(57)【要約】  本明細書は、概して、式（Ｉ）の化合物：2020514344.tif 000029（式中、Ｒ１は、本明細書に定義した意味を有する）、及び薬学的に許容し得るその塩に関する。本明細書はまた、癌を含めたＡＴＭ介在疾患を治療又は予防するための、式（Ｉ）の化合物及びその塩の使用に関する。本明細書はさらに、置換されたイミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オン化合物及び薬学的に許容し得るその塩を含む医薬組成物；及びこうした化合物及び塩を含むキットに関する。
2020514344.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物：
【化１】
2020514344.tif 000028
（式中、Ｒ１は、Ｈ又はＤである）又は薬学的に許容し得るその塩。
【請求項２】
４，６−ジジュウテロ−７−フルオロ−１−イソプロピル−３−メチル−８−［６−［３−（１−ピペリジル）プロポキシ］−３−ピリジル］イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オン、又は薬学的に許容し得るその塩である、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項３】
請求項１又は２に記載の、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩と、薬学的に許容し得る少なくとも１種の賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項４】
治療法における使用のための、請求項１又は２に記載の、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩。
【請求項５】
癌の治療における使用のための、請求項１又は２に記載の、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩。
【請求項６】
前記式（Ｉ）の化合物が、放射線療法と同時に、別に、又は連続して投与される、請求項５に記載の、癌の治療における使用のための式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩。
【請求項７】
前記式（Ｉ）の化合物が、ドキソルビシン、イリノテカン、トポテカン、エトポシド、マイトマイシン、ベンダムスチン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イホスファミド、カルムスチン、メルファラン、及びブレオマイシンからなる群から選択される少なくとも１種の追加の抗腫瘍物質と同時に、別に、又は連続して投与される、請求項５に記載の、癌の治療における使用のための、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩。
【請求項８】
癌の治療のための医薬品の製造における、請求項１又は２に記載の、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩の使用。
【請求項９】
こうした治療を必要とする温血動物における癌を治療するための方法であって、前記温血動物に、請求項１又は２に記載の、治療有効量の式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩を投与することを含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本明細書は、重水素化イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オン化合物及び薬学的に許容し得るその塩に関する。これらの化合物及び塩は、血管拡張性失調症変異（「ＡＴＭ」）キナーゼを選択的に調節するので、本明細書はまた、癌を含めたＡＴＭ介在疾患を治療又は予防するための、重水素化イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オン化合物及びその塩の使用にも関する。本明細書はさらに、重水素化イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オン化合物及び薬学的に許容し得るその塩を含む医薬組成物；並びにこうした化合物及び塩を含むキットに関する。
【背景技術】
【０００２】
ＡＴＭキナーゼは、元々、血管拡張性失調症で変異した遺伝子の産物と特定された、セリントレオニンキナーゼである。血管拡張性失調症は、ヒト染色体１１ｑ２２−２３上に位置し、約３５０ｋＤａの大きなタンパク質をコードし、ＡＴＭキナーゼの活性及び機能を調節するＦＲＡＰ−ＡＴＭ−ＴＲＲＡＰ及びＦＡＴＣドメインに隣接するホスファチジルイノシトール（「ＰＩ」）３−キナーゼ様セリン／トレオニンキナーゼドメインの存在が特徴である。ＡＴＭキナーゼは、二本鎖切断によって誘発されるＤＮＡ損傷応答の主役と特定されている。これは、ＤＮＡ損傷後の細胞完全性を維持するために、主として、Ｓ／Ｇ２／Ｍ細胞周期移行において、また、剥離した（ｃｏｌｌａｐｓｅｄ）複製フォークで機能して、細胞周期チェックポイント、クロマチン修飾、ＨＲ修復、及び生存促進性シグナル伝達カスケードを開始する（非特許文献１）。
【０００３】
ＡＴＭキナーゼシグナル伝達は、概して、２つのカテゴリー：二本鎖切断により、Ｍｒｅ１１−Ｒａｄ５０−ＮＢＳ１複合体と共にシグナルを発し、ＤＮＡ損傷チェックポイントを活性化する標準の経路と、他の形態の細胞ストレスによって活性化される、活性化のいくつかの非標準の機序とに分けることができる（非特許文献２）。
【０００４】
ＡＴＭキナーゼは、二本鎖切断に応答して迅速かつ確実に活性化され、８００を超える基質をリン酸化し（非特許文献３）、多数のストレス応答経路を連係させる（非特許文献４）ことが可能であると報告されている。ＡＴＭキナーゼは、大部分は細胞の核内に、不活性なホモ二量体型で存在するが、ＤＮＡ二本鎖切断を感知すると、Ｓｅｒ１９８１で、それ自体が自己リン酸化され（標準の経路）、完全なキナーゼ活性をもつ単量体への解離がもたらされる（非特許文献５）。これは、重要な活性化事象であり、したがって、ＡＴＭ  ｐｈｏｓｐｈｏ−Ｓｅｒ１９８１は、腫瘍の経路依存性についての直接的薬力学的と患者選択との両方のバイオマーカーである。
【０００５】
ＡＴＭキナーゼは、電離放射線及びトポイソメラーゼ−ＩＩ阻害剤（ドキソルビシン、エトポシド）などの一般的な抗癌治療によって引き起こされる直接的な二本鎖切断に応答するだけでなく、複製中の一本鎖切断から二本鎖切断への転換を介して、トポイソメラーゼ−Ｉ阻害剤（例えばイリノテカン及びトポテカン）にも応答する。ＡＴＭキナーゼ阻害は、これらのいずれの薬剤の活性も増強することができ、その結果、ＡＴＭキナーゼ阻害剤は、癌の治療に有用であることが期待される。
【０００６】
（特許文献１）は、いくつかのイミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オン化合物を報告し、これを、ＰＩ３−キナーゼαと哺乳類ラパマイシン標的（「ｍＴＯＲ」）キナーゼの二重阻害剤であると言及している。（特許文献１）で報告された化合物としては、以下のものが挙げられる：
【化１】
2020514344.tif 000003
【０００７】
（特許文献２）は、ある種のイミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オン化合物を報告し、これを、ＰＩ３−キナーゼα阻害剤であると言及している。（特許文献２）で報告された化合物としては、以下のものが挙げられる：
【化２】
2020514344.tif 000004
【０００８】
（特許文献１）及び（特許文献２）の化合物は、ＰＩ３−キナーゼα、及び場合によってはｍＴＯＲキナーゼに対する活性を有すると報告されているが、ＡＴＭキナーゼなどの様々なキナーゼ酵素に対して、より有効である新規化合物を開発する必要性が、依然として存在する。高度に選択的な様式で（すなわち、他の生物学的標的よりも効率的にＡＴＭを調節することによって）、ＡＴＭキナーゼのようなある種のキナーゼ酵素に逆らって作用する新規化合物の必要性が、さらに存在する。
【０００９】
本明細書の他の箇所で（例えば、実験セクションに記載された細胞ベースのアッセイにおいて）実証された通り、本明細書の化合物は、概して、非常に強力なＡＴＭキナーゼ阻害活性を有するが、ＰＩ  ３−キナーゼα、ｍＴＯＲキナーゼ、並びに血管拡張性失調症及びＲａｄ３関連タンパク質（ａｔａｘｉａ  ｔｅｌａｎｇｉｅｃｔａｓｉａ  ａｎｄ  Ｒａｄ３−ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ）（「ＡＴＲ」）キナーゼなどの他のチロシンキナーゼ酵素に対する活性は、かなり弱い。したがって、本明細書の化合物は、ＡＴＭキナーゼを阻害するだけでなく、ＡＴＭキナーゼの高度に選択的な阻害剤であるとみなすことができる。
【００１０】
その高度に選択的な性質の結果として、本明細書の化合物は、ＡＴＭキナーゼが関与する（例えば、癌の治療における）疾患の治療に特に有用であることが期待されるが、ここでは、クラスＰＩ３−キナーゼα、ｍＴＯＲキナーゼ、及びＡＴＲキナーゼなどの他のチロシンキナーゼ酵素の阻害が原因で生じる可能性があるオフターゲット効果又は毒性を最小限にすることが望ましい。
【００１１】
医療用化合物は、許容されるレベルで患者に投与されることを可能にする薬物動態特性を有することが望ましい。劣った薬物動態特性は、薬物候補が臨床開発で失敗する原因である可能性がある。劣った薬物動態特性の例は、薬物が体から急速に排除されることを引き起こし、したがって、その治療効果を低下させる可能性がある、急速な代謝である。より高頻度又は高濃度の薬物投与によって、急速な薬物クリアランスに打ち勝つことが可能であるかもしれないが、こうした手法は、患者の服薬遵守を低下させる、及び／又は患者を副作用増加のリスクにさらす可能性がある。急速な代謝の問題に対処する別の手法は、薬物分子中の１つ又は複数の炭素結合水素原子を重水素と置換することである（非特許文献６）。重水素は、水素と比較してより強い、炭素との結合を形成し、場合によっては、その結合安定性の増大が、例えば、その代謝のある種の経路を遅らせることによって、薬物の薬物動態特性に影響を与えることができる。薬物分子中の１つ又は複数の炭素結合水素原子の、重水素との置換は、無視できる立体効果を与えるので、重水素による水素の置き換えは、その非重水素化等価物と比較した場合の薬物の生物学的活性に影響を与えることは予想されなかったであろう。しかし、ごくわずかの割合の重水素化薬物しか、これまでに承認されておらず、薬物の薬物動態特性に対する重水素修飾の影響は、重水素原子が代謝の公知の部位で組み込まれた場合でも、予測可能ではない。
【００１２】
本明細書の化合物は、患者への投与に適したプロファイルを示すであろう薬物動態特性を示すことが予想される。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１３】
【特許文献１】中国特許第１０２３７２７１１Ａ号明細書
【特許文献２】中国特許第１０２３９９２１８Ａ号明細書
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】Ｌａｖｉｎ，Ｍ．Ｆ．；Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．２００８，７５９−７６９
【非特許文献２】Ｃｒｅｍｏｎａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２０１３，３３５１−３３６０
【非特許文献３】Ｍａｔｓｕｏｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２００７，１１６０−１１６６
【非特許文献４】Ｋｕｒｚ  ａｎｄ  Ｌｅｅｓ  Ｍｉｌｌｅｒ，ＤＮＡ  Ｒｅｐａｉｒ  ２００４，８８９−９００
【非特許文献５】Ｂａｋｋｅｎｉｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ２００３，４９９−５０６
【非特許文献６】Ａ．Ｂ．Ｆｏｓｔｅｒ，Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９８４（５），５２４−５２７
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１５】
同時係属中の出願ＰＣＴ／ＥＰ２０１６／０７１７８２号明細書は、ＡＴＭキナーゼの選択的モジュレーターである、置換されたイミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オン化合物を記載している；これらのモジュレーターの誘導体を、本明細書で記載する。簡単に言えば、本明細書は、一つには、式（Ｉ）の化合物：
【化３】
2020514344.tif 000005
（式中、Ｒ１は、Ｈ又はＤである）
又は薬学的に許容し得るその塩を記載する。
【００１６】
本明細書はまた、一つには、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩と、薬学的に許容し得る少なくとも１種の賦形剤とを含む医薬組成物を記載する。
【００１７】
本明細書はまた、一つには、治療法における使用のための、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩を記載する。
【００１８】
本明細書はまた、一つには、癌の治療における使用のための、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩を記載する。
【００１９】
本明細書はまた、一つには、癌の治療のための医薬品の製造における、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩の使用を記載する。
【００２０】
本明細書はまた、一つには、こうした治療を必要とする温血動物における癌を治療するための方法であって、治療有効量の式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩を、前記温血動物に投与することを含む方法を記載する。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
本発明の多くの実施態様は、本明細書全体を通して詳述され、当業者に明らかであろう。本発明は、そのいずれかの特定の実施態様に限定されると解釈されるべきではない。
【００２２】
第１の実施態様では、式（Ｉ）の化合物：
【化４】
2020514344.tif 000006
（式中、Ｒ１は、Ｈ又はＤである）
又は薬学的に許容し得るその塩が提供される。
【００２３】
「ヒドロ（ｈｙｄｒｏ）」又は「Ｈ」基は、水素原子と等価である。ヒドロ基が付着している原子は、置換されていないとみなすことができる。
【００２４】
本明細書に記載した式（Ｉ）の化合物において、特に「Ｄ」又は「重水素」と指定された位置は、０．０１５％である重水素の天然の存在量よりも少なくとも３０００倍多い存在量の重水素（すなわち、重水素の少なくとも４５％の取り込み）を有することが理解されよう。他の実施態様では、式（Ｉ）の化合物は、少なくとも３５００（それぞれの指定された重水素原子での５２．５％の重水素取り込み）、少なくとも４０００（６０％の重水素取り込み）、少なくとも４５００（６７．５％の重水素取り込み）、少なくとも５０００（７５％の重水素）、少なくとも５５００（８２．５％の取り込み）、少なくとも６０００（９０％の重水素取り込み）、少なくとも６３３３．３（９５％の重水素取り込み）、少なくとも６４６６．７（９７％の重水素取り込み）、少なくとも６６００（９９％の重水素取り込み）、又は少なくとも６６３３．３（９９．５％の重水素取り込み）の、それぞれの指定された重水素原子についての同位体濃縮係数を有する。例えば、式（Ｉ）の化合物は、少なくとも６４６６．７（９７％の重水素取り込み）の、それぞれの指定された重水素原子についての同位体濃縮係数を有することができる。重水素取り込みは、１Ｈ  ＮＭＲ分光法などの当技術分野で公知の技術によって測定することができる。
【００２５】
用語「薬学的に許容し得る」は、ある物体（例えば、塩、剤形、又は賦形剤が、患者における使用に適していることを明記するために使用される。薬学的に許容し得る塩の例示的リストは、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｕｓｅ，Ｐ．Ｈ．Ｓｔａｈｌ  ａｎｄ  Ｃ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ，ｅｄｉｔｏｒｓ，Ｗｅｉｎｈｅｉｍ／Ｚｕｅｒｉｃｈ：Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ／ＶＨＣＡ，２００２において参照することができる。式（Ｉ）の化合物の適切な薬学的に許容し得る塩は、例えば、酸付加塩である。式（Ｉ）の化合物の酸付加塩は、該化合物を、当業者に公知の条件下で、適切な無機又は有機酸と接触させることによって形成することができる。酸付加塩は、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、及びリン酸からなる群から選択される無機酸を使用して形成することができる。酸付加塩はまた、トリフルオロ酢酸、クエン酸、マレイン酸、シュウ酸、酢酸、ギ酸、安息香酸、フマル酸、コハク酸、酒石酸、乳酸、ピルビン酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、及びパラ−トルエンスルホン酸からなる群から選択される有機酸を使用して形成することができる。
【００２６】
したがって、一実施態様では、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩が提供され、ここでは、該薬学的に許容し得る塩は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、トリフルオロ酢酸、クエン酸、マレイン酸、シュウ酸、酢酸、ギ酸、安息香酸、フマル酸、コハク酸、酒石酸、乳酸、ピルビン酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、又はパラ−トルエンスルホン酸塩である。一実施態様では、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩が提供され、ここでは、該薬学的に許容し得る塩は、メタンスルホン酸塩である。一実施態様では、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩が提供され、ここでは、該薬学的に許容し得る塩は、モノ−メタンスルホン酸塩、すなわち、式（Ｉ）の化合物−対−メタンスルホン酸の、化合物の化学量論は、１：１である。
【００２７】
一実施態様では、４，６−ジジュウテロ（Ｄｉｄｅｕｔｅｒｏ）−７−フルオロ−１−イソプロピル−３−メチル−８−［６−［３−（１−ピペリジル）プロポキシ］−３−ピリジル］イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オン、又は薬学的に許容し得るその塩が提供される。
【００２８】
一実施態様では、４，６−ジジュウテロ−７−フルオロ−１−イソプロピル−３−メチル−８−［６−［３−（１−ピペリジル）プロポキシ］−３−ピリジル］イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オンが提供される。
【００２９】
一実施態様では、４，６−ジジュウテロ−７−フルオロ−１−イソプロピル−３−メチル−８−［６−［３−（１−ピペリジル）プロポキシ］−３−ピリジル］イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オンの薬学的に許容し得る塩が提供される。
【００３０】
一実施態様では、４−ジュウテロ（Ｄｅｕｔｅｒｏ）−７−フルオロ−１−イソプロピル−３−メチル−８−［６−［３−（１−ピペリジル）プロポキシ］−３−ピリジル］イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オン、又は薬学的に許容し得るその塩が提供される。
【００３１】
一実施態様では、４−ジュウテロ−７−フルオロ−１−イソプロピル−３−メチル−８−［６−［３−（１−ピペリジル）プロポキシ］−３−ピリジル］イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オンが提供される。
【００３２】
一実施態様では、４−ジュウテロ−７−フルオロ−１−イソプロピル−３−メチル−８−［６−［３−（１−ピペリジル）プロポキシ］−３−ピリジル］イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オンの薬学的に許容し得る塩が提供される。
【００３３】
本明細書に記載する化合物及び塩は、溶媒和形態及び非溶媒和形態で存在することができる。例えば、溶媒和形態は、水和形態、例えば、半水和物、一水和物、二水和物、三水和物、又はその代替数量の水和物であり得る。本発明は、すべてのこうした溶媒和及び非溶媒和形態の式（Ｉ）の化合物を、特にこうした形態が、例えば本明細書に記載する試験を使用して測定された場合に、ＡＴＭキナーゼ阻害活性を有する限りは包含する。
【００３４】
本明細書に記載する化合物及び塩の原子は、その同位体として存在することができる。本発明は、ある原子が１以上のその同位体によって置き換えられたすべての式（Ｉ）の化合物（例えば、１以上の炭素原子が１１Ｃ若しくは１３Ｃ炭素同位体である、又は、１以上の水素原子が２Ｈ若しくは３Ｈ同位体である、式（Ｉ）の化合物）を包含する。
【００３５】
本明細書に記載する化合物及び塩は、互変異性体の混合物として存在することができる。「互変異性体」は、水素原子の転位に起因して平衡状態で存在する構造異性体である。本発明は、式（Ｉ）の化合物のすべての互変異性体を、特にこうした互変異性体がＡＴＭキナーゼ阻害活性を有する限りは含む。
【００３６】
本明細書に記載する化合物及び塩は、結晶性であり得、また、１以上の結晶形を呈することができる。本発明は、ＡＴＭキナーゼ阻害活性を有する、あらゆる結晶又は非結晶形態の式（Ｉ）の化合物、又はこうした形態の混合物を包含する。
【００３７】
結晶性材料を、Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、熱重量分析（ＴＧＡ）、フーリエ変換赤外拡散反射分光法（Ｄｉｆｆｕｓｅ  Ｒｅｆｌｅｃｔａｎｃｅ  Ｉｎｆｒａｒｅｄ  Ｆｏｕｒｉｅｒ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍ）（ＤＲＩＦＴ）分光法、近赤外線（ＮＩＲ）分光法、溶液及び／又は固体状態の核磁気共鳴分光法などの、従来の技術を使用して特徴付けることができることが、一般に知られている。結晶性材料の含水量は、カールフィッシャー分析によって決定することができる。
【００３８】
そのＡＴＭキナーゼ阻害活性の結果として、式（Ｉ）の化合物及び薬学的に許容し得るその塩は、治療法において、例えば、癌を含めた、ＡＴＭキナーゼによって少なくともある程度介在される疾患又は医学的状態の治療において有用であることが期待される。
【００３９】
「癌」が言及される場合、これには、非転移性癌と転移性癌との両方が含まれ、その結果、癌を治療することは、原発腫瘍と腫瘍転移との両方の治療を含む。
【００４０】
「ＡＴＭキナーゼ阻害活性」は、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩の存在に対する直接的又は間接的応答としての、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩の非存在下でのＡＴＭキナーゼの活性に対するＡＴＭキナーゼの活性の低下を指す。こうした活性の低下は、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩と、ＡＴＭキナーゼとの直接的相互作用が原因、又は、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩と、ひいてはＡＴＭキナーゼ活性に影響を与える１以上の他の因子との相互作用が原因であり得る。例えば、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩は、ＡＴＭキナーゼに直接的に結合することによって、又は別の因子にＡＴＭキナーゼ活性を（直接的又は間接的に）低下させることによって、又は細胞又は生物内に存在するＡＴＭキナーゼの量を（直接的又は間接的に）低下させることによって、ＡＴＭキナーゼを低下させることができる。
【００４１】
用語「治療法」は、その症状の１つ、いくつか、又はすべてを完全に又は部分的に緩和するために、又は根底にある病的状態を治す若しくは相殺するために疾患に対処するという、その通常の意味を有するものとする。用語「治療法」には、それに反する特定の指示が存在しない限り、「予防法」も含まれる。用語「治療的」及び「治療的に」は、それに対応する方式で解釈されるべきである。
【００４２】
用語「予防法」は、その通常の意味を有するものとし、疾患の発症を予防するための一次予防法、及び、疾患が既に発症しており、患者が疾患の増悪若しくは悪化又は疾患の新しい症状の発症から一時的又は永続的に保護される二次予防法が含まれる。
【００４３】
用語「治療」は、「治療法」と同義的に使用される。同様に、用語「治療する」は、「治療法を適用すること」（ここでは、「治療法」は、本明細書に定義した通りである）とみなすことができる。
【００４４】
一実施態様では、治療法における使用のための、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩が提供される。
【００４５】
一実施態様では、医薬品の製造のための、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩の使用が提供される。
【００４６】
一実施態様では、ＡＴＭキナーゼによって介在される疾患の治療における使用のための、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩が提供される。一実施態様では、ＡＴＭキナーゼによって介在される前記疾患は、癌である。一実施態様では、前記癌は、大腸癌、膠芽腫、胃癌、卵巣癌、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、慢性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、頭頸部扁平上皮癌、乳癌、肝細胞癌、小細胞肺癌、及び非小細胞肺癌からなる群から選択される。一実施態様では、前記癌は、大腸癌、膠芽腫、胃癌、卵巣癌、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、慢性リンパ性白血病、頭頸部扁平上皮癌、及び肺癌からなる群から選択される。一実施態様では、前記癌は、大腸癌である。
【００４７】
一実施態様では、癌の治療における使用のための、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩が提供される。
【００４８】
一実施態様では、ハンチントン病の治療における使用のための、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩が提供される。
【００４９】
一実施態様では、神経保護剤としての使用のための、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩が提供される。
【００５０】
「神経保護剤」は、神経細胞の構造及び／又は機能の相対的保持を助ける薬剤である。
【００５１】
一実施態様では、ＡＴＭキナーゼによって介在される疾患の治療のための医薬品の製造のための、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩の使用が提供される。一実施態様では、ＡＴＭキナーゼによって介在される前記疾患は、癌である。一実施態様では、前記癌は、大腸癌、膠芽腫、胃癌、卵巣癌、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、慢性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、頭頸部扁平上皮癌、乳癌、肝細胞癌、小細胞肺癌、及び非小細胞肺癌からなる群から選択される。一実施態様では、前記癌は、大腸癌、膠芽腫、胃癌、卵巣癌、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、慢性リンパ性白血病、頭頸部扁平上皮癌、及び肺癌からなる群から選択される。一実施態様では、前記癌は、大腸癌である。
【００５２】
一実施態様では、癌の治療のための医薬品の製造のための、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩の使用が提供される。
【００５３】
一実施態様では、ハンチントン病の治療のための医薬品の製造のための、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩の使用が提供される。
【００５４】
一実施態様では、神経保護剤としての使用のための医薬品の製造のための、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩の使用が提供される。
【００５５】
一実施態様では、こうした治療を必要とする温血動物において、ＡＴＭキナーゼの阻害が有益である疾患を治療するための方法であって、治療有効量の式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩を、前記温血動物に投与することを含む方法が提供される。一実施態様では、前記疾患は、癌である。一実施態様では、前記癌は、大腸癌、膠芽腫、胃癌、卵巣癌、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、慢性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、頭頸部扁平上皮癌、乳癌、肝細胞癌、小細胞肺癌、及び非小細胞肺癌からなる群から選択される。一実施態様では、前記癌は、大腸癌、膠芽腫、胃癌、卵巣癌、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、慢性リンパ性白血病、頭頸部扁平上皮癌、及び肺癌からなる群から選択される。一実施態様では、前記癌は、大腸癌である。
【００５６】
あらゆる実施態様では、ＡＴＭキナーゼの阻害が有益である疾患は、ハンチントン病であり得る。
【００５７】
一実施態様では、こうした治療を必要とする温血動物における神経細胞の構造及び／又は機能の相対的保持を助けるための治療の方法であって、治療有効量の式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩を、前記温血動物に投与することを含む方法が提供される。
【００５８】
用語「治療有効量」は、対象において「治療法」を提供する、又は対象における疾患又は障害を「治療する」のに有効である、本明細書の実施態様のいずれかに記載した通りの式（Ｉ）の化合物の量を指す。癌の場合では、治療有効量は、上の「治療法」、「治療」、及び「予防法」の定義において記載した通りの、対象における観察可能又は測定可能な変化のいずれかを引き起こすことができる。例えば、有効量は、癌若しくは腫瘍細胞の数を減少させる；癌全体の大きさを低下させる；例えば軟部組織及び骨を含めた末梢器官への腫瘍細胞浸潤を抑制又は停止させる；腫瘍転移を抑制又は停止させる；腫瘍成長を抑制又は停止させる；癌に伴われる１以上の症状をある程度緩和する；罹患率及び死亡率を低下させる；生活の質を向上させることができる；又はこうした効果の組み合わせである。有効量は、ＡＴＭキナーゼ活性の阻害に応答して、疾患の症状を軽減するのに十分な量であり得る。癌治療法については、インビボの有効性は、例えば、生存期間、無増悪期間（ｔｉｍｅ  ｔｏ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ）（ＴＴＰ）、奏効率（ＲＲ）、奏効期間、及び／又は生活の質を評価することによって測定することができる。当業者によって認識される通り、有効量は、投与経路、賦形剤使用量、及び他の薬剤との同時使用量に応じて変動し得る。例えば、組み合わせ治療法が使用される場合、本明細書に記載する式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得る塩の量と、医薬として活性な他の薬剤の量は、合わせられた場合に、動物の患者における標的とされる障害を治療するのに協働的に有効である。この状況では、合わせられた量は、これらが、合わせられた場合に、上に記載した通りにＡＴＭ活性の阻害に応答して疾患の症状を軽減するのに十分であるならば、「治療有効量」である。一般的に、こうした量は、例えば、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩について本明細書に記載する投薬量範囲、及び医薬として活性な他の化合物の認可された又は他に公表された投薬量範囲から開始することによって、当業者によって決定することができる。
【００５９】
「温血動物」には、例えば、ヒトが含まれる。
【００６０】
一実施態様では、こうした治療を必要とする温血動物における癌を治療するための方法であって、治療有効量の式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩を、前記温血動物に投与することを含む方法が提供される。一実施態様では、前記癌は、大腸癌、膠芽腫、胃癌、卵巣癌、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、慢性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、頭頸部扁平上皮癌、乳癌、肝細胞癌、小細胞肺癌、及び非小細胞肺癌からなる群から選択される。一実施態様では、前記癌は、大腸癌、膠芽腫、胃癌、卵巣癌、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、慢性リンパ性白血病、頭頸部扁平上皮癌、及び肺癌からなる群から選択される。一実施態様では、前記癌は、大腸癌である。
【００６１】
一般的な意味で癌が言及される、あらゆる実施態様では、前記癌は、大腸癌、膠芽腫、胃癌、卵巣癌、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、慢性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、頭頸部扁平上皮癌、乳癌、肝細胞癌、小細胞肺癌、及び  非小細胞肺癌からなる群から選択され得る。前記癌はまた、大腸癌、膠芽腫、胃癌、卵巣癌、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、慢性リンパ性白血病、頭頸部扁平上皮癌、及び肺癌からなる群から選択され得る。
【００６２】
一般的な意味で癌が言及される、あらゆる実施態様では、次の実施態様を適用することができる：
【００６３】
一実施態様では、癌は、大腸癌である。
【００６４】
一実施態様では、癌は、膠芽腫である。
【００６５】
一実施態様では、癌は、胃癌である。
【００６６】
一実施態様では、癌は、食道癌である。
【００６７】
一実施態様では、癌は、卵巣癌である。
【００６８】
一実施態様では、癌は、子宮内膜癌である。
【００６９】
一実施態様では、癌は、子宮頸癌である。
【００７０】
一実施態様では、癌は、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫である。
【００７１】
一実施態様では、癌は、慢性リンパ性白血病である。
【００７２】
一実施態様では、癌は、急性骨髄性白血病である。
【００７３】
一実施態様では、癌は、頭頸部扁平上皮癌である。
【００７４】
一実施態様では、癌は、乳癌である。一実施態様では、癌は、トリプルネガティブ乳癌である。
【００７５】
「トリプルネガティブ乳癌」は、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、及びＨｅｒ２／ｎｅｕに対する遺伝子を発現しない、いずれかの乳癌である。
【００７６】
一実施態様では、癌は、肝細胞癌である。
【００７７】
一実施態様では、癌は、肺癌である。一実施態様では、肺癌は、小細胞肺癌である。一実施態様では、肺癌は、非小細胞肺癌である。
【００７８】
一実施態様では、癌は、転移性癌である。一実施態様では、転移性癌は、中枢神経系の転移を含む。一実施態様では、中枢神経系の転移は、脳転移を含む。一実施態様では、中枢神経系の転移は、軟膜髄膜転移を含む。
【００７９】
「軟膜髄膜転移」は、癌が髄膜、すなわち脳及び脊髄を覆う組織の層に広がる場合に起こる。転移は、血液を通じて髄膜に広がる可能性もあるし、髄膜を流れる脳脊髄液（ＣＳＦ）によって運ばれる脳転移から移動する可能性もある。一実施態様では、癌は、非転移性癌である。
【００８０】
本明細書に記載する抗癌治療は、単独の治療法として有用であり得るし、式（Ｉ）の化合物の投与に加えて、従来の手術、放射線療法、若しくは化学療法；又はこうした追加の治療法の組み合わせを含むこともできる。こうした従来の手術、放射線療法、又は化学療法は、式（Ｉ）の化合物での治療と同時に、連続して、又は別に施すことができる。
【００８１】
放射線療法には、１以上の次のカテゴリーの治療法が含まれ得る：
ｉ．電磁放射線を使用する外部放射線療法、及び電磁放射線を使用する術中放射線療法；
ｉｉ．内部放射線療法又は密封小線源療法；（組織内放射線療法又は腔内放射線療法が含まれる）；又は
ｉｉｉ．全身放射線療法（限定はされないが、ヨウ素１３１及びストロンチウム８９が含まれる）。
【００８２】
したがって、一実施態様では、癌の治療における使用のための、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩と、放射線療法が提供される。一実施態様では、癌は、膠芽腫である。一実施態様では、癌は、転移性癌である。一実施態様では、転移性癌は、中枢神経系の転移を含む。一実施態様では、中枢神経系の転移は、脳転移を含む。一実施態様では、中枢神経系の転移は、軟膜髄膜転移を含む。
【００８３】
一実施態様では、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩が放射線療法と組み合わせて投与される、癌の治療における使用のための、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩が提供される。一実施態様では、癌は、膠芽腫である。一実施態様では、癌は、転移性癌である。一実施態様では、転移性癌は、中枢神経系の転移を含む。一実施態様では、中枢神経系の転移は、脳転移を含む。一実施態様では、中枢神経系の転移は、軟膜髄膜転移を含む。
【００８４】
一実施態様では、癌の同時、個別（ｓｅｐａｒａｔｅ）、又は連続治療における使用のための、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩と、放射線療法が提供される。一実施態様では、癌は、膠芽腫、肺癌（例えば小細胞肺癌又は非小細胞肺癌）、乳癌（例えばトリプルネガティブ乳癌）、頭頸部扁平上皮癌、食道癌、子宮頸癌、及び子宮内膜癌から選択される。一実施態様では、癌は、膠芽腫である。一実施態様では、癌は、転移性癌である。一実施態様では、転移性癌は、中枢神経系の転移を含む。一実施態様では、中枢神経系の転移は、脳転移を含む。一実施態様では、中枢神経系の転移は、軟膜髄膜転移を含む。
【００８５】
一実施態様では、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩が、放射線療法と同時に、別に、又は連続して投与される、癌の治療における使用のための、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩が提供される。一実施態様では、癌は、膠芽腫、肺癌（例えば小細胞肺癌又は非小細胞肺癌）、乳癌（例えばトリプルネガティブ乳癌）、頭頸部扁平上皮癌、食道癌、子宮頸癌、及び子宮内膜癌から選択される。一実施態様では、癌は、膠芽腫である。一実施態様では、癌は、転移性癌である。一実施態様では、転移性癌は、中枢神経系の転移を含む。一実施態様では、中枢神経系の転移は、脳転移を含む。一実施態様では、中枢神経系の転移は、軟膜髄膜転移を含む。
【００８６】
一実施態様では、こうした治療を必要とする温血動物における癌を治療する方法であって、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩と、放射線療法とを、前記温血動物に施すことを含む方法が提供される。一実施態様では、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩と、放射線療法は、抗癌効果をもたらすのに協働的に有効である。一実施態様では、癌は、膠芽腫、肺癌（例えば小細胞肺癌又は非小細胞肺癌）、乳癌（例えばトリプルネガティブ乳癌）、頭頸部扁平上皮癌、食道癌、子宮頸癌、及び子宮内膜癌から選択される。一実施態様では、癌は、膠芽腫である。一実施態様では、癌は、転移性癌である。一実施態様では、転移性癌は、中枢神経系の転移を含む。一実施態様では、中枢神経系の転移は、脳転移を含む。一実施態様では、中枢神経系の転移は、軟膜髄膜転移を含む。
【００８７】
一実施態様では、こうした治療を必要とする温血動物における癌を治療する方法であって、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩を、前記温血動物に投与することと、放射線療法を同時に、別に、又は連続して投与することを含む方法が提供される。一実施態様では、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩と、放射線療法は、抗癌効果をもたらすのに協働的に有効である。一実施態様では、癌は、膠芽腫である。一実施態様では、癌は、転移性癌である。一実施態様では、転移性癌は、中枢神経系の転移を含む。一実施態様では、中枢神経系の転移は、脳転移を含む。一実施態様では、中枢神経系の転移は、軟膜髄膜転移を含む。
【００８８】
あらゆる実施態様では、放射線療法は、上の項目（ｉ）〜（ｉｉｉ）で列挙した、１以上のカテゴリーの放射線療法からなる群から選択される。
【００８９】
化学療法は、次のカテゴリーの抗腫瘍物質のうちの１つ以上を含むことができる：
ｉ．抗悪性腫瘍薬及びその組み合わせ、例えばＤＮＡアルキル化剤（例えば、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン、シクロホスファミド、ナイトロジェンマスタード（イホスファミド、ベンダムスチン、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファンのような）、テモゾラミド（ｔｅｍｏｚｏｌａｍｉｄｅ）、及びニトロソウレア（カルムスチンのような））；代謝拮抗剤（例えば、ゲムシタビン及び葉酸代謝拮抗剤、例えばフルオロピリミジン（５−フルオロウラシル及びテガフールのような）、ラルチトレキセド、メトトレキサート、シトシンアラビノシド、及びヒドロキシ尿素）；抗腫瘍抗生物質（例えば、アントラサイクリン（アドリアマイシン、ブレオマイシン、ドキソルビシン、リポソームドキソルビシン、ピラルビシン、ダウノマイシン、バルルビシン、エピルビシン、イダルビシン、マイトマイシン−Ｃ、ダクチノマイシン、アムルビシン、及びミスラマイシンのような））；有糸分裂阻害剤（例えば、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、及びビノレルビンのような）、並びにタキソイド（タキソール及びタキソテールのような）、並びにポロキナーゼ（ｐｏｌｏｋｉｎａｓｅ）阻害剤）；並びにトポイソメラーゼ阻害剤（例えば、エピポドフィロトキシン（エトポシド及びテニポシドのような）、アムサクリン、イリノテカン、トポテカン、及びカンプトテシン）；ＤＮＡ修復機構の阻害剤、例えばＣＨＫキナーゼ；ＤＮＡ依存性プロテインキナーゼ阻害剤；ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼの阻害剤（オラパリブを含めたＰＡＲＰ阻害剤）；並びにＨｓｐ９０阻害剤、例えばタネスピマイシン及びレタスピマイシン、ＡＴＲキナーゼの阻害剤（ＡＺＤ６７３８など）；並びにＷＥＥ１キナーゼの阻害剤（ＡＺＤ１７７５／ＭＫ−１７７５など）；
ｉｉ．抗血管新生薬、例えば血管内皮増殖因子の効果を抑制するもの、例えば抗−血管内皮細胞増殖因子抗体ベバシズマブ、及び例えばＶＥＧＦ受容体チロシンキナーゼ阻害剤、例えばバンデタニブ（ＺＤ６４７４）、ソラフェニブ、バタラニブ（ＰＴＫ７８７）、スニチニブ（ＳＵ１１２４８）、アキシチニブ（ＡＧ−０１３７３６）、パゾパニブ（ＧＷ  ７８６０３４）、及びセジラニブ（ＡＺＤ２１７１）；国際特許出願・国際公開第９７／２２５９６号パンフレット、同第９７／３００３５号パンフレット、同第９７／３２８５６号パンフレット、及び同第９８／１３３５４号パンフレットに開示されているものなどの化合物；並びに他の機構によって働く化合物（例えばリノミド（ｌｉｎｏｍｉｄｅ）、インテグリンαｖβ３機能の阻害剤、及びアンジオスタチン）、又はアンジオポエチン及びその受容体（Ｔｉｅ−１及びＴｉｅ−２）の阻害剤、ＰＬＧＦの阻害剤、δ様リガンド（ｄｅｌｔａ−ｌｉｋｅ  ｌｉｇａｎｄ）（ＤＬＬ−４）の阻害剤；
ｉｉｉ．免疫療法手法（例えば、患者腫瘍細胞の免疫原性を増大させるためのエクスビボ及びインビボ手法が含まれる）、例えばインターロイキン２、インターロイキン４、又は顆粒球マクロファージコロニー刺激因子などのサイトカインでの遺伝子導入；Ｔ細胞アネルギー又は制御性Ｔ細胞機能を低下させるための手法；腫瘍に対するＴ細胞応答を増強する手法、例えば、ＣＴＬＡ４（例えばイピリムマブ及びトレメリムマブ）、Ｂ７Ｈ１、ＰＤ−１（例えばＢＭＳ−９３６５５８又はＡＭＰ−５１４）、ＰＤ−Ｌ１（例えばＭＥＤＩ４７３６）に対するブロッキング抗体、及びＣＤ１３７に対するアゴニスト抗体；サイトカイン導入樹状細胞などの、遺伝子導入された免疫細胞を使用する手法；サイトカイン導入腫瘍細胞株を使用する手法、腫瘍関連抗原に対する抗体、標的細胞型を除去する抗体（例えば、非結合抗ＣＤ２０抗体、例えばリツキシマブ、放射標識された抗ＣＤ２０抗体ベキサール及びゼヴァリン、及び抗ＣＤ５４抗体キャンパス）を使用する手法；抗イディオタイプ抗体を使用する手法；ナチュラルキラー細胞機能を増強する手法；及び抗体−毒素複合体を利用する手法（例えば抗ＣＤ３３抗体マイロターグ）；モキセツムマブシュードトクス（ｍｏｘｅｔｕｍｕｍａｂ  ｐａｓｕｄｏｔｏｘ）などの免疫毒素；ｔｏｌｌ様受容体７又はｔｏｌｌ様受容体９のアゴニスト；
ｉｖ．ロイコボリンなどの有効性増強剤。
【００９０】
したがって、一実施態様では、癌の治療における使用のための、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩と、少なくとも１種の追加の抗腫瘍物質が提供される。一実施態様では、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩が、追加の抗腫瘍物質と組み合わせて投与される、癌の治療における使用のための、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩が提供される。一実施態様では、１種の追加の抗腫瘍物質が存在する。一実施態様では、２種の追加の抗腫瘍物質が存在する。一実施態様では、３種以上の追加の抗腫瘍物質が存在する。
【００９１】
一実施態様では、癌の同時、個別、又は連続治療における使用のための、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩と、少なくとも１種の追加の抗腫瘍物質が提供される。一実施態様では、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩が、追加の抗腫瘍物質と同時に、別に、又は連続して投与される、癌の治療における使用のための、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩が提供される。
【００９２】
一実施態様では、こうした治療を必要とする温血動物における癌を治療する方法であって、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩と、追加の抗腫瘍物質とを、前記温血動物に投与すること（ここでは、一定量の式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩と、追加の抗腫瘍物質は、抗癌効果をもたらすのに協働的に有効である）を含む方法が提供される。
【００９３】
一実施態様では、こうした治療を必要とする温血動物における癌を治療する方法であって、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩を、前記温血動物に投与することと、少なくとも１種の追加の抗腫瘍物質を前記温血動物に同時に、別に、又は連続して投与することと（ここでは、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩と、追加の抗腫瘍物質は、抗癌効果をもたらすのに協働的に有効である）を含む方法が提供される。
【００９４】
あらゆる実施態様では、追加の抗腫瘍物質は、上の項目（ｉ）〜（ｉｖ）で列挙した、１以上の抗腫瘍物質からなる群から選択される。
【００９５】
一実施態様では、癌の治療における使用のための、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩と、少なくとも１種の抗悪性腫瘍薬が提供される。一実施態様では、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩が、少なくとも１種の抗悪性腫瘍薬と組み合わせて投与される、癌の治療における使用のための、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩が提供される。一実施態様では、抗悪性腫瘍薬は、上の項目（ｉ）内の抗悪性腫瘍薬のリストから選択される。
【００９６】
一実施態様では、癌の同時、個別、又は連続治療における使用のための、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩と、少なくとも１種の抗悪性腫瘍薬が提供される。一実施態様では、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩が、少なくとも１種の抗悪性腫瘍薬と同時に、別に、又は連続して投与される、癌の治療における使用のための、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩が提供される。一実施態様では、抗悪性腫瘍薬は、上の項目（ｉ）内の抗悪性腫瘍薬のリストから選択される。
【００９７】
一実施態様では、癌の治療における使用のための、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩と、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン、バルルビシン、イダルビシン、ドキソルビシン、ピラルビシン、イリノテカン、トポテカン、アムルビシン、エピルビシン、エトポシド、マイトマイシン、ベンダムスチン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イホスファミド、カルムスチン、メルファラン、ブレオマイシン、オラパリブ、ＭＥＤＩ４７３６、ＡＺＤ１７７５、及びＡＺＤ６７３８からなる群から選択される少なくとも１種の追加の抗腫瘍物質が提供される。
【００９８】
一実施態様では、癌の治療における使用のための、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩と、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン、ドキソルビシン、ピラルビシン、イリノテカン、トポテカン、アムルビシン、エピルビシン、エトポシド、マイトマイシン、ベンダムスチンベンダムスチン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イホスファミド、カルムスチン、メルファラン、ブレオマイシン、オラパリブ、ＡＺＤ１７７５、及びＡＺＤ６７３８からなる群から選択される少なくとも１種の追加の抗腫瘍物質が提供される。
【００９９】
一実施態様では、癌の治療における使用のための、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩が提供され、ここでは、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩は、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン、バルルビシン、イダルビシン、ドキソルビシン、ピラルビシン、イリノテカン、トポテカン、アムルビシン、エピルビシン、エトポシド、マイトマイシン、ベンダムスチン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イホスファミド、カルムスチン、メルファラン、ブレオマイシン、オラパリブ、ＭＥＤＩ４７３６、ＡＺＤ１７７５、及びＡＺＤ６７３８からなる群から選択される少なくとも１種の追加の抗腫瘍物質と組み合わせて投与される。
【０１００】
一実施態様では、癌の治療における使用のための、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩と、ドキソルビシン、イリノテカン、トポテカン、エトポシド、マイトマイシン、ベンダムスチン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イホスファミド、カルムスチン、メルファラン、ブレオマイシン、及びオラパリブからなる群から選択される少なくとも１種の追加の抗腫瘍物質が提供される。
【０１０１】
一実施態様では、癌の治療における使用のための、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩が提供され、ここでは、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩は、ドキソルビシン、イリノテカン、トポテカン、エトポシド、マイトマイシン、ベンダムスチン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イホスファミド、カルムスチン、メルファラン、ブレオマイシン、及びオラパリブからなる群から選択される少なくとも１種の追加の抗腫瘍物質と組み合わせて投与される。
【０１０２】
一実施態様では、癌の治療における使用のための、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩と、ドキソルビシン、イリノテカン、トポテカン、エトポシド、マイトマイシン、ベンダムスチン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イホスファミド、カルムスチン、メルファラン、及びブレオマイシンからなる群から選択される少なくとも１種の追加の抗腫瘍物質が提供される。
【０１０３】
一実施態様では、癌の治療における使用のための、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩が提供され、ここでは、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩は、ドキソルビシン、イリノテカン、トポテカン、エトポシド、マイトマイシン、ベンダムスチン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イホスファミド、カルムスチン、メルファラン、及びブレオマイシンからなる群から選択される少なくとも１種の追加の抗腫瘍物質と組み合わせて投与される。
【０１０４】
一実施態様では、癌の治療における使用のための、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩が提供され、ここでは、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩は、ドキソルビシン、ピラルビシン、アムルビシン、及びエピルビシンからなる群から選択される少なくとも１種の追加の抗腫瘍物質と組み合わせて投与される。一実施態様では、癌は、急性骨髄性白血病である。一実施態様では、癌は、乳癌（例えばトリプルネガティブ乳癌）である。一実施態様では、癌は、肝細胞癌である。
【０１０５】
一実施態様では、癌の治療における使用のための、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩と、イリノテカンが提供される。一実施態様では、癌の治療における使用のための、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩が提供され、ここでは、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩は、イリノテカンと組み合わせて投与される。一実施態様では、癌は、大腸癌である。
【０１０６】
一実施態様では、癌の治療における使用のための、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩と、ＦＯＬＦＩＲＩが提供される。一実施態様では、癌の治療における使用のための、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩が提供され、ここでは、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩は、ＦＯＬＦＩＲＩと組み合わせて投与される。一実施態様では、癌は、大腸癌である。
【０１０７】
ＦＯＬＦＩＲＩは、ロイコボリンと、５−フルオロウラシルと、イリノテカンとの組み合わせを含む投薬計画である。
【０１０８】
一実施態様では、癌の治療における使用のための、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩が提供され、ここでは、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩は、オラパリブと組み合わせて投与される。一実施態様では、癌は、胃癌である。
【０１０９】
一実施態様では、癌の治療における使用のための、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩が提供され、ここでは、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩は、トポテカンと組み合わせて投与される。一実施態様では、癌は、小細胞肺癌である。一実施態様では、癌の治療における使用のための、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩が提供され、ここでは、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩は、免疫療法と組み合わせて投与される。一実施態様では、免疫療法は、上の項目（ｉｉｉ）に列挙した１以上の薬剤である。一実施態様では、免疫療法は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体（例えばＭＥＤＩ４７３６）である。
【０１１０】
さらなる実施態様によれば、以下を含むキットが提供される：
ａ）第１の単位剤形中の式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩；
ｂ）さらなる単位剤形中のさらなる追加の抗腫瘍物質；
ｃ）前記第１の単位剤形及びさらなる単位剤形を含有するための容器手段；及び任意選択で
ｄ）使用のための説明書。一実施態様では、抗腫瘍物質は、抗悪性腫瘍薬を含む。
【０１１１】
抗悪性腫瘍薬が言及される、あらゆる実施態様では、抗悪性腫瘍薬は、上の項目（ｉ）で列挙した１以上の薬剤である。
【０１１２】
式（Ｉ）の化合物及び薬学的に許容し得るその塩は、薬学的に許容し得る１以上の賦形剤を含む医薬組成物として投与することができる。
【０１１３】
したがって、一実施態様では、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩と、薬学的に許容し得る少なくとも１種の賦形剤とを含む医薬組成物が提供される。
【０１１４】
ある特定の組成物への包含のために選択される賦形剤は、投与の様式及び提供される組成物の形態などの因子に依存することとなる。薬学的に許容し得る適切な賦形剤は、当業者に周知であり、例えば、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，Ｓｉｘｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ，ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ  Ｒｏｗｅ，Ｒａｙ  Ｃ；Ｓｈｅｓｋｅｙ，Ｐａｕｌ  Ｊ；Ｑｕｉｎｎ，Ｍａｒｉａｎに記載されている。薬学的に許容し得る賦形剤は、例えば、アジュバント、希釈剤、担体、安定剤、着香料、着色料、充填剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、流動促進剤（ｇｌｉｄａｎｔ）、増粘剤、及びコーティング剤として機能することができる。当業者は、薬学的に許容し得るある種の賦形剤が、どれほど多くの賦形剤が組成物中に存在するか、また、他のどの賦形剤が組成物中に存在するかに応じて、２以上の機能を果たすことができる、また、他の機能を果たすことができることを認識しているであろう。
【０１１５】
該医薬組成物は、経口使用のために（例えば、錠剤、ロゼンジ、ハード若しくはソフトカプセル、水性若しくは油性の懸濁剤、乳剤、分散性の散剤又は顆粒剤、シロップ又はエリキシルとして）、局所使用のために（例えば、クリーム、軟膏、ゲル、又は水性若しくは油性の液剤又は懸濁剤として）、吸入による投与のために（例えば微粉化された粉末又は液体エアロゾルとして）、吸入による投与のために（例えば微粉化された粉末として）、又は非経口投与のために（例えば、静脈内、皮下、筋肉内、又は筋肉内投薬のための、無菌の水性若しくは油性の溶液として）、又は直腸内投薬のための座剤として、適した形態であり得る。該組成物は、当技術分野で周知の従来の手順によって得ることができる。経口使用を目的とする組成物は、追加の成分、例えば、１以上の着色剤、甘味料、着香剤、及び／又は保存剤を含有することができる。
【０１１６】
式（Ｉ）の化合物は、通常、２．５〜５０００ｍｇ／ｍ２（動物の体面積）、又は約０．０５〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲内の単位用量として、温血動物に投与されることとなり、これは、通常、治療有効用量を提供する。錠剤又はカプセル剤などの単位剤形は、通常、例えば０．１〜２５０ｍｇの活性成分を含有することとなる。１日量は、必然的に、治療される受容者、個々の投与経路、同時に施されるいずれかの治療法、及び治療される病気の重症度に応じて変動することとなる。したがって、いずれかの特定の患者を治療している医師は、最適投薬量を決定することができる。
【０１１７】
本明細書に記載する医薬組成物は、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩を含み、したがって、治療法において有用であることが期待される。
【０１１８】
したがって、一実施態様では、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩と、薬学的に許容し得る少なくとも１種の賦形剤とを含む、治療法における使用のための医薬組成物が提供される。
【０１１９】
一実施態様では、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩と、薬学的に許容し得る少なくとも１種の賦形剤とを含む、ＡＴＭキナーゼの阻害が有益である疾患の治療における使用のための医薬組成物が提供される。
【０１２０】
一実施態様では、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩と、薬学的に許容し得る少なくとも１種の賦形剤とを含む、癌の治療における使用のための医薬組成物が提供される。
【０１２１】
一実施態様では、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩と、薬学的に許容し得る少なくとも１種の賦形剤とを含む、ＡＴＭキナーゼの阻害が有益である癌の治療における使用のための医薬組成物が提供される。
【０１２２】
一実施態様では、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩と、薬学的に許容し得る少なくとも１種の賦形剤とを含む、大腸癌、膠芽腫、胃癌、卵巣癌、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、慢性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、頭頸部扁平上皮癌、乳癌、肝細胞癌、小細胞肺癌、又は非小細胞肺癌の治療における使用のための医薬組成物が提供される。
【実施例】
【０１２３】
本発明の種々の実施態様を、以下の実施例によって例示する。本発明は、実施例に限定されると解釈されるべきではない。実施例の調製中、一般に：
ｉ．操作は、他に記述がない限り、周囲温度で、すなわち約１７から３０℃の範囲内で、かつ、窒素などの不活性気体の雰囲気中で実施し；
ｉｉ．蒸発は、真空中で、回転蒸発によって又はＧｅｎｅｖａｃ装置を利用して実施し、濾過による残留固体の除去後に精製手順を実施し；
ｉｉｉ．フラッシュクロマトグラフィー精製は、充填されたＭｅｒｃｋ順相Ｓｉ６０シリカカートリッジ（粒度分布：１５〜４０又は４０〜６３μｍ）（Ｍｅｒｃｋ，Ｄａｒｍｓｔａｄ，Ｇｅｒｍａｎｙから入手）、ｓｉｌｉｃｙｃｌｅシリカカートリッジ、又はｇｒａｃｅｒｅｓｏｌｖシリカカートリッジを使用して、自動Ａｒｍｅｎ  Ｇｌｉｄｅｒ  Ｆｌａｓｈ：Ｓｐｏｔ  ＩＩ  Ｕｌｔｉｍａｔｅ（Ａｒｍｅｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ，Ｓａｉｎｔ−Ａｖｅ，Ｆｒａｎｃｅ）又は自動Ｐｒｅｓｅａｒｃｈ  ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ  ｃｏｍｐａｎｉｏｎで実施し；
ｉｖ．分取クロマトグラフィーは、溶出剤として、水（１％アンモニアを含有）とアセトニトリルとの漸減的極性混合物、又は水（０．１％ギ酸を含有）とアセトニトリルとの漸減的極性混合物を使用して、ＺＭＤ又はＺＱ  ＥＳＣｉ質量分析計及びＷａｔｅｒｓ  Ｘ−Ｔｅｒｒａ又はＷａｔｅｒｓ  Ｘ−Ｂｒｉｄｇｅ又はＷａｔｅｒｓ  ＳｕｎＦｉｒｅ逆相カラム（Ｃ−１８、５ミクロンのシリカ、直径１９ｍｍ又は５０ｍｍ、長さ１００ｍｍ、４０ｍＬ／分の流速）を備え付けた、Ｗａｔｅｒｓ装置（６００／２７００又は２５２５）で実施し；
ｖ．収率は、存在する場合、必ずしも、達成可能な最大値ではなく；
ｖｉ．式（Ｉ）の最終生成物の構造は、核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法によって確認され、ＮＭＲ化学シフト値は、δスケールで測定した。プロトン磁気共鳴スペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ  ａｄｖａｎｃｅ  ７００（７００ＭＨｚ）、Ｂｒｕｋｅｒ  Ａｖａｎｃｅ  ５００（５００ＭＨｚ）、Ｂｒｕｋｅｒ  ４００（４００ＭＨｚ）、又はＢｒｕｋｅｒ  ３００（３００ＭＨｚ）装置を使用して決定し；１９Ｆ  ＮＭＲは、２８２ＭＨｚ又は３７６ＭＨｚで決定し；１３Ｃ  ＮＭＲは、７５ＭＨｚ又は１００ＭＨｚで決定し；測定は、他に指定がない限り、およそ２０〜３０℃で行い；次の略語を使用し：ｓ、一重線；ｄ、二重線；ｔ、三重線；ｑ、四重線；ｍ、多重線；ｄｄ、二重線の二重線；ｄｄｄ、二重線の二重線の二重線；ｄｔ、三重線の二重線；ｂｓ、広域シグナル（ｂｒｏａｄ  ｓｉｇｎａｌ）；
ｖｉｉ．式（Ｉ）の最終生成物はまた、液体クロマトグラフィー（ＬＣＭＳ）後の質量分析によって特徴付け；ＬＣＭＳは、９５％Ａ＋５％Ｃから９５％Ｂ＋５％Ｃの溶媒系（ここでは、Ａ＝水、Ｂ＝メタノール、Ｃ＝１：１メタノール：水（０．２％炭酸アンモニウムを含有）である）を４分にわたって使用して、２．４ｍＬ／分の流速で、Ｗａｔｅｒｓ  ＺＱ  ＥＳＣｉ又はＺＭＤ  ＥＳＣｉ質量分析計及びＸ  Ｂｒｉｄｇｅ  ５μｍ  Ｃ−１８カラム（２．１×５０ｍｍ）を備え付けたＷａｔｅｒｓ  Ａｌｌｉａｎｃｅ  ＨＴ（２７９０＆２７９５）を使用して；又は、９５％Ｄ＋５％Ｅから９５％Ｅ＋５％Ｄの溶媒系（ここでは、Ｄ＝水（０．０５％  ＴＦＡを含有）、Ｅ＝アセトニトリル（０．０５％  ＴＦＡを含有）である）（酸性条件）を４分にわたって、又は９０％Ｆ＋１０％Ｇから９５％Ｇ＋５％Ｆの溶媒系（ここでは、Ｆ＝水（６．５ｍＭ炭酸水素アンモニウムを含有、かつアンモニアの添加によりｐＨ１０に調整）、Ｇ＝アセトニトリルである）（塩基性条件）を４分にわたって使用して、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｇｅｍｉｎｉ−ＮＸ  Ｃ１８  ３．０×５０ｍｍ、３．０μＭカラム又は等価物（塩基性条件）又はＳｈｉｍ  ｐａｃｋ  ＸＲ−ＯＤＳ  ３．０×５０ｍｍ、２．２μＭカラム又はＷａｔｅｒｓ  ＢＥＨ  Ｃ１８  ２．１×５０ｍｍ、１．７μＭカラム又は等価物を備え付けた、ＤＡＤ検出器、ＥＬＳＤ検出器、及び２０２０ＥＶ質量分析計（又は等価物）を連結したＳｈｉｍａｄｚｕ  ＵＦＬＣ又はＵＨＰＬＣを使用することによって実施し；
ｖｉｉｉ．中間体は、概して、十分には特徴付けせず、純度を、薄層クロマトグラフィー、質量スペクトル、ＨＰＬＣ、及び／又はＮＭＲ分析によって評価し；
ｉｘ．Ｘ線粉末回折スペクトルは、結晶性材料の試料をＢｒｕｋｅｒシリコン単結晶（ＳＳＣ）ウェーハ台に乗せ、スライドガラスを用いて試料を薄層に広げることによって（Ｂｒｕｋｅｒ  Ｄ４  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ装置を使用して）決定した。この試料を、（計数統計を向上させるために）３０回転／分で回転させ、１．５４１８オングストロームの波長をもつ、４０ｋＶ及び４０ｍＡで作動させた銅のロングファインフォーカス管によって生じたＸ線を照射した。平行にされたＸ線源を、Ｖ２０に設定した自動可変拡散スリットに通過させ、反射した放射線を、５．８９ｍｍ散乱防止スリットと９．５５ｍｍ検出器スリットを通過するように方向付けた。試料を、シータ−シータモードで２度から４０度２シータの範囲にわたって、０．００５７０°  ２シータ増分につき０．０３秒間（連続スキャンモード）、曝露させた。実行時間は、３分と３６秒であった。この装置には、位置敏感型検出器（Ｌｙｎｘｅｙｅ）を備え付けた。制御及びデータ取り込みは、Ｄｉｆｆｒａｃ＋ソフトウェアと共に動作させるＤｅｌｌ  Ｏｐｔｉｐｌｅｘ  ６８６  ＮＴ  ４．０  Ｗｏｒｋｓｔａｔｉｏｎを用いた；
ｘ．示差走査熱量測定は、ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｑ１０００  ＤＳＣで実施した。典型的には、蓋を備え付けた標準のアルミニウムパンに含有されている５ｍｇ未満の材料を、１０℃／分の一定の加熱速度で、２５℃から３００℃の温度範囲にわたって加熱した。窒素を使用するパージ気体を、流速５０ｍｌ／分で使用した。
ｘｉ．次の略語が使用されており：ｈ＝時間；ｒ．ｔ．＝室温（約１８〜２５℃）；ｃｏｎｃ．＝濃縮された；ＦＣＣ＝シリカを使用するフラッシュカラムクロマトグラフィー；ＤＣＭ＝ジクロロメタン；ＤＩＰＥＡ＝ジイソプロピルエチルアミン；ＤＭＡ＝Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド；ＤＭＦ＝Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド；ＤＭＳＯ＝ジメチルスルホキシド；Ｅｔ２Ｏ＝ジエチルエーテル；ＥｔＯＡｃ＝酢酸エチル；ＥｔＯＨ＝エタノール；Ｋ２ＣＯ３＝炭酸カリウム；ＭｅＯＨ＝メタノール；ＭｅＣＮ＝アセトニトリル；ＭＴＢＥ＝メチルｔｅｒｔブチルエーテル；ＭｇＳＯ４＝無水硫酸マグネシウム；Ｎａ２ＳＯ４＝無水硫酸ナトリウム；ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン；ｓａｔ．＝飽和水溶液；また
ｘｉｉ．ＩＵＰＡＣ名は、「Ｃａｎｖａｓ」又は「ＩＢＩＳ」、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ所有のプログラムを使用して作成した。導入部に記述した通り、本発明の化合物は、イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オン・コアを含む。しかし、ある実施例では、ＩＵＰＡＣ名は、コアをイミダゾ［５，４−ｃ］キノリン−２−オンと記載する。イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オン・コアとイミダゾ［５，４−ｃ］キノリン−２−オン・コアは、末梢の基により、命名規則は異なるとは言っても、同じものである。
【０１２４】
実施例１：４，６−ジジュウテリオ（Ｄｉｄｅｕｔｅｒｉｏ）−７−フルオロ−１−イソプロピル−３−メチル−８−［６−［３−（１−ピペリジル）プロポキシ］−３−ピリジル］イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オン
【化５】
2020514344.tif 000007
炭素担持ロジウム（５％）（２１０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）と７−フルオロ−１−イソプロピル−３−メチル−８−［６−［３−（１−ピペリジル）プロポキシ］−３−ピリジル］イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オン（２００ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）とを２５０ｍＬ  ３つ口フラスコ内の乾燥ＴＨＦ（２０ｍＬ）に入れた混合物を、排気し、窒素を２回再充填した。このフラスコを排気し、重水素気体（２．２６Ｅ＋０４ｍｇ、５６１０．４４ｍｍｏｌ）雰囲気中に置き、周囲温度及び圧力で、４．５ｈ撹拌し、この期間中に、重水素気体を３回交換した（重水素化率９９．８％）。触媒をセライトを通した濾過によって除去し、ＴＨＦで洗浄した。濾液を真空中で４０℃で蒸発させて、油とし、これを凝固させて、オフホワイトの固体（２０２ｍｇ）とした。トルエンを添加し（３ｍＬ）、次いで、減圧下で除去した。この固体を、アセトニトリル（３ｍＬ）で粉末化し、濾過し、アセトニトリルで洗浄した後に、真空中で４０℃で一晩乾燥させて、オフホワイトの固体として所望の材料（８５ｍｇ、０．１７７ｍｍｏｌ）をもたらした。ＮＭＲスペクトル：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１．３３−１．４３（２Ｈ，ｍ），１．４９（４Ｈ，ｐ），１．６４（６Ｈ，ｄ），１．８５−１．９８（２Ｈ，ｍ），２．３４（４Ｈ，ｍ），２．３９（２Ｈ，ｔ），３．５０（３Ｈ，ｓ），４．３６（２Ｈ，ｔ），５．２８（１Ｈ，ｐ），６．９８（１Ｈ，ｄｄ），８．０４（１Ｈ，ｄｔ），８．３２（１Ｈ，ｄ），８．５０（１Ｈ，ｄｄｄ）．質量スペクトル：ｍ／ｚ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝４８０．
【０１２５】
およそδ７．９２及びδ８．９１でのピークの欠如は、イミダゾ［４，５−ｃ］キノロンコアの４及び６位置での重水素の取り込みを示した。
【０１２６】
７−フルオロ−１−イソプロピル−３−メチル−８−［６−［３−（１−ピペリジル）プロポキシ］−３−ピリジル］イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オンの調製を、下に記載する：
【０１２７】
７−フルオロ−１−イソプロピル−３−メチル−８−［６−［３−（１−ピペリジル）プロポキシ］−３−ピリジル］イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オン
【化６】
2020514344.tif 000008
３−（ピペリジン−１−イル）プロパン−１−オール（１．０５１ｇ、７．３４ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１５ｍＬ）に入れたものを、水素化ナトリウム（０．５８７ｇ、１４．６７ｍｍｏｌ）のスラリー（ＴＨＦ（１５ｍＬ）中）にゆっくりと添加し、この溶液を５０℃で４０分間撹拌した。７−フルオロ−８−（６−フルオロ−３−ピリジル）−１−イソプロピル−３−メチル−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オン（２．０ｇ、５．６４ｍｍｏｌ）の混合物（ＴＨＦ（１５ｍＬ）中）を添加し、反応物を５０℃で６ｈ撹拌し、次いで、室温まで冷却させ、水で急冷した。静置すると、固体の沈殿が認められ、濾過によって収集した。この材料を、フラッシュシリカクロマトグラフィー（溶出勾配０から１０％  ＭｅＯＨ（ＤＣＭ中））によって、次いで、溶出剤として水（０．１％  ＮＨ３を含有）とＭｅＣＮの極性混合物を漸減的に使用する分取ＨＰＬＣ（ｒｅｄｉｓｅｐ  ｇｏｌｄ  Ｃ１８カラム、８０ｇ）によって精製し、所望の材料をもたらした。生成物を、沸騰しているＥｔＯＨから再結晶させて、白色固体として所望の材料をもたらした（１．５１２ｇ、５６．１％）。ＮＭＲスペクトル：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１．３４−１．４４（２Ｈ，ｍ），１．５０（４Ｈ，ｐ），１．６５（６Ｈ，ｄ），１．９１（２Ｈ，ｐ），２．２９−２．３７（４Ｈ，ｍ），２．３９（２Ｈ，ｑ），３．５１（３Ｈ，ｓ），４．３７（２Ｈ，ｔ），５．２９（１Ｈ，ｐ），６．９９（１Ｈ，ｄｄ），７．９２（１Ｈ，ｄ），８．０５（１Ｈ，ｄｔ），８．３３（１Ｈ，ｄ），８．５０（１Ｈ，ｓ），８．９１（１Ｈ，ｓ）．質量スペクトル：ｍ／ｚ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝４７８．
【０１２８】
所望の材料は、次の通りにメタンスルホン酸塩として単離することもできる。メタンスルホン酸（０．０２６ｇ、０．２７ｍｍｏｌ）（ＤＣＭ（０．５ｍＬ）中）を、周囲温度で、単離された遊離塩基（１２７ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）に添加した。得られた溶液を、周囲温度で１５分間撹拌し、次いで、真空中で濃縮し、残渣を真空中で乾燥させて、白色固体として所望のメタンスルホン酸塩をもたらした（３３６ｍｇ、１００％）。ＮＭＲスペクトル：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１．７８（６Ｈ，ｄ），１．８６−１．９９（４Ｈ，ｍ），２．１１−２．２５（２Ｈ，ｍ），２．３７−２．４８（２Ｈ，ｍ），２．６−２．７４（２Ｈ，ｍ），２．８４（３Ｈ，ｓ），３．２２−３．３１（２Ｈ，ｍ），３．５９（３Ｈ，ｓ），３．６９（２Ｈ，ｄ），４．４８−４．５６（２Ｈ，ｍ），５．１７−５．２７（１Ｈ，ｍ），６．９０（１Ｈ，ｄｄ），７．９０（１Ｈ，ｄｔ），７．９６（１Ｈ，ｄ），８．２３（１Ｈ，ｄ），８．３９（１Ｈ，ｄ），８．７６（１Ｈ，ｓ），１０．７５（１Ｈ，ｓ）．
質量スペクトル：ｍ／ｚ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝４７８．
【０１２９】
７−フルオロ−１−イソプロピル−３−メチル−８−［６−［３−（１−ピペリジル）プロポキシ］−３−ピリジル］イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オンは、下に記載する方法を使用して、８−ブロモ−７−フルオロ−１−イソプロピル−３−メチル−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オンから直接的に調製することもできる。
【０１３０】
３−（ジ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィノ）プロパン−１−スルホン酸（０．５５５ｍｇ、２．０７ｍｍｏｌ）を、不活性雰囲気中で、四塩化一パラジウム（ＩＶ）二ナトリウム（０．３０４ｇ、１．０３ｍｍｏｌ）（水（１２ｍＬ）中）に添加した。得られた混合物を、周囲温度で１０分間撹拌し、次いで、反応混合物を、７−フルオロ−８−（６−フルオロ−３−ピリジル）−１−イソプロピル−３−メチル−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オン（３５．０ｇ、１０３．５０ｍｍｏｌ）と、２−［３−（１−ピペリジル）プロポキシ］−５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピリジン（６２．２ｇ、１２９．３７ｍｍｏｌ）と、炭酸カリウム（４２．９ｇ、３１０．４９ｍｍｏｌ）とをジオキサン（４５０ｍＬ）と水（９０ｍＬ）に入れたものに、不活性雰囲気中で、周囲温度で、一度に添加した。得られた溶液を、８０℃で１６ｈ撹拌し、反応物を蒸発させた。この未精製材料を、ＤＣＭ（５００ｍＬ）に溶解し、ブライン（２×１００ｍＬ）で洗浄し、有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。この未精製生成物を、フラッシュシリカクロマトグラフィー（溶出勾配０から１０％（０．１％アンモニアをＭｅＯＨに入れたもの）（ＤＣＭ中））によって精製して、茶色の固体として所望の材料をもたらした（４０．５ｇ、８２％）。この材料を、類似の調製物から得られた材料と合わせ（合計５１．３ｇ）、ＭｅＣＮ（１００ｍＬ）中でスラリー化させた。沈殿を濾過によって収集し、ＭｅＣＮ（１００ｍＬ）で洗浄し、真空中で乾燥させて、白色固体としての所望の材料とした（３２．０ｇ、６２．４％）。解析データは、以前に調製された試料からのデータと一致していた。
【０１３１】
中間体Ａ１：７−フルオロ−８−（６−フルオロ−３−ピリジル）−１−イソプロピル−３−メチル−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オン
【化７】
2020514344.tif 000009
ジクロロビス（ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（３−スルホプロピル）ホスホニオ）パラデート（ＩＩ）（０．０５Ｍ水溶液、１１．８３ｍＬ、０．５９ｍｍｏｌ）を、８−ブロモ−７−フルオロ−１−イソプロピル−３−メチル−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オン（４．０ｇ、１１．８３ｍｍｏｌ）と、（６−フルオロピリジン−３−イル）ボロン酸（２．０ｇ、１４．１９ｍｍｏｌ）と、２Ｍ炭酸カリウム溶液（１７．７４ｍＬ、３５．４８ｍｍｏｌ）（１，４−ジオキサン（５０ｍＬ）及び水（１２．５ｍＬ）中）との脱気混合物に添加した。混合物を、窒素でパージし、８０℃で１ｈ加熱し、次いで、冷却させ、減圧下で濃縮して、除去した。残りの溶液を、ＤＣＭ（２５０ｍＬ）で希釈し、水（２００ｍＬ）で洗浄し、有機層を相分離カートリッジで乾燥させ、蒸発させて、未精製生成物をもたらした。この未精製生成物を、フラッシュシリカクロマトグラフィー（溶出勾配０から１０％ＭｅＯＨ（ＤＣＭ中））によって精製して、白色固体として所望の材料をもたらした（３．７０ｇ、８８％）。ＮＭＲスペクトル：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１．７７（６Ｈ，ｄｄ），３．５８（３Ｈ，ｄ），５．２０（１Ｈ，ｓ），７．１１（１Ｈ，ｄｄｄ），７．９３（１Ｈ，ｄ），８．０６−８．１４（１Ｈ，ｍ），８．２２（１Ｈ，ｄ），８．４６−８．５１（１Ｈ，ｍ），８．７２（１Ｈ，ｓ）．質量スペクトル：ｍ／ｚ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝３５５．３．
【０１３２】
ジクロロビス（ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（３−スルホプロピル）ホスホニオ）パラデート（ＩＩ）（０．０５Ｍ水溶液）は、下に記載する通りに調製することができる：
【０１３３】
脱気水（３０ｍＬ）を、テトラクロロパラジウム（ＩＩ）酸ナトリウム（０．４１０ｇ、１．３９ｍｍｏｌ）及び３−（ジ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィノ）プロパン−１−スルホン酸（０．７４８ｇ、２．７９ｍｍｏｌ）に、不活性雰囲気中で、周囲温度で添加した。懸濁液を、５分間撹拌し、次いで、固体を濾過によって除去し、廃棄して、赤茶色の溶液として所望の試薬を残した。
【０１３４】
中間体Ａ２：８−ブロモ−７−フルオロ−１−イソプロピル−３−メチル−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オン
【化８】
2020514344.tif 000010
水酸化ナトリウム（１１．２９ｇ、２８２．２８ｍｍｏｌ）の水（６００ｍＬ）溶液を、８−ブロモ−７−フルオロ−１−イソプロピル−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オン（６１ｇ、１８８．１９ｍｍｏｌ）、臭化テトラブチルアンモニウム（６．０７ｇ、１８．８２ｍｍｏｌ）、及びヨウ化メチル（２３．５３ｍＬ、３７６．３７ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１３００ｍＬ）に入れた撹拌混合物に添加し、混合物を周囲温度で１７ｈ撹拌した。同じプロセスを、同一規模で繰り返し、反応混合物を合わせ、濃縮し、ＭｅＯＨ（７５０ｍＬ）で希釈した。沈殿を濾過によって収集し、ＭｅＯＨ（５００ｍＬ）で洗浄し、固体を真空中で乾燥させて、白色固体として所望の材料をもたらした（１０８ｇ、８５％）。ＮＭＲスペクトル：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  １．７６（６Ｈ，ｄ），３．５７（３Ｈ，ｓ），５．１３（１Ｈ，ｔ），７．８３（１Ｈ，ｄ），８．４１（１Ｈ，ｄ），８．６９（１Ｈ，ｓ）．質量スペクトル：ｍ／ｚ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝３８０．
【０１３５】
中間体Ａ３：８−ブロモ−７−フルオロ−１−イソプロピル−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オン
【化９】
2020514344.tif 000011
トリエチルアミン（１６４ｍＬ、１１７３．７８ｍｍｏｌ）を、６−ブロモ−７−フルオロ−４−（イソプロピルアミノ）キノリン−３−カルボン酸（１２８ｇ、３９１．２６ｍｍｏｌ）（ＤＭＦ（１５００ｍＬ）中）に、一度に添加し、混合物を、３０分間、不活性雰囲気中で、周囲温度で撹拌した。ジフェニルリン酸アジド（１０１ｍＬ、４６９．５１ｍｍｏｌ）を添加し、溶液を、周囲温度でさらに３０分間、次いで、６０℃で３ｈ撹拌した。反応混合物を、氷水に注ぎ、沈殿を濾過によって収集し、水（１Ｌ）で洗浄し、真空中で乾燥させて、黄色固体として所望の材料をもたらした（１２２ｇ、９６％）。ＮＭＲスペクトル：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  １．６２（６Ｈ，ｄ），５．１２−５．１９（１Ｈ，ｍ），７．９２（１Ｈ，ｄ），８．５７（１Ｈ，ｄ），８．６８（１Ｈ，ｓ），１１．５８（１Ｈ，ｓ）．質量スペクトル：ｍ／ｚ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝３２４．
【０１３６】
中間体Ａ４：６−ブロモ−７−フルオロ−４−（イソプロピルアミノ）キノリン−３−カルボン酸
【化１０】
2020514344.tif 000012
２Ｎ水酸化ナトリウム溶液（８３３ｍＬ、１６６６．６６ｍｍｏｌ）を、６−ブロモ−７−フルオロ−４−（イソプロピルアミノ）キノリン−３−カルボン酸エチル（１４８ｇ、４１６．６６ｍｍｏｌ）（ＴＨＦ（１５００ｍＬ）中）に、１５℃で、何度かに分けて添加し、得られた混合物を、６０℃で５ｈ撹拌した。反応混合物を濃縮し、水（２Ｌ）で希釈し、この混合物を２Ｍ塩酸で酸性化した。沈殿を、濾過によって洗浄し、水（１Ｌ）で洗浄し、真空中で乾燥させて、白色固体として所望の材料をもたらした（１２８ｇ、９４％）。ＮＭＲスペクトル：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１．２４−１．３６（６Ｈ，ｍ），４．３７（１Ｈ，ｓ），７．７８（１Ｈ，ｔ），８．５５（１Ｈ，ｓ），８．９０（１Ｈ，ｓ）．質量スペクトル：ｍ／ｚ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝３２７．
【０１３７】
中間体Ａ５：６−ブロモ−７−フルオロ−４−（イソプロピルアミノ）キノリン−３−カルボン酸エチル
【化１１】
2020514344.tif 000013
ＤＩＰＥＡ（１５４ｍＬ、８８４．０７ｍｍｏｌ）を、プロパン−２−アミン（３９．２ｇ、６６３．０５ｍｍｏｌ）及び６−ブロモ−４−クロロ−７−フルオロキノリン−３−カルボン酸エチル（１４７ｇ、４４２．０４ｍｍｏｌ）（ＤＭＡ（６００ｍＬ）中）に、周囲温度で、何度かに分けて添加し、得られた混合物を、１００℃で４ｈ撹拌した。反応混合物を、氷水に注ぎ、沈殿を濾過によって収集し、水（１Ｌ）で洗浄し、真空中で乾燥させて、薄茶色の固体として所望の材料をもたらした（１４８ｇ、９４％）。ＮＭＲスペクトル：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１．２６−１．３３（９Ｈ，ｍ），４．１７−４．２５（１Ｈ，ｍ），４．３２−４．３７（２Ｈ，ｍ），７．２８（１Ｈ，ｄ），８．５０（１Ｈ，ｄ），８．５９（１Ｈ，ｄ），８．８６（１Ｈ，ｓ）．質量スペクトル：ｍ／ｚ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝３５５．
【０１３８】
中間体Ａ６：６−ブロモ−４−クロロ−７−フルオロキノリン−３−カルボン酸エチル
【化１２】
2020514344.tif 000014
ＤＭＦ（０．５３５ｍＬ、６．９１ｍｍｏｌ）を、不活性雰囲気中で、１０℃で、６−ブロモ−７−フルオロ−１−［（４−メトキシフェニル）メチル］−４−オキソ−キノリン−３−カルボン酸エチル（２００ｇ、４６０．５６ｍｍｏｌ）（塩化チオニル（６００ｍＬ）中）に添加し、得られた混合物を、７０℃で３ｈ撹拌した。混合物を、蒸発乾固させて、残渣をトルエン（３００ｍＬ）と共沸させて、未精製生成物をもたらした。未精製生成物を、ヘキサンからの結晶化によって精製して、白色固体として所望の材料をもたらした（１４７ｇ、９６％）。ＮＭＲスペクトル：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１．４９（３Ｈ，ｔ），４．５１−４．５６（２Ｈ，ｍ），７．９１（１Ｈ，ｄ），８．７１（１Ｈ，ｄ），９．２６（１Ｈ，ｓ）．質量スペクトル：ｍ／ｚ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝３３４．
【０１３９】
中間体Ａ７：６−ブロモ−７−フルオロ−１−［（４−メトキシフェニル）メチル］−４−オキソ−キノリン−３−カルボン酸エチル
【化１３】
2020514344.tif 000015
ＤＢＵ（７６ｍＬ、５０６．３２ｍｍｏｌ）を、不活性雰囲気中で、エチル−２−（５−ブロモ−２，４−ジフルオロ−ベンゾイル）−３−［（４−メトキシフェニル）メチルアミノ］プロパ（ｐｒｏｐ）−２−エノアート（ｅｎｏａｔｅ）（２３０ｇ、５０６．３２ｍｍｏｌ）（アセトン（８００ｍＬ）中）に、５分かけて１０℃でゆっくりと添加し、得られた混合物を、周囲温度で１６ｈ撹拌した。沈殿を、濾過によって収集し、Ｅｔ２Ｏ（３×５００ｍＬ）で洗浄し、真空中で乾燥させて、白色固体として所望の材料をもたらした（１６６ｇ、７５％）。ＮＭＲスペクトル：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１．２９（３Ｈ，ｔ），３．７２（３Ｈ，ｓ），４．２２−４．２７（２１Ｈ，ｍ），５．５７（２Ｈ，ｓ），６．９２−６．９５（２Ｈ，ｍ），７．２４（２Ｈ，ｄ），７．７９（１Ｈ，ｄ），８．４０（１Ｈ，ｄ），８．８９（１Ｈ，ｓ）．質量スペクトル：ｍ／ｚ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝４３４．
【０１４０】
中間体Ａ８：エチル−２−（５−ブロモ−２，４−ジフルオロ−ベンゾイル）−３−［（４−メトキシフェニル）メチルアミノ］プロパ−２−エノアート
【化１４】
2020514344.tif 000016
３−（ジメチルアミノ）アクリル酸（Ｅ）−エチル（８０ｍＬ、５５５．５０ｍｍｏｌ）を、不活性雰囲気中で、周囲温度で、ＤＩＰＥＡ（１３２ｍＬ、７５７．５０ｍｍｏｌ）と５−ブロモ−２，４−ジフルオロ−塩化ベンゾイル（１２９ｇ、５０５．００ｍｍｏｌ）とをトルエン（６００ｍＬ）に入れた混合物に滴下した。得られた溶液を、７０℃で１７ｈ撹拌し、次いで冷却させた。（４−メトキシフェニル）メタンアミン（６６．０ｍＬ、５０５．２９ｍｍｏｌ）を、この混合物に、何度かに分けて添加し、反応物を、周囲温度で３ｈ撹拌した。反応混合物を、ＤＣＭ（２Ｌ）で希釈し、水（４×２００ｍＬ）、飽和ブライン（３００ｍＬ）で連続的に洗浄し、有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させて、薄茶色の固体として所望の材料をもたらし（２３０ｇ、１００％）、これを、さらなる精製を行わずに次のステップで使用した。ＮＭＲスペクトル：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１．０９（３Ｈ，ｔ），３．８２（３Ｈ，ｓ），４．００−４．１０（２Ｈ，ｍ），４．５５（２Ｈ，ｔ），６．８４−６．９６（３Ｈ，ｍ），７．２０−７．２９（２Ｈ，ｍ），７．５５（１Ｈ，ｄ），８．１８（１Ｈ，ｔ）．質量スペクトル：ｍ／ｚ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝４５４．
【０１４１】
中間体Ａ９：５−ブロモ−２，４−ジフルオロ−塩化ベンゾイル
【化１５】
2020514344.tif 000017
塩化チオニル（５５．４ｍＬ、７５９．５０ｍｍｏｌ）を、不活性雰囲気中で、ＤＭＦ（７．８４ｍＬ、１０１．２７ｍｍｏｌ）と５−ブロモ−２，４−ジフルオロ安息香酸（１２０ｇ、５０６．３３ｍｍｏｌ）とをトルエン（６００ｍＬ）に入れた混合物に、１５℃で５分かけて何度かに分けて添加した。得られた混合物を、７０℃で４ｈ撹拌し、次いで蒸発乾固させ、残渣を、トルエンと共沸させて、茶色の油として所望の材料をもたらし（１２９ｇ、１００％）、これを、精製せずに次のステップで直接使用した。ＮＭＲスペクトル：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．０４−７．０９（１Ｈ，ｍ），８．３４−８．４２（１Ｈ，ｍ）．
【０１４２】
中間体Ａ３  ８−ブロモ−７−フルオロ−１−イソプロピル−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オンはまた、下に記載する通りに調製することもできる：
【化１６】
2020514344.tif 000018
６−ブロモ−７−フルオロ−４−（イソプロピルアミノ）キノリン−３−カルボキサミド（１６．６ｇ、５０．８９ｍｍｏｌ）と１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（１５．２２ｍＬ、１０１．７９ｍｍｏｌ）とをメタノール（２００ｍＬ）に入れた撹拌懸濁液に、１，３，５−トリクロロ−１，３，５−トリアジナン−２，４，６−トリオン（５．９１ｇ、２５．４５ｍｍｏｌ）を、５℃で、何度かに分けて添加した。得られた懸濁液を、周囲温度で１ｈ撹拌した。反応物を濾過し、固体を真空オーブン内で２ｈ乾燥させて、淡黄色固体として所望の材料をもたらした（１４．１８ｇ、８６％）。濾液を２日間静置し、次いで濾過した後、追加の材料が得られた。単離された追加の固体を、ＥｔＯＨ（５０ｍＬ）中で３０分間加熱し、次いで、冷却させ、濾過して、白色固体（２．６ｍｇ）として追加の所望の材料を提供した。解析データは、先に記載された代替調製物から得られるデータと一致していた。
【０１４３】
中間体Ａ１０：６−ブロモ−７−フルオロ−４−（イソプロピルアミノ）キノリン−３−カルボキサミド
【化１７】
2020514344.tif 000019
プロパン−２−アミン（２．８０ｍｌ、３２．６２ｍｍｏｌ）を、６−ブロモ−４−クロロ−７−フルオロ−キノリン−３−カルボキサミド（１０ｇ、２９．６５ｍｍｏｌ）と炭酸カリウム（８．２０ｇ、５９．３１ｍｍｏｌ）とをアセトニトリル（２５０ｍＬ）に入れた懸濁液に添加し、混合物を９５℃で４ｈ撹拌した。さらなるプロパン−２−アミン（２ｍＬ）を添加し、混合物を９５℃でさらに４ｈ、次いで周囲温度で一晩撹拌した。この混合物に水を添加し、固体を濾過によって収集し、真空中で乾燥させて、所望の材料（８．２５ｇ、８５％）をもたらした。ＮＭＲスペクトル：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  １．２５（６Ｈ，ｄ），４．１７（１Ｈ，ｄ），７．５１（１Ｈ，ｓ），７．６９（１Ｈ，ｄ），８．１１（２Ｈ，ｓ），８．６１（１Ｈ，ｓ），８．６７（１Ｈ，ｄ）．質量スペクトル：ｍ／ｚ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝２３６．
【０１４４】
中間体Ａ１１：６−ブロモ−４−クロロ−７−フルオロ−キノリン−３−カルボキサミド
【化１８】
2020514344.tif 000020
ＤＭＦ（０．５ｍＬ）を、６−ブロモ−７−フルオロ−４−オキソ−１Ｈ−キノリン−３−カルボン酸（２２．５ｇ、７８．６６ｍｍｏｌ）を塩化チオニル（１４０ｇ、１１７９．８５ｍｍｏｌ）に入れた撹拌懸濁液に添加し、混合物を２ｈ加熱還流した。反応物を、冷却させ、真空中で濃縮し、残渣をトルエンと２回共沸させて、黄色固体をもたらした。この固体を、水酸化アンモニウム（１４７ｍＬ、１１７９．８５ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃で何度かに分けて添加した。白色懸濁液を、１５分間撹拌し、次いで、固体を濾過し、水で洗浄し、真空中で乾燥させて、白色粉末として所望の材料をもたらした（２３．８０ｇ、１００％）。ＮＭＲスペクトル：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．９２（１Ｈ，ｓ），８．５９（１Ｈ，ｄ），８．２１（１Ｈ，ｓ），８．０９（１Ｈ，ｄ），７．９８（１Ｈ，ｓ）．質量スペクトル：ｍ／ｚ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝３０４．８．
【０１４５】
中間体Ａ１２：６−ブロモ−７−フルオロ−４−オキソ−１Ｈ−キノリン−３−カルボン酸
【化１９】
2020514344.tif 000021
水酸化ナトリウム（１８．３４ｇ、４５８．４４ｍｍｏｌ）の水（１００ｍＬ）溶液を、６−ブロモ−７−フルオロ−４−オキソ−１Ｈ−キノリン−３−カルボン酸エチル（２８．８ｇ、９１．６９ｍｍｏｌ）をＥｔＯＨ（５００ｍＬ）に入れた撹拌懸濁液に、周囲温度で添加した。次いで、反応混合物を、７５℃で２ｈ撹拌し、冷却させ、ｐＨを、２Ｎ塩酸を使用して４に調整した。沈殿を、濾過によって収集し、水で洗浄し、真空中で乾燥させて、白色粉末として所望の材料をもたらした（２３．３０ｇ、８９％）。ＮＭＲスペクトル：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１４．７８（１Ｈ，ｓ），１３．４５（１Ｈ，ｓ），８．９３（１Ｈ，ｓ），８．４６（１Ｈ，ｄ），７．７０（１Ｈ，ｄ）．質量スペクトル：ｍ／ｚ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝２８７．８．
【０１４６】
中間体Ａ１３：６−ブロモ−７−フルオロ−４−オキソ−１Ｈ−キノリン−３−カルボン酸エチル
【化２０】
2020514344.tif 000022
２−［（４−ブロモ−３−フルオロ−アニリノ）メチレン］プロパン二酸ジエチル（９０ｇ、２４９．８８ｍｍｏｌ）をジフェニルエーテル（６００ｍＬ、３．７９ｍｏｌ）に入れた溶液を、２４０℃で２．５ｈ撹拌した。混合物を７０℃に冷却させ、固体を濾過によって収集し、真空オーブン内で乾燥させて、白色固体として所望の材料をもたらし（５０ｇ、６４％）、これを、さらなる精製を行わずに使用した。ＮＭＲスペクトル：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，（１００℃））δ１．２６−１．３３（３Ｈ，ｍ），４．２５（２Ｈ，ｑ），７．５２（１Ｈ，ｄ），８．３７（１Ｈ，ｄ），８．４８（１Ｈ，ｓ），１２．０５（１Ｈ，ｓ）．質量スペクトル：ｍ／ｚ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝３１４．
【０１４７】
中間体Ａ１４：２−［（４−ブロモ−３−フルオロ−アニリノ）メチレン］プロパン二酸ジエチル
【化２１】
2020514344.tif 000023
４−ブロモ−３−フルオロアニリン（５６．６ｇ、２９７．８７ｍｍｏｌ）と２−（エトキシメチリデン）プロパン二酸１，３−ジエチル（７２．４５ｇ、３３５．０６ｍｍｏｌ）とをＥｔＯＨ（５６０ｍＬ）に入れた溶液を、８０℃で４ｈ撹拌した。反応混合物を、冷却させ、固体を濾過によって収集し、オーブンで乾燥させて、オフホワイトの固体として所望の材料をもたらし（９０ｇ、８４％）、これを、さらなる精製を行わずに使用した。ＮＭＲスペクトル：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１．２６（６Ｈ，ｑ），４．１４（２Ｈ，ｑ），４．２２（２Ｈ，ｑ），７．１８−７．２５（１Ｈ，ｍ），７．５７（１Ｈ，ｄｄ），７．６４−７．７（１Ｈ，ｍ），８．３３（１Ｈ，ｄ），１０．６２（１Ｈ，ｄ）．質量スペクトル：ｍ／ｚ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝３６０．
【０１４８】
８−［６−［３−（ジメチルアミノ）プロポキシ］−３−ピリジル］−７−フルオロ−１−イソプロピル−３−メチル−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オンは、下に記載する方法を使用して、８−ブロモ−７−フルオロ−１−イソプロピル−３−メチル−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オンから直接的に調製することもできる。
【０１４９】
３−（ジ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィノ）プロパン−１−スルホン酸（０．４６７ｍｇ、１．７７ｍｍｏｌ）を、不活性雰囲気中で、四塩化一パラジウム（ＩＶ）二ナトリウム（０．２６１ｇ、０．８９ｍｍｏｌ）（水（５０ｍＬ）中）に添加した。得られた混合物を、周囲温度で２０分間撹拌し、次いで、反応混合物を、８−ブロモ−７−フルオロ−１−イソプロピル−３−メチル−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オンと、Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピリジン−２−イル］オキシプロパン−１−アミン（４２．４ｇ、１１０．８９ｍｍｏｌ）と、炭酸カリウム（３６．８ｇ、２６６．１３ｍｍｏｌ）とをジオキサン（５００ｍＬ）と水（１００ｍＬ）に入れたものに、不活性雰囲気中で、周囲温度で、一度に添加した。得られた溶液を、８０℃で２ｈ撹拌した。反応溶液を、真空中で濃縮し、ＤＣＭで希釈した。有機相を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させて、未精製生成物をもたらした。この未精製物を、シリカ（溶出勾配０から２％ＭｅＯＨ（７ＭＮＨ３をＭｅＯＨに入れたもの）（ＤＣＭ中））によって精製して、固体をもたらし、これを、ＭｅＣＮで粉末化して、黄色固体として所望の材料をもたらした（２５．００ｇ、６４．４％）。この純粋な材料を、類似の様式で調製した追加の材料と合わせ（合計３８．６ｇ）、ＭｅＣＮ（１００ｍＬ）中で１０分間加熱し、次いで、０℃に冷却させ、２ｈ撹拌した。固体を真空中で濾過し、真空オーブン内で１６ｈ乾燥させて、淡黄色の結晶性固体（３５．５ｇ）として所望の材料をもたらした。解析データは、以前に調製された材料からのデータと一致していた。
【０１５０】
中間体Ｂ１：２−［３−（１−ピペリジル）プロポキシ］−５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピリジン
【化２２】
2020514344.tif 000024
ｎ−ブチルリチウム（１３９ｍＬ、３４７．５９ｍｍｏｌ）を、５−ブロモ−２−［３−（１−ピペリジル）プロポキシ］ピリジン（８０ｇ、２６７．３７ｍｍｏｌ）と２−イソプロポキシ−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン（６４．７ｇ、３４７．５９ｍｍｏｌ）とをＴＨＦ（４００ｍＬ）に入れたものに滴下し、不活性雰囲気中で１０分かけて、−７８℃に冷却した。得られた混合物を、周囲温度まで温め、１２ｈ撹拌した。反応混合物を、塩化アンモニウムの飽和水溶液（１００ｍＬ）で急冷し、この混合物を減圧下で濃縮した。この混合物を、ＥｔＯＡｃ（２×５００ｍＬ）で抽出し、有機層を、飽和ブライン（２×１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させて、黄色の油として所望の材料をもたらした（９２ｇ、９９％）。この生成物を、さらなる精製を行わずに、次のステップで直接使用した。ＮＭＲスペクトル：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１．３４（１２Ｈ，ｓ），１．６０（５Ｈ，ｐ），１．９３−２．０８（３Ｈ，ｍ），２．３９−２．５３（６Ｈ，ｍ），４．３４（２Ｈ，ｄｔ），６．６７−６．７７（１Ｈ，ｍ），７．９２（１Ｈ，ｄｄ），８．５０−８．５６（１Ｈ，ｍ）．
【０１５１】
中間体Ｂ２：５−ブロモ−２−［３−（１−ピペリジル）プロポキシ］ピリジン
【化２３】
2020514344.tif 000025
水素化ナトリウム（２０．９１ｇ、５２２．７７ｍｍｏｌ）を、３−（ピペリジン−１−イル）プロパン−１−オール（３５．８ｇ、２５０．０２ｍｍｏｌ）（ＴＨＦ（４００ｍＬ）中）に、不活性雰囲気中で、周囲温度で、何度かに分けて添加した。得られた懸濁液を、５０℃で３０分間撹拌し、次いで冷却させ、５−ブロモ−２−フルオロピリジン（４０．０ｇ、２２７．２９ｍｍｏｌ）を添加した。この溶液を５０℃で２ｈ撹拌し、次いで冷却させた。この反応を、水素化ナトリウム（５．２３ｇ、１３０．６９ｍｍｏｌ）、３−（ピペリジン−１−イル）プロパン−１−オール（８．９５ｇ、６２．５０ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（１００ｍＬ）、及び５−ブロモ−２−フルオロピリジン（１０ｇ、５６．８２ｍｍｏｌ）を使用して、類似の様式で繰り返した。２つの反応混合物を合わせ、氷水（１０００ｍＬ）に注いだ。溶媒を、減圧下で濃縮し、ＤＣＭ（３×１５０ｍＬ）で抽出し、有機層を、飽和ブライン（３×１５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させて、茶色の油として所望の材料をもたらした（９６ｇ、１１３％）。この材料を、さらなる精製を行わずに使用した。ＮＭＲスペクトル：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１．４３−１．４９（２Ｈ，ｍ），１．６１（５Ｈ，ｐ），１．９９（２Ｈ，ｄｑ），２．４６（６Ｈ，ｄｄ），４．３１（２Ｈ，ｔ），６．６５（１Ｈ，ｄ），７．６４（１Ｈ，ｄｄ），８．１９（１Ｈ，ｄ）．質量スペクトル：ｍ／ｚ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝２９９．
【０１５２】
生物アッセイ
本発明の化合物の効果を測定するために、次のアッセイを使用した：ａ）ＡＴＭ細胞効力（ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｐｏｔｅｎｃｙ）アッセイ；ｂ）ＰＩ３Ｋ細胞効力アッセイ；ｃ）  ｍＴＯＲ細胞効力アッセイ；ｄ）ＡＴＲ細胞効力アッセイ。これらのアッセイの説明中、概して：
ｉ．次の略語を使用する：４ＮＱＯ＝４−ニトロキノリンＮ−オキシド；Ａｂ＝抗体；ＢＳＡ＝ウシ血清アルブミン；ＣＯ２＝二酸化炭素；ＤＭＥＭ＝ダルベッコ変法イーグル培地；ＤＭＳＯ＝ジメチルスルホキシド；ＥＤＴＡ＝エチレンジアミン四酢酸；ＥＧＴＡ＝エチレングリコール四酢酸；ＥＬＩＳＡ＝酵素結合免疫吸着検定法；ＥＭＥＭ＝イーグル最小必須培地；ＦＢＳ＝ウシ胎児血清；ｈ＝時間；ＨＲＰ＝西洋ワサビペルオキシダーゼ；ｉ．ｐ．＝腹腔内；ＰＢＳ＝リン酸緩衝生理食塩水；ＰＢＳＴ＝リン酸緩衝生理食塩水／Ｔｗｅｅｎ；ＴＲＩＳ＝Ｔｒｉｓ（ヒドロキシメチル）アミノメタン；ＭＴＳ試薬：［３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２−（４−スルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム、分子内塩、及び電子結合試薬（フェナジンメトサルフェート）ＰＭＳ；ｓ．ｃ．＝皮下に。
ｉｉ．ＩＣ５０値は、Ｇｅｎｅｄａｔａのスマートフィッティングモデル（ｓｍａｒｔ  ｆｉｔｔｉｎｇ  ｍｏｄｅｌ）を使用して算出した。ＩＣ５０値は、生物活性の５０％を抑制する試験化合物の濃度であった。
【０１５３】
アッセイａ）：ＡＴＭ細胞効力
原理：
細胞照射は、ＤＮＡ二本鎖切断、及びセリン１９８１の急速な分子間自己リン酸化を誘発し、これは二量体解離を引き起こし、細胞のＡＴＭキナーゼ活性を起動する。細胞内のほとんどのＡＴＭ分子は、０．５Ｇｙと同程度に低い放射線の照射の後、この部位で迅速にリン酸化され、細胞内のほんのわずかなＤＮＡ二本鎖切断の導入後に、リン酸化部位特異的抗体の結合が検出可能となる。
【０１５４】
ｐＡＴＭアッセイの原理は、細胞内のＡＴＭの阻害剤を特定することである。ＨＴ２９細胞を、Ｘ線照射の前に、試験化合物と共に１時間インキュベートする。１ｈ後、細胞を固定し、ｐＡＴＭ（Ｓｅｒ１９８１）に対して染色する。ａｒｒａｙｓｃａｎイメージングプラットフォームで蛍光を読み取る。
【０１５５】
方法詳細：
ＨＴ２９細胞（ＥＣＡＣＣ  ＃８５０６１１０９）を、１％  Ｌグルタミンと１０％  ＦＢＳを含有する４０μｌ  ＥＭＥＭ培地中、３５００細胞／ウェルの密度で３８４ウェルアッセイプレート（Ｃｏｓｔａｒ  ＃３７１２）に播種し、一晩接着させた。翌朝、式（Ｉ）の化合物（１００％  ＤＭＳＯ中）を、超音波分注によってアッセイプレートに添加した。３７℃及び５％  ＣＯ２での１ｈインキュベーション後、プレート（一度に最大６枚まで）を、約６００ｃＧｙ相当を用いるＸ−ＲＡＤ  ３２０装置（ＰＸｉ）を使用して照射した。プレートをさらに１ｈ、インキュベーターに戻した。次いで、細胞を、２０μｌの３．７％ホルムアルデヒドのＰＢＳ溶液を添加し、室温で２０分間インキュベートし、その後、Ｂｉｏｔｅｋ  ＥＬ４０５プレートウォッシャーを使用して５０μｌ／ウェルのＰＢＳで洗浄することによって固定した。次いで、２０μｌの０．１％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ１００（ＰＢＳ中）を添加し、室温で２０分間インキュベートして、細胞を透過処理した。次いで、プレートを、Ｂｉｏｔｅｋ  ＥＬ４０５プレートウォッシャーを使用して５０μｌ／ウェルのＰＢＳで１回洗浄した。
【０１５６】
Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＡＴＭ  Ｓｅｒ１９８１抗体（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  ＃ＭＡＢ３８０６）を、０．０５％ポリソルベート／Ｔｗｅｅｎと３％  ＢＳＡを含有するＰＢＳで１００００倍希釈し、２０μｌを各ウェルに添加し、室温で一晩インキュベートした。翌朝、プレートを、Ｂｉｏｔｅｋ  ＥＬ４０５プレートウォッシャーを使用して５０μｌ／ウェルのＰＢＳで３回洗浄し、次いで、０．０５％ポリソルベート／Ｔｗｅｅｎと３％  ＢＳＡを含有するＰＢＳで５００倍希釈したＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８ヤギ抗ウサギＩｇＧ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ａ１１００１）及び０．００２ｍｇ／ｍｌ  Ｈｏｅｓｃｈｓｔ色素（Ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ＃Ｈ−３５７０）を含有する、２０μｌの二次Ａｂ溶液を添加した。室温での１ｈインキュベーション後、プレートを、Ｂｉｏｔｅｋ  ＥＬ４０５プレートウォッシャーを使用して５０μｌ／ウェルのＰＢＳで３回洗浄し、プレートを密閉し、読み取りまで、４℃のＰＢＳ中で維持した。プレートを、１０×対物レンズと共にＸＦ５３フィルターを使用するＡｒｒａｙＳｃａｎ  ＶＴＩ装置を使用して読み取った。２種のレーザーの設定を使用して、Ｈｏｅｓｃｈｓｔ（４０５ｎｍ）での核染色と、ｐＳｅｒ１９８１（４８８ｎｍ）の二次抗体染色を分析した。
【０１５７】
アッセイｂ）：ＡＴＲ細胞効力
原理：
ＡＴＲは、複製が阻止される間、ＤＮＡ損傷に応答してセリン又はトレオニン残基上の多数の基質をリン酸化する、ＰＩ３−キナーゼ関連のキナーゼである。Ｃｈｋ１、すなわちＡＴＲの下流プロテインキナーゼは、ＤＮＡ損傷チェックポイント制御における主要な役割を果たす。Ｃｈｋ１の活性化は、Ｓｅｒ３１７及びＳｅｒ３４５（後者が、ＡＴＲによるリン酸化／活性化に対する優先的な標的とみなされる）のリン酸化を含む。これは、式（Ｉ）の化合物及びＵＶ模倣体（ｍｉｍｅｔｉｃ）４ＮＱＯ（Ｓｉｇｍａ  ＃Ｎ８１４１）での処理後のＨＴ２９細胞におけるＣｈｋ１（Ｓｅｒ  ３４５）のリン酸化の低下を測定することによってＡＴＲキナーゼの阻害を測定するための、細胞ベースのアッセイであった。
【０１５８】
方法詳細：
ＨＴ２９細胞（ＥＣＡＣＣ  ＃８５０６１１０９）を、１％  Ｌグルタミンと１０％  ＦＢＳを含有する４０μｌ  ＥＭＥＭ培地中、６０００細胞／ウェルの密度で３８４ウェルアッセイプレート（Ｃｏｓｔａｒ  ＃３７１２）に播種し、一晩接着させた。翌朝、式（Ｉ）の化合物（１００％  ＤＭＳＯ中）を、超音波分注によってアッセイプレートに添加した。３７℃及び５％  ＣＯ２での１ｈインキュベーション後、４０ｎｌの３ｍＭ  ４ＮＱＯ（１００％  ＤＭＳＯ中）を、最小対照ウェル（これは、無応答対照を作製するために、４ＮＱＯで処理しないままであった）を除いて、超音波分注によって、すべてのウェルに添加した。プレートをさらに１ｈ、インキュベーターに戻した。次いで、細胞を、２０μｌの３．７％ホルムアルデヒドのＰＢＳ溶液を添加し、室温で２０分間インキュベートすることによって固定した。次いで、２０μｌの０．１％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ１００（ＰＢＳ中）を添加し、室温で２０分間インキュベートして、細胞を透過処理した。次いで、プレートを、Ｂｉｏｔｅｋ  ＥＬ４０５プレートウォッシャーを使用して５０μｌ／ウェルのＰＢＳで１回洗浄した。
【０１５９】
Ｐｈｏｓｐｈｏ−Ｃｈｋ１  Ｓｅｒ  ３４５  抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ＃２３４８）を、０．０５％ポリソルベート／Ｔｗｅｅｎを含有するＰＢＳで１５０倍希釈し、１５μｌを各ウェルに添加し、室温で一晩インキュベートした。翌朝、プレートを、Ｂｉｏｔｅｋ  ＥＬ４０５プレートウォッシャーを使用して５０μｌ／ウェルのＰＢＳで３回洗浄し、次いで、ＰＢＳＴで５００倍希釈したＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８ヤギ抗ウサギＩｇＧ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ  ＃Ａ−１１００８）及び０．００２ｍｇ／ｍｌ  Ｈｏｅｓｃｈｓｔ色素（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ  ＃Ｈ−３５７０）を含有する、２０μｌの二次Ａｂ溶液を添加した。室温での２ｈインキュベーション後、プレートを、Ｂｉｏｔｅｋ  ＥＬ４０５プレートウォッシャーを使用して５０μｌ／ウェルのＰＢＳで３回洗浄し、次いでプレートを、読み取りまで、黒色プレートシールで密閉した。プレートを、１０×対物レンズと共にＸＦ５３フィルターを使用するＡｒｒａｙＳｃａｎ  ＶＴＩ装置を使用して読み取った。２種のレーザーの設定を使用して、Ｈｏｅｓｃｈｓｔ（４０５ｎｍ）での核染色と、ｐＣｈｋ１（４８８ｎｍ）の二次抗体染色を分析した。
【０１６０】
アッセイｃ）：ＰＩ３Ｋ細胞効力
原理：
このアッセイを使用して、細胞におけるＰＩ３Ｋ−α阻害を測定した。ＰＤＫ１は、ＰＫＢの活性化に不可欠である、プロテインキナーゼＢ（Ａｋｔ１）の下流活性化ループキナーゼと特定された。脂質キナーゼであるホスホイノシチド３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）の活性化は、ＰＤＫ１によるＰＫＢの活性化にとって重要である。
【０１６１】
受容体チロシンキナーゼのリガンド刺激後、ＰＩ３Ｋは活性化され、これはＰＩＰ２をＰＩＰ３に転換させ、これがＰＤＫ１のＰＨドメインに結合され、ＰＤＫ１の原形質膜への動員がもたらされ、ここでは、これが、活性化ループ内のＴｈｒ３０８で、ＡＫＴをリン酸化する。
【０１６２】
この細胞ベースの作用様式アッセイの目的は、ＰＩ３Ｋ活性を阻害することによってＰＤＫ活性、又はＰＤＫ１の膜への動員を阻害する化合物を特定することである。化合物での２ｈの処理後のＢＴ４７４ｃ細胞におけるｐｈｏｓｐｈｏ−Ａｋｔ（Ｔ３０８）のリン酸化は、ＰＤＫ１の直接的尺度及びＰＩ３Ｋ活性の間接的尺度である。
【０１６３】
方法詳細：
ＢＴ４７４細胞（ヒト乳管癌、ＡＴＣＣ  ＨＴＢ−２０）を、１０％  ＦＢＳと１％グルタミンを含有するＤＭＥＭ培地中、５６００細胞／ウェルの密度で黒色３８４ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ  ＃３７１２）に播種し、一晩接着させた。
【０１６４】
翌朝、化合物（１００％  ＤＭＳＯ中）を、超音波分注によってアッセイプレートに添加した。３７℃及び５％  ＣＯ２での２ｈインキュベーション後、培地を吸引し、細胞を、２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、３ｍＭ  ＥＧＴＡ、５０ｍＭフッ化ナトリウム、２ｍＭ  オルトバナジン酸ナトリウム、０．２７Ｍスクロース、１０ｍＭ  β−グリセロリン酸塩、５ｍＭピロリン酸ナトリウム、０．５％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、及びｃｏｍｐｌｅｔｅプロテアーゼ阻害剤カクテル錠（Ｒｏｃｈｅ  ＃０４  ６９３  １１６  ００１、溶解緩衝液５０ｍｌにつき１錠使用）を含有する緩衝液で溶解した。
【０１６５】
２０分後、細胞溶解物を、抗−全ＡＫＴ抗体（ＰＢＳ緩衝液中）であらかじめコーティングされたＥＬＩＳＡプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ  ＃  ７８１０７７）に移し、非特異的結合を、０．０５％  Ｔｗｅｅｎ２０を含有する１％  ＢＳＡ（ＰＢＳ中）でブロックした。プレートを、４℃で一晩インキュベートした。翌日、プレートを、０．０５％  Ｔｗｅｅｎ２０を含有するＰＢＳ緩衝液で洗浄し、マウスモノクローナル抗ｐｈｏｓｐｈｏ  ＡＫＴ  Ｔ３０８と共に、２ｈ、さらにインキュベートした。プレートを、上の通りに再び洗浄し、その後、ウマ抗マウス−ＨＲＰ結合二次抗体を添加した。室温での２ｈインキュベーション後、プレートを洗浄し、ＱｕａｎｔａＢｌｕ基質作業溶液（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ＃１５１６９、供給業者の説明書に従って調製）を、各ウェルに添加した。６０分後に、生成物の蛍光発生を、ウェルへの停止溶液の添加によって停止させた。３２５ｎｍの励起波長と４２０ｎｍの発光波長をそれぞれ使用するＴｅｃａｎ  Ｓａｆｉｒｅプレートリーダーを使用して、プレートを読み取った。指定された場合を除いて、Ｃｅｌｌ  ＳｉｇｎａｌｌｉｎｇのＰａｔｈ  Ｓｃａｎ  Ｐｈｏｓｐｈｏ  ＡＫＴ（Ｔｈｒ３０８）サンドイッチＥＬＩＳＡキットに含有されている試薬（＃７１４４）を、このＥＬＩＳＡアッセイに使用した。
【０１６６】
アッセイｄ）：ｍＴＯＲ細胞効力
原理：
このアッセイを使用して、細胞におけるｍＴＯＲ阻害を測定した。Ａｃｕｍｅｎ  Ｅｘｐｌｏｒｅｒを使用する、ｐｈｏｓｐｈｏ−ＡＫＴ細胞ベースの作用機序アッセイの目的は、ＰＩ３Ｋα又はｍＴＯＲ−Ｒｉｃｔｏｒ（ラパマイシン非感受性ｍＴＯＲコンパニオン）の阻害剤を特定することである。これは、化合物での処理後のＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞におけるＳｅｒ４７３でのＡｋｔタンパク質のリン酸化（ＡＫＴは、シグナル伝達経路において、ＰＩ３Ｋαの下流に位置する）のいずれかの低下によって測定される。
【０１６７】
方法詳細：
ＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞（ヒト乳腺癌＃ＡＴＣＣ  ＨＴＢ  １３２）を、１０％  ＦＢＳと１％グルタミンを含有する４０μｌのＤＭＥＭ培地中、１５００細胞／ウェルで、Ｇｒｅｉｎｅｒ  ３８４ウェル黒色平底プレートに播種した。細胞プレートを、３７℃インキュベーター内で１８ｈインキュベートし、その後、超音波分注を使用して、式（Ｉ）の化合物（１００％  ＤＭＳＯ中）を与えた。化合物は、ランダム化されたプレートマップに、１２点の濃度範囲で与えた。１００％  ＤＭＳＯの添加（最大シグナル）、又はｐＡＫＴシグナルを完全に消去する参照化合物（ＰＩ３Ｋ−β阻害剤）の添加（最小対照）によって、対照ウェルを作製した。次いで、化合物を、２つのアッセイプロトコルＡ又はＢのうちの１つによって試験した：
【０１６８】
プロトコルＡ：
プレートを、３７℃で２ｈインキュベートした；次いで、細胞を、１０μｌの３．７％ホルムアルデヒド溶液の添加によって固定した。３０分後、プレートを、Ｔｅｃａｎ  ＰＷ３８４プレートウォッシャーを使用して、ＰＢＳで洗浄した。ウェルをブロックし、０．５％  Ｔｗｅｅｎ２０と１％  Ｍａｒｖｅｌ（商標）（乾燥粉乳）を含有する４０μｌのＰＢＳの添加で、細胞を透過処理し、室温で６０分間インキュベートした。プレートを、０．５％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ２０を含有するＰＢＳで洗浄し、２０μｌウサギ抗ｐｈｏｓｐｈｏ  ＡＫＴ  Ｓｅｒ４７３（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，＃３７８７）（同じＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ中）＋１％  Ｍａｒｖｅｌ（商標）を添加し、４℃で一晩インキュベートした。
【０１６９】
プレートを、Ｔｅｃａｎ  ＰＷ３８４を使用して、ＰＢＳ＋０．０５％  Ｔｗｅｅｎ２０で３回洗浄し、ＰＢＳで希釈した２０μｌの二次抗体Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８抗ウサギ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，＃Ａ１１００８）＋０．０５％  Ｔｗｅｅｎ２０（１％  Ｍａｒｖｅｌ（商標）を含有）を、各ウェルに添加し、室温で１ｈインキュベートした。プレートを、前と同様に３回洗浄し、次いで、２０μｌ  ＰＢＳを各ウェルに添加し、プレートを黒色プレートシーラーで密閉した。
【０１７０】
プレートを、可能な限り早く、Ａｃｕｍｅｎプレートリーダーで読み取り、４８８ｎｍレーザーでの励起後に、緑色蛍光を測定した。このシステムを使用して、ＩＣ５０値をもたらし、対照ウェルによって、プレートの質を決定した。アッセイ性能を見るために、毎回、参照化合物を利用した。
【０１７１】
プロトコルＢ：
次いで、細胞プレートを３７℃で２ｈインキュベートし、その後、２０μｌ  ３．７％ホルムアルデヒド（ＰＢＳ中）／Ａ（１．２％最終濃度）の添加によって固定し、それに続いて３０分の室温インキュベーションを行い、次いで、ＢｉｏＴｅｋ  ＥＬｘ４０６プレートウォッシャーを使用して、１５０μｌ  ＰＢＳ／Ａで２×洗浄した。細胞を、透過処理し、２０μｌのアッセイ緩衝液（０．１％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００（ＰＢＳ中）／Ａ＋１％  ＢＳＡ）で、室温で１ｈブロックし、次いで、５０μｌ  ＰＢＳ／Ａで１×洗浄した。一次ｐｈｏｓｐｈｏ−ＡＫＴ（Ｓｅｒ４７３）  Ｄ９Ｅ  ＸＰ（登録商標）ウサギモノクローナル抗体（＃４０６０，Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を、アッセイ緩衝液で１：２００希釈し、ウェルあたり２０μｌを添加し、プレートを４℃で一晩インキュベートした。細胞プレートを２００μｌ  ＰＢＳ／Ｔで３×洗浄し、次いで、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８ヤギ抗ウサギＩｇＧ二次抗体（＃Ａ１１００８，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）のアッセイ緩衝液で１：７５０希釈した２０μｌを、１：５０００希釈のＨｏｅｃｈｓｔ  ３３３４２と共に、ウェルごとに添加した。室温での１ｈインキュベーション後、プレートを、２００μｌ  ＰＢＳ／Ｔで３×洗浄し、４０μｌ  ＰＢＳ  ｗ／ｏ  Ｃａ、Ｍｇ、及びＮａ  Ｂｉｃａｒｂ（Ｇｉｂｃｏ  ＃１４１９０−０９４）をウェルごとに添加した。
【０１７２】
染色された細胞プレートを、黒色シールで覆い、次いで、１０×対物レンズを用いるＣｅｌｌ  Ｉｎｓｉｇｈｔイメージングプラットフォーム（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で読み取った。一次チャネル（Ｈｏｅｃｈｓｔ青色蛍光（ｂｌｕｅ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ）４０５ｎＭ、ＢＧＲＦＲ＿３８６＿２３）を、Ａｕｔｏｆｏｃｕｓに対して使用し、事象の数を計数した（これは、試験された化合物の細胞毒性に関する情報を提供する）。二次チャネル（Ｇｒｅｅｎ  ４８８ｎＭ、ＢＧＲＦＲ＿４８５＿２０）は、ｐＡＫＴ染色を測定した。データを分析し、Ｇｅｎｅｄａｔａ  Ｓｃｒｅｅｎｅｒ（登録商標）ソフトウェアを使用してＩＣ５０を算出した。
【０１７３】
表２は、試験ａ）、ｂ）、ｃ）、及びｄ）における実施例を試験した結果を示す。結果は、いくつかの試験の幾何平均であり得る。
【０１７４】
【表１】
2020514344.tif 000026
【０１７５】
表３は、試験ａ）、ｂ）、ｃ）、及びｄ）における中国特許第１０２３９９２１８Ａ号明細書（段落０２４９、０２５２、及び０１０２）並びに中国特許第１０２３７２７１１Ａ号明細書（段落０１０１及び０２６８）のいくつかの化合物についての比較データを示す。結果は、いくつかの試験の幾何平均であり得る。
【０１７６】
【表２】
2020514344.tif 000027
【国際調査報告】
2020514344.tif 000030
2020514344.tif 000031