(57)【要約】  本発明は、ＮＡＡＤＰ受容体２孔チャネルＴＰＣ１および／またはＴＰＣ２の開口による神経変性疾患および／または炎症性疾患の予防および／または治療に薬物として使用する、ＣＤ３８と特異的に結合する化合物であって、ＮＡＡＤＰ受容体２孔チャネルＴＰＣ１および／またはＴＰＣ２の開口を活性化する、化合物に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＮＡＡＤＰ受容体２孔チャネルＴＰＣ１および／またはＴＰＣ２の開口による神経変性疾患および／または炎症性疾患の予防および／または治療に薬物として使用する、ＣＤ３８と特異的に結合する化合物であって、ＮＡＡＤＰ受容体２孔チャネルＴＰＣ１および／またはＴＰＣ２の開口を活性化する、化合物。
【請求項２】
抗体、その抗原結合フラグメントまたは抗原結合抗体模倣物および
有機小分子
を含む群より選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
前記化合物が、ＣＤ３８のＮＡＡＤＰ加水分解酵素活性を阻害することによって、またはＣＤ３８のＮＡＡＤＰシンターゼ活性を活性化することによって、ニューロンおよび／または免疫細胞の細胞内ＮＡＡＤＰレベルを増大させる、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
前記化合物が、配列番号１のアミノ酸２２０〜２８５を含むペプチドと特異的に結合する抗ＣＤ３８抗体、その抗原結合フラグメントまたは抗原結合抗体模倣物である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５】
前記化合物が、配列番号１のシステイン２５４および／またはシステイン２７５と特異的に結合する抗ＣＤ３８抗体、その抗原結合フラグメントまたは抗原結合抗体模倣物である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
前記化合物が、配列番号１のシステイン２５４およびシステイン２７５を含む５番目のＣ末端ジスルフィドループに特異的に結合する抗ＣＤ３８抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは抗原結合抗体模倣物である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
ＣＤ３８の内部移行を誘導する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８】
前記化合物が、好ましくはバイオセンサー解析によって求め得る１０−７以下のＫＤでヒトＣＤ３８と特異的に結合する抗ＣＤ３８抗体、その抗原結合フラグメントまたは抗原結合抗体模倣物である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項９】
ヒト化モノクローナル抗体である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１０】
前記化合物が、ＣＤ３８のＮＡＡＤＰ加水分解酵素活性を５μＭ以下のＩＣ５０で阻害する、またはＣＤ３８のＮＡＡＤＰシンターゼ活性を５μＭ以下のＥＣ５０で活性化する有機小分子である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１１】
前記化合物が、グルタミン酸１４６、アスパラギン酸１５５およびグルタミン酸２２６を含む群より選択される配列番号１のヒトＣＤ３８の少なくとも１つのアミノ酸と特異的に結合する、有機小分子である、請求項１〜３または１０のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１２】
前記神経変性疾患が、パーキンソン病、パーキンソン認知症、常染色体劣性遺伝性ＰＡＲＫ２およびＰＡＲＫ６連鎖パーキンソニズム、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症候群、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、グアドループ島パーキンソニズムおよびリティコ・ボディグ病を含めた非定型パーキンソン症候群を含めたパーキンソン病ならびに関連障害；筋萎縮性側索硬化症、前頭側頭型認知症、進行性球麻痺、仮性球麻痺、原発性側索硬化症、進行性筋萎縮症、脊髄性筋萎縮症およびポリオ後症候群を含めた運動ニューロン疾患；神経炎症性疾患；初期段階のアルツハイマー障害、軽度段階のアルツハイマー障害、中等度段階のアルツハイマー障害、軽度から中等度段階のアルツハイマー障害、進行した段階のアルツハイマー障害、軽度認知障害、血管性認知症、混合型認知症、ピック病、嗜銀顆粒性疾患、後部皮質萎縮症、ウェルニッケ・コルサコフ症候群を含めたアルツハイマー病および関連障害；プリオン病；リソソーム蓄積症；白質ジストロフィー；ハンチントン病；多発性硬化症；ダウン症候群；球脊髄性筋萎縮症；ＨＩＶ関連神経認知障害；トゥレット症候群；常染色体優性遺伝性脊髄小脳失調症；フリードライヒ運動失調症；歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症；筋強直性ジストロフィー；統合失調症；加齢による記憶障害；自閉症および自閉症スペクトラム障害；注意欠陥多動障害；慢性疼痛；アルコール性認知症；進行性非流暢性失語症；意味性認知症；痙性対麻痺；線維筋痛症；ライム病後；ニューロパチー；離脱症状；アルパース病；脳・眼・顔・骨格症候群；ウィルソン病；コケイン症候群；リー病；脳内鉄蓄積を伴う神経変性；オプソクローヌス・ミオクローヌス症候群；アルファ−メチルアシル−ＣｏＡラセマーゼ欠損症；アンダーマン症候群；アーツ症候群；マリネスコ・シェーグレン症候群；ミトコンドリア膜タンパク質関連神経変性；パントテン酸キナーゼ関連神経変性症；硬化性白質脳症を伴う多発嚢胞性脂肪膜性骨異形成症；リボフラビン輸送体欠損性神経細胞障害；ならびに毛細血管拡張性運動失調症を含む群より選択される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１３】
前記神経変性疾患が、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、アルツハイマー病、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症候群、前頭側頭型認知症、筋萎縮性側索硬化症、球脊髄性筋萎縮症、脳卒中、外傷性脳損傷、ハンチントン病、多発性硬化症、フリードライヒ運動失調症、シャルコー・マリー・トゥース病、クロイツフェルト・ヤコブ病およびその他のプリオン病、ロイコジストロフィー、リソソーム蓄積症を含む群より選択される、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１４】
前記炎症性疾患が、神経炎症性疾患、ゴーシェ病、自己免疫疾患、アレルギー、喘息、肝炎、再灌流傷害、２型糖尿病および移植拒絶反応を含む群より選択される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１５】
有効成分として、
請求項１〜１１のいずれか１項で定められる少なくとも１つの化合物と、
神経保護剤、対症剤、プロバイオティクスおよび凝集タンパク質または易凝集性タンパク質を中和するのに使用する抗体を含む群より選択される、少なくとも１つの第二の治療剤と
を含み、ＮＡＡＤＰ受容体２孔チャネルＴＰＣ１および／またはＴＰＣ２の開口による神経変性疾患および／または炎症性疾患の予防および／または治療に薬物として使用され、前記有効成分が、個別投与、同時投与または連続投与用に製剤化されている、配合剤。
【請求項１６】
請求項１〜１１のいずれか１項で定められる化合物を製造する方法であって、配列番号１と特異的に結合し、ＮＡＡＤＰ受容体２孔チャネルＴＰＣ１および／またはＴＰＣ２の開口を活性化する化合物を選択する段階を含む、方法。
【請求項１７】
ＣＤ３８のＮＡＡＤＰ加水分解酵素活性を阻害する、またはＣＤ３８のＮＡＡＤＰシンターゼ活性を活性化する化合物を選択する段階をさらに含む、請求項１６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、神経変性疾患および／または炎症性疾患の予防および／または治療の分野に関する。
【０００２】
具体的には、本発明は、神経変性および／または炎症性疾患の予防および／または治療に有用な化合物であって、ＣＤ３８と特異的に結合し、ＮＡＡＤＰ受容体２孔チャネルＴＰＣ１および／またはＴＰＣ２の開口を活性化する化合物に関する。
【背景技術】
【０００３】
神経変性疾患は、主としてヒトの脳および脊髄のニューロンに影響を及ぼす様々な病態を表す包括的用語である。ニューロンは、脳および脊髄を含めた神経系の構成要素である。ニューロンは通常、自身を再生することも交換することもないため、損傷または死滅すると、身体がそれを交換することができない。神経変性疾患の例としては、パーキンソン病、アルツハイマー病または筋萎縮性側索硬化症が挙げられ、これらの疾患は神経細胞の進行性の変性および／または死をもたらす。このような疾患の症状は、運動の障害（運動失調と呼ばれる）または精神機能の障害（認知症と呼ばれる）と関係がある。
【０００４】
神経変性の過程は十分に理解されていないため、それを原因とする疾患には未だに治療法がない。一部の患者には、症状を緩和するのに投薬、脳外科手術および集学的管理が治療方法として用いられる。パーキンソン病の場合にはこれまで、運動症状を軽減する薬物としてレボドパが最も広く用いられてきたが、その効果は一時的なものであり、時間とともに無効にする副作用が起こる。アルツハイマー病では、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤などの薬物も患者の症状に正の効果がみられるが、その効果は主として疾患の初期段階で認められるものである。
【０００５】
現在、ニューロン変性の阻害を目的とする方法が検討されている。現時点で研究段階にある薬剤としては、特にカルシウムチャネル遮断剤（イスラジピン）またはＮＡＡＤＰ受容体のアンタゴニスト、例えば国際公開第２０１６０２４２４６号に記載されているものなどが挙げられる。しかし、これらの薬剤のうち臨床的に確証されたものはない。
【０００６】
さらに、既知の薬剤は、１つのタイプの神経変性機序（例えば、興奮毒性、酸化ストレスまたはミトコンドリアの異常によるエネルギー欠乏など）だけを標的とするものである。
【０００７】
したがって、当該技術分野では、神経変性障害に罹患しているあらゆるタイプの患者に対し、様々なタイプの神経変性機序を標的とすることが可能な薬剤を用いる新たな改善された治療法が大いに必要とされている。
【０００８】
ＣＤ３８は、長いＣ末端細胞外ドメインと短いＮ末端細胞質ドメインを有する４５ｋＤａのＩＩ型膜貫通糖タンパク質である。ＣＤ３８には、受容体介在性機能および酵素媒介性機能の両方がある。ＣＤ３８は受容体としては、そのリガンドであるＣＤ３１と相互作用することができる。ＣＤ３８はエクト酵素としては、
（ｉ）ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ＋）をアデノシン二リン酸−リボース（ＡＤＰＲ）に変換するＮＡＤ＋ヌクレオシダーゼ（ＮＡＤアーゼ）活性；
（ｉｉ）ＮＡＤ＋を環状ＡＤＰＲ（ｃＡＤＰＲ）に変換するＡＤＰ−リボシルシクラーゼ活性；
（ｉｉｉ）ｃＡＤＰＲをＡＤＰＲに加水分解する環状ＡＤＰ−リボース加水分解酵素活性；
（ｉｖ）ニコチン酸の存在下でＮＡＤＰ＋（ＮＡＤ＋のリン酸化同等物）をニコチン酸アデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＡＤＰ）に変換するＮＡＡＤＰシンターゼ活性；および
（ｖ）ＮＡＡＤＰをＡＤＰＲリン酸（ＡＤＰＲＰ）に変換するＮＡＡＤＰ加水分解酵素活性
を介して複数の反応を触媒する、多機能性タンパク質である（Ｍａｌａｖａｓｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００８．Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｒｅｖ．８８（３）：８４１−８８６）。
【０００９】
ＣＤ３８は、多数の造血器悪性腫瘍でアップレギュレートされ、その発現が疾患進行と相関することから、癌研究で盛んに研究されてきた。抗体がいくつか開発され、最初は研究ツール（クローン９０、ＡＴ１、ＡＴ１３／５、ＡＴ２、ＨＢ−７、ＩＢ４、ＩＢ６、ＯＫＴ−１０、ＳＵＮ−４Ｂ７、Ｔ１６）として、次いで癌に対する治療薬（現時点で第ＩＩＩ相臨床試験［ＮＣＴ０２９９０３３８］の段階にあるＳＡＲ６５０９８４、現時点で第ＩＩ相［ＮＣＴ０１４２１１８６］の段階にあるＭＯＲ２０２および前臨床開発の段階にあるＡｂ７９を含む）として使用された。２０１５年１１月および２０１６年５月、米国食品医薬品局および欧州医薬品庁がそれぞれ、以前に３種類以上の治療を受けた多発性骨髄腫患者の治療にダラツムマブを承認している。
【００１０】
ＣＤ３８は、主要な細胞内ＮＡＤアーゼであり（Ｃｈｉｎｉ，２００９．Ｃｕｒｒ  Ｐｈａｒｍ  Ｄｅｓ．１５（１）：５７−６３）、そのＮＡＤ＋またはその前駆体が多数の研究で神経保護作用があることが明らかにされている（Ｈａｒｌａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２９１（２０）：１０８３６−４６；Ｌｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４．Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ  Ｍａｄ．８（３）：９４３−５０；Ｇｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ  Ａｇｉｎｇ．３４（６）：１５８１−８；米国特許出願公開第ＵＳ２０１２０３２８５２６号）ことから、急性または慢性の神経変性疾患の治療の新たな治療標的として提案された（Ｋｒｉｓｔｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１．Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｒｅｓ．８９（１２）：１９４６−５５）。実際、ＣＤ３８ノックアウト（ＫＯ）マウスを用いた複数の試験では、このマウスに虚血性脳損傷に対する有意な保護作用（Ｌｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１７．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ  Ｒｅｓ．４２（１）：２８３−９３；米国特許出願公開第ＵＳ２０１２０３２８５２６号）がみられたほか、アルツハイマー病実験マウスモデルＡＰＰｓｗｅＰＳ１ΔＥ９と交配すると、ＮＡＤ＋レベルの上昇によってＡβ産生および神経炎症が減少すること（Ｂｌａｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５．Ａｎｎ  Ｎｅｕｒｏｌ．７８（１）：８８−１０３）が明らかにされており、このことから、ＣＤ３８酵素活性を阻害するとＮＡＤ＋レベルの上昇による神経保護作用がみられる可能性が示唆される。
【００１１】
発明者らは予想外にも、ＣＤ３８と特異的に結合し、ＮＡＡＤＰ受容体２孔チャネルＴＰＣ１および／またはＴＰＣ２の開口を活性化する化合物が、細胞質カルシウムレベルを上昇させることによって効率的にニューロンの変性を防ぎ、ニューロンを変性から保護することができることをここで明らかにした。
【００１２】
これらの結果は、最新技術で示唆されているのとは対照的に、ＣＤ３８と特異的に結合する化合物が、文献で示唆されているようにＮＡＤ＋レベルを上昇させることによってではなく、ＮＡＤ＋処理によってごくわずかしか活性を示さないＮＡＡＤＰ受容体のＴＰＣを活性化することによって神経保護を示すことが明らかにされたことから、驚くべきものである。このことは、これまでに引用されたＣＤ３８  ＫＯマウスを用いた試験（Ｌｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１７．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ  Ｒｅｓ．４２（１）：２８３−９３；Ｂｌａｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５．Ａｎｎ  Ｎｅｕｒｏｌ．７８（１）：８８−１０３；米国特許出願公開第２０１２０３２８５２６号）；パーキンソン病患者の線維芽細胞のリソソーム異常が、（ｉ）ＮＡＡＤＰ受容体の阻害によって是正される、（ｉｉ）ＮＡＡＤＰによって悪化することを示したＨｏｃｋｅｙらの刊行物（２０１５．Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉ．１２８（２）：２３２−８）；およびＮＡＡＤＰ受容体の阻害を阻害すると様々な神経変性疾患で上昇する細胞質鉄レベルが低下することを示したＦｅｒｎａｎｄｅｚらによって公開されている試験（２０１６．Ａｕｔｏｐｈａｇｙ．１２（９）：１４８７−５０６）と完全に矛盾している。
【００１３】
このことは、カルシウムチャネルを遮断することによって（例えば、イスラジピン）、またはＮＡＡＤＰ受容体と拮抗することによって（例えば、国際公開第２０１６０２４２４６号に記載されているものなど）、細胞質カルシウムレベルを低下させ、ニューロンの変性を阻害することができる薬剤の開発を目指して現在実施されている研究とも完全に矛盾している。
【００１４】
ＣＤ３８は、Ｂ細胞、Ｔ細胞、単球およびＮＫ細胞（Ｋｒｅｊｃｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６．Ｂｌｏｏｄ．１２８（３）：３８４−９４）を含めた末梢血単核球（ＰＢＭＣ）（Ｍａｌａｖａｓｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００８．Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ．８８：８４１−８８６）に強く発現し、その発現は、炎症性サイトカイン、エンドトキシンおよびインターフェロンによって誘導されることが示されている（概説についてはＣｈｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１８．Ｔｒｅｎｄｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｓｃｉ．３９（４）：４２４−３６を参照されたい）。さらに一般的には、ＣＤ３８発現の増大は活性化の炎症誘発性Ｍ１状態のマーカーであると考えられている（Ｊａｂｌｏｎｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５．ＰＬＯＳ  Ｏｎｅ．１０（１２）：ｅ０１４５３４２）。これらの証拠と一致するように、ＣＤ３８発現の増大が実験的自己免疫性脳脊髄炎のラットモデル（Ｈｅｒｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６．Ｄｉｓ  Ｍｏｄｅｌ  Ｍｅｃｈ．９（１０）：１２１１−２０）、全身性エリテマトーデス患者のヒトＴ細胞（Ｐａｖｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００６．Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．４３（７）：１０２９−３９）および関節リウマチ滑膜組織（Ｃｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４．Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７６（２）：２２２−３１）で観察されている。
【００１５】
抗ＣＤ３８抗体のダラツムマブまたはイサツキシマブでＣＤ３８を標的化すると、抗炎症性インターロイキン１０（ＩＬ−１０）の血漿中レベルが低下することがわかっている（Ｋｒｅｊｃｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６．Ｂｌｏｏｄ．１２８（３）：３８４−９４；Ｆｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１７．Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２３（１５）：４２９０−４３００）。予想外であり、これらの結果と矛盾するように、本発明者らは、ＣＤ３８と特異的に結合し、ＮＡＡＤＰ受容体の２孔ャネルＴＰＣ１および／またはＴＰＣ２の開口を活性化する化合物が、ｉｎ  ｖｉｖｏで血漿中ＩＬ−１０レベルを大幅に増大させることを明らかにした。
【発明の概要】
【００１６】
本発明は、ＮＡＡＤＰ受容体２孔チャネルＴＰＣ１および／またはＴＰＣ２の開口による神経変性疾患および／または炎症性疾患の予防および／または治療に薬物として使用する、ＣＤ３８と特異的に結合する化合物であって、ＮＡＡＤＰ受容体２孔チャネルＴＰＣ１および／またはＴＰＣ２の開口を活性化する化合物に関する。
【００１７】
一実施形態では、本発明による使用のための化合物は、
−抗体、その抗原結合フラグメントまたは抗原結合抗体模倣物；および
−有機小分子
を含む群より選択される。
【００１８】
一実施形態では、本発明による使用のための化合物は、ＣＤ３８のＮＡＡＤＰ加水分解酵素活性を阻害することによって、またはＣＤ３８のＮＡＡＤＰシンターゼ活性を活性化することによって、ニューロンおよび／または免疫細胞の細胞内ＮＡＡＤＰレベルを増大させる。
【００１９】
一実施形態では、本発明による使用のための化合物は、配列番号１のアミノ酸２２０〜２８５を含むペプチドと特異的に結合する抗ＣＤ３８抗体、その抗原結合フラグメントまたは抗原結合抗体模倣物である。
【００２０】
一実施形態では、本発明による使用のための化合物は、配列番号１のシステイン２５４および／またはシステイン２７５と特異的に結合する、抗ＣＤ３８抗体、その抗原結合フラグメントまたは抗原結合抗体模倣物である。
【００２１】
一実施形態では、本発明による使用のための化合物は、配列番号１のシステイン２５４およびシステイン２７５を含む５番目のＣ末端ジスルフィドループと特異的に結合する、抗ＣＤ３８抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは抗原結合抗体模倣物である。
【００２２】
一実施形態では、本発明による使用のための化合物は、ＣＤ３８の内部移行を誘導する。
【００２３】
一実施形態では、本発明による使用のための化合物は、好ましくはバイオセンサー解析によって求め得る１０−７以下のＫＤでヒトＣＤ３８と特異的に結合する抗ＣＤ３８抗体、その抗原結合フラグメントまたは抗原結合抗体模倣物である。
【００２４】
一実施形態では、本発明による使用のための化合物は、ヒト化モノクローナル抗体である。
【００２５】
一実施形態では、本発明による使用のための化合物は、ＣＤ３８のＮＡＡＤＰ加水分解酵素活性を５μＭ以下のＩＣ５０で阻害する、またはＣＤ３８のＮＡＡＤＰシンターゼ活性を５μＭ以下のＥＣ５０で活性化する有機小分子である。
【００２６】
一実施形態では、本発明による使用のための化合物は、グルタミン酸１４６、アスパラギン酸１５５およびグルタミン酸２２６を含む群より選択される配列番号１のヒトＣＤ３８の少なくとも１つのアミノ酸と特異的に結合する、有機小分子である。
【００２７】
一実施形態では、前記神経変性疾患は、パーキンソン病、パーキンソン認知症、常染色体劣性遺伝性ＰＡＲＫ２およびＰＡＲＫ６連鎖パーキンソニズム、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症候群、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、グアドループ島パーキンソニズムおよびリティコ・ボディグ病を含めた非定型パーキンソン症候群を含めたパーキンソン病ならびに関連障害；筋萎縮性側索硬化症、前頭側頭型認知症、進行性球麻痺、仮性球麻痺、原発性側索硬化症、進行性筋萎縮症、脊髄性筋萎縮症およびポリオ後症候群を含めた運動ニューロン疾患；神経炎症性疾患；初期段階のアルツハイマー障害、軽度段階のアルツハイマー障害、中等度段階のアルツハイマー障害、軽度から中等度段階のアルツハイマー障害、進行した段階のアルツハイマー障害、軽度認知障害、血管性認知症、混合型認知症、ピック病、嗜銀顆粒性疾患、後部皮質萎縮症、ウェルニッケ・コルサコフ症候群を含めたアルツハイマー病および関連障害；プリオン病；リソソーム蓄積症；白質ジストロフィー；ハンチントン病；多発性硬化症；ダウン症候群；球脊髄性筋萎縮症；ＨＩＶ関連神経認知障害；トゥレット症候群；常染色体優性遺伝性脊髄小脳失調症；フリードライヒ運動失調症；歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症；筋強直性ジストロフィー；統合失調症；加齢による記憶障害；自閉症および自閉症スペクトラム障害；注意欠陥多動障害；慢性疼痛；アルコール性認知症；進行性非流暢性失語症；意味性認知症；痙性対麻痺；線維筋痛症；ライム病後；ニューロパチー；離脱症状；アルパース病；脳・眼・顔・骨格症候群；ウィルソン病；コケイン症候群；リー病；脳内鉄蓄積を伴う神経変性；オプソクローヌス・ミオクローヌス症候群；アルファ−メチルアシル−ＣｏＡラセマーゼ欠損症；アンダーマン症候群；アーツ症候群；マリネスコ・シェーグレン症候群；ミトコンドリア膜タンパク質関連神経変性；パントテン酸キナーゼ関連神経変性症；硬化性白質脳症を伴う多発嚢胞性脂肪膜性骨異形成症；リボフラビン輸送体欠損性神経細胞障害；ならびに毛細血管拡張性運動失調症を含む群より選択される。
【００２８】
一実施形態では、前記神経変性疾患は、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、アルツハイマー病、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症候群、前頭側頭型認知症、筋萎縮性側索硬化症、球脊髄性筋萎縮症、脳卒中、外傷性脳損傷、ハンチントン病、多発性硬化症、フリードライヒ運動失調症、シャルコー・マリー・トゥース病、クロイツフェルト・ヤコブ病およびその他のプリオン病、ロイコジストロフィー、リソソーム蓄積症を含む群より選択される。
【００２９】
一実施形態では、前記炎症性疾患は、神経炎症性疾患、ゴーシェ病、自己免疫疾患、アレルギー、喘息、肝炎、再灌流傷害、２型糖尿病および移植拒絶反応を含む群より選択される。
【００３０】
本発明は、有効成分として、
−少なくとも１つの本発明による化合物；ならびに
−神経保護剤、対症剤、プロバイオティクスおよび凝集タンパク質または易凝集性タンパク質を中和するのに使用する抗体を含む群より選択される少なくとも１つの第二の治療剤
を含み、ＮＡＡＤＰ受容体２孔チャネルＴＰＣ１および／またはＴＰＣ２の開口による神経変性疾患および／または炎症性疾患の予防および／または治療に薬物として使用され、前記有効成分が、個別投与、同時投与または連続投与用に製剤化されている、配合剤にも関する。
【００３１】
本発明は、本発明による化合物を製造する方法であって、配列番号１と特異的に結合し、ＮＡＡＤＰ受容体２孔チャネルＴＰＣ１および／またはＴＰＣ２の開口を活性化する化合物を選択する段階を含む、方法にも関する。
【００３２】
一実施形態では、本発明の方法は、ＣＤ３８のＮＡＡＤＰ加水分解酵素活性を阻害する、またはＣＤ３８のＮＡＡＤＰシンターゼ活性を活性化する化合物を選択する段階をさらに含む。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
一態様では、本発明は、ＮＡＡＤＰ受容体２孔チャネルＴＰＣ１および／またはＴＰＣ２の開口による神経変性疾患および／または炎症性疾患の予防および／または治療に薬物として使用する、ＣＤ３８、特にヒトＣＤ３８と特異的に結合する化合物であって、ＮＡＡＤＰ受容体２孔チャネルＴＰＣ１および／またはＴＰＣ２の開口を活性化する化合物に関する。
【００３４】
ＣＤ３８と特異的に結合し、ＮＡＡＤＰ受容体２孔チャネルＴＰＣ１および／またはＴＰＣ２の開口を活性化する化合物を薬物として使用することには、具体的には以下のような利点がある：
−様々なタイプのニューロンの様々なタイプの変性を直接的および間接的に効率的に防ぐ：
〇神経保護は特定のタイプのニューロンに特異的なものではない。それとは対照的に、グルタミン酸作動性細胞およびＧＡＢＡ作動性細胞を含む皮質ニューロンならびに中脳培養物のドーパミン作動性ニューロンを含めた様々なタイプのニューロンをｉｎ  ｖｉｔｒｏで効率的に保護することが可能である；
〇興奮毒性、酸化ストレス、ミトコンドリア複合体Ｉ阻害によるエネルギー欠乏、電気活動の欠乏および神経栄養因子欠乏を含めた様々なタイプの変性機序から直接的にニューロンを保護することが可能である；
〇変性から間接的にニューロンを保護することが可能であり、小膠細胞および星状膠細胞の数を抑えることによる抗炎症効果がある。
−神経変性障害には様々なタイプのニューロンおよび神経変性機序があることを考慮すると、神経変性障害に罹患しているあらゆるタイプの患者に有用である；
−化合物の特異性による副作用が少ない；
−神経変性疾患のあらゆる段階で効率的である；
−効果が一時的なものではない；
−他の被験薬剤と比較して低い用量を用いても極めて効率が高い（例えば、ＨＢ７抗体が７．５ｎＭの濃度でドーパミン作動性ニューロンの細胞死を完全に防いだのに対し、ＮＡＤ＋は３ｍＭの濃度でその神経保護効果を発揮した）；
−血漿中インターロイキン１０レベルを増大させることによる抗炎症特性を示す。
【００３５】
別途定義されない限り、本明細書で使用される技術用語および科学用語はいずれも、当業者に一般に理解されるものと同じ意味を有する。
【００３６】
便宜上、明細書、実施例および請求項で用いられる特定の用語および語句の意味を記載する。
【００３７】
本明細書で使用される「ＣＤ３８と特異的に結合する化合物」という用語は、ＣＤ３８と特異的に結合し、製薬学的用途に適した任意の分子に関連するものである。これには、抗体、その抗原結合フラグメント、抗原結合抗体模倣物、有機小分子、オリゴヌクレオチドおよび組換えタンパク質が包含される。
【００３８】
一実施形態では、ＣＤ３８と特異的に結合する本発明による化合物は、
−抗体、その抗原結合フラグメント、抗原結合抗体模倣物；および
−有機小分子
を含むか、これよりなる群より選択される。
【００３９】
本明細書で使用される「抗体」という用語は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、組換え抗体、二重特異性抗体、多重特異性抗体または改変抗体を含む。
【００４０】
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」は、アミノ酸配列の異なる抗体の混合物を含有する「ポリクローナル抗体」調製物とは対照的に、共通の重鎖および共通の軽鎖のアミノ酸配列を有する抗体分子、抗体の調製物を指すものとする。モノクローナル抗体は、ファージディスプレイ、細菌ディスプレイ、酵母ディスプレイまたはリボソームディスプレイなどのいくつかの既知の技術によって、およびハイブリドーマ由来抗体により例示される古典的方法によって作製することができる。したがって、「モノクローナル」という用語は、１つの核酸クローンに由来するあらゆる抗体を指すのに用いられる。
【００４１】
本発明の抗体は組換え抗体を含む。本明細書で使用される「組換え抗体」という用語は、組換え手段によって産生、発現、作製または単離した抗体、例えば、宿主細胞にトランスフェクトした組換え発現ベクターを用いて発現させた抗体；組換えコンビナトリアル抗体ライブラリーから単離した抗体；ヒト免疫グロブリン遺伝子によるトランスジェニックである動物（例えば、マウス）から単離した抗体；または特定の免疫グロブリン遺伝子配列（ヒト免疫グロブリン遺伝子配列など）を他のＤＮＡ配列とともに構築する任意の他の方法で産生、発現、作製もしくは単離した抗体などを指す。組換え抗体としては、例えば、キメラ抗体およびヒト化抗体が挙げられる。
【００４２】
本明細書で使用される「キメラ抗体」は、マウスなどの哺乳動物種の生殖系列に由来する可変ドメインの配列を、ヒトなどの別の哺乳動物種の生殖系列に由来する定常ドメインの配列に移植した抗体を指す。
【００４３】
本明細書で使用される「ヒト化抗体」は、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖系列に由来するＣＤＲ配列をヒトフレームワーク配列に移植した抗体を指す。
【００４４】
一実施形態では、本発明は、ヒト化モノクローナル抗体である、上で定義したような抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。
【００４５】
本明細書で使用される「抗体の抗原結合フラグメント」は、抗体の一部分、すなわち、本発明の抗体の構造の一部に相当し、できる限りその天然の形態で、ＣＤ３８に対して抗原結合能を示す分子を意味し、このようなフラグメントは特に、前記抗原に対して、対応する４本鎖抗体の抗原結合特異性と比較して同じまたは実質的に同じ抗原結合特異性を示す。抗原結合フラグメントは、対応する４本鎖抗体と同程度の結合親和性を有するのが有利である。ただし、対応する４本鎖抗体よりも抗原結合親和性が低い抗原結合フラグメントも本発明の範囲内に包含される。抗原結合能は、抗体と標的フラグメントとの間の親和性を測定することによって求めることができる。これらの抗原結合フラグメントは、抗体の「機能性フラグメント」と呼ばれることもある。
【００４６】
抗体の抗原結合フラグメントとは、そのＣＤＲ（相補性決定領域）と呼ばれる超可変ドメインまたは同ドメインの一部分（１つまたは複数）を含むフラグメントであって、抗原、すなわちＣＤ３８に対する認識部位が含まれ、それにより抗原認識特異性が定められる、フラグメントのことである。
【００４７】
４本鎖免疫グロブリンの各軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメイン（それぞれ、ＶＬおよびＶＨ）は、それぞれＶＬ−ＣＤＲ１（またはＬＣＤＲ１）、ＶＬ−ＣＤＲ２（またはＬＣＤＲ２）、ＶＬ−ＣＤＲ３（またはＬＣＤＲ３）およびＶＨ−ＣＤＲ１（またはＨＣＤＲ１）、ＶＨ−ＣＤＲ２（またはＨＣＤＲ２）、ＶＨ−ＣＤＲ３（またはＨＣＤＲ３）と呼ばれる３つのＣＤＲを有する。
【００４８】
当業者には、この点に関して記載されている参照番号付け法を含めた標準的定義を参照することにより、ＫＡＢＡＴの番号付け法を参照することにより、またはＩＭＧＴ「ｃｏｌｌｉｅｒ  ｄｅ  ｐｅｒｌｅ」アルゴリズムの適用により、抗体の様々な領域／ドメインの位置を決定することが可能である。この点に関して、本発明の配列を定めるにあたって、領域／ドメインの画定が参照法によって異なり得ることが留意される。したがって、本発明で定められる領域／ドメインは、抗体の可変ドメインの完全長配列内での該当する配列の長さまたは位置付けに±１０％前後の差がみられる配列を包含する。
【００４９】
したがって、４本鎖免疫グロブリンの構造に基づき、様々なクラスの抗体、特にＩｇＧ、具体的には哺乳動物ＩｇＧについてフレームワークおよび定常ドメインの位置が明確に定められていることに留意して、利用可能なデータベースおよび先行技術の抗体の配列と比較することにより、特にこれらの配列中での機能ドメインの位置を比較することにより、抗原結合フラグメントを定めることができる。このような比較には、抗体の三次元構造に関するデータも含まれる。
【００５０】
本発明の特定の実施形態を説明する目的で、前記抗体のＣＤＲを含む可変ドメインを含む、抗体の抗原結合フラグメントには、Ｆｖ、ｄｓＦｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２および単一ドメイン抗体が包含される。Ｆｖフラグメントは、疎水性相互作用により結合した抗体のＶＬドメインとＶＨドメインとからなり；ｄｓＦｖフラグメントでは、ＶＨ：ＶＬヘテロ二量体がジスルフィド結合によって安定化されており；ｓｃＦｖフラグメントでは、ＶＬドメインとＶＨドメインが柔軟なペプチドリンカーを介して互いに連結され、それにより一本鎖タンパク質を形成している。Ｆａｂフラグメントは、抗体のパパイン消化によって得られる単量体フラグメントであり、ジスルフィド結合により互いに結合したＬ鎖全体とＨ鎖のＶＨ−ＣＨ１フラグメントとを含む。Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、抗体のヒンジジスルフィドより下の部分をペプシンで消化することによって得られるものであり、２つのＦａｂ’フラグメントと、さらには免疫グロブリン分子のヒンジ領域の一部とを含む。Ｆａｂ’フラグメントは、ヒンジ領域内のジスルフィド結合を切断することによってＦ（ａｂ’）２フラグメントから得られるものである。Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは二価である、すなわち、天然の免疫グロブリン分子のように２つの抗原結合部位を含み；それに対して、Ｆｖ（Ｆａｂの可変部分を構成しているＶＨＶＬ二量体）フラグメント、ｄｓＦｖフラグメント、ｓｃＦｖフラグメント、ＦａｂフラグメントおよびＦａｂ’フラグメントが一価である、すなわち、単一の抗原結合部位を含む。これらの本発明の基本的な抗原結合フラグメント同士を組み合わせて、ダイアボディ、トライアボディまたはテトラボディなどの多価抗原結合フラグメントを得ることができる。これらの多価抗原結合フラグメントも本発明の一部である。
【００５１】
本明細書で使用される「二重特異性抗体」という用語は、第一の抗原に特異的な少なくとも１つの領域（例えば、第一の抗体の可変領域に由来するもの）と、第二の抗原に特異的な少なくとも１つの第二の領域（例えば、第二の抗体の可変領域に由来するもの）とを有することによって２種類の異なる抗原を認識する抗体を指す。二重特異性抗体は２種類の標的抗原と結合し、このため、多重特異性抗体の１種である。２種類以上の異なる抗原を認識する多重特異性抗体は、組換えＤＮＡ法によって作製することができるか、または、任意の好都合な方法によって化学的に作製した抗体を含むものであり得る。二重特異性抗体には、２種類の異なる抗原を認識することが可能なあらゆる抗体もしくは抗体のコンジュゲートまたは多量体型の抗体が含まれる。二重特異性抗体には、二価特性が保持されるように小型化し再構成した抗体および各抗原に対して複数の抗原認識部位を有し得るように２つの抗体を化学的にカップリングしたもの、例えばＢｉＭＥ（二重特異性マクロファージ増強抗体）、ＢｉＴＥ（二重特異性Ｔ細胞結合体）、ＤＡＲＴ（二重親和性再標的化）；ＤＮＬ（ドック・アンド・ロック（ｄｏｃｋ−ａｎｄ−ｌｏｃｋ））、ＤＶＤ−Ｉｇ（二重可変ドメイン免疫グロブリン）、ＨＡＳ（ヒト血清アルブミン）、ｋｉｈ（ノブズ・イントゥー・ホールズ（ｋｎｏｂｓ  ｉｎｔｏ  ｈｏｌｅｓ））などが含まれる。
【００５２】
したがって、本発明の二重特異性抗体は、ＣＤ３８および第二の抗原と特異的に結合し、ＮＡＡＤＰ受容体２孔チャネルＴＰＣ１および／またはＴＰＣ２の開口を活性化する。
【００５３】
一実施形態では、本発明は、二重特異性であり、特にＮＡＡＤＰ受容体２孔チャネルＴＰＣ１および／またはＴＰＣ２の開口による神経変性および／または炎症性疾患の予防および／または治療に薬物として使用する、本明細書で定義される抗ＣＤ３８抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは抗原結合抗体模倣物も包含する。
【００５４】
治療用抗体を開発するためのいくつかの研究により、抗体特性を最適化するＦｃ領域が設計され、治療用抗体に必要とされる薬理学活性にさらに適した分子の作製が可能になった。抗体のＦｃ領域は、血清中半減期およびエフェクター機能、例えば補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）などを媒介する。ＣＨ２ドメインとＣＨ３ドメインの境界に位置するいくつかの変異、例えばＴ２５０Ｑ／Ｍ４２８ＬおよびＭ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ＋Ｈ４３３Ｋ／Ｎ４３４Ｆなどが、ＩｇＧ１のＦｃＲｎに対する結合親和性および半減期をｉｎ  ｖｉｖｏで増大させることが明らかにされている。しかし、ＦｃＲｎ結合の増大と半減期の改善との間に必ずしも直接的な関係があるわけではない。治療用抗体の効果を改善する方法の１つが、その血清中での持続性を増大させ、それにより循環血中レベルを高め、投与頻度を減らし、用量を減じることである。抗体のエフェクター機能を低下または増大させるようＦｃ領域を設計することが望まれ得る。細胞表面分子、特に免疫細胞またはニューロン上の細胞表面分子を標的とする抗体には、エフェクター機能を消失させることが必要である。これとは逆に、腫瘍に対する使用を目的とする抗体には、エフェクター機能を増大させることにより治療活性が改善され得る。４種類のヒトＩｇＧアイソタイプは、異なる親和性で活性化Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩＩａ）、阻害ＦｃγＲＩＩｂ受容体および補体の第１成分（Ｃ１ｑ）と結合し、エフェクター機能に大きな差がある。ＩｇＧとＦｃγＲまたはＣ１ｑとの結合は、ヒンジ領域およびＣＨ２ドメインに位置する残基に依存する。ＩｇＧ２およびＩｇＧ４では、ＣＨ２ドメインの２つの領域がＦｃγＲおよびＣ１ｑとの結合に極めて重要であり、特有の配列を有する。
【００５５】
本明細書で使用される「改変抗体」は、機能的に異なる分子と結合した抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、分子に対応する。本発明の改変抗体は、抗体または機能的フラグメントの安定性および／または半減期を改善する共有結合、移植、化学基もしくは生物学的基または分子、例えばＰＥＧポリマーまたはｉｎ  ｖｉｖｏでのプロテアーゼによる切断からの保護に適した別の保護基もしくは分子などとの化学結合を含めた任意の適切な形態の結合から得られる融合キメラタンパク質またはコンジュゲートであり得る。同様の技術を用いて、特に化学的カップリングまたは移植により、生物学的活性分子を用いて改変抗体を調製することができ、前記活性分子は、例えば、毒素、特にシュードモナスエキソトキシンＡ、植物毒素リシンのＡ鎖またはサポリン毒素、特に治療有効成分、抗体または機能性フラグメントをヒト身体の特定の細胞または組織に標的化するのに適したベクター（特にタンパク質ベクターを含む）のうちから選択されるものであるか、あるいは、特に抗体のフラグメントを使用する場合には、標識またはリンカーと結合したものであり得る。抗体またはその機能性フラグメントのＰＥＧ化は、特に治療用途には、宿主への活性物質の送達条件が改善されることから、関心がもたれる特定の実施形態である。ＰＥＧ化は、抗体または機能性フラグメントの認識部位に干渉しないよう部位特異的なものであり得、高分子量のＰＥＧで実施し得る。ＰＥＧ化は、抗体もしくは機能性フラグメントの配列中に存在する遊離システイン残基を介して、または抗体もしくは機能性フラグメントのアミノ配列中に付加した遊離システイン残基を介して達成され得る。
【００５６】
一実施形態では、本発明は、改変されており、特にＮＡＡＤＰ受容体２孔チャネルＴＰＣ１および／またはＴＰＣ２の開口による神経変性および／または炎症性疾患の予防および／または治療に薬物として使用する、本明細書で定義される抗ＣＤ３８抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは抗原結合抗体模倣物も包含する。
【００５７】
本明細書で使用される「抗原結合抗体模倣物」という用語は、抗体のものを模倣する抗原結合能を有する、人工のタンパク質、ペプチドおよび任意の化合物を指す。
【００５８】
このような模倣物はオリゴヌクレオチドアプタマーを含む。本明細書で使用される「オリゴヌクレオチド」という用語は、ＤＮＡ、ＲＮＡのほかにも修飾ヌクレオチド（少なくとも１つの化学修飾を含むヌクレオチドなど）を含めた短いヌクレオチド分子に関連するものである。具体的には、前記オリゴヌクレオチドは２００個未満のヌクレオチド、より具体的には５０個未満のヌクレオチドからなる。本明細書で使用される「オリゴヌクレオチドアプタマー」という用語は、自身に特有の三次元構造に折り畳まれたとき、高い親和性および特異性で小分子のリガンドまたはタンパク質標的と選択的に結合することができる、短いオリゴヌクレオチドを指す。
【００５９】
このような模倣物は、アフィチンおよびアンチカリンならびにペプチドアプタマーを含む。アフィチンは、抗原と選択的に結合することが可能な人工タンパク質である。アフィチンは構造的には、古細菌ドメインに属する微生物、スルホロブス・アシドカルダリウス（Ｓｕｌｆｏｌｏｂｕｓ  ａｃｉｄｏｃａｌｄａｒｉｕｓ）にみられるＤＮＡ結合タンパク質Ｓａｃ７ｄに由来する。Ｓａｃ７ｄの結合表面のアミノ酸をランダム化することにより、例えば、Ｓａｃ７ｄの結合面の１１残基のランダム置換に対応するバリアントを作製することにより、アフィチンライブラリーを作製することができ、得られたタンパク質ライブラリーにリボソームディスプレイのラウンドを実施して、親和性をペプチド、タンパク質、ウイルスおよび細菌などの様々な標的に向けることができる。アフィチンは抗体模倣物であり、バイオテクノロジーのツールとして開発が進められている。アフィチンはこれまで、様々な酵素に特異的な阻害剤としても用いられている（Ｋｒｅｈｅｎｂｒｉｎｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００８．Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．３８３（５）：１０５８−６８）。当業者であれば、当該技術分野で公知の方法、特に国際公開第２００８０６８６３７号および上記の刊行物に開示されている方法、特に、本明細書に開示されるファージディスプレイおよび／またはリボソームディスプレイライブラリーの作製ならびに抗原を用いるそのスクリーニングを用いて、必要な結合特性を有するアンチカリンを容易に開発し得る。アンチカリンは、抗原、タンパク質または小分子と結合することが可能な人工タンパク質である。アンチカリンは、自然な状態で結合するタンパク質のファミリーであるヒトリポカリンに由来する抗体模倣物である。アンチカリンは、約８分の１であり、大きさ約１８０アミノ酸、質量約２０ｋＤａである（Ｋｏｌｍａｒ  ＆  Ｓｋｅｒｒａ，２００８．ＦＥＢＳ  Ｊ．２７５（１１）：２６６７）。これまでに、特に特定の結合特性を有するアンチカリンのスクリーニングおよび選択が可能なアンチカリンファージディスプレイライブラリーが作製されている。当業者であれば、当該技術分野で公知の方法、特に欧州特許第１２７０７２５号、米国特許第８，５３６，３０７号、ＳｃｈｌｅｈｕｂｅｒおよびＳｋｅｒｒａ（２００２．Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｃｈｅｍ．９６（２−３）：２１３−２８）ならびに上記の刊行物に開示されている方法、特に、本明細書に開示されるファージディスプレイおよび／またはリボソームディスプレイライブラリーの作製ならびに抗原を用いるそのスクリーニングを用いて、必要な結合特性を有するアフィチンを容易に開発し得る。本明細書で使用される「ペプチドアプタマー」という用語は、標的分子（抗原）上の特定の部位と結合するよう選択した小型のコンビナトリアルタンパク質を指す。細菌発現系を含む多数の発現系で、またはコンビナトリアル化学によって、アンチカリンおよびアフィチンおよびペプチドアプタマーを作製し得る。したがって、本発明は、特に、ＣＤ３８との特異的結合およびＮＡＡＤＰ受容体２孔チャネルＴＰＣ１および／またはＴＰＣ２の開口の活性化に関して、本明細書に記載される抗体の特徴を有する、アフィチン、アンチカリン、ペプチドアプタマーおよびその他の類似した抗体模倣物を提供する。
【００６０】
抗体またはそのフラグメントに関して本明細書に開示される実施形態はいずれも、必要な変更を加えて本発明の抗原結合抗体模倣物に置き換えられる。
【００６１】
本明細書で使用される「ＣＤ３８」という用語は、Ｍａｌａｖａｓｉら（２００８．Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ．８８：８４１−８８６）に記載されているＴ１０、環状ＡＤＰ−リボース加水分解酵素１、ＡＤＰＲＣ１としても知られ、具体的には哺乳動物種に由来する４５ｋＤａのＩＩ型膜貫通糖タンパク質、より具体的にはヒトＣＤ３８を指す。
【００６２】
好ましくは、「ヒトＣＤ３８」という用語は、ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＰ＿００１７６６により参照される、配列番号１のアミノ酸配列のタンパク質を指す。本明細書に記載されるヒトＣＤ３８のアミノ酸の番号付けは、ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＰ＿００１７６６により参照され、配列番号１で示される、ヒトＣＤ３８配列のアミノ酸の番号付けに対応する。
【００６３】
配列番号１
ＭＡＮＣＥＦＳＰＶＳＧＤＫＰＣＣＲＬＳＲＲＡＱＬＣＬＧＶＳＩＬＶＬＩＬＶＶＶＬＡＶＶＶＰＲＷＲＱＱＷＳＧＰＧＴＴＫＲＦＰＥＴＶＬＡＲＣＶＫＹＴＥＩＨＰＥＭＲＨＶＤＣＱＳＶＷＤＡＦＫＧＡＦＩＳＫＨＰＣＮＩＴＥＥＤＹＱＰＬＭＫＬＧＴＱＴＶＰＣＮＫＩＬＬＷＳＲＩＫＤＬＡＨＱＦＴＱＶＱＲＤＭＦＴＬＥＤＴＬＬＧＹＬＡＤＤＬＴＷＣＧＥＦＮＴＳＫＩＮＹＱＳＣＰＤＷＲＫＤＣＳＮＮＰＶＳＶＦＷＫＴＶＳＲＲＦＡＥＡＡＣＤＶＶＨＶＭＬＮＧＳＲＳＫＩＦＤＫＮＳＴＦＧＳＶＥＶＨＮＬＱＰＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧＲＥＤＳＲＤＬＣＱＤＰＴＩＫＥＬＥＳＩＩＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲＰＤＫＦＬＱＣＶＫＮＰＥＤＳＳＣＴＳＥＩ
【００６４】
「抗ＣＤ３８抗体」という用語は、ＣＤ３８、特にヒトＣＤ３８と特異的に結合する抗体を指す。
【００６５】
本発明による化合物（具体的には、本発明による抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは抗原結合抗体模倣物）とＣＤ３８（具体的には、ＣＤ３８内のエピトープ）との間の特異的結合から、本発明による化合物（具体的には、本発明による抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは抗原結合抗体模倣物；本発明による有機小分子；あるいは本発明によるオリゴヌクレオチド）がＣＤ３８（具体的には、ＣＤ３８内のエピトープ）に対して相当な親和性を示すことがわかる。
【００６６】
化合物が抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは抗原結合抗体模倣物である場合、「相当な親和性」には、約１０−７Ｍ、好ましくは約１０−８Ｍ（ＫＤ−親和性定数）またはこれより強い親和性で結合することが含まれる。好ましくは、結合親和性が約１０−７Ｍ〜約１０−１２Ｍ、任意選択で約１０−８〜約１０−１２、任意選択で約１０−９Ｍ〜約１０−１１Ｍの範囲内にある、具体的には約１０−１０Ｍであるとき、結合が特異的なものであると考える。
【００６７】
化合物が有機小分子である場合、「相当な親和性」には、約１０−６Ｍ（ＫＤ−親和性定数）またはこれより強い親和性で結合することが含まれる。好ましくは、結合親和性が約１０−６Ｍ〜約１０−１０Ｍ、任意選択で約１０−７Ｍ〜約１０−９Ｍの範囲内にある、具体的には約１０−８Ｍであるとき、結合が特異的なものであると考える。
【００６８】
化合物がオリゴヌクレオチドである場合、「相当な親和性」には、約２００ｎＭ（ＫＤ−親和性定数）またはこれより強い親和性で結合することが含まれる。好ましくは、結合親和性が約１０ｎＭ〜約２００ｎＭ、任意選択で約５０ｎＭ〜約１５０ｎＭの範囲内にある、具体的には約１００ｎＭであるとき、結合が特異的なものであると考える。
【００６９】
ある結合ドメインが標的と特異的に反応または結合するかどうかは、具体的には、前記結合ドメインと標的タンパク質または抗原との反応と、前記結合ドメインと標的タンパク質以外のタンパク質または抗原との反応を比較することによって容易に試験することができる。
【００７０】
親和性は、当業者に周知の様々な方法によって求めることができる。このような方法としては、特に限定されないが、Ｂｉａｃｏｒｅ解析、Ｂｌｉｔｚ解析およびスキャッチャードプロットが挙げられる。
【００７１】
一実施形態では、本発明による抗ＣＤ３８抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは抗原結合抗体模倣物は、好ましくはバイオセンサー解析によって、特にＢｉａｃｏｒｅ解析によって求め得るＣＤ３８に対するＫＤ値（親和性定数）が約１０−７Ｍ以下、好ましくは約１０−８以下、より好ましくは約１０−９Ｍ以下、さらにより好ましくは約１０−１０Ｍ以下である。
【００７２】
本明細書で使用される「ＮＡＡＤＰ受容体２孔チャネルＴＰＣ１および／またはＴＰＣ２」という用語は、Ｐａｔｅｌら（２０１５．Ｓｃｉ  Ｓｉｇｎａｌ．８（３８４）：ｒｅ７）に記載されているＴＰＣＮ１およびＴＰＣＮ２としても知られる受容体と関連するものである。
【００７３】
好ましくは、「ＮＡＡＤＰ受容体２孔チャネルＴＰＣ１」は、ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＰ＿００１１３７２９１．１により参照される配列番号２のアミノ酸配列のヒトＴＰＣ１を指す。
【００７４】
配列番号２
ＭＥＳＣＹＩＡＱＡＧＬＥＬＬＧＳＳＳＳＰＴＬＴＳＱＳＡＥＩＴＥＤＡＳＮＧＧＶＳＥＱＨＰＷＰＳＧＦＥＲＥＬＫＰＥＴＩＳＳＰＧＹＨＩＬＲＡＴＧＥＥＮＭＡＶＳＬＤＤＤＶＰＬＩＬＴＬＤＥＧＧＳＡＰＬＡＰＳＮＧＬＧＱＥＥＬＰＳＫＮＧＧＳＹＡＩＨＤＳＱＡＰＳＬＳＳＧＧＥＳＳＰＳＳＰＡＨＮＷＥＭＮＹＱＥＡＡＩＹＬＱＥＧＥＮＮＤＫＦＦＴＨＰＫＤＡＫＡＬＡＡＹＬＦＡＨＮＨＬＦＹＬＭＥＬＡＴＡＬＬＬＬＬＬＳＬＣＥＡＰＡＶＰＡＬＲＬＧＩＹＶＨＡＴＬＥＬＦＡＬＭＶＶＶＦＥＬＣＭＫＬＲＷＬＧＬＨＴＦＩＲＨＫＲＴＭＶＫＴＳＶＬＶＶＱＦＶＥＡＩＶＶＬＶＲＱＭＳＨＶＲＶＴＲＡＬＲＣＩＦＬＶＤＣＲＹＣＧＧＶＲＲＮＬＲＱＩＦＱＳＬＰＰＦＭＤＩＬＬＬＬＬＦＦＭＩＩＦＡＩＬＧＦＹＬＦＳＰＮＰＳＤＰＹＦＳＴＬＥＮＳＩＶＳＬＦＶＬＬＴＴＡＮＦＰＤＶＭＭＰＳＹＳＲＮＰＷＳＣＶＦＦＩＶＹＬＳＩＥＬＹＦＩＭＮＬＬＬＡＶＶＦＤＴＦＮＤＩＥＫＲＫＦＫＳＬＬＬＨＫＲＴＡＩＱＨＡＹＲＬＬＩＳＱＲＲＰＡＧＩＳＹＲＱＦＥＧＬＭＲＦＹＫＰＲＭＳＡＲＥＲＹＬＴＦＫＡＬＮＱＮＮＴＰＬＬＳＬＫＤＦＹＤＩＹＥＶＡＡＬＫＷＫＡＫＫＮＲＥＨＷＦＤＥＬＰＲＴＡＬＬＩＦＫＧＩＮＩＬＶＫＳＫＡＦＱＹＦＭＹＬＶＶＡＶＮＧＶＷＩＬＶＥＴＦＭＬＫＧＧＮＦＦＳＫＨＶＰＷＳＹＬＶＦＬＴＩＹＧＶＥＬＦＬＫＶＡＧＬＧＰＶＥＹＬＳＳＧＷＮＬＦＤＦＳＶＴＶＦＡＦＬＧＬＬＡＬＡＬＮＭＥＰＦＹＦＩＶＶＬＲＰＬＱＬＬＲＬＦＫＬＫＥＲＹＲＮＶＬＤＴＭＦＥＬＬＰＲＭＡＳＬＧＬＴＬＬＩＦＹＹＳＦＡＩＶＧＭＥＦＦＣＧＩＶＦＰＮＣＣＮＴＳＴＶＡＤＡＹＲＷＲＮＨＴＶＧＮＲＴＶＶＥＥＧＹＹＹＬＮＮＦＤＮＩＬＮＳＦＶＴＬＦＥＬＴＶＶＮＮＷＹＩＩＭＥＧＶＴＳＱＴＳＨＷＳＲＬＹＦＭＴＦＹＩＶＴＭＶＶＭＴＩＩＶＡＦＩＬＥＡＦＶＦＲＭＮＹＳＲＫＮＱＤＳＥＶＤＧＧＩＴＬＥＫＥＩＳＫＥＥＬＶＡＶＬＥＬＹＲＥＡＲＧＡＳＳＤＶＴＲＬＬＥＴＬＳＱＭＥＲＹＱＱＨＳＭＶＦＬＧＲＲＳＲＴＫＳＤＬＳＬＫＭＹＱＥＥＩＱＥＷＹＥＥＨＡＲＥＱＥＱＱＲＱＬＳＳＳＡＡＰＡＡＱＱＰＰＧＳＲＱＲＳＱＴＶＴ
【００７５】
好ましくは、「ＮＡＡＤＰ受容体２孔チャネルＴＰＣ２」という用語は、ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＰ＿６２０７１４．２により参照される配列番号３のアミノ酸配列のヒトＴＰＣ２を指す。
【００７６】
配列番号３
ＭＡＥＰＱＡＥＳＥＰＬＬＧＧＡＲＧＧＧＧＤＷＰＡＧＬＴＴＹＲＳＩＱＶＧＰＧＡＡＡＲＷＤＬＣＩＤＱＡＶＶＦＩＥＤＡＩＱＹＲＳＩＮＨＲＶＤＡＳＳＭＷＬＹＲＲＹＹＳＮＶＣＱＲＴＬＳＦＴＩＦＬＩＬＦＬＡＦＩＥＴＰＳＳＬＴＳＴＡＤＶＲＹＲＡＡＰＷＥＰＰＣＧＬＴＥＳＶＥＶＬＣＬＬＶＦＡＡＤＬＳＶＫＧＹＬＦＧＷＡＨＦＱＫＮＬＷＬＬＧＹＬＶＶＬＶＶＳＬＶＤＷＴＶＳＬＳＬＶＣＨＥＰＬＲＩＲＲＬＬＲＰＦＦＬＬＱＮＳＳＭＭＫＫＴＬＫＣＩＲＷＳＬＰＥＭＡＳＶＧＬＬＬＡＩＨＬＣＬＦＴＭＦＧＭＬＬＦＡＧＧＫＱＤＤＧＱＤＲＥＲＬＴＹＦＱＮＬＰＥＳＬＴＳＬＬＶＬＬＴＴＡＮＮＰＤＶＭＩＰＡＹＳＫＮＲＡＹＡＩＦＦＩＶＦＴＶＩＧＳＬＦＬＭＮＬＬＴＡＩＩＹＳＱＦＲＧＹＬＭＫＳＬＱＴＳＬＦＲＲＲＬＧＴＲＡＡＦＥＶＬＳＳＭＶＧＥＧＧＡＦＰＱＡＶＧＶＫＰＱＮＬＬＱＶＬＱＫＶＱＬＤＳＳＨＫＱＡＭＭＥＫＶＲＳＹＧＳＶＬＬＳＡＥＥＦＱＫＬＦＮＥＬＤＲＳＶＶＫＥＨＰＰＲＰＥＹＱＳＰＦＬＱＳＡＱＦＬＦＧＨＹＹＦＤＹＬＧＮＬＩＡＬＡＮＬＶＳＩＣＶＦＬＶＬＤＡＤＶＬＰＡＥＲＤＤＦＩＬＧＩＬＮＣＶＦＩＶＹＹＬＬＥＭＬＬＫＶＦＡＬＧＬＲＧＹＬＳＹＰＳＮＶＦＤＧＬＬＴＶＶＬＬＶＬＥＩＳＴＬＡＶＹＲＬＰＨＰＧＷＲＰＥＭＶＧＬＬＳＬＷＤＭＴＲＭＬＮＭＬＩＶＦＲＦＬＲＩＩＰＳＭＫＬＭＡＶＶＡＳＴＶＬＧＬＶＱＮＭＲＡＦＧＧＩＬＶＶＶＹＹＶＦＡＩＩＧＩＮＬＦＲＧＶＩＶＡＬＰＧＮＳＳＬＡＰＡＮＧＳＡＰＣＧＳＦＥＱＬＥＹＷＡＮＮＦＤＤＦＡＡＡＬＶＴＬＷＮＬＭＶＶＮＮＷＱＶＦＬＤＡＹＲＲＹＳＧＰＷＳＫＩＹＦＶＬＷＷＬＶＳＳＶＩＷＶＮＬＦＬＡＬＩＬＥＮＦＬＨＫＷＤＰＲＳＨＬＱＰＬＡＧＴＰＥＡＴＹＱＭＴＶＥＬＬＦＲＤＩＬＥＥＰＧＥＤＥＬＴＥＲＬＳＱＨＰＨＬＷＬＣＲ
【００７７】
本明細書で使用される「ＮＡＡＤＰ受容体２孔チャネルＴＰＣ１および／またはＴＰＣ２の開口を活性化する」という用語は、ＮＡＡＤＰ受容体２孔チャネルＴＰＣ１および／またはＴＰＣ２を活性化することにより、その開口およびリソソームのＣａ２＋貯蔵から細胞質へのＣａ２＋の放出を引き起こす（Ｐａｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５．Ｓｃｉ  Ｓｉｇｎａｌ．８（３８４）：ｒｅ７に記載されている）ことと関連するものである。
【００７８】
ある化合物がＮＡＡＤＰ受容体２孔チャネルＴＰＣ１および／またはＴＰＣ２の開口を活性化する能力は、のちの実施例の節でさらに記載するように、ＴＰＣ１および／またはＴＰＣ２活性化阻害剤、例えばＮｅｄＫ（Ｄａｖｉｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｒｅｓ．１０８（３）：３５７−６６）またはＮｅｄ−１９（Ａｒｎｄｔ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４．Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  Ｃｅｌｌ．２５（６）：９４８−６４；Ｃａｌｃｒａｆｔ  ｅｔ  ａｌ．，２００９．Ｎａｔｕｒｅ．４５９（７２４６）：５９６−６００；Ｎａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００９．Ｎａｔ  Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ．５（４）：２２０−６；Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６．Ｓｃｉ  Ｒｅｐ．６：２０２８２）などを用いて試験することができる。
【００７９】
具体的には、ＣＤ３８と特異的に結合する本発明による化合物の神経保護効果は、のちの実施例の節で記載する神経保護アッセイで、ＮｅｄＫおよび／またはＮｅｄ−１９の存在下では、ＮｅｄＫおよび／またはＮｅｄ−１９の不在下での陰性対照と比較して、少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、具体的には少なくとも６０％、より具体的には少なくとも７０％拮抗される。このような神経保護アッセイとしては、特に限定されないが、のちの実施例の節でさらに記載する、中脳培養物中での自発的で進行性のドーパミン作動性（ＤＡ）ニューロン死の防止、ドーパミン作動性ニューロンのミトコンドリア神経毒ＭＰＰ＋からの保護、ドーパミン作動性ニューロンの神経栄養因子欠乏からの保護、皮質ニューロンの酸化ストレスからの保護および皮質ニューロンの興奮毒性からの保護に関してＮｅｄ−１９の存在下または不在下で実施するアッセイが挙げられる。
【００８０】
具体的には、ＣＤ３８と特異的に結合する本発明による化合物の抗炎症効果は、のちの実施例の節でさらに記載する炎症アッセイで、ＮｅｄＫおよび／またはＮｅｄ−１９の存在下では、ＮｅｄＫおよび／またはＮｅｄ−１９の不在下の陰性対照と比較して、少なくとも１０％、２０％、２５％、３０％、具体的には少なくとも３５％、より具体的には少なくとも４０％拮抗される。このような炎症アッセイとしては、特に限定されないが、のちの実施例の節でさらに記載し、Ｎｅｄ−１９の存在下または不在下で実施する、ミトコンドリア神経毒ＭＰＰ＋で処理したときの小膠細胞数の増加をｉｎ  ｖｉｔｒｏで定量化するアッセイ、あるいはコンズリトールβエポキシド（ＣＢＥ）で処理したときの小膠細胞数および／または星状膠細胞数の増加をｉｎ  ｖｉｖｏで定量化するアッセイが挙げられる。
【００８１】
一実施形態では、本発明に従ってＣＤ３８と特異的に結合し、ＮＡＡＤＰ受容体２孔チャネルＴＰＣ１および／またはＴＰＣ２の開口を活性化する、本発明による化合物には、様々なタイプのニューロンを様々なタイプの神経変性機序から直接的および／または間接的に保護するという利点がある。
【００８２】
本発明に従ってＣＤ３８と特異的に結合し、ＮＡＡＤＰ受容体２孔チャネルＴＰＣ１および／またはＴＰＣ２の開口を活性化する、本発明による化合物には、以下の特性のうち少なくとも１つ、具体的には全部の特性がある：
−ニューロン、具体的には中脳ドーパミン作動性ニューロンの自発的で進行性の細胞死を防止する；
−ドーパミン作動性ニューロンをミトコンドリア複合体Ｉ阻害によるエネルギー欠乏から、具体的にはミトコンドリア神経毒ＭＰＰ＋から保護する；
−ドーパミン作動性ニューロンを神経栄養因子欠乏から、特にＧＤＮＦ欠乏から保護する；
−ニューロン、具体的には皮質ニューロンを興奮毒性から、具体的にはグルタミン酸傷害から保護する；
−皮質ニューロンを酸化ストレスから、具体的にはＨ２Ｏ２傷害から保護する；および
−ｉｎ  ｖｉｖｏで注射したとき、小膠細胞と星状膠細胞の数を抑えること、および／または抗炎症性インターロイキン１０（ＩＬ−１０）レベルを増大させることによる、抗炎症効果を示す。
【００８３】
一実施形態では、本発明による化合物は、ＮＡＡＤＰレベル測定アッセイで、具体的にはニューロンの細胞内ＮＡＡＤＰレベルを陰性対照分子と比較して少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、具体的には少なくとも６０％、より具体的には少なくとも７０％増大させる。
【００８４】
ＨＰＬＣおよび質量スペクトル解析などにより細胞内ＮＡＡＤＰレベルを求める方法は、当該技術分野で周知である（Ｂｅｒｒｉｄｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００２．Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ．３６５（Ｐｔ１）：２９５−３０１を参照されたい）。
【００８５】
具体的には、本発明による化合物は、ＣＤ３８（具体的にはヒトＣＤ３８）のＮＡＡＤＰ加水分解酵素活性を阻害することによって、またはＣＤ３８（具体的にはヒトＣＤ３８）のＮＡＡＤＰシンターゼ活性を活性化することによって、具体的にはニューロンの細胞内ＮＡＡＤＰレベルを増大させる。
【００８６】
具体的には、本発明による化合物は、ＣＤ３８（具体的にはヒトＣＤ３８）がＮＡＡＤＰを（具体的にはＡＤＰＲＰ）に分解する能力を阻害することによって（すなわち、ＣＤ３８のＮＡＡＤＰ加水分解酵素活性を阻害することによって）、またはＣＤ３８（具体的にはヒトＣＤ３８）が（具体的にはニコチン酸の存在下でＮＡＤＰ＋から）ＮＡＡＤＰを合成する能力を活性化することによって（すなわち、ＣＤ３８のＮＡＡＤＰシンターゼ活性を活性化することによって）、具体的にはニューロンの細胞内ＮＡＡＤＰレベルを増大させる。
【００８７】
ある化合物がＣＤ３８のＮＡＡＤＰ加水分解酵素活性を阻害する（すなわち、ＣＤ３８がＮＡＡＤＰを具体的にはＡＤＰＲＰに分解する能力を阻害する）能力は、当該技術分野で周知の方法を用いて、例えば、Ｓｃｈｍｉｄら（２０１１．ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．５８５（２２）：３５４４−８）に記載されているように少なくともＮＡＡＤＰとＣＤ３８（組換えＣＤ３８タンパク質、抽出した細胞タンパク質またはＣＤ３８を発現する細胞全体に由来するもの；生化学的アッセイまたは細胞ベースのアッセイ）とを含む溶液を用いてｉｎ  ｖｉｔｒｏで、アッセイすることができる。
【００８８】
ある化合物がＣＤ３８のＮＡＡＤＰシンターゼ活性を活性化する（すなわち、ＣＤ３８が具体的にはニコチン酸の存在下でＮＡＤＰ＋からＮＡＡＤＰを合成する能力を活性化する；ＮＡＡＤＰシンターゼ活性）を活性化する能力は、当該技術分野で周知の方法を用いて、例えば、Ｓｃｈｍｉｄら（２０１１．ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．５８５（２２）：３５４４−８）に記載されているように少なくともＮＡＤＰとニコチン酸とＣＤ３８（組換えＣＤ３８タンパク質、抽出した細胞タンパク質またはＣＤ３８を発現する細胞全体に由来するもの；生化学的アッセイまたは細胞ベースのアッセイ）とを含む溶液を用いてｉｎ  ｖｉｔｒｏで、アッセイすることができる。
【００８９】
一実施形態では、本発明による化合物は、細胞内カルシウムレベル測定アッセイで、具体的にはニューロンの細胞質カルシウムレベルを陰性対照分子と比較して少なくとも１０％、２０％、具体的には少なくとも３０％、より具体的には少なくとも４０％増大させる。
【００９０】
のちの実施例の節でさらに記載する蛍光カルシウム指示薬を用いる顕微鏡法などにより細胞質カルシウムレベルを求める方法は、当該技術分野で周知である。
【００９１】
いくつかの論文では、ＣＤ３８と特定の抗体との結合がＣＤ３８の内部移行およびそれに続くリソソームへの再局在化を引き起こすことが明らかにされている（Ｆｕｎａｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０（５）：２２３８−４７）。さらに、ＣＤ３８によるＮＡＡＤＰ合成は酸性ｐＨでのみ起こる（Ａａｒｈｕｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２７０（５１）：３０３２７−３３）。このようなｐＨ条件がみられるのは、細胞内ではリソソーム区画に限られる。Ｆａｎｇら（２０１８．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２９３（２１）：８１５１−８１６０）は、抗体がＣＤ３８と結合すると、このタンパク質がクラスリン依存性エンドサイトーシスによりリソソーム区画内に内部移行することを報告している。Ｆａｎｇらは、ＣＤ３８のリソソーム内への再局在化が細胞内ＮＡＡＤＰレベルを増大させることも明らかにしている。
【００９２】
一実施形態では、本発明による化合物は、ＣＤ３８と結合すると、エンドサイトーシスによるＣＤ３８の内部移行を引き起こす。一実施形態では、本発明による化合物は、ＣＤ３８と結合すると、エンドサイトーシスによるＣＤ３８のクラスリン被覆小胞内への内部移行を引き起こす。一実施形態では、本発明による化合物は、ＣＤ３８と結合すると、エンドサイトーシスによるＣＤ３８のリソソーム内への内部移行を引き起こす。
【００９３】
一実施形態では、本発明による化合物はエンドサイトーシス区画に内部移行する。
【００９４】
特定の細胞成分（例えば、ＣＤ３８など）または外因性に供給された化合物（例えば、本発明による化合物など）のエンドサイトーシスによる内部移行を明らかにする方法は当該技術分野で周知であり、例えば、前記成分または化合物の標識および顕微鏡観察、前記成分または化合物がプロテアーゼから保護される程度の定量化が挙げられる。初期エンドサイトーシスマーカー、例えばＲａｂ５もしくはクラスリンなど、またはリソソームマーカー、例えばｌｙｓｏｔｒａｃｋｅｒもしくはＬＡＭＰ１などとの共標識を用いて、内部移行したＣＤ３８が局在化しているエンドサイトーシス区画を特定してもよい。
【００９５】
一実施形態では、本発明による化合物の神経保護効果は、のちの実施例の節でさらに記載する神経保護アッセイで、エンドサイトーシスによる内部移行の阻害剤の存在下では、前記阻害剤の存在しない対照と比較して少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、具体的には少なくとも６０％、より具体的には少なくとも７０％拮抗される。このようなアッセイに使用し得るエンドサイトーシスによる内部移行の阻害剤の非限定的な例として、ジャスプラキノリドがある。
【００９６】
一実施形態では、本発明による化合物による細胞内カルシウム濃度の増大は、のちの実施例の節でさらに記載する細胞内カルシウムレベル測定アッセイで、エンドサイトーシスによる内部移行の阻害剤の存在下では、このような阻害剤が存在しない対照と比較して少なくとも５％、１０％、１５％、具体的には少なくとも２０％、より具体的には少なくとも２５％拮抗される。このようなアッセイに使用し得るエンドサイトーシスによる内部移行の阻害剤の非限定的な例として、ジャスプラキノリドがある。
【００９７】
一実施形態では、本発明による化合物は、ＣＤ３８と結合すると、エンドサイトーシスによるＣＤ３８のリソソーム内区画、好ましくはリソソーム区画への内部移行を引き起こす。
【００９８】
一実施形態では、本発明による化合物はエンドサイトーシスによりリソソーム区画に取り込まれる。
【００９９】
一実施形態では、本発明による化合物の神経保護効果は、のちの実施例の節でさらに記載する神経保護アッセイで、リソソーム酸性化阻害剤の存在下では、このような阻害剤が存在しない対照と比較して少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、具体的には少なくとも６０％、より具体的には少なくとも７０％拮抗される。このようなアッセイに使用し得るリソソーム酸性化阻害剤の非限定的な例として、バフィロマイシンＡ１がある。
【０１００】
一実施形態では、本発明による化合物の神経保護効果は、のちの実施例の節でさらに記載する神経保護アッセイで、リソソーム成熟および／またはＣａ２＋依存性エキソサイトーシスの阻害剤の存在下では、このような阻害剤が存在しない対照と比較して少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、具体的には少なくとも６０％、より具体的には少なくとも７０％拮抗される。このようなアッセイに使用し得るリソソーム成熟および／またはＣａ２＋依存性エキソサイトーシスの阻害剤の非限定的な例として、バキュオリン１およびエンドシジン２がある。
【０１０１】
一実施形態では、本発明による化合物の神経保護効果は、のちの実施例の節でさらに記載する神経保護アッセイで、サーチュイン１阻害剤の存在下では、このような阻害剤が存在しない対照と比較して５０％以下、４０％以下、３０％以下、２０％以下、１５％以下、具体的には１０％以下、より具体的には５％以下だけ拮抗される。このようなアッセイで使用し得るサーチュイン１阻害剤の非限定的な例として、Ｅｘ−５２７がある。
【０１０２】
一実施形態では、本発明による化合物の神経保護効果は、のちの実施例の節でさらに記載する神経保護アッセイで、リアノジン受容体阻害剤の存在下では、このような阻害剤が存在しない対照と比較して５０％以下、４０％以下、３０％以下、２０％以下、１５％以下、具体的には１０％以下、より具体的には５％以下だけ拮抗される。このようなアッセイに使用し得るリアノジン受容体阻害剤の非限定的な例として、ダントロレンがある。
【０１０３】
一実施形態では、本発明による化合物は、のちの実施例の節でさらに記載するグルコース取込みアッセイで、具体的にはニューロンでのグルコース取込みを陰性対照分子と比較して少なくとも３０％、４０％、５０％、具体的には少なくとも６０％、より具体的には少なくとも６５％増大させる。
【０１０４】
一実施形態では、本発明による化合物は、抗ＣＤ３８抗体、その抗原結合フラグメントおよび抗原結合抗体模倣物を含むか、これよりなる群より選択される。
【０１０５】
具体的には、本発明による前記抗ＣＤ３８抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは抗原結合抗体模倣物は、配列番号１のヒトＣＤ３８のアミノ酸７０〜３００を含むか、これよりなるペプチド、より具体的にはアミノ酸２２０〜２８５を含むか、これよりなるペプチドと特異的に結合する。
【０１０６】
本明細書に記載されるヒトＣＤ３８のアミノ酸の番号付けは、配列番号１で示され、ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＰ＿００１７６６により参照される、ヒトＣＤ３８配列のアミノ酸の番号付けに対応する。したがって、ヒトＣＤ３８のアミノ酸７０〜３００を含むか、これよりなるペプチド、より具体的にはアミノ酸２２０〜２８５を含むか、これよりなるペプチドと特異的に結合する、前記本発明による抗ＣＤ３８抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは抗原結合抗体模倣物は、配列番号１で示され、ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＰ＿００１７６６により参照されるヒトＣＤ３８配列内の７０〜３００位にあるアミノ酸を含むか、これよりなるペプチド、より具体的にはアミノ酸２２０〜２８５を含むか、これよりなるペプチドと特異的に結合する。
【０１０７】
一実施形態では、前記本発明による抗ＣＤ３８抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは抗原結合抗体模倣物は、配列番号１のヒトＣＤ３８のシステイン２５４および／またはシステイン２７５と特異的に結合する。
【０１０８】
一実施形態では、前記本発明による抗ＣＤ３８抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは抗原結合抗体模倣物は、ヒトＣＤ３８のシステイン２５４およびシステイン２７５を含む５番目（最後から２番目）のＣ末端ジスルフィドループを含む領域、具体的には、配列番号１のヒトＣＤ３８のアミノ酸２２０〜２８５を含むか、これよりなる前記領域と特異的に結合する。
【０１０９】
一実施形態では、前記本発明による抗ＣＤ３８抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは抗原結合抗体模倣物は、配列番号１のヒトＣＤ３８のシステイン２５４およびシステイン２７５を含む５番目のＣ末端ジスルフィドループと特異的に結合する。
【０１１０】
一実施形態では、前記本発明による抗ＣＤ３８抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは抗原結合抗体模倣物は、配列番号１のヒトＣＤ３８のシステイン２８７およびシステイン２９６を含む６番目のＣ末端ジスルフィドループを含む領域、より具体的には、配列番号１のヒトＣＤ３８のアミノ酸２８５〜３００を含むか、これよりなる前記領域と特異的に結合することはない。
【０１１１】
一実施形態では、前記本発明による抗ＣＤ３８抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは抗原結合抗体模倣物は、配列番号１のヒトＣＤ３８のシステイン２８７およびシステイン２９６を含む６番目のＣ末端ジスルフィドループと特異的に結合することはない。
【０１１２】
一実施形態では、本発明による抗ＣＤ３８抗体は、ＨＢ７、クローン９０、ＡＴ１、（表１に記載されている）ＡＴ１３／５ならびにＣＤ３８と特異的に結合し、ＮＡＡＤＰ受容体２孔チャネルＴＰＣ１および／またはＴＰＣ２の開口を活性化することが可能なその変異抗体、（キメラおよびヒト化を含む）組換え抗体、二重特異性抗体および改変抗体を含むか、これよりなる群のなかで；具体的には、ＨＢ７、クローン９０、ＡＴ１ならびにＣＤ３８と特異的に結合し、ＮＡＡＤＰ受容体２孔チャネルＴＰＣ１および／またはＴＰＣ２の開口を活性化することが可能なその変異抗体、（キメラおよびヒト化を含む）組換え抗体、二重特異性抗体および改変抗体を含むか、これよりなる群のなかで；より具体的には、ＨＢ７、クローン９０ならびにＣＤ３８と特異的に結合し、ＮＡＡＤＰ受容体２孔チャネルＴＰＣ１および／またはＴＰＣ２の開口を活性化することが可能なその変異抗体、（キメラおよびヒト化を含む）組換え抗体、二重特異性抗体および改変抗体を含むか、これよりなる群のなかで；さらにより具体的には、ＨＢ７ならびにＣＤ３８と特異的に結合し、ＮＡＡＤＰ受容体２孔チャネルＴＰＣ１および／またはＴＰＣ２の開口を活性化することが可能なその変異抗体、（キメラおよびヒト化を含む）組換え抗体、二重特異性抗体および改変抗体を含むか、これよりなる群のなかで選択される。
【０１１３】
一実施形態では、本発明の抗ヒトＣＤ３８抗体は、モノクローナル抗体、具体的にはヒト化モノクローナル抗体、より具体的には、抗体の軽鎖定常ドメインがヒトカッパ軽鎖定常メインに由来し、抗体の重鎖定常ドメインが、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４（野生型または変異）重鎖定常ドメインに由来するヒト化モノクローナル抗体である。
【０１１４】
本発明によるヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントには、それを投与するヒト対象に対して免疫原性がマウスより低い（または完全に非免疫原性である）という利点がある。
【０１１５】
当業者に周知のように、重鎖定常ドメインのＩｇＧアイソタイプの選択では、特定の機能が必要とされるかどうかということ、および適切なｉｎ  ｖｉｖｏ半減期の必要性に重点を置く。例えば、癌細胞の選択的根絶のために設計する抗体は通常、補体活性化および抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性によるエフェクター媒介性細胞殺作用を可能にする活性なアイソタイプを必要とする。ヒトＩｇＧ１アイソタイプおよびＩｇＧ３アイソタイプ（半減期が短い方）の両方、特にヒトＩｇＧ１アイソタイプ（野生型およびバリアント）がこれらの基準を満たす。具体的には、重鎖定常ドメインのＩｇＧアイソタイプ（特に、ヒト野生型およびバリアントＩｇＧ１アイソタイプ）に応じて、抗体は、ＣＤＣ、ＡＤＣＣおよび／またはＡＤＣＰ機序を介して、細胞に対し細胞傷害性となり得る（Ｓａｌｆｅｌｄ，２００７．Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２５（１２）：１３６９−７２；Ｉｒａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５．Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．６７（２ＰｔＡ）：１７１−８２）。実際、結晶化可能フラグメント（Ｆｃ）領域は、様々なアクセサリー分子と相互作用して、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）などの間接的なエフェクター機能を媒介する。
【０１１６】
一実施形態では、抗体、その抗原結合フラグメントまたは抗原結合抗体模倣物を改変して、血液脳関門（ＢＢＢ）を通過する送達を促進する。例えば抗体を非経口投与する場合に、抗体を改変して、それがＢＢＢを通過するのを促進する手段および方法は当該技術分野で周知であり、例えば、Ｙｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１．Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ．３（８４）：８４ｒａ４４；Ａｔｗａｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１．Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ．３（８４）：８４ｒａ４３；ならびに国際公開第２０１５０３１６７３号および同第２０１６２０８６９５号に記載されている。
【０１１７】
本明細書で使用される「有機小分子」という用語は、低分子量有機化合物（最大５０００Ｄａ、より具体的には最大２０００Ｄａ、最も具体的には最大約１０００Ｄａ）を指す。
【０１１８】
一実施形態では、本発明による有機小分子は、ａｒａ−２’−Ｆ−ＮＡＤ＋（ＡＲＡ−Ｆ−ＮＡＤ、β−ａｒａ−２’−デオキシ−２’−フルオロ−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドとも呼ばれる）およびＣＤ３８と特異的に結合し、ＮＡＡＤＰ受容体２孔チャネルＴＰＣ１および／またはＴＰＣ２の開口を活性化することが可能なその変異有機小分子を含むか、これよりなる群のなかで選択される。（ｋｗｏｎｇら）
【０１１９】
一実施形態では、本発明による有機小分子は、参照により本明細書に組み込まれるＫｗｏｎｇら（２０１２．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．５１（１）：５５５−６４）に記載されているものを含むか、これよりなる群のなかで選択される。
【０１２０】
一実施形態では、本発明による有機小分子は、ａｒａ−２’Ｆ−ＮＭＮおよびその誘導体、例えば、
【化１】
2020528447.tif 000002
2020528447.tif 000003
2020528447.tif 000004
などから選択され、式中、Ｒは、Ｃ３Ｈ７、Ｃ４Ｈ９、Ｃ６Ｈ１３またはＣ１２Ｈ２５およびその誘導体から選択される。
【０１２１】
一実施形態では、本発明による有機小分子は、参照により本明細書に組み込まれるＺｈｏｕら（２０１２．ＣｈｅｍＭｅｄＣｈｅｍ．７（２）：２２３−８）に記載されているものを含むか、これよりなる群のなかで選択される。
【０１２２】
一実施形態では、本発明による有機小分子は、
【化２】
2020528447.tif 000005
およびその誘導体、例えば、
【化３】
2020528447.tif 000006
2020528447.tif 000007
2020528447.tif 000008
2020528447.tif 000009
2020528447.tif 000010
2020528447.tif 000011
およびその誘導体などから選択される。
【０１２３】
一実施形態では、本発明による有機小分子は、参照により本明細書に組み込まれるＷｕら（２０１３．Ａｃｔａ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｉｎ  Ｂ．３（４）：２４５−５３）に記載されているものを含むか、これよりなる群のなかで選択される。
【０１２４】
一実施形態では、本発明による有機小分子は、インドール誘導体、例えば、（Ｓ）−４−（エトキシカルボニル）フェニル−５−［５−アミノ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−５−オキソペンタンアミド］−１Ｈ−インドール−３−カルボキシラート；４−（エトキシカルボニル）フェニル−５−プロピオンアミド−１Ｈ−インドール−３−カルボキシラート；４−（エトキシカルボニル）フェニル−５−（２−フェニルアセトアミド）−１Ｈ−インドール−３−カルボキシラート；４−（エトキシカルボニル）フェニル−５−［２−（４−メトキシフェニル）アセトアミド］−１Ｈ−インドール−３−カルボキシラート；４−（エトキシカルボニル）フェニル−５−（４−フェニルブタンアミド）−１Ｈ−インドール−３−カルボキシラート；４−（エトキシカルボニル）フェニル−５−［３−（ピリジン−３−イル）プロパンアミド］−１Ｈ−インドール−３−カルボキシラート；４−（エトキシカルボニル）フェニル−５−［３−（ピリジン−４−イル）プロパンアミド］−１Ｈ−インドール−３−カルボキシラート；４−（エトキシカルボニル）フェニル−５−［３−（フラン−２−イル）プロパンアミド］−１Ｈ−インドール−３−カルボキシラート；４−（エトキシカルボニル）フェニル−５−［５−オキソ−５−（チオフェン−２−イル）ペンタン−アミド］−１Ｈ−インドール−３−カルボキシラート；（Ｓ）−４−（エトキシカルボニル）フェニル−５−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−プロパンアミド］−１Ｈ−インドール−３−カルボキシラート；（Ｓ）−４−（エトキシカルボニル）フェニル−５−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−プロパンアミド］−１Ｈ−インドール−３−カルボキシラート；４−（エトキシカルボニル）フェニル−５−［３−（４−クロロフェニル）プロパンアミド］−１Ｈ−インドール−３−カルボキシラート；４−（エトキシカルボニル）フェニル−５−［３−（３−クロロフェニル）プロパンアミド］−１Ｈ−インドール−３−カルボキシラート；４−（エトキシカルボニル）フェニル−５−［３−（４−フルオロフェニル）プロパンアミド］−１Ｈ−インドール−３−カルボキシラート；４−（エトキシカルボニル）フェニル−５−［３−（２−フルオロフェニル）プロパンアミド］−１Ｈ−インドール−３−カルボキシラート；４−（エトキシカルボニル）フェニル−５−｛３−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］プロパンアミド｝−１Ｈ−インドール−３−カルボキシラート；４−（エトキシカルボニル）フェニル−５−［３−（４−ニトロフェニル）プロパンアミド］−１Ｈ−インドール−３−カルボキシラート；４−（エトキシカルボニル）フェニル−５−［３−（３−ニトロフェニル）プロパンアミド］−１Ｈ−インドール−３−カルボキシラート；４−（エトキシカルボニル）フェニル−５−［３−（４−メトキシフェニル）プロパンアミド］−１Ｈ−インドール−３−カルボキシラート；４−（エトキシカルボニル）フェニル−５−［３−（３，４，５−トリメトキシフェニル）プロパンアミド］−１Ｈ−インドール−３−カルボキシラート；１−（３−（３−｛［４−（エトキシカルボニル）フェノキシ］カルボニル｝−１Ｈ−インドール−５−イルアミノ）−３−オキソプロピル）ピリジニウムクロリド；３−カルバモイル−１−（３−（３−｛［４−（エトキシカルボニル）フェノキシ］カルボニル｝−１Ｈ−インドール−５−イルアミノ）−３−オキソプロピル）ピリジニウムクロリド；４−カルバモイル−１−（３−（３−｛［４−（エトキシカルボニル）フェノキシ］カルボニル｝−１Ｈ−インドール−５−イルアミノ）−３−オキソプロピル）ピリジニウムクロリド；（Ｓ）−４−（エトキシカルボニル）フェニル−５−（２−アミノ−３−フェニルプロパンアミド）−１Ｈ−インドール−３−カルボキシラート；（Ｒ）−４−（エトキシカルボニル）フェニル−５−（２−アミノ−３−フェニルプロパンアミド）−１Ｈ−インドール−３−カルボキシラート；４−（エトキシカルボニル）フェニル−５−［３−（４−アミノフェニル）プロパンアミド］−１Ｈ−インドール−３−カルボキシラート；４−（エトキシカルボニル）フェニル−５−［３−（３−アミノフェニル）プロパンアミド］−１Ｈ−インドール−３−カルボキシラート；４−（エトキシカルボニル）フェニル−５−｛３−［３−（４−ヒドロキシブチルアミノ）フェニル］プロパンアミド｝−１Ｈ−インドール−３−カルボキシラート；４−（エトキシカルボニル）フェニル−５−（４−ヒドロキシブチルアミノ）−１Ｈ−インドール−３−カルボキシラート；およびその誘導体などから選択される。
【０１２５】
一実施形態では、本発明による有機小分子は、参照により本明細書に組み込まれるＷａｎｇら（２０１４．Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．１９：１５７５４−６７）に記載されているものを含むか、これよりなる群のなかで選択される。
【０１２６】
一実施形態では、本発明による有機小分子は、ＮＡＤの類似体および誘導体、例えば、３，５−ジ−Ｏ−ベンゾイル−２−デオキシ−２−フルオロ−２−メチル−１−ブロミド−Ｄ−リボフラノース；２’−デオキシ−２’−フルオロ−２’−メチル−β−ニコチンアミドリボフラノシド；２’−デオキシ−２’−フルオロ−２’−メチル−β−ニコチンアミドモノヌクレオチド；２’−デオキシ−２’−フルオロ−２’−メチル−β−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド；２’−デオキシ−２’−フルオロ−５’−チオ−ホスファート−アラビノフラノシド−β−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド；Ｐ１−（アデノシン）−Ｐ３−（２’−デオキシ−２’−フルオロ−β−ニコチンアミドアラビノフラノシド）トリホスファート；２’−デオキシ−２’−フルオロ−アラビノシル−β−ニコチンアミドヒポキサンチンジヌクレオチド；２’−デオキシ−２’−フルオロ−アラビノシル−β−ニコチンアミドグアニンジヌクレオチド；２’−デオキシ−２’−フルオロ−アラビノシル−β−ニコチンアミド６−Ｏ−メチル−ヒポキサンチンジヌクレオチド；ビス（２’−デオキシ−２’−フルオロ−β−ニコチンアミド−アラビノシル）ピロホスファート；ビス（２’−デオキシ−２’−フルオロ−β−ニコチンアミド−アラビノシル）−メチレンジホスホナート；ビス（２’−デオキシ−２’−フルオロ−２’−メチル−β−ニコチンアミド）−メチレンジホスホナートおよびその誘導体などから選択される。
【０１２７】
一実施形態では、本発明による有機小分子は、参照により本明細書に組み込まれるＳｗａｒｂｒｉｃｋら（２０１４．Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．５７（２０）：８５１７−２９）に記載されているものを含むか、これよりなる群のなかで選択される。
【０１２８】
一実施形態では、本発明による有機小分子は、
【化４】
2020528447.tif 000012
2020528447.tif 000013
およびその誘導体を含むか、これよりなる群から選択される。
【０１２９】
一実施形態では、本発明による有機小分子は、参照により本明細書に組み込まれるＢｅｃｈｅｒｅｒら（２０１５．Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．５８（１７）：７０２１−５６）に記載されているものを含むか、これよりなる群のなかで選択される。
【０１３０】
一実施形態では、本発明による有機小分子は、４−アミノ−８−キノリンカルボキサミド、例えば、８−ブロモ−Ｎ−［（２，６−ジメチルフェニル）メチル］−２−メチル−４−キノリンアミン；４−｛［（２，６−ジメチルフェニル）メチル］アミノ｝−２−メチル−８−キノリンカルボキサミド；４−アミノ−２−メチル−８−キノリンカルボキサミド；Ｎ−ベンジル−８−ブロモ−２−メチルキノリン−４−アミン；４−（ベンジルアミノ）−２−メチルキノリン−８−カルボニトリル；４−（ベンジルアミノ）−２−メチルキノリン−８−カルボキサミド；４−ヒドロキシ−２−メチルキノリン−８−カルボニトリル；８−シアノ−２−メチルキノリン−４−イルトリフルオロメタンスルホナート；２−メチル−４−（２−メチルベンジルアミノ）キノリン−８−カルボニトリル；２−メチル−４−（２−メチルベンジルアミノ）キノリン−８−カルボキサミド；４−（２−クロロベンジルアミノ）−２−メチルキノリン−８−カルボニトリル；２−メチル−４−（２−メチルベンジルアミノ）キノリン−８−カルボキサミド；８−ブロモ−Ｎ−（２−メトキシベンジル）−２−メチルキノリン−４−アミン；４−（（２−メトキシベンジル）アミノ）−２−メチルキノリン−８−カルボキサミド；８−ブロモ−２−メチル−Ｎ−（３−メチルベンジル）キノリン−４−アミン；２−メチル−４−（（３−メチルベンジル）アミノ）キノリン−８−カルボキサミド；８−ブロモ−Ｎ−［（３−クロロフェニル）メチル］−２−メチル−４−キノリンアミン；４−｛［（３−クロロフェニル）メチル］アミノ｝−２−メチル−８−キノリンカルボキサミド；８−ブロモ−Ｎ−（３−メトキシベンジル）−２−メチルキノリン−４−アミン；４−（（３−メトキシベンジル）アミノ）−２−メチルキノリン−８−カルボキサミド；８−ブロモ−２−メチル−Ｎ−（４−メチルベンジル）キノリン−４−アミン；２−メチル−４−（（４−メチルベンジル）アミノ）キノリン−８−カルボキサミド；４−（４−クロロベンジルアミノ）−２−メチルキノリン−８−カルボニトリル；４−（４−クロロベンジルアミノ）−２−メチルキノリン−８−カルボキサミド；８−ブロモ−Ｎ−（４−メトキシベンジル）−２−メチルキノリン−４−アミン；４−（（４−メトキシベンジル）アミノ）−２−メチルキノリン−８−カルボキサミド；２−メチル−４−（２−（トリフルオロメチル）ベンジルアミノ）キノリン−８−カルボニトリル；２−メチル−４−（２−（トリフルオロメチル）ベンジルアミノ）キノリン−８−カルボキサミド；４−（２−ブロモベンジルアミノ）−２−メチルキノリン−８−カルボニトリル；４−（２−ブロモベンジルアミノ）−２−メチルキノリン−８−カルボキサミド；４−（｛［２，４−ビス（メチルオキシ）フェニル］メチル｝アミノ）−２−メチル−８−キノリンカルボニトリル；４−アミノ−２−メチル−８−キノリンカルボニトリル；４−（２−シアノベンジルアミノ）−２−メチルキノリン−８−カルボニトリル；４−（２−カルバモイルベンジルアミノ）−２−メチルキノリン−８−カルボキサミド；４−（２，３−ジメチルベンジルアミノ）−２−メチルキノリン−８−カルボニトリル；（２，３−ジメチルベンジルアミノ）−２−メチルキノリン−８−カルボキサミドトリフルオロアセタート；４−｛［（２，３−ジクロロフェニル）メチル］アミノ｝−２−メチル−８−キノリンカルボキサミド；４−（２，４−ジメチルベンジルアミノ）−２−メチルキノリン−８−カルボニトリル；４−（２，４−ジメチルベンジルアミノ）−２−メチルキノリン−８−カルボキサミドトリフルオロアセタート；４−（２，４−ジクロロベンジルアミノ）−２−メチルキノリン−８−カルボニトリル；４−（２，４−ジクロロベンジルアミノ）−２−メチルキノリン−８−カルボキサミド；８−ブロモ−Ｎ−（２，５−ジメチルベンジル）−２−メチルキノリン−４−アミン；４−（２，５−ジメチルベンジルアミノ）−２−メチルキノリン−８−カルボニトリル；４−（２，５−ジメチルベンジルアミノ）−２−メチルキノリン−８−カルボキサミド；４−（２，５−ジクロロベンジルアミノ）−２−メチルキノリン−８−カルボニトリル；２−メチル−４−（２−メチルベンジルアミノ）キノリン−８−カルボキサミド；４−（２，６−ジクロロベンジルアミノ）−２−メチルキノリン−８−カルボニトリル；４−（２，６−ジクロロベンジルアミノ）−２−メチルキノリン−８−カルボキサミド；４−（３，４−ジメチルベンジルアミノ）−２−メチルキノリン−８−カルボニトリル；４−（３，４−ジメチルベンジルアミノ）−２−メチルキノリン−８−カルボキサミド；４−（３，４−ジクロロベンジルアミノ）−２−メチルキノリン−８−カルボニトリル；４−（３，４−ジクロロベンジルアミノ）−２−メチルキノリン−８−カルボキサミドヒドロクロリド；８−ブロモ−Ｎ−（３，５−ジメチルベンジル）−２−メチルキノリン−４−アミン；４−（３，５−ジメチルベンジルアミノ）−２−メチルキノリン−８−カルボニトリル；４−（３，５−ジメチルベンジルアミノ）−２−メチルキノリン−８−カルボキサミド；４−（３，５−ジクロロベンジルアミノ）−２−メチルキノリン−８−カルボニトリル；４−（３，５−ジクロロベンジルアミノ）−２−メチルキノリン−８−カルボキサミド；４−（３−クロロ−２−フルオロベンジルアミノ）−２−メチルキノリン−８−カルボニトリル；４−（３−クロロ−２−フルオロベンジルアミノ）−２−メチルキノリン−８−カルボキサミド；４−（３−クロロ−２−メチルベンジルアミノ）−２−メチルキノリン−８−カルボニトリル；４−（３−クロロ−２−メチルベンジルアミノ）−２−メチルキノリン−８−カルボキサミド；４−（２−フルオロ−３−（トリフルオロメチル）ベンジルアミノ）−２−メチルキノリン−８−カルボニトリル；４−（２−フルオロ−３−（トリフルオロメチル）ベンジルアミノ）−２−メチルキノリン−８−カルボキサミド；２−メチル−４−（ナフタレン−１−イルメチルアミノ）キノリン−８−カルボニトリル；２−メチル−４−（ナフタレン−１−イルメチルアミノ）キノリン−８−カルボキサミド；４−（２，６−ジフルオロベンジルアミノ）−２−メチルキノリン−８−カルボニトリル；４−（２−クロロ−３，６−ジフルオロベンジルアミノ）−２−メチルキノリン−８−カルボキサミド；４−（２−クロロ−６−フルオロベンジルアミノ）−２−メチルキノリン−８−カルボニトリル；４−（２−クロロ−６−フルオロベンジルアミノ）−２−メチルキノリン−８−カルボキサミド；４−（２−クロロ−６−メチルベンジルアミノ）−２−メチルキノリン−８−カルボニトリル；４−（２−クロロ−６−メチルベンジルアミノ）−２−メチルキノリン−８−カルボキサミド；８−ブロモ−Ｎ−（２−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）ベンジル）−２−メチルキノリン−４−アミン；４−（（２−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）ベンジル）アミノ）−２−メチルキノリン−８−カルボキサミド；８−ブロモ−２−メチル−Ｎ−［（２，３，６−トリクロロフェニル）メチル］−４−キノリンアミン；２−メチル−４−｛［（２，３，６−トリクロロフェニル）メチル］アミノ｝−８−キノリンカルボキサミド；４−｛［（３−クロロ−２，６−ジフルオロフェニル）メチル］アミノ｝−２−メチル−８−キノリンカルボニトリル；４−｛［（３−クロロ−２，６−ジフルオロフェニル）メチル］アミノ｝−２−メチル−８−キノリンカルボキサミド；４−（２−クロロ−３，６−ジフルオロベンジルアミノ）−２−メチルキノリン−８−カルボニトリル；４−（２−クロロ−３，６−ジフルオロベンジルアミノ）−２−メチルキノリン−８−カルボキサミド；８−ブロモ−Ｎ−［（３，６−ジクロロ−２−フルオロフェニル）メチル］−２−メチル−４−キノリンアミン；４−｛［（３，６−ジクロロ−２−フルオロフェニル）メチル］アミノ｝−２−メチル−８−キノリンカルボキサミド；８−ブロモ−Ｎ−［（２，３−ジクロロ−６−フルオロフェニル）メチル］−２−メチル−４−キノリンアミン；４−｛［（２，３−ジクロロ−６−フルオロフェニル）メチル］アミノ｝−２−メチル−８−キノリンカルボキサミド；８−ブロモ−Ｎ−［（２−クロロ−６−フルオロ−３−メチルフェニル）メチル］−２−メチル−４−キノリンアミン；４−｛［（２−クロロ−６−フルオロ−３−メチルフェニル）メチル］アミノ｝−２−メチル−８−キノリンカルボキサミド；８−ブロモ−２−メチル−Ｎ−｛［３−（トリフルオロメチル）−２−ピリジニル］メチル｝−４−キノリンアミン；２−メチル−４−（｛［３−（トリフルオロメチル）−２−ピリジニル］メチル｝アミノ）−８−キノリンカルボキサミド；８−ブロモ−２−メチル−Ｎ−｛［４−（トリフルオロメチル）−３−ピリジニル］メチル｝−４−キノリンアミン；２−メチル−４−（｛［４−（トリフルオロメチル）−３−ピリジニル］メチル｝アミノ）−８−キノリンカルボキサミド；８−ブロモ−Ｎ−［（３−クロロ−４−ピリジニル）メチル］−２−メチル−４−キノリンアミン；４−｛［（３−クロロ−４−ピリジニル）メチル］アミノ｝−２−メチル−８−キノリンカルボキサミド；８−ブロモ−２−メチル−Ｎ−｛［２−（トリフルオロメチル）−３−ピリジニル］メチル｝−４−キノリンアミン；２−メチル−４−（｛［２−（トリフルオロメチル）−３−ピリジニル］メチル｝アミノ）−８−キノリンカルボキサミド；８−ブロモ−Ｎ−［（３−クロロ−２−チエニル）メチル］−２−メチル−４−キノリンアミン；４−｛［（３−クロロ−２−チエニル）メチル］アミノ｝−２−メチル−８−キノリンカルボキサミド；８−ブロモ−Ｎ−［（３，５−ジメチル−４−イソオキサゾリル）メチル］−２−メチル−４−キノリンアミン；４−｛［（３，５−ジメチル−４−イソオキサゾリル）メチル］アミノ｝−２−メチル−８−キノリンカルボキサミド；８−ブロモ−Ｎ−（シクロヘキシルメチル）−２−メチル−４−キノリンアミン；４−［（シクロヘキシルメチル）アミノ］−２−メチル−８−キノリンカルボキサミド；Ｎ−［（１−アセチル−４−ピペリジニル）メチル］−８−ブロモ−２−メチル−４−キノリンアミン；４−｛［（１−アセチル−４−ピペリジニル）メチル］アミノ｝−２−メチル−８−キノリンカルボキサミド；８−ブロモ−２−メチル−Ｎ−［（１−メチル−４−ピペリジニル）メチル］−４−キノリンアミン；２−メチル−４−｛［（１−メチル−４−ピペリジニル）メチル］アミノ｝−８−キノリンカルボキサミド；８−ブロモ−２−メチル−Ｎ−［（１Ｒ）−１−（２−メチルフェニル）エチル］−４−キノリンアミン；２−メチル−４−｛［（１Ｒ）−１−（２−メチルフェニル）エチル］アミノ｝−８−キノリンカルボキサミド；８−ブロモ−Ｎ−［（１Ｓ）−１−（２，６−ジメチルフェニル）エチル］−２−メチル−４−キノリンアミン；４−｛［（１Ｓ）−１−（２，６−ジメチルフェニル）エチル］アミノ｝−２−メチル−８−キノリンカルボキサミド；８−ブロモ−２−メチル−Ｎ−［（１Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフタレニル］−４−キノリンアミン；２−メチル−４−［（１Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフタレニルアミノ］−８−キノリンカルボキサミド；８−ブロモ−２−メチル−Ｎ−［（１Ｓ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフタレニル］−４−キノリンアミン；２−メチル−４−［（１Ｓ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフタレニルアミノ］−８−キノリンカルボキサミド；８−ブロモ−Ｎ−（２，６−ジクロロベンジル）−Ｎ，２−ジメチルキノリン−４−アミン；４−（（２，６−ジクロロベンジル）（メチル）アミノ）−２−メチルキノリン−８−カルボキサミド；２，６−ジクロロ−Ｎ−（８−シアノ−２−メチル−４−キノリニル）ベンズアミド；４−（２，６−ジクロロベンズアミド）−２−メチルキノリン−８−カルボキサミド；４−（２，６−ジクロロベンジルオキシ）
−２−メチルキノリン−８−カルボニトリル；４−（（２，６−ジクロロベンジル）オキシ）−２−メチルキノリン−８−カルボキサミド；８−ブロモ−４−（（２，６−ジクロロベンジル）チオ）−２−メチルキノリン；４−（（２，６−ジクロロベンジル）チオ）−２−メチルキノリン−８−カルボキサミド；８−ブロモ−６−フルオロ−２−メチルキノリン−４−オール；８−ブロモ−４−クロロ−６−フルオロ−２−メチルキノリン；８−ブロモ−６−フルオロ−２−メチル−Ｎ−（２，３，６−トリクロロベンジル）キノリン−４−アミン；６−フルオロ−２−メチル−４−（（２，３，６−トリクロロベンジル）アミノ）キノリン−８−カルボキサミド；メチル６−ブロモ−４−ヒドロキシ−２−メチルキノリン−８−カルボキシラート；メチル６−ブロモ−４−クロロ−２−メチル−８−キノリンカルボキシラート；メチル４−クロロ−２，６−ジメチル−８−キノリンカルボキシラート；４−クロロ−２，６−ジメチル−８−キノリンカルボキサミド；４−｛［（２，６−ジメチルフェニル）メチル］アミノ｝−２，６−ジメチル−８−キノリンカルボキサミド；６−ブロモ−４−クロロ−２−メチルキノリン−８−カルボキサミド；６−ブロモ−４−（（２，６−ジメチルベンジル）アミノ）−２−メチルキノリン−８−カルボキサミド；４−クロロ−２−メチル−６−フェニル−８−キノリンカルボキサミド；４−｛［（２，６−ジメチルフェニル）メチル］アミノ｝−２−メチル−６−フェニル−８−キノリンカルボキサミド；Ｎ−［（２，３−ジクロロフェニル）メチル］−２−メチル−４−キノリンアミン；８−ブロモ−Ｎ−［（２，３−ジクロロフェニル）メチル］−２−メチル−４−キノリンアミン；４−｛［（２，３−ジクロロフェニル）メチル］アミノ｝−Ｎ，２−ジメチル−８−キノリンカルボキサミド；４−｛［（２，３−ジクロロフェニル）メチル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ，２−トリメチル−８−キノリンカルボキサミド；メチル４−｛［（２，３−ジクロロフェニル）メチル］アミノ｝−２−メチル−８−キノリンカルボキシラート；４−｛［（２，３−ジクロロフェニル）メチル］アミノ｝−２−メチル−８−キノリンカルボン酸；（４−｛［（２，３−ジクロロフェニル）メチル］アミノ｝−２−メチル−８−キノリニル）メタノール；８−（アミノメチル）−Ｎ−［（２，３−ジクロロフェニル）メチル］−２−メチル−４−キノリンアミン；４−｛［（２，３−ジクロロフェニル）メチル］アミノ｝−２−メチル−８−キノリンカルボニトリル；４−クロロ−２−メチル−８−キノリンスルホンアミド；４−｛［（２，３−ジクロロフェニル）メチル］アミノ｝−２−メチル−８−キノリンスルホンアミド；およびその誘導体などから選択される。
【０１３１】
一実施形態では、本発明による有機小分子は、参照により本明細書に組み込まれるＨａｆｆｎｅｒら（２０１５．Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．５８（８）：３５４８−７１）に記載されているものを含むか、これよりなる群のなかで選択される。
【０１３２】
一実施形態では、本発明による有機小分子は、
【化５】
2020528447.tif 000014
およびその誘導体、例えば、６−ブロモ−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−４−キノリンアミン；Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−６−（１，３−チアゾール−５−イル）−４−キノリンアミン；６−ブロモ−Ｎ−フェニルキナゾリン−４−アミン；Ｎ−フェニル−６−（チアゾール−５−イル）キナゾリン−４−アミン；２−アミノ−５−ブロモ−３−メトキシ安息香酸；２−アミノ−５−ブロモ−３−（トリフルオロメチル）安息香酸；２−アミノ−５−ヨード−３−（トリフルオロメチル）安息香酸；６−ブロモ−８−メトキシキナゾリン−４（３Ｈ）−オン；６−ブロモ−８−（トリフルオロメチル）−４（１Ｈ）−キナゾリノン；６−ブロモ−８−（トリフルオロメチル）−４（１Ｈ）−キナゾリノン；６−ブロモ−４−クロロ−８−メトキシキナゾリン；６−ブロモ−４−クロロ−８−（トリフルオロメチル）キナゾリン；６−ブロモ−４−クロロ−８−メチルキナゾリン；６−ブロモ−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−８−メトキシキナゾリン−４−アミン；４−｛［６−ブロモ−８−（メチルオキシ）−４−キナゾリニル］アミノ｝ベンズアミド；４−｛［６−ブロモ−８−（トリフルオロメチル）−４−キナゾリニル］アミノ｝ベンズアミド；−ブロモ−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−８−（トリフルオロメチル）−４−キナゾリンアミン；６−ブロモ−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−８−メチル−４−キナゾリンアミン；Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−８−メトキシ−６−（チアゾール−５−イル）キナゾリン−４−アミン；４−｛［８−（メチルオキシ）−６−（１，３−チアゾール−５−イル）−４−キナゾリニル］アミノ｝ベンズアミド；４−｛［６−（１，３−チアゾール−５−イル）−８−（トリフルオロメチル）−４−キナゾリニル］アミノ｝ベンズアミド；Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−６−（１，３−チアゾール−５−イル）−８−（トリフルオロメチル）−４−キナゾリンアミン；Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−８−メチル−６−（１，３−チアゾール−５−イル）−４−キナゾリンアミン；６−ブロモ−８−メチル−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−キナゾリンジオン；４−ヒドロキシ−６−ヨードキナゾリン−２（１Ｈ）−オン；６−ブロモ−２，４−ジクロロ−８−メチルキナゾリン；２，４−ジクロロ−６−ヨードキナゾリン；６−ブロモ−２−クロロ−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−８−メチル−４−キナゾリンアミン；６−ブロモ−２−クロロ−Ｎ−（（１ｓ，４ｓ）−４−メトキシシクロヘキシル）−８−メチルキナゾリン−４−アミン；２−クロロ−６−ヨード−Ｎ−（（１ｓ，４ｓ）−４−（２−メトキシエトキシ）シクロヘキシル）キナゾリン−４−アミン；２−クロロ−６−ヨード−Ｎ−（（１ｓ，４ｓ）−４−メトキシシクロヘキシル）キナゾリン−４−アミン；６−ブロモ−４−（（３−クロロ−４−フルオロフェニル）アミノ）−８−メチルキナゾリン−２（１Ｈ）−オン；６−ブロモ−４−（（（１ｓ，４ｓ）−４−メトキシシクロヘキシル）アミノ）−８−メチルキナゾリン−２（１Ｈ）−オン；６−ヨード−４−（（（１ｓ，４ｓ）−４−（２−メトキシエトキシ）シクロヘキシル）アミノ）キナゾリン−２−オール；６−ヨード−４−（（（１ｓ，４ｓ）−４−メトキシシクロヘキシル）アミノ）キナゾリン−２−オール；４−（（３−クロロ−４−フルオロフェニル）アミノ）−８−メチル−６−（チアゾール−５−イル）キナゾリン−２（１Ｈ）−オン；４−（（（１ｓ，４ｓ）−４−メトキシシクロヘキシル）アミノ）−８−メチル−６−（チアゾール−５−イル）キナゾリン−２（１Ｈ）−オン；６−ヨード−４−（（（１ｓ，４ｓ）−４−（２−メトキシエトキシ）シクロヘキシル）アミノ）−１−メチルキナゾリン−２（１Ｈ）−オン；６−ヨード−４−（（（１ｓ，４ｓ）−４−メトキシシクロヘキシル）アミノ）−１−メチルキナゾリン−２（１Ｈ）−オン；４−（（（１ｓ，４ｓ）−４−（２−メトキシエトキシ）シクロヘキシル）アミノ）−１−メチル−６−（チアゾール−５−イル）キナゾリン−２（１Ｈ）−オン；４−（（（１ｓ，４ｓ）−４−メトキシシクロヘキシル）アミノ）−１−メチル−６−（チアゾール−５−イル）キナゾリン−２（１Ｈ）−オン；６−ヨード−２−メチル−８−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−オール；６−ブロモ−８−メチル−２−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，３］オキサジン−４−オン；６−ブロモ−８−メチル−２−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−（３Ｈ）−オン；４−クロロ−６−ヨード−２−メチル−８−（トリフルオロメチル）キナゾリン；６−ブロモ−４−クロロ−２，８−ジメチルキナゾリン；（１ｓ，４ｓ）−Ｎ−メチル−４−（（２−メチル−６−（チアゾール−５−イル）−８−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イル）アミノ）シクロヘキサンカルボキサミド；（１ｓ，４ｓ）−４−（（６−ブロモ−８−メチル−２−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イル）アミノ）−Ｎメチルシクロヘキサンカルボキサミド；（１ｓ，４ｓ）−Ｎ−メチル−４−（（８−メチル−６−（チアゾール−５−イル）−２−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イル）アミノ）シクロヘキサンカルボキサミド；（１ｓ，４ｓ）−４−（（２，８−ジメチル−６−（チアゾール−５−イル）キナゾリン−４−イル）アミノ）−Ｎメチルシクロヘキサンカルボキサミド；４−ヨード−Ｎ−メチルアニリン；４−ヨード−Ｎ，２−ジメチルアニリン；メチル３−（（４−ヨードフェニル）アミノ）−３−オキソプロパノアート；メチル３−（（４−ヨード−２−メチルフェニル）アミノ）−３−オキソプロパノアート；メチル３−（（４−ヨードフェニル）（メチル）アミノ）−３−オキソプロパノアート；３−（（４−ヨードフェニル）アミノ）−３−オキソプロパン酸；３−（（４−ヨード−２−メチルフェニル）アミノ）−３−オキソプロパン酸；３−（（４−ヨードフェニル）（メチル）アミノ）−３−オキソプロパン酸；３−（（４−ヨード−２−メチルフェニル）（メチル）アミノ）−３−オキソプロパン酸；６−ヨードキノリン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン；６−ヨード−８−メチルキノリン−２，４−ジオール；４−ヒドロキシ−６−ヨード−１−メチルキノリン−２（１Ｈ）−オン；４−ヒドロキシ−６−ヨード−１，８−ジメチルキノリン−２（１Ｈ）−オン；２，４−ジクロロ−６−ヨードキノリン；２，４−ジクロロ−６−ヨード−８−メチルキノリン；４−クロロ−６−ヨードキノリン−２（１Ｈ）−オン；６−ブロモ−４−クロロ−８−メチルキノリン−２（１Ｈ）−オン；４−クロロ−６−ヨード−８−メチルキノリン−２（１Ｈ）−オン；（１ｓ，４ｓ）−４−（（６−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−４−イル）アミノ）−Ｎ−メチルシクロヘキサンカルボキサミド；６−ブロモ−４−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アミノ）キノリン−２（１Ｈ）−オン；６−ブロモ−４−（（（１ｒ，４ｒ）−４−（２−メトキシエトキシ）シクロヘキシル）アミノ）キノリン−２（１Ｈ）−オン；６−ブロモ−４−（（（１ｒ，４ｒ）−４−（２−メトキシエトキシ）シクロヘキシル）アミノ）−８−メチルキノリン−２（１Ｈ）−オン；４−クロロ−６−ヨード−１−メチルキノリン−２（１Ｈ）−オン；−クロロ−６−ヨード−１，８−ジメチルキノリン−２（１Ｈ）−オン；４−クロロ−６−（チアゾール−５−イル）キノリン−２（１Ｈ）−オン；４−クロロ−８−メチル−６−（チアゾール−５−イル）キノリン−２（１Ｈ）−オン；４−クロロ−１−メチル−６−（チアゾール−５−イル）キノリン−２（１Ｈ）−オン；４−クロロ−１，８−ジメチル−６−（チアゾール−５−イル）キノリン−２（１Ｈ）−オン；４−クロロ−１−エチル−６−（チアゾール−５−イル）キノリン−２（１Ｈ）−オン；（１ｓ，４ｓ）−Ｎ−メチル−４−（（２−オキソ−６−（チアゾール−５−イル）−１，２−ジヒドロキノリン−４−イル）アミノ）シクロヘキサンカルボキサミド；４−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アミノ）−６−（チアゾール−５−イル）キノリン−２（１Ｈ）−オン；４−（（（１ｓ，４ｓ）−４−（２−メトキシエトキシ）シクロヘキシル）アミノ）−６−（チアゾール−５−イル）キノリン−２（１Ｈ）−オン；（１ｒ，４ｒ）−Ｎ−メチル−４−（（８−メチル−２−オキソ−６−（チアゾール−５−イル）−１，２−ジヒドロキノリン−４−イル）アミノ）シクロヘキサンカルボキサミド；８−メチル−４−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アミノ）−６−（チアゾール−５−イル）キノリン−２（１Ｈ）−オン；４−（（（１ｓ，４ｓ）−４−（２−メトキシエトキシ）シクロヘキシル）アミノ）−８−メチル−６−（チアゾール−５−イル）キノリン−２（１Ｈ）−オン；４−（（（１ｓ，４ｓ）−４−メトキシシクロヘキシル）アミノ）−８−メチル−６−（チアゾール−５−イル）キノリン−２（１Ｈ）−オン；（１ｒ，４ｒ）−Ｎ−メチル−４−（（１−メチル−２−オキソ−６−（チアゾール−５−イル）−１，２−ジヒドロキノリン−４−イル）アミノ）シクロヘキサンカルボキサミド；１−メチル−４−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アミノ）−６−（チアゾール−５−イル）キノリン−２（１Ｈ）−オン；４−（（（１ｒ，４ｒ）−４−（２−メトキシエトキシ）シクロヘキシル）アミノ）−１−メチル−６−（チアゾール−５−イル）キノリン−２（１Ｈ）−オン；４−（（（１ｒ，４ｒ）−４−メトキシシクロヘキシル）アミノ）−１−メチル−６−（チアゾール−５−イル）キノリン−２（１Ｈ）−オン；４−（（（１ｓ，４ｓ）−４−ヒドロキシシクロヘキシル）アミノ）−１−メチル−６−（チアゾール−５−イル）キノリン−２（１Ｈ）−オントリフルオロ酢酸塩；４−アミノ−１−メチル−６−（チアゾール−５−イル）キノリン−２（１Ｈ）−オン；（１ｒ，４ｒ）−４−（（１，８−ジメチル−２−オキソ−６−（チアゾール−５−イル）−１，２−ジヒドロキノリン−４−イル）アミノ）−Ｎメチルシクロヘキサンカルボキサミド；１，８−ジメチル−４−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アミノ）−６−（チアゾール−５−イル）キノリン−２（１Ｈ）−オン；４−（（（１ｒ，４ｒ）−４−（２−メトキシエトキシ）シクロヘキシル）アミノ）−１，８−ジメチル−６−（チアゾール−５−イル）キノリン−２（１Ｈ）−オン；４−（（（１ｒ，４ｒ）−４−メトキシシクロヘキシル）アミノ）−１，８−ジメチル−６−（チアゾール−５−イル）キノリン−２（１Ｈ）−オン；（１ｒ，４ｒ）−４−（（１−エチル−２−オキソ−６−（チアゾール−５−イル）−１，２−ジヒドロキノリン−４−イル）アミノ）−Ｎメチルシクロヘキサンカルボキサミド；１−エチル−４−（（（１ｒ，４ｒ）−４−（２−メトキシエトキシ）シクロヘキシル）アミノ）−６−（チアゾール−５−イル）キノリン−２（１Ｈ）−オン；およびその誘導体などから選択される。
【０１３３】
一実施形態では、本発明による有機小分子は、参照により本明細書に組み込まれるＳｅｐｅｈｒｉおよびＧｈａｖａｍｉ（２０１７．Ｊ  Ｂｉｏｍｏｌ  Ｓｔｒｕｃｔ  Ｄｙｎ．３５（９）：１８９０−８）に記載されているものを含むか、これよりなる群のなかで選択される。
【０１３４】
一実施形態では、本発明による有機小分子は、参照により本明細書に組み込まれるＳｃｕｌｌｙら（２０１７．ＡＣＳ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  Ｌｅｔｔ．８（２）：１９６−２００）に記載されているものを含むか、これよりなる群のなかで選択される。
【０１３５】
一実施形態では、本発明による有機小分子は、
【化６】
2020528447.tif 000015
およびその誘導体、例えば、
【化７】
2020528447.tif 000016
（式中、Ｒは、
【化８】
2020528447.tif 000017
2020528447.tif 000018
などから選択される）；
【化９】
2020528447.tif 000019
（式中、Ｒは、
【化１０】
2020528447.tif 000020
（ｎは５または１３である）、
2020528447.tif 000021
から選択される）
；およびその誘導体などから選択される。
【０１３６】
一実施形態では、本発明による有機小分子は、参照により本明細書に組み込まれるＤｅａｔｏｎら（２０１８．Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．２６（８）：２１０７−２１５０）に記載されているものを含むか、これよりなる群のなかで選択される。
【０１３７】
一実施形態では、本発明による有機小分子は、
【化１１】
2020528447.tif 000022
および
2020528447.tif 000023
誘導体、例えば、２−（（（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メチル）アミノ）−４−（（２−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）ベンジル）アミノ）キナゾリン−８−カルボキサミド；２−（（（１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メチル）アミノ）−４−（（２−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）ベンジル）アミノ）キナゾリン−８−カルボキサミド；４−（（２−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）ベンジル）アミノ）−２−（（（３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メチル）アミノ）キナゾリン−８−カルボキサミド；２−（４，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ）−イル）−４−（｛［２−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝アミノ）−８−キナゾリンカルボキサミド；２−（６，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５（４Ｈ）−イル）−４−（（２−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）ベンジル）アミノ）キナゾリン−８−カルボキサミド；２−（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン−６（７Ｈ）−イル）−４−（（２−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）ベンジル）アミノ）キナゾリン−８−カルボキサミド；２−（５，６−ジヒドロピラゾロ［３，４−ｃ］アゼピン−７（１Ｈ，４Ｈ，８Ｈ）−イル）−４−（（２−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）ベンジル）アミノ）キナゾリン−８−カルボキサミド；（Ｒ）−４−（（２−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）ベンジル）アミノ）−２−（６−メチルピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ，４Ｈ，６Ｈ）−イル）キナゾリン−８−カルボキサミド；（Ｓ）−４−（（２−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）ベンジル）アミノ）−２−（６−メチルピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ，４Ｈ，６Ｈ）−イル）キナゾリン−８−カルボキサミド；４−（（２−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）ベンジル）アミノ）−２−（１−メチルピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ，４Ｈ，６Ｈ）−イル）キナゾリン−８−カルボキサミド；４−（（２−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）ベンジル）アミノ）−２−（２−メチルピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（２Ｈ，４Ｈ，６Ｈ）−イル）キナゾリン−８−カルボキサミド；４−（（２−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）ベンジル）アミノ）−２−（３−メチルピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ，４Ｈ，６Ｈ）−イル）キナゾリン−８−カルボキサミド；（Ｓ）−４−（（２−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）ベンジル）アミノ）−２−（４−メチルピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ，４Ｈ，６Ｈ）−イル）キナゾリン−８−カルボキサミド；（Ｒ）−４−（（２−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）ベンジル）アミノ）−２−（４−メチルピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ，４Ｈ，６Ｈ）−イル）キナゾリン−８−カルボキサミド；（Ｒ）−２−（６−エチルピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ，４Ｈ，６Ｈ）−イル）−４−（（２−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）ベンジル）アミノ）キナゾリン−８−カルボキサミド；（Ｓ）−２−（６−エチルピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ，４Ｈ，６Ｈ）−イル）−４−（（２−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）ベンジル）アミノ）キナゾリン−８−カルボキサミド；（Ｒ）−２−（６−エチルピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ，４Ｈ，６Ｈ）−イル）−４−（（２−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）ベンジル）アミノ）キナゾリン−８−カルボキサミド；（Ｓ）−２−（６−エチルピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ，４Ｈ，６Ｈ）−イル）−４−（（２−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）ベンジル）アミノ）キナゾリン−８−カルボキサミド；２−（３−エチルピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ，４Ｈ，６Ｈ）−イル）−４−（（２−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）ベンジル）アミノ）キナゾリン−８−カルボキサミド；４−（（２−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）ベンジル）アミノ）−２−（３−（トリフルオロメチル）ピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ，４Ｈ，６Ｈ）−イル）キナゾリン−８−カルボキサミド；４−（（２−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）ベンジル）アミノ）−２−（３−オキソ−２，３−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ，４Ｈ，６Ｈ）−イル）キナゾリン−８−カルボキサミドトリフルオロ酢酸塩；２−（３−アミノピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ，４Ｈ，６Ｈ）−イル）−４−（（２−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）ベンジル）アミノ）キナゾリン−８−カルボキサミド；２−（３−カルバモイルピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ，４Ｈ，６Ｈ）−イル）−４−（（２−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）ベンジル）アミノ）キナゾリン−８−カルボキサミド；（Ｓ）−４−（（２−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）ベンジル）アミノ）−２−（３−（１−ヒドロキシエチル）ピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ，４Ｈ，６Ｈ）−イル）キナゾリン−８−カルボキサミドトリフルオロアセタート；（Ｒ）−４−（（２−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）ベンジル）アミノ）−２−（３−（１−ヒドロキシエチル）ピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ，４Ｈ，６Ｈ）−イル）キナゾリン−８−カルボキサミドトリフルオロアセタート；（Ｓ）−４−（（２−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）ベンジル）アミノ）−２−（３−（１−ヒドロキシエチル）ピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ，４Ｈ，６Ｈ）−イル）キナゾリン−８−カルボキサミドトリフルオロアセタート；（Ｒ）−４−（（２−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）ベンジル）アミノ）−２−（３−（１−ヒドロキシエチル）ピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ，４Ｈ，６Ｈ）−イル）キナゾリン−８−カルボキサミドトリフルオロアセタート；（Ｒ）−２−（３，６−ジメチルピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ，４Ｈ，６Ｈ）−イル）−４−（（２−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）ベンジル）アミノ）キナゾリン−８−カルボキサミド；（Ｓ）−２−（３，６−ジメチルピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ，４Ｈ，６Ｈ）−イル）−４−（（２−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）ベンジル）アミノ）キナゾリン−８−カルボキサミド；（Ｒ）−２−（３−アミノ−６−メチルピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ，４Ｈ，６Ｈ）−イル）−４−（（２−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）ベンジル）アミノ）キナゾリン−８−カルボキサミド；（Ｓ）−２−（３−アミノ−６−メチルピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ，４Ｈ，６Ｈ）−イル）−４−（（２−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）ベンジル）アミノ）キナゾリン−８−カルボキサミド；（Ｒ）−２−（３−アミノ−６−メチルピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ，４Ｈ，６Ｈ）−イル）−４−（（２−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）ベンジル）アミノ）キナゾリン−８−カルボキサミド；２−（３−アミノ−６，６−ジメチルピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ，４Ｈ，６Ｈ）−イル）−４−（（２−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）ベンジル）アミノ）キナゾリン−８−カルボキサミド；２−（３０−アミノ−１０Ｈ−スピロ［シクロプロパン−１，６０−ピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール］−５０（４０Ｈ）−イル）−４−（（２−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）ベンジル）アミノ）キナゾリン−８−カルボキサミド；２−（３０−アミノ−１０Ｈ−スピロ［シクロブタン−１，６０−ピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール］−５０（４０Ｈ）−イル）−４−（（２−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）ベンジル）アミノ）キナゾリン−８−カルボキサミド；２−（３０−アミノ−１０Ｈ−スピロ［シクロペンタン−１，６０−ピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール］−５０（４０Ｈ）−イル）−４−（（２−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）ベンジル）アミノ）キナゾリン−８−カルボキサミド；およびその誘導体などから選択される。
【０１３８】
一実施形態では、本発明による有機小分子は、ＣＤ３８の（具体的にはヒトＣＤ３８の）ＮＡＡＤＰ加水分解酵素活性を５μＭ以下、具体的には５００ｎＭ以下、より具体的には５０ｎＭ以下のＩＣ５０で阻害する；またはＣＤ３８の（具体的にはヒトＣＤ３８）のＮＡＡＤＰシンターゼ活性を５μＭ以下、具体的には５００ｎＭ以下、より具体的には５０ｎＭ以下のＥＣ５０で活性化する。
【０１３９】
一実施形態では、本発明による有機小分子は、ＣＤ３８、具体的にはヒトＣＤ３８がＮＡＡＤＰを分解する能力を５μＭ以下、具体的には５００ｎＭ以下、より具体的には５０ｎＭ以下のＩＣ５０で阻害する；またはＣＤ３８、具体的にはヒトＣＤ３８がＮＡＡＤＰを合成する能力を５μＭ以下、具体的には５００ｎＭ以下、より具体的には５０ｎＭ以下のＥＣ５０で活性化する。
【０１４０】
ＣＤ３８、具体的にはヒトＣＤ３８がＮＡＡＤＰを分解する能力を阻害する本発明による有機小分子のＩＣ５０を求める方法では、Ｓｃｈｍｉｄら（２０１１．ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．５８５（２２）：３５４４−８）に記載されているように、目的の化合物の存在下または不在下で、少なくともＮＡＡＤＰとＣＤ３８（組換えＣＤ３８タンパク質、抽出した細胞タンパク質またはＣＤ３８を発現する細胞全体に由来するもの）とを含む溶液を用い、ＮＡＡＤＰ分解をＨＰＬＣにより、もしくはＥＬＩＳＡなどの別の検出方法により追跡することによって、またはＡＤＰＲＰ形成を追跡することによって、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでアッセイすることができる。
【０１４１】
ＣＤ３８、具体的にはヒトＣＤ３８がＮＡＡＤＰを合成する能力を活性化する本発明による有機小分子のＥＣ５０を求める方法では、Ｓｃｈｍｉｄら（２０１１．ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．５８５（２２）：３５４４−８）に記載されているように、目的の化合物の存在下または不在下で、少なくともＮＡＤＰとニコチン酸とＣＤ３８（組換えＣＤ３８タンパク質、抽出した細胞タンパク質またはＣＤ３８を発現する細胞全体に由来するもの）とを含む溶液を用い、ＨＰＬＣにより、もしくは別のＥＬＩＳＡなどの検出方法によりＮＡＡＤＰ合成を追跡することによって、またはＮＡＤＰ分解を追跡することによって、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでアッセイすることができる。
【０１４２】
一実施形態では、本発明による有機小分子は、配列番号１のヒトＣＤ３８のグルタミン酸１４６、アスパラギン酸１５５およびグルタミン酸２２６を含むか、これよりなる群より選択される少なくとも１つ、具体的には少なくとも２つ、より具体的には少なくとも３つのアミノ酸と特異的に結合する（Ｇｒａｅｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，２００６．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２８１（３９）：２８９５１−７）。
【０１４３】
具体的には、本発明による有機小分子は、配列番号１のヒトＣＤ３８のグルタミン酸１４６、アスパラギン酸１５５およびグルタミン酸２２６と特異的に結合する。
【０１４４】
本明細書で使用される「神経変性疾患」という用語は、神経変性の保護および／または予防によって改善または予防することが可能な任意の病態を指す。
【０１４５】
具体的には、神経変性疾患は、パーキンソン病および関連障害（特に限定されないが、パーキンソン病、パーキンソン認知症、常染色体劣性遺伝性ＰＡＲＫ２およびＰＡＲＫ６連鎖パーキンソニズム、非定型パーキンソン症候群［例えば、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症候群、レビー小体型認知症、多系統萎縮症など］、グアドループ島パーキンソニズムおよびリティコ・ボディグ病を含む）；運動ニューロン疾患（特に限定されないが、筋萎縮性側索硬化症、前頭側頭型認知症、進行性球麻痺、仮性球麻痺、原発性側索硬化症、進行性筋萎縮症、脊髄性筋萎縮症およびポリオ後症候群を含む）；神経炎症性疾患；アルツハイマー病および関連障害（特に限定されないが、初期段階のアルツハイマー障害、軽度段階のアルツハイマー障害、中等度段階のアルツハイマー障害、軽度から中等度段階のアルツハイマー障害、進行した段階のアルツハイマー障害、軽度認知障害、血管性認知症、混合型認知症、ピック病、嗜銀顆粒性疾患、後部皮質萎縮症、ウェルニッケ・コルサコフ症候群を含む）；プリオン病（特に限定されないが、クロイツフェルト・ヤコブ病を含む）；リソソーム蓄積症；白質ジストロフィー；ハンチントン病；ダウン症候群；球脊髄性筋萎縮症；脳卒中；外傷性脳損傷；ＨＩＶ関連神経認知障害；トゥレット症候群；常染色体優性遺伝性脊髄小脳失調症；多発性硬化症；フリードライヒ運動失調症；シャルコー・マリー・トゥース病；歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症；筋強直性ジストロフィー；統合失調症；加齢による記憶障害；自閉症および自閉症スペクトラム障害；注意欠陥多動障害；慢性疼痛；アルコール性認知症；進行性非流暢性失語症；意味性認知症；痙性対麻痺；線維筋痛症；ライム病後；ニューロパチー；離脱症状；アルパース病；脳・眼・顔・骨格症候群；ウィルソン病；コケイン症候群；リー病；脳内鉄蓄積を伴う神経変性；オプソクローヌス・ミオクローヌス症候群；アルファ−メチルアシル−ＣｏＡラセマーゼ欠損症；アンダーマン症候群；アーツ症候群；マリネスコ・シェーグレン症候群；ミトコンドリア膜タンパク質関連神経変性；パントテン酸キナーゼ関連神経変性症；硬化性白質脳症を伴う多発嚢胞性脂肪膜性骨異形成症；リボフラビン輸送体欠損性神経細胞障害；ならびに毛細血管拡張性運動失調症を含むか、これよりなる群のなかで選択される。
【０１４６】
より具体的には、神経変性疾患は、パーキンソン病；レビー小体型認知症；多系統萎縮症；アルツハイマー病；進行性核上性麻痺；大脳皮質基底核変性症；ピック病；前頭側頭型認知症；筋萎縮性側索硬化症；球脊髄性筋萎縮症；脳卒中；外傷性脳損傷；ハンチントン病；多発性硬化症；フリードライヒ運動失調症；シャルコー・マリー・トゥース病；クロイツフェルト・ヤコブ病およびその他のプリオン病；ロイコジストロフィー；ならびにリソソーム蓄積症を含むか、これよりなる群のなかで選択される。
【０１４７】
本明細書で使用される「炎症性疾患」という用語は、自己免疫疾患もしくはアレルギーの場合などには異常な炎症、または慢性疼痛、発赤、腫脹、硬直につながる組織の過剰な炎症、および／または健常組織に対する損傷を特徴とする、疾患を指す。
【０１４８】
具体的には、炎症性疾患は、神経炎症性疾患（特に限定されないが、髄膜炎、脳炎および自己免疫性神経炎症性疾患［多発性硬化症、ギラン・バレー症候群、バロー病、慢性炎症性脱髄性多発性ニューロパチー、デビック病、多巣性運動ニューロパチー、ナルコレプシー、視神経脊髄炎、視神経炎、傍腫瘍性小脳変性症および横断性脊髄炎］を含む）；ゴーシェ病；自己免疫疾患（特に限定されないが、アカラシア、アジソン病、成人スティル病、無ガンマグロブリン血症、円形脱毛症、アミロイドーシス、強直性脊椎炎、抗ＧＢＭ／抗ＴＢＭ腎炎、抗リン脂質症候群、自己免疫性血管性浮腫、自己免疫性自律神経障害、自己免疫性脳脊髄炎、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患、自己免疫性心筋炎、自己免疫性卵巣炎、自己免疫性精巣炎、自己免疫性膵炎、自己免疫性網膜症、バロー病、ベーチェット病、良性粘膜類天疱瘡、水疱性類天疱瘡、キャッスルマン病、シャーガス病、慢性炎症性脱髄性多発性ニューロパチー、慢性再発性多発性骨髄炎、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、セリアック病、コーガン症候群、寒冷凝集素症、先天性心ブロック、コクサッキー心筋炎、クレスト症候群、疱疹状皮膚炎、デビック病、円板状狼瘡、ドレスラー症候群、子宮内膜症、好酸球性食道炎、好酸球性筋膜炎、結節性紅斑、本態性混合型クリオグロブリン血症、エバンス症候群、線維筋痛症、線維性肺胞炎、巨細胞性動脈炎、巨細胞性心筋炎、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、多発血管炎性肉芽腫症、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、溶血性貧血、橋本病、ヘノッホ‐シェーンライン紫斑病、妊娠性疱疹、化膿性汗腺炎、低ガンマグロブリン血症、特発性血小板減少性紫斑病、ＩｇＡ腎症、ＩｇＧ４関連硬化性疾患、免疫性血小板減少性紫斑病、封入体筋炎、炎症性腸疾患、炎症性ミオパチー、間質性膀胱炎、若年性関節炎、若年性筋炎、川崎病、ランバート・イートン症候群、白血球破壊性血管炎、扁平苔癬、硬化性苔癬、木質結膜炎、線状ＩｇＡ病、狼瘡、慢性ライム病、メニエール病、顕微鏡的多発血管炎、混合性結合組織病、モーレン潰瘍、ムッカ・ハーベルマン病、多巣性運動ニューロパチー、多発性硬化症、重症筋無力症、筋炎、ナルコレプシー、新生児ループス、視神経脊髄炎、好中球減少症、眼部瘢痕性類天疱瘡、視神経炎、回帰性リウマチ、傍腫瘍性小脳変性症、発作性夜間ヘモグロビン尿症、パリー・ロンベルグ症候群、毛様体扁平部炎、パーソネージ・ターナー症候群、溶連菌感染関連小児自己免疫性精神神経障害（ＰＡＮＤＡＳ）、天疱瘡、末梢性ニューロパチー、静脈周囲性脳脊髄炎、悪性貧血、ＰＯＥＭＳ症候群、結節性多発動脈炎、多腺性症候群、リウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎、心筋梗塞後症候群、心膜切開後症候群、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、プロゲステロン皮膚炎、乾癬、乾癬性関節炎、赤芽球ろう、壊疽性膿皮症、レイノー現象、反応性関節炎、反射性交感神経性ジストロフィー、再発性多発軟骨炎、下肢静止不能症候群、後腹膜線維症、リウマチ熱、関節リウマチ、サルコイドーシス、シュミット症候群、強膜炎、強皮症、シェーグレン症候群、精子および精巣自己免疫、全身硬直症候群、亜急性細菌性心内膜炎、スザック症候群（Ｓｕｃａｃ’ｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）交感性眼炎、全身性エリテマトーデス、高安動脈炎、側頭動脈炎、トロサ・ハント症候群、横断性脊髄炎、１型糖尿病、未分化結合組織疾患、ブドウ膜炎、血管炎フォークト・小柳・原田病、白斑およびウェゲナー肉芽腫症を含む）；アレルギー；喘息；肝炎（特に限定されないが、急性肝炎、劇症肝炎、慢性肝炎、ウイルス性肝炎、寄生虫性肝炎、細菌性肝炎、アルコール性肝炎、毒物性および薬物性肝炎、脂肪性肝炎、アルファ−１−アンチトリプシン欠損症、ヘモクロマトーシス、ウィルソン病虚血性肝炎、非アルコール性およびアルコール性脂肪性肝炎を含む）；再灌流傷害；２型糖尿病；ならびに移植拒絶反応を含むか、これよりなる群のなかで選択される。
【０１４９】
より具体的には、炎症性疾患は、特に限定されないが、髄膜炎、脳炎、多発性硬化症、ギラン・バレー症候群、バロー病、慢性炎症性脱髄性多発性ニューロパチー、デビック病、多巣性運動ニューロパチー、ナルコレプシー、視神経脊髄炎、視神経炎、傍腫瘍性小脳変性症および横断性脊髄炎を含めた神経炎症性疾患を含むか、これよりなる群のなかで選択される。
【０１５０】
より具体的には、炎症性疾患は、特に限定されないが、アカラシア、アジソン病、成人スティル病、無ガンマグロブリン血症、円形脱毛症、アミロイドーシス、強直性脊椎炎、抗ＧＢＭ／抗ＴＢＭ腎炎、抗リン脂質症候群、自己免疫性血管性浮腫、自己免疫性自律神経障害、自己免疫性脳脊髄炎、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患、自己免疫性心筋炎、自己免疫性卵巣炎、自己免疫性精巣炎、自己免疫性膵炎、自己免疫性網膜症、バロー病、ベーチェット病、良性粘膜類天疱瘡、水疱性類天疱瘡、キャッスルマン病、シャーガス病、慢性炎症性脱髄性多発性ニューロパチー、慢性再発性多発性骨髄炎、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、セリアック病、コーガン症候群、寒冷凝集素症、先天性心ブロック、コクサッキー心筋炎、クレスト症候群、疱疹状皮膚炎、デビック病、円板状狼瘡、ドレスラー症候群、子宮内膜症、好酸球性食道炎、好酸球性筋膜炎、結節性紅斑、本態性混合型クリオグロブリン血症、エバンス症候群、線維筋痛症、線維性肺胞炎、巨細胞性動脈炎、巨細胞性心筋炎、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、多発血管炎性肉芽腫症、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、溶血性貧血、橋本病、ヘノッホ‐シェーンライン紫斑病、妊娠性疱疹、化膿性汗腺炎、低ガンマグロブリン血症、特発性血小板減少性紫斑病、ＩｇＡ腎症、ＩｇＧ４関連硬化性疾患、免疫性血小板減少性紫斑病、封入体筋炎、炎症性腸疾患、炎症性ミオパチー、間質性膀胱炎、若年性関節炎、若年性筋炎、川崎病、ランバート・イートン症候群、白血球破壊性血管炎、扁平苔癬、硬化性苔癬、木質結膜炎、線状ＩｇＡ病、狼瘡、慢性ライム病、メニエール病、顕微鏡的多発血管炎、混合性結合組織病、モーレン潰瘍、ムッカ・ハーベルマン病、多巣性運動ニューロパチー、多発性硬化症、重症筋無力症、筋炎、ナルコレプシー、新生児ループス、視神経脊髄炎、好中球減少症、眼部瘢痕性類天疱瘡、視神経炎、回帰性リウマチ、傍腫瘍性小脳変性症、発作性夜間ヘモグロビン尿症、パリー・ロンベルグ症候群、毛様体扁平部炎、パーソネージ・ターナー症候群、溶連菌感染関連小児自己免疫性精神神経障害（ＰＡＮＤＡＳ）、天疱瘡、末梢性ニューロパチー、静脈周囲性脳脊髄炎、悪性貧血、ＰＯＥＭＳ症候群、結節性多発動脈炎、多腺性症候群、リウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎、心筋梗塞後症候群、心膜切開後症候群、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、プロゲステロン皮膚炎、乾癬、乾癬性関節炎、赤芽球ろう、壊疽性膿皮症、レイノー現象、反応性関節炎、反射性交感神経性ジストロフィー、再発性多発軟骨炎、下肢静止不能症候群、後腹膜線維症、リウマチ熱、関節リウマチ、サルコイドーシス、シュミット症候群、強膜炎、強皮症、シェーグレン症候群、精子および精巣自己免疫、全身硬直症候群、亜急性細菌性心内膜炎、スザック症候群（Ｓｕｃａｃ’ｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）交感性眼炎、全身性エリテマトーデス、高安動脈炎、側頭動脈炎、トロサ・ハント症候群、横断性脊髄炎、１型糖尿病、未分化結合組織疾患、ブドウ膜炎、血管炎フォークト・小柳・原田病、白斑ならびにウェゲナー肉芽腫症を含めた自己免疫疾患を含むか、これよりなる群のなかで選択される。
【０１５１】
本発明は、薬物として使用する、本発明による化合物であって、ＮＡＤ＋依存性経路および／またはｃＡＤＰＲ依存性経路を標的とする治療に対して非奏効患者に投与する化合物にも関する。
【０１５２】
本明細書で使用される「薬物」は、対象または患者、例えば哺乳動物など、特にヒトに投与するのに適した組成物を包含するものとする。一般に、「薬物」は無菌であり、通常、対象内に望ましくない応答を引き起こすことが可能な汚染物を含まない（例えば、薬物中の化合物（１つまたは複数）は医薬品等級である）。薬物は、それを必要とする対象に経口、バッカル、経直腸、非経口、腹腔内、真皮内、皮下、鼻腔内、髄腔内、脊髄周囲（ｐｅｒｉｓｐｉｎａｌ）などを含めた多数の様々な投与経路で投与するよう設計することができる。好ましい形態は、意図する投与様式および治療用途によって決まる。典型的な好ましい形態として、経口液剤、注射用液剤または注入用液剤がある。
【０１５３】
本発明は、本発明による化合物を含むか、これよりなるか、実質的にこれよりなる組成物にも関する。
【０１５４】
本発明は、本発明による化合物と少なくとも１つの薬学的に許容される担体を含むか、これよりなるか、実質的にこれよりなる医薬組成物にも関する。
【０１５５】
本明細書で使用される「薬学的に許容される担体」は、医薬組成物の調製に有用であり、一般に安全で、無毒性であり、生物学的にもその他の点でも望ましくないものではなく、賦形剤、希釈剤、担体および補助剤を包含するものとし、獣医学用途およびヒトへの製薬学的用途に許容される補形剤、希釈剤、担体および補助剤がこれに含まれる。本明細書で使用される「薬学的に許容される担体」は、１つの、および２つ以上のこのような賦形剤、希釈剤、担体および補助剤をともに含む。
【０１５６】
本発明は、本発明による化合物を含むか、これよりなるか、実質的にこれよりなる薬物にも関する。
【０１５７】
組成物、医薬組成物または薬物に関して本明細書で使用される「実質的に〜よりなる」という用語は、本発明による化合物が、前記組成物、医薬組成物または薬物内で生物活性のある唯一の薬剤であることを意味する。
【０１５８】
具体的には、本発明による組成物、医薬組成物または薬物は、有効成分として、薬学的に許容される担体を添加した本発明による化合物を含むか、これよりなるか、実質的にこれよりなるものである。
【０１５９】
本発明は、ＣＤ３８と特異的に結合し、ＮＡＡＤＰ受容体２孔チャネルＴＰＣ１および／またはＴＰＣ２の開口を活性化する化合物の、神経変性および／または炎症性疾患の予防および／または治療のための薬物の調製への使用にも関する。このような化合物（本発明による抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは抗原結合抗体模倣物または有機小分子）は、本発明による薬物中に治療量（活性があり、毒性がない量）で存在し得る。
【０１６０】
本発明は、神経変性および／または炎症性疾患の治療方法であって、ＣＤ３８と特異的に結合し、ＮＡＡＤＰ受容体２孔チャネルＴＰＣ１および／またはＴＰＣ２の開口を活性化する、本発明による化合物を、必要とする対象に治療量で投与することを含む、方法にも関する。
【０１６１】
「治療有効量」は、標的に有意な負の副作用も有害な副作用も引き起こさずに、（１）神経変性および／または炎症性疾患の発症を遅らせる、または予防すること；（２）神経変性および／または炎症性疾患の１つまたは複数の症状の進行、悪化または増悪の速度を低下させる、またはこれを停止させること；（３）神経変性および／または炎症性疾患の症状の改善をもたらすこと；（４）神経変性および／または炎症性疾患の重症度または発現率を抑えること；あるいは（５）神経変性および／または炎症性疾患を治癒することを目的とする薬剤のレベルまたは量を指す。
【０１６２】
このような治療量は、前記成分の投与が前記本発明による医薬組成物または薬物の投与によって予防および／または治療しようとする病態および／または障害に及ぼす効果を評価することを含めたルーチンの試験により、当業者が決定することができる。
【０１６３】
例えば、このような試験は、様々な量の上記の前記化合物（本発明による抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは抗原結合抗体模倣物または有機小分子）の投与が、具体的には対象の生体試料に由来する、前記病態および／または前記障害に特徴的なマーカー（生物学的および／または臨床的）のセットに及ぼす定量的効果および定性的効果の両方を解析することによって実施することができる。
【０１６４】
予防処置には、神経変性および／または炎症性疾患の発症前に治療有効量を投与し得る。上記のものに代えて、またはこれに加えて、治療処置には、神経変性および／または炎症性疾患の発症後に治療有効量を投与し得る。一実施形態では、組成物の治療有効量は、神経変性および／または炎症性疾患の少なくとも１つの症状を軽減するのに効果的な量である。
【０１６５】
一実施形態では、本発明による組成物、医薬組成物または薬物を、髄腔内投与経路を用いて、すなわち髄腔内に投与することができる。
【０１６６】
本発明の化合物と同程度の大きさの化合物、例えばリツキシマブなどの、髄腔内投与経路を用いた効率的な送達が臨床試験ＮＣＴ０１７１９１５９に既に例示されており、またニボルマブについては、臨床試験ＮＣＴ０３０２５２５６に既に例示されている。
【０１６７】
髄腔内投与用の無菌薬は、必要量の本発明の化合物を適切な溶媒に組み込んだ後、精密ろ過により滅菌することによって調製することができる。溶媒または媒体として、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなどおよびその組合せを使用し得る。多くの場合、組成物中に糖、ポリアルコールまたは塩化ナトリウムなどの等張剤を含ませるのが好ましい。これらの薬物には、補助剤、具体的には、湿潤剤、等張化剤、乳化剤、分散剤および安定剤が含まれていてもよい。
【０１６８】
一実施形態では、本発明による組成物、医薬組成物または薬物を、皮下投与経路を用いて、すなわち皮下に投与することができる。
【０１６９】
本発明の化合物と同程度の大きさの化合物、例えばダクリズマブなどの、皮下投与経路を用いた効率的な送達が臨床試験ＮＣＴ００１０９１６１に既に例示されている。
【０１７０】
好ましい実施形態では、本発明による組成物、医薬組成物または薬物を、静脈内投与経路を用いて、すなわち、静脈内に投与することができる。
【０１７１】
本発明の化合物と同程度の大きさの化合物、例えばアデュカヌマブなどの、静脈内投与経路を用いた効率的な送達が、臨床試験ＮＣＴ０１６７７５７２およびＳｅｖｉｇｎｙら（２０１６．Ｎａｔｕｒｅ．５３７（７６１８）：５０−６）に既に例示されている。
【０１７２】
使用時に滅菌水または任意の他の注射用無菌媒体に溶解させ得る無菌固体組成物の形態で非経口投与用の無菌薬を調製してもよい。
【０１７３】
一実施形態では、本発明による組成物、医薬組成物または薬物を経口的に投与することができる。経口投与用の固形薬として、錠剤、丸剤、粉末剤（ゼラチンカプセル剤、サシェ剤）または顆粒剤を使用し得る。これらの薬物では、本発明による有効成分をアルゴン流下で１つまたは複数の不活性希釈剤、例えばデンプン、セルロース、スクロース、ラクトースまたはシリカなどと混合する。これらの薬物には、希釈剤以外の物質、例えば、１つまたは複数のステアリン酸マグネシウムもしくはタルクなどの滑沢剤、着色剤、コーティング剤（糖衣錠）または光沢剤が含まれていてもよい。経口投与用の液体薬として、不活性希釈剤、例えば水、エタノール、グリセロール、植物油またはパラフィン油などを含有する薬学的に許容される液剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤およびエリキシル剤を使用し得る。これらの薬物には、希釈剤以外の物質、例えば、湿潤剤、甘味剤，増粘剤、香味剤または安定化剤が含まれていてよい。
【０１７４】
一実施形態では、本発明の化合物、組成物、医薬組成物または薬物を、当業者が決定し、各対象に個人別に適合させた用量で投与することができる。
【０１７５】
本発明の化合物、組成物、医薬組成物または薬物の総１日使用量は、主治医によって妥当な医学的判断の範囲内で決定されることが理解されよう。任意の特定の対象に対する具体的な治療有効量または栄養補助有効量は、治療する疾患および疾患の重症度；用いる具体的な組成物、対象の年齢、体重、全般的健康状態、性別および食事；投与時間、投与経路、治療期間；本発明の化合物、組成物、医薬組成物または薬物と併用または同時使用する薬物；ならびに医術分野で周知のこれと同様の因子を含めた様々な因子によって決まる。例えば、所望の治療効果を得るのに必要なレベルより低いレベルで治療用化合物の投与を開始し、所望の効果が得られるまで用量を漸増させることは、当業者の技能範囲内に十分に含まれるものであるが、それとは逆に、より迅速に定常状態血漿中濃度に到達する方法である負荷投与で開始し、次いで、排泄過程による影響を正確に相殺するよう算出した維持量でこれに続くことが同じように有用であることがある。
【０１７６】
一実施形態では、治療有効量の本発明の化合物、組成物、医薬組成物または薬物を少なくとも１日１回、少なくとも１日２回、少なくとも１日３回投与することができる。
【０１７７】
一実施形態では、治療有効量の本発明の化合物、組成物、医薬組成物または薬物を２日毎、３日毎、４日毎、５日毎、６日毎に投与することができる。
【０１７８】
一実施形態では、治療有効量の本発明の化合物、組成物、医薬組成物または薬物を週２回、毎週、２週間毎、月１回投与することができる。
【０１７９】
一実施形態では、治療有効量の本発明の化合物、組成物、医薬組成物または薬物を月１回、２か月毎、３か月毎、４か月毎、５か月毎、６か月毎および年１回投与することができる。
【０１８０】
一実施形態では、治療有効量の本発明の化合物、組成物、医薬組成物または薬物を約１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、３週間、１か月、２か月、３か月、６か月、１年の期間またはそれ以上の期間にわたって、例えば、数年または対象の生涯などにわたって投与することができる。一実施形態では、治療有効量の本発明の化合物、組成物、医薬組成物または薬物を神経変性および／または炎症性疾患が治療または緩和されるまで投与することができる。
【０１８１】
一実施形態では、治療有効量の本発明の化合物、組成物、医薬組成物または薬物を慢性治療で投与することができる。一実施形態では、治療有効量の本発明の化合物、組成物、医薬組成物または薬物を急性治療で投与することができる。
【０１８２】
一実施形態では、治療有効量の本発明の化合物、組成物、医薬組成物または薬物は、好ましくは髄腔内投与経路を用いて投与する場合、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの範囲内にあり、好ましくは約０．１ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇの範囲内にあり、より好ましくは約１ｍｇ／ｋｇである。
【０１８３】
一実施形態では、治療有効量の本発明の化合物、組成物、医薬組成物または薬物は、好ましくは静脈内投与経路を用いて投与する場合、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約２５０ｍｇ／ｋｇの範囲内にあり、好ましくは約１ｍｇ／ｋｇ〜約２００ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇの範囲内にあり、より好ましくは約１０ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇの範囲内にあり、さらにより好ましくは約１５ｍｇ／ｋｇである。
【０１８４】
一実施形態では、治療有効量の本発明の化合物、組成物、医薬組成物または薬物は、好ましくは皮下投与経路を用いて投与する場合、約１ｍｇ〜１０００ｍｇの範囲内にあり、好ましくは約１０〜２５０ｍｇの範囲内にあり、より好ましくは約１００ｍｇである。
【０１８５】
一実施形態では、本発明の化合物は、好ましくは静脈内または皮下投与経路を用いる場合、血液脳関門（ＢＢＢ）を通過することができる。
【０１８６】
静脈内に注射した抗体にＢＢＢを通過させて送達する方法は、当該技術分野で公知である。実際、いくつかの刊行物で、モノクローナル抗体の静脈内注射が血液脳関門（ＢＢＢ）を効率的に通過したことが明らかにされている。静脈内注射したモノクローナル抗体の脳内濃度の薬物動態モデル化により、脳内の血漿中ｍＡｂ濃度が０．４％程度であることが明らかにされている（Ｓｈａｈ  ＆  Ｂｅｔｓ，２０１３．ＭＡｂｓ．５（２）：２９７−３０５）。ヒトでは、アデュカヌマブおよびＡＢＢＶ−８Ｅ１２の脳／血漿比がそれぞれ１．３％および０．３８５％に達することがわかっている（Ｓｅｖｉｇｎｙ  ｅｔ  ａｌ．２０１６．Ｎａｔｕｒｅ．５３７（７６１８）：５０−６；Ｗｅｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，２０１７．Ｊ  Ｐｒｅｖ  Ａｌｚ  Ｄｉｓ．４（４）：２３６−２４１）。さらに、インスリン受容体もしくはトランスフェリン受容体（概説についてはＮｅｖｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６．Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．３４（１）：３６−４８を参照されたい）を標的とする二重特異性抗体の使用またはＫｏｎｏｆａｇｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２．Ｃｕｒｒ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１３（７）：１３３２−４５に記載されているように超音波によるＢＢＢ開口を用いることを含め、ＢＢＢ通過を改善する方法がいくつか開発されている。
【０１８７】
用量は、所望の効果、治療期間および用いる投与経路によって決まり、一般に、成人に対する経口投与には１日当たり５ｍｇ〜１０００ｍｇであり、活性物質の単位用量は０．０１ｍｇ〜２５０ｍｇの範囲内である。一般に、治療する対象の固有の年齢、体重および任意の他の因子に応じて、医師が適切な用量を決定する。
【０１８８】
本発明は、有効成分として、
−少なくとも１つの本発明による化合物；ならびに
−神経保護剤、対症剤、プロバイオティクスおよび凝集タンパク質または易凝集性タンパク質を中和するのに使用する抗体を含むか、これよりなる群より選択される少なくとも１つの第二の治療剤
を含み、ＮＡＡＤＰ受容体２孔チャネルＴＰＣ１および／またはＴＰＣ２の開口による神経変性および／または炎症性疾患の予防および／または治療に薬物として使用され、前記有効成分が、個別投与、同時投与または連続投与用に製剤化されている、配合剤にも関する。
【０１８９】
本発明は、有効成分として、
−少なくとも１つの本発明による化合物；ならびに
−神経保護剤、対症剤、プロバイオティクスおよび凝集タンパク質または易凝集性タンパク質を中和するのに使用する抗体を含むか、これよりなる群より選択される少なくとも１つの第二の治療剤
を含み、ＮＡＡＤＰ受容体２孔チャネルＴＰＣ１および／またはＴＰＣ２の開口による神経変性および／または炎症性疾患の予防および／または治療に薬物として個別使用、同時使用または連続使用する、配合剤にも関する。
【０１９０】
本明細書で使用される「神経保護剤」という用語は、神経保護効果を有する任意の薬剤を包含する。
【０１９１】
本明細書で使用される「プロバイオティクス」という用語は、有益な特性を有する微生物、例えば腸内細菌叢の微生物などの増殖を促進し、かつ／またはそのような微生物を含有する、任意の物質を指す。例えば、前記プロバイオティクスは、Ｓ．サーモフィルス（Ｓ．ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、Ｂ．アニマリス（Ｂ．ａｎｉｍａｌｉｓ）、Ｌ．ブルガリクス（Ｌ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）、ラクトコッカス・ラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｌａｃｔｉｓ）、ラクトバチルス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス・カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃａｓｅｉ）、ビフィドバクテリウム・ビフィドゥム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｉｆｉｄｕｍ）およびラクトバチルス・ファーメンタム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）の菌株を含有し得る。これまでに、このようなプロバイオティクスの定期的摂取により認知能力が改善されることが記載されている。
【０１９２】
本明細書で使用される「凝集タンパク質または易凝集性タンパク質を中和するのに使用する抗体」という用語は、αシヌクレイン、ＡＰＰもしくはＡＰＰフラグメント（Ａβ１−４２を含む）、タウ、プリオンまたはポリグルタミン伸長タンパク質を標的とする任意の抗体を指す。例えば、前記凝集タンパク質または易凝集性タンパク質を中和するのに使用する抗体は、Ａβペプチドを中和するソラネズマブまたはアデュカヌマブ、タウを中和するアルマネズマブ、およびαシヌクレインを中和するＰＲＸ００２またはＰＤ０８０５であり得る。
【０１９３】
本明細書で使用される「対症剤」という用語は、病態の進行を変化させずに、神経変性疾患に罹患している患者の生活の質を改善するのに使用される、任意の薬剤を指す。
【０１９４】
特に神経変性または炎症性疾患が筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）である場合、前記第二の治療剤は、リルゾール、エダラボン（フリーラジカルスカベンジャー）およびマシチニブを含むか、これよりなる群のなかで選択される神経保護剤であり得る。
【０１９５】
特に神経変性または炎症性疾患がアルツハイマー病である場合、前記第二の治療剤は、コリンエステラーゼ阻害剤（例えば、ドネペジル、ガランタミン、メマンチン、リバスチグミン）およびＮＭＤＡ受容体アンタゴニスト（例えば、メマンチン）を含むか、これよりなる群のなかで選択される対症剤であり得る。
【０１９６】
特に、神経変性または炎症性疾患がパーキンソン病である場合、前記第二の治療剤は、ドーパミン模倣物（例えば、カルビドパ、レボドパ、両製品の組合せ）、ドーパミンアゴニスト（例えば、アポモルフィン、ブロモクリプチン、ロチゴチン、プラミペキソール、ロピニロール）、抗コリン（例えば、ベンザトロピン、トリヘキシフェニジル）、ＭＡＯ−Ｂ阻害剤（例えば、セレギリン、ラサギリン）、ＣＯＭ−Ｔ阻害剤（例えば、エンタカポン、トルカポン）およびアマンタジン、ドロキシドパ、ピマバンセリン（ｐｉｍａｖａｎｅｒｓｉｎ）、リバスチグミンを含むか、これよりなる群のなかで選択される対症剤であり得る。
【０１９７】
特に神経変性または炎症性疾患がハンチントン病である場合、前記第二の治療剤は、抗精神病（例えば、ハロペリドール、クロルプロマジン、リスペリドン、クエチアピン、オランザピン）、抗うつ剤（例えば、シタロプラム、フルオキセチン、オランザピン）、気分安定薬（例えば、バルプロエート、カルバマゼピン、ラモトリギン）およびテトラベナジン、アマンタジン、レベチラセタム、クロナゼパムを含むか、これよりなる群のなかで選択される対症剤であり得る。
【０１９８】
特に神経変性または炎症性疾患が脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）である場合、前記第二の治療剤はヌシネルセンであり得る。
【０１９９】
特に神経変性または炎症性疾患がフリードライヒ運動失調症である場合、前記第二の治療剤は、５−ヒドロキシトリプトファン、補酵素Ｑ、イデベノンを含むか、これよりなる群のなかで選択される神経保護剤であり得る。
【０２００】
特に神経変性または炎症性疾患が多発性硬化症である場合、前記第二の治療剤は、インターフェロンベータ−１ａ、ペグインターフェロンベータ−１ａ、インターフェロンベータ−１ｂ、酢酸グラチラマー、ダクリズマブ、テリフルノミド、フィンゴリモド、フマル酸ジメチル、アレムツズマブ、ミトキサントロン、オクレリズマブ、ナタリズマブ、プレドニゾン、メチルプレドニゾロン、バクロフェン、チザニジンを含むか、これよりなる群のなかで選択される抗炎症剤または神経保護剤であり得る。
【０２０１】
特に神経変性または炎症性疾患が脳卒中である場合、前記第二の治療剤は、抗凝固剤（例えば、ワルファリン）、抗血小板剤（例えば、アスピリン、ジピリダモール、クロピドグレル）を含むか、これよりなる群のなかで選択される抗凝固剤または組織プラスミノーゲン活性化因子、アルテプラーゼ、スタチン、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断剤、ＡＣＥ阻害剤、ベータ遮断剤、カルシウムチャネル遮断剤、利尿剤などの薬剤であり得る。
【０２０２】
特に神経変性または炎症性疾患がゴーシェ病である場合、前記第二の治療剤は、イミグルセラーゼ、ベラグルセラーゼ、エリグルスタット、ミグルスタットを含むか、これよりなる群のなかで選択される酵素補充療法剤または基質合成抑制療法剤であり得る。
【０２０３】
本発明は、対象の血中の少なくとも１つの抗炎症性サイトカインのレベルを増大させる方法であって、ＣＤ３８と特異的に結合し、ＮＡＡＤＰ受容体２孔チャネルＴＰＣ１および／またはＴＰＣ２の開口を活性化する本発明による化合物を、必要とする前記対象に治療有効量で投与することを含む、方法にも関する。
【０２０４】
抗炎症性サイトカインの例としては、特に限定されないが、インターロイキン１０（ＩＬ−１０）、トランスフォーミング増殖因子β（ＴＧＦ−β）、インターロイキン１ｒａ（ＩＬ−１ｒａ）、インターロイキン４（ＩＬ−４）、インターロイキン６（ＩＬ−６）、インターロイキン１１（ＩＬ−１１）、インターロイキン１３（ＩＬ−１３）およびインターロイキン２２（ＩＬ−２２）が挙げられる。
【０２０５】
対象の血中サイトカインレベルを測定する方法は、当該技術分野で公知である。このような方法としては、例えば、ＥＬＩＳＡ試験、例えばのちの実施例の節に記載するものなどの使用が挙げられる。
【０２０６】
本発明は、対象の血中のインターロイキン１０（ＩＬ−１０）レベルを増大させる方法であって、ＣＤ３８と特異的に結合し、ＮＡＡＤＰ受容体２孔チャネルＴＰＣ１および／またはＴＰＣ２の開口を活性化する本発明による化合物を、必要とする前記対象に治療有効量で投与することを含む、方法にも関する。
【０２０７】
対象の血液試料中のＩＬ−１０レベルを測定する方法は当該技術分野で周知であり、例えば、ＥＬＩＳＡ試験の使用が挙げられる。
【０２０８】
一実施形態では、本発明による化合物の投与により、対象の血中のＩＬ−１０レベルが、陰性対照分子の投与と比較して少なくとも１００％、２００％、３００％、具体的には少なくとも４００％、より具体的には少なくとも５００％増大する。
【０２０９】
本発明は、本発明による化合物を製造する方法であって、ＣＤ３８と特異的に結合し、ＮＡＡＤＰ受容体２孔チャネルＴＰＣ１および／またはＴＰＣ２の開口を活性化する化合物を選択する段階を含む、方法にも関する。
【０２１０】
具体的には、バイオセンサー解析、具体的にはＢｉａｃｏｒｅ解析によって求め得るＣＤ３８に対するＫＤ値が１０−７Ｍ以下、好ましくは１０−８以下、より好ましくは１０−９Ｍ以下、さらにより好ましくは１．１０−１０Ｍ以下である抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは抗原結合抗体模倣物を選択することを含むか、これよりなる、ＣＤ３８と特異的に結合する本発明による抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは抗原結合抗体模倣物を選択する段階。
【０２１１】
具体的には、バイオセンサー解析、具体的にはＢｉａｃｏｒｅ解析によって求め得るＣＤ３８に対するＫＤ値が１０−６Ｍ、好ましくは１０−７Ｍ、より好ましくは１．１０−８Ｍ以下である有機小分子を選択することを含むか、これよりなる、ＣＤ３８と特異的に結合する本発明による有機小分子を選択する段階。
【０２１２】
具体的には、バイオセンサー解析、具体的にはＢｉａｃｏｒｅ解析によって求め得るＣＤ３８に対するＫＤ値が２００ｎＭ以下、好ましくは１５０ｎＭ以下、より好ましくは１００ｎＭ以下である有機小分子を選択することを含むか、これよりなる、ＣＤ３８特異的に結合する本発明によるオリゴヌクレオチドを選択する段階。
【０２１３】
上記の通り、ある化合物がＮＡＡＤＰ受容体２孔チャネルＴＰＣ１および／またはＴＰＣ２の開口を活性化する能力は、のちの実施例の節でさらに記載するように、ＮｅｄＫおよびＮｅｄ−１９などのＴＰＣ１および／またはＴＰＣ２活性化の阻害剤を用いることによって試験することができる。
【０２１４】
具体的には、のちの実施例の節でさらに記載する神経保護アッセイで、Ｎｅｄ−１９の存在下では、Ｎｅｄ−１９の不在下での陰性対照と比較して、神経保護効果が少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、具体的には少なくとも６０％、より具体的には少なくとも７０％拮抗される化合物を選択することを含むか、これよりなる、ＮＡＡＤＰ受容体２孔チャネルＴＰＣ１および／またはＴＰＣ２の開口を活性化する化合物を選択する段階。このような神経保護アッセイとしては、特に限定されないが、のちの実施例の節でさらに記載する、中脳培養物中での自発的で進行性のドーパミン作動性（ＤＡ）ニューロン死の防止、ドーパミン作動性ニューロンのミトコンドリア神経毒ＭＰＰ＋からの保護および皮質ニューロンの興奮毒性からの保護に関してＮｅｄ−１９の存在下または不在下で実施するアッセイが挙げられる。
【０２１５】
本発明の方法は、ＣＤ３８のＮＡＡＤＰ加水分解酵素活性を阻害する、またはＣＤ３８のＮＡＡＤＰシンターゼ活性を活性化する化合物を選択する段階をさらに含み得る。
【０２１６】
本発明の方法は、ＣＤ３８がＮＡＡＤＰを分解する能力を阻害する、またはＣＤ３８がＮＡＡＤＰを合成する能力を活性化する化合物を選択する段階をさらに含み得る。
【０２１７】
化合物がＣＤ３８のＮＡＡＤＰ加水分解酵素活性（すなわち、ＣＤ３８がＮＡＡＤＰを分解する能力）を阻害する、またはＣＤ３８のＮＡＡＤＰシンターゼ活性（すなわち、ＣＤ３８がＮＡＡＤＰを合成する能力）を活性化する能力は、上記のように、Ｓｃｈｍｉｄら（２０１１．ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．５８５（２２）：３５４４−８）に記載されている方法を用いて試験することができる。
【０２１８】
本発明の方法は、ＮＡＡＤＰレベル測定アッセイで、ＣＤ３８がＮＡＡＤＰを分解する能力を阻害することによって（すなわち、ＣＤ３８のＮＡＡＤＰ加水分解酵素活性を阻害することよって）、またはＣＤ３８がＮＡＡＤＰを合成する能力を活性化することによって（すなわち、ＣＤ３８のＮＡＡＤＰシンターゼ活性を活性化することによって）、具体的にはニューロンの細胞内ＮＡＡＤＰレベルを陰性対照分子と比較して、好ましくは少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、具体的には少なくとも６０％、より具体的には少なくとも７０％増大させる化合物を選択する段階をさらに含み得る。
【０２１９】
本発明の方法は、細胞内カルシウムレベル測定アッセイで、具体的にはニューロンの細胞質カルシウムレベルを陰性対照分子と比較して、好ましくは少なくとも１０％、２０％、具体的には少なくとも３０％、より具体的には少なくとも４０％増大させる化合物を選択する段階をさらに含み得る。
【０２２０】
本発明の方法は、
−配列番号１のヒトＣＤ３８のアミノ酸２２０〜２８５を含む少なくとも１つのペプチド；および／または
−配列番号１のヒトＣＤ３８のシステイン２５４および／または２７５；および／または
−配列番号１のヒトＣＤ３８のシステイン２５４およびシステイン２７５を含む５番目のＣ末端ジスルフィドループ
と特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは抗原結合抗体模倣物を選択する段階も含み得る。
【０２２１】
本発明の方法は、ＣＤ３８、特にヒトＣＤ３８がＮＡＡＤＰを分解する能力を５μＭ以下、具体的には５００ｎＭ以下、より具体的には５０ｎＭ以下のＩＣ５０で阻害する、またはＣＤ３８、特にヒトＣＤ３８がＮＡＡＤＰを合成する能力を５μＭ以下、具体的には５００ｎＭ以下、より具体的には５０ｎＭ以下のＥＣ５０で活性化する有機小分子を選択する段階も含み得る。
【０２２２】
本発明の方法は、グルタミン酸１４６、アスパラギン酸１５５およびグルタミン酸２２６を含むか、これよりなる群から選択される、配列番号１のヒトＣＤ３８の少なくとも１つ、具体的には少なくとも２つ、より具体的には３つのアミノ酸（１つまたは複数）に特異的に結合する有機小分子を選択する段階も含み得る。
【図面の簡単な説明】
【０２２３】
【図１】ニューロンが成熟するにつれて自発的、選択的かつ進行性に変性する中脳培養物モデルでのＮＡＤ＋（１）および数種類の抗ＣＤ３８抗体（ＨＢ７（２）、ＡＴ１（３）、クローン９０（４）、ＡＴ１３／５（５）またはＯＫＴ−１０（６））の神経保護効果を示す棒グラフである。ＮＡＡＤＰ受容体活性化の阻害剤であるＮｅｄ−１９（２μＭ）の存在下または不在下でＮＡＤ＋（３ｍＭ）または数種類の抗ＣＤ３８抗体（クローン９０、ＡＴ１、ＡＴ１３／５、ＯＫＴ−１０またはＨＢ−７；１μｇ／ｍＬ）に慢性的に曝露した培養物のｉｎ  ｖｉｔｒｏ第（ＤＩＶ）１０日のＤＡ（ＴＨ＋）ニューロンの数。結果は、ＤＩＶ１０の対照培養物のＴＨ＋ニューロンに対する％で表されている。＄未処理培養物に対してＰ＜０．０５。
【図２】ＧＤＮＦ断薬後にニューロンが変性する培養モデルでのＮＡＤ＋（１）および数種類の抗ＣＤ３８抗体（ＨＢ７（２）、ＡＴ１（３）、クローン９０（４）、ＡＴ１３／５（５）またはＯＫＴ−１０（６））のＤＡ（ＴＨ＋）ニューロンに対する神経保護効果を示す棒グラフである。最初に１０ＤＩＶにわたって２０ｎｇ／ｍＬのＧＤＮＦに曝露した後、１１〜１５ＤＩＶにこのペプチドを枯渇させ、ＮＡＡＤＰ受容体活性化の阻害剤であるＮｅｄ−１９（２μＭ）の存在下または不在下でＮＡＤ＋（３ｍＭ）または数種類の抗ＣＤ３８抗体（クローン９０、ＡＴ１、ＡＴ１３／５、ＯＫＴ−１０またはＨＢ−７；１μｇ／ｍＬ）に曝露した、または暴露していない中脳培養物中でのＤＡ細胞の生存率。陽性対照にはＧＤＮＦを２０ｎｇ／ｍＬの濃度で用いた。結果は、未除去条件下のニューロンに対する％で表されている。＄未処理培養物に対してＰ＜０．０５；＃ＧＤＮＦで処理した培養物に対してＰ＜０．０５。
【図３】ＮＡＤ＋（１）および数種類の抗ＣＤ３８抗体（ＨＢ７（２）、ＡＴ１（３）、クローン９０（４）、ＡＴ１３／５（５）またはＯＫＴ−１０（６））のＭＰＰ＋誘導性ＤＡ細胞死に対する神経保護効果を示す棒グラフである。５〜７ＤＩＶにＭＰＰ＋（３μＭ）で処理し、ＮＡＡＤＰ受容体活性化の阻害剤であるＮｅｄ−１９（２μＭ）の存在下または不在下でＮＡＤ＋（３ｍＭ）または数種類の抗ＣＤ３８抗体（クローン９０、ＡＴ１、ＡＴ１３／５、ＯＫＴ−１０またはＨＢ−７；１μｇ／ｍＬ）に曝露した、または曝露していない中脳培養物中でのＤＡ（ＴＨ＋）細胞の生存率。結果は、対応する対照培養物に対する％で表されている。＄対照処理に対してＰ＜０．０５；＃ＭＰＰ＋処理に対してＰ＜０．０５。
【図４】ＭＰＰ＋（３μＭ）処理後の小膠細胞に対するＮＡＤ＋（１）および数種類の抗ＣＤ３８抗体（ＨＢ７（２）、ＡＴ１（３）、クローン９０（４）、ＡＴ１３／５（５）またはＯＫＴ−１０（６））の効果を示す棒グラフである。５〜７ＤＩＶにＭＰＰ＋（３μＭ）で処理し、ＮＡＡＤＰ受容体活性化の阻害剤であるＮｅｄ−１９（２μＭ）の存在下または不在下でＮＡＤ＋（３ｍＭ）または数種類の抗ＣＤ３８抗体（クローン９０、ＡＴ１、ＡＴ１３／５、ＯＫＴ−１０またはＨＢ−７；１μｇ／ｍＬ）に曝露した、または曝露していない中脳培養物中の小膠細胞数。結果は、対応する対照培養物に対する％で表されている。＄対照処理に対してＰ＜０．０５；＃ＭＰＰ＋処理に対してＰ＜０．０５。
【図５】皮質培養物をグルタミン酸（７５μＭ）で長期間処理することにより誘発した興奮毒性に対するＮＡＤ＋（１）および数種類の抗ＣＤ３８抗体（ＨＢ７（２）、ＡＴ１（３）、クローン９０（４）、ＡＴ１３／５（５）またはＯＫＴ−１０（６））の神経保護効果を示す棒グラフである。１２〜１４ＤＩＶにグルタミン酸（７５μＭ）で処理し、ＮＡＡＤＰ受容体活性化の阻害剤であるＮｅｄ−１９（２μＭ）の存在下または不在下でＮＡＤ＋（３ｍＭ）または数種類の抗ＣＤ３８抗体（クローン９０、ＡＴ１、ＡＴ１３／５、ＯＫＴ−１０またはＨＢ−７；１μｇ／ｍＬ）に曝露した皮質培養物中での神経細胞の生存率。結果は、対応する対照培養物に対する％で表されている。＄グルタミン酸処理に対してＰ＜０．０５；＃対照処理に対してＰ＜０．０５。
【図６】皮質培養物をＨ２Ｏ２（７５μＭ）で処理することにより誘発した酸化ストレスに対するＮＡＤ＋（１）および数種類の抗ＣＤ３８抗体（ＨＢ７（２）、ＡＴ１（３）、クローン９０（４）、ＡＴ１３／５（５）またはＯＫＴ−１０（６））の神経保護効果を示す棒グラフである。１２〜１４ＤＩＶにＨ２Ｏ２（７５μＭ）で処理し、ＮＡＡＤＰ受容体活性化の阻害剤であるＮｅｄ−１９（２μＭ）の存在下または不在下でＮＡＤ＋（３ｍＭ）または数種類の抗ＣＤ３８抗体（クローン９０、ＡＴ１、ＡＴ１３／５、ＯＫＴ−１０またはＨＢ−７；１μｇ／ｍＬ）に曝露した皮質培養物中での神経細胞の生存率。結果は、対応する対照培養物に対する％で表されている。＄Ｈ２Ｏ２処理に対してＰ＜０．０５；＃対照処理に対してＰ＜０．０５。
【図７】Ｎｅｄ−１９（２μＭ）の存在下または不在下でのＨＢ７抗体の細胞質カルシウムレベルに対する効果を示す棒グラフである。ＮＡＡＤＰ受容体活性化の阻害剤であるＮｅｄ−１９（２μＭ）の存在下または不在下でＨＢ−７（１μｇ／ｍＬ）に曝露した、または曝露していない７〜１０ＤＩＶの皮質培養物中の細胞質カルシウムレベルの増大。結果は、対応する対照培養物に対する％で表されている。＄対照処理に対してＰ＜０．０５。
【図８】ａｒａ−２’−Ｆ−ＮＡＤ＋（ＡＲＡ−Ｆ−ＮＡＤ、２００μＭ）のＭＰＰ＋誘導性ＤＡ細胞死に対する神経保護効果を示す棒グラフである。５〜７ＤＩＶにＭＰＰ＋（３μＭ）で処理し、ＮＡＡＤＰ受容体活性化の阻害剤であるＮｅｄ−１９（２μＭ）の存在下または不在下でＡＲＡ−Ｆ−ＮＡＤに曝露した、または曝露していない中脳培養物中でのＤＡ（ＴＨ＋）細胞の生存率。結果は、対応する対照培養物に対する％で表されている。＄対照処理に対してＰ＜０．０５；＃ＭＰＰ＋処理に対してＰ＜０．０５。
【図９】抗ＣＤ３８クローンＨＢ７抗体（１）、ＮＡＤ＋（２）およびｃＡＤＰＲ（３）のＭＰＰ＋誘導性ＤＡ細胞死に対する神経保護効果を示す棒グラフである。５〜７ＤＩＶにＭＰＰ＋（３μＭ）で処理し、ＮＡＡＤＰ受容体活性化の阻害剤であるＮｅｄ−１９（２μＭ）、リソソーム成熟およびＣａ２＋依存性リソソームエキソサイトーシスの阻害剤であるバキュオリン１（ＶＡＣ、１０μＭ）ならびにエンドシジン２（ＥＮＤＯ、４０μＭ）、サーチュイン１阻害剤のＥｘ−５２７（ＥＸ５２７、１００μＭ）またはリアノジン受容体アンタゴニストのダントロレン（ＤＡＮＴ、３０μＭ）の存在下または不在下で抗ＣＤ３８クローンＨＢ７抗体（１μｇ／ｍＬ）、ＮＡＤ＋（３ｍＭ）またはｃＡＤＰＲ（２００μＭ）に曝露した、または曝露していない中脳培養物中でのＤＡ（ＴＨ＋）細胞の生存率。結果は、対応する対照培養物に対する％で表されている。＄参照処理（ＨＢ７、ＮＡＤ＋またはｃＡＤＰＲ）単独に対してＰ＜０．０５。
【図１０】抗ＣＤ３８クローンＨＢ７抗体（１）、ＮＡＤ＋（２）およびｃＡＤＰＲ（３）の神経保護作用機序を示す模式図である。ＥＲ：小胞体。ＲｙＲ：リアノジン受容体。
【図１１】エンドサイトーシス阻害剤ジャスプラキノリドまたはリソソーム酸性化阻害剤バフィロマイシンＡ１の存在下または不在下での抗ＣＤ３８クローンＨＢ７抗体（１）およびＮＡＤ＋（２）の細胞質カルシウムレベルに対する効果を示す棒グラフである。エンドサイトーシスの阻害剤であるジャスプラキノリド（ＪＡＳ、１０μＭ）またはリソソーム酸性化の阻害剤であるバフィロマイシンＡ１（ＢＡＦ、５０ｎＭ）の存在下または不在下で抗ＣＤ３８クローンＨＢ−７抗体（１μｇ／ｍＬ）またはＮＡＤ＋（３ｍＭ）に曝露した、または曝露していない７〜１０ＤＩＶの皮質培養中の細胞質カルシウムレベルの増大。結果は、対応する対照培養物に対する％で表されている。＄参照処理（ＨＢ７またはＮＡＤ＋）単独に対してＰ＜０．０５。
【図１２】抗ＣＤ３８クローンＨＢ７抗体（１）およびＮＡＤ＋（２）のＭＰＰ＋誘導性ＤＡ細胞死に対する神経保護効果を示す棒グラフである。５〜７ＤＩＶにＭＰＰ＋（３μＭ）で処理し、エンドサイトーシスの阻害剤であるジャスプラキノリド（ＪＡＳ、１０μＭ）の存在下または不在下で抗ＣＤ３８クローンＨＢ７抗体（１μｇ／ｍＬ）またはＮＡＤ＋（３ｍＭ）に曝露した、または曝露していない中脳培養物中でのＤＡ（ＴＨ＋）細胞の生存率。結果は、対応する対照培養物に対する％で表されている。＄参照処理（ＨＢ７またはＮＡＤ＋）単独に対してＰ＜０．０５。
【図１３】インスリン、抗ＣＤ３８クローンＨＢ７抗体およびＮＡＤ＋による急性（３０分）処理が皮質ニューロン内へのグルコース取込みに及ぼす効果を示す棒グラフである。インスリン（１００ｎＭ）、抗ＣＤ３８クローンＨＢ７抗体（１μｇ／ｍＬ）またはＮＡＤ＋（３ｍＭ）に曝露した、または曝露していない皮質培養物の７ＤＩＶのグルコース取込みの増大。結果は、対応する対照培養物に対する％で表されている。＄対照処理に対してＰ＜０．０５。
【図１４】ｉｎ  ｖｉｖｏ片側６−ＯＨＤＡマウスモデルの脳内に注射した３種類の異なる濃度の抗ＣＤ３８  ＨＢ７抗体（０．１ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇおよび１ｍｇ／ｋｇ）が黒質緻密部（１）のＤＡ（ＴＨ＋）ニューロンの数、線条体ドーパミンレベル（２）、アポモルフィン誘発性反対側回転運動（３）および血漿中インターロイキン１０（ＩＬ−１０）レベル（４）に及ぼす効果を示す棒グラフである。結果は、非破壊側に対する％（１、２）、反対側回転の数（３）またはｐｇ／ｍＬで表した血漿中ＩＬ−１０レベル（４）で表されている。対照群：ｎ＝３；６−ＯＨＤＡ群：ｎ＝７；６−ＯＨＤＡ＋ＨＢ７  ０．１ｍｇ／ｋｇ  ｉｃｖ（脳室内注射）群：ｎ＝９；６−ＯＨＤＡ＋ＨＢ７  ０．４ｍｇ／ｋｇ  ｉｃｖ群：ｎ＝１４；６−ＯＨＤＡ＋ＨＢ７  １ｍｇ／ｋｇ  ｉｃｖ群：ｎ＝９。＄対照（非注射）群に対してＰ＜０．０５；＃６−ＯＨＤＡ群に対してＰ＜０．０５。
【図１５】ｉｎ  ｖｉｖｏ片側６−ＯＨＤＡマウスモデルの脳内（１ｍｇ／ｋｇ  ｉｃｖ、６−ＯＨＤＡと同時）または静脈内（４ｍｇ／ｋｇ  ｉｖ、６−ＯＨＤＡの定位固定注射の１日前に注射）に注射した抗ＣＤ３８  ＨＢ７抗体が黒質緻密部のＤＡ（ＴＨ＋）ニューロンの数に及ぼす神経保護効果を示す棒グラフである。結果は、非破壊側に対する％で表されている。ＰＢＳ群：ｎ＝９；６−ＯＨＤＡ群：ｎ＝１０；６−ＯＨＤＡ＋ＨＢ７  １ｍｇ／ｋｇ  ｉｃｖ群：ｎ＝７；６−ＯＨＤＡ＋ＨＢ７  ４ｍｇ／ｋｇ  ｉｖ群：ｎ＝９。＄対照（ＰＢＳ注射）群に対してＰ＜０．０５；＃６−ＯＨＤＡ群に対してＰ＜０．０５。
【図１６】ｉｎ  ｖｉｖｏ片側６−ＯＨＤＡマウスモデルに６−ＯＨＤＡと同時に（Ｄ０）、６−ＯＨＤＡ破壊の１日後に（Ｄ１）、または６−ＯＨＤＡ破壊の２日後に脳内に注射した抗ＣＤ３８  ＨＢ７抗体（１ｍｇ／ｋｇ）が黒質緻密部のＤＡ（ＴＨ＋）ニューロンの数に及ぼす効果を示す棒グラフである。結果は、非破壊側に対する％で表されている。ＰＢＳ群：ｎ＝１４；６−ＯＨＤＡ群：ｎ＝１６；６−ＯＨＤＡ  Ｄ０＋ＨＢ７  １ｍｇ／ｋｇ  ｉｃｖ  Ｄ０群：ｎ＝１８；６−ＯＨＤＡ  Ｄ０＋ＨＢ７  １ｍｇ／ｋｇ  ｉｃｖ  Ｄ１群：ｎ＝６；６−ＯＨＤＡ  Ｄ０＋ＨＢ７  １ｍｇ／ｋｇ  ｉｃｖ  Ｄ２群：ｎ＝１８。＄対照（ＰＢＳ注射）群に対してＰ＜０．０５；＃６−ＯＨＤＡ群に対してＰ＜０．０５。
【図１７】ｉｎ  ｖｉｖｏ片側６−ＯＨＤＡマウスモデルの脳内に注射した（１ｍｇ／ｋｇ  ｉｃｖ、６−ＯＨＤＡと同時）抗ＣＤ３８  ＨＢ７抗体または抗ＣＤ３８  ＯＫＴ１０抗体が黒質緻密部のＤＡ（ＴＨ＋）ニューロンの数に及ぼす効果を示す棒グラフである。結果は、非破壊側に対する％で表されている。ＰＢＳ群：ｎ＝９；６−ＯＨＤＡ群：ｎ＝１０；６−ＯＨＤＡ＋ＨＢ７  １ｍｇ／ｋｇ  ｉｃｖ群：ｎ＝１０；６−ＯＨＤＡ＋ＯＫＴ１０  １ｍｇ／ｋｇ群：ｎ＝１０。＄対照（ＰＢＳ注射）群に対してＰ＜０．０５。＃６−ＯＨＤＡ群に対してＰ＜０．０５。
【図１８】脳内（１ｍｇ／ｋｇ  ｉｃｖ、ＣＢＥ処置開始の１日前に注射）または静脈内（４ｍｇ／ｋｇ  ｉｖ、ＣＢＥ処置開始の１日前に注射）に注射した抗ＣＤ３８  ＨＢ７抗体がｉｎ  ｖｉｖｏ  ＣＢＥマウスモデルの線条体の小膠細胞が占める数（１、２）および面積（１、３）に及ぼす効果を示す写真（１）、棒グラフ（２）および点プロット（３）である。結果は、偽処置（生理食塩水注射）群に対する％で表されている。偽処置群：ｎ＝８；ＣＢＥ群：ｎ＝９；ＣＢＥ＋ＨＢ７  １ｍｇ／ｋｇ  ｉｃｖ群：ｎ＝８；ＣＢＥ＋ＨＢ７  ４ｍｇ／ｋｇ  ｉｖ群：ｎ＝７。＄偽処置（生理食塩水注射）群に対してＰ＜０．０５；＃ＣＢＥ群に対してＰ＜０．０５。
【図１９】脳内（１ｍｇ／ｋｇ  ｉｃｖ、ＣＢＥ処置開始の１日前に注射）または静脈内（４ｍｇ／ｋｇ  ｉｖ、ＣＢＥ処置開始の１日前に注射）に注射した抗ＣＤ３８  ＨＢ７抗体が、ＣＢＥマウスモデルの線条体の反応性星状膠細胞が占める面積に及ぼす効果を示す写真（１）および点プロット（２）である。結果は、偽処置（生理食塩水注射）群に対する％で表されている。偽処置群：ｎ＝８；ＣＢＥ群：ｎ＝９；ＣＢＥ＋ＨＢ７  １ｍｇ／ｋｇ  ｉｃｖ群：ｎ＝８；ＣＢＥ＋ＨＢ７  ４ｍｇ／ｋｇ  ｉｖ群：ｎ＝７．＄偽処置（生理食塩水注射）群に対してＰ＜０．０５；＃ＣＢＥ群に対してＰ＜０．０５。
【図２０】ｉｎ  ｖｉｖｏ  ＭＰＴＰマウスモデルに静脈内注射（１５ｍｇ／ｋｇ  ｉｖ、ＭＰＴＰ注射の２日前）した抗ＣＤ３８  ＨＢ７抗体が黒質緻密部のＤＡ（ＴＨ＋）ニューロンの数に及ぼす効果を示す棒グラフである。結果は、対照（ＰＢＳ注射）マウスに対する％で表されている。ＰＢＳ群：ｎ＝５；ＭＰＴＰ群：ｎ＝６；ＭＰＴＰ＋ＨＢ７  １５ｍｇ／ｋｇ  ｉｖ群：ｎ＝８。＄対照（ＰＢＳ注射）群に対してＰ＜０．０５。＃ＭＰＴＰ群に対してＰ＜０．０５。
【０２２４】
（実施例）
以下の実施例で本発明についてさらに記載するが、本発明の技術範囲はこれらの実施例に限定されない。
【０２２５】
表１に、実施例で使用する抗体に関する情報、具体的には（配列番号１のアミノ酸配列の）ＣＤ３８内のエピトープ結合配列をまとめる。
【０２２６】
【表１】
2020528447.tif 000024
2020528447.tif 000025
（＊）前記「エピトープ配列結合」からなるヒトＣＤ３８のアミノ酸番号付けは、配列番号１で示され、ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＰ＿００１７６６により参照されるヒトＣＤ３８配列のアミノ酸番号付けに対応する。
【０２２７】
実施例１：抗ＣＤ３８抗体によるｉｎ  ｖｉｔｒｏでの中脳ドーパミン作動性ニューロンの神経保護
中脳培養物中での自発的で進行性のドーパミン作動性（ＤＡ）細胞死の予防
ここでは、中脳ＤＡ（ＴＨ＋）ニューロンが成熟するにつれて自発的、選択的かつ進行的に死滅する培養条件下では、ＮＡＤ＋（３ｍＭ）および数種類の抗ＣＤ３８抗体（クローン９０、ＡＴ１、ＡＴ１３／５、ＯＫＴ−１０またはＨＢ−７；１μｇ／ｍＬ）が同ニューロンの数を増加させたことを報告する（図１）。注目すべき点は、ＮＡＡＤＰ受容体活性化の阻害剤であるＮｅｄ−１９（２μＭ）の存在下で、抗ＣＤ３８抗体（クローン９０、ＡＴ１、ＡＴ１３／５、ＯＫＴ−１０またはＨＢ−７）の神経保護効果が拮抗され、ＮＡＤ＋の神経保護効果がわずかではあるが有意に拮抗されたことである。
【０２２８】
ＧＤＮＦ除去後に変性するＤＡニューロンの保護
さらに成熟したＤＡニューロンでもＮＡＤ＋（３ｍＭ）および数種類の抗ＣＤ３８抗体（クローン９０、ＡＴ１、ＡＴ１３／５、ＯＫＴ−１０またはＨＢ−７；１μｇ／ｍＬ）の保護効果がみられるかどうかを明らかにするため（図２）、ＧＤＮＦ（２０ｎｇ／ｍＬ）の慢性適用によって自発的死滅過程を１０日間先延ばしにする中脳培養物を用いた。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ第１１日（ＤＩＶ）にこの培養物からＧＤＮＦを除去したところ、これまでのデータ（Ｇｕｅｒｒｅｉｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００８．Ｍｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．７４（４）：９８０−９）と同じように、翌日から５日間でＴＨ＋ニューロンが大量かつ選択的に死滅した。興味深い点は、ＮＡＤ＋（３ｍＭ）または抗ＣＤ３８抗体（クローン９０、ＡＴ１、ＡＴ１３／５またはＨＢ−７；１μｇ／ｍＬ）によってこのニューロンが多数、死滅から免れたが、クローンＯＫＴ−１０抗ＣＤ３８抗体（１μｇ／ｍＬ）ではそのようなことはなかった。ＮＡＡＤＰ受容体活性化の阻害剤であるＮｅｄ−１９（２μＭ）の存在下では、抗ＣＤ３８抗体のクローン９０、ＡＴ１、ＡＴ１３／５またはＨＢ−７の神経保護効果が消失したが、ＮＡＤ＋の神経保護効果が消失することはなかった。
【０２２９】
ミトコンドリア神経毒ＭＰＰ＋からの保護
ミトコンドリアのＭＰＰ＋中毒によってＤＡ細胞死が引き起こされる状況下でもＮＡＤ＋（３ｍＭ）および数種類の抗ＣＤ３８抗体（クローン９０、ＡＴ１、ＡＴ１３／５、ＯＫＴ−１０またはＨＢ−７；１μｇ／ｍＬ）が保護効果を示すかどうかを明らかにするため、ＤＡ神経毒ＭＰＴＰの活性代謝物を試験した。この目的のため、脱分極濃度のＫ＋（３０ｍＭ）と、望ましくない興奮毒性傷害を防ぐのに使用されるグルタミン酸受容体アンタゴニストＭＫ８０１（５μＭ）とを併用する処理によって、自発的に起こるＤＡ細胞死を予防した。次いで、５〜７ＤＩＶに培養物を３μＭのＭＰＰ＋に曝露して、ＤＡニューロンの約５０％を死滅させた。中毒期間に培養物をＮＡＤ＋（３ｍＭ）または抗ＣＤ３８抗体（クローン９０、ＡＴ１、ＡＴ１３／５、ＯＫＴ−１０またはＨＢ−７；１μｇ／ｍＬ）に曝露したところ、これらの化合物によってＭＰＰ＋誘導性のＤＡ細胞の死滅が部分的に、またはほぼ完全に予防された（図３）。ＮＡＡＤＰ受容体活性化の阻害剤であるＮｅｄ−１９（２μＭ）の存在下では、抗ＣＤ３８抗体のクローン９０、ＡＴ１、ＡＴ１３／５またはＨＢ−７の神経保護効果が消失したが、ＮＡＤ＋およびクローンＯＫＴ−１０抗ＣＤ３８抗体（１μｇ／ｍＬ）の神経保護効果が消失することはなかった。
【０２３０】
このｉｎ  ｖｉｔｒｏの細胞培養設定に抹消免疫細胞は存在しないことから、以上の効果は真の直接的な神経保護効果であって、（Ｈａｒａ−Ｙｏｋｏｙａｍａ  ｅｔ  ａｌ．，２００８．Ｉｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．８（１）：５９−７０に示されているように）免疫細胞上に局在するＣＤ３８に対して起こり得る干渉によるものではないことにも留意されたい。
【０２３１】
実施例２：ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの抗ＣＤ３８抗体の抗炎症効果
小膠細胞数の抑制
神経炎症が神経変性に関与することがこれまでに何度も示されており、この過程には、脳に常在する自然免疫細胞である小膠細胞が重要な役割を果たすものと思われる。ＭＰＰ＋が小膠細胞数の増加を引き起こすことがｉｎ  ｖｉｔｒｏで明らかにされている（Ｈｅｎｚｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００５．Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．９５（４）：１０６９−７７）。本発明者らは、ＮＡＤ＋（３ｍＭ）および数種類の抗ＣＤ３８抗体（クローン９０、ＡＴ１、ＡＴ１３／５、ＯＫＴ−１０またはＨＢ−７；１μｇ／ｍＬ）がＭＰＰ＋適用後に観察される小膠細胞の数の増加を抑えることができるかどうかをｉｎ  ｖｉｔｒｏで試験した。抗ＣＤ３８抗体（クローン９０、ＡＴ１、ＡＴ１３／５またはＨＢ−７；１μｇ／ｍＬ）が、ＮＡＤ＋（３ｍＭ）およびクローンＯＫＴ−１０抗ＣＤ３８抗体（１μｇ／ｍＬ）とは異なり、７ＤＩＶの中脳培養物中の小膠細胞の数を抑え（図４）、培養物にＮｅｄ−１９（２μＭ）を同時に添加すると、この効果が抑制されるのが観察された。
【０２３２】
実施例３：ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの抗ＣＤ３８抗体による皮質ニューロンの神経保護
興奮毒性からの保護
グルタミン酸受容体の過活性化によって起こる興奮毒性が神経変性に重要な役割を果たすと考えられている（Ｌｅｗｅｒｅｎｚ  ａｎｄ  Ｍａｈｅｒ，Ｆｒｏｎｔ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，２０１５，９：４６９）。ＮＡＤ＋（３ｍＭ）および数種類の抗ＣＤ３８抗体（クローン９０、ＡＴ１、ＡＴ１３／５、ＯＫＴ−１０またはＨＢ−７；１μｇ／ｍＬ）がニューロンを興奮毒性傷害から保護するかどうかを明らかにするため、グルタミン酸（７５μＭ）曝露後に皮質培養物に神経変性が誘導されるモデルでこれらの化合物を試験した。ＮＡＤ＋（３ｍＭ）または抗ＣＤ３８抗体（クローン９０、ＡＴ１、ＡＴ１３／５、ＯＫＴ−１０またはＨＢ−７；１μｇ／ｍＬ）に曝露した培養物が興奮毒性から保護されるのが観察された（図５）。ＮＡＡＤＰ受容体活性化の阻害剤であるＮｅｄ−１９（２μＭ）の存在下では、抗ＣＤ３８抗体クローン９０、ＡＴ１およびＨＢ７の神経保護効果が消失したが、ＮＡＤ＋ならびに抗ＣＤ３８抗体クローンＡＴ１３／５およびＯＫＴ−１０（１μｇ／ｍＬ）の効果が消失することはなかった。
【０２３３】
酸化ストレスからの保護
ＮＡＤ＋（３ｍＭ）および数種類の抗ＣＤ３８抗体（クローン９０、ＡＴ１、ＡＴ１３／５、ＯＫＴ−１０またはＨＢ−７；１μｇ／ｍＬ）がニューロンを酸化ストレス傷害から保護するかどうかを明らかにするため、Ｈ２Ｏ２（７５μＭ）曝露後に皮質培養物に神経変性が誘導されるモデルでこれらの化合物を試験した。ＮＡＤ＋（３ｍＭ）または抗ＣＤ３８抗体（クローン９０、ＡＴ１またはＨＢ−７；１μｇ／ｍＬ）に曝露した培養物が、抗ＣＤ３８抗体クローンＡＴ１３／５またはＯＫＴ−１０（１μｇ／ｍＬ）に曝露した培養物とは異なり、酸化ストレスから保護されるのが観察された（図６）。ＮＡＡＤＰ受容体活性化の阻害剤であるＮｅｄ−１９（２μＭ）の存在下では、抗ＣＤ３８抗体クローン９０、ＡＴ１およびＨＢ７の神経保護効果が消失したが、ＮＡＤ＋の神経保護効果が消失することはなかった。
【０２３４】
神経保護は細胞内遊離カルシウムレベルの増大と相関する
ＮＡＡＤＰ受容体ＴＰＣ１およびＴＰＣ２は、リソソーム区画からカルシウムを放出して細胞質カルシウムを増大させることがわかっている（Ｐｉｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６．Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．５９４（１５）：４１７１−９）。ＮＡＡＤＰ受容体の動員により抗ＣＤ３８クローンＨＢ７抗体（１μｇ／ｍＬ）処理後に細胞質カルシウムレベルが増大するかどうかを明らかにするため、ＨＢ７および／またはＮＡＡＤＰ受容体アンタゴニストＮｅｄ−１９（２μＭ）の存在下または不在下で皮質ニューロンの細胞質カルシウムレベルを測定した（図７）。抗ＣＤ３８クローンＨＢ７抗体が細胞質カルシウムレベルを増大させ、ＮＡＡＤＰ受容体アンタゴニストＮｅｄ−１９（２μＭ）の存在下では、この効果が打ち消されるのが観察された。
【０２３５】
実施例４：ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの有機小分子ＣＤ３８阻害剤による中脳ドーパミン作動性ニューロンの神経保護
ＣＤ３８酵素活性の有機小分子阻害剤が神経保護作用を示すかどうかを明らかにするため、結合速度が遅く選択的なＣＤ３８阻害剤であるａｒａ−２’−Ｆ−ＮＡＤ＋（ＡＲＡ−Ｆ−ＮＡＤ）（Ｍｕｌｌｅｒ−Ｓｔｅｆｆｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２６７（１４）：９６０６−１１；Ｂｅｒｔｈｅｌｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８．Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ．３３０（Ｐｔ３）：１３８３−９０）の効果をＭＰＰ＋ｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルで試験した。中毒期間に培養物をＡＲＡ−Ｆ−ＮＡＤ（２００μＭ）に曝露したところ、このＣＤ３８阻害剤によりＭＰＰ＋誘発性のＤＡ細胞の死滅がほぼ完全に予防された（図８）。ＴＰＣ１および／またはＴＰＣ２活性化の阻害剤であるＮｅｄ−１９（２μＭ）の存在下では、ＡＲＡ−Ｆ−ＮＡＤによる神経保護効果が消失した。この実験から、この有機小分子ＣＤ３８阻害剤がＮＡＡＤＰ受容体ＴＰＣ１および／またはＴＰＣ２の開口を活性化してニューロンの保護をもたらすことが可能であることがわかる。
【０２３６】
実施例５：抗ＣＤ３８クローンＨＢ７、ＮＡＤ＋およびｃＡＤＰＲの神経保護効果の比較解析
ＣＤ３８酵素活性は極めて複雑なものであり、ＮＡＡＤＰ、ＮＡＤ＋および環状アデノシン二リン酸リボース（ｃＡＤＰＲ）の産生または分解を引き起こすことができる（Ｍａｌａｖａｓｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００８．Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｒｅｖ．８８（３）：８４１−８６）。本発明者らは既に、ＴＰＣ１および／またはＴＰＣ２活性化の阻害剤であるＮｅｄ−１９（２μＭ）の存在下では、抗ＣＤ３８クローンＨＢ７の効果は拮抗されるが、ＮＡＤ＋の効果は拮抗されないことを観察しており、このことから、抗ＣＤ３８クローンＨＢ７の神経保護効果はＮＡＤ＋レベルの増大を伴わないことが示唆された。抗ＣＤ３８クローンＨＢ７の神経保護効果が実際にＮＡＤ＋またはｃＡＤＰＲのレベルを伴うかどうかをさらに深く検討するため、これらの化合物それぞれの神経保護の作用機序を検討した。
【０２３７】
抗ＣＤ３８クローンＨＢ７による神経保護にはＮＡＤ＋もｃＡＤＰＲも関与しない
最初に、ＭＰＰ＋ｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルを用いて、ＴＰＣ１および／またはＴＰＣ２活性化の阻害剤であるＮｅｄ−１９、リソソーム成熟およびＣａ２＋依存性リソソームエキソサイトーシスの阻害剤であるバキュオリン１およびエンドシジン２、サーチュイン１阻害剤のＥｘ−５２７またはリアノジン受容体アンタゴニストのダントロレンの存在下または不在下で、抗ＣＤ３８クローンＨＢ７（１μｇ／ｍＬ）、ＮＡＤ＋（３ｍＭ）またはｃＡＤＰＲ（２００μＭ）の神経保護の細胞内作用機序を検討した（図９）。抗ＣＤ３８クローンＨＢ７抗体（１μｇ／ｍＬ）の神経保護効果はＮｅｄ−１９（２μＭ）、バキュオリン１（１０μＭ）またはエンドシジン２（４０μＭ）の存在下で完全に拮抗され、ＮＡＤ＋（３ｍＭ）の神経保護効果はＥｘ−５２７（１００μＭ）またはダントロレンの存在下でのみ拮抗されるのが観察された。ｃＡＤＰＲ（２００μＭ）の神経保護効果はダントロレンの存在下でのみ拮抗された。以上の結果から、ｃＡＤＰＲの神経保護効果は、既に記載されているようにリアノジン受容体の開口に依存し（Ｏｇｕｎｂａｙｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２８６（１１）：９１３６−４０）、ＮＡＤの神経保護効果には、既に記載されているようにサーチュイン１およびリアノジン受容体の動員を伴う（Ｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５．Ｆｒｏｎｔ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．９：６４）ことが示唆される。これとは逆に、抗ＣＤ３８クローンＨＢ７抗体の神経保護効果は、リソソームエキソサイトーシスを生じさせるＴＰＣ開口およびそれに続くリソソームから細胞質ゾルへのカルシウム流出を伴う事象の複雑なカスケードを引き起こすことがわかった（図１０）。以上の結果を合わせると、抗ＣＤ３８クローンＨＢ７抗体による神経保護は、Ｅｘ−５２７の存在下でもダントロレンの存在下でも拮抗されないことから、ＮＡＤ＋もｃＡＤＰＲも伴わないことが示された。
【０２３８】
抗ＣＤ３８クローンＨＢ７後の神経保護および細胞質Ｃａ２＋の増大にはＣＤ３８の内部移行およびリソソームの酸性環境が必要である
いくつかの論文では、ＣＤ３８と特定の抗体との結合がＣＤ３８の内部移行およびリソソームへの再局在化を引き起こすことが明らかにされている（Ｆｕｎａｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０（５）：２２３８−４７）。さらに、ＣＤ３８によるＮＡＡＤＰ合成は酸性ｐＨでのみ起こる（Ａａｒｈｕｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２７０（５１）：３０３２７−３３）。このようなｐＨ条件がみられるのは、細胞内ではリソソーム区画に限られる。抗ＣＤ３８クローンＨＢ７またはＮＡＤ＋の後に観察される細胞質Ｃａ２＋レベルの増大にＣＤ３８の内部移行および／またはリソソームの酸性環境が必要であるかどうかを明らかにするため、エンドサイトーシス阻害剤ジャスプラキノリド（１０μＭ）またはリソソーム酸性化阻害剤バフィロマイシンＡ１（５０ｎＭ）の存在下で細胞質Ｃａ２＋レベルをモニターした（図１１）。ジャスプラキノリドまたはバフィロマイシンＡ１の存在下では、抗ＣＤ３８クローンＨＢ７処理（１μｇ／ｍＬ）後に得られる細胞質Ｃａ２＋レベルの増大が完全に拮抗され、ＮＡＤ＋（３ｍＭ）の効果が拮抗されることはないことが観察された。さらに、ジャスプラキノリドの存在下では、ＭＰＰ＋モデルでの抗ＣＤ３８クローンＨＢ７の神経保護効果も拮抗され、ＮＡＤ＋の神経保護効果は拮抗されることはなかった（図１２）。以上の結果は、抗ＣＤ３８クローンＨＢ７の神経保護および細胞質Ｃａ２＋レベルの増大が、
（ｉ）ＮＡＤ＋のものとは異なり、
（ｉｉ）ＣＤ３８の内部移行、リソソームへの向け直しおよび酸性ｐＨ条件下でのＮＡＡＤＰの合成によって媒介される
ことを示唆するものである。
【０２３９】
この作用機序については最近、ほかの文献に記載されている（Ｆａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１８．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２９３（２１）：８１５１−８１６０）が、神経保護に関連するものではない。
【０２４０】
抗ＣＤ３８クローンＨＢ７抗体による急性処理により皮質培養物のグルコース取込みが大幅に増大した
ＮＡＡＤＰ−ＣＤ３８系が脂肪細胞のグルコース取込みを制御することが既に明らかにされている（Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２．Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐ．２（６）：１６０７−１９）。この効果をニューロンでも観察することができるかどうかを明らかにするため、皮質ニューロン培養物に蛍光グルコース類似体２−ＮＢＤＧを用いて、インスリン、抗ＣＤ３８クローンＨＢ７抗体またはＮＡＤ＋による急性処理（３０分）後に誘導されるグルコース取込みの増大を評価した。抗ＣＤ３８クローンＨＢ７抗体（１μｇ／ｍＬ）による急性処理ではインスリン（１００ｎＭ）と同程度にグルコース取込みが増大するのが観察された（図１３）。ＮＡＤ＋（３ｍＭ）処理では皮質培養物のグルコース取込みがわずかに増大するにとどまった。
【０２４１】
注目すべき点は、これまでに、グルコース代謝低下が神経変性疾患の罹患者の脳にみられる顕著な特徴であることが明らかにされている（Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２．Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ．４２１（４）：７２７−３０；Ｈａｓｓａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４．ＣＮＳ  Ｎｅｕｒｏｌ  Ｄｉｓｏｒｄ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ．１３（７）：１２３２−４５；Ｎｉｃｃｏｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６．Ｃｕｒｒ  Ｂｉｏｌ．２６（１７）：２２９１−３００）ことである。
【０２４２】
したがって、ここに記載される結果は、神経変性疾患の治療における抗ＣＤ３８抗体のグルコース代謝の調節による効果を強く裏付けるものである。
【０２４３】
実施例６：片側６−ＯＨＤＡマウスモデルにおけるｉｎ  ｖｉｖｏでの中脳ドーパミン作動性ニューロンの神経保護
片側６−ＯＨＤＡマウスモデルを用いた抗ＣＤ３８クローンＨＢ７処置に関する用量反応試験
抗ＣＤ３８クローンＨＢ７抗体がｉｎ  ｖｉｖｏで酸化ストレスによって誘発される神経変性からの神経保護作用を示すかどうかを明らかにするため、右側線条体に６−ヒドロキシドーパミン（６−ＯＨＤＡ）を投与した後に右側黒質緻密部のドーパミン作動性ニューロンが変性するマウスモデルに異なる濃度のこの抗体（０．１ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇまたは１ｍｇ／ｋｇ）を脳内投与した。６−ＯＨＤＡは、ドーパミンの類似体であるため、ドーパミン輸送体によってドーパミン作動性ニューロン内に輸送され、それによりドーパミン作動性集団に特有の細胞死が起こる。６−ＯＨＤＡは、新規な対症剤ならびに神経保護および神経修復方法の評価のための試験システムとして広く用いられてきた（Ｇａｌｉｎｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４．Ｉｎ  Ｋｏｓｔｒｚｅｗａ（Ｅｄ．），Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｃｉｔｙ（１ｓｔ  Ｅｄ．，ｐｐ．６３９−６５１）．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ）。６−ＯＨＤＡを右側線条体に片側注射するため、各マウスは左側黒質のドーパミン作動性ニューロンが毒素による影響を受けることはなく、自身のコントロール下にある。
【０２４４】
抗ＣＤ３８クローンＨＢ７抗体が用量依存性に黒質緻密部のドーパミン作動性ニューロンを保護するのが観察された（図１４）。さらに、この神経保護効果には線条体のドーパミンレベルのレスキューが伴い、このことは、抗ＣＤ３８クローンＨＢ７抗体がドーパミン作動性ニューロンを保護するばかりでなく、その機能性も維持することを意味するものであった。アポモルフィン誘発性反対側回転に関する試験では、同じ用量依存性の効果が行動レベルで観察された。最後に、抗ＣＤ３８クローンＨＢ７抗体による処置が、主要な抗炎症性サイトカインであるインターロイキン１０（ＩＬ−１０）の血漿中レベルを用量依存性に増大させることも明らかになり、この抗体が、ｉｎ  ｖｉｖｏの強力な神経保護作用ばかりでなく、強力な抗炎症特性も有することが示唆された。
【０２４５】
抗ＣＤ３８クローンＨＢ７の脳内注射または静脈内注射が片側６−ＯＨＤＡマウスモデルに及ぼす効果の差
抗ＣＤ３８クローンＨＢ７抗体が静脈内投与後にｉｎ  ｖｉｖｏで神経保護作用を示すかどうかを明らかにするため、片側６−ＯＨＤＡマウスモデルの脳内（１ｍｇ／ｋｇ）または静脈内（４ｍｇ／ｋｇ）に注射した抗ＣＤ３８クローンＨＢ７抗体の神経保護効果を比較した。抗ＣＤ３８クローンＨＢ７抗体は、静脈内投与経路を用いて注射しても、脳内投与経路を用いて注射しても、同じレベルまで黒質緻密部のドーパミン作動性ニューロンを保護することがわかった（図１５）。
【０２４６】
抗ＣＤ３８クローンＨＢ７による処置の遅延が片側６−ＯＨＤＡマウスモデルに及ぼす効果
抗ＣＤ３８クローンＨＢ７抗体を神経変性過程の進行中に投与してもｉｎ  ｖｉｖｏの神経保護作用を示すかどうかを明らかにするため、片側６−ＯＨＤＡマウスモデルに６−ＯＨＤＡと同時に、または６−ＯＨＤＡを投与してから１日後もしくは２日後に脳内に注射した（１ｍｇ／ｋｇ）抗ＣＤ３８クローンＨＢ７抗体の神経保護効果を比較した。抗ＣＤ３８クローンＨＢ７抗体は、６−ＯＨＤＡと同時に、または６−ＯＨＤＡ投与の１日後に注射した場合、黒質緻密部のドーパミン作動性ニューロンを有意に保護することがわかり、抗ＣＤ３８抗体が、神経変性機序が既に進行中でも依然としてニューロンの保護に効果的であることが示唆された（図１６）。
【０２４７】
注目すべき点は、６−ＯＨＤＡ注射の２日後に抗ＣＤ３８クローンＨＢ７抗体を注射した場合、その効果には６−ＯＨＤＡ処置マウスと統計学的差がみられなかったが、一定の強い傾向が観察されたことである。
【０２４８】
片側６−ＯＨＤＡマウスモデルを用いた抗ＣＤ３８クローンＨＢ７またはクローンＯＫＴ１０抗体の脳内注射の効果の比較
抗ＣＤ３８クローンＯＫＴ１０抗体が片側６−ＯＨＤＡマウスモデルにおいてｉｎ  ｖｉｖｏで神経保護作用を示すかどうかを明らかにするため、抗ＣＤ３８クローンＨＢ７抗体の脳内注射（１ｍｇ／ｋｇ）の神経保護効果を抗ＣＤ３８クローンＯＫＴ１０抗体のものと比較した。抗ＣＤ３８クローンＯＫＴ１０抗体は片側６−ＯＨＤＡマウスモデルの黒質緻密部のドーパミン作動性ニューロンを保護することができないことが観察され、特異的エピトープと結合する抗ＣＤ３８抗体のみがｉｎ  ｖｉｖｏで神経保護作用を示すことが示唆された（図１７）。
【０２４９】
抗ＣＤ３８クローンＨＢ７抗体で処置したとき、その神経保護効果以外にも、主要な抗炎症性サイトカインであるＩＬ−１０の血漿中レベルの用量依存性の増大が観察されたことは、同抗体の強力なｉｎ  ｖｉｖｏの抗炎症特性を示している。この観察結果は、炎症性疾患の治療における抗ＣＤ３８クローンＨＢ７抗体の治療上の利益を示唆している。
【０２５０】
実施例７：ＣＢＥマウスモデルでのｉｎ  ｖｉｖｏの抗炎症効果
ゴーシェ病（ＧＤ）は、酵素グルコセレブロシダーゼ（ＧＣａｓｅ）をコードするＧＢＡ遺伝子の変異を原因とする常染色体劣性先天代謝異常である。ＧＣａｓｅ機能の異常によってリソソームにグルコシルセラミドが蓄積し、臓器肥大、貧血、血小板減少症および骨疾患を含めた様々な全身症状を引き起こす。さらに、様々な一連の証拠から、ＧＢＡ変異とパーキンソン病およびその他のレビー小体障害の発症との間に予想外の相関があることがわかった。実際、ＧＢＡ遺伝子の変異が、数値的にパーキンソン病発症の最も重要な素因となる危険因子を構成している。ＧＢＡ変異体の保有者ではホモ接合型、ヘテロ接合型ともに、パーキンソン病の発症リスクが２０〜３０倍になり、パーキンソン病患者の約５〜１０％にＧＢＡ変異があると推定されている（Ｓｉｄｒａｎｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００９．Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．３６１（１７）：１６５１−６１；Ｂｕｌｔｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０．Ｊ  Ｉｎｈｅｒｉｔ  Ｍｅｔａｂ  Ｄｉｓ．３３（２）：１６７−７３）。
【０２５１】
これまでに、ＧＣアーゼの触媒部位に結合するＧＣアーゼの不可逆的阻害剤であるコンズリトールβエポキシド（ＣＢＥ）の使用に基づき、ＧＤ患者に観察される変異体ＧＣアーゼ酵素活性の喪失（Ｌｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．１０７（５０）：２１６６５−７０）を模倣する、化学的に誘発したＧＤのｉｎ  ｖｉｖｏマウスモデルが開発されている（Ｇｒａｂｏｗｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２６１（１８）：８２６３−９）。きわめて興味深いのは、ＣＢＥを注射したマウスには、ＣＧアーゼ阻害によって誘発したリソソーム機能不全による小膠細胞および星状膠細胞の強い活性化がみられた（Ｍａｎｎｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００９．Ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ．３０（６）：１１２７−３２；Ｒｏｃｈａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５．Ａｎｔｉｏｘｉｄ  Ｒｅｄｏｘ  Ｓｉｇｎａｌ．２３（６）：５５０−６４２０１５）ことである。
【０２５２】
抗ＣＤ３８クローンＨＢ７の脳内注射または静脈内注射がＣＢＥマウスモデルの線条体小膠細胞に及ぼす効果。
抗ＣＤ３８クローンＨＢ７抗体がＣＢＥ（１００ｍｇ／ｋｇ）を９日間連続で注射した後に誘発される線条体小膠細胞の活性化を抑えるのにｉｎ  ｖｉｖｏで効果的であるかどうかを明らかにするため、最初のＣＢＥ注射の１日前、マウスの脳内（１ｍｇ／ｋｇ）または静脈内（４ｍｇ／ｋｇ）に抗ＣＤ３８クローンＨＢ７抗体を注射した。脳内に注射した（１ｍｇ／ｋｇ）抗ＣＤ３８クローンＨＢ７抗体では、ＣＢＥ注射単独の後に観察される、小膠細胞が占める数および面積の増大を完全が予防され、静脈内投与（４ｍｇ／ｋｇ）では、これらの効果がわずかではあるが統計学的に有意に予防されるのが観察された（図１８）。
【０２５３】
抗ＣＤ３８クローンＨＢ７の脳内注射または静脈内注射がＣＢＥマウスモデル線条体の反応性星状膠細胞に及ぼす効果。
抗ＣＤ３８クローンＨＢ７抗体がＣＢＥ（１００ｍｇ／ｋｇ）を９日間連続して注射した後に誘発される線条体の反応性星状膠細胞の活性化を抑えるのにｉｎ  ｖｉｖｏで効果的であるかどうかを明らかにするため、最初のＣＢＥ注射の１日前、マウスの脳内（１ｍｇ／ｋｇ）または静脈内（４ｍｇ／ｋｇ）に抗ＣＤ３８クローンＨＢ７抗体を注射した。脳内（１ｍｇ／ｋｇ）または静脈内に注射した抗ＣＤ３８クローンＨＢ７抗体により、ＣＢＥ注射単独の後に観察される、反応性星状膠細胞が占める面積の増大が完全に予防されるのが観察された（図１９）。
【０２５４】
実施例８：急性ＭＰＴＰマウスモデルにおけるｉｎ  ｖｉｖｏでの中脳ドーパミン作動性ニューロンの神経保護
抗ＣＤ３８クローンＨＢ７抗体がミトコンドリア阻害によって誘発される神経変性に対してｉｎ  ｖｉｖｏで神経保護作用を示すかどうかを明らかにするため、ＭＰＴＰを腹腔内に反復注射した後に黒質緻密部のドーパミン作動性ニューロンが変性するマウスモデルに用量１５ｍｇ／ｋｇのこの抗体を静脈内注射した。ＭＰＴＰは血液脳関門を通過することが可能であり、星状膠細胞によってＭＰＰ＋に転換される。ミトコンドリア複合体Ｉの阻害剤であるＭＰＰ＋は、ドーパミン輸送体によってドーパミン作動性ニューロン内に優先的に輸送され、それによりドーパミン作動性集団に特有の細胞死が起こる。ＭＰＴＰは、神経保護および神経修復方法の評価のための試験システムとして広く用いられてきた（Ｄａｕｅｒ  ＆  Ｐｒｚｅｄｂｏｒｓｋｉ，２００３．ニューロン．３９（６）：８８９−９０９）。
【０２５５】
用量１５ｍｇ／ｋｇの抗ＣＤ３８クローンＨＢ７抗体を静脈内注射することにより、黒質緻密部のドーパミン作動性ニューロンがＭＰＴＰ誘発性神経変性から強力に保護されるのが観察された（図２０）。
【０２５６】
材料および方法
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ実験
中脳細胞培養物
実験動物の管理と使用に関する指針（Ｇｕｉｄｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌｓ）（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｕｎｃｉｌ，１９９６）、欧州指針（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｄｉｒｅｃｔｉｖｅ）８６／６０９および地方の動物実験委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）に従って動物を取り扱った。妊娠齢１５．５のＷｉｓｔａｒラット胚（Ｊａｎｖｉｅｒ  Ｂｒｅｅｄｉｎｇ  Ｃｅｎｔｅｒ、ル・ジュネスト＝サン＝ティスル、フランス）の腹側中脳から培養物を調製した。記載されている通りに（Ｍｉｃｈｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７．Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．６９（４）：１４９９−５０７）、中脳組織片の機械的粉砕によって得た分離細胞懸濁液を、ｐＨ８．３のホウ酸緩衝液で希釈した１ｍｇ／ｍＬポリエチレンイミンで予めコートした組織培養支持体上に１．２〜１．５ｘ１０５細胞／ｃｍ２の密度で播いた。次いで、培養物の最初の成熟に有利になるようウシ胎児血清の濃度を２．５％にした最初の３ＤＩＶを除いて、５ｍＭグルコース、５％ウマ血清および０．５％ウシ胎児血清を添加したＮ５培地で培養物を維持した（Ｇｕｅｒｒｅｉｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００８．Ｍｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．７４（４）：９８０−９）。培地の７０％を交換することにより、培養物に毎日栄養を補給した。日常的な方法で、Ｎｕｎｃ  ２４ウェル培養プレート（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｃｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、ロチェスター、ニューヨーク州）上に中脳培養物を確立した。この培養物には、もっぱらドーパミン作動性を示したチロシンヒドロキシラーゼ（ＴＨ）＋ニューロンが含まれていることに留意されたい（Ｔｒａｖｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００６．Ｍｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．７０（１）：３０−４０）。ＴＨ＋ニューロンは、この培養物中に存在する総神経細胞数の約１〜２％を占めていた。記載されている通りに（Ｔｏｕｌｏｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１．Ｆａｓｅｂ  Ｊ．２５（８）：２５６３−７３）、ＴＨに対して免疫陽性の細胞をカウントすることにより、ＤＡニューロンの生存率の評価を実施した。
【０２５７】
中脳ドーパミン作動性ニューロン細胞死のモデル化に用いた培養系
自発的ドーパミン作動性（ＤＡ）細胞死モデル
ＤＡ細胞の死滅が自発的なものであるモデル系を用いた。播種後のＤＡニューロン死滅は進行性であり、１０ＤＩＶ後に約６５〜７０％に達するものであった（Ｇｕｅｒｒｅｉｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００８．Ｍｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．７４（４）：９８０−９）。
【０２５８】
ＧＤＮＦ断薬モデル
さらに成熟したＤＡニューロン集団に対する本発明者らの化合物の効果を評価するため、以前のモデル系の１つのバリエーションも用いた。さらに詳細に述べれば、健常ＤＡニューロンの成熟に有利になるようＧＤＮＦ（２０ｎｇ／ｍＬ）で慢性処理することにより、１０ＤＩＶまで自発的ＤＡ細胞死が起こらないようにした。次いで、次の５日間にわたって、ＧＤＮＦを完全に断薬することによりＤＡ細胞死を引き起こした。
【０２５９】
ＭＰＰ＋中毒モデル
既に記載されているように（Ｄｏｕｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００１．Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．７８（１）：１６３−７４）、望ましくない興奮毒性傷害を予防するグルタミン酸受容体アンタゴニストＭＫ８０１（５μＭ）の存在下、脱分極濃度のＫ＋（３０ｍＭ）に長期間曝露することによって自発的死の過程を防いだ培養物にＭＰＰ＋による処理を実施した。５〜７ＤＩＶに、ＭＰＰ＋および神経保護作用を示す可能性のある分子による処理を実施した。ＭＰＰ＋が小膠細胞の増殖を誘導することがわかっている（Ｈｅｎｚｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００５．Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．９５（４）：１０６９−７７）ため、この同じモデルで小膠細胞数を評価した。
【０２６０】
皮質細胞培養物
実験動物の管理と使用に関する指針（Ｇｕｉｄｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌｓ）（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｕｎｃｉｌ，１９９６）、欧州指針（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｄｉｒｅｃｔｉｖｅ）８６／６０９および地方の動物実験委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）のガイドラインに従って動物を取り扱った。妊娠齢１５．５のＷｉｓｔａｒラット胚（Ｊａｎｖｉｅｒ  Ｂｒｅｅｄｉｎｇ  Ｃｅｎｔｅｒ、ル・ジュネスト＝サン＝ティスル、フランス）の皮質から培養物を調製した。中脳培養物に関して既に記載したプロトコルに従い、皮質組織片の機械的粉砕によって得た分離細胞懸濁液を、ｐＨ８．３のホウ酸緩衝液で希釈した１ｍｇ／ｍＬポリエチレンイミンで予めコートした組織培養支持体上に播いた。次いで、培養物の最初の成熟に有利になるようウシ胎児血清の濃度を２．５％にした最初の３ＤＩＶを除いて、５ｍＭグルコース、５％ウマ血清および０．５％ウシ胎児血清を添加したＮ５培地で培養物を維持した（Ｇｕｅｒｒｅｉｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００８．Ｍｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．７４（４）：９８０−９）。培地の７０％を交換することにより、培養物に毎日栄養を補給した。日常的な方法で、Ｎｕｎｃ  ２４ウェル培養プレート（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｃｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、ロチェスター、ニューヨーク州）上に皮質培養物を確立した。
【０２６１】
皮質ニューロン細胞死のモデル化に用いた培養系
興奮毒性モデル
１２〜１４ＤＩＶに、神経保護作用を示す可能性のある治療剤の存在下または不在下で、グルタミン酸（７５μＭ）を皮質培養物に添加した。次いで、培養物をホルムアルデヒドで固定し、抗ＭＡＰ−２抗体を用いて免疫染色した。ＩｍａｇｅＪを用いて、ＭＡＰ−２＋ニューロンが占める面積を評価した。
【０２６２】
酸化ストレスモデル
１２〜１４ＤＩＶに、神経保護作用を示す可能性のある分子の存在下または不在下で、Ｈ２Ｏ２（７５μＭ）を皮質培養物に添加した。次いで、培養物をホルムアルデヒドで固定し、抗ＭＡＰ−２抗体を用いて免疫染色した。ＩｍａｇｅＪを用いて、ＭＡＰ−２＋ニューロンが占める面積を評価した。
【０２６３】
ニューロン生存率および小膠細胞数の定量化
ダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）に溶かした４％ホルムアルデヒドを用いて培養物を１２分間固定し、次いでＰＢＳで２回洗浄した後、以下に挙げる抗体とのインキュベーション段階を４℃で２４時間実施した。１／５０００希釈モノクローナル抗ＴＨ抗体（ＩｍｍｕｎｏＳｔａｒ社、ハドソン、ウィスコンシン州）または１／１０００希釈ポリクローナル抗ＴＨ抗体（ＵＳ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ社、セーレム、マサチューセッツ州）を用いてＤＡニューロンの生存率を評価した。１／２５０に希釈したモノクローナル抗ＭＡＰ２抗体（クローンＡＰ２０、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社）を用いて皮質ニューロンの生存率を評価した。マウス抗Ｉｂａ１抗体（１／５０；クローンＭＲＣ  ＯＸ−４２；Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社、ル・ポン＝ド＝クレ、フランス）を用いて小膠細胞の特徴を明らかにした。抗体は、ＰＢＳのみで希釈したマウス抗Ｉｂａ１を除きいずれも、０．２％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００を含有するＰＢＳで希釈した。抗マウスＩｇＧ抗体のＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ−４８８コンジュゲートまたは抗ウサギ抗体（１：５００）のＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ−５５５コンジュゲートを用いて一次抗体の検出を実施した。
【０２６４】
細胞質Ｃａ２＋レベルの測定
Ｃａｌ−５２０（ＡＡＴ  Ｂｉｏｑｕｅｓｔ社）を用いて個々の皮質ニューロンの細胞質遊離カルシウムレベルを測定した。簡潔に述べれば、７〜８日間増殖させた培養物を１０μＭのＣａｌ−５２０と３７℃で３０分間インキュベートし、無血清グルコース添加Ｎ５培地で２回洗浄して過剰な指示薬を除去し、次いで、被験化合物の存在下で３０分間回復させた後、評価した。Ｃ−Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社製のＳｉｍｐｌｅ−ＰＣＩソフトウェアと、Ｈａｍａｍａｔｓｕ社（ブリッジウォーター、ニュージャージー州）製のＯＲＣＡ−ＥＲデジタルカメラを備えたＮｉｋｏｎ社（東京、日本）製ＴＥ−３００倒立顕微鏡とを用いて、蛍光シグナル（励起４８０ｎｍ；発光５１０ｎｍ）を定量化した。様々な実験条件下で各細胞体表面の平均ピクセル強度を求めた。生データからバックグラウンド蛍光を減じ、その結果を対照条件下での１細胞当たりの平均蛍光強度に対する割合として表した。各試験条件下で最低１８０個の細胞を解析した。
【０２６５】
グルコース取込みの測定
蛍光グルコース類似体２−ＮＢＤＧ（Ａｂｃａｍ社）を用いて個々の皮質ニューロンのグルコース取込みを測定した。簡潔に述べれば、７日間増殖させた培養物を無グルコースＮ５培地中、被験化合物の存在下で２−ＮＢＤＧ（３００μＭ）と３７℃で３０分間インキュベートし、２回洗浄して過剰な指示薬を除去し、次いで３０分間回復させた後、評価した。Ａｒｒａｙｓｃａｎ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）を用いて蛍光シグナル（励起４６５ｎｍ；発光５４０ｎｍ）を取得し、ＩｍａｇｅＪを用いて定量化した。様々な実験条件下で各細胞体表面の平均ピクセル強度を求めた。生データからバックグラウンド蛍光を減じ、その結果を対照条件下での１細胞当たりの平均蛍光強度に対する割合として表した。各試験条件下で１００個の細胞を解析した。
【０２６６】
統計解析
スチューデントｔ検定を用いて２群間の単純比較を実施した。一元配置分散分析、可能であれば、次いでダネット検定により、単一の参照群に対する多重比較を実施した。全対比較が必要な場合には、スチューデント−ニューマン−クールズ検定を用いた。少なくとも３つの独立した実験からＳ．Ｅ．Ｍ．値を求めた。
【０２６７】
ｉｎ  ｖｉｖｏ実験
動物
実験動物の管理と使用に関する指針（Ｇｕｉｄｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌｓ）（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｕｎｃｉｌ，１９９６）、欧州指針（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｄｉｒｅｃｔｉｖｅ）８６／６０９および地方の動物実験委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）のガイドラインに従って動物を取り扱った。いずれの試験にも、８〜１０週齢の雄Ｃ５７Ｂｌ／６マウス（Ｊａｎｖｉｅｒ社、フランス）を用いた。マウスは午前８時に点灯する１２：１２時間の明／暗周期下で維持した。室温を２０℃に維持し、標準飼料および水道水を自由摂取させた。
【０２６８】
実験計画
３種類のｉｎ  ｖｉｖｏマウスモデル、すなわち、６−ＯＨＤＡマウスモデル、ＣＢＥマウスモデルおよびＭＰＴＰマウスモデルを用いた。６−ＯＨＤＡマウスモデルでは、中毒プロトコルを右側線条体への６−ＯＨＤＡの片側定位固定線条体内注射に基づくものとした。外科的定位固定処置の前日に治療剤の静脈内注射を実施した。外科的定位固定処置の８日後にマウスを屠殺した。
【０２６９】
ＣＢＥマウスモデルでは、マウスに９日間連日でＣＢＥ（１００ｍｇ／ｋｇ、Ｔｏｒｏｎｔｏ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ社、カナダ）のｉ．ｐ．注射を実施した。最初のＣＢＥ注射の前に脳内注射または静脈内注射を実施した。最後のＣＢＥ注射の１日後にマウスを屠殺した。
【０２７０】
ＭＰＴＰマウスモデルでは、ＭＰＴＰ（２０ｍｇ／ｋｇ）を４回注射した。ＭＰＴＰ注射の２日前に抗ＣＤ３８クローンＨＢ７抗体の静脈内注射を実施した。ＭＰＴＰ注射の７日後にマウスを屠殺した。
【０２７１】
外科的定位固定処置
片側６−ＯＨＤＡマウスモデルおよびＣＢＥマウスモデルのＨＢ７抗体の脳内注射では、抱水クロラール（４００ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）を用いてマウスに麻酔をかけ、マウスに適合させた定位フレーム内に置いた。Ｈａｍｉｌｔｏｎシリンジを用いて以下の座標、すなわち、ＡＰ：＋０．８５ｃｍ、ＭＬ：±２ｃｍ、ＤＶ：−３．４ｃｍ（Ｆｒａｎｋｌｉｎ  ａｎｄ  Ｐａｘｉｎｏｓ，１９９７の図譜に対応する）で注射を実施した。被験治療剤の存在下または不在下でＰＢＳで希釈した６−ＯＨＤＡ  ５μｇを含む、または含まない総体積２．５μＬを注射した。注射後、針を１０分間留置した後、引き抜いた。
【０２７２】
アポモルフィン誘発性反対側回転運動
６−ＯＨＤＡの片側線条体注射により黒質のドーパミン作動性ニューロンの同側破壊が起こる。損傷の程度は行動試験、すなわち、アポモルフィン誘発性回転運動試験により推定することができる。アポモルフィンは、ドーパミン作動性受容体Ｄ１およびＤ２のアゴニストであり、重度の破壊を受けたマウスに常同性の反対側回転活動を引き起こす。破壊が重大なものであるほど、回転運動の数は重大なものになる。
【０２７３】
マウスに１ｍｇ／ｋｇのアポモルフィンをｉ．ｐ．注射し、透明なＰｌｅｘｉｇｌａｓ管に入れた。回転運動をカメラで３０分間記録し、カウントした。この試験を６−ＯＨＤＡ注射の８日後、マウスを安楽死させる直前に実施した。
【０２７４】
組織標本
マウスを頸椎脱臼により屠殺し、断頭して、脳および血液試料を採取した。氷冷プラスチック皿の上で右側と左側の線条体を切り分け、重量を測定し、２００μｌの０．２Ｎ過塩素酸中に移した。脳の残りの部分をパラホルムアルデヒド溶液（４％）で１日間固定した後、スクロース（３０％）に２日間浸漬し、次いで、のちの解析に−８０℃で凍結させた。
【０２７５】
線条体ドーパミンレベルの定量化
過塩素酸（０．２Ｎ）に浸漬した脳組織片を１０秒間超音波処理し、得られたホモジネートを４℃で２０分間、１３，０００ｇで遠心分離した。上清を０．２μｍの膜でろ過し、ろ液をのちの解析まで−８０℃で保管した。高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）に注入する前に、試料１００μＬをリン酸緩衝液（２Ｍ、ｐＨ７．５）１０μＬおよびアスコルビン酸（０．３ｍｇ／ｍＬ）５μＬと混合した。電気化学検出の電位を＋０．６５Ｖに設定し、カラム温度を１９℃に維持した。移動相（１５．９％メタノールと、１．２５ｍＭオクタン−１スルホン酸ナトリウム塩と、０．７Ｍ  ＫＨ２ＰＯ４、１ｍＭＥＤＴＡ、３１ｍＭトリエチルアミンを含有するｐＨ３の７６％の緩衝液とを含有する緩衝水溶液）を逆相Ｃ１８カラム（２５０×４．６ｍｍ、結合シリカ、Ｓｕｎｆｉｒｅ、Ｗａｔｅｒｓ社、ギュイヤンクール、フランス）に送った。
【０２７６】
ＩＬ−１０  ＥＬＩＳＡアッセイ
収集チューブ（Ｍｉｃｒｏｖｅｔｔｅ（登録商標）５００  ＥＤＴＡ−Ｋ３、ＳＡＲＳＴＥＤＴ社）に収集した血液試料を３０００回転／分で１５分間遠心分離した。上清（血漿）を採取し、チューブ内に移し、のちの解析に−８０℃で凍結させた。ＥＬＩＳＡ  ＩＬ−１０キット（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ社）を製造業者が指定した使用上の指示通りに用いて、血漿試料中のＩＬ−１０レベルをアッセイした。
【０２７７】
脳スライス、免疫蛍光およびニューロン計数
−３０℃の凍結ミクロトームを用いて各脳をスライスした。各スライスの厚さを２０μｍとした。線条体（Ａｌｌｅｎ  Ｍｏｕｓｅ  Ｂｒａｉｎによるスライス２１〜スライス３０から５０スライス）および黒質（Ａｌｌｅｎ  Ｍｏｕｓｅ  Ｂｒａｉｎによるスライス５１〜６３から８０スライス）周辺でスライスを実施した。
【０２７８】
次いで、スライスをＰＢＳですすぎ、ドーパミン作動性ニューロン（Ａｂｃａｍ社）を染色する抗チロシンヒドロキシラーゼ、小膠細胞を染色する抗Ｉｂａ−１（Ａｂｃａｍ社）または反応性星状膠細胞を染色する抗ＧＦＡＰ（Ａｂｃａｍ社）と４℃で２日間、攪拌しながらインキュベートした。スライスを、細胞核を染色するＤＡＰＩ（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ社）の存在下で対応する二次抗体と室温で２時間インキュベートし、ゼラチンコートスライド上にマウントした。
【０２７９】
Ｈａｍａｍａｔｓｕ社製ＯＲＣＥ−ＥＲカメラを備えたＮｉｋｏｎ社製ＴＥ２０００Ｕまたはａｘｉｏｃａｍ  ５０３  ｍｏｎｏカメラを備えたＺｅｉｓｓ社製Ａｘｉｏ  Ｖｅｒｔ．Ａ１を用いてスライスを撮像した。ＩｍａｇｅＪソフトウェアまたはＺｅｎ（Ｚｅｉｓｓ社）を用いて画像解析を実施した。
【０２８０】
統計解析
ソフトウェアＳｉｇｍａ  Ｐｌｏｔで統計解析を実施し、図を作製する。データに応じて異なる試験を実施してよく、適用条件を重視する場合には一元配置ＡＮＯＶＡおよび事後検定を実施する。そうでない場合にはクラスカル・ウォリス検定を実施する。
【図１】
2020528447.tif 000026
【図２】
2020528447.tif 000027
【図３】
2020528447.tif 000028
【図４】
2020528447.tif 000029
【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０−１】
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【図１０−２】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【手続補正書】
【提出日】令和2年3月26日(2020.3.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2020528447000001.app
【国際調査報告】
2020528447.tif 000047
2020528447.tif 000048
2020528447.tif 000049
2020528447.tif 000050
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