(57)【要約】  本発明は、木香抽出物およびコスツノリド（costunolide）を有効成分として含有する前立腺肥大症治療用の組成物および健康機能食品に関する。【選択図】図３
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
木香抽出物を有効成分として含有する、前立腺肥大症の治療および予防用の組成物。
【請求項２】
前記木香抽出物は、エタノール、メタノール、水のいずれかを溶媒とする抽出物であることを特徴とする、請求項１に記載の前立腺肥大症の治療および予防用の組成物。
【請求項３】
コスツノリド（costunolide）を有効成分として含有する、前立腺肥大症の治療および予防用の組成物。
【請求項４】
請求項１〜請求項３のいずれか１項を含有する前立腺肥大症緩和用の健康機能食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、木香抽出物およびコスツノリド（costunolide）を有効成分として含有する、前立腺肥大症治療用の組成物および健康機能食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
木香（木香；Aucklandiae Radix）は、キク（Asteraceae）科の多年生草であるAucklandia lappa Decneの根である。韓国の大韓薬典外韓薬（生薬）規格集収載生薬（ｋｈｐ）にも収載されており、東医宝鑑と方藥合編、本草綱目のような東洋医書にも収載されている。
【０００３】
現在流通している木香はA. lappaの栽培品で、韓国内では自生せず、中国の雲南、広西、四川などで栽培されているものである。それで、栽培地域によって雲木香または唐木香で流通されるが、これは木香の異名であるだけで、同じA. lappaに起因するものである。韓国内では植物名が木香であるキク科のInula helenium L.の根が土木香に命名されてA. lappaと分離されて大韓薬典外（生薬）規格集に収録されており、代替品として使用されているが、市場性がないものと知られている。
【０００４】
また、他のキク科の植物であるVladimiria souliei(Franch) Lingの根も中国薬剤市場で川木香という名前で流通されており、ウマノスズクサ科（Aristolochiae）のAristolochia contorta Bungeの根も青木香という名前で木香の混・偽品として流通されているが、生理活性化合物の組成と含量の違いのため、韓国内では流通が禁止されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
特許請求の範囲を始め、本発明で「木香」というのは、雲木香、土木香、川木香などを全て含んでいる。
【０００６】
木香の根は精油（精油）０．３〜２．７８％を含有しており、その（木香）主要成分としてコスツノリド（costunolide, Ｃ１５Ｈ２０Ｏ２：２３２．３２）とデヒドロコスツスラクトン（dehydrocostuslactone, Ｃ１５Ｈ１８Ｏ２：２３０．３０）の合計を１．８％以上含有する生薬として、韓方では芳香性健胃、利尿、去痰、駆虫作用があって食滞、嘔吐、吐瀉、下痢などの胃腸疾患に使用されてきている。
【０００７】
特に、主要成分の一つであるコスツノリド（costunolide）はテルペン系のセスキテルペンラクトン（sesquiterpene lactones）で、伝統的に抗炎、抗菌、抗ウイルスなどの様々な治療製剤として利用されてきた。コスツノリドは酸化窒素シンターゼの活性を遮断することにより、血管の酸化を防止する強力な抗酸化作用をする。これは、植物が紫外線や病虫害などの酸化ストレスから自分を守るために作り出す物質として、人体にも似たような作用をするものと見られる。最近では、様々な癌細胞柱の成長、新血管の生成、転移を防いでくれる抗癌効果もあることが報告されている。
【０００８】
前立腺は４×３×３ｃｍ３のサイズを有し、体積は約２０ｍｌであって、繊維筋組織が線組織をめぐる形をしている男性の膀胱下部にある性腺機関であり、第二次性徴の後、２０代後半まで毎年１．６ｇずつ成長して成人サイズを成すが、３０代後半から毎年０．４ｇずつ大きくなる。
【０００９】
前立腺肥大症は、中年以降に相対的に減少する体内のテストステロン（testosterone）のレベルの減少とともに、増加するＤＨＴ（ジヒドロテストステロン；dihydrotestosterone）の濃度によって、前立腺組織の結節性過増殖および肥大が伴って下部尿路閉鎖の症状などを誘発する疾患として、前立腺組織内のDHTの増加には、５α−リダクターゼが重要な役割を果たす。
【００１０】
また、内因性で前立腺組織では、前立腺癌と前立腺肥大症でアポトーシス抑制遺伝子であるサバイビン（survivin）が増加することと報告されており、ｂｃｌ−２の発現が増加することが知られているところ、このような病理機序を介して、前立腺組織が過成長にされ、臨床的には、排尿閉塞、残尿感、排尿不安定性、排尿困難、排尿痛のような様々な排尿関連症状を経験することになり、ひどい場合は結石や腎不全、血尿、感染症の合併症を経験することができる。
【００１１】
特に、前立腺肥大症は、老齢人口の増加とともに、男性人口の生活の質に大きな影響を与えることになり、最近になって、経済社会状況が改善されながら、その重要性に対する認識が変化しており、治療薬の市場も拡大している傾向にある。
【００１２】
これまで、前立腺肥大症に対しては、尿の改善をはじめとした症状を緩和させるα−アドレナリン（alpha adrenergic）受容体遮断薬とＤＨＴ濃度を下げる５α−リダクターゼ阻害剤、そして一部の補完代替療法剤が主に使用されてきている程度で、治療選択の幅がそんなに広くなかった。
【００１３】
α−アドレナリン受容体遮断薬には、テラゾシン（terazosin）、ドキサゾシン（doxazosin）、アルフゾシン（alfuzosin）、タムスロシン（tamsulosin）などがあり、５α−リダクターゼ阻害剤にはフィナステリド（finasteride）、デュタステリド（dutasteride）ぐらいがあるだけだ。これらの薬剤は、その治療学的な便益にもかかわらず、薬剤自体が持つ固有の異常反応のために使用にかなりの制約がある。例えばα−アドレナリン受容体遮断薬は、起立性高血圧と心血管系の副作用が、５α−リダクターゼ阻害剤は、性欲減退のような副作用がある。これらの理由のために補完代替治療薬剤が代案として提示されており、ここには、Saw palmettoなどが多く使用されている。しかし、これらの薬剤に対しても国内関連学会が海外の研究結果をもとに、前立腺肥大症の改善効果に否定的であるという意見を出すなど、効能の限界があって、新たな治療効果物質の必要性が台頭している。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明者らが注目したコスツノリド（Costunolide）を有効成分とする木香抽出物は、これまで前立腺肥大症の治療効果に対して知られているところが皆無である。本発明者らは、細胞実験および前立腺誘導動物実験を通じて、上記成分が肝毒性および細胞毒性はないが、免疫力を増加させ、前立腺重量および体積を減少させて、肥厚した前立腺を改善させることを確認して本発明を完成した。
【００１５】
本発明は、上記のような背景から案出されたもので、木香が前立腺肥大症に効果があることを実証して、これを同用途に適用することができる組成物を提供することにその目的がある。
【００１６】
上記のような目的を達成するための本発明は、
木香抽出物を有効成分として含有する、前立腺肥大症の治療および予防用の組成物であることを特徴とする。
この際、上記木香抽出物は、エタノール、メタノール、水のいずれかを溶媒とする抽出物であることを特徴とする。
【００１７】
本発明は、またコスツノリドを有効成分として含有する、前立腺肥大症の治療および予防用の組成物であることを特徴とする。
【００１８】
本発明は、また上記木香抽出物またはコスツノリドを含有する前立腺肥大症緩和用の健康機能食品であることを特徴とする。
【発明の効果】
【００１９】
後述するように、本発明に係る木香抽出物は、前立腺肥大症に効果がある。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】図１は、木香メタノール１００％の抽出物、木香エタノール３０％の抽出物、木香エタノール７０％の抽出物およびコスツノリド処理による細胞のＮＯ生成率および抗炎症効能の評価結果を示したものである。
【図２Ａ】図２Ａ、図２Ｂ、図２Ｃは、木香エタノール３０％の抽出物、木香エタノール７０％の抽出物およびコスツノリド処理による炎症性サイトカイン（ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α）の濃度の測定結果を示したものである。
【図２Ｂ】図２Ａ、図２Ｂ、図２Ｃは、木香エタノール３０％の抽出物、木香エタノール７０％の抽出物およびコスツノリド処理による炎症性サイトカイン（ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α）の濃度の測定結果を示したものである。
【図２Ｃ】図２Ａ、図２Ｂ、図２Ｃは、木香エタノール３０％の抽出物、木香エタノール７０％の抽出物およびコスツノリド処理による炎症性サイトカイン（ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α）の濃度の測定結果を示したものである。
【図３】図３は、木香メタノール１００％の抽出物、木香エタノール３０％の抽出物、木香エタノール７０％の抽出物およびコスツノリド処理による前立腺肥大症の改善効果を示したものである。
【図４】図４と図５は、木香抽出物とコスツノリドによる前立腺病理組織の検査結果を示したものである。
【図５】図４と図５は、木香抽出物とコスツノリドによる前立腺病理組織の検査結果を示したものである。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
以下、本発明を実施例とともに詳細に説明する。ただし、実施例は、本発明の理解を助けるためのもので、本発明の範囲がこれに限定されるものではないことを明らかにしておく。
【００２２】
＜１．木香抽出物の製造＞
本実験に使用した木香は、ヒョンジン剤薬から購入した。
【００２３】
購入した木香を還流抽出器（ＣＯＳＭＯＳ６６０/８０Ｌ, Misung Scientific.co.Ltd., Yangju, Kyunggido, Korea）を利用して、総２回抽出した後、抽出物を混合して使用した。最初の抽出時には、溶媒をサンプル重量の１０倍、第二の抽出時には、サンプルの重量の７倍の容量に添加した後、それぞれ３時間、加熱抽出した。
【００２４】
抽出物は、濾過（Ｗｈａｔｍａｎ  ｎｏ  ２, Maidstone, England）の後、凍結乾燥（ＰＶＴＦＤ１０Ｒ, Ilsinb iobase, Dounducheon, Gyeonggido, Korea）して粉末化（Ｃｙｃｌｏｔｅｃ  １０９３  Ｓａｍｐｌｅ  Ｍｉｌｌ, Tecator Co., Sweden）した後、−２０℃に冷凍保存して使用した。
【００２５】
溶媒としては、メタノール１００％、エタノール７０％、エタノール３０％を使用し、抽出条件は同じである。
【００２６】
＜２．木香抽出物のHPLC分析＞
木香抽出物を１０ｍｇずつ秤量して、メタノールに３０分以上振って溶かした。この時まで溶けない成分は、膜フィルター（０．４５μｍ）で除去し、透明な溶液だけ上記のような条件でＨＰＬＣ分析して、クロマトグラムを得て現れた結果を表にまとめた（表１）。クロマトグラムからそれぞれのピーク面積を検量式に代入しておおよその濃度を計算した結果、３０％のエタノール抽出物に比べて、７０％のエタノール抽出物で、コスツノリドは約１．８倍、デヒドロコスツスラクトン成分は、約１．６倍より多く含有されていることを確認した。
【００２７】
【表１】
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【００２８】
＜３．木香抽出物およびコスツノリドの抗炎症効能の評価＞
１）マクロファージの培養
本実験に使用されたマクロファージＲＡＷ  ２６４．７細胞は、American Type Culture Collection（ＡＴＣＣ）から分譲を受けたものである。この細胞は、１０％ ウシ胎児血清（ＦＢＳ）が含まれたＤＭＥＭ培地を使用してＣＯ２インキュベーター（Formascientific, Inc.）で培養した。これを顕微鏡で観察して、細胞が分化されたことを確認した後、実験に使用した。
【００２９】
２）一酸化窒素（Nitric oxide）（ＮＯ）の変化および抗炎症効能の評価
マクロファージの活性化を誘発するために、ＲＡＷ  ２６４．７細胞にリポ多糖（ＬＰＳ）２００ｎｇ／ｍｌを処理し、同時に木香メタノール１００％の抽出物（ＭｅＯＨ  １００％と表記)、木香エタノール３０％の抽出物（ＥｔＯＨ  ３０％と表記）および木香エタノール７０％の抽出物（ＥｔＯＨ  ７０％と表記）およびコスツノリドを様々な濃度で（μｇ／ｍｌ）処理して、３７℃、５％  ＣＯ２インキュベーターで１８時間培養した。１８時間後、それぞれのグループごとに上澄み液１００μｌずつ新しいプレートに移し、ここにＧｒｉｅｓｓ ｒｅａｇｅｎｔ Ａ（２％  ｓｕｌｆａｎｉｌａｍｉｄｅ  ｉｎ ５％  ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ  ａｃｉｄ)、Ｇｒｅｉｓｓ ｒｅａｇｅｎｔ Ｂ（０．２％ ｎａｐｈｔｈｙｌｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅ ｄｉｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）を１：１の割合で混合した溶液１００μｌを入れた後、５４０ｎｍで吸光度を測定した。
【００３０】
実験の結果、対照群のグループである細胞単独処理群に比べてＬＰＳ単独処理グループのＮＯ量が増加し、木香抽出物およびコスツノリドが処理されたグループのすべてが濃度依存的であり、有意にＮＯの量が減る傾向が現れた（図１）。これらの結果から木香抽出物およびコスツノリドは、細胞の過剰な炎症反応を抑制して、組織の損傷を防止する抗炎症効果があることを確認することができる。
【００３１】
３）炎症性サイトカインの変化および抗炎症効能の評価
ＲＡＷ  ２６４．７細胞にＬＰＳ  ２００ｎｇ／ｍｌを処理し、同時に木香抽出物（エタノール３０％、７０％）およびコスツノリドを濃度別（μｇ／ｍｌ）に処理して、３７℃、５％  ＣＯ２インキュベーターで１８時間培養した。１８時間後、それぞれのグループごとの上澄み液で炎症性サイトカインＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α濃度を確認するために、それぞれのＥＬＩＳＡ分析キット（eBioScience 88-7013, 88-7064 USA, BD 555268 USA）を使用して確認した。
【００３２】
図２は、ＬＰＳによって活性化されたマクロファージの培養液中に生成された炎症性サイトカイン（cytokine）のＩＬ−１β（図２Ａ）、ＩＬ−６（図２Ｂ）、ＴＮＦ−α（図２Ｃ）の濃度をＥＬＩＳＡ分析キットを使用して測定した結果としてＬＰＳのみを処理した細胞と比較した時、木香抽出物およびコスツノリドを処理した細胞で炎症性サイトカインの分泌量が減少することを測定し、これにより抗炎症効果があることを確認することができる。
【００３３】
＜４．木香抽出物の前立腺肥大症の改善効果の評価＞
１）前立腺肥大症の動物モデルの製作
６週齢の雄Ｗｉｓｔａｒラット（セムタコ、韓国）を入手して、１週間純化させた後、各オブジェクトの体重が３４０〜３５０ｇであるとき、実験群ごとに６匹ずつ構成して使用した。
【００３４】
実験構成は、精巣を去勢していない群と精巣を去勢して４時間の回復時間を与えた群とに分けて、テストステロン（testosterone）５ｍｇ／ｋｇを皮下注射して８週間前立腺肥大を誘導（ＢＰＨ誘導群）した。木香抽出物およびコスツノリドは、各濃度別（ｍｇ／ｋｇ）で１日１回、週７回で８週間経口投与して実験群を製作し、前立腺肥大症の治療薬として使用されているフィナステリド（finasteride）を経口投与して陽性対照群として使用した。
【００３５】
２）前立腺重量および体積の変化
実験終了の後、すべての実験群のラットは安楽死させた後、前立腺の組織と主要な臓器を摘出し、動物体重用の電子秤およびcaliper（ｍｍ３）を使用して、その重量および体積を測定した（表２）。
【００３６】
その結果、ＢＰＨ誘導群は正常対照群に比べて有意に体重および体積が増加して、前立腺肥大が誘導されたことを確認した。
【００３７】
木香抽出物投与群の前立腺重量および体積は、すべてＢＰＨの治療薬であるフィナステリド（Finasteride）投与群（Ｆｉｎａ）と似たような数値に減少し、特にコスツノリド投与群（０．０７５μｇ／ｍｌ）の場合、フィナステリド群より減少効果がより優れていることを確認した（図３）。
【００３８】
【表２】
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【００３９】
３）肝毒性および腎機能の変化を測定
血清中の生化学的指標の分析のために、剖検時にすべての群のラットから腹帯静脈を介して血液を得た。血液は、約３０分間凝固させた後、血清を分離するために１０，０００ｒｐｍに５分間遠心分離した。血清を分離した後、肝機能（ＡＳＴ、ＡＬＰ）、脂蛋白質（Total cholesterol(T-CHO)、HDL cholesterol(HDL-C)、LDL cholesterol(LDL-C)）、腎機能（Creatine）の数値を確認するために生化学分析器（ＡＵ４８０, Beckman Coulter, USA）を使用して測定した（表３）。その結果、抽出物およびコスツノリド投与群の両方で有意な変化が観察されず、肝毒性および腎毒性がないことを確認した。
【００４０】
【表３】
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【００４１】
４）前立腺病理組織検査
試験終了の後、各群から摘出された前立腺組織は１０％の中性ホルマリンに固定して保存した。各群ごとの組織は、パラフィンブロックで製作し、組織検鏡用のスライドを製作して、Ｈ＆Ｅ（hematoxylin ＆ eosin）染色した。組織検鏡は顕微鏡（Olympus, Tokyo, Japan）を通じて確認し、Ｘ２００倍率で実施した。
【００４２】
正常対照群に比べて、前立腺肥大症誘発群では、前立腺小細胞の上皮細胞の委縮と肥大および基底膜の厚さが全体的に厚くなったことを見ることができた。木香抽出物およびコスツノリドを投与した実験群では、正常対照群と同様に胞状腺が委縮せずに丸い形を維持しており、前立腺肥大症誘発群に比べて上皮細胞の厚さが目に見えて減少していることが確認できた（図４、図５）。
【００４３】
＜５．木香抽出物の毒性評価＞
木香抽出物の安全領域を調査するために、急性毒性試験およびＭＴＤ毒性試験を実施した。
【００４４】
急性毒性試験は、健康な雌雄７週齢のＳＤ  ｒａｔを正常対照群の１グループと薬物投与群の２グループ（木香抽出物を、体重ｋｇ当たり１，０００ｍｇと２，０００ｍｇを経口単回投与した２グループ）とに分類してグループごとに、それぞれ５匹ずつをとって実験に臨んだ。実験の結果、正常対照群と薬物投与群間の動物の体重、飼料摂取量等に有意な差がなかったし、毒性関連臨床症状が観察されなかった（表４．急性毒性試験の結果）。
【００４５】
【表４】
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【００４６】
−体重、飼料摂取量および臨床症状：正常対照群と木香抽出物投与群間の有意な差がない。
−Ｃ．Ｓ．＊：Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｓｉｇｎ
【００４７】
ＭＴＤ毒性試験は、健康な雄７週齢のＳＤ  ｒａｔを薬物投与群の２グループ（木香抽出物を３０％エタノールの抽出物、７０％エタノールの抽出物で５日間経口投与した２グループ）に分類してグループごとに各３匹ずつをとって実験に臨んだ。実験の結果、薬物投与群間の動物の体重、飼料摂取量等に有意な差がなかったし、臨床および剖検で毒性関連の症状が観察されなかった（表５．ＭＴＤ毒性試験の結果）。
【００４８】
【表５】
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【００４９】
−体重、飼料摂取量および臨床症状：二つのグループ間の有意な差がない。
−Ｃ．Ｓ．＊：Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｓｉｇｎ，ＮＦ＊＊：Ｎｅｃｒｏｐｓｙ  Ｆｉｎｄｉｎｇｓ
【００５０】
以上の結果から、木香抽出物は、一般的な毒性がなく、免疫関連抗炎症反応を増加させ、前立腺重量および体積を減少させて、肥厚した前立腺を改善させることができるという点がわかる。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図３】
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【図４】
2020523421.tif 000013
【図５】
2020523421.tif 000014
【国際調査報告】
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2020523421.tif 000016
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