(57)【要約】  微生物の存在の影響を受けやすい製品、特に食品上で、細菌を不活性化するおよび／または微生物数を減少させるためのシステムが開示され、前記システムは、ｉ）ＵＶ−Ｃ光を発生させるための手段とｉｉ）過酸化水素蒸気を発生させるための手段および／またはオゾンを発生させるための手段とｉｉｉ）熱源とに動作可能に接続された処理チャンバを備える。微生物の存在の影響を受けやすい製品、特に食品上で、細菌を不活性化するおよび／または微生物数を減少させるための方法も開示され、前記方法は、処理チャンバ内の前記製品を、５〜１２０秒の処理時間にわたって、紫外線Ｃ（ＵＶ−Ｃ）光および過酸化水素蒸気および／またはオゾン、ならびに熱との曝露に供することを含み、過酸化水素蒸気は最大１２％ｖ／ｖ溶液で存在し、処理チャンバ内部の温度は約２２℃から６０℃の間で維持される。
2020517231.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
微生物の存在の影響を受けやすい食品上で細菌を不活性化するおよび／または微生物数を減少させるための方法であって、
前記食品を処理チャンバに連続的に通過させ、前記食品を、５〜１２０秒の前記処理チャンバ内処理時間にわたって、紫外線Ｃ（ＵＶ−Ｃ）光、過酸化水素蒸気、オゾン、および熱との曝露に供するステップ
を含み、
前記過酸化水素蒸気が最大１２％ｖ／ｖ溶液で存在し、
前記処理チャンバ内部の温度が約２２℃から６０℃の間に維持される、方法。
【請求項２】
前記細菌がリステリア属である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記食品が果実、好ましくはリンゴである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記オゾンおよび前記過酸化水素蒸気が２つの別個の供給源によって提供される、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記ＵＶ−Ｃ光の波長範囲が２９０ｎｍから１００ｎｍの間である、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記過酸化水素蒸気の濃度が２〜６％ｖ／ｖである、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記過酸化水素蒸気の流量が毎分０から１０リットルの間である、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
オゾンが、１２５〜２２５ｎｍの範囲の波長で発するオゾン電球によって提供される、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
過酸化水素蒸気が過酸化水素の噴霧器または気化器によって提供される、請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記処理チャンバ内部の湿度が、６０％から１００％の相対湿度で維持される、請求項１から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記方法が、オゾン含有液を前記食品と接触させるステップを除外する、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
微生物の存在の影響を受けやすい食品上で細菌を不活性化するおよび／または微生物数を減少させるためのシステムであって、
処理チャンバと、前記処理チャンバを通して前記食品を連続的に搬送するための手段と、
ｉ）ＵＶ−Ｃ光を生成するための手段と、ｉｉ）過酸化水素蒸気を生成するための手段と、ｉｉｉ）オゾンを生成するための手段と、ｉｖ）熱源と
を備え、
ｉ）〜ｉｖ）の各々が、前記処理チャンバに動作可能に接続される、システム。
【請求項１３】
前記過酸化水素蒸気を生成するための手段と前記オゾンを生成するための手段が別個である、請求項１２に記載のシステム。
【請求項１４】
前記チャンバ内の湿度を維持するための手段をさらに備える、請求項１２から１３のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項１５】
前記処理チャンバが約１’×６”×６”〜６０’×３０’×２０’のサイズを有する、請求項１２から１４のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項１６】
前記処理チャンバ内のＵＶ−Ｃ光を発生させるための前記手段に対する前記食品の距離が１ｃｍから２００ｃｍの間であるように構成された、請求項１２から１５のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項１７】
ＵＶを発生させるために２９０ｎｍから１００ｎｍの間の波長範囲を発するランプと、オゾンを発生させるために２０ｎｍ未満、好ましくは約１８５ｎｍの波長を発するランプとを備える、請求項１２から１６のいずれか一項に記載のシステム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般に、食物内の微生物数を減少させるための方法およびシステムに関する。本発明の方法およびシステムは、本明細書において、本発明の理解を容易にするために、リンゴに関して説明される。しかしながら、前記方法および前記システムの適用可能性がリンゴに限定されないことは、当業者には明らかであるはずである。むしろ、前記方法および前記システムは、他の果実および野菜などの、望ましくない微生物の存在の影響を受けやすい他の製品において微生物数を減少させるように適合可能である。
【背景技術】
【０００２】
関連する従来技術との議論および比較
２０１４年１２月、米国での多州にわたるリステリア症大流行が、カラメルでコーティングされたリンゴの消費に結び付けられた。次の数ヶ月にわたって、調査から、リステリア属は、被害を受けたリンゴの表面上で発生し、その後、持ち手として使用される棒が生産中にリンゴに刺されたときにリンゴの内部へと導入されたことが明らかにされた。キャンディーアップルからのリステリア症のリスクは、依然として低いとみなすことができるが、カラメルリンゴ生産中に予防措置を適用することが必要とされている。
【０００３】
水溶性消毒剤中でリンゴを洗うことは、そのような予防措置の一例である。しかしながら、水洗システムは、コストおよび空間上の制約ならびに水を製造施設に持ち込むことについての懸念ゆえに、常に実際的であるとは限らない。さらに、この消毒オプションは、限られた汚染除去能力を有すること（＜１ｌｏｇ  ｃｆｕの減少）がわかっており、潜在的に交差汚染を招き得る（Ｐｅｒｅｚ−Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚら、２０１４年、「Ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｒｏｓｓ−ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｏｆ  Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｉｎ  ｆｒｅｓｈ  ａｐｐｌｅｓ」、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｆｏｏｄ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、１８４、９２〜９７。その開示全体は、参照により本明細書に組み込まれる）。さらに、リンゴ上に残留する水分は、リンゴ上でのカラメルのコーティングを妨げ、それによって、生産中に困難が生じる。したがって、水を含まない手法（たとえば、過酸化水素蒸気）は、キャンディーアップル生産により適合し、さらに、従来の収穫後洗浄と比較したとき、農産物を除染するうえで効果的であることが判明している（Ｂａｃｋら、２０１４年、「Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｈｙｄｒｏｇｅｎ  ｐｅｒｏｘｉｄｅ  ｖａｐｏｒ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ，  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ０１５７：Ｈ７  ａｎｄ  Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ  ｏｎ  ｏｒｇａｎｉｃ  ｆｒｅｓｈ  ｌｅｔｔｕｃｅ」、Ｆｏｏｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌ、４４、７８〜８５。その開示全体は、参照により本明細書に組み込まれる）。
【０００４】
オゾンは、抗菌作用と関連づけられ、米国食品医薬品局によって、一般に安全と認められる（ＧＲＡＳ）に指定されている（たとえば、ＳｈａｒｍａおよびＨｕｄｓｏｎ、「Ｏｚｏｎｅ  ｇａｓ  ｉｓ  ａｎ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ａｎｄ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ  ａｇｅｎｔ」、Ａｍ  Ｊ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｃｏｎｔｒｏｌ．、２００８年１０月、３６（８）：５５９〜６３を参照されたい。その開示全体は、参照により本明細書に組み込まれる）。食物を除染するためにオゾンを含む溶液を使用するプロセスは、たとえば、米国特許第６，４８５，７６９号および第６，１６２，４７７号に記載されている。しかしながら水は、食物製造施設内で汚染源であることが多い。さらに、上記で述べられたように、水を含まない手法は、キャンディーアップルを含むある特定のタイプの食品により適合する。
【０００５】
さらに最近、オゾンガスの使用が提案された（たとえば、Ｋｈａｄｒｅら、２００１年、「Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｓｐｅｃｔｓ  ｏｆ  ｏｚｏｎｅ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｆｏｏｄ：  Ａ  ｒｅｖｉｅｗ」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｆｏｏｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、６６、１２６２〜１２５２を参照されたい。その開示全体は、参照により本明細書に組み込まれる）。以前の研究は、貯蔵室の空気へと導入されたオゾンが、果実上の微生物負荷を減少させることができることを示した（Ｙａｓｅｅｎら、２０１５年、「Ｏｚｏｎｅ  ｆｏｒ  ｐｏｓｔ−ｈａｒｖｅｓｔ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｐｐｌｅ  ｆｒｕｉｔｓ」、Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉａ  Ｍｅｄｉｔｅｒｒａｎｅａ、５４、９４〜１０３。その開示全体は参照により本明細書に組み込まれる）。しかしながら、貯蔵室内のオゾンは、備品の過度の腐食を防止し、労働者に対する危険を減少させるために、低レベル（０．５〜２ｐｐｍ）で適用される。したがって、曝露時間の延長が微生物減少を達成するために必要とされるが、各個々のリンゴを接触させることは難題である。
【０００６】
オゾンの代替として、ＵＶが、標的微生物のＤＮＡを直接的に損傷する光子によって抗菌作用を引き起こすことが知られている。ＵＶは、水および他の透明な液体の消毒に広く使用されているが、これまでのところ、食料品表面のＵＶ処理は、バイオフィルムまたは細胞集塊内の不規則な輪郭および／または存在によって引き起こされる遮光効果（Ｓｈａｄｉｎｇ  ｅｆｆｅｃｔｓ）ゆえに、問題があるままである。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、ＵＶ処理をオゾンまたは過酸化水素またはそれらの組み合わせなどの酸化剤と組み合わせることによって、従来技術の方法およびシステムの上述した欠点に対処する。たとえば、発明者らは、オゾン処理を、促進酸化処理（ＡＯＰ）と呼ばれるプロセス（過酸化水素とＵＶの組み合わせ）と組み合わせることを提案する。このプロセスは、濁り水およびカートン包装を処理するのに有用である。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、処理される食品を紫外線Ｃ（ＵＶ−Ｃ）光、過酸化水素、および／またはオゾン、ならびに熱と接触させることを含む、（表面、表面下、および内部の）微生物の存在の影響を受けやすい食品上の細菌を不活性化するための方法を提供し、この方法は、前記ＵＶ−Ｃ光、過酸化水素、および／またはオゾン、ならびに熱の各々を提供する手段を備えるシステムの使用を含むことができる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】実験１および実験２のための、ＵＶ：過酸化水素の反応器装置の概略図。
【図２】ＵＶ：１〜６％の過酸化水素によるリンゴ上およびその内部でのリステリアモノサイトゲネスの不活性化を示すグラフである。接種されたリンゴは、チャンバ内に置かれ、異なる濃度の過酸化水素が送出された。すべての処理は、４８℃で６０秒間実行された。
【図３】４８℃で３０〜１２０秒間、６％の過酸化水素とともに、または過酸化水素なしで、ＵＶ：オゾンを使用した、リンゴの表面および芯上のリステリアモノサイトゲネスの不活性化を示すグラフである。
【図４Ａ】２２℃で貯蔵されたキャンディーアップルの表面および芯上のリステリアモノサイトゲネスの数を示すグラフである。リンゴは、リステリア属を接種され、オゾン（最大５０ｐｐｍ）に続くＡＯＰという組み合わせを使用して処理された。次いで、リンゴは、カラメルおよびチョコレートでコーティングされた。図４Ａは赤リンゴであり、各色３個が異なる試料採取ポイントで除去された。
【図４Ｂ】２２℃で貯蔵されたキャンディーアップルの表面および芯上のリステリアモノサイトゲネスの数を示すグラフである。リンゴは、リステリア属を接種され、オゾン（最大５０ｐｐｍ）に続くＡＯＰという組み合わせを使用して処理された。次いで、リンゴは、カラメルでコーティングされた。図４Ｂは青リンゴであり、各色３個が異なる試料採取ポイントで除去された。
【図５】過酸化水素蒸気（２および４％）で３０秒間、６０秒間、および１２０秒間処理されたレタスの玉全体の上での糞便系大腸菌群のｌｏｇ数減少を示すグラフである。ｌｏｇ数減少（ＬＣＲ）は、処理されていない果実上で回収された平均ｌｏｇ残存物から、平均ｌｏｇ残存物（各々３個が異なる試料採取ポイントで除去された）を減算することによって計算された。
【図６】高い湿度および低い湿度でオゾンおよびＡＯＰを用いて処理されたレタスの玉全体の上での糞便系大腸菌群のｌｏｇ数減少を示すグラフである。ｌｏｇ数減少（ＬＣＲ）は、処理されていない果実から回収された平均ｌｏｇ残存物から、平均ｌｏｇ残存物（各々３個が異なる試料採取ポイントで除去された）を減算することによって計算された。
【図７】５分間オゾンガス単独で、ならびにＨ２Ｏ２、ＵＶ、および二酸化塩素と組み合わせて、処理されたレタスの玉の全体の上での糞便系大腸菌群の平均ｌｏｇ数減少を示すグラフである。ｌｏｇ数減少（ＬＣＲ）は、処理されていない果実上で回収された平均ｌｏｇ残存物から、平均ｌｏｇ残存物（各々３個が異なる試料採取ポイントで除去された）を減算することによって計算された。
【図８】貯蔵０日目、２日目、５日目、８日目、および１０日目における、糞便系大腸菌群を接種され、５分間オゾンガス単独で、ならびにＨ２Ｏ２、ＵＶ、および二酸化塩素と組み合わせて、処理されたレタス（図７）、ならびに処理されていない対照群の、レタスの玉全体の貯蔵寿命を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本明細書において説明される本発明の態様は、果実、特にリンゴにおいて、微生物数を減少させることに関して説明されているが、説明される方法、システム、および関連アセンブリは、他のタイプの食物または製品において微生物数を減少させるために使用可能であることが認識されるべきである。
【００１１】
さらに、本明細書において説明される方法およびシステムの特定の実施形態および例は例示であり、本開示の趣旨または添付の特許請求の範囲から逸脱することなく、多くの変形が、これらの実施形態および例に導入可能である。異なる例示的な実施形態および／または例の要素および／または特徴は、本開示および添付の特許請求の範囲内で、互いと組み合わされてもよいし、および／または、互いの代わりに用いられてもよい。
【００１２】
定義
本明細書で使用されるとき、および別段に記載されていない限り、以下の用語の各々は、以下に記載される定義を有するものとする。
【００１３】
本明細書で使用されるとき、数値または範囲の文脈における「約」は、列挙または特許請求される数値または範囲の±１０％を意味する。本明細書で開示される任意の範囲によって、範囲内の１００分の１、１０分の１、および整数の一の位の量がすべて本発明の一部として具体的に開示されることが意味される。したがって、「約」記載された値は、具体的には、その記載された値を含む。たとえば、約２０分の範囲は、２０分を含む、２０分の±１０％の範囲内のすべての測定値を指す。
【００１４】
食料品の中の微生物数を減少させるための、従来技術による食料品の処理に関連づけられた欠点を克服するために、本発明は、ＵＶ処理をオゾンまたは過酸化水素またはそれらの組み合わせなどの酸化剤と組み合わせることを提案する。提案されるＡＯＰプロセスでは、過酸化水素はＵＶ光子によって分解され、処理される食料品の表面上の遮光されたエリアへと浸透することができる短寿命で抗菌性のフリーラジカルを形成する。
【００１５】
ＡＯＰは、新鮮な農産物を除染することが実証された。ＡＯＰプロセスをサポートするための重要なパラメータは、温度と、過酸化水素の濃度である。具体的には、ラジカルを発生させる反応は、４８℃では有利だが、典型的な室温（約２２℃）ではそれほど有利ではない。さらに、低すぎるレベルの過酸化水素は不十分なラジカル発生という結果を生じるであろうが、過剰な過酸化水素はラジカルの密度をあまりにも高めるので、ラジカルが最終的に結合し、それにより中和されるがゆえに、ＡＯＰプロセスは、最適な過酸化水素濃度を有する。
【００１６】
さらなる利点は、オゾンと過酸化水素蒸気の組み合わせが使用されるとき、得られる。チャンバ内の過酸化水素蒸気の存在ゆえに、処理される果実の周囲の相対湿度が増加するので、オゾンの致死効果に対する微生物細胞の感受性も増加すると予想される（Ｍｉｌｌｅｒら、２０１３年、「Ａ  ｒｅｖｉｅｗ  ｏｎ  ｏｚｏｎｅ−ｂａｓｅｄ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ  ｆｏｒ  ｆｒｕｉｔ  ａｎｄ  ｖｅｇｅｔａｂｌｅｓ  ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ」、Ｆｏｏｄ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｒｅｖｉｅｗｓ、５、７７〜１０６、およびｄｅ  Ｃａｎｄｉａら、２０１５年、「Ｅｒａｄｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｉｇｈ  ｖｉａｂｌｅ  ｌｏａｄｓ  ｏｆ  Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ  ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｎｇ  ｆｏｏｄ−ｃｏｎｔａｃｔ  ｓｕｒｆａｃｅｓ、Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、６、１２。開示全体が各々、参照により本明細書に組み込まれる）。
【００１７】
一連の実験を通して、本明細書において説明される方法およびシステムの本発明者らは、ＵＶ−Ｃ光、過酸化水素、熱、およびオゾンのさまざまな組み合わせで農産物、特にリンゴを処理することによって、それらの上のリステリア属を殺すことが可能であることを示した。この一連の実験では、結果は、０−ｌｏｇから６−ｌｏｇの範囲にわたる殺菌であった。各「対数」減少は、１０倍の殺菌の程度を示す。すなわち、９９％（２−ｌｏｇ）から９９．９９９％（５−ｌｏｇ）のリステリア属の殺菌があった。これらの実験において使用されるシステムは反応器を備え、この反応器は、処理チャンバの中に配置されたＵＶ−Ｃランプおよび／またはオゾンランプを有する処理チャンバ、ならびに過酸化水素蒸気および熱を処理チャンバに提供するための手段を有する。ランプからの距離、酸の濃度、酸の流量、温度、および滞留時間はすべて制御される。最初の肯定的な実験室の結果は、商業的規模の適用試験が正当化されることを示唆した。したがって、処理チャンバを通してリンゴを搬送するための連続コンベアユニットが構築され、密封チャンバ設計と置き換えられた。
【００１８】
したがって、本発明の一実施形態では、表面および内部の微生物の存在の影響を受けやすい食品上で細菌を不活性化するおよび／または微生物数を減少させるためのシステムが提供され、前記システムは、ＵＶ−Ｃ光、過酸化水素、および／またはオゾン、ならびに熱の各々を生成するおよび／または食料品に供給するための手段に動作可能に接続されたチャンバを備える。好ましい一実施形態では、システムは、ＵＶ−Ｃ光、過酸化水素、およびオゾンの各々を生成するおよび／または食料品に供給するための手段を備える。オゾンガスを使用すること、または過酸化物を含むオゾン処理された水を導入することすら、可能である。本明細書において説明されるシステムの一実施形態では、システムは、処理される製品を搬送するための手段、たとえばコンベア、および／または温度センサをさらに備える。連続コンベアは、処理される食品が処理チャンバを通って連続的に流れることを可能にすることができるので、処理は、小規模（１〜５ｌｂ／時間）でも中規模（５〜５００ｌｂ／時間）でも大規模（＞５００ｌｂ／時間）でもできる。さらなる実施形態では、本明細書において説明される方法およびシステムは、食品からの殺虫剤の除去に適合可能である。
【００１９】
一実施形態では、チャンバは、少なくとも１ｌｂｓ、少なくとも１０ｌｂｓ、少なくとも１００ｌｂｓ、または少なくとも２００ｌｂｓの食品を保持する容積を有する。
【００２０】
本明細書において説明される方法の一実施形態では、細菌はリステリア属である。別の実施形態では、細菌はサルモネラ属または糞便系大腸菌群である。
【００２１】
一実施形態では、食品は果実または野菜である。別の実施形態では、食品は、リンゴ、メロン、レタス、キノコ、ズッキーニ、またはキュウリ（全体または芯）である。別の実施形態では、食品は、アボカド、モモ、レモン、カンタループ、胡椒、トマト、またはマンゴーである。さらに別の実施形態では、食品は、種子、香辛料、紅茶、または穀物である。
【００２２】
一実施形態では、処理チャンバは、食品の処理中、所定の湿度に保たれ、その湿度は約６０〜１００％である。別の実施形態では、システムは、製品が５秒から２分、またはそれ以上の処理チャンバ内滞留時間を有するように構成される。
【００２３】
一実施形態では、微生物の存在の影響を受けやすい食品上の細菌を不活性化するための特許請求される方法のプロセスパラメータは、以下のとおりである。
【００２４】
ＵＶ光：合計ワット数は、最大１０，０００Ｗであることができる。たとえば、ＵＶ光は、以下のように構成可能である。２５４ｎｍ（２９０ｎｍから１００ｎｍの間の波長範囲）で発する最大４００個×２３ＷのＵＶ−Ｃランプ、または３つ×１７Ｗ＝合計５１Ｗ、または４つの電球×４６Ｗ＋両側の２つの電球×電球１つあたり３４Ｗ＝合計２５２Ｗ。
【００２５】
オゾン：（存在する場合）最大４００個の１７４ｎｍ（波長範囲±５０％）で発するオゾン電球。本発明者らによって使用された殺菌ランプから発せられる紫外線エネルギーの約９５％は、２５４ナノメートルの水銀共振波長である。この波長は、最大殺菌効果の領域にあり、ウイルス、細菌、原生動物、およびカビにとって極めて致命的である。２００ナノメートルよりも短い紫外線波長は、空気中の酸素（Ｏ２）からオゾンを生成することが可能である。本発明者らによって使用されたオゾンランプは、２５４ナノメートル波長の殺菌紫外線出力を発したのに加えて、１８５ナノメートル波長のオゾン発生線も発する。
【００２６】
ランプの全エネルギー出力の７％のみであるが、１８５ナノメートルの波長のエネルギーは、有機物の酸化によって有機物を二酸化炭素ガスへと破壊する独自の能力を有する。微生物減少の程度は、両方の紫外線清浄器サイズ（１平方センチメートルあたりマイクロワット秒の線量レベル単位として表現される）に依存する。
【００２７】
電球からの食品の距離：１ｃｍから２００ｃｍの間。
【００２８】
過酸化水素の濃度：（存在する場合）１％から１２％体積／体積溶液、好ましくは１〜６％、より好ましくは２〜４％。
【００２９】
過酸化水素の流量：（存在する場合）毎分０から１０リットルの間。
【００３０】
処理チャンバ内の温度：２２℃から６０℃の間、好ましくは４０〜５５℃、最も好ましくは約４８℃。
【００３１】
処理チャンバの滞留時間：５秒から２分の間。
【００３２】
処理チャンバ内部の湿度：６０％から１００％の間。
【００３３】
処理チャンバのサイズ：１’×６”×６”〜６０’×３０’×２０’。
【００３４】
オゾンモニタが任意選択で室内に設置可能であり、それは、０．１ｐｐｍのオゾンが検出された場合、チャンバを自動的に遮断し、排気ファンを起動するようにプログラムされる。
【００３５】
本発明のシステムおよび方法は、環境に配慮しているという点で、以前から知られている消毒方法よりも有利である。具体的には、本発明の方法は、水を使用せず、それによって、新鮮な水を節約し、塩素またはアンモニアのような刺激の強い（ｈａｒｓｈ）消毒用化学物質を有する化学廃液の作成を回避する。さらに、オゾンガスは酸素に分解され、危険なまたは有害な副産物を残さない。
【００３６】
最後に、本明細書において言及される任意の実施形態または特徴と別個に言及される他の実施形態または特徴のいずれかのうちの１つまたは複数との組み合わせは、本発明の範囲内であると企図される。
【００３７】
実験
材料および方法
リステリアモノサイトゲネスの代用物としてのラクトバチルスフルクチボランスの適性
リステリアモノサイトゲネスと比較した、オゾンに対するラクトバチルス属の相対的抵抗が、抗菌ガスが導入されたバイオバブルの内部に置かれた接種されたリンゴを使用して評価された。オゾン処理によるラクトバチルス属およびリステリアモノサイトゲネスの不活性化の程度は、適用時間（オゾン濃度）に依存することがわかった。相対的に見れば、同じオゾン曝露を受けたラクトバチルス属と比較して、リステリアモノサイトゲネスの対数減少に有意差はなかった（Ｐ＞０．０５）。したがって、ラクトバチルス属の菌株は、オゾン処理の能力を評価するための商業的試験において適用可能なリステリアモノサイトゲネスの適切な代用物である。
【００３８】
使用された細菌およびリンゴの接種
リステリアモノサイトゲネスの接種用懸濁液は、以下のように調製された。リステリアモノサイトゲネス血清型４ｂ（新鮮な農産物から分離された）およびラクトバチルスフルクチボランス（ワインから分離された）が、試験全体を通じて使用された。リステリアモノサイトゲネスは、５０ｍｌのトリプチックソイブロス（ＴＳＢ）中で２４時間３０℃にて培養され、ラクトバチルス属は、ＭＲＳブロス中で３０℃にて４８時間培養された。細胞は遠心分離（５０００ｇで１０分間）によって採取され、ペレットは、８ｌｏｇ  ｃｆｕ／ｍｌの最終的な細胞密度まで生理食塩水中で再懸濁させられた。
【００３９】
１セットの実験のために、リンゴスライス（３０ｇ）が果実全体から切除され、皮の表面は、７  ｌｏｇ  ｃｆｕの最終的な細胞密度を与えるように０．１ｍｌのリステリア属培養物を接種された。リンゴスライスは、４℃で１６時間インキュベートされてから、ＵＶまたはＵＶおよび過酸化水素で処理された。処理後、リステリア属は、１：１０の最終的な比を与えるように生理食塩水に浸漬することによってリンゴスライスから回収され、次いで、ストマッキング処理（ｓｔｏｍａｃｈｉｎｇ）によってホモジナイズされた。希釈系列が、生理食塩水中で調製され、次いで、３０℃で４８時間インキュベートされた改良型オックスフォード（ＭＯＸ）処方寒天培地上に塗抹された。
【００４０】
リンゴ全体の場合、果実は、７ｌｏｇ  ｃｆｕ／ｍｌを含む懸濁液中に２０分間浸漬され接種された。次いで、リンゴは除去され、真空チャンバ内に置かれ、次いで、リステリア属を芯表面下に浸入させるために３×３０秒サイクルに供された。リンゴは除去され、４℃で一晩貯蔵され、次いで、翌日に使用された。処理されたリンゴから細胞を回収するために、芯は最初に、滅菌した芯抜き器を使用して除去され、１：１０の希釈物を得るために生理食塩水とともに滅菌バッグ内に置かれた。芯は、３０秒間ストマッキング処理によってホモジナイズされ、次いで段階希釈が生理食塩水中で調製された。リンゴの残りの部分は、１００ｍｌの生理食塩水を含む別の滅菌パウチへと置かれ、リステリア属は、揉むことによって剥離された。再び、希釈系列が生理食塩水中で調製され、ＭＯｘ寒天培地上に塗抹され、次いで３０℃で４８時間インキュベートされた。
【００４１】
ＵＶ反応器
ＵＶ反応器は、２４”の長さであり、直径が１５ｍｍであり、８．５のＵＶ出力をもち、２５４ｎｍで発し、コンベア表面から１６ｍｌの距離のところに保持された４×２３Ｗランプ（１００時間および８０℃で２５４ｎｍにて測定される）を備える、紫外線器具（Ｓａｎｉ−Ｒａｙ（登録商標）−ステンレス鋼、２４”×９”×５”、１２０ｖ、５０／６０Ｈｚ）を含む。標準的なＵＶランプ（製造番号０５−１３４８）およびオゾンランプ（番号０５−１３４９，２．３のオゾン出力）が両方とも使用された（各々２つ）。ＵＶＸラジオメータ（製造業者の指示により±５％に較正されたＵＶＰ（登録商標））が、一貫性を保証するためにランプ強度をモニタするために使用された。
【００４２】
過酸化水素（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（登録商標）から入手された、３０％溶液）が、さまざまな濃度（２〜４％ｖ／ｖ）で調製され、湯浴器中で２２℃または４８℃に予熱され、次いで、噴霧器／気化器のリザーバ内に置かれた。処理チャンバは、接種されたリンゴをユニットの中へと置く直前にスイッチが切られたファンヒータを用いて予熱された。リンゴは、割り当てられた時間期間にわたってユニットの中心に保持され、反対側の端で除去された。装置は、図１の概略図からわかる。
【００４３】
図１を参照すると、図中のラベルは、以下の要素を指定する。
１：過酸化水素気化器。
２：ＵＶ光。
３：リンゴのトレイ。
４：加熱されたトンネル。
５：コンベア。
過酢酸
過酢酸（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（登録商標）から入手された、酢酸：水において４０％）が、２０〜７０ｐｐｍのさまざまな濃度に希釈され、洗浄液または噴霧液のどちらかとして使用された。
【００４４】
リステリアモノサイトゲネスを制御するための組み合わせられたオゾンおよびＡＯＰプロセスの検証
リンゴは、上記で説明されたように、リステリアモノサイトゲネスの５菌株カクテルをリンゴの萼にスポット接種された（５  ｌｏｇ１０  ＣＦＵ／リンゴ）。リンゴは、低温の部屋に移され、処理の前に一晩保持された。１３個のリンゴのバッチがオゾン反応器内に置かれ、４０分間処理された。次いで、リンゴは、オゾンなしでさらに５０分間乾燥され、次いで、ＡＯＰユニットに直接的に移された。萼がＵＶ−Ｃ：オゾンランプに面した状態でチャンバ内にリンゴを置いて、ＡＯＰ処理が実行された。過酸化水素蒸気が、４８℃に予熱された６％ｖ／ｖ溶液から発生させられた。処理は３０秒間実行され、その後、木製の棒が萼に挿入されてから、８０℃に維持されたカラメルでコーティングされた。赤リンゴの場合、さらなるチョコレート層が追加された。次いで、リンゴは、２２℃に維持された部屋の中のトレイ上で貯蔵された。リンゴの対照群は、処理されるリンゴと同時に準備され、同じ様式で貯蔵された。しかしながら、対照群は、オゾンおよび過酸化水素で処理される代わりに空気および水のみに曝露された（プロセスを模倣するために、他の点、流量および温度は同一）。
【００４５】
定期的に、キャンディーアップル（ｎ＝３）が、微生物分析のために移された。ここで、芯は、滅菌した芯抜き器を使用して除去され、滅菌バッグ内に置かれ、次いで、ワンステップ増菌ブロス中で１：１０の希釈物へと再懸濁させられた。芯は、ストマッカー内で６０秒間ホモジネートされた。棒の、リンゴに埋め込まれた部分は、任意の付着したリステリア属を剥離するために、ホモジェネート内で手で揉まれた。リンゴの残りの部分は、１００ｍｌのワンステップ増菌ブロス中に浸漬され、キャンディー：カラメル層を剥離するために手で揉まれた。
【００４６】
試料は、３０℃で４８時間インキュベートされたＭＯＸ処方培地上に塗抹された。並行して、ホモジェネートは、３７℃で２４時間増菌され、次いで、３０℃で４８時間インキュベートされたＭＯｘ寒天培地上に画線された。各プレートからの推定陽性コロニーは、ＡＰＩ試験片を使用する確認に供された。
【００４７】
細菌の回収および計数
レタス
処理後、レタスの玉は刻まれ、５００ｍｌの生理食塩水中に懸濁させられ、１分間ストマッキング処理され（ｓｔｏｍａｃｈｅｄ）、希釈系列が生理食塩水中で調製された。ＳＴＥＣを計数するために、次いで、試料が、２４時間３７℃でインキュベートされたソルビトールマッコンキー寒天培地（ＣＴ−ＳＭＡＣ）および発色培地（ＣＨＲＯＭａｇａｒ）上に塗抹平板法で塗抹（ｓｐｒｅａｄ  ｐｌａｔｅ）された。リステリアモノサイトゲネスは、３５℃で２４〜４８時間インキュベートされたＭＯＸ寒天培地上に塗抹された。
【００４８】
リンゴ
レタスと同じ様式でリンゴから病原体を回収する難題を抱えた後、リンゴの表面からリステリア属を回収するのに最適な方法を決定するために、ベースライン試験が実行された。リンゴは、１００μｌのリステリア属［８−ｌｏｇ  ＣＦＵ］をスポット接種され、次いで、４時間にわたって付着させられた。次いで、リステリア属が、各方法の能力を評価するために、３つの方法のうちの１つによって回収された。方法は、以下のとおりであった。方法（１）リンゴ全体が、滅菌プラスチックパウチ内に置かれ、１００ｍｌの生理食塩水中に懸濁させられ、手で１分間こすられた。方法（２）の場合、皮むき器が、リンゴの果皮を除去するために使用され、次いで、リンゴの果皮が、５０ｍｌの生理食塩水中に置かれ、１分間激しく振り混ぜられた。最後に、方法（３）は、ラボトップブレンダ（ｌａｂ  ｔｏｐ  ｂｌｅｎｄｅｒ）を使用して果皮がホモジナイズされたことを除いて、（２）に関して説明されたのと同じであった。回収の方法に関係なく、希釈系列は、生理食塩水中で調製され、次いで、３５℃で２４〜４８時間インキュベートされたＭＯＸ寒天培地上に塗抹平板法で塗抹された。推定陽性コロニーがカウントされ、ｌｏｇ  ＣＦＵが報告された。
【００４９】
付着に対するリステリア属インキュベーション温度の影響
リステリア属のインキュベーション温度がリンゴへのリステリア属の付着に重要であるかどうかを決定するために、細菌は、２５℃（リステリア属が鞭毛を発現した）と３７℃（すなわち、鞭毛は発現しなかった）の両方で培養された。細菌は、上記で説明されたように、除去される前にリンゴに固着する時間を与えられた（方法１）。
【００５０】
統計分析
各実験は、少なくとも３回繰り返され、３つ組の試料が分析された。細菌数は、チューキー検定とＡＮＯＶＡを併用して実行された平均間の差によってｌｏｇ１０値へと変換された。
【００５１】
実験１：ＵＶ：過酸化水素処理
ベースライン試験によって、リステリアモノサイトゲネスを接種されたリンゴの除染に対する、時間、過酸化水素濃度（１〜１．５％）、および温度（２２℃〜４８℃）の影響が決定された。アッセイの感受性を増加させ、外形の影響を回避するために、リンゴ全体の代わりに、リンゴの半分が使用された。結果から、ＵＶ単独では、低濃度の過酸化水素において使用されたときと比較して、リステリア属の高い対数減少が裏付けられた（表１）ことがわかった。結果は、遮光効果がない場合のリステリア属の直接的な不活性化に帰することができる。
【００５２】
過酸化水素単独では、無視できるほど少ないリステリア属の対数減少が観察されたが、能力は、２２℃と比較して４８℃でユニットを動作させることにより、向上させることができた。より明白な温度の影響は、ＵＶが過酸化水素と組み合わせられたときに観察された（表１）。ここで、ユニットが４８℃で稼働させられたときに、２２℃と比較して、著しくより高い対数減少があった。最も高い対数減少は、３０秒の滞留時間とともに４８℃でユニットへと導入された１．５％ｖ／ｖの過酸化水素濃度を使用して得られた。この結果は、２２℃と比較して４８℃でより大きい程度までＡＯＰ処理によって説明できる。より低い濃度の過酸化水素では、Ｈ２Ｏ２のＵＶ分解から形成されたラジカルが不十分であったことにより、観察される致死性が低くなった。にもかかわらず、過酸化水素の存在は、ＵＶ光子を吸収することによって、リンゴの表面上のリステリア属に保護効果を提供するのに十分であった。
【００５３】
表１：異なるＵＶ：過酸化水素の組み合わせを使用することによる接種された半分のリンゴ上のリステリアモノサイトゲネスの不活性化。
【００５４】
【表１】
2020517231.tif 000003
【００５５】
実際的に見れば、リンゴ全体の処理は、リステリア属が潜在的に芯の表面下の内部に存在することに加えて、リンゴの物理的な形状によって引き起こされる遮光により、難しい。前述の遮光効果のために、ＵＶ単独の使用は限られるであろう。これは実際、接種されたリンゴ全体に適用されたＵＶが、リンゴの表面上のリステリア属の＜１ｌｏｇ  ｃｆｕの減少、および内部芯の中の病原体のレベルにおける平均的な減少なし（−０．２１±０．６９）という結果を生じた、現在のケースで見出された。ＵＶが過酸化水素と組み合わせて使用されたとき、リステリア属のＬＣＲは、それを超えると病原体のより大きい減少がサポートされなかった、最大４％ｖ／ｖＨ２Ｏ２まで増加した（図２）。しかしながら、過酸化水素濃度とリンゴの芯組織へと導入されたリステリア属の減少との間には、相関があった（図２）。ここで、ＵＶと組み合わせて使用された６％過酸化水素が、元の個体数の８４％の減少を表すリステリア属レベルの０．８６ｌｏｇ  ｃｆｕの減少を裏付けることができたことがわかった。
【００５６】
実験２：リンゴを除染するための、ＵＶ、過酸化水素、およびオゾンの組み合わせの能力
オゾンは、ＵＶ−Ｃランプのうちの１つを、１７４ｎｍで発するランプに置き換えることによって発生させられ、過酸化水素は、４８℃で蒸気を介して導入された。３０秒の処理時間の場合、リンゴの表面上のリステリア属の減少は、ＵＶ：オゾン：過酸化物が適用されたとき、ＵＶ：オゾン処理と比較して、著しくより高かったことがわかった。より長い処理時間が適用されたとき、リンゴの表面上のリステリア属の不活性化の程度は、ＵＶ：オゾン：過酸化物とＵＶ：オゾンの間で有意差はなかった（図３）。リンゴの表面上のリステリア属の対数減少は処理時間に依存せず、残留する残存物が保護されたくぼみにおけるものであることを示唆した。
【００５７】
リンゴの表面上の対数減少の傾向と同様に、芯内の病原体の不活性化は、３０秒の処理で、ＵＶ：オゾン：過酸化物の場合、ＵＶ：オゾンと比較して著しくより高かった（図１２）。しかしながら、ＵＶ：オゾン：過酸化物によるリステリア属不活性化の程度は、処理時間の延長とともに増加しなかった。対照的に、ＵＶ：オゾンによる芯内のリステリア属の対数減少は、時間とともに増加し、１２０秒では、ＵＶ：オゾン：過酸化物と有意差はなかった。
【００５８】
結果から、ＵＶ：オゾン：過酸化物の活動は、Ｈ２Ｏ２なしでＵＶ：オゾンが適用されたときと比較して、リステリア属の急速な不活性化をもたらすことが示唆された。
【００５９】
結論
４８℃で６％Ｈ２Ｏ２を６０秒間使用するＵＶ：過酸化水素処理は、リンゴの表面上および芯内のリステリアモノサイトゲネスを著しく減少させることができる。処理は、ＵＶ：過酸化物をオゾンと組み合わせることを通じて向上させることができた。
【００６０】
実験３：キャンディーアップル上のリステリアモノサイトゲネスを制御するための、組み合わせられたオゾンおよびＡＯＰプロセスの検証
この実験の目的は、リンゴ上のリステリアモノサイトゲネスを制御するためのオゾンとＡＯＰ（ＵＶ：過酸化水素：オゾン）の組み合わせられた効果と、２２℃で貯蔵されたキャンディーアップル上の残存物の死滅を評価することである。
【００６１】
材料および方法
リンゴは、リステリアモノサイトゲネスの５菌株カクテルをリンゴの萼にスポット接種された（５  ｌｏｇ  ｃｆｕ／リンゴ）。リンゴは、低温の部屋に移され、処理の前に一晩保持された。１３個のリンゴのバッチがオゾン反応器内に置かれ、４０分間処理された。次いで、リンゴは、オゾンなしでさらに５０分間乾燥させられ、次いで、ＡＯＰユニットに直接的に移された。萼がＵＶ−Ｃ：オゾンランプに面した状態でチャンバ内にリンゴを置いて、ＡＯＰ処理が実行された。過酸化水素蒸気が、４８℃に予熱された６％ｖ／ｖ溶液から発生させられた。処理は３０秒間実行され、その後、木製の棒が萼に挿入されてから、８０℃に維持されたカラメルでコーティングされた。赤リンゴの場合、さらなるチョコレート層が追加された。次いで、リンゴは、２２℃に維持された部屋の中のトレイ上で貯蔵された。
【００６２】
定期的に、キャンディーアップル（ｎ＝３）が、微生物分析のために移された。ここで、芯は、滅菌した芯抜き器を使用して除去され、滅菌バッグ内に置かれ、次いで、ワンステップ増菌ブロス中で１：１０の希釈物へと再懸濁させられた。芯は、ストマッカー内で６０秒間ホモジネートされた。棒の、リンゴに埋め込まれた部分は、任意の付着したリステリア属を剥離するために、ホモジェネート内で手で揉まれた。リンゴの残りの部分は、１００ｍｌのワンステップ増菌ブロス中に浸漬され、キャンディー：カラメル層を剥離するために手で揉まれた。
【００６３】
試料は、３０℃で４８時間インキュベートされたＭＯＸ処方培地上に塗抹された。並行して、ホモジェネートは、３７℃で２４時間増菌され、次いで、３０℃で４８時間インキュベートされたＭＯｘ寒天培地上に画線された。各プレートからの推定陽性コロニーは、ＡＰＩ試験片を使用する確認に供された。
【００６４】
結果
この実験の結果は、図４ならびに以下の表２Ａおよび表２Ｂに示されている。
表２Ａおよび２Ｂ：１９日の貯蔵寿命にわたって２２℃でキャンディーアップルから回収されたリステリアモノサイトゲネス。データは、図４からである。
【００６５】
【表２】
2020517231.tif 000004
【００６６】
【表３】
2020517231.tif 000005
【００６７】
対照の処理されていないリンゴ（青および赤）上のリステリア属レベルは５ｌｏｇ  ｃｆｕであり、数字は、カラメルコーティングプロセスによって０．４〜０．９ｌｏｇ  ｃｆｕ減少した。処理されていない青リンゴから作られたキャンディーアップルでは、１９日の貯蔵寿命の終了時のリステリア属の数は、１日目と比較して有意に変化しなかった（Ｐ＞０．０５）（図４Ａ、表２Ａ）。しかしながら、処理されていないリンゴの芯に関するリステリア属は、３日の遅延期間の後でレベルが増加し、１９日の貯蔵寿命の終了時では有意に（Ｐ＜０．０５）高かった（図４Ａ、表２Ａ）。
【００６８】
処理されていない青リンゴから作られたキャンディーアップルの表面上のリステリア属の数は、最初の３日の貯蔵寿命にわたって約１ｌｏｇ  ｃｆｕ減少したが、次いで、残りの１６日の貯蔵期間の間は一定のままであった（図４Ｂ、表２Ｂ）。２２℃で貯蔵されたキャンディーアップルの芯内のリステリアモノサイトゲネスの数は、１９日の貯蔵寿命にわたって変動し、終了時では、１日目と比較して、数の全体的な有意な変化はなかった（図４Ｂ、表２Ｂ）。
【００６９】
リステリア属は、オゾンの次にＡＯＰで処理された青いまたは赤い果実から作られたキャンディーアップルからは回収されなかった（図４、表２）。芯の試料に関しては、赤青どちらのリンゴも、３つの複製物（ｒｅｐｌｉｃａｔｅ）のうちの２つが、オゾンおよびＡＯＰ処理された後の増菌によりリステリア属について試験で陰性であった（図４、表２）。したがって、リステリア属の全体的な対数減少は、どちらのキャンディーアップルの種類の場合でも、４〜５ｌｏｇ  ｃｆｕ／リンゴであった。
【００７０】
貯蔵の過程で、リステリア属は、処理された赤リンゴから作られたキャンディーアップルの表面から散発的に回収されたが、病原体のレベルは、数字の増加はなかった。赤リンゴの芯内のリステリア属は、１９日の貯蔵期間にわたって散発的に回収され、数字の全体的な増加は観察されなかった（図４Ａ、表２Ａ）。処理された青リンゴでは、キャンディーアップル上の表面での数は、貯蔵５日目の後で増加し、１９日の貯蔵期間の終了時に、１ｌｏｇ  ｃｆｕ／リンゴに達した（図４Ｂ、表２Ｂ）。対照的に、青リンゴの芯内の残存するリステリア属は貯蔵寿命にわたって減少し、８日目を過ぎて得られた試料はいずれも、病原体の試験で陽性ではなかった（図４Ｂ、表２Ｂ）。
【００７１】
気相介入を使用したレタスの玉の除染
研究手法の理論的根拠は、汚染が表面に限定されるであろうという仮定の下にレタスの玉の上の病原体を不活性化することであった。これは実際、収穫後洗浄に頼ることを減少させ、加工ラインを通して病原体をばらまくリスクも最小にするであろう。評価された２つの処理は、オゾンと、過酸化水素とＵＶの組み合わせを使用することに基づいた処理（ＡＯＰ）であった。
【００７２】
過酸化水素：ＵＶ
レタスの玉は、ＵＶ反応器チャンバ内に置かれ、ＵＶ−Ｃを用いた照射がある場合とない場合で過酸化水素（２または４％）が噴霧された。対照群として、接種されたリンゴは、Ｈ２Ｏ２の代わりにＨ２Ｏ蒸気で処理された。農産物が通過しているところに上から蒸気がチャンバに入る、農産物コンベアタイプシステムの性質ゆえに、製品と接触する蒸気の正確な量を正確に示すことは不可能である。しかしながら、プロセスが終了した後、農産物は、サーキュレーションファンによって乾燥させられる。より短期間の処理の場合、レタスの玉全体の上の糞便系大腸菌群を減少させるのに４％のＨ２Ｏ２の方がより効果的であるが、２％は、２分後により高い減少を達成した（図５）。対照として、Ｈ２Ｏ２を水と置き換えると、処理は同程度に効果的である。ＵＶ単独での照射は、最も低い対数減少を裏付け、＞６０秒の処理時間では、能力は増加しなかった。処理されたリンゴをカタラーゼアッセイで試験すると、検出可能な過酸化水素の残留はなかった（検出のレベル＞１０ｐｐｍ）。
【００７３】
オゾン
高い湿度条件の下で適用されたオゾンは、最も高い対数減少（ちょうど１ｌｏｇ  ＣＦＵ／ｇを超える）をもたらし、これは、同じ湿度条件下でのＡＯＰプロセスよりもわずかに高かった（図６）。全体的に、処理は、最小の対数減少を達成した。
レタスを除染するための、ＵＶ、過酸化水素、オゾン、および二酸化塩素の組み合わせの能力
オゾン、６％Ｈ２Ｏ２、および５０ｐｐｍ二酸化塩素の組み合わせられた逐次処理は、ほぼ４ｌｏｇ  ＣＦＵ／ｇ減少を達成した（図７）。組み合わせられた処理プロセス（図８）は、安定したレベルの病原体を維持した処理されていないグループと比較したとき、１０日の貯蔵寿命全体を通じて維持された、非常に低い糞便系大腸菌群レベルをもつレタスをもたらした（図８）。
【００７４】
結論／議論
リステリア属を接種されたが処理されなかったリンゴから作られたキャンディーアップル上で、病原体レベルは、２２℃での１９日の貯蔵期間中、減少したか、著しく変化しなかったか、または増加した。リステリアモノサイトゲネスは、処理されていない赤リンゴの芯内で増加し、＞６ｌｏｇ  ｃｆｕ／リンゴのレベルに達することがわかった。
【００７５】
オゾンとＡＯＰの組み合わせを使用することによって、リステリアモノサイトゲネスの４〜５ｌｏｇ  ｃｆｕの減少を達成することが可能であった。赤リンゴから作られたキャンディーアップルでは、キャンディーアップルが２２℃で１９日間保持されたとき、キャンディーアップルの芯または表面内のリステリア属の数は著しく変化しなかった。同様に、処理された青リンゴの芯内のリステリア属は、貯蔵寿命にわたって減少した。処理された青リンゴから作られたキャンディーアップルの表面上のリステリア属の回収の証拠があった。しかしながら、レベルは低く、試料を増菌する（ｅｎｒｉｃｈ）ことによってのみ検出された。
【００７６】
他者によって公表された研究とともに実行された研究から、キャンディーアップル上のリステリアモノサイトゲネスの死滅は、いくつかの要因に依存する。具体的には、リステリアモノサイトゲネスによってもたらされる最大のリスクは、リンゴの表面とは対照的に、芯の中に導入される。
【００７７】
リステリアモノサイトゲネスがキャンディーアップル上／内で発育する程度は、貯蔵温度よりも、病原体があらかじめストレスを加えられたかどうかに、より大きく依存する。この点に関して、オゾンガス、次いでＡＯＰの適用は、室温で保持されたキャンディーアップルによる病原体の発育の制限を説明し得る、リステリアモノサイトゲネスのストレスの増加につながるであろう。
【００７８】
結論として、オゾンガス処理およびＡＯＰを実施することによって、キャンディーアップル生産用途のリンゴ上およびその中のリステリアモノサイトゲネスのレベルを減少させることが可能である。両方の介入が水を含まないことに基づいて、製品を汚染するリステリアモノサイトゲネスを積極的に発育させるリスクはほとんどない。したがって、まとめると、提示された証拠は、室温とは対照的に４℃でリンゴを貯蔵することがリステリアモノサイトゲネス制御に大きな恩恵をもたらさないことを示す。したがって、説明されたように調製されたキャンディーアップルは、汚染されるまたはリステリアモノサイトゲネスの発育を助ける何らのさらなるリスクなしに、室温で貯蔵可能である。
【００７９】
実験４：ＵＶ／オゾン／過酸化水素の組み合わせを使用した異なる果実および野菜の除染
この実験は、異なる農産物タイプに導入され、ＵＶ／オゾン／過酸化水素の組み合わせで処理されたリステリアモノサイトゲネスのｌｏｇ数減少を決定するために行われた。
【００８０】
方法
細菌および培養の条件
リステリアモノサイトゲネス（血清型４ａ、４ｂ、１／２ｂ、１／２ａ、および３ａ）はＴＳＢ中で３７℃にて一晩培養され、細胞は遠心分離によって採取された。ペレットは、生理食塩水中で、８ｌｏｇ  ｃｆｕ／ｍｌ（ＯＤ６００−０．２）の最終的な細胞密度まで懸濁させられた。細胞懸濁液は、使用前に４℃で最長１２時間保持された。
【００８１】
試験用野菜および果実は、果実の上部のまわりで皮に対し表面上で、８−ｌｏｇ１０ＣＦＵ／ｍｌの濃度の１００μｌの試験用細菌をスポット接種された。次いで、リンゴは、バイオセーフティキャビネット内で２０分から４時間乾燥させられてから、最大２４時間４℃の貯蔵に移された。細菌をインターナライズするために、１ｍｌの懸濁液が、茎の割れ目に追加され、１分間真空下に置かれ、真空から除去され、１分間放置されてから、さらに１分間もう一度真空化された。
【００８２】
反応器
ＵＶ反応器は、２４”の長さであり、直径が１５ｍｍであり、８．５のＵＶ出力をもち、コンベア表面から１６ｃｍの距離のところに保持された、４×２５Ｗランプ（１００時間および８０℃で２５４ｎｍにて測定される）を備える、紫外線器具（Ｓａｎｉ−Ｒａｙ（登録商標）−ステンレス鋼、２４”×９”×５”、１２０ｖ、５０／６０Ｈｚ）からなった。標準的なＵＶランプ（製造番号０５−１３４８）およびオゾンランプ（番号０５−１３４９，２．３のオゾン出力）が両方とも使用された（各々２つ）。ＵＶＸラジオメータ（製造業者の指示により±５％に較正されたＵＶＰ（登録商標））が、一貫性を保証するためにランプ強度をモニタするために使用された。過酸化水素（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（登録商標）から入手された、３０％溶液）が、さまざまな濃度（２〜４％ｖ／ｖ）で調製され、湯浴器中で２２℃または４８℃に予熱され、次いで、噴霧器／気化器のリザーバ内に置かれた。処理チャンバは、接種されたリンゴをユニットの中へと置く直前にスイッチが切られたファンヒータを用いて予熱された。リンゴは、割り当てられた時間期間にわたってユニットの中心に保持され、反対側の端で除去された。
【００８３】
結果
結果は、以下の表３に示されている。
【００８４】
【表４】
2020517231.tif 000006
【図１】
2020517231.tif 000007
【図２】
2020517231.tif 000008
【図３】
2020517231.tif 000009
【図４Ａ】
2020517231.tif 000010
【図４Ｂ】
2020517231.tif 000011
【図５】
2020517231.tif 000012
【図６】
2020517231.tif 000013
【図７】
2020517231.tif 000014
【図８】
2020517231.tif 000015
【国際調査報告】
2020517231.tif 000016
2020517231.tif 000017
2020517231.tif 000018
2020517231.tif 000019