(57)【要約】アシアロ糖タンパク質受容体１（ＡＳＧＲ１）遺伝子発現の阻害のための組成物および方法が、本明細書に記載される。ＡＳＧＲ１遺伝子の発現を阻害するためのＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）剤、たとえば、二本鎖ＲＮＡｉ剤、およびＲＮＡｉ剤−標的化リガンドコンジュゲートが、記載される。１つまたは複数のＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を、必要に応じて、１つまたは複数の追加の治療薬とともに含む、医薬組成物もまた、記載される。ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、様々な疾患および状態、たとえば、非ＨＤＬコレステロール（非ＨＤＬ−Ｃ）レベルの上昇、ＬＤＬコレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）レベルの上昇、総コレステロールレベルの上昇、および／またはトリグリセリド（ＴＧ）レベルの上昇と関連する心血管代謝疾患の処置の方法において、使用することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＡＳＧＲ１遺伝子の発現を阻害するためのＲＮＡｉ剤であって、
表２または表３に提供されるアンチセンス鎖配列のうちのいずれかと０または１個のヌクレオチドが異なる少なくとも１６個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖と、
前記アンチセンス鎖に対して少なくとも部分的に相補的であるヌクレオチド配列を含むセンス鎖と
を含む、ＲＮＡｉ剤。
【請求項２】
前記アンチセンス鎖が、表２または表３に提供される配列のうちのいずれかのヌクレオチド２〜１８を含む、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項３】
前記センス鎖が、前記アンチセンス鎖に対して少なくとも８５％相補的である少なくとも１６個の連続したヌクレオチドのヌクレオチド配列を含む、請求項１または２に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項４】
前記センス鎖が、表２または表４に提供されるセンス鎖配列のうちのいずれかの少なくとも１６個の連続したヌクレオチドを含む、請求項３に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項５】
前記センス鎖およびアンチセンス鎖が、それぞれ、約１６〜約３０個のヌクレオチドの長さである、請求項１から４のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項６】
前記センス鎖およびアンチセンス鎖が、それぞれ、約１７〜約２６個のヌクレオチドの長さである、請求項１から５のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項７】
前記センス鎖および／または前記アンチセンス鎖の少なくとも１つのヌクレオチドが、修飾されたヌクレオチドであるか、または修飾されたヌクレオシド間連結を含む、請求項１から６のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項８】
前記ヌクレオチドのすべてまたは実質的にすべてが、修飾されたヌクレオチドである、請求項１から６のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項９】
前記修飾されたヌクレオチドが、デオキシリボヌクレオチド、脱塩基ヌクレオチド、２’−修飾ヌクレオチド、逆位ヌクレオチド、２’，３’−セコヌクレオチド模倣体、ロックドヌクレオチド、２’−Ｆ−アラビノヌクレオチド、５’−Ｍｅ，２’−フルオロヌクレオチド、イノシン含有ヌクレオチド、またはこれらの組合せである、請求項７または８に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項１０】
前記センス鎖が、少なくとも１つのイノシン含有ヌクレオチドを含む、請求項７に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項１１】
前記アンチセンス鎖が、少なくとも１つの２’，３’−セコ−ヌクレオチドを含む、請求項７に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項１２】
前記アンチセンス鎖が、表２に提供されるアンチセンス配列のうちのいずれかのヌクレオチド配列を含む、請求項１から１１のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項１３】
前記センス鎖が、表２に提供されるセンス配列のうちのいずれかのヌクレオチド配列を含む、請求項１２に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項１４】
前記アンチセンス鎖が、表３に提供される修飾されたアンチセンス配列のうちのいずれかの修飾された配列を含む、請求項１から１１のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項１５】
前記センス鎖が、表４に提供される修飾されたセンス配列のうちのいずれかの修飾された配列を含む、請求項１４に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項１６】
標的化リガンドにコンジュゲートされている、請求項１から１５のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項１７】
前記標的化リガンドが、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む、請求項１６に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項１８】
前記標的化リガンドが、表６内の標的化リガンドから選択される、請求項１６に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項１９】
前記標的化リガンドが、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ３７）、または（ＮＡＧ３７）ｓである、請求項１６に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項２０】
前記標的化リガンドが、前記センス鎖の５’末端にコンジュゲートされている、請求項１６から１９のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項２１】
前記標的化リガンドが、前記センス鎖の３’末端にコンジュゲートされている、請求項１６から１９のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項２２】
前記センス鎖が、１つまたは２つの逆位脱塩基残基を含む、請求項１から２１のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項２３】
表５に提供される二重鎖のうちのいずれかである、請求項１から２２のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項２４】
【化１５１】
2020537653.tif 000252
【化１５２】
2020537653.tif 000253
から選択される二重鎖である、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項２５】
前記アンチセンス鎖が、以下のヌクレオチド配列（５’から３’）
【化１５３】
2020537653.tif 000254
のうちの１つと０または１個のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含む、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項２６】
前記センス鎖が、以下のヌクレオチド配列（５’から３’）
【化１５４】
2020537653.tif 000255
のうちの１つと０または１個のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含み、
Ｉは、イノシンヌクレオチドを表す、請求項２５に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項２７】
前記ヌクレオチドのすべてまたは実質的にすべてが、修飾されたヌクレオチドである、請求項２５または２６に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項２８】
前記センス鎖が、前記ヌクレオチド配列の３’末端、前記ヌクレオチド配列の５’末端、または３’末端および５’末端の両方に、逆位脱塩基残基をさらに含む、請求項２７に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項２９】
前記アンチセンス鎖が、以下のヌクレオチド配列（５’から３’）
【化１５５】
2020537653.tif 000256
【化１５６】
2020537653.tif 000257
のうちの１つと０または１個のヌクレオチドが異なる修飾されたヌクレオチド配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなり、ａ、ｃ、ｇ、およびｕが、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆが、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、ＵＵＮＡが、２’，３’−セコ−ウリジンを表し、ｓが、ホスホロチオエート連結を表し、前記センス鎖におけるヌクレオチドのすべてまたは実質的にすべてが、修飾されたヌクレオチドである、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項３０】
前記センス鎖が、以下のヌクレオチド配列（５’から３’）
【化１５７】
2020537653.tif 000258
のうちの１つと０または１個のヌクレオチドが異なる修飾されたヌクレオチド配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなり、ａ、ｃ、ｇ、ｉ、およびｕが、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、イノシン、またはウリジンを表し、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆが、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表す、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項３１】
二重鎖対の前記センス鎖およびアンチセンス鎖が、以下のヌクレオチド配列対（５’から３’）
【化１５８】
2020537653.tif 000259
のうちの１つと０または１個のヌクレオチドが異なる修飾されたヌクレオチド配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項３２】
前記センス鎖の５’末端において標的化リガンドにコンジュゲートされている、請求項２９から３１のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項３３】
前記標的化リガンドが、
（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ３７）、または（ＮＡＧ３７）ｓ
からなる群から選択される、請求項３２に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項３４】
前記標的化リガンドが、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含み、
【化１５９】
2020537653.tif 000260
【化１６０】
2020537653.tif 000261
からなる群から選択される構造を有する、三座リガンドである、請求項３３に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項３５】
請求項１から３１のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤と、薬学的に許容される賦形剤とを含む、組成物。
【請求項３６】
アンチセンス鎖およびセンス鎖を含む第２のＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤をさらに含み、前記アンチセンス鎖が、表２または表３に提供される配列のうちのいずれかのヌクレオチド２〜１８を含む、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３７】
１つまたは複数の追加の治療薬をさらに含む、請求項３５または３６に記載の組成物。
【請求項３８】
細胞においてＡＳＧＲ１遺伝子の発現を阻害するための方法であって、前記細胞に、請求項１から３４のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤を投与するステップを含む、方法。
【請求項３９】
前記細胞が、ヒト対象内にある、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
対象においてＡＳＧＲ１遺伝子の発現を阻害するための方法であって、前記対象に、請求項３５から３７のいずれかに記載の組成物を投与するステップを含む、方法。
【請求項４１】
ＡＳＧＲ１関連疾患または障害を処置する方法であって、それを必要とする対象に、有効量の請求項１から３４のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤または請求項３５から３７のいずれか一項に記載の組成物を投与するステップを含む、方法。
【請求項４２】
前記ＡＳＧＲ１関連疾患または障害が、肥満、代謝症候群、高脂血症、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、脂質代謝異常および／もしくはコレステロール代謝異常、アテローム性動脈硬化症、糖尿病、心血管疾患、冠状動脈疾患、心筋梗塞、末梢血管疾患、または脳血管疾患である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
非ＨＤＬコレステロールの低減をそれを必要とする対象において行うための方法であって、前記対象に、有効量の請求項１から３４のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤または請求項３５から３７のいずれか一項に記載の組成物を投与するステップを含む、方法。
【請求項４４】
前記非ＨＤＬコレステロールが、ＬＤＬコレステロールである、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
心筋梗塞の危険性の低減をそれを必要とする対象において行うための方法であって、前記対象に、有効量の請求項１から３４のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤または請求項３５から３７のいずれか一項に記載の組成物を投与するステップを含む、方法。
【請求項４６】
前記対象が、冠状動脈疾患と診断されている、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記対象が、非ＨＤＬコレステロールレベルの上昇を有する、請求項４５に記載の方法。
【請求項４８】
前記ＲＮＡｉ剤が、ヒト対象の体重を基準として約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約５．０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項３８から４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
ＡＳＧＲ１関連疾患または障害の処置のための、請求項１から３４のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤または請求項３５から３７のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【請求項５０】
ＡＳＧＲ１関連疾患または障害の処置のための医薬の製造のための、請求項３５から３７のいずれかに記載の組成物の使用。
【請求項５１】
非ＨＤＬコレステロールの低減をそれを必要とする対象において行うための医薬の製造のための、請求項１から３４のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤の使用。
【請求項５２】
心筋梗塞の危険性の低減をそれを必要とする対象において行うための医薬の製造のための、請求項１から３４のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本出願は、２０１８年２月２６日に出願された米国仮特許出願第６２／６３５，２７７号、２０１７年１２月２１日に出願された米国仮特許出願第６２／６０８，６０６号、および２０１７年１０月１７日に出願された米国仮特許出願第６２／５７３，２０６号に基づく優先権を主張し、これらのそれぞれの内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で提出された配列表を含み、この配列表は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。ＡＳＣＩＩコピーは、３０６５３−Ｗ０１＿ＳＥＱＬＩＳＴ．ｔｘｔという名称であり、サイズが２２６ｋｂである。
【０００３】
発明の分野
本開示は、アシアロ糖タンパク質受容体１（ＡＳＧＲ１）遺伝子の発現の阻害のためのＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）剤、たとえば、二本鎖ＲＮＡｉ剤、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含む組成物、およびそれを使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
背景
アシアロ糖タンパク質受容体１（ＡＳＧＲ１、これは、ＡＳＧＰＲ、ＡＳＧＰＲ１、ＨＬ−１、およびＣＬＥＣ４Ｈ１としても公知）は、以前は、Ａｓｈｗｅｌｌ−Ｍｏｒｅｌｌ受容体として公知であった。ＡＳＧＲ１は、脱シアル化された糖タンパク質の結合、内部移行、および循環からのクリアランスに関する主要な生理学的役割を果たす、膜貫通タンパク質である。ＡＳＧＲ１は、主として、アシアロ糖タンパク質受容体１遺伝子（ＡＳＧＲ１遺伝子）によって、肝臓において発現される。
【０００５】
非ＨＤＬコレステロールレベルならびに冠状動脈疾患および心筋梗塞の危険性に影響を及ぼすバリアントについての全ゲノム関連研究により、ＡＳＧＲ１における配列バリアントが特定された。ＡＳＧＲ１のハプロ不全をもたらすｄｅｌ１２  ＡＳＧＲ１配列バリアントは、非ＨＤＬコレステロールの低減、ならびに冠状動脈疾患および心筋梗塞の危険性の低減と関連付けられることが報告されている（Nioi,  Sigurdsson  et  al.,  N.  Engl.  J.  Med.  2016,  374,  2131-41）。ｄｅｌ  １２保持者におけるＡＳＧＲ１レベルの約５０％の低減から予測されるように、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰまたはＡＬＫＰ）レベルおよびビタミンＢ１２レベルの増加があったが、これは、これらのタンパク質がいずれもアシアロ糖タンパク質受容体の基質であるためである。ＡＳＧＲ１タンパク質を低減することは、したがって、心血管疾患の処置のための有望な標的となっている。ＡＳＧＲ１遺伝子を標的とし、ＡＳＧＲ１タンパク質レベルを低減することができる、治療薬は、冠状動脈疾患を含む心血管疾患を処置する新規な手段を表す。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Nioi,  Sigurdsson  et  al.,  N.  Engl.  J.  Med.  2016,  374,  2131-41
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
要旨
ＡＳＧＲ１遺伝子の発現を選択的かつ効率的に阻害することができる、新規なＡＳＧＲ１特異的ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）剤（本明細書において、ＲＮＡｉ剤、ＲＮＡｉトリガー、またはトリガーとも称される）、たとえば、二本鎖ＲＮＡｉ剤に対する必要性が存在する。さらに、とりわけ、非ＨＤＬコレステロール（非ＨＤＬ−Ｃ）レベルの上昇、ＬＤＬコレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）レベルの上昇、総コレステロールレベルの上昇、および／またはトリグリセリド（ＴＧ）レベルの上昇と関連する疾患の処置（予防的処置を含む）のための、新規なＡＳＧＲ１特異的ＲＮＡｉ剤の組成物に対する必要性が存在する。
【０００８】
概して、本開示は、新規なＡＳＧＲ１遺伝子特異的ＲＮＡｉ剤、ＡＳＧＲ１遺伝子特異的ＲＮＡｉ剤を含む組成物、ならびに本明細書に記載されるＡＳＧＲ１遺伝子特異的ＲＮＡｉ剤およびＡＳＧＲ１遺伝子特異的ＲＮＡｉ剤を含む組成物を使用してｉｎ  ｖｉｖｏおよび／またはｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいてＡＳＧＲ１遺伝子の発現を阻害するための方法を特徴とする。少なくとも部分的にＡＳＧＲ１遺伝子の発現によって媒介される疾患または障害の処置の方法であって、対象への、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のうちの１つまたは複数の投与を含む、方法が、本明細書にさらに記載される。
【０００９】
本明細書に記載されるＡＳＧＲ１遺伝子特異的ＲＮＡｉ剤は、ＡＳＧＲ１遺伝子の発現を選択的かつ効率的に減少させることができる。本明細書に記載されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、それによって、対象、たとえば、ヒトまたは動物対象において、非ＨＤＬコレステロールレベル、および／またはＬＤＬコレステロールレベル、および／または総コレステロールレベル、および／またはトリグリセリドレベルを低減することができる。本明細書に記載されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤はまた、アテローム性動脈硬化症および／または血管疾患と関連する他の内因性因子にも影響を及ぼし得る。たとえば、記載されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、肥満、代謝症候群、高脂血症、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、脂質代謝異常および／もしくはコレステロール代謝異常、アテローム性動脈硬化症、糖尿病、心血管疾患、冠状動脈疾患、心筋梗塞、末梢血管疾患、脳血管疾患、ならびに他の代謝関連障害および疾患を含むがこれらに限定されない、血清リポタンパク質レベル異常と関連する症状および疾患の治療的処置および／または予防のための方法において、使用することができる。一部の実施形態では、本明細書に開示される方法は、対象への、１つまたは複数のＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤の投与を含む。本明細書に記載される１つまたは複数のＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、当該技術分野において公知の任意の好適な方法、たとえば、皮下注射または静脈内投与によって、対象に投与され得る。
【００１０】
一態様では、本開示は、ＡＳＧＲ１遺伝子の発現を選択的かつ効率的に減少または阻害することができる、１つまたは複数のＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含む、組成物を特徴とする。一部の実施形態では、１つまたは複数のＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含む、本明細書に開示される組成物は、対象においてＡＳＧＲ１タンパク質のレベルを低減することができる。一部の実施形態では、１つまたは複数のＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含む、本明細書に開示される組成物は、対象においてＡＳＧＲ１  ｍＲＮＡのレベルを低減することができる。１つまたは複数のＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含む組成物は、非ＨＤＬ−Ｃレベルの上昇、および／またはＬＤＬ−Ｃレベルの上昇、および／または総コレステロールレベルの上昇、および／またはＴＧレベルの上昇と関連する症状および疾患の処置および／または予防のために、対象、たとえば、ヒトまたは動物対象に投与することができる。
【００１１】
本明細書に記載されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、センス鎖（パッセンジャー鎖とも称される）およびアンチセンス鎖（ガイド鎖とも称される）を含む。センス鎖およびアンチセンス鎖は、互いに対して、部分的に、実質的に、または完全に、相補的であり得る。本明細書に記載されるＲＮＡｉ剤のセンス鎖およびアンチセンス鎖の長さは、それぞれ、１６〜３０個のヌクレオチドの長さであり得る。一部の実施形態では、センス鎖およびアンチセンス鎖は、独立して、１７〜２６個のヌクレオチドの長さである。一部の実施形態では、センス鎖およびアンチセンス鎖は、独立して、２１〜２６個のヌクレオチドの長さである。一部の実施形態では、センス鎖およびアンチセンス鎖は、独立して、２１〜２４個のヌクレオチドの長さである。一部の実施形態では、センス鎖およびアンチセンス鎖は、いずれも、２１個のヌクレオチドの長さである。一部の実施形態では、センス鎖および／またはアンチセンス鎖は、独立して、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０個のヌクレオチドの長さである。センス鎖およびアンチセンス鎖は、同じ長さであってもよく、または異なる長さであってもよい。本明細書に記載されるＲＮＡｉ剤は、ＡＳＧＲ１を発現する細胞に送達されると、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて１つまたは複数のＡＳＧＲ１遺伝子の発現を阻害する。
【００１２】
本明細書に記載されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、ＡＳＧＲ１  ｍＲＮＡにおける同じヌクレオチド数のコアストレッチ配列（本明細書において、「コアストレッチ」または「コア配列」とも称される）に対して少なくとも８５％の同一性を有する少なくとも１６個の連続したヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ｍＲＮＡにおける配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するセンス鎖コアストレッチは、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、または２３個のヌクレオチドの長さである。一部の実施形態では、このセンス鎖コアストレッチは、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、または２３個のヌクレオチドの長さである。一部の実施形態では、このセンス鎖コアストレッチは、１７個のヌクレオチドの長さである。一部の実施形態では、このセンス鎖コアストレッチは、１９個のヌクレオチドの長さである。
【００１３】
ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、ＡＳＧＲ１  ｍＲＮＡにおける同じヌクレオチド数のコアストレッチおよび対応するセンス鎖における同じヌクレオチド数のコアストレッチに対して、少なくとも８５％の相補性を有する少なくとも１６個の連続したヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ｍＲＮＡまたは対応するセンス鎖における配列に対して少なくとも８５％の相補性を有するアンチセンス鎖コアヌクレオチドストレッチは、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、または２３個のヌクレオチドの長さである。一部の実施形態では、このアンチセンス鎖コアストレッチは、１７個のヌクレオチドの長さである。一部の実施形態では、このアンチセンス鎖コアストレッチは、１９個のヌクレオチドの長さである。
【００１４】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、表１に開示される配列のうちのいずれかの配列を有するＡＳＧＲ１遺伝子の部分を標的とするように設計されている。
【００１５】
本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤に含まれ得るＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖およびアンチセンス鎖の例は、表２、３、および４に提供される。ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤の二重鎖の例は、表５に提供される。本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖およびアンチセンス鎖からなるかまたはそれに含まれる、１９個のヌクレオチドのコアストレッチ配列の例は、表２に提供される。
【００１６】
別の態様では、本開示は、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を、ｉｎ  ｖｉｖｏで、対象、たとえば、哺乳動物における肝臓細胞へと送達するための方法を特徴とする。また、そのような方法における使用のための組成物も、本明細書に記載される。１つまたは複数のＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、当該技術分野において公知の任意のオリゴヌクレオチド送達技術を使用して、標的細胞または組織へと送達され得る。核酸送達方法としては、リポソームへのカプセル封入によるもの、イオン泳動によるもの、または他のビヒクル、たとえば、ヒドロゲル、シクロデキストリン、生体分解性ナノカプセル、および生体接着性マイクロスフェア、タンパク質性ベクター、もしくはＤｙｎａｍｉｃ  Ｐｏｌｙｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ（商標）（ＤＰＣ）への組込みによるものが挙げられるが、これらに限定されない（たとえば、ＷＯ２０００／０５３７２２、ＷＯ２００８／００２２３０９、ＷＯ２０１１／１０４１６９、およびＷＯ２０１２／０８３１８５を参照されたく、これらのそれぞれは、参照により本明細書に組み込まれる）。
【００１７】
一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ＲＮＡｉ剤を標的化基に共有結合により連結するかまたはコンジュゲートすることによって、標的細胞または組織へと送達される。一部の実施形態では、標的化基は、抗体、たとえば、モノクローナル抗体を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる。（たとえば、国際特許出願公開第ＷＯ２０１８／０３９６４７号を参照されたく、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。一部の実施形態では、標的化基は、アシアロ糖タンパク質受容体リガンド（すなわち、アシアロ糖タンパク質受容体に対する親和性を有する化合物を含むリガンド）からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含む。一部の実施形態では、アシアロ糖タンパク質受容体リガンドは、ガラクトースまたはガラクトース誘導体クラスターを含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる。一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ガラクトース誘導体Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む標的化リガンドに連結されている。一部の実施形態では、ガラクトース誘導体クラスターは、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン三量体またはＮ−アセチル−ガラクトサミン四量体を含む。一部の実施形態では、ガラクトース誘導体クラスターは、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン三量体またはＮ−アセチル−ガラクトサミン四量体である。一部の実施形態では、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む標的化リガンドにコンジュゲートされたＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、受容体に媒介されるエンドサイトーシスまたは他の手段のいずれかを通じて、肝臓細胞、および具体的には肝細胞によって選択的に内部移行される。ＲＮＡｉ剤を送達するのに有用な標的化基の例は、たとえば、Ａｒｒｏｗｈｅａｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，  Ｉｎｃ．への国際特許出願公開第ＷＯ２０１８／０４４３５０号および同第ＷＯ２０１７／１５６０１２号に開示されており、これらは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【００１８】
標的化基は、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖またはアンチセンス鎖の３’末端または５’末端に連結され得る。一部の実施形態では、標的化基は、センス鎖の３’末端または５’末端に連結される。一部の実施形態では、標的化基は、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖および／またはアンチセンス鎖におけるヌクレオチドに内部で連結される。一部の実施形態では、標的化基は、センス鎖の５’末端に連結される。一部の実施形態では、標的化基は、リンカーを介してＲＮＡｉ剤に連結される。
【００１９】
標的化基は、リンカーの有無にかかわらず、表２、３、および４に開示されているセンス鎖および／またはアンチセンス鎖のうちのいずれかの５’末端または３’末端に連結され得る。リンカーは、標的化基の有無にかかわらず、表２、３、および４に開示されているセンス鎖および／またはアンチセンス鎖のうちのいずれかの５’末端または３’末端に結合され得る。
【００２０】
一部の実施形態では、表５に開示されている二重鎖構造を有する１つまたは複数のＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含む組成物が、本明細書に記載される。
【００２１】
さらなる態様では、１つまたは複数の記載されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を、必要に応じて１つまたは複数の追加の（すなわち、第２、第３などの）治療薬と組み合わせて含む、医薬組成物が、本明細書に記載される。追加の治療薬は、別のＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤（たとえば、ＡＳＧＲ１遺伝子内の異なる配列を標的とするＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤）であってもよい。追加の治療薬はまた、小分子薬、抗体、抗体断片、ペプチド、および／またはアプタマーであってもよい。ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、１つまたは複数の追加の治療薬の有無にかかわらず、１つまたは複数の賦形剤と組み合わせて、医薬組成物を形成することができる。記載されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、必要に応じて、単一の剤形（すなわち、単回注射に含まれるカクテル）において、１つまたは複数の追加の治療薬と組み合わせることができる。一部の実施形態では、１つまたは複数の記載されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を、必要に応じて１つまたは複数の追加の（すなわち、第２、第３などの）治療薬と組み合わせて含む、医薬組成物は、薬学的に許容される担体または希釈剤において製剤化することができる。一部の実施形態では、これらの組成物は、対象、たとえば、哺乳動物に投与することができる。一部の実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。
【００２２】
一部の実施形態では、記載されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、１つまたは複数の必要に応じた追加の治療薬とは別個に投与され得る。一部の実施形態では、記載されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、それを必要とする対象に、皮下注射によって投与され、１つまたは複数の必要に応じた追加の治療薬は、経口で投与され、これらが、一緒に、非ＨＤＬ−Ｃレベルの上昇、および／またはＬＤＬ−Ｃレベルの上昇、および／または総コレステロールレベルの上昇、および／またはＴＧレベルの上昇と関連する疾患および状態の処置レジメンを提供する。一部の実施形態では、記載されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、それを必要とする対象に、皮下注射によって投与され、１つまたは複数の必要に応じた追加の治療薬は、別個の皮下注射によって投与される。
【００２３】
一部の実施形態では、異なるヌクレオチド配列を有する少なくとも２つのＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤の組合せまたはカクテルを含む、組成物が、本明細書に記載される。一部の実施形態では、２つまたはそれを上回る異なるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、それぞれ、別個かつ独立して、標的化基に連結されている。一部の実施形態では、２つまたはそれを上回る異なるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、それぞれ、別個かつ独立して、アシアロ糖タンパク質受容体を標的とする１つまたは複数の部分を含む標的化リガンドを含むかまたはそれからなる標的化基に、連結されている。一部の実施形態では、２つまたはそれを上回る異なるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、それぞれ、１つまたは複数のガラクトース誘導体を含む標的化リガンドを含むかまたはそれからなる標的化基に、連結されている。一部の実施形態では、２つまたはそれを上回る異なるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、それぞれ、１つまたは複数のＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む標的化リガンドを含むかまたはそれからなる標的化基に、連結されている。一部の実施形態では、２つまたはそれを上回るＲＮＡｉ剤が、１つの組成物に含まれている場合、ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、独立して、同じ標的化基に連結されている。一部の実施形態では、２つまたはそれを上回るＲＮＡｉ剤が、１つの組成物に含まれる場合、ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、独立して、異なる標的化基、たとえば、異なる化学構造を有する標的化基に連結されている。
【００２４】
一部の実施形態では、標的化基は、追加のリンカーを使用することなく、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤に連結されている。一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤への連結を促進するために、容易に存在するリンカーを有する標的化基が、設計される。一部の実施形態では、２つまたはそれを上回るＲＮＡｉ剤が、１つの組成物に含まれる場合、２つまたはそれを上回るＲＮＡｉ剤は、同じリンカーを使用してそれぞれの標的化基に連結されていてもよい。一部の実施形態では、２つまたはそれを上回るＲＮＡｉ剤が、１つの組成物に含まれる場合、２つまたはそれを上回るＲＮＡｉ剤は、異なるリンカーを使用してそれぞれの標的化基に連結されている。
【００２５】
別の態様では、本開示は、非ＨＤＬ−Ｃレベルの上昇、および／またはＬＤＬ−Ｃレベルの上昇、および／または総コレステロールレベルの上昇、および／またはＴＧレベルの上昇によって引き起こされるかまたはそれに帰属する疾患または症状の処置（予防または予防的処置を含む）の方法であって、表２または３内の配列のうちのいずれかの配列を含むアンチセンス鎖を有するＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を投与するステップを含む、方法を特徴とする。
【００２６】
一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１遺伝子の発現を阻害する方法であって、細胞に、表２または３内の配列のうちのいずれかの配列を含むアンチセンス鎖を含むＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を投与するステップを含む、方法が、本明細書に開示される。
【００２７】
一部の実施形態では、非ＨＤＬ−Ｃレベルの上昇、および／またはＬＤＬ−Ｃレベルの上昇、および／または総コレステロールレベルの上昇、および／またはＴＧレベルの上昇によって引き起こされる疾患または症状の処置または予防の方法であって、表２または４内の配列のうちのいずれかの配列を含むセンス鎖を有するＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を投与するステップを含む、方法が、本明細書に開示される。
【００２８】
一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１遺伝子の発現を阻害する方法であって、表２または４内の配列のうちのいずれかの配列を含むセンス鎖を有するＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を投与するステップを含む、方法が、本明細書に開示される。
【００２９】
一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１遺伝子の発現を阻害する方法であって、対象に、表４内の配列のうちのいずれかの配列を含むセンス鎖と、表３内の配列のうちのいずれかの配列を含むアンチセンス鎖とを含む、治療有効量のＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を投与するステップを含む、方法が、本明細書に開示される。
【００３０】
一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１遺伝子の発現を阻害する方法であって、表４内の配列のうちのいずれかの核酸塩基配列からなるセンス鎖と、表３内の配列のうちのいずれかの核酸塩基配列からなるアンチセンス鎖とを含む、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を投与するステップを含む、方法が、本明細書に開示される。他の実施形態では、ＡＳＧＲ１遺伝子の発現を阻害する方法であって、表４内の修飾された配列のうちのいずれかの修飾された配列からなるセンス鎖と、表３内の修飾された配列のうちのいずれかの修飾された配列からなるアンチセンス鎖とを含む、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を投与するステップを含む、方法が、本明細書に開示される。
【００３１】
一部の実施形態では、細胞においてＡＳＧＲ１遺伝子の発現を阻害するための方法であって、表５内の二重鎖のうちのいずれかの二重鎖構造を有する１つまたは複数のＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を投与するステップを含む、方法が、本明細書に開示される。
【００３２】
さらなる態様では、本開示は、非ＨＤＬ−Ｃレベルの上昇、および／またはＬＤＬ−Ｃレベルの上昇、および／または総コレステロールレベルの上昇、および／またはＴＧレベルの上昇によって引き起こされる疾患または症状の処置（予防的または防止的処置を含む）の方法であって、表１に列挙されている配列のうちのいずれか１つを有するＡＳＧＲ１  ｍＲＮＡの部分に対して少なくとも部分的に相補的であるアンチセンス鎖を有するＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を投与するステップを含む、方法を特徴とする。
【００３３】
一部の実施形態では、細胞においてＡＳＧＲ１遺伝子の発現を阻害するための方法であって、表１に列挙されている配列のうちのいずれか１つを有するＡＳＧＲ１  ｍＲＮＡの部分に対して少なくとも部分的に相補的であるアンチセンス鎖を有するＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を投与するステップを含む、方法が、本明細書に開示される。
【００３４】
一部の実施形態では、非ＨＤＬ−Ｃレベルの上昇、および／またはＬＤＬ−Ｃレベルの上昇、および／または総コレステロールレベルの上昇、および／またはＴＧレベルの上昇によって引き起こされる疾患または症状の処置または予防の方法であって、表２または３内の配列のうちのいずれかの配列を含むアンチセンス鎖と、アンチセンス鎖に対して少なくとも部分的に相補的である、表２または４内の配列のうちのいずれかを含むセンス鎖とを有する、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を投与するステップを含む、方法が、本明細書に開示される。
【００３５】
一部の実施形態では、非ＨＤＬ−Ｃレベルの上昇、および／またはＬＤＬ−Ｃレベルの上昇、および／または総コレステロールレベルの上昇、および／またはＴＧレベルの上昇によって引き起こされる疾患または症状の処置または予防の方法であって、表２または４内の配列のうちのいずれかを含むセンス鎖と、センス鎖に対して少なくとも部分的に相補的である、表２または３内の配列のうちのいずれかの配列を含むアンチセンス鎖とを有する、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を投与するステップを含む、方法が、本明細書に開示される。
【００３６】
一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１遺伝子の発現を阻害する方法であって、表２または３内の配列のうちのいずれかの配列を含むアンチセンス鎖と、アンチセンス鎖に対して少なくとも部分的に相補的である、表２または４内の配列のうちのいずれかを含むセンス鎖とを含む、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を投与するステップを含む、方法が、本明細書に開示される。
【００３７】
一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１遺伝子の発現を阻害する方法であって、表２または４内の配列のうちのいずれかを含むセンス鎖と、センス鎖に対して少なくとも部分的に相補的である、表２または３内の配列のうちのいずれかの配列を含むアンチセンス鎖とを含む、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を投与するステップを含む、方法が、本明細書に開示される。
【００３８】
一部の実施形態では、細胞においてＡＳＧＲ１遺伝子の発現を阻害するための組成物であって、本明細書に記載されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のうちのいずれかを含む、組成物が、本明細書に開示される。
【００３９】
一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を、ｉｎ  ｖｉｖｏで肝臓細胞へと送達するための組成物であって、標的化基にコンジュゲートまたは連結されたＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含む、組成物が、本明細書に開示される。一部の実施形態では、標的化基は、アシアロ糖タンパク質受容体リガンドである。一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を、ｉｎ  ｖｉｖｏで肝臓細胞へと送達するための組成物であって、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む標的化リガンドに連結されたＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含む組成物が、記載される。
【００４０】
一部の実施形態では、記載されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のうちの１つまたは複数は、薬学的に許容される担体または希釈剤において、対象、たとえば、哺乳動物に投与される。一部の実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。
【００４１】
ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤の使用は、非ＨＤＬ−Ｃレベルの上昇、および／またはＬＤＬ−Ｃレベルの上昇、および／または総コレステロールレベルの上昇、および／またはＴＧレベルの上昇、および／またはＡＳＧＲ１発現の増強もしくは上昇と関連する疾患／障害の治療的および／または予防的処置のための方法を提供する。記載されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ＲＮＡ干渉を媒介し、ＡＳＧＲ１タンパク質の産生に必要な１つまたは複数の遺伝子の発現を阻害することができる。ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤はまた、肥満、代謝症候群、高脂血症、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、脂質代謝異常および／またはコレステロール代謝異常、アテローム性動脈硬化症、糖尿病、心血管疾患、冠状動脈疾患、心筋梗塞、末梢血管疾患、脳血管疾患、ならびに他の代謝関連障害および疾患を含むがこれらに限定されない、血清リポタンパク質レベル異常と関連する様々な疾患または障害を処置または予防するために使用することができる。本明細書に記載されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤はまた、アテローム性動脈硬化症および／または血管疾患と関連する他の内因性因子にも影響を及ぼし得る。さらに、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のｉｎ  ｖｉｖｏでの肝臓細胞への送達のための組成物が、記載される。
【００４２】
１つまたは複数のＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物は、局所処置が所望されるかまたは全身処置が所望されるかに応じて、いくつかの手段で投与することができる。投与は、静脈内、動脈内、皮下、腹腔内、真皮下（たとえば、埋込みデバイスを介して）、および実質内の投与であり得るが、これらに限定されない。一部の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、皮下注射によって投与される。
【００４３】
記載されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤、および／またはＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含む組成物は、非ＨＤＬ−Ｃレベルの上昇、および／またはＬＤＬ−Ｃレベルの上昇、および／または総コレステロールレベルの上昇、および／またはＴＧレベルの上昇によって引き起こされる疾患または状態の治療的処置のための方法において使用することができる。そのような方法は、本明細書に記載されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤の、対象、たとえば、ヒトまたは動物対象への投与を含む。
【００４４】
一部の実施形態では、本明細書に記載されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、それぞれ、表６において定義されている、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ２６）、（ＮＡＧ２６）ｓ、（ＮＡＧ２７）、（ＮＡＧ２７）ｓ、（ＮＡＧ２８）、（ＮＡＧ２８）ｓ、（ＮＡＧ２９）、（ＮＡＧ２９）ｓ、（ＮＡＧ３０）、（ＮＡＧ３０）ｓ、（ＮＡＧ３１）、（ＮＡＧ３１）ｓ、（ＮＡＧ３２）、（ＮＡＧ３２）ｓ、（ＮＡＧ３３）、（ＮＡＧ３３）ｓ、（ＮＡＧ３４）、（ＮＡＧ３４）ｓ、（ＮＡＧ３５）、（ＮＡＧ３５）ｓ、（ＮＡＧ３６）、（ＮＡＧ３６）ｓ、（ＮＡＧ３７）、（ＮＡＧ３７）ｓ、（ＮＡＧ３８）、（ＮＡＧ３８）ｓ、（ＮＡＧ３９）、（ＮＡＧ３９）ｓの構造を有する１つまたは複数の標的化基を含み得る。
【００４５】
一部の実施形態では、本明細書に記載されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、センス鎖の５’末端に、それぞれ、表６において定義されている、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ２６）、（ＮＡＧ２６）ｓ、（ＮＡＧ２７）、（ＮＡＧ２７）ｓ、（ＮＡＧ２８）、（ＮＡＧ２８）ｓ、（ＮＡＧ２９）、（ＮＡＧ２９）ｓ、（ＮＡＧ３０）、（ＮＡＧ３０）ｓ、（ＮＡＧ３１）、（ＮＡＧ３１）ｓ、（ＮＡＧ３２）、（ＮＡＧ３２）ｓ、（ＮＡＧ３３）、（ＮＡＧ３３）ｓ、（ＮＡＧ３４）、（ＮＡＧ３４）ｓ、（ＮＡＧ３５）、（ＮＡＧ３５）ｓ、（ＮＡＧ３６）、（ＮＡＧ３６）ｓ、（ＮＡＧ３７）、（ＮＡＧ３７）ｓ、（ＮＡＧ３８）、（ＮＡＧ３８）ｓ、（ＮＡＧ３９）、（ＮＡＧ３９）ｓの構造を有する１つの標的化基を含む。
【００４６】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化１】
2020537653.tif 000002
と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化２】
2020537653.tif 000003
と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖であって、ヌクレオチドのすべてまたは実質的にすべてが、修飾されたヌクレオチドである、アンチセンス鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化３】
2020537653.tif 000004
と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ここで、配列番号３は、アンチセンス鎖の１〜２１位（５’から３’）に位置している。
【００４７】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化４】
2020537653.tif 000005
と１個以下のヌクレオチドが異なる修飾されたヌクレオチド配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ここで、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、ｓは、ホスホロチオエート連結を表し、センス鎖は、アンチセンス鎖に対して少なくとも実質的に相補的である。当業者であれば、本明細書に開示される修飾されたヌクレオチド配列に示されているホスホロチオエート連結を含めることで、オリゴヌクレオチドに典型的に存在しているホスホジエステル連結が置き換えられることを明確に理解する（たとえば、すべてのヌクレオシド間連結を示している図１Ａから１Ｍを参照されたい）。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化５】
2020537653.tif 000006
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ここで、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、ｓは、ホスホロチオエート連結を表し、センス鎖は、アンチセンス鎖に対して少なくとも実質的に相補的である。
【００４８】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化６】
2020537653.tif 000007
と１個以下のヌクレオチドが異なる修飾されたヌクレオチド配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ここで、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、ＵＵＮＡは、２’，３’−セコ−ウリジンを表し（たとえば、表６を参照されたい）、ｓは、ホスホロチオエート連結を表し、センス鎖は、アンチセンス鎖に対して少なくとも実質的に相補的である。当業者であれば、本明細書に開示される修飾されたヌクレオチド配列に示されているホスホロチオエート連結を含めることで、オリゴヌクレオチドに典型的に存在しているホスホジエステル連結が置き換えられることを明確に理解する（たとえば、すべてのヌクレオシド間連結を示している図１Ａから１Ｍを参照されたい）。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化７】
2020537653.tif 000008
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ここで、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、ＵＵＮＡは、２’，３’−セコ−ウリジンを表し（たとえば、表６を参照されたい）、ｓは、ホスホロチオエート連結を表し、センス鎖は、アンチセンス鎖に対して少なくとも実質的に相補的である。
【００４９】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化８】
2020537653.tif 000009
と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化９】
2020537653.tif 000010
と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖であって、ヌクレオチドのすべてまたは実質的にすべてが、修飾されたヌクレオチドである、アンチセンス鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化１０】
2020537653.tif 000011
と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ここで、配列番号６は、アンチセンス鎖の１〜２１位（５’から３’）に位置している。
【００５０】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化１１】
2020537653.tif 000012
と１個以下のヌクレオチドが異なる修飾されたヌクレオチド配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ここで、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、ｓは、ホスホロチオエート連結を表し、センス鎖は、アンチセンス鎖に対して少なくとも実質的に相補的である。当業者であれば、本明細書に開示される修飾されたヌクレオチド配列に示されているホスホロチオエート連結を含めることで、オリゴヌクレオチドに典型的に存在しているホスホジエステル連結が置き換えられることを明確に理解する（たとえば、すべてのヌクレオシド間連結を示している図１Ａから１Ｍを参照されたい）。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化１２】
2020537653.tif 000013
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ここで、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、ｓは、ホスホロチオエート連結を表し、センス鎖は、アンチセンス鎖に対して少なくとも実質的に相補的である。
【００５１】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化１３】
2020537653.tif 000014
と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化１４】
2020537653.tif 000015
と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖であって、ヌクレオチドのすべてまたは実質的にすべてが、修飾されたヌクレオチドである、アンチセンス鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化１５】
2020537653.tif 000016
と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ここで、配列番号８は、アンチセンス鎖の１〜２１位（５’から３’）に位置している。
【００５２】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化１６】
2020537653.tif 000017
と１個以下のヌクレオチドが異なる修飾されたヌクレオチド配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ここで、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、ｓは、ホスホロチオエート連結を表し、センス鎖は、アンチセンス鎖に対して少なくとも実質的に相補的である。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化１７】
2020537653.tif 000018
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ここで、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、ｓは、ホスホロチオエート連結を表し、センス鎖は、アンチセンス鎖に対して少なくとも実質的に相補的である。
【００５３】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化１８】
2020537653.tif 000019
と１個以下のヌクレオチドが異なる修飾されたヌクレオチド配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ここで、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、ｓは、ホスホロチオエート連結を表し、センス鎖は、アンチセンス鎖に対して少なくとも実質的に相補的である。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化１９】
2020537653.tif 000020
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ここで、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、ｓは、ホスホロチオエート連結を表し、センス鎖は、アンチセンス鎖に対して少なくとも実質的に相補的である。
【００５４】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化２０】
2020537653.tif 000021
と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化２１】
2020537653.tif 000022
と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖であって、ヌクレオチドのすべてまたは実質的にすべてが、修飾されたヌクレオチドである、アンチセンス鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化２２】
2020537653.tif 000023
と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ここで、配列番号１１は、アンチセンス鎖の１〜２１位（５’から３’）に位置している。
【００５５】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化２３】
2020537653.tif 000024
と１個以下のヌクレオチドが異なる修飾されたヌクレオチド配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ここで、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、ｓは、ホスホロチオエート連結を表し、センス鎖は、アンチセンス鎖に対して少なくとも実質的に相補的である。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化２４】
2020537653.tif 000025
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ここで、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、ｓは、ホスホロチオエート連結を表し、センス鎖は、アンチセンス鎖に対して少なくとも実質的に相補的である。
【００５６】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化２５】
2020537653.tif 000026
と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化２６】
2020537653.tif 000027
と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖であって、ヌクレオチドのすべてまたは実質的にすべてが、修飾されたヌクレオチドである、アンチセンス鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化２７】
2020537653.tif 000028
と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ここで、配列番号２７は、アンチセンス鎖の１〜２１位（５’から３’）に位置している。
【００５７】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化２８】
2020537653.tif 000029
と１個以下のヌクレオチドが異なる修飾されたヌクレオチド配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ここで、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、ｓは、ホスホロチオエート連結を表し、センス鎖は、アンチセンス鎖に対して少なくとも実質的に相補的である。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化２９】
2020537653.tif 000030
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ここで、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、ｓは、ホスホロチオエート連結を表し、センス鎖は、アンチセンス鎖に対して少なくとも実質的に相補的である。
【００５８】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化３０】
2020537653.tif 000031
と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖と、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化３１】
2020537653.tif 000032
と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むセンス鎖とを含む。（Ｉは、イノシンヌクレオチドを表す）。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化３２】
2020537653.tif 000033
と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖であって、ヌクレオチドのすべてまたは実質的にすべてが、修飾されたヌクレオチドである、アンチセンス鎖と、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化３３】
2020537653.tif 000034
と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むセンス鎖であって、ヌクレオチドのすべてまたは実質的にすべてが、修飾されたヌクレオチドである、センス鎖とを含む。
【００５９】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化３４】
2020537653.tif 000035
と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖と、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化３５】
2020537653.tif 000036
と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むセンス鎖とを含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化３６】
2020537653.tif 000037
と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖であって、ヌクレオチドのすべてまたは実質的にすべてが、修飾されたヌクレオチドである、アンチセンス鎖と、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化３７】
2020537653.tif 000038
と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むセンス鎖であって、ヌクレオチドのすべてまたは実質的にすべてが、修飾されたヌクレオチドである、センス鎖とを含む。
【００６０】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化３８】
2020537653.tif 000039
と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖と、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化３９】
2020537653.tif 000040
と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むセンス鎖とを含む。（Ｉは、イノシンヌクレオチドを表す）。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化４０】
2020537653.tif 000041
と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖であって、ヌクレオチドのすべてまたは実質的にすべてが、修飾されたヌクレオチドである、アンチセンス鎖と、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化４１】
2020537653.tif 000042
と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むセンス鎖であって、ヌクレオチドのすべてまたは実質的にすべてが、修飾されたヌクレオチドである、センス鎖とを含む。
【００６１】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化４２】
2020537653.tif 000043
と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖と、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化４３】
2020537653.tif 000044
と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むセンス鎖とを含む。（Ｉは、イノシンヌクレオチドを表す）。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化４４】
2020537653.tif 000045
と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖であって、ヌクレオチドのすべてまたは実質的にすべてが、修飾されたヌクレオチドである、アンチセンス鎖と、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化４５】
2020537653.tif 000046
と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むセンス鎖であって、ヌクレオチドのすべてまたは実質的にすべてが、修飾されたヌクレオチドである、センス鎖とを含む。
【００６２】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化４６】
2020537653.tif 000047
と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖と、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化４７】
2020537653.tif 000048
と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むセンス鎖とを含む。（Ｉは、イノシンヌクレオチドを表す）。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化４８】
2020537653.tif 000049
と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖であって、ヌクレオチドのすべてまたは実質的にすべてが、修飾されたヌクレオチドである、アンチセンス鎖と、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化４９】
2020537653.tif 000050
と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むセンス鎖であって、ヌクレオチドのすべてまたは実質的にすべてが、修飾されたヌクレオチドである、センス鎖とを含む。
【００６３】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化５０】
2020537653.tif 000051
と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖と、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化５１】
2020537653.tif 000052
と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むセンス鎖とを含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化５２】
2020537653.tif 000053
と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖であって、ヌクレオチドのすべてまたは実質的にすべてが、修飾されたヌクレオチドである、アンチセンス鎖と、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化５３】
2020537653.tif 000054
と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むセンス鎖であって、ヌクレオチドのすべてまたは実質的にすべてが、修飾されたヌクレオチドである、センス鎖とを含む。
【００６４】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化５４】
2020537653.tif 000055
と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖と、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化５５】
2020537653.tif 000056
と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むセンス鎖とを含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化５６】
2020537653.tif 000057
と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖であって、ヌクレオチドのすべてまたは実質的にすべてが、修飾されたヌクレオチドである、アンチセンス鎖と、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化５７】
2020537653.tif 000058
と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むセンス鎖であって、ヌクレオチドのすべてまたは実質的にすべてが、修飾されたヌクレオチドである、センス鎖とを含む。
【００６５】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化５８】
2020537653.tif 000059
と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖と、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化５９】
2020537653.tif 000060
と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むセンス鎖とを含む。（Ｉは、イノシンヌクレオチドを表す）。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化６０】
2020537653.tif 000061
と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖であって、ヌクレオチドのすべてまたは実質的にすべてが、修飾されたヌクレオチドである、アンチセンス鎖と、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化６１】
2020537653.tif 000062
と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むセンス鎖であって、ヌクレオチドのすべてまたは実質的にすべてが、修飾されたヌクレオチドである、センス鎖とを含む。
【００６６】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化６２】
2020537653.tif 000063
と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖と、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化６３】
2020537653.tif 000064
と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むセンス鎖とを含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化６４】
2020537653.tif 000065
と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖であって、ヌクレオチドのすべてまたは実質的にすべてが、修飾されたヌクレオチドである、アンチセンス鎖と、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化６５】
2020537653.tif 000066
と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むセンス鎖であって、ヌクレオチドのすべてまたは実質的にすべてが、修飾されたヌクレオチドである、センス鎖とを含む。
【００６７】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化６６】
2020537653.tif 000067
と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖と、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化６７】
2020537653.tif 000068
と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むセンス鎖とを含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化６８】
2020537653.tif 000069
と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖であって、ヌクレオチドのすべてまたは実質的にすべてが、修飾されたヌクレオチドである、アンチセンス鎖と、ヌクレオチド配列（５’から３’）
【化６９】
2020537653.tif 000070
と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むセンス鎖であって、ヌクレオチドのすべてまたは実質的にすべてが、修飾されたヌクレオチドである、センス鎖とを含む。
【００６８】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化７０】
2020537653.tif 000071
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖と、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化７１】
2020537653.tif 000072
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むセンス鎖とを含み、ここで、ａ、ｃ、ｇ、ｉ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、イノシン、またはウリジンを表し、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、ｓは、ホスホロチオエート連結を表す。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化７２】
2020537653.tif 000073
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖と、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化７３】
2020537653.tif 000074
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むセンス鎖とを含み、ここで、センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端に逆位脱塩基残基をさらに含み、センス鎖は、３’末端および／または５’末端に共有結合により連結された標的化リガンドも含む。ある特定の実施形態では、標的化リガンドは、それぞれ本明細書の表６において定義されている、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ３７）、および（ＮＡＧ３７）ｓから選択される。
【００６９】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化７４】
2020537653.tif 000075
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖と、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化７５】
2020537653.tif 000076
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むセンス鎖とを含み、ここで、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、ＵＵＮＡは、２’，３’−セコ−ウリジンを表し（表６を参照されたい）、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、ｓは、ホスホロチオエート連結を表す。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化７６】
2020537653.tif 000077
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖と、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化７７】
2020537653.tif 000078
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むセンス鎖とを含み、ここで、センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端に逆位脱塩基残基をさらに含み、センス鎖は、３’末端および／または５’末端に共有結合により連結された標的化リガンドも含む。ある特定の実施形態では、標的化リガンドは、それぞれ本明細書の表６において定義されている、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ３７）、および（ＮＡＧ３７）ｓから選択される。
【００７０】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化７８】
2020537653.tif 000079
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖と、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化７９】
2020537653.tif 000080
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むセンス鎖とを含み、ここで、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、ｓは、ホスホロチオエート連結を表す。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化８０】
2020537653.tif 000081
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖と、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化８１】
2020537653.tif 000082
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むセンス鎖とを含み、ここで、センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端に逆位脱塩基残基をさらに含み、センス鎖は、３’末端および／または５’末端に共有結合により連結された標的化リガンドも含む。ある特定の実施形態では、標的化リガンドは、それぞれ本明細書の表６において定義されている、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ３７）、および（ＮＡＧ３７）ｓから選択される。
【００７１】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化８２】
2020537653.tif 000083
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖と、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化８３】
2020537653.tif 000084
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むセンス鎖とを含み、ここで、ａ、ｃ、ｇ、ｉ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、イノシン、またはウリジンを表し、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、ｓは、ホスホロチオエート連結を表す。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化８４】
2020537653.tif 000085
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖と、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化８５】
2020537653.tif 000086
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むセンス鎖とを含み、ここで、センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端に逆位脱塩基残基をさらに含み、センス鎖は、３’末端および／または５’末端に共有結合により連結された標的化リガンドも含む。ある特定の実施形態では、標的化リガンドは、それぞれ本明細書の表６において定義されている、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ３７）、および（ＮＡＧ３７）ｓから選択される。
【００７２】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化８６】
2020537653.tif 000087
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖と、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化８７】
2020537653.tif 000088
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むセンス鎖とを含み、ここで、ａ、ｃ、ｇ、ｉ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、イノシン、またはウリジンを表し、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、ｓは、ホスホロチオエート連結を表す。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化８８】
2020537653.tif 000089
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖と、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化８９】
2020537653.tif 000090
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むセンス鎖とを含み、ここで、センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端に逆位脱塩基残基をさらに含み、センス鎖は、３’末端および／または５’末端に共有結合により連結された標的化リガンドも含む。ある特定の実施形態では、標的化リガンドは、それぞれ本明細書の表６において定義されている、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ３７）、および（ＮＡＧ３７）ｓから選択される。
【００７３】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化９０】
2020537653.tif 000091
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖と、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化９１】
2020537653.tif 000092
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むセンス鎖とを含み、ここで、ａ、ｃ、ｇ、ｉ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、イノシン、またはウリジンを表し、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、ｓは、ホスホロチオエート連結を表す。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化９２】
2020537653.tif 000093
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖と、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化９３】
2020537653.tif 000094
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むセンス鎖とを含み、ここで、センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端に逆位脱塩基残基をさらに含み、センス鎖は、３’末端および／または５’末端に共有結合により連結された標的化リガンドも含む。ある特定の実施形態では、標的化リガンドは、それぞれ本明細書の表６において定義されている、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ３７）、および（ＮＡＧ３７）ｓから選択される。
【００７４】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化９４】
2020537653.tif 000095
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖と、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化９５】
2020537653.tif 000096
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むセンス鎖とを含み、ここで、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、ｓは、ホスホロチオエート連結を表す。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化９６】
2020537653.tif 000097
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖と、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化９７】
2020537653.tif 000098
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むセンス鎖とを含み、ここで、センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端に逆位脱塩基残基をさらに含み、センス鎖は、３’末端および／または５’末端に共有結合により連結された標的化リガンドも含む。ある特定の実施形態では、標的化リガンドは、それぞれ本明細書の表６において定義されている、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ３７）、および（ＮＡＧ３７）ｓから選択される。
【００７５】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化９８】
2020537653.tif 000099
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖と、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化９９】
2020537653.tif 000100
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むセンス鎖とを含み、ここで、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、ｓは、ホスホロチオエート連結を表す。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化１００】
2020537653.tif 000101
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖と、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化１０１】
2020537653.tif 000102
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むセンス鎖とを含み、ここで、センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端に逆位脱塩基残基をさらに含み、センス鎖は、３’末端および／または５’末端に共有結合により連結された標的化リガンドも含む。ある特定の実施形態では、標的化リガンドは、それぞれ本明細書の表６において定義されている、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ３７）、および（ＮＡＧ３７）ｓから選択される。
【００７６】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化１０２】
2020537653.tif 000103
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖と、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化１０３】
2020537653.tif 000104
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むセンス鎖とを含み、ここで、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、ｓは、ホスホロチオエート連結を表す。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化１０４】
2020537653.tif 000105
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖と、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化１０５】
2020537653.tif 000106
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むセンス鎖とを含み、ここで、センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端に逆位脱塩基残基をさらに含み、センス鎖は、３’末端および／または５’末端に共有結合により連結された標的化リガンドも含む。ある特定の実施形態では、標的化リガンドは、それぞれ本明細書の表６において定義されている、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ３７）、および（ＮＡＧ３７）ｓから選択される。
【００７７】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化１０６】
2020537653.tif 000107
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖と、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化１０７】
2020537653.tif 000108
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むセンス鎖とを含み、ここで、ａ、ｃ、ｇ、ｉ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、イノシン、またはウリジンを表し、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、ｓは、ホスホロチオエート連結を表す。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化１０８】
2020537653.tif 000109
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖と、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化１０９】
2020537653.tif 000110
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むセンス鎖とを含み、ここで、センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端に逆位脱塩基残基をさらに含み、センス鎖は、３’末端および／または５’末端に共有結合により連結された標的化リガンドも含む。ある特定の実施形態では、標的化リガンドは、それぞれ本明細書の表６において定義されている、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ３７）、および（ＮＡＧ３７）ｓから選択される。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化１１０】
2020537653.tif 000111
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖と、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化１１１】
2020537653.tif 000112
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むセンス鎖とを含み、ここで、ａ、ｃ、ｇ、ｉ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、イノシン、またはウリジンを表し、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、ｓは、ホスホロチオエート連結を表す。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化１１２】
2020537653.tif 000113
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖と、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化１１３】
2020537653.tif 000114
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むセンス鎖とを含み、ここで、センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端に逆位脱塩基残基をさらに含み、センス鎖は、３’末端および／または５’末端に共有結合により連結された標的化リガンドも含む。ある特定の実施形態では、標的化リガンドは、それぞれ本明細書の表６において定義されている、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ３７）、および（ＮＡＧ３７）ｓから選択される。
【００７８】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化１１４】
2020537653.tif 000115
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖と、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化１１５】
2020537653.tif 000116
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むセンス鎖とを含み、ここで、ａ、ｃ、ｇ、ｉ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、イノシン、またはウリジンを表し、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、ｓは、ホスホロチオエート連結を表す。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化１１６】
2020537653.tif 000117
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖と、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化１１７】
2020537653.tif 000118
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むセンス鎖とを含み、ここで、センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端に逆位脱塩基残基をさらに含み、センス鎖は、３’末端および／または５’末端に共有結合により連結された標的化リガンドも含む。ある特定の実施形態では、標的化リガンドは、それぞれ本明細書の表６において定義されている、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ３７）、および（ＮＡＧ３７）ｓから選択される。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化１１８】
2020537653.tif 000119
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖と、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化１１９】
2020537653.tif 000120
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むセンス鎖とを含み、ここで、ａ、ｃ、ｇ、ｉ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、イノシン、またはウリジンを表し、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、ｓは、ホスホロチオエート連結を表す。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化１２０】
2020537653.tif 000121
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖と、修飾されたヌクレオチド配列（５’から３’）
【化１２１】
2020537653.tif 000122
からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むセンス鎖とを含み、ここで、センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端に逆位脱塩基残基をさらに含み、センス鎖は、３’末端および／または５’末端に共有結合により連結された標的化リガンドも含む。ある特定の実施形態では、標的化リガンドは、それぞれ本明細書の表６において定義されている、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ３７）、および（ＮＡＧ３７）ｓから選択される。
【００７９】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、以下のヌクレオチド配列（５’から３’）
【化１２２】
2020537653.tif 000123
のうちの１つと０または１個のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ここで、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖に対して少なくとも部分的に相補的であるセンス鎖をさらに含み、アンチセンス鎖およびセンス鎖の両方におけるヌクレオチドのすべてまたは実質的にすべては、修飾されたヌクレオチドである。
【００８０】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、以下のヌクレオチド配列（５’から３’）
【化１２３】
2020537653.tif 000124
のうちの１つと０または１個のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ここで、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖に対して少なくとも部分的に相補的であるセンス鎖をさらに含み、アンチセンス鎖およびセンス鎖の両方におけるヌクレオチドのすべてまたは実質的にすべては、修飾されたヌクレオチドであり、センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端に逆位脱塩基残基をさらに含み、センス鎖は、３’末端および／または５’末端に共有結合により連結された標的化リガンドも含む。
【００８１】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、以下のヌクレオチド配列（５’から３’）
【化１２４】
2020537653.tif 000125
のうちの１つと０または１個のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ここで、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖に対して少なくとも部分的に相補的であるセンス鎖をさらに含み、アンチセンス鎖およびセンス鎖の両方におけるヌクレオチドのすべてまたは実質的にすべては、修飾されたヌクレオチドであり、センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端に逆位脱塩基残基をさらに含み、センス鎖は、３’末端および／または５’末端に共有結合により連結された標的化リガンドも含み、それぞれのアンチセンス鎖配列は、アンチセンス鎖の１〜２１位に位置している。
【００８２】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖とセンス鎖とを含み、ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖は、以下のヌクレオチド配列（５’から３’）対：
【化１２５】
2020537653.tif 000126
（ここで、Ｉは、イノシンヌクレオチドを表す）、
【化１２６】
2020537653.tif 000127
（ここで、Ｉは、イノシンヌクレオチドを表す）、
【化１２７】
2020537653.tif 000128
（ここで、Ｉは、イノシンヌクレオチドを表す）、
【化１２８】
2020537653.tif 000129
（ここで、Ｉは、イノシンヌクレオチドを表す）、
【化１２９】
2020537653.tif 000130
（ここで、Ｉは、イノシンヌクレオチドを表す）、
【化１３０】
2020537653.tif 000131
のうちの１つと０または１個のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含み、ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖の両方におけるヌクレオチドのすべてまたは実質的にすべては、修飾されたヌクレオチドである。
【００８３】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖とセンス鎖とを含み、ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖は、以下のヌクレオチド配列（５’から３’）対
【化１３１】
2020537653.tif 000132
（ここで、Ｉは、イノシンヌクレオチドを表す）、
【化１３２】
2020537653.tif 000133
（ここで、Ｉは、イノシンヌクレオチドを表す）、
【化１３３】
2020537653.tif 000134
（ここで、Ｉは、イノシンヌクレオチドを表す）、
【化１３４】
2020537653.tif 000135
（ここで、Ｉは、イノシンヌクレオチドを表す）、
【化１３５】
2020537653.tif 000136
（ここで、Ｉは、イノシンヌクレオチドを表す）、
【化１３６】
2020537653.tif 000137
のうちの１つと０または１個のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含み、ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖の両方におけるヌクレオチドのすべてまたは実質的にすべては、修飾されたヌクレオチドであり、センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端に逆位脱塩基残基をさらに含み、センス鎖は、３’末端および／または５’末端に共有結合により連結された標的化リガンドも含む。
【００８４】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、以下のヌクレオチド配列（５’から３’）
【化１３７】
2020537653.tif 000138
のうちの１つと０または１個のヌクレオチドが異なる修飾されたヌクレオチド配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ここで、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、ＵＵＮＡは、２’，３’−セコ−ウリジンを表し（たとえば、表６を参照されたい）、ｓは、ホスホロチオエート連結を表し、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖に対して少なくとも部分的に相補的であるセンス鎖をさらに含み、センス鎖におけるヌクレオチドのすべてまたは実質的にすべては、修飾されたヌクレオチドである。
【００８５】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、以下のヌクレオチド配列（５’から３’）
【化１３８】
2020537653.tif 000139
のうちの１つと０または１個のヌクレオチドが異なる修飾されたヌクレオチド配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ここで、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖に対して少なくとも部分的に相補的であるセンス鎖をさらに含み、センス鎖におけるヌクレオチドのすべてまたは実質的にすべては、修飾されたヌクレオチドであり、センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端に逆位脱塩基残基をさらに含み、センス鎖は、３’末端および／または５’末端に共有結合により連結された標的化リガンドも含む。ある特定の実施形態では、標的化リガンドは、それぞれ本明細書の表６において定義されている、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ３７）、および（ＮＡＧ３７）ｓから選択される。
【００８６】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、以下のヌクレオチド配列対（５’から３’）
【化１３９】
2020537653.tif 000140
のうちの１つと０または１個のヌクレオチドが異なる修飾されたヌクレオチド配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖およびセンス鎖を含み、ここで、ａ、ｃ、ｇ、ｉ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、イノシン、またはウリジンを表し、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、ＵＵＮＡは、２’，３’−セコ−ウリジンを表し（たとえば、表６を参照されたい）、ｓは、ホスホロチオエート連結を表す。
【００８７】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、以下のヌクレオチド配列対（５’から３’）
【化１４０】
2020537653.tif 000141
のうちの１つからなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含むアンチセンス鎖およびセンス鎖を含み、ここで、ａ、ｃ、ｇ、ｉ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、イノシン、またはウリジンを表し、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、ＵＵＮＡは、２’，３’−セコ−ウリジンを表し（たとえば、表６を参照されたい）、ｓは、ホスホロチオエート連結を表し、センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端に、逆位脱塩基残基をさらに含み、センス鎖は、３’末端および／または５’末端に共有結合により連結された標的化リガンドも含む。ある特定の実施形態では、標的化リガンドは、それぞれ本明細書の表６において定義されている、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ３７）、および（ＮＡＧ３７）ｓから選択される。
【００８８】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、（５’から３’）
【化１４１】
2020537653.tif 000142
からなる群から選択されるヌクレオチド配列と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖を含む。
【００８９】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、（５’から３’）
【化１４２】
2020537653.tif 000143
からなる群から選択されるヌクレオチド配列と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖であって、ヌクレオチドのすべてまたは実質的にすべてが、修飾されたヌクレオチドである、アンチセンス鎖を含む。
【００９０】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、（５’から３’）
【化１４３】
2020537653.tif 000144
からなる群から選択されるヌクレオチド配列と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖であって、ヌクレオチドのすべてまたは実質的にすべてが、修飾されたヌクレオチドであり、
【化１４４】
2020537653.tif 000145
が、それぞれ、アンチセンス鎖のヌクレオチド１〜１９位（５’から３’）に位置している、アンチセンス鎖を含む。
【００９１】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、（５’から３’）
【化１４５】
2020537653.tif 000146
からなる群から選択されるヌクレオチド配列対と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列をそれぞれ含む、アンチセンス鎖およびセンス鎖を含み、ここで、Ｉは、イノシンヌクレオチドを表す。
【００９２】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、（５’から３’）
【化１４６】
2020537653.tif 000147
【化１４７】
2020537653.tif 000148
からなる群から選択されるヌクレオチド配列対と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列をそれぞれ含む、アンチセンス鎖およびセンス鎖を含み、ここで、Ｉは、イノシンヌクレオチドを表し、ヌクレオチドのすべてまたは実質的にすべては、修飾されたヌクレオチドである。
【００９３】
一部の実施形態では、１つまたは複数のＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含む本明細書に記載される組成物は、キット、容器、パック、ディスペンサー、事前充填シリンジ、またはバイアルにパッケージングされる。一部の実施形態では、本明細書に記載される組成物は、非経口で投与される。
【００９４】
本発明の他の目的、特性、態様、および利点は、以下の詳細な説明、添付の図面、および特許請求の範囲から明らか。
【図面の簡単な説明】
【００９５】
【図１Ａ】図１Ａは、（ＮＡＧ３７）ｓの構造を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンド（表６を参照されたい）にコンジュゲートされた、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５１２６の修飾されたセンス鎖およびアンチセンス鎖（表３〜５を参照されたい）の概略図である。図１Ａは、配列番号１０および６３１を開示する。  以下の略語が、図１Ａから１Ｍにおいて使用されている：ａ、ｃ、ｇ、ｉ、およびｕは、２’−Ｏ−メチル修飾ヌクレオチドであり、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、２’−フルオロ修飾ヌクレオチドであり、ｐは、ホスホジエステル連結であり、ｓは、ホスホロチオエート連結であり、ｉｎｖＡｂは、逆位脱塩基残基であり（たとえば、表６を参照されたい）、Ｃは、シチジンリボヌクレオチドであり、ＵＵＮＡは、２’，３’−セコ−ウリジンであり（たとえば、表６を参照されたい）、（ＮＡＧ３７）ｓおよび（ＮＡＧ３７）ｐは、それぞれ、表６に示される構造を有する三座配位のＮ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドである。
【図１Ｂ】図１Ｂは、（ＮＡＧ３７）ｓの構造を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンド（表６を参照されたい）にコンジュゲートされた、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５１５０の修飾されたセンス鎖およびアンチセンス鎖（表３〜５を参照されたい）の概略図である。図１Ｂは、配列番号１０および６３２を開示する。
【図１Ｃ】図１Ｃは、（ＮＡＧ３７）ｓの構造を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンド（表６を参照されたい）にコンジュゲートされた、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５１８３の修飾されたセンス鎖およびアンチセンス鎖（表３〜５を参照されたい）の概略図である。図１Ｃは、配列番号２および６３６を開示する。
【図１Ｄ】図１Ｄは、（ＮＡＧ３７）ｓの構造を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンド（表６を参照されたい）にコンジュゲートされた、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５１８６の修飾されたセンス鎖およびアンチセンス鎖（表３〜５を参照されたい）の概略図である。図１Ｄは、配列番号２および６３９を開示する。
【図１Ｅ】図１Ｅは、（ＮＡＧ３７）ｓの構造を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンド（表６を参照されたい）にコンジュゲートされた、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５１９３の修飾されたセンス鎖およびアンチセンス鎖（表３〜５を参照されたい）の概略図である。図１Ｅは、配列番号５および６４５を開示する。
【図１Ｆ】図１Ｆは、（ＮＡＧ３７）ｓの構造を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンド（表６を参照されたい）にコンジュゲートされた、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５１９５の修飾されたセンス鎖およびアンチセンス鎖（表３〜５を参照されたい）の概略図である。図１Ｆは、配列番号５および６４７を開示する。
【図１Ｇ】図１Ｇは、（ＮＡＧ３７）ｓの構造を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンド（表６を参照されたい）にコンジュゲートされた、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５１９６の修飾されたセンス鎖およびアンチセンス鎖（表３〜５を参照されたい）の概略図である。図１Ｇは、配列番号５および６４８を開示する。
【図１Ｈ】図１Ｈは、（ＮＡＧ３７）ｓの構造を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンド（表６を参照されたい）にコンジュゲートされた、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５２０６の修飾されたセンス鎖およびアンチセンス鎖（表３〜５を参照されたい）の概略図である。図１Ｈは、配列番号２８および６５８を開示する。
【図１Ｉ】図１Ｉは、（ＮＡＧ３７）ｓの構造を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンド（表６を参照されたい）にコンジュゲートされた、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５２０９の修飾されたセンス鎖およびアンチセンス鎖（表３〜５を参照されたい）の概略図である。図１Ｉは、配列番号４および６０２を開示する。
【図１Ｊ】図１Ｊは、（ＮＡＧ３７）ｓの構造を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンド（表６を参照されたい）にコンジュゲートされた、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５２５６の修飾されたセンス鎖およびアンチセンス鎖（表３〜５を参照されたい）の概略図である。図１Ｊは、配列番号２および６７４を開示する。
【図１Ｋ】図１Ｋは、（ＮＡＧ３７）ｓの構造を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンド（表６を参照されたい）にコンジュゲートされた、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５３７４の修飾されたセンス鎖およびアンチセンス鎖（表３〜５を参照されたい）の概略図である。図１Ｋは、配列番号２および７００を開示する。
【図１Ｌ】図１Ｌは、（ＮＡＧ３７）ｓの構造を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンド（表６を参照されたい）にコンジュゲートされた、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５６０９の修飾されたセンス鎖およびアンチセンス鎖（表３〜５を参照されたい）の概略図である。図１Ｌは、配列番号７および７０８を開示する。
【図１Ｍ】図１Ｍは、（ＮＡＧ３７）ｓの構造を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンド（表６を参照されたい）にコンジュゲートされた、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５６９２の修飾されたセンス鎖およびアンチセンス鎖（表３〜５を参照されたい）の概略図である。図１Ｍは、配列番号９および７２１を開示する。
【図２Ａ】図２Ａ〜２Ｄは、ナトリウム塩の形態で示されている、センス鎖の５’末端において（ＮＡＧ３７）ｓの構造を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンド（表６を参照されたい）にコンジュゲートされた、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５１９３の化学構造の図である。
【図２Ｂ】図２Ａ〜２Ｄは、ナトリウム塩の形態で示されている、センス鎖の５’末端において（ＮＡＧ３７）ｓの構造を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンド（表６を参照されたい）にコンジュゲートされた、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５１９３の化学構造の図である。
【図２Ｃ】図２Ａ〜２Ｄは、ナトリウム塩の形態で示されている、センス鎖の５’末端において（ＮＡＧ３７）ｓの構造を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンド（表６を参照されたい）にコンジュゲートされた、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５１９３の化学構造の図である。
【図２Ｄ】図２Ａ〜２Ｄは、ナトリウム塩の形態で示されている、センス鎖の５’末端において（ＮＡＧ３７）ｓの構造を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンド（表６を参照されたい）にコンジュゲートされた、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５１９３の化学構造の図である。
【図３Ａ】図３Ａ〜３Ｄは、遊離酸の形態で示されている、センス鎖の５’末端において（ＮＡＧ３７）ｓの構造を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンド（表６を参照されたい）にコンジュゲートされた、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５１９３の化学構造の図である。
【図３Ｂ】図３Ａ〜３Ｄは、遊離酸の形態で示されている、センス鎖の５’末端において（ＮＡＧ３７）ｓの構造を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンド（表６を参照されたい）にコンジュゲートされた、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５１９３の化学構造の図である。
【図３Ｃ】図３Ａ〜３Ｄは、遊離酸の形態で示されている、センス鎖の５’末端において（ＮＡＧ３７）ｓの構造を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンド（表６を参照されたい）にコンジュゲートされた、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５１９３の化学構造の図である。
【図３Ｄ】図３Ａ〜３Ｄは、遊離酸の形態で示されている、センス鎖の５’末端において（ＮＡＧ３７）ｓの構造を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンド（表６を参照されたい）にコンジュゲートされた、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５１９３の化学構造の図である。
【図４Ａ】図４Ａ〜４Ｄは、ナトリウム塩の形態で示されている、センス鎖の５’末端において（ＮＡＧ３７）ｓの構造を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンド（表６を参照されたい）にコンジュゲートされた、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５２０９の化学構造の図である。
【図４Ｂ】図４Ａ〜４Ｄは、ナトリウム塩の形態で示されている、センス鎖の５’末端において（ＮＡＧ３７）ｓの構造を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンド（表６を参照されたい）にコンジュゲートされた、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５２０９の化学構造の図である。
【図４Ｃ】図４Ａ〜４Ｄは、ナトリウム塩の形態で示されている、センス鎖の５’末端において（ＮＡＧ３７）ｓの構造を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンド（表６を参照されたい）にコンジュゲートされた、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５２０９の化学構造の図である。
【図４Ｄ】図４Ａ〜４Ｄは、ナトリウム塩の形態で示されている、センス鎖の５’末端において（ＮＡＧ３７）ｓの構造を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンド（表６を参照されたい）にコンジュゲートされた、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５２０９の化学構造の図である。
【図５Ａ】図５Ａ〜５Ｄは、遊離酸の形態で示されている、センス鎖の５’末端において（ＮＡＧ３７）ｓの構造を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンド（表６を参照されたい）にコンジュゲートされた、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５２０９の化学構造の図である。
【図５Ｂ】図５Ａ〜５Ｄは、遊離酸の形態で示されている、センス鎖の５’末端において（ＮＡＧ３７）ｓの構造を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンド（表６を参照されたい）にコンジュゲートされた、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５２０９の化学構造の図である。
【図５Ｃ】図５Ａ〜５Ｄは、遊離酸の形態で示されている、センス鎖の５’末端において（ＮＡＧ３７）ｓの構造を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンド（表６を参照されたい）にコンジュゲートされた、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５２０９の化学構造の図である。
【図５Ｄ】図５Ａ〜５Ｄは、遊離酸の形態で示されている、センス鎖の５’末端において（ＮＡＧ３７）ｓの構造を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンド（表６を参照されたい）にコンジュゲートされた、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５２０９の化学構造の図である。
【発明を実施するための形態】
【００９６】
詳細な説明
定義
本明細書において使用される場合、「オリゴヌクレオチド」および「ポリヌクレオチド」という用語は、連結したヌクレオシドのポリマーを意味し、それらのそれぞれは、独立して、修飾されていてもよく、または修飾されていなくてもよい。
【００９７】
本明細書において使用される場合、「ＲＮＡｉ剤」（「ＲＮＡｉトリガー」とも称される）は、配列特異的な様式で、標的メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）のｍＲＮＡ転写産物の翻訳を低下または阻害することができる（たとえば、適切な条件下において低下または阻害する）、ＲＮＡまたはＲＮＡ様（たとえば、化学修飾されたＲＮＡ）オリゴヌクレオチド分子を含む組成物を意味する。本明細書において使用される場合、ＲＮＡｉ剤は、ＲＮＡ干渉機序（すなわち、哺乳動物細胞のＲＮＡ干渉経路機構（ＲＮＡに誘導されるサイレンシング複合体もしくはＲＩＳＣ）との相互作用を通じてＲＮＡ干渉を誘導すること）を通じて、または任意の代替的な機序または経路によって、作動し得る。ＲＮＡｉ剤は、この用語が本明細書において使用される場合、主として、ＲＮＡ干渉機序を通じて作動すると考えられるが、開示されるＲＮＡｉ剤は、任意の特定の作用経路または作用機序に束縛されることも制限されることもない。本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖から構成され、これには、短い（または小さな）干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、短いヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、およびダイサー（dicer）基質が含まれるが、これらに限定されない。本明細書に記載されるＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、標的とされているｍＲＮＡ（すなわち、ＡＳＧＲ１  ｍＲＮＡ）に対して少なくとも部分的に相補的である。ＲＮＡｉ剤は、１つもしくは複数の修飾されたヌクレオチドおよび／または１つもしくは複数の非ホスホジエステル連結を含み得る。
【００９８】
本明細書において使用される場合、「サイレンシングする」、「低減する」、「阻害する」、「下方調節する」、または「ノックダウンする」という用語は、所与の遺伝子の発現に言及する場合、遺伝子が転写される細胞、細胞の群、組織、器官、または対象において、遺伝子から転写されるＲＮＡのレベルまたはｍＲＮＡから翻訳されるポリペプチド、タンパク質、もしくはタンパク質サブユニットのレベルによって測定される遺伝子の発現が、細胞、細胞の群、組織、器官、または対象を本明細書に記載されるＲＮＡｉ剤で処置した場合に、そのように処置されていない第２の細胞、細胞の群、組織、器官、または対象と比較して、低減されることを意味する。
【００９９】
本明細書において使用される場合、「配列」および「ヌクレオチド配列」という用語は、標準的な命名法を使用して一連の文字で記載された、核酸塩基またはヌクレオチドの連続物または順序を意味する。
【０１００】
本明細書において使用される場合、「塩基」、「ヌクレオチド塩基」、または「核酸塩基」は、ヌクレオチドの構成要素である複素環式ピリミジンまたはプリン化合物であり、これには、主要なプリン塩基であるアデニンおよびグアニン、ならびに主要なピリミジン塩基であるシトシン、チミン、およびウラシルが含まれる。核酸塩基は、限定することなく、ユニバーサル塩基、疎水性塩基、乱雑塩基（promiscuous  base）、サイズ拡大塩基、およびフッ素化塩基を含むように、さらに修飾され得る。（たとえば、Modified  Nucleosides  in  Biochemistry,  Biotechnology  and  Medicine,  Herdewijn,  P.  ed.  Wiley  -VCH,  2008を参照されたい）。そのような修飾された核酸塩基（修飾された核酸塩基を含むホスホラミダイト化合物を含む）の合成は、当該技術分野において公知である。
【０１０１】
本明細書において使用される場合、および別途示されない場合、「相補的」という用語は、第１の核酸塩基またはヌクレオチド配列（たとえば、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖または標的とされるｍＲＮＡ）を、第２の核酸塩基またはヌクレオチド配列（たとえば、ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖または一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチド）に関連して説明するために使用される場合、第１のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドが、ハイブリダイズし（哺乳動物の生理学的条件（またはｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける類似の条件）下において塩基対の水素結合を形成し）、ある特定の標準的な条件下において第２のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドと二重鎖または二本鎖ヘリックス構造を形成する、能力を意味する。相補的な配列には、少なくとも上述のハイブリダイゼーション要件が満たされる程度に、ワトソンクリック塩基対または非ワトソンクリック塩基対が含まれ、天然であるかまたは修飾されたヌクレオチドまたはヌクレオチド模倣体が含まれる。配列同一性または相補性は、修飾とは独立している。たとえば、ａおよびＡｆは、本明細書において定義される場合、同一性または相補性を決定する目的で、Ｕ（またはＴ）に対して相補的であり、Ａと同一である。
【０１０２】
本明細書において使用される場合、「完璧に相補的」または「完全に相補的」とは、ハイブリダイズした核酸塩基またはヌクレオチド配列分子の対において、第１のオリゴヌクレオチドの連続した配列における塩基のすべて（１００％）が、第２のオリゴヌクレオチドの連続した配列における同じ数の塩基とハイブリダイズすることを意味する。連続した配列は、第１または第２のヌクレオチド配列のすべてまたは一部を含み得る。
【０１０３】
本明細書において使用される場合、「部分的に相補的」とは、ハイブリダイズした核酸塩基またはヌクレオチド配列分子の対において、第１のオリゴヌクレオチドの連続した配列における塩基のすべてではないが少なくとも７０％が、第２のオリゴヌクレオチドの連続した配列における同じ数の塩基とハイブリダイズすることを意味する。連続した配列は、第１または第２のヌクレオチド配列のすべてまたは一部を含み得る。
【０１０４】
本明細書において使用される場合、「実質的に相補的」とは、ハイブリダイズした核酸塩基またはヌクレオチド配列分子の対において、第１のオリゴヌクレオチドの連続した配列における塩基のすべてではないが少なくとも８５％が、第２のオリゴヌクレオチドの連続した配列における同じ数の塩基とハイブリダイズすることを意味する。連続した配列は、第１または第２のヌクレオチド配列のすべてまたは一部を含み得る。
【０１０５】
本明細書において使用される場合、「相補的」、「完全に相補的」、「部分的に相補的」、および「実質的に相補的」という用語は、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖とアンチセンス鎖との間、またはＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖とＡＳＧＲ１  ｍＲＮＡの配列との間の核酸塩基またはヌクレオチドのマッチングに関して使用される。
【０１０６】
本明細書において使用される場合、「実質的に同一」または「実質的な同一性」という用語は、核酸配列に適用される場合、ヌクレオチド配列（またはヌクレオチド配列の一部分）が、参照配列と比較して、少なくとも約８５％の配列同一性、またはそれを上回る、たとえば、少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有することを意味する。配列同一性の割合は、２つの最適にアライメントされた配列を、比較枠にわたって比較することによって判定される。割合は、両方の配列において同じ種類の核酸塩基が生じる位置の数を判定して、マッチする位置の数を得、マッチする位置の数を、比較の枠内の位置の総数で除し、結果に１００を乗じて配列同一性の割合を得ることによって、計算される。本明細書に開示される発明は、本明細書に開示されるものと実質的に同一であるヌクレオチド配列を包含する。
【０１０７】
本明細書において使用される場合、「処置する」、「処置」などの用語は、対象における疾患の１つまたは複数の症状の数、重症度、および／または頻度の軽減または緩和を提供するためになされる方法またはステップを意味する。本明細書において使用される場合、「処置する」および「処置」には、対象における疾患の１つまたは複数の症状の数、重症度、および／または頻度の予防的処置、管理、防止的処置、および／または阻害もしくは低減が含まれ得る。
【０１０８】
本明細書において使用される場合、「細胞に導入する」という語句は、ＲＮＡｉ剤に言及する場合、ＲＮＡｉ剤を細胞に機能的に送達することを意味する。「機能的な送達」という語句は、ＲＮＡｉ剤が、予測される生物学的活性、たとえば、遺伝子発現の配列特異的な阻害を有することが可能となる様式で、ＲＮＡｉ剤を細胞に送達することを意味する。
【０１０９】
別途示されない限り、
【化１４８】
2020537653.tif 000149
という記号の使用は、本明細書において使用される場合、本明細書に記載される発明の範囲内に含まれる、任意の基が、そこに連結され得ることを意味する。
【０１１０】
本明細書において使用される場合、「異性体」という用語は、同一な分子式を有するが、原子の結合の性質もしくは順序または原子の空間配置が異なる、化合物を指す。原子の空間配置が異なる異性体は、「立体異性体」と称される。互いに鏡像ではない立体異性体は、「ジアステレオ異性体」と称され、重ね合わせることができない鏡像である立体異性体は、「エナンチオマー」と称されるかまたは光学異性体と称されることもある。同一でない４つの置換基に結合した炭素原子は、「キラル中心」と称される。
【０１１１】
本明細書において使用される場合、構造において特定の立体構造を有すると具体的に特定されない限り、不斉中心が存在し、したがってエナンチオマー、ジアステレオマー、または他の立体異性体構成が生じるそれぞれの構造について、本明細書に開示されるそれぞれの構造は、光学的に純粋な形態およびラセミ形態を含め、すべてのそのような可能性のある異性体を表すことが意図される。たとえば、本明細書に開示される構造は、ジアステレオマーの混合物ならびに単一の立体異性体の両方を包含することが意図される。
【０１１２】
本特許請求において使用される場合、「からなる」という語句は、本特許請求に示されていない任意の要素、ステップ、または成分を除外する。本特許請求において使用される場合、「本質的にからなる」という語句は、本特許請求の範囲を、指定された材料またはステップ、ならびに特許請求される発明の基本的かつ新規な特徴に実質的に影響を及ぼさないものに限定する。
【０１１３】
当業者であれば、本明細書に開示される化合物および組成物が、化合物または組成物が置かれている環境に応じて、ある特定の原子（たとえば、Ｎ、Ｏ、またはＳ原子）をプロトン化状態または脱プロトン化状態で有し得ることを容易に理解および認識する。したがって、本明細書において使用される場合、本明細書に開示される構造は、ある特定の官能基、たとえば、ＯＨ、ＳＨ、またはＮＨなどが、プロトン化されていてもよく、または脱プロトン化されていてもよいことを想定する。本明細書における開示は、当業者によって容易に理解されるように、開示される化合物および組成物を、環境（たとえば、ｐＨ）に基づいたプロトン化の状態に関係なく、包含することを意図する。
【０１１４】
本明細書において使用される場合、「連結された」または「コンジュゲートされた」という用語は、２つの化合物または分子の間の接続に言及している場合、２つの化合物または分子が、共有結合によって結合されていることを意味する。示されない限り、「連結された」および「コンジュゲートされた」という用語は、本明細書において使用される場合、任意の介在原子または原子の群を伴うかまたは伴わないかのいずれかの、第１の化合物と第２の化合物との間の接続を指し得る。
【０１１５】
本明細書において使用される場合、「含む」という用語は、「含むが、限定されない」という語句を意味して本明細書に使用され、また、それと互換可能に使用される。「または」という用語は、内容により別途明確に示されない限り、「および／または」という用語を意味して本明細書に使用され、また、それと互換可能に使用される。
【０１１６】
別途定義されない限り、本明細書において使用されるすべての技術用語および科学用語は、当業者によって広く理解されているものと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものに類似またはそれと同等の方法および材料を、本発明の実施または試験において使用することができるが、好適な方法および材料が、以下に記載されている。本明細書に記載されるすべての刊行物、特許出願、特許、および他の参考文献は、参照によりその全体が組み込まれる。矛盾が生じた場合には、定義を含め、本明細書が優先される。加えて、材料、方法、および実施例は、例示に過ぎず、限定することを意図するものではない。
ＲＮＡｉ剤
【０１１７】
ＡＳＧＲ１遺伝子の発現を阻害するためのＲＮＡｉ剤（本明細書において、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤またはＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉトリガーと称される）が、本明細書に記載される。それぞれのＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含む。センス鎖およびアンチセンス鎖は、それぞれ、１６〜３０ヌクレオチド長であり得る。一部の実施形態では、センス鎖およびアンチセンス鎖は、それぞれ、１７〜２６個のヌクレオチドの長さであり得る。センス鎖およびアンチセンス鎖は、同じ長さであってもよく、またはそれらは異なる長さであってもよい。一部の実施形態では、センス鎖およびアンチセンス鎖は、それぞれ、独立して、１７〜２１個のヌクレオチドの長さである。一部の実施形態では、センス鎖およびアンチセンス鎖は、それぞれ、２１〜２６個のヌクレオチドの長さである。一部の実施形態では、センス鎖は、約１９個のヌクレオチドの長さであり、一方でアンチセンス鎖は、約２１個のヌクレオチドの長さである。一部の実施形態では、センス鎖は、約２１個のヌクレオチドの長さであり、一方でアンチセンス鎖は、約２３個のヌクレオチドの長さである。一部の実施形態では、センス鎖は、２３個のヌクレオチドの長さであり、アンチセンス鎖は、２１個のヌクレオチドの長さである。一部の実施形態では、センス鎖およびアンチセンス鎖の両方は、それぞれ、２１個のヌクレオチドの長さである。一部の実施形態では、センス鎖およびアンチセンス鎖の両方は、それぞれ、２６個のヌクレオチドの長さである。一部の実施形態では、センス鎖は、２２個のヌクレオチドの長さであり、アンチセンス鎖は、２１個のヌクレオチドの長さである。一部の実施形態では、センス鎖は、１９個のヌクレオチドの長さであり、アンチセンス鎖は、２１個のヌクレオチドの長さである。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖およびアンチセンス鎖は、それぞれ、独立して、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、または２６個のヌクレオチドの長さである。
【０１１８】
一部の実施形態では、二本鎖ＲＮＡｉ剤は、約１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４個のヌクレオチドの二重鎖長を有する。センス鎖とアンチセンス鎖との間の完全または実質的な相補性のこの領域は、典型的に、１５〜２６個（たとえば、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、または２６個）のヌクレオチドの長さであり、アンチセンス鎖の５’末端またはその近傍に生じる（たとえば、この領域は、完全または実質的に相補的ではないヌクレオチド０、１、２、３、または４個分、アンチセンス鎖の５’末端から離れていてもよい）。
【０１１９】
センス鎖およびアンチセンス鎖は、それぞれ、１６〜２３個の核酸塩基の長さであるコアストレッチ配列を含む。アンチセンス鎖のコアストレッチ配列は、ＡＳＧＲ１  ｍＲＮＡ標的に存在するヌクレオチド配列（しばしば、たとえば、標的配列と称される）に対して、１００％（完全に）相補的であるか、または少なくとも約８５％（実質的に）相補的である。センス鎖のコアストレッチ配列は、アンチセンス鎖のコアストレッチ配列に対して、１００％（完全に）相補的であるか、または少なくとも約８５％（実質的に）相補的であり、したがって、センス鎖のコアストレッチ配列は、ＡＳＧＲ１  ｍＲＮＡ標的に存在するヌクレオチド配列（標的配列）に完全に同一であるかまたは少なくとも約８５％同一である。センス鎖のコアストレッチ配列は、対応するアンチセンスのコア配列と同じ長さであってもよく、または異なる長さであってもよい。一部の実施形態では、アンチセンス鎖のコアストレッチ配列は、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、または２３個のヌクレオチドの長さである。一部の実施形態では、センス鎖のコアストレッチ配列は、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、または２３個のヌクレオチドの長さである。
【０１２０】
ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を形成するのに使用されるセンス鎖およびアンチセンス鎖のヌクレオチド配列の例は、表２、３、および４に提供される。表３および４内のセンス鎖およびアンチセンス鎖の配列を含む、ＲＮＡｉ剤の二重鎖の例は、表５に示されている。
【０１２１】
ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖およびアンチセンス鎖が、アニーリングして、二重鎖が形成される。ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖およびアンチセンス鎖は、互いに、部分的に、実質的に、または完全に相補的であり得る。相補的な二重鎖領域内において、センス鎖のコアストレッチ配列は、アンチセンスのコアストレッチ配列に対して少なくとも８５％相補的であるかまたは１００％相補的である。一部の実施形態では、センス鎖のコアストレッチ配列は、アンチセンス鎖のコアストレッチ配列の対応する１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、または２３個のヌクレオチドの配列に対して、少なくとも８５％または１００％相補的である少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、または少なくとも２３個のヌクレオチドの配列を含む（すなわち、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のセンスおよびアンチセンスのコアストレッチ配列は、少なくとも８５％が塩基対合しているかまたは１００％が塩基対合している少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、または少なくとも２３個のヌクレオチドの領域を有する）。
【０１２２】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表２または表３のアンチセンス鎖配列のうちのいずれかと０、１、２、または３個のヌクレオチドが異なる。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、表２または表４のセンス鎖配列のうちのいずれかと０、１、２、または３個のヌクレオチドが異なる。
【０１２３】
センス鎖および／またはアンチセンス鎖は、必要に応じてかつ独立して、コアストレッチ配列の３’末端、５’末端、または３’末端および５’末端の両方に、追加の１、２、３、４、５、または６個のヌクレオチド（伸長）を含み得る。アンチセンス鎖の追加のヌクレオチドは、存在する場合、ＡＳＧＲ１  ｍＲＮＡにおける対応する配列に対して相補的であってもよく、または相補的でなくてもよい。センス鎖の追加のヌクレオチドは、存在する場合、ＡＳＧＲ１  ｍＲＮＡにおける対応する配列と同一であってもよく、または同一でなくてもよい。アンチセンス鎖の追加のヌクレオチドは、存在する場合、対応するセンス鎖の追加のヌクレオチドが存在する場合にはそれに対して相補的であってもよく、または相補的でなくてもよい。
【０１２４】
本明細書において使用される場合、伸長は、センス鎖のコアストレッチ配列および／またはアンチセンス鎖のコアストレッチ配列の５’末端および／または３’末端における１、２、３、４、５、または６個のヌクレオチドを含む。センス鎖における伸長ヌクレオチドは、対応するアンチセンス鎖における、コアストレッチ配列のヌクレオチドまたは伸長ヌクレオチドのいずれかのヌクレオチドに対して相補的であってもよく、または相補的でなくてもよい。逆に、アンチセンス鎖における伸長ヌクレオチドは、対応するセンス鎖における、コアストレッチヌクレオチドまたは伸長ヌクレオチドのいずれかのヌクレオチドに対して相補的であってもよく、または相補的でなくてもよい。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖およびアンチセンス鎖の両方が、３’および５’伸長を含む。一部の実施形態では、一方の鎖の３’伸長ヌクレオチドのうちの１つまたは複数は、他方の鎖の１つまたは複数の５’伸長ヌクレオチドと塩基対合する。他の実施形態では、一方の鎖の３’伸長ヌクレオチドのうちの１つまたは複数は、他方の鎖の１つまたは複数の５’伸長ヌクレオチドと塩基対合しない。一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、３’伸長を有するアンチセンス鎖および５’伸長を有するセンス鎖を有する。
【０１２５】
一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、１、２、３、４、５、または６個のヌクレオチドの長さの３’伸長を有するアンチセンス鎖を含む。他の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、１、２、または３個のヌクレオチドの長さの３’伸長を有するアンチセンス鎖を含む。一部の実施形態では、アンチセンス鎖の伸長ヌクレオチドのうちの１つまたは複数は、ウラシルもしくはチミジンヌクレオチド、または対応するＡＳＧＲ１  ｍＲＮＡ配列に対して相補的であるヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、３’アンチセンス鎖伸長は、限定されないが、以下の配列のうちの１つを含むかまたはそれからなる：ＡＵＡ、ＵＧＣＵＵ、ＣＵＧ、ＵＧ、ＵＧＣＣ、ＣＵＧＣＣ、ＣＧＵ、ＣＵＵ、ＵＧＣＣＵＡ、ＣＵＧＣＣＵ、ＵＧＣＣＵ、ＵＧＡＵＵ、ＧＣＣＵＡＵ、Ｔ、ＴＴ、Ｕ、ＵＵ（それぞれ、５’から３’で列挙されている）。
【０１２６】
一部の実施形態では、アンチセンス鎖の３’末端は、追加の脱塩基残基または部位（Ａｂ）を含み得る。「脱塩基残基」または「脱塩基部位」は、糖の１’位における核酸塩基が欠如したヌクレオチドまたはヌクレオシドである。一部の実施形態では、ＡｂまたはＡｂＡｂが、アンチセンス鎖の３’末端に付加され得る。一部の実施形態では、脱塩基残基は、逆位脱塩基残基として付加されてもよい（表６を参照されたい）。（たとえば、F.  Czauderna,  Nucleic  Acids  Res.,  2003,  31(11),  2705-16を参照されたい）。
【０１２７】
一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、１、２、３、４、または５個のヌクレオチドの長さの５’伸長を有するアンチセンス鎖を含む。他の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、１または２個のヌクレオチドの長さの５’伸長を有するアンチセンス鎖を含む。一部の実施形態では、アンチセンス鎖の伸長ヌクレオチドのうちの１つまたは複数は、ウラシルもしくはチミジンヌクレオチド、または対応するＡＳＧＲ１  ｍＲＮＡ配列に対して相補的であるヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、５’アンチセンス鎖伸長は、限定されないが、以下の配列のうちの１つを含むかまたはそれからなる：ＵＡ、ＴＵ、Ｕ、Ｔ、ＵＵ、ＴＴ、ＣＵＣ（それぞれ、５’から３’で列挙されている）。アンチセンス鎖は、上述の３’伸長のうちのいずれかを、記載される５’アンチセンス鎖伸長が存在する場合はそれらのうちのいずれかと組み合わせて有してもよい。
【０１２８】
一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、１、２、３、４、または５個のヌクレオチドの長さの３’伸長を有するセンス鎖を含む。一部の実施形態では、センス鎖の伸長ヌクレオチドのうちの１つまたは複数は、アデノシン、ウラシル、もしくはチミジンヌクレオチド、ＡＴジヌクレオチド、またはＡＳＧＲ１  ｍＲＮＡ配列内のヌクレオチドに対応するヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、３’センス鎖伸長は、限定されないが、以下の配列のうちの１つを含むかまたはそれからなる：Ｔ、ＵＴ、ＴＴ、ＵＵ、ＵＵＴ、ＴＴＴ、またはＴＴＴＴ（それぞれ、５’から３’で列挙されている）。
【０１２９】
一部の実施形態では、センス鎖の３’末端は、追加の脱塩基残基を含み得る。一部の実施形態では、ＵＵＡｂ、ＵＡｂ、またはＡｂは、センス鎖の３’末端に付加され得る。一部の実施形態では、センス鎖の３’末端に付加される１つまたは複数の脱塩基残基は、逆位であってもよい（ｉｎｖＡｂ）。一部の実施形態では、１つまたは複数の逆位脱塩基残基は、標的化リガンドとＲＮＡｉ剤のセンス鎖の核酸塩基配列との間に挿入され得る。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の一方または両方の末端またはその近傍に１つまたは複数の逆位脱塩基残基を含むことにより、ＲＮＡｉ剤の活性または他の所望される特性の増強が可能となり得る。
【０１３０】
一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、１、２、３、４、５、または６個のヌクレオチドの長さの５’伸長を有するセンス鎖を含む。一部の実施形態では、センス鎖の伸長ヌクレオチドのうちの１つまたは複数は、ウラシルもしくはアデノシンヌクレオチド、またはＡＳＧＲ１  ｍＲＮＡ配列内のヌクレオチドに対応するヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、センス鎖５’伸長は、限定されないが、以下の配列のうちの１つであり得る：ＣＡ、ＡＵＡＧＧＣ、ＡＵＡＧＧ、ＡＵＡＧ、ＡＵＡ、Ａ、ＡＡ、ＡＣ、ＧＣＡ、ＧＧＣＡ、ＧＧＣ、ＵＡＵＣＡ、ＵＡＵＣ、ＵＣＡ、ＵＡＵ、Ｕ、ＵＵ（それぞれ、５’から３’で列挙されている）。センス鎖は、３’伸長および／または５’伸長を有し得る。
【０１３１】
一部の実施形態では、センス鎖の５’末端は、１つまたは複数の追加の脱塩基残基（たとえば、（Ａｂ）または（ＡｂＡｂ））を含み得る。一部の実施形態では、センス鎖の５’末端に付加される１つまたは複数の脱塩基残基は、逆位であってもよい（たとえば、ｉｎｖＡｂ）。一部の実施形態では、１つまたは複数の逆位脱塩基残基は、標的化リガンドとＲＮＡｉ剤のセンス鎖の核酸塩基配列との間に挿入され得る。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の一方または両方の末端またはその近傍に１つまたは複数の逆位脱塩基残基を含むことにより、ＲＮＡｉ剤の活性または他の所望される特性の増強が可能となり得る。
【０１３２】
一部の実施形態では、センス鎖のコアストレッチ配列の３’末端またはセンス鎖配列の３’末端は、逆位脱塩基残基（ｉｎｖＡｂ（表６を参照されたい））を含み得る。一部の実施形態では、センスコアストレッチの５’末端、またはセンス鎖配列の５’末端は、逆位脱塩基部位または残基を含み得る。一部の実施形態では、センス鎖のコアストレッチ配列の３’末端および５’末端の両方が、逆位脱塩基残基を含み得る。一部の実施形態では、センス鎖配列の３’末端および５’末端の両方が、逆位脱塩基残基を含み得る。
【０１３３】
一部の実施形態では、アンチセンス鎖のコアストレッチ配列の３’末端またはアンチセンス鎖配列の３’末端は、逆位脱塩基残基（ｉｎｖＡｂ（表６を参照されたい））を含み得る。一部の実施形態では、アンチセンスコアストレッチの５’末端、またはアンチセンス鎖配列の５’末端は、逆位脱塩基部位または残基を含み得る。一部の実施形態では、アンチセンス鎖のコアストレッチ配列の３’末端および５’末端の両方が、逆位脱塩基残基を含み得る。一部の実施形態では、アンチセンス鎖配列の３’末端および５’末端の両方が、逆位脱塩基残基を含み得る。
【０１３４】
ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を形成するのに使用される配列の例は、表２、３、および４に提供される。一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表２または３内の配列のうちのいずれかの配列を含む。一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表２または３内の配列のうちのいずれかのヌクレオチド１〜１７、２〜１５、２〜１７、１〜１８、２〜１８、１〜１９、２〜１９、１〜２０、２〜２０、１〜２１、２〜２１、１〜２２、２〜２２、１〜２３、２〜２３、１〜２４、２〜２４、１〜２５、２〜２５、１〜２６、または２〜２６の配列を含む。ある特定の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表３内の修飾された配列のうちのいずれか１つの修飾された配列を含むかまたはそれからなる。一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、表２または４内の配列のうちのいずれかの配列を含む。一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、表２または４内の配列のうちのいずれかのヌクレオチド１〜１８、１〜１９、１〜２０、１〜２１、１〜２２、１〜２３、１〜２４、１〜２５、１〜２６、２〜１９、２〜２０、２〜２１、２〜２２、２〜２３、２〜２４、２〜２５、２〜２６、３〜２０、３〜２１、３〜２２、３〜２３、３〜２４、３〜２５、３〜２６、４〜２１、４〜２２、４〜２３、４〜２４、４〜２５、４〜２６、５〜２２、５〜２３、５〜２４、５〜２５、５〜２６、６〜２３、６〜２４、６〜２５、６〜２６、７〜２４、７〜２５、７〜２５、８〜２５、８〜２６の配列を含む。ある特定の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、表４内の修飾された配列のうちのいずれか１つの修飾された配列を含むかまたはそれからなる。
【０１３５】
一部の実施形態では、本明細書に記載されるＲＮＡｉ剤のセンス鎖およびアンチセンス鎖は、同じ数のヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるＲＮＡｉ剤のセンス鎖およびアンチセンス鎖は、異なる数のヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の５’末端およびアンチセンス鎖の３’末端は、平滑末端を形成する。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の３’末端およびアンチセンス鎖の５’末端は、平滑末端を形成する。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤の両端は、平滑末端を形成する。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤のいずれの末端も、平滑末端ではない。本明細書において使用される場合、平滑末端は、２つのアニーリングされた鎖の末端のヌクレオチドが相補的である（相補的な塩基対を形成する）、二本鎖ＲＮＡｉ剤の末端を指す。
【０１３６】
一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の５’末端およびアンチセンス鎖の３’末端は、ほつれ末端（frayed  end）を形成する。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の３’末端およびアンチセンス鎖の５’末端は、ほつれ末端を形成する。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤の両端は、ほつれ末端を形成する。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤のいずれの末端も、ほつれ末端ではない。本明細書において使用される場合、ほつれ末端は、２つのアニーリングされた鎖の末端のヌクレオチドが対を形成する（すなわち、オーバーハングを形成しない）が、相補的ではない（すなわち、非相補的な対を形成する）、二本鎖ＲＮＡｉ剤の末端を指す。本明細書において使用される場合、オーバーハングは、二本鎖ＲＮＡｉ剤の一方の鎖の末端における１つまたは複数の対合していないヌクレオチドのストレッチである。対合していないヌクレオチドは、センス鎖にあってもアンチセンス鎖にあってもよく、３’オーバーハングまたは５’オーバーハングのいずれかをもたらす。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤は、平滑末端およびほつれ末端、平滑末端および５’オーバーハング末端、平滑末端および３’オーバーハング末端、ほつれ末端および５’オーバーハング末端、ほつれ末端および３’オーバーハング末端、２つの５’オーバーハング末端、２つの３’オーバーハング末端、５’オーバーハング末端および３’オーバーハング末端、２つのほつれ末端、または２つの平滑末端を含む。
【０１３７】
ヌクレオチド塩基（または核酸塩基）は、すべての核酸の構成要素である複素環式ピリミジンまたはプリン化合物であり、これには、アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）、シトシン（Ｃ）、チミン（Ｔ）、およびウラシル（Ｕ）が含まれる。本明細書において使用される場合、「ヌクレオチド」という用語は、修飾されたヌクレオチド（たとえば、ヌクレオチド模倣体、脱塩基部位もしくは残基（Ａｂ）、または代理置換え部分など）を含み得る。修飾されたヌクレオチドは、様々なポリヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド構築物において使用される場合、細胞における化合物の活性を保存し、同時に、これらの化合物の血清安定性を増加させることができ、さらに、ポリヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド構築物を投与したときにヒトにおいてインターフェロン活性を作動させる可能性を最小限に抑えることができる。
【０１３８】
一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、塩、混合塩、または遊離酸として調製または提供される。一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ナトリウム塩として調製される。そのような形態は、本明細書に開示される発明の範囲内である。
【０１３９】
修飾されたヌクレオチド
一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、１つまたは複数の修飾されたヌクレオチドを含む。本明細書において使用される場合、「修飾されたヌクレオチド」は、リボヌクレオチド（２’−ヒドロキシルヌクレオチド）以外のヌクレオチドである。一部の実施形態では、ヌクレオチドのうちの少なくとも５０％（たとえば、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）が、修飾されたヌクレオチドである。本明細書において使用される場合、修飾されたヌクレオチドとしては、デオキシリボヌクレオチド、ヌクレオチド模倣体、脱塩基ヌクレオチド（本明細書においてＡｂとして表される）、２’−修飾ヌクレオチド、３’と３’との連結（逆位）ヌクレオチド（本明細書において、ｉｎｖｄＮ、ｉｎｖＮ、ｉｎｖｎ、ｉｎｖＡｂとして表される）、修飾された核酸塩基を含むヌクレオチド、架橋ヌクレオチド、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、２’，３’−セコヌクレオチド模倣体（アンロックド核酸塩基類似体（unlocked  nucleobase  analogue）、本明細書においてＮＵＮＡまたはＮＵＮＡとして表される）、ロックドヌクレオチド（本明細書においてＮＬＮＡまたはＮＬＮＡとして表される）、３’−Ｏ−メトキシ（２’ヌクレオシド間連結）ヌクレオチド（本明細書において３’−ＯＭｅｎとして表される）、２’−Ｆ−アラビノヌクレオチド（本明細書においてＮｆＡＮＡまたはＮｆＡＮＡとして表される）、５’−Ｍｅ，２’−フルオロヌクレオチド（本明細書において５Ｍｅ−Ｎｆとして表される）、モルホリノヌクレオチド、ビニルホスホネートデオキシリボヌクレオチド（本明細書においてｖｐｄＮとして表される）、ビニルホスホネート含有ヌクレオチド、ならびにシクロプロピルホスホネート含有ヌクレオチド（ｃＰｒｐＮ）が挙げられるが、これらに限定されない。２’−修飾ヌクレオチド（すなわち、５員の糖環の２’位にヒドロキシル基以外の基を有するヌクレオチド）としては、２’−Ｏ−メチルヌクレオチド（本明細書では、ヌクレオチド配列において小文字の「ｎ」として表される）、２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチド（本明細書においてＮｆとして表され、また本明細書において２’−フルオロヌクレオチドとしても表される）、２’−デオキシヌクレオチド（本明細書においてｄＮとして表される）、２’−メトキシエチル（２’−Ｏ−２−メトキシエチル）ヌクレオチド（本明細書においてＮＭまたは２’−ＭＯＥとして表される）、２’−アミノヌクレオチド、および２’−アルキルヌクレオチドが挙げられるが、これらに限定されない。所与の化合物におけるすべての位置が、均一に修飾されている必要はない。逆に、１つを上回る修飾が、単一のＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤に組み込まれていてもよく、またはさらにはその単一のヌクレオチドに組み込まれていてもよい。ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖およびアンチセンス鎖は、当該技術分野において公知の方法によって合成および／または修飾され得る。１つのヌクレオチドにおける修飾は、別のヌクレオチドにおける修飾とは独立している。
【０１４０】
修飾された核酸塩基としては、合成および天然の核酸塩基が含まれ、たとえば、５−置換ピリミジン、６−アザピリミジン、ならびにＮ−２、Ｎ−６、およびＯ−６置換プリン、（たとえば、２−アミノプロピルアデニン、５−プロピニルウラシル、または５−プロピニルシトシン）、５−メチルシトシン（５−ｍｅ−Ｃ）、５−ヒドロキシメチルシトシン、イノシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、アデニンおよびグアニンの６−アルキル（たとえば、６−メチル、６−エチル、６−イソプロピル、または６−ｎ−ブチル）誘導体、アデニンおよびグアニンの２−アルキル（たとえば、２−メチル、２−エチル、２−イソプロピル、または２−ｎ−ブチル）および他のアルキル誘導体、２−チオウラシル、２−チオチミン、２−チオシトシン、５−ハロウラシル、シトシン、５−プロピニルウラシル、５−プロピニルシトシン、６−アゾウラシル、６−アゾシトシン、６−アゾチミン、５−ウラシル（シュードウラシル）、４−チオウラシル、８−ハロ、８−アミノ、８−スルフヒドリル、８−チオアルキル、８−ヒドロキシル、および他の８−置換アデニンおよびグアニン、５−ハロ（たとえば、５−ブロモ）、５−トリフルオロメチル、および他の５−置換ウラシルおよびシトシン、７−メチルグアニンおよび７−メチルアデニン、８−アザグアニンおよび８−アザアデニン、７−デアザグアニン、７−デアザアデニン、３−デアザグアニン、ならびに３−デアザアデニンが挙げられる。
【０１４１】
一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤のヌクレオチドのすべてまたは実質的にすべては、修飾されたヌクレオチドである。本明細書において使用される場合、存在するヌクレオチドのうちの実質的にすべてが修飾されたヌクレオチドであるＲＮＡｉ剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖の両方における４個またはそれを下回る（すなわち、０、１、２、３、または４個の）ヌクレオチドがリボヌクレオチドである、ＲＮＡｉ剤である。本明細書において使用される場合、存在するヌクレオチドのうちの実質的にすべてが修飾されたヌクレオチドであるセンス鎖は、センス鎖における２個またはそれを下回る（すなわち、０、１、または２個の）ヌクレオチドがリボヌクレオチドである、センス鎖である。本明細書において使用される場合、存在するヌクレオチドのうちの実質的にすべてが修飾されたヌクレオチドであるアンチセンスセンス鎖は、センス鎖における２個またはそれを下回る（すなわち、０、１、または２個の）ヌクレオチドがリボヌクレオチドである、アンチセンス鎖である。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤の１つまたは複数のヌクレオチドは、リボヌクレオチドである。
【０１４２】
修飾されたヌクレオシド間連結
一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤の１つまたは複数のヌクレオチドは、非標準的な連結または骨格（すなわち、修飾されたヌクレオシド間連結または修飾された骨格）によって連結されている。修飾されたヌクレオシド間連結または骨格としては、限定されないが、ホスホロチオエート基（本明細書において小文字の「ｓ」として表される）、キラルホスホロチオエート、チオホスフェート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキル−ホスホトリエステル、アルキルホスホネート（たとえば、メチルホスホネートまたは３’−アルキレンホスホネート）、キラルホスホネート、ホスフィネート、ホスホロアミデート（たとえば、３’−アミノホスホロアミデート、アミノアルキルホスホロアミデート、またはチオノホスホロアミデート）、チオノアルキル−ホスホネート、チオノアルキルホスホトリエステル、モルホリノ連結、ノルマル３’−５’連結を有するボラノホスフェート、ボラノホスフェートの２’−５’連結類似体、またはヌクレオシド単位の隣接する対が３’−５’と５’−３’または２’−５’と５’−２’で連結されている極性反転を有するボラノホスフェートが挙げられる。
【０１４３】
一部の実施形態では、修飾されたヌクレオシド間連結または骨格は、リン原子が欠如している。リン原子が欠如している修飾されたヌクレオシド間連結としては、短鎖アルキルもしくはシクロアルキル糖間連結、混合ヘテロ原子およびアルキルもしくはシクロアルキル糖間連結、または１つもしくは複数の短鎖ヘテロ原子もしくは複素環式糖間連結が挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、修飾されたヌクレオシド間骨格としては、シロキサン骨格、スルフィド骨格、スルホキシド骨格、スルホン骨格、ホルムアセチルおよびチオホルムアセチル骨格、メチレンホルムアセチルおよびチオホルムアセチル骨格、アルケン含有骨格、スルファメート骨格、メチレンイミノおよびメチレンヒドラジノ骨格、スルホネートおよびスルホンアミド骨格、アミド骨格、ならびにＮ、Ｏ、Ｓ、およびＣＨ２成分の混合を有する他の骨格が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１４４】
一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖が、１、２、３、４、５、もしくは６つのホスホロチオエート連結を含み得、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖が、１、２、３、４、５、もしくは６つのホスホロチオエート連結を含み得るか、またはセンス鎖およびアンチセンス鎖の両方が、独立して、１、２、３、４、５、もしくは６つのホスホロチオエート連結を含んでもよい。一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖が、１、２、３、もしくは４つのホスホロチオエート連結を含み得、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖が、１、２、３、もしくは４つのホスホロチオエート連結を含み得るか、またはセンス鎖およびアンチセンス鎖の両方が、独立して、１、２、３、もしくは４つのホスホロチオエート連結を含んでもよい。
【０１４５】
一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、少なくとも２つのホスホロチオエートヌクレオシド間連結を含む。一部の実施形態では、少なくとも２つのホスホロチオエートヌクレオシド間連結は、センス鎖の３’末端から１〜３位のヌクレオチドの間にある。一部の実施形態では、少なくとも２つのホスホロチオエートヌクレオシド間連結は、センス鎖の５’末端から１〜３位、２〜４位、３〜５位、４〜６位、４〜５位、または６〜８位のヌクレオチドの間にある。一部の実施形態では、一方のホスホロチオエートヌクレオシド間連結は、センス鎖の５’末端にあり、もう一方のホスホロチオエート連結は、センス鎖の３’末端にある。一部の実施形態では、２つのホスホロチオエートヌクレオシド間連結は、センス鎖の５’末端に位置しており、別のホスホロチオエート連結は、センス鎖の３’末端にある。一部の実施形態では、センス鎖は、ヌクレオチドの間にいずれのホスホロチオエートヌクレオシド間連結も含まないが、５’末端および３’末端の両方の末端のヌクレオチドの間に１、２、または３つのホスホロチオエート連結を含み、必要に応じて、逆位脱塩基残基末端キャップを示す。一部の実施形態では、標的化リガンドが、ホスホロチオエート連結を介してセンス鎖に連結されている。一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、４つのホスホロチオエートヌクレオシド間連結を含む。一部の実施形態では、４つのホスホロチオエートヌクレオシド間連結は、アンチセンス鎖の５’末端から１〜３位のヌクレオチドの間、ならびに５’末端から１９〜２１位、２０〜２２位、２１〜２３位、２２〜２４位、２３〜２５位、または２４〜２６位のヌクレオチドの間にある。一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、センス鎖に少なくとも２つのホスホロチオエートヌクレオシド間連結を含み、アンチセンス鎖に３または４つのホスホロチオエートヌクレオシド間連結を含む。
【０１４６】
一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、４つのホスホロチオエートヌクレオシド間連結を含む。一部の実施形態では、４つのホスホロチオエートヌクレオシド間連結は、アンチセンス鎖の５’末端から１〜３位のヌクレオチドの間、ならびに５’末端から１９〜２１位、２０〜２２位、２１〜２３位、２２〜２４位、２３〜２５位、または２４〜２６位のヌクレオチドの間にある。一部の実施形態では、３つのホスホロチオエートヌクレオシド間連結は、アンチセンス鎖の５’末端から１〜４位の間に位置しており、第４のホスホロチオエートヌクレオシド間連結は、アンチセンス鎖の５’末端から２０〜２１位の間に位置している。一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖に少なくとも３または４つのホスホロチオエートヌクレオシド間連結を含む。
【０１４７】
一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、１つまたは複数の修飾されたヌクレオチドおよび１つまたは複数の修飾されたヌクレオシド間連結を含む。一部の実施形態では、２’−修飾ヌクレオシドは、修飾されたヌクレオシド間連結と組み合わされる。
【０１４８】
ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、表１に示されるＡＳＧＲ１遺伝子の位置またはその近傍のＡＳＧＲ１遺伝子を標的とする。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表１に開示される標的ＡＳＧＲ１  １９量体配列に対して完全に、実質的に、または少なくとも部分的に相補的である、コアストレッチ配列を含む。
【表１−１】
2020537653.tif 000150
【表１−２】
2020537653.tif 000151
【０１４９】
一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖を含み、ここで、アンチセンス鎖の１９位（５’から３’）は、表１に開示される１９量体標的配列の１位と塩基対を形成することができる。一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖を含み、ここで、アンチセンス鎖の１位（５’から３’）は、表１に開示される１９量体標的配列の１９位と塩基対を形成することができる。
【０１５０】
一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖を含み、ここで、アンチセンス鎖の２位（５’から３’）は、表１に開示される１９量体標的配列の１８位と塩基対を形成することができる。一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖を含み、ここで、アンチセンス鎖の２位から１８位（５’から３’）は、表１に開示される１９量体標的配列の１８位から２位に位置するそれぞれの相補的な塩基のそれぞれと塩基対を形成することができる。
【０１５１】
本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤について、アンチセンス鎖の１位（５’末端から３’末端）のヌクレオチドは、ＡＳＧＲ１遺伝子に対して完全に相補的であってもよく、またはＡＳＧＲ１遺伝子に対して非相補的であってもよい。一部の実施形態では、アンチセンス鎖の１位（５’末端から３’末端）のヌクレオチドは、Ｕ、Ａ、またはｄＴ（またはその修飾されたバージョン）である。一部の実施形態では、アンチセンス鎖の１位（５’末端から３’末端）のヌクレオチドは、センス鎖とＡ：ＵまたはＵ：Ａの塩基対を形成する。
【０１５２】
一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表２または表３内のアンチセンス鎖配列のうちのいずれかのヌクレオチド（５’末端から３’末端）２〜１８または２〜１９の配列を含む。一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉのセンス鎖は、表２または表４内のセンス鎖配列のうちのいずれかのヌクレオチド（５’末端から３’末端）１〜１７、１〜１８、または２〜１８の配列を含む。
【０１５３】
一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、（ｉ）表２または表３内のアンチセンス鎖配列のうちのいずれかのヌクレオチド（５’末端から３’末端）２〜１８または２〜１９の配列を含むアンチセンス鎖と、（ｉｉ）表２または表４内のセンス鎖配列のうちのいずれかのヌクレオチド（５’末端から３’末端）１〜１７、１〜１８、または２〜１８の配列を含むセンス鎖とから構成される。
【０１５４】
一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、以下の表２に示されているセンス鎖、アンチセンス鎖、またはセンス鎖およびアンチセンス鎖の両方におけるコア１９量体ヌクレオチド配列を含む。
【表２−１】
2020537653.tif 000152
【表２−２】
2020537653.tif 000153
【表２−３】
2020537653.tif 000154
【表２−４】
2020537653.tif 000155
【表２−５】
2020537653.tif 000156
【表２−６】
2020537653.tif 000157
【表２−７】
2020537653.tif 000158
【０１５５】
表２内のヌクレオチド配列を含むかまたはそれからなるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖およびアンチセンス鎖は、修飾されたヌクレオチドであってもよく、または修飾されていないヌクレオチドであってもよい。一部の実施形態では、表２内のヌクレオチド配列を含むかまたはそれからなるセンス鎖およびアンチセンス鎖配列を有するＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、すべてまたは実質的にすべてが修飾されたヌクレオチドである。
【０１５６】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表２内のアンチセンス鎖配列のうちのいずれかと０、１、２、または３個のヌクレオチドが異なる。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、表２内のセンス鎖配列のうちのいずれかと０、１、２、または３個のヌクレオチドが異なる。
【０１５７】
本明細書において使用される場合、表２に開示される配列において列挙されているそれぞれのＮは、独立して、ありとあらゆる核酸塩基（修飾されたヌクレオチドおよび修飾されていないヌクレオチドの両方に見出されるものを含む）から選択され得る。一部の実施形態では、表２に開示される配列において列挙されているＮヌクレオチドは、他方の鎖の対応する位置にあるＮヌクレオチドに対して相補的である核酸塩基を有する。一部の実施形態では、表２に開示される配列において列挙されているＮヌクレオチドは、他方の鎖の対応する位置にあるＮヌクレオチドに対して相補的でない核酸塩基を有する。一部の実施形態では、表２に開示される配列において列挙されているＮヌクレオチドは、他方の鎖の対応する位置にあるＮヌクレオチドと同じである核酸塩基を有する。一部の実施形態では、表２に開示される配列において列挙されているＮヌクレオチドは、他方の鎖の対応する位置にあるＮヌクレオチドと異なる核酸塩基を有する。
【０１５８】
ある特定の修飾されたＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖およびアンチセンス鎖は、表３および表４に提供される。ある特定の修飾されたＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖、ならびにそれらの根底にある修飾されていない核酸塩基配列は、表３に提供される。ある特定の修飾されたＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖、ならびにそれらの根底にある修飾されていない配列は、表４に提供される。ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を形成する際、表３および４、ならびに上述の表２に列挙されている修飾されていない配列のそれぞれにおけるヌクレオチドのそれぞれは、修飾されたヌクレオチドであってもよい。
【０１５９】
本明細書に記載されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖をセンス鎖とアニーリングすることによって形成される。表２または表４に列挙されている配列を含むセンス鎖を、表２または表３に列挙されている配列を含む任意のアンチセンス鎖とハイブリダイズさせることができるが、ただし、２つの配列が、連続した１６、１７、１８、１９、２０、または２１個のヌクレオチドの配列にわたる少なくとも８５％の相補性の領域を有することを条件とする。
【０１６０】
一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表２または表３内の配列のうちのいずれかのヌクレオチド配列を含む。
【０１６１】
一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、表２、表３、または表４内の配列のうちのいずれかのセンス鎖およびアンチセンス鎖の核酸塩基配列を有する二重鎖を含むかまたはそれからなる。
【０１６２】
修飾されたヌクレオチドを含むアンチセンス鎖の例は、表３に提供される。修飾されたヌクレオチドを含むセンス鎖の例は、表４に提供される。
【０１６３】
表３および４において使用される場合、修飾されたヌクレオチド、標的化基、および連結基を示すために、以下の表記が使用される。当業者であれば、配列によって別途示されない限り、オリゴヌクレオチドに存在する場合、モノマーは、５’−３’−ホスホジエステル結合によって相互に連結されていることを容易に理解するであろう。
Ａ＝アデノシン−３’−リン酸
Ｃ＝シチジン−３’−リン酸
Ｇ＝グアノシン−３’−リン酸
Ｕ＝ウリジン−３’−リン酸
Ｉ＝イノシン−３’−リン酸
ｎ＝任意の２’−Ｏ−メチル修飾ヌクレオチド
ａ＝２’−Ｏ−メチルアデノシン−３’−リン酸
ａｓ＝２’−Ｏ−メチルアデノシン−３’−ホスホロチオエート
ｃ＝２’−Ｏ−メチルシチジン−３’−リン酸
ｃｓ＝２’−Ｏ−メチルシチジン−３’−ホスホロチオエート
ｇ＝２’−Ｏ−メチルグアノシン−３’−リン酸
ｇｓ＝２’−Ｏ−メチルグアノシン−３’−ホスホロチオエート
ｔ＝２’−Ｏ−メチル−５−メチルウリジン−３’−リン酸
ｔｓ＝２’−Ｏ−メチル−５−メチルウリジン−３’−ホスホロチオエート
ｕ＝２’−Ｏ−メチルウリジン−３’−リン酸
ｕｓ＝２’−Ｏ−メチルウリジン−３’−ホスホロチオエート
ｉ＝２’−Ｏ−メチルイノシン−３’−リン酸
ｉｓ＝２’−Ｏ−メチルイノシン−３’−ホスホロチオエート
Ｎｆ＝任意の２’−フルオロ修飾ヌクレオチド
Ａｆ＝２’−フルオロアデノシン−３’−リン酸
Ａｆｓ＝２’−フルオロアデノシン−３’−ホスホロチオエート
Ｃｆ＝２’−フルオロシチジン−３’−リン酸
Ｃｆｓ＝２’−フルオロシチジン−３’−ホスホロチオエート
Ｇｆ＝２’−フルオログアノシン−３’−リン酸
Ｇｆｓ＝２’−フルオログアノシン−３’−ホスホロチオエート
Ｔｆ＝２’−フルオロ−５’−メチルウリジン−３’−リン酸
Ｔｆｓ＝２’−フルオロ−５’−メチルウリジン−３’−ホスホロチオエート
Ｕｆ＝２’−フルオロウリジン−３’−リン酸
Ｕｆｓ＝２’−フルオロウリジン−３’−ホスホロチオエート
ｄＮ＝任意の２’−デオキシリボヌクレオチド
ｄＡ＝２’−デオキシアデノシン−３’−リン酸
ｄＡｓ＝２’−デオキシアデノシン−３’−ホスホロチオエート
ｄＣ＝２’−デオキシシチジン−３’−リン酸
ｄＣｓ＝２’−デオキシシチジン−３’−ホスホロチオエート
ｄＧ＝２’−デオキシグアノシン−３’−リン酸
ｄＧｓ＝２’−デオキシグアノシン−３’−ホスホロチオエート
ｄＴ＝２’−デオキシチミジン−３’−リン酸
ｄＴｓ＝２’−デオキシチミジン−３’−ホスホロチオエート
ｄＵ＝２’−デオキシウリジン−３’−リン酸
ｄＵｓ＝２’−デオキシウリジン−３’−ホスホロチオエート
ＮＵＮＡ＝２’，３’−セコヌクレオチド模倣体（アンロックド核酸塩基類似体）−３’−リン酸
ＮＵＮＡｓ＝２’，３’−セコヌクレオチド模倣体（アンロックド核酸塩基類似体）−３’−ホスホロチオエート
ＡＵＮＡ＝２’，３’−セコ−アデノシン−３’−リン酸
ＡＵＮＡｓ＝２’，３’−セコ−アデノシン−３’−ホスホロチオエート
ＣＵＮＡ＝２’，３’−セコ−シチジン−３’−リン酸
ＣＵＮＡｓ＝２’，３’−セコ−シチジン−３’−ホスホロチオエート
ＧＵＮＡ＝２’，３’−セコ−グアノシン−３’−リン酸
ＧＵＮＡｓ＝２’，３’−セコ−グアノシン−３’−ホスホロチオエート
ＵＵＮＡ＝２’，３’−セコ−ウリジン−３’−リン酸
ＵＵＮＡｓ＝２’，３’−セコ−ウリジン−３’−ホスホロチオエート
ａ＿２Ｎ＝表６を参照されたい
ａ＿２Ｎｓ＝表６を参照されたい
ｐｕ＿２Ｎ＝表６を参照されたい
ｐｕ＿２Ｎｓ＝表６を参照されたい
ＮＬＮＡ＝ロックドヌクレオチド
ＮｆＡＮＡ＝２’−Ｆ−アラビノヌクレオチド
ＮＭ＝２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオチド
ＡＭ＝２’−Ｏ−メトキシエチルアデノシン−３’−リン酸
ＡＭｓ＝２’−Ｏ−メトキシエチルアデノシン−３’−ホスホロチオエート
ＴＭ＝２’−Ｏ−メトキシエチルチミジン−３’−リン酸
ＴＭｓ＝２’−Ｏ−メトキシエチルチミジン−３’−ホスホロチオエート
Ｒ＝リビトール
（ｉｎｖｄＮ）＝任意の逆位デオキシリボヌクレオチド（３’−３’連結ヌクレオチド）
（ｉｎｖＡｂ）＝逆位（３’−３’連結）脱塩基デオキシリボヌクレオチド、表６を参照されたい
（ｉｎｖＡｂ）ｓ＝逆位（３’−３’連結）脱塩基デオキシリボヌクレオチド−５’−ホスホロチオエート、表６を参照されたい
（ｉｎｖｎ）＝任意の逆位２’−ＯＭｅヌクレオチド（３’−３’連結ヌクレオチド）
ｓ＝ホスホロチオエート連結
ｓｐ＝表６を参照されたい
ｖｐｄＮ＝ビニルホスホネートデオキシリボヌクレオチド
（５Ｍｅ−Ｎｆ）＝５’−Ｍｅ，２’−フルオロヌクレオチド
ｃＰｒｐ＝シクロプロピルホスホネート、表６を参照されたい
ｅｐＴｃＰｒ＝表６を参照されたい
ｅｐＴＭ＝表６を参照されたい
【０１６４】
当業者であれば、配列によって（たとえば、ホスホロチオエート連結「ｓ」によってなど）別途示されない限り、オリゴヌクレオチドに存在する場合、ヌクレオチドモノマーは、５’−３’−ホスホジエステル結合によって相互に連結されていることを容易に理解するであろう。当業者であれば、本明細書に開示される修飾されたヌクレオチド配列に示されているホスホロチオエート連結を含めることで、オリゴヌクレオチドに典型的に存在しているホスホジエステル連結が置き換えられることを明確に理解するであろう（たとえば、すべてのヌクレオシド間連結を示している図１Ａから１Ｍを参照されたい）。さらに、当業者であれば、所与のオリゴヌクレオチド配列の３’末端における末端ヌクレオチドが、典型的に、ｅｘ  ｖｉｖｏにおけるリン酸部分の代わりに、所与のモノマーのそれぞれの３’位置にヒドロキシル（−ＯＨ）基を有することを容易に理解するであろう。さらに、当業者には容易に理解され認識されるように、本明細書に示されているホスホロチオエート化学構造は、典型的に、硫黄原子上のアニオンを示すが、本明細書に開示される発明は、すべてのホスホロチオエート互変異性体および／またはジアステレオマー（たとえば、硫黄原子が二重結合を有し、アニオンが酸素原子上にある場合）を包含する。本明細書において別途明示的に示されない限り、当業者のそのような理解は、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤およびＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤の組成物について説明する際に使用される。
【０１６５】
本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤とともに使用される標的化基および連結基のある特定の例は、以下の表６に提供される。より具体的には、標的化基および連結基は、以下のものを含み、それらの化学構造は、以下の表６に提供される。（ＮＡＧ１３）、（ＮＡＧ１３）ｓ、（ＮＡＧ１８）、（ＮＡＧ１８）ｓ、（ＮＡＧ２４）、（ＮＡＧ２４）ｓ、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ２６）、（ＮＡＧ２６）ｓ、（ＮＡＧ２７）、（ＮＡＧ２７）ｓ、（ＮＡＧ２８）、（ＮＡＧ２８）ｓ、（ＮＡＧ２９）、（ＮＡＧ２９）ｓ、（ＮＡＧ３０）、（ＮＡＧ３０）ｓ、（ＮＡＧ３１）、（ＮＡＧ３１）ｓ、（ＮＡＧ３２）、（ＮＡＧ３２）ｓ、（ＮＡＧ３３）、（ＮＡＧ３３）ｓ、（ＮＡＧ３４）、（ＮＡＧ３４）ｓ、（ＮＡＧ３５）、（ＮＡＧ３５）ｓ、（ＮＡＧ３６）、（ＮＡＧ３６）ｓ、（ＮＡＧ３７）、（ＮＡＧ３７）ｓ、（ＮＡＧ３８）、（ＮＡＧ３８）ｓ、（ＮＡＧ３９）、（ＮＡＧ３９）ｓ。それぞれのセンス鎖および／またはアンチセンス鎖は、配列の５’末端および／または３’末端にコンジュゲートされた、本明細書に列挙されている任意の標的化基または連結基、ならびに他の標的化基または連結基を有し得る。
【表３−１】
2020537653.tif 000159
【表３−２】
2020537653.tif 000160
【表３−３】
2020537653.tif 000161
【表３−４】
2020537653.tif 000162
【表３−５】
2020537653.tif 000163
【表３−６】
2020537653.tif 000164
【０１６６】
【表４−１】
2020537653.tif 000165
【表４−２】
2020537653.tif 000166
【表４−３】
2020537653.tif 000167
【表４−４】
2020537653.tif 000168
【表４−５】
2020537653.tif 000169
【表４−６】
2020537653.tif 000170
【表４−７】
2020537653.tif 000171
【０１６７】
本明細書に記載されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖をセンス鎖とアニーリングすることによって形成される。表２または表４に列挙されている配列を含むセンス鎖を、表２または表３に列挙されている配列を含む任意のアンチセンス鎖とハイブリダイズさせることができるが、ただし、２つの配列が、連続した１６、１７、１８、１９、２０、または２１個のヌクレオチドの配列にわたる少なくとも８５％の相補性の領域を有することを条件とする。
【０１６８】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表３内のアンチセンス鎖配列のうちのいずれかと０、１、２、または３個のヌクレオチドが異なる。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、表４内のセンス鎖配列のうちのいずれかと０、１、２、または３個のヌクレオチドが異なる。
【０１６９】
一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表２または表３内の配列のうちのいずれかのヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表２または表３内の配列のうちのいずれかのヌクレオチド（５’末端から３’末端）１〜１７、２〜１７、１〜１８、２〜１８、１〜１９、２〜１９、１〜２０、２〜２０、１〜２１、２〜２１、１〜２２、２〜２２、１〜２３、２〜２３、１〜２４、２〜２４、１〜２５、２〜２５、１〜２６、または２〜２６の配列を含む。ある特定の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表３内の修飾された配列のうちのいずれか１つの修飾された配列を含むかまたはそれからなる。
【０１７０】
一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、表２または表４内の配列のうちのいずれかのヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、表２または表４内の配列のうちのいずれかのヌクレオチド（５’末端から３’末端）１〜１７、２〜１７、３〜１７、４〜１７、１〜１８、２〜１８、３〜１８、４〜１８、１〜１９、２〜１９、３〜１９、４〜１９、１〜２０、２〜２０、３〜２０、４〜２０、１〜２１、２〜２１、３〜２１、４〜２１、１〜２２、２〜２２、３〜２２、４〜２２、１〜２３、２〜２３、３〜２３、４〜２３、１〜２４、２〜２４、３〜２４、４〜２４、１〜２５、２〜２５、３〜２５、４〜２５、１〜２６、２〜２６、３〜２６、または４〜２６の配列を含む。ある特定の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、表４内の修飾された配列のうちのいずれか１つの修飾された配列を含むかまたはそれからなる。
【０１７１】
本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤について、アンチセンス鎖の１位（５’末端から３’末端）のヌクレオチドは、ＡＳＧＲ１遺伝子に対して完全に相補的であってもよく、またはＡＳＧＲ１遺伝子に対して非相補的であってもよい。一部の実施形態では、アンチセンス鎖の１位（５’末端から３’末端）のヌクレオチドは、Ｕ、Ａ、またはｄＴ（またはその修飾されたバージョン）である。
【０１７２】
一部の実施形態では、アンチセンス鎖の１位（５’末端から３’末端）のヌクレオチドは、センス鎖とＡ：ＵまたはＵ：Ａの塩基対を形成する。
【０１７３】
一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表２または表３内のアンチセンス鎖配列のうちのいずれかのヌクレオチド（５’末端から３’末端）２〜１８または２〜１９の配列を含む。一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉのセンス鎖は、表２または表４内のセンス鎖配列のうちのいずれかのヌクレオチド（５’末端から３’末端）１〜１７または１〜１８の配列を含む。
【０１７４】
一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、（ｉ）表２または表３内のアンチセンス鎖配列のうちのいずれかのヌクレオチド（５’末端から３’末端）２〜１８または２〜１９の配列を含むアンチセンス鎖と、（ｉｉ）表２または表４内のセンス鎖配列のうちのいずれかのヌクレオチド（５’末端から３’末端）１〜１７または１〜１８の配列を含むセンス鎖とを含む。
【０１７５】
表２または表４に列挙されている配列を含むセンス鎖を、表２または表３に列挙されている配列を含む任意のアンチセンス鎖とハイブリダイズさせることができるが、ただし、２つの配列が、連続した１６、１７、１８、１９、２０、または２１個のヌクレオチドの配列にわたる少なくとも８５％の相補性の領域を有することを条件とする。一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、表４内の修飾された配列のうちのいずれかの修飾された配列からなるセンス鎖と、表３内の修飾された配列のうちのいずれかの修飾された配列からなるアンチセンス鎖とを有する。それぞれの配列の対合は、表５に示される二重鎖識別番号で例示されている。
【０１７６】
一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、本明細書に提示される二重鎖識別番号のうちのいずれかによって表される二重鎖のうちのいずれかを含む。一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、本明細書に提示される二重鎖識別番号のうちのいずれかによって表される二重鎖のうちのいずれかからなる。一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、本明細書に提示される二重鎖識別番号のうちのいずれかによって表される二重鎖のうちのいずれかのセンス鎖およびアンチセンス鎖のヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、本明細書に提示される二重鎖識別番号のうちのいずれかによって表される二重鎖のうちのいずれかのセンス鎖およびアンチセンス鎖のヌクレオチド配列、ならびに標的化基および／または連結基を含み、ここで、標的化基および／または連結基は、センス鎖またはアンチセンス鎖に共有結合により連結（すなわち、コンジュゲート）されている。一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、本明細書に提示される二重鎖識別番号のうちのいずれかによって表される二重鎖のうちのいずれかの修飾されたヌクレオチド配列を有するセンス鎖およびアンチセンス鎖を含む。一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、本明細書に提示される二重鎖識別番号のうちのいずれかによって表される二重鎖のうちのいずれかの修飾されたヌクレオチド配列を有するセンス鎖およびアンチセンス鎖、ならびに標的化基および／または連結基を含み、ここで、標的化基および／または連結基は、センス鎖またはアンチセンス鎖に共有結合により連結されている。
【０１７７】
一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、表２または表５のアンチセンス鎖／センス鎖二重鎖のうちのいずれかのヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖およびセンス鎖を含み、標的化基をさらに含む。一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、表２または表５のアンチセンス鎖／センス鎖二重鎖のうちのいずれかのヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖およびセンス鎖を含み、アシアロ糖タンパク質受容体リガンド標的化基をさらに含む。
【０１７８】
一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、表２または表５のアンチセンス鎖／センス鎖二重鎖のうちのいずれかのヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖およびセンス鎖を含み、それぞれ表６において定義されている、（ＰＡＺ）、（ＮＡＧ１３）、（ＮＡＧ１３）ｓ、（ＮＡＧ１８）、（ＮＡＧ１８）ｓ、（ＮＡＧ２４）、（ＮＡＧ２４）ｓ、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ２６）、（ＮＡＧ２６）ｓ、（ＮＡＧ２７）、（ＮＡＧ２７）ｓ、（ＮＡＧ２８）、（ＮＡＧ２８）ｓ、（ＮＡＧ２９）、（ＮＡＧ２９）ｓ、（ＮＡＧ３０）、（ＮＡＧ３０）ｓ、（ＮＡＧ３１）、（ＮＡＧ３１）ｓ、（ＮＡＧ３２）、（ＮＡＧ３２）ｓ、（ＮＡＧ３３）、（ＮＡＧ３３）ｓ、（ＮＡＧ３４）、（ＮＡＧ３４）ｓ、（ＮＡＧ３５）、（ＮＡＧ３５）ｓ、（ＮＡＧ３６）、（ＮＡＧ３６）ｓ、（ＮＡＧ３７）、（ＮＡＧ３７）ｓ、（ＮＡＧ３８）、（ＮＡＧ３８）ｓ、（ＮＡＧ３９）、（ＮＡＧ３９）ｓからなる群から選択される標的化基をさらに含む。一部の実施形態では、標的化基は、表６において定義される（ＮＡＧ２５）または（ＮＡＧ２５）ｓである。他の実施形態では、標的化基は、表６において定義される（ＮＡＧ３７）または（ＮＡＧ３７）ｓである。
【０１７９】
一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、表５の二重鎖のうちのいずれかのアンチセンス鎖および／またはセンス鎖ヌクレオチド配列のうちのいずれかの修飾されたヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖およびセンス鎖を含む。
【０１８０】
一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、表５の二重鎖のうちのいずれかのアンチセンス鎖および／またはセンス鎖ヌクレオチド配列のうちのいずれかの修飾されたヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖およびセンス鎖を含み、アシアロ糖タンパク質受容体リガンド標的化基を含む。
【０１８１】
一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、表２または表５の二重鎖のうちのいずれかを含む。ある特定の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ０５１２６、ＡＤ０５１５０、ＡＤ０５１８３、ＡＤ０５１８６、ＡＤ０５１９３、ＡＤ０５１９５、ＡＤ０５１９６、ＡＤ０５２０６、ＡＤ０５２０９、ＡＤ０５２５６、ＡＤ０５３７４、ＡＤ０５６０９、およびＡＤ０５６９２、またはそれらの塩からなる群から選択される二重鎖を含む。
【０１８２】
一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、表２または表５の二重鎖のうちのいずれかからなる。ある特定の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ０５１２６、ＡＤ０５１５０、ＡＤ０５１８３、ＡＤ０５１８６、ＡＤ０５１９３、ＡＤ０５１９５、ＡＤ０５１９６、ＡＤ０５２０６、ＡＤ０５２０９、ＡＤ０５２５６、ＡＤ０５３７４、ＡＤ０５６０９、およびＡＤ０５６９２、またはそれらの塩からなる群から選択される二重鎖からなる。
【表５−１】
2020537653.tif 000172
【表５−２】
2020537653.tif 000173
【表５−３】
2020537653.tif 000174
【０１８３】
一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、塩、混合塩、または遊離酸として調製または提供される。本明細書に記載されるＲＮＡｉ剤は、ＡＳＧＲ１遺伝子を発現する細胞に送達されると、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて１つまたは複数のＡＳＧＲ１遺伝子の発現を阻害またはノックダウンする。
【０１８４】
標的化基、連結基、および送達ビヒクル
一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、標的化基、連結基、送達ポリマー、または送達ビヒクルを含むがこれらに限定されない、１つまたは複数の非ヌクレオチド基にコンジュゲートされている。非ヌクレオチド基は、ＲＮＡｉ剤の標的化、送達、または結合を増強することができる。標的化基および連結基の例は、表６に提供される。非ヌクレオチド基は、センス鎖および／またはアンチセンス鎖のいずれかの３’末端および／または５’末端に、共有結合により連結され得る。一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、センス鎖の３’末端および／または５’末端に連結された非ヌクレオチド基を含む。一部の実施形態では、非ヌクレオチド基は、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の５’末端に連結されている。非ヌクレオチド基は、ＲＮＡｉ剤に直接的に連結されてもよく、またはリンカー／連結基を介して間接的に連結されてもよい。一部の実施形態では、非ヌクレオチド基は、不安定性、切断可能、または可逆性の結合またはリンカーを介して、ＲＮＡｉ剤に連結される。
【０１８５】
一部の実施形態では、非ヌクレオチド基は、それが結合しているＲＮＡｉ剤またはコンジュゲートの薬物動態または生体分布特性を増強して、ＲＮＡｉ剤またはコンジュゲートの細胞または組織特異的分布および細胞特異的取り込みを改善する。一部の実施形態では、非ヌクレオチド基は、ＲＮＡｉ剤のエンドサイトーシスを増強する。
【０１８６】
標的化基または標的化部分は、それらが結合したコンジュゲートまたはＲＮＡｉ剤の薬物動態または生体分布特性を増強して、コンジュゲートまたはＲＮＡｉ剤の細胞特異的（一部の場合には、器官特異的を含む）生体分布および細胞特異的（または器官特異的）取り込みを改善する。標的化基は、それが指向される標的に対して、一価、二価、三価、四価であってもよく、またはそれを上回る価数を有してもよい。代表的な標的化基としては、細胞表面分子に対する親和性を有する化合物、細胞表面分子に対する親和性を有する細胞受容体リガンド、ハプテン、抗体、モノクローナル抗体、抗体断片、ならびに抗体模倣体が挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、標的化基は、リンカー、たとえば、ＰＥＧリンカー、または一部の場合にはリンカーとしての機能を果たし得る１、２、もしくは３つの脱塩基および／もしくはリビトール（脱塩基リボース）残基を使用して、ＲＮＡｉ剤に連結されている。一部の実施形態では、標的化基は、ガラクトース誘導体クラスターを含む。
【０１８７】
本明細書に記載されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、５’末端および／または３’末端に反応性基、たとえば、アミノ基（本明細書においてアミンとも称される）を有するように合成することができる。反応性基は、後で、当該技術分野において典型的な方法を使用して、標的化基を結合するために使用され得る。
【０１８８】
一部の実施形態では、標的化基は、アシアロ糖タンパク質受容体リガンドを含む。本明細書において使用される場合、アシアロ糖タンパク質受容体リガンドは、アシアロ糖タンパク質受容体に対する親和性を有する化合物を含むリガンドである。本明細書に示されるように、アシアロ糖タンパク質受容体は、肝細胞に高度に発現される。一部の実施形態では、アシアロ糖タンパク質受容体リガンドは、１つまたは複数のガラクトース誘導体を含むかまたはそれからなる。本明細書において使用される場合、ガラクトース誘導体という用語は、ガラクトース、およびガラクトースのものと同等であるかもしくはそれよりも高いアシアロ糖タンパク質受容体に対する親和性を有するガラクトースの誘導体の両方を含む。ガラクトース誘導体としては、ガラクトース、ガラクトサミン、Ｎ−ホルミルガラクトサミン、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン、Ｎ−プロピオニル−ガラクトサミン、Ｎ−ｎ−ブタノイル−ガラクトサミン、およびＮ−イソ−ブタノイルガラクトース−アミンが挙げられるが、これらに限定されない（たとえば、S.T.  Iobst  and  K.  Drickamer,  J.B.C.,  1996,  271,  6686を参照されたい）。ｉｎ  ｖｉｖｏでのオリゴヌクレオチドおよび他の分子の肝臓への標的化に有用であるガラクトース誘導体およびガラクトース誘導体のクラスターは、当該技術分野において公知である（たとえば、Baenziger  and  Fiete,  1980,  Cell,  22,  611-620;  Connolly  et  al.,  1982,  J.  Biol.  Chem.,  257,  939-945を参照されたい）。
【０１８９】
ガラクトース誘導体は、肝細胞の表面上に発現されるアシアロ糖タンパク質受容体への結合を通じて、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて分子を肝細胞へと標的化するために使用されている。アシアロ糖タンパク質受容体リガンドのアシアロ糖タンパク質受容体への結合により、肝細胞への細胞特異的標的化および分子の肝細胞内へのエンドサイトーシスが促進される。アシアロ糖タンパク質受容体リガンドは、モノマー（たとえば、単一のガラクトース誘導体を有する）であってもよく、または多量体（たとえば、複数のガラクトース誘導体を有する）であってもよい。ガラクトース誘導体またはガラクトース誘導体クラスターは、当該技術分野において公知の方法を使用して、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖またはアンチセンス鎖の３’末端または５’末端に結合され得る。標的化基、たとえば、ガラクトース誘導体クラスターの調製は、たとえば、Ａｒｒｏｗｈｅａｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，  Ｉｎｃ．に対する国際特許出願公開第ＷＯ２０１８／０４４３５０号、およびＡｒｒｏｗｈｅａｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，  Ｉｎｃ．に対する国際特許出願公開第ＷＯ２０１７／１５６０１２号に記載されており、これらの両方の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０１９０】
本明細書において使用される場合、ガラクトース誘導体クラスターは、２〜４つの末端ガラクトース誘導体を有する分子を含む。末端ガラクトース誘導体は、そのＣ−１炭素を通じて分子に結合される。一部の実施形態では、ガラクトース誘導体クラスターは、ガラクトース誘導体三量体（三分岐ガラクトース誘導体または三価ガラクトース誘導体とも称される）である。一部の実施形態では、ガラクトース誘導体クラスターは、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む。一部の実施形態では、ガラクトース誘導体クラスターは、３つのＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む。一部の実施形態では、ガラクトース誘導体クラスターは、ガラクトース誘導体四量体（四分岐ガラクトース誘導体または四価ガラクトース誘導体とも称される）である。一部の実施形態では、ガラクトース誘導体クラスターは、４つのＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む。
【０１９１】
本明細書において使用される場合、ガラクトース誘導体三量体は、それぞれが中心の分岐点に連結された３つのガラクトース誘導体を含む。本明細書において使用される場合、ガラクトース誘導体四量体は、それぞれが中心の分岐点に連結された４つのガラクトース誘導体を含む。ガラクトース誘導体は、糖類のＣ−１炭素を通じて中心の分岐点に結合され得る。一部の実施形態では、ガラクトース誘導体は、リンカーまたはスペーサーを介して分岐点に連結される。一部の実施形態では、リンカーまたはスペーサーは、可動性親水性スペーサー、たとえば、ＰＥＧ基である（たとえば、米国特許第５，８８５，９６８号、Biessen  et  al.  J.  Med.  Chem.  1995  Vol.  39  p.  1538-1546を参照されたい）。一部の実施形態では、ＰＥＧスペーサーは、ＰＥＧ３スペーサーである。分岐点は、３つのガラクトース誘導体の結合を許容し、さらにＲＮＡｉ剤への分岐点の結合を許容する、任意の小分子であり得る。分岐点基の例は、ジ−リシンまたはジ−グルタメートである。ＲＮＡｉ剤への分岐点の結合は、リンカーまたはスペーサーを通じて生じ得る。一部の実施形態では、リンカーまたはスペーサーは、可動性親水性スペーサー、たとえば、限定されないが、ＰＥＧスペーサーを含む。一部の実施形態では、リンカーは、剛性リンカー、たとえば、環式基を含む。一部の実施形態では、ガラクトース誘導体は、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含むかまたはそれからなる。一部の実施形態では、ガラクトース誘導体クラスターは、たとえば、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン四量体であり得るガラクトース誘導体四量体から構成される。
【０１９２】
本開示の実施形態は、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤をｉｎ  ｖｉｖｏにおいて肝臓細胞に送達するための医薬組成物を含む。そのような医薬組成物は、たとえば、ガラクトース誘導体クラスターにコンジュゲートされたＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含み得る。一部の実施形態では、ガラクトース誘導体クラスターは、たとえば、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン三量体であり得るガラクトース誘導体三量体、またはたとえば、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン四量体であり得るガラクトース誘導体四量体から構成される。
【０１９３】
標的化基としては、表６において定義されている、（ＰＡＺ）、（ＮＡＧ１３）、（ＮＡＧ１３）ｓ、（ＮＡＧ１８）、（ＮＡＧ１８）ｓ、（ＮＡＧ２４）、（ＮＡＧ２４）ｓ、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ２６）、（ＮＡＧ２６）ｓ、（ＮＡＧ２７）、（ＮＡＧ２７）ｓ、（ＮＡＧ２８）、（ＮＡＧ２８）ｓ、（ＮＡＧ２９）、（ＮＡＧ２９）ｓ、（ＮＡＧ３０）、（ＮＡＧ３０）ｓ、（ＮＡＧ３１）、（ＮＡＧ３１）ｓ、（ＮＡＧ３２）、（ＮＡＧ３２）ｓ、（ＮＡＧ３３）、（ＮＡＧ３３）ｓ、（ＮＡＧ３４）、（ＮＡＧ３４）ｓ、（ＮＡＧ３５）、（ＮＡＧ３５）ｓ、（ＮＡＧ３６）、（ＮＡＧ３６）ｓ、（ＮＡＧ３７）、（ＮＡＧ３７）ｓ、（ＮＡＧ３８）、（ＮＡＧ３８）ｓ、（ＮＡＧ３９）、および（ＮＡＧ３９）ｓが挙げられるが、これらに限定されない。ガラクトースクラスター標的化リガンドを含む、他の標的化基は、当該技術分野において公知である。
【０１９４】
一部の実施形態では、連結基は、ＲＮＡｉ剤にコンジュゲートされている。連結基は、薬剤の標的化基または送達ポリマーまたは送達ビヒクルへの共有結合による連結を促進する。連結基は、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖またはアンチセンス鎖の３’末端または５’末端に連結され得る。一部の実施形態では、連結基は、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖に連結されている。一部の実施形態では、連結基は、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の５’末端または３’末端にコンジュゲートされている。一部の実施形態では、連結基は、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の５’末端にコンジュゲートされている。連結基の例としては、反応性基、たとえば、一級アミンおよびアルキン、アルキル基、脱塩基ヌクレオチド、リビトール（脱塩基リボース）、ならびに／またはＰＥＧ基が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１９５】
リンカーまたは連結基は、１つまたは複数の共有結合により、１つの化学基（たとえば、ＲＮＡｉ剤）または目的のセグメントを、別の化学基（たとえば、標的化基もしくは送達ポリマー）または目的のセグメントに連結する、２つの原子間の接続である。不安定性連結は、不安定性結合を含む。連結は、必要に応じて、２つの結合される原子間の距離を増加させるスペーサーを含んでもよい。スペーサーは、さらに、連結に可動性および／または長さを付加し得る。スペーサーとしては、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アラルキル基、アラルケニル基、およびアラルキニル基が挙げられるがこれらに限定されず、これらのそれぞれは、１つまたは複数のヘテロ原子、複素環、アミノ酸、ヌクレオチド、および糖類を含み得る。スペーサー基は、当該技術分野において周知であり、前述の一覧は、説明の範囲を制限することを意味するものではない。
【０１９６】
表２、３、または４に列挙されているＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のヌクレオチド配列のうちのいずれも、修飾されているか修飾されていないかにかかわらず、３’または５’標的化基または連結基を含み得る。３’または５’標的化基または連結基を含む、表３または４に列挙されているＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤の配列のうちのいずれも、代替として、３’または５’標的化基もしくは連結基を含まなくてもよく、または表６に示されているものを含むがこれらに限定されない異なる３’もしくは５’標的化基もしくは連結基を含んでもよい。表２または表５に列挙されているＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤の二重鎖のいずれも、修飾されているかまたは修飾されていないかにかかわらず、表６に示されているものを含むがこれらに限定されない標的化基または連結基をさらに含んでもよく、標的化基または連結基は、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤の二重鎖のセンス鎖またはアンチセンス鎖のいずれかの３’末端または５’末端に結合されていてもよい。
【０１９７】
標的化基および連結基の例は、表６に提供される。表４は、５’末端または３’末端に連結された標的化基または連結基を有する、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖のいくつかの実施形態を提供する。
【表６−１】
2020537653.tif 000175
【表６−２】
2020537653.tif 000176
【表６−３】
2020537653.tif 000177
【表６−４】
2020537653.tif 000178
【表６−５】
2020537653.tif 000179
【表６−６】
2020537653.tif 000180
【表６−７】
2020537653.tif 000181
【表６−８】
2020537653.tif 000182
【表６−９】
2020537653.tif 000183
【表６−１０】
2020537653.tif 000184
【表６−１１】
2020537653.tif 000185
【表６−１２】
2020537653.tif 000186
【表６−１３】
2020537653.tif 000187
【表６−１４】
2020537653.tif 000188
【表６−１５】
2020537653.tif 000189
【表６−１６】
2020537653.tif 000190
【表６−１７】
2020537653.tif 000191
【０１９８】
表６内の上述の構造のそれぞれにおいて、ＮＡＧは、当業者には理解されるように、上述の構造および本明細書に提供される説明を踏まえて結合しようとするＮ−アセチル−ガラクトサミンまたは別のアシアロ糖タンパク質受容体リガンドを含む。たとえば、一部の実施形態では、表６に提供される構造におけるＮＡＧは、以下の構造によって表される。
【化１４９】
2020537653.tif 000192
それぞれの（ＮＡＧｘ）は、リン酸基（（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ３０）、および（ＮＡＧ３１）にあるように）、またはホスホロチオエート基（（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ２９）ｓ、（ＮＡＧ３０）ｓ、（ＮＡＧ３１）ｓ、もしくは（ＮＡＧ３７）ｓであるように）、または別の連結基を介して、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤に結合され得る。
【化１５０】
2020537653.tif 000193
【０１９９】
当該技術分野において公知の他の連結基を使用してもよい。
【０２００】
一部の実施形態では、送達ビヒクルは、ＲＮＡｉ剤を細胞または組織に送達するために使用することができる。送達ビヒクルは、ＲＮＡｉ剤の細胞または組織への送達を改善する化合物である。送達ビヒクルは、ポリマー、たとえば、両親媒性ポリマー、膜活性ポリマー、ペプチド、メリチンペプチド、メリチン様ペプチド（ＭＬＰ）、脂質、可逆的に修飾されたポリマーもしくはペプチド、または可逆的に修飾された膜活性ポリアミンを含み得るか、またはこれらからなり得るが、これらに限定されない。
【０２０１】
一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤は、脂質、ナノ粒子、ポリマー、リポソーム、ミセル、ＤＰＣ、または当該技術分野において利用可能な他の送達系と組み合わせることができる。ＲＮＡｉ剤はまた、標的化基、脂質（コレステロールおよびコレステリル誘導体を含むがこれらに限定されない）、ナノ粒子、ポリマー、リポソーム、ミセル、ＤＰＣ（たとえば、ＷＯ２０００／０５３７２２、ＷＯ２００８／００２２３０９、ＷＯ２０１１／１０４１６９、およびＷＯ２０１２／０８３１８５、ＷＯ２０１３／０３２８２９、ＷＯ２０１３／１５８１４１を参照されたく、これらのそれぞれは、参照により本明細書に組み込まれる）、または当該技術分野において利用可能な他の送達系に、化学的にコンジュゲートされ得る。
【０２０２】
医薬組成物および製剤
本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、医薬組成物または製剤（本明細書において、「医薬」とも称される）として調製することができる。一部の実施形態では、医薬組成物は、少なくとも１つのＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含む。これらの医薬組成物は、標的細胞、細胞の群、組織、または生物における標的ｍＲＮＡの発現の阻害に特に有用である。医薬組成物は、標的ｍＲＮＡのレベルの低減または標的遺伝子の発現の阻害により利益を得る疾患または障害を有する対象を処置するために使用することができる。医薬組成物は、標的ｍＲＮＡのレベルの低減または標的遺伝子の発現の阻害により利益を得る疾患または障害を発症する危険性にある対象を処置するために使用することができる。一実施形態では、本方法は、本明細書に記載されるように、標的化リガンドに連結されたＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を、処置しようとする対象に投与するステップを含む。一部の実施形態では、１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤（ビヒクル、担体、希釈剤、および／または送達ポリマーを含む）が、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物に添加され、それによって、ヒトを含む対象へのｉｎ  ｖｉｖｏ送達に好適な医薬製剤が形成される。
【０２０３】
本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物および方法は、対象に、治療有効量の本明細書に記載されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を投与し、それによって対象におけるＡＳＧＲ１  ｍＲＮＡの発現を阻害することによるものを含め、細胞、細胞の群、細胞の群、組織、または対象における標的ｍＲＮＡのレベルを減少させる。一部の実施形態では、対象は、標的とされる細胞または組織における標的遺伝子の病原的上方調節を有するとして以前に特定されている。
【０２０４】
一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含む、記載される医薬組成物は、非ＨＤＬ−Ｃレベルの上昇、および／またはＬＤＬ−Ｃレベルの上昇、および／または総コレステロールレベルの上昇、および／またはＴＧレベルの上昇、および／またはＡＳＧＲ１  ｍＲＮＡの過剰発現と関連する臨床症状を処置または管理するために使用される。一部の実施形態では、治療有効量または予防有効量の、医薬組成物のうちの１つまたは複数は、そのような処置、予防、または管理を必要とする対象に投与される。一部の実施形態では、開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のうちのいずれかの投与は、対象における疾患の症状の数、重症度、および／または頻度を減少させるために使用することができる。一部の実施形態では、対象は、コレステロールレベルの上昇、トリグリセリドレベルの上昇、および／または何らかの他の脂質異常症を有するとして、以前に特定または診断されている。
【０２０５】
ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含む、記載される医薬組成物は、ＡＳＧＲ１  ｍＲＮＡの発現の低減または阻害により利益を得る疾患または障害を有する対象において少なくとも１つの症状を処置するために使用することができる。一部の実施形態では、対象には、治療有効量の、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含む１つまたは複数の医薬組成物が投与され、それによって、症状が処置される。他の実施形態では、対象には、予防有効量の、１つまたは複数のＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤が投与され、それによって、少なくとも１つの症状が予防される。
【０２０６】
投与の経路は、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤が身体と接触する経路である。一般に、哺乳動物の処置のために、薬物、オリゴヌクレオチド、および核酸を投与する方法は、当該技術分野において周知であり、本明細書に記載される組成物の投与に適用することができる。本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、特定の経路のために適切に調整された調製物において、任意の好適な経路を介して投与することができる。したがって、本明細書に記載される医薬組成物は、たとえば、静脈内、筋肉内、皮内、皮下、関節内、または腹腔内の注射によって投与することができる。一部の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、皮下注射を介して投与される。
【０２０７】
本明細書に記載されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物は、当該技術分野において公知のオリゴヌクレオチド送達技術を使用して、細胞、細胞の群、組織、または対象に送達することができる。一般に、核酸分子を送達するため（ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏにおいて）の当該技術分野において認識されている任意の好適な方法を、本明細書に記載される組成物での使用に適合することができる。たとえば、送達は、局所投与、（たとえば、直接的な注射、埋込み、もしくは局部投与）、全身投与、または皮下、静脈内、腹腔内、もしくは非経口の経路によるものであってよく、頭蓋内（たとえば、脳室内、実質内、および髄腔内）、筋肉内、経皮、気道（エアロゾル）、鼻内、経口、直腸、または局所（頬内および舌下を含む）投与が含まれる。ある特定の実施形態では、組成物は、皮下または静脈内の注入または注射によって投与される。
【０２０８】
したがって、一部の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤を含み得る。一部の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、対象への投与のために製剤化され得る。
【０２０９】
本明細書において使用される場合、医薬組成物または医薬は、薬理学的有効量の、記載されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のうちの少なくとも１つと、１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤とを含む。薬学的に許容される賦形剤（賦形剤）は、薬物送達系に意図的に含められる、活性医薬成分（ＡＰＩ、治療用製品、たとえば、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤）以外の物質である。賦形剤は、意図される投薬量で、治療作用を発揮しないか、または治療作用を発揮することは意図されない。賦形剤は、ａ）製造中の薬物送達系の加工を補助する、ｂ）ＡＰＩの安定性、バイオアベイラビリティ、もしくは患者許容性を保護、補助、もしくは強化する、ｃ）製品の識別を補助する、および／またはｄ）保管もしくは使用中のＡＰＩの送達の全般的な安全性、有効性に関する任意の他の属性を強化するように、作用し得る。薬学的に許容される賦形剤は、不活性物質であってもよく、またはそうでなくてもよい。
【０２１０】
賦形剤としては、吸収促進剤、接着防止剤、消泡剤、酸化防止剤、結合剤、緩衝剤、担体、コーティング剤、着色剤、送達促進剤、送達ポリマー、デキストラン、デキストロース、希釈剤、崩壊剤、乳化剤、増量剤、充填剤、香味剤、滑剤、保水剤、滑沢剤、油、ポリマー、保存剤、生理食塩水、塩、溶媒、糖、懸濁化剤、持続放出マトリックス、甘味剤、増粘剤、等張剤、ビヒクル、撥水剤、および湿潤剤が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２１１】
注射での使用に好適な医薬組成物には、滅菌水溶液（水溶性の場合）または分散液、および滅菌注射溶液または分散液の即時調製のための滅菌粉末が挙げられる。静脈内投与に関して、好適な担体としては、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）ＥＬＴＭ（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、ＮＪ）、またはリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。それは、製造および保管の条件下において安定である必要があり、細菌および真菌などの微生物の混入作用から保護されなければならない。担体は、たとえば、水、エタノール、ポリオール（たとえば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコール）、およびそれらの好適な混合物を含有する、溶媒または分散媒であり得る。適切な流動性は、たとえば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散液の場合には、必要な粒子サイズの維持によって、および界面活性剤の使用によって、維持することができる。多くの事例では、組成物中に、等張剤、たとえば、糖、多価アルコール、たとえば、マンニトール、ソルビトール、および塩化ナトリウムを含めることが好ましい。注射用組成物の持続吸収は、吸収を遅延する薬剤、たとえば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを組成物中に含めることによって、もたらすことができる。
【０２１２】
滅菌注射溶液は、必要に応じて、上述の成分のうちの１つまたは組合せとともに、活性化合物を、必要とされる量で、適切な溶媒中に組み込み、続いて濾過滅菌することによって、調製することができる。一般に、分散液は、活性化合物を、基礎分散培地および上述のもの以外の必要な他の成分を含む、滅菌ビヒクル中に組み込むことによって、調製される。滅菌注射溶液の調製のための滅菌粉末の事例において、調製の方法は、真空乾燥および凍結乾燥により、活性成分に任意の追加の所望される成分を加えた粉末を、それらの事前に滅菌濾過した溶液から得ることを含む。
【０２１３】
関節内投与に好適な製剤は、微晶質形態、たとえば、水性微晶質懸濁液の形態であり得る薬物の滅菌水性調製物の形態であり得る。リポソーム製剤または生体分解性ポリマー系もまた、関節内および眼内投与の両方のための薬物を提示するために使用することができる。
【０２１４】
インプラントおよびマイクロカプセル化送達系を含む、制御放出製剤など、化合物を身体からの急速な排除から保護する担体を用いて、活性化合物を調製することができる。生分解性生体適合性ポリマー、たとえば、エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸を使用することができる。そのような製剤を調製するための方法は、当業者には明らか。リポソーム懸濁液もまた、薬学的に許容される担体として使用することができる。これらは、たとえば、米国特許第４，５２２，８１１号に記載されているように、当業者に公知の方法に従って調製することができる。
【０２１５】
ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、投与の容易さおよび投薬量の均一性のために、投薬単位形態で組成物に製剤化することができる。投薬単位形態とは、治療しようとする対象の単位投薬量として好適な物理的に別個の単位を指し、それぞれの単位は、必要とされる薬学的担体と関連して所望される治療作用をもたらすように計算された、所定の量の活性化合物を含有する。本開示の投薬単位形態の仕様は、活性化合物の固有の特徴および達成しようとする治療作用、ならびに個体の処置のためのそのような活性化合物の配合の技術分野に固有の制限によって決定され、それらに直接左右される。
【０２１６】
医薬組成物は、医薬組成物において一般的に見出される他の追加の成分を含有してもよい。そのような追加の成分としては、鎮痒剤、収れん剤、局所麻酔薬、または抗炎症剤（たとえば、抗ヒスタミン剤、ジフェンヒドラミンなど）が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書に定義されるＲＮＡｉ剤を発現するかまたは含む、細胞、組織、または単離された器官を、「医薬組成物」として使用してもよいこともまた、想定される。本明細書において使用される場合、「薬理学的有効量」、「治療有効量」、または単純に「有効量」とは、薬理学的、治療的、または予防的な結果をもたらすＲＮＡｉ剤の量を指す。
【０２１７】
一般に、活性化合物の有効量は、約０．１〜約１００ｍｇ／体重ｋｇ／日、たとえば、約１．０〜約５０ｍｇ／体重ｋｇ／日の範囲である。一部の実施形態では、活性化合物の有効量は、１用量当たり約０．２５〜約５ｍｇ／体重ｋｇの範囲である。一部の実施形態では、活性成分の有効量は、１用量当たり約０．５〜約４ｍｇ／体重ｋｇの範囲である。投与される量はまた、患者の全般的な健康状態、送達される化合物の相対的な生物学的有効性、薬物の製剤、製剤中の賦形剤の存在および種類、ならびに投与経路などの変数にも依存する可能性が高い。また、投与される初回投薬量は、所望される血液レベルもしくは組織レベルを高速で達成するために、上限レベルを上回って増加させてもよく、または初回投薬量は、最適よりも低いものであってもよいことを理解されたい。
【０２１８】
疾患の処置のため、または疾患の処置のための医薬もしくは組成物の形成のために、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含む本明細書に記載される医薬組成物は、賦形剤と組み合わせてもよく、または第２のもしくはその他のＲＮＡｉ剤、小分子薬、抗体、抗体断片、ペプチド、および／もしくはアプタマーを含むがこれらに限定されない第２の治療剤もしくは処置と組み合わせてもよい。
【０２１９】
記載されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、薬学的に許容される賦形剤またはアジュバントに添加されると、キット、容器、パック、またはディスペンサーにパッケージングすることができる。本明細書に記載される医薬組成物は、事前充填シリンジまたはバイアルにパッケージングすることができる。
【０２２０】
処置および発現の阻害の方法
本明細書に開示されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、化合物の投与により利益を得る疾患または障害を有する対象（たとえば、ヒトまたは他の哺乳動物）を処置するために使用することができる。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤は、ＡＳＧＲ１  ｍＲＮＡの発現の低減または阻害により利益を得る疾患または障害を有する対象（たとえば、ヒト）を処置するために使用することができる。対象には、治療有効量の、本明細書に記載されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のうちのいずれか１つまたは複数が投与される。対象は、ヒト、患者、またはヒト患者であり得る。対象は、成人、青年期、小児、または幼児であり得る。ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含む記載される医薬組成物は、疾患の治療的処置のための方法を提供するために使用することができる。そのような方法には、本明細書に記載される医薬組成物のヒトまたは動物への投与が含まれる。
【０２２１】
一部の実施形態では、本明細書に記載されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ＡＳＧＲ１関連疾患または障害を有する対象を処置するために使用される。「ＡＳＧＲ１関連疾患または障害」は、ＡＳＧＲ１の発現レベルが改変されているか、またはＡＳＧＲ１の発現レベルの上昇が、状態、疾患、もしくは障害を発症する危険性の増加と関連している、状態、疾患、または障害を指す。ＡＳＧＲ１関連疾患または障害としては、肥満、代謝症候群、高脂血症、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、脂質代謝異常および／またはコレステロール代謝異常、アテローム性動脈硬化症、糖尿病、心血管疾患、冠状動脈疾患、心筋梗塞、末梢血管疾患、脳血管疾患、ならびに他の代謝関連障害および疾患が挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、記載されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ＡＳＧＲ１関連疾患または障害を有する対象において少なくとも１つの症状を処置するために使用される。対象には、治療有効量の、記載されるＲＮＡｉ剤のうちのいずれか１つまたは複数が投与される。一部の実施形態では、本発明は、ＡＳＧＲ１関連疾患または障害の処置をそれを必要とする患者において行うための医薬の調製のための、本明細書に記載されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤の使用を提供する。他の実施形態では、本発明は、ＡＳＧＲ１関連疾患の処置をそれを必要とする患者において行うための方法において使用するための、本明細書に記載されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を提供する。
【０２２２】
ある特定の実施形態では、本発明は、心筋梗塞の危険性の低減を、それを必要とする患者において行うための方法であって、患者に、本明細書に記載されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のうちのいずれかを投与するステップを含む、方法を提供する。心筋梗塞を有する危険性にある患者は、心筋梗塞の病歴を有する（たとえば、以前に心筋梗塞を有したことがある）患者であり得る。心筋梗塞を有する危険性にある患者はまた、心筋梗塞の家族歴を有する患者であり得るか、または心筋梗塞の１つもしくは複数の危険性因子を有する患者であり得る。そのような危険性因子としては、高血圧、非ＨＤＬコレステロールのレベルの上昇、トリグリセリドのレベルの上昇、糖尿病、肥満、または自己免疫疾患（たとえば、リウマチ性関節炎、ループス）の病歴が挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態では、心筋梗塞を有する危険性にある患者は、冠状動脈疾患を有するかまたはそう診断された患者である。これらおよび他の患者における心筋梗塞の危険性は、本明細書に記載されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のうちのいずれかを患者に投与することによって、低減され得る。一部の実施形態では、本発明は、心筋梗塞の危険性の低減をそれを必要とする患者において行うための医薬の調製のための、本明細書に記載されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤の使用を提供する。他の実施形態では、本発明は、心筋梗塞の危険性の低減をそれを必要とする患者において行うための方法において使用するための、本明細書に記載されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を提供する。
【０２２３】
一部の実施形態では、本発明は、非ＨＤＬコレステロールの低減を、それを必要とする患者において行うための方法であって、患者に、本明細書に記載されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のうちのいずれかを投与することによる、方法を、提供する。非ＨＤＬコレステロールは、ＬＤＬコレステロール、超低密度リポタンパク質、中間密度リポタンパク質、リポタンパク質（ａ）、カイロミクロン、およびカイロミクロンレムナントを含む、すべてのコレステロール含有アテローム生成促進性リポタンパク質の尺度である。非ＨＤＬコレステロールは、心血管の危険性の良好な予測因子であることが報告されている（Rana  et  al.,  Curr.  Atheroscler.  Rep.,  Vol.  14:  130-134,  2012）。非ＨＤＬコレステロールレベルは、総コレステロールレベルから、ＨＤＬコレステロールレベルを差し引くことによって、計算することができる。一実施形態では、患者のＬＤＬコレステロールレベルは、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤の投与後に、低減される。別の実施形態では、患者のリポタンパク質（ａ）レベルは、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤の投与後に、低減される。一部の実施形態では、本発明は、非ＨＤＬコレステロールの低減をそれを必要とする患者において行うための医薬の調製のための、本明細書に記載されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤の使用を提供する。他の実施形態では、本発明は、非ＨＤＬコレステロールの低減をそれを必要とする患者において行うための方法において使用するための、本明細書に記載されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を提供する。
【０２２４】
一部の実施形態では、本発明の方法に従って処置しようとする患者は、非ＨＤＬコレステロールのレベルの上昇（たとえば、非ＨＤＬコレステロールの血清レベルの上昇）を有する患者である。理想的には、非ＨＤＬコレステロールのレベルは、任意の所与の患者について、ＬＤＬコレステロールレベルの標的を約３０ｍｇ／ｄＬ上回るべきである。特定の実施形態では、患者が、約１３０ｍｇ／ｄＬまたはそれを上回る非ＨＤＬコレステロールレベルを有する場合、患者に、本発明のＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤が投与される。一実施形態では、患者が、約１６０ｍｇ／ｄＬまたはそれを上回る非ＨＤＬコレステロールレベルを有する場合、患者に、本発明のＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤が投与される。別の実施形態では、患者が、約１９０ｍｇ／ｄＬまたはそれを上回る非ＨＤＬコレステロールレベルを有する場合、患者に、本発明のＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤が投与される。なおも別の実施形態では、患者が、約２２０ｍｇ／ｄＬまたはそれを上回る非ＨＤＬコレステロールレベルを有する場合、患者に、本発明のＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤が投与される。ある特定の実施形態では、患者が、２０１３年の心血管危険性の評価に関するＡＣＣ／ＡＨＡガイドライン（2013  ACC/AHA  Guideline  on  the  Assessment  of  Cardiovascular  Risk）（Goff  et  al.,  ACC/AHA  guideline  on  the  assessment  of  cardiovascular  risk:  a  report  of  the  American  College  of  Cardiology/American  Heart  Association  Task  Force  on  Practice  Guidelines.  Circulation.  2013;00:000-000）に従って高いかもしくは非常に高い心血管疾患の危険性にあり、また約１００ｍｇ／ｄＬもしくはそれを上回る非ＨＤＬコレステロールレベルを有する場合、患者に、本発明のＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤が投与される。
【０２２５】
本発明の方法の一部の実施形態では、患者が、２０１３年の心血管危険性の評価に関するＡＣＣ／ＡＨＡガイドライン（本明細書において「２０１３年のガイドライン」と称される）に従って中等度またはそれよりも高い心血管疾患の危険性にある場合、患者に、本明細書に記載されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤が投与される。ある特定の実施形態では、本発明のＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、患者のＬＤＬコレステロールレベルが約１６０ｍｇ／ｄＬを上回る場合に、患者に投与される。他の実施形態では、本発明のＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、患者のＬＤＬコレステロールレベルが約１３０ｍｇ／ｄＬを上回り、患者が、２０１３年のガイドラインに従って中等度の心血管疾患の危険性を有する場合に、患者に投与される。なおも他の実施形態では、本発明のＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、患者のＬＤＬコレステロールレベルが１００ｍｇ／ｄＬを上回り、患者が、２０１３年のガイドラインに従って高いかまたは非常に高い心血管疾患の危険性を有する場合に、患者に投与される。
【０２２６】
一部の実施形態では、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤は、ＡＳＧＲ１関連疾患または障害を有する対象の臨床症状を処置または管理するために使用される。対象には、治療有効量の、本明細書に記載されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤またはＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含有する組成物のうちの１つまたは複数が投与される。一部の実施形態では、本方法は、処置しようとする対象に、本明細書に記載されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含む組成物を投与するステップを含む。
【０２２７】
一部の実施形態では、記載されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤が投与された対象におけるＡＳＧＲ１遺伝子の遺伝子発現レベルおよび／またはｍＲＮＡレベルは、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤が投与される前の対象またはＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を受容していない対象と比べて、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または９９％を上回って低減される。対象における遺伝子発現レベルおよび／またはｍＲＮＡレベルは、対象の細胞、細胞の群、および／または組織において低減され得る。一部の実施形態では、記載されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤が投与された対象におけるＡＳＧＲ１のタンパク質レベルは、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤が投与される前の対象またはＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を受容していない対象と比べて、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または９９％を上回って低減される。対象におけるタンパク質レベルは、対象の細胞、細胞の群、組織、血液、および／または他の体液において低減され得る。遺伝子発現、ｍＲＮＡ、またはタンパク質のレベルの低減は、当該技術分野において公知の任意の方法によって評価することができる。ＡＳＧＲ１  ｍＲＮＡレベルおよび／またはタンパク質レベルの低減または減少は、本明細書において、集合的に、ＡＳＧＲ１の低減もしくは減少、またはＡＳＧＲ１の発現の阻害もしくは低減と称される。
【０２２８】
細胞、組織、器官、および非ヒト生物
本明細書に記載されるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のうちの少なくとも１つを含む細胞、組織、器官、および非ヒト生物が、企図される。細胞、組織、器官、または非ヒト生物は、ＲＮＡｉ剤を、細胞、組織、器官、または非ヒト生物に送達することによって作製される。
【０２２９】
上記に提供される実施形態および項目は、以下の非限定的な実施例とともにさらに例証される。
【実施例】
【０２３０】
（実施例１）
ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤の合成。
表５に（表３および４において特定される対応するセンス鎖およびアンチセンス鎖の配列とともに）示されているＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤の二重鎖を、以下に従って合成した。
【０２３１】
Ａ．合成。ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖およびアンチセンス鎖を、オリゴヌクレオチド合成において使用される固相におけるホスホラミダイト技術に従って合成した。規模に応じて、ＭｅｒＭａｄｅ９６Ｅ（登録商標）（Ｂｉｏａｕｔｏｍａｔｉｏｎ）、ＭｅｒＭａｄｅ１２（登録商標）（Ｂｉｏａｕｔｏｍａｔｉｏｎ）、またはＯＰ  Ｐｉｌｏｔ  １００（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）のいずれかを使用した。合成は、制御多孔質ガラス（ＣＰＧ、５００Åまたは６００Å、Ｐｒｉｍｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ａｓｔｏｎ、ＰＡ、ＵＳＡから入手）から作製された固体支持体において行った。すべてのＲＮＡおよび２’−修飾ＲＮＡホスホラミダイトは、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、ＷＩ、ＵＳＡ）から購入した。２’−Ｏ−メチルホスホラミダイトには、以下が含まれた：（５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ６−（ベンゾイル）−２’−Ｏ−メチル−アデノシン−３’−Ｏ−（２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）ホスホラミダイト、５’−Ｏ−ジメトキシ−トリチル−Ｎ４−（アセチル）−２’−Ｏ−メチル−シチジン−３’−Ｏ−（２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル−アミノ）ホスホラミダイト、（５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ２−（イソブチリル）−２’−Ｏ−メチル−グアノシン−３’−Ｏ−（２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）ホスホラミダイト、および５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−Ｏ−メチル−ウリジン−３’−Ｏ−（２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）ホスホラミダイト。２’−デオキシ−２’−フルオロ−ホスホラミダイトは、２’−Ｏ−メチルアミダイトと同じ保護基を有していた。５’−（４，４’−ジメトキシトリチル）−２’，３’−セコ−ウリジン−２’−ベンゾイル−３’−［（２−シアノエチル）−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）］−ホスホラミダイトもまた、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから購入した。５’−ジメトキシトリチル−２’−Ｏ−メチル−イノシン−３’−Ｏ−（２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）ホスホラミダイトは、Ｇｌｅｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｖｉｒｇｉｎｉａ）から購入した。逆位脱塩基（３’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−デオキシリボース−５’−Ｏ−（２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）ホスホラミダイトは、ＣｈｅｍＧｅｎｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ、ＵＳＡ）から購入した。
【０２３２】
標的化リガンドを含むホスホラミダイトを、無水ジクロロメタンまたは無水アセトニトリル（５０ｍＭ）中に溶解し、一方ですべての他のアミダイトは、無水アセトニトリル（規模に応じて５０ｍＭまたは１００ｍＭ）中に溶解し、分子篩（３Å）を添加した。５−ベンジルチオ−１Ｈ−テトラゾール（ＢＴＴ、アセトニトリル中２５０ｍＭ）または５−エチルチオ−１Ｈ−テトラゾール（ＥＴＴ、アセトニトリル中２５０ｍＭ）を、活性化溶液として使用した。カップリング時間は、１２分間（ＲＮＡ）、１５分間（標的化リガンド）、９０秒間（２’ＯＭｅ）、および６０秒間（２’Ｆ）であった。ホスホロチオエート連結を導入するために、無水アセトニトリル中の、３−フェニル１，２，４−ジチアゾリン−５−オン（ＰＯＳ、ＰｏｌｙＯｒｇ，  Ｉｎｃ．、Ｌｅｏｍｉｎｓｔｅｒ、ＭＡ、ＵＳＡから入手）の１００ｍＭ溶液を、利用した。標的化リガンドが存在していない「ネイキッド」ＲＮＡｉ剤として具体的に特定されない限り、以下の実施例において合成および試験するＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤の二重鎖のそれぞれは、表６に表される標的化リガンドの化学構造においてＮ−アセチル−ガラクトサミンを「ＮＡＧ」として利用した。
【０２３３】
Ｂ．支持体に結合したオリゴマーの切断および脱保護。固相合成の終了処理の後に、乾燥させた固体支持体を、３０℃において１．５時間、水中４０重量％のメチルアミンおよび２８％水酸化アンモニウム溶液（Ａｌｄｒｉｃｈ）の１：１体積溶液で処理した。溶液を蒸発させ、固体残渣を、水中に再構成した（以下を参照されたい）。
【０２３４】
Ｃ．精製。粗製オリゴマーを、ＴＳＫｇｅｌ  ＳｕｐｅｒＱ−５ＰＷ  １３μｍカラムおよびＳｈｉｍａｄｚｕ  ＬＣ−２０ＡＰシステムを使用して、アニオン交換ＨＰＬＣによって精製した。緩衝液Ａは、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、ｐＨ９．０であり、２０％アセトニトリルを含有し、緩衝液Ｂは、緩衝液Ａと同じであったが、１．５Ｍ塩化ナトリウムが添加されていた。２６０ｎｍでのＵＶトレースを記録した。適切な画分をプールし、次いで、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５微細を充填したＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  ＸＫ  ２６／４０カラムを使用して、濾過したＤＩ水または１００ｍＭ重炭酸アンモニウム、ｐＨ６．７および２０％アセトニトリルの泳動緩衝液を用いて、サイズ排除ＨＰＬＣを行った。
【０２３５】
Ｄ．アニーリング。１倍リン酸緩衝食塩水（Ｃｏｍｉｎｇ、Ｃｅｌｌｇｒｏ）中のＲＮＡ溶液（センスおよびアンチセンス）を等モルで合わせることによって、相補鎖を混合し、ＲＮＡｉ剤を形成した。一部のＲＮＡｉ剤を、−１５〜−２５℃で凍結乾燥させ、保管した。二重鎖の濃度は、１倍リン酸緩衝食塩水において、ＵＶ−Ｖｉｓ分光計で溶液の吸光を測定することによって判定した。２６０ｎｍでの溶液の吸光に、次いで、変換係数および希釈係数を乗じて、二重鎖の濃度を判定した。使用した変換係数は、０．０３７ｍｇ／（ｍＬ・ｃｍ）であったか、または実験的に判定した消光係数から計算したかのいずれかであった。
【０２３６】
（実施例２）
ＡＳＧＲ１−ＳＥＡＰマウスモデル。
ＲＮＡｉ剤の効力を評価するために、ＡＳＧＲ１−ＳＥＡＰマウスモデルを使用した。６〜８週齢の雌性Ｃ５７ＢＬ／６アルビノマウスに、ｉｎ  ｖｉｖｏで、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤または対照の投与の少なくとも１５日前に投与した、流体力学的尾静脈注射によって、プラスミドを一過性にトランスフェクトした。プラスミドは、ＳＥＡＰ（分泌型ヒト胎盤アルカリホスファターゼ）レポーター遺伝子の３’  ＵＴＲに挿入されたＡＳＧＲ１  ｃＤＮＡ配列（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＭ＿００１６７１．４（配列番号１））を含む。動物の体重の１０％の総体積で、リンガー溶液中、５０μｇのＡＳＧＲ１  ｃＤＮＡ配列含有プラスミドを、尾静脈からマウスに注射して、ＡＳＧＲ１−ＳＥＡＰモデルマウスを作製した。溶液は、これまでに説明されているように、２７ゲージのニードルを通じて５〜７秒間で注射した（Zhang  G  et  al.,  "High  levels  of  foreign  gene  expression  in  hepatocytes  after  tail  vein  injection  of  naked  plasmid  DNA."  Human  Gene  Therapy  1999  Vol.  10,  p  1735-1737.）。ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤によるＡＳＧＲ１の発現の阻害は、Ｐｈｏｓｐｈａ−Ｌｉｇｈｔ（商標）ＳＥＡＰレポーター遺伝子アッセイシステム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）によって測定される、ＳＥＡＰ発現の同時阻害をもたらす。処置の前に、血清中のＳＥＡＰ発現レベルを測定し、マウスを、平均ＳＥＡＰレベルに応じて群に分けた。
【０２３７】
分析：ＳＥＡＰレベルは、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤の投与の前および後の両方の様々な時点において測定してよい。
【０２３８】
ｉ）血清採取：マウスに、２〜３％  イソフルランで麻酔を行い、血液試料を、顎下の領域から、血清分離チューブ（Ｓａｒｓｔｅｄｔ  ＡＧ＆Ｃｏ．、Ｎｕｍｂｒｅｃｈｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）に採取した。血液を、周囲温度で２０分間、凝固させた。チューブを、８，０００×ｇで３分間遠心分離して、血清を分離させ、４℃で保管した。
【０２３９】
ｉｉ）血清ＳＥＡＰレベル：血清を採取し、Ｐｈｏｓｐｈａ−Ｌｉｇｈｔ（商標）ＳＥＡＰレポーター遺伝子アッセイシステム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）によって、製造業者の説明に従って測定した。このモデルでの処置とは無関係のＡＳＧＲ１発現低下を説明するために、それぞれの動物の血清ＳＥＡＰレベルを、生理食塩水を注射したマウスの対照群に対して正規化した。「処置前に対して正規化した」発現の比を判定するために、まず、ある時点におけるそれぞれの動物のＳＥＡＰレベルを、その動物における処置前の発現レベル（「処置前」）で除した。次いで、個々の動物の「処置前に対して正規化した」比を、通常の生理食塩水対照群におけるすべてのマウスの平均の「処置前に対して正規化した」比で除すことによって、特定の時点における発現を、対照群に対して正規化した。代替として、本明細書に記載される一部の実施例では、それぞれの動物の血清ＳＥＡＰレベルは、処置前のレベルに対してのみ正規化することによって評価した。
【０２４０】
（実施例３）
ＡＳＧＲ１−ＳＥＡＰマウスにおけるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のｉｎ  ｖｉｖｏ試験。
上述の実施例２において説明されているＡＳＧＲ１−ＳＥＡＰマウスモデルを使用した。１日目に、それぞれのマウスに、３．０ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）のＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含有する２００μｌまたは対照として使用するためにＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含まない２００μｌの生理食塩水の単回皮下注射を、以下の表７に従って、行った。
【表７】
2020537653.tif 000194
【０２４１】
ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、表４および５に示されるように、センス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドを含んでいた。注射は、首および肩の領域にわたる緩んだ皮膚に、皮膚と筋肉との間に行った（すなわち、皮下注射）。それぞれの群において３匹のマウスに試験を行った（ｎ＝３匹）。３日目、８日目、１５日目、２２日目、２９日目、および３６日目に血清を採取し、ＳＥＡＰ発現レベルを、上述の実施例２に記載されている手順に従って判定した。実験から得られたデータを、以下の表８に示すが、平均ＳＥＡＰは、正規化されたＳＥＡＰ平均値を反映している。
【表８−１】
2020537653.tif 000195
【表８−２】
2020537653.tif 000196
【０２４２】
投薬群（すなわち、群２から９）のそれぞれにおけるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、すべての測定時点において、生理食塩水対照（群１）と比較して、ＳＥＡＰの低減を示し、これは、本明細書に記載されるように、ＡＳＧＲ１−ＳＥＡＰマウスモデルにおけるＡＳＧＲ１の阻害を示す。たとえば、群３は、１５日目に０．０１０（±０．０１１）の正規化されたＳＥＡＰレベルを示すが、これは、３．０ｍｇ／ｋｇの二重鎖ＡＤ０４６９８の単回投与後のその時点における９９％の発現の阻害を示す。
【０２４３】
（実施例４）
ＡＳＧＲ１−ＳＥＡＰマウスにおけるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のｉｎ  ｖｉｖｏ試験。
上述の実施例２において説明されているＡＳＧＲ１−ＳＥＡＰマウスモデルを使用した。１日目に、それぞれのマウスに、３．０ｍｇ／ｋｇのＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含有する２００μｌまたは対照として使用するためにＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含まない２００μｌの生理食塩水の単回皮下注射を、以下の表９に従って、行った。
【表９】
2020537653.tif 000197
【０２４４】
ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、表４および５に示されるように、センス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドを含んでいた。注射は、首および肩の領域にわたる緩んだ皮膚に、皮膚と筋肉との間に行った（すなわち、皮下注射）。それぞれの群において３匹のマウスに試験を行った（ｎ＝３匹）。４日目、８日目、１５日目、２２日目、および２９日目に血清を採取し、ＳＥＡＰ発現レベルを、上述の実施例２に記載されている手順に従って判定した。実験から得られたデータを、以下の表１０に示すが、平均ＳＥＡＰは、正規化されたＳＥＡＰ平均値を反映している。
【表１０−１】
2020537653.tif 000198
【表１０−２】
2020537653.tif 000199
（実施例５）
【０２４５】
ＡＳＧＲ１−ＳＥＡＰマウスにおけるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のｉｎ  ｖｉｖｏ試験。
【０２４６】
上述の実施例２において説明されているＡＳＧＲ１−ＳＥＡＰマウスモデルを使用した。１日目に、それぞれのマウスに、０．５ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、もしくは３．０ｍｇ／ｋｇのいずれかのＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含有する２００μｌ、または対照として使用するためにＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含まない２００μｌの生理食塩水の単回皮下注射を、以下の表１１に従って、行った。
【表１１】
2020537653.tif 000200
【０２４７】
ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、表４および５に示されるように、センス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドを含んでいた。注射は、首および肩の領域にわたる緩んだ皮膚に、皮膚と筋肉との間に行った（すなわち、皮下注射）。それぞれの群において３匹のマウスに試験を行った（ｎ＝３匹）。８日目、１５日目、２２日目、および２９日目に血清を採取し、ＳＥＡＰ発現レベルを、上述の実施例２に記載されている手順に従って判定した。実験から得られたデータを、以下の表１２に示すが、平均ＳＥＡＰは、正規化されたＳＥＡＰ平均値を反映している。
【表１２】
2020537653.tif 000201
【０２４８】
（実施例６）
ＡＳＧＲ１−ＳＥＡＰマウスにおけるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のｉｎ  ｖｉｖｏ試験。
上述の実施例２において説明されているＡＳＧＲ１−ＳＥＡＰマウスモデルを使用した。１日目に、それぞれのマウスに、１．０ｍｇ／ｋｇもしくは３．０ｍｇ／ｋｇのいずれかのＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含有する２００μｌ、または対照として使用するためにＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含まない２００μｌの生理食塩水の単回皮下注射を、以下の表１３に従って、行った。
【表１３】
2020537653.tif 000202
【０２４９】
ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、表４および５に示されるように、センス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドを含んでいた。注射は、首および肩の領域にわたる緩んだ皮膚に、皮膚と筋肉との間に行った（すなわち、皮下注射）。それぞれの群において４匹のマウスに試験を行った（ｎ＝４匹）。８日目、１３日目、２２日目、および２９日目に血清を採取し、ＳＥＡＰ発現レベルを、上述の実施例２に記載されている手順に従って判定した。実験から得られたデータを、以下の表１４に示すが、平均ＳＥＡＰは、正規化されたＳＥＡＰ平均値を反映している。
【表１４】
2020537653.tif 000203
【０２５０】
（実施例７）
ＡＳＧＲ１−ＳＥＡＰマウスにおけるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のｉｎ  ｖｉｖｏ試験。
上述の実施例２において説明されているＡＳＧＲ１−ＳＥＡＰマウスモデルを使用した。１日目に、それぞれのマウスに、１．０ｍｇ／ｋｇもしくは３．０ｍｇ／ｋｇのいずれかのＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含有する２００μｌ、または対照として使用するためにＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含まない２００μｌの生理食塩水の単回皮下注射を、以下の表１５に従って、行った。
【表１５】
2020537653.tif 000204
【０２５１】
ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、表４および５に示されるように、センス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドを含んでいた。注射は、首および肩の領域にわたる緩んだ皮膚に、皮膚と筋肉との間に行った（すなわち、皮下注射）。それぞれの群において４匹のマウスに試験を行った（ｎ＝４匹）。８日目、１５日目、２２日目、および２９日目に血清を採取し、ＳＥＡＰ発現レベルを、上述の実施例２に記載されている手順に従って判定した。実験から得られたデータを、以下の表１６に示すが、平均ＳＥＡＰは、正規化されたＳＥＡＰ平均値を反映している。
【表１６】
2020537653.tif 000205
【０２５２】
（実施例８）
ＡＳＧＲ１−ＳＥＡＰマウスにおけるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のｉｎ  ｖｉｖｏ試験。
上述の実施例２において説明されているＡＳＧＲ１−ＳＥＡＰマウスモデルを使用した。１日目に、それぞれのマウスに、１．０ｍｇ／ｋｇもしくは３．０ｍｇ／ｋｇのいずれかのＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含有する２００μｌ、または対照として使用するためにＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含まない２００μｌの生理食塩水の単回皮下注射を、以下の表１７に従って、行った。
【表１７】
2020537653.tif 000206
【０２５３】
ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、表４および５に示されるように、センス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドを含んでいた。注射は、首および肩の領域にわたる緩んだ皮膚に、皮膚と筋肉との間に行った（すなわち、皮下注射）。それぞれの群において３匹のマウスに試験を行った（ｎ＝３匹）。８日目、１５日目、２２日目、および２９日目に血清を採取し、ＳＥＡＰ発現レベルを、上述の実施例２に記載されている手順に従って判定した。実験から得られたデータを、以下の表１８に示すが、平均ＳＥＡＰは、正規化されたＳＥＡＰ平均値を反映している。
【表１８】
2020537653.tif 000207
【０２５４】
（実施例９）
ＡＳＧＲ１−ＳＥＡＰマウスにおけるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のｉｎ  ｖｉｖｏ試験。
上述の実施例２において説明されているＡＳＧＲ１−ＳＥＡＰマウスモデルを使用した。１日目に、それぞれのマウスに、１．０ｍｇ／ｋｇもしくは３．０ｍｇ／ｋｇのいずれかのＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含有する２００μｌ、または対照として使用するためにＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含まない２００μｌの生理食塩水の単回皮下注射を、以下の表１９に従って、行った。
【表１９】
2020537653.tif 000208
【０２５５】
ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、表４および５に示されるように、センス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドを含んでいた。注射は、首および肩の領域にわたる緩んだ皮膚に、皮膚と筋肉との間に行った（すなわち、皮下注射）。それぞれの群において３匹のマウスに試験を行った（ｎ＝３匹）。８日目、１３日目、２２日目、２９日目、および３６日目に血清を採取し、ＳＥＡＰ発現レベルを、上述の実施例２に記載されている手順に従って判定した。実験から得られたデータを、以下の表２０に示すが、平均ＳＥＡＰは、正規化されたＳＥＡＰ平均値を反映している。
【表２０−１】
2020537653.tif 000209
【表２０−２】
2020537653.tif 000210
【０２５６】
（実施例１０）
ＡＳＧＲ１−ＳＥＡＰマウスにおけるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のｉｎ  ｖｉｖｏ試験。
上述の実施例２において説明されているＡＳＧＲ１−ＳＥＡＰマウスモデルを使用した。１日目に、それぞれのマウスに、１．０ｍｇ／ｋｇもしくは３．０ｍｇ／ｋｇのいずれかのＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含有する２００μｌ、または対照として使用するためにＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含まない２００μｌの生理食塩水の単回皮下注射を、以下の表２１に従って、行った。
【表２１】
2020537653.tif 000211
【０２５７】
ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、表４および５に示されるように、センス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドを含んでいた。注射は、首および肩の領域にわたる緩んだ皮膚に、皮膚と筋肉との間に行った（すなわち、皮下注射）。それぞれの群において３匹のマウスに試験を行った（ｎ＝３匹）。８日目、１５日目、２２日目、２９日目、および３６日目に血清を採取し、ＳＥＡＰ発現レベルを、上述の実施例２に記載されている手順に従って判定した。実験から得られたデータを、以下の表２２に示すが、平均ＳＥＡＰは、正規化されたＳＥＡＰ平均値を反映している。
【表２２−１】
2020537653.tif 000212
【表２２−２】
2020537653.tif 000213
【０２５８】
（実施例１１）
ＡＳＧＲ１−ＳＥＡＰマウスにおけるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のｉｎ  ｖｉｖｏ試験。
上述の実施例２において説明されているＡＳＧＲ１−ＳＥＡＰマウスモデルを使用した。１日目に、それぞれのマウスに、１．０ｍｇ／ｋｇのＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含有する２００μｌ、または対照として使用するためにＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含まない２００μｌの生理食塩水の単回皮下注射を、以下の表２３に従って、行った。
【表２３】
2020537653.tif 000214
【０２５９】
ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、表４および５に示されるように、センス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドを含んでいた。注射は、首および肩の領域にわたる緩んだ皮膚に、皮膚と筋肉との間に行った（すなわち、皮下注射）。それぞれの群において３匹のマウスに試験を行った（ｎ＝３匹）。８日目、１５日目、２２日目、２９日目、および３６日目に血清を採取し、ＳＥＡＰ発現レベルを、上述の実施例２に記載されている手順に従って判定した。実験から得られたデータを、以下の表２４に示すが、平均ＳＥＡＰは、正規化されたＳＥＡＰ平均値を反映している。
【表２４−１】
2020537653.tif 000215
【表２４−２】
2020537653.tif 000216
【０２６０】
（実施例１２）
ＡＳＧＲ１−ＳＥＡＰマウスにおけるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のｉｎ  ｖｉｖｏ試験。
上述の実施例２において説明されているＡＳＧＲ１−ＳＥＡＰマウスモデルを使用した。１日目に、それぞれのマウスに、１．０ｍｇ／ｋｇのＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含有する２００μｌ、または対照として使用するためにＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含まない２００μｌの生理食塩水の単回皮下注射を、以下の表２５に従って、行った。
【表２５】
2020537653.tif 000217
【０２６１】
ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、表４および５に示されるように、センス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドを含んでいた。注射は、首および肩の領域にわたる緩んだ皮膚に、皮膚と筋肉との間に行った（すなわち、皮下注射）。それぞれの群において３匹のマウスに試験を行った（ｎ＝３匹）。８日目、１５日目、２３日目、２９日目、および３６日目に血清を採取し、ＳＥＡＰ発現レベルを、上述の実施例２に記載されている手順に従って判定した。実験から得られたデータを、以下の表２６に示すが、平均ＳＥＡＰは、正規化されたＳＥＡＰ平均値を反映している。
【表２６】
2020537653.tif 000218
【０２６２】
（実施例１３）
ＡＳＧＲ１−ＳＥＡＰマウスにおけるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のｉｎ  ｖｉｖｏ試験。
上述の実施例２において説明されているＡＳＧＲ１−ＳＥＡＰマウスモデルを使用した。１日目に、それぞれのマウスに、１．０ｍｇ／ｋｇのＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含有する２００μｌ、または対照として使用するためにＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含まない２００μｌの生理食塩水の単回皮下注射を、以下の表２７に従って、行った。
【表２７】
2020537653.tif 000219
【０２６３】
ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、表４および５に示されるように、センス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドを含んでいた。注射は、首および肩の領域にわたる緩んだ皮膚に、皮膚と筋肉との間に行った（すなわち、皮下注射）。それぞれの群において３匹のマウスに試験を行った（ｎ＝３匹）。８日目、１６日目、２２日目、２９日目、および３６日目に血清を採取し、ＳＥＡＰ発現レベルを、上述の実施例２に記載されている手順に従って判定した。実験から得られたデータを、以下の表２８に示すが、平均ＳＥＡＰは、正規化されたＳＥＡＰ平均値を反映している。
【表２８−１】
2020537653.tif 000220
【表２８−２】
2020537653.tif 000221
【０２６４】
（実施例１４）
ＡＳＧＲ１−ＳＥＡＰマウスにおけるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のｉｎ  ｖｉｖｏ試験。
上述の実施例２において説明されているＡＳＧＲ１−ＳＥＡＰマウスモデルを使用した。１日目に、それぞれのマウスに、０．５ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、もしくは３．０ｍｇ／ｋｇのいずれかのＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含有する２００μｌ、または対照として使用するためにＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含まない２００μｌの生理食塩水の単回皮下注射を、以下の表２９に従って、行った。
【表２９】
2020537653.tif 000222
【０２６５】
ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、表４および５に示されるように、センス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドを含んでいた。注射は、首および肩の領域にわたる緩んだ皮膚に、皮膚と筋肉との間に行った（すなわち、皮下注射）。それぞれの群において３匹のマウスに試験を行った（ｎ＝３匹）。８日目、１５日目、２２日目、２９日目、および３６日目に血清を採取し、ＳＥＡＰ発現レベルを、上述の実施例２に記載されている手順に従って判定した。実験から得られたデータを、以下の表３０に示すが、平均ＳＥＡＰは、正規化されたＳＥＡＰ平均値を反映している。
【表３０−１】
2020537653.tif 000223
【表３０−２】
2020537653.tif 000224
【０２６６】
上述の表３０に示されるように、用量応答が、試験したＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のそれぞれについて、観察される。たとえば、２２日目に、ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５２０９は、投与した用量０．５ｍｇ／ｋｇでおよそ７３％（０．２６８）、１．０ｍｇ／ｋｇでおよそ８９％（０．１１３）、および３．０ｍｇ／ｋｇでおよそ９８％（０．０２４）のノックダウンを示した。
【０２６７】
（実施例１５）
カニクイザルにおけるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のｉｎ  ｖｉｖｏ試験。
ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を、カニクイザルにおいて評価した。１日目に、カニクイザル（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）霊長類（「カニクイザル」）に、生理食塩水中に製剤化された５．０ｍｇ／ｋｇのＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５１２６またはＡＤ０５１５０を含む０．３ｍＬ／ｋｇ（動物の大きさに応じておよそ２〜３ｍＬ体積）の単回皮下注射を与えた。ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、表４および５に示されるように、センス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドを含んでいた。
【０２６８】
それぞれの群において２匹のサルに試験を行った（ｎ＝２匹）。血液試料を採取し、１日目（投薬前）、８日目、１５日目、２２日目、２９日目、３６日目、および５０日目に、アルカリホスファターゼ（「ＡＬＰ」、「ＡＬＫＰ」、または「Ａｌｋ−Ｐｈｏｓ」と称される）および標準的な臨床化学パネルについて、血清試料を分析した。ＡＬＰは、ＡＳＧＲ１の基質であるため、ＡＳＧＲ１の低減は、ヒト集団でＡＳＧＲ１  ｄｅｌ１２保持者において観察されるように、ＡＬＰレベルを増加させることが予測される。全体として、ＡＳＧＲ１  ｄｅｌ１２保持者におけるＡＳＧＲ１レベルの５０％の低減は、ＡＬＰレベルのおよそ５０．１％の増加を示した。したがって、ＡＬＰは、ＡＳＧＲ１の低減およびＡＳＧＲ１遺伝子の阻害をモニタリングするための代理バイオマーカーとしての機能を果たすことが示されている。（Nioi  et  al.,  2016）。血清中のＡＬＰレベルを、Ｃｏｂａｓ（登録商標）Ｉｎｔｅｇｒａ  ４００（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）において、製造業者の推奨に従って測定した。
【０２６９】
実験から得られたデータを、以下の表３１および３２に示すが、これは、未加工のＡＬＰ値（単位／Ｌ）ならびに平均した個々の処置前レベルに対して正規化したＡＬＰを報告する。
【表３１】
2020537653.tif 000225
【表３２】
2020537653.tif 000226
【０２７０】
ＡＤ０５１２６またはＡＤ０５１５０のいずれかを投薬したカニクイザルのそれぞれは、測定したすべての時点にわたって、投薬前の測定値と比較して、ＡＬＰの増加を示し、ＡＳＧＲ１タンパク質レベルの低減およびＡＳＧＲ１の阻害を示した。
【０２７１】
（実施例１６）
カニクイザルにおけるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のｉｎ  ｖｉｖｏ試験。
ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を、カニクイザルにおいて評価した。１日目に、カニクイザル（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）霊長類（「カニクイザル」）に、生理食塩水中に製剤化された５．０ｍｇ／ｋｇのＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５１８６またはＡＤ０５１９６を含む０．３ｍＬ／ｋｇ（動物の大きさに応じておよそ２〜３ｍＬ体積）の単回皮下注射を与えた。ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、表４および５に示されるように、センス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドを含んでいた。
【０２７２】
それぞれの群において２匹のサルに試験を行った（ｎ＝２匹）。血液試料を採取し、１日目（投薬前）、８日目、１５日目、２２日目、２９日目、３６日目、および４３日目に、ＡＬＰおよび標準的な臨床化学パネルについて、血清試料を分析した。実施例１５に記載されるように、ＡＬＰは、ＡＳＧＲ１の低減およびＡＳＧＲ１遺伝子の阻害をモニタリングするための代理バイオマーカーとしての機能を果たす。血清中のＡＬＰレベルを、Ｃｏｂａｓ（登録商標）Ｉｎｔｅｇｒａ  ４００（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）において、製造業者の推奨に従って測定した。
【０２７３】
実験から得られたデータを、以下の表３３および３４に示すが、これは、未加工のＡＬＰ値（単位／Ｌ）ならびに平均した個々の処置前レベルに対して正規化したＡＬＰを報告する。
【表３３】
2020537653.tif 000227
【表３４】
2020537653.tif 000228
【０２７４】
（実施例１７）
カニクイザルにおけるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のｉｎ  ｖｉｖｏ試験。
ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を、カニクイザルにおいて評価した。１日目に、カニクイザル（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）霊長類に、生理食塩水中に製剤化された３．０ｍｇ／ｋｇのＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５１８３またはＡＤ０５１９３を含む０．３ｍＬ／ｋｇ（動物の大きさに応じておよそ２〜３ｍＬ体積）の単回皮下注射を与えた。ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、表４および５に示されるように、センス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドを含んでいた。
【０２７５】
それぞれの群において２匹のサルに試験を行った（ｎ＝２匹）。血液試料を採取し、８日目、１５日目、２２日目、２９日目、３６日目、および４３日目に、ＡＬＰおよび標準的な臨床化学パネルについて、血清試料を分析した。実施例１５に記載されるように、ＡＬＰは、ＡＳＧＲ１の低減およびＡＳＧＲ１遺伝子の阻害をモニタリングするための代理バイオマーカーとしての機能を果たす。血清中のＡＬＰレベルを、Ｃｏｂａｓ（登録商標）Ｉｎｔｅｇｒａ  ４００（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）において、製造業者の推奨に従って測定した。
【０２７６】
実験から得られたデータを、以下の表３５および３６に示すが、これは、未加工のＡＬＰ値（単位／Ｌ）ならびに平均した個々の処置前レベルに対して正規化したＡＬＰを報告する。
【表３５】
2020537653.tif 000229
【表３６】
2020537653.tif 000230
【０２７７】
（実施例１８）
カニクイザルにおけるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のｉｎ  ｖｉｖｏ試験。
ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を、カニクイザルにおいて評価した。１日目に、カニクイザル（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）霊長類に、生理食塩水中に製剤化された、総用量５．０ｍｇ／ｋｇで１６．７ｍｇ／ｍＬのＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５２０９、ＡＤ０５１９５、またはＡＤ０５２５６を含む０．３ｍＬ／ｋｇ（動物の大きさに応じておよそ２〜３ｍＬ体積）の単回皮下注射を与えた。ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、表４および５に示されるように、センス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドを含んでいた。
【０２７８】
それぞれの群において２匹のサルに試験を行ったが、１匹のみに投薬したＡＤ０５１９５は除く。血液試料を採取し、８日目、１５日目、２２日目、および２９日目に、ＡＬＰおよび標準的な臨床化学パネルについて、血清試料を分析した。実施例１５に記載されるように、ＡＬＰは、ＡＳＧＲ１の低減およびＡＳＧＲ１遺伝子の阻害をモニタリングするための代理バイオマーカーとしての機能を果たす。血清中のＡＬＰレベルを、Ｃｏｂａｓ（登録商標）Ｉｎｔｅｇｒａ  ４００（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）において、製造業者の推奨に従って測定した。
【０２７９】
実験から得られたデータを、以下の表３７および３８に示すが、これは、未加工のＡＬＰ値（単位／Ｌ）ならびに平均した個々の処置前レベルに対して正規化したＡＬＰを報告する。
【表３７】
2020537653.tif 000231
【表３８】
2020537653.tif 000232
【０２８０】
（実施例１９）
カニクイザルにおけるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のｉｎ  ｖｉｖｏ試験。
ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を、カニクイザルにおいて評価した。１日目に、カニクイザル（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）霊長類に、生理食塩水中に製剤化された、総用量３．０ｍｇ／ｋｇ、５．０ｍｇ／ｋｇ、または８．０ｍｇ／ｋｇで、それぞれ、１０．０ｍｇ／ｍＬ、１６．７ｍｇ／ｍＬ、または２６．７ｍｇ／ｍＬのＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５１８３を含む０．３ｍＬ／ｋｇ（動物の大きさに応じておよそ２〜３ｍＬ体積）の単回皮下注射を与えた。追加の群には、対照として使用するために、０．３ｍＬ／ｋｇ（動物の大きさに応じておよそ２〜３ｍＬ体積）で、生理食塩水を投薬した。ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、表４および５に示されるように、センス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドを含んでいた。
【０２８１】
それぞれの群において２匹のサルに試験を行ったが、生理食塩水対照を投薬したサルのうちの１匹が、１５日目よりも前に死亡したことを除く。血液試料を採取し、８日目、１５日目、２２日目、２９日目、３６日目、４３日目、５０日目、および５７日目に、ＡＬＰおよび標準的な臨床化学パネルについて、血清試料を分析した。実施例１５に記載されるように、ＡＬＰは、ＡＳＧＲ１の低減およびＡＳＧＲ１遺伝子の阻害をモニタリングするための代理バイオマーカーとしての機能を果たす。血清中のＡＬＰレベルを、Ｃｏｂａｓ（登録商標）Ｉｎｔｅｇｒａ  ４００（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）において、製造業者の推奨に従って測定した。
【０２８２】
実験から得られたデータを、以下の表３９および４０に示すが、これは、未加工のＡＬＰ値（単位／Ｌ）ならびに平均した個々の処置前レベルに対して正規化したＡＬＰを報告する。
【表３９】
2020537653.tif 000233
【０２８３】
【表４０−１】
2020537653.tif 000234
【表４０−２】
2020537653.tif 000235
【０２８４】
（実施例２０）
ＡＳＧＲ１−ＳＥＡＰマウスにおけるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のｉｎ  ｖｉｖｏ試験。
上述の実施例２において説明されているＡＳＧＲ１−ＳＥＡＰマウスモデルを使用した。１日目に、それぞれのマウスに、１．０ｍｇ／ｋｇのＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含有する２００μｌ、または対照として使用するためにＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含まない２００μｌの生理食塩水の単回皮下注射を、以下の表４１に従って、行った。
【表４１】
2020537653.tif 000236
【０２８５】
ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、表４および５に示されるように、センス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドを含んでいた。注射は、首および肩の領域にわたる緩んだ皮膚に、皮膚と筋肉との間に行った（すなわち、皮下注射）。それぞれの群において３匹のマウスに試験を行った（ｎ＝３匹）。８日目、１５日目、２２日目、２９日目、および３６日目に血清を採取し、ＳＥＡＰ発現レベルを、上述の実施例２に記載されている手順に従って判定した。実験から得られたデータを、以下の表４２に示すが、平均ＳＥＡＰは、正規化されたＳＥＡＰ平均値を反映している。
【表４２−１】
2020537653.tif 000237
【表４２−２】
2020537653.tif 000238
【０２８６】
（実施例２１）
ＡＳＧＲ１−ＳＥＡＰマウスにおけるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のｉｎ  ｖｉｖｏ試験。
上述の実施例２において説明されているＡＳＧＲ１−ＳＥＡＰマウスモデルを使用した。１日目に、それぞれのマウスに、１．０ｍｇ／ｋｇのＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含有する２００μｌ、または対照として使用するためにＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含まない２００μｌの生理食塩水の単回皮下注射を、以下の表４３に従って、行った。
【表４３】
2020537653.tif 000239
【０２８７】
ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、表４および５に示されるように、センス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドを含んでいた。注射は、首および肩の領域にわたる緩んだ皮膚に、皮膚と筋肉との間に行った（すなわち、皮下注射）。それぞれの群において３匹のマウスに試験を行った（ｎ＝３匹）。８日目、１５日目、２２日目、２９日目、および３６日目に血清を採取し、ＳＥＡＰ発現レベルを、上述の実施例２に記載されている手順に従って判定した。実験から得られたデータを、以下の表４４に示すが、平均ＳＥＡＰは、正規化されたＳＥＡＰ平均値を反映している。
【表４４−１】
2020537653.tif 000240
【表４４−２】
2020537653.tif 000241
【０２８８】
（実施例２２）
カニクイザルにおけるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のｉｎ  ｖｉｖｏ試験。
ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を、カニクイザルにおいて評価した。１日目に、カニクイザル（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）霊長類に、それぞれ、生理食塩水中に製剤化された、総用量３．０ｍｇ／ｋｇで１０．０ｍｇ／ｍＬのＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５２０９、ＡＤ０５３７４、ＡＤ０５６０９、またはＡＤ０５６９２のいずれかを含む０．３ｍＬ／ｋｇ（動物の大きさに応じておよそ２〜３ｍＬ体積）の単回皮下注射を与えた。ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、表４および５に示されるように、センス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドを含んでいた。
【０２８９】
それぞれの群において２匹のサルに試験を行った。血液試料を採取し、８日目、１５日目、２２日目、２９日目、および３６日目に、ＡＬＰおよび標準的な臨床化学パネルについて、血清試料を分析した。実施例１５に記載されるように、ＡＬＰは、ＡＳＧＲ１の低減およびＡＳＧＲ１遺伝子の阻害をモニタリングするための代理バイオマーカーとしての機能を果たす。血清中のＡＬＰレベルを、Ｃｏｂａｓ（登録商標）Ｉｎｔｅｇｒａ  ４００（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）において、製造業者の推奨に従って測定した。
【０２９０】
実験から得られたデータを、以下の表４５および４６に示すが、これは、未加工のＡＬＰ値（単位／Ｌ）ならびに個々の処置前レベルの平均に対して正規化したＡＬＰを報告する。
【表４５】
2020537653.tif 000242
【０２９１】
【表４６−１】
2020537653.tif 000243
【表４６−２】
2020537653.tif 000244
【０２９２】
上述の表４５および４６に提示されているデータにおいて示されるように、ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、カニクイザルにおける投与の後に、報告されるＡＬＰレベルの増加を示した。たとえば、３．０ｍｇ／ｋｇのＡＤ０５２０９を投薬したカニクイザルの両方が、２２日目、２９日目、および３６日目において、ベースラインと比較して、それぞれのＡＬＰレベルが２倍になった（たとえば、ベースラインと比較した比を示す表４６を参照されたい）。
【０２９３】
（実施例２３）
ＡＳＧＲ１−ＳＥＡＰマウスにおけるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のｉｎ  ｖｉｖｏ試験。
上述の実施例２において説明されているＡＳＧＲ１−ＳＥＡＰマウスモデルを使用した。１日目に、それぞれのマウスに、１．０ｍｇ／ｋｇのＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含有する２００μｌ、または対照として使用するためにＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を含まない２００μｌの生理食塩水の単回皮下注射を、以下の表４７に従って、行った。
【表４７】
2020537653.tif 000245
【０２９４】
ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、表４および５に示されるように、センス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドを含んでいた。注射は、首および肩の領域にわたる緩んだ皮膚に、皮膚と筋肉との間に行った（すなわち、皮下注射）。それぞれの群において３匹のマウスに試験を行った（ｎ＝３匹）。８日目、１５日目、２２日目、および２９日目に血清を採取し、ＳＥＡＰ発現レベルを、上述の実施例２に記載されている手順に従って判定した。実験から得られたデータを、以下の表４８に示すが、これは、処置前および対照に対して正規化したＳＥＡＰの正規化した平均値を反映する平均ＳＥＡＰを示し、以下の表４９には、処置前のレベルに対してのみ正規化したＳＥＡＰの正規化した平均値を反映する平均ＳＥＡＰを示す。
【表４８】
2020537653.tif 000246
【０２９５】
【表４９】
2020537653.tif 000247
【０２９６】
（実施例２４）
カニクイザルにおけるＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のｉｎ  ｖｉｖｏ試験。
ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤を、カニクイザルにおいてＡＳＧＲ１  ｍＲＮＡレベルの低減に関して評価した。１日目に、雌性のカニクイザル（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）霊長類（「カニクイザル」）に、それぞれ、生理食塩水中に製剤化された、総用量３．０ｍｇ／ｋｇで１０．０ｍｇ／ｍＬのＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５１９３またはＡＤ０５２０９のいずれかを含む０．３ｍＬ／ｋｇ（動物の大きさに応じておよそ２〜３ｍＬ体積）の単回皮下注射を与えた。ＡＳＧＲ１  ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、表４、５、および６に示されるように、（ＮＡＧ３７）ｓの構造を有する、センス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドを含んでいた。
【０２９７】
それぞれの群において４匹のサルに試験を行った。−７日目（処置前）、１５日目、２９日目、４３日目、および５７日目に、肝臓生検を採取した。それぞれの生検採取の日に、カニクイザルを、麻酔し、超音波ガイド下肝臓生検を行って、肝臓組織試料を抽出した。中葉からおよそ１００ｍｇの肝臓試料を採取し、ＲＮＡ単離のために液体窒素中で瞬間凍結させた。生検試料を、次いで、ホモジナイズし、カニクイザル肝臓におけるＡＳＧＲ１  ｍＲＮＡのレベルを、ＲＴ−ｑＰＣＲによって測定した。結果として得られた値を、次に、ΔΔＣＴ方法を使用して、投薬前（この事例では、−７日目）のＡＳＧＲ１  ｍＲＮＡ測定値に対して正規化し、これは、以下の表５０に反映されている。
【０２９８】
加えて、−１４日目、−１日目、１日目（投薬前）、８日目、１５日目、２２日目、２９日目、３６日目、４３日目、５７日目、７１日目、および８５日目に、血清試料を採取し、それぞれの日の血清中のＡＬＰレベルを、Ｃｏｂａｓ（登録商標）Ｉｎｔｅｇｒａ  ４００（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）において、製造業者の推奨に従って測定し、これを、以下の表５１および５２に報告する。
【表５０】
2020537653.tif 000248
【０２９９】
【表５１】
2020537653.tif 000249
【０３００】
【表５２−１】
2020537653.tif 000250
【表５２−２】
2020537653.tif 000251
【０３０１】
両方の群におけるカニクイザルが、測定したすべての時点において、処置前の測定値と比較して、肝臓特異的ＡＳＧＲ１  ｍＲＮＡの有意な低減を示した。４３日目には、投薬前のレベルと比較して、たとえば、群１（ＡＤ０５１９３）のカニクイザルは、ＡＳＧＲ１  ｍＲＮＡのおよそ７５．２％（０．２４８）の低減を有し、一方で、群２（ＡＤ０５２０９）のカニクイザルは、およそ７６．３％（０．２３７）の低減を有した。
【０３０２】
他の実施形態
本発明は、その詳細な説明とともに記載されているが、前述の説明は、例示を意図するものであり、添付の特許請求の範囲によって定められる本発明の範囲を制限することを意図するものではないことを理解されたい。他の態様、利点、および修正が、以下の特許請求の範囲内に含まれる。
【図１Ａ】
2020537653.tif 000262
【図１Ｂ】
2020537653.tif 000263
【図１Ｃ】
2020537653.tif 000264
【図１Ｄ】
2020537653.tif 000265
【図１Ｅ】
2020537653.tif 000266
【図１Ｆ】
2020537653.tif 000267
【図１Ｇ】
2020537653.tif 000268
【図１Ｈ】
2020537653.tif 000269
【図１Ｉ】
2020537653.tif 000270
【図１Ｊ】
2020537653.tif 000271
【図１Ｋ】
2020537653.tif 000272
【図１Ｌ】
2020537653.tif 000273
【図１Ｍ】
2020537653.tif 000274
【図２Ａ】
2020537653.tif 000275
【図２Ｂ】
2020537653.tif 000276
【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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