(57)【要約】  本発明は、ループス腎炎（LN)の重篤度と進行をモニタリングするためのLNと診断された患者の尿中のLGALS3BPを測定するために用いる組成物および方法を記載する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳類対象から入手したサンプルを用いて腎臓病態生理学を診断しそして非侵襲的にモニタリングする際に手掛かりとなるデータを構築する方法であって、
(i) 前記サンプルに関連したデータセットを取得し、ここで該データセットは、尿LGALS3BP、尿クレアチニン、および尿タンパク：クレアチン比（uPCR）として表される尿タンパク、から選ばれた少なくとも２つのマーカーに関するタンパク質発現レベルを含み；そして
(ii) 前記データセットを、分析プロセスに入力し、そのデータを利用して腎臓病理学を診断しモニタリングするのに有用な結果を獲得する
ことを含む方法。
【請求項２】
前記腎臓病理学が、糸球体疾患；全身性エリテマトーデス（SLE）疾患；ループス腎炎（LN）における間質性炎症；ループス腎炎（LN）における間質性線維症；腎間質性炎症（IFN）；半月体糸球体腎炎；膜性糸球体腎症；および糸球体基底膜疾患のうちの１つ以上を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
全身性エリテマトーデスに冒された対象または潜在的に冒された対象においてループス腎炎のインビトロでの予測および／または診断方法であって、次の工程：
a) 前記対象から尿サンプルを得；b) 前記尿中のLGALS3BP、クレアチニンおよび総タンパクレベルを測定し；c) 工程b)で測定されたようなLGALS3BPとクレアチニン(c)の測定レベルを、LGALS3BP／cの比として表し；d) 前記総タンパクに対する前記LGALS3BP／c比を、対照値と比較し、ここで前記対照値に関して前記総タンパクに対するLGALS3BP／c比の上昇が、ループス腎炎の発症を示す方法。
【請求項４】
前記LGALS3BPとクレアチニンレベルの測定が、ELISA法またはウエスタンブロット法により実施される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
全身性エリテマトーデスを罹患している患者においてループス腎炎の進行をモニタリングするためのインビトロ法であって、a) 前記患者から尿サンプルを取得し；b) 前記尿中のガレクチン３結合タンパク質、クレアチニンおよび総タンパクのレベルを測定し；c) 前記患者の少なくとも第一および第二の尿サンプルにおいてLGALS3BPとクレアチニン(c)の測定レベルを、LGALS3BP／c：前記総タンパクの比として表し、ここで前記少なくとも第一および第二の尿サンプルが異なる時点で採尿され；そしてd) 前記第一および第二の尿サンプルについて得られた前記総タンパク濃度に対する前記測定LGALS3BP／c比を互いに比較することを含む方法。
【請求項６】
前記少なくとも第一および第二のサンプルが、それぞれ治療を開始する前、前記治療の最中および／または治療後に得られる、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記治療が、ステロイド剤、免疫抑制剤、リツキシマブまたはアンギオテンシン変換酵素阻害剤による処置を含む、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
対象における全身性エリテマトーデスおよびループス腎炎を診断し、そしてそれらを別のリウマチ状態と原発性糸球体腎炎から鑑別するためのインビトロ法であって、前記対象から尿サンプルを取得し；b) 前記尿中のLGALS3BP、クレアチニンおよび総タンパクレベルを測定し；c) 工程b)において測定されたLGALS3BPとクレアチニン(c)の測定レベルをLGALS3BP／cとして表し；d) 前記総タンパクに対する前記LGALS3BP／c比を、対照値と比較し、ここで前記対照値に関して前記総タンパクに対するLGALS3BP／c比の増加が、ループス腎炎の発症を示す方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
優先権の主張
本出願は、2016年12月16日出願の米国仮出願第62/435,235号の利益を主張し、それは参考として本明細書中に援用される。
【０００２】
本出願は、ASCII形式で電子的に提出されている配列表を含み、その全内容が参考として本明細書中に組み込まれる。前記ASCIIコピーは、2017年12月15日に作成され、P16-214WO_SL.txtという名であり、サイズが433,834バイトである。
発明の分野
【０００３】
本発明は一般に、ループス腎炎（LN)の進行を検出及びモニタリングするための方法論における尿中のLGALS3BPの検出に関する。
【背景技術】
【０００４】
全身性エリテマトーデス（SLE)は、自己抗体を含む免疫複合体（IC)の形成により特徴づけられ、炎症、組織損傷及び早死にを誘発する自己免疫疾患である（Tsokos GC, N Engl J Med (2011); 365:2110-2121）。SLE ICはしばしば、サイトカインの産生を引き起こし、最終的に臓器の損傷を引き起こす免疫応答を誘発する病理学的機構を開始させる。SLEは多彩な臨床的多様性と特発性をもつために、SLEの管理はそれの特異的な兆候及び重篤度に依存する。従って、SLEを治療するために提案する薬物治療は、必ずしもループス腎炎（LN)のような全ての徴候と合併症の治療に効果的であるわけではない。LNの病因は、腎損傷を引き起こす炎症反応を開始させる腎臓糸球体への免疫複合体の沈着に起因すると考えられている（Davisdon A2016, Nature Reviews Rheumatology 12:143-153）。SLE患者の推定30〜60％がその病気の過程で腎炎を発症する。LNは進行性疾患であり、臨床的再燃と再発の過程をとる。後期LNは、腎臓における不可逆的瘢痕（はんこん）により特徴づけられ、これは現存のSLE薬で治療することはできず、腎臓移植を必要とする（Lionaki S他、World Journal of Transplantation, 2014, 4(3): 176-182）。
【０００５】
ループス腎炎の一般的症状は、高い尿タンパク濃度を引き起こす腎臓のろ過機能障害による泡状又は出血性の尿である。ループス腎炎は腎生検により診断される（Schwartz N他、Curr Opin Rheumatol. 2014）。腎機能は、血中尿窒素（BUN)試験、血清クレアチニン判定、尿検査（総タンパク、赤血球数及び細胞円柱）、クレアチニンとタンパク濃度のスポット尿検査、又はクレアチニンクリアランスとタンパク排出についての24時間検尿により、測定することができる。生検は侵襲的でありかつ通常は初期診断のためにのみ実施されるので、LNにおける腎疾患の正確なモニタリングは現在のところ可能でない。腎機能は現行の試験を使って推定することができるが、それらは原因となる炎症のレベルを評価することはできない（Zickert A他、Lupus Sci Med 2014, 1:e000018; Alvarado他、Lupus 2014, 23: 840）。それらの治療は進行中の炎症を消散させることに向けられるため、腎臓の炎症状態を評価できなくては、医師はそれらの治療の有効性を正確に評価することはできない。腎臓における原因となる炎症の正確なモニタリングは、積極的治療決定とターゲット治療（treat-to-target)アプローチにより医師を助けることができ、それにより病気の進行を遅らせ、患者の生活を改善し、高価な腎臓移植の必要性を避けることにより医療コストを下げることができる。
【０００６】
SLEは、抗マラリア薬、コルチコステロイド、非ステロイド系抗炎症薬（NSAID)、免疫抑制薬、及びベリムマブ（Belimumab)（BAFF中和）やリツキシマブ（Rituximab）（Ｂ細胞枯渇）のような生物製剤で治療される。多くの患者は上記に挙げた標準的な医療処置に対して奏効がないか又は部分的にのみ奏効があり、高用量のコルチコステロイドと細胞傷害性療法の長期使用は、骨髄抑制、日和見感染の増加、不可逆的卵巣機能不全、脱毛症、悪性リスクの増加といった顕著な副作用を生じ得る。従って、SLE/LNの明白な診断をより良好に提供し、かつ疾患活動性をモニタリングすることで副作用の少ない、より標的を絞った積極的治療を可能にする、代替的な診断薬が必要とされている。
【０００７】
ガレクチン３結合タンパク質〔別名：LGALS3BP（及び全ての関連の多形）、uG3BP、G3BP、Mac2-BP、p90、レクチンガラクトシド結合−可溶性３結合タンパク質、BTBD17B、CyCAP、gp90、L3抗原、M2BP、Mac-2結合タンパク質、MAC-2-BP及びTANGO10B〕は、スカベンジャー受容体ファミリーに属する、ユビキタス的に発現される遺伝子の遺伝子産物である（Koths, K.他、1993 J. Biol. Chem. 268: 14245）。585アミノ酸（aa)ヒトタンパク質は、18 aaのシグナル配列と４つのドメインを含む（Hohenester, E.他 1999 Nat. Struct. Biol. 6:228; Muller, S.A.他、1999 J. Mol. Biol. 291: 801; Hellstern, S.他 2002 J. Biol. Chem. 277: 15690）。ドメイン１はグループＡスカベンジャー受容体ドメインであり、ドメイン２は二量化を強力に媒介するBTB/POZドメインであり、そしてドメイン３は、ショウジョウバエKelchタンパク質中のPOZドメインの後方にも見つかるIVRドメインである。ドメイン４についてはほとんど知られていないが、組換えドメイン３と４は、全長ガレクチン３BPの固相接着プロファイルを再生する。７箇所のＮ結合部位におけるグリコシル化は、85〜97 kDaの分子量を生成する（Ullrich A.他（1994) J. Biol. Chem. 269:18401）。ガレクチン３BP二量体は、直鎖及び環状形のオリゴマーを形作り、最も頻繁には10量体及び12量体を形成する。LGALS3BPはある種の腫瘍細胞により分泌されるタンパク質であり、発現レベルが腫瘍進行と相関関係があるタンパク質である（Grassadonia, A.他、2004 Glycoconj. J. 19:551）。腫瘍細胞増殖／生存に対するそれの直接作用とは別に、LGALS3BPは血管内皮増殖因子の発現を上方制御し、かつ血管形成を促進することもできる。HIV-1感染中にそれのレベルが増強され、その活性がエンベロープタンパク質の成熟とウイルス粒子中への該タンパク質の取り込みの干渉を介してHIV-1の感染力を減少させると考えられる（Lodermeyer V他、Retrovirology. 2013 24;10:111）。LGALS3BPの血中濃度がベーチェット病患者で増加し、それは疾患活動性と相関する（Lee YJ他、Clin Exp Rheumatol. 2007 25 (4 増補45）:S41-5）。増加した血漿LGALS3BP濃度は、SLE患者の特定のコホートにおいても観察されている（Nielsen CT他、Lupus Sci Med. 2014 19; 1(1))。LGALS3BPはそれのプロモーター中にIRF調節要素を有しており（Heinig M他 Nature. 2010 23; 467 (7314): 460-4）、I型IFNによる制御を示し、それとウイルス感染や炎症反応との関連性を説明する。
【０００８】
1) SLEがLNとして現れるかどうかを同定するため；ii) LNとして既に診断された対象において腎臓病態生理学の変化を評価するため；及びiii) 病気進行／退行を評価するために、改善された非侵襲性ツールを臨床医学及び生物医学研究において利用することが緊急であり、いまだ満たされていない要望である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、体液試料中のガラクチン-3結合タンパク質（LGALS3BP)の量を測定するLNを有するか又は発症するリスクがある哺乳類対象において現存の及び進行中の腎臓炎症を評価する組成物及び方法を提供する。本発明はまた、LNに関連した炎症（フレア）を治療するためにデザインされた治療の前及び特に治療後に、体液中のLGALS3BPのレベルを測定することにより、LNにおける腎臓病態生理学のための治療の有効性をモニタリングする方法も提供する。予測マーカーとしてのLGALS3BPの性質と特徴は、LNにおける腎臓病態生理学の早期検出に、又はLNとの関連でLN状態であるLNの腎臓病態生理学の変化の早期検出に本方法を利用できるようにする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
一態様において、本発明は、LN状態における腎臓病態生理学の評価は、LNでの腎臓病態生理学が無症候性であるか、安定であるか、又は進行中であるか（すなわち進行性腎臓病）どうかを決定するために用いることができる。わずか１回のサンプリングとアッセイを用いて、LNにおける進行性又は悪化性腎臓病態生理学としての腎臓状態の評価も提供する。
【００１１】
本発明の一態様では、哺乳類のLN状態における腎臓病態生理学の任意変化の検出方法であって、i) SLEの少なくとも１症状を呈している哺乳類から体液の初回サンプルを採取し、ここで前記体液は尿、血漿及び血清から成る群より選択され（好ましい実施形態では、前記体液が尿である）；ii) 前記初回サンプル中のLGALS3BPのレベルを検出（例えば測定）し（例えばLGALS3BPに対する抗体を使って）；iii) 前記初回サンプルを取得した後一定時間経過した後、哺乳類から少なくとも１回のその後の体液サンプルを取得し；そしてiv) 前記少なくとも１回のその後の体液サンプル中のLGALS3BPのレベルを検出（例えば測定）し；v) 前記少なくとも１回のその後の体液サンプル中のLGALS3BPのレベルを、前記初回サンプル中のLGALS3BPのレベルと比較することに基づいて、前記哺乳類のLN状態における腎臓病態生理学を評価することを含む。一般に、その後のサンプル中の高LGALS3BPレベルは、対象におけるLN状態の悪化性腎臓病態生理学の指標であり、SLEからLNへの進行を示すSLEの少なくとも１症状を表す。一方で、次のサンプル中のLGALS3BPの同レベル又は減少レベルは、LN状態の腎臓病態生理学の改善の指標であり、また、前記対象のSLEがほとんどLNに進行しないという指標である。
【００１２】
一実施形態では、本発明は、哺乳類におけるLNの腎臓病態生理学の治療の有効性をモニタリングする方法であって、i) LNの少なくとも１症状を経験している哺乳類から初回の体液の基準値サンプルを用意又は採取し、ここで前記体液は尿、血漿及び血清から成る群より選択され（好ましい態様では、前記体液が尿である）；ii) 前記初回サンプル中のLGALS3BPのレベルを検出し（例えば測定し）（例えばLGALS3BPに対する抗体を使って）；そしてv) 初回サンプル中のLGALS3BPレベルに対して少なくとも１回のその後のサンプル中のLGALS3BPのレベルを比較することに基づいて、長い時間をかけて同哺乳類における腎臓病態生理学の程度を測定するという工程を含む方法を提供する。典型的には、哺乳類対象がヒトである。１回以上のその後のサンプルが採取される場合、それらは典型的には前記対象から断続的に、そして予め決められた時点で、１又は数日から、１又は数週間、１又は数カ月、１又は数年までに及ぶ期間、取得され準備される。別のサンプリング方法も使用できる。
【００１３】
一実施形態では、哺乳類対象が、サンプル中のLGALS3BPのレベルに寄与しうる別の状態を経験しているかどうか評価して決定することも可能である。そのような状態としては、限定されないが、急性細菌性又はウイルス性感染、急性炎症、別の臓器への急性もしくは慢性損傷、又は癌が挙げられる。そのような別の状態は腎臓に影響しなくてもよく、又は腎臓に損傷を引き起こさない場合もある。しかしながら、そのような状態は尿中に検出されるLGALS3BPの量に寄与するため、そのようなLGALS3BPを、LNの腎臓病態生理学の直接結果として現れるLGALS3BPと鑑別することは困難である。別の状態の幾つかの種類は、腎臓障害に起因するLGALS3BP濃度を圧倒するような高レベルのLGALS3BPを惹起しうる。
【００１４】
様々なタンパク質検出方式が期待され、例としては限定されないが、ELISA（エンザイムリンクドイムノソルベントアッセイ）、SMCイムノアッセイ技術（単一分子カウンティング）及びウエスタンブロットが挙げられる。
【００１５】
ある実施形態では、アッセイ装置、特にELISA装置は、コーティングされたマイクロタイタープレートを含む。一態様では、捕捉試薬（すなわちLGALS3BP抗体）がマイクロタイタープレートのウェルに提供される。このアッセイでは、着目の分析物（例えばLGALS3BP）を含む試験サンプル（例えば血液又は尿）が、固定化捕捉試薬を含有するマイクロタイタープレートのウェルに適用される。分析物が特異的に固定化捕捉因子に結合し、次いで未結合の材料が洗い流され、主としてプレートに結合した分析物−抗体複合体が残る。
この複合体は様々な方法で検出することができ、例えば標識された検出試薬、例えば標識LGALS3BP抗体の使用により検出することができる。マイクロタイタープレート形式の１つの利点は、サンプルプレートの１つ以上の異なるウェルにおいて多数のサンプルを同時に試験できることであり（対照と一緒に）、よって多数のサンプルの高処理量分析を実施することができる点である。
【００１６】
いくつかの実施形態では、競合型ELISAアッセイが用いられる（例えば米国特許第5,958,715号と同第5,484,707号を参照のこと；それらは参考として本明細書中に援用される）。競合型ELISAは定量的又は非定量的であることができる。競合型ELISAでは、マイクロタイタープレートのウェルがまず最初にLGALS3BPの全部又は一断片を含む融合タンパク質でコーティングされる。試験すべきサンプルは、LGALS3BPに特異的である抗体と一緒にプレートに添加される。サンプル中のLGALS3BPが抗体への結合を目当てに固定化ペプチドと競争する。プレートを洗浄し、次いで固定化されたLGALS3BPポリペプチドに結合した抗体が適当な方法を使って（例えば標識又は酵素検出系と反応性の基を含む二次抗体を使って）検出される。シグナルの量はサンプル中に存在するLGALS3BPの量に反比例する（例えば高いシグナルはサンプル中に存在するLGALS3BPの量が低いことを示す）。
【００１７】
ある実施態様では、本発明のイムノアッセイ装置は、液体サンプル中の分析物の存在（又は不在）の視覚識別による判定のための、比較的低費用で、使い捨ての、膜ベースのアッセイの実施を許容する。そういった装置は、一般に独立式のディップスティック（例えば試験紙）又は幾つかの仕分け用外枠を有する装置としてフォーマットされる。典型的には、本発明のイムノアッセイ装置は、約200マイクロリットルほど少量の液体サンプルを使って実施することができ、サンプル中の分析物の検出は（要求はされないが）２〜５分以内に終了することができる。好ましい態様では、そのような試験を実施するのに何も補助機器を必要とせず、前記のような装置はクリニック、研究所及び屋外の場所において容易に使用することができる。
【００１８】
ある態様では、ELISAは免疫クロマトグラフ「サンドイッチ」アッセイである。一般に、サンドイッチ免疫クロマトグラフ法は、アッセイすべき分析物（例えばLGALS3BP）を含む可能性のあるサンプルを、LGALS3BPに特異的な抗体と共に混合することを必要とする。抗体、すなわち検出試薬は、可動性であり、典型的には標識又は別のシグナル試薬、例えば着色したラテックス、コロイド状金属ゾル、又は放射性同位体に連結される。次いでこの混合物は、LGALS3BPを認識する固定化抗体（すなわち捕捉抗体又は捕捉試薬）のバンド又はゾーンを含有するクロマトグラフ媒体に供される。クロマトグラフ媒体はしばしば、ディップスティックに似た細長い片（ストリップ）の形である。LGALS3BPと検出試薬の複合体がクロマトグラフ媒体上の固定化捕捉抗体のゾーンに到達すると、結合が起こり、検出試薬複合体がそのゾーンに局在化される。これは、アッセイしようとする分子の存在を示す。この技術を利用して、定量的又は半定量的結果を得ることができる。試験片上で実行されるサンドイッチイムノアッセイの例は、米国特許第4,168,146号と同第4,366,241号明細書に記載されており、その各々が参考として本明細書に援用される。
【００１９】
いくつかの実施形態では、着目のタンパク質を検出するのに「ウエスタンブロット」方式が用いられる。ウエスタンブロットとは、ニトロセルロースのような支持体又は膜上に固定化されたタンパク質（又はポリペプチド）の分析を言う。タンパク質をアクリルアミドゲル上に流してタンパク質を分離し、続いてタンパク質をゲルから固体支持体、例えばニトロセルロース又はナイロン膜に移行させる。固定化されたタンパク質は次いで着目の抗原に対する反応性をもつ抗体に暴露される。抗体の結合は、放射性標識抗体の使用を含む様々な方法により検出することができる。
【００２０】
本発明の別の実施形態では、哺乳類対象から得られたサンプルを使って腎臓病理学を診断しそして非侵襲的にモニタリングするのに有用な結果を生じる方法が提供される。該方法は、該サンプルに関連付けられたデータセットを取得し、ここで該データセットは、尿タンパク対クレアチニン比（uPCR）として表される尿クレアチニン及びタンパク尿からなる群より選択されたマーカーのタンパク発現レベルを含み；そして該データを利用して腎臓病理学を診断しモニタリングするのに有用な結果を生じる分析プロセスに前記データセットを入力することを含む。
【００２１】
ある実施形態では、ループス腎炎の定義は、ループス腎炎、特発性免疫複合体型糸球体腎炎、糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎のうちの１つ以上を含む。
ある実施形態では、本発明の診断面は、侵襲性の腎生検及び／又は治療レジメンの変更を考えるべき時により良い情報を与えることができる。診断用の腎生検は、ループス患者が新たな腎炎の臨床的証拠（エビデンス）、例えば本発明の診断的態様により提供されるようなLGALS3BPの増加レベルの検出、を呈する時に、治療の指針となるために実施されるであろう。
【００２２】
一実施形態では、ループス腎炎の腎臓分類法は次の通りである：
クラスＩ疾患（最小メサンギウム糸球体腎炎）は、光学顕微鏡下で正常な外観を有するが、電子顕微鏡下でメサンギウム沈着を認める。この病期では尿検査は正常である。
クラスII疾患（メサンギウム増殖性糸球体腎炎）は、メサンギウム細胞過多及び基質肥大により指摘される。タンパク尿を伴う又は伴わない顕微鏡的血尿が認められる時がある。この病期では、高血圧、ネフローゼ症候群、及び急性腎機能不全は非常にまれである。
【００２３】
クラスIII疾患（巣状糸球体腎炎）は、糸球体の50％未満を冒す硬化病変により指摘され、これは分節性又は全節性、急性又は慢性であることができ、血管内皮の又は血管外の増殖性病変を伴う。電子顕微鏡下では、内皮細胞下沈着が認められ、幾分のメサンギウム変化が存在する場合がある。免疫蛍光は、IgG、IgA、IgM、C3及びC1qについて陽性を示す（免疫複合体沈着の指標）。臨床所見で、血尿及びタンパク尿が認められ、ネフローゼ症候群、高血圧及び血中クレアチニンの上昇を伴うか又は伴わない場合がある。病理学検体においてびまん性増殖性ループス腎炎が認められる。
クラスIV疾患（びまん性増殖性糸球体腎炎）は最も重篤で最も一般的な亜型である。糸球体の50％以上が冒される。病変は分節性又は全節性、活動性又は慢性であることができ、血管内皮の又は血管外皮の増殖性病変を伴う。電子顕微鏡下、内皮下沈着が認められ、幾分のメサンギウム変化が存在する場合がある。臨床所見で、血尿及びタンパク尿があり、しばしばネフローゼ症候群、高血圧、低補体血、抗ds-DNA力価の上昇、及び血清クレアチニン値の上昇が認められる。
【００２４】
クラスＶ疾患（膜性糸球体腎炎）は、糸球体毛細管壁のびまん性肥厚（分節性又は全節性）により特徴づけられ、びまん性膜肥厚を伴い、電子顕微鏡下で内皮下沈着が認められる。臨床所見では、Ｖ期はネフローゼ症候群の徴候を示す。顕微鏡的血尿と高血圧もみられる場合がある。Ｖ期は腎臓血栓又は肺塞栓などの血栓合併症をきたすこともある。
【００２５】
クラスVI又は進行した硬化性ループス腎炎。糸球体の90％以上を冒す全節性硬化症により表される。前炎症性障害の回復を示す。急性糸球体腎炎は通常は存在しない。この病期は、ゆっくり進行する腎機能不全により特徴づけられ、比較的淡泊な尿沈査を伴う。免疫療法に対する応答は一般に乏しい。毛細管内皮内への尿細管網様封入もまた、ループス腎炎の特徴であり、電子顕微鏡下で全病期において認められる。しかしながら、それはHIV感染のような他の状態でも存在するので、診断とはならない。それは慢性的なインターフェロン暴露のためであると思われる。
【００２６】
本出願に与えられるデータにおいて報告されるように、特に断らない限り、LGALS3BPはng/mLで測定される。LGALS3BP／クレアチニン比は、ng LGALS3BP／mgクレアチニン／mL尿である。
【００２７】
いくつかの実施形態では、ループス腎炎LNの腎臓病態生理学は、次の１以上を含む：メサンギウム免疫複合体沈着の存在、内皮下の免疫沈着の存在、上皮下の免疫沈着の存在、尿細管間質線維症、尿細管間質硬化症、硬化症、半月体糸球体腎炎（半月体病変又は管外増殖の存在）、管外増殖、管内増殖、増殖性糸球体腎炎、巣状糸球体症（又は巣状糸球体腎炎）、巣状分節性糸球体症（又は巣状分節性糸球体腎炎）、分節性糸球体症（又は分節性糸球体腎炎）、膜性糸球体症、糸球体基底膜の異常（例えば肥厚）、糸球体硬化症（又は糸球体硬化）、メサンギウム過形成（又はメサンギウム増殖）、メサンギウム基質の拡張、メサンギウム線維症。
【００２８】
いくつかの実施形態では、分析プロセスが線形判別分析モデルである。更に、ある実施形態では、分析プロセスが予測モデルの使用を含むことができる。ある実施形態では、分析プロセスが、取得したデータセットを参照データセットと比較することを含む。
【００２９】
いくつかの実施形態では、参照データセットが、１以上の健常対照の被験対象から得られたタンパク質発現レベルを含む。別の実施形態では、該方法は更に、参照データセットに対する取得したデータセットの類似性の統計的尺度を得ることを含む。
【００３０】
いくつかの実施形態では、該方法が更に、LNの少なくとも１つの症状を示している対象において、診断、病期、予後、腎臓炎症レベルに前記分類を利用すること、進行程度を評価すること、治療応答を経過観察すること、腎間質性炎症（INF）の発症を推測すること、又は腎間質性炎症（INF）の不安定な兆候から安定な兆候を識別することを含む。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】図１は、低又は高IFN-αシグニチャーを有するHC及びLN患者から単離されたPBMC中のLGALS3BP mRNA発現レベルを示す。
【００３２】
【図２Ａ】図２Ａは、指摘の刺激剤で６時間活性化されインビトロで分化した初代ヒトマクロファージから抽出したRNAを使ったqPCRにより、炎症刺激（限定されないがIFN-αを含む）によりLGALS3BPが誘導されることを示すデータを与える。サンプル間の発現は、ハウスキーピング遺伝子としてHPRT1を用いて正規化した。
【００３３】
【図２Ｂ】図２Ｂは、指摘の刺激剤で20時間活性化されインビトロで分化した初代ヒトマクロファージの上清中でELSAによって測定された炎症性刺激（限定されないがIFN-αを含む）によりLGALS3BPが誘導されることを示す追加のデータを示す。
【００３４】
【図３】図３は、血清、尿及び血漿中のLGALS3BPタンパクレベルを示す。LGALS3BPの血漿及び尿中レベルが、健常対照ドナー、SLE患者及びLN患者においてELISAにより測定された。尿中LGALS3BPタンパクレベルは、SLE患者又は健常対照に対比してLN患者で有意に高かった（P＜0.0001、Tukey事後検定を伴う一元配置分散分析（ANOVA）））。この相違は、同一対象からの血清においては検出されない。血漿レベルと尿レベルの間には全く線形相関は認められない。
【００３５】
【図４Ａ】図４Ａは、HC患者とLN患者からの腎組織切片の糸球体及び尿細管間質におけるLGALS3BPの遺伝子発現レベルを示す。欧州腎臓cDNAバンク（European Renal cDNA Bank）からの合計46サンプル（ｎ＝14 HC＆32 LN）を記載の通りに処理し、マイクロアレイ分析に使用した（Berthier他、JI 2012）。生検切片を、糸球体及び尿細管間質区画へと手法で顕微解剖し、Human Genome U133A Affymetrix GeneChipアレイを用いて遺伝子発現プロファイリングを行った。ここで、LGALS3BPの遺伝子発現レベルは、糸球体（ｐ＝9.221e-12）と尿細管間質（ｐ＝1.511e-4）の両方でHCに比較して有意に高かった。
【００３６】
【図４Ｂ】図４Ｂは、HC患者とLN患者からの腎生検の糸球体及び尿細管間質におけるCCL2（MCP-1）の遺伝子発現レベルを示す。欧州腎臓cDNAバンク（European Renal cDNA Bank）からの合計46サンプル（ｎ＝14 HC＆32 LN）を記載の通りに処理し、マイクロアレイ分析に使用した（Berthier他、JI 2012）。生検切片を、糸球体及び尿細管間質区画へと手法で顕微解剖し、Human Genome U133A Affymetrix GeneChipアレイを用いて遺伝子発現プロファイリングを行った。ここで、CCL2（MCP-1）の遺伝子発現レベルは、糸球体と尿細管間質の両方においてHCとLNサンプルの間で同等でなかった。
【００３７】
【図４Ｃ】図４Ｃは、HC患者とLN患者からの腎生検の糸球体及び尿細管間質におけるTNFSF12の遺伝子発現レベルを示す。欧州腎臓cDNAバンク（European Renal cDNA Bank）からの合計46サンプル（ｎ＝14 HC＆32 LN）を記載の通りに処理し、マイクロアレイ分析に使用した（Berthier他、JI 2012）。生検切片を、糸球体及び尿細管間質区画へと手法で顕微解剖し、Human Genome U133A Affymetrix GeneChipアレイを用いて遺伝子発現プロファイリングを行った。ここで、TNFSF12遺伝子発現レベルは、LNの糸球体で有意に高く（ｐ＝0.017）、尿細管間質では有意に低かった（ｐ＝9.08e-5）。
【００３８】
【図４Ｄ】図４Ｄは、健常志願者（HC）、尿細管間質性腎炎（TIN）を有する又はを有さないLN患者、真性糖尿病（DM）患者及びIgA腎症（IgAN）患者からの腎生検におけるガレクチン３結合タンパク質発現を示す。ガレクチン３結合タンパク質（明るい領域）を抗体で染色し、蛍光顕微鏡により分析した。
【００３９】
【図５】図５は、BXSB-Yaa LNマウスモデルにおけるLGALS3BP mRNA発現を示す。罹患マウスを20週齢で安楽死させ、腎臓LGALS3BP発現をNanoStringによって分析し、HPRT1発現に対して正規化した。対照マウスは発症前の若齢（９週齢）のBXSX-Yaaマウスである。腎臓損傷を組織学により評価した。
【００４０】
【図６Ａ】図６Ａは、健常対照（HC）、ループス腎炎（LN）、及び全身性エリテマトーデス（SLE）のドナーの尿における尿クレアチニン比に対して正規化した総LGALS3BPを示す。
【００４１】
【図６Ｂ】図６Ｂは、健常対照（HC）、ループス腎炎（LN）、及び全身性エリテマトーデス（SLE）ドナーの尿における総タンパク対クレアチニン比を示す。
【００４２】
【図６Ｃ】図６Ｃは、健常対照（HC）、ループス腎炎（LN）、及び全身性エリテマトーデス（SLE）ドナーの尿におけるクレアチニンに対する尿アルブミンの比を示す。
【００４３】
【図７Ａ】図７Ａは、尿検査測定値の相関を示し、ここで、アルブミン対クレアチニン比及び総タンパク対クレアチニン比は、0.95の相関係数で互いに高い相関性があることを示した。
【００４４】
【図７Ｂ】図７Ｂは、尿検査測定値の相関を示し、ここで、LGALS3BP対クレアチニン比は、総タンパク対クレアチニン比と正の相関がある（Ｒ＝0.494）。
【００４５】
【図７Ｃ】図７Ｃは、尿検査測定値の相関を示し、ここで、LGALS3BP対クレアチニン比は、アルブミン対クレアチニン比と正の相関がある（Ｒ＝0.484）。
【００４６】
【図８Ａ】図８Ａは、複数回の来院にわたる患者の尿タンパク測定値の変化を示す。全ての値はクレアチニンレベルに対して正規化されたものとして与えられる。各点はサンプルを表し、各線はドナーを表す。線の色は、LNサンプルが紫色、SLEサンプルがシアン色、HCサンプルが濃い灰色の罹患群を表す。
【００４７】
【図８Ｂ】図８Ｂは、複数回の来院にわたる患者のアルブミン測定値の変化を示す。全ての値はクレアチニンレベルに対して正規化されたものとして与えられる。各点はサンプルを表し、各線はドナーを表す。線の色は、LNサンプルが紫色、SLEサンプルが青緑（シアン）色、HCサンプルが濃灰色の罹患群を表す。
【００４８】
【図８Ｃ】図８Ｃは、複数回の来院にわたる患者のLGALS3BP測定値の変化を示す。全ての値はクレアチニンレベルに対して正規化されたものとして与えられる。各点はサンプルを表し、各線はドナーを表す。線の色は、LNサンプルが紫色、SLEサンプルが青緑（シアン）色、HCサンプルが濃灰色の罹患群を表す。
【００４９】
【図９】図９は、選択された抗LGALS3BPモノクローナル抗体の結合曲線を示す。抗体ファージライブラリースクリーニングにおいて同定されたモノクローナル抗体の連続希釈液を、全長組換えヒトLGALS3BPがコーティングされたマイクロタイタープレートを用いたELISAにより、結合について試験した。プレートに固定されたLGALS3BPに結合するモノクローナル抗体を、西洋ワサビペルオキシダーゼ（HRP）結合二次抗Ig抗体を用いて検出した。HRP基質を用いて結合を顕示化し、そして450 nmで光学濃度を測定した。
【００５０】
【図１０Ａ】図１０Ａと図１０Ｂは、サンドイッチELISA用の抗LGALS3BPモノクローナル抗体ペアの組み合わせ表を示す。100 ng/mLの組換えLGALS3BP（図１０Ｂ）を被分析物として使用し、緩衝液のみの対照と比較した（図１０Ａ）。抗体をビーズに接合し、マルチプレックスLuminexアッセイで試験し、最良のペアを決定した。各抗体を異なるチャネルで検出することにより、同じ環境でそれらのペアの評価ができるようにした。値はLuminexリーダーからの任意単位である。縦列は捕捉抗体であり、横列は検出抗体である。
【００５１】
【図１０Ｂ】図１０Ａと図１０Ｂは、サンドイッチELISA用の抗LGALS3BPモノクローナル抗体ペアの組み合わせ表を示す。100 ng/mLの組換えLGALS3BP（図１０Ｂ）を被分析物として使用し、緩衝液のみの対照と比較した（図１０Ａ）。抗体をビーズに接合し、マルチプレックスLuminexアッセイで試験し、最良のペアを決定した。各抗体を異なるチャネルで検出することにより、同じ環境でそれらのペアの評価ができるようにした。値はLuminexリーダーからの任意単位である。縦列は捕捉抗体であり、横列は検出抗体である。
【００５２】
【図１１Ａ】図１１Ａは、ヒト尿試料中のLGALS3BPを捕捉及び検出するためのサンドイッチELISAにおける使用について評価されたモノクローナル抗体ペアを示す。グラフはLuminex対合実験から誘導される。「捕捉用mAb−検出用mAb」（すなわち、mAb1−mAb9）が示されている。LGALS3BP濃度は、健常対照（健常）、ループス腎炎患者（LN）及び腎外全身性エリテマトーデス患者（SLE）からの尿サンプルについてng/mLで与えられる。
【００５３】
【図１１Ｂ】図１１Ｂは、ヒト尿試料中のLGALS3BPを捕捉及び検出するためのサンドイッチELISAにおける使用について評価されたモノクローナル抗体ペアを示す。グラフはLuminex対合実験から誘導される。「捕捉用mAb−検出用mAb」（すなわち、mAb3−mAb11）が示されている。LGALS3BP濃度は、健常対照（健常）、ループス腎炎患者（LN）及び腎外全身性エリテマトーデス患者（SLE）からの尿サンプルについてng/mLで与えられる。
【００５４】
【図１１Ｃ】図１１Ｃは、ヒト尿試料中のLGALS3BPを捕捉及び検出するためのサンドイッチELISAにおける使用について評価されたモノクローナル抗体ペアを示す。グラフはLuminex対合実験から誘導される。「捕捉用mAb−検出用mAb」（すなわち、mAb3−mAb22）が示されている。LGALS3BP濃度は、健常対照（健常）、ループス腎炎患者（LN）及び腎外全身性エリテマトーデス患者（SLE）からの尿サンプルについてng/mLで与えられる。
【００５５】
【図１１Ｄ】図１１Ｄは、ヒト尿試料中のLGALS3BPを捕捉及び検出するためのサンドイッチELISAにおける使用について評価されたモノクローナル抗体ペアを示す。グラフはLuminex対合実験から誘導される。「捕捉用mAb−検出用mAb」（すなわち、mAb114−mAb116）が示されている。LGALS3BP濃度は、健常対照（健常）、ループス腎炎患者（LN）及び腎外全身性エリテマトーデス患者（SLE）からの尿サンプルについてng/mLで与えられる。
【００５６】
【図１２Ａ】図１２Ａは、ヒト尿試料中のLGALS3BPを捕捉及び検出するためのサンドイッチELISAにおける使用について評価されたモノクローナル抗体ペアを示す。グラフはLuminex対合実験から誘導される。「捕捉用mAb−検出用mAb」（すなわち、mAb103−mAb116）が示されている。LGALS3BP濃度は、健常対照（健常）、ループス腎炎患者（LN）及び腎外全身性エリテマトーデス患者（SLE）からの尿サンプルについてng/mLで与えられる。
【００５７】
【図１２Ｂ】図１２Ｂは、ヒト尿試料中のLGALS3BPを捕捉及び検出するためのサンドイッチELISAにおける使用について評価されたモノクローナル抗体ペアを示す。グラフはLuminex対合実験から誘導される。「捕捉用mAb−検出用mAb」（すなわち、mAb109−mAb116）が示されている。LGALS3BP濃度は、健常対照（健常）、ループス腎炎患者（LN）及び腎外全身性エリテマトーデス患者（SLE）からの尿サンプルについてng/mLで与えられる。
【００５８】
【図１２Ｃ】図１２Ｃは、ヒト尿試料中のLGALS3BPを捕捉及び検出するためのサンドイッチELISAにおける使用について評価されたモノクローナル抗体ペアを示す。グラフはLuminex対合実験から誘導される。「捕捉用mAb−検出用mAb」（すなわち、mAb110−mAb116）が示されている。LGALS3BP濃度は、健常対照（健常）、ループス腎炎患者（LN）及び腎外全身性エリテマトーデス患者（SLE）からの尿サンプルについてng/mLで与えられる。
【００５９】
【図１２Ｄ】図１２Ｄは、ヒト尿試料中のLGALS3BPを捕捉及び検出するためのサンドイッチELISAにおける使用について評価されたモノクローナル抗体ペアを示す。グラフはLuminex対合実験から誘導される。「捕捉用mAb−検出用mAb」（すなわち、mAb112−mAb116）が示されている。LGALS3BP濃度は、健常対照（健常）、ループス腎炎患者（LN）及び腎外全身性エリテマトーデス患者（SLE）からの尿サンプルについてng/mLで与えられる。
【００６０】
【図１３Ａ】図１２Ｂは、ヒト尿試料中のLGALS3BPを捕捉及び検出するためのサンドイッチELISAにおける使用について評価されたモノクローナル抗体ペアを示す。グラフはLuminex対合実験から誘導される。「捕捉用mAb−検出用mAb」（すなわち、mAb105−mAb116）が示されている。LGALS3BP濃度は、健常対照（健常）、ループス腎炎患者（LN）及び腎外全身性エリテマトーデス患者（SLE）からの尿サンプルについてng/mLで与えられる。
【００６１】
【図１３Ｂ】図１３Ｂは、ヒト尿試料中のLGALS3BPを捕捉及び検出するためのサンドイッチELISAにおける使用について評価されたモノクローナル抗体ペアを示す。グラフはLuminex対合実験から誘導される。「捕捉用mAb−検出用mAb」（すなわち、mAb29−mAb116）が示されている。LGALS3BP濃度は、健常対照（健常）、ループス腎炎患者（LN）及び腎外全身性エリテマトーデス患者（SLE）からの尿サンプルについてng/mLで与えられる。
【００６２】
【図１３Ｃ】図１３Ｃは、ヒト尿試料中のLGALS3BPを捕捉及び検出するためのサンドイッチELISAにおける使用について評価されたモノクローナル抗体ペアを示す。グラフはLuminex対合実験から誘導される。「捕捉用mAb−検出用mAb」（すなわち、mAb113−mAb116）が示されている。LGALS3BP濃度は、健常対照（健常）、ループス腎炎患者（LN）及び腎外全身性エリテマトーデス患者（SLE）からの尿サンプルについてng/mLで与えられる。
【００６３】
【図１３Ｄ】図１２Ｂは、ヒト尿試料中のLGALS3BPを捕捉及び検出するためのサンドイッチELISAにおける使用について評価されたモノクローナル抗体ペアを示す。グラフはLuminex対合実験から誘導される。「捕捉用mAb−検出用mAb」（すなわち、mAb102−mAb103）が示されている。LGALS3BP濃度は、健常対照（健常）、ループス腎炎患者（LN）及び腎外全身性エリテマトーデス患者（SLE）からの尿サンプルについてng/mLで与えられる。
【００６４】
【図１４Ａ】図１４Ａは、ヒト尿試料中のLGALS3BPを捕捉及び検出するためのサンドイッチELISAにおける使用について評価されたモノクローナル抗体ペアを示す。グラフはLuminex対合実験から誘導される。「捕捉用mAb−検出用mAb」（すなわち、mAb103−mAb103）が示されている。LGALS3BP濃度は、健常対照（健常）、ループス腎炎患者（LN）及び腎外全身性エリテマトーデス患者（SLE）からの尿サンプルについてng/mLで与えられる。
【００６５】
【図１４Ｂ】図１４Ｂは、ヒト尿試料中のLGALS3BPを捕捉及び検出するためのサンドイッチELISAにおける使用について評価されたモノクローナル抗体ペアを示す。グラフはLuminex対合実験から誘導される。「捕捉用mAb−検出用mAb」（すなわち、mAb109−mAb103）が示されている。LGALS3BP濃度は、健常対照（健常）、ループス腎炎患者（LN）及び腎外全身性エリテマトーデス患者（SLE）からの尿サンプルについてng/mLで与えられる。
【００６６】
【図１４Ｃ】図１４Ｃは、ヒト尿試料中のLGALS3BPを捕捉及び検出するためのサンドイッチELISAにおける使用について評価されたモノクローナル抗体ペアを示す。グラフはLuminex対合実験から誘導される。「捕捉用mAb−検出用mAb」（すなわち、mAb114−mAb103）が示されている。LGALS3BP濃度は、健常対照（健常）、ループス腎炎患者（LN）及び腎外全身性エリテマトーデス患者（SLE）からの尿サンプルについてng/mLで与えられる。
【００６７】
【図１４Ｄ】図１４Ｄは、ヒト尿試料中のLGALS3BPを捕捉及び検出するためのサンドイッチELISAにおける使用について評価されたモノクローナル抗体ペアを示す。グラフはLuminex対合実験から誘導される。「捕捉用mAb−検出用mAb」（すなわち、mAb110−mAb103）が示されている。LGALS3BP濃度は、健常対照（健常）、ループス腎炎患者（LN）及び腎外全身性エリテマトーデス患者（SLE）からの尿サンプルについてng/mLで与えられる。
【００６８】
【図１５Ａ】図１５Ａは、ヒト尿試料中のLGALS3BPを捕捉及び検出するためのサンドイッチELISAにおける使用について評価されたモノクローナル抗体ペアを示す。グラフはLuminex対合実験から誘導される。「捕捉用mAb−検出用mAb」（すなわち、mAb116−mAb103）が示されている。LGALS3BP濃度は、健常対照（健常）、ループス腎炎患者（LN）及び腎外全身性エリテマトーデス患者（SLE）からの尿サンプルについてng/mLで与えられる。
【００６９】
【図１５Ｂ】図１５Ｂは、ヒト尿試料中のLGALS3BPを捕捉及び検出するためのサンドイッチELISAにおける使用について評価されたモノクローナル抗体ペアを示す。グラフはLuminex対合実験から誘導される。「捕捉用mAb−検出用mAb」（すなわち、mAb112−mAb103）が示されている。LGALS3BP濃度は、健常対照（健常）、ループス腎炎患者（LN）及び腎外全身性エリテマトーデス患者（SLE）からの尿サンプルについてng/mLで与えられる。
【００７０】
【図１５Ｃ】図１５Ｃは、ヒト尿試料中のLGALS3BPを捕捉及び検出するためのサンドイッチELISAにおける使用について評価されたモノクローナル抗体ペアを示す。グラフはLuminex対合実験から誘導される。「捕捉用mAb−検出用mAb」（すなわち、mAb105−mAb103）が示されている。LGALS3BP濃度は、健常対照（健常）、ループス腎炎患者（LN）及び腎外全身性エリテマトーデス患者（SLE）からの尿サンプルについてng/mLで与えられる。
【００７１】
【図１５Ｄ】図１５Ｄは、ヒト尿試料中のLGALS3BPを捕捉及び検出するためのサンドイッチELISAにおける使用について評価されたモノクローナル抗体ペアを示す。グラフはLuminex対合実験から誘導される。「捕捉用mAb−検出用mAb」（すなわち、mAb25−mAb103）が示されている。LGALS3BP濃度は、健常対照（健常）、ループス腎炎患者（LN）及び腎外全身性エリテマトーデス患者（SLE）からの尿サンプルについてng/mLで与えられる。
【００７２】
【図１６Ａ】図１６Ａは、ヒト尿試料中のLGALS3BPを捕捉及び検出するためのサンドイッチELISAにおける使用について評価されたモノクローナル抗体ペアを示す。グラフはLuminex対合実験から誘導される。「捕捉用mAb−検出用mAb」（すなわち、mAb26−mAb103）が示されている。LGALS3BP濃度は、健常対照（健常）、ループス腎炎患者（LN）及び腎外全身性エリテマトーデス患者（SLE）からの尿サンプルについてng/mLで与えられる。
【００７３】
【図１６Ｂ】図１６Ｂは、ヒト尿試料中のLGALS3BPを捕捉及び検出するためのサンドイッチELISAにおける使用について評価されたモノクローナル抗体ペアを示す。グラフはLuminex対合実験から誘導される。「捕捉用mAb−検出用mAb」（すなわち、mAb29−mAb103）が示されている。LGALS3BP濃度は、健常対照（健常）、ループス腎炎患者（LN）及び腎外全身性エリテマトーデス患者（SLE）からの尿サンプルについてng/mLで与えられる。
【００７４】
【図１６Ｃ】図１６Ｃは、ヒト尿試料中のLGALS3BPを捕捉及び検出するためのサンドイッチELISAにおける使用について評価されたモノクローナル抗体ペアを示す。グラフはLuminex対合実験から誘導される。「捕捉用mAb−検出用mAb」（すなわち、mAb113−mAb103）が示されている。LGALS3BP濃度は、健常対照（健常）、ループス腎炎患者（LN）及び腎外全身性エリテマトーデス患者（SLE）からの尿サンプルについてng/mLで与えられる。
【００７５】
【図１７】図１７は、多様な保存条件下でLGALS3BPが尿中で安定であることを示すデータを提供する。３名のLN患者からの尿試料（−80℃で保存）を解凍し、様々な条件下で保存した：凍結融解の繰り返し、室温で１時間もしくは18時間、37℃もしくは４℃もしくは−20℃で一晩。尿試料中のLGALS3BPレベルをサンドイッチELISAにより測定した。３名のLN患者からの技術的二重複製物の平均＋SEM値が示される。
【００７６】
【図１８】図１８は、異なる患者コホート由来のLN患者において、尿中LGALS3BP濃度（ng/mL）が有意に上昇することを示す。LGALS3BPは、示された対照と患者からの尿試料において当方のプロトタイプキットを用いて測定された。LN患者は、米国の異なる２箇所の場所からの２つの異なるコホートから得られた。LGALS3BPレベルは、他の全てのグループと比較して、その２つのLNコホートで有意に高い（P＜0.0001、Tukeyの多重比較検定による一元配置分散分析(ANOVA)）。灰色の領域は健常対照試料の範囲を表す。
【００７７】
【図１９】図１９は、HC、SLE、LN及びIgAＮ由来の尿試料中のLGALS3BP対クレアチニン比を示す。
【００７８】
【図２０】図２０は、尿タンパク対クレアチニン比（UPCR）がｙ軸に示される測定基準であるように再フォーマットされた、図１９の同データを示す。
【００７９】
【図２１Ａ】LGALS3BPは、CCL2（MCP-1）よりも、健常対照と腎外SLE患者からのLN患者のより良好な鑑別を示す。示された群からのサンプル中の尿LGALS3BPを測定し、そして尿クレアチニンレベルに対して正規化した。**P＜0.01、****P＜0.00001、Tukeyの多重比較検定による一元配置分散分析（ANOVA）。
【００８０】
【図２１Ｂ】LGALS3BPは、CCL2（MCP-1）よりも、腎外SLE患者と健常対照からのLN患者のより良好な鑑別を示す。示された群からのサンプル中の尿CCL2（MCP-1）を測定し、そして尿クレアチニンレベルに対して正規化した。**P＜0.01、****P＜0.00001、Tukeyの多重比較検定による一元配置分散分析（ANOVA）。
【００８１】
【図２２Ａ】図２２Ａと図２２Ｂは、尿中LGALS3BPの検出が、CCL2（MCP-1）よりも、LN検出についてより高い感度と特異性を与えることを確証するデータを記載する。健常対照（HC）又は腎外SLE（SLE）からLNを鑑別するための尿LGALS3BP／クレアチニン（Cr）比及びCCL2(MCP-1)／クレアチニン比の受信者動作特性（ROC）曲線。
【００８２】
【図２２Ｂ】図２２Ａと図２２Ｂは、尿中LGALS3BPの検出が、CCL2（MCP-1）よりも、LN検出についてより高い感度と特異性を与えることを確証するデータを記載する。健常対照（HC）又は腎外SLE（SLE）からLNを鑑別するための尿LGALS3BP／クレアチニン（Cr）比及びCCL2(MCP-1)／クレアチニン比の受信者動作特性（ROC）曲線。
【００８３】
【図２３Ａ】図２３Ａは、尿検査測定値の相関を示し、ここで、アルブミン対クレアチニン比及び総タンパク対クレアチニン比は、0.965の相関係数で互いに近接な相関があった。
【００８４】
【図２３Ｂ】図２３Ｂは、尿分析測定値（本出願の実験の項目に示される診断キットに関連した試薬を使用）の相関を示し、ここで、LGALS3BP対クレアチニン比は、総タンパク対クレアチニン比と弱い正の相関を示す（ｒ＝0.494）。
【００８５】
【図２４】図２４は、尿分析測定値（本出願の実験の項目に示される診断キットに関連した試薬を使用）の相関を示し、ここで、LGALS3BP対クレアチニン比は、アルブミン対クレアチニン比と弱い正の相関を示す（ｒ＝0.484）。
【００８６】
【図２５】図２５は、異なる腎臓病群における尿LGALS3BP／クレアチニン比を示すデータを記載する。グラフは、活動性（フレア）の場合のLNにおいて優先的にLGALS3BPの上昇レベルを示す。これは、uG3BP発現における疾患特異的パターン、及びLNの状況下での活動性炎症により導き出される傾向を示す。
【００８７】
【図２６Ａ】図２６Ａは、異なる腎臓病群における尿LGALS3BP／クレアチニン比の平均を示す。尿LGALS3BP濃度（ng/mL）をクレアチニン濃度（mg/mL）に対して正規化し、自然対数変換し、そして異常値をデータ分析のために除外した。ANOVA及びウィルコクソン（Wilcoxon）のノンパラメトリック多重比較を含むJMP pro v12を用いた。
【００８８】
【図２６Ｂ】図２６Ｂは、比較群間の有意なｐ値を示す。尿LGALS3BPデータをクレアチニン濃度に対して正規化し、自然対数変換し、そして異常値をデータ分析のために除外した。ANOVA及びウィルコクソン(Wilcoxon)のノンパラメトリック多重比較を含むJMP pro v12を用いた。
【００８９】
【図２７Ａ】図２７Ａ、図２７Ｂ及び図２７Ｃは、疾病状態に関係なく、LNにおいて、尿LGALS3BP／クレアチニン比と尿タンパク／クレアチニン比との間に弱い正の相関があることを示す（全て、活動性又は寛解期）。
【００９０】
【図２７Ｂ】図２７Ａ、図２７Ｂ及び図２７Ｃは、疾病状態に関係なく、LNにおいて、尿LGALS3BP／クレアチニン比と尿タンパク／クレアチニン比との間に弱い正の相関があることを示す（全て、活動性又は寛解期）。
【００９１】
【図２７Ｃ】図２７Ａ、図２７Ｂ及び図２７Ｃは、疾病状態に関係なく、LNにおいて、尿LGALS3BP／クレアチニン比と尿タンパク／クレアチニン比との間に弱い正の相関があることを示す（全て、活動性又は寛解期）。
【００９２】
【図２８Ａ】図２８Ａは、国際腎臓病学会（ISN）／腎臓病理学会（RPS）によるLN分類で活動性疾患と寛解期患者における尿タンパク／クレアチニン比（UPCR）を示す。UPCRは腎障害に関連があり、ISN/RPSのクラスに関係なく、活動性疾患では常に高い値を示す。
【００９３】
【図２８Ｂ】図２８Ｂは、国際腎臓病学会（ISN）／腎臓病理学会（RPS）によるLN分類で活動性疾患と寛解期患者における尿LGALS3BP／クレアチニン比を示す。活動性疾患では、尿LGALS3BP／クレアチニンレベルはクラスII〜IVの寛解期と比較して上昇するが、クラスＶでは上昇しない。クラスII〜IVは炎症性型のLNであり、クラスＶはあまり炎症性でなく、尿LGALS3BPが腎臓の活動性炎症の読み出された情報（readout)であることを更に支持する。
【００９４】
【図２９】図２９は、LN患者における尿LGALS3BP／クレアチニンレベルの経時的変動を示す。LN患者の尿を毎月検査した。
【００９５】
【図３０】図３０は、LN特異的治療の開始が尿LGALS3BPレベルを経時的にどのように低下させるかを示す。具体的には、新たに診断されたLN患者にユーロループス（Eurolupus）治療（特異的）を受けてもらい、尿LGALS3BPレベルを経時的に追跡した。
【発明を実施するための形態】
【００９６】
本明細書を通して、特に断らない限り、又は状況が別のものを要求しない限り、単一の工程、組成物、複数工程の群又は複数組成物の群は、それらの工程、組成物、工程の群又は組成物の群の１つ又は複数（すなわち１以上）を含むと解釈すべきである。よって、本明細書中で用いる場合、単数形の「a」、「an」及び「the」は、状況が明らかに別の物を指摘しない限り、複数の態様も包含する。一例として、「一つの（“a”）」への言及は１個に加えて２又はそれ以上を含み、「その（“the”）」への言及は１個に加えて２又はそれ以上を含むという風に。
【００９７】
本開示の各実施形態は、特に断らない限り、どんな他の実施形態にも変更すべきところは変更して適用することができる。
【００９８】
当業者は、本開示が具体的に記載されたもの以外の変更と改変を受けることができることを理解するだろう。本開示が全てのそのような変更と改変を含むことを理解すべきである。本開示は、本明細書中に個別にもしくはまとめて言及又は指摘された、工程、特徴、組成物及び化合物の全て、並びに前記工程又は特徴の任意のもしくは全ての組み合わせ又はいずれか２つ以上を包含する。
【００９９】
本開示は、本明細書中に記載の特定実施形態により範囲が限定されるものではなく、それは例示の目的にのみ意図されるものである。機能的に等価の生成物、組成物及び方法は、本明細書に記載のように明らかに本開示の範囲内に含まれる。
【０１００】
本開示は、異なって指摘されない限り、過度の実験を行うことなく、分子生物学、微生物学、ウイルス学、組換えDNA技術、液相ペプチド合成、固相ペプチド合成及び免疫学の従来技術を使って実施される。そのような手法は例えば、Sambrook, Fritsch & Maniatis, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratories, New York, 第二版(1989), Vol. I, II＆IIIの全巻; Benny K. C. Lo, “Antibody Engineering: Methods and Protocols”, (2004) Humana Press, Vol. 248; DNA Cloning: A Practical Approach, Vols. I ＆ II (D. N. Glover編, 1985), IRL Press, Oxford, 全文; Oligonucleotide Synthesis: A Practical Approach (M. J. Gait編, 1984) IRL Press, Oxford, 全文, 特にGait著の1-22頁、Atkinson他著の35-81頁、Sproat他著の83-115頁及びWu他著の135-151頁の論文; Nucleic Acid Hybridization: A Practical Approach (B. D. Hames & S. J. Higgins編, 1985) IRL Press, Oxford, 全文; Immobilized Cells and Enzymes: A Practical Approach (1986) IRL Press, Oxford, 全文; Perbal, B., A Practical Guide to Molecular Cloning (1984); Methods In Enzymology (S. Colowick and N. Kaplan編, Academic Press, Inc.), 全シリーズ; J. F. Ramalho Ortigao, “The Chemistry of Peptide Synthesis” In: Knowledge database of Access to Virtual Laboratory website (Interactiva, ドイツ); Sakakibara Biochem. Biophys. Res. Commun 73: 336-342, 1976; Merrifield J. Am. Chem. Soc. 85: 2149-2154, 1963; Barany & Merrifield (1979) in The Peptides (Gross, E. & Meienhofer, J.編), 第2巻, 1-284頁, Academic Press, New York. 12. Wunsch, E.編(1974) Synthese von Peptiden in Houben-Weyls Metoden der Organischen Chemie (Muller, E.編), 第15巻, 第4版, Parts 1 and 2, Thieme, Stuttgart; Bodanszky, M. (1984) Principles of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, Heidelberg; Bodanszky, M. & Bodanszky, A. (1984) The Practice of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, Heidelberg; Bodanszky Int. J. Peptide Protein Res. 25: 449-474, 1985; Handbook of Experimental Immunology, 第I-IV巻 (D. M. Weir & C. C. Blackwell編, 1986, Blackwell Scientific Publications); 及び Animal Cell Culture: Practical Approach, 第3版 (John R. W. Masters編, 2000), ISBN 0199637970, 全文中に記載されている。
【０１０１】
本明細書を通して、用語「含む」又は「含んでいる」といった変形は、言及した要素、整数もしくは工程、又は複数の要素、整数もしくは工程の群の包含を意味するものであり、それ以外の要素、整数もしくは工程、又は要素、整数もしくは工程の群を除外するものではないと理解すべきである。
【０１０２】
本発明の好ましい実施形態は、LGALS3BPがLNにおける腎炎のレベルを定量する際に予測マーカーとして働くという役割に基づく。
【０１０３】
例示的な全長ヒトLGALS3BPポリペプチド配列（配列番号１）は以下の通りである：
【０１０４】
【化１】
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〔定義〕
【０１０５】
「炎症」とは、本明細書中ではその用語の一般的な医学的意味において用いられ、そして任意の数の化学的、物理的もしくは生物学的剤又は剤の組み合わせにより開始又は保持される、急性又は慢性の；単純又は炎症性の；限局性又は播種性の；細胞及び組織の応答であることができる。
【０１０６】
「炎症状態」は、炎症から生じる、又は炎症の程度を特徴づける、対象の相対的生物学的状態を示すために用いられる。
【０１０７】
用語「患者」及び「対象」は、LNのような状態を治療している又は治療する必要がある哺乳類を指す。この用語は、ヒト患者と志願者、非ヒト哺乳類、例えは非ヒト霊長類、大型動物モデル及びげっ歯類を含む。
【０１０８】
対象からの「サンプル（試料）」は、穿刺、排せつ、射精、マッサージ、生検、針吸引、洗浄試料、剥離、外科的切開もしくは治療介入といった手段により又は当業界で既知の他の手段により、対象から採取した単細胞もしくは多細胞又は細胞の断片又は体液のアリコートを包含する。サンプルは、対象の血液、尿、髄液、リンパ液、粘膜分泌物、前立腺液、精液、血液リンパ、及び当業界で既知の他の任意の体液である。サンプルは組織サンプルでもよい。
【０１０９】
「治療」は、生物学的、化学的、物理学的又はそれの組み合わせのいずれであろうと、観察される対象の生物学的状態を維持又は変更するための、全ての治療介入を包含する。
【０１１０】
用語「単離されたタンパク質」とは、それの起源又は由来のために、生来の状態ではそれに付随している天然関連成分を伴わないタンパク質又はポリペプチドであり；その同起源からの別のタンパク質を実質的に含有しないタンパク質又はポリペプチドを意味するつもりである。タンパク質は、当業界で既知のタンパク質精製技術を用いて、単離により実質的に天然関連成分不含有にされるか又は実質的に精製されてもよい。「実質的に精製された」とは、汚染物質を実質的に含まず、一態様として、汚染物質を少なくとも約70％又は75％又は80％又は85％又は90％又は95％又は96％又は97％又は98％又は99％含まない。
【０１１１】
用語「組換え」は、人工的遺伝子組換えの産物を意味するものと理解すべきである。従って、抗原結合ドメインを含む組換えタンパク質の場合には、この用語は、Ｂ細胞成熟過程の間に起こる自然の組換え産物である対象の体内に天然に存在する抗体を包含しない。しかしながら、そのような抗体が単離されているならば、それは抗原結合ドメインを含む単離されたタンパク質と見なすことができる。同様に、タンパク質をコードする核酸が単離されそして組換え手段を使って発現されるならば、生成するタンパク質は抗原結合ドメインを含む組換えタンパク質である。組換えタンパク質は、それが細胞、組織又は対象、例えばそれが発現される細胞、組織又は対象の中に存在する場合、人工的な組換え手段により発現されたタンパク質も包含する。
【０１１２】
用語「LGALS3BPに特異的に結合するIg融合タンパク質」とは、本明細書に記載の及び／又は特許請求範囲記載の方法でLGALS3BPに結合することができるIg融合タンパク質（非限定的に抗LGALS3BP抗体を含む）を含むものと解釈すべきである。
【０１１３】
用語「ポリペプチド」又は「ポリペプチド鎖」とは、ペプチド結合により連結された一連の連続アミノ酸を意味するものと理解されるだろう。
【０１１４】
本明細書中で用いる場合、用語「抗原結合ドメイン」は、抗原に特異的に結合することができる抗体の領域、すなわち、ＶH もしくはＶL、又はＶH とＶL の両方を含むＦvを意味するものと解釈すべきである。抗原結合ドメインは必ずしも完全抗体の状況にある必要はなく、例えば、それは単離形（例えばドメイン抗体）又は別の形（例えばscFv）であることもできる。
【０１１５】
本開示の目的上、用語「抗体」は、Fv中に含まれる抗原結合ドメインによって１つの又はごく少数の密接に関連した抗原（例えばLGALS3BP）に特異的に結合することができるタンパク質を包含する。この用語は、４本の鎖の抗体（例えば二本の軽（Ｌ)鎖と二本の重(Ｈ)鎖）、組換えもしくは修飾抗体（例えばキメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、CDR移植抗体、霊長類化抗体、脱免疫化抗体、合成ヒト化（synhumanized）抗体、半抗体、二特異性抗体）を包含する。抗体は一般に、１つの定常領域もしくは定常断片又は結晶化可能断片（Fc)にアレンジすることができる定常ドメインを含む。抗体の典型的形態は、その基本単位として４本鎖構造を含む。全長抗体は、共有結合で連結された二本の重鎖（各々約50〜70 kDa）と二本の軽鎖（各々約23 kDa)を含む。軽鎖は一般に可変領域（存在する場合）と定常ドメインを含み、哺乳類ではκ軽鎖かλ軽鎖のいずれかである。重鎖は一般に、可変領域と、ヒンジ領域を介して追加の定常ドメインに連結された１又は２個の定常ドメインを含む。哺乳類の重鎖は次のタイプのうちの１つである：α、δ、ε、γ又はμ。各軽鎖はまた、１本の重鎖に共有結合的に連結される。一例として、２本の重鎖と重鎖及び軽鎖とが、鎖間ジスルフィド結合により及び非共有結合的相互作用により一緒にまとめられる。鎖間ジスルフィド結合の数は様々な抗体の種類によって異なり得る。各鎖は１つのＮ末端可変領域（ＶH又はＶL、各々が長さ約110アミノ酸である）とＣ末端に１つ以上の定常ドメインを含む。軽鎖の定常ドメイン（長さ約110アミノ酸であるＣL）は、重鎖の第一定常ドメイン（長さ330〜440アミノ酸であるＣH1）と整列されジスルフィド結合で結合されている。軽鎖可変領域は重鎖の可変領域と整列される。抗体重鎖は２以上の追加のＣHドメイン（例えばＣH2、ＣH3など）を含むことができ、そしてＣH1とＣH2定常ドメインの間にヒンジ領域を含むことができる。抗体は任意のタイプ（例えばIgG、IgE、IgM、IgD、IgA及びIgY）、クラス（例えばIgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及びIgA2)又はサブクラスのものであることができる。
【０１１６】
本明細書中で用いる場合、「可変領域」は、抗体に特異的に結合することができる、本明細書中に定義されるような抗体の軽鎖及び／又は重鎖の部分を指し、そして相補性決定領域（CDR)のアミノ酸配列、すなわちCDR1, CDR2及びCDR3、及びフレームワーク領域（FR)のアミノ酸配列を含む。一態様として、可変領域は３又は４つのFR（例えばFR1, FR2, FR3及び場合によりFR4）と共に３つのCDRを含む。ＶHは重鎖の可変領域を指し、ＶLは軽鎖の可変領域を指す。
【０１１７】
本明細書中で用いる場合、「相補性決定領域」（同義語CDR、すなわち、CDR1、CDR2及びCDR3)は、その存在が特異的抗原結合への主な寄与因子である、抗体可変領域のアミノ酸残基を指す。各可変領域ドメイン（ＶH又はＶL）は典型的にはCDR1、CDR2及びCDR3と特定される３つのCDR領域を有する。一実施形態では、CDR及びFRに割り当てられるアミノ酸位置は、Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1987及び1991（Kabat番号付け法とも呼ばれる）に従って規定される。別の実施形態では、CDR及びFRに割り当てられるアミノ酸位置は、Enhanced Chothia Numbering Schemeに従って規定される。Kabatの番号付け法によると、ＶH FRs及びCDRsは次のように位置付けられる：残基１〜30（FR1)、31〜35（CDR1)、36〜49（FR2)、50〜65（CDR2)、66〜94（FR3)、95〜102（CDR3)及び103〜113（FR4)。Kabatの番号付け法によれば、ＶL FRs及びCDRsは次のように位置付けられる：残基１〜23（FR1)、24〜34（CDR1)、35〜49（FR2)、50〜56（CDR2)、57〜88（FR3)、89〜97（CDR3)、及び98〜107（FR4)。本開示はKabat番号付け法により定められたFR及びCDRに限定されず、古典的番号付け法又はChothia & Lesk, J. Mol. Biol. 196: 901-917, 1987；Chothia他、Nature 342: 877-883, 1989；及び／又はAl-Zakikani他、J. Mol. Biol. 273: 927-948, 1997；Honnegher & Pliikthun J. Mol. Biol. 309: 657-670, 2001の番号付け法；又はGiudicelli他、Nucleic Acids Res. 25: 206-211, 1997において論じされたIMGT法を初めとする、全ての番号付け法を包含する。一実施形態では、CDRはKabat番号付け法に従って規定される。
【０１１８】
本明細書中で用いる場合、用語「Fv」は、複数のポリペプチド又は単一のポリペプチドから構成されるかに関係なく、ＶLとＶHが会合して、抗原に特異的に結合することができる抗原結合ドメインを有する複合体を形成する、任意タンパク質を意味するものと解釈すべきである。抗原結合ドメインを形成するＶHとＶLは、単一ポリペプチド鎖中又は異なるポリペプチド鎖中にあることができる。更に、本開示のFv（並びに本開示の任意タンパク質）は、同一抗原を結合してもしなくてもよい複数の抗原結合ドメインを有することができる。この用語は、抗体から直接誘導される断片に加えて、組換え手段を使って生産されるそのような断片に相当するタンパク質を包含すると理解すべきである。ある実施形態では、ＶHが重鎖定常ドメイン（ＣH）１に結合されず、そして／又はＶLが軽鎖定常ドメイン（ＣL）に結合されない。典型的なFv含有ポリペプチド又はタンパク質しては、Fab断片、Fab’断片、F(ab’）断片、scFv、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディもしくはより高次の複合体、又はそれの定常領域もしくはドメインに連結された前記のいずれか、例えばＣH2もしくはＣH3ドメイン、例えばミニボディが挙げられる。
【０１１９】
「Fab断片」は、免疫グロブリンの一価抗原結合性断片から成り、パパイン酵素での完全抗体の消化により製造して完全な軽鎖と重鎖の一部とから成る断片を与えることができ、又は組換え手段を使って生産することができる。
【０１２０】
抗体の「Fab’断片」は、完全抗体をペプシンで処理し、続いて還元することにより得ることができ、それは完全な軽鎖と、ＶHと１つの定常ドメインを含む重鎖の一部とから成る分子を生成することができる。この方法で処理すると１抗体当たり２つのFab’断片が得られる。Fab’断片は組換え法により産生することもできる。
【０１２１】
「一本鎖Fv」又は「scFv」は、抗体の可変領域断片（Ｆv）を含む組換え分子であって、軽鎖の可変領域と重鎖の可変領域とが適当なフレキシブルなポリペプチドリンカーによって共有結合的に連結されている組換え分子である。
【０１２２】
本明細書中で用いる場合、LGALS3BPに又はそれの抗原結合ドメインに特異的に結合するIg融合タンパク質の相互作用に関する用語「結合する」とは、該相互作用が抗原上の特定構造（例えば抗原決定基又はエピトープ）の存在に依存することを意味する。例えば、抗体は通常、タンパク質全体というよりもむしろ特別なタンパク質構造を認識して結合する。抗体がエピトープ「Ａ」に結合するならば、標識された「Ａ」と該抗体とを含む反応において、エピトープ「Ａ」を含む分子の存在が、該抗体に結合する標識された「Ａ］の量を減少させるだろう。
【０１２３】
本明細書中で用いる場合、用語「特異的に結合する」とは、本開示のタンパク質（例えば抗LGALS3BP抗体）が、別の抗原もしくは細胞と反応又は会合するよりも、より高頻度で、より迅速に、より長い時間及び／又はより大きい親和性で、特定の抗原もしくはそれを発現する細胞と反応又は会合することを意味する。例えば、ある抗原に特異的に結合するタンパク質は、別の抗原に結合するよりもより大きい親和性で、より容易に、及び／又はより長い時間、その抗原に結合する。一態様として、あるタンパク質が、別の免疫グロブリンスーパーファミリーリガンドに結合するよりも、又は多反応性天然抗体によって（すなわちヒトにおいて天然に見つかる多様な抗原を結合することが知られている天然の抗体によって）一般に認識される抗原に結合するよりも、実質的に大きな親和性でLGALS3BPに結合する。この定義を、一例として、第一の抗原に特異的に結合するタンパク質が第二の抗原には特異的に結合してもしなくてもよいと解釈することによっても理解される。そのようなものとして、「特異的結合」は、必ずしも排他的結合又は別の抗原の検出不可能な結合（これは用語「選択的結合」により意味される）を要求するものではない。
【０１２４】
本明細書中で用いる場合、用語「エピトープ」（同義語「抗原決定基」）は、抗体の抗原結合ドメインを含むタンパク質が結合するLGALS3BPの領域を意味すると理解すべきである。この用語は必ずしも、該タンパク質が接触される特定の残基又は構造に限定されるわけではない。例として、この用語は、タンパク質により接触されるアミノ酸残基に及ぶ領域及び／又はこの領域の外側の少なくとも５〜10又は２〜５又は１〜３アミノ酸残基を含む。幾つかの実施形態では、エピトープが直鎖状の連続アミノ酸である。エピトープは、LGALS3BPが折りたたまれる時に互いに近接して配置される不連続アミノ酸の配列、すなわち、「立体構造エピトープ」を含むこともできる。当業者は、用語「エピトープ」がペプチド又はポリペプチドに限定されないこともよく知っているだろう。一態様として、用語「エピトープ」は、糖側鎖、ホスホリル側鎖又はスルホニル側鎖といった分子の化学的に活性な表面基を含み、そしてある態様では、特定の三次元構造特性及び／又は特定の電荷特性を有することができる。エピトープ又はそれを含むペプチドもしくはポリペプチドは、該エピトープに対する抗体を産生させるために動物に投与することができる。
【０１２５】
本明細書中で用いる場合、用語「診断」及びそれの変形、例えば限定されないが「診断する」、「診断された」又は「診断の」とは、臨床状態の任意の一次診断又は再発疾患の診断を含む。
〔方法〕
【０１２６】
本特許出願の下記実施例の項目にて用いる材料（限定されないがヒト及び非ヒト組織、細胞及びタンパク質を含む）を調達し調製するために、次の方法を使用した。
【０１２７】
ヒトマクロファージのインビトロ刺激
健常ドナーのバフィーコート調製物（New York Blood Center）から、Ficoll Paque Plus（GE Health Sciences)を使って製造元の指示書に従ってヒトマクロファージを単離した。プラスチック壁への90分間の接着により単球を精製し、続いてPen/Strepと10％熱不活性化ウシ胎仔血清（Corning）を含有するRPMI 1640培地（Gibco）中で100 ng/mLのGM-CSF（Sargramostim, Sanofi）と共に培養することにより、マクロファージへと分化させた。７日目に炎症性刺激剤（組換えIFNα、TLR9にはCpG、TLR4には LPS、TLR7/8には小分子アゴニスト、及びIFNα)を添加し、６時間後にqPCRによりLGALS3BP mRNAを測定し、そして20時間後にELISAによりLGALS3BPタンパク質を測定した。mRNAはTaqman技術（Applied Biosystems）を用いて測定し、正規化のためにハウスキーピング遺伝子としてHPRT1を使用した。サンプルをApplied Biosystems QuantStudio機器に供した。LGALS3BPタンパク質は市販のELISAキット(Abnova)を用いて測定した。
【０１２８】
血液中のLGALS3BP発現
患者の全血を採血し、フィコール密度遠心分離によりPBMCを単離した。PBMCを、10％DMSOを含有する90％ウシ胎仔血清中で-80℃で凍結した。更なる分析に用意するとき、細胞を迅速に解凍し、１％β-メルカプトエタノールを含むRLTバッファー（Qiagen）を用いて細胞を溶解させ、そしてRNeasyミニキット（Qiagen）を使ってRNAを抽出した。これに続いてDNase I処理とSPRIビーズ（Life Technologies）を使った追加の清浄化を行った。その後、Smartseq2プロトコルを使ってRNA-seqを実施した。データはFPKM値として与えられる。
【０１２９】
LN患者と対照健常者からの腎臓におけるLGALS3BP発現
動物を用いる全ての作業は、全て動物の管理に関する現地法と国内法及び規制に従って実施した。詳細な方法の情報は原出願（Berthier CC他、JI 2012)中に見つけることができる。このデータはGSE32591のもとにGEOデータベースからアクセスした。一次式データが示される。
【０１３０】
BXSB-YaaモデルにおけるLGALS3BP発現
動物を用いる全ての作業は、全て動物の管理に関する現地法と国内法及び規制に従って実施した。雄のBXSB-YaaマウスをJacksonから購入した。20週齢でマウスをCO2窒息により安楽死させ、大静脈から血液を採取した。実験の終わりに、腎臓を採取し、ホルマリン固定し、HistoTox Labに輸送し、そこで熟練した病理学者により、それらをヘマトキシリンとエオシン染色用に処理し、損傷の組織学的エビデンスのためにスコア付けした。使用したスコアリング法は、前に発表された方法（Chan, O., Madaio, M.P.及びShlomchik, M.J., 1997.“The roles of B cells in MRL/lpr murine lupus.” Ann NY Acad Sci 815:75-87)を使用し、糸球体の半月体、タンパク円柱、間質性炎症、及び血管炎に基づいて腎臓切片を評価し、そして全組織学スコアはそれらのパラメータの集成値に基づいて得られる。
【０１３１】
血漿と尿の採取
健常者又はSLE患者とLN患者から、全血と新鮮尿を採取した。全血はヘパリン管中に採血し、周囲温度で輸送した。血漿は全血を720×ｇで10分間回転することにより採集した。血小板を除去するため2000×ｇで15分間再遠心して血漿を採取した。全てのサンプルは-80℃で保存した。
【０１３２】
抗体／ライブラリーベースの方法
本開示は、抗体又はそれの抗原結合ドメイン（例えばそれの可変領域を含む）を含むタンパク質のライブリーをスクリーニングし、本開示のLGALS3BPに特異的に結合するIg融合タンパク質を同定した。一態様として、本開示のＶHと複数のＶL領域を含むライブラリーをスクリーニングし、本開示のLGALS3BPに特異的に結合するIg融合タンパク質を同定することができる。
【０１３３】
本開示により意図されるライブラリーの実施形態としては、ナイーブライブラリー（抗原投与していない対象）、免疫処置ライブラリー（抗原で免疫処置した対象からのもの）又は合成ライブラリーが挙げられる。抗体又はその領域（例えば可変領域）をコードする核酸を従来技術（例えばSambrook & Russell編、Molecular Cloning: A Laboratory Manual、第3版、第1〜3版、Cold Spring Harbor Laboratory Press、2001）によりクローニングし、当業界で周知の方法を用いてタンパク質をコードし提示させるのに使用した。タンパク質ライブラリーを作製するための別の技術は、例えば、米国特許第6,300,064号（例えばHuCAL library of Morphosys AG)、米国特許第5,885,793号、米国特許第6,204,023号、米国特許第6,291,158号又は米国特許第6,248,516号明細書中に記載されている。
【０１３４】
本開示に従ってLGALS3BPに特異的に結合するIg融合タンパク質は、可溶性の分泌タンパク質であるか、又は細胞表面上の融合タンパク質として又は粒子（例えばファージ又は別のウイルス、リボソームもしくは胞子）として提供してもよい。様々なライブラリー提示（ディスプレイ）形式が当業界で周知である。例えば、ライブラリーはインビトロ提示ライブラリー（例えばリボソーム提示ライブラリー、共有結合提示ライブラリー又はmRNA提示ライブラリー、例えば米国特許第7,270,969号明細書に記載のもの）である。更に別の実施形態では、提示ライブラリーは、例えば米国特許第6,300,064号、米国特許第5,885,793号、米国特許第6,204,023号、米国特許第6,291,158号、又は米国特許第6,248,516号明細書に記載のような、抗体の抗原結合ドメインを含むタンパク質がファージ上に発現されるというファージ提示ライブラリーである。別のファージ提示方法も当業界で既知であり、本開示により意図される。同様に、細胞提示方法も意図され、一態様として、例えば米国特許第5,516,637号明細書に記載のような細菌提示ライブラリー；例えば米国特許第6,423,538号明細書に記載のような酵母提示ライブラリーが意図される。
【０１３５】
提示ライブラリーをスクリーニングする方法は周知である。一態様では、本開示の提示ライブラリーが、例えばScopes (Protein purification: principles and practice, 第３版, Springer Verlag, 1994）に記載のようなアフィニティー精製を用いてスクリーニングされる。アフィニティー精製方法は、典型的には、ライブラリーにより提示された抗原結合ドメインを含むタンパク質を、標的抗原（例えばLGALS3BP）と接触させ、続いてそれを洗浄し、前記抗原に結合したままであるそれらのドメインを溶出させることを伴う。
【０１３６】
スクリーニングによって同定された任意の可変領域又はscFvは、所望であれば完全抗体へと容易に改変することができる。可変領域又はscFvを完全抗体へと改変又は再形成するための方法は、例えば、Jones他、J. Immunol. Methods 354:85-90, 2010;又はJostock他、J. Immunol. Methods, 289: 65-80, 2004中に記載されている。代わりに又は加えて、標準的なクローニング法、例えばAusubel他（Current Protocols in Molecular Biology. Wiley Interscience, ISBN 047 150338中）及び／又はSambrook他（Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratories, New York, 第三版2001）により記載されているような方法が用いられる。
【０１３７】
一態様では、本開示は、本開示のLGALS3BPに特異的に結合するIg融合タンパク質を生産又は単離するための方法であって、該方法は例えば、提示ライブラリー、例えば米国特許第6,300,064号及び／又は米国特許第5,885,793号明細書に記載のようなファージ提示ライブラリーをスクリーニングすることによる方法を提供する。例えば、本発明者らは、全長組換えヒトLGALS3BPに対する選択を何回も繰り返すことによってヒトscFv免疫グロブリン遺伝子ライブラリーをバイオパニング（biopanning）することによりscFvを単離した。単離されたら、LGALS3BPに特異的に結合するIg融合タンパク質を、例えば当業界で周知の方法を使ってクローニングしそして発現させ、所望により例えばIgG1抗体として再編成することができる。
【０１３８】
一実施形態では、本開示は、LGALS3BPに特異的に結合するIg融合タンパク質の生産方法であって、該方法は
(i) LGALS3BPの細胞外ドメイン（例えば組換えヒトLGALS3BPの細胞外ドメイン）に結合する結合タンパク質について、LGALS3BP調製物又は同ライブラリーに特異的に結合するIg融合タンパク質をスクリーニングする工程；及び
(ii) 前記LGALS3BPの細胞外ドメインに対して所望の結合親和性を有するLGALS3BPに特異的に結合するIg融合タンパク質を単離する工程
を含む。
【０１３９】
一実施形態では、LGALS3BP調製物に特異的に結合するIg融合タンパク質がスクリーニングされる。LGALS3BP調製物は、例えば、LGALS3BPの細胞外ドメインと反応する抗体を生産するようにLGALS3BP抗原で動物を免疫処置することにより作製される。
【０１４０】
別の実施形態では、LGALS3BPライブラリーに特異的に結合するIg融合タンパク質がスクリーニングされる。該ライブラリーはファージライブラリー、例えばscFvファージライブラリー又はFabファージライブラリーであることができる。
【０１４１】
一実施形態では、該方法は、標的LGALS3BPエピトープ又は抗原に対してある範囲の結合特異性を有する結合性分子の集団をそれらの表面上に提示するファージ粒子の一群を生産することを含む。そのようなファージ粒子は、結合タンパク質をコードする核酸を含むファジミドゲノムを包含する。この核酸は、組換え系において単離され、クローニングされそして発現され、本発明のLGALS3BPに特異的に結合するIg融合タンパク質を産生する。
【０１４２】
LGALS3BPに特異的に結合するIg融合タンパク質を発現させるのに用いられる典型的な細胞は、CHO細胞、ミエローマ細胞又はHEK細胞である。それらの細胞は更に、改変抗体の発現を容易にする１以上の遺伝子変異及び／又は欠失を更に含んでもよい。非限定例は、発現される免疫グロブリン又は抗体のフコシル化に必要である酵素をコードする遺伝子の欠失である。
【０１４３】
タンパク質精製
生産／発現後、本開示のLGALS3BPに特異的に結合するIg融合タンパク質は当業界で既知の方法を使って精製される。そのような精製は非特異的タンパク質、酸、脂質、炭水化物等を実質的に含有しない。一実施形態では、タンパク質は、調製物中の該タンパク質の約90％超（例えば95％、98％又は99％）が本開示のLGALS3BPに特異的に結合するIg融合タンパク質である調製物の形態であろう。
【０１４４】
本開示のLGALS3BPに特異的に結合する単離されたIg融合タンパク質を得るために、標準的なペプチド精製法を使用でき、その例としては限定されないが、種々の高圧（又は高性能）液体クロマトグラフィー（HPLC)及び非HPLCポリぺプチド単離プロトコル、例えばサイズ排除クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、混成型クロマトグラフィー、相分離法、電気泳動分離、沈澱法、塩析及び／又は塩溶法、免疫クロマトグラフィー、及び／又は他の方法が挙げられる。
【０１４５】
LGALS3BP／抗LGALS3BP抗体に特異的に結合するIg融合タンパク質
本発明の特定の実施形態は、本発明者らのLGALS3BPに特異的に結合するヒト抗体の産生に基づく。それらのヒト抗LGALS3BP抗体は、ヒトscFv配列のファージ提示ライブラリーから誘導され、得られたscFvファージクローンはIgG1 mAbとして再構成される。
【０１４６】
本開示は、広範囲には、LGALS3BPに特異的に結合する抗原結合ドメインを含む、LGALS3BPに特異的に結合するIg融合タンパク質に向けられる。
【０１４７】
一実施形態では、本発明は、LGALS3BPに特異的に結合するLGALS3BP Ig融合タンパク質を開示し、ここで該Ig融合タンパク質は、次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む重鎖可変領域（ＶH）（ＶH CDR1は配列番号32に示されるアミノ酸配列を有し、ＶH CDR2は配列番号33に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶH CDR3は配列番号34に示されるアミノ酸配列を有する）；及び次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む軽鎖可変領域（ＶL）（ＶL CDR1は配列番号35に示されるアミノ酸配列を有し、ＶL CDR2は配列番号36に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶL CDR3は配列番号37に示されるアミノ酸配列を有する）を含む。前の段落に言及したLGALS3BP Ig融合タンパク質の３つのＶH CDRsと３つのＶL CDRsの縮合体は、配列番号２のアミノ酸配列に示される。
【０１４８】
一実施形態では、本発明は、LGALS3BPに特異的に結合するLGALS3BP Ig融合タンパク質を開示し、ここで該Ig融合タンパク質は、次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む重鎖可変領域（ＶH）（ＶH CDR1は配列番号38に示されるアミノ酸配列を有し、ＶH CDR2は配列番号39に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶH CDR3は配列番号40に示されるアミノ酸配列を有する）；及び次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む軽鎖可変領域（ＶL）（ＶL CDR1は配列番号41に示されるアミノ酸配列を有し、ＶL CDR2は配列番号42に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶL CDR3は配列番号43に示されるアミノ酸配列を有する）を含む。前の段落に言及したLGALS3BP Ig融合タンパク質の３つのＶH CDRsと３つのＶL CDRsの縮合体は、配列番号３のアミノ酸配列に示される。
【０１４９】
一実施形態では、本発明は、LGALS3BPに特異的に結合するLGALS3BP Ig融合タンパク質を開示し、ここで該Ig融合タンパク質は、次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む重鎖可変領域（ＶH）（ＶH CDR1は配列番号44に示されるアミノ酸配列を有し、ＶH CDR2は配列番号45に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶH CDR3は配列番号46に示されるアミノ酸配列を有する）；及び次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む軽鎖可変領域（ＶL）（ＶL CDR1は配列番号47に示されるアミノ酸配列を有し、ＶL CDR2は配列番号48に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶL CDR3は配列番号49に示されるアミノ酸配列を有する）を含む。前の段落に言及したLGALS3BP Ig融合タンパク質の３つのＶH CDRsと３つのＶL CDRsの縮合体は、配列番号４のアミノ酸配列に示される。
【０１５０】
一実施形態では、本発明は、LGALS3BPに特異的に結合するLGALS3BP Ig融合タンパク質を開示し、ここで該Ig融合タンパク質は、次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む重鎖可変領域（ＶH）（ＶH CDR1は配列番号50に示されるアミノ酸配列を有し、ＶH CDR2は配列番号51に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶH CDR3は配列番号52に示されるアミノ酸配列を有する）；及び次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む軽鎖可変領域（ＶL）（ＶL CDR1は配列番号53に示されるアミノ酸配列を有し、ＶL CDR2は配列番号54に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶL CDR3は配列番号55に示されるアミノ酸配列を有する）を含む。前の段落に言及したLGALS3BP Ig融合タンパク質の３つのＶH CDRsと３つのＶL CDRsの縮合体は、配列番号５のアミノ酸配列に示される。
【０１５１】
一実施形態では、本発明は、LGALS3BPに特異的に結合するLGALS3BP Ig融合タンパク質を開示し、ここで該Ig融合タンパク質は、次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む重鎖可変領域（ＶH）（ＶH CDR1は配列番号56に示されるアミノ酸配列を有し、ＶH CDR2は配列番号57に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶH CDR3は配列番号58に示されるアミノ酸配列を有する）；及び次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む軽鎖可変領域（ＶL）（ＶL CDR1は配列番号59に示されるアミノ酸配列を有し、ＶL CDR2は配列番号60に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶL CDR3は配列番号61に示されるアミノ酸配列を有する）を含む。前の段落に言及したLGALS3BP Ig融合タンパク質の３つのＶH CDRsと３つのＶL CDRsの縮合体は、配列番号６のアミノ酸配列に示される。
【０１５２】
一実施形態において、本発明は、LGALS3BPに特異的に結合するLGALS3BP Ig融合タンパク質を開示し、ここで該Ig融合タンパク質は、次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む重鎖可変領域（ＶH）（ＶH CDR1は配列番号62に示されるアミノ酸配列を有し、ＶH CDR2は配列番号63に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶH CDR3は配列番号64に示されるアミノ酸配列を有する）；及び次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む軽鎖可変領域（ＶL）（ＶL CDR1は配列番号65に示されるアミノ酸配列を有し、ＶL CDR2は配列番号66に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶL CDR3は配列番号67に示されるアミノ酸配列を有する）を含む。前の段落に言及したLGALS3BP Ig融合タンパク質の３つのＶH CDRsと３つのＶL CDRsの縮合体は、配列番号７のアミノ酸配列に示される。
【０１５３】
一実施形態において、本発明は、LGALS3BPに特異的に結合するLGALS3BP Ig融合タンパク質を開示し、ここで該Ig融合タンパク質は、次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む重鎖可変領域（ＶH）（ＶH CDR1は配列番号68に示されるアミノ酸配列を有し、ＶH CDR2は配列番号69に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶH CDR3は配列番号70に示されるアミノ酸配列を有する）；及び次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む軽鎖可変領域（ＶL）（ＶL CDR1は配列番号71に示されるアミノ酸配列を有し、ＶL CDR2は配列番号72に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶL CDR3は配列番号73に示されるアミノ酸配列を有する）を含む。前の段落に言及したLGALS3BP Ig融合タンパク質の３つのＶH CDRsと３つのＶL CDRsの縮合体は、配列番号８のアミノ酸配列に示される。
【０１５４】
一実施形態において、本発明は、LGALS3BPに特異的に結合するLGALS3BP Ig融合タンパク質を開示し、ここで該Ig融合タンパク質は、次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む重鎖可変領域（ＶH）（ＶH CDR1は配列番号74に示されるアミノ酸配列を有し、ＶH CDR2は配列番号75に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶH CDR3は配列番号76に示されるアミノ酸配列を有する）；及び次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む軽鎖可変領域（ＶL）（ＶL CDR1は配列番号77に示されるアミノ酸配列を有し、ＶL CDR2は配列番号78に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶL CDR3は配列番号79に示されるアミノ酸配列を有する）を含む。前の段落に言及したLGALS3BP Ig融合タンパク質の３つのＶH CDRsと３つのＶL CDRsの縮合体は、配列番号９のアミノ酸配列に示される。
【０１５５】
一実施形態において、本発明は、LGALS3BPに特異的に結合するLGALS3BP Ig融合タンパク質を開示し、ここで該Ig融合タンパク質は、次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む重鎖可変領域（ＶH）（ＶH CDR1は配列番号80に示されるアミノ酸配列を有し、ＶH CDR2は配列番号81に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶH CDR3は配列番号82に示されるアミノ酸配列を有する）；及び次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む軽鎖可変領域（ＶL）（ＶL CDR1は配列番号83に示されるアミノ酸配列を有し、ＶL CDR2は配列番号84に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶL CDR3は配列番号85に示されるアミノ酸配列を有する）を含む。前の段落に言及したLGALS3BP Ig融合タンパク質の３つのＶH CDRsと３つのＶL CDRsの縮合体は、配列番号10のアミノ酸配列に示される。
【０１５６】
一実施形態において、本発明は、LGALS3BPに特異的に結合するLGALS3BP Ig融合タンパク質を開示し、ここで該Ig融合タンパク質は、次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む重鎖可変領域（ＶH）（ＶH CDR1は配列番号86に示されるアミノ酸配列を有し、ＶH CDR2は配列番号87に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶH CDR3は配列番号88に示されるアミノ酸配列を有する）；及び次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む軽鎖可変領域（ＶL）（ＶL CDR1は配列番号89に示されるアミノ酸配列を有し、ＶL CDR2は配列番号90に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶL CDR3は配列番号91に示されるアミノ酸配列を有する）を含む。前の段落に言及したLGALS3BP Ig融合タンパク質の３つのＶH CDRsと３つのＶL CDRsの縮合体は、配列番号11のアミノ酸配列に示される。
【０１５７】
一実施形態において、本発明は、LGALS3BPに特異的に結合するLGALS3BP Ig融合タンパク質を開示し、ここで該Ig融合タンパク質は、次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む重鎖可変領域（ＶH）（ＶH CDR1は配列番号92に示されるアミノ酸配列を有し、ＶH CDR2は配列番号93に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶH CDR3は配列番号94に示されるアミノ酸配列を有する）；及び次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む軽鎖可変領域（ＶL）（ＶL CDR1は配列番号95に示されるアミノ酸配列を有し、ＶL CDR2は配列番号96に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶL CDR3は配列番号97に示されるアミノ酸配列を有する）を含む。前の段落に言及したLGALS3BP Ig融合タンパク質の３つのＶH CDRsと３つのＶL CDRsの縮合体は、配列番号12のアミノ酸配列に示される。
【０１５８】
一実施形態において、本発明は、LGALS3BPに特異的に結合するLGALS3BP Ig融合タンパク質を開示し、ここで該Ig融合タンパク質は、次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む重鎖可変領域（ＶH）（ＶH CDR1は配列番号98に示されるアミノ酸配列を有し、ＶH CDR2は配列番号99に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶH CDR3は配列番号100に示されるアミノ酸配列を有する）；及び次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む軽鎖可変領域（ＶL）（ＶL CDR1は配列番号101に示されるアミノ酸配列を有し、ＶL CDR2は配列番号102に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶL CDR3は配列番号103に示されるアミノ酸配列を有する）を含む。前の段落に言及したLGALS3BP Ig融合タンパク質の３つのＶH CDRsと３つのＶL CDRsの縮合体は、配列番号13のアミノ酸配列に示される。
【０１５９】
一実施形態において、本発明は、LGALS3BPに特異的に結合するLGALS3BP Ig融合タンパク質を開示し、ここで該Ig融合タンパク質は、次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む重鎖可変領域（ＶH）（ＶH CDR1は配列番号104に示されるアミノ酸配列を有し、ＶH CDR2は配列番号105に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶH CDR3は配列番号106に示されるアミノ酸配列を有する）；及び次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む軽鎖可変領域（ＶL）（ＶL CDR1は配列番号107に示されるアミノ酸配列を有し、ＶL CDR2は配列番号108に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶL CDR3は配列番号109に示されるアミノ酸配列を有する）を含む。前の段落に言及したLGALS3BP Ig融合タンパク質の３つのＶH CDRsと３つのＶL CDRsの縮合体は、配列番号14のアミノ酸配列に示される。
【０１６０】
一実施形態において、本発明は、LGALS3BPに特異的に結合するLGALS3BP Ig融合タンパク質を開示し、ここで該Ig融合タンパク質は、次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む重鎖可変領域（ＶH）（ＶH CDR1は配列番号110に示されるアミノ酸配列を有し、ＶH CDR2は配列番号111に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶH CDR3は配列番号112に示されるアミノ酸配列を有する）；及び次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む軽鎖可変領域（ＶL）（ＶL CDR1は配列番号113に示されるアミノ酸配列を有し、ＶL CDR2は配列番号114に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶL CDR3は配列番号115に示されるアミノ酸配列を有する）を含む。前の段落に言及したLGALS3BP Ig融合タンパク質の３つのＶH CDRsと３つのＶL CDRsの縮合体は、配列番号15のアミノ酸配列に示される。
【０１６１】
一実施形態において、本発明は、LGALS3BPに特異的に結合するLGALS3BP Ig融合タンパク質を開示し、ここで該Ig融合タンパク質は、次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む重鎖可変領域（ＶH）（ＶH CDR1は配列番号116に示されるアミノ酸配列を有し、ＶH CDR2は配列番号117に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶH CDR3は配列番号118に示されるアミノ酸配列を有する）；及び次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む軽鎖可変領域（ＶL）（ＶL CDR1は配列番号119に示されるアミノ酸配列を有し、ＶL CDR2は配列番号120に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶL CDR3は配列番号121に示されるアミノ酸配列を有する）を含む。前の段落に言及したLGALS3BP Ig融合タンパク質の３つのＶH CDRsと３つのＶL CDRsの縮合体は、配列番号16のアミノ酸配列に示される。
【０１６２】
一実施形態において、本発明は、LGALS3BPに特異的に結合するLGALS3BP Ig融合タンパク質を開示し、ここで該Ig融合タンパク質は、次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む重鎖可変領域（ＶH）（ＶH CDR1は配列番号122に示されるアミノ酸配列を有し、ＶH CDR2は配列番号123に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶH CDR3は配列番号124に示されるアミノ酸配列を有する）；及び次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む軽鎖可変領域（ＶL）（ＶL CDR1は配列番号125に示されるアミノ酸配列を有し、ＶL CDR2は配列番号126に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶL CDR3は配列番号127に示されるアミノ酸配列を有する）を含む。前の段落に言及したLGALS3BP Ig融合タンパク質の３つのＶH CDRsと３つのＶL CDRsの縮合体は、配列番号17のアミノ酸配列に示される。
【０１６３】
一実施形態において、本発明は、LGALS3BPに特異的に結合するLGALS3BP Ig融合タンパク質を開示し、ここで該Ig融合タンパク質は、次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む重鎖可変領域（ＶH）（ＶH CDR1は配列番号128に示されるアミノ酸配列を有し、ＶH CDR2は配列番号129に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶH CDR3は配列番号130に示されるアミノ酸配列を有する）；及び次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む軽鎖可変領域（ＶL）（ＶL CDR1は配列番号131に示されるアミノ酸配列を有し、ＶL CDR2は配列番号132に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶL CDR3は配列番号133に示されるアミノ酸配列を有する）を含む。前の段落に言及したLGALS3BP Ig融合タンパク質の３つのＶH CDRsと３つのＶL CDRsの縮合体は、配列番号18のアミノ酸配列に示される。
【０１６４】
一実施形態において、本発明は、LGALS3BPに特異的に結合するLGALS3BP Ig融合タンパク質を開示し、ここで該Ig融合タンパク質は、次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む重鎖可変領域（ＶH）（ＶH CDR1は配列番号134に示されるアミノ酸配列を有し、ＶH CDR2は配列番号135に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶH CDR3は配列番号136に示されるアミノ酸配列を有する）；及び次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む軽鎖可変領域（ＶL）（ＶL CDR1は配列番号137に示されるアミノ酸配列を有し、ＶL CDR2は配列番号138に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶL CDR3は配列番号139に示されるアミノ酸配列を有する）を含む。前の段落に言及したLGALS3BP Ig融合タンパク質の３つのＶH CDRsと３つのＶL CDRsの縮合体は、配列番号19のアミノ酸配列に示される。
【０１６５】
一実施形態において、本発明は、LGALS3BPに特異的に結合するLGALS3BP Ig融合タンパク質を開示し、ここで該Ig融合タンパク質は、次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む重鎖可変領域（ＶH）（ＶH CDR1は配列番号140に示されるアミノ酸配列を有し、ＶH CDR2は配列番号141に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶH CDR3は配列番号142に示されるアミノ酸配列を有する）；及び次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む軽鎖可変領域（ＶL）（ＶL CDR1は配列番号143に示されるアミノ酸配列を有し、ＶL CDR2は配列番号144に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶL CDR3は配列番号145に示されるアミノ酸配列を有する）を含む。前の段落に言及したLGALS3BP Ig融合タンパク質の３つのＶH CDRsと３つのＶL CDRsの縮合体は、配列番号20のアミノ酸配列に示される。
【０１６６】
一実施形態において、本発明は、LGALS3BPに特異的に結合するLGALS3BP Ig融合タンパク質を開示し、ここで該Ig融合タンパク質は、次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む重鎖可変領域（ＶH）（ＶH CDR1は配列番号146に示されるアミノ酸配列を有し、ＶH CDR2は配列番号147に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶH CDR3は配列番号148に示されるアミノ酸配列を有する）；及び次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む軽鎖可変領域（ＶL）（ＶL CDR1は配列番号149に示されるアミノ酸配列を有し、ＶL CDR2は配列番号150に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶL CDR3は配列番号151に示されるアミノ酸配列を有する）を含む。前の段落に言及したLGALS3BP Ig融合タンパク質の３つのＶH CDRsと３つのＶL CDRsの縮合体は、配列番号21のアミノ酸配列に示される。
【０１６７】
一実施形態において、本発明は、LGALS3BPに特異的に結合するLGALS3BP Ig融合タンパク質を開示し、ここで該Ig融合タンパク質は、次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む重鎖可変領域（ＶH）（ＶH CDR1は配列番号152に示されるアミノ酸配列を有し、ＶH CDR2は配列番号153に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶH CDR3は配列番号154に示されるアミノ酸配列を有する）；及び次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む軽鎖可変領域（ＶL）（ＶL CDR1は配列番号155に示されるアミノ酸配列を有し、ＶL CDR2は配列番号156に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶL CDR3は配列番号157に示されるアミノ酸配列を有する）を含む。前の段落に言及したLGALS3BP Ig融合タンパク質の３つのＶH CDRsと３つのＶL CDRsの縮合体は、配列番号22のアミノ酸配列に示される。
【０１６８】
一実施形態において、本発明は、LGALS3BPに特異的に結合するLGALS3BP Ig融合タンパク質を開示し、ここで該Ig融合タンパク質は、次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む重鎖可変領域（ＶH）（ＶH CDR1は配列番号158に示されるアミノ酸配列を有し、ＶH CDR2は配列番号159に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶH CDR3は配列番号160に示されるアミノ酸配列を有する）；及び次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む軽鎖可変領域（ＶL）（ＶL CDR1は配列番号161に示されるアミノ酸配列を有し、ＶL CDR2は配列番号162に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶL CDR3は配列番号163に示されるアミノ酸配列を有する）を含む。前の段落に言及したLGALS3BP Ig融合タンパク質の３つのＶH CDRsと３つのＶL CDRsの縮合体は、配列番号23のアミノ酸配列に示される。
【０１６９】
一実施形態において、本発明は、LGALS3BPに特異的に結合するLGALS3BP Ig融合タンパク質を開示し、ここで該Ig融合タンパク質は、次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む重鎖可変領域（ＶH）（ＶH CDR1は配列番号164に示されるアミノ酸配列を有し、ＶH CDR2は配列番号165に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶH CDR3は配列番号166に示されるアミノ酸配列を有する）；及び次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む軽鎖可変領域（ＶL）（ＶL CDR1は配列番号167に示されるアミノ酸配列を有し、ＶL CDR2は配列番号168に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶL CDR3は配列番号169に示されるアミノ酸配列を有する）を含む。前の段落に言及したLGALS3BP Ig融合タンパク質の３つのＶH CDRsと３つのＶL CDRsの縮合体は、配列番号24のアミノ酸配列に示される。
【０１７０】
一実施形態において、本発明は、LGALS3BPに特異的に結合するLGALS3BP Ig融合タンパク質を開示し、ここで該Ig融合タンパク質は、次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む重鎖可変領域（ＶH）（ＶH CDR1は配列番号170に示されるアミノ酸配列を有し、ＶH CDR2は配列番号171に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶH CDR3は配列番号172に示されるアミノ酸配列を有する）；及び次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む軽鎖可変領域（ＶL）（ＶL CDR1は配列番号173に示されるアミノ酸配列を有し、ＶL CDR2は配列番号174に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶL CDR3は配列番号175に示されるアミノ酸配列を有する）を含む。前の段落に言及したLGALS3BP Ig融合タンパク質の３つのＶH CDRsと３つのＶL CDRsの縮合体は、配列番号25のアミノ酸配列に示される。
【０１７１】
一実施形態において、本発明は、LGALS3BPに特異的に結合するLGALS3BP Ig融合タンパク質を開示し、ここで該Ig融合タンパク質は、次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む重鎖可変領域（ＶH）（ＶH CDR1は配列番号176に示されるアミノ酸配列を有し、ＶH CDR2は配列番号177に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶH CDR3は配列番号178に示されるアミノ酸配列を有する）；及び次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む軽鎖可変領域（ＶL）（ＶL CDR1は配列番号179に示されるアミノ酸配列を有し、ＶL CDR2は配列番号180に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶL CDR3は配列番号181に示されるアミノ酸配列を有する）を含む。前の段落に言及したLGALS3BP Ig融合タンパク質の３つのＶH CDRsと３つのＶL CDRsの縮合体は、配列番号26のアミノ酸配列に示される。
【０１７２】
一実施形態において、本発明は、LGALS3BPに特異的に結合するLGALS3BP Ig融合タンパク質を開示し、ここで該Ig融合タンパク質は、次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む重鎖可変領域（ＶH）（ＶH CDR1は配列番号182に示されるアミノ酸配列を有し、ＶH CDR2は配列番号183に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶH CDR3は配列番号184に示されるアミノ酸配列を有する）；及び次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む軽鎖可変領域（ＶL）（ＶL CDR1は配列番号185に示されるアミノ酸配列を有し、ＶL CDR2は配列番号186に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶL CDR3は配列番号187に示されるアミノ酸配列を有する）を含む。前の段落に言及したLGALS3BP Ig融合タンパク質の３つのＶH CDRsと３つのＶL CDRsの縮合体は、配列番号27のアミノ酸配列に示される。
【０１７３】
一実施形態において、本発明は、LGALS3BPに特異的に結合するLGALS3BP Ig融合タンパク質を開示し、ここで該Ig融合タンパク質は、次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む重鎖可変領域（ＶH）（ＶH CDR1は配列番号188に示されるアミノ酸配列を有し、ＶH CDR2は配列番号189に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶH CDR3は配列番号190に示されるアミノ酸配列を有する）；及び次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む軽鎖可変領域（ＶL）（ＶL CDR1は配列番号191に示されるアミノ酸配列を有し、ＶL CDR2は配列番号192に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶL CDR3は配列番号193に示されるアミノ酸配列を有する）を含む。前の段落に言及したLGALS3BP Ig融合タンパク質の３つのＶH CDRsと３つのＶL CDRsの縮合体は、配列番号28のアミノ酸配列に示される。
【０１７４】
一実施形態において、本発明は、LGALS3BPに特異的に結合するLGALS3BP Ig融合タンパク質を開示し、ここで該Ig融合タンパク質は、次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む重鎖可変領域（ＶH）（ＶH CDR1は配列番号194に示されるアミノ酸配列を有し、ＶH CDR2は配列番号195に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶH CDR3は配列番号196に示されるアミノ酸配列を有する）；及び次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む軽鎖可変領域（ＶL）（ＶL CDR1は配列番号197に示されるアミノ酸配列を有し、ＶL CDR2は配列番号198に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶL CDR3は配列番号199に示されるアミノ酸配列を有する）を含む。前の段落に言及したLGALS3BP Ig融合タンパク質の３つのＶH CDRsと３つのＶL CDRsの縮合体は、配列番号29のアミノ酸配列に示される。
【０１７５】
一実施形態において、本発明は、LGALS3BPに特異的に結合するLGALS3BP Ig融合タンパク質を開示し、ここで該Ig融合タンパク質は、次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む重鎖可変領域（ＶH）（ＶH CDR1は配列番号200に示されるアミノ酸配列を有し、ＶH CDR2は配列番号201に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶH CDR3は配列番号202に示されるアミノ酸配列を有する）；及び次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む軽鎖可変領域（ＶL）（ＶL CDR1は配列番号203に示されるアミノ酸配列を有し、ＶL CDR2は配列番号204に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶL CDR3は配列番号205に示されるアミノ酸配列を有する）を含む。前の段落に言及したLGALS3BP Ig融合タンパク質の３つのＶH CDRsと３つのＶL CDRsの縮合体は、配列番号30のアミノ酸配列に示される。
【０１７６】
一実施形態において、本発明は、LGALS3BPに特異的に結合するLGALS3BP Ig融合タンパク質を開示し、ここで該Ig融合タンパク質は、次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む重鎖可変領域（ＶH）（ＶH CDR1は配列番号206に示されるアミノ酸配列を有し、ＶH CDR2は配列番号207に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶH CDR3は配列番号208に示されるアミノ酸配列を有する）；及び次の３つの相補性決定領域（CDR）を含む軽鎖可変領域（ＶL）（ＶL CDR1は配列番号209に示されるアミノ酸配列を有し、ＶL CDR2は配列番号210に示されるアミノ酸配列を有し、そしてＶL CDR3は配列番号211に示されるアミノ酸配列を有する）を含む。前の段落に言及したLGALS3BP Ig融合タンパク質の３つのＶH CDRsと３つのＶL CDRsの縮合体は、配列番号31のアミノ酸配列に示される。
【０１７７】
一実施形態では、ＶHとＶLが単一ポリペプチド鎖中に存在する。例えば、LGALS3BPに特異的に結合するIg融合タンパク質は下記のものである：
(i) 一本鎖Fv断片（scFv)；又は
(ii) 二量体scFv（di-scFv)；又は
(iii) Fcに連結された又は重鎖定常ドメイン（ＣH）2及び／又はＣH3に連結された(i)もしくは(ii)；又は
(iv) 免疫エフェクター細胞に結合するタンパク質に連結された(i)もしくは(ii)。
【０１７８】
本発明の特定の実施形態では、ＶLとＶHが別々のポリペプチド鎖中に存在することが意図される。例えば、LGALS3BPに特異的に結合するIg融合タンパク質は下記のものである：
(i) ダイアボディ；又は
(ii) トリアボディ；又は
(iii) テトラボディ；又は
(iv) Fab；又は
(v) F(ab’)2；又は
(vi) Fv；又は
(vii) Fcに連結された又はＣH2及び／又はＣH3に連結された(i)〜（vi)のいずれか１つ。
【０１７９】
本発明の好ましい実施形態では、本発明のLGALS3BPに特異的に結合するIg融合タンパク質が、全長（完全）抗体である。
【０１８０】
第１表〜第７表は、本発明の種々の実施形態により記載されるLGALS3BPに特異的に結合するIg融合タンパク質を記述している種々のアミノ酸配列を示す。
第１表：統合したＶH 及びＶL CDR配列
【０１８１】
【表１−１】
2020502507.tif 000003
【０１８２】
【表１−２】
2020502507.tif 000004
【０１８３】
第２表：ＶH 及びＶL ELISA反応性
【０１８４】
【表２】
2020502507.tif 000005
【０１８５】
第３表：ＶH 及びＶL 配列の個別CDR5
【０１８６】
【表３−１】
2020502507.tif 000006
【０１８７】
【表３−２】
2020502507.tif 000007
【０１８８】
【表３−３】
2020502507.tif 000008
【０１８９】
【表３−４】
2020502507.tif 000009
【０１９０】
第４表：ＬH 配列の個々のCDR5
【０１９１】
【表４−１】
2020502507.tif 000010
【０１９２】
【表４−２】
2020502507.tif 000011
【０１９３】
【表４−３】
2020502507.tif 000012
【０１９４】
【表４−４】
2020502507.tif 000013
【０１９５】
【表４−５】
2020502507.tif 000014
【０１９６】
【表４−６】
2020502507.tif 000015
【０１９７】
【表４−７】
2020502507.tif 000016
【０１９８】
【表４−８】
2020502507.tif 000017
【０１９９】
第５表：統合したＶL CDR配列
【０２００】
【表５−１】
2020502507.tif 000018
【０２０１】
【表５−２】
2020502507.tif 000019
【０２０２】
【表５−３】
2020502507.tif 000020
【０２０３】
【表５−４】
2020502507.tif 000021
【０２０４】
【表５−５】
2020502507.tif 000022
【０２０５】
第６表：ＶL 配列の個々のCDR
【０２０６】
【表６−１】
2020502507.tif 000023
【０２０７】
【表６−２】
2020502507.tif 000024
【０２０８】
【表６−３】
2020502507.tif 000025
【０２０９】
【表６−４】
2020502507.tif 000026
【０２１０】
【表６−５】
2020502507.tif 000027
【０２１１】
【表６−６】
2020502507.tif 000028
【０２１２】
【表６−７】
2020502507.tif 000029
【０２１３】
第７表：統合したＶH CDR配列
【０２１４】
【表７−１】
2020502507.tif 000030
【０２１５】
【表７−２】
2020502507.tif 000031
【０２１６】
【表７−３】
2020502507.tif 000032
【０２１７】
【表７−４】
2020502507.tif 000033
【０２１８】
【表７−５】
2020502507.tif 000034
【０２１９】
【表７−６】
2020502507.tif 000035
【０２２０】
【表７−７】
2020502507.tif 000036
【０２２１】
【表７−８】
2020502507.tif 000037
【０２２２】
LGALS3BP検出アッセイ及びキット
本発明の一実施形態はキットである。このヒトuG3BP ELISAキットは、尿試料中のヒトG3BP（ガレクチン３結合タンパク質、LGALS3BP、レクチンガラクトシド結合性可溶性３結合タンパク質、M2BBP；Mac-2 BP；90K/Mac-2結合タンパク質）の非放射性定量に用いられる。１つのキットが38種の未知試料を二通りで測定するのに十分である。
【０２２３】
〔アッセイ理論〕
このアッセイは、1) 抗ヒトG3BPモノクローナル抗体が被覆されたマイクロタイタープレートのウェルへの、サンプル由来のヒトG3BP分子の捕捉、2）サンプル由来の未結合物質の洗浄、3) 捕捉された前記分子への二次ビオチン化抗ヒトG3BPモノクローナル抗体の結合、4) サンプル由来の未結合物質の洗浄、5) 固定化されたビオチン化抗体へのストレプトアビジン−西洋わさびペルオキシダーゼ（HRP)結合体の結合、6）過剰な遊離酵素結合体の洗浄、及び7) 基質3,3’,5,5’−テトラメチルベンジジン（TMB)の存在下で西洋わさびペルオキシダーゼ活性をモニタリングすることによる、固定化抗体−酵素結合体の定量。酵素活性は、形成された生成物の酸性化後に450 nm-590 nmでの吸光度の増加により分光光度的に測定する。吸光度の増加は、未知試料中の捕捉されたヒトG3BP量に正比例するので、この量は、既知濃度のヒトG3BPの参照標準を使った同アッセイにおいて作成された基準曲線からの外挿により、誘導することができる。当業者は、配列番号２〜31により表される抗ヒトG3BPモノクローナル抗体を当該アッセイに組み入れることができることを理解するだろう。
【０２２４】
〔供給試薬〕
各キットは、１枚の96ウェルプレート上で実施するのに十分であり、次の試薬を含有する（全ての試薬は２〜８℃で保存する）：
【０２２５】
【表８】
2020502507.tif 000038
【０２２６】
〔保存と安定性〕
全ての構成要素は２〜８℃で輸送され保存される。将来の使用のために再構成した標準液及び対照を凍結することができるが、凍結／融解工程の繰り返しは避けるべきである。使用前に全ての試薬上の使用期限を参照すること。同一ロット番号のものでない限り、異なるキットからの試薬を混合してはならない。
【０２２７】
〔必要であるが供給されない材料〕
1. マルチチャンネルピペットとピペットチップ：5-50μL及び50-300μL
2. ピペットとピペットチップ：10μL-20μL又は20μL-100μL
3. 試薬貯蔵庫
4. ポリプロピレン遠心管
5. ボルテックスミキサー
6. 脱イオン水
7. 450 nmと590 nmでの吸光度を読むことができるマイクロタイタープレートリーダー
8. 軌道旋回マイクロタイタープレート振盪器
9. 吸収紙又は布
10.
【０２２８】
〔尿試料採取及び保存〕
尿試料の調製
・試料を４℃で遠心分離して破片を取り除き、即座にアッセイするか又はアリコートに分けて≦-20℃で試料を保存する。
・凍結／融解工程の繰り返しを避ける。
・尿試料はアッセイ前にアッセイ緩衝液で１：10希釈を要する場合がある。
【０２２９】
注意：
・希釈済又はニートの尿試料を最大100μL／ウエルで使用することができる。
・全ての試料はポリプロピレン管中に保存しなければならない。「ガラス容器中で試料を保存してはならない」。
【０２３０】
〔試薬調製〕
ヒトG3B標準調製物
1. ピペットを使って、ヒトG3BP標準液を500μLの蒸留水又は脱イオン水で再構成する。穏やかに反転させて混合し、５分間静置し、次いで十分に混合する。
【０２３１】
2. ７本のポリプロピレン遠心管をチューブ１，２，３，４，５，６及び７とラベル付けする。200μLのアッセイ緩衝液をチューブ１，２，３，４，５及び６に加える。500μLの前記再構成標準液をチューブ７に添加して十分混合し、そのチューブ７の100μLをチューブ６に移して十分混合し、チューブ６の100μLをチューブ５に移して十分混合し、チューブ５の100μLをチューブ４に移して十分混合し、チューブ４の100μLをチューブ３に移して十分混合し、チューブ３の100μLをチューブ２に移して十分混合し、チューブ２の100μLをチューブ１に移して十分混合することにより、倍々希釈液を調製する。0 ng/mLの標準液（バックグラウンド）がアッセイ緩衝液である。
【０２３２】
注意：希釈ごとに毎回チップを交換すること。分注する前に標準液でチップを湿らせること。再構成した標準液のうちの未使用の部分は小アリコートに分割して≦-20℃で保存すること。複数回の凍結／融解工程は避けること。
【０２３３】
【表９】
2020502507.tif 000039
【０２３４】
〔試薬の調製（続き）〕
Ｂ．ヒトG3BP QC１及び２調製物
各々のヒトG3BP QC１及びQC2を500μLの蒸留水又は脱イオン水で再構成し、完全な水和が得られるように穏やかに反転させる（穏やかに混合し、５分静置し、次いで十分混合する）。再構成したQC調製物の未使用部分は、小分けして≦-20℃で保存すること。それ以上の凍結／融解工程は避けること。
【０２３５】
Ｃ．洗浄緩衝液の調製
10×洗浄緩衝液を室温に置き、全ての塩が溶解するように混合する。50 mLの10×洗浄緩衝液を450 mLの脱イオン水で希釈する。未使用部分は１か月まで２〜８℃で保存できる。
【０２３６】
〔ヒトuG3BP ELISAアッセイ手順〕
アッセイをセットアップする前に全ての試薬を室温に加温する。
1. マイクロタイターアッセイプレートから必要な数の小片を取り出す。未使用の小片はアルミホイル袋の中に再封止し、２〜８℃で保存する。空のプレートホルダーの中に小片を集める。300μLの希釈済洗浄緩衝液をプレートの各ウエルに添加する。洗浄緩衝液をデカンテーションし、プレートを反転させ、吸収性タオルの上で数回軽くたたくことにより、残余部分を取り除く。洗浄作業をもう２回繰り返す。次の工程に進む前にウェルを乾燥させないようにする。アッセイに自動化装置を使用する場合、このプロトコルに記載の全ての洗浄工程はその製造元の指示書に準ずる。
【０２３７】
2. 50μLのアッセイ緩衝液をウェルに添加する。
3. 50μLのアッセイ緩衝液をブランクウェルの各々に添加する。
4. 適当なウェルに50μLの標準品とQCサンプルを添加する（提案されるサンプル順の配置については「マイクロタイタープレート配置」の項目を参照のこと）。
5. 希釈された尿試料50μLを適当なウェルに添加する。
6. プレートをプレートシーラーで覆い、室温で２時間、約400〜500 rpmの中程度の速度で回転するように設定された軌道回転式マイクロタイタープレート振盪器上でインキュベートする。
【０２３８】
7. プレートシーラーを取り外し、プレートから試薬をデカンテーションする。上記と同様に軽くたたいてウェル中の残留容積を除去する。ウェルを１回洗浄当たり300μLの希釈済洗浄緩衝液で３回洗浄する。各洗浄後にデカンテーションとタップを行い、残りの緩衝液を除去する。（自動プレート洗浄機を使用する場合には、各洗浄工程の間に攪拌／浸漬工程を追加することが推奨される。）
8. 100μLの検出抗体を各ウェルに添加する。プレートをシーラーで再び覆い、約400〜500 rpmの中程度の速度で回転するように設定された軌道回転式マイクロタイタープレート振盪器上で室温で１時間インキュベートする。
9. プレートシーラーを外し、プレートから試薬をデカンテーションする。上記と同様軽くたたいてウェル中の残留容積を除去する。ウェルを１回洗浄当たり１ウェルあたり300μLの希釈済洗浄緩衝液で３回洗浄する。各洗浄後にデカンテーションとタップを行い、残りの緩衝液を除去する。
【０２３９】
10. 各ウェルに100μLの酵素溶液を添加する。プレートをシーラーで覆い、マイクロタイタープレート振盪器上で中程度の速度で振盪しながら室温にて30分間インキュベートする。
11．シーラーを外し、プレートから試薬をデカンテーションし、軽くたたいて残留容積を除去する。ウェルを１回洗浄当たり１ウェルあたり300μLの希釈済洗浄緩衝液で４回洗浄する。各洗浄後にデカンテーションとタップを行い、残りの緩衝液を除去する。
12．各ウェルに100μLの基質溶液を添加し、シーラーで覆い、プレート振盪器上で約５〜20分間振盪する。ヒトG3BP標準品のウェル中には青色が形成され、その強度はヒトG3BPの増加する濃度に比例するだろう。
注意：局所的な室温に依存して、推奨されるインキュベーション時間よりも速く又は遅く発色する場合がある。発色を視覚的に監視してインキュベーション時間を最適化すること。
【０２４０】
13. シーラーを外し、100μLの停止溶液を加え、手動でプレートを穏やかに振盪し、全てのウェル中の溶液が完全に混合するようにする。酸性化後、青色が黄色に変わるはずである。マイクロタイタープレートの底をふき取りいくらかの残留物を除去した後、プレートリーダー上で読み取る。プレートリーダーにおいて450 nm（シグナル）と590 nm（バックグラウンド）での吸光度を５分間以内で読み、その際どのウェル中にも気泡が存在しないようにする。吸光度単位の差を読む。最も高いヒトG3BP標準の吸光度が約2.5〜3.5であるべきであるが、使用するプレートリーダーの性能を超えるべきではない。
注意：尿サンプルが1：10希釈される場合には、最終結果のサンプル中のG3BPのng/mL濃度は、10倍の希釈率を乗じなければならない。
ヒトuGBP ELISAキットについてのアッセイ手順
【０２４１】
【表１０】
2020502507.tif 000040
【０２４２】
第９表：マイクロタイタープレート配置（ヒトu3BP ELISA)
【０２４３】
【表１１】
2020502507.tif 000041
【０２４４】
第１０表：典型的な基準曲線のグラフ
【０２４５】
【表１２】
2020502507.tif 000042
【０２４６】
〔アッセイ特性〕
Ａ．感度
ヒトG3BPの最小検出可能濃度（MinDC)は0.08 ng/mLである。それはMILLIPLEX（登録商標）Analyst 5.1を用いることにより算出される。それは、もし無限数の標準濃度を同一条件下で該アッセイに供したら、どのような経験的MiniDC値となるかを数学的に決定することにより、アッセイの真の検出限界を測定する。報告される数値は多重アッセイ（ｎ＝８）のMinDCの平均＋２標準偏差である。
Ｂ．特異性
このアッセイで使用する抗体ペアはヒトG3BPに特異的である。
Ｃ．精度
【０２４７】
【表１３】
2020502507.tif 000043
【０２４８】
このuGBP ELISAキットのアッセイ変動を、尿サンプルに関するuG3BP検量線上の２点のレベルで調べた。平均アッセイ内変動は、指摘のサンプルの８回の測定値の結果から算出した。各サンプルの平均アッセイ内変動は、各アッセイにおいて二通りのサンプルを使った８つの別々のアッセイから算出した。（尿試料はアッセイ前にアッセイ緩衝液で希釈した。）
【０２４９】
Ｄ．アッセイサンプル中のG3BPのスパイク回収率
８本の尿サンプル中のヒトG3BPの平均回収率は103％であった。３種の濃度のヒトG3BPを各尿サンプル（ｎ＝８）に添加し、生成した各サンプルのG3BP含量をヒトu3BP ELISAによりアッセイした。回収率＝〔（観測されたG3BP／（スパイクしたG3BP濃度＋基礎G3BP)〕×100％。（尿サンプルはアッセイ前にアッセイ緩衝液で希釈した。）
Ｅ．サンプル希釈液の直線性
８本の尿サンプルにおける直線性期待値の平均％は96％であった。アッセイ緩衝液の必要量をそれぞれ１，２，４，８倍の希釈率を生じるように添加した。％期待値＝（観測値／期待値）×100％。（尿サンプルはアッセイ前にアッセイ緩衝液で希釈した。）
【実施例】
【０２５０】
実験例
次の実施例は本発明を単に説明するためのものであり、本発明の範囲を限定するものであると解釈すべきではない。
【０２５１】
〔実施例１〕
LGALS3BP発現はLN患者からのPBMCにおいて増加し、それらのインターフェロン状態と相関する
LN患者における疾患活動性の予測マーカーを探すために、LN患者から単離したPBMCのmRNAプロファイルを評価し、それらのプロファイルを健常対照（HC）のものと比較した。PBMCは、HC（ｎ＝４）とLNドナー（ｎ＝９）の全血からフィコール勾配により単離した。遺伝子発現プロファイルはRNA-seqにより実装した。FPKM値が示される。LN患者を４つのIFN誘導性遺伝子、すなわちIFI44L、RSAD2、MX1及びOAS2（Hagberg N及びRonnblom L, Scand J Immunol. 2015 Sep; 82(3):199-20）のメジアン平均ｚスコアに基づいて、低インターフェロン（IFN）群又は高IFN群にグループ分けした。LGALS3BP mRNAレベルは、LN（低IFN）群（ｐ＝0.044）及びHC群（ｐ＝0.028）に対比してLN（高IFN）群において有意に高かった。上記プロファイリングから、LGALS3BPが、LGALS3BP mRNA発現のレベルを用いてLN PBMCとHC PBMCとを鑑別するのに用いることができる、最も有効な遺伝子の１つであることが分かった（図１）。LN患者間でLGALS3BPのレベルに有意な変動性があることも観察された。LN患者はしばしば、インターフェロン誘導性遺伝子のレベルにより測定されるようなそれらのＩ型インターフェロンレベルに基づいて分類される（Scand J Immunol. 2015 Sep; 82(3):199-20）。それに続く評価により、LNサンプル間のインターフェロンレベルがLGALS3BP中に観察される大幅な変動性を説明することができるかどうかを調べた。ループス腎炎患者では、Ｉ型インターフェロン誘導性遺伝子の二峰性の分布が観察され、このことは、高インターフェロンシグニチャーを有する患者もいれば、低インターフェロンシグニチャーを有する患者もいることを示す。ループス腎炎患者をそれらの２群に更に分別するために、４つの既知インターフェロン誘導性遺伝子、すなわちIFI44L、RSAD2、OAS2及びMX1の発現レベルを、全サンプルにわたってそれらの４遺伝子の平均ｚスコアを求めることにより組み合わせた。中央値（メジアン）レベルに等しいか又は低いインターフェロンシグニチャースコアを有するサンプルを、低インターフェロン群に割り付けた。該メジアン値より上のインターフェロンスコアを有するサンプルを、高インターフェロン群に割り付けた。ドナーをそれらの２つの群に分類した後、LGALS3BPレベルは健常対照に比較して低インターフェロン群では５倍高く、健常対照に比較して高インターフェロン群では30倍高かった（ｐ＝0.028；図１）。更に、LGALS3BPレベルは低インターフェロン群に比較して高インターフェロン群で６倍高かった（ｐ＝0.044）。これらのデータは、LGALS3BP発現がLN患者で増加し、LGALS3BP発現がおそらくＩ型インターフェロンにより調節されるのであろうということを証明する。
【０２５２】
〔実施例２〕
LGALS3BP発現はIFNα及び他の炎症刺激により誘導されうる
LGALS3BPは、Ｉ型インターフェロンによる調節と一致するIRF7結合部位を有する。どの経路がLGALS3BP発現を誘導できるかを発見するために、初代ヒト単球をインビトロでマクロファージに分化させ、続いてIFNα、INFγ、TLR4アゴニスト（LPS）、TLR7/8アゴニスト（レシキモド）、及びTLR9アゴニスト（CpG）を用いて刺激した。IFNα、IFNγ及びLPSはLGALS3BP mRNA発現を誘導し（図２ａ）、該タンパク質の分泌を増加させた（図２ｂ）。全ての刺激剤がIL-6の分泌を誘導した。これらのデータは、Ｉ型インターフェロンがLGALS3BP発現を発動させるだけでなく、IFNγや他の生来のトリガーも発動させることができることを示す。ヒストンアセチル化部位の位置に基づくと、LGALS3BP発現はLGALS3BP遺伝子中の４つの異なる領域、すなわちプロモーター開始部位、上流エンハンサー（５K上流の領域）、イントロン部位又は３′UTR、に結合する因子により調節されるようである。３種の異なる方法によるモチーフスキャンは、免疫関連の転写調節因子を同定した。IRF、AP-1及びSTAT並びに他の重要な因子（例えばNF-κB）は、LGALS3BP遺伝子座の中及び周辺に見つかった。転写因子結合の予測は、LGALS3BP発現がインターフェロン調節因子（IRF）並びにSTAT、NF-κB及びAP-1を活性化する別の免疫刺激剤を通して、インターフェロンにより調節されることを示す。
【０２５３】
〔実施例３〕
LGALS3BPタンパク質はLN患者からの尿中に増加するが血漿中には増加しない
PBMC中のmRNAレベルの上昇が患者の血中のLGALS3BPタンパク質レベルの増加をもたらすかどうかを決定するために、LN患者、SLE患者及び健常対照（HC）ドナーからの血漿において、ELISAによりLGALS3BPを測定した。PBMC中のmRNAの上方制御にもかかわらず、それらの３つの群において血漿LGALS3BPレベルに全く有意な差は認められなかった（図３）。PBMCだけが総血漿LGALS3BPの微量に起因することが証明されている。それにもかかわらず、LN患者からの尿ではSLE患者や健常対照に比較して有意に高いLGALS3BPレベルが観察された。
【０２５４】
〔実施例４〕
LN患者の腎臓においてLGALS3BP発現が上昇する
LNは腎臓の炎症により特徴づけられる。疾患活動性を監視するための現行の試験は、血中及び尿中の腎機能を測定するが、原因となる炎症は測定しない。LGALS3BPは炎症性刺激により誘導され、尿中のLGALS3BPの存在の増加は腎臓炎症を反映する可能性がある。増加した尿LGALS3BPがループス腎炎の炎症をモニタリングするための尿タンパク測定基準として適切かどうかを判断するために、LGALS3BPのmRNA発現プロファイルを腎生検において調べた。欧州腎臓cDNAバンクから収集された合計46の腎生検サンプル（ｎ＝14 HC及び32 LN）を含むGEOデータセット（GSE32592）を使用した。糸球体と尿細管間質を顕微解剖により単離し、Affymetrix GeneChipアレイを用いて発現プロファイリングを実行した。初期の品質管理評価及び正規化の後、LGALS3BPの発現レベルは、健常対照と比較してLN患者の糸球体（1.5倍、p＝9.2e-12）及び尿細管間質（2.2倍、p＝1.5e-4）の両方において有意に高いことが認められた（図４ａ）。次に、２つの追加の遺伝子、CCL2（MCP-1)とTNFSF12（TEWAK)〔両方とも潜在的な尿バイオマーカーとして提案されている（Schwartz他、Ann NY Acad. Sci. 2007 Aug; 1109:265-74）〕の発現プロファイルを評価した。そのデータセットでは、CCL2（MCP-1)（図４ｂ）の発現レベルは、糸球体（1.3倍、p＝0.392）と尿細管間質（0.7倍、p＝0.33）の両方において、LNサンプルとHCサンプルとで同等であることがわかった。TNFSF12の発現レベル（図４Ｃ）は、LNサンプルの糸球体において有意に高かった（1.2倍、p＝9.1e-5）が、LNサンプルの尿細管間質では有意に低かった（0.85倍、p＝0.017）。これらのデータは、LGALS3BPが、CCL2（MCP-1）やTNFSF12よりも、HCサンプルとLNサンプルとを識別するための適切な尿予測マーカーであり得ることを示唆する。
【０２５５】
LN患者において有意に活性調節された全ての遺伝子を解明するために、大域的差次的発現も評価した。ＲパッケージLimmaを使用して、組織間差を制御しながら差次的発現の計算を実装するモデルを構築した。これにより、糸球体と尿細管間質の両方からのデータを統合して利用できるようになった。解析に含まれた12,030の全遺伝子のうち、わずかに166個の遺伝子が0.01未満のｐ値と、少なくとも２の倍数変化を有した。LNで有意に上方制御された遺伝子は137個を数えたが、一方で29個の遺伝子がLNにおいて有意に下方制御された。当該分析において、LGALS3BPは2.11e-8のｐ値を有し、最低のｐ値を有する遺伝子の上位３％の中にあった。これらのデータは、LGALS3BPが、LN腎生検の糸球体と尿細管間質の両方において有意に上方制御された数少ない遺伝子のうちの１つであり、そのため、有効な予測マーカーであることを確証する。
【０２５６】
抗LGALS3BP抗体を用いたLN腎生検の染色は、特定の領域、特に尿細管間質性腎炎を伴う又は伴わない患者の尿細管周囲において、レベルの上昇と点状パターンを示した（図４ｄ）。健常対照サンプル中のLGALS3BPシグナルはそれほど強くなく、より拡散しており、大部分が二次抗体（FITC抗ウサギ抗体）のバックグラウンド染色によるものであった。糖尿病（ＤＭ）患者及びIgA腎症（IgAN）患者からのサンプルは、幾分染色があるがLNよりも弱いLGALS3BP染色を示した。
【０２５７】
〔実施例５〕
LGALS3BP発現は、腎臓損傷が検出された場合にのみLNのマウスモデルにおいて増加する
LGALS3BP腎臓発現の増加が局所炎症により誘導されるかどうかを更に調べるために、BXSB-Yaaループスマウスにおいてその発現を測定した。このマウスはSLE及びLN様炎症の全身症状と腎臓の損傷を自然発症する。このモデルは、TLR7遺伝子を包含しそして増加したTLR7発現とＩ型インターフェロン炎症を生じる、Yaa遺伝子座の複製に基づいている。マウスにおけるLGALS3BP相同体の上昇レベルは、糸球体の半月体、プロテイン円柱、間質性炎症及び血管炎を評価する組織学により腎臓の損傷と炎症が検出された場合にのみ、疾患に伴って認められた（図５）。これらの結果は更に、LGALS3BPが腎臓の炎症過程の間に局所的に発現されることを示す。
【０２５８】
〔実施例６〕
LGALS3BPタンパク質はLN患者の尿中で上昇する
以下の実験は、患者の腎臓におけるLGALS3BP発現の増加が、LN患者、SLE患者及び健常対照ドナーを鑑別することができる、尿タンパクレベルの測定可能な差につながるかどうかを決定するために設計された。LGALS3BPタンパク質を、LN患者、SLE患者及び健常対照からの尿のELISAにより測定した。データを尿クレアチニン濃度に対して正規化した後、LGALS3BP（図３Ａ）がSLE患者（6.8倍、p＜0.001）とHCドナー（17.7倍、p＜0.001）よりもLN患者において有意に高いことが認められた。HCドナーに対比してSLE患者で高レベルのLGALS3BPが見られる傾向があったが、この傾向は統計的に有意ではなかった（2.6倍、p＝0.59）。
【０２５９】
次に、LGALS3BPの尿タンパクレベルが、総タンパクやアルブミンレベルなどの他の一般的な尿検査値と比較してどうなるかを検討した。すべての値を尿クレアチニンレベルに対して正規化した後、総タンパク又はアルブミンレベルも同様に、SLE患者とHCドナーからLN患者を鑑別する機能を果たすことが分かった。総タンパク（図６Ｂ）とアルブミン（図６Ｃ）の双方のレベルは、SLE患者又はHCドナーよりもLN患者において有意に高かった（どちらも p＜0.001）。
【０２６０】
これらのデータを診断テストの構築に適用するには、腎臓炎症に関連する値を定義する必要があった。これらの値にたどり着くために、健常対照サンプルからの最大値をカットオフとして設定した。カットオフ値は、最大の健常対照サンプルよりも高い値を有する任意の試料がおそらく腎臓炎症を有するであろうということを意味する。この理論的根拠は、健常対照ドナーは何も炎症を有するはずはなく、従って、健常対照に認められる値は正常範囲を表すであろうという仮定に基づいている。LGALS3BP／クレアチニン比、タンパク／クレアチニン比、及びアルブミン／クレアチニン比について、カットオフ値はそれぞれ3.133、0.166、及び0.457であった。これらの値を用いると、LGALS3BPについては、50本のLN検体と12本のSLEサンプルがカットオフ値より上であることが分かった（図６Ａ）。総タンパクについては、53本のLNサンプルと18本のSLEサンプルがカットオフを上回った（図６Ｂ）。アルブミンについては、56本のLNサンプルと９本のSLEサンプルがカットオフを超えた（図６Ｃ）。これらのデータは、LGALS3BPが、腎臓に炎症を起こしている可能性があるサンプルの同定において、より保守的であることを示唆している。カットオフ値を超えるLGALS3BPレベルを有するSLEサンプルの場合、それらはループス腎炎を発症するリスクが最も高い患者、又は診断未確定のLNを有するSLE患者である可能性がある。
【０２６１】
〔実施例７〕
LGALS3BP尿レベルは腎臓機能や濾過能力の反映ではない
LNの予測マーカーとしてのLGALS3BPを検証するために、総タンパク又はアルブミン値の観点から、検出されたLGALS3BPを更に調べた。これを決定するために、尿クレアチニンレベルに対して正規化した後、それら３つの測定値を互いに比較してピアソン相関係数を評価した。この経験的調査を通して、総タンパクレベルとアルブミンレベルとの間に非常に強い相関があることが見出された（Ｒ＝0.95；図７Ａ）。LGALS3BPと総タンパク間（Ｒ＝0.513；図７Ｂ）、及びLGALS3BPとアルブミンレベル間（Ｒ＝0.507；図７Ｃ）との間にも正の相関があることがわかった。これらの相関係数に基づいて、このデータは、総タンパク又はアルブミン測定値と比較して、LGALS3BP測定値が差次的読み出しを提供することを実証する。より具体的に言えば、高レベルのLGALS3BPと低レベルの総タンパクを有する患者サンプルでは、この発現プロファイルが、腎臓に高レベルの炎症を有するが比較的低レベルの腎臓損傷を有する患者と一致し；初期LNのLN病態生理学所見と一致する。低レベルのLGALS3BPと高い総タンパクレベルを示す患者試料では、その発現プロファイルが、低レベルの腎炎を有するが高レベルの腎臓損傷を有する患者と一致する。腎不全のリスクがあるクラスＶ末期腎臓病のLN病態生理学と一致する。これらのデータは、LGALS3BPの尿測定が、総尿タンパク又はアルブミンレベルを測定することに比べて、LNの重篤度や進行に関する多様でかつより繊細な診断情報を提供することを証明する。
【０２６２】
〔実施例８〕
尿LGALS3BPレベルは経時的に変動する
LN患者は、SLE患者やHCドナーと比較して、より高レベルの総タンパク、アルブミン及びLGALS3BPを有する。大部分のサンプル提供者において、これらの値が、特にHC群とSLE患者群で、ほとんど一定状態であった。しかしながら、一部のLN患者では、総タンパク（図５Ａ）及びアルブミン（図５Ｂ）並びにLGALS3BP（図５Ｃ）値にスパイクが観察された。これらの測定基準は、それ自体として（すなわちLN患者における腎臓炎症のモニタリング）だけでなく、LN患者における特定の免疫抑制治療の有効性を評価するのにも有用である。
【０２６３】
アメリカ合衆国における全ての目的のために、本明細書中に引用される各々の及び全ての刊行物と特許文書は、あたかもそのような各刊行物又は文書が参照により本明細書に組み入れられることが具体的にかつ個別に指摘されたかのように、参照により組み入れられる。
【０２６４】
本発明を特定の実施形態を参照しながら説明したが、特定の状況又は意図する使用目的に適合するように変更を加えたり同等物を代用することができ、それにより特許請求の範囲から逸脱することなく本発明の利益を達成することができる。
【０２６５】
〔実施例９〕
様々な腎臓病群における尿LGALS3BP／クレアチニン比
図２５に示すように、活動性（フレア）の時には、LN群において優先的に尿LGALS3BPレベルが上昇する。これは、尿LGALS3BP発現の疾患特異的パターン、及び主にLNとの関連で活動性炎症により引き起こされる傾向を示す。糖尿病性腎症（DM）、IgAN及びANCAは、低い尿LGALS3BPレベルを示す。ANCAやDMが慢性的な低悪性度炎症により特徴づけられることを考慮すると、このデータは尿LGALS3BPレベルが疾患特異的であり、かつ非LN特異的腎臓炎症状態により増加しないことを示す。
【０２６６】
活動性LNと寛解LNとは明らかな相違を示す。本出願に記載の尿LGALS3BPアッセイの利点、すなわち活動性疾患と慢性疾患とを鑑別することを考慮すると、この相違は重要である。図２６Ａと２６Ｂに示されるように、尿LGALS3BPＰデータをクレアチニン濃度に対して正規化し、自然対数変換し、そしてデータ分析のために異常値を除外した。また、平均LGALS3BP／クレアチニン比及び標準誤差平均を示す、ANOVAとWilcoxonノンパラメトリック多重比較を含むJMP pro v12を利用した。点線は、健常対照についての平均＋２標準偏差を示す（132.95）。
【０２６７】
〔実施例１０〕
尿LGALS3BP／クレアチニン比及び尿タンパク／クレアチニン比はLNと相関しない
図２７Ａ、２７Ｂ及び２７Ｃに示すように、患者の尿サンプルをLGALS3BP／クレアチニン値及び尿総タンパク／クレアチニン（UPCR）値について比較した。これらのデータは、LGALS3BP／クレアチニンが、活動性LN腎臓疾患におけるUPCR（すなわち損傷）よりもむしろ何か他のもの（すなわち炎症）について報告していることを示す。活動性LNでUPCR値が上昇することなくLGALS3BP／Cr値が上昇するという事実は、この測定基準が活動性炎症について報告することを示す。寛解期患者での上昇したUPCRを呈するが低LGALS3BP／Crレベルを有する多くのサンプルにこのことが当てはまり、炎症は解消したが腎臓損傷が持続していることを示す。にもかかわらず、上昇したLGALS3BP／Crを示すがUPCRの低下を示す寛解期の患者は、LNの再燃のリスクがある。上記の図において、Ｒ2はピアソン相関係数である。
【０２６８】
〔実施例１１〕
ＬＮ患者における尿LGALS3BP／クレアチニンレベルの変動
図２９に示されるように、ＬＮ患者において尿LGALS3BP／クレアチニン比の経時的な変動が見られた。より具体的には、ＬＮ患者の尿を毎月モニタリングした。それらのデータは、尿LGALS3BPレベルの経時的変動が炎症の早期指標として相関することを示す。
当業者に対する本発明の教示に照らして、本発明の精神及び範囲から逸脱することなく何らかの変更や修正をなし得ることが理解される。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図９】
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【図１０Ａ】
2020502507.tif 000063
【図１０Ｂ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１１Ｄ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１２Ｃ】
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【図１２Ｄ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１３Ｃ】
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【図１３Ｄ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１４Ｃ】
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【図１４Ｄ】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１５Ｃ】
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【図１５Ｄ】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【図１６Ｃ】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１Ａ】
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【図２１Ｂ】
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【図２２Ａ】
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【図２２Ｂ】
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【図２３Ａ】
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【図２３Ｂ】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６Ａ】
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【図２６Ｂ】
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【図２７Ａ】
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【図２７Ｂ】
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【図２７Ｃ】
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【図２８Ａ】
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【図２８Ｂ】
2020502507.tif 000106
【図２９】
2020502507.tif 000107
【図３０】
2020502507.tif 000108
【配列表】
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【国際調査報告】
2020502507.tif 000109
2020502507.tif 000110
2020502507.tif 000111
2020502507.tif 000112
2020502507.tif 000113