(57)【要約】本発明は、神経変性疾患の治療薬として有用である小有機分子を提供する。骨形成タンパク質（ＢＭＰ）の阻害剤として作用する小有機分子は、神経炎症性障害、特に多発性硬化症の処置に有用である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
骨形成タンパク質２（ＢＭＰ２）阻害剤を含む医薬組成物であって、前記ＢＭＰ２阻害剤が神経炎症性疾患の処置に使用される小分子であり、前記小分子が、ＳＭ１、ＳＭ２、ＳＭ３、ＳＭ４、ＳＭ５、ＳＭ６、ＳＭ７、ＳＭ８、ＳＭ９からなる群から選択される、医薬組成物。
【化１】
2020517678.tif 000036
【化２】
2020517678.tif 000037
【化３】
2020517678.tif 000038
【化４】
2020517678.tif 000039
【請求項２】
前記処置が追加の治療薬を更に含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記神経炎症性疾患が多発性硬化症である、請求項１又は２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記多発性硬化症が再発寛解型多発性硬化症である、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
一般式（Ｉ）の化合物又はその塩を含む医薬組成物であって、
【化５】
2020517678.tif 000040
式中、
Ｘ１及びＸ２は各々独立にＳ、Ｏ又はＮ−Ｒ４であり、Ｒ４は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アリール及びヘテロアリールからなる群から選択され、
Ｘ３は、ＣＮ、ハロゲン、ＮＯ２、ＣＯ−Ｘ９及びＳＯ２Ｘ９からなる群から選択され、Ｘ９は、ＯＨ、Ｏ−及びＮＨ２からなる群から選択され、
Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７及びＸ８は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アリール、アミン、ハロゲン、アルコキシ、ヒドロキシ、ヘテロアリール、ＮＯ２、ＣＮ、ＣＯ−Ｘ１０及びＳＯ２Ｘ１０からなる群から各々独立に選択され、Ｘ１０は、ＯＨ、Ｏ−及びＮＨ２からなる群から選択され、
Ｒ１とＲ２の一方は存在せず、他方のＲ１及びＲ２は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アリール、アミン、ハロゲン、アルコキシ、ヘテロアリール、ＣＮ、ＣＯ−Ｘ１１及びＳＯ２Ｘ１１からなる群から選択され、Ｘ１１は、ＯＨ、Ｏ−及びＮＨ２からなる群から選択され、
Ｒ３は、ＯＲ５、Ｏ−及びＮＲ６Ｒ７からなる群から選択され、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル及びアリールからなる群から各々独立に選択され、
点線の各々は独立に単結合又は二重結合である、
医薬組成物。
【請求項６】
神経炎症性疾患の処置に使用される、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記処置が追加の治療薬を更に含む、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記神経炎症性疾患が多発性硬化症である、請求項６又は７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記多発性硬化症が再発寛解型多発性硬化症である、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記化合物がＳＭ１である、請求項５から９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【化６】
2020517678.tif 000041
【請求項１１】
神経炎症性疾患の処置に使用される、一般式（ＩＸ）の化合物又はその塩を含む医薬組成物であって、
【化７】
2020517678.tif 000042
式中、
Ｘ１２、Ｘ１３、Ｘ１５及びＸ１６は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アリール、アミン、ハロゲン、アルコキシ、ヒドロキシ、ヘテロアリール、ＣＮ、ＮＯ２、ＣＯ−Ｘ１９及びＳＯ２Ｘ１９からなる群から各々独立に選択され、Ｘ１９は、ＯＨ、Ｏ−及びＮＨ２からなる群から選択され、
Ｘ１４及びＸ１８は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アリール、アミン、ハロゲン、アルコキシ、ヒドロキシ、ヘテロアリール、ＣＮ、ＮＯ２、ＣＯ−Ｘ２０及びＳＯ２Ｘ２０からなる群から各々独立に選択され、Ｘ２０は、ＯＨ、Ｏ−及びＮＨ２からなる群から選択され、
Ｘ１７はＳ、Ｏ又はＮ−Ｒ９であり、Ｒ９は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アリール及びヘテロアリールからなる群から選択され、
ｎは１又は２であり、
Ｒ８は、アルキル、ハロゲン化アルキル、シクロアルキル及びアリールからなる群から選択される、
医薬組成物。
【請求項１２】
前記処置が追加の治療薬を更に含む、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記神経炎症性疾患が多発性硬化症である、請求項１１又は１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記多発性硬化症が再発寛解型多発性硬化症である、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記化合物がＳＭ９である、請求項１１から１４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【化８】
2020517678.tif 000043
【請求項１６】
神経炎症性疾患の処置に使用される、一般式（ＶＩＩ）の化合物又はその塩を含む医薬組成物であって、
【化９】
2020517678.tif 000044
式中、
Ｘ２１及びＲ１０は、アルキル、ハロゲン化アルキル、シクロアルキル、アリール、アミン、ハロゲン、アルコキシ、ヒドロキシ、ヘテロアリール、ＣＮ、ＮＯ２、ＣＯ−Ｘ２３及びＳＯ２Ｘ２３からなる群から各々独立に選択され、Ｘ２３は、ＯＨ、Ｏ−及びＮＨ２からなる群から選択され、
Ｘ２２は、ＯＲ１２、Ｏ−及びＮＲ１３Ｒ１４からなる群から選択され、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル及びアリールからなる群から各々独立に選択され、
Ｒ１１は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アリール、アミン、ハロゲン、アルコキシ、ヘテロアリール、ＣＮ、ＣＯ−Ｘ２４及びＳＯ２Ｘ２４からなる群から選択され、Ｘ２４は、ＯＨ、Ｏ−及びＮＨ２からなる群から選択される、
医薬組成物。
【請求項１７】
前記処置が追加の治療薬を更に含む、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
前記神経炎症性疾患が多発性硬化症である、請求項１６又は１７に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
前記多発性硬化症が再発寛解型多発性硬化症である、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
前記化合物がＳＭ７である、請求項１６から１９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【化１０】
2020517678.tif 000045
【請求項２１】
一般式（ＶＩ）の化合物又はその塩を含む医薬組成物であって、
【化１１】
2020517678.tif 000046
式中、
Ｘ２４はＯ又はＳであり、
Ｒ１５及びＸ２５は、アルキル、ハロゲン化アルキル、シクロアルキル、アリール、アミン、ハロゲン、アルコキシ、ヒドロキシ、ヘテロアリール、ＣＮ、ＮＯ２、ＣＯ−Ｘ２６及びＳＯ２Ｘ２６からなる群から各々独立に選択され、Ｘ２６は、ＯＨ、Ｏ−及びＮＨ２からなる群から選択され、
Ｒ１６は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アリール、アミン、ハロゲン、アルコキシ、ヘテロアリール、ＣＮ、ＣＯ−Ｘ２４及びＳＯ２Ｘ２４からなる群から選択され、Ｘ２４は、ＯＨ、Ｏ−及びＮＨ２からなる群から選択される、
医薬組成物。
【請求項２２】
神経炎症性疾患の処置に使用される、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
前記処置が追加の治療薬を更に含む、請求項２２に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
前記神経炎症性疾患が多発性硬化症である、請求項２２又は２３に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
前記多発性硬化症が再発寛解型多発性硬化症である、請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
神経炎症性疾患の処置に使用される、一般式（ＩＩ）の化合物又はその塩を含む医薬組成物であって、
【化１２】
2020517678.tif 000047
式中、
Ｒ１７及びＲ１８は各々独立に、任意に置換されているフェニル環であり、
Ｒ１９は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル及びアリールからなる群から選択され、
Ｒ２０とＲ２１の一方は存在せず、他方のＲ２０又はＲ２１は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル及びアリールからなる群から選択され、
点線の各々は独立に単結合又は二重結合である、
医薬組成物。
【請求項２７】
前記処置が追加の治療薬を更に含む、請求項２６に記載の医薬組成物。
【請求項２８】
前記神経炎症性疾患が多発性硬化症である、請求項２６又は２７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
前記多発性硬化症が再発寛解型多発性硬化症である、請求項２８に記載の医薬組成物。
【請求項３０】
前記化合物がＳＭ２である、請求項２６から２９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【化１３】
2020517678.tif 000048
【請求項３１】
一般式（ＩＩＩ）の化合物又はその塩を含む医薬組成物であって、
【化１４】
2020517678.tif 000049
式中、
Ｒ２２及びＲ２３は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル及びアリールからなる群から各々独立に選択され、
Ｘ２７は、ハロゲン化アルキル、アミン、ハロゲン、アルコキシ、ヒドロキシ、ＣＮ及びＮＯ２からなる群から選択される、
医薬組成物。
【請求項３２】
神経炎症性疾患の処置に使用される、請求項３１に記載の医薬組成物。
【請求項３３】
前記処置が追加の治療薬を更に含む、請求項３２に記載の医薬組成物。
【請求項３４】
前記神経炎症性疾患が多発性硬化症である、請求項３２又は３３に記載の医薬組成物。
【請求項３５】
前記多発性硬化症が再発寛解型多発性硬化症である、請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項３６】
前記化合物がＳＭ３である、請求項３１から３５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【化１５】
2020517678.tif 000050
【請求項３７】
一般式（ＩＶ）の化合物又はその塩を含む医薬組成物であって、
【化１６】
2020517678.tif 000051
式中、
Ｘ２８は、ハロゲン化アルキル、アミン、ハロゲン、アルコキシ、ヒドロキシ、ＣＮ及びＮＯ２からなる群から選択され、
Ｒ２４は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル及びアリールからなる群から選択され、
Ｒ２５は、アルキル、ハロゲン化アルキル、シクロアルキル、アリール、アミン、ハロゲン、アルコキシ、ヒドロキシ、ヘテロアリール、ＣＮ及びＮＯ２からなる群から選択される、
医薬組成物。
【請求項３８】
神経炎症性疾患の処置に使用される、請求項３７に記載の医薬組成物。
【請求項３９】
前記処置が追加の治療薬を更に含む、請求項３８に記載の医薬組成物。
【請求項４０】
前記神経炎症性疾患が多発性硬化症である、請求項３８又は３９に記載の医薬組成物。
【請求項４１】
前記多発性硬化症が再発寛解型多発性硬化症である、請求項４０に記載の医薬組成物。
【請求項４２】
前記化合物がＳＭ４である、請求項３７から４１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【化１７】
2020517678.tif 000052
【請求項４３】
一般式（Ｖ）の化合物又はその塩を含む医薬組成物であって、
【化１８】
2020517678.tif 000053
式中、
Ｘ２９は、ＯＲ２６、Ｏ−及びＮＲ２７Ｒ２８からなる群から選択され、Ｒ２６、Ｒ２７及びＲ２８は、Ｈ、ＣＯＲ２９、アルキル、シクロアルキル及びアリールからなる群から各々独立に選択され、Ｒ２９は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル及びアリールからなる群から選択され、
Ｘ３０は、ＯＲ３０、Ｏ−及びＮＲ３１Ｒ３２からなる群から選択され、Ｒ３０、Ｒ３１及びＲ３２は、Ｈ、ＣＯＲ３３、アルキル、シクロアルキル及びアリールからなる群から各々独立に選択され、Ｒ３３は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル及びアリールからなる群から選択される、
医薬組成物。
【請求項４４】
神経炎症性疾患の処置に使用される、請求項４３に記載の医薬組成物。
【請求項４５】
前記処置が追加の治療薬を更に含む、請求項４４に記載の医薬組成物。
【請求項４６】
前記神経炎症性疾患が多発性硬化症である、請求項４４又は４５に記載の医薬組成物。
【請求項４７】
前記多発性硬化症が再発寛解型多発性硬化症である、請求項４６に記載の医薬組成物。
【請求項４８】
前記化合物がＳＭ５である、請求項４３から４６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【化１９】
2020517678.tif 000054
【請求項４９】
一般式（ＶＩＩＩ）の化合物又はその塩を含む医薬組成物であって、
【化２０】
2020517678.tif 000055
式中、
Ｘ３１は、Ｓ及びＯから選択され、
Ｒ３４は、ハロゲン化アリール及びハロゲン化ヘテロアリールから選択され、
Ｒ３５及びＲ３６は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル及びアリールからなる群から各々独立に選択される、
医薬組成物。
【請求項５０】
神経炎症性疾患の処置に使用される、請求項４９に記載の医薬組成物。
【請求項５１】
前記処置が追加の治療薬を更に含む、請求項５０に記載の医薬組成物。
【請求項５２】
前記神経炎症性疾患が多発性硬化症である、請求項５０又は５１に記載の医薬組成物。
【請求項５３】
前記多発性硬化症が再発寛解型多発性硬化症である、請求項５２に記載の医薬組成物。
【請求項５４】
前記化合物がＳＭ８である、請求項４９から５３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【化２１】
2020517678.tif 000056
【請求項５５】
神経炎症性疾患を処置する方法であって、それを必要とする対象に治療有効量の骨形成タンパク質２（ＢＭＰ２）阻害剤を投与するステップを含み、前記ＢＭＰ２阻害剤がＳＭ１、ＳＭ２、ＳＭ３、ＳＭ４、ＳＭ５、ＳＭ６、ＳＭ７、ＳＭ８、ＳＭ９からなる群から選択される小分子である、方法。
【化２２】
2020517678.tif 000057
【化２３】
2020517678.tif 000058
【化２４】
2020517678.tif 000059
【化２５】
2020517678.tif 000060
【請求項５６】
前記神経炎症性疾患が多発性硬化症である、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記多発性硬化症が再発寛解型多発性硬化症である、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
追加の治療薬を前記対象に投与するステップを更に含む、請求項５５から５７のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、神経変性及び神経炎症性疾患の治療薬の分野に関する。骨形成タンパク質（ＢＭＰ：ｂｏｎｅ  ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎ）の阻害剤として作用し得る小有機分子が、神経炎症性障害、特に多発性硬化症の処置に有用であるとして開示される。
【背景技術】
【０００２】
多発性硬化症（ＭＳ：Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）は、脳及び脊髄における神経細胞の保護外被であるミエリンが損傷を受けた周知の脱髄疾患である。非特許文献１［１］。骨形成タンパク質（ＢＭＰ）は、発生及び病態中の髄鞘形成の阻害剤として示された（非特許文献２［２］で概説された）。
【０００３】
特許文献１［１７］は、ＢＭＰシグナル伝達の単一の遮断薬又は幾つかの遮断薬の組合せを含む神経炎症性又は神経変性疾患の処置用医薬組成物を開示する。
【０００４】
特許文献２［３］は、ＢＭＰ−２及びＢＭＰ−４に対する単一の抗体又は幾つかの抗体の組合せを含む神経炎症性又は神経変性疾患の処置方法を開示する。
【０００５】
特許文献３［４］は、ＢＭＰ２Ａ阻害剤、特にｓｉＲＮＡ分子又はアンチセンス分子を用いて、組織外傷に起因しようと、慢性又は急性の退行性変化に起因しようと、損傷を受けたニューロン組織に関連する症候及び徴候の軽減又は減少の方法を開示する。
【０００６】
非特許文献３［５］は、乏突起膠細胞前駆細胞（ＯＰＣ：ｏｌｉｇｏｄｅｎｄｒｏｃｙｔｅ  ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ  ｃｅｌｌ）に対するＰＰＡＲδ（ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体）作動物質ＧＷ０７４２の効果を調べ、ＧＷ０７４２がＯＰＣにおけるＢＭＰ２及びＢＭＰ４ｍＲＮＡレベルを、星状細胞における効果よりは低いが、低下させることを示した。Ｓｉｍｏｎｉｎｉらは、ＰＰＡＲδが、ＯＰＣ成熟において、ＢＭＰ及びＢＭＰ拮抗物質の調節によって部分的に媒介されるある役割を果たすと結論した。
【０００７】
非特許文献４［６］は、ＤＧ顆粒細胞下層（ＤＧ−ＳＧＺ）における海馬細胞増殖、及びアルツハイマー病のマウスモデルであるＡＰＰｓｗｅ／ＰＳ１ＤｅｌｔａＥ９トランスジェニックマウスにおけるＢＭＰ４ｍＲＮＡレベルを評価した。研究者らは、ＢＭＰ４ｍＲＮＡ発現の増加とＢｒｄＵ標識細胞数の減少との有意な相関を見いだし、海馬のＤＧ内のＢＭＰ４ｍＲＮＡの発現の増加が、ＡＰＰｓｗｅ／ＰＳ１ＤｅｌｔａＥ９トランスジェニックマウスにおける細胞増殖の減少の一因になり得ることを示唆した。
【０００８】
非特許文献５［７］は、ＢＭＰが、乏突起膠細胞−アストログリア前駆細胞（Ｏ−２Ａ）から星状細胞への選択的用量依存的分化を促進し、同時に乏突起膠細胞分化を抑制することを報告した。
【０００９】
非特許文献６［８］は、ＢＭＰが、マウス胚脳室下帯（ＳＶＺ）多分化能前駆細胞からのアストログリア系譜の選択的用量依存的生成を引き起こすことを示した。
【００１０】
非特許文献７［９］は、ＢＭＰ４を過剰発現するトランスジェニックマウスを構築した。ＢＭＰ４の過剰発現は、複数の脳領域における星状細胞の密度を著しく増加させ、乏突起膠細胞の密度を減少させた。ニューロン数や髄鞘形成パターンの変化は検出されず、全体的な構造異常もなかった。これらの観察の示唆するところによれば、ＢＭＰ４は、乏突起膠細胞系譜ではなく星状細胞系譜に関与するように前駆細胞をインビボで誘導し、ＢＭＰは、インビボでの星状細胞の発生の重要な媒介物質である可能性がある。
【００１１】
非特許文献８［１０］は、ＢＭＰ拮抗物質ノギンが、脳室下帯（ＳＶＺ）に隣接する上衣細胞によって発現されることを示した。ＳＶＺ細胞は、ＢＭＰ及びそれらの同族受容体を発現することが判明した。精製マウスノギンタンパク質は、神経形成をインビトロで促進し、グリア細胞分化を阻害し、異所性ノギンは、線条体に移植されたＳＶＺ細胞のニューロン分化を促進した。研究者らは、したがって、上衣ノギン産生が、内在ＢＭＰシグナル伝達を遮断することによって隣接ＳＶＺにおいて神経原性環境をもたらすことを提案した。
【００１２】
特許文献４［１１］は、目の症状、例えば加齢黄斑変性症を処置するためのイソチアゾールの使用を開示する。特許文献５［１２］は、Ｃ型肝炎の処置のためのシクロアルキル、アリール及びヘテロアリールアミノイソチアゾールを開示する。特許文献６［１３］は、ケモカインＭＩＰ−１アルファ及びＲＡＮＴＥＳの活性を阻害する活性化合物を含む医薬組成物を開示する。それは、これらの医薬組成物を使用して炎症性疾患を処置する方法も対象とする。特許文献７［１４］は、種々のプロテインキナーゼ（特にＭＥＫ及び／又はＥＲＫ）を阻害するように誘導された置換イソチアゾール化合物を開示する。それは、ＭＥＫ及び／又はＥＲＫ機能の異常に関連する疾患の処置方法も対象とする。
【００１３】
多発性硬化症の処置の改善が必要とされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１４】
【特許文献１】国際公開第２０１３／１８６７７７号
【特許文献２】米国特許出願公開第２０１５／１３９９８３号
【特許文献３】米国特許出願公開第２００８／０２４９０３８号
【特許文献４】国際公開第１１／０１９６７８号
【特許文献５】米国特許出願公開第２００６／２１７３９０号
【特許文献６】国際公開第０３／１０５８５７号
【特許文献７】米国特許出願公開第２００４／０３９０３７号
【非特許文献】
【００１５】
【非特許文献１】Ｔｒａｐｐ，Ｂ．Ｄ．ａｎｄ  Ｎａｖｅ，Ｋ．Ａ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２００８；３１：２４７−２６９．
【非特許文献２】Ｇｒｉｎｓｐａｎ  Ｊ．Ｂ．［２０１５］Ｖｉｔａｍｉｎｓ  ａｎｄ  Ｈｏｒｍｏｎｅｓ，Ｃｈａｐｔｅｒ  ６，ｖｏｌｕｍｅ  ９９，ｐａｇｅｓ  １９５−２２２．
【非特許文献３】Ｓｉｍｏｎｉｎｉ  Ｍ．Ｖ．ｅｔ  ａｌ．ＡＳＮ  Ｎｅｕｒｏ．２０１０  Ｊａｎ  １５；２［１］；ｅ０００２５
【非特許文献４】Ｌｉ  Ｄ．ｅｔ  ａｌ．Ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ  ２００８；１８：６９２−８
【非特許文献５】Ｍａｂｉｅ  Ｐ．Ｃ．ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１９９７，１７：４１１２−４１２０
【非特許文献６】Ｇｒｏｓｓ  Ｒ．Ｅ．ｅｔ  ａｌ．Ｎｅｕｒｏｎ  １９９６，１７：５９５−６０６
【非特許文献７】Ｇｏｍｅｓ  Ｗ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．２００３，２５５：１６４−１７７
【非特許文献８】Ｌｉｍ  Ｄ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．Ｎｅｕｒｏｎ  ２０００，２８：７１３−７２６
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１６】
小有機分子がＢＭＰ２を含めて、ただしそれに限定されない骨形成タンパク質（ＢＭＰ）の阻害剤として作用し得ることが今回初めて開示される。さらに、ＢＭＰの阻害能力に基づいて選択された分子が、神経炎症性障害、特に多発性硬化症の処置において有用であることも開示される。本発明の一部の態様によれば、ＩＣ５０が１０μＭ未満でＢＭＰ２を阻害可能な小有機分子が提供される。本発明の更なる態様によれば、ＢＭＰ２とＢＭＰ４の両方を阻害可能な小有機分子が提供される。更なる態様によれば、ＢＭＰ２を阻害可能な小有機分子は、多発性硬化症を含めて、ただしそれに限定されない神経炎症性疾患の処置に有用な医薬組成物中で提供される。
【００１７】
本発明は、本明細書でＳＭ１、ＳＭ６、ＳＭ７及びＳＭ９と命名された特定の化合物を含めた式（Ｉ）〜（ＩＸ）の小有機化合物が細胞に基づくアッセイにおいて骨形成タンパク質２（ＢＭＰ２）の活性を阻害したという知見に部分的に基づく。さらに、これらの分子は、多発性硬化症（ＭＳ）を模倣した確立されたモデルである、再発寛解型実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＲＲ−ＥＡＥ：ｒｅｌａｐｓｉｎｇ／ｒｅｍｉｔｔｉｎｇ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ）の動物モデルにおいて、疾患進行を阻害した。特定の作用機序理論に拘泥するものではないが、これらの小有機分子は、脱髄を阻害することによって、再ミエリン化を誘発することによって、又はその両方によって、神経形成及び乏突起膠細胞発生を誘発し、ミエリン量を維持すると思われる。
【００１８】
一部の実施形態によれば、本発明は、一般式（Ｉ）の化合物又はその塩を含む医薬組成物を提供する。
【００１９】
【化１】
2020517678.tif 000002
【００２０】
式中、
Ｘ１及びＸ２は各々独立にＳ、Ｏ又はＮ−Ｒ４であり、Ｒ４は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アリール及びヘテロアリールからなる群から選択され、
Ｘ３は、ＣＮ、ハロゲン、ニトロ、ＣＯ−Ｘ９及びＳＯ２Ｘ９からなる群から選択され、Ｘ９は、ＯＨ、Ｏ−及びＮＨ２からなる群から選択され、
Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７及びＸ８は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アリール、アミン、ハロゲン、アルコキシ、ヒドロキシ、ヘテロアリール、ＣＮ、ニトロ、ＣＯ−Ｘ１０及びＳＯ２Ｘ１０からなる群から各々独立に選択され、Ｘ１０は、ＯＨ、Ｏ−及びＮＨ２からなる群から選択され、
Ｒ１とＲ２の一方は存在せず、他方のＲ１及びＲ２は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アリール、アミン、ハロゲン、アルコキシ、ヘテロアリール、ＣＮ、ＣＯ−Ｘ１１及びＳＯ２Ｘ１１からなる群から選択され、Ｘ１１は、ＯＨ、Ｏ−及びＮＨ２からなる群から選択され、
Ｒ３は、ＯＲ５、Ｏ−及びＮＲ６Ｒ７からなる群から選択され、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル及びアリールからなる群から各々独立に選択され、
点線の各々は独立に単結合又は二重結合である。
【００２１】
一部の実施形態によれば、医薬組成物は、式（Ｉａ）の化合物又はその塩を含む。
【００２２】
【化２】
2020517678.tif 000003
【００２３】
一部の実施形態によれば、神経炎症性疾患を処置する方法であって、それを必要とする対象に治療有効量の一般式（Ｉ）の化合物又はその塩を投与するステップを含み、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７、Ｘ８、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３の各々が本明細書に記載の通りである、方法が提供される。
【００２４】
一部の実施形態によれば、神経炎症性疾患を処置する方法であって、それを必要とする対象に治療有効量の一般式（Ｉａ）の化合物又はその塩を投与するステップを含み、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７、Ｘ８、Ｒ１及びＲ３の各々が本明細書に記載の通りである、方法が提供される。
【００２５】
一部の実施形態によれば、神経炎症性疾患に罹患した対象の処置のための一般式（Ｉ）の化合物又はその塩の使用であって、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７、Ｘ８、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３の各々が記載の通りである、使用が提供される。
【００２６】
一部の実施形態によれば、Ｘ１とＸ２はどちらもＳである。
【００２７】
一部の実施形態によれば、Ｘ３はＣＮである。
【００２８】
一部の実施形態によれば、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７及びＸ８の各々はＨである。
【００２９】
一部の実施形態によれば、Ｒ１はＨである。
【００３０】
一部の実施形態によれば、Ｒ３はＯＲ５である。
【００３１】
一部の実施形態によれば、Ｒ５はメチル又はエチルである。
【００３２】
一部の実施形態によれば、化合物は式ＳＭ１を有する。
【００３３】
【化３】
2020517678.tif 000004
【００３４】
一部の実施形態によれば、神経炎症性疾患の処置に使用される、一般式（ＩＸ）の化合物又はその塩を含む医薬組成物が提供される。
【００３５】
【化４】
2020517678.tif 000005
【００３６】
式中、
Ｘ１２、Ｘ１３、Ｘ１５及びＸ１６は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アリール、アミン、ハロゲン、アルコキシ、ヒドロキシ、ヘテロアリール、ＣＮ、ＮＯ２、ＣＯ−Ｘ１９及びＳＯ２Ｘ１９からなる群から各々独立に選択され、Ｘ１９は、ＯＨ、Ｏ−及びＮＨ２からなる群から選択され、
Ｘ１４及びＸ１８は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アリール、アミン、ハロゲン、アルコキシ、ヒドロキシ、ヘテロアリール、ＣＮ、ＮＯ２、ＣＯ−Ｘ２０及びＳＯ２Ｘ２０からなる群から各々独立に選択され、Ｘ２０は、ＯＨ、Ｏ−及びＮＨ２からなる群から選択され、
Ｘ１７はＳ、Ｏ又はＮ−Ｒ９であり、Ｒ９は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アリール及びヘテロアリールからなる群から選択され、
ｎは１又は２であり、
Ｒ８は、アルキル、ハロゲン化アルキル、シクロアルキル及びアリールからなる群から選択される。
【００３７】
一部の実施形態によれば、神経炎症性疾患を処置する方法であって、それを必要とする対象に治療有効量の一般式（ＩＸ）の化合物又はその塩を投与するステップを含み、Ｘ１２、Ｘ１３、Ｘ１４、Ｘ１５、Ｘ１６、Ｘ１７、Ｘ１８及びＲ８の各々が本明細書に記載の通りである、方法が提供される。
【００３８】
一部の実施形態によれば、神経炎症性疾患に罹患した対象の処置のための医薬組成物の調製における一般式（ＩＸ）の化合物又はその塩及び薬学的に許容される担体の使用であって、Ｘ１２、Ｘ１３、Ｘ１４、Ｘ１５、Ｘ１６、Ｘ１７、Ｘ１８及びＲ８の各々が本明細書に記載の通りである、使用が提供される。
【００３９】
一部の実施形態によれば、Ｘ１２、Ｘ１３、Ｘ１５及びＸ１６の各々はＨである。
【００４０】
一部の実施形態によれば、Ｘ１４はハロゲンである。
【００４１】
一部の実施形態によれば、Ｘ１４はＣｌである。
【００４２】
一部の実施形態によれば、Ｘ１８はＣＮである。
【００４３】
一部の実施形態によれば、Ｘ１７はＯである。
【００４４】
一部の実施形態によれば、Ｒ８はメチルである。
【００４５】
一部の実施形態によれば、ｎは２である。
【００４６】
一部の実施形態によれば、化合物は式ＳＭ９を有する。
【００４７】
【化５】
2020517678.tif 000006
【００４８】
一部の実施形態によれば、神経炎症性疾患の処置に使用される、一般式ＳＭ７の化合物、そのエステル又は塩を含む医薬組成物が提供される。
【００４９】
【化６】
2020517678.tif 000007
【００５０】
一部の実施形態によれば、一般式ＳＭ６の化合物又はその塩を含む医薬組成物が提供される。
【００５１】
【化７】
2020517678.tif 000008
【００５２】
一部の実施形態によれば、神経炎症性疾患の処置に使用される、一般式ＳＭ２の化合物又はその塩を含む医薬組成物が提供される。
【００５３】
【化８】
2020517678.tif 000009
【００５４】
一部の実施形態によれば、一般式ＳＭ３の化合物又はその塩を含む医薬組成物が提供される。
【００５５】
【化９】
2020517678.tif 000010
【００５６】
一部の実施形態によれば、一般式ＳＭ４の化合物又はその塩を含む医薬組成物が提供される。
【００５７】
【化１０】
2020517678.tif 000011
【００５８】
一部の実施形態によれば、一般式ＳＭ５の化合物又はその塩を含む医薬組成物が提供される。
【００５９】
【化１１】
2020517678.tif 000012
【００６０】
一部の実施形態によれば、一般式ＳＭ８の化合物又はその塩を含む医薬組成物が提供される。
【００６１】
【化１２】
2020517678.tif 000013
【００６２】
一部の実施形態によれば、医薬組成物は、神経炎症性疾患の処置に使用される。
【００６３】
一部の実施形態によれば、医薬組成物は、追加の治療薬を更に含む。
【００６４】
一部の実施形態によれば、神経炎症性疾患は多発性硬化症である。
【００６５】
一部の実施形態によれば、多発性硬化症は再発寛解型多発性硬化症である。
【００６６】
一部の実施形態によれば、方法は、前記対象への追加の治療薬の投与を更に含む。
【００６７】
一部の実施形態によれば、追加の治療薬は、少なくとも１種の化合物又は前記少なくとも１種の化合物を含む医薬組成物の投与前に、投与と同時に、又は投与後に投与される。
【００６８】
本明細書に開示される主題をより理解し、それが実際に行われ得る方法を例示するために、添付図面を参照して、非限定的例のみによって、実施形態を以下に記述する。
【図面の簡単な説明】
【００６９】
【図１】ハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ：Ｈｉｇｈ  Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ）バイオアッセイ評価を示す図である。（Ａ）ＢＭＰ−２の存在又は非存在下で（「ＢＭＰ−２あり」−正方形、「ＢＭＰ−２なし」−菱形）、ウェル１個当たりのＯ．Ｄ４０５ｎｍとして示される、ＣＤＰ−Ｓｔａｒ（登録商標）化学発光基質によって求められるＡＬＰ活性。（Ｂ）ＢＭＰ−２の存在又は非存在下で（「ＢＭＰ−２あり」−正方形、「ＢＭＰ−２なし」−菱形）、ウェル１個当たりのＯ．Ｄ４０５ｎｍとして示される、Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ基質によって求められる細胞生存率。（Ｃ）ＢＭＰ−２の存在又は非存在下の（「ＢＭＰ−２あり」−正方形、「ＢＭＰ−２なし」−菱形）ウェル１個当たりのＡＬＰ／細胞の比。
【図２】ＢＰＭ−２によるＡＬＰ刺激及び細胞生存率に対するＳＭ１〜ＳＭ９の効果を示す図である。ＳＭ１〜ＳＭ９のＡＬＰパーセント（％）（菱形）及び細胞生存率（％）（正方形）を様々な分子濃度（０．６２μＭ、１．２５μＭ、２．５μＭ、５μＭ及び１０μＭ）について示す。
【図３】ＲＲ−ＥＡＥにおけるＳＭ１〜ＳＭ９の効果を示す図である。ＲＲ−ＥＡＥマウスにおけるＥＡＥ臨床スコア、免疫化後９日目から３０日間のビヒクル単独（５％ＤＭＳＯのＰＢＳ溶液、２００μｇ／マウス）に比べた、小分子（ＳＭ１〜９それぞれ、１０ｍｇ／ｋｇ／日）で処置された各群（ｎ＝７）。ＳＭ−菱形、ビヒクル−正方形。
【図４】ＲＲ−ＥＡＥにおけるＳＭ１、ＳＭ６、ＳＭ７及びＳＭ９の効果を示す図である。ＲＲ−ＥＡＥマウスにおけるＥＡＥ臨床スコア、９日目から３０日間のビヒクル単独（５％ＤＭＳＯのＰＢＳ溶液、２００μｌ／マウス）（菱形）に比べた、２つの投与量１０ｍｇ／ｋｇ／日（正方形）及び２０ｍｇ／ｋｇ／日（三角形）におけるＳＭ１、ＳＭ７、ＳＭ９又はＳＭ６で処置された各群（ｎ＝１４）。
【図５】中程度−重度ＥＡＥのマウス数に対するＳＭ１、ＳＭ６、ＳＭ７及びＳＭ９の効果を示す図である。臨床スコアが２／日／群以上のマウス数（１０ｍｇ／ｋｇ／日−正方形、２０ｍｇ／ｋｇ／日−三角形、ビヒクル−菱形）。
【図６】脱髄に対するＳＭ１、ＳＭ６、ＳＭ７及びＳＭ９の効果を示す図である。  （Ａ）ビヒクル、ＳＭ１  １０ｍｇ／ｋｇ／日、ＳＭ１  ２０ｍｇ／ｋｇ／日、ＳＭ７  １０ｍｇ／ｋｇ／日、ＳＭ９  １０ｍｇ／ｋｇ／日、ＳＭ９  ２０ｍｇ／ｋｇ／日、ＳＭ６  １０ｍｇ／ｋｇ／日及びＳＭ６  ２０ｍｇ／ｋｇ／日で処置されたマウスのＬＦＢで染色された腰髄切片（前側索）の代表的画像。（Ｂ）有髄領域の定量化。グラフは、免疫化後４８日目における全脊髄切片に対するＬＦＢ染色領域パーセント（％）を示す。定量化を、Ｉｍａｇｅ  Ｊソフトウェアを用いて６マウス／群及び３切片／マウスに対して行った。
【図７Ａ】Ｐ１９細胞におけるニューロン表現型に対するＳＭ１、ＳＭ７及びＳＭ９の効果を示す図である。ＭＡＰ−２及びＨｏｅｃｈｓｔで染色された８日目のＰ１９細胞の代表的画像である。
【図７Ｂ】Ｐ１９細胞におけるニューロン表現型に対するＳＭ１、ＳＭ７及びＳＭ９の効果を示す図である。％ＭＡＰ−２陽性細胞の分析。分析をＩｍａｇｅ  Ｊソフトウェアによって行った。
【図８】ウエスタンブロットによって検出されたＳＭＡＤ１／５／８シグナル伝達に対するＳＭ１、ＳＭ７及びＳＭ９の効果を示す図である。（Ａ）刺激なし（「対照」）又は示したようにＢＭＰ−２、ＢＭＰ−２＋抗ＢＭＰ−２／４Ａｂ、ＢＭＰ−２＋ＳＭ１、ＳＭ７若しくはＳＭ９  ２．５μＭ及び５μＭ刺激に応答したリン酸化ＳＭＡＤ（ｐ−ＳＭＡＤ）、全ＳＭＡＤ及びチューブリンのウエスタンブロット。（Ｂ）Ｉｍａｇｅ  Ｊソフトウェアによって行われたｐ−ＳＭＡＤ／チューブリンの定量化。
【図９】ＢＭＰ−４／ＢＭＰ−２によって誘導されるＡＴＤＣ５バイオアッセイにおけるＳＭ１、ＳＭ７、ＳＭ９及びＳＭ６の効果を示す図である。ＢＭＰ−４刺激対ＢＭＰ−２刺激の存在下でＳＭ１、ＳＭ７、ＳＭ９及びＳＭ６  ２．５μＭ及び５μＭのＡＬＰ誘導率及び細胞生存率。
【図１０Ａ】ＳＶＺにおける神経芽細胞マーカーダブルコルチンの新規発現に対するＳＭ１、ＳＭ７、ＳＭ９及びＳＭ６の効果を示す図である。ＳＶＺにおけるＢｒｄＵ及びダブルコルチン（ＤＣＸ）の標識化を示す免疫蛍光画像。画像を、Ｚｅｉｓｓ７１０共焦点顕微鏡、冠状切片を用いて得た。ＬＶ、側脳室、ＳＶＺ、脳室下帯。画像のスケールバー：ａ、ｃ、ｅ、ｇ、ｉ、ｋ、ｍ、ｏ＝１００μｍ（倍率１０倍）、及び画像：ｂ、ｄ、ｆ、ｈ、ｊ、ｌ、ｎ、ｐ＝２０μｍ（倍率６３倍）。
【図１０Ｂ】ＳＶＺにおける神経芽細胞マーカーダブルコルチンの新規発現に対するＳＭ１、ＳＭ７、ＳＭ９及びＳＭ６の効果を示す図である。ＳＶＺにおけるＢｒｄＵ＋ＤＣＸ＋細胞の定量化。分析を、Ｉｍａｇｅ  Ｊソフトウェアを用いて各マウスの３個の切片（各群から３匹のマウス、全ｎ＝９）に対して行った。値を平均±ＳＥＭとして示し、スチューデントのｔ検定の結果を＊ｐ＜０．０５として表す。
【図１１Ａ】ＳＧＺにおけるダブルコルチンの新規発現に対するＳＭ１、ＳＭ７、ＳＭ９及びＳＭ６の効果を示す図である。（Ａ）は、ＳＧＺにおけるＢｒｄＵ＋ＤＣＸ＋細胞の標識化を示す免疫組織化学画像である。画像を、Ｏｌｙｍｐｕｓ８．１顕微鏡（倍率１０倍）を用いて得た。
【図１１Ｂ】ＳＧＺにおけるダブルコルチンの新規発現に対するＳＭ１、ＳＭ７、ＳＭ９及びＳＭ６の効果を示す図である。（Ｂ）ＳＧＺにおけるＢｒｄＵ＋ＤＣＸ＋細胞の定量化。分析を、Ｉｍａｇｅ  Ｊソフトウェアを用いて各マウスの３個の切片（各群から３匹のマウス、全ｎ＝９）に対して行った。値を平均±ＳＥＭとして示し、スチューデントのｔ検定の結果を＊ｐ＜０．０５として表す。
【図１２Ａ】ＳＧＺにおける成熟ニューロンマーカーＮｅｕＮの新規発現に対するＳＭ１、ＳＭ７、ＳＭ９及びＳＭ６の効果を示す図である。（Ａ）は、ＳＧＺにおけるＢｒｄＵ＋ＮｅｕＮ＋細胞の標識化を示す免疫組織化学画像である。画像を、Ｏｌｙｍｐｕｓ８．１顕微鏡（倍率１０倍）を用いて得た。
【図１２Ｂ】ＳＧＺにおける成熟ニューロンマーカーＮｅｕＮの新規発現に対するＳＭ１、ＳＭ７、ＳＭ９及びＳＭ６の効果を示す図である。（Ｂ）ＳＧＺにおけるＢｒｄＵ＋ＮｅｕＮ＋の定量化。分析を、Ｉｍａｇｅ  Ｊソフトウェアを用いて各マウスの３個の切片（各群から３匹のマウス、全ｎ＝９）に対して行った。値を平均±ＳＥＭとして示し、スチューデントのｔ検定の結果を＊ｐ＜０．０５として表す。
【発明を実施するための形態】
【００７０】
本発明は、ＥＡＥ、特に再発寛解型多発性硬化症を模倣したモデルである再発型のＥＡＥを阻害するのに治療上有用である、ＢＭＰを阻害可能な小有機分子を提供する。
【００７１】
本発明は、本明細書でＳＭ１、ＳＭ６、ＳＭ７及びＳＭ９と命名された特定の化合物を含めて、ただしそれらに限定されない式（Ｉ）〜（ＩＸ）の小有機化合物が細胞に基づくアッセイにおいて骨形成タンパク質２（ＢＭＰ２）の活性を阻害したという知見に部分的に基づく。これらの分子は、多発性硬化症（ＭＳ）を模倣した十分に確立されたモデルである、再発寛解型実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＲＲ−ＥＡＥ）動物モデルにおいて、疾患進行を阻害することが示された。特定の作用機序理論に拘泥するものではないが、これらの分子は、脱髄を阻害することによって、再ミエリン化を誘発することによって、又はその両方によって、神経形成及び乏突起膠細胞発生を誘発し、ミエリン量を維持すると思われる。
【００７２】
したがって、一部の実施形態によれば、骨形成タンパク質２（ＢＭＰ２）阻害剤を含む医薬組成物であって、ＢＭＰ２阻害剤が小分子である、医薬組成物が提供される。一部の実施形態によれば、医薬組成物は、多発性硬化症などの神経炎症性疾患の処置に使用される。
【００７３】
一部の実施形態によれば、神経炎症性疾患を処置する方法であって、それを必要とする対象に治療有効量の骨形成タンパク質２（ＢＭＰ２）阻害剤を投与するステップを含み、ＢＭＰ２阻害剤が小分子である、方法が提供される。
【００７４】
一部の実施形態によれば、神経炎症性疾患に罹患した対象の処置のための医薬組成物の調製における骨形成タンパク質２（ＢＭＰ２）阻害剤の使用であって、ＢＭＰ２阻害剤が小分子である、使用が提供される。
【００７５】
一部の実施形態によれば、神経炎症性疾患に罹患した対象の処置のための骨形成タンパク質２（ＢＭＰ２）阻害剤の使用であって、ＢＭＰ２阻害剤が小分子である、使用が提供される。
【００７６】
一部の実施形態によれば、小分子は、分子量が１０００ｇ／ｍｏｌ以下である。
【００７７】
一部の実施形態によれば、小分子は、式（Ｉ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ）、式（ＩＶ）、式（Ｖ）、式（ＶＩ）、式（ＶＩＩ）、式（ＶＩＩＩ）、式（ＩＸ）からなる群から選択される式及びそれらの塩である。一部の実施形態によれば、小分子は、式（Ｉ）、式（ＶＩ）、式（ＶＩＩ）、式（ＩＸ）からなる群から選択される式及びそれらの塩である。一部の実施形態によれば、小分子は、式（Ｉ）、式（ＩＸ）からなる群から選択される式及びそれらの塩である。一部の実施形態によれば、小分子は、ＳＭ１、ＳＭ２、ＳＭ３、ＳＭ４、ＳＭ５、ＳＭ６、ＳＭ７、ＳＭ８、ＳＭ９からなる群から選択される式及びそれらの塩である。一部の実施形態によれば、小分子は、ＳＭ１、ＳＭ６、ＳＭ７、ＳＭ９からなる群から選択される式及びそれらの塩である。一部の実施形態によれば、小分子は、ＳＭ１、ＳＭ９からなる群から選択される式及びそれらの塩である。
【００７８】
一部の実施形態によれば、本発明は、一般式（Ｉ）の化合物又はその塩を含む医薬組成物を提供する。
【００７９】
【化１３】
2020517678.tif 000014
【００８０】
式中、
Ｘ１及びＸ２は各々独立にＳ、Ｏ又はＮ−Ｒ４であり、Ｒ４は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アリール及びヘテロアリールからなる群から選択され、
Ｘ３は、ＣＮ、ハロゲン、ニトロ、ＣＯ−Ｘ９及びＳＯ２Ｘ９からなる群から選択され、Ｘ９は、ＯＨ、Ｏ−及びＮＨ２からなる群から選択され、
Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７及びＸ８は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アリール、アミン、ハロゲン、アルコキシ、ヒドロキシ、ヘテロアリール、ＣＮ、ニトロ、ＣＯ−Ｘ１０及びＳＯ２Ｘ１０からなる群から各々独立に選択され、Ｘ１０は、ＯＨ、Ｏ−及びＮＨ２からなる群から選択され、
Ｒ１とＲ２の一方は存在せず、他方のＲ１及びＲ２は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アリール、アミン、ハロゲン、アルコキシ、ヘテロアリール、ＣＮ、ＣＯ−Ｘ１１及びＳＯ２Ｘ１１からなる群から選択され、Ｘ１１は、ＯＨ、Ｏ−及びＮＨ２からなる群から選択され、
Ｒ３は、ＯＲ５、Ｏ−及びＮＲ６Ｒ７からなる群から選択され、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル及びアリールからなる群から各々独立に選択され、
点線の各々は独立に単結合又は二重結合である。
【００８１】
一部の実施形態によれば、神経炎症性疾患を処置する方法であって、それを必要とする対象に治療有効量の一般式（Ｉ）の化合物又はその塩を投与するステップを含み、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７、Ｘ８、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３の各々が本明細書に記載の通りである、方法が提供される。
【００８２】
一部の実施形態によれば、神経炎症性疾患に罹患した対象の処置のための一般式（Ｉ）の化合物又はその塩の使用であって、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７、Ｘ８、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３の各々が本明細書に記載の通りである、使用が提供される。
【００８３】
一部の実施形態によれば、医薬組成物は、式（Ｉａ）の化合物又はその塩を含む。
【００８４】
【化１４】
2020517678.tif 000015
【００８５】
一部の実施形態によれば、神経炎症性疾患を処置する方法であって、それを必要とする対象に治療有効量の一般式（Ｉａ）の化合物又はその塩を投与するステップを含み、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７、Ｘ８、Ｒ１及びＲ３の各々が本明細書に記載の通りである、方法が提供される。
【００８６】
一部の実施形態によれば、神経炎症性疾患に罹患した対象の処置のための一般式（Ｉａ）の化合物又はその塩の使用であって、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７、Ｘ８、Ｒ１及びＲ３の各々が本明細書に記載の通りである、使用が提供される。
【００８７】
一部の実施形態によれば、Ｘ１とＸ２は各々独立にＳ又はＯである。一部の実施形態によれば、Ｘ１はＳ又はＯである。一部の実施形態によれば、Ｘ２はＳ又はＯである。一部の実施形態によれば、Ｘ１はＳである。一部の実施形態によれば、Ｘ２はＳである。一部の実施形態によれば、Ｘ１とＸ２はどちらもＳである。
【００８８】
一部の実施形態によれば、Ｘ３は、ＣＮ、ハロゲン及びニトロからなる群から選択される。一部の実施形態によれば、Ｘ３はＣＮである。
【００８９】
一部の実施形態によれば、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７及びＸ８は、Ｈ、アルキル、ハロゲン、ヒドロキシ及びアルコキシからなる群から各々独立に選択される。一部の実施形態によれば、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７及びＸ８は、各々独立にＨ又はハロゲンである。一部の実施形態によれば、Ｘ４はＨである。一部の実施形態によれば、Ｘ５はＨである。一部の実施形態によれば、Ｘ６はＨである。一部の実施形態によれば、Ｘ７はＨである。一部の実施形態によれば、Ｘ８はＨである。一部の実施形態によれば、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７及びＸ８の少なくとも１つはＨである。一部の実施形態によれば、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７及びＸ８の少なくとも２つはＨである。一部の実施形態によれば、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７及びＸ８の少なくとも３つはＨである。一部の実施形態によれば、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７及びＸ８の少なくとも４つはＨである。一部の実施形態によれば、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７及びＸ８は、各々独立にＨである。
【００９０】
一部の実施形態によれば、Ｒ１とＲ２の一方は存在せず、他方のＲ１及びＲ２は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アリール、ＣＯ−Ｘ１１及びＳＯ２Ｘ１１からなる群から選択される。一部の実施形態によれば、Ｒ２は存在せず、Ｒ１は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アリール、ＣＯ−Ｘ１１及びＳＯ２Ｘ１１からなる群から選択される。一部の実施形態によれば、Ｒ１はＨである。
【００９１】
一部の実施形態によれば、Ｒ３は、ＯＲ５及びＯ−からなる群から選択される。一部の実施形態によれば、Ｒ３はＯＲ５である。一部の実施形態によれば、Ｒ５はアルキル鎖である。一部の実施形態によれば、Ｒ５は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ブチル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル及びイソブチルからなる群から選択される。一部の実施形態によれば、Ｒ５はメチル又はエチルである。一部の実施形態によれば、Ｒ５はメチルである。一部の実施形態によれば、Ｒ３はＯＭｅ又はＯＥｔである。一部の実施形態によれば、Ｒ３はＯＭｅである。
【００９２】
一部の実施形態によれば、化合物は式ＳＭ１を有する。
【００９３】
【化１５】
2020517678.tif 000016
【００９４】
一部の実施形態によれば、本発明は、神経炎症性疾患の処置に使用される、一般式（ＩＸ）の化合物又はその塩を含む医薬組成物を提供する。
【００９５】
【化１６】
2020517678.tif 000017
【００９６】
式中、
Ｘ１２、Ｘ１３、Ｘ１５及びＸ１６は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アリール、アミン、ハロゲン、アルコキシ、ヒドロキシ、ヘテロアリール、ＣＮ、ＮＯ２、ＣＯ−Ｘ１９及びＳＯ２Ｘ１９からなる群から各々独立に選択され、Ｘ１９は、ＯＨ、Ｏ−及びＮＨ２からなる群から選択され、
Ｘ１４及びＸ１８は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アリール、アミン、ハロゲン、アルコキシ、ヒドロキシ、ヘテロアリール、ＣＮ、ＮＯ２、ＣＯ−Ｘ２０及びＳＯ２Ｘ２０からなる群から各々独立に選択され、Ｘ２０は、ＯＨ、Ｏ−及びＮＨ２からなる群から選択され、
Ｘ１７はＳ、Ｏ又はＮ−Ｒ９であり、Ｒ９は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アリール及びヘテロアリールからなる群から選択され、
ｎは１又は２であり、
Ｒ８は、アルキル、ハロゲン化アルキル、シクロアルキル及びアリールからなる群から選択される。
【００９７】
一部の実施形態によれば、神経炎症性疾患を処置する方法であって、それを必要とする対象に治療有効量の一般式（ＩＸ）の化合物又はその塩を投与するステップを含み、Ｘ１２、Ｘ１３、Ｘ１４、Ｘ１５、Ｘ１６、Ｘ１７、Ｘ１８及びＲ８の各々が本明細書に記載の通りである、方法が提供される。
【００９８】
一部の実施形態によれば、神経炎症性疾患に罹患した対象の処置のための一般式（ＩＸ）の化合物又はその塩の使用であって、Ｘ１２、Ｘ１３、Ｘ１４、Ｘ１５、Ｘ１６、Ｘ１７、Ｘ１８及びＲ８の各々が本明細書に記載の通りである、使用が提供される。
【００９９】
一部の実施形態によれば、Ｘ１２、Ｘ１３、Ｘ１５及びＸ１６は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アリール、アミン、ハロゲン、アルコキシ、ヒドロキシＣＮ、及びＮＯ２からなる群から各々独立に選択される。一部の実施形態によれば、Ｘ１２、Ｘ１３、Ｘ１５及びＸ１６は、Ｈ、アルキル、ハロゲン、ヒドロキシ及びアルコキシからなる群から各々独立に選択される。一部の実施形態によれば、Ｘ１２、Ｘ１３、Ｘ１５及びＸ１６は、各々独立にＨ又はハロゲンである。一部の実施形態によれば、Ｘ１２はＨである。一部の実施形態によれば、Ｘ１３はＨである。一部の実施形態によれば、Ｘ１５はＨである。一部の実施形態によれば、Ｘ１６はＨである。一部の実施形態によれば、Ｘ１２、Ｘ１３、Ｘ１５及びＸ１６の少なくとも１つはＨである。一部の実施形態によれば、Ｘ１２、Ｘ１３、Ｘ１５及びＸ１６の少なくとも２つはＨである。一部の実施形態によれば、Ｘ１２、Ｘ１３、Ｘ１５及びＸ１６の少なくとも３つはＨである。一部の実施形態によれば、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７及びＸ８は、各々独立にＨである。
【０１００】
一部の実施形態によれば、Ｘ１４は、Ｈ、アミン、ハロゲン、アルコキシ、ヒドロキシ、ＣＮ及びＮＯ２からなる群から選択される。一部の実施形態によれば、Ｘ１４は、ＮＨ２、ハロゲン、アルコキシ、ヒドロキシ、ＣＮ及びＮＯ２からなる群から選択される。一部の実施形態によれば、Ｘ１４は、ハロゲン及びヒドロキシからなる群から選択される。一部の実施形態によれば、Ｘ１４はハロゲンである。一部の実施形態によれば、Ｘ１４は、Ｆ及びＣｌからなる群から選択される。一部の実施形態によれば、Ｘ１４はＣｌである。
【０１０１】
一部の実施形態によれば、Ｘ１８は、ハロゲン、ＣＮ、ＮＯ２、ＣＯ−Ｘ２０及びＳＯ２Ｘ２０からなる群から選択され、Ｘ２０は、ＯＨ、Ｏ−及びＮＨ２からなる群から選択される。一部の実施形態によれば、Ｘ１８はＣＮである。
【０１０２】
一部の実施形態によれば、ｎは２である。
【０１０３】
一部の実施形態によれば、Ｒ８は、アルキル及びハロゲン化アルキルからなる群から選択される。一部の実施形態によれば、Ｒ８はアルキル基である。一部の実施形態によれば、Ｒ８はＣ１〜４アルキルである。一部の実施形態によれば、Ｒ８は、Ｍｅ、Ｅｔ及びＣＦ３からなる群から選択される。一部の実施形態によれば、Ｒ８はＭｅである。
【０１０４】
一部の実施形態によれば、化合物は式ＳＭ９を有する。
【０１０５】
【化１７】
2020517678.tif 000018
【０１０６】
一部の実施形態によれば、本発明は、神経炎症性疾患の処置に使用される、一般式（ＶＩＩ）の化合物又はその塩を含む医薬組成物を提供する。
【０１０７】
【化１８】
2020517678.tif 000019
【０１０８】
式中、
Ｘ２１及びＲ１０は、アルキル、ハロゲン化アルキル、シクロアルキル、アリール、アミン、ハロゲン、アルコキシ、ヒドロキシ、ヘテロアリール、ＣＮ、ＮＯ２、ＣＯ−Ｘ２３及びＳＯ２Ｘ２３からなる群から各々独立に選択され、Ｘ２３は、ＯＨ、Ｏ−及びＮＨ２からなる群から選択され、
Ｘ２２は、ＯＲ１２、Ｏ−及びＮＲ１３Ｒ１４からなる群から選択され、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル及びアリールからなる群から各々独立に選択され、
Ｒ１１は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アリール、アミン、ハロゲン、アルコキシ、ヘテロアリール、ＣＮ、ＣＯ−Ｘ２４及びＳＯ２Ｘ２４からなる群から選択され、Ｘ２４は、ＯＨ、Ｏ−及びＮＨ２からなる群から選択される。
【０１０９】
一部の実施形態によれば、神経炎症性疾患を処置する方法であって、それを必要とする対象に治療有効量の一般式（ＶＩＩ）の化合物又はその塩を投与するステップを含み、Ｘ２１、Ｘ２２、Ｒ１０及びＲ１１の各々が本明細書に記載の通りである、方法が提供される。
【０１１０】
一部の実施形態によれば、神経炎症性疾患に罹患した対象の処置のための一般式（ＶＩＩ）の化合物又はその塩の使用であって、Ｘ２１、Ｘ２２、Ｒ１０及びＲ１１の各々が本明細書に記載の通りである、使用が提供される。
【０１１１】
一部の実施形態によれば、Ｘ２１は、ハロゲン、ＣＮ、ＮＯ２、ＣＯ−Ｘ２３及びＳＯ２Ｘ２３からなる群から選択される。一部の実施形態によれば、Ｘ２１はＣＮである。
【０１１２】
一部の実施形態によれば、Ｘ２２はＯＲ１２である。一部の実施形態によれば、Ｒ１２はＨ又はアルキルである。一部の実施形態によれば、Ｒ１２はＨである。一部の実施形態によれば、Ｘ２２はＯＨである。
【０１１３】
一部の実施形態によれば、Ｒ１０は、アルキル、ハロゲン化アルキル、シクロアルキル及びハロゲンからなる群から選択される。一部の実施形態によれば、Ｒ１０はハロゲン化アルキルである。一部の実施形態によれば、Ｒ１０はフッ化アルキルである。一部の実施形態によれば、Ｒ１０はＣＦ３である。
【０１１４】
一部の実施形態によれば、Ｒ１１は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アリール、アミン、ハロゲン、アルコキシ、ヘテロアリール、ＣＮ、ＣＯ−Ｘ２４及びＳＯ２Ｘ２４からなる群から選択される。一部の実施形態によれば、Ｒ１１はＨ又はＣＯ−Ｘ２４である。一部の実施形態によれば、Ｒ１１はＨである。
【０１１５】
一部の実施形態によれば、化合物は式ＳＭ７を有する。
【０１１６】
【化１９】
2020517678.tif 000020
【０１１７】
一部の実施形態によれば、本発明は、一般式（ＶＩ）の化合物又はその塩を含む医薬組成物を提供する。
【０１１８】
【化２０】
2020517678.tif 000021
【０１１９】
式中、
Ｘ２４はＯ又はＳである。
【０１２０】
Ｒ１５及びＸ２５は、アルキル、ハロゲン化アルキル、シクロアルキル、アリール、アミン、ハロゲン、アルコキシ、ヒドロキシ、ヘテロアリール、ＣＮ、ＮＯ２、ＣＯ−Ｘ２６及びＳＯ２Ｘ２６からなる群から各々独立に選択され、Ｘ２６は、ＯＨ、Ｏ−及びＮＨ２からなる群から選択され、
Ｒ１６は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アリール、アミン、ハロゲン、アルコキシ、ヘテロアリール、ＣＮ、ＣＯ−Ｘ２４及びＳＯ２Ｘ２４からなる群から選択され、Ｘ２４は、ＯＨ、Ｏ−及びＮＨ２からなる群から選択される。
【０１２１】
一部の実施形態によれば、神経炎症性疾患を処置する方法であって、それを必要とする対象に治療有効量の一般式（ＶＩ）の化合物又はその塩を投与するステップを含み、Ｘ２４、Ｘ２５、Ｒ１５及びＲ１６の各々が本明細書に記載の通りである、方法が提供される。
【０１２２】
一部の実施形態によれば、神経炎症性疾患に罹患した対象の処置のための一般式（ＶＩ）の化合物又はその塩の使用であって、Ｘ２４、Ｘ２５、Ｒ１５及びＲ１６の各々が本明細書に記載の通りである、使用が提供される。
【０１２３】
一部の実施形態によれば、Ｘ２４はＯである。
【０１２４】
一部の実施形態によれば、Ｘ２５は、アミン、ハロゲン、ＣＮ、ＮＯ２、ＣＯ−Ｘ２６及びＳＯ２Ｘ２６からなる群から選択される。一部の実施形態によれば、Ｘ２５は窒素原子を含む。一部の実施形態によれば、Ｘ２５はＮＯ２である。
【０１２５】
一部の実施形態によれば、Ｒ１５は、アルキル、ハロゲン化アルキル、シクロアルキル及びハロゲンからなる群から選択される。一部の実施形態によれば、Ｒ１５はハロゲン化アルキルである。一部の実施形態によれば、Ｒ１５はフッ化アルキルである。一部の実施形態によれば、Ｒ１５はＣＦ３である。
【０１２６】
一部の実施形態によれば、Ｒ１６は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アリール、アミン、ハロゲン、アルコキシ、ヘテロアリール、ＣＮ、ＣＯ−Ｘ２４及びＳＯ２Ｘ２４からなる群から選択される。一部の実施形態によれば、Ｒ１６はＨ又はＣＯ−Ｘ２４である。一部の実施形態によれば、Ｒ１６はＨである。
【０１２７】
一部の実施形態によれば、化合物は式ＳＭ６を有する。
【０１２８】
【化２１】
2020517678.tif 000022
【０１２９】
一部の実施形態によれば、本発明は、神経炎症性疾患の処置に使用される、一般式（ＩＩ）の化合物又はその塩を含む医薬組成物を提供する。
【０１３０】
【化２２】
2020517678.tif 000023
【０１３１】
式中、
Ｒ１７及びＲ１８は各々独立に、任意に置換されているフェニル環であり、
Ｒ１９は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル及びアリールからなる群から選択され、
Ｒ２０とＲ２１の一方は存在せず、他方のＲ２０又はＲ２１は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル及びアリールからなる群から選択され、
点線の各々は独立に単結合又は二重結合である。
【０１３２】
一部の実施形態によれば、化合物は一般式（ＩＩａ）を有する。
【０１３３】
【化２３】
2020517678.tif 000024
【０１３４】
式中、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ１９及びＲ２０の各々は本明細書に記載の通りである。
【０１３５】
一部の実施形態によれば、神経炎症性疾患を処置する方法であって、それを必要とする対象に治療有効量の一般式（ＩＩ）の化合物又はその塩を投与するステップを含み、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ１９及びＲ２０の各々が本明細書に記載の通りである、方法が提供される。
【０１３６】
一部の実施形態によれば、神経炎症性疾患に罹患した対象の処置のための一般式（ＩＩ）の化合物又はその塩の使用であって、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ１９及びＲ２０の各々が本明細書に記載の通りである、使用が提供される。
【０１３７】
一部の実施形態によれば、Ｒ１７はＣ６Ｈ５である。一部の実施形態によれば、Ｒ１８はＣ６Ｈ５である。一部の実施形態によれば、Ｒ１７とＲ１８はどちらもＣ６Ｈ５である。
【０１３８】
一部の実施形態によれば、Ｒ１９はＨである。
【０１３９】
一部の実施形態によれば、Ｒ２０はＨである。
【０１４０】
一部の実施形態によれば、Ｒ２１は存在しない。
【０１４１】
一部の実施形態によれば、化合物は式ＳＭ２を有する。
【０１４２】
【化２４】
2020517678.tif 000025
【０１４３】
一部の実施形態によれば、本発明は、一般式（ＩＩＩ）の化合物又はその塩を含む医薬組成物を提供する。
【０１４４】
【化２５】
2020517678.tif 000026
【０１４５】
式中、
Ｒ２２及びＲ２３は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル及びアリールからなる群から各々独立に選択され、
Ｘ２７は、ハロゲン化アルキル、アミン、ハロゲン、アルコキシ、ヒドロキシ、ＣＮ及びＮＯ２からなる群から選択される。
【０１４６】
一部の実施形態によれば、神経炎症性疾患を処置する方法であって、それを必要とする対象に治療有効量の一般式（ＩＩＩ）の化合物又はその塩を投与するステップを含み、Ｘ２７、Ｒ２２及びＲ２３の各々が本明細書に記載の通りである、方法が提供される。
【０１４７】
一部の実施形態によれば、神経炎症性疾患に罹患した対象の処置のための一般式（ＩＩＩ）の化合物又はその塩の使用であって、Ｘ２７、Ｒ２２及びＲ２３の各々が本明細書に記載の通りである、使用が提供される。
【０１４８】
一部の実施形態によれば、Ｘ２７は窒素原子を含む。一部の実施形態によれば、Ｘ２７はＮＯ２である。
【０１４９】
一部の実施形態によれば、Ｒ２２はアルキル鎖である。一部の実施形態によれば、Ｒ２２は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ブチル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル及びイソブチルからなる群から選択される。一部の実施形態によれば、Ｒ２２はメチル又はエチルである。一部の実施形態によれば、Ｒ２２はエチルである。
【０１５０】
一部の実施形態によれば、Ｒ２３はＨである。
【０１５１】
一部の実施形態によれば、化合物は式ＳＭ３を有する。
【０１５２】
【化２６】
2020517678.tif 000027
【０１５３】
一部の実施形態によれば、本発明は、一般式（ＩＶ）の化合物又はその塩を含む医薬組成物を提供する。
【０１５４】
【化２７】
2020517678.tif 000028
【０１５５】
式中、
Ｘ２８は、ハロゲン化アルキル、アミン、ハロゲン、アルコキシ、ヒドロキシ、ＣＮ及びＮＯ２からなる群から選択される。
【０１５６】
Ｒ２４は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル及びアリールからなる群から選択され、
Ｒ２５は、アルキル、ハロゲン化アルキル、シクロアルキル、アリール、アミン、ハロゲン、アルコキシ、ヒドロキシ、ヘテロアリール、ＣＮ及びＮＯ２からなる群から選択される。
【０１５７】
一部の実施形態によれば、神経炎症性疾患を処置する方法であって、それを必要とする対象に治療有効量の一般式（ＩＶ）の化合物又はその塩を投与するステップを含み、Ｘ２８、Ｒ２４及びＲ２５の各々が本明細書に記載の通りである、方法が提供される。
【０１５８】
一部の実施形態によれば、神経炎症性疾患に罹患した対象の処置のための一般式（ＩＶ）の化合物又はその塩の使用であって、Ｘ２８、Ｒ２４及びＲ２５の各々が本明細書に記載の通りである、使用が提供される。
【０１５９】
一部の実施形態によれば、Ｘ２８は窒素原子を含む。一部の実施形態によれば、Ｘ２８はＮＯ２である。
【０１６０】
一部の実施形態によれば、Ｒ２４はＨである。
【０１６１】
一部の実施形態によれば、Ｒ２５は、アルキル、ハロゲン化アルキル、シクロアルキル及びハロゲンからなる群から選択される。一部の実施形態によれば、Ｒ２５はハロゲン化アルキルである。一部の実施形態によれば、Ｒ２５はフッ化アルキルである。一部の実施形態によれば、Ｒ２５はＣＦ３である。
【０１６２】
一部の実施形態によれば、化合物は式ＳＭ４を有する。
【０１６３】
【化２８】
2020517678.tif 000029
【０１６４】
一部の実施形態によれば、本発明は、一般式（Ｖ）の化合物又はその塩を含む医薬組成物を提供する。
【０１６５】
【化２９】
2020517678.tif 000030
【０１６６】
式中、
Ｘ２９は、ＯＲ２６、Ｏ−及びＮＲ２７Ｒ２８からなる群から選択され、Ｒ２６、Ｒ２７及びＲ２８は、Ｈ、ＣＯＲ２９、アルキル、シクロアルキル及びアリールからなる群から各々独立に選択され、Ｒ２９は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル及びアリールからなる群から選択され、
Ｘ３０は、ＯＲ３０、Ｏ−及びＮＲ３１Ｒ３２からなる群から選択され、Ｒ３０、Ｒ３１及びＲ３２は、Ｈ、ＣＯＲ３３、アルキル、シクロアルキル及びアリールからなる群から各々独立に選択され、Ｒ３３は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル及びアリールからなる群から選択される。
【０１６７】
一部の実施形態によれば、神経炎症性疾患を処置する方法であって、それを必要とする対象に治療有効量の一般式（Ｖ）の化合物又はその塩を投与するステップを含み、Ｘ２９及びＸ３０の各々が本明細書に記載の通りである、方法が提供される。
【０１６８】
一部の実施形態によれば、神経炎症性疾患に罹患した対象の処置のための一般式（Ｖ）の化合物又はその塩の使用であって、Ｘ２９及びＸ３０の各々が本明細書に記載の通りである、使用が提供される。
【０１６９】
一部の実施形態によれば、Ｘ２９はＮＲ２７Ｒ２８である。一部の実施形態によれば、Ｒ２７はＨである。一部の実施形態によれば、Ｒ２８はＣＯＲ２９である。一部の実施形態によれば、Ｒ２９はアルキル基である。一部の実施形態によれば、Ｒ２９はＣ１〜４アルキルである。一部の実施形態によれば、Ｒ２９はメチルである。一部の実施形態によれば、Ｘ２９はＮＨＡｃである。
【０１７０】
一部の実施形態によれば、Ｘ３０はＮＲ３１Ｒ３２である。一部の実施形態によれば、Ｒ３１はＨである。一部の実施形態によれば、Ｒ３２はＣＯＲ３３である。一部の実施形態によれば、Ｒ３３はアルキル基である。一部の実施形態によれば、Ｒ３３はＣ１〜４アルキルである。一部の実施形態によれば、Ｒ３３はメチルである。一部の実施形態によれば、Ｘ３３はＮＨＡｃである。
【０１７１】
一部の実施形態によれば、化合物は式ＳＭ５を有する。
【０１７２】
【化３０】
2020517678.tif 000031
【０１７３】
一部の実施形態によれば、本発明は、一般式（ＶＩＩＩ）の化合物又はその塩を含む医薬組成物を提供する。
【０１７４】
【化３１】
2020517678.tif 000032
【０１７５】
式中、
Ｘ３１は、Ｓ及びＯから選択され、
Ｒ３４は、ハロゲン化アリール及びハロゲン化ヘテロアリールから選択され、
Ｒ３５及びＲ３６は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル及びアリールからなる群から各々独立に選択される。
【０１７６】
一部の実施形態によれば、神経炎症性疾患を処置する方法であって、それを必要とする対象に治療有効量の一般式（ＶＩＩＩ）の化合物又はその塩を投与するステップを含み、Ｘ３１、Ｒ３４、Ｒ３５及びＲ３６の各々が本明細書に記載の通りである、方法が提供される。
【０１７７】
一部の実施形態によれば、神経炎症性疾患に罹患した対象の処置のための一般式（ＶＩＩＩ）の化合物又はその塩の使用であって、Ｘ３１、Ｒ３４、Ｒ３５及びＲ３６の各々が本明細書に記載の通りである、使用が提供される。
【０１７８】
一部の実施形態によれば、Ｘ３１はＳである。
【０１７９】
一部の実施形態によれば、Ｒ３４はハロゲン化ヘテロアリールである。一部の実施形態によれば、Ｒ３４は、少なくとも２個のハロゲン原子を含む。一部の実施形態によれば、Ｒ３４は、２個のハロゲン原子を含む。一部の実施形態によれば、ハロゲン原子は塩素原子である。一部の実施形態によれば、Ｒ３４はハロゲン化ピリジンである。一部の実施形態によれば、Ｒ３４は以下である。
【０１８０】
【化３２】
2020517678.tif 000033
【０１８１】
一部の実施形態によれば、Ｒ３５はＨである。一部の実施形態によれば、Ｒ３６はＨである。一部の実施形態によれば、Ｒ３５とＲ３６はどちらもＨである。
【０１８２】
一部の実施形態によれば、化合物は式ＳＭ８を有する。
【０１８３】
【化３３】
2020517678.tif 000034
【０１８４】
一部の実施形態によれば、医薬組成物は、神経炎症性疾患の処置に使用される。
【０１８５】
一部の実施形態によれば、医薬組成物は、追加の治療薬を更に含む。
【０１８６】
一部の実施形態によれば、神経炎症性疾患は多発性硬化症である。
【０１８７】
一部の実施形態によれば、多発性硬化症は再発寛解型多発性硬化症である。
【０１８８】
一部の実施形態によれば、方法は、前記対象への追加の治療薬の投与を更に含む。
【０１８９】
一部の実施形態によれば、追加の治療薬は、少なくとも１種の化合物又は前記少なくとも１種の化合物を含む医薬組成物の投与前に、投与と同時に、又は投与後に投与される。
【０１９０】
本発明に従って利用される化合物においては、
本明細書では「小分子」と「小有機分子」という用語は、互換性があり、分子量２０００ｇ／ｍｏｌ以下の有機分子を指す。一部の実施形態によれば、小分子の分子量は１０００ｇ／ｍｏｌ以下である。一部の実施形態によれば、小分子の分子量は７５０ｇ／ｍｏｌ以下である。一部の実施形態によれば、小分子の分子量は５００ｇ／ｍｏｌ以下である。
【０１９１】
本明細書では「カルボシクリル」という用語は、複数の炭素原子とＮ、Ｓ及びＯから選択される１個以上のヘテロ原子とを含む環構造を指す。カルボシクリルは、単一の環構造を含む５若しくは６員環、又は２個以上の環を含む環構造とすることができ、前記２個以上の環の各々は５又は６員環とすることができる。環構造中の２個以上の環は、互いに縮合することができ、又は共有結合を介して互いに連結することができる。
【０１９２】
「アルキル」、「アルケニル」及び「アルキニル」炭素鎖という用語（単数又は複数）は、指定しない場合、各々１〜２０個の炭素又は１若しくは２〜１６個の炭素を含む炭素鎖を指し、直鎖又は分岐鎖である。こうした各基は置換されていてもよい。一部の実施形態においては、炭素鎖は、１〜１０個の炭素原子を含む。一部の実施形態においては、炭素鎖は、１〜６個の炭素原子を含む。一部の実施形態においては、炭素鎖は、２〜６個の炭素原子を含む。一部の実施形態においては、アルキルはハロゲン化アルキルである。ハロゲン化アルキルという用語は、トリフルオロメチルなど、ただしそれに限定されない少なくとも１個のハロゲン原子に共有結合した任意のアルキル鎖を指す。アルケニル炭素鎖は、２〜２０個の炭素、又は２〜１８個の炭素、又は２〜１６個の炭素、又は２〜１４個の炭素、又は２〜１２個の炭素、又は２〜１０個の炭素、又は２〜８個の炭素、又は２〜６個の炭素、又は２〜４個の炭素を含むことができる。アルケニル炭素鎖は、同様に、１〜８個の二重結合、又は１〜７個の二重結合、又は１〜６個の二重結合、又は１〜５個の二重結合、又は１〜４個の二重結合、又は１〜３個の二重結合、又は１個の二重結合、又は２個の二重結合を含むことができる。２〜２０個の炭素、又は２〜１８個の炭素、又は２〜１６個の炭素、又は２〜１４個の炭素、又は２〜１２、又は炭素２〜１０個の炭素、又は２〜８個の炭素、又は２〜６個の炭素、又は２〜４個の炭素のアルキニル炭素鎖。アルキニル炭素鎖は、同様に、１〜８個の三重結合、又は１〜７個の三重結合、又は１〜６個の三重結合、又は１〜５個の三重結合、又は１〜４個の三重結合、又は１〜３個の三重結合、又は１個の三重結合、又は２個の三重結合を含むことができる。例示的なアルキル、アルケニル及びアルキニル基としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、イソブチル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソヘキシル、アリル（プロペニル）及びプロパルギル（プロピニル）が挙げられるが、それらに限定されない。「ハロゲン化アルキル」という用語は、それに共有結合した少なくとも１個のハロゲンを有するアルキル基を指す。例示的なハロゲン化アルキル基としては、トリフルオロメチル、クロロメチルなどが挙げられるが、それらに限定されない。
【０１９３】
「−Ｃ１〜Ｃ５−アルキレン−」と命名された基は、１〜５個の炭素原子を有するアルキレンである。一部の実施形態においては、該基は、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレン及びペンチレンから選択され、又はイソプロピレンなどの〜５個の炭素原子を有する任意の他のアルキル及び他のものである。該基は置換されていてもよい。
【０１９４】
「−Ｃ２〜Ｃ５−アルケニレン−」と命名された基は、少なくとも２個の炭素原子と１個以上のＣ＝Ｃ結合（二重結合）とを含む炭素基である。該基は置換されていてもよい。
【０１９５】
「シクロアルキル」とは、ある実施形態においては３〜１０個の炭素原子、別の実施形態においては３〜６個の炭素原子の飽和単環又は多環式環系を指し、シクロアルケニル及びシクロアルキニルとは、それぞれ少なくとも１個の二重結合及び少なくとも１個の三重結合を含む単環又は多環式環系を指す。シクロアルケニル及びシクロアルキニル基は、一部の実施形態においては３〜１０個の炭素原子、更なる実施形態においては４〜７個の炭素原子を含むことができ、シクロアルキニル基は、更なる実施形態においては８〜１０個の炭素原子を含むことができる。シクロアルキル、シクロアルケニル及びシクロアルキニル基の環系は、１個の環で構成され得、又は縮合、架橋若しくはスピロ結合様式で連結され得る２個以上の環で構成され得る。
【０１９６】
「アリール」とは、６〜１０個の炭素原子を含む芳香族単環式又は多環式基を指す。アリール基としては、非置換又は置換フルオレニル、非置換又は置換フェニル、非置換又は置換ナフチルなどの基が挙げられるが、それらに限定されない。「−Ｃ６−アリーレン−」基は、フェニル又はフェニル置換基である。
【０１９７】
「ヘテロアリール」とは、環系中の１個以上、一部の実施形態においては１〜３個の原子がヘテロ原子、すなわち、例えば、窒素、酸素又は硫黄を含めた炭素以外の元素である、ある実施形態においては約５〜約１５員の、単環式又は多環式芳香環系を指す。ヘテロアリール基は、任意にベンゼン環と縮合している。ヘテロアリール基としては、フリル、イミダゾリル、ピリミジニル、テトラゾリル、チエニル、ピリジル、ピロリル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、トリアゾリル、キノリニル及びイソキノリニルが挙げられるが、それらに限定されない。
【０１９８】
「ヘテロシクリル」とは、環系中の１個以上、ある実施形態においては１〜３個の原子がヘテロ原子、すなわち、窒素、酸素又は硫黄を含めて、ただしそれらに限定されない炭素以外の元素である、一実施形態においては３〜１０員、別の一実施形態においては４〜７員、更なる一実施形態においては５〜６員の、飽和単環式又は多環式環系を指す。ヘテロ原子（単数又は複数）が窒素である実施形態においては、窒素は、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、ヘテロアラルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルアルキル、アシル、グアニジンで任意に置換されており、又は窒素は四級化されて、置換基が上記のように選択されたアンモニウム基を形成することができる。
【０１９９】
「ハライド」、「ハロゲン」及び「ハロ」という用語は、フッ素、塩素、臭素又はヨウ素を表す。
【０２００】
「アルコキシ」という用語は、−Ｏ−アルキルを指す。したがって、アルコキシ基は、酸素に単結合したアルキル（炭素及び水素鎖）基である。非限定的例としては、メトキシ（ＯＭｅ）及びエトキシ（ＯＥｔ）が挙げられる。
【０２０１】
基「−Ｏ−」及び「Ｏ−」とは、負に帯電した酸素原子を指す。負に帯電した酸素原子は、Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｌｉ＋を含めて、ただしそれらに限定されない金属カチオン、Ｒ’’’’、Ｒ’’’、Ｒ’’及びＲ’が各々独立に水素原子又はアルキル基であり得るＮＲ’’’’Ｒ’’’Ｒ’’Ｒ’＋などの有機カチオンなどのカチオンと結合していることを理解されたい。
【０２０２】
「アミン」という用語は、−ＮＲ’Ｒ２’’基を指す。「−ＮＲ’Ｒ’’」基とは、Ｒ１及びＲ２が、各々本明細書に定義される又は当該技術分野で既知の水素、アルキル、アルケニル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、エステル及びカルボニルから独立に選択される、アミン基を指す。
【０２０３】
本明細書では「塩」又は「その塩」という用語は、本明細書に開示される化合物の薬学的に許容される塩を指す。非限定的例としては、酸付加カチオン塩及びアニオン塩が挙げられる。「酸付加カチオン塩」は、一般に、塩基性原子を有する化合物が酸性環境に曝露されたときに形成される。これらには、非限定的例として、窒素含有化合物のプロトン化によって形成されるものなどのアンモニウムイオンが含まれる。「アニオン塩」は、一般に、水素原子を有する化合物が塩基性環境に曝露されたときに形成される。これらには、非限定的例として、カルボン酸の脱プロトン化又はエステルの鹸化によって形成され得るカルボキシラート、及び脱プロトン化窒素原子を有する化合物が含まれる。
【０２０４】
可能な置換に関して、「任意に置換されている」又は他に「置換された」と列挙された任意の１つの基は、その原子のいずれかの上の本来の原子又は基（水素原子など）を置換する１個以上の原子又は原子群を有すると言える。一部の実施形態においては、置換基は、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ハロゲン、アルキレン−ＣＯＯＨ、エステル、−ＯＨ、−ＳＨ及び−ＮＨから選択される。一部の実施形態においては、あるリガンド上の置換基の数は、０又は１又は２又は３又は４又は５又は６又は７又は８又は９又は２０個の置換基である。
【０２０５】
本発明は、本明細書でＳＭ１、ＳＭ６、ＳＭ７又はＳＭ９と命名された化合物のいずれかの使用を更に提供する。
【０２０６】
本発明は、式（Ｉ）の少なくとも１種の化合物、例えば、本明細書で「ＳＭ１」又は「ＳＭ９」と命名された化合物と、場合によっては、薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤とを含む組成物、例えば、医薬組成物を更に提供する。
【０２０７】
別の一態様によって、本発明は、神経炎症性障害、例えば、多発性硬化症、神経毒性又は脳損傷の処置に使用される、「ＳＭ１」、「ＳＭ６」、「ＳＭ７」又は「ＳＭ９」と命名された少なくとも１種の化合物と、場合によっては、薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤とを含む医薬組成物を提供する。
【０２０８】
本発明は、本明細書で列挙された化合物のいずれかの鏡像異性体、立体異性体又は任意の他の異性体も包含する。
【０２０９】
本発明の化合物又はそれらの鏡像異性体、立体異性体若しくは異性体のいずれかの治療効果を、インビトロで又は動物モデル、例えば、ＥＡＥ動物モデルで試験することができる。
【０２１０】
これらの化合物のすべてを商業供給源、例えば、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｃ．から入手することができる。
【０２１１】
本発明の化合物は、プロドラッグとして改変及び投与することができる。
【０２１２】
本明細書では「医薬組成物」という用語は、本明細書に記載の少なくとも１種の有機小分子の調製物を指す。さらに、本発明の医薬組成物は、薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤を含む。
【０２１３】
「薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤」という用語は、任意の及びすべての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤、抗真菌剤などを含み、生物を著しく刺激せず、投与された小有機化合物の生物活性及び性質を阻害しない、担体又は希釈剤を指す。アジュバントはこの用語に含まれる。ここでは「賦形剤」という用語は、医薬組成物に添加して、活性成分の投与を更に容易にする不活性物質を指す。
【０２１４】
賦形剤又は無毒担体の限定されない例としては、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖及び種々のデンプン、グルコース、スクロース、ナトリウムサッカリン、マンニトール、ラクトース、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油、ステアリン酸マグネシウム、炭酸マグネシウム、タルカム、ポリアルキレングリコール及びポリエチレングリコールが挙げられるが、それらに限定されない。
【０２１５】
本発明に係る医薬組成物は、当該技術分野で周知のプロセスによって、１種以上の薬学的に許容される担体を用いて、例えば、従来の混合、溶解、顆粒化、乳化、カプセル化、封入又は凍結乾燥プロセスによって、製造することができる。適切な処方は、選択される投与経路に依存する。医薬組成物は、固体剤形、例えば、散剤、丸剤、錠剤などとして、又は溶液剤、乳濁液剤、懸濁液剤、エアロゾル剤、シロップ剤若しくはエリキシル剤として、製造することができる。
【０２１６】
本明細書に定義される「処置」又は「処置方法」という用語は、治療対象における疾患の自然経過を変える試みにおける臨床介入を指し、予防によって、又は臨床病理の過程において、行うことができる。処置の望ましい効果としては、疾患の発生又は再発の防止、症候の緩和、軽減又は解消、疾患進行速度の減少、疾患重症度又は状態の改善又は緩和、予後の改善、疾患の症候の発生の遅延、再発の遅延、並びに神経形成及び髄鞘形成の誘導が挙げられる。
【０２１７】
一部の実施形態においては、ＭＳに罹患した対象に対する本発明に係る処置の効果は、障害レベルを表す０．５単位刻みの０〜１０の範囲の尺度である「総合障害度評価尺度」（ＥＤＳＳ：Ｅｘｐａｎｄｅｄ  Ｄｉｓａｂｉｌｉｔｙ  Ｓｔａｔｕｓ  Ｓｃａｌｅ）によってモニターすることができる。スコアリングは、神経科医による検査に基づく。ＥＤＳＳステップ１．０〜４．５は、補助なしで歩くことができるＭＳの人を指し、以下の８つの機能系（ＦＳ：ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｓｙｓｔｅｍ）における障害の程度に基づく：錐体、小脳、脳幹、感覚、腸＆膀胱、視覚、大脳及びその他（歩行運動）［１５］。各機能系は、０（正常）〜５又は６（最大障害）の尺度でスコア化される。ＥＤＳＳステップ５．０〜９．５は、歩行障害によって定義される。
【０２１８】
「神経炎症性障害」、「神経炎症性疾患」又は「神経炎症性症状」という用語は、本明細書では区別なく使用され、免疫応答が神経系の成分を損なう状態を指す。一般例は、中枢神経系の炎症性脱髄並びにそれに続く神経細胞及び軸索の損傷を特徴とする多発性硬化症（ＭＳ）及び視神経脊髄炎（ＮＭＯ）である。炎症性機序は、血管炎、サルコイドーシス、ベーチェット病などの中枢神経系が関与する全身性炎症性症状、並びに神経変性、精神障害、神経毒性状態、卒中及び脳傷害を含めて、多数の他のＣＮＳ障害の病態形成にも関係している。
【０２１９】
本明細書に定義される「神経変性疾患、症状又は障害」という用語は、脳又は脊髄におけるニューロン死を含めて、ニューロンの構造又は機能の進行性喪失である。神経変性は、ウイルス性傷害後に認められ、大部分は、高齢者に一般に認められるアルツハイマー病（ＡＤ：Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）、パーキンソン病（ＰＤ：Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ：Ａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃ  Ｌａｔｅｒａｌ  Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ、ルーゲーリッグ病とも称する）などの種々のいわゆる「神経変性疾患」において認められる。
【０２２０】
幾つかの特定の実施形態においては、本発明に係る医薬組成物は、「脱髄疾患」の処置用である。本明細書に定義される「脱髄疾患」という用語は、ニューロンの髄鞘が損傷を受け、又は除去されて、神経細胞の機能が阻害される、任意の神経系疾患である。
【０２２１】
一部の実施形態においては、本発明に係る神経変性疾患は多発性硬化症である。更なる特定の実施形態においては、本発明に係る医薬組成物は、多発性硬化症の処置用である。
【０２２２】
本明細書に定義される「多発性硬化症」（ＭＳ）という用語は、ミエリン、乏突起膠細胞及び軸索を破壊する中枢神経系の慢性炎症性神経変性疾患である。ＭＳは、若年成人で最も一般的な神経疾患であり、一般に２０〜４０歳で出現する。ＭＳの症候は、片目の視力喪失、複視などの視覚障害の出現から筋力低下疲労、疼痛、知覚麻痺、凝り及び不安定、運動失調、並びに振戦、めまい、不明瞭発語、嚥下困難、情緒障害などの他の症候まで様々である。疾患の進行とともに、患者は、その歩行運動能力を失い、認知機能低下、毎日の活動の自己管理の喪失に遭遇し、重度の障害及び依存になる可能性がある。
【０２２３】
免疫系の要素が脳の細胞（グリア及び／又はニューロン）を攻撃し、軸索の保護髄鞘を損なうので、ＭＳ症候が発生する。これらの攻撃が起こる領域は、脳を介したメッセージの伝達を混乱させる病変部と称される。
【０２２４】
多発性硬化症は、疾患進行を特徴とする４つのタイプに分類される：（１）再発（症状再燃の発作）とそれに続く寛解（安定化及び可能な回復の期間、一部の寛解では完全な回復、別の寛解では部分的回復又は回復せず）を特徴とする、再発寛解型ＭＳ（ＲＲＭＳ）。ＲＲＭＳの症候は軽度から重度まで様々であり、再発は数日又は数か月持続し得る。ＭＳを有する人の８０パーセント超が再発寛解型サイクルで始まる。（２）二次性進行型ＭＳ（ＳＰＭＳ：Ｓｅｃｏｎｄａｒｙ−ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  ＭＳ）は、再発寛解型ＭＳを有する人において発生する。ＳＰＭＳにおいては、再発が起こり得るが、有意義な期間の寛解（安定化）がなく、障害が次第に悪化する。（３）その発生から徐々に着実に進行し、ＭＳ症例の２０パーセント未満を占める、原発性進行性ＭＳ（ＰＰＭＳ）。寛解期間がなく、症候は一般に強度が低下しない。（４）進行性再発性ＭＳ（ＰＲＭＳ：Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ−ｒｅｌａｐｓｉｎｇ  ＭＳ）。このタイプのＭＳにおいては、人々は、着実に悪化する症候と寛解期間の発作の両方を経験する。
【０２２５】
現在、多発性硬化症は治癒しない。処置は、通常、ＭＳ発作を処置する戦略、症候を管理する戦略、及び疾患の進行を遅らせる戦略に焦点が置かれる。ＭＳの処置に使用される公知の薬剤としては、再発中に急増する炎症を抑制するのに主に使用されるコルチコステロイド、多発性硬化症の進行を遅らせ、発作の数を減少させ、発作の重症度を低下させるベータインターフェロン、ＭＳ発作の数を減少させるグラチラマー酢酸塩（Ｃｏｐａｘｏｎｅ（登録商標））、フィンゴリモド（Ｇｉｌｅｎｙａ（登録商標））、ナタリズマブ（Ｔｙｓａｂｒｉ（登録商標））、及び当該技術分野で既知の他の薬剤が挙げられる。再発率を低下させ、障害進行に穏やかに影響する新しい療法としては、フマル酸ジメチル（ＢＧ−１２、Ｔｅｃｆｉｄｅｒａ（登録商標））、テリフルノミド（Ａｕｂａｇｉｏ（登録商標））、アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標）１−Ｈ、Ｌｅｍｔｒａｄａ（登録商標））及びオクレリズマブ（Ｏｃｒｅｖｕｓ（商標））が挙げられる。
【０２２６】
多発性硬化症の診断は、当該技術分野で既知の任意の方法によって行うことができ、ＣＳＦオリゴクローナルバンド形成を含めた脳脊髄液試験のための腰椎穿刺（脊椎穿刺）、脳のＭＲＩスキャン、脊椎（脊髄）のＭＲＩスキャン、及びニューロン経路機能検査（誘発電位試験）を含む。
【０２２７】
下記実施例（例えば、実施例２及び３）に示すように、本発明の小有機化合物ＳＭ１、ＳＭ７及びＳＭ９の腹腔内投与は、多発性硬化症（ＭＳ）を模倣した確立されたモデルである再発寛解型実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＲＲ−ＥＡＥ）動物モデルにおける臨床症状を改善した。
【０２２８】
本明細書に定義される「実験的自己免疫性脳脊髄炎」（ＥＡＥ、又は実験的アレルギー性脳脊髄炎（Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ａｌｌｅｒｇｉｃ  Ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ））という用語は、一般に、多発性硬化症（ＭＳ）及び急性散在性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）を含めて、ただしそれらに限定されない、ヒトＣＮＳ脱髄疾患の動物モデルとして広く受け入れられた中枢神経系（ＣＮＳ：ｃｅｎｔｒａｌ  ｎｅｒｖｏｕｓ  ｓｙｓｔｅｍ）の誘導炎症性脱髄疾患を指す。
【０２２９】
ＥＡＥは、マウス、ラット、モルモット、ウサギ及び霊長類を含めた多数の種において誘導することができる。疾患誘導は、通常、動物を種々の抗原に曝露することによって行われる。最も一般に使用される抗原は、脊髄ホモジネート（ＳＣＨ：ｓｐｉｎａｌ  ｃｏｒｄ  ｈｏｍｏｇｅｎａｔｅ）、精製ミエリン、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）、ミエリンプロテオリピドタンパク質（ＰＬＰ又はリポフィリン）、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ：ｍｙｅｌｉｎ  ｏｌｉｇｏｄｅｎｄｒｏｃｙｔｅ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ）などのミエリンタンパク質、又はこれらのタンパク質のペプチドであり、すべてが免疫学と病理学の両方に関して異なる疾患特性を有する異なるモデルをもたらす。
【０２３０】
使用される抗原及び動物の遺伝子構成に応じて、齧歯動物は、単相性のＥＡＥ、再発寛解型又は慢性ＥＡＥを示し得る。典型的な感受性の齧歯動物は、免疫処置の約２週間後に臨床症状が出現し、再発寛解型疾患の症候を示す。
【０２３１】
多発性硬化症のモデリングは、ＳＪＬ／Ｊマウスを用いて行うことができる。このＥＡＥモデルは、８週齢ＳＪＬ／Ｊ雌性マウスにおいて（百日咳毒素と一緒に）プロテオリピドタンパク質（ＰＬＰ）断片によって誘導される。このモデルは、再発寛解型（ＲＲ）疾患経過を示し、ＭＳ患者において観察されるものに似ている。
【０２３２】
多発性硬化症のモデリングは、Ｃ５７ＢＬ／６雌性マウスを用いて行うこともでき、疾患はミエリン−乏突起膠細胞糖タンパク質ペプチド（ＭＯＧ：ｍｙｅｌｉｎ−ｏｌｉｇｏｄｅｎｄｒｏｃｙｔｅ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ）を用いて誘導される。このモデルは、疾患の進行性（慢性とも称される）型である。
【０２３３】
当該技術分野で知られているように、モデル動物は、通常、以下のスコアリング指標を用いて疾患活動性（「疾患活動性指標」、ＤＡＩ：Ｄｉｓｅａｓｅ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｉｎｄｅｘと称する）についてスコア化される：正常マウス、疾患の明白な徴候なし「０」、たるんだ尾又は後肢虚弱であるが両方ではない「１」、たるんだ尾及び後肢虚弱「２」、部分的後肢麻痺「３」、完全な後肢麻痺「４」、及び死又は人道的理由による絶命「５」。別のＤＡＩ、例えば、以下のスコアリングを使用するＤＩＡもある：尾部弛緩「１」、軽度から中程度の後肢虚弱「２」、重度の後肢虚弱「３」、１本以上の肢の完全な麻痺「４」、瀕死「５」。
【０２３４】
上記スコアリング指標は、したがって、本発明の小有機分子の治療効果を決定するために、疾患の重症度及び再発のモニタリングに使用することができる。
【０２３５】
したがって、一実施形態においては、本発明の化合物をＲＲ−ＭＳの処置に使用することができる。
【０２３６】
別の実施形態においては、本発明の化合物を二次性進行型ＭＳ（ＳＰＭＳ）、原発性進行性ＭＳ（ＰＰＭＳ）又は進行性再発性ＭＳ（ＰＲＭＳ）の処置に使用することができる。
【０２３７】
別の一態様においては、本発明は、多発性硬化症を処置する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量の「ＳＭ１」、「ＳＭ６」、「ＳＭ７」及び「ＳＭ９」からなる群から選択される式の少なくとも１種の化合物、又は前記少なくとも１種の化合物を含む医薬組成物を投与するステップを含む方法を提供する。
【０２３８】
例として、本発明の化合物又は本発明の医薬組成物を投与するステップは、それらに限定されないが、以下の投与経路によって実施することができる：経口、直腸、経粘膜、経鼻、腸、又は筋肉内、皮下及び髄内注射、並びに髄腔内、直接脳室内、静脈内、腹腔内、鼻腔内又は眼内注射を含めた非経口送達。あるいは、本発明に係る医薬組成物を、例えば、対象の組織領域、例えば、患部ＣＮＳ領域に医薬組成物を直接注射することによって、全身ではなく局所的に投与することができる。
【０２３９】
一部の実施形態においては、本発明の小有機分子を追加の治療薬と組み合わせて投与する。
【０２４０】
追加の治療薬は、多発性硬化症を治療するのに、又は再発率を低下させ、障害進行に作用するのに、適切である、又は知られている、任意の治療薬とすることができる。非限定的例としては、インターフェロンベータ１（Ａｖｏｎｅｘ（登録商標）、Ｂｅｔａｆｅｒｏｎ（登録商標）、Ｒｅｂｉｆ（登録商標）など）、グラチラマー酢酸塩（Ｃｏｐａｘｏｎｅ（登録商標））、フィンゴリモド（Ｇｉｌｅｎｙａ（登録商標））、ナタリズマブ（Ｔｙｓａｂｒｉ（登録商標））、オクレリズマブ（Ｏｃｒｅｖｕｓ（登録商標））及び当該技術分野で既知の他の薬剤が挙げられる。
【０２４１】
追加の治療薬は、すべての入手可能な供給源からの間葉幹細胞（ＭＳＣ：ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌ）、ＭＳＣ様細胞、神経前駆細胞、ＣＤ３４＋細胞、ＣＤ１３３  ＋細胞、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ：ｉｎｄｕｃｅｄ  ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌ）、分化多能性幹細胞などを含めて、ただしそれらに限定されない細胞の投与を含めた細胞療法とすることができる。
【０２４２】
一実施形態においては、前記追加の治療薬は、ＢＢＢが開くのを媒介する薬剤、例えば、静脈内に注射することができるマンニトールである。
【０２４３】
追加の治療薬は、本発明の小有機化合物と一緒に処方することができ、又は別の組成物の一部とすることができる。追加の薬剤は、本発明の化合物と一緒に又は別々に投与することができる。それは、本発明の化合物又は医薬組成物の投与前に、投与と同時に、又は投与後に投与することができる。
【０２４４】
当該技術分野で知られているように、「血液脳関門（ＢＢＢ：ｂｌｏｏｄ−ｂｒａｉｎ  ｂａｒｒｉｅｒ）」という用語は、循環血液からの中枢神経系の構造上の膜分離に関する。
【０２４５】
本発明に係る少なくとも１種の小有機分子の「治療有効量（単数又は複数）」という用語は、病状を治癒、抑止又は少なくとも軽減するために、当該技術分野で既知の考慮事項によって決定される。投与の正確な用量及び頻度は、患者の疾患の重症度、投与経路、及び化合物の薬物動態学に依存する。用量の決定は、通常の手順であり、医師及び他の当業者によく知られている。本発明の方法に使用される任意の調製物の場合、投与量又は治療有効量は、動物モデル、例えば、ＥＡＥで行われるインビトロアッセイ、細胞培養アッセイ及びインビボ実験から最初に推定することができる。
【０２４６】
例えば、下記投与量を多発性硬化症のＥＡＥマウスモデルに基づいて推定した。下記実施例２及び３に示すように、ＳＭ１、ＳＭ７又はＳＭ９の各々１０ｍｇ／ｋｇ又は２０ｍｇ／ｋｇによる処置は、ＥＡＥを改善した。顕著なことに、処置ＥＡＥマウスの症候は、検査の各相において、対照よりも重篤でなかった。この効果は、処置ＥＡＥマウス群において、より重症型の疾患（すなわち、臨床スコア２〜５）を示すマウスが少なかったという事実によっても明らかになった。さらに、処置は、ＥＡＥマウスの脊髄中のミエリン量を増加させ、これらのＳＭ処置に応答して再ミエリン化プロセスの増加若しくは脱髄の減少又はその両方を示すことが判明した。
【０２４７】
治療投与量の非限定的例としては、約７０ｋｇの人１名当たり４００〜８００ｍｇが挙げられるが、それに限定されない。
【０２４８】
なお、投与すべき小有機分子の量は、特定の薬剤の分子量及び他の特徴を考慮して、約５〜２５％変動し得ることを注記するべきである。したがって、本明細書に定義される「約」という用語は、本明細書に定義される量の５〜２５％の変動を指す。好ましくは、「約」という用語は、指定値の＋／−１０％、より好ましくは＋／−５％、更により好ましくは＋／−１％、更により好ましくは＋／−０．１％の変化を包含する。
【０２４９】
本発明に係る小有機分子又はそれを含む任意の医薬組成物は、患者に１回又は複数回投与することができる。小有機分子又はそれを含む医薬組成物は、病状を治癒、抑止又は少なくとも軽減するために、当業者に公知の考慮事項によって決定して、連続的に又は不連続な時間に患者に投与することができる。
【０２５０】
本明細書に記載の小有機分子の毒性及び治療効果は、標準薬学手順によってインビトロ、細胞培養物又は実験動物において測定することができる。これらのインビトロ、細胞培養アッセイ及び動物試験から得られるデータは、ヒトに使用されるある範囲の投与量を処方するのに使用することができる。投与量は、使用剤形及び投与経路に応じて変動し得る。
【０２５１】
本明細書では「対象」という用語は、例えば、ラット、マウス、イヌ、ネコ、モルモット、霊長類、ヒトなどの温血動物を意味する。本発明の方法は、神経変性疾患に罹患したヒト対象の処置用に特に意図されるが、他の哺乳動物対象も含まれる。対象と患者という用語は、本明細書では区別なく使用される。
【０２５２】
本発明は、多発性硬化症に罹患した対象の処置の方法に使用される式「ＳＭ１」、「ＳＭ６」、「ＳＭ７」又は「ＳＭ９」の化合物及び薬学的に許容される担体、賦形剤又は希釈剤も開示し、前記方法は、前記少なくとも１個の小有機分子及び薬学的に許容される担体を前記対象に投与するステップを含む。
【０２５３】
多発性硬化症に罹患した対象の処置のための医薬組成物の調製における式「ＳＭ１」、「ＳＭ６」、「ＳＭ７」又は「ＳＭ９」の少なくとも１種の化合物及び薬学的に許容される担体の使用も更に開示される。
【０２５４】
本発明の化合物は、最初に、ＢＭＰ−２シグナル伝達をインビトロで阻害するその能力に基づいて選択された。実施例１に示すように、小有機分子ＳＭ１、ＳＭ６、ＳＭ７及びＳＭ９は、マウスＡＴＤＣ５細胞において細胞傷害性を生じずに、ＢＭＰ−２をインビトロで阻害するその能力について大きなライブラリからスクリーニングされた。さらに、実施例４、７及び８に示すように、これらの化合物は、神経分化をインビトロで示す幾つかのマーカーの増加を示した。
【０２５５】
本明細書に定義される「骨形成タンパク質（単数又は複数）」（ＢＭＰ）という用語は、サイトカイン又はメタボロゲン（ｍｅｔａｂｏｌｏｇｅｎ）としても知られる成長因子の一群を指す。ＢＭＰは、骨及び軟骨の形成を誘導し、胚脳発生において複数の役割を有する。２０種のＢＭＰがこれまで発見され、そのうち、６種のＢＭＰ（すなわちＢＭＰ−２〜ＢＭＰ−７）は、タンパク質の形質転換成長因子β（ベータ）スーパーファミリーに属する。特に、本発明は、ニューロンの増殖及び発生に関連するＢＭＰに関する。非限定的例としては、ＢＭＰ−２及びＢＭＰ−４が挙げられる。特定の一実施形態においては、ＢＭＰはヒトＢＭＰである。
【０２５６】
他の骨形成タンパク質として「骨形成タンパク質２」（すなわちＢＭＰ−２）は、骨及び軟骨の発生において重要な役割を果たす。それは、ハリネズミ経路、ＴＧＦβシグナル伝達経路、及びサイトカイン−サイトカイン受容体相互作用に関与する。それは、心臓細胞分化及び上皮間葉転換にも関与する。ＢＭＰ−２は、ジスルフィド結合ホモ二量体として作用し、骨の産生を刺激することが示された。
【０２５７】
一部の実施形態においては、本発明に係る骨形成タンパク質２は、ＮＣＢＩ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）受託番号ＮＭ＿００１２００．２のヒトＢＭＰ−２である。
【０２５８】
「骨形成タンパク質４」（すなわちＢＭＰ−４）も骨及び軟骨の発生、特に歯及び肢の発生並びに骨折修復に関与する。この特別なファミリーメンバーは、ヒトにおける軟骨内の骨形成の開始に重要な役割を果たす。それは、筋発生、骨石灰化及び尿管芽発生に関与することが示された。ヒト胚発生においては、ＢＭＰ−４は、胚の初期分化及び背腹軸の確立に必要な重要なシグナル伝達分子である。ＢＭＰ−４は、脊索の背部から分泌され、（脊索の腹部から放出される）ソニックヘッジホッグと協調して作用して、その後の構造の分化のために背腹軸を確立する。
【０２５９】
一部の実施形態においては、本発明に係る骨形成タンパク質４は、ＮＣＢＩ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）受託番号Ｐ１２６４４のヒトＢＭＰ−４である。
【０２６０】
ＢＭＰは、骨形成タンパク質受容体（ＢＭＰＲ：ｂｏｎｅ  ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）と称される細胞表面の特定の受容体と相互作用する。ＢＭＰＲを介したシグナル伝達は、タンパク質のＳＭＡＤファミリーのメンバーの動員をもたらす。本明細書では「ＢＭＰシグナル伝達」という用語は、ＢＭＰとその受容体の結合によって惹起されるシグナル伝達経路、及びこの結合によって誘導される後続の細胞プロセス、例えば、タンパク質のＳＭＡＤファミリーのメンバーの動員を指す。
【０２６１】
本発明は、本明細書に開示される特定の例、プロセスステップ及び材料に限定されず、こうしたプロセスステップ及び材料がある程度変わり得ることを理解されたい。本明細書で使用する用語は、特定の実施形態を記述するために使用されるにすぎず、限定することを意図したものではなく、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲及びその均等物によってのみ限定されることも理解されたい。
【０２６２】
本明細書及び添付の特許請求の範囲では、単数形「１つの（ａ、ａｎ）」及び「前記（ｔｈｅ）」は、特に明示しない限り、複数形も含むことに留意しなければならない。
【０２６３】
別段の記載がない限り、本明細書で使用するすべての技術用語及び科学用語は、本発明が関連する技術分野の当業者によって一般に理解されているのと同じ意味を有する。以下の用語が本明細書に記載の本発明のために定義される。
【実施例】
【０２６４】
更なる説明がなくとも、当業者は、前述の説明によって、本発明を最大限に利用することができると考えられる。以下の好ましい具体的実施形態は、したがって、単なる説明であって、特許請求した発明を決して限定するものではないと解釈すべきである。
【０２６５】
本明細書に特に記述しない当該技術分野で既知の標準分子生物学手順は、一般に、Ｓａｍｂｒｏｏｋ＆Ｒｕｓｓｅｌｌ、２００１に本質的に従う。
【０２６６】
略語：
小分子−ＳＭ
実験的自己免疫性脳脊髄炎−ＥＡＥ、
再発寛解型−ＲＲ、
多発性硬化症−ＭＳ、
再発寛解型実験的自己免疫性脳脊髄炎−ＲＲ−ＥＡＥ、
プロテオリピドタンパク質ペプチド−ＰＬＰ、
ミエリン−乏突起膠細胞糖タンパク質ペプチド−ＭＯＧ、
リン酸緩衝食塩水−ＰＢＳ（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒｅｄ  ｓａｌｉｎｅ）、
完全フロイントアジュバント−ＣＦＡ（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ  Ａｄｊｕｖａｎｔ）、
百日咳毒素−ＰＴＸ、
骨形成タンパク質−ＢＭＰ、
血液脳関門−ＢＢＢ、
中枢神経系−ＣＮＳ、
時間−ｈｒ、ｈ、
分−ｍｉｎ。
【０２６７】
実験手順
ハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）バイオアッセイ
ポリ−Ｌ−リジン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を３８４ウェルプレートに添加し、室温で３０分インキュベーション後に除去した。ＤＭＥＭ／Ｆ１２、２％ＦＢＳ、ペニシリン１００単位／ｍｌ、ストレプトマイシン（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ）１００ｍｇ／ｍｌを含むアッセイ培地を、各ウェルに添加した。次いで、組換えヒトＢＭＰ−２（ｒｈＢＭＰ−２、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を、最終濃度２μｇ／ｍｌまで各ウェルに添加した。ＡＴＤＣ５細胞（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を収集し、アッセイ培地に再懸濁し、最終濃度２０００細胞／ウェルまで添加した。最後に、ヘパリン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を、最終濃度２μｇ／ｍｌまで添加した。細胞を、４８時間３７℃で５％ＣＯ２と一緒に加湿チャンバ中でＢＰＭ−２の潜在的小分子阻害剤の存在又は非存在下でインキュベーションした。インキュベーション後、ＡＬＰレベル及び細胞生存率を、完全に自動化された手順で測定した。細胞をＰＢＳで洗浄し、プロテアーゼ阻害剤カクテル（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を補充したＰＢＳ中に０．２％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００を含む溶解緩衝剤を用いて溶解し、室温で２５分間インキュベーションした。次いで、ＣＤＰ−Ｓｔａｒ（登録商標）化学発光基質（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を添加し、２５分間室温で暗所でインキュベーション後に発光を測定して、ＡＬＰレベルを求めた。最後に、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ）を添加し、１０分間インキュベーション後に発光を測定して、細胞生存率を求めた。
【０２６８】
マウスにおける実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）誘導
ＳＪＬ雌性マウス（６〜８週齢）において０．１ｍｌ  ＰＢＳ中のプロテオリピドタンパク質ペプチド（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈによって合成されたＰＬＰ１３９−１５１）１００μｇ／マウスで皮下免疫処置して（０日目）、ＲＲ−ＥＡＥを誘導した。結核菌Ｈ３７ＲＡ（ＭＴ、ＤＩＦＣＯ製）５００μｇを含む等量の完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ、ＤＩＦＣＯ製）でペプチドを乳化した。０．２ｍｌ  ＰＢＳ中の百日咳毒素（ＰＴＸ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ製）３００ｎｇも、マウスに腹腔内注射した。２回目のＰＴＸ注射（３００ｎｇ／マウス）を、４８時間後に行った。
【０２６９】
マウスのＲＲ−ＥＡＥ症候をモニターし、以下のようにスコア化した：疾患なし「０」、尾部麻痺「１」、後肢虚弱「２」、後肢麻痺「３」、後肢及び前肢虚弱／麻痺「４」、瀕死「５」。
【０２７０】
マウスを含む全手順をＡｎｉｍａｌ  Ｅｔｈｉｃａｌ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｏｕｒａｓｋｙ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｅｎｔｅｒのガイドラインに従って行った。
【０２７１】
Ｐ１９細胞のインビトロ分化アッセイ
７．５％子ウシ血清、２．５％ウシ胎仔血清及び０．４μｌ／ｍｌペニシリン−ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ）を含む最少必須培地（ａＭＥＭ：ａ−ｍｉｎｉｍｕｍ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｍｅｄｉｕｍ）（Ｇｉｂｃｏ）中で３７℃、５％ＣＯ２でＰ１９細胞を成長させた。細胞に新しい培地を４８時間毎に補充した。分化検査の場合、Ｐ１９細胞を濃度２×１０５細胞／６０ｍｍ細菌皿で培養し、刺激しないか、又は以下の刺激と一緒にインキュベーションした。
１）５×１０−７Ｍ全トランス型レチノイン酸（ＲＡ：ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）（Ｓｉｇｍａ）
２）ＲＡ＋５ｎｇ／ｍｌ  ｒｈＢＭＰ２（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ）
３）ＲＡ＋ｒｈＢＭＰ−２＋５００ｎｇ／ｍｌマウス抗ヒトＢＭＰ−２／４ｍＡｂ（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ）
４）ＲＡ＋ｒｈＢＭＰ−２＋ＳＭ１／ＳＭ７／ＳＭ９（Ｍａｙｂｒｉｄｇｅ（ＨｉｔＦｉｎｄｅｒ（商標）コレクション））濃度：０．６２５、１．２５及び２．５μＭ。
【０２７２】
ＲＡ、ＢＭＰ補助剤及びＳＭを含む培地を、４８時間後に補充した。４日後、ＲＡ処理中に形成された凝集体を、酵素的に（０．０５％ｖ／ｖトリプシン−０．０２％ｖ／ｖＥＤＴＡ）かつ機械的に分散させ、組織培養グレードの皿の中で培養した。この段階で、細胞を、ＲＡ、ＢＭＰ及びＳＭを含まない培地中で培養し、培地を４８時間毎に新しくした。ＭＡＰ−２陽性ニューロンを、８日目（すなわち、ＲＡ処置後４日目）に免疫蛍光によって調べた。手短に述べると、７日目に細胞をカバーガラス付きの２４ウェルプレート中で最終濃度５×１０４細胞／ウェルで再培養した。８日目に細胞をＰＢＳで洗浄し、４％ＰＦＡで１５分間固定し、０．５％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｔｘで透過処理し、１０％ＦＣＳ、０．１％ＢＳＡ及び０．０５％Ｔｗｅｅｎで３０分間ブロックし、ＭＡＰ２ウサギｍＡｂ（１：１００、Ｄ５Ｇ１、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）で１時間染色した。ウサギに対するＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８複合ＩｇＧ抗体で１時間標識化して二次抗体ステップを行った（１：１０００、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ  ＵＳＡ）。
【０２７３】
ウエスタンブロット分析によるＳＭＡＤ１／５／８シグナル伝達の測定
Ｐ１９細胞を６ウェルプレートに播いた（３．５×１０５細胞／ウェル）。翌日、細胞を処理しないか、又は５×１０−７Ｍ  ＲＡ、５ｎｇ／ｍｌ  ＢＭＰ−２若しくはＳＭで４時間処理した。細胞を氷冷ＰＢＳで洗浄し、収集し、プロテアーゼ阻害剤カクテル及びホスファターゼ阻害剤としてオルトバナジン酸ナトリウム（Ｎａ３ＶＯ４）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を補充した氷冷ＲＩＰＡ緩衝剤（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を用いて溶解した。タンパク質濃度を、ＢＣＡタンパク質アッセイキット（Ｐｉｅｒｃｅ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）を用いて測定した。細胞溶解物（タンパク質４０〜６０μｇ）を、４〜１５％ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル電気泳動によって分離し、次いでニトロセルロース膜に０．２Ａで２時間転写した。膜を５％（ｗ／ｖ）脱脂粉乳で室温で１時間ブロックし、次いで抗ホスホＳｍａｄ１／５／９、抗Ｓｍａｄ１（Ｃｅｌｌ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｂｅｖｅｒｌｙ、ＭＡ、ＵＳＡ）及び抗チューブリン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）抗体と一緒に室温で２時間インキュベーションした。膜を洗浄し、アルカリホスファターゼ複合二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、ＰＡ、ＵＳＡ）と一緒にインキュベーションした。シグナルを、増感化学発光キット（Ｃｌａｒｉｔｙ、ＢｉｏＲａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｒｉｃｈｍｏｎｄ、ＣＡ）を用いて検出し、デジタル画像を、ＭｉｃｒｏＣｈｅｍｉ（ＤＮＲ  Ｂｉｏ−ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｊｅｒｕｓａｌｅｍ、Ｉｓｒａｅｌ）によってキャプチャーした。タンパク質レベルを、ＩｍａｇｅＪソフトウェアを用いて定量化し、｛アルファ｝−チューブリンに対して規準化した。
【０２７４】
実施例１
小分子のハイスループットスクリーニング
ＢＭＰ−２とＢＭＰ受容体ＩＡの構造−機能関係を評価するＡＴＤＣ５細胞アッセイが、Ｋｅｌｌｅｒら（Ｎａｔｕｒｅ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ＆Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２００４  １１、４８１〜４８８）に最初に記載された。多量の治療薬候補をスクリーニングするために、ＢＭＰ阻害を検出するＡＴＤＣ５細胞バイオアッセイを、ハイスループットスクリーニングに使用するように改作した。バイオアッセイは、ＢＭＰ−２及びヘパリンの投与によるマウスＡＴＤＣ５細胞におけるアルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）産生の刺激、並びに阻害剤候補の存在下におけるＡＬＰレベルの測定に基づく。アッセイは、以下の特徴によって特徴付けられる。
【０２７５】
（ａ）ＨＴＳ自動化機器の最適条件が、ＢＭＰ−２の存在下のＡＬＰ産生とＢＭＰ−２の非存在下（刺激なし）のＡＬＰ産生との十分な相違（すなわち、０．５を超える陽性Ｚプライム）が得られるように見いだされた。
【０２７６】
（ｂ）高感度法がＨＴＳのＡＬＰ測定用に設計された。すなわち、ＣＤＰ−Ｓｔａｒ（登録商標）化学発光基質及び発光測定の使用。
【０２７７】
（ｃ）ＡＬＰ産生と細胞生存率の両方を同時に測定した。ＣＤＰ−Ｓｔａｒ（登録商標）による発光シグナルが消えた後に細胞生存率を評価するＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙによってこれを行った。潜在的に有毒な試験小分子はＢＭＰ−２シグナル伝達の妨害によるよりも細胞傷害活性によってＡＬＰレベルを低下させ得るので、ＡＬＰ産生と細胞生存率の両方の同時評価が必要であった。したがって、単に細胞死を引き起こす分子を除外するために、同じ細胞培養物においてＡＬＰレベルと細胞生存率の両方を調べることが不可欠であった。バイオアッセイの明細については、上記実験手順の項で詳述した。
【０２７８】
この完全自動化試験の有効性を図１に示す。図１（Ａ）は、ヘパリンの存在下でｒｈＢＭＰ−２による刺激に応答したＡＴＤＣ５細胞におけるＡＬＰ活性を示す。ＡＬＰ活性を、ＣＤＰ−Ｓｔａｒ（登録商標）化学発光基質を用いて測定した。明らかに、図１（Ｂ）に示すように、ｒｈＢＭＰ−２による細胞の刺激は細胞数を減少させる。これは、ＡＴＤＣ５細胞のＢＭＰ−２によって誘導される軟骨形成とそれに続く増殖の減少の結果かもしれない。図１（Ｃ）に示すように、ＡＬＰ／細胞の比は４．３倍と誘導され、Ｚ’＝０．５９であった。Ｚ’は、効果の有意性、すなわちＢＭＰ２の存在下のＡＬＰシグナルがＢＭＰ２の非存在下のシグナルのレベルに比べてどのくらい高いかを示すパラメータである。Ｚ’が１に近いほど差が大きい。計算を以下のように行う。
Ｚ’＝１−３（σｐ＋σｎ）／Ｉμｐ＋μｎＩ
ここで、σ＝標準偏差、μ＝平均、ｐ＝陽性（ＢＭＰあり）、ｎ＝陰性（ＢＭＰなし）及びＩ＝値
【０２７９】
小分子（ＳＭ：ｓｍａｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ）のライブラリを、上記ハイスループットスクリーニングバイオアッセイによってスクリーニングした。前もって培養したＨｉｔＦｉｎｄｅｒ（商標）Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎを用いて、有機「薬物様」化合物からなるＭａｙｂｒｉｄｇｅライブラリから約７６００個のＳＭをスクリーニングした。ポリ−Ｌ−リジンでのコーティング後、かつｒｈＢＭＰ−２添加前に、化合物を各ウェルに最終濃度５μＭまで添加した。第１のスクリーニング後、２５％を超えるＢＭＰ−２シグナル伝達阻害率及び２０％未満の細胞毒性率を示す９６種の候補分子を、ＢＭＰ−２阻害について選択した（本明細書では「ヒット」と称する）。様々な濃度（０．６２μＭ、１．２５μＭ、２．５μＭ、５μＭ及び１０μＭ）のこれらの分子をバイオアッセイで更に試験して、ＩＣ５０を計算した。ＩＣ５０決定後、１７種の陽性ヒットを得た。最良のＩＣ５０値を示した９種の分子を更なる分析のために選択した。これらの分子を本明細書ではＳＭ１〜ＳＭ９と称する。ＳＭ１〜ＳＭ９の阻害活性及び細胞系に対するそれらの細胞傷害効果を、図２に示す。ＡＬＰレベル及び細胞生存率を、ＳＭを含まないＢＭＰ−２存在下のＡＬＰの割合又は生存率発光レベルとして図２に示す。ＳＭを様々な濃度、すなわち、０．６２μＭ、１．２５μＭ、２．５μＭ、５μＭ及び１０μＭで試験した。
【０２８０】
表１にＳＭ１〜ＳＭ９の化学名、構造及びＩＣ５０値を要約する。
【０２８１】
表１
【表１】
2020517678.tif 000035
【０２８２】
実施例２
ＲＲ−ＥＡＥモデルを用いた疾患進行に対するインビボでのＳＭの効果
上記実施例１で確認された小分子阻害剤の効果を、ＳＪＬマウスにおいて実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）モデルを用いてインビボで更に試験した。ＥＡＥは、再発寛解型多発性硬化症（ＭＳ）のモデルとして役立つ。ＥＡＥを実験手順の項に記載のように誘導した。ＳＭ１〜９又はビヒクル単独（５％ＤＭＳＯのＰＢＳ溶液）を、２５０μｇ／マウス（１０ｍｇ／ｋｇ／日）の腹腔内注射によって、免疫化後９日目から開始して次の３０日間毎日投与した。動物を誘導後４５日目までＥＡＥの症候についてモニターし、以下のようにスコア化した：０＝疾患なし、１＝尾部麻痺、２＝後肢虚弱、３＝後肢麻痺、４＝後肢＋前肢麻痺及び５＝瀕死。
【０２８３】
図３に示すように、有益な効果が、分子ＳＭ１、ＳＭ７及びＳＭ９による処置で認められた（ｐ＜０．０１対ビヒクル）。最も明白な効果が、ＳＭ１−ＫＭ０３７０２による処置で認められた。有益な効果は、免疫化後１９日目で既に認められた（ＥＡＥ臨床スコアはビヒクル群における１．１±０．３に対して０．５±０．２）。この効果は２７日目まで増加し、そのとき臨床スコアは０．３±０．３に達した。
【０２８４】
ＳＭ７−ＲＦ０２４３３及びＳＭ９−ＫＭ０１４８４も、免疫化後２１日目からＥＡＥを改善した（ＥＡＥ臨床スコアは、ビヒクル群の１．１±０．３に対してＳＭ７及びＳＭ９処置群それぞれ０．６±０．１及び０．８±０．３）。明らかに、ＳＭ６は、この実験で有益な効果を何ら示さなかったが、何らかの比較上の結果を得るために、次の実験にも更なる分析のために選択された。
【０２８５】
４種の上記分子ＳＭ１、ＳＭ６、ＳＭ７＆ＳＭ９を用いて実験を繰り返した。２つの投与量、用量１０ｍｇ／ｋｇ及び用量２０ｍｇ／ｋｇ、すなわち２５０μｇ／マウス及び５００μｇ／マウスの分子を９〜３８日目に投与した以外は実験を上記と同様の条件で行った（図４参照）。
【０２８６】
低投与量１０ｍｇ／ｋｇのＳＭ１による処置で有意な有益効果が認められた（ｐ＝０．０００５対ビヒクル）。高用量のＳＭ１で回復傾向も認められたが、統計的に有意ではなかった（ｐ＝０．０９）。さらに、低投与量と高投与量の両方のＳＭ９による処置もＥＡＥを改善した。ここで、高投与量２０ｍｇ／ｋｇは低投与量よりも効力があった（１０ｍｇ／ｋｇｂｗの場合ｐ＝０．０４９、２０ｍｇ／ｋｇの場合ｐ＝０．０００１）。以前の実験と同様に、回復は、第２及び第３の再発（それぞれ２３〜３１日目及び３７〜４４日目）中に主に認められた。
【０２８７】
ＳＭ６による処置の効果はより軽度であり、有意でなかった。しかし、以前の実験と反対に、ＳＭ７は処置マウスの大部分の死を招く毒作用を有することが認められ、実験終了（４８日目）までに、８匹のマウスが１０ｍｇ／ｋｇの低用量群で死亡し、マウスのすべてが２０ｍｇ／ｋｇの高用量群で死亡した。
【０２８８】
少なくともスコア２（後肢不全麻痺）を示す動物の数も検査中いつでも分析した（図５参照）。示したように、平均臨床スコア分析と同様に、ＳＭ１（主に低投与量１０ｍｇ／ｋｇ）とＳＭ９（主に高投与量２０ｍｇ／ｋｇ）の両方が、中程度〜重度のＥＡＥスコアのマウス数の減少に関連して有益な効果を示した。
【０２８９】
興味深いことに、ＳＭ６で処置されたマウス群においては、より重度のＥＡＥのマウスの数が減少した（第２の再発中：ＳＭ６処置群の２〜３匹のマウス対ビヒクル群の５〜６匹のマウス、及び第３の再発中：ＳＭ６処置群の５〜７匹対ビヒクル群の８〜９匹のマウス）。明らかに、ＳＭ６は、重度ＥＡＥの回復に対して効果を有する。
【０２９０】
実施例３
ＥＡＥにおける脱髄に対するＳＭ１、ＳＭ６、ＳＭ７及びＳＭ９の効果
脱髄及び再ミエリン化プロセスに対するＳＭの直接効果を分析した。脊髄を各群の６匹のマウスから取り出し、脊髄の腰部を切断し（１０μｍ冠状パラフィン切片）、ミエリン及び浸潤部染色のためにＬＦＢ−Ｈ＆Ｅ（ルクソールファストブルーとＨ＆Ｅ）処理した。図６Ａに示すように、浸潤部及び脱髄の数の増加がビヒクル処置群において認められた。すべての検査したＳＭで有髄領域％のわずかな上昇傾向があったが（図６Ｂ）、有意な効果は、１０ｍｇ／ｋｇ  ＳＭ７（１０ｍｇ／ｋｇ  ＳＭ７処置群における３４．０±０．８％対ビヒクルにおける２８．３±１．８％  ｐ＝０．０４、高投与量は毒性のために検査されなかった）、２０ｍｇ／ｋｇ  ＳＭ９（３４．６±１．６％、ｐ＝０．０３）、及び１０ｍｇ／ｋｇ  ＳＭ６（３４．８±１．６％＝ｐ，０．０３）で認められた。これらの結果は、これらのＳＭ処置に応答した再ミエリン化プロセスの増加若しくは脱髄の減少又はその両方を示している可能性がある。
【０２９１】
実施例４
インビトロでの神経形成に対するＳＭ１、ＳＭ７及びＳＭ９の効果
次に、Ｐ１９分化モデルにおける神経形成に対する小分子の効果を測定した。マウス胚由来の奇形癌腫細胞であるＰ１９細胞は、レチノイン酸（ＲＡ）刺激に応答してニューロンに分化し、この分化は、ｒｈＢＭＰ−２（骨形成タンパク質−２）の添加によって阻止され得ることが実証された［８］。ニューロン分化はニューロンマーカーＭＡＰ−２の発現によって表され、ＢＭＰ−２の添加はこのマーカーのレベルを低下させる。マウス抗ＢＭＰ−２／４モノクローナル抗体の添加は、ＢＭＰ−２の効果を逆転させ、ニューロン表現型の獲得を誘導する。したがって、Ｐ１９細胞におけるニューロンマーカーＭＡＰ−２の発現に対するＳＭ１、ＳＭ７及びＳＭ９の効果をＲＡ及びＢＭＰ−２の存在下で調べた。３つの分子濃度を試験した：０．６２５μＭ、１．２５μＭ及び２．５μＭ。
【０２９２】
ＭＡＰ−２陽性細胞は、刺激の非存在下では観察されなかった。図７Ａ〜７Ｂに示すように、Ｐ１９細胞のＲＡ刺激は、ＭＡＰ−２＋細胞数を増加させた（７３．８±６．５％）。ｒｈＢＭＰ−２の添加は、ＭＡＰ−２＋細胞数を有意に減少させ（３１．４±４．３％）、すなわちニューロン表現型を阻止し、抗ＢＭＰ−２／４ｍＡｂの添加は、ＭＡＰ−２＋細胞数を増加させることによってＢＭＰ−２の効果を逆転させた（８３．６±３．５％、ｐ＜０．０１対ＲＡ＋ＢＭＰ−２）。抗ＢＭＰ−２／４中和ｍＡｂの効果と同様に、ＳＭ１、ＳＭ７及びＳＭ９は、ＢＭＰ−２の効果を逆転させ、単なるＲＡ＋ＢＭＰ−２刺激に比べて、ＭＡＰ−２＋細胞（ニューロン）数を増加させた。
【０２９３】
ＳＭ１は、ニューロン表現型をすべての検査濃度で誘導したが、より高濃度の２．５μＭにおいて最も著しかった（６２．２±３．９％、ｐ＜０．０１対ＲＡ＋ＢＭＰ−２）。
【０２９４】
用量依存的効果もＳＭ７では認められ、ニューロン表現型を低濃度と中濃度の両方、特に中濃度の１．２５μＭにおいて誘導した（７６．１±３．１％、ｐ＜０．０１対ＲＡ＋ＢＭＰ−２）。恐らくは毒作用のために、より高濃度では有意な効果が認められなかった。ＳＭ９は、低濃度では有効でなく、１．２５μＭ及び２．５μＭの中濃度と高濃度の両方で神経形成を誘導した（それぞれ７６．４±１２．６％及び８０．６±１０．０％、ｐ＜０．０５対ＲＡ＋ＢＭＰ−２）。
【０２９５】
実施例５
Ｐ１９細胞におけるＳＭＡＤシグナル伝達に対するＳＭ１、ＳＭ７及びＳＭ９の効果
標準的なＢＭＰシグナルは、ＳＭＡＤリン酸化を介して媒介されることが知られている。ＢＭＰは、Ｉ及びＩＩ型セリン／スレオニンキナーゼ受容体の複合体に結合することによってシグナルを伝達する。リガンド結合は、受容体のリン酸化を誘導し、次いで受容体Ｓｍａｄ（Ｒ−Ｓｍａｄ）１、５及び８を介して標準的なシグナル伝達を活性化する。Ｒ−Ｓｍａｄは、活性化Ｉ型受容体によってリン酸化される。次いで、それらはＳｍａｄ４と複合し、核移行を誘発する［１６］。Ｐ１９細胞においてＢＭＰ−２による刺激に応答して誘導される標準的なＳＭＡＤ１／５／８シグナル伝達のリン酸化に対するＳＭの効果を調べた。
【０２９６】
図８Ａ及び８Ｂに示すように、ｒｈＢＭＰ−２によるＰ１９細胞の４時間の刺激は、ｐ−ＳＭＡＤ発現（チューブリン発現に対して規準化）を４．９倍誘導した。抗ＢＭＰ−２／４ｍＡｂの添加は、ＢＭＰ−２単独による刺激に比べて、ｐ−ＳＭＡＤ発現を７６．２％阻害した。ＳＭ７及びＳＭ９は、特に低濃度２．５μＭにおいて、ＳＭＡＤリン酸化に対して最も明白な効果を示した（単なるＢＭＰ−２による刺激に比べて、ＳＭ７及びＳＭ９それぞれでｐ−ＳＭＡＤ／チューブリンの４０．０％及び４２．７％の減少）。ＳＭ１は、ＳＭＡＤリン酸化に対して軽度の効果しか示さなかった（２．５μＭ及び５μＭでそれぞれ２４．２％及び１９．９％の阻害）。
【０２９７】
実施例６
ＢＭＰ−４阻害に対するＳＭ１、ＳＭ７、ＳＭ９及びＳＭ６の効果
ＢＭＰ−２とＢＭＰ−４の高い相同性のために、ＢＭＰ−２及びＢＭＰ−４シグナル伝達を阻害するＳＭの能力も調べた（抗ＢＭＰ−２／４ｍＡｂの効果と同様）。ＡＴＤＣ５細胞の刺激のためにｒｈＢＭＰ−４をｒｈＢＭＰ−２の代わりに使用した以外は、スクリーニングに使用した同じバイオアッセイ（すなわち、ＡＬＰ及び生存率検出を伴うＡＴＤＣ５バイオアッセイ）によってＢＭＰ−４中和を分析した。
図９に示すように、ＳＭ１とＳＭ６は、ＢＭＰ−４及びＢＭＰ−２によって誘導されるＡＬＰ産生に対して同じ効果を有した。ＳＭ７とＳＭ９のどちらも、ＢＭＰ−４よりもわずかに大きくＢＭＰ−２を阻害すると思われた（２．５μＭ  ＳＭ７の場合、ＢＭＰ−４の２９．８％阻害に比べてＢＭＰ−２の４７．３％阻害、及び２．５μＭ  ＳＭ９の場合、ＢＭＰ−４の１８．９％阻害に比べてＢＭＰ−２の２９．１％阻害）。
【０２９８】
実施例７
脳室下帯（ＳＶＺ）及び顆粒細胞下層（ＳＧＺ）における神経芽細胞マーカーダブルコルチン（ＤＣＸ）の新規発現に対するＳＭ１、ＳＭ７、ＳＭ９及びＳＭ６の効果
ＲＲ−ＥＡＥを誘導したマウスに小分子ＳＭ１、ＳＭ７、ＳＭ９、ＳＭ６又は対応するビヒクル２５０μｇ／マウス（低−Ｌ）又は５００μｇ／マウス（高−Ｈ）を腹腔内注射した。ＳＭを免疫化後９日目から３０日間毎日注射した。免疫組織化学分析では、各群の３匹のマウスに免疫化後９日目から８日間ブロモ−２’−デオキシウリジン（ＢｒｄＵ）を毎日腹腔内注射した。図１０Ａ〜１０Ｂを見て分かるように、ＥＡＥマウスのＳＶＺにおけるＢｒｄＵ＋ＤＣＸ＋細胞の定量化によれば、ＳＭ９Ｌ（低用量のＳＭ９）はＢｒｄＵ＋ＤＣＸ＋細胞において有意な増加をもたらした。対照ビヒクルに比べてＳＭ９Ｈ、ＳＭ１Ｌ、ＳＭ１Ｈ及びＳＭ６ＨによるＢｒｄＵ＋ＤＣＸ＋細胞の誘導の増加傾向も結果から明らかである。
【０２９９】
次に、マウスのＳＧＺにおけるＢｒｄＵ＋ＤＣＸ＋細胞の量を評価した。
図１１Ａ〜１１Ｂは、ＳＭ又はビヒクル処置後のＥＡＥマウスにおけるＢｒｄＵ＋ＤＣＸ＋細胞の免疫組織化学的標識化を示す。ＢｒｄＵ＋ＤＣＸ＋細胞の定量化から、ビヒクル処置に比べてＳＭ９Ｌ、ＳＭ６Ｌ及びＳＭ７Ｌによって誘導されたＢｒｄＵ＋ＤＣＸ＋細胞の増加傾向と共に、ＳＭ９ＨによるＳＧＺにおけるＢｒｄＵ＋ＤＣＸ＋細胞の有意な誘導増加が明らかになった。
【０３００】
実施例８
ＳＧＺにおける成熟ニューロンマーカーＮｅｕＮの新規発現に対するＳＭ１、ＳＭ７、ＳＭ９及びＳＭ６の効果。
この実験では、マウスのＳＧＺにおけるＢｒｄＵ＋ＮｅｕＮ＋細胞の量を評価した。図１２Ａ〜１２Ｂは、Ｏｌｙｍｐｕｓ８．１顕微鏡（倍率１０倍）を用いた、ＳＭ又はビヒクルで処置されたＥＡＥマウスにおけるＢｒｄＵ＋ＮｅｕＮ＋細胞の免疫組織化学的標識化を示す。ＢｒｄＵ＋ＮｅｕＮ＋細胞の定量化から、ビヒクル処置に比べてＳＭ９Ｈによって誘導されたＢｒｄＵ＋ＮｅｕＮ＋細胞の増加傾向と共に、ＳＭ１Ｈ及びＳＭ９Ｌ処置マウスによるＳＧＺにおけるＢｒｄＵ＋ＮｅｕＮ＋細胞の有意な誘導増加が明らかになった。
【０３０１】
引用文献
背景として本開示の主題に関連すると考えられる参考文献を以下に示す。
［１］Ｔｒａｐｐ，Ｂ．Ｄ．ａｎｄ  Ｎａｖｅ，Ｋ．Ａ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２００８；３１：２４７−２６９．
［２］Ｇｒｉｎｓｐａｎ  Ｊ．Ｂ．（２０１５）Ｖｉｔａｍｉｎｓ  ａｎｄ  Ｈｏｒｍｏｎｅｓ，Ｃｈａｐｔｅｒ  ６，ｖｏｌｕｍｅ  ９９，ｐａｇｅｓ  １９５−２２２．
［３］ＵＳ  ２０１５／１３９９８３
［４］ＵＳ  ２００８／０２４９０３８  
［５］Ｓｉｍｏｎｉｎｉ  Ｍ．Ｖ．ｅｔ  ａｌ．ＡＳＮ  Ｎｅｕｒｏ．２０１０  Ｊａｎ  １５；２（１）；ｅ０００２５
［６］Ｌｉ  Ｄ．ｅｔ  ａｌ．Ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ  ２００８；１８：６９２−８
［７］Ｍａｂｉｅ  Ｐ．Ｃ．ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１９９７，１７：４１１２−４１２０
［８］Ｇｒｏｓｓ  Ｒ．Ｅ．ｅｔ  ａｌ．Ｎｅｕｒｏｎ  １９９６，１７：５９５−６０６
［９］Ｇｏｍｅｓ  Ｗ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．２００３，２５５：１６４−１７７
［１０］Ｌｉｍ  Ｄ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．Ｎｅｕｒｏｎ  ２０００，２８：７１３−７２６
［１１］ＷＯ  １１／０１９６７８
［１２］ＵＳ  ２００６２１７３９０
［１３］ＷＯ  ０３／１０５８５７
［１４］ＵＳ  ２００４０３９０３７
［１５］Ｋｕｒｔｚｋｅ，Ｊ．Ｆ．ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  １９８３：３３（１１）：１４４４−１４５２
［１６］Ｂａｎｉ−Ｙａｇｈｏｕｂ  Ｍ，Ｆｅｌｋｅｒ  ＪＭ，Ｓａｎｓ  Ｃ，Ｎａｕｓ  ＣＣ．Ｅｘｐ  Ｎｅｕｒｏｌ．２０００；１６２：１３−２６．
［１７］ＷＯ  ２０１３／１８６７７７
【０３０２】
本明細書における上記参考文献の確認が、これらが本開示の主題の特許性に何らかの点で関連することを意味するものと考えるべきではない。
【図１】
2020517678.tif 000061
【図２】
2020517678.tif 000062
【図３】
2020517678.tif 000063
【図４】
2020517678.tif 000064
【図５】
2020517678.tif 000065
【図６】
2020517678.tif 000066
【図７Ａ】
2020517678.tif 000067
【図７Ｂ】
2020517678.tif 000068
【図８】
2020517678.tif 000069
【図９】
2020517678.tif 000070
【図１０Ａ】
2020517678.tif 000071
【図１０Ｂ】
2020517678.tif 000072
【図１１Ａ】
2020517678.tif 000073
【図１１Ｂ】
2020517678.tif 000074
【図１２Ａ】
2020517678.tif 000075
【図１２Ｂ】
2020517678.tif 000076
【国際調査報告】
2020517678.tif 000077
2020517678.tif 000078
2020517678.tif 000079
2020517678.tif 000080
2020517678.tif 000081
2020517678.tif 000082
2020517678.tif 000083
2020517678.tif 000084