(57)【要約】ＴＬＲ７／８作動薬などのトル様受容体（「ＴＬＲ」）作動薬のマルチアームポリマーコンジュゲート、並びに関連する組成物及びこのようなコンジュゲートを作製し、且つ使用する方法が提供される。例示的なコンジュゲートは、式Ｉ：2020514300.tif 000095又はその薬学的に許容可能な塩形態に包含され、式中、ＲがＱと一緒になって、３〜約５０個のヒドロキシル、チオール、又はアミノ基を担持するポリオール、ポリチオール、又はポリアミンの残基であり；各Ｑは、酸素、硫黄及び−ＮＨから選択されるリンカーであり；各ＰＯＬＹは、独立して、水溶性非ペプチド性ポリマーであり；各Ｘｒは、独立して、結合を含むスペーサ部分であり；ｑは、３〜約５０の正の整数であり；且つ各ＴＬＲ７／８  ＡＧは、トル様受容体７／８作動薬である。癌を有する患者に（ａ）ＩＬ−２Ｒβ活性化量の長時間作用型ＩＬ−２Ｒβ選択的作動薬；及び（ｂ）上記のコンジュゲートなどのトル様受容体作動薬を投与する方法、並びに関連する組成物、キット及び方法もまた提供される。
2020514300.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
結合を含むスペーサ部分を介して、マルチアーム水溶性非ペプチド性ポリマーに共有結合しているＴＬＲ７／８作動薬を含むコンジュゲート。
【請求項２】
前記ＴＬＲ７／８作動薬が低分子である、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項３】
前記マルチアーム水溶性ポリマーが３〜約５０のポリマーアームを含む、請求項１又は請求項２に記載のコンジュゲート。
【請求項４】
前記マルチアーム水溶性非ペプチド性ポリマーの前記アームの１つ以上の末端で共有結合している前記ＴＬＲ７／８作動薬を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項５】
前記マルチアーム水溶性非ペプチド性ポリマーの前記アームの各々の末端で共有結合している前記ＴＬＲ７／８作動薬を含む、請求項４に記載のコンジュゲート。
【請求項６】
式Ｉ：
【化１】
2020514300.tif 000084
（式中：
ＲがＱと一緒になって、３〜約５０個のヒドロキシル、チオール、又はアミノ基を担持するポリオール、ポリチオール、又はポリアミンの残基であり；
各Ｑは、酸素、硫黄及び−ＮＨから選択されるリンカーであり；
各ＰＯＬＹは、独立して、水溶性非ペプチド性ポリマーであり；
各Ｘｒは、独立して、結合を含むスペーサ部分であり；
ｑは、３〜約５０の正の整数であり；且つ
各ＴＬＲ７／８  ＡＧは、トル様受容体７／８作動薬である）
に係る、請求項４に記載のコンジュゲート又は
その薬学的に許容可能な塩形態。
【請求項７】
前記ＴＬＲ７／８作動薬が、（Ｎ−［４−（４−アミノ−２−エチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５ｃ］キノリン−１−イル）ブチル］メタンスルホンアミド又は［８−（３−（ピロリジン−１−イルメチル）ベンジル）−４−アミノ−２−ブトキシ−７，８−ジヒドロプテリジン−６（５Ｈ）−オン］である、請求項１〜６のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項８】
前記ＴＬＲ７／８作動薬がイミダゾキノリン化合物である、請求項１〜６のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項９】
前記ＴＬＲ７／８作動薬がレシキモド又はイミキモドである、請求項１〜６のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項１０】
ＲがＱと一緒になって、ポリオールの残基である、請求項１〜９のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項１１】
各Ｘｒが、独立して、好適な結合を含むスペーサ部分である、請求項６〜１０のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項１２】
各Ｘｒが、独立して、放出可能な結合を含むスペーサ部分である、請求項６〜１０のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項１３】
ｑが、３〜１０の正の整数である、請求項６〜１２のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項１４】
ｑが、３〜６の正の整数である、請求項６〜１２のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項１５】
ｑが、３、４、及び５から選択される、請求項６〜１２のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項１６】
ｑが４である、請求項６〜１２のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項１７】
前記結合を含むスペーサ部分が、チオエーテル、カルバマート、エステル、カルボナート、又は尿素官能基を含む、請求項１〜１６のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項１８】
前記結合を含むスペーサ部分が、酵素切断可能なペプチド性結合を含む、請求項１〜１６のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項１８】
Ｘｒが式ＩＩ：
〜［Ｘ１］ａ−［Ｌｒ］ｂ−Ｘ２〜
式ＩＩ
（式中：
ａは、０又は１であり；
ｂは、０又は１であり；
Ｘ１は、存在する場合、スペーサであり；
Ｌｒは、存在する場合、結合であり；且つ
Ｘ２は、前記ＴＬＲ７／８作動薬に直接共有結合している官能基である）
に係る、請求項１〜１８のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項１９】
Ｘ１が存在する、請求項１８に記載のコンジュゲート。
【請求項２０】
Ｘ１が、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）−である、請求項１９に記載のコンジュゲート。
【請求項２１】
Ｘ１が存在しない、請求項１８に記載のコンジュゲート。
【請求項２２】
Ｘ２が、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、及び−ＮＨからなる群から選択される、請求項１８〜２１のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項２３】
Ｌｒが存在する、請求項１８〜２２のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項２４】
Ｌｒが、−（ＣＲｘＲｙ）ｚ−、及び−ＮＨ（ＣＲｘＲｙ）ｚ−からなる群から選択され、各Ｒｘ及びＲｙが、独立して、水素、低級アルキル、ハロ、及びハロ置換低級アルキルから選択され、ｚが１〜６の整数である、請求項２３に記載のコンジュゲート。
【請求項２５】
Ｌｒが、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−  −ＣＨ２ＣＨＦ−、−ＣＨＣＨ３−、−ＣＨＣＨ（ＣＨ３）２−、−ＣＨＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２−、−Ｃ（ＣＨ３）２−、−ＮＨＣＨ２−、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２−、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−  −ＮＨＣＨ２ＣＨＦ−、−ＮＨＣＨＣＨ３−、−ＮＨＣＨＣＨ（ＣＨ３）２−、−ＮＨＣＨＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２−、及び−ＮＨＣ（ＣＨ３）２−から選択される、請求項２４に記載のコンジュゲート。
【請求項２６】
前記水溶性非ペプチド性ポリマーがポリ（アルキレンオキシド）である、請求項１〜２５のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項２７】
前記ポリ（アルキレンオキシド）がポリ（エチレンオキシド）である、請求項２６に記載のコンジュゲート。
【請求項２８】
「ｑ」ポリマーアームの各々に含まれる前記水溶性非ペプチド性ポリマーが、約１〜約３０個の単量体サブユニットを含有する、請求項１〜２７のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項２９】
前記水溶性非ペプチド性ポリマーが、約２，０００ダルトン〜約１５０，０００ダルトンの分子量を有する、請求項１〜２８のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項３０】
前記水溶性非ペプチド性ポリマーが、約５，０００ダルトン〜約４０，０００ダルトンの分子量を有する、請求項１〜２９のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項３１】
前記水溶性非ペプチド性ポリマーが、約５，０００ダルトン〜約２５，０００ダルトンの分子量を有する、請求項１〜３０のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項３２】
式ＩＩＩ：
【化２】
2020514300.tif 000085
に係る式を有する、請求項１に記載のコンジュゲート
又はその薬学的に許容可能な塩若しくは立体異性体（式中：
Ｌは、−（ＣＨ２）ｍ−、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｍ−、−ＣＨＦ−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｍ−、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｍ−、−（ＣＨ２）ｍ−ＣＨ（ＣＨ（ＣＨ３）２）−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｍ−、−（ＣＨ２）ｍ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｍ−、−Ｃ（ＣＨ３）２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｍ−、単結合、又は−ＮＨ−（ＣＨ２）ｍ−であり、
各ｍは、独立して、１〜５の整数（両端を含む）であり；
各ｎは、独立して、４０〜３５０の整数（両端を含む）であり；
Ｒ１は、水素又は−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ３−であり；且つ
Ｒ２は、水素又はヒドロキシルである）。
【請求項３３】
Ｌが、−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨＦ−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ（ＣＨ３）２）−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−Ｃ（ＣＨ３）２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、単結合、又は−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−である、請求項３２に記載のコンジュゲート。
【請求項３４】
各ｎが、独立して、１００〜２５０の整数（両端を含む）である、請求項３１又は請求項３２に記載のコンジュゲート。
【請求項３５】
Ｒ１が水素であり、且つＲ２が水素である、請求項３２〜３４のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項３６】
Ｒ１が−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ３−であり、且つＲ２がヒドロキシルである、請求項３２〜３４のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項３７】
化合物１〜１０及び１２〜１６：
【化３】
2020514300.tif 000086
【化４】
2020514300.tif 000087
【化５】
2020514300.tif 000088
からなる群から選択されるコンジュゲート又はその薬学的に許容可能な塩若しくは立体異性体（式中、各ｎは、独立して、４０〜３５０の整数である）。
【請求項３８】
請求項１〜３７のいずれか一項に記載のコンジュゲート及び薬学的に許容可能な賦形剤を含む組成物。
【請求項３９】
請求項１〜３８のいずれか一項に記載のコンジュゲート又は組成物又は組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、治療の方法。
【請求項４０】
癌の治療に使用するための、請求項１〜３７のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項４１】
癌の治療に有用な薬剤の調製に使用するための、請求項１〜３７のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項４２】
癌を有する対象に（ｉ）結合を含むスペーサ部分を介してマルチアーム水溶性非ペプチド性ポリマーに共有結合している、ＴＬＲ７／８受容体活性化量のＴＬＲ７／８作動薬を含む請求項１〜３７のいずれか一項に記載のコンジュゲート、及び（ｉｉ）ＩＬ−２Ｒβ活性化量の長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬を投与することを含む、投与の方法。
【請求項４３】
前記コンジュゲート及び前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬が、同時に又は連続的に、並びに任意の順序で、並びに同一及び／又は異なる投与経路により、それぞれ免疫調節量で投与される、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記方法が、１回のサイクルの投与を含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記方法が、２回以上のサイクルの投与を含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項４６】
前記コンジュゲートを局所的に投与し、前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬を非経口投与する、請求項４２〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
前記コンジュゲートを、癌性腫瘍の部位に直接（即ち、腫瘍内）投与する、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記コンジュゲートを前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬と別個に前記対象に投与する、請求項４２〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
前記コンジュゲートを前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬の投与前に前記対象に投与する、請求項４２〜４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
前記コンジュゲートと前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬とを治療の１日目に両方投与する、請求項４２〜４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５１】
前記コンジュゲートを治療の１日目に投与し、前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬を治療の１〜４日目のいずれか１日に投与する、請求項４２〜４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
前記対象がヒト対象である、請求項４２〜５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
前記癌が固形癌である、請求項４２〜５２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
前記固形癌が、乳癌、卵巣癌、結腸癌、前立腺癌、骨癌、結腸直腸癌、胃癌、リンパ腫、悪性黒色腫、肝癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膵癌、甲状腺癌、腎癌、胆管癌、脳癌、子宮頸癌、上顎洞癌、膀胱癌、食道癌、ホジキン病及び副腎皮質癌からなる群から選択される、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬がポリエチレングリコールに放出可能に共有結合しているアルデスロイキンを含む、請求項４２〜５４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬が４つから、５つ及び６つのポリエチレングリコールポリマーに放出可能に共有結合しているアルデスロイキンを含む、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬が平均約６つのポリエチレングリコールポリマーに放出可能に共有結合しているアルデスロイキンを含む、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
アルデスロイキンに放出可能に共有結合している前記ポリエチレングリコールポリマーが、分枝状である、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬が、以下の式：
【化６】
2020514300.tif 000089
（式中、ＩＬ−２はインターロイキン−２であり、「ｎ」は約３〜約４０００の整数である）に包含される化合物、又はその薬学的に許容可能な塩を含む、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬が、以下の式
【化７】
2020514300.tif 000090
（式中、ＩＬ−２はインターロイキン−２であり、ｎ’は１、２、３、７及び＞７からなる群から選択される整数である）に包含される化合物、及びその薬学的に許容可能な塩を１０％以下（モル量基準）含む組成物中に含まれる、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記コンジュゲートが、以下の構造：
【化８】
2020514300.tif 000091
（式中、各ｎは、独立して４０〜３５０の整数である）を有する、請求項４２〜６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６２】
前記ポリマーアームの各々におけるｎの値が、実質的に同じである、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記ポリマーアームの各々におけるｎの値が、約１１３である、請求項６１に記載の方法。
【請求項６４】
前記投与が、前記対象においてアブスコパル効果をもたらすのに有効である、請求項４２〜６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６５】
前記投与が、マウスＣＴ−２６結腸腫瘍モデルなどの好適な動物モデルにおいて評価される場合、ビヒクルのみの群における全ての対象が０％の生存率に達した日の後である治療の開始後の日において、治療効果が同等の用量で対象に併用して投与される場合に前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬又は前記コンジュゲートのいずれかの単独投与について観察されるものを超える生存率パーセントを提供するのに有効である、請求項４２〜６４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６６】
癌を有する対象の治療に使用するための併用であって、前記併用が、ＩＬ−２Ｒβ活性化量の長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬と自然免疫活性化量の請求項１〜３７のいずれか一項に記載のコンジュゲートを含み、癌を有する対象の治療に使用するための説明書を伴う、併用。
【請求項６７】
前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬が、ポリエチレングリコールに放出可能に共有結合しているアルデスロイキンを含む、請求項６６に記載の併用。
【請求項６８】
前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬が４つから、５つ及び６つのポリエチレングリコールポリマーに放出可能に共有結合しているアルデスロイキンを含む、請求項６７に記載の併用。
【請求項６９】
前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬が平均約６つのポリエチレングリコールポリマーに放出可能に共有結合しているアルデスロイキンを含む、請求項６８に記載の併用。
【請求項７０】
アルデスロイキンに放出可能に共有結合している前記ポリエチレングリコールポリマーが、分枝状である、請求項６７〜６９のいずれか一項に記載の併用。
【請求項７１】
前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬が、以下の式：
【化９】
2020514300.tif 000092
（式中、ＩＬ−２はインターロイキン−２であり、「ｎ」は約３〜約４０００の整数である）
に包含される化合物、又はその薬学的に許容可能な塩を含む、請求項６６に記載の併用。
【請求項７２】
前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬が、以下の式
【化１０】
2020514300.tif 000093
（式中、ＩＬ−２はインターロイキン−２であり、ｎ’は１、２、３、７及び＞７からなる群から選択される整数である）に包含される化合物、又はその薬学的に許容可能な塩を１０％以下（モル量基準）含む組成物中に含まれる、請求項７１に記載の併用。
【請求項７３】
前記コンジュゲートが、以下の式：
【化１１】
2020514300.tif 000094
（式中、各ｎは、独立して、４０〜３５０の整数である）を有する、請求項６６〜７２のいずれか一項に記載の併用。
【請求項７４】
前記ポリマーアームの各々におけるｎの値が、実質的に同じである、請求項７３に記載の併用。
【請求項７５】
前記ポリマーアームの各々におけるｎの値が、約１１３である、請求項７３に記載の併用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、米国特許法第１１９条（ｅ）のもと、２０１７年１月１０日に出願された米国仮特許出願第６２／４４４，７３５号、２０１７年１月１０日に出願された米国仮特許出願第６２／４４４，７５６号、２０１７年３月７日に出願された米国仮特許出願第６２／４６７，９４５号、２０１７年４月２１日に出願された米国仮特許出願第６２／４８８，２５１号、２０１７年４月２１日に出願された米国仮特許出願第６２／４８８，４０７号、２０１７年５月２３日に出願された米国仮特許出願第６２／５１０，０１９号、及び２０１７年５月２３日に出願された米国仮特許出願第６２／５１０，０２４号の優先権の利益を主張するものであり、これらの仮特許出願の内容は参照により全体として本明細書に援用される。
【０００２】
本願は、（特に）トル様受容体（「ＴＬＲ」）作動薬、詳細には、ＴＬＲ７及び／又はＴＬＲ８のトル様受容体作動薬のマルチアームポリマーコンジュゲート、並びにマルチアームポリマーＴＬＲ作動薬コンジュゲートを含む組成物、並びにそのコンジュゲートを作製し、且つ使用する方法に関する。本願はまた、癌免疫療法の分野に関し、且つ例えば、本明細書でより詳細に記載される、トル様受容体（ＴＬＲ）作動薬、例えば、トル様受容体作動薬のマルチアームポリマーコンジュゲートと長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬とを併用して個体に投与することによる癌を有する個体の治療、並びに関連する組成物及び方法を含む。
【背景技術】
【０００３】
トル様受容体（「ＴＬＲ」）は、自然免疫系及び適応免疫系に属する複数の細胞型で発現される。今日までに、少なくとも１３種の様々なＴＬＲが哺乳動物において同定されている（Ｚｈａｏ，Ｇ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｆｏｒ  ＩｍｍｕｎｏＴｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  ２０１４，２：１２）。ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、及びＴＬＲ１０は細胞表面上で発現するが、ＴＬＲ３、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、及びＴＬＲ９は、細胞内部のエンドソーム膜上に位置する（Ｋａｃｚａｎｏｗｓｋａ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ  Ｂｉｏｌ．２０１３  Ｊｕｎ；９３（６）：８４７−８６３）。ＴＬＲは、病原菌及び病原菌関連分子パターン（ＰＡＭＰ）と呼ばれる悪性細胞由来分子を検知するセンサーであり、それらがＴＬＲに結合すると、樹状細胞（ＤＣ）及びマクロファージなどの他の抗原提示細胞において炎症性サイトカインの産生をもたらす（ＮＦ）−κＢ並びにＩ型インターフェロン経路を誘発する。ＴＬＲは、ＤＣ成熟の刺激、抗原取り込み及び抗原提示、並びにＣＤ４＋細胞の分化並びに制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞の制御において極めて重要である。
【０００４】
ＴＬＲ作動薬はそれらの抗腫瘍特性について調査されてきたが、概して、大部分のＴＬＲ作動薬は癌治療法として期待した成果をあげていない。このような低迷は、免疫抑制性因子の誘導がＴＬＲ作動薬誘導性炎症を弱める機構によって説明され得ると仮定されてきた。（Ｌｕ，Ｈ．Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｍａｒｃｈ  ２０１４，５，８３）。例えば、ＴＬＲ作動薬は、樹状細胞上のＣＤ８０、ＣＤ８６、及びＣＤ４０などの共刺激分子、並びに免疫応答を方向づけするＴＮＦ−α及びＩＬ−１２などの炎症性サイトカインの誘導を介した免疫刺激効果を有する。しかしながら、ＴＬＲ作動薬はまた、例えば、ＩＬ−１０、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、及びＰＤ−１を含む、これら全ては抗腫瘍免疫を抑制することが可能ないくつかの免疫抑制性因子を誘導することによって、免疫抑制効果を有する（Ｌｕ，Ｈ．，２０１４、同個所）。
【０００５】
ＴＬＲ−７、ＴＬＲ−８、及びＴＬＲ−９は、それらの核酸モチーフの認識及びエンドソーム区画内での発現において類似している（Ｚｈａｏ，Ｇ．，２０１４、同個所）。合成及び天然のヌクレオシドの両方であるいくつかのリガンドが、ＴＬＲ７及び／又はＴＬＲ８リガンドとして特徴付けられてきた。ＴＬＲ７受容体又はＴＬＲ８受容体によるこれらのヌクレオシドリガンドの認識により、炎症性サイトカイン、ケモカイン、及びＩ型インターフェロン（ＩＦＮ）の誘導、並びに共刺激分子の上方制御が極点に達する細胞内経路が活性化される。ＴＬＲは、病原菌関連分子パターンの認識に関与するロイシンリッチリピートで構成される外部ドメイン、及び下流のシグナル伝達に必要であるトル／インターロイキン−１受容体（ＴＩＲ）ドメインと呼ばれる細胞質ドメインによって特徴付けられるＩ型膜タンパク質である。ＴＬＲ７及びＴＬＲ８は密接に関係しており、細胞内エンドソームでのそれらの所在及びリガンドを共有している。ＴＬＲ７又はＴＬＲ８によるリガンドの認識に続いて、ＴＬＲドメイン含有アダプター分子であるミエロイド系分化初期応答遺伝子８８（ＭｙＤ８８）の動員が起こる。ＴＬＲ７／８及びＭｙＤ８８の会合が、インターロイキン−１受容体関連キナーゼファミリーのメンバーの動員を刺激し、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）及びＩκＢキナーゼ（ＩＫＫ）複合体の下流での活性化を引き起こす。ＴＬＲ７及びＴＬＲ８のトル様受容体作動薬はマクロファージを活性化し、またいくつかの例では、腫瘍環境を腫瘍促進性環境から腫瘍抑制性（炎症性）環境へと変化させることができる。
ＤＣ、単球、マクロファージ、線維芽細胞、及びヒトケラチノサイトなどのいくつかの細胞型を活性化し、アポトーシスを誘導し、免疫原性の増大、並びに細胞傷害性Ｔ細胞リンパ球及び化学療法により媒介される殺傷に対する感作の増大を引き起こすことができるそれらの潜在的な能力を考慮すれば、ＴＬＲリガンドは、有効な抗腫瘍免疫応答を引き起こす潜在力を有する免疫応答調節剤の部類であると見なされる。さらに、ＴＬＲ８リガンドは、ＣＤ８＋Ｔｒｅｇ細胞の抑制性の機能を逆転させることが示されている（Ｋｉｎｉｗａ  Ｙ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００７；１３：６９４７−５８）。さらに、ＴＬＲ８リガンドの適用は、腫瘍環境を腫瘍促進性から腫瘍抑制性に変える腫瘍浸潤性Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇ細胞の誘導をもたらした（Ａｎｚ  Ｄ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０１５；７５：４４８３−９３）。他方では、ＴＬＲ活性化は、特定の例において、腫瘍細胞の増殖、侵襲性、及び／又は生存にとって有利であることが示されている（例えば、Ｂｏｈｎｈｏｒｓｔ  Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ２００６；２０：１１３８−１１４４；及びＪｅｇｏ  Ｇ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ２００６；２０：１１３０−１１３７を参照されたい）。ある種のＴＬＲ７／８作動薬はまた、免疫抑制及び自己免疫疾患を誘発することが示されている（Ｃｈｉ  Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ．２０１７；８：３０４）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｚｈａｏ，Ｇ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｆｏｒ  ＩｍｍｕｎｏＴｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  ２０１４，２：１２
【非特許文献２】Ｋａｃｚａｎｏｗｓｋａ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ  Ｂｉｏｌ．２０１３  Ｊｕｎ；９３（６）：８４７−８６３
【非特許文献３】Ｌｕ，Ｈ．Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｍａｒｃｈ  ２０１４，５，８３
【非特許文献４】Ｋｉｎｉｗａ  Ｙ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００７；１３：６９４７−５８
【非特許文献５】Ａｎｚ  Ｄ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０１５；７５：４４８３−９３
【非特許文献６】Ｂｏｈｎｈｏｒｓｔ  Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ２００６；２０：１１３８−１１４４
【非特許文献７】Ｊｅｇｏ  Ｇ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ２００６；２０：１１３０−１１３７
【非特許文献８】Ｃｈｉ  Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ．２０１７；８：３０４
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
上述の欠点の１つ以上を克服する新たなＴＬＲ作動薬及び改善されたＴＬＲ作動薬の開発における多大な試行が存在しているが、新たなより有効なＴＬＲ作動薬、並びに先行技術の化合物及び現存の治療方法の欠点を克服する一方で、炎症などの重大な不所望な副作用を誘発することなく有利な免疫応答も提供する関連治療レジメンを特定及び提供することが依然として必要とされている。本開示はこの及び他の必要性に対処しようとするものである。本明細書に記載されるＴＬＲ７／８作動薬は、独立した免疫療法（即ち、単剤での免疫療法）として使用することができるか、又は別の態様では、長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬と併用することができる。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
第１の態様においては、本開示は、トル様受容体（「ＴＬＲ」）作動薬のマルチアームポリマーコンジュゲートを対象としている。より詳しくは、そのコンジュゲートには、結合含有スペーサ部分（ｌｉｎｋａｇｅ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｓｐａｃｅｒ  ｍｏｉｅｔｙ）を介して、マルチアームで、水溶性の、非ペプチド性ポリマーに共有結合的に結合された、ＴＬＲ７／８作動薬化合物が含まれている。とりわけ、本明細書において提供されるコンジュゲートによって、例えば、腫瘍部位に対してコンジュゲートを局所投与することが可能となるが、その場合、そのコンジュゲートが、その腫瘍部位に滞留中に、局所的に抗腫瘍免疫を優先的に開始させるのに有効である。マルチアームコンジュゲートの構築が、特定のＴＬＲ７／８作動薬、付着化学反応（ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ  ｃｈｅｍｉｓｉｔｒｙ）、及び投与モードとあいまって、コンジュゲートの、腫瘍の内部での滞留時間がより長くなり、そして腫瘍抗原提示及びＴ細胞刺激を増大させるのに有効となる（即ち、ＣＤ８Ｔ細胞プライミングを向上させる結果となる）、即ち、先天免疫応答を誘発する結果を得るのに有効であり、しかも、活性が局所化されているために、有毒性副作用が最小限に抑えられる。
【０００９】
マルチアームコンジュゲートのいくつかの実施態様においては、そのＴＬＲ７／８作動薬化合物が、小分子である。
【００１０】
マルチアームポリマーコンジュゲートの、さらに１つ又は複数のさらなる実施態様においては、そのマルチアーム化された水溶性のポリマーには、３〜約５０本のポリマーアーム、又は３〜約１０本のポリマーアーム、又は３〜６本のポリマーアームが含まれる。１つ又は複数の特定の実施態様においては、そのマルチアームポリマーコンジュゲートには、３、４、又は５本のポリマーアームが含まれる。１つ又は複数のさらなる実施態様においては、そのマルチアームポリマーコンジュゲートには、４本のポリマーアームが含まれる。
【００１１】
いくつかの実施態様においては、そのコンジュゲートには、マルチアームで、水溶性の非ペプチド性ポリマーのアームの１つ又は複数の末端に、共有結合的に結合されたＴＬＲ７／８作動薬が含まれる。１つ又は複数の実施態様においては、そのＴＬＲ７／８作動薬が、マルチアームで、水溶性の非ペプチド性ポリマーのアームのそれぞれの末端に、共有結合的に結合されている。さらに１つ又は複数の実施態様においては、マルチアームポリマーコンジュゲートのそれぞれのポリマーアームが同一である。
【００１２】
いくつかの特定の実施態様においては、マルチアームポリマーコンジュゲートが、式Ｉで表される構造を有している：
【化１】
2020514300.tif 000003
［式中、Ｒは、それぞれのＱと組み合わさって、３〜約５０個のヒドロキシル、チオール、又はアミノ基を担持するポリオール、ポリチオール、又はポリアミンの残基であり；それぞれのＱは、酸素、硫黄、及び−ＮＨから選択されるリンカー（例えば、それぞれポリオール、ポリチオール、又はポリアミンからの酸素、硫黄、又は窒素原子に相当する）であり；それぞれのＰＯＬＹは、独立して、水溶性の、非ペプチド性ポリマーであり；それぞれのＸｒは、独立して、結合含有スペーサ部分であり；ｑは、３〜約５０の正の整数であり；そしてそれぞれのＴＬＲ７／８ＡＧは、トル様受容体７／８作動薬であるか、又はそれらの薬学的に許容される塩である。］
【００１３】
さらに１つ又は複数のさらなる実施態様においては、そのＴＬＲ７／８作動薬が、（Ｎ−［４−（４−アミノ−２−エチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５ｃ］キノリン−１−イル）ブチル］メタンスルホンアミド、又は［８−（３−（ピロリジン−１−イルメチル）ベンジル）−４−アミノ−２−ブトキシ−７，８−ジヒドロプテリジン−６（５Ｈ）−オン］である。
【００１４】
いくつかの他の実施態様においては、そのＴＬＲ７／８作動薬が、イミダゾキノリン化合物である。１つ又は複数の好ましい実施態様においては、そのＴＬＲ７／８作動薬が、レシキモド（ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）若しくはイミキモド（ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ）、又はそれらの類似体、誘導体、若しくは異性体である。
【００１５】
式Ｉに関連する、さらにいくつかのさらなる実施態様においては、Ｒは、Ｑと組み合わさって、ポリオールの残基である。
【００１６】
式Ｉに関連するいくつかの実施態様においては、それぞれのＸｒが、独立して、安定な結合含有スペーサ部分である。さらにいくつかの代わりの実施態様においては、それぞれのＸｒが、独立して、放出可能な結合含有スペーサ部分である。
【００１７】
式Ｉに関連するいくつかの追加の実施態様においては、ｑが、３〜１０から選択される正の整数であるか、又は３〜６から選択される正の整数であるか、又は３、４、及び５から選択される正の整数であるか、又は４である。
【００１８】
さらにいくつかのさらなる実施態様においては、その結合含有スペーサ部分には、チオエーテル、カルバメート、エステル、カーボネート、又は尿素官能基が含まれる。
【００１９】
さらにいくつかの追加の実施態様においては、その結合含有スペーサ部分に、酵素で開裂させることが可能なペプチド結合が含まれる。
【００２０】
式Ｉに関連する１つ又は複数の特定の実施態様においては、Ｘｒが、式ＩＩで表される：
〜［Ｘ１］ａ−［Ｌｒ］ｂ−Ｘ２〜
式ＩＩ
［式中、ａは、ゼロ又は１であり（ａがゼロなら、Ｘ１は存在せず、そしてａが１なら、Ｘ１が存在していることを意味している）；ｂは、ゼロ又は１であり（ｂがゼロなら、Ｌｒは存在せず、そしてｂが１なら、Ｌｒが存在していることを意味している）；Ｘ１が存在しているのなら、それはスペーサであり；Ｌｒが存在しているのなら、それは結合基（ｌｉｎｋａｇｅ）であり；そして、Ｘ２は、ＴＬＲ７／８作動薬に共有結合的に直接結合された官能基である］。
【００２１】
式ＩＩに関連するいくつかの実施態様においては、「ａ」がゼロである。さらにいくつかの他の実施態様においては、「ｂ」がゼロである。いくつかの追加の実施態様においては、「ａ」、「ｂ」共にゼロである。さらにいくつかのさらなる実施態様においては、「ａ」が１である。さらにいくつかのさらなる実施態様においては、「ｂ」が１である。さらにいくつかの追加の実施態様においては、「ａ」、「ｂ」共に１である。
【００２２】
式ＩＩに関連するいくつかのさらなる実施態様においては、Ｘ１が、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）−である。
【００２３】
式ＩＩに関連するさらにいくつかの追加の実施態様においては、Ｘ２が、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、及び−ＮＨからなる群より選択される。
【００２４】
式ＩＩに関連するさらにいくつかの追加の実施態様においては、Ｌｒが、−（ＣＲｘＲｙ）ｚ−、及び−ＮＨ（ＣＲｘＲｙ）ｚ−からなる群より選択されるが、ここで、それぞれのＲｘ及びＲｙは、独立して、水素、低級アルキル、ハロ、及びハロ−置換された低級アルキルから選択され、そしてｚは、１〜６の整数である。例えば、前述のもののいくつかの追加の特定の実施態様においては、Ｌｒが、以下のものから選択される：−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨＦ−、−ＣＨＣＨ３−、−ＣＨＣＨ（ＣＨ３）２−、−ＣＨＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２−、−Ｃ（ＣＨ３）２−、−ＮＨＣＨ２−、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２−、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＮＨＣＨ２ＣＨＦ−、−ＮＨＣＨＣＨ３−、−ＮＨＣＨＣＨ（ＣＨ３）２−、−ＮＨＣＨＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２−、及び−ＮＨＣ（ＣＨ３）２−。
【００２５】
コンジュゲートのマルチアームポリマー部分の１つ又は複数の実施態様においては、その水溶性の、非ペプチド性ポリマーが、ポリ（アルキレンオキシド）である。いくつかの特定の実施態様においては、そのポリ（アルキレンオキシド）が、ポリ（エチレンオキシド）である。
【００２６】
いくつかの実施態様においては、「ｑ個の」ポリマーアームのそれぞれの中に含まれている水溶性の、非ペプチド性ポリマーには、約１〜約３０個のモノマー性サブユニットが含まれる。さらにいくつかの他の実施態様においては、その水溶性の、非ペプチド性ポリマー全体、即ちそのポリマーアームのそれぞれを含めたものが、約２，０００ダルトン〜約１５０，０００ダルトンの分子量を有している。いくつかのある種の他の実施態様においては、その水溶性の、非ペプチド性ポリマー全体で、約５，０００ダルトン〜約４０，０００ダルトンの分子量を有している。さらに追加の実施態様においては、その水溶性の、非ペプチド性ポリマー全体で、約５，０００ダルトン〜約２５，０００ダルトンの分子量を有している。
【００２７】
１つ又は複数の特定の実施態様においては、ＴＬＲ７／８作動薬のマルチアームポリマーコンジュゲートが、式ＩＩＩで表される式、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは立体異性体を有する：
【化２】
2020514300.tif 000004
［式中、Ｌは、−（ＣＨ２）ｍ−、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｍ−、−ＣＨＦ−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｍ−、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｍ−、−（ＣＨ２）ｍ−ＣＨ（ＣＨ（ＣＨ３）２）−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｍ−、−（ＣＨ２）ｍ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｍ−、−Ｃ（ＣＨ３）２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｍ−、単結合、又は−ＮＨ−（ＣＨ２）ｍ−であり、それぞれのｍは、独立して、１〜５の整数（両端を含む）であり；それぞれのｎは、独立して、４０〜３５０の整数（両端を含む）であり；Ｒ１は、水素又は−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ３であり；そしてＲ２は、水素又はヒドロキシルである］。式ＩＩＩに関連するさらにいくつかのさらなる実施態様においては、Ｌは、以下のものから選択される：−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨＦ−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ（ＣＨ３）２）−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−Ｃ（ＣＨ３）２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、単結合、及び−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−。
【００２８】
式ＩＩＩのさらにいくつかのさらなる実施態様においては、それぞれのｎが、独立して、１００〜２５０の整数（両端を含む）である。さらにいくつかの他の実施態様においては、Ｒ１が水素であり、そしてＲ２も水素である。さらにいくつかの追加の実施態様においては、Ｒ１が、−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ３であり、そしてＲ２がヒドロキシルである。
【００２９】
１つ又は複数の特定の実施態様においては、そのマルチアームポリマーコンジュゲートが、以下の化合物１〜１０及び１２〜１６、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは立体異性体から選択される：
【化３】
2020514300.tif 000005
ここで、それぞれのＰＥＧ５ｋは、式−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｙＣＨ２ＣＨ２−（ここで、ｙは約１１３である）を有する直鎖状のポリエチレングリコールである；
【化４】
2020514300.tif 000006
【化５】
2020514300.tif 000007
【化６】
2020514300.tif 000008
ここで、それぞれのｎは、独立して、４０〜３５０の整数である。
【００３０】
１つ又は複数の特定の実施態様においては、そのマルチアームポリマーコンジュゲートが化合物６である。
【００３１】
さらに１つ又は複数の追加の実施態様に提供されているのは、本明細書に記載されたマルチアームポリマーコンジュゲート及び薬学的に許容される医薬品添加物（ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ）を含む組成物である。
【００３２】
さらにまた別の態様（例えば、第２の態様）において開示されているのは、本明細書において提供されるマルチアームポリマーコンジュゲートを、それを必要としている患者に投与することを含む治療方法である。
【００３３】
さらにまた別の、即ち第３の態様において開示されているのは、本明細書において提供される、ＴＬＲ７／８作動薬のマルチアームポリマーコンジュゲートの、癌の治療のための使用である。
【００３４】
関連する、即ち第４の態様において開示されているのは、本明細書において提供されるＴＬＲ７／８作動薬のマルチアーム化ポリマーコンジュゲートの、癌の治療において有用な医薬品の製剤における使用である。
【００３５】
さらに別な、即ち第５の態様において開示されているのは、安定、若しくは放出可能いずれかの結合含有スペーサ部分を介して、ＴＬＲ７／８作動薬を、マルチアーム化された水溶性のポリマーに対して、共有結合を実施するのに好適な条件下で、共有結合的に結合させることによる、ＴＬＲ７／８作動薬のマルチアームポリマーコンジュゲートを調製するための方法である。
【００３６】
さらに別の、即ち第６の態様において、両方ともに本明細書により詳細に記載される、例えば、本明細書で開示されるＴＬＲ７／８のマルチアームポリマーコンジュゲートなどのＴＬＲ作動薬と、ＩＬ−２Ｒβ活性化量の長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬とを、癌を有する対象に投与することを含む方法が本明細書に提供される。ある実施形態において、その併用は、免疫系の活性化を促進する（例えば、ＣＤ８  Ｔ細胞、ＣＤ１１ｃ＋及びＣＤ８＋樹状細胞、並びに好中球の促進を通して）のに有効であるが、一方でまた、免疫抑制を克服する（例えば、制御性Ｔ細胞、マクロファージ、及び単球の抑制にもかかわらず）。
【００３７】
明確にしておくと、投与順序に関して、ＴＬＲ７／８作動薬及び長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬は、同時に又は連続的に、並びに任意の順序で、並びに同一及び／又は異なる投与経路により、それぞれ免疫調節量で投与することができる。さらに、治療は、単一の治療サイクルを含み得、又は複数の治療サイクル（即ち、２回以上）を含み得る。
【００３８】
１つ以上の実施形態において、ＴＬＲ作動薬は局所的に投与され、長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬は非経口的に投与される。１つ以上の関連実施形態において、ＴＬＲ作動薬、例えば、ＴＬＲ７／８作動薬のマルチアームポリマーコンジュゲートは、腫瘍部位に直接投与される。
【００３９】
第６の態様に関連する１つ以上の実施形態において、ＴＬＲ作動薬、例えば、ＴＬＲ７／８作動薬のマルチアームポリマーコンジュゲートは、長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬と別個に対象に投与する。
【００４０】
さらに１つ以上の別の実施形態において、ＴＬＲ作動薬、例えば、ＴＬＲ７／８作動薬のマルチアームポリマーコンジュゲートは、は、長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬の投与前に対象に投与する。例えば１つ以上の実施形態において、ＴＬＲ作動薬と長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬とは治療の１日目に両方投与する。１つ以上の代替実施形態において、ＴＬＲ作動薬を治療の１日目に投与し、長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬を治療の１〜４日目のいずれか１日に投与する。例えば長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬は、１、２、３、又は４日目のいずれか１日に投与する。
【００４１】
好ましい実施形態において、対象はヒト対象である。
【００４２】
１つ以上のさらなる実施形態において、癌は固形癌である。例えば癌は、乳癌、卵巣癌、結腸癌、前立腺癌、骨癌、結腸直腸癌、胃癌、リンパ腫、悪性黒色腫、肝癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膵癌、甲状腺癌、腎癌、胆管癌、脳癌、子宮頸癌、上顎洞癌、膀胱癌、食道癌、ホジキン病及び副腎皮質癌からなる群から選択される。
【００４３】
一部の実施形態において、長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬は、ポリエチレングリコールに放出可能に共有結合しているアルデスロイキンを含む。さらに一部のさらなる実施形態において、長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬は、４、５及び６つのポリエチレングリコールポリマーに放出可能に共有結合しているアルデスロイキンを含む。さらに一部の別の実施形態において、長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬は、平均約６つのポリエチレングリコールポリマーに放出可能に共有結合しているアルデスロイキンを含む。１つ以上のさらなる実施形態において、アルデスロイキンに放出可能に共有結合しているポリエチレングリコールポリマーは、分枝状である。
【００４４】
前述の態様又は実施形態のいずれか１つ以上に関するさらに一部の別の実施形態において、ＴＬＲ作動薬は、ＴＬＲ７作動薬又はＴＬＲ８作動薬である。１つ以上の実施形態において、ＴＬＲ作動薬はＴＬＲ７作動薬である。さらに１つ以上の代替実施形態において、ＴＬＲ作動薬はＴＬＲ８作動薬である。一部の実施形態において、ＴＬＲ作動薬は、長時間作用型ＴＬＲ７作動薬又は長時間作用型ＴＬＲ８作動薬（例えば、マルチアームポリマーで修飾されたＴＬＲ７作動薬又はＴＬＲ８作動薬）などの長時間作用型ＴＬＲ作動薬である。
【００４５】
さらに一部のさらなる実施形態において、長時間作用型ＴＬＲ作動薬は、ＴＬＲ７／８作動薬などのＴＬＲ作動薬のマルチアーム水溶性ポリマーコンジュゲートである。さらに１つ以上の別の実施形態において、マルチアーム水溶性ポリマーは、ＴＬＲ作動薬、例えば、ＴＬＲ７／８作動薬に安定的に共有結合している。１つ以上の代替実施形態において、マルチアーム水溶性ポリマーは、ＴＬＲ作動薬、例えば、ＴＬＲ７／８作動薬に放出可能に共有結合している。
【００４６】
さらに１つ以上の特定の実施形態において、長時間作用型ＴＬＲ作動薬は、４つのポリマーアームのそれぞれの末端で安定的に又は放出可能に共有結合しているＴＬＲ作動薬分子を有する４−ａｒｍ−ペンタエリトリトリル系ポリエチレングリコールコンジュゲートである。
【００４７】
一部の好ましい実施形態において、長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬は、以下の式：
【化７】
2020514300.tif 000009
（式中、ＩＬ−２はインターロイキン−２であり、「ｎ」は約３〜約４０００の整数である）に包含される化合物、又はその薬学的に許容可能な塩を含む。
【００４８】
一部の実施形態において、前の段落に記載される式を有する長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬は、以下の式：
【化８】
2020514300.tif 000010
（式中、ＩＬ−２はインターロイキン−２であり、ｎ’は１、２、３、７及び＞７からなる群から選択される整数である）に包含される化合物、及びその薬学的に許容可能な塩を１０％以下（モル量基準）含む組成物中に含まれる。
【００４９】
投与方法の一部の別の実施形態において、ＴＬＲ７／８コンジュゲートは、以下の構造：
【化９】
2020514300.tif 000011
（式中、各ｎは、独立して４０〜３５０の整数である）を有する。１つ以上の関連実施形態において、ポリマーアームの各々におけるｎの値は、実質的に同じである。一部の特定の実施形態において、４つのポリマーアームの各々におけるｎの値は、約１１３である。
【００５０】
第６の態様の一部の実施形態において、本投与は、対象においてアブスコパル効果をもたらすのに有効である。
【００５１】
上記に関連する一部の別の実施形態において、本投与は、マウスＣＴ−２６結腸腫瘍モデルなどの好適な動物モデルにおいて評価される場合、ビヒクルのみの群における全ての対象が０％の生存率に達した日（例えば、３５日〜５０日）の後である治療の開始後の日において、単一の薬剤の各々（即ち、長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬及びＴＬＲ作動薬）の単独投与について観察されるものを超える生存率パーセントを提供するのに有効である。
【００５２】
さらに別の態様において、癌を有する対象の治療における使用に関する説明書が添付された、ＩＬ−２Ｒβ活性化量の長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬と自然免疫活性化量のＴＬＲ作動薬、例えば、ＴＬＲ７／８作動薬のマルチアームポリマーコンジュゲートを含むキットが提供される。
【００５３】
キットの１つ以上の実施形態において、長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬とＴＬＲ作動薬とは対象への投与のための単一の組成物中に含まれ、単一の組成物は場合により、薬学的に許容可能な賦形剤を含む。
【００５４】
キットの一部の代替的実施形態において、長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬とＴＬＲ作動薬とは別個の容器中に提供され、キットはＴＬＲ作動薬と長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬とを別個に対象に投与するための説明書を含む。
【００５５】
キットの一部の実施形態において、長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬とＴＬＲ作動薬との両方は固体形態である。１つ以上の関連実施形態において、長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬と長時間作用型ＴＬＲ作動薬のそれぞれは、水性希釈剤中での再構成に好適な固体形態である。
【００５６】
さらに１つ以上の別の実施形態において、長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬とＴＬＲ作動薬との各々は薬学的に許容可能な賦形剤を各々含む別個の組成物内に含まれる。
【００５７】
本コンジュゲート、組成物、方法などのさらなる実施形態は、以下の説明、実施例、及び特許請求の範囲から明らかであろう。上記及び下記の説明から理解することができるとおり、本明細書に記載されるあらゆる特徴、及びこのような特徴の２つ以上のあらゆる組み合わせが、本開示の範囲内に含まれるが、ただし、このような組み合わせに含まれる特徴が、相互に矛盾しないことを条件とする。加えて、任意の特徴又は特徴の組み合わせは、任意の実施形態から具体的に除外され得る。
【図面の簡単な説明】
【００５８】
【図１】実施例２１に詳細に記載されるとおりの、第１の腫瘍（ＴＬＲ作動薬注射部位）容積に対する、マウス結腸癌腫モデル（ＣＴ−２６）において様々な介入（ビヒクル、例示的な長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬であるＲＳＬＡＩＬ−２；例示的なＴＬＲ作動薬である４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｎ−Ｒ８４８；及びＲＳＬＡＩＬ−２と４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｎ−Ｒ８４８の併用）で治療されたマウスの最初の投与後の日数を示すプロットである。
【図２】実施例２１に詳細に記載されるとおりの、第２の腫瘍（遠隔性、非ＴＬＲ作動薬注射部位）容積に対する、マウス結腸癌腫モデル（ＣＴ−２６）において様々な介入で治療されたマウスの最初の投与後の日数を示すプロットである。
【図３】実施例２１に詳細に記載されるとおりの、生存パーセントに対する、マウス結腸癌腫モデル（ＣＴ−２６）において様々な介入（ビヒクル、例示的な長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬であるＲＳＬＡＩＬ−２；例示的なＴＬＲ作動薬である４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｎ−Ｒ８４８；及びＲＳＬＡＩＬ−２と４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｎ−Ｒ８４８の併用）で治療されたマウスの最初の投与後の日数を示すプロットである。
【図４ＡＢＣＤ】実施例２３に詳細に記載されるとおり、ＲＳＬＡＩＬ−２とＲ８４８の併用治療が、治療開始後２５日目までに、高投与量群において１０頭の動物中９頭、中程度の投与量群において１０頭の動物中７頭、及び低投与量群において８頭の動物中ただ１頭の治療された腫瘍の腫瘍容積の縮小又は維持をもたらすことを示すプロットである。
【図４ＥＦＧＨ】実施例２３に詳細に記載されるとおり、ＲＳＬＡＩＬ−２と化合物６の併用治療が、治療開始後３２日目までに、高投与量群において１０頭の動物中９頭、中程度の投与量群において１０頭の動物中９頭、及び（驚くべきことに）低投与量群において１０頭の動物中１０頭の治療された腫瘍の腫瘍容積の縮小又は維持をもたらすことを示すプロットである。
【図５ＡＢＣＤ】実施例２３に詳細に記載されるとおり、ＲＳＬＡＩＬ−２とＲ８４８の併用治療が、治療開始後２５日目までに、高投与量群において１０頭の動物中９頭、中程度の投与量群において１０頭の動物中５頭、及び低投与量群において８頭の動物中ただ１頭の治療されていない腫瘍の腫瘍容積の縮小又は維持をもたらすことを示すプロットである。
【図５ＥＦＧＨ】実施例２３に詳細に記載されるとおり、ＲＳＬＡＩＬ−２と化合物６の併用治療が、治療開始後３２日目までに、高投与量群において１０頭の動物中９頭、中程度の投与量群において１０頭の動物中８頭、及び（驚くべきことに）低投与量群において１０頭の動物中１０頭の治療されていない腫瘍の腫瘍容積の縮小又は維持をもたらすことを示すプロットである。
【図６】実施例１８に記載されるとおり、化合物６による治療後、それぞれ２時間及び６時間での腫瘍及び血漿のサイトカイン濃度の比較を提供するグラフである。全身的なサイトカインの濃度は、測定された各サイトカイン（ＩＬ−６、ＫＣ／ＧＲＯ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＩＬ−５、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２及びＩＬ−１２ｐ７０）について腫瘍中の濃度より有意に低かった。
【発明を実施するための形態】
【００５９】
定義
本明細書で使用する場合、単数形の冠詞「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」には、文脈的にそうではないとはっきり示されている場合以外は、複数の指示も含まれる。
【００６０】
「水溶性の非ペプチド性ポリマー（ｗａｔｅｒ−ｓｏｌｕｂｌｅ，ｎｏｎ−ｐｅｐｔｉｄｉｃ  ｐｏｌｙｍｅｒ）」という用語は、室温で水の中に、少なくとも３５％（重量）が可溶性である、好ましくは７０％（重量）を超えて、そしてより好ましくは９５％（重量）を超えて溶解するようなポリマーを指している。典型的には、未濾過の「水溶性の（ｗａｔｅｒ−ｓｏｌｕｂｌｅ）」のポリマーの水性調製物が、濾過した後の同一の溶液で透過される光の量の少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも９５％の透過率を示す。しかしながら、その水溶性のポリマーが、水中へ少なくとも９５％（重量）溶解するか、又は水に完全に溶解するのが、最も好ましい。「非ペプチド性（ｎｏｎ−ｐｅｐｔｉｄｉｃ）」であるということに関しては、ポリマーが３５％（重量）未満のアミノ酸残基しか有していない場合に、そのポリマーは非ペプチド性である。
【００６１】
用語「単量体」、「単量体サブユニット」及び「単量体ユニット」は、本明細書では同義的に使用され、ポリマーの基本構造単位の１つを指す。ホモポリマーの場合、単一の繰り返し構造単位がポリマーを形成する。コポリマーの場合、２つ以上の構造単位が−あるパターンで又はランダムに−繰り返すことでポリマーを形成する。好ましいポリマーはホモポリマーである。水溶性非ペプチドポリマーは、連続的に結合された１つ以上の単量体を含んで単量体の鎖を形成する。そのポリマーは、単一のモノマーから形成されるタイプ（即ち、ホモポリマーである）から、又は２種若しくは３種のモノマーのタイプ（即ち、コポリマーである）から形成させることができる。
【００６２】
「ポリマー（ｐｏｌｙｍｅｒ）」という用語は、本明細書で使用するとき、約２個〜約２０００個以上、例えば約２個〜約４０００個のモノマーを含む分子である。特異的なポリマーとしては、例えば直鎖状、分岐状、又はフォーク状のような各種の形状を有するものが挙げられるが、それについては、以下においてさらに詳しく説明する。
【００６３】
「ＰＥＧ」又は「ポリエチレングリコール」は、本明細書で使用されるとき、任意の水溶性ポリ（エチレンオキシド）を包含することが意図される。特に指示されない限り、「ＰＥＧポリマー」又は任意のポリエチレングリコールは、実質的に全ての（好ましくは全ての）単量体サブユニットがエチレンオキシドサブユニットであるものであり、しかしながらポリマーは、例えばコンジュゲーション用に、個別のエンドキャッピング部分又は官能基を含有してもよい。ＰＥＧポリマーは、１つ以上の末端酸素が例えば合成変換中に置換されたか否かに応じて、以下の２つの構造のうちの一方を含み得る：「−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−」又は「−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−１ＣＨ２ＣＨ２−」。前述のとおり、ＰＥＧポリマーについては、変量（ｎ）（即ち、繰り返し単位の数）は約２〜２０００、又は約２〜４０００の範囲であり、末端基及びＰＥＧ全体の構造は様々であり得る。ＰＥＧが、例えば、小分子の医薬品（ｓｍａｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｄｒｕｇ）に結合するための官能基をさらに含む場合には、その官能基は、ＰＥＧポリマーに共有結合的に結合されたときには、その結果として、酸素−酸素結合（−Ｏ−Ｏ−、ペルオキシド結合）を形成することはない。
【００６４】
「エンドキャップト（ｅｎｄ−ｃａｐｐｅｄ）」又は「ターミナリーキャップト（ｔｅｒｍｉｎａｌｌｙ  ｃａｐｐｅｄ）」という用語は、本明細書においては、相互に交換可能に使用され、エンドキャッピング部分を有するポリマーの、ターミナル又はエンドポイントを指している。そのエンドキャッピング部分には、典型的には、ヒドロキシ基、又はＣ１〜２０アルコキシ基、又はアルカアリールオキシ基が含まれるが、それが必須という訳ではない。従って、エンドキャッピング部分の例としては、アルコキシ（例えば、メトキシ及びエトキシ）、ベンジルオキシ、さらにはアリール、ヘテロアリール、シクロ、ヘテロシクロなどが挙げられる。それに加えて、前述のものそれぞれの、飽和、不飽和、置換及び非置換の形態も考えられる。さらには、そのエンドキャッピング基が、シランであるということもまた可能である。そのエンドキャッピング基に、検出可能なラベルが含まれているのも、有利となりうる。そのポリマーが、検出可能なラベルを含むエンドキャッピング基を有している場合には、関心の対象となっているポリマー及び／又はそのポリマーが結合されている部分（例えば、活性薬剤）の量や位置を、適切な検出器を使用することにより、調べることができる。そのようなラベルとしては、以下のものが挙げられる（それらに限定される訳ではない）：蛍光剤、化学発光剤、酵素のラベリングに使用される部分、比色分析用部分（例えば、色素）、金属イオン、放射性部分など。適切な検出器としては、光度計、フィルム、分光計などが挙げられる。それに加えて、エンドキャッピング基には、ターゲティング部分が含まれていてもよい。
【００６５】
「ターゲティング部分（ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｍｏｉｅｔｙ）」という用語は、そのコンジュゲートをターゲティング領域に局在化させるのに役立つ、例えば細胞の中に入れたり、受容体と結合したりするのに役立つような分子構造を指している。ターゲティング部分としては、好ましくは以下のものが挙げられる：ビタミン、抗体、抗原、受容体、ＤＮＡ、ＲＮＡ、シアリルＬｅｗｉｓ  Ｘ抗原、ヒアルロン酸、糖類、細胞特異性レクチン、ステロイド若しくはステロイド誘導体、ＲＧＤペプチド、細胞表面受容体のためのリガンド、血清成分、又は各種の細胞内若しくは細胞外受容体を対象としたコンビナトリアル分子。ターゲティング部分に、脂質又はリン脂質が含まれていてもよい。リン脂質の例としては以下のものが挙げられるが、これらに限定される訳ではない：ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロール、及びホスファチジルエタノールアミン。これらの脂質は、ミセル又はリポソームなどの形態であってよい。ターゲティング部分には、検出可能なラベルをさらに含んでいてもよいし、或いはその代わりに、検出可能なラベルを、ターゲティング部分として役立ててもよい。ポリマーコンジュゲートが、検出可能なラベルを含むターゲティング基を有している場合、ポリマー、及び／又はそれに対してそのポリマーがコンジュゲートされた部分（例えば、活性薬剤）の量及び／又は分布／位置を、適切な検出器を用いて測定することができる。そのようなラベルとしては、以下のものが挙げられる（それらに限定される訳ではない）：蛍光剤、化学発光剤、酵素のラベリングに使用される部分、比色分析（例えば、色素）、金属イオン、放射性部分、金の微粒子、量子ドットなど。
【００６６】
水溶性ポリマー、例えばＰＥＧに関する分子量は、数平均分子量又は重量平均分子量のいずれかとして表現することができる。特に示されない限り、本明細書の分子量への全ての言及は重量平均分子量を指す。分子量決定の両方、数平均及び重量平均は、ゲル浸透クロマトグラフィー又は他の液体クロマトグラフィー技術を使用して計測することができる。分子量値を計測する他の方法、例えば数平均分子量を決定するための末端基分析の使用若しくは束一性特性（例えば凝固点降下、沸点上昇、又は浸透圧）の計測又は重量平均分子量を決定するための光散乱技術、超遠心、若しくは粘度測定を使用することもできる。ＰＥＧポリマーは、典型的には、多分散性（即ちポリマーの数平均分子量及び重量平均分子量は等しくない）であり、好ましくは約１．２未満、より好ましくは約１．１５未満、いっそうより好ましくは約１．１０未満、さらによりいっそうより好ましくは約１．０５未満、最も好ましくは約１．０３未満の低多分散性値を有する。
【００６７】
ポリマーの形状又は全体構造に関連して、「分岐状の（ｂｒａｎｃｈｅｄ）」という用語は、分岐点から延びている２本以上のポリマーの「アーム（ａｒｍ）」を有するポリマーを指している。
【００６８】
ポリマーの形状又は全体構造に関連して、「フォーク状の（ｆｏｒｋｅｄ）」という用語は、分岐点から（典型的には、１個又は２個以上の原子を介して）延びている２個以上の官能基を有するポリマーを指している。
【００６９】
「分岐点（ｂｒａｎｃｈ  ｐｏｉｎｔ）」という用語は、直鎖状の構造から、その点で、ポリマーが分岐状又はフォーク状となって１本又は複数の追加のアームとなる、１個又はそれ以上の原子を含む、分岐点（ｂｉｆｕｒｃａｔｉｏｎ  ｐｏｉｎｔ）を指している。
【００７０】
「反応性（ｒｅａｃｔｉｖｅ）」又は「活性化された（ａｃｔｉｖａｔｅｄ）」という用語は、有機合成の通常の条件下で、容易に、或いは実用的な速度で反応する、官能基を指している。このものは、全く反応しないか、或いは、反応させるためには、強力な触媒や、非実用的な反応条件を必要とするような基（即ち「非反応性（ｎｏｎｒｅａｃｔｉｖｅ）」又は「不活性（ｉｎｅｒｔ）」な基）とは対照的である。
【００７１】
反応混合物中の分子の上に存在する官能基に関連して、「容易には反応しない（ｎｏｔ  ｒｅａｄｉｌｙ  ｒｅａｃｔｉｖｅ）」という用語は、その基が、その反応混合物の中で所望の反応を起こさせるのに有効な条件下でも、ほとんど反応せずに留まることを示している。
【００７２】
「保護基（ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  ｇｒｏｕｐ）」は、ある種の条件下で、ある分子の中の特に化学反応性の高い官能系の反応を、防止又は遮断するような部分である。保護するべき化学的反応性の基、さらには採用される反応条件、並びに、その分子の中にそれ以外に存在している反応性の基又は保護基に応じて、その保護基を変えるのがよい。保護することが可能な官能基の例を挙げれば、カルボン酸基、アミノ基、ヒドロキシル基、チオール基、カルボニル基などである。代表的な保護基としては、以下のものが挙げられる：カルボン酸のためには、エステル（例えば、ｐ−メトキシベンジルエステル）、アミド、及びヒドラジド；アミノ基のためには、カルバメート（例えば、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）及びアミド；ヒドロキシル基のためには、エーテル及びエステル；チオール基のためには、チオエーテル及びチオエステル；カルボニル基のためには、アセタール及びケタール；など。そのような保護基は、当業者には公知であって、例えば次の文献に記載されている：Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９９、及びその中で引用されている文献。
【００７３】
「保護された形（ｐｒｏｔｅｃｔｅｄ  ｆｏｒｍ）」にある官能基とは、保護基を担持している官能基を指している。本明細書で使用するとき、「官能基（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｇｒｏｕｐ）」又はそれの各種の同義語には、それらの保護された形も包含される。
【００７４】
「放出可能な結合（ｒｅｌｅａｓａｂｌｅ  ｌｉｎｋａｇｅ）」という用語は、生理学的条件下でも解離する、比較的不安定な結合であって、その解離は、各種異なった機構のいずれかによって起こさせることができる。放出可能な結合の例の１つのタイプは、例えば生理学的条件下で、加水分解可能な、即ち水との反応で解離する（即ち、加水分解される）結合であって、例えば芳香族アミド結合のようなアミド結合の加水分解である。結合が、水の中で加水分解される傾向は、２個の原子をつないでいる結合の一般的なタイプだけではなく、それらの原子に付着している置換基にも依存する。加水分解的に不安定、即ち弱い、適切な結合としては以下のものが挙げられるが、これらに限定される訳ではない：カルボン酸エステル、リン酸エステル、無水物、アセタール、ケタール、アシルオキシアルキルエーテル、イミン、オルトエステル、ペプチド、オリゴヌクレオチド、チオエステル、及びカーボネート。放出可能な結合としてはさらに、酵素的に放出可能な結合も挙げられるが、ここで「酵素的に放出可能な結合（ｅｎｚｙｍａｔｉｃａｌｌｙ  ｒｅｌｅａｓａｂｌｅ  ｌｉｎｋａｇｅ）」という用語は、１種又は複数の酵素によって解離される結合基を意味している。放出機構のさらなるタイプとしては、１，６−ベンジル脱離、β−脱離などが挙げられるが、これらに限定される訳ではない。ある種の結合が、安定であるか、或いは放出可能であるかを考える場合、そのような特性解析は、分子の全体構造、又は実体構造の範囲内で考えるべきである。ある種の場合においては、放出可能な結合を含むポリマーコンジュゲートは、プロドラッグとも呼ばれ、その場合、インビボで（即ち、生理学的条件下で）その放出可能な結合が解離して、その親薬物が放出される（又は活性薬剤に放出可能に付着されているポリマー部分の数に依存して、最終的には放出される）。共有結合的な「放出可能な（ｒｅｌｅａｓａｂｌｅ）」結合は、例えば、有効成分例えばインターロイキン−２又はＴＬＲ作動薬例えばレシキモド（別名、Ｒ８４８）に共有結合的に結合されている、水溶性ポリマー例えばポリエチレングリコールの場合においては、生理学的条件下で解離し、それにより有効成分の部分から水溶性ポリマーを放出若しくは切り離すか、又は水溶性のポリマーから有効成分を切り離すようなものである。
【００７５】
「安定な」結合（ｌｉｎｋａｇｅ）又は結合（ｂｏｎｄ）は、水中で（例えば、生理学的条件下）実質的に安定な化学結合、即ち、長期間にわたり生理学的条件下でいかなる認め得る程度の加水分解も受けない結合を指す。加水分解に安定な結合の例としては、限定はされないが、一般的に以下が挙げられ得る：炭素−炭素結合（例えば脂肪族鎖中の）、エーテル類、アミド類、ウレタン類、アミン類など。概して、安定な結合は、生理学的条件下で１日約１〜２％未満の加水分解速度を呈するものである。代表的な化学結合の加水分解速度は、多くの標準的な化学テキストブックを参照することができる。
【００７６】
「ＴＬＲ７／８作動薬」（又は、「ＴＬＲ作動薬」）は、トル様受容体７及び／又はトル様受容体８に対する作動薬である、各種の化合物である。
【００７７】
「実質的に（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ、又はｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ）」という用語は、ほぼ全部又は完全ということを意味していて、例えば所定の量に対して、９５％以上、より好ましくは９７％以上、さらにより好ましくは９８％以上、なおより好ましくは９９％以上、さらになおより好ましくは９９．９％以上であり、最も好ましくは９９．９９％以上である。
【００７８】
「アルキル（ａｌｋｙｌ）」という用語は、長さ方向に約１〜２０個の原子が配列されている炭化水素鎖を指している。そのような炭化水素鎖は、（必ずという訳ではないが）好ましくは飽和していて、分岐鎖であっても、直鎖であってもよい。アルキル基の例としては、以下のものが挙げられる：メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、２−メチルブチル、イソプロピル、３−メチルペンチルなど。本明細書で使用するとき、「アルキル」には、シクロアルキルも含まれるが、その場合３個以上の炭素原子が対象となっている。「アルケニル（ａｌｋｅｎｙｌ）」基は、少なくとも１個の炭素−炭素二重結合を含む、２〜２０個の炭素原子を有するアルキル基である。
【００７９】
「置換された（ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ）アルキル」又は「置換されたＣｑ〜ｒアルキル」（ここで、ｑ及びｒは、そのアルキル基の中に含まれる炭素原子の範囲を特定している整数である）という用語は、以下のものによって置換された、上記のアルキル基を表している：１個、２個、又は３個の、ハロ原子（例えば、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、トリフルオロメチル、ヒドロキシ、Ｃ１〜７アルキル（例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ブチル、ｔ−ブチルなど）、Ｃ１〜７アルコキシ、Ｃ１〜７アシルオキシ、Ｃ３〜７ヘテロシクリル、アミノ、フェノキシ、ニトロ、カルボキシ、アシル、シアノなど。置換されたアルキル基は、同一又は異なった置換基を用いて、１回、２回、又は３回置換されていてもよい。
【００８０】
「低級（ｌｏｗｅｒ）アルキル」という用語は、１〜７個の炭素原子を含むアルキル基を指しており、直鎖又は分岐鎖であってよく、例えば、メチル、エチル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチルである。
【００８１】
「低級（ｌｏｗｅｒ）アルケニル」という用語は、少なくとも１個の炭素−炭素二重結合を有する２〜６個の炭素原子の低級アルキル基を指している。
【００８２】
「非干渉（ｎｏｎ−ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ）置換基」とは、分子の中にあって、典型的には、その分子の中に含まれている他の官能基とは反応しない基である。
【００８３】
「アルコキシ（ａｌｋｏｘｙ）」という用語は、−Ｏ−Ｒ基を指しているが、ここでＲは、アルキル又は置換されたアルキル、好ましくはＣ１〜Ｃ２０アルキル（例えば、メトキシ、エトキシ、プロピルオキシなど）、好ましくはＣ１〜Ｃ７アルキルである。
【００８４】
「薬学的に許容可能な賦形剤」又は「薬学的に許容可能な担体」は、本明細書に記載される組成物中に含まれ得る成分であって、患者に重大な有害毒性効果を引き起こさない成分を指す。
【００８５】
「アリール（ａｒｙｌ）」という用語は、１４個までの炭素原子を有する芳香族基を意味している。アリール基としては、フェニル、ナフチル、ビフェニル、フェナントレニル、ナフタレニルなどが挙げられる。「置換されたフェニル」及び「置換されたアリール」という用語は、それぞれ、ハロ（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、アルキル（例えば、Ｃ１〜６アルキル）、アルコキシ（例えば、Ｃ１〜６アルコキシ）、ベンジルオキシ、カルボキシ、アリールなどから選択された１個、２個、３個、４個、又は５個で置換された（例えば、１−２、１−３、又は１−４置換基）のフェニル基及びアリール基を表している。
【００８６】
例に挙げたコンジュゲート、有効成分、又は、本明細書に記載されたような、その他の好適に適合することが可能な化学部分には、適用可能である限りにおいて、それらの類似体、異性体、多形、溶媒和化合物、及び薬学的に許容される塩の形も包含されているものとする。
【００８７】
「薬理学的有効量」、「生理的有効量」、及び「治療有効量」という用語は、本明細書においては相互に交換可能に使用され、血流において、又は目標としている組織において、所望の応答が得られるような、活性薬剤及び／又はコンジュゲートの所望のレベルを与えるのに必要とされる、活性薬剤、典型的にはポリマーコンジュゲートの量を意味している。正確な量は、例えば、具体的な活性薬剤、その組成物の成分及び物理的特性、意図している患者の母集団、患者の事情など、多くの因子に依存する可能性があるが、当業熟練者であれば、本明細書において提供される情報及び、関連の文献から入手可能な情報に基づいて、容易に決めることができるであろう。
【００８８】
本明細書に記載された塩基性反応剤又は酸性反応剤には、中性のもの、荷電したもの、及びそれらの各種の相当する塩の形が含まれる。
【００８９】
用語「患者」、又は「対象」は、本明細書で使用されるとき、本明細書に提供されるとおりの化合物又は組成物又は併用の投与により予防又は治療することのできる病態、例えば癌に罹患している又はそれに罹り易い生物を指し、ヒト及び動物の両方が含まれる。対象には、限定されるものではないが、哺乳動物（例えばマウス、サル、ウマ、ウシ、ブタ、イヌ、ネコなど）が含まれ、好ましくはヒトである。
【００９０】
「場合による（ｏｐｔｉｏｎａｌ）」又は「場合によっては（ｏｐｔｉｏｎａｌｌｙ）」という用語は、その後に記述されている状況が、必ずしも起きる必要がないということを意味していて、そのため、その記述には、その状況が起きる場合と、それが起きない場合との両方が含まれている。
【００９１】
「小分子（ｓｍａｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ）」という用語は、本明細書で使用するとき、典型的には、約１０００未満の分子量の有機化合物を指している。
【００９２】
概要
本明細書に記載されるマルチアーム水溶性ポリマーＴＬＲ７／８作動薬コンジュゲートは、新規の潜在的に安全であり且つ非常に有効な抗癌療法を統合する薬剤設計におけるいくつかの革新的な進歩及び治療の理論的根拠を取り入れている。それらは、自然免疫系を活性化することができ、且つＴＬＲ作動薬化合物に対する放出可能な結合で構成される場合、癌性腫瘍などの注射された組織において活性のＴＬＲ７／８作動薬を放出及び保持するのに有効である。このコンジュゲートは、腫瘍内に投与される場合、細胞障害性Ｔ細胞に対する局所性の腫瘍抗原提示を活性化し、腫瘍環境における免疫抑制性のシグナルを克服するのに有効である。マルチアーム水溶性ポリマー骨格は、注射された腫瘍部位で主に保持されている注射されたコンジュゲートに寄与し、それにより、ＴＬＲ７／８作動薬に依存する免疫活性化が、全身性の活性を低減しながら治療部位で最高になる。従来の全身性の低分子ＴＬＲ作動薬を超えるこのような薬剤設計の重要な利点は、治療される腫瘍での局所的な薬剤活性及び潜在的な毒性を低減する全身性の暴露の減少である。
【００９３】
加えて、マルチアーム水溶性ポリマーＴＬＲ７／８作動薬コンジュゲートが長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬と併用投与される本明細書で提供されるとおりの併用治療は、局所ＴＬＲ７／８作動薬ポリマーコンジュゲート誘導性抗腫瘍自然免疫活性化の固有の相乗作用及び長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬による細胞傷害性Ｔ細胞の全身性の腫瘍内増殖に由来する。本明細書で記載されるとおり、多発性同系腫瘍モデルの研究は、二重の療法薬併用の薬物動態特性及び薬力学特性の最適化が、天然の病原菌に誘導される免疫応答と同様に抗腫瘍の自然免疫活性化及び適応免疫活性化を首尾良く共役させる、非常に有効な併用療法をもたらすことを示す。両方の治療成分が、免疫系の補完的な部門を活性化して、全身的な腫瘍排除に必要な全体の免疫活性化カスケードに従事させる。本明細書に記載される併用療法は、単独で投与されるいずれかの薬剤よりも安全であり、且つより効果的な抗腫瘍免疫応答を相乗的に誘発するために設計される。これら及び他の特徴は、以下の節で明らかになり、詳細に記載される。
【００９４】
ＴＬＲ７／８作動薬のマルチアームポリマーコンジュゲート
先に述べたように、本明細書において提供されるのは、トル様受容体（「ＴＬＲ」）作動薬化合物、即ちＴＬＲ７／８作動薬のマルチアームポリマーコンジュゲートである。いくつかの特定の実施態様においては、そのマルチアームポリマーコンジュゲートが、式Ｉで表される構造を有している：
【化１０】
2020514300.tif 000012
［式中、Ｒは、それぞれのＱと組み合わさって、それぞれ３〜約５０個のヒドロキシル、チオール、又はアミノ基を担持するポリオール、ポリチオール、又はポリアミンの残基であり；それぞれのＱは、独立して、酸素、硫黄、及び−ＮＨから選択されるリンカー（例えば、それぞれポリオール、ポリチオール、又はポリアミンからの酸素、硫黄、又は窒素原子に相当する）であり；それぞれのＰＯＬＹは、独立して、水溶性の、非ペプチド性ポリマーであり；それぞれのＸｒは、独立して、結合含有スペーサ部分であり；ｑは、３〜約５０の正の整数であり；そしてそれぞれのＴＬＲ７／８ＡＧは、トル様受容体７／８作動薬であり、ここで、式Ｉには、それらの薬学的に許容される塩も包含される］。ここで、式Ｉのマルチアームポリマーコンジュゲートの各種の構成要素それぞれについて、考えてみることにしよう。
【００９５】
式Ｉに関しては、１つ又は複数の実施態様においては、そのポリオール、ポリチオール又はポリアミンの残基である、「Ｒ」は、このマルチアームポリマーに関連して使用した場合、約３〜約１５０個の炭素原子（例えば、約３〜約５０個の炭素原子）を有する、有機ラジカル含有部分である。いくつかの好ましい実施態様においては、Ｒは、Ｑと組み合わさって、即ち（Ｒ−Ｑ）ｑとして取り上げれば、これは、ポリオール、ポリアミン又はポリチオールのコア分子（ｃｏｒｅ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ）であって、３〜約２５個の炭素原子、又は３〜約１０個の炭素原子、例えば３、４、５、６、７、８、９、又は１０個の炭素原子が含まれている。その残基には、Ｑで定義されたものに加えて、１個のさらなるヘテロ原子（例えば、Ｏ、Ｓ、又はＮ）が含まれていてもよい。ポリオール（又はポリアミン又はポリチオール）に関連して、「残基（ｒｅｓｉｄｕｅ）」という用語は、その親分子から、その末端の１個又は複数の水素原子を取り去って、ＰＯＬＹを付着させるのに適した有機ラジカルを与えたものを意味している。
【００９６】
先にも説明したように、ポリオール、ポリチオール又はポリアミンの残基、（Ｒ−Ｑ）ｑは、本明細書において提供されるマルチアームコンジュゲートのための、枝分かれの基本を形成するものであって、相当するポリオール、ポリチオール又はポリアミンに由来している。１つ又は複数の実施態様においては、その相当するポリオール、ポリチオール、又はポリアミンは、それぞれ、ポリマーを付着させるのに利用することができる、少なくとも３個のヒドロキシル基、チオール基、又はアミノ基を担持している。「ポリオール（ｐｏｌｙｏｌ）」は、３個以上のヒドロキシル基を含む分子である。「ポリチオール（ｐｏｌｙｔｈｉｏｌ）」は、３個以上のチオール基を含む分子である。「ポリアミン（ｐｏｌｙａｍｉｎｅ）」は、３個以上のアミノ基を含む分子である。
【００９７】
１つ又は複数の実施態様においては、そのポリオール、ポリアミン、又はポリチオールには、典型的には、それぞれ、３〜約２５個のヒドロキシル基、又はアミノ基、又はチオール基、例えばそれぞれ３〜約１０個（即ち、３、４、５、６、７、８、９、又は１０個）のヒドロキシル基、アミノ基、又はチオール基、好ましくはそれぞれ、３〜約８個（即ち、３、４、５、６、７、又は８個）のヒドロキシル基、アミノ基、又はチオール基が含まれる。１つ又は複数の実施態様においては、それぞれのヒドロキシル基、チオール基、又はアミノ基の間の原子の数は、変化するであろうが、それぞれのヒドロキシル基、チオール基、又はアミノ基の間に、約１〜約２０個（例えば、１〜約５個）の、間に挟まる原子例えば炭素原子の長さが、一例として挙げられる。間に挟まるコア原子とその長さについて言えば、−ＣＨ２−は、１個の介在原子の長さと考えられるし、−ＣＨ２ＣＨ２−は、２個の原子の長さと考えられる。
【００９８】
ポリオール及びポリアミンの例では、それぞれ、（ラジカル）−（ＯＨ）ｑ及び（ラジカル）−（ＮＨ２）ｑ構造を有しているが、ここで（ラジカル）は、有機含有ラジカルに相当し、ｑは、３〜約５０の正の整数である。先に述べたように、式Ｉにおける変数「Ｑ」は、Ｒと組み合わさって、典型的には、本明細書に記載されたようなコアの有機ラジカルの残基を表しているということに、注目されたい。即ち、ポリオール、ポリチオール、及びポリマーアミンと、特に名前で記述したときに、これらの分子は、マルチアームポリマー含有構造の中に取り込まれるより前のそれらの形で参照されている（即ち、それらの親分子として参照されている）。即ち、好ましい有機コア分子を、特に名前で記述したときに、そのコア分子は、例えば、１個又は複数のプロトンを除去した後のそれらのラジカルの形態というよりは、その前駆体の形態で記述されている。そのため、例えば、その有機コアラジカルがペンタエリスリトールから誘導されたとすると、その前駆体ポリオールは、構造Ｃ（ＣＨ２ＯＨ）４を有しているが、その有機コアラジカルは、Ｑと組み合わさって、Ｃ（ＣＨ２Ｏ−）４に相当する（ここで、Ｑは、Ｏである）。従って、例えば、式Ｉのコンジュゲートで、Ｑと組み合わさったＲが、ポリオールの、ペンタエリスリトールＣ（ＣＨ２ＯＨ）４の残基であり、Ｑと組み合わさった残基Ｒが、「Ｃ（ＣＨ２Ｏ−）４」に相当して、それにより、マルチアームポリマーコンジュゲートの中の「ｑ個の」ポリマーアームのそれぞれが、ペンタエリスリトールコア即ち残基のそれぞれの酸素原子から伸びていることになるであろう。
【００９９】
ポリオールの例としては、１〜１０個の炭素原子及び３〜１０個のヒドロキシル基を有する脂肪族ポリオール、例えば、トリヒドロキシアルカン、テトラヒドロキシアルカン、ポリヒドロキシアルキルエーテル、ポリヒドロキシアルキルポリエーテルなどが挙げられる。脂環式ポリオールとしては、以下のような、直鎖状又は閉環糖類、及び糖アルコールが挙げられる：マンニトール、ソルビトール、イノシトール、キシリトール、クエブラキトール、トレイトール、アラビトール、エリスリトール、アドニトール、ズルシトール、ファコース、リボース、アラビノース、キシロース、リキソース、ラムノース、ガラクトース、グルコース、フルクトース、ソルボース、マンノース、ピラノース、アルトロース、タロース、タギトース、ピラノシド、スクロース、ラクトース、マルトースなど。脂肪族ポリオールの追加の例としては、グルコース、リボース、マンノース、ガラクトース、及び関連の立体異性体の誘導体が挙げられる。芳香族ポリオールを使用することも可能であり、例えば以下のものが挙げられる：１，１，１−トリス（４’−ヒドロキシフェニル）アルカン、例えば１，１，１−トリス（４−ヒドロキシフェニル）エタン、２，６−ビス（ヒドロキシアルキル）クレゾールなど。使用することが可能なその他のコアポリオールとしては、以下のものが挙げられる：ポリヒドロキシクラウンエーテル、シクロデキストリン、デキストリン、及びその他の炭水化物（例えば、単糖類、オリゴサッカライド、及び多糖類、デンプン、並びにアミラーゼ）。
【０１００】
ポリオールの例としては、以下のものが挙げられる：グリセロール、トリメチロールプロパン、ペンタエリスリトール、ジペンタエリスリトール、トリペンタエリスリトール、グリセロールのエトキシル化した形、トリメチロールプロパン、ペンタエリスリトール、ジペンタエリスリトール、トリペンタエリスリトール。さらに、好ましいのは、還元糖類例えば、ソルビトール及びグリセロール、オリゴマー例えば、ジグリセロール、トリグリセロール、ヘキサグリセロールなどである。２１個の利用可能なヒドロキシル基を有している、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンを使用して、２１本アームのポリマーを合成することができる。それらに加えて、平均して２４個のヒドロキシル基を有するポリグリセロールもまた、ポリオールの例として挙げることができる。
【０１０１】
ポリアミンの例としては、以下のものが挙げられる：脂肪族ポリアミン例えば、ジエチレントリアミン、Ｎ，Ｎ’，Ｎ”−トリメチルジエチレントリアミン、ペンタメチルジエチレントリアミン、トリエチレンテトラアミン、テトラエチレンペンタアミン、ペンタエチレンヘキサアミン、ジプロピレントリアミン、トリプロピレンテトラアミン、ビス−（３−アミノプロピル）−アミン、ビス−（３−アミノプロピル）−メチルアミン、及びＮ，Ｎ−ジメチル−ジプロピレン−トリアミン。使用することが可能な天然由来のポリアミンとしては、プトレッシン、スペルミジン、及びスペルミンが挙げられる。使用するのに適した、多くの好適なペンタアミン、テトラアミン、オリゴアミン、及びペンタアミジン類似体が、Ｂａｃｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，４６（１）（２００２）：５５〜６１に記載されている（参照することにより、本明細書に取り入れたものとする）。
【０１０２】
以下に示したのは、ポリオールの残基に相当する、説明のための構造である（それぞれの構造は、対応するヒドロキシル基から誘導された酸素原子（「Ｏ」）を用いて示されているが、それぞれポリチオール又はポリアミンの相当する残基を示すには、それぞれの「Ｏ」を、硫黄（「Ｓ」）又はＮＨと置きかえることが可能である）。ここで注意すべきは、以下で示す残基は、以下に示した酸素原子（又はその他の適切なヘテロ原子）の数に相当する数のアームを有するマルチアームポリマーコンジュゲートを得るための、Ｑと組み合わさったＲに相当する、式Ｉのコンジュゲートの観点から理解するということである。
【化１１】
2020514300.tif 000013
式中、ｍは、０〜４０の正の整数［例えば、０〜１０、例えば、０〜５（即ち、０、１、２、３、４、５）］である。
【０１０３】
水溶性の、非ペプチド性ポリマー、「ＰＯＬＹ」
マルチアームポリマーコンジュゲートには、水溶性の、非ペプチド性ポリマーが含まれる。広く各種のポリマーを使用することが可能であり、本明細書において提供される構造は、水溶性のポリマーのタイプ（例えば、ポリエチレンオキシドか、ポリオキサゾリンか）又はサイズ（例えば、サイズが、２〜４，０００個のモノマー）に関する限定を受けるものではない。
【０１０４】
タイプに関しては、その水溶性の、非ペプチド性ポリマーは、モノマーの一連の繰り返しと理解するべきであるが、ここで、そのモノマーのタイプが、その水溶性の、非ペプチド性ポリマーのタイプを規定している。モノマーの例としては、以下のものが挙げられるが、これらの限定される訳ではない：アルキレンオキシド、例えばエチレンオキシド又はプロピレンオキシド；オレフィン系アルコール、例えばビニルアルコール、１−プロペノール又は２−プロペノール；ビニルピロリドン；ヒドロキシアルキルメタクリルアミド及びヒドロキシアルキルメタクリレート（ここで、それぞれの場合において、アルキルは、好ましくはメチルである）；α−ヒドロキシ酸、例えば乳酸又はグリコール酸；ホスファゼン、オキサゾリン、炭水化物、例えば単糖類、アルジトール例えば、マンニトール；並びにＮ−アクリロイルモルホリン。１つ又は複数の実施態様においては、その水溶性の、非ペプチド性ポリマーが、この群から選択される２種のモノマーからのコポリマーであるか、又はより好ましくは、この群から選択される１種のモノマーからのホモポリマーである。コポリマーに関して言えば、それにはブロックコポリマーも含まれるが、コポリマーの中の２種のモノマーのタイプが、同一のモノマータイプ、例えば、２種のアルキレンオキシド、例えば、エチレンオキシドとプロピレンオキシドであってもよい。
【０１０５】
サイズに関しては、その水溶性の、非ペプチド性ポリマーは、比較的小さくてもよいし、或いは、その水溶性の、非ペプチド性ポリマーが比較的大きくてもよい。
【０１０６】
ＰＯＬＹ、即ちそれぞれのポリマーアームに関連して言えば、比較的小さな水溶性の、非ペプチド性ポリマーが存在しているような実施態様においては、分子量の例としては、次の値が挙げられる：約２０００ダルトン未満；約１５００ダルトン未満；約１４５０ダルトン未満；約１４００ダルトン未満；約１３５０ダルトン未満；約１３００ダルトン未満；約１２５０ダルトン未満；約１２００ダルトン未満；約１１５０ダルトン未満；約１１００ダルトン未満；約１０５０ダルトン未満；約１０００ダルトン未満；約９５０ダルトン未満；約９００ダルトン未満；約８５０ダルトン未満；約８００ダルトン未満；約７５０ダルトン未満；約７００ダルトン未満；約６５０ダルトン未満；約６００ダルトン未満；約５５０ダルトン未満；約５００ダルトン未満；約４５０ダルトン未満；約４００ダルトン未満；約３５０ダルトン未満；約３００ダルトン未満；約２５０ダルトン未満；約２００ダルトン未満；そして約１００ダルトン未満。比較的小さな水溶性の、非ペプチド性ポリマーでの範囲の例としては、次の範囲が挙げられる：約１００〜約１４００ダルトン；約１００〜約１２００ダルトン；約１００〜約８００ダルトン；約１００〜約５００ダルトン；約１００〜約４００ダルトン；約２００〜約５００ダルトン；約２００〜約４００ダルトン；約７５〜１０００ダルトン；及び約７５〜約７５０ダルトン。
【０１０７】
比較的小さな水溶性の、非ペプチド性ポリマー（「ＰＯＬＹ」）では、モノマーの数は、典型的には、次の範囲の１つ又は複数の範囲に入る：１〜約３０（両端を含む）の間；約２〜約２５の間；約２〜約２０の間；約２〜約１５の間；約２〜約１２の間；約２〜約１０の間。ある種の例においては、そのポリマー（及びそれに相当するコンジュゲート）の中で、直列になっているモノマーの数は、１、２、３、４、５、６、７、又は８の内の１つである。追加の実施態様においては、そのポリマー（及びそれに相当するコンジュゲート）には、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０個のモノマーが含まれる。なおもさらなる実施態様においては、それぞれのポリマー「アーム」の中のポリマー部分（及びそれに相当するコンジュゲート）は、直列に、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、又は３０個のモノマーを有している。従って、例えば、その水溶性の、非ペプチド性ポリマーアームが、−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−を含んでいる場合、「ｎ」は整数であり、いくつかの実施態様においては、以下の数から選択される：１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、及び３０。そして、次の範囲の１つ又は複数の中に入ることができる：約１〜約２５の間；約１〜約２０の間；約１〜約１５の間；約１〜約１２の間；約１〜約１０の間。
【０１０８】
コンジュゲートの中の水溶性の、非ペプチド性ポリマー全体の分子量が、比較的大きい場合（例えば、２，０００ダルトンより大）、その全体の分子量は、２，０００ダルトン〜約１５０，０００ダルトンの範囲内に入ることができる。しかしながら、範囲の例としては、次の範囲の分子量が挙げられる：約３，０００ダルトン〜約１２０，０００ダルトンの範囲；約５，０００ダルトン〜約１１０，０００ダルトンの範囲；５，０００ダルトンより大から〜約１００，０００ダルトンの範囲内、約６，０００ダルトン〜約９０，０００ダルトンの範囲、約１０，０００ダルトン〜約８５，０００ダルトンの範囲、１０，０００ダルトンより大から〜約８５，０００ダルトンの範囲、約２０，０００ダルトン〜約８５，０００ダルトンの範囲、約５３，０００ダルトン〜約８５，０００ダルトンの範囲、約２５，０００ダルトン〜約１２０，０００ダルトンの範囲、約２９，０００ダルトン〜約１２０，０００ダルトンの範囲、約３５，０００ダルトン〜約１２０，０００ダルトンの範囲、そして約４０，０００ダルトン〜約１２０，０００ダルトンの範囲。
【０１０９】
式Ｉの中のポリマーアーム「ＰＯＬＹ」のそれぞれに関連する比較的大きな水溶性の、非ペプチド性ポリマーの分子量の例としては、次のものが挙げられる：約５００ダルトン、約７５０ダルトン、約１，０００ダルトン、約１５００ダルトン、約２，０００ダルトン、約２，２００ダルトン、約２，５００ダルトン、約３，０００ダルトン、約４，０００ダルトン、約４，４００ダルトン、約４，５００ダルトン、約５，０００ダルトン、約５，５００ダルトン、約６，０００ダルトン、約７，０００ダルトン、約７，５００ダルトン、約８，０００ダルトン、約９，０００ダルトン、約１０，０００ダルトン、約１１，０００ダルトン、約１２，０００ダルトン、約１３，０００ダルトン、約１４，０００ダルトン、約１５，０００ダルトン、及び約２０，０００ダルトン。
【０１１０】
マルチアームコンジュゲートのポリマー部分全体に関連する、比較的大きな水溶性の、非ペプチド性ポリマーの分子量の例としては、例えば、次のものが挙げられる：約２０，０００ダルトン、２２，５００ダルトン、約２５，０００ダルトン、約３０，０００ダルトン、約３５，０００ダルトン、約４０，０００ダルトン、約４５，０００ダルトン、約５０，０００ダルトン、約５５，０００ダルトン、約６０，０００ダルトン、約６５，０００ダルトン、約７０，０００ダルトン、及び約７５，０００ダルトン。上述のいずれかの合計分子量を有する水溶性の、非ペプチド性ポリマーの分岐状のタイプのものも、ポリマーアームのそれぞれにおいて使用することが可能で、多重分岐のコンジュゲートで得られる。
【０１１１】
従って、使用される水溶性の、非ペプチド性ポリマーが比較的に小さいか、或いは大きいかには関係なく、その水溶性の、非ペプチド性ポリマーがポリ（エチレンオキシド）の場合には、そのポリマーには、多くの数の（ＯＣＨ２ＣＨ２）モノマー［或いは、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）モノマー、ＰＥＧの定義の仕方に依存する］が含まれるであろう。本明細書の記述を通して、繰り返し単位の数は、「（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ」における、下付文字「ｎ」によって認識される。従って、（ｎ）の値は、典型的には、次の範囲の１つ又は複数の中に入る：２〜約３４００、約１００〜約２３００、約１００〜約２２７０、約１３６〜約２０５０、約２２５〜約１９３０、約４５０〜約１９３０、約１２００〜約１９３０、約５６８〜約２７２７、約６６０〜約２７３０、約７９５〜約２７３０、約７９５〜約２７３０、約９０９〜約２７３０、及び約１，２００〜約１，９００。分子量が公知であるようなポリマーなら、いかなるものであっても、そのポリマーの全重量平均分子量を、その繰り返しモノマーの分子量で割り算することによって、繰り返し単位の数（即ち、「ｎ」）を求めることができる。
【０１１２】
マルチアームの水溶性の、非ペプチド性ポリマーに関しては、これらのポリマーは、典型的には、３本以上の、識別可能な水溶性の、非ペプチド性ポリマーアーム又はセグメントを含んでいる。他にも利点はあるものの、マルチアームの水溶性の、非ペプチド性ポリマーは、それぞれのアームが、ＴＬＲ７／８作動薬に対して共有結合的な結合をする性能を有しているので、例えば、それに付着した単一のＴＬＲ７／８作動薬を有する直鎖状のポリマーに比較して、より大きな薬物的特性を与える可能性を有している。
【０１１３】
結合含有スペーサ部分、「Ｘｒ」
式Ｉに関連して、一般的には、ＰＯＬＹをＴＬＲ７／８作動薬に共有結合的に結合している結合含有スペーサ部分（ｌｉｎｋａｇｅ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｓｐａｃｅｒ  ｍｏｉｅｔｙ）が、生物学的に適切なｐＨで、加水分解的及び／又は酵素的に、安定であったり、或いは放出可能であったりすることができる。即ち、いくつかの実施態様においては、Ｘｒが、加水分解的に安定な結合である。さらにいくつかの他の実施態様においては、Ｘｒが、放出可能な結合を含んでいる。
【０１１４】
先に記述したように、安定な結合というのは、患者に投薬した後で、インビボでは、明らかな解離を起こさないものである。この点に関しては、安定な結合は当業者には公知である。それに加えて、ある結合が、本明細書において提供されるコンジュゲートに関連して、安定な結合として役立つかどうかは、実験を通して試験することができる（例えば、提案された安定な結合を有するコンジュゲートを患者に投与し、解離の指標を得るために一定時間おきに採血して、例えば、クロマトグラフィーその他適切な方法を用いて試験する）。
【０１１５】
マルチアームコンジュゲートのいくつかの実施態様においては、その結合含有スペーサ部分に、ＴＬＲ７／８作動薬と水溶性の、非ペプチド性ポリマーとの間に挟み込ませた放出可能な結合が含まれる。従って、放出可能な結合とは、患者に投与した後、インビボで解離し、それにより、そのポリマーアームから、ＴＬＲ７／８作動薬化合物（又は、例えば小さな分子標識を備えた、それの少し変性された形）が放出されるような結合である。この点に関しては、放出可能な結合は当業者には公知である。それに加えて、ある結合が、本明細書において提供されるマルチアームコンジュゲートに関連して、本来的に放出可能であるかどうかは、実験を通して試験することができる（例えば、提案された放出可能な結合を有するコンジュゲートを患者に投与し、解離の指標を得るために一定時間おきに採血して、例えば、クロマトグラフィーその他適切な方法を用いて試験する）。いくつかの好ましい実施態様においては、ＴＬＲ７／８作動薬のマルチアームポリマーコンジュゲートには、放出可能な結合が含まれる、即ち、Ｘｒに放出可能な結合が含まれる。
【０１１６】
例えば、ＴＬＲ７／８作動薬のマルチアームポリマーコンジュゲートの中に含まれている結合基の放出可能特性の評価は、インビトロで、各種のタイムポイントで採取したサンプルについて、人からのヘパリン化したプール血漿（ｐＨ、７．２〜７．４）を用いて、コンジュゲートサンプルを３７℃でインキュベーションしてから、決めることができるが、この場合、サンプルは直ちに凍結し、後に、例えば、各種適切な検出及び定量方法、例えばＬＣ−ＭＳを使用して、サンプルの分析及び定量を実施する。次いで、みかけの変換半減期（ｔ１／２，ａｐｐ）を、コンジュゲートの、その最初の名目インキュベーション濃度からの変換が、ＴＬＲ７／８作動薬の放出のみに起因するという仮定に基づいて計算するが、ここで、約３００時間以下のｔ１／２であれば、放出可能な結合又は放出可能なコンジュゲートであることの指標であると考えることができる。
【０１１７】
本明細書において提供されるコンジュゲートに関連して使用される放出可能な結合の例としては、以下のものが挙げられるが、これらに限定される訳ではない：アミド、チオエーテル、カルバメート、エステル、カーボネート、尿素、及び酵素で開裂させることが可能なペプチド結合（ＴＬＲ７／８作動薬化合物の構造及びリンカー構造全体に依存する）。場合によっては、ある結合又は結合（ｂｏｎｄ  ｏｒ  ｌｉｎｋａｇｅ）が、単独で考えると、一般的には、本来的に「放出可能（ｒｅｌｅａｓａｂｌｅ）」又は「解離可能（ｃｌｅａｖａｂｌｅ）」であるとは考えられないこともあるが、しかしながら、それが共有結合的に結合されている分子的実体の構造と組み合わせると、例えば、イミダゾキノリン構造を有するＴＬＲ７／８作動薬化合物のような場合、そのような結合は、例えばベータ−脱離、アミド加水分解などのような特殊な放出メカニズムのために、放出可能となり得る。例えば、チオエーテル、アミド、カルバメート、エステル、カーボネート、尿素などは、β−脱離反応又は加水分解を介して解離することができる（酵素の協調の存在下又は非存在下で、例えば、エステルは、そのエステルがエステラーゼにより解離されるかどうかには関係なく、放出可能な結合として機能することができる）。
【０１１８】
放出可能な結合を含むＴＬＲ７／８作動薬のマルチアームポリマーコンジュゲートは、放出の結果が、未変性の親分子の放出となるような場合には、多くの場合プロドラッグとして分類されるが、その理由は、それらが、投与された後で（即ち、生理学的条件下で）、共有結合的に結合されたＴＬＲ７／８作動薬化合物を放出するからである。一般的には、本明細書に記載された特定のマルチアームポリマーレシキモドコンジュゲートには、レシキモドへと放出可能な結合が含まれている。
【０１１９】
酵素で開裂させることが可能なペプチド結合に関しては、そのスペーサ部分には、意図された患者の母集団の中に存在している酵素のための基質として知られている、一連のアミノ酸の１個又は複数を含むことができる。この場合においては、患者に投与すると、そのコンジュゲートの中に含まれている、酵素で開裂させることが可能なペプチド結合の、酵素的に誘発された解離によって、ＴＬＲ７／８作動薬（又は、解離によって形成される、比較的小さな分子の破片即ち「タグ（ｔａｇ）」を伴うＴＬＲ７／８作動薬）が放出されるであろう。所定の患者の母集団の中で、酵素的解離の影響を受けやすいペプチド結合の例は、例えば、米国特許出願公開第２００５／００７９１５５号明細書に記載されており、実験的に求めることもまた可能である。
【０１２０】
Ｘｒに関連しては、その結合含有スペーサ部分には、いくつかの例示的なアミノ酸、例えばベータ−アラニン、グリシン、Ｌ−アラニン、Ｌ−バリン、ロイシン、ジメチルグリシンなどのいずれかが含まれていてもよい。いくつかの実施態様においては、Ｘｒには、前述のアミノ酸のいずれか１種又は複数に対して、そのアミノ基を介して共有結合的に結合されたカルボキシメチル基、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）−が含まれるが、ここで、その末端のカルボキシ基が、そのＴＬＲ７／８作動薬のアミノ基に共有結合的に結合されて、アミド結合を与えており、それが、いくつかの実施態様においては、放出可能となっている。
【０１２１】
いくつかの実施態様においては、その結合含有スペーサ部分の「Ｘｒ」が、式ＩＩで表される：
〜［Ｘ１］ａ−［Ｌｒ］ｂ−Ｘ２〜
（式ＩＩ）
ここで、「ａ」は、ゼロ又は１であり（即ち、ゼロは、「Ｘ１」が存在しないことを表し、そして１は、それが存在していることを示している）；「ｂ」は、ゼロ又は１であり（即ち、ゼロは、「Ｌｒ」が存在しないことを表し、そして１は、それが存在していることを示している）；Ｘ１が存在している場合には、それがスペーサであり；Ｌｒが存在している場合には、それが結合基であり；そして、Ｘ２は、ＴＬＲ７／８作動薬に共有結合的に直接に結合された官能基である。
【０１２２】
ａ及びｂがいずれもゼロであるような、式ＩＩの場合においては、その結合含有スペーサがＸ２、マルチアームポリマーの残りの部分（例えば、ポリマーアーム、ＰＯＬＹ）に対してＴＬＲ７／８作動薬を共有結合的に結合している官能基で構成されているということは、理解されるであろう。そのような場合においては、その結合含有スペーサには、官能基Ｘ２のみが含まれており、ＴＬＲ７／８作動薬と水溶性の、非ペプチド性ポリマーとの間には、他の原子は一切含まれない。典型的には、Ｘ２には、それに対してマルチアームポリマーが共有結合的に結合されている、未変性のＴＬＲ７／８作動薬の単一又は複数の原子が含まれている。例えば、ＴＬＲ７／８作動薬のアミノ基のところで付着が起きているのなら、典型的には、そのアミノ基が、Ｘ２の部分を構成している。
【０１２３】
ａ及びｂのいずれか、又は両方が１であるような、式ＩＩの場合においては、その結合含有スペーサには、Ｘ２を構成しているものとは異なる、１個又は複数の追加の原子が含まれるということは理解されるであろう。Ｘ１及びＬｒの非限定的な例としては、以下のものが挙げられる（右から左へと、左から右への、いずれも考えられる）：−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＣＨ２−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−ＣＨ２−、−ＯＣ（Ｏ）−ＣＨ２−、Ｃ（Ｏ）−ＮＨ、ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ、Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ、−Ｃ（Ｓ）−、−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−、−Ｏ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｏ−、−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−、−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−、−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＮＨ−ＣＨ２−、−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＨ２−、−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、二価のシクロアルキル基、−Ｎ（Ｒ６）−（ここで、Ｒ６は、Ｈ又は、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アリール、及び置換されたアリール、並びに前述の１種又は複数の組み合わせからなる群より選択される有機ラジカルである）。さらなるスペーサ及び結合としては、以下のものが挙げられる：アシルアミノ、アシル、アリールオキシ、１〜５（両端を含む）個の炭素原子を含むアルキレンブリッジ、アルキルアミノ、約２〜４（両端を含む）個の炭素原子を有するジアルキルアミノ、ピペリジノ、ピロリジノ、Ｎ−（低級アルキル）−２−ピペリジル、モルホリノ、１−ピペリジニル、４−（低級アルキル）−１−ピペリジニル、４−（ヒドロキシル−低級アルキル）−１−ピペリジニル、４−（メトキシ−低級アルキル）−１−ピペリジニル、フルオレニル、及びグアニジン。本明細書の記述の目的では、しかしながら、一群の原子が、ポリマーセグメントに直に隣接している場合には、それらはスペーサとはみなさず、それらの群の原子は、ポリマーにおけるモノマーと同じであって、そのためその群は、ポリマー鎖の単なる延長を表しているだけのことである。
【０１２４】
スペーサ及び／又は結合が存在している場合には、それらは、典型的には、とは言え必ずという訳ではないが、本来的に直鎖状である。それに加えて、スペーサ及び／又は結合は、典型的には、とは言え必ずという訳ではないが、加水分解的に安定であり、及び／又は、酵素的に安定である。１つ又は複数の実施態様においては、スペーサ又は結合が存在している場合、それらは、約１２原子未満（例えば、約１０原子未満、約８原子未満、及び約５原子未満）の鎖長を有している。特定のスペーサ又は結合の長さの判定に関しては、本明細書においては、長さは、単一の鎖の原子の数と定義される（置換基は数えない）。例えば、次のＲ−ＰＯＬＹ−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−ＴＬＲ７／８作動薬のような尿素結合は、３原子（−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−）の鎖長を有していると考える。
【０１２５】
式ＩＩに関連して、Ｘ１を存在させる場合、その特定の例としては、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）−（本明細書においては、カルボキシメチルと呼ばれる）が挙げられる。
【０１２６】
Ｘ２の例としては、以下のものが挙げられる：−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（ここで、ＮＨは、ＴＬＲ７／８作動薬への付着点であって、共有結合的な結合をさせる前の未変性のＴＬＲ作動薬の一部を形成している）；−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（ここで、ＮＨは、ＴＬＲ７／８作動薬への付着点であって、共有結合的な結合をさせる前の未変性のＴＬＲ作動薬の一部を形成している）；−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）（ここで、そのカルボニル炭素は、ＴＬＲ７／８作動薬への付着点を示し、共有結合的な結合をさせる前の未変性のＴＬＲ作動薬の一部を形成している）、並びに−ＮＨ（ここで、その窒素原子は、ＴＬＲ７／８作動薬への付着点を示し、共有結合的な結合をさせる前の未変性のＴＬＲ作動薬の一部を形成している）。
【０１２７】
Ｌｒの例としては、以下のものが挙げられる：−（ＣＲｘＲｙ）ｚ−、及び−ＮＨ（ＣＲｘＲｙ）ｚ−（ここでそれぞれのＲｘ及びＲｙは、独立して、水素、低級アルキル、ハロ（Ｘ）、及びハロ−置換された低級アルキルから選択され、そしてｚは、１〜６の整数、例えば、１、２、３、４、５、及び６から選択される）。低級アルキルの例としては、以下のものが挙げられる：メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ペンチル、及びヘキシル。ハロ基の例は、フルオロ、クロロ、ブロモ、ヨードである。Ｌｒ基を説明する例としては、例えば、以下のものが挙げられる：−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨＦ−、−ＣＨＣＨ３−、−ＣＨＣＨ（ＣＨ３）２−、−ＣＨＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２−、−Ｃ（ＣＨ３）２−、−ＮＨＣＨ２−、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２−、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−−ＮＨＣＨ２ＣＨＦ−、−ＮＨＣＨＣＨ３−、−ＮＨＣＨＣＨ（ＣＨ３）２−、−ＮＨＣＨＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２−、及び−ＮＨＣ（ＣＨ３）２−。さらなる構造も、本明細書において提供される。
【０１２８】
ＴＬＲ７／８作動薬
ここで話題を、本明細書に記載されたマルチアームポリマーコンジュゲートの中に含まれるＴＬＲ７／８作動薬に転じると、ＴＬＲ７／８作動薬は、トル様受容体７及び／又はトル様受容体８に対する作動薬である、各種の化合物である。ＴＬＲ７／８作動薬が、小分子の作動薬であるのが好ましい。構造的な分類の例としては、グアノシン含有化合物及びイミダゾキノリンが挙げられる。
【０１２９】
ＴＬＲ７／８作動薬化合物の例としては、例えば、以下のものが挙げられる：３Ｍ−０５２（ＭＥＤＩ−９７９７）、Ｒ８４８（Ｓ−２８４６３）、Ｒ８３７（Ｓ−２６３０８）、Ｓ−２８６９０、３Ｍ−００１（８５２Ａ、ＰＦ−４８７８６９１、ＴＭＸ−１０１）、ＧＳ−９６２０）、ＡＮＡ−７７３、ＡＺＤ８８４８、ＣＬ０９７、ＣＬ０５７（３Ｍ−００２）、３Ｍ−００３、ＴＭＸ−２０２、ＴＭＸ−３０２、ＴＭＸ−３０６、ＩＶ１３６、ＩＶ２０９、３Ｍ−０１１、ＳＭ−２７６００１、ＳＭ−３２４４０５、ＳＭ−３２４４０５、ＳＭ−３６０３２０、ＰＦ−４１７１４５５、ＣｐＧ、ＣｐＲ、ｓｓＲＮＡ、ＢＨＭＡ、ＳＭ−３２４４０５、ＡＺ１２４４１９７０、及びＡＺ１２４４３９８８。
【０１３０】
例えば、ＴＬＲ７／８作動薬は、以下のものから選択することができる：４−（（６−アミノ−８−ヒドロキシ−２−（２−メトキシエトキシ）−９Ｈ−プリン−９−イル）−メチル）−Ｎ−（２０−アジド−３，６，９，１２，１５，１８−ヘキサオキサイコシル）ベンズアミド；３−（１−（１−（４−（（６−アミノ−８−ヒドロキシ−２−（２−メトキシエトキシ）−９Ｈ−プリン−９−イル）メチル）フェニル）−１−オキソ−５，８，１１，１４，１７，２０−ヘキサオキサ−２−アザドコサン−２２−イル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾル−４−イル）プロパン酸；４−（（６−アミノ−８−ヒドロキシ−２−（２−メトキシエトキシ）−９Ｈ−プリン−９−イル）−メチル）−Ｎ−（２０−アミノ−３，６，９，１２，１５，１８−ヘキサオキサイコシル）ベンズアミド；４−（（６−アミノ−８−ヒドロキシ−２−（２−メトキシエトキシ）−９Ｈ−プリン−９−イル）メチル）−Ｎ−（３２−アジド−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０−デカオキサ−イル）メチル）−Ｎ−（３２−アジド−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０−デカオキサドトリアコンチル）ベンズアミド；３−（１−（１−（４−（（６−アミノ−８−ヒドロキシ−２−（２−メトキシエトキシ）−９Ｈ−３−（１−（１−（４−（（６−アミノ−８−ヒドロキシ−２−（２−メトキシエトキシ）−９Ｈプリン−９−イル）メチル）フェニル）−１−オキソ−５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２−デカオキサ−２−アザテトラトリアコンタン−３４−イル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾル−４−イル）−プロパン酸；４−（（６−アミノ−８−ヒドロキシ−２−（２−メトキシエトキシ）−９Ｈ−プリン−９−イル）メチル）−Ｎ−（３２−アミノ−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０−デカオキサドトリアコンチル）−ベンズアミド；４−（（６−アミノ−８−ヒドロキシ−２−（２−メトキシエトキシ）−９Ｈ−プリン−９−イル）メチル）−Ｎ−（５９−アミノ−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６，３９，４２，４５，４８，５１，５４，５７−ノナデカオキサノナペンタコンチル）ベンズアミド；｛Ｎ−［４−（４−アミノ−２−エチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５ｃ］キノリン−１−イル）ブチル］メタンスルホンアミド｝；［８−（３−（ピロリジン−１−イルメチル）ベンジル）−４−アミノ−２−ブトキシ−７，８−ジヒドロプテリジン−６（５Ｈ）−オン］；［２−（４−（（６−アミノ−２−（２−メトキシエトキシ）−８−オキソ−７Ｈ−プリン−９（８Ｈ）−イル）メチル）ベンズアミド）エチル２，３−ビス（ドデカノイルオキシ）プロピルホスフェート］；［１−（４−（（６−アミノ−２−（２−メトキシエトキシ）−８−オキソ−７Ｈ−プリン−９（８Ｈ）−イル）メチル）フェニル）−１−オキソ−５，８，１１，１４，１７，２０−ヘキサオキサ−２−アザトリコサン−２３−オイック酸］；［９−ベンジル−８−ヒドロキシ−２−（２−メトキシエトキシ）アデニン；メチル２−（３−｛［６−アミノ−２−ブトキシ−８−オキソ−７Ｈ−プリン−９（８Ｈ）−イル］メチル｝フェニル）アセテート、ＳＭ−３２４４０６：２−（３−｛［６−アミノ−２−ブトキシ−８−オキソ−７Ｈ−プリン−９（８Ｈ）−イル］メチル｝フェニル）酢酸；メチル２−（３−（（（３−（６−アミノ−２−ブトキシ−８−オキソ−７Ｈ−プリン−９（８Ｈ）−イル）プロピル）（３−（ジメチルアミノ）プロピル）アミノ）フェニル）アセテート；及び２−（３−（（（３−（６−アミノ−２−ブトキシ−８−オキソ−７Ｈ−プリン−９（８Ｈ）−イル）プロピル）（３−（ジメチルアミノ）プロピル）アミノ）フェニル）。
【０１３１】
ＴＬＲ７／８作動薬のマルチアームポリマーコンジュゲートのいくつかの特定の実施態様においては、そのＴＬＲ７／８作動薬が、以下のものである：３Ｍ−０５２（ＭＥＤＩ−９７９７）、Ｒ８４８（Ｓ−２８４６３）、Ｒ８３７（Ｓ−２６３０８）、Ｓ−２８６９０、３Ｍ−００１（８５２Ａ、ＰＦ−４８７８６９１）、ＴＭＸ−１０１、ＧＳ−９６２０、ＡＮＡ−７７３、ＡＺＤ８８４８、ＣＬ０９７、ＳＭ−３２４４０５、ＡＺ１２４４１９７０、ＧＳＫ２２４５０５３、ＳＺ−１０１、４−［６−アミノ−８−ヒドロキシ−２−（２−メトキシエトキシ）プリン−９−イルメチル］ベンズアルデヒド（ＵＣ−１Ｖ１５０）、９−ベンジル−８−ヒドロキシ−２−（２−メトキシエトキシ）アデニン（ＳＭ３６０３２０、１Ｖ１３６）、ＶＴＸ−１４６３、及びＶＴＸ−２３３７。さらにいくつかの他の実施態様においては、そのＴＬＲ７／８作動薬が、（Ｎ−［４−（４−アミノ−２−エチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５ｃ］キノリン−１−イル）ブチル］メタンスルホンアミド、又は［８−（３−（ピロリジン−１−イルメチル）ベンジル）−４−アミノ−２−ブトキシ−７，８−ジヒドロプテリジン−６（５Ｈ）−オン］である。
【０１３２】
ある種の好ましい実施態様においては、そのＴＬＲ７／８作動薬が、イミダゾキノリン化合物である。イミダゾキノリンの例としては、例えば米国特許第５，３８９，６４０号明細書に記載されているような、例えば、１−置換、２−置換の１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］−キノリン−４−アミン化合物が挙げられる。そのような化合物としては、以下のものが挙げられる：４−アミノ−７−クロロ−アルファ、アルファ−ジメチル−２−エトキシメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−エタノール；４−アミノ−アルファ，アルファ−ジメチル−２−ヒドロキシメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−エタノール；４−アミノ−アルファ，アルファ−ジメチル−２−メトキシメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−エタノール；２−エトキシメチル−１−（３−メトキシプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン；及び１−（２−メトキシエチル）−２−メトキシメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン。
【０１３３】
１つ又は複数の好ましい実施態様においては、そのＴＬＲ７／８作動薬が、レシキモド（Ｒ−８４８）又はイミキモド（１−イソブチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン）、又はそれらの誘導体である。
【０１３４】
１つ又は複数の特定の実施態様においては、そのＴＬＲ７／８作動薬が、イミキモドである。
【化１２】
2020514300.tif 000014
【０１３５】
さらにある種の他の特定の実施態様においては、そのＴＬＲ７／８作動薬が、レシキモドである。
【化１３】
2020514300.tif 000015
【０１３６】
ＴＬＲ７／８作動薬のマルチアームポリマーに対する共有結合的結合は、ＴＬＲ７／８作動薬化合物の上に、各種適切な官能基又は原子を付着させることで実施することができる。マルチアームポリマーへの付着に適した官能基の例としては、アミノ、ヒドロキシル、カルボキシ、及びチオールなどが挙げられる。ある種の好ましい実施態様においては、イミキモドに対する共有結合的な結合が、芳香族の−ＮＨ２基で実施される。他の好ましい実施態様においては、レシキモドに対する共有結合的な結合が、芳香族の−ＮＨ２基で実施される。構造の例については、以下において示す。
【０１３７】
コンジュゲートを合成するための方法
本明細書に記載されたコンジュゲートは、各種の方法で調製することが可能であるが、そのような合成例は、以下の実施例で示す。
【０１３８】
１つの例においては、そのコンジュゲートが、マルチアームで水溶性の、非ペプチド性の反応性ポリマーを、ＴＬＲ７／８作動薬に共有結合的に結合させることを含む方法によって調製される。多くのＴＬＲ７／８作動薬は、市場で入手することもできるし、或いは、当業熟練者に公知の方法により合成することもできる。
【０１３９】
反応性のマルチアームで水溶性の、非ペプチド性ポリマーに関しては、そのようなポリマーは、１個又は複数個の反応性基を担持していて、それによって、ＴＬＲ７／８作動薬に共有結合的な結合をさせるのに適した反応剤が得られるような形で、市場で入手することが可能であるし、或いは、国際公開第２０１１／０６３１５６号パンフレットに記載されているようにして、アルコキシル化を介して直接合成することもできる。この形態にある場合、その水溶性の、非ペプチド性ポリマーは、「ポリマー性反応剤」又は「活性化ポリマー」と呼ばれることも多い。
【０１４０】
一例として、多くの好適なポリオールコア物質のいくつかは、化学薬品供給業者例えばＡｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）から購入することができる。最初に、ポリオールの末端ヒドロキシルを、例えば強塩基を使用して、それらのアニオンの形に転換させて、重合を開始させるのに適したサイトを作り、その後でそのコアの上に、モノマーサブユニット例えば、エチレンオキシドを直接重合させる。それぞれのアームの中で、所望の長さのポリマー鎖に達するまで、鎖の構築を続けさせ、その後で、反応、例えば停止反応によって、そして場合によっては、適切な反応性基を導入することによって反応を停止させる。
【０１４１】
それに代わるアプローチ方法では、活性化されたマルチアームポリマー前駆体を、最初に所望のポリオールコア物質を準備し、適切な条件下で、そのポリオールを所望の長さのヘテロ２官能性ＰＥＧメシレートと反応させることによって合成的に調製することが可能であって、この場合、場合によっては非メシレートＰＥＧ末端は保護して、ポリオールのコアとの反応を防止する。そのようにして得られたマルチアームポリマー前駆体は、次いで、追加の転換反応やＴＬＲ７／８作動薬への直接的なカップリングに好適であって、その後で、必要があれば、脱保護する。
【０１４２】
そのようなポリマー性反応剤を市販している供給業者としては、例えば、以下のものが挙げられる：Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）、Ｃｒｅａｔｉｖｅ  ＰＥＧＷｏｒｋｓ（Ｗｉｎｓｔｏｎ  Ｓａｌｅｍ，ＮＣ，ＵＳＡ）、ＳｕｎＢｉｏ  ＰＥＧ−Ｓｈｏｐ（ＳｕｎＢｉｏ  ＵＳＡ，Ｏｒｉｎｄａ，ＣＡ）、ＪｅｎＫｅｍ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ＵＳＡ（Ａｌｌｅｎ，ＴＸ）、及びＮＯＦ  Ａｍｅｒｉｃａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｗｈｉｔｅ  Ｐｌａｉｎｓ，ＮＹ）（例えば、４本又は８本のポリマーアームを有するマルチアームポリマーのＳＵＮＢＲＩＧＨＴシリーズ、又はポリオールコアから延びる３又は４本のポリマーアームを有する、分岐状のポリマーシリーズを参照されたい）。ルーチン的な実験を使用すれば、当業者ならば、主題のＴＬＲ７／８作動薬コンジュゲートを調製するための、サイズ、構造、及び反応性基などを有する、マルチアームポリマー性反応剤を識別することができる。
【０１４３】
例えば、そのシリーズの中のそれぞれのメンバーが、特徴（例えば、水溶性の、非ペプチド性ポリマーのサイズ、反応性基のタイプ、結合基の放出性能など）の点で異なっているような、コンジュゲートのシリーズを調製することが可能であって、次いで、そのシリーズの中の１つのメンバーを患者に投与し、その後で、（例えば、クロマトグラフィー法を使用して）、血液及び／又は尿のサンプルの検出及び定量を実施する。そのシリーズのそれぞれのメンバーは、未処置の（ｎａｉｖｅ）患者に、同様の方法で、投与し、定量する。そのシリーズのそれぞれのメンバーの試験が済んだら、それらの結果を検討して、どの特徴によって、所望の効果を有するコンジュゲートが得られるかを求める。
【０１４４】
ポリマー性反応剤をＴＬＲ７／８作動薬に共有結合的に結合させることは、典型的には、コンジュゲーション条件下で実施するが、その条件には、マルチアームポリマー性反応剤の反応性基と、ＴＬＲ７／８作動薬の上の反応性基との間での共有結合的な結合を可能とする、温度、ｐＨ、時間、及び溶媒の条件下で、ＴＬＲ７／８作動薬をポリマー性反応剤と（多くの場合、ＴＬＲ７／８作動薬に対して、マルチアームポリマー性反応剤を過剰モルで使用して）組み合わせることが含まれる。１つ又は複数の特定の実施態様においては、その反応性基が、反応性のアミノ基である。
【０１４５】
ポリマー性反応剤の例は、例えば，式Ｉのような構造を有するであろう。
【化１４】
2020514300.tif 000016
ここで、Ｙは、式ＩにおけるＸｒを表すが、ただし、異なっているのは、Ｙが、ＴＬＲ７／８作動薬の反応性基又は原子と反応するのに有効な官能基の末端を有していて、ＴＬＲ７／８作動薬化合物に対する究極的な共有結合的な結合を与える。例えば、式ＩＩに関連しては、Ｙは、〜［Ｘ１］ａ−［Ｌｒ］ｂ−Ｘ２〜に近いものではあるものの、ただし、Ｘ２を含むのではなく、ＴＬＲ７／８作動薬に対して直接共有結合的な結合している点で異なっており、Ｙは、式ＩＩ’の、〜［Ｘ１］ａ−［Ｌｒ］ｂ−Ｘｐｒｅ−２〜に従った構造を有しているが、ここで、それらの変数は、式ＩＩについて先に述べたものであるが、ただし、Ｘｐｒｅ−２はそれとは異なっていて、ＴＬＲ７／８作動薬の反応性の基又は原子と反応するのに適した反応性基（即ち、Ｘ２基前駆体）を表していて、ＴＬＲ７／８作動薬とカップリングすることによって、共有結合的な結合、Ｘ２が生成する。
【０１４６】
いくつかの実施態様においては、マルチアームポリマー性反応剤は、（ｉ）そのポリマー性反応剤の反応性基が、ＴＬＲ７／８作動薬の反応性基のところで共有結合的な結合を形成し、そして（ｉｉ）そのポリマー性反応剤が、（即ち、ＴＬＲ７／８作動薬へ共有結合的に結合する前に）放出可能な結合を含むか、又は、（例えば、ＴＬＲ７／８作動薬に対してそのマルチアームポリマー反応剤が共有結合的に結合した後で）放出可能な結合を形成できるように選択される。
【０１４７】
さらにいくつかの他の実施態様においては、そのマルチアームポリマー性反応剤が、（ｉ）そのポリマー性反応剤の反応性基が、ＴＬＲ７／８作動薬の反応性基のところで共有結合的な結合を形成し、そして（ｉｉ）そのポリマー性反応剤が、（例えば、ＴＬＲ７／８作動薬への共有結合的に結合する前に）安定な結合を含んでいるか、又は（例えば、ＴＬＲ７／８作動薬に対してそのマルチアームポリマー反応剤が共有結合的に結合した後で）安定な結合が形成されるように、選択される。
【０１４８】
例えば、Ｘｐｒｅ−２のような、ＴＬＲ７／８作動薬のような小分子に対して共有結合的な結合を形成するための反応性基の例としては、以下のものが挙げられる：Ｎ−スクシイミジルカーボネート、アミン、ヒドラジド、スクシイミジルプロピオネート、スクシイミジルブタノエート、スクシイミジルスクシネート、スクシイミジルエステル、ベンゾトリアゾールカーボネート、グリシジルエーテル、オキシカルボニルイミダゾール、ｐ−ニトロフェニルカーボネート、アルデヒド、マレイミド、オルトピリジル−ジスルフィド、アクリロール、ビニルスルホンなど。１つ又は複数の実施態様においては、Ｘｐｒｅ−２がカルボキシルであるか、又は活性化エステルである。
【０１４９】
いくつかの例示的な実施態様においては、そのポリマーアームそれぞれの末端に活性化されたカルボキシメチル基（例えば、カルボキシメチル基のＮＨＳエステル）を有するマルチアームポリマー反応剤が、アミノ酸、例えば、ベータ−アラニン、グリシン、Ｌ−アラニン、Ｌ−バリン、ロイシン、ジメチルグリシンなどに共有結合的に結合されて、本明細書に記載されたようにしてＴＬＲ７／８作動薬に対してカップリングするのに適した、活性化されたマルチアームポリマー性反応剤が得られる。
【０１５０】
反応性基を担持する所定のポリマー性反応剤と、ＴＬＲ７／８作動薬の上の反応性基との間のコンジュゲーション条件の例は、本明細書において提供される開示に基づき、そして関連する文献の文脈においては、当業者には公知であろう。例えば、Ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ）  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ（Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ）（１９９７）を参照されたい。本主題のマルチアームポリマーコンジュゲートを調製するための詳細な説明例は、付属の裏付け用の実施例において提供される。例えば、実施例１〜１６を参照されたい。
【０１５１】
ＴＬＲ７／８作動薬のマルチアームポリマーコンジュゲートのいくつかの特徴が好ましく、以下において記述されるそれらの特徴のそれぞれが、個々に、且つ明確に組み合わせとして、考慮されるべきである。いくつかの好ましい実施態様においては、中央のコアから延びているポリマーアームのそれぞれが、同一である。即ち、例えば式Ｉに関連していて言えば、Ｒから延びている、それぞれのＱ、ＰＯＬＹ、Ｘｒ、及びＴＬＲ７／８作動薬が、同じである。ある種の好ましい実施態様においては、ｑが４である。他の好ましい実施態様においては、そのマルチアームポリマーコンジュゲートに、ペンタエリスリトールのコアが含まれる。さらにいくつかのさらなる実施態様においては、そのＴＬＲ７／８作動薬が、レシキモドである。さらにいくつかの追加の実施態様においては、ＰＯＬＹがポリエチレングリコールであり、ＰＯＬＹ−Ｘｒには、−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−アミノ酸−が含まれるが、ここでそのアミノ酸は、ベータ−アラニン、グリシン、Ｌ−アラニン、Ｌ−バリン、ロイシン、Ｈ２ＮＣＨ２ＣＨＦＣＯＯＨ、及びジメチルグリシンから選択され、そしてそれらのアミノ酸のアミノ基は、カルボニル基に直接結合されている。前述のさらにいくつかのさらなる実施態様においては、そのアミノ酸がグリシンである。さらにいくつかのさらなる実施態様においては、そのマルチアームポリマーコンジュゲートが化合物６である。
【０１５２】
コンジュゲートの例
先に述べたように特徴を有する代表的なコンジュゲートを、以下に示す。例えば、コンジュゲートが、式ＩＩＩ、又はそれらの薬学的に許容される塩、又はそれらの立体異性体、で定義されるような構造を有していてよい：
【化１５】
2020514300.tif 000017
［式中、Ｌは、−（ＣＨ２）ｍ−、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｍ−，−ＣＨＦ−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｍ−、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｍ−、−（ＣＨ２）ｍ−ＣＨ（ＣＨ（ＣＨ３）２）−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｍ−、−（ＣＨ２）ｍ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｍ−、−Ｃ（ＣＨ３）２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｍ−、単結合、又は−ＮＨ−（ＣＨ２）ｍ−であり；それぞれのｍは、独立して、１〜５の整数（両端を含む）であり；それぞれのｎは、独立して、４０〜３５０の整数（両端を含む）であり；Ｒ１は、水素又は−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ３であり；そしてＲ２は、水素又はヒドロキシルである］。
【０１５３】
式ＩＩＩの具体的なコンジュゲートにおいては、Ｌは，例えば、以下のものから選択される：−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨＦ−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ（ＣＨ３）２）−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−Ｃ（ＣＨ３）２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、単結合、及び−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−。
【０１５４】
式ＩＩＩのいくつかの特異的な実施態様を以下に示す。
【０１５５】
例えば、いくつかの実施態様においては、それぞれのｎが、独立して、１００〜２５０の整数（両端を含む）である。
【０１５６】
式ＩＩＩのいくつかのコンジュゲートにおいては、Ｒ１が水素であり、そしてＲ２も水素である。
【０１５７】
さらに別な式ＩＩＩのコンジュゲートにおいては、Ｒ１が−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ３であり、そしてＲ２がヒドロキシルである。
【０１５８】
特定のマルチアームコンジュゲートは、以下のような構造を有している。即ち、いくつかの実施態様においては、マルチアームポリマーコンジュゲートが、化合物１〜１０又は１２〜１６、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは立体異性体のいずれか１つの構造を有している：
【化１６】
2020514300.tif 000018
【化１７】
2020514300.tif 000019
【化１８】
2020514300.tif 000020
【０１５９】
いくつかの実施態様においては、化学的な変換（即ち、ＴＬＲ７／８作動薬に対する共有結合的なカップリング）が不完全だったり、収率が１００％未満になったり、及び／又は化学合成の際に日常的に遭遇するその他の避けがたい複雑化が起きたりするので、マルチアームポリマーコンジュゲートを含む例示組成物には、「ｑ個」の数のポリマーアームのそれぞれに対して付着したＴＬＲ７／８作動薬化合物が、理想よりは少ない数しか含まれないことになるであろう。そのような数は、典型的には、ポリマー担持度（ｄｅｇｒｅｅ  ｏｆ  ｐｏｌｙｍｅｒ  ｌｏａｄｉｎｇ）と呼ばれていて、この場合、担持度１００％とは、「ｑ個」のポリマーアームのそれぞれの末端にＴＬＲ７／８作動薬化合物が共有結合的に結合されているような、完全な担持を表している。例えば、一例として、「４−ａｒｍ−ＰＥＧ」コンジュゲートは、４本アームのコンジュゲートを含む混合物として特徴付けることが可能であるが、ここで、その組成物の中の４本アームコンジュゲートの少なくとも５０面積パーセント（ａ／ａ、ＨＰＬＣによる測定）が、ＴＬＲ７／８作動薬に対してコンジュゲートされた４本のアームのそれぞれを有している。「４−ａｒｍ−ＰＥＧ」コンジュゲートの例を含むさらなる組成物の例では、４本アームコンジュゲートを含む組成物を特徴とすることができるが、ここで、その組成物の４本アームコンジュゲートの、少なくとも６５〜９０、７０〜８５、又は７０〜７５面積パーセント（ａ／ａ、ＨＰＬＣによる測定）が、ＴＬＲ７／８作動薬にコンジュゲートされた４本のアームのそれぞれを有している。
【０１６０】
組成物
それらのコンジュゲートは、それ自体で、又は薬学的に許容される塩の形態で投与することが可能であるが、本明細書の中で、いずれか１つ又は複数のマルチアームポリマーコンジュゲートを参照した場合には、薬学的に許容される塩が含まれることが意図されている。本明細書に記載されたようなコンジュゲートの塩を使用するならば、それは、薬理学的及び薬学的、いずれでも許容されるものでなければならない。そのような薬理学的及び薬学的に許容される塩は、文献に詳述されている標準的な方法を用いて、コンジュゲートを、有機酸又は無機酸と反応させることによって調製することができる。有用な塩の例としては、以下の酸を用いて調製したものが挙げられるが、それらに限定される訳ではない：塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、マレイン酸、酢酸、サリチル酸、ｐ−トルエンスルホン酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ギ酸、マロン酸、コハク酸、ナフタレン−２−スルホン酸、及びベンゼンスルホン酸、トリフルオロ酢酸など。さらに、薬学的に許容される塩は、カルボン酸基のアルカリ金属又はアルカリ土類金属の塩、例えば、ナトリウム、カリウム、又はカルシウム塩として調製することができる。
【０１６１】
コンジュゲート、特にコンジュゲートのＴＬＲ７／８作動薬の部分には、１個又は複数のキラル中心が含まれていてもよい。それらの中に含まれているそれぞれのキラル中心については、当該の（ｉｎｓｔａｎｔ）化合物及び構造物には、それぞれの光学異性体、さらには光学活性な形態の各種の組み合わせ又は比率のもの、例えば、単一の光学活性な鏡像異性体、又は複数の鏡像異性体の各種組み合わせ又は比率のもの（例えば、スカレミック混合物及びラセミ混合物）が包含されることが意図されている。それに加えて、小分子の医薬品には、１つ又は複数の幾何異性体の形態が含まれていてもよく、それらそれぞれが、本明細書に包含されると考えるべきである。幾何異性体に関しては、コンジュゲートには、単一の幾何異性体、又は２つ以上の幾何異性体の混合物を含むことができるものの、特定のマルチアームポリマーコンジュゲート構造の中に入る単一の幾何異性体が好ましい。
【０１６２】
本明細書において提供されるのはさらに、薬学的添加物と組み合わせた、本明細書において提供されるようなＴＬＲ７／８作動薬のマルチアームポリマーコンジュゲートを含む医薬製剤である。一般的には、コンジュゲートそのものは、固形の形態（例えば、沈殿物）にあるであろうが、それを、適切な薬学的添加物（固形の形態、液体の形態いずれであってもよい）と組み合わせることができる。
【０１６３】
医薬品添加物の例としては、以下のものからなる群より選択されるものが挙げられるが、これらに限定される訳ではない：炭水化物、無機塩、抗菌剤、抗酸化剤、界面活性剤、緩衝剤、酸、塩基、及びそれらの組み合わせ。
【０１６４】
炭水化物例えば、糖、変性糖例えば、アルジトール、アルドン酸、エステル化糖、及び／又は糖のポリマーを、医薬品添加物として存在させることができる。具体的な炭水化物系医薬品添加物としては、例えば以下のものが挙げられる：単糖類例えば、フルクトース、マルトース、ガラクトース、グルコース、Ｄ−マンノース、ソルボースなど；二糖類例えば、ラクトース、スクロース、トレハロース、セロビオースなど；多糖類例えば、ラフィノース、メレジトース、マルトデキストリン、デキストラン、デンプンなど；並びにアルジトール例えば、マンニトール、マルチトール、ラクチトール、キシリトール、ソルビトール、ミオイノシトールなど。
【０１６５】
医薬品添加物としてはさらに、以下のものも挙げられる：無機塩又は緩衝剤、例えば、クエン酸、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸ナトリウム、硝酸カリウム、一塩基性リン酸ナトリウム、二塩基性リン酸ナトリウム、及びそれらの組み合わせ。
【０１６６】
その製剤にはさらに、微生物の生育を防止又は阻止するための抗菌剤が含まれていてもよい。適切な抗菌剤の例を非限定的に挙げれば、以下のものである：塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ベンジルアルコール、塩化セチルピリジニウム、クロロブタノール、フェノール、フェニルエチルアルコール、硝酸フェニル水銀、チメロサール、及びそれらの組み合わせ。
【０１６７】
同様に、製剤の中に抗酸化剤を存在させることも可能である。抗酸化剤は、酸化を防止するために使用され、それによって、その製剤の中のコンジュゲート又はその他の成分の劣化を防止する。好適な抗酸化剤としては、例えば、以下のものが挙げられる：パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、次亜リン酸、モノチオグリセロール、没食子酸プロピル、重亜硫酸ナトリウム、ホルムアルデヒドスルホキシル酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、及びそれらの組み合わせ。
【０１６８】
医薬品添加物として、界面活性剤を存在させてもよい。界面活性剤の例としては、以下のものが挙げられる：ポリソルベート例えば、「Ｔｗｅｅｎ２０」及び「Ｔｗｅｅｎ８０」、並びにプルロニック例えば、Ｆ６８及びＦ８８（いずれも、ＢＡＳＦ，Ｍｏｕｎｔ  Ｏｌｉｖｅ，ＮＪから入手可能）；ソルビタンエステル；脂質例えば、リン脂質例えばレシチン及びその他のホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、脂肪酸及び脂肪族エステル；ステロイド例えば、コレステロール；並びにキレート化剤例えば、ＥＤＴＡ、亜鉛、及びその他のそのような適切なカチオン。
【０１６９】
その製剤の中には、医薬品添加物として、薬学的に許容される酸又は塩基が存在していてもよい。使用することが可能な酸の非限定的な例としては、以下のものからなる群より選択されるものが挙げられる：塩酸、酢酸、リン酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、ギ酸、トリクロロ酢酸、硝酸、過塩素酸、リン酸、硫酸、フマル酸、及びそれらの組み合わせ。好適な塩基の例としては、次のものからなる群より選択される塩基が挙げられるが、これらに限定される訳ではない：水酸化ナトリウム、酢酸ナトリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カリウム、酢酸アンモニウム、酢酸カリウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、クエン酸ナトリウム、ギ酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸カリウム、フマル酸カリウム、及びそれらの組み合わせ。
【０１７０】
その他の薬学的添加物及び／又は本開示に従った組成物、及び関連の製剤のための方法で使用するのに適した添加物は、例えば以下の文献に見出すことができる：”Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＆  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ”，２２ｎｄ  Ｅｄ．；Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：”Ｔｈｅ  Ｅｓｓｅｎｔｉａｌｓ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ（２００９）”；及び”Ｐｈｙｃｉａｎ’ｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ”（２０１７）；及び”Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ”，７ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ。
【０１７１】
組成物の中のコンジュゲートの量は、いくつかの因子に依存して変化するであろうが、その組成物を単位投与量容器の中に保存したときに、治療有効量となるようにするのが最善であろう。治療有効量は、臨床的に所望のエンドポイントに達するのに必要な量を求める目的で、コンジュゲートの量を増やしながら、繰り返し投与することによって、実験的に求めることができる。
【０１７２】
その組成物の中の、各種個々の医薬品添加物の量は、その医薬品添加物の活性、及びその組成物の具体的な必要性に応じて、変化するであろう。各種個々の医薬品添加物の最適量は、ルーチン的な実験によって決められる、即ち、医薬品添加物を（低から高までの範囲の）各種の量で含む組成物を調製し、その安定性及びその他のパラメータを確認し、次いで、顕著な有害効果がなく、最適な性能が達成される範囲を決定する。
【０１７３】
しかしながら、組成物の中には、医薬品添加物を、一般的には約１重量％〜約９９重量％、好ましくは約５重量％〜９８重量％、より好ましくは約１５〜９５重量％の医薬品添加物の量で、最も好ましくは３０重量％未満の濃度で存在させるであろう。
【０１７４】
医薬組成物は、任意の数の形態をとることができ、組成物はこれに関して限定されるものではない。例示的な製剤は、錠剤、カプレット、カプセル、ゲルキャップ、トローチ、分散体、懸濁液、溶液、エリキシル剤、シロップ剤、舐剤、経皮貼付剤、噴霧剤、坐剤、及び散剤などの経口投与に好適な形態であり得る。好ましい実施形態において、組成物は腫瘍内投与に好適な形態である。
【０１７５】
経口投与形態としては、錠剤、カプレット、カプセル、ゲルキャップ、懸濁液、溶液、エリキシル剤、及びシロップ剤が挙げられ、また、任意選択的に被包される複数の顆粒剤、ビーズ、散剤又は粒剤を含んでもよい。このような投与形態は、製剤分野の当業者に知られる従来の方法を使用して作製され、関連文献に記載されている。
【０１７６】
例えば、錠剤及びカプレットは、標準的な錠剤加工手順及び装置を用いて製造することができる。本明細書で記載されるコンジュゲートを含有する錠剤又はカプレットを作製する際は、直接打錠法及び直接顆粒化法が好ましい。コンジュゲートに加えて、本錠剤及びカプレットは通常、結合剤、潤滑剤、崩壊剤、充填剤、安定剤、界面活性剤、着色剤、流動化剤などの不活性の薬学的に許容可能な担体材料を含有することになる。結合剤を使用して、錠剤に凝集性の性質を付与し、従って、確実に錠剤がそのまま維持される。好適な結合剤材料としては、限定されるものではないが、澱粉（トウモロコシ澱粉及びアルファ化澱粉を含む）、ゼラチン、糖（スクロース、グルコース、デキストロース、及びラクトースを含む）、ポリエチレングリコール、ワックス、並びに天然ゴム及び合成ゴム、例えば、アカシアアルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系ポリマー（ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、微結晶セルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロースなど）、並びにビーガムが挙げられる。潤滑剤を使用して、錠剤製造を容易にして、粉末の流動を促進し、圧力が軽減される際の粒子キャッピング（即ち、粒子破砕）を防止する。有用な潤滑剤は、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、及びステアリン酸である。崩壊剤を使用して、錠剤の崩壊を容易にし、崩壊剤は通常、澱粉、粘土、セルロース、アルギン、ゴム、又は架橋ポリマーである。充填剤としては、例えば、二酸化ケイ素、二酸化チタン、アルミナ、タルク、カオリン、粉末セルロース、及び微結晶セルロースなどの材料、並びにマンニトール、尿素、スクロース、ラクトース、デキストロース、塩化ナトリウム、及びソルビトールなどの可溶性材料が挙げられる。当技術分野でよく知られるとおり、安定剤を使用して、一例として酸化反応を含む薬剤分解反応を阻害するか、又は遅らせる。
【０１７７】
カプセルはまた、好ましい経口投与形態であり、この場合、コンジュゲート含有組成物は、液体又はゲル（例えば、ゲルキャップの場合）又は固体（顆粒剤、ビーズ、散剤若しくは粒剤などの微粒子を含む）の形態で被包され得る。好適なカプセルとしては、硬質カプセル及び軟質カプセルが挙げられ、通常、ゼラチン、澱粉、又はセルロース系材料で作製される。二部分から成る硬質ゼラチンカプセルは、ゼラチンバンドなどで密閉されることが好ましい。
【０１７８】
実質的に乾燥形態（粉末又はケーキの形態であり得る凍結乾燥物又は沈殿物として）の非経口製剤、及び液体であり、且つ非経口製剤の乾燥形態を再構成する工程を要する注射用に作製された製剤が挙げられる。注射前に固体組成物を再構成するための好適な希釈剤の例としては、注射用静菌水、５％デキストロース水溶液、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル溶液、生理食塩水、滅菌水、脱イオン水、及びこれらの組み合わせが挙げられる。
【０１７９】
いくつかの場合において、非経口投与を目的とした組成物は、非水溶液、懸濁液、又はエマルジョンの形態をとることができ、通常、滅菌済みである。非水性溶媒又はビヒクルの例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油及びトウモロコシ油などの植物油、ゼラチン、並びにオレイン酸エチルなどの注射用有機エステルである。
【０１８０】
本明細書で記載される非経口製剤はまた、保存剤、湿潤剤、乳化剤、及び分散剤などのアジュバントを含有してもよい。製剤は、滅菌剤、細菌を保持するフィルターを通したろ過、放射線照射、又は加熱を組み入れることによって滅菌される。
【０１８１】
コンジュゲートはまた、従来の経皮貼付剤又は他の経皮的な送達システムを用いて皮膚を通して投与することができ、ここで、コンジュゲートは、皮膚に貼られる薬物送達デバイスとして機能する積層構造内に含有される。このような構造において、コンジュゲートは、層、又は裏地の上部の下地となる「レザバー」に含有される。積層構造は、単一のレザバーを含有してもよいし、複数のレザバーを含有してもよい。
【０１８２】
コンジュゲートはまた、直腸投与用の坐剤に製剤化されてもよい。坐剤に関して、コンジュゲートを、コカバター（カカオ脂）、ポリエチレングリコール、グリセリンゼラチン、脂肪酸、及びこれらの組み合わせなどの（例えば、室温で固体を維持するが、体温で軟化するか、融解するか、又は溶解する賦形剤）である坐剤のベース材料と混合する。坐剤は、例えば、以下の工程（必ずしも提示される順序ではない）：坐剤のベース材料を融解して溶解物を形成する工程；コンジュゲートを組み込む工程（坐剤のベース材料の融解の前又は後のいずれか）；溶解物を鋳型に注ぐ工程；溶解物を冷却して（例えば、溶解物を含有する鋳型を室温環境に置く）、それにより坐剤を形成する工程；及び鋳型から坐剤を取り外す工程を実施することによって作製することができる。
【０１８３】
一部の好ましい実施形態において、コンジュゲート又はコンジュゲートを含む組成物は、腫瘍内に投与される（例えば、腫瘍に直接投与される（例えば、注射によって））。このような投与により、ＴＬＲ７／８作動薬の体循環への、また、放出可能な結合を含むコンジュゲートの場合は腫瘍それ自体への遅延放出を伴い、腫瘍中においてＴＬＲ７／８作動薬の高い濃度が達成される。ＴＬＲ７／８作動薬のマルチアームポリマーコンジュゲートの腫瘍内投与のための例示的な製剤は、ｐＨ７．４のＮａ／Ｋリン酸塩緩衝液を含む。
【０１８４】
一部の実施形態において、コンジュゲートを含む組成物はさらに、好適な送達ビヒクルに組み込まれてもよい。このような送達ビヒクルは、コンジュゲートの制御放出及び／又は連続放出を実現し得、且つ標的化部分としても機能し得る。送達ビヒクルの非限定的な例としては、アジュバント、合成アジュバント、マイクロカプセル、微小粒子、リポソーム、及び酵母細胞壁粒子が挙げられる。酵母細胞壁は、様々に処理されてタンパク質成分、グルカン、又はマンナン層を除去される場合があり、全グルカン粒子（ＷＧＰ）、酵母β−グルカンマンナン粒子（ＹＧＭＰ）、酵母グルカン粒子（ＹＧＰ）、ロドトルラ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ）酵母細胞粒子（ＹＣＰ）と称される。Ｓ．セレビシエ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）及びロドトルラ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ）種などの酵母細胞が好ましいが；任意の酵母細胞が使用されてもよい。これらの酵母細胞は、流体力学的体積に関して異なる特性を示し、それらの内容物を放出し得る標的器官も異なる。これらの粒子の製造及び特徴付けの方法は、米国特許第５，７４１，４９５号明細書、同第４，８１０，６４６号明細書、同第４，９９２，５４０号明細書、同第５，０２８，７０３号明細書、同第５，６０７，６７７号明細書並びに米国特許出願公開第２００５／０２８１７８１号明細書及び同第２００８／００４４４３８号明細書に記載されている。
【０１８５】
本明細書に提供されるＴＬＲ７／８作動薬のマルチアームポリマーコンジュゲートを、例えば癌を有する患者などの本コンジュゲートによる治療に応答する病態に罹患している患者に投与するための方法も提供される。本方法は、（好ましくは、医薬品の一部として提供される）治療有効量のコンジュゲートを投与する工程を含み、例示的な投与方法としては、経口投与に加えて、肺内、鼻内、頬側、直腸、舌下、経皮、及び非経口などの経路が挙げられる。本明細書で使用されるとき、用語「非経口」には、皮下、静脈内、動脈内、腹腔内、心臓内、くも膜下腔内、及び筋肉内注射、並びに点滴注射が含まれる。
【０１８６】
ある実施形態において、癌は固形癌である。例えば癌は、乳癌、卵巣癌、結腸癌、前立腺癌、骨癌、結腸直腸癌、胃癌、リンパ腫、悪性黒色腫、肝癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膵癌、甲状腺癌、腎癌、胆管癌、脳癌、子宮頸癌、上顎洞癌、膀胱癌、食道癌、ホジキン病及び副腎皮質癌からなる群から選択することができる。
【０１８７】
非経口投与が用いられる場合、例えば、約５００〜６０，０００ダルトンの範囲の分子量（例えば、約５００、１０００、２０００、２５００、３０００、５０００、７５００、１００００、１５０００、２００００、２５０００、３０，０００、４０，０００、５０，０００以上の分子量を有する）を有するいくらか大きいポリマーを用いることが有用である場合がある。
【０１８８】
一実施形態において、癌を治療する方法を対象とする方法が提供され、この方法は、患者に本明細書で記載されるコンジュゲートを含む医薬組成物を投与することを含む。
【０１８９】
一実施形態において、固形癌などの癌の治療に有用である医薬の調製における本明細書で記載されるコンジュゲートの使用が本明細書に提供される。
【０１９０】
投与すべき実際の用量は、対象の年齢、体重、及び全身状態並びに治療下の病態の重症度、医療専門家の判断、並びに投与されているコンジュゲートに応じて異なる。治療有効量は当業者に公知であり、且つ／又は関連の参考テキスト及び文献に記載されている。一般に、治療有効量は約０．００１ｍｇ〜１０００ｍｇの範囲であり、好ましくは０．０１ｍｇ／日〜７５０ｍｇ／日の用量、より好ましくは０．１０ｍｇ／日〜５００ｍｇ／日の用量である。
【０１９１】
任意の所与のコンジュゲート（繰り返しになるが、好ましくは、医薬品の一部として提供される）の単位投与量を、臨床医の判断、患者の必要性などに応じて種々の投与スケジュールで投与することができる。特定の投与スケジュールは、当業者に公知であるか、又は通例の方法を用いて実験的に決定することができる。例示的な投与スケジュールとしては、限定されるものではないが、１日に５回、１日に４回、１日に３回、１日に２回、１日に１回、１週間に３回、１週間に２回、１週間に１回、１ヶ月に２回、１ヶ月に１回、及びこれらの任意の組み合わせが挙げられる。一旦臨床エンドポイントが達成されたら、組成物の投与は中止される。
【０１９２】
トル様受容体（ＴＬＲ）作動薬と長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬の併用投与による癌を有する患者の治療
ＩＬ−２Ｒβ選択的作動薬の投与は、適応免疫系を標的化することによってある種の癌に罹患している患者に有益であると示唆された。このような投与は、ＣＤ８＋記憶Ｔ細胞を増加させながら制御性Ｔ細胞の免疫抑制効果を低減して、それにより癌細胞を消失させる患者自身の免疫系を動員すると予想される。例えば、Ｃｈａｒｙｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，ＡＡＣＲ  ２０１３，Ａｂｓｔｒａｃｔ  ＃４８２を参照されたい。
【０１９３】
ＩＬ−２Ｒβ選択的作動薬の投与を介する癌の治療における癌患者の免疫系の動員（直接的に免疫を活性化することができる）を、場合によっては、例えば、追加の薬剤の投与によってさらに増強することができる。しかしながら、２種以上の免疫調節物質を投与することによって腫瘍に対する細胞傷害性免疫応答を活性化しようとする場合、多数の課題が生じる。例えば、場合によっては、第２の免疫調節薬の投与は、実際には、単剤として（即ち、単剤療法として）投与される場合には強力な抗腫瘍応答を促進する第１の免疫調節薬の細胞障害効果を増強する代わりに、細胞障害効果を減弱又は抑制する可能性がある。癌免疫療法において、有効な抗腫瘍応答を実現するための免疫刺激と免疫抑制との間の好ましいバランスの達成は、特に複数の活性薬剤を投与する場合には重大な課題となる。
【０１９４】
ＴＬＲ作動薬はそれらの抗腫瘍特性について調査されてきたが、概して、大部分のＴＬＲ作動薬は癌治療法として期待した成果をあげていない。このような低迷は、免疫抑制性因子の誘導がＴＬＲ作動薬誘導性炎症を弱める機構によって説明され得ると仮定されてきた。（Ｌｕ，Ｈ．Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｍａｒｃｈ  ２０１４，５，８３）。例えば、ＴＬＲ作動薬は、樹状細胞上のＣＤ８０、ＣＤ８６、及びＣＤ４０などの共刺激分子、並びに免疫応答を方向づけするＴＮＦ−α及びＩＬ−１２などの炎症性サイトカインの誘導を介した免疫刺激効果を有する。しかしながら、ＴＬＲ作動薬はまた、例えば、ＩＬ−１０、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、及びＰＤ−１を含む、これら全ては抗腫瘍免疫を抑制することが可能ないくつかの免疫抑制性因子を誘導することによって、免疫抑制効果を有する（Ｌｕ，Ｈ．，２０１４、同個所）。従って、両方の成分が有利に相互作用して治療効果を増強する免疫療法的併用に達しようとするには、顕著な課題が存在している。
【０１９５】
上述のように、今日まで様々なプラットフォームを包含する有効な癌免疫療法の開発における多大な試行が存在しているが、例えば、癌を治療するための新たなより有効な免疫療法による治療レジメンを特定及び提供することが依然として必要とされている。本開示のこの及び他の態様は、この及び他の必要性に対処しようとするものである。
【０１９６】
概要
単一の免疫療法剤を含む現在の抗腫瘍戦略に関連する欠点、例えば、高い全身暴露並びに関連する毒性及び／又は最適以下の腫瘍溶解効果などの少なくとも一部に対処するための試行において、自然免疫活性化量のＴＬＲ作動薬及びＩＬ−２Ｒβ活性化量の長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬を、癌を有する対象に投与することを含む方法が本明細書に提供される。本開示は、少なくとも一部には、ＴＬＲ作動薬、好ましくは本明細書で提供されるＴＬＲ７／８作動薬のマルチアームポリマーコンジュゲート及び長時間作用型ＩＬ−２Ｒ作動薬、より具体的にはＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬を含む驚くほど有利な療法薬併用の発見に基づく。
【０１９７】
Ｉｌ−２は、アルファ（ＩＬ２Ｒα、ＣＤ２５）、ベータ（ＩＬ２Ｒβ、ＣＤ１２２）及び共通のガンマ鎖受容体（γｃ’ＣＤ１３２）を含有する受容体シグナリング複合体を通じて免疫細胞増殖及び活性化を刺激する。高用量において、ＩＬ２はヘテロ二量体ＩＬ２Ｒβγ受容体に結合し、腫瘍殺傷ＣＤ８＋メモリーエフェクターＴ（ＣＤ８Ｔ）細胞の所望の拡大をもたらす。しかしながら、ＩＬ２はそのヘテロ三量体受容体ＩＬ２Ｒαβγにもより大きな親和性で結合し、それが免疫抑制ＣＤ４＋、ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を拡大し、それが癌免疫療法についての不所望な効果をもたらし得る。従って、ＩＬ−２Ｒαβバイアス作動薬、特に、長時間作用型ＩＬ−２Ｒαβバイアス作動薬とＴＬＲ作動薬の投与を併用する治療モダリティが本明細書に提供される。理論により拘束されるものではないが、本出願人らは、免疫抑制Ｔｒｅｇの活性化を担うＩＬ２Ｒαサブユニットと相互作用する領域をマスクする（即ちその活性を抑制し、又は減衰させる）長時間作用型ＩＬ−２化合物、即ち長時間作用型ＩＬ−２Ｒαβバイアス作動薬を利用することにより、抗原提示細胞の成熟及びＴ細胞プライミングの作用機序を有するＴＬＲ作動薬と選択的に併用する場合に、優れた治療有効性を達成することができることを発見し、それは本開示及び裏付けの実施例から明らかになる。実際に、代表的な実施例において、前述の併用により驚異的なアブスコパル効果がもたらされ、その結果、全ての腫瘍、つまりＴＬＲ作動薬が直接投与された腫瘍（第１の腫瘍）及びＴＬＲ作動薬が直接投与されなかった腫瘍（第２の腫瘍）の両方において、有効性が観察された。
【０１９８】
本明細書で提供される治療方法は、即ち、自然免疫応答を刺激するためのＴＬＲ作動薬を投与することを含む。ＴＬＲ作動薬の投与は、例えば、自然免疫、骨髄系細胞応答を活性化し、且つ腫瘍抗原提示を増加させるために有効である。概して、ＴＬＲ作動薬は、局所感染を模倣することによって、腫瘍中において腫瘍抑制性微小環境を作出することができる。
【０１９９】
様々なＴＬＲ作動薬を本明細書に記載される方法に従って投与することができ、本開示はこれに関して限定されるものではない。良好なアウトカムは、ＩＬ−２経路により（即ちＴＬＲ作動薬と長時間作用型ＩＬ−２Ｒαβバイアス作動薬の共投与により）達成してＴＬＲ作動薬及び長時間作用型ＩＬ−２Ｒαβバイアス作動薬の補完性並びに作用機序に起因して所望のＴ細胞応答を刺激することができることが本出願人らの見地である。例示的なＴＬＲ作動薬としては、限定されるものではないが、例えば、ＴＬＲ７又はＴＬＲ８作動薬が挙げられる。特に好ましいＴＬＲ作動薬は、上記のとおりのＴＬＲ７／８作動薬のマルチアームポリマーコンジュゲートである。
【０２００】
１つ以上の実施形態において、ＴＬＲ作動薬は、４つのポリマーアームのそれぞれの末端で安定的に又は放出可能に共有結合しているレシキモドなどのＴＬＲ作動薬分子を有する、２０，０００ダルトンの４−ａｒｍ−ペンタエリトリトリル系ポリエチレングリコールコンジュゲートである。
【０２０１】
ある実施形態において、長時間作用型ＴＬＲ作動薬は、４つのポリマーアームのそれぞれの末端で放出可能に共有結合しているＲ８４８を有する４−ａｒｍ−ペンタエリトリトリル系ポリエチレングリコールコンジュゲートであり、以下の構造を有する。
【化１９】
2020514300.tif 000021
【０２０２】
前述のＴＬＲ作動薬マルチアームポリマーコンジュゲートは、本明細書で「４−ａｒｍ−ＰＥＧ−ＣＭ−Ｎ−Ｒ８４８」と称され、Ｎ−は、ＴＬＲ作動薬分子Ｒ８４８のアミノ基への結合を示し；その調製は実施例３において記載される。
【０２０３】
ある実施形態において、ＴＬＲ作動薬は、化合物１〜１０若しくは１２〜１６のいずれか１つ、又はその薬学的に許容可能な塩形態である。
【０２０４】
ある実施形態において、ＴＬＲ作動薬は、下に示される構造を有する化合物１１であり、ｎは、本明細書で記載される繰り返し単位の任意の好適な数である。
【化２０】
2020514300.tif 000022
【０２０５】
さらに他の好ましい実施形態において、ＴＬＲ作動薬化合物は、下に示される構造を有する化合物６であり、ｎは、本明細書で記載される繰り返し単位の任意の好適な数である。
【化２１】
2020514300.tif 000023
【０２０６】
ＴＬＲ作動薬は、任意の好適な投与経路、例えば皮内、静脈内、皮下、節内、リンパ管内、腫瘍内投与などにより投与することができる。本方法の１つ以上の特定の実施形態において、ＴＬＲ作動薬は、例えば、対象における自然免疫を活性化するのに有効な量で注射により腫瘍に直接投与される。
【０２０７】
長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬
本明細書に記載される方法、製剤、キットなどは、長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬の投与を含む。これに関連して、本開示は、その作動薬が同じインビトロモデルにおけるＩＬ−２Ｒαβへの結合親和性よりも少なくとも５倍高い（より好ましくは少なくとも１０倍高い）ＩＬ−２Ｒβへのインビトロ結合親和性を呈し、ＩＬ−２よりも少なくとも１０倍有効なインビボ半減期（ＩＬ−２のインビボ消失に基づく半減期）を有する限り、いかなる特定の長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬にも限定されない。例として、ＩＬ−２に対する親和性を基準として計測することが可能である。これに関連して、本明細書中の実施例１に言及されるＲＳＬＡＩＬ−２は、ＩＬ−２と比べてＩＬ−２Ｒαβへの親和性の約６０倍の低下を呈するが、ＩＬ−２Ｒβへの親和性はＩＬ−２と比べて約５倍の低下に過ぎない。
【０２０８】
長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬の非限定的な例が国際公開第２０１２／０６５０８６号パンフレット及び国際公開第２０１５／１２５１５９号パンフレットに記載されている。例示的な長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬は本願の実施例１９に言及されるＲＳＬＡＩＬ−２であり、放出可能ＰＥＧは下記のとおりの２，７，９置換フルオレンをベースとし、ポリ（エチレングリコール）鎖は、フルオレン環上の２及び７位からアミド結合（フルオレン−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−）、及びフルオレン環の９位にメチレン基（−ＣＨ２−）により結合しているカルバメート窒素原子への結合によるＩＬ−２への放出可能な共有結合により延在している。これに関連して、ＲＳＬＡＩＬ−２は、以下の式：
【化２２】
2020514300.tif 000024
［式中、ＩＬ−２はＩＬ−２の残基であり、及び「ｎ」は約３〜約４０００の整数である］に包含される化合物、及びその薬学的に許容可能な塩を含む組成物である。１つ以上の実施形態において、この組成物は、以下の式：
【化２３】
2020514300.tif 000025
［式中、ＩＬ−２はＩＬ−２の残基であり、（ｎ）（ＩＬ−２に結合しているポリエチレングリコール部分の数を指す）は１、２、３、７及び＞７からなる群から選択される整数である］に包含される化合物、及びその薬学的に許容可能な塩を１０％以下（モル量基準）、好ましくは５％以下（モル量基準）含有する。一部の実施形態において、ＲＳＬＡＩＬ−２はＩＬ−２に結合している平均約６つのポリエチレングリコール部分を有する。一部の別の実施形態において、ＲＳＬＡＩＬ−２は、一般に、不活性プロドラッグ、即ち投与時に不活性であると見なされ、インビボでのポリエチレングリコール部分の徐放により、腫瘍部位における持続濃度を達成するために有効なインターロイキン−２の活性コンジュゲート形態を提供する。
【０２０９】
ＲＳＬＡＩＬ−２のさらなる例示的な組成物は、分子の全てのポリマー部分が約２５０ダルトン〜約９０，０００ダルトンの範囲の重量平均分子量を有する上記の式に係る化合物を含む。さらなる好適な範囲としては、約１，０００ダルトン〜約６０，０００ダルトンから選択される範囲、約５，０００ダルトン〜約６０，０００ダルトンの範囲、約１０，０００ダルトン〜約５５，０００ダルトンの範囲、約１５，０００ダルトン〜約５０，０００ダルトンの範囲、及び約２０，０００ダルトン〜約５０，０００ダルトンの範囲の重量平均分子量が挙げられる。
【０２１０】
ポリエチレングリコールポリマー部分のさらなる例示的な重量平均分子量としては、約２００ダルトン、約３００ダルトン、約４００ダルトン、約５００ダルトン、約６００ダルトン、約７００ダルトン、約７５０ダルトン、約８００ダルトン、約９００ダルトン、約１，０００ダルトン、約１，５００ダルトン、約２，０００ダルトン、約２，２００ダルトン、約２，５００ダルトン、約３，０００ダルトン、約４，０００ダルトン、約４，４００ダルトン、約４，５００ダルトン、約５，０００ダルトン、約５，５００ダルトン、約６，０００ダルトン、約７，０００ダルトン、約７，５００ダルトン、約８，０００ダルトン、約９，０００ダルトン、約１０，０００ダルトン、約１１，０００ダルトン、約１２，０００ダルトン、約１３，０００ダルトン、約１４，０００ダルトン、約１５，０００ダルトン、約２０，０００ダルトン、約２２，５００ダルトン、約２５，０００ダルトン、約３０，０００ダルトン、約３５，０００ダルトン、約４０，０００ダルトン、約４５，０００ダルトン、約５０，０００ダルトン、約５５，０００ダルトン、約６０，０００ダルトン、約６５，０００ダルトン、約７０，０００ダルトン、及び約７５，０００ダルトンが挙げられる。一部の実施形態において、ポリエチレングリコールポリマーの重量平均分子量は約２０，０００ダルトンである。
【０２１１】
上記のとおり、長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬は、（ＴＬＲ作動薬の場合のように）薬学的に許容可能な塩の形態であり得る。典型的には、かかる塩は薬学的に許容可能な酸又は酸等価物との反応によって形成される。これに関連して用語「薬学的に許容可能な塩」は、概して、比較的非毒性の無機酸及び有機酸付加塩を指し得る。これらの塩は、投与媒体又は剤形製造過程においてインサイチューで、又は別途本明細書に記載されるとおりの長時間作用型インターロイキン−２を好適な有機酸又は無機酸と反応させて、そのようにして形成された塩を単離することにより調製し得る。代表的な塩としては、臭化水素酸塩、塩酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、酢酸塩、吉草酸塩、オレイン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリン酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、リン酸塩、トシル酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ナフチル酸塩（ｎａｐｔｈｙｌａｔｅ）、シュウ酸塩、メシル酸塩、グルコヘプトン酸塩、ラクトビオン酸塩、及びラウリルスルホン酸塩などが挙げられる。（例えば、Ｂｅｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９７７）「薬学的塩（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ）」，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：１−１９を参照のこと）。従って、記載されるとおりの塩は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸などの無機酸に由来してもよく；又は酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パルミチン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸（ｓａｌｉｃｙｃｌｉｃ）、スルファニル酸、２−アセトキシ安息香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸、イセチオン酸（ｉｓｏｔｈｉｏｎｉｃ）などの有機酸から調製されてもよい。
【０２１２】
前述のＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬に関して、用語「ＩＬ−２」は、本明細書で使用されるとき、ヒトＩＬ−２活性を有する部分を指す。用語、「残基」は、ＩＬ−２の残基の文脈では、上記の式に示されるとおり、ＩＬ−２分子のうち１つ以上の共有結合部位においてポリエチレングリコールなどのポリマー剤との共有結合後に残る部分を意味する。非修飾ＩＬ−２がポリエチレングリコールなどのポリマーに結合すると、その１つ以上のポリマーとの結合に付随する１つ以上の共有結合の存在によってＩＬ−２は僅かに変化することが理解されるであろう。この僅かに変化した形態の、別の分子に結合したＩＬ−２は、ある場合には、ＩＬ−２の「残基」と称され得る。
【０２１３】
例えば、国際公開第２０１２／０６５０８６号パンフレットに記載される配列番号１〜４のいずれか１つに対応するアミノ酸配列を有するタンパク質が、それらと実質的に相同な任意のタンパク質又はポリペプチドと同様に、例示的ＩＬ−２タンパク質である。用語の実質的に相同とは、特定の対象配列、例えば突然変異配列が１つ以上の置換、欠失、又は付加だけ参照配列と異なるが、その正味の効果は参照配列と対象配列との間に有害な機能的相違をもたらさないものであることを意味する。本明細書の目的上、９５パーセントより高い相同性、等価な生物学的活性（必須ではないが等価な生物学的活性強度）、及び等価な発現特性を有する配列が、実質的に相同と見なされる。相同性を決定する目的上、成熟配列のトランケーションは無視しなければならない。本明細書で使用されるとき、用語「ＩＬ−２」には、例えば部位特異的突然変異誘発によるとおり意図的に修飾されるか、又は突然変異を通じて偶発的に修飾されたタンパク質が含まれる。これらの用語にはまた、１〜６つのさらなるグリコシル化部位を有する類似体、タンパク質のカルボキシ端側末端に少なくとも１つのさらなるアミノ酸を有する類似体であって、そのさらなる１つ以上のアミノ酸が少なくとも１つのグリコシル化部位を含む類似体、及び少なくとも１つのグリコシル化部位を含むアミノ酸配列を有する類似体も含まれる。この用語には、天然の部分及び組換え生成された部分の両方が含まれる。加えて、ＩＬ−２は、ヒト供給源、動物供給源、及び植物供給源に由来し得る。１つの例示的ＩＬ−２は、アルデスロイキンと称される組換えＩＬ−２である。
【０２１４】
化合物の放射標識、そのインビボ投与、及びそのクリアランスの決定が関わるものなどの従来手法を用いて、長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬であると提案される化合物が「長時間作用型」であるかどうかを決定することができる。本明細書における目的上、ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬の性質は、典型的には、マウスにおいて評価しようとする作動薬の投与後の様々な時点でフローサイトメトリーを用いてリンパ球のＳＴＡＴ５リン酸化を計測することにより決定される。参考として、ＩＬ−２では約２４時間までにシグナルが失われるが、長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬についてはそれより長い期間持続する。例示として、ＲＳＬＡＩＬ−２の組成物についてシグナルは数日間持続する。
【０２１５】
ここで本明細書に記載される長時間作用型作動薬のＩＬ−２Ｒβバイアスを考慮して、実施例２０は、ＲＳＬＡＩＬ−２の例示的組成物についての受容体バイアスに関連するインビトロ及びインビボデータの両方を提供する。実施例２０に記載されるとおり、マウス黒色腫腫瘍モデルにおいて、ＩＬ−２と比較した場合のＲＳＬＡＩＬ−２についてのＣＤ８／制御性Ｔ細胞の比は、ＩＬ２受容体アルファと比べたＩＬ−２受容体ベータの優先的な活性化を裏付ける。例示的な長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬、例えばＲＳＬＡＩＬ−２は、例えばＴｒｅｇと比べてエフェクターＣＤ８＋Ｔ及びＮＫ細胞を優先的に活性化させ、拡大するために有効である。
【０２１６】
さらに、代表的な長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬、例えばＲＳＬＡＩＬ−２は、ＩＬ−２と比べて増加した腫瘍曝露、好ましくは有意に増強された腫瘍曝露、例えばＩＬ−２の等価物について正規化した場合、少なくとも５０倍増加した曝露、又は少なくとも１００倍増加した曝露、又は少なくとも２００倍増加した曝露、又は少なくとも３００倍増加した曝露、又は少なくとも４００倍増加した曝露、又は少なくとも５００倍増加した曝露を提供する。
【０２１７】
上記に関連する方法、組成物、及びキット
本明細書に記載される長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬の特徴の少なくとも１つ以上に基づき、免疫抑制Ｔｒｅｇの活性化を担うＩＬ２Ｒαサブユニットと相互作用する領域をマスクする長時間作用型ＩＬ−２化合物を全身的に投与することによって、投与、例えば、最小の全身暴露を伴うＴＬＲ作動薬のマルチアームポリマーコンジュゲートの局所投与により腫瘍中のＴＬＲ活性を選択的に最適化して、それにより癌患者におけるＴ細胞応答を拡大して、それによりこの併用に対する優れた治療有効性を達成するために有効な方法が本明細書に提供される。
【０２１８】
本明細書に記載される方法、組成物、及びキットによれば、長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬はＩＬ−２Ｒβ活性化量で提供される。当業者は、どのくらいの所与の長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬がＩＬ−２Ｒβにおける臨床的に有意味なアゴニスト活性をもたらすのに十分であるかを決定することができる。例えば、当業者は文献を参照してもよく、及び／又は一連の漸増量の長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬を投与して、どの１つ以上の量がＩＬ−２Ｒβの臨床的に有意味なアゴニスト活性をもたらすかを決定してもよい。或いは、長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬の活性化量を、上記に記載されるインビボＳＴＡＴ５リン酸化アッセイを用いて決定する（投与後にインビボで決定する）ことができ、ここではピーク時点でＮＫ細胞の１０％を上回るＳＴＡＴ５リン酸化を誘導するのに十分な量が活性化量と見なされる。
【０２１９】
しかしながら、１つ以上の例において、ＩＬ−２Ｒβ活性化量は、タンパク質の量で表現される以下の範囲の１つ以上により包含される量である：約０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ；約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約７５ｍｇ／ｋｇ；約０．０２ｍｇ／ｋｇ〜約６０ｍｇ／ｋｇ；約０．０３ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ；約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ；約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ；約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ；約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇ；約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ；約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ；約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇ。一部の実施形態において、長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬は、０．７ｍｇ／ｋｇ以下の用量において投与する。特定の例示的な投与量範囲には、例えば約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、又は約０．２ｍｇ／ｋｇ〜約７ｍｇ／ｋｇ又は約０．２ｍｇ／ｋｇ〜約０．７ｍｇ／ｋｇ未満が含まれる。
【０２２０】
確認のために言えば、長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬に関して、活性化の量及び程度は大きく異なり得、ＴＬＲ作動薬の投与と合わせた場合になおも有効であり得る。即ち、ＩＬ−２Ｒβでごく最小限の作動薬活性を十分に長期間にわたり呈する長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬の量は、ＴＬＲ作動薬と投与する場合、本明細書に記載される方法、組成物、及びキットが臨床的に意味のある応答を可能とする限り、なおも長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬であり得る。一部の例において、（例えば）相乗的相互作用及び応答に起因して、ＴＬＲ作動薬（例えば、長時間作用型ＴＬＲ作動薬）の投与を伴う場合、ＩＬ−２Ｒβの作動薬活性は最小限だけ要求され得る。
【０２２１】
本明細書に記載される治療方法は、患者ケアを監督する臨床医がその治療方法を有効であると見なす限り継続され得る。治療方法が有効であることの指標となる非限定的パラメータには、以下のいずれか１つ以上が含まれる：腫瘍縮小（重量及び／又は容積の点で）；個別の腫瘍コロニーの数の減少；腫瘍消失；及び無進行生存。腫瘍サイズの変化は、任意の好適な方法、例えばイメージングにより決定することができる。様々な診断イメージングモダリティ、例えばコンピュータ断層撮影（ＣＴスキャン）、二重エネルギーＣＤＴ、陽電子放出断層撮影及びＭＲＩを用いることができる。
【０２２２】
ＴＬＲ作動薬及び長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬の実際の用量、並びに本明細書に記載される方法、組成物、及びキットに関連する投与レジメンは、対象の年齢、体重、及び全身状態並びに治療下の癌の種類及び進行、医療専門家の判断、並びに投与すべき特定のＴＬＲ作動薬及び長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬に応じて異なる。
【０２２３】
ＴＬＲ作動薬及び長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬の投与頻度及びスケジュールに関して、当業者は適切な頻度を決定することが可能であろう。例えば臨床医は、治療サイクルにおいて、ＴＬＲ作動薬を例えば単一用量として又は例えば数日間若しくは数週間の過程にわたる一連の用量のいずれかで投与することを決定することができる）。一部の治療レジメンにおいて、ＴＬＲ作動薬は、治療の開始時に単一用量として投与する。長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬は、ＴＬＲ作動薬と同時に、又はＴＬＲ作動薬の投与前、又はＴＬＲ作動薬の投与後のいずれかで投与する。好ましい治療モダリティにおいて、ＴＬＲ作動薬は、長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬の前に投与する。例えば、ＴＬＲ作動薬がＴＬＲ７／８作動薬のマルチアームポリマーコンジュゲートである場合、ＴＬＲ作動薬は腫瘍内に投与するが、ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬は、例えば注射によって全身的に投与する。例えば一部の治療モダリティにおいて、長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬は、ＴＬＲ作動薬投与の１４日以内に（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４日目のいずれか１日に）投与し、０日目は治療の開始を示す。一部の治療レジメンにおいて、長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬は、ＴＬＲ作動薬の投与の７日以内、例えば、１、２、３、４、５、６又は７日目のいずれか１日に投与するか；ＴＬＲ作動薬の投与の４日以内に投与するか、又はＴＬＲ作動薬の投与の２日以内に投与する。
【０２２４】
ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬の長時間作用性質に基づき、このような化合物は、典型的には、比較的低頻度で（例えば３週間に１回、２週間に１回、８〜１０日に１回、週に１回など）投与する。
【０２２５】
治療過程に関連する例示的な時間の長さには、約１週間；約２週間；約３週間；約４週間；約５週間；約６週間；約７週間；約８週間；約９週間；約１０週間；約１１週間；約１２週間；約１３週間；約１４週間；約１５週間；約１６週間；約１７週間；約１８週間；約１９週間；約２０週間；約２１週間；約２２週間；約２３週間；約２４週間；約７ヵ月；約８ヵ月；約９ヵ月；約１０ヵ月；約１１ヵ月；約１２ヵ月；約１３ヵ月；約１４ヵ月；約１５ヵ月；約１６ヵ月；約１７ヵ月；約１８ヵ月；約１９ヵ月；約２０ヵ月；約２１ヵ月；約２２ヵ月；約２３ヵ月；約２４ヵ月；約３０ヵ月；約３年；約４年；約５年が含まれる。
【０２２６】
本明細書に記載される治療方法は、典型的には、患者ケアを監督する臨床医がその治療方法を有効である、即ち患者が治療に応答していると見なす限り継続される。治療方法が有効であることの指標となる非限定的なパラメータには、以下の１つ以上が含まれ得る：腫瘍縮小（重量及び／又は容積及び／又は外観の点で）；個別の腫瘍コロニーの数の減少；腫瘍消失；無進行生存；好適な腫瘍マーカーによる適切な応答（該当する場合）、ＮＫ（ナチュラルキラー）細胞数の増加、Ｔ細胞数の増加、メモリーＴ細胞数の増加、セントラルメモリーＴ細胞数の増加、制御性Ｔ細胞、例えばＣＤ４＋Ｔｒｅｇ、ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ、及びＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇの数の低下。
【０２２７】
本明細書に提供される方法は、（特に）癌を有する患者の治療に有用である。例えば、患者は、ＴＬＲ作動薬単独による治療、長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬単独による治療、並びにＴＬＲ作動薬及び長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬の併用に対して応答性であり得るが、その併用に対してより応答性である。別の例として、患者はＴＬＲ作動薬又は長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬のいずれかに対して非応答性であり得るが、その併用に対して応答性である。さらに別の例として、患者は、単独で投与される場合にはＴＬＲ作動薬及び長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬の両方に対して非応答性であり得るが、その併用に対して応答性である。
【０２２８】
例えばＴＬＲ作動薬及び／又は長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬の投与は、典型的には注射によるものである。肺内、鼻内、頬側、直腸、舌下及び経皮など、他の投与方法もまた企図される。本明細書で使用されるとき、用語「非経口」には、皮下、静脈内、動脈内、腫瘍内、リンパ管内、腹腔内、心臓内、くも膜下腔内、及び筋肉内注射、並びに点滴注射が含まれる。上記のとおり、ＴＬＲ作動薬及び長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬は、別個に投与することができる。或いは、初回用量として、又は治療過程全体にわたり、又は投与レジメンの様々な段階においてＴＬＲ作動薬及び長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬の投与が同時であることが所望される場合（及びＴＬＲ作動薬及び長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬が互いに及び所与の製剤中で適合する）、単一剤形／製剤の投与（例えば両方の免疫学的成分を含有する静脈内製剤の静脈内投与）により同時投与を実現することができる。当業者はルーチンの試験を通じて、２つのそのような成分が互いに及び所与の製剤中で適合するかどうかを決定することができる。
【０２２９】
本明細書に記載される療法薬併用、即ち長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬及びＴＬＲ作動薬は、キットの形態で提供することができる。上記のとおり、成分は、単一の組成物中に、場合により、１つ以上の薬学的に許容可能な賦形剤を伴って含めることができ、又は別個の容器中で提供することができ、キットは、典型的には、使用説明書を含む。キット成分、例えばＴＬＲ作動薬と長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬とを含む組成物は、液体又は固体形態のいずれかであり得る。ある実施形態において、ＴＬＲ作動薬及び長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬の両方は、固体形態である。代表的な固体形態は、例えば約５重量パーセント未満の水、又は好ましくは２重量パーセント未満の水を含有する固体乾燥形態であるものである。固体形態は、一般に水性希釈剤中での再構成に好適である。
【０２３０】
ここに記載した方法、キット及び関連組成物は、本明細書に記載される方法により治癒又は予防し得る任意の病態、例えば癌に罹患している患者の治療に使用することができる。例示的病態は、癌、例えば線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵癌、脳癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆管癌、絨毛癌、セミノーマ、胚性癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、精巣癌、肺癌、小細胞肺癌、脳癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、黒色腫、多発性骨髄腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、及び白血病である。一部の特定の実施形態において、治療すべき癌は、固形癌、例えば乳癌、卵巣癌、結腸癌、前立腺癌、骨癌、結腸直腸癌、胃癌、リンパ腫、悪性黒色腫、肝癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膵癌、甲状腺癌、腎癌、胆管癌、脳癌、子宮頸癌、上顎洞癌、膀胱癌、食道癌、ホジキン病及び副腎皮質癌などである。
【０２３１】
本方法、キット及び組成物は、単剤としてのＴＬＲ作動薬又は長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬のいずれかの投与の治療効力の増強に有用である。増強された応答は、治療の間、単一の治療ラウンド後、２〜３つの治療サイクル後など任意の好適な時点において、及び多数の好適な方法のいずれか、例として、腫瘍の縮小（部分奏効）、即ち腫瘍サイズ又は容積の評価、腫瘍の消失、疾患進行の低下（癌は進行していない）、及び１つ以上の腫瘍試験マーカーの分析により適宜評価することができる。特に有効な治療は、５０％の最大腫瘍成長において評価する場合）、少なくとも５日、又は少なくとも１０日、又は少なくとも１２日、又は少なくとも１５日だけ、又は少なくとも２０日だけ、又は少なくとも３０日以上だけ生存期間を延長する。
【０２３２】
本明細書に提供される方法、キット、組成物などは、治療を受ける対象における腫瘍成長又はサイズ（又は容積）の低下にも有用である。例えば一部の実施形態において、１つ以上の治療サイクルは、腫瘍サイズを治療前の腫瘍サイズと比較する場合に約２５％だけ、又は約３０％だけ、又は約４０％だけ、又は約５０％だけ、又はさらには約６０％だけ、又は約７０％以上だけ、例えば、約９０％以上だけ低下させるために有効である。
【０２３３】
裏付けの実施例について見ると、実施例２３〜３０に詳細に記載されるとおり、様々なマウス腫瘍モデルを、ＴＬＲ７／８作動薬の例示的なマルチアームポリマーコンジュゲートであるレシキモド、４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８（化合物６）、及び例示的な長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬であるＲＳＬＡＩＬ−２による併用治療の有効性について評価した。腫瘍モデルとしては、それぞれＣＴ２６結腸癌腫腫瘍モデル、ＷＥＨＩ−１６４線維肉腫腫瘍モデル、ＪＣ乳腺癌腫瘍モデル、４Ｔ１乳癌腫腫瘍モデル、ＭＣ３８結腸癌腫腫瘍モデル、ＥＭＴ６乳癌腫腫瘍モデル、ＲＭ−１前立腺癌腫腫瘍モデル、及びＨ２２肝細胞癌腫腫瘍モデルが挙げられる。併用治療は、複数のモデルにおいて有意な腫瘍成長の抑制から最大１００％の完全奏功の範囲にある有効性を有して、試験された全ての腫瘍モデルにおいて有効性を示した。
【０２３４】
ＣＴ２６結腸癌腫腫瘍モデルの結果は、ＲＳＬＡＩＬ−２治療と併用した非常に少ない量の腫瘍内送達ＴＬＲ作動薬が、治療部位及び非治療の遠隔腫瘍部位（即ち、ＴＬＲ作動薬化合物が直接投与されなかった部位）で腫瘍成長を有意に阻害することを示している。
【０２３５】
ＷＥＨＩ−１６４線維肉腫腫瘍モデルにおいて、ＲＳＬＡＩＬ−２＋４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８による二重の薬剤治療は、投与の開始後５２日目の試験終了までに当該動物のうち９０％の生存をもたらした。際だったことに、ＲＳＬＡＩＬ−２＋４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８治療群における全ての動物のうちの８０％が完全奏功を有し、これは、ビヒクル群では生存している動物がいなかったこととは対照的に、試験終了までに測定可能な腫瘍が観察されなかったことを意味する。全ての動物は、治療開始後１７日目と３１日目の間で極限の腫瘍容積に達したため試験から取り除かれた。
【０２３６】
同様に、ＪＣ乳腺癌腫瘍モデルにおいて、ＲＳＬＡＩＬ−２と４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８（化合物６）による二重の薬剤治療（即ち、併用療法）は、４３日目までに当該動物のうち９０％の生存をもたらしたが、一方で、ビヒクル群においては、４３日目までに生存している動物は残らなかった。ＲＳＬＡＩＬ−２＋４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８の併用治療は、投与開始後１１３日目の試験終了までに２０％の動物の生存をもたらした。際だったことに、ＲＳＬＡＩＬ−２＋４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８治療群における動物のうちの１０％が完全奏功を有し、これは、試験終了までに測定可能な腫瘍が観察されなかったことを意味する。対照的に、ビヒクル群は生存している動物がいなかった。実際に、全ての動物は、治療開始後２６日目と３６日目の間で極限の腫瘍容積に達したため試験から取り除かれた。
【０２３７】
同様にして、４Ｔ１乳癌腫腫瘍モデルにおいて、ＲＳＬＡＩＬ−２＋４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８による二重の免疫療法剤による治療は、投与の開始後２５日目の試験終了までに当該動物のうち３０％の生存をもたらした。ＲＳＬＡＩＬ−２＋４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８による併用治療は、治療された動物において腫瘍成長を減速させることによって、ビヒクル治療と比較して有意な改善を示した。対照的に、ビヒクル群は、２５日目の試験終了までに生存している動物がいなかった。全ての動物は、治療開始後１６日目と１８日目の間で極限の腫瘍容積に達したため試験から取り除かれた。
【０２３８】
実施例２７に提供されるとおり、ＭＣ３８結腸癌腫腫瘍モデルにおいて、ＲＳＬＡＩＬ−２＋４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８による二重の免疫療法剤による治療は、投与の開始後７０日目の試験終了までに当該動物のうち５０％の生存をもたらした。際だったことに、ＲＳＬＡＩＬ−２＋４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８治療群における生存している全ての動物が完全奏功を有し、これは、試験終了までに測定可能な腫瘍が観察されなかったことを意味する。著しく対照的に、ビヒクル群は生存している動物がいなかった。
【０２３９】
実施例２８に記載されるとおりの皮下ＥＭＴ６乳癌腫腫瘍モデルにおいて、ＲＳＬＡＩＬ−２又は４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８による単剤治療は、腫瘍成長の部分的な制御をもたらしたが、投与の開始後５５日目の試験終了までに生存している動物はいなかった。著しく対照的に、ＲＳＬＡＩＬ−２＋４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８による二重の薬剤治療は、投与の開始後５５日目の試験終了までに当該動物のうち１００％の生存をもたらした。治療レジメンにおいて、腫瘍形成細胞を各側腹部において腫瘍とともに皮下に移植し、４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８を、２つの腫瘍のうちの１つ（第１の腫瘍）に腫瘍内又は腫瘍周囲に（即ち、直接）投与したが、ここで、反対側の第２の腫瘍は、ＴＬＲ作動薬、４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８で直接的に治療しなかった。ＲＳＬＡＩＬ−２を静脈内注射により全身的に投与した。生存群における全ての動物は、両方の腫瘍（第１及び第２）が消失して完全奏功を有した。即ち、予想に反して、ＲＳＬＡＩＬ−２＋４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８による併用治療は、等価用量のＲＳＬＡＩＬ−２又は４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８による単剤での免疫療法治療モダリティと比較して有意な改善を提供するだけでなく、第１の腫瘍（ＴＬＲ作動薬で注射される）及び第２の腫瘍（ＴＬＲ作動薬の直接的な注射なし、第１の腫瘍部位から離れている）の両方の完全な根絶ももたらした。ビヒクル群は生存している動物がいなかった。
【０２４０】
実施例２９に提供されるとおり、ＲＭ−１前立腺癌腫腫瘍モデルにおいて、ビヒクル治療と比較した場合の例示的な長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬であるＲＳＬＡＩＬ−２、及び例示的な長時間作用型ＴＬＲ作動薬である４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８の併用の抗腫瘍応答を評価並びに比較するための試験を実施した。ＲＳＬＡＩＬ−２＋４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８による併用療法薬剤は、ビヒクル治療と比較して腫瘍成長の有意な低下をもたらし、ＲＳＬＡＩＬ−２＋４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８治療群において、治療開始後２０日目までに当該動物の８０％及び３６日目の試験終了までに動物の１０％の生存をもたらした。対照的に、ビヒクル群は、治療開始後２０日目までに生存している動物がいなかった。
【０２４１】
実施例３０に記載されるとおりのさらに別の例示的なインビボ試験において、Ｈ２２肝細胞癌腫腫瘍モデルにおいて、ビヒクル治療と比較した場合の例示的な長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬であるＲＳＬＡＩＬ−２、及び例示的な長時間作用型ＴＬＲ作動薬である４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｎ−Ｒ８４８の併用の抗腫瘍応答を評価並びに比較するための試験を実施した。ＲＳＬＡＩＬ−２＋４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８による二重の薬剤治療は、投与の開始後１０５日目の試験終了までに当該動物のうち５０％の生存をもたらした。際だったことに、ＲＳＬＡＩＬ−２＋４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８治療群における動物の４０％が完全奏功を有し、これは、試験終了までに測定可能な腫瘍が観察されなかったことを意味する。対照的に、ビヒクル群は生存している動物がいなかったが、これは、これらの例示的な実施例のそれぞれのとおり、本開示の併用療法により提供される例外的な結果を実証している。
【実施例】
【０２４２】
実施例に記載されている、全ての非ＰＥＧ化学反応剤は、特に断らない限り、市場で入手可能である。水溶性のポリマー反応剤の製剤は、特に断らない限り、文献記載の当業者公知の方法を使用して調製することが可能であるか、或いは、市販している供給源から入手することが可能である。
【０２４３】
原料物質
４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋＤ−ＳＣＭ（ＮＨＳ−エステル）及び４−ａｒｍ−ＰＥＧ４０ｋＤ−ＳＣＭ（ＮＨＳ−エステル）は、国際公開第２０１０／０１９２３３Ａ１号パンフレットの実施例３に従って、合成することができる。
【０２４４】
４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋＤ−ＢＡ（ブタン酸）は、国際公開第２０１０／０１９２３３Ａ１号パンフレットの実施例１に従って、合成することができる。
【０２４５】
ｍＰＥＧ５ｋＤ−ＳＣは、ＮＯＦ  Ａｍｅｒｉｃａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｉｒｖｉｎｅ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＵＳＡ）から入手可能である。
【０２４６】
４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋＤ−ＳＣは、Ｂｉｏｃｈｅｍｐｅｇ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｃ．，（Ｗａｔｅｒｔｏｗｎ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ，ＵＳＡ）から入手可能である。
【０２４７】
４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋＤ−ＮＣＯは、ＪｅｎＫｅｍ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｐｌａｎｏ，Ｔｅｘａｓ，ＵＳＡ）から入手可能である。
【０２４８】
４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋＤ−アミンは、Ｌａｙｓｏｎ  Ｂｉｏ，（Ａｒａｂ，Ａｌａｂａｍａ，ＵＳＡ）から入手可能である。
【０２４９】
前述のものそれぞれの化学構造を、後に示す。
【０２５０】
アルデスロイキンのものと同一のアミノ酸配列を有する組換えヒトＩＬ−２をクローニングし、発現させ、使用して本明細書でＲＳＬＡＩＬ−２と称される例示的な長時間作用型ＩＬ−２Ｒαβバイアス作動薬を調製した。
【０２５１】
ＲＳＬＡＩＬ−２は、国際公開第２０１５／１２５１５９号パンフレットの実施例１の手順に従うと得ることが可能な組成物を指し、概してマルチＰＥＧ化形態のＩＬ−２を含む組成物であって、ここでマルチＰＥＧ化コンジュゲートに含まれるＰＥＧ部分への結合は投与後に遊離可能である。
【０２５２】
測定器
１Ｈ  ＮＭＲ（核磁気共鳴）データは、５００ｍＨｚのＢｒｕｋｅｒ  ＮＭＲ分光計で測定した。
【０２５３】
実施例１
４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｎ−Ｒ８４８（化合物１）の合成
【化２４】
2020514300.tif 000026
タイトル化合物を、以下の反応スキームに従って合成した。
【化２５】
2020514300.tif 000027
式中、４−ａｒｍ−２０ｋ−ＰＥＧ−ＳＣＭは、次の構造を有している：
【化２６】
2020514300.tif 000028
【０２５４】
２０℃で、４−ａｒｍ−２０ｋ−ＰＥＧ−ＳＣＭ（５．０ｇ、１．０ｍｍｏｌのＳＣＭ）及びＲ−８４８（ＢｅＰｈａｒｍ  Ｌｔｄ、３７７ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を、脱水したＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２５ｍＬ）の中に溶解させた。その反応溶液を、５０℃で１８時間撹拌した。その反応溶液を、１リットルのエチルエーテルの中に撹拌しながら注いだ。生成した沈殿物を、濾過によって捕集し、エチルエーテル（５０ｍＬ）を用いて洗浄した。そのようにして得られた固形物を、イソプロピルアルコール（３００ｍＬ）の中に加え、その懸濁液を加熱して６０℃とすると、透明な溶液が生成した。その溶液を、撹拌しながら冷却して、室温とした。生成した沈殿物を、濾過によって捕集し、エチルエーテル（５０ｍＬ）を用いて洗浄した。イソプロピルアルコールの中へ沈殿させることによる精製をもう一度繰り返し、その後で、高真空中で一夜かけて乾燥させると、純粋なコンジュゲートが白色の固形物として得られた（４．２４ｇ、５．１重量％のＲ−８４８担持）。
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ９．４（ブロード，３．６Ｈ），８．２２−８．１４（ｔ，７．１Ｈ），７．６１（ｄｄｄ，Ｊ＝８．３，７．０，１．３Ｈｚ，３．６Ｈ），７．４９（ｄｄｄ，Ｊ＝８．２，７．０，１．４Ｈｚ，３．６Ｈ），４．９４（ｓ，７．１Ｈ），４．８０（ｓ，７．１Ｈ），３．７−３．９（ｍ，１８１８Ｈ），１．３２（ｓ，２０．１Ｈ），１．２５（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１０．７Ｈ）．
【０２５５】
実施例２
４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−β−アラニン−Ｎ−Ｒ８４８（化合物２）の合成
【化２７】
2020514300.tif 000029
タイトル化合物を、以下の反応スキームに従って合成した。
【化２８】
2020514300.tif 000030
【０２５６】
４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−β−アラニン：
ベータ−アラニン（７．１００ｇ、１０当量）及び重炭酸ナトリウム（６．７２０ｇ、１０当量）を、脱イオン水（８００ｍＬ）の中に加え、その混合物を撹拌して、透明な溶液を形成させた。その溶液の中に、４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＳＣＭ（４０．０２０ｇ、１当量）を加えた。その反応溶液を、室温で３時間撹拌した。その溶液の中に５ＮのＨＣｌを加えて、ｐＨを４．０に調節した。ジクロロメタン（１５０ｍＬ）を用いて２回、その溶液を抽出し、その有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムを用いて乾燥させた。フリットを通過させることによって、固形物を除去した。その濾液を濃縮して５０ｍＬとし、次いで、５００ｍＬのエチルエーテルを加えて、沈殿を起こさせた。濾過により、反応生成物（３５．０５０ｇ、収率８７％）が白色の粉体として得られ、高真空下で一夜かけて乾燥させた。
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ３．９８（ｓ，７．１１Ｈ），３．６４（ｔ，７．１１Ｈ），３．５８−  ３．３３（ｍ，１８１８Ｈ），３．２７（ｓ，７．９０Ｈ），２．４０（ｔ，７．１１Ｈ）．
【化２９】
2020514300.tif 000031
【０２５７】
４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−β−アラニン−Ｎ−Ｒ８４８：
２０℃で、４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−β−アラニン（４．０１２ｇ、０．８ｍｍｏｌの−ＣＯＯＨ）、ヒドロキシベンゾトリアゾール（２１６ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩（３０７ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）、及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２０７ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（２５ｍＬ）の中に溶解させた。その混合物を、室温で３０分間撹拌した。Ｒ８４８（３０２ｍｇ、０．９６ｍｍｏｌ）を加え、その反応溶液を２０℃で２４時間撹拌した。その反応溶液を、１リットルのエチルエーテルの中に、撹拌しながら加えた。生成した沈殿物を、濾過によって捕集し、エチルエーテル（５０ｍＬ）を用いて洗浄した。そのようにして得られた固形物を、イソプロピルアルコール（３００ｍＬ）の中に加え、その懸濁液を加熱して６０℃とすると、透明な溶液が生成した。その溶液を、撹拌しながら冷却して、室温とした。生成した沈殿物を、濾過によって捕集し、エチルエーテル（５０ｍＬ）を用いて洗浄した。イソプロピルアルコールの中へ沈殿させることによる精製をもう一度繰り返し、その後で、高真空中で一夜かけて乾燥させると、純粋なコンジュゲートが白色の固形物（３．８６０ｇ、５．６％（ｗ／ｗ）のＲ８４８担持）として得られた。
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ８．８２（ｓ，３．５６Ｈ），８．１７（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，４．４９Ｈ），８．０７（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，４．０２Ｈ），７．４９（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，４．１７Ｈ），７．４９（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，７．５５Ｈ），４．９３（ｓ，８．３９Ｈ），４．７９（ｓ，９．０Ｈ），３．９９（ｓ，７．６０Ｈ），３．８０−３．４４（ｍ，１８１８Ｈ），１．３３（ｓ）及び１．２６（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ）（合計３４．１８Ｈ）．
【０２５８】
実施例３
４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＢＡ−Ｎ−Ｒ８４８（化合物３）の合成
【化３０】
2020514300.tif 000032
タイトル化合物を、以下の反応スキームに従って合成した。
【化３１】
2020514300.tif 000033
【０２５９】
４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＢＡ−Ｎ−Ｒ８４８：
２０℃で、４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＢＡ（４．０２０ｇ、０．８ｍｍｏｌの−ＣＯＯＨ）、ヒドロキシベンゾトリアゾール（２１６ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩（３０７ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）、及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２０７ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（１５ｍＬ）の中に溶解させた。その混合物を、室温で３０分間撹拌した。Ｒ８４８（３０２ｍｇ、０．９６ｍｍｏｌ）を加え、その反応溶液を２０℃で２４時間撹拌した。その反応溶液を、１リットルのエチルエーテルの中に、撹拌しながら加えた。生成した沈殿物を、濾過によって捕集し、エチルエーテル（５０ｍＬ）を用いて洗浄した。そのようにして得られた固形物を、イソプロピルアルコール（３００ｍＬ）の中に加え、その懸濁液を加熱して６０℃とすると、透明な溶液が生成した。その溶液を、撹拌しながら冷却して、室温とした。生成した沈殿物を、濾過によって捕集し、エチルエーテル（５０ｍＬ）を用いて洗浄した。イソプロピルアルコールの中へ沈殿させることによる精製をもう一度繰り返し、その後で、高真空中で一夜かけて乾燥させると、純粋なコンジュゲートが白色の固形物（３．８０５ｇ、５．２％（ｗ／ｗ）のＲ８４８担持）として得られた。
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ８．１６（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，３．４５Ｈ），８．０７（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，３．４３Ｈ），７．５９（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，３．６３Ｈ），７．４７（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，３．７１Ｈ），４．９１及び４．７８（ｓ，１５．８６Ｈ），３．７７−３．４０（ｍ，１８１８Ｈ），２．１０（ｔ，７．３０Ｈ），１．３３（ｓ）及び１．２６（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ）（合計３１．３４Ｈ）．
【０２６０】
実施例４
４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−α−（Ｒ）−フルオロ−プロパンアミド−Ｎ−Ｒ８４８（化合物４）の合成
【化３２】
2020514300.tif 000034
タイトル化合物を、以下の反応スキームに従って合成した。
【化３３】
2020514300.tif 000035
【０２６１】
４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−α−（Ｒ）−フルオロ−プロパン酸：
４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＳＣＭ（５．１４０ｇ、１．０３ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（５０ｍＬ）の中に溶解させた。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）の中に、（Ｒ）−３−アミノ−２−フルオロ−プロパン酸（４４０ｍｇ、４．１１ｍｍｏｌ）、及びトリエチルアミン（４１６ｍｇ、４．１１ｍｍｏｌ）を加えて、懸濁液を生成させた。その懸濁液を、ＤＣＭ溶液中の４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＳＣＭに加えた。その反応液を、２０℃で１０日間撹拌してから、水（２００ｍＬ）で希釈した。ジクロロメタン（３×１００ｍＬ）を用いて、その水溶液を抽出した。有機相を合わせて、無水硫酸マグネシウムを用いて乾燥させ、濾過した。その濾液を濃縮して５０ｍＬとし、それをエチルエーテル（１リットル）の中に加えて、沈殿物を生成させた。その沈殿物を濾過によって捕集し、それを高真空下で乾燥させると、４．６３８ｇの白色の固形物である、４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−α−（Ｒ）−フルオロ−プロパン酸が、７０％の置換度で得られた。
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ７．４９（ｓ，２．７７Ｈ），５．０２（ｄ，Ｊ＝４８．５Ｈｚ，２．７７Ｈ），４．１５（ｓ，３．９５Ｈ），３．６５（ｂｒ，１８１８Ｈ），３．１１（ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２．９２Ｈ），１．３５（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，３．９５Ｈ）．
【化３４】
2020514300.tif 000036
【０２６２】
４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−α−（Ｒ）−フルオロ−プロパンアミド−Ｎ−Ｒ８４８：
４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−α−（Ｒ）−Ｆ−プロパン酸（２．００４ｇ、０．４ｍｍｏｌのＣＯＯＨ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２０７ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩（１５３ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）、及びヒドロキシベンゾトリアゾール（１０８ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）を、脱水したジクロロメタン（１５ｍＬ）の中に溶解させた。３０分かけて、Ｒ８４８（１１３ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）を加えた。その反応溶液を、２０℃で１８時間撹拌した。その反応溶液を、１リットルのエチルエーテルの中に撹拌しながら加えた。生成した沈殿物を、濾過によって捕集し、エチルエーテル（５０ｍＬ）を用いて洗浄した。そのようにして得られた固形物を、イソプロピルアルコール（３００ｍＬ）の中に加え、その懸濁液を加熱して６０℃とすると、透明な溶液が生成した。その溶液を、撹拌しながら冷却して、室温とした。生成した沈殿物を、濾過によって捕集し、エチルエーテル（５０ｍＬ）を用いて洗浄した。イソプロピルアルコールの中へ沈殿させることによる精製をもう一度繰り返し、その後で、高真空中で一夜かけて乾燥させると、白色の固形物として、純粋なコンジュゲート（１．６０２ｇ、４．１（ｗ／ｗ）％のＲ８４８担持）が得られた。
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ８．１７（ｓ，５．５３Ｈ），７．５４（ｄ，Ｊ＝５７．７Ｈｚ，６．７２Ｈ），４．９２（ｓ，４．７４Ｈ），４．７９（ｓ，４．７４Ｈ），３．６２（ｂｒ，１８１８Ｈ），１．５−１．０（ｂｒ．，３０．０Ｈ）．
【０２６３】
実施例５
４−ａｒｍ−ＰＥＧ４０ｋ−ＣＭ−Ｎ−Ｒ８４８（化合物５）の合成
【化３５】
2020514300.tif 000037
タイトル化合物を、以下の反応スキームに従って合成した。
【化３６】
2020514300.tif 000038
【０２６４】
４−ａｒｍ−ＰＥＧ４０ｋ−ＣＭ−Ｎ−Ｒ８４８：
４−ａｒｍ−ＰＥＧ４０ｋ−ＳＣＭ（４．４１０ｇ、０．４４ｍｍｏｌのＳＣＭ）を、脱水したジクロロメタン（３３ｍＬ）の中に溶解させた。室温で、Ｒ８４８（１１６ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）を加えた。そのようにして得られた混合物の溶液を、室温で４日間撹拌した。その反応混合物を濃縮して、溶媒を除去した。上述と同じようにして、イソプロピルアルコール（３００ｍＬ）を用いて、その残分を２回、再結晶させると、４．２６２ｇの反応生成物が白色の固形物として得られた。ＮＭＲ分析によると、その反応生成物には、２．０％（ｗ／ｗ）のＲ８４８が含まれていた。
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ８．１６（ｍ，５．４Ｈ），７．５８（ｔ，２．８Ｈ），７．４７（ｔ，２．８Ｈ），４．９２−４．７０（ｍ，１０．６Ｈ），４．０７（ｓ，１．５Ｈ），３．８８−３．４５（ｍ，３６３６Ｈ），１．２３（ｓ）及び１．２１（ｔ）（合計２３．６Ｈ）．
【０２６５】
実施例６
４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−グリシン−Ｎ−Ｒ８４８（化合物６）の合成
【化３７】
2020514300.tif 000039
タイトル化合物を、以下の反応スキームに従って合成した。
【化３８】
2020514300.tif 000040
【０２６６】
４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−グリシン：
グリシン（６．００３ｇ、１０当量）及び重炭酸ナトリウム（６．７２０ｇ、１０当量）を、脱イオン水（８００ｍＬ）の中に加え、その溶液を、透明になるまで撹拌した。その溶液の中に、４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＳＣＭ（４０．０２０ｇ、１当量）を加えた。その反応溶液を、室温で３時間撹拌した。その溶液の中に５ＮのＨＣｌ溶液を加えて、ｐＨを４．０に調節した。ジクロロメタン（２×１５０ｍＬ）を用いて、その溶液を抽出した。有機相を合わせて、無水硫酸ナトリウムを用いて乾燥させた。フリットを通過させることによって、固形物を除去した。その濾液を濃縮して５０ｍＬとし、次いで、５００ｍＬのエチルエーテルを加えて、沈殿物を得た。濾過により、反応生成物が、白色の固体の粉体（３５．０５０ｇ）として得られ、高真空下、一夜かけて乾燥させた。
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ４．０１（ｄ，７．１Ｈ），３．９９（ｓ，７．１Ｈ），３．７４−３．４８（ｍ，１８１８Ｈ），３．３５（ｓ，７．１Ｈ）．
【化３９】
2020514300.tif 000041
【０２６７】
４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−グリシン−Ｎ−Ｒ８４８：
２０℃で、４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−グリシン（２．５２０ｇ、０．５ｍｍｏｌのＣＯＯＨ）、ヒドロキシベンゾトリアゾール（１３５ｍｇ、１ｍｍｏｌ）、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩（１９２ｍｇ、１ｍｍｏｌ）、及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２５８ｍｇ、２ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（１５ｍＬ）の中に溶解させた。その混合物を、２０℃で３０分間撹拌した。Ｒ８４８（１８９ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）を加えた。その反応溶液を、２０℃で１８時間撹拌した。その反応溶液を、１リットルのエチルエーテルの中に、撹拌しながら注いだ。生成した沈殿物を、濾過によって捕集し、エチルエーテル（５０ｍＬ）を用いて洗浄した。そのようにして得られた固形物を、イソプロピルアルコール（３００ｍＬ）の中に加え、その懸濁液を加熱して６０℃とすると、透明な溶液が生成した。その溶液を、撹拌しながら冷却して、室温とした。生成した沈殿物を、濾過によって捕集し、エチルエーテル（５０ｍＬ）を用いて洗浄した。イソプロピルアルコールの中へ沈殿させることによる精製をもう一度繰り返し、その後で、高真空中で一夜かけて乾燥させると、純粋なコンジュゲートが白色の固形物（１．８２３ｇ、５．１％（ｗ／ｗ）のＲ８４８担持）として得られた。
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ８．９７（ｓ，３．５６Ｈ），８．１８（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，３．５２Ｈ），８．１６−８．１１（ｍ，２．７７Ｈ），７．８１（ｓ，２．９２Ｈ），７．６３（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，３．０６Ｈ），７．５１（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，３．４８Ｈ），４．９８（ｄ，Ｊ＝３９．６Ｈｚ，１３．３２Ｈ），４．８１（ｓ，６．６４Ｈ），４．１３（ｓ，６．２０Ｈ），３．６５（ｓ，１８１８Ｈ），１．３４（ｓ，２３．６３Ｈ），１．２７（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１０．５９Ｈ）．
【０２６８】
ｔ−ブチルエステル保護された４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−グリシンの別な合成
次の反応スキームに従って、４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−グリシンを合成した。
【化４０】
2020514300.tif 000042
【０２６９】
４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−グリシンｔ−ブチルエステル：
グリシンのｔｅｒｔ−ブチルエステルＨＣｌ塩（２．１ｇ、１２．６ｍｍｏｌ、１．０５当量）を、ジクロロメタン（３００ｍＬ）の中に加え、次いでトリエチルアミン（２．５４ｇ、２５ｍｍｏｌ、２．１当量）及び４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＳＣＭ（６０ｇ、３ｍｍｏｌ、ＭＷ約２０，０００）を加えた。その反応溶液を、室温で１２時間撹拌し、そして、撹拌下のＴＭＢＥ（２．０Ｌ）に加え、反応生成物を沈殿させた。濾過により、その反応生成物を単離し、３０％ＭｅＯＨ／７０％ＴＢＭＥ（１Ｌ）を用いて洗浄して、ＮＨＳを除去した。その反応生成物を、真空下で１２時間かけて乾燥させると、４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−グリシンｔ−ブチルエステル（６０．０ｇ）が得られた。
【０２７０】
４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−グリシン
４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−グリシンｔ−ブチルエステル（５５ｇ）とＤＣＭ（７５ｍＬ）との混合物に、ＴＦＡ（２２５ｍＬ）を加えた。そのようにして得られた反応溶液を、室温で１４時間撹拌させておいた。その反応混合物を、撹拌下のＴＭＢＥ（２．４Ｌ）に徐々に加えて、反応生成物を沈殿させた。濾過により、その反応生成物を単離し、３０％ＭｅＯＨ／７０％ＴＢＭＥ（１Ｌ）を用いて洗浄した。真空下でその反応生成物を乾燥させると、４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−グリシン（５４．０ｇ）が得られた。
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ４．０１（ｄ，７．１Ｈ），３．９９（ｓ，７．１Ｈ），３．７４−３．４８（ｍ，１８１８Ｈ），３．３５（ｓ，７．１Ｈ）．
【化４１】
2020514300.tif 000043
【０２７１】
４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−グリシン−Ｎ−Ｒ８４８：
上述の反応スキームに従って、そのようにして得られた４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−グリシンを使用して、４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−グリシン−Ｎ−Ｒ８４８を得た。
【０２７２】
実施例７
４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−（Ｌ）−アラニン−Ｎ−Ｒ８４８（化合物７）の合成
【化４２】
2020514300.tif 000044
タイトル化合物を、以下の反応スキームに従って合成した。
【化４３】
2020514300.tif 000045
【０２７３】
４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｌ−アラニン：
Ｌ−アラニン（７．１００ｇ、１０当量）及び重炭酸ナトリウム（６．７２０ｇ、１０当量）を、脱イオン水（８００ｍＬ）の中に加え、その溶液を、透明になるまで撹拌した。次いで、その溶液の中に、４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＳＣＭ（４０．０３０ｇ、１当量）を加えた。その反応溶液を、２０℃で３時間撹拌した。その溶液の中に５ＮのＨＣｌ溶液を加えて、ｐＨを４．０に調節した。ジクロロメタン（２×１５０ｍＬ）を用いて、その溶液を抽出した。有機相を合わせて、無水硫酸ナトリウムを用いて乾燥させた。フリットを通過させることによって、固形物を除去した。その濾液を濃縮して５０ｍＬとし、次いで、５００ｍＬのエチルエーテルを加えて、沈殿物を得た。濾過により、反応生成物（３５．０１２ｇ、収率８７％）が白色の固体粉体として得られ、高真空中、一夜かけて乾燥させた。
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ４．４２（ｍ，３．５６Ｈ），３．８５（ｓ，７．１１Ｈ），３．５８−  ３．３３（ｍ，１８１８Ｈ），３．２７（ｓ，７．９０Ｈ），１．３０（ｄ，１０．２８Ｈ）．
【化４４】
2020514300.tif 000046
【０２７４】
４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｌ−アラニン−Ｎ−Ｒ８４８：
２０℃で、４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｌ−アラニン（２．５００ｇ、０．５ｍｍｏｌのＣＯＯＨ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２５８ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩（１９２ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）、及びヒドロキシベンゾトリアゾール（１３５ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を、脱水したジクロロメタン（１５ｍＬ）の中に溶解させた。３０分かけて、Ｒ８４８（１８９ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）を加えた。その反応溶液を、２０℃で１８時間撹拌した。その反応溶液を、１リットルのエチルエーテルの中に撹拌しながら注いだ。生成した沈殿物を、濾過によって捕集し、エチルエーテル（５０ｍＬ）を用いて洗浄した。そのようにして得られた固形物を、イソプロピルアルコール（３００ｍＬ）の中に加え、その懸濁液を加熱して６０℃とすると、透明な溶液が生成した。その溶液を、撹拌しながら冷却して、室温とした。生成した沈殿物を、濾過によって捕集し、エチルエーテル（５０ｍＬ）を用いて洗浄した。イソプロピルアルコールの中へ沈殿させることによる精製をもう一度繰り返し、その後で、高真空中で一夜かけて乾燥させると、白色の固形物として、純粋なコンジュゲート（１．７０２ｇ、４．２％（ｗ／ｗ）のＲ８４８担持）が得られた。
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ８．１４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，５．１４Ｈ），７．６９−７．５４（ｍ，３．９５Ｈ），７．４８（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２．３７Ｈ），４．９０（ｓ，４．７４Ｈ），４．７８（ｓ，４．７４Ｈ），３．６２（ｂｒ，１８１８Ｈ），１．６０（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，５．９３Ｈ），１．３９（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，５．９３Ｈ），１．３６−１．２７（ｍ，２１．７３Ｈ），１．２４（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１５．８０Ｈ）．
【０２７５】
実施例８
４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−（Ｌ）−バリン−Ｎ−Ｒ８４８（化合物８）の合成
【化４５】
2020514300.tif 000047
タイトル化合物を、以下の反応スキームに従って合成した。
【化４６】
2020514300.tif 000048
【０２７６】
Ｂｏｃ−バリン−Ｒ８４８：
１−（４−アミノ−２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル）−２−メチルプロパン−２−オール（Ｒ８４８）（２３７．５ｍｇ、０．７５５ｍｍｏｌ）を、脱水したＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）の中に溶解させた。Ｂｏｃ−Ｌ−バリン（２６３．４ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）及び４−（ジメチルアミノ）ピリジン（１８７．４ｍｇ、１．５３４ｍｍｏｌ）を加えた。Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩（２３６．１ｍｇ、１．２３２ｍｍｏｌ）を加えた。そのようにして得られた混合物を、室温で３時間撹拌した。水を加えて、その反応を停止させた。塩水を加えた。酢酸エチル（２×５０ｍＬ）を用いて、その混合物を抽出した。それらの有機溶液を合わせて、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濃縮乾固させた。その残分を、シリカゲルのフラッシュカラムクロマトグラフィーを用い、１〜１０％のメタノール／ジクロロメタンを使用して精製すると、反応生成物（３９４．７ｍｇ）が白色の固形物として得られた。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ８．９９（ｂｒ．，１Ｈ），８．１５−８．１１（ｍ，２Ｈ），７．５８（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．４７（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），５．４２（ｍ，１Ｈ），４．８９（ｂｒ，２Ｈ），４．７７（ｓ，２Ｈ），３．６３（ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），３．２７（ｍ，１Ｈ），２．４５（ｂｒ，１Ｈ），１．４４（ｓ，９Ｈ），１．３１（ｂｒ，６Ｈ），１．２２（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ），１．１４（ｂｒ，３Ｈ），０．９３（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ：５１４（ＭＨ＋／ｚ）．
【０２７７】
バリン−Ｒ８４８・ｎＴＦＡ塩：
【化４７】
2020514300.tif 000049
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル（１−（（２−（エトキシメチル）−１−（２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバメート（Ｂｏｃ−バリン−Ｒ８４８）（３７７．０ｍｇ、０．７３ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（３０ｍＬ）の中に溶解させ、そしてトリフルオロ酢酸（３ｍＬ、３８．８ｍｍｏｌ）を加えた。そのようにして得られた混合物を、室温で３．５時間撹拌した。その混合物を濃縮して、溶媒を除去した。その残分を、高真空下で乾燥させると、反応生成物（６７８．５ｍｇ）がＴＦＡ塩として得られた。
ＬＣ−ＭＳ：４１４（ＭＨ＋／ｚ）。
【０２７８】
４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−バリン−Ｎ−Ｒ８４８
【化４８】
2020514300.tif 000050
脱水したジクロロメタン（２０ｍＬ）中の４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＳＣＭ（４．１７０ｇ、０．７４ｍｍｏｌのＳＣＭ）の溶液を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．０ｍＬ）中のバリン−Ｒ８４８・ｎＴＦＡ（約０．７３４ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（０．３ｍＬ、２．１５ｍｍｏｌ）との混合物に、室温で加えた。ジクロロメタン（約１０ｍＬ）を使用して、バイアル中で、４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＳＣＭの残分を溶解させて、その反応混合物に加えた。トリエチルアミン（０．１５ｍＬ、１．０７６ｍｍｏｌ）を加えた。そのようにして得られた混合物を、室温で２３時間撹拌した。その反応混合物を濃縮して、溶媒を除去した。イソプロピルアルコール（２７５ｍＬ）を用いてその残分を再結晶させた。エチルエーテルを用いてその固形物を洗浄し、高真空下で一夜かけて乾燥させると、４．０５３ｇの反応生成物が白色の固形物として得られた。薬物の担持率（ｄｒｕｇ  ｌｏａｄｉｎｇ）は、４．３％（ｗ／ｗ）であった。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ８．９９（ｂｒ），８．１０−８．０９（ｍ，６Ｈ），７．５４（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ），７．４７（ｄ，３Ｈ）．７．４２（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ），４．８４０（ｂｒ，６Ｈ），４．７１２（ｓ，６Ｈ），４．０７−３．９５（ｍ，６Ｈ），３．７２−３．４２（ｍ，１８１８Ｈ），３．３９（ｍ，３Ｈ），２．４１（ｂｒ，６Ｈ），１．３６（ｂｒ，１８Ｈ），１．１６（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，９Ｈ），１．１２（ｍ，９Ｈ），０．９２（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，９Ｈ）．
【０２７９】
実施例９
４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−（Ｌ）−ロイシン−Ｎ−Ｒ８４８（化合物９）の合成
【化４９】
2020514300.tif 000051
タイトル化合物を、以下の反応スキームに従って合成した。
【化５０】
2020514300.tif 000052
【０２８０】
Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−Ｒ８４８：
１−（４−アミノ−２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル）−２−メチルプロパン−２−オール（Ｒ８４８）（４２１．８ｍｇ、１．３４ｍｍｏｌ）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）の中に溶解させた。Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ（５０１．４ｍｇ、２．２０７ｍｍｏｌ）及び４−（ジメチルアミノ）ピリジン（３４４．６ｍｇ、２．８２ｍｍｏｌ）を加えた。Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩（４３８．２ｍｇ、２．２８６ｍｍｏｌ）を加えた。そのようにして得られた混合物を、室温で１８時間撹拌した。水を加えて、その反応を停止させた。塩水を加えた。酢酸エチル（２×５０ｍＬ）を用いて、その混合物を抽出した。それらの有機溶液を合わせて、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、そして濃縮乾固させた。その残分を、シリカゲルのフラッシュカラムクロマトグラフィーを用い、１〜１０％のメタノール／ジクロロメタンを使用して精製すると、４９４ｍｇの反応生成物が白色の固形物として、７０％の収率で得られた。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ９．０３（ｂｒ，１Ｈ），８．１６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．１７（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５７（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．４６（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），５．２６（ｍ，１Ｈ），４．８５（ｂｒ，２Ｈ），４．７７（ｓ，２Ｈ），３．６３（ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），３．２６（ｍ，１Ｈ），１．８９（ｍ，２Ｈ），１．６９（ｓ，３Ｈ），１．５６（ｍ，１Ｈ），１．４３（ｓ，９Ｈ），１．３１（ｂｒ，３Ｈ），１．２２（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ），１．０８（ｂｒ，３Ｈ），０．９４（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ：５２８（ＭＨ＋／ｚ）．
【化５１】
2020514300.tif 000053
【０２８１】
Ｌｅｕ−Ｒ８４８・ｎＴＦＡ塩：
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル（１−（（２−（エトキシメチル）−１−（２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−イル）アミノ）−４−メチル−１−オキソペンタン−２−イル）カルバメート（Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−Ｒ８４８）（４９４ｍｇ、０．９３６ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２０ｍＬ）の中に溶解させ、そしてトリフルオロ酢酸（３ｍＬ、３８．８ｍｍｏｌ）を加えた。そのようにして得られた混合物を、室温で４時間撹拌した。その混合物を濃縮して、溶媒を除去した。その残分を、高真空下で乾燥させると、反応生成物（８９５．７ｍｇ）がＴＦＡ塩として得られた。
ＬＣ−ＭＳ：４２８（ＭＨ＋／ｚ）。
【化５２】
2020514300.tif 000054
【０２８２】
４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｌ−ロイシン−Ｒ８４８：
脱水したジクロロメタン（３０ｍＬ）中、４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＳＣＭ（５．２００ｇ、０．９６ｍｍｏｌのＳＣＭ）の溶液を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．０ｍＬ）中、Ｒ８４８−Ｌｅｕ−ＮＨ２・ｎＴＦＡ（約０．９３６ｍｍｏｌ）の溶液に、室温で加えた。ジクロロメタン（約１０ｍＬ）を使用して、バイアル中で、４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＳＣＭの残分を溶解させて、それを、その反応混合物に加えた。トリエチルアミン（０．３５ｍＬ、２．５１ｍｍｏｌ）を加えた。そのようにして得られた混合物を、室温で３５分間撹拌した。トリエチルアミン（０．２５ｍＬ、１．７９ｍｍｏｌ）を加えた。その混合物を、室温で１９時間撹拌した。その反応混合物を濃縮して、溶媒を除去した。イソプロピルアルコール（２７５ｍＬ）を用いてその残分を再結晶させた。エチルエーテルを用いてその固形物を洗浄し、高真空下で一夜かけて乾燥させると、５．１２ｇの白色の固形物が反応生成物として得られた。薬物の担持率は、４％（ｗ／ｗ）であった。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ８．０９−８．０８（ｍ，５．５Ｈ），７．５１（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２．７５Ｈ），７．４０（ｍ，５．５Ｈ）．４．８５（ｂｒ，５．５Ｈ），４．７０（ｓ，５．５Ｈ），４．０２−３．９１（ｍ，５．５Ｈ），３．７０−３．３２（ｍ，１８１８Ｈ），１．８１（ｍ，２．７５Ｈ），１．７２（ｂｒ，２．７５Ｈ），１．６３（ｍ，２．７５Ｈ），１．２２（ｍ，１６．５Ｈ），１．１２（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，８．２５Ｈ），０．９５（ｂｒ，８．２５Ｈ），０．８６（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，８．２５Ｈ）．
【０２８３】
実施例１０
４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−α，α−ジメチル−グリシン−Ｎ−Ｒ８４８の合成（化合物１０）
【化５３】
2020514300.tif 000055
タイトル化合物を、以下の反応スキームに従って合成した。
【化５４】
2020514300.tif 000056
【０２８４】
４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−α，α−ジメチル−グリシン：
２−アミノ−２−メチルプロパン酸（２．８９０ｇ、２８ｍｍｏｌ）及び重炭酸ナトリウム（２．３５２ｇ、２８ｍｍｏｌ）を水（４０ｍＬ）の中に溶解させた。４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＳＣＭ（７．０ｇ、１．４ｍｍｏｌのＳＣＭ）を数回に分けて加えた。その反応混合物を、２０℃で１８時間撹拌した。１ＭのＨＣｌ塩（４２ｍＬ）を用いて、その反応液を中和してｐＨ４．７とした。塩化ナトリウムを用いてその反応混合物を飽和させ、ジクロロメタン（３×１００ｍＬ）を用いて抽出した。無水硫酸マグネシウム上で有機相を乾燥させ、濃縮した。イソプロピルアルコール（５００ｍＬ）を用いて残分を再結晶させると、４．７１０ｇの、白色の固形物、４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋＣＭ−α，α−ジメチル−グリシンが、８０％の置換度で得られた。
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ７．４５（ｓ，３．５６Ｈ），４．１５（ｓ，２．７７Ｈ），３．９７（ｓ，２．７７Ｈ），３．６４（ｂｒ，１８１８Ｈ），３．４１（ｓ，７．９０Ｈ），１．６２（ｓ，１９．３６Ｈ）．
【化５５】
2020514300.tif 000057
【０２８５】
４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−α，α−ジメチル−グリシン−Ｎ−Ｒ８４８：
２０℃で、４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋＣＭ−α，α−ジメチル−グリシン（２．０００ｇ、０．４３ｍｍｏｌのＣＯＯＨ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２５８ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩（１５３ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）、及びヒドロキシベンゾトリアゾール（１０８ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）を、脱水したジクロロメタン（１５ｍＬ）の中に溶解させた。３０分かけて、Ｒ８４８（１３８ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）を加えた。その反応溶液を、２０℃で１８時間撹拌した。その反応溶液を、１リットルのエチルエーテルの中に撹拌しながら注いだ。生成した沈殿物を、濾過によって捕集し、エチルエーテル（５０ｍＬ）を用いて洗浄した。そのようにして得られた固形物を、イソプロピルアルコール（３００ｍＬ）の中に加え、その懸濁液を加熱して６０℃とすると、透明な溶液が生成した。その溶液を、撹拌しながら冷却して、室温とした。生成した沈殿物を、濾過によって捕集し、エチルエーテル（５０ｍＬ）を用いて洗浄した。イソプロピルアルコールの中へ沈殿させることによる精製をもう一度繰り返し、その後で、高真空中で一夜かけて乾燥させると、白色の固形物として、純粋なコンジュゲート（１．８１９ｇ、４．７％（ｗ／ｗ）Ｒ８４８担持）が得られた。
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ９．７１（ｓ，３．９５Ｈ），８．２９−８．０３（ｍ，３．９５Ｈ），７．５７（ｓ，３．９５Ｈ），７．４５（ｓ，３．９５Ｈ），４．８３（ｄ，Ｊ＝６６．８Ｈｚ，１１．８５Ｈ），３．６１（ｂｒ，１８１８Ｈ），２．５０（ｓ，７．９０Ｈ），１．７６（ｓ，１１．８５Ｈ），１．４２（ｓ，３．９５Ｈ），１．２６（ｄ，Ｊ＝３４．３Ｈｚ，２７．６５Ｈ）．
【０２８６】
実施例１１
ｍＰＥＧ５ｋ−カルバメート−Ｎ−Ｒ８４８（化合物１１）の合成
【化５６】
2020514300.tif 000058
タイトル化合物を、以下の反応スキームに従って合成した。
【化５７】
2020514300.tif 000059
【０２８７】
ｍＰＥＧ５ｋ−カルバメート−Ｎ−Ｒ８４８：
５０℃で、ｍＰＥＧ５ｋ−ＳＣ（２．５００ｇ、０．５ｍｍｏｌ）、Ｒ８４８（２３６ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）、及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１２９ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を、脱水したＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）の中に溶解させた。その反応溶液を、５０℃で１８時間撹拌した。その反応溶液を、１リットルのエチルエーテルの中に撹拌しながら加えた。生成した沈殿物を、濾過によって捕集し、エチルエーテル（５０ｍＬ）を用いて洗浄した。そのようにして得られた固形物を、イソプロピルアルコール（３００ｍＬ）の中に加え、その懸濁液を加熱して６０℃とすると、透明な溶液が生成した。その溶液を、撹拌しながら冷却して、室温とした。生成した沈殿物を、濾過によって捕集し、エチルエーテル（５０ｍＬ）を用いて洗浄した。イソプロピルアルコールの中へ沈殿させることによる精製をもう一度繰り返し、その後で、高真空中で一夜かけて乾燥させると、白色の固形物として、純粋なコンジュゲート（２．３３８ｇ、４．５％（ｗ／ｗ）のＲ８４８担持）が得られた。
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ８．１８（ｓ，０．７７Ｈ），８．１３（ｄｄ，Ｊ＝８．４，１．３Ｈｚ，０．７８Ｈ），７．５９（ｄｄｄ，Ｊ＝８．４，７．０，１．３Ｈｚ，０．８２Ｈ），７．４９−７．４４（ｍ，０．８２Ｈ），４．９１（ｓ，１．７Ｈ），４．７８（ｓ，１．７Ｈ），４．４３（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），３．６３（ｂｒ，５７４Ｈ），３．３７（ｓ，３Ｈ），１．３２（ｓ，５Ｈ），１．２５（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ）．
【０２８８】
実施例１２
４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−カルバメート−Ｎ−Ｒ８４８（化合物１２）の合成
【化５８】
2020514300.tif 000060
タイトル化合物を、以下の反応スキームに従って合成した。
【化５９】
2020514300.tif 000061
【０２８９】
４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−カルバメート−Ｎ−Ｒ８４８：
５０℃で、４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＳＣ（５．０ｇ、１．０ｍｍｏｌのＳＣＭ）及びＲ８４８（３７７ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を、脱水した１，２−ジクロロエタン（２５ｍＬ）の中に溶解させた。その溶液の中に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１２９ｍｇ、２ｍｍｏｌ）を加えた。その反応溶液を、５０℃で１８時間撹拌した。その反応溶液を、１リットルのエチルエーテルの中に撹拌しながら加えた。生成した沈殿物を、濾過によって捕集し、エチルエーテル（５０ｍＬ）を用いて洗浄した。そのようにして得られた固形物を、イソプロピルアルコール（３００ｍＬ）の中に加え、その懸濁液を加熱して６０℃とすると、透明な溶液が生成した。その溶液を、撹拌しながら冷却して、室温とした。沈殿物が生成したので、濾過によって捕集し、エチルエーテル（５０ｍＬ）を用いて洗浄した。イソプロピルアルコールの中へ沈殿させることによる精製をもう一度繰り返し、その後で、高真空中で一夜かけて乾燥させると、白色の固形物として、純粋なコンジュゲート（４．２４０ｇ、４．５％（ｗ／ｗ）のＲ８４８担持）が得られた。
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ８．１６（ｔ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，５．９３Ｈ），７．６１（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，３．１６Ｈ），７．４８（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，３．１６Ｈ），４．９３（ｓ，２．９６Ｈ），４．８０（ｓ，５．９３Ｈ），４．４５（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２．９６Ｈ），３．８２（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２．９６Ｈ），３．７９（ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，５．９３Ｈ），３．６５（ｂｒ，１８１８Ｈ），３．４２（ｓ，３．１６Ｈ），１．３３（ｓ，１９．７５Ｈ），１．２６（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，７．９０Ｈ）．
【０２９０】
実施例１３
４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−尿素−Ｎ−Ｒ８４８（化合物１３）の合成
【化６０】
2020514300.tif 000062
タイトル化合物を、以下の反応スキームに従って合成した。
【化６１】
2020514300.tif 000063
【０２９１】
４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−尿素−Ｎ−Ｒ８４８：
５０℃で、４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−イソシアネート（１．０ｇ、０．２ｍｍｏｌのＮＣＯ）及びＲ８４８（６９．２ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を、脱水した１，２−ジクロロエタン（１０ｍＬ）の中に溶解させた。その反応溶液を、５０℃で１８時間撹拌した。その反応溶液を、０．５リットルのエチルエーテルの中に撹拌しながら注いだ。生成した沈殿物を、濾過によって捕集し、エチルエーテル（５０ｍＬ）を用いて洗浄した。そのようにして得られた固形物を、イソプロピルアルコール（２５０ｍＬ）の中に加え、その懸濁液を加熱して６０℃とすると、透明な溶液が生成した。その溶液を、撹拌しながら冷却して、室温とした。生成した沈殿物を、濾過によって捕集し、エチルエーテル（５０ｍＬ）を用いて洗浄した。イソプロピルアルコールの中へ沈殿させることによる精製をもう一度繰り返し、その後で、高真空中で一夜かけて乾燥させると、白色の固形物（９３８ｍｇ、４．７％（ｗ／ｗ）のＲ８４８担持）として、純粋なコンジュゲートが得られた。
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  １０．３０（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，３．５６Ｈ），８．１７−８．０９（ｍ，７．１１Ｈ），７．９４（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，３．５６Ｈ），７．５７（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，３．５６Ｈ），７．４３（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，３．５６Ｈ），４．９２（ｓ，７．５１Ｈ），４．７７（ｓ，７．５１Ｈ），３．６３（ｂｒ，１８１８Ｈ），１．３２（ｓ，２３．７０Ｈ），１．２４（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１０．６７Ｈ）．
【０２９２】
実施例１４
４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−イミキモド（化合物１４）の合成
【化６２】
2020514300.tif 000064
タイトル化合物を、以下の反応スキームに従って合成した。
【化６３】
2020514300.tif 000065
【０２９３】
４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−イミキモド：
４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＳＣＭ（６．７８９ｇ、１．２ｍｍｏｌのＳＣＭ）を脱水したジクロロメタン（３３ｍＬ）の中に溶解させ、次いで、室温で、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５．０ｍＬ）中のイミキモド（３５９．７ｍｇ、１．４５２ｍｍｏｌ）の懸濁液に加えた。ジクロロメタン（約１０ｍＬ）を使用して、４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＳＣＭの残分を溶解させて、その反応混合物に加えた。そのようにして得られた混合物を、室温で３日間撹拌した。ジクロロメタン（１０ｍＬ）を加えた。その混合物を、室温でもう１日撹拌した。その反応混合物を濃縮して、溶媒を除去した。その残分を、イソプロピルアルコールを用いて２回再結晶させると、４．８６１２ｇの反応生成物が白色の固形物として得られた。薬物の担持率は、３．９％（ｗ／ｗ）であった。
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ９．５５（ｂｒ，２．５Ｈ），８．０２６（ｍ，３．２Ｈ），７．８５３（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，３．３Ｈ），７．７２０（ｓ，３．３Ｈ），７．４５０（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，３．３Ｈ），７．３７１（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，３．３Ｈ），４．３０−４．１８（ｍ，１３．２６Ｈ），３．４７１（ｍ，１８１８Ｈ），２．１９０（ｍ，３．１Ｈ），０．８７７及び０．９８６（２ｓ，２０．４Ｈ）．
【０２９４】
実施例１５
４−ａｒｍ−ＰＥＧ４０ｋ−ＣＭ−Ｎ−イミキモド（化合物１５）の合成
【化６４】
2020514300.tif 000066
タイトル化合物を、以下の反応スキームに従って合成した。
【化６５】
2020514300.tif 000067
【０２９５】
４−ａｒｍ−ＰＥＧ４０ｋ−ＣＭ−Ｎ−イミキモド：
４−ａｒｍ−ＰＥＧ４０ｋ−ＳＣＭ（５．１１０ｇ、０．５１ｍｍｏｌのＳＣＭ）を脱水したジクロロメタン（３３ｍＬ）の中に溶解させ、室温で、イミキモド（１４８ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ）を加えた。そのようにして得られた懸濁液を、室温で４日間撹拌すると、透明な溶液が生成した。その反応混合物を濃縮して、溶媒を除去した。上述と同じようにして、イソプロピルアルコール（２５０ｍＬ）を用いて、その残分を２回、再結晶させると、４．６０９ｇの反応生成物が白色の固形物として得られた。ＮＭＲ分析では、その反応生成物には、１．８％（ｗ／ｗ）のイミキモドが含まれていた。
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ８．２１（ｄ，３．０６Ｈ），８．０２（ｄ，３．０６Ｈ），７．８５（ｓ，３．１５Ｈ），７．６３（ｔ，３．３４Ｈ），７．５３（ｔ，３．１７Ｈ），４．３４（ｄ，６．２１Ｈ），３．８９−３．４３（ｍ，３６３６Ｈ），１．０３（ｓ，１８．０９Ｈ）．
【０２９６】
実施例１６
４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−４−（（６−アミノ−８−ヒドロキシ−２−（２−メトキシエトキシ）−９Ｈ−プリン−９−イル）メチル）−ベンズアミド（化合物１６）の合成
【化６６】
2020514300.tif 000068
タイトル化合物を、以下の反応スキームに従って合成した。
【化６７】
2020514300.tif 000069
【０２９７】
２０℃で、４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−アミン（１．５００ｇ、０．３ｍｍｏｌのアミン）をジクロロメタン（３ｍＬ）の中に溶解させた。その溶液を、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１１６ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）、１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム−３−オキシドヘキサフルオロホスフェート（１３７ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）、及び４−（（６−アミノ−８−ヒドロキシ−２−（２−メトキシエトキシ）−９Ｈ−プリン−９−イル）メチル）安息香酸（１０８ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）を含む、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）の溶液の中に加えた。その反応混合物を、２０℃で１８時間撹拌した。その反応溶液を、０．３リットルのエチルエーテルの中に撹拌しながら加えた。生成した沈殿物を、濾過によって捕集し、エチルエーテル（５０ｍＬ）を用いて洗浄した。そのようにして得られた固形物を、フラッシュクロマトグレフィーにより、ジクロロメタン中１０〜３０％のメタノールを用いて精製した。その反応生成物を、２０ｍＬｍのジクロロメタンの中に溶解させ、濾過した。その濾液を濃縮し、もう一度エチルエーテルの中で沈殿させると、純粋なコンジュゲート３００ｍｇが、白色の固形物として得られた（薬物の担持率、６．０％（ｗ／ｗ））。
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ９．２６（ｓ，３．９５Ｈ），７．７８（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，７．９０Ｈ），７．５２（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，７．９０Ｈ），５．６７（ｓ，７．９０Ｈ），５．０４（ｓ，７．９０Ｈ），４．４２（ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，７．９０Ｈ），３．６６（ｂｒ，１８１８Ｈ）．
【０２９８】
実施例１７
インビボ試験：ＴＬＲ７／８依存性サイトカイン産生の実証
化合物６又はＲ８４８によるＴＬＲ７／８アゴニズムの後のサイトカインの誘導を測定することによって、血漿におけるＴＬＲ７／８依存性サイトカイン産生を評価するための試験を実施した。
【０２９９】
方法
化合物６、Ｒ８４８、又はビヒクル（ＨＢＳＳ；ハンクス平衡塩溶液）を、ＣＴ２６腫瘍を担持するＢａｌｂ／ｃマウスに腫瘍内投与した。用量は、１０μｇの化合物６（Ｒ８４８等価物）又は１０μｇのＲ８４８であった。（コンジュゲートの用量及び濃度は、ＴＬＲ７／８作動薬（例えば、レシキモド又は他のＴＬＲ７／８作動薬）含量に基づいて表現され、ＴＬＲ７／８作動薬の質量はＰＥＧ質量とは独立して表現される。）ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ５、ＩＬ−６、ＩＬ−１β、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２ｐ７０、ＫＣ／ＧＲＯ、ＴＮＦ−α、及びＩＦＮ−αのレベルの分析のために、血漿を所定の時点で回収した。
【０３００】
ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ５、ＩＬ−６、ＩＬ−１β、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２ｐ７０、ＫＣ／ＧＲＯ、及びＴＮＦαを評価するために、捕捉抗体で予めコーティングされたＭｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ；Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ、ＵＳ）の９６ウェルマルチスポットプレートを用いて、複製試料上で電気化学発光アッセイを実施した。ＭＳＤ  ＳＵＬＦＯ−ＴＡＧ試薬で標識した検出抗体を各ウェルに添加し、室温で２時間インキュベートすることによって、特定のサイトカインレベルを定量化した。ＳＥＣＴＯＲ  Ｉｍａｇｅｒ  ２４００を用いてプレートを速やかに読み取り、Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈソフトウェア  バージョン４．０（ＭＳＤ；Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ、ＵＳ）を用いてデータを定量化した。
【０３０１】
マウスＩＦＮαを、製造業者の説明書に従ってＶｅｒｋｉｎｅマウスインターフェロン−α  ＥＬＩＳＡキット（ＰＢＬ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ、ＵＳＡ）で測定した。停止溶液の添加の後、ＢｉｏＴｅｋ  μＱｕａｎｔマイクロプレートリーダー（Ｂｉｏｔｅｋ；Ｗｉｎｏｏｓｋｉ、ＶＴ、ＵＳＡ）を用いて、４５０ｎｍでの吸光度を決定した。Ｂｉｏｔｅｋ  Ｇｅｎ５ソフトウェア（Ｂｉｏｔｅｋ；Ｗｉｎｏｏｓｋｉ、ＶＴ、ＵＳＡ）を用いて、ＥＬＩＳＡデータを定量化した。データは、複製物の倍数変化の平均として表される。
【０３０２】
結果
結果は、表１及び表２において３頭の動物の平均として提供される。
【０３０３】
【表１】
2020514300.tif 000070
【０３０４】
倍数変化は以下のとおりに提供される：
ＮＡは該当なしである。
−−は試験されていない。
＋＜５０≦＋＋＜２００≦＋＋＋＜８００≦＋＋＋＋
【０３０５】
【表２】
2020514300.tif 000071
【０３０６】
倍数変化は以下のとおりに提供される：
ＮＡは該当なしである。
−−は試験されていない。
＋＜５≦＋＋＜１０≦＋＋＋＜２０≦＋＋＋＋
【０３０７】
化合物６の腫瘍内投与は、血漿におけるサイトカインの誘導をもたらしたが、Ｒ８４８親分子で観察された誘導よりも低いレベルであった。これらの結果は、Ｒ８４８のＰＥＧ化により血漿サイトカインの全身性の産生が低下し、毒性の可能性を低下させていることを実証する。
【０３０８】
実施例１８
インビボ試験：血漿及び腫瘍薬物動態並びにサイトカイン産生
血漿及び腫瘍組織におけるＲ８４８並びに化合物６の単一用量の薬物動態を評価するための試験を実施した。
【０３０９】
Ｒ８４８又は化合物６を、ＣＴ２６又はＥＭＴ６腫瘍を担持するＢａｌｂ／ｃマウスに腫瘍内投与した。Ｒ８４８及び化合物６の両方の用量は、１０μｇであった（Ｒ８４８等価物）。適格なＬＣ−ＭＳ／ＭＳ法を用いるＲ８４８及び化合物６の分析のために、血漿及び腫瘍組織を所定の時点で回収した。
【０３１０】
結果を表３Ａ及び３Ｂに提供する。提供される結果は、３頭の動物の平均であり、Ｒ８４８等価物として提供される。
【０３１１】
【表３】
2020514300.tif 000072
【０３１２】
【表４】
2020514300.tif 000073
【０３１３】
血漿濃度は以下のとおりに提供される：
ＮＡは該当なしである。
ＢＬＱは定量下限値未満である。
−−は試験されていない。
＋＜１０≦＋＋＜１００≦＋＋＋＜１，０００≦＋＋＋＋
【０３１４】
腫瘍濃度は以下のとおりに提供される：
ＮＡは該当なしである。
ＢＬＱは定量下限値未満である。−−は試験されていない。
＋＜１，０００≦＋＋＜１０，０００≦＋＋＋＜１００，０００≦＋＋＋＋
【０３１５】
Ｒ８４８の腫瘍内投与と比較する場合、化合物６の腫瘍内投与は、放出されたＲ８４８のピークの全身濃度を有意に低下させながら（観察される全身的なサイトカインのより低いピーク誘導と一致する）、治療された腫瘍において化合物６（及び局所的に放出されたＲ８４８）を保持するための有効な方法である。
【０３１６】
サイトカイン分析（ＣＴ２６腫瘍担持マウス）：腫瘍及び血漿試料を、サイトカイン分析のために投与後の複数の時点で得た。治療された腫瘍からＲＮＡを単離して、Ｉ型インターフェロン依存性遺伝子発現及びＮＦκβ依存性遺伝子発現の誘導を評価した。一群の炎症性サイトカインを、複数のタンパク質測定アッセイにより腫瘍組織及び血漿から測定した。
【０３１７】
化合物６による全身的なサイトカインのより低いピーク誘導が、図６Ａ及び６Ｂにおいて示される。図６Ａ及び６Ｂは、それぞれ化合物６による治療の２時間後及び６時間後における、腫瘍及び血漿サイトカイン濃度の比較を提供するグラフである。全身的なサイトカインの濃度は、測定された各サイトカイン（ＩＬ−６、ＫＣ／ＧＲＯ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＩＬ−５、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２及びＩＬ−１２ｐ７０）について腫瘍中の濃度より有意に低かった。
【０３１８】
これらのＣＴ２６モデル条件における化合物６の用量は、腫瘍内サイトカイン誘導を最大化する最適なサイトカイン誘導プロファイル及び血液中における最小の誘導を示した（図６Ａ及び６Ｂ）。この観察は、過剰な全身性の免疫活性化のリスクを低減する、腫瘍内／腫瘍周囲に送達された化合物６（例示的なＴＬＲ７／８作動薬のマルチアームポリマーコンジュゲート）による腫瘍環境に偏った免疫細胞の関与を目的とすることを支持する。
【０３１９】
化合物６（ＴＬＲ７／８作動薬のマルチアームポリマーコンジュゲート）は、マウスの腫瘍におけるＴＬＲ７受容体活性の下流の血漿サイトカインを依存的に誘導した。コンジュゲートの腫瘍内／腫瘍周囲への送達は、末梢血と比較して治療された腫瘍においてより高いレベルのＴＬＲ７経路の活性化をもたらし、腫瘍内に偏った局所的な免疫活性化の発想を支持している。
【０３２０】
実施例１９
ＭＰＥＧ２−Ｃ２−Ｆｍｏｃ−２０ＫＤ−ＮＨＳによるｒＩＬ−２の反応
１．４４ｍｇ／ｍｌの精製ｒＩＬ−２（１０６．４ｍＬ）を第１の容器に入れ、続いて５３．６ｍＬの製剤化緩衝液（１０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ４．５、５％トレハロース）を加えた。ｐＨを測ると４．６２であり、温度を測ると２１．２℃であった。ＰＥＧ試薬のＣ２−ＰＥＧ２−ＦＭＯＣ−ＮＨＳ−２０Ｋ（国際公開第２００６／１３８５７２号パンフレットに記載されるとおり利用可能）（１３．１ｇ）を第２の容器に入れ、続いて７３．３ｍＬの２ｍＭ  ＨＣｌを加えた。得られた溶液を手動で２５分間かき混ぜた。第１の容器にホウ酸ナトリウム（０．５Ｍ、ｐＨ９．８）を加えてｐＨを約９．１に上昇させ、次にＰＥＧ試薬が入った第２の容器の内容物を１〜２分間かけて第１の容器に加えた。次に８．１ｍＬの２ｍＭ  ＨＣｌを第２の容器に入れることによってリンスステップを行い、第１の容器に内容物を加えた。コンジュゲーション反応では、最終的なｒＩＬ−２濃度は０．６ｍｇ／ｍＬであり、ホウ酸ナトリウム濃度は１２０ｍＭであり、ｐＨは９．１±０．２であり、温度は２０〜２２℃であった。試薬の活性（置換レベル）を調整した後のＰＥＧ試薬とｒＩＬ−２とのモル比は３５：１であった。コンジュゲーション反応を３０分間進行させ、７５ｍＬの２Ｎ酢酸の添加による酸性化反応（ｐＨをほぼ４に降下させる）により停止させた。生成物を上記のとおりイオン交換クロマトグラフィーにより精製して主として４ｍｅｒ、５ｍｅｒ及び６ｍｅｒ（ｒ−ＩＬ−２に放出可能に共有結合しているＰＥＧ試薬の数を指す（８ｍｅｒ及びそれより高度なＰＥＧ化は、クロマトグラフィーに関連する洗浄ステップの間に取り除かれた）の組成物を提供した。この組成物は、本明細書で「ＲＳＬＡＩＬ−２」と称する。
【０３２１】
実施例２０
ＲＳＬＡＩＬ−２の受容体バイアス及び関連免疫療法特性
ＩＬ−２受容体に対する結合親和性及び免疫刺激プロファイルに関連する受容体バイアス：ＲＳＬＡＩＬ−２のＩＬ−２Ｒα及びＩＬ−２Ｒβへの親和性を表面プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ−１００）により直接計測し、臨床的に利用可能なＩＬ−２（アルデスロイキン）と比較した。ＥＤＣ／ＮＨＳ化学を使用して抗ヒト抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）をＣＭ−５センサーチップの表面に結合させた。次にヒトＩＬ−２Ｒα−Ｆｃ又はＩＬ−２Ｒβ−Ｆｃ融合タンパク質のいずれかをこの表面にわたって捕捉リガンドとして使用した。酢酸塩緩衝液ｐＨ４．５に、５ｍＭから始まるＲＳＡＩＬ−２及びその活性ＩＬ−２コンジュゲート代謝産物（１−ＰＥＧ及び２−ＰＥＧ−ＩＬ−２）の段階希釈物を作成した。これらの希釈物をリガンドに５分間結合させて、結合した反応単位（ＲＵ）を濃度に対してプロットし、ＥＣ５０値を決定した。各ＩＬ−２受容体サブタイプに対する各アイソフォームの親和性をＩＬ−２と比べた倍数変化として計算した。
【０３２２】
ＲＳＬＡＩＬ−２のインビトロ結合及び活性化プロファイルは、ＰＥＧ化がアルデスロイキンと比べてＩＬ２とＩＬ２Ｒαとの相互作用を妨害することを示唆し；これらの効果がインビボで免疫細胞サブタイプのプロファイルをバイアスするかどうかを決定するための調査を実施した。ＲＳＬＡＩＬ−２又はＩＬ２のいずれかの投与後の腫瘍中のＣＤ８Ｔ及びＴｒｅｇ細胞の数は、ＩＬ２の多面的効果がＩＬ２／ＩＬ２Ｒα界面におけるポリ（エチレングリコール）（ＲＳＬＡＩＬ−２中として）へのＩＬ２のコンジュゲーションに起因してシフトしたかどうかの重要な尺度である。この課題に対処するため、皮下Ｂ１６Ｆ１０マウス黒色腫腫瘍を担持するマウスを単一用量のＲＳＬＡＩＬ−２又は５回用量のアルデスロイキンにより治療し、腫瘍微小環境中の免疫細胞をフローサイトメトリーにより定量した。
【０３２３】
アルデスロイキン治療マウスの腫瘍中で総及びメモリーＣＤ８細胞は腫瘍浸潤リンパ球の割合として増加し；しかしながら、これらの効果は一過的であり、ビヒクルと比べて５日目に有意性を達成した。対照的に、有意な（Ｐ＜０．０５）及び持続される総及びメモリーＣＤ８Ｔ細胞刺激は単一ＲＳＬＡＩＬ−２投与後に達成され、メモリーＣＤ８（７日目）及び総ＣＤ８（７及び１０日目）の割合がアルデスロイキンと比べて優れていた。ＲＳＬＡＩＬ−２及びアルデスロイキン治療の両方は、治療開始５及び７日後に増加した活性化ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞をもたらしたが、この効果は１０日目までに縮小した。腫瘍浸潤リンパ球のＣＤ４細胞の割合は、５日目にビヒクルと比べてＲＳＬＡＩＬ−２治療後に縮小した。１０日目、ＲＳＬＡＩＬ−２は、ビヒクル及びアルデスロイキンと比較して少数のＣＤ４細胞割合をもたらした。ＣＤ４細胞集団を、Ｔｒｅｇ集団を定義するＦｏｘＰ３＋サブセットについてさらに分析した。ＲＳＬＡＩＬ−２投与は全ての時点においてＴｒｅｇの割合を低下させ、ＰＥＧ鎖から生じるＩＬ２Ｒαサブユニットへの接近の低下と一致した。対照的に、アルデスロイキンによるＴｒｅｇ低下は穏やかであり、５日目に有意性を達成した。ＣＤ８Ｔ細胞の増加及びＴｒｅｇの低下は、７日目までに腫瘍中のＣＤ８／Ｔｒｅｇ比の顕著な上昇をもたらした。ＲＳＬＡＩＬ−２、アルデスロイキン、及びビヒクルについてのＣＤ８／Ｔｒｅｇの比はそれぞれ４４９、１８、及び４であり、ＲＳＬＡＩＬ−２についてのＩＬ２受容体アルファと比べたＩＬ２受容体ベータの優先的な活性化を裏付けた。
【０３２４】
免疫組織化学染色を実施し、ＣＤ８Ｔ細胞は数が増加しただけでなく、腫瘍細胞が散在したことを裏付けた。これらの結果は、ＲＳＬＡＩＬ−２が、腫瘍中のＴｒｅｇの等しい刺激なしで非修飾ＩＬ−２（アルデスロイキン）について見られるものよりもロバストなインビボメモリーエフェクターＣＤ８Ｔ細胞応答を誘導するために有効であることを示し、インビトロＩＬ２Ｒβ選択的結合プロファイルと一致する。即ち、ＲＳＬＡＩＬ−２はＴｒｅｇと比べてエフェクターＣＤ８＋Ｔ及びＮＫ細胞を優先的に活性化させ、拡大するために有効である。
【０３２５】
実施例２１
インビボ試験：マウスＣＴ−２６結腸腫瘍モデルにおけるＲＳＬＡＩＬ−２及び４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｎ−Ｒ８４８の投与
マウスＣＴ−２６結腸腫瘍モデルにおいて、ＲＳＬＡＩＬ−２及び４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｎ−Ｒ８４８の単剤の各々による免疫療法と比較した場合の例示的な長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬であるＲＳＬＡＩＬ−２、及び例示的な長時間作用型ＴＬＲ作動薬である４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｎ−Ｒ８４８の併用の抗腫瘍応答を評価並びに比較するための試験を実施した。
【０３２６】
インビボモデル：使用されたマウスは、各側腹部に移植された２００万個のＣＴ２６腫瘍細胞を有する約１０週齢の雌Ｂａｌｂ／ｃ系統であった。細胞を９日間腫瘍に成熟させて、１００〜１５０ｍｍ３の容積に達した。
【０３２７】
投与：４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｎ−Ｒ８４８を、２つの腫瘍のうちの１つ（第１の腫瘍）の腫瘍内又は腫瘍周囲に（即ち、直接的に）４０μｌ量で投与した。第２の反対側の腫瘍は、ＴＬＲ作動薬である４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｎ−Ｒ８４８により直接的に治療されなかった。ＲＳＬＡＩＬ−２を０．８ｍｇ／ｋｇで静脈内注射により全身的に投与した。
【０３２８】
標識された群：「ＲＳＬＡＩＬ−２＋４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｎ−Ｒ８４８」：マウスは、腫瘍サイズが１００〜１５０ｍｍ３である最初の投与日（投与０日目）に８００μｇの４ａｒｍ−２０ｋＰＥＧ−ＣＭ−Ｎ−Ｒ８４８を腫瘍内／腫瘍周囲に投与された。同じマウスはまた、０日目、９日目及び１８日目に０．８ｍｇ／ｋｇの用量でＲＳＬＡＩＬ−２を静脈内に投与された（即ち、それらは投与０日目から開始して９日ごとに、合計で３回投与された）。
【０３２９】
標識された群「４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｎ−Ｒ８４８」：マウスは、１００〜１５０ｍｍ３の範囲の腫瘍サイズである最初の投与日（投与０日目）に８００μｇの４ａｒｍ−２０ｋＰＥＧ−ＣＭ−Ｎ−Ｒ８４８を腫瘍内／腫瘍周囲に１回投与された。
【０３３０】
標識された群「ＲＳＬＡＩＬ−２」：マウスはまた、０日目、９日目及び１８日目に０．８ｍｇ／ｋｇのＲＳＬＡＩＬ−２を静脈内に投与された（投与０日目から開始して９日ごとに、合計で３回の投与）。
【０３３１】
標識された群「ビヒクル」：マウスは、１００〜１５０ｍｍ３の範囲の腫瘍サイズである最初の投与日（投与０日目）に４０μｌのハンクス緩衝生理食塩水（４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｎ−Ｒ８４８のビヒクル）を腫瘍内／腫瘍周囲に投与された。同じマウスはまた、０日目、９日目及び１８日目にＲＳＬＡＩＬ−２のビヒクルを静脈内に投与された（投与０日目から開始して９日ごとに、合計で３回の投与）。
【０３３２】
測定：腫瘍容積を、１週間に３回のキャリパー測定によって収集し、式：Ｌ×Ｗ２／２（式中、Ｌは腫瘍の長さであり、Ｗは腫瘍の幅である）によって算出した。
【０３３３】
結果は表４において提供される。
【０３３４】
【表５】
2020514300.tif 000074
【０３３５】
４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｎ−Ｒ８４８による単剤治療は、投与開始後４７日目の実験終了までに当該動物のうち３０％のみの生存をもたらした。当該動物のうち２０％のみが完全奏功を有し、治療された側の腫瘍及び治療されていない側の腫瘍の両方が消失した；当該動物の１０％が、２つの腫瘍のうちの１つが根絶される部分奏功を有した。
【０３３６】
ＲＳＬＡＩＬ−２による単剤治療は、投与の開始後４７日目の試験終了までに当該動物のうち３０％の生存をもたらした。生存群における全ての動物は、完全奏功を有し、両方の腫瘍が根絶された。
【０３３７】
最も特記されることとして、ＲＳＬＡＩＬ−２＋４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｎ−Ｒ８４８による併用治療は、治療された全ての動物における腫瘍の完全な消失及び１００％の生存をもたらした。際だったことに、第１及び第２の腫瘍の両方が、治療の期間を通じて消失した。図１〜３を参照されたい。即ち、予想に反して、併用治療は、少なくとも４７日目までに１００％の生存を有する併用免疫療法に対する単剤免疫療法治療モダリティ、例えば、４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｎ−Ｒ８４８（４７日目で３０％の生存）；ＲＳＬＡＩＬ−２（４７日目で３０％の生存）を超える有意な改善をもたらしただけでなく、第１の腫瘍（ＴＬＲ作動薬を注射された）及び第２の腫瘍（ＴＬＲ作動薬を直接注射されていない、第１の腫瘍の部位から離れた部位）の両方の完全な根絶ももたらした。
【０３３８】
ビヒクル群は生存している動物がいなかった。全ての動物は、治療開始後１０日目と２０日目の間で極限の腫瘍容積に達したため試験から取り除かれた。
【０３３９】
結果は、単独で投与された免疫調節剤のそれぞれによる単剤療法と比較した場合に併用に関して著しいものであり、即ち、ＲＳＬＡＩＬ−２＋４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｎ−Ｒ８４８の併用投与は、注射によって４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｎ−Ｒ８４８を直接投与された第１のＣＴ−２６結腸腫瘍を根絶するのに有効であっただけでなく、第２のＣＴ−２６結腸腫瘍を根絶するのにも有効であった。４７日の試験の期間を通じて、腫瘍の再生は観察されなかった。さらに、併用療法群に対する生存は１００パーセントのままであったが、単剤療法群は両方ともに、４７日目までに３０％の生存へと減少した。
【０３４０】
結果を図１〜３に示す。
【０３４１】
実施例２２
免疫細胞型に対するインビボ治療の効果
本実施例は、長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬とＴＬＲ７／８作動薬の併用が、免疫系の活性化を促進することができる一方で、免疫抑制も克服することを示す。具体的には、免疫活性化は、ＣＤ８  Ｔ細胞、ＣＤ１１ｃ＋及びＣＤ８＋樹状細胞、並びに好中球の促進を通して示されるが、一方で免疫抑制の克服は、制御性Ｔ細胞、マクロファージ、及び単球の抑制を通して示される。
【０３４２】
使用された雌Ｂａｌｂ／ｃマウスは、各側腹部に移植された２００万個のＣＴ２６腫瘍細胞を有する約１０週齢のマウスであった。細胞を９日間成長させ、１００〜１５０ｍｍ３容積の腫瘍サイズに達した。
【０３４３】
Ｒ８４８を、腫瘍のうちの１つ（第１の腫瘍）の腫瘍内又は腫瘍周囲に４０μｌ量で投与した。他方（反対側）の腫瘍は、Ｒ８４８を投与しなかった。
【０３４４】
ＲＳＬＡＩＬ−２を０．８ｍｇ／ｋｇで静脈内注射により全身的に投与した。
【０３４５】
免疫細胞サブタイプをフローサイトメトリーにより測定した。腫瘍を単一細胞懸濁液へと分離し、細胞を、細胞型を同定する蛍光標識抗体の組み合わせで染色して、単剤及び併用としてのＲＳＬＡＩＬ−２並びにＲ８４８治療に応答する単球、マクロファージ、制御性Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、好中球、及び樹状細胞サブタイプを含む腫瘍内の免疫細胞型の比率の変化を評価した。
【０３４６】
結果は、ビヒクル対照群に対する細胞集団のパーセントとして表５に提供される。
【０３４７】
【表６】
2020514300.tif 000075
【０３４８】
表５のデータから見て分かるとおり、Ｒ８４８による単剤治療又はＲ８４８及びＲＳＬＡＩＬ−２による併用治療は：（ｉ）腫瘍中の制御性Ｔ細胞の存在量の減少；及び（ｉｉ）ビヒクル治療腫瘍に対して好中球存在量の増加をもたらす。
【０３４９】
ＲＳＬＡＩＬ−２による単剤治療は、腫瘍内単球の減少及びビヒクル治療腫瘍に対してＣＤ８  Ｔ細胞の増加をもたらす。
【０３５０】
併用を考慮すると、ＲＳＬＡＩＬ−２とＲ８４８（例示的なＴＬＲ作動薬）による治療は、腫瘍内免疫細胞の存在量に対して上述の単剤の効果を組み合わせた増強効果をもたらす。加えて、併用は特に、ビヒクル治療と比較した場合、治療された腫瘍においてＣＤ８＋  ＣＤ１１ｃ＋樹状細胞を増加させ、且つマクロファージを減少させる。
【０３５１】
ＲＳＬＡＩＬ−２による併用治療における全ての細胞性の変化は、Ｒ８４８治療腫瘍だけでなく、Ｒ８４８により直接的に治療されていないが、Ｒ８４８治療腫瘍として同じ動物中に存在する遠位の腫瘍においても観察される（即ち、アブスコパル効果を実証している）。
【０３５２】
実施例２３
インビボ試験：ＣＴ２６腫瘍モデルにおけるＲＳＬＡＩＬ−２及びＴＬＲ作動薬の投与
一定範囲のＴＬＲ作動薬投与量に対するＣＴ−２６腫瘍モデルにおいて、例示的な長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬であるＲＳＬＡＩＬ−２、及び短時間作用型ＴＬＲ作動薬（Ｒ８４８）又は例示的な長時間作用型ＴＬＲ作動薬（化合物６）の併用の抗腫瘍応答を評価並びに比較するための試験を実施した。
【０３５３】
使用されたマウスは、各側腹部に移植された２００万個のＣＴ２６腫瘍細胞を有する約１０週齢の雌Ｂａｌｂ／ｃ系統であった。細胞を、ＲＳＬＡＩＬ−２と化合物６の併用による治療のために７日間、及びＲＳＬＡＩＬ−２とＲ８４８の併用治療のために９日間腫瘍に成熟させて、各治療群について１００〜１５０ｍｍ３の容積に達した。各治療群は、１０頭のマウスを含んだ。
【０３５４】
ＴＬＲ作動薬（Ｒ８４８又は化合物６）を、２つの腫瘍のうちの１つ（第１の腫瘍）の腫瘍内又は腫瘍周囲（即ち、直接的に）に、１０マイクログラム（「高」）、１マイクログラム（「中」）、又は０．１マイクログラム（「低」）（Ｒ８４８等価物）の固定された用量において４０μｌ量で投与した。反対側の腫瘍は、ＴＬＲ作動薬により直接的に治療されなかった。ＲＳＬＡＩＬ−２を０．８ｍｇ／ｋｇで静脈内注射により全身的に投与した。
【０３５５】
腫瘍サイズが１００〜１５０ｍｍ３である最初の投与日（投与０日目）において、マウスは、１０マイクログラム、１マイクログラム、又は０．１マイクログラム（Ｒ８４８等価物）の固定された用量のＴＬＲ作動薬を腫瘍内／腫瘍周囲に投与された。同じマウスはまた、４日目、１３日目及び２２日目に０．８ｍｇ／ｋｇの用量でＲＳＬＡＩＬ−２を静脈内に投与された（即ち、それらは投与０日目から開始して９日ごとに、合計で３回投与された）。
【０３５６】
標識された群「ビヒクル」について：マウスは、１００〜１５０ｍｍ３の範囲の腫瘍サイズである最初の投与日（投与０日目）に４０μｌのハンクス緩衝生理食塩水（ＴＬＲ作動薬のビヒクル）を腫瘍内／腫瘍周囲に投与された。同じマウスはまた、０日目、９日目及び１８日目にＲＳＬＡＩＬ−２のビヒクルを静脈内に投与された（投与０日目から開始して９日ごとに、合計で３回の投与）。
【０３５７】
腫瘍容積を、１週間に２〜３回のキャリパー測定によって収集し、式：Ｌ×Ｗ２／２（式中、Ｌは腫瘍の長さであり、Ｗは腫瘍の幅である）によって算出した。
【０３５８】
ＲＳＬＡＩＬ−２とＲ８４８による併用治療に関する結果を図４Ａ〜４Ｄに提供し、ＲＳＬＡＩＬ−２と化合物６による併用治療に関する結果を図４Ｅ〜Ｈに提供する。ＲＳＬＡＩＬ−２とＲ８４８による併用治療に関する結果を図５Ａ〜５Ｄにも示し、ＲＳＬＡＩＬ−２と化合物６による併用治療に関する結果を図５Ｅ〜５Ｈにも示す。図４Ａ〜４Ｄに提供されるとおり、ＲＳＬＡＩＬ−２とＲ８４８の併用治療は、治療開始後２５日目までに、高投与量群において１０頭の動物中９頭、中程度の投与量群において１０頭の動物中７頭、及び低投与量群において８頭の動物中ただ１頭の治療された腫瘍の腫瘍容積の縮小又は維持をもたらす。
【０３５９】
図４Ｅ〜４Ｈに提供されるとおり、ＲＳＬＡＩＬ−２と化合物６の併用治療は、治療開始後３２日目までに、高投与量群において１０頭の動物中９頭、中程度の投与量群において１０頭の動物中９頭、及び驚くべきことに、低投与量群において１０頭の動物中１０頭の治療された腫瘍の腫瘍容積の縮小又は維持をもたらす。
【０３６０】
図５Ａ〜５Ｄに提供されるとおり、ＲＳＬＡＩＬ−２とＲ８４８の併用治療は、治療開始後２５日目までに、高投与量群において１０頭の動物中９頭、中程度の投与量群において１０頭の動物中５頭、及び低投与量群において８頭の動物中ただ１頭の治療されていない腫瘍の腫瘍容積の縮小又は維持をもたらす。
【０３６１】
図５Ｅ〜５Ｈに提供されるとおり、ＲＳＬＡＩＬ−２と化合物６の併用治療は、治療開始後３２日目までに、高投与量群において１０頭の動物中９頭、中程度の投与量群において１０頭の動物中８頭、及び驚くべきことに、低投与量群において１０頭の動物中１０頭の治療されていない腫瘍の腫瘍容積の縮小又は維持をもたらす。
【０３６２】
図４Ａ〜４Ｈ及び図５Ａ〜５Ｈに提供されるとおり、ビヒクル群は、治療開始後２５日目までに生存している動物がいなかった。全ての動物は、治療開始後８日目と１８日目の間で極限の腫瘍容積に達したため試験から取り除かれた。
【０３６３】
このデータは、ＲＳＬＡＩＬ−２治療と併用した非常に少ないマイクログラム未満の腫瘍内送達ＴＬＲ作動薬化合物６が、治療部位及び非治療の遠隔腫瘍部位（即ち、ＴＬＲ作動薬化合物が直接投与されなかった部位）で腫瘍成長を有意に阻害することを示している。
【０３６４】
実施例２４
インビボ試験：ＷＥＨＩ−１６４腫瘍モデルにおけるＲＳＬＡＩＬ−２及び例示的ＴＬＲ作動薬の投与
ＷＥＨＩ−１６４線維肉腫腫瘍モデルにおいて、ビヒクル治療と比較した場合の例示的な長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬であるＲＳＬＡＩＬ−２、及び例示的なＴＬＲ作動薬である４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８（化合物６）の併用の抗腫瘍応答を評価並びに比較するための試験を実施した。
【０３６５】
インビボモデル：使用されたマウスは、右側腹部皮下に移植された１００万個のＷＥＨＩ−１６４腫瘍細胞を有する約１０週齢の雌Ｂａｌｂ／ｃ系統であった。細胞を、治療開始前に５０〜１５０ｍｍ３容積に達する腫瘍に成長させた。
【０３６６】
投与：４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８を、腫瘍内又は腫瘍周囲に（即ち、直接的に）４０μｌ量で腫瘍に投与した。ＲＳＬＡＩＬ−２を０．８ｍｇ／ｋｇで静脈内注射により全身的に投与した。
【０３６７】
標識された群：「ＲＳＬＡＩＬ−２＋４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８」：マウスは、腫瘍サイズが５０〜１５０ｍｍ３である最初の投与日（投与０日目）に２０μｇの４ａｒｍ−２０ｋＰＥＧ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８を腫瘍内／腫瘍周囲に投与された。同じマウスはまた、０日目、９日目及び１８日目に０．８ｍｇ／ｋｇの用量でＲＳＬＡＩＬ−２を静脈内に投与された（即ち、それらは９日おきに合計で３回投与された）。
【０３６８】
標識された群「ビヒクル」：マウスは、５０〜１５０ｍｍ３の範囲の腫瘍サイズである最初の投与日（投与０日目）に４０μｌのハンクス緩衝生理食塩水（４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８のビヒクル）を腫瘍内／腫瘍周囲に投与された。同じマウスはまた、０日目、９日目及び１８日目にＲＳＬＡＩＬ−２のビヒクル緩衝液を静脈内に投与された（投与０日目から開始して９日ごとに、合計で３回の投与）。
【０３６９】
測定：腫瘍容積を、５２日の間１週間に２〜３回のキャリパー測定によって収集し、式：Ｌ×Ｗ２／２（式中、Ｌは腫瘍の長さであり、Ｗは腫瘍の幅である）によって算出した。
【０３７０】
データは表６において提供される。
【０３７１】
【表７】
2020514300.tif 000076
【０３７２】
生存割合は以下のとおりに提供される：
０％≦＋＜２５％
２５％≦＋＋＜５０％
５０％≦＋＋＋＜７５％
７５％≦＋＋＋＋＜１００％
【０３７３】
ＲＳＬＡＩＬ−２＋４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８による二重の薬剤治療は、投与の開始後５２日目の試験終了までに当該動物のうち９０％の生存をもたらした。際だったことに、ＲＳＬＡＩＬ−２＋４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８治療群における全ての動物のうちの８０％が完全奏功を有し、これは、試験終了までに測定可能な腫瘍が観察されなかったことを意味する。
【０３７４】
ビヒクル群は生存している動物がいなかった。全ての動物は、治療開始後１７日目と３１日目の間で極限の腫瘍容積に達したため試験から取り除かれた。
【０３７５】
実施例２５
インビボ試験：ＪＣ腫瘍モデルにおけるＲＳＬＡＩＬ−２及びＴＬＲ作動薬の投与
ＪＣ乳腺癌腫瘍モデルにおいて、ビヒクル治療と比較した場合の例示的な長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬であるＲＳＬＡＩＬ−２、及び例示的なＴＬＲ作動薬である４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８の併用の抗腫瘍応答を評価並びに比較するための試験を実施した。
【０３７６】
インビボモデル：使用されたマウスは、右側腹部皮下に移植された４００万個のＪＣ腫瘍細胞を有する約１０週齢の雌Ｂａｌｂ／ｃ系統であった。細胞を、治療開始前に５０〜１５０ｍｍ３容積に達する腫瘍に成長させた。
【０３７７】
投与：４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８を、腫瘍内又は腫瘍周囲に（即ち、直接的に）４０μｌ量で腫瘍に投与した。ＲＳＬＡＩＬ−２を０．８ｍｇ／ｋｇで静脈内注射により全身的に投与した。
【０３７８】
標識された群：「ＲＳＬＡＩＬ−２＋４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８」：マウスは、腫瘍サイズが５０〜１５０ｍｍ３である最初の投与日（投与０日目）に２０μｇの４ａｒｍ−２０ｋＰＥＧ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８を腫瘍内／腫瘍周囲に投与された。同じマウスはまた、０日目、９日目及び１８日目に０．８ｍｇ／ｋｇの用量でＲＳＬＡＩＬ−２を静脈内に投与された（即ち、それらは９日おきに合計で３回投与された）。
【０３７９】
標識された群「ビヒクル」：マウスは、５０〜１５０ｍｍ３の範囲の腫瘍サイズである最初の投与日（投与０日目）に４０μｌのハンクス緩衝生理食塩水（４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８のビヒクル）を腫瘍内／腫瘍周囲に投与された。同じマウスはまた、０日目、９日目及び１８日目にＲＳＬＡＩＬ−２のビヒクル緩衝液を静脈内に投与された（投与０日目から開始して９日ごとに、合計で３回の投与）。
【０３８０】
測定：腫瘍容積を、１１３日の間１週間に２〜３回のキャリパー測定によって収集し、式：Ｌ×Ｗ２／２（式中、Ｌは腫瘍の長さであり、Ｗは腫瘍の幅である）によって算出した。
【０３８１】
データは表７において提供される。
【０３８２】
【表８】
2020514300.tif 000077
【０３８３】
生存割合は以下のとおりに提供される：
０％≦＋＜２５％
２５％≦＋＋＜５０％
５０％≦＋＋＋＜７５％
７５％≦＋＋＋＋＜１００％
【０３８４】
ＲＳＬＡＩＬ−２と４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８（化合物６）による二重の薬剤治療（即ち、併用療法）は、４３日目までに当該動物のうち９０％の生存をもたらしたが、一方で、ビヒクル群においては、４３日目までに生存している動物は残らなかった。ＲＳＬＡＩＬ−２＋４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８の併用治療は、投与開始後１１３日目の試験終了までに２０％の動物の生存をもたらした。際だったことに、ＲＳＬＡＩＬ−２＋４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８治療群における動物のうちの１０％が完全奏功を有し、これは、試験終了までに測定可能な腫瘍が観察されなかったことを意味する。
【０３８５】
ビヒクル群は生存している動物がいなかった。全ての動物は、治療開始後２６日目と３６日目の間で極限の腫瘍容積に達したため試験から取り除かれた。
【０３８６】
実施例２６
インビボ試験：４Ｔ１腫瘍モデルにおけるＲＳＬＡＩＬ−２及びＴＬＲ作動薬の投与
皮下４Ｔ１乳癌腫腫瘍モデルにおいて、単剤のＲＳＬＡＩＬ−２及び単剤のＴＬＲ作動薬による免疫療法（比較の単剤両方）と比較した場合の例示的な長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬であるＲＳＬＡＩＬ−２、及び例示的なＴＬＲ作動薬である４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８の併用の抗腫瘍応答を評価並びに比較するための試験を実施した。
【０３８７】
インビボモデル：使用されたマウスは、各側腹部に移植された２００万個の４Ｔ１腫瘍細胞を有する約１０週齢の雌Ｂａｌｂ／ｃ系統であった。細胞を７日間腫瘍に成熟させて、７５〜１５０ｍｍ３の容積に達した。
【０３８８】
投与：４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−Ｇｌｙ−ＣＭ−Ｎ−Ｒ８４８を、２つの腫瘍のうちの１つ（第１の腫瘍）の腫瘍内又は腫瘍周囲に（即ち、直接的に）４０μｌ量で投与した。第２の反対側の腫瘍は、ＴＬＲ作動薬である４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８により直接的に治療されなかった。ＲＳＬＡＩＬ−２を０．８ｍｇ／ｋｇで静脈内注射により全身的に投与した。
【０３８９】
標識された群：「ＲＳＬＡＩＬ−２＋４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８」：マウスは、腫瘍サイズが７５〜１５０ｍｍ３である最初の投与日（投与０日目）に２０μｇの４ａｒｍ−２０ｋＰＥＧ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８を腫瘍内／腫瘍周囲に投与された。同じマウスはまた、０日目、９日目及び１８日目に０．８ｍｇ／ｋｇの用量でＲＳＬＡＩＬ−２を静脈内に投与された（即ち、それらは投与０日目から開始して９日おきに合計で３回投与された）。
【０３９０】
標識された群「ビヒクル」：マウスは、７５〜１５０ｍｍ３の範囲の腫瘍サイズである最初の投与日（投与０日目）に４０μｌのハンクス緩衝生理食塩水（４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８のビヒクル）を腫瘍内／腫瘍周囲に投与された。
【０３９１】
測定：腫瘍容積を、１週間に２〜３回のキャリパー測定によって収集し、式：Ｌ×Ｗ２／２（式中、Ｌは腫瘍の長さであり、Ｗは腫瘍の幅である）によって算出した。
【０３９２】
結果：データは表８において提供される。結果は、ビヒクル治療と比較した場合、二重の併用について顕著であり、即ち、ＲＳＬＡＩＬ−２と４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８の二重の併用投与は、４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８が注射により直接投与された第１の腫瘍における腫瘍成長を減速させるのに有効であるだけでなく、第２の腫瘍の成長を減速させるのにも有効であった。２５日目の試験終了までにＲＳＬＡＩＬ−２と４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８の二重の併用療法群については３０％が生存したままであったが、試験の１８日目の後のビヒクル治療群においては生存している動物は残らなかった。
【０３９３】
【表９】
2020514300.tif 000078
【０３９４】
生存割合は以下のとおりに提供される：
０％≦＋＜２５％
２５％≦＋＋＜５０％
５０％≦＋＋＋＜７５％
７５％≦＋＋＋＋＜１００％
【０３９５】
ＲＳＬＡＩＬ−２＋４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８による二重の免疫療法剤治療は、投与の開始後２５日目の試験終了までに当該動物のうち３０％の生存をもたらした。ＲＳＬＡＩＬ−２＋４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８による併用治療は、治療された動物において腫瘍成長を減速させることによって、ビヒクル治療と比較して有意な改善を示した。
【０３９６】
ビヒクル群は、２５日目の試験終了までに生存している動物がいなかった。全ての動物は、治療開始後１６日目と１８日目の間で極限の腫瘍容積に達したため試験から取り除かれた。
【０３９７】
実施例２７
インビボ試験：ＭＣ３８腫瘍モデルにおけるＲＳＬＡＩＬ−２及びＴＬＲ作動薬の投与
ＭＣ３８結腸癌腫腫瘍モデルにおいて、ビヒクル治療と比較した場合の例示的な長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬であるＲＳＬＡＩＬ−２、及び例示的なＴＬＲ７／８作動薬のマルチアームポリマーコンジュゲートである４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８の併用の抗腫瘍応答を評価並びに比較するための試験を実施した。
【０３９８】
インビボモデル：使用されたマウスは、右側腹部皮下に移植された２５万個のＭＣ３８腫瘍細胞を有する約１０週齢の雌Ｂａｌｂ／ｃ系統であった。細胞を、治療開始前に５０〜１５０ｍｍ３容積に達する腫瘍に成長させた。
【０３９９】
投与：４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８を、腫瘍内又は腫瘍周囲に（即ち、直接的に）４０μｌ量で腫瘍に投与した。ＲＳＬＡＩＬ−２を０．８ｍｇ／ｋｇで静脈内注射により全身的に投与した。
【０４００】
標識された群：「ＲＳＬＡＩＬ−２＋４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８」：マウスは、腫瘍サイズが５０〜１５０ｍｍ３である最初の投与日（投与０日目）に２０μｇの４ａｒｍ−２０ｋＰＥＧ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８を腫瘍内／腫瘍周囲に投与された。同じマウスはまた、０日目、９日目及び１８日目に０．８ｍｇ／ｋｇの用量でＲＳＬＡＩＬ−２を静脈内に投与された（即ち、それらは９日おきに合計で３回投与された）。
【０４０１】
標識された群「ビヒクル」：マウスは、５０〜１５０ｍｍ３の範囲の腫瘍サイズである最初の投与日（投与０日目）に４０μｌのハンクス緩衝生理食塩水（４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８のビヒクル）を腫瘍内／腫瘍周囲に投与された。同じマウスはまた、０日目、９日目及び１８日目にＲＳＬＡＩＬ−２のビヒクル緩衝液を静脈内に投与された（投与０日目から開始して９日ごとに、合計で３回の投与）。
【０４０２】
測定：腫瘍容積を、７０日の間１週間に２〜３回のキャリパー測定によって収集し、式：Ｌ×Ｗ２／２（式中、Ｌは腫瘍の長さであり、Ｗは腫瘍の幅である）によって算出した。
【０４０３】
結果：データは表９において提供される。
【０４０４】
【表１０】
2020514300.tif 000079
【０４０５】
生存割合は以下のとおりに提供される：
０％≦＋＜２５％
２５％≦＋＋＜５０％
５０％≦＋＋＋＜７５％
７５％≦＋＋＋＋＜１００％
【０４０６】
ＲＳＬＡＩＬ−２＋４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８による二重の薬剤治療は、投与の開始後７０日目の試験終了までに当該動物のうち５０％の生存をもたらした。際だったことに、ＲＳＬＡＩＬ−２＋４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８治療群における生存している全ての動物が完全奏功を有し、これは、試験終了までに測定可能な腫瘍が観察されなかったことを意味する。
【０４０７】
ビヒクル群は生存している動物がいなかった。全ての動物は、治療開始後７日目と３９日目の間で極限の腫瘍容積に達したため試験から取り除かれた。
【０４０８】
実施例２８
インビボ試験：ＥＭＴ６腫瘍モデルにおけるＲＳＬＡＩＬ−２及びＴＬＲ作動薬の投与
皮下ＥＭＴ６乳癌腫腫瘍モデルにおいて、単剤のＲＳＬＡＩＬ−２及び単剤のＴＬＲ作動薬による免疫療法と比較した場合の例示的な長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬であるＲＳＬＡＩＬ−２、及び例示的な長時間作用型ＴＬＲ作動薬である４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８の併用の抗腫瘍応答を評価並びに比較するための試験を実施した。
【０４０９】
インビボモデル：使用されたマウスは、各側腹部に移植された２００万個のＥＭＴ６腫瘍細胞を有する約１０週齢の雌Ｂａｌｂ／ｃ系統であった。細胞を７日間腫瘍に成熟させて、７５〜１５０ｍｍ３の容積に達した。
【０４１０】
投与：４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−Ｇｌｙ−ＣＭ−Ｎ−Ｒ８４８を、２つの腫瘍のうちの１つ（第１の腫瘍）の腫瘍内又は腫瘍周囲に（即ち、直接的に）４０μｌ量で投与した。第２の反対側の腫瘍は、ＴＬＲ作動薬である４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８により直接的に治療されなかった。ＲＳＬＡＩＬ−２を０．８ｍｇ／ｋｇで静脈内注射により全身的に投与した。
【０４１１】
標識された群：「ＲＳＬＡＩＬ−２＋４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８」：マウスは、腫瘍サイズが７５〜１５０ｍｍ３である最初の投与日（投与０日目）に２０μｇの４ａｒｍ−２０ｋＰＥＧ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８を腫瘍内／腫瘍周囲に投与された。同じマウスはまた、０日目、９日目及び１８日目に０．８ｍｇ／ｋｇの用量でＲＳＬＡＩＬ−２を静脈内に投与された（即ち、それらは投与０日目から開始して９日おきに合計で３回投与された）。
【０４１２】
標識された群「ＲＳＬＡＩＬ−２」：マウスはまた、０日目、９日目及び１８日目に０．８ｍｇ／ｋｇの用量でＲＳＬＡＩＬ−２を腫瘍内に投与された（即ち、それらは投与０日目から開始して９日おきに合計で３回投与された）。
【０４１３】
標識された群「４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８」：マウスは、腫瘍サイズが７５〜１５０ｍｍ３である最初の投与日（投与０日目）に２０μｇの４ａｒｍ−２０ｋＰＥＧ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８を腫瘍内／腫瘍周囲に投与された。
【０４１４】
標識された群「ビヒクル」：マウスは、７５〜１５０ｍｍ３の範囲の腫瘍サイズである最初の投与日（投与０日目）に４０μｌのハンクス緩衝生理食塩水（４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８のビヒクル）を腫瘍内／腫瘍周囲に投与された。
【０４１５】
測定：腫瘍容積を、１週間に２〜３回のキャリパー測定によって収集し、式：Ｌ×Ｗ２／２（式中、Ｌは腫瘍の長さであり、Ｗは腫瘍の幅である）によって算出した。
【０４１６】
結果：データは表１０において提供される。結果は、効果の乏しいＲＳＬＡＩＬ−２及び４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８の単剤治療と比較した場合、二重の併用について劇的であり、即ち、ＲＳＬＡＩＬ−２と４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８の二重の併用投与は、４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８が注射により直接投与された第１の腫瘍を根絶するのに有効であるだけでなく、第２の腫瘍を根絶するのにも有効であった。完全な腫瘍退縮後の２１日の期間を通じて、腫瘍の再生は観察されなかった。さらに、二重の併用療法群については１００％が生存したままであったが、単剤治療群においては、５５日目の試験終了までに生存している動物は残らなかった。
【０４１７】
【表１１】
2020514300.tif 000080
【０４１８】
生存割合は以下のとおりに提供される：
０％≦＋＜２５％
２５％≦＋＋＜５０％
５０％≦＋＋＋＜７５％
７５％≦＋＋＋＋＜１００％
【０４１９】
ＲＳＬＡＩＬ−２又は４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８による単剤治療は、腫瘍成長の部分的な制御をもたらしたが、投与の開始後５５日目の試験終了までに生存している動物はいなかった。
【０４２０】
対照的に、ＲＳＬＡＩＬ−２＋４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８による二重の薬剤治療は、投与の開始後５５日目の試験終了までに当該動物のうち１００％の生存をもたらした。生存群における全ての動物は、完全奏功を有し、両方の腫瘍が根絶された。即ち、予想に反して、ＲＳＬＡＩＬ−２＋４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８による併用治療は、等価用量のＲＳＬＡＩＬ−２又は４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８による免疫療法治療モダリティと比較して有意な改善であるだけでなく、第１の腫瘍（ＴＬＲ作動薬で注射される）及び第２の腫瘍（ＴＬＲ作動薬の直接的な注射なし、第１の腫瘍部位から離れている）の両方の完全な根絶ももたらした。
【０４２１】
ビヒクル群は生存している動物がいなかった。全ての動物は、治療開始後１３日目と１５日目の間で極限の腫瘍容積に達したため試験から取り除かれた。
【０４２２】
実施例２９
インビボ試験：ＲＭ−１腫瘍モデルにおけるＲＳＬＡＩＬ−２及びＴＬＲ作動薬の投与
ＲＭ−１前立腺癌腫腫瘍モデルにおいて、ビヒクル治療と比較した場合の例示的な長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬であるＲＳＬＡＩＬ−２、及び例示的な長時間作用型ＴＬＲ作動薬である４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８の併用の抗腫瘍応答を評価並びに比較するための試験を実施した。
【０４２３】
インビボモデル：使用されたマウスは、右側腹部皮下に移植された２００万個のＲＭ−１腫瘍細胞を有する約１０週齢の雌Ｂａｌｂ／ｃ系統であった。細胞を、治療開始前に５０〜１５０ｍｍ３容積に達する腫瘍に成長させた。
【０４２４】
投与：４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８を、腫瘍内又は腫瘍周囲に（即ち、直接的に）４０μｌ量で腫瘍に投与した。ＲＳＬＡＩＬ−２を０．８ｍｇ／ｋｇで静脈内注射により全身的に投与した。
【０４２５】
標識された群：「ＲＳＬＡＩＬ−２＋４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８」：マウスは、腫瘍サイズが５０〜１５０ｍｍ３である最初の投与日（投与０日目）に２０μｇの４ａｒｍ−２０ｋＰＥＧ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８を腫瘍内／腫瘍周囲に投与された。同じマウスはまた、０日目、９日目及び１８日目に０．８ｍｇ／ｋｇの用量でＲＳＬＡＩＬ−２を静脈内に投与された（即ち、それらは９日おきに合計で３回投与された）。
【０４２６】
標識された群「ビヒクル」：マウスは、５０〜１５０ｍｍ３の範囲の腫瘍サイズである最初の投与日（投与０日目）に４０μｌのハンクス緩衝生理食塩水（４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８のビヒクル）を腫瘍内／腫瘍周囲に投与された。同じマウスはまた、０日目、９日目及び１８日目にＲＳＬＡＩＬ−２のビヒクル緩衝液を静脈内に投与された（投与０日目から開始して９日ごとに、合計で３回の投与）。
【０４２７】
測定：腫瘍容積を、３６日の間１週間に２〜３回のキャリパー測定によって収集し、式：Ｌ×Ｗ２／２（式中、Ｌは腫瘍の長さであり、Ｗは腫瘍の幅である）によって算出した。
【０４２８】
結果：データは表１１において提供される。
【０４２９】
【表１２】
2020514300.tif 000081
【０４３０】
生存割合は以下のとおりに提供される：
０％≦＋＜２５％
２５％≦＋＋＜５０％
５０％≦＋＋＋＜７５％
７５％≦＋＋＋＋＜１００％
【０４３１】
ＲＳＬＡＩＬ−２＋４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８による二重の薬剤治療は、ビヒクル治療と比較して腫瘍成長の有意な低下をもたらし、ＲＳＬＡＩＬ−２＋４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８治療群において、治療開始後２０日目までに当該動物の８０％及び３６日目の試験終了までに動物の１０％の生存をもたらした。
【０４３２】
ビヒクル群は、治療開始後２０日目までに生存している動物がいなかった。全ての動物は、治療開始後１３日目と１８日目の間で極限の腫瘍容積に達したため試験から取り除かれた。
【０４３３】
実施例３０
インビボ試験：Ｈ２２腫瘍モデルにおけるＲＳＬＡＩＬ−２及びＴＬＲ作動薬の投与
Ｈ２２肝細胞癌腫腫瘍モデルにおいて、ビヒクル治療と比較した場合の例示的な長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬であるＲＳＬＡＩＬ−２、及び例示的な長時間作用型ＴＬＲ作動薬である４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｎ−Ｒ８４８の併用の抗腫瘍応答を評価並びに比較するための試験を実施した。
【０４３４】
インビボモデル：使用されたマウスは、右側腹部皮下に移植された３００万個のＨ２２腫瘍細胞を有する約１０週齢の雌Ｂａｌｂ／ｃ系統であった。細胞を、治療開始前に５０〜１５０ｍｍ３容積に達する腫瘍に成長させた。
【０４３５】
投与：４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８を、腫瘍内又は腫瘍周囲に（即ち、直接的に）４０μｌ量で腫瘍に投与した。ＲＳＬＡＩＬ−２を０．８ｍｇ／ｋｇで静脈内注射により全身的に投与した。
【０４３６】
標識された群：「ＲＳＬＡＩＬ−２＋４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８」：マウスは、腫瘍サイズが５０〜１５０ｍｍ３である最初の投与日（投与０日目）に２０μｇの４ａｒｍ−２０ｋＰＥＧ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８を腫瘍内／腫瘍周囲に投与された。同じマウスはまた、０日目、９日目及び１８日目に０．８ｍｇ／ｋｇの用量でＲＳＬＡＩＬ−２を静脈内に投与された（即ち、それらは９日おきに合計で３回投与された）。
【０４３７】
標識された群「ビヒクル」：マウスは、５０〜１５０ｍｍ３の範囲の腫瘍サイズである最初の投与日（投与０日目）に４０μｌのハンクス緩衝生理食塩水（４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８のビヒクル）を腫瘍内／腫瘍周囲に投与された。同じマウスはまた、０日目、９日目及び１８日目にＲＳＬＡＩＬ−２のビヒクル緩衝液を静脈内に投与された（投与０日目から開始して９日ごとに、合計で３回の投与）。
【０４３８】
測定：腫瘍容積を、１０５日の間１週間に２〜３回のキャリパー測定によって収集し、式：Ｌ×Ｗ２／２（式中、Ｌは腫瘍の長さであり、Ｗは腫瘍の幅である）によって算出した。
【０４３９】
結果：データは表１２において提供される。
【０４４０】
【表１３】
2020514300.tif 000082
【０４４１】
生存割合は以下のとおりに提供される：
０％≦＋＜２５％
２５％≦＋＋＜５０％
５０％≦＋＋＋＜７５％
７５％≦＋＋＋＋＜１００％
【０４４２】
ＲＳＬＡＩＬ−２＋４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８による二重の薬剤治療は、投与の開始後１０５日目の試験終了までに当該動物のうち５０％の生存をもたらした。際だったことに、ＲＳＬＡＩＬ−２＋４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｒ８４８治療群における動物の４０％が完全奏功を有し、これは、試験終了までに測定可能な腫瘍が観察されなかったことを意味する。
【０４４３】
ビヒクル群は生存している動物がいなかった。全ての動物は、２８日目と５６日目の間で極限の腫瘍容積に達したため試験から取り除かれた。
【０４４４】
実施例３１
インビトロ試験：４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｎ−Ｒ８４８及び関連化合物によるＴＬＲの活性化
用量反応実験において、ヒト（ｈ）ＴＬＲ７、ｈＴＬＲ８及びｈＴＬＲ４の下流の転写応答の開始について、レシキモド及び例示的な長時間作用型ＴＬＲ作動薬である４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｎ−Ｒ８４８（化合物６）を比較的に試験した。
【０４４５】
使用された試験系は、５つのＮＦｋＢ及びＡＰ−１結合部位（ｈＴＬＲ７及びｈＴＬＲ８細胞系）に融合したミニマルＩＦＮβプロモーター又は５つのＮＦｋＢ及びＡＰ−１結合部位（ｈＴＬＲ４細胞系）に融合したＩＬ−１２  ｐ４０ミニマルプロモーターの下流のヒトＴＬＲ受容体並びに分泌型アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）レポーター構築物で安定的に形質移入されたＨＥＫ２９３細胞におけるレポーター遺伝子細胞系であった。親細胞系（ｈＴＬＲ受容体発現を有しないがＳＥＡＰレポートで安定的に形質移入されたＮｕｌｌ１及びＮｕｌｌ１Ｋ）は、陰性対照として使用された。
【０４４６】
表１３に示されるとおり、レシキモド及び化合物６は、ｈＴＬＲ７及びｈＴＬＲ８発現細胞系におけるレポーター発現を活性化したが、ｈＴＬＲ４細胞系では活性化しなかった。既知のｈＴＬＲ４リガンドであるＬＰＳは、ｈＴＬＲ４細胞系のレポーター発現を特異的に活性化した。これらのデータは、レシキモドがｈＴＬＲ７及びｈＴＬＲ８のシグナリングを特異的に活性化したことを示す。化合物６もまた、ｈＴＬＲ７及びｈＴＬＲ８の下流のレポーター発現を特異的に活性化したが、レシキモドと比較して２０倍を超えて高い濃度であり、且つｈＴＬＲ４に影響をもたなかった。
【０４４７】
レシキモドは既知のＴＬＲ７／８作動薬であるため、ｈＴＬＲ４ではなくｈＴＬＲ７及びｈＴＬＲ８を発現する細胞系における応答が予想された。これらの実験は、化合物６が不十分な活性であることを実証し、レシキモドの放出が有効な受容体アゴニズムに必要であることを示唆する。
【０４４８】
これらのデータは、化合物６がレシキモドのプロドラッグであり、且つ放出可能なリンカーを介するＰＥＧへのコンジュゲーションがレシキモドの活性を著しく減弱することを実証する。この結果はさらに、ＰＢＭＣ培養物中の初代血中単球における化合物６及びレシキモドの活性比較によって裏付けられた。
【０４４９】
【表１４】
2020514300.tif 000083
【０４５０】
実施例３２
ＢＡＬＢ／ｃマウスのマウス結腸癌腫モデルＣＴ２６における時間差ＲＳＬＡＩＬ−２投与と併用した化合物６又はレシキモド治療後の血漿サイトカイン誘導の分析
各側腹部に１つある２つのＣＴ２６皮下腫瘍（１００〜２００ｍｍ３）を担持するＢａｌｂ／ｃマウス（ｎ＝６／群）の解剖学上右側の腫瘍に、単一の固定された腫瘍内／腫瘍周囲用量のレシキモド（１０μｇ）又は例示的な長時間作用型ＴＬＲ作動薬である４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｎ−Ｒ８４８（化合物６）（１μｇ若しくは１０μｇ）のいずれかを投与した。これらのマウスの半数（ｎ＝３／群）が、化合物６又はレシキモドの投与の９６時間後に０．８ｍｇ／ｋｇの例示的な長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬であるＲＳＬＡＩＬ−２の単回静注用量を受容して、単剤としてのレシキモドと化合物又はＲＳＬＡＩＬ−２との併用の比較を可能にした。炎症性サイトカインＩＦＮα、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−６及びＩＬ−１２の濃度は、投与後の指定の時点で多重のタンパク質測定アッセイにより血漿中において決定された。
【０４５１】
化合物６の低い方の用量レベル（１μｇ）は、血漿中において全てのサイトカインの極めて僅かな誘導を示した。しかしながら、レシキモド及び化合物６両方の１０μｇの腫瘍内／腫瘍周囲用量は、血中においてロバストな炎症性サイトカイン誘導を示した。両方の化合物が、ＩＦＮα、ＴＮＦα、ＩＬ−６及びＩＬ−１２に関して投与後２時間でピークレベルをもたらす急速な誘導、及びＩＦＮ−γに関して投与後６時間での遅延したピークを有して、試験された全てのサイトカインについて同様の一過的誘導パターンを示した。サイトカインレベルは、２４時間までにバックグラウンドレベル近傍までおさまった。
【０４５２】
しかしながら、レシキモドと化合物６との間の重要な差が、ＴＮＦαを除く測定された全てのサイトカインについての誘導の大きさにおいて観察された。化合物６と比較したレシキモドによって誘導されるピークのサイトカインレベルにおける差は、８〜１０倍（ＩＬ−６、ＩＦＮα）から３〜４倍（ＩＦＮγ、ＩＬ−１２）の高さでばらつきがあった。化合物６又はレシキモドから４日後のＲＳＡＩＬ−２の投与は、血漿中のＩＦＮα、ＴＮＦ−及びＩＬ−１２の中程度の上昇を誘導した。しかしながら、ＩＦＮγは、治療開始時における単剤のレシキモド又は化合物６よりも、ＲＳＬＡＩＬ−２によってより高いレベルに誘導された。血漿ＩＦＮγレベルは、最後のサンプリング時間となった３日間高いまま（＞１００ｐｇ／ｍｌ）であった。
【０４５３】
まとめると、同じレシキモド用量レベルでの並列の比較において、化合物６は、腫瘍内／腫瘍周囲送達後の非コンジュゲートレシキモドと比較して、血漿サイトカイン誘導の低下を示した。化合物６による治療にＲＳＬＡＩＬ−２を加えることによって、測定されたサイトカインのうちただ１つ、ＩＦＮγを有意に誘導したが、これは、２つの治療剤に関するサイトカイン誘導プロファイルが大部分重複していないことを示す。
【０４５４】
実施例３３
ＣＴ２６腫瘍モデルにおける腫瘍内／腫瘍周囲投与されたＴＬＲ作動薬及び静脈内ＲＳＬＡＩＬ−２により誘導される免疫細胞薬力学のフローサイトメトリー評価
各側腹部に１つある両側のＣＴ２６皮下腫瘍を担持するＢａｌｂ／ｃマウス（ｎ＝３／群）の解剖学上右側の腫瘍において、単一腫瘍内／腫瘍周囲用量の例示的な長時間作用型ＴＬＲ作動薬である４−ａｒｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｎ−Ｎ−Ｒ８４８（化合物６）（１０μｇ又は０．１μｇ）又はビヒクルを投与した。化合物６の投与の４日後、例示的な長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬であるＲＳＬＡＩＬ−２（０．８ｍｇ／ｋｇ）を静脈内に送達した。
【０４５５】
化合物６で治療された腫瘍における免疫細胞の局所的な変化並びに反対側の非治療腫瘍及び血中におけるアブスコパルな変化を誘導した治療を、フローサイトメトリー分析によって評価した。腫瘍及び血液を回収し、化合物６の投与の１日後及び７日後、抗体染色のために処理した。この治療及び分析スキームにより、Ｔ細胞への腫瘍抗原提示に必要な好中球及び樹状細胞を含む、主として自然免疫細胞型における急速な化合物６用量依存的な単一成分活性の特徴付けが可能になった。化合物６の後の７日目の第２のサンプリング時点（ＲＳＬＡＩＬ−２治療後３日目）は、化合物６治療が、血液及び腫瘍において後に発生するＲＳＬＡＩＬ−２誘導性Ｔ細胞応答をどのように依存的に調節したかを示した。
【０４５６】
治療後１日目に観察された早期の免疫学的事象は、１０μｇの高い方の用量の化合物６で治療された腫瘍の腫瘍内好中球の増加を含み、これは、細胞死の増加と一致した。好中球の腫瘍浸潤はまた、治療された腫瘍及び遠隔腫瘍の両方における成熟並びにリンパ節ホーミングに関するマーカーの上方制御を示した樹状細胞の一過的な活性化とも一致した。併用治療開始後７日目（ＲＳＬＡＩＬ−２投与後３日目）に、治療された腫瘍において化合物６の用量依存的に好中球が増加した。ＲＳＬＡＩＬ−２誘導性の腫瘍細胞死に対する化合物６依存的な効果は、化合物６治療腫瘍及び非治療腫瘍の両方において観察されたが、これはおそらく、両腫瘍におけるＲＳＬＡＩＬ−２の増強に依存的な細胞傷害性ＣＤ８＋Ｔ細胞の増加によって誘導された。
【０４５７】
腫瘍関連単球は、治療後の腫瘍において、ＲＳＬＡＩＬ−２投与の３日後である７日目の時点で最も有意に低減された。生細胞の割合としてのマクロファージの総数が増大したが、これは、細胞死の増加が白血球ではなく腫瘍細胞において選択的に誘導されたことを示唆している。しかしながら、腫瘍中の総白血球の割合としてのマクロファージの相対数は、併用治療後に低減された。
【０４５８】
白血球における相対的なマクロファージの減少についての主要なドライバーは、示される腫瘍浸潤性Ｔ細胞の実質的な増加であった。ＣＤ８＋Ｔ細胞は、ＲＳＬＡＩＬ−２による併用治療後の腫瘍における選択的な化合物６の用量依存的な増加を示した。制御性Ｔ細胞の相対的な割合は、劇的に減少して、高いＣＤ８：Ｔｒｅｇ比をもたらした。腫瘍浸潤性ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞の割合の増加は、ＣＤ４４の高い表面発現及びＰＤ−１＋ＣＴＬＡ−４＋二重陽性の増加を呈し、これは、腫瘍環境における高い抗原特異的活性を示唆している。
【０４５９】
治療された腫瘍とは異なり、細胞生存率及び好中球数は、血液中において影響されなかった。最初は単球が化合物６の治療後に血液中において用量依存的に一過的に増加したが、ビヒクルと比較して、ＲＳＬＡＩＬ−２治療後には血液中において減少した。血中ＮＫ細胞は、高用量の化合物６に応答して僅かな増加を示した。しかしながら、ＲＳＬＡＩＬ−２治療後、有意に高いＮＫ細胞の増加が明らかになった。腫瘍環境と比較して、血液中のＴ細胞は、最も著しい差としてＲＳＬＡＩＬ−２治療後の制御性Ｔ細胞の有意な増加を有する治療に対して顕著に異なる応答を示した。ＲＳＬＡＩＬ−２投与後、化合物６の高用量の群における血液中のＣＤ８＋Ｔ細胞集団において僅かな増加が観察された。ＣＤ４＋Ｔ細胞は、化合物６の投与後に僅かな用量依存的な一過的な増加を示したが、ＲＳＬＡＩＬ−２投与後には有意な応答は観察されなかった。重要なことに、両治療群が、腫瘍中で観察される劇的な用量依存的ＣＤ８：Ｔｒｅｇの増加とは異なり、血液中においてＣＤ８：Ｔｒｅｇ比の全体的な減少を示した。
【０４６０】
存在量の僅かな増加を呈する一方で、血液中の試験されたＴ細胞サブポピュレーションにおいて、活性化マーカー及び抑制性フィードバックチェックポイント受容体の明らかな上方制御が観察された。ＣＤ２５の発現は、ＩＬ−２受容体の関与及び観察される存在量の増加と一致して、ＲＳＬＡＩＬ−２治療に応答して血液中の制御性Ｔ細胞上で上方制御された。ＣＤ４＋Ｔ細胞は、高用量の化合物６及びＲＳＬＡＩＬ−２投与後の両薬剤の治療群においてＣＤ６９活性化マーカーの発現を誘導した。ＣＤ８＋Ｔ細胞は、ＲＳＬＡＩＬ−２投与に応答したＣＤ２５発現のロバストな増加及び高用量の化合物６に応答した一過的なＣＤ６９の上方制御を示した。ＣＤ８＋Ｔ細胞のうちＣＤ４４を発現する割合は、ＲＳＬＡＩＬ−２投与後に化合物６の用量に依存的な増加を示した。抑制性のチェックポイント受容体ＰＤ−１及びＣＴＬＡ−４は、ＣＤ８＋Ｔ細胞上の活性化マーカーＣＤ２５、ＣＤ６９及びＣＤ４４と同じ誘導パターンに従ったが、これは、腫瘍抗原依存的活性化を示唆している。
【０４６１】
これらのデータは、それぞれ化合物６及びＲＳＬＡＩＬ−２などの、長時間作用型ＴＬＲ作動薬及び長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬による例示的な併用療法が、細胞傷害性Ｔ細胞の腫瘍抗原特異的な腫瘍内蓄積及び活性を最適化する自然免疫細胞型並びに適応免疫細胞型の連続的な活性化をもたらすモデルを裏付ける。
【０４６２】
自然免疫は、好中球による腫瘍抗原の放出及び樹状細胞による主要なＣＤ８＋Ｔリンパ球への提示を誘導する化合物６の局所的な送達によって活性化され、続いてこれは、腫瘍抗原特異的活性ＣＤ８＋Ｔ細胞集団の広く全身的な腫瘍内での増加をもたらす治療薬のＲＳＬＡＩＬ−２成分によって大幅に増幅された。
【０４６３】
参照による援用
本明細書において参照される全ての論文、書籍、特許、特許公報及び他の刊行物は、全体として参照により援用される。本明細書の教示と参照によって援用される技術との間に不一致が生じた場合、本明細書におけるその教示の意味が優先するものとする。
【図１】
2020514300.tif 000096
【図２】
2020514300.tif 000097
【図３】
2020514300.tif 000098
【図４ＡＢＣＤ】
2020514300.tif 000099
【図４ＥＦＧＨ】
2020514300.tif 000100
【図５ＡＢＣＤ】
2020514300.tif 000101
【図５ＥＦＧＨ】
2020514300.tif 000102
【図６】
2020514300.tif 000103
【手続補正書】
【提出日】令和1年7月17日(2019.7.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
結合を含むスペーサ部分を介して、マルチアーム水溶性非ペプチド性ポリマーに共有結合しているＴＬＲ７／８作動薬を含むコンジュゲート。
【請求項２】
前記ＴＬＲ７／８作動薬が低分子である、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項３】
前記マルチアーム水溶性ポリマーが３〜約５０のポリマーアームを含む、請求項１又は請求項２に記載のコンジュゲート。
【請求項４】
前記マルチアーム水溶性非ペプチド性ポリマーの前記アームの１つ以上の末端で共有結合している前記ＴＬＲ７／８作動薬を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項５】
前記マルチアーム水溶性非ペプチド性ポリマーの前記アームの各々の末端で共有結合している前記ＴＬＲ７／８作動薬を含む、請求項４に記載のコンジュゲート。
【請求項６】
式Ｉ：
【化１】
2020514300.tif 000104
（式中：
ＲがＱと一緒になって、３〜約５０個のヒドロキシル、チオール、又はアミノ基を担持するポリオール、ポリチオール、又はポリアミンの残基であり；
各Ｑは、酸素、硫黄及び−ＮＨから選択されるリンカーであり；
各ＰＯＬＹは、独立して、水溶性非ペプチド性ポリマーであり；
各Ｘｒは、独立して、結合を含むスペーサ部分であり；
ｑは、３〜約５０の正の整数であり；且つ
各ＴＬＲ７／８  ＡＧは、トル様受容体７／８作動薬である）
に係る、請求項４に記載のコンジュゲート又は
その薬学的に許容可能な塩形態。
【請求項７】
前記ＴＬＲ７／８作動薬が、（Ｎ−［４−（４−アミノ−２−エチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５ｃ］キノリン−１−イル）ブチル］メタンスルホンアミド又は［８−（３−（ピロリジン−１−イルメチル）ベンジル）−４−アミノ−２−ブトキシ−７，８−ジヒドロプテリジン−６（５Ｈ）−オン］である、請求項１〜６のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項８】
前記ＴＬＲ７／８作動薬がイミダゾキノリン化合物である、請求項１〜６のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項９】
前記ＴＬＲ７／８作動薬がレシキモド又はイミキモドである、請求項１〜６のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項１０】
ＲがＱと一緒になって、ポリオールの残基である、請求項１〜９のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項１１】
各Ｘｒが、独立して、好適な結合を含むスペーサ部分である、請求項６〜１０のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項１２】
各Ｘｒが、独立して、放出可能な結合を含むスペーサ部分である、請求項６〜１０のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項１３】
ｑが、３〜１０の正の整数である、請求項６〜１２のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項１４】
ｑが、３〜６の正の整数である、請求項６〜１２のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項１５】
ｑが、３、４、及び５から選択される、請求項６〜１２のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項１６】
ｑが４である、請求項６〜１２のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項１７】
前記結合を含むスペーサ部分が、チオエーテル、カルバマート、エステル、カルボナート、又は尿素官能基を含む、請求項１〜１６のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項１８】
前記結合を含むスペーサ部分が、酵素切断可能なペプチド性結合を含む、請求項１〜１６のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項１９】
Ｘｒが式ＩＩ：
〜［Ｘ１］ａ−［Ｌｒ］ｂ−Ｘ２〜
式ＩＩ
（式中：
ａは、０又は１であり；
ｂは、０又は１であり；
Ｘ１は、存在する場合、スペーサであり；
Ｌｒは、存在する場合、結合であり；且つ
Ｘ２は、前記ＴＬＲ７／８作動薬に直接共有結合している官能基である）
に係る、請求項１〜１８のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項２０】
Ｘ１が存在する、請求項１９に記載のコンジュゲート。
【請求項２１】
Ｘ１が、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）−である、請求項２０に記載のコンジュゲート。
【請求項２２】
Ｘ１が存在しない、請求項１９に記載のコンジュゲート。
【請求項２３】
Ｘ２が、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、及び−ＮＨからなる群から選択される、請求項１９〜２２のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項２４】
Ｌｒが存在する、請求項１９〜２３のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項２５】
Ｌｒが、−（ＣＲｘＲｙ）ｚ−、及び−ＮＨ（ＣＲｘＲｙ）ｚ−からなる群から選択され、各Ｒｘ及びＲｙが、独立して、水素、低級アルキル、ハロ、及びハロ置換低級アルキルから選択され、ｚが１〜６の整数である、請求項２４に記載のコンジュゲート。
【請求項２６】
Ｌｒが、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−  −ＣＨ２ＣＨＦ−、−ＣＨＣＨ３−、−ＣＨＣＨ（ＣＨ３）２−、−ＣＨＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２−、−Ｃ（ＣＨ３）２−、−ＮＨＣＨ２−、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２−、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−  −ＮＨＣＨ２ＣＨＦ−、−ＮＨＣＨＣＨ３−、−ＮＨＣＨＣＨ（ＣＨ３）２−、−ＮＨＣＨＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２−、及び−ＮＨＣ（ＣＨ３）２−から選択される、請求項２５に記載のコンジュゲート。
【請求項２７】
前記水溶性非ペプチド性ポリマーがポリ（アルキレンオキシド）である、請求項１〜２６のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項２８】
前記ポリ（アルキレンオキシド）がポリ（エチレンオキシド）である、請求項２７に記載のコンジュゲート。
【請求項２９】
「ｑ」ポリマーアームの各々に含まれる前記水溶性非ペプチド性ポリマーが、約１〜約３０個の単量体サブユニットを含有する、請求項１〜２８のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項３０】
前記水溶性非ペプチド性ポリマーが、約２，０００ダルトン〜約１５０，０００ダルトンの分子量を有する、請求項１〜２９のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項３１】
前記水溶性非ペプチド性ポリマーが、約５，０００ダルトン〜約４０，０００ダルトンの分子量を有する、請求項１〜３０のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項３２】
前記水溶性非ペプチド性ポリマーが、約５，０００ダルトン〜約２５，０００ダルトンの分子量を有する、請求項１〜３１のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項３３】
式ＩＩＩ：
【化２】
2020514300.tif 000105
に係る式を有する、請求項１に記載のコンジュゲート
又はその薬学的に許容可能な塩若しくは立体異性体（式中：
Ｌは、−（ＣＨ２）ｍ−、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｍ−、−ＣＨＦ−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｍ−、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｍ−、−（ＣＨ２）ｍ−ＣＨ（ＣＨ（ＣＨ３）２）−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｍ−、−（ＣＨ２）ｍ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｍ−、−Ｃ（ＣＨ３）２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｍ−、単結合、又は−ＮＨ−（ＣＨ２）ｍ−であり、
各ｍは、独立して、１〜５の整数（両端を含む）であり；
各ｎは、独立して、４０〜３５０の整数（両端を含む）であり；
Ｒ１は、水素又は−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ３−であり；且つ
Ｒ２は、水素又はヒドロキシルである）。
【請求項３４】
Ｌが、−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨＦ−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ（ＣＨ３）２）−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−Ｃ（ＣＨ３）２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、単結合、又は−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−である、請求項３３に記載のコンジュゲート。
【請求項３５】
各ｎが、独立して、１００〜２５０の整数（両端を含む）である、請求項３２又は請求項３３に記載のコンジュゲート。
【請求項３６】
Ｒ１が水素であり、且つＲ２が水素である、請求項３３〜３５のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項３７】
Ｒ１が−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ３−であり、且つＲ２がヒドロキシルである、請求項３３〜３５のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項３８】
化合物１〜１０及び１２〜１６：
【化３】
2020514300.tif 000106
【化４】
2020514300.tif 000107
【化５】
2020514300.tif 000108
からなる群から選択されるコンジュゲート又はその薬学的に許容可能な塩若しくは立体異性体（式中、各ｎは、独立して、４０〜３５０の整数である）。
【請求項３９】
請求項１〜３８のいずれか一項に記載のコンジュゲート及び薬学的に許容可能な賦形剤を含む組成物。
【請求項４０】
請求項１〜３９のいずれか一項に記載のコンジュゲート又は組成物又は組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、治療の方法。
【請求項４１】
癌の治療に使用するための、請求項１〜３８のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項４２】
癌の治療に有用な薬剤の調製に使用するための、請求項１〜３８のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項４３】
癌を有する対象に（ｉ）結合を含むスペーサ部分を介してマルチアーム水溶性非ペプチド性ポリマーに共有結合している、ＴＬＲ７／８受容体活性化量のＴＬＲ７／８作動薬を含む請求項１〜３８のいずれか一項に記載のコンジュゲート、及び（ｉｉ）ＩＬ−２Ｒβ活性化量の長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬を投与することを含む、投与の方法。
【請求項４４】
前記コンジュゲート及び前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬が、同時に又は連続的に、並びに任意の順序で、並びに同一及び／又は異なる投与経路により、それぞれ免疫調節量で投与される、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記方法が、１回のサイクルの投与を含む、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記方法が、２回以上のサイクルの投与を含む、請求項４４に記載の方法。
【請求項４７】
前記コンジュゲートを局所的に投与し、前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬を非経口投与する、請求項４３〜４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
前記コンジュゲートを、癌性腫瘍の部位に直接（即ち、腫瘍内）投与する、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記コンジュゲートを前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬と別個に前記対象に投与する、請求項４３〜４８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
前記コンジュゲートを前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬の投与前に前記対象に投与する、請求項４３〜５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５１】
前記コンジュゲートと前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬とを治療の１日目に両方投与する、請求項４３〜５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
前記コンジュゲートを治療の１日目に投与し、前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬を治療の１〜４日目のいずれか１日に投与する、請求項４３〜５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
前記対象がヒト対象である、請求項４３〜５２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
前記癌が固形癌である、請求項４３〜５３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５５】
前記固形癌が、乳癌、卵巣癌、結腸癌、前立腺癌、骨癌、結腸直腸癌、胃癌、リンパ腫、悪性黒色腫、肝癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膵癌、甲状腺癌、腎癌、胆管癌、脳癌、子宮頸癌、上顎洞癌、膀胱癌、食道癌、ホジキン病及び副腎皮質癌からなる群から選択される、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬がポリエチレングリコールに放出可能に共有結合しているアルデスロイキンを含む、請求項４３〜５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５７】
前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬が４つから、５つ及び６つのポリエチレングリコールポリマーに放出可能に共有結合しているアルデスロイキンを含む、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬が平均約６つのポリエチレングリコールポリマーに放出可能に共有結合しているアルデスロイキンを含む、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
アルデスロイキンに放出可能に共有結合している前記ポリエチレングリコールポリマーが、分枝状である、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬が、以下の式：
【化６】
2020514300.tif 000109
（式中、ＩＬ−２はインターロイキン−２であり、「ｎ」は約３〜約４０００の整数である）に包含される化合物、又はその薬学的に許容可能な塩を含む、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬が、以下の式
【化７】
2020514300.tif 000110
（式中、ＩＬ−２はインターロイキン−２であり、ｎ’は１、２、３、７及び＞７からなる群から選択される整数である）に包含される化合物、及びその薬学的に許容可能な塩を１０％以下（モル量基準）含む組成物中に含まれる、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記コンジュゲートが、以下の構造：
【化８】
2020514300.tif 000111
（式中、各ｎは、独立して４０〜３５０の整数である）を有する、請求項４３〜６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６３】
前記ポリマーアームの各々におけるｎの値が、実質的に同じである、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
前記ポリマーアームの各々におけるｎの値が、約１１３である、請求項６２に記載の方法。
【請求項６５】
前記投与が、前記対象においてアブスコパル効果をもたらすのに有効である、請求項４３〜６４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６６】
前記投与が、マウスＣＴ−２６結腸腫瘍モデルなどの好適な動物モデルにおいて評価される場合、ビヒクルのみの群における全ての対象が０％の生存率に達した日の後である治療の開始後の日において、治療効果が同等の用量で対象に併用して投与される場合に前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬又は前記コンジュゲートのいずれかの単独投与について観察されるものを超える生存率パーセントを提供するのに有効である、請求項４３〜６５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６７】
癌を有する対象の治療に使用するための併用であって、前記併用が、ＩＬ−２Ｒβ活性化量の長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬と自然免疫活性化量の請求項１〜３８のいずれか一項に記載のコンジュゲートを含み、癌を有する対象の治療に使用するための説明書を伴う、併用。
【請求項６８】
前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬が、ポリエチレングリコールに放出可能に共有結合しているアルデスロイキンを含む、請求項６７に記載の併用。
【請求項６９】
前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬が４つから、５つ及び６つのポリエチレングリコールポリマーに放出可能に共有結合しているアルデスロイキンを含む、請求項６８に記載の併用。
【請求項７０】
前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬が平均約６つのポリエチレングリコールポリマーに放出可能に共有結合しているアルデスロイキンを含む、請求項６９に記載の併用。
【請求項７１】
アルデスロイキンに放出可能に共有結合している前記ポリエチレングリコールポリマーが、分枝状である、請求項６８〜７０のいずれか一項に記載の併用。
【請求項７２】
前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬が、以下の式：
【化９】
2020514300.tif 000112
（式中、ＩＬ−２はインターロイキン−２であり、「ｎ」は約３〜約４０００の整数である）
に包含される化合物、又はその薬学的に許容可能な塩を含む、請求項６７に記載の併用。
【請求項７３】
前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬が、以下の式
【化１０】
2020514300.tif 000113
（式中、ＩＬ−２はインターロイキン−２であり、ｎ’は１、２、３、７及び＞７からなる群から選択される整数である）に包含される化合物、又はその薬学的に許容可能な塩を１０％以下（モル量基準）含む組成物中に含まれる、請求項７２に記載の併用。
【請求項７４】
前記コンジュゲートが、以下の式：
【化１１】
2020514300.tif 000114
（式中、各ｎは、独立して、４０〜３５０の整数である）を有する、請求項６７〜７３のいずれか一項に記載の併用。
【請求項７５】
前記ポリマーアームの各々におけるｎの値が、実質的に同じである、請求項７４に記載の併用。
【請求項７６】
前記ポリマーアームの各々におけるｎの値が、約１１３である、請求項７４に記載の併用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５７】
本コンジュゲート、組成物、方法などのさらなる実施形態は、以下の説明、実施例、及び特許請求の範囲から明らかであろう。上記及び下記の説明から理解することができるとおり、本明細書に記載されるあらゆる特徴、及びこのような特徴の２つ以上のあらゆる組み合わせが、本開示の範囲内に含まれるが、ただし、このような組み合わせに含まれる特徴が、相互に矛盾しないことを条件とする。加えて、任意の特徴又は特徴の組み合わせは、任意の実施形態から具体的に除外され得る。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
結合を含むスペーサ部分を介して、マルチアーム水溶性非ペプチド性ポリマーに共有結合しているＴＬＲ７／８作動薬を含むコンジュゲート。
（項目２）
前記ＴＬＲ７／８作動薬が低分子である、項目１に記載のコンジュゲート。
（項目３）
前記マルチアーム水溶性ポリマーが３〜約５０のポリマーアームを含む、項目１又は項目２に記載のコンジュゲート。
（項目４）
前記マルチアーム水溶性非ペプチド性ポリマーの前記アームの１つ以上の末端で共有結合している前記ＴＬＲ７／８作動薬を含む、項目１〜３のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
（項目５）
前記マルチアーム水溶性非ペプチド性ポリマーの前記アームの各々の末端で共有結合している前記ＴＬＲ７／８作動薬を含む、項目４に記載のコンジュゲート。
（項目６）
式Ｉ：
【化１】
2020514300.tif 000115
（式中：
ＲがＱと一緒になって、３〜約５０個のヒドロキシル、チオール、又はアミノ基を担持するポリオール、ポリチオール、又はポリアミンの残基であり；
各Ｑは、酸素、硫黄及び−ＮＨから選択されるリンカーであり；
各ＰＯＬＹは、独立して、水溶性非ペプチド性ポリマーであり；
各Ｘｒは、独立して、結合を含むスペーサ部分であり；
ｑは、３〜約５０の正の整数であり；且つ
各ＴＬＲ７／８  ＡＧは、トル様受容体７／８作動薬である）
に係る、項目４に記載のコンジュゲート又は
その薬学的に許容可能な塩形態。
（項目７）
前記ＴＬＲ７／８作動薬が、（Ｎ−［４−（４−アミノ−２−エチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５ｃ］キノリン−１−イル）ブチル］メタンスルホンアミド又は［８−（３−（ピロリジン−１−イルメチル）ベンジル）−４−アミノ−２−ブトキシ−７，８−ジヒドロプテリジン−６（５Ｈ）−オン］である、項目１〜６のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
（項目８）
前記ＴＬＲ７／８作動薬がイミダゾキノリン化合物である、項目１〜６のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
（項目９）
前記ＴＬＲ７／８作動薬がレシキモド又はイミキモドである、項目１〜６のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
（項目１０）
ＲがＱと一緒になって、ポリオールの残基である、項目１〜９のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
（項目１１）
各Ｘｒが、独立して、好適な結合を含むスペーサ部分である、項目６〜１０のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
（項目１２）
各Ｘｒが、独立して、放出可能な結合を含むスペーサ部分である、項目６〜１０のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
（項目１３）
ｑが、３〜１０の正の整数である、項目６〜１２のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
（項目１４）
ｑが、３〜６の正の整数である、項目６〜１２のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
（項目１５）
ｑが、３、４、及び５から選択される、項目６〜１２のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
（項目１６）
ｑが４である、項目６〜１２のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
（項目１７）
前記結合を含むスペーサ部分が、チオエーテル、カルバマート、エステル、カルボナート、又は尿素官能基を含む、項目１〜１６のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
（項目１８）
前記結合を含むスペーサ部分が、酵素切断可能なペプチド性結合を含む、項目１〜１６のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
（項目１８）
Ｘｒが式ＩＩ：
〜［Ｘ１］ａ−［Ｌｒ］ｂ−Ｘ２〜
式ＩＩ
（式中：
ａは、０又は１であり；
ｂは、０又は１であり；
Ｘ１は、存在する場合、スペーサであり；
Ｌｒは、存在する場合、結合であり；且つ
Ｘ２は、前記ＴＬＲ７／８作動薬に直接共有結合している官能基である）
に係る、項目１〜１８のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
（項目１９）
Ｘ１が存在する、項目１８に記載のコンジュゲート。
（項目２０）
Ｘ１が、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）−である、項目１９に記載のコンジュゲート。
（項目２１）
Ｘ１が存在しない、項目１８に記載のコンジュゲート。
（項目２２）
Ｘ２が、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、及び−ＮＨからなる群から選択される、項目１８〜２１のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
（項目２３）
Ｌｒが存在する、項目１８〜２２のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
（項目２４）
Ｌｒが、−（ＣＲｘＲｙ）ｚ−、及び−ＮＨ（ＣＲｘＲｙ）ｚ−からなる群から選択され、各Ｒｘ及びＲｙが、独立して、水素、低級アルキル、ハロ、及びハロ置換低級アルキルから選択され、ｚが１〜６の整数である、項目２３に記載のコンジュゲート。
（項目２５）
Ｌｒが、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−  −ＣＨ２ＣＨＦ−、−ＣＨＣＨ３−、−ＣＨＣＨ（ＣＨ３）２−、−ＣＨＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２−、−Ｃ（ＣＨ３）２−、−ＮＨＣＨ２−、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２−、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−  −ＮＨＣＨ２ＣＨＦ−、−ＮＨＣＨＣＨ３−、−ＮＨＣＨＣＨ（ＣＨ３）２−、−ＮＨＣＨＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２−、及び−ＮＨＣ（ＣＨ３）２−から選択される、項目２４に記載のコンジュゲート。
（項目２６）
前記水溶性非ペプチド性ポリマーがポリ（アルキレンオキシド）である、項目１〜２５のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
（項目２７）
前記ポリ（アルキレンオキシド）がポリ（エチレンオキシド）である、項目２６に記載のコンジュゲート。
（項目２８）
「ｑ」ポリマーアームの各々に含まれる前記水溶性非ペプチド性ポリマーが、約１〜約３０個の単量体サブユニットを含有する、項目１〜２７のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
（項目２９）
前記水溶性非ペプチド性ポリマーが、約２，０００ダルトン〜約１５０，０００ダルトンの分子量を有する、項目１〜２８のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
（項目３０）
前記水溶性非ペプチド性ポリマーが、約５，０００ダルトン〜約４０，０００ダルトンの分子量を有する、項目１〜２９のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
（項目３１）
前記水溶性非ペプチド性ポリマーが、約５，０００ダルトン〜約２５，０００ダルトンの分子量を有する、項目１〜３０のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
（項目３２）
式ＩＩＩ：
【化２】
2020514300.tif 000116
に係る式を有する、項目１に記載のコンジュゲート
又はその薬学的に許容可能な塩若しくは立体異性体（式中：
Ｌは、−（ＣＨ２）ｍ−、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｍ−、−ＣＨＦ−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｍ−、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｍ−、−（ＣＨ２）ｍ−ＣＨ（ＣＨ（ＣＨ３）２）−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｍ−、−（ＣＨ２）ｍ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｍ−、−Ｃ（ＣＨ３）２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｍ−、単結合、又は−ＮＨ−（ＣＨ２）ｍ−であり、
各ｍは、独立して、１〜５の整数（両端を含む）であり；
各ｎは、独立して、４０〜３５０の整数（両端を含む）であり；
Ｒ１は、水素又は−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ３−であり；且つ
Ｒ２は、水素又はヒドロキシルである）。
（項目３３）
Ｌが、−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨＦ−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ（ＣＨ３）２）−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−Ｃ（ＣＨ３）２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、単結合、又は−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−である、項目３２に記載のコンジュゲート。
（項目３４）
各ｎが、独立して、１００〜２５０の整数（両端を含む）である、項目３１又は項目３２に記載のコンジュゲート。
（項目３５）
Ｒ１が水素であり、且つＲ２が水素である、項目３２〜３４のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
（項目３６）
Ｒ１が−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ３−であり、且つＲ２がヒドロキシルである、項目３２〜３４のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
（項目３７）
化合物１〜１０及び１２〜１６：
【化３】
2020514300.tif 000117
【化４】
2020514300.tif 000118
【化５】
2020514300.tif 000119
からなる群から選択されるコンジュゲート又はその薬学的に許容可能な塩若しくは立体異性体（式中、各ｎは、独立して、４０〜３５０の整数である）。
（項目３８）
項目１〜３７のいずれか一項に記載のコンジュゲート及び薬学的に許容可能な賦形剤を含む組成物。
（項目３９）
項目１〜３８のいずれか一項に記載のコンジュゲート又は組成物又は組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、治療の方法。
（項目４０）
癌の治療に使用するための、項目１〜３７のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
（項目４１）
癌の治療に有用な薬剤の調製に使用するための、項目１〜３７のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
（項目４２）
癌を有する対象に（ｉ）結合を含むスペーサ部分を介してマルチアーム水溶性非ペプチド性ポリマーに共有結合している、ＴＬＲ７／８受容体活性化量のＴＬＲ７／８作動薬を含む項目１〜３７のいずれか一項に記載のコンジュゲート、及び（ｉｉ）ＩＬ−２Ｒβ活性化量の長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬を投与することを含む、投与の方法。
（項目４３）
前記コンジュゲート及び前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬が、同時に又は連続的に、並びに任意の順序で、並びに同一及び／又は異なる投与経路により、それぞれ免疫調節量で投与される、項目４２に記載の方法。
（項目４４）
前記方法が、１回のサイクルの投与を含む、項目４３に記載の方法。
（項目４５）
前記方法が、２回以上のサイクルの投与を含む、項目４３に記載の方法。
（項目４６）
前記コンジュゲートを局所的に投与し、前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬を非経口投与する、項目４２〜４５のいずれか一項に記載の方法。
（項目４７）
前記コンジュゲートを、癌性腫瘍の部位に直接（即ち、腫瘍内）投与する、項目４６に記載の方法。
（項目４８）
前記コンジュゲートを前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬と別個に前記対象に投与する、項目４２〜４７のいずれか一項に記載の方法。
（項目４９）
前記コンジュゲートを前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬の投与前に前記対象に投与する、項目４２〜４９のいずれか一項に記載の方法。
（項目５０）
前記コンジュゲートと前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬とを治療の１日目に両方投与する、項目４２〜４９のいずれか一項に記載の方法。
（項目５１）
前記コンジュゲートを治療の１日目に投与し、前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬を治療の１〜４日目のいずれか１日に投与する、項目４２〜４９のいずれか一項に記載の方法。
（項目５２）
前記対象がヒト対象である、項目４２〜５１のいずれか一項に記載の方法。
（項目５３）
前記癌が固形癌である、項目４２〜５２のいずれか一項に記載の方法。
（項目５４）
前記固形癌が、乳癌、卵巣癌、結腸癌、前立腺癌、骨癌、結腸直腸癌、胃癌、リンパ腫、悪性黒色腫、肝癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膵癌、甲状腺癌、腎癌、胆管癌、脳癌、子宮頸癌、上顎洞癌、膀胱癌、食道癌、ホジキン病及び副腎皮質癌からなる群から選択される、項目５３に記載の方法。
（項目５５）
前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬がポリエチレングリコールに放出可能に共有結合しているアルデスロイキンを含む、項目４２〜５４のいずれか一項に記載の方法。
（項目５６）
前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬が４つから、５つ及び６つのポリエチレングリコールポリマーに放出可能に共有結合しているアルデスロイキンを含む、項目５５に記載の方法。
（項目５７）
前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬が平均約６つのポリエチレングリコールポリマーに放出可能に共有結合しているアルデスロイキンを含む、項目５６に記載の方法。
（項目５８）
アルデスロイキンに放出可能に共有結合している前記ポリエチレングリコールポリマーが、分枝状である、項目５７に記載の方法。
（項目５９）
前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬が、以下の式：
【化６】
2020514300.tif 000120
（式中、ＩＬ−２はインターロイキン−２であり、「ｎ」は約３〜約４０００の整数である）に包含される化合物、又はその薬学的に許容可能な塩を含む、項目５８に記載の方法。
（項目６０）
前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬が、以下の式
【化７】
2020514300.tif 000121
（式中、ＩＬ−２はインターロイキン−２であり、ｎ’は１、２、３、７及び＞７からなる群から選択される整数である）に包含される化合物、及びその薬学的に許容可能な塩を１０％以下（モル量基準）含む組成物中に含まれる、項目５９に記載の方法。
（項目６１）
前記コンジュゲートが、以下の構造：
【化８】
2020514300.tif 000122
（式中、各ｎは、独立して４０〜３５０の整数である）を有する、項目４２〜６０のいずれか一項に記載の方法。
（項目６２）
前記ポリマーアームの各々におけるｎの値が、実質的に同じである、項目６１に記載の方法。
（項目６３）
前記ポリマーアームの各々におけるｎの値が、約１１３である、項目６１に記載の方法。
（項目６４）
前記投与が、前記対象においてアブスコパル効果をもたらすのに有効である、項目４２〜６３のいずれか一項に記載の方法。
（項目６５）
前記投与が、マウスＣＴ−２６結腸腫瘍モデルなどの好適な動物モデルにおいて評価される場合、ビヒクルのみの群における全ての対象が０％の生存率に達した日の後である治療の開始後の日において、治療効果が同等の用量で対象に併用して投与される場合に前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬又は前記コンジュゲートのいずれかの単独投与について観察されるものを超える生存率パーセントを提供するのに有効である、項目４２〜６４のいずれか一項に記載の方法。
（項目６６）
癌を有する対象の治療に使用するための併用であって、前記併用が、ＩＬ−２Ｒβ活性化量の長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬と自然免疫活性化量の項目１〜３７のいずれか一項に記載のコンジュゲートを含み、癌を有する対象の治療に使用するための説明書を伴う、併用。
（項目６７）
前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬が、ポリエチレングリコールに放出可能に共有結合しているアルデスロイキンを含む、項目６６に記載の併用。
（項目６８）
前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬が４つから、５つ及び６つのポリエチレングリコールポリマーに放出可能に共有結合しているアルデスロイキンを含む、項目６７に記載の併用。
（項目６９）
前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬が平均約６つのポリエチレングリコールポリマーに放出可能に共有結合しているアルデスロイキンを含む、項目６８に記載の併用。
（項目７０）
アルデスロイキンに放出可能に共有結合している前記ポリエチレングリコールポリマーが、分枝状である、項目６７〜６９のいずれか一項に記載の併用。
（項目７１）
前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬が、以下の式：
【化９】
2020514300.tif 000123
（式中、ＩＬ−２はインターロイキン−２であり、「ｎ」は約３〜約４０００の整数である）
に包含される化合物、又はその薬学的に許容可能な塩を含む、項目６６に記載の併用。
（項目７２）
前記長時間作用型ＩＬ−２Ｒβバイアス作動薬が、以下の式
【化１０】
2020514300.tif 000124
（式中、ＩＬ−２はインターロイキン−２であり、ｎ’は１、２、３、７及び＞７からなる群から選択される整数である）に包含される化合物、又はその薬学的に許容可能な塩を１０％以下（モル量基準）含む組成物中に含まれる、項目７１に記載の併用。
（項目７３）
前記コンジュゲートが、以下の式：
【化１１】
2020514300.tif 000125
（式中、各ｎは、独立して、４０〜３５０の整数である）を有する、項目６６〜７２のいずれか一項に記載の併用。
（項目７４）
前記ポリマーアームの各々におけるｎの値が、実質的に同じである、項目７３に記載の併用。
（項目７５）
前記ポリマーアームの各々におけるｎの値が、約１１３である、項目７３に記載の併用。
【国際調査報告】
2020514300.tif 000126
2020514300.tif 000127
2020514300.tif 000128
2020514300.tif 000129