(57)【要約】  本発明は、ＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体を用いた、ＤＬＢＣＬの併用療法を対象とする。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
医薬としての使用のための、ＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体。
【請求項２】
ＤＬＢＣＬの治療における使用のための、ＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体。
【請求項３】
ＢＥＴ阻害剤が２−［（Ｓ）−４−（４−クロロ−フェニル）−２，３，９−トリメチル−６Ｈ−１−チア−５，７，８，９ａ−テトラアザ−シクロペンタ［ｅ］アズレン−６−イル］−Ｎ−［３−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−プロピル］−アセトアミド（ＲＧ６１４６）である、請求項１又は２に記載の、使用のための、ＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体。
【請求項４】
Ｂｃｌ−２阻害剤がベネトクラクスである、請求項１から３のいずれか一項に記載の、使用のための、ＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体。
【請求項５】
抗ＣＤ２０抗体が、Ｉ型抗ＣＤ２０抗体であるか、又はＦｃ領域中のＮ結合型オリゴ糖の少なくとも４０％が非フコシル化されているＩＩ型抗ＣＤ２０抗体である、請求項１から４のいずれか一項に記載の、使用のための、ＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体。
【請求項６】
ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体がヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体である、請求項５に記載の、使用のための、ＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体。
【請求項７】
ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体がオビヌツズマブである、請求項５又は６に記載の、使用のための、ＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体。
【請求項８】
Ｉ型抗ＣＤ２０抗体がリツキシマブである、請求項５に記載の、使用のための、ＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体。
【請求項９】
一又は複数の追加の他の細胞毒性剤、化学療法剤又は抗がん剤を含む、請求項１から８のいずれか一項に記載の、使用のための、ＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体。
【請求項１１】
ＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体並びに一又は複数の薬学的に許容される添加剤を含む、薬学的組成物。
【請求項１２】
ＤＬＢＣＬの治療のための医薬の製造のための、ＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体の使用。
【請求項１３】
ＤＬＢＣＬの治療におけるＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体の使用。
【請求項１４】
ＤＬＢＣＬの治療方法であって、それを必要とする患者へ、ＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体を投与することを含む、方法。
【請求項１５】
前記ＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体の同時、別個又は逐次投与のためのＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体を含むキット。
【請求項１６】
ＤＬＢＣＬの治療における使用のための、請求項１５に記載のキット。
【請求項１７】
ＢＥＴ阻害剤が２−［（Ｓ）−４−（４−クロロ−フェニル）−２，３，９−トリメチル−６Ｈ−１−チア−５，７，８，９ａ−テトラアザ−シクロペンタ［ｅ］アズレン−６−イル］−Ｎ−［３−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−プロピル］−アセトアミド（ＲＧ６１４６）である、請求項１１から１６のいずれか一項に記載の、薬学的組成物、使用、方法又はキット。
【請求項１８】
Ｂｃｌ−２阻害剤がベネトクラクスである、請求項１１から１７のいずれか一項に記載の、薬学的組成物、使用、方法又はキット。
【請求項１９】
抗ＣＤ２０抗体が、Ｉ型抗ＣＤ２０抗体であるか、又はＦｃ領域中のＮ結合型オリゴ糖の少なくとも４０％が非フコシル化されているＩＩ型抗ＣＤ２０抗体である、請求項１１から１８のいずれか一項に記載の、薬学的組成物、使用、方法又はキット。
【請求項２０】
ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体がヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体である、請求項１９に記載の、薬学的組成物、使用、方法又はキット。
【請求項２１】
ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体がオビヌツズマブである、請求項１９に記載の、薬学的組成物、使用、方法又はキット。
【請求項２２】
Ｉ型抗ＣＤ２０抗体がリツキシマブである、請求項１９に記載の、薬学的組成物、使用、方法又はキット。
【請求項２３】
上に記載した発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体を用いた、がん、特にＤＬＢＣＬの併用療法を対象とする。
【背景技術】
【０００２】
Ｂ細胞リンパ腫は、Ｔ細胞リンパ腫よりもはるかに一般的であり、すべての非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）のおよそ８５パーセントを占める。びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）は、ＮＨＬの最も一般的な形態であり、米国でＮＨＬと新たに診断された事例の約３０パーセントを占める。ＤＬＢＣＬは男性と女性の両方に発生するが、男性にわずかに多くみられる。ＤＬＢＣＬは小児期に発生する可能性があるが、その発生率は一般的に年齢とともに増加し、患者の約半数は６０歳以上である。
【０００３】
ＤＬＢＣＬは、リンパ節又はリンパ系の外側、胃腸管、精巣、甲状腺、皮膚、乳房、骨、若しくは脳に発生する可能性のある侵攻性（増殖の速い）リンパ腫である。多くの場合、ＤＬＢＣＬの最初の兆候は、肥大したリンパ節によって引き起こされる首、脇の下、又は鼠径部の痛みのない急速な腫れである。一部の患者にとって、腫れは痛みを伴う場合がある。その他の症状には、寝汗、発熱及び原因不明の体重減少が含められ得る。患者は、疲労、食欲不振、息切れ、又は痛みに気付く場合がある。
【０００４】
エピジェネティックな調節不全は、様々な血液悪性腫瘍で見られる異常な遺伝子発現パターンを引き起こす上で重要な役割を果たしている。多くのエピジェネティックな変化は可逆的であるため、これらの因子は潜在的な抗悪性腫瘍標的としてかなりの注目を集めている。重要な臨床的関心のある特定の標的は、タンパク質のブロモドメイン及び末端外（ＢＥＴ）ファミリーであり、ＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４、及び精巣特異的ＢＲＤＴを含める。ブロモドメイン（ＢＲＤ）は、クロマチン内のアセチル化ヒストンタンパク質を含めた、アセチル化モチーフへの結合に高い親和性を有するタンパク質ドメインである。タンパク質のＢＥＴファミリーは、アセチル化クロマチンに結合し、遺伝子転写を調節する。
【０００５】
ＢＥＴタンパク質とアセチル化クロマチンとの間の相互作用の選択的阻害は、急性白血病、リンパ腫、及び多発性骨髄腫（ＭＭ）の前臨床モデルに顕著な活性をもたらした。ＢＥＴタンパク質を標的とすることは、がん遺伝子及び疾患の発症と進行に重要な遺伝子の転写を特異的に標的とすることができる（Onco Targets Ther. 2016; 9）。
【０００６】
Ｂｃｌ−２タンパク質は、多くの疾患、特にがん、白血病、免疫疾患、及び自己免疫疾患で役割を果たす。Ｂｃｌ−２タンパク質は、膀胱がん、脳がん、乳がん、骨髄がん、子宮頸がん、慢性リンパ球性白血病、結腸直腸がん、食道がん、肝細胞がん、リンパ芽球性白血病、濾胞性リンパ腫、Ｔ細胞又はＢ細胞由来のリンパ性悪性腫瘍、メラノーマ、骨髄性白血病、骨髄腫、口腔がん、卵巣がん、非小細胞肺がん、前立腺がん、小細胞肺がん、脾臓がんに関与すると言われている。Ｂｃｌ−２タンパク質の過剰発現は、免疫系の様々ながん及び障害における化学療法に対する耐性、臨床転帰、疾患進行、全体的な予後又はそれらの組み合わせと相関している。
【０００７】
ＣＤ２０分子（ヒトＢリンパ球限定分化抗原又はＢｐ３５とも呼ばれる）は、広範に記載されている前Ｂ及び成熟Ｂリンパ球に位置する疎水性膜貫通タンパク質である（Valentine, M.A., et al., J. Biol. Chem. 264 (1989) 11282-11287;及びEinfeld, D.A., et al., EMBO J. 7 (1988) 711-717; Tedder, T.F., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85 (1988) 208-212; Stamenkovic, I., et al., J. Exp. Med. 167 (1988) 1975-1980; Tedder, T.F., et al., J. Immunol. 142 (1989) 2560-2568）。ＣＤ２０は、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）の９０％超に発現する（Anderson, K.C., et al., Blood 63 (1984) 1424-1433）が、造血幹細胞、プロＢ細胞、正常な形質細胞、又は他の正常な組織では見られない（Tedder, T.F., et al., J, Immunol. 135 (1985) 973- 979）。
【０００８】
ＣＤ２０結合のモード及び生物学的活性が著しく異なる二つの異なる種類の抗ＣＤ２０抗体が存在する（Cragg, M.S., et al., Blood 103 (2004) 2738-2743;及びCragg, M.S., et al., Blood 101 (2003) 1045-1052）。Ｉ型抗ＣＤ２０抗体は主に補体を利用して標的細胞を死滅させるが、ＩＩ型抗体は主に細胞死の直接誘導によって機能する。
【０００９】
Ｉ型及びＩＩ型抗ＣＤ２０抗体並びにそれらの特性は、例えばKlein et al., mAbs 5 (2013), 22-33に概説がある。ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、ＣＤ２０を脂質ラフトに局在させず、低いＣＤＣ（補体依存性溶解）活性を示し、Ｉ型抗ＣＤ２０抗体と比較してＢ細胞への結合能力の約半分しか示さず、同型凝集及び細胞死を誘導する。それとは反対に、Ｉ型抗体は、ＣＤ２０を脂質ラフトに局在させ、高いＣＤＣ活性、Ｂ細胞への完全結合能、並びに同型凝集及び直接細胞死の弱い誘導のみを示す。
【００１０】
モノクローナル抗体の細胞媒介性エフェクター機能は、Umana, P., et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180；及び米国特許第６６０２６８４号に記載されているように、それらのオリゴ糖成分を操作することにより高めることができる。がん免疫療法において最も一般的に使用される抗体であるＩｇＧ１型抗体は、各ＣＨ２ドメインにおいて、Ａｓｎ２９７に保存されたＮ結合グリコシル化部位を有する糖タンパク質である。Ａｓｎ２９７に結合した２つの複合二分岐オリゴ糖はＣＨ２ドメイン間に包埋されて、ポリペプチド骨格を有する広範な接触部を形成し、それらの存在は、抗体が抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）等のエフェクター機能を媒介するのに必須である（Lifely, M.R., et al., Glycobiology 5 (1995) 813-822; Jefferis, R., et al., Immunol. Rev. 163 (1998) 59-76; Wright, A., 及びMorrison, S.L., Trends Biotechnol. 15 (1997) 26-32)。Umana, P., et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180、及び国際公開第９９／１５４３４２号は、二分されたオリゴ糖の形成を触媒するグリコシルトランスフェラーゼであるβ（１，４）−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（「ＧｎＴＩＩＩ」）のチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞内での過剰発現が、抗体のインビトロＡＤＣＣ活性を有意に増大させることを示した。Ｎ２９７の糖の組成の改変又はその除去もまた、ＦｃγＲ及びＣ１  ｑに結合するＦｃへの結合に影響を及ぼす（Umana, P., et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180; Davies, J., et al., Biotechnol. Bioeng. 74 (2001) 288-294; Mimura, Y., et al., J. Biol. Chem. 276 (2001) 45539-45547; Radaev, S., et al., J. Biol. Chem. 276 (2001) 16478-16483; Shields, R.L., et al., J. Biol. Chem. 276 (2001) 6591-6604; Shields, R.L., et al., J. Biol. Chem. 277 (2002) 26733-26740; Simmons, L.C., et al., J. Immunol. Methods 263 (2002) 133-147）。
【００１１】
抗ＣＤ２０抗体を含めたアフコシル化及びフコシル化抗体の活性について議論する研究が報告されている（例えば、Iida, S., et al., Clin. Cancer Res. 12 (2006) 2879-2887; Natsume, A., et al., J. Immunol. Methods 306 (2005) 93-103; Satoh, M., et al., Expert Opin. Biol. Ther. 6 (2006) 1161-1173; Kanda, Y., et al., Biotechnol. Bioeng. 94 (2006) 680-688; Davies, J., et al., Biotechnol. Bioeng. 74 (2001) 288-294）。
【００１２】
驚くべきことに、ＢＥＴ阻害剤とＢｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体の組み合わせは、ＤＬＢＣＬに対して有意に高い有効性を示し、治療の停止後、明確な腫瘍縮小と腫瘍再成長の遅延を引き起こすことがわかった。驚くべきことに、この三重の組み合わせによる腫瘍縮小は相加以上であり、すなわち、３つの成分のそれぞれによって別々に誘導される累積腫瘍縮小よりも優れている。
【発明の概要】
【００１３】
よって、本発明は、特に：
医薬としての使用のための、ＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体；
ＤＬＢＣＬの治療における使用のための、ＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体；
ＢＥＴ阻害剤が２−［（Ｓ）−４−（４−クロロ−フェニル）−２，３，９−トリメチル−６Ｈ−１−チア−５，７，８，９ａ−テトラアザ−シクロペンタ［ｅ］アズレン−６−イル］−Ｎ−［３−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−プロピル］−アセトアミド（ＲＧ６１４６）、ＩＮＣＢ−０５４３２９、ＩＮＣＢ−０５７６４３、ＧＳＫ５２５７６２、ＧＳ−５８２９、ＣＰＩ−０６１０、ビラブレシブ、ＰＬＸ５１１０７、ＡＢＢＶ−０７５、ＢＩ  ８９４９９９、ＦＴ−１１０１、ＺＥＮ−３６９４、ＧＳＫ−２８２０１５１又はＢＭＳ−９８６１５８である、本発明による使用のための、ＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体；
ＢＥＴ阻害剤が２−［（Ｓ）−４−（４−クロロ−フェニル）−２，３，９−トリメチル−６Ｈ−１−チア−５，７，８，９ａ−テトラアザ−シクロペンタ［ｅ］アズレン−６−イル］−Ｎ−［３−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−プロピル］−アセトアミド（ＲＧ６１４６）である、本発明による使用のための、ＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体；
Ｂｃｌ−２阻害剤が、ベネトクラクス、ナビトクラクス、オバトクラクス、Ｓ−０５５７４６又はＰＮＴ−２２５８である、本発明による使用のための、ＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体；
Ｂｃｌ−２阻害剤がベネトクラクスである、本発明による使用のための、ＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体；
抗ＣＤ２０抗体が、Ｉ型抗ＣＤ２０抗体であるか、又はＦｃ領域中のＮ結合型オリゴ糖の少なくとも４０％が非フコシル化されているＩＩ型抗ＣＤ２０抗体である、本発明による使用のための、ＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体；
ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体がヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体である、本発明による使用のための、ＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体；
ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体がオビヌツズマブである、本発明による使用のための、ＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体；
Ｉ型抗ＣＤ２０抗体がリツキシマブである、本発明による使用のための、ＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体；
抗ＣＤ２０抗体がリツキシマブ又はオビヌツズマブ（ｏｂｉｎｕｔｚｕｍａｂ）である、本発明による使用のための、ＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体；
抗ＣＤ２０抗体がリツキシマブである、本発明による使用のための、ＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体；
抗ＣＤ２０抗体がオビヌツズマブ（ｏｂｉｎｕｔｚｕｍａｂ）である、本発明による使用のための、ＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体；
一又は複数の追加の他の細胞毒性剤、化学療法剤又は抗がん剤を含む、本発明による使用のための、ＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体；
前記薬剤の効果を高める電離放射線を含む、本発明による使用のための、ＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体；
ＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体並びに一又は複数の薬学的に許容される添加剤を含む、薬学的組成物；
ＤＬＢＣＬの治療における使用のための、ＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体並びに一又は複数の薬学的に許容される添加剤を含む、薬学的組成物；
ＤＬＢＣＬの治療のための医薬の製造のためのＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体の使用；
ＤＬＢＣＬの治療におけるＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体の使用；
それを必要とする患者へＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体を投与することを含む、ＤＬＢＣＬの治療方法；
前記ＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体の同時、別個又は逐次投与のためのＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体を含むキット；
ＤＬＢＣＬの治療における使用のための、本発明によるキット；
ＢＥＴ阻害剤が、２−［（Ｓ）−４−（４−クロロ−フェニル）−２，３，９−トリメチル−６Ｈ−１−チア−５，７，８，９ａ−テトラアザ−シクロペンタ［ｅ］アズレン−６−イル］−Ｎ−［３−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−プロピル］−アセトアミド（ＲＧ６１４６）、ＩＮＣＢ−０５４３２９、ＩＮＣＢ−０５７６４３、ＧＳＫ５２５７６２、ＧＳ−５８２９、ＣＰＩ−０６１０、ビラブレシブ、ＰＬＸ５１１０７、ＡＢＢＶ−０７５、ＢＩ  ８９４９９９、ＦＴ−１１０１、ＺＥＮ−３６９４、ＧＳＫ−２８２０１５１又はＢＭＳ−９８６１５８である、本発明による薬学的組成物、使用、方法又はキット；
ＢＥＴ阻害剤がＲＧ６１４６である、本発明による薬学的組成物、使用、方法又はキット；
Ｂｃｌ−２阻害剤が、ベネトクラクス、ナビトクラクス、オバトクラクス、Ｓ−０５５７４６又はＰＮＴ−２２５８である、本発明による薬学的組成物、使用、方法又はキット；
Ｂｃｌ−２阻害剤がベネトクラクスである、本発明による薬学的組成物、使用、方法又はキット；
抗ＣＤ２０抗体が、Ｉ型抗ＣＤ２０抗体であるか、又はＦｃ領域中のＮ結合型オリゴ糖の少なくとも４０％が非フコシル化されているＩＩ型抗ＣＤ２０抗体である、本発明による薬学的組成物、使用、方法又はキット；
ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体がヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体である、本発明による薬学的組成物、使用、方法又はキット；
ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体がオビヌツズマブである、本発明による薬学的組成物、使用、方法又はキット；
Ｉ型抗ＣＤ２０抗体がリツキシマブである、本発明による薬学的組成物、使用、方法又はキット；
抗ＣＤ２０抗体がリツキシマブ又はオビヌツズマブである、本発明による薬学的組成物、使用、方法又はキット；
抗ＣＤ２０抗体がリツキシマブである、本発明による薬学的組成物、使用、方法又はキット；及び
抗ＣＤ２０抗体がオビヌツズマブである、本発明による薬学的組成物、使用、方法又はキット
に関する。
【００１４】
よって、本発明による使用のための、ＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体は、組み合わせて投与（又は共投与）される。
【００１５】
よって、本発明は、本発明による組み合わせ使用のための、ＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体に関する。
【００１６】
よって、本発明は、医薬としての組み合わせ使用のための、特にＤＬＢＣＬの治療における組み合わせ使用のための、ＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体に関する。
【００１７】
一実施態様では、ＢＥＴ阻害剤は、国際公開第２０１１／１４３６６９号に記載される化合物から選択される化合物である。前記ＢＥＴ阻害剤を製造する方法も、国際公開第２０１１／１４３６６９号に開示されている。
【００１８】
最も好ましくは、ＢＥＴ阻害剤は、以下の式にあるような２−［（Ｓ）−４−（４−クロロ−フェニル）−２，３，９−トリメチル−６Ｈ−１−チア−５，７，８，９ａ−テトラアザ−シクロペンタ［ｅ］アズレン−６−イル］−Ｎ−［３−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−プロピル］−アセトアミド又はその塩である。国際公開第２０１１／１４３６６９号の例ＪＱ３５は、その調製のための方法を開示している。
【００１９】
好ましいＢＥＴ阻害剤は、以下の式で図示される：
2020528061.tif 000002
【００２０】
上のＢＥＴ阻害剤は、ＲＧ６１４６、ＪＱ３５又はＴＥＮ−０１０としても知られている。
【００２１】
一実施態様では、Ｂｃｌ−２阻害剤は、国際公開第２０１０／１３８５８８号に記載される化合物から選択される化合物である。前記Ｂｃｌ−２阻害剤を製造する方法も、国際公開第２０１０／１３８５８８号に開示されている。
【００２２】
最も好ましくは、Ｂｃｌ−２阻害剤は、以下の式にあるような４−（４−｛［２−（４−クロロフェニル）−４，４−ジメチルシクロヘキス−１−エン−１−イル］メチル｝ピペラジン−１−イル）−Ｎ−（｛３−ニトロ−４−［（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルメチル）アミノ］フェニル｝スルホニル）−２−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イルオキシ）ベンズアミド又はその塩である。国際公開第２０１０／１３８５８８の例５は、前記Ｂｃｌ−２阻害剤の調製のための方法を記載している。
【００２３】
好ましいＢｃｌ−２阻害剤は、以下の式で図示される：
2020528061.tif 000003
【００２４】
上のＢｃｌ−２阻害剤はまた、ＡＢＴ−１９９、ＧＤＣ−０１９９又はベネトクラクスとも称される。
【００２５】
抗ＣＤ２０抗体は、Ｉ型抗ＣＤ２０抗体又はＩＩ型抗ＣＤ２０抗体であり得る。
【００２６】
リツキシマブは、特に好ましい抗ＣＤ２０抗体である。リツキシマブはＩ型抗ＣＤ２０抗体である。それは、一般的に、ヒトＣＤ２０抗原に対するモノクローナル抗体を含有する操作されたキメラヒトガンマ１マウス定常ドメインである。このキメラ抗体はヒトガンマ１定常ドメインを含有し、ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎに譲渡された１９９８年４月７日に発行された米国特許第５，７３６，１３７号（Anderson et. al.）において「Ｃ２Ｂ８」の名称で同定されている。リツキシマブは、再発したか又は難治性の低悪性度の濾胞性、ＣＤ２０陽性、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫を有する患者の治療に承認されている。Ｉｎ  ｖｉｔｒｏの作用機序の研究は、リツキシマブがヒト補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を呈することを示している（Reff, M.E., et. al., Blood 83 (1994) 435-445）。さらに、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を測定するアッセイで著しい活性を呈する。リツキシマブはアフコシル化されない。
【００２７】
ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、Ｆｃ領域におけるグリコシル化の修飾により有利に操作されている。具体的な実施態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、非操作抗体と比較して、Ｆｃ領域において非フコシル化オリゴ糖の割合が増加するように操作される。抗体のＦｃ領域における非フコシル化オリゴ糖の割合の増加は、抗体のエフェクター機能の増加をもたらす。
【００２８】
より具体的な実施態様では、少なくとも約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％又は約１００％、好ましくは少なくとも約４０％のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体のＦｃ領域中のＮ結合型オリゴ糖は非フコシル化される。
【００２９】
一実施態様では、約４０％から約８０％のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体のＦｃ領域中のＮ結合型オリゴ糖は非フコシル化される。一実施態様では、約４０％から約６０％のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体のＦｃ領域中のＮ結合型オリゴ糖は非フコシル化される。
【００３０】
別の具体的な実施態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、非操作抗体と比較して、Ｆｃ領域において二分されたオリゴ糖の割合が増加するように操作される。より具体的な実施態様では、少なくとも約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％又は約１００％、好ましくは少なくとも約４０％のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体のＦｃ領域中のＮ結合型オリゴ糖は二分される。一実施態様では、約４０％から約８０％の抗ＣＤ２０抗体のＦｃ領域中のＮ結合型オリゴ糖は二分される。一実施態様では、約４０％から約６０％のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体のＦｃ領域中のＮ結合型オリゴ糖は二分される。
【００３１】
抗ＣＤ２０抗体は、有利には、ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体である。
【００３２】
一実施態様では、ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体は、配列番号３から配列番号１９（国際公開第２００５／０４４８５９号及び国際公開第２００７／０３１８７５号のＢ−ＨＨ２からＢ−ＨＨ９及びＢ−ＨＬ８からＢ−ＨＬ１７）の群から選択される重鎖（ＶＨ）の可変領域を有する。
【００３３】
具体的な一実施態様では、そのような可変ドメインは、配列番号３、配列番号４、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３及び配列番号１５（国際公開第２００５／０４４８５９号及び国際公開第２００７／０３１８７５号のＢ−ＨＨ２、ＢＨＨ−３、Ｂ−ＨＨ６、Ｂ−ＨＨ８、Ｂ−ＨＬ８、Ｂ−ＨＬ１１及びＢ−ＨＬ１３）からなる群より選択される。
【００３４】
具体的な一実施態様では、ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体は、配列番号７（国際公開第２００５／０４４８５９号及び国際公開第２００７／０３１８７５号のＢ−ＨＨ６）の重鎖（ＶＨ）の可変領域を有する。
【００３５】
具体的な一実施態様では、ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体は、配列番号２０（国際公開第２００５／０４４８５９号及び国際公開第２００７／０３１８７５号のＢ−ＫＶ１）の軽鎖（ＶＬ）の可変領域を有する。
【００３６】
具体的な一実施態様では、ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体は、配列番号７（国際公開第２００５／０４４８５９及び国際公開第２００７／０３１８７５のＢ−ＨＨ６）の重鎖（ＶＨ）の可変領域と、配列番号２０（国際公開第２００５／０４４８５９号及び国際公開第２００７／０３１８７５号のＢ−ＫＶ１）の軽鎖（ＶＬ）の可変領域とを有する。
【００３７】
さらに、一実施態様では、ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体はＩｇＧ１抗体である。
【００３８】
本発明によれば、そのようなヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体は、好ましくは、国際公開第２００５／０４４８５９号、国際公開第２００４／０６５５４０号、国際公開第２００７／０３１８７５号、Umana, P. et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180及び国際公開第９９／１５４３４２号に記載される手順に従って糖鎖改変（ＧＥ）される。
【００３９】
一実施態様では、糖鎖改変ヒト化Ｂ−Ｌｙ１はＢ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１  ＧＥである。
【００４０】
一実施態様では、抗ＣＤ２０抗体はオビヌツズマブである（推奨ＩＮＮ、WHO Drug Information, Vol. 26, No. 4, 2012, p. 453）。本明細書で使用される場合、オビヌツズマブはＧＡ１０１と同義であり、以前はアフツズマブとして知られている（推奨ＩＮＮ、WHO Drug Information, Vol. 23, No. 2, 2009, p. 176; Vol. 22, No. 2, 2008, p. 124）。その商品名はＧＡＺＹＶＡ又はＧＡＺＹＶＡＲＯである。ＷＨＯ  Ｄｒｕｇ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎの文書は、以前の全てのバージョンを換える（例えば、Vol. 25, No. 1, 2011, p.75-76）。
【００４１】
一実施態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、ＣＤ２０を１０−８Ｍから１０−１３ＭのＫＤで結合する。
【００４２】
本発明の特定の態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体はＩｇＧ１アイソタイプである。
【００４３】
本発明の特定の態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体はヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体である。
【００４４】
特に好ましい実施態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体はオビヌツズマブである。
【図面の簡単な説明】
【００４５】
【図１】ＲＧ６１４６、ベネトクラクス及びオビヌツマブの３剤の、ビヒクル、単剤療法、２剤療法と比較した併用療法の抗腫瘍効果（第１０日〜第５０日）。
【図２】ビヒクル、単剤療法、２剤療法と比較した、ＲＧ６１４６、ベネトクラクス及びオビヌツズマブの３剤の組み合わせでの治療後の腫瘍増殖の遅延。
【図３】ＲＧ６１４６、ベネトクラクス及びリツキシマブの３剤の、ビヒクル、単剤療法、２剤療法と比較した併用療法の抗腫瘍効果（第１０日〜第２８日）。
【発明を実施するための形態】
【００４６】
用語「抗体」は、限定されないが、全抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、及びモノクローナル抗体、キメラ抗体又は組換え抗体のような遺伝子操作された抗体、並びに本発明による特性が保持される限りそのような抗体の断面も含める様々な形態を包含する。本明細書で使用される場合、用語「モノクローナル抗体」又は「モノクローナル抗体組成物」は、単一のアミノ酸組成物の抗体分子の調製物を指す。したがって、用語「ヒトモノクローナル抗体」は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域及び定常領域を有する単一結合特異性を示す抗体を指す。一実施態様では、ヒトモノクローナル抗体は、不死化細胞に融合したヒト重鎖導入遺伝子及びヒト軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有するトランスジェニック非ヒト動物、例えばトランスジェニックマウスから得られるＢ細胞を含めるハイブリドーマにより産生される。
【００４７】
用語「キメラ抗体」は、通常は組換えＤＮＡ技術によって調製される、一つの供給源又は種由来の可変領域、すなわち結合領域と、異なる供給源又は種由来の定常領域の少なくとも一部を含む、モノクローナル抗体を指す。マウス可変領域及びヒト定常領域を含むキメラ抗体が特に好ましい。そのようなマウス／ヒトキメラ抗体は、マウス免疫グロブリン可変領域をコードするＤＮＡセグメントと、ヒト免疫グロブリン定常領域をコードするＤＮＡセグメントとを含む、発現した免疫グロブリン遺伝子の産物である。本発明によって包含される「キメラ抗体」の他の形態は、クラス又はサブクラスが元々の抗体のものから改変されたか、又は変化されたものである。そのような「キメラ」抗体は、「クラススイッチ抗体」とも称される。キメラ抗体を作製するための方法は、今や当該技術分野でよく知られている一般的な組換えＤＮＡ及び遺伝子トランスフェクション技術を含む。例えば、Morrison, S.L., et al., Proc. Natl. Acad Sci. USA 81 (1984) 6851-6855；米国特許第５２０２２３８号及び米国特許第５２０４２４４号を参照のこと。
【００４８】
用語「ヒト化抗体」は、フレームワーク又は「相補性決定領域」（ＣＤＲ）が、親免疫グロブリンのものと比較して異なった特異性を有する免疫グロブリンのＣＤＲを含むように改変された抗体を指す。好ましい実施態様では、「ヒト化抗体」を調製するために、マウスＣＤＲがヒト抗体のフレームワーク領域中にグラフトされる。例えば、Riechmann, L. et al., Nature 332 (1988) 323-327；及び Neuberger, M.S. et al., Nature 314 (1985) 268-270を参照のこと。特に好ましいＣＤＲは、キメラ抗体及び二重又は多重特異性抗体について上述した抗原認識配列を示すＣＤＲに相当する。
【００４９】
本明細書で使用する用語「ヒト抗体」は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域及び定常領域を有する抗体を含めることが意図される。ヒト抗体は当該技術分野でよく知られている（van Dijk, M.A., 及び van de Winkel, J.G., Curr. Opin. Chem. Biol. 5 (2001) 368-374）。そのような技術に基づき、多種多様な標的に対するヒト抗体を産生することができる。ヒト抗体の例は、例えば、Kellermann, S.A., et al., Curr Opin Biotechnol. 13 (2002) 593-597に記載されている。
【００５０】
本明細書において使用される「組換えヒト抗体」という用語は、ＮＳＯ細胞若しくはＣＨＯ細胞等の宿主細胞から、又はヒト免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニックである動物（例えば、マウス）から単離された抗体、或いは宿主細胞中にトランスフェクトされた組換え発現ベクターを用いて発現された抗体等、組換え手段により調製、発現、作製又は単離されたすべてのヒト抗体を含むことが意図される。そのような組換えヒト抗体は、再配列された形態でヒト生殖系列免疫グロブリンに由来する可変領域及び定常領域を有する。本発明による組換えヒト抗体はインビボ体細胞超変異に供されている。したがって、組換え抗体のＶＨ領域及びＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶＨ配列及びＶＬ配列に由来し、且つそれらに関連しているが、ｉｎ  ｖｉｖｏでヒト抗体生殖系列レパートリー内には天然に存在しない可能性がある配列である。
【００５１】
本明細書で使用される場合の用語「二重又は多重特異性抗体」は、少なくとも二つの異なる部位に対して結合特異性を有するモノクローナル抗体に関する。ある実施態様において、結合特異性の一つはＣＤ２０に対してであり、他は、任意の他の抗原に対してである。ある実施態様において、二重特異性抗体は、ＣＤ２０の２つの異なるエピトープに結合することができる。二重特異性抗体はまた、ＣＤ２０を発現する細胞に対して細胞傷害性薬物を局在させるために用いることができる。二重特異性抗体は、全長抗体又は抗体断片として調製することができる。
【００５２】
用語「完全長抗体」、「インタクトな抗体」及び「全抗体」は、本明細書中で互換的に使用され、天然型抗体構造と実質的に類似の構造を有するか、又は本明細書で定義されるＦｃ領域を含む重鎖を有する抗体を指す。
【００５３】
「抗体断片」は、インタクトな抗体が結合する抗原を結合するインタクトな抗体の一部を含むインタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例としては、限定されないが、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、ダイアボディ、直鎖状抗体；単鎖抗体分子（例えばｓｃＦｖ）、及び抗体断片から形成される多重特異性抗体を含む。本明細書で使用される場合の用語「抗体断片」は、単一ドメイン抗体も包含する。
【００５４】
本明細書中の用語「Ｆｃドメイン」又は「Ｆｃ領域」は、定常領域の少なくとも一部を含む、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。その用語は、天然配列Ｆｃ領域と変異体Ｆｃ領域を含む。ＩｇＧ重鎖のＦｃ領域の境界はわずかに変化し得るが、通常、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域はＣｙｓ２２６又はＰｒｏ２３０から重鎖のカルボキシル末端まで伸長すると定義される。しかしながら、宿主細胞により産生される抗体は、重鎖のＣ末端からの一又は複数、特に一又は二のアミノ酸の翻訳後切断を受ける場合がある。したがって、完全長重鎖をコードする特定の核酸分子の発現によって宿主細胞により産生される抗体は、完全長重鎖を含め得るか、又は、完全長重鎖の切断変異体（「切断変異体重鎖」とも称される）を含め得る。これは、重鎖の最後の二つのＣ末端アミノ酸がグリシン（Ｇ４４６）及びリジン（Ｋ４４７、番号付けはＫａｂａｔ  ＥＵ  ｉｎｄｅｘに従う）である場合に当てはまり得る。したがって、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）、又はＣ末端グリシン（Ｇｌｙ４４６）及びリジン（Ｋ４４７）は、存在してもしなくてもよい。本明細書に別途明記されていない限り、Ｆｃ領域又は定常領域内のアミノ酸残基の番号付けは、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991に記載されるように、ＥＵインデックスとも呼ばれるＥＵ番号付けシステムに従う（上記も参照のこと）。本明細書で使用される場合のＦｃドメインの「サブユニット」は、安定した自己会合が可能な、二量体Ｆｃドメインを形成する二つのポリペプチドのうちの一つ、すなわち、免疫グロブリン重鎖のＣ末端定常領域を含むポリペプチドを指す。例えば、ＩｇＧ  Ｆｃドメインのサブユニットは、ＩｇＧ  ＣＨ２及びＩｇＧ  ＣＨ３定常ドメインを含む。
【００５５】
本明細書で使用される場合、用語「結合する」又は「特異的に結合する」とは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ、好ましくは精製された野生型抗原でのプラズモン共鳴アッセイ（BIAcore, GE-Healthcare（ウプサラ、スウェーデン））での抗体の腫瘍抗原のエピトープへの結合を指す。結合親和性は、用語ｋａ（抗体／抗原複合体からの抗体の会合の速度定数）、ｋＤ（解離定数）、及びＫＤ（ｋＤ／ｋａ）により定義される。結合又は特異的結合は、１０−８Ｍ以下、好ましくは１０−８Ｍから１０−１３Ｍ（一実施態様では１０−９Ｍから１０−１３Ｍ）の結合親和性（ＫＤ）を意味する。したがって、本発明によるアフコシル化抗体は、１０−８ｍｏｌ／ｌ以下、好ましくは１０−８Ｍから１０−１３Ｍ（一実施態様では１０−９Ｍから１０−１３Ｍ）の結合親和性（ＫＤ）で腫瘍抗原に特異的に結合している。
【００５６】
本明細書で使用される場合、用語「核酸分子」は、ＤＮＡ分子及びＲＮＡ分子を含めることが意図される。核酸分子は、一本鎖又は二本鎖であり得るが、好ましくは二本鎖ＤＮＡである。
【００５７】
「定常ドメイン」は、抗体の抗原への結合には直接関与しないが、エフェクター機能（ＡＤＣＣ、補体結合、及びＣＤＣ）には関与する。
【００５８】
本明細書で使用される場合の「可変ドメイン」（軽鎖の可変ドメイン（ＶＬ）、重鎖の可変ドメイン（ＶＨ））は、抗原への抗体の結合に直接関与する軽鎖ドメイン及び重鎖の対の各々を意味する。可変ヒト軽鎖及び重鎖ドメインは、同じ一般構造を有し、各ドメインは、三つの「超可変領域」（又は相補性決定領域、ＣＤＲ）によって接続された、配列が広く保存されている四つのフレームワーク（ＦＲ）領域を含む。フレームワーク領域は、β−シート構造をとり、また、ＣＤＲは、β−シート構造を接続するループを形成し得る。各鎖におけるＣＤＲは、フレームワーク領域によりその三次元構造が保持され、もう一方の鎖に由来するＣＤＲと共に抗原結合部位を形成する。
【００５９】
用語「超可変領域」は、本明細書において使用される場合、抗原結合性を生じる抗体のアミノ酸残基を指す。超可変領域は、「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」からのアミノ酸残基を含む。「フレームワーク」又は「ＦＲ」領域は、本明細書で定義している超可変領域残基以外の可変ドメイン領域である。したがって、抗体の軽鎖及び重鎖は、Ｎ末端からＣ末端で、ドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４を含む。特に、重鎖のＣＤＲ３は、抗原結合に最も寄与する領域である。ＣＤＲ及びＦＲ領域は、Kabat, et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)の標準定義、及び／又は「超可変ループ」からのそれらの残基に従って決定される。
【００６０】
用語「アフコシル化抗体」は、フコース残基のレベルが減少したＡｓｎ２９７でＦｃ領域における改変したグルコシル化パターンを有するＩｇＧ１又はＩｇＧ３アイソタイプの（好ましくはＩｇＧ１アイソタイプの）抗体を指す。ヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ３のグリコシル化は、２個までのＧａｌ残基で終結するコアフコシル化複合二分岐オリゴ糖グリコシル化として、Ａｓｎ２９７で生じる。これらの構造は、末端Ｇａｌ残基の量に応じて、Ｇ０、Ｇ１（α−１，６若しくはα１，３）、又はＧ２グリカン残基と命名される（Raju, T.S., Bioprocess Int. 1 (2003) 44-53）。抗体Ｆｃ部分のＣＨＯ型グリコシル化は、例えばRoutier, F.H., Glycoconjugate J. 14 (1997) 201-207によって記載されている。非糖修飾のＣＨＯ宿主細胞において組換え的に発現した抗体は、通常、少なくとも８５％の量でＡｓｎ２９７でフコシル化されている。本明細書で使用されるアフコシル化抗体という用語は、そのグルコシル化パターンにおいてフコースを有しない抗体を含めることを、理解されたい。抗体における典型的なグルコシル化残基の位置は、ＥＵ番号付けシステムに従った２９７位でのアスパラギン（「Ａｓｎ２９７」）であることが一般的に知られている。
【００６１】
「ＥＵ番号付けシステム」又は「ＥＵインデックス」は、免疫グロブリン重鎖定常領域における残基を指す場合に一般的に使用される（例えば、ＥＵインデックスは、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991）で報告されており、これは参照により本明細書中に明示的に援用されている）。
【００６２】
ＣＤ２０（Ｂリンパ球抗原ＣＤ２０、Ｂリンパ球表面抗原Ｂ１、Ｌｅｕ−１６、Ｂｐ３５、ＢＭ５、及びＬＦ５としても知られる；この配列はＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベースエントリー番号Ｐ１１８３６により特徴づけられる）は、前Ｂ及び成熟Ｂリンパ球上に位置するおよそ３５ｋＤの分子量を有する疎水性膜貫通タンパク質である（Valentine, M.A. et al., J. Biol. Chem. 264 (1989) 11282-11287; Tedder, T.F., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85 (1988) 208-212; Stamenkovic, I., et al., J. Exp. Med. 167 (1988) 1975-1980; Einfeld, D.A., et al., EMBO J. 7 (1988) 711-717; Tedder, T.F., et al., J. Immunol. 142 (1989) 2560-2568）。対応するヒト遺伝子は、ＭＳ４Ａ１としても知られる、膜貫通４−ドメイン、サブファミリーＡ、メンバー１である。この遺伝子は、膜貫通４Ａ遺伝子ファミリーのメンバーをコードする。この新生タンパク質ファミリーのメンバーは、一般的な構造特徴及び同様のイントロン／エクソンスプライス境界により特徴づけられ、造血細胞及び非リンパ系組織の中で独特の発現パターンを示す。この遺伝子は、Ｂ細胞の形質細胞への展開及び分化において役割を果たすＢリンパ球表面分子をコードする。このファミリーメンバーは、ファミリーメンバーのクラスターの中でも１１ｑ１２に局在する。この遺伝子の選択的スプライシングは、同一のタンパク質をコードする二つの転写変異体をもたらす。
【００６３】
用語「ＣＤ２０」及び「ＣＤ２０抗原」は、本明細書では互換的に使用され、細胞により天然に発現するか又はＣＤ２０遺伝子でトランスフェクトされた細胞に発現するヒトＣＤ２０の変異体、アイソフォーム及び種ホモログを含める。本発明の抗体のＣＤ２０抗原への結合は、ＣＤ２０を不活性化することにより、ＣＤ２０を発現させる細胞（例えば腫瘍細胞）の死滅を媒介する。ＣＤ２０を発現させる細胞の死滅は、以下の機構：細胞死／アポトーシス誘導、ＡＤＣＣ及びＣＤＣの一又は複数により生じ得る。
【００６４】
当該技術分野で認識されているように、ＣＤ２０の同義語には、Ｂリンパ球抗原ＣＤ２０、Ｂリンパ球表面抗原Ｂ１、Ｌｅｕ−１６、Ｂｐ３５、ＢＭ５、及びＬＦ５が含められる。
【００６５】
本発明による用語「抗ＣＤ２０抗体」は、ＣＤ２抗原に特異的に結合する抗体である。抗ＣＤ２０抗体のＣＤ２０抗原への結合特性及び生物活性に応じて、二つの種類の抗ＣＤ２０抗体（Ｉ型及びＩＩ型抗ＣＤ２０抗体）を、Cragg, M.S., et al., Blood 103 (2004) 2738-2743；及びCragg, M.S., et al., Blood 101 (2003) 1045-1052に従って区別することができる（表１を参照）。
2020528061.tif 000004
【００６６】
Ｉ型抗ＣＤ２０抗体の例には、例えば、リツキシマブ（８５％以上のフコースの量を有する非アフコシル化抗体）、ＨＩ４７  ＩｇＧ３（ＥＣＡＣＣ、ハイブリドーマ）、２Ｃ６  ＩｇＧ１（国際公開第２００５／１０３０８１号に開示されるようなもの）、２Ｆ２  ＩｇＧ１（国際公開第２００４／０３５６０７号及び国際公開第２００５／１０３０８１号に開示されるようなもの）、２Ｈ７  ＩｇＧ１（国際公開第２００４／０５６３１２号に開示されるようなもの）、オファツムマブ、ベルツズマブ、オクレリズマブ、オカラツズマブ、ＰＲＯ１３１９２１及びウブリツキシマブが含められる。
【００６７】
ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の例には、例えば、ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体、ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体  ＩｇＧ１（国際公開第２００５／０４４８５９号に開示されるようなキメラヒト化ＩｇＧ１抗体）、オビヌツズマブ、トシツモマブ（ｔｏｓｉｔｕｍｕｍａｂ）（Ｂ１）、１１Ｂ８  ＩｇＧ１（国際公開第２００４／０３５６０７号に開示されるようなもの）、ＡＴ８０  ＩｇＧ１が含められる。典型的には、ＩｇＧ１アイソタイプのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体はＣＤＣ特性を示す。ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプのＩ型抗体と比較して、ＣＤＣが減少している（ＩｇＧ１アイソタイプの場合）。
【００６８】
用語「エフェクター機能」とは、抗体についての言及に使用される場合、抗体のアイソタイプにより変わる、抗体のＦｃ領域に起因する生物学的活性を指す。抗体エフェクター機能の例には：Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞障害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）、サイトカイン分泌、抗体提示細胞による免疫複合体媒介性抗原取り込み、細胞表面受容体（Ｂ細胞受容体）のダウンレギュレーション、及びＢ細胞の活性化が含まれる。
【００６９】
エフェクター機能の増加は、当該技術分野で知られる方法により測定することができる。ＡＤＣＣを測定するための適切なアッセイを本明細書に記載する。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイのその他の例は、米国特許第５，５００，３６２号； Hellstrom et al. Proc Natl Acad Sci USA 83, 7059-7063 (1986)及びHellstrom et al., Proc Natl Acad Sci USA 82, 1499-1502 (1985)；米国特許第５，８２１，３３７号； Bruggemann et al., J Exp Med 166, 1351-1361 (1987)に記載されている。あるいは、非放射性アッセイ法が用いられてもよい（例えば、フローサイトメトリーのためのＡＣＴＩＴＭ非放射性細胞傷害性アッセイ（CellTechnology, Inc. Mountain View, CA）；及びＣｙｔｏＴｏｘ  ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Promega, Madison, WI)）。このようなアッセイにおいて有用なエフェクター細胞は、末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む。代替的又は追加的に、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、例えば、Clynes et al., Proc Natl Acad Sci USA 95, 652-656 (1998)において開示されているような動物モデルにおいて、ｉｎ  ｖｉｖｏで評価され得る。Ｆｃ受容体への結合は、例えば、ＥＬＩＳＡにより、又はＢＩＡｃｏｒｅ機器（GE Healthcare）等の標準的な器具類及び組換え発現により得ることができるようなＦｃ受容体を使用する表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により、容易に決定することができる。特定の実施態様によれば、活性化Ｆｃ受容体に対する結合親和性は、２５℃でＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｔ１００機（GE Healthcare）を使用する表面プラズモン共鳴により測定される。あるいは、抗体のＦｃ受容体への結合親和性は、特定のＦｃ受容体、例えばＦｃγＩＩＩａ受容体を発現させるＮＫ細胞等を発現させると知られている細胞株を使用して評価され得る。Ｃ１ｑ結合アッセイはまた、抗体がＣ１ｑを結合することができるかどうか、したがって、ＣＤＣ活性を有するかどうかを決定するために行われ得る。例えば、国際公開第２００６／０２９８７９号及び国際公開第２００５／１００４０２号のＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照のこと。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを行うことができる（例えば、Gazzano-Santoro et al., J Immunol Methods 202, 163 (1996); Cragg et al., Blood 101, 1045-1052 (2003);及びCragg and Glennie, Blood 103, 2738-2743 (2004)を参照のこと）。
【００７０】
許容されるｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＡＤＣＣアッセイの一つは以下の通りである：
１）アッセイは、抗体の抗原結合領域によって認識される標的抗原を発現させると知られている標的細胞を使用し；
２）アッセイは、エフェクター細胞として、無作為に選択された健康なドナーの血液から単離された、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を使用し；
３）アッセイは、以下のプロトコール：
に従って実行され、
ｉ）ＰＢＭＣを、標準的な密度遠心分離手順を使用して単離し、ＲＰＭＩ細胞培地に５×１０６細胞／ｍｌで懸濁させ；
ｉｉ）標的細胞を、標準的な組織培養法により増殖し、９０％超の生存率を有する指数増殖期から採取し、ＲＰＭＩ細胞培地で洗浄し、１００マイクロキュリーの５１Ｃｒで標識し、１０５細胞／ｍｌの密度で細胞培地に再懸濁させ；
ｉｉｉ）上の最終的な標的細胞懸濁液１００マイクロリットルを、９６ウェルマイクロタイタープレートの各ウェルに移し；
ｉｖ）抗体を細胞培地で４０００ｎｇ／ｍｌから０．０４ｎｇ／ｍｌに連続希釈し、得られた抗体溶液の５０マイクロリットルを９６ウェルマイクロタイタープレートの標的細胞に添加し、上の全濃度範囲を網羅する様々な抗体濃度で３回試験し；
ｖ）最大放出（ＭＲ）コントロールのために、標識された標的細胞を含有するプレートの３つの追加のウェルに、抗体溶液（上のｉｖ）の代わりに５０マイクロリットルの２％（ＶＮ）非イオン性洗剤の水溶液（Nonidet, Sigma, St. Louis）を入れ；
ｖｉ）自発放出（ＳＲ）コントロールのために、標識された標的細胞を含有するプレートの３つの追加のウェルに、抗体溶液（上のｉｖ）の代わりに５０マイクロリットルのＲＰＭＩ細胞培地を入れ；
ｖｉｉ）その後、９６ウェルマイクロタイタープレートを５０×ｇで１分間遠心分離機にかけ、４℃で１時間インキュベートし；
ｖｉｉｉ）５０マイクロリットルのＰＢＭＣ懸濁液（上のｉ）を各ウェルに添加して２５：１のエフェクター：標的細胞の比を得、プレートを５％ＣＯ２雰囲気下、３７℃で４時間インキュベーターに置き；
ｉｘ）各ウェルからの無細胞上清を採取し、実験的放出放射能（ＥＲ）をガンマカウンターを使用して定量し；
ｘ）特定の溶解の割合を式（ＥＲ−ＭＲ）／（ＭＲ−ＳＲ）×１００に従って各抗体濃度について計算し、ここで、ＥＲは、その抗体濃度についての定量された平均放射能（上のｉｘを参照）であり、ＭＲは、ＭＲコントロール（上のｖを参照）についての定量された平均放射能（上にｉｘを参照）であり、ＳＲは、ＳＲコントロール（上のｖｉを参照）についての定量された平均放射能（上のｉｘを参照）である；
４）「ＡＤＣＣの増加」は、上で試験された抗体濃度範囲内で観察された特定の溶解の最大割合における増加、及び／又は上で試験された抗体濃度範囲内で観察された特定の溶解の最大割合の２分の１を達成するのに必要とされる抗体濃度における減少のいずれかとして定義される。ＡＤＣＣの増加とは、当業者に知られている同一の標準的な産生、精製、配合及び貯蔵方法を使用し、同一の種類の宿主細胞により産生されたが、ＧｎＴＩＩＩを過剰発現するように操作された宿主細胞によっては産生されていない、同一の抗体により媒介された、上記アッセイで測定されたＡＤＣＣに対するものである。
【００７１】
「ＡＤＣＣの増加」は、前記抗体の糖鎖工学によって得ることができ、これは、モノクローナル抗体の前記天然の細胞媒介性エフェクター機能を、Umana, P., et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180及び米国特許第６，６０２，６８４号に記載されるようなそれらのオリゴ糖成分を操作することにより増強することを意味する。
【００７２】
用語「補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）」は、補体の存在下での、本発明の抗体によるヒト腫瘍標的細胞の溶解を指す。ＣＤＣは、好ましくは、補体の存在下で、本発明による細胞を発現させるＣＤ２０の調製物の抗ＣＤ２０抗体での処理により測定される。抗体が１００ｎＭの濃度で４時間後に腫瘍細胞の２０％以上の溶解（細胞死）を誘導する場合、ＣＤＣが見つかる。好ましくは、アッセイは、５１Ｃｒ又はＥｕ標識腫瘍細胞及び放出された５１Ｃｒ及びＥｕの測定により実施される。コントロールには、補体を含むが抗体を含まない腫瘍標的細胞のインキュベーションが含められる。
【００７３】
用語「ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体」は、国際公開第２００５／０４４８５９号及び国際公開第２００７／０３１８７５号に開示されるようなヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体を指し、それらは、ＩｇＧ１からのヒト定常ドメインでのキメラ化及びその後のヒト化により、マウスのモノクローナル抗ＣＤ２０抗体  Ｂ−Ｌｙ１マウス重鎖（ＶＨ）：配列番号１の可変領域；マウス軽鎖（ＶＬ）：配列番号２の可変領域（Poppema, S. and Visser, L., Biotest Bulletin 3 (1987) 131-139を参照のこと）から得られた（国際公開第２００５／０４４８５９号及び国際公開第２００７／０３１８７５号を参照のこと）。これらの「ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体」は、国際公開第２００５／０４４８５９号及び国際公開第２００７／０３１８７５号で詳細に開示されている。
【００７４】
本発明による用語「ＢＥＴ阻害剤」は、約０．００１μＭから約２μＭのＩＣ５０を有するＢＥＴタンパク質の活性を妨げる薬剤を指す。
【００７５】
本発明による用語「Ｂｃｌ−２阻害剤」は、約０．００１μＭから約２μＭのＩＣ５０を有するＢｃｌ−２タンパク質の活性を妨げる薬剤を指す。
【００７６】
「塩」は、薬学的に許容される塩のような化合物の塩を指す。そのような塩は、アルカリ金属（カリウム、ナトリウム等）を有する塩、アルカリ土類金属（カルシウム、マグネシウム等）を有する塩、アンモニウム塩、薬学的に許容される有機アミン（テトラメチルアンモニウム、トリエチルアミン、メチルアミン、ジメチルアミン、シクロペンチルアミン、ベンジルアミン、フェネチルアミン、ピペリジン、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、リジン、アルギニン、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン等）を有する塩、及び酸付加塩（無機酸塩（塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩等）及び有機酸塩（酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、シュウ酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、安息香酸塩、クエン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、イセチオン酸塩、グルクロン酸塩、グルコン酸塩等など））により例示することができる。
【００７７】
「ＩＣ５０」は、特定の測定活性の５０％を阻害するために必要とされる特定の化合物の濃度を指す。
【００７８】
オリゴ糖成分は、物理的安定性、プロテアーゼ攻撃に対する耐性、免疫系との相互作用、薬物動態、及び特定の生物活性を含めた治療用の糖タンパク質の有効性に関連する特性に著しく影響する。そのような特性は、オリゴ糖の存在又は不存在だけではなく、その特定の構造にも依拠し得る。オリゴ糖構造と糖タンパク質機能の間でいくつかの一般化を行うことができる。例えば、特定のオリゴ糖構造は、特定の糖結合タンパク質との相互作用を通じた血流から糖タンパク質の迅速なクリアランスを媒介するが、他の構造は抗体により結合され、望ましくない免疫反応を引き起こす可能性がある（Jenkins, N., et al., Nature Biotechnol. 14 (1996) 975-981）。
【００７９】
哺乳動物の細胞は、ヒトへの適用に最も適合した形態でタンパク質をグリコシル化する能力があるため、治療用の糖タンパク質の産生にとって優れた宿主である（Cumming, D.A., et al., Glycobiology 1 (1991) 115-130; Jenkins, N., et al., Nature Biotechnol. 14 (1996) 975-981）。細菌はタンパク質をめったにグリコシル化せず、他の種類の一般的な宿主、例えば酵母、糸状菌、昆虫細胞及び植物細胞と同様に、血流からの迅速なクリアランス、望ましくない免疫相互作用及びいくつかの特定の場合は生物活性の減少に関連するグリコシル化パターンを生じさせる。哺乳動物の細胞の中でも、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞は、過去２０年間で最も一般的に使用されてきた。適切なグリコシル化パターンをもたらすことに加えて、これらの細胞は、遺伝的に安定した、生産性の高いクローン細胞の一貫した発生を可能にする。それらは、血清を含まない媒体を使用して単一のバイオリアクター中で高密度に培養することができ、安全で再現性のあるバイオプロセスの展開を可能にする。他の一般的に使用される動物細胞には、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、ＮＳＯ−及びＳＰ２／０−マウス骨髄腫細胞が含められる。より最近では、トランスジェニック動物からの産生も試験されてきた（Jenkins, N., et al., Nature Biotechnol. 14 (1996) 975-981）。
【００８０】
全ての抗体は、重鎖定常領域の保存位置で糖鎖構造を含有し、各アイソタイプは、Ｎ結合型糖鎖構造の異なるアレイを有しており、このことは、タンパク質の集合、分泌又は機能的活性に様々な影響を与える（Wright, A., and Morrison, S.L., Trends Biotech. 15 (1997) 26-32)。結合したN結合型糖鎖の構造は、処理の程度に応じてかなり異なり、高マンノース型、多分岐型、及び二分岐複合オリゴ糖を含むことができる（Wright, A., and Morrison, S.L., Trends Biotech. 15 (1997) 26-32）。典型的には、モノクローナル抗体でさえ複数のグリコフォームとして存在するように、特定のグリコシル化部位に結合したコアオリゴ糖構造の不均一な処理が存在する。同様に、細胞株間で抗体のグリコシル化に大きな違いが生じることが示されており、異なる培養条件下で成長した所与の細胞株ではわずかな違いさえ見られる（Lifely, M.R., et al., Glycobiology 5 (1995) 813-822）。
【００８１】
単純な産生プロセスを維持し、重大な望ましくない副作用を潜在的に回避しながら、効力の大幅な向上を得るための１つの方法は、Umana, P. et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180及び米国特許第6,602,684号に記載されているようにオリゴ糖成分を操作することによりモノクローナル抗体の天然の細胞媒介性エフェクター機能を強化することである。がん免疫療法において最も一般的に使用される抗体であるＩｇＧ１型抗体は、各ＣＨ２ドメインにおいて、Ａｓｎ２９７に保存されたＮ結合グリコシル化部位を有する糖タンパク質である。Ａｓｎ２９７に結合した２つの複合二分岐オリゴ糖はＣＨ２ドメイン間に包埋されて、ポリペプチド骨格を有する広範な接触部を形成し、それらの存在は、抗体が抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）等のエフェクター機能を媒介するのに必須である（Lifely, M.R., et al., Glycobiology 5 (1995) 813-822; Jefferis, R., et al., Immunol. Rev. 163 (1998) 59-76; Wright, A., and Morrison, S.L., Trends Biotechnol. 15 (1997) 26-32）。
【００８２】
二分されたオリゴ糖の形成を触媒するグリコシルトランスフェラーゼであるβ（１，４）−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（「ＧｎＴＩＩＩ７ｙ」）のチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞内での過剰発現は、操作されたＣＨＯ細胞により産生された抗神経芽腫キメラモノクローナル抗体（ｃｈＣＥ７）のｉｎ  ｖｉｔｒｏＡＤＣＣ活性を著しく増大させることが、以前に示された（Umana, P. et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180；及び国際公開第９９／１５４３４２号を参照のこと、これらの全内容は、参照により本明細書に援用される）。抗体ｃｈＣＥ７は、ＧｎＴＩＩＩが存在しない標準的な産業用細胞株において産生される場合、高い腫瘍親和性及び特異性を有するが、臨床的に有用である効力は非常に小さい、非コンジュゲートモノクローナル抗体の大きいクラスに属する（Umana, P., et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180）。この研究は最初に、ＡＤＣＣ活性の大きな増加は、ＧｎＴＩＩＩを発現させるように抗体産生細胞を操作することにより得られ、これはさらに天然に存在する抗体においてみられるレベルを超える、二分された非フコシル化オリゴ糖を含めた、定常領域（Ｆｃ）−会合された二分されたオリゴ糖の割合の増加にもつながることを示した。
【００８３】
用語「治療する方法」、「治療方法」又はこれと同義の用語は、例えばがんに適用される場合、患者におけるがん細胞の数を減少させ、又は消滅させるように、又はがんの症候を緩和するように設計された手順又は行動方針を指す。がん又は他の増殖性疾患の「治療方法」は、がん細胞若しくは他の疾患が実際に消滅され、細胞の数若しくは疾患が実際に低減され、又はがん若しくは他の疾患の症状が実際に緩和されることを必ずしも意味するとは限らない。がんを治療する方法は、しばしば、成功の確率が低くても、患者の既往歴や推定生存期間を前提として、総合的に有益な行動方針を誘導すると考えられる治療方法が実施される。
【００８４】
用語「組み合わせ」、「共投与」又は「共投与すること」は、一又は複数の製剤での、本発明によるＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体の投与を指す。共投与は、同時であっても、又は任意の順序で逐次的であってもよく、二つ（又はすべて）の活性剤がそれらの生物活性を同時に発揮する期間があることが好ましい。三つの治療剤が逐次的に共投与されるとき、例えば、それら全てを三回の別個の投与で同日に投与してもよく、又はそれらの薬剤の一つを第１日に、第２及び第３の薬剤を第２日から第７日、若しくは第２日から第４日に共投与してもよい。よって、一実施態様では、用語「逐次的に」とは、第１の成分の投与後７日又は４日以内を意味し；用語「同時に」とは、同時又は同日を意味する。抗ＣＤ２０抗体、Ｂｃｌ−２阻害剤及びＢＥＴ阻害剤の維持量に関する用語「共投与」とは、治療サイクルが全ての薬剤に適切である、例えば１週間毎である場合、維持量を同時に共投与することができること、又はＢｃｌ−２阻害剤及びＢＥＴ阻害剤を、例えば第１日から第３日毎に投与することができ、抗ＣＤ２０抗体を１週間毎に投与することができること、又は維持量を１日内若しくは数日内に逐次的に共投与することができることのいずれかを意味する。
【００８５】
それぞれの化合物又は組み合わせの量が、研究者、獣医、医師若しくは他の臨床家が求める組織、系、動物若しくはヒトの生物学的又は医学的奏功を引き出す量である、「治療的有効量」（又は単に「有効量」）で抗体及び阻害剤が患者に投与されることは自明である。
【００８６】
ＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体の共投与の量及び共投与のタイミングは、治療される患者のタイプ（人種、性別、年齢、体重等）及び状態、並びに治療される疾患又は状態の重症度に依拠する。
【００８７】
ＢＥＴ阻害剤は、好ましくは皮下投与される。
【００８８】
ＢＥＴ阻害剤は、好ましくは、約０．３ｍｇ／ｋｇ／ｄから約０．６５ｍｇ／ｋｇ／ｄの用量で投与される。
【００８９】
ＢＥＴ阻害剤は、好ましくは、３週間毎（すなわち、２週間投与、１週間休薬）に１４日連続して毎日投与される。
【００９０】
ＢＥＴ阻害剤は、好ましくは、約０．３ｍｇ／ｋｇ／ｄから約０．６５ｍｇ／ｋｇ／ｄの用量で皮下投与される。
【００９１】
ＢＥＴ阻害剤は、好ましくは、約０．３ｍｇ／ｋｇ／ｄから約０．６５ｍｇ／ｋｇ／ｄの用量で、３週間毎（すなわち、２週間投与、１週間休薬）に１４日連続して皮下投与される。
【００９２】
ＢＥＴ阻害剤は好ましくはＲＧ６１４６である。
【００９３】
ＢＥＴ阻害剤、特にＲＧ６１４６の投与は、最大３週間、すなわち１、２又は３週間中断することができる。
【００９４】
Ｂｃｌ−２阻害剤は、好ましくは経口投与される。
【００９５】
Ｂｃｌ−２阻害剤は、好ましくは、約４００ｍｇ／ｄから約８００ｍｇ／ｄの用量で投与される。
【００９６】
Ｂｃｌ−２阻害剤は、好ましくは、約４００ｍｇ／ｄから約８００ｍｇ／ｄの用量で経口投与される。
【００９７】
Ｂｃｌ−２阻害剤は、好ましくは、毎日投与される。これは、連続投与と呼ばれる。
【００９８】
Ｂｃｌ−２阻害剤は、好ましくは、約４００ｍｇ／ｄから約８００ｍｇ／ｄの用量で、毎日経口投与される。
【００９９】
Ｂｃｌ−２阻害剤は、好ましくはベネトクラクスである。
【０１００】
抗ＣＤ２０抗体は、好ましくは静脈内投与される。
【０１０１】
抗ＣＤ２０抗体は、好ましくは、約３７５ｍｇ／ｍ２の用量で（体表面積投与量）で投与される。
【０１０２】
抗ＣＤ２０抗体は、好ましくは毎週（すなわち、１週間に１回）投与される。
【０１０３】
抗ＣＤ２０抗体は、好ましくは、約３７５ｍｇ／ｍ２の用量で（体表面積投与量）で静脈内投与される。
【０１０４】
抗ＣＤ２０抗体は、好ましくは、約３７５ｍｇ／ｍ２の用量で（体表面積投与量）で毎週、すなわち、１週間に１回約３７５ｍｇ／ｍ２が投与される。
【０１０５】
例えば、平均のサイズ又は体表面積の成人に対して、抗ＣＤ２０抗体の用量は約１０ｍｇ／ｋｇである。
【０１０６】
抗ＣＤ２０抗体は、好ましくは、リツキシマブ又はオビヌツズマブ、より好ましくはリツキシマブである。
【０１０７】
ＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体の投与サイクルは、好ましくは同日に開始される。
【０１０８】
疾患の種類及び重症度に応じて、以下の量が投与され得る：約０．３ｍｇ／ｋｇ／ｄから約０．６５ｍｇ／ｋｇ／ｄのＢＥＴ阻害剤、好ましくはＲＧ６１４６；約４００ｍｇ／ｄから約８００ｍｇ／ｄのＢｃｌ−２阻害剤、好ましくはベネトクラクス；及び約３７５ｍｇ／ｍ２（体表面積投与量）の抗ＣＤ２０抗体、好ましくはリツキシマブ。
【０１０９】
特定の有利な組み合わせは、約０．３ｍｇ／ｋｇ／ｄから約０．６５ｍｇ／ｋｇ／ｄのＢＥＴ阻害剤、好ましくはＲＧ６１４６を３週間毎（すなわち、２週間投与、１週間休薬）に１４日連続して毎日投与し；約４００ｍｇ／ｄから約８００ｍｇ／ｄのＢｃｌ−２阻害剤、好ましくはベネトクラクスを連続的に（すなわち、毎日）投与し；約３７５ｍｇ／ｍ２（体表面積投与量）の抗ＣＤ２０抗体、好ましくはリツキシマブを毎週（すなわち、１週間に１回）投与することである。
【０１１０】
さらなる特定の有利な組み合わせは、約０．３ｍｇ／ｋｇ／ｄから約０．６５ｍｇ／ｋｇ／ｄのＢＥＴ阻害剤、好ましくはＲＧ６１４６を３週間毎（すなわち、２週間投与、１週間休薬）に１４日連続して毎日皮下投与し；約４００ｍｇ／ｄから約８００ｍｇ／ｄのＢｃｌ−２阻害剤、好ましくはベネトクラクスを連続的に（すなわち、毎日）経口投与し；約３７５ｍｇ／ｍ２（体表面積投与量）の抗ＣＤ２０抗体、好ましくはリツキシマブを毎週（すなわち、１週間に１回）静脈内投与することである。
【０１１１】
あるいは、抗ＣＤ２０抗体、特にＩＩ型抗ＣＤ２０抗体、特にオビヌツズマブは、以下のような２８日の６サイクルで投与され得る：第１サイクルで第１、８及び１５日に約１０００ｍｇ；第２〜６サイクルで第１日に約１０００ｍｇ。
【０１１２】
オビヌツズマブも好ましくは静脈内投与される。
【０１１３】
疾患の種類及び重症度に応じて、以下の量も投与され得る：約０．３ｍｇ／ｋｇ／ｄから約０．６５ｍｇ／ｋｇ／ｄのＢＥＴ阻害剤、好ましくはＲＧ６１４６；約４００ｍｇ／ｄから約８００ｍｇ／ｄのＢｃｌ−２阻害剤、好ましくはベネトクラクス；及び２８日サイクルの第１、８及び１５日に約１０００ｍｇの抗ＣＤ２０抗体、好ましくはオビヌツズマブ。
【０１１４】
特定の有利な組み合わせは、約０．３ｍｇ／ｋｇ／ｄから約０．６５ｍｇ／ｋｇ／ｄのＢＥＴ阻害剤、好ましくはＲＧ６１４６を３週間毎（すなわち、２週間投与、１週間休薬）に１４日連続して毎日投与し；約４００ｍｇ／ｄから約８００ｍｇ／ｄのＢｃｌ−２阻害剤、好ましくはベネトクラクスを連続的に（すなわち、毎日）投与し；約１０００ｍｇの抗ＣＤ２０抗体、好ましくはオビヌツズマブを第１サイクル（２８日サイクル）の第１、８及び１５日に、及び約１０００ｍｇの抗ＣＤ２０抗体、好ましくはオビヌツズマブを第２〜６サイクル（２８日サイクル）の第１日に投与することである。
【０１１５】
さらなる特定の有利な組み合わせは、約０．３ｍｇ／ｋｇ／ｄから約０．６５ｍｇ／ｋｇ／ｄのＢＥＴ阻害剤、好ましくはＲＧ６１４６を３週間毎（すなわち、２週間投与、１週間休薬）に１４日連続して毎日皮下投与し；約４００ｍｇ／ｄから約８００ｍｇ／ｄのＢｃｌ−２阻害剤、好ましくはベネトクラクスを連続的に（すなわち、毎日）経口投与し；約１０００ｍｇの抗ＣＤ２０抗体、好ましくはオビヌツズマブを第１サイクル（２８日サイクル）の第１、８及び１５日に皮下投与、及び抗ＣＤ２０抗体、好ましくはオビヌツズマブを第２〜６サイクル（２８日サイクル）の第１日に皮下投与することである。
【０１１６】
上の投与計画では、ＢＥＴ阻害剤、特にＲＧ６１４６の投与は、最大３週間、すなわち１、２又は３週間中断することができる。
【０１１７】
上の投与計画では、Ｂｃｌ−２阻害剤、特にベネトクラクスの投与は、最大３週間、すなわち１、２又は３週間中断することができる。
【０１１８】
化学療法剤のさらなる共投与がある場合、推奨用量は変化し得る。
【０１１９】
本発明は、ＤＬＢＣＬに罹患しているそのような患者における転移又はさらなる播種を予防又は減少させるのに有用である。この発明は、そのような患者の生存期間を増加させること、そのような患者の無増悪生存を増加させること、奏功期間を増加させること、生存期間、無増悪生存、奏効率又は奏功期間により測定された場合に治療された患者の統計的に有意で臨床的に有意義な改善をもたらすことに有用である。好ましい実施態様では、この発明は、患者群における奏効率を増加させることに有用である。
【０１２０】
本発明に関連して、追加のその他の細胞傷害剤、化学療法剤若しくは抗がん剤、又はそのような薬剤（例えばサイトカイン）の効果を高める化合物若しくは電離放射線が使用され得る。このような分子は、好適には、意図した目的に有効な量で組み合わされて存在する。
【０１２１】
そのような追加の薬剤は、例えば以下を含む：シクロホスファミド（ＣＴＸ；例えば、シトキサン（登録商標））、クロラムブシル（ＣＨＬ；例えば、ロイケラン（登録商標））、シスプラチン（ＣｉｓＰ；例えば、プラチノール（登録商標））、ブスルファン（例えば、ミレラン（登録商標））、メルファラン、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ストレプトゾトシン、トリエチレンメラミン（ＴＥＭ）、マイトマイシンＣ等のアルキル化剤又はアルキル化作用を有する薬剤；メトトレキサート（ＭＴＸ）、エトポシド（ＶＰ１６；例えば、べプシド（登録商標））、６−メルカプトプリン（６ＭＰ）、６−チオグアニン（６ＴＧ）、シタラビン（Ａｒａ−Ｃ）、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、カペシタビン（例えば、ゼローダ（登録商標））、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）等の代謝拮抗剤；アクチノマイシンＤ、ドキソルビシン（ＤＸＲ；例えば、アドリアマイシン（登録商標））、ダウノルビシン（ダウノマイシン）、ブレオマイシン、ミスラマイシン等の抗生物質；ビンカアルカロイド（例えば、ビンクリスチン（ＶＣＲ）、ビンブラスチン、及び同類のもの）等のアルカロイド；並びに、パクリタキセル（例えば、タキソール（登録商標））や、パクリタキセル誘導体等の他の抗腫瘍剤、細胞増殖抑制剤、デキサメサゾン（ＤＥＸ；例えば、デカドロン（登録商標））等のグルココルチコイド、及び、プレドニゾン等のコルチコステロイド、ヒドロキシウレア等のヌクレオシド酵素阻害剤、アスパラギナーゼ、ロイコボリンや他の葉酸誘導体等のアミノ酸除去酵素、及び類似の様々な抗腫瘍剤。以下の薬剤も、追加の薬剤として使用されてもよい：アミホスチン（ａｒｎｉｆｏｓｔｉｎｅ）（例えば、エチオール（登録商標））、ダクチノマイシン、メクロレタミン（ナイトロジェンマスタード）、ストレプトゾシン、シクロホスファミド、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、ドキソルビシン  リポ（例えば、ドキシル（登録商標））、ゲムシタビン（例えば、ジェムザール（登録商標））、ダウノルビシン  リポ（例えば、ダウノキソーム（登録商標））、プロカルバジン、マイトマイシン、ドセタキセル（例えば、タキソテール（登録商標））、アルデスロイキン、カルボプラチン、オキサリプラチン、クラドリビン、カンプトセシン、ＣＰＴ  １１（イリノテカン）、１０−ヒドロキシ  ７−エチル−カンプトセシン（ＳＮ３８）、フロクスウリジン、フルダラビン、イホスファミド、イダルビシン、メスナ、インターフェロン  ベータ、インターフェロン  アルファ、ミトキサントロン、トポテカン、ロイプロリド、メゲストロール、メルファラン、メルカプトプリン、プリカマイシン、ミトタン、ペグアスパルガーゼ、ペントスタチン、ピポブロマン、プリカマイシン、タモキシフェン、テニポシド、テストラクトン、チオグアニン、チオテパ、ウラシルマスタード、ビノレルビン又はクロラムブシル。
【０１２２】
化学療法レジメンにおける上記の細胞傷害剤及び抗がん剤並びにタンパク質キナーゼ阻害剤のような抗増殖性標的特異的抗がん剤の使用は、一般に、がん治療の分野において特徴が明らかにされており、本明細書におけるその使用も、耐性及び有効性のモニタリング並びに投与経路及び投与量の制御について、幾らか調節した上で、同様に考慮される。例えば、細胞傷害剤の実際の用量は、組織培養法を用いることにより決定される患者の培養細胞応答に応じて変化し得る。一般に、用量は、追加の他の薬剤の非存在下で使用される量と比較して減らされる。
【０１２３】
有効な細胞傷害剤の典型的な用量は、製造者によって推奨される範囲であってよく、インビトロ反応又は動物モデルにおける反応により指示される場合、最大約１桁までの範囲で濃度又は量を減らすことができる。したがって、実際の用量は、医師の判断、患者の状態、及び初代培養悪性細胞若しくは組織培養試料のインビトロ応答性に基づくか、又は適切な動物モデルにおいて観察される応答に基づく治療法の有効性によって決まる。
【０１２４】
本発明に関連して、電離放射線の有効量が実施されてもよく、且つ／又は放射性医薬品が使用されてもよい。放射線源は、治療されるべき患者の外部又は内部のいずれかにあってよい。放射線源が患者に対して外部である場合、治療は外部照射療法（ＥＢＲＴ）として知られている。放射線源が患者に対して内部である場合、治療は近接照射療法（ＢＴ）と称される。本発明に関連して使用される放射性原子は、ラジウム、イットリウム−９０、セシウム−１３７、イリジウム−１９２、アメリシウム−２４１、金−１９８、コバルト−５７、銅−６７、テクネチウム−９９、ヨウ素−１２３、ヨウ素−１３１、及びインジウム−１１１を含むがこれらに限定されない群から選択され得る。抗体をそのような放射性同位体で標識することも可能である。
【０１２５】
放射線療法は、切除不可能若しくは手術不可能な腫瘍及び／又は腫瘍転移物を抑制するための標準的な治療である。放射線療法が化学療法と併用された場合に、改善した結果が見られた。放射線療法は、標的領域に送達された高用量の放射線が腫瘍組織及び正常組織の両方において生殖細胞の死をもたらすという原理に基づいている。放射線投与レジメンは、一般的に、放射線吸収用量（Ｇｙ）、時間及び細分化の観点から定義され、がん専門医によって注意深く定められる必要がある。患者が受ける放射線量は、様々な考慮に依拠することになるが、二つの最も重要なことは、体の他の重要な構造又は臓器に対する腫瘍の位置及び腫瘍が広がる程度である。放射線療法を受ける患者の典型的な治療過程は、約１．８から２．０Ｇｙの単回一日画分で週に５日、総用量で１０から８０Ｇｙ患者に投与される、１から６週間にわたる治療スケジュールである。本発明の好ましい実施態様において、ヒト患者の腫瘍が本発明の併用療法と放射線とを用いて治療される場合に相乗効果がある。換言すれば、本発明の組み合わせを含む薬剤による腫瘍増殖の阻害は、放射線と組み合わされた時に、場合により追加の化学療法剤又は抗がん剤と組み合わされた時に、亢進される。アジュバント放射線療法のパラメーターは、例えば、国際公開第９９／６００２３号に包含されている。
【０１２６】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」又は「薬学的に許容される添加剤」という用語は、薬物投与に適合するすべての物質を含むことを意図し、そのような物質には、溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌性及び抗真菌性薬剤、等張及び吸収遅延剤、並びに薬物投与に適合する他の物質及び化合物が含まれる。但し、活性化合物と適合性である限り従来の媒体又は薬剤のいずれについても、本発明の組成物におけるその使用が考慮される。補足的活性化合物も、組成物中に取り込むことができる。
【０１２７】
薬学的組成物は、本発明によるＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体を薬学的に許容される無機若しくは有機担体又は添加剤で加工することにより得ることができる。例えば、そのような担体として、ラクトース、コーンスターチ又はそれらの誘導体、タルク、ステアリン酸又はその塩などが、錠剤、コーティング錠、ドラジェ及び硬ゼラチンカプセル剤に使用され得る。軟ゼラチンカプセル剤に適した担体は、例えば、植物油、ワックス、油脂、半固体物質及び液状ポリオールなどである。しかしながら、活性物質の性質により、軟ゼラチンカプセル剤の場合には担体は通常必要とされない。溶液及びシロップの製造に適した担体は、例えば、水、ポリオール、グリセロール、植物油などである。坐剤に適した担体は、例えば、天然油又は硬化油、ワックス、油脂、半液状又は液状ポリオールなどである。
【０１２８】
さらに、薬学的組成物は、防腐剤、可溶化剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、甘味剤、着色剤、香味剤、浸透圧を変えるための塩、バッファー、マスキング剤、又は抗酸化剤を含有することができる。それらは、さらに他の治療的に有効な物質を含むこともできる。
【０１２９】
抗ＣＤ２０抗体の薬学的組成物は、単独で、凍結乾燥製剤又は水溶液の形で、所望の純度を有する抗体を任意選択的な薬学的に許容される担体、添加又は安定剤と混合することにより（Remington’s Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. (ed.) (1980)）、保存用に調製することができる。許容される担体、添加剤、又は安定剤は、使用される投薬量及び濃度でレシピエントに毒性でなく、これには、リン酸塩、クエン酸塩及び他の有機酸のような緩衝液；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（例えば、オクタデシルジメチオルベンジルアンモニウムクロライド；ヘキサメトニウムクロライド；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチル若しくはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチル若しくはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、若しくは免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン若しくはリジン；マンノサッカライド、ジサッカライド、及びグルコース、マンノース若しくはデキストリンを含む他の炭水化物；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロース若しくはソルビトール；塩形成対イオン、例えば、ナトリウム、金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；及び／又はＴＷＥＥＮＴＭ、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳＴＭ若しくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性剤が挙げられる。
【０１３０】
ＢＥＴ阻害剤の薬学的組成物とＢｃｌ−２阻害剤の薬学的組成物は、経口、鼻腔、局所（頬側及び舌下を含む）、直腸、膣内及び／又は非経口投与に適したものを含める。簡便には、組成物は、単位投与形態で提示することができ、薬学の分野において周知の何れかの方法により調製することができる。単一投与形態を製造するために担体材料と組み合わせることができる活性成分の量は、治療されている宿主、並びに特定の投与様式によって様々である。単一投与形態を製造するために担体材料と組み合わせることができる活性成分の量は、通常、治療効果を生むＢｃｌ−２阻害剤又はＢＥＴ阻害剤の量である。一般的に、１００パーセントのうち、この量は、約１パーセントから約９９パーセント、好ましくは約５パーセントから約７０パーセント、最も好ましくは約１０パーセントから約３０パーセントの活性成分の範囲となる。このような組成物を調製する方法は、Ｂｃｌ−２阻害剤又はＢＥＴ阻害剤を、担体及び任意選択的に一又は複数の副成分と会合させる工程を含む。一般に、薬学的組成物は、Ｂｃｌ−２阻害剤又はＢＥＴ阻害剤を、液体担体、又は微粉固体担体、又はそれら両方と均一且つ密接に会合させ、次いで必要に応じて製品を成形することにより調製される。経口投与に適した薬学的組成物は、カプセル剤、カシェ剤、サシェ剤、丸薬、錠剤、ロゼンジ（香味料ベース、通常スクロース及びアカシア又はトラガカントを使用）、粉末、顆粒の形態、又は水性若しくは非水性液体中の溶液又は懸濁液としての形態、又は水中油型若しくは油中水型液体エマルションの形態としての形態、又はエリキシル又はシロップとしての形態、又は香錠（ゼラチン及びグリセリン、又はスクロース及びアカシアのような不活性ベースを使用）及び／又は洗口剤のようなものとしての形態であってよく、それらはそれぞれ、活性成分として、所定量のＢｃｌ−２阻害剤又はＢＥＴ阻害剤を含有する。Ｂｃｌ−２阻害剤及びＢＥＴ阻害剤はまた、ボーラス、舐剤又はペーストとして投与されてもよい。
【０１３１】
本発明のさらなる実施態様では、ＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体は、一、二又は三つの別個の薬学的組成物に配合される。
【０１３２】
また、活性成分はまた、例えば、コアセルベーション技術又は界面重合（interracial polymerization）により調製したマイクロカプセル、例えば、それぞれ、コロイド状薬物送達系（例えばリポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子及びナノカプセル）において又はマクロエマルジョンにおいて、ヒドロキシメチルセルロース又はゼラチンのマイクロカプセル及びポリ−（メチルメタクリラート）マイクロカプセル中に封入されてもよい。このような技術は、Remington’s Pharmaceutical Sciences, 16th edition, Osol, A. (ed.) (1980)に開示される。
【０１３３】
徐放性調製物が調製されてもよい。徐放性調製物の好適な例は、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスを含み、そのマトリックスは成形品、例えばフィルム又はマイクロカプセルの形をしている。徐放性マトリックスの例としては、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）、又はポリ（ビニルアルコール））、ポリ乳酸（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ−グルタミン酸とガンマ−エチル−Ｌ−グルタメートとの共重合体、非分解性エチレン−酢酸ビニル、ＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯＴＴＭ（乳酸−グリコール酸共重合体及び酢酸ロイプロリドからなる注射可能なミクロスフェア）のような分解性乳酸−グリコール酸共重合体、並びにポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸が挙げられる。
【０１３４】
ｉｎ  ｖｉｖｏ投与に使用される製剤は、無菌である必要がある。これは、滅菌濾過膜を通して濾過することにより容易に達成される。
【０１３５】
配列表
配列番号１  マウスモノクローナル抗ＣＤ２０抗体  Ｂ−Ｌｙ１の重鎖可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列。
配列番号２  マウスモノクローナル抗ＣＤ２０抗体  Ｂ−Ｌｙ１の軽鎖可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列。
配列番号３−１９  ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体（Ｂ−ＨＨ２からＢ−ＨＨ９、Ｂ−ＨＬ８、及びＢ−ＨＬ１０からＢ−ＨＬ１７）の重鎖可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列。
配列番号２０  ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体  Ｂ−ＫＶ１の軽鎖可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列。
【０１３６】
以下の実施例及び図面は、本発明を説明するために提供され、限定的な特徴を有しない。
【実施例】
【０１３７】
実施例１：Ｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍効果
Ｂｃｌ−２阻害剤ベネトクラクス（ＧＤＣ−０１９９）及びＢＥＴ阻害剤  ＲＧ６１４６と組み合わせたＣＤ２０特異的抗体オビヌツズマブ又はリツキシマブのｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍効果をＷＳＵ−ＤＬＣＬ２異種移植片（ＣＤ２０＋）に対して評価した。
【０１３８】
試験剤
ＣＤ２０抗体オビヌツズマブ又はリツキシマブは、Ｒｏｃｈｅ（バーゼル、スイス）から原液として提供された。抗体バッファーはヒスチジンを含んでいた。抗体溶液を、注射前に原液からバッファー中に適切に希釈した。ＢＥＴ阻害剤  ＲＧ６１４６は、Ｒｏｃｈｅ（バーゼル、スイス）から粉末として提供され、使用前に再懸濁された。Ｂｃｌ−２阻害剤  ＧＤＣ−０１９９は、Genentech, South San Francisco, USAにより提供され、使用前に配合された。
【０１３９】
細胞株及び培養条件
元のＷＳＵ−ＤＬＣＬ２ヒトＢ細胞ＮＨＬ細胞株（ＤＬＢＣＬ）をＤＳＭＺ（Braunschweig、ドイツ）から購入した。プロトコールに従い、ＴＡＰ  ＣｏｍｐａｃＴ  ＣｅｌｌＢａｓｅ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｒｏｂｏｔｅｒで移植のための腫瘍細胞の拡大を行った。ＲＰＭＩ１６４０培地、ＦＣＳ１０％及びＬ−グルタミン２ｍＭで、３７℃、５％ＣＯ２の水飽和雰囲気で日常的に腫瘍細胞株を培養した。トリプシン／ＥＤＴＡ  １×を用いて１週間に２回スプリットして培養継代を実施し、継代３を移植に使用した。
【０１４０】
動物
到着時に生後６−７週のメスのＳＣＩＤベージュマウスを、徹底したガイドラインに従い、１２時間明／１２時間暗の毎日のサイクルで、特定の病原体がない条件下で保持した。実験的な研究プロトコールが審査され、地方自治体により承認された。動物を到着後１週間、新しい環境への馴致及び観察のために動物施設に保持した。継続的な健康モニタリングを定期的に実施した。食料及びオートクレーブ水を不断給餌した。
【０１４１】
モニタリング
動物は、臨床症状、及び副作用の検出のために毎日制御された。実験期間を通して、モニタリングのために動物の体重を記録した。
【０１４２】
動物の治療
中央腫瘍サイズが約１５０ｍｍ３であったランダム化後に、図１に示す研究のための動物の治療を開始した。ＣＤ２０抗体オビヌツズマブを、第１０、１７、２４及び３１日に週に１回１０ｍｇ／ｋｇ  ｉｐで単剤として、及び組み合わせて投与した。対応するビヒクルを同じ日に投与した。３０ｍｇ／ｋｇでのＢＥＴ阻害剤  ＲＧ６１４６のｉｐ治療を、第１０−１８日、第２１−２５日及び第２８−３２日に単剤として、及び組み合わせて行った。そして、Ｂｃｌ−２阻害剤ベネトクラクス（ＧＤＣ−０１９９）を、第１０−１８日、第２１−２５日及び第２８−３２日に１００ｍｇ／ｋｇで単剤として、及び組み合わせて経口投与した。
【０１４３】
中央腫瘍サイズが約１３０ｍｍ３であったランダム化後に、図３に示す研究のための動物の治療を開始した。ＣＤ２０抗体リツキシマブを、第１０、１７、及び２４日に週に１回１０ｍｇ／ｋｇ  ｉｐで単剤として、及び組み合わせて投与した。対応するビヒクルを同じ日に投与した。３０ｍｇ／ｋｇでのＢＥＴ阻害剤  ＲＧ６１４６のｉｐ治療を、第１１−１７日に単剤として、及び組み合わせて行った。そして、Ｂｃｌ−２阻害剤ベネトクラクス（ＧＤＣ−０１９９）を、第１１−１７日に１００ｍｇ／ｋｇで単剤として、及び組み合わせて経口投与した。
【０１４４】
抗腫瘍効果
図１に示す研究のために、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２ヒトびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）細胞（ＣＤ２０＋）をマトリゲルを用いてメスＳＣＩＤベージュマウスに皮下接種した。腫瘍保有マウスを１０日後に指定の研究グループにランダム化し、化合物治療を開始した。腫瘍保有動物をビヒクルコントロール、３０ｍｇ／ｋｇのＢＥＴ阻害剤ＲＧ６１４６、１０ｍｇ／ｋｇの抗ＣＤ２０抗体オビヌツズマブ、又は１００ｍｇ／ｋｇのＢｃｌ−２阻害剤ベネトクラクス（ＧＤＣ−０１９９）で単剤で治療した。さらに、三つのグループをＲＧ６１４６とベネトクラクス、又はＲＧ６１４６とオビヌツズマブ、又はオビヌツズマブとベネトクラクスのいずれかの２剤併用で治療した。そして、一つの研究グループは、ＢＥＴ阻害剤ＲＧ６１４６、ＣＤ２０抗体オビヌツズマブ及びＢｃｌ−２阻害剤  ベネトクラクス（ＧＤＣ−０１９９）の３剤併用を受けた。結果として、単剤として投与された全ての化合物は、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２異種移植片に対して有意な抗腫瘍効果を実証した。さらに詳細には、ＢＥＴ阻害剤ＲＧ６１４６での治療は、ｒｅｓｕｌｔｅｄ  ｉｎ  ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２異種移植片に対し、コントロールと比較して、４６％の腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）をもたらした。Ｂｃｌ−２阻害剤ベネトクラクスでの治療後も同様の効果を示した（４９％  ＴＧＩ）が、一方、抗ＣＤ２０抗体オビヌツズマブでの治療後に、単剤として最も強力な効果を達成した（ＴＧＩ  ８４％）。しかしながら、ＢＥＴ阻害剤ＲＧ６１４６＋ＣＤ２０抗体オビヌツズマブ＋Ｂｃｌ−２阻害剤ベネトクラクスを含む３剤併用のグループについて優れた効果を観察した。より詳細には、３剤併用アプローチは、腫瘍縮小を実質的に誘発し、それは最終的に７５％に達し、２２％は完全な腫瘍寛解となった。これとは対照的に、それぞれの２剤併用研究群は、効果が低く、腫瘍停滞に翻訳された（ＴＧＩ  約１００％）。特に、研究のフォローアップでは、治療が中止された後、４０日後に３剤併用では腫瘍の再増殖が実質的に２倍遅延したことが観察された。これとは対照的に、それぞれの２剤併用レジメンでは、約２０日後に腫瘍が再増殖した。
【０１４５】
結果を図１〜２及び表２〜４に示す。
2020528061.tif 000005
【０１４６】
表２は、図１にプロットされる中央腫瘍体積のデータを列挙する。
2020528061.tif 000006
2020528061.tif 000007
2020528061.tif 000008
【０１４７】
表５は、図３にプロットされる中央腫瘍体積のデータを列挙する。
2020528061.tif 000009
【０１４８】
本明細書で開示され、また配列表に付されるように、以下の配列は本発明の一部である。
【０１４９】
配列
配列番号１
マウスモノクローナル抗ＣＤ２０抗体  Ｂ−Ｌｙ１の重鎖可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列。
Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys 
Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser Trp Met Asn Trp Val Lys Leu 
Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp 
Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr 
Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr Met Gln Leu Thr Ser Leu Thr 
Ser Val Asp Ser Ala Val Tyr Leu Cys Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly 
Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala 
【０１５０】
配列番号２
マウスモノクローナル抗ＣＤ２０抗体  Ｂ−Ｌｙ１の軽鎖可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列
Asn Pro Val Thr Leu Gly Thr Ser Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser 
Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu 
Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn 
Leu Val Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr 
Asp Phe Thr Leu Arg Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val 
Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn Leu Glu Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly 
Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 
【０１５１】
配列番号３
ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体（Ｂ−ＨＨ２）の重鎖可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
【０１５２】
配列番号４
ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体（Ｂ−ＨＨ３）の重鎖可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Leu Cys 
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
【０１５３】
配列番号５
ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体（Ｂ−ＨＨ４）の重鎖可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
【０１５４】
配列番号６
ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体（Ｂ−ＨＨ５）の重鎖可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
【０１５５】
配列番号７
ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体（Ｂ−ＨＨ６）の重鎖可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 
Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
【０１５６】
配列番号８
ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体（Ｂ−ＨＨ７）の重鎖可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 
Trp Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
【０１５７】
配列番号９
ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体（Ｂ−ＨＨ８）の重鎖可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Tyr Ser 
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
【０１５８】
配列番号１０
ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体（Ｂ−ＨＨ９）の重鎖可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Tyr Ser 
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
【０１５９】
配列番号１１
ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体（Ｂ−ＨＬ８）の重鎖可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Ser 
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
【０１６０】
配列番号１２
ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体（Ｂ−ＨＬ１０）の重鎖可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ala Phe Ser Tyr Ser 
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
【０１６１】
配列番号１３
ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体（Ｂ−ＨＬ１１）の重鎖可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Ser 
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
【０１６２】
配列番号１４
ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体（Ｂ−ＨＬ１２）の重鎖可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Ser 
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
【０１６３】
配列番号１５
ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体（Ｂ−ＨＬ１３）の重鎖可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Lys Pro Gly Gly 
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Ser 
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
【０１６４】
配列番号１６
ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体（Ｂ−ＨＬ１４）の重鎖可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Lys Lys Pro Gly Gly 
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Ser 
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
【０１６５】
配列番号１７
ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体（Ｂ−ＨＬ１５）の重鎖可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Ser 
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Ser 
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
【０１６６】
配列番号１８
ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体（Ｂ−ＨＬ１６）の重鎖可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 
Ser Leu Arg Val Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Ser 
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
【０１６７】
配列番号１９
ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体（Ｂ−ＨＬ１７）の重鎖可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Ser 
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
【０１６８】
配列番号２０
ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体  Ｂ−ＫＶ１の軽鎖可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser 
Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Val Ser Gly Val Pro 
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn 
Leu Glu Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
Arg Thr Val 
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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