(57)【要約】本出願は、標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールと、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能なＴ細胞受容体モジュールとを含む、キメラ抗体−ＴＣＲ構築物を提供する。これらの構築物を作製し、使用する方法も提供される。
2020517287.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
キメラ抗体Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）構築物（ｃａＴＣＲ）であって、標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールと、第１のＴＣＲ膜貫通ドメイン（ＴＣＲ−ＴＭ）を含む第１のＴＣＲドメイン（ＴＣＲＤ）と第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤを含むＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）とを含み、前記ＴＣＲ−ＴＭのうち少なくとも１つが、天然に存在せず、前記ＴＣＲＭが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を促進し、前記抗原結合モジュールが、天然に存在するＴ細胞受容体抗原結合部分ではない、ｃａＴＣＲ。
【請求項２】
前記ＴＣＲ−ＴＭが両方とも、天然に存在しないものである、請求項１に記載のｃａＴＣＲ。
【請求項３】
前記第１のＴＣＲ−ＴＭが、前記第１の天然に存在するＴ細胞受容体の膜貫通ドメインの１つに由来し、前記第２のＴＣＲ−ＴＭが、前記第１の天然に存在するＴ細胞受容体の他の膜貫通ドメインに由来する、請求項１又は２に記載のｃａＴＣＲ。
【請求項４】
前記第１の天然に存在するＴ細胞受容体が、γ／δ  Ｔ細胞受容体である、請求項３に記載のｃａＴＣＲ。
【請求項５】
前記ＴＣＲＭが、前記第１の天然に存在するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、前記少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することを可能にする、請求項３又は４に記載のｃａＴＣＲ。
【請求項６】
前記第１のＴＣＲ−ＴＭが、その由来となる膜貫通ドメインと比較して５個までのアミノ酸置換を含み、及び／又は前記第２のＴＣＲ−ＴＭが、その由来となる膜貫通ドメインと比較して５個までのアミノ酸置換を含む、請求項３〜５のいずれか一項に記載のｃａＴＣＲ。
【請求項７】
前記第１のＴＣＲ−ＴＭ中の置換アミノ酸が、前記第２のＴＣＲ−ＴＭ中の置換アミノ酸に対して近位である、請求項６に記載のｃａＴＣＲ。
【請求項８】
１つ以上の置換アミノ酸が、ＣＤ３に対する結合に関与する前記第１のＴＣＲ−ＴＭ中又は前記第２のＴＣＲ−ＴＭ中のアミノ酸に対して近位である、請求項６又は７に記載のｃａＴＣＲ。
【請求項９】
１つ以上の置換アミノ酸が、それらの対応する非置換アミノ酸よりも疎水性である、請求項６〜８のいずれか一項に記載のｃａＴＣＲ。
【請求項１０】
前記第１のＴＣＲ−ＴＭが、配列番号７及び９〜１３のいずれか１つのアミノ酸配列を含み、前記第２のＴＣＲ−ＴＭが、配列番号８及び１４〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のｃａＴＣＲ。
【請求項１１】
請求項１に記載のｃａＴＣＲであって、前記第１のＴＣＲ−ＴＭ及び前記第２のＴＣＲ−ＴＭが、（ａ）それぞれ、配列番号９及び８、
（ｂ）それぞれ、配列番号７及び１４、
（ｃ）それぞれ、配列番号７及び１５、
（ｄ）それぞれ、配列番号７及び１６、
（ｅ）それぞれ、配列番号１０及び１６、
（ｆ）それぞれ、配列番号７及び１７、
（ｇ）それぞれ、配列番号７及び１８、
（ｈ）それぞれ、配列番号７及び１９、
（ｉ）それぞれ、配列番号７及び２０、
（ｊ）それぞれ、配列番号７及び２１、
（ｋ）それぞれ、配列番号７及び２２、
（ｌ）それぞれ、配列番号１１及び２３、
（ｍ）それぞれ、配列番号１２及び２４、
（ｎ）それぞれ、配列番号７及び２５、
（ｏ）それぞれ、配列番号１３及び２６のアミノ酸配列を含む、ｃａＴＣＲ。
【請求項１２】
前記ｃａＴＣＲが、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインとを含む安定化モジュールを更に含み、前記第１の安定化ドメイン及び前記第２の安定化ドメインが、前記ｃａＴＣＲを安定化する互いに対する結合親和性を有する、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のｃａＴＣＲ。
【請求項１３】
前記安定化モジュールが、ＣＨ１−ＣＬモジュール、ＣＨ２−ＣＨ２モジュール、ＣＨ３−ＣＨ３モジュール及びＣＨ４−ＣＨ４モジュールからなる群から選択される、実施形態１２に記載のｃａＴＣＲ。
【請求項１４】
前記ｃａＴＣＲが、前記抗原結合モジュールと前記ＴＣＲＭとの間にスペーサーモジュールを更に含み、前記スペーサーモジュールが、前記ＴＣＲＭに対して前記抗原結合モジュールを接続する１つ以上のペプチドリンカーを含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載のｃａＴＣＲ。
【請求項１５】
前記ｃａＴＣＲが多重特異性である、請求項１〜１４のいずれか一項に記載のｃａＴＣＲ。
【請求項１６】
前記抗原結合モジュールが、前記ＴＣＲＤの１つに結合するＶＨドメインと、他のＴＣＲＤに結合するＶＬドメインとを含む、請求項１〜１５のいずれか一項に記載のｃａＴＣＲ。
【請求項１７】
前記標的抗原が、細胞表面抗原である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載のｃａＴＣＲ。
【請求項１８】
前記標的抗原が、ペプチドと主要組織適合抗原複合体（ＭＨＣ）タンパク質とを含む複合体である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載のｃａＴＣＲ。
【請求項１９】
ｃａＴＣＲであって、
（ａ）第１の標的抗原に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインと第２の標的抗原に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインを含む多重特異性抗原結合モジュールと、
（ｂ）第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ（ＴＣＲＤ１）と第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤ（ＴＣＲＤ２）を含むＴＣＲＭとを含み、
前記ＴＣＲＭが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を促進する、ｃａＴＣＲ。
【請求項２０】
前記第１の抗原結合ドメインが、第１の重鎖可変ドメイン（ＶＨ１）と第１の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ１）を含むＦｖであり、前記第２の抗原結合ドメインが、重鎖定常ドメイン１（ＣＨ１）に融合した第２のＶＨ（ＶＨ２）と、軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）に融合した第２のＶＬ（ＶＬ２）とを含むＦａｂである、請求項１９に記載のｃａＴＣＲ。
【請求項２１】
請求項２０に記載のｃａＴＣＲであって、
（ｉ）Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＨ１−Ｌ１−ＶＨ２−ＣＨ１−ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖と、Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＬ１−Ｌ２−ＶＬ２−ＣＬ−ＴＣＲＤ２を含む第２のポリペプチド鎖；
（ｉｉ）Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＨ１−Ｌ１−ＶＬ２−ＣＬ−ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖と、Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＬ１−Ｌ２−ＶＨ２−ＣＨ１−ＴＣＲＤ２を含む第２のポリペプチド鎖；
（ｉｉｉ）Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＬ１−Ｌ１−ＶＨ２−ＣＨ１−ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖と、Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＨ１−Ｌ２−ＶＬ２−ＣＬ−ＴＣＲＤ２を含む第２のポリペプチド鎖；
又は、
（ｉｖ）Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＬ１−Ｌ１−ＶＬ２−ＣＬ−ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖と、Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＨ１−Ｌ２−ＶＨ２−ＣＨ１−ＴＣＲＤ２を含む第２のポリペプチド鎖を含み、
Ｌ１及びＬ２がペプチドリンカーである、ｃａＴＣＲ。
【請求項２２】
前記第１の抗原結合ドメインが第１のｓｃＦｖ（ｓｃＦｖ１）であり、前記第２の抗原結合ドメインが第２のｓｃＦｖ（ｓｃＦｖ２）であり、前記ｃａＴＣＲが、ＣＨ１とＣＬを更に含む、請求項１９に記載のｃａＴＣＲ。
【請求項２３】
請求項２２に記載のｃａＴＣＲであって、
（ｉ）Ｎ末端からＣ末端まで、ｓｃＦｖ１−Ｌ１−ＣＨ１−ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖と、Ｎ末端からＣ末端まで、ｓｃＦｖ２−Ｌ２−ＣＬ−ＴＣＲＤ２を含む第２のポリペプチド鎖；
又は、
（ｉｉ）Ｎ末端からＣ末端まで、ｓｃＦｖ２−Ｌ１−ＣＨ１−ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖と、Ｎ末端からＣ末端まで、ｓｃＦｖ１−Ｌ２−ＣＬ−ＴＣＲＤ２を含む第２のポリペプチド鎖を含み、
Ｌ１及びＬ２がペプチドリンカーである、ｃａＴＣＲ。
【請求項２４】
前記第１の抗原結合ドメインがｓｃＦｖであり、前記第２の抗原結合ドメインが、ＣＨ１に融合したＶＨとＣＬに融合したＶＬとを含むＦａｂである、請求項１９に記載のｃａＴＣＲ。
【請求項２５】
請求項２４に記載のｃａＴＣＲであって、
（ｉ）Ｎ末端からＣ末端まで、ｓｃＦｖ−Ｌ１−ＶＨ−ＣＨ１−ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖と、Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＬ−ＣＬ−ＴＣＲＤ２を含む第２のポリペプチド鎖；
又は、
（ｉｉ）Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＨ−ＣＨ１−ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖と、Ｎ末端からＣ末端まで、ｓｃＦｖ−Ｌ２−ＶＬ−ＣＬ−ＴＣＲＤ２を含む第２のポリペプチド鎖を含み、
Ｌ１及びＬ２がペプチドリンカーである、ｃａＴＣＲ。
【請求項２６】
Ｌ１及び／又はＬ２が、約５〜約５０アミノ酸長である、請求項２１、２３又は２５に記載のｃａＴＣＲ。
【請求項２７】
前記第１の標的抗原が、第１の細胞表面抗原であり、前記第２の標的抗原が、第２の細胞表面抗原である、請求項１９〜２６のいずれか一項に記載のｃａＴＣＲ。
【請求項２８】
前記第１の標的抗原がＣＤ１９であり、前記第２の標的抗原がＣＤ２２であるか、又は前記第１の標的抗原がＣＤ２２であり、前記第２の標的抗原がＣＤ１９である、請求項２７に記載のｃａＴＣＲ。
【請求項２９】
ＣＤ２２に特異的に結合する抗原結合ドメインが、配列番号６５のアミノ酸配列を含むＶＨのＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２及びＨＣ−ＣＤＲ３を含むＶＨと、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＶＬのＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２及びＬＣ−ＣＤＲ３を含むＶＬとを含む、請求項２８に記載のｃａＴＣＲ。
【請求項３０】
ＣＤ１９に特異的に結合する抗原結合ドメインが、配列番号７４のアミノ酸配列を含むＶＨのＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２及びＨＣ−ＣＤＲ３を含むＶＨと、配列番号７８のアミノ酸配列を含むＶＬのＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２及びＬＣ−ＣＤＲ３を含むＶＬとを含む、請求項２８又は２９に記載のｃａＴＣＲ。
【請求項３１】
前記ＴＣＲ−ＴＭのうち少なくとも１つが、天然に存在しないものである、請求項１９〜３０のいずれか一項に記載のｃａＴＣＲ。
【請求項３２】
前記第１のＴＣＲＤが、ＴＣＲサブユニットの第１の接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含み、及び／又は前記第２のＴＣＲＤが、ＴＣＲサブユニットの第２の接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含む、請求項１〜３１のいずれか一項に記載のｃａＴＣＲ。
【請求項３３】
前記第１のＴＣＲＤが、ＴＣＲ細胞内配列を含む第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は前記第２のＴＣＲＤが、ＴＣＲ細胞内配列を含む第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む、請求項１〜３２のいずれか一項に記載のｃａＴＣＲ。
【請求項３４】
請求項１〜３３のいずれか一項に記載のｃａＴＣＲをコードする、１つ以上の核酸。
【請求項３５】
請求項３４に記載の１つ以上の核酸を含む、１つ以上のベクター。
【請求項３６】
請求項１〜３３のいずれか一項に記載のｃａＴＣＲと、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子とを含む、複合体。
【請求項３７】
請求項１〜３３のいずれか一項に記載のｃａＴＣＲ又は請求項３６に記載の複合体をその表面上に提示するエフェクター細胞。
【請求項３８】
標的抗原を提示する標的細胞を死滅させる方法であって、前記標的細胞と、請求項３７に記載のエフェクター細胞とを接触させることを含み、前記ｃａＴＣＲが、前記標的抗原に特異的に結合する、方法。
【請求項３９】
医薬組成物であって、（ａ）請求項１〜３３のいずれか一項に記載のｃａＴＣＲ、請求項３４に記載の１つ以上の核酸、又は請求項３５に記載の１つ以上のベクター、又は請求項３７に記載のエフェクター細胞と、（ｂ）医薬的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
【請求項４０】
標的抗原関連疾患の治療を必要とする個体において当該疾患を治療する方法であって、有効量の請求項３９に記載の組成物を前記個体に投与することを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、２０１７年４月２６日出願の米国特許仮出願第６２／４９０，５７６号、２０１７年４月２６日出願の米国特許仮出願第６２／４９０，５７８号及び２０１７年４月２６日出願の米国特許仮出願第６２／４９０，５８０号に対する優先権を主張するものであり、それらは全て、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの配列表の提出
【０００２】
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの以下の提出物の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる：コンピュータ可読形態（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名：７５００４２０００６４０ＳＥＱＬＩＳＴ．ｔｘｔ、記録日：２０１８年４月２４日、サイズ：１６８ＫＢ）。
【０００３】
（発明の分野）
本発明は、１つ以上の標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールと、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能なＴ細胞受容体モジュールとを含む、キメラ抗体−ＴＣＲ構築物に関する。
【背景技術】
【０００４】
Ｔ細胞性免疫は、ウイルス、細菌、寄生虫感染又は悪性細胞を排除するために、抗原（Ａｇ）に特異的なＴリンパ球を発達させる獲得プロセスである。このプロセスは、自己抗原の異常な認識も伴う場合があり、自己免疫炎症性疾患を引き起こす。Ｔリンパ球のＡｇ特異性は、Ａｇ提示細胞（ＡＰＣ）上の主要組織適合抗原複合体（ＭＨＣ）分子によって提示される固有の抗原性ペプチドのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）による認識に基づく（Ｂｒｏｅｒｅら、Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、２０１１）。各Ｔリンパ球は、胸腺の成熟時の発達選択の結果として、細胞表面上で固有のＴＣＲを発現する。ＴＣＲは、αβヘテロ二量体又はγδヘテロ二量体のいずれかとして、２つの形態で生じる。Ｔ細胞は、細胞表面でαβ形態又はγδ形態のＴＣＲのいずれかを発現する。４つの鎖（α／β／γ／δ）は全て、高度に多型である「免疫グロブリン可変領域」様Ｎ末端ドメインと、「免疫グロブリン定常領域」様の第２のドメインとからなる特徴的な細胞外構造を有する。これらのドメインは、それぞれ、特徴的なドメイン内ジスルフィド架橋を有する。定常領域は、細胞膜の近位にあり、定常領域の後には、接続ペプチド、膜貫通領域及び短い細胞質尾部が続く。ヘテロ二量体ＴＣＲの２本鎖間の共有結合は、細胞外定常ドメインと、膜貫通領域とをつなぐ短い接続ペプチド配列内に位置するシステイン残基によって形成される。これらのシステイン残基が、対応する位置にありペアとなるＴＣＲ鎖システイン残基とジスルフィド結合を形成する（Ｔｈｅ  Ｔ  ｃｅｌｌ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｆａｃｔｓｂｏｏｋ、２００１）。
【０００５】
αβ及びγδＴＣＲは、非多型膜結合ＣＤ３タンパク質と会合し、ＴＣＲヘテロ二量体と、３つの二量体シグナル伝達分子ＣＤ３δ／ε、ＣＤ３γ／ε及びＣＤ３ζ／ζ又はζ／ηとからなる機能的な八量体ＴＣＲ−ＣＤ３複合体を形成する。各サブユニットの膜貫通ドメイン中のイオン化可能な残基は、相互作用により極性の網目構造を形成し、複合体を共に保持する。Ｔ細胞活性化のために、ＴＣＲのＮ末端可変領域は、標的細胞の表面上に提示されるペプチド／ＭＨＣ複合体を認識し、一方、ＣＤ３タンパク質は、シグナル伝達に関与する（Ｃａｌｌら、Ｃｅｌｌ．１１１（７）：９６７−７９、２００２）。Ｔｈｅ  Ｔ  ｃｅｌｌ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｆａｃｔｓｂｏｏｋ、２００１）。
【０００６】
従来のＴＣＲとも呼ばれるαβＴＣＲは、ほとんどのリンパ球で発現されており、グリコシル化多型α鎖及びβ鎖からなる。異なるαβＴＣＲは、ＭＨＣＩＩ分子の表面に埋め込まれた様々なペプチド（大部分はＡＰＣ細胞表面で発現する）及びＭＨＣＩ分子の表面に埋め込まれた様々なペプチド（全て有核細胞で発現される）を識別することができ、これらのペプチドの寸法及び形状は比較的一定である。γδＴＣＲは、αβＴＣＲと構造的に類似しているが、ＭＨＣ提示とは独立した様式で、炭水化物を保有する抗原、ヌクレオチドを保有する抗原又は蛍光体を保有する抗原を認識する（Ｔｈｅ  Ｔ  ｃｅｌｌ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｆａｃｔｓｂｏｏｋ、２００１；Ｇｉｒａｒｄｉら、Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１２６（１）：２５−３１、２００６；Ｈａｙｅｓら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．１６（６）：８２７−３８、２００２）。
【０００７】
過去２０年間における、免疫学及び腫瘍生物学における基本的な進歩と、多数の腫瘍抗原の同定とが合わさることで、細胞ベースの免疫治療の分野は顕著に進歩した。自己Ｔ細胞及びｅｘ  ｖｉｖｏで増殖させたＴ細胞を患者に移すことによって癌を治療することを目標としたＴ細胞療法が細胞系免疫療法の分野において占める割合は大きく、いくつかの顕著な抗腫瘍応答が得られている（Ｂｌａｔｔｍａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ．３０５（５６８１）：２００−５、２００４）。例えば、増殖させた天然に存在する腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の投与は、肝臓、肺、軟組織及び脳を含む複数の部位での大きな浸潤性腫瘍を含め、黒色腫患者の５０〜７０％の範囲の客観的な応答率にｅｘ  ｖｉｖｏで介在した（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇら、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ．８（４）：２９９−３０８、２００８；Ｄｕｄｌｅｙ  ＭＥら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２３（１０）：２３４６−５７、２００５）。
【０００８】
ＴＩＬ療法の広範な応用に対する主な制限は、抗腫瘍能（ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ）を有するヒトＴ細胞の作成が難しいことである。代替的なアプローチとして、外来性高親和性ＴＣＲを、Ｔ細胞操作を通じて患者の正常な自己Ｔ細胞に導入することができる。リンパ球が枯渇した患者へのこれらの細胞の養子移入は、黒色腫、大腸直腸癌及び滑膜肉腫などの癌の癌退縮に介在することが示されている（Ｋｕｎｅｒｔ  Ｒら、Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４：３６３、２０１３）。滑膜肉腫に対し抗ＮＹ−ＥＳＯ−１  ＴＣＲを用いた近年の第Ｉ相臨床試験は、全奏効率６６％であり、Ｔ細胞療法を受けた患者の１人において、完全な応答が達成されたことを報告した（Ｒｏｂｂｉｎｓ  ＰＦら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２１（５）：１０１９−２７、２０１５）。
【０００９】
ＴＣＲを操作したＴ細胞療法の利点の１つは、プロセシングを受けた後にＭＨＣ提示により細胞表面に送達される、潜在的な細胞内腫瘍特異的タンパク質のアレイ全体を標的とすることができる点である。更に、ＴＣＲは高感度であり、ごく少量の抗原ペプチド／ＭＨＣ分子によって活性化することができ、この活性化により、サイトカイン分泌、Ｔ細胞増殖及び所定の標的細胞の細胞分解を含む、細胞溶解性Ｔ細胞応答がトリガーされる。したがって、抗体又は低分子療法と比較して、ＴＣＲを操作したＴ細胞は、標的細胞内抗原のごく少量の複製によって標的細胞を死滅させるという能力に特に価値がある（Ｋｕｎｅｒｔら、Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４：３６３、２０１３）。
【００１０】
しかし、そのほとんどがハイブリドーマ又はディスプレイ技術によって開発される治療抗体とは異なり、標的に特異的なＴＣＲの同定には、患者Ｔ細胞に由来する標的ペプチド／ＭＨＣ特異的ＴＣＲクローンの樹立と、最適な標的抗原結合親和性を有する正しいα−β鎖の組み合わせのスクリーニングが必要とされる。非常に多くの場合ＴＣＲの標的結合親和性を更に向上させるために、患者Ｔ細胞に由来するＴＣＲのクローニングの後、ファージ／酵母ディスプレイが使用される。この全プロセスは、多くの領域において専門知識を必要とし、時間がかかるものである（Ｋｏｂａｙａｓｈｉ  Ｅら、Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．３（１）：ｅ２７２５８、２０１４）。ＴＣＲ発見プロセスにおける課題が、ＴＣＲを操作したＴ細胞療法の広範な応用を大きく妨げる。この応用はまた、特に、腫瘍細胞上で過剰に発現するだけでなく健康な細胞上でも発現する抗原に対してＴＣＲを用いる場合、又は標的外のペプチド／ＭＨＣ複合体を認識するＴＣＲを用いる場合に、治療関連毒性により妨げられる（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ  ＳＡら、Ｓｃｉｅｎｃｅ．３４８（６２３０）：６２−８、２０１５）。
【００１１】
標的化された癌免疫療法のためにＴ細胞を組み合わせるために、近年、様々な手法が開発されてきた。この新たな手法は、キメラ抗原受容体Ｔ細胞療法（ＣＡＲ−Ｔ）と呼ばれる。この新しい手法は、モノクローナル抗体の優れた標的特異性と、細胞毒性Ｔ細胞によって与えられる強力な細胞毒性と長期間持続性とを併せもつ。ＣＡＲは、細胞表面抗原を認識する細胞外ドメインと、膜貫通領域と、細胞内シグナル伝達ドメインとから構成される。細胞外ドメインは、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）に融合するモノクローナル抗体の重鎖及び軽鎖に由来する抗原結合可変領域からなる。細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシン系活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）（例えば、ＣＤ３ζ又はＦｃＲγに由来するもの）と、１つ以上の共刺激シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ２８、４−１ＢＢ又はＯＸ４０に由来するもの）とを含む（Ｂａｒｒｅｔｔ  ＤＭら、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．６５：３３３−４７、２０１４；Ｄａｖｉｌａ  ＭＬら、Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．１（９）：１５７７−１５８３、２０１２）。Ｔ細胞表面上に導入したＣＡＲが標的抗原を結合すると、ＴＣＲ−ペプチド／ＭＨＣ複合体相互作用とは独立して、Ｔ細胞エフェクター機能をトリガーし得る。したがって、ＣＡＲを備えたＴ細胞は、Ｔ細胞上のＴＣＲのＭＨＣの種類は一致していないものの標的細胞表面抗原を発現するものを含め、多種多様な細胞を攻撃するように再方向付けされてもよい。この手法は、ＭＨＣ制限ＴＣＲ認識の制約を克服し、抗原提示又はＭＨＣ分子の発現における欠陥を介して腫瘍がエスケープすることを回避する。臨床試験は、神経芽腫（Ｌｏｕｉｓ  ＣＵら、Ｂｌｏｏｄ．１１８（２３）：６０５０−６０５６、２０１１）、Ｂ−ＡＬＬ（Ｍａｕｄｅ，ＳＬら、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ３７１：１６：１５０７−１５１７、２０１４）、ＣＬＬ（Ｂｒｅｎｔｊｅｎｓ，ＲＪら、Ｂｌｏｏｄ  １１８：１８：４８１７−４８２８、２０１１）及びＢ細胞リンパ腫（Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒ，ＪＮら、Ｂｌｏｏｄ  １１６：２０：４０９９−４１０２、２０１０）におけるＣＡＲ−Ｔ療法について、臨床的に優位な抗腫瘍活性を示した。ある研究では、ＣＤ１９−ＣＡＲ  Ｔ療法で治療したＢ−ＡＬＬ患者３０名において９０％の完全寛解率を報告した（Ｍａｕｄｅ，ＳＬら、前掲）。
【００１２】
全てではないが、今までに研究されたＣＡＲのほとんどは、細胞表面で高発現する腫瘍抗原を対象としている。既知の全ての腫瘍特異的抗原の９５％に該当する、低複製数の細胞表面腫瘍抗原及び細胞内腫瘍抗原を標的とするために、より強力かつ有効に操作された細胞療法を開発する必要がある（Ｃｈｅｅｖｅｒら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１５（１７）：５３２３−３７、２００９）。
Ｔ細胞受容体エフェクター機能により抗体特異性を有するキメラ受容体分子を操作するよういくつかの試みがなされてきた。例えば、Ｋｕｗａｎａ，Ｙら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１４９（３）：９６０−９６８、１９８７；Ｇｒｏｓｓ，Ｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８６：１００２４−１００２８、１９８９；Ｇｒｏｓｓ，Ｇ及びＥｓｈｈａｒ，Ｚ、ＦＡＳＥＢ  Ｊ．６（１５）：３３７０−３３７８、１９９２；及び米国特許第７，７４１，４６５号を参照。今日まで、これらのキメラ受容体はいずれも臨床用途に採用されておらず、ヒトＴ細胞における発現及び機能性が改善された抗体−ＴＣＲキメラ受容体の新規設計が必要とされている。
本明細書で参照した全ての出版物、特許、特許出願、及び特許出願公開の開示内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０５８３０５号は、その全体が本明細書に参考として組み込まれる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１３】
【特許文献１】米国特許第７，７４１，４６５号明細書
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】Ｂｒｏｅｒｅら、Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、２０１１
【非特許文献２】Ｃａｌｌら、Ｃｅｌｌ．１１１（７）：９６７−７９、２００２
【非特許文献３】Ｇｉｒａｒｄｉら、Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１２６（１）：２５−３１、２００６
【非特許文献４】Ｈａｙｅｓら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．１６（６）：８２７−３８、２００２
【非特許文献５】Ｂｌａｔｔｍａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ．３０５（５６８１）：２００−５、２００４
【非特許文献６】Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇら、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ．８（４）：２９９−３０８、２００８
【非特許文献７】Ｄｕｄｌｅｙ  ＭＥら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２３（１０）：２３４６−５７、２００５
【非特許文献８】Ｋｕｎｅｒｔ  Ｒら、Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４：３６３、２０１３
【非特許文献９】Ｒｏｂｂｉｎｓ  ＰＦら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２１（５）：１０１９−２７、２０１５
【非特許文献１０】Ｋｏｂａｙａｓｈｉ  Ｅら、Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．３（１）：ｅ２７２５８、２０１４
【非特許文献１１】Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ  ＳＡら、Ｓｃｉｅｎｃｅ．３４８（６２３０）：６２−８、２０１５
【非特許文献１２】Ｂａｒｒｅｔｔ  ＤＭら、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．６５：３３３−４７、２０１４
【非特許文献１３】Ｄａｖｉｌａ  ＭＬら、Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．１（９）：１５７７−１５８３、２０１２
【非特許文献１４】Ｌｏｕｉｓ  ＣＵら、Ｂｌｏｏｄ．１１８（２３）：６０５０−６０５６、２０１１
【非特許文献１５】Ｍａｕｄｅ，ＳＬら、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ３７１：１６：１５０７−１５１７、２０１４
【非特許文献１６】Ｂｒｅｎｔｊｅｎｓ，ＲＪら、Ｂｌｏｏｄ  １１８：１８：４８１７−４８２８、２０１１
【非特許文献１７】Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒ，ＪＮら、Ｂｌｏｏｄ  １１６：２０：４０９９−４１０２、２０１０
【非特許文献１８】Ｃｈｅｅｖｅｒら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１５（１７）：５３２３−３７、２００９
【非特許文献１９】Ｋｕｗａｎａ，Ｙら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１４９（３）：９６０−９６８、１９８７
【非特許文献２０】Ｇｒｏｓｓ，Ｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８６：１００２４−１００２８、１９８９
【非特許文献２１】Ｇｒｏｓｓ，Ｇ及びＥｓｈｈａｒ，Ｚ、ＦＡＳＥＢ  Ｊ．６（１５）：３３７０−３３７８、１９９２
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本出願は、一態様では、Ｔ細胞受容体モジュールに融合した抗原結合モジュール（例えば、抗体部分）を含む構築物（例えば、単離された構築物）を提供する（当該構築物は、本明細書で「キメラ抗体ＴＣＲ分子」又は「ｃａＴＣＲ」とも呼ばれる）。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールと、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能なＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）とを含む。いくつかの実施形態では、標的抗原は、ペプチドとＭＨＣタンパク質（例えば、ＭＨＣクラスＩタンパク質又はＭＨＣクラスＩＩタンパク質）とを含む複合体である。いくつかの実施形態では、標的抗原は、細胞表面抗原である。
【００１６】
いくつかの実施形態では、キメラ抗体Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）構築物（ｃａＴＣＲ）であって、標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールと、第１のＴＣＲ膜貫通ドメイン（ＴＣＲ−ＴＭ）を含む第１のＴＣＲドメイン（ＴＣＲＤ）及び第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤを含むＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）とを含み、ＴＣＲ−ＴＭのうち少なくとも１つが、天然に存在せず、ＴＣＲＭが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を促進し、抗原結合モジュールが、天然に存在するＴ細胞受容体抗原結合部分ではない、ｃａＴＣＲが提供される。
【００１７】
いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲであって、（ａ）第１の標的抗原に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインと第２の標的抗原に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインを含む多重特異性（例えば、二重特異性）抗原結合モジュールと、（ｂ）第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ（ＴＣＲＤ１）と第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤ（ＴＣＲＤ２）を含むＴＣＲＭとを含み、ＴＣＲＭが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を促進する、ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ−ＴＭのうち少なくとも１つは、天然に存在しない。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び第２のＴＣＲ−ＴＭは、天然に存在する。
【００１８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲをコードする１つ以上の核酸が提供される。いくつかの実施形態では、１つ以上の核酸を含む１つ以上のベクターが提供される。いくつかの実施形態では、１つ以上の核酸又は１つ以上のベクターを含む組成物が提供される。いくつかの実施形態では、１つ以上の核酸又は１つ以上のベクターを含むエフェクター細胞が提供される。
【００１９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲと、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子とを含む、複合体が提供される。
【００２０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のエフェクター細胞を含む組成物（例えば、医薬組成物）が提供される。
【００２１】
いくつかの実施形態では、標的抗原を提示する標的細胞を死滅させる方法であって、標的細胞と、本明細書に記載のエフェクター細胞とを接触させることを含む、方法が提供される。
【００２２】
いくつかの実施形態では、標的抗原関連疾患の治療を必要とする個体において当該疾患を治療する方法であって、本明細書に記載される有効量の医薬組成物を個体に投与することを含む、方法が提供される。
【００２３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のエフェクター細胞のため不均一な細胞集団を濃縮する方法であって、（ａ）不均一な細胞集団と、標的抗原又はその中に含まれる１つ以上のエピトープを含むリガンドとを接触させ、リガンドに結合したエフェクター細胞の複合体を形成することと、（ｂ）この複合体を、不均一な細胞集団から分離し、それによって、エフェクター細胞が濃縮された細胞集団を生成することとを含む、方法が提供される。
【００２４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される複数のｃａＴＣＲをコードする配列を含む核酸ライブラリーが提供される。いくつかの実施形態では、標的抗原に対して高い親和性を有するｃａＴＣＲについて、本明細書に記載のライブラリーをスクリーニングする方法であって、（ａ）核酸ライブラリーを複数の細胞に導入し、その結果、ｃａＴＣＲが複数の細胞の表面で発現することと、（ｂ）複数の細胞を、標的抗原又はその中に含まれる１つ以上のエピトープを含むリガンドと共にインキュベートすることと、（ｃ）リガンドに結合した細胞を集めることと、（ｄ）工程（ｃ）で集めた細胞から、ｃａＴＣＲをコードする配列を単離し、それによって、標的抗原に特異的なｃａＴＣＲを同定することとを含む、方法が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】様々な抗原結合モジュールを有する数種類のｃａＴＣＲ分子の概略図を示す。
【００２６】
【図２】ｃａＴＣＲ−１−０構築物の概略図を示し、ＴＭ変異体を作製するために変異を導入されたその膜貫通領域を強調している。
【００２７】
【図３】ｃａＴＣＲ膜貫通領域のらせん状の輪状突出部を示す。膜貫通変異体を作製するために変異を導入されたアミノ酸位置が強調されている。
【００２８】
【図４】ＪＲＴ３．１細胞上のｃａＴＣＲ膜貫通変異体及びＣＤ３の発現を、抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊２：０１結合部分を含むｃａＴＣＲ−１−０で形質導入された細胞上のそれぞれのＭＦＩ発現の割合として示す。表面ＣＤ３ε又はｃａＴＣＲ受容体のフローサイトメトリー分析を使用し、それぞれの受容体のＭＦＩを計算した。
【００２９】
【図５】内在性ＣＤ３複合体とｃａＴＣＲ−１−０又はｃａＴＣＲ−１−ＴＭ変異体との結合親和性を調べるために使用されるウェスタンブロット分析を示す。ｃａＴＣＲ−１−０又はｃａＴＣＲ−１膜貫通変異体（−ＴＭ６、−ＴＭ１０）を用いて形質導入されたＪＲＴ３−Ｔ３．５細胞に由来する溶解物又は抗ＦＬＡＧ免疫沈降物を、抗ＦＬＡＧ及び抗ＣＤ３ζ抗体を用いてブロットした。
【００３０】
【図６】ｍｏｃｋ形質導入されたＴ細胞、又はｃａＴＣＲ−１−０を形質導入されたＴ細胞、又は抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊２：０１結合部分を有するｃａＴＣＲ−１膜貫通変異体で形質導入されたＴ細胞が介在する、癌細胞株ＳＫ−ＨＥＰ−１及びＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧの殺傷に由来する特異的溶解率を示す。
【００３１】
【図７】ｃａＴＣＲ−１−０で形質導入されたＴ細胞、又は抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊２：０１結合部分を有するｃａＴＣＲ−１膜貫通変異体で形質導入されたＴ細胞による、癌細胞株ＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧのｉｎ  ｖｉｔｒｏでの死滅後の上清中に見出されるサイトカインの濃度を示す。
【００３２】
【図８】ｍｏｃｋ形質導入されたＴ細胞、又は形質導入されたＴ細胞ｃａＴＣＲ−１−０、又は抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊２：０１結合部分を有するｃａＴＣＲ−１膜貫通変異体で形質導入されたＴ細胞が介在する、癌細胞株ＳＫ−ＨＥＰ−１及びＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧの死滅からの特異的溶解率を示す。
【００３３】
【図９】ｃａＴＣＲ−１−０で形質導入されるＴ細胞、又は抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊２：０１結合部分を有するｃａＴＣＲ−１膜貫通変異体で形質導入されるＴ細胞による、癌細胞株ＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧのｉｎ  ｖｉｔｒｏでの死滅後の上清中に見出されるサイトカインの濃度を示す。
【００３４】
【図１０】形質導入されるＴ細胞ｃａＴＣＲ−１−０、又は抗ＣＤ１９結合部分を有するｃａＴＣＲ−ＴＭ５膜貫通変異体で形質導入されたＴ細胞が介在する、癌細胞株ＮＡＬＭ６の死滅からの特異的溶解率を示す。
【００３５】
【図１１】ｍｏｃｋ形質導入されたＴ細胞、又は形質導入されるＴ細胞ｃａＴＣＲ−１−０、又は抗ＣＤ１９結合部分を有するｃａＴＣＲ−１ーＴＭ５膜貫通変異体で形質導入されるＴ細胞による、癌細胞株ＮＡＬＭ６のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの死滅後の上清中に見出されるサイトカインの濃度を示す。
【００３６】
【図１２Ａ】ＮＡＬＭ６腫瘍細胞による刺激に応答する増殖速度の実証として、形質導入されるＴ細胞ｃａＴＣＲ−１−０、又はｃａＴＣＲ−１−ＴＭ５で形質導入されたＴ細胞内のＣＦＳＥの量を示す。腫瘍細胞溶解後の生存Ｔ細胞の数を表５に列挙している。
【図１２Ｂ】ＮＡＬＭ６腫瘍細胞による刺激に応答する増殖速度の実証として、形質導入されるＴ細胞ｃａＴＣＲ−１−０、又はｃａＴＣＲ−１−ＴＭ５で形質導入されたＴ細胞内のＣＦＳＥの量を示す。腫瘍細胞溶解後の生存Ｔ細胞の数を表５に列挙している。
【００３７】
【図１３Ａ】例示的な二重特異性ｃａＴＣＲ分子の概略的な構造を示す。
【図１３Ｂ】例示的な二重特異性ｃａＴＣＲ分子の概略的な構造を示す。
【図１３Ｃ】例示的な二重特異性ｃａＴＣＲ分子の概略的な構造を示す。
【図１３Ｄ】例示的な二重特異性ｃａＴＣＲ分子の概略的な構造を示す。
【図１３Ｅ】例示的な二重特異性ｃａＴＣＲ分子の概略的な構造を示す。
【００３８】
【図１４】Ｋ５６２、Ｋ５６２−ＣＤ１９（ＣＤ１９＋）、Ｋ５６２−ＣＤ２２（ＣＤ２２＋）、Ｒａｊｉ、及びｍｏｃｋ形質導入されたＴ細胞、又は二重特異性ｃａＴＣＲ構築物、抗ＣＤ１９抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲ−７−２ａをコードするベクターで形質導入されたＴ細胞を含むＲａｊｉ  ＣＤ１９  Ｋ／Ｏといった癌細胞株をｉｎ  ｖｉｔｒｏでインキュベーションした後に上清中に見出されるＩＦＮγの濃度を示す。
【００３９】
【図１５】Ｋ５６２、Ｋ５６２−ＣＤ１９（ＣＤ１９＋）、Ｋ５６２−ＣＤ２２（ＣＤ２２＋）、及び抗ＣＤ１９  ｃａＴＣＲ−１又は４種類の異なる抗ＣＤ１９抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲ構築物のいずれか１つをコードするベクターで形質導入されたＴ細胞が介在するＫ５６２−ＣＤ１９／ＣＤ２２（ＣＤ１９＋ＣＤ２２＋）といった癌細胞株の死滅に由来する特異的溶解率を示す。
【発明を実施するための形態】
【００４０】
本出願は、一態様では、単離されたキメラ抗体／Ｔ細胞受容体構築物（本明細書で「ｃａＴＣＲ」と呼ばれる）であって、標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールと、１つ以上の天然に存在しないＴＣＲ由来の膜貫通ドメインを含むＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）とを含み、ＴＣＲＭが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能である、ｃａＴＣＲを提供する。別の態様では、本出願は、２つ以上の異なる標的抗原又はエピトープに特異的に結合する多重特異性（例えば、二重特異性）抗原結合モジュールと、天然に存在するか、又は天然に存在しないＴＣＲ由来の膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭとを含むｃａＴＣＲを提供する。本明細書に記載されるｃａＴＣＲは、標的抗原を発現する疾患細胞を死滅させるために、ヒトＴ細胞を特異的に再方向付けさせる。標的抗原は、細胞表面で発現するタンパク質であってもよく、又はペプチドとＭＨＣタンパク質とを含む複合体（本明細書では「ｐＭＨＣ複合体」又は「ｐＭＨＣ」と呼ばれる）、例えば、疾患細胞表面にあるＭＨＣ提示疾患関連抗原ペプチドであってもよい。ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞受容体活性化を制御する天然に存在する機構によって制御されるが、天然に存在するＴ細胞受容体とは異なり、ｃａＴＣＲは、表面発現及び／又は機能を増強する改変を含む。
【００４１】
本願発明者らは、天然に存在するＴＣＲ配列のみを有する同様の構築物と比較して、表面発現及び／又は機能を改善した、ＴＣＲ配列の天然に存在しない多様体を含む、一連の新規な合成キメラ抗体−ＴＣＲ構築物を開発した。本願発明者らはまた、抗原の逃避を減らすために複数の標的抗原を特異的に認識する、多重特異性キメラ抗体−ＴＣＲ構築物を開発した。ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞表面上で効率的に発現させることができ、内在性ＣＤ３分子に会合して、安定なＴＣＲ様シグナル伝達複合体を形成することが示されている。Ｔ細胞において操作されると、ｃａＴＣＲは、ＭＨＣ依存性（ペプチド／ＭＨＣ抗原）の構成及びＭＨＣ非依存性（細胞表面抗原）の構成の両方で、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏの両方で、Ｔ細胞に、標的を有する腫瘍細胞に対する強力な細胞毒性を与えた。
【００４２】
したがって、本出願の一態様は、ｃａＴＣＲ（例えば、単離されたｃａＴＣＲ）であって、標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールと、１つ以上の天然に存在しないＴＣＲ由来の膜貫通ドメインを含むＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）とを含み、ＴＣＲＭが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能である、ｃａＴＣＲを提供する。ｃａＴＣＲは、抗原結合モジュール及び／又はＴＣＲＭにおける様々な多数のフォーマットのうちのいずれかをとることができる。例えば、ｃａＴＣＲは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ及びｓｃＦｖからなる群から選択される部分を含む抗原結合モジュールと、膜貫通ドメイン、接続ペプチド及び細胞内ドメインのうち１つ以上が多様体を含み、α／β及び／又はγ／δ  ＴＣＲに由来する１つ以上の天然に存在しない配列を有するＴＣＲＭと、を含んでいてもよい。例示的なｃａＴＣＲ構築物の設計については、図１を参照のこと。
【００４３】
本出願の別の態様は、ｃａＴＣＲであって、（ａ）第１の標的抗原に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインと第２の標的抗原に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインを含む多重特異性（例えば、二重特異性）抗原結合モジュールと、（ｂ）第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ（ＴＣＲＤ１）と第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤ（ＴＣＲＤ２）を含むＴＣＲＭとを含み、ＴＣＲＭが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を促進する、ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、第１の標的抗原はＣＤ１９であり、第２の標的抗原はＣＤ２２であるか、又は第１の標的抗原はＣＤ２２であり、第２の標的抗原はＣＤ１９である。いくつかの実施形態では、第１の標的抗原はＣＤ１９であり、第２の標的抗原はＣＤ２０であるか、又は第１の標的抗原はＣＤ２０であり、第２の標的抗原はＣＤ２２である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、１つ以上の天然に存在しないＴＣＲ由来の膜貫通ドメインを含む。例示的な多重特異性ｃａＴＣＲ構築物の設計については、図１３Ａ〜１３Ｅを参照のこと。
【００４４】
別の態様では、ｃａＴＣＲをコードする１つ以上の核酸が提供される。
【００４５】
更に別の態様では、ｃａＴＣＲと、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子とを含む、複合体（本明細書では、「ｃａＴＣＲ−ＣＤ３複合体」と呼ばれる）が提供される。複合体は、ｃａＴＣＲ、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及びζζといった４つの二量体を含む八量体であってもよい。ｃａＴＣＲ又はｃａＴＣＲ−ＣＤ３複合体を発現するか、又はこれに会合するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）も提供される。
【００４６】
更に別の態様では、ｃａＴＣＲを含む組成物が提供される。組成物は、ｃａＴＣＲを発現するか、又はこれに会合するｃａＴＣＲ又はエフェクター細胞（例えば、ｃａＴＣＲを発現するＴ細胞）を含む医薬組成物であってもよい。
【００４７】
治療目的のために、ｃａＴＣＲ（又はｃａＴＣＲを発現するか、若しくはこれに会合する細胞）を作製し、使用する方法、並びにこのような方法に有用なキット及び製造物品も提供される。更に、ｃａＴＣＲ（又はｃａＴＣＲを発現するか、又はこれに会合する細胞）を用い、疾患を治療する方法が提供される。
定義
【００４８】
「抗体」又は「抗体部分」との用語は、完全長抗体及びその抗原結合フラグメントを含む。完全長抗体は、２つの重鎖と２つの軽鎖とを含む。軽鎖及び重鎖の可変領域は、抗原結合に関与する。両鎖の可変領域は、一般に、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる３つのきわめて可変性のループ（ＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２及びＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲと、ＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２及びＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ）を含む。本明細書に開示される抗体及び抗原結合フラグメントのＣＤＲの境界は、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、又はＡｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉによって定義又は同定されてもよい（Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  １９９７；Ｃｈｏｔｈｉａ  １９８５；Ｃｈｏｔｈｉａ  １９８７；Ｃｈｏｔｈｉａ  １９８９；Ｋａｂａｔ  １９８７；Ｋａｂａｔ  １９９１）。重鎖又は軽鎖の３つのＣＤＲは、フレームワーク領域（ＦＲ）として知られるフランキング伸長部の間に挟まっており、ＣＤＲよりも高度に保存され、超可変ループを支えるための骨格を形成する。重鎖及び軽鎖の定常領域は、抗原結合には関与しないが、様々なエフェクター機能を示す。抗体は、重鎖の定常領域のアミノ酸配列に基づき、いくつかのクラスに割り当てられる。抗体の５つの主要なクラス又はアイソタイプは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭであり、それぞれ、α、δ、ε、γ及びμ重鎖の存在によって特徴付けられる。主要な抗体クラスのいくつかは、例えば、ｌｇＧ１（γ１重鎖）、ｌｇＧ２（γ２重鎖）、ｌｇＧ３（γ３重鎖）、ｌｇＧ４（γ４重鎖）、ｌｇＡ１（α１重鎖）又はｌｇＡ２（α２重鎖）などのサブクラスに分けられる。
【００４９】
「抗原結合フラグメント」との用語は、本明細書で使用される場合、例えば、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖフラグメント、ジスルフィドで安定化されたＦｖフラグメント（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、二重特異性ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ−ｄｓＦｖ’）、ジスルフィドで安定化されたダイアボディ（ｄｓダイアボディ）、一本鎖抗体分子（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖ二量体（二価ダイアボディ）、１つ以上のＣＤＲを含む抗体の一部から形成される多重特異性抗体、ラクダ化されたシングルドメイン抗体、ナノボディ、ドメイン抗体、二価ドメイン抗体、又は抗原に結合するが完全な抗体構造を含まない任意の他の抗体フラグメントを含む、抗体フラグメントを指す。抗原結合フラグメントは、親抗体又は親抗体フラグメント（例えば、親ｓｃＦｖ）が結合するのと同じ抗原に結合することができる。いくつかの実施形態では、抗原結合フラグメントは、１つ以上の異なるヒト抗体由来のフレームワーク領域にグラフトした、特定のヒト抗体由来の１つ以上のＣＤＲを含んでいてもよい。
【００５０】
本明細書で使用される場合、等モル濃度の第１の抗体部分存在下、第１の抗体部分が、第２の抗体部分の標的抗原結合を少なくとも約５０％（例えば、少なくとも約５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％又は９９％のいずれか）まで阻害する場合、第１の抗体部分は、第２の抗体部分と、標的抗原への結合について「競合する」か、又はその逆が成り立つ。これらの交差競合に基づく抗体の「ビニング」のための高スループットプロセスは、ＰＣＴ公開第ＷＯ  ０３／４８７３１号に記載される。
【００５１】
本明細書で使用される場合、「特異的に結合する」又は「〜に特異的である」との用語は、生体分子を含めた異種分子集団の存在下で標的が存在することの指標となる、測定可能かつ再現性のある相互作用（例えば、標的と抗体又は抗体部分との間の結合）を指す。例えば、標的（エピトープであってもよい）に特異的に結合する抗体部分は、他の標的に対する結合よりも大きな親和性で、より大きなアビディティーで、より容易に、及び／又はより長時間、標的に結合する抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗原に特異的に結合する抗体部分は、抗原の１つ以上の抗原決定基（例えば、細胞表面抗原又はペプチド／ＭＨＣタンパク質複合体）と、他の標的に対する結合親和性の少なくとも約１０倍の結合親和性で反応する。
【００５２】
「Ｔ細胞受容体」又は「ＴＣＲ」との用語は、Ｔ細胞の表面上で対を形成するαβ鎖又はγδ鎖で構成されるヘテロ二量体受容体を指す。各α、β、γ、及びδ鎖は、相補性決定領域（ＣＤＲ）を介して抗原認識を付与する可変ドメイン（Ｖ）と、次いで、接続ペプチド及び膜貫通（ＴＭ）領域によって細胞膜に固定される定常ドメイン（Ｃ）といった２つのＩｇ様ドメインで構成される。ＴＭ領域は、ＣＤ３シグナル伝達装置のインバリアントなサブユニットと会合する。Ｖドメインはそれぞれ、３つのＣＤＲを含む。これらのＣＤＲは、主要組織適合抗原複合体（ｐＭＨＣ）によりコードされるタンパク質に結合した抗原ペプチド間の複合体と相互作用する（Ｄａｖｉｓ及びＢｊｏｒｋｍａｎ（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ、３３４、３９５−４０２；Ｄａｖｉｓら（１９９８）、Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、１６、５２３−５４４；Ｍｕｒｐｈｙ（２０１２）、ｘｉｘ、８６８ｐ）。
【００５３】
「ＴＣＲ関連シグナル伝達分子」との用語は、ＴＣＲ−ＣＤ３複合体の一部である細胞質免疫受容体チロシン系活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を有する分子を指す。ＴＣＲ関連シグナル伝達分子としては、ＣＤ３γε、ＣＤ３δε、及びζζ（ＣＤ３ζ又はＣＤ３ζζとしても知られる）が挙げられる。
【００５４】
「活性化」は、本明細書で、ＣＤ３を発現する細胞に関連して使用される場合、限定されないが、細胞増殖及びサイトカイン産生を含め、下流のＣＤ３シグナル伝達経路のエフェクター機能を検出可能なほどに増強するのに十分に刺激を受けた細胞の状態を指す。
【００５５】
「モジュール」との用語は、タンパク質又はタンパク質の一部を指すとき、１つ以上のポリペプチド鎖（例えば、二量体タンパク質又は二量体タンパク質の一部）を含むことを意味する。１つ以上の鎖は、リンカー（例えば、ペプチドリンカー）又は化学結合（例えば、ペプチド結合）などによって接続していてもよい。「モジュール」はまた、タンパク質を構成する１つ以上のポリペプチドの構造及び／又は機能に関連する部分を含むことも意味する。例えば、二量体受容体の膜貫通モジュールは、膜にまたがる受容体の各ポリペプチド鎖の部分を指していてもよい。モジュールはまた、単一のポリペプチド鎖の関連部分を指す場合もある。例えば、単量体受容体の膜貫通モジュールは、膜にまたがる受容体の単一のポリペプチド鎖の部分を指していてもよい。モジュールはまた、ポリペプチドの単一部分のみを含んでもよい。
【００５６】
「単離された」構築物（例えば、ｃａＴＣＲ）は、本明細書で使用される場合、（１）自然界で見出されるタンパク質と会合しておらず、（２）同じ供給源に由来する他のタンパク質を含まず、（３）異なる種に由来する細胞によって発現されるか、又は（４）自然界では生じない構築物を指す。
【００５７】
「単離された核酸」との用語は、本明細書で使用される場合、ゲノム、ｃＤＮＡ、又は合成された核酸、又はこれらのいくつかの組み合わせを意味することを意図し、その由来という観点で、「単離された核酸」は、（１）「単離された核酸」が天然に見出されるポリヌクレオチドの全て又は一部に会合していない、（２）天然では接続されていないポリヌクレオチドに作動可能に接続されている、又は（３）天然ではより大きな配列の一部として生じない。
【００５８】
本明細書で使用される場合、「ＣＤＲ」又は「相補性決定領域」との用語は、重鎖及び軽鎖ポリペプチドの両方の可変領域内に見出される非連続な抗原結合部位を意味することを意図する。これらの具体的な領域は、Ｋａｂａｔら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９−６６１６（１９７７）；Ｋａｂａｔら、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ」（１９９１）；Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７）；Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  Ｂ．ら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２７３：９２７−９４８（１９９７）；ＭａｃＣａｌｌｕｍら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２−７４５（１９９６）；Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ及びＭａｒｔｉｎ、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、４５：３８３２−３８３９（２００８）；Ｌｅｆｒａｎｃ  Ｍ．Ｐ．ら、Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２７：５５−７７（２００３）；及びＨｏｎｅｇｇｅｒ及びＰｌｕｅｃｋｔｈｕｎ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、３０９：６５７−６７０（２００１）によって記載されており、この定義は、互いに比較したときに、アミノ酸残基の重なり合い又は部分集合を含む。しかしながら、抗体又はグラフト化した抗体又はこれらの多様体のＣＤＲを指すためのいずれかの定義の適用は、本明細書で定義され、本明細書で使用される用語の範囲内であることが意図される。上に引用した参照文献のそれぞれによって定義されるＣＤＲを包含するアミノ酸残基を、比較として以下の表１に記載する。ＣＤＲ予測アルゴリズム及びインターフェースは、当該技術分野において既知であり、例えば、Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ及びＭａｒｔｉｎ、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、４５：３８３２−３８３９（２００８）；Ｅｈｒｅｎｍａｎｎ  Ｆ．ら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、３８：Ｄ３０１−Ｄ３０７（２０１０）；及びＡｄｏｌｆ−Ｂｒｙｆｏｇｌｅ  Ｊ．ら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、４３：Ｄ４３２−Ｄ４３８（２０１５）を含む。本段落で引用される参考文献の内容は、本発明で使用するため、また、本明細書の１つ以上の特許請求の範囲に可能ならば包含するため、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【表１】
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１残基の付番は、上掲のＫａｂａｔらの命名法に従う。
２残基の付番は、上掲のＣｈｏｔｈｉａらの命名法に従う。
３残基付番は、上掲のＭａｃＣａｌｌｕｍらの命名法に従う。
４残基の付番は、上掲のＬｅｆｒａｎｃらの命名法に従う。
５残基の付番は、上掲のＨｏｎｅｇｇｅｒ及びＰｌｕｅｃｋｔｈｕｎの命名法に従う。
【００５９】
用語「キメラ抗体」は、本発明の生物活性を示すものであるという条件で、重鎖及び／又は軽鎖が、特定の種に由来する抗体又は特定の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一であり又は相同であり、なおかつ鎖の残部は別の種に由来する抗体又は別の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体、及び係る抗体のフラグメントと同一である又は相同である抗体を指す（米国特許第４，８１６，５６７号、及びＭｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８１：６８５１−６８５５（１９８４）を参照）。
【００６０】
抗体又は抗体部分を参照して、「半合成」との用語は、その抗体又は抗体部分が、１つ以上の天然に存在する配列と、１つ以上の天然に存在しない（すなわち、合成の）配列とを有することを意味する。
【００６１】
抗体又は抗体部分を参照して、「完全合成」との用語は、その抗体又は抗体部分が、定型的なものであり、大部分又は全てが天然に存在するＶＨ／ＶＬフレームワーク対を有するが、重鎖及び軽鎖の両方の６つＣＤＲの全てが天然には存在しない（すなわち、合成の）配列を有することを意味する。天然に存在しないＣＤＲとしては、改変されたヒトＣＤＲ配列を含むもの、例えば、保存的アミノ酸置換又はシステイン残基の導入によって改変されたＣＤＲ配列が挙げられる。
【００６２】
非ヒト（例えば、げっ歯類）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト抗体に由来する最小配列を含むキメラ抗体である。大部分について、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域（ＨＶＲ）に由来する残基が、所望の抗体特異性、親和性及び能力を有するマウス、ラット、ウサギ、又はヒト以外の霊長類などのヒト以外の種（ドナー抗体）の超可変領域に由来する残基によって置き換えられている、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。ある場合には、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）の残基は、ヒトのものではない対応する残基によって置き換わっている。更に、ヒト化抗体は、レシピエント抗体中又はドナー抗体中に見出されない残基を含んでいてもよい。これらの改変は、抗体性能を更に改良するために行われる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含んでいてもよく、超可変ループの全て又は実質的に全ては、ヒト以外の免疫グロブリンのものと対応し、ＦＲの全て又は実質的に全ては、ヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体は、場合により、免疫グロブリン（典型的には、ヒト免疫グロブリンの）定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部も含むだろう。更なる詳細については、Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９（１９８８）；及びＰｒｅｓｔａ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６（１９９２）を参照。
【００６３】
「ホモロジー」は、２つのポリペプチド間又は２つの核酸分子間の配列類似性又は配列同一性を指す。２つの比較配列の両方の位置が、同じ塩基又はアミノ酸単量体サブユニットによって占有される場合、例えば、２つのＤＮＡ分子のそれぞれの位置がアデニンによって占有される場合、分子は、その位置において「相同」である。２つの配列間の「相同性（％）」又は「配列同一性（％）」は、配列同一性の一部として任意の保存的置換を考慮しつつ、２つの配列によって共有される一致する位置又は相同な位置の数を、比較した位置の数によって割り算し、１００を掛け算した関数である。例えば、２つの配列中の位置の１０のうち６が一致しているか、又は相同である場合、２つの配列は、６０％相同性である。例として、ＤＮＡ配列ＡＴＴＧＣＣ及びＴＡＴＧＧＣは、５０％の相同性を共有する。一般に、相同性が最大となるように２つの配列をアラインメントして、比較が行われる。アミノ酸配列同一性率を決定する目的のためのアラインメントは、当該技術分野における様々な方法で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、Ｍｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）又はＭＵＳＣＬＥソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを用いて達成することができる。当業者は、比較される配列の完全長にわたって最大のアラインメントを得るのに必要な任意のアルゴリズムを含む、アラインメント評価用の適切なパラメーターを決定することができる。しかしながら、本明細書の目的のために、アミノ酸配列同一性％の値は、配列比較コンピュータプログラムＭＵＳＣＬＥを用いて作成される（Ｅｄｇａｒ，Ｒ．Ｃ．、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ３２（５）：１７９２−１７９７、２００４；Ｅｄｇａｒ，Ｒ．Ｃ．、ＢＭＣ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ５（１）：１１３、２００４）。
【００６４】
ヒトＩｇＧの「ＣＨ１ドメイン」（「Ｈ１」ドメインの「Ｃ１」とも呼ばれる）は、通常、アミノ酸約１１８〜アミノ酸約２１５まで延在する（ＥＵ番号付けシステム）。
【００６５】
別途記載のない限り、「アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列」は、互いに縮重態様であり、同じアミノ酸配列をコードする全てのヌクレオチド配列を含む。句「タンパク質又はＲＮＡをコードするヌクレオチド配列」は、タンパク質をコードするヌクレオチド配列が、ある態様でイントロンを含む程度まで、イントロンも含んでいてもよい。
【００６６】
「作動可能に接続した」との用語は、異種核酸配列の発現をもたらす、制御配列と異種核酸配列との間の機能的接続を指す。例えば、第１の核酸配列が、第２の核酸配列と機能的な関係で配置されるとき、第１の核酸配列は、第２の核酸配列と作動可能に接続する。例えば、プロモーターがコード配列の転写又は発現に影響を与える場合、プロモーターは、コード配列に作動可能に接続する。一般的に、作動可能に接続したＤＮＡ配列は、連続的であり、２つのタンパク質コード領域を接続することが必要とされる場合、同じリーディングフレーム内にある。
【００６７】
「誘導プロモーター」との用語は、１つ以上の特定のシグナルを加えるか、又は除去することによって活性を制御可能なプロモーターを指す。例えば、誘導プロモーターは、例えば、プロモーターを活性化させるか、及び／又はプロモーターの抑制を緩和する誘導剤の存在下、特定の一連の条件下で、作動可能に接続した核酸の転写を活性化できる。
【００６８】
本明細書で使用される場合、「治療」又は「治療する」は、臨床結果を含めて有益な結果又は所望の結果を得るための手法である。本発明の目的のために、有益な又は所望の臨床結果には、以下のうちの１つ以上が含まれるが、これらに限定されない。疾患から生じる１つ以上の症状を軽減すること、疾患の程度を低減させること、疾患を安定させること（例えば、疾患の悪化を防止するか、又は遅らせること）、疾患の広がり（例えば、転移）を防止するか、又は遅らせること、疾患の再発を防止するか、又は遅らせること、疾患の進行を遅らせるか、又はゆっくりにすること、疾患状態を軽減すること、疾患の寛解（部分的又は完全に）をもたらすこと、疾患を治療するために必要な１つ以上の他の医薬の用量を減らすこと、疾患の進行を遅らせること、生活の質を高めるか、又は向上させること、体重増加を高めること、及び／又は生存期間を延ばすこと。また、「治療」に包含されるのは、疾患に関する病理学的結果（例えば、癌における腫瘍体積など）の低減である。本発明の方法は、治療のこれらの態様のうちのいずれか１つ以上を企図する。
【００６９】
「再発（recurrence）」、「再発する（relapse）」又は「再発する（relapsed）」との用語は、疾患が消失したとする臨床評価の後の癌又は疾患の戻りを指す。遠隔転移又は局所再発の診断は、再発とみなすことができる。
【００７０】
「難治性」又は「抵抗性」との用語は、治療に応答しない癌又は疾患を指す。
【００７１】
本明細書に開示されるｃａＴＣＲ又はｃａＴＣＲを含む組成物の「有効量」は、具体的に記載された目的を実現するのに十分な量である。「有効量」は、経験的に、また、記載された目的に関連する既知の方法によって決定することができる。
【００７２】
「治療に有効な量」との用語は、個体において疾患又は障害を「治療する」のに有効な、本明細書に開示されるｃａＴＣＲ又はｃａＴＣＲを含む組成物の量を指す。癌の場合、治療に有効な量の本明細書に開示されるｃａＴＣＲ又はｃａＴＣＲを含む組成物は、癌細胞の数を低減することができ、腫瘍の大きさ又は重量を小さくすることができ、末梢臓器への癌細胞浸潤を阻害する（すなわち、ある程度まで遅くさせ、好ましくは停止する）ことができ、腫瘍転移を阻害する（すなわち、ある程度まで遅くさせ、好ましくは停止する）ことができ、腫瘍成長をある程度まで阻害することができ、及び／又は癌に関連する症状のうち１つ以上をある程度まで緩和することができる。本明細書に開示されるｃａＴＣＲ又はｃａＴＣＲを含む組成物は、増殖を防止し、及び／又は既存の癌細胞を死滅させることができ、細胞増殖抑制性及び／又は細胞毒性であってもよい。いくつかの実施形態では、治療有効量は、増殖抑制量である。いくつかの実施形態では、治療有効量は、患者の無増悪生存率を改善する量である。ウイルス感染などの感染性疾患の場合、治療に有効な量の本明細書に開示されるｃａＴＣＲ又はｃａＴＣＲを含む組成物は、病原体に感染した細胞の数を低減することができ、病原体由来抗原の産生又は放出を低減することができ、病原体の非感染細胞への伝播を阻害し（すなわち、ある程度遅くさせ、好ましくは停止する）、及び／又は感染に関連する１つ以上の症状をある程度緩和することができる。いくつかの実施形態では、治療有効量は、患者の生存期間を延ばす量である。
【００７３】
本明細書で使用されるとき、「医薬的に許容される」又は「薬理的に適合される」は、生物学的又は非生物学的に望ましくないものではない物質を意味し、例えば、その物質を、望まれない生物学的影響をほとんど起こさずに、又は、それが含有される組成物の別のなんらかの構成成分と悪い相互作用をせずに、患者に投与される医薬組成物中に組み込むことができる。医薬的に許容される担体又は賦形剤は、好ましくは、必要な毒性学的及び製造的検査基準を満たしており、並びに／又は、Ｕ．Ｓ．Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎが作成したＩｎａｃｔｉｖｅ  Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ  Ｇｕｉｄｅに含まれている。
【００７４】
本明細書に記載の本発明の実施形態は、実施形態「からなる」及び／又は「から本質的になる」を含むことを理解されたい。
【００７５】
本明細書に記載の「約」のついた値又はパラメーターへの言及は、値又はパラメーター自体を対象とする変形を含む（及び記載する）。例えば、「約Ｘ」に言及する説明は、「Ｘ」の説明を含む。
【００７６】
本明細書で使用するとき、「〜されない」などの否定（not）を伴うある値又はパラメーターへの言及は、その値又はパラメーター「以外」が肯定されることを一般に意味し、記載する。例えば、「方法は、タイプＸの癌を治療するのに使用されない」は、「方法は、Ｘ以外のタイプの癌を治療するのに使用される」を意味する。
【００７７】
本明細書及び添付の「特許請求の範囲」で使用するとき、単数形の「ａ」、「ｏｒ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈から単数であることが明確に読み取れる場合を除き、対象の複数形も含まれるものとする。
キメラ抗体／Ｔ細胞受容体（ｃａＴＣＲ）構築物
【００７８】
一態様では、本発明は、標的抗原に特異的なキメラ抗体／Ｔ細胞受容体（ｃａＴＣＲ）であって、標的抗原（細胞表面抗原又はペプチド／ＭＨＣ複合体など）に特異的に結合し、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子（例えば、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及び／又はζζ）を動員することが可能であり、ｃａＴＣＲが、少なくとも１つの天然に存在しないＴＣＲドメイン（例えば、天然に存在しないＴＣＲ膜貫通ドメイン）を含む、ｃａＴＣＲを提供する。例えば、いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、１つ又は２つの天然に存在しないＴＣＲ膜貫通ドメインを含む。天然に存在しないＴＣＲドメインは、１つ以上のアミノ酸の置換により、及び／又は対応するドメインの一部と、別のＴＣＲからの類似したドメインの一部とを置き換えることにより改変された、天然に存在するＴＣＲの対応するドメインであってもよい。
【００７９】
一態様では、本発明は、２つ以上の標的抗原又はエピトープ（２つの異なる細胞表面抗原など）に特異的に結合し、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子（例えば、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及び／又はζζ）を動員することが可能な、多重特異性ｃａＴＣＲを提供する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗原結合モジュールは、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）、クロスオーバー二重可変（ＣＯＤＶ）ドメイン、又はｓｃＦｖ−Ｆａｂ融合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、多重特異性抗原結合モジュールは、第１のＦｖ及び第２のＦｖ、第１のｓｃＦｖ及び第２のｓｃＦｖ、又はＦａｂ及びｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、１つ以上の天然に存在しないＴＣＲドメイン（例えば、天然に存在しないＴＣＲ膜貫通ドメイン）を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、天然に存在しないＴＣＲ膜貫通ドメインを含まない。
【００８０】
本明細書に記載のｃａＴＣＲは、抗原特異性を与える抗原結合モジュール（例えば、単一特異性又は多重特異性の抗原結合モジュール）と、ＣＤ３の動員及びシグナル伝達を可能にするＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）とを含む。抗原結合モジュールは、天然に存在するＴ細胞受容体抗原結合部分ではない。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、ＴＣＲＭ中のポリペプチド鎖のアミノ末端に結合している。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。ＴＣＲＭは、αβ及び／又はγδ  ＴＣＲなどの１つ以上のＴＣＲの膜貫通ドメイン（ＴＣＲ−ＴＭ）に由来する膜貫通モジュールを含み、場合により、ＴＣＲの接続ペプチド又はそのフラグメント及び／又は１つ以上のＴＣＲ細胞内ドメイン又はそのフラグメントの一方又は両方を更に含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、２つのポリペプチド鎖を含み、各ポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシ末端まで、接続ペプチド、膜貫通ドメインを含み、場合により、ＴＣＲ細胞内ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とを含み、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖が合わさって抗原結合モジュールとＴＣＲＭを形成する。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖は、別個のポリペプチド鎖であり、ｃａＴＣＲは、多量体（例えば、二量体）である。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖は、例えば、ペプチド結合によって、又は別の化学結合（例えば、ジスルフィド結合）によって、共有結合している。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖は、少なくとも１つのジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、１つ以上のＴ細胞共刺激シグナル伝達配列を更に含む。１つ以上の共刺激シグナル伝達配列は、個々に、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどを含め、共刺激分子の細胞内ドメインの全て又は一部であってもよい。いくつかの実施形態では、１つ以上の共刺激シグナル伝達配列は、第１のＴＣＲ−ＴＭと第１のＴＣＲ細胞内ドメインとの間、及び／又は第２のＴＣＲ−ＴＭと第２のＴＣＲ細胞内ドメインとの間にある。いくつかの実施形態では、１つ以上の共刺激シグナル伝達配列は、第１のＴＣＲＤ及び／又は第２のＴＣＲＤに対してカルボキシ末端にある。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインとを含む安定化モジュールを更に含み、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化する互いに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、安定化モジュールは、抗原結合モジュールとＴＣＲＭとの間に位置している。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、任意の２つのｃａＴＣＲモ��ュール又はドメインの間にスペーサーモジュールを更に含む。いくつかの実施形態では、スペーサーモジュールは、２つのｃａＴＣＲモジュール又はドメインを接続する１つ以上のペプチドリンカーを含む。
【００８１】
本明細書に記載のｃａＴＣＲは、天然に存在しない膜貫通ドメインを含むｃａＴＣＲ及び多重特異性ｃａＴＣＲを含め、この章に記載の１つ以上の特徴を有し得るものである。本明細書に記載されるｃａＴＣＲのそれぞれの構成要素（例えば、抗原結合モジュール、ＴＣＲＤ、ＴＣＲ−ＴＭ、スペーサーモジュール、安定化モジュール、Ｔ細胞共刺激配列及び様々なリンカーなど）についての特徴のいずれも、それぞれの組み合わせ及び全ての組み合わせが個々に記載されているかのように、互いに組み合わせることができることが意図されている。
【００８２】
いくつかの実施形態では、抗原結合モジュール（例えば、抗体部分）は、（ａ）他の分子に対する結合親和性の少なくとも約１０倍（例えば、少なくとも約１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、７５倍、１００倍、２００倍、３００倍、４００倍、５００倍、７５０倍、１０００倍のいずれか、又はもっと多くを含む）の親和性で標的抗原に特異的に結合するか、又は（ｂ）他の分子に対する結合のＫｄの約１／１０以下（例えば、１／１０以下、１／２０以下、１／３０以下、１／４０以下、１／５０以下、１／７５以下、１／１００以下、１／２００以下、１／３００以下、１／４００以下、１／５００以下、１／７５０以下、１／１０００以下のいずれか、又はもっと小さい）のＫｄで標的抗原に特異的に結合する。結合親和性は、ＥＬＩＳＡ、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）分析、又は放射線免疫沈降アッセイ（ＲＩＡ）などの当該技術分野において既知の方法によって求めることができる。Ｋｄは、例えばＢｉａｃｏｒｅ機器を利用する表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイ、又は例えばＳａｐｉｄｙｎｅ装置を利用する動的排除アッセイ（ＫｉｎＥｘＡ）などの当該技術分野で既知の方法によって求めることができる。
【００８３】
安定化ドメインの例としては、Ｆｃ領域；ヒンジ領域；ＣＨ３ドメイン；ＣＨ４ドメイン；ＣＨ１又はＣＬドメイン；ロイシンジッパードメイン（例えば、ｊｕｎ／ｆｏｓロイシンジッパードメイン、例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｅｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１４８：１５４７−１５５３、１９９２を参照；又は酵母ＧＣＮ４ロイシンジッパードメイン）；イソロイシンジッパードメイン；細胞表面受容体（例えば、インターロイキン−８受容体（ＩＬ−８Ｒ）を二量体化する二量体化領域；又はＬＦＡ−１又はＧＰＩＩＩｂ／ＩＩＩａなどのインテグリンヘテロ二量体）；分泌される二量体化リガンドの二量体化領域（例えば、神経成長因子（ＮＧＦ）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、インターロイキン−８（ＩＬ−８）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）又は脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）；例えば、Ａｒａｋａｗａら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：２７８３３−２７８３９、１９９４及びＲａｄｚｉｅｊｅｗｓｋｉら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．３２：１３５０、１９９３）；コイル状コイル二量体化ドメイン（例えば、ＷＯ２０１４１５２８７８号を参照；Ｆｌｅｔｃｈｅｒら、ＡＣＳ  Ｓｙｎｔｈ．Ｂｉｏｌ．１：２４０−２５０、２０１２；及びＴｈｏｍａｓら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１３５（１３）：５１６１−５１６６、２０１３を参照）；ポリペプチドと、少なくとも１つのシステイン残基を含む第２のポリペプチドとの間にジスルフィド結合を形成し得るような、少なくとも１つのシステイン残基（例えば、約１、２又は３個から約１０個までのシステイン残基）を含むポリペプチドが挙げられる。
【００８４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲＭは、（ａ）第１のＴＣＲ膜貫通ドメイン（ＴＣＲ−ＴＭ）を含む第１のＴ細胞受容体ドメイン（ＴＣＲＤ）と、（ｂ）第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤとを含み、ＴＣＲＭが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を促進し、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び第２のＴＣＲ−ＴＭが、天然に存在するものである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲＭは、（ａ）第１のＴＣＲ膜貫通ドメイン（ＴＣＲ−ＴＭ）を含む第１のＴ細胞受容体ドメイン（ＴＣＲＤ）と、（ｂ）第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤとを含み、ＴＣＲＭが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を促進し、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び第２のＴＣＲ−ＴＭが、天然に存在しないものである。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ−ＴＭは両方とも、天然に存在しないものである。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ−ＴＭは、天然に存在するＴ細胞受容体（例えば、αβＴＣＲ又はγδＴＣＲ）の膜貫通ドメインの１つに由来し、第２のＴＣＲ−ＴＭは、天然に存在するＴ細胞受容体の他の膜貫通ドメインに由来する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、天然に存在するＴ細胞受容体の膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することができる。ＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員は、ＴＣＲ−ＣＤ３複合体表面発現のＦＡＣＳ分析、又はＣＤ３サブユニットとｃａＴＣＲとの同時免疫沈降など、当該技術分野において既知の方法によって求めることができる。
【００８５】
例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲＭの第１のＴＣＲ−ＴＭは、ＴＣＲα鎖の膜貫通ドメイン（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ寄託番号：ＣＣＩ７３８９５）又はその多様体を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなり、ＴＣＲＭの第２のＴＣＲ−ＴＭは、ＴＣＲβ鎖の膜貫通ドメイン（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ寄託番号：ＣＣＩ７３８９３）又はその多様体を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなる。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ−ＴＭは、ＴＣＲδ鎖の膜貫通ドメイン（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ寄託番号：ＡＡＱ５７２７２）又はその多様体を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなり、第２のＴＣＲ−ＴＭは、ＴＣＲγ鎖の膜貫通ドメイン（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ寄託番号：ＡＧＥ９１７８８）又はその多様体を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲＭの第１のＴＣＲ−ＴＭ及び第２のＴＣＲ−ＴＭは、それぞれ、ＴＣＲα鎖定常ドメイン（例えば、配列番号１）の膜貫通ドメイン又はその多様体及びＴＣＲβ鎖定常ドメイン（例えば、配列番号２）の膜貫通ドメイン又はその多様体を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなる。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び第２のＴＣＲ−ＴＭは、それぞれ、ＴＣＲδ鎖定常ドメイン（例えば、配列番号３）の膜貫通ドメイン又はその多様体及びＴＣＲγ鎖定常ドメイン（例えば、配列番号４）の膜貫通ドメイン又はその多様体を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなる。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び第２のＴＣＲ−ＴＭは、それぞれ、配列番号５及び６のアミノ酸配列、又はその多様体を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなる。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び第２のＴＣＲ−ＴＭは、それぞれ、配列番号７及び８のアミノ酸配列、又はその多様体を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなる。膜貫通ドメインの多様体としては、限定されないが、参照配列と比較して、１つ以上のアミノ酸置換を有する膜貫通ドメインが挙げられる。いくつかの実施形態では、多様体膜貫通ドメインは、参照配列と比較して、５個以下のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、膜貫通ドメインに対してアミノ末端に第１の接続ペプチドを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、膜貫通ドメインに対してアミノ末端に第２の接続ペプチドを更に含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドは、第１のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットの接続ペプチドの全て又は一部、又はその多様体を含み、及び／又は第２の接続ペプチドは、第２のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットの接続ペプチドの全て又は一部、又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチド及び第２の接続ペプチドは、それぞれ、ＴＣＲα鎖定常ドメイン（配列番号１）の接続ペプチドの全て又は一部、又はその多様体及びＴＣＲβ鎖定常ドメイン（配列番号２）の接続ペプチドの全て又は一部、又はその多様体を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなる。いくつかの実施形態では、第���の接続ペプチド及び／又は第２の接続ペプチドは、それぞれ、配列番号２７又は２８の接続ペプチドの全て又は一部、又はその多様体及び配列番号２９又は３０の接続ペプチドの全て又は一部、又はその多様体を含むか、これらから本質的になるか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチド及び／又は第２の接続ペプチドは、それぞれ、ＴＣＲδ鎖定常ドメイン（例えば、配列番号３）の接続ペプチドの全て又は一部、又はその多様体及びＴＣＲγ鎖定常ドメイン（例えば、配列番号４）の接続ペプチドの全て又は一部、又はその多様体を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなる。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチド及び／又は第２の接続ペプチドは、それぞれ、配列番号３１又は３２の接続ペプチドの全て又は一部、又はその多様体及び配列番号３３又は３４の接続ペプチドの全て又は一部、又はその多様体を含むか、これらから本質的になるか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ−ＴＭに対してカルボキシ末端に第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ−ＴＭに対してカルボキシ末端に第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメインは、第１のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットの細胞内ドメインの全て又は一部、又はその多様体を含み、及び／又は第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、第２のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットの細胞内ドメインの全て又は一部、又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、配列番号３５〜３６のアミノ酸配列又はその多様体のうち、いずれか１つを含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、天然に存在するＴＣＲの１つの鎖のフラグメント又はその多様体であり、及び／又は第２のＴＣＲＤは、天然に存在するＴＣＲの他の鎖のフラグメント又はその多様体である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＤのうち少なくとも１つは、天然に存在しない。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤは、第１の接続ペプチド中の残基と第２の接続ペプチド中の残基との間のジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及びζζのそれぞれを動員して、ｃａＴＣＲ−ＣＤ３複合体を形成することが可能である（すなわち、ｃａＴＣＲ−ＣＤ３複合体形成を促進する）。
【００８６】
想定されるｃａＴＣＲ構築物としては、例えば、細胞表面抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲ、細胞表面提示ペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的に結合するｃａＴＣＲ、及び細胞表面抗原と細胞表面提示ペプチド／ＭＨＣ複合体の両方に特異的に結合するｃａＴＣＲが挙げられる。
【００８７】
いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）からなる群から選択される抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、単一特異性である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、多重特異性である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、二重特異性である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、タンデムｓｃＦｖ、ダイアボディ（Ｄｂ）、単鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）、二重親和性再標的化（ＤＡＲＴ）抗体、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）抗体、化学的に架橋した抗体、ヘテロ多量体抗体又はヘテロコンジュゲート抗体である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ペプチドリンカーによって結合した２つのｓｃＦｖを含むタンデムｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、抗体部分は、直接的に結合していない２つのｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、抗体部分は、完全にヒトのもの、ヒト抗体フレームワーク領域を有する半合成のもの、又はヒト化されたものである。
【００８８】
いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、ＶＨ抗体ドメインを含む第１の抗原結合ドメインと、ＶＬ抗体ドメインを含む第２の抗原結合ドメインとを含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ抗体ドメイン及びＶＬ抗体ドメインのＣＤＲは、同じ抗体部分に由来する。いくつかの実施形態では、ＶＨ抗体ドメイン及びＶＬ抗体ドメインのＣＤＲの一部は、異なる抗体部分に由来する。いくつかの実施形態では、ＶＨ抗体ドメイン及び／又はＶＬ抗体ドメインは、ヒト、ヒト化、キメラ、半合成、又は完全に合成されたものである。
【００８９】
いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、完全なヒト配列と１つ以上の合成領域とを含む、半合成の抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、完全なヒトＶＬと、完全なヒトＦＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＨＣ−ＣＤＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４領域と合成ＨＣ−ＣＤＲ３とを含む半合成ＶＨとを含む、半合成の抗体部分である。いくつかの実施形態では、半合成ＶＨは、約５〜約２５（例えば、約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４又は２５のいずれか）のアミノ酸長の配列を含む、完全に合成のＨＣ−ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、半合成ＶＨ又は合成ＨＣ−ＣＤＲ３は、約５〜約２５（例えば、約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４又は２５のいずれか）のアミノ酸長の配列を含む完全に合成のＨＣ−ＣＤＲ３を含む、半合成ライブラリー（例えば、半合成ヒトライブラリー）から得られ、この配列中のそれぞれのアミノ酸は、互いに独立して、システインを除く標準的なヒトアミノ酸から無作為に選択される。いくつかの実施形態では、合成ＨＣ−ＣＤＲ３は、約１０〜約１９（例えば、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８又は１９のいずれか）のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、半合成ＶＬと半合成ＶＨとを含む、半合成抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、固定されたヒトＶＨ／ＶＬフレームワーク対を含むが、重鎖及び軽鎖両方の６個のＣＤＲ全てについて無作為な合成配列を含む、完全に合成の抗体部分である。
【００９０】
抗原結合モジュールは、いくつかの実施形態では、１つ以上の抗体部分（例えば、モノクローナル抗体）に由来する特定のＣＤＲ配列、又は１つ以上のアミノ酸置換を含むこのような配列の特定の多様体を含む、抗体部分である。いくつかの実施形態では、多様体配列中のアミノ酸置換は、抗原結合モジュールが標的抗原に結合する能力を実質的に低下させない。標的抗原結合親和性を実質的に改善するか、又は標的抗原の関連する多様体との特異性及び／又は交差反応性などのいくつかの他の特性に影響を与える改変も想定される。
【００９１】
いくつかの実施形態では、安定化モジュールは、抗体部分に由来する。例えば、いくつかの実施形態では、安定化モジュールは、ＣＨ１抗体ドメイン又はその多様体を含む第１の安定化ドメインと、ＣＬ抗体ドメイン又はその多様体を含む第２の安定化ドメインとを含む。別の実施形態では、安定化モジュールは、ＣＨ３抗体ドメイン又はその多様体を含む第１の安定化ドメインと、ＣＨ３抗体ドメイン又はその多様体を含む第２の安定化ドメインとを含む。いくつかの実施形態では、安定化モジュールに含まれる抗体重鎖定常ドメイン（例えば、ＣＨ１又はＣＨ３）は、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４）、ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１又はＩｇＡ２）、ＩｇＤ、ＩｇＭ又はＩｇＥ重鎖、場合により、ヒトに由来する。いくつかの実施形態では、安定化モジュールに含まれる抗体重鎖定常ドメイン（例えば、ＣＨ１又はＣＨ３）は、その由来となる配列と比較して、１つ以上の改変（例えば、アミノ酸置換、挿入及び／又は欠失）を含む多様体である。いくつかの実施形態では、安定化モジュールに含まれる抗体軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）は、κ軽鎖又はλ軽鎖に由来し、場合により、ヒトのものに由来する。いくつかの実施形態では、安定化モジュールに含まれる抗体軽鎖定常ドメイン（例えば、ＣＬ）は、その由来となる配列と比較して、１つ以上の改変（例えば、アミノ酸置換、挿入及び／又は欠失）を含む多様体である。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメイン及び／又は第２の安定化ドメインは、互いに対する結合親和性を実質的に変えない１つ以上の改変を含む。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメイン及び／又は第２の安定化ドメインは、互いに対する結合親和性を高め、及び／又は天然に存在しないジスルフィド結合を導入する１つ以上の改変を含む。いくつかの実施形態では、安定化モジュールは、穴にノブを入れる（knob-into-hole）改変を含む（例えば、Ｃａｒｔｅｒ  Ｐ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．２４８：７−１５、２００１を参照）。例えば、いくつかの実施形態では、安定化モジュールは、穴にノブを入れる改変を含む抗体定常ドメイン領域（例えば、ＣＨ３ドメイン）を含む。いくつかの実施形態では、安定化モジュールは、その会合を高めるための静電的ステアリングによって改変された抗体定常ドメイン領域（例えば、ＣＨ３ドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２００６１０６９０５号及びＧｕｎａｓｅｋａｒａｎ  Ｋら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２８５：１９６３７−４６、２０１０を参照）。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって結合する。
【００９２】
いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、本明細書に記載のＴＣＲＭに結合する本明細書に記載の抗原結合モジュールを含み、場合により、安定化モジュールを含む。例えば、いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、ＴＣＲＤの一方又は両方のＮ末端に結合した抗原結合モジュールを含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、ＴＣＲＭと抗原結合モジュールとの間に安定化モジュールを含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール又はドメインの間にスペーサーモジュールを更に含む。いくつかの実施形態では、スペーサーモジュールは、約５〜約７０（例えば、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５又は７０のいずれか、これらの値の間にある任意の範囲を含む）のアミノ酸長の１つ以上のペプチドリンカーを含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、１つ以上のアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のアクセサリー細胞内ドメインは、第１のＴＣＲＤ及び／又は第２のＴＣＲＤに対してカルボキシ末端にある。いくつかの実施形態では、１つ以上のアクセサリー細胞内ドメインは、第１のＴＣＲ−ＴＭと第１のＴＣＲ細胞内ドメインとの間、及び／又は第２のＴＣＲ−ＴＭと第２のＴＣＲ細胞内ドメインとの間にある。いくつかの実施形態では、１つ以上のアクセサリー細胞内ドメインは、個々に、ＴＣＲ共刺激ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ共刺激ドメインは、免疫共刺激分子（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなど）の細胞内ドメインの全て又は一部を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ共刺激ドメインは、配列番号４９〜５１のアミノ酸配列の全て又は一部又はその多様体を含む。
【００９３】
いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、細胞表面抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、細胞表面抗原は、タンパク質、炭水化物及び脂質からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、細胞表面抗原は、疾患細胞中で発現される疾患関連抗原である。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、ペプチドとＭＨＣタンパク質とを含む複合体に特異的に結合する。ペプチド／ＭＨＣ複合体としては、例えば、疾患細胞内で発現する疾患関連抗原に由来するペプチドと、ＭＨＣタンパク質とを含む、表面提示複合体が挙げられる。いくつかの実施形態では、完全長疾患関連抗原は、疾患細胞表面上で通常は発現しない（例えば、疾患関連抗原は、細胞内タンパク質又は分泌タンパク質である）。いくつかの実施形態では、疾患は癌であり、疾患関連抗原は、癌細胞中で発現される腫瘍関連抗原である。いくつかの実施形態では、腫瘍関連抗原は、癌タンパク質である。いくつかの実施形態では、癌タンパク質は、癌原遺伝子における変異の結果であり、癌タンパク質は、変異を含むネオエピトープを含む。例えば、いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、細胞表面腫瘍関連抗原（例えば、ネオエピトープを含む癌タンパク質）に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、癌細胞表面上で通常は発現しない腫瘍関連抗原（例えば、細胞内抗原又は分泌型の腫瘍関連抗原）に由来するペプチド（例えば、ネオエピトープを含む癌タンパク質）とＭＨＣタンパク質とを含む複合体に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、疾患はウイルス感染であり、疾患関連抗原は、感染細胞において発現されるウイルス関連抗原である。例えば、いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、細胞表面ウイルス関連抗原と特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、ウイルスに感染した細胞表面上で通常は発現しないウイルス関連抗原（例えば、細胞内抗原又は分泌型腫瘍関連抗原）に由来するペプチドとＭＨＣタンパク質とを含む複合体に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ構築物は、約０．１ｐＭ〜約５００ｎＭ（例えば、約０．１ｐＭ、１．０ｐＭ、１０ｐＭ、５０ｐＭ、１００ｐＭ、５００ｐＭ、１ｎＭ、１０ｎＭ、５０ｎＭ、１００ｎＭ又は５００ｎＭのいずれか、これらの値の間にある任意の範囲を含む）のＫｄで、標的抗原に結合する。
【００９４】
いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、細胞表面抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールを含み、細胞表面抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＧＰＣ−３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ又はＦＣＲＬ５であり、これらの多様体又は変異体を含む。全長抗原（例えば、細胞表面抗原）に対する特異的な結合は、「非ＭＨＣ制限結合」と呼ばれることがある。
【００９５】
いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、ペプチドとＭＨＣタンパク質とを含む複合体に特異的に結合する抗原結合モジュールを含み、このペプチドは、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１、ＫＲＡＳ、Ｈｉｓｔｏｎｅ  Ｈ３．３及びＰＳＡからなる群から選択されるタンパク質に由来し、これらの多様体又は変異体を含む。ペプチドとＭＨＣタンパク質とを含む複合体に対する特異的な結合は、「ＭＨＣ制限結合」と呼ばれることがある。
【００９６】
いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、疾患関連抗原（腫瘍関連抗原又はウイルスによってコードされる抗原など）に由来するペプチドとＭＨＣクラスＩタンパク質とを含む複合体に特異的に結合する抗原結合モジュールを含み、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−Ｆ又はＨＬＡ−Ｇである。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ又はＨＬＡ−Ｃである。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａである。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ｂである。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ｃである。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ０１、ＨＬＡ−Ａ０２、ＨＬＡ−Ａ０３、ＨＬＡ−Ａ０９、ＨＬＡ−Ａ１０、ＨＬＡ−Ａ１１、ＨＬＡ−Ａ１９、ＨＬＡ−Ａ２３、ＨＬＡ−Ａ２４、ＨＬＡ−Ａ２５、ＨＬＡ−Ａ２６、ＨＬＡ−Ａ２８、ＨＬＡ−Ａ２９、ＨＬＡ−Ａ３０、ＨＬＡ−Ａ３１、ＨＬＡ−Ａ３２、ＨＬＡ−Ａ３３、ＨＬＡ−Ａ３４、ＨＬＡ−Ａ３６、ＨＬＡ−Ａ４３、ＨＬＡ−Ａ６６、ＨＬＡ−Ａ６８、ＨＬＡ−Ａ６９、ＨＬＡ−Ａ７４又はＨＬＡ−Ａ８０である。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ０２である。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１−５５５、例えば、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０２、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０３、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０４、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０５、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０６、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０７、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０８、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０９、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１０、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１１、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１２、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１３、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１４、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１５、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１６、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１７、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１８、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１９、ＨＬＡ−Ａ＊０２：２０、ＨＬＡ−Ａ＊０２：２１、ＨＬＡ−Ａ＊０２：２２又はＨＬＡ−Ａ＊０２：２４のうち、いずれか１つである。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。
【００９７】
いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、疾患関連抗原（腫瘍関連抗原又はウイルスによってコードされる抗原など）に由来するペプチドとＭＨＣクラスＩＩタンパク質とを含む複合体に特異的に結合する抗原結合モジュールを含み、ＭＨＣクラスＩＩタンパク質は、ＨＬＡ−ＤＰ、ＨＬＡ−ＤＱ又はＨＬＡ−ＤＲである。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩＩタンパク質は、ＨＬＡ−ＤＰである。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩＩタンパク質は、ＨＬＡ−ＤＱである。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩＩタンパク質は、ＨＬＡ−ＤＲである。
【００９８】
いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ（例えば、単離されたｃａＴＣＲ）であって、（ａ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールと、（ｂ）天然に存在するＴＣＲ（例えば、αβＴＣＲ又はγδＴＣＲ）の膜貫通ドメインに由来する第１のＴＣＲ−ＴＭ及び第２のＴＣＲ−ＴＭを含むＴＣＲＭとを含み、ＴＣＲＭが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能であり、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び／又は第２のＴＣＲ−ＴＭが、天然に存在しないものである、ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び第２のＴＣＲ−ＴＭは、天然に存在しないものである。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、ＴＣＲＭ中の１つ以上のポリペプチド鎖のアミノ末端に結合している。例えば、いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、２つのポリペプチド鎖を含み、抗原結合モジュールは、ＴＣＲＭポリペプチド鎖の一方又は両方のアミノ末端に結合している。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＴＣＲ−ＴＭに対してアミノ末端に、天然に存在するＴＣＲの少なくとも１つの接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＴＣＲ−ＴＭに対してカルボキシ末端に、天然に存在するＴＣＲの細胞内ドメイン由来の配列を含む少なくとも１つのＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、天然に存在するＴＣＲ鎖のフラグメントに由来するＴＣＲＤを含む。ＴＣＲＤのうち少なくとも１つは、天然に存在しない。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、ＴＣＲ−ＴＭに対してカルボキシ末端にＴ細胞共刺激シグナル伝達分子（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０又はＣＤ４０由来）を含む少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＶＨ抗体ドメインと、ＶＬ抗体ドメインとを含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ヒト、ヒト化、キメラ、半合成、又は完全に合成されたものである。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化する互いに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、安定化モジュールは、安定化ドメインを結合する少なくとも１つのジスルフィド結合を含む。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインは、ＣＨ１及びＣＬ抗体ドメインなどの抗体部分、又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、天然に存在するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することを可能にする。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ−ＣＤ３複合体の形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール又は���メインの間にスペーサーモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、ヘテロ多量体（例えば、ヘテロ二量体）である。例えば、いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１のＴＣＲＤを含む第１のポリペプチド鎖と第２のＴＣＲＤを含む第２のポリペプチド鎖とを含むヘテロ二量体であり、抗原結合モジュールは、第１のポリペプチド鎖及び／又は第２のポリペプチド鎖に結合している。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、多重特異性（例えば、二重特異性）である。
【００９９】
いくつかの実施形態では、標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲであって、（ａ）天然に存在するＴＣＲの膜貫通ドメインの１つに由来する第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤと天然に存在するＴＣＲの他の膜貫通ドメインに由来する第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤを含み、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能なＴＣＲＭを形成し、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び／又は第２のＴＣＲ−ＴＭが、天然に存在しないものであり、（ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールであって、抗原結合モジュールが、第１のＴＣＲＤ及び／又は第２のＴＣＲＤに結合する、抗原結合モジュールとを含む、ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、天然に存在するＴＣＲは、αβＴＣＲであり、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び第２のＴＣＲ−ＴＭは、ＴＣＲα及びβサブユニット膜貫通ドメインに由来する。いくつかの実施形態では、天然に存在するＴＣＲは、γδＴＣＲであり、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び第２のＴＣＲ−ＴＭは、ＴＣＲγ及びδサブユニット膜貫通ドメインに由来する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドは、第１のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットの接続ペプチドの全て又は一部、又はその多様体を含み、及び／又は第２の接続ペプチドは、第２のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットの接続ペプチドの全て又は一部、又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドと第２の接続ペプチドは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメインは、第１のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットの細胞内ドメインに由来する配列を含み、及び／又は第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、第２のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットの細胞内ドメインに由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットのフラグメントであり、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットのフラグメントである。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０又はＣＤ４０由来）を含む少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインとを含む安定化モジュールを更に含み、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化する互いに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメイン及��第２の安定化ドメインは、ＣＨ１及びＣＬ抗体ドメインなどの抗体部分、又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、天然に存在するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することを可能にする。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ−ＣＤ３複合体の形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール又はドメインの間にスペーサーモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、多重特異性（例えば、二重特異性）である。
【０１００】
いくつかの実施形態では、標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲであって、（ａ）天然に存在するαβＴＣＲの膜貫通ドメインの１つに由来する第１のＴＣＲ−ＴＭと天然に存在するαβＴＣＲの他の膜貫通ドメインに由来する第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤを含み、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能なＴＣＲＭを形成し、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び／又は第２のＴＣＲ−ＴＭが、天然に存在しないものである、第１のＴＣＲＤと、（ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールであって、抗原結合モジュールが、第１のＴＣＲＤ及び／又は第２のＴＣＲＤに結合する、抗原結合モジュールとを含む、ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドは、第１のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットの接続ペプチドの全て又は一部、又はその多様体を含み、及び／又は第２の接続ペプチドは、第２のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットの接続ペプチドの全て又は一部、又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドと第２の接続ペプチドは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメインは、第１のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットの細胞内ドメインに由来する配列を含み、及び／又は第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、第２のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットの細胞内ドメインに由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットのフラグメントであり、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットのフラグメントである。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０又はＣＤ４０由来）を含む少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化する互いに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインは、ＣＨ１及びＣＬ抗体ドメインなどの抗体部分、又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、天然に存在するαβＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することを可能にする。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ−ＣＤ３複合体の形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール又はドメインの間にスペーサーモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、多重特異性（例えば、二重特異性）である。
【０１０１】
いくつかの実施形態では、標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲであって、（ａ）天然に存在するγδＴＣＲの膜貫通ドメインの１つに由来する第１のＴＣＲ−ＴＭと天然に存在するγδＴＣＲの他の膜貫通ドメインに由来する第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤを含み、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能なＴＣＲＭを形成し、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び／又は第２のＴＣＲ−ＴＭが、天然に存在しないものである、第１のＴＣＲＤと、（ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールであって、抗原結合モジュールが、第１のＴＣＲＤ及び／又は第２のＴＣＲＤに結合する、抗原結合モジュールとを含む、ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドは、第１のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットの接続ペプチドの全て又は一部、又はその多様体を含み、及び／又は第２の接続ペプチドは、第２のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットの接続ペプチドの全て又は一部、又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドと第２の接続ペプチドは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメインは、第１のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットの細胞内ドメインに由来する配列を含み、及び／又は第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、第２のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットの細胞内ドメインに由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットのフラグメントであり、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットのフラグメントである。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０又はＣＤ４０由来）を含む少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化する互いに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインは、ＣＨ１及びＣＬ抗体ドメインなどの抗体部分、又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、天然に存在するγδＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することを可能にする。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ−ＣＤ３複合体の形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール又はドメインの間にスペーサーモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、多重特異性（例えば、二重特異性）である。
【０１０２】
いくつかの実施形態では、標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲであって、（ａ）配列番号１及び配列番号２のアミノ酸配列の１つに含まれる膜貫通ドメインに由来する第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤと、他のアミノ酸配列に含まれる膜貫通ドメインに由来する第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤを含み、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能なＴＣＲＭを形成し、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び／又は第２のＴＣＲ−ＴＭが、天然に存在しないものであり、（ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールであって、抗原結合モジュールが、第１のＴＣＲＤ及び／又は第２のＴＣＲＤに結合する、抗原結合モジュールとを含む、ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチド及び第２の接続ペプチドは、それぞれ互いに独立して、配列番号１〜４のアミノ酸配列又はこれらの多様体のうちいずれか１つに含まれる接続ペプチドのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチド及び第２の接続ペプチドは、それぞれ互いに独立して、配列番号２７〜３４又はこれらの多様体のうちいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドと第２の接続ペプチドは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメイン及び第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、それぞれ互いに独立して、配列番号１〜４のアミノ酸配列又はこれらの多様体のうちいずれか１つに含まれる細胞内ドメインのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメイン及び第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、それぞれ互いに独立して、配列番号３５又は３６又はこれらの多様体のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０又はＣＤ４０由来）を含む少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化する互いに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインは、ＣＨ１及びＣＬ抗体ドメインなどの抗体部分、又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、配列番号１及び２に含まれる膜貫通ドメインの配列を有するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の再動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ−ＣＤ３複合体の形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール又はドメインの間にスペーサーモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、多重特異性（例えば、二重特異性）である。
【０１０３】
いくつかの実施形態では、標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲであって、（ａ）配列番号１及び配列番号２のアミノ酸配列の１つに含まれる膜貫通ドメインに由来する第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤと、他のアミノ酸配列に含まれる膜貫通ドメインに由来する第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤを含み、ＴＣＲ−ＴＭの少なくとも１つが、その由来となるアミノ酸配列と比較して、１つ以上（例えば、２、３、４、５、又はもっと多く）のアミノ酸置換を含み、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能なＴＣＲＭを形成し、（ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールであって、抗原結合モジュールが、第１のＴＣＲＤ及び／又は第２のＴＣＲＤに結合する、抗原結合モジュールとを含む、ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ−ＴＭは、それぞれ互いに独立して、その由来となるアミノ酸配列と比較して、１つ以上（例えば、２、３、４、５、又はもっと多く）のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び／又は第２のＴＣＲ−ＴＭは、それぞれ互いに独立して、その由来となるアミノ酸配列と比較して、５個以下のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ−ＴＭの少なくとも１つは、その由来となるアミノ酸配列と比較して、単一のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ−ＴＭは、それぞれ、その由来となるアミノ酸配列と比較して、単一のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ−ＴＭ中の置換アミノ酸の少なくとも１つが、ｃａＴＣＲにおいて、第２のＴＣＲ−ＴＭ中の置換アミノ酸の少なくとも１つと相互作用し得るように配置される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチド及び第２の接続ペプチドは、それぞれ互いに独立して、配列番号１〜４のアミノ酸配列又はこれらの多様体のうちいずれか１つに含まれる接続ペプチドのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチド及び第２の接続ペプチドは、それぞれ互いに独立して、配列番号２７〜３４又はこれらの多様体のうちいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドと第２の接続ペプチドは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメイン及び第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、それぞれ互いに独立して、配列番号１〜４のアミノ酸配列又はこれらの多様体のうちいずれか１つに含まれる細胞内ドメインのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメイン及び第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、それぞれ互いに独立して、配列番号３５又は３６又はこれらの多様体のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０又はＣＤ４０由来）を含む少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化する互いに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインは、ＣＨ１及びＣＬ抗体ドメインなどの抗体部分、又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、配列番号１及び２に含まれる膜貫通ドメインの配列を有するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の再動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ−ＣＤ３複合体の形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール又はドメインの間にスペーサーモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、多重特異性（例えば、二重特異性）である。
【０１０４】
いくつかの実施形態では、標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲであって、（ａ）配列番号１及び配列番号２のアミノ酸配列の１つに含まれる膜貫通ドメインに由来する第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤと、他のアミノ酸配列に含まれる膜貫通ドメインに由来する第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤを含み、ＴＣＲ−ＴＭの少なくとも１つが、配列番号３又は４に含まれる膜貫通ドメインに由来する連続アミノ酸の一部を含むキメラ配列を含み、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能なＴＣＲＭを形成し、（ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールであって、抗原結合モジュールが、第１のＴＣＲＤ及び／又は第２のＴＣＲＤに結合する、抗原結合モジュールとを含む、ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ−ＴＭは、それぞれ互いに独立して、配列番号３又は４に含まれる膜貫通ドメインに由来する連続アミノ酸の一部を含むキメラ配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び／又は第２のＴＣＲ−ＴＭは、それぞれ互いに独立して、配列番号３又は４に含まれる膜貫通ドメインに由来する約１０以下（例えば、約９、８、７、６、５以下、又はもっと少ない）の連続アミノ酸の一部を含むキメラ配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ−ＴＭ中又は第２のＴＣＲ−ＴＭ中のキメラ配列は、配列番号３に含まれる膜貫通ドメインに由来し、他方のＴＣＲ−ＴＭ中のキメラ配列は、配列番号４に含まれる膜貫通ドメインに由来する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ−ＴＭ中のキメラ配列は、第２のＴＣＲ−ＴＭ中のキメラ配列と相互作用し得るように配置される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチド及び第２の接続ペプチドは、それぞれ互いに独立して、配列番号１〜４のアミノ酸配列又はこれらの多様体のうちいずれか１つに含まれる接続ペプチドのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチド及び第２の接続ペプチドは、それぞれ互いに独立して、配列番号２７〜３４又はこれらの多様体のうちいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドと第２の接続ペプチドは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメイン及び第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、それぞれ互いに独立して、配列番号１〜４のアミノ酸配列又はこれらの多様体のうちいずれか１つに含まれる細胞内ドメインのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメイン及び第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、それぞれ互いに独立して、配列番号３５又は３６又はこれらの多様体のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０又はＣＤ４０由来）を含む少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化する互いに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインは、ＣＨ１及びＣＬ抗体ドメインなどの抗体部分、又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、配列番号１及び２に含まれる膜貫通ドメインの配列を有するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の再動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ−ＣＤ３複合体の形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール又はドメインの間にスペーサーモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、多重特異性（例えば、二重特異性）である。
【０１０５】
いくつかの実施形態では、標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲであって、（ａ）配列番号３及び配列番号４のアミノ酸配列の１つに含まれる膜貫通ドメインに由来する第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤと、他のアミノ酸配列に含まれる膜貫通ドメインに由来する第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤを含み、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能なＴＣＲＭを形成し、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び／又は第２のＴＣＲ−ＴＭが、天然に存在しないものであり、（ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールであって、抗原結合モジュールが、第１のＴＣＲＤ及び／又は第２のＴＣＲＤに結合する、抗原結合モジュールとを含む、ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチド及び第２の接続ペプチドは、それぞれ互いに独立して、配列番号１〜４のアミノ酸配列又はこれらの多様体のうちいずれか１つに含まれる接続ペプチドのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチド及び第２の接続ペプチドは、それぞれ互いに独立して、配列番号２７〜３４又はこれらの多様体のうちいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドと第２の接続ペプチドは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメイン及び第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、それぞれ互いに独立して、配列番号１〜４のアミノ酸配列又はこれらの多様体のうちいずれか１つに含まれる細胞内ドメインのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメイン及び第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、それぞれ互いに独立して、配列番号３５又は３６又はこれらの多様体のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０又はＣＤ４０由来）を含む少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化する互いに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインは、ＣＨ１及びＣＬ抗体ドメインなどの抗体部分、又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、配列番号３及び４に含まれる膜貫通ドメインの配列を有するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の再動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ−ＣＤ３複合体の形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール又はドメインの間にスペーサーモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、多重特異性（例えば、二重特異性）である。
【０１０６】
いくつかの実施形態では、標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲであって、（ａ）配列番号３及び配列番号４のアミノ酸配列の１つに含まれる膜貫通ドメインに由来する第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤと、他のアミノ酸配列に含まれる膜貫通ドメインに由来する第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤを含み、ＴＣＲ−ＴＭの少なくとも１つが、その由来となるアミノ酸配列と比較して、１つ以上（例えば、２、３、４、５、又はもっと多く）のアミノ酸置換を含み、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能なＴＣＲＭを形成し、（ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールであって、抗原結合モジュールが、第１のＴＣＲＤ及び／又は第２のＴＣＲＤに結合する、抗原結合モジュールとを含む、ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ−ＴＭは、それぞれ互いに独立して、その由来となるアミノ酸配列と比較して、１つ以上（例えば、２、３、４、５、又はもっと多く）のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び／又は第２のＴＣＲ−ＴＭは、それぞれ互いに独立して、その由来となるアミノ酸配列と比較して、５個以下のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ−ＴＭの少なくとも１つは、その由来となるアミノ酸配列と比較して、単一のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ−ＴＭは、それぞれ、その由来となるアミノ酸配列と比較して、単一のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ−ＴＭ中の置換アミノ酸の少なくとも１つが、ｃａＴＣＲにおいて、第２のＴＣＲ−ＴＭ中の置換アミノ酸の少なくとも１つと相互作用し得るように配置される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチド及び第２の接続ペプチドは、それぞれ互いに独立して、配列番号１〜４のアミノ酸配列又はこれらの多様体のうちいずれか１つに含まれる接続ペプチドのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチド及び第２の接続ペプチドは、それぞれ互いに独立して、配列番号２７〜３４又はこれらの多様体のうちいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドと第２の接続ペプチドは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメイン及び第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、それぞれ互いに独立して、配列番号１〜４のアミノ酸配列又はこれらの多様体のうちいずれか１つに含まれる細胞内ドメインのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメイン及び第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、それぞれ互いに独立して、配列番号３５又は３６又はこれらの多様体のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０又はＣＤ４０由来）を含む少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化する互いに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインは、ＣＨ１及びＣＬ抗体ドメインなどの抗体部分、又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、配列番号３及び４に含まれる膜貫通ドメインの配列を有するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の再動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ−ＣＤ３複合体の形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール又はドメインの間にスペーサーモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、多重特異性（例えば、二重特異性）である。
【０１０７】
いくつかの実施形態では、標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲであって、（ａ）配列番号３及び配列番号４のアミノ酸配列の１つに含まれる膜貫通ドメインに由来する第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤと、他のアミノ酸配列に含まれる膜貫通ドメインに由来する第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤを含み、ＴＣＲ−ＴＭの少なくとも１つが、配列番号１又は２に含まれる膜貫通ドメインに由来する連続アミノ酸の一部を含むキメラ配列を含み、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能なＴＣＲＭを形成し、（ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールであって、抗原結合モジュールが、第１のＴＣＲＤ及び／又は第２のＴＣＲＤに結合する、抗原結合モジュールとを含む、ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ−ＴＭは、それぞれ互いに独立して、配列番号１又は２に含まれる膜貫通ドメインに由来する連続アミノ酸の一部を含むキメラ配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び／又は第２のＴＣＲ−ＴＭは、それぞれ互いに独立して、配列番号１又は２に含まれる膜貫通ドメインに由来する約１０以下（例えば、約９、８、７、６、５以下、又はもっと少ない）の連続アミノ酸の一部を含むキメラ配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ−ＴＭ中又は第２のＴＣＲ−ＴＭ中のキメラ配列は、配列番号１に含まれる膜貫通ドメインに由来し、他方のＴＣＲ−ＴＭ中のキメラ配列は、配列番号２に含まれる膜貫通ドメインに由来する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ−ＴＭ中のキメラ配列は、第２のＴＣＲ−ＴＭ中のキメラ配列と相互作用し得るように配置される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチド及び第２の接続ペプチドは、それぞれ互いに独立して、配列番号１〜４のアミノ酸配列又はこれらの多様体のうちいずれか１つに含まれる接続ペプチドのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチド及び第２の接続ペプチドは、それぞれ互いに独立して、配列番号２７〜３４又はこれらの多様体のうちいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドと第２の接続ペプチドは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメイン及び第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、それぞれ互いに独立して、配列番号１〜４のアミノ酸配列又はこれらの多様体のうちいずれか１つに含まれる細胞内ドメインのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメイン及び第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、それぞれ互いに独立して、配列番号３５又は３６又はこれらの多様体のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０又はＣＤ４０由来）を含む少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化する互いに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインは、ＣＨ１及びＣＬ抗体ドメインなどの抗体部分、又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、配列番号３及び４に含まれる膜貫通ドメインの配列を有するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の再動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ−ＣＤ３複合体の形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール又はドメインの間にスペーサーモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、多重特異性（例えば、二重特異性）である。
【０１０８】
いくつかの実施形態では、標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲであって、（ａ）配列番号５及び配列番号６のアミノ酸配列の１つに由来する第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤと、他のアミノ酸配列に由来する第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤを含み、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能なＴＣＲＭを形成し、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び／又は第２のＴＣＲ−ＴＭが、天然に存在しないものであり、（ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールであって、抗原結合モジュールが、第１のＴＣＲＤ及び／又は第２のＴＣＲＤに結合する、抗原結合モジュールとを含む、ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチド及び第２の接続ペプチドは、それぞれ互いに独立して、配列番号２７〜３４又はこれらの多様体のうちいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドと第２の接続ペプチドは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメイン及び第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、それぞれ互いに独立して、配列番号３５又は３６又はこれらの多様体のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０又はＣＤ４０由来）を含む少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化する互いに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインは、ＣＨ１及びＣＬ抗体ドメインなどの抗体部分、又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、配列番号５及び６の配列を有するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ−ＣＤ３複合体の形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール又はドメインの間にスペーサーモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、多重特異性（例えば、二重特異性）である。
【０１０９】
いくつかの実施形態では、標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲであって、（ａ）配列番号５及び配列番号６のアミノ酸配列の１つに由来する第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤと、他のアミノ酸配列に由来する第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤを含み、ＴＣＲ−ＴＭの少なくとも１つが、その由来となるアミノ酸配列と比較して、１つ以上（例えば、２、３、４、５、又はもっと多く）のアミノ酸置換を含み、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能なＴＣＲＭを形成し、（ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールであって、抗原結合モジュールが、第１のＴＣＲＤ及び／又は第２のＴＣＲＤに結合する、抗原結合モジュールとを含む、ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ−ＴＭは、それぞれ互いに独立して、その由来となるアミノ酸配列と比較して、１つ以上（例えば、２、３、４、５、又はもっと多く）のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び／又は第２のＴＣＲ−ＴＭは、それぞれ互いに独立して、その由来となるアミノ酸配列と比較して、５個以下のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ−ＴＭの少なくとも１つは、その由来となるアミノ酸配列と比較して、単一のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ−ＴＭは、それぞれ、その由来となるアミノ酸配列と比較して、単一のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ−ＴＭ中の置換アミノ酸の少なくとも１つが、ｃａＴＣＲにおいて、第２のＴＣＲ−ＴＭ中の置換アミノ酸の少なくとも１つと相互作用し得るように配置される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチド及び第２の接続ペプチドは、それぞれ互いに独立して、配列番号２７〜３４又はこれらの多様体のうちいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドと第２の接続ペプチドは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメイン及び第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、それぞれ互いに独立して、配列番号３５又は３６又はこれらの多様体のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０又はＣＤ４０由来）を含む少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化する互いに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインは、ＣＨ１及びＣＬ抗体ドメインなどの抗体部分、又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、配列番号５及び６の配列を有するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ−ＣＤ３複合体の形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール又はドメインの間にスペーサーモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、多重特異性（例えば、二重特異性）である。
【０１１０】
いくつかの実施形態では、標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲであって、（ａ）配列番号５及び配列番号６のアミノ酸配列の１つに由来する第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤと、他のアミノ酸配列に由来する第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤを含み、ＴＣＲ−ＴＭの少なくとも１つが、配列番号７又は８に由来する連続アミノ酸の一部を含むキメラ配列を含み、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能なＴＣＲＭを形成し、（ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールであって、抗原結合モジュールが、第１のＴＣＲＤ及び／又は第２のＴＣＲＤに結合する、抗原結合モジュールとを含む、ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ−ＴＭは、それぞれ互いに独立して、配列番号７又は８に由来する連続アミノ酸の一部を含むキメラ配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び／又は第２のＴＣＲ−ＴＭは、それぞれ互いに独立して、配列番号７又は８に由来する約１０以下（例えば、約９、８、７、６、５以下、又はもっと少ない）の連続アミノ酸の一部を含むキメラ配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ−ＴＭ中又は第２のＴＣＲ−ＴＭ中のキメラ配列は、配列番号７に由来し、他方のＴＣＲ−ＴＭ中のキメラ配列は、配列番号８に由来する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ−ＴＭ中のキメラ配列は、第２のＴＣＲ−ＴＭ中のキメラ配列と相互作用し得るように配置される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチド及び第２の接続ペプチドは、それぞれ互いに独立して、配列番号２７〜３４又はこれらの多様体のうちいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドと第２の接続ペプチドは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメイン及び第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、それぞれ互いに独立して、配列番号３５又は３６又はこれらの多様体のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０又はＣＤ４０由来）を含む少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化する互いに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインは、ＣＨ１及びＣＬ抗体ドメインなどの抗体部分、又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、配列番号５及び６の配列を有するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ−ＣＤ３複合体の形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール又はドメインの間にスペーサーモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、多重特異性（例えば、二重特異性）である。
【０１１１】
いくつかの実施形態では、標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲであって、（ａ）配列番号７及び配列番号８のアミノ酸配列の１つに由来する第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤと、他のアミノ酸配列に由来する第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤを含み、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能なＴＣＲＭを形成し、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び／又は第２のＴＣＲ−ＴＭが、天然に存在しないものであり、（ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールであって、抗原結合モジュールが、第１のＴＣＲＤ及び／又は第２のＴＣＲＤに結合する、抗原結合モジュールとを含む、ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチド及び第２の接続ペプチドは、それぞれ互いに独立して、配列番号２７〜３４又はこれらの多様体のうちいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドと第２の接続ペプチドは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメイン及び第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、それぞれ互いに独立して、配列番号３５又は３６又はこれらの多様体のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０又はＣＤ４０由来）を含む少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化する互いに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインは、ＣＨ１及びＣＬ抗体ドメインなどの抗体部分、又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、配列番号７及び８の配列を有するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ−ＣＤ３複合体の形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール又はドメインの間にスペーサーモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、多重特異性（例えば、二重特異性）である。
【０１１２】
いくつかの実施形態では、標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲであって、（ａ）配列番号７及び配列番号８のアミノ酸配列の１つに由来する第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤと、他のアミノ酸配列に由来する第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤを含み、ＴＣＲ−ＴＭの少なくとも１つが、その由来となるアミノ酸配列と比較して、１つ以上（例えば、２、３、４、５、又はもっと多く）のアミノ酸置換を含み、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能なＴＣＲＭを形成し、（ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールであって、抗原結合モジュールが、第１のＴＣＲＤ及び／又は第２のＴＣＲＤに結合する、抗原結合モジュールとを含む、ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ−ＴＭは、それぞれ互いに独立して、その由来となるアミノ酸配列と比較して、１つ以上（例えば、２、３、４、５、又はもっと多く）のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び／又は第２のＴＣＲ−ＴＭは、それぞれ互いに独立して、その由来となるアミノ酸配列と比較して、５個以下のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ−ＴＭの少なくとも１つは、その由来となるアミノ酸配列と比較して、単一のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ−ＴＭは、それぞれ、その由来となるアミノ酸配列と比較して、単一のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ−ＴＭ中の置換アミノ酸の少なくとも１つが、ｃａＴＣＲにおいて、第２のＴＣＲ−ＴＭ中の置換アミノ酸の少なくとも１つと相互作用し得るように配置される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチド及び第２の接続ペプチドは、それぞれ互いに独立して、配列番号２７〜３４又はこれらの多様体のうちいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドと第２の接続ペプチドは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメイン及び第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、それぞれ互いに独立して、配列番号３５又は３６又はこれらの多様体のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０又はＣＤ４０由来）を含む少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化する互いに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインは、ＣＨ１及びＣＬ抗体ドメインなどの抗体部分、又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、配列番号７及び８の配列を有するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ−ＣＤ３複合体の形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール又はドメインの間にスペーサーモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、多重特異性（例えば、二重特異性）である。
【０１１３】
いくつかの実施形態では、標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲであって、（ａ）配列番号７及び配列番号８のアミノ酸配列の１つに由来する第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤと、他のアミノ酸配列に由来する第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤを含み、ＴＣＲ−ＴＭの少なくとも１つが、配列番号５又は６に由来する連続アミノ酸の一部を含むキメラ配列を含み、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能なＴＣＲＭを形成し、（ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールであって、抗原結合モジュールが、第１のＴＣＲＤ及び／又は第２のＴＣＲＤに結合する、抗原結合モジュールとを含む、ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ−ＴＭは、それぞれ互いに独立して、配列番号５又は６に由来する連続アミノ酸の一部を含むキメラ配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び／又は第２のＴＣＲ−ＴＭは、それぞれ互いに独立して、配列番号５又は６に由来する約１０以下（例えば、約９、８、７、６、５以下、又はもっと少ない）の連続アミノ酸の一部を含むキメラ配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ−ＴＭ中又は第２のＴＣＲ−ＴＭ中のキメラ配列は、配列番号５に由来し、他方のＴＣＲ−ＴＭ中のキメラ配列は、配列番号６に由来する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ−ＴＭ中のキメラ配列は、第２のＴＣＲ−ＴＭ中のキメラ配列と相互作用し得るように配置される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチド及び第２の接続ペプチドは、それぞれ互いに独立して、配列番号２７〜３４又はこれらの多様体のうちいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドと第２の接続ペプチドは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメイン及び第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、それぞれ互いに独立して、配列番号３５又は３６又はこれらの多様体のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０又はＣＤ４０由来）を含む少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化する互いに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインは、ＣＨ１及びＣＬ抗体ドメインなどの抗体部分、又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、配列番号７及び８の配列を有するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ−ＣＤ３複合体の形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール又はドメインの間にスペーサーモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、多重特異性（例えば、二重特異性）である。
【０１１４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲのいずれかに記載のｃａＴＣＲと、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのシグナル伝達分子とを含む、複合体が提供される。いくつかの実施形態では、複合体は、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及びζζのそれぞれを含む。したがって、いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及びζζを含む複合体が提供される。
【０１１５】
異なる態様は、以下の様々な章で更に詳細に論じられる。
ＴＣＲ−ＴＭ多様体
【０１１６】
本明細書に記載のｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭは、天然に存在するＴ細胞受容体に由来する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ−ＴＭのうち少なくとも１つは、天然に存在しない。天然に存在するＴ細胞受容体に由来する、天然に存在しないＴＣＲ−ＴＭは、１つ以上のアミノ酸置換によって改変された天然に存在するＴ細胞受容体に由来する膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のうち少なくとも１つは、対応する非置換残基よりも疎水性である残基で置換される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸は、それぞれ、対応する非置換残基よりも疎水性である残基で置換される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のうちの少なくとも１つは、ＣＤ３への結合に関与するＴＣＲＭ中のアミノ酸に対して近位（一次配列で、又は空間的に）である。例えば、いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のうちの少なくとも１つは、ＣＤ３への結合に関与するＴＣＲＭ中のアミノ酸から、３以下の（例えば、０、１、２又は３の）アミノ酸だけ離れている。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のうちの少なくとも１つは、ＣＤ３への結合に関与するＴＣＲＭ中のアミノ酸から、約１５（例えば、約１４、１２、１０、８、６、４、２又は１以下のいずれか）Å以内で離れている。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸は、それぞれ、ＣＤ３への結合に関与するＴＣＲＭ中のアミノ酸に対して近位である。
【０１１７】
例えば、いくつかの実施形態では、天然に存在するＴ細胞受容体に由来する、天然に存在しないＴＣＲ−ＴＭは、１つ以上のアミノ酸残基の置換によって改変されたα、β、γ又はδＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインを含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインは、５個以下のアミノ酸残基の置換によって改変される。いくつかの実施形態では、ＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインは、単一のアミノ酸残基の置換によって改変される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のうち少なくとも１つは、対応する非置換残基よりも疎水性である残基で置換される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸は、それぞれ、対応する非置換残基よりも疎水性である残基で置換される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のうち少なくとも１つは、ＣＤ３への結合に関与するＴＣＲＭ中のアミノ酸に対して近位である。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸は、それぞれ、ＣＤ３への結合に関与するＴＣＲＭ中のアミノ酸に対して近位である。
【０１１８】
したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載する天然に存在するＴ細胞受容体に由来する、天然に存在しないＴＣＲ−ＴＭは、１つ以上のアミノ酸残基の置換によって改変される、配列番号１に含まれる膜貫通ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号５）を含むαＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインを含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなる。いくつかの実施形態では、αＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインは、配列番号１に含まれる膜貫通ドメイン中の５個以下のアミノ酸残基の置換によって改変される。いくつかの実施形態では、αＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインは、配列番号１に含まれる膜貫通ドメイン中の単一のアミノ酸残基の置換によって改変される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のうち少なくとも１つは、対応する非置換残基よりも疎水性である残基で置換される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸は、それぞれ、対応する非置換残基よりも疎水性である残基で置換される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のうち少なくとも１つは、ＣＤ３への結合に関与するＴＣＲＭ中のアミノ酸に対して近位である。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸は、それぞれ、ＣＤ３への結合に関与するＴＣＲＭ中のアミノ酸に対して近位である。
【０１１９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載する天然に存在するＴ細胞受容体に由来する、天然に存在しないＴＣＲ−ＴＭは、１つ以上のアミノ酸残基の置換によって改変される、配列番号５のアミノ酸配列を含むαＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインを含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインは、配列番号５中の５個以下のアミノ酸残基の置換によって改変される。いくつかの実施形態では、αＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインは、配列番号５中の単一のアミノ酸残基の置換によって改変される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のうち少なくとも１つは、対応する非置換残基よりも疎水性である残基で置換される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸は、それぞれ、対応する非置換残基よりも疎水性である残基で置換される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のうち少なくとも１つは、ＣＤ３への結合に関与するＴＣＲＭ中のアミノ酸に対して近位である。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸は、それぞれ、ＣＤ３への結合に関与するＴＣＲＭ中のアミノ酸に対して近位である。
【０１２０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載する天然に存在するＴ細胞受容体に由来する、天然に存在しないＴＣＲ−ＴＭは、１つ以上のアミノ酸残基の置換によって改変される、配列番号２に含まれる膜貫通ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号６）を含むβＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインを含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなる。いくつかの実施形態では、βＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインは、配列番号２に含まれる膜貫通ドメイン中の５個以下のアミノ酸残基の置換によって改変される。いくつかの実施形態では、βＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインは、配列番号２に含まれる膜貫通ドメイン中の単一のアミノ酸残基の置換によって改変される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のうち少なくとも１つは、対応する非置換残基よりも疎水性である残基で置換される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸は、それぞれ、対応する非置換残基よりも疎水性である残基で置換される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のうち少なくとも１つは、ＣＤ３への結合に関与するＴＣＲＭ中のアミノ酸に対して近位である。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸は、それぞれ、ＣＤ３への結合に関与するＴＣＲＭ中のアミノ酸に対して近位である。
【０１２１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載する天然に存在するＴ細胞受容体に由来する、天然に存在しないＴＣＲ−ＴＭは、１つ以上のアミノ酸残基の置換によって改変される、配列番号６のアミノ酸配列を含むβＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインを含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなる。いくつかの実施形態では、βＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインは、配列番号６中の５個以下のアミノ酸残基の置換によって改変される。いくつかの実施形態では、βＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインは、配列番号６中の単一のアミノ酸残基の置換によって改変される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のうち少なくとも１つは、対応する非置換残基よりも疎水性である残基で置換される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸は、それぞれ、対応する非置換残基よりも疎水性である残基で置換される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のうち少なくとも１つは、ＣＤ３への結合に関与するＴＣＲＭ中のアミノ酸に対して近位である。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸は、それぞれ、ＣＤ３への結合に関与するＴＣＲＭ中のアミノ酸に対して近位である。
【０１２２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載する天然に存在するＴ細胞受容体に由来する、天然に存在しないＴＣＲ−ＴＭは、１つ以上のアミノ酸残基の置換によって改変される、配列番号３に含まれる膜貫通ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号７）を含むδＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインを含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなる。いくつかの実施形態では、δＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインは、配列番号３に含まれる膜貫通ドメイン中の５個以下のアミノ酸残基の置換によって改変される。いくつかの実施形態では、δＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインは、配列番号３に含まれる膜貫通ドメイン中の単一のアミノ酸残基の置換によって改変される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のうち少なくとも１つは、対応する非置換残基よりも疎水性である残基で置換される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸は、それぞれ、対応する非置換残基よりも疎水性である残基で置換される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のうち少なくとも１つは、ＣＤ３への結合に関与するＴＣＲＭ中のアミノ酸に対して近位である。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸は、それぞれ、ＣＤ３への結合に関与するＴＣＲＭ中のアミノ酸に対して近位である。
【０１２３】
いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ−ＴＭは、配列番号７中のアミノ酸配列Ｌ４、Ｍ６、Ｖ１２、Ｎ１５、Ｆ２４５及びＬ２５に対応するアミノ酸中の１つ以上の置換（例えば、より疎水性の残基を用いた置換）によって改変される、配列番号３に含まれる膜貫通ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号７）を含む。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ−ＴＭは、配列番号７中のアミノ酸配列Ｖ１２及びＮ１５に対応するアミノ酸中の置換（例えば、より疎水性の残基を用いた置換）によって改変される、配列番号３に含まれる膜貫通ドメインのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ−ＴＭは、配列番号７中の置換Ｌ４Ｃ、Ｍ６Ｖ、Ｖ１２Ｆ、Ｎ１５Ｓ、Ｆ２４５Ｓ及びＬ２５Ｓに対応する１つ以上の置換によって改変される、配列番号３に含まれる膜貫通ドメインのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ−ＴＭは、配列番号７中の置換Ｖ１２Ｆ及びＮ１５Ｓに対応する置換によって改変される、配列番号３に含まれる膜貫通ドメインのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ−ＴＭは、配列番号９〜１３のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。
【０１２４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載する天然に存在するＴ細胞受容体に由来する、天然に存在しないＴＣＲ−ＴＭは、１つ以上のアミノ酸残基の置換によって改変される、配列番号７のアミノ酸配列を含むδＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインを含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなる。いくつかの実施形態では、δＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインは、配列番号７中の５個以下のアミノ酸残基の置換によって改変される。いくつかの実施形態では、δＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインは、配列番号７中の単一のアミノ酸残基の置換によって改変される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のうち少なくとも１つは、対応する非置換残基よりも疎水性である残基で置換される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸は、それぞれ、対応する非置換残基よりも疎水性である残基で置換される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のうち少なくとも１つは、ＣＤ３への結合に関与するＴＣＲＭ中のアミノ酸に対して近位である。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸は、それぞれ、ＣＤ３への結合に関与するＴＣＲＭ中のアミノ酸に対して近位である。
【０１２５】
いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ−ＴＭは、配列番号７中のアミノ酸配列Ｌ４、Ｍ６、Ｖ１２、Ｎ１５、Ｆ２４５及びＬ２５に対応するアミノ酸中の１つ以上の置換（例えば、より疎水性の残基を用いた置換）によって改変される、配列番号７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ−ＴＭは、配列番号７中のアミノ酸配列Ｖ１２及びＮ１５に対応するアミノ酸中の置換（例えば、より疎水性の残基を用いた置換）によって改変される、配列番号７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ−ＴＭは、配列番号７中の置換Ｌ４Ｃ、Ｍ６Ｖ、Ｖ１２Ｆ、Ｎ１５Ｓ、Ｆ２４５Ｓ及びＬ２５Ｓに対応する１つ以上の置換によって改変される、配列番号７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ−ＴＭは、配列番号７中の置換Ｖ１２Ｆ及びＮ１５Ｓに対応する置換によって改変される、配列番号７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ−ＴＭは、配列番号９〜１３のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。
【０１２６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載する天然に存在するＴ細胞受容体に由来する、天然に存在しないＴＣＲ−ＴＭは、１つ以上のアミノ酸残基の置換によって改変される、配列番号４に含まれる膜貫通ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号８）を含むγＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインを含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなる。いくつかの実施形態では、γＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインは、配列番号４に含まれる膜貫通ドメイン中の５個以下のアミノ酸残基の置換によって改変される。いくつかの実施形態では、γＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインは、配列番号４に含まれる膜貫通ドメイン中の単一のアミノ酸残基の置換によって改変される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のうち少なくとも１つは、対応する非置換残基よりも疎水性である残基で置換される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸は、それぞれ、対応する非置換残基よりも疎水性である残基で置換される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のうち少なくとも１つは、ＣＤ３への結合に関与するＴＣＲＭ中のアミノ酸に対して近位である。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸は、それぞれ、ＣＤ３への結合に関与するＴＣＲＭ中のアミノ酸に対して近位である。
【０１２７】
いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ−ＴＭは、配列番号８中のアミノ酸配列Ｙ１、Ｙ２、Ｍ３、Ｌ５、Ｌ８、Ｖ１２、Ｖ１３、Ｆ１５、Ａ１６、Ｉ１８、Ｃ１９、Ｃ２０及びＣ２１に対応するアミノ酸中の１つ以上の置換（例えば、より疎水性の残基を用いた置換）によって改変される、配列番号４に含まれる膜貫通ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号８）を含む。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ−ＴＭは、配列番号８中のアミノ酸配列Ｙ２、Ｍ３、Ａ１６及びＩ１８に対応するアミノ酸中の置換（例えば、より疎水性の残基を用いた置換）によって改変される、配列番号４に含まれる膜貫通ドメインのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ−ＴＭは、配列番号８中のアミノ酸配列Ｌ８、Ｖ１２及びＦ１５に対応するアミノ酸中の置換（例えば、より疎水性の残基を用いた置換）によって改変される、配列番号４に含まれる膜貫通ドメインのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ−ＴＭは、配列番号８中の置換Ｙ１Ｑ、Ｙ２Ｌ、Ｙ２Ｉ、Ｍ３Ｖ、Ｍ３Ｉ、Ｌ５Ｃ、Ｌ８Ｆ、Ｖ１２Ｆ、Ｖ１３Ｙ、Ｆ１５Ｓ、Ａ１６Ｖ、Ａ１６Ｉ、Ｉ１８Ｖ、Ｉ１８Ｌ、Ｃ１９Ｍ、Ｃ２０Ｍ及びＣ２１Ｇに対応する１つ以上の置換によって改変される、配列番号４に含まれる膜貫通ドメインのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ−ＴＭは、配列番号８中の置換Ｙ２Ｌ、Ｍ３Ｖ、Ａ１６Ｖ及びＩ１８Ｖに対応する置換によって改変される、配列番号４に含まれる膜貫通ドメインのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ−ＴＭは、配列番号８中の置換Ｙ２Ｉ、Ｍ３Ｉ、Ａ１６Ｉ及びＩ１８Ｌに対応する置換によって改変される、配列番号４に含まれる膜貫通ドメインのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ−ＴＭは、配列番号８中の置換Ｌ８Ｆ、Ｖ１２Ｆ及びＦ１５Ｓに対応する置換によって改変される、配列番号４に含まれる膜貫通ドメインのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ−ＴＭは、配列番号１４〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。
【０１２８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載する天然に存在するＴ細胞受容体に由来する、天然に存在しないＴＣＲ−ＴＭは、１つ以上のアミノ酸残基の置換によって改変される、配列番号８のアミノ酸配列を含むγＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインを含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなる。いくつかの実施形態では、γＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインは、配列番号８中の５個以下のアミノ酸残基の置換によって改変される。いくつかの実施形態では、γＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインは、配列番号８中の単一のアミノ酸残基の置換によって改変される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のうち少なくとも１つは、対応する非置換残基よりも疎水性である残基で置換される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸は、それぞれ、対応する非置換残基よりも疎水性である残基で置換される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のうち少なくとも１つは、ＣＤ３への結合に関与するＴＣＲＭ中のアミノ酸に対して近位である。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸は、それぞれ、ＣＤ３への結合に関与するＴＣＲＭ中のアミノ酸に対して近位である。
【０１２９】
いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ−ＴＭは、配列番号８中のアミノ酸配列Ｙ１、Ｙ２、Ｍ３、Ｌ５、Ｌ８、Ｖ１２、Ｖ１３、Ｆ１５、Ａ１６、Ｉ１８、Ｃ１９、Ｃ２０及びＣ２１に対応するアミノ酸中の１つ以上の置換（例えば、より疎水性の残基を用いた置換）によって改変される、配列番号８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ−ＴＭは、配列番号８中のアミノ酸配列Ｙ２、Ｍ３、Ａ１６及びＩ１８に対応するアミノ酸中の置換（例えば、より疎水性の残基を用いた置換）によって改変される、配列番号８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ−ＴＭは、配列番号８中のアミノ酸配列Ｌ８、Ｖ１２及びＦ１５に対応するアミノ酸中の置換（例えば、より疎水性の残基を用いた置換）によって改変される、配列番号８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ−ＴＭは、配列番号８中の置換Ｙ１Ｑ、Ｙ２Ｌ、Ｙ２Ｉ、Ｍ３Ｖ、Ｍ３Ｉ、Ｌ５Ｃ、Ｌ８Ｆ、Ｖ１２Ｆ、Ｖ１３Ｙ、Ｆ１５Ｓ、Ａ１６Ｖ、Ａ１６Ｉ、Ｉ１８Ｖ、Ｉ１８Ｌ、Ｃ１９Ｍ、Ｃ２０Ｍ及びＣ２１Ｇに対応する１つ以上の置換によって改変される、配列番号８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ−ＴＭは、配列番号８中の置換Ｙ２Ｌ、Ｍ３Ｖ、Ａ１６Ｖ及びＩ１８Ｖに対応する置換によって改変される、配列番号８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ−ＴＭは、配列番号８中の置換Ｙ２Ｉ、Ｍ３Ｉ、Ａ１６Ｉ及びＩ１８Ｌに対応する置換によって改変される、配列番号８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ−ＴＭは、配列番号８中の置換Ｌ８Ｆ、Ｖ１２Ｆ及びＦ１５Ｓに対応する置換によって改変される、配列番号８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ−ＴＭは、配列番号１４〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。
【０１３０】
いくつかの実施形態では、標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲであって、（ａ）配列番号７及び９〜１３のアミノ酸配列のいずれか１つを含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなる第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤと、配列番号８及び１４〜２６のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなる第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤとを含み、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能なＴＣＲＭを形成し、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び／又は第２のＴＣＲ−ＴＭが、天然に存在しないものであり、（ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールであって、抗原結合モジュールが、第１のＴＣＲＤ及び／又は第２のＴＣＲＤに結合する、抗原結合モジュールとを含む、ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び第２のＴＣＲ−ＴＭは、表２に列挙したｃａＴＣＲのいずれかに従って選択される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドは、配列番号３１又は３２のアミノ酸配列又はその多様体を含み、及び／又は第２の接続ペプチドは、配列番号３３又は３４のアミノ酸配列又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドと第２の接続ペプチドは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、配列番号３６のアミノ酸配列又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０又はＣＤ４０由来）を含む少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化する互いに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインは、ＣＨ１及びＣＬ抗体ドメインなどの抗体部分、又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、配列番号７及び８の配列を有するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ−ＣＤ３複合体の形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール又はドメインの間にスペーサーモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。
【表２】
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抗原結合モジュール
【０１３１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のいずれかのｃａＴＣＲによれば、抗原結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ及び単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、抗体部分が、第１の抗体部分鎖と第２の抗体部分鎖を含む多量体である場合、ｃａＴＣＲは、第１の抗体部分鎖又は第２の抗体部分鎖に結合した第１のＴＣＲＤと、他の抗体部分鎖に結合した第２のＴＣＲＤとを含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は、限定されないが、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＧＰＣ−３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ及びＦＣＲＬ５を含み、これらの多様体又は変異体を含む、細胞表面抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的に結合し、ペプチドは、限定されないが、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１、ＫＲＡＳ、Ｈｉｓｔｏｎｅ  Ｈ３．３及びＰＳＡを含み、これらの多様体又は変異体を含む、タンパク質に由来する。
【０１３２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のいずれかのｃａＴＣＲによれば、抗原結合モジュールは、ＣＨ１とＣＬドメインとを含む抗体部分である。いくつかの実施形態では、ＣＨ１ドメインは、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４）重鎖に由来し、場合により、ヒトのものに由来する。いくつかの実施形態では、ＣＨ１ドメインは、その由来となる配列と比較して、１つ以上の改変（例えば、アミノ酸置換、挿入及び／又は欠失）を含む多様体である。いくつかの実施形態では、ＣＨ１ドメインは、配列番号３７〜４７及び８６のいずれか１つ又はその多様体のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ１ドメインは、配列番号３７又はその多様体のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＬドメインは、κ又はλ軽鎖に由来し、場合により、ヒトのものに由来する。いくつかの実施形態では、ＣＬドメインは、その由来となる配列と比較して、１つ以上の改変（例えば、アミノ酸置換、挿入及び／又は欠失）を含む多様体である。いくつかの実施形態では、ＣＬドメインは、配列番号４８又は８７、又はその多様体のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ１及び／又はＣＬドメインは、互いに対する結合親和性を実質的に変えない１つ以上の改変を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ１及び／又はＣＬドメインは、互いに対する結合親和性を高め、及び／又は天然に存在しないジスルフィド結合を導入する１つ以上の改変を含む。
【０１３３】
いくつかの実施形態では、標的抗原に特異的に結合する抗体部分を含む本明細書に記載のｃａＴＣＲのいずれかによれば、抗体部分は、標的抗原に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤ１９に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１７０６６１３６Ａ２号を参照）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤ１９に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）（例えば、配列番号５４のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなるＶＨドメイン、及び／又は配列番号５５のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなるＶＬドメイン、又はその中に含まれるＣＤＲ）を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤ２０に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）（例えば、配列番号５６のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなるＶＨドメイン、及び／又は配列番号５７のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなるＶＬドメイン、又はその中に含まれるＣＤＲ）を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤ２２に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、その内容が全体的に本明細書に参考として組み込まれる、２０１８年３月３０日に出願されたＵＳＳＮ  ６２／６５０，９５５号を参照）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤ２２に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）（例えば、配列番号６５のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなるＶＨドメイン、及び／又は配列番号６９のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなるＶＬドメイン、又はその中に含まれるＣＤＲ）を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＧＰＣ３に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、その内容が全体的に本明細書に参考として組み込まれる、２０１７年４月２６日に出願されたＵＳＳＮ  ６２／４９０，５８６号を参照）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＧＰＣ３に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）（例えば、配列番号５８のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなるＶＨドメイン、及び／又は配列番号５９のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなるＶＬドメイン、又はその中に含まれるＣＤＲ）を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＲＯＲ１に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／１８７２２０号及びＷＯ２０１６／１８７２１６号を参照）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＲＯＲ２に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／１４２７６８号を参照）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、��ＣＭＡに特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／０９０３２７号及びＷＯ２０１６／０９０３２０号を参照）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＧＰＲＣ５Ｄに特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／０９０３２９号及びＷＯ２０１６／０９０３１２号を参照）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＦＣＲＬ５に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／０９０３３７号を参照）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＷＴ−１に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１２／１３５８５４号、ＷＯ２０１５／０７００７８号及びＷＯ２０１５／０７００６１号を参照）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＡＦＰに特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／１６１３９０号を参照）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＨＰＶ１６−Ｅ７に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／１８２９５７号を参照）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＮＹ−ＥＳＯ−１に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／２１０３６５号を参照）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＰＲＡＭＥに特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／１９１２４６号を参照）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａに特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／２０１１２４号を参照）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＫＲＡＳに特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／１５４０４７号を参照）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＰＳＡに特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１７／０１５６３４号を参照）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＶＨドメインとＣＨ１ドメインとを含む１つのＦａｂ鎖と、ＶＬドメインとＣＬドメインとを含む別のＦａｂ鎖とを含む、Ｆａｂである。いくつかの実施形態では、ＣＨ１ドメインは、配列番号３７〜４７及び８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含み、及び／又はＣＬドメインは、配列番号４８又は８７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ１ドメインは、配列番号３７のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなり、ＣＬドメインは、配列番号４８のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなる。
ｃａＴＣＲ構築物
【０１３４】
いくつかの実施形態では、標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲであって、（ａ）天然に存在するＴＣＲの膜貫通ドメインの１つに由来する第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤと天然に存在するＴＣＲの他の膜貫通ドメインに由来する第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤを含み、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能なＴＣＲＭを形成し、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び／又は第２のＴＣＲ−ＴＭが、天然に存在しないものであり、（ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗体部分であって、抗体部分が、第１のＴＣＲＤ及び／又は第２のＴＣＲＤに結合する、抗体部分とを含む、ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ及び単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、抗体部分は、限定されないが、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＧＰＣ−３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ及びＦＣＲＬ５を含み、これらの多様体又は変異体を含む、細胞表面抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的に結合し、ペプチドは、限定されないが、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１、ＫＲＡＳ、Ｈｉｓｔｏｎｅ  Ｈ３．３及びＰＳＡを含み、これらの多様体又は変異体を含む、タンパク質に由来する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化する互いに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、安定化モジュールは、ＴＣＲＭと抗体部分との間に位置している。
【０１３５】
いくつかの実施形態では、標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲであって、（ａ）配列番号７及び９〜１３のアミノ酸配列のいずれか１つを含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなる第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤと、配列番号８及び１４〜２６のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなる第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤとを含み、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能なＴＣＲＭを形成し、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び／又は第２のＴＣＲ−ＴＭが、天然に存在しないものであり、（ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗体部分であって、抗体部分が、第１のＴＣＲＤ及び／又は第２のＴＣＲＤに結合する、抗体部分とを含む、ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び第２のＴＣＲ−ＴＭは、表２に列挙したｃａＴＣＲのいずれかに従って選択される。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ及び単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、抗体部分は、限定されないが、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＧＰＣ−３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ及びＦＣＲＬ５を含み、これらの多様体又は変異体を含む、細胞表面抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的に結合し、ペプチドは、限定されないが、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１、ＫＲＡＳ、Ｈｉｓｔｏｎｅ  Ｈ３．３及びＰＳＡを含み、これらの多様体又は変異体を含む、タンパク質に由来する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドは、配列番号３１又は３２のアミノ酸配列又はその多様体を含み、及び／又は第２の接続ペプチドは、配列番号３３又は３４のアミノ酸配列又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドと第２の接続ペプチドは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、配列番号３６のアミノ酸配列又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０又はＣＤ４０由来）を含む少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化する互いに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結���によって結合する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、配列番号７及び８の配列を有するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ−ＣＤ３複合体の形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール又はドメインの間にスペーサーモジュールが存在する。
【０１３６】
いくつかの実施形態では、標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲであって、（ａ）第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤであって、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び第２のＴＣＲ−ＴＭは、それぞれ、配列番号９及び８、７及び１４、７及び１５、７及び１６、１０及び１６、７及び１７、７及び１８、７及び１９、７及び２０、７及び２１、７及び２２、１１及び２３、１２及び２４、７及び２５、又は１３及び２６のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなり、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能なＴＣＲＭを形成し、（ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗体部分であって、抗体部分が、第１のＴＣＲＤ及び／又は第２のＴＣＲＤに結合する、抗体部分とを含む、ｃａＴＣＲが提供される。例えば、いくつかの実施形態では、標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲであって、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなる第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤと、配列番号８のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなる第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤとを含み、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能なＴＣＲＭを形成し、（ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗体部分であって、抗体部分が、第１のＴＣＲＤ及び／又は第２のＴＣＲＤに結合する、抗体部分とを含む、ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ及び単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、抗体部分は、限定されないが、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＧＰＣ−３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ及びＦＣＲＬ５を含み、これらの多様体又は変異体を含む、細胞表面抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的に結合し、ペプチドは、限定されないが、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１、ＫＲＡＳ、Ｈｉｓｔｏｎｅ  Ｈ３．３及びＰＳＡを含み、これらの多様体又は変異体を含む、タンパク質に由来する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドは、配列番号３１又は３２のアミノ酸配列又はその多様体を含み、及び／又は第２の接続ペプチドは、配列番号３３又は３４のアミノ酸配列又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドと第２の接続ペプチドは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、配列番号３６のアミノ酸配列又はその多様体を含む���いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０又はＣＤ４０由来）を含む少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化する互いに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、配列番号７及び８の配列を有するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ−ＣＤ３複合体の形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール又はドメインの間にスペーサーモジュールが存在する。
【０１３７】
いくつかの実施形態では、標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲであって、（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列を有する第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤと、配列番号１６のアミノ酸配列を有する第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤとを含み、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能なＴＣＲＭを形成し、（ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗体部分であって、抗体部分が、第１のＴＣＲＤ及び／又は第２のＴＣＲＤに結合する、抗体部分とを含む、ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ及び単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、抗体部分は、限定されないが、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＧＰＣ−３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ及びＦＣＲＬ５を含み、これらの多様体又は変異体を含む、細胞表面抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的に結合し、ペプチドは、限定されないが、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１、ＫＲＡＳ、Ｈｉｓｔｏｎｅ  Ｈ３．３及びＰＳＡを含み、これらの多様体又は変異体を含む、タンパク質に由来する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドは、配列番号３１又は３２のアミノ酸配列又はその多様体を含み、及び／又は第２の接続ペプチドは、配列番号３３又は３４のアミノ酸配列又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドと第２の接続ペプチドは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、配列番号３６のアミノ酸配列又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０又はＣＤ４０由来）を含む少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化する互いに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、配列番号７及び８の配列を有するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグ���ル伝達分子の動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ−ＣＤ３複合体の形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール又はドメインの間にスペーサーモジュールが存在する。
【０１３８】
いくつかの実施形態では、標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲであって、（ａ）天然に存在するＴＣＲの膜貫通ドメインの１つに由来する第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤに結合する第１のＦａｂ鎖を含む第１の抗原結合ドメインを含む第１のポリペプチド鎖と、（ｂ）天然に存在するＴＣＲの他の膜貫通ドメインに由来する第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤに結合する第２のＦａｂ鎖を含む第２の抗原結合ドメインを含む第２のポリペプチド鎖とを含み、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能なＴＣＲＭを形成し、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び／又は第２のＴＣＲ−ＴＭが、天然に存在しないものであり、第１のＦａｂ鎖及び第２のＦａｂ鎖が、標的抗原に特異的に結合するＦａｂ様抗原結合モジュールを形成する、ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、（ａ）第１のＦａｂ鎖は、ＶＨ及びＣＨ１抗体ドメインを含み、第２のＦａｂ鎖は、ＶＬ及びＣＬ抗体ドメインを含み、又は（ｂ）第１のＦａｂ鎖は、ＶＬ及びＣＬ抗体ドメインを含み、第２のＦａｂ鎖は、ＶＨ及びＣＨ１抗体ドメインを含む。例えば、いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、（ａ）第１のＴＣＲＤに結合するＶＨ及びＣＨ１抗体ドメインを含む第１のＦａｂ鎖を含む第１のポリペプチド鎖と、（ｂ）第２のＴＣＲＤに結合するＶＬ及びＣＬ抗体ドメインを含む第２のＦａｂ鎖とを含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、（ａ）第１のＴＣＲＤに結合するＶＬ及びＣＬ抗体ドメインを含む第１のＦａｂ鎖と、（ｂ）第２のＴＣＲＤに結合するＶＨ及びＣＨ１抗体ドメインを含む第２のＦａｂ鎖とを含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＤの一方又は両方と、それらに結合するＦａｂ鎖との間にペプチドリンカーが存在する。いくつかの実施形態では、ＣＨ１ドメイン中の残基とＣＬドメイン中の残基との間にジスルフィド結合が存在する。いくつかの実施形態では、ＣＨ１及び／又はＣＬドメインは、互いに対するＦａｂ鎖の結合親和性を高める１つ以上の改変を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ１とＣＬドメインが交換されており、その結果、Ｆａｂ鎖の一方がＶＨ及びＣＬ抗体ドメインを含み、他方のＦａｂ鎖が、ＶＬ及びＣＨ１抗体ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、限定されないが、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＧＰＣ−３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ及びＦＣＲＬ５を含み、これらの多様体又は変異体を含む、細胞表面抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、ペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的に結合し、ペプチドは、限定されないが、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１、ＫＲＡＳ、Ｈｉｓｔｏｎｅ  Ｈ３．３及びＰＳＡを含み、これらの多様体又は変異体を含む、タンパク質に由来する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化する互いに対する結合親和性を有する。いく���かの実施形態では、第１の安定化ドメイン又は第２の安定化ドメインは、第１のＴＣＲＤとその結合したＦａｂ鎖との間に位置しており、他の安定化ドメインは、第２のＴＣＲＤとその結合したＦａｂ鎖との間に位置している。
【０１３９】
いくつかの実施形態では、標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲであって、（ａ）配列番号７及び９〜１３のアミノ酸配列のいずれか１つを含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなる第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤに結合する第１のＦａｂ鎖を含む第１の抗原結合ドメインを含む第１のポリペプチド鎖と、（ｂ）配列番号８及び１４〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなる第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤに結合する第２のＦａｂ鎖を含む第２の抗原結合ドメインを含む第２のポリペプチド鎖とを含み、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能なＴＣＲＭを形成し、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び／又は第２のＴＣＲ−ＴＭが、天然に存在しないものであり、第１のＦａｂ鎖及び第２のＦａｂ鎖が、標的抗原に特異的に結合するＦａｂ様抗原結合モジュールを形成する、ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び第２のＴＣＲ−ＴＭは、表２に列挙したｃａＴＣＲのいずれかに従って選択される。いくつかの実施形態では、（ａ）第１のＦａｂ鎖は、ＶＨ及びＣＨ１抗体ドメインを含み、第２のＦａｂ鎖は、ＶＬ及びＣＬ抗体ドメインを含み、又は（ｂ）第１のＦａｂ鎖は、ＶＬ及びＣＬ抗体ドメインを含み、第２のＦａｂ鎖は、ＶＨ及びＣＨ１抗体ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ１ドメインは、配列番号３７〜４７及び８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含み、及び／又はＣＬドメインは、配列番号４８又は８７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ１ドメインは、配列番号３７のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなり、ＣＬドメインは、配列番号４８のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなる。いくつかの実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、限定されないが、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＧＰＣ−３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ及びＦＣＲＬ５を含み、これらの多様体又は変異体を含む、細胞表面抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、ペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的に結合し、ペプチドは、限定されないが、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１、ＫＲＡＳ、Ｈｉｓｔｏｎｅ  Ｈ３．３及びＰＳＡを含み、これらの多様体又は変異体を含む、タンパク質に由来する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドは、配列番号３１又は３２のアミノ酸配列又はその多様体を含み、及び／又は第２の接続ペプチドは、配列番号３３又は３４のアミノ酸配列又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドと第２の接続ペプチドは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に���み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、配列番号３６のアミノ酸配列又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０又はＣＤ４０由来）を含む少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化する互いに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、配列番号７及び８の配列を有するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ−ＣＤ３複合体の形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール又はドメインの間にスペーサーモジュールが存在する。
【０１４０】
いくつかの実施形態では、標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲであって、（ａ）第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤに結合する第１のＦａｂ鎖を含む第１の抗原結合ドメインを含む第１のポリペプチド鎖と、第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤに結合する第２のＦａｂ鎖を含む第２の抗原結合ドメインを含む第２のポリペプチド鎖とを含み、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び第２のＴＣＲ−ＴＭは、それぞれ、配列番号９及び８、７及び１４、７及び１５、７及び１６、１０及び１６、７及び１７、７及び１８、７及び１９、７及び２０、７及び２１、７及び２２、１１及び２３、１２及び２４、７及び２５、又は１３及び２６のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなり、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能なＴＣＲＭを形成し、第１のＦａｂ鎖及び第２のＦａｂ鎖が、標的抗原に特異的に結合するＦａｂ様抗原結合モジュールを形成する、ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、（ａ）第１のＦａｂ鎖は、ＶＨ及びＣＨ１抗体ドメインを含み、第２のＦａｂ鎖は、ＶＬ及びＣＬ抗体ドメインを含み、又は（ｂ）第１のＦａｂ鎖は、ＶＬ及びＣＬ抗体ドメインを含み、第２のＦａｂ鎖は、ＶＨ及びＣＨ１抗体ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ１ドメインは、配列番号３７〜４７及び８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含み、及び／又はＣＬドメインは、配列番号４８又は８７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ１ドメインは、配列番号３７のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなり、ＣＬドメインは、配列番号４８のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなる。いくつかの実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、限定されないが、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＧＰＣ−３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ及びＦＣＲＬ５を含み、これらの多様体又は変異体を含む、細胞表面抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、ペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的に結合し、ペプチドは、限定されないが、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１、ＫＲＡＳ、Ｈｉｓｔｏｎｅ  Ｈ３．３及びＰＳＡを含み、これらの多様体又は変異体を含む、タンパク質に由来する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドは、配列番号３１又は３２のアミノ酸配列又はその多様体を含み、及び／又は第２の接続ペプチドは、配列番号３３又は３４のアミノ酸配列又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドと第２の接続ペプチドは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では���第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、配列番号３６のアミノ酸配列又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０又はＣＤ４０由来）を含む少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化する互いに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、配列番号７及び８の配列を有するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ−ＣＤ３複合体の形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール又はドメインの間にスペーサーモジュールが存在する。
【０１４１】
いくつかの実施形態では、標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲであって、（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列を有する第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤに結合する第１のＦａｂ鎖を含む第１の抗原結合ドメインを含む第１のポリペプチド鎖と、配列番号１６のアミノ酸配列を有する第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤに結合する第２のＦａｂ鎖を含む第２の抗原結合ドメインを含む第２のポリペプチド鎖とを含み、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能なＴＣＲＭを形成し、第１のＦａｂ鎖及び第２のＦａｂ鎖が、標的抗原に特異的に結合するＦａｂ様抗原結合モジュールを形成する、ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、（ａ）第１のＦａｂ鎖は、ＶＨ及びＣＨ１抗体ドメインを含み、第２のＦａｂ鎖は、ＶＬ及びＣＬ抗体ドメインを含み、又は（ｂ）第１のＦａｂ鎖は、ＶＬ及びＣＬ抗体ドメインを含み、第２のＦａｂ鎖は、ＶＨ及びＣＨ１抗体ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ１ドメインは、配列番号３７〜４７及び８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含み、及び／又はＣＬドメインは、配列番号４８又は８７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ１ドメインは、配列番号３７のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなり、ＣＬドメインは、配列番号４８のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなる。いくつかの実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、限定されないが、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＧＰＣ−３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ及びＦＣＲＬ５を含み、これらの多様体又は変異体を含む、細胞表面抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、ペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的に結合し、ペプチドは、限定されないが、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１、ＫＲＡＳ、Ｈｉｓｔｏｎｅ  Ｈ３．３及びＰＳＡを含み、これらの多様体又は変異体を含む、タンパク質に由来する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドは、配列番号３１又は３２のアミノ酸配列又はその多様体を含み、及び／又は第２の接続ペプチドは、配列番号３３又は３４のアミノ酸配列又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドと第２の接続ペプチドは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、配列番号３６のアミノ酸配列又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０又はＣＤ４０由来）を含む少なく���も１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインとを含む安定化モジュールを更に含み、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化する互いに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、配列番号７及び８の配列を有するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ−ＣＤ３複合体の形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール又はドメインの間にスペーサーモジュールが存在する。
【０１４２】
いくつかの実施形態では、標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲであって、（ａ）天然に存在するＴＣＲの膜貫通ドメインの１つに由来する第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤと天然に存在するＴＣＲの他の膜貫通ドメインに由来する第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤを含み、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能なＴＣＲＭを形成し、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び／又は第２のＴＣＲ−ＴＭが、天然に存在しないものであり、（ｂ）標的抗原に特異的に結合するＦａｂ’であって、Ｆａｂ’が、ＶＨ、ＣＨ１及び部分的なヒンジ抗体ドメインを含む第１のＦａｂ’鎖と、ＶＬ及びＣＬ抗体ドメインを含む第２のＦａｂ’鎖とを含み、第１のＦａｂ’鎖が、第１のＴＣＲＤ又は第２のＴＣＲＤに結合し、第２のＦａｂ’鎖が、他のＴＣＲＤに結合する、ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＤの一方又は両方と、それらに結合するＦａｂ’鎖との間にペプチドリンカーが存在する。いくつかの実施形態では、ＣＨ１ドメイン中の残基とＣＬドメイン中の残基との間にジスルフィド結合が存在する。いくつかの実施形態では、ＣＨ１及び／又はＣＬドメインは、互いに対するＦａｂ’鎖の結合親和性を高める１つ以上の改変を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ１とＣＬドメインが交換されており、その結果、第１のＦａｂ’鎖が、ＶＨ、ＣＬ及び部分的なヒンジ抗体ドメインを含み、第２のＦａｂ’鎖が、ＶＬ及びＣＨ１抗体ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｆａｂ’は、限定されないが、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＧＰＣ−３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ及びＦＣＲＬ５を含み、これらの多様体又は変異体を含む、細胞表面抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、Ｆａｂ’は、ペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的に結合し、ペプチドは、限定されないが、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１、ＫＲＡＳ、Ｈｉｓｔｏｎｅ  Ｈ３．３及びＰＳＡを含み、これらの多様体又は変異体を含む、タンパク質に由来する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化する互いに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメイン又は第２の安定化ドメインは、第１のＴＣＲＤとその結合したＦａｂ’鎖との間に位置しており、他の安定化ドメインは、第２のＴＣＲＤとその結合したＦａｂ’鎖との間に位置している。
【０１４３】
いくつかの実施形態では、標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲであって、（ａ）天然に存在するＴＣＲの膜貫通ドメインの１つに由来する第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤと天然に存在するＴＣＲの他の膜貫通ドメインに由来する第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤを含み、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能なＴＣＲＭを形成し、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び／又は第２のＴＣＲ−ＴＭが、天然に存在しないものであり、（ｂ）標的抗原に特異的に結合する（Ｆａｂ’）２であって、（Ｆａｂ’）２が、ＶＨ、ＣＨ１及び部分的なヒンジ抗体ドメインを含む第１の（Ｆａｂ’）２鎖及び第２の（Ｆａｂ’）２鎖と、ＶＬ及びＣＬ抗体ドメインを含む第３の（Ｆａｂ’）２鎖及び第４の（Ｆａｂ’）２鎖とを含み、第１の（Ｆａｂ’）２鎖が、第１のＴＣＲＤ又は第２のＴＣＲＤに結合し、第２の（Ｆａｂ’）２鎖が、他のＴＣＲＤに結合する、ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＤの一方又は両方と、それらに結合する（Ｆａｂ’）２鎖との間にペプチドリンカーが存在する。いくつかの実施形態では、ＣＨ１ドメイン中の残基とＣＬドメイン中の残基との間にジスルフィド結合が存在する。いくつかの実施形態では、ＣＨ１及び／又はＣＬドメインは、互いに対する（Ｆａｂ’）２鎖の結合親和性を高める１つ以上の改変を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ１とＣＬドメインが交換されており、その結果、第１の（Ｆａｂ’）２鎖及び第２の（Ｆａｂ’）２鎖が、ＶＨ、ＣＬ及び部分的なヒンジ抗体ドメインを含み、第３の（Ｆａｂ’）２鎖及び第４の（Ｆａｂ’）２鎖が、ＶＬ及びＣＨ１抗体ドメインを含む。いくつかの実施形態では、（Ｆａｂ’）２は、限定されないが、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＧＰＣ−３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ及びＦＣＲＬ５を含み、これらの多様体又は変異体を含む、細胞表面抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、（Ｆａｂ’）２は、ペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的に結合し、ペプチドは、限定されないが、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１、ＫＲＡＳ、Ｈｉｓｔｏｎｅ  Ｈ３．３及びＰＳＡを含み、これらの多様体又は変異体を含む、タンパク質に由来する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化する互いに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメイン又は第２の安定化ドメインは、第１のＴＣＲＤとその結合した（Ｆａｂ’）２鎖との間に位置しており、他の安定化ドメインは、第２のＴＣＲＤとその結合した（Ｆａｂ’）２鎖との間に位置している。
【０１４４】
いくつかの実施形態では、標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲであって、（ａ）天然に存在するＴＣＲの膜貫通ドメインの１つに由来する第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤと天然に存在するＴＣＲの他の膜貫通ドメインに由来する第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤを含み、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能なＴＣＲＭを形成し、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び／又は第２のＴＣＲ−ＴＭが、天然に存在しないものであり、（ｂ）標的抗原に特異的に結合するＦｖであって、Ｆｖが、ＶＨ抗体ドメインを含む第１のＦｖ鎖と、ＶＬ抗体ドメインを含む第２のＦｖ鎖とを含み、第１のＦｖ鎖が、第１のＴＣＲＤ又は第２のＴＣＲＤに結合し、第２のＦｖ鎖が、他のＴＣＲＤに結合する、ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＤの一方又は両方と、それらに結合するＦｖ鎖との間にペプチドリンカーが存在する。いくつかの実施形態では、Ｆｖは、限定されないが、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＧＰＣ−３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ及びＦＣＲＬ５を含み、これらの多様体又は変異体を含む、細胞表面抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、Ｆｖは、ペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的に結合し、ペプチドは、限定されないが、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１、ＫＲＡＳ、Ｈｉｓｔｏｎｅ  Ｈ３．３及びＰＳＡを含み、これらの多様体又は変異体を含む、タンパク質に由来する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化する互いに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメイン又は第２の安定化ドメインは、第１のＴＣＲＤとその結合したＦｖ鎖との間に位置しており、他の安定化ドメインは、第２のＴＣＲＤとその結合したＦｖ鎖との間に位置している。
【０１４５】
いくつかの実施形態では、標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲであって、（ａ）天然に存在するＴＣＲの膜貫通ドメインの１つに由来する第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤと天然に存在するＴＣＲの他の膜貫通ドメインに由来する第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤを含み、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能なＴＣＲＭを形成し、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び／又は第２のＴＣＲ−ＴＭが、天然に存在しないものであり、（ｂ）標的抗原に特異的に結合する第１のｓｃＦｖであって、第１のｓｃＦｖが、ＶＨ及びＶＬ抗体ドメインを含み、第１のｓｃＦｖが、第１のＴＣＲＤ及び／又は第２のＴＣＲＤに結合する、抗体部分とを含む、ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１のｓｃＦｖに結合するか、又は第１のｓｃＦｖに結合しないＴＣＲＤに結合する第２の抗原結合モジュールを更に含む。いくつかの実施形態では、第２の抗原結合モジュールは、標的抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第２の抗原結合モジュールは、標的抗原以外の抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第２の抗原結合モジュールは、第２のｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、第１のｓｃＦｖとその結合したＴＣＲＤとの間、及び／又は第２のｓｃＦｖとその結合したｓｃＦｖ又はＴＣＲＤとの間にペプチドリンカーが存在する。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、限定されないが、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＧＰＣ−３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ及びＦＣＲＬ５を含み、これらの多様体又は変異体を含む、細胞表面抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、ペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的に結合し、ペプチドは、限定されないが、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１、ＫＲＡＳ、Ｈｉｓｔｏｎｅ  Ｈ３．３及びＰＳＡを含み、これらの多様体又は変異体を含む、タンパク質に由来する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化する互いに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメイン又は第２の安定化ドメインは、第１のｓｃＦｖとその結合したＴＣＲＤとの間に位置しており、他の安定化ドメインは、第２のＴＣＲＤに結合している。
【０１４６】
いくつかの実施形態では、標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲであって、（ａ）天然に存在するＴＣＲの膜貫通ドメインの１つに由来する第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤと天然に存在するＴＣＲの他の膜貫通ドメインに由来する第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤを含み、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能なＴＣＲＭを形成し、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び／又は第２のＴＣＲ−ＴＭが、天然に存在しないものであり、（ｂ）標的抗原に特異的に結合する第１のｓｃＦｖと、第２のｓｃＦｖを含み、第１のｓｃＦｖ及び第２のｓｃＦｖが、ＶＨ及びＶＬ抗体ドメインを含み、第１のｓｃＦｖが、第１のＴＣＲＤ又は第２のＴＣＲＤに結合し、第２のｓｃＦｖが、他のＴＣＲＤに結合する、ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、第２のＴＣＲＤは、標的抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第２のｓｃＦｖは、第１のｓｃＦｖのアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなる。いくつかの実施形態では、第２のｓｃＦｖは、標的抗原以外の抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第１のｓｃＦｖ及び／又は第２のｓｃＦｖは、独立して、限定されないが、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＧＰＣ−３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ及びＦＣＲＬ５を含み、これらの多様体又は変異体を含む、細胞表面抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第１のｓｃＦｖ及び／又は第２のｓｃＦｖは、独立して、ペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的に結合し、ペプチドは、限定されないが、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１、ＫＲＡＳ、Ｈｉｓｔｏｎｅ  Ｈ３．３及びＰＳＡを含み、これらの多様体又は変異体を含む、タンパク質に由来する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化する互いに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメイン又は第２の安定化ドメインは、第１のｓｃＦｖとその結合したＴＣＲＤとの間に位置しており、他の安定化ドメインは、第２のｓｃＦｖとその結合したＴＣＲＤとの間に位置している。
多重特異性ｃａＴＣＲ
【０１４７】
本出願の一態様は、２つ以上（例えば、２、３、４、又はもっと多く）の異なる標的抗原又はエピトープに特異的に結合する多重特異性ｃａＴＣＲを提供する。いくつかの実施形態では、多重特異性ｃａＴＣＲは、２つ以上（例えば、２、３、４、又はもっと多く）の異なる標的抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、多重特異性ｃａＴＣＲは、同じ標的抗原上の２つ以上（例えば、２、３、４、又はもっと多く）の異なる標的抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、多重特異性ｃａＴＣＲは、それぞれの抗原又はエピトープのための抗原結合モジュールを含む。いくつかの実施形態では、多重特異性ｃａＴＣＲは、少なくとも１つの抗原又はエピトープのための２個より多い抗原結合モジュールを含む。いくつかの実施形態では、多重特異性ｃａＴＣＲは、抗原又はエピトープにそれぞれ特異的に結合する２つ以上（例えば、２、３、４、又はもっと多く）の抗原結合ドメインを含む多重特異性抗原結合モジュールを含む。いくつかの実施形態では、多重特異性ｃａＴＣＲは、二重特異性である。いくつかの実施形態では、多重特異性ｃａＴＣＲは、三重特異性である。
【０１４８】
多重特異性分子は、少なくとも２つの異なる抗原又はエピトープに対する結合特異性を有する分子である（例えば、二重特異性抗体は、２つの抗原又はエピトープに対する結合特異性を有する）。２より大きい価数及び／又は特異性を有する多重特異性ｃａＴＣＲも想定される。二重特異性抗体は、例えば、Ｂｒｉｎｋｍａｎｎ  Ｕ．及びＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ  Ｒ．Ｅ．（２０１７）ＭＡＢＳ、９（２）、１８２−２１２を参照。三重特異性抗体を調製することができる。Ｔｕｔｔら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）を参照。当業者は、当該技術分野において既知の個々の多重特異性分子の適切な特徴を選択して、多重特異性ｃａＴＣＲを形成することができることを理解されたい。
【０１４９】
いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ（本明細書では「多重特異性ｃａＴＣＲ」とも呼ばれる）であって、（ａ）第１の標的抗原に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインと第２の標的抗原に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインを含む多重特異性（例えば、二重特異性）抗原結合モジュールと、（ｂ）第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ（ＴＣＲＤ１）と第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤ（ＴＣＲＤ２）を含むＴＣＲＭとを含み、ＴＣＲＭが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を促進する、ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドは、第１のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットの接続ペプチドの全て又は一部、又はその多様体を含み、及び／又は第２の接続ペプチドは、第２のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットの接続ペプチドの全て又は一部、又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドと第２の接続ペプチドは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメインは、第１のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットの細胞内ドメインに由来する配列を含み、及び／又は第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、第２のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットの細胞内ドメインに由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットのフラグメントであり、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットのフラグメントである。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０又はＣＤ４０由来）を含む少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化する互いに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインは、ＣＨ１及びＣＬ抗体ドメインなどの抗体部分、又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、天然に存在するαβＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することを可能にする。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭ��、ｃａＴＣＲ−ＣＤ３複合体の形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール又はドメインの間にスペーサーモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び第２のＴＣＲ−ＴＭは、両方とも天然に存在する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ−ＴＭのうち少なくとも１つは、天然に存在しない。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ−ＴＭは、その由来となる膜貫通ドメインと比較して５個までのアミノ酸置換（例えば、単一のアミノ酸置換）を含み、及び／又は第２のＴＣＲ−ＴＭは、その由来となる膜貫通ドメインと比較して５個までのアミノ酸置換（例えば、単一のアミノ酸置換）を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ−ＴＭ中の置換アミノ酸は、第２のＴＣＲ−ＴＭ中の置換アミノ酸に対して近位である。いくつかの実施形態では、１つ以上の置換アミノ酸は、ＣＤ３に対する結合に関与する第１のＴＣＲ−ＴＭ中又は第２のＴＣＲ−ＴＭ中のアミノ酸に対して近位である。いくつかの実施形態では、１つ以上の（例えば、それぞれの）置換アミノ酸は、それらの対応する非置換アミノ酸よりも疎水性である。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ−ＴＭは、配列番号７及び９〜１３のいずれか１つのアミノ酸配列を含み、第２のＴＣＲ−ＴＭは、配列番号８及び１４〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。
【０１５０】
二重特異性ｃａＴＣＲの例示的な構造を図１３Ａ〜１３Ｅに示し、ここで、標的抗原は、ＣＤ１９及びＣＤ２２であるが、当業者は、他の標的抗原又はエピトープを標的とする二重特異性ｃａＴＣＲを同じ構造フォーマットを使用して調製してもよいことを容易に理解するだろう。
【０１５１】
例えば、ＤＶＤ  ＩｇＧに由来する二重可変ドメイン（ＤＶＤ）（ＤｉＧｉａｍｍａｒｉｎｏら、ｍＡｂｓ  ３（５）：４８７−４９４を参照）を、ｃａＴＣＲ中の二重特異性抗原結合モジュールとして使用することができる（図１３Ａ）。外側可変ドメインと内側可変ドメインの融合のための種々のリンカーが開発され、ＤＶＤ−Ｉｇについて最適化されており、このリンカーは、ＤＶＤモジュールを有する二重特異性ｃａＴＣＲを構築するのに有用であろう。しかし、ＤＶＤモジュールにおける可変ドメインのスタッキング手法は、内側可変ドメインの折りたたみ及び標的結合親和性に影響を与える場合がある。２つの可変ドメイン間のリンカーと、この２つの可変ドメインの順序は、ｃａＴＣＲの効能に影響を与える場合がある。
【０１５２】
いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲであって、（ａ）第１の標的抗原に特異的に結合するＦｖと、第２の標的抗原に特異的に結合するＦａｂとを含む、多重特異性（例えば、二重特異性）抗原結合モジュールと、（ｂ）第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ（ＴＣＲＤ１）と第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤ（ＴＣＲＤ２）とを含むＴＣＲＭとを含み、ＴＣＲＭが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を促進する、ｃａＴＣＲが提供される。
【０１５３】
いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲであって、（ｉ）Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＨ１−Ｌ１−ＶＨ２−ＣＨ１−ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖と、Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＬ１−Ｌ２−ＶＬ２−ＣＬ−ＴＣＲＤ２を含む第２のポリペプチド鎖；（ｉｉ）Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＨ１−Ｌ１−ＶＬ２−ＣＬ−ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖と、Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＬ１−Ｌ２−ＶＨ２−ＣＨ１−ＴＣＲＤ２を含む第２のポリペプチド鎖；（ｉｉｉ）Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＬ１−Ｌ１−ＶＨ２−ＣＨ１−ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖と、Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＨ１−Ｌ２−ＶＬ２−ＣＬ−ＴＣＲＤ２を含む第２のポリペプチド鎖；又は（ｉｖ）Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＨ１−Ｌ１−ＶＬ２−ＣＬ−ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖と、Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＨ１−Ｌ２−ＶＨ２−ＣＨ１−ＴＣＲＤ２を含む第２のポリペプチド鎖を含み、ＶＨ１とＶＬ１は、第１の標的抗原に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインを形成し、ＶＨ２とＶＬ２は、第２の標的抗原に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインを形成し、ＴＣＲＤ１とＴＣＲＤ２が、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能なＴＣＲＭを形成し、Ｌ１及びＬ２がペプチドリンカーである、ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、Ｌ１及び／又はＬ２は、約５〜約５０（例えば、約５〜１０、約１０〜１５、又は約１５〜３０）のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、Ｌ１及び／又はＬ２は、配列番号８３〜８５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ１とＬ２は、同じ長さを有する。いくつかの実施形態では、Ｌ１とＬ２は、同じアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、Ｌ１とＬ２は、異なる長さを有する。いくつかの実施形態では、Ｌ１とＬ２は、異なるアミノ酸配列を有する。例示的な二重特異性ｃａＴＣＲを図１３Ａに示す。
【０１５４】
ＣＯＤＶ−ＩｇＧに由来するクロスオーバー二重可変ドメイン（ＣＯＤＶ）（Ｓｔｅｉｎｍｅｔｚら、ｍＡｂｓ（２０１６）、８（５）：８６７−８７８）を、ｃａＴＣＲ中の二重特異性抗原結合モジュールとして使用することができる（図１３Ｂ）。ＣＯＤＶは、各Ｆｖに対する比較的障害のない抗原結合部位を可能にする。重鎖及び軽鎖の可変ドメインの融合のための種々のリンカーが開発され、ＣＯＤＶ−Ｉｇについて最適化されている。このリンカーは、ＣＯＤＶモジュールを有する二重特異性ｃａＴＣＲを構築するのに有用であろう。しかし、ＣＯＤＶモジュールの適切な折り畳みは困難な場合があり、ＣＯＤＶモジュールにおいて使用される長いリンカーは、免疫原性の原因となる可能性があり、タンパク質分解による切断を受けやすい場合がある。
【０１５５】
いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲであって、（ａ）第１の標的抗原に特異的に結合する第１のＦｖと、第２の標的抗原に特異的に結合する第２のＦａｂとを含む、多重特異性（例えば、二重特異性）抗原結合モジュールと、（ｂ）第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ（ＴＣＲＤ１）と第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤ（ＴＣＲＤ２）とを含むＴＣＲＭとを含み、ＴＣＲＭが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を促進する、ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、ＣＨ１とＣＬを更に含む。
【０１５６】
いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲであって、（ｉ）Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＨ１−Ｌ１−ＶＨ２−ＣＨ１−ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖と、Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＬ２−Ｌ２−ＶＬ１−ＣＬ−ＴＣＲＤ２を含む第２のポリペプチド鎖；又は（ｉｉ）Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＬ１−Ｌ１−ＶＬ２−ＣＬ−ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖と、Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＨ２−Ｌ２−ＶＨ１−ＣＨ１−ＴＣＲＤ２を含む第２のポリペプチド鎖を含み、ＶＨ１とＶＬ１は、第１の標的抗原に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインを形成し、ＶＨ２とＶＬ２は、第２の標的抗原に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインを形成し、ＴＣＲＤ１とＴＣＲＤ２が、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を促進することが可能なＴＣＲＭを形成し、Ｌ１及びＬ２がペプチドリンカーである、ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、Ｌ１及び／又はＬ２は、約５〜約５０（例えば、約５〜２０、約１５〜３０、又は約３０〜５０）のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、Ｌ１及び／又はＬ２は、配列番号８３〜８５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ１とＬ２は、同じ長さを有する。いくつかの実施形態では、Ｌ１とＬ２は、同じアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、Ｌ１とＬ２は、異なる長さを有する。いくつかの実施形態では、Ｌ１とＬ２は、異なるアミノ酸配列を有する。例示的な二重特異性ｃａＴＣＲを図１３Ｂに示す。
【０１５７】
ｓｃＦｖ融合タンパク質に由来する二重特異性抗原結合モジュール、例えば、Ｃｈｅｎら、ｍＡｂｓ  ８（４）：７６１−７７４に記載されるものを、二重特異性ｃａＴＣＲで使用してもよい（図１３Ｃ）。同様の融合フォーマットを有する二重特異性抗体の発現は、このフォーマットの適切な折り畳み及び安定性を示している。ｓｃＦｖを定常ドメインに融合させるための種々のリンカーが開発され、これらの二重特異性抗体について最適化されている。このリンカーは、同様のｓｃＦｖ融合ドメインを有する二重特異性ｃａＴＣＲを構築するのに有用であろう。しかし、ｓｃＦｖ間の立体障害が、標的抗原に対するｓｃＦｖの結合を損なう場合がある。
【０１５８】
いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲであって、（ａ）第１の標的抗原に特異的に結合する第１のｓｃＦｖと、第２の標的抗原に特異的に結合する第２のｓｃＦｖとを含む、多重特異性（例えば、二重特異性）抗原結合モジュールと、（ｂ）第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ（ＴＣＲＤ１）と第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤ（ＴＣＲＤ２）とを含むＴＣＲＭとを含み、ＴＣＲＭが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を促進する、ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、ＣＨ１とＣＬを更に含む。
【０１５９】
いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲであって、（ｉ）Ｎ末端からＣ末端まで、ｓｃＦｖ１−Ｌ１−ＣＨ１−ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖と、Ｎ末端からＣ末端まで、ｓｃＦｖ２−Ｌ２−ＣＬ−ＴＣＲＤ２を含む第２のポリペプチド鎖；又は（ｉｉ）Ｎ末端からＣ末端まで、ｓｃＦｖ２−Ｌ１−ＣＨ１−ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖と、Ｎ末端からＣ末端まで、ｓｃＦｖ１−Ｌ２−ＣＬ−ＴＣＲＤ２を含む第２のポリペプチド鎖を含み、ここで、ｓｃＦｖ１は、第１の標的抗原に特異的に結合し、ｓｃＦｖ２は、第２の標的抗原に特異的に結合し、ＴＣＲＤ１及びＴＣＲＤ２は、少なくとも１つのＴＣＲ−関連シグナル伝達分子の動員を促進するＴＣＲＭを形成し、Ｌ１及びＬ２がペプチドリンカーである、ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、Ｌ１及び／又はＬ２は、約５〜約５０（例えば、約５〜１０、約１０〜１５、又は約１５〜３０）のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、Ｌ１及び／又はＬ２は、配列番号８３〜８５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ１とＬ２は、同じ長さを有する。いくつかの実施形態では、Ｌ１とＬ２は、同じアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、Ｌ１とＬ２は、異なる長さを有する。いくつかの実施形態では、Ｌ１とＬ２は、異なるアミノ酸配列を有する。例示的な二重特異性ｃａＴＣＲを図１３Ｃに示す。
【０１６０】
ＩｇＧ−ｓｃＦｖ二重特異性抗体又はＦａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ二重特異性抗体に由来する二重特異性抗原結合モジュールを、二重特異性ｃａＴＣＲに使用してもよい。あるフォーマット（図１３Ｄ）において、ｓｃＦｖは、ＦａｂのＶＨ又はＶＬのいずれかに接続し、ｓｃＦｖの可撓性を大きくし、それにより、Ｆａｂのその標的抗原へのアクセスを大きくすることを可能にする。しかしながら、ｓｃＦｖ−Ｆａｂモジュールには、安全性の問題があり得る。第２のフォーマット（図１３Ｅ）において、Ｆａｂは、第１のＴＣＲＤに融合し、ｓｃＦｖは、第２のＴＣＲＤに融合する。
【０１６１】
いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲであって、（ａ）第１の標的抗原に特異的に結合するｓｃＦｖと、第２の標的抗原に特異的に結合するＦａｂとを含む、多重特異性（例えば、二重特異性）抗原結合モジュールと、（ｂ）第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ（ＴＣＲＤ１）と第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤ（ＴＣＲＤ２）とを含むＴＣＲＭとを含み、ＴＣＲＭが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を促進する、ｃａＴＣＲが提供される。
【０１６２】
いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲであって、（ｉ）Ｎ末端からＣ末端まで、ｓｃＦｖ−Ｌ１−ＶＨ−ＣＨ１−ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖と、Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＬ−ＣＬ−ＴＣＲＤ２を含む第２のポリペプチド鎖；又は（ｉｉ）Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＨ−ＣＨ１−ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖と、Ｎ末端からＣ末端まで、ｓｃＦｖ−Ｌ２−ＶＬ−ＣＬ−ＴＣＲＤ２を含む第２のポリペプチド鎖を含み、ここで、ｓｃＦＶは、第１の標的抗原に特異的に結合し、ＶＨ及びＶＬは、第２の標的抗原に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインを形成し、ＴＣＲＤ１及びＴＣＲＤ２は、少なくとも１つのＴＣＲ−関連シグナル伝達分子の動員を促進するＴＣＲＭを形成し、Ｌ１及びＬ２がペプチドリンカーである、ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、Ｌ１及び／又はＬ２は、約５〜約５０（例えば、約５〜１０、約１０〜１５、又は約１５〜３０）のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、Ｌ１及び／又はＬ２は、配列番号８３〜８５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。例示的な二重特異性ｃａＴＣＲを図１３Ｄに示す。
【０１６３】
いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲであって、（ｉ）Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＬ−ＣＬ−Ｌ１−ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖と、Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＨ−ＣＨ１を含む第２のポリペプチド鎖と、Ｎ末端からＣ末端まで、ｓｃＦｖ−Ｌ２−ＴＣＲＤ２を含む第３のポリペプチド鎖；（ｉｉ）Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＨ−ＣＨ１−Ｌ１−ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖と、Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＬ−ＣＬを含む第２のポリペプチド鎖と、Ｎ末端からＣ末端まで、ｓｃＦｖ−Ｌ２−ＴＣＲＤ２を含む第３のポリペプチド鎖；（ｉｉｉ）Ｎ末端からＣ末端まで、ｓｃＦｖ−Ｌ１−ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖と、Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＨ−ＣＨ１を含む第２のポリペプチド鎖と、Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＬ−ＣＬ−Ｌ２−ＴＣＲＤ２を含む第３のポリペプチド鎖；又は（ｉｖ）Ｎ末端からＣ末端まで、ｓｃＦｖ−Ｌ１−ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖と、Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＬ−ＣＬを含む第２のポリペプチド鎖と、Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＨ−ＣＨ１−Ｌ２−ＴＣＲＤ２を含む第３のポリペプチド鎖を含み、ここで、ｓｃＦＶは、第１の標的抗原に特異的に結合し、ＶＨ及びＶＬは、第２の標的抗原に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインを形成し、ＴＣＲＤ１及びＴＣＲＤ２は、少なくとも１つのＴＣＲ−関連シグナル伝達分子の動員を促進するＴＣＲＭを形成し、Ｌ１及びＬ２がペプチドリンカーである、ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、Ｌ１及び／又はＬ２は、約５〜約５０（例えば、約５〜１０、約１０〜１５、又は約１５〜３０）のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、Ｌ１及び／又はＬ２は、配列番号８３〜８５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。例示的な二重特異性ｃａＴＣＲを図１３Ｅに示す。ｓｃＦｖとＴＣＲＤとの間のペプチドリンカーの長さと、ＦａｂとＴＣＲＤとの間のペプチドリンカーの長さは、その標的抗原に対するｓｃＦｖ及びＦａｂのアクセス性に影響を与え得るように最適化することができる。
【０１６４】
多重特異性ｃａＴＣＲの多重特異性抗原結合モジュールは、標的抗原又はエピトープの任意の好適な組み合わせに特異的に結合し得る。いくつかの実施形態では、多重特異性抗原結合モジュールは、少なくとも１つの細胞表面抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの細胞表面抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＧＰＣ−３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ及びＦＣＲＬ５からなる群から選択され、これらの多様体又は変異体を含む。いくつかの実施形態では、多重特異性抗原結合モジュールは、少なくとも１つのペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのペプチド／ＭＨＣ複合体は、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１、ＫＲＡＳ、Ｈｉｓｔｏｎｅ  Ｈ３．３及びＰＳＡからなる群から選択され、これらの多様体又は変異体を含む、タンパク質に由来するペプチドを含む。いくつかの実施形態では、多重特異性抗原結合モジュールは、第１の細胞表面抗原及び第２の細胞表面抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗原結合モジュールは、ＣＤ１９及びＣＤ２２に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗原結合モジュールは、ＣＤ１９及びＣＤ２０に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗原結合モジュールは、第１のペプチド／ＭＨＣ複合体及び第２のペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗原結合モジュールは、細胞表面抗原及びペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的に結合する。
【０１６５】
第１の抗原結合ドメイン及び第２の抗原結合ドメインは、好適な抗体に由来する抗体部分であってもよい。例示的な抗ＣＤ１９抗体及び抗ＣＤ２２抗体は、当該技術分野において既知である。例えば、ＷＯ２０１７０６６１３６Ａ２号に記載されている抗ＣＤ１９抗体、及び２０１８年３月３０日に出願されたＵＳＳＮ  ６２／６５０，９５５号（その内容が、全体的に本明細書に参考として組み込まれる）に記載されている抗ＣＤ２２抗体を参照。
【０１６６】
いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲであって、（ａ）ＣＤ１９に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインとＣＤ２２に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインを含む多重特異性（例えば、二重特異性）抗原結合モジュールと、（ｂ）第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ（ＴＣＲＤ１）と第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤ（ＴＣＲＤ２）を含むＴＣＲＭとを含み、ＴＣＲＭが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を促進する、ｃａＴＣＲが提供される。
【０１６７】
いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲであって、（ａ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＶＨのＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２及びＨＣ−ＣＤＲ３を含むＶＨと、配列番号７８のアミノ酸配列を含むＶＬのＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２及びＬＣ−ＣＤＲ３を含むＶＬとを含む、ＣＤ１９に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインと、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＶＨのＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２及びＨＣ−ＣＤＲ３を含むＶＨと、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＶＬのＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２及びＬＣ−ＣＤＲ３を含むＶＬとを含む、ＣＤ２２に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインとを含む、多重特異性（例えば、二重特異性）抗原結合モジュールと、（ｂ）第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ（ＴＣＲＤ１）と第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤ（ＴＣＲＤ２）を含むＴＣＲＭとを含み、ＴＣＲＭが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を促進する、ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２及び配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含むＶＨと、配列番号７５のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、配列番号７６のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２及び配列番号７７のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含むＶＬとを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２２に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインは、配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２及び配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含むＶＨと、配列番号６６のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、配列番号６７のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２及び配列番号６８のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含むＶＬとを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号７４のアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号７８のアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２２に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインは、配列番号６５のアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号７９のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号７０のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＤ１は、配列番号８０のアミノ酸配列を含み、ＴＣＲＤ２は、配列番号８１のアミノ酸配列を含むか、又はＴＣＲＤ１は、配列番号８１のアミノ酸配列を含み、ＴＣＲＤ２は、配列番号８０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、ＴＣＲＤ１に融合するＣＨ１と、ＴＣＲＤ２に融合するＣＬとを含むか、又はＴＣＲＤ１に融合するＣＬと、ＴＣＲＤ２に融合するＣＨ１とを含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ１は、配列番号３７のアミノ酸配列を含み、ＣＬは、配列番号４８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ１及びＣＬは、二量体形成を安定化させる１つ以上の変異を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ１は、配列番号８６のアミノ酸配列を含み、ＣＬは、配列番号８７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の抗原結合ドメイン又はそのフラグメント（例えば、ＶＨ又はＶＬ）は、ペプチドリンカーを介して、第２の抗原結合ドメイン又はそのフラグメント（例えば、ＶＨ又はＶＬ）に融合する。いくつかの実施形態では、第１の抗原結合ドメイン又はそのフラグメント（例えば、ＶＨ又はＶＬ）は、ペプチドリンカーを介して、ＣＨ１又はＣＬに融合する。いくつかの実施形態では、第２の抗原結合ドメイン又はそのフラグメント（例えば、ＶＨ又はＶＬ）は、ペプチドリンカーを介して、ＣＨ１又はＣＬに融合する。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、約５〜約５０アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、配列番号８３〜８５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。
【０１６８】
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９及びＣＤ２０に特異的に結合するｃａＴＣＲであって、（ｉ）配列番号８８のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドと、配列番号８９のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド、（ｉｉ）配列番号９０のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドと、配列番号９１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド、（ｉｉｉ）配列番号９２のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドと、配列番号９３のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド、（ｉｖ）配列番号９４のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドと、配列番号９５のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド、（ｖ）配列番号９６のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドと、配列番号９７のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド、（ｖｉ）配列番号９８のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドと、配列番号９９のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド、（ｖｉｉ）配列番号１００のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドと、配列番号１０１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド、（ｖｉｉｉ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドと、配列番号１０３のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド、（ｉｘ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドと、配列番号１０５のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド、（ｘ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドと、配列番号１０７のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド、（ｘｉ）配列番号１０８のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドと、配列番号１０９のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド、（ｘｉｉ）配列番号１１０のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドと、配列番号１１１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド、又は（ｘｉｉｉ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドと、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む、ｃａＴＣＲが提供される。
【０１６９】
いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲであって、（ａ）ＣＤ１９に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインとＣＤ２０に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインを含む多重特異性（例えば、二重特異性）抗原結合モジュールと、（ｂ）第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ（ＴＣＲＤ１）と第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤ（ＴＣＲＤ２）を含むＴＣＲＭとを含み、ＴＣＲＭが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を促進する、ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９に特異的に結合する抗原結合ドメインは、配列番号７４のアミノ酸配列を含むＶＨのＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２及びＨＣ−ＣＤＲ３を含むＶＨと、配列番号７８のアミノ酸配列を含むＶＬのＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２及びＬＣ−ＣＤＲ３を含むＶＬとを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２０に特異的に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５６のアミノ酸配列を含むＶＨのＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２及びＨＣ−ＣＤＲ３を含むＶＨと、配列番号５７のアミノ酸配列を含むＶＬのＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２及びＬＣ−ＣＤＲ３を含むＶＬとを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号７４のアミノ酸配列を含むＶＨを含み、ＶＬは、配列番号７８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２０に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインは、配列番号５６のアミノ酸配列を含むＶＨを含み、ＶＬは、配列番号５７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＤ１は、配列番号８０のアミノ酸配列を含み、ＴＣＲＤ２は、配列番号８１のアミノ酸配列を含むか、又はＴＣＲＤ１は、配列番号８１のアミノ酸配列を含み、ＴＣＲＤ２は、配列番号８０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、ＴＣＲＤ１に融合するＣＨ１と、ＴＣＲＤ２に融合するＣＬとを含むか、又はＴＣＲＤ１に融合するＣＬと、ＴＣＲＤ２に融合するＣＨ１とを含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ１は、配列番号３７のアミノ酸配列を含み、ＣＬは、配列番号４８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ１及びＣＬは、二量体形成を安定化させる１つ以上の変異を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ１は、配列番号８６のアミノ酸配列を含み、ＣＬは、配列番号８７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の抗原結合ドメイン又はそのフラグメント（例えば、ＶＨ又はＶＬ）は、ペプチドリンカーを介して、第２の抗原結合ドメイン又はそのフラグメント（例えば、ＶＨ又はＶＬ）に融合する。いくつかの実施形態では、第１の抗原結合ドメイン又はそのフラグメント（例えば、ＶＨ又はＶＬ）は、ペプチドリンカーを介して、ＣＨ１又はＣＬに融合する。いくつかの実施形態では、第２の抗原結合ドメイン又はそのフラグメント（例えば、ＶＨ又はＶＬ）は、ペプチドリンカーを介して、ＣＨ１又はＣＬに融合する。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、約５〜約５０アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、配列番号８３〜８５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。
キメラ共刺激受容体（ＣＳＲ）構築物
【０１７０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲのいずれか１つと、キメラ共刺激受容体（ＣＳＲ）とを含む、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）であって、キメラ共刺激受容体（ＣＳＲ）は、（ｉ）標的リガンドと結合するか、又は相互作用することが可能なリガンド結合モジュールと、（ｉｉ）膜貫通モジュールと、（ｉｉｉ）共刺激信号を免疫細胞に与えることが可能な共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールとを含み、リガンド結合モジュールと共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールは、同じ分子に由来せず、ＣＳＲが、機能的な一次免疫細胞シグナル伝達ドメインを欠いている、免疫細胞が提供される。このような免疫細胞は、本明細書では「ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞」とも呼ばれる。
【０１７１】
本明細書に記載のリガンド特異的キメラ共刺激受容体（ＣＳＲ）は、標的リガンド（例えば、細胞表面抗原又はペプチド／ＭＨＣ複合体）に特異的に結合し、標的リガンドが結合すると機能的に発現する表面で免疫細胞を刺激することが可能である。ＣＳＲは、リガンド結合特異性を与えるリガンド結合モジュールと、膜貫通モジュールと、免疫細胞を刺激することが可能な共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールとを含む。ＣＳＲは、機能的な一次免疫細胞シグナル伝達配列を欠いている。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、任意の一次免疫細胞シグナル伝達配列を欠いている。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、リガンド結合モジュールと、膜貫通モジュールと、共刺激シグナル伝達モジュールとを含む、単一のポリペプチド鎖を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とを含み、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖が合わさって、リガンド結合モジュール、膜貫通モジュール及び共刺激シグナル伝達モジュールを形成する。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖は、別個のポリペプチド鎖であり、ＣＳＲは、多量体（例えば、二量体）である。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖は、例えば、ペプチド結合によって、又は別の化学結合（例えば、ジスルフィド結合）によって、共有結合している。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖は、少なくとも１つのジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞におけるＣＳＲの発現は、誘導性である。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の発現は、ｃａＴＣＲを介してシグナル伝達するときに誘導性である。
【０１７２】
本発明のＣＳＲで使用するための共刺激免疫細胞シグナル伝達ドメインの例は、ｃａＴＣＲと協働して作用し、ｃａＴＣＲ係合後のシグナル伝達を開始させることができる、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の細胞質配列、及びこれらの配列の任意の誘導体又は多様体、及び同じ機能能力を有する任意の合成配列が挙げられる。
【０１７３】
いくつかの状況下では、ＴＣＲのみによって生成されたシグナルは、Ｔ細胞の完全な活性化には不十分であり、二次シグナル又は共刺激シグナルも必要である。したがって、いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性化には、ＴＣＲによる抗原依存性一次活性化を開始させるもの（本明細書では、「一次Ｔ細胞シグナル伝達配列」と呼ばれる）と、二次シグナル又は共刺激シグナルを与える抗原非依存性の様式で作用するもの（本明細書では、「共刺激性Ｔ細胞シグナル伝達配列」と呼ばれる）といった、２つの別個のクラスの細胞内シグナル伝達配列が介在している。
【０１７４】
刺激による経路で作用する一次免疫細胞シグナル伝達配列は、免疫受容体チロシン由来の活性化モチーフ、又はＩＴＡＭとして知られる、シグナル伝達モチーフを含んでいてもよい。ＩＴＡＭを含有する一次免疫細胞シグナル伝達配列の例としては、ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ及びＣＤ６６ｄに由来するものが挙げられる。「機能的」一次免疫細胞シグナル伝達配列は、適切な受容体に作動可能に接続すると、免疫細胞活性化シグナルを形質導入することが可能な配列である。「非機能的」一次免疫細胞シグナル伝達配列は、一次免疫細胞シグナル伝達配列のフラグメント又は多様体を含んでいてもよいが、免疫細胞活性化シグナルを形質導入することができない。本明細書に記載のＣＳＲは、機能的一次免疫細胞シグナル伝達配列（例えば、ＩＴＡＭを含む機能的シグナル伝達配列）を欠いている。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、任意の一次免疫細胞シグナル伝達配列を欠いている。
【０１７５】
共刺激免疫細胞シグナル伝達配列は、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどを含め、共刺激分子の細胞内ドメインの一部であってもよい。
【０１７６】
いくつかの実施形態では、標的リガンドは、細胞表面抗原である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、ペプチド／ＭＨＣ複合体である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、同じ免疫細胞で発現されたｃａＴＣＲの標的抗原と同じである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、同じ免疫細胞で発現されたｃａＴＣＲの標的抗原とは異なる。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、標的抗原を提示する細胞の表面上に提示される分子である。例えば、いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲの標的抗原は、癌細胞上に提示される癌関連抗原であり、標的リガンドは、インテグリンなどの癌細胞の表面上に発現されるユビキチン分子である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、疾患関連リガンドである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、癌関連リガンドである。いくつかの実施形態では、癌関連リガンドは、例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＩＬ４、ＧＰＣ−３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ又はＦＣＲＬ５である。いくつかの実施形態では、癌関連リガンドは、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ及びＰＳＡを含むタンパク質に由来するペプチドを含む、ペプチド／ＭＨＣ複合体である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、ウイルス関連リガンドである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、免疫チェックポイント分子である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子は、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳＬ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、４−１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ４０及びＧＡＬ９を含む。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、アポトーシス分子である。いくつかの実施形態では、アポトーシス分子は、ＦａｓＬ、ＦａｓＲ、ＴＮＦＲ１及びＴＮＦＲ２を含む。
【０１７７】
いくつかの実施形態では、リガンド結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、限定されないが、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＧＰＣ−３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ及びＦＣＲＬ５を含む、細胞表面抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的に結合し、ペプチドは、限定されないが、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ及びＰＳＡを含む、タンパク質に由来する。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤ１９に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１７０６６１３６Ａ２号を参照）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤ１９に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）（例えば、配列番号５４のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなるＶＨドメイン、及び／又は配列番号５５のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなるＶＬドメイン、又はその中に含まれるＣＤＲ）を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤ２０に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）（例えば、配列番号５６のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなるＶＨドメイン、及び／又は配列番号５７のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなるＶＬドメイン、又はその中に含まれるＣＤＲ）を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤ２２に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、その内容が全体的に本明細書に参考として組み込まれる、２０１８年３月３０日に出願されたＵＳＳＮ  ６２／６５０，９５５号を参照）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤ２２に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）（例えば、配列番号６５のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなるＶＨドメイン、及び／又は配列番号６９のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなるＶＬドメイン、又はその中に含まれるＣＤＲ）を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＧＰＣ３に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、その内容が全体的に本明細書に参考として組み込まれる、２０１７年４月２６日に出願されたＵＳＳＮ  ６２／４９０，５８６号を参照）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＧＰＣ３に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）（例えば、配列番号５８のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなるＶＨドメイン、及び／又は配列番号５９のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなるＶＬドメイン、又はその中に含まれるＣＤＲ）を含む。いくつかの実施形態��は、抗体部分は、ＲＯＲ１に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／１８７２２０号及びＷＯ２０１６／１８７２１６号を参照）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＲＯＲ２に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／１４２７６８号を参照）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＢＣＭＡに特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／０９０３２７号及びＷＯ２０１６／０９０３２０号を参照）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＧＰＲＣ５Ｄに特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／０９０３２９号及びＷＯ２０１６／０９０３１２号を参照）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＦＣＲＬ５に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／０９０３３７号を参照）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＷＴ−１に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１２／１３５８５４号、ＷＯ２０１５／０７００７８号及びＷＯ２０１５／０７００６１号を参照）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＡＦＰに特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／１６１３９０号を参照）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＨＰＶ１６−Ｅ７に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／１８２９５７号を参照）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＮＹ−ＥＳＯ−１に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／２１０３６５号を参照）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＰＲＡＭＥに特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／１９１２４６号を参照）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａに特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／２０１１２４号を参照）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＫＲＡＳに特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／１５４０４７号を参照）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＰＳＡに特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１７／０１５６３４号を参照）。
【０１７８】
いくつかの実施形態では、リガンド結合モジュールは、標的リガンドの受容体の細胞外ドメインの全て又は一部である（又はこれらに由来する）。いくつかの実施形態では、受容体は、例えば、ＦａｓＲ、ＴＮＦＲ１、ＴＮＦＲ２、ＰＤ−１、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ−３、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２７及びＴＩＭ−３を含む。
【０１７９】
いくつかの実施形態では、膜貫通モジュールは、例えば、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７又はＣＤ１５４に由来する１つ以上の膜貫通ドメインを含む。
【０１８０】
いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達モジュールは、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどを含む、免疫細胞共刺激分子の細胞内ドメインの全て又は一部を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなる。いくつかの実施形態では、共刺激性シグナル伝達分子は、配列番号４９又は１１８のアミノ酸配列を含むＣＤ２８のフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、共刺激性シグナル伝達分子は、配列番号５０又は１１９のアミノ酸配列を含む４−１ＢＢのフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、共刺激性シグナル伝達分子は、配列番号５１又は１２０のアミノ酸配列を含むＯＸ４０のフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、共刺激性シグナル伝達分子は、配列番号１２２又は１２３のアミノ酸配列を含むＣＤ２７のフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、共刺激性シグナル伝達分子は、配列番号１２４又は１２５のアミノ酸配列を含むＣＤ３０のフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、共刺激性シグナル伝達分子は、配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＣＤ８のフラグメントを含む。
【０１８１】
いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、リガンド結合モジュール、膜貫通モジュール及び共刺激シグナル伝達モジュールのいずれかの間にスペーサーモジュールを更に含む。いくつかの実施形態では、スペーサーモジュールは、２つのＣＳＲモジュールを接続する１つ以上のペプチドリンカーを含む。いくつかの実施形態では、スペーサーモジュールは、約５〜約７０（例えば、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５又は７０のいずれか、これらの値の間にある任意の範囲を含む）のアミノ酸長の１つ以上のペプチドリンカーを含む。
【０１８２】
いくつかの実施形態では、リガンド結合モジュール（例えば、抗体部分）は、（ａ）他の分子に対する結合親和性の少なくとも約１０倍（例えば、少なくとも約１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、７５倍、１００倍、２００倍、３００倍、４００倍、５００倍、７５０倍、１０００倍のいずれか、又はもっと多くを含む）の親和性で標的抗原に特異的に結合するか、又は（ｂ）他の分子に対する結合のＫｄの約１／１０以下（例えば、１／１０以下、１／２０以下、１／３０以下、１／４０以下、１／５０以下、１／７５以下、１／１００以下、１／２００以下、１／３００以下、１／４００以下、１／５００以下、１／７５０以下、１／１０００以下のいずれか、又はもっと小さい）のＫｄで標的抗原に特異的に結合する抗体部分を含む。結合親和性は、ＥＬＩＳＡ、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）分析、又は放射線免疫沈降アッセイ（ＲＩＡ）などの当該技術分野において既知の方法によって決定することができる。Ｋｄは、例えばＢｉａｃｏｒｅ機器を利用する表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイ、又は例えばＳａｐｉｄｙｎｅ装置を利用する動的排除アッセイ（ＫｉｎＥｘＡ）などの当該技術分野で既知の方法によって決定することができる。
【０１８３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＳＲは、標的リガンド（例えば、細胞表面抗原又はペプチド／ＭＨＣ複合体）に特異的に結合し、（ａ）標的リガンド結合ドメイン（ＬＢＤ）と、（ｂ）膜貫通ドメインと、（ｃ）共刺激シグナル伝達ドメインとを含み、ＣＳＲは、標的リガンド結合の際に機能的に発現される表面で免疫細胞を刺激することが可能である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、細胞表面抗原である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、ペプチド／ＭＨＣ複合体である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、同じ免疫細胞で発現されたｃａＴＣＲの標的抗原と同じである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、同じ免疫細胞で発現されたｃａＴＣＲの標的抗原とは異なる。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、疾患関連リガンドである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、癌関連リガンドである。いくつかの実施形態では、癌関連リガンドは、例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＩＬ４、ＧＰＣ−３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ又はＦＣＲＬ５である。いくつかの実施形態では、癌関連リガンドは、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ及びＰＳＡを含むタンパク質に由来するペプチドを含む、ペプチド／ＭＨＣ複合体である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、ウイルス関連リガンドである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、免疫チェックポイント分子である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子は、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳＬ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、４−１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ４０及びＧＡＬ９を含む。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、アポトーシス分子である。いくつかの実施形態では、アポトーシス分子は、ＦａｓＬ、ＦａｓＲ、ＴＮＦＲ１及びＴＮＦＲ２を含む。いくつかの実施形態では、リガンド結合ドメインは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、リガンド結合ドメインは、標的リガンドの受容体の細胞外ドメインの全て又は一部である（又はこれらに由来する）。いくつかの実施形態では、受容体は、例えば、ＦａｓＲ、ＴＮＦＲ１、ＴＮＦＲ２、ＰＤ−１、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ−３、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２７及びＴＩＭ−３を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通モジュールは、例えば、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７又はＣＤ１５４を含む、膜貫通タンパク質に由来する膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、膜貫通タンパク質（ｆＴＭＰ）のフラグメントを含み、ｆＴＭＰは、ＣＳＲ膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、��ンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどを含む、免疫細胞共刺激分子の細胞内ドメインの全て又は一部を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなる。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、免疫細胞共刺激分子（ｆＣＳＭ）のフラグメントを含み、ｆＣＳＭは、ＣＳＲ膜貫通ドメインと、ＣＳＲ共刺激シグナル伝達ドメインとを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、リガンド結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び共刺激シグナル伝達ドメインのいずれかの間にスペーサードメインを更に含む。いくつかの実施形態では、スペーサードメインは、２つのＣＳＲドメインを接続するペプチドリンカーを含む。
【０１８４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＳＲは、標的リガンドに特異的に結合し、（ａ）標的リガンド結合ドメインと、（ｂ）膜貫通ドメインと、（ｃ）共刺激シグナル伝達ドメインとを含み、標的リガンドは、細胞表面抗原であり、ＣＳＲは、標的リガンド結合の際に機能的に発現される表面で免疫細胞を刺激することが可能である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、同じ免疫細胞で発現されたｃａＴＣＲの標的抗原と同じである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、同じ免疫細胞で発現されたｃａＴＣＲの標的抗原とは異なる。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、疾患関連リガンドである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、癌関連リガンドである。いくつかの実施形態では、癌関連リガンドは、例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＩＬ４、ＧＰＣ−３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ又はＦＣＲＬ５である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、ウイルス関連リガンドである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、免疫チェックポイント分子である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子は、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳＬ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、４−１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ４０及びＧＡＬ９を含む。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、アポトーシス分子である。いくつかの実施形態では、アポトーシス分子は、ＦａｓＬ、ＦａｓＲ、ＴＮＦＲ１及びＴＮＦＲ２を含む。いくつかの実施形態では、リガンド結合ドメインは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、リガンド結合ドメインは、標的リガンドの受容体の細胞外ドメインの全て又は一部である（又はこれらに由来する）。いくつかの実施形態では、受容体は、例えば、ＦａｓＲ、ＴＮＦＲ１、ＴＮＦＲ２、ＰＤ−１、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ−３、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２７及びＴＩＭ−３を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通モジュールは、例えば、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７又はＣＤ１５４を含む、膜貫通タンパク質に由来する膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、膜貫通タンパク質（ｆＴＭＰ）のフラグメントを含み、ｆＴＭＰは、ＣＳＲ膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどを含む、免疫細胞共刺激分子の細胞内ドメインの全て又は一部を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなる。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、免疫細胞共刺激分子（ｆＣＳＭ）のフラグメントを含み、ｆＣＳＭは、ＣＳＲ膜貫通ドメインと、��ＳＲ共刺激シグナル伝達ドメインとを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、リガンド結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び共刺激シグナル伝達ドメインのいずれかの間にスペーサードメインを更に含む。いくつかの実施形態では、スペーサードメインは、２つのＣＳＲドメインを接続するペプチドリンカーを含む。
【０１８５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＳＲは、標的リガンドに特異的に結合し、（ａ）標的リガンド結合ドメインと、（ｂ）膜貫通ドメインと、（ｃ）共刺激シグナル伝達ドメインとを含み、標的リガンドは、ペプチド／ＭＨＣ複合体であり、ＣＳＲは、標的リガンド結合の際に機能的に発現される表面で免疫細胞を刺激することが可能である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、同じ免疫細胞で発現されたｃａＴＣＲの標的抗原と同じである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、同じ免疫細胞で発現されたｃａＴＣＲの標的抗原とは異なる。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、疾患関連リガンドである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、癌関連リガンドである。いくつかの実施形態では、癌関連リガンドは、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ及びＰＳＡを含むタンパク質に由来するペプチドを含む、ペプチド／ＭＨＣ複合体である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、ウイルス関連リガンドである。いくつかの実施形態では、リガンド結合ドメインは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、膜貫通モジュールは、例えば、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７又はＣＤ１５４を含む、膜貫通タンパク質に由来する膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、膜貫通タンパク質（ｆＴＭＰ）のフラグメントを含み、ｆＴＭＰは、ＣＳＲ膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどを含む、免疫細胞共刺激分子の細胞内ドメインの全て又は一部を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなる。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、免疫細胞共刺激分子（ｆＣＳＭ）のフラグメントを含み、ｆＣＳＭは、ＣＳＲ膜貫通ドメインと、ＣＳＲ共刺激シグナル伝達ドメインとを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、リガンド結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び共刺激シグナル伝達ドメインのいずれかの間にスペーサードメインを更に含む。いくつかの実施形態では、スペーサードメインは、２つのＣＳＲドメインを接続するペプチドリンカーを含む。
【０１８６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＳＲは、標的リガンド（例えば、細胞表面抗原又はペプチド／ＭＨＣ複合体）に特異的に結合し、（ａ）標的リガンド結合ドメインと、（ｂ）膜貫通ドメインと、（ｃ）共刺激シグナル伝達ドメインとを含み、リガンド結合ドメインは、抗体部分であり、ＣＳＲは、標的リガンド結合の際に機能的に発現される表面で免疫細胞を刺激することが可能である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、細胞表面抗原である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、ペプチド／ＭＨＣ複合体である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、同じ免疫細胞で発現されたｃａＴＣＲの標的抗原と同じである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、同じ免疫細胞で発現されたｃａＴＣＲの標的抗原とは異なる。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、疾患関連リガンドである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、癌関連リガンドである。いくつかの実施形態では、癌関連リガンドは、例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＩＬ４、ＧＰＣ−３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ又はＦＣＲＬ５である。いくつかの実施形態では、癌関連リガンドは、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ及びＰＳＡを含むタンパク質に由来するペプチドを含む、ペプチド／ＭＨＣ複合体である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、ウイルス関連リガンドである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、免疫チェックポイント分子である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子は、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳＬ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、４−１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ４０及びＧＡＬ９を含む。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、アポトーシス分子である。いくつかの実施形態では、アポトーシス分子は、ＦａｓＬ、ＦａｓＲ、ＴＮＦＲ１及びＴＮＦＲ２を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、膜貫通モジュールは、例えば、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７又はＣＤ１５４を含む、膜貫通タンパク質に由来する膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、膜貫通タンパク質（ｆＴＭＰ）のフラグメントを含み、ｆＴＭＰは、ＣＳＲ膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどを含む、免疫細胞共刺激分子の細胞内ドメインの全て又は一部を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなる。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、免疫細胞共刺激分子（ｆＣＳＭ）のフラグメントを含み、ｆＣＳＭは、ＣＳＲ膜貫通ドメインと、ＣＳ��共刺激シグナル伝達ドメインとを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、リガンド結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び共刺激シグナル伝達ドメインのいずれかの間にスペーサードメインを更に含む。いくつかの実施形態では、スペーサードメインは、２つのＣＳＲドメインを接続するペプチドリンカーを含む。
【０１８７】
いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、ＣＤ２８のｆＣＳＭを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、（ａ）標的リガンド結合ドメインと、（ｂ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＣＤ２８のフラグメントとを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、標的リガンド結合ドメインと、配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＣＳＲドメインとを含む。
【０１８８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＳＲは、標的リガンド（例えば、細胞表面抗原又はペプチド／ＭＨＣ複合体）に特異的に結合し、（ａ）標的リガンド結合ドメインと、（ｂ）膜貫通ドメインと、（ｃ）共刺激シグナル伝達ドメインとを含み、リガンド結合ドメインは、標的リガンドの受容体の細胞外ドメインの全て又は一部であるか（又はこれらに由来し）、ＣＳＲは、標的リガンド結合の際に機能的に発現される表面で免疫細胞を刺激することが可能である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、細胞表面抗原である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、同じ免疫細胞で発現されたｃａＴＣＲの標的抗原と同じである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、同じ免疫細胞で発現されたｃａＴＣＲの標的抗原とは異なる。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、疾患関連リガンドである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、癌関連リガンドである。いくつかの実施形態では、癌関連リガンドは、例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＩＬ４、ＧＰＣ−３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ又はＦＣＲＬ５である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、免疫チェックポイント分子である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子は、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳＬ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、４−１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ４０及びＧＡＬ９を含む。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、アポトーシス分子である。いくつかの実施形態では、アポトーシス分子は、ＦａｓＬ、ＦａｓＲ、ＴＮＦＲ１及びＴＮＦＲ２を含む。いくつかの実施形態では、標的リガンド受容体は、例えば、ＦａｓＲ、ＴＮＦＲ１、ＴＮＦＲ２、ＰＤ−１、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ−３、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２７及びＴＩＭ−３を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、例えば、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７又はＣＤ１５４に由来する膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどを含む、免疫細胞共刺激分子の細胞内ドメインの全て又は一部を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなる。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、リガンド結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び共刺激シグナル伝達ドメインのいずれかの間にスペーサードメインを更に含む。いくつかの実施形態では、スペーサードメインは、２つのＣＳＲドメインを接続するペプチドリンカーを含む。
【０１８９】
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９に特異的に結合する本明細書に記載のＣＳＲは、（ａ）配列番号７４のアミノ酸配列を有するＶＨドメインと配列番号７８のアミノ酸配列を有するＶＬドメインと、（ｂ）配列番号４９又は１１８のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなるＣＤ２８のフラグメントとを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８のフラグメントは、配列番号１１８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、アミノ末端からカルボキシ末端まで、ｓｃＦｖと、ペプチドリンカーと、ＣＤ２８のフラグメントとを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、配列番号１２７のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなる。
【０１９０】
いくつかの実施形態では、ＧＰＣ３に特異的に結合する本明細書に記載のＣＳＲは、（ａ）配列番号５８のアミノ酸配列を有するＶＨドメインと配列番号５９のアミノ酸配列を有するＶＬドメインと、（ｂ）配列番号４９又は８０のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなるＣＤ２８のフラグメントとを含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１１７のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなる。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８のフラグメントは、配列番号１１８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、アミノ末端からカルボキシ末端まで、ｓｃＦｖと、ペプチドリンカーと、ＣＤ２８のフラグメントとを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、配列番号１２８のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなる。
【０１９１】
いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞におけるＣＳＲの発現は、誘導性である。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、本明細書に記載の誘導プロモーターのいずれかを含む、誘導プロモーターに作動可能に接続するＣＳＲをコードする核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞におけるＣＳＲの発現は、ｃａＴＣＲを介してシグナル伝達するときに誘導性である。いくつかのこのような実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、ｃａＴＣＲによるシグナル伝達に応答してプロモーター又は調節エレメントに作動可能に接続するＣＳＲをコードする核酸配列を組む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲをコードする核酸配列は、活性化Ｔ細胞（ＮＦＡＴ）由来プロモーターの核因子に作動可能に接続する。いくつかの実施形態では、ＮＦＡＴ由来プロモーターは、ＮＦＡＴ由来最小プロモーターである（例えば、Ｄｕｒａｎｄ，Ｄ．ら、Ｍｏｌｅｃ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．８、１７１５−１７２４（１９８８）；Ｃｌｉｐｓｔｏｎｅ，ＮＡ、Ｃｒａｂｔｒｅｅ，ＧＲ．Ｎａｔｕｒｅ．１９９２  ３５７（６３８０）：６９５−７；Ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉ，Ｍ．ら、Ｃａｎｃｅｒ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ７１．１７（２０１１）：５６９７−５７０６；及びＺｈａｎｇ，Ｌ．ら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｔｈｅｒａｐｙ  １９．４（２０１１）：７５１−７５９を参照）。いくつかの実施形態では、ＮＦＡＴ由来プロモーターは、配列番号１１６のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲをコードする核酸配列は、ＩＬ−２プロモーターに作動可能に接続する。
分泌二次エフェクター（ＳＳＥ）構築物
【０１９２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲのいずれか１つを含む免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）が提供され、当該免疫細胞は、分泌二次エフェクター（ＳＳＥ）を分泌することが可能である。このような免疫細胞は、本明細書では「ｃａＴＣＲ＋ＳＳＥ免疫細胞」とも呼ばれる。ＳＳＥは、機能的に発現され、分泌型であり、ｃａＴＣＲ＋ＳＳＥ免疫細胞が介在する免疫応答を強化する。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、他の免疫細胞（例えば、バイスタンダーＴ細胞又はＮＫ細胞）を、標的疾患細胞（又は、標的癌細胞）に再指向させることが可能である。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）及び疾患細胞（例えば、癌細胞）を標的とする多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）である。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、免疫抑制腫瘍環境などの免疫抑制環境からｃａＴＣＲ＋ＳＳＥ免疫細胞を保護する。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、ｃａＴＣＲ＋ＳＳＥ免疫細胞上での刺激受容体の自己分泌活性化を与える。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、外来性増殖因子又は刺激サイトカインである。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＳＳＥ免疫細胞におけるＳＳＥの発現は、誘導性である。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＳＳＥ免疫細胞におけるＳＳＥの発現は、ｃａＴＣＲを介してシグナル伝達するときに誘導性である。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＳＳＥ免疫細胞は、本明細書に記載されるＣＳＲのうちのいずれかの１つを更に含む。
【０１９３】
いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、Ｔ細胞及び疾患細胞を標的とする多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）である。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、Ｔ細胞の表面抗原に特異的に結合する抗体部分を含む。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞表面抗原は、ＣＤ３である。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、疾患関連抗原（例えば、癌関連抗原）に特異的に結合する抗体部分を含む。いくつかの実施形態では、疾患関連抗原は、疾患細胞（癌細胞など）の表面抗原である。いくつかの実施形態では、疾患関連抗原は、グリピカン−３（ＧＰＣ３）、ＣＤ４７、ムチン−１６（ＭＵＣ１６）、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＥｐＣＡＭ、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＣＥＡ、ＰＳＭＡ、ＡＦＰ、ＰＳＡ、ＢＣＭＡ、ＦＣＲＬ５、ＮＹ−ＥＳＯ、ＨＰＶ１６又はＦｏｘＰ３であり、これらの多様体又は変異体を含む。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、タンデムｓｃＦｖ、ダイアボディ（Ｄｂ）、単鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）、二重親和性再標的化（ＤＡＲＴ）抗体及び二重可変ドメイン（ＤＶＤ）抗体からなる群から選択される多重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、二重特異性である。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、Ｔ細胞表面抗原を標的とする第１のｓｃＦｖと、疾患関連抗原を標的とする第２のｓｃＦｖとを含む、タンデムｓｃＦｖである。
【０１９４】
いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、ＣＤ３を標的とする第１のｓｃＦｖと、疾患関連抗原を標的とする第２のｓｃＦｖとを含む、タンデムｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、疾患関連抗原は、ＧＰＣ３、ＣＤ４７、ＭＵＣ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＥｐＣＡＭ、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＣＥＡ、ＰＳＭＡ、ＡＦＰ、ＰＳＡ、ＢＣＭＡ、ＦＣＲＬ５、ＮＹ−ＥＳＯ、ＨＰＶ１６又はＦｏｘＰ３であり、これらの多様体又は変異体を含む。
【０１９５】
いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、ＣＤ３を標的とする第１のｓｃＦｖと、ＧＰＣ３を標的とする第２のｓｃＦｖとを含む、タンデムｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、第２のｓｃＦｖは、配列番号５８のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなるＶＨドメインと、配列番号５９のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなるＶＬドメインとを含む。いくつかの実施形態では、ＶＨドメインは、ＶＬドメインに対してアミノ末端にある。いくつかの実施形態では、ＶＬドメインは、ＶＨドメインに対してアミノ末端にある。いくつかの実施形態では、第２のｓｃＦｖは、配列番号１１７のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなる。いくつかの実施形態では、第１のｓｃＦｖは、第２のｓｃＦｖに対してアミノ末端にある。いくつかの実施形態では、第２のｓｃＦｖは、第１のｓｃＦｖに対してアミノ末端にある。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、配列番号１２９のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなる。
【０１９６】
いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、ＣＤ３を標的とする第１のｓｃＦｖと、ＣＤ４７を標的とする第２のｓｃＦｖとを含む、タンデムｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、ＣＤ３を標的とする第１のｓｃＦｖと、ＭＵＣ１６を標的とする第２のｓｃＦｖとを含む、タンデムｓｃＦｖである。
【０１９７】
いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、ＮＫ細胞及び疾患関連抗原（例えば、癌関連抗原）を標的とする多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）である。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、ＮＫ細胞の表面抗原に特異的に結合する抗体部分を含む。いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞表面抗原は、ＣＤ１６ａである。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、疾患関連抗原（例えば、癌関連抗原）に特異的に結合する抗体部分を含む。いくつかの実施形態では、疾患関連抗原は、疾患細胞（癌細胞など）の表面抗原である。いくつかの実施形態では、疾患関連抗原は、ＧＰＣ３、ＣＤ４７、ＭＵＣ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＥｐＣＡＭ、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＣＥＡ、ＰＳＭＡ、ＡＦＰ、ＰＳＡ、ＢＣＭＡ、ＦＣＲＬ５、ＮＹ−ＥＳＯ、ＨＰＶ１６又はＦｏｘＰ３であり、これらの多様体又は変異体を含む。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、タンデムｓｃＦｖ、ダイアボディ（Ｄｂ）、単鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）、二重親和性再標的化（ＤＡＲＴ）抗体及び二重可変ドメイン（ＤＶＤ）抗体からなる群から選択される多重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、二重特異性である。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、ＮＫ細胞表面抗原を標的とする第１のｓｃＦｖと、疾患関連抗原を標的とする第２のｓｃＦｖとを含む、タンデムｓｃＦｖである。
【０１９８】
いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、ＣＤ１６ａを標的とする第１のｓｃＦｖと、疾患関連抗原を標的とする第２のｓｃＦｖとを含む、タンデムｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、疾患関連抗原は、ＧＰＣ３、ＣＤ４７、ＭＵＣ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＥｐＣＡＭ、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＣＥＡ、ＰＳＭＡ、ＡＦＰ、ＰＳＡ、ＢＣＭＡ、ＦＣＲＬ５、ＮＹ−ＥＳＯ、ＨＰＶ１６又はＦｏｘＰ３であり、これらの多様体又は変異体を含む。
【０１９９】
いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、ＣＤ１６ａを標的とする第１のｓｃＦｖと、ＧＰＣ３を標的とする第２のｓｃＦｖとを含む、タンデムｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、ＣＤ１６ａを標的とする第１のｓｃＦｖと、ＣＤ４７を標的とする第２のｓｃＦｖとを含む、タンデムｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、ＣＤ１６ａを標的とする第１のｓｃＦｖと、ＭＵＣ１６を標的とする第２のｓｃＦｖとを含む、タンデムｓｃＦｖである。
【０２００】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＳＳＥは、疾患関連抗原に特異的に結合する抗体部分を含み、抗体部分は、疾患関連抗原に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤ１９に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１７０６６１３６Ａ２号を参照）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤ１９に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）（例えば、配列番号５４のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなるＶＨドメイン、及び／又は配列番号５５のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなるＶＬドメイン、又はその中に含まれるＣＤＲ）を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤ２０に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）（例えば、配列番号５６のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなるＶＨドメイン、及び／又は配列番号５７のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなるＶＬドメイン、又はその中に含まれるＣＤＲ）を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤ２２に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、その内容が全体的に本明細書に参考として組み込まれる、２０１８年３月３０日に出願されたＵＳＳＮ  ６２／６５０，９５５号を参照）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤ２２に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）（例えば、配列番号６５のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなるＶＨドメイン、及び／又は配列番号６９のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなるＶＬドメイン、又はその中に含まれるＣＤＲ）を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＧＰＣ３に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、その内容が全体的に本明細書に参考として組み込まれる、２０１７年４月２６日に出願されたＵＳＳＮ  ６２／４９０，５８６号を参照）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＧＰＣ３に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）（例えば、配列番号５８のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなるＶＨドメイン、及び／又は配列番号５９のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなるＶＬドメイン、又はその中に含まれるＣＤＲ）を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＲＯＲ１に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／１８７２２０号及びＷＯ２０１６／１８７２１６号を参照）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＲＯＲ２に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／１４２７６８号を参照）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＢＣＭＡに��異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／０９０３２７号及びＷＯ２０１６／０９０３２０号を参照）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＧＰＲＣ５Ｄに特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／０９０３２９号及びＷＯ２０１６／０９０３１２号を参照）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＦＣＲＬ５に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／０９０３３７号を参照）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＷＴ−１に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１２／１３５８５４号、ＷＯ２０１５／０７００７８号及びＷＯ２０１５／０７００６１号を参照）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＡＦＰに特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／１６１３９０号を参照）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＨＰＶ１６−Ｅ７に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／１８２９５７号を参照）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＮＹ−ＥＳＯ−１に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／２１０３６５号を参照）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＰＲＡＭＥに特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／１９１２４６号を参照）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａに特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／２０１１２４号を参照）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＫＲＡＳに特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／１５４０４７号を参照）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＰＳＡに特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１７／０１５６３４号を参照）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、（ａ）Ｔ細胞（例えば、ＣＤ３）又はＮＫ細胞（例えば、ＣＤ１６ａ）の表面抗原に特異的に結合する第１のｓｃＦｖと、（ｂ）抗体部分とを含み、抗体部分が第２のｓｃＦｖである、タンデムｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、ペプチドリンカーによって接続した第１のｓｃＦｖと第２のｓｃＦｖとを含む。いくつかの実施形態では、第１のｓｃＦｖは、第２のｓｃＦｖに対してアミノ末端にある。いくつかの実施形態では、第２のｓｃＦｖは、第１のｓｃＦｖに対してアミノ末端にある。
【０２０１】
いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、１つ以上の可溶性免疫抑制剤を標的とする多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）である。このようなＳＳＥは、可溶性免疫抑制剤をその標的から隔離するための捕捉剤として作用し、それによって、その免疫抑制効果を減らすことができる。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、１つ以上の可溶性免疫抑制剤に特異的に結合する１つ以上の抗体部分を含む。いくつかの実施形態では、免疫抑制剤は、免疫抑制性サイトカインである。いくつかの実施形態では、免疫抑制性サイトカインとしては、ＴＧＦ−βファミリーメンバー（例えば、ＴＧＦ−β１〜４）、ＩＬ−４及びＩＬ−１０（これらの多様体又は変異体を含む）が挙げられる。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、タンデムｓｃＦｖ、ダイアボディ（Ｄｂ）、単鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）、二重親和性再標的化（ＤＡＲＴ）抗体及び二重可変ドメイン（ＤＶＤ）抗体からなる群から選択される多重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、二重特異性である。例えば、いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、第１の免疫抑制サイトカイン（例えば、ＴＧＦβ）を標的とする第１のｓｃＦｖと、第２の免疫抑制サイトカイン（例えば、ＩＬ−４）を標的とする第２のｓｃＦｖとを含む、タンデムｓｃＦｖである。
【０２０２】
いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、免疫チェックポイント分子を標的とする抗体部分である。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、阻害性免疫チェックポイント分子のアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、阻害免疫チェックポイント分子は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３及びＡ２ａＲからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニストである。いくつかの実施形態では、刺激免疫チェックポイント分子は、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２７及びＣＤ４０からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、抗体部分は、完全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ｓｃＦｖである。
【０２０３】
いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、ＰＤ−１を標的とするアンタゴニスト性抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＰＤ−１に特異的なアンタゴニスト性抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／２１０１２９号を参照）。いくつかの実施形態では、アンタゴニスト抗体部分は、完全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、アンタゴニスト性抗体部分は、ｓｃＦｖである。
【０２０４】
いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、ＣＤ４７を標的とするアンタゴニスト性抗体部分である。いくつかの実施形態では、アンタゴニスト性抗体部分は、ＣＤ４７に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）（例えば、配列番号６０のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなるＶＨドメイン、及び／又は配列番号６１のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなるＶＬドメイン、又はその中に含まれるＣＤＲ）を含む。いくつかの実施形態では、アンタゴニスト抗体部分は、完全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、アンタゴニスト性抗体部分は、ｓｃＦｖである。
【０２０５】
いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、（ａ）他の分子に対する結合親和性の少なくとも約１０倍（例えば、少なくとも約１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、７５倍、１００倍、２００倍、３００倍、４００倍、５００倍、７５０倍、１０００倍のいずれか、又はもっと多くを含む）の親和性で標的抗原に特異的に結合するか、又は（ｂ）他の分子に対する結合のＫｄの約１／１０以下（例えば、１／１０以下、１／２０以下、１／３０以下、１／４０以下、１／５０以下、１／７５以下、１／１００以下、１／２００以下、１／３００以下、１／４０以下、１／５００以下、１／７５０以下、１／１０００以下のいずれか、又はもっと小さい）のＫｄで標的抗原に特異的に結合する抗体部分を含む。結合親和性は、ＥＬＩＳＡ、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）分析、又は放射線免疫沈降アッセイ（ＲＩＡ）などの当該技術分野において既知の方法によって決定することができる。Ｋｄは、例えばＢｉａｃｏｒｅ機器を利用する表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイ、又は例えばＳａｐｉｄｙｎｅ装置を利用する動的排除アッセイ（ＫｉｎＥｘＡ）などの当該技術分野で既知の方法によって決定することができる。
【０２０６】
いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、免疫抑制受容体のリガンドに特異的に結合する可溶性分子である。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、免疫抑制受容体の細胞外ドメインに由来するリガンド結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、リガンド結合ドメインは、受容体の細胞外ドメインの一部である。いくつかの実施形態では、免疫抑制受容体は、ＦａｓＲ、ＴＮＦＲ１、ＴＮＦＲ２、ＳＩＲＰα、ＰＤ−１、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ−３、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ４０及びＴＩＭ−３からなる群から選択される。
【０２０７】
いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、免疫抑制受容体に特異的に結合し、拮抗作用をもたらす可溶性分子である。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、免疫抑制受容体のリガンドの細胞外ドメインに由来する受容体結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、受容体結合ドメインは、リガンドの細胞外ドメインの一部である。いくつかの実施形態では、リガンドは、ＦａｓＬ、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＤ４７、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳＬ、ＨＶＥＭ、４−１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ４０Ｌ及びＧＡＬ９からなる群から選択される。
【０２０８】
いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、外来性刺激サイトカインである。本明細書に記載の外来性サイトカインは、外来性遺伝子から発現されるサイトカインである。いくつかの実施形態では、外来性刺激サイトカインは、ＩＬ−１２ファミリーメンバーである。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１２ファミリーメンバーは、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７又はＩＬ−３５である。いくつかの実施形態では、外来性刺激サイトカインは、ＩＬ−２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８又はＩＬ−２１である。いくつかの実施形態では、外来性刺激サイトカインは、ｃａＴＣＲ＋ＳＳＥ免疫細胞上のサイトカインの受容体の自己分泌活性化を与えることができる。
【０２０９】
いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＳＳＥ免疫細胞におけるＳＳＥの発現は、誘導性である。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＳＳＥ免疫細胞は、本明細書に記載の誘導プロモーターのいずれかを含む、誘導プロモーターに作動可能に接続するＳＳＥをコードする核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＳＳＥ免疫細胞におけるＳＳＥの発現は、ｃａＴＣＲを介してシグナル伝達するときに誘導性である。いくつかのこのような実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＳＳＥ免疫細胞は、ｃａＴＣＲによるシグナル伝達に応答してプロモーター又は調節エレメントに作動可能に接続するＳＳＥをコードする核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＳＳＥをコードする核酸配列は、活性化Ｔ細胞（ＮＦＡＴ）由来プロモーターの核因子に作動可能に接続する。いくつかの実施形態では、ＮＦＡＴ由来プロモーターは、ＮＦＡＴ由来最小プロモーターである（例えば、Ｄｕｒａｎｄ，Ｄ．ら、Ｍｏｌｅｃ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．８、１７１５−１７２４（１９８８）；Ｃｌｉｐｓｔｏｎｅ，ＮＡ、Ｃｒａｂｔｒｅｅ，ＧＲ．Ｎａｔｕｒｅ．１９９２  ３５７（６３８０）：６９５−７；Ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉ，Ｍ．ら、Ｃａｎｃｅｒ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ７１．１７（２０１１）：５６９７−５７０６；及びＺｈａｎｇ，Ｌ．ら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｔｈｅｒａｐｙ  １９．４（２０１１）：７５１−７５９を参照）。いくつかの実施形態では、ＮＦＡＴ由来プロモーターは、配列番号１１６のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＳＳＥをコードしている核酸配列は、ＩＬ−２プロモーターに操作可能に連結されている。
核酸
【０２１０】
本明細書に記載されるｃａＴＣＲ、ＣＳＲ及び／又はＳＳＥをコードする核酸分子も想定される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるｃａＴＣＲ、ＣＳＲ及び／又はＳＳＥのいずれかによれば、ｃａＴＣＲ、ＣＳＲ及び／又はＳＳＥをコードする核酸（又は核酸のセット）が提供される。
【０２１１】
本発明はまた、本発明の核酸が挿入されるベクターも提供する。
【０２１２】
簡潔に要約すると、ｃａＴＣＲをコードする核酸によるｃａＴＣＲの発現は、核酸を適切な発現ベクターに挿入することによって達成することができ、その結果、核酸は、５’及び３’調節エレメント（例えば、プロモーター（例えば、リンパ球に特異的なプロモーターを含む））及び３’非翻訳領域（ＵＴＲ）に作動可能に接続する。ベクターは、真核生物宿主細胞における複製及び組み込みに適している場合がある。典型的なクローニング及び発現ベクターは、転写及び翻訳停止部と、開始配列と、所望の核酸配列の発現の制御に有用なプロモーターとを含む。
【０２１３】
本発明の核酸は、標準的な遺伝子送達プロトコルを用いて、核酸免疫化及び遺伝子治療に使用することも可能である。遺伝子送達の方法は、当該技術分野において既知である。例えば、その全体が本明細書に参考として組み込まれる米国特許第５，３９９，３４６号、同第５，５８０，８５９号、同第５，５８９，４６６号を参照。いくつかの実施形態では、本発明は、遺伝子治療ベクターを提供する。
【０２１４】
核酸は、多数の種類のベクターにクローニングすることができる。例えば、核酸は、限定されないが、プラスミド、ファージミド、ファージ誘導体、動物ウイルス及びコスミドを含むベクターにクローニングすることができる。特定の目的のベクターとしては、発現ベクター、複製ベクター、プローブ生成ベクター及びシークエンシングベクターが挙げられる。
【０２１５】
更に、発現ベクターは、ウイルスベクターの形態で細胞に提供されてもよい。ウイルスベクター技術は、当該技術分野において周知であり、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（２００１、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）に記載されており、他のウイルス学及び分子生物学のマニュアルに記載されている。ベクターとして有用なウイルスとしては、限定されないが、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス及びレンチウイルスが挙げられる。一般に、好適なベクターは、少なくとも１つの有機体と、プロモーター配列と、簡便な制限エンドヌクレアーゼ部位と、１つ以上の選択可能なマーカーとを含む（例えば、国際公開第０１／９６５８４号；国際公開第０１／２９０５８号及び米国特許第６，３２６，１９３号を参照）。
【０２１６】
哺乳類細胞への遺伝子導入のために、多数のウイルス由来の系が開発されてきた。例えば、レトロウイルスは、遺伝子送達系に簡便なプラットフォームを提供する。選択された遺伝子をベクターに挿入し、当該技術分野において既知の技術を使用してレトロウイルス粒子に封入することができる。次いで、組換えウイルスを単離し、ｉｎ  ｖｉｖｏ又はｅｘ  ｖｉｖｏのいずれかで対象の細胞に送達することができる。多くのレトロウイルス系が当該技術分野において既知である。いくつかの実施形態では、アデノウイルスベクターが使用される。多くのアデノウイルスベクターが当該技術分野において既知である。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターが使用される。レンチウイルスなどのレトロウイルス由来のベクターは、長期間の遺伝子転写を達成するのに適したツールである。これらのベクターは、長期間にわたる導入遺伝子の安定した組み込み及び娘細胞におけるその伝播を可能にするからである。レンチウイルスベクターは、肝細胞などの非増殖性細胞を形質導入することができるという点で、マウス白血病ウイルスなどの癌性レトロウイルス由来のベクターと比較して、利点を有する。これらのベクターはまた、免疫原性が低いという更なる利点も有する。
【０２１７】
例えば、エンハンサーなどの更なるプロモーター配列は、転写開始の頻度を調節する。典型的には、これらは、開始部位から３０〜１１０ｂｐ上流の領域に位置しているが、近年、多くのプロモーターが、同様に開始部位の下流に機能配列を含むことが示されている。プロモーター配列間の間隔は、多くの場合、フレキシブルであり、そのため、配列が互いに対して反転しているか、又は移動するときにも、プロモーター機能が保存される。チミジンキナーゼ（ｔｋ）プロモーターでは、プロモーター配列間の間隔は、活性が低下し始める前に、５０ｂｐまで増加させることができる。
【０２１８】
好適なプロモーターの一例は、前初期サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター配列である。このプロモーター配列は、作動可能に接続した任意のポリヌクレオチド配列の高レベルでの発現を促すことが可能な、強力な構成型プロモーター配列である。好適なプロモーターの別の例は、伸長増殖因子−１α（ＥＦ−１α）である。しかしながら、他の構成型プロモーター配列としては、限定されないが、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）初期プロモーター、マウス乳腺腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）長末端反復（ＬＴＲ）プロモーター、ＭｏＭｕＬＶプロモーター、トリ白血病ウイルスプロモーター、エプスタインバールウイルスの前初期プロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーター、及びヒト遺伝子プロモーター、限定されないが、アクチンプロモーター、ミオシンプロモーター、ヘモグロビンプロモーター及びクレアチンキナーゼプロモーターが挙げられ、これらも使用可能である。
【０２１９】
更に、本発明は、構成型プロモーターの使用に限定されるべきではない。誘導プロモーターもまた、本発明の一部として想定される。誘導プロモーターの使用は、作動可能に接続したポリヌクレオチド配列の発現を、このような発現が望ましいときにオンにするか、又は発現が望ましくないときに発現をオフにすることが可能な分子スイッチを与える。真核細胞で使用するための例示的な誘導プロモーター系としては、限定されないが、ホルモン応答配列（例えば、Ｍａｄｅｒ，Ｓ．及びＷｈｉｔｅ，Ｊ．Ｈ．（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：５６０３−５６０７を参照）、合成リガンド制御要素（例えば、Ｓｐｅｎｃｅｒ，Ｄ．Ｍ．ら、１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６２：１０１９−１０２４を参照）及びイオン化照射制御要素（例えば、Ｍａｎｏｍｅ，Ｙ．ら、（１９９３）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３２：１０６０７−１０６１３；Ｄａｔｔａ，Ｒ．ら、（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：１０１４−１０１５３を参照）が挙げられる。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏの哺乳動物系で使用するための更なる例示的な誘導プロモーター系は、Ｇｉｎｇｒｉｃｈら（１９９８）Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ２１：３７７−４０５にまとめられている。
【０２２０】
本発明で使用するための例示的な誘導プロモーター系は、Ｔｅｔ系である。係る系は、Ｇｏｓｓｅｎら（１９９３）によって記載されるＴｅｔシステムに基づく。例示的な実施形態では、目的のポリヌクレオチドは、１つ以上のＴｅｔ操作（ＴｅｔＯ）部位を含むプロモーターの制御下にある。非活性状態では、Ｔｅｔリプレッサー（ＴｅｔＲ）は、ＴｅｔＯ部位に結合し、プロモーターからの転写を抑制する。活性状態では、例えば、テトラサイクリン（Ｔｃ）、無水テトラサイクリン、ドキシサイクリン（Ｄｏｘ）、又はその活性類似体などの誘導剤存在下で、誘導剤は、ＴｅｔＯからＴｅｔＲを放出させ、それによって、転写を行うことができる。ドキシサイクリンは、抗生物質であるテトラサイクリンファミリーの一員であり、１−ジメチルアミノ−２，４ａ，５，７，１２−ペンタヒドロキシ−１１−メチル−４，６−ジオキソ−１，４ａ，１１，１１ａ，１２，１２ａ−ヘキサヒドロテトラセン−３−カルボキサミドの化学名を有する。
【０２２１】
一実施形態では、ＴｅｔＲは、哺乳類細胞、例えば、マウス又はヒト細胞における発現のためにコドン最適化される。大部分のアミノ酸は、遺伝子コードの縮重により、１つより多いコドンによりコードされており、核酸によりコードされるアミノ酸配列を何ら変更することなく、所与の核酸のヌクレオチド配列の実質的な多様性を可能にする。しかし、多くの生物は、使用コドンにおいて違いを示し、この違いは、「コドンバイアス」（すなわち、所与のアミノ酸についての特定のコドンの使用に関する偏り）としても知られる。コドンバイアスは、多くは、特定のコドンについての主なｔＲＮＡ種の存在と相関関係にあり、ひいてはｍＲＮＡ翻訳の効率を高める。したがって、特定の生物（例えば、原核生物）由来のコード配列は、コドン最適化を介して、異なる生物（例えば、真核生物）における発現の改善に合わせて調整されてもよい。
【０２２２】
Ｔｅｔ系の他の特定の変形例としては、以下の「Ｔｅｔ−Ｏｆｆ」及び「Ｔｅｔ−Ｏｎ」系が挙げられる。Ｔｅｔ−Ｏｆｆ系では、Ｔｃ又はＤｏｘ存在下、転写は不活性である。この系では、テトラサイクリン制御性転写活性化タンパク質（ｔＴＡ）は、ヘルペス単純ウイルス由来のＶＰ１６の強力な転写活性化ドメインに融合したＴｅｔＲで構成されており、テトラサイクリン応答性プロモーター配列（ＴＲＥ）の転写制御下にある標的核酸の発現を調整する。ＴＲＥは、プロモーター（一般的に、ヒトサイトメガロウイルス（ｈＣＭＶ）前初期プロモーターに由来する最小プロモーター配列）に融合したＴｅｔＯ配列コンカテマーで構成される。Ｔｃ又はＤｏｘが存在しない状態では、ｔＴＡはＴＲＥに結合し、標的遺伝子の転写を活性化する。Ｔｃ又はＤｏｘが存在する状態では、ｔＴＡは、ＴＲＥに結合することができず、標的遺伝子からの発現は、不活性なままである。
【０２２３】
逆に、Ｔｅｔ−Ｏｎ系では、転写は、Ｔｃ又はＤｏｘが存在する状態で活性である。Ｔｅｔ−Ｏｎ系は、逆テトラサイクリン制御転写活性化剤ｒｔＴＡに基づく。ｔＴＡと同様に、ｒｔＴＡは、ＴｅｔＲリプレッサーとＶＰ１６転写活性化ドメインとで構成される融合タンパク質である。しかし、ＴｅｔＲ  ＤＮＡ結合部分中の４つのアミノ酸の変化は、Ｄｏｘ存在下で標的転写遺伝子のＴＲＥ中のｔｅｔＯ配列のみを認識することができるように、ｒｔＴＡの結合特性を変える。したがって、Ｔｅｔ−Ｏｎシステムでは、ＴＲＥ制御された標的遺伝子の転写は、Ｄｏｘの存在下、ｒｔＴＡのみによって刺激される。
【０２２４】
別の誘導プロモーター系は、Ｅ．ｃｏｌｉ由来のｌａｃリプレッサー系である。（Ｂｒｏｗｎら、Ｃｅｌｌ  ４９：６０３−６１２（１９８７）を参照。）ｌａｃリプレッサー系は、ｌａｃオペレーター（ｌａｃＯ）を含むプロモーターに作動可能に接続する目的のポリヌクレオチドの転写を制御することによって機能する。ｌａｃリプレッサー（ｌａｃＲ）は、ＬａｃＯに結合し、それにより、目的のポリヌクレオチドの転写を抑制する。目的のポリヌクレオチドの発現は、適切な誘導剤、例えば、イソプロピル−β−Ｄ−チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）によって誘導される。
【０２２５】
ポリペプチド又はその部分の発現を評価するために、細胞に導入される発現ベクターは、ウイルスベクターによってトランスフェクションされるか、又は感染することが求められる細胞集合からの発現細胞の同定及び選択を容易にするために、選択可能なマーカー遺伝子又はレポーター遺伝子又はこれらを両方とも含んでいてもよい。他の態様では、選択可能なマーカーは、ＤＮＡの別個の断片上に保有され、同時導入法で使用されてもよい。選択可能なマーカー及びレポーター遺伝子が両方とも、宿主細胞における発現を可能にするために適切な調節配列と隣接していてもよい。有用な選択可能なマーカーとしては、例えば、ｎｅｏなどの抗生物質耐性遺伝子が挙げられる。
【０２２６】
レポーター遺伝子は、トランスフェクションされ得る細胞を同定するため、また、調節配列の機能性を評価するために使用される。一般に、レポーター遺伝子は、レシピエント生物又は組織内に存在しないか、又は発現していない遺伝子であり、一部の容易に検出可能な特性、例えば、酵素活性によって発現が示されるポリペプチドをコードする遺伝子である。ＤＮＡがレシピエント細胞に導入された後、レポーター遺伝子の発現を好適な時間でアッセイする。好適なレポーター遺伝子としては、ルシフェラーゼ、β−ガラクトシダーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、分泌アルカリホスファターゼ、又は緑色蛍光タンパク質遺伝子をコードする遺伝子を挙げることができる（例えば、Ｕｉ−Ｔｅｌら、２０００  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ４７９：７９−８２）。好適な発現系は周知であり、既知の技術を使用して調製することができ、又は商業的に入手することができる。一般に、レポーター遺伝子の発現の最高レベルを示す最小５’隣接領域を有する構築物は、プロモーターとして同定される。このようなプロモーター領域を、レポーター遺伝子に接続させて、プロモーターによって促される転写を調節する能力について薬剤を評価するために使用してもよい。
【０２２７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲのいずれかに係るｃａＴＣＲをコードする核酸が提供される。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲをコードする核酸は、ｃａＴＣＲの全てのポリペプチド鎖をコードする１つ以上の核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の核酸配列はそれぞれ、別個のベクター上に位置する。いくつかの実施形態では、核酸配列の少なくとも一部は、同じベクター上に位置する。ベクターは、例えば、哺乳動物発現ベクター及びウイルスベクター（例えば、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス及びレンチウイルス由来のもの）からなる群から選択されてもよい。例えば、いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１のｃａＴＣＲポリペプチド鎖と第２のｃａＴＣＲポリペプチド鎖とを含み、ｃａＴＣＲをコードする核酸が、第１のｃａＴＣＲポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列と、第２のｃａＴＣＲ鎖をコードする第２の核酸配列とを含む、二量体である。いくつかの実施形態では、第１の核酸配列は、第１のベクター上に位置し、第２の核酸配列は、第２のベクター上に位置する。いくつかの実施形態では、第１の核酸配列と第２の核酸配列は、同じベクター上に位置する。いくつかの実施形態では、第１の核酸配列は、第１のプロモーターの制御下にあり、第２の核酸配列は、第２のプロモーターの制御下にある。いくつかの実施形態では、第１のプロモーターと第２のプロモーターは、同じ配列を有する。いくつかの実施形態では、第１のプロモーターと第２のプロモーターは、異なる配列を有する。いくつかの実施形態では、第１の核酸配列及び第２の核酸配列は、多重シストロン性（例えば、二重シストロン性）ベクターにおいて、単一プロモーター制御下で、単一の転写物として発現される。例えば、Ｋｉｍ，ＪＨら、ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ６（４）：ｅ１８５５６、２０１１を参照。いくつかの実施形態では、第１のプロモーター、第２のプロモーター及び／又は単一のプロモーターは、誘導性である。いくつかの実施形態では、第１の核酸配列は、宿主細胞（Ｔ細胞など）における発現レベルが、宿主細胞中の第２の核酸配列の発現レベルとほぼ同じである。いくつかの実施形態では、第１の核酸配列は、宿主細胞（Ｔ細胞など）における発現レベルが、宿主細胞における第２の核酸配列の発現レベルの少なくとも約２倍である（例えば、少なくとも約２倍、３倍、４倍、５倍のいずれか、又はもっと多い）。いくつかの実施形態では、第１の核酸配列は、宿主細胞（Ｔ細胞など）における発現レベルが、宿主細胞における第２の核酸配列の発現レベルの約１／２以下である（例えば、約１／２、１／３、１／４、１／５以下のいずれか、又はもっと少ない）。発現は、ｍＲＮＡレベル又はタンパク質レベルで求めることができる。ｍＲＮＡ発現レベルは、ノーザンブロット、定量的ＲＴ−ＰＣＲ、マイクロアレイ解析などを含む種々の周知の方法を用い、核酸から転写されたｍＲＮＡの量を測定することによって求めることができる。タンパク質の発現レベルは、免疫細胞化学染色、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ウェスタンブロット分析、発光アッセイ、質量分析、高速液体クロマトグラフィー��高圧液体クロマトグラフィー−タンデム質量分析などを含む既知の方法によって測定することができる。本明細書に記載される実施形態の特徴は、ｃａＴＣＲをコードする核酸が、３つ以上の核酸配列を含む実施形態（例えば、ｃａＴＣＲが、３つ以上の別個のポリペプチド鎖を含む場合）、又は単一の核酸配列を含む実施形態（例えば、ｃａＴＣＲが、単一のポリペプチド鎖を含む場合）を包含するように採用され、組み合わさせることが可能であることを理解すべきである。
【０２２８】
したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲのいずれかに係る第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とを含む二量体ｃａＴＣＲをコードする核酸であって、（ａ）ｃａＴＣＲの第１のポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列と、（ｂ）ｃａＴＣＲの第２のポリペプチド鎖をコードする第２の核酸配列とを含み、第１の核酸配列が、第１のベクター（例えば、レンチウイルスベクター）上に位置し、第１のプロモーターに作動可能に接続し、第２の核酸配列が、第２のベクター（例えば、レンチウイルスベクター）上に位置し、第２のプロモーターに作動可能に接続する、核酸が提供される。いくつかの実施形態では、第１のプロモーターと第２のプロモーターは、同じ配列を有する。いくつかの実施形態では、第１のプロモーターと第２のプロモーターは、異なる配列を有する。いくつかの実施形態では、第１のプロモーター及び／又は第２のプロモーターは、誘導性である。いくつかの実施形態では、第１の核酸配列は、宿主細胞（Ｔ細胞など）における発現レベルが、宿主細胞における第２の核酸配列の発現レベルとほぼ同じである。いくつかの実施形態では、第１の核酸配列は、宿主細胞（Ｔ細胞など）における発現レベルが、宿主細胞における第２の核酸配列の発現レベルの少なくとも約２倍である（例えば、少なくとも約２倍、３倍、４倍、５倍のいずれか、又はもっと多い）。いくつかの実施形態では、第１の核酸配列は、宿主細胞（Ｔ細胞など）における発現レベルが、宿主細胞における第２の核酸配列の発現レベルの約１／２以下である（例えば、約１／２、１／３、１／４、１／５以下のいずれか、又はもっと少ない）。いくつかの実施形態では、第１のベクター及び／又は第２のベクターは、ウイルスベクター（例えば、レンチウイルスベクター）である。
【０２２９】
いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクター）であって、（ａ）ｃａＴＣＲの第１のポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列に作動可能に接続した第１のプロモーターと、（ｂ）ｃａＴＣＲの第２のポリペプチド鎖をコードする第２の核酸配列に作動可能に接続した第２のプロモーターとを含む、本明細書に記載のｃａＴＣＲのいずれかに係る第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とを含む二量体ｃａＴＣＲをコードする核酸を含む、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、第１のプロモーターと第２のプロモーターは、同じ配列を有する。いくつかの実施形態では、第１のプロモーターと第２のプロモーターは、異なる配列を有する。いくつかの実施形態では、第１のプロモーター及び／又は第２のプロモーターは、誘導性である。いくつかの実施形態では、第１の核酸配列は、宿主細胞（Ｔ細胞など）における発現レベルが、宿主細胞における第２の核酸配列の発現レベルとほぼ同じである。いくつかの実施形態では、第１の核酸配列は、宿主細胞（Ｔ細胞など）における発現レベルが、宿主細胞における第２の核酸配列の発現レベルの少なくとも約２倍である（例えば、少なくとも約２倍、３倍、４倍、５倍のいずれか、又はもっと多い）。いくつかの実施形態では、第１の核酸配列は、宿主細胞（Ｔ細胞など）における発現レベルが、宿主細胞における第２の核酸配列の発現レベルの約１／２以下である（例えば、約１／２、１／３、１／４、１／５以下のいずれか、又はもっと少ない）。いくつかの実施形態では、ベクターは、ウイルスベクター（例えば、レンチウイルスベクター）である。
【０２３０】
いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクター）であって、本明細書に記載のｃａＴＣＲのいずれかに係る第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とを含む二量体ｃａＴＣＲをコードする核酸を含み、ｃａＴＣＲが、（ａ）ｃａＴＣＲの第１のポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列と、（ｂ）ｃａＴＣＲの第２のポリペプチド鎖をコードする第２の核酸配列とを含み、第１の核酸配列と第２の核酸配列が、単一のプロモーターの制御下にある、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、プロモーターは、第１の核酸配列の５’末端に作動可能に接続し、第１の核酸配列には、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、及び第１の核酸配列の３’末端を第２の核酸配列の５’に接続する自己切断型２Ａペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２Ａ又はＦ２Ａ）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１の核酸配列と第２の核酸配列が、プロモーター制御下、単一のＲＮＡとして転写される。いくつかの実施形態では、プロモーターは、第２の核酸配列の５’末端に作動可能に接続し、第２の核酸配列には、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、及び第２の核酸配列の３’末端を第１の核酸配列の５’に接続する自己切断型２Ａペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２Ａ又はＦ２Ａ）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１の核酸配列と第２の核酸配列が、プロモーター制御下、単一のＲＮＡとして転写される。いくつかの実施形態では、プロモーターは、誘導性である。いくつかの実施形態では、ベクターは、ウイルスベクター（例えば、レンチウイルスベクター）である。
【０２３１】
遺伝子を細胞に導入し、発現させる方法は、当該技術分野において既知である。発現ベクターの文脈において、ベクターは、当該技術分野における任意の方法により、宿主細胞、例えば、哺乳類、細菌、酵母又は昆虫細胞に容易に導入することができる。例えば、発現ベクターは、物理的、化学的又は生物学的手段によって、宿主細胞に移行することができる。
【０２３２】
ポリヌクレオチドを宿主細胞に導入する物理的な方法としては、リン酸カルシウム沈殿、リポフェクション、粒子衝突、マイクロインジェクション、エレクトロポレーションなどが挙げられる。ベクター及び／又は外因性核酸を含む細胞を産生する方法は、当該技術分野において周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（２００１、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）を参照。いくつかの実施形態では、宿主細胞へのポリヌクレオチドの導入は、リン酸カルシウムによるトランスフェクションによって行われる。
【０２３３】
宿主細胞に目的のポリヌクレオチドを導入するための生物学的方法としては、ＤＮＡ及びＲＮＡベクターの使用が挙げられる。ウイルスベクター、特にレトロウイルスベクターは、哺乳動物（例えば、ヒト）の細胞に遺伝子を挿入するための最も広く使用されている方法となっている。他のウイルスベクターは、レンチウイルス、ポックスウイルス、ヘルペスウイルス１、アデノウイルス及びアデノ随伴ウイルスなどに由来していてもよい。例えば、米国特許第５，３５０，６７４号及び同第５，５８５，３６２号も参照。
【０２３４】
ポリヌクレオチドを宿主細胞に導入するための化学的手段としては、コロイド状分散系、例えば、高分子複合体、ナノカプセル、微小球、ビーズ、水中油エマルションを含む脂質由来の系、ミセル、混合ミセル及びリポソームが挙げられる。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏでの送達ビヒクルとして使用するための例示的なコロイド系は、リポソーム（例えば、人工膜小胞）である。
【０２３５】
非ウイルス送達系が利用される場合、例示的な送達ビヒクルは、リポソームである。脂質製剤の使用は、核酸の宿主細胞への（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏで）導入について想定されている。別の態様では、核酸は、脂質と会合していてもよい。脂質と会合する核酸は、リポソームの水性内側に封入され、リポソームの脂質二重層内に散在し、リポソーム及びオリゴヌクレオチドの両方に会合する接続分子を介してリポソームに接続し、リポソーム内に捕捉され、リポソームと複合体化し、脂質を含有する溶液中に分散し、脂質と混合され、脂質と組み合わせられ、脂質中の懸濁物として含まれ、ミセルと共に含まれるか、又はミセルと複合体化し、又はその他の様式で脂質と会合してもよい。脂質、脂質／ＤＮＡ又は脂質／発現ベクターの会合組成物は、溶液中の任意の特定の構造に限定されない。例えば、これらは、ミセルとして、又は「潰れた」構造を有する二重層構造で存在してもよい。これらはまた、単に溶液中に散在してもよく、場合によっては、大きさ又は形状が均一ではない凝集体を形成してもよい。脂質は、天然に存在し得る脂肪物質又は合成脂質である。例えば、脂質としては、天然に細胞質中に生じる脂肪液滴や、長鎖脂肪族炭化水素及びその誘導体（例えば、脂肪酸、アルコール、アミン、アミノアルコール及びアルデヒド）を含む化合物群が挙げられる。
【０２３６】
外因性核酸を宿主細胞に導入するために使用される方法、又はその他、本発明の阻害剤に細胞をさらす方法に関わらず、宿主細胞中の組換えＤＮＡ配列の存在を確認するために、様々なアッセイを実施することができる。このようなアッセイとしては、例えば、サザンブロット法及びノーザンブロット法、ＲＴ−ＰＣＲ及びＰＣＲなどの当業者に周知の「分子生物学的」アッセイ、「生化学」アッセイ、例えば、免疫学的手法（ＥＬＩＳＡ及ぶウェスタンブロット法）によって、又は本発明の範囲内に含まれる薬剤を同定するための本明細書に記載のアッセイによる、例えば、特定のペプチドの有無を検出するものが挙げられる。
ｃａＴＣＲエフェクター細胞
【０２３７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲのいずれかに係るｃａＴＣＲをその表面上に提示するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）が提供される。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞は、ｃａＴＣＲをコードする核酸を含み、ｃａＴＣＲは、核酸から発現して、エフェクター細胞表面に局在する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、外因的に発現し、エフェクター細胞と組み合わされる。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞は、細胞毒性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞は、ｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットを発現しない。例えば、いくつかの実施形態では、エフェクター細胞はαβＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭは、ＴＣＲδ及びγ鎖に由来する配列を含むか、又は、Ｔ細胞はγδＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭは、ＴＣＲα及びβ鎖に由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞は、ｃａＴＣＲのＴＣＲＤの由来となる内在性ＴＣＲサブユニットのうちの一方又は両方の発現を遮断するか、又は減少させるように改変される。例えば、いくつかの実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲα及び／又はβ鎖の発現を遮断するか、又は減少させるように改変されたαβＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲＤは、ＴＣＲα及びβ鎖に由来する配列を含むか、又は、エフェクター細胞は、ＴＣＲγ及び／又はδ鎖の発現を遮断するか、又は減少させるように改変されたγδＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲＤは、ＴＣＲγ及びδ鎖に由来する配列を含む。遺伝子発現を破壊する細胞の改変としては、例えば、ＲＮＡ干渉（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ）、遺伝子編集（例えば、ＣＲＩＳＰＲ系又はＴＡＬＥＮ系の遺伝子ノックアウト）などを含む、当該技術分野において既知の任意のそのような技術が挙げられる。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞は、キメラ共刺激受容体（ＣＳＲ）を更に含む。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞は、ｃａＴＣＲが介在する免疫応答を増強することが可能な分泌二次エフェクター（ＳＳＥ）を分泌することが可能である。
【０２３８】
例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲのいずれかに係るｃａＴＣＲをコードする核酸を含むエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）であって、ｃａＴＣＲが、核酸から発現し、エフェクター細胞表面に局在化する、エフェクター細胞が提供される。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲをコードする核酸は、ｃａＴＣＲの第１のポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列と、ｃａＴＣＲの第２のポリペプチド鎖をコードする第２の核酸配列とを含む。いくつかの実施形態では、第１の核酸配列は、第１のベクター上に位置し、第２の核酸配列は、第２のベクター上に位置する。いくつかの実施形態では、第１の核酸配列と第２の核酸配列は、同じベクター上に位置する。ベクターは、例えば、哺乳動物発現ベクター及びウイルスベクター（例えば、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス及びレンチウイルス由来のもの）からなる群から選択されてもよい。いくつかの実施形態では、ベクターのうちの１つ以上は、エフェクター細胞の宿主ゲノムに組み込まれる。いくつかの実施形態では、第１の核酸配列は、第１のプロモーターの制御下にあり、第２の核酸配列は、第２のプロモーターの制御下にある。いくつかの実施形態では、第１のプロモーターと第２のプロモーターは、同じ配列を有する。いくつかの実施形態では、第１のプロモーターと第２のプロモーターは、異なる配列を有する。いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸は、単一のプロモーターの制御下にある。いくつかの実施形態では、第１のプロモーター、第２のプロモーター及び／又は単一のプロモーターは、誘導性である。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖の発現は、第２のポリペプチド鎖の発現とほぼ同じである。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖の発現は、第２のポリペプチド鎖の発現の少なくとも約２倍である（例えば、少なくとも約２倍、３倍、４倍、５倍のいずれか、又はもっと多い）。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖の発現は、第２のポリペプチド鎖の発現の約１／２以下である（例えば、約１／２、１／３、１／４、１／５以下のいずれか、又はもっと少ない）。発現は、ｍＲＮＡレベル又はタンパク質レベルで求めることができる。ｍＲＮＡ発現レベルは、ノーザンブロット、定量的ＲＴ−ＰＣＲ、マイクロアレイ解析などを含む種々の周知の方法を用い、核酸から転写されたｍＲＮＡの量を測定することによって求めることができる。タンパク質の発現レベルは、免疫細胞化学染色、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ウェスタンブロット分析、発光アッセイ、質量分析、高速液体クロマトグラフィー、高圧液体クロマトグラフィー−タンデム質量分析などを含む既知の方法によって測定することができる。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞は、細胞毒性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。
【０２３９】
したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲのいずれかに係るｃａＴＣＲをその表面上で発現するｃａＴＣＲエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）であって、ｃａＴＣＲエフェクター細胞が、（ａ）ｃａＴＣＲの第１のポリペプチド鎖をコードする核酸配列に作動可能に接続した第１のプロモーターを含む第１の核酸と、（ｂ）ｃａＴＣＲの第２のポリペプチド鎖をコードする核酸配列に作動可能に接続した第２のプロモーターを含む第２の核酸とを含み、第１のポリペプチド鎖が第１の核酸から発現し、第２のポリペプチド鎖が第２の核酸から発現して、ｃａＴＣＲを形成し、ｃａＴＣＲが、エフェクター細胞の表面に局在する、ｃａＴＣＲエフェクター細胞が提供される。いくつかの実施形態では、第１のプロモーターと第２のプロモーターは、同じ配列を有する。いくつかの実施形態では、第１のプロモーターと第２のプロモーターは、異なる配列を有する。いくつかの実施形態では、第１のプロモーター及び／又は第２のプロモーターは、誘導性である。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖の発現は、第２のポリペプチド鎖の発現とほぼ同じである。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖の発現は、第２のポリペプチド鎖の発現の少なくとも約２倍である（例えば、少なくとも約２倍、３倍、４倍、５倍のいずれか、又はもっと多い）。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖の発現は、第２のポリペプチド鎖の発現の約１／２以下である（例えば、約１／２、１／３、１／４、１／５以下のいずれか、又はもっと少ない）。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞は、ｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットを発現しない。例えば、いくつかの実施形態では、エフェクター細胞はαβＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭは、ＴＣＲδ及びγ鎖に由来する配列を含むか、又は、エフェクター細胞はγδＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭは、ＴＣＲα及びβ鎖に由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞は、ｃａＴＣＲのＴＣＲＤの由来となる内在性ＴＣＲサブユニットのうちの一方又は両方の発現を遮断するか、又は減少させるように改変される。例えば、いくつかの実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲα及び／又はβ鎖の発現を遮断するか、又は減少させるように改変されたαβＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲＤは、ＴＣＲα及びβ鎖に由来する配列を含むか、又は、エフェクター細胞は、ＴＣＲγ及び／又はδ鎖の発現を遮断するか、又は減少させるように改変されたγδＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲＤは、ＴＣＲγ及びδ鎖に由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞は、細胞毒性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ベクターは、エフェクター細胞の宿主ゲノムに組み込まれたウイルスベクター（例えば、レンチウイルスベクター）である。
【０２４０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲのいずれかに係るｃａＴＣＲをその表面上で発現するｃａＴＣＲエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）であって、ｃａＴＣＲエフェクター細胞が、（ａ）ｃａＴＣＲの第１のポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列に作動可能に接続した第１のプロモーターを含む第１のベクターと、（ｂ）ｃａＴＣＲの第２のポリペプチド鎖をコードする第２の核酸配列に作動可能に接続した第２のプロモーターを含む第２のベクターとを含み、第１のポリペプチド鎖が第１の核酸配列から発現し、第２のポリペプチド鎖が第２の核酸配列から発現して、ｃａＴＣＲを形成し、ｃａＴＣＲが、エフェクター細胞の表面に局在する、ｃａＴＣＲエフェクター細胞が提供される。いくつかの実施形態では、第１のプロモーターと第２のプロモーターは、同じ配列を有する。いくつかの実施形態では、第１のプロモーターと第２のプロモーターは、異なる配列を有する。いくつかの実施形態では、第１のプロモーター及び／又は第２のプロモーターは、誘導性である。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖の発現は、第２のポリペプチド鎖の発現とほぼ同じである。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖の発現は、第２のポリペプチド鎖の発現の少なくとも約２倍である（例えば、少なくとも約２倍、３倍、４倍、５倍のいずれか、又はもっと多い）。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖の発現は、第２のポリペプチド鎖の発現の約１／２以下である（例えば、約１／２、１／３、１／４、１／５以下のいずれか、又はもっと少ない）。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞は、ｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットを発現しない。例えば、いくつかの実施形態では、エフェクター細胞はαβＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭは、ＴＣＲδ及びγ鎖に由来する配列を含むか、又は、エフェクター細胞はγδＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭは、ＴＣＲα及びβ鎖に由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞は、ｃａＴＣＲのＴＣＲＤの由来となる内在性ＴＣＲサブユニットのうちの一方又は両方の発現を遮断するか、又は減少させるように改変される。例えば、いくつかの実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲα及び／又はβ鎖の発現を遮断するか、又は減少させるように改変されたαβＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲＤは、ＴＣＲα及びβ鎖に由来する配列を含むか、又は、エフェクター細胞は、ＴＣＲγ及び／又はδ鎖の発現を遮断するか、又は減少させるように改変されたγδＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲＤは、ＴＣＲγ及びδ鎖に由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞は、細胞毒性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第１ベクター及び第２のベクターは、エフェクター細胞の宿主ゲノムに組み込まれたウイルスベクター（例えば、レンチウイルスベクター）である。
【０２４１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲのいずれかに係るｃａＴＣＲをその表面上で発現するｃａＴＣＲエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）であって、ｃａＴＣＲエフェクター細胞が、（ａ）ｃａＴＣＲの第１のポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列に作動可能に接続した第１のプロモーターと、（ｂ）ｃａＴＣＲの第２のポリペプチド鎖をコードする第２の核酸配列に作動可能に接続した第２のプロモーターとを含み、第１のポリペプチド鎖が第１の核酸配列から発現し、第２のポリペプチド鎖が第２の核酸配列から発現して、ｃａＴＣＲを形成し、ｃａＴＣＲが、エフェクター細胞の表面に局在する、ｃａＴＣＲエフェクター細胞が提供される。いくつかの実施形態では、第１のプロモーターと第２のプロモーターは、同じ配列を有する。いくつかの実施形態では、第１のプロモーターと第２のプロモーターは、異なる配列を有する。いくつかの実施形態では、第１のプロモーター及び／又は第２のプロモーターは、誘導性である。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖の発現は、第２のポリペプチド鎖の発現とほぼ同じである。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖の発現は、第２のポリペプチド鎖の発現の少なくとも約２倍である（例えば、少なくとも約２倍、３倍、４倍、５倍のいずれか、又はもっと多い）。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖の発現は、第２のポリペプチド鎖の発現の約１／２以下である（例えば、約１／２、１／３、１／４、１／５以下のいずれか、又はもっと少ない）。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞は、ｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットを発現しない。例えば、いくつかの実施形態では、エフェクター細胞はαβＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭは、ＴＣＲδ及びγ鎖に由来する配列を含むか、又は、エフェクター細胞はγδＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭは、ＴＣＲα及びβ鎖に由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞は、ｃａＴＣＲのＴＣＲＤの由来となる内在性ＴＣＲサブユニットのうちの一方又は両方の発現を遮断するか、又は減少させるように改変される。例えば、いくつかの実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲα及び／又はβ鎖の発現を遮断するか、又は減少させるように改変されたαβＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲＤは、ＴＣＲα及びβ鎖に由来する配列を含むか、又は、エフェクター細胞は、ＴＣＲγ及び／又はδ鎖の発現を遮断するか、又は減少させるように改変されたγδＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲＤは、ＴＣＲγ及びδ鎖に由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞は、細胞毒性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第１ベクター及び第２のベクターは、エフェクター細胞の宿主ゲノムに組み込まれたウイルスベクター（例えば、レンチウイルスベクター）である。
【０２４２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲのいずれかに係るｃａＴＣＲをその表面上で発現するｃａＴＣＲエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）であって、ｃａＴＣＲエフェクター細胞が、（ａ）ｃａＴＣＲの第１のポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列に作動可能に接続した第１のプロモーターと、（ｂ）ｃａＴＣＲの第２のポリペプチド鎖をコードする第２の核酸配列に作動可能に接続した第２のプロモーターとを含み、第１のポリペプチド鎖が第１の核酸配列から発現し、第２のポリペプチド鎖が第２の核酸配列から発現して、ｃａＴＣＲを形成し、ｃａＴＣＲが、エフェクター細胞の表面に局在する、ｃａＴＣＲエフェクター細胞が提供される。いくつかの実施形態では、第１のプロモーターと第２のプロモーターは、同じ配列を有する。いくつかの実施形態では、第１のプロモーターと第２のプロモーターは、異なる配列を有する。いくつかの実施形態では、第１のプロモーター及び／又は第２のプロモーターは、誘導性である。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖の発現は、第２のポリペプチド鎖の発現とほぼ同じである。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖の発現は、第２のポリペプチド鎖の発現の少なくとも約２倍である（例えば、少なくとも約２倍、３倍、４倍、５倍のいずれか、又はもっと多い）。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖の発現は、第２のポリペプチド鎖の発現の約１／２以下である（例えば、約１／２、１／３、１／４、１／５以下のいずれか、又はもっと少ない）。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞は、ｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットを発現しない。例えば、いくつかの実施形態では、エフェクター細胞はαβＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭは、ＴＣＲδ及びγ鎖に由来する配列を含むか、又は、エフェクター細胞はγδＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭは、ＴＣＲα及びβ鎖に由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞は、ｃａＴＣＲのＴＣＲＤの由来となる内在性ＴＣＲサブユニットのうちの一方又は両方の発現を遮断するか、又は減少させるように改変される。例えば、いくつかの実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲα及び／又はβ鎖の発現を遮断するか、又は減少させるように改変されたαβＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲＤは、ＴＣＲα及びβ鎖に由来する配列を含むか、又は、エフェクター細胞は、ＴＣＲγ及び／又はδ鎖の発現を遮断するか、又は減少させるように改変されたγδＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲＤは、ＴＣＲγ及びδ鎖に由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞は、細胞毒性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。
【０２４３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲのいずれかに係るｃａＴＣＲをその表面上で発現するｃａＴＣＲエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）であって、ｃａＴＣＲエフェクター細胞が、（ａ）ｃａＴＣＲの第１のポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列と、（ｂ）ｃａＴＣＲの第２のポリペプチド鎖をコードする第２の核酸配列とを含み、第１の核酸配列と第２の核酸配列が、単一のプロモーターの制御下にあり、第１のポリペプチド鎖が第１の核酸配列から発現し、第２のポリペプチド鎖が第２の核酸配列から発現して、ｃａＴＣＲを形成し、ｃａＴＣＲが、エフェクター細胞の表面に局在する、ｃａＴＣＲエフェクター細胞が提供される。いくつかの実施形態では、プロモーターは、第１の核酸配列の５’末端に作動可能に接続し、第１の核酸配列には、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、及び第１の核酸配列の３’末端を第２の核酸配列の５’に接続する自己切断型２Ａペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２Ａ又はＦ２Ａ）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１の核酸配列と第２の核酸配列が、プロモーター制御下、単一のＲＮＡとして転写される。いくつかの実施形態では、プロモーターは、第２の核酸配列の５’末端に作動可能に接続し、第２の核酸配列には、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、及び第２の核酸配列の３’末端を第１の核酸配列の５’に接続する自己切断型２Ａペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２Ａ又はＦ２Ａ）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１の核酸配列と第２の核酸配列が、プロモーター制御下、単一のＲＮＡとして転写される。いくつかの実施形態では、プロモーターは、誘導性である。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞は、ｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットを発現しない。例えば、いくつかの実施形態では、エフェクター細胞はαβＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭは、ＴＣＲδ及びγ鎖に由来する配列を含むか、又は、エフェクター細胞はγδＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭは、ＴＣＲα及びβ鎖に由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞は、ｃａＴＣＲのＴＣＲＤの由来となる内在性ＴＣＲサブユニットのうちの一方又は両方の発現を遮断するか、又は減少させるように改変される。例えば、いくつかの実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲα及び／又はβ鎖の発現を遮断するか、又は減少させるように改変されたαβＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲＤは、ＴＣＲα及びβ鎖に由来する配列を含むか、又は、エフェクター細胞は、ＴＣＲγ及び／又はδ鎖の発現を遮断するか、又は減少させるように改変されたγδＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲＤは、ＴＣＲγ及びδ鎖に由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞は、細胞毒性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ベクターは、エフェクター細胞の宿主ゲノムに組み込まれたウイルスベクター（例えば、レンチウイルスベクター）である。
【０２４４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲのいずれかに係るｃａＴＣＲをその表面上で発現するｃａＴＣＲエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）であって、ｃａＴＣＲエフェクター細胞が、（ａ）ｃａＴＣＲの第１のポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列と、（ｂ）ｃａＴＣＲの第２のポリペプチド鎖をコードする第２の核酸配列とを含む、宿主ゲノムに組み込まれたレンチウイルスベクターを含み、第１の核酸配列と第２の核酸配列が、単一のプロモーターの制御下にあり、第１のポリペプチド鎖が第１の核酸配列から発現し、第２のポリペプチド鎖が第２の核酸配列から発現して、ｃａＴＣＲを形成し、ｃａＴＣＲが、エフェクター細胞の表面に局在する、ｃａＴＣＲエフェクター細胞が提供される。いくつかの実施形態では、第１の核酸配列の５’末端に作動可能に接続したプロモーターが存在し、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、及び第１の核酸配列の３’末端を第２の核酸配列の５’末端に接続する自己切断型２Ａペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２Ａ又はＦ２Ａ）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１の核酸配列と第２の核酸配列が、プロモーター制御下、単一のＲＮＡとして転写される。いくつかの実施形態では、第２の核酸配列の５’末端に作動可能に接続したプロモーターが存在し、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、及び第２の核酸配列の３’末端を第１の核酸配列の５’末端に接続する自己切断型２Ａペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２Ａ又はＦ２Ａ）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１の核酸配列と第２の核酸配列が、プロモーター制御下、単一のＲＮＡとして転写される。いくつかの実施形態では、プロモーターは、誘導性である。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞は、ｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットを発現しない。例えば、いくつかの実施形態では、エフェクター細胞はαβＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭは、ＴＣＲδ及びγ鎖に由来する配列を含むか、又は、エフェクター細胞はγδＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭは、ＴＣＲα及びβ鎖に由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞は、ｃａＴＣＲのＴＣＲＤの由来となる内在性ＴＣＲサブユニットのうちの一方又は両方の発現を遮断するか、又は減少させるように改変される。例えば、いくつかの実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲα及び／又はβ鎖の発現を遮断するか、又は減少させるように改変されたαβＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲＤは、ＴＣＲα及びβ鎖に由来する配列を含むか、又は、エフェクター細胞は、ＴＣＲγ及び／又はδ鎖の発現を遮断するか、又は減少させるように改変されたγδＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲＤは、ＴＣＲγ及びδ鎖に由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞は、細胞毒性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。
ｃａＴＣＲ、ＣＳＲ及びＳＳＥの調製
【０２４５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲ、ＣＳＲ及びＳＳＥのいずれかによれば、抗原結合モジュールは、モノクローナル抗体由来の配列を含むＦａｂ様抗原結合モジュールを含む。いくつかの実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、モノクローナル抗体からのＶＨ、ＣＨ１、ＶＬ及びＣＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、モノクローナル抗体由来の配列を含むＦｖ又はｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、モノクローナル抗体に由来する１つ以上のＦａｂ、Ｆｖ及びｓｃＦｖを含む二重特異性融合ドメインを含む。モノクローナル抗体は、例えば、Ｋｏｈｌｅｒ及びＭｉｌｓｔｅｉｎ、Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５（１９７５）及びＳｅｒｇｅｅｖａら、Ｂｌｏｏｄ、１１７（１６）：４２６２−４２７２に記載されるような、例えば、ハイブリドーマ法を用いて調製することができる。
【０２４６】
ハイブリドーマ法では、ハムスター、マウス、又は他の適切な宿主動物を、典型的には、免疫剤を用いて免疫し、免疫剤に特異的に結合する抗体を産生するか、又は産生することが可能なようにリンパ球を導く。あるいは、リンパ球をｉｎ  ｖｉｔｒｏで免疫してもよい。免疫剤は、目的のタンパク質のポリペプチド又は融合タンパク質、又は少なくとも２つの分子を含む複合体、例えば、ペプチドとＭＨＣタンパク質とを含む複合体を含んでいてもよい。一般に、ヒト由来の細胞が望まれる場合は、末梢血リンパ球（「ＰＢＬ」）を使用し、又は、供給源としてヒト以外の哺乳類が望まれる場合は、脾臓細胞又はリンパ節細胞を使用する。その後、リンパ球を、好適な融合剤、例えばポリエチレングリコールを用いて不死化細胞株と融合し、ハイブリドーマ細胞を形成する。例えば、Ｇｏｄｉｎｇ、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、１９８６）、ｐｐ．５９−１０３を参照。不死化細胞株は、通常は、形質転換された哺乳類細胞、特に、げっ歯類、ウシ及びヒト由来の骨髄腫細胞である。通常は、ラット又はマウス骨髄腫細胞株を用いる。ハイブリドーマ細胞を、適切な培地中で培養してもよく、当該培地は、好ましくは、融合していない不死化細胞の増殖又は生存を阻害する１つ以上の物質を含む。例えば、親細胞が、酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴ又はＨＰＲＴ）を欠損している場合、ハイブリドーマ用の培養培地は、典型的には、ヒポキサンチン、アミノプテリン及びチミジンを含み（ＨＡＴ培地）、この培地は、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の増殖を抑制する。
【０２４７】
いくつかの実施形態では、不死化細胞株は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による抗体の安定な高レベル発現を補助し、ＨＡＴ培地などの培地に感受性である。いくつかの実施形態では、不死化細胞株は、マウス骨髄腫株であり、例えば、Ｓａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ（サンディエゴ、カリフォルニア）及びＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（マナサッス、バージニア）から得ることができる。ヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株もまた、ヒトモノクローナル抗体の産生について記載されている。Ｋｏｚｂｏｒ、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１３３：３００１（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９８７）、ｐｐ．５１−６３。
【０２４８】
次いで、ハイブリドーマ細胞を培養する培養培地を、ポリペプチドに対して指向するモノクローナル抗体の存在についてアッセイすることができる。ハイブリドーマ細胞によって産生されるモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降法により、又は、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）又は酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）などのｉｎ  ｖｉｔｒｏ結合アッセイによって求めることができる。このような技術及びアッセイは、当該技術分野において既知である。モノクローナル抗体の結合親和性は、例えば、Ｍｕｎｓｏｎ及びＰｏｌｌａｒｄ、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、１０７：２２０（１９８０）のＳｃａｔｃｈａｒｄ分析によって決定されてもよい。
【０２４９】
所望のハイブリドーマ細胞を同定した後、限界希釈法によってクローンをサブクローニングし、標準的な方法により増殖させることができる。Ｇｏｄｉｎｇ（前掲）。この目的のための好適な培地としては、例えば、ダルベッコ変法イーグル培地及びＲＰＭＩ−１６４０培地が挙げられる。あるいは、ハイブリドーマ細胞を哺乳動物体内の腹水などといったｉｎ  ｖｉｖｏで増殖させてもよい。
【０２５０】
サブクローンによって分泌されたモノクローナル抗体は、例えば、プロテインＡ−セファロース、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、又はアフィニティクロマトグラフィーなどの従来の免疫グロブリン精製手順によって、培養培地又は腹水液から単離されるか、又は精製されてもよい。
【０２５１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるｃａＴＣＲ、ＣＳＲ及びＳＳＥのいずれかによれば、抗原結合モジュールは、抗体部分ライブラリー（ｓｃＦｖ又はＦａｂフラグメントを提示するファージライブラリーなど）から選択されるクローンに由来する配列を含む抗体部分である。クローンは、所望の活性又は複数の活性を有する抗体フラグメントのコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることによって同定されてもよい。例えば、ファージディスプレイライブラリーを生成し、所望の結合特性を有する抗体について係るライブラリーをスクリーニングするための様々な方法が当該技術分野において既知である。このような方法は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎら編集、Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、Ｎ．Ｊ．、２００１）にまとめられており、更に、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４；Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８（１９９１）；Ｍａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９２）；Ｍａｒｋｓ及びＢｒａｄｂｕｒｙ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２４８：１６１−１７５（Ｌｏ編集、Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、Ｎ．Ｊ．、２００３）；Ｓｉｄｈｕら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９−３１０（２００４）；Ｌｅｅら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３−１０９３（２００４）；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０１（３４）：１２４６７−１２４７２（２００４）；及びＬｅｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８４（１−２）：１１９−１３２（２００４）に記載されている。
【０２５２】
特定のファージディスプレイ方法では、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーを、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって別々にクローニングし、ファージライブラリーにおいて無作為に再結合し、次いで、Ｗｉｎｔｅｒら、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１２：４３３−４５５（１９９４）に記載されるように、抗原結合ファージについてスクリーニングしてもよい。ファージは、典型的には、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）フラグメント又はＦａｂフラグメントのいずれかとして抗体フラグメントを提示する。免疫源からのライブラリーは、ハイブリドーマを構築する必要なく、免疫原に対して高親和性の抗体を提供する。あるいは、ナイーブ型レパートリーを（例えば、ヒトから）クローン化して、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら、ＥＭＢＯ  Ｊ、１２：７２５−７３４（１９９３）に記載されているような免疫を行わずに、広範囲の非自己抗原及び自己抗原に対し単一の抗体源を提供することができる。最後に、ナイーブライブラリーはまた、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ及びＷｉｎｔｅｒ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２７：３８１−３８８（１９９２）に記載されているように、幹細胞からの再配置されていないＶ遺伝子をクローニングし、ランダム配列を含むＰＣＲプライマーを用い、高度に可変性のＣＤＲ３領域をコードし、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの再配置を達成することによって、合成することができる。ヒト抗体ファージライブラリーを記載する特許刊行物としては、例えば、米国特許第５，７５０，３７３号、及び米国特許出願公開第２００５／００７９５７４号、同第２００５／０１１９４５５号、同第２００５／０２６６０００号、同第２００７／０１１７１２６号、同第２００７／０１６０５９８号、同第２００７／０２３７７６４号、同第２００７／０２９２９３６号及び同第２００９／０００２３６０号が含まれる。
【０２５３】
抗体部分は、標的抗原（ペプチド／ＭＨＣクラスＩ／ＩＩ複合体又は細胞表面抗原など）に特異的な抗体のライブラリーをスクリーニングするために、ファージディスプレイを使用して調製することができる。ライブラリーは、少なくとも１×１０９（例えば、少なくとも約１×１０９、２．５×１０９、５×１０９、７．５×１０９、１×１０１０、２．５×１０１０、５×１０１０、７．５×１０１０、又は１×１０１１のいずれか）の多様性を有するヒトｓｃＦｖファージディスプレイライブラリーであってもよい。いくつかの実施形態では、ライブラリーは、ヒトＰＭＢＣから抽出されたＤＮＡ及び健康なドナーの脾臓から構築されたナイーブ型ヒトライブラリーであり、全てのヒト重鎖及び軽鎖サブファミリーを包含する。いくつかの実施形態では、ライブラリーは、自己免疫疾患患者、癌患者及び感染性疾患を有する患者などの様々な疾患を有する患者から単離されたＰＢＭＣから抽出されたＤＮＡから構築されたナイーブ型ヒトライブラリーである。いくつかの実施形態では、ライブラリーは、半合成ヒトライブラリーであり、重鎖ＣＤＲ３は、完全にランダム化され、全てのアミノ酸（システイン以外）は、任意の所与の位置に存在する可能性が等しくなる（例えば、Ｈｏｅｔ，Ｒ．Ｍ．ら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３（３）：３４４−３４８、２００５を参照）。いくつかの実施形態では、半合成ヒトライブラリーの重鎖ＣＤＲ３は、約５〜約２４（例えば、約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３又は２４のいずれか）のアミノ酸長を有する。いくつかの実施形態では、ライブラリーは、完全合成ファージディスプレイライブラリーである。いくつかの実施形態では、ライブラリーは、ヒト以外のファージディスプレイライブラリーである。
【０２５４】
高親和性で標的抗原に結合するファージクローンは、固体支持体（例えば、溶液パニングのためのビーズ又は細胞パニングのための哺乳動物細胞など）に結合させた標的抗原に対しファージを結合させて、その後、結合していないファージを除去し、特異的に結合したファージを溶出することを反復して選択することができる。溶液パニングの一例では、標的抗原は、固体支持体への固定のためにビオチン化されてもよい。ビオチン化標的抗原は、ファージライブラリー及び固体支持体（例えば、ストレプトアビジン標識したＤｙｎａｂｅａｄｓ  Ｍ−２８０）と混合され、次いで、標的抗原ファージビーズ複合体が単離される。次いで、結合したファージクローンを溶出させ、発現及び精製のために、Ｅ．ｃｏｌｉ  ＸＬ１−Ｂｌｕｅなどの適切な宿主細胞を感染させる。細胞パニングの一例では、ＡＦＰペプチドを保有するＴ２細胞（ＴＡＰ欠乏、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１＋リンパ芽細胞株）をファージライブラリーと混合した後、細胞を集め、結合したクローンを溶出させ、発現及び精製のために適切な宿主細胞を感染させるために使用される。パニングは、標的抗原に特異的に結合するファージクローンを濃縮するために、溶液パニング、細胞パニング、又はそれらの両方の組み合わせのいずれかで、複数回（２、３、４、５、６回、又はもっと多くのいずれか）行うことができる。濃縮されたファージクローンは、例えば、ＥＬＩＳＡ及びＦＡＣＳを含め、当該技術分野において既知の任意の方法による標的抗原への特異的結合について試験することができる。
ヒト及びヒト化抗体部分
【０２５５】
ｃａＴＣＲ、ＣＳＲ及びＳＳＥ抗体部分は、ヒトであってもよく、又はヒト化されたものであってもよい。ヒト以外（例えば、マウス）の抗体部分をヒト化させたものは、典型的にはヒト以外の免疫グロブリン由来の配列を最小限で含む、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖又はそのフラグメント（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、又はその他抗体の抗原結合サブ配列）である。ヒト化抗体部分としては、レシピエントのＣＤＲに由来する残基が、所望の特異性、親和性及び能力を有するマウス、ラット又はウサギなどのヒト以外の種のＣＤＲ（ドナー抗体）に由来する残基と置き換わった、ヒト免疫グロブリン、ヒト免疫グロブリン鎖、又はこれらのフラグメント（レシピエント抗体）が挙げられる。場合によっては、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基が、対応するヒト以外の残基で置換される。ヒト化抗体の部分はまた、レシピエント抗体部分又は移入されたＣＤＲ又はフレームワーク配列のいずれにおいても見られない残基も含んでよい。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含んでいてもよく、ＣＤＲ領域の全て又は実質的に全ては、非ヒト免疫グロブリンのものと対応し、ＦＲ領域の全て又は実質的に全ては、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。例えば、Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３３２：３２３−３２９（１９８８）；Ｐｒｅｓｔａ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．、２：５９３−５９６（１９９２）を参照。
【０２５６】
一般的に、ヒト化抗体部分は、ヒト以外の供給源から導入された１つ以上のアミノ酸残基を有する。これらのヒト以外のアミノ酸残基は、典型的には「移入」可変ドメインから取り込まれた「移入」残基と呼ばれることが多い。いくつかの実施形態によれば、ヒト化は、ヒト抗体部分の対応する配列のためにげっ歯類ＣＤＲ又はＣＤＲ配列を置換することにより、Ｗｉｎｔｅｒ及び共同研究者らの方法（Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３２１：５２２−５２５（１９８６）Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３３２：３２３−３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３９：１５３４−１５３６（１９８８））に本質的に従って行うことができる。したがって、このような「ヒト化」抗体部分は、抗体部分（米国特許第４，８１６，５６７号）であり、加工を受けていないヒト可変ドメインより実質的に小さい部分が、非ヒト種由来の対応する配列によって置換されている。実際には、ヒト化抗体部分は、典型的には、いくつかのＣＤＲ残基及び可能ならいくつかのＦＲ残基が、げっ歯類抗体の類似部位に由来する残基で置換された、ヒト抗体部分である。
【０２５７】
ヒト化の代替として、ヒト抗体部分を作成してもよい。例えば、今では、免疫によって、内因性免疫グロブリンを産生せずにヒト抗体の完全なレパートリーを産生可能なトランスジェニック動物（例えば、マウス）を作製可能である。例えば、キメラ及び生殖系変異マウスの抗体重鎖連結領域（ＪＨ）遺伝子のホモ結合型欠失により、内因性抗体の産生を完全に阻害することが記載されている。ヒト生殖系免疫グロブリン遺伝子アレイをこのような生殖系変異マウスに導入すると、抗原チャレンジ時にヒト抗体が産生する。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ、９０：２５５１（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３６２：２５５−２５８（１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎら、Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、７：３３（１９９３）；米国特許第５，５４５，８０６号、同第５，５６９，８２５号、同第５，５９１，６６９号；同第５，５４５，８０７号及び国際公開第９７／１７８５２号を参照。あるいは、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を、内因性免疫グロブリン遺伝子が部分的に又は完全に不活性化されている、トランスジェニック動物、例えば、マウスに導入することによって、ヒト抗体を作製することができる。チャレンジ時、遺伝子再配置、アセンブリ及び抗体レパートリーなどの全ての点において、ヒトで見られるものとよく似たヒト抗体産生が観察される。この手法は、例えば、米国特許第５，５４５，８０７号；同第５，５４５，８０６号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；及び同第５，６６１，０１６号、及びＭａｒｋｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０：７７９−７８３（１９９２）；Ｌｏｎｂｅｒｇら、Ｎａｔｕｒｅ、３６８：８５６−８５９（１９９４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ、Ｎａｔｕｒｅ、３６８：８１２−８１３（１９９４）；Ｆｉｓｈｗｉｌｄら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１４：８４５−８５１（１９９６）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１４：８２６（１９９６）；Ｌｏｎｂｅｒｇ及びＨｕｓｚａｒ、Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１３：６５−９３（１９９５）に記載される。
【０２５８】
ヒト抗体はまた、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの活性化Ｂ細胞（米国特許第５，５６７，６１０号及び同第５，２２９，２７５号を参照）によって、又はファージディスプレイライブラリーを含む当該技術分野において既知の様々な技術を使用することによって生成されてもよい。Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ及びＷｉｎｔｅｒ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２７：３８１（１９９１）；Ｍａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２２：５８１（１９９１）を参照）。Ｃｏｌｅら及びＢｏｅｒｎｅｒらの技術もまた、ヒトモノクローナル抗体の調製に利用可能である。Ｃｏｌｅら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ、Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ、ｐ．７７（１９８５）及びＢｏｅｒｎｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４７（１）：８６−９５（１９９１）。
多様体
【０２５９】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗原結合モジュールのアミノ酸配列の多様体が想定される。例えば、多様体は、抗原結合モジュールの結合親和性及び／又はその他の生物学的特性を改善するのに望ましい場合がある。抗原結合モジュールのアミノ酸配列多様体は、抗原結合モジュールをコードするヌクレオチド配列に適切な修飾を導入することによって、又はペプチド合成によって、調製することができる。このような改変としては、例えば、抗原結合モジュールのアミノ酸配列内の残基の欠失及び／又は挿入及び／又は置換が挙げられる。最終構築物が所望の特徴（例えば、抗原結合）を有するように最終構築物に達するように、欠失、挿入及び置換の任意の組み合わせが行われてもよい。
【０２６０】
いくつかの実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換を有する抗原結合モジュール変異体が提供される。置換変異導入の目的の部位としては、抗体部分のＨＶＲ及びＦＲが挙げられる。アミノ酸置換は、例えば、抗原結合の保持／改善、又は免疫原性低減などといった所望の活性についてスクリーニングされた、対象の抗原結合モジュール及び生成物に導入することができる。
【０２６１】
保存的置換を以下の表３に示す。
【表３】
2020517287.tif 000005
【０２６２】
アミノ酸は、共通の側鎖特性に従って、異なるクラスに分類されてもよい。
ａ．疎水性：Ｎｏｒｌｅｕｃｉｎｅ、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
ｂ．中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
ｃ．酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
ｄ．塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
ｅ．鎖の向きに影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ
ｆ．芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【０２６３】
非保存的置換は、これらの分類のうち１つを別の分類のものに交換することを伴う。
【０２６４】
例示的な置換多様体は、親和性成熟した抗体部分であり、例えば、ファージディスプレイをベースとした親和性成熟技術を使用し、簡便に生成することができる。簡潔に述べると、１つ以上のＣＤＲ残基に変異を導入し、ファージ上に表示された当該多様体抗体部分を、特定の生体活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングする。例えば、抗体部分の親和性を改善するために、改変（例えば、置換）をＨＶＲで作製することができる。このような改変は、ＨＶＲ「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟プロセス中に高頻度で変異を受けるコドンによってコードされる残基（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７：１７９−１９６（２００８）を参照）、及び／又は特異性決定残基（ＳＤＲ）でなされてもよく、得られた多様体ＶＨ又はＶＬは、結合親和性について試験される。二次ライブラリーを構築し、再選択することによる親和性成熟は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎら編集、Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ（２００１））に記載されている。
【０２６５】
親和性成熟のいくつかの実施形態では、多様性は、多様な方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、連鎖シャッフル、又はオリゴヌクレオチド指向突然変異誘発）のいずれかによって、成熟のために選択された可変遺伝子に導入される。次いで、二次ライブラリーが作成される。次いで、このライブラリーをスクリーニングし、所望の親和性を有する任意の抗体部分多様体を同定する。多様性を導入するための別の方法は、いくつかのＨＶＲ残基（例えば、一度に４〜６残基）がランダム化される、ＨＶＲを対象とする手法を伴う。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング変異導入又はモデリングを用いて特異的に同定されてもよい。ＣＤＲ−Ｈ３及びＣＤＲ−Ｌ３は、特に標的とされることが多い。
【０２６６】
いくつかの実施形態では、置換、挿入又は欠失は、このような改変により抗体部分の抗原結合能を実質的に低下させないようにして、１つ以上のＨＶＲ内で行われてもよい。例えば、結合親和性を実質的に低下させない保存的改変（例えば、本明細書で提供される保存的置換）が、ＨＶＲにおいて行われてもよい。このような変更は、ＨＶＲ「ホットスポット」又はＳＤＲの外側にあってもよい。上に提供された多様体ＶＨ及びＶＬ配列のいくつかの実施形態では、各ＨＶＲは、変更されていないか、又は１つ以下、２つ又は３つ以下のアミノ酸置換を含む。
【０２６７】
変異導入のために標的とされ得る抗原結合モジュールの残基又は領域の同定に有用な方法は、「アラニンスキャニング変異導入」と呼ばれ、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ及びＷｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１−１０８５に記載されている。この方法では、標的残基又は標的残基群（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ及びｇｌｕなどの帯電した残基）が同定され、中性又は負に帯電したアミノ酸（例えば、アラニン又はポリアラニン）によって置き換えられ、抗原結合モジュールと抗原との相互作用が影響を受けているかどうかを判定する。更なる置換は、初期の置換に対する機能的感受性を示すアミノ酸位置に導入されてもよい。あるいは、又更に、抗原−抗原−結合モジュール複合体の結晶構造を決定し、抗原結合モジュールと抗原との間の接触点を同定することができる。このような接触残基及び隣接する残基は、置換の候補として標的とされてもよく、又は除外されてもよい。多様体をスクリーニングし、所望の特性を含有するかどうかを判定してもよい。
【０２６８】
アミノ酸配列挿入として、１つの残基から１００以上の残基を含むポリペプチドまで長さに幅がある、アミノ及び／又はカルボキシル末端融合、並びに、単一若しくは複数のアミノ酸残基の配列内挿入が挙げられる。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗原結合モジュールが挙げられる。抗原結合モジュールのその他の挿入多様体としては、酵素に対する抗原結合モジュールのＮ末端又はＣ末端への融合（例えば、ＡＤＥＰＴ向け）、又は抗原結合モジュールの血清半減期を延長するポリペプチドが挙げられる。
誘導体
【０２６９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるｃａＴＣＲｓのいずれかに係るｃａＴＣＲ、本明細書に記載されるＣＳＲのいずれかに係るＣＳＲ、及び／又は本明細書に記載のＳＳＥのいずれかに係るＳＳＥは、当該技術分野において既知であり、容易に入手可能な更なる非タンパク質性部分を含有するように更に改変されてもよい。ｃａＴＣＲ及び／又はＣＳＲ及び／又はＳＳＥの誘導体化に好適な部分としては、水溶性ポリマーが挙げられるが、これに限定されない。水溶性ポリマーの非限定例としては、限定されないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマー又はランダムコポリマーのいずれか）、及びデキストラン又はポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロプロピレン（propropylene）グリコールホモポリマー、プロリプロピレン（prolypropylene）オキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、及びそれらの混合物が挙げられる。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、その水中安定性から、製造における利点を有し得る。ポリマーは、任意の分子量であってよく、分枝型又は非分枝型であってよい。ｃａＴＣＲ及び／又はＣＳＲ及び／又はＳＳＥに接続するポリマーの数は、様々であってもよく、１つより多いポリマーが接続する場合、ポリマーは、同じ分子であってもよく、又は異なる分子であってもよい。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数及び／又は種類は、改良されるｃａＴＣＲ及び／又はＣＳＲ及び／又はＳＳＥの特定の性質又は機能、ｃａＴＣＲ及び／又はＣＳＲ及び／又はＳＳＥ誘導体が、所定の条件などで治療に使用されるかどうかなどを含むがこれらに限定されない検討事項に基づいて決定することができる。
【０２７０】
いくつかの実施形態では、放射線への曝露によって選択的に加熱され得るｃａＴＣＲ及び／又はＣＳＲ及び／又はＳＳＥ及び非タンパク質性部分の標識が提供される。いくつかの実施形態では、非タンパク質性部分は、カーボンナノチューブである（Ｋａｍら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０２：１１６００−１１６０５（２００５））。放射線は、任意の波長を有するものであってもよく、限定されないが、通常の細胞を害しないが、ｃａＴＣＲ−及び／又はＣＳＲ−及び／又はＳＳＥ−非タンパク質性部分の近位の細胞が死滅する温度に非タンパク質性部分を加熱する波長が挙げられる。
ｃａＴＣＲエフェクター細胞の調製
【０２７１】
本発明は、一態様では、ｃａＴＣＲを発現するエフェクター細胞（例えば、リンパ球、例えばＴ細胞）を提供する。ｃａＴＣＲを発現するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）（ｃａＴＣＲエフェクター細胞、例えば、ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞）を調製する例示的な方法が、本明細書で提供される。
【０２７２】
いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞（ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞など）は、標的抗原（例えば、疾患関連抗原）に特異的に結合するｃａＴＣＲ（例えば、本明細書に記載のｃａＴＣＲのいずれか）をコードする１つ以上の核酸（例えば、レンチウイルスベクターを含む）をエフェクター細胞に導入することによって生成することができる。エフェクター細胞への１つ以上の核酸の導入は、核酸について本明細書に記載される技術など、当該技術分野において既知の技術を使用して達成することができる。いくつかの実施形態では、本発明のｃａＴＣＲエフェクター細胞（例えば、ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞）は、ｉｎ  ｖｉｖｏで複製することができ、その結果、標的抗原（例えば、癌又はウイルス感染）の発現に関連する疾患の持続的な制御をもたらし得る、長期持続性をもたらす。
【０２７３】
いくつかの実施形態では、本発明は、例えば癌又はウイルス感染を含む標的抗原の発現に関連する疾患及び／又は障害（本明細書では、「標的抗原陽性」又は「ＴＡ陽性」疾患又は障害とも呼ばれる）を発症するか、又は発症するリスクがある患者の治療のために、本明細書に記載のｃａＴＣＲのいずれかに係る標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲを発現する遺伝子改変Ｔ細胞を、リンパ球注入を用いて投与することに関する。いくつかの実施形態では、自己リンパ球注入が、治療に使用される。自己ＰＢＭＣは、治療を必要とする患者から集められ、Ｔ細胞は、本明細書に記載され、当該技術分野において既知の方法を使用して活性化され、増殖され、次いで患者に注入により戻される。
【０２７４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲ（本明細書では「ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞」とも呼ばれる）のいずれかに係る標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲを発現するＴ細胞が提供される。本発明のｃａＴＣＲ  Ｔ細胞は、安定したｉｎ  ｖｉｖｏでのＴ細胞増殖を受けることができ、血液及び骨髄の中で長期間にわたって高レベルを維持する標的抗原に特異的なメモリー細胞を確立することができる。いくつかの実施形態では、患者に注入された本発明のｃａＴＣＲ  Ｔ細胞は、標的抗原に関連する疾患を有する患者について、ｉｎ  ｖｉｖｏで標的抗原提示細胞（例えば、標的抗原提示癌又はウイルスによって感染した細胞）を排除することができる。いくつかの実施形態では、患者に注入された本発明のｃａＴＣＲ  Ｔ細胞は、少なくとも１つの従来の治療に対して難治性の標的抗原関連疾患を有する患者についてｉｎ  ｖｉｖｏで標的抗原提示細胞（例えば、標的抗原提示癌又はウイルスに感染した細胞）を排除することができる。
【０２７５】
Ｔ細胞の増殖及び遺伝子改変の前に、Ｔ細胞源は、対象から得られる。Ｔ細胞は、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位からの組織、腹水、胸膜滲出液、脾臓組織及び腫瘍を含む多数の供給源から得ることができる。本発明のいくつかの実施形態では、当該技術分野において利用可能な任意の数のＴ細胞株を使用することができる。本発明のいくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ＦＩＣＯＬＬ（商標）分離などの当業者に既知の任意の数の技術を使用して、対象から採取された血液単位から得ることができる。いくつかの実施形態では、個体の循環血液由来の細胞は、アフェレーシスによって得られる。アフェレーシス製品は、典型的には、Ｔ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞、他の有核白血球、赤血球、及び血小板を含むリンパ球を含有する。いくつかの実施形態では、アフェレーシスによって収集された細胞を洗浄して血漿画分を除去し、後続の処理工程のために適切な緩衝液又は培地に細胞を配置することができる。いくつかの実施形態では、細胞は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄される。いくつかの実施形態では、洗浄溶液はカルシウムを含まず、マグネシウムを含まなくてもよく、又は二価カチオンが全く存在しない場合には、多く存在しなくてもよい。当業者であれば、製造業者の指示に従って、半自動化「フロースルー」遠心分離器（例えば、Ｃｏｂｅ  ２９９１細胞処理機、Ｂａｘｔｅｒ  ＣｙｔｏＭａｔｅ，又はＨａｅｍｏｎｅｔｉｃｓ  Ｃｅｌｌ  Ｓａｖｅｒ  ５）を使用するなどして、当該技術分野において既知の方法によって洗浄工程を達成してもよいことを容易に理解するだろう。洗浄後、細胞は、Ｃａ２＋を含まず、Ｍｇ２＋を含まないＰＢＳ、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ  Ａ、又は緩衝剤を含むか、又は含まない他の生理食塩水溶液などの様々な生体適合性緩衝液中に再懸濁されてもよい。あるいは、アフェレーシスサンプルの望ましくない成分を除去し、細胞を培地に直接再懸濁させてもよい。
【０２７６】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、赤血球細胞を溶解し、単球を枯渇させることにより、例えばＰＥＲＣＯＬＬ（商標）勾配による遠心分離、又は対向流遠心分離溶出によって、末梢血リンパ球から単離される。ＣＤ３＋、ＣＤ２８＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＡ＋及びＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞などのＴ細胞の特定の部分集合は、陽性又は陰性の選択法によって更に単離されてもよい。例えば、いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、所望のＴ細胞を陽性選択するのに十分な時間にわたって、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８（すなわち、３×２８）標識ビーズ（例えば、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）Ｍ−４５０  ＣＤ３／ＣＤ２８  Ｔ）とのインキュベーションによって、所望のＴ細胞の陽性選択に十分な時間にわたって、Ｔ細胞を単離する。いくつかの実施形態では、期間は、約３０分である。いくつかの実施形態では、期間は、３０分〜３６時間の範囲、又はもっと長い（これらの値の間の全ての範囲を含む）。いくつかの実施形態では、期間は、少なくとも１時間、２時間、３時間、４時間、５時間又は６時間である。いくつかの実施形態では、期間は、１０〜２４時間である。いくつかの実施形態では、インキュベーション時間は、２４時間である。白血病患者からＴ細胞を単離する際、２４時間などのより長いインキュベーション時間を用いることよって、細胞収率を増加させることができる。腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を腫瘍組織から単離する際、又は免疫不全の個体から腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を単離する際、他の細胞型と比較して、数種類のＴ細胞が存在する任意の状況でＴ細胞を単離するために、より長いインキュベーション時間を使用することができる。更に、より長いインキュベーション時間の使用は、ＣＤ８＋Ｔ細胞の捕捉効率を高めることができる。したがって、Ｔ細胞をＣＤ３／ＣＤ２８ビーズに結合させる時間を単純に短くするか、又は長くすることによって、及び／又はＴ細胞に対するビーズの比率を増やすか、又は減らすことによって、Ｔ細胞の分集団を、培養開始のために、又は培養開始に対して、又はこのプロセス中の他の時点で優先的に選択することができる。更に、ビーズ又は他の表面上の抗ＣＤ３抗体及び／又は抗ＣＤ２８抗体の比を増加させるか、又は減少させることによって、Ｔ細胞の分集団は、培養開始のために、又は培養開始時に、又は他の所望な時間点で優先的に選択されてもよい。当業者は、本発明の文脈において、複数回の選択を使用してもよいことを認識するだろう。いくつかの実施形態では、選択手順を実行し、活性化及び増殖プロセスにおいて、「選択されていない」細胞を使用することが望ましい場合がある。「選択されていない」細胞にも、更なる選択を行ってもよい。
【０２７７】
陰性選択によるＴ細胞集団の濃縮は、負に選択された細胞に固有の表面マーカーを対象とする抗体の組み合わせで達成することができる。１つの方法は、負であると選択された細胞上に存在する細胞表面マーカーを指向するモノクローナル抗体のカクテルを使用する、陰性磁気免疫接着又はフローサイトメトリーによる細胞選別及び／又は選択である。例えば、陰性選択によってＣＤ４＋細胞を濃縮するために、モノクローナル抗体カクテルは、典型的には、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ−ＤＲ及びＣＤ８に対する抗体を含む。いくつかの実施形態では、典型的には、ＣＤ４＋、ＣＤ２５＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＧＩＴＲ＋及びＦｏｘＰ３＋を発現する制御Ｔ細胞を濃縮するか、又は陽性選択することが望ましい場合がある。あるいは、いくつかの実施形態では、制御性Ｔ細胞は、抗ＣＤ２５標識したビーズ又は他の同様の選択方法によって消耗される。
【０２７８】
陽性選択又は陰性選択による所望の細胞集団の単離のために、細胞及び表面（例えば、ビーズなどの粒子）の濃度を変化させることができる。いくつかの実施形態では、細胞とビーズとを確実に最大限に接触させるために、ビーズと細胞が一緒に混合される体積を著しく減少させる（すなわち、細胞の濃度を増加させる）ことが望ましい場合がある。例えば、いくつかの実施形態では、約２０億細胞／ｍＬの濃度が使用される。いくつかの実施形態では、約１０億細胞／ｍＬの濃度が使用される。いくつかの実施形態では、約１億細胞／ｍＬより多く使用される。いくつかの実施形態では、約１千万、１千５百万、２千万、２千５百万、３千万、３千５百万、４千万、４千５百万又は５千万個の細胞／ｍＬのいずれかの細胞濃度が使用される。いくつかの実施形態では、約７千５百万、８千万、８千５百万、９千万、９千５百万又は１億個の細胞／ｍＬのいずれかの細胞濃度が使用される。いくつかの実施形態では、約１億２千５百万細胞／ｍＬ又は約１億５千万細胞／ｍＬの濃度が使用される。高濃度を使用すると、細胞収率、細胞活性化及び細胞増殖を増加させることができる。更に、高い細胞濃度を用いることで、ＣＤ２８陰性Ｔ細胞などの目的の標的抗原を弱く発現し得る細胞、又は多くの腫瘍細胞が存在するサンプル（すなわち、白血病血液、腫瘍組織など）からの、より効率的な細胞の捕捉を可能にする。このような細胞集団は、治療価値を有し得るものであり、治療価値が得られることが望ましいだろう。例えば、高濃度の細胞を使用することにより、ＣＤ２８発現が通常より弱いＣＤ８＋Ｔ細胞のより効率的な選択を可能にする。
【０２７９】
本発明のいくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、治療直後に患者から得られる。この点に関し、特定の癌治療後、特に、免疫系を損傷する薬物による治療に続いて、患者が通常治療から回復する期間中に、治療からすぐ後に、得られるＴ細胞の質は、ｅｘ  ｖｉｖｏで増殖する能力に関して最適であるか、又は改善され得ることが観察されている。同様に、本明細書に記載される方法を使用したｅｘ  ｖｉｖｏでの操作に続いて、これらの細胞は、強化された生着及びｉｎ  ｖｉｖｏでの増殖のための好ましい状態であってもよい。したがって、本発明の文脈内では、この回復期間中に、Ｔ細胞、樹状細胞、又は造血系の他の細胞を含む血液細胞を集めることが、本発明の文脈内で想定される。更に、いくつかの実施形態では、動員（例えば、ＧＭ−ＣＳＦによる動員）及びコンディショニングレジメンを使用して、対象において、特に治療後の定義された期間に、特定の細胞型の再増殖、再循環、再生、及び／又は増殖が有利である条件をもたらす事ができる。例示的な細胞型としては、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、及び免疫系の他の細胞が挙げられる。
【０２８０】
所望なｃａＴＣＲを発現するためのＴ細胞の遺伝子改変の前又は後に、多くの場合、例えば、米国特許第６，３５２，６９４号、同第６，５３４，０５５号；同第６，９０５，６８０号；同第６，６９２，９６４号；同第５，８５８，３５８号；同第６，８８７，４６６号；同第６，９０５，６８１号；同第７，１４４，５７５号；同第７，０６７，３１８号；同第７，１７２，８６９号；同第７，２３２，５６６号；同第７，１７５，８４３号；同第５，８８３，２２３号；同第６，９０５，８７４号；同第６，７９７，５１４号；同第６，８６７，０４１号；及び米国特許出願公開第２００６０１２１００５号に記載されている方法を使用して、Ｔ細胞が活性化され、増殖されてもよい。
【０２８１】
一般的に、本発明のＴ細胞は、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体関連シグナルを刺激する薬剤と、Ｔ細胞の表面上にある共刺激分子を刺激するリガンドと、Ｔ細胞に接続されている表面とを接触させることによって増殖される。特に、Ｔ細胞集団は、例えば、抗ＣＤ３抗体又はその抗原結合フラグメント、又はある表面に固定された抗ＣＤ２抗体との接触によって、又はカルシウムイオノフォアと組み合わせたタンパク質キナーゼＣ活性化因子（例えば、ブリオスタチン）との接触によって、刺激されてもよい。Ｔ細胞表面上のアクセサリー分子の共刺激のために、アクセサリー分子に結合するリガンドが使用される。例えば、Ｔ細胞集団は、Ｔ細胞の増殖を刺激するのに適切な条件で、抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体と接触してもよい。ＣＤ４＋Ｔ細胞又はＣＤ８＋Ｔ細胞のいずれかの増殖を刺激するための、抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体。抗ＣＤ２８抗体の例としては、９．３、Ｂ−Ｔ３、当該技術分野で一般的に知られる他の方法であり得るような、使用可能なＸＲ−ＣＤ２８（Ｄｉａｃｌｏｎｅ、ブザンソン、フランス）が挙げられる（Ｂｅｒｇら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｐｒｏｃ．３０（８）：３９７５−３９７７、１９９８；Ｈａａｎｅｎら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９０（９）：１３１９１３２８、１９９９；Ｇａｒｌａｎｄら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．２２７（１−２）：５３−６３、１９９９）。
【０２８２】
本明細書に記載される任意のそのような実施形態のいくつかにおいて、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の調製は、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の疲弊を最小限に抑えるか、又は実質的に全くもたらさない。例えば、いくつかの実施形態では、調製によって、約５０％未満（例えば、約４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０又は５％未満などのいずれか）のｃａＴＣＲエフェクター細胞が消耗する。エフェクター細胞の疲弊は、本明細書に記載される任意の手段を含め、当該技術分野において既知の任意の手段によって求めることができる。
【０２８３】
本明細書に記載される任意のそのような実施形態のいくつかにおいて、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の調製は、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の最終分化を最小限に抑えるか、又は実質的に全くもたらさない。例えば、いくつかの実施形態では、調製によって、約５０％未満（例えば、約４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０又は５％未満などのいずれか）のｃａＴＣＲエフェクター細胞が最終分化する。エフェクター細胞の分化は、本明細書に記載される任意の手段を含め、当該技術分野において既知の任意の手段によって判定することができる。
【０２８４】
本明細書に記載される任意のそのような実施形態のいくつかにおいて、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の調製は、ｃａＴＣＲエフェクター細胞のｃａＴＣＲの内在化を最小限に抑えるか、又は実質的に全くもたらさない。例えば、いくつかの実施形態では、調製によって、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の約５０％未満（例えば、約４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０又は５％未満などのいずれか）のｃａＴＣＲが内在化する。ｃａＴＣＲエフェクター細胞でのｃａＴＣＲの内在化は、本明細書に記載される任意の手段を含め、当該技術分野において既知の任意の手段によって判定することができる。
遺伝子改変
【０２８５】
いくつかの実施形態では、本発明のｃａＴＣＲエフェクター細胞（例えば、ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞）は、本明細書に記載のｃａＴＣＲをコードするウイルスベクターを用いてエフェクター細胞（本明細書に記載の方法によって調製されるＴ細胞など）に形質導入することによって生成される。ウイルスベクター送達システムは、エフェクター細胞への送達後にエピソーム又は統合ゲノムのいずれかを有するＤＮＡ及びＲＮＡウイルスを含む。遺伝子治療手技の概説としては、Ａｎｄｅｒｓｏｎ、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５６：８０８−８１３（１９９２）；Ｎａｂｅｌ及びＦｅｉｇｎｅｒ、ＴＩＢＴＥＣＨ  １１：２１１−２１７（１９９３）；Ｍｉｔａｎｉ及びＣａｓｋｅｙ、ＴＩＢＴＥＣＨ  １１：１６２−１６６（１９９３）；Ｄｉｌｌｏｎ、ＴＩＢＴＥＣＨ  １１：１６７−１７５（１９９３）；Ｍｉｌｌｅｒ、Ｎａｔｕｒｅ  ３５７：４５５−４６０（１９９２）；Ｖａｎ  Ｂｒｕｎｔ、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ６（１０）：１１４９−１  １５４（１９８８）；Ｖｉｇｎｅ、Ｒｅｓｔｏｒａｔｉｖｅ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ８：３５−３６（１９９５）；Ｋｒｅｍｅｒ  ＆  Ｐｅｒｒｉｃａｕｄｅｔ、Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｂｕｌｌｅｔｉｎ  ５１（ｌ）：３１−４４（１９９５）；及びＹｕら、Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １：１３−２６（１９９４）を参照のこと。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、レンチウイルスベクターであり、ｃａＴＣＲエフェクター細胞は、ｃａＴＣＲエフェクター細胞ゲノムに組み込まれたレンチウイルスベクターを含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞は、そのゲノムに組み込まれたレンチウイルスベクターを含むｃａＴＣＲ  Ｔ細胞である。
【０２８６】
いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞は、その内在性ＴＣＲ鎖のうちの一方又は両方の発現を遮断するか、又は減少させるように改変されたＴ細胞である。例えば、いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞は、ＴＣＲα及び／又はβ鎖の発現を遮断するか、又は減少させるように改変されたαβＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲＤは、ＴＣＲα及びβ鎖に由来する配列を含むか、又は、ｃａＴＣＲエフェクター細胞は、ＴＣＲγ及び／又はδ鎖の発現を遮断するか、又は減少させるように改変されたγδＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲＤは、ＴＣＲγ及びδ鎖に由来する配列を含む。遺伝子発現を破壊する細胞の改変としては、例えば、ＲＮＡ干渉（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ）、遺伝子編集（例えば、ＣＲＩＳＰＲ系又はＴＡＬＥＮ系の遺伝子ノックアウト）などを含む、当該技術分野において既知の任意のそのような技術が挙げられる。
【０２８７】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞の内在性ＴＣＲ鎖の一方又は両方の発現が減少したｃａＴＣＲ  Ｔ細胞は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系を使用して生成される。遺伝子編集のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムの概説としては、例えば、Ｊｉａｎ  Ｗ及びＭａｒｒａｆｆｉｎｉ  ＬＡ、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６９、２０１５；Ｈｓｕ  ＰＤら、Ｃｅｌｌ、１５７（６）：１２６２−１２７８、２０１４；及びＯ’Ｃｏｎｎｅｌｌ  ＭＲら、ＮａｔｕｒｅＶｏｌｕｍｅ：５１６：２６３−２６６、２０１４を参照。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞の内在性ＴＣＲ鎖の一方又は両方の発現が減少したｃａＴＣＲ  Ｔ細胞は、ＴＡＬＥＮ系のゲノム編集を使用して生成される。
濃縮
【０２８８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるｃａＴＣＲエフェクター細胞のいずれかに係るｃａＴＣＲエフェクター細胞の不均一な細胞集団を濃縮する方法が提供される。
【０２８９】
標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲエフェクター細胞（例えば、ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞）の特定の分集団は、陽性選択技術によって濃縮することができる。例えば、いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞（例えば、ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞）は、所望のｃａＴＣＲエフェクター細胞を陽性選択するのに十分な時間にわたる、標的抗原結合ビーズとのインキュベーションによって濃縮される。いくつかの実施形態では、期間は、約３０分である。いくつかの実施形態では、期間は、３０分〜３６時間の範囲、又はもっと長い（これらの値の間の全ての範囲を含む）。いくつかの実施形態では、期間は、少なくとも１時間、２時間、３時間、４時間、５時間又は６時間である。いくつかの実施形態では、期間は、１０〜２４時間である。いくつかの実施形態では、インキュベーション時間は、２４時間である。不均一な細胞集団において低濃度で存在するｃａＴＣＲエフェクター細胞の単離のために、更に長いインキュベーション時間（例えば２４時間）を使用すると、細胞収率を高めることができる。他の細胞型と比較して存在するｃａＴＣＲエフェクター細胞が少ない任意の状況において、ｃａＴＣＲエフェクター細胞を単離するために、更に長いインキュベーション時間を使用してもよい。当業者は、本発明の文脈において、複数回の選択を使用してもよいことを認識するだろう。
【０２９０】
陽性選択によりｃａＴＣＲエフェクター細胞の所望の集団を単離するために、細胞と表面（例えば、ビーズなどの粒子）の濃度を変えてもよい。いくつかの実施形態では、細胞とビーズの最大接触を確実にするために、ビーズと細胞が一緒に混合される（すなわち、細胞の濃度を増加させる）体積を著しく減少させることが望ましい場合がある。例えば、いくつかの実施形態では、約２０億細胞／ｍＬの濃度が使用される。いくつかの実施形態では、約１０億細胞／ｍＬの濃度が使用される。いくつかの実施形態では、約１億細胞／ｍＬより多く使用される。いくつかの実施形態では、約１千万、１千５百万、２千万、２千５百万、３千万、３千５百万、４千万、４千５百万又は５千万細胞／ｍＬのいずれかの細胞濃度が使用される。いくつかの実施形態では、約７千５百万、８千万、８千５百万、９千万、９千５百万又は１億細胞／ｍＬのいずれかの細胞濃度が使用される。いくつかの実施形態では、約１億２千５百万又は約１億５千万細胞／ｍＬの濃度が使用される。高濃度を使用すると、細胞収率、細胞活性化及び細胞増殖を増加させることができる。更に、高い細胞濃度の使用は、ｃａＴＣＲを弱く発現し得るｃａＴＣＲエフェクター細胞のより効率的な捕捉を可能にする。
【０２９１】
本明細書に記載される任意のそのような実施形態のいくつかにおいて、濃縮は、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の疲弊を最小限に抑えるか、又は実質的に全くもたらさない。例えば、いくつかの実施形態では、濃縮によって、約５０％未満（例えば、約４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０又は５％未満などのいずれか）のｃａＴＣＲエフェクター細胞が枯渇する。エフェクター細胞の疲弊は、本明細書に記載される任意の手段を含め、当該技術分野において既知の任意の手段によって決定することができる。
【０２９２】
本明細書に記載される任意のそのような実施形態のいくつかにおいて、濃縮は、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の最終分化を最小限に抑えるか、又は実質的に全くもたらさない。例えば、いくつかの実施形態では、濃縮によって、約５０％未満（例えば、約４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０又は５％未満などのいずれか）のｃａＴＣＲエフェクター細胞が最終分化する。エフェクター細胞の分化は、本明細書に記載される任意の手段を含め、当該技術分野において既知の任意の手段によって判定することができる。
【０２９３】
本明細書に記載される任意のそのような実施形態のいくつかにおいて、濃縮は、ｃａＴＣＲエフェクター細胞のｃａＴＣＲの内在化を最小限に抑えるか、又は実質的に全くもたらさない。例えば、いくつかの実施形態では、濃縮によって、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の約５０％未満（例えば、約４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０又は５％未満などのいずれか）のｃａＴＣＲエフェクター細胞が内在化する。ｃａＴＣＲエフェクター細胞でのｃａＴＣＲの内在化は、本明細書に記載される任意の手段を含め、当該技術分野において既知の任意の手段によって判定することができる。
【０２９４】
本明細書に記載される任意のそのような実施形態のいくつかにおいて、濃縮は、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の増殖を増加させる。例えば、いくつかの実施形態では、濃縮によって、濃縮後のｃａＴＣＲエフェクター細胞の数を少なくとも約１０％（例えば、少なくとも約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、１０００％のいずれか、又はもっと多く）増加させる。
【０２９５】
したがって、いくつかの実施形態では、標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲを発現するｃａＴＣＲエフェクター細胞の不均一な細胞集団を濃縮する方法であって、（ａ）不均一な細胞集団と、標的抗原又はその中に含まれる１つ以上のエピトープを含む捕捉分子とを接触させ、捕捉分子に結合するｃａＴＣＲエフェクター細胞を含む複合体を形成することと、（ｂ）この複合体を、不均一な細胞集団から分離し、それによって、ｃａＴＣＲエフェクター細胞が濃縮された細胞集団を生成することとを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、捕捉分子は、固体支持体に固定される。いくつかの実施形態では、固体支持体は、粒状物（ビーズなど）である。いくつかの実施形態では、固体支持体は、表面（ウェルの底部など）である。いくつかの実施形態では、捕捉分子は、タグで標識される。いくつかの実施形態では、タグは、蛍光分子、親和性タグ又は磁気タグである。いくつかの実施形態では、本方法は、捕捉分子からｃａＴＣＲエフェクター細胞を溶出させ、溶出物を回収することを更に含む。
ライブラリースクリーニング
【０２９６】
いくつかの実施形態では、標的抗原に特異的な候補ｃａＴＣＲ構築物を単離するために、ｃａＴＣＲライブラリー（例えば、複数のｃａＴＣＲをコードする核酸のライブラリーを発現する細胞）が、標的抗原又はその中に含まれる１つ以上のエピトープを含む捕捉分子にさらされてもよく、その後、捕捉分子に特異的に結合するライブラリーの親和性メンバーの単離が行われてもよい。いくつかの実施形態では、捕捉分子は、固体支持体上に固定される。いくつかの実施形態では、支持体は、ビーズ、マイクロタイタープレート、免疫チューブ、又はそのような目的に有用な当該技術分野において既知の任意の材料の表面であってもよい。いくつかの実施形態では、相互作用は、タグ付き捕捉分子（例えば、ビオチン化捕捉分子）により、溶液中で起こる。いくつかの実施形態では、この手順は、非特異的かつ非反応性のライブラリーメンバーを除去するための１つ以上の洗浄工程（パニング）を含む。いくつかの実施形態では、溶液中の複合体を精製するために、複合体は、固定又は遠心分離のいずれかによって集められる。いくつかの実施形態では、親和性メンバーは、可溶性ビオチン化捕捉分子上に捕捉され、その後、ストレプトアビジンビーズ上への親和性複合体（親和性メンバーと捕捉分子）の固定が続く。いくつかの実施形態では、固体支持体は、ビーズである。いくつかの実施形態では、ビーズとしては、例えば、磁気ビーズ（例えば、Ｂａｎｇｓ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｉｎｃ．、Ｄｙｎａｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ又はＱｕａｎｔｕｍ  Ｍａｇｎｅｔｉｃ製）、非磁気ビーズ（例えば、Ｐｉｅｒｃｅ  ａｎｄ  Ｕｐｓｔａｔｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、単分散ビーズ（例えば、Ｄｙｎａｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈ及びＭｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅ  Ｇｍｂｈ）及び多分散ビーズ（例えば、Ｃｈｅｍａｇｅｎ）が挙げられる。磁気ビーズの使用は、文献（Ｕｈｌｅｎ，Ｍら（１９９４）、Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｍａｇｎｅｔｉｃ  Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｐｒｅｓｓ、ウェストボロー、ＭＡ）に記載されている。いくつかの実施形態では、親和性メンバーは、陽性選択によって精製される。いくつかの実施形態では、親和性メンバーは、望ましくないライブラリーメンバーを除去するために、陰性選択によって精製される。いくつかの実施形態では、親和性メンバーは、陽性選択工程及び陰性選択工程の両方によって精製される。
【０２９７】
一般に、ライブラリー構築物を調製するために使用される技術は、既知の遺伝子工学技術に基づく。これに関し、ライブラリー内で発現されるｃａＴＣＲをコードする核酸配列は、使用される発現系の種類に適した発現ベクターに組み込まれる。ＣＤ３＋細胞などの細胞における提示に使用するのに適した発現ベクターは、周知であり、当該技術分野において記載されている。例えば、いくつかの実施形態では、発現ベクターは、ウイルスベクター（例えば、レンチウイルスベクター）である。
【０２９８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される実施形態のいずれか１つに係る複数のｃａＴＣＲをコードする配列を含む核酸ライブラリーが提供される。いくつかの実施形態では、核酸ライブラリーは、複数のｃａＴＣＲをコードするウイルスベクターを含む。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、レンチウイルスベクターである。
【０２９９】
いくつかの実施形態では、標的抗原に特異的なｃａＴＣＲをコードする配列について、本明細書に記載の実施形態のいずれかに係る核酸ライブラリーをスクリーニングする方法であって、（ａ）核酸ライブラリーを複数の細胞に導入し、その結果、ｃａＴＣＲが複数の細胞の表面で発現することと、（ｂ）複数の細胞を、標的抗原又はその中に含まれる１つ以上のエピトープを含む捕捉分子と共にインキュベートすることと、（ｃ）捕捉分子に結合した細胞を集めることと、（ｄ）工程（ｃ）で集めた細胞から、ｃａＴＣＲをコードする配列を単離し、それによって、標的抗原に特異的なｃａＴＣＲを同定することとを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、本方法は、１つ以上の洗浄工程を更に含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の洗浄工程は、工程（ｂ）と工程（ｃ）との間で実施される。いくつかの実施形態では、複数の細胞は、複数のＣＤ３＋細胞である。いくつかの実施形態では、捕捉分子は、固体支持体上に固定される。いくつかの実施形態では、固体支持体は、ビーズである。いくつかの実施形態では、捕捉分子に結合した細胞を集めることは、固体支持体に結合した捕捉リガンドから細胞を溶出させることと、溶出物を集めることとを含む。いくつかの実施形態では、捕捉分子は、タグで標識される。いくつかの実施形態では、タグは、蛍光分子、親和性タグ又は磁気タグである。いくつかの実施形態では、捕捉分子に結合した細胞を集めることは、細胞と標識されたリガンドとを含む複合体を単離することを含む。いくつかの実施形態では、細胞は、複合体から解離される。
ＭＨＣタンパク質
【０３００】
ＭＨＣクラスＩタンパク質は、主要組織適合抗原複合体（ＭＨＣ）分子の２つの主要なクラスの１つであり（他方はＭＨＣクラスＩＩである）、身体のほぼ全ての有核細胞に見出される。それらの機能は、Ｔ細胞に対し、細胞内からのタンパク質のフラグメントを提示するためのものであり、健康な細胞は無視されるが、外来タンパク質又は変異タンパク質を含有する細胞は、免疫系によって攻撃されるであろう。ＭＨＣクラスＩタンパク質は、細胞質タンパク質に由来するペプチドを提示するため、ＭＨＣクラスＩ提示の経路は、細胞質経路又は内在性経路と呼ばれることが多い。クラスＩ  ＭＨＣ分子は、プロテアソームによる細胞質タンパク質の分解から主に生成されたペプチドに結合する。ＭＨＣ  Ｉ：ペプチド複合体を、次いで、細胞の形質膜に挿入する。ペプチドは、クラスＩ  ＭＨＣ分子の細胞外部分に結合する。したがって、クラスＩ  ＭＨＣの機能は、細胞内タンパク質を細胞毒性Ｔ細胞（ＣＴＬ）に提示することである。しかし、クラスＩ  ＭＨＣはまた、交差提示として知られるプロセスにおいて、外因性タンパク質から生成されたペプチドも提示することができる。
【０３０１】
ＭＨＣクラスＩタンパク質は、２つのポリペプチド鎖であるα及びβ２−ミクログロブリン（β２Ｍ）からなる。この２つの鎖は、β２Ｍとα３ドメインとの相互作用によって、非共有結合的に結合する。α鎖のみが多型であり、ＨＬＡ遺伝子によりコードされており、一方、β２Ｍサブユニットは、多型ではなく、β−２ミクログロブリン遺伝子によりコードされる。α３ドメインは、形質膜に広がっており、Ｔ細胞のＣＤ８共受容体と相互作用する。α３−ＣＤ８相互作用によりＭＨＣ  Ｉ分子が所定の位置に保持される一方で、細胞毒性Ｔ細胞の表面上のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）がそのα１−α２ヘテロ二量体リガンドに結合し、結合したペプチドの抗原性を調べる。α１ドメイン及びα２ドメインは、結合するペプチドのための溝を形成するように折り畳まれる。ＭＨＣクラスＩタンパク質は、８〜１０アミノ酸長のペプチドに結合する。
【０３０２】
ＭＨＣクラスＩＩ分子は、樹状細胞、単核食細胞、一部の内皮細胞、胸腺上皮細胞及びＢ細胞などの抗原提示細胞上にのみ通常見出される分子のファミリーである。クラスＩＩペプチドによって提示される抗原は、細胞外タンパク質（クラスＩのような細胞質ではない）由来であり、したがって、抗原提示のＭＨＣクラスＩＩ依存的経路は、エンドサイトーシス経路又は外因性経路と呼ばれる。ＭＨＣクラスＩＩ分子のローディングは、食作用によって生じる。細胞外タンパク質は、取り込まれ、リソソーム内で消化され、得られたエピトープペプチドフラグメントは、細胞表面に移動する前に、ＭＨＣクラスＩＩ分子上にロードされる。
【０３０３】
ＭＨＣクラスＩ分子と同様に、クラスＩＩ分子もヘテロ二量体であるが、この場合、２つの均一なペプチドであるα鎖及びβ鎖からなる。サブ表記であるα１、α２などは、ＨＬＡ遺伝子内の別個のドメインを指す。各ドメインは、通常、遺伝子内の異なるエクソンによってコードされ、いくつかの遺伝子は、リーダー配列、膜貫通配列などをコードする更なるドメインを有する。ＭＨＣクラスＩＩ分子の抗原結合溝は両端で開放しており、一方、クラスＩ分子上の対応する溝は、各末端で閉じているため、ＭＨＣクラスＩＩ分子によって提示される抗原は、より長く、一般的に、１５〜２４アミノ酸長である。
【０３０４】
ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）遺伝子は、ＭＨＣ遺伝子のヒト態様である。ヒトにおける３つの主要なＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ及びＨＬＡ−Ｃであり、一方、３つの少数のＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−Ｆ及びＨＬＡ−Ｇである。ヒトにおける抗原提示に関与する３つの主要なＭＨＣクラスＩＩタンパク質は、ＨＬＡ−ＤＰ、ＨＬＤＡ−ＤＱ及びＨＬＡ−ＤＲであり、一方、他のＭＨＣクラスＩＩタンパク質は、ＨＬＡ−ＤＭ及びＨＬＡ−ＤＯであり、初期の処理及び抗原のローディングに関与する。進化が最も速いコード配列を持つＨＬＡ−Ａは、ヒトの遺伝子の中でランク付けされる。２０１３年１２月の時点で、１７４０個の活性タンパク質及び１１７個のヌルタンパク質をコードする２４３２個の既知のＨＬＡ−Ａ対立遺伝子が存在した。ＨＬＡ−Ａ遺伝子は、６番染色体の短腕上に位置し、ＨＬＡ−Ａのより大きなα鎖構成要素をコードする。ＨＬＡ−Ａα鎖の変動は、ＨＬＡ機能にとって鍵となる。この変動によって、集団における遺伝的多様性を促進する。各ＨＬＡは、特定の構造のペプチドについて異なる親和性を有するため、ＨＬＡが多様であるほど、細胞表面に「提示される」抗原がより多様であることを意味し、この集団の分集団が、任意の所与の外来侵入物に対して耐性である可能性を高める。これにより、単一の病原体が、ヒト集団全体を一掃する能力を有する可能性が減少する。各個体は、これらの親それぞれから１つずつ、２種類までのＨＬＡ−Ａを発現してもよい。個体の一部は、両方の親から同じＨＬＡ−Ａを受け継ぎ、この個体のＨＬＡ多様性は減少する。しかし、個体の大部分は、２種類の異なるＨＬＡ−Ａの複製物を受け取る。この同じパターンは、全てのＨＬＡ群について成り立つ。言い換えると、ヒトは、２４３２個の既知のＨＬＡ−Ａ対立遺伝子の１つ又は２つのいずれかのみを発現することができる。
【０３０５】
全ての対立遺伝子は、少なくとも４桁の分類、例えば、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１２を受け取る。Ａは、対立遺伝子がどのＨＬＡ遺伝子に属するかを意味する。多くのＨＬＡ−Ａ対立遺伝子が存在し、その結果、血清型による分類が、カテゴリー化を単純化する。次の１対の数字は、この割り当てを示す。例えば、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０２、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０４及びＨＬＡ−Ａ＊０２：３２４は、全てＡ２血清型のメンバーである（＊０２という接頭語によって示される）。この群は、ＨＬＡ適合性に関与する主要な因子である。その後の全ての数字は、血清型によって決定することはできず、遺伝子配列決定によって指定される。２番目の数字のセットは、どのＨＬＡタンパク質が産生されるかを示す。これらは、発見の順序で割り当てられ、２０１３年１２月時点で、４５６個の異なるＨＬＡ−Ａ−Ａ０２タンパク質が既知である（割り当てられた名称はＨＬＡ−Ａ＊０２：０１からＨＬＡ−Ａ＊０２：４５６）。最も短い可能なＨＬＡ名は、これらの詳細の両方を含む。これを超えるそれぞれの長くなった部分は、タンパク質を変化させてもよく、又は変化させなくてもよいヌクレオチド変化を示す。
【０３０６】
いくつかの実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合分子は、疾患関連抗原（腫瘍関連抗原又はウイルスによってコードされる抗原など）に由来するペプチドとＭＨＣクラスＩタンパク質とを含む複合体に特異的に結合し、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−Ｆ又はＨＬＡ−Ｇである。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ又はＨＬＡ−Ｃである。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａである。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ｂである。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ｃである。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ０１、ＨＬＡ−Ａ０２、ＨＬＡ−Ａ０３、ＨＬＡ−Ａ０９、ＨＬＡ−Ａ１０、ＨＬＡ−Ａ１１、ＨＬＡ−Ａ１９、ＨＬＡ−Ａ２３、ＨＬＡ−Ａ２４、ＨＬＡ−Ａ２５、ＨＬＡ−Ａ２６、ＨＬＡ−Ａ２８、ＨＬＡ−Ａ２９、ＨＬＡ−Ａ３０、ＨＬＡ−Ａ３１、ＨＬＡ−Ａ３２、ＨＬＡ−Ａ３３、ＨＬＡ−Ａ３４、ＨＬＡ−Ａ３６、ＨＬＡ−Ａ４３、ＨＬＡ−Ａ６６、ＨＬＡ−Ａ６８、ＨＬＡ−Ａ６９、ＨＬＡ−Ａ７４又はＨＬＡ−Ａ８０である。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ０２である。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１−５５５、例えば、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０２、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０３、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０４、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０５、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０６、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０７、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０８、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０９、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１０、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１１、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１２、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１３、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１４、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１５、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１６、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１７、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１８、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１９、ＨＬＡ−Ａ＊０２：２０、ＨＬＡ−Ａ＊０２：２１、ＨＬＡ−Ａ＊０２：２２又はＨＬＡ−Ａ＊０２：２４のうち、いずれか１つである。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１は、全白人の３９〜４６％で発現され、したがって、本発明で使用するためのＭＨＣクラスＩタンパク質の好適な選択を表す。
【０３０７】
いくつかの実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合分子は、疾患関連抗原（腫瘍関連抗原又はウイルスによってコードされる抗原など）に由来するペプチドとＭＨＣクラスＩＩタンパク質とを含む複合体に特異的に結合し、ＭＨＣクラスＩＩタンパク質は、ＨＬＡ−ＤＰ、ＨＬＡ−ＤＱ又はＨＬＡ−ＤＲである。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩＩタンパク質は、ＨＬＡ−ＤＰである。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩＩタンパク質は、ＨＬＡ−ＤＱである。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩＩタンパク質は、ＨＬＡ−ＤＲである。
【０３０８】
Ｆａｂ様抗原結合モジュールの生成に使用するのに好適なペプチドは、例えば、当業者に既知のコンピュータ予測モデルを使用して、ＨＬＡ（例えば、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１）結合モチーフと、プロテアソーム及び免疫プロテアソームの切断部位の存在に基づいて決定することができる。ＭＨＣ結合部位を予測するために、このようなモデルとしては、限定されないが、ＰｒｏＰｒｅｄ１（Ｓｉｎｇｈ  ａｎｄ  Ｒａｇｈａｖａ，ＰｒｏＰｒｅｄ：ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ＨＬＡ−ＤＲ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｓｉｔｅｓ．ＢＩＯＩＮＦＯＲＭＡＴＩＣＳ  １７（１２）：１２３６−１２３７、２００１に更に詳細な記載）及びＳＹＦＰＥＩＴＨＩ（Ｓｃｈｕｌｅｒら、ＳＹＦＰＥＩＴＨＩ，Ｄａｔａｂａｓｅ  ｆｏｒ  Ｓｅａｒｃｈｉｎｇ  ａｎｄ  Ｔ−Ｃｅｌｌ  Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ．ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、ｖｏｌ  ４０９（１）：７５−９３、２００７を参照）が挙げられる。
【０３０９】
適切なペプチドが同定されたら、当業者に周知のプロトコルに従ってペプチド合成を行うことができる。本発明のペプチドは、大きさが比較的小さいため、従来のペプチド合成技術に従って、溶液中又は固体支持体上で直接合成されてもよい。様々な自動合成装置が市販されており、既知のプロトコルに従って使用することができる。溶液相中のペプチドの合成は、合成ペプチドの大規模生産のための十分に確立された手順となっており、したがって、本発明のペプチドを調製するための好適な代替方法である（例えば、Ｊｏｈｎ  Ｍｏｒｒｏｗ  Ｓｔｅｗａｒｔ及びＭａｒｔｉｎらによるＳｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｌｍｅｚ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ａｍｉｄａｔｉｏｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ  ｔｏ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  Ｖｏｌ．３９、ページ１５１７−１５２０、１９９８を参照）。
医薬組成物
【０３１０】
本明細書では、本明細書に記載される実施形態のいずれかに係るｃａＴＣＲ、又は本明細書に記載される実施形態のいずれかに係るｃａＴＣＲをコードする核酸、又は本明細書に記載される実施形態のいずれかに係るｃａＴＣＲエフェクター細胞を含む、組成物（例えば、医薬組成物、本明細書では製剤とも呼ばれる）も提供される。いくつかの実施形態では、組成物は、本明細書に記載のｃａＴＣＲのいずれかに係るｃａＴＣＲをその表面上に提示するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）を含む、ｃａＴＣＲエフェクター細胞組成物（例えば、医薬組成物）である。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞組成物は、医薬組成物である。
【０３１１】
組成物は、同じ細胞型を有し、同じｃａＴＣＲを発現するｃａＴＣＲエフェクター細胞を含む均一な細胞集団を含んでいてもよく、又は異なる細胞型を有し、及び／又は異なるｃａＴＣＲを発現するｃａＴＣＲエフェクター細胞を含む複数のｃａＴＣＲエフェクター細胞集団を含む不均一な細胞集団を含んでいてもよい。組成物は、ｃａＴＣＲエフェクター細胞ではない細胞を更に含んでもよい。
【０３１２】
したがって、いくつかの実施形態では、同じ細胞型を有し、同じｃａＴＣＲを発現するｃａＴＣＲエフェクター細胞（例えば、ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞）を含む均一な細胞集団を含むｃａＴＣＲエフェクター細胞組成物が提供される。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞は、細胞毒性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞組成物は、医薬組成物である。
【０３１３】
いくつかの実施形態では、異なる細胞型を有し、及び／又は異なるｃａＴＣＲを発現するｃａＴＣＲエフェクター細胞を含む複数のｃａＴＣＲエフェクター細胞集団を含む不均一な細胞集団を含むｃａＴＣＲエフェクター細胞組成物が提供される。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の各集団は、互いに独立して、細胞毒性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される細胞型を有する。いくつかの実施形態では、組成物中のｃａＴＣＲエフェクター細胞の全ては、同じ細胞型を有する（例えば、全てのｃａＴＣＲエフェクター細胞は、細胞毒性Ｔ細胞である）。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の少なくとも１つの集団は、他とは異なる細胞型を有する（例えば、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の１つの集団は細胞毒性Ｔ細胞からなり、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の他の集団は、ナチュラルキラーＴ細胞からなる）。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の各集団は、同じｃａＴＣＲを発現する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の少なくとも１つの集団は、他の集団とは異なるｃａＴＣＲを発現する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の各集団は、他の集団とは異なるｃａＴＣＲを発現する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の各集団は、同じ標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲを発現する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の少なくとも１つの集団は、他の集団とは異なる標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲを発現する（例えば、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の１つの集団は、ｐＭＨＣ複合体に特異的に結合し、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の他の集団は、細胞表面受容体に特異的に結合する）。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の少なくとも１つの集団が、異なる標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲを発現する場合、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の各集団は、同じ疾患又は障害と関連する標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲを発現する（例えば、それぞれの標的抗原は、癌、例えば、乳癌に関連する）。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞組成物は、医薬組成物である。
【０３１４】
したがって、いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞組成物であって、本明細書に記載される実施形態のいずれかに係る複数のｃａＴＣＲエフェクター細胞集団を含み、組成物中のｃａＴＣＲエフェクター細胞の全てが、同じ細胞型を有し（例えば、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の全てが、細胞毒性Ｔ細胞である）、ｃａＴＣＲエフェクター細胞のそれぞれの集団が、他とは異なるｃａＴＣＲを発現する、ｃａＴＣＲエフェクター細胞組成物が提供される。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞は、細胞毒性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の各集団は、同じ標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲを発現する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の少なくとも１つの集団は、他の集団とは異なる標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲを発現する（例えば、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の１つの集団は、ｐＭＨＣ複合体に特異的に結合し、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の他の集団は、細胞表面受容体に特異的に結合する）。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の少なくとも１つの集団が、異なる標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲを発現する場合、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の各集団は、同じ疾患又は障害と関連する標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲを発現する（例えば、それぞれの標的抗原は、癌、例えば、乳癌に関連する）。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞組成物は、医薬組成物である。
【０３１５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される実施形態のいずれかに係る複数のｃａＴＣＲエフェクター細胞集団を含む組成物であって、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の少なくとも１つの集団が、他とは異なる細胞型である、組成物が提供される。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の集団は全て、異なる細胞型を有する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の各集団は、互いに独立して、細胞毒性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される細胞型を有する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の各集団は、同じｃａＴＣＲを発現する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の少なくとも１つの集団は、他の集団とは異なるｃａＴＣＲを発現する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の各集団は、他の集団とは異なるｃａＴＣＲを発現する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の各集団は、同じ標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲを発現する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の少なくとも１つの集団は、他の集団とは異なる標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲを発現する（例えば、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の１つの集団は、ｐＭＨＣ複合体に特異的に結合し、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の他の集団は、細胞表面受容体に特異的に結合する）。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の少なくとも１つの集団が、異なる標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲを発現する場合、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の各集団は、同じ疾患又は障害と関連する標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲを発現する（例えば、それぞれの標的抗原は、癌、例えば、乳癌に関連する）。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞組成物は、医薬組成物である。
【０３１６】
組成物の調製中の様々な点において、細胞を凍結保存することが必要であるか、又は有益な場合がある。「凍結され／凍結」及び「凍結保存され／冷凍保存」との用語は、相互に置き換え可能に使用することができる。凍結は、凍結乾燥を含む。
【０３１７】
当業者には理解されるように、細胞の凍結は破壊的な場合がある（Ｍａｚｕｒ，Ｐ．、１９７７、Ｃｒｙｏｂｉｏｌｏｇｙ  １４：２５１−２７２を参照）が、このような損傷を防ぐために利用可能な多くの手順が存在する。例えば、損傷は、（ａ）凍結保護剤（cryoprotective  agent）の使用、（ｂ）凍結速度の制御及び／又は（ｃ）分解反応を最小限にするのに十分に低い温度での保存によって避けることができる。例示的な凍結保護剤としては、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）（Ｌｏｖｅｌｏｃｋ及びＢｉｓｈｏｐ、１９５９、Ｎａｔｕｒｅ  １８３：１３９４−１３９５；Ａｓｈｗｏｏｄ−Ｓｍｉｔｈ、１９６１、Ｎａｔｕｒｅ  １９０：１２０４−１２０５）、グリセロール、ポリビニルピロリジン（Ｒｉｎｆｒｅｔ、１９６０、Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８５：５７６）、ポリエチレングリコール（Ｓｌｏｖｉｔｅｒ及びＲａｖｄｉｎ、１９６２、Ｎａｔｕｒｅ  １９６：５４８）、アルブミン、デキストラン、ショ糖、エチレングリコール、ｉ−エリスリトール、Ｄ−リビトール、Ｄ−マンニトール（Ｒｏｗｅら、１９６２、Ｆｅｄ．Ｐｒｏｃ．２１：１５７）、Ｄ−ソルビトール、ｉ−イノシトール、Ｄ−ラクトース、塩化コリン（Ｂｅｎｄｅｒら、１９６０、Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．１５：５２０）、アミノ酸（Ｐｈａｎ  Ｔｈｅ  Ｔｒａｎ  ａｎｄ  Ｂｅｎｄｅｒ、１９６０、Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓ．２０：６５１）、メタノール、アセトアミド、グリセロールモノアセテート（Ｌｏｖｅｌｏｃｋ、１９５４、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．５６：２６５）、及び無機塩（Ｐｈａｎ  Ｔｈｅ  Ｔｒａｎ  ａｎｄ  Ｂｅｎｄｅｒ、１９６０、Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．１０４：３８８；Ｐｈａｎ  Ｔｈｅ  Ｔｒａｎ  ａｎｄ  Ｂｅｎｄｅｒ、１９６１、Ｒａｄｉｏｂｉｏｌｏｇｙ、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｔｈｉｒｄ  Ａｕｓｔｒａｌｉａｎ  Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ  ｏｎ  Ｒａｄｉｏｂｉｏｌｏｇｙ、ｌｌｂｅｒｙ編集、Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈ、Ｌｏｎｄｏｎ、ｐ．５９）が挙げられる。特定の実施形態では、ＤＭＳＯを使用することができる。血漿の添加（例えば、２０〜２５％の濃度になるまで）によって、ＤＭＳＯの保護効果を増強することができる。ＤＭＳＯを添加した後、１％のＤＭＳＯ濃度は４℃より高い温度では毒性な場合があるため、凍結するまで細胞を０℃に維持してもよい。
【０３１８】
細胞の凍結保存において、冷却速度をゆっくりに制御することが重要な場合があり、凍結保護剤が異なる場合（Ｒａｐａｔｚら、１９６８、Ｃｒｙｏｂｉｏｌｏｇｙ  ５（１）：１８−２５）及び細胞型が異なる場合は、最適冷却速度が異なる（例えば、幹細胞の生存及びその移植可能性に対する冷却速度の影響について、Ｒｏｗｅ及びＲｉｎｆｒｅｔ、１９６２、Ｂｌｏｏｄ  ２０：６３６；Ｒｏｗｅ、１９６６、Ｃｒｙｏｂｉｏｌｏｇｙ  ３（１）：１２−１８；Ｌｅｗｉｓら、１９６７、Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ  ７（１）：１７−３２；及びＭａｚｕｒ、１９７０、Ｓｃｉｅｎｃｅ  １６８：９３９−９４９を参照）。水が氷になるときの融合相の熱は、最小限であるべきである。冷却手順は、例えば、プログラム可能な凍結装置又はメタノール浴手順の使用によって実施することができる。プログラム可能な冷凍装置は、最適な冷却速度の決定を可能にし、標準的な再現可能な冷却を容易にする。
【０３１９】
特定の実施形態では、ＤＭＳＯ処理した細胞を、氷であらかじめ冷却し、冷却メタノールを含むトレーに移してもよく、次に、これを−８０℃の機械的冷蔵庫（例えば、Ｈａｒｒｉｓ又はＲｅｖｃｏ）内に入れる。メタノール浴及びサンプルの熱電対測定値は、１℃〜３℃／分の冷却速度が好ましい場合があることを示している。少なくとも２時間後、標本は、温度−８０℃に達してもよく、液体窒素（−１９６℃）に直接入れられてもよい。
【０３２０】
十分に凍結させた後、長期凍結保存容器に細胞をすぐに移してもよい。好ましい実施形態では、サンプルは、液体窒素（−１９６℃）又は蒸気（−１℃）中で凍結保存されてもよい。このような保存は、高効率の液体窒素冷蔵庫が利用可能であれば促進される。
【０３２１】
細胞の操作、凍結保存及び長期保存のための更なる検討事項及び手順は、以下の例示的な参考文献中に見出すことができる。米国特許第４，１９９，０２２号；同第３，７５３，３５７号及び同第４，５５９，２９８号Ｇｏｒｉｎ、１９８６、Ｃｌｉｎｉｃｓ  Ｉｎ  Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ  １５（１）：１９−４８；Ｂｏｎｅ−Ｍａｒｒｏｗ  Ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ，Ｃｕｌｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ａ  Ｐａｎｅｌ，Ｍｏｓｃｏｗ、７月２２〜２６日、１９６８年、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｔｏｍｉｃ  Ｅｎｅｒｇｙ  Ａｇｅｎｃｙ、Ｖｉｅｎｎａ、ｐｐ．１０７−１８６；Ｌｉｖｅｓｅｙ及びＬｉｎｎｅｒ、１９８７、Ｎａｔｕｒｅ  ３２７：２５５；Ｌｉｎｎｅｒら、１９８６、Ｊ．Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．３４（９）：１  １２３−１  １３５；Ｓｉｍｉｏｎｅ、１９９２、Ｊ．Ｐａｒｅｎｔｅｒ．Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．４６（６）：２２６−３２）。
【０３２２】
凍結保存の後、凍結した細胞を、当業者に既知の方法に従って、使用するために解凍してもよい。凍結した細胞は、好ましくは迅速に解凍され、解凍直後に冷却される。特定の実施形態では、凍結した細胞を含有するバイアルを、温水浴中にその首部まで浸漬してもよく、穏やかに回転させることにより、解凍に伴い、細胞懸濁物を確実に混合し、温水から内部の氷塊への熱移動を増加させる。氷が完全に融けたらすぐに、バイアルを氷上に置いてもよい。
【０３２３】
特定の実施形態では、解凍中の細胞凝集を防止するための方法を使用することができる。例示的な方法としては、凍結前及び／又は凍結後のＤＮａｓｅの添加（Ｓｐｉｔｚｅｒら、１９８０、Ｃａｎｃｅｒ  ４５：３０７５−３０８５）、低分子量デキストラン及びクエン酸、ヒドロキシエチルデンプンの添加（Ｓｔｉｆｆら、１９８３、Ｃｒｙｏｂｉｏｌｏｇｙ  ２０：１７−２４）などが挙げられる。［０１６２］当業者には理解されるように、ヒトに毒性がある凍結保護剤が使用される場合、治療目的の使用の前に除去するべきである。ＤＭＳＯは、重大な毒性を有していない。
【０３２４】
細胞の例示的な担体及び投与態様は、米国特許公開第２０１０／０１８３５６４号のページ１４−１５に記載されている。更なる医薬担体は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、２１ｓｔ  Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｄａｖｉｄ  Ｂ．Ｔｒｏｙ編集、Ｌｉｐｐｉｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ及びＷｉｌｋｉｎｓ（２００５）に記載されている。
【０３２５】
特定の実施形態では、細胞を培養培地から収集し、洗浄し、治療有効量で担体に濃縮することができる。例示的な担体としては、食塩水、緩衝化食塩水、生理食塩水、水、Ｈａｎｋｓ溶液、Ｒｉｎｇｅｒ溶液、Ｎｏｎｎｏｓｏｌ−Ｒ（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｓ）、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ  Ａ（Ｒ）（Ｂａｘｔｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．、モートングローブ、ＩＬ）、グリセロール、エタノール、及びこれらの組み合わせが挙げられる。
【０３２６】
特定の実施形態では、担体は、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）又は他のヒト血清成分又はウシ胎児血清を追加してもよい。特定の実施形態では、注入用担体は、５％ＨＡＳ又はデキストロースを含む緩衝化食塩水を含む。更なる等張化剤として、三価以上の糖アルコールを含む多価糖アルコール、例えば、グリセリン、エリスリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトール及びマンニトールが挙げられる。
【０３２７】
担体としては、緩衝剤、例えば、クエン酸緩衝剤、コハク酸緩衝剤、酒石酸緩衝剤、フマル酸緩衝剤、グルコン酸緩衝剤、シュウ酸緩衝剤、乳酸緩衝剤、酢酸緩衝剤、リン酸緩衝剤、ヒスチジン緩衝剤、及び／又はトリメチルアミン塩を挙げることができる。
【０３２８】
安定化剤は、増量剤から、容器壁への細胞の付着を防止するのに役立つ添加剤までの機能範囲であり得る広範なカテゴリーの賦形剤を指す。典型的な安定化剤としては、多価糖アルコール；アミノ酸、例えば、アルギニン、リジン、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アラニン、オルニチン、Ｌ−ロイシン、２−フェニルアラニン、グルタミン酸及びスレオニン；有機糖又は糖アルコール、例えば、ラクトース、トレハロース、スタキオース、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、リビトール、ミオニシトール、ガラクチトール、グリセロール及びシクリトール、例えば、イノシトール；ＰＥＧ；アミノ酸ポリマー；硫黄含有還元剤、例えば、尿素、グルタチオン、チオクト酸、チオグリコール酸ナトリウム、チオグリセロール、α−モノチオグリセロール及びチオ硫酸ナトリウム；低分子量ポリペプチド（すなわち、１０残基未満）；ＨＳＡ、ウシ血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリンなどのタンパク質；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；単糖類、例えば、キシロース、マンノース、フルクトース及びグルコース；二糖類、例えば、ラクトース、マルトース及びショ糖；三糖類、例えば、ラフィノース、及び多糖類、例えば、デキストランが挙げられる。
【０３２９】
必要な場合又は有益な場合、組成物は、注射部位での痛みを和らげるリドカインなどの局所麻酔薬を含んでいてもよい。
【０３３０】
例示的な防腐剤としては、フェノール、ベンジルアルコール、メタ−クレゾール、メチルパラベン、プロピルパラベン、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、ハロゲン化ベンザルコニウム、塩化ヘキサメトニウム、アルキルパラベン、例えば、メチルパラベン又はプロピルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール及び３−ペンタノールが挙げられる。
【０３３１】
組成物内の細胞の治療有効な量は、１０２個より多く、１０３個より多く、１０４個より多く、１０５個より多く、１０６個より多く、１０７個より多く、１０８個より多く、１０９個より多く、１０１０個より多く、又は１０１１個より多くてもよい。
【０３３２】
本明細書に開示される組成物及び製剤において、細胞は、一般的に、１リットル以下、５００ｍＬ以下、２５０ｍＬ以下、又は１００ｍＬ以下の体積である。したがって、投与される細胞の密度は、典型的には、１０４個／ｍＬより大きく、１０７個／ｍＬより大きく、又は１０８個／ｍＬより大きい。
【０３３３】
本明細書では、本明細書に記載されるｃａＴＣＲをコードする核酸のいずれかを含む、ｃａＴＣＲ核酸組成物（例えば、医薬組成物、本明細書では製剤とも呼ばれる）も提供される。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ核酸組成物は、医薬組成物である。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ核酸組成物は、等張化剤、賦形剤、希釈剤、増粘剤、安定化剤、緩衝剤、及び／又は防腐剤、及び／又は水性ビヒクル、例えば、精製水、水性糖溶液、緩衝液、生理食塩水、水性ポリマー溶液、又はＲＮａｓｅフリー水のいずれかを更に含む。添加されるこのような添加剤及び水性ビヒクルの量は、ｃａＴＣＲ核酸組成物の使用形態に従って好適に選択することができる。
【０３３４】
本明細書に開示される組成物及び製剤は、例えば、注射、注入、灌流、又は洗浄によって投与するために調製することができる。組成物及び製剤は、更に、骨髄、静脈内、皮内、動脈内、節内、リンパ管内、腹腔内、病変内、前立腺内、膣内、直腸内、局所、髄腔内、腫瘍内、筋肉内、小胞内及び／又は皮下注射用に配合することができる。
【０３３５】
ｉｎ  ｖｉｖｏ投与に使用される製剤は、無菌でなければならない。これは、例えば、滅菌濾過膜を通した濾過によって容易に達成される。
ｃａＴＣＲを使用した治療方法
【０３３６】
本発明のｃａＴＣＲ及び／又は組成物は、例えば、癌及び感染性疾患（例えばウイルス感染）を含め、標的抗原（ＴＡ）発現に関連する疾患及び／又は障害（本明細では、「標的抗原陽性」又は「ＴＡ陽性」疾患又は障害とも呼ばれる）を治療するために、個体（例えば、ヒトなどの哺乳動物）に投与することができる。したがって、本出願は、いくつかの実施形態では、個体において標的抗原陽性疾患（例えば、癌又はウイルス感染）を治療するための方法であって、抗体部分を含むｃａＴＣＲ（例えば、本明細書に記載のｃａＴＣＲのいずれか１つ）を含む組成物（例えば、医薬組成物）を有効量、個体に投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、組成物は、ｃａＴＣＲに関連する細胞（エフェクター細胞など）を更に含む。いくつかの実施形態では、癌は、例えば、副腎皮質癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、胆管癌、大腸癌、食道癌、神経膠芽腫、神経膠腫、肝細胞癌、頭頸部癌、腎臓癌、肺癌、黒色腫、中皮腫、多発性骨髄腫、膵臓癌、褐色細胞腫、形質細胞腫、神経芽腫、卵巣癌、前立腺癌、肉腫、胃癌、子宮癌及び甲状腺癌からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ウイルス感染は、例えば、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、エプスタインバールウイルス（ＥＢＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、伝染性軟属腫ウイルス（ＭＣＶ）、ヒトＴ細胞白血病ウイルス１（ＨＴＬＶ−１）、ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス）及びＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）からなる群から選択されるウイルスによって引き起こされる。
【０３３７】
例えば、いくつかの実施形態では、標的抗原関連疾患の治療を必要とする個体において、当該疾患を治療する方法であって、（ａ）天然に存在するＴＣＲの膜貫通ドメインの１つに由来する第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤと天然に存在するＴＣＲの他の膜貫通ドメインに由来する第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤを含み、ＴＣＲ−ＴＭのうち少なくとも１つが天然に存在しないものであり、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能なＴＣＲＭを形成し、（ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールであって、抗原結合モジュールが、第１のＴＣＲＤ及び／又は第２のＴＣＲＤに結合する、抗原結合モジュールを含む、その表面上でｃａＴＣＲ（例えば、単離されたｃａＴＣＲ）を提示するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はナチュラルキラー細胞）を含む組成物を有効量、個体に投与することを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、天然に存在するＴＣＲは、αβＴＣＲであり、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び第２のＴＣＲ−ＴＭは、ＴＣＲα及びβサブユニット膜貫通ドメインに由来する。いくつかの実施形態では、天然に存在するＴＣＲは、γδＴＣＲであり、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び第２のＴＣＲ−ＴＭは、ＴＣＲγ及びδサブユニット膜貫通ドメインに由来する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドは、第１のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットの接続ペプチドの全て又は一部、又はその多様体を含み、及び／又は第２の接続ペプチドは、第２のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットの接続ペプチドの全て又は一部、又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドと第２の接続ペプチドは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメインは、第１のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットの細胞内ドメインに由来する配列を含み、及び／又は第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、第２のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットの細胞内ドメインに由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットのフラグメントであり、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットのフラグメントである。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０又はＣＤ４０由来）を含む少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインとを含む安定化モジュールを更に含み、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定��する互いに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインは、ＣＨ１及びＣＬ抗体ドメインなどの抗体部分、又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、天然に存在するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することを可能にする。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ−ＣＤ３複合体の形成を促進する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュール、安定化モジュール及びＴＣＲＭのいずれかの間にスペーサーモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、多重特異性（例えば、二重特異性）である。いくつかの実施形態では、標的抗原は、細胞表面抗原である。いくつかの実施形態では、細胞表面抗原は、タンパク質、炭水化物及び脂質からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、細胞表面抗原は、腫瘍関連抗原又はウイルスによってコードされる抗原などの疾患関連抗原である。いくつかの実施形態では、細胞表面抗原は、ＣＤ１９、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ又はＦＣＲＬ５である。いくつかの実施形態では、標的抗原は、表面提示ペプチド／ＭＨＣ複合体である。いくつかの実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、疾患関連抗原（腫瘍関連抗原又はウイルスによってコードされる抗原など）に由来するペプチドと、ＭＨＣタンパク質とを含む。いくつかの実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、ペプチドとＭＨＣタンパク質とを含み、ペプチドは、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１、ＫＲＡＳ、Ｈｉｓｔｏｎｅ  Ｈ３．３及びＰＳＡからなる群から選択されるタンパク質に由来し、これらの多様体又は変異体を含む。いくつかの実施形態では、ＭＨＣタンパク質は、ＭＨＣクラスＩタンパク質である。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａである。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ−Ａは、ＨＬＡ−Ａ０２である。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ−Ａ０２は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞は、γδＴ細胞である。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲα鎖及び／又はβ鎖の発現を遮断するか、又は減少させるように改変されているαβＴ細胞である。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞は、細胞毒性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。
【０３３８】
いくつかの実施形態では、標的抗原関連疾患（例えば、癌又はウイルス感染）の治療を必要とする個体において、当該疾患を治療する方法であって、（ａ）天然に存在するＴＣＲの膜貫通ドメインの１つに由来する第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤと天然に存在するＴＣＲの他の膜貫通ドメインに由来する第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤを含み、ＴＣＲ−ＴＭのうち少なくとも１つが天然に存在しないものであり、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能なＴＣＲＭを形成し、（ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールであって、抗原結合モジュールが、第１のＴＣＲＤ及び／又は第２のＴＣＲＤに結合する、抗原結合モジュールを含む、その表面上で、標的抗原を特異的に認識するｃａＴＣＲを提示するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はナチュラルキラー細胞）を含む組成物を有効量、個体に投与することを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドは、第１のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットの接続ペプチドの全て又は一部、又はその多様体を含み、及び／又は第２の接続ペプチドは、第２のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットの接続ペプチドの全て又は一部、又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドと第２の接続ペプチドは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメインは、第１のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットの細胞内ドメインに由来する配列を含み、及び／又は第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、第２のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットの細胞内ドメインに由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットのフラグメントであり、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットのフラグメントである。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０又はＣＤ４０由来）を含む少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインとを含む安定化モジュールを更に含み、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化する互いに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインは、ＣＨ１及びＣＬ抗体ドメインなどの抗体部分、又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、天然に存在するαβＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することを可能にする。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ−ＣＤ３複合体の形成を促進する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュール、安定化モジュール及びＴＣＲＭのいずれかの間にスペーサーモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、多重特異性（例えば、二重特異性）である。
【０３３９】
いくつかの実施形態では、標的抗原関連疾患（例えば、癌又はウイルス感染）の治療を必要とする個体において、当該疾患を治療する方法であって、（ａ）天然に存在するγδＴＣＲの膜貫通ドメインの１つに由来する第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤと天然に存在するγδＴＣＲの他の膜貫通ドメインに由来する第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤを含み、ＴＣＲ−ＴＭのうち少なくとも１つが天然に存在しないものであり、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能なＴＣＲＭを形成し、（ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールであって、抗原結合モジュールが、第１のＴＣＲＤ及び／又は第２のＴＣＲＤに結合する、抗原結合モジュールを含む、その表面上で、標的抗原を特異的に認識するｃａＴＣＲを提示するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はナチュラルキラー細胞）を含む組成物を有効量、個体に投与することを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドは、第１のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットの接続ペプチドの全て又は一部、又はその多様体を含み、及び／又は第２の接続ペプチドは、第２のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットの接続ペプチドの全て又は一部、又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドと第２の接続ペプチドは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメインは、第１のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットの細胞内ドメインに由来する配列を含み、及び／又は第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、第２のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットの細胞内ドメインに由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットのフラグメントであり、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットのフラグメントである。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０又はＣＤ４０由来）を含む少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインとを含む安定化モジュールを更に含み、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化する互いに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインは、ＣＨ１及びＣＬ抗体ドメインなどの抗体部分、又はその多様体を含む。いくつかの実施形態���は、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、天然に存在するγδＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することを可能にする。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ−ＣＤ３複合体の形成を促進する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュール、安定化モジュール及びＴＣＲＭのいずれかの間にスペーサーモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、多重特異性（例えば、二重特異性）である。
【０３４０】
いくつかの実施形態では、標的抗原関連疾患（例えば、癌又はウイルス感染）の治療を必要とする個体において、当該疾患を治療する方法であって、（ａ）配列番号５及び配列番号６のアミノ酸配列の１つに由来する第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤと、他のアミノ酸配列に由来する第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤとを含み、ＴＣＲ−ＴＭのうち少なくとも１つが天然に存在しないものであり、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能なＴＣＲＭを形成し、（ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールであって、抗原結合モジュールが、第１のＴＣＲＤ及び／又は第２のＴＣＲＤに結合する、抗原結合モジュールを含む、その表面上で、標的抗原を特異的に認識するｃａＴＣＲを提示するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はナチュラルキラー細胞）を含む組成物を有効量、個体に投与することを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチド及び第２の接続ペプチドは、それぞれ互いに独立して、配列番号２７〜３４又はこれらの多様体のうちいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドと第２の接続ペプチドは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメイン及び第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、それぞれ互いに独立して、配列番号３５又は３６又はこれらの多様体のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０又はＣＤ４０由来）を含む少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインとを含む安定化モジュールを更に含み、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化する互いに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインは、ＣＨ１及びＣＬ抗体ドメインなどの抗体部分、又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、配列番号５及び６の配列を有するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ−ＣＤ３複合体の形成を促進する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュール、安定化モジュール及びＴＣＲＭのいずれかの間にスペーサーモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、多重特異性（例えば、二重特異性）である。
【０３４１】
いくつかの実施形態では、標的抗原関連疾患（例えば、癌又はウイルス感染）の治療を必要とする個体において、当該疾患を治療する方法であって、（ａ）配列番号５及び配列番号６のアミノ酸配列の１つに由来する第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤと、他のアミノ酸配列に由来する第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤを含み、ＴＣＲ−ＴＭの少なくとも１つが、その由来となるアミノ酸配列と比較して、１つ以上（例えば、２、３、４、５、又はもっと多く）のアミノ酸置換を含み、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能なＴＣＲＭを形成し、（ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールであって、抗原結合モジュールが、第１のＴＣＲＤ及び／又は第２のＴＣＲＤに結合する、抗原結合モジュールとを含む、その表面上で、標的抗原を特異的に認識するｃａＴＣＲを提示するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はナチュラルキラー細胞）を含む組成物を有効量、個体に投与することを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ−ＴＭは、それぞれ互いに独立して、その由来となるアミノ酸配列と比較して、１つ以上（例えば、２、３、４、５、又はもっと多く）のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び／又は第２のＴＣＲ−ＴＭは、それぞれ互いに独立して、その由来となるアミノ酸配列と比較して、５個以下のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ−ＴＭの少なくとも１つは、その由来となるアミノ酸配列と比較して、単一のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ−ＴＭは、それぞれ、その由来となるアミノ酸配列と比較して、単一のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ−ＴＭ中の置換アミノ酸の少なくとも１つが、ｃａＴＣＲにおいて、第２のＴＣＲ−ＴＭ中の置換アミノ酸の少なくとも１つと相互作用し得るように配置される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチド及び第２の接続ペプチドは、それぞれ互いに独立して、配列番号２７〜３４又はこれらの多様体のうちいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドと第２の接続ペプチドは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメイン及び第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、それぞれ互いに独立して、配列番号３５又は３６又はこれらの多様体のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０又はＣＤ４０由来）を含む少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインとを含む安定化モジュールを更に含み、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化する互いに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインは、ＣＨ１及びＣＬ抗体ドメインなどの抗体部分、又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、配列番号５及び６の配列を有するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ−ＣＤ３複合体の形成を促進する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュール、安定化モジュール及びＴＣＲＭのいずれかの間にスペーサーモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、多重特異性（例えば、二重特異性）である。
【０３４２】
いくつかの実施形態では、的抗原関連疾患（例えば、癌又はウイルス感染）の治療を必要とする個体において、当該疾患を治療する方法であって、（ａ）配列番号５及び配列番号６のアミノ酸配列の１つに由来する第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤと、他のアミノ酸配列に由来する第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤを含み、ＴＣＲ−ＴＭの少なくとも１つが、配列番号７又は８に由来する連続アミノ酸の一部を含むキメラ配列を含み、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能なＴＣＲＭを形成し、（ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールであって、抗原結合モジュールが、第１のＴＣＲＤ及び／又は第２のＴＣＲＤに結合する、抗原結合モジュールを含む、その表面上で、標的抗原を特異的に認識するｃａＴＣＲを提示するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はナチュラルキラー細胞）を含む組成物を有効量、個体に投与することを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ−ＴＭは、それぞれ互いに独立して、配列番号７又は８に由来する連続アミノ酸の一部を含むキメラ配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び／又は第２のＴＣＲ−ＴＭは、それぞれ互いに独立して、配列番号７又は８に由来する約１０以下（例えば、約９、８、７、６、５以下、又はもっと少ない）の連続アミノ酸の一部を含むキメラ配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ−ＴＭ中又は第２のＴＣＲ−ＴＭ中のキメラ配列は、配列番号７に由来し、他方のＴＣＲ−ＴＭ中のキメラ配列は、配列番号８に由来する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ−ＴＭ中のキメラ配列は、第２のＴＣＲ−ＴＭ中のキメラ配列と相互作用し得るように配置される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチド及び第２の接続ペプチドは、それぞれ互いに独立して、配列番号２７〜３４又はこれらの多様体のうちいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドと第２の接続ペプチドは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメイン及び第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、それぞれ互いに独立して、配列番号３５又は３６又はこれらの多様体のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０又はＣＤ４０由来）を含む少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインとを含む安定化モジュールを更に含み、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化する互いに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインは、ＣＨ１及びＣＬ抗体ドメインなどの抗体部分、又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、配列番号５及び６の配列を有するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ−ＣＤ３複合体の形成を促進する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュール、安定化モジュール及びＴＣＲＭのいずれかの間にスペーサーモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、多重特異性（例えば、二重特異性）である。
【０３４３】
いくつかの実施形態では、標的抗原関連疾患（例えば、癌又はウイルス感染）の治療を必要とする個体において、当該疾患を治療する方法であって、（ａ）配列番号７及び配列番号８のアミノ酸配列の１つに由来する第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤと、他のアミノ酸配列に由来する第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤとを含み、ＴＣＲ−ＴＭのうち少なくとも１つが天然に存在しないものであり、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能なＴＣＲＭを形成し、（ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールであって、抗原結合モジュールが、第１のＴＣＲＤ及び／又は第２のＴＣＲＤに結合する、抗原結合モジュールを含む、その表面上で、標的抗原を特異的に認識するｃａＴＣＲを提示するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はナチュラルキラー細胞）を含む組成物を有効量、個体に投与することを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチド及び第２の接続ペプチドは、それぞれ互いに独立して、配列番号２７〜３４又はこれらの多様体のうちいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドと第２の接続ペプチドは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメイン及び第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、それぞれ互いに独立して、配列番号３５又は３６又はこれらの多様体のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０又はＣＤ４０由来）を含む少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインとを含む安定化モジュールを更に含み、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化する互いに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインは、ＣＨ１及びＣＬ抗体ドメインなどの抗体部分、又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、配列番号７及び８の配列を有するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ−ＣＤ３複合体の形成を促進する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュール、安定化モジュール及びＴＣＲＭのいずれかの間にスペーサーモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び第２のＴＣＲ−ＴＭは、表２に列挙したｃａＴＣＲのいずれかに従って選択される。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、多重特異性（例えば、二重特異性）である。
【０３４４】
いくつかの実施形態では、標的抗原関連疾患（例えば、癌又はウイルス感染）の治療を必要とする個体において、当該疾患を治療する方法であって、（ａ）配列番号７及び配列番号８のアミノ酸配列の１つに由来する第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤと、他のアミノ酸配列に由来する第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤを含み、ＴＣＲ−ＴＭの少なくとも１つが、その由来となるアミノ酸配列と比較して、１つ以上（例えば、２、３、４、５、又はもっと多く）のアミノ酸置換を含み、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能なＴＣＲＭを形成し、（ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールであって、抗原結合モジュールが、第１のＴＣＲＤ及び／又は第２のＴＣＲＤに結合する、抗原結合モジュールとを含む、その表面上で、標的抗原を特異的に認識するｃａＴＣＲを提示するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はナチュラルキラー細胞）を含む組成物を有効量、個体に投与することを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ−ＴＭは、それぞれ互いに独立して、その由来となるアミノ酸配列と比較して、１つ以上（例えば、２、３、４、５、又はもっと多く）のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び／又は第２のＴＣＲ−ＴＭは、それぞれ互いに独立して、その由来となるアミノ酸配列と比較して、５個以下のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ−ＴＭの少なくとも１つは、その由来となるアミノ酸配列と比較して、単一のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ−ＴＭは、それぞれ、その由来となるアミノ酸配列と比較して、単一のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ−ＴＭ中の置換アミノ酸の少なくとも１つが、ｃａＴＣＲにおいて、第２のＴＣＲ−ＴＭ中の置換アミノ酸の少なくとも１つと相互作用し得るように配置される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチド及び第２の接続ペプチドは、それぞれ互いに独立して、配列番号２７〜３４又はこれらの多様体のうちいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドと第２の接続ペプチドは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメイン及び第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、それぞれ互いに独立して、配列番号３５又は３６又はこれらの多様体のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０又はＣＤ４０由来）を含む少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化する互いに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインは、ＣＨ１及びＣＬ抗体ドメインなどの抗体部分、又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、配列番号７及び８の配列を有するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ−ＣＤ３複合体の形成を促進する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュール、安定化モジュール及びＴＣＲＭのいずれかの間にスペーサーモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び第２のＴＣＲ−ＴＭは、表２に列挙したｃａＴＣＲのいずれかに従って選択される。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、多重特異性（例えば、二重特異性）である。
【０３４５】
いくつかの実施形態では、標的抗原関連疾患（例えば、癌又はウイルス感染）の治療を必要とする個体において、当該疾患を治療する方法であって、（ａ）第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤであって、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び第２のＴＣＲ−ＴＭは、それぞれ、配列番号９及び８、７及び１４、７及び１５、７及び１６、１０及び１６、７及び１７、７及び１８、７及び１９、７及び２０、７及び２１、７及び２２、１１及び２３、１２及び２４、７及び２５、又は１３及び２６のアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になり、又はこれらからなり、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能なＴＣＲＭを形成し、（ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールであって、抗原結合モジュールが、第１のＴＣＲＤ及び／又は第２のＴＣＲＤに結合する、抗原結合モジュールとを含む、その表面上で、標的抗原を特異的に認識するｃａＴＣＲを提示するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はナチュラルキラー細胞）を含む組成物を有効量、個体に投与することを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ及び単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、抗体部分は、限定されないが、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＧＰＣ−３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ及びＦＣＲＬ５を含み、これらの多様体又は変異体を含む、細胞表面抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的に結合し、ペプチドは、限定されないが、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１、ＫＲＡＳ、Ｈｉｓｔｏｎｅ  Ｈ３．３及びＰＳＡを含み、これらの多様体又は変異体を含む、タンパク質に由来する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドは、配列番号３１又は３２のアミノ酸配列又はその多様体を含み、及び／又は第２の接続ペプチドは、配列番号３３又は３４のアミノ酸配列又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドと第２の接続ペプチドは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、配列番号３６のアミノ酸配列又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０又はＣＤ４０由来）を含む少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１の安���化ドメイン及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化する互いに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、配列番号７及び８の配列を有するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ−ＣＤ３複合体の形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール又はドメインの間にスペーサーモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、多重特異性（例えば、二重特異性）である。
【０３４６】
いくつかの実施形態では、標的抗原関連疾患（例えば、癌又はウイルス感染）の治療を必要とする個体において、当該疾患を治療する方法であって、（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列を有する第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤと、配列番号１６のアミノ酸配列を有する第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤとを含み、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能なＴＣＲＭを形成し、（ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールであって、抗原結合モジュールが、第１のＴＣＲＤ及び／又は第２のＴＣＲＤに結合する、抗原結合モジュールを含む、その表面上で、標的抗原を特異的に認識するｃａＴＣＲを提示するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はナチュラルキラー細胞）を含む組成物を有効量、個体に投与することを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ及び単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、抗体部分は、限定されないが、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＧＰＣ−３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ及びＦＣＲＬ５を含み、これらの多様体又は変異体を含む、細胞表面抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的に結合し、ペプチドは、限定されないが、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１、ＫＲＡＳ、Ｈｉｓｔｏｎｅ  Ｈ３．３及びＰＳＡを含み、これらの多様体又は変異体を含む、タンパク質に由来する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドは、配列番号３１又は３２のアミノ酸配列又はその多様体を含み、及び／又は第２の接続ペプチドは、配列番号３３又は３４のアミノ酸配列又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドと第２の接続ペプチドは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、配列番号３６のアミノ酸配列又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０又はＣＤ４０由来）を含む少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化する互いに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、配列番号７及び８の配列を有するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ−ＣＤ３複合体の形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール又はドメインの間にスペーサーモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、多重特異性（例えば、二重特異性）である。
【０３４７】
いくつかの実施形態では、標的抗原関連疾患（例えば、癌又はウイルス感染）の治療を必要とする個体において、当該疾患を治療する方法であって、（ａ）配列番号７及び配列番号８のアミノ酸配列の１つに由来する第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤと、他のアミノ酸配列に由来する第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤを含み、ＴＣＲ−ＴＭの少なくとも１つが、配列番号５又は６に由来する連続アミノ酸の一部を含むキメラ配列を含み、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能なＴＣＲＭを形成し、（ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールであって、抗原結合モジュールが、第１のＴＣＲＤ及び／又は第２のＴＣＲＤに結合する、抗原結合モジュールを含む、その表面上で、標的抗原を特異的に認識するｃａＴＣＲを提示するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はナチュラルキラー細胞）を含む組成物を有効量、個体に投与することを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ−ＴＭは、それぞれ互いに独立して、配列番号５又は６に由来する連続アミノ酸の一部を含むキメラ配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び／又は第２のＴＣＲ−ＴＭは、それぞれ互いに独立して、配列番号７又は８に由来する約１０以下（例えば、約９、８、７、６、５以下、又はもっと少ない）の連続アミノ酸の一部を含むキメラ配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ−ＴＭ中又は第２のＴＣＲ−ＴＭ中のキメラ配列は、配列番号５に由来し、他方のＴＣＲ−ＴＭ中のキメラ配列は、配列番号６に由来する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ−ＴＭ中のキメラ配列は、第２のＴＣＲ−ＴＭ中のキメラ配列と相互作用し得るように配置される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチド及び第２の接続ペプチドは、それぞれ互いに独立して、配列番号２７〜３４又はこれらの多様体のうちいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドと第２の接続ペプチドは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメイン及び第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、それぞれ互いに独立して、配列番号３５又は３６又はこれらの多様体のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０又はＣＤ４０由来）を含む少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化する互いに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインは、ＣＨ１及びＣＬ抗体ドメインなどの抗体部分、又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、配列番号７及び８の配列を有するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ−ＣＤ３複合体の形成を促進する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュール、安定化モジュール及びＴＣＲＭのいずれかの間にスペーサーモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、多重特異性（例えば、二重特異性）である。
【０３４８】
いくつかの実施形態では、第１の標的抗原及び第２の標的抗原に関連する疾患（例えば、癌又はウイルス感染）の治療を必要とする個体において、当該疾患を治療する方法であって、その表面上でｃａＴＣＲを提示するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はナチュラルキラー細胞）を含む組成物を有効量、個体に投与することを含み、このｃａＴＣＲが、（ａ）第１の標的抗原に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインと第２の標的抗原に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインを含む多重特異性（例えば、二重特異性）抗原結合モジュールと、（ｂ）第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ（ＴＣＲＤ１）と第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤ（ＴＣＲＤ２）を含むＴＣＲＭとを含み、ＴＣＲＭが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を促進する、ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドは、第１のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットの接続ペプチドの全て又は一部、又はその多様体を含み、及び／又は第２の接続ペプチドは、第２のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットの接続ペプチドの全て又は一部、又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、第１の接続ペプチドと第２の接続ペプチドは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメインは、第１のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットの細胞内ドメインに由来する配列を含み、及び／又は第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、第２のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットの細胞内ドメインに由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットのフラグメントであり、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ−ＴＭの由来となるＴＣＲサブユニットのフラグメントである。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０又はＣＤ４０由来）を含む少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化する互いに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって結合する。いくつかの実施形態では、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインは、ＣＨ１及びＣＬ抗体ドメインなどの抗体部分、又はその多様体を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、天然に存在するαβＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することを可能にする。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ−ＣＤ３複合体の形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール又はドメインの間にスペーサーモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び第２のＴＣＲ−ＴＭは、両方とも天然に存在する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ−ＴＭのうち少なくとも１つは、天然に存在しない。いくつかの実施形態では、第１の標的抗原はＣＤ１９であり、第２の標的抗原はＣＤ２２であるか、又は第１の標的抗原はＣＤ２２であり、第２の標的抗原はＣＤ１９である。いくつかの実施形態では、第１の標的抗原はＣＤ１９であり、第２の標的抗原はＣＤ２０であるか、又は第１の標的抗原はＣＤ２０であり、第２の標的抗原はＣＤ１９である。いくつかの実施形態では、疾患は、白血病である。
【０３４９】
また、標的抗原関連疾患を治療する必要がある個体において、当該疾患を治療する方法であって、異なるｃａＴＣＲを発現する複数のエフェクター細胞を含む組成物を個体に投与することを含む方法も想定される。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載される個体において標的抗原関連疾患を治療するための方法のいずれかによれば、組成物は、本明細書に記載されるような不均一なｃａＴＣＲエフェクター細胞組成物である。
【０３５０】
例えば、いくつかの実施形態では、標的抗原関連疾患（例えば、癌又はウイルス感染）の治療を必要とする個体において、当該疾患を治療する方法であって、本明細書に記載のいずれかの実施形態に係る複数のｃａＴＣＲエフェクター細胞の集団を含む不均一なｃａＴＣＲエフェクター細胞組成物を有効量、個体に投与することを含み、組成物中のｃａＴＣＲエフェクター細胞の全てが、同じ細胞型を有し（例えば、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の全てが細胞毒性Ｔ細胞である）、ｃａＴＣＲエフェクター細胞のそれぞれの集団が、他の集団とは異なるｃａＴＣＲを発現し、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の少なくとも１つの集団が、標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲを発現する、方法が提供される。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞は、細胞毒性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の各集団は、標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲを発現する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の少なくとも１つの集団は、異なる標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲを発現する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の少なくとも１つの集団が、異なる標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲを発現する場合、異なる標的抗原はそれぞれ、標的抗原関連疾患と関連する。
【０３５１】
いくつかの実施形態では、標的抗原関連疾患（例えば、癌又はウイルス感染）の治療を必要とする個体において、当該疾患を治療する方法であって、本明細書に記載のいずれかの実施形態に係る複数のｃａＴＣＲエフェクター細胞の集団を含む不均一なｃａＴＣＲエフェクター細胞組成物を有効量、個体に投与することを含み、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の少なくとも１つの集団が、他の集団とは異なる細胞型を有し、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の少なくとも１つの集団が、標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲを発現する、方法が提供される。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の集団は全て、異なる細胞型を有する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の各集団は、互いに独立して、細胞毒性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される細胞型を有する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の各集団は、同じｃａＴＣＲを発現する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の少なくとも１つの集団は、他の集団とは異なるｃａＴＣＲを発現する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の各集団は、他の集団とは異なるｃａＴＣＲを発現する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の各集団は、標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲを発現する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の少なくとも１つの集団は、異なる標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲを発現する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の少なくとも１つの集団が、異なる標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲを発現する場合、異なる標的抗原はそれぞれ、標的抗原関連疾患と関連する。
【０３５２】
いくつかの実施形態では、複数の標的抗原に関連する疾患の治療を必要とする個体において、当該疾患を治療する方法であって、本明細書に記載のいずれかの実施形態に係る複数のｃａＴＣＲエフェクター細胞の集団を含む不均一なｃａＴＣＲエフェクター細胞組成物を有効量、個体に投与することを含み、組成物中のｃａＴＣＲエフェクター細胞の全てが、同じ細胞型を有し（例えば、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の全てが細胞毒性Ｔ細胞である）、ｃａＴＣＲエフェクター細胞のそれぞれの集団が、他の集団とは異なるｃａＴＣＲを発現し、複数の標的抗原のそれぞれの標的抗原について、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の少なくとも１つの集団が、標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲを発現する、方法が提供される。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞は、細胞毒性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。
【０３５３】
いくつかの実施形態では、複数の標的抗原に関連する疾患の治療を必要とする個体において、当該疾患を治療する方法であって、本明細書に記載のいずれかの実施形態に係る複数のｃａＴＣＲエフェクター細胞の集団を含む不均一なｃａＴＣＲエフェクター細胞組成物を有効量、個体に投与することを含み、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の少なくとも１つの集団が、他の集合とは異なる細胞型を有し、複数の標的抗原のそれぞれの標的抗原について、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の少なくとも１つの集団が、標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲを発現する、方法が提供される。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の集団は全て、異なる細胞型を有する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の各集団は、互いに独立して、細胞毒性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される細胞型を有する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞の各集団は、他の集団とは異なるｃａＴＣＲを発現する。
【０３５４】
いくつかの実施形態では、個体は、哺乳動物（例えば、ヒト、非ヒト霊長類、ラット、マウス、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコなど）である。いくつかの実施形態では、個体はヒトである。いくつかの実施形態では、個体は、臨床患者、臨床試験志願者、実験動物などである。いくつかの実施形態では、個体は、約６０歳より若い（例えば、５０歳、４０歳、３０歳、２５歳、２０歳、１５歳又は１０歳より若いのいずれかを含む）。いくつかの実施形態では、個体は、約６０歳よりも年上である（例えば、７０歳、８０歳、９０歳又は１００歳より年上のいずれかを含む）。いくつかの実施形態では、個体は、本明細書に記載の疾患又は障害（例えば、癌又はウイルス感染）の１つ以上であると診断されているか、又は環境的又は遺伝的にこれらにかかりやすい。いくつかの実施形態では、個体は、本明細書に記載の１つ以上の疾患又は障害に関連する１つ以上のリスク因子を有する。
【０３５５】
いくつかの実施形態では、本発明のｃａＴＣＲエフェクター細胞組成物は、標的抗原の発現を伴う疾患又は障害を治療するために、第２、第３又は第４の薬剤（例えば、抗新生物剤、成長阻害剤、細胞毒性剤又は化学療法剤）と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞組成物は、サイトカイン（ＩＬ−２など）と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、ＭＨＣタンパク質の発現を増加させるか、及び／又はＭＨＣタンパク質によるペプチドの表面提示を増強する薬剤と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、薬剤としては、例えば、ＩＦＮ受容体アゴニスト、Ｈｓｐ９０阻害剤、ｐ５３発現のエンハンサー及び化学療法剤が挙げられる。いくつかの実施形態では、薬剤は、例えば、ＩＦＮγ、ＩＦＮβ及びＩＦＮαを含むＩＦＮ受容体アゴニストである。いくつかの実施形態では、薬剤は、例えば、タネスピマイシン（１７−ＡＡＧ）、アルベスピマイシン（１７−ＤＭＡＧ）、レタスピマイシン（ＩＰＩ−５０４）、ＩＰＩ−４９３、ＣＮＦ２０２４／ＢＩＩＢ０２１、ＭＰＣ−３１００、Ｄｅｂｉｏ  ０９３２（ＣＵＤＣ−３０５）、ＰＵ−Ｈ７１、ガネテスピブ（ＳＴＡ−９０９０）、ＮＶＰ−ＡＵＹ９２２（ＶＥＲ−５２２６９）、ＨＳＰ９９０、ＫＷ−２４７８、ＡＴ１３３８７、ＳＮＸ−５４２２、ＤＳ−２２４８及びＸＬ８８８を含む、Ｈｓｐ９０阻害剤である。いくつかの実施形態では、薬剤は、例えば、５−フルオロウラシル及びヌトリン−３を含む、ｐ５３発現のエンハンサーである。いくつかの実施形態では、薬剤は、例えば、トポテカン、エトポシド、シスプラチン、パクリタキセル及びビンブラスチンを含む化学療法剤である。
【０３５６】
いくつかの実施形態では、標的抗原陽性疾患の治療を必要とする個体において、当該疾患を治療する方法であって、本明細書に記載の実施形態のいずれかに係るｃａＴＣＲエフェクター細胞組成物を、サイトカイン（例えばＩＬ−２）と組み合わせて個体に投与することを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞組成物とサイトカインは、同時に投与される。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞組成物とサイトカインは、順次投与される。
【０３５７】
いくつかの実施形態では、標的抗原陽性疾患の治療を必要とする個体において、当該疾患を治療する方法であって、標的抗原を発現する細胞が、標的抗原とＭＨＣクラスＩタンパク質とを含む複合体がその表面に通常は存在しないか、又は比較的低レベルで存在し、この方法は、本明細書に記載の実施形態のいずれかに係るｃａＴＣＲエフェクター細胞組成物を、ＭＨＣクラスＩタンパク質の発現を高めるか、及び／又はＭＨＣクラスＩタンパク質によって標的抗原の表面提示を増強させる薬剤と組み合わせて個体に投与することを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、薬剤としては、例えば、ＩＦＮ受容体アゴニスト、Ｈｓｐ９０阻害剤、ｐ５３発現のエンハンサー及び化学療法剤が挙げられる。いくつかの実施形態では、薬剤は、例えば、ＩＦＮγ、ＩＦＮβ及びＩＦＮαを含むＩＦＮ受容体アゴニストである。いくつかの実施形態では、薬剤は、例えば、タネスピマイシン（１７−ＡＡＧ）、アルベスピマイシン（１７−ＤＭＡＧ）、レタスピマイシン（ＩＰＩ−５０４）、ＩＰＩ−４９３、ＣＮＦ２０２４／ＢＩＩＢ０２１、ＭＰＣ−３１００、Ｄｅｂｉｏ  ０９３２（ＣＵＤＣ−３０５）、ＰＵ−Ｈ７１、ガネテスピブ（ＳＴＡ−９０９０）、ＮＶＰ−ＡＵＹ９２２（ＶＥＲ−５２２６９）、ＨＳＰ９９０、ＫＷ−２４７８、ＡＴ１３３８７、ＳＮＸ−５４２２、ＤＳ−２２４８及びＸＬ８８８を含む、Ｈｓｐ９０阻害剤である。いくつかの実施形態では、薬剤は、例えば、５−フルオロウラシル及びヌトリン−３を含む、ｐ５３発現のエンハンサーである。いくつかの実施形態では、薬剤は、例えば、トポテカン、エトポシド、シスプラチン、パクリタキセル及びビンブラスチンを含む化学療法剤である。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞組成物と薬剤は、同時に投与される。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞組成物と薬剤は、順次投与される。
【０３５８】
いくつかの実施形態では、標的抗原関連疾患の治療を必要とする個体において、当該疾患（例えば、癌又はウイルス感染）を治療する方法であって、本明細書に記載の実施形態のいずれかに係るｃａＴＣＲをコードする核酸を含む組成物を有効量、個体に投与することを含む、方法が提供される。遺伝子送達の方法は、当該技術分野において既知である。例えば、その全体が本明細書に参考として組み込まれる米国特許第５，３９９，３４６号、同第５，５８０，８５９号、同第５，５８９，４６６号を参照。
【０３５９】
癌治療は、例えば、腫瘍退縮、腫瘍の重量又は大きさの収縮、進行するまでの時間、生存期間、無増悪生存率、全奏効率、応答期間、生活の質、タンパク質発現及び／又は活性によって評価することができる。治療の効能を判定するための手法は、例えば、放射線イメージングによる応答の測定を含め、利用することができる。
【０３６０】
いくつかの実施形態では、治療の効能は、腫瘍成長阻害率（％ＴＧＩ）として測定され、式１００−（Ｔ／Ｃ×１００）を用いて計算され、ここで、Ｔは、治療される腫瘍の平均相対腫瘍体積であり、Ｃは、治療されていない腫瘍の平均相対腫瘍体積である。いくつかの実施形態では、％ＴＧＩは、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％であるか、又は９５％より大きい。
【０３６１】
ウイルス感染治療は、例えば、ウイルス負荷、生存期間、生活の質、タンパク質発現及び／又は活性によって評価することができる。
疾患
【０３６２】
ｃａＴＣＲエフェクター細胞は、いくつかの実施形態では、標的抗原と関連する癌を治療するのに有用であり得る。本明細書に記載される方法のいずれかを使用して治療され得る癌としては、血管形成されていないか、又はまだ実質的に血管形成されていない腫瘍、及び血管形成された腫瘍が挙げられる。癌は、非固形腫瘍（例えば、血液腫瘍、例えば、白血病及びリンパ腫）を含んでもよく、又は固形腫瘍を含んでもよい。本発明のｃａＴＣＲエフェクター細胞で治療される癌の種類としては、限定されないが、癌腫、芽腫及び肉腫、及び特定の白血病又はリンパ系悪性腫瘍、良性及び悪性の腫瘍、及び悪性腫瘍、例えば、肉腫、癌腫及び黒色腫が挙げられる。成人腫瘍／癌及び小児腫瘍／癌もまた含まれる。
【０３６３】
血液癌は、血液又は骨髄の癌である。血液学的（又は血液系）癌の例としては、急性白血病（急性リンパ性白血病、急性骨髄球性白血病、急性骨髄性白血病及び骨髄芽球性、前骨髄球性、骨髄球性、単球性及び赤血球性白血病など）、慢性白血病（慢性骨髄球性（顆粒球）白血病など）、慢性骨髄性白血病及び慢性リンパ性白血病）、真性多血症、リンパ腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫（緩慢性及び高悪性度形態）、多発性骨髄腫、形質細胞腫、ワルデンストロムマクログロブリン血症、重鎖病、骨髄異形成症候群、有毛細胞白血病及び骨髄異形成症が挙げられる。
【０３６４】
固形腫瘍は、通常、嚢胞又は液体領域を含まない、異常な組織の塊である。固形腫瘍は、良性であってもよく、又は悪性であってもよい。異なる種類の固形腫瘍は、それらを形成する細胞の種類について命名されている（例えば、肉腫、癌腫及びリンパ腫）。肉腫及び癌腫などの固形腫瘍の例としては、副腎皮質癌、胆管癌、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、及び他の肉腫、滑液腫瘍、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、胃癌、リンパ腫悪性疾患、膵臓癌、乳癌、肺癌、卵巣癌、前立腺癌、肝細胞癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、甲状腺癌（例えば、髄甲状腺癌及び乳頭甲状腺癌）、褐色細胞腫、脂腺癌、乳頭癌、乳糖腺癌、髄様癌、気管支癌、腎細胞癌、肝癌、胆管癌、絨毛腫、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌（例えば、子宮頸癌及び子宮頸部異形成）、大腸直腸癌、肛門、肛門管又は肛門直腸の癌、膣癌、陰門癌（例えば、扁平上皮癌、上皮内癌、腺癌及び線維肉腫）、陰茎癌、口腔咽頭癌、食道癌、頭部癌（例えば、扁平上皮癌）、頸部癌（例えば、扁平上皮癌）、精巣癌（例えば、精上皮腫、奇形腫、胎生期癌、奇形癌、絨毛腫、肉腫、ライディッヒ細胞腫、線維腫、線維腺腫、類腺腫瘍及び脂肪腫）、膀胱癌、腎臓癌、黒色腫、子宮の癌（例えば、子宮内膜癌）、尿路上皮癌（例えば、扁平上皮癌、移行上皮癌、腺癌、尿管癌及び膀胱癌）、及びＣＮＳ腫瘍（例えば、神経膠腫（例えば、脳幹神経膠腫及び混合性神経膠腫）、膠芽細胞腫（多形性膠芽腫としても知られている）、星状細胞腫、ＣＮＳリンパ腫、胚細胞腫、髄芽腫、シュワンノーマ頭蓋骨髄腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、神経芽細胞腫、網膜芽腫及び脳転移）が挙げられる。
【０３６５】
癌治療は、例えば、腫瘍退縮、腫瘍の重量又は大きさの収縮、進行するまでの時間、生存期間、無増悪生存率、全奏効率、応答期間、生活の質、タンパク質発現及び／又は活性によって評価することができる。治療の効能を判定するための手法は、例えば、放射線イメージングによる応答の測定を含め、利用することができる。
【０３６６】
他の実施形態におけるｃａＴＣＲエフェクター細胞は、病原体関連（ウイルスによってコードされる）抗原を標的とすることによって感染症を治療するのに有用であり得る。予防されるか、又は治療される感染症は、例えば、ウイルス、細菌、原虫又は寄生体によって引き起こされ得る。標的抗原は、病原体によって引き起こされる疾患に関与する病原性タンパク質、ポリペプチド、若しくはペプチドであってもよく、病原体に感染した宿主において免疫応答を誘導し得るものである。ｃａＴＣＲエフェクター細胞によって標的とすることができる病原性抗原としては、限定されないが、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ、Ａｎａｐｌａｓｍａ  ｇｅｎｕｓ、Ａｎａｐｌａｓｍａ  ｐｈａｇｏｃｙｔｏｐｈｉｌｕｍ、Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ  ｂｒａｚｉｌｉｅｎｓｅ、Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ  ｄｕｏｄｅｎａｌｅ、Ａｒｃａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｍ、Ａｓｃａｒｉｓ  ｌｕｍｂｒｉｃｏｉｄｅｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｇｅｎｕｓ、Ａｓｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｂａｂｅｓｉａ  ｇｅｎｕｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｅｒｅｕｓ、Ｂａｒｔｏｎｅｌｌａ  ｈｅｎｓｅｌａｅ、ＢＫ  ｖｉｒｕｓ、Ｂｌａｓｔｏｃｙｓｔｉｓ  ｈｏｍｉｎｉｓ、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｇｅｎｕｓ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｓｐｐ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ｇｅｎｕｓ、Ｂｒｕｇｉａ  ｍａｌａｙｉ、Ｂｕｎｙａｖｉｒｉｄａｅファミリー、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｐａｃｉａ及び他のＢｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ種、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｍａｌｌｅｉ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｐｓｅｕｄｏｍａｌｌｅｉ、Ｃａｌｉｃｉｖｉｒｉｄａｅファミリー、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ属、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｐｐ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ  ｐｓｉｔｔａｃｉ、ＣＪＤプリオン、Ｃｌｏｎｏｒｃｈｉｓ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｓｐｐ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｓｐｐ、ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓｅｓ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ、Ｃｏｘｉｅｌｌａ  ｂｕｒｎｅｔｉｉ、Ｃｒｉｍｅａｎ−Ｃｏｎｇｏ出血熱ウイルス、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ属、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、デングウイルス（ＤＥＮ−１、ＤＥＮ−２、ＤＥＮ−３及びＤＥＮ−４）、Ｄｉｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｆｒａｇｉｌｉｓ、エボラウイルス（ＥＢＯＶ）、Ｅｃｈｉｎｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ  ｃｈａｆｆｅｅｎｓｉｓ、Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ  ｅｗｉｎｇｉｉ、Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ属、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃ��、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ属、エンテロウイルス属、エンテロウイルス、主に、Ｃｏｘｓａｃｋｉｅ  Ａウイルス及びエンテロウイルス７１（ＥＶ７１）、Ｅｐｉｄｅｒｍｏｐｈｙｔｏｎ  ｓｐｐ、エプスタインバールウイルス（ＥＢＶ）、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  Ｏ１５７：Ｈ７、Ｏ１１１及びＯ１０４：Ｈ４、Ｆａｓｃｉｏｌａ  ｈｅｐａｔｉｃａ及びＦａｓｃｉｏｌａ  ｇｉｇａｎｔｉｃａ、ＦＦＩプリオン、Ｆｉｌａｒｉｏｉｄｅａスーパーファミリー、フラビウイルス、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ  ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ、Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｃａｎｄｉｄｕｍ、Ｇｉａｒｄｉａ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｉｓ、Ｇｎａｔｈｏｓｔｏｍａ  ｓｐｐ、ＧＳＳプリオン、Ｇｕａｎａｒｉｔｏウイルス、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｄｕｃｒｅｙｉ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ、ヘニパウイルス（Ｈｅｎｄｒａウイルス、Ｎｉｐａｈウイルス）、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、Ｄ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、ヘルペス単純ウイルス１型及び２型（ＨＳＶ−１及びＨＳＶ−２）、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ、ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス）、Ｈｏｒｔａｅａ  ｗｅｒｎｅｃｋｉｉ、ヒトボカウイルス（ＨＢｏＶ）、ヒトヘルペスウイルス６（ＨＨＶ−６）及びヒトヘルペスウイルス７（ＨＨＶ−７）、ヒトメタニューもウイルス（ｈＭＰＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、ヒトパラインフルエンザウイルス（ＨＰＩＶ）、ヒトＴ細胞白血病ウイルス１（ＨＴＬＶ−１）、日本脳炎ウイルス、ＪＣウイルス、Ｊｕｎｉｎウイルス、カポジ肉腫に関連するヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）、Ｋｉｎｇｅｌｌａ  ｋｉｎｇａｅ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｇｒａｎｕｌｏｍａｔｉｓ、Ｋｕｒｕプリオン、ラッサウイルス、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ属、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ属、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、Ｍａｃｈｕｐｏウイルス、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ  ｓｐｐ、Ｍａｒｂｕｒｇウイルス、Ｍｅａｓｌｅｓウイルス、Ｍｅｔａｇｏｎｉｍｕｓ  ｙｏｋａｇａｗａｉ、Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｉｄｉａ  ｐｈｙｌｕｍ、伝染性軟属腫ウイルス（ＭＣＶ）、Ｍｕｍｐｓウイルス、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅ及びＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒｏｍａｔｏｓｉｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｕｌｃｅｒａｎｓ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｎａｅｇｌｅｒｉａ  ｆｏｗｌｅｒｉ、Ｎｅｃａｔｏｒ  ａｍｅｒｉｃａｎｕｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｎｏｃａｒｄｉａ  ａｓｔｅｒｏｉｄｅｓ、Ｎｏｃａｒｄｉａ  ｓｐｐ、Ｏｎｃｈｏｃｅｒｃａ  ｖｏｌｖｕｌｕｓ、Ｏｒｉｅｎｔｉａ  ｔｓｕｔｓｕｇａｍｕｓｈｉ、Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅファミリー（インフルエンザ）、Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ、Ｐａｒａｇｏｎ��ｍｕｓ  ｓｐｐ、Ｐａｒａｇｏｎｉｍｕｓ  ｗｅｓｔｅｒｍａｎｉ、Ｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ  Ｂ１９、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ  ｇｅｎｕｓ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ属、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｊｉｒｏｖｅｃｉｉ、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、呼吸系発疹ウイルス（ＲＳＶ）、ライノウイルス、ライノウイルス、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ａｋａｒｉ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ属、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｐｒｏｗａｚｅｋｉｉ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｒｉｃｋｅｔｔｓｉｉ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｔｙｐｈｉ、リフトバレー熱ウイルス、ロタウイルス、風疹ウイルス、サビアウイルス、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ属、Ｓａｒｃｏｐｔｅｓ  ｓｃａｂｉｅｉ、ＳＡＲＳコロナウイルス、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ属、Ｓｈｉｇｅｌｌａ属、Ｓｉｎ  Ｎｏｍｂｒｅウイルス、ハンタウイルス、Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ  ｓｃｈｅｎｃｋｉｉ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｓｔｒｏｎｇｙｌｏｉｄｅｓ  ｓｔｅｒｃｏｒａｌｉｓ、Ｔａｅｎｉａ属、Ｔａｅｎｉａ  ｓｏｌｉｕｍ、ダニ媒介性脳炎ウイルス（ＴＢＥＶ）、Ｔｏｘｏｃａｒａ  ｃａｎｉｓ又はＴｏｘｏｃａｒａ  ｃａｔｉ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｕｍ、Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａ  ｓｐｉｒａｌｉｓ、Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  ｓｐｐ、Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ  ｔｒｉｃｈｉｕｒａ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｂｒｕｃｅｉ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ、Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ  ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、Ｖａｒｉｏｌａ  ｍａｊｏｒ又はＶａｒｉｏｌａ  ｍｉｎｏｒ、ｖＣＪＤプリオン、ベネズエラ馬脳炎ウイルス、Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ、西ナイルウイルス、西部馬脳脊髄炎ウイルス、Ｗｕｃｈｅｒｅｒｉａ  ｂａｎｃｒｏｆｔｉ、黄熱ウイルス、Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ及びＹｅｒｓｉｎｉａ  ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓに由来する抗原が挙げられる。
【０３６７】
いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲエフェクター細胞は、発癌ウイルスによる感染などの発癌性感染疾患を治療するために使用される。発癌ウイルスとしては、ＣＭＶ、ＥＢＶ、ＨＢＶ、ＫＳＨＶ、ＨＰＶ、ＭＣＶ、ＨＴＬＶ−１、ＨＩＶ−１及びＨＣＶが挙げられるが、これらに限定されない。ｃａＴＣＲの標的抗原は、Ｔａｘ、Ｅ７、Ｅ６／Ｅ７、Ｅ６、ＨＢｘ、ＥＢＮＡタンパク質（例えば、ＥＢＮＡ３  Ａ、ＥＢＮＡ３  Ｃ及びＥＢＮＡ  ２）、ｖ−サイクリン、ＬＡＮＡ１、ＬＡＮＡ２、ＬＭＰ−１、ｋ−ｂＺＩＰ、ＲＴＡ、ＫＳＨＶ  Ｋ８、及びこれらのフラグメントを含む、ウイルス由来の癌タンパク質であってもよい。Ａｈｕｊａ、Ｒｉｃｈａら、Ｃｕｒｒ．Ｓｃｉ．、２０１４を参照。
製造物品及びキット
【０３６８】
本発明のいくつかの実施形態では、標的抗原陽性疾患、例えば、癌（例えば、副腎皮質癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、胆管癌、大腸癌、食道癌、神経膠芽腫、神経膠腫、肝細胞癌、頭頸部癌、腎臓癌、肺癌、黒色腫、中皮腫、多発性骨髄腫、膵臓癌、褐色細胞腫、形質細胞腫、神経芽腫、卵巣癌、前立腺癌、肉腫、胃癌、子宮癌又は甲状腺癌）又はウイルス感染（例えば、ＣＭＶ、ＥＢＶ、ＨＢＶ、ＫＳＨＶ、ＨＰＶ、ＭＣＶ、ＨＴＬＶ−１、ＨＩＶ−１又はＨＣＶによる感染）の治療に有用な物質を含む製造物品が提供される。製品は、容器と、この容器上にある又はこの容器に付随したラベル又は添付文書と、を含むことができる。好適な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジなどが挙げられる。容器は、ガラス又はプラスチックなどの様々な材料から形成されてもよい。一般に、容器は、本明細書に記載の疾患又は障害を処置するのに有効な組成物を保持するものであり、無菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、皮下注射針によって貫通可能なストッパーを有する静脈輸液バッグ又はバイアルであってよい）。組成物中の少なくとも１つの活性薬剤は、その表面上に本発明のｃａＴＣＲを提示するエフェクター細胞である。ラベル又は添付文書は、組成物が特定の状態を治療するために使用されることを示す。ラベル又は添付文書は、ｃａＴＣＲエフェクター細胞組成物を患者に投与するための指示書を更に含む。本明細書に記載の併用療法を含む製造物品及びキットも想定される。
【０３６９】
添付文書は、治療用製品の商品パッケージに習慣的に含まれている、このような治療用製品の使用に関しての指示、使用法、用量、投与、禁忌及び／又は警告に関する情報を記載している説明書を参照する。いくつかの実施形態では、添付文書は、組成物が、標的抗原陽性癌（例えば、副腎皮質癌、膀胱癌、白血病、乳癌、子宮頸癌、胆管癌、大腸癌、食道癌、神経膠芽腫、神経膠腫、肝細胞癌、頭頸部癌、腎臓癌、肺癌、黒色腫、中皮腫、多発性骨髄腫、膵臓癌、褐色細胞腫、形質細胞腫、神経芽腫、卵巣癌、前立腺癌、肉腫、胃癌、子宮癌又は甲状腺癌）を治療するために使用されることを示す。他の実施形態では、添付文書は、組成物が標的抗原陽性ウイルス感染（例えば、ＣＭＶ、ＥＢＶ、ＨＢＶ、ＫＳＨＶ、ＨＰＶ、ＭＣＶ、ＨＴＬＶ−１、ＨＩＶ−１又はＨＣＶによる感染）を治療するために使用されることを示す。
【０３７０】
更に、製造物品は、医薬的に許容される緩衝剤、例えば、静菌注射用水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、Ｒｉｎｇｅｒ液及びデキストロース液などを含む第２の容器を更に含んでいてもよい。これは、他の緩衝液、希釈液、濾過器、針、及び注射器を含めて、商業上及び利用者の立場からの他の好ましい材料を更に含んでよい。
【０３７１】
例えば、本明細書に記載される標的抗原陽性疾患又は障害の治療のために、場合により、製造物品と組み合わせて、様々な目的で有用なキットも提供される。本発明のキットは、ｃａＴＣＲエフェクター細胞組成物（又は単位剤形及び／又は製造物品）を含む１つ以上の容器を含み、いくつかの実施形態では、別の薬剤（本明細書に記載の薬剤など）及び／又は本明細書に記載される方法のいずれかに従って使用するための指示書を更に含む。このキットは、処置に適している個体の選択についての説明を更に含んでよい。本発明のキットで提供される使用説明書は、典型的には、ラベル又は添付文書（例えば、キットに含まれる紙シート）に書かれた説明書であるが、機械読み出し可能な命令（例えば、磁気又は光学記憶ディスクで実行される命令）も許容される。
【０３７２】
例えば、いくつかの実施形態では、キットは、その表面上にｃａＴＣＲを提示するエフェクター細胞を含む組成物を含む。いくつかの実施形態では、キットは、（ａ）その表面上にｃａＴＣＲを提示するエフェクター細胞を含む組成物と、（ｂ）有効量の少なくとも１つの他の薬剤とを含み、他の薬剤は、ＭＨＣタンパク質の発現を増加させ、及び／又はＭＨＣタンパク質によるペプチド（例えば、ＩＦＮγ、ＩＦＮβ、ＩＦＮα又はＨｓｐ９０阻害剤）の表面提示を強化する。いくつかの実施形態では、キットは、（ａ）その表面上にｃａＴＣＲを提示するエフェクター細胞を含む組成物と、（ｂ）標的抗原陽性疾患（例えば、癌又はウイルス感染）の治療のためにｃａＴＣＲエフェクター細胞組成物を個体に投与するための使用説明書とを含む。いくつかの実施形態では、キットは、（ａ）その表面上にｃａＴＣＲを提示するエフェクター細胞を含む組成物と、（ｂ）有効量の少なくとも１つの他の薬剤であって、ＭＨＣタンパク質の発現を増加させ、及び／又はＭＨＣタンパク質によるペプチド（例えば、ＩＦＮγ、ＩＦＮβ、ＩＦＮα又はＨｓｐ９０阻害剤）の表面提示を強化する、薬剤と、（ｃ）標的抗原陽性疾患（例えば、癌又はウイルス感染）の治療のためにｃａＴＣＲエフェクター細胞組成物と他の薬剤とを個体に投与するための使用説明書と、を含む。ｃａＴＣＲエフェクター細胞組成物及び他の薬剤は、別個の容器に存在してもよく、又は単一の容器内に存在してもよい。例えば、キットは、１つの別個の組成物又は２つ以上の組成物を含んでもよく、１つの組成物はｃａＴＣＲエフェクター細胞を含み、別の組成物は他の薬剤を含む。
【０３７３】
いくつかの実施形態では、キットは、（ａ）ｃａＴＣＲを含む組成物と、（ｂ）ｃａＴＣＲとエフェクター細胞（例えば、個体に由来する、Ｔ細胞又はナチュラルキラー細胞などのエフェクター細胞）とを合わせ、その表面上にｃａＴＣＲを提示するエフェクター細胞を含む組成物を生成し、標的抗原陽性疾患（例えば、癌又はウイルス感染）の治療のためにｃａＴＣＲエフェクター細胞組成物を個体に投与するための使用説明書とを含む。いくつかの実施形態では、キットは、（ａ）ｃａＴＣＲを含む組成物と、（ｂ）エフェクター細胞（細胞毒性細胞など）を含む。いくつかの実施形態では、キットは、（ａ）ｃａＴＣＲを含む組成物と、（ｂ）エフェクター細胞（例えば、細胞毒性細胞）と、（ｃ）ｃａＴＣＲとエフェクター細胞とを合わせ、その表面上にｃａＴＣＲを提示するエフェクター細胞を含む組成物を生成し、標的抗原陽性疾患（例えば、癌又はウイルス感染）の治療のためにｃａＴＣＲエフェクター細胞組成物を個体に投与するための使用説明書とを含む。
【０３７４】
いくつかの実施形態では、キットは、ｃａＴＣＲをコードする核酸（又は核酸のセット）を含む。いくつかの実施形態では、キットは、（ａ）ｃａＴＣＲをコードする核酸（又は核酸のセット）と、（ｂ）核酸（又は核酸のセット）を発現するための宿主細胞（例えば、エフェクター細胞）とを含む。いくつかの実施形態では、キットは、（ａ）ｃａＴＣＲをコードする核酸（又は核酸のセット）と、（ｂ）（ｉ）宿主細胞（例えば、エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞）でｃａＴＣＲを発現し、（ｉｉ）ｃａＴＣＲを発現する宿主細胞を含む組成物を調製し、（ｉｉｉ）標的抗原陽性疾患（例えば、癌又はウイルス感染）の治療のためにｃａＴＣＲを発現する宿主細胞を含む組成物を個体に投与するための使用説明書とを含む。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、個体に由来する。いくつかの実施形態では、キットは、（ａ）ｃａＴＣＲをコードする核酸（又は核酸のセット）と、（ｂ）核酸（又は核酸のセット）を発現するための宿主細胞（例えば、エフェクター細胞）と、（ｃ）（ｉ）宿主細胞でｃａＴＣＲを発現し、（ｉｉ）ｃａＴＣＲを発現する宿主細胞を含む組成物を調製し、（ｉｉｉ）標的抗原陽性疾患（例えば、癌又はウイルス感染）の治療のためにｃａＴＣＲを発現する宿主細胞を含む組成物を個体に投与するための使用説明書とを含む。
【０３７５】
本発明のキットは、好適なパッケージに入っている。好適なパッケージには、バイアル、ボトル、ジャー、可撓性パッケージ（例えば、密閉マイラー又はプラスチック袋）などが挙げられるが、これらに限定されない。キットは、任意追加的に、緩衝剤及び解釈的情報など追加の構成要素を提供してよい。したがって、本願はまた、バイアル（密閉バイアルなど）、ボトル、ジャー、可撓性パッケージなどを含む製品を提供する。
【０３７６】
ｃａＴＣＲエフェクター細胞組成物の使用に関する使用説明書は、意図する治療向けの用量、投与スケジュール及び投与経路に関する情報を概ね含む。容器は、単位用量、大量容器（例えば、多用量パッケージ）又は分割単位用量（sub-unit  doses）であってよい。例えば、長期間（例えば、１週間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、２週間、３週間、４週間、６週間、８週間、３ヶ月間、４ヶ月間、５ヶ月間、７ヶ月間、８ヶ月間、９ヶ月間のいずれか、又はもっと長く）にわたって個体に有効な治療を与えるのに十分な用量の本明細書に記載のｃａＴＣＲエフェクター細胞組成物を含むキットが提供されてもよい。キットはまた、複数単位用量のｃａＴＣＲと医薬組成物と、使用のための指示書とを含んでいてもよく、例えば、院内薬局及び調剤薬局など薬局での保管及び使用に十分な量で包装されてもよい。
【０３７７】
当業者は、本発明の範囲及び趣旨内でいくつかの実施形態が可能であることを理解するであろう。次に、以下の非限定的な実施例を参照して、本発明を更に詳細に説明する。以下の実施例は、本発明を更に説明するが、当然のことながら、決してその範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。
例示的な実施形態
【０３７８】
実施形態１．キメラ抗体Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）構築物（ｃａＴＣＲ）であって、標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールと、第１のＴＣＲ膜貫通ドメイン（ＴＣＲ−ＴＭ）を含む第１のＴＣＲドメイン（ＴＣＲＤ）と第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤを含むＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）とを含み、ＴＣＲ−ＴＭのうち少なくとも１つが、天然に存在せず、ＴＣＲＭが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を促進し、抗原結合モジュールが、天然に存在するＴ細胞受容体抗原結合部分ではない、ｃａＴＣＲ。
【０３７９】
実施形態２．ＴＣＲ−ＴＭが両方とも、天然に存在しないものである、実施形態１に記載のｃａＴＣＲ。
【０３８０】
実施形態３．第１のＴＣＲ−ＴＭが、第１の天然に存在するＴ細胞受容体の膜貫通ドメインの１つに由来し、第２のＴＣＲ−ＴＭが、第１の天然に存在するＴ細胞受容体の他の膜貫通ドメインに由来する、実施形態１又は２に記載のｃａＴＣＲ。
【０３８１】
実施形態４．ＴＣＲＭが、第１の天然に存在するＴ細胞受容体の膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナ伝達分子の動員を強化することを可能にする、実施形態３に記載のｃａＴＣＲ。
【０３８２】
実施形態５．第１のＴＣＲ−ＴＭが、その由来となる膜貫通ドメインと比較して５個までのアミノ酸置換を含み、及び／又は第２のＴＣＲ−ＴＭが、その由来となる膜貫通ドメインと比較して５個までのアミノ酸置換を含む、実施形態３又は４に記載のｃａＴＣＲ。
【０３８３】
実施形態６．第１のＴＣＲ−ＴＭが、１個のアミノ酸置換を含み、及び／又は第２のＴＣＲ−ＴＭが、１個のアミノ酸置換を含む、実施形態５に記載のｃａＴＣＲ。
【０３８４】
実施形態７．第１のＴＣＲ−ＴＭ中の置換アミノ酸が、第２のＴＣＲ−ＴＭ中の置換アミノ酸に対して近位である、実施形態５又は６に記載のｃａＴＣＲ。
【０３８５】
実施形態８．１つ以上の置換アミノ酸が、ＣＤ３に対する結合に関与する第１のＴＣＲ−ＴＭ中又は第２のＴＣＲ−ＴＭ中のアミノ酸に対して近位である、実施形態５〜７のいずれか１つに記載のｃａＴＣＲ。
【０３８６】
実施形態９．１つ以上の置換アミノ酸が、それらの対応する非置換アミノ酸よりも疎水性である、実施形態５〜８のいずれか１つに記載のｃａＴＣＲ。
【０３８７】
実施形態１０．置換アミノ酸はそれぞれ、それらの対応する非置換アミノ酸よりも疎水性である、実施形態９に記載のｃａＴＣＲ。
【０３８８】
実施形態１１．第１のＴＣＲ−ＴＭが、配列番号７及び９〜１３のいずれか１つのアミノ酸配列を含み、第２のＴＣＲ−ＴＭが、配列番号８及び１４〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態１に記載のｃａＴＣＲ。
【０３８９】
実施形態１２．実施形態１に記載のｃａＴＣＲであって、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び第２のＴＣＲ−ＴＭが、（ａ）それぞれ、配列番号９及び８、（ｂ）それぞれ、配列番号７及び１４、（ｃ）それぞれ、配列番号７及び１５、（ｄ）それぞれ、配列番号７及び１６、（ｅ）それぞれ、配列番号１０及び１６、（ｆ）それぞれ、配列番号７及び１７、（ｇ）それぞれ、配列番号７及び１８、（ｈ）それぞれ、配列番号７及び１９、（ｉ）それぞれ、配列番号７及び２０、（ｊ）それぞれ、配列番号７及び２１、（ｋ）それぞれ、配列番号７及び２２、（ｌ）それぞれ、配列番号１１及び２３、（ｍ）それぞれ、配列番号１２及び２４、（ｎ）それぞれ、配列番号７及び２５、（ｏ）それぞれ、配列番号１３及び２６のアミノ酸配列を含む、ｃａＴＣＲ。
【０３９０】
実施形態１３．ｃａＴＣＲが、第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化する互いに対する結合親和性を有する、実施形態１〜１２のいずれか１つに記載のｃａＴＣＲ。
【０３９１】
実施形態１４．安定化モジュールが、ＣＨ１−ＣＬモジュール、ＣＨ２−ＣＨ２モジュール、ＣＨ３−ＣＨ３モジュール及びＣＨ４−ＣＨ４モジュールからなる群から選択される、実施形態１３に記載のｃａＴＣＲ。
【０３９２】
実施形態１５．第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインとの間に共有結合が存在する、実施形態１３又は１４に記載のｃａＴＣＲ。
【０３９３】
実施形態１６．共有結合がジスルフィド結合である、実施形態１５に記載のｃａＴＣＲ。
【０３９４】
実施形態１７．安定化モジュールが、抗原結合モジュールとＴＣＲＭとの間に位置している、実施形態１３〜１６のいずれか１つに記載のｃａＴＣＲ。
【０３９５】
実施形態１８．ｃａＴＣＲが、抗原結合モジュールとＴＣＲＭとの間にスペーサーモジュールを更に含み、スペーサーモジュールが、ＴＣＲＭに対して抗原結合モジュールを接続する１つ以上のペプチドリンカーを含む、実施形態１〜１７のいずれか１つに記載のｃａＴＣＲ。
【０３９６】
実施形態１９．ペプチドリンカーが、約５〜約５０アミノ酸長である、実施形態１８に記載のｃａＴＣＲ。
【０３９７】
実施形態２０．抗原結合モジュールが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ及び単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）からなる群から選択される抗体部分である、実施形態１〜１９のいずれか１つに記載のｃａＴＣＲ。
【０３９８】
実施形態２１．ｃａＴＣＲが、２つ以上の抗原結合モジュールを含む、実施形態１〜２０のいずれか１つに記載のｃａＴＣＲ。
【０３９９】
実施形態２２．ｃａＴＣＲが多重特異性である、実施形態２１に記載のｃａＴＣＲ。
【０４００】
実施形態２３．抗原結合モジュールが、ＴＣＲＤの少なくとも１つに結合する少なくとも１つのｓｃＦｖを含む、実施形態１〜２２のいずれか１つに記載のｃａＴＣＲ。
【０４０１】
実施形態２４．抗原結合モジュールが、ＴＣＲＤの１つに結合するＶＨドメインと、他のＴＣＲＤに結合するＶＬドメインとを含む、実施形態１〜２３のいずれか１つに記載のｃａＴＣＲ。
【０４０２】
実施形態２５．ｃａＴＣＲが、第１のＴＣＲＤを含む第１のポリペプチド鎖と、第２のＴＣＲＤを含む第２のポリペプチド鎖とを含む、ヘテロダイマーである、実施形態１〜２４のいずれか１つに記載のｃａＴＣＲ。
【０４０３】
実施形態２６．標的抗原が、細胞表面抗原である、実施形態１〜２５のいずれか１つに記載のｃａＴＣＲ。
【０４０４】
実施形態２７．細胞表面抗原が、タンパク質、炭水化物及び脂質からなる群から選択される、実施形態２６に記載のｃａＴＣＲ。
【０４０５】
実施形態２８．細胞表面抗原が、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＧＰＣ−３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ及びＦＣＲＬ５からなる群から選択される、実施形態２６に記載のｃａＴＣＲ。
【０４０６】
実施形態２９．標的抗原が、ペプチドと主要組織適合抗原複合体（ＭＨＣ）タンパク質とを含む複合体である、実施形態１〜２５のいずれか１つに記載のｃａＴＣＲ。
【０４０７】
実施形態３０．ペプチドが、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１、ＫＲＡＳ、Ｈｉｓｔｏｎｅ  Ｈ３．３及びＰＳＡからなる群から選択されるタンパク質に由来する、実施形態２９に記載のｃａＴＣＲ。
【０４０８】
実施形態３１．ｃａＴＣＲが、約０．１ｐＭ〜約５００ｎＭの平衡解離定数（Ｋｄ）で標的抗原に結合する、実施形態１〜３０のいずれか１つに記載のｃａＴＣＲ。
【０４０９】
実施形態３２．ｃａＴＣＲであって、（ａ）第１の標的抗原に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインと第２の標的抗原に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインを含む多重特異性抗原結合モジュールと、（ｂ）第１のＴＣＲ−ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ（ＴＣＲＤ１）と第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤ（ＴＣＲＤ２）を含むＴＣＲＭとを含み、ＴＣＲＭが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を促進する、ｃａＴＣＲ。
【０４１０】
実施形態３３．第１の抗原結合ドメインが、第１の重鎖可変ドメイン（ＶＨ１）と第１の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ１）を含むＦｖであり、第２の抗原結合ドメインが、重鎖定常ドメイン１（ＣＨ１）に融合した第２のＶＨ（ＶＨ２）と、軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）に融合した第２のＶＬ（ＶＬ２）とを含むＦａｂである、実施形態３２に記載のｃａＴＣＲ。
【０４１１】
実施形態３４．実施形態３３に記載のｃａＴＣＲであって、（ｉ）Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＨ１−Ｌ１−ＶＨ２−ＣＨ１−ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖と、Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＬ１−Ｌ２−ＶＬ２−ＣＬ−ＴＣＲＤ２を含む第２のポリペプチド鎖；（ｉｉ）Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＨ１−Ｌ１−ＶＬ２−ＣＬ−ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖と、Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＬ１−Ｌ２−ＶＨ２−ＣＨ１−ＴＣＲＤ２を含む第２のポリペプチド鎖；（ｉｉｉ）Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＬ１−Ｌ１−ＶＨ２−ＣＨ１−ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖と、Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＨ１−Ｌ２−ＶＬ２−ＣＬ−ＴＣＲＤ２を含む第２のポリペプチド鎖；又は（ｉｖ）Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＬ１−Ｌ１−ＶＬ２−ＣＬ−ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖と、Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＨ１−Ｌ２−ＶＨ２−ＣＨ１−ＴＣＲＤ２を含む第２のポリペプチド鎖を含み、Ｌ１及びＬ２がペプチドリンカーである、ｃａＴＣＲ。
【０４１２】
実施形態３５．第１の抗原結合ドメインが、ＶＨ１とＶＬ１を含む第１のＦｖであり、第２の抗原結合ドメインが、ＶＨ２とＶＬ２を含む第２のＦｖであり、ｃａＴＣＲが、ＣＨ１とＣＬを更に含む、実施形態３２に記載のｃａＴＣＲ。
【０４１３】
実施形態３６．実施形態３５に記載のｃａＴＣＲであって、（ｉ）Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＨ１−Ｌ１−ＶＨ２−ＣＨ１−ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖と、Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＬ２−Ｌ２−ＶＬ１−ＣＬ−ＴＣＲＤ２を含む第２のポリペプチド鎖；又は（ｉｉ）Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＬ１−Ｌ１−ＶＬ２−ＣＬ−ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖と、Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＨ２−Ｌ２−ＶＨ１−ＣＨ１−ＴＣＲＤ２を含む第２のポリペプチド鎖を含み、Ｌ１及びＬ２がペプチドリンカーである、ｃａＴＣＲ。
【０４１４】
実施形態３７．第１の抗原結合ドメインが第１のｓｃＦｖ（ｓｃＦｖ１）であり、第２の抗原結合ドメインが第２のｓｃＦｖ（ｓｃＦｖ２）であり、ｃａＴＣＲが、ＣＨ１とＣＬを更に含む、実施形態３２に記載のｃａＴＣＲ。
【０４１５】
実施形態３８．実施形態３７に記載のｃａＴＣＲであって、（ｉ）Ｎ末端からＣ末端まで、ｓｃＦｖ１−Ｌ１−ＣＨ１−ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖と、Ｎ末端からＣ末端まで、ｓｃＦｖ２−Ｌ２−ＣＬ−ＴＣＲＤ２を含む第２のポリペプチド鎖；又は（ｉｉ）Ｎ末端からＣ末端まで、ｓｃＦｖ２−Ｌ１−ＣＨ１−ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖と、Ｎ末端からＣ末端まで、ｓｃＦｖ１−Ｌ２−ＣＬ−ＴＣＲＤ２を含む第２のポリペプチド鎖を含み、Ｌ１及びＬ２がペプチドリンカーである、ｃａＴＣＲ。
【０４１６】
実施形態３９．第１の抗原結合ドメインがｓｃＦｖであり、第２の抗原結合ドメインが、ＣＨ１に融合したＶＨとＣＬに融合したＶＬとを含むＦａｂである、実施形態３２に記載のｃａＴＣＲ。
【０４１７】
実施形態４０．実施形態３９に記載のｃａＴＣＲであって、（ｉ）Ｎ末端からＣ末端まで、ｓｃＦｖ−Ｌ１−ＶＨ−ＣＨ１−ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖と、Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＬ−ＣＬ−ＴＣＲＤ２を含む第２のポリペプチド鎖；又は（ｉｉ）Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＨ−ＣＨ１−ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖と、Ｎ末端からＣ末端まで、ｓｃＦｖ−Ｌ２−ＶＬ−ＣＬ−ＴＣＲＤ２を含む第２のポリペプチド鎖を含み、Ｌ１及びＬ２がペプチドリンカーである、ｃａＴＣＲ。
【０４１８】
実施形態４１．実施形態３９に記載のｃａＴＣＲであって、（ｉ）Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＬ−ＣＬ−Ｌ１−ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖と、Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＨ−ＣＨ１を含む第２のポリペプチド鎖と、Ｎ末端からＣ末端まで、ｓｃＦｖ−Ｌ２−ＴＣＲＤ２を含む第３のポリペプチド鎖；（ｉｉ）Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＨ−ＣＨ１−Ｌ１−ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖と、Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＬ−ＣＬを含む第２のポリペプチド鎖と、Ｎ末端からＣ末端まで、ｓｃＦｖ−Ｌ２−ＴＣＲＤ２を含む第３のポリペプチド鎖；（ｉｉｉ）Ｎ末端からＣ末端まで、ｓｃＦｖ−Ｌ１−ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖と、Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＨ−ＣＨ１を含む第２のポリペプチド鎖と、Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＬ−ＣＬ−Ｌ２−ＴＣＲＤ２を含む第３のポリペプチド鎖；又は（ｉｖ）Ｎ末端からＣ末端まで、ｓｃＦｖ−Ｌ１−ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖と、Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＬ−ＣＬを含む第２のポリペプチド鎖と、Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＨ−ＣＨ１−Ｌ２−ＴＣＲＤ２を含む第３のポリペプチド鎖を含み、Ｌ１及びＬ２がペプチドリンカーである、ｃａＴＣＲ。
【０４１９】
実施形態４２．Ｌ１及び／又はＬ２が、約５〜約５０アミノ酸長である、実施形態３４、３６、３８、４０又は４１に記載のｃａＴＣＲ。
【０４２０】
実施形態４３．Ｌ１及び／又はＬ２が、配列番号８２〜８５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態４２に記載のｃａＴＣＲ。
【０４２１】
実施形態４４．第１の標的抗原が、第１の細胞表面抗原であり、第２の標的抗原が、第２の細胞表面抗原である、実施形態３２〜４３のいずれか１つに記載のｃａＴＣＲ。
【０４２２】
実施形態４５．第１の標的抗原がＣＤ１９であり、第２の標的抗原がＣＤ２２であるか、又は第１の標的抗原がＣＤ２２であり、第２の標的抗原がＣＤ１９である、実施形態４４に記載のｃａＴＣＲ。
【０４２３】
実施形態４６．第１の標的抗原がＣＤ１９であり、第２の標的抗原がＣＤ２０であるか、又は第１の標的抗原がＣＤ２０であり、第２の標的抗原がＣＤ１９である、実施形態４４に記載のｃａＴＣＲ。
【０４２４】
実施形態４７．ＣＤ２２に特異的に結合する抗原結合ドメインが、配列番号６５のアミノ酸配列を含むＶＨのＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２及びＨＣ−ＣＤＲ３を含むＶＨと、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＶＬのＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２及びＬＣ−ＣＤＲ３を含むＶＬとを含む、実施形態４５又は４６に記載のｃａＴＣＲ。
【０４２５】
実施形態４８．ＣＤ２２に特異的に結合する抗原結合ドメインが、配列番号６５のアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＶＬとを含む、実施形態４７に記載のｃａＴＣＲ。
【０４２６】
実施形態４９．ＣＤ１９に特異的に結合する抗原結合ドメインが、配列番号７４のアミノ酸配列を含むＶＨのＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２及びＨＣ−ＣＤＲ３を含むＶＨと、配列番号７８のアミノ酸配列を含むＶＬのＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２及びＬＣ−ＣＤＲ３を含むＶＬとを含む、実施形態４５〜４８のいずれか１つに記載のｃａＴＣＲ。
【０４２７】
実施形態５０．ＣＤ１９に特異的に結合する抗原結合ドメインが、配列番号７４のアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号７８のアミノ酸配列を含むＶＬとを含む、実施形態４９に記載のｃａＴＣＲ。
【０４２８】
実施形態５１．第１のＴＣＲ−ＴＭ及び第２のＴＣＲ−ＴＭが、両方とも天然に存在するものである、実施形態３２〜５０のいずれか１つに記載のｃａＴＣＲ。
【０４２９】
実施形態５２．ＴＣＲ−ＴＭのうち少なくとも１つが、天然に存在しないものである、実施形態３２〜５０のいずれか１つに記載のｃａＴＣＲ。
【０４３０】
実施形態５３．多重特異性抗原結合モジュールが二重特異性である、実施形態３２〜５２のいずれか１つに記載のｃａＴＣＲ。
【０４３１】
実施形態５４．第１のＴＣＲＤが、ＴＣＲサブユニットの第１の接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含む、実施形態１〜５３のいずれか１つに記載のｃａＴＣＲ。
【０４３２】
実施形態５５．第２のＴＣＲＤが、ＴＣＲサブユニットの第２の接続ペプチド又はそのフラグメントを更に含む、実施形態１〜５４のいずれか１つに記載のｃａＴＣＲ。
【０４３３】
実施形態５６．ＴＣＲＭが、第１の接続ペプチド中の残基と第２の接続ペプチド中の残基との間にジスルフィド結合を含む、実施形態５５に記載のｃａＴＣＲ。
【０４３４】
実施形態５７．第１のＴＣＲＤが、ＴＣＲ細胞内配列を含む第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む、実施形態１〜５６のいずれか１つに記載のｃａＴＣＲ。
【０４３５】
実施形態５８．第２のＴＣＲＤが、ＴＣＲ細胞内配列を含む第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む、実施形態１〜５７のいずれか１つに記載のｃａＴＣＲ。
【０４３６】
実施形態５９．ｃａＴＣＲが、共刺激細胞内シグナル伝達配列を含む第１のアクセサリー細胞内ドメインを更に含む、実施形態１〜５８のいずれか１つに記載のｃａＴＣＲ。
【０４３７】
実施形態６０．ＴＣＲ関連シグナル伝達分子が、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及びζζからなる群から選択される、実施形態１〜５９のいずれか１つに記載のｃａＴＣＲ。
【０４３８】
実施形態６１．第１の天然に存在するＴ細胞受容体が、γ／δ  Ｔ細胞受容体である、実施形態３〜６０のいずれか１つに記載のｃａＴＣＲ。
【０４３９】
実施形態６２．第１の天然に存在するＴ細胞受容体が、α／β  Ｔ細胞受容体である、実施形態３〜６０のいずれか１つに記載のｃａＴＣＲ。
【０４４０】
実施形態６３．実施形態１〜６２のいずれか１つに記載のｃａＴＣＲをコードする、１つ以上の核酸。
【０４４１】
実施形態６４．ｃａＴＣＲが、同じ核酸分子上にコードされる、実施形態６３に記載の１つ以上の核酸。
【０４４２】
実施形態６５．実施形態６３又は６４に記載の１つ以上の核酸を含む、１つ以上のベクター。
【０４４３】
実施形態６６．１つ以上の核酸を含む単一のベクターを含む、実施形態６５に記載の１つ以上のベクター。
【０４４４】
実施形態６７．実施形態６３又は６４に記載の１つ以上の核酸、又は実施形態６５又は６６に記載の１つ以上のベクターを含む、組成物。
【０４４５】
実施形態６８．実施形態１〜６２のいずれか１つに記載のｃａＴＣＲと、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子とを含む、複合体。
【０４４６】
実施形態６９．複合体が、ｃａＴＣＲと、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及びζζとを含む八量体である、実施形態６８に記載の複合体。
【０４４７】
実施形態７０．実施形態１〜６２のいずれか１つに記載のｃａＴＣＲ又は実施形態６８又は６９に記載の複合体をその表面上に提示するエフェクター細胞。
【０４４８】
実施形態７１．実施形態６３又は６４に記載の１つ以上の核酸、又は実施形態６５又は６６に記載の１つ以上のベクターを含み、エフェクター細胞がｃａＴＣＲを発現する、エフェクター細胞。
【０４４９】
実施形態７２．エフェクター細胞が、第１及び／又は第２のＴＣＲＤと対を形成することが可能な内在性Ｔ細胞受容体サブユニットを発現しない、実施形態７０又は７１に記載のエフェクター細胞。
【０４５０】
実施形態７３．エフェクター細胞が、第１及び／又は第２のＴＣＲＤと対を形成することが可能な内在性Ｔ細胞受容体サブユニットを天然には発現しない、実施形態７２に記載のエフェクター細胞。
【０４５１】
実施形態７４．エフェクター細胞が、第１の内在性ＴＣＲサブユニット及び／又は第２の内在性ＴＣＲサブユニットの発現を遮断するか、又は減少させるように改変されている、実施形態７２に記載のエフェクター細胞。
【０４５２】
実施形態７５．エフェクター細胞がＣＤ３＋細胞である、実施形態７０〜７４のいずれか１つに記載のエフェクター細胞。
【０４５３】
実施形態７６．ＣＤ３＋細胞が、細胞毒性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される、実施形態７５に記載のエフェクター細胞。
【０４５４】
実施形態７７．ｃａＴＣＲがヘテロ二量体であり、（ａ）第１のプロモーターの制御下で、ｃａＴＣＲの第１のポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列を含む第１のベクターと、（ｂ）第２のプロモーターの制御下で、ｃａＴＣＲの第２のポリペプチド鎖をコードする第２の核酸配列を含む第２のベクターとを含む、実施形態７０〜７６のいずれか１つに記載のエフェクター細胞。
【０４５５】
実施形態７８．ｃａＴＣＲがヘテロ二量体であり、（ａ）第１のプロモーターの制御下で、ｃａＴＣＲの第１のポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列と、（ｂ）第２のプロモーターの制御下で、ｃａＴＣＲの第２のポリペプチド鎖をコードする第２の核酸配列とを含む、ベクターを含む、実施形態７０〜７６のいずれか１つに記載のエフェクター細胞。
【０４５６】
実施形態７９．ｃａＴＣＲがヘテロ二量体であり、（ａ）ｃａＴＣＲの第１のポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列とｃａＴＣＲの第２のポリペプチド鎖をコードする第２の核酸配列を含むベクターを含み、第１の核酸配列と第２の核酸配列が、単一のプロモーターの制御下にある、実施形態７０〜７６のいずれか１つに記載のエフェクター細胞。
【０４５７】
実施形態８０．ｃａＴＣＲの第１のポリペプチド鎖の発現が、ｃａＴＣＲの第２のポリペプチド鎖の発現の２倍より多い、実施形態７０〜７８のいずれか１つに記載のエフェクター細胞。
【０４５８】
実施形態８１．標的抗原を提示する標的細胞を死滅させる方法であって、標的細胞と、実施形態７０〜８０のいずれか１つに記載のエフェクター細胞とを接触させることを含み、ｃａＴＣＲが、標的抗原に特異的に結合する、方法。
【０４５９】
実施形態８２．接触させることが、ｉｎ  ｖｉｖｏでの接触である、実施形態８１に記載の方法。
【０４６０】
実施形態８３．接触させることが、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの接触である、実施形態８１に記載の方法。
【０４６１】
実施形態８４．医薬組成物であって、（ａ）実施形態１〜６２のいずれか１つに記載のｃａＴＣＲ、実施形態６３又は６４に記載の１つ以上の核酸、又は実施形態６５又は６６に記載の１つ以上のベクター、又は実施形態７０〜８０のいずれか１つに記載のエフェクター細胞と、（ｂ）医薬的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
【０４６２】
実施形態８５．標的抗原関連疾患の治療を必要とする個体において当該疾患を治療する方法であって、有効量の実施形態８４に記載の組成物を個体に投与することを含む、方法。
【０４６３】
実施形態８６．標的抗原関連疾患が癌である、実施形態８５に記載の方法。
【０４６４】
実施形態８７．癌が、副腎皮質癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、胆管癌、大腸癌、食道癌、神経膠芽腫、神経膠腫、肝細胞癌、頭頸部癌、腎臓癌、白血病、肺癌、リンパ腫、黒色腫、中皮腫、多発性骨髄腫、膵臓癌、褐色細胞腫、形質細胞腫、神経芽腫、卵巣癌、前立腺癌、肉腫、胃癌、子宮癌及び甲状腺癌からなる群から選択される、実施形態８６に記載の方法。
【０４６５】
実施形態８８．標的抗原関連疾患がウイルス感染である、実施形態８５に記載の方法。
【０４６６】
実施形態８９．ウイルス感染が、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、エプスタインバールウイルス（ＥＢＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、伝染性軟属腫ウイルス（ＭＣＶ）、ヒトＴ細胞白血病ウイルス１（ＨＴＬＶ−１）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）及びＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）からなる群から選択されるウイルスによって引き起こされる、実施形態８８に記載の方法。
【０４６７】
実施形態９０．実施形態７０〜８０のいずれか１つに記載のエフェクター細胞のための不均一な細胞集団を濃縮する方法であって、（ａ）不均一な細胞集団と、標的抗原又はその中に含まれる１つ以上のエピトープを含むリガンドとを接触させ、リガンドに結合したエフェクター細胞の複合体を形成することと、（ｂ）この複合体を、不均一な細胞集団から分離し、それによって、エフェクター細胞が濃縮された細胞集団を生成することとを含む、方法。
【０４６８】
実施形態９１．実施形態１〜６２のいずれか１つに記載の複数のｃａＴＣＲをコードする配列を含む、核酸ライブラリー。
【０４６９】
実施形態９２．標的抗原に対して高い親和性を有するｃａＴＣＲについて、実施形態９１に記載のライブラリーをスクリーニングする方法であって、（ａ）核酸ライブラリーを複数の細胞に導入し、その結果、ｃａＴＣＲが複数の細胞の表面で発現することと、（ｂ）複数の細胞を、標的抗原又はその中に含まれる１つ以上のエピトープを含むリガンドと共にインキュベートすることと、（ｃ）リガンドに結合した細胞を集めることと、（ｄ）工程（ｃ）で集めた細胞から、ｃａＴＣＲをコードする配列を単離し、それによって、標的抗原に特異的なｃａＴＣＲを同定することとを含む、方法が提供される。
【実施例】
【０４７０】
材料及び方法
細胞サンプル、細胞株及び抗体
細胞株ＨｅｐＧ２（ＡＴＣＣ  ＨＢ−８０６５；ＨＬＡ−Ａ２＋、ＡＦＰ＋）、ＳＫ−ＨＥＰ−１（ＡＴＣＣ  ＨＴＢ−５２；ＨＬＡ−Ａ２＋、ＡＦＰ−）、Ｒａｊｉ（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−８６；ＣＤ１９＋）、ＣＡ４６（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１６４８；ＣＤ１９＋）、Ｊｕｒｋａｔ（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２８９９、ＣＤ１９−）、Ｊ．ＲＴ３−Ｔ３．５（ＡＴＣＣ  ＴＩＢ−１５３）、Ｊｅｋｏ−１（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−３００６；ＣＤ１９＋）、Ｋ５６２（ＡＴＣＣ  ＣＣ−２４３、ＣＤ１９−）、ＴＨＰ−１（ＡＴＣＣ  ＴＩＢ−２０２、ＣＤ１９−）、Ｄａｕｄｉ（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−２１３；ＣＤ１９＋）、ＨｅＬａ（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−２）、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１（ＡＴＣＣ  ＨＴＢ−２６）及びＭＣＦ−７（ＡＴＣＣ  ＨＴＢ−２２）を、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから得た。Ｊｕｒｋａｔは、Ｔ細胞白血病由来のヒトＴリンパ球細胞株である。Ｊ．ＲＴ３−Ｔ３．５は、Ｔ細胞受容体β鎖を欠く、Ｊｕｒｋａｔ細胞由来の突然変異株である。Ｒａｊｉは、ＣＤ１９を発現するバーキットリンパ腫細胞株である。Ｒａｊｉ−ＣＤ１９ノックアウト（Ｒａｊｉ−ＣＤ１９ＫＯ）株を、ＣＲＩＳＰＲ技術によって作成した。Ｒａｊｉ細胞中のＣＤ１９を標的とするために、３種類のガイド配列を設計した。ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９ベクターをＯｒｉｇｅｎｅから購入し、各ガイドを、ｐＣａｓ−Ｇｕｉｄｅベクターに別々にクローニングした。エレクトロポレーションの３日後、各ガイドによるノックアウト効率をフローサイトメトリーによって評価し、限界希釈によって、クローン選択のために最良のＣＤ１９ノックアウトプールを選択した。選択されたクローンを、配列決定によって完全なＣＤ１９ノックアウトであると確認した。別のコントロール細胞株ＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧは、ＡＦＰペプチドＡＦＰ１５８を発現するミニ遺伝子カセットを用いてＳＫ−ＨＥＰ−１細胞株に形質導入することによって生成され、ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１複合体の高レベルの細胞表面発現をもたらす。Ｋ５６２は、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞株である。Ｋ５６２−ＣＤ２２は、ＣＤ２２を発現するベクターを用い、Ｋ５６２細胞株に形質導入することによって生成した。Ｋ５６２−ＣＤ１９は、ＣＤ１９を発現するベクターを用い、Ｋ５６２細胞株に形質導入することによって生成した。Ｋ５６２−ＣＤ１９／ＣＤ２２は、ＣＤ１９を発現するベクター及びＣＤ２２を発現するベクターを用い、Ｋ５６２細胞株に形質導入することによって生成した。全ての細胞株を、３７℃／５％ＣＯ２で、１０％ＦＢＳ及び２ｍＭグルタミンを添加したＲＰＭＩ  １６４０又はＤＭＥＭ中で培養した。
【０４７１】
ＦＩＴＣ又はＡＰＣ標識したヒトＨＬＡ  Ａ０２（クローンＢＢ７．２）に対するモノクローナルＡｂ、ＦＩＴＣ又はＡＰＣ標識したそのアイソタイプコントロールマウスＩｇＧ２ｂ、ヒト又はマウスＣＤ３に対する抗体、ヒトＴ細胞受容体の種々のサブユニット、３×Ｆｌａｇタグ、ＨＡタグ、ＦＩＴＣ又はＡＰＣに標識したヤギＦ（ａｂ）２抗ヒトＩｇＧ、蛍光標識したヤギＦ（ａｂ’）２抗マウスＩｇ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を購入した。ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１に特異的な抗体に対する抗イディオタイプ抗体を開発し、Ｅｕｒｅｋａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓにおいて、社内で製造した。フローサイトメトリーデータをＢＤ  ＦＡＣＳＣａｎｔｏ  ＩＩを使用して集め、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアパッケージを使用して分析した。
【０４７２】
全てのペプチドを購入し、Ｅｌｉｍ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａにより合成した。ペプチドは、９０％超の純度であった。ペプチドをＤＭＳＯに溶解するか、又は食塩水で１０ｍｇ／ｍＬになるまで希釈し、−８０℃で凍結させた。ビオチン化単鎖ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１及びコントロールペプチド／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１複合体単量体を、組換えＨＬＡ−Ａ＊０２：０１及びβ−２ミクログロブリン（β２Ｍ）を用いてペプチドを再折り畳みすることにより生成した。単量体は、ＢｉｒＡ酵素によるＨＬＡ−Ａ＊０２：０１細胞外ドメイン（ＥＣＤ）のＣ末端に接続するＢＳＰペプチドを介してビオチン化した。蛍光標識ストレプトアビジンをビオチン化ペプチド／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１複合体単量体と混合して、蛍光標識されたペプチド／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１四量体を形成した。
【０４７３】
ヒトＣＤ１９に特異的又はＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１に特異的なＣＡＲ又はｃａＴＣＲを含有するレンチウイルスを、例えば、キメラ構築物をコードするベクターを用いた２９３Ｔ細胞のトランスフェクションによって作製した。初代ヒトＴ細胞を、１００Ｕ／ｍＬのインターロイキン−２（ＩＬ−２）の存在下で、ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズ（ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）による１日間の刺激後に形質導入に使用した。濃縮レンチウイルスを、レトロネクチン（Ｔａｋａｒａ）コーティングされた６ウェルプレート中のＴ細胞に９６時間適用した。抗ＡＦＰ及び抗ＣＤ１９キメラ構築物の形質導入効率を、それぞれＰＥ標識したストレプトアビジン又は抗ｍｙｃ抗体を含むビオチン化ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１四量体（「ＡＦＰ１５８四量体」）を使用して、フローサイトメトリーによって評価した。フローサイトメトリーによる反復分析を、５日目と、その後に３〜４日おきに行った。
【０４７４】
細胞株には、ｃａＴＣＲ構築物の２つのサブユニットをコードする１つ又は２つのベクターのいずれかを用いて形質導入した。形質導入から５日後に、抗ＨＡ（抗ＨＡタグ抗体−ＣｈＩＰグレード、Ａｂｃａｍ）又は抗Ｆｌａｇ抗体（ウサギで作られた抗Ｆｌａｇ抗体、Ｓｉｇｍａ）を使用し、ウェスタンブロットのために細胞溶解物を生成した。
【０４７５】
腫瘍細胞毒性を、Ｃｙｔｏｘ  ９６非放射性ＬＤＨ細胞毒性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）によりアッセイした。ＣＤ３＋Ｔ細胞は、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３６、ＣＤ５６、ＣＤ６６ｂ、ＣＤ１２３、グリコホリンＡを発現する細胞を負に枯渇させるＥａｓｙＳｅｐ  Ｈｕｍａｎ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用し、ＰＢＭＣを濃縮した全血から調製した。ヒトＴ細胞を活性化し、例えば、製造元のプロトコルに従ってＣＤ３／ＣＤ２８  Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で増殖させた。活性化Ｔ細胞（ＡＴＣ）を培養し、１０％ＦＢＳ＋１００Ｕ／ｍＬ  ＩＬ−２を添加したＲＰＭＩ１６４０培地で維持し、７〜１４日目に使用した。活性化Ｔ細胞（エフェクター細胞）及び標的細胞を、様々なエフェクターと標的の比率（例えば、２：１、２．５：１又は５：１）で１６時間共培養し、細胞毒性についてアッセイした。
実施例１．キメラ抗体−Ｔ細胞受容体（ｃａＴＣＲ）の設計
【０４７６】
様々なキメラ抗体−Ｔ細胞受容体（ｃａＴＣＲ）の設計が想定され、６種類の異なる例が図１に示される（ｃａＴＣＲ−１、ｃａＴＣＲ−２、ｃａＴＣＲ−３、ｃａＴＣＲ−４、ｃａＴＣＲ−５及びｃａＴＣＲ−６）。これらの設計では、様々な抗体部分（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ又はｓｃＦｖ）は、可変ドメイン及び定常ドメインを欠くＴ細胞受容体α／β鎖又はγ／δ鎖のアミノ末端に融合され、それらの接続ペプチドの全て又は一部（定常ドメインの後の領域）、それらの膜貫通ドメイン又はその変異体、及び任意の細胞内ドメインを含み、Ｔ細胞の表面上で発現され得るｃａＴＣＲヘテロ二量体を形成する。ネイティブなＴＣＲでは、Ｖα／Ｖβ又はＶδ／Ｖγドメインは、ＴＣＲの抗原結合ドメインを形成する。本願発明者らの設計は、Ｖα−Ｃα／Ｖβ−Ｃβ領域又はＶδ−Ｃδ／Ｖγ−Ｃγ領域を種々の抗体部分と置き換え、少なくとも１つのＴＣＲ膜貫通ドメイン多様体を導入し、それにより、抗体の結合特異性を構築物に付与し、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε及びＣＤ３ζζなどのＴＣＲ複合体において、天然に存在するＴＣＲ膜貫通ドメインのみを有するＴＣＲ又は関連する構築物と比較して、アクセサリー分子を動員する構築物の能力が向上する。ｃａＴＣＲ構築物は、以下のように命名された。ｃａＴＣＲ［設計番号］−［多様体の位置］［番号］。設計番号１は、Ｆａｂ抗体部分を有するｃａＴＣＲに対応し、設計番号２は、Ｆａｂ’抗体部分を有するｃａＴＣＲに対応し、設計番号３は、（Ｆａｂ’）２抗体部分を有するｃａＴＣＲに対応し、設計番号４は、Ｆｖ抗体部分を有するｃａＴＣＲに対応し、設計番号５は、単一のｓｃＦｖ抗体部分を有するｃａＴＣＲに対応し、設計番号６は、２つのｓｃＦｖ抗体部分を有するｃａＴＣＲに対応する（図１参照）。多様体の位置がなく、０番（例えば、ｃａＴＣＲ−１−０）は、天然に存在するＴＣＲドメインを有する構築物に対応し、１以上の番号は、多様体の位置に特定の多様体を有するｃａＴＣＲに対応する（例えば、ｃａＴＣＲ−１−ＴＭ１は、１つの膜貫通ドメイン多様体に対応し、ｃａＴＣＲ−１−ＥＣ１は、１つの細胞外ドメイン多様体に対応する。表２を参照のこと）。
【０４７７】
ｃａＴＣＲ−１（ＩｇＶＨ−ＩｇＣＨ１−ＴＣＲδ／ＩｇＶＬ−ＩｇＣＬ−ＴＣＲγ）の設計では、抗体重鎖の可変ドメイン及び第１定常ドメイン（ＩｇＶＨ−ＩｇＣＨ１）が、ＴＣＲδ鎖のアミノ末端部分を、Ｖδ−Ｃδ領域の後のＴＣＲδ鎖の細胞外ドメイン中の接続ペプチドの境界の位置、又はその中にある位置まで、置き換え、場合により、ＴＣＲδ鎖の膜貫通ドメインが、例えば、１つ以上のアミノ酸の置換によって改変されている。対応する抗体軽鎖の可変ドメイン及び定常ドメイン（ＩｇＶＬ−ＩｇＣＬ）は、ＴＣＲγ鎖のアミノ末端部分を、Ｖγ−Ｃγ領域の後のＴＣＲγ鎖の細胞外ドメイン中の接続ペプチドの境界の位置、又はその中にある位置まで、置き換え、場合により、ＴＣＲγ鎖の膜貫通ドメインが、例えば、１つ以上のアミノ酸の置換によって改変されている。
【０４７８】
ｃａＴＣＲ−１の一実施形態では、１つの鎖は、膜貫通ドメインとＴＣＲγ鎖の接続ペプチドの全て又は一部とを含むＴＣＲδ鎖のカルボキシ末端部分に融合した、抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１抗体（配列番号５２）のＩｇＶＨドメイン（配列番号３７）を含み、他の鎖は、膜貫通ドメインとＴＣＲγ鎖の接続ペプチドの全て又は一部とを含むＴＣＲγ鎖のカルボキシ末端部分に融合した、ＩｇＣＬドメイン（配列番号４８）に融合した抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１抗体（配列番号５３）のＩｇＶＬドメインを含み、ＴＣＲドメインの少なくとも１つ（例えば、ＴＣＲ膜貫通ドメイン）は、１つ以上のアミノ酸置換を含む天然に存在しない多様体である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲδ鎖のカルボキシ末端部分は、配列番号３１又は３２のアミノ酸配列を有する接続ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲδ鎖のカルボキシ末端部分は、配列番号７及び９〜１３のいずれか１つのアミノ酸配列を有する膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲγ鎖のカルボキシ末端部分は、配列番号３３又は３４のアミノ酸配列を有する接続ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲγ鎖のカルボキシ末端部分は、配列番号８及び１４〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列を有する膜貫通ドメインを含む。
【０４７９】
ｃａＴＣＲ−２（ＩｇＶＨ−ＩｇＣＨ１−ヒンジ−ＴＣＲδ／ＩｇＶＬ−ＩｇＣＬ−リンカー−ＴＣＲγ）の設計では、抗体重鎖の可変ドメイン、第１定常ドメイン及びヒンジ（ＩｇＶＨ−ＩｇＣＨ１−ヒンジ）が、ＴＣＲδ鎖のアミノ末端部分を、Ｖδ−Ｃδ領域の後のＴＣＲδ鎖の細胞外ドメイン中の接続ペプチドの境界の位置、又はその中にある位置まで、置き換え、場合により、ＴＣＲδ鎖の膜貫通ドメインは、１つ以上のアミノ酸の置換によって改変される。リンカーに融合した、対応する抗体軽鎖の可変ドメイン及び定常ドメイン（ＩｇＶＬ−ＩｇＣＬ−リンカー）は、ＴＣＲγ鎖のアミノ末端部分を、ＴＣＲγ鎖の細胞外ドメイン内の接続ペプチドの境界の位置、又はその中にある位置まで、置き換え、場合により、ＴＣＲγ鎖の膜貫通ドメインは、例えば、１つ以上のアミノ酸の置換によって改変される。
【０４８０】
ｃａＴＣＲ−３（ＩｇＶＨ−ＩｇＣＨ１−ヒンジ−ＴＣＲδ／ＩｇＶＨ−ＩｇＣＨ１−ヒンジ−ＴＣＲγ＋ＩｇＶＬ−ＩｇＣＬ）の設計において、抗体重鎖の可変ドメイン、第１定常ドメイン、ヒンジ（ＩｇＶＨ−ＩｇＣＨ１）が、ＴＣＲδ鎖のアミノ末端部分を、Ｖδ−Ｃδ領域の後のＴＣＲδ鎖の細胞外ドメイン中の接続ペプチドの境界の位置、又はその中にある位置まで、置き換え、場合により、ＴＣＲδ鎖の膜貫通ドメインが、例えば、１つ以上のアミノ酸の置換によって改変されている。抗体重鎖の可変ドメイン、第１の定常ドメイン及びヒンジ（ＩｇＶＨ−ＩｇＣＨ１−ヒンジ）は、ＴＣＲγ鎖のアミノ末端部分を、Ｖγ−Ｃγ領域の後のＴＣＲγ鎖の細胞外ドメイン中の接続ペプチドの境界の位置、又はその中にある位置まで、置き換え、場合により、ＴＣＲγ鎖の膜貫通ドメインが、例えば、１つ以上のアミノ酸の置換によって改変されている。対応する抗体軽鎖の可変ドメイン及び定常ドメイン（ＩｇＶＬ−ＩｇＣＬ）は、ＩｇＶＨ−ＩｇＣＨ１ドメインと関連がある。
【０４８１】
ｃａＴＣＲ−４（ＩｇＶＨ−ＴＣＲδ／ＩｇＶＬ−ＴＣＲγ）の設計では、抗体重鎖の可変ドメイン（ＩｇＶＨ）が、ＴＣＲδ鎖のアミノ末端部分を、Ｖδ−Ｃδ領域の後のＴＣＲδ鎖の細胞外ドメイン中の接続ペプチドの境界の位置、又はその中にある位置まで、置き換え、場合により、ＴＣＲδ鎖の膜貫通ドメインが、例えば、１つ以上のアミノ酸の置換によって改変されている。対応する抗体軽鎖の可変ドメイン（ＩｇＶＬ）は、ＴＣＲγ鎖のアミノ末端部分を、Ｖγ−Ｃγ領域の後のＴＣＲγ鎖の細胞外ドメイン中の接続ペプチドの境界の位置、又はその中にある位置まで、置き換え、場合により、ＴＣＲγ鎖の膜貫通ドメインが、例えば、１つ以上のアミノ酸の置換によって改変されている。
【０４８２】
ｃａＴＣＲ−５（ＩｇＶＨ−ＩｇＶＬ−ＴＣＲδ／ＴＣＲγ）の設計では、対応する抗体軽鎖の可変ドメインに融合した抗体重鎖の可変ドメイン（ＩｇＶＨ−ＩｇＶＬ又はＩｇＶＬ−ＩｇＶＨ）は、Ｖδ−Ｃδ領域の後に、ＴＣＲδ鎖のアミノ末端部分を、ＴＣＲδ鎖の細胞外ドメイン中の接続ペプチドの境界の位置、又はその中にある位置まで、置き換え、場合により、ＴＣＲδ鎖の膜貫通ドメインが、例えば、１つ以上のアミノ酸の置換によって改変されている。Ｖγ−Ｃγ領域の後に、ＴＣＲγ鎖の細胞外ドメイン中の接続ペプチドの境界の位置、又はその中にある位置までのＴＣＲγ鎖のアミノ末端部分が削除され、場合により、ＴＣＲγ鎖の膜貫通ドメインが、例えば、１つ以上のアミノ酸の置換によって改変されている。
【０４８３】
ｃａＴＣＲ−６（ＩｇＶＨ−ＩｇＶＬ−ＴＣＲδ／ＩｇＶＨ−ＩｇＶＬ−ＴＣＲγ）の設計では、対応する抗体軽鎖の可変ドメインに融合した抗体重鎖の可変ドメイン（ＩｇＶＨ−ＩｇＶＬ又はＩｇＶＬ−ＩｇＶＨ）が、ＴＣＲδ鎖のアミノ末端部分を、Ｖδ−Ｃδ領域の後のＴＣＲδ鎖の細胞外ドメイン中の接続ペプチドに属するか、又はその中にある位置まで、置き換え、場合により、ＴＣＲδ鎖の膜貫通ドメインが、例えば、１つ以上のアミノ酸の置換によって改変されている。対応する抗体軽鎖の可変ドメインに融合した抗体重鎖の可変ドメイン（ＩｇＶＨ−ＩｇＶＬ又はＩｇＶＬ−ＩｇＶＨ）は、ＴＣＲγ鎖のアミノ末端部分を、Ｖγ−Ｃγ領域の後のＴＣＲγ鎖の細胞外ドメイン内の接続ペプチドに属するか、又はその中にある位置まで、置き換え、場合により、ＴＣＲγ鎖の膜貫通ドメインは、例えば、１つ以上のアミノ酸の置換によって改変される。
実施例２：ｃａＴＣＲ−１−ＴＭ多様体を作製するために置換された膜貫通アミノ酸
【０４８４】
この実施例は、ｃａＴＣＲ−１−ＴＭ構築物の生成に使用される、天然に存在するＴＣＲ膜貫通ドメインの多様体を記載する。ｃａＴＣＲ−１受容体は、δ及びγＴＣＲサブユニットに由来の膜貫通ドメインを含有していた。ｃａＴＣＲ−１受容体の概略図を図２に示し、膜貫通ドメインが強調されている。ｃａＴＣＲ治療の効能を高めるための置換は、２つの鎖の膜貫通ドメインを構成するアミノ酸に焦点を合わせた。ｃａＴＣＲ−１−０受容体を構成する膜貫通領域のαヘリックス様の輪状突出部は、ｃａＴＣＲ−１−ＴＭ膜貫通変異体を形成するように変異した位置を強調している（図３）。
【０４８５】
δＴＣＲサブユニットの天然に存在する膜貫通ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列を有し、以下の置換によって改変された。Ｌ４Ｃ；Ｍ６Ｖ；Ｖ１２Ｆ及びＮ１５Ｓ；Ｆ２４５Ｓ；又はＬ２５Ｓ。γＴＣＲサブユニットの天然に存在する膜貫通ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列を有し、以下の置換によって改変された。Ｙ２Ｌ、Ｍ３Ｖ、Ａ１６Ｖ及びＩ１８Ｖ；Ｙ２Ｉ、Ｍ３Ｉ、Ａ１６Ｉ及びＩ１８Ｌ；Ｌ８Ｆ、Ｖ１２Ｆ及びＦ１５Ｓ；Ｙ１Ｑ；Ｙ２Ｌ；Ｍ３Ｖ；Ｍ３Ｉ；Ｌ５Ｃ；Ｖ１３Ｙ；Ａ１６Ｖ；Ｉ１８Ｖ；Ｃ１９Ｍ；又はＣ２１Ｇ。作成したｃａＴＣＲ−１−ＴＭ多様体を表２にまとめる。
実施例３．フローサイトメトリーによるｃａＴＣＲ細胞表面発現及びＴＣＲ−ＣＤ３複合体形成の検出
【０４８６】
ｃａＴＣＲ−１−０と共に、３種類の膜貫通変異体受容体（ｃａＴＣＲ−１−ＴＭ３、−ＴＭ４、−ＴＭ５）は、個々にＪ．ＲＴ３−Ｔ３．５細胞に形質導入された。ｃａＴＣＲ−１−０及びｃａＴＣＲ−１−ＴＭ変異体構築物を用いて形質導入された細胞を、抗ＣＤ３ε抗体によって評価し、ＴＣＲ陰性Ｊ．ＲＴ３−Ｔ３．５細胞及びＰＥ標識されたＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１四量体上でのＣＤ３ε発現の補助を評価し、細胞表面でのｃａＴＣＲ構築物の発現を測定した。フローサイトメトリー分析を使用し、細胞の表面上のＣＤ３及びｃａＴＣＲのＭＦＩを測定した。ＣＤ３又はｃａＴＣＲの発現は、ｃａＴＣＲ−１−０形質導入細胞に対するＭＦＩ測定値の百分率として表される。
【０４８７】
結果を図４に示す。Ｍｏｃｋ形質導入は、ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１四量体への結合を与えず、Ｊ．ＲＴ３−Ｔ３．５細胞表面上でＣＤ３εの発現をもたらさなかった。ＪＲＴ３−Ｔ３．５細胞を個別に形質導入して変異体受容体を発現させ、蛍光標識されたＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１で染色し、抗ＣＤ３εは、ｃａＴＣＲ−１−０で観察されたＭＦＩ値を上回る蛍光強度の別個のピークを示した。顕著には、変異体受容体は、ＴＣＲ陰性ＪＲＴ３−Ｔ３．５細胞株におけるＣＤ３εの細胞表面発現を補助することができただけでなく、細胞表面でのｃａＴＣＲ−１−０の発現に関連する上述のＣＤ３シグナル伝達複合体の発現を増加させることも可能であった。
【０４８８】
このことから、膜貫通変異体が、内在性ＣＤ３複合体を動員するためのｃａＴＣＲの重要な要件を改善することができたことが実証された。これは、ＴＣＲの定常ドメインが、ＣＤ３鎖との相互作用に寄与しているため、予想されないものとして見ることができ（Ｋｕｈｎｓ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｓ、Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１２；３：１５９；及びＷａｎｇ及びＲｅｉｎｈｅｒｚ、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．２０１２、２５０：１０２）、ＴＣＲ−ＣＤ３シグナル伝達複合体の安定性に関するＴＣＲ膜貫通領域の役割は、正しく評価されていない。更に、本キメラは、ＴＣＲ定常ドメインをＩｇＧ  ＣＨ１で置換しており、このことは、ＴＣＲ定常ドメインが、アッセイしたいずれのｃａＴＣＲ受容体とのＣＤ３アセンブリにも必要ではないことを示している。これは、試験した外因性ｃａＴＣＲキメラの全てが、それらの同族抗原に結合し得る機能的な受容体を形成し、Ｊ．ＲＴ３−Ｔ３．５細胞上のＣＤ３複合体の細胞表面発現を補助することができることを示す。
実施例４．ｃａＴＣＲ−１−ＴＭ変異体を用いたＣＤ３ζのＣｏ−ＩＰプルダウン
【０４８９】
抗ＦＬＡＧ免疫沈降は、（図４）のように形質導入されたＪＲＴ３−Ｔ３．５細胞の細胞溶解物から行い、ｃａＴＣＲ複合体を、ｃａＴＣＲ受容体の全ての鎖ＩＩに融合したＦＬＡＧタグによってプルダウンした。形質導入されたＪＲＴ３−Ｔ３．５細胞を溶解し、ｃａＴＣＲ複合体を非イオン性洗剤で洗浄し、そのまま精製した（Ｃｏｈｅｎら、２００６  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．）。抗Ｆｌａｇ抗体を使用し、ウェスタンブロットで、ｃａＴＣＲ鎖ＩＩの発現を検出した（図５）。ＣＤ３複合体とのＦＬＡＧタグ化ｃａＴＣＲの会合は、抗ＣＤ３ζ抗体とのウェスタンブロットによって可視化した（図５）。ｃａＴＣＲ−１−ＴＭ４及びｃａＴＣＲ−１−ＴＭ５は、２つの受容体によってプルダウンされたＣＤ３ζの量の増加によって分かるように、ＣＤ３複合体に対してより高い親和性を有した（図５、矢印）。ｃａＴＣＲ−１−ＴＭ４は、鎖ＩＩ上に変異を有し、一方、ｃａＴＣＲ−１−ＴＭ５は、鎖１上の更なる変異と共に、鎖ＩＩに同一の変異を有する。
実施例５．ｃａＴＣＲ−１膜貫通変異体で形質導入されたＴ細胞を用いた、ＡＦＰ陽性腫瘍のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの死滅活性の特性決定
【０４９０】
初代Ｔ細胞を、ｍｏｃｋ形質導入するか、又は抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合部分（それぞれ、配列番号５２及び５３のＶＨドメイン及びＶＬドメイン）をコードするｃａＴＣＲ−１−０又はｃａＴＣＲ−１膜貫通変異体（−ＴＭ１〜−ＴＭ５、及び−ＴＭ１４〜−ＴＭ１６）を用いて形質導入した。形質導入効率は、ＰＥ標識されたＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１テトラマーで染色することによって決定した。全てのｃａＴＣＲ−１  Ｔ細胞を、ｍｏｃｋ  Ｔ細胞と混合することによって、受容体陽性率４０％で一致させた。２つの細胞株ＳＫ−ＨＥＰ−１（ＡＦＰ−／ＨＬＡ−Ａ２＋）及びＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧ（ＡＦＰミニ遺伝子で形質導入されたＳＫ−ＨＥＰ−１）を、エフェクターと標的の比率２．５：１で使用した。Ｃｙｔｏｘ  ９６  Ｎｏｎ−ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用し、１６時間インキュベーションした後に、特異的なＴ細胞溶解を測定した。抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合部分を有する全てのｃａＴＣＲ−１−ＴＭ変異体で形質導入されたＴ細胞は、抗原陽性細胞株ＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧの死滅を指向したが、抗原陰性細胞株ＳＫ−ＨＥＰ−１の死滅は引き起こさなかった（図６）。全てのｃａＴＣＲ−１−ＴＭ変異体で形質導入された細胞で観察される特異的溶解のレベルは、ｃａＴＣＲ−１−０で形質導入されたＴ細胞のレベルに匹敵するものであり、このことは、ＴＭ変異体（ＴＭ１〜ＴＭ５）が、抗原陽性腫瘍細胞に対してＴ細胞の細胞毒性をシグナル伝達する機能的能力を保持していることを示している。
実施例６．ｃａＴＣＲ−１−ＴＭ変異体Ｔ細胞を用いた、ＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧ腫瘍細胞株のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの死滅中に放出されるサイトカイン
【０４９１】
初代Ｔ細胞を、ｍｏｃｋ形質導入するか、又は抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合部分（それぞれ、配列番号５２及び５３のＶＨドメイン及びＶＬドメイン）をコードするｃａＴＣＲ−１−０又はｃａＴＣＲ−１膜貫通変異体（−ＴＭ１〜−ＴＭ５）を用いて形質導入した。形質導入効率は、ＰＥ標識されたＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１テトラマーで染色することによって決定した。全てのｃａＴＣＲ−１  Ｔ細胞を、ｍｏｃｋ  Ｔ細胞と混合することによって、受容体陽性率４０％で一致させた。ＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧ（ＡＦＰミニ遺伝子で形質導入されたＳＫ−ＨＥＰ−１）を、エフェクターと標的の比率２．５：１で使用した。１６時間のＳＫ−ＨＥＰ１−ＡＦＰ−ＭＧ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ死滅アッセイ（図６）の後に、ＩＬ−２、ＩＬ−１０、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ及びＴＮＦ−αの培地へのサイトカイン放出を、Ｂｉｏ−ｐｌｅｘ  Ｐｒｏ  Ｈｕｍａｎ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ８−ｐｌｅｘ  Ａｓｓａｙ（ＢｉｏＲａｄ）を備えたＭａｇｐｉｘ  ｍｕｌｔｉｐｌｅｘシステム（Ｌｕｍｉｎｅｘ）を用いて測定した。ＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧ標的反応からのアッセイ上清を１０倍に希釈した。サイトカイン濃度は、ＢｉｏＲａｄ  Ｂｉｏ−ｐｌｅｘキットにより供給される標準曲線を用いて測定された（図７）。膜貫通変異体を用いたときのサイトカイン放出のわずかな増加は、特定の膜貫通変異体が、毒性レベルのサイトカイン放出を防ぐ制御機構を維持しつつ、抗原により誘導されるＴ細胞シグナル伝達強度を増加させ得ることを示唆している。
実施例７．ｃａＴＣＲ−１膜貫通変異体で形質導入されたＴ細胞を用いた、ＡＦＰ陽性腫瘍のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの死滅活性の特性決定
【０４９２】
初代Ｔ細胞を、ｍｏｃｋ形質導入するか、又は抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合部分（それぞれ、配列番号５２及び５３のＶＨドメイン及びＶＬドメイン）をコードするｃａＴＣＲ−１−０又はｃａＴＣＲ−１膜貫通変異体（−ＴＭ５〜−ＴＭ１３）を用いて形質導入した。形質導入効率は、ＰＥ標識されたＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１テトラマーで染色することによって求めた。全てのｃａＴＣＲ−１  Ｔ細胞を、ｍｏｃｋ  Ｔ細胞と混合することによって、受容体陽性率４０％で一致させた。３つの細胞株ＳＫ−ＨＥＰ−１（ＡＦＰ−／ＨＬＡ−Ａ２＋）、ＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧ（ＡＦＰミニ遺伝子で形質導入されたＳＫ−ＨＥＰ−１）、及び内因性のＡＦＰ発現ＨｅｐＧ２（ＡＦＰ＋／ＨＬＡ−Ａ２＋）を、エフェクターと標的の比率２．５：１で使用した。Ｃｙｔｏｘ  ９６  Ｎｏｎ−ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用し、１６時間インキュベーションした後に、特異的なＴ細胞溶解を測定した。抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合部分を有する全てのｃａＴＣＲ−１−ＴＭ変異体で形質導入されたＴ細胞は、抗原陽性細胞株ＨｅｐＧ２及びＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧの死滅を指向したが、抗原陰性細胞株ＳＫ−ＨＥＰ−１の死滅は引き起こさなかった（図８）。ＡＦＰ陽性腫瘍細胞であるＳＫ−ＨＥＰ１−ＡＦＰ−ＭＧ及びＨｅｐＧ２の両方の特異的溶解は、全てのｃａＴＣＲ−１−ＴＭ変異体で形質導入されたＴ細胞の間に匹敵するものであり、このことは、ＴＭ変異体（−ＴＭ５〜−ＴＭ１３）が、抗原陽性腫瘍細胞に対してＴ細胞の細胞毒性をシグナル伝達する機能的能力を保持していることを示している。
実施例８．ｃａＴＣＲ−１−ＴＭ変異体Ｔ細胞を用いた、ＨｅｐＧ２腫瘍細胞株のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの死滅中に放出されるサイトカイン
【０４９３】
初代Ｔ細胞を、ｍｏｃｋ形質導入するか、又は抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合部分（それぞれ、配列番号５２及び５３のＶＨドメイン及びＶＬドメイン）をコードするｃａＴＣＲ−１−０又はｃａＴＣＲ−１膜貫通変異体（−ＴＭ５〜−ＴＭ１３）を用いて形質導入した。形質導入効率は、ＰＥ標識されたＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１テトラマーで染色することによって決定した。全てのｃａＴＣＲ−１  Ｔ細胞を、ｍｏｃｋ  Ｔ細胞と混合することによって、受容体陽性率４０％で一致させた。ＨｅｐＧ２細胞を、エフェクターと標的の比率２．５：１で使用した。１６時間のＨｅｐＧ２  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ死滅アッセイ（図８）の後にＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ及びＴＮＦ−αの培地へのサイトカイン放出を、Ｂｉｏ−ｐｌｅｘ  Ｐｒｏ  Ｈｕｍａｎ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ８−ｐｌｅｘ  Ａｓｓａｙ（ＢｉｏＲａｄ）を備えたＭａｇｐｉｘ  ｍｕｌｔｉｐｌｅｘシステム（Ｌｕｍｉｎｅｘ）を用いて測定した。ＨｅｐＧ２標的反応からのアッセイ上清を４倍に希釈した。サイトカイン濃度は、ＢｉｏＲａｄ  Ｂｉｏ−ｐｌｅｘキットにより供給される標準曲線を用いて測定した（図９）。ＨｅｐＧ２を死滅させるときのｃａＴＣＲ−１−ＴＭ５を用いたサイトカイン放出の顕著な増加は、ｃａＴＣＲ−１−ＴＭ５受容体内の膜貫通変異が、細胞毒性シグナル伝達能力を増加させていることを示す。
実施例９．ｃａＴＣＲ−１−ＴＭ５で形質導入されたＴ細胞を用いたＣＤ１９陽性ＮＡＬＭ６腫瘍のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの死滅
【０４９４】
初代Ｔ細胞を、ｃａＴＣＲ−１−０、又は抗ＣＤ１９結合部分（それぞれ、配列番号５４及び５５のＶＨドメイン及びＶＬドメイン）をコードするｃａＴＣＲ−１−ＴＭ５を用いて形質導入した。形質導入効率を決定し、Ｔ細胞を、ｍｏｃｋ  Ｔ細胞と混合することによって、受容体陽性率４０％で一致させた。ＮＡＬＭ６標的細胞をＣＦＳＥで５分間標識した後、エフェクターと標的の比率１：１、１：２又は１：４で、適切なＴ細胞を４時間インキュベーションした。ＦＡＣＳ分析によりＣＦＳＥ陽性細胞の数を計数し、Ｔ細胞を含まないウェル中のＣＦＳＥ陽性細胞の数で除算することによって、死滅率を決定した（図１０）。ＣＤ１９陽性ＮＡＬＭ６腫瘍のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの死滅効率は、親のｃａＴＣＲ−１−０と変異体ｃａＴＣＲ−１−ＴＭ５で形質導入された細胞の間に相当する効率を維持しており、このことは、ｃａＴＣＲ−１−ＴＭ５変異体が、抗ＣＤ１９モデルにおいて、その細胞毒性シグナル伝達機能を維持していることを示している。
実施例１０．ｃａＴＣＲ−１−ＴＭ５  Ｔ細胞を用いた、ＮＡＬＭ６腫瘍細胞株のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの死滅中に放出されるサイトカイン
【０４９５】
初代Ｔ細胞を、ｃａＴＣＲ−１−０、又は抗ＣＤ１９結合部分（それぞれ、配列番号５４及び５５のＶＨドメイン及びＶＬドメイン）をコードするｃａＴＣＲ−１−ＴＭ５を用いて形質導入した。形質導入効率を決定し、Ｔ細胞を、ｍｏｃｋ  Ｔ細胞と混合することによって、受容体陽性率４０％で一致させた。ＮＡＬＭ６細胞を、エフェクターと標的の比率２．５：１で使用した。１６時間のＮＡＬＭ６  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ死滅アッセイ（図１０）の後に、ＩＬ−２、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ及びＴＮＦ−αの培地へのサイトカイン放出を、Ｂｉｏ−ｐｌｅｘ  Ｐｒｏ  Ｈｕｍａｎ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ８−ｐｌｅｘ  Ａｓｓａｙ（ＢｉｏＲａｄ）を備えたＭａｇｐｉｘ  ｍｕｌｔｉｐｌｅｘシステム（Ｌｕｍｉｎｅｘ）を用いて測定した。ＮＡＬＭ６標的反応からのアッセイ上清を４倍に希釈した。サイトカイン濃度は、ＢｉｏＲａｄ  Ｂｉｏ−ｐｌｅｘキットにより供給される標準曲線を用いて測定した（図１１）。ＮＡＬＭ６を死滅させるときのｃａＴＣＲ−１−ＴＭ５を用いたサイトカイン放出の増加は、ｃａＴＣＲ−１−ＴＭ５変異体受容体が、抗ＣＤ１９モデルにおいて、細胞毒性シグナル伝達能力を維持していることを示す。
実施例１１．ＣＤ１９陽性標的細胞に応答した細胞内サイトカイン産生
【０４９６】
サイトカイン発現に対するｃａＴＣＲ−１シグナル伝達の結果をより直接的に求めるために、抗原陽性腫瘍細胞による刺激に応答する細胞内サイトカイン産生を測定した。初代Ｔ細胞を、ｃａＴＣＲ−１−０、又は抗ＣＤ１９結合部分（それぞれ、配列番号５４及び５５のＶＨドメイン及びＶＬドメイン）をコードするｃａＴＣＲ−１−ＴＭ５を用いて形質導入した。形質導入効率を決定し、Ｔ細胞を、ｍｏｃｋ  Ｔ細胞と混合することによって、受容体陽性率４０％で一致させた。サイトカイン分泌を防ぐために、タンパク質輸送阻害剤カクテル（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅカタログ番号００４９８００３）と共に、Ｍｏｃｋ形質導入されたＴ細胞、又はｃａＴＣＲ−１−０又はｃａＴＣＲ−１−ＴＭ５で形質導入されたＴ細胞を、ＮＡＬＭ６又はＲａｊｉ標的細胞と共に比率２．５：１で培養した。４時間の治療後、Ｔ細胞を、抗ＴＮＦ−α、抗ＩＦＮ−γ、又は抗ＩＬ−２抗体と共に、ｃａＴＣＲ−１受容体及び抗ＣＤ４抗体に対して染色した。フローサイトメトリーを使用して、ｃａＴＣＲ−１受容体陽性細胞に対しゲーティングすることで、細胞内ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−γ及びＩＬ−２について陽性の細胞の割合を計算した（表４）。ｃａＴＣＲ−１−ＴＭ５変異体受容体による刺激は、細胞内サイトカイン発現を伴う細胞の増加をもたらし、ｃａＴＣＲ−１−ＴＭ５における膜貫通変異が、Ｔ細胞の細胞毒性シグナル伝達能の増加をもたらす能力を更に実証する。
【表４】
2020517287.tif 000006
実施例１２．ｃａＴＣＲ−１受容体による刺激後の増殖及び持続性
【０４９７】
初代Ｔ細胞を、ｃａＴＣＲ−１−０、又は抗ＣＤ１９結合部分（それぞれ、配列番号５４及び５５のＶＨドメイン及びＶＬドメイン）をコードするｃａＴＣＲ−１−ＴＭ５を用いて形質導入した。形質導入効率を決定し、Ｔ細胞を、ｍｏｃｋ  Ｔ細胞と混合することによって、受容体陽性率４０％で一致させた。Ｔ細胞をＣＦＳＥで標識し、Ｒａｊｉ又はＮＡＬＭ６標的細胞で刺激した。５×１０４個のＮＡＬＭ６細胞を、エフェクターと標的の比率２：１で使用した。ＦＡＣＳ分析を用い、ＣＦＳＥ蛍光を測定した（図１２Ａ及び１２Ｂ）。ＣＦＳＥ蛍光強度は、各細胞分裂と共に減少するため、これを、抗原刺激に応答したＴ細胞の増殖力をアッセイするために使用することができる。刺激後に生存するＴ細胞の生存期間（persistence）を観察するために、標的細胞の曝露から３日後に残った生存Ｔ細胞の総数を数えた（表５）。ｃａＴＣＲ−１−ＴＭ５受容体を介する刺激は、３日目のＣＦＳＥピークの左方向へのシフト及び生存Ｔ細胞総数の生存期間に見られるように、両方の増殖能の増加を示した。養子Ｔ細胞療法中のＴ細胞の生存期間及び増殖の両方が、より良好な臨床転帰に関連するため、これらは重要な特性である。
【表５】
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実施例１３．二重特異性抗ＣＤ１９抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲの構築及び特性決定
【０４９８】
単一の標的抗原を標的とするキメラ抗原受容体を用いた療法は、標的抗原遺伝子の消失、代替的スプライシング及びエピトープ喪失に起因して、抗原のエスケープに対して脆弱な場合がある。二重特異性ｃａＴＣＲは、抗原がエスケープする可能性を減らすことによって、有効性の改善された治療を提供するように設計された。
【０４９９】
抗ＣＤ１９抗体に由来する１つの抗原結合ドメインと、抗ＣＤ２２抗体に由来する１つの抗原結合ドメインとを有する二重特異性ｃａＴＣＲを構築した（本明細書では、「抗ＣＤ１９抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲ」と称されるか、又は「ＣＤ１９  ＣＤ２２  ＣＡＴＣＲ」と略される）。抗ＣＤ１９抗体は、国際公開第２０１７０６６１３６（Ａ２）号に既報である。抗ＣＤ２２抗体は、２０１８年３月３０日に出願されたＵＳＳＮ  ６２／６５０，９５５号に記載の「抗ＣＤ２２クローン２」として知られている。各抗ＣＤ１９抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲは、２つのポリペプチドを含み、１つはＴＣＲ  δドメインを含有し、１つはＴＣＲγドメインを含有する。異なる構造フォーマット及びリンカー（異なる長さ及び配列）を構築物に使用した。抗ＣＤ１９抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲ−９−２変異をＣＨ１（Ｓ６４Ｅ及びＳ６６Ｖ変異）及びＣＬ（Ｓ６９Ｌ及びＴ７１Ｓ変異）ドメインに導入して二量体形成を安定化させた。他の抗ＣＤ１９抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲ構築物は、リンカー、安定化ドメイン及び／又は膜貫通ドメインを変更することによって（例えば、変異膜貫通ドメインを使用して）、及び／又は抗原結合ドメインを交換することによって、生成することができる。
【０５００】
以下の表６は、各抗ＣＤ１９抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲ構築物における各ポリペプチドのＮ末端からＣ末端への構造的特徴を示す。抗ＣＤ１９抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲ構築物のポリペプチドの各対をコードするレンチウイルスベクターを調製した。
【表６】
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サイトカイン分泌
【０５０１】
初代Ｔ細胞を、ｍｏｃｋ形質導入するか、又は抗ＣＤ１９抗ＣＤ２２ｃａＴＣＲ−７−２ａ構築物をコードするレンチウイルスベクターを用いて形質導入した。形質導入されたＴ細胞を、Ｋ５６２（ＣＤ１９  ＣＤ２２二重陰性）、Ｋ５６２−ＣＤ２２（ＣＤ２２で形質導入されたＫ５６２）、Ｋ５６２−ＣＤ１９（ＣＤ１９で形質導入されたＫ５６２）、Ｒａｊｉ（ＣＤ１９及びＣＤ２２の両方を発現するＲａｊｉ）、又はＲａｊｉ  ＣＤ１９  Ｋ／Ｏ（ＣＤ１９ノックアウトを有するＲａｊｉ）細胞と、エフェクターと標的との比率２．５：１で混合した。Ｔ細胞は、標的リガンドとのＴＣＲエンゲージメントによって活性化されると、ＩＦＮ−γを分泌する。ＩＦＮ−γのサイトカイン放出レベルを測定し、受容体のシグナル伝達電位の指標として使用した（レベルが高いほど、受容体のシグナル伝達電位及び細胞毒性Ｔ細胞活性が高い）。Ｂｉｏ−ｐｌｅｘ  Ｐｒｏ  Ｈｕｍａｎ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ８  ｐｌｅｘアッセイ（ＢｉｏＲａｄ）を用い、Ｍａｇｐｉｘ多重系（Ｌｕｍｉｎｅｘ）を使用して、１６時間の共培養後にサイトカイン濃度を測定した。
【０５０２】
図１４に示すように、一連のＣＤ１９＋及び／又はＣＤ２２＋細胞株にわたって、抗原特異的ＩＦＮ−γ放出が観察された。抗ＣＤ１９抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲ−７−２ａ構築物を発現するＴ細胞は、ＣＤ１９抗原又はＣＤ２２抗原のいずれかを発現するＫ５６２と共にインキュベートしたときに、ＩＦＮ−γ分泌を特異的に活性化した。ｃａＴＣＲ−７−２ａ  Ｔ細胞はまた、ＣＤ１９遺伝子がＣＤ１９＋ＣＤ２２＋Ｒａｊｉリンパ腫細胞株（Ｒａｊｉ  ＣＤ１９  Ｋ／Ｏ）からノックアウトされた抗原エスケープモデルにおいてＩＦＮ−γを放出し、したがって、単一のｃａＴＣＲ−７が２つの独立した抗原に結合する能力を実証した。
ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの死滅
【０５０３】
様々な抗ＣＤ１９抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲ−７構築物のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの細胞死滅活性を、方法に記載のＬＤＨ細胞毒性アッセイによって評価した。簡潔に述べると、ドナー（Ｒ１７７）由来のヒト初代Ｔ細胞を、ｍｏｃｋ形質導入し、又は抗ＣＤ１９  ｃａＴＣＲ−１をコードするレンチウイルス又は抗ＣＤ１９抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲ構築物（ｃａＴＣＲ−７−１ｂ、ｃａＴＣＲ−７−２ｂ、ｃａＴＣＲ−７−１ｃ又はｃａＴＣＲ−７−２ｃ）をコードするレンチウイルスを用いて形質導入した。形質導入されたＴ細胞を、Ｋ５６２、Ｋ５６２−ＣＤ２２（ＣＤ２２を発現するＫ５６２）、Ｋ５６２−ＣＤ１９（ＣＤ１９を発現するＫ５６２）、又はＫ５６２−ＣＤ１９／ＣＤ２２（ＣＤ１９及びＣＤ２２抗原を発現するＫ５６２細胞）細胞と、エフェクターと標的の比率２：１で混合した。Ｃｙｔｏｘ  ９６  Ｎｏｎ−ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用し、１６時間インキュベーションした後に、特異的なＴ細胞溶解を測定した。
【０５０４】
図１５に示すように、様々な二重特異性抗ＣＤ１９抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲｓを発現するＴ細胞は、ＣＤ１９、ＣＤ２２、又はＣＤ１９及びＣＤ２２の両方を発現するＫ５６２標的細胞を溶解させることができた。しかしながら、単一特異性ＣＤ１９  ｃａＴＣＲ−１を発現するＴ細胞は、ＣＤ１９を発現するＫ５６２標的細胞を溶解させることのみが可能であった。
【表７−１】
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【表７−２】
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【表７−３】
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【表７−４】
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【表７−５】
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【表７−６】
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【表７−７】
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【表７−８】
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【表７−９】
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【表７−１０】
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【表７−１１】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１３Ｃ】
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【図１３Ｄ】
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【図１３Ｅ】
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【図１４】
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【図１５】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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