ酸を分離する２つの連続するＤ−アミノ酸を含む。本発明のなお更なる実施形態では、本発明のペプチドは、２つのＬ−アミノ酸を分離する２つの連続するＤ−アミノ酸、及び、Ｌ−Ｄ−Ｄ−Ｌ−Ｄ−Ｌを有するペプチド配列が挙げられるが、これらに限定されない、交互のキラリティを有する少なくとも４つの連続したアミノ酸を含む。本発明の更なる実施形態では、本発明のペプチドは、２つのＬ−アミノ酸を分離する２つの連続したＤ−アミノ酸、及び、Ｌ−Ｄ−Ｄ−Ｌ−Ｄ−Ｌ−Ｄを有するペプチド配列などであるが、これらに限定されない、交互のキラリティを有する少なくとも５つの連続アミノ酸を含む。
【０２１８】
いくつかの実施形態では、交互のキラリティを有するアミノ酸配列は、約４個以上のアミノ酸、少なくとも約５個のアミノ酸、少なくとも約６個のアミノ酸、少なくとも約７個のアミノ酸、少なくとも約８個のアミノ酸、又は少なくとも約９個のアミノ酸を含む。実施形態では、交互のキラリティを有するアミノ酸配列は、約４個のアミノ酸〜約９個のアミノ酸、又は約５個のアミノ酸〜約６個のアミノ酸、又は約７個のアミノ酸〜約９個のアミノ酸を含み、又は約８アミノ酸〜約９アミノ酸、又は約４アミノ酸〜約８アミノ酸、又は約４アミノ酸〜約７アミノ酸、又は約４アミノ酸〜約６アミノ酸、又は約４アミノ酸〜約５アミノ酸を含む。
【０２１９】
特定の実施形態では、本発明のペプチドは、少なくとも１つの疎水性残基を含む。更なる実施形態では、本発明のペプチドは、２つの疎水性残基を含む。更なる実施形態では、本発明のペプチドは、少なくとも２つの疎水性残基を含む。特定の実施形態では、少なくとも１つの疎水性残基は、芳香族疎水性残基である。特定の実施形態では、少なくとも１つの疎水性残基は、ナフチルアラニン、フェニルアラニン、トリプトファン、及びチロシンからなる群から選択される。更なる実施形態では、少なくとも１つの疎水性残基は、ナフチルアラニン及びフェニルアラニンからなる群から選択される。特定の実施形態では、本発明のペプチドは、少なくとも１つのナフチルアラニンを含む。更に他の実施形態では、本発明のペプチドは、少なくとも１つのフェニルアラニンを含む。更に他の実施形態では、本発明のペプチドは、少なくとも１つのフェニルアラニン及び少なくとも１つのナフチルアラニンを含む。本発明の特定の実施形態では、ペプチドは、ＡＡ１、ＡＡ２、又はＡＡ３位置に少なくとも１つの疎水性残基を含む。特定の実施形態では、ペプチドは、ＡＡ１、ＡＡ２、又はＡＡ３位置に少なくとも１つの芳香族疎水性残基を含む。本発明の更なる実施形態では、ペプチドは、ＡＡ１、ＡＡ２、又はＡＡ３位置においてナフチルアラニン及びフェニルアラニンからなる群から選択される少なくとも１つの疎水性残基を含む。
【０２２０】
特定の態様では、本明細書では、式Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩ、ＩＸ、Ｘ、及びＸＩＩの二環式ペプチド、
【０２２１】
【化３５】
2020502051.tif 000045
又はその薬学的に許容される塩が開示されており、ＡＡ１、ＡＡ２、ＡＡ３、ＡＡ４、ＡＡ５、ＡＡ６、ＡＡ７、ＡＡ８、ＡＡ９、ＡＡ１０、及びＡＡ１１は、各々が独立してアミノ酸である。
【０２２２】
いくつかの実施形態では、少なくとも３つのアミノ酸はアルギニンである。更なる実施形態では、少なくとも２つのアミノ酸は、疎水性残基を含む。いくつかの実施形態では、各発生においてＡＡＳは、独立して、Ｊとジスルフィド結合を形成する部分である。
【０２２３】
いくつかの実施形態では、Ｊは、Ｎ−アルキル、アリール、又はヘテロアリールであり、これらの各々は、独立して、各発生においてＡＡＳとジスルフィド結合を形成する少なくとも２つの置換基で独立して置換される。いくつかの実施形態では、Ｊは、
【０２２４】
【化３６】
2020502051.tif 000046
からなる群から選択される。
【０２２５】
いくつかの実施形態では、Ｌは、
【０２２６】
【化３７】
2020502051.tif 000047
からなる群から選択される。
【０２２７】
いくつかの実施形態では、化合物は、
【０２２８】
【化３８】
2020502051.tif 000048
【０２２９】
【化３９】
2020502051.tif 000049
又はその薬学的に許容される塩からなる群から選択され、各ｄは、独立して、１又は２である。
【０２３０】
式Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩ、ＩＸ、又はＸの化合物が、例えば、ジスルフィド架橋を形成する前、又は細胞に侵入しＧＳＨによって作用された後に、式Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩ、ＩＸ、又はＸの化合物がその非環化形態である場合、それらは式Ｉ−Ａとして表すことができる。また、式Ｖ−Ａ、ＶＩ−Ａ、ＶＩＩ−Ａ、ＶＩＩＩ−Ａ、ＩＸ−Ａ、及びＸ−Ａ、
【０２３１】
【化４０】
2020502051.tif 000050
又はその薬学的に許容される塩であって、
式中、
各発生においてＡＡＳ’は、独立してチオールを含む部分であり、
Ｊ’は、アルキル、Ｎ−アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、又はヘテロシクリルであり、これらの各々は、少なくとも２つのチオール置換基で独立して置換されており、
Ｘｎ及びＬは、本明細書で定義される。
【０２３２】
いくつかの実施形態では、Ｊは、Ｎ−アルキル又はアリールである。いくつかの実施形態では、Ｊ’は、
【０２３３】
【化４１】
2020502051.tif 000051
【０２３４】
いくつかの実施形態では、各ＡＡＳは、独立して
【０２３５】
【化４２】
2020502051.tif 000052
であり、式中、ＡＡＳ’のＣ末端は、アミド結合を形成するか、又はＲ１であり、Ｒ１はＯＨ、ＯＲ２、ＮＨＲ２であり、Ｒ２は、アルキル、アリール、ヘテロアリール、アミノ酸、２〜２０個のアミノ酸のペプチド配列、検出可能な部分、又は固体支持体である。
【０２３６】
いくつかの実施形態では、化合物は、
【０２３７】
【化４３】
2020502051.tif 000053
又は、その薬学的に許容される塩からなる群から選択される、請求項５８に記載の化合物。
【０２３８】
Ｘｎ
アミノ酸配列Ｘｎは、カーゴペプチド配列である。上述したように、アミノ酸Ｘｎの数は限定されない。いくつかの実施形態では、Ｘｎは、１〜５０個のアミノ酸、例えば、１〜２０、１〜１０、４〜２０、４〜１０のアミノ酸及びその中の全ての値及び部分範囲を有することができる。Ｘｎの配列の例は、表２に概説されたものであり、その変異体又は誘導体が挙げられる。カーゴペプチド配列の更なる例は、表４若しくは表５に列挙されるもののいずれか、又はそれらの誘導体若しくは組み合わせを含むことができる。
【０２３９】
【表６】
2020502051.tif 000054
【０２４０】
【表７】
2020502051.tif 000055
＊ｐＣＡＰ、ホスホクマリルアミノプロピオン酸Ω、ノルロイシンＵ，２−アミノ酪酸。
【０２４１】
式Ｉを参照する場合、配列Ｘｎは、各末端でシステイン残基（Ｃ）に結合され、当該カップリングによって形成されるアミド結合は、式Ｉに含まれることが理解されるべきである。同様に、式ＩＩを参照する場合、Ｘｍは、各末端でシステイン残基に結合され、当該カップリングによって形成されるアミド結合は、式ＩＩに含まれる。例えば、これらの部分は、−Ｃ−Ｘｎ−Ｃ−ＸＸｎ若しくは−Ｃ−Ｘｍ−Ｃ−、又は場合により−Ｃ−（ＡＡ）ｎ−Ｃ−と表すことができ、式中、ＡＡ＝は本明細書で定義されるアミノ酸残基であり、ｎは２〜８の整数であり、例えば、−Ｃ−ＡＡ１−ＡＡ２−Ｃ−、−Ｃ−ＡＡ１−ＡＡ２−ＡＡ３−Ｃ−、−Ｃ−ＡＡ１−ＡＡ２−ＡＡ３−ＡＡ４−Ｃ−、−Ｃ−ＡＡ１−ＡＡ２−ＡＡ３−ＡＡ４−ＡＡ５−Ｃ−、−Ｃ−ＡＡ１−ＡＡ２−ＡＡ３−ＡＡ５−ＡＡ６−Ｃ−、−Ｃ−ＡＡ１−ＡＡ２−ＡＡ３−ＡＡ５−ＡＡ６−ＡＡ７−Ｃ−、及び−Ｃ−ＡＡ１−ＡＡ２−ＡＡ３−ＡＡ５−ＡＡ６−ＡＡ７−ＡＡ８−Ｃ−である。式Ｉを参照する場合、配列Ｘｎに結合した２つの末端システイン残基は、式Ｉの３，５−（ビスメルカプトメチルベンゾイル）部分に結合され、１つのシステイン残基も、配列Ｘｍ（式Ｉの３，５−（ビスメルカプトメチルベンゾイル）部分にも結合される）に結合される。式ＩＩを参照する場合、配列Ｘｍに結合した２つの末端システイン残基は、式ＩＩの３，５−（ビスメルカプトメチルベンゾイル）部分に結合され、１つのシステイン残基も、配列Ｘｎ（式ＩＩの３，５−（ビスメルカプトメチルベンゾイル）部分にも結合される）に結合される。
【０２４２】
具体例
本明細書に開示される二環式ペプチドの具体例を表６に示す。
【０２４３】
【表８】
2020502051.tif 000056
ａ  ＢＭＢ、３、５−ビス（メルカプトメチル）ベンゾイル、Φ、Ｌ−２−ナフチルアラニン、ＭＰ，３−メルカプトプロピオニル。
ｂ  下線部のみである。
【０２４４】
検出可能な部分
開示される化合物はまた、例えば、Ｘｍ又はＸｎ又はＲ１上の任意のアミノ酸の側鎖に結合された、検出可能な部分も含むことができる。検出可能な部分は、任意の検出可能な標識を含むことができる。好適な検出可能な標識の例としては、紫外線Ｖｉｓ標識、近赤外標識、発光基、燐光基、磁気スピン共鳴標識、光増感剤、光膨潤部性部分、キレート中心、重原子、放射性同位体、同位体検出可能なスピン共鳴標識、常磁性部分、発色団、又はそれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、標識は、更なる試薬を添加することなく検出可能である。
【０２４５】
いくつかの実施形態では、検出可能な部分は生体適合性の検出可能な部分であり、そのため、化合物は、様々な生物学的用途での使用に好適とすることができる。本明細書で使用するとき、「生物適合性」及び「生物学的に適合性」は、一般に、任意の代謝産物又はその分解生成物と共に、細胞及び組織に対して一般に非毒性であり、かつ細胞及び組織がそれらの存在下でインキュベートされる（例えば、培養される）場合、細胞及び組織に有意な有害作用を引き起こさない化合物を指す。
【０２４６】
検出可能な部分は、蛍光標識又は近赤外標識などの発光団を含有することができる。好適な発光団の例としては、金属ポルフィリン、ベンゾポルフィリン、アザベンゾポルフィリン、ナフトポルフィリン、フタロシアニン、ペリレン、ペリレン二イミン、ピレンなどの多環芳香族炭化水素、アゾ染料、キサンテン染料、ボロンジピロメチエン、アザ−ボロンジピロメエン、シアニン染料、ビピリジン、ビピリジル、フェナントロリン、クマリン、並びにルテニウム及びイリジウムのアセチルアセトネートなどの金属配位子錯体、アクリジン、ベンゾフェノキサジンなどのオキサジン誘導体、アザ−アヌレン、スクアカイン、８ヒドロキシキノリン、ポリメタリン、量子ドット、ナノ結晶などの発光ナノ粒子、カルボスチリル、テルビウム錯体、無機蛍光体、結合又は誘導体化された染料などのクラウンエーテル類のようなイオノフォア、又はそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。好適な発光団の具体例としては、Ｐｄ（ＩＩ）オクタエチルポルフィリン、Ｐｔ（ＩＩ）−オクタエチルポルフィリン、Ｐｄ（ＩＩ）テトラフェニルポルフィリン、Ｐｔ（ＩＩ）テトラフェニルポルフィリン、Ｐｄ（ＩＩ）メソ−テトラフェニルポルフィリン四元ブタリン、Ｐｔ（ＩＩ）メソ−テトラフェニレン−メトロイルベンゾポルフィリン、Ｐｄ（ＩＩ）オクタエチルポルフィリンケトン、Ｐｔ（ＩＩ）オクタエチルポルフィリンケトン、Ｐｄ（ＩＩ）メソテトラ（ペンタフルオロフェニル）ポルフィリン、Ｐｔ（ＩＩ）メソテトラ（ペンタフルオロフェニル）ポルフィリン、Ｒｕ（ＩＩ）トリス（４，７ジフェニル−１，１０−フェナントロリン）（Ｒｕ（ｄｐｐ）３）、Ｒｕ（ＩＩ）トリス（１，１０−フェナントロリン）（Ｒｕ（フェン）３）、トリス（２，２’−ビピリジン）ルスニレン（ＩＩ）塩化物六水和物（Ｒｕ（ｂｐｙ）３）、エリトロシンＢ、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、エオシン、イリジウム（ＩＩＩ）（（Ｎ−メチル−ベンゾイミダゾール−２−イル）−７−（ジエチルアミノ）−クマリン）、インジウム（ＩＩＩ）（（ベンゾチアゾール−２−イル）−７−（ジエチルアミノ）−クマリン）−２−（アセチルアセトネート）、Ｌｕｍｏｇｅｎ染料、Ｍａｃｒｏｆｌｅｘ蛍光赤色、Ｍａｃｒｏｌｅｘ蛍光黄色、テキサスレッド（商標）、ローダミンＢ、ローダミン６Ｇ、硫黄ローダミン、Ｍ−クレゾール、チモールブルー、キシレノールブルー、クレゾールレッド、クロロフェノールブルー、ブロモクレゾールグリーン、ｂｒｏｍｃｒｅｓｏｌレッド、ブロモチモールブルー、Ｃｙ２、Ｃｙ３、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７４−ニチオフェノール、アリザリン、フェノフタレイン、ｏ−クレゾールフタレイン、クロロフェノールレッド、カルマナイト、ブロモ−キシレノール、フェノールレッド、中性赤色、ニトラジン、３，４，５，６−テトラブロモフェノレレイン、コンゴレッド、フルオレセイン、エオシン、２’，７’−ジクロロフルオレセイン、５（６）−カルボキシ−フルオレセシン、カルボキシナフトフルオレセイン、８ヒドロキシピレン−１，３，６−トリスルホン酸、半ナフチルホーナ、半ナフトフルオレセイン、トリス（４，７ジフェニル−１，１０−フェナントロリン）ルテニウム（ＩＩ）ジクロライド、（４，７ジフェニル−１，１０−フェナントロリン）ルテニウム（ＩＩ）テトラフェニルボロン、白金（ＩＩ）オクタエチルポルフィリン、ジアルキルカルボシアニン、ジオクタデシルシクロキサカルボシアニン、フルオレニルメチルオキシカルボニルクロリド、７アミノ−４−メチルコリナ（Ａｍｃ）、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、及びそれらの誘導体又は組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２４７】
いくつかの例では、検出可能な部分は、ローダミンＢ（Ｒｈｏ）、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、７−アミノ−４−メチルクラミニン（Ａｍｃ）、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、又はそれらの誘導体若しくは組み合わせを含むことができる。
【０２４８】
検出可能な部分は、アミノ基、カルボキシレート基、又は細胞膜透過ペプチド部分若しくはカーゴ部分のいずれかのアミノ酸の側鎖（例えば、アミノ基、カルボキシレート基、又は側鎖又はＸｍ若しくはＸｎ若しくはＲ１のいずれか）における細胞膜透過ペプチド部分に付着させることができる。
【０２４９】
治療部分
開示される化合物はまた、治療部分を含むことができる。いくつかの例では、カーゴ部分は治療部分を含む。検出可能な部分は、治療部分に結合することができ、又は検出可能な部分は治療部分としても機能することができる。治療部分とは、被験体に投与された場合、疾患又は障害の１つ以上の症状を減少させる基を指す。
【０２５０】
治療部分は、アンタゴニスト、例えば酵素阻害剤、及びアゴニスト、例えば、所望の遺伝子産物の発現の増加をもたらす転写因子、を含む多種多様な薬を含むことができる（当業者には理解されるように、拮抗的転写因子も使用することができる）。加えて、治療部分は、直接毒性を有することができ、及び／又は身体内の健康及び／又は不健康な細胞に毒性を誘導することが可能な薬剤を含む。また、治療部分は、潜在的病原体に対して免疫系を誘導及び／又はプライミングすることができる。
【０２５１】
治療部分は、例えば、抗癌剤、抗ウイルス剤、抗菌剤、抗炎症剤、免疫抑制剤、麻酔剤、又はそれらの任意の組み合わせを含むことができる。
【０２５２】
治療部分は、抗癌剤を含むことができる。抗癌剤の例としては、１３−ｃｉｓ−レチノイン酸、２−アミノ−６−メルカプトプリン、２−ＣｄＡ、２−クロロデオキシアデノシン、５−フルオロウラシル、６−チオグアニン、６−メルカプトプリン、アキュテイン、アクチノマイシンＤ、アドリアマイシン、アドルシル、アグリリン、アラ−コート、アルデスロイキン、アレムツズマブ、アリトレチノイン、アルカバン−ＡＱ、アルケラン、オールトランスレチノイン酸、αインターフェロン、アルトレタミン、アメトプテリン、アミホスチン、アミノグルテチミド、アナグレリド、アナンドロン、アナストロゾール、アラビノシルシトシン、アラネスプ、アレディア、アリミデックス、アロマシン、三酸化ヒ素、アスパラギナーゼ、ＡＴＲＡ、アバスチン、ＢＣＧ、ＢＣＮＵ、ベバシズマブ、ベキサロテン、ビカルタミド、ＢｉＣＮＵ、ブレオキサン、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ブスルファン、ブスルフェックス、Ｃ２２５、カルシウムロイコボリン、キャンパス、カンプトサー、カンプトテシン−１１、カペシタビン、カラック、カルボプラチン、カルムスチン、カルムスチンウェハー、カソデックス、ＣＣＮＵ、ＣＤＤＰ、ＣｅｅＮＵ、セルビジン、セツキシマブ、クロラブシル、シスプラチン、シトロボラムファクター、クラドリビン、コルチソン、コスメゲン、ＣＰＴ−１１、シクロホスファミド、シタドレン、シタラビン、シタラビンリポソーム、シトサル−Ｕ、サイトキサン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダルベポエチンα、ダウノマイシン、ダウノルビシン、ダウノルビシン塩酸塩、ダウノルビシンリポソーム、ダウノキソーム、デカドロン、デルタ−コルテフ、デルタソン、デニロイキンジフチトクス、デポサイト、デキサメタゾン、酢酸デキサメタゾン、デキサメタゾンリン酸ナトリウム、デキサソン、デクスラゾキサン、ＤＨＡＤ、ＤＩＣ、ジオデックス、ドセタキセル、ドキシ、ドキソルビシン、ドキソルビシンリポソーム、ドロキシア、ＤＴＩＣ、ＤＴＩＣドーム、デュラロン、エフデックス、エリガード、エレンス、エロキサチン、エルスパー、エムサイト、エピルビシン、エポエチンα、エルビツックス、エルウィニアＬ−アスパラギナーゼ、エストラムスチン、エチオール、エトポフォス、エトポシド、エトポシドホスフェート、ユーレキシン、エビスタ、エキセメスタン、ファレストン、ファスロデックス、フェマーラ、フィルグラスチム、フロクスリジン、フルダラ、フルダラビン、フルオロプレックス、フルオロウラシル、フルオロウラシル（クリーム）、フルオキシメステロン、フルタミド、フォリン酸、ＦＵＤＲ、フルベスタント、Ｇ−ＣＳＦ、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、ゲムツズマブオゾガミシン、ゲムザール、グリベック、ルプロン、ルプロンデポット、マツラン、マキシデックス、メクロレタミン、−メクロレタミン塩酸塩、メドラロン、Ｍｅｄｒｏｌ、メガセ、メゲステロール、酢酸メゲステロール、メルファラン、メルカプトプリン、メスナ、メスネックス、メソトレキセート、メソトレキセートナトリウム、メチルプレニソロン、ミロセル、レトロゾール、ネオサー、ニューラスタ、ニューメガ、ニューポゲン、ニランドロン、ニルタミド、窒素マスタード、ノバルデックス、ノバントロン、オクトレオチド、酢酸オクトレオチド、オンコスパー、オンコビン、オンタック、オンキサル、オプレベルキン、オラプレッド、オラソン、オキサリプラチン、パクリタクセル、パミドロナート、パンレチン、パラプラチン、ペジアプレッド、ＰＥＧインターフェロン、ペガスパルガーセ、ペグフィルグラスチム、ペグイントロン、ＰＥＧ−Ｌ−アスパラギナーゼ、フェニルアラニンマスタード、プラチノール、プラチノール−ＡＱ、プレニソロン、プレニソン、プレロン、プロカルバジン、ＰＲＯＣＲＩＴ、プロロイキン、カムスチンインプラントを有するプロリフェプロスパン２０、プリネトール、ラロキシフェン、リューマトレックス、リツキサン、リツキシマブ、Ｒｏｖｅｒｏｎ−Ａ（インターフェロンα−２ａ）、ルベックス、ルビドマイシン塩酸塩、サンドスタチン、サンドスタチンＬＡＲ、サルグラモスチム、ソルコルテフ、ソル−メドロール、ＳＴＩ−５７１、ストレプトゾシン、タモキシフェン、タルグレチン、タキソール、タキソテレ、テモダール、テモゾロマイド、テニポシド、ＴＥＳＰＡ、サリドマイド、タロミド、ＴｈｅｒａＣｙｓ、チオグアニン、チオグアニンタブロイド、チオホスホアミド、チオプレックス、チオテパ、ＴＩＣＥ、トポサー、トポテカン、トレミフェン、トラスツマブ、トレチノイン、トレキサール、トリセノックス、ＴＳＰＡ、ＶＣＲ、ベルバン、ベルケード、ベペシド、ベサノイド、ビアヂュール、ビンブラスチン、ビンブラスチン硫酸塩、ビンカサーＰｆｓ、ビンクリスチン、ビノレルビン、ビノレルビンタータレート、ＶＬＢ、ＶＰ−１６、ブモン、ゼローダ、ザノサー、ゼバリン、ゼネカード、ゾラデックス、ゾレドロン酸、ゾメタ、グリアデルウェファー、グリベック、ＧＭ−ＣＳＦ、ゴセレリン、果粒球コロニー刺激因子、ハロテスチン、ヘルセプチン、ヘキサドロール、ヘキサレン、ヘキサメチルメラニン、ＨＭＭ、ハイカムチン、ハイドレア、ハイドロコルテートアセテート、ヒドロコルチゾン、リン酸ヒドロコルチゾンナトリウム、コハク酸ヒドロコルチゾンナトリウム、ヒドロコルトンフォスファーゼ、ヒドロキシウレア、イブリツモマブ、イブリツモマブチウキセタン、イママイシン、イダルビシン、イフェックス、ＩＦＮ−α、イホスファミド、ＩＬ２、ＩＬ−１１、イマチニブメシラート、イミダゾールカルボキサミド、インターフェロンα、インターフェロンα−２ｂ（ＰＥＧ接合体）、インターロイキン２、インターロイキン−１１、ＩｎｔｒｏｎＡ（インターフェロンα−２ｂ）、ロイコボリン、ロイケラン、ロイキン、ロイプロリド、ロイロクリスチン、ロイスタチン、リポソームＡｒａ−Ｃ、液体プレデ、ロムスチン、Ｌ−ＰＡＭ、Ｌ−サルコリシン、メチコルテン、ミトマイシン、ミトマイシン−Ｃ、ミトキサントロン、Ｍ−プレニソル、ＭＴＣ、ＭＴＸ、ムスタルゲン、ムスチン、ムタマイシン、ミレラン、イレッサ、イリノテカン、イソトレチノイン、キドロラーゼ、ラナコート、Ｌ−アスパラギナーゼ、及びＬＣＲが挙げられる。治療部分はまた、例えば抗体などの生物学的医薬を含むことができる。
【０２５３】
いくつかの例では、治療部分は、ガンシクロビル、アジドチミジン（ＡＺＴ）、ラミブジン（３ＴＣ）などの抗ウイルス剤を含むことができる。
【０２５４】
いくつかの例では、治療部分は、アシドパスなどの抗菌剤を含むことができ、アセトスルホンナトリウム、アルムネシン、アレキシジン、アミジノリン、アミジノニンキシルキシル、アマサイクリン、アミフロキサシン、アミフロキサシンメシレート、アミドシン、アミルシン硫酸塩、アミノサリチル酸、アミノサリチレートナトリウム、アモキシシリン、アンホマイシン、アンピシリン、アンピシリンナトリウム、アピシリンナトリウム、アプラマイシン、アスパラギン酸、アストロマイシン硫酸塩、アビラマイシン、オルトパルシン、アジトロマイシン、アズニシリン、アジクリンナトリウム、バカニシリン塩酸塩、バシトラシン、バシトラシンメチレンジアリシレート、バシトラシン亜鉛、ベバーミクシン、ベンゾイルペルカルシウム、ベリトロマイシン、ベータミシン硫酸塩、ビアペネム、ビニラマイシン、ビフェニラミン塩酸塩、ビスピピリチオンマグサルフェックス、ブチカシン、ブチロ硫酸塩、カプリルマイシン硫酸塩、カルバックス、カルベニシリン二ナトリウム、カルベニシリンインダニルナトリウム、カルベニリンフェニルナトリウム、カルベニシリンカリウム、カルモナムナトリウム、セファル、セフェロキシロール、セフマンドール、セフマンドルナフレート、セフマンドルナトリウム、セフアロル、セファリジン、セファザフルオロナトリウム、セファゾリン、セファザリンナトリウム、セフブペルゾン、セフジア、セフェピーム、セフェピムヒドロクロリド、セフェテコール、セフィキシム、セファメンオキシムヒドロクロリド、セフメタゾール、セフメタゾールナトリウム、セフォニドモノナトリウム、セフォニドナトリウム、セフオペラゾンナトリウム、セフォアニド、セフォタキシムナトリウム、セフォテタン、セフォテタンジナトリウム、セフォチム塩酸塩、セフオキシチン、セフオキシチンナトリウム、セフピミゾール、セファピミゾールナトリウム、セファピラミド、セファピラミドナトリウム、セフピロム硫酸塩、セフポドキシムプロクセチル、セフプロジニル、セフロキサジン、セフサロジンナトリウム、セフタジジム、セフチブテン、セフチゾキシムナトリウム、セファトリアキソンナトリウム、セフロキシム、セフロキシムアセチル、セフロキシム（cefuroxime）ｐｉｖｏｘｅｔｉｌ、セフロキシムナトリウム、セセトリルナトリウム、セファシン、セファキシンヒドロクロリド、セファログリシン、セファリジン、セファロチンナトリウム、セファピルナトリウム、セファラジン、セトサイクリン塩酸塩、セトフェニコール、クロラムフェニコール、クロラムフェニコールパルミテート、クロラムフェニコールパントテン酸塩複合体、クロラムフェニコールナトリウムコハク酸塩、クロルヘキシジン亜リン酸クロルヘキシジン、クロロキシレノール、クロルテトラサイクリン硫酸塩、クロルテトラサイクリン塩酸塩、シノキサシン、シプロフロキサシン、シプロフロキサシン塩酸塩、シロレマイシン、クラリスロマイシン、クリンフロキサシン塩酸塩、クリンダマイシン、クリンダマイシン塩酸塩、クリンダマイシンパルミチン酸塩塩酸塩、クリンダマイシンリン酸塩、クロフェジミン、クロキサセリンベンズアチン、クロキサアセリンナトリウム、クロキシキリン、大腸菌ナトリ��ム、大腸菌硫酸塩、クママイシン、クママイシンナトリウム、サイクリンリン、シクロセリン、ダルフォプリスチン、ダプソンダプトマイシン、デメロサイクリン、デメクロサイクリン塩酸塩、デメサイクリン、デノノギン、ジベニジン、ジクロポニシリン、ジクロポニンナトリウム、ジヒドロストレプトマイシン硫酸塩、ジピリチオン、ジリスロマイシン、ドキシサイクリン、ドキシサイクリンカルシウム、ドキシサイクリン化石、ドキシサイクリンハイドレートドロキサシンナトリウム、エノキサシン、エピソニシリン、エピテトラサイクリン塩酸塩、エリスロマイシン、エリスロマイシン酸性基質、エリスロマイシンエストレート、エリスロマイシンエチルコハク酸塩、エリスロマイシン接着剤、エリスロマイシンラクトビオナート、エリスロマイシンプロピオネート、エリスロマイシンステアレート、エタンプトール塩酸塩、エタンアミド、フロキサシン、フロキサセリン、フルドアラニン、フルメクチン、ホスホマイシン、ホスホマイシントロメタミン、フモキシシリン、フラゾリウム塩化物、フラゾリウム酒石酸塩、フシデートナトリウム、フシジン酸、ゲンタマイシン硫酸塩、グローキシモナム、グラミジン、ハロプロリン、ヘタリン、ヘタリンカリウム、ヘキセジン、イブフロキサシン、イミネム、イソコナゾール、イセプタマイシン、イソニザリド、ホサマイシン、カナマイシン硫酸塩、キザマイシン、レボフルタドン、レボプロピルシクロリンカリウム、キシロマイシン、リナコマイシン、リナコマイシン塩酸塩、ロメフロキサシン、ロメフロキサシン塩酸塩、ロメフロキサシン酸塩、ロラカルベフ、マフェンニド、メクロサイクリン、メクロサイクリンスルホサリチレート、メロマイシンカリウムリン酸塩、メクキドックス、メロペネム、メタサイクリン、メタサイクリン塩酸塩、メタンアミン、メチルアミンヒットリウム、メチルアミンマンデレート、メチシリンナトリウム、メチオプリム、メトロニダゾール塩酸塩、メトロニダリン、メゾロニシリン、メゾロリンナトリウム、ミノサイクリン、ミノサイクリン塩酸塩、ミリンカマイシン塩酸塩、モネシン、モネシン（monensin sodium）、ナフチリンナトリウム、ナリジキサートナトリウム、ナイアシンアミド酸、ナツリマイシン、ネブラマイシン、ネオマイシンパルミテート、ブレオマイシン硫酸塩、ネオマイシンウンデシレン酸、ネオティマイシン硫酸塩、ニュートラマイシン、ニフルイラデン、ニフラルデゾン、ニフルネート、ニフルタロン、ニフルダジル、ニフェリミド、ニフィルヒノール、ニフルキナゾール、ニフチアゾール、ニトロサイクリン、ニトロフラントイン、ニトロアミド、ノルフロキサシン、ノボビオシンナトリウム、オフロキサシン、オネトリム、オキセリン、オキサラクシリンナトリウム、オキシモナム、オキシモナムナトリウム、オキソリン酸、オキシテトラサイクリン、オキシテトラサイクリンカルシウム、オキシテトラサイクリン塩酸塩、パルジマイシン、パラクロロフェノール、パラロマイシン、ペフロキサシン、ペフロキサシン（pefloxacin mesylate）、ペムネリン、ペニシリンＧベンザチン、ペニシリンＧカリウム、ペニシリンＧプロカイン、ペニシリンＧナトリウム、ペニシリンＶ、ペニシリンＶベンザチン、ペニシリン���ヒドラバミン、ペニシリンＶカリウム、ペンチゾドンナトリウム、フェニルアミノサリチレート、ピペラニンナトリウム、ピルベニシリンナトリウム、ピリジリンナトリウム、ピルホリマイシン塩酸塩、ピペンプニシリン塩酸塩、ピンプアンピシリン（pivampicine pamoate）、ピンプアンピリンプロベノエート、ポリミキシンＢ硫酸塩、ポルフィロマイシン、プロピカシン、ピラノアミド、ピリチオン亜鉛、キナデアミン酢酸塩、キヌクリスチン、ラセミフェノール、ラモプランン、ランマイシン、リロマイシン、レプロマイシン、リファブチン、リファメラン、リフェメキシロール、リファミド、リフアンシン、リフアプレチン、リフェキシミン、クロリテトラサイクリン、クロロテトラサイクリン硝酸塩、ロサマシン、ロカルバミン酸ブチレート、プロピオン酸ロシカルバミン酸塩、ロジカルバシン酸ナトリウム、ロジカルバシン酸塩、ロソキサシン、ロクサゾン、ロキシロマイシン、サンサイライン、サンフェトリネムナトリウム、サルコモキシシリン、サルコピニリン、スコプタノギン、シソミシン、シソミシン硫酸塩、スパーフロキサシン、スペクチノマイシン塩酸塩、スピラマイシン、スタルリマイシン塩酸塩、ステアロフィマイシン、ストレプトマイシン硫酸塩、ストレプトトニコゼイド、スルブネン、スルブエンアミド、スルファタミド、スルホタミドナトリウム、スルファチチン、スルファジアジン、サルファジアジンナトリウム、スルブチルオキサジン、スルファレン、スルホアミルジン、スルファメーター、スルファメタジン、スルフェメタゾ（sulfamethizole）、スルファメトキサゾール、スルファムノメトキシン、スルファモキサゾール、硫酸スルファニル亜鉛、スルファニトラン、サルファタラジン、スルファゾミゾール、スルフェチアチアゾール、スルファザミン、サルソキサゾール、サルソキサゾールアセチル、サルセボキサゾールジアミン、スルホミキシン、サロペム、スルタムリシリン、ヒマリンナトリウム、タルアンピシリン塩酸塩、テイコプランン、テマフロキサシン塩酸塩、テモセリン、テトラサイクリン、テトラサイクリン塩酸塩、テトラサイクリンリン酸錯体、テトロキサムリム、チアンフェニコール、チフェンクリンカリウム、チクサリンクレジルナトリウム、チアーリンジナトリウム、チアーリンモノナトリウム、チラトン、塩化チードニウム、トブラマイシン、トブラマイシン硫酸塩、トスフロキサシン、トリメチオリム、トリメチオリム硫酸塩、トリスルファピリミジン、トロリードマイシン、トロメトマイシン硫酸塩、チロトリシン、バニマイシン、バニマイシン塩酸塩、ビルガニマイシン、又はジボマイシンが挙げられる。
【０２５５】
いくつかの例では、治療部分は抗炎症剤を含むことができる。
【０２５６】
いくつかの例では、治療部分は、デキサメタゾン（Ｄｅｘ）を含むことができる。
【０２５７】
他の例では、治療部分は、治療用タンパク質を含む。例えば、一部の人々は、特定の酵素（例えば、リソソーム保存疾患）に欠陥を有する。本明細書では、酵素／タンパク質を、開示される細胞膜透過ペプチドのうちの１つに結合することによって、かかる酵素／タンパク質をヒト細胞に送達することが開示される。開示された細胞浸透ペプチドは、タンパク質（例えば、ＧＦＰ、ＰＴＰ１Ｂ、アクチン、カルモジュリン、トロポニンＣ）で試験され、機能することが示されている。
【０２５８】
標的部分
開示される化合物は、標的部分も含むことができる。いくつかの例では、カーゴ部分は標的部分を含む。標的部分は、例えば、１つ以上の酵素ドメインを標的とすることができるアミノ酸配列を含むことができる。いくつかの例では、標的部分は、癌、嚢胞性線維症、糖尿病、肥満、又はそれらの組み合わせなどの疾患において役割を果たすことができる酵素に対する阻害剤を含むことができる。例えば、標的部分は、表７に列挙される配列のいずれかを含むことができる。
【０２５９】
【表９−１】
2020502051.tif 000057
【表９−２】
2020502051.tif 000058
＊Ｆｐａ、Σ＝Ｌ−４−フルオロフェニルアラニン；Ｐｉｐ、Θ＝Ｌ−ホモプロリン；Ｎｌｅ、Ω＝Ｌ−ノルロイシン；Ｐｈｇ、Ψ＝Ｌ−フェニルグリシン、Ｆ２Ｐｍｐ、λ＝Ｌ−４−（ホスホノジフルオロメチル）フェニルアラニン、Ｄａｐ＝Ｌ−２，３−ジアミノプロピオン酸、Ｎａｌ，Φ’＝Ｌ−Β−ナフチルアラニン、Ｐｐ、
【０２６０】
【数１】
2020502051.tif 000059
Ｓａｒ、Ξ＝サルコシン、Ｔｍ＝トリメシン酸。
【０２６１】
いくつかの例では、標的部分は、配列番号１６８〜配列番号２１４のいずれかとすることができる。いくつかの例では、標的部分は、配列番号１６８〜配列番号２１４のいずれかに記載の変異体とすることができる。
【０２６２】
標的部分及び細胞膜透過ペプチド部分は、重複することができ、すなわち、細胞膜透過ペプチド部分を形成する残基は、標的部分を形成する配列の一部とすることができ、逆もまた同様である。
【０２６３】
治療部分は、アミノ基、カルボキシレート基、又は細胞膜透過ペプチド部分若しくはカーゴ部分のいずれかのアミノ酸の側鎖（例えば、アミノ基、カルボキシレート基、又は側鎖又はＸｍ若しくはＸｎ若しくはＲ１のいずれか）における細胞膜透過ペプチド部分に付着させることができる。いくつかの例では、治療部分は、検出可能な部分に付着させることができる。
【０２６４】
いくつかの例では、治療部分は、Ｒａｓ（例えば、Ｋ−Ｒａｓ）、ＰＴＰ１Ｂ、Ｐｉｎ１、Ｇｒｂ２  ＳＨ２、ＣＡＬ  ＰＤＺなど、又はそれらの組み合わせに対する阻害剤として作用することができる標的部分を含むことができる。
【０２６５】
この抗体は、ヒトにおいて、ＲＡＳ遺伝子によってコードされるタンパク質である。正常なＲＡＳタンパク質は、正常な組織シグナル伝達において必須の機能を果たし、Ｒａｓ遺伝子の突然変異は、多くの癌の発生に関与する。Ｒａｓは、分子オン／オフスイッチとして機能することができ、一旦それがオンになると、ＲＡＳが再動員され、成長因子及び他の受容体のシグナルの伝播に必要なタンパク質を活性化する。変異型のＲＡＳは、肺癌、結腸癌、膵臓癌、及び様々な白血病を含む様々な癌に関与している。
【０２６６】
タンパク質チロシンホスファターゼ１Ｂ（ＰＴＰ１Ｂ）は、ＰＴＰスーパーファミリのプロトタイプメンバであり、真核細胞シグナル伝達中に多数の役割を果たす。ＰＴＰ１Ｂは、インスリンシグナル伝達経路の負の調節因子であり、特にＩＩ型糖尿病の治療のための有望な潜在的治療標的と考えられる。ＰＩＰ１Ｂはまた、乳癌の発達に関与している。
【０２６７】
Ｐｉｎ１は、タンパク質のサブセットに結合し、タンパク質機能を調節する際のリン酸化後制御として役割を果たす酵素である。Ｐｉｎ１活性は、プロライン指向性キナーゼシグナル伝達の結果を調節することができ、その結果、細胞増殖及び細胞生存を調節することができる。Ｐｉｎ１の調節は、様々な疾患において役割を果たすことができる。Ｐｉｎ１の上方制御は、特定の癌に関与することができ、Ｐｉｎ１の下方制御はアルツハイマー病に関与することができる。Ｐｉｎ１の阻害剤は、癌及び免疫疾患の治療的影響を有することができる。
【０２６８】
Ｇｒｂ２は、シグナル伝達及び細胞伝達に関与するアダプタタンパク質である。Ｇｒｂ２タンパク質は、チロシンリン酸化配列に結合することができる１つのＳＨ２ドメインを含有する。Ｇｒｂ２は、広く発現しており、複数の細胞機能に不可欠である。Ｇｒｂ２機能の阻害は、発生過程を阻害することができ、様々な細胞型の形質転換及び増殖を阻害することができる。
【０２６９】
近年、嚢胞性線維症（ＣＦ）患者に変異した塩化物イオンチャネルタンパク質である、嚢胞性線維症膜コンダクタンスレギュレータ（ＣＦＴＲ）の活性は、そのＰＤＺドメイン（ＣＡＣＡＬ  ＰＤＺ）を介してＣＦＴＲ関連リガンド（ＣＡＬ）によって負に調節されることが報告されている（Ｗｏｌｄｅ，Ｍ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００７，２８２，８０９９）。ＣＦＴＲ／ＣＡＣＡＬ  ＰＤＺ相互作用の阻害は、最も一般的な形のＣＦＴＲ突然変異であるΔＰｈｅ５０８−ＣＦＴＲの活性を改善することが示され（Ｃｈｅｎｇ，ＳＨ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌ  １９９０，６３，８２７；Ｋｅｒｅｍ，ＢＳ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９８９，２４５，１０７３）、これはプロテアソーム介在性分解を低減することによるものである（Ｃｕｓｈｉｎｇ，ＰＲ  ｅｔ  ａｌ．Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．２０１０，４９，９９０７）。したがって、本明細書に開示されるのは、本明細書に開示される有効量の化合物又は組成物を投与することによって、嚢胞性線維症を有する被験体を治療するための方法が開示される。被験体に投与される化合物又は組成物は、ＣＡＬ  ＰＤＺに対する阻害剤として作用し得る標的部分を含み得る治療部分を含むことができる。また、本明細書に開示される組成物又は組成物は、ＣＦＴＲ機能を補正する分子と共に投与することができる。
【０２７０】
いくつかの例では、標的部分は、Ｅ−Ｔ−Ｇ−Ｅ−Ｆ−Ｌ（配列番号２１５）又はＬＤＰＥＴＧＥ（配列番号２１６）を含むことができる。
【０２７１】
結合部分
本開示は、式ＩＶ’に従う化合物を提供し、
【０２７２】
【化４４】
2020502051.tif 000060
式中、
各Ｙは独立して、ＣＨ又はＮであり、４個以下のＹがＮであり、
Ｚは、ＯＲａ、水素、ハロゲン、カルボシクリル、ヘテロシクリル、又はアミノ酸であり、
各Ｒは、独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、又はアミノ酸であり、
Ｒａは、独立してＨ、Ｃ（Ｏ）アルキル、アルキル、アルケニル、アルキニル、炭素環、又はヘテロシクリルである。
【０２７３】
実施形態において、式ＩＶの化合物は、式ＩＶ’ａに従う構造を有する。
【０２７４】
【化４５】
2020502051.tif 000061
【０２７５】
いくつかの実施形態では、ＺはＯＨである。いくつかの実施形態では、Ｒは、独立してアリール又はヘテロアリールである。
【０２７６】
いくつかの実施形態では、式ＩＶの化合物は、式ＩＶ’ｂに従う構造を有し、
【０２７７】
【化４６】
2020502051.tif 000062
式中、Ｑは各々独立して、ＣＨ又はＮである。
【０２７８】
いくつかの実施形態では、化合物は以下の構造を有する。
【０２７９】
【化４７】
2020502051.tif 000063
【０２８０】
作製方法
本明細書に記載の化合物は、当業者に理解されるように有機合成又はその変形例の当業者に周知の様々な方法で調製することができる。本明細書に記載の化合物は、容易に入手できる出発物質から調製され得る。最適な反応条件は、特定の反応物質又は使用される溶媒によって異なり得るが、そのような条件は、当業者によって決定され得る。
【０２８１】
本明細書に記載の化合物の変形例は、それぞれの化合物に関して記載されるように様々な構成成分の追加、サブトラクション、又は移動を含む。同様に、分子内に１つ以上のキラル中心が存在するとき、分子のキラリティを変更することができる。更に、化合物合成は、様々な化学基の保護及び脱保護を伴い得る。保護及び脱保護の使用、並びに適切な保護基の選択は、当業者によって決定され得る。保護基の化学的性質は、例えば、Ｗｕｔｓ  ａｎｄ  Ｇｒｅｅｎｅ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，４ｔｈ  Ｅｄ．，Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，２００６，に見出すことができ、その全体が参照として本明細書に組み込まれる。
【０２８２】
開示した化合物及び組成物の調製に使用される出発物質及び試薬は、Ｋａｔｃｈｅｍ（Ｐｒａｇｕｅ，Ｃｚｅｃｈ  Ｒｅｐｕｂｌｉｃ），Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ），Ａｃｒｏｓ  Ｏｒｇａｎｉｃｓ（Ｍｏｒｒｉｓ  Ｐｌａｉｎｓ，ＮＪ），Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡ），Ｓｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ），Ｐｆｉｚｅｒ（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ），ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ（Ｒａｌｅｉｇｈ，ＮＣ），Ｍｅｒｃｋ（Ｗｈｉｔｅｈｏｕｓｅ  Ｓｔａｔｉｏｎ，ＮＪ），Ｊｏｈｎｓｏｎ  ＆  Ｊｏｈｎｓｏｎ（Ｎｅｗ  Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ，ＮＪ），Ａｖｅｎｔｉｓ（Ｂｒｉｄｇｅｗａｔｅｒ，ＮＪ），ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＤＥ），Ｎｏｖａｒｔｉｓ（Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ），Ｗｙｅｔｈ（Ｍａｄｉｓｏｎ，ＮＪ），Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ−Ｓｑｕｉｂｂ（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ），Ｒｏｃｈｅ（Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ），Ｌｉｌｌｙ（Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ），Ａｂｂｏｔｔ（Ａｂｂｏｔｔ  Ｐａｒｋ，ＩＬ），Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  Ｐｌｏｕｇｈ（Ｋｅｎｉｌｗｏｒｔｈ，ＮＪ），若しくはＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ（Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）のような業者いずれかから入手可能であるか、又はＦｉｅｓｅｒ  ａｎｄ  Ｆｉｅｓｅｒ’ｓ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｖｏｌｕｍｅｓ  １〜１７（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，１９９１）；Ｒｏｄｄ’ｓ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｃａｒｂｏｎ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，Ｖｏｌｕｍｅｓ  １〜５  ａｎｄ  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｌｓ（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９８９）；Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｖｏｌｕｍｅｓ  １〜４０（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，１９９１）；Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ）；及びＬａｒｏｃｋ’ｓ  Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ（ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ  Ｉｎｃ．，１９８９）のような文献で説明された手順に従う当業者に周知の方法によって調整される。Ｒｏｄｄ’ｓ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｃａｒｂｏｎ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，Ｖｏｌｕｍｅｓ  １〜５  ａｎｄ  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｌｓ（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９８９）；Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｖｏｌｕｍｅｓ  １〜４０（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，１９９１）；Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ）；及びＬａｒｏｃｋ’ｓ  Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ（ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ  Ｉｎｃ．，１９８９）。本明細書に開示される薬学的担体などの他の材料は、商業的供給源から入手することができる。
【０２８３】
本明細書に記載した化合物を製造する反応は、溶媒中で実行することができ、この溶媒は、有機合成の当業者によって選択され得る。溶媒は、出発物質（反応物質）、中間生成物、又は生産物と、反応が行われる条件、すなわち、温度及び圧力の下で実質的に非反応性であり得る。反応は、１種類の溶媒又は１種類を超える溶媒の混合物中で行われ得る。生産物又は中間生成物の形成は、当該技術分野において周知の任意の好適な方法によって監視され得る。例えば、生産物の形成は、核磁気共鳴分光法（例えば、１Ｈ若しくは１３Ｃ）赤外線分光法、分光測定法（例えば、紫外可視）、若しくは質量分析法などの分光学的方法によって、又は高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）若しくは薄層クロマトグラフィなどのクロマトグラフィによって監視され得る。
【０２８４】
開示される化合物は、アミノ酸α−Ｎ末端が酸又は塩基保護基によって保護される固相ペプチド合成によって調製することができる。そのような保護基は、ペプチド連鎖を破壊することなく容易に除去可能である一方で、その中に含まれるキラル中心のいずれかのラセミ化を破壊することなく容易に除去可能である特性を有するべきである。好適な保護基は、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）、ビフェニルオキシソプロピルオキシカルボニル、ｔ−アミルオキシカルボニル、イソボルニルオキシカルボニル、α，α−ジメチル−３，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、ｏ−ニトロフェニルスルフェニル、２−シアノ−ｔ−ブチルオキシカルボニルなどである。９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）保護基は、開示される化合物の合成に特に好ましい。他の好ましい側鎖保護基は、リジン及びアルギニンのような側鎖アミノ基については、２，２，５，７，７，８ペンタメチルクロマン−６−スルホニル（ｐｍｃ）、ニトロ、ｐ−トルエンスルホニル、４−メトキシベンゼンスルホニル、Ｃｂｚ、Ｂｏｃ、及びアダマンタルオキシカルボニル、チロシンについては、ベンジル、ｏ−ブロモベンジルオキシ−カルボニル、２，６−ジクロロベンジル、イソプロピル、ｔ−ブチル（ｔ−Ｂｕ）、シクロヘキシル、シクロペンチル、及びアセチル（Ａｃ）、セリンについては、ｔ−ブチル、ベンジル、及びテトラヒドロピラニル、ヒスチジンについては、トリチル、ベンジル、Ｃｂｚ、ｐ−トルエンスルホニル、及び２，４−ジニトロフェニル、トリプトファンについては、ホルミル、アスパラギン酸及びグルタミン酸については、ベンジル及びｔ−ブチル、並びにシステインについては、トリフェニルメチル（トリチル）である。固相ペプチド合成法では、α−Ｃ末端アミノ酸は、好適な固体支持体又は樹脂に結合される。上記合成に有用な好適な固体支持体は、工程的縮合−脱保護反応の試薬及び反応条件に対して不活性であり、並びに使用される媒体に不溶である物質である。α−Ｃ末端カルボキシペプチドの合成のための固体支持体は、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，Ｃａｌｉｆ．）から入手可能な４−ヒドロキシメチルフェノキシメチル−コポリ（スチレン−１％ジビニルベンゼン）又は４−（２’，４’−ジメトキシフェニル−Ｆｍｏｃ−アミノメチル）フェノキシアセトアミドエチル樹脂である。α−Ｃ末端アミノ酸は、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）、又はビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスフィンクロリド（ＢＯＰＣ１）の有無にかかわらず、Ｎ、Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、Ｎ、Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）、又はＯ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ、Ｎ、Ｎ’、Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）によって樹脂に結合され、ジクロロメタン又はＤＭＦのような溶媒中、１０��〜５０℃の温度で約１〜約２４時間カップリングを媒介する。固体支持体が４−（２’，４’−ジメトキシフェニル−Ｆｍｏｃ−アミノメチル）フェノキシ−アセトアミドエチル樹脂である場合、Ｆｍｏｃ基は、上記のようにα−Ｃ末端アミノ酸とカップリングする前に、二級アミン、好ましくはピペリジンで切断される。脱保護された４（２’，４’−ジメトキシフェニル−Ｆｍｏｃ−アミノメチル）フェノキシ−アセトアミドエチル樹脂にカップリングするための１つの方法は、ＤＭＦ中のＯ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ、１当量）及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ、１当量）である。連続した保護アミノ酸のカップリングは、自動ポリペプチド合成装置において実施することができる。一例では、成長するペプチド鎖のアミノ酸中のα−Ｎ末端は、Ｆｍｏｃで保護される。成長するペプチドのα−Ｎ末端側からのＦｍｏｃ保護基の除去は、二級アミン、好ましくはピペリジンによる処理によって実現される。次いで、各保護アミノ酸は、約３倍モル過剰で導入され、カップリングは、好ましくはＤＭＦ中で実施される。カップリング剤は、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ、１当量）及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ、１当量）とすることができる。固相合成の最後に、ポリペプチドを樹脂から取り出し、連続的に又は単一操作のいずれかで脱保護する。ポリペプチドの除去及び脱保護は、チアナソール、水、エタンジチオール、及びトリフルオロ酢酸を含む切断試薬で樹脂結合ポリペプチドを処理することによって、単一の操作で実現することができる。ポリペプチドのα−Ｃ末端がアルキルアミドである場合、樹脂はアルキルアミンによるアミノ分解によって切断される。代替的に、ペプチドは、例えばメタノールのエステル交換、続いてアミノ分解、又は直接アミド化によって除去することができる。保護ペプチドは、この時点で精製されるか、又は次の工程に直接取り込むことができる。側鎖保護基の除去は、上記の切断カクテルを使用して実現することができる。完全脱保護ペプチドは、以下の種類のいずれか又は全てを用いる一連のクロマトグラフィ工程によって精製することができる：弱塩基性樹脂上でのイオン交換（アセテート形態）、アンダーバイ化ポリスチレン−ジビニルベンゼン（例えば、Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ  ＸＡＤ）上の疎水性吸着クロマトグラフィ、シリカゲル吸着クロマトグラフィ、カルボキシメチルセルロース上のイオン交換クロマトグラフィ、例えば、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５、ＬＨ−２０又は向流分布などの分配クロマトグラフィ、高性能液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）、特にオクチル−又はオクタデシルシリル−シリカ結合相カラムパッキング上の逆相ＨＰＬＣ。
【０２８５】
本明細書に開示される特定の方法は、二環式ペプチドを作製する方法であり、式ＩＶの化合物
【０２８６】
【化４８】
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（式中、Ｑ１及びＱ２は、互いに独立して、ＣＨ又はＮから選択される）を、８〜２０個のアミノ酸残基を有する固体支持ペプチドと接触させることであって、少なくとも２つの残基が、システイン残基である、接触させることと、前記ペプチドを前記固体支持体から切断することと、を含む。好適な固体支持体の例は、ポリスチレン、ポリアクリルアミド、ポリエチレングリコール支持体である。Ｒｉｎｋ、Ｗａｎｇ、又はＴｅｎｔａｇｅｌ樹脂は、使用することができる固体支持体の好適な例である。固体のサポートからペプチドを切断することは、通常、軽度の酸又は塩基で実現することができる。
【０２８７】
使用方法
また、本明細書で提供されるのは、本明細書に記載された化合物又は組成物の使用方法である。また、本明細書で提供されるのは、治療を必要とする被験体において、疾病又は病変を治療するための方法であり、本明細書に記載された化合物又は組成物のいずれかの治療有効量を被検体に投与することを含む。
【０２８８】
また、本明細書で提供されるのは、被検体において癌を治療する、防止する、又は寛解させる方法である。方法は、本明細書に記載の化合物若しくは組成物、又はその薬学的に許容される塩のうち１つ以上の治療有効量を被検体に投与することを含む。本明細書に記載される化合物及び組成物又はその薬学的に許容される塩は、ヒト（例えば、小児及び高齢者集団）、及び動物（例えば、獣医学の適用）における癌の治療に有用である。開示された方法は、癌の治療が必要である又は必要になり得る患者を同定することを任意追加的含み得る。本明細書に記載される化合物及び組成物によって治療できる癌の種類の例として、膀胱癌、脳癌、乳癌、大腸癌、子宮頸癌、胃腸癌、泌尿生殖器癌、頭頚部癌、肺癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、腎臓癌、皮膚癌、及び精巣癌が挙げられる。更なる例として、肛門、胆管、骨、骨髄、腸（結腸及び直腸を含む）、目、胆嚢、腎臓、口、喉頭、食道、胃、睾丸、頚、中皮腫、神経内分泌、陰茎、皮膚、脊髄、甲状腺、膣、外陰、子宮、肝臓、筋、血球（リンパ球及び他の免疫系細胞を含む）の癌及び／又は腫瘍が挙げられる。本明細書に記載の化合物及び組成物によって治療できる癌の更なる例として、癌腫、カポジ肉腫、黒色腫、中皮腫、軟部組織肉腫、膵癌、肺癌、白血病（急性リンパ芽球性、急性骨髄性、慢性リンパ性、慢性骨髄性など）、及びリンパ腫（ホジキン及び非ホジキン）、並びに多発性骨髄腫が挙げられる。開示される化合物によって治療可能な癌の更なる例は、ｐ５３癌であり、例えば、カーゴ部分が配列番号１５６、例えば、配列番号１６６及び配列番号１６７、である化合物を使用することによってなされる。
【０２８９】
本明細書に記載の癌の治療又は防止の方法は、１つ以上の追加の手段（例えば、抗癌剤又は電離放射線）による治療を更に含むことができる。１つ以上の追加の手段並びに本明細書に記載されるような化合物及び組成物又はその薬学的に許容される塩は、同時投与、並びに最大で数日離れた時間的に間隔のある順序を含む任意の順序で投与され得る。方法は、１つ以上の追加の手段並びに／又は本明細書に記載されるような化合物及び組成物若しくはその薬学的に許容される塩の複数回の投与も含み得る。１つ以上の追加の手段並びに本明細書に記載されるような化合物及び組成物又はその薬学的に許容される塩の投与は、同じ又は異なる経路によって可能である。１つ以上の追加の手段を使用して治療する際、本明細書に記載されるような化合物及び組成物又はその薬学的に許容される塩を、１つ以上の追加の手段を含む医薬組成物に混ぜ合わせることができる。
【０２９０】
例えば、本明細書に記載される化合物又は組成物又はその薬学的に許容される塩は、追加の抗癌剤と共に薬学的組成物に組み合わせることができる。
【０２９１】
本明細書で開示される化合物を、単独又は他の抗癌剤若しくは抗ウイルス薬（ガンシクロビル、アジドチミジン（ＡＺＴ）、ラミブジン（３ＴＣ）、など）との組み合わせで使用して、細胞形質転換の原因となり得るウイルスに感染している患者を治療する、及び／又は細胞内のウイルスゲノムの存在と関連する腫瘍若しくは癌を有する患者を治療することもできる。本明細書で開示される化合物を、腫瘍性疾患のウイルスに基づく治療と組み合わせて使用することもできる。
【０２９２】
また、本明細書に記載されるのは、被検体において腫瘍の成長を抑制する方法である。方法は、本明細書に記載されるように化合物又は組成物の治療有効量を腫瘍に接触させることを含み、治療有効量の電離放射線によって腫瘍に照射する工程を任意選択で含む。更に、腫瘍の放射線療法の方法が本明細書に提供される。方法は、本明細書に記載されるように化合物又は組成物の治療有効量を腫瘍に接触させることと、治療有効量の電離放射線によって腫瘍に照射することと、を含む。本明細書で使用するとき、電離放射線という用語は、十分なエネルギーを有するか、又はイオン化を発生させる核相互作用を介して十分なエネルギーを生じ得る粒子若しくは光子を含む放射線を指す。電離放射線の例は、ｘ線放射である。電離放射線の治療有効量は、本明細書に記載の化合物と組み合わせて投与した場合、細胞損傷又は細胞死の増加を生じる電離放射線の線量を指す。電離放射線は、放射性標識抗体及び放射性同位元素を投与することを含む、当該技術分野において周知の方法に従って送達され得る。
【０２９３】
本明細書に記載されるとおりの方法及び化合物は、予防的処置及び治療的処置の両方に有用である。本明細書で使用するとき、治療又は治療という用語は、予防、発症の遅れ、発症後の徴候又は症状の悪化、根絶、又は遅延、並びに再発の予防、を含む。予防的な使用のために、本明細書に記載されるような化合物及び組成物又はその薬学的に許容される塩の治療上有効量は、発症前（例えば、癌の明らかな兆候の前）、発症初期の間（例えば、癌の初期兆候及び症状時）、又は癌の発症が確定した後、被体に投与する。予防投与は、感染症の症状が現れる前の数日から数年間にわたって実施することができる。予防的投与は、例えば、前癌性病変を示す被験体の化学予防療法において、早期の悪性疾患と診断された人々、及び特定の癌に対する感染しやすいサブグループ（例えば、家族、人種、及び／又は職業）に対して使用することができる。治療的処置は、癌が診断された後に、本明細書に記載されるような化合物及び組成物又はその薬学的に許容される塩の治療上有効量を被検体に投与することを伴う。
【０２９４】
被験体における癌又は腫瘍の治療、予防、又は寛解を治療する方法のいくつかの例では、被験体に投与される化合物又は組成物は、Ｒａｓ（例えば、Ｋ−Ｒａｓ）、ＰＴＰ１Ｂ、Ｐｉｎ１、Ｇｒｂ２  ＳＨ２、又はそれらの組み合わせに対する阻害剤として作用し得る標的部分を含む得る治療部分を含むことができる。
【０２９５】
開示される主題はまた、代謝障害又は病状を有する被験体を治療するための方法に関する。一実施形態では、本明細書に開示される１つ以上の化合物又は組成物の有効量は、代謝障害を有し、かつその治療を必要とする被験体に投与される。いくつかの例では、代謝障害は、ＩＩ型糖尿病を含むことができる。被験体における代謝障害の治療、予防、又は寛解を治療する方法のいくつかの例では、被験体に投与される化合物又は組成物は、ＰＴＰ１Ｂに対する阻害剤として作用し得る標的部分を含み得る治療部分を含むことができる。この方法の特定の一例では、被験体は肥満であり、本方法は、本明細書に開示される組成物を投与することによって肥満の被験体を治療することを含む。
【０２９６】
開示される主題はまた、免疫障害又は病状を有する被験体を治療するための方法に関する。一実施形態では、本明細書に開示される１つ以上の化合物又は組成物の有効量は、免疫障害を有し、かつその治療を必要とする被験体に投与される。被験体における免疫障害の治療、予防、又は寛解を治療する方法のいくつかの例では、被験体に投与される化合物又は組成物は、Ｐｉｎ１に対する阻害剤として作用し得る標的部分を含み得る治療部分を含むことができる。
【０２９７】
開示される主題はまた、嚢胞性線維症を有する被験体を治療するための方法に関する。一実施形態では、本明細書に開示される１つ以上の化合物又は組成物の有効量は、嚢胞性線維症を有し、かつその治療を必要とする被験体に投与される。被験体における嚢胞性線維症を治療する方法のいくつかの例では、被験体に投与される化合物又は組成物は、ＣＡＬ  ＰＤＺに対する阻害剤として作用し得る標的部分を含み得る治療部分を含むことができる。
【０２９８】
組成物、処方及び投与方法
開示した化合物、及びそれらを含む組成物の生体内適用は、現在又は将来を見越して当業者に周知の任意の好適な方法及び技術によって達成され得る。例えば、開示した化合物は、生理学的に又は薬学的に許容される形態で処方され、当該技術分野において周知の任意の好適な経路（例えば、経口、鼻、直腸、局所性、及び非経口の投与経路）によって投与され得る。本明細書で使用するとき、非経口という用語は、注射によるなどの、皮下、皮内、静脈内、筋肉内、腹腔内及び胸骨内の投与を含む。開示した化合物又は組成物の投与は、当業者によって容易に決定され得るような単回投与、又は連続若しくは別個の間隔であり得る。
【０２９９】
本明細書で開示した化合物及びそれらを含む組成物はまた、リポソーム技術、持続放出性カプセル、埋め込み型ポンプ、及び生分解性容器を使用して投与することもできる。これらの送達方法は、有利なことに、長期間にわたって均一の用量を提供することができる。化合物はまた、それらの塩誘導体の形態又は結晶質形態で投与することもできる。
【０３００】
本明細書で開示した化合物は、薬学的に許容される組成物を調製するための既知の方法に従って処方され得る。処方は、当業者に既知であり、かつ容易に入手できる多数の情報源に詳細に説明されている。例えば、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ（１９９５）によるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅは、開示される方法に関連して使用することができる製剤を記載している。一般に、本明細書で開示した化合物は、化合物の有効な投与を容易にするために化合物の治療有効量を好適な担体と組み合わせるように処方することができる。使用される組成物はまた、様々な形態であり得る。これらには、例えば、固体、半固体、及び液体剤形（例えば錠剤、ピル、粉末、液体溶液又は懸濁液、座薬、注射可能及び注入可能溶液、並びにスプレー）を含む。好ましい形態は、意図した投与方法及び治療適用例に応じて異なる。組成物は、好ましくは、当業者に周知の従来の薬学的に許容される担体及び希釈剤も含む。化合物と共に使用するための担体及び希釈剤の例として、エタノール、ジメチルスルホキシド、グリセロール、アルミナ、デンプン、生理食塩水、並びに同等の担体及び希釈剤が挙げられる。所望の治療的処置のためにかかる用量の投与をもたらすため、本明細書に開示される組成物は、有利には、担体又は希釈剤を含む組成物の総重量に基づき、合計量約０．１重量％〜１００重量％の１つ以上の対象の化合物を含んでよい。
【０３０１】
投与に好適な処方は、例えば、抗酸化剤、緩衝液、制菌剤、及び処方を意図したレシピエントの血液と等張にする溶質を含み得る水性無菌注射液、並びに懸濁化剤及び増粘剤を含み得る水性及び非水性無菌懸濁液が挙げられる。処方は、単回投与容器又は複数回投与容器、例えば密封したアンプル及びバイアル瓶に入れて提供することができ、例えば、使用前に注射用の水など無菌液体担体の条件のみが必要なフリーズドライ（凍結乾燥）状態で貯蔵することができる。即時の注射溶液及び懸濁液は、無菌粉末、顆粒、錠剤などから調製され得る。特定の上述した賦形剤に加えて、本明細書で開示した組成物は、議論されている処方のタイプを考慮して従来の当該技術分野の他の薬剤を含めることができることを理解されたい。
【０３０２】
本明細書で開示した組成物は、及びそれらを含む組成物は、細胞に直接接触することによって、又は担持手段を介して細胞に送達され得る。化合物及び組成物を細胞に送達するための担持手段は、当該技術分野において周知であり、例えば、リポソーム部分に組成物を封入することを含む。細胞への本明細書で開示した化合物及び組成物の送達の別の手段は、標的細胞に送達するために標的となるたんぱく質又は核酸に化合物を付着させることを含む。米国特許第６，９６０，６４８号、並びに米国特許出願公開第２００３００３２５９４号及び同第２００２０１２０１００号は、別の組成物に結合され得、及び組成物が生体膜を横断して移動することを可能にするアミノ酸配列を開示している。米国特許出願公開第２００２００３５２４３号はまた、細胞内送達のために細胞膜を横断して生物学的部分を移送する組成物について説明している。化合物はまた、ポリマーに組み込むこともでき、その例としては、頭蓋内腫瘍用のポリ（Ｄ−Ｌラクチド−コ−グリコリド）ポリマー、ポリ［ビス（ｐ−カルボキシフェノキシ）プロパン、セバシン酸］２０：８０モル比（ＧＬＩＡＤＥＬで使用）、コンドロイチン、キチン及びキトサンが挙げられる。
【０３０３】
腫瘍障害の治療のために、本明細書で開示した化合物を、治療を必要とする患者に他の抗腫瘍若しくは抗癌物質と、並びに／又は放射線及び／若しくは光動療法と、並びに／又は外科療法と組み合わせて投与して腫瘍を除去することができる。これらの他の物質又は治療は、本明細書で開示した化合物と同時又は異なるときに提供され得る。例えば、本明細書で開示した化合物は、タキソール若しくはビンブラスチンなどの有糸分裂阻害剤、シクロホスアミド若しくはイホスファミドなどのアルキル化剤、５−フルオロウラシル若しくはヒドロキシウレアなどの代謝拮抗薬、アドリアマイシン若しくはブレオマイシンなどのＤＮＡインターカレータ、エトポシド若しくはカンプトテシンなどのトポイソメラーゼ阻害薬、アンギオスタチンなどの抗血管新生薬、タモキシフェンなどの抗エストロゲン薬、並びに／又は他の抗癌剤若しくは抗体、それぞれ例えば、ＧＬＥＥＶＥＣ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）及びＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）、又はイピリムマブ及びボルテゾミブなどの免疫治療薬と組み合わせて使用され得る。
【０３０４】
特定の例において、本明細書で開示した化合物及び組成物は、所望により不活性希釈剤などの薬学的に許容される担体と組み合わせて、望まない細胞成長の部位など（腫瘍部位又は良性皮膚成長、例えば、腫瘍又は皮膚成長に注射又は局所に適用される）、１つ以上の解剖学的部位に局所的に投与され得る。本明細書で開示した化合物及び組成物は、所望により不活性希釈剤などの薬学的に許容される担体、又は経口送達用の吸収可能な食用の担体と組み合わせて全身投与され得る（例えば、静脈内又は経口的に）。それら化合物及び組成物は、ハード若しくはソフトシェルゼラチンカプセル内に密閉され得、錠剤に圧縮され得、又は患者の治療食の食物に直接組み込まれ得る。経口治療的投与に関して、活性化合物は、１つ以上の賦形剤と組み合わされ、摂取可能錠剤、バッカル錠剤、トローチ剤、カプセル、エリキシル剤、懸濁液、シロップ剤、ウェハ、エアゾールスプレーなどの形態で使用され得る。
【０３０５】
開示される組成物は、生物学的に利用可能であり、経口的に送達することができる。口腔用組成物は、錠剤、トローチ、丸薬、カプセルなどとすることができ、かつ以下を含有することができ、トラガカントガム、アカシア、トウモロコシデンプン又はゼラチンなどの結合剤、リン酸二カルシウムなどの賦形剤、トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、アルギン酸などの崩壊剤、ステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤、及びスクロース、フルクトース、ラクトース若しくはアスパルテームなどの甘味剤、又はペパーミント、冬緑油、又はチェリー風味付与剤などの風味剤を添加することができる。単位剤形がカプセルであるとき、上記タイプの物質に加えて植物油又はポリエチレングリコールなどの液体担体を含むことができる。様々な他の物質は、コーティングとして存在し得、ないしは別の方法で固形単位剤形の物理形態を変更することができる。例えば、錠剤、ピル、又はカプセルは、ゼラチン、ワックス、セラック、又は糖などでコーティングされ得る。シロップ剤又はエリキシル剤は、活性化合物、甘味剤として、スクロース又はフルクトース、保存剤としてメチル及びプロピルパラベン、チェリー又はオレンジ香料などの染料及び香料を含むことができる。当然のことながら、任意の単位剤形を調製する際に使用される任意の物質は、薬学的に許容される及び使用される量において実質的に非毒性である必要がある。加えて、活性化合物は、持続放出性の調整物及びデバイスに組み込まれ得る。
【０３０６】
薬学的に許容される塩又はプロドラッグを含む、本明細書で開示した化合物及び組成物は、注入又は注射によって静脈内、筋肉内、又は腹腔内に投与され得る。活性剤又はその塩の溶液は、水で調製され得、所望により非中毒性の界面活性剤と混合され得る。分散液は、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、トリアセチン、及びそれらの混合物で、並びに油で調製することもできる。通常の保存及び使用条件の下では、これらの調製物は、保存剤を含んで微生物の増殖を防ぐことができる。
【０３０７】
注射又は注入に好適な薬学的剤形は、活性成分を含む無菌水溶液又は分散液又は無菌粉末を含み得、それは無菌の注射可能又は注入可能な溶液又は分散液のその場での調製に適合し、必要に応じてリポソームに封入される。最終剤形は、無菌で液性かつ、製造及び保存条件の下で安定である必要がある。液体担体又は賦形剤は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど）、植物油、非中毒性グリセリルエステル、及びそれらの好適な混合物を含む溶媒又は液体の分散液媒質であり得る。適切な流動性は、例えば、リポソームの形成によって、分散液の場合に必要な粒径の維持により、又は界面活性剤の使用により、維持され得る。必要に応じて、微生物の活動の防止は、様々な他の抗菌薬及び抗真菌薬、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどによって徐々にもたらされ得る。多くの場合に、等張化剤、例えば、糖、緩衝剤、又は塩化ナトリウムを含むことが好ましいであろう。注射可能な組成物の持続的吸収は、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンなど吸収を遅延させる薬剤の封入によって徐々にもたらされ得る。
【０３０８】
無菌の注射可能な溶液は、適切な溶媒に本明細書で開示した化合物及び／又は薬剤を必要な量で、必要に応じて上に列挙した様々な他の成分と組み入れて、続けて濾過滅菌することによって、調製される。無菌注射剤を調製するための無菌粉末の場合、好ましい調製方法は、予め無菌濾過した溶液中に存在する活性成分及び任意の所望の追加成分の粉末を得る、真空乾燥及び凍結乾燥技術である。
【０３０９】
局所投与には、本明細書で開示した化合物及び薬剤は、液体又は固体として適用され得る。しかしながら、固形又は液体であり得る皮膚科学的に許容可能な担体と組み合わせて組成物として皮膚に局所的に投与することが一般に望ましいであろう。本明細書で開示した化合物及び薬剤及び組成物は、被検体の皮膚に局所的に適用して、悪性又は良性の腫瘍の大きさを縮小することができる（また完全に除去することを含み得る）、又は感染部位を治療することができる。本明細書で開示した化合物及び薬剤は、腫瘍又は感染部位に直接適用することができる。好ましくは、化合物及び薬剤は、軟膏、クリーム、ローション、溶液、チンキ剤などの製剤で腫瘍又は感染部位に適用される。
【０３１０】
有用な固体担体として、タルク、粘度、微結晶セルロース、シリカ、アルミナなどの超微粒子状固体が挙げられる。有用な液体担体として、必要に応じて非中毒性界面活性剤の補助を用いて化合物が有効な濃度で溶解又は分散され得る、水、アルコール、若しくはグリコール又は水−アルコール／グリコールブレンドが挙げられる。香料及び追加の抗菌剤などの補助剤を追加して、所与の使用のために特性を最適化することができる。結果として得られる液体組成物は、包帯及び他の包帯剤を含浸するのに使用される吸収パッドから適用され得るか、又は、例えば、ポンプ型又はエアゾールスプレーを使用して患部にスプレーされ得る。
【０３１１】
合成ポリマー、脂肪酸、脂肪酸塩及びエステル、脂肪族アルコール、変性セルロース又は変性ミネラル材料などの増粘剤はまた、ユーザーの皮膚に直接適用するための軟らかいペースト、ジェル、軟膏、石鹸などを形成するために液体担体と共に使用され得る。
【０３１２】
本明細書で開示した化合物及び薬剤及び医薬組成物の有用な用量は、動物モデルで生体外活性、及び生体内活性を比較することによって決定され得る。マウス及び他の動物における有効な用量のヒトへの外挿方法は、当該技術分野において周知である。
【０３１３】
組成物の投与用量範囲は、症状又は疾患が影響を受ける所望の効果を生じるほど大きいものである。用量は、望ましくない交差反応、アナフィラキシー反応などの有害な副作用を引き起こすほど大きくあるべきではない。一般に、用量は、年齢、状態、性別、及び患者の疾患の程度と共に変動し、当業者によって判定することができる。用量は、いずれかの禁忌がある場合には、個々の医師によって調整することができる。用量は、変更することができ、毎日、１日又は数日間、１つ以上の用量の投与において投与することができる。
【０３１４】
また、開示されるのは、薬学的に許容される賦形剤と組み合わせた本明細書で開示された化合物を含む薬学的組成物である。ある量の化合物を含む、経口、局所、又は非経口投与に適した医薬組成物は、好ましい態様を構成する。患者、特にヒトに投与される用量は、致死毒性を持たずに、好ましくは副作用又は罹患率の許容できるレベルを超えないで、妥当な時間枠にわたって患者において治療的反応を得るのに十分であるべきである。当業者は、用量が、被検体の状態（健康）、被検体の体重、併用治療の種類、存在する場合は、治療の頻度、治療可能比、並びに病的状態の程度及び段階を含む様々な因子に依存することを認識するであろう。
【０３１５】
また、開示されるのは、１つ以上の容器内に本明細書で開示した化合物を含むキットである。開示したキットは、所望により薬学的に許容される担体及び／又は希釈剤を含み得る。１つの実施例において、キットは、本明細書に記載されるように１つ以上の他の構成要素、添加剤、又は補助剤を含む。別の実施例において、キットは、本明細書に記載した薬剤など１つ以上の抗癌剤を含む。１つの実施例において、キットは、キットの化合物又は組成物の投与方法を説明する使用説明書又は包装材料を含む。キットの容器は、任意の好適な材料（例えば、ガラス、プラスチック金属など）、及び任意の好適な寸法、形状、又は構成であり得る。１つの実施例において、本明細書で開示された化合物及び／又は薬剤は、錠剤、ピル、又は粉末形状などの固体としてキットで提供される。別の実施例において、本明細書で開示された化合物及び／又は薬剤は、液体又は溶液としてキットで提供される。１つの実施例において、キットは、本明細書に開示した化合物及び／又は薬剤を液体又は溶液の形態で含むアンプル又は注射器を含む。
【０３１６】
本発明のいくつかの実施形態について説明されている。それでもなお、本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく種々の修正を加えてもよいことが理解される。したがって、他の実施形態は、以下の特許請求の範囲内である。
【実施例】
【０３１７】
以下の実施例は、本明細書において特許請求の範囲に記載された化合物、組成物、物品、デバイス、及び／又は方法をどのように製造及び評価するかの完全な開示及び記載を当業者に提供するために示され、純粋に例示的であることが意図され、開示を制限することを意図しない。しかしながら、当業者は、本開示に照らして、開示される特定の実施形態において多くの変更を行うことができ、本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく、同様の又は類似の結果を得ることができることを理解するであろう。
【０３１８】
数字（例えば、量、温度など）に関して精度を保証する努力がなされたが、ある程度の誤差及び偏差を考慮するものとする。別途記載のない限り、部は重量部であり、温度は℃単位であり、又は周囲温度であり、圧力は大気又はほぼ大気の圧力である。
【０３１９】
実施例１．二環化母核の合成。
ペプチド合成用試薬は、Ｃｈｅｍ−Ｉｍｐｅｘ（Ｗｏｏｄ  Ｄａｌｅ，ＩＬ）、ＮｏｖａＢｉｏｃｈｅｍ（Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）、又はＡｎａｓｐｅｃ（Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）から購入した。Ｒｉｎｋアミド樹脂ＬＳ（１００〜２００メッシュ、０．２  ｍｍｏｌ／ｇ）は、Ａｄｖａｎｃｅｄ  ＣｈｅｍＴｅｃｈ．から購入した。細胞培養培地、ウシ胎児血清、ペニシリン−ストレプトマイシン、０．２５％トリプシン−ＥＤＴＡ、及びＤＰＢＳをＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）から購入した。メチル３，５−ジメチルベンゾイレート、Ｎ−ブロモスクシンイミド、ジエチルホスファイト、２，２’−ジピリジルジスルフィド、及び他の有機試薬／溶媒をＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）から購入した。抗ＧＳＴ−Ｔｂ及びストレプトアビジン−ｄ２は、Ｃｉｓｂｉｏ（Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）から購入した。ＮＦ−κＢレポータ（Ｌｕｃ）−ＨＥＫ２９３細胞株及びＯｎｅ−Ｓｔｅｐ（登録商標）ルシフェラーゼ分析システムをＢＰＳ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から購入した。
【０３２０】
【化４９】
2020502051.tif 000065
スキーム２．二環化母核の合成。
【０３２１】
メチル３、５−ビス（ブロモメチル）ベンゾエートの合成。二環化母核の合成計画全体をスキーム２に示す。四塩化炭素（２０ｍＬ、窒素スパージ）にメチル３，５−ジメチルベンゾエート（２．０ｇ、１２．２ｍｍｏｌ）を入れた５０ｍＬの丸底フラスコに、Ｎ−−ブロモスクシンイミド（４．２５ｇ、２３．９ｍｍｏｌ）及び過酸化ベンゾイル（約６０ｍｇ）を開始剤として添加した。反応物を窒素雰囲気下で３時間還流させた。反応混合物を冷却し、濾過した。濾液を水（２０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗生成物を石油エーテル中で再結晶化させて、３０％収量の標題化合物（１．２ｇ、３．８ｍｍｏｌ）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ  ７．９９（ｓ，２Ｈ），７．６２（ｓ，１Ｈ），４．５０（ｓ，４Ｈ），３．９４（ｓ，３Ｈ）．
【０３２２】
３，５−ビス（（アセチルチオ）メチル）ベンゾエートの合成。上記の粗メチル３，５−ビス（ブロモメチル）ベンゾエート（１．０ｇ、３．１ｍｍｏｌ）を上から投入した５０ｍＬの丸底フラスコに、アセトン（２０ｍＬ）及びチオアセテートカリウム（０．８６ｇ、７．５２ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を窒素雰囲気下で３時間還流させ、冷却させた。反応物をクエンチするために２０ｍＬの水を添加し、混合物を酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ４で濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィで精製して、０．７２ｇの橙褐色の固体を得た（収率７４．２％）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ  ７．８３（ｓ，２Ｈ），７．４１（ｓ，１Ｈ），４．１２（ｓ，４Ｈ），３．９０（ｓ，３Ｈ），２．３６（ｓ，６Ｈ）。
【０３２３】
３，５−ビス（（ピリジン−２−イルジスルファニル）メチル）安息香酸の合成。窒素雰囲気下の５０ｍＬ丸底フラスコに、メチル３，５−ビス（（アセチルチオ）メチル）ベンゾエート（０．５ｇ、１．６ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１５ｍＬ）に溶解した。Ｈ２Ｏ（３ｍＬ）中ＮａＯＨ（８３２ｍｇ、２０．８ｍｍｏｌ）の溶液を添加し、反応物を室温で一晩反応させた。反応溶液をＡｃＯＨ（２．３８ｍＬ、４１．６ｍｍｏｌ）で酸性化し、２、２−ジピリジルジスルフィド（１．４１ｇ、６．４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を濾過して、形成された橙色の沈殿物を除去し、室温で１時間撹拌した。反応が完了した後、メタノールを減圧下で蒸発させて除去し、残留物をシリカゲルカラム上に迅速に充填した。カラムをヘキサン中２０％〜５０％  ＥｔＯＡｃで最初に溶出して、任意の低極性種を除去した後、所望の生成物を１％ＡｃＯＨを含有するヘキサン中１：１（ｖ／ｖ）ＥｔＯＡｃで溶出した。溶媒の蒸発により、茶色の固体が得られた（２２２ｍｇ、２工程にわたって収率３２％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ  ８．４３（ｍ，２Ｈ），７．８３（ｓ，２Ｈ），７．５３〜７．４３（ｍ，５Ｈ），７．０４（ｍ，２Ｈ），３．９７（ｓ，４Ｈ）。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）：Ｃ１９Ｈ１７Ｎ２Ｏ２Ｓ４（Ｍ＋Ｈ＋）の計算値（Ｍ＋Ｈ＋）：４３３．０１７３；実測値：４３３．０１７６．
【０３２４】
実施例２．二環式ペプチドの合成
ペプチド調製及び特性評価。標準Ｆｍｏｃ化学を用いて、Ｒｉｎｋアミド樹脂ＬＳ（０．２ｍｍｏｌ／ｇ）でペプチドを合成した。典型的なカップリング反応には、５当量のＦｍｏｃアミノ酸、５当量の２−（７アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）、及び１０当量のジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）を含有し、穏やかに混合しながら４５分間進行させた。ペプチドを脱保護し、９０：２．５：２．５：２．５：２．５（ｖ／ｖ）ＴＦＡ／１，２−エタンジチオール／水／フェノール／トリイソプロピルシラン（ＴＩＰＳ）で２回処理することにより、ペプチドを脱保護し、樹脂から放出した。ペプチドをコールドエチルエーテル（３ｘ）で粉砕し、Ｃ１８カラムを備えた逆相ＨＰＬＣにより精製した。３００μＬの１：１：１ＤＭＳＯ／ＤＭＦ／１５０ｍＭ重炭酸ナトリウム（ｐＨ８．５）中に精製ペプチド（各々が約１ｍｇ）を溶解し、ＤＭＳＯ（１００ｍｇ／ｍＬ）中の１０μＬのＦＩＴＣと混合することにより、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）によるペプチドラベリングを行った。室温で２０分後、反応混合物を逆相ＨＰＬＣによって再度精製して、ＦＩＴＣ標識ペプチドを単離した。
【０３２５】
ジスルフィド介在二環式ペプチドを合成するために、２つのＡｃｍ保護されたＣｙｓ残基を含有する対応する直鎖ペプチドを、標準Ｆｍｏｃ／ＨＡＴＵ化学物質を使用して最初に調製した。２Ｍの水銀（ＩＩ）アセテートを用いて、ＤＭＦ中で一晩処理することによって、Ａｃｍ基を除去した。次いで、樹脂をＤＭＦ中の２０％  β−メルカプトエタノール中で２時間（２回）インキュベートして、遊離チオールを放出した。ＤＭＦで徹底的に洗浄して全ての還元剤を除去した後、樹脂を、１％（ｖ／ｖ）酢酸を含有するメタノール中、３，５−ビス（（ピリジン−２−イルジスルファニル）メチル）安息香酸の１当量と一晩インキュベートした。樹脂の小部分を除去し、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＳによって脱保護／放出されたペプチド生成物を分析することによって、反応の進行をモニタした。ペプチド脱保護及び放出は、樹脂を８５：１０：２．５：２．５（ｖ／ｖ）ＴＦＡ／ＤＣＭ／水／ＴＩＰＳで２時間処理した後、上述のエーテル粉砕及びＨＰＬＣ精製（図５Ａ）を用いて実現した。この作業で使用した最終ペプチドの全ては、分析ＨＰＬＣ（図５Ｂ及び図７）によって判定されるように、≧９５％純度を有した。ペプチドの真正性は、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＳ分析によって確認された。生物学的活性ペプチド４を更に特徴付けるために、ペプチドをＨ２Ｏ／Ｄ２Ｏ（９：１、５００μＬ、最終サンプル濃度２ｍＭ）に溶解した。ＮＭＲスペクトルを、２９８ＫでＢｒｕｋｅｒ  Ａｓｃｅｎｄ  ７００  ＭＨｚ分光計に記録した。
【０３２６】
実施例３．細胞系分析
細胞培養。ＨｅＬａ細胞を、ＤＭＥＭ、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）及び１％ペニシリン／ストレプトマイシンからなる培地で維持した。ＮＦ−κＢレポータ（Ｌｕｃ）−ＨＥＫ２９３細胞を、ＤＭＥＭ、１０％  ＦＢＳ、１％ペニシリン／ストレプトマイシン、及び１００μｇ／ｍＬのヒグロマイシンＢ細胞からなる培地中で維持した。細胞は、５％ＣＯ２の存在下、３７℃の加湿インキュベータ中で培養した。
【０３２７】
タンパク質発現及び精製。大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３）細胞をｐＧＥＸ４Ｔ３−ＧＳＴ−ＮＥＭＯ（１〜１９６）プラスミドで形質転換し、０．０５ｍｇ／ｍＬのアンピシリンを添加したルリアブロス中で、０．４のＯＤ６００に３７℃で増殖させた。イソプロピルβ−Ｄ−１−チオガラクトピラノシド（１５０μＭ最終濃度）を添加することにより、発現を誘導した。３０℃で５時間後、遠心分離により細胞を回収した。細胞ペレットを、４０ｍＬの溶解緩衝液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、０．５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、５ｍＭβメルカプトエタノール、０．１％  Ｔｒｉｔｉｔｏｎ  Ｘ−１００、ｐＨ８．０）、１００μｇ／ｍＬリゾチーム、１００μｌ  ＤＮＡｓｅ  Ｉ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ＢｉｏＬａｂｓ）、及び１００μｌのＨａｌｔ  Ｐｒｏｔｅａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ｃｏｃｋｔａｉｌ（ＥＤＴＡ−ｆｒｅｅ）（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に懸濁させた。この混合物を４℃で３０分間撹拌し、短時間超音波処理した（２×１０秒パルス）。粗溶解物を遠心分離して透明な上清を得、これをグルタチオンセファロース４Ｂカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上に直接充填した。結合タンパク質を、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）（４０ｍＬ）中１０ｍＭのグルタチオンを用いてカラムから溶出し、Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５遠心濾過ユニット（ＭＷＣＯ  １０ＫＤＡ）を使用して０．５ｍＬに濃縮し、ＰＢＳ（２．６７ｍＭ塩化カリウム、１．４７ｍＭリン酸カリウム一塩基性、１３７ｍＭ塩化ナトリウム、及び８．０６  ｍＭリン酸ナトリウム二塩基）に対して透析した。ＧＳＴタグを含まないＮＥＭＯを生成するために、タンパク質を、濃縮の前に４℃で１６時間、トロンビン（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で処理した。タンパク質濃度は、標準としてウシ血清アルブミンを有するＢｒａｄｆｏｒｄ分析を用いて決定した。タンパク質を迅速に凍結させ、−８０℃で保存した。
【０３２８】
Ｎ末端６−ヒスチジンタグ、チオオレドキシン、ＴＥＶプロテアーゼ切断部位、及びＫ７０３Ｒ／Ｋ７０４Ｒ変異体形態のＩＫＫβＣ末端断片（アミノ酸７０１〜７４５）［Ｈｉｓ−ｔｈｘ−ＩＫＫβＫＫ／ＲＲ（７０１〜７４５）］を含有する融合タンパク質をコードする遺伝子操作された原核生物発現プラスミドｐＪＣＣ０４ａ、１が、Ｄｒ．Ｍａｒｉａ  Ｐｅｌｌｅｇｒｉｎｉ（Ｄａｒｔｍｏｕｔｈ  Ｃｏｌｌｅｇｅ）により提供された。Ｈｉｓ−ｔｈｘ−ＩＫＫβＫＫ／ＲＲ（７０１〜７４５）を大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３）細胞で同様に発現させ、ＨｉｓＴｒａｐ  ＦＦカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用してアフィニティクロマトグラフィにより精製した。融合タンパク質を、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、３００ｍＭ  ＮａＣｌ、２５０ｍＭのイマジゾール、２ｍＭ  βメルカプトエタノールで溶出し、ＴＥＶプロテアーゼ（１ｍｇの融合タンパク質の１５０単位）で４℃で１６時間処理して、チオレドキシン（ＴＨＸ）を除去した。得られたプロテアーゼ消化混合物をＨｉｓＴｒａｐカラムに再充填した。フロースルー画分を回収し、Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５遠心濾過ユニット（ＭＷＣＯ  １０ｋＤａ）を使用して、約２ｍｇ／ｍＬに濃縮した。ＩＫＫβＫＫ／ＲＲ（７０１〜７４５）タンパク質を、４℃で一晩、１０倍モル過剰のビオチン−ＮＨＳで処理することによってビオチン化した。ビオチン化ＩＫＫβＫＫ／ＲＲ（７０１〜７４５）を、Ｃ１８カラムを備えた逆相ＨＰＬＣによって精製し、約８０℃で凍結保存した。
【０３２９】
フローサイトメトリ。ＨｅＬａ細胞を、６ウェルプレート（ウェル当たり５×１０５個の細胞）中で２４ｈ培養した。実験日に、細胞を、５μＭ  ＦＩＴＣ標識ペプチドと共に、５Ｍ  ＦＩＴＣ標識ペプチドと共に、３７℃で２時間インキュベートした。細胞をＤＰＢＳで洗浄し、０．２５％トリプシンを有するプレートから分離し、１０％  ＦＢＳを含有する透明なＤＭＥＭに希釈し、２５０ｇで５分間ペレット化し、ＤＰＢＳで１回洗浄し、１％ウシ血清アルブミンを含有するＤＰＢＳ中で再懸濁し、ＢＤ  ＬＳＲ  ＩＩフローサイトメータで分析した。データをＦｌｏｗｊｏソフトウェア（Ｔｒｅｅ  Ｓｔａｒ）で分析した。
【０３３０】
血清安定性試験。安定性試験は、事前に報告された手順２を修正することによって実施した。希釈ヒト血清（２５％）を１５，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、上清を回収した。ペプチド原液を上清中に５μＭの最終濃度まで希釈し、３７℃でインキュベートした。様々な時点（０〜２０時間）で、２００μＬのアリコートを回収し、５０μＬの１５％トリクロロ酢酸及び２００μＬのアセトニトリルと混合し、混合物を４℃で一晩インキュベートした。最終混合物をマイクロ遠心分離器で１５，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、分析用Ｃ１８カラム（Ｗａｔｅｒｓ）を備えた逆相ＨＰＬＣによって上清を分析した。残存ペプチドの量（時間ゼロ対照に対して％）は、ペプチドピークの下の領域（２１４ｎｍでモニタ）を積分することによって決定した。
【０３３１】
ＨＴＲＦ分析。組換えＧＳＴ−ＮＥＭＯ（３０ｎＭ）、ビオチン−ＩＫＫβＫＫ／ＲＲ（７０１〜７４５）（５０ｎＭ）、ｄ２受容体で標識化されたストレプトアビジン（２．５μｇ／ｍＬ）、Ｔｂドナー（２．５μｇ／ｍＬ）で標識化された抗ＧＳＴモノクローナル抗体、及び様々な濃度のペプチド（０〜１００μＭ）を、３８４ウェルプレート中に５ｍＭのＴＣＥＰ及び０．０１％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００（総体積２０μＬ）を含有するＰＢＳ中で混合した。プレートを室温で２時間インキュベートした。ＨＴＲＦ信号は、Ｔｅｃａｎ無限Ｍ１０００  Ｐｒｏマイクロプレートリーダ上で測定し、ペプチド濃度の関数としてプロットした。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ６．０を使用してデータを分析し、用量反応阻害曲線にデータをフィッティングすることによってＩＣ５０値を得た。
【０３３２】
ＮＦ−κＢルシフェラーゼ分析。ＮＦ−κＢレポータ（Ｌｕｃ）−ＨＥＫ２９３細胞を、９６ウェルの４５μＬの分析培地（ＤＭＥＭ、１０％  ＦＢＳ、及び１％ペニシリン／ストレプトマイシン、ウェル当たり〜１５００細胞）に播種し、一晩培養した。分析培地中の５μＬのＮＥＭＯ阻害剤を細胞に加え、細胞を２時間インキュベートした。５Ｌの分析培地中の２組換えＴＮＦα３を５μｎｇ／ｍＬの最終濃度でウェルに添加した。４時間のインキュベーション後、５５μＬのＯＮＥ−Ｓｔｅｐルシフェラーゼ分析試薬を各ウェルに添加した。Ｔｅｃａｎ  Ｉｎｆｉｎｉｔｅ  Ｍ１０００  Ｐｒｏマイクロプレートリーダを使用して、１０分間インキュベートした後、発光を測定した。ＴＮＦα非刺激及び刺激細胞のルシフェラーゼ活性を、それぞれ、それぞれ、ＡＡ−及びＡＵ＋として記録した。異なる濃度のＮＥＭＯ阻害剤でインキュベートした後のＴＮＦα刺激細胞のルシフェラーゼ活性をＡＵｐｅｐとして記録した。ＮＦ−κＢシグナル伝達活性化の阻害は、以下の式に基づいてルシフェラーゼ活性誘導の割合によって計算される。
ＴＮＦα活性化の阻害（％）＝（ＡＵｐｅｐ−ＡＵ−）／（ＡＵ＋−ＡＵ−）×１００％
【０３３３】
結果。可逆的な二環化方法の有効性を試験するために、ＣＰＰモチーフ（ＲＲＲＲΦＦ（配列番号６８）又はＦΦＲＲＲＲ（配列番号６９）及びモックカーゴモチーフ（ＳＡＳＡＳ（配列番号１５６））を含む２つのモデルペプチドが設計され、そのＮ末端又はＣ末端（表６、詳細構造のペプチド２及び３、図３）に融合されている。２つのシステイン残基もまた、後の環化のために配列に組み込まれ、ＣＰＰとカーゴモチーフとの間の接合部、及びＣ末端で１つである。直鎖ペプチドは、Ｒｉｎｋアミド樹脂上の標準Ｆｍｏｃ固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）化学により合成した（スキーム１）。２つのシステイン側鎖上のアセトアミドメチル（Ａｃｍ）基を、Ｈｇ（ＯＡｃ）２で処理することによって選択的に除去し、次いで、露出した遊離チオールを３，５−ビス（（ピリジン−２−イルジスルファニル）メチル）安息香酸と反応させ、これを市販の出発物質から容易に調製した（スキーム２）。システイン側鎖と３，５−ビス（メルカプトメチル）安息香酸（ＢＭＢ）母核の間の２つのジスルフィド結合の形成は、ペプチドの環化をもたらした。次に、１，８ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）によってＮ末端Ｆｍｏｃ基を除去し、ＢＭＢのカルボン酸基とＮ末端アミンの間にラクタムを形成することによってペプチドを二環化した（スキーム１）。その構造対称性がジスルフィド交換反応後に単一の二環式生成物が形成されることを確実にするので、ＢＭＢは、母核として理想的に適している。加えて、母核の剛性は、任意の分子内ジスルフィド結合の形成を防止し、母核の合成及びシステイン含有ペプチドのその反応の両方を単純化する。
【０３３４】
それらの細胞取り込みをモニタするために、ペプチド２及び３は、Ｃ末端リジンの側鎖上のフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）で標識した。５μＭペプチドｃＦΦＲ４（配列番号７２）、２及び３を２時間処理したＨｅＬａ細胞のフローサイトメトリ分析は、それぞれ、３０２０、５１８０、及び４１００の平均蛍光強度（ＭＦＩ）値を示した（図１Ａ）。したがって、二環式ペプチド２及び３は、ｃＦΦＲ４よりも、それぞれ、７２％及び３６％高い効率を有するＨｅＬａ細胞に侵入した（配列番号７２）。
【０３３５】
可逆的な二環化方法を適用して、ＮＥＭＯ−ＩＫＫ相互作用に対する細胞膜透過性の生物学的活性ペプチジル阻害剤を生成した。そのインビボ有効性にもかかわらず、直鎖Ａｎｔｐ−ＮＢＤペプチドは、血清中での急速なタンパク質分解分解（ｔ１／２〜１５分）のために、薬動態が乏しくなっている。Ａｎｔｐ−ＮＢＤの、立体配座的に拘束された二環構造への変換は、そのタンパク質分解安定性を実質的に増加させることが想定された。ＣＰＰモチーフＲＲＲＲΦＦ（配列番号６８）は、ＮＢＤのＮ末端に融合させ、Ｎ末端及びＣ末端のスレオニン残基を２つのシステインと置き換えた（表６、ペプチド４、図４、詳細構造（配列番号２１６）。ペプチド融合体を、上記の２つのジスルフィド結合を介してＢＭＢ母核の周囲で二環化して、主要な生成物として二環式ペプチド４を得た（図５Ａ）。対照として、ペプチド４と構造的に類似しているが、２つのＴｒｐ残基の代わりに２つのＡｌａ残基を含有するペプチド５（詳細構造の図４）も調製した。Ｔｒｐ残基をアラニンで置換することは、ＮＥＭＯ結合をほとんど無効にすることが以前に示された（Ｍ．Ｊ．Ｍａｙ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２０００，２８９，１５５０）。
【０３３６】
【化５０】
2020502051.tif 000066
スキーム１．ジスルフィド介在二環式ペプチドの固相合成
【０３３７】
ペプチド４及び５を、それらのＣ末端に添加されたリジンの側鎖にＦＩＴＣで標識し、フローサイトメトリによってそれらの細胞侵入を評価した。両ペプチドは、ＨｅＬａ細胞に効率的に侵入し、それぞれ、ｃＦΦＲ４のＭＦＩ値よりも３倍及び２倍高いＭＦＩ値を示した（図１Ａ）。ペプチド４及び５のＮＥＭＯ結合親和性は、均質な時間分解蛍光（ＨＴＲＦ）分析（Ｍ．Ｒｕｓｈｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２００８，１６，７９８、Ｙ．Ｇｏｔｏｈ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２０１０，４０５，１９）を使用して決定した。簡潔に言えば、蛍光ドナー（Ｔｂ）で標識された抗グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）抗体及び蛍光受容体（ｄ２）で標識されたストレプトアビジンの存在下で、ＧＳＴ−ＮＥＭＯのビオチン化ＩＫＫβフラグメント（アミノ酸７０１〜７４５）への結合（Ｂ．Ｇａｏ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２０１４，５３，６７７）は、共鳴エネルギー移動をもたらす。ＮＥＭＯ阻害剤の添加は、ＮＥＭＯ−ＩＫＫβ相互作用を遮断し、ＨＴＲＦ信号を低減する。ペプチド４及び５中のジスルフィド結合を完全に低減することが予想される５ｍＭトリス（カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）の存在下で、ペプチド４は、３．５±０．２μＭの最大半値阻害濃度（ＩＣ５０）値を有する、濃度依存的な方法でＮＥＭＯ−ＩＫＫβ相互作用を阻害した（図１Ｂ）。同じ条件下で、Ａｎｔｐ−ＮＢＤは、以前に報告された結合親和性と一致して、約５０μＭのＩＣ５０値を示した（Ｍ．Ｒｕｓｈｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２００８，１６，７９８、Ｙ．Ｇｏｔｏｈ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２０１０，４０５，１９）を使用して決定した。予想されるように、最大１００μＭのペプチド５は、相互作用のわずかな阻害のみを引き起こした。スレオニンの２つのシステイン残基の置換はＮＥＭＯ結合親和性を有意に変化させなかった（図６）ため、Ａｎｔｐ−ＮＢＤに対するペプチド４のＮＥＭＯ結合の増強は、ＣＰＰモチーフのフェニルアラニン（ＲＲＲＲΦＦ（配列番号６８））とＮＥＭＯタンパク質表面との間の更なる相互作用によって引き起こされる可能性が高い。ＩＫＫβは、同じ位置にフェニルアラニンを含有する（Ｐｈｅ−７３４）。ＮＥＭＯ−ＩＫＫβ複合体の結晶構造は、Ｐｈｅ−７３４の側鎖がＮＥＭＯ表面上の疎水性ポケット内に挿入されることを示す（同上）。したがって、ペプチド４中のフェニルアラニンは、細胞侵入及びＮＥＭＯ結合の二重役割を果たす可能性が高い。
【０３３８】
細胞内のＮＥＭＯ−ＩＫＫ相互作用を調節する二環式ペプチドの能力を、ＮＦ−κＢのＴＮＦα−誘導活性化をモニタすることによって評価した。ＮＦ−κＢの制御下でルシフェラーゼレポータ遺伝子によりトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞を、最初にペプチドの濃度を変えて２時間処理した後、ＴＮＦα（で処理した（Ｍ．Ｊ．Ｍａｙ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２０００，２８９，１５５０、Ａ．Ｇａｕｒｎｉｅｒ−Ｈａｕｓｓｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０１１，１７，４６６１）。任意の阻害ペプチドが存在しない場合、５ｎｇ／ｍＬのＴＮＦαによる処理は、１７７任意単位（ＡＵ）〜７１５ＡＵの基底準位からルシフェラーゼ活性を増加させた。ペプチド４は、ＩＣ５０値が約２０μＭ（図１Ｃ）で、用量依存的な方法でＴＮＦα誘導ルシフェラーゼ活性を減少させた。対照的に、対照ペプチド５は、２０μＭでＮＦ−κＢシグナル伝達に有意な影響を及ぼさず、試験した最高濃度で約１０％阻害をもたらした（４０μＭ）。以前の報告（Ｍ．Ｊ．Ｍａｙ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２０００，２８９，１５５０）、Ａｎｔｐ−ＮＢＤ（ペプチド１）はまた、濃度依存性阻害を引き起こしたが、１４０μＭのＩＣ５０値を示した。細胞分析におけるＡｎｔｐ−ＮＢＤに対する二環式ペプチド４の効力が高いほど、改善された細胞侵入効率（図１Ａ）及びより高いＮＥＭＯ−結合親和性（図１Ｂ）の両方の結果である可能性が高い。５ｍＭグルタチオンを用いた二環式ペプチド４の２時間のインビトロ処理は、ジスルフィド結合を完全に減少させ（図５Ｂ）、ペプチド２〜５は、サイトソール侵入時に完全に還元されるべきであることを示唆している。
【０３３９】
最後に、ペプチド４及びＡｎｔｐ−ＮＢＤのタンパク質分解安定性を、様々な長さの時間にわたってヒト血清中のペプチドをインキュベートすることによって試験し、残存量の無傷ペプチドを分析ＨＰＬＣにより定量した。比較のために、ペプチド４と同じ配列を有するが、そのＣＰＰモチーフのみを環化した対照ペプチド（表６、ペプチド６）を合成した。これまでの報告（Ｅ．Ｊｉｍｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．２００４，１０，６１７、Ｓ．Ｄａｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００４，２７９，３７２１９、Ｗ．Ｓｈｉｂａｔａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００７，１７９，２６８１、Ｓ．Ｈ．Ｄａｖｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００７，１７９，７８５２、Ａ．Ｇａｕｒｎｉｅｒ−Ｈａｕｓｓｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０１１，１７，４６６１、Ｊ．Ｍ．Ｐｅｔｅｒｓｏｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．２０１１，１７，５０８、Ｄ．Ａ．Ｄｅｌｆｉｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．２０１１，９，６８、Ｄ．Ｐ．Ｒｅａｙ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．Ｄｉｓ．２０１１，４３，５９８、Ｊ．Ｎ．Ｋｏｒｎｅｇａｙ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｋｅｌｅｔ．Ｍｕｓｃｌｅ  ２０１４，４，１８、Ｇ．Ｈａｂｉｎｅｚａ  Ｎｄｉｋｕｙｅｚｅ，ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ，２０１４，９，ｅ９５４０４）と一致して、Ａｎｔｐ−ＮＢＤは、ヒト血清によって約１５分の半減期を伴って急速に分解された（図１Ｄ）。対照的に、二環式ペプチド４は、約１０時間の半減期を示し、ペプチドのうちの２３％は、２０時間の３７℃でのインキュベーションインキュベーション後に無傷のままであった。単環式対照ペプチド６もまた、恐らく直鎖ＮＢＤ配列のタンパク質分解に起因して、急速に分解した（約３０分の半減期を伴って）。ｃＦΦＲ４のＧｌｎ側鎖に結合した直鎖ペプチジルカーゴは、ヒト血清中で急速に分解されることが以前に示された（Ｚ．Ｑｉａｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．２０１５，５４，５８７４、Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．２０１５，１２７，５９７２）。
【０３４０】
結論として、ペプチドを短いＣＰＰモチーフと融合することと、及びジスルフィド結合を通じて、融合ペプチドを可逆的に環化することとによって、ペプチジルリガンドを哺乳動物細胞に効率的に送達するための単純な方法が開発されている。得られる二環式ペプチドは、大幅に増強された細胞取り込み、並びにタンパク質分解安定性を有する。この方法は、いかなる直鎖ペプチドにも適用可能であるはずである。
【０３４１】
実施例４．サイトソール中の環状細胞膜透過ペプチドからペプチジルカーゴを放出する二環式ペプチドの合成
以下のスキーム２に示されるように、所望の環状ＣＰＰは、最初に、Ｆｍｏｃ／ＨＡＴＵ化学物質を使用して標準固相ペプチド合成によって合成され、Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）リンカーを介して支持体に固定した。依然として樹脂上にある間、Ｍｔｔ基は２％  ＴＦＡで除去され、曝露されたＬｙｓ側鎖は、ＨＡＴＵを使用することによってビス（メルカプトメチル）安息香酸母核に結合される。次いで、環状ＣＰＰを樹脂から切断し、ＴＦＡによって脱保護する。遊離チオールは、溶液（ｐＨ５）中のペプチドをジチオジピリジンと反応させて、ＣＰＰ母核を生成することによって保護／活性化される。最後に、ＣＰＰ母核及びチオール含有ペプチドをｐＨ８の水性緩衝液中で単純に混合することにより、所望のＣＰＰペプチドカーゴ接合体を調製する。
【０３４２】
【化５１】
2020502051.tif 000067
スキーム２．ジスルフィド介在二環式ペプチドの固相合成
【０３４３】
スキーム２に従って合成された様々な二環式ペプチド。具体的には、環状ＣＰＰ１２（ＦｆФＲｒＲｒ）を、Ｋｅａｐ１−Ｎｒｆ２（図１０Ａ）に対するペプチジル阻害剤、Ｐｉｎ１に対するペプチジル阻害剤（図１１）、ＣＡＰＺ  ＣＦＴＲ（ＰＤＺ）相互作用に対するペプチジル阻害剤（図１２Ａ）、及びＭＤＭ２−ｐ５３相互作用（ＰＭＩ）に対するペプチジル阻害剤（図１３Ａ）に接合させた。細胞取り込み効率を定量化するために、必要に応じて当該技術分野において既知の方法を用いて蛍光標識を取り付けた。
【０３４４】
細胞取り込み分析。スキーム２に従って合成された様々な二環式ペプチド（環状ＣＰＰ＋ペプチジルカーゴ）を、フローサイトメトリを使用して細胞取り込み効率について分析し、直鎖ペプチジルカーゴ（環状ＣＰＰを含まない）の細胞取り込み効率と比較した。
【０３４５】
全ての測定を３回行い、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）の存在下で行った。カーゴペプチド（例えば、Ｋｅａｐ１ペプチドなどの負に荷電したペプチド）の付着は、細胞取り込みを阻害する（ＣＰＰ１２に対して）。
【０３４６】
血清安定性。スキーム２に従って合成した二環式ペプチド（環状ＣＰＰ＋ペプチジルカーゴ）の血清安定性を分析し、直鎖ペプチジルカーゴ（環状ＣＰＰを含まない）の細胞取り込み効率と比較した。非抱合ペプチド及びＣＰＰ１２ペプチド接合体を、様々な期間（分）にわたって２５％ヒト血清中でインキュベートし、残存無傷ペプチドを分析ＨＰＬＣにより定量した。具体的には、環状ＣＰＰ１２（ＦｆФＲｒＲｒ）を含む二環式ペプチドの血清安定性は、ＭＤＭ２−ｐ５３相互作用（ＰＭＩ）に対してペプチジル阻害剤に接合させ（図１７）、又はＫｅａｐ１−Ｎｒｆ２相互作用に対するペプチジル阻害剤に接合させ（図１８）、又はＰＩＮ−１（Ｐ１）に対するペプチジル阻害剤に接合させ（図１９）、それぞれの直鎖ペプチジル阻害剤の血清安定性と比較した。
【０３４７】
ＣＰＰ１２の接合（環化による）は、全てのペプチドの血清安定性を大幅に増加させる。
【０３４８】
当業者であれば、日常的な実験のみを使用して、本明細書に記載の本発明の具体的な実施形態に対する多くの等価物を理解するか、又は解明することができる。そのような等価物は、以下の特許請求の範囲によって包含されることが意図される。
【図１Ａ】
2020502051.tif 000088
【図１Ｂ】
2020502051.tif 000089
【図１Ｃ】
2020502051.tif 000090
【図１Ｄ】
2020502051.tif 000091
【図２】
2020502051.tif 000092
【図３−１】
2020502051.tif 000093
【図３−２】
2020502051.tif 000094
【図４−１】
2020502051.tif 000095
【図４−２】
2020502051.tif 000096
【図４−３】
2020502051.tif 000097
【図５Ａ】
2020502051.tif 000098
【図５Ｂ】
2020502051.tif 000099
【図５Ｃ】
2020502051.tif 000100
【図６】
2020502051.tif 000101
【図７】
2020502051.tif 000102
【図８】
2020502051.tif 000103
【図９】
2020502051.tif 000104
【図１０Ａ】
2020502051.tif 000105
【図１０Ｂ】
2020502051.tif 000106
【図１１】
2020502051.tif 000107
【図１２Ａ】
2020502051.tif 000108
【図１２Ｂ】
2020502051.tif 000109
【図１３Ａ】
2020502051.tif 000110
【図１３Ｂ】
2020502051.tif 000111
【図１４】
2020502051.tif 000112
【図１５Ａ】
2020502051.tif 000113
【図１５Ｂ】
2020502051.tif 000114
【図１６】
2020502051.tif 000115
【図１７】
2020502051.tif 000116
【図１８】
2020502051.tif 000117
【図１９】
2020502051.tif 000118
【配列表】
2020502051000001.app
【国際調査報告】
2020502051.tif 000119
2020502051.tif 000120
2020502051.tif 000121
2020502051.tif 000122