(57)【要約】  本開示は、（ａ）単離された免疫原性ＣＥＡポリペプチド；（ｂ）（ｉ）免疫原性ＣＥＡポリペプチド、（ｉｉ）免疫原性ＣＥＡポリペプチドおよび免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチド、（ｉｉｉ）免疫原性ＣＥＡポリペプチドおよび免疫原性ＴＥＲＴポリペプチド、または（ｉｖ）免疫原性ＣＥＡポリペプチド、免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドおよび免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドをコードする単離された核酸分子；（ｃ）単離された核酸分子を含む組成物；ならびに（ｄ）免疫原性ＣＥＡポリペプチド、核酸分子および組成物の使用に関連する方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
免疫原性ＣＥＡポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む抗原構築物。
【請求項２】
免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列をさらに含む、請求項１に記載の抗原構築物。
【請求項３】
免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドをコードするヌクレオチド配列をさらに含む、請求項１に記載の抗原構築物。
【請求項４】
免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列、および免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドをコードするヌクレオチド配列をさらに含む、請求項１に記載の抗原構築物。
【請求項５】
スペーサーヌクレオチド配列をさらに含む、請求項２、３または４のいずれか一項に記載の抗原構築物。
【請求項６】
スペーサーヌクレオチド配列が、２Ａペプチドをコードする、請求項５に記載の抗原構築物。
【請求項７】
スペーサーヌクレオチド配列が、ＥＭＣ２Ａ、ＥＲＡ２Ａ、ＥＲＢ２ＡおよびＴ２Ａからなる群から選択される２Ａペプチドをコードする、請求項５に記載の抗原構築物。
【請求項８】
免疫原性ＣＥＡポリペプチドが、
（１）配列番号２のアミノ酸２〜７０２、配列番号２のアミノ酸３２３〜７０２もしくは配列番号２のアミノ酸３２３〜６７７を含むもしくはこれからなるポリペプチド、
（２）配列番号１５のアミノ酸配列もしくは配列番号１５のアミノ酸４〜７０４を含むもしくはこれからなるポリペプチド、
（３）配列番号１７のアミノ酸配列もしくは配列番号１７のアミノ酸４〜５２６を含むもしくはこれからなるポリペプチド、
（４）配列番号１９の配列もしくは配列番号１９のアミノ酸４〜４６８を含むもしくはこれからなるポリペプチド、または
（５）上述の（１）〜（４）のポリペプチドのいずれかの機能的バリアントであるポリペプチド
からなる群から選択される、請求項１から７のいずれか一項に記載の抗原構築物。
【請求項９】
免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドが、
（１）配列番号９のアミノ酸配列または配列番号９のアミノ酸２〜８９３を含むポリペプチド、
（２）配列番号１１のアミノ酸配列または配列番号１１のアミノ酸３〜７９１を含むポリペプチド、
（３）配列番号１３のアミノ酸配列または配列番号１３のアミノ酸４〜５９４を含むポリペプチド、および
（４）上述の（１）〜（３）のポリペプチドのいずれかの機能的バリアントであるポリペプチド
からなる群から選択される、請求項３から８のいずれか一項に記載の抗原構築物。
【請求項１０】
免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドが、
（１）配列番号５のアミノ酸配列または配列番号５のアミノ酸４〜５３７を含むポリペプチド、
（２）配列番号７のアミノ酸配列または配列番号７のアミノ酸４〜５１７を含むポリペプチド、および
（３）上述の（１）または（２）のポリペプチドの機能的バリアント
からなる群から選択される、請求項２、４から９のいずれか一項に記載の抗原構築物。
【請求項１１】
（１）配列番号３１のアミノ酸配列または配列番号３１のアミノ酸４〜１０８８を含むアミノ酸配列、
（２）配列番号３３のアミノ酸配列または配列番号３３のアミノ酸４〜１０８１を含むアミノ酸配列、
（３）配列番号３５のアミノ酸配列または配列番号３５のアミノ酸４〜１０８５を含むアミノ酸配列、
（４）配列番号３７のアミノ酸配列または配列番号３７のアミノ酸４〜１０３０を含むアミノ酸配列、
（５）配列番号３９のアミノ酸配列または配列番号３９のアミノ酸４〜１３８１を含むアミノ酸配列、および
（６）配列番号４１のアミノ酸配列または配列番号４１のアミノ酸４〜１４４１を含むアミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む、請求項１に記載の抗原構築物。
【請求項１２】
（１）配列番号３０のヌクレオチド配列または配列番号３０のヌクレオチド１０〜３２６４を含むヌクレオチド配列、
（２）配列番号３２のヌクレオチド配列または配列番号３２のヌクレオチド１０〜３２４３を含むヌクレオチド配列、
（３）配列番号３４のヌクレオチド配列または配列番号３４のヌクレオチド１０〜３２５５を含むヌクレオチド配列、
（４）配列番号３６のヌクレオチド配列または配列番号３６のヌクレオチド１０〜３０９０を含むヌクレオチド配列、
（５）配列番号３８のヌクレオチド配列または配列番号３８のヌクレオチド１０〜４１４３を含むヌクレオチド配列、
（６）配列番号４０のヌクレオチド配列または配列番号４０のヌクレオチド１０〜４３２３を含むヌクレオチド配列、および
（７）上述の（１）〜（６）のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項１に記載の抗原構築物。
【請求項１３】
（１）配列番号４３のアミノ酸配列または配列番号４３のアミノ酸４〜２００３を含むアミノ酸配列、
（２）配列番号４５のアミノ酸配列または配列番号４５のアミノ酸４〜２００１を含むアミノ酸配列、
（３）配列番号４７のアミノ酸配列または配列番号４７のアミノ酸４〜２００８を含むアミノ酸配列、
（４）配列番号４９のアミノ酸配列または配列番号４９のアミノ酸４〜１９９６を含むアミノ酸配列、
（５）配列番号５１のアミノ酸配列または配列番号５１のアミノ酸４〜１９４３を含むアミノ酸配列、および
（６）配列番号５３のアミノ酸配列または配列番号５３のアミノ酸４〜１９４３を含むアミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む、請求項１に記載の抗原構築物。
【請求項１４】
（１）配列番号４２のヌクレオチド配列または配列番号４２のヌクレオチド１０〜６００９を含むヌクレオチド配列、
（２）配列番号４４のヌクレオチド配列または配列番号４４のヌクレオチド１０〜６００３を含むヌクレオチド配列、
（３）配列番号４６のヌクレオチド配列または配列番号４６のヌクレオチド１０〜６０２４を含むヌクレオチド配列、
（４）配列番号４８のヌクレオチド配列または配列番号４８のヌクレオチド１０〜５９８８を含むヌクレオチド配列、
（５）配列番号５０のヌクレオチド配列または配列番号５０のヌクレオチド１０〜５８２９を含むヌクレオチド配列、
（６）配列番号５２のヌクレオチド配列または配列番号５２のヌクレオチド１０〜５８２９を含むヌクレオチド配列、および
（７）上述の（１）〜（６）のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項１に記載の抗原構築物。
【請求項１５】
（１）配列番号８７、８８、８９、９０、９１および９２のいずれかのヌクレオチド配列、または
（２）配列番号８７、８８、８９、９０、９１および９２のいずれかのヌクレオチド配列の縮重バリアント
を含む、請求項１に記載の抗原構築物。
【請求項１６】
（ｉ）請求項１から１５のいずれか一項に記載の抗原構築物、および（ｉｉ）薬学的に許容できる担体を含む、医薬組成物。
【請求項１７】
ワクチンである、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
有効量の請求項１６または請求項１７に記載の医薬組成物をヒトに投与するステップを含む、処置を必要とするヒトにおけるがんを処置する方法。
【請求項１９】
がんが、ＭＵＣ１、ＣＥＡまたはＴＥＲＴから選択される１種または複数の腫瘍関連抗原を過剰発現する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
がんが、膵がん、卵巣がん、乳がん、胃がん、肺がんまたは結腸直腸がんである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
がんが、三重陰性乳がん、エストロゲン受容体陽性乳がんまたはＨＥＲ２陽性乳がんである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】
有効量の免疫モジュレーターを患者に投与するステップをさらに含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２３】
免疫モジュレーターが、ＣＴＬＡ−４阻害剤、ＩＤＯ１阻害剤、ＰＤ−１阻害剤またはＰＤ−Ｌ１阻害剤である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
アジュバントをヒトに投与するステップをさらに含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２５】
請求項１から１５のいずれか一項に記載の抗原構築物を含むベクター。
【請求項２６】
プラスミドベクターである、請求項２５に記載のベクター。
【請求項２７】
配列番号５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７０、７１、７２、７３および７４のいずれかのヌクレオチド配列を含む、請求項２６に記載のベクター。
【請求項２８】
ウイルスベクターである、請求項２５に記載のベクター。
【請求項２９】
配列番号５８、６０、６２、６４、６６および６８のいずれかのヌクレオチド配列を含む、請求項２８に記載のベクター。
【請求項３０】
医薬としての、（１）請求項１から１５のいずれか一項に記載の抗原構築物、（２）請求項１６もしくは請求項１７に記載の医薬組成物、または（３）請求項２５から２９のいずれか一項に記載のベクターの使用。
【請求項３１】
医薬が、がんの処置のためのものである、請求項３０に記載の使用。
【請求項３２】
がんの処置のための医薬の製造のための、（１）請求項１から１４のいずれか一項に記載の抗原構築物、または（２）請求項２５から２９のいずれか一項に記載のベクターの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の参照
本願は、２０１７年７月１１日に出願された米国特許仮出願第６２／５３１，２２７号、および２０１８年６月７日に出願された米国特許仮出願第６２／６８２，０４４号の利益を主張する。前述の（forgoing）出願のそれぞれの内容全体を参照により本明細書に組み込む。
【０００２】
配列表の参照
本願は、電子フォーマットの配列表と共に出願されている。配列表は、２０１８年６月８日に作成された、９６３ＫＢのサイズを有する、「ＰＣ７２３５４Ａ＿ＦＦ＿ＳｅｑＬｉｓｔ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」と題する．ｔｘｔフォーマットのファイルとして提供される。．ｔｘｔファイルに含有される配列表は、本明細書の一部であり、その全体（entity）を参照により本明細書に組み込む。
【０００３】
発明の分野
本発明は、全般的には、免疫療法に関し、具体的には、新生物障害を処置または予防するためのワクチンおよび方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
がんは、世界中で死亡率の主要な原因である。がんは、膵臓、乳房、肺、胃、結腸および直腸等、種々の臓器および組織において発生し得る。膵がんは、米国におけるがんによる死亡の４番目に多い原因である。膵がんは、膵臓の外分泌または内分泌成分において発生し得る。外分泌がんは、（１）ずば抜けて最も一般的な型である膵腺癌、（２）外分泌膵がんの５％を占める腺房細胞癌、（３）膵がんの１％を占める嚢胞腺癌、ならびに（４）膵芽腫、腺扁平上皮癌、印環細胞癌、肝様癌、コロイド癌、未分化癌、および破骨細胞様巨細胞による未分化癌等の他の希少な形態のがんを含む。
【０００５】
乳がん（ＢｒＣ）は、アメリカ人女性の間における別の一般的ながんであり、女性におけるがんによる死亡の２番目に多い原因である。エストロゲン受容体（ＥＲ）、プロゲステロン受容体（ＰＲ）およびヒト上皮増殖因子受容体２（ＨＥＲ２）等の様々な腫瘍マーカーに基づき、乳がんは、（１）ホルモン受容体陽性がん（がん細胞が、エストロゲン受容体またはプロゲステロン受容体のいずれかを含有する）；（２）ホルモン受容体陰性がん（がん細胞が、エストロゲン受容体またはプロゲステロン受容体のどちらも有しない）；（３）ＨＥＲ２／ｎｅｕ陽性（過剰なＨＥＲ２／ｎｅｕタンパク質またはＨＥＲ２／ｎｅｕ遺伝子の余分なコピーを有するがん）；（４）ＨＥＲ２／ｎｅｕ陰性がん（がんが、過剰なＨＥＲ２／ｎｅｕを有しない）；（５）三重陰性がん（乳がん細胞が、エストロゲン受容体もプロゲステロン受容体も過剰なＨＥＲ２も有しない）；および（６）三重陽性がん（がんが、エストロゲン受容体陽性、プロゲステロン受容体陽性であり、過多のＨＥＲ２を有する）等の主要なサブタイプに分類することができる。
【０００６】
肺がんは、がんによる死亡全体の４分の１超を占め、世界中でがん関連死亡率の主要な原因である。症例のおよそ８５％は、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）として組織学的に分類される。ＮＳＣＬＣは、扁平細胞（類表皮）癌、腺癌、大細胞（未分化）癌、腺扁平上皮癌および肉腫様癌等のいくつかのサブタイプにさらに分類され得る。肺がんの２番目に多い型は、小細胞肺がん（ＳＣＬＣ）であり、これは、全肺がんの約１０％〜１５％を占める。
【０００７】
胃がん（ＧａＣ）は、世界でがん関連死の３番目に多い原因である。胃がんの約９０〜９５％は、腺癌である；他のより一般的でない型は、リンパ腫、ＧＩＳＴおよびカルチノイド腫瘍を含む。
【０００８】
結腸直腸がん（ＣＲＣ）もまた、米国におけるがん関連死の主要な原因である。腺癌は、ＣＲＣの最も一般的な型であり、これは、結腸直腸がんの９５％超を占める。ＣＲＣの他のより一般的でない型は、カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、リンパ腫および肉腫を含む。
【０００９】
がん管理の伝統的レジメンは、循環および固形がんの選択的な群の管理に成功した。しかし、がんの多くの型は、伝統的なアプローチに抵抗性である。近年、がんのための免疫療法、特に、がんワクチンおよび抗体療法が探索された。がん免疫療法の１つのアプローチは、標的がん細胞上の腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に対する活性全身性免疫応答を生成するための免疫原を投与することを含む。多数の腫瘍関連抗原が同定され、それらの抗原の多くが、がんの処置または予防のためのウイルス、細菌、タンパク質、ペプチドまたはＤＮＡに基づくワクチンとして探索されたが、大部分の臨床治験は、現在までに、治療用製品を産生することができていない。したがって、がんの処置または予防において使用することができる免疫原またはワクチンの必要がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本開示は、腫瘍関連抗原ＭＵＣ１、ＣＥＡまたはＴＥＲＴに由来する免疫原性ポリペプチド、かかる免疫原性ポリペプチドをコードする核酸分子、ワクチン等のかかる免疫原性ポリペプチドまたは核酸分子を含む組成物、ならびにポリペプチド、核酸分子および組成物の使用に関する。
【００１１】
ヒトムチン１タンパク質（ＭＵＣ１；エピシアリン（episialin）、ＰＥＭ、Ｈ２３Ａｇ、ＥＭＡ、ＣＡ１５−３およびＭＣＡとしても知られる）は、単純上皮および腺上皮の頂端表面に発現される多形性膜貫通糖タンパク質である。ＭＵＣ１遺伝子は、シグナルペプチド配列を含む単一のポリペプチド鎖前駆体をコードする。翻訳直後に、シグナルペプチド配列は除去され、ＭＵＣ１前駆体の残っている部分は、２個のペプチド断片へとさらに切断される：長い方のＮ末端サブユニット（ＭＵＣ１−ＮまたはＭＵＣ１α）および短い方のＣ末端サブユニット（ＭＵＣ１−ＣまたはＭＵＣ１β）。成熟ＭＵＣ１は、安定した水素結合を介して会合したＭＵＣ１−ＮおよびＭＵＣ１−Ｃを含む。細胞外ドメインであるＭＵＣ１−Ｎは、２０アミノ酸残基の可変数タンデム反復（ＶＮＴＲ）を含有し、反復の数は、異なる個体において２０から１２５に変動する。可変数タンデム反復で構成されるＭＵＣ１タンパク質の領域は、本開示において、「ＶＮＴＲ領域」とも称される。ＭＵＣ１−Ｃは、短い細胞外領域（およそ５３アミノ酸）、膜貫通ドメイン（およそ２８アミノ酸）および細胞質尾部（およそ７２アミノ酸）を含有する。ＭＵＣ１の細胞質尾部（ＭＵＣ１−ＣＴ）は、増殖因子受容体および細胞内キナーゼによってリン酸化される、高度に保存されたセリンおよびチロシン残基を含有する。ヒトＭＵＣ１は、ＭＵＣ１  ＲＮＡ選択的スプライシングの異なる型に起因する複数のアイソフォームで存在する。全長ヒトＭＵＣ１アイソフォーム１タンパク質前駆体（アイソフォーム１、Ｕｎｉｐｒｏｔ  Ｐ１５９４１−１）のアミノ酸配列は、配列番号１（「ＭＵＣ１参照ポリペプチド」）に提示される。ヒトＭＵＣ−１の少なくとも１６種の他のアイソフォームが、現在までに報告されており（Ｕｎｉｐｒｏｔ  Ｐ１５９４１−２からＰ１５９４１−１７）、これらは、アイソフォーム１の配列と比較して様々な挿入、欠失または置換を含む。これらのアイソフォームは、アイソフォーム２、３、４、５、６、Ｙ、８、９、Ｆ、Ｙ−ＬＳＰ、Ｓ２、Ｍ６、ＺＤ、Ｔ１０、Ｅ２およびＪ１３として知られる（それぞれＵｎｉｐｒｏｔ  Ｐ１５９４１−２からＰ１５９４１−１７）。全長ヒトＭＵＣ１アイソフォーム１前駆体タンパク質は、１２５５アミノ酸からなり、これは、アミノ酸１〜２３にシグナルペプチド配列を含む。成熟ＭＵＣ１タンパク質のＭＵＣ１−ＮおよびＭＵＣ１−Ｃドメインは、それぞれアミノ酸２４〜１０９７および１０９８〜１２５５からなる。
【００１２】
癌胎児抗原関連細胞接着分子（ＣＥＡＣＡＭとしても知られる）は、免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリー群における糖タンパク質の群である。構造上、ＣＥＡＣＡＭ群は、単一Ｎ末端ドメイン、およびＣ２型Ｉｇドメインと同様の最大６個のジスルフィド連結された内部ドメインからなる。この群は、１２種のタンパク質（ＣＥＡＣＡＭ１、３〜８、１６、１８〜２１）を含有し、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＥＡＣＡＭ５およびＣＥＡＣＡＭ６等、そのうちいくつかは、メラノーマ、肺、結腸直腸および膵がん等の様々ながんにおける妥当な臨床マーカーおよび有望な治療標的とみなされた。ＣＥＡとしても本明細書で称され当技術分野で公知のＣＥＡＣＡＭ５の過剰発現は、ヒト癌の大部分にあることが判明した。ＣＥＡＣＡＭ５は、（１）シグナルペプチド（アミノ酸１〜３４）；（２）Ｎドメイン（アミノ酸３５〜１４４）；（３）Ａ１（アミノ酸１４６〜２３７）、Ｂ１（アミノ酸２３８〜３２２）、Ａ２（アミノ酸３２４〜４１５）およびＢ２（アミノ酸４１６〜４９８）、Ａ３（アミノ酸５０２〜５９３）およびＢ３（アミノ酸５９４〜６７７）と命名された６個の定常Ｃ２様ドメインを含む３個の反復単位；ならびに（４）プロペプチド（アミノ酸６８６〜７０２）からなる７０２アミノ酸前駆体タンパク質として発現される。シグナルペプチドは、細胞表面への輸送の際に成熟タンパク質から切断除去される。全長ヒトＣＥＡ前駆体タンパク質のアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ（受託番号Ｐ０６７３１）で利用でき、本明細書において、配列番号２（「ＣＥＡ参照ポリペプチド」）においても表記される。
【００１３】
テロメラーゼ逆転写酵素（またはＴＥＲＴ）は、テロメア反復ＴＴＡＧＧＧの付加によるテロメア端の維持に関与するリボヌクレオタンパク質ポリメラーゼであるテロメラーゼの触媒成分である。ＴＥＲＴに加えて、テロメラーゼは、テロメア反復の鋳型として機能するＲＮＡ成分も含む。ヒトＴＥＲＴ遺伝子は、１１３２アミノ酸タンパク質をコードする。選択的スプライシングに起因するヒトＴＥＲＴのいくつかのアイソフォームが存在する。アイソフォーム１、アイソフォーム２、アイソフォーム３およびアイソフォーム４のアミノ酸配列は、Ｕｎｉｐｒｏｔで利用できる（＜ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ＞；それぞれＵｎｉｐｒｏｔ識別子Ｏ１４７４６−１、Ｏ１４７４６−２、Ｏ１４７４６−３およびＯ１４７４６−４）。ヒト全長ＴＥＲＴアイソフォーム１タンパク質（アイソフォーム１、Ｇｅｎｂａｎｋ  ＡＡＤ３００３７、Ｕｎｉｐｒｏｔ  Ｏ１４７４６−１）のアミノ酸配列は、本明細書において、配列番号３（「ＴＥＲＴ参照ポリペプチド」）においても提示される。ＴＥＲＴアイソフォーム１（Ｏ１４７４６−１）と比較して、アイソフォーム２（Ｏ１４７４６−２）は、アミノ酸７６４〜８０７の置き換え（ＳＴＬＴＤＬＱＰＹＭ．．．ＬＮＥＡＳＳＧＬＦＤ→ＬＲＰＶＰＧＤＰＡＧ．．．ＡＧＲＡＡＰＡＦＧＧ）およびＣ末端アミノ酸８０８〜１１３２の欠失を有し、アイソフォーム３（Ｏ１４７４６−３）は、アミノ酸８８５〜９４７の欠失を有し、アイソフォーム４（Ｏ１４７４６−４）は、アミノ酸７１１〜７２２および８０８〜１１３２の欠失ならびにアミノ酸７６４〜８０７の置き換え（ＳＴＬＴＤＬＱＰＹＭ．．．ＬＮＥＡＳＳＧＬＦＤ→ＬＲＰＶＰＧＤＰＡＧ．．．ＡＧＲＡＡＰＡＦＧＧ）を有する。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
一部の態様では、本開示は、例えば、ｉｎ  ｖｉｖｏでの（例えば、ヒトを含む動物における）免疫応答の誘発において、またはがんの処置のためのワクチンを含む医薬組成物における成分としての使用に有用な、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）ＭＵＣ１、ＣＥＡおよびＴＥＲＴに由来する単離された免疫原性ポリペプチドを提供する。
【００１５】
他の態様では、本開示は、本開示によって提供される１種または複数の免疫原性ポリペプチドをそれぞれコードする核酸分子（「抗原構築物」とも称される）を提供する。一部の実施形態では、本開示は、２、３種以上の免疫原性ＴＡＡポリペプチドをそれぞれコードする多重抗原核酸構築物を提供する。
【００１６】
本開示はまた、本開示によって提供される１種または複数の核酸分子を含有するベクターを提供する。ベクターは、核酸分子によってコードされる免疫原性ＴＡＡポリペプチドのクローニングもしくは発現に、または宿主細胞へのまたは宿主動物もしくはヒトへのワクチン等の組成物中の核酸分子の送達に有用である。一態様では、本開示はまた、ワクチンとしてのまたはワクチンにおける使用のための、本開示によって提供される１種または複数の核酸分子を含有するベクターを提供する。
【００１７】
一部のさらなる態様では、本開示は、１種もしくは複数の免疫原性ポリペプチド、免疫原性ＴＡＡポリペプチドをコードする単離された抗原構築物、または１種もしくは複数の免疫原性ＴＡＡポリペプチドをコードする抗原構築物を含有するベクターもしくはプラスミドを含む、組成物を提供する。一部の実施形態では、組成物は、マウス、イヌ、サルまたはヒト等の哺乳動物におけるＴＡＡに対する免疫応答の誘発に有用な免疫原性組成物である。一部の実施形態では、組成物は、ヒト等の哺乳動物の免疫化に、異常細胞増殖の阻害に、がんの発症に対する保護の達成に（予防薬として使用）、またはがん、特に、膵、卵巣、肺、結腸直腸、胃および乳がん等のＴＡＡ過剰発現に関連する障害の処置に（治療薬として使用）有用なワクチン組成物である。
【００１８】
一部のさらなる態様では、本開示は、マウス、イヌ、サルまたはヒト等の哺乳動物におけるＴＡＡに対する免疫応答を誘発する方法における使用のための、１種もしくは複数の免疫原性ＴＡＡポリペプチドをコードする単離された核酸分子、または本明細書に開示される１種もしくは複数の免疫原性ＴＡＡポリペプチドをコードする核酸分子を含有するベクター（ウイルスベクターおよびプラスミドベクター等）を提供する。一部のさらなる態様では、本開示は、哺乳動物における異常細胞増殖を阻害する方法における使用のための、１種もしくは複数の免疫原性ＴＡＡポリペプチドをコードする単離された核酸分子、または本明細書に開示される１種もしくは複数の免疫原性ＴＡＡポリペプチドをコードする核酸分子を含有するベクター（ウイルスベクターおよびプラスミドベクター等）を提供する。一部のさらなる態様では、本開示は、がんの発症に対する保護を達成する方法における使用のための、がんの処置のための、または哺乳動物におけるＴＡＡの過剰発現に関連する障害の処置のための、１種もしくは複数の免疫原性ＴＡＡポリペプチドをコードする単離された核酸分子、または本明細書に開示される１種もしくは複数の免疫原性ＴＡＡポリペプチドをコードする核酸分子を含有するベクター（ウイルスベクターおよびプラスミドベクター等）を提供する。
【００１９】
一部のさらなる態様では、本開示は、抗がん剤としての使用のための、１種もしくは複数の免疫原性ＴＡＡポリペプチドをコードする単離された核酸分子、または本明細書に開示される１種もしくは複数の免疫原性ＴＡＡポリペプチドをコードする核酸分子を含有するベクターもしくはプラスミドを提供する。一部の特異的な態様では、がんは、膵、卵巣、肺、結腸直腸、胃または乳がんである。
【００２０】
また他の態様では、本開示は、免疫原性ＴＡＡポリペプチド、単離された核酸分子および組成物を使用する方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、哺乳動物、特にヒトにおけるＴＡＡに対する免疫応答を誘発する方法であって、標的ＴＡＡに対して免疫原性である本発明によって提供されるポリペプチドの有効量、かかる免疫原性ポリペプチドをコードする単離された核酸分子、またはかかる免疫原性ポリペプチドもしくはかかる免疫原性ポリペプチドをコードする単離された核酸分子を含む組成物の有効量を哺乳動物に投与するステップを含む方法を提供する。ポリペプチドまたは核酸組成物は、１種または複数のアジュバントまたは免疫モジュレーターと共に使用することができる。
【００２１】
また他の態様では、本開示は、医薬としての使用のための、本明細書に開示される免疫原性ＴＡＡポリペプチド、単離された核酸分子および組成物を提供する。ポリペプチドまたは核酸組成物は、１種または複数のアジュバントまたは免疫モジュレーターと共に使用することができる。
【００２２】
本発明のある態様では、番号を付けた条項によってそれぞれ記載されている次の実施形態が企図される：
【００２３】
１．本明細書に開示される免疫原性ＣＥＡポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む抗原構築物。
【００２４】
２．本明細書に開示される免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列をさらに含む、条項１に記載の抗原構築物。
【００２５】
３．本明細書に開示される免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドをコードするヌクレオチド配列をさらに含む、条項１または２に記載の抗原構築物。
【００２６】
４．本明細書に開示される免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列、および本明細書に開示される免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドをコードするヌクレオチド配列をさらに含む、条項１に記載の抗原構築物。
【００２７】
５．本明細書に開示されるスペーサーヌクレオチド配列をさらに含む、条項２、３または４のいずれか一項に記載の抗原構築物。
【００２８】
６．スペーサーヌクレオチド配列が、２Ａペプチドをコードする、条項５に記載の抗原構築物。
【００２９】
７．スペーサーヌクレオチド配列が、ＥＭＣ２Ａ、ＥＲＡ２Ａ、ＥＲＢ２ＡおよびＴ２Ａからなる群から選択される２Ａペプチドをコードする、条項５に記載の抗原構築物。
【００３０】
８．免疫原性ＣＥＡポリペプチドが、
（１）配列番号２のアミノ酸２〜７０２、配列番号２のアミノ酸３２３〜７０２もしくは配列番号２のアミノ酸３２３〜６７７を含むもしくはこれからなるポリペプチド、
（２）配列番号１５のアミノ酸配列もしくは配列番号１５のアミノ酸４〜７０４を含むもしくはこれからなるポリペプチド、
（３）配列番号１７のアミノ酸配列もしくは配列番号１７のアミノ酸４〜５２６を含むもしくはこれからなるポリペプチド、
（４）配列番号１９の配列もしくは配列番号１９のアミノ酸４〜４６８を含むもしくはこれからなるポリペプチド、または
（５）上述の（１）〜（４）のポリペプチドのいずれかの機能的バリアントであるポリペプチド
からなる群から選択される、条項１〜７のいずれか一項に記載の抗原構築物。
【００３１】
９．免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドが、
（１）配列番号９のアミノ酸配列または配列番号９のアミノ酸２〜８９３を含むポリペプチド、
（２）配列番号１１のアミノ酸配列または配列番号１１のアミノ酸３〜７９１を含むポリペプチド、
（３）配列番号１３のアミノ酸配列または配列番号１３のアミノ酸４〜５９４を含むポリペプチド、および
（４）上述の（１）〜（３）のポリペプチドのいずれかの機能的バリアントであるポリペプチド
からなる群から選択される、条項３〜８のいずれか一項に記載の抗原構築物。
【００３２】
１０．免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドが、
（１）配列番号５のアミノ酸配列または配列番号５のアミノ酸４〜５３７を含むポリペプチド、
（２）配列番号７のアミノ酸配列または配列番号７のアミノ酸４〜５１７を含むポリペプチド、および
（３）上述の（１）または（２）のポリペプチドの機能的バリアント
からなる群から選択される、条項２および４〜９のいずれか一項に記載の抗原構築物。
【００３３】
１１．（１）配列番号３１のアミノ酸配列または配列番号３１のアミノ酸４〜１０８８を含むアミノ酸配列、
（２）配列番号３３のアミノ酸配列または配列番号３３のアミノ酸４〜１０８１を含むアミノ酸配列、
（３）配列番号３５のアミノ酸配列または配列番号３５のアミノ酸４〜１０８５を含むアミノ酸配列、
（４）配列番号３７のアミノ酸配列または配列番号３７のアミノ酸４〜１０３０を含むアミノ酸配列、
（５）配列番号３９のアミノ酸配列または配列番号３９のアミノ酸４〜１３８１を含むアミノ酸配列、および
（６）配列番号４１のアミノ酸配列または配列番号４１のアミノ酸４〜１４４１を含むアミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む、条項１〜１０のいずれか一項に記載の抗原構築物。
【００３４】
１２．（１）配列番号３０のヌクレオチド配列または配列番号３０のヌクレオチド１０〜３２６４を含むヌクレオチド配列、
（２）配列番号３２のヌクレオチド配列または配列番号３２のヌクレオチド１０〜３２４３を含むヌクレオチド配列、
（３）配列番号３４のヌクレオチド配列または配列番号３４のヌクレオチド１０〜３２５５を含むヌクレオチド配列、
（４）配列番号３６のヌクレオチド配列または配列番号３６のヌクレオチド１０〜３０９０を含むヌクレオチド配列、
（５）配列番号３８のヌクレオチド配列または配列番号３８のヌクレオチド１０〜４１４３を含むヌクレオチド配列、
（６）配列番号４０のヌクレオチド配列または配列番号４０のヌクレオチド１０〜４３２３を含むヌクレオチド配列、および
（７）上述の（１）〜（６）のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、条項１〜１１のいずれか一項に記載の抗原構築物。
【００３５】
１３．（１）配列番号４３のアミノ酸配列または配列番号４３のアミノ酸４〜２００３を含むアミノ酸配列、
（２）配列番号４５のアミノ酸配列または配列番号４５のアミノ酸４〜２００１を含むアミノ酸配列、
（３）配列番号４７のアミノ酸配列または配列番号４７のアミノ酸４〜２００８を含むアミノ酸配列、
（４）配列番号４９のアミノ酸配列または配列番号４９のアミノ酸４〜１９９６を含むアミノ酸配列、
（５）配列番号５１のアミノ酸配列または配列番号５１のアミノ酸４〜１９４３を含むアミノ酸配列、および
（６）配列番号５３のアミノ酸配列または配列番号５３のアミノ酸４〜１９４３を含むアミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む、条項１〜１２のいずれか一項に記載の抗原構築物。
【００３６】
１４．（１）配列番号４２のヌクレオチド配列または配列番号４２のヌクレオチド１０〜６００９を含むヌクレオチド配列、
（２）配列番号４４のヌクレオチド配列または配列番号４４のヌクレオチド１０〜６００３を含むヌクレオチド配列、
（３）配列番号４６のヌクレオチド配列または配列番号４６のヌクレオチド１０〜６０２４を含むヌクレオチド配列、
（４）配列番号４８のヌクレオチド配列または配列番号４８のヌクレオチド１０〜５９８８を含むヌクレオチド配列、
（５）配列番号５０のヌクレオチド配列または配列番号５０のヌクレオチド１０〜５８２９を含むヌクレオチド配列、
（６）配列番号５２のヌクレオチド配列または配列番号５２のヌクレオチド１０〜５８２９を含むヌクレオチド配列、および
（７）上述の（１）〜（６）のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、条項１〜１３のいずれか一項に記載の抗原構築物。
【００３７】
１５．（１）配列番号８７、８８、８９、９０、９１および９２のいずれかのヌクレオチド配列、または
（２）配列番号８７、８８、８９、９０、９１および９２のいずれかのヌクレオチド配列の縮重バリアント
を含む、条項１〜１４のいずれか一項に記載の抗原構築物。
【００３８】
１６．（ｉ）条項１〜１５のいずれか一項に記載の抗原構築物、および（ｉｉ）薬学的に許容できる担体を含む、医薬組成物。
【００３９】
１７．ワクチンである、条項１６に記載の医薬組成物。
【００４０】
１８．有効量の条項１６または条項１７に記載の医薬組成物をヒトに投与するステップを含む、処置を必要とするヒトにおけるがんを処置する方法。
【００４１】
１９．がんが、ＭＵＣ１、ＣＥＡまたはＴＥＲＴから選択される１種または複数の腫瘍関連抗原を過剰発現する、条項１８に記載の方法。
【００４２】
２０．がんが、膵がん、卵巣がん、乳がん、胃がん、肺がんまたは結腸直腸がんである、条項１８に記載の方法。
【００４３】
２１．がんが、三重陰性乳がん、エストロゲン受容体陽性乳がんまたはＨＥＲ２陽性乳がんである、条項１８に記載の方法。
【００４４】
２２．有効量の免疫モジュレーターを患者に投与するステップをさらに含む、条項１８に記載の方法。
【００４５】
２３．免疫モジュレーターが、ＣＴＬＡ−４阻害剤、ＩＤＯ１阻害剤、ＰＤ−１阻害剤またはＰＤ−Ｌ１阻害剤である、条項２２に記載の方法。
【００４６】
２４．アジュバントをヒトに投与するステップをさらに含む、条項１８に記載の方法。
【００４７】
２５．条項１〜１５のいずれか一項に記載の抗原構築物を含むベクター。
【００４８】
２６．プラスミドベクターである、条項２５に記載のベクター。
【００４９】
２７．配列番号５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７０、７１、７２、７３および７４のいずれかのヌクレオチド配列を含む、条項２６に記載のベクター。
【００５０】
２８．ウイルスベクターである、条項２５に記載のベクター。
【００５１】
２９．配列番号５８、６０、６２、６４、６６および６８のいずれかのヌクレオチド配列を含む、条項２８に記載のベクター。
【００５２】
３０．医薬としての使用のための、（１）条項１〜１５のいずれか一項に記載の抗原構築物、（２）条項１６もしくは条項１７に記載の医薬組成物、または（３）条項２５〜２９のいずれか一項に記載のベクターの使用。
【００５３】
３１．医薬が、がんの処置のためのものである、条項３０に記載の使用。
【００５４】
３２．がんの処置のための医薬の製造のための、（１）条項１〜１４のいずれか一項に記載の抗原構築物、または（２）条項２５〜２９のいずれか一項に記載のベクターの使用。
【図面の簡単な説明】
【００５５】
【図１】三重抗原構築物を保有するＡｄＣ６８ベクター（すなわち、ベクターＡｄＣ６８Ｙ−１４２４、ＡｄＣ６８Ｙ−１４２５、ＡｄＣ６８Ｙ−１４２６、ＡｄＣ６８Ｙ−１４２７、ＡｄＣ６８Ｙ−１４２８およびＡｄＣ６８Ｙ−１４２９と称される）の構成を描写する図である。Ｅ１およびＥ３欠失ＡｄＣ６８ベクター骨格は、Ｇｅｎｂａｎｋ参照配列ＡＣ＿００００１１．１から設計した。導入遺伝子オープンリーディングフレームは、ＣＭＶ最初期エンハンサー／プロモーターおよびＳＶ４０ポリＡターミネーターの間のＥ１領域に挿入した。ｔｅｔオペレーター配列は、プロモーターの後に挿入した。
【発明を実施するための形態】
【００５６】
Ａ．定義
用語「アジュバント」は、ヒト等の宿主哺乳動物に投与されると、宿主におけるワクチンまたは免疫原によって誘発される抗原特異的免疫応答を増強、加速または延長することができる物質を指す。
【００５７】
用語「アゴニスト」は、別の分子（受容体等）の活性を促進する（誘導する、引き起こす、増強するまたは増加させる）物質を指す。アゴニストという用語は、受容体に結合する物質、およびそれに結合することなく受容体機能を促進する物質を包含する。
【００５８】
用語「アンタゴニスト」または「阻害剤」は、別の分子または受容体の生物活性を部分的にまたは完全に遮断、阻害または中和する物質を指す。
【００５９】
用語「抗原」は、宿主哺乳動物に導入されると（直接的に、または例えばＤＮＡワクチンなどでの発現後に）、抗体またはＴ細胞上の抗原受容体への結合等、宿主哺乳動物の免疫系によって認識され得る物質を指す。抗原は、タンパク質もしくはタンパク質断片、炭水化物、ガングリオシド、ハプテンまたは核酸であり得る。物質は、抗体またはＴ細胞抗原受容体等の免疫系の抗原認識分子と特異的に相互作用することができる場合、「抗原性」と命名される。用語「腫瘍関連抗原」または「ＴＡＡ」は、腫瘍細胞によって特異的に発現される、または腫瘍細胞によって、同じ組織型の非腫瘍細胞よりも高い頻度もしくは密度で発現される抗原を指す。ＴＡＡは、宿主によって正常には発現されない分子、または宿主によって正常に発現される分子が突然変異、短縮、ミスフォールドもしくは他の形で異常に顕在化された分子であり得る。ＴＡＡの例として、ＣＥＡ、ＴＥＲＴおよびＭＵＣ１が挙げられる。
【００６０】
用語「同時投与」は、処置レジメンの一部としての同じ対象への２種以上の薬剤の投与を指す。２種以上の薬剤は、単一製剤中に包含され得、よって、同時に投与され得る。あるいは、２種以上の薬剤は、物理的に別々の製剤中に存在し得、対象に逐次または同時のいずれかで別々に投与され得る。用語「同時に投与される」または「同時の投与」は、第１の薬剤の投与および第２の薬剤の投与が、互いに時間的に重複することを意味するが、用語「逐次に投与される」または「逐次の投与」は、第１の薬剤の投与および第２の薬剤の投与が、互いに時間的に重複しないことを意味する。
【００６１】
用語「サイトゾル」または「細胞質」は、特定のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列が、宿主細胞によって発現された後に、発現されたポリペプチドが、宿主細胞の内側に保持されると予想されることを意味する。
【００６２】
用語「縮重バリアント」は、塩基の置換を有するが、同じポリペプチドまたはアミノ酸配列をコードする核酸配列を指す。
【００６３】
用語「有効量」は、哺乳動物において所望の効果を引き起こすのに十分な、哺乳動物に投与される量を指す。
【００６４】
アミノ酸配列または免疫原性ＴＡＡポリペプチド（まとめると「参照ポリペプチド」）の「機能的バリアント」という用語は、参照（refrence）ポリペプチドのアミノ酸の数の９０％〜１００％を含み、参照ポリペプチドのアミノ酸配列に対し１００％よりも低いが９５％よりも高い同一性を有し、参照ポリペプチドと同じまたは同様の免疫原性特性を保持する、アミノ酸配列またはポリペプチドを指す。
【００６５】
用語「同一」は、それぞれヌクレオチドまたはアミノ酸の全く同じ配列を共有する２種以上の核酸または２種以上のポリペプチドを指す。用語「パーセント同一性」は、２種以上の核酸またはポリペプチドの間の類似性のレベルについて記載する。２種の配列が、バイオインフォマティクスソフトウェアによって整列される場合、「パーセント同一性」は、配列間の正確なヌクレオチド／アミノ酸マッチの数に１００を掛け、ギャップを含む整列された領域の長さで割ることにより計算される。例えば、整列された場合に１０個のミスマッチを示す２種の１００アミノ酸長ポリペプチドは、９０％同一となる。
【００６６】
用語「免疫エフェクター細胞エンハンサー」または「ＩＥＣエンハンサー」は、哺乳動物の免疫エフェクター細胞の１種または複数の型の数、品質および／または機能を増加および／または増強することができる物質を指す。免疫エフェクター細胞の例として、細胞溶解性樹状（Dendiritic）細胞、ＣＤ８  Ｔ細胞、ＣＤ４  Ｔ細胞、ＮＫ細胞およびＢ細胞が挙げられる。
【００６７】
用語「免疫モジュレーター」は、哺乳動物の自然、液性または細胞性免疫系のいずれかの成分の働きまたは機能を変更（例えば、阻害、減少、増加、増強または刺激）することができる物質を指す。よって、用語「免疫モジュレーター」は、本明細書に定義されている「免疫エフェクター細胞エンハンサー」および本明細書に定義されている「免疫抑制性細胞阻害剤」、ならびに哺乳動物の免疫系の他のいずれかの成分に影響を与える物質を包含する。
【００６８】
用語「免疫応答」は、細胞媒介性免疫応答（例えば、抗原特異的Ｔ細胞等のＴ細胞および免疫系の非特異的細胞によって媒介される応答）および液性免疫応答（例えば、抗体の生成ならびに血漿、リンパ液および／または組織液への分泌等、Ｂ細胞によって媒介される応答）を含む、宿主哺乳動物の適応免疫系による特定の物質（抗原または免疫原等）に対するいずれかの検出可能応答を指す。免疫応答の例として、サイトカイン（例えば、Ｔｈ１、Ｔｈ２またはＴｈ１７型サイトカイン）またはケモカインの放出の変更（例えば、増加）、マクロファージ活性化、樹状細胞活性化、Ｔ細胞（例えば、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞）活性化、Ｂ細胞応答（例えば、抗体産生）の誘導、細胞傷害性Ｔリンパ球（「ＣＴＬ」）応答の誘導、および免疫系の細胞（例えば、Ｔ細胞およびＢ細胞）の増大（例えば、細胞の集団の成長）が挙げられる。
【００６９】
用語「免疫原性の」または「免疫原性」は、単独であれ担体に連結された場合であれ、アジュバントの存在または非存在下での、宿主哺乳動物における免疫応答を引き起こす、誘発する、刺激するもしくは誘導する、または既存の免疫応答を改善する、増強する、増加するもしくは延長する、宿主哺乳動物（ヒト等）への投与後の物質の能力を指す。かかる物質は、「免疫原」と称される。
【００７０】
用語「免疫原性組成物」は、免疫原性である組成物を指す。
【００７１】
用語「免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチド」は、ヒト天然ＭＵＣ１タンパク質、またはヒト天然ＭＵＣ１タンパク質を発現する細胞に対して免疫原性であるポリペプチドを指す。ポリペプチドは、ヒト天然ＭＵＣ１タンパク質の配列と同じアミノ酸配列を有することができる、またはヒト天然ＭＵＣ１タンパク質のアミノ酸配列と比較して、１個もしくは複数の突然変異を表示することができる。
【００７２】
用語「免疫原性ＣＥＡポリペプチド」は、ヒト天然ＣＥＡタンパク質、またはヒト天然ＣＥＡタンパク質を発現する細胞に対して免疫原性であるポリペプチドを指し、ヒト天然ＣＥＡタンパク質のアミノ酸配列と比較して、１個または複数のアミノ酸の欠失等の１個または複数の突然変異を表示する。
【００７３】
用語「免疫原性ＴＥＲＴポリペプチド」は、ヒト天然ＴＥＲＴタンパク質、またはヒト天然ＴＥＲＴタンパク質を発現する細胞に対して免疫原性であるポリペプチドを指す。ポリペプチドは、ヒト天然ＴＥＲＴタンパク質の配列と同じアミノ酸配列を有することができる、またはヒト天然ＴＥＲＴタンパク質のアミノ酸配列と比較して、１個もしくは複数の突然変異を表示する。
【００７４】
用語「免疫原性ＴＡＡポリペプチド」は、本明細書の上述にそれぞれ定義されている、「免疫原性ＣＥＡポリペプチド」、「免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチド」または「免疫原性ＴＥＲＴポリペプチド」を指す。
【００７５】
用語「免疫抑制性細胞阻害剤」または「ＩＳＣ阻害剤」は、哺乳動物の免疫抑制性細胞の数および／または機能を低下および／または抑制することができる物質を指す。免疫抑制性細胞の例として、調節性Ｔ細胞（「Ｔｒｅｇ」）、骨髄系由来サプレッサー細胞および腫瘍関連マクロファージが挙げられる。
【００７６】
用語「哺乳動物」は、哺乳綱のいずれかの動物種を指す。哺乳動物の例として、ヒト；サル等の非ヒト霊長類；ラット、マウス、モルモット等の実験動物；ネコ、イヌ、ウサギ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマおよびブタ等の飼育動物；ならびにライオン、トラ、ゾウその他等の捕獲野生動物が挙げられる。
【００７７】
用語「膜結合」は、特定のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列が、宿主細胞によって発現された後に、発現されたポリペプチドが、細胞の膜に結合される、これに取り付けられる、または他の形でこれに会合されることを意味する。
【００７８】
用語「新生物障害」は、細胞が、異常に速く制御されない速度で増殖する状態を指し、この速度は、周囲の正常組織の増殖速度を超え、これと非協調的である。それは通常、「腫瘍」として知られる固形の病変またはしこりを生じる。この用語は、良性および悪性新生物障害を包含する。本開示において用語「がん」と互換的に使用される用語「悪性新生物障害」は、身体の他の位置に拡散する腫瘍細胞の能力（「転移」として知られる）によって特徴付けられる新生物障害を指す。用語「良性新生物障害」は、腫瘍細胞が、転移する能力を欠く新生物障害を指す。
【００７９】
用語「突然変異」は、参照タンパク質またはポリペプチドのアミノ酸配列と比較した、タンパク質またはポリペプチドのアミノ酸配列におけるアミノ酸残基の欠失、付加または置換を指す。
【００８０】
用語「医薬組成物」は、所望の生理学的、薬理学的または治療的効果を誘発するための、対象（例えば、ヒト患者）への投与に適した固体または液体組成物を指す。１種または複数の活性成分の含有に加えて、医薬組成物は、１種または複数の薬学的に許容できる賦形剤を含有することができる。
【００８１】
用語「薬学的に許容できる賦形剤」は、活性成分（例えば、抗原、抗原コード核酸、免疫モジュレーターまたはアジュバント）以外の、ワクチン等の医薬組成物中の物質を指し、これは、活性成分と適合性であり、これが投与された対象において有意な有害効果を引き起こさない。
【００８２】
医薬組成物の文脈で使用される用語「賦形剤」は、一般に薬用特性がなく、薬物製品の製造を合理化する、ならびに／または活性薬物物質の安定化、送達および吸収を容易にする目的で組成物中に含まれる物質を指す。用語「薬学的に許容できる賦形剤」は、ワクチン組成物等の医薬組成物中の賦形剤を指し、これは、組成物中の活性成分（例えば、抗原または免疫原、抗原コード核酸、免疫モジュレーターまたはアジュバント）と適合性であり、これが投与された対象において有意な有害効果を引き起こさない。
【００８３】
用語「ペプチド」、「ポリペプチド」および「タンパク質」は、本明細書で互換的に使用され、ペプチド結合によって一体に連結されたアミノ酸のポリマー形態を指す。これらの用語は、いかなる長さのものであってもよく、コードされたおよびコードされていないアミノ酸、化学もしくは生化学修飾されたまたは誘導体化されたアミノ酸を含むことができる。
【００８４】
用語「予防すること」または「予防する」は、（ａ）障害が発生するのを妨げること、（ｂ）障害の発生もしくは障害の症状の発生を遅延させること、または（ｃ）障害の発生率もしくは効果を最小化することを指す。
【００８５】
ポリペプチドの文脈における用語「分泌された」は、ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列が、宿主細胞によって発現された後に、発現されたポリペプチドが、宿主細胞の外側に分泌されることを意味する。
【００８６】
タンパク質キナーゼ阻害剤等の免疫モジュレーターの量の記載に使用される場合、用語「最適に満たない用量」は、免疫モジュレーターが患者に単独で投与される場合に処置されている疾患のための所望の治療的効果の産生に要求される最小量を下回る、免疫モジュレーターの用量を指す。
【００８７】
用語「処置すること」、「処置」または「処置する」は、障害を抑止すること、障害の重症度を低下させること、または障害の症状の重症度もしくは出現頻度を低下させることを指す。
【００８８】
用語「ワクチン」は、特定の抗原（単数または複数）に対する防御免疫応答を誘発するための、哺乳動物（ヒト等）への投与のための免疫原性組成物を指す。ワクチンの主要な活性成分は、免疫原（複数可）である。免疫原として免疫原性ポリペプチドを含むワクチンは、「ペプチドワクチン」とも称される。免疫原性ポリペプチドを含有しないが、むしろ免疫原性ポリペプチドをコードする核酸分子を含有するワクチンは、「ＤＮＡワクチン」または「ＲＮＡワクチン」（状況に応じて）と称される。宿主細胞へのＤＮＡまたはＲＮＡワクチンの送達後に、核酸分子によってコードされる免疫原性ポリペプチドは、宿主細胞によって発現され、防御免疫応答を生じる。ＤＮＡまたはＲＮＡワクチン中の核酸分子は、ネイキッド核酸、プラスミドもしくはウイルスベクターの形態、または核酸の送達に適した他のいずれかの形態であり得る。
【００８９】
用語「ベクター」は、外来性核酸分子を宿主細胞に輸送または移入することができる、核酸分子または修飾された微生物を指す。外来性核酸分子は、「挿入物」または「導入遺伝子」と称される。ベクターは一般に、挿入物、およびベクターの骨格として機能するより大型の配列からなる。ベクターの構造または起源に基づき、ベクターの主要な型は、プラスミドベクター、コスミドベクター、ファージベクター（ラムダファージ等）、ウイルスベクター（アデノウイルスベクター等）、人工染色体および細菌ベクターを含む。
【００９０】
Ｂ．免疫原性ＴＡＡポリペプチド
一部の態様では、本開示は、例えば、ｉｎ  ｖｉｖｏ（例えば、ヒトを含む動物における）もしくはｉｎ  ｖｉｔｒｏでの免疫応答の誘発、エフェクターＴ細胞の活性化、またはＴＡＡに特異的な抗体の生成に、または膵、肺がん、結腸直腸がん、胃がんもしくは乳がん等のがんの処置のためのワクチンを含む医薬組成物中の成分としての使用に有用な、単離された免疫原性ＴＡＡポリペプチドを提供する。
【００９１】
これらの免疫原性ＴＡＡポリペプチドは、本開示を踏まえて、当技術分野で公知の方法によって調製することができる。免疫応答を誘発するポリペプチドの能力は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイまたはｉｎ  ｖｉｖｏアッセイにおいて測定することができる。免疫応答を誘発するポリペプチドまたはＤＮＡ構築物の能力を決定するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイは、当技術分野で公知である。かかるｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイの一例は、その開示が本願に組み込まれる米国特許第７，３８７，８８２号に記載されている通り、Ｔ細胞応答を刺激するポリペプチドまたはポリペプチドを発現する核酸の能力を測定することである。アッセイ方法は、（１）培養抗原提示細胞を抗原と接触させ、これにより、抗原提示細胞によって抗原が取り入れられプロセシングされ、１種または複数のプロセシングされた抗原を産生することができるステップ；（２）Ｔ細胞が、プロセシングされた抗原のうち１種または複数に応答するのに十分な条件下で、抗原提示細胞をＴ細胞と接触させるステップ；（３）Ｔ細胞が、プロセシングされた抗原のうち１種または複数に応答するか決定するステップを含む。使用されるＴ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞またはＣＤ４＋Ｔ細胞であり得る。Ｔ細胞応答は、インターフェロン−ガンマおよびインターロイキン−２等の１種または複数のサイトカインの放出ならびに抗原提示細胞（腫瘍細胞）の溶解を測定することにより決定することができる。Ｂ細胞応答は、抗体の産生を測定することにより決定することができる。
【００９２】
Ｂ−１．免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチド
一態様では、本開示は、ヒト天然ＭＵＣ１タンパク質に１個または複数の突然変異を導入することにより、ヒト天然ＭＵＣ１に由来する免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドを提供する。突然変異の例として、ＭＵＣ１タンパク質のＶＮＴＲ領域における２０アミノ酸のタンデム反復の全てではなく一部の欠失、全体的なまたは部分的なシグナルペプチド配列の欠失、およびＭＵＣ１アイソフォームに見出される非コンセンサスアミノ酸配列のアミノ酸の欠失が挙げられる。よって、一部の実施形態では、免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドは、（１）ヒトＭＵＣ１タンパク質の２０アミノ酸の３〜３０個のタンデム反復のアミノ酸配列、および（２）ＶＮＴＲ領域に隣接するヒトＭＵＣ１タンパク質のアミノ酸配列を含む。一部の特定の実施形態では、免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドは、（１）ヒトＭＵＣ１の５〜２５個のタンデム反復のアミノ酸配列、および（２）ＶＮＴＲ領域に隣接するヒトＭＵＣ１タンパク質のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドは、（１）ヒトＭＵＣ１タンパク質の２０アミノ酸の３〜３０個のタンデム反復のアミノ酸配列、および（２）ＶＮＴＲ領域に隣接するヒトＭＵＣ１タンパク質のアミノ酸配列からなる。一部の特定の実施形態では、免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドは、（１）ヒトＭＵＣ１の５〜２５個のタンデム反復のアミノ酸配列、および（２）ＶＮＴＲ領域に隣接するヒトＭＵＣ１タンパク質のアミノ酸配列からなる。一部のさらなる実施形態では、免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドは、細胞質形態（または「ｃＭＵＣ１」）である。用語「細胞質形態」は、ヒト天然ＭＵＣ１タンパク質の分泌配列（アミノ酸１〜２３；「シグナルペプチド配列」としても知られる）を全体的にまたは部分的に欠く免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドを指す。分泌配列のアミノ酸の欠失は、細胞内で発現される際にポリペプチドが分泌経路に進入するのを防ぐと予想される。一部の他の実施形態では、免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドは、膜結合形態である。免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドは、例えば、Ｕｎｉｐｒｏｔアイソフォーム１、２、３、４、５、６、Ｙ、８、９、Ｆ、Ｙ−ＬＳＰ、Ｓ２、Ｍ６、ＺＤ、Ｔ１０、Ｅ２およびＪ１３（それぞれＵｎｉｐｒｏｔ  Ｐ１５９４１−１からＰ１５９４１−１７）を含む、当技術分野で公知のまたは将来発見されるヒトＭＵＣ１アイソフォームのいずれかのアミノ酸配列に由来する、これから構築するまたはこれから調製することができる。一部の実施形態では、免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドは、ヒトＭＵＣ１アイソフォーム１の一部であるアミノ酸配列を含み、ヒトＭＵＣ１アイソフォーム１のアミノ酸配列は、配列番号１に表記されている。一部の実施形態では、免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドは、ヒトＭＵＣ１アイソフォーム１の一部であるアミノ酸配列からなり、ヒトＭＵＣ１アイソフォーム１のアミノ酸配列は、配列番号１に表記されている。特定の実施形態では、免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列のアミノ酸２２〜２２５および９４６〜１２５５を含む。一部の他の特定の実施形態では、本開示は、
（１）配列番号５のアミノ酸配列（プラスミド１０２７ポリペプチド）を含むまたはこれからなるポリペプチド；
（２）配列番号５のアミノ酸４〜５３７を含むまたはこれからなるポリペプチド；
（３）配列番号５のアミノ酸２４〜５３７を含むまたはこれからなるポリペプチド；
（４）配列番号７のアミノ酸配列（プラスミド１１９７ポリペプチド）を含むまたはこれからなるポリペプチド；
（５）配列番号７のアミノ酸４〜５１７を含むまたはこれからなるポリペプチド；
（６）配列番号７のアミノ酸４〜５１７を含むまたはこれからなるポリペプチドであって、配列番号７における位置（positon）５１３のアミノ酸がＴである、ポリペプチド；および
（７）上述の（１）〜（６）のポリペプチドのいずれかの機能的バリアント
から選択される免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドを提供する。
【００９３】
一部の特定の実施形態では、免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドは、配列番号５（プラスミド１０２７ポリペプチド）または配列番号７（プラスミド１１９７ポリペプチド）のアミノ酸配列を含む。一部の特定の実施形態では、免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドは、配列番号５（プラスミド１０２７ポリペプチド）または配列番号７（プラスミド１１９７ポリペプチド）のアミノ酸配列からなる。
【００９４】
一態様では、本発明は、本明細書に開示される免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドのいずれかの機能的バリアントを提供する。
【００９５】
Ｂ−２．免疫原性ＴＥＲＴポリペプチド
別の態様では、本開示は、ＴＥＲＴタンパク質の最大６００個のＮ末端アミノ酸の欠失によりヒトＴＥＲＴタンパク質に由来する免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドを提供する。よって、免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドは、いずれかのヒトＴＥＲＴタンパク質アイソフォームの位置６０１から始まるＣ末端アミノ酸配列を含むことができる。一部の実施形態では、免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドは、配列番号３に表記されているＴＥＲＴアイソフォーム１のアミノ酸配列を含み、ＴＥＲＴアイソフォーム１のアミノ酸配列のＮ末端（アミノ末端）から最大約６００アミノ酸が存在しない。ＴＥＲＴアイソフォーム１のＮ末端から最大６００個のいかなる数のアミノ酸も、免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドにおいて存在しなくてもよい。例えば、配列番号３のＴＥＲＴアイソフォーム１の位置１から位置５０、１００、５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０または６００のＮ末端アミノ酸が、免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドから存在しなくてもよい。よって、免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドは、配列番号３のアミノ酸５１〜１１３２、１０１〜１１３２、１５１〜１１３２、２０１〜１１３２、２５１〜１１３２、３０１〜１１３２、３５１〜１１３２、４０１〜１１３２、４５１〜１１３２、５０１〜１１３２または５５１〜１１３２を含むことができる。一実施形態では、免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドは、配列番号３のアミノ酸配列のアミノ酸６０１〜１１３２を含む。別の実施形態では、本開示は、配列番号３のアミノ酸配列のアミノ酸２４１〜１１３２を含む免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドを提供する。
【００９６】
免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドは、配列番号３のアミノ酸５１〜１１３２、１０１〜１１３２、１５１〜１１３２、２０１〜１１３２、２５１〜１１３２、３０１〜１１３２、３５１〜１１３２、４０１〜１１３２、４５１〜１１３２、５０１〜１１３２または５５１〜１１３２からなることができる。一実施形態では、免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドは、配列番号３のアミノ酸配列のアミノ酸６０１〜１１３２からなる。別の実施形態では、本開示は、配列番号３のアミノ酸配列のアミノ酸２４１〜１１３２からなる免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドを提供する。
【００９７】
免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドは、他のＴＥＲＴアイソフォームから構築することもできる。免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドが、アイソフォーム２、３または４等、Ｃ末端短縮を有するＴＥＲＴアイソフォームから構築される場合、より少ないアミノ酸が、タンパク質のＮ末端から欠失されることが好ましい。
【００９８】
一部のさらなる実施形態では、免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドは、ＴＥＲＴ触媒ドメインを不活性化する１個または複数のアミノ酸突然変異をさらに含む。かかるアミノ酸突然変異の例として、配列番号３の位置７１２におけるアラニンによるアスパラギン酸の置換（Ｄ７１２Ａ）および配列番号３の位置７１３におけるイソロイシンによるバリンの置換（Ｖ７１３Ｉ）が挙げられる。一部の実施形態では、免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドは、突然変異Ｄ７１２ＡおよびＶ７１３Ｉの両方を含む。ある実施形態では、前記突然変異は、配列番号３の位置７１２におけるアスパラギン酸の置換および／または配列番号３の位置７１３におけるバリンの置換（Ｖ７１３Ｉ）を含み、前記突然変異（複数可）は、ＴＥＲＴ触媒ドメインを不活性化する。別の実施形態では、前記突然変異は、配列番号３の位置７１２におけるアスパラギン酸の置換および／または配列番号３の位置７１３におけるバリンの置換（Ｖ７１３Ｉ）からなり、前記突然変異（複数可）は、ＴＥＲＴ触媒ドメインを不活性化する。また別の実施形態では、前記突然変異は、配列番号３の位置７１２におけるアラニンによるアスパラギン酸の置換（Ｄ７１２Ａ）および／または配列番号３の位置７１３におけるイソロイシンによるバリンの置換（Ｖ７１３Ｉ）からなる。
【００９９】
一部の特定の実施形態では、本開示は、
（１）配列番号９のアミノ酸配列（プラスミド１１１２ポリペプチド）もしくは配列番号９のアミノ酸２〜８９３を含むもしくはこれからなるポリペプチド；
（２）配列番号１１のアミノ酸配列（プラスミド１３２６ポリペプチド）もしくは配列番号１１のアミノ酸３〜７９１を含むもしくはこれからなるポリペプチド；
（３）配列番号１３のアミノ酸配列（プラスミド１３３０ポリペプチド）もしくは配列番号１３のアミノ酸４〜５９４を含むもしくはこれからなるポリペプチド；または
（４）上述の（１）〜（３）のポリペプチドのいずれかの機能的バリアントであるポリペプチド
から選択される免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドを提供する。
【０１００】
一態様では、本発明は、本明細書に開示される免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドのいずれかの機能的バリアントを提供する。
【０１０１】
Ｂ−３．免疫原性ＣＥＡポリペプチド
別の態様では、本開示は、ヒト天然ＣＥＡ前駆体タンパク質に１個または複数の突然変異を導入することにより、ヒト天然ＣＥＡに由来する単離された免疫原性ＣＥＡポリペプチドを提供する。導入される突然変異の例として、Ｃ２様ドメインのうち１、２、３、４または５個の欠失、全体的なまたは部分的なシグナルペプチド配列の欠失、およびプロペプチドのアミノ酸の一部または全ての欠失が挙げられる。よって、一部の実施形態では、本開示によって提供される免疫原性ＣＥＡポリペプチドは、（１）Ｎ−ドメインのアミノ酸配列、および（２）ヒトＣＥＡタンパク質の１〜５個のＣ２様ドメインのアミノ酸配列を含む。一部の特定の実施形態では、免疫原性ＣＥＡポリペプチドは、（１）Ａ２、Ｂ２、Ａ３およびＢ３等の少なくとも４個のＣ２様ドメインのアミノ酸配列、ならびに（２）Ｎ−ドメインのアミノ酸配列を含む。一部のさらなる実施形態では、免疫原性ＣＥＡポリペプチドは、細胞質形態（または「ｃＣＥＡ」）である。用語「細胞質形態」は、ヒト天然ＣＥＡ前駆体タンパク質のシグナルペプチド配列（アミノ酸１〜３４）を全体的にまたは部分的に欠く免疫原性ＣＥＡポリペプチドを指す。シグナルペプチドのアミノ酸の欠失は、細胞内で発現される際にポリペプチドが分泌経路に進入するのを防ぐと予想される。一部の他の実施形態では、免疫原性ＣＥＡポリペプチドは、膜結合形態（または「ｍＣＥＡ」）である。免疫原性ｍＣＥＡポリペプチドは、シグナルペプチドのアミノ酸を含み、宿主細胞によって発現された後に、宿主細胞の膜に結合または他の形で会合されたままとなる。
【０１０２】
本開示によって提供される免疫原性ＣＥＡポリペプチドは、当技術分野で公知のまたは将来発見されるヒトＣＥＡアイソフォームのいずれかのアミノ酸配列に由来する、これから構築する、またはこれから調製することができる。一部の実施形態では、免疫原性ＣＥＡポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸配列を有するヒトＣＥＡアイソフォーム１前駆体タンパク質の一部であるアミノ酸配列を含む。
【０１０３】
一部の特定の実施形態では、本開示は、次の免疫原性ＣＥＡポリペプチドのいずれかを提供する：
（１）配列番号２のアミノ酸２〜７０２、配列番号２のアミノ酸３２３〜７０２もしくは配列番号２のアミノ酸３２３〜６７７を含むポリペプチド；
（２）配列番号２のアミノ酸２〜７０２、配列番号２のアミノ酸３２３〜７０２もしくは配列番号２のアミノ酸３２３〜６７７からなるポリペプチド；
（３）配列番号１５のアミノ酸（プラスミド１３６１にコードされるアミノ酸配列）もしくは配列番号１５のアミノ酸４〜７０４を含むポリペプチド；
（４）配列番号１５のアミノ酸（プラスミド１３６１にコードされるアミノ酸配列）もしくは配列番号１５のアミノ酸４〜７０４からなるポリペプチド；
（５）配列番号１７のアミノ酸配列（プラスミド１３８６にコードされるアミノ酸配列）もしくは配列番号１７のアミノ酸４〜５２６を含むポリペプチド；
（６）配列番号１７のアミノ酸配列（プラスミド１３８６にコードされるアミノ酸配列）もしくは配列番号１７のアミノ酸４〜５２６からなるポリペプチド；
（７）配列番号１９の配列（プラスミド１３９０にコードされるアミノ酸配列）もしくは配列番号１９のアミノ酸４〜４６８を含むポリペプチド；
（８）配列番号１９の配列（プラスミド１３９０にコードされるアミノ酸配列）もしくは配列番号１９のアミノ酸４〜４６８からなるポリペプチド；または
（９）上述の（１）〜（８）のポリペプチドのいずれかの機能的バリアントであるポリペプチド。
【０１０４】
一態様では、本発明は、本明細書に開示される免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドのいずれかの機能的バリアントを提供する。
【０１０５】
Ｃ．１種または複数の免疫原性ＴＡＡポリペプチドをコードする抗原構築物
一部の態様では、本開示は、１、２、３種以上の別々の免疫原性ＴＡＡポリペプチドをコードする単離された核酸分子を提供する。かかる核酸分子は、本開示で「抗原構築物」とも称される。１種のみの免疫原性ＴＡＡポリペプチドをコードする核酸分子は、本明細書で、「単一抗原構築物」とも称され、１種より多い免疫原性ＴＡＡポリペプチドをコードする核酸分子は、「多重抗原構築物」とも称される。２種の異なる免疫原性ＴＡＡポリペプチドをコードする核酸分子は、「二重抗原構築物」とも称され、３種の異なる免疫原性ＴＡＡポリペプチドをコードする核酸分子は、「三重抗原構築物」とも称される。核酸分子は、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）またはリボ核酸（ＲＮＡ）であり得る。よって、核酸分子は、本明細書に開示されるヌクレオチド配列を含むことができ、チミジン（Ｔ）は、ウラシル（Ｕ）であってもよく、これは、ＤＮＡおよびＲＮＡの化学構造の間の差を反映する。本開示におけるＤＮＡのヌクレオチド配列に対応するＲＮＡのヌクレオチド配列を参照すると、用語「対応する」または「対応すること」は、ＤＮＡヌクレオチド配列におけるチミジン（Ｔ）が、ＲＮＡヌクレオチド配列においてウラシル（Ｕ）に置き換えられていることを除いて、ＤＮＡの参照ヌクレオチド配列と同一であるＲＮＡのヌクレオチド配列を指す。核酸分子は、修飾形態、一本鎖もしくは二本鎖形態、または直鎖状もしくは環状形態であり得る。
【０１０６】
ＤＮＡおよびＲＮＡ構築物の両方を含む（inlcduing）抗原構築物は、本開示を踏まえて、当技術分野で公知の方法を使用して調製することができる。単一抗原構築物および多重抗原構築物を作製するための方法は、本明細書にさらに後述されている。その上、宿主細胞へのｍＲＮＡの注射が、コードされたタンパク質の発現および免疫学的応答をもたらすことが十分に確立されている。当技術分野で公知の様々なエレメント／システム（ＵＴＲ、ポリＡ、キャッピングシステムおよびコドン最適化等）の使用により、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写されたｍＲＮＡを安定に産生することができ、コードされたタンパク質を効率的に翻訳することができる。さらに、ｍＲＮＡコードされたポリペプチドへのリソソームまたはエンドソーム標的化シグナルの融合は、Ｔ細胞免疫応答を増強することができる。ｍＲＮＡは、製剤化せずにまたはＥＰによりまたは脂質もしくは他の媒体中に製剤化して送達することができる。
【０１０７】
Ｃ−１．ＣＥＡ単一抗原構築物
一部の実施形態では、本開示は、本明細書に上述されている免疫原性ＣＥＡポリペプチドのいずれかをコードする抗原構築物を提供する。
【０１０８】
一部の特定の実施形態では、抗原構築物は、
（１）配列番号２のアミノ酸２〜７０２、配列番号２のアミノ酸３２３〜７０２もしくは配列番号２のアミノ酸３２３〜６７７を含むポリペプチド；
（２）配列番号１５のアミノ酸（プラスミド１３６１にコードされるアミノ酸配列）もしくは配列番号１５のアミノ酸４〜７０４を含むポリペプチド；
（３）配列番号１７のアミノ酸配列（プラスミド１３８６にコードされるアミノ酸配列）もしくは配列番号１７のアミノ酸４〜５２６を含むポリペプチド；
（４）配列番号１９の配列（プラスミド１３９０にコードされるアミノ酸配列）もしくは配列番号１９のアミノ酸４〜４６８を含むポリペプチド；または
（５）上述の（１）〜（４）のポリペプチドのいずれかの機能的バリアントであるポリペプチド
から選択される免疫原性ＣＥＡポリペプチドをコードする。
【０１０９】
一部の特定の実施形態では、抗原構築物は、
（１）配列番号２のアミノ酸２〜７０２、配列番号２のアミノ酸３２３〜７０２もしくは配列番号２のアミノ酸３２３〜６７７からなるポリペプチド；
（２）配列番号１５のアミノ酸（プラスミド１３６１にコードされるアミノ酸配列）もしくは配列番号１５のアミノ酸４〜７０４からなるポリペプチド；
（３）配列番号１７のアミノ酸配列（プラスミド１３８６にコードされるアミノ酸配列）もしくは配列番号１７のアミノ酸４〜５２６からなるポリペプチド；
（４）配列番号１９の配列（プラスミド１３９０にコードされるアミノ酸配列）もしくは配列番号１９のアミノ酸４〜４６８からなるポリペプチド；または
（５）上述の（１）〜（４）のポリペプチドのいずれかの機能的バリアントであるポリペプチド
から選択される免疫原性ＣＥＡポリペプチドをコードする。
【０１１０】
一部の特定の実施形態では、本開示は、ＤＮＡであり、
（１）配列番号１４のヌクレオチド配列（プラスミド１３６１オープンリーディングフレーム）または配列番号１４のヌクレオチド１０〜２１１２を含むヌクレオチド配列；
（２）配列番号１６のヌクレオチド配列（プラスミド１３８６オープンリーディングフレーム）または配列番号１６のヌクレオチド１０〜１５７８を含むヌクレオチド配列；
（３）配列番号１８のヌクレオチド配列（プラスミド１３９０オープンリーディングフレーム）または配列番号１８のヌクレオチド１０〜１４０４を含むヌクレオチド配列；および
（４）（１）〜（３）のヌクレオチド配列の縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む抗原構築物を提供する。
【０１１１】
一部の他の特定の実施形態では、本開示は、ＤＮＡであり、
（１）配列番号１４のヌクレオチド配列（プラスミド１３６１オープンリーディングフレーム）または配列番号１４のヌクレオチド１０〜２１１２からなるヌクレオチド配列；
（２）配列番号１６のヌクレオチド配列（プラスミド１３８６オープンリーディングフレーム）または配列番号１６のヌクレオチド１０〜１５７８からなるヌクレオチド配列；
（３）配列番号１８のヌクレオチド配列（プラスミド１３９０オープンリーディングフレーム）または配列番号１８のヌクレオチド１０〜１４０４からなるヌクレオチド配列；および
（４）（１）〜（３）のヌクレオチド配列の縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列からなる抗原構築物を提供する。一部の他の特定の実施形態では、本開示は、ＲＮＡであり、
（１）配列番号１４のヌクレオチド配列（プラスミド１３６１オープンリーディングフレーム）または配列番号１４のヌクレオチド１０〜２１１２を含むヌクレオチド配列；
（２）配列番号１６のヌクレオチド配列（プラスミド１３８６オープンリーディングフレーム）または配列番号１６のヌクレオチド１０〜１５７８を含むヌクレオチド配列；
（３）配列番号１８のヌクレオチド配列（プラスミド１３９０オープンリーディングフレーム）または配列番号１８のヌクレオチド１０〜１４０４を含むヌクレオチド配列；および
（４）（１）〜（３）のヌクレオチド配列の縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対応するヌクレオチド配列を含む抗原構築物を提供する。
【０１１２】
Ｃ−２．多重抗原構築物
別の態様では、本開示は、２、３種以上の異なる免疫原性ＴＡＡポリペプチドをそれぞれコードする抗原構築物を提供する。
【０１１３】
単一の核酸からの２種以上のポリペプチドの同時発現のためのベクター（当技術分野で「マルチシストロニック（multicistronic）ベクター」としても知られる）の構築のための方法および技法が、当技術分野で公知である。本開示によって提供される多重抗原構築物は、本開示を踏まえてかかる技法を使用して調製することができる。例えば、多重抗原構築物は、複数の独立したプロモーターを単一のプラスミドに取り込むことにより構築することができる（Ｈｕａｎｇ，Ｙ．、Ｚ．Ｃｈｅｎら（２００８）「Ｄｅｓｉｇｎ，  ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ，  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｄｕａｌ−ｐｒｏｍｏｔｅｒ  ｍｕｌｔｉｇｅｎｉｃ  ＤＮＡ  ｖａｃｃｉｎｅ  ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ａｇａｉｎｓｔ  ａｎ  ＨＩＶ−１  ｓｕｂｔｙｐｅ  Ｃ／Ｂ’  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ．」Ｊ  Ａｃｑｕｉｒ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｄｅｆｉｃ  Ｓｙｎｄｒ  ４７（４）：４０３〜４１１；Ｘｕ，Ｋ．、Ｚ．Ｙ．Ｌｉｎｇら（２０１１）「Ｂｒｏａｄ  ｈｕｍｏｒａｌ  ａｎｄ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ｅｌｉｃｉｔｅｄ  ｂｙ  ａ  ｂｉｖａｌｅｎｔ  ＤＮＡ  ｖａｃｃｉｎｅ  ｅｎｃｏｄｉｎｇ  ＨＡ  ａｎｄ  ＮＰ  ｇｅｎｅｓ  ｆｒｏｍ  ａｎ  Ｈ５Ｎ１  ｖｉｒｕｓ．」Ｖｉｒａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２４（１）：４５〜５６）。プラスミドは、それぞれａ）エンハンサーエレメントありまたはなしの、ＲＮＡポリメラーゼ依存性転写を開始するための真核生物プロモーター、ｂ）標的抗原をコードする遺伝子、およびｃ）転写ターミネーター配列からなる、複数の発現カセットを保有するように操作することができる。トランスフェクトされた細胞核へのプラスミドの送達後に、各プロモーターから転写が開始され、標的抗原の１種をそれぞれコードする別々のｍＲＮＡの産生をもたらす。ｍＲＮＡは、独立して翻訳され、これにより、所望の抗原を産生する。
【０１１４】
本開示によって提供される多重抗原構築物は、ウイルス２Ａペプチドの使用により構築することもできる（Ｓｚｙｍｃｚａｋ，Ａ．Ｌ．およびＤ．Ａ．Ｖｉｇｎａｌｉ（２００５）「Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ２Ａ  ｐｅｐｔｉｄｅ−ｂａｓｅｄ  ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  ｍｕｌｔｉｃｉｓｔｒｏｎｉｃ  ｖｅｃｔｏｒｓ．」Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｌ  Ｔｈｅｒ  ５（５）：６２７〜６３８；ｄｅ  Ｆｅｌｉｐｅ，Ｐ．、Ｇ．Ａ．Ｌｕｋｅら（２００６）「Ｅ  ｕｎｕｍ  ｐｌｕｒｉｂｕｓ：  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｆｒｏｍ  ａ  ｓｅｌｆ−ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ  ｐｏｌｙｐｒｏｔｅｉｎ．」Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２４（２）：６８〜７５；Ｌｕｋｅ，Ｇ．Ａ．、Ｐ．ｄｅ  Ｆｅｌｉｐｅら（２００８）「Ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ，  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ  ｏｒｉｇｉｎｓ  ｏｆ  ’２Ａ−ｌｉｋｅ’  ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｉｎ  ｖｉｒｕｓ  ｇｅｎｏｍｅｓ．」Ｊ  Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ  ８９（Ｐｔ  ４）：１０３６〜１０４２；Ｉｂｒａｈｉｍｉ，Ａ．、Ｇ．Ｖａｎｄｅ  Ｖｅｌｄｅら（２００９）「Ｈｉｇｈｌｙ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  ｍｕｌｔｉｃｉｓｔｒｏｎｉｃ  ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ  ｖｅｃｔｏｒｓ  ｗｉｔｈ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ２Ａ  ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ．」Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ２０（８）：８４５〜８６０；Ｋｉｍ，Ｊ．Ｈ．、Ｓ．Ｒ．Ｌｅｅら（２０１１）「Ｈｉｇｈ  ｃｌｅａｖａｇｅ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｏｆ  ａ  ２Ａ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆｒｏｍ  ｐｏｒｃｉｎｅ  ｔｅｓｃｈｏｖｉｒｕｓ−１  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ，  ｚｅｂｒａｆｉｓｈ  ａｎｄ  ｍｉｃｅ．」ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ６（４）：ｅ１８５５６）。切断カセットまたはＣＨＹＳＥＬ（シス作用性ヒドロラーゼエレメント）とも呼ばれるこれらのペプチドは、高度に保存されたカルボキシ末端Ｄ−Ｖ／Ｉ−ＥＸＮＰＧＰモチーフを有するおよそ２０アミノ酸長である。これらのペプチドは、実際希少であり、最も一般的には、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）、Ａ型ウマ鼻炎ウイルス（ＥＲＡＶ）、Ｂ型ウマ鼻炎ウイルス（ＥＲＢＶ）、脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣＶ）、ブタテッショウウイルス（ＰＴＶ）およびゾセア・アシグナ（Ｔｈｏｓｅａ  ａｓｉｇｎａ）ウイルス（ＴＡＶ）等のウイルスに見出される（Ｌｕｋｅ，Ｇ．Ａ．、Ｐ．ｄｅ  Ｆｅｌｉｐｅら（２００８）「Ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ，  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ  ｏｒｉｇｉｎｓ  ｏｆ  ’２Ａ−ｌｉｋｅ’  ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｉｎ  ｖｉｒｕｓ  ｇｅｎｏｍｅｓ．」Ｊ  Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ  ８９（Ｐｔ  ４）：１０３６〜１０４２）。これらのペプチドのうちいくつかのアミノ酸配列は、表１７に提示される。２Ａに基づく多重抗原発現戦略により、複数の標的抗原をコードする遺伝子は、ウイルス２Ａペプチドをコードする配列によって分けられて、単一のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）において一体に連結される。オープンリーディングフレーム全体は、単一のプロモーターおよびターミネーターを有するベクターにクローニングすることができる。宿主細胞への構築物の送達後に、複数の抗原をコードするｍＲＮＡは、単一のポリタンパク質として転写および翻訳される。２Ａペプチドの翻訳の際に、リボソームは、Ｃ末端グリシンおよびプロリンの間の結合をスキップする。リボソームスキッピングは、２Ａペプチドの上流のペプチド配列を下流の配列から放出する同時翻訳自己触媒「切断」のように作用する。２個のタンパク質抗原の間の２Ａペプチドの取り込みは、上流ポリペプチドのＣ末端への約２０アミノ酸および下流タンパク質のＮ末端への１アミノ酸（プロリン）の付加をもたらすことができる。この方法論の適応において、遍在性プロテアーゼが、上流タンパク質からカセットを切断するように、プロテアーゼ切断部位を２ＡカセットのＮ末端に取り込むことができる（Ｆａｎｇ，Ｊ．、Ｓ．Ｙｉら（２００７）「Ａｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｓｙｓｔｅｍ  ｆｏｒ  ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｌｅｖｅｌｓ  ｏｆ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．」Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ  １５（６）：１１５３〜１１５９）。本開示の多重抗原構築物の構築において使用することができる特定の２Ａペプチド配列の例として、Ａｎｄｒｅａ  Ｌ．Ｓｚｙｍｃｚａｋ＆Ｄａｒｒｉｏ  ＡＡ  Ｖｉｇｎａｌｉ：Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ２Ａ  ｐｅｐｔｉｄｅ−ｂａｓｅｄ  ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  ｍｕｌｔｉｃｉｓｔｒｏｎｉｃ  ｖｅｃｔｏｒｓ．  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｂｉｏｌ．  Ｔｈｅｒ．（２００５）５（５）６２７〜６３８、およびその開示を参照により本明細書に組み込む国際特許出願ＷＯ２０１５／０６３６７４に開示されている配列が挙げられる。
【０１１５】
多重抗原構築物の構築に使用することができる別の方法は、配列内リボソーム進入部位すなわちＩＲＥＳの使用を含む。配列内リボソーム進入部位は、ある特定のＲＮＡ分子の５’非翻訳領域に見出されるＲＮＡエレメントである（Ｂｏｎｎａｌ，Ｓ．、Ｃ．Ｂｏｕｔｏｎｎｅｔら（２００３）「ＩＲＥＳｄｂ：  ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｒｉｂｏｓｏｍｅ  Ｅｎｔｒｙ  Ｓｉｔｅ  ｄａｔａｂａｓｅ．」Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ３１（１）：４２７〜４２８）。この部位は、ＲＮＡに真核生物リボソームを引きつけて、下流オープンリーディングフレームの翻訳を容易にする。正常な細胞７−メチルグアノシンキャップ依存性翻訳とは異なり、ＩＲＥＳ媒介性翻訳は、ＲＮＡ分子のはるかに内部のＡＵＧコドンにおいて開始することができる。この高度に効率的なプロセスは、マルチシストロニック発現ベクターにおける使用に活用することができる（Ｂｏｃｈｋｏｖ，Ｙ．Ａ．およびＡ．Ｃ．Ｐａｌｍｅｎｂｅｒｇ（２００６）「Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｏｆ  ＥＭＣＶ  ＩＲＥＳ  ｉｎ  ｂｉｃｉｓｔｒｏｎｉｃ  ｖｅｃｔｏｒｓ  ｉｓ  ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｕｐｏｎ  ＩＲＥＳ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  ｇｅｎｅ  ｌｏｃａｔｉｏｎ．」Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ４１（３）：２８３〜２８４、２８６、２８８）。典型的に、２個の導入遺伝子は、ＩＲＥＳで分けられた２個の別々のオープンリーディングフレームとして、ベクターのプロモーターおよび転写ターミネーターの間に挿入される。宿主細胞への構築物の送達後に、両方の導入遺伝子をコードする単一の長い転写物が転写される。第１のＯＲＦは、ＩＲＥＳの上流の終止コドンで終結する、伝統的なキャップ依存性様式で翻訳される。第２のＯＲＦは、ＩＲＥＳを使用する、キャップ非依存性様式で翻訳される。このようにして、単一の発現カセットを有するベクターから転写された単一のｍＲＮＡから、２種の独立したタンパク質を産生することができる。ＩＲＥＳ配列の例として、ポリオウイルス（ＰＶ）ＩＲＥＳ、脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣＶ）ＩＲＥＳ、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）ＩＲＥＳ、Ａ型肝炎ウイルスＩＲＥＳ、Ｂ型肝炎ウイルスＩＲＥＳ、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）ＩＲＥＳおよび古典的ブタ熱ウイルスＩＲＥＳが挙げられる。ＥＭＣＶ  ＩＲＥＳのヌクレオチド配列は、ＷＯ２０１３／１６５７５４（図３）に開示されており、本開示の配列番号９３に表記されている。最小ＥＭＣＶ  ＩＲＥＳエレメントは、配列番号９３のヌクレオチド配列の３’端の１５ヌクレオチド（ＥＭＣＶ  Ｌタンパク質の最初の５コドンを表す）を除外する。
【０１１６】
核酸分子のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）における２個のコード配列または導入遺伝子の間に挿入され、核酸分子からの２種の別々の遺伝子産物の同時発現または翻訳を可能にするように機能するヌクレオチド配列は、本開示で「スペーサーヌクレオチド配列」と称される。多重抗原構築物において使用することができる特定のスペーサーヌクレオチド配列の例として、真核生物プロモーター、２Ａペプチドをコードするヌクレオチド配列、および配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列が挙げられる。特定の２Ａペプチドの例として、急性ハチ麻痺ウイルス（ＡＢＰ２Ａ）、コオロギ麻痺ウイルス（ＣｒＰ２Ａ）、Ａ型ウマ鼻炎ウイルス（ＥＲＡ２Ａ）、Ｂ型ウマ鼻炎ウイルス（ＥＲＢ２Ａ）、脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣ２Ａ）、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤ２ＡまたはＦ２Ａ）、ヒトロタウイルス（ＨＴ２Ａ）、感染性軟化病ウイルス（ＩＦ２Ａ）、ブタテッショウウイルス（ＰＴ２ＡまたはＰ２Ａ）、ブタロタウイルス（ＰＲ２Ａ）およびゾセア・アシグナ（Ｔｈｏｓｅａ  ａｓｉｇｎａ）ウイルス（Ｔ２Ａ、ＴＡ２ＡまたはＴＡＶ２Ａ）の２Ａペプチドが挙げられる。
【０１１７】
一部の態様では、本開示は、（ｉ）免疫原性ＣＥＡポリペプチドをコードする少なくとも１種のコードヌクレオチド配列、および（ｉｉ）免疫原性ＴＥＲＴポリペプチド、免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチド、免疫原性ＭＳＬＮポリペプチド、免疫原性ＰＳＡポリペプチド、免疫原性ＰＳＭＡポリペプチドまたは免疫原性ＰＳＣＡポリペプチド等、１種または複数の他の免疫原性ＴＡＡポリペプチドをコードする１種または複数のヌクレオチド配列を含む抗原構築物を提供する。
【０１１８】
一部の実施形態では、本開示は、（ｉ）免疫原性ＣＥＡポリペプチドをコードする少なくとも１種のコードヌクレオチド配列、および（ｉｉ）免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドまたは免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドのいずれかをコードする少なくとも１種のコードヌクレオチド配列を含む抗原構築物を提供する。免疫原性ＣＥＡポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、他のコードヌクレオチド配列の上流または下流のいずれかであり得る。構築物は、コードヌクレオチド配列の間にスペーサーヌクレオチド配列をさらに含むことができる。かかる二重抗原構築物の構造は、式（Ｉ）および式（ＩＩ）に示されている：
ＴＡＡ−スペーサー−ＣＥＡ  （Ｉ）
ＣＥＡ−スペーサー−ＴＡＡ  （ＩＩ）
式（Ｉ）および（ＩＩ）のそれぞれにおいて、（ｉ）ＣＥＡは、免疫原性ＣＥＡポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を表し、（ｉｉ）ＴＡＡは、免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドまたは免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドのいずれかをコードするヌクレオチド配列を表し、（ｉｉｉ）スペーサーは、スペーサーヌクレオチド配列であり、存在しなくてもよい。二重抗原構築物に含まれ得るスペーサーヌクレオチド配列の例として、口蹄疫ウイルス２Ａペプチド（ＦＭＤ２ＡまたはＦＭＤＶ２Ａ）、Ａ型ウマ鼻炎ウイルス２Ａペプチド（ＥＲＡ２Ａ）、Ｂ型ウマ鼻炎ウイルス２Ａペプチド（ＥＲＢ２Ａ）、脳心筋炎ウイルス２Ａペプチド（ＥＭＣ２ＡまたはＥＭＣＶ２Ａ）、ブタテッショウウイルス２Ａペプチド（ＰＴ２Ａ）およびゾセア・アシグナ（Ｔｈｏｓｅａ  ａｓｉｇｎａ）ウイルス２Ａペプチド（Ｔ２Ａ、ＴＡ２ＡまたはＴＡＶ２Ａ）をコードするヌクレオチド配列が挙げられる。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性ＣＥＡポリペプチドのいずれかをコードする。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドのいずれかをコードする。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドのいずれかをコードする。
【０１１９】
一部の他の態様では、本開示は、（ｉ）免疫原性ＣＥＡポリペプチドをコードする少なくとも１種のコードヌクレオチド配列、（ｉｉ）免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドをコードする少なくとも１種のコードヌクレオチド配列、および（ｉｉｉ）免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドをコードする少なくとも１種のコードヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物を提供する。一部の実施形態では、多重抗原構築物は、スペーサーヌクレオチド配列をさらに含む。多重抗原構築物の構造は、式（ＩＩＩ）に示されている：
ＴＡＡ１−スペーサー１−ＴＡＡ２−スペーサー２−ＴＡＡ３  （ＩＩＩ）
式（ＩＩＩ）において、（ｉ）ＴＡＡ１、ＴＡＡ２およびＴＡＡ３はそれぞれ、免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチド、免疫原性ＣＥＡポリペプチドおよび免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドからなる群から選択される免疫原性ＴＡＡポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を表し、ＴＡＡ１、ＴＡＡ２およびＴＡＡ３は、異なる免疫原性ＴＡＡポリペプチドをコードし、（ｉｉ）スペーサー１およびスペーサー２はそれぞれ、スペーサーヌクレオチド配列を表し、（ａ）スペーサー１およびスペーサー２は、同じであっても異なっていてもよく、（ｂ）スペーサー１およびスペーサー２の一方または両方は、存在しなくてもよい。一部の実施形態では、スペーサー１およびスペーサー２は、独立して、２Ａペプチドをコードするヌクレオチド配列またはＧＧＳＧＧをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー１およびスペーサー２は、２Ａペプチドをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー１およびスペーサー２は、ＧＧＳＧＧをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー１は、２Ａペプチドをコードするヌクレオチド配列であり、スペーサー２は、ＧＧＳＧＧをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー１は、ＧＧＳＧＧをコードするヌクレオチド配列であり、スペーサー２は、２Ａペプチドをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性ＣＥＡポリペプチドのいずれかをコードする。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドのいずれかをコードする。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドのいずれかをコードする。
【０１２０】
一部の実施形態では、本開示は、式（ＩＩＩ）の多重抗原構築物を提供し、式（ＩＩＩ）において、（ｉ）ＴＡＡ１は、免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であり、（ｉｉ）ＴＡＡ２は、免疫原性ＣＥＡポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であり、（ｉｉｉ）ＴＡＡ３は、免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー１およびスペーサー２は、独立して、２Ａペプチドをコードするヌクレオチド配列またはＧＧＳＧＧをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー１およびスペーサー２は、２Ａペプチドをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー１およびスペーサー２は、ＧＧＳＧＧをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー１は、２Ａペプチドをコードするヌクレオチド配列であり、スペーサー２は、ＧＧＳＧＧをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー１は、ＧＧＳＧＧをコードするヌクレオチド配列であり、スペーサー２は、２Ａペプチドをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性ＣＥＡポリペプチドのいずれかをコードする。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドのいずれかをコードする。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドのいずれかをコードする。
【０１２１】
一部の他の実施形態では、本開示は、式（ＩＩＩ）の多重抗原構築物を提供し、式（ＩＩＩ）において、（ｉ）ＴＡＡ１は、免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であり、（ｉｉ）ＴＡＡ２は、免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であり、（ｉｉｉ）ＴＡＡ３は、免疫原性ＣＥＡポリペプチドをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー１およびスペーサー２は、独立して、２Ａペプチドをコードするヌクレオチド配列またはＧＧＳＧＧをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー１およびスペーサー２は、２Ａペプチドをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー１およびスペーサー２は、ＧＧＳＧＧをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー１は、２Ａペプチドをコードするヌクレオチド配列であり、スペーサー２は、ＧＧＳＧＧをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー１は、ＧＧＳＧＧをコードするヌクレオチド配列であり、スペーサー２は、２Ａペプチドをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性ＣＥＡポリペプチドのいずれかをコードする。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドのいずれかをコードする。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドのいずれかをコードする。
【０１２２】
さらに他の実施形態では、本開示は、式（ＩＩＩ）の多重抗原構築物を提供し、式（ＩＩＩ）において、（ｉ）ＴＡＡ１は、免疫原性ＣＥＡポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であり、（ｉｉ）ＴＡＡ２は、免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であり、（ｉｉｉ）ＴＡＡ３は、免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー１およびスペーサー２は、独立して、２Ａペプチドをコードするヌクレオチド配列またはＧＧＳＧＧをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー１およびスペーサー２は、２Ａペプチドをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー１およびスペーサー２は、ＧＧＳＧＧをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー１は、２Ａペプチドをコードするヌクレオチド配列であり、スペーサー２は、ＧＧＳＧＧをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー１は、ＧＧＳＧＧをコードするヌクレオチド配列であり、スペーサー２は、２Ａペプチドをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性ＣＥＡポリペプチドのいずれかをコードする。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドのいずれかをコードする。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドのいずれかをコードする。
【０１２３】
一部のさらなる実施形態では、本開示は、式（ＩＩＩ）の多重抗原構築物を提供し、式（ＩＩＩ）において、（ｉ）ＴＡＡ１は、免疫原性ＣＥＡポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であり、（ｉｉ）ＴＡＡ２は、免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であり、（ｉｉｉ）ＴＡＡ３は、免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー１およびスペーサー２は、独立して、２Ａペプチドをコードするヌクレオチド配列またはＧＧＳＧＧをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー１およびスペーサー２は、２Ａペプチドをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー１およびスペーサー２は、ＧＧＳＧＧをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー１は、２Ａペプチドをコードするヌクレオチド配列であり、スペーサー２は、ＧＧＳＧＧをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー１は、ＧＧＳＧＧをコードするヌクレオチド配列であり、スペーサー２は、２Ａペプチドをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性ＣＥＡポリペプチドのいずれかをコードする。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドのいずれかをコードする。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドのいずれかをコードする。
【０１２４】
さらに他の実施形態では、本開示は、式（ＩＩＩ）の多重抗原構築物を提供し、式（ＩＩＩ）において、（ｉ）ＴＡＡ１は、免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であり、（ｉｉ）ＴＡＡ２は、免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であり、（ｉｉｉ）ＴＡＡ３は、免疫原性ＣＥＡポリペプチドをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー１およびスペーサー２は、独立して、２Ａペプチドをコードするヌクレオチド配列またはＧＧＳＧＧをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー１およびスペーサー２は、２Ａペプチドをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー１およびスペーサー２は、ＧＧＳＧＧをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー１は、２Ａペプチドをコードするヌクレオチド配列であり、スペーサー２は、ＧＧＳＧＧをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー１は、ＧＧＳＧＧをコードするヌクレオチド配列であり、スペーサー２は、２Ａペプチドをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性ＣＥＡポリペプチドのいずれかをコードする。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドのいずれかをコードする。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドのいずれかをコードする。
【０１２５】
さらに他の実施形態では、本開示は、式（ＩＩＩ）の多重抗原構築物を提供し、式（ＩＩＩ）において、（ｉ）ＴＡＡ１は、免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であり、（ｉｉ）ＴＡＡ２は、免疫原性ＣＥＡポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であり、（ｉｉｉ）ＴＡＡ３は、免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー１およびスペーサー２は、独立して、２Ａペプチドをコードするヌクレオチド配列またはＧＧＳＧＧをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー１およびスペーサー２は、２Ａペプチドをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー１およびスペーサー２は、ＧＧＳＧＧをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー１は、２Ａペプチドをコードするヌクレオチド配列であり、スペーサー２は、ＧＧＳＧＧをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー１は、ＧＧＳＧＧをコードするヌクレオチド配列であり、スペーサー２は、２Ａペプチドをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性ＣＥＡポリペプチドのいずれかをコードする。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドのいずれかをコードする。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドのいずれかをコードする。
【０１２６】
一部の特定の実施形態では、本開示は、
（１）ＭＵＣ１−２Ａ−ＣＥＡ−２Ａ−ＴＥＲＴ  （ＩＶ）
（２）ＭＵＣ１−２Ａ−ＴＥＲＴ−２Ａ−ＣＥＡ  （Ｖ）
（３）ＣＥＡ−２Ａ−ＭＵＣ１−２Ａ−ＴＥＲＴ    （ＶＩ）
（４）ＣＥＡ−２Ａ−ＴＥＲＴ−２Ａ−ＭＵＣ１    （ＶＩＩ）
（５）ＴＥＲＴ−２Ａ−ＭＵＣ１−２Ａ−ＣＥＡ    （ＶＩＩＩ）
（６）ＴＥＲＴ−２Ａ−ＣＥＡ−２Ａ−ＭＵＣ１    （ＩＸ）
からなる群から選択される式の多重抗原構築物を提供し、式（ＩＶ）〜（ＩＸ）のそれぞれにおいて、（ｉ）ＭＵＣ１、ＣＥＡおよびＴＥＲＴは、それぞれ免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチド、免疫原性ＣＥＡポリペプチドおよび免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を表し、（ｉｉ）２Ａは、２Ａペプチドをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性ＣＥＡポリペプチドのいずれかをコードする。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドのいずれかをコードする。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドのいずれかをコードする。
【０１２７】
二重抗原構築物および三重抗原構築物を含む多重抗原構築物にコードされる免疫原性ＣＥＡポリペプチド、免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドおよび免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドは、膜結合形態または細胞質形態であり得る。一部の特定の実施形態では、免疫原性ＴＡＡポリペプチドは、細胞質形態である。
【０１２８】
一部の実施形態では、多重抗原構築物にコードされる免疫原性ＣＥＡポリペプチドは、（１）Ｎ−ドメインのアミノ酸配列、および（２）ヒトＣＥＡタンパク質の１、２、３、４または５個のＣ様ドメインのアミノ酸配列を含む。一部の特定の実施形態では、免疫原性ＣＥＡポリペプチドは、（１）Ａ２、Ｂ２、Ａ３およびＢ３等の少なくとも４個のＣ様ドメインのアミノ酸配列、ならびに（２）Ｎ−ドメインのアミノ酸配列を含む。一部のさらなる実施形態では、免疫原性ＣＥＡポリペプチドは、細胞質形態（または「ｃＣＥＡ」）または膜結合形態（または「ｍＣＥＡ」）である。
【０１２９】
一部の特定の実施形態では、多重抗原構築物にコードされる免疫原性ＣＥＡポリペプチドは、
（１）（ｉ）配列番号２のアミノ酸３２３〜６７７もしくは（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸３５〜１４４および３２３〜６７７を含むもしくはこれからなるアミノ酸配列；
（２）（ｉ）配列番号２のアミノ酸３２３〜７０２もしくは（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜１４４および３２３〜７０２を含むもしくはこれからなるアミノ酸配列；
（３）配列番号１７のアミノ酸配列（プラスミド１３８６にコードされるアミノ酸配列）（ｍＣＥＡ）もしくは配列番号１７のアミノ酸４〜５２６；
（４）配列番号１９のアミノ酸配列（プラスミド１３９０にコードされるアミノ酸配列）（ｃＣＥＡ）もしくは配列番号１９のアミノ酸４〜４６８；または
（５）上述の（１）〜（４）のアミノ酸配列のいずれかの機能的バリアント
から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０１３０】
一部の特定の実施形態では、多重抗原構築物にコードされる免疫原性ＣＥＡポリペプチドは、
（１）（ｉ）配列番号２のアミノ酸３２３〜６７７もしくは（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸３５〜１４４および３２３〜６７７を含むもしくはこれからなるアミノ酸配列；
（２）（ｉ）配列番号２のアミノ酸３２３〜７０２もしくは（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜１４４および３２３〜７０２を含むもしくはこれからなるアミノ酸配列；
（３）配列番号１７のアミノ酸配列（プラスミド１３８６にコードされるアミノ酸配列）（ｍＣＥＡ）もしくは配列番号１７のアミノ酸４〜５２６；
（４）配列番号１９のアミノ酸配列（プラスミド１３９０にコードされるアミノ酸配列）（ｃＣＥＡ）もしくは配列番号１９のアミノ酸４〜４６８；または
（５）上述の（１）〜（４）のアミノ酸配列のいずれかの機能的バリアント
から選択されるアミノ酸配列からなる。
【０１３１】
一部の特定の実施形態では、多重抗原構築物は、ＤＮＡであり、（１）配列番号１４のヌクレオチド配列、（２）配列番号１６のヌクレオチド配列、（３）配列番号１８のヌクレオチド配列、または（４）配列番号１４、１６もしくは１８のヌクレオチド配列の縮重バリアントを含む。一部の他の特定の実施形態では、多重抗原構築物は、ＲＮＡであり、（１）配列番号１４のヌクレオチド配列、（２）配列番号１６のヌクレオチド配列、（３）配列番号１８のヌクレオチド配列、または（４）配列番号１４、１６もしくは１８のヌクレオチド配列の縮重バリアントに対応するヌクレオチド配列を含む。
【０１３２】
一部の実施形態では、多重抗原構築物にコードされる免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドは、（１）ヒトＭＵＣ１タンパク質の２０アミノ酸の３〜３０個のタンデム反復のアミノ酸配列、および（２）ＶＮＴＲ領域に隣接するヒトＭＵＣ１タンパク質のアミノ酸配列を含む。一部の特定の実施形態では、多重抗原構築物にコードされる免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドは、
（１）配列番号５のアミノ酸配列（プラスミド１０２７ポリペプチド）；
（２）配列番号５のアミノ酸４〜５３７を含むアミノ酸配列；
（３）配列番号５のアミノ酸２４〜５３７を含むアミノ酸配列；
（４）配列番号７のアミノ酸配列（プラスミド１１９７ポリペプチド）；
（５）配列番号７のアミノ酸４〜５１７を含むアミノ酸配列；および
（６）位置（positon）５１３におけるアミノ酸がＴであるという条件で、配列番号７のアミノ酸４〜５１７を含むアミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０１３３】
一部の実施形態では、多重抗原構築物にコードされる免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドは、（１）ヒトＭＵＣ１タンパク質の２０アミノ酸の３〜３０個のタンデム反復のアミノ酸配列、および（２）ＶＮＴＲ領域に隣接するヒトＭＵＣ１タンパク質のアミノ酸配列からなる。一部の特定の実施形態では、多重抗原構築物にコードされる免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドは、
（１）配列番号５のアミノ酸配列（プラスミド１０２７ポリペプチド）；
（２）配列番号５のアミノ酸４〜５３７を含むアミノ酸配列；
（３）配列番号５のアミノ酸２４〜５３７を含むアミノ酸配列；
（４）配列番号７のアミノ酸配列（プラスミド１１９７ポリペプチド）；
（５）配列番号７のアミノ酸４〜５１７を含むアミノ酸配列；および
（６）位置（positon）５１３におけるアミノ酸がＴであるという条件で、配列番号７のアミノ酸４〜５１７を含むアミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列からなる。
【０１３４】
一部の特定の実施形態では、多重抗原構築物にコードされる免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドは、
（１）配列番号５のアミノ酸４〜５３７からなるアミノ酸配列；
（２）配列番号５のアミノ酸２４〜５３７からなるアミノ酸配列；
（３）配列番号７のアミノ酸４〜５１７からなるアミノ酸配列；および
（４）位置（positon）５１３におけるアミノ酸がＴであるという条件で、配列番号７のアミノ酸４〜５１７からなるアミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列からなる。
【０１３５】
一部の特定の実施形態では、多重抗原構築物は、ＤＮＡであり、（１）配列番号４のヌクレオチド配列、（２）配列番号６のヌクレオチド配列、または（３）配列番号４もしくは６のヌクレオチド配列の縮重バリアントを含む。一部の他の特定の実施形態では、多重抗原構築物は、ＲＮＡであり、（１）配列番号４のヌクレオチド配列、（２）配列番号６のヌクレオチド配列、または（３）配列番号４もしくは６のヌクレオチド配列の縮重バリアントに対応するヌクレオチド配列を含む。
【０１３６】
多重抗原構築物にコードされる免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドは、全長ＴＥＲＴタンパク質、またはＴＥＲＴタンパク質のいずれかの短縮もしくは突然変異形態であり得る。全長ＴＥＲＴタンパク質は、短縮形態よりも強い免疫応答を生成すると予想される。しかし、構築物の送達に選択された特定のベクターに応じて、ベクターは、全長ＴＥＲＴタンパク質をコードする遺伝子を保有する能力を有しない場合がある。したがって、導入遺伝子が特定のベクターに適合するように、タンパク質からのいくつかのアミノ酸の欠失をなすことができる。アミノ酸の欠失は、ＴＥＲＴタンパク質（例えば、配列番号３のＴＥＲＴタンパク質由来の）の配列におけるＮ末端、Ｃ末端またはいずれかの場所からなすことができる。核局在化シグナルを除去し、これにより、ポリペプチドを細胞質型にし、細胞の抗原プロセシング／提示機構へのアクセスを増加させるために、追加的な欠失をなすことができる。一部の実施形態では、ＴＥＲＴタンパク質のＮ末端の位置２００、３００、４００、５００または６００までのアミノ酸は、免疫原性ＴＥＲＴポリペプチド（例えば、配列番号３のＴＥＲＴタンパク質由来の）から存在しない。
【０１３７】
一部の特定の実施形態では、配列番号３のＴＥＲＴタンパク質のＮ末端のアミノ酸１〜３４３（ＴＥＲＴ３４３）、１〜２４０（ＴＥＲＴ２４０）または１〜５４１（ＴＥＲＴ５４１）は、存在しない。よって、ある実施形態では、本発明の多重抗原構築物にコードされる免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドのアミノ酸配列は、次のうちのいずれかである：
（１）配列番号３のアミノ酸５１〜１１３２を含み、配列番号３のアミノ酸１〜５０を欠く、アミノ酸配列；
（２）配列番号３のアミノ酸１０１〜１１３２を含み、配列番号３のアミノ酸１〜１００を欠く、アミノ酸配列；
（３）配列番号３のアミノ酸１５１〜１１３２を含み、配列番号３のアミノ酸１〜１５０を欠く、アミノ酸配列；
（４）配列番号３のアミノ酸２０１〜１１３２を含み、配列番号３のアミノ酸１〜２００を欠く、アミノ酸配列；
（５）配列番号３のアミノ酸２４１〜１１３２を含み、配列番号３のアミノ酸１〜２４０を欠く、アミノ酸配列；
（６）配列番号３のアミノ酸３０１〜１１３２を含み、配列番号３のアミノ酸１〜３００を欠く、アミノ酸配列；
（７）配列番号３のアミノ酸３５１〜１１３２を含み、配列番号３のアミノ酸１〜３５０を欠く、アミノ酸配列；
（８）配列番号３のアミノ酸４０１〜１１３２を含み、配列番号３のアミノ酸１〜４００を欠く、アミノ酸配列；
（９）配列番号３のアミノ酸４５１〜１１３２を含み、配列番号３のアミノ酸１〜４５０を欠く、アミノ酸配列；
（１０）配列番号３のアミノ酸５０１〜１１３２を含み、配列番号３のアミノ酸１〜５００を欠く、アミノ酸配列；
（１１）配列番号３のアミノ酸５５１〜１１３２を含み、配列番号３のアミノ酸１〜５５０を欠くアミノ酸配列；または
（１２）配列番号３のアミノ酸６０１〜１１３２を含み、配列番号３のアミノ酸１〜６００を欠くアミノ酸配列。
【０１３８】
ある実施形態では、本発明の多重抗原構築物にコードされる免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドのアミノ酸配列は、次のうちのいずれかである：
（１）配列番号３のアミノ酸５１〜１１３２、１０１〜１１３２、１５１〜１１３２、２０１〜１１３２、２５１〜１１３２、３０１〜１１３２、３５１〜１１３２、４０１〜１１３２、４５１〜１１３２、５０１〜１１３２または５５１〜１１３２からなるアミノ酸配列；
（２）配列番号３のアミノ酸６０１〜１１３２からなるアミノ酸配列
（３）配列番号３のアミノ酸５４２〜１１３２からなるアミノ酸配列
（４）配列番号３のアミノ酸３４４〜１１３２からなるアミノ酸配列
（５）配列番号３のアミノ酸２４１〜１１３２からなるアミノ酸配列。
【０１３９】
ＴＥＲＴ触媒ドメインを不活性化するために、追加的なアミノ酸の突然変異を導入することができる。かかる突然変異の例として、Ｄ７１２Ａ等の配列番号３の位置７１２におけるアスパラギン酸の置換、およびＶ７１３Ｉ等の配列番号３の位置７１３におけるバリンの置換が挙げられる。したがって、ある実施形態では、多重抗原構築物にコードされる免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドは、上に開示されているＴＥＲＴポリペプチドのいずれかからなり、配列番号３のアスパラギン酸７１２に対応する位置における置換および／または配列番号３のバリン７１３に対応する位置における置換を有し、前記突然変異（複数可）は、ＴＥＲＴ触媒ドメインを不活性化する。ある実施形態では、前記突然変異は、配列番号３の位置７１２に対応する位置（positon）におけるアスパラギン酸の置換、および配列番号３の位置７１３に対応する位置におけるバリンの置換からなり、前記突然変異（複数可）は、ＴＥＲＴ触媒ドメインを不活性化する。ある実施形態では、前記突然変異は、配列番号３の位置７１２に対応する位置におけるアラニンによるアスパラギン酸の置換（Ｄ７１２Ａ）、および配列番号３の位置７１３に対応する位置におけるイソロイシンによるバリンの置換（Ｖ７１３Ｉ）からなる。
【０１４０】
一部の特定の実施形態では、多重抗原構築物にコードされる免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドは、
（１）配列番号９のアミノ酸配列（プラスミド１１１２ポリペプチド）もしくは配列番号９のアミノ酸２〜８９３を含むアミノ酸配列；
（２）配列番号１１のアミノ酸配列（プラスミド１３２６ポリペプチド）もしくは配列番号１１のアミノ酸４〜７９１を含むアミノ酸配列；
（３）配列番号１３のアミノ酸配列（プラスミド１３３０ポリペプチド）もしくは配列番号１３のアミノ酸４〜５９４を含むアミノ酸配列；または
（４）上述の（１）〜（３）のアミノ酸配列のいずれかの機能的バリアントであるアミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０１４１】
一部の特定の実施形態では、多重抗原構築物にコードされる免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドは、
（１）配列番号９のアミノ酸配列（プラスミド１１１２ポリペプチド）もしくは配列番号９のアミノ酸２〜８９３を含むアミノ酸配列；
（２）配列番号１１のアミノ酸配列（プラスミド１３２６ポリペプチド）もしくは配列番号１１のアミノ酸４〜７９１を含むアミノ酸配列；
（３）配列番号１３のアミノ酸配列（プラスミド１３３０ポリペプチド）もしくは配列番号１３のアミノ酸４〜５９４を含むアミノ酸配列；または
（４）上述の（１）〜（３）のアミノ酸配列のいずれかの機能的バリアントであるアミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列からなる。
【０１４２】
一部の特定の実施形態では、多重抗原構築物にコードされる免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドは、
（１）配列番号９のアミノ酸２〜８９３からなるアミノ酸配列；
（２）配列番号１１のアミノ酸４〜７９１からなるアミノ酸配列；
（３）配列番号１３のアミノ酸４〜５９４からなるアミノ酸配列；または
（４）上述の（１）〜（３）のアミノ酸配列のいずれかの機能的バリアントであるアミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列からなる。
【０１４３】
一部の特定の実施形態では、多重抗原構築物は、ＤＮＡであり、（１）配列番号８のヌクレオチド配列、（２）配列番号１０のヌクレオチド配列、（３）配列番号１２のヌクレオチド配列、または（４）配列番号８、配列番号１０もしくは配列番号１２のヌクレオチド配列の縮重バリアントを含む。一部の他の特定の実施形態では、多重抗原構築物は、ＲＮＡであり、（１）配列番号８のヌクレオチド配列、（２）配列番号１０のヌクレオチド配列、（３）配列番号１２のヌクレオチド配列、または（４）配列番号８、１０もしくは１２のヌクレオチド配列の縮重バリアントに対応するヌクレオチド配列を含む。
【０１４４】
一部の特定の実施形態では、本開示は、（ｉ）免疫原性ＣＥＡポリペプチドをコードする少なくとも１種のヌクレオチド配列、および（ｉｉ）免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドまたは免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドのいずれかをコードする少なくとも１種のヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物であって、
（１）配列番号３１のアミノ酸配列もしくは配列番号３１のアミノ酸４〜１０８８；
（２）配列番号３３のアミノ酸配列もしくは配列番号３３のアミノ酸４〜１０８１；
（３）配列番号３５のアミノ酸配列もしくは配列番号３５のアミノ酸４〜１０８５；
（４）配列番号３７のアミノ酸配列もしくは配列番号３７のアミノ酸４〜１０３０；
（５）配列番号３９のアミノ酸配列もしくは配列番号３９のアミノ酸４〜１３８１；または
（６）配列番号４１のアミノ酸配列もしくは配列番号４１のアミノ酸４〜１４４１
を含むアミノ酸配列をコードする多重抗原構築物を提供する。
【０１４５】
一部の特定の実施形態では、本開示は、（ｉ）免疫原性ＣＥＡポリペプチドをコードする少なくとも１種のヌクレオチド配列、および（ｉｉ）免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドまたは免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドのいずれかをコードする少なくとも１種のヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物であって、
（１）配列番号３１のアミノ酸配列もしくは配列番号３１のアミノ酸４〜１０８８；
（２）配列番号３３のアミノ酸配列もしくは配列番号３３のアミノ酸４〜１０８１；
（３）配列番号３５のアミノ酸配列もしくは配列番号３５のアミノ酸４〜１０８５；
（４）配列番号３７のアミノ酸配列もしくは配列番号３７のアミノ酸４〜１０３０；
（５）配列番号３９のアミノ酸配列もしくは配列番号３９のアミノ酸４〜１３８１；または
（６）配列番号４１のアミノ酸配列もしくは配列番号４１のアミノ酸４〜１４４１
からなるアミノ酸配列をコードする多重抗原構築物を提供する。
【０１４６】
一部の特定の実施形態では、本開示は、ＤＮＡであり、（ｉ）免疫原性ＣＥＡポリペプチドをコードする少なくとも１種のヌクレオチド配列、および（ｉｉ）免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドまたは免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドのいずれかをコードする少なくとも１種のヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物であって、
（１）配列番号３０のヌクレオチド配列もしくは配列番号３０のヌクレオチド１０〜３２６４を含むヌクレオチド配列；
（２）配列番号３２のヌクレオチド配列もしくは配列番号３２のヌクレオチド１０〜３２４３を含むヌクレオチド配列；
（３）配列番号３４のヌクレオチド配列もしくは配列番号３４のヌクレオチド１０〜３２５５を含むヌクレオチド配列；
（４）配列番号３６のヌクレオチド配列もしくは配列番号３６のヌクレオチド１０〜３０９０を含むヌクレオチド配列；
（５）配列番号３８のヌクレオチド配列もしくは配列番号３８のヌクレオチド１０〜４１４３を含むヌクレオチド配列；
（６）配列番号４０のヌクレオチド配列もしくは配列番号４０のヌクレオチド１０〜４３２３を含むヌクレオチド配列；または
（７）上述の（１）〜（６）のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物を提供する。
【０１４７】
一部の特定の実施形態では、本開示は、ＤＮＡであり、（ｉ）免疫原性ＣＥＡポリペプチドをコードする少なくとも１種のヌクレオチド配列、および（ｉｉ）免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドまたは免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドのいずれかをコードする少なくとも１種のヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物であって、
（１）配列番号３０のヌクレオチド１０〜３２６４からなるヌクレオチド配列；
（２）配列番号３２のヌクレオチド１０〜３２４３からなるヌクレオチド配列；
（３）配列番号３４のヌクレオチド１０〜３２５５からなるヌクレオチド配列；
（４）配列番号３６のヌクレオチド１０〜３０９０からなるヌクレオチド配列；
（５）配列番号３８のヌクレオチド１０〜４１４３からなるヌクレオチド配列；
（６）配列番号４０のヌクレオチド１０〜４３２３からなるヌクレオチド配列；または
（７）上述の（１）〜（６）のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物を提供する。
【０１４８】
一部の他の特定の実施形態では、本開示は、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）であり、（ｉ）免疫原性ＣＥＡポリペプチドをコードする少なくとも１種のヌクレオチド配列、および（ｉｉ）免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドまたは免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドのいずれかをコードする少なくとも１種のヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物であって、
（１）配列番号３０のヌクレオチド配列もしくは配列番号３０のヌクレオチド１０〜３２６４を含むヌクレオチド配列；
（２）配列番号３２のヌクレオチド配列もしくは配列番号３２のヌクレオチド１０〜３２４３を含むヌクレオチド配列；
（３）配列番号３４のヌクレオチド配列もしくは配列番号３４のヌクレオチド１０〜３２５５を含むヌクレオチド配列；
（４）配列番号３６のヌクレオチド配列もしくは配列番号３６のヌクレオチド１０〜３０９０を含むヌクレオチド配列；
（５）配列番号３８のヌクレオチド配列もしくは配列番号３８のヌクレオチド１０〜４１４３を含むヌクレオチド配列；
（６）配列番号４０のヌクレオチド配列もしくは配列番号４０のヌクレオチド１０〜４３２３を含むヌクレオチド配列；または
（７）上述の（１）〜（６）のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対応するヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物を提供する。
【０１４９】
一部の他の特定の実施形態では、本開示は、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）であり、（ｉ）免疫原性ＣＥＡポリペプチドをコードする少なくとも１種のヌクレオチド配列、および（ｉｉ）免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドまたは免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドのいずれかをコードする少なくとも１種のヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物であって、
（１）配列番号３０のヌクレオチド１０〜３２６４からなるヌクレオチド配列；
（２）配列番号３２のヌクレオチド１０〜３２４３からなるヌクレオチド配列；
（３）配列番号３４のヌクレオチド１０〜３２５５からなるヌクレオチド配列；
（４）配列番号３６のヌクレオチド１０〜３０９０からなるヌクレオチド配列；
（５）配列番号３８のヌクレオチド１０〜４１４３からなるヌクレオチド配列；
（６）配列番号４０のヌクレオチド１０〜４３２３からなるヌクレオチド配列；または
（７）上述の（１）〜（６）のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対応するヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物を提供する。
【０１５０】
一部の他の実施形態では、本開示は、（１）免疫原性ＣＥＡポリペプチドをコードする少なくとも１種のヌクレオチド配列、（２）免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドをコードする少なくとも１種のヌクレオチド配列、および（３）免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドをコードする少なくとも１種のヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物であって、
（１）配列番号４３のアミノ酸配列もしくは配列番号４３のアミノ酸４〜２００３を含むアミノ酸配列；
（２）配列番号４５のアミノ酸配列もしくは配列番号４５のアミノ酸４〜２００１を含むアミノ酸配列；
（３）配列番号４７のアミノ酸配列もしくは配列番号４７のアミノ酸４〜２００８を含むアミノ酸配列；
（４）配列番号４９のアミノ酸配列もしくは配列番号４９のアミノ酸４〜１９９６を含むアミノ酸配列；
（５）配列番号５１のアミノ酸配列もしくは配列番号５１のアミノ酸４〜１９４３を含むアミノ酸配列；または
（６）配列番号５３のアミノ酸配列もしくは配列番号５３のアミノ酸４〜１９４３を含むアミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物を提供する。
【０１５１】
一部の他の実施形態では、本開示は、（１）免疫原性ＣＥＡポリペプチドをコードする少なくとも１種のヌクレオチド配列、（２）免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドをコードする少なくとも１種のヌクレオチド配列、および（３）免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドをコードする少なくとも１種のヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物であって、
（１）配列番号４３のアミノ酸４〜２００３からなるアミノ酸配列；
（２）配列番号４５のアミノ酸４〜２００１からなるアミノ酸配列；
（３）配列番号４７のアミノ酸４〜２００８からなるアミノ酸配列；
（４）配列番号４９のアミノ酸４〜１９９６からなるアミノ酸配列；
（５）配列番号５１のアミノ酸４〜１９４３からなるアミノ酸配列；または
（６）配列番号５３のアミノ酸４〜１９４３からなるアミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物を提供する。
【０１５２】
一部の特定の実施形態では、本開示は、（１）免疫原性ＣＥＡポリペプチドをコードする少なくとも１種のヌクレオチド配列、（２）免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドをコードする少なくとも１種のヌクレオチド配列、および（３）免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドをコードする少なくとも１種のヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物であって、ＤＮＡであり、
（１）配列番号４２のヌクレオチド配列または配列番号４２のヌクレオチド１０〜６００９を含むヌクレオチド配列；
（２）配列番号４４のヌクレオチド配列または配列番号４４のヌクレオチド１０〜６００３を含むヌクレオチド配列；
（３）配列番号４６のヌクレオチド配列または配列番号４６のヌクレオチド１０〜６０２４を含むヌクレオチド配列；
（４）配列番号４８のヌクレオチド配列または配列番号４８のヌクレオチド１０〜５９８８を含むヌクレオチド配列；
（５）配列番号５０のヌクレオチド配列または配列番号５０のヌクレオチド１０〜５８２９を含むヌクレオチド配列；
（６）配列番号５２のヌクレオチド配列または配列番号５２のヌクレオチド１０〜５８２９を含むヌクレオチド配列；および
（７）上述の（１）〜（６）のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物を提供する。
【０１５３】
一部の特定の実施形態では、本開示は、（１）免疫原性ＣＥＡポリペプチドをコードする少なくとも１種のヌクレオチド配列、（２）免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドをコードする少なくとも１種のヌクレオチド配列、および（３）免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドをコードする少なくとも１種のヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物であって、ＤＮＡであり、
（１）配列番号４２のヌクレオチド１０〜６００９からなるヌクレオチド配列；
（２）配列番号４４のヌクレオチド１０〜６００３からなるヌクレオチド配列；
（３）配列番号４６のヌクレオチド１０〜６０２４からなるヌクレオチド配列；
（４）配列番号４８のヌクレオチド１０〜５９８８からなるヌクレオチド配列；
（５）配列番号５０のヌクレオチド１０〜５８２９からなるヌクレオチド配列；
（６）配列番号５２のヌクレオチド１０〜５８２９からなるヌクレオチド配列；および
（７）上述の（１）〜（６）のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物を提供する。
【０１５４】
一部の他の特定の実施形態では、本開示は、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）であり、
（１）配列番号４２のヌクレオチド配列または配列番号４２のヌクレオチド１０〜６００９を含むヌクレオチド配列；
（２）配列番号４４のヌクレオチド配列または配列番号４４のヌクレオチド１０〜６００３を含むヌクレオチド配列；
（３）配列番号４６のヌクレオチド配列または配列番号４６のヌクレオチド１０〜６０２４を含むヌクレオチド配列；
（４）配列番号４８のヌクレオチド配列または配列番号４８のヌクレオチド１０〜５９８８を含むヌクレオチド配列；
（５）配列番号５０のヌクレオチド配列または配列番号５０のヌクレオチド１０〜５８２９を含むヌクレオチド配列；
（６）配列番号５２のヌクレオチド配列または配列番号５２のヌクレオチド１０〜５８２９を含むヌクレオチド配列；および
（７）上述の（１）〜（６）のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対応するヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物を提供する。
【０１５５】
一部の他の特定の実施形態では、本開示は、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）であり、
（１）配列番号４２のヌクレオチド１０〜６００９からなるヌクレオチド配列；
（２）配列番号４４のヌクレオチド１０〜６００３からなるヌクレオチド配列；
（３）配列番号４６のヌクレオチド１０〜６０２４からなるヌクレオチド配列；
（４）配列番号４８のヌクレオチド１０〜５９８８からなるヌクレオチド配列；
（５）配列番号５０のヌクレオチド１０〜５８２９からなるヌクレオチド配列；
（６）配列番号５２のヌクレオチド１０〜５８２９からなるヌクレオチド配列；および
（７）上述の（１）〜（６）のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対応するヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物を提供する。
【０１５６】
また他の特定の実施形態では、本開示は、（１）免疫原性ＣＥＡポリペプチドをコードする少なくとも１種のヌクレオチド配列、（２）免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドをコードする少なくとも１種のヌクレオチド配列、および（３）免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドをコードする少なくとも１種のヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物であって、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）であり、
（１）配列番号８７のヌクレオチド配列；
（２）配列番号８８のヌクレオチド配列；
（３）配列番号８９のヌクレオチド配列；
（４）配列番号９０のヌクレオチド配列；
（５）配列番号９１のヌクレオチド配列；
（６）配列番号９２のヌクレオチド配列；および
（７）配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１または配列番号９２のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアント
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物を提供する。
【０１５７】
また他の特定の実施形態では、本開示は、（１）免疫原性ＣＥＡポリペプチドをコードする少なくとも１種のヌクレオチド配列、（２）免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドをコードする少なくとも１種のヌクレオチド配列、および（３）免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドをコードする少なくとも１種のヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物であって、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）であり、
（１）配列番号８７のヌクレオチド配列；
（２）配列番号８８のヌクレオチド配列；
（３）配列番号８９のヌクレオチド配列；
（４）配列番号９０のヌクレオチド配列；
（５）配列番号９１のヌクレオチド配列；
（６）配列番号９２のヌクレオチド配列；および
（７）配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１または配列番号９２のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアント
からなる群から選択されるヌクレオチド配列からなる多重抗原構築物を提供する。
【０１５８】
Ｄ．抗原構築物を含有するベクター
本発明の別の態様は、単一抗原構築物、二重抗原構築物、三重抗原構築物および他の多重抗原構築物を含む本開示によって提供される抗原構築物のいずれかのうち１種または複数を含有するベクターに関する。ベクターは、抗原構築物にコードされる免疫原性ＴＡＡポリペプチドのクローニングもしくは発現に、または宿主細胞へのもしくはヒト等の宿主動物へのワクチン等の組成物中の抗原構築物の送達に有用である。
【０１５９】
プラスミドベクター、コスミドベクター、ファージベクターおよびウイルスベクター等、多種多様なベクターを、本開示によって提供される抗原構築物を含有および発現するように調製することができる。オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）とも称される導入遺伝子挿入物配列（すなわち、本開示によって提供される単一抗原構築物または多重抗原構築物）に加えて、ベクターの構造は典型的に、複製起点、マルチクローニング部位および選択可能マーカー等、発現を可能にするまたは容易にする他の成分またはエレメントを含む。
【０１６０】
一部の実施形態では、本開示は、本開示によって提供される抗原構築物を含有するプラスミドベクターを提供する。適したプラスミドベクターの例として、ｐＢＲ３２５、ｐＵＣ１８、ｐＳＫＦ、ｐＥＴ２３ＤおよびｐＧＢ−２が挙げられる。プラスミドベクターの他の例およびかかるベクターを構築する方法は、米国特許第５，５８９，４６６号、同第５，６８８，６８８号および同第５，８１４，４８２号に記載されている。単一抗原構築物、二重抗原構築物または三重抗原構築物を含む特定の例示的なプラスミドベクターの構築は、本開示にも記載されている。
【０１６１】
一部の特定の実施形態では、本開示は、配列番号５４、５５、５６、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７０、７１、７２、７３および７４のいずれかのヌクレオチド配列を含むプラスミドベクターを提供する。
【０１６２】
他の実施形態では、本発明は、ＤＮＡウイルスおよびＲＮＡウイルス（レトロウイルス）を含む、ウイルスから構築されたベクター（すなわち、ウイルスベクター）を提供する。ベクターの構築に使用することができるＤＮＡウイルスの例として、単純ヘルペスウイルス、パルボウイルス、ワクシニアウイルスおよびアデノウイルスが挙げられる。ベクターの構築に使用することができるＲＮＡウイルスの例として、アルファウイルス、フラビウイルス、ペスチウイルス、インフルエンザウイルス、リッサウイルスおよびベシクロウイルスが挙げられる。様々なウイルスからのベクターの構築は、当技術分野で公知である。レトロウイルスベクターの例は、米国特許第５，７１６，６１３号、同第５，７１６，８３２号および同第５，８１７，４９１号に記載されている。アルファウイルスから生成することができるベクターの例は、米国特許第５，０９１，３０９号、同第５，８４３，７２３号および同第５，７８９，２４５号に記載されている。他のベクターの例として、（１）カナリアポックスウイルスまたはワクシニアウイルス等のポックスウイルス（米国特許第４，６０３，１１２号、同第４，７６９，３３０号および同第５，０１７，４８７号；ＷＯ８９／０１９７３）；（２）ＳＶ４０（Ｍｕｌｌｉｇａｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ２７７：１０８〜１１４、１９７９）；（３）ヘルペス（Ｋｉｔ、Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２１５：２１９〜２３６、１９８９；米国特許第５，２８８，６４１号）；および（４）ＨＩＶ等のレンチウイルス（Ｐｏｚｎａｎｓｋｙ，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６５：５３２〜５３６、１９９１）が挙げられる。
【０１６３】
一部の特定の実施形態では、本開示は、サルアデノウイルス等の非ヒト霊長類アデノウイルスに由来するアデノウイルスベクターを提供する。かかるアデノウイルスベクターの例およびその調製は、ＰＣＴ出願公開ＷＯ２００５／０７１０９３およびＷＯ２０１０／０８６１８９に記載されており、ＣｈＡｄ３、ＣｈＡｄ４、ＣｈＡｄ５、ＣｈＡｄ７、ＣｈＡｄ８、ＣｈＡｄ９、ＣｈＡｄ１０、ＣｈＡｄ１１、ＣｈＡｄ１６、ＣｈＡｄ１７、ＣｈＡｄ１９、ＣｈＡｄ２０、ＣｈＡｄ２２、ＣｈＡｄ２４、ＣｈＡｄ２６、ＣｈＡｄ３０、ＣｈＡｄ３１、ＣｈＡｄ３７、ＣｈＡｄ３８、ＣｈＡｄ４４、ＣｈＡｄ６３、ＣｈＡｄ６８、ＣｈＡｄ８２、ＣｈＡｄ５５、ＣｈＡｄ７３、ＣｈＡｄ８３、ＣｈＡｄ１４６、ＣｈＡｄ１４７、ＰａｎＡｄ１、Ｐａｎ  Ａｄ２およびＰａｎ  Ａｄ３等のサルアデノウイルスから構築された非複製ベクター、ならびにアデノウイルスＡｄ４またはＡｄ７から構築された複製可能なベクターを含む。サルアデノウイルスからのアデノウイルスベクターの構築において、Ｅ１Ａ、Ｅ１Ｂ、Ｅ２Ａ、Ｅ２Ｂ、Ｅ３およびＥ４から選択されるウイルスのゲノム領域由来の初期遺伝子のうち１種または複数が、欠失される、または欠失もしくは突然変異によって非機能的にされることが好ましい。特定の実施形態では、ベクターは、ＣｈＡｄ６８から構築される。チンパンジーアデノウイルスＣｈＡｄ６８は、文献で、サルアデノウイルス２５、Ｃ６８、ＡｄＣ６８、Ｃｈａｄ６８、ＳＡｄＶ２５、ＰａｎＡｄ９またはＰａｎ９とも称される。多重抗原構築物を発現させるためにＣｈＡｄ６８からベクターを構築する方法は、国際特許出願公開ＷＯ２０１５／０６３６４７に記載されている。発現ベクターは典型的に、発現させようとする核酸配列に作動可能に連結された１種または複数の制御エレメントを含む。用語「制御エレメント」は、レシピエント細胞におけるコード配列の複製、転写および翻訳をまとめてもたらす、プロモーター領域、ポリアデニル化シグナル、転写終結配列、上流調節性ドメイン、複製起点、配列内リボソーム進入部位（「ＩＲＥＳ」）、エンハンサーその他をまとめて指す。選択されたコード配列が、適切な宿主細胞において複製、転写および翻訳され得る限りにおいて、これらの制御エレメントの全てが常に存在している必要はない。制御エレメントは、特定の宿主細胞および他のベクター成分の供給源または構造等、当業者に公知のいくつかの因子に基づき選択される。免疫原性ＴＡＡポリペプチドの発現を増強するため、免疫原性ＴＡＡポリペプチドをコードする配列の上流にコザック配列を配置することができる。脊椎動物に関して、公知のコザック配列は、（ＧＣＣ）ＮＣＣＡＴＧＧであり、ここで、Ｎは、ＡまたはＧであり、ＧＣＣは保存性が低い。使用することができる例示的なコザック配列は、ＧＡＡＣＡＴＧＧ、ＡＣＣＡＵＧＧおよびＡＣＣＡＴＧＧを含む。
【０１６４】
一部の実施形態では、ベクターは、（ｉ）少なくとも１種の免疫原性ＣＥＡポリペプチド、および（ｉｉ）少なくとも１種の免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドまたは少なくとも１種の免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドをコードする多重抗原構築物を含む。ベクターは、ＤＮＡプラスミドベクター、ＤＮＡウイルスベクター、ＲＮＡプラスミドベクターまたはＲＮＡウイルスベクターであり得る。一部の特定の実施形態では、ベクターは、ＤＮＡベクターであり、
（１）配列番号３０のヌクレオチド配列または配列番号３０のヌクレオチド１０〜３２６４を含むヌクレオチド配列；
（２）配列番号３２のヌクレオチド配列または配列番号３２のヌクレオチド１０〜３２４３を含むヌクレオチド配列；
（３）配列番号３４のヌクレオチド配列または配列番号３４のヌクレオチド１０〜３２５５を含むヌクレオチド配列；
（４）配列番号３６のヌクレオチド配列または配列番号３６のヌクレオチド１０〜３０９０を含むヌクレオチド配列；
（５）配列番号３８のヌクレオチド配列または配列番号３８のヌクレオチド１０〜４１４３を含むヌクレオチド配列；
（６）配列番号４０のヌクレオチド配列または配列番号４０のヌクレオチド１０〜４３２３を含むヌクレオチド配列；および
（７）上述の（１）〜（６）のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物を含む。
【０１６５】
一部の他の特定の実施形態では、本開示は、
（１）配列番号３０のヌクレオチド配列または配列番号３０のヌクレオチド１０〜３２６４を含むヌクレオチド配列；
（２）配列番号３２のヌクレオチド配列または配列番号３２のヌクレオチド１０〜３２４３を含むヌクレオチド配列；
（３）配列番号３４のヌクレオチド配列または配列番号３４のヌクレオチド１０〜３２５５を含むヌクレオチド配列；
（４）配列番号３６のヌクレオチド配列または配列番号３６のヌクレオチド１０〜３０９０を含むヌクレオチド配列；
（５）配列番号３８のヌクレオチド配列または配列番号３８のヌクレオチド１０〜４１４３を含むヌクレオチド配列；
（６）配列番号４０のヌクレオチド配列または配列番号４０のヌクレオチド１０〜４３２３を含むヌクレオチド配列；および
（７）上述の（１）〜（６）のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対応するヌクレオチド配列を含むＲＮＡベクターを提供する。
【０１６６】
一部の他の実施形態では、ベクターは、（ｉ）少なくとも１種の免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチド、（ｉｉ）少なくとも１種の免疫原性ＣＥＡポリペプチドおよび（ｉｉｉ）少なくとも１種の免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドをコードする多重抗原構築物を含有する。ベクターは、ＤＮＡプラスミドベクター、ＤＮＡウイルスベクター、ＲＮＡプラスミドベクターまたはＲＮＡウイルスベクターであり得る。一部の特定の実施形態では、本開示は、
（１）配列番号４２のヌクレオチド配列もしくは配列番号４２のヌクレオチド１０〜６００９を含むヌクレオチド配列；
（２）配列番号４４のヌクレオチド配列もしくは配列番号４４のヌクレオチド１０〜６００３を含むヌクレオチド配列；
（３）配列番号４６のヌクレオチド配列もしくは配列番号４６のヌクレオチド１０〜６０２４を含むヌクレオチド配列；
（４）配列番号４８のヌクレオチド配列もしくは配列番号４８のヌクレオチド１０〜５９８８を含むヌクレオチド配列；
（５）配列番号５０のヌクレオチド配列もしくは配列番号５０のヌクレオチド１０〜５８２９を含むヌクレオチド配列；または
（６）配列番号５２のヌクレオチド配列もしくは配列番号５２のヌクレオチド１０〜５８２９を含むヌクレオチド配列；および
（７）上述の（１）〜（６）のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物を含むＤＮＡベクターを提供する。
【０１６７】
一部の他の特定の実施形態では、本開示は、
（１）配列番号４２のヌクレオチド配列または配列番号４２のヌクレオチド１０〜６００９を含むヌクレオチド配列；
（２）配列番号４４のヌクレオチド配列または配列番号４４のヌクレオチド１０〜６００３を含むヌクレオチド配列；
（３）配列番号４６のヌクレオチド配列または配列番号４６のヌクレオチド１０〜６０２４を含むヌクレオチド配列；
（４）配列番号４８のヌクレオチド配列または配列番号４８のヌクレオチド１０〜５９８８を含むヌクレオチド配列；
（５）配列番号５０のヌクレオチド配列または配列番号５０のヌクレオチド１０〜５８２９を含むヌクレオチド配列；
（６）配列番号５２のヌクレオチド配列または配列番号５２のヌクレオチド１０〜５８２９を含むヌクレオチド配列；および
（７）上述の（１）〜（６）のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対応するヌクレオチド配列を含むＲＮＡベクターを提供する。
【０１６８】
一部の特定の実施形態では、本開示は、配列番号５８、６０、６２、６４、６６および６８のいずれかのヌクレオチド配列を含むＤＮＡウイルスベクターを提供する。一部の他の特定の実施形態では、本開示は、配列番号５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７０、７１、７２、７３および７４のいずれかのヌクレオチド配列を含むＤＮＡプラスミドベクターを提供する。
【０１６９】
一部の特定の実施形態では、ベクターは、ＤＮＡベクターであり、
（１）配列番号３０のヌクレオチド１０〜３２６４からなるヌクレオチド配列；
（２）配列番号３２のヌクレオチド１０〜３２４３からなるヌクレオチド配列；
（３）配列番号３４のヌクレオチド１０〜３２５５からなるヌクレオチド配列；
（４）配列番号３６のヌクレオチド１０〜３０９０からなるヌクレオチド配列；
（５）配列番号３８のヌクレオチド１０〜４１４３からなるヌクレオチド配列；
（６）配列番号４０のヌクレオチド１０〜４３２３からなるヌクレオチド配列；および
（７）上述の（１）〜（６）のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物を含む。
【０１７０】
一部の他の特定の実施形態では、本開示は、
（１）配列番号３０のヌクレオチド１０〜３２６４からなるヌクレオチド配列；
（２）配列番号３２のヌクレオチド１０〜３２４３からなるヌクレオチド配列；
（３）配列番号３４のヌクレオチド１０〜３２５５からなるヌクレオチド配列；
（４）配列番号３６のヌクレオチド１０〜３０９０からなるヌクレオチド配列；
（５）配列番号３８のヌクレオチド１０〜４１４３からなるヌクレオチド配列；
（６）配列番号４０のヌクレオチド１０〜４３２３からなるヌクレオチド配列；および
（７）上述の（１）〜（６）のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対応するヌクレオチド配列を含むＲＮＡベクターを提供する。
【０１７１】
一部の他の実施形態では、ベクターは、（ｉ）少なくとも１種の免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチド、（ｉｉ）少なくとも１種の免疫原性ＣＥＡポリペプチドおよび（ｉｉｉ）少なくとも１種の免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドをコードする多重抗原構築物を含有する。ベクターは、ＤＮＡプラスミドベクター、ＤＮＡウイルスベクター、ＲＮＡプラスミドベクターまたはＲＮＡウイルスベクターであり得る。一部の特定の実施形態では、本開示は、
（１）配列番号４２のヌクレオチド１０〜６００９からなるヌクレオチド配列；
（２）配列番号４４のヌクレオチド１０〜６００３からなるヌクレオチド配列；
（３）配列番号４６のヌクレオチド１０〜６０２４からなるヌクレオチド配列；
（４）配列番号４８のヌクレオチド１０〜５９８８からなるヌクレオチド配列；
（５）配列番号５０のヌクレオチド１０〜５８２９からなるヌクレオチド配列；または
（６）配列番号５２のヌクレオチド１０〜５８２９からなるヌクレオチド配列；および
（７）上述の（１）〜（６）のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物を含むＤＮＡベクターを提供する。
【０１７２】
一部の特定の実施形態では、本開示は、配列番号５８、６０、６２、６４、６６および６８のいずれかのヌクレオチド配列からなるＤＮＡウイルスベクターを提供する。一部の他の特定の実施形態では、本開示は、配列番号５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７０、７１、７２、７３および７４のいずれかのヌクレオチド配列からなるＤＮＡプラスミドベクターを提供する。
【０１７３】
一部の他の特定の実施形態では、本開示は、
（１）配列番号４２のヌクレオチド１０〜６００９からなるヌクレオチド配列；
（２）配列番号４４のヌクレオチド１０〜６００３からなるヌクレオチド配列；
（３）配列番号４６のヌクレオチド１０〜６０２４からなるヌクレオチド配列；
（４）配列番号４８のヌクレオチド１０〜５９８８からなるヌクレオチド配列；
（５）配列番号５０のヌクレオチド１０〜５８２９からなるヌクレオチド配列；
（６）配列番号５２のヌクレオチド１０〜５８２９からなるヌクレオチド配列；および
（７）上述の（１）〜（６）のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対応するヌクレオチド配列を含むＲＮＡベクターを提供する。
【０１７４】
Ｅ．抗原構築物またはベクターを含む組成物
本開示はまた、本開示によって提供される単離された核酸分子（すなわち、抗原構築物）またはベクターを含む組成物を提供する。組成物は、二重抗原構築物または三重抗原構築物等の１種のみの個々の抗原構築物を含むことができる。組成物は、単一抗原構築物および二重抗原構築物の組合せ、または異なる免疫原性ＴＡＡポリペプチドをコードする３種以上の単一抗原構築物の組合せ等の２種以上の異なる個々の抗原構築物を含むこともできる。組成物は、ヒトを含む哺乳動物におけるｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏでのＴＡＡタンパク質に対する免疫応答の誘発に有用である。一部の実施形態では、組成物は、免疫原性組成物または医薬組成物である。一部の特定の実施形態では、組成物は、（１）異常な細胞増殖を阻害し、がんの発症に対する保護をもたらす（予防薬として使用される）、（２）ＴＡＡ過剰発現に関連するがんを処置する（治療薬として使用される）、または（３）ＣＥＡ、ＭＵＣ１およびＴＥＲＴ等の特定のヒトＴＡＡに対する免疫応答を誘発するための、ヒトへの投与のためのワクチン組成物である。
【０１７５】
一部の実施形態では、本開示によって提供される組成物は、多重抗原構築物または多重抗原構築物を含むベクターを含み、多重抗原構築物は、２種以上の免疫原性ＴＡＡポリペプチドをコードする。例えば、多重抗原構築物は、次の組合せのいずれかにおいて２種以上の免疫原性ＴＡＡポリペプチドをコードすることができる：
（１）免疫原性ＣＥＡポリペプチドおよび免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチド；
（２）免疫原性ＣＥＡポリペプチドおよび免疫原性ＴＥＲＴポリペプチド；ならびに
（３）免疫原性ＣＥＡポリペプチド、免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドおよび免疫原性ＴＥＲＴポリペプチド。
【０１７６】
一部の特定の実施形態では、本開示によって提供される組成物は、二重抗原構築物または二重抗原構築物を含むベクターを含み、二重抗原構築物は、
（１）配列番号３１のアミノ酸配列または配列番号３１のアミノ酸４〜１０８８をコードするヌクレオチド配列；
（２）配列番号３３のアミノ酸配列または配列番号３３のアミノ酸４〜１０８１をコードするヌクレオチド配列；
（３）配列番号３５のアミノ酸配列または配列番号３５のアミノ酸４〜１０８５をコードするヌクレオチド配列；
（４）配列番号３７のアミノ酸配列または配列番号３７のアミノ酸４〜１０３０をコードするヌクレオチド配列；
（５）配列番号３９のアミノ酸配列または配列番号３９のアミノ酸４〜１３８１をコードするヌクレオチド配列；
（６）配列番号４１のアミノ酸配列または配列番号４１のアミノ酸４〜１４４１をコードするヌクレオチド配列；
（７）配列番号３０のヌクレオチド配列または配列番号３０のヌクレオチド１０〜３２６４を含むヌクレオチド配列；
（８）配列番号３２のヌクレオチド配列または配列番号３２のヌクレオチド１０〜３２４３を含むヌクレオチド配列；
（９）配列番号３４のヌクレオチド配列または配列番号３４のヌクレオチド１０〜３２５５を含むヌクレオチド配列；
（１０）配列番号３６のヌクレオチド配列または配列番号３６のヌクレオチド１０〜３０９０を含むヌクレオチド配列；
（１１）配列番号３８のヌクレオチド配列または配列番号３８のヌクレオチド１０〜４１４３を含むヌクレオチド配列；
（１２）配列番号４０のヌクレオチド配列または配列番号４０のヌクレオチド１０〜４３２３を含むヌクレオチド配列；および
（１３）上述の（１）〜（１２）のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む。
【０１７７】
一部の他の特定の実施形態では、本開示によって提供される組成物は、（１）三重抗原構築物、または（２）三重抗原構築物を含むベクターを含み、三重抗原構築物は、
（１）配列番号４３のアミノ酸配列または配列番号４３のアミノ酸４〜２００３をコードするヌクレオチド配列；
（２）配列番号４５のアミノ酸配列または配列番号４５のアミノ酸４〜２００１をコードするヌクレオチド配列；
（３）配列番号４７のアミノ酸配列または配列番号４７のアミノ酸４〜２００８をコードするヌクレオチド配列；
（４）配列番号４９のアミノ酸配列または配列番号４９のアミノ酸４〜１９９６をコードするヌクレオチド配列；
（５）配列番号５１のアミノ酸配列または配列番号５１のアミノ酸４〜１９４３をコードするヌクレオチド配列；
（６）配列番号５３のアミノ酸配列または配列番号５３のアミノ酸４〜１９４３をコードするヌクレオチド配列；
（７）配列番号４２のヌクレオチド配列または配列番号４２のヌクレオチド１０〜６００９を含むヌクレオチド配列；
（８）配列番号４４のヌクレオチド配列または配列番号４４のヌクレオチド１０〜６００３を含むヌクレオチド配列；
（９）配列番号４６のヌクレオチド配列または配列番号４６のヌクレオチド１０〜６０２４を含むヌクレオチド配列；
（１０）配列番号４８のヌクレオチド配列または配列番号４８のヌクレオチド１０〜５９８８を含むヌクレオチド配列；
（１１）配列番号５０のヌクレオチド配列または配列番号５０のヌクレオチド１０〜５８２９を含むヌクレオチド配列；
（１２）配列番号５２のヌクレオチド配列または配列番号５２のヌクレオチド１０〜５８２９を含むヌクレオチド配列；および
（１３）上述の（１）〜（１２）のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む。
【０１７８】
一部の他の特定の実施形態では、本開示によって提供される組成物は、三重抗原構築物または三重抗原構築物を含むベクターを含み、三重抗原構築物は、
（１）配列番号４２のヌクレオチド１０〜６００９からなるヌクレオチド配列；
（２）配列番号４４のヌクレオチド１０〜６００３からなるヌクレオチド配列；
（３）配列番号４６のヌクレオチド１０〜６０２４からなるヌクレオチド配列；
（４）配列番号４８のヌクレオチド１０〜５９８８からなるヌクレオチド配列；
（５）配列番号５０のヌクレオチド１０〜５８２９からなるヌクレオチド配列；
（６）配列番号５２のヌクレオチド１０〜５８２９からなるヌクレオチド配列；および
（７）上述の（１）〜（７）のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む。
【０１７９】
他の特定の実施形態では、本開示によって提供される組成物は、ＲＮＡ三重抗原構築物または三重抗原構築物を含むＲＮＡベクターを含み、三重抗原構築物は、（１）配列番号４２、４４、４６、４８、５０、５２の配列のいずれか、または（２）配列番号４２、４４、４６、４８、５０、５２のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列に対応するヌクレオチド配列を含む。
【０１８０】
他の特定の実施形態では、本開示によって提供される組成物は、ＲＮＡ三重抗原構築物または三重抗原構築物を含むＲＮＡベクターを含み、三重抗原構築物は、（１）配列番号４２、４４、４６、４８、５０、５２の配列のいずれか、または（２）配列番号４２、４４、４６、４８、５０、５２のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列に対応するヌクレオチド配列からなる。
【０１８１】
また他の特定の実施形態では、本開示によって提供される組成物は、三重抗原構築物または三重抗原構築物を含むベクターを含み、三重抗原構築物は、（１）配列番号８７、８８、８９、９０、９１および９２のいずれかのヌクレオチド配列、または（２）配列番号８７、８８、８９、９０、９１および９２のいずれかのヌクレオチド配列の縮重バリアントを含む。一部の他の特定の実施形態では、本開示は、配列番号５７、５９、６１、６３、６５および６７のいずれかのヌクレオチド配列を含むプラスミドを含む組成物を提供する。また他の特定の実施形態では、本開示は、配列番号５８、６０、６２、６４、６６および６８のいずれかのヌクレオチド配列を含むベクターを含む組成物を提供する。
【０１８２】
また他の特定の実施形態では、本開示によって提供される組成物は、三重抗原構築物または三重抗原構築物を含むベクターを含み、三重抗原構築物は、（１）配列番号８７、８８、８９、９０、９１および９２のいずれかのヌクレオチド配列、または（２）配列番号８７、８８、８９、９０、９１および９２のいずれかのヌクレオチド配列の縮重バリアントからなる。一部の他の特定の実施形態では、本開示は、配列番号５７、５９、６１、６３、６５および６７のいずれかのヌクレオチド配列からなるプラスミドを含む組成物を提供する。また他の特定の実施形態では、本開示は、配列番号５８、６０、６２、６４、６６および６８のいずれかのヌクレオチド配列からなるベクターを含む組成物を提供する。
【０１８３】
医薬組成物またはワクチン組成物等の組成物は、薬学的に許容できる賦形剤をさらに含むことができる。ＤＮＡワクチンおよびＲＮＡワクチン組成物を含む核酸組成物に適した薬学的に許容できる賦形剤は、当業者に周知である。かかる賦形剤は、水性または非水性溶液、懸濁液およびエマルションであり得る。非水性賦形剤の例として、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油等の植物油、およびオレイン酸エチル等の注射用有機エステルが挙げられる。水性賦形剤の例として、生理食塩水および緩衝培地を含む、水、アルコール性／水性溶液、エマルションまたは懸濁液が挙げられる。適した賦形剤は、ポリヌクレオチド分子の細胞取込みを補助する薬剤も含む。かかる薬剤の例は、（ｉ）ブピバカイン等の細胞透過性を修飾する化学物質、（ｉｉ）ポリヌクレオチドの被包のためのリポソームもしくはウイルス粒子、または（ｉｉｉ）ポリヌクレオチドと会合するカチオン性脂質、もしくはシリカ、金もしくはタングステン微粒子である。アニオン性および中性リポソームは、当技術分野で周知であり（例えば、リポソームを作製するための方法の詳細な説明については、Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ：  Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ、ＲＰＣ  Ｎｅｗ  Ｅｄ、ＩＲＬ  ｐｒｅｓｓ（１９９０）を参照）、ポリヌクレオチドを含む広範囲の産物の送達に有用である。
【０１８４】
本開示によって提供される免疫原性組成物、医薬組成物またはワクチン組成物は、１種または複数の免疫モジュレーターと併せてまたはこれと組み合わせて使用することができる。組成物は、１種または複数のアジュバントと併せてまたはこれと組み合わせて使用することもできる。さらに、組成物は、１種または複数の免疫モジュレーターおよび１種または複数のアジュバントと併せてまたはこれと組み合わせて使用することができる。免疫モジュレーターまたはアジュバントは、抗原構築物もしくはベクターとは別々に製剤化することができる、または同じ組成物製剤の一部であり得る。よって、一部の実施形態では、本開示は、（１）本開示によって提供される抗原構築物またはかかる抗原構築物を含有するベクター、および（２）免疫モジュレーターを含む医薬組成物を提供する。一部のさらなる実施形態では、医薬組成物は、アジュバントをさらに含む。免疫モジュレーターおよびアジュバントの例は、本明細書に後述する。
【０１８５】
ワクチン組成物を含む組成物は、液体形態（例えば、溶液、懸濁液またはエマルション）および固体形態（例えば、カプセル、錠剤または粉末）等のいずれか適した剤形で、当業者に公知の方法によって調製することができる。
【０１８６】
Ｆ．抗原構築物、ベクターおよび組成物の使用
他の態様では、本開示は、（１）医薬としての抗原構築物、ベクターおよび組成物の使用、（２）ＴＡＡに対する免疫応答を誘発するための、異常な細胞増殖を阻害するための、またはがんを処置するための医薬の製造における抗原構築物、ベクターおよび組成物の使用、ならびに（３）抗原構築物、ベクターおよび組成物を使用する方法を提供し、抗原構築物、ベクターおよび組成物は、本明細書に上述されている通りである。
【０１８７】
一態様では、本開示は、ヒト等の哺乳動物におけるＴＡＡに対する免疫応答を誘発するための、（１）１種もしくは複数の免疫原性ＴＡＡポリペプチドをコードする抗原構築物、（２）かかる抗原構築物を含有するベクター、または（３）かかる（such as）抗原構築物もしくはベクターを含有する組成物の使用を提供する。一部の実施形態では、本開示は、哺乳動物、特にヒトにおけるＴＡＡに対する免疫応答を誘発する方法であって、（１）１種もしくは複数の免疫原性ＴＡＡポリペプチドをコードする抗原構築物、または（２）１種もしくは複数の免疫原性ＴＡＡポリペプチドをコードする抗原構築物を含有するベクターを含む有効量の組成物を哺乳動物に投与するステップを含む方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、哺乳動物、特にヒトにおけるＣＥＡに対する免疫応答を誘発する方法であって、本開示によって提供される抗原構築物を含む有効量の組成物を哺乳動物に投与するステップを含み、抗原構築物が、（１）免疫原性ＣＥＡポリペプチドをコードする少なくとも１種のヌクレオチド配列、および（２）免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドまたは免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドをコードする少なくとも１種のヌクレオチド配列を含む、方法を提供する。一部の他の実施形態では、本開示は、哺乳動物、特にヒトにおけるＭＵＣ１に対する免疫応答を誘発する方法であって、本開示によって提供される抗原構築物を含む有効量の組成物を哺乳動物に投与するステップを含み、抗原構築物が、（１）免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドをコードする少なくとも１種のヌクレオチド配列、および（２）免疫原性ＣＥＡポリペプチドまたは免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドをコードする少なくとも１種のヌクレオチド配列を含む、方法を提供する。一部のさらなる実施形態では、本開示は、哺乳動物、特にヒトにおけるＴＥＲＴに対する免疫応答を誘発する方法であって、本開示によって提供される抗原構築物を含む有効量の組成物を哺乳動物に投与するステップを含み、抗原構築物が、（１）免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドをコードする少なくとも１種のヌクレオチド配列、および（２）免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドまたは免疫原性ＣＥＡポリペプチドをコードする少なくとも１種のヌクレオチド配列を含む、方法を提供する。
【０１８８】
別の態様では、本開示は、ヒト等の哺乳動物における異常な細胞増殖を阻害するための、（１）１種もしくは複数の免疫原性ＴＡＡポリペプチドをコードする抗原構築物、（２）かかる抗原構築物を含有するベクター、または（３）かかる（such as）抗原構築物もしくはベクターを含有する組成物の使用を提供する。一部の実施形態では、本開示は、哺乳動物、特にヒトにおける異常な細胞増殖を阻害する方法であって、（１）１種もしくは複数の免疫原性ＴＡＡポリペプチドをコードする抗原構築物、または（２）１種もしくは複数の免疫原性ＴＡＡポリペプチドをコードする抗原構築物を含有するベクターを含む有効量の組成物を哺乳動物に投与するステップを含み、異常な細胞増殖が、腫瘍関連抗原ＣＥＡ、ＭＵＣ１またはＴＥＲＴの過剰発現に関連する、方法を提供する。異常な細胞増殖は、乳房、胃、卵巣、肺、膀胱、大腸（例えば、結腸および直腸）、腎臓、膵臓および前立腺等のヒトのいずれかの臓器または組織に存することができる。一部の実施形態では、本方法は、乳房、卵巣、膵臓、結腸、肺、胃および直腸における異常な細胞増殖を阻害するためのものである。投与される組成物中の抗原構築物またはベクターは、過剰発現された腫瘍関連抗原に由来するまたはこれに対して免疫原性である少なくとも１種の免疫原性ポリペプチドをコードする。抗原構築物は、単一抗原構築物または二重抗原構築物もしくは三重抗原構築物等の多重抗原構築物であり得る。一部の特定の実施形態では、組成物は、免疫原性ＣＥＡポリペプチド、免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドおよび免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドをコードする三重抗原構築物を含む。
【０１８９】
さらなる態様では、本開示は、哺乳動物、特にヒトにおけるがんの処置のための医薬としての、（１）１種もしくは複数の免疫原性ＴＡＡポリペプチドをコードする抗原構築物、（２）かかる抗原構築物を含有するベクター、または（３）かかる（such as）抗原構築物もしくはベクターを含有する組成物の使用を提供する。一部の実施形態では、本開示は、ヒトにおけるがんを処置する方法であって、がんが、腫瘍関連抗原ＣＥＡ、ＭＵＣ１およびＴＥＲＴのうち１種または複数の過剰発現に関連する、方法を提供する。本方法は、特定のがんにおいて過剰発現された腫瘍関連抗原に由来するまたはこれに対して免疫原性である少なくとも１種の免疫原性ポリペプチドをコードする抗原構築物を含む有効量の組成物をヒトに投与するステップを含む。抗原構築物は、単一抗原構築物または二重抗原構築物もしくは三重抗原構築物等の多重抗原構築物であり得る。一部の特定の実施形態では、組成物は、免疫原性ＣＥＡポリペプチド、免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドおよび免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドをコードする三重抗原構築物を含む。腫瘍関連抗原ＭＵＣ１、ＣＥＡおよび／またはＴＥＲＴを過剰発現するいずれのがんも、本開示によって提供される方法によって処置することができる。がんの例として、乳がん、卵巣がん、肺がん（小細胞肺がんおよび非小細胞肺がん等）、結腸直腸がん、胃がんおよび膵がんが挙げられる。一部の特定の実施形態では、本開示は、ヒトにおけるがんを処置する方法であって、三重抗原構築物を含む有効量の組成物をヒトに投与するステップを含み、がんが、（１）エストロゲン受容体および／またはプロゲステロン受容体陽性乳がん、ＨＥＲ２陽性乳がんまたは三重陰性乳がん等の乳がん、（２）ＮＳＣＬＣまたはＳＣＬＣ等の肺がん、（３）胃がん、（４）膵がん、または（５）結腸直腸がんである、方法を提供する。
【０１９０】
一部の特定の実施形態では、本開示は、哺乳動物、特にヒトにおけるＴＡＡに対する免疫応答を誘発する方法、異常な細胞増殖を阻害する方法、またはがんを処置する方法であって、多重抗原構築物または多重抗原構築物を含むベクターを含む有効量の組成物を哺乳動物に投与するステップを含み、多重抗原構築物が、配列番号４３、４５、４７、４９、５１および５３のアミノ酸配列のいずれかをコードするヌクレオチド配列を含む、方法を提供する。他の特定の実施形態では、本開示は、哺乳動物、特にヒトにおけるＴＡＡに対する免疫応答を誘発する方法、異常な細胞増殖を阻害する方法、またはがんを処置する方法であって、多重抗原構築物を含む有効量の組成物を哺乳動物に投与するステップを含み、多重抗原構築物が、配列番号４２、４４、４６、４８、５０、５２および８７〜９２のいずれかのヌクレオチド配列を含む、方法を提供する。他の特定の実施形態では、本開示は、哺乳動物、特にヒトにおけるＴＡＡに対する免疫応答を誘発する方法、異常な細胞増殖を阻害する方法、またはがんを処置する方法であって、ベクターを含む有効量の組成物を哺乳動物に投与するステップを含み、ベクターが、配列番号５７〜６８のいずれかのヌクレオチド配列を含む、方法を提供する。
【０１９１】
組成物は、当技術分野で公知のいくつかの適した方法によって、ヒトを含む哺乳動物に投与することができる。適した方法の例として、（１）筋肉内、真皮内、表皮内または皮下投与、（２）経口投与、および（３）外用適用（眼球、鼻腔内および腟内適用等）が挙げられる。核酸ワクチン組成物、特に、ＤＮＡプラスミドを含有する組成物の真皮内または表皮内投与の１つの特定の方法は、ＰｏｗｄｅｒＭｅｄによって販売される粒子媒介性表皮送達（ＰＭＥＤ（商標））ワクチン送達デバイスを使用した遺伝子銃送達である。ＰＭＥＤは、動物またはヒトにワクチンを投与する無針方法である。ＰＭＥＤシステムは、顕微鏡レベルの金粒子上にＤＮＡを沈殿させ、これを次いで、ヘリウムガスによって表皮内に推進させることを含む。ＤＮＡコーティングされた金粒子は、表皮のＡＰＣおよびケラチノサイトに送達され、これらの細胞の核の内側に入ったら、ＤＮＡは、金から溶離し、転写的に活性になり、コードされたタンパク質を産生する。核酸ワクチンの筋肉内投与のための別の特定の方法は、エレクトロポレーションを含む。エレクトロポレーションは、制御された電気パルスを使用して、細胞膜に一時的なポアを作製し、これにより、筋肉中に注射された核酸ワクチンの細胞取込みが容易になる。ＣｐＧが核酸ワクチンと組み合わせて使用される場合、ＣｐＧおよび核酸ワクチンは、１種の製剤中に同時製剤化することができ、この製剤は、エレクトロポレーションによって筋肉内投与される。
【０１９２】
所与の方法で投与されるべき組成物の有効量は、当業者によって容易に決定することができ、いくつかの因子に依存する。膵がん、卵巣がん、肺がん、結腸直腸がん、胃がんおよび乳がん等のがんを処置する方法において、有効量の決定において考慮され得る因子は、対象の免疫状態および健康を含む、処置されるべき対象、処置されるべきがんの重症度またはステージ、発現される特定の免疫原性ＴＡＡポリペプチド、所望の保護または処置の程度、投与方法およびスケジュール、ならびに使用される他の治療剤（アジュバントまたは免疫モジュレーター等）を含む。製剤化および送達の方法は、有効な免疫応答の誘発に要求される核酸の用量を決定するための特に鍵となる因子である。例えば、ワクチンが、水性溶液として製剤化され、真皮下針注射または空気圧注射によって投与される場合、ワクチン中の核酸の有効量は、２μｇ／用量〜１０ｍｇ／用量の範囲内であり得る一方、核酸が、コーティングされた金ビーズとして調製され、遺伝子銃技術を使用して送達される場合、僅か１６ｎｇ／用量〜１６μｇ／用量が要求され得る。エレクトロポレーションによるワクチン中の核酸の用量範囲は一般に、０．５〜１０ｍｇ／用量の範囲内である。核酸ワクチンが、同時製剤中でエレクトロポレーションによってＣｐＧと共に投与される場合、核酸ワクチンの用量は、０．５〜５ｍｇ／用量の範囲内であり得、ＣｐＧの用量は典型的に、１人あたり０．０５、０．２、０．６または１．２ｍｇ／用量等、０．０５ｍｇ〜５ｍｇ／用量の範囲内である。
【０１９３】
本開示によって提供されるワクチン組成物は、予備刺激−追加免疫戦略において使用して、頑強で長続きする免疫応答を誘導することができる。同じ免疫原性構築物の反復注射に基づく予備刺激および追加免疫ワクチン接種プロトコールは周知されている。一般に、ワクチンの第１の用量は、防御免疫を産生することができず、免疫系の「予備刺激」のみを行う。防御免疫応答は、第２の、第３のまたはその後の用量（「追加免疫」）の後に生じる。追加免疫は、従来技法に従って行われ、投与のスケジュール、投与の経路、アジュバントの選択、用量、および別のワクチンと共に投与される場合は可能な順序の観点から経験的にさらに最適化することができる。一実施形態では、ワクチン組成物は、従来の同種予備刺激−追加免疫戦略において使用され、この戦略において、同じワクチンが、予備刺激および追加免疫用量の両方において動物に投与される。例えば、プラスミドベクターを含有する同じワクチン組成物は、初回用量（「予備刺激」）およびその後の用量（「追加免疫」）の両方において投与される。別の実施形態では、ワクチン組成物は、異種予備刺激−追加免疫ワクチン接種において使用され、このワクチン接種において、同じ免疫原性ＴＡＡポリペプチド（複数可）を発現するワクチンの異なる型が、所定の時間間隔で投与される。例えば、抗原構築物は、予備刺激用量においてプラスミドベクターの形態で、追加免疫用量においてウイルスベクターの形態で投与される、またはその逆もまた同じである。
【０１９４】
ワクチン組成物は、１種または複数のアジュバントと共に使用することができる。適したアジュバントの例として、（１）ＭＦ５９およびＡＳ０３等の水中油型エマルション製剤；（２）ＱＳ２１およびＩｓｃｏｍａｔｒｉｘ（登録商標）（Ｃｏｍｍｏｎｗｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｕｍ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、オーストラリア）等のサポニンアジュバント；（３）フロイント完全アジュバント（ＣＦＡ）およびフロイント不完全アジュバント（ＩＦＡ）；（４）インターロイキン（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１２）、インターフェロン（例えば、ガンマインターフェロン）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）および腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）等のサイトカイン；（５）モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）または３−Ｏ−脱アシル化ＭＰＬ（３ｄＭＰＬ）；（６）ＣｐＧモチーフを含むオリゴヌクレオチド；ならびに（７）リン酸アルミニウムおよび水酸化アルミニウム等のアルミニウム塩（ミョウバン）を含む金属塩が挙げられる。
【０１９５】
さらに、ヒトを含む哺乳動物におけるがんを含む新生物障害の処置のため、組成物は、１種または複数の免疫モジュレーターと組み合わせて投与することができる。免疫モジュレーターは、免疫抑制性細胞阻害剤（ＩＳＣ阻害剤）または免疫エフェクター細胞エンハンサー（ＩＥＣエンハンサー）であり得る。さらに、１種または複数のＩＳＣ阻害剤は、１種または複数のＩＥＣエンハンサーと組み合わせて使用することができる。免疫モジュレーターは、（１）静脈内、筋肉内または経口投与等の全身性投与、ならびに（２）真皮内および皮下投与等の局所的投与を含む、いずれか適した方法および経路によって投与することができる。適切な場合または適している場合、全身性投与よりも局所的投与が一般に好ましい。いずれかの免疫モジュレーターの局所的投与は、医薬品の局所的投与に適した哺乳動物の身体のいずれかの位置で実行することができる；しかし、これらの免疫モジュレーターは、ワクチン流入領域リンパ節のすぐ近くに局所的に投与されることがより好ましい。
【０１９６】
ワクチン等の組成物は、使用される免疫モジュレーターのいずれかまたは全てと同時にまたは逐次に投与することができる。同様に、２種以上の免疫モジュレーターが使用される場合、これらは、互いに関して同時にまたは逐次に投与することができる。一部の実施形態では、ワクチンは、１種の免疫モジュレーターに関して同時に（例えば、混合物中で）、ただし、１種または複数の追加的な免疫モジュレーターに関して逐次に投与される。ワクチンおよび免疫モジュレーターの同時投与は、抗原および免疫モジュレーターが同時に投与されない場合であっても、同時的にワクチン流入領域リンパ節等の投与部位にそれぞれが存在するように、ワクチンおよび少なくとも１種の免疫モジュレーターが投与される場合を含むことができる。ワクチンおよび免疫モジュレーターの同時投与は、ワクチンまたは免疫モジュレーターが、投与部位から排除されるが、排除されたワクチンまたは免疫モジュレーターの少なくとも１種の細胞性効果が、少なくとも、１種または複数の追加的な免疫モジュレーターが投与部位に投与されるまで、ワクチン流入領域リンパ節等の投与部位で持続する場合を含むこともできる。核酸ワクチンが、ＣｐＧと組み合わせて投与される場合、ワクチンおよびＣｐＧは、単一製剤中に含有されて、いずれか適した方法によって一緒に投与されてよい。一部の実施形態では、同時製剤（混合物）中の核酸ワクチンおよびＣｐＧは、エレクトロポレーションと組み合わせた筋肉内注射によって投与される。
【０１９７】
一部の実施形態では、免疫モジュレーターは、ＩＳＣ阻害剤である。ＩＳＣ阻害剤の例として、（１）イマチニブ、ソラフェニブ、ラパチニブ、ＢＩＲＢ−７９６およびＡＺＤ−１１５２、ＡＭＧ７０６、ザクチマ（Zactima）（ＺＤ６４７４）、ＭＰ−４１２、ソラフェニブ（ＢＡＹ  ４３−９００６）、ダサチニブ、ＣＥＰ−７０１（レスタウルチニブ）、ＸＬ６４７、ＸＬ９９９、タイケルブ（ラパチニブ）、ＭＬＮ５１８（以前はＣＴ５３５１８として知られる）、ＰＫＣ４１２、ＳＴ１５７１、ＡＥＥ  ７８８、ＯＳＩ−９３０、ＯＳＩ−８１７、スニチニブリンゴ酸塩（スーテント）、アキシチニブ（ＡＧ−０１３７３６）、エルロチニブ、ゲフィチニブ、アキシチニブ、ボスチニブ、テムシロリムス（temsirolismus）およびニロチニブ（ＡＭＮ１０７）等のタンパク質キナーゼ阻害剤。一部の特定の実施形態では、チロシンキナーゼ阻害剤は、スニチニブ、ソラフェニブ、またはスニチニブもしくはソラフェニブの薬学的に許容できる塩もしくは誘導体（リンゴ酸塩またはトシル酸塩等）である；（２）セレコキシブおよびロフェコキシブ等のシクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）阻害剤；（３）アバナフィル、ロデナフィル（lodenafil）、ミロデナフィル（mirodenafil）、シルデナフィル、タダラフィル、バルデナフィル、ウデナフィルおよびザプリナスト等のホスホジエステラーゼ５型（ＰＤＥ５）阻害剤、（４）シクロホスファミド等のＤＮＡ架橋剤、（５）タラゾパリブ等のＰＡＲＰ阻害剤、ならびに（６）パルボシクリブ（palbocyclib）等のＣＤＫ阻害剤が挙げられる。
【０１９８】
一部の実施形態では、核酸組成物と組み合わせて使用される免疫モジュレーターは、ＩＥＣエンハンサーである。２種以上のＩＥＣエンハンサーを一緒に使用することができる。使用することができるＩＥＣエンハンサーの例として、（１）ＯＸ４０、４−１ＢＢ（ＢＭＳ−６６３５１３等）、ＧＩＴＲ（ＴＲＸ５１８等）およびＣＤ４０（ＣＤ４０アゴニスト抗体等）のアゴニスト等のＴＮＦＲアゴニスト；（２）イピリムマブおよびトレメリムマブ等のＣＴＬＡ−４阻害剤；（３）ＣｐＧ  ７９０９（５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ３’）、ＣｐＧ  ２４５５５（５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＴＣＧＧＴＧＣＴＴＴＴ３’（ＣｐＧ  ２４５５５）；およびＣｐＧ  １０１０３（５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＴＣＧＧＴＣＧＴＴＴＴ３’）等のＴＬＲアゴニスト；（４）ニボルマブおよびペムブロリズマブ等のプログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１）阻害剤；ならびに（５）アテゾリズマブ、デュルバルマブおよびアベルマブ（velumab）等のＰＤ−Ｌ１阻害剤；ならびに（６）ＩＤＯ１阻害剤が挙げられる。
【０１９９】
一部の実施形態では、ＩＥＣエンハンサーは、ヒト、ヒト化または一部ヒト型キメラ抗ＣＤ４０抗体であり得る、ＣＤ４０アゴニスト抗体である。特定のＣＤ４０アゴニスト抗体の例として、Ｇ２８−５、ｍＡｂ８９、ＥＡ−５またはＳ２Ｃ６モノクローナル抗体、およびＣＰ８７０，８９３が挙げられる。ＣＰ−８７０，８９３は、抗腫瘍療法として臨床研究された、完全ヒト型アゴニストＣＤ４０モノクローナル抗体（ｍＡｂ）である。ＣＰ８７０，８９３の構造および調製は、ＷＯ２００３０４１０７０に開示されている（そこでは、抗体は、内部同定された「２１．４．１」によって同定され、抗体の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４０および配列番号４１に表記されている）。本開示の組成物と組み合わせた使用のため、ＣＰ−８７０，８９３は、真皮内、皮下または筋肉内注射等のいずれか適した経路によって投与することができる。ＣＰ８７０８９３の有効量は一般に、０．０１〜０．２５ｍｇ／ｋｇの範囲内である。一部の実施形態では、ＣＰ８７０８９３は、０．０５〜０．１ｍｇ／ｋｇの量で投与される。
【０２００】
一部の他の実施形態では、ＩＥＣエンハンサーは、イピリムマブおよびトレメリムマブ等のＣＴＬＡ−４阻害剤である。ＹＥＲＶＯＹとして販売されるイピリムマブ（ＭＥＸ−０１０またはＭＤＸ−１０１としても知られる）は、ヒト型抗ヒトＣＴＬＡ−４抗体である。イピリムマブは、そのＣＡＳ登録番号４７７２０２−００−９によって参照することもでき、ＰＣＴ公開番号ＷＯ０１／１４４２４において抗体１０ＤＩとして開示される。トレメリムマブ（ＣＰ−６７５，２０６としても知られる）は、完全ヒト型ＩｇＧ２モノクローナル抗体であり、ＣＡＳ番号７４５０１３−５９−６を有する。トレメリムマブは、その全体を参照により本明細書に組み込む米国特許第６，６８２，７３６号に開示されており、そこでは、これは、抗体１１．２．１として同定されており、その重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４２および４３に表記されている。本開示によって提供される組成物と組み合わせた使用のため、トレメリムマブは、局所的に、特に、真皮内または皮下に投与することができる。真皮内または皮下投与されるトレメリムマブの有効量は典型的に、１人あたり５〜２００ｍｇ／用量の範囲内である。一部の実施形態では、トレメリムマブの有効量は、用量あたり１人あたり１０〜１５０ｍｇ／用量の範囲内である。一部の特定の実施形態では、トレメリムマブの有効量は、１人あたり約１０、２５、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７５または２００ｍｇ／用量である。
【０２０１】
一部の他の実施形態では、免疫モジュレーターは、ＰＤ−１阻害剤またはＰＤ−Ｌ１阻害剤である。ＰＤ−１阻害剤の例として、ニボルマブ（商品名Ｏｐｄｉｖｏ）、ペムブロリズマブ（商品名Ｋｅｙｔｒｕｄａ）、ＲＮ８８８（抗ＰＤ−１抗体）、ピディリズマブ（Ｃｕｒｅ  Ｔｅｃｈ、ＡＭＰ−２２４（ＧＳＫ）、ＡＭＰ−５１４（ＧＳＫ）およびＰＤＲ００１（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）が挙げられる。ＰＤ−Ｌ１阻害剤の例として、アテゾリズマブ（ＰＤ−Ｌ１特異的ｍＡｂ；商品名Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ）、デュルバルマブ（ＰＤ−Ｌ１特異的ｍＡｂ；商品名Ｉｍｆｉｎｚｉ）およびアベルマブ（ＰＤ−Ｌ１特異的ｍＡｂ；商品名Ｂａｖｅｎｃｉｏ）およびＢＭＳ−９３６５５９（ＢＭＳ）が挙げられる。Ｏｋａｚａｋｉ  Ｔら、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００７）；１９、７：８１３〜８２４およびＳｕｎｓｈｉｎｅ  Ｊら、Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２０１５年８月；２３：３２〜８）も参照されたい。一部の特定の実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、ＲＮ８８８である。ＲＮ８８８は、ＰＤ−１に特異的に結合するモノクローナル抗体である。ＲＮ８８８は、国際特許出願公開ＷＯ２０１６／０９２４１９に開示されており、そこでは、この抗体は、配列番号２９の全長重鎖アミノ酸配列および配列番号３９の全長軽鎖アミノ酸配列を有するｍＡｂ７として同定される。
【０２０２】
他の実施形態では、免疫モジュレーターは、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ１（「ＩＤＯ１」としても知られる）の阻害剤である。ＩＤＯ１は、抑制性表現型へと免疫細胞機能をモジュレートすることが判明しており、したがって、宿主免疫監視からの腫瘍回避を部分的に説明すると考えられた。この酵素は、必須アミノ酸トリプトファンをキヌレニンおよび他の代謝物へと分解する。これらの代謝物、およびトリプトファン不足が、エフェクターＴ細胞機能の抑制および調節性Ｔ細胞の分化増大をもたらすことが判明した。ＩＤＯ１阻害剤は、抗体等の大分子、または化合物等の低分子であり得る。
【０２０３】
一部の特定の実施形態では、本開示によって提供されるポリペプチドまたは核酸組成物は、ＷＯ２０１０／００５９５８に開示されている１，２，５−オキサジアゾール誘導体ＩＤＯ１阻害剤と組み合わせて使用される。特定の１，２，５−オキサジアゾール誘導体ＩＤＯ１阻害剤の例として、次の化合物が挙げられる：
４−（｛２−［（アミノスルホニル）アミノ］エチル｝アミノ）−Ｎ−（３−ブロモ−４−フルオロフェニル）−Ｎ’−ヒドロキシ−１，２，５−オキサジアゾール−３−カルボキシイミドアミド；
４−（｛２［（アミノスルホニル）アミノ］エチル｝アミノ）−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−Ｎ’−ヒドロキシ−１，２，５−オキサジアゾール３−カルボキシイミドアミド；
４−（｛２［（アミノスルホニル）アミノ］エチル｝アミノ）−Ｎ−［４−フルオロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−Ｎ’−ヒドロキシ−１，２，５オキサジアゾール−３−カルボキシイミドアミド；
４−（｛２［（アミノスルホニル）アミノ］エチル｝アミノ）−Ｎ’−ヒドロキシ−Ｎ−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−１，２，５オキサジアゾール−３−カルボキシイミドアミド；
４−（｛２［（アミノスルホニル）アミノ］エチル｝アミノ）−Ｎ−（３−シアノ−４−フルオロフェニル）−Ｎ’−ヒドロキシ−１，２，５−オキサジアゾール３−カルボキシイミドアミド；
４−（｛２［（アミノスルホニル）アミノ］エチル｝アミノ）−Ｎ−［（４−ブロモ−２−フリル）メチル］−Ｎ’−ヒドロキシ−１，２，５オキサジアゾール−３−カルボキシイミドアミド；または
４−（｛２［（アミノスルホニル）アミノ］エチル｝アミノ）−Ｎ−［（４−クロロ−２−フリル）メチル］−Ｎ’−ヒドロキシ−１，２，５オキサジアゾール−３−カルボキシイミドアミド。
【０２０４】
１，２，５−オキサジアゾール誘導体ＩＤＯ１阻害剤は典型的に、１日に１回または２回経口投与され、経口投与による有効量は一般に、２５ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、７００ｍｇ、８００ｍｇまたは１０００ｍｇ等、患者あたり用量あたり２５ｍｇ〜１０００ｍｇの範囲内である。特定の実施形態では、本開示によって提供されるポリペプチドまたは核酸組成物は、用量あたり２５ｍｇまたは５０ｍｇで１日に２回経口投与される４−（｛２−［（アミノスルホニル）アミノ］エチル｝アミノ）−Ｎ−（３−ブロモ−４−フルオロフェニル（fiuorophenyl））−Ｎ’−ヒドロキシ−１，２，５−オキサジアゾール−３−カルボキシイミドアミドと組み合わせて使用される。１，２，５−オキサジアゾール誘導体は、その全体を参照により本明細書に組み込む米国特許第８，０８８，８０３号に記載されている通りに合成することができる。
【０２０５】
一部の他の特定の実施形態では、本開示によって提供されるポリペプチドまたは核酸組成物は、ＷＯ２０１５／１７３７６４に開示されているピロリジン−２，５−ジオン誘導体ＩＤＯ１阻害剤と組み合わせて使用される。特定のピロリジン−２，５−ジオン誘導体阻害剤の例として、次の化合物が挙げられる：
３−（５−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イル）ピロリジン−２，５−ジオン；
（３−２Ｈ）−３−（５−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イル）ピロリジン−２，５−ジオン；
（−）−（Ｒ）−３−（５−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イル）ピロリジン−２，５−ジオン；
３−（１Ｈ−インドール−３−イル）ピロリジン−２，５−ジオン；
（−）−（Ｒ）−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）ピロリジン−２，５−ジオン；
３−（５−クロロ−１Ｈ−インドール−３−イル）ピロリジン−２，５−ジオン；
（−）−（Ｒ）−３−（５−クロロ−１Ｈ−インドール−３−イル）ピロリジン−２，５−ジオン；
３−（５−ブロモ−１Ｈ−インドール−３−イル）ピロリジン−２，５−ジオン；
３−（５，６−ジフルオロ−１Ｈ−インドール−３−イル）ピロリジン−２，５−ジオン；および
３−（６−クロロ−１Ｈ−インドール−３−イル）ピロリジン−２，５−ジオン。
【０２０６】
ピロリジン−２，５−ジオン誘導体ＩＤＯ１阻害剤は典型的に、１日に１回または２回経口投与され、経口投与による有効量は一般に、１２５ｍｇ、２５０ｍｇ、５００ｍｇ、７５０ｍｇまたは１０００ｍｇ等、患者あたり用量あたり５０ｍｇ〜１０００ｍｇの範囲内である。特定の実施形態では、本開示によって提供されるポリペプチドまたは核酸組成物は、患者あたり用量あたり１２５〜１００ｍｇで１日に１回経口投与される３−（５−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イル）ピロリジン−２，５−ジオンと組み合わせて使用される。ピロリジン−２，５−ジオン誘導体は、その全体を参照により本明細書に組み込む米国特許出願公開ＵＳ２０１５３２９５２５に記載されている通りに合成することができる。
【実施例】
【０２０７】
Ｇ．実施例
次の実施例は、本発明のある特定の実施形態を説明するために提供される。実施例は、決して本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。上の論述およびこれらの実施例から、当業者は、本発明の本質的特徴を確かめることができ、その精神および範囲から逸脱することなく、様々な利用および条件に適応させるために、本発明に様々な変更および修正をなすことができる。
【０２０８】
（実施例１）
単一抗原構築物または多重抗原構築物を含有するプラスミドの構築
実施例１は、単一抗原構築物、二重抗原構築物または三重抗原構築物を含有するプラスミドベクターの構築を説明する。特に断りがなければ、ＭＵＣ１、ＣＥＡおよびＴＥＲＴタンパク質のアミノ酸位置または残基の参照は、それぞれ、配列番号１に表記されているヒトＭＵＣ１アイソフォーム１前駆体タンパク質のアミノ酸配列、配列番号２に表記されているヒト癌胎児抗原（ＣＥＡ）アイソフォーム１前駆体タンパク質のアミノ酸配列、および配列番号３に表記されているヒトＴＥＲＴアイソフォーム１前駆体タンパク質のアミノ酸配列を指す。プラスミド構築において使用されるプライマーのいくつかの構造は、表１６に提示される。
【０２０９】
１Ａ．単一抗原構築物を含有するプラスミド
プラスミド１０２７（ＭＵＣ１）。遺伝子合成および制限断片交換の技法を使用して、プラスミド１０２７を生成した。５×タンデム反復ＶＮＴＲ領域を有するヒトＭＵＣ１のアミノ酸配列を、遺伝子最適化および合成のためにＧｅｎｅＡｒｔに入れた。ポリペプチドをコードする遺伝子を、発現に関して最適化し、合成し、クローニングした。ＭＵＣ−１オープンリーディングフレームは、ＮｈｅＩおよびＢｇｌＩＩによる消化によってＧｅｎｅＡｒｔベクターから切除し、同様に消化されたプラスミドｐＰＪＶ７５６３に挿入した。プラスミド１０２７のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）ヌクレオチド配列は、配列番号４に表記されている。プラスミド１０２７にコードされるアミノ酸配列は、配列番号５に表記（set for）されている。
【０２１０】
プラスミド１３６１（ＣＥＡ）。遺伝子合成、ＰＣＲおよびシームレス（Seamless）クローニングの技法を使用して、プラスミド１３６１を構築した。第一に、ＣＥＡ参照配列をコードする遺伝子を、ＤＮＡ２．０における発現に関してコドン最適化した。アミノ酸２〜７０２をコードする配列は、ＰＣＲによって、プライマーＩＤ１３６１−１３６２＿ＰＣＲＦおよびＩＤ１３６１−１３６２＿ＰＣＲＲを用いて増幅した。アンプリコンを、シームレスクローニングによってｐＰＪＶ７５６３のＮｈｅＩ／ＢｇｌＩＩ部位にクローニングした。プラスミド１３６１のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号１４に表記されている。プラスミド１３６１にコードされるアミノ酸配列は、配列番号１５に表記（set for）されている。
【０２１１】
プラスミド１３８６（ｍＣＥＡ）。膜結合型免疫原性ＣＥＡポリペプチド（ｍＣＥＡ）をコードするプラスミド１３８６は、ＰＣＲおよびシームレスクローニングの技法を使用して構築した。第一に、ＣＥＡアミノ酸２〜１４４をコードする遺伝子断片は、ＰＣＲによって、プラスミド１３６１から、プライマーｆ  ｐｍｅｄ  ＣＥＡ  ＳＳおよびｒ  ＣＥＡ  Ｄ１を用いて増幅した。第二に、ＣＥＡアミノ酸３２３〜７０２をコードする遺伝子断片は、ＰＣＲによって、プラスミド１３６１から、プライマーｆ  ＣＥＡ  Ｄ１−Ｄ４およびｒ  ｐｍｅｄ  ＣＥＡ  ＧＰＩを用いて増幅した。アンプリコンを、シームレスクローニングによってｐＰＪＶ７５６３のＮｈｅＩ／ＢｇｌＩＩ部位にライゲーションおよびクローニングした。プラスミド１３８６のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号１６に表記されている。プラスミド１３８６にコードされるアミノ酸配列は、配列番号１７に表記（set for）されている。
【０２１２】
プラスミド１３９０（ｃＣＥＡ）。細胞質型免疫原性ＣＥＡポリペプチド（ｃＣＥＡ）をコードするプラスミド１３９０は、ＰＣＲおよびシームレスクローニングの技法を使用して構築した。第一に、ＣＥＡアミノ酸３５〜１４４をコードする遺伝子断片は、ＰＣＲによって、プラスミド１３６１から、プライマーｆ  ｐｍｅｄ  ＣＥＡ  Ｄ１およびｒ  ＣＥＡ  Ｄ１を用いて増幅した。第二に、ＣＥＡアミノ酸３２３〜６７７をコードする遺伝子断片は、ＰＣＲによって、プラスミド１３６１から、プライマーｆ  ＣＥＡ  Ｄ１−Ｄ４およびｒ  ｐｍｅｄ  ＣＥＡ  Ｄ７を用いて増幅した。アンプリコンを、シームレスクローニングによってｐＰＪＶ７５６３のＮｈｅＩ／ＢｇｌＩＩ部位にライゲーションおよびクローニングした。プラスミド１３９０のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号１８に表記されている。プラスミド１３９０にコードされるアミノ酸配列は、配列番号１９に表記（set for）されている。
【０２１３】
プラスミド１０６５（全長ＴＥＲＴ  Ｄ７１２Ａ／Ｖ７１３Ｉ）。遺伝子合成および制限断片交換の技法を使用して、プラスミド１０６５を生成した。酵素活性を不活性化するように設計された、２個の突然変異（Ｄ７１２Ａ／Ｖ７１３Ｉ）を有するヒトＴＥＲＴのアミノ酸配列を、遺伝子最適化および合成のためにＤＮＡ２．０に入れた。ポリペプチドをコードする遺伝子を、発現に関して最適化し、合成し、クローニングした。ＴＥＲＴオープンリーディングフレームは、ＮｈｅＩおよびＢｇｌＩＩによる消化によってＤＮＡ２．０ベクターから切除し、同様に消化されたプラスミドｐＰＪＶ７５６３に挿入した。プラスミド１０６５にコードされるアミノ酸配列は、配列番号８１に表記（set for）されている。プラスミド１０６５のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）ヌクレオチド配列は、配列番号８２に表記されている。
【０２１４】
プラスミド１１１２（ＴＥＲＴ２４０）。プラスミド１１１２は、ＰＣＲおよびシームレスクローニングの技法を使用して構築した。第一に、ＴＥＲＴアミノ酸２４１〜１１３２をコードする遺伝子は、ＰＣＲによって、プラスミド１０６５から、プライマーｆ  ｐｍｅｄ  ＴＥＲＴ  ２４１Ｇおよびｒ  ＴＥＲＴ  ｃｏ＃  ｐＭｅｄを用いて増幅した。アンプリコンを、シームレスクローニングによってｐＰＪＶ７５６３のＮｈｅＩ／ＢｇｌＩＩ部位にクローニングした。プラスミド１１１２のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号８に表記されている。プラスミド１１１２にコードされるアミノ酸配列は、配列番号９に表記（set for）されている。
【０２１５】
プラスミド１１９７（ｃＭＵＣ１）。細胞質型免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチド（ｃＭＵＣ１）をコードするプラスミド１１９７は、ＰＣＲおよびシームレスクローニングの技法を使用して構築した。第一に、ＭＵＣ１アミノ酸２２〜２２５、９４６〜１２５５をコードする遺伝子は、ＰＣＲによって、プラスミド１０２７から、プライマーＩＤ１１９７ＦおよびＩＤ１１９７Ｒを用いて増幅した。アンプリコンを、シームレスクローニングによってｐＰＪＶ７５６３のＮｈｅＩ／ＢｇｌＩＩ部位にクローニングした。プラスミド１１９７のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号６に表記されている。プラスミド１１９７にコードされるアミノ酸配列は、配列番号７に表記（set for）されている。
【０２１６】
プラスミド１３２６（ＴＥＲＴ３４３）。プラスミド１３２６は、ＰＣＲおよびシームレスクローニングの技法を使用して構築した。第一に、ＴＥＲＴアミノ酸３４４〜１１３２をコードする遺伝子は、ＰＣＲによって、プラスミド１１１２から、プライマーＴｅｒｔΔ３４３−ＦおよびＴｅｒｔ−Ｒを用いて増幅した。アンプリコンを、シームレスクローニングによってｐＰＪＶ７５６３のＮｈｅＩ／ＢｇｌＩＩ部位にクローニングした。プラスミド１３２６のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号１０に表記されている。プラスミド１３２６にコードされるアミノ酸配列は、配列番号１１に表記（set for）されている。
【０２１７】
プラスミド１３３０（ＴＥＲＴ５４１）。プラスミド１３３０は、ＰＣＲおよびシームレスクローニングの技法を使用して構築した。第一に、ＴＥＲＴアミノ酸５４２〜１１３２をコードする遺伝子は、ＰＣＲによって、プラスミド１１１２から、プライマーＴｅｒｔΔ５４１−ＦおよびＴｅｒｔ−Ｒを用いて増幅した。アンプリコンを、シームレスクローニングによってｐＰＪＶ７５６３のＮｈｅＩ／ＢｇｌＩＩ部位にクローニングした。プラスミド１３３０のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号１２に表記されている。プラスミド１３３０にコードされるアミノ酸配列は、配列番号１３に表記（set for）されている。
【０２１８】
１Ｂ．二重抗原構築物を含有するプラスミド
プラスミド１２６９（Ｍｕｃ１−Ｔｅｒｔ２４０）。プラスミド１２６９は、ＰＣＲおよびシームレスクローニングの技法を使用して構築した。第一に、ヒトテロメラーゼアミノ酸２４１〜１１３２をコードする遺伝子は、ＰＣＲによって、プラスミド１１１２から、プライマーｆ  ｔｇ  ｌｉｎｋ  Ｔｅｒ２４０およびｒ  ｐｍｅｄ  Ｂｇｌ  Ｔｅｒ２４０を用いて増幅した。ヒトムチン−１アミノ酸２〜２２５、９４６〜１２５５をコードする遺伝子は、ＰＣＲによって、プラスミド１０２７から、プライマーｆ  ｐｍｅｄ  Ｎｈｅ  Ｍｕｃおよびｒ  ｌｉｎｋ  ｍｕｃを用いて増幅した。ＰＣＲは、Ｔｅｒｔの５’端およびＭｕｃ１の３’端における重複するＧＧＳＧＧリンカーの付加をもたらした。アンプリコンを一体に混合し、シームレスクローニングによってｐＰＪＶ７５６３のＮｈｅＩ／ＢｇｌＩＩ部位にクローニングした。プラスミド１２６９のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号２０に表記されている。プラスミド１２６９にコードされるアミノ酸配列は、配列番号２１に表記（set for）されている。
【０２１９】
プラスミド１２７０（Ｍｕｃ１−ＥＲＢ２Ａ−Ｔｅｒｔ２４０）。プラスミド１２７０は、ＰＣＲおよびシームレスクローニングの技法を使用して構築した。第一に、ヒトテロメラーゼアミノ酸２４１〜１１３２をコードする遺伝子は、ＰＣＲによって、プラスミド１１１２から、プライマーｆ２  ＥＲＢＶ２Ａ、ｆ１  ＥＲＢＶ２Ａ  Ｔｅｒ２４０およびｒ  ｐｍｅｄ  Ｂｇｌ  Ｔｅｒ２４０を用いて増幅した。ヒトムチン−１アミノ酸２〜２２５、９４６〜１２５５をコードする遺伝子は、ＰＣＲによって、プラスミド１０２７から、プライマーｆ  ｐｍｅｄ  Ｎｈｅ  Ｍｕｃおよびｒ  ＥＲＢ２Ａ  Ｂａｍｈ  Ｍｕｃを用いて増幅した。ＰＣＲは、Ｔｅｒｔの５’端およびＭｕｃ１の３’端における重複するＥＲＢＶ  ２Ａ配列の付加をもたらした。アンプリコンを一体に混合し、シームレスクローニングによってｐＰＪＶ７５６３のＮｈｅＩ／ＢｇｌＩＩ部位にクローニングした。プラスミド１２７０のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号２２に表記されている。プラスミド１２７０にコードされるアミノ酸配列は、配列番号２３に表記（set for）されている。
【０２２０】
プラスミド１２７１（Ｔｅｒｔ２４０−ＥＲＢ２Ａ−Ｍｕｃ１）。プラスミド１２７１は、ＰＣＲおよびシームレスクローニングの技法を使用して構築した。第一に、ヒトテロメラーゼアミノ酸２４１〜１１３２をコードする遺伝子は、ＰＣＲによって、プラスミド１１１２から、プライマーｆ  ｐｍｅｄ  Ｎｈｅ  Ｔｅｒ２４０およびｒ  ＥＲＢ２Ａ  Ｂａｍｈ  Ｔｅｒ２４０を用いて増幅した。ヒトムチン−１アミノ酸２〜２２５、９４６〜１２５５をコードする遺伝子は、ＰＣＲによって、プラスミド１０２７から、プライマーｆ２  ＥＲＢＶ２Ａ、ｆ１  ＥＲＢＶ２Ａ  Ｍｕｃおよびｒ  ｐｍｅｄ  Ｂｇｌ  Ｍｕｃを用いて増幅した。ＰＣＲは、Ｔｅｒｔの３’端およびＭｕｃ１の５’端における重複するＥＲＢＶ  ２Ａ配列の付加をもたらした。アンプリコンを一体に混合し、シームレスクローニングによってｐＰＪＶ７５６３のＮｈｅＩ／ＢｇｌＩＩ部位にクローニングした。プラスミド１２７１のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号２４に表記されている。プラスミド１２７１にコードされるアミノ酸配列は、配列番号２５に表記（set for）されている。
【０２２１】
プラスミド１２８６（ｃＭｕｃ１−ＥＲＢ２Ａ−Ｔｅｒｔ２４０）。プラスミド１２８６は、ＰＣＲおよびシームレスクローニングの技法を使用して構築した。第一に、ヒトテロメラーゼアミノ酸２４１〜１１３２をコードする遺伝子は、ＰＣＲによって、プラスミド１１１２から、プライマーｆ２  ＥＲＢＶ２Ａ、ｆ１  ＥＲＢＶ２Ａ  Ｔｅｒ２４０およびｒ  ｐｍｅｄ  Ｂｇｌ  Ｔｅｒ２４０を用いて増幅した。ヒトムチン−１アミノ酸２２〜２２５、９４６〜１２５５をコードする遺伝子は、ＰＣＲによって、プラスミド１１９７から、プライマーｆ  ｐｍｅｄ  Ｎｈｅ  ｃｙｔＭｕｃおよびｒ  ＥＲＢ２Ａ  Ｂａｍｈ  Ｍｕｃを用いて増幅した。ＰＣＲは、Ｔｅｒｔの５’端およびＭｕｃ１の３’端における重複するＥＲＢＶ  ２Ａ配列の付加をもたらした。アンプリコンを一体に混合し、シームレスクローニングによってｐＰＪＶ７５６３のＮｈｅＩ／ＢｇｌＩＩ部位にクローニングした。プラスミド１２８６のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号２６に表記されている。プラスミド１２８６にコードされるアミノ酸配列は、配列番号２７に表記（set for）されている。
【０２２２】
プラスミド１２８７（Ｔｅｒｔ２４０−ＥＲＢ２Ａ−ｃＭｕｃ１）。プラスミド１２８７は、ＰＣＲおよびシームレスクローニングの技法を使用して構築した。第一に、ヒトテロメラーゼアミノ酸２４１〜１１３２をコードする遺伝子は、ＰＣＲによって、プラスミド１１１２から、プライマーｆ  ｐｍｅｄ  Ｎｈｅ  Ｔｅｒ２４０およびｒ  ＥＲＢ２Ａ  Ｂａｍｈ  Ｔｅｒ２４０を用いて増幅した。ヒトムチン−１アミノ酸２２〜２２５、９４６〜１２５５をコードする遺伝子は、ＰＣＲによって、プラスミド１１９７から、プライマーｆ２  ＥＲＢＶ２Ａ、ｆ１  ＥＲＢＶ２Ａ  ｃＭｕｃおよびｒ  ｐｍｅｄ  Ｂｇｌ  Ｍｕｃを用いて増幅した。ＰＣＲは、Ｔｅｒｔの３’端およびＭｕｃ１の５’端における重複するＥＲＢＶ  ２Ａ配列の付加をもたらした。アンプリコンを一体に混合し、シームレスクローニングによってｐＰＪＶ７５６３のＮｈｅＩ／ＢｇｌＩＩ部位にクローニングした。プラスミド１２８７のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号２８に表記されている。プラスミド１２８７にコードされるアミノ酸配列は、配列番号２９に表記（set for）されている。
【０２２３】
プラスミド１４０９（Ｍｕｃ１−ＥＭＣ２Ａ−ｍＣＥＡ）。プラスミド１４０９は、ＰＣＲおよびシームレスクローニングの技法を使用して構築した。第一に、ヒトムチン−１アミノ酸２〜２２５、９４６〜１２５５をコードする遺伝子は、ＰＣＲによって、プラスミド１０２７から、プライマーｆ  ｐｍｅｄ  Ｎｈｅ  Ｍｕｃおよびｒ  ＥＭ２Ａ  Ｂａｍｈ  Ｍｕｃを用いて増幅した。ＣＥＡアミノ酸２〜１４４、３２３〜７０２をコードする遺伝子は、ＰＣＲによって、プラスミド１３８６から、プライマーｆ２  ＥＭＣＶ２Ａ、ｆ１  ＥＭＣ２ａ  ＣＥＡｓｓおよびｒ  ｐｍｅｄ  ＣＥＡ  ＧＰＩを用いて増幅した。ＰＣＲは、ＣＥＡの５’端およびＭｕｃ１の３’端における重複するＥＭＣＶ  ２Ａ配列の付加をもたらした。アンプリコンを一体に混合し、シームレスクローニングによってｐＰＪＶ７５６３のＮｈｅＩ／ＢｇｌＩＩ部位にクローニングした。プラスミド１４０９のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号３０に表記されている。プラスミド１４０９にコードされるアミノ酸配列は、配列番号３１に表記（set for）されている。
【０２２４】
プラスミド１４１０（ｍＣＥＡ−Ｔ２Ａ−Ｍｕｃ１）。プラスミド１４１０は、ＰＣＲおよびシームレスクローニングの技法を使用して構築した。第一に、ＣＥＡアミノ酸２〜１４４、３２３〜７０２をコードする遺伝子は、ＰＣＲによって、プラスミド１３８６から、プライマーｆ  ｐｍｅｄ  ＣＥＡ  ＳＳおよびｒ  Ｔ２Ａ  ＣＥＡを用いて増幅した。ヒトムチン−１アミノ酸２〜２２５、９４６〜１２５５をコードする遺伝子は、ＰＣＲによって、プラスミド１０２７から、プライマーｆ２  Ｔ２Ａ  ６３、ｆ１  Ｔ２ａ  Ｍｕｃおよびｒ  ｐｍｅｄ  Ｂｇｌ  Ｍｕｃを用いて増幅した。ＰＣＲは、ＣＥＡの３’端およびＭｕｃ１の５’端における重複するＴ２Ａ配列の付加をもたらした。アンプリコンを一体に混合し、シームレスクローニングによってｐＰＪＶ７５６３のＮｈｅＩ／ＢｇｌＩＩ部位にクローニングした。プラスミド１４１０のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号３２に表記されている。プラスミド１４１０にコードされるアミノ酸配列は、配列番号３３に表記（set for）されている。
【０２２５】
プラスミド１４１１（ｍＣＥＡ−フューリン−Ｔ２Ａ−Ｍｕｃ１）。プラスミド１４１１は、ＰＣＲおよびシームレスクローニングの技法を使用して構築した。第一に、ＣＥＡアミノ酸２〜１４４、３２３〜７０２をコードする遺伝子は、ＰＣＲによって、プラスミド１３８６から、プライマーｆ  ｐｍｅｄ  ＣＥＡ  ＳＳおよびｒ  Ｔ２ＡフューリンＣＥＡを用いて増幅した。ヒトムチン−１アミノ酸２〜２２５、９４６〜１２５５をコードする遺伝子は、ＰＣＲによって、プラスミド１０２７から、プライマーｆ２  Ｔ２Ａ  ６３、ｆ１  Ｔ２ａ  Ｍｕｃおよびｒ  ｐｍｅｄ  Ｂｇｌ  Ｍｕｃを用いて増幅した。ＰＣＲは、ＣＥＡの３’端およびＭｕｃ１の５’端における重複するフューリン切断部位およびＴ２Ａ配列の付加をもたらした。アンプリコンを一体に混合し、シームレスクローニングによってｐＰＪＶ７５６３のＮｈｅＩ／ＢｇｌＩＩ部位にクローニングした。プラスミド１４１１のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号３４に表記されている。プラスミド１４１１にコードされるアミノ酸配列は、配列番号３５に表記（set for）されている。
【０２２６】
プラスミド１４３１（Ｍｕｃ１−ＥＭＣ２Ａ−ｃＣＥＡ）。プラスミド１４３１は、ＰＣＲおよびシームレスクローニングの技法を使用して構築した。第一に、ヒトムチン−１アミノ酸２〜２２５、９４６〜１２５５をコードする遺伝子は、ＰＣＲによって、プラスミド１０２７から、プライマーｆ  ｐｍｅｄ  Ｎｈｅ  Ｍｕｃおよびｒ  ＥＭ２Ａ  Ｂａｍｈ  Ｍｕｃを用いて増幅した。ＣＥＡアミノ酸３５〜１４４、３２３〜６７７をコードする遺伝子は、ＰＣＲによって、プラスミド１３９０から、プライマーｆ２  ＥＭＣＶ２Ａ、ｆ  ＥＭＣ２ａ  ＣＥＡ  ｄ１およびｒ  ｐｍｅｄ  ＣＥＡ  Ｄ７を用いて増幅した。ＰＣＲは、ＣＥＡの５’端およびＭｕｃ１の３’端における重複するＥＭＣＶ  ２Ａ配列の付加をもたらした。アンプリコンを一体に混合し、シームレスクローニングによってｐＰＪＶ７５６３のＮｈｅＩ／ＢｇｌＩＩ部位にクローニングした。プラスミド１４３１のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号３６に表記されている。プラスミド１４３１にコードされるアミノ酸配列は、配列番号３７に表記（set for）されている。
【０２２７】
プラスミド１４３２（ｃＣＥＡ−Ｔ２Ａ−Ｔｅｒｔ２４０）。プラスミド１４３２は、ＰＣＲおよびシームレスクローニングの技法を使用して構築した。第一に、ＣＥＡアミノ酸３５〜１４４、３２３〜６７７をコードする遺伝子は、ＰＣＲによって、プラスミド１３９０から、プライマーｆ  ｐｍｅｄ  ＣＥＡ  Ｄ１およびｒ  Ｔ２ａ  ＣＥＡ  Ｄ７を用いて増幅した。ヒトテロメラーゼアミノ酸２４１〜１１３２をコードする遺伝子は、ＰＣＲによって、プラスミド１１１２から、プライマーｆ２  Ｔ２Ａ  ６３、ｆ１  Ｔ２Ａ  Ｔｅｒｔ２４０およびｒ  ｐｍｅｄ  Ｂｇｌ  Ｔｅｒ２４０を用いて増幅した。ＰＣＲは、Ｔｅｒｔの５’端およびＣＥＡの３’端における重複するＴＡＶ  ２Ａ配列の付加をもたらした。アンプリコンを一体に混合し、シームレスクローニングによってｐＰＪＶ７５６３のＮｈｅＩ／ＢｇｌＩＩ部位にクローニングした。プラスミド１４３２のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号３８に表記されている。プラスミド１４３２にコードされるアミノ酸配列は、配列番号３９に表記（set for）されている。
【０２２８】
プラスミド１４４０（Ｔｅｒｔ２４０−ＥＲＡ２Ａ−ｍＣＥＡ）。プラスミド１４４０は、ＰＣＲおよびシームレスクローニングの技法を使用して構築した。第一に、ヒトテロメラーゼアミノ酸２４１〜１１３２をコードする遺伝子は、ＰＣＲによって、プラスミド１１１２から、プライマーｆ  ｐｍｅｄ  Ｎｈｅ  ｔｅｒｔ２４０およびｒ  ＥＲＡ２Ａ  Ｔｅｒｔを用いて増幅した。ＣＥＡアミノ酸２〜１４４、３２３〜７０２をコードする遺伝子は、ＰＣＲによって、プラスミド１３８６から、プライマー  ｆ２  ＥＲＡＶ２Ａ、ｆ１  ＥＲＡ２Ａ  ｓｓＣＥＡおよびｒ  ｐｍｅｄ  ＣＥＡ  ＧＰＩを用いて増幅した。ＰＣＲは、Ｔｅｒｔの３’端およびＣＥＡの５’端における重複するＥＲＡＶ  ２Ａ配列の付加をもたらした。アンプリコンを一体に混合し、シームレスクローニングによってｐＰＪＶ７５６３のＮｈｅＩ／ＢｇｌＩＩ部位にクローニングした。プラスミド１４４０のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号４０に表記されている。プラスミド１４４０にコードされるアミノ酸配列は、配列番号４１に表記（set for）されている。
【０２２９】
１Ｃ．三重抗原構築物を含有するプラスミド
プラスミド１４２４（Ｍｕｃ１−ＥＲＢ２Ａ−Ｔｅｒｔ２４０−ＥＲＡ２Ａ−ｍＣＥＡ）。プラスミド１４２４は、ＰＣＲおよびシームレスクローニングの技法を使用して構築した。第一に、ヒトムチン−１アミノ酸２〜２２５、９４６〜１２５５、ＥＲＢＶ  ２ＡペプチドおよびヒトＴｅｒｔ２４０のアミノ末端側半分をコードする遺伝子は、ＰＣＲによって、プラスミド１２７０から、プライマーｆ  ｐｍｅｄ  Ｎｈｅ  Ｍｕｃおよびｒ  ｔｅｒｔ  １６０２−１５７９を用いて増幅した。Ｔｅｒｔ２４０のカルボキシ末端側半分、ＥＲＡＶ  ２ＡペプチドおよびヒトＣＥＡアミノ酸２〜１４４、３２３〜７０２をコードする遺伝子は、ＰＣＲによって、プラスミド１４４０から、プライマーｆ  ｔｅｒｔ  １５８４−１６０７およびｒ  ｐｍｅｄ  ＣＥＡ  ＧＰＩを用いて増幅した。部分的に重複するアンプリコンをＤｐｎＩで消化し、一体に混合し、シームレスクローニングによってｐＰＪＶ７５６３のＮｈｅＩ／ＢｇｌＩＩ部位にクローニングした。プラスミド１４２４のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号４２に表記されている。プラスミド１４２４にコードされるアミノ酸配列は、配列番号４３に表記（set for）されている。
【０２３０】
プラスミド１４２５（ｍＣＥＡ−Ｔ２Ａ−Ｍｕｃ１−ＥＲＢ２Ａ−Ｔｅｒｔ２４０）。プラスミド１４２５は、ＰＣＲおよびシームレスクローニングの技法を使用して構築した。第一に、ヒトＣＥＡアミノ酸２〜１４４、３２３〜７０２、ＴＡＶ  ２Ａペプチドおよびヒトムチン−１のアミノ末端側半分をコードする遺伝子は、ＰＣＲによって、プラスミド１４１０から、プライマーｆ  ｐｍｅｄ  ＣＥＡ  ＳＳおよびｒ  ｍｕｃ  ９８６−９６３を用いて増幅した。ヒトムチン−１のカルボキシ末端側半分、ＥＲＢＶ  ２Ａペプチドおよびヒトテロメラーゼアミノ酸２４１〜１１３２をコードする遺伝子は、ＰＣＲによって、プラスミド１２７０から、プライマーｆ  Ｍｕｃ  ９６０−９８３およびｒ  ｐｍｅｄ  Ｂｇｌ  Ｔｅｒ２４０を用いて増幅した。部分的に重複するアンプリコンをＤｐｎＩで消化し、一体に混合し、シームレスクローニングによってｐＰＪＶ７５６３のＮｈｅＩ／ＢｇｌＩＩ部位にクローニングした。プラスミド１４２５のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号４４に表記されている。プラスミド１４２５にコードされるアミノ酸配列は、配列番号４５に表記（set for）されている。
【０２３１】
プラスミド１４２６（Ｔｅｒｔ２４０−ＥＲＢ２Ａ−Ｍｕｃ１−ＥＭＣ２Ａ−ｍＣＥＡ）。プラスミド１４２６は、ＰＣＲおよびシームレスクローニングの技法を使用して構築した。第一に、ヒトテロメラーゼアミノ酸２４１〜１１３２、ＥＲＢＶ  ２Ａペプチドおよびヒトムチン−１のアミノ末端側半分をコードする遺伝子は、ＰＣＲによって、プラスミド１２７１から、プライマーｆ  ｐｍｅｄ  Ｎｈｅ  Ｔｅｒ２４０およびｒ  ｍｕｃ  ９８６−９６３を用いて増幅した。ヒトムチン−１のカルボキシ末端側半分、ＥＭＣＶ  ２ＡペプチドおよびＣＥＡアミノ酸２〜１４４、３２３〜７０２をコードする遺伝子は、ＰＣＲによって、プラスミド１４０９から、プライマーｆ  Ｍｕｃ  ９６０−９８３およびｒ  ｐｍｅｄ  ＣＥＡ  ＧＰＩを用いて増幅した。部分的に重複するアンプリコンをＤｐｎＩで消化し、一体に混合し、シームレスクローニングによってｐＰＪＶ７５６３のＮｈｅＩ／ＢｇｌＩＩ部位にクローニングした。プラスミド１４２６のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号４６に表記されている。プラスミド１４２６にコードされるアミノ酸配列は、配列番号４７に表記（set for）されている。
【０２３２】
プラスミド１４２７（Ｔｅｒｔ２４０−ＥＲＡ２Ａ−ｍＣＥＡ−Ｔ２Ａ−Ｍｕｃ１）。プラスミド１４２７は、ＰＣＲおよびシームレスクローニングの技法を使用して構築した。第一に、ヒトテロメラーゼアミノ酸２４１〜１１３２、ＥＲＡＶ  ２ＡペプチドおよびｍＣＥＡのアミノ末端側半分をコードする遺伝子は、ＰＣＲによって、プラスミド１４４０から、プライマーｆ  ｐｍｅｄ  Ｎｈｅ  Ｔｅｒ２４０およびＲ  ＣＥＡ  ＳＲ２を用いて増幅した。ｍＣＥＡのカルボキシ末端側半分、ＴＡＶ  ２Ａペプチドおよびヒトムチン−１アミノ酸２〜２２５、９４６〜１２５５をコードする遺伝子は、ＰＣＲによって、プラスミド１４１０から、プライマーｆ  ｃＣＥＡ  ５６２−５９２およびｒ  ｐｍｅｄ  Ｂｇｌ  Ｍｕｃを用いて増幅した。部分的に重複するアンプリコンをＤｐｎＩで消化し、一体に混合し、シームレスクローニングによってｐＰＪＶ７５６３のＮｈｅＩ／ＢｇｌＩＩ部位にクローニングした。プラスミド１４２７のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号４８に表記されている。プラスミド１４２７にコードされるアミノ酸配列は、配列番号４９に表記（set for）されている。
【０２３３】
プラスミド１４２８（Ｍｕｃ１−ＥＭＣ２Ａ−ｃＣＥＡ−Ｔ２Ａ−Ｔｅｒｔ２４０）。プラスミド１４２８は、ＰＣＲおよびシームレスクローニングの技法を使用して構築した。第一に、ヒトムチン−１アミノ酸２〜２２５、９４６〜１２５５、ＥＭＣＶ  ２ＡペプチドおよびｃＣＥＡのアミノ末端側半分をコードする遺伝子は、ＰＣＲによって、プラスミド１４３１から、プライマーｆ  ｐｍｅｄ  Ｎｈｅ  Ｍｕｃおよびｒ  ｃＣＥＡ  ８４９−８２０を用いて増幅した。ｃＣＥＡのカルボキシ末端側半分、ＴＡＶ  ２Ａペプチドおよびヒトテロメラーゼアミノ酸２４１〜１１３２をコードする遺伝子は、ＰＣＲによって、プラスミド１４３２から、プライマーｆ  ＣＥＡ  ８３３−８５５およびｒ  ｐｍｅｄ  Ｂｇｌ  Ｔｅｒ２４０を用いて増幅した。部分的に重複するアンプリコンをＤｐｎＩで消化し、一体に混合し、シームレスクローニングによってｐＰＪＶ７５６３のＮｈｅＩ／ＢｇｌＩＩ部位にクローニングした。プラスミド１４２８のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号５０に表記されている。プラスミド１４２８にコードされるアミノ酸配列は、配列番号５１に表記（set for）されている。
【０２３４】
プラスミド１４２９（ｃＣＥＡ−Ｔ２Ａ−Ｔｅｒｔ２４０−ＥＲＢ２Ａ−Ｍｕｃ１）。プラスミド１４２９は、ＰＣＲおよびシームレスクローニングの技法を使用して構築した。第一に、ヒトＣＥＡアミノ酸３５〜１４４、３２３〜６７７、ＴＡＶ  ２ＡペプチドおよびヒトＴｅｒｔ２４０のアミノ末端側半分をコードする遺伝子は、ＰＣＲによって、プラスミド１４３２から、プライマーｆ  ｐｍｅｄ  ＣＥＡ  Ｄ１およびｒ  ｔｅｒｔ  １６０２−１５７９を用いて増幅した。ヒトＴｅｒｔ２４０のカルボキシ末端側半分、ＥＲＢＶ  ２Ａペプチドおよびヒトムチン−１アミノ酸２〜２２５、９４６〜１２５５をコードする遺伝子は、ＰＣＲによって、プラスミド１２７１から、プライマーｆ  ｔｅｒｔ  １５８４−１６０７およびｒ  ｐｍｅｄ  Ｂｇｌ  Ｍｕｃを用いて増幅した。部分的に重複するアンプリコンをＤｐｎＩで消化し、一体に混合し、シームレスクローニングによってｐＰＪＶ７５６３のＮｈｅＩ／ＢｇｌＩＩ部位にクローニングした。プラスミド１４２９のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号５２に表記されている。プラスミド１４２９にコードされるアミノ酸配列は、配列番号５３に表記（set for）されている。
【０２３５】
１Ｄ．ベクター構築
本実施例は、多重抗原構築物を保有するベクターの構築を説明する。プラスミド１４２４、１４２５、１４２６、１４２７、１４２８および１４２９のそれぞれによって保有されるものと同じ三重抗原構築物（オープンリーディングフレーム）を保有するベクターは、国際特許出願公開ＷＯ２０１５／０６３６４７に記載されているチンパンジーアデノウイルスＡｄＣ６８ゲノム配列から構築した。これらのベクターは、それぞれＡｄＣ６８Ｙ−１４２４、ＡｄＣ６８Ｙ−１４２５、ＡｄＣ６８Ｙ−１４２６、ＡｄＣ６８Ｙ−１４２７、ＡｄＣ６８Ｙ−１４２８およびＡｄＣ６８Ｙ−１４２９と称される。これらのベクターの構成は、図１に提示される。
【０２３６】
ＡｄＣ６８の全長ゲノム配列は、受託番号ＡＣ＿００００１１．１を有するＧｅｎｂａｎｋから入手でき、ＷＯ２０１５／０６３６４７にも提示されている。導入遺伝子なしのＡｄＣ６８骨格（「空ベクター」）をｉｎ  ｓｉｌｉｃｏで設計し、Ｅ１およびＥ３欠失をウイルスへと操作して、その複製能力をなくし、導入遺伝子挿入のための空間を作製した。塩基４５６〜３２５６および２７４７６〜３１８３１の欠失を有するベクターＡｄＣ６８Ｙは、以前のＡｄＣ６８ベクターよりも改善された成長特性を有するように操作した。ｉｎ  ｖｉｔｒｏオリゴ合成、ならびに大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ／Ｅ．ｃｏｌｉ）および／または酵母における人工染色体としてのその後の組換え媒介性中間アセンブリを利用した多段階プロセスにおいて、空ベクターを生化学的に合成した。様々な免疫原性ＴＡＡポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームは、ＰＣＲによって、それぞれプライマーセットＭｕｃ１−２０ｂｐ−Ｆ−９８／ｍＣＥＡ−２０ｂｐ−Ｒ−１００、Ｙ−ｍＣＥＡ−Ｓ２／Ｙ−Ｔｅｒｔ−Ａ２、Ｙ−Ｔｅｒｔ−Ｓ／Ｙ−ＣＥＡ−Ａ、Ｙ−Ｔｅｒｔ−Ｓ／Ｙ−ＭＵＣ−Ａ、Ｙ−ＭＵＣ−Ｓ２／Ｙ−Ｔｅｒｔ−Ａ２およびｃＣＥＡ−２０ｂｐ−Ｆ−１０６／Ｍｕｃ１−２０ＢＰ−Ｒ−１０８を使用して、プラスミド１４２４、１４２５、１４２６、１４２７、１４２８および１４２９から増幅した。次いで、アンプリコンを空ベクター骨格に挿入した。ＰａｃＩによる消化により、組換えウイルスゲノムを細菌人工染色体から放出させ、直鎖化された核酸を、Ｅ１補完（complimenting）接着ＨＥＫ２９３細胞株にトランスフェクトした。目に見える細胞壊死効果およびアデノウイルスフォーカス形成の後に、複数ラウンドの凍結／融解を行って細胞からウイルスを放出させることにより、培養物を収集した。標準技法によってウイルスを増幅および精製した。
【０２３７】
（実施例２）
ＭＵＣ１単一抗原構築物の免疫原性
ＨＬＡ−Ａ２／ＤＲ１マウスにおける試験
試験設計。１２匹の雌雄混合ＨＬＡ−Ａ２／ＤＲ１マウスに、ＰＭＥＤ方法を使用して、ＤＮＡ構築物プラスミド１０２７（配列番号５の膜結合型免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドをコードする）またはプラスミド１１９７（配列番号７のサイトゾル型免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドをコードする）を０日目に予備刺激し、１４日目に追加免疫した。２１日目に、マウスを屠殺し、インターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）ＥＬＩＳｐｏｔおよび細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）アッセイにおいてＭＵＣ１特異的細胞性免疫原性に関して脾細胞を評価した。
【０２３８】
粒子媒介性表皮送達（ＰＭＥＤ）。ＰＭＥＤは、動物または患者にワクチンを投与する無針方法である。ＰＭＥＤシステムは、顕微鏡レベルの金粒子上にＤＮＡを沈殿させ、これを次いで、ヘリウムガスによって表皮内に推進させることを含む。使い捨てデバイスであるＮＤ１０は、内部シリンダーからの加圧ヘリウムを使用して、金粒子を送達し、リピーター送達デバイスであるＸ１５は、高圧ホースを介してＸ１５に接続された外部ヘリウムタンクを使用して、金粒子を送達する。これらのデバイスの両方を試験において使用して、ＭＵＣ１  ＤＮＡプラスミドを送達した。金粒子は通常、１〜３μｍの直径であり、粒子は、金粒子１ｍｇにつき２μｇの抗原ＤＮＡプラスミドを含有するように製剤化した（Ｓｈａｒｐｅ，Ｍ．ら：Ｐ．  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｉｃｅ  ｆｒｏｍ  Ｈ５Ｎ１  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  ｃｈａｌｌｅｎｇｅ  ｂｙ  ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ  ＤＮＡ  ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ  ｕｓｉｎｇ  ｐａｒｔｉｃｌｅ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ．Ｖａｃｃｉｎｅ、２００７、２５（３４）：６３９２〜９８：Ｒｏｂｅｒｔｓ  ＬＫら：Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｓａｆｅｔｙ  ａｎｄ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ａ  ｐｏｗｄｅｒｅｄ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｂ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ  ｖａｃｃｉｎｅ  ｄｅｌｉｖｅｒｅｄ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ  ｂｙ  ａ  ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ  ｐｒｏｔｏｔｙｐｅ  ｄｅｖｉｃｅ．Ｖａｃｃｉｎｅ、２００５；２３（４０）：４８６７〜７８）。
【０２３９】
ＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳｐｏｔアッセイ。個々の動物由来の脾細胞を、ＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳｐｏｔプレートにおいて、個々のＡｇ特異的ペプチド（２〜１０ｕｇ／ｍｌの各ペプチド、ウェルあたり２．５〜５ｅ５個の細胞）または１５ｍｅｒ  Ａｇ特異的ペプチドのプール（１１アミノ酸により重複、Ａｇ特異的アミノ酸配列全体を網羅；表１５を参照；２〜５ｕｇ／ｍｌの各ペプチド、ウェルあたり１．２５〜５ｅ５個の細胞）と共に三連でコインキュベートした。プレートを約１６時間、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートし、次いで、製造業者の説明書に従って洗浄し発色させた。ＩＦＮ−γスポット形成細胞（ＳＦＣ）の数を、ＣＴＬリーダーで計数した。三連の平均を計算し、ペプチドを含有しなかった陰性対照ウェルの応答を減算した。次いで、ＳＦＣ計数を正規化して、１ｅ６個の脾細胞あたりの応答を表した。表中の抗原特異的応答は、Ａｇ特異的ペプチドまたはペプチドプールに対する応答の和を表す。
【０２４０】
ＩＣＳアッセイ。個々の動物由来の脾細胞を、Ｕ字底９６ウェルプレート組織培養プレートにおいて、Ｈ−２ｂ、ＨＬＡ−Ａ２またはＨＬＡ−Ａ２４拘束Ａｇ特異的ペプチド（５〜１０ｕｇ／ｍｌの各ペプチド、ウェルあたり１〜２ｅ６個の脾細胞）または１５ｍｅｒ  Ａｇ特異的ペプチドのプール（１１アミノ酸により重複、Ａｇ特異的アミノ酸配列全体を網羅；表１５を参照；２〜５ｕｇ／ｍｌの各ペプチド、ウェルあたり１〜２ｅ６個の脾細胞）と共にコインキュベートした。プレートを約１６時間、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。次いで、細胞を染色して、ＣＤ８＋Ｔ細胞から細胞内ＩＦＮ−γ発現を検出し、固定した。フローサイトメーターにおいて細胞を獲得した。ペプチドを含有しなかった陰性対照ウェルにおいて得られた応答の減算後のペプチド（複数可）ＡｇまたはペプチドプールＡｇ特異的ＩＦＮ−γ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度として、動物ごとにデータを提示した。
【０２４１】
サンドイッチＥＬＩＳＡアッセイ。Ｔｅｃａｎ  Ｅｖｏ、Ｂｉｏｍｅｋ  ＦｘＰおよびＢｉｏＴｅｋ  ４０５  Ｓｅｌｅｃｔ  ＴＳ自動化装置を使用して、標準サンドイッチＥＬＩＳＡアッセイを行った。３８４ウェルマイクロプレート（フラットウェル、高結合）を、２５μｌ／ウェルで、１×ＰＢＳ中１．０μｇ／ｍＬヒトＭＵＣ１またはヒトＣＥＡタンパク質（抗原）でコーティングし、一晩４℃でインキュベートした。翌朝、プレートを、０．０５％Ｔｗｅｅｎ  ２０を含有するＰＢＳ（ＰＢＳ−Ｔ）中の５％ＦＢＳにより１時間ＲＴでブロッキングした。９６Ｕ字底ウェルプレートにおいて、ＰＢＳ−Ｔにおける１／１００出発希釈においてマウス血清を調製した。Ｔｅｃａｎ  Ｅｖｏは、９個の希釈増分ポイントにわたりＰＢＳ−Ｔにおいて１／２対数系列希釈を行い、続いて、９６ウェルプレートから３８４ウェルプレートへの２５μｌ／ウェルの希釈血清のスタンピングを行った。３８４ウェルプレートを、６００ＲＰＭの振盪機において１時間ＲＴでインキュベートし、次いで、ＢｉｏＴｅｋ  ＥＬ  ４０５  Ｓｅｌｅｃｔ  ＴＳプレート洗浄機を使用して、ＰＢＳ−Ｔにおいてプレートを４回洗浄した。二次マウス抗ＩｇＧ−ＨＲＰ抗体を適切な希釈度に希釈し、Ｂｉｏｍｅｋ  ＦｘＰによって２５μｌ／ウェルで３８４ウェルプレートへとスタンピングし、６００ＲＰＭの振盪機において１時間ＲＴでインキュベートし、続いて、５回の反復洗浄を行った。Ｂｉｏｍｅｋ  ＦｘＰを使用して、２５μｌ／ウェルのＲＴ  ＴＭＢ基質でプレートをスタンピングし、暗所にてＲＴで３０分間インキュベートし、続いて、１Ｎ  Ｈ２ＳＯ４酸の２５μｌ／ウェルスタンピングを行って、酵素反応を終止した。Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ、Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘ  ３４０ＰＣ／３８４  Ｐｌｕｓにおいて４５０ｎｍ波長でプレートを読み取った。データは、検出限界９９．０によるＯＤ１．０における計算された力価として報告した。抗原特異的市販モノクローナル抗体を各プレートにおいて陽性対照として使用して、プレート間の変動性能を追跡した；無関係ワクチン接種マウス血清を陰性対照として使用し、ＰＢＳ−Ｔのみのウェルを使用して、非特異的結合バックグラウンドをモニターした。表中の力価は、個々の動物から誘発された抗原特異的ＩｇＧ力価を表す。
【０２４２】
結果。表１は、それぞれＭＵＣ１ペプチドライブラリーに由来するペプチドプール（表１５を参照）またはＭＵＣ１ペプチドａａ５１６〜５３０と共に培養されたＨＬＡ−Ａ２／ＤＲ１脾細胞のＥＬＩＳｐｏｔおよびＩＣＳデータを示す。３番目の列の数は、ＭＵＣ１ペプチドプールによる再刺激およびバックグラウンド減算後の、＃ＩＦＮ−γスポット／脾細胞１０６個を表す。４番目の列の数は、ＭＵＣ１ペプチドａａ５１６〜５３０による再刺激およびバックグラウンド減算後の、ＩＦＮ−γ＋であるＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を表す。陽性応答は、ＳＦＣ＞１００およびＩＦＮ−γ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度＞０．１％を有すると定義される。表１に示す通り、全長膜結合型（プラスミド１０２７）およびサイトゾル型（プラスミド１１９７）ＭＵＣ１構築物により作製された免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドは、ＨＬＡ−Ａ２拘束ＭＵＣ１ペプチドａａ５１６〜５３０特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を含むＭＵＣ１特異的Ｔ細胞応答を誘導することができた。サイトゾル型ＭＵＣ１抗原フォーマットは、最高規模のＴ細胞応答を誘導した。重要なことに、ＭＵＣ１ペプチドａａ５１６〜５３０に対するがん患者に由来するＴ細胞応答は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで抗腫瘍有効性と相関することが示され（Ｊｏｃｈｅｍｓ  Ｃら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ（２０１４）６３：１６１〜１７４）、この特定のエピトープに対する細胞性応答を生じることの重要性を実証した。
【０２４３】
【表１】
2020526202.tif 000002
【０２４４】
ＨＬＡ−Ａ２４マウスにおける試験
試験設計。雌雄混合ＨＬＡ−Ａ２４マウスに、ＰＭＥＤ投与によってＤＮＡ構築物プラスミド１０２７を０日目に予備刺激し、１４、２８および４２日目に追加免疫した。２１日目に、マウスを屠殺し、ＭＵＣ１特異的細胞性免疫原性に関して脾細胞を評価した（ＥＬＩＳｐｏｔ）。
【０２４５】
結果。表２は、ＭＵＣ１ペプチドライブラリーに由来するペプチドプール（表１５を参照）と共に培養されたＨＬＡ−Ａ２４脾細胞のＥＬＩＳｐｏｔデータを示す。３番目の列の数は、ＭＵＣ１ペプチドプールによる再刺激およびバックグラウンド減算後の、＃ＩＦＮ−γスポット／脾細胞１０６個を表す。太字フォントの数は、検査した少なくとも１個のペプチドプールが数え切れず、したがって、実数が少なくとも記述の値であることを示す。陽性応答は、ＳＦＣ＞１００を有すると定義される。表２に示す通り、膜結合型ＭＵＣ１構築物は、ＭＵＣ１特異的細胞性応答を誘導することができた。
【０２４６】
【表２】
2020526202.tif 000003
【０２４７】
サルにおける試験
試験設計。１４匹の中国起源のカニクイザルに、２ｅ１１個のウイルス粒子で、両側性筋肉内注射（総計１ｍＬ）により、サイトゾル型ＭＵＣ１ポリペプチド（プラスミド１１９７にコードされるものと同じポリペプチド）または全長膜結合型ＭＵＣ１ポリペプチド（プラスミド１０２７にコードされるものと同じポリペプチド）をコードするアデノウイルスベクターＡｄＣ６８Ｗを予備刺激した。２９日後に、動物に、エレクトロポレーションにより両側性に筋肉内送達されるプラスミド１１９７またはプラスミド１０２７を追加免疫した（総計２ｍＬ）。抗ＣＴＬＡ−４を１日目（３２ｍｇ）および２９日目（５０ｍｇ）に皮下投与した。最後の免疫化から１４日後に、動物を出血させ、ＰＢＭＣおよび血清を単離して、それぞれＭＵＣ１特異的細胞性（ＥＬＩＳｐｏｔ、ＩＣＳ）および液性（ＥＬＩＳＡ）応答を評価した。本開示の本実施例および他の実施例において使用したアデノウイルスベクターＡｄＣ６８Ｗは、国際特許出願ＷＯ２０１５／０６３６４７に記載されている方法に従ってチンパンジーアデノウイルスＡｄＣ６８から構築した。
【０２４８】
ＮＨＰ特異的免疫アッセイ
ＥＬＩＳｐｏｔアッセイ。個々の動物由来のＰＢＭＣを、二連で、ＩＦＮ−ｙ  ＥＬＩＳｐｏｔプレートにおいて、２ｕｇ／ｍｌの各ペプチド、ウェルあたり４ｅ５細胞で、１５ｍｅｒ  Ａｇ特異的ペプチドのプール（１１アミノ酸により重複、Ａｇ特異的アミノ酸配列全体を網羅）と共にコインキュベートした（表１５を参照）。プレートを約１６時間、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートし、次いで、製造業者の説明書に従って洗浄し発色させた。ＩＦＮ−γスポット形成細胞（ＳＦＣ）の数をＣＴＬリーダーにより計数した。二連の平均を計算し、ペプチドを含有しなかった陰性対照ウェルの応答を減算した。次いで、ＳＦＣ計数を、１ｅ６個のＰＢＭＣあたりの応答を表すように正規化した。表中の抗原特異的応答は、Ａｇ特異的ペプチドプールに対する応答の和を表す。
【０２４９】
ＩＣＳアッセイ。個々の動物由来のＰＢＭＣを、Ｕ字底９６ウェルプレート組織培養プレートにおいて、２ｕｇ／ｍＬの各ペプチド、ウェルあたり１．５〜２ｅ６個のＰＢＭＣで、１５ｍｅｒ  ＭＵＣ１ペプチドのプール（１１アミノ酸により重複、天然全長ＭＵＣ１アミノ酸配列全体を網羅；表１５を参照）と共にコインキュベートした。プレートを約１６時間、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートし、次いで染色して、ＣＤ８  Ｔ細胞から細胞内ＩＦＮ−γ発現を検出した。固定後に、フローサイトメーターにおいて細胞を獲得した。ペプチドを含有しなかった陰性対照ウェルにおいて得られた応答の減算および１ｅ６個のＣＤ８＋Ｔ細胞に対する正規化後に、ＭＵＣ１、ＣＥＡまたはＴＥＲＴ特異的ＩＦＮ−γ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の数として、個々の動物ごとに結果を提示する。
【０２５０】
サンドイッチＥＬＩＳＡアッセイ。Ｔｅｃａｎ  Ｅｖｏ、Ｂｉｏｍｅｋ  ＦｘＰおよびＢｉｏＴｅｋ  ４０５  Ｓｅｌｅｃｔ  ＴＳ自動化装置を使用して、標準サンドイッチＥＬＩＳＡアッセイを行った。３８４ウェルマイクロプレート（フラットウェル、高結合）を、２５μｌ／ウェルで、１×ＰＢＳ中１．０μｇ／ｍＬヒトＭＵＣ１またはヒトＣＥＡタンパク質（抗原）でコーティングし、一晩４℃でインキュベートした。翌朝、プレートを、０．０５％Ｔｗｅｅｎ  ２０を含有するＰＢＳ（ＰＢＳ−Ｔ）中の５％ＦＢＳにより１時間ＲＴでブロッキングした。９６Ｕ字底ウェルプレートにおいて、ＰＢＳ−Ｔにおける１／１００出発希釈で、中国起源のカニクイザルから血清を調製した。Ｔｅｃａｎ  Ｅｖｏは、９個の希釈増分ポイントにわたりＰＢＳ−Ｔにおいて１／２対数系列希釈を行い、続いて、９６ウェルプレートから３８４ウェルプレートへの２５μｌ／ウェルの希釈血清のスタンピングを行った。３８４ウェルプレートを、６００ＲＰＭの振盪機において１時間ＲＴでインキュベートし、次いで、ＢｉｏＴｅｋ  ＥＬ  ４０５  Ｓｅｌｅｃｔ  ＴＳプレート洗浄機を使用して、ＰＢＳ−Ｔにおいてプレートを４回洗浄した。カニクイザルＩｇＧと交差反応する二次アカゲザル抗ＩｇＧ−ＨＲＰ抗体を適切な希釈度に希釈し、Ｂｉｏｍｅｋ  ＦｘＰによって２５μｌ／ウェルで３８４ウェルプレートへとスタンピングし、６００ＲＰＭの振盪機において１時間ＲＴでインキュベートし、続いて、５回の反復洗浄を行った。Ｂｉｏｍｅｋ  ＦｘＰを使用して、２５μｌ／ウェルのＲＴ  ＴＭＢ基質でプレートをスタンピングし、暗所にてＲＴで３０分間インキュベートし、続いて、１Ｎ  Ｈ２ＳＯ４酸の２５μｌ／ウェルスタンピングを行って、酵素反応を終止した。Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ、Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘ  ３４０ＰＣ／３８４  Ｐｌｕｓにおいて４５０ｎｍ波長でプレートを読み取った。データは、検出限界９９．０によるＯＤ１．０における計算された力価として報告した。抗原特異的市販モノクローナル抗体を各プレートにおいて陽性対照として使用して、プレート間の変動性能を追跡した；無関係ワクチン接種マウス血清を陰性対照として使用し、ＰＢＳ−Ｔのみのウェルを使用して、非特異的結合バックグラウンドをモニターした。表中の力価は、個々の動物から誘発された抗原特異的ＩｇＧ力価を表す。
【０２５１】
結果。表３は、ＭＵＣ１ペプチドライブラリーに由来するペプチドプール（表１５）と共に培養された中国起源のカニクイザルＰＢＭＣのＥＬＩＳｐｏｔおよびＩＣＳデータ、ならびに中国起源のカニクイザル血清のＥＬＩＳＡデータを示す。３番目の列の数は、ＭＵＣ１ペプチドプールによる再刺激およびバックグラウンド減算後の、＃ＩＦＮ−γスポット／ＰＢＭＣ１０６個を表す。４番目の列の数は、ＭＵＣ１ペプチドプールによる再刺激およびバックグラウンド減算後の、＃ＩＦＮ−γ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞／ＣＤ８＋Ｔ細胞１０６個を表す。５番目の列の数は、抗ＭＵＣ１  ＩｇＧ力価（光学密度（Ｏ．Ｄ）＝１、検出限界（Ｌ．Ｏ．Ｄ）＝９９．０）を表す。陽性応答は、ＳＦＣ＞５０、ＩＦＮ−γ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞／ＣＤ８＋Ｔ細胞１ｅ６個＞５０、およびＩｇＧ力価＞９９を有すると定義される。表３に示す通り、サイトゾル型（プラスミド１１９７）および天然全長膜結合型（プラスミド１０２７）ＭＵＣ１構築物により作製された免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドは、ＭＵＣ１特異的ＴおよびＢ細胞応答を誘導することができた。天然全長膜結合型ＭＵＣ１構築物（プラスミド１０２７）は、全体的な最良のＭＵＣ１特異的細胞性および液性応答を誘導することが示された。
【０２５２】
【表３】
2020526202.tif 000004
【０２５３】
（実施例３）
ＣＥＡ単一抗原構築物の免疫原性
パスツール（Pasteur）（ＨＬＡ−Ａ２／ＤＲ１）マウスにおける免疫応答試験
試験設計。雌雄混合ＨＬＡ−Ａ２／ＤＲ１マウスに、エレクトロポレーションによって、ヒト膜結合型（プラスミド１３８６）またはサイトゾル型ＣＥＡポリペプチド（プラスミド１３９０）をコードする単一抗原構築物を保有するプラスミドを０日目に予備刺激し、１４日目に追加免疫した。抗原特異的Ｔ細胞応答を、ＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳｐｏｔおよびＩＣＳアッセイにおいて７日後に測定した。
【０２５４】
結果。表４は、構築物１３８６で免疫化されたマウスのためのａａ１〜６９９、およびプラスミド１３９０で免疫化されたマウスのためのａａ３７〜６７９（シグナル配列およびＧＰＩ配列の除去）で構成されるＣＥＡペプチドライブラリーに由来するペプチドプール（表１５も参照）と共に培養されたＨＬＡ−Ａ２／ＤＲ１脾細胞のＥＬＩＳｐｏｔおよびＩＣＳデータを示す。３および４番目の列の数は、関連するＣＥＡペプチドプールによる再刺激およびバックグラウンド減算後に誘発される、＃ＩＦＮ−γ＋スポット／脾細胞１ｅ６個、およびＩＦＮ−γ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度をそれぞれ表す。表５は、ＣＥＡペプチドａａ６９３〜７０１と共に培養されたＨＬＡ−Ａ２／ＤＲ１脾細胞のＥＬＩＳｐｏｔデータを示す。陽性応答は、ＳＦＣ＞１００、およびＩＦＮ−γ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度＞０．１％を有すると定義される。表４に示す通り、上の実施例１Ａに記載されている膜結合型（プラスミド１３８６）およびサイトゾル型（プラスミド１３９０）ＣＥＡ構築物により作製された免疫原性ＣＥＡポリペプチドは、ＣＥＡ特異的Ｔ細胞応答を誘導することができた。膜結合型およびサイトゾル型ＣＥＡ抗原フォーマットの両方によって、同等の規模のＣＥＡ特異的Ｔ細胞応答が誘導された。表５に示す通り、膜結合型構築物１３８６による免疫化は、ＨＬＡ−Ａ２によってプロセシングおよび提示されることが文献において示された（Ｃｏｎｆｏｒｔｉ  Ａら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ（２００９）３２：７４４〜７５４）、ＣＥＡペプチドａａ６９３〜７０１に対するＨＬＡ−Ａ２拘束Ｔ細胞応答を誘導した。
【０２５５】
【表４】
2020526202.tif 000005
【０２５６】
【表５】
2020526202.tif 000006
【０２５７】
ＨＬＡ  Ａ２４マウスにおける免疫応答試験
試験設計。１６匹の雌雄混合ＨＬＡ−Ａ２４マウスに、ＤＮＡエレクトロポレーションにより、ヒト膜結合型（プラスミド１３８６）またはサイトゾル型ＣＥＡ（プラスミド１３９０）ＤＮＡ構築物を０日目に予備刺激し、１４日目に追加免疫した。ＣＥＡ特異的Ｔ細胞応答を、ＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳｐｏｔおよびＩＣＳアッセイにおいて、最後の免疫化の７日後に測定した。
【０２５８】
結果。表６は、ＣＥＡペプチドライブラリーに由来するペプチドプール（表１５も参照）と共に培養されたＨＬＡ−Ａ２４脾細胞のＥＬＩＳｐｏｔおよびＩＣＳデータを示す。３番目の列の数は、ａａ１〜６９９を包含するＣＥＡペプチドプールによる再刺激およびバックグラウンド減算後の、＃ＩＦＮ−γスポット／脾細胞１０６個を表す。４番目の列の数は、ａａ３７〜６７９を包含するＣＥＡペプチドプールによる再刺激およびバックグラウンド減算後の、ＩＦＮ−γ＋であるＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を表す。陽性応答は、ＳＦＣ＞１００およびＩＦＮ−γ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度＞０．１％を有すると定義される。太字フォントの数は、検査した少なくとも１個のペプチドプールが数え切れず、したがって、実数が少なくとも記述の値であることを示す。表６に示す通り、膜結合型（プラスミド１３８６）およびサイトゾル型ＣＥＡ（プラスミド１３９０）構築物により作製された免疫原性ＣＥＡポリペプチドは、ＥＬＩＳｐｏｔにより測定される場合に同等のＣＥＡ特異的細胞性応答を誘導することができた。しかし、サイトゾル型ＣＥＡ構築物（プラスミド１３９０）によるワクチン接種は、ＩＣＳにより測定される、より高いＣＥＡ特異的ＩＦＮ−γ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を誘導した。
【０２５９】
【表６】
2020526202.tif 000007
【０２６０】
（実施例４）
ＴＥＲＴ単一抗原構築物の免疫原性
ＨＬＡ−Ａ２／ＤＲ１マウスにおける免疫応答試験
試験設計。６匹の雌雄混合ＨＬＡ−Ａ２／ＤＲ１マウスに、１ｅ１０個のウイルス粒子で、筋肉内注射（５０ｕｌ）により、短縮（Δ２４０）サイトゾル型免疫原性ＴＥＲＴポリペプチド（プラスミド１１１２）をコードするＡｄＣ６８Ｗアデノウイルスベクターを予備刺激した。２８日後に、動物に、短縮（Δ２４０）サイトゾル型ＴＥＲＴ抗原（プラスミド１１１２）をコードする、エレクトロポレーションにより両側性送達される５０ｕｇ  ＤＮＡを筋肉内に追加免疫した（２×２０ｕｌ）。抗原特異的Ｔ細胞応答を、ＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳｐｏｔおよびＩＣＳアッセイにおいて７日後に測定した。
【０２６１】
結果。表７は、それぞれＴＥＲＴペプチドライブラリーに由来するペプチドプール（表１５も参照）またはＴＥＲＴペプチドａａ８６１〜８７５と共に培養されたＨＬＡ−Ａ２／ＤＲ１脾細胞のＥＬＩＳｐｏｔおよびＩＣＳデータを示す。３番目の列の数は、ＴＥＲＴペプチドプールによる再刺激およびバックグラウンド減算後の、＃ＩＦＮ−γスポット／脾細胞１０６個を表す。４番目の列の数は、ＴＥＲＴペプチドａａ８６１〜８７５による再刺激およびバックグラウンド減算後に、ＩＦＮ−γ＋であるＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を表す。陽性応答は、ＳＦＣ＞１００およびＩＦＮ−γ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度＞０．１％を有すると定義される。表７に示す通り、短縮（Δ２４０）サイトゾル型ＴＥＲＴ構築物により作製された免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドは、ＨＬＡ−Ａ２拘束ＴＥＲＴ特異的ＣＤ８  Ｔ細胞応答を誘導することができた。
【０２６２】
【表７】
2020526202.tif 000008
【０２６３】
ＨＬＡ−Ａ２４マウスにおける免疫応答試験
試験設計。８匹の雌雄混合ＨＬＡ−Ａ２４マウスに、総計１ｅ１０個のウイルス粒子で、両側性筋肉内注射（各前脛骨筋に５０ｕｌ）により、短縮（Δ２４０）サイトゾル型ＴＥＲＴポリペプチド（プラスミド１１１２にコードされるものと同じポリペプチド）をコードするＡｄＣ６８Ｗアデノウイルスベクターを予備刺激した。１４日後に、動物に、短縮（Δ２４０）サイトゾル型ＴＥＲＴポリペプチドをコードする、エレクトロポレーションにより両側性送達される５０ｕｇ  ＤＮＡ（プラスミド１１１２）を筋肉内に追加免疫した（２×２０ｕｌ）。抗原特異的Ｔ細胞応答を、ＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳｐｏｔおよびＩＣＳアッセイにおいて７日後に測定した。
【０２６４】
結果。表８は、それぞれＴＥＲＴペプチドライブラリーに由来するペプチドプール（表１５も参照）またはＴＥＲＴペプチドａａ８４１〜８５５）と共に培養されたＨＬＡ−Ａ２４脾細胞のＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳｐｏｔおよびＩＣＳデータを示す。３番目の列の数は、ＴＥＲＴペプチドプールによる再刺激およびバックグラウンド減算後の、＃ＩＦＮ−γスポット／脾細胞１０６個を表す。４番目の列の数は、ＴＥＲＴペプチドａａ８４１〜８５５による再刺激およびバックグラウンド減算後の、ＩＦＮ−γ＋であるＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を表す。太字フォントの数は、検査した少なくとも１個のペプチドプールが数え切れず、したがって、実数が少なくとも記述の値であることを示す。陽性応答は、ＳＦＣ＞１００およびＩＦＮ−γ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度＞０．１％を有すると定義される。表８に示す通り、短縮（Δ２４０）サイトゾル型ＴＥＲＴ（プラスミド１１１２）構築物により作製された免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドは、ＨＬＡ−Ａ２４拘束ＴＥＲＴ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を誘導することができる。
【０２６５】
【表８】
2020526202.tif 000009
【０２６６】
サルにおける免疫応答試験
試験設計。８匹の中国起源のカニクイザルに、２ｅ１１個のウイルス粒子で、両側性筋肉内注射（総計１ｍＬ）により、短縮（Δ２４０）サイトゾル型ＴＥＲＴ抗原をコードするＡｄＣ６８Ｗアデノウイルスベクター（プラスミド１１１２）を予備刺激した。３０および６４日後に、動物に、エレクトロポレーションにより両側性に筋肉内送達される、短縮（Δ２４０）サイトゾル型ＴＥＲＴ抗原をコードするＤＮＡ（プラスミド１１１２）を追加免疫した（総計２ｍＬ）。１日目（３２ｍｇ）、３１日目（５０ｍｇ）および６５日目（７５ｍｇ）に、抗ＣＴＬＡ−４を皮下投与した。最後の免疫化から１４日後に、動物を出血させ、ＰＢＭＣを単離して、ＴＥＲＴ特異的細胞性（ＥＬＩＳｐｏｔ、ＩＣＳ）応答を評価した。
【０２６７】
結果。表９は、ＴＥＲＴペプチドライブラリーに由来するペプチドプール（表１５も参照）と共に培養された中国起源のカニクイザルのＰＢＭＣのＥＬＩＳｐｏｔおよびＩＣＳデータを示す。３番目の列の数は、ＴＥＲＴペプチドプールによる再刺激およびバックグラウンド減算後の、＃ＩＦＮ−γスポット／脾細胞１０６個を表す。４番目の列の数は、ＴＥＲＴペプチドプールによる再刺激およびバックグラウンド減算後の、＃ＩＦＮ−γ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞／ＣＤ８＋Ｔ細胞１０６個を表す。陽性応答は、ＳＦＣ＞５０およびＩＦＮ−γ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞／ＣＤ８＋Ｔ細胞１ｅ６個＞５０を有すると定義される。表９に示す通り、短縮（Δ２４０）サイトゾル型（プラスミド１１１２）ＴＥＲＴ構築物により作製された免疫原性ＴＥＲＴポリペプチドは、ＴＥＲＴ特異的Ｔ細胞応答を誘導することができた。
【０２６８】
【表９】
2020526202.tif 000010
【０２６９】
（実施例５）
二重抗原構築物の免疫原性
サルにおける免疫応答試験
試験設計。２４匹の中国起源のカニクイザルに、２ｅ１１個のウイルス粒子で、両側性筋肉内注射（総計１ｍＬ）により、ヒト天然全長膜結合型ＭＵＣ１（ＭＵＣ１）およびヒト短縮（Δ２４０）サイトゾル型ＴＥＲＴ（ＴＥＲＴΔ２４０）ポリペプチドをコードする二重抗原アデノウイルスＡｄＣ６８Ｗベクター（プラスミド１２７０、１２７１および１２６９）を予備刺激した。３０および６４日後に、動物に、エレクトロポレーションにより両側性に筋肉内送達される同じ２種の抗原をコードする二重抗原ＤＮＡ構築物（プラスミド１２７０、１２７１および１２６９）を追加免疫した（総計２ｍＬ）。１日目（３２ｍｇ）、３１日目（５０ｍｇ）および６５日目（７５ｍｇ）に、抗ＣＴＬＡ−４を皮下投与した。最後の免疫化から１４日後に、動物を出血させ、ＰＢＭＣおよび血清を単離して、それぞれＭＵＣ１およびＴＥＲＴ特異的細胞性（ＥＬＩＳｐｏｔ、ＩＣＳ）ならびにＭＵＣ１特異的液性（ＥＬＩＳＡ）応答を評価した。全体として、両方の抗原を同時発現した３種の異なる二重抗原ワクチン構築物を評定した：ａ）ＭＵＣ１−２Ａ−ＴＥＲＴΔ２４０（プラスミド１２７０）、２Ａペプチドによって連結されたＭＵＣ１およびＴＥＲＴをコードするＡｄＣ６８ＷベクターおよびＤＮＡプラスミド；ｂ）ＴＥＲＴΔ２４０−２Ａ−ＭＵＣ１（プラスミド１２７１）、２Ａペプチドによって連結されたＴＥＲＴおよびＭＵＣ１をコードするＡｄＣ６８ＷベクターおよびＤＮＡプラスミド；ｃ）ＭＵＣ１−ＴＥＲＴΔ２４０（プラスミド１２６９）、ＭＵＣ１−ＴＥＲＴ融合タンパク質をコードするＡｄＣ６８ＷベクターおよびＤＮＡプラスミド。
【０２７０】
結果。表１０は、ＭＵＣ１およびＴＥＲＴペプチドライブラリーに由来するペプチドプール（表１５も参照）と共に培養された中国起源のカニクイザルＰＢＭＣのＥＬＩＳｐｏｔおよびＩＣＳデータ、ならびに中国起源のカニクイザル血清のＥＬＩＳＡデータを示す。陽性応答は、ＳＦＣ＞５０、ＩＦＮ−γ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞／ＣＤ８＋Ｔ細胞１ｅ６個＞５０およびＩｇＧ力価＞９９を有すると定義される。３および６番目の列の数は、それぞれＭＵＣ１およびＴＥＲＴペプチドプールによる再刺激ならびにバックグラウンド減算後の、＃ＩＦＮ−γスポット／脾細胞１０６個を表す。太字フォントの数は、検査した少なくとも１個のペプチドプールが数え切れず、したがって、実数が少なくとも記述の値であることを示す。４および７番目の列の数は、それぞれＭＵＣ１ペプチドプールおよびＴＥＲＴペプチドプールによる再刺激ならびにバックグラウンド減算後の、＃ＩＦＮ−γ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞／ＣＤ８＋Ｔ細胞１０６個を表す。５番目の列の数は、抗ＭＵＣ１  ＩｇＧ力価を表す（光学密度（Ｏ．Ｄ）＝１、検出限界（Ｌ．Ｏ．Ｄ）＝９９．０）。表１０に示す通り、ＭＵＣ１およびＴＥＲＴ発現二重抗原構築物（プラスミド１２７０、１２７１および１２６９）により作製された免疫原性ＭＵＣ１およびＴＥＲＴポリペプチドは、ＭＵＣ１およびＴＥＲＴ特異的Ｔ細胞応答ならびにＭＵＣ１特異的Ｂ細胞応答を誘導することができた。ＭＵＣ１−ＴＥＲＴ融合タンパク質をコードする二重抗原構築物１２６９は、最も強い全体的ＭＵＣ１特異的細胞性応答を誘導することが示された；対照的に、二重抗原構築物プラスミド１２７１（ＴＥＲＴ−２Ａ−ＭＵＣ１）は、最も強い全体的ＴＥＲＴ特異的細胞性応答を誘導することが示された。全３種の二重抗原構築物は、同等のＭＵＣ１特異的液性応答を誘導することが示された。
【０２７１】
【表１０−１】
2020526202.tif 000011
【０２７２】
【表１０−２】
2020526202.tif 000012
【０２７３】
（実施例６）
三重抗原構築物の免疫原性
実施例６は、ヒト天然全長膜結合型ＭＵＣ１ポリペプチド（ＭＵＣ１）、ヒト膜結合型またはサイトゾル型ＣＥＡポリペプチド（ｍＣＥＡまたはｃＣＥＡ）およびヒト短縮（Δ２４０）サイトゾル型ＴＥＲＴポリペプチド（ＴＥＲＴΔ２４０）を発現する三重抗原構築物を保有するプラスミドおよびアデノウイルスベクターの、全３種のコードされるがん抗原に対するＡｇ特異的ＴおよびＢ細胞応答を誘発する能力を説明する。
【０２７４】
ＤＮＡエレクトロポレーションを使用したＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスにおける免疫応答試験
試験設計。４８匹の雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスを、ヒトＭＵＣ１、ｍＣＥＡまたはｃＣＥＡおよびＴＥＲＴΔ２４０をコードする三重抗原ＤＮＡ構築物により免疫化した。三重抗原ＤＮＡワクチン（５０ｕｇ）を、各ワクチン接種の間に２週間あけた予備刺激／追加免疫レジメンにおいて、同時的エレクトロポレーションにより両側性に筋肉内送達した（各前脛骨筋に総計２０ｕｌ）。ＭＵＣ１、ＣＥＡおよびＴＥＲＴ特異的細胞性応答ならびにＭＵＣ１およびＣＥＡ特異的液性応答を、それぞれＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳｐｏｔアッセイおよびＥＬＩＳＡアッセイにおいて、最後の免疫化の７日後に測定した。全体として、２Ａペプチドによって連結された３個のＴＡＡポリペプチドをそれぞれコードする三重抗原ＤＮＡ構築物を保有する６種の異なるプラスミドを次の通りに使用した：ＭＵＣ１−２Ａ−ＴＥＲＴΔ２４０−２Ａ−ｍＣＥＡ（プラスミド１４２４）、ｍＣＥＡ−２Ａ−ＭＵＣ１−２Ａ−ＴＥＲＴΔ２４０（プラスミド１４２５）、ＴＥＲＴΔ２４０−２Ａ−ＭＵＣ１−２Ａ−ｍＣＥＡ（プラスミド１４２６）、ＴＥＲＴΔ２４０−２Ａ−ｍＣＥＡ−２Ａ−ＭＵＣ１（プラスミド１４２７）、ＭＵＣ１−２Ａ−ｃＣＥＡ−２Ａ−ＴＥＲＴΔ２４０（プラスミド１４２８）、ｃＣＥＡ−２Ａ−ＴＥＲＴΔ２４０−２Ａ−ＭＵＣ１（プラスミド１４２９）。
【０２７５】
結果。表１１Ａ〜Ｃは、ＭＵＣ１、ＣＥＡおよびＴＥＲＴペプチドライブラリーに由来するペプチドプール（表１５も参照）と共に培養されたＣ５７ＢＬ／６Ｊ脾細胞のＥＬＩＳｐｏｔデータ、ＴＥＲＴペプチドａａ１０２５〜１０３９と共に培養されたＣ５７ＢＬ／６Ｊ脾細胞のＩＣＳデータ、ならびにＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス血清のＥＬＩＳＡデータを示す。陽性応答は、ＳＦＣ＞１００、ＩＦＮ−γ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度＞０．１％、およびＩｇＧ力価＞９９を有すると定義される。表１１Ａ〜Ｃの３番目の列の数は、それぞれＭＵＣ１、ＣＥＡまたはＴＥＲＴペプチドプールによる再刺激、およびバックグラウンド減算後の、＃ＩＦＮ−γスポット／脾細胞１０６個を表す。太字フォントの数は、検査した少なくとも１個のペプチドプールが数え切れず、したがって、実数が少なくとも記述の値であることを示す。表１１Ａ〜Ｂの４番目の列の数は、それぞれ抗ＭＵＣ１およびＣＥＡ  ＩｇＧ力価を表す（光学密度（Ｏ．Ｄ）＝１、検出限界（Ｌ．Ｏ．Ｄ）＝９９．０）。表１１Ｃの４番目の列の数は、ＴＥＲＴ特異的ペプチドＴＥＲＴ  ａａ１０２５〜１０３９による再刺激およびバックグラウンド減算後の、ＩＦＮ−γ＋であるＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を表す。表１１Ａ〜Ｃに示す通り、ＭＵＣ１、ＣＥＡおよびＴＥＲＴ発現三重抗原構築物により作製された免疫原性ＭＵＣ１、ＣＥＡおよびＴＥＲＴポリペプチドは、全３種の抗原に対するＴ細胞応答、およびＭＵＣ１に対するＢ細胞応答を誘導することができた。対照的に、ｍＣＥＡ含有三重抗原構築物（プラスミド１４２４〜１４２７）は、ＣＥＡに対するＢ細胞応答を誘導することができた一方、ｃＣＥＡ含有三重抗原構築物（プラスミド１４２８〜１４２９）は、より弱いＣＥＡ特異的Ｂ細胞応答を誘導したまたは誘導しなかった。
【０２７６】
【表１１−１】
2020526202.tif 000013
【０２７７】
【表１１−２】
2020526202.tif 000014
【０２７８】
【表１２−１】
2020526202.tif 000015
【０２７９】
【表１２−２】
2020526202.tif 000016
【０２８０】
【表１３−１】
2020526202.tif 000017
【０２８１】
【表１３−２】
2020526202.tif 000018
【０２８２】
アデノウイルスベクターを使用したＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスにおける免疫応答試験
試験設計。４８匹の雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスに、１ｅ１０個のウイルス粒子で、筋肉内注射（各前脛骨筋に５０ｕｌ）により、ヒトＭＵＣ１、ｍＣＥＡまたはｃＣＥＡ、およびＴＥＲＴΔ２４０をコードする三重抗原アデノウイルスベクターを予備刺激した。１４日後に、動物に、同時的エレクトロポレーションにより、両側性に筋肉内送達される（各前脛骨筋に２０ｕｌ）三重抗原ＤＮＡ構築物（５０ｕｇ）を追加免疫した。ＭＵＣ１、ＣＥＡおよびＴＥＲＴ特異的細胞性応答、ならびにＭＵＣ１およびＣＥＡ特異的液性応答を、それぞれＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳｐｏｔおよびＩＣＳアッセイならびにＥＬＩＳＡアッセイにおいて、最後の免疫化の７日後に測定した。全体として、２Ａペプチドによって連結されたＭＵＣ１、ｍＣＥＡまたはｃＣＥＡ、およびＴＥＲＴΔ２４０をコードする６種の三重抗原アデノウイルスおよびＤＮＡ構築物を次の通りに使用した：ＭＵＣ１−２Ａ−ＴＥＲＴΔ２４０−２Ａ−ｍＣＥＡ（プラスミド１４２４）、ｍＣＥＡ−２Ａ−ＭＵＣ１−２Ａ−ＴＥＲＴΔ２４０（プラスミド１４２５）、ＴＥＲＴΔ２４０−２Ａ−ＭＵＣ１−２Ａ−ｍＣＥＡ（プラスミド１４２６）、ＴＥＲＴΔ２４０−２Ａ−ｍＣＥＡ−２Ａ−ＭＵＣ１（プラスミド１４２７）、ＭＵＣ１−２Ａ−ｃＣＥＡ−２Ａ−ＴＥＲＴΔ２４０（プラスミド１４２８）、ｃＣＥＡ−２Ａ−ＴＥＲＴΔ２４０−２Ａ−ＭＵＣ１（プラスミド１４２９）。
【０２８３】
結果。表１２Ａ〜Ｃは、ＭＵＣ１、ＣＥＡおよびＴＥＲＴペプチドライブラリーに由来するペプチドプール（表１５も参照）と共に培養されたＣ５７ＢＬ／６Ｊ脾細胞のＥＬＩＳｐｏｔデータ、ＴＥＲＴペプチドａａ１０２５〜１０３９と共に培養されたＣ５７ＢＬ／６Ｊ脾細胞のＩＣＳデータ、ならびにＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス血清のＥＬＩＳＡデータを示す。陽性応答は、ＳＦＣ＞１００、ＩＦＮ−γ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度＞０．１％、およびＩｇＧ力価＞９９を有すると定義される。表１２Ａ〜Ｃにおける３番目の列の数は、それぞれＭＵＣ１、ＣＥＡまたはＴＥＲＴペプチドプールによる再刺激、およびバックグラウンド減算後の、＃ＩＦＮ−γスポット／脾細胞１０６個を表す。太字フォントの数は、検査した少なくとも１個のペプチドプールが数え切れず、したがって、実数が少なくとも記述の値であることを示す。表１２Ｃにおける４番目の列の数は、ＴＥＲＴ特異的ペプチドＴＥＲＴ  ａａ１０２５〜１０３９による再刺激およびバックグラウンド減算後の、＃ＩＦＮ−γ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞／ＣＤ８＋Ｔ細胞１０６個を表す。表１２Ａ〜Ｂにおける４番目の列の数は、それぞれ抗ＭＵＣ１および抗ＣＥＡ  ＩｇＧ力価を表す（光学密度（Ｏ．Ｄ）＝１、検出限界（Ｌ．Ｏ．Ｄ）＝９９．０）。表１２Ａ〜Ｃに示す通り、ＭＵＣ１、ＣＥＡおよびＴＥＲＴ発現三重抗原構築物により作製された免疫原性ＭＵＣ１、ＣＥＡおよびＴＥＲＴポリペプチドは、全３種の抗原に対するＴ細胞応答、およびＭＵＣ１に対するＢ細胞応答を誘導することができた。対照的に、ｍＣＥＡ含有三重抗原構築物（プラスミド１４２４〜１４２７）は、ＣＥＡに対するＢ細胞応答を誘導することができた一方、ｃＣＥＡ含有三重抗原構築物（プラスミド１４２８〜１４２９）は、より弱いＣＥＡ特異的Ｂ細胞応答を誘導したまたは誘導しなかった。
【０２８４】
【表１４−１】
2020526202.tif 000019
【０２８５】
【表１４−２】
2020526202.tif 000020
【０２８６】
【表１５−１】
2020526202.tif 000021
【０２８７】
【表１５−２】
2020526202.tif 000022
【０２８８】
【表１６−１】
2020526202.tif 000023
【０２８９】
【表１６−２】
2020526202.tif 000024
【０２９０】
ＨＬＡ−Ａ２４マウスにおける免疫応答試験
試験設計。１６匹の雌雄混合ＨＬＡ−Ａ２４マウスに、１ｅ１０個のウイルス粒子で、筋肉内注射（各前脛骨筋に５０ｕｌ）により、ヒトＭＵＣ１、ｍＣＥＡまたはｃＣＥＡ、およびＴＥＲＴΔ２４０をコードするアデノウイルスＡｄＣ６８Ｙ三重抗原構築物（プラスミド１４２６：ＴＥＲＴΔ２４０−２Ａ−ＭＵＣ１−２Ａ−ｍＣＥＡまたはプラスミド１４２８：ＭＵＣ１−２Ａ−ｃＣＥＡ−２Ａ−ＴＥＲＴΔ２４０）を予備刺激した。１４日後に、動物に、同じ３種の抗原をコードする５０ｕｇ三重抗原ＤＮＡ構築物（プラスミド１４２６または１４２８）を筋肉内に追加免疫した（同時的エレクトロポレーションにより２０ｕｌを各前脛骨筋に送達）。ＨＬＡ−Ａ２４拘束ＭＵＣ１特異的細胞性応答を、ＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳｐｏｔアッセイにおいて、最後の免疫化の７日後に測定した。
【０２９１】
結果。表１３は、ＭＵＣ１ペプチドａａ５２４〜５３２と共に培養されたＨＬＡ−Ａ２４脾細胞のＥＬＩＳｐｏｔデータを示す。陽性応答は、ＳＦＣ＞５０を有すると定義される。３番目の列の数は、ＭＵＣ１ペプチドａａ５２４〜５３２による再刺激およびバックグラウンド減算後の、＃ＩＦＮ−γスポット／脾細胞１０６個を表す。表１３に示す通り、ＭＵＣ１、ＣＥＡおよびＴＥＲＴ発現三重抗原構築物１４２６および１４２８により作製された免疫原性ＭＵＣ１ポリペプチドは、ＨＬＡ−Ａ２４拘束ＭＵＣ１ペプチドａａ５２４〜５３２特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を誘導することができた。重要なことに、この特定のＭＵＣ１ペプチドに対するがん患者に由来するＴ細胞応答は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで抗腫瘍有効性と相関することが示され（Ｊｏｃｈｅｍｓ  Ｃら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ（２０１４）６３：１６１〜１７４）、この特定のエピトープに対する細胞性応答を生じることの重要性を実証した。
【０２９２】
【表１７】
2020526202.tif 000025
【０２９３】
サルにおける免疫応答試験
試験設計。４２匹の中国起源のカニクイザルに、２ｅ１１個のウイルス粒子で、両側性筋肉内注射（総計１ｍＬ）により、ヒト天然全長膜結合型ＭＵＣ１（ＭＵＣ１）、ヒト膜結合型または細胞質型ＣＥＡ（ｍＣＥＡまたはｃＣＥＡ）、およびヒト短縮（Δ２４０）サイトゾル型ＴＥＲＴ（ＴＥＲＴΔ２４０）抗原をコードするＡｄＣ６８Ｙアデノウイルスベクターを１日目に予備刺激した。３０日目および５７日目に、動物に、エレクトロポレーションにより両側性に筋肉内送達される同じ３種の抗原をコードするＤＮＡを追加免疫した（総計２ｍＬ）。１日目（３２ｍｇ）、３０日目（５０ｍｇ）および５７日目（７５ｍｇ）に、抗ＣＴＬＡ−４を皮下投与した。最後の免疫化の１５日後に、動物を出血させ、ＰＢＭＣおよび血清を単離して、それぞれＭＵＣ１、ＣＥＡおよびＴＥＲＴ特異的細胞性（ＥＬＩＳｐｏｔ、ＩＣＳ）ならびにＭＵＣ１およびＣＥＡ特異的液性（ＥＬＩＳＡ）応答を評価した。全体として、２Ａペプチドによって連結されたＭＵＣ１、ｍＣＥＡまたはｃＣＥＡ、およびＴＥＲＴΔ２４０をコードする６種の三重抗原アデノウイルスおよびＤＮＡ構築物を評定した：ＭＵＣ１−２Ａ−ＴＥＲＴΔ２４０−２Ａ−ｍＣＥＡ（プラスミド１４２４）、ｍＣＥＡ−２Ａ−ＭＵＣ１−２Ａ−ＴＥＲＴΔ２４０（プラスミド１４２５）、ＴＥＲＴΔ２４０−２Ａ−ＭＵＣ１−２Ａ−ｍＣＥＡ（プラスミド１４２６）、ＴＥＲＴΔ２４０−２Ａ−ｍＣＥＡ−２Ａ−ＭＵＣ１（プラスミド１４２７）、ＭＵＣ１−２Ａ−ｃＣＥＡ−２Ａ−ＴＥＲＴΔ２４０（プラスミド１４２８）、ｃＣＥＡ−２Ａ−ＴＥＲＴΔ２４０−２Ａ−ＭＵＣ１（プラスミド１４２９）。
【０２９４】
結果。表１４Ａ、１４Ｂおよび１４Ｃは、ＭＵＣ１、ＣＥＡおよびＴＥＲＴペプチドライブラリーに由来するペプチドプール（表１５も参照）と共に培養された中国起源のカニクイザルＰＢＭＣのＥＬＩＳｐｏｔおよびＩＣＳデータ、ならびに中国起源のカニクイザル血清のＥＬＩＳＡデータを示す。陽性応答は、ＳＦＣ＞５０、ＩＦＮ−γ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞／ＣＤ８＋Ｔ細胞１ｅ６個＞５０、およびＩｇＧ力価＞９９を有すると定義される。表１４Ａ〜Ｃにおける３番目の列の数は、それぞれＭＵＣ１、ＣＥＡまたはＴＥＲＴペプチドプールによる再刺激、およびバックグラウンド減算後の、＃ＩＦＮ−γスポット／脾細胞１０６個を表す。太字フォントの数は、検査した少なくとも１個のペプチドプールが数え切れず、したがって、実数が少なくとも記述の値であることを示す。表１４Ａ〜Ｃにおける４番目の列の数は、それぞれＭＵＣ１、ＣＥＡまたはＴＥＲＴペプチドプールによる再刺激、およびバックグラウンド減算後の、＃ＩＦＮ−γ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞／ＣＤ８＋Ｔ細胞１０６個を表す。表１４Ａ〜Ｂにおける５番目の列の数は、それぞれ抗ＭＵＣ１および抗ＣＥＡ  ＩｇＧ力価を表す（光学密度（Ｏ．Ｄ）＝１、検出限界（Ｌ．Ｏ．Ｄ）＝９９．０）。表１４Ａ〜Ｃに示す通り、ＭＵＣ１、ＣＥＡおよびＴＥＲＴ発現三重Ａｇ構築物により作製された免疫原性ＭＵＣ１、ＣＥＡおよびＴＥＲＴポリペプチドは、全３種の抗原に対する細胞性応答、およびＭＵＣ１に対する液性応答を誘導することができた。しかし、ｍＣＥＡを含有する三重抗原構築物は、ｃＣＥＡを含有するものよりも大きいＣＥＡ特異的Ｂ細胞応答を誘導した。
【０２９５】
【表１８−１】
2020526202.tif 000026
【０２９６】
【表１８−２】
2020526202.tif 000027
【０２９７】
【表１９−１】
2020526202.tif 000028
【０２９８】
【表１９−２】
2020526202.tif 000029
【０２９９】
【表２０−１】
2020526202.tif 000030
【０３００】
【表２０−２】
2020526202.tif 000031
【０３０１】
【表２１】
2020526202.tif 000032
【０３０２】
【表２２−１】
2020526202.tif 000033
【０３０３】
【表２２−２】
2020526202.tif 000034
【０３０４】
【表２２−３】
2020526202.tif 000035
【０３０５】
【表２２−４】
2020526202.tif 000036
【０３０６】
【表２３】
2020526202.tif 000037
【０３０７】
【表２４−１】
2020526202.tif 000038
【０３０８】
【表２４−２】
2020526202.tif 000039
【０３０９】
【表２４−３】
2020526202.tif 000040
【０３１０】
未加工の配列表（部分的）
配列番号４２．プラスミド１４２４  ＯＲＦ（ヌクレオチド配列）
2020526202.tif 000041
2020526202.tif 000042
配列番号４３．プラスミド１４２４ポリペプチド
2020526202.tif 000043
配列番号４４．プラスミド１４２５  ＯＲＦ（ヌクレオチド配列）
2020526202.tif 000044
2020526202.tif 000045
配列番号４５．プラスミド１４２５ポリペプチド
2020526202.tif 000046
配列番号４６．プラスミド１４２６  ＯＲＦ（ヌクレオチド配列）
2020526202.tif 000047
2020526202.tif 000048
配列番号４７．プラスミド１４２６ポリペプチド
2020526202.tif 000049
配列番号４８．プラスミド１４２７  ＯＲＦ（ヌクレオチド配列）
2020526202.tif 000050
2020526202.tif 000051
配列番号４９．プラスミド１４２７ポリペプチド
2020526202.tif 000052
配列番号５０．プラスミド１４２８  ＯＲＦ（ヌクレオチド配列）
2020526202.tif 000053
2020526202.tif 000054
配列番号５１．プラスミド１４２８ポリペプチド
2020526202.tif 000055
配列番号５２．プラスミド１４２９  ＯＲＦ（ヌクレオチド配列）
2020526202.tif 000056
2020526202.tif 000057
配列番号５３．プラスミド１４２９ポリペプチド
2020526202.tif 000058
配列番号６５．プラスミド１４２８完全ベクター（ヌクレオチド配列）
2020526202.tif 000059
2020526202.tif 000060
2020526202.tif 000061
配列番号６６．ＡｄＣ６８Ｙ  １４２８完全ベクター（ヌクレオチド配列）
2020526202.tif 000062
2020526202.tif 000063
2020526202.tif 000064
2020526202.tif 000065
2020526202.tif 000066
2020526202.tif 000067
2020526202.tif 000068
2020526202.tif 000069
2020526202.tif 000070
配列番号８７．プラスミド１４２４  ＯＲＦ（ＲＮＡ）
2020526202.tif 000071
2020526202.tif 000072
配列番号８８．プラスミド１４２５  ＯＲＦ（ＲＮＡ）
2020526202.tif 000073
2020526202.tif 000074
配列番号８９．プラスミド１４２６  ＯＲＦ（ＲＮＡ）
2020526202.tif 000075
2020526202.tif 000076
配列番号９０．プラスミド１４２７  ＯＲＦ（ＲＮＡ）
2020526202.tif 000077
2020526202.tif 000078
配列番号９１．プラスミド１４２８  ＯＲＦ（ＲＮＡ）
2020526202.tif 000079
2020526202.tif 000080
配列番号９２．プラスミド１４２９  ＯＲＦ（ＲＮＡ）
2020526202.tif 000081
2020526202.tif 000082
【図１】
2020526202.tif 000083
【配列表】
2020526202000001.app
【国際調査報告】
2020526202.tif 000084
2020526202.tif 000085
2020526202.tif 000086
2020526202.tif 000087