(57)【要約】  肥満の治療管理のためのガルシノール含有組成物が開示されている。より具体的には、本発明は、ａ）哺乳類脂肪細胞系においてエネルギーバランスを維持すること、ｂ）高コレステロール血症の管理、およびｃ）哺乳類において体重増加を低下させることのためのガルシノールの使用に関する。ガルシノールによる、腸内微生物叢の改変および有益な微生物アッカーマンシア・ムシニフィラの増加もまた開示される。【選択図】  図１ｂ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳類における肥満の治療管理のための方法であって、有効濃度のガルシノール含有組成物を前記哺乳類に投与して、前記哺乳類において、ａ）脂肪生成の阻害、ｂ）体重および内臓脂肪の減少をもたらすステップを含む、方法。
【請求項２】
脂肪生成の阻害が、ＰＰＡＲγ、ｃＥＢＰα、ＦＡＳ、ＡＰ２、レジスチン、およびレプチンからなる群から選択される遺伝子の下方制御によりもたらされる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
脂肪生成の阻害が、ｐ−ＡＭＰＫ、ＡＭＰＫ、およびＰＲＥＦ−１からなる群から選択される遺伝子の上方制御によりもたらされる、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
内臓脂肪が腸間膜脂肪、腹膜脂肪、および性腺周囲脂肪からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
哺乳類脂肪細胞系においてエネルギーバランスを達成する方法であって、哺乳類前脂肪細胞および／または脂肪細胞にターゲットされるガルシノール含有組成物を有効量で投与して、（ａ）脂肪生成の阻害の増大の効果、および（ｂ）褐色脂肪細胞または褐色様（ベージュまたはブライト）脂肪細胞を特異的にリクルートし、（ｃ）白色脂肪細胞貯蔵部位に褐色様表現型（ベージュまたはブライト脂肪細胞）を誘導するように個々に、または組み合わせて機能する分泌性因子の発現の増加の効果を達成して、前記哺乳類において脂肪利用およびエネルギーバランスの効果をもたらすステップを含む、方法。
【請求項６】
分泌性因子がミトコンドリアＵＣＰ−１、ＰＲＤＭ１６、ＰＧＣ−１α、およびＢＭＰ７を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
哺乳類において腸内微生物叢を改変する方法であって、有効量のガルシノール含有組成物を前記哺乳類に投与して、腸内微生物叢の変化をもたらすステップを含む、方法。
【請求項８】
腸内微生物叢が、デファリバクター門（Ｄｅｆｅｒｒｉｂａｃｔｅｒｅｓ）、プロテオバクテリア門（Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ）、バクテロイデス門（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ）、ベルコミクロビウム門（Ｖｅｒｒｕｃｏｍｉｃｒｏｂｉａ）、およびフィルミクテス門（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ）から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
腸内微生物叢が、ラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、ブチリビブリオ属（Ｂｕｔｙｒｉｖｉｂｒｉｏ）、クロストリジウム属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、アナエロブランカ属（Ａｎａｅｒｏｂｒａｎｃａ）、ディスゴノモナス属（Ｄｙｓｇｏｎｏｍｏｎａｓ）、ジョンソネラ属（Ｊｏｈｎｓｏｎｅｌｌａ）、ルミノコッカス属（Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ）、バクテロイデス属（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）、オシロスピラ属（Ｏｓｃｉｌｌｏｓｐｉｒａ）、パラバクテロイデス属（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｒｏｉｄｅｓ）、アッカーマンシア属（Ａｋｋｅｒｍａｎｉｓａ）、およびブラウティア属（Ｂｌａｕｔｉａ）から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
腸内微生物叢が、パラバクテロイデス・ゴルドステイニイ（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｇｏｌｄｓｔｅｉｎｉｉ）、バクテロイデス・カカエ（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｃａｃｃａｅ）、ジョンソネラ・イグナバ（Ｊｏｈｎｓｏｎｅｌｌａ  ｉｇｎａｖａ）、ブラウティア・ウェクスレラエ（Ｂｌａｕｔｉａ  ｗｅｘｌｅｒａｅ）、ディスゴノモナス・ウィンペンニ（Ｄｙｓｇｏｎｏｍｏｎａｓ  ｗｉｍｐｅｎｎｙｉ）、ブラウティア・ハンセンニ（Ｂｌａｕｔｉａ  ｈａｎｓｅｎｎｉ）、アナエロブランカ・ザバルチンニ（Ａｎａｅｒｏｂｒａｎｃａ  ｚａｖａｒｚｉｎｎｉ）、オシロスピラ・エアエ（Ｏｓｃｉｌｌｏｓｐｉｒａ  ｅａｅ）、ムシスピリルム・シェドレリー（Ｍｕｃｉｓｐｉｒｉｌｌｕｓ  ｓｃｈａｅｄｌｅｒｉ）、ブラウティア・コッコイデス（Ｂｌａｕｔｉａ  ｃｏｃｃｏｉｄｅｓ）、アナエロツルンカス・コリホミニス（Ａｎａｅｒｏｔｒｕｎｃｕｓ  ｃｏｌｉｈｏｍｉｎｉｓ）、ブチリビブリオ・プロテオクラスティカス（Ｂｕｔｙｒｉｖｉｂｒｏ  ｐｒｏｔｅｏｃｌａｓｔｉｃｕｓ）、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）、ラクノスピラ・ペクチノスチザ（Ｌａｃｈｎｏｓｐｏｒａ  ｐｅｃｔｉｎｏｓｃｈｉｚａ）、ペドバクター・クワンジャンゲンシス（Ｐｅｄｏｂａｃｔｅｒ  ｋｗａｎｇｙａｎｇｅｎｓｉｓ）、アルカリフィルス・クロトンアトキシダンス（Ａｌｋａｌｉｐｈｉｌｕｓ  ｃｒｏｔｏｎａｔｏｘｉｄａｎｓ）、ラクトバチルス・サリバリウス（ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）、アナエロビブリオ・リポリティカス（Ａｎａｅｒｉｖｉｂｒｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃｕｓ）、ロドサーマス・クラルス（Ｒｈｏｄｏｔｈｅｒｍｕｓ  ｃｌａｒｕｓ）、バクテロイデス・ステルコリロソリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｓｔｅｒｃｏｒｉｒｏｓｏｒｉｓ）、ルミノコッカス・フラベファシエンス（Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｏｃｃｕｓ  ｆｌａｖｅｆａｃｉｅｎｓ）、バクテロイデス・キシラニソルベンス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｘｙｌａｎｉｓｏｌｖｅｎｓ）、ルミノコッカス・グナバス（Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｇｎａｖｕｓ）、クロストリジウム・ターマイティディス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｒｍｉｔｉｄｉｓ）、クロストリジウム・アルカリセルロシー（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ａｌｋａｌｉｃｅｌｌｕｌｏｓｉ）、エムチシシア・オリゴラフィカ（Ｅｍｔｉｃｉｃｉａ  ｏｌｉｇｏｒａｐｈｉｃａ）、シュードブチリビブリオ・キシラニボランス（Ｐｓｅｕｄｏｂｕｔｙｒｉｖｉｂｒｏ  ｘｙｌａｎｉｖｏｒａｎｓ）、アクチノマイセス・ナツラエ（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ  ｎａｔｕｒａｅ）、ペプトニフィラス・コキシー（Ｐｅｐｔｏｎｉｐｈｉｌｕｓ  ｃｏｘｉｉ）、およびドリコスペルマム・クルバム（Ｄｏｌｉｃｈｏｓｐｅｒｍｕｍ  ｃｕｒｖｕｍ）からなる群から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
腸内微生物叢の改変が、肥満、心血管系合併症、炎症性腸疾患、クローン病、セリアック病、メタボリックシンドローム、肝臓疾患、および神経障害からなる群から選択される疾患の治療管理において有効である、請求項７に記載の方法。
【請求項１２】
哺乳類の腸内においてアッカーマンシア・ムシニフィラの生菌数を増加させるための方法であって、有効量のガルシノール含有組成物を哺乳類に投与して、前記細菌のコロニーの増加をもたらすステップを含む、方法。
【請求項１３】
アッカーマンシア・ムシニフィラのコロニー数の増加が、エンドカンナビノイド放出を引き起こすことによりＡＭＰＫシグナル伝達経路を通して体重を減少させる、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
哺乳類における高脂血症の治療管理の方法であって、有効濃度のガルシノール含有組成物を投与して、前記哺乳類の血液において、（ｉ）血中総コレステロールレベルの量を低下させること；（ｉｉ）低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）および超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）の濃度を低下させること；（ｉｉｉ）高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）の濃度を増加させること；ならびに（ｉｖ）血清トリグリセリドの濃度を低下させることの効果をもたらすステップを含む、方法。
【請求項１５】
高脂血症の医学的原因が肥満である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
プレバイオティクス剤としての使用のためのガルシノール含有組成物。
【請求項１７】
組成物が、薬学的／栄養補助的に許容される賦形剤、補助剤、希釈剤、または担体と共に製剤化され、錠剤、カプセル、シロップ、グミ、粉末、懸濁液、乳濁液、咀嚼錠、キャンディ、および食料品の形をとって経口投与される、請求項１６に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連特許出願の相互参照
本発明は、２０１７年６月１５日に出願された米国仮特許出願第６２５１９９４９号および２０１７年６月２２日に出願された米国仮特許出願第６２５２３６１１号の優先権を主張するＰＣＴ出願である。
本発明は、一般的に、体重管理のための組成物に関する。具体的には、本発明は、肥満、高コレステロール血症、および腸内微生物叢（gut microbiota）の改変の管理のための、ガルシノールを含有する組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
肥満は、高血圧症、２型糖尿病、心疾患、脳卒中、変形性関節症、および精神疾患のような様々な障害の発生の主要な健康リスクであると考えられている。世界的には１０人中１人より多くが肥満であり、また米国では成人の約３６％が肥満である（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｍｅｄｉｃａｌｎｅｗｓｔｏｄａｙ．ｃｏｍ／ａｒｔｉｃｌｅｓ／３１９９０２．ｐｈｐ、２０１８年５月１０日にアクセス）。肥満は、食べられた食物のエネルギー含量と、生命を維持するために、および肉体労働を行うために身体により消費されたエネルギーとの間の不均衡により生じる。そのようなエネルギーバランスの枠組みは、体重の制御を調べるための潜在的に強力なツールである。
【０００３】
白色脂肪組織から褐色またはベージュ／ブライト脂肪組織への変換は、過度のエネルギー存在量を利用して、エネルギー消費を増加させる効果的な機構として報告されている。褐色脂肪組織（ＢＡＴ）の役割は、以下の先行技術において十分、記載されている：
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【０００４】
白色脂肪細胞から褐色脂肪細胞への変換を促進する薬物および／または天然分子は、肥満関連状態の処置／管理において有効である。しかしながら、本発明者らは、エネルギー消費に関与する成分、ならびに肥満などの状態の自然の経過を説明するための、および治療介入の規模および潜在的成功を推定するための様々な時間スケールに渡るそれらの相互作用のより良い理解を必要としている（Kevin D. Hall, Steven B. Heymsfield, Joseph W. Kemnitz, Samuel Klein, Dale A. Schoeller, and John R. Speakman, Energy balance and its components: implications for body weight regulation, Am J Clin Nutr. 2012 Apr; 95(4): 989-994）。
最近、腸内微生物叢が、肥満およびＩＩ型糖尿病のような状態において変化していることが観察された。プロバイオティクスの肥満個体への投与は、効果的な体重減少を生じた。１つの特定の腸内微生物、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）は、肥満、糖尿病、心臓代謝疾患、および軽度の炎症と反比例的に関連している（Cani et al., Next-Generation Beneficial Microbes: The Case of  Akkermansia muciniphila, Front. Microbiol., 22 September 2017,  https://doi.org/10.3389/fmicb.2017.01765）。Ａ．ムシニフィラの相対存在量がプレバイオティクスの摂取後、１００倍を超えて増加したということが明らかになっている（Everard et al., 2014 Microbiome of prebiotic-treated mice reveals novel targets involved in host response during obesity. ISME J. 8, 2116-2130. doi: 10.1038/ismej2014.45）。研究により、Ａ．ムシニフィラの数が肥満および２型糖尿病マウスにおいてより少なく、かつ抗糖尿病処置で増加することが見出されることも示された（Cani et al., Next-Generation Beneficial Microbes: The Case of Akkermansia muciniphila, Front. Microbiol., 22 September 2017,  https://doi.org/10.3389/fmicb.2017.01765）。別の研究により、Ａ．ムシニフィラ処置が、体脂肪量増加、代謝性内毒血症、脂肪組織炎症、およびインスリン抵抗性を含む高脂肪食誘導性代謝障害を逆転させることが観察された（Amandine Everard, Clara Belzer, Lucie Geurts, Janneke P. Ouwerkerk, Celine Druart, Laure B. Bindels, Yves Guiot, Muriel Derrien, Giulio G. Muccioli, Nathalie M. Delzenne, Willem M. de Vos and Patrice D. Cani, Cross-talk between Akkermansia muciniphila and intestinal epithelium controls diet-induced obesity, PNAS May 28, 2013. 110 (22) 9066-9071）。このゆえに、アッカーマンシア・ムシニフィラの生菌数を増加させることが、肥満、糖尿病、および他の代謝障害の管理のための有効な治療であり得る。アッカーマンシア・ムシニフィラのプロバイオティクス的かつ有益的効果は、以下の先行技術文献に十分、記載されている。
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【０００５】
天然分子は、現在、肥満および関連障害の管理について、幅広く評価されている。ガルシニア・カンボジア（Ｇａｒｃｉｎｉａ  ｃａｍｂｏｇｉａ）の抽出物は、体重減少の潜在能力を有すると報告されている。米国特許第７０６３８６１号は、ガルシノールおよびヒドロキシクエン酸（ＨＣＡ）を、任意でアントシアニンと共に含有する体重減少組成物を開示する。米国特許第８３２９７４３号もまた、ガルシノール、プテロスチルベン、およびアントシアニンを含有する体重減少製剤を開示する。米国特許第７０６３８６１号は、ガルシノールとＨＣＡの組合せが、抗肥満効果をもたらすＨＣＡの生物学的利用率を増加させることを示している。このように、ガルシノールそれ自体の抗肥満効果は報告されておらず、また先行技術文献から予想することはできない。さらに、Ｈｅｏら（Gut microbiota Modulated by Probiotics and Garcinia cambogia Extract Correlate with Weight Gain and Adipocyte Sizes in High Fat-Fed Mice Sci Rep. 2016;6:33566）は、ガルシノールに具体的に言及することなく、ガルシニア・カンボジア抽出物による腸内微生物叢の調節およびＡ．ムシニフィラの増加を報告している。本発明は、ガルシノールによる、抗肥満効果および腸内マイクロバイオームを調節する能力を開示することにより上記問題を解決する。
本発明の主たる目的は、体重減少およびエネルギーバランスをもたらすことによりガルシノールの抗肥満効果を開示することである。
腸内マイクロバイオームを改変して、プロバイオティクス細菌アッカーマンシア・ムシニフィラの生菌数を増加させるガルシノールの能力を開示することが、本発明の別の目的である。
ガルシノールの脂質低下効果を開示することは、本発明のさらに別の目的である。
本発明は、上記のそのような目的を果たし、かつさらなる関連した利点を提供する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、肥満管理のためのガルシノール組成物に関連する。より具体的には、本発明は、ａ）哺乳類脂肪細胞系においてエネルギーバランスを維持すること、ｂ）高コレステロール血症の管理、およびｃ）哺乳類において体重増加を低下させることのためのガルシノールの使用に関する。ガルシノールによる、腸内微生物叢の改変および有益な微生物アッカーマンシア・ムシニフィラの増加もまた開示される。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１ａ】ガルシノールによる脂肪細胞における脂質蓄積の用量依存性低下を示す、脂肪細胞のオイル−Ｏ−レッド染色の図である。
【図１ｂ】ガルシノールによる脂肪生成の阻害パーセンテージのグラフ表示である。
【図２】ガルシノール処置群における脂肪生成に関連した遺伝子の発現の減少を示すグラフ表示である。
【図３】ガルシノール処置群における褐色脂肪変換および脂肪利用に関連した遺伝子の発現の増加を示すグラフ表示である。
【図４ａ】４ヶ月間に渡る、異なる濃度のガルシノールを投与された動物の体重の変化を示すグラフ表示である。
【図４ｂ】１２０日間、異なる濃度のガルシノールを投与された動物の最終体重を示すグラフ表示である。
【図５】マウスの身体における異なる脂肪パッド領域を示す代表的な画像である。
【図６】異なる濃度のガルシノールで処置された腹膜、腸間膜、および性腺周囲（perigonadal）の脂肪組織の質量の変化を示す図である。
【図７】異なる濃度のガルシノールを投与された動物における用量依存性様式での内臓脂肪の低下パーセンテージを示すグラフ表示である。
【図８ａ−８ｂ】異なる濃度のガルシノールを投与された動物の脂肪組織における脂肪生成に関連した遺伝子の発現の減少を示すグラフ表示である。
【図９】異なる濃度のガルシノールを投与された動物の脂肪組織における褐色脂肪変換および脂肪利用に関連した遺伝子の発現の増加を示すグラフ表示である。
【図１０ａ】異なる濃度のガルシノールを投与された動物の血清中の総コレステロールおよびトリグリセリドのレベルを示すグラフ表示である。
【図１０ｂ】異なる濃度のガルシノールを投与された動物の血清中のＬＤＬおよびＶＬＤＬのレベルを示すグラフ表示である。
【図１０ｃ】異なる濃度のガルシノールを投与された動物の血清中のＨＤＬのレベルを示すグラフ表示である。
【図１１】ＨＦＤ（高脂肪食）誘導性肥満マウスにおけるガルシノールでの抗肥満研究についての実験デザインを示す図である。
【図１２】Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるＨＦＤ誘導性肥満へのガルシノールの効果を示す代表的な画像である。画像Ａは、１３週間目の終了時におけるマウスの各群の代表的な写真である。画像Ｂは、性腺周囲脂肪組織の写真であり、画像Ｃは肝臓の写真を示す。
【図１３】様々な濃度のガルシノールを投与された動物の体重のグラフ表示である。体重は、毎週モニターされ、各群の平均体重は、平均±ＳＥとして表されている、ｐ＜０．０５；ａ、ｂ、ｃ、およびｄは、各群の間で有意に異なる。
【図１４ａ】ガルシノールを投与された動物の性腺周囲、後腹膜、および腸間膜の脂肪組織の写真である。
【図１４ｂ】ガルシノールを投与された動物の脂肪組織質量のグラフ表示である。
【図１５ａ】性腺周囲脂肪組織におけるＨ＆Ｅ染色による病理学的評価についての各研究群の代表的な画像である。
【図１５ｂ】ガルシノールで処置された動物における脂肪細胞サイズの頻度パーセンテージを示すグラフ表示である。脂肪細胞サイズは、代表的な切片から顕微鏡下で定量化された。
【図１６ａ−１６ｂ】ガルシノールを投与された動物におけるコロニー細菌群集の分類学的組成の変化を示す図である。図１６ａは、糞便微生物叢の門の相対存在量における変化を示し、図１６ｂは、属の相対存在量を表す。
【図１７ａ−１７ｂ】全試料（Ａ）門（Ｂ）属の標準化相対存在量を示す主座標分析（ＰＣｏＡ）プロットを示す図である。
【図１７ｃ】ＨＦＤ摂食マウスにおけるガルシノールにより有意に変化した５０個の操作的分類単位（ＯＴＵ）の存在量を示すヒートマップである。
【図１８ａ】ＨＦＤ摂食Ｃ５７ＢＬ／６マウス性腺周囲脂肪組織における脂肪細胞特異的因子およびＡＭＰＫシグナル伝達のタンパク質発現へのガルシノールの効果を示す図である。ｐ−ＡＭＰＫ（Ｔｈｒ１７２）、ＡＭＰＫ、Ｐｒｅｆ−１、ＳＲＥＢＰ−１、およびＰＰＡＲγのタンパク質レベルは、特異的抗体でのウェスタンブロット分析により決定された。β−アクチンは、負荷対照として用いられた。
【図１８ｂ】ＨＦＤ摂食Ｃ５７ＢＬ／６マウス性腺周囲脂肪組織における脂肪細胞特異的因子およびＡＭＰＫシグナル伝達のタンパク質発現のレベルのグラフ表示である。値は、β−アクチンに対して標準化されたタンパク質バンドの相対密度を示す。*ｐ＜０．０５；**ｐ＜０．００５；ＨＦＤ処置のみとの比較。
【図１９ａ】様々な濃度のガルシノールおよびガルシノールブレンドを投与された動物の体重のグラフ表示である。
【図１９ｂ】研究期間の終了時におけるマウスの各群の代表的な写真である。
【図２０ａ】異なる濃度のガルシノールおよびガルシノールブレンドを投与された動物の性腺周囲脂肪質量のグラフ表示である。
【図２０ｂ】異なる濃度のガルシノールおよびガルシノールブレンドを投与された動物の後腹膜脂肪質量のグラフ表示である。
【図２０ｃ】異なる濃度のガルシノールおよびガルシノールブレンドを投与された動物の腸間膜脂肪質量のグラフ表示である。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
最も好ましい実施形態において、本発明は、哺乳類における肥満の治療管理のための方法であって、有効濃度のガルシノール含有組成物を前記哺乳類に投与して、前記哺乳類において、ａ）脂肪生成の阻害、ｂ）体重および内臓脂肪の減少をもたらすステップを含む、方法を開示する。関連した実施形態において、脂肪生成の阻害は、非限定的に、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲγ）、ＣＣＡＡＴ／エンハンサー結合タンパク質アルファ（ｃＥＢＰα）、第１アポトーシスシグナル（ｆｉｒｓｔ  ａｐｏｐｔｏｔｉｃ  ｓｉｇｎａｌ）（ＦＡＳ）、脂肪細胞タンパク質２（ＡＰ２）、レジスチン、およびレプチンからなる群から選択される遺伝子の下方制御によりもたらされる。関連した実施形態において、脂肪生成の阻害は、非限定的に、ホスホアデノシン一リン酸活性化タンパク質キナーゼ（ｐ−ＡＭＰＫ）、ＡＭＰ活性化タンパク質キナーゼ（ＡＭＰＫ）、および前脂肪細胞因子１（ＰＲＥＦ−１）からなる群から選択される遺伝子の上方制御によりもたらされる。別の関連した実施形態において、内臓脂肪は、腸間膜脂肪、腹膜脂肪、および性腺周囲脂肪からなる群から選択される。関連した実施形態において、組成物は、薬学的／栄養補助的に許容される賦形剤、補助剤、希釈剤、または担体と共に製剤化され、錠剤、カプセル、シロップ、グミ、粉末、懸濁液、乳濁液、咀嚼錠、キャンディ、および食料品の形をとって経口投与される。
【０００９】
別の好ましい実施形態において、本発明は、哺乳類脂肪細胞系においてエネルギーバランスを達成する方法であって、哺乳類前脂肪細胞および／または脂肪細胞にターゲットされるガルシノール含有組成物を有効量で投与して、（ａ）脂肪生成の阻害の増大の効果、および（ｂ）褐色脂肪細胞または褐色様（ベージュまたはブライト）脂肪細胞を特異的にリクルートし、（ｃ）白色脂肪細胞貯蔵部位に褐色様表現型（ベージュまたはブライト脂肪細胞）を誘導するように個々に、または組み合わせて機能する因子の発現の増加の効果を達成して、前記哺乳類において脂肪利用およびエネルギーバランスの効果をもたらすステップを含む、方法を開示する。関連した実施形態において、因子には、膜貫通タンパク質ミトコンドリア脱共役タンパク質（ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｕｎｃｏｕｐｌｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ）（ＵＣＰ−１）、エネルギー代謝に関与する遺伝子を制御する、転写同時制御因子、タンパク質１６を含有するＰＲドメイン（ＰＲ  ｄｏｍａｉｎ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １６）（ＰＲＤＭ１６）およびペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマコアクチベーター１−アルファ（Ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｇａｍｍａ  ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ  １−ａｌｐｈａ）（ＰＧＣ−１α）、ならびにエネルギー消費を調節する分泌タンパク質である骨形成タンパク質７（ＢＭＰ７）が挙げられる。関連した実施形態において、組成物は、薬学的／栄養補助的に許容される賦形剤、補助剤、希釈剤、または担体と共に製剤化され、錠剤、カプセル、シロップ、グミ、粉末、懸濁液、乳濁液、咀嚼錠、キャンディ、および食料品の形をとって経口投与される。
【００１０】
別の好ましい実施形態において、本発明は、哺乳類において腸内微生物叢を改変する方法であって、有効量のガルシノール含有組成物を前記哺乳類に投与して、腸内微生物叢の変化をもたらすステップを含む、方法を開示する。関連した実施形態において、腸内微生物叢は、デファリバクター門（Ｄｅｆｅｒｒｉｂａｃｔｅｒｅｓ）、プロテオバクテリア門（Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ）、バクテロイデス門（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ）、ベルコミクロビウム門（Ｖｅｒｒｕｃｏｍｉｃｒｏｂｉａ）、およびフィルミクテス門（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ）から選択される。別の関連した実施形態において、腸内微生物叢は、ラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、ブチリビブリオ属（Ｂｕｔｙｒｉｖｉｂｒｉｏ）、クロストリジウム属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、アナエロブランカ属（Ａｎａｅｒｏｂｒａｎｃａ）、          ディスゴノモナス属（Ｄｙｓｇｏｎｏｍｏｎａｓ）、ジョンソネラ属（Ｊｏｈｎｓｏｎｅｌｌａ）、ルミノコッカス属（Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ）、バクテロイデス属（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）、オシロスピラ属（Ｏｓｃｉｌｌｏｓｐｉｒａ）、パラバクテロイデス属（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｒｏｉｄｅｓ）、アッカーマンシア属（Ａｋｋｅｒｍａｎｉｓａ）、およびブラウティア属（Ｂｌａｕｔｉａ）から選択される。より具体的には、腸内微生物叢は、パラバクテロイデス・ゴルドステイニイ（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｇｏｌｄｓｔｅｉｎｉｉ）、バクテロイデス・カカエ（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｃａｃｃａｅ）、ジョンソネラ・イグナバ（Ｊｏｈｎｓｏｎｅｌｌａ  ｉｇｎａｖａ）、ブラウティア・ウェクスレラエ（Ｂｌａｕｔｉａ  ｗｅｘｌｅｒａｅ）、ディスゴノモナス・ウィンペンニ（Ｄｙｓｇｏｎｏｍｏｎａｓ  ｗｉｍｐｅｎｎｙｉ）、ブラウティア・ハンセンニ（Ｂｌａｕｔｉａ  ｈａｎｓｅｎｎｉ）、アナエロブランカ・ザバルチンニ（Ａｎａｅｒｏｂｒａｎｃａ  ｚａｖａｒｚｉｎｎｉ）、オシロスピラ・エアエ（Ｏｓｃｉｌｌｏｓｐｉｒａ  ｅａｅ）、ムシスピリルム・シェドレリー（Ｍｕｃｉｓｐｉｒｉｌｌｕｓ  ｓｃｈａｅｄｌｅｒｉ）、ブラウティア・コッコイデス（Ｂｌａｕｔｉａ  ｃｏｃｃｏｉｄｅｓ）、アナエロツルンカス・コリホミニス（Ａｎａｅｒｏｔｒｕｎｃｕｓ  ｃｏｌｉｈｏｍｉｎｉｓ）、ブチリビブリオ・プロテオクラスティカス（Ｂｕｔｙｒｉｖｉｂｒｏ  ｐｒｏｔｅｏｃｌａｓｔｉｃｕｓ）、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）、ラクノスピラ・ペクチノスチザ（Ｌａｃｈｎｏｓｐｏｒａ  ｐｅｃｔｉｎｏｓｃｈｉｚａ）、ペドバクター・クワンジャンゲンシス（Ｐｅｄｏｂａｃｔｅｒ  ｋｗａｎｇｙａｎｇｅｎｓｉｓ）、アルカリフィルス・クロトンアトキシダンス（Ａｌｋａｌｉｐｈｉｌｕｓ  ｃｒｏｔｏｎａｔｏｘｉｄａｎｓ）、ラクトバチルス・サリバリウス（ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）、アナエロビブリオ・リポリティカス（Ａｎａｅｒｉｖｉｂｒｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃｕｓ）、ロドサーマス・クラルス（Ｒｈｏｄｏｔｈｅｒｍｕｓ  ｃｌａｒｕｓ）、バクテロイデス・ステルコリロソリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｓｔｅｒｃ���ｒｉｒｏｓｏｒｉｓ）、ルミノコッカス・フラベファシエンス（Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｏｃｃｕｓ  ｆｌａｖｅｆａｃｉｅｎｓ）、バクテロイデス・キシラニソルベンス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｘｙｌａｎｉｓｏｌｖｅｎｓ）、ルミノコッカス・グナバス（Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｇｎａｖｕｓ）、クロストリジウム・ターマイティディス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｒｍｉｔｉｄｉｓ）、クロストリジウム・アルカリセルロシー（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ａｌｋａｌｉｃｅｌｌｕｌｏｓｉ）、エムチシシア・オリゴラフィカ（Ｅｍｔｉｃｉｃｉａ  ｏｌｉｇｏｒａｐｈｉｃａ）、シュードブチリビブリオ・キシラニボランス（Ｐｓｅｕｄｏｂｕｔｙｒｉｖｉｂｒｏ  ｘｙｌａｎｉｖｏｒａｎｓ）、アクチノマイセス・ナツラエ（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ  ｎａｔｕｒａｅ）、ペプトニフィラス・コキシー（Ｐｅｐｔｏｎｉｐｈｉｌｕｓ  ｃｏｘｉｉ）、およびドリコスペルマム・クルバム（Ｄｏｌｉｃｈｏｓｐｅｒｍｕｍ  ｃｕｒｖｕｍ）からなる群から選択される。関連した実施形態において、腸内微生物叢の改変は、肥満、心血管系合併症、炎症性腸疾患、クローン病、セリアック病、メタボリックシンドローム、肝臓疾患、および神経障害からなる群から選択される疾患の治療管理において有効である。関連した実施形態において、組成物は、薬学的／栄養補助的に許容される賦形剤、補助剤、希釈剤、または担体と共に製剤化され、錠剤、カプセル、シロップ、グミ、粉末、懸濁液、乳濁液、咀嚼錠、キャンディ、および食料品の形をとって経口投与される。
【００１１】
別の好ましい実施形態において、本発明は、哺乳類の腸内においてアッカーマンシア・ムシニフィラの生菌数を増加させるための方法であって、有効量のガルシノール含有組成物を哺乳類に投与して、前記細菌のコロニーの増加をもたらすステップを含む、方法を開示する。関連した実施形態において、アッカーマンシア・ムシニフィラのコロニー数の増加は、エンドカンナビノイド放出を引き起こすことによりＡＭＰＫシグナル伝達経路を通して体重を減少させる。関連した実施形態において、組成物は、薬学的／栄養補助的に許容される賦形剤、補助剤、希釈剤、または担体と共に製剤化され、錠剤、カプセル、シロップ、グミ、粉末、懸濁液、乳濁液、咀嚼錠、キャンディ、および食料品の形をとって経口投与される。
【００１２】
別の好ましい実施形態において、本発明は、哺乳類における高脂血症の治療管理の方法であって、有効濃度のガルシノール含有組成物を投与して、前記哺乳類の血液において、（ｉ）血中総コレステロールレベルの量を低下させること；（ｉｉ）低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）および超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）の濃度を低下させること；（ｉｉｉ）高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）の濃度を増加させること；ならびに（ｉｖ）血清トリグリセリドの濃度を低下させることの効果をもたらすステップを含む、方法を開示する。関連した実施形態において、高脂血症の医学的原因は肥満である。関連した実施形態において、組成物は、薬学的／栄養補助的に許容される賦形剤、補助剤、希釈剤、または担体と共に製剤化され、錠剤、カプセル、シロップ、グミ、粉末、懸濁液、乳濁液、咀嚼錠、キャンディ、および食料品の形をとって経口投与される。
別の好ましい実施形態において、本発明は、プレバイオティクス剤としての使用のためのガルシノール含有組成物を開示する。
本明細書の下記において、最も好ましい実施形態を明確に述べる特定の例示的な例が含まれる。
【実施例】
【００１３】
（例１）
ガルシノールの抗肥満効果  −  Ｓａｍｉ  Ｌａｂｓ  Ｌｉｍｉｔｅｄ、Ｂａｎｇａｌｏｒｅ、ＩｎｄｉａおよびＳｒｉｍａｄ  Ａｎｄａｖａｎ  Ａｒｔｓ  ＆  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｃｏｌｌｅｇｅ、Ｔｉｒｕｃｈｉｒａｐａｌｌｉ、Ｉｎｄｉａで行われた研究
培養３Ｔ３Ｌ１および動物組織におけるガルシノールによる脂肪生成阻害および褐色脂肪特異的遺伝子発現
方法論
ストック溶液の調製
１０ｍｇ／ｍｌのガルシノール（２０％）ストックをＤＭＳＯ中に調製し、０．２μｍシリンジフィルターを通して濾過した。ストックをＤＭＥＭ中、１０００倍希釈して、１０μｇ／ｍｌ最終濃度を得て、段階希釈した。インスリン（Ｈｉ  Ｍｅｄｉａ）を、２０ｍｇ／ｍｌの濃度での溶液とした。これを、ＤＭＥＭ中１μｇ／ｍｌに希釈した。ＩＢＭＸ（Ｓｉｇｍａ）  −  ５ｍＭのストックをＤＭＥＭ中に調製し、０．５ｍＭの最終濃度で用いるために１０倍希釈した。デキサメタゾン（Ｓｉｇｍａ）  −  １０μＭのストックをＤＭＥＭ中に調製し、０．２５μＭの最終濃度を得るように４０倍希釈した。
【００１４】
細胞培養
マウス３Ｔ３−Ｌ１前脂肪細胞を、１０％熱失活ウシ胎仔血清、抗生物質と共に２５ｍＭグルコースを含有するＤＭＥＭ中、３７℃、５％ＣＯ２で培養した。その細胞が、７０〜８０％コンフルエントになった時、それらをトリプシン処理し、洗浄し、ウェルあたり２×１０6個の細胞の密度で６ウェルプレートに播種した。コンフルエンスに達して（０日目）から２日後、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を含有するＤＭＥＭ培地に１μｇ／ｍＬインスリン、０．２５μＭデキサメタゾン、０．５ｍＭ  １−メチル−３−イソブチル−キサンチン（ＩＢＭＸ）、および異なる濃度のガルシノール（２０％）を追加することにより、細胞を分化するように誘導した。３日目から７日目まで、細胞を、１μｇ／ｍＬインスリンおよび異なる濃度のガルシノール（２０％）を追加した進行培地において維持した。未処理の細胞およびＦＣＳ培地中で増殖した未分化細胞を、本実験についての脂肪生成陽性対照および陰性対照として用いた。脂肪細胞に蓄積されたトリグリセリドの量の定量化を、オイルレッドＯ染色により行った。
【００１５】
ＲＮＡ抽出
７日目における２回目の進行後、細胞を収集し、全ＲＮＡを、Ｔｒｉｚｏｌ方法を用いて抽出した。抽出されたＲＮＡを、デオキシリボヌクレアーゼＩで処理して、いかなる混入ＤＮＡも除去し、再び、フェノール：クロロホルム：イソアミルアルコール抽出（２４：２５：１）を用いて抽出した。ＲＮＡの品質を、Ｎａｎｏｄｒｏｐ（Ｔｈｅｒｍｏ）を用いて２６０／２８０ｎｍにおける吸光度をチェックすることにより決定した。
マウス脂肪パッドにおける遺伝子発現研究
処理された動物および未処理の動物由来の凍結脂肪パッドは、後でのＲＮＡのために収集され、凍結された。およそ１００ｍｇの組織を、氷中でホモジナイズし、前に記載されているように１ｍｌ  Ｔｒｉｚｏｌで抽出した。
【００１６】
定量リアルタイムＰＣＲ
２μｇの全ＲＮＡを、ｃＤＮＡ合成のためにＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ  ＩＩＩ  Ｆｉｒｓｔ−Ｓｔｒａｎｄ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて取得した。褐色脂肪特異的遺伝子の発現を決定するために、ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎマスターミックス（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて、Ｒｏｃｈｅ  Ｌｉｇｈｔ  ｃｙｃｌｅｒ  ９６において定量ＲＴ−ＰＣＲ分析を実施した。βアクチンを、ハウスキーピング遺伝子として用いた。ＢＡＴ遺伝子の相対的ＲＮＡ存在量を、ハウスキーピングβアクチン遺伝子に対して標準化し、ΔΔＣＴ（Ｌｏｇ2により変換された倍数変化と等価）として表した。
【００１７】
プライマー配列：脂肪生成に関連した褐色脂肪特異的遺伝子の発現を決定するために用いられたプライマーは表１に示されている。
【表１】
2020523373.tif 000005
【００１８】
結果
脂肪細胞に蓄積された脂質を、オイルレッドＯ染色により定量化した。ガルシノールは、脂肪細胞における脂質蓄積において用量依存性低下を示し（図１）、５μｇ／ｍｌおよび１０μｇ／ｍｌが、４７．８％および４７．２％の脂質蓄積の最も高い阻害を示した（図１ｂ）。
【００１９】
脂肪生成に関与する遺伝子に関して、ＰＰＡＲγは、脂肪生成の主要な制御因子であると考えられている。ＰＰＡＲγ発現の減少は、他の脂肪生成特異的遺伝子の発現を低下させる。本研究において、ガルシノールは、ＰＰＡＲγ発現、ならびにｃＥＢＰα、ＦＡＳ、およびＡＰ２のような脂肪生成および脂肪酸合成に関連した遺伝子の発現において用量依存性低下を示し（図２）、ガルシノールが用量依存性様式で脂肪生成を阻害することを示している。
【００２０】
ガルシノールはまた、褐色脂肪組織特異的遺伝子を有意に増加させた。ＵＣＰ１、ＰＲＤＭ１６、ＰＧＣ１α、およびＢＭＰ７の発現は、ガルシノールにより用量依存性様式で増加し（図３）、ガルシノールが、白色脂肪組織貯蔵部位を褐色またはブライト／ベージュ脂肪組織に変換して、それによって、脂肪利用および脂肪分解によるエネルギー消費を増加させることに有効であると示唆している。
【００２１】
Ｃ５７マウスにおける高脂肪食誘導性肥満へのガルシノールの効果
方法
動物  −  ６〜８週齢のＣ５７／ＢＬ６マウスを８匹／群（４匹の雄および４匹の雌）で本研究に用いた。動物を、十分な新鮮な空気供給（１時間あたり１２〜１５回の空気交換）、室温２０．２〜２３．５℃、および相対湿度５８〜６４％で空調管理され、１２時間の蛍光の光と１２時間の暗闇のサイクルでの標準実験条件下、飼育した。温度および相対湿度を１日１回、記録した。
餌
動物に、順化および実験期間を通じて、正常食（９ｋｃａｌ／日）および高脂肪食（５０ｋｃａｌ／日）を与えた。
水を、順化および実験期間を通じて、動物に高脂肪食と共に供給した。清浄器付き水濾し器からの水が、ステンレススチールシッパーチューブを有する動物給餌ボトルにおいて提供された。
【００２２】
全ての研究を、ＣＰＣＳＥＡの倫理指針に従って、その委員会から必要な認可を得た（承認番号：７９０／０３／ａｃ／ＣＰＣＳＥＡ）後で行った。
ａ．インドの１９９８年１２月１５日の公報において発表された実験動物施設についての動物に関する実験の管理および監視のための委員会（ｔｈｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｐｕｒｐｏｓｅ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  ａｎｄ  Ｓｕｐｅｒｖｉｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ  ｏｎ  Ａｎｉｍａｌｓ）（ＣＰＣＳＥＡ）指針の推奨による。
ｂ．本研究（抗肥満活性）についてのＣＰＣＳＥＡ承認番号はＳＡＣ／ＩＡＥＣ／ＢＣ／２０１７／ＩＰ．−００１である。
【００２３】
研究群のデザインは表２に示されている。
【表２】
2020523373.tif 000006
【００２４】
動物の体重を、実験期間の全ての日において記録した。実験期間の終了時において、動物を、頚椎脱臼により屠殺した。血液を収集し、血清を遠心分離により分離して、生化学的パラメータの分析に用いた。肝臓、腎臓、脾臓、および膵臓などの臓器ならびに脂肪組織（後腹膜脂肪、性腺周囲脂肪、および腸間膜脂肪）を切除し、リン酸緩衝食塩水中で洗浄した。
【００２５】
効力測定
以下のパラメータを上記群において測定した。
体重の測定
臓器質量の決定
コレステロールの推定（Zak et al., (2009) A new method for the determination of serum cholesterol. J Clin Endocrinol Metab., 94(7), 2215-2220）
トリグリセリドの推定（Foster L.B and Dunn R.T. (1973) Stable reagents for determination of serum triglycerides by a colorimetric Hantzsch condensation method. Clin Chem, 196, 338-340）
ＨＤＬコレステロールの推定（Burstein et al., (1970). Determination of HDL cholesterol. J.lipid Res., 11, 583）
ＬＤＬおよびＶＬＤＬの決定（Friedewald et al., (1972) Estimation of the concentration of Low Density Lipoprotein cholesterol in plasma without use of preparative centrifuge. J.Clin Chem.; 18:499）
【００２６】
結果
体重
結果より、ガルシノールが、高脂肪食を１２０日間、与えられた動物において用量依存性様式で体重増加を阻害することが示された（図４ａおよび４ｂ）。体重の変化パーセンテージは下記の表に示されている。
【表３】
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【００２７】
脂肪貯蔵部位の低下
マウスの異なる脂肪パッド領域における脂肪低下（図５）もまた評価した。ガルシノールの１２０日間の投与後の後腹膜、性腺周囲、および腸間膜の脂肪貯蔵部位の質量は下記のように表にされている。
【００２８】
【表４】
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ガルシノール処置は、異なる脂肪パッド領域における脂肪蓄積を有意に低下させた（図６）。内臓脂肪のパーセンテージは、ガルシノール処置により低下し（図７）、１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量が最大効果を示した。
【００２９】
臓器質量
ガルシノール投与は、臓器の質量に有害には影響せず、ガルシノールが重要な臓器において少しの有害作用も誘発しないことを示唆している（表５）。
【表５】
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【００３０】
遺伝子発現：脂肪生成に関連した遺伝子の発現の低下が、ガルシノールで処置された動物の脂肪パッドにおいて観察された。マウス３Ｔ３−Ｌ１細胞株と同様に、ガルシノール投与は、脂肪パッド領域においてＰＰＡＲγ、ＡＰ２、ＦＡＳ、レジスチン、およびレプチンの発現を有意に低下させた（図８ａおよび８ｂ）。同様に、ガルシノール投与は、マウス脂肪パッド領域において褐色脂肪特異的遺伝子の発現を効果的に増加させた（図９）。
脂質プロファイル：高脂肪食は、研究動物の血清中の総コレステロール、ＬＤＬ、ＶＬＤＬ、およびトリグリセリドのレベルを増加させた。ガルシノールと同時投与された高脂肪食は、血清中、総コレステロールおよびトリグリセリド（図１０ａ）、ＬＤＬおよびＶＬＤＬ（図１０ｂ）を有意に低下させ、ＨＤＬレベル（図１０ｃ）を増加させた。
【００３１】
結論：
ガルシノール処置は、インビトロで脂肪生成の用量依存性阻害を示し、白色脂肪組織から褐色またはブライト／ベージュ脂肪組織への変換を誘導し、それにより、脂肪利用およびエネルギー代謝を増加させた。インビボ結果より、ガルシノールが、１０ｍｇ／ｋｇにおいて体重および内臓脂肪蓄積を有意に低下させるのに効果的であり、かつマウス脂肪パッドにおける脂肪パッドにおいて、脂肪生成特異的遺伝子発現を低下させ、褐色脂肪組織特異的遺伝子を増加させることが示された。ガルシノール投与はまた、内臓脂肪および臓器質量の低下を生じ、ガルシノールが脂肪分解およびエネルギー代謝を促進することを示している。全体にわたって、ガルシノールは、体重減少を誘導し、内臓脂肪を低下させ、重要な臓器の健康を維持する。
【００３２】
（例２）
ガルシノールの抗肥満効果  −  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｔａｉｗａｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、Ｔａｉｐｅｉ、Ｔａｉｗａｎで行われた研究
方法論
試薬および抗体
ＡＭＰＫおよびｐ−ＡＭＰＫ（Ｔｈｒ１７２）抗体を、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｂｅｖｅｒｌｙ、ＭＡ、ＵＳＡ）から購入した。ＳＲＥＢＰ−１抗体をＳａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ、ＣＡ、ＵＳＡ）から調達した。ＰＰＡＲγおよびＰｒｅｆ−１抗体をａｂｃａｍ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、Ｅｎｇｌａｎｄ）から購入した。マウスβ−アクチンモノクローナル抗体をＳｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、ＵＳＡ）から入手した。Ｂｉｏ−Ｒａｄタンパク質アッセイ色素試薬をＢｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｍｕｎｉｃｈ、Ｇｅｒｍａｎｙ）から購入した。キシレンならびにヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色を、Ｓｕｒｇｉｐａｔｈ（Ｐｅｔｅｒｂｏｒｏｕｇｈ、ＵＫ）から入手した。動物食餌の一部として用いられるコレステロールを、Ａｃｒｏｓ  Ｏｒｇａｎｉｃｓ（Ｂｒｉｄｇｅｗａｔｅｒ、ＮＪ、ＵＳＡ）から入手した。ガルシノールを、Ｓａｂｉｎｓａ  Ｃｏｒｐ．（Ｅａｓｔ  Ｗｉｎｄｓｏｒ、ＮＪ、ＵＳＡ）から調達した。ガルシノールの純度は、高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）により９９％より高いことを決定された。
【００３３】
動物飼育および実験デザイン
５週齢の雄Ｃ５７ＢＬ／６マウスをＢｉｏＬＡＳＣＯ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ（Ｔａｉｗａｎ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ、Ｔａｉｐｅｉ、Ｔａｉｗａｎ）から購入し、管理された雰囲気（２５±１℃、５０％相対湿度）下、１２時間の明／暗サイクルで飼育した。１週間の順化後、動物を、１３週間の間、各群中８匹のマウスの、正常食（ＮＤ、脂肪として１５％エネルギー）群、ＨＦＤ（脂肪として５０％エネルギー）群、および０．１％または０．５％ガルシノールとのＨＦＤ群にランダムに振り分けた。実験デザインは図１１に要約されている。実験食餌を、Ｐｕｒｉｎａ  ５００１食餌（ＬａｂＤｉｅｔ、ＰＭＩ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、ＵＳＡ）から改変した。動物は、食物および水に自由にアクセスできた。食物カップに、毎日、新鮮な食餌を補充した。この研究で用いられた全ての動物実験プロトコールは、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｔａｉｗａｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＩＡＣＵＣ、ＮＴＵ）により承認された。研究の終了時、動物を、ＣＯ2窒息により屠殺し、解剖し、それらの全身の質量、ならびに肝臓、腎臓、脾臓、脂肪組織（性腺周囲脂肪、後腹膜脂肪、および腸間膜脂肪）、および血清を含む選択された組織をすぐに収集し、質量測定し、写真撮影した。
【００３４】
病理組織学的試験
性腺周囲脂肪および肝臓の中葉の一部分を切除し、１０％緩衝ホルマリン中に固定し、一連のエタノール溶液で脱水し、パラフィン包埋のために処理した。厚さ３〜５μｍの切片に切断し、脱パラフィンし、再水和させ、Ｈ＆Ｅで染色し、顕微鏡写真評価に供した。脂肪細胞サイズをＩｍａｇｅ  Ｊソフトウェア（Ｒａｓｂａｎｄ、Ｗ．Ｓ．、ＩｍａｇｅＪ、Ｕ．Ｓ．  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ、ＵＳＡ）を用いて決定した。
【００３５】
生化学的分析
血液試料を、麻酔下、左心室から収集した。その試料を、１０μＬのヘパリンナトリウム中に混合し、３５００ｒｐｍで、４℃、１０分間、遠心分離した。その後、血漿を、使用するまで−８０℃で保存した。グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ（ＧＰＴ）、総コレステロール（ＴＣ）、ＴＧ、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、および低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）のレベルをＮａｔｉｏｎａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ、ＮＬＡＣ（Ｔａｉｐｅｉ、Ｔａｉｗａｎ）において７０８０  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ｈｉｔａｃｈｉ、Ｔｏｋｙｏ、Ｊａｐａｎ）で製造会社の使用説明書に従って分析した。
【００３６】
１６Ｓ  ｒＤＮＡ遺伝子シーケンシングおよび分析
全ＤＮＡを、新鮮な糞便試料から抽出した。精製されたＤＮＡを、ｉｎｎｕＳＰＥＥＤ  Ｓｔｏｏｌ  ＤＮＡキット（Ａｎａｌｙｔｉｋ  Ｊｅｎａ  ＡＧ、Ｊｅｎａ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて、製造会社のプロトコールに従って溶出した。Ｃａｐｏｒａｓｏら（Caporaso, J. G., Lauber, C. L., Walters, W. A., Berg-Lyons, D. et al., Global patterns of 16S rRNA diversity at a depth of millions of sequences per sample. Proc.Natl.Acad.Sci U.S A 2011, 108 Suppl 1, 4516-4522）からのＰＣＲプライマー配列を用いて、１６Ｓ  ｒＲＮＡ可変領域を増幅し、ＰＣＲ条件を、Ｔｕｎｇら（Tung, Y. C., Lin, Y. H., Chen, H. J., Chou, S. C. et al., Piceatannol Exerts Anti-Obesity Effects in C57BL/6 Mice through Modulating Adipogenic Proteins and Gut Microbiota. Molecules. 2016, 21）およびＣｈｏｕら（Chou, Y. C., Suh, J. H., Wang, Y., Pahwa, M. et al., Boswellia serrata resin extract alleviates azoxymethane (AOM)/dextran sodium sulfate (DSS)-induced colon tumorigenesis. Mol.Nutr Food Res. 2017, 61）において述べられているように実施した。その後、その単位複製配列を用いて、Ｉｌｌｕｍｉｎａ  ＤＮＡ  Ｌｉｂｒａｒｙ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎキット（Ｉｌｌｕｍｉｎａ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、ＵＳＡ）でインデックス標識ライブラリーを構築した。ペアードエンド（ｐａｉｒｅｄ−ｅｎｄ）シーケンシング（２×１５０ｂｐ）での１００，０００個より多い読み取りを分析するために、Ｉｌｌｕｍｉｎａ  ＭｉｎｉＳｅｑ  ＮＧＳ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）が用いられ、メタゲノミクスワークフローは、１６Ｓ  ｒＲＮＡデータのデータベースを用いて単位複製配列から生物体を分類した。分類は、Ｇｒｅｅｎｇｅｎｅｓデータベース（ｈｔｔｐｓ：／／ｇｒｅｅｎｇｅｎｅｓ．ｌｂｌ．ｇｏｖ／）に基づいた。ワークフローのアウトプットは、いくつかの分類学的レベル：界、門、綱、目、科、属、および種における読み取りの分類であった。
【００３７】
タンパク質調製およびウェスタンブロット
組織を、１個のＰｒｏｔｅａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ｃｏｃｋｔａｉｌ  Ｔａｂｌｅｔ（Ｒｏｃｈｅ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ、ＵＳＡ）を含有する氷冷溶解バッファー（１０％グリセロール、１％  ＴｒｉｔｏｎＸ−１００、１ｍＭ  Ｎａ3ＶＯ4、１ｍＭ  ＥＧＴＡ、１０ｍＭ  ＮａＦ、１ｍＭ  Ｎａ4Ｐ2Ｏ7、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓバッファー（ｐＨ７．９）、１００μＭ  β−グリセロホスフェート、１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、および５ｍＭ  ＥＤＴＡ）中、氷上で１時間、ホモジナイズし、その後、１７，５００ｇで、４℃、３０分間、遠心分離した。そのタンパク質濃度を、Ｂｉｏ−Ｒａｄタンパク質アッセイ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｉｎｃ．、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ、ＵＳＡ）で測定した。
【００３８】
統計解析
マウスの群間の差の有意性の統計的評価を、スチューデントｔ検定を用いて評価した。複数の群を比較する実験について、その差を、一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）およびＤｕｎｃａｎの事後検定を実行することにより分析した。データは、示された数の、独立して実施された実験についての平均±ＳＥとして提示され、ｐ値＜０．０５が、統計的に有意であるとみなされた。試料間の差を可視化するために主成分分析（ＰＣＡ）を行った。
【００３９】
結果
体重増加
結果より、１３週間のＨＦＤ摂食が、性腺周囲、後腹膜、および腸間膜の脂肪蓄積と共に体重および肝臓質量の有意な増加をもたらすことが示された。０．１％および０．５％ガルシノールを追加された食餌は、体重を用量依存性様式で低下させた。高用量のガルシノール（０．５％）とＨＦＤ食餌での同時処置は、体重増加を阻害し、ＨＦＤ＋０．５％ガルシノール群とＮＤ群の間に差はない（図１２および図１３）。
【００４０】
白色脂肪組織脂肪細胞サイズおよび肝臓恒常性への効果
０．５％の濃度でのガルシノールは、全ての３つの白色脂肪の脂肪質量を、ＨＦＤ群と比較して、性腺周囲の質量に関して８５．１％、後腹膜の質量に関して９２．４％、および腸間膜の質量に関して７７．７％、劇的に減少させた（図１４ａおよび１４ｂ）。
【００４１】
性腺周囲脂肪組織における平均脂肪細胞サイズを、Ｈ＆Ｅ染色により評価し、その結果により、脂肪細胞が、ＨＦＤ摂食マウスにおいて、ＮＤマウスの脂肪細胞と比較して、拡大していることが明らかにされた。脂肪細胞サイズの増加は、ガルシノール処置マウスにおいて有意に低下した（図１５）。ガルシノール（０．５％）は、ＨＦＤにより誘導される脂肪細胞の拡大を防止することができ、脂肪細胞が２０００μｍ2のサイズに分布された。重要なことには、脂肪細胞サイズは、ガルシノールにより用量依存性形式で防止または阻害することができる（表６）。
【００４２】
【表６】
2020523373.tif 000010
４つの群の間での差の有意性は、一元配置ＡＮＯＶＡおよびＤｕｎｃａｎの多範囲検定により分析された。異なる文字を有する値は、各群間で有意に異なっている（ｐ＜０．０５）。
【００４３】
脂質プロファイル：血漿脂質プロファイルもまた分析され、表７に提示されている。
【表７】
2020523373.tif 000011
データは、平均±ＳＥとして提示されている。４つの群の間での差の有意性は、一元配置ＡＮＯＶＡおよびＤｕｎｃａｎの多範囲検定により分析された。同じ行において同じ上付き文字を共有しない値は、群の間で有意に異なっている。ｐ＜０．０５；ａ、ｂ、ｃ、およびｄは、各群間で有意に異なっている。
【００４４】
０．１％および０．５％でのガルシノールを投与されたマウスは、ＴＣとＴＧの両方の血清中レベルを有意に減少させた。ＬＤＬおよびＨＤＬに関して、ガルシノール（０．１％および０．５％）は、ＨＦＤにより誘導されたＬＤＬレベルを用量依存性様式で低下させることができた。ＴＣ減少はＨＦＤによりもたらされたため、ＨＦＤ群は、ＬＤＬレベルだけでなく、ＨＤＬレベルもまた増加させる。このゆえに、本発明者らは、この変化を表現するためにＬＤＬ／ＨＤＬ比を用いた。高用量および低用量のガルシノールは、ＨＦＤ群と比較して、ＬＤＬ／ＨＤＬ比を有意に減少させることができる。
【００４５】
ガルシノールはＨＦＤ誘導性腸内毒素症を逆転させた
異なる群における細菌群集の全体的組成を、属レベルでのメタゲノム試料間での細菌の分類学的類似性の度合いを分析することにより評価した。細菌群集を、ＰＣＡを用いてクラスター化し、それは、ＨＦＤ食餌／ガルシノール処置に基づいた微生物群集を識別した。肥満のヒトおよびＨＦＤ摂食マウスの腸内微生物叢は、バクテロイデス門に対するフィルミクテス門（Ｆ／Ｂ比）の増加により特徴づけられる（Brun, P., Castagliuolo, I., Di, L., V, Buda, A. et al., Increased intestinal permeability in obese mice: new evidence in the pathogenesis of nonalcoholic steatohepatitis. Am.J Physiol Gastrointest.Liver Physiol 2007, 292, G518-G525）。結果は、ＨＦＤ群の門レベルがＮＤ群と比較してより高いＦ／Ｂ比を有することを示した（図１６ａ）。興味深いことに、ガルシノール処置は、バクテロイデス門群集を非常に高めることによりＦ／Ｂ比を低下させた。加えて、ガルシノール処置は、ベルコミクロビウム門群集の数を上昇させた（図１６ｂ）。群集構造のＵｎｉＦｒａｃに基づいたペアワイズ比較のＰＣＡにより、４つのマウス群の間での微生物群集の分布が開示された。ＰＣＡの主な所見は、異なる食餌が様々な腸内微生物群集の発生を促進することであった。ＨＦＤ摂食マウスは、ＮＤ群マウスと異なるクラスターを形成し、ＨＦＤ摂食マウスはまた、ガルシノール処置マウスとも異なった（図１７ａ、ｂ、およびｃ）。しかしながら、高用量のガルシノール（０．５％）で処置されたマウスの微生物群集は、ＮＤマウスのそれと近接したクラスターを形成し、これは、ガルシノールが腸内微生物群集組成に顕著な効果を生じ、また、ＨＦＤ誘導性腸内毒素症を逆転させたことを示している。
【００４６】
ガルシノール投与の腸内微生物群集組成への効果
腸内微生物叢の変化がガルシノール補給により誘導されたかどうかをさらに調べるために、本発明者らは次に、腸内微生物叢の属レベルを決定し、ヒートマップを用いて、ＨＦＤ摂食マウスにおけるガルシノールにより有意に変化した５０個のＯＴＵの存在量を表した（図１８）。結果は、ＨＦＤ摂食マウスが、ブラウティア属群集を増加させ、その群集は、高用量ガルシノール処置群と低用量ガルシノール処置群の両方において劇的に減少した。本研究により、ブラウティア  ｓｐｐ．およびエンテロバクター  ｓｐｐ．が、マウスモデルにおけるＨＦＤ原因の肥満と関連していることが指摘された（Becker, N., Kunath, J., Loh, G., and Blaut, M. Human intestinal microbiota: characterization of a simplified and stable gnotobiotic rat model. Gut Microbes. 2011, 2, 25-33; Fei, N. and Zhao, L. An opportunistic pathogen isolated from the gut of an obese human causes obesity in germfree mice. ISME.J 2013, 7, 880-884）。興味深いことに、パラバクテロイデス属、バクテロイデス属、およびアッカーマンシア属もまた、ガルシノール摂食マウスにおいて数が劇的に上昇した。パラバクテロイデス属およびバクテロイデス属は、バクテロイデス門に属し、アッカーマンシア属はベルコミクロビウム門に属する：これは、Ｆ／Ｂ比が、ガルシノール処置による誘導後にそれが動いたように、なぜ動いたのかということを説明している。ヒートマップにおいて、本発明者らは、アナエロブランカ・ザバルチンニ、ブラウティア・コッコイデス、およびブチリビブリオ・プロテオクラスティカスの群集が、ＨＦＤ摂食後数が上昇したが、ガルシノール投与は、それらの細菌だけでなく、オシロスピラ・エアエ、ムシスピリルム・シェドレリー、アナエロツルンカス・コリホミニス、およびラクノスピラ・ペクチノスチザもまた減少させた。加えて、ガルシノールは、アッカーマンシア・ムシニフィラ、バクテロイデス・ステルコリロソリス、およびバクテロイデス・キシラニソルベンスの数を増加させ、それらは、ＮＤ群およびＨＦＤ群において減少した。
【００４７】
アナエロブランカ・ザバルチンニ、ブラウティア・コッコイデス、およびブチリビブリオ・プロテオクラスティカスは、フィルミクテス門に属する；アナエロブランカ・ザバルチンニはＩＢＤ患者と正に相関し、ブラウティア・コッコイデスはＨＦＤ誘導マウスモデルにおいて増加した。ブチリビブリオ・プロテオクラスティカスは、不飽和脂肪酸の毒性効果に極度の感受性があり、肥満と関連づけられている。他方、バクテロイデス・ステルコリロソリスおよびバクテロイデス・キシラニソルベンスはバクテロイデス門に属し、アッカーマンシア・ムシニフィラはベルコミクロビウム門に属する。Ａｎｄｏｈら（Andoh, A., Nishida, A., Takahashi, K., Inatomi, O. et al., Comparison of the gut microbial community between obese and lean peoples using 16S gene sequencing in a Japanese population. J Clin.Biochem.Nutr 2016, 59, 65-70）は、肥満および痩せ型の日本人集団の腸内微生物叢プロファイルの１６Ｓ  ｒＲＮＡ配列分析を実施し、彼らは、バクテロイデス・ステルコリロソリスが痩せ型の日本人に存在することを見出した。Ｌｉｕら（Liu, R., Hong, J., Xu, X., Feng, Q. et al., Gut microbiome and serum metabolome alterations in obesity and after weight-loss intervention. Nat.Med 2017, 23, 859-868）は、痩せ型と肥満の若い中国人個体においてメタゲノムワイドの関連研究および血清メタボロミクスプロファイリングを実施した。彼らは、腸内微生物叢変化を循環アミノ酸および肥満に結びつけ、バクテロイデス・キシラニソルベンスが痩せ型対照において有意に豊富であることを示した。
【００４８】
いくつかの研究は、ムチン分解細菌、アッカーマンシア・ムシニフィラの効果を強調しており、その細菌は、健康な対象の粘膜において、糖尿病患者または動物の粘膜においてより豊富である（Liou, A. P., Paziuk, M., Luevano, J. M., Jr., Machineni, S. et al., Conserved shifts in the gut microbiota due to gastric bypass reduce host weight and adiposity. Sci Transl.Med 2013, 5, 178ra41）。多くの研究は、アッカーマンシア・ムシニフィラの食事性効果、およびどのようにしてそれがまた肥満を阻害するのかを実証している。ＨＦＤのブドウポリフェノールでの食事性補給は、Ｆ／Ｂ比の低下およびアッカーマンシア・ムシニフィラのブルームを含む腸内微生物群集構造の劇的な変化を生じた（Roopchand, D. E., Carmody, R. N., Kuhn, P., Moskal, K. et al., Dietary Polyphenols Promote Growth of the Gut Bacterium Akkermansia muciniphila and Attenuate High-Fat Diet-Induced Metabolic Syndrome. Diabetes 2015, 64, 2847-2858）。これらの全ての研究は、アッカーマンシア・ムシニフィラが抗肥満効果を有するプロバイオティクスとしての潜在的役割をもつという示唆を支持し、したがって、本発明者らは、ガルシノールがプレバイオティクス的役割を示すことを提唱する。
【００４９】
ガルシノール処置は、アッカーマンシア  ｓｐｐ．の数を増加させ、エンドカンナビノイド発現を誘導することによりＡＭＰＫシグナル伝達経路に影響を与えた
本発明者らはさらに、ガルシノールが抗肥満効果を発揮する分子機構を調べた。ＨＦＤ摂食Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるＡＭＰＫ、ｐ−ＡＭＰＫ、ＰＰＡＲγ、前脂肪細胞因子１（Ｐｒｅｆ−１）、およびＳＲＥＢＰ−１のタンパク質レベルは図１９に示されている。ＨＦＤ摂食は、白色脂肪組織において、ＮＤ群のＡＭＰＫと比較して、ＡＭＰＫの減少を生じたが、それは、低用量のガルシノール（０．１％）の投与により増加した。興味深いことに、高用量のガルシノール（０．５％）は、ＡＭＰＫタンパク質レベルもｐ−ＡＭＰＫタンパク質レベルも上昇させなかった。本発明者らは、これは、アッカーマンシア  ｓｐｐ．と関連している可能性があると推定した。ＨＦＤ誘導性肥満マウスへの４週間のＡ．ムシニフィラの投与は、２−ＡＧ、２−ＰＧ、および２−ＯＧを含むエンドカンナビノイド含有量を向上させた（Everard, A., Belzer, C., Geurts, L., Ouwerkerk, J. P. et al., Cross-talk between Akkermansia muciniphila and intestinal epithelium controls diet-induced obesity. Proc.Natl.Acad.Sci U.S A 2013, 110, 9066-9071）。腸組織内において、２−ＡＧの増加は、杯細胞およびＴｒｅｇ集団を増加させることにより、代謝性内毒血症および全身性炎症を低下させる。しかしながら、性腺周囲脂肪組織において、２−ＡＧの増加はまた、（脂肪細胞ＰＰＡＲγレベルの上方制御を介して）前脂肪細胞分化を刺激し、（リポタンパク質リパーゼの刺激ならびにＦＡＳレベルおよびグルコース取り込みの上方制御を介して）新規の脂肪酸合成を増強し、（ＡＭＰＫの阻害を介して）脂肪酸酸化を減少させ、（脂肪分解の阻害を介して）トリアシルグリセロール蓄積を増強することにより、脂肪組織の貯蔵能力を増強した。２−ＡＧは、それの化学構造内にアラキドン酸鎖を含有するリン脂質由来脂質である。２−ＡＧはまた、トリアシルグリセロールおよびリン脂質代謝における中間体であり、それゆえに、ＨＦＤで処置されたマウスは、２−ＡＧ産生のための基質を容易に供給することができる。Ｐｒｅｆ−１は、前脂肪細胞において高度に発現し、かつ分化中に消失する、脂肪細胞分化の阻害剤として同定されている。ガルシノール処置は、精巣上体脂肪組織においてＰｒｅｆ−１のタンパク質レベルの増加を引き起こし、そのことは、ガルシノールが、ＨＦＤ摂食マウスにおいて前脂肪細胞状態の維持に機能し得ることを示唆している。
【００５０】
結論
結果により、ガルシノール処置が、ＨＦＤを受けたマウスにおいて腸内微生物叢の組成の予想外の変化をもたらし、その変化が根底にある分子機構に影響し得ることが明らかにされた。さらに、これらの所見は、アッカーマンシア集団を増加させることを目指した腸内微生物群集の変化が、ＨＦＤにより誘導された肥満を防止することができるという概念を強化する。
【００５１】
（例３）
ガルシノール、ならびにガルシノール、プテロスチルベン、およびアントシアニンを含有する組成物の体重減少についての比較評価
本発明は、哺乳類における、ガルシノール、プテロスチルベン、およびアントシアニンを含む組成物（ガルシノールブレンド（ＧＢ））と比較したガルシノールの抗肥満効果を研究した。研究は、５週齢のＣ５７ＢＬ／６雄マウスにおいてインビボで行われた。合計４２匹のマウスが、それぞれ７匹のマウスの６群でこの研究に含まれた。群は、表８においてのように分けられた。
【００５２】
高脂肪食（ＨＦＤ）群は、肥満の誘導のために４５％高脂肪食を１６週間、与えられ、同時に、前述の表に示されているように試験物質を投与された。正常群は正常食を１６週間、与えられた。
【表８】
2020523373.tif 000012
体重は毎週、モニターされ、各群（ｎ＝７）の平均体重は、平均±ＳＥとして表された。６つの群の間での差の有意性は、一元配置ＡＮＯＶＡおよびＤｕｎｃａｎの多範囲検定により分析された。ｐ＜０．０５、ａ、ｂ、およびｃは、各群間で有意に異なっている。
【００５３】
結果は、ＨＦＤ＋０．５％ガルシノールを与えられたマウス群が、ＨＦＤ摂食群およびＨＦＤ＋ＧＢ群と比較して、最も有意に減少した体重を示し、体重増加を防止したことを示した（図１９ａおよび１９ｂ）。ＨＦＤ＋０．５％ガルシノールを投与されたマウスは、他の群と比較して最も少ない体重増加を示し（表９）、そのことは、予想外の所見であり、当業者によって予測することができない。
【００５４】
性腺周囲、後腹膜、および腸間膜の脂肪組織の質量を低下させることへのガルシノールおよびガルシノールブレンドの効果もまた評価した。その結果は、０．５％ガルシノールが、ガルシノールブレンドと比較して、性腺周囲、後腹膜、および腸間膜の脂肪組織の質量を有意に低下させることを示した（図２０ａ、ｂ、ｃ）。
【表９】
2020523373.tif 000013
各群（ｎ＝７）の平均体重は、平均±ＳＥとして表されている。６つの群の間での差の有意性は、一元配置ＡＮＯＶＡおよびＤｕｎｃａｎの多範囲検定により分析された。同じ行において同じ上付き文字を共有しない値は、群の間で有意に異なっている。ｐ＜０．０５、ａ、ｂ、およびｃは、各群間で有意に異なっている。
【００５５】
結論
ＨＦＤ＋０，５％ガルシノールを与えられたマウスは、ガルシノールブレンドと比較して体重の有意な低下を示した。これは、予想外の所見であり、当業者によって予測することができない。
【００５６】
上記の例から、ガルシノールが、脂肪生成の阻害をもたらし、かつプテロスチルベンおよびアントシアニンを含有するガルシノールブレンドと比較して、体重減少を用量依存性様式で促進することは明らかである。ガルシノールはまた、腸内微生物叢を改変し、有益な微生物  −  アッカーマンシア・ムシニフィラの生菌コロニーを増加させ、それにより、全体的な健康および快適性を維持かつ向上させる。本発明は、ガルシノールが効果的な抗肥満分子であり、肥満および関連障害の管理のために単独型として、または他の体重減少成分と組み合わせて、効果的に投与され得ることを確認している。
本発明は、好ましい実施形態に関して記載されているが、本発明がそれらに限定されないことは、当業者により明らかに理解されているはずである。むしろ、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲に関連してのみ解釈されるべきである。
【図１ａ】
2020523373.tif 000014
【図１ｂ】
2020523373.tif 000015
【図２】
2020523373.tif 000016
【図３】
2020523373.tif 000017
【図４ａ】
2020523373.tif 000018
【図４ｂ】
2020523373.tif 000019
【図５】
2020523373.tif 000020
【図６】
2020523373.tif 000021
【図７】
2020523373.tif 000022
【図８ａ】
2020523373.tif 000023
【図８ｂ】
2020523373.tif 000024
【図９】
2020523373.tif 000025
【図１０ａ】
2020523373.tif 000026
【図１０ｂ】
2020523373.tif 000027
【図１０ｃ】
2020523373.tif 000028
【図１１】
2020523373.tif 000029
【図１２】
2020523373.tif 000030
【図１３】
2020523373.tif 000031
【図１４ａ】
2020523373.tif 000032
【図１４ｂ】
2020523373.tif 000033
【図１５ａ】
2020523373.tif 000034
【図１５ｂ】
2020523373.tif 000035
【図１６ａ】
2020523373.tif 000036
【図１６ｂ】
2020523373.tif 000037
【図１７ａ−１７ｂ】
2020523373.tif 000038
【図１７ｃ】
2020523373.tif 000039
【図１８ａ】
2020523373.tif 000040
【図１８ｂ】
2020523373.tif 000041
【図１９ａ】
2020523373.tif 000042
【図１９ｂ】
2020523373.tif 000043
【図２０ａ】
2020523373.tif 000044
【図２０ｂ】
2020523373.tif 000045
【図２０ｃ】
2020523373.tif 000046
【配列表】
2020523373000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和2年4月7日(2020.4.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳類における肥満の治療管理のための組成物であって、
前記組成物が、有効濃度のガルシノールを含有し、
前記組成物が、前記哺乳類において、ａ）脂肪生成の阻害、ｂ）体重および内臓脂肪の減少をもたらす、組成物。
【請求項２】
脂肪生成の阻害が、ＰＰＡＲγ、ｃＥＢＰα、ＦＡＳ、ＡＰ２、レジスチン、およびレプチンからなる群から選択される遺伝子の下方制御によりもたらされる、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
脂肪生成の阻害が、ｐ−ＡＭＰＫ、ＡＭＰＫ、およびＰＲＥＦ−１からなる群から選択される遺伝子の上方制御によりもたらされる、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
内臓脂肪が腸間膜脂肪、腹膜脂肪、および性腺周囲脂肪からなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
哺乳類脂肪細胞系においてエネルギーバランスを達成するための組成物であって、
前記組成物が、哺乳類前脂肪細胞および／または脂肪細胞にターゲットされるガルシノールの有効量を含み、
前記組成物が、（ａ）脂肪生成の阻害の増大の効果、（ｂ）褐色脂肪細胞または褐色様（ベージュまたはブライト）脂肪細胞を特異的にリクルートし、白色脂肪細胞貯蔵部位に褐色様表現型（ベージュまたはブライト脂肪細胞）を誘導するように個々に、または組み合わせて機能する分泌性因子の発現の増加の効果、並びに（ｃ）ミトコンドリア脱共役タンパク質１（ＵＣＰ−１）の発現の増加を誘導し、分化した褐色脂肪細胞およびベージュまたはブライト脂肪細胞におけるエネルギー消費を増大させる効果を達成して、前記哺乳類において脂肪利用およびエネルギーバランスの効果をもたらす、組成物。
【請求項６】
分泌性因子が、ＰＲＤＭ１６、ＰＧＣ−１α、およびＢＭＰ７を含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
哺乳類において腸内微生物叢を改変するための組成物であって、
前記組成物が、有効量のガルシノールを含有し、
前記組成物が、腸内微生物叢の変化をもたらす、組成物。
【請求項８】
腸内微生物叢が、デファリバクター門（Ｄｅｆｅｒｒｉｂａｃｔｅｒｅｓ）、プロテオバクテリア門（Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ）、バクテロイデス門（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ）、ベルコミクロビウム門（Ｖｅｒｒｕｃｏｍｉｃｒｏｂｉａ）、およびフィルミクテス門（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ）から選択される、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
腸内微生物叢が、ラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、ブチリビブリオ属（Ｂｕｔｙｒｉｖｉｂｒｉｏ）、クロストリジウム属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、アナエロブランカ属（Ａｎａｅｒｏｂｒａｎｃａ）、ディスゴノモナス属（Ｄｙｓｇｏｎｏｍｏｎａｓ）、ジョンソネラ属（Ｊｏｈｎｓｏｎｅｌｌａ）、ルミノコッカス属（Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ）、バクテロイデス属（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）、オシロスピラ属（Ｏｓｃｉｌｌｏｓｐｉｒａ）、パラバクテロイデス属（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｒｏｉｄｅｓ）、アッカーマンシア属（Ａｋｋｅｒｍａｎｉｓａ）、およびブラウティア属（Ｂｌａｕｔｉａ）から選択される、請求項７に記載の組成物。
【請求項１０】
腸内微生物叢が、パラバクテロイデス・ゴルドステイニイ（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｇｏｌｄｓｔｅｉｎｉｉ）、バクテロイデス・カカエ（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｃａｃｃａｅ）、ジョンソネラ・イグナバ（Ｊｏｈｎｓｏｎｅｌｌａ  ｉｇｎａｖａ）、ブラウティア・ウェクスレラエ（Ｂｌａｕｔｉａ  ｗｅｘｌｅｒａｅ）、ディスゴノモナス・ウィンペンニ（Ｄｙｓｇｏｎｏｍｏｎａｓ  ｗｉｍｐｅｎｎｙｉ）、ブラウティア・ハンセンニ（Ｂｌａｕｔｉａ  ｈａｎｓｅｎｎｉ）、アナエロブランカ・ザバルチンニ（Ａｎａｅｒｏｂｒａｎｃａ  ｚａｖａｒｚｉｎｎｉ）、オシロスピラ・エアエ（Ｏｓｃｉｌｌｏｓｐｉｒａ  ｅａｅ）、ムシスピリルム・シェドレリー（Ｍｕｃｉｓｐｉｒｉｌｌｕｓ  ｓｃｈａｅｄｌｅｒｉ）、ブラウティア・コッコイデス（Ｂｌａｕｔｉａ  ｃｏｃｃｏｉｄｅｓ）、アナエロツルンカス・コリホミニス（Ａｎａｅｒｏｔｒｕｎｃｕｓ  ｃｏｌｉｈｏｍｉｎｉｓ）、ブチリビブリオ・プロテオクラスティカス（Ｂｕｔｙｒｉｖｉｂｒｏ  ｐｒｏｔｅｏｃｌａｓｔｉｃｕｓ）、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）、ラクノスピラ・ペクチノスチザ（Ｌａｃｈｎｏｓｐｏｒａ  ｐｅｃｔｉｎｏｓｃｈｉｚａ）、ペドバクター・クワンジャンゲンシス（Ｐｅｄｏｂａｃｔｅｒ  ｋｗａｎｇｙａｎｇｅｎｓｉｓ）、アルカリフィルス・クロトンアトキシダンス（Ａｌｋａｌｉｐｈｉｌｕｓ  ｃｒｏｔｏｎａｔｏｘｉｄａｎｓ）、ラクトバチルス・サリバリウス（ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）、アナエロビブリオ・リポリティカス（Ａｎａｅｒｉｖｉｂｒｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃｕｓ）、ロドサーマス・クラルス（Ｒｈｏｄｏｔｈｅｒｍｕｓ  ｃｌａｒｕｓ）、バクテロイデス・ステルコリロソリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｓｔｅｒｃｏｒｉｒｏｓｏｒｉｓ）、ルミノコッカス・フラベファシエンス（Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｏｃｃｕｓ  ｆｌａｖｅｆａｃｉｅｎｓ）、バクテロイデス・キシラニソルベンス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｘｙｌａｎｉｓｏｌｖｅｎｓ）、ルミノコッカス・グナバス（Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｇｎａｖｕｓ）、クロストリジウム・ターマイティディス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｒｍｉｔｉｄｉｓ）、クロストリジウム・アルカリセルロシー（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ａｌｋａｌｉｃｅｌｌｕｌｏｓｉ）、エムチシシア・オリゴラフィカ（Ｅｍｔｉｃｉｃｉａ  ｏｌｉｇｏｒａｐｈｉｃａ）、シュードブチリビブリオ・キシラニボランス（Ｐｓｅｕｄｏｂｕｔｙｒｉｖｉｂｒｏ  ｘｙｌａｎｉｖｏｒａｎｓ）、アクチノマイセス・ナツラエ（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ  ｎａｔｕｒａｅ）、ペプトニフィラス・コキシー（Ｐｅｐｔｏｎｉｐｈｉｌｕｓ  ｃｏｘｉｉ）、およびドリコスペルマム・クルバム（Ｄｏｌｉｃｈｏｓｐｅｒｍｕｍ  ｃｕｒｖｕｍ）からなる群から選択される、請求項７に記載の組成物。
【請求項１１】
腸内微生物叢の改変が、肥満、心血管系合併症、炎症性腸疾患、クローン病、セリアック病、メタボリックシンドローム、肝臓疾患、および神経障害からなる群から選択される疾患の治療管理において有効である、請求項７に記載の組成物。
【請求項１２】
哺乳類の腸内においてアッカーマンシア・ムシニフィラの生菌数を増加させるための組成物であって、
前記組成物が、有効量のガルシノールを含有し、
前記組成物が、前記細菌のコロニーの増加をもたらす、組成物。
【請求項１３】
アッカーマンシア・ムシニフィラのコロニー数の増加が、エンドカンナビノイド放出を引き起こすことによりＡＭＰＫシグナル伝達経路を通して体重を減少させる、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
哺乳類における高脂血症の治療管理のための組成物であって、
前記組成物が、有効濃度のガルシノールを含有し、
前記組成物が、前記哺乳類の血液において、（ｉ）血中総コレステロールレベルの量を低下させること；（ｉｉ）低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）および超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）の濃度を低下させること；（ｉｉｉ）高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）の濃度を増加させること；ならびに（ｉｖ）血清トリグリセリドの濃度を低下させることの効果をもたらす、組成物。
【請求項１５】
高脂血症の医学的原因が肥満である、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
プレバイオティクス剤としての使用のためのガルシノール含有組成物。
【請求項１７】
組成物が、薬学的／栄養補助的に許容される賦形剤、補助剤、希釈剤、または担体と共に製剤化され、錠剤、カプセル、シロップ、グミ、粉末、懸濁液、乳濁液、咀嚼錠、キャンディ、および食料品の形をとって経口投与される、請求項１６に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５６】
上記の例から、ガルシノールが、脂肪生成の阻害をもたらし、かつプテロスチルベンおよびアントシアニンを含有するガルシノールブレンドと比較して、体重減少を用量依存性様式で促進することは明らかである。ガルシノールはまた、腸内微生物叢を改変し、有益な微生物  −  アッカーマンシア・ムシニフィラの生菌コロニーを増加させ、それにより、全体的な健康および快適性を維持かつ向上させる。本発明は、ガルシノールが効果的な抗肥満分子であり、肥満および関連障害の管理のために単独型として、または他の体重減少成分と組み合わせて、効果的に投与され得ることを確認している。
本発明は、好ましい実施形態に関して記載されているが、本発明がそれらに限定されないことは、当業者により明らかに理解されているはずである。むしろ、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲に関連してのみ解釈されるべきである。
本発明のまた別の態様は、以下のとおりであってもよい。
〔１〕哺乳類における肥満の治療管理のための方法であって、有効濃度のガルシノール含有組成物を前記哺乳類に投与して、前記哺乳類において、ａ）脂肪生成の阻害、ｂ）体重および内臓脂肪の減少をもたらすステップを含む、方法。
〔２〕脂肪生成の阻害が、ＰＰＡＲγ、ｃＥＢＰα、ＦＡＳ、ＡＰ２、レジスチン、およびレプチンからなる群から選択される遺伝子の下方制御によりもたらされる、前記〔１〕に記載の方法。
〔３〕脂肪生成の阻害が、ｐ−ＡＭＰＫ、ＡＭＰＫ、およびＰＲＥＦ−１からなる群から選択される遺伝子の上方制御によりもたらされる、前記〔１〕に記載の方法。
〔４〕内臓脂肪が腸間膜脂肪、腹膜脂肪、および性腺周囲脂肪からなる群から選択される、前記〔１〕に記載の方法。
〔５〕哺乳類脂肪細胞系においてエネルギーバランスを達成する方法であって、哺乳類前脂肪細胞および／または脂肪細胞にターゲットされるガルシノール含有組成物を有効量で投与して、（ａ）脂肪生成の阻害の増大の効果、および（ｂ）褐色脂肪細胞または褐色様（ベージュまたはブライト）脂肪細胞を特異的にリクルートし、（ｃ）白色脂肪細胞貯蔵部位に褐色様表現型（ベージュまたはブライト脂肪細胞）を誘導するように個々に、または組み合わせて機能する分泌性因子の発現の増加の効果を達成して、前記哺乳類において脂肪利用およびエネルギーバランスの効果をもたらすステップを含む、方法。
〔６〕分泌性因子がミトコンドリアＵＣＰ−１、ＰＲＤＭ１６、ＰＧＣ−１α、およびＢＭＰ７を含む、前記〔５〕に記載の方法。
〔７〕哺乳類において腸内微生物叢を改変する方法であって、有効量のガルシノール含有組成物を前記哺乳類に投与して、腸内微生物叢の変化をもたらすステップを含む、方法。
〔８〕腸内微生物叢が、デファリバクター門（Ｄｅｆｅｒｒｉｂａｃｔｅｒｅｓ）、プロテオバクテリア門（Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ）、バクテロイデス門（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ）、ベルコミクロビウム門（Ｖｅｒｒｕｃｏｍｉｃｒｏｂｉａ）、およびフィルミクテス門（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ）から選択される、前記〔７〕に記載の方法。
〔９〕腸内微生物叢が、ラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、ブチリビブリオ属（Ｂｕｔｙｒｉｖｉｂｒｉｏ）、クロストリジウム属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、アナエロブランカ属（Ａｎａｅｒｏｂｒａｎｃａ）、ディスゴノモナス属（Ｄｙｓｇｏｎｏｍｏｎａｓ）、ジョンソネラ属（Ｊｏｈｎｓｏｎｅｌｌａ）、ルミノコッカス属（Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ）、バクテロイデス属（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）、オシロスピラ属（Ｏｓｃｉｌｌｏｓｐｉｒａ）、パラバクテロイデス属（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｒｏｉｄｅｓ）、アッカーマンシア属（Ａｋｋｅｒｍａｎｉｓａ）、およびブラウティア属（Ｂｌａｕｔｉａ）から選択される、前記〔７〕に記載の方法。
〔１０〕腸内微生物叢が、パラバクテロイデス・ゴルドステイニイ（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｇｏｌｄｓｔｅｉｎｉｉ）、バクテロイデス・カカエ（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｃａｃｃａｅ）、ジョンソネラ・イグナバ（Ｊｏｈｎｓｏｎｅｌｌａ  ｉｇｎａｖａ）、ブラウティア・ウェクスレラエ（Ｂｌａｕｔｉａ  ｗｅｘｌｅｒａｅ）、ディスゴノモナス・ウィンペンニ（Ｄｙｓｇｏｎｏｍｏｎａｓ  ｗｉｍｐｅｎｎｙｉ）、ブラウティア・ハンセンニ（Ｂｌａｕｔｉａ  ｈａｎｓｅｎｎｉ）、アナエロブランカ・ザバルチンニ（Ａｎａｅｒｏｂｒａｎｃａ  ｚａｖａｒｚｉｎｎｉ）、オシロスピラ・エアエ（Ｏｓｃｉｌｌｏｓｐｉｒａ  ｅａｅ）、ムシスピリルム・シェドレリー（Ｍｕｃｉｓｐｉｒｉｌｌｕｓ  ｓｃｈａｅｄｌｅｒｉ）、ブラウティア・コッコイデス（Ｂｌａｕｔｉａ  ｃｏｃｃｏｉｄｅｓ）、アナエロツルンカス・コリホミニス（Ａｎａｅｒｏｔｒｕｎｃｕｓ  ｃｏｌｉｈｏｍｉｎｉｓ）、ブチリビブリオ・プロテオクラスティカス（Ｂｕｔｙｒｉｖｉｂｒｏ  ｐｒｏｔｅｏｃｌａｓｔｉｃｕｓ）、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）、ラクノスピラ・ペクチノスチザ（Ｌａｃｈｎｏｓｐｏｒａ  ｐｅｃｔｉｎｏｓｃｈｉｚａ）、ペドバクター・クワンジャンゲンシス（Ｐｅｄｏｂａｃｔｅｒ  ｋｗａｎｇｙａｎｇｅｎｓｉｓ）、アルカリフィルス・クロトンアトキシダンス（Ａｌｋａｌｉｐｈｉｌｕｓ  ｃｒｏｔｏｎａｔｏｘｉｄａｎｓ）、ラクトバチルス・サリバリウス（ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）、アナエロビブリオ・リポリティカス（Ａｎａｅｒｉｖｉｂｒｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃｕｓ）、ロドサーマス・クラルス（Ｒｈｏｄｏｔｈｅｒｍｕｓ  ｃｌａｒｕｓ）、バクテロイデス・ステルコリロソリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｓｔｅｒｃｏｒｉｒｏｓｏｒｉｓ）、ルミノコッカス・フラベファシエンス（Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｏｃｃｕｓ  ｆｌａｖｅｆａｃｉｅｎｓ）、バクテロイデス・キシラニソルベンス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｘｙｌａｎｉｓｏｌｖｅｎｓ）、ルミノコッカス・グナバス（Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｇｎａｖｕｓ）、クロストリジウム・ターマイティディス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｒｍｉｔｉｄｉｓ）、クロストリジウム・アルカリセルロシー（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ａｌｋａｌｉｃｅｌｌｕｌｏｓｉ）、エムチシシア・オリゴラフィカ（Ｅｍｔｉｃｉｃｉａ  ｏｌｉｇｏｒａｐｈｉｃａ）、シュードブチリビブリオ・キシラニボランス（Ｐｓｅｕｄｏｂｕｔｙｒｉｖｉｂｒｏ  ｘｙｌａｎｉｖｏｒａｎｓ）、アクチノマイセス・ナツラエ（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ  ｎａｔｕｒａｅ）、ペプトニフィラス・コキシー（Ｐｅｐｔｏｎｉｐｈｉｌｕｓ  ｃｏｘｉｉ）、およびドリコスペルマム・クルバム（Ｄｏｌｉｃｈｏｓｐｅｒｍｕｍ  ｃｕｒｖｕｍ）からなる群から選択される、前記〔７〕に記載の方法。
〔１１〕腸内微生物叢の改変が、肥満、心血管系合併症、炎症性腸疾患、クローン病、セリアック病、メタボリックシンドローム、肝臓疾患、および神経障害からなる群から選択される疾患の治療管理において有効である、前記〔７〕に記載の方法。
〔１２〕哺乳類の腸内においてアッカーマンシア・ムシニフィラの生菌数を増加させるための方法であって、有効量のガルシノール含有組成物を哺乳類に投与して、前記細菌のコロニーの増加をもたらすステップを含む、方法。
〔１３〕アッカーマンシア・ムシニフィラのコロニー数の増加が、エンドカンナビノイド放出を引き起こすことによりＡＭＰＫシグナル伝達経路を通して体重を減少させる、前記〔１２〕に記載の方法。
〔１４〕哺乳類における高脂血症の治療管理の方法であって、有効濃度のガルシノール含有組成物を投与して、前記哺乳類の血液において、（ｉ）血中総コレステロールレベルの量を低下させること；（ｉｉ）低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）および超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）の濃度を低下させること；（ｉｉｉ）高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）の濃度を増加させること；ならびに（ｉｖ）血清トリグリセリドの濃度を低下させることの効果をもたらすステップを含む、方法。
〔１５〕高脂血症の医学的原因が肥満である、前記〔１４〕に記載の方法。
〔１６〕プレバイオティクス剤としての使用のためのガルシノール含有組成物。
〔１７〕組成物が、薬学的／栄養補助的に許容される賦形剤、補助剤、希釈剤、または担体と共に製剤化され、錠剤、カプセル、シロップ、グミ、粉末、懸濁液、乳濁液、咀嚼錠、キャンディ、および食料品の形をとって経口投与される、前記〔１６〕に記載の組成物。
【国際調査報告】
2020523373.tif 000047
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