(57)【要約】個体に有効量の少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤およびウイルス組成物を投与することを含み、ウイルス組成物が、Ｎ１Ｌ遺伝子の欠失、マトリックス分解タンパク質遺伝子、アデノウイルス死タンパク質（ＡＤＰ）遺伝子、および／またはシトクロムｐ４５０遺伝子を含むように操作された１つまたは複数のウイルスを含む、個体においてがんを治療するための方法および組成物が本明細書で提供される。個体に有効量のウイルス組成物を投与することを含み、ウイルス組成物が、Ｎ１Ｌ遺伝子の欠失、マトリックス分解タンパク質遺伝子、アデノウイルス死タンパク質（ＡＤＰ）遺伝子、および／またはシトクロムｐ４５０遺伝子を含むように操作された２つまたはそれより多くのウイルスを含む、個体においてがんを治療するための方法および組成物も本明細書で提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象においてがんを治療する方法であって、前記対象に、有効量の
（ａ）Ｎ１Ｌ遺伝子の欠失、マトリックス分解タンパク質遺伝子、アデノウイルス死タンパク質（ＡＤＰ）遺伝子、および／またはシトクロムｐ４５０遺伝子を含むように操作された１つまたは複数のウイルス、および
（ｂ）少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤
を投与することを含む、方法。
【請求項２】
対象においてがんを治療する方法であって、前記対象に、有効量の、Ｎ１Ｌ遺伝子の欠失、マトリックス分解タンパク質遺伝子、アデノウイルス死タンパク質（ＡＤＰ）遺伝子、および／またはシトクロムｐ４５０遺伝子を含むように操作された２つまたはそれより多くのウイルスを投与することを含む、方法。
【請求項３】
対象においてがんまたは感染性疾患を治療または予防する方法であって、前記対象に、有効量の
（ａ）少なくとも１つの腫瘍関連または病原体関連抗原を発現するワクシニアウイルスであって、Ｎ１Ｌ遺伝子の欠失を含む、ワクシニアウイルス、および
（ｂ）少なくとも１つの腫瘍関連または病原体関連抗原を発現する少なくとも第２のウイルス
を投与することを含む、方法。
【請求項４】
前記腫瘍関連抗原が、メソテリン、黒色腫関連遺伝子（ＭＡＧＥ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、変異型Ｒａｓ、または変異型ｐ５３である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記病原体関連抗原が、感染性ウイルス、細菌、真菌、プリオン、または寄生虫生物により発現される抗原である、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記ワクシニアウイルスにより発現される前記少なくとも１つの腫瘍関連または病原体関連抗原および前記第２のウイルスにより発現される前記少なくとも１つの腫瘍関連または病原体関連抗原が同じである、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
前記ワクシニアウイルスにより発現される前記少なくとも１つの腫瘍関連または病原体関連抗原および前記第２のウイルスにより発現される前記少なくとも１つの腫瘍関連または病原体関連抗原が異なる、請求項３に記載の方法。
【請求項８】
前記ウイルスが局所および／またはアブスコパル効果を誘導する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項９】
少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤を投与することをさらに含む、請求項２または３に記載の方法。
【請求項１０】
２つ、３つ、または４つのウイルスが投与される、請求項１または請求項２または請求項３に記載の方法。
【請求項１１】
前記ウイルスが、アデノウイルス、レトロウイルス、ワクシニアウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、水胞性口内炎ウイルス、および／または口内炎ウイルスを含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１２】
前記ウイルスが１つまたは複数のアデノウイルスを含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１３】
少なくとも１つの腫瘍関連または病原体関連抗原を発現する前記第２のウイルスが、アデノウイルス、レトロウイルス、ワクシニアウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、水胞性口内炎ウイルス、および／または口内炎ウイルスである、請求項３に記載の方法。
【請求項１４】
少なくとも１つの腫瘍関連または病原体関連抗原を発現する前記第２のウイルスがアデノウイルスである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記アデノウイルスが、少なくとも１つの腫瘍関連または病原体関連抗原を発現する前記Ｎ１Ｌを欠失したワクシニアウイルスの投与の前に投与される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記アデノウイルス死タンパク質遺伝子が過剰発現される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１７】
前記マトリックス分解タンパク質遺伝子が、リラキシン、ヒアルロニダーゼ、またはデコリンである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１８】
前記マトリックス分解タンパク質遺伝子がリラキシンである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１９】
前記シトクロムｐ４５０遺伝子がシトクロムｐ４５０  ２Ｂ１遺伝子である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項２０】
前記シトクロムｐ４５０  ２Ｂ１遺伝子がラットシトクロムｐ４５０  ２Ｂ１遺伝子である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記Ｎ１Ｌの欠失を含むように操作された前記ウイルスがワクシニアウイルスである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項２２】
前記シトクロムｐ４５０遺伝子を含むように操作された前記ウイルスが単純ヘルペスウイルスである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項２３】
前記マトリックス分解タンパク質および／またはアデノウイルス死タンパク質遺伝子を含むように操作された前記ウイルスがアデノウイルスである、請求項１６に記載の方法。
【請求項２４】
前記ウイルスが、治療用核酸を発現するようにさらに操作される、請求項１または請求項２または請求項３に記載の方法。
【請求項２５】
前記治療用核酸がｐ５３および／またはＩＬ−２４をコードする、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
ｐ５３および／またはＩＬ−２４の機能を回復または増進させることをさらに含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項２７】
前記少なくとも１つのチェックポイント阻害剤が、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＬＡＧ−３、ＢＴＬＡ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＴＩＭ３、ＫＩＲ、またはＡ２ａＲの阻害剤から選択される、請求項１または９に記載の方法。
【請求項２８】
前記少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤がヒトプログラム細胞死１（ＰＤ−１）軸結合アンタゴニストである、請求項１または９に記載の方法。
【請求項２９】
前記ＰＤ−１軸結合アンタゴニストが、ＰＤ−１結合アンタゴニスト、ＰＤＬ１結合アンタゴニストおよびＰＤＬ２結合アンタゴニストからなる群から選択される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記ＰＤ−１軸結合アンタゴニストがＰＤ−１結合アンタゴニストである、請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
前記ＰＤ−１結合アンタゴニストが、ＰＤＬ１および／またはＰＤＬ２へのＰＤ−１の結合を阻害する、請求項２９に記載の方法。
【請求項３２】
前記ＰＤ−１結合アンタゴニストがモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３３】
前記ＰＤ−１結合アンタゴニストが、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピジリズマブ（pidillizumab）、ＡＭＰ−５１４、ＲＥＧＮ２８１０、ＣＴ−０１１、ＢＭＳ  ９３６５５９、ＭＰＤＬ３２８ＯＡまたはＡＭＰ−２２４である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３４】
前記少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤が抗ＣＴＬＡ−４抗体である、請求項１または９に記載の方法。
【請求項３５】
前記抗ＣＴＬＡ−４抗体がトレメリムマブまたはイピリムマブである、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤が抗キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）抗体である、請求項１または９に記載の方法。
【請求項３７】
前記抗ＫＩＲ抗体がリリルマブである、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
１つより多くのチェックポイント阻害剤が投与される、請求項１または９に記載の方法。
【請求項３９】
前記免疫チェックポイント阻害剤が全身投与される、請求項１または９に記載の方法。
【請求項４０】
前記ウイルスが複製コンピテントまたは腫瘍溶解性である、請求項１または請求項２または請求項３に記載の方法。
【請求項４１】
前記ウイルスが複製インコンピテントである、請求項１または請求項２または請求項３に記載の方法。
【請求項４２】
前記ウイルスが、複製コンピテントウイルスと複製インコンピテントウイルスとの組合せを含む、請求項１または請求項２または請求項３に記載の方法。
【請求項４３】
前記ウイルスおよび／または前記少なくとも１つのチェックポイント阻害剤が、腫瘍内に、動脈内に、静脈内に、血管内に、胸膜内に、腹腔内に、気管内に、髄腔内に、筋肉内に、内視鏡的に、病巣内に、経皮的に、皮下に、局部的に、定位的に、または直接的な注射もしくは灌流により投与される、請求項１または９に記載の方法。
【請求項４４】
前記ウイルスが腫瘍内に投与される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４５】
前記ウイルスが、皮内に、皮下に、筋肉内に、腹腔内に、経口的に、吸入により、または他の形態の粘膜曝露により投与される、請求項３に記載の方法。
【請求項４６】
前記がんが、黒色腫、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、肺がん、肝細胞癌、網膜芽腫、星状細胞腫、膠芽腫、白血病、神経芽腫、頭部がん、頸部がん、乳がん、膵臓がん、前立腺がん、腎臓がん、骨がん、精巣がん、卵巣がん、中皮腫、子宮頸がん、胃腸がん、泌尿生殖器がん、気道がん、造血性がん、筋骨格がん、神経内分泌がん、癌腫、肉腫、中枢神経系がん、末梢神経系がん、リンパ腫、脳がん、結腸がんまたは膀胱がんである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４７】
前記がんが転移性である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４８】
前記ウイルスおよび／または前記少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤がアブスコパル効果を誘導する、請求項１または９に記載の方法。
【請求項４９】
前記対象が、前記ウイルスおよび／または前記少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤を１回より多く投与される、請求項１または９に記載の方法。
【請求項５０】
前記対象が、前記少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤の前に、同時に、または後に前記ウイルスを投与される、請求項１または９に記載の方法。
【請求項５１】
投与が局所または局部注射を含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項５２】
投与が、連続注入、腫瘍内注射、静脈注射、動脈注射、腹腔内注射、胸膜内注射、または髄腔内注射を介して為される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項５３】
前記対象がヒトである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項５４】
前記対象が健康な対象である、請求項３に記載の方法。
【請求項５５】
前記対象が前がん病変を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５６】
前記前がん病変が白斑または形成異常病変である、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記対象ががんを発症するリスクを有する、請求項３に記載の方法。
【請求項５８】
前記対象が喫煙者である、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記対象ががんの家族歴を有する、請求項５７に記載の方法。
【請求項６０】
有効量の免疫アジュバントを投与することをさらに含む、請求項３に記載の方法。
【請求項６１】
少なくとも１つの追加の抗がん治療を投与することをさらに含む、請求項１または請求項２または請求項３に記載の方法。
【請求項６２】
前記少なくとも１つの追加の抗がん治療が、外科療法、化学療法、放射線療法、ホルモン療法、免疫療法、小分子療法、受容体キナーゼ阻害剤療法、抗血管新生療法、サイトカイン療法、寒冷療法または生物学的療法である、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記生物学的療法が、モノクローナル抗体、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイムまたは遺伝子療法である、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
前記少なくとも１つの追加の抗がん治療がプロテインキナーゼ阻害剤である、請求項６１に記載の方法。
【請求項６５】
前記プロテインキナーゼ阻害剤がチロシンキナーゼ阻害剤である、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記チロシンキナーゼ阻害剤が、ブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害剤としてさらに定義される、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
前記ＢＴＫ阻害剤が、イブルチニブ、アカラブルチニブ（ＡＣＰ−１９６）、ＯＮＯ−４０５９、スペブルチニブ（ＣＣ−２９２）、ＨＭ−７１２２４、ＣＧ−０３６８０６、ＧＤＣ−０８３４、ＯＮＯ−４０４９、ＲＮ−４８６、ＳＮＳ−０６２、ＴＡＳ−５５６７、ＡＶＬ−１０１、ＡＶＬ−２９１、ＰＣＩ−４５２６１、ＨＣＩ−１６８４、ＰＬＳ−１２３、およびＢＧＢ−３１１１からなる群から選択される、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
前記少なくとも１つの追加の抗がん治療がＨＤＭ２および／またはＨＤＭ４の阻害剤である、請求項６１に記載の方法。
【請求項６９】
前記ＨＤＭ２の阻害剤がＨＤＭ２０１である、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
前記少なくとも１つの追加の抗がん治療が複製コンピテントまたは複製インコンピテントウイルスである、請求項６１に記載の方法。
【請求項７１】
前記複製コンピテントまたは複製インコンピテントウイルスが、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルス、レンチウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、ワクシニアウイルス、水胞性口内炎ウイルス、ポリオウイルス、ニューカッスル病ウイルス、エプスタイン・バーウイルス、インフルエンザウイルスまたはレオウイルスである、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
前記複製コンピテントまたは複製インコンピテントウイルスが、治療用核酸を発現するように操作される、請求項７０に記載の方法。
【請求項７３】
前記治療用核酸がｐ５３および／またはＩＬ−２４をコードする、請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
前記複製コンピテントまたは複製インコンピテントウイルスが単純ヘルペスウイルスである、請求項７０に記載の方法。
【請求項７５】
前記複製コンピテントまたは複製インコンピテントウイルスが、サイトカインを発現するように操作される、請求項７０に記載の方法。
【請求項７６】
前記サイトカインが顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）である、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
前記複製コンピテントまたは複製インコンピテントウイルスが、タリモジーン・ラハーパレプベック（Ｔ−ＶＥＣ）としてさらに定義される、請求項７０に記載の方法。
【請求項７８】
前記少なくとも１つの追加の抗がん治療がプロテインキナーゼまたは成長因子シグナル伝達経路阻害剤である、請求項６１に記載の方法。
【請求項７９】
前記プロテインキナーゼまたは成長因子シグナル伝達経路阻害剤が、アファチニブ、アキシチニブ、ベバシズマブ、ボスチニブ、セツキシマブ、クリゾチニブ、ダサチニブ、エルロチニブ、フォスタマチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、レンバチニブ、ムブリチニブ、ニロチニブ、パニツムマブ、パゾパニブ、ペガプタニブ、ラニビズマブ、ルキソリチニブ、サラカチニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、トラスツズマブ、バンデタニブ、ＡＰ２３４５１、ベムラフェニブ、ＣＡＬ１０１、ＰＸ−８６６、ＬＹ２９４００２、ラパマイシン、テムシロリムス、エベロリムス、リダホロリムス、アルボシジブ、ゲニステイン、セルメチニブ、ＡＺＤ−６２４４、バタラニブ、Ｐ１４４６Ａ−０５、ＡＧ−０２４３２２、ＺＤ１８３９、Ｐ２７６−００またはＧＷ５７２０１６である、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
前記プロテインキナーゼ阻害剤がＰＩ３Ｋ阻害剤である、請求項７８に記載の方法。
【請求項８１】
前記ＰＩ３Ｋ阻害剤がＰＩ３Ｋデルタ阻害剤である、請求項８０に記載の方法。
【請求項８２】
前記免疫療法がサイトカインを含む、請求項６２に記載の方法。
【請求項８３】
前記サイトカインが顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）である、請求項８２に記載の方法。
【請求項８４】
前記サイトカインがインターロイキンおよび／またはインターフェロンである、請求項８２に記載の方法。
【請求項８５】
前記インターロイキンがＩＬ−２である、請求項８４に記載の方法。
【請求項８６】
前記インターフェロンがＩＦＮαである、請求項８４に記載の方法。
【請求項８７】
前記免疫療法が、共刺激受容体アゴニスト、自然免疫細胞の刺激因子、または自然免疫の活性化因子を含む、請求項６２に記載の方法。
【請求項８８】
前記共刺激受容体アゴニストが、抗ＯＸ４０抗体、抗ＧＩＴＲ抗体、抗ＣＤ１３７抗体、抗ＣＤ４０抗体、または抗ＣＤ２７抗体である、請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
前記免疫細胞の刺激因子が、細胞傷害性阻害受容体の阻害剤または免疫刺激ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）のアゴニストである、請求項８７に記載の方法。
【請求項９０】
前記細胞傷害性阻害受容体が、ＮＫＧ２Ａ／ＣＤ９４またはＣＤ９６  ＴＡＣＴＩＬＥの阻害剤である、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
前記ＴＬＲアゴニストがＴＬＲ７アゴニスト、ＴＬＲ８アゴニスト、またはＴＬＲ９アゴニストである、請求項８９に記載の方法。
【請求項９２】
前記免疫療法が、ＰＤ−Ｌ１阻害剤、４−１ＢＢアゴニスト、およびＯＸ４０アゴニストの組合せを含む、請求項６２に記載の方法。
【請求項９３】
前記免疫療法がインターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）アゴニストを含む、請求項６２に記載の方法。
【請求項９４】
前記自然免疫の活性化因子が、ＩＤＯ阻害剤、ＴＧＦβ阻害剤、またはＩＬ−１０阻害剤である、請求項８７に記載の方法。
【請求項９５】
前記化学療法がＤＮＡ損傷剤を含む、請求項６２に記載の方法。
【請求項９６】
前記ＤＮＡ損傷剤が、ガンマ照射、Ｘ線、ＵＶ照射、マイクロ波、電子放射、アドリアマイシン、５−フルオロウラシル（５ＦＵ）、カペシタビン、エトポシド（ＶＰ−１６）、カンプトテシン、アクチノマイシンＤ、ミトマイシンＣ、シスプラチン（ＣＤＤＰ）、または過酸化水素である、請求項９４に記載の方法。
【請求項９７】
前記ＤＮＡ損傷剤が５ＦＵまたはカペシタビンである、請求項９４に記載の方法。
【請求項９８】
前記化学療法が、シスプラチン（ＣＤＤＰ）、カルボプラチン、プロカルバジン、メクロレタミン、シクロホスファミド、カンプトテシン、イホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、ニトロソウレア、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、プリカマイシン、ミトマイシン、エトポシド（ＶＰ１６）、タモキシフェン、タキソテール、タキソール、トランス白金、５−フルオロウラシル、ビンクリスチン、ビンブラスチン、メトトレキサート、またはこれらの任意のアナログもしくは誘導体バリアントを含む、請求項６２に記載の方法。
【請求項９９】
（ａ）Ｎ１Ｌ遺伝子の欠失、マトリックス分解タンパク質遺伝子、アデノウイルス死タンパク質（ＡＤＰ）遺伝子、および／またはシトクロムｐ４５０遺伝子を含むように操作された１つまたは複数のウイルス、および（ｂ）少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤を含む、医薬組成物。
【請求項１００】
前記１つまたは複数のウイルスが、リラキシンを発現するように操作されたウイルス、アデノウイルス死タンパク質（ＡＤＰ）遺伝子を過剰発現するように操作されたウイルス、Ｎ１Ｌ遺伝子を欠失するように操作されたワクシニアウイルス、およびラットシトクロムｐ４５０  ２Ｂ１遺伝子を発現するように操作された単純ヘルペスウイルスからなる群から選択される、請求項９９に記載の組成物。
【請求項１０１】
Ｎ１Ｌ遺伝子の欠失、マトリックス分解タンパク質遺伝子、アデノウイルス死タンパク質（ＡＤＰ）遺伝子、および／またはシトクロムｐ４５０遺伝子を含むように操作された２つまたはそれより多くのウイルスを含む、医薬組成物。
【請求項１０２】
前記２つまたはそれより多くのウイルスが、リラキシンを発現するように操作されたウイルス、前記アデノウイルス死タンパク質（ＡＤＰ）遺伝子を過剰発現するように操作されたウイルス、前記Ｎ１Ｌ遺伝子を欠失するように操作されたワクシニアウイルス、およびラットシトクロムｐ４５０  ２Ｂ１遺伝子を発現するように操作された単純ヘルペスウイルスからなる群から選択される、請求項１０１に記載の組成物。
【請求項１０３】
前記ウイルスが、アデノウイルス、レトロウイルス、ワクシニアウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、水胞性口内炎ウイルス、および／または口内炎ウイルスを含む、請求項９９または１０１に記載の組成物。
【請求項１０４】
前記ウイルスが１つまたは複数のアデノウイルスを含む、請求項９９または１０１に記載の組成物。
【請求項１０５】
前記アデノウイルス死タンパク質が過剰発現される、請求項９９または１０１に記載の組成物。
【請求項１０６】
前記マトリックス分解タンパク質が、リラキシン、ヒアルロニダーゼ、またはデコリンである、請求項９９または１０１に記載の組成物。
【請求項１０７】
前記マトリックス分解タンパク質がリラキシンである、請求項９９または１０１に記載の組成物。
【請求項１０８】
前記シトクロムｐ４５０遺伝子がシトクロムｐ４５０  ２Ｂ１遺伝子である、請求項９９または１０１に記載の組成物。
【請求項１０９】
前記シトクロムｐ４５０  ２Ｂ１遺伝子がラットシトクロムｐ４５０  ２Ｂ１遺伝子である、請求項１０８に記載の組成物。
【請求項１１０】
前記Ｎ１Ｌの欠失を含むように操作された前記ウイルスがワクシニアウイルスである、請求項９９または１０１に記載の組成物。
【請求項１１１】
前記シトクロムｐ４５０遺伝子を含むように操作された前記ウイルスが単純ヘルペスウイルスである、請求項９９または１０１に記載の組成物。
【請求項１１２】
前記マトリックス分解タンパク質および／またはアデノウイルス死タンパク質を含むように操作された前記ウイルスがアデノウイルスである、請求項１０５に記載の組成物。
【請求項１１３】
（ａ）少なくとも１つの腫瘍関連または病原体関連抗原およびＮ１Ｌ遺伝子の欠失を発現するワクシニアウイルス、および（ｂ）少なくとも１つの腫瘍関連または病原体関連抗原を発現する少なくとも第２のウイルスを含む、医薬組成物。
【請求項１１４】
前記腫瘍関連抗原が、メソテリン、黒色腫関連遺伝子（ＭＡＧＥ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、変異型Ｒａｓ、または変異型ｐ５３である、請求項１１３に記載の組成物。
【請求項１１５】
前記病原体関連抗原が、感染性ウイルス、細菌、真菌、プリオン、または寄生虫生物により発現される抗原である、請求項１１３に記載の組成物。
【請求項１１６】
少なくとも１つの腫瘍関連または病原体関連抗原を発現する前記第２のウイルスがアデノウイルスである、請求項１１３に記載の組成物。
【請求項１１７】
前記ワクシニアウイルスにより発現される前記少なくとも１つの腫瘍関連または病原体関連抗原および前記第２のウイルスにより発現される前記少なくとも１つの腫瘍関連または病原体関連抗原が同じである、請求項１１３に記載の組成物。
【請求項１１８】
前記ワクシニアウイルスにより発現される前記少なくとも１つの腫瘍関連または病原体関連抗原および前記第２のウイルスにより発現される前記少なくとも１つの腫瘍関連または病原体関連抗原が異なる、請求項１１３に記載の組成物。
【請求項１１９】
免疫アジュバントをさらに含む、請求項１１３に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１６年１２月１２日に出願された米国仮出願第６２／４３３，０７５号、２０１６年１２月２２日に出願された米国仮出願第６２／４３８，２７３号、２０１７年１月９日に出願された米国仮出願第６２／４４４，１６０号の優先権の利益を主張し、各出願の内容全体は、本明細書において参考として援用される。
【背景技術】
【０００２】
１．発明の分野
本発明は、概して、生物学および薬剤の分野に関する。より具体的には、本発明は局所および／またはアブスコパル効果を誘導する遺伝子操作されたウイルスを組み合わせた方法および組成物に関する。
【０００３】
２．関連技術の説明
がんの現行の療法は、局所領域の治療、例えば手術または放射線、および全身投与される剤、例えば化学療法およびモノクローナル抗体を含む。
【０００４】
アブスコパル効果は、転移がんの治療においてまれな現象であり、腫瘍の局在化された治療が、治療された腫瘍および局在化された治療の範囲外の追加の腫瘍の退縮を引き起こす。この現象は、医師であるＲ．Ｈ．Ｍｏｌｅにより放射線療法について１９５３年に最初に定義され、彼は、治療された体積から距離があるが、同じ生物内での治療効果を指すために「アブスコパル」（ａｂｓｃｏｐａｌ；「ａｂ」−離れて、「ｓｃｏｐｕｓ」−標的）（Mole、１９５３年）という用語を提案した。
【０００５】
局所領域および全身の両方のがん治療の進歩にかかわらず、米国において年間約５００，０００人のがんによる死亡が推定されている。それゆえ、局所およびアブスコパルの有効性を増加させることができる改善されたがん療法の満たされていない必要性が存在する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
ある特定の実施形態では、本開示は、ウイルス組成物を投与して対象においてがんを治療することによるがんを治療する方法を提供する。一実施形態では、本開示は、対象においてがんを治療する方法および組成物であって、対象にＮ１Ｌ遺伝子の欠失、マトリックス分解タンパク質（matrix-degrading  protein）遺伝子、アデノウイルス死タンパク質（adenoviral  death  protein；ＡＤＰ）遺伝子、および／またはシトクロムｐ４５０遺伝子を含むように操作された有効量の２つまたはそれより多くのウイルスを投与することを含む、方法および組成物を提供する。ある特定の態様では、アデノウイルス死タンパク質は過剰発現される。特定の態様では、Ｎ１Ｌの欠失を含むように操作されたウイルスはワクシニアウイルスである。一部の態様では、シトクロムｐ４５０遺伝子を含むように操作されたウイルスは単純ヘルペスウイルスである。ある特定の態様では、マトリックス分解タンパク質および／またはアデノウイルス死タンパク質を含むように操作されたウイルスはアデノウイルスである。
【０００７】
別の実施形態では、本開示は、対象においてがんを治療する方法および組成物であって、対象に、有効量の（ａ）Ｎ１Ｌ遺伝子の欠失、マトリックス分解タンパク質遺伝子、アデノウイルス死タンパク質（ＡＤＰ）遺伝子、および／またはシトクロムｐ４５０遺伝子を含むように操作された１つまたは複数のウイルス１つまたは複数のウイルス、および（ｂ）少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤を投与することを含む、方法および組成物を提供する。ある特定の態様では、１つより多くのチェックポイント阻害剤が投与される。特定の態様では、ウイルスの１つ、２つ、３つ、または４つ全てが投与される。ある特定の態様では、アデノウイルス死タンパク質は過剰発現される。特定の態様では、Ｎ１Ｌの欠失を含むように操作されたウイルスはワクシニアウイルスである。一部の態様では、シトクロムｐ４５０遺伝子を含むように操作されたウイルスは単純ヘルペスウイルスである。ある特定の態様では、マトリックス分解タンパク質および／またはアデノウイルス死タンパク質を含むように操作されたウイルスはアデノウイルスである。
【０００８】
１つの特定の態様では、上記実施形態におけるウイルス組成物は、以下のウイルス：（ａ）リラキシン遺伝子を発現するように操作されたウイルス、（ｂ）アデノウイルス死タンパク質（ＡＤＰ）遺伝子を過剰発現するように操作されたウイルス、（ｃ）Ｎ１Ｌ遺伝子を欠失するように操作されたワクシニアウイルス、および（ｄ）ラットシトクロムｐ４５０  ２Ｂ１遺伝子を発現するように操作された単純ヘルペスウイルスの１つ、２つ、３つ、または４つを含んでよい。
【０００９】
一実施形態では、本開示は、対象においてがんまたは感染性疾患を治療または予防するための方法および組成物であって、対象に、有効量の（ａ）少なくとも１つの腫瘍関連または病原体関連抗原を発現するワクシニアウイルスであって、Ｎ１Ｌ遺伝子の欠失を含む、ワクシニアウイルス、および（ｂ）少なくとも１つの腫瘍関連または病原体関連抗原を発現する少なくとも第２のウイルス、好ましくはアデノウイルスを投与することを含む、方法および組成物を提供する。ある特定の態様では、腫瘍関連抗原は、メソテリン、黒色腫関連遺伝子（melanoma-associated  gene；ＭＡＧＥ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、変異型Ｒａｓ、または変異型ｐ５３である。ある特定の態様では、病原体関連抗原は、感染性ウイルス、細菌、真菌、プリオン、または寄生虫生物により発現される抗原である。一部の態様では、ワクシニアウイルスにより発現される少なくとも１つの腫瘍関連または病原体関連抗原および第２のウイルスにより発現される少なくとも１つの腫瘍関連または病原体関連抗原は同じである。他の態様では、ワクシニアウイルスにより発現される少なくとも１つの腫瘍関連または病原体関連抗原および第２のウイルスにより発現される少なくとも１つの腫瘍関連または病原体関連抗原は異なる。ある特定の態様では、第２のウイルス、好ましくはアデノウイルスは、少なくとも１つの腫瘍関連または病原体関連抗原を発現するＮ１Ｌを欠失したワクシニアウイルスの投与の前に投与される。ある特定の態様では、対象は、開始プライミングワクチン接種の後に１つまたは複数のブースターワクチン接種を提供するように１回より多くウイルス組成物を投与される。一部の態様では、対象は、腫瘍抑制因子免疫遺伝子療法をさらに投与される（ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０６０８３３を参照；参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）。
【００１０】
一部の態様では、上記実施形態のウイルスは、アデノウイルス、レトロウイルス、ワクシニアウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、水胞性口内炎ウイルス、および／または口内炎ウイルスを含む。ある特定の態様では、ウイルスは１つまたは複数のアデノウイルスを含む。
【００１１】
一部の態様では、マトリックス分解タンパク質は、リラキシン、ヒアルロニダーゼ、またはデコリンである。特定の態様では、マトリックス分解タンパク質はリラキシンである。
【００１２】
ある特定の態様では、シトクロムｐ４５０遺伝子はシトクロムｐ４５０  ２Ｂ１遺伝子である。特定の態様では、シトクロムｐ４５０  ２Ｂ１遺伝子はラットシトクロムｐ４５０  ２Ｂ１遺伝子である。
【００１３】
一部の態様では、ウイルス組成物は局所および／またはアブスコパル効果を誘導する。一部の態様では、ウイルス組成物は局所およびアブスコパル効果を誘導する。
【００１４】
ある特定の態様では、ウイルスは複製コンピテントまたは腫瘍溶解性である。ある特定の態様では、ウイルスは複製インコンピテントである。ある特定の態様では、ウイルス組成物は、複製コンピテントウイルスと複製インコンピテントウイルスとの組合せを含む。
【００１５】
一部の態様では、リラキシンを発現するように操作されたウイルスおよび／またはアデノウイルス死タンパク質（ＡＤＰ）を過剰発現するように操作されたウイルスは、アデノウイルス、レトロウイルス、ワクシニアウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、水胞性口内炎ウイルス、または口内炎ウイルスである。特定の態様では、リラキシンを発現するように操作されたウイルスおよび／またはアデノウイルス死タンパク質（ＡＤＰ）を過剰発現するように操作されたウイルスはアデノウイルスである。
【００１６】
特定の態様では、治療される対象は哺乳動物またはヒトである。ある特定の態様では、治療は、前がん性または悪性の過剰増殖状態を予防または治療するために提供される。予防のある特定の態様では、対象は健康な対象である。予防の他の態様では、対象は、前がん病変、例えば、白斑または形成異常病変を含む。予防の他の態様では、対象は、例えば、喫煙者であることまたはがんの家族歴を有することなどにより、がんを発症するリスクを有する。ある特定の態様では、治療は、最初または再発性の過剰増殖状態のためのものである。一部の態様では、治療は、別の療法への抵抗性を増大または後退させるために投与される。ある特定の態様では、治療への抵抗性は、過剰増殖状態患者の特定の集団について歴史により既知である。ある特定の態様では、治療への抵抗性は、個々の過剰増殖状態患者において観察される。
【００１７】
ある特定の態様では、対象に投与されるウイルスは、リラキシンを発現するように操作される。一部の態様では、リラキシンは全長リラキシンである。他の態様では、リラキシンは、生物学的活性を保持するリラキシン分子の断片である（例えば、米国特許第５，０２３，３２１号に記載されている）。特定の態様では、リラキシンは、組換えヒトリラキシン（Ｈ２）またはリラキシン様活性を有する他の活性剤、例えば、結合したリラキシンを受容体から競合的に解離させる剤である。
【００１８】
ある特定の態様では、ＡＤＰを過剰発現するように操作されたウイルスは、ＶＲＸ−００７と称される血清型５アデノウイルス（すなわち、Ｅ３領域のほとんどを欠失し、Ｅ３−１１．６Ｋアデノウイルス死タンパク質（ＡＤＰ）を過剰発現するように操作された腫瘍溶解性アデノウイルスベクター）である。ＶＲＸ−００７はまた、他の治療遺伝子を発現するように改変されてもよい。ＶＲＸ−００７の構築は以前に記載されている（Doronin  ２００３年；Tollefson  １９９６年；Lichtenstein  ２００４年）。
【００１９】
ある特定の態様では、Ｎ１Ｌを欠失するように操作されたワクシニアウイルスは、Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｒｅｓｅｒｖｅ株、Ｗｙｅｔｈ株およびＬｉｓｔｅｒ株に由来する。これらの各株の様々な欠失変異体が作出されている。ある特定の態様では、用いられるＮ１Ｌ欠失誘導体ＶＶＬ  １５Ｎ１Ｌは、Wangら、２０１５年に記載されるものである（特許ＷＯ２０１５／１５０８０９Ａ１）。ＶＶＬ  １５Ｎ１Ｌベクターはまた、ＩＬ−１２および／またはリラキシンが挙げられるがこれらに限定されない治療遺伝子を発現するように改変されてもよい。一部の態様では、ＶＶＬ  １５Ｎ１Ｌベクターはまた、免疫チェックポイント阻害剤およびＰＩ３Ｋ阻害剤と組み合わせられる。特定の態様では、ＰＩ３ＫデルタまたはＰＩ３Ｋガンマ／デルタ阻害剤が、ウイルスベクターの静脈内投与を増進させるために投与される。１つの特定の方法では、対象は、静脈内ＶＶＬ  １５Ｎ１Ｌベクターの前（例えば、数時間前）にＰＩ３Ｋデルタ阻害剤を投与される。
【００２０】
ある特定の態様では、ラットシトクロムｐ４５０  ２Ｂ１遺伝子を発現するように操作された単純ヘルペスウイルスは、欠失したＩＣＰ６遺伝子を有し、（Aghiら、１９９９年）にさらに記載されるようにｒＲｐ４５０と称される。ベクターは、シクロホスファミド（ＣＰＡ）感受性ラットシトクロムｐ４５０  ２Ｂ１、およびガンシクロビル（ＧＣＶ）感受性単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（ＨＳＶ−ＴＫ）遺伝子の発現をコードする。シトクロムｐ４５０およびＨＳＶ−ＴＫ遺伝子の発現は、それぞれＣＰＡおよびＧＣＶプロドラッグのそれらの治療活性代謝物への変換を結果としてもたらす。特定の態様では、ｒＲｐ４５０は、ＣＰＡおよびＧＣＶと組み合わせて投与される。
【００２１】
ある特定の態様では、少なくとも１つのチェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＬＡＧ−３、ＢＴＬＡ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＴＩＭ３、ＫＩＲ、またはＡ２ａＲの阻害剤から選択される。一部の態様では、少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤は抗ＣＴＬＡ−４抗体である。一部の態様では、抗ＣＴＬＡ−４抗体はトレメリムマブまたはイピリムマブである。ある特定の態様では、少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤は抗キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）抗体である。一部の実施形態では、抗ＫＩＲ抗体はリリルマブである。一部の態様では、ＰＤ−Ｌ１の阻害剤は、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、またはアベルマブである。一部の態様では、ＰＤ−Ｌ２の阻害剤はｒＨＩｇＭ１２Ｂ７である。一部の態様では、ＬＡＧ３阻害剤はＩＭＰ３２１、またはＢＭＳ−９８６０１６である。一部の態様では、Ａ２ａＲの阻害剤はＰＢＦ−５０９である。
【００２２】
一部の態様では、少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤はヒトプログラム細胞死１（ＰＤ−１）軸結合アンタゴニストである。ある特定の態様では、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、ＰＤ−１結合アンタゴニスト、ＰＤＬ１結合アンタゴニストおよびＰＤＬ２結合アンタゴニストからなる群から選択される。一部の態様では、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストはＰＤ−１結合アンタゴニストである。ある特定の態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤＬ１および／またはＰＤＬ２へのＰＤ−１の結合を阻害する。特に、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、モノクローナル抗体またはその抗原結合性断片である。一部の実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピジリズマブ、ＡＭＰ−５１４、ＲＥＧＮ２８１０、ＣＴ−０１１、ＢＭＳ  ９３６５５９、ＭＰＤＬ３２８ＯＡまたはＡＭＰ−２２４である。
【００２３】
一部の態様では、ウイルス組成物は、腫瘍内に、動脈内に、静脈内に、血管内に、胸膜内に、腹腔内に、気管内に、髄腔内に、筋肉内に、内視鏡的に、病巣内に、経皮的に、皮下に、局部的に、定位的に、または直接的な注射もしくは灌流により投与される。一部の態様では、投与は、連続注入、腫瘍内注射、静脈注射、動脈注射、腹腔内注射、胸膜内注射、または髄腔内注射を介して為される。一部の態様では、ウイルス組成物は、皮内に、皮下に、筋肉内に、腹腔内に、経口的に、吸入により、または他の形態の粘膜曝露により投与される。
【００２４】
ある特定の態様では、対象は、少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤の後にウイルス組成物を投与される。ある特定の態様では、対象は、少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤の前にウイルス組成物を投与される。ある特定の態様では、対象は、少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤と同時にウイルス組成物を投与される。一部の態様では、ウイルス組成物は、対象の局所領域に投与され、処置されていない遠位の腫瘍に対してアブスコパル効果を誘導する。一部の態様では、ウイルス組成物および少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤は、ウイルス組成物を注射されていない遠位の腫瘍に対してアブスコパル効果を誘導する。
【００２５】
ある特定の態様では、がんは、黒色腫、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、肺がん、肝細胞癌、網膜芽腫、星状細胞腫、膠芽腫、白血病、神経芽腫、頭部がん、頸部がん、乳がん、膵臓がん、前立腺がん、腎臓がん、骨がん、精巣がん、卵巣がん、中皮腫、子宮頸がん、胃腸がん、泌尿生殖器がん、気道がん、造血性がん、筋骨格がん、神経内分泌がん、癌腫、肉腫、中枢神経系がん、末梢神経系がん、リンパ腫、脳がん、結腸がんまたは膀胱がんである。一部の態様では、がんは転移性である。
【００２６】
ある特定の態様では、ウイルス組成物は、約１０３〜約１０１３個のウイルス粒子で投与される。一部の態様では、ウイルス組成物は、対象に、静脈内に、動脈内に、血管内に、胸膜内に、腹腔内に、気管内に、腫瘍内に、髄腔内に、筋肉内に、内視鏡的に、病巣内に、経皮的に、皮下に、局部的に、定位的に、または直接的な注射もしくは灌流により投与される。ある特定の態様では、対象は、１回より多くウイルス組成物を投与される。ウイルス組成物は、治療される対象中の１つまたは複数の腫瘍に投与されてもよい。
【００２７】
一部の態様では、ウイルス組成物は、治療用核酸を発現するようにさらに操作されている。ある特定の態様では、治療用核酸は、腫瘍抑制因子遺伝子、免疫刺激遺伝子、放射線増進遺伝子、または化学療法増進遺伝子である。ある特定の態様では、治療用核酸はまた、他の遺伝子、例えばｓｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡの発現を調節してもよい。一部の態様では、治療遺伝子は、ｐ５３および／もしくはＩＬ−２４または類似のもしくは改善された機能を有するそのバリアントをコードする。他の態様では、ｐ５３またはＩＬ−２４の機能を回復または増進させる方法およびこれらの方法は当該技術分野において公知であり、これらもまた本発明の実施形態において使用するために想定される。
【００２８】
ある特定の態様では、投与は、局所（local）または局部（regional）注射を含む。他の態様では、投与は、連続注入、腫瘍内注射、静脈注射または動脈注射を介して為される。
【００２９】
一部の態様では、方法は、少なくとも１つの追加の抗がん治療を施すことをさらに含む。ある特定の態様では、少なくとも１つの追加の抗がん治療は、外科療法、化学療法（例えば、プロテインキナーゼ阻害剤またはＥＧＦＲ標的化療法の投与）、塞栓療法、化学塞栓療法、放射線療法、寒冷療法、ハイパーサーミア治療、光線療法、ラジオ焼灼療法、ホルモン療法、免疫療法、小分子療法、受容体キナーゼ阻害剤療法、抗血管新生療法、サイトカイン療法または生物学的療法、例えば、モノクローナル抗体、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイムもしくは遺伝子療法である。特定の態様では、少なくとも１つの追加の抗がん治療は、プロテインキナーゼ阻害剤、例えばチロシンキナーゼ阻害剤である。１つの特定の態様では、プロテインキナーゼ阻害剤は、ブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害剤（例えば、イブルチニブ、アカラブルチニブ（ＡＣＰ−１９６）、ＯＮＯ−４０５９、スペブルチニブ（ＣＣ−２９２）、ＨＭ−７１２２４、ＣＧ−０３６８０６、ＧＤＣ−０８３４、ＯＮＯ−４０４９、ＲＮ−４８６、ＳＮＳ−０６２、ＴＡＳ−５５６７、ＡＶＬ−１０１、ＡＶＬ−２９１、ＰＣＩ−４５２６１、ＨＣＩ−１６８４、ＰＬＳ−１２３、またはＢＧＢ−３１１１）である。一部の態様では、１つまたは複数のＢＴＫ阻害剤は、ウイルス組成物と組み合わせて投与される。ある特定の態様では、１つまたは複数のＢＴＫ阻害剤は、ウイルス組成物および少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせて投与される。一部の態様では、少なくとも１つの追加の抗がん治療は、ｐ５３活性の阻害を後退させるものなどの、ＨＤＭ２（ＭＤＭ２としても公知）および／またはＨＤＭ４の阻害剤（例えば、小分子阻害剤）である。特定の態様では、ＨＤＭ２の小分子阻害剤は、ＨＤＭ２０１、シス−イミダゾリン（例えば、ヌトリン）、ベンゾジアゼピン（ＢＤＰ）、スピロオキシインドールである。
【００３０】
一部の態様では、免疫療法はサイトカインを含む。特定の態様では、サイトカインは、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターロイキン、例えばＩＬ−２、および／またはインターフェロン、例えばＩＦＮ−アルファである。腫瘍標的化免疫応答を増強させる追加のアプローチとしては、追加の免疫チェックポイント阻害が挙げられる。一部の態様では、免疫チェックポイント阻害は、抗ＣＴＬＡ４、抗ＰＤ−１、抗ＰＤ−Ｌ１、抗ＰＤ−Ｌ２、抗ＴＩＭ−３、抗ＬＡＧ−３、抗Ａ２ａＲ、または抗ＫＩＲ抗体を含む。一部の態様では、免疫療法は、共刺激受容体アゴニスト、例えば、抗ＯＸ４０抗体、抗ＧＩＴＲ抗体、抗ＣＤ１３７抗体、抗ＣＤ４０抗体、および抗ＣＤ２７抗体を含む。ある特定の態様では、免疫療法は、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）およびがん関連線維芽細胞（ＣＡＦ）の抑制を含む。さらなる態様では、免疫療法は、自然免疫細胞、例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、および樹状細胞の刺激を含む。追加の免疫刺激治療としては、ＩＤＯ阻害剤、ＴＧＦ−ベータ阻害剤、ＩＬ−１０阻害剤、インターフェロン遺伝子の刺激因子（stimulator  of  interferon  genes；ＳＴＩＮＧ）アゴニスト、ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト（例えば、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、またはＴＬＲ９）、腫瘍ワクチン（例えば、全腫瘍細胞ワクチン、ペプチド、および組換え腫瘍関連抗原ワクチン）、および養子細胞療法（ＡＣＴ）（例えば、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、ＴＩＬ、およびＬＡＫ細胞）を挙げることができる。ある特定の態様では、これらの剤の組合せ、例えば、免疫チェックポイント阻害剤、チェックポイント阻害＋Ｔ細胞共刺激受容体のアゴニズム、およびチェックポイント阻害＋ＴＩＬ  ＡＣＴを組み合わせて使用することができる。ある特定の態様では、追加の抗がん治療としては、抗ＰＤ−Ｌ１免疫チェックポイント阻害剤（例えば、アベルマブ）、４−１ＢＢ（ＣＤ−１３７）アゴニスト（例えば、ウトミルマブ（Utomilumab））、およびＯＸ４０（ＴＮＦＲＳ４）アゴニストの組合せが挙げられる。
【００３１】
一部の態様では、化学療法はＤＮＡ損傷剤を含む。一部の実施形態では、ＤＮＡ損傷剤は、ガンマ照射、Ｘ線、ＵＶ照射、マイクロ波、電子放射、アドリアマイシン、５−フルオロウラシル（５ＦＵ）、カペシタビン、エトポシド（ＶＰ−１６）、カンプトテシン、アクチノマイシンＤ、ミトマイシンＣ、シスプラチン（ＣＤＤＰ）、または過酸化水素である。特定の態様では、ＤＮＡ損傷剤は５ＦＵまたはカペシタビンである。一部の態様では、化学療法は、シスプラチン（ＣＤＤＰ）、カルボプラチン、プロカルバジン、メクロレタミン、シクロホスファミド、カンプトテシン、イホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン（bisulfan）、ニトロソウレア（nitrosurea）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン（doxombicin）、ブレオマイシン、プリカマイシン（plicomycin）、ミトマイシン、エトポシド（ＶＰ１６）、タモキシフェン、タキソテール、タキソール、トランス白金、５−フルオロウラシル、ビンクリスチン（vincristin）、ビンブラスチン（vinblastin）、メトトレキサート、ＨＤＡＣ阻害剤またはこれらの任意のアナログもしくは誘導体バリアントを含む。
【００３２】
一部の態様では、少なくとも１つの追加の抗がん治療は複製コンピテントまたは複製インコンピテントウイルスである。ある特定の態様では、複製コンピテントまたは複製インコンピテントウイルスは、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルス、レンチウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、ワクシニアウイルス、水胞性口内炎ウイルス、ポリオウイルス、ニューカッスル病ウイルス、エプスタイン・バーウイルス、インフルエンザウイルス、またはレオウイルスである。特定の態様では、複製コンピテントまたは複製インコンピテントウイルスは単純ヘルペスウイルスである。一部の態様では、複製コンピテントまたは複製インコンピテントウイルスは、導入遺伝子、例えば腫瘍抑制因子（例えば、ｐ５３）および／またはサイトカイン（例えば、ＩＬ−２４）を発現するように操作されている。一部の実施形態では、サイトカインは顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）である。一部の実施形態では、複製コンピテントまたは複製インコンピテントウイルスは、タリモジーン・ラハーパレプベック（Ｔ−ＶＥＣ）（例えば、ＩＭＬＹＧＩＣ（商標））としてさらに定義される。一部の実施形態では、追加の複製コンピテントまたは複製インコンピテントウイルスは、局所／アブスコパルウイルス組成物および免疫チェックポイント阻害剤の前に、同時に、または後に投与される。
【００３３】
一部の態様では、少なくとも１つの追加のがん治療は、プロテインキナーゼまたは成長因子シグナル伝達経路に関与する受容体を阻害するプロテインキナーゼ阻害剤またはモノクローナル抗体である。例えば、プロテインキナーゼまたは受容体阻害剤は、ＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ、ＡＫＴ、Ｅｒｂ１、Ｅｒｂ２、ＥｒｂＢ、Ｓｙｋ、Ｂｃｒ−Ａｂｌ、ＪＡＫ、Ｓｒｃ、ＧＳＫ−３、ＰＩ３Ｋ、Ｒａｓ、Ｒａｆ、ＭＡＰＫ、ＭＡＰＫＫ、ｍＴＯＲ、ｃ−Ｋｉｔ、ｅｐｈ受容体またはＢＲＡＦ阻害剤であり得る。特定の態様では、プロテインキナーゼ阻害剤はＰＩ３Ｋ阻害剤である。一部の実施形態では、ＰＩ３Ｋ阻害剤はＰＩ３Ｋデルタ阻害剤である。例えば、プロテインキナーゼまたは受容体阻害剤は、アファチニブ、アキシチニブ、ベバシズマブ、ボスチニブ、セツキシマブ、クリゾチニブ、ダサチニブ、エルロチニブ、フォスタマチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、レンバチニブ、ムブリチニブ、ニロチニブ、パニツムマブ、パゾパニブ、ペガプタニブ、ラニビズマブ、ルキソリチニブ、サラカチニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、トラスツズマブ、バンデタニブ、ＡＰ２３４５１、ベムラフェニブ、ＣＡＬ１０１、ＰＸ−８６６、ＬＹ２９４００２、ラパマイシン、テムシロリムス、エベロリムス、リダホロリムス、アルボシジブ、ゲニステイン、セルメチニブ、ＡＺＤ−６２４４、バタラニブ、Ｐ１４４６Ａ−０５、ＡＧ−０２４３２２、ＺＤ１８３９、Ｐ２７６−００、ＧＷ５７２０１６、またはこれらの混合物であり得る。ある特定の態様では、プロテインキナーゼ阻害剤はＡＫＴ阻害剤（例えば、ＭＫ−２２０６、ＧＳＫ６９０６９３、Ａ−４４３６５４、ＶＱＤ−００２、ミルテホシンまたはペリホシン）である。ある特定の態様では、実施形態にしたがって使用するためのＥＧＦＲ標的化療法としては、ＥＧＦＲ／ＥｒｂＢ１／ＨＥＲ、ＥｒｂＢ２／Ｎｅｕ／ＨＥＲ２、ＥｒｂＢ３／ＨＥＲ３、および／またはＥｒｂＢ４／ＨＥＲ４の阻害剤が挙げられるがこれらに限定されない。広範なそのような阻害剤が公知であり、該阻害剤としては、該受容体に対して活性のチロシンキナーゼ阻害剤およびＥＧＦＲ結合抗体またはアプタマーが挙げられるがこれらに限定されない。例えば、ＥＧＦＲ阻害剤は、ゲフィチニブ、エルロチニブ、セツキシマブ、マツズマブ、パニツムマブ、ＡＥＥ７８８；ＣＩ−１０３３、ＨＫＩ−２７２、ＨＫＩ−３５７、またはＥＫＢ−５６９であり得る。プロテインキナーゼ阻害剤は、ＢＲＡＦ阻害剤、例えばダブラフェニブ、またはＭＥＫ阻害剤、例えばトラメチニブであってよい。
【００３４】
さらなる実施形態では、（ａ）Ｎ１Ｌ遺伝子の欠失、マトリックス分解タンパク質遺伝子、アデノウイルス死タンパク質（ＡＤＰ）遺伝子、および／またはシトクロムｐ４５０遺伝子を含むように操作された１つまたは複数のウイルス、および（ｂ）少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤を含む医薬組成物が提供される。ある特定の態様では、アデノウイルス死タンパク質は過剰発現される。特定の態様では、Ｎ１Ｌの欠失を含むように操作されたウイルスはワクシニアウイルスである。一部の態様では、シトクロムｐ４５０遺伝子を含むように操作されたウイルスは単純ヘルペスウイルスである。ある特定の態様では、マトリックス分解タンパク質および／またはアデノウイルス死タンパク質を含むように操作されたウイルスはアデノウイルスである。
【００３５】
１つの特定の態様では、１つまたは複数のウイルスは、リラキシン遺伝子を発現するように操作されたウイルス、アデノウイルス死タンパク質（ＡＤＰ）遺伝子を過剰発現するように操作されたウイルス、Ｎ１Ｌ遺伝子を欠失するように操作されたワクシニアウイルス、およびラットシトクロムｐ４５０  ２Ｂ１遺伝子を発現するように操作された単純ヘルペスウイルスからなる群から選択される。
【００３６】
一部の態様では、上記実施形態のウイルスは、アデノウイルス、レトロウイルス、ワクシニアウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、水胞性口内炎ウイルス、および／または口内炎ウイルスを含む。ある特定の態様では、ウイルスは１つまたは複数のアデノウイルスを含む。
【００３７】
一部の態様では、マトリックス分解タンパク質は、リラキシン、ヒアルロニダーゼ、またはデコリンである。特定の態様では、マトリックス分解タンパク質はリラキシンである。
【００３８】
ある特定の態様では、シトクロムｐ４５０遺伝子はシトクロムｐ４５０  ２Ｂ１遺伝子である。特定の態様では、シトクロムｐ４５０  ２Ｂ１遺伝子はラットシトクロムｐ４５０  ２Ｂ１遺伝子である。
【００３９】
さらに別の実施形態では、Ｎ１Ｌ遺伝子の欠失、マトリックス分解タンパク質遺伝子、アデノウイルス死タンパク質（ＡＤＰ）遺伝子、および／またはシトクロムｐ４５０遺伝子を含むように操作された２つまたはそれより多くのウイルスを含む医薬組成物が提供される。一部の態様では、組成物は、３つまたは４つのウイルスを含む。
【００４０】
１つの特定の態様では、２つまたはそれより多くのウイルスは、リラキシン遺伝子を発現するように操作されたウイルス、アデノウイルス死タンパク質（ＡＤＰ）遺伝子を過剰発現するように操作されたウイルス、Ｎ１Ｌ遺伝子を欠失するように操作されたワクシニアウイルス、およびラットシトクロムｐ４５０  ２Ｂ１遺伝子を発現するように操作された単純ヘルペスウイルスからなる群から選択される。
【００４１】
一部の態様では、ウイルスは、アデノウイルス、レトロウイルス、ワクシニアウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、水胞性口内炎ウイルス、および／または口内炎ウイルスを含む。ある特定の態様では、ウイルスは１つまたは複数のアデノウイルスを含む。
【００４２】
一部の態様では、マトリックス分解タンパク質は、リラキシン、ヒアルロニダーゼ、またはデコリンである。特定の態様では、マトリックス分解タンパク質はリラキシンである。
【００４３】
ある特定の態様では、シトクロムｐ４５０遺伝子はシトクロムｐ４５０  ２Ｂ１遺伝子である。特定の態様では、シトクロムｐ４５０  ２Ｂ１遺伝子はラットシトクロムｐ４５０  ２Ｂ１遺伝子である。
【００４４】
さらに別の実施形態では、（ａ）少なくとも１つの腫瘍関連または病原体関連抗原およびＮ１Ｌ遺伝子の欠失を発現するワクシニアウイルス、および（ｂ）少なくとも１つの腫瘍関連または病原体関連抗原を発現する少なくとも第２のウイルスを含む医薬組成物が提供される。ある特定の態様では、組成物は、免疫アジュバント、例えば、抗抗原免疫応答を増加させることが公知のアジュバントをさらに含む。一部の態様では、腫瘍関連抗原は、メソテリン、黒色腫関連遺伝子（ＭＡＧＥ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、変異型Ｒａｓ、または変異型ｐ５３である。一部の態様では、病原体関連抗原は、感染性ウイルス、細菌、真菌、プリオン、または寄生虫生物により発現される抗原である。一態様では、少なくとも１つの腫瘍関連または病原体関連抗原を発現する第２のウイルスはアデノウイルスである。様々な態様では、ワクシニアウイルスにより発現される少なくとも１つの腫瘍関連または病原体関連抗原および第２のウイルスにより発現される少なくとも１つの腫瘍関連または病原体関連抗原は同じまたは異なる。
【００４５】
本発明の他の目的、特徴および利点は、以下の詳細な説明から明らかとなるであろう。しかしながら、詳細な説明および特定の例は、本発明の好ましい実施形態を指し示すが、説明のためにのみ与えられるものであり、本発明の精神および範囲内での様々な変更および改良がこの詳細な説明から当業者に明らかとなるであろうことが理解されるべきである。
【００４６】
以下の図面は本明細書の部分を形成し、本発明のある特定の態様をさらに実証するために含められる。本明細書に提示される特定の実施形態の詳細な説明と組み合わせてこれらの図面の１つまたは複数を参照することにより本発明はより良好に理解され得る。
【図面の簡単な説明】
【００４７】
【図１】Ａｄ−リラキシン＋抗ＰＤ−１の局所有効性：腫瘍体積。リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）対照、抗ＰＤ−１、Ａｄ−リラキシン、またはＡｄ−リラキシン＋抗ＰＤ−１の組合せのいずれかを与えた齧歯動物における経時的な腫瘍体積を示すグラフ。Ａｄ−リラキシン療法により誘導された抗ＰＤ−１抵抗性の後退と共に抗ＰＤ−１療法の間に重篤な腫瘍進行があった。抗ＰＤ−１またはＡｄ−リラキシン療法のいずれか単独と比較してＡｄ−リラキシン＋抗ＰＤ−１治療には相乗的に増進された有効性があった。８日目までに、Ａｄ−リラキシン＋抗ＰＤ−１の組合せ治療は、抗ＰＤ−１またはＡｄ−リラキシン療法のいずれか単独と比較して腫瘍体積の大きい減少を誘導した。Ｔ検定の統計分析はＡｄ−リラキシン＋抗ＰＤ１の抗腫瘍効果を決定し、それはＡｄ−リラキシン単独（ｐ値０．０２５４）または抗ＰＤ−１単独（ｐ値０．０２３１）と比較して有意であった。組み合わせたＡｄ−リラキシンおよび抗ＰＤ−１の増加した有効性は、ＰＢＳ対照での処置と統計的に異ならなかったＡｄ−リラキシンおよび抗ＰＤ−１療法単独の小さい効果と比較して相加より大きかった。
【００４８】
【図２】Ａｄ−リラキシン＋抗ＰＤ−１のアブスコパル有効性：対側の腫瘍体積。Ａｄ−リラキシンまたはＡｄ−リラキシン＋抗ＰＤ−１治療の組合せのいずれかを原発性腫瘍に与えた齧歯動物における経時的な対側の腫瘍体積。抗ＰＤ−１単独で治療した原発性腫瘍の成長速度と比較して減少した腫瘍成長を有するＴ検定による統計的に有意なアブスコパル効果は、ウイルス療法注射を与えなかった対側の（二次）腫瘍においても観察された。これらの発見は、ウイルス治療（Ａｄ−リラキシン単独およびＡｄ−リラキシン＋抗ＰＤ１）はアブスコパル効果を誘導したことを指し示す。Ａｄ−リラキシン単独で原発性腫瘍を治療した動物における対側の腫瘍は、抗ＰＤ−１単独で治療した原発性腫瘍の成長速度と比較して有意に遅延した腫瘍成長（ｐ＝０．０２７３）を示した。原発性腫瘍成長の抑制において観察された相乗効果に合致して、対側の腫瘍成長に対するいっそう大きいアブスコパル効果（ｐ＝０．０００９）が、組み合わせたＡｄ−リラキシン＋抗ＰＤ−１で原発性腫瘍を治療したマウスにおいて観察された。
【００４９】
【図３】Ａｄ−リラキシン＋抗ＰＤ１の有効性：生存。ＰＢＳ、抗ＰＤ−１、Ａｄ−リラキシンまたはＡｄ−リラキシン＋抗ＰＤ−１の組合せのいずれかで治療したマウスのカプラン・マイヤー生存曲線。抗ＰＤ−１単独での治療と比較して組み合わせたＡｄ−リラキシン＋抗ＰＤ−１で原発性腫瘍を治療したマウスにおいてログランク検定により生存の統計的に有意な増加があった（ｐ＝０．００１０）。組み合わせたＡｄ−リラキシン＋抗ＰＤ−１群についてのメジアン生存の増加は、Ａｄ−リラキシン単独および抗ＰＤ−１単独について観察された別々の効果の相加より大きかった。抗ＰＤ−１単独と比較してＡｄ−リラキシン単独で治療したマウスについて生存の統計的に有意な増加はなかった。相加より大きいＡｄ−リラキシン＋抗ＰＤ−１による増加した生存という発見は、組み合わせたＡｄ−リラキシン＋抗ＰＤ−１療法についての原発性腫瘍成長の抑制において観察された相乗効果および対側の腫瘍成長に対するより大きなアブスコパル効果に合致し、組合せ治療の予想外の相乗効果を反映する。
【００５０】
【図４】アデノウイルス死タンパク質を過剰発現するＶＲＸ−００７＋抗ＰＤ−Ｌ１の有効性：腫瘍体積。アデノウイルス死タンパク質（ＡＤＰ）遺伝子療法と組み合わせた免疫チェックポイント阻害剤抗ＰＤ−Ｌ１治療の有効性をＡＤＳ免疫適格動物腫瘍モデルにおいて評価した。ＶＲＸ−００７は、ＡＤＰ遺伝子を過剰発現するように操作されたアデノウイルスである。ＰＢＳビヒクル対照（Ｎ＝１０）、抗ＰＤ−Ｌ１免疫チェックポイント阻害剤（Ｎ＝１０）、ＶＲＸ−００７（Ｎ＝４）およびＶＲＸ−００７＋抗ＰＤ−Ｌ１（Ｎ＝４）を含む４つの治療群を比較した。ベースライン値と比べた療法開始の１５日後（または動物の屠殺時）の腫瘍体積の変化のパーセンテージを比較することにより治療有効性を評価した。クラスカル・ウォリス一元配置分散分析（ランクでの一元配置分散分析）により、治療群間の統計的有意差が実証された（ｐ値＝０．０２５８）。組み合わせたＶＲＸ−００７＋抗ＰＤ−Ｌ１療法の統計的に有意な抗腫瘍効果（ｐ＝０．００４７）は予想外かつ驚くべきことに相乗的であり、ＶＲＸ−００７（ｐ＝０．１２３２）および抗ＰＤ−Ｌ１（ｐ＝０．５８６６）のいずれも別々ではビヒクル対照での処置と統計的に異ならなかった。組み合わせたＶＲＸ−００７および抗ＰＤ−Ｌ１の増加した有効性は相加より大きく、組合せ治療はまた、抗ＰＤ−Ｌ１療法単独より統計的に優れていた（ｐ＝０．０１５７）。さらには、Ｔ検定の統計分析により、ＶＲＸ−００７＋抗ＰＤ１の抗腫瘍効果はＶＲＸ−００７単独と比較して有意であることが明らかになった（対応のないｐ値＝０．０３５６）。組み合わせたＶＲＸ−００７＋抗ＰＤ−Ｌ１療法の有効性および相乗作用は、いずれの治療も別々では統計的に有意な有効性を実証しなかったので予想外であった。
【発明を実施するための形態】
【００５１】
腫瘍は開始および進行の間に進化して免疫系による破壊を回避することが周知である。この抵抗性を後退させるための免疫チェックポイント阻害剤の最近の使用はある程度の成功を実証してきたが、患者の大部分はこれらの治療に応答しない。ある特定の実施形態では、本開示は、腫瘍の微環境を変化させて、抵抗性を克服し、抗腫瘍免疫応答を増進させるための方法および組成物を提供する。一実施形態では、ウイルス組成物を単独でまたは少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせて投与することによるがんの治療方法が提供される。ウイルス組成物は、Ｎ１Ｌ遺伝子の欠失、マトリックス分解タンパク質遺伝子、アデノウイルス死タンパク質（ＡＤＰ）遺伝子、および／またはシトクロムｐ４５０遺伝子を含むように操作された１つまたは複数のウイルスを含んでよい。１つの方法では、細胞外マトリックス分解療法は、リラキシン遺伝子療法、例えばアデノウイルスのリラキシンである。特に、アデノウイルスのリラキシンは腫瘍内または動脈内に投与される。
【００５２】
例示的な方法では、ウイルス組成物は、リラキシン遺伝子を発現するように操作されたウイルス、アデノウイルス死タンパク質（ＡＤＰ）遺伝子を過剰発現するように操作されたウイルス、Ｎ１Ｌ遺伝子を欠失するように操作されたワクシニアウイルス、および／またはラットシトクロムｐ４５０  ２Ｂ１遺伝子を発現するように操作された単純ヘルペスウイルスを含んでよい。
【００５３】
特に、ウイルス組成物は複製コンピテントまたは腫瘍溶解性である。ある特定の態様では、ウイルス組成物は複製インコンピテントであり、または複製コンピテントウイルスと複製インコンピテントウイルスとの組合せを含む。特に、ウイルス組成物は局所および／またはアブスコパル効果を誘導する。
【００５４】
１つの方法では、ウイルス組成物は、免疫チェックポイント阻害剤、例えば抗ＰＤ１抗体または抗ＫＩＲ抗体と組み合わせて投与されて、適応抗腫瘍免疫応答を誘導するウイルス組成物の投与の前に自然抗腫瘍免疫を増進させる。または、ウイルス組成物は、免疫チェックポイント阻害剤と並行して投与されてもよい。
【００５５】
さらに、治療方法は、本明細書で提供される併用療法の抗腫瘍効果を増進させる追加の抗がん療法、例えばサイトカインまたは化学療法薬を含むことができる。例えば、サイトカインは顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）であってよく、化学療法は、５−フルオロウラシル（５ＦＵ）またはカペシタビンまたはシクロホスファミドまたはＰＩ３Ｋ阻害剤であってよい。
【００５６】
本研究では、局所領域のウイルス組成物治療は、全身性の免疫チェックポイント阻害剤療法への抵抗性を後退させ、免疫チェックポイント阻害剤治療との予想外の相乗作用を実証し、併用療法はウイルス組成物で処置されていない遠位の腫瘍に対して優れたアブスコパル効果を誘導した。これらの予想外の全身性治療効果は、骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）、Ｔ−Ｒｅｇおよび樹状細胞をモジュレートすることが公知の化学療法、サイトカイン療法および剤と組み合わせて増進されることが発見された。したがって、本開示は、自然および適応抗腫瘍免疫応答を増進させる他に、免疫チェックポイント療法への抵抗性を克服し、アブスコパル全身性治療効果を誘導することによるがんの治療方法を提供する。
Ｉ．定義
【００５７】
本明細書で使用される場合、特定の成分に関する「本質的に含まない」は、特定の成分のいずれも組成物中に意図的に配合されておらず、および／または汚染物としてもしくは微量でのみ存在することを意味するために本明細書で使用される。したがって、組成物の任意の意図しない汚染の結果としてもたらされる特定の成分の総量は、０．０５％より充分に低く、好ましくは０．０１％より低い。特定の成分が標準的な分析方法で全く検出できない組成物が最も好ましい。
【００５８】
本明細書で使用される場合、「ａ」または「ａｎ」は１つまたは複数を意味することができる。特許請求の範囲において使用される場合、「含む」という語と組み合わせて使用された場合の「ａ」または「ａｎ」という語は、１つまたは１つより多くを意味することができる。
【００５９】
特許請求の範囲における「または」という用語の使用は、選択肢のみを指すことを明示的に指し示しまたは選択肢が互いに排他的である場合を除いて、「および／または」を意味するために使用されるが、本開示は、選択肢のみおよび「および／または」を指すという定義を支持する。本明細書で使用される場合、「別の」は、少なくとも２つ目またはそれより多くを意味することができる。
【００６０】
本出願の全体を通じて、「約」という用語は、値が、その値を決定するために用いられるデバイス、方法に本来備わっている誤差のばらつき、または研究対象間に存在するばらつきを含むことを指し示すために使用される。
【００６１】
本明細書で使用される場合、「野生型」は、生物のゲノム中の遺伝子座における核酸の天然に存在する配列、およびそのような核酸から転写または翻訳される配列を指す。したがって、「野生型」という用語はまた、核酸によりコードされるアミノ酸配列を指すことができる。遺伝子座は１つより多くの配列または個体の集団におけるアレルを有することがあるので、「野生型」という用語は、全てのそのような天然に存在するアレルを包含する。本明細書で使用される場合、「多型」（polymorphic）という用語は、集団の個体において遺伝子座にバリエーションが存在する（すなわち、２つまたはそれより多くのアレルが存在する）ことを意味する。本明細書で使用される場合、「変異体」は、組換えＤＮＡ技術の結果としての、核酸またはそれがコードするタンパク質、ポリペプチド、もしくはペプチドの配列の変化を指す。
【００６２】
細胞または生物中のタンパク質、遺伝子、核酸、またはポリヌクレオチドとの関連で使用された場合の「外因性」という用語は、人工的または天然の手段により細胞または生物中に導入されたタンパク質、遺伝子、核酸、またはポリヌクレオチドを指し、または細胞との関連で、該用語は、単離された後、人工的または天然の手段により他の細胞または生物に導入された細胞を指す。外因性核酸は、異なる生物または細胞からのものであってよく、またはそれは生物または細胞内で天然に生じる核酸の１つまたは複数の追加のコピーであってよい。外因性細胞は異なる生物からのものであってよく、またはそれは同じ生物からのものであってよい。非限定的な例として、外因性核酸は、天然細胞中にそれがあるであろう場所とは異なる染色体位置にあるか、またはそうでなければ天然に見出されるものとは異なる核酸配列に挟まれた核酸である。
【００６３】
「発現構築物」または「発現カセット」は、転写を指示することができる核酸分子を意味する。発現構築物は、最小で、１つまたは複数の所望の細胞種、組織または臓器中で遺伝子発現を指示する１つまたは複数の転写制御エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサーまたはこれらと機能的に同等の構造物）を含む。追加のエレメント、例えば転写終結シグナルも含まれてよい。
【００６４】
「ベクター」または「構築物」（遺伝子送達システムまたは遺伝子移入「ビヒクル」と称することもある）は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏのいずれかで宿主細胞に送達されるポリヌクレオチドを含む高分子または分子の複合体を指す。
【００６５】
一般的な種類のベクターである「プラスミド」は、染色体ＤＮＡとは独立して複製することができる染色体ＤＮＡから分離した染色体外ＤＮＡ分子である。ある特定の場合、それは環状および二本鎖である。
【００６６】
「複製起点」（origin  of  replication）（「ｏｒｉ」）または「複製起点」（replication  origin）は、細胞中のプラスミド中に存在する時にプラスミド中の連結した配列を維持することができる、例えばリンパ球向性ヘルペスウイルス中の、ＤＮＡ配列、および／またはＤＮＡ合成が開始する位置にあるもしくはその近くの部位である。一例としては、ＥＢＶのｏｒｉは、ＦＲ配列（３０ｂｐのリピートの２０個の不完全なコピー）、好ましくはＤＳ配列を含むが、ＥＢＶ中の他の部位はＥＢＮＡ−１に結合し、例えば、Ｒｅｐ＊配列は複製起点としてＤＳを置換することができる（KirshmaierおよびSugden、１９９８年）。したがって、ＥＢＶの複製起点は、ＦＲ、ＤＳもしくはＲｅｐ＊配列またはこれらに由来する核酸改変もしくは合成の組合せを通じて任意の機能的に同等の配列を含む。例えば、本発明は、Lindnerら、２００８年に具体的に記載されるように、個々のエレメントの挿入または変異などにより、ＥＢＶの遺伝子操作された複製起点を使用することもできる。
【００６７】
特定のタンパク質を「コード」する「遺伝子」、「ポリヌクレオチド」、「コーディング領域」、「配列」、「セグメント」、「断片」または「導入遺伝子」は、適切な調節配列の制御下に置かれた時に、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで、転写され、任意選択でさらに遺伝子産物、例えばポリペプチドに翻訳される核酸分子である。コーディング領域は、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、またはＲＮＡのいずれかの形態で存在することができる。ＤＮＡの形態で存在する場合、核酸分子は一本鎖（すなわち、センス鎖）または二本鎖であってよい。コーディング領域の境界は、５’（アミノ）末端の開始コドンおよび３’（カルボキシ）末端の翻訳終止コドンにより決定される。遺伝子としては、原核性または真核性ｍＲＮＡからのｃＤＮＡ、原核性または真核性ＤＮＡからのゲノムＤＮＡ配列、および合成ＤＮＡ配列を挙げることができるがこれらに限定されない。転写終結配列は、通常、遺伝子配列の３’に位置する。
【００６８】
「制御エレメント」という用語は、プロモーター領域、ポリアデニル化シグナル、転写終結配列、上流の調節ドメイン、複製起点、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、エンハンサー、スプライスジャンクションなどを総称的に指し、これらはレシピエント細胞中でコーディング配列の複製、転写、転写後プロセシング、および翻訳を共同で提供する。選択されたコーディング配列が適切な宿主細胞中で複製、転写、および翻訳され得る限り、これらの制御エレメントの全てが存在する必要はない。
【００６９】
「プロモーター」という用語はその通常の意味で本明細書において使用され、ＲＮＡポリメラーゼに結合して下流（３’方向）のコーディング配列の転写を開始させることができる遺伝子に由来するＤＮＡ調節配列を含むヌクレオチド領域を指す。それは、調節タンパク質および分子が例えばＲＮＡポリメラーゼおよび他の転写因子にそこで結合して核酸配列の特異的転写を開始させることができる遺伝学的エレメントを含有することができる。「作動可能に配置された」、「作動可能に連結された」「制御下」および「転写制御下」という語句は、核酸配列の転写開始および／または発現を制御するためにその配列に対してプロモーターが正しい機能的位置および／または配向にあることを意味する。
【００７０】
「エンハンサー」は、プロモーターに近接して配置された時に、エンハンサードメインの非存在下のプロモーターの結果としてもたらされる転写活性と比べて増加した転写活性を付与する核酸配列を意味する。
【００７１】
核酸分子に関する「作動可能に連結される」または「共発現される」は、２つまたはそれより多くの核酸分子（例えば、転写される核酸分子、プロモーター、およびエンハンサーエレメント）が、核酸分子の転写を可能にするように接続されていることを意味する。ペプチドおよび／またはポリペプチド分子に関する「作動可能に連結される」または「共発現される」は、２つまたはそれより多くのペプチドおよび／またはポリペプチド分子が、融合物の各ペプチドおよび／またはポリペプチド成分の少なくとも１つの特性を有する単一のポリペプチド鎖、すなわち融合ポリペプチドをもたらすように接続されていることを意味する。融合ポリペプチドは、好ましくはキメラ、すなわち異種の分子から構成される。
【００７２】
「相同性」は、２つのポリヌクレオチドまたは２つのポリペプチド間の同一性のパーセントを指す。１つの配列と別の配列との対応関係は、当該技術分野において公知の技術により決定することができる。例えば、相同性は、配列情報をアライメントすることおよび容易に利用可能なコンピュータープログラムを使用することにより２つのポリペプチド分子間の配列情報の直接的な比較により決定することができる。または、相同性は、相同領域間の安定なデュプレックスの形成を促進する条件下でのポリヌクレオチドのハイブリダイゼーション、その後の一本鎖特異的ヌクレアーゼによる消化、および消化された断片のサイズ決定により決定することができる。２つのＤＮＡ、または２つのポリペプチドの配列は、上記方法を使用する決定で、分子の定義された長さにわたってそれぞれヌクレオチド、またはアミノ酸の少なくとも約８０％、好ましくは少なくとも約９０％、最も好ましくは少なくとも約９５％が一致する時に互いに「実質的に相同」である。
【００７３】
「核酸」という用語は、一般に、少なくとも１つの核酸塩基、例えば、ＤＮＡ（例えば、アデニン「Ａ」、グアニン「Ｇ」、チミン「Ｔ」、およびシトシン「Ｃ」）またはＲＮＡ（例えば、Ａ、Ｇ、ウラシル「Ｕ」、およびＣ）中に見出される天然に存在するプリンまたはピリミジン塩基を含む、ＤＮＡ、ＲＮＡまたはこれらの誘導体もしくは模倣体の少なくとも１つの分子または鎖を指す。「核酸」という用語は「オリゴヌクレオチド」および「ポリヌクレオチド」という用語を包含する。「オリゴヌクレオチド」という用語は、約３〜約１００核酸塩基の長さの少なくとも１つの分子を指す。「ポリヌクレオチド」という用語は、約１００核酸塩基を超える長さの少なくとも１つの分子を指す。これらの定義は、通常、少なくとも１つの一本鎖分子を指すが、特定の実施形態では、少なくとも１つの一本鎖分子に部分的、実質的または全体的に相補的な少なくとも１つの追加の鎖も包含する。したがって、核酸は、１つまたは複数の相補鎖または分子の鎖を構成する特定の配列の「相補体」を含む少なくとも１つの二本鎖分子または少なくとも１つの三本鎖分子を包含することができる。
【００７４】
本出願の全体を通じて使用される「治療的利益」という用語は、がんの医学的治療に関して患者の健康な状態を促進しまたは増進させることを指す。この非網羅的な例のリストには、患者の寿命の任意の期間の延長、疾患の新生物発生の減少または遅延、過剰増殖の減少、腫瘍成長の低減、転移の遅延、がん細胞または腫瘍細胞の増殖速度の低減、任意の処置された細胞または処置された細胞に影響される任意の細胞におけるアポトーシスの誘導、および患者の状態に起因し得る患者にとっての痛みの減少が含まれる。
【００７５】
「有効量」は、特定の障害の測定可能な改善または予防をもたらすために必要とされる少なくとも最小量である。本明細書における有効量は、患者の病態、年齢、性別、および体重、ならびに個体において所望の応答を誘発する抗体の能力などの要因にしたがって変化し得る。有効量はまた、治療の任意の毒性のまたは有害な効果が治療的に有益な効果より小さい量である。予防的使用について、有益なまたは所望の結果としては、リスクの除去または低減、重篤度の縮小、または疾患の発症の遅延などの結果が挙げられ、該疾患には、疾患の生化学的、組織学的および／または行動的症状、その合併症および疾患の発生の間に現れる中間的な病理学的表現型が含まれる。治療的使用について、有益なまたは所望の結果としては、疾患の結果としてもたらされる１つまたは複数の症状の減少、疾患を患う者のクオリティオブライフの増加、疾患を治療するために必要とされる他の医薬の用量の減少、標的化などを介して別の医薬の効果の増進、疾患の進行の遅延、および／または生存の長期化などの臨床結果が挙げられる。がんまたは腫瘍の場合、有効量の薬物は、がん細胞の数を低減させ、腫瘍サイズを低減させ、末梢臓器へのがん細胞浸潤を阻害し（すなわち、ある程度まで緩慢化させまたは望ましくは停止させ）、腫瘍転移を阻害し（すなわち、ある程度まで緩慢化させまたは望ましくは停止させ）、腫瘍成長をある程度まで阻害し、および／または障害に関連付けられる症状の１つまたは複数をある程度まで緩和する効果を有し得る。有効量は、１つまたは複数の投与において投与することができる。本発明の目的のために、薬物、化合物、または医薬組成物の有効量は、直接的または間接的のいずれかで予防または治療処置を達成するために充分な量である。臨床的な文脈において理解されるように、薬物、化合物、または医薬組成物の有効量は、別の薬物、化合物、または医薬組成物との組合せで達成されてもよいし、そうでなくてもよい。したがって、「有効量」は、１つまたは複数の治療剤を投与する文脈で考慮されてよく、１つまたは複数の他の剤との組合せで望ましい結果が達成され得るまたは達成される場合、単一の剤は有効量で与えられると考慮することができる。
【００７６】
本明細書で使用される場合、「担体」には、任意のおよび全ての溶媒、分散媒体、ビヒクル、コーティング、希釈剤、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤、緩衝剤、担体溶液、懸濁液、コロイドなどが含まれる。医薬活性物質のためのそのような媒体および剤の使用は当該技術分野において周知である。任意の従来の媒体または剤が活性成分と不適合である場合を除いて、治療用組成物におけるその使用が想定される。補助的活性成分も組成物中に組み込むことができる。
【００７７】
「医薬配合物」という用語は、活性成分の生物学的活性を有効なものとすることができる形態であり、配合物が投与される対象に許容できない程に毒性である追加の成分を含有しない調製物を指す。そのような配合物は滅菌されている。「薬学的に許容される」賦形剤（ビヒクル、添加剤）は、用いられる活性成分の有効な用量を提供するために対象哺乳動物に合理的に投与できるものである。
【００７８】
本明細書で使用される場合、「治療」という用語は、臨床的な病理の経過中に治療されている個体または細胞の自然経過を変化させるように設計された臨床的介入を指す。治療の望ましい効果としては、疾患進行の速度の減少、病態の改善または緩和、および寛解または予後の改善が挙げられる。例えば、個体は、がんに関連付けられる１つまたは複数の症状が軽減されまたは取り除かれる場合、「治療」が成功しており、これには、がん細胞の増殖の低減（または破壊）、疾患の結果としてもたらされる症状の減少、疾患を患う者のクオリティオブライフの増加、疾患を治療するために必要とされる他の医薬の用量の減少、および／または個体の生存の長期化が挙げられるがこれらに限定されない。
【００７９】
「抗がん」剤は、例えば、がん細胞の殺傷の促進、がん細胞のアポトーシスの誘導、がん細胞の増殖速度の低減、転移の発生もしくは数の低減、腫瘍サイズの低減、腫瘍成長の阻害、腫瘍もしくはがん細胞への血液供給の低減、がん細胞もしくは腫瘍に対する免疫応答の促進、がんの進行の予防もしくは阻害、またはがんを有する対象の寿命の増加により、対象中のがん細胞／腫瘍に負に影響することができる。
【００８０】
本明細書における「抗体」という用語は最も広い意味において使用され、具体的には、それらが所望の生物学的活性を呈する限り、モノクローナル抗体（全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異的抗体（例えば、二重特異的抗体）、および抗体断片を包含する。
【００８１】
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を指し、例えば、集団を構成する個々の抗体は、微量で存在することがある起こり得る変異、例えば天然に存在する変異を除いて同一である。したがって、「モノクローナル」という修飾語は、別々の抗体の混合物ではないという抗体の特徴を指し示す。ある特定の実施形態では、そのようなモノクローナル抗体は、典型的に、標的に結合するポリペプチド配列を含む抗体を含み、標的結合ポリペプチド配列は、複数のポリペプチド配列から単一の標的結合ポリペプチド配列を選択することを含む方法により得られたものである。例えば、選択方法は、複数のクローン、例えば、ハイブリドーマクローン、ファージクローン、または組換えＤＮＡクローンのプールからの独特のクローンの選択であり得る。選択した標的結合配列をさらに変化させて、例えば、標的に対する親和性を向上させ、標的結合配列をヒト化し、細胞培養でのその産生を向上させ、ｉｎ  ｖｉｖｏでの免疫原性を低減させ、多重特異的抗体を作出することなどができること、および、変化した標的結合配列を含む抗体もまた本発明のモノクローナル抗体であることが理解されるべきである。異なる決定基（エピトープ）を対象とする異なる抗体を典型的に含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基を対象とする。特異性に加えて、モノクローナル抗体調製物は、典型的に他の免疫グロブリンにより汚染されていないという点で有利である。
【００８２】
「免疫チェックポイント」という用語は、免疫反応を均衡させるために免疫系の成分に阻害シグナルを提供する免疫系中のタンパク質などの分子を指す。公知の免疫チェックポイントタンパク質には、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１ならびにそのリガンドＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２に加えて、ＬＡＧ−３、ＢＴＬＡ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＴＩＭ３、ＫＩＲが含まれる。ＬＡＧ３、ＢＴＬＡ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＴＩＭ３、およびＫＩＲを含む経路は、ＣＴＬＡ−４およびＰＤ−１依存性経路に類似する免疫チェックポイント経路を構成することが当該技術分野において認識されている（例えば、Pardoll、２０１２年、Nature  Rev  Cancer  １２巻：２５２〜２６４頁；Mellmanら、２０１１年、Nature  ４８０巻：４８０〜４８９頁を参照）。
【００８３】
「ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト」という用語は、その結合パートナーの１つまたは複数のいずれかとのＰＤ−１軸結合パートナーの相互作用を阻害して、ＰＤ−１シグナル伝達軸でのシグナル伝達の結果としてもたらされるＴ細胞機能障害を除去し、結果としてＴ細胞機能（例えば、増殖、サイトカイン産生、標的細胞殺傷）を回復または増進させる分子を指す。本明細書で使用される場合、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストとしては、ＰＤ−１結合アンタゴニスト、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストおよびＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストが挙げられる。
【００８４】
「ＰＤ−１結合アンタゴニスト」という用語は、その結合パートナー、例えばＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２の１つまたは複数とのＰＤ−１の相互作用の結果としてもたらされるシグナル伝達を減少させ、遮断し、阻害し、妨げ、またはそれに干渉する分子を指す。一部の実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、その結合パートナーの１つまたは複数へのＰＤ−１の結合を阻害する分子である。特定の態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２へのＰＤ−１の結合を阻害する。例えば、ＰＤ−１結合アンタゴニストとしては、抗ＰＤ−１抗体、その抗原結合性断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチドならびにＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２とのＰＤ−１の相互作用の結果としてもたらされるシグナル伝達を減少させ、遮断し、阻害し、妨げまたはそれに干渉する他の分子が挙げられる。一実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤ−１により媒介されるまたはＰＤ−１を通じたＴリンパ球媒介性のシグナル伝達で発現される細胞表面タンパク質を通じた負の共刺激シグナルを低減させて、機能障害のＴ細胞の機能障害を小さくさせる（例えば、抗原認識へのエフェクター応答を増進させる）。一部の実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは抗ＰＤ−１抗体である。特定の態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストはＭＤＸ−１１０６（ニボルマブ）である。別の特定の態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストはＭＫ−３４７５（ペムブロリズマブ）である。別の特定の態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストはＣＴ−０１１（ピジリズマブ）である。別の特定の態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストはＡＭＰ−２２４である。
【００８５】
「ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニスト」という用語は、その結合パートナー、例えばＰＤ−１またはＢ７−１の１つまたは複数のいずれかとのＰＤ−Ｌ１の相互作用の結果としてもたらされるシグナル伝達を減少させ、遮断し、阻害し、妨げ、またはそれに干渉する分子を指す。一部の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、その結合パートナーへのＰＤ−Ｌ１の結合を阻害する分子である。特定の態様では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤ−１および／またはＢ７−１へのＰＤ−Ｌ１の結合を阻害する。一部の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストとしては、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、その抗原結合性断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチドおよびその結合パートナー、例えばＰＤ−１またはＢ７−１の１つまたは複数とのＰＤ−Ｌ１の相互作用の結果としてもたらされるシグナル伝達を減少させ、遮断し、阻害し、妨げまたはそれに干渉する他の分子が挙げられる。一実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１により媒介されるまたはＰＤ−Ｌ１を通じたＴリンパ球媒介性のシグナル伝達で発現される細胞表面タンパク質を通じた負の共刺激シグナルを低減させて、機能障害のＴ細胞の機能障害を小さくさせる（例えば、抗原認識へのエフェクター応答を増進させる）。一部の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。特定の態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体はＹＷ２４３．５５．Ｓ７０である。別の特定の態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体はＭＤＸ−１１０５である。さらに別の特定の態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体はＭＰＤＬ３２８０Ａである。さらに別の特定の態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体はＭＥＤＩ４７３６である。
【００８６】
「ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニスト」という用語は、その結合パートナー、例えばＰＤ−１の１つまたは複数のいずれかとのＰＤ−Ｌ２の相互作用の結果としてもたらされるシグナル伝達を減少させ、遮断し、阻害し、妨げ、またはそれに干渉する分子を指す。一部の実施形態では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、その結合パートナーの１つまたは複数へのＰＤ−Ｌ２の結合を阻害する分子である。特定の態様では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２の結合を阻害する。一部の実施形態では、ＰＤ−Ｌ２アンタゴニストとしては、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、その抗原結合性断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチドおよびその結合パートナー、例えばＰＤ−１の１つまたは複数のいずれかとのＰＤ−Ｌ２の相互作用の結果としてもたらされるシグナル伝達を減少させ、遮断し、阻害し、妨げまたはそれに干渉する他の分子が挙げられる。一実施形態では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ２により媒介されるまたはＰＤ−Ｌ２を通じたＴリンパ球媒介性のシグナル伝達で発現される細胞表面タンパク質を通じた負の共刺激シグナルを低減させて、機能障害のＴ細胞の機能障害を小さくさせる（例えば、抗原認識へのエフェクター応答を増進させる）。一部の実施形態では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストはイムノアドヘシンである。
【００８７】
「免疫チェックポイント阻害剤」は、免疫チェックポイントタンパク質の機能を阻害する任意の化合物を指す。阻害には、機能の低減および完全な遮断が含まれる。特に、免疫チェックポイントタンパク質はヒト免疫チェックポイントタンパク質である。したがって、免疫チェックポイントタンパク質阻害剤は、特に、ヒト免疫チェックポイントタンパク質の阻害剤である。
【００８８】
「細胞外マトリックス分解タンパク質」（extracellular  matrix  degradative  protein）または「細胞外マトリックス分解タンパク質」（extracellular  matrix  degrading  protein）は、細胞マトリックスの完全性に作用する任意のタンパク質を指し、これは特に、完全もしくは部分的な分解または前記マトリックスの構成要素の少なくとも１つもしくはこれらの様々な構成要素を統合する結合への不安定化作用を発揮する。
【００８９】
本明細書において「アブスコパル効果」は、腫瘍の局在化された治療の範囲の外側での腫瘍の縮小として言及される。例えば、免疫チェックポイント療法での全身性治療と組み合わせた本明細書で提供されるウイルス組成物での局在化された治療は、ウイルス組成物を注射されていない遠位の腫瘍においてアブスコパル効果を結果としてもたらすことができる。
ＩＩ．ウイルス組成物
【００９０】
本開示の実施形態は、Ｎ１Ｌ遺伝子の欠失、マトリックス分解タンパク質遺伝子、アデノウイルス死タンパク質（ＡＤＰ）遺伝子、および／またはシトクロムｐ４５０遺伝子を含むように操作された１つまたは複数のウイルスを含むウイルス組成物に関する。特定の態様では、ウイルス組成物は、リラキシン遺伝子を発現するように操作されたウイルス、アデノウイルス死タンパク質（ＡＤＰ）遺伝子を過剰発現するように操作されたウイルス、Ｎ１Ｌ遺伝子を欠失するように操作されたワクシニアウイルス、および／またはラットシトクロムｐ４５０  ２Ｂ１遺伝子を発現するように操作された単純ヘルペスウイルスを含む。対象は、局所および／またはアブスコパル効果を誘導するためにこれらのウイルスの１つ、２つ、３つ、または４つを投与されてよい。ウイルス組成物は、免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせて投与されてよい。
Ａ．細胞外マトリックスタンパク質を発現するウイルス
【００９１】
一態様では、遺伝子療法の送達（例えば、ウイルスの分配）および腫瘍内侵入は、腫瘍細胞の細胞外マトリックス（ＥＣＭ）またはその成分を分解するタンパク質または剤により増進される。
【００９２】
細胞外マトリックス（ＥＣＭ）は、周囲の細胞への構造的および生化学的なサポートを提供する細胞により分泌される細胞外分子の集合物である。多細胞性は異なる多細胞系列で独立して進化したので、ＥＣＭの組成は多細胞構造間で異なるが、細胞接着、細胞間通信および分化はＥＣＭの共通の機能である。細胞外マトリックス分解タンパク質により標的化され得るＥＣＭの成分としては、コラーゲン、エラスチン、ヒアルロン酸、フィブロネクチンおよびラミニンが挙げられる。
１．リラキシン
【００９３】
本明細書で提供される方法に使用できる１つの細胞外マトリックス分解タンパク質はリラキシンである。リラキシンは、インスリンおよびインスリン様成長因子に構造的に関連する６ｋＤａのペプチドホルモンである。それは主に黄体および子宮内膜中で産生され、その血清レベルは妊娠中に大きく増加する（Sherwoodら、１９８４年）。リラキシンは、コラーゲンが過剰発現された時のコラーゲン発現の強力な阻害剤であるが、他のコラーゲンとは対照的に、コラーゲン発現の基礎レベルを著しく変化させない。それは様々なＭＭＰ、例えば、ＭＭＰ２、ＭＭＰ３、およびＭＭＰ９の発現を促進させてコラーゲンを分解し、それにより結合組織および基底膜が分解されて産道の細胞外マトリックスの破壊に繋がる。これに加えて、リラキシンによるＭＭＰ１およびＭＭＰ３の発現の促進もまた肺、心臓、皮膚、腸、乳腺、血管および精管において観察されており、これらにおいてリラキシンはコラーゲンの過剰発現を防止する阻害剤としての役割を果たす（Qin,  X.ら、１９９７年ａ；Qin,  X.ら、１９９７年ｂ）。
【００９４】
リラキシンタンパク質またはリラキシンタンパク質をコードする核酸の投与は、腫瘍細胞の周囲の細胞外マトリックスの主成分であるコラーゲンの分解を誘導して結合組織および基底膜を破壊し、それにより細胞外マトリックスの分解を結果としてもたらすことができる。特に、結合組織により堅固に取り囲まれた腫瘍組織に投与された時に、リラキシンと組み合わせた腫瘍抑制因子遺伝子療法の投与は、向上した抗腫瘍有効性を呈する。
【００９５】
リラキシンタンパク質は、全長リラキシンまたは米国特許第５，０２３，３２１号に記載されるように生物学的活性を保持するリラキシン分子の部分であってよい。特に、リラキシンは、組換えヒトリラキシン（Ｈ２）またはリラキシン様活性を有する他の活性剤、例えば、結合したリラキシンを受容体から競合的に解離させる剤である。リラキシンは当業者に公知の任意の方法により調製することができ、好ましくは米国特許第４，８３５，２５１号に記載されるように為される。リラキシンアナログまたはその誘導体は米国特許第５，８１１，３９５号に記載されており、ペプチド合成は米国特許出願公開第２０１１００３９７７８号に記載されている。
【００９６】
本明細書で提供される方法に使用され得る例示的なアデノウイルスのリラキシンは、Ｋｉｍら（２００６年）に記載されている。簡潔に述べれば、リラキシン発現、複製コンピテント（Ａｄ−ΔＥ１Ｂ−ＲＬＸ）アデノウイルスは、リラキシン遺伝子をＥ３アデノウイルス領域に挿入することにより生成される。
２．ヒアルロニダーゼ
【００９７】
一部の実施形態では、ヒアルロン酸などの細胞外マトリックス中に通常存在する多糖を加水分解できる任意の物質を投与することができる。特に、本発明において使用される細胞外マトリックス分解タンパク質はヒアルロニダーゼであり得る。ヒアルロナン（またはヒアルロン酸）は、脊椎動物の細胞外マトリックスの遍在的な構成要素である。グルクロン酸およびグルコサミン［Ｄ−グルクロン酸１−β−３）Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン（１−ｂ−４）］に基づくこの線状多糖は、非常に粘性の溶液を形成するその特性によりマトリックスの物理化学的特徴に影響を及ぼすことができる。ヒアルロン酸はまた、細胞の表面上に位置する様々な受容体および結合タンパク質と相互作用する。それは、多数の生物学的プロセス、例えば、受精、胚発生、細胞の遊走および分化、創傷治癒、炎症、腫瘍成長および転移の形成に関与する。
【００９８】
ヒアルロン酸はヒアルロニダーゼにより加水分解され、その加水分解は細胞外マトリックスの解体に繋がる。したがって、ヒアルロニダーゼ活性を持つ任意の物質、例えば、Kreil（Protein  Sci.、１９９５年、４巻：１６６６〜１６６９頁）に記載されるようなヒアルロニダーゼが本発明の方法において使用するために好適であると想定される。ヒアルロニダーゼは、哺乳動物、爬虫類動物または膜翅目動物のヒアルロン酸グリカノヒドロラーゼ、ヒルの唾液腺のヒアルロン酸グリカノヒドロラーゼ、または細菌、特にstreptococcus、pneumococcusおよびclostridiumのヒアルロン酸リアーゼに由来するヒアルロニダーゼであり得る。ヒアルロニダーゼの酵素活性は、従来技術、例えば、HynesおよびFerretti（Methods  Enzymol、１９９４年、２３５巻：６０６〜６１６頁）またはBaileyおよびLevine（J.  Pharm.  Biomed.  Anal.、１９９３年、１１巻：２８５〜２９２頁）に記載される従来技術により評価することができる。
３．デコリン
【００９９】
小さいロイシンリッチのプロテオグリカンであるデコリンは、細胞外マトリックスの遍在的な成分であり、コラーゲン原線維との会合状態で優先的に見出される。デコリンはコラーゲン原線維に結合し、個々の三重らせんコラーゲン分子の横方向の組立てを遅延させ、原線維の直径の減少を結果としてもたらす。加えて、デコリンは、細胞外マトリックス成分、例えばフィブロネクチンおよびトロンボスポンジンの細胞との相互作用をモジュレートすることができる。さらには、デコリンは、マトリックスメタロプロテアーゼコラゲナーゼの誘導により細胞外マトリックスのリモデリングに影響することができる。これらの観察は、デコリンがいくつものレベルで細胞外マトリックスの産生および組立てを調節し、それゆえChoiら（Gene  Therapy、１７巻：１９０〜２０１頁、２０１０年）およびXuら（Gene  Therapy、２２巻（３号）：３１〜４０頁、２０１５年）に記載されるように結合組織のリモデリングにおいて目立った役割を有することを示唆する。
【０１００】
本明細書で提供される方法に使用され得る例示的なアデノウイルスのデコリンはChoiら（Gene  Therapy、１７巻：１９０〜２０１頁、２０１０年）に記載されている。簡潔に述べれば、デコリンを発現する複製コンピテント（Ａｄ−ΔＥ１Ｂ−ＤＣＮＧ）アデノウイルスは、デコリン遺伝子をＥ３アデノウイルス領域に挿入することにより生成される。本明細書で提供される方法に使用され得る別の例示的なアデノウイルスのデコリンはXuら（Gene  Therapy、２２巻（３号）：３１〜４０頁、２０１５年）に記載されている。同様に、デコリンを発現する複製コンピテント（Ａｄ．ｄｃｎ）アデノウイルスは、デコリン遺伝子をＥ３アデノウイルス領域に挿入することにより生成される。
【０１０１】
米国特許第８，０６７，５６７号に記載される改変ＴＥＲＴプロモーター腫瘍溶解性アデノウイルス、ＰＣＴ／ＫＲ２０１１／００４６９３に記載されるＨＲＥ−Ｅ２Ｆ−ＴＥＲＴハイブリッドプロモーター腫瘍溶解性アデノウイルス、米国特許出願第１１／８１６，７５１号に記載されるデコリン遺伝子を発現するウイルス、米国特許出願第１０／５９９，５２１号に記載されるリラキシン遺伝子を発現するウイルスを含む追加の例示的なアデノウイルスを方法において使用することができる（これらの全ては参照することにより組み込まれる）。
Ｂ．ＡＤＰの過剰発現を含むウイルス
【０１０２】
本開示のある特定の実施形態は、アデノウイルス死タンパク質（ＡＤＰ）（すなわち、Ｅ３  １１．６Ｋタンパク質）を過剰発現するように操作されたウイルスに関する。
【０１０３】
ウイルスが組換えアデノウイルスである場合、ＡＤＰの過剰発現は数多くの方法で達成することができる（例えば、ＵＳ２０１０００３４７７６に記載されている；参照することにより本明細書に組み込まれる）。一般に、Ｅ３  ｍＲＮＡのいずれかについてスプライス部位を除去するＥ３領域中の任意の種類の欠失は、Ｅ３プレｍＲＮＡ分子のより多くがＡＤＰのｍＲＮＡにプロセシングされる限り、ＡＤＰのｍＲＮＡの過剰発現に繋がる。ＡｄベクターにおいてＡＤＰの過剰発現を達成する他の手段としては、ＡＤＰの遺伝子を挟む部位におけるプレｍＲＮＡのスプライシングおよび切断／ポリアデニル化シグナルの挿入；Ａｄゲノム中の様々な部位に挿入された別のプロモーター、例えばヒトサイトメガロウイルスプロモーターからのＡＤＰの発現；およびＡＤＰの翻訳の内部からの開始を可能とするＡＤＰ配列、例えばＡｄトリパータイトリーダーまたはウイルス内部リボソーム開始配列の５’側の配列と共に、別のＡｄ  ＭＲＮＡの遺伝子の後ろにＡＤＰの遺伝子を挿入することが挙げられるがこれらに限定されない。
【０１０４】
本開示によるベクターにより発現されるＡＤＰは、天然に存在する全長ＡＤＰアミノ酸配列またはＡＤＰを発現するベクターにベクターを含有する細胞を溶解する能力を付与して、ベクターの複製されたコピーが感染された細胞から放出されるようにするそのバリアントを含む任意のポリペプチドである。好ましい全長ＡＤＰは、Ａｄ１、Ａｄ２、ＡｄＳまたはＡｄ６によりコードされるＡＤＰのアミノ酸配列を含む。ＡＤＰバリアントとしては、そのようなバリアントが細胞内でベクターにより発現された時に細胞を溶解する能力を保持する限り、天然に存在するアデノウイルス死タンパク質の断片および欠失変異体の他に、全長分子、断片および保存的アミノ酸置換を含有する欠失変異体が挙げられる。
【０１０５】
ある特定の態様では、ＡＤＰを過剰発現するように操作されたウイルスは、ＶＲＸ−００７と称される血清型５アデノウイルス（すなわち、Ｅ３領域のほとんどを欠失し、Ｅ３−１１．６Ｋアデノウイルス死タンパク質（ＡＤＰ）を過剰発現するように操作された腫瘍溶解性アデノウイルスベクター）である。ＶＲＸ−００７はまた、他の治療遺伝子を発現するように改変されてもよい。ＶＲＸ−００７の構築は以前に記載されている（Doronin  ２００３年；Tollefson  １９９６年；Lichtenstein  ２００４年）。
Ｃ．Ｎ１Ｌの欠失を含むワクシニアウイルス
【０１０６】
本開示のある特定の実施形態は、Ｎ１Ｌの欠失を含むワクシニアウイルスに関する。ある特定の態様では、Ｎ１Ｌを欠失するように操作されたワクシニアウイルスは、Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｒｅｓｅｒｖｅ株、Ｗｙｅｔｈ株およびＬｉｓｔｅｒ株に由来する。これらの各株の様々な欠失変異体が作出されている。ある特定の態様では、用いられるＮ１Ｌ欠失誘導体ＶＶＬ  １５Ｎ１Ｌは、Wangら、２０１５年に記載されている（ＰＣＴ公開ＷＯ２０１５／１５０８０９Ａ１）。ＶＶＬ  １５Ｎ１Ｌベクターはまた、ＩＬ−１２および／またはリラキシンが挙げられるがこれらに限定されない治療遺伝子を発現するように改変されてもよい。一部の態様では、ＶＶＬ  １５Ｎ１Ｌベクターはまた、免疫チェックポイント阻害剤およびＰＩ３Ｋ阻害剤と組み合わせられる。特定の態様では、ＰＩ３ＫデルタまたはＰＩ３Ｋガンマ／デルタ阻害剤が、ウイルスベクターの静脈内投与を増進させるために投与される。１つの特定の方法では、対象は、静脈内ＶＶＬ  １５Ｎ１Ｌベクターの前（例えば、数時間前）にＰＩ３Ｋデルタ阻害剤を投与される。
Ｄ．シトクロムｐ４５０  ２Ｂ１遺伝子を発現する単純ヘルペスウイルス
【０１０７】
本開示の実施形態は、一部の態様では、シトクロムｐ４５０  ２Ｂ１遺伝子を発現するウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルス）に関する。ある特定の態様では、ラットシトクロムｐ４５０  ２Ｂ１遺伝子を発現するように操作された単純ヘルペスウイルスは、欠失したＩＣＰ６遺伝子を有し、（Aghiら  １９９９年）にさらに記載されるようにｒＲｐ４５０と称される。ベクターは、シクロホスファミド（ＣＰＡ）感受性ラットシトクロムｐ４５０  ２Ｂ１、およびガンシクロビル（ＧＣＶ）感受性単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（ＨＳＶ−ＴＫ）遺伝子の発現をコードする。シトクロムｐ４５０およびＨＳＶ−ＴＫ遺伝子の発現は、それぞれＣＰＡおよびＧＣＶプロドラッグのそれらの治療活性代謝物への変換を結果としてもたらす。特定の態様では、ｒＲｐ４５０は、ＣＰＡおよびＧＣＶと組み合わせて投与される。使用され得るヘルペスウイルスの追加の例は米国特許第６，６０２，４９９号（参照することにより本明細書に組み込まれる）に記載されている。
ＩＩＩ．核酸
【０１０８】
核酸は、当業者に公知の任意の技術により調製することができる。合成核酸、特に合成オリゴヌクレオチドの非限定的な例としては、欧州特許出願第２６６，０３２号に記載されるものなどのリン酸トリエステル、亜リン酸塩またはホスホロアミダイト化学および固相技術を使用して、またはFroehlerら、１９８６年、および米国特許第５，７０５，６２９号に記載されるデオキシヌクレオシドＨ−ホスホネート中間体を介してｉｎ  ｖｉｔｒｏ化学合成により調製された核酸が挙げられる。酵素的に製造される核酸の非限定的な例としては、ＰＣＲ（商標）などの増幅反応（例えば、米国特許第４，６８３，２０２号および米国特許第４，６８２，１９５号を参照）、または米国特許第５，６４５，８９７号に記載されるオリゴヌクレオチドの合成において酵素により製造されるものが挙げられる。生物学的に製造される核酸の非限定的な例としては、生細胞中での組換え核酸の製造、例えば、細菌中での組換えＤＮＡベクターの製造が挙げられる（例えば、Sambrookら、１９８９年を参照）。
【０１０９】
核酸は、配列自体の長さにかかわらず、プロモーター、エンハンサー、ポリアデニル化シグナル、制限酵素部位、マルチクローニングサイト、コーディングセグメントなどが挙げられるがこれらに限定されない他の核酸配列と組み合わせられて、１つまたは複数の核酸構築物を作出することができる。全体の長さは、核酸構築物の間でかなり変動し得る。したがって、ほぼあらゆる長さの核酸セグメントを用いることができ、全体の長さは、好ましくは、意図する組換え核酸プロトコールにおける調製または使用の容易さにより限定される。
Ａ．発現ベクターによる核酸送達
【０１１０】
本明細書で提供されるベクターは主に、調節された真核性プロモーター（すなわち、構成的、誘導性、抑制可能、組織特異的）の制御下で治療遺伝子（例えば、ＩＬ−１２などの免疫刺激因子遺伝子および／またはシトクロムｐ４５０のようなプロドラッグ変換遺伝子および／またはＡＤＰのようなウイルス由来溶解促進遺伝子）および／または細胞外マトリックス分解遺伝子（例えば、リラキシン）を発現するように設計される。一部の態様では、治療遺伝子は、ベクター中で共発現されてよい。別の態様では、治療遺伝子は、細胞外マトリックス分解遺伝子と共発現されてよい。また、ベクターは、他の理由がなければ、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのそれらの取り扱いを容易にする選択可能マーカーを含有してよい。
【０１１１】
当業者は、標準的な組換え技術を通じてベクターを構築する能力を充分に備えている（例えば、Sambrookら、２００１年およびAusubelら、１９９６年を参照；共に参照することにより本明細書に組み込まれる）。ベクターとしては、プラスミド、コスミド、ウイルス（バクテリオファージ、動物ウイルス、および植物ウイルス）、および人工染色体（例えば、ＹＡＣ）、例えば、レトロウイルスベクター（例えば、モロニーマウス白血病ウイルスベクター（ＭｏＭＬＶ）、ＭＳＣＶ、ＳＦＦＶ、ＭＰＳＶ、ＳＮＶなどに由来する）、レンチウイルスベクター（例えば、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、ＳＩＶ、ＢＩＶ、ＦＩＶなどに由来する）、アデノウイルス（Ａｄ）ベクター（その複製コンピテント、複製欠損およびガットレス（gutless）形態を含む）、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、シミアンウイルス４０（ＳＶ−４０）ベクター、ウシパピローマウイルスベクター、エプスタイン・バーウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、Ｈａｒｖｅｙマウス肉腫ウイルスベクター、マウス乳腺腫瘍ウイルスベクター、ラウス肉腫ウイルスベクター、パルボウイルスベクター、ポリオウイルスベクター、水胞性口内炎ウイルスベクター、マラバウイルスベクターおよびＢ群アデノウイルスであるエンアデノツシレブ（enadenotucirev）ベクターが挙げられるがこれらに限定されない。
１．ウイルスベクター
【０１１２】
本開示のある特定の態様において、治療遺伝子をコードするウイルスベクターが提供され得る。組換えウイルスベクターの生成において、非必須遺伝子は、典型的に、異種（または非天然）タンパク質の遺伝子またはコーディング配列と置き換えられる。ウイルスベクターは、ウイルス配列を利用して細胞中に核酸および場合によりタンパク質を導入する発現構築物の一種である。ある特定のウイルスが受容体媒介性のエンドサイトーシスを介して細胞に感染しまたは細胞内に入り、宿主細胞のゲノムに組み込まれてウイルス遺伝子を安定的かつ効率的に発現できることにより、それらは細胞（例えば、哺乳動物細胞）中への外来核酸の移入のための魅力的な候補となった。本発明のある特定の態様の核酸を送達するために使用され得るウイルスベクターの非限定的な例が以下に記載される。
【０１１３】
レンチウイルスは複雑なレトロウイルスであり、一般的なレトロウイルス遺伝子ｇａｇ、ｐｏｌ、およびｅｎｖに加えて、調節または構造機能を有する他の遺伝子を含有する。レンチウイルスベクターは当該技術分野において周知である（例えば、Naldiniら、１９９６年；Zuffereyら、１９９７年；Blomerら、１９９７年；米国特許第６，０１３，５１６号および同第５，９９４，１３６号を参照）。
【０１１４】
組換えレンチウイルスベクターは非分裂細胞に感染することができ、核酸配列のｉｎ  ｖｉｖｏおよびｅｘ  ｖｉｖｏの両方での遺伝子移入および発現のために使用することができる。例えば、非分裂細胞に感染することができる組換えレンチウイルスであって、パッケージング機能、すなわちｇａｇ、ｐｏｌおよびｅｎｖの他に、ｒｅｖおよびｔａｔを持つ２つまたはそれより多くのベクターにより好適な宿主細胞にトランスフェクトされる、組換えレンチウイルスが米国特許第５，９９４，１３６号（参照することにより本明細書に組み込まれる）に記載されている。
ａ．アデノウイルスベクター
【０１１５】
腫瘍抑制因子および／または細胞外マトリックス分解遺伝子の１つの送達方法はアデノウイルス発現ベクターの使用を含む。アデノウイルスベクターはゲノムＤＮＡへの組込み能力が低いことが公知であるが、この特徴は、これらのベクターによりもたらされる遺伝子移入の高い効率により埋め合わせされる。アデノウイルス発現ベクターとしては、（ａ）構築物のパッケージングをサポートし、（ｂ）その中にクローニングされた組換え遺伝子構築物を最終的に発現するために充分なアデノウイルス配列を含有する構築物が挙げられる。
【０１１６】
アデノウイルスの増殖および取り扱いは当業者に公知であり、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏで広範な宿主の範囲を呈する。この群のウイルスは、高力価、例えば、１ｍｌ当たり１０９〜１０１１のプラーク形成単位で得ることができ、高度に感染性である。アデノウイルスのライフサイクルは、宿主細胞ゲノムへの組込みを必要としない。アデノウイルスベクターにより送達される外来遺伝子はエピソーム性であり、したがって宿主細胞に対して低い遺伝毒性を有する。野生型アデノウイルスを用いるワクチン接種の研究において副作用は報告されておらず（Couchら、１９６３年；Topら、１９７１年）、ｉｎ  ｖｉｖｏでの遺伝子移入ベクターとしてのそれらの安全性および治療可能性を実証している。
【０１１７】
３６ｋｂの線状の二本鎖ＤＮＡウイルスというアデノウイルスの遺伝学的編成の知識は、最大７ｋｂの外来配列によるアデノウイルスＤＮＡの大きい部分の置換を可能とする（GrunhausおよびHorwitz、１９９２年）。レトロウイルスとは対照的に、アデノウイルスＤＮＡは潜在的な遺伝毒性なしにエピソームとして複製できるので、宿主細胞のアデノウイルス感染は染色体への組込みを結果としてもたらさない。また、アデノウイルスは構造的に安定であり、大規模な増幅後にゲノム再構成は検出されていない。
【０１１８】
アデノウイルスは、その中間的なサイズのゲノム、取り扱いの容易さ、高力価、標的細胞の広い範囲および高い感染力のため、遺伝子移入ベクターとして使用するために特に好適である。ウイルスゲノムの両末端は、ウイルスＤＮＡの複製およびパッケージングのために必要なシスエレメントである１００〜２００塩基対の逆位反復（ＩＴＲ）を含有する。ゲノムの初期（Ｅ）および後期（Ｌ）領域は、ウイルスＤＮＡ複製が始まることにより分割される異なる転写単位を含有する。Ｅ１領域（Ｅ１ＡおよびＥ１Ｂ）は、ウイルスゲノムおよび小数の細胞遺伝子の転写の調節に関与するタンパク質をコードする。Ｅ２領域（Ｅ２ＡおよびＥ２Ｂ）の発現は、ウイルスＤＮＡ複製のためのタンパク質の合成を結果としてもたらす。これらのタンパク質はＤＮＡ複製、後期遺伝子の発現および宿主細胞の遮断に関与する（Renan、１９９０年）。ウイルスカプシドタンパク質の大部分を含む後期遺伝子の産物は、後期主要プロモーター（ＭＬＰ）により生じる単一の一次転写物の著しいプロセシング後に初めて発現される。（１６．８ｍ．ｕ．に位置する）ＭＬＰは、感染の後期に特に効率的であり、このプロモーターから生じる全てのｍＲＮＡは、それらを翻訳のための特定のｍＲＮＡとする５’−トリパータイトリーダー（ＴＰＬ）配列を持つ。
【０１１９】
本明細書で提供される組換えアデノウイルスは、シャトルベクターとプロウイルスベクターとの相同組換えにより生成することができる。２つのプロウイルスベクター間の組換えが可能なことにより、野生型アデノウイルスはこのプロセスから生成することができる。したがって、ウイルスの単一のクローンが個々のプラークから単離され、そのゲノム構造が調べられる。
【０１２０】
アデノウイルスベクターは、複製コンピテント、複製欠陥型、または条件付き欠陥型のものであってよく、アデノウイルスベクターの性質は本発明の実施の成功にとって極めて重要であるとは思われない。アデノウイルスは、４２の異なる公知の血清型または亜群Ａ〜Ｆのいずれであってもよい。亜群Ｃのアデノウイルス５型は、本発明において使用するための条件付き複製欠陥型アデノウイルスベクターを得るための特定の出発材料である。この理由は、アデノウイルス５型は多くの生化学的および遺伝学的情報が公知のヒトアデノウイルスであり、ベクターとしてアデノウイルスを用いるほとんどの構築のために歴史的に使用されてきたからである。しかしながら、アデノウイルスの他の血清型を同様に利用することができる。
【０１２１】
コーディング配列が除去された位置でアデノウイルスベクターに核酸を導入することができる。例えば、複製欠陥型アデノウイルスベクターは、Ｅ１コーディング配列が除去されていてもよい。目的の遺伝子をコードするポリヌクレオチドは、Karlssonら（１９８６年）に記載されるようにＥ３置換ベクター中の欠失したＥ３領域の代わりにまたはＥ４領域中に挿入されてよく、ヘルパー細胞株またはヘルパーウイルスがＥ４の欠陥を補完する。
【０１２２】
複製欠損アデノウイルスベクターの生成および繁殖は、ヘルパー細胞株を用いて行うことができる。２９３と称される１つの独特のヘルパー細胞株は、Ａｄ５  ＤＮＡ断片によりヒト胎児腎臓細胞から形質転換されたものであり、Ｅ１タンパク質を構成的に発現する（Grahamら、１９７７年）。Ｅ３領域はアデノウイルスゲノムに必ずしも必要でないので（JonesおよびShenk、１９７８年）、２９３細胞の助けと共にアデノウイルスベクターは、Ｅ１、Ｅ３、または両方の領域のいずれかに外来ＤＮＡを持つ（GrahamおよびPrevec、１９９１年）。
【０１２３】
ヘルパー細胞株は、ヒト細胞、例えば、ヒト胎児腎臓細胞、筋肉細胞、造血細胞または他のヒト胚性間葉もしくは上皮細胞に由来するものであってよい。または、ヘルパー細胞は、ヒトアデノウイルスに許容的な他の哺乳動物種の細胞に由来するものであってよい。そのような細胞としては、例えば、Ｖｅｒｏ細胞または他のサル胚性間葉もしくは上皮細胞が挙げられる。上記の通り、特定のヘルパー細胞株は２９３である。
【０１２４】
組換えアデノウイルスを製造する方法は、米国特許第６７４０３２０号（参照することにより本明細書に組み込まれる）など、当該技術分野において公知である。また、Racherら（１９９５年）は、２９３細胞を培養し、アデノウイルスを繁殖させる改良された方法を開示している。１つのフォーマットにおいて、天然細胞凝集物は、１００〜２００ｍｌの培地を含有する１リットルのシリコン処理したスピナーフラスコ（Ｔｅｃｈｎｅ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＫ）中に個々の細胞を接種することにより生育される。４０ｒｐｍでの撹拌後、トリパンブルーを用いて細胞生存能力が推定される。別のフォーマットでは、Ｆｉｂｒａ−Ｃｅｌマイクロキャリア（Ｂｉｂｂｙ  Ｓｔｅｒｌｉｎ、Ｓｔｏｎｅ、ＵＫ）（５ｇ／ｌ）が以下の通りに用いられる。５ｍｌの培地中に再懸濁した細胞接種物を２５０ｍｌのエルレンマイヤーフラスコ中の担体（５０ｍｌ）に加え、時々かき混ぜて１〜４時間静置する。次に培地を５０ｍｌの新鮮な培地で置き換え、振とうを開始させる。ウイルスの産生のために、細胞を約８０％コンフルエンスまで生育させた後、培地を（２５％の最終体積まで）置き換え、０．０５のＭＯＩでアデノウイルスを加える。培養物を終夜静置した後、体積を１００％まで増加させ、さらに７２時間の振とうを開始させる。
ｂ．レトロウイルスベクター
【０１２５】
さらに、ウイルス組成物はレトロウイルスベクターを含んでよい。レトロウイルスは、逆転写のプロセスにより感染した細胞中でそれらのＲＮＡを二本鎖ＤＮＡに変換する能力により特徴付けられる一群の一本鎖ＲＮＡウイルスである（Coffin、１９９０年）。次に、結果として生じるＤＮＡは、細胞染色体中にプロウイルスとして安定的に組み込まれ、ウイルスタンパク質の合成を指示する。組込みは、レシピエント細胞およびその子孫においてウイルス遺伝子配列の保持を結果としてもたらす。レトロウイルスゲノムは、３つの遺伝子、ｇａｇ、ｐｏｌ、およびｅｎｖを含有し、これらはカプシドタンパク質、ポリメラーゼ酵素、およびエンベロープ成分をそれぞれコードする。ｇａｇ遺伝子の上流に見出される配列は、ビリオンへのゲノムのパッケージングのためのシグナルを含有する。２つの長鎖末端反復（ＬＴＲ）配列がウイルスゲノムの５’および３’末端に存在する。これらは強いプロモーターおよびエンハンサー配列を含有し、宿主細胞ゲノム中への組込みのためにも必要とされる（Coffin、１９９０年）。
【０１２６】
レトロウイルスベクターを構築するために、目的の遺伝子をコードする核酸はある特定のウイルス配列の位置においてウイルスゲノム中に挿入されて、複製欠陥型のウイルスが製造される。ビリオンを製造するために、ｇａｇ、ｐｏｌ、およびｅｎｖ遺伝子を含有するがＬＴＲおよびパッケージング成分を有しないパッケージング細胞株が構築される（Mannら、１９８３年）。レトロウイルスのＬＴＲおよびパッケージング配列と共にｃＤＮＡを含有する組換えプラスミドが（例えばリン酸カルシウム沈殿により）この細胞株中に導入される場合、パッケージング配列により、組換えプラスミドのＲＮＡ転写物がウイルス粒子中にパッケージングされ、次にそれが培養培地中に分泌されることが可能となる（NicolasおよびRubenstein、１９８８年；Temin、１９８６年；Mannら、１９８３年）。組換えレトロウイルスを含有する培地が次に回収され、任意選択で濃縮され、遺伝子移入のために使用される。レトロウイルスベクターは広範な細胞種に感染することができる。しかしながら、組込みおよび安定発現は宿主細胞の分裂を必要とする（Paskindら、１９７５年）。
【０１２７】
欠陥型レトロウイルスベクターの使用に関する懸念は、パッケージング細胞中で野生型複製コンピテントウイルスが現れる可能性があることである。これは、ｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ配列の上流の組換えウイルス挿入物からのインタクトな配列が宿主細胞ゲノム中に組み込まれる組換え事象の結果としてもたらされ得る。しかしながら、組換えの可能性を大きく減少させるパッケージング細胞株が利用可能である（Markowitzら、１９８８年；Hersdorfferら、１９９０年）。
ｃ．アデノ随伴ウイルスベクター
【０１２８】
アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）は、高頻度に組み込まれ、非分裂細胞に感染することができ、したがって哺乳動物細胞への遺伝子の送達のために有用であるので、本開示において使用するための魅力的なベクター系である（Muzyczka、１９９２年）。ＡＡＶは、広範な宿主範囲に感染力を有し（Tratschinら、１９８４年；Laughlinら、１９８６年；Lebkowskiら、１９８８年；McLaughlinら、１９８８年）、すなわち本発明と共に使用するために適用可能である。ｒＡＡＶベクターの生成および使用に関する詳細は米国特許第５，１３９，９４１号および米国特許第４，７９７，３６８号に記載されている。
【０１２９】
ＡＡＶは、培養細胞において生産的な感染を遂げるために別のウイルス（アデノウイルスまたはヘルペスウイルスファミリーのメンバーのいずれか）との共感染を必要とする点で、従属的なパルボウイルスである（Muzyczka、１９９２年）。ヘルパーウイルスとの共感染がない場合、野生型ＡＡＶゲノムはその末端を通じてヒト第１９染色体に組み込まれ、そこでプロウイルスとして潜伏状態で存在する（Kotinら、１９９０年；Samulskiら、１９９１年）。しかしながら、ＡＡＶ  Ｒｅｐタンパク質も発現されない場合、ｒＡＡＶの組込みは第１９染色体に制約されない（ShellingおよびSmith、１９９４年）。ＡＡＶプロウイルスを持つ細胞がヘルパーウイルスに重感染した場合、ＡＡＶゲノムは染色体または組換えプラスミドから「レスキュー」され、正常な生産的な感染が確立される（Samulskiら、１９８９年；McLaughlinら、１９８８年；Kotinら、１９９０年；Muzyczka、１９９２年）。
【０１３０】
典型的に、組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）ウイルスは、２つのＡＡＶ末端反復に挟まれた目的の遺伝子を含有するプラスミド（McLaughlinら、１９８８年；Samulskiら、１９８９年；それぞれは参照することにより本明細書に組み込まれる）および末端反復を有しない野生型ＡＡＶコーディング配列を含有する発現プラスミド、例えばｐＩＭ４５（McCartyら、１９９１年）を共トランスフェクトさせることにより調製される。細胞はまた、アデノウイルスまたはＡＡＶヘルパー機能のために必要とされるアデノウイルス遺伝子を持つプラスミドに感染させまたはそれをトランスフェクトされる。そのような方法で調製されたｒＡＡＶウイルスストックは、アデノウイルスで汚染されており、アデノウイルスは（例えば、塩化セシウム密度遠心分離により）ｒＡＡＶ粒子から物理的に分離されなければならない。または、ＡＡＶコーディング領域を含有するアデノウイルスベクターまたはＡＡＶコーディング領域およびアデノウイルスヘルパー遺伝子の一部または全てを含有する細胞株を使用することができる（Yangら、１９９４年；Clarkら、１９９５年）。組み込まれたプロウイルスとしてｒＡＡＶ  ＤＮＡを持つ細胞株も使用することができる（Flotteら、１９９５年）。
ｄ．他のウイルスベクター
【０１３１】
本開示における構築物として他のウイルスベクターを用いてもよい。ワクシニアウイルス（Ridgeway、１９８８年；BaichwalおよびSugden、１９８６年；Couparら、１９８８年）およびヘルペスウイルスなどのウイルスに由来するベクターを用いてもよい。それらは、様々な哺乳動物細胞にとっていくつもの魅力的な特徴を与える（Friedmann、１９８９年；Ridgeway、１９８８年；BaichwalおよびSugden、１９８６年；Couparら、１９８８年；Horwichら、１９９０年）。
【０１３２】
ベネズエラウマ脳炎（ＶＥＥ）ウイルスの分子クローン株は、異種ウイルスタンパク質の発現用の複製コンピテントワクチンベクターとして遺伝学的に精密化されている（Davisら、１９９６年）。ＶＥＥ感染は強力なＣＴＬ応答を刺激することが研究により実証されており、ＶＥＥは免疫化のために極めて有用なベクターであり得ることが示唆されている（Caleyら、１９９７年）。
【０１３３】
さらなる実施形態では、核酸は、特定の結合リガンドを発現するように操作された感染性ウイルス内に収容される。したがって、ウイルス粒子は、標的細胞のコグネイト受容体に特異的に結合し、内容物を細胞に送達する。レトロウイルスベクターの特異的標的化を可能とするように設計された新規のアプローチが、ウイルスエンベロープへのラクトース残基の化学的付加によるレトロウイルスの化学修飾に基づいて最近開発された。この修飾は、シアロ糖タンパク質受容体を介して肝細胞への特異的感染を可能とすることができる。
【０１３４】
例えば、レトロウイルスエンベロープタンパク質および特定の細胞受容体に対するビオチン化抗体が使用される組換えレトロウイルスの標的化が設計された。抗体は、ストレプトアビジンを使用することによりビオチン成分を介して連結された（Rouxら、１９８９年）。主要組織適合複合体クラスＩおよびクラスＩＩ抗原に対する抗体を使用して、彼らはｉｎ  ｖｉｔｒｏでエコトロピックウイルスによるそれらの表面抗原を持つ様々なヒト細胞への感染を実証した（Rouxら、１９８９年）。
２．調節エレメント
【０１３５】
本開示において有用なベクター中に含まれる発現カセットは特に、（５’から３’への方向に）タンパク質コーディング配列に作動可能に連結された真核性転写プロモーター、介在配列を含むスプライスシグナル、および転写終結／ポリアデニル化配列を含有する。真核細胞中でタンパク質をコードする遺伝子の転写を制御するプロモーターおよびエンハンサーは複数の遺伝学的エレメントから構成される。細胞機構は、各エレメントが伝達する調節情報を集めて統合することができ、異なる遺伝子が転写調節の別個の、多くの場合複雑なパターンを進化させることを可能とする。本発明の文脈において使用されるプロモーターとしては、構成的、誘導性、および組織特異的プロモーターが挙げられる。
ａ．プロモーター／エンハンサー
【０１３６】
本明細書で提供される発現構築物は、腫瘍抑制因子および／または細胞外マトリックス分解遺伝子の発現を推進するためのプロモーターを含む。プロモーターは、通常、ＲＮＡ合成のための開始部位を位置付けるように機能する配列を含む。これの最もよく知られた例はＴＡＴＡボックスであるが、例えば、哺乳動物の末端デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ遺伝子のプロモーターおよびＳＶ４０後期遺伝子のプロモーターなどの、ＴＡＴＡボックスを欠く一部のプロモーターでは、開始部位自体にある別々のエレメントが開始の場所を定めることを助ける。追加のプロモーターエレメントは転写開始の頻度を調節する。典型的に、これらは、開始部位の３０〜１１０ｂｐ上流の領域に位置するが、多数のプロモーターが開始部位の下流に機能的エレメントを含有することも示されている。コーディング配列をプロモーターの「制御下」にもたらすために、選択されたプロモーターの「下流」（すなわち、３’）に転写リーディングフレームの転写開始部位の５’末端を位置付ける。「上流」のプロモーターは、ＤＮＡの転写を刺激し、コードされたＲＮＡの発現を促進する。
【０１３７】
プロモーターエレメント間の間隔は多くの場合柔軟であり、エレメントが互いに対して逆転しまたは移動した時にプロモーター機能は保存される。ｔｋプロモーターにおいて、活性が低下し始めるまで、プロモーターエレメント間の間隔を５０ｂｐまで増加させることができる。プロモーターに応じて、個々のエレメントは共同してまたは独立して転写を活性化させるように機能できるようである。プロモーターは、核酸配列の転写活性化に関与するシス作用性調節配列を指す「エンハンサー」と組み合わせて使用してもよいし、そうしなくてもよい。
【０１３８】
プロモーターは、コーディングセグメントおよび／またはエクソンの上流に位置する５’非コーディング配列を単離することにより得られ得るような、核酸配列に天然に関連付けられるものであってよい。そのようなプロモーターを「内因性」と称することができる。同様に、エンハンサーは、その核酸配列の下流または上流のいずれかに位置する、その配列に天然に関連付けられるものであってよい。または、その天然の環境において核酸配列に通常関連付けられないプロモーターを指す組換えまたは異種プロモーターの制御下にコーディング核酸セグメントを配置することによりある特定の利点が得られる。組換えまたは異種エンハンサーはまた、その天然の環境において核酸配列に通常関連付けられないエンハンサーを指す。そのようなプロモーターまたはエンハンサーとしては、他の遺伝子のプロモーターまたはエンハンサー、および任意の他のウイルス、または原核もしくは真核細胞から単離されたプロモーターまたはエンハンサー、ならびに「天然に存在する」ものではない、すなわち、異なる転写調節領域の異なるエレメント、および／または発現を変化させる変異を含有するプロモーターまたはエンハンサーを挙げることができる。例えば、組換えＤＮＡ構築において最もよく使用されるプロモーターとしては、β−ラクタマーゼ（ペニシリナーゼ）、ラクトースおよびトリプトファン（ｔｒｐ）プロモーターシステムが挙げられる。プロモーターおよびエンハンサーの核酸配列の合成による製造に加えて、配列は、本明細書に開示される組成物との関連で、組換えクローニングおよび／またはＰＣＲ（商標）などの核酸増幅技術を使用して製造されてもよい（米国特許第４，６８３，２０２号および同第５，９２８，９０６号を参照；それぞれは参照することにより本明細書に組み込まれる）。さらには、非核細胞小器官、例えば、ミトコンドリア、葉緑体などの中で配列の転写および／または発現を指示する制御配列も用い得ることが想定される。
【０１３９】
当然、発現のために選択された細胞小器官、細胞種、組織、臓器、または生物中でＤＮＡ断片の発現を効果的に指示するプロモーターおよび／またはエンハンサーを用いることが重要である。分子生物学の当業者は、一般に、タンパク質発現のためのプロモーター、エンハンサー、および細胞種の組合せの使用を分かっている（例えばSambrookら、１９８９年を参照；参照することにより本明細書に組み込まれる）。用いられるプロモーターは、構成的、組織特異的、誘導性、および／または組換えタンパク質および／もしくはペプチドの大規模製造において有利なものなどの、導入されるＤＮＡ断片の高レベルの発現を指示するために適切な条件下で有用なものであってよい。プロモーターは、異種または内因性のものであってよい。
【０１４０】
さらにまた、（例えば、ワールドワイドウェブepd.isb-sib.ch/のＥｕｋａｒｙｏｔｉｃ  Ｐｒｏｍｏｔｅｒ  Ｄａｔａ  Ｂａｓｅ  ＥＰＤＢにしたがって）任意のプロモーター／エンハンサーの組合せを、発現を推進するために使用することができる。Ｔ３、Ｔ７またはＳＰ６細胞質発現系の使用は別の可能な実施形態である。真核細胞は、送達複合体の部分または追加の遺伝子発現構築物のいずれかとして適切な細菌ポリメラーゼが提供された場合に、ある特定の細菌プロモーターからの細胞質での転写をサポートすることができる。
【０１４１】
プロモーターの非限定的な例としては、初期または後期ウイルスプロモーター、例えば、ＳＶ４０初期または後期プロモーター、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）最初期プロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）初期プロモーター；真核細胞プロモーター、例えば、ベータアクチンプロモーター（Ng、１９８９年；Quitscheら、１９８９年）、ＧＡＤＰＨプロモーター（Alexanderら、１９８８年、Ercolaniら、１９８８年）、メタロチオネインプロモーター（Karinら、１９８９年；Richardsら、１９８４年）；ならびに連結応答因子プロモーター、例えば、サイクリックＡＭＰ応答因子プロモーター（ｃｒｅ）、血清応答因子プロモーター（ｓｒｅ）、ホルボールエステルプロモーター（ＴＰＡ）および最小ＴＡＴＡボックスの近くの応答因子プロモーター（ｔｒｅ）が挙げられる。ヒト成長ホルモンプロモーター配列（例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ、受託番号Ｘ０５２４４、ヌクレオチド２８３〜３４１に記載されるヒト成長ホルモン最小プロモーター）またはマウス乳腺腫瘍プロモーター（ＡＴＣＣ、カタログ番号ＡＴＣＣ  ４５００７から入手可能）を使用することもできる。ある特定の実施形態では、プロモーターは、ＣＭＶ  ＩＥ、デクチン１、デクチン２、ヒトＣＤ１１ｃ、Ｆ４／８０、ＳＭ２２、ＲＳＶ、ＳＶ４０、Ａｄ  ＭＬＰ、ベータアクチン、ＭＨＣクラスＩまたはＭＨＣクラスＩＩのプロモーターであるが、治療遺伝子の発現を推進するために有用な任意の他のプロモーターを本発明の実施に応用することができる。
【０１４２】
ある特定の態様では、本開示の方法はまた、エンハンサー配列にも関し、これはすなわち、プロモーターの活性を増加させ、比較的長距離であっても（標的プロモーターから最大数キロ塩基離れていても）、方向にかかわらず、シスで作用する能力を有する核酸配列である。しかしながら、エンハンサー機能はそのような長距離に必ずしも制約されず、それらはまた、所与のプロモーターに近接して機能するものであってもよい。
ｂ．開始シグナルおよび連結された発現
【０１４３】
特定の開始シグナルもまた、コーディング配列の効率的な翻訳のために本開示で提供される発現構築物において使用することができる。これらのシグナルとしては、ＡＴＧ開始コドンまたは隣接配列が挙げられる。ＡＴＧ開始コドンなどの外因性翻訳制御シグナルの提供が必要とされることがある。当業者は容易にこれを判定し、必要なシグナルを提供することができる。挿入物全体の翻訳を確実にするために、開始コドンは所望のコーディング配列のリーディングフレームと「インフレーム」でなければならないことは周知である。外因性翻訳制御シグナルおよび開始コドンは天然または合成のいずれであってもよい。適切な転写エンハンサーエレメントを含めることにより発現の効率を増進させてもよい。
【０１４４】
ある特定の実施形態では、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）エレメントの使用が、複数遺伝子、またはポリシストロン性の、メッセージを作出するために使用される。ＩＲＥＳエレメントは、５’メチル化キャップ依存性の翻訳のリボソームスキャニングモデルを回避して内部部位で翻訳を開始させることができる（PelletierおよびSonenberg、１９８８年）。ピコルナウイルスファミリーの２つのメンバー（polioおよびencephalomyocarditis）からのＩＲＥＳエレメント（PelletierおよびSonenberg、１９８８年）の他に、哺乳動物メッセージからのＩＲＥＳ（MacejakおよびSarnow、１９９１年）が記載されている。ＩＲＥＳエレメントを異種のオープンリーディングフレームに連結することができる。それぞれがＩＲＥＳにより分離された複数のオープンリーディングフレームを一緒に転写させて、ポリシストロン性のメッセージを作出することができる。ＩＲＥＳエレメントにより、各オープンリーディングフレームは、効率的な翻訳のためにリボソームが接近可能である。単一のプロモーター／エンハンサーを使用して単一のメッセージを転写することで複数の遺伝子を効率的に発現させることができる（米国特許第５，９２５，５６５号および同第５，９３５，８１９号を参照；それぞれは参照することにより本明細書に組み込まれる）。
【０１４５】
さらに、ある特定の２Ａ配列エレメントを使用して、本開示で提供される構築物中の遺伝子の連結または共発現を作出してもよい。例えば、単一のシストロンを形成するようにオープンリーディングフレームを連結させることにより、切断配列を使用して遺伝子を共発現させることができる。例示的な切断配列は、Ｆ２Ａ（口蹄病ウイルス２Ａ）または「２Ａ様」配列（例えば、Ｔｈｏｓｅａ  ａｓｉｇｎａウイルス２Ａ；Ｔ２Ａ）である（MinskaiaおよびRyan、２０１３年）。
ｃ．複製起点
宿主細胞中でベクターを繁殖させるために、１つまたは複数の複製起点部位（多くの場合、「ｏｒｉ」と称される）、例えば、上記のＥＢＶのｏｒｉＰまたはプログラミングにおいて類似のまたは向上した機能を有する遺伝子操作されたｏｒｉＰに対応する核酸配列を含有してもよく、これは、複製が開始される特定の核酸配列である。または、上記される他の染色体外複製ウイルスまたは自律複製配列（ＡＲＳ）の複製起点を用いることができる。
３．選択およびスクリーニング可能マーカー
【０１４６】
一部の実施形態では、本開示の構築物を含有する細胞は、発現ベクター中にマーカーを含めることによりｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで同定することができる。そのようなマーカーは、その発現ベクターを含有する細胞の容易な同定を可能とする同定可能な変化を細胞に付与する。一般に、選択マーカーは、選択を可能とする特性を付与するものである。陽性選択マーカーはマーカーの存在がその選択を可能とするものであり、陰性選択マーカーはその存在がその選択を防止するものである。陽性選択マーカーの例は薬物耐性マーカーである。
【０１４７】
通常、薬物選択マーカーを含めることは、形質転換体のクローニングおよび同定を補助し、例えば、ネオマイシン、ピューロマイシン、ハイグロマイシン、ＤＨＦＲ、ＧＰＴ、ゼオシンおよびヒスチジノールに対して抵抗性を付与する遺伝子は有用な選択マーカーである。条件の履行に基づいて形質転換体の識別を可能とする表現型を付与するマーカーに加えて、比色分析に基づくＧＦＰなどのスクリーニング可能マーカーなどの他の種類のマーカーも想定される。または、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（ｔｋ）またはクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）などの陰性選択マーカーとしてスクリーニング可能な酵素を利用してもよい。当業者はまた、場合によりＦＡＣＳ分析と組み合わせて、免疫学的マーカーをどのように用いるべきかを分かっている。遺伝子産物をコードする核酸と同時に発現できる限り、使用されるマーカーは重要でないと思われる。選択およびスクリーニング可能マーカーのさらなる例は当業者に周知である。
Ｂ．核酸送達の他の方法
【０１４８】
治療遺伝子および／または細胞外マトリックス分解遺伝子をコードする核酸のウイルス送達に加えて、以下は、所与の宿主細胞への組換え遺伝子送達の追加の方法であり、したがって本開示において考慮される。したがって、遺伝子編集方法、例えば、メガヌクレアーゼ、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写活性化因子様エフェクターベースのヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、およびＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓシステムなどの他の形態の遺伝子療法を治療用ウイルス組成物と組み合わせてもよい。
【０１４９】
核酸、例えばＤＮＡまたはＲＮＡの導入は、本明細書に記載されるまたは当業者に公知の、細胞の形質転換のための核酸送達の任意の好適な方法を使用することができる。そのような方法としては、ＤＮＡの直接的な送達、例えば、ｅｘ  ｖｉｖｏトランスフェクション（Wilsonら、１９８９年、Nabelら、１９８９年）、注射（米国特許第５，９９４，６２４号、同第５，９８１，２７４号、同第５，９４５，１００号、同第５，７８０，４４８号、同第５，７３６，５２４号、同第５，７０２，９３２号、同第５，６５６，６１０号、同第５，５８９，４６６号および同第５，５８０，８５９号；それぞれは参照することにより本明細書に組み込まれる）、例えば、マイクロインジェクション（HarlandおよびWeintraub、１９８５年；米国特許第５，７８９，２１５号；参照することにより本明細書に組み込まれる）；エレクトロポレーション（米国特許第５，３８４，２５３号；参照することにより本明細書に組み込まれる；Tur-Kaspaら、１９８６年；Potterら、１９８４年）；リン酸カルシウム沈殿（GrahamおよびVan  Der  Eb、１９７３年；ChenおよびOkayama、１９８７年；Rippeら、１９９０年）；ＤＥＡＥデキストラン、続いてポリエチレングリコールの使用（Gopal、１９８５年）；ダイレクトソニックローディング（Fechheimerら、１９８７年）；リポソーム媒介性のトランスフェクション（NicolauおよびSene、１９８２年；Fraleyら、１９７９年；Nicolauら、１９８７年；Wongら、１９８０年；Kanedaら、１９８９年；Katoら、１９９１年）および受容体媒介性のトランスフェクション（WuおよびWu、１９８７年；WuおよびWu、１９８８年）；微粒子銃（ＰＣＴ出願番号ＷＯ９４／０９６９９および同９５／０６１２８；米国特許第５，６１０，０４２号；同第５，３２２，７８３号、同第５，５６３，０５５号、同第５，５５０，３１８号、同第５，５３８，８７７号および同第５，５３８，８８０号；それぞれは参照することにより本明細書に組み込まれる）；炭化ケイ素繊維との撹拌（Kaepplerら、１９９０年；米国特許第５，３０２，５２３号および同第５，４６４，７６５号；それぞれは参照することにより本明細書に組み込まれる）；Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ媒介性の形質転換（米国特許第５，５９１，６１６号および同第５，５６３，０５５号；それぞれは参照することにより本明細書に組み込まれる）；乾燥／阻害媒介性のＤＮＡ取込み（Potrykusら、１９８５年）、およびそのような方法の任意の組合せが挙げられるがこれらに限定されない。これらのような技術の応用を通じて、細胞小器官、細胞、組織または生物を安定的にまたは一過的に形質転換することができる。
１．エレクトロポレーション
【０１５０】
本開示のある特定の実施形態では、遺伝子構築物は、エレクトロポレーションを介して標的過剰増殖性細胞中に導入される。エレクトロポレーションは、高電圧放電への細胞（または組織）およびＤＮＡ（またはＤＮＡ複合体）の曝露を含む。
【０１５１】
エレクトロポレーションを使用する真核細胞のトランスフェクションはかなり成功してきた。この方法でマウスプレＢリンパ球にヒトカッパー免疫グロブリン遺伝子がトランスフェクトされており（Potterら、１９８４年）、ラット肝細胞にクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ遺伝子がトランスフェクトされている（Tur-Kaspaら、１９８６年）。
【０１５２】
異なる供給源からの過剰増殖性細胞のためにエレクトロポレーション条件を最適化してもよいことが想定される。電圧、キャパシタンス、時間およびエレクトロポレーション培地組成などのパラメーターの最適化が特に望まれ得る。他のルーチンの調整の実行は当業者に公知であろう。例えば、Hoffman、１９９９年；Hellerら、１９９６年を参照。
２．脂質媒介性の形質転換
【０１５３】
さらなる実施形態では、腫瘍抑制因子および／または細胞外マトリックス分解遺伝子は、リポソームまたは脂質配合物中に封入され得る。リポソームは、リン脂質二重層膜および内部水性媒体により特徴付けられる小胞構造物である。マルチラメラリポソームは、水性媒体により分離された複数の脂質層を有する。それらは、リン脂質が過剰の水溶液中に懸濁された時に自然に形成される。脂質成分は、閉じた構造の形成前に自己再構成を遂げ、脂質二重層の間に水および溶解した溶質を封入する（GhoshおよびBachhawat、１９９１年）。リポフェクタミンと複合体化した遺伝子構築物も想定される（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ）。
【０１５４】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの外来ＤＮＡの脂質媒介性の核酸送達および発現は非常に成功している（NicolauおよびSene、１９８２年；Fraleyら、１９７９年；Nicolauら、１９８７年）。Wongら（１９８０年）は、培養されたニワトリ胚、ＨｅＬａおよびヘパトーマ細胞中での外来ＤＮＡの脂質媒介性の送達および発現の実行可能性を実証した。
【０１５５】
脂質ベースの非ウイルス配合物は、アデノウイルス遺伝子療法の代替を提供する。多くの細胞培養研究で脂質ベースの非ウイルス遺伝子移入が報告されてきたが、脂質ベースの配合物を介する全身性の遺伝子送達は限定されている。非ウイルス性の脂質ベースの遺伝子送達の大きな制限は、非ウイルス送達ビヒクルを含むカチオン性脂質の毒性である。リポソームのｉｎ  ｖｉｖｏでの毒性は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏとｉｎ  ｖｉｖｏとの間の遺伝子移入の結果の不一致を部分的に説明する。この矛盾するデータに寄与する別の要因は、血清タンパク質の存在下および非存在下での脂質ビヒクルの安定性の差異である。脂質ビヒクルと血清タンパク質との相互作用は、脂質ビヒクルの安定性の特徴に対して劇的な影響力を有する（YangおよびHuang、１９９７年）。カチオン性脂質は負に荷電した血清タンパク質を誘引してそれに結合する。血清タンパク質に会合した脂質ビヒクルは、溶解するか、またはマクロファージにより取り去られ、循環からの除去に繋がる。現行のｉｎ  ｖｉｖｏ脂質送達方法は、循環中のカチオン性脂質に関連付けられる毒性および安定性の問題を回避するために、皮下、皮内、腫瘍内、または頭蓋内注射を使用する。脂質ビヒクルと血漿タンパク質との相互作用は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ（Felgnerら、１９８７年）およびｉｎ  ｖｉｖｏでの遺伝子移入（Zhuら、１９９３年；Philipら、１９９３年；Solodinら、１９９５年；Liuら、１９９５年；Thierryら、１９９５年；Tsukamotoら、１９９５年；Aksentijevichら、１９９６年）の効率の不均衡に関与する。
【０１５６】
脂質配合物の進歩により、ｉｎ  ｖｉｖｏでの遺伝子移入の効率が改善された（Templetonら、１９９７年；ＷＯ９８／０７４０８）。等モル比の１，２−ビス（オレオイルオキシ）−３−（トリメチルアンモニオ）プロパン（ＤＯＴＡＰ）およびコレステロールから構成される新規の脂質配合物は、全身性のｉｎ  ｖｉｖｏ遺伝子移入を有意に約１５０倍増進させる。ＤＯＴＡＰ：コレステロール脂質配合物は、「サンドイッチリポソーム」と称される独特の構造を形成する。この配合物は、嵌入した二重層または「瓶」構造の間にＤＮＡを「サンドイッチ」することが報告されている。これらの脂質構造物の有益な特徴としては、正のρ、コレステロールによるコロイドの安定化、二次元のＤＮＡパッキングおよび増加した血清安定性が挙げられる。特許出願第６０／１３５，８１８号および同第６０／１３３，１１６号には、本発明と共に使用され得る配合物が議論されている。
【０１５７】
脂質配合物の製造は、多くの場合、（Ｉ）逆相蒸発、（ＩＩ）脱水−再水和、（ＩＩＩ）界面活性剤透析および（ＩＶ）薄膜水和の後のリポソーム混合物の超音波処理または連続押出しにより達成される。脂質構造物が製造されたら、それを使用して、循環中にある時に毒性（化学療法薬）または不安定（核酸）な化合物をカプセル化することができる。脂質カプセル化は、そのような化合物についてより低い毒性およびより長い血清半減期を結果としてもたらしてきた（Gabizonら、１９９０年）。多数の疾患治療は、従来の療法を増進させるためまたは新規の療法を確立するために（特に過剰増殖性疾患を治療するための療法）、脂質ベースの遺伝子移入戦略を使用している。
ＩＶ．免疫チェックポイント阻害剤
【０１５８】
本開示は、免疫チェックポイントの遮断をウイルス組成物と組み合わせる方法を提供する。免疫チェックポイントは、シグナル（例えば、共刺激分子）を大きくするまたはシグナルを小さくする免疫系中の分子である。免疫チェックポイントの遮断により標的化され得る阻害性チェックポイント分子としては、アデノシンＡ２Ａ受容体（Ａ２ＡＲ）、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６としても公知）、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ−４、ＣＤ１５２としても公知）、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、キラー細胞免疫グロブリン（ＫＩＲ）、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３）、プログラム死１（ＰＤ−１）、Ｔ細胞免疫グロブリンドメインおよびムチンドメイン３（ＴＩＭ−３）およびＶドメインＩｇ  Ｔ細胞活性化抑制因子（V-domain  Ig  suppressor  of  T  cell  activation；ＶＩＳＴＡ）が挙げられる。特に、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１軸および／またはＣＴＬＡ−４を標的化する。
【０１５９】
免疫チェックポイント阻害剤は、薬物、例えば、小分子、組換え型のリガンドもしくは受容体であってよく、または、特に、抗体、例えばヒト抗体である（例えば、国際特許出願公開ＷＯ２０１５０１６７１８；Pardoll、２０１２年；共に参照することにより本明細書に組み込まれる）。免疫チェックポイントタンパク質の公知の阻害剤またはそのアナログを使用することができ、特に、キメラ化、ヒト化またはヒト型の抗体を使用することができる。当業者に公知のように、本開示に記載されるある特定の抗体について代替的なおよび／または同等の名称が使用されることがある。そのような代替的なおよび／または同等の名称は、本発明の文脈において交換可能である。例えば、ランブロリズマブは、ＭＫ−３４７５およびペムブロリズマブという代替的および同等の名称でも公知であることが知られている。
【０１６０】
免疫応答を刺激することが当該技術分野において公知である免疫チェックポイント阻害剤のいずれを使用してもよいことが想定される。これには、抗原特異的Ｔリンパ球を直接的または間接的に刺激しまたは増進させる阻害剤が含まれる。これらの免疫チェックポイント阻害剤としては、ＰＤ−Ｌ２、ＬＡＧ３、ＢＴＬＡ、Ｂ７Ｈ４およびＴＩＭ３を含む免疫チェックポイントタンパク質および経路を標的化する剤が挙げられるがこれらに限定されない。例えば、当該技術分野において公知のＬＡＧ３阻害剤としては、可溶性ＬＡＧ３（ＷＯ２００９０４４２７３に開示されているＩＭＰ３２１、またはＬＡＧ３−Ｉｇ）の他に、ヒトＬＡＧ３を遮断するマウスもしくはヒト化抗体（例えば、ＷＯ２００８１３２６０１に開示されているＩＭＰ７０１）、またはヒトＬＡＧ３を遮断する完全ヒト抗体（ＥＰ２３２０９４０に開示されるものなど）が挙げられる。別の例は、ＢＴＬＡに対する遮断剤の使用により提供され、これには、ヒトＢＴＬＡのそのリガンドとの相互作用を遮断する抗体（ＷＯ２０１１０１４４３８に開示されている４Ｃ７など）が含まれるがこれに限定されない。さらに別の例は、Ｂ７Ｈ４を中和する剤の使用により提供され、これには、ヒトＢ７Ｈ４に対する抗体（ＷＯ２０１３０２５７７９、およびＷＯ２０１３０６７４９２に開示されているもの）または可溶性組換え型のＢ７Ｈ４（米国特許出願公開第２０１２０１７７６４５号に開示されているものなど）が含まれるがこれらに限定されない。さらに別の例は、Ｂ７−Ｈ３を中和する剤により提供され、これには、ヒトＢ７−Ｈ３を中和する抗体（例えば、米国特許出願公開第２０１２０２９４７９６号においてＢＲＣＡ８４Ｄとして開示されるＭＧＡ２７１および誘導体）が含まれるがこれに限定されない。さらに別の例は、ＴＩＭ３を標的化する剤により提供され、これには、ヒトＴＩＭ３を標的化する抗体（例えば、ＷＯ２０１３００６４９０Ａ２に開示されるものまたはJonesら、２００８年に開示される抗ヒトＴＩＭ３遮断抗体Ｆ３８−２Ｅ２）が含まれるがこれに限定されない。
【０１６１】
加えて、１つより多くの免疫チェックポイント阻害剤（例えば、抗ＰＤ−１抗体および抗ＣＴＬＡ−４抗体）を局所／アブスコパルウイルス組成物と組み合わせて使用してもよい。例えば、局所／アブスコパルウイルス組成物および免疫チェックポイント阻害剤（例えば、抗ＫＩＲ抗体および／または抗ＰＤ−１抗体）は、自然抗腫瘍免疫を増進させるために投与することができ、続いて局所／アブスコパルウイルス組成物および免疫チェックポイント阻害剤（例えば、抗ＰＤ−１抗体）は、適応抗腫瘍免疫応答を誘導するために投与することができる。
Ａ．ＰＤ−１軸アンタゴニスト
【０１６２】
Ｔ細胞機能障害またはアネルギーは、阻害性受容体、プログラム死１ポリペプチド（ＰＤ−１）の誘導された持続した発現と並行して起こる。したがって、ＰＤ−１およびＰＤ−１との相互作用を通じてシグナル伝達する他の分子、例えば、プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）およびプログラム死リガンド２（ＰＤ−Ｌ２）を標的化する治療薬が本明細書で提供される。ＰＤ−Ｌ１は多くのがんにおいて過剰発現され、多くの場合に予後不良と関連付けられている（Okazaki  Tら、２００７年）。したがって、腫瘍のＣＤ８＋Ｔ細胞媒介性の殺傷を増進させるためなどの、局所／アブスコパルウイルス組成物療法と組み合わせたＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１相互作用の阻害が本明細書で提供される。
【０１６３】
個体においてがんを治療しまたはその進行を遅延させる方法であって、個体に有効量のＰＤ−１軸結合アンタゴニストを局所／アブスコパルウイルス組成物と組み合わせて投与することを含む、方法が本明細書で提供される。それを必要とする個体において免疫機能を増進させる方法であって、個体に有効量のＰＤ−１軸結合アンタゴニストおよび局所／アブスコパルウイルス組成物を投与することを含む、方法も本明細書で提供される。
【０１６４】
例えば、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストとしては、ＰＤ−１結合アンタゴニスト、ＰＤＬ１結合アンタゴニストおよびＰＤＬ２結合アンタゴニストが挙げられる。「ＰＤ−１」の代替的な名称としては、ＣＤ２７９およびＳＬＥＢ２が挙げられる。「ＰＤＬ１」の代替的な名称としては、Ｂ７−Ｈ１、Ｂ７−４、ＣＤ２７４、およびＢ７−Ｈが挙げられる。「ＰＤＬ２」の代替的な名称としては、Ｂ７−ＤＣ、Ｂｔｄｃ、およびＣＤ２７３が挙げられる。一部の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤＬ１、およびＰＤＬ２は、ヒトＰＤ−１、ＰＤＬ１およびＰＤＬ２である。
【０１６５】
一部の実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤ−１のそのリガンド結合パートナーへの結合を阻害する分子である。特定の態様では、ＰＤ−１リガンド結合パートナーはＰＤＬ１および／またはＰＤＬ２である。別の実施形態では、ＰＤＬ１結合アンタゴニストは、ＰＤＬ１のその結合パートナーへの結合を阻害する分子である。特定の態様では、ＰＤＬ１結合パートナーはＰＤ−１および／またはＢ７−１である。別の実施形態では、ＰＤＬ２結合アンタゴニストは、ＰＤＬ２のその結合パートナーへの結合を阻害する分子である。特定の態様では、ＰＤＬ２結合パートナーはＰＤ−１である。アンタゴニストは、抗体、その抗原結合性断片、イムノアドヘシン（immunoadhesion）、融合タンパク質、またはオリゴペプチドであってよい。例示的な抗体は、米国特許第８７３５５５３号、同第８３５４５０９号、および同第８００８４４９号（これらの全ては参照することにより本明細書に組み込まれる）に記載されている。米国特許出願第２０１４０２９４８９８号、同第２０１４０２２０２１号、および同第２０１１０００８３６９号（これらの全ては参照することにより本明細書に組み込まれる）に記載されるものなどの、本明細書で提供される方法において使用するための他のＰＤ−１軸アンタゴニストが当該技術分野において公知である。
【０１６６】
一部の実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは抗ＰＤ−１抗体（例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体）である。一部の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、およびＣＴ−０１１からなる群から選択される。一部の実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストはイムノアドヘシン（例えば、定常領域（例えば、免疫グロブリン配列のＦｃ領域）に融合したＰＤＬ１またはＰＤＬ２の細胞外またはＰＤ−１結合部分を含むイムノアドヘシン）である。一部の実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストはＡＭＰ−２２４である。ＭＤＸ−１１０６−０４、ＭＤＸ−１１０６、ＯＮＯ−４５３８、ＢＭＳ−９３６５５８、およびＯＰＤＩＶＯ（登録商標）としても公知のニボルマブは、ＷＯ２００６／１２１１６８に記載されている抗ＰＤ−１抗体である。ＭＫ−３４７５、Ｍｅｒｃｋ  ３４７５、ランブロリズマブ、ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）、およびＳＣＨ−９００４７５としても公知のペムブロリズマブは、ＷＯ２００９／１１４３３５に記載されている抗ＰＤ−１抗体である。ｈＢＡＴまたはｈＢＡＴ−１としても公知のＣＴ−０１１は、ＷＯ２００９／１０１６１１に記載されている抗ＰＤ−１抗体である。Ｂ７−ＤＣＩｇとしても公知のＡＭＰ−２２４は、ＷＯ２０１０／０２７８２７およびＷＯ２０１１／０６６３４２に記載されているＰＤＬ２−Ｆｃ融合可溶性受容体である。追加のＰＤ−１結合アンタゴニストとしては、ＣＴ−０１１としても公知のピジリズマブ、ＡＭＰ−５１４としても公知のＭＥＤＩ０６８０、およびＲＥＧＮ２８１０が挙げられる。
【０１６７】
一部の態様では、免疫チェックポイント阻害剤はＰＤ−Ｌ１アンタゴニスト、例えば、ＭＥＤＩ４７３６としても公知のデュルバルマブ、ＭＰＤＬ３２８０Ａとしても公知のアテゾリズマブ、またはＭＳＢ０００１０１１８Ｃとしても公知のアベルマブである。ある特定の態様では、免疫チェックポイント阻害剤はＰＤ−Ｌ２アンタゴニスト、例えばｒＨＩｇＭ１２Ｂ７である。一部の態様では、免疫チェックポイント阻害剤はＬＡＧ−３アンタゴニスト、例えば、以下に限定されないが、ＩＭＰ３２１、およびＢＭＳ−９８６０１６である。免疫チェックポイント阻害剤は、アデノシンＡ２ａ受容体（Ａ２ａＲ）アンタゴニスト、例えばＰＢＦ−５０９であってよい。
【０１６８】
一部の態様では、本明細書に記載される抗体（抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤＬ１抗体、または抗ＰＤＬ２抗体など）は、ヒトまたはマウス定常領域をさらに含む。またさらなる態様では、ヒト定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４からなる群から選択される。またさらなる特定の態様では、ヒト定常領域はＩｇＧ１である。またさらなる態様では、マウス定常領域はＩｇＧ１、ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ、ＩｇＧ３からなる群から選択される。またさらなる特定の態様では、抗体は、低減したまたは最小のエフェクター機能を有する。またさらなる特定の態様では、最小のエフェクター機能は、原核細胞中での製造の結果としてもたらされる。またさらなる特定の態様では、最小のエフェクター機能は、「エフェクターレスＦｃ変異」またはアグリコシル化（aglycosylation）の結果としてもたらされる。
【０１６９】
したがって、本明細書で使用される抗体は、アグリコシル化されたものであり得る。抗体のグリコシル化は、典型的に、Ｎ連結またはＯ連結のいずれかである。Ｎ連結は、アスパラギン残基の側鎖への炭水化物部分の結合を指す。トリペプチド配列アスパラギン−Ｘ−セリンおよびアスパラギン−Ｘ−スレオニン（Ｘはプロリンを除く任意のアミノ酸である）は、アスパラギン側鎖への炭水化物部分の酵素結合のための認識配列である。したがって、ポリペプチド中のこれらのトリペプチド配列のいずれかの存在は、潜在的なグリコシル化部位を作出する。Ｏ連結グリコシル化は、糖Ｎ−アセチルガラクトサミン（N-aceylgalactosamine）、ガラクトース、またはキシロースの１つの、ヒドロキシアミノ酸への結合を指し、該ヒドロキシアミノ酸は、最も多くはセリンまたはスレオニンであるが、５−ヒドロキシプロリンまたは５−ヒドロキシリシンを使用することもできる。抗体からのグリコシル化部位の除去は、簡便には、上記のトリペプチド配列（Ｎ連結グリコシル化部位について）の１つが除去されるようにアミノ酸配列を変化させることにより達成される。変化は、グリコシル化部位内のアスパラギン、セリンまたはスレオニン残基を別のアミノ酸残基（例えば、グリシン、アラニンまたは保存的置換）で置換することにより行うことができる。
【０１７０】
抗体またはその抗原結合性断片は、当該技術分野において公知の方法、例えば、そのような抗体または断片を製造するために好適な条件下で、発現のために好適な形態で以前に記載された抗ＰＤＬ１、抗ＰＤ−１、または抗ＰＤＬ２抗体または抗原結合性断片のいずれかをコードする核酸を含有する宿主細胞を培養すること、および抗体または断片を回収することを含む方法により、調製することができる。
Ｂ．ＣＴＬＡ−４
【０１７１】
本明細書で提供される方法において標的化できる別の免疫チェックポイントは、ＣＤ１５２としても公知の細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ−４）である。ヒトＣＴＬＡ−４の完全なｃＤＮＡ配列はＧｅｎｂａｎｋ受託番号Ｌ１５００６を有する。ＣＴＬＡ−４は、Ｔ細胞の表面上に見出され、抗原提示細胞の表面上のＣＤ８０またはＣＤ８６に結合した時に「オフ」スイッチとして作用する。ＣＴＬＡ４は、ヘルパーＴ細胞の表面上で発現される免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーであり、阻害シグナルをＴ細胞に伝達する。ＣＴＬＡ４はＴ細胞共刺激タンパク質ＣＤ２８に類似しており、両方の分子は、抗原提示細胞上のそれぞれＢ７−１およびＢ７−２とも呼ばれるＣＤ８０およびＣＤ８６に結合する。ＣＴＬＡ４は阻害シグナルをＴ細胞に伝達し、ＣＤ２８は刺激シグナルを伝達する。細胞内ＣＴＬＡ４も制御性Ｔ細胞中に見出され、これはそれらの機能にとって重要であり得る。Ｔ細胞受容体およびＣＤ２８を通じたＴ細胞活性化は、Ｂ７分子の阻害性受容体であるＣＴＬＡ−４の増加した発現に繋がる。
【０１７２】
一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体）、その抗原結合性断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、またはオリゴペプチドである。
【０１７３】
本発明の方法において使用するために好適な抗ヒトＣＴＬＡ−４抗体（またはそれに由来するＶＨおよび／またはＶＬドメイン）は、当該技術分野において周知の方法を使用して生成することができる。または、当該技術分野で認識される抗ＣＴＬＡ−４抗体を使用することができる。例えば、米国特許第８，１１９，１２９号、ＷＯ０１／１４４２４、ＷＯ９８／４２７５２；ＷＯ００／３７５０４（ＣＰ６７５，２０６、トレメリムマブとしても公知；旧チシリムマブ）、米国特許第６，２０７，１５６号；Hurwitzら、１９９８年；Camachoら、２００４年；およびMokyrら、１９９８年に開示される抗ＣＴＬＡ−４抗体を本明細書に開示される方法において使用することができる。上述の各刊行物の教示は、参照することにより本明細書に組み込まれる。これらの当該技術分野で認識される抗体のいずれかとＣＴＬＡ−４への結合について競合する抗体もまた使用することができる。例えば、ヒト化ＣＴＬＡ−４抗体が国際特許出願番号ＷＯ２００１０１４４２４、ＷＯ２００００３７５０４、および米国特許第８０１７１１４号（これらの全ては参照することにより本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【０１７４】
例示的な抗ＣＴＬＡ−４抗体は、イピリムマブ（１０Ｄ１、ＭＤＸ−０１０、ＭＤＸ−１０１、およびＹｅｒｖｏｙ（登録商標）としても公知）またはその抗原結合性断片およびバリアントである（例えば、ＷＯ０１／１４４２４を参照）。他の実施形態では、抗体は、イピリムマブの重鎖および軽鎖ＣＤＲまたはＶＲを含む。したがって、一実施形態では、抗体は、イピリムマブのＶＨ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメイン、ならびにイピリムマブのＶＬ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む。別の実施形態では、抗体は、上記の抗体と同じＣＴＬＡ−４上のエピトープと結合について競合し、および／またはそれに結合する。別の実施形態では、抗体は、上記の抗体と少なくとも約９０％の可変領域アミノ酸配列の同一性（例えば、イピリムマブと少なくとも約９０％、９５％、または９９％の可変領域同一性）を有する。
【０１７５】
ＣＴＬＡ−４をモジュレートするための他の分子としては、ＣＴＬＡ−４リガンドおよび受容体、例えば、米国特許第５８４４９０５号、同第５８８５７９６号および国際特許出願ＷＯ１９９５００１９９４および同ＷＯ１９９８０４２７５２（これらの全ては参照することにより本明細書に組み込まれる）に記載されるもの、およびイムノアドヘシン、例えば、米国特許第８３２９８６７号（参照することにより本明細書に組み込まれる）に記載されているものが挙げられる。
Ｃ．キラー免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）
【０１７６】
本発明において使用するための別の免疫チェックポイント阻害剤は抗ＫＩＲ抗体である。本発明において使用するために好適な抗ヒトＫＩＲ抗体（またはそれに由来するＶＨ／ＶＬドメイン）は、当該技術分野において周知の方法を使用して生成することができる。
【０１７７】
または、当該技術分野で認識される抗ＫＩＲ抗体を使用することができる。抗ＫＩＲ抗体は、複数の阻害性ＫＩＲ受容体と交差反応性であってよく、これらの受容体の１つまたは複数を持つＮＫ細胞の細胞傷害性を増強するものであってよい。例えば、抗ＫＩＲ抗体は、ＫＩＲ２Ｄ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２、およびＫＩＲ２ＤＬ３のそれぞれに結合するものであってよく、これらのＫＩＲのいずれかまたは全てにより媒介されるＮＫ細胞の細胞傷害性の阻害を低減させ、中和し、および／または後退させることによりＮＫ細胞活性を増強するものであってよい。一部の態様では、抗ＫＩＲ抗体は、ＫＩＲ２ＤＳ４および／またはＫＩＲ２ＤＳ３に結合しない。例えば、ＷＯ２００６／００３１７９（その教示は参照することにより本明細書に組み込まれる）に記載されているモノクローナル抗体１−７Ｆ９（ＩＰＨ２１０１としても公知）、１４Ｆ１、１−６Ｆ１および１−６Ｆ５を使用することができる。これらの当該技術分野で認識される抗体のいずれかとＫＩＲへの結合について競合する抗体も使用することができる。使用できる追加の当該技術分野で認識される抗ＫＩＲ抗体としては、例えば、ＷＯ２００５／００３１６８、ＷＯ２００５／００９４６５、ＷＯ２００６／０７２６２５、ＷＯ２００６／０７２６２６、ＷＯ２００７／０４２５７３、ＷＯ２００８／０８４１０６、ＷＯ２０１０／０６５９３９、ＷＯ２０１２／０７１４１１およびＷＯ／２０１２／１６０４４８に開示されているものが挙げられる。
【０１７８】
例示的な抗ＫＩＲ抗体はリリルマブである（ＢＭＳ−９８６０１５またはＩＰＨ２１０２とも称される）。他の実施形態では、抗ＫＩＲ抗体は、リリルマブの重鎖および軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）または可変領域（ＶＲ）を含む。したがって、一実施形態では、抗体は、リリルマブの重鎖可変（ＶＨ）領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメイン、ならびにリリルマブの軽鎖可変（ＶＬ）領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む。別の実施形態では、抗体は、リリルマブと少なくとも約９０％の可変領域アミノ酸配列の同一性を有する。
Ｖ．治療方法
【０１７９】
個体においてがんを治療し、その進行を遅延させ、または予防する方法であって、個体に有効量のウイルス組成物を単独でまたは少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤（例えば、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストおよび／またはＣＴＬＡ−４抗体）と組み合わせて投与することを含む、方法が本明細書で提供される。
【０１８０】
一部の実施形態では、治療は、治療の中止後に個体において持続的な応答を結果としてもたらす。本明細書に記載される方法は、がんの治療のための腫瘍免疫原性の増加など、免疫原性の増進が所望される状態の治療において使用されてよい。がんを有する個体などにおいて免疫機能を増進させる方法であって、個体に有効量の免疫チェックポイント阻害剤（例えば、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストおよび／またはＣＴＬＡ−４抗体）および局所／アブスコパルウイルス組成物療法を投与することを含む、方法も本明細書で提供される。一部の実施形態では、個体はヒトである。
【０１８１】
治療のために想定されるがんの例としては、肺がん、頭頸部がん、乳がん、膵臓がん、前立腺がん、腎臓がん、骨がん、精巣がん、子宮頸がん、胃腸がん、リンパ腫、肺における前新生物性病変、結腸がん、黒色腫、および膀胱がんが挙げられる。
【０１８２】
一部の実施形態では、個体は、１つまたは複数の抗がん療法に抵抗性の（抵抗性であることが実証されている）がんを有する。一部の実施形態では、抗がん療法への抵抗性は、がんの再発または難治性がんを含む。再発は、治療後に元々の部位または新たな部位においてがんが再出現することを指し得る。一部の実施形態では、抗がん療法への抵抗性は、抗がん療法での治療中のがんの進行を含む。一部の実施形態では、がんは初期ステージまたは後期ステージにある。
【０１８３】
個体は、ＰＤ−Ｌ１バイオマーカーを発現する（例えば診断試験においてそれを発現することが示されている）がんを有し得る。一部の実施形態では、患者のがんは、低いＰＤ−Ｌ１バイオマーカーを発現する。一部の実施形態では、患者のがんは、高いＰＤ−Ｌ１バイオマーカーを発現する。ＰＤ−Ｌ１バイオマーカーは、ＦＡＣＳ、ウエスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、免疫沈降、免疫組織化学、免疫蛍光、ラジオイムノアッセイ、ドットブロッティング、免疫検出法、ＨＰＬＣ、表面プラズモン共鳴、分光法、質量分析法、ＨＰＬＣ、ｑＰＣＲ、ＲＴ−ｑＰＣＲ、マルチプレックスｑＰＣＲまたはＲＴ−ｑＰＣＲ、ＲＮＡ−ｓｅｑ、マイクロアレイ分析、ＳＡＧＥ、ＭａｓｓＡＲＲＡＹ技術、およびＦＩＳＨ、ならびにこれらの組合せからなる群から選択される方法を使用して試料中で検出することができる。
【０１８４】
本明細書に記載される方法のいずれか（例えば、有効量のウイルス組成物療法を単独でまたは少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせて投与することを含む組合せ治療）の有効性は、当該技術分野において公知の様々なモデル、例えば、臨床または前臨床モデルにおいて試験することができる。好適な前臨床モデルは本明細書に例示されており、さらに、ＩＤ８卵巣がん、ＧＥＭモデル、Ｂ１６黒色腫、ＲＥＮＣＡ腎臓細胞がん、ＣＴ２６結腸直腸がん、ＭＣ３８結腸直腸がん、およびがんのＣｌｏｕｄｍａｎ黒色腫モデルを挙げることができるがこれらに限定されない。
【０１８５】
本開示の方法の一部の実施形態では、がんは、低いレベルのＴ細胞浸潤を有する。一部の実施形態では、がんは、検出可能なＴ細胞浸潤を有しない。一部の実施形態では、がんは非免疫原性がん（例えば、非免疫原性結腸直腸がんおよび／または卵巣がん）である。理論によって縛れるものではないが、組合せ治療は、組合せの投与の前と比べてＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、メモリーＴ細胞）のプライミング、活性化および／または増殖を増加させ得る。
【０１８６】
本開示の方法の一部の実施形態では、個体中の活性化したＣＤ４および／またはＣＤ８  Ｔ細胞は、組合せの投与の前と比べてγ−ＩＦＮ産生ＣＤ４および／もしくはＣＤ８  Ｔ細胞ならびに／または増進された細胞溶解活性により特徴付けられる。γ−ＩＦＮは、当該技術分野において公知の任意の手段により測定することができ、該手段としては、例えば、細胞固定、透過処理、およびγ−ＩＦＮに対する抗体での染色を含む細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）が挙げられる。細胞溶解活性は、当該技術分野において公知の任意の手段、例えば、混合されたエフェクターおよび標的細胞を用いる細胞殺傷アッセイを使用する手段により測定することができる。
【０１８７】
本開示は、免疫系の標的としてまたは外来の標的への免疫系の応答の部分として免疫反応に参加する任意のヒト細胞のために有用である。方法としては、ｅｘ  ｖｉｖｏの方法、ｉｎ  ｖｉｖｏの方法、および宿主細胞へのポリヌクレオチドまたはベクターの注射を含む様々な他の方法が挙げられる。方法としてはまた、腫瘍または腫瘍床への直接的な注射の他に、腫瘍への局所または局部注射が挙げられる。
Ａ．投与
【０１８８】
本明細書で提供される療法は、有効量のウイルス組成物を単独でまたは少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤（例えば、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストおよび／またはＣＴＬＡ−４抗体）と組み合わせて投与することを含む。併用療法は、当該技術分野において公知の任意の好適な方法で投与することができる。例えば、免疫チェックポイント阻害剤（例えば、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストおよび／またはＣＴＬＡ−４抗体）およびウイルス組成物は、逐次的に（異なる時点に）または並行して（同時に）投与されてよい。一部の実施形態では、１つまたは複数の免疫チェックポイント阻害剤は、局所／アブスコパルウイルス組成物療法またはその発現構築物とは別々の組成物中にある。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、局所／アブスコパルウイルス組成物療法と同じ組成物中にある。ある特定の態様では、対象は、少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤の前に、同時に、または後に、ｐ５３をコードする核酸および／またはＭＤＡ−７をコードする核酸を投与される。
【０１８９】
１つまたは複数の免疫チェックポイント阻害剤およびウイルス組成物療法の成分は、同じ投与経路で投与されてよく、または異なる投与経路で投与されてよい。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、静脈内に、筋肉内に、皮下に、局所的に、経口的に、経皮的に、腹腔内に、眼窩内に、インプラント挿入により、吸入により、髄腔内に、脳室内に、または鼻腔内に投与される。一部の実施形態では、局所／アブスコパルウイルス組成物療法は、静脈内に、筋肉内に、皮下に、局所的に、経口的に、経皮的に、腹腔内に、眼窩内に、インプラント挿入により、吸入により、髄腔内に、脳室内に、または鼻腔内に投与される。一部の態様では、投与は、連続注入、腫瘍内注射、静脈注射、動脈注射、腹腔内注射、胸膜内注射、または髄腔内注射を介して為される。有効量の免疫チェックポイント阻害剤および局所／アブスコパルウイルス組成物療法は、疾患の予防または治療のために投与されてよい。免疫チェックポイント阻害剤および／または局所／アブスコパルウイルス組成物療法の適切な投与量は、治療される疾患の種類、疾患の重篤度および経過、個体の臨床的状態、個体の臨床的な歴史および治療への応答、および主治医の裁量に基づいて決定することができる。一部の実施形態では、少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤（例えば、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストおよび／またはＣＴＬＡ−４抗体）および局所／アブスコパルウイルス組成物療法を用いる組合せ治療は相乗的であり、それにより、組合せ中の局所／アブスコパルウイルス組成物療法の有効用量は、単剤としての少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤（例えば、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストおよび／またはＣＴＬＡ−４抗体）の有効用量と比べて低減される。
【０１９０】
例えば、ヒトに投与される治療有効量の免疫チェックポイント阻害剤、例えば抗体、ならびに／またはｐ５３および／もしくはＭＤＡ−７をコードする核酸もしくはその発現構築物は、１回の投与であっても複数回の投与であっても、患者の体重１ｋｇ当たり約０．０１〜約５０ｍｇ／ｋｇの範囲内である。一部の実施形態では、使用される抗体は、約０．０１〜約４５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約３５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約２５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約２０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約１５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約５ｍｇ／ｋｇ、または約０．０１〜約１ｍｇ／ｋｇが例えば連日投与される。一部の実施形態では、抗体は１５ｍｇ／ｋｇで投与される。しかしながら、他の投与量レジメンが有用なことがある。一実施形態では、本明細書に記載される抗ＰＤＬ１抗体は、２１日サイクルの１日目に約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇまたは約１４００ｍｇの用量でヒトに対して投与される。用量は、注入などで、単回用量として、または複数回用量（例えば、２回または３回用量）として投与されてよい。この療法の進行は従来技術により容易にモニターされる。
【０１９１】
腫瘍内注射、または腫瘍血管系への注射が、離散的な、固形の、接近可能な腫瘍のために具体的に想定される。局所、局部または全身性の投与も適切なことがある。４ｃｍより大きい腫瘍について、投与される体積は約４〜１０ｍｌ（特に、１０ｍｌ）であり、４ｃｍより小さい腫瘍について、約１〜３ｍｌの体積（特に、３ｍｌ）が使用されるであろう。単回用量として送達される複数の注射は、約０．１〜約０．５ｍｌの体積を含む。例えば、アデノウイルス粒子は、腫瘍に複数の注射を投与することにより有利なことに接触させることができる。
【０１９２】
治療レジメンは様々であってもよく、それは多くの場合、腫瘍の種類、腫瘍の位置、疾患進行、ならびに患者の健康および年齢に依存する。明らかなことに、ある特定の種類の腫瘍はより侵攻性の治療を必要とするが、それと同時にある特定の患者はより負荷の大きいプロトコールに耐えることができない。臨床医は治療用配合物の既知の有効性および（それがある場合）毒性に基づいてそのような決定を行うために最も適するであろう。
【０１９３】
ある特定の実施形態では、治療されている腫瘍は、少なくとも最初に、切除可能でなくてもよい。治療用ウイルス構築物での治療は、縁での縮小に起因してまたはある特定の特に浸潤性の部分の除去により腫瘍の切除可能性を増加させることがある。治療後に、切除が可能なことがある。切除後の追加の治療は、腫瘍部位における顕微鏡での残留疾患を取り除くために役立つ。
【０１９４】
治療は、様々な「単位用量」を含んでよい。単位用量は、予め決定された量の治療用組成物を含有するものとして定義される。投与される量、ならびに特定の経路および配合物は、臨床技術における当業者の技術的範囲内である。単位用量は単一の注射として投与される必要はなく、設定された期間にわたる連続注入を含んでよい。本発明の単位用量は、ウイルス構築物のプラーク形成単位（ｐｆｕ）として記載されることが簡便なことがある。単位用量は、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１０１０、１０１１、１０１２、１０１３ｐｆｕおよびより高いものに及ぶ。または、ウイルスの種類および達成可能な力価に応じて、１〜１００、１０〜５０、１００〜１０００、または最大約１×１０４、１×１０５、１×１０６、１×１０７、１×１０８、１×１０９、１×１０１０、１×１０１１、１×１０１２、１×１０１３、１×１０１４、または１×１０１５またはより高い感染性ウイルス粒子（ｖｐ）が患者または患者の細胞に送達される。
Ｂ．注射用組成物および配合物
【０１９５】
本明細書で提供されるウイルス組成物および／または免疫チェックポイント阻害剤の過剰増殖性細胞への送達のための本開示における１つの方法は、腫瘍内注射を介する。しかしながら、本明細書に開示される医薬組成物は、代替的に、米国特許第５，５４３，１５８号、米国特許第５，６４１，５１５号および米国特許第５，３９９，３６３号（これらの全ては参照することにより本明細書に組み込まれる）に記載されるように、非経口的に、静脈内に、皮内に、筋肉内に、経皮的にまたはさらには腹腔内に投与されてよい。
【０１９６】
核酸構築物の注射は、発現構築物が注射のために必要とされる針の特定のゲージを通過できる限り、注射器または溶液の注射のために使用される任意の他の方法により送達されてよい。溶液を保持するためのアンプルチャンバーを画定するノズルおよび送達の部位へノズルから溶液を押し出すためのエネルギーデバイスを有する新規の針なしの注射システムが記載されている（米国特許第５，８４６，２３３号）。精密に任意の深さに予め決定された量の溶液の複数の注射を可能とする遺伝子療法において使用するための注射器システムも記載されている（米国特許第５，８４６，２２５号）。
【０１９７】
遊離塩基または薬理学的に許容される塩としての活性化合物の溶液を、好適には界面活性剤、例えばヒドロキシプロピルセルロースと混合された水中で調製してもよい。分散液をグリセロール、液体ポリエチレングリコール、およびこれらの混合物中および油中で調製することもできる。貯蔵および使用の通常の条件下で、これらの調製物は、微生物の増殖を予防する防腐剤を含有する。注射用の使用のために好適な医薬剤形としては、滅菌水溶液または分散液および滅菌注射溶液または分散液の即席の調製のための滅菌粉末が挙げられる（米国特許第５，４６６，４６８号）。全ての場合に、剤形は滅菌されていなければならず、容易な注射針通過性が存在する程度まで液体でなければならない。製造および貯蔵の条件下で安定でなければならず、微生物、例えば細菌および真菌の汚染作用から保護されなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、好適なこれらの混合物、および／または植物油を含有する溶媒または分散媒体であってよい。例えば、コーティング、例えばレシチンの使用により、分散液の場合は必要とされる粒径の維持により、および界面活性剤の使用により、適切な流動性を維持することができる。微生物の作用の予防は、様々な抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどによりもたらすことができる。多くの場合、等張剤、例えば、糖または塩化ナトリウムを含めることが好ましい。注射用組成物の持続吸収は、組成物中に吸収を遅延させる剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを使用することによりもたらすことができる。
【０１９８】
例えば水溶液中での非経口投与のために、溶液は、必要であれば好適には緩衝化されるべきであり、液体希釈剤は最初に充分な食塩水またはグルコースで等張にされるべきである。これらの特定の水溶液は、静脈内、筋肉内、皮下、腫瘍内および腹腔内投与のために特に好適である。これに関連して、用いることができる滅菌水性媒体は、本開示に照らして当業者に公知であろう。例えば、１つの投与量を１ｍｌの等張ＮａＣｌ溶液中に溶解し、１０００ｍｌの皮下注射液に加えるか、または提案される注入部位に注射することができる（例えば、「Remington's  Pharmaceutical  Sciences」第２２版を参照）。投与量におけるいくつかのバリエーションが、治療されている対象の状態に応じて必要により行われる。いずれにしても、投与に関与する人が、個々の対象にとって適切な用量を決定する。さらに、ヒトへの投与のために、調製物は、ＦＤＡ生物学的製剤基準局により必要とされる滅菌状態、発熱原性、一般的安全性および純度基準を満たすべきである。
【０１９９】
滅菌注射溶液は、必要とされる量の活性化合物を、必要に応じて上記に列挙した様々な他の成分と共に適切な溶媒中に組み込んだ後、濾過滅菌することにより調製される。一般に、分散液は、様々な滅菌された活性成分を、基本的な分散媒体および上に列挙したものからの必要とされる他の成分を含有する滅菌されたビヒクル中に組み込むことにより調製される。滅菌注射溶液の調製用の滅菌粉末の場合、調製の好ましい方法は、活性成分と、以前に滅菌濾過されたその溶液からの任意の追加の所望の成分との粉末をもたらす真空乾燥（vaccuum-drying）およびフリーズドライ技術である。
【０２００】
本明細書に開示される組成物は、中性または塩の形態で配合されてよい。薬学的に許容される塩としては、無機酸、例えば塩酸またはリン酸、または有機酸、例えば、酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸などと形成された（タンパク質の遊離アミノ基と形成された）酸付加塩が挙げられる。遊離カルボキシル基と形成された塩はまた、無機塩基、例えば、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、または水酸化第二鉄、および有機塩基、例えば、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ヒスチジン、プロカインなどに由来してもよい。配合されると、溶液は、投与配合物と適合する方法および治療的に有効な量で投与される。配合物は、様々な投与剤形、例えば、注射溶液、薬物放出カプセルなどで容易に投与される。
Ｃ．追加の抗がん療法
【０２０１】
本明細書で提供されるウイルス組成物、および一部の態様では少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤の有効性を増加させるために、それらをがんの治療において有効な少なくとも１つの追加の剤と組み合わせることができる。より一般には、これらの他の組成物は、細胞を殺傷しまたはその増殖を阻害するために有効な合わせた量で提供される。この方法は、細胞をウイルス組成物および剤または複数の因子に同時に接触させることを含み得る。これは、細胞を両方の剤を含む単一の組成物または薬理学的配合物と接触させることにより、または１つの組成物がウイルス組成物を含み、他の組成物が第２の剤を含む２つの別個の組成物または配合物に細胞を同時に接触させることにより達成することができる。または、ウイルス組成物は増殖する細胞と接触されてよく、追加の療法は、抗腫瘍免疫応答および治療有効性を増進させるために免疫系の他の細胞または腫瘍微環境に影響してよい。
【０２０２】
少なくとも１つの追加の抗がん療法は、外科療法、化学療法（例えば、プロテインキナーゼ阻害剤またはＥＧＦＲ標的化療法の投与）、放射線療法、寒冷療法、ハイパーサーミア治療、光線療法、ラジオ焼灼療法、ホルモン療法、免疫療法、小分子療法、受容体キナーゼ阻害剤療法、抗血管新生療法、サイトカイン療法または生物学的療法、例えば、モノクローナル抗体、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイムもしくは遺伝子療法であってよいがこれらに限定されない。非限定的に、生物学的療法は、遺伝子療法、例えば、腫瘍抑制因子遺伝子療法、細胞死タンパク質遺伝子療法、細胞周期調節因子遺伝子療法、サイトカイン遺伝子療法、毒素遺伝子療法、免疫遺伝子療法、自殺遺伝子療法、プロドラッグ遺伝子療法、抗細胞増殖遺伝子療法、酵素遺伝子療法、または抗血管新生因子遺伝子療法であってよい。
【０２０３】
遺伝子療法は、数分から数週に及ぶ間隔で他の剤での治療に先立ってよく、またはその後であってよい。他の剤および発現構築物が別々に細胞に適用される実施形態では、通常、各送達の時点の間に長い期間が過ぎないようにして、剤および発現構築物が細胞に対して有利に組合せ効果をなおも発揮できることを確実にする。そのような例では、細胞を両方のモダリティーと互いに約１２〜２４時間以内、より好ましくは、互いに約６〜１２時間以内に接触させ得ることが想定される。しかしながら、一部の状況では、治療の期間を大幅に延長させて、数日（例えば、２、３、４、５、６または７）から数週（例えば、１、２、３、４、５、６、７または８）が各々の投与の間に過ぎるようにすることが望ましいことがある。
【０２０４】
ウイルス組成物および一部の実施形態では免疫チェックポイント阻害剤を「Ａ」とし、二次的な剤、すなわち化学療法を「Ｂ］とする様々な組合せを用いることができる：
Ａ／Ｂ／Ａ  Ｂ／Ａ／Ｂ  Ｂ／Ｂ／Ａ  Ａ／Ａ／Ｂ  Ａ／Ｂ／Ｂ  Ｂ／Ａ／Ａ  Ａ／Ｂ／Ｂ／Ｂ  Ｂ／Ａ／Ｂ／Ｂ
Ｂ／Ｂ／Ｂ／Ａ  Ｂ／Ｂ／Ａ／Ｂ  Ａ／Ａ／Ｂ／Ｂ  Ａ／Ｂ／Ａ／Ｂ  Ａ／Ｂ／Ｂ／Ａ  Ｂ／Ｂ／Ａ／Ａ
Ｂ／Ａ／Ｂ／Ａ  Ｂ／Ａ／Ａ／Ｂ  Ａ／Ａ／Ａ／Ｂ  Ｂ／Ａ／Ａ／Ａ  Ａ／Ｂ／Ａ／Ａ  Ａ／Ａ／Ｂ／Ａ
１．化学療法
【０２０５】
がん療法はまた、一般に、化学的治療および放射線ベースの治療の両方との様々な併用療法を含む。併用化学療法としては、例えば、シスプラチン（ＣＤＤＰ）、カルボプラチン、プロカルバジン、メクロレタミン、シクロホスファミド、カンプトテシン、イホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、ニトロソウレア、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、プリカマイシン、ミトマイシン、エトポシド（ＶＰ１６）、タモキシフェン、ラロキシフェン、エストロゲン受容体結合剤、タキソール、ゲムシタビン（gemcitabien）、ナベルビン、ファルネシル（famesyl）タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、トランス白金、５−フルオロウラシル、ビンクリスチン、ビンブラスチンおよびメトトレキサート、テモゾロミド（Temazolomide）（ＤＴＩＣの水性形態）、または以上の任意のアナログもしくは誘導体バリアントが挙げられる。生物学的療法との化学療法の組合せは生化学療法として公知である。化学療法は、メトロノミック化学療法として公知の低い連続的な用量で投与されてもよい。
【０２０６】
またさらなる併用化学療法としては、例えば、アルキル化剤、例えばチオテパおよびシクロホスファミド（cyclosphosphamide）；アルキルスルホネート、例えば、ブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファン；アジリジン、例えば、ベンゾドーパ（benzodopa）、カルボコン、メツレドーパ（meturedopa）、およびウレドーパ（uredopa）；エチレンイミンおよびメチラメラミン、例えば、アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド（trietylenephosphoramide）、トリエチレンチオホスホラミド（triethiylenethiophosphoramide）およびトリメチロールメラミン（trimethylolomelamine）；アセトゲニン（特にブラタシンおよびブラタシノン）；カンプトテシン（合成アナログであるトポテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシンおよびビゼレシン合成アナログを含む）；クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成アナログＫＷ−２１８９およびＣＢ１−ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチン（sarcodictyin）；スポンギスタチン；ナイトロジェンマスタード、例えば、クロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド（cholophosphamide）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミン酸化物塩酸塩、メルファラン、ノベンビチン（novembichin）、フェネステリン（phenesterine）、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード；ニトロソウレア、例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、およびラニムスチン（ranimnustine）；抗生物質、例えば、エンジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特にカリケアマイシンガンマｌＩおよびカリケアマイシンオメガＩ１；ダイネマイシン（ダイネマイシンＡを含む）；ビスホスホネート、例えばクロドロネート；エスペラマイシン；ならびにネオカルジノスタチン発色団および関連する色素タンパク質エンジイン抗生物質（antiobiotic）発色団、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アウスラマイシン（authrarnycin）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン（carabicin）、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン（chromomycinis）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン（モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、ミトマイシン、例えばミトマイシンＣ、ミコフェノール酸、ノガラマイシン（nogalarnycin）、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（potfiromycin）、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン（rodorubicin）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；抗代謝物、例えば、メトトレキサートおよび５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）；葉酸アナログ、例えば、デノプテリン、プテロプテリン、トリメトレキセート；プリンアナログ、例えば、フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジンアナログ、例えば、アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン；アンドロゲン、例えば、カルステロン、ドロスタノロンプロピオネート（dromostanolone  propionate）、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン；抗アドレナル、例えば、ミトタン、トリロスタン；葉酸補充剤（folic  acid  replenisher）、例えばフロリン酸（frolinic  acid）；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトレキセート（edatraxate）；デホファミン（defofamine）；デメコルシン；ジアジコン；エルホルミチン（elformithine）；エリプチニウム酢酸塩；エポチロン；エトグルシド；ガリウム硝酸塩；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダミン（lonidainine）；メイタンシノイド、例えば、メイタンシンおよびアンサミトシン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール（mopidanmol）；ニトラエリン（nitraerine）；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ多糖複合体；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２’’−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特に、Ｔ−２毒素、ベラクリンＡ（verracurin  A）、ロリジンＡおよびアンギジン（anguidine））；ウレタン（urethan）；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（gacytosine）；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；タキソイド、例えば、パクリタキセルおよびドセタキセル・ゲムシタビン；６−チオグアニン；メルカプトプリン；白金配位複合体、例えば、シスプラチン、オキサリプラチンおよびカルボプラチン；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ノバントロン；テニポシド；エダトレキセート；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；イリノテカン（例えば、ＣＰＴ−１１）；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ  ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（difluorometlhylornithine）（ＤＭＦＯ）；レチノイド、例えばレチノイン酸；カペシタビン；カルボプラチン、プロカルバジン、プリカマイシン、ゲムシタビン、ナベルビン、ファルネシル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、トランス白金；および上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸または誘導体が挙げられる。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される組成物は、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤と組み合わせて使用されてよい。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される組成物は、ゲフィチニブと組み合わせて使用されてよい。他の実施形態では、本発明の実施形態は、グリベックと組み合わせて実施されてよい（例えば、約４００〜約８００ｍｇ／日のグリベックが患者に投与されてよい）。ある特定の実施形態では、１つまたは複数の化学療法薬は、本明細書で提供される組成物と組み合わせて使用されてよい。
２．放射線療法
【０２０７】
ＤＮＡ損傷を引き起こす広く使用されてきた他の因子としては、一般にｙ線として公知のもの、Ｘ線、および／または腫瘍細胞への放射性同位体の方向付けられた送達が挙げられる。マイクロ波およびＵＶ照射などの他の形態のＤＮＡ損傷因子もまた公知である。これらの因子の全ては、ＤＮＡ、ＤＮＡの前駆体、ＤＮＡの複製および修復、ならびに染色体のアセンブリーおよび維持に対して広範な範囲の損傷をもたらす可能性が最も高い。Ｘ線の線量範囲は、長期の期間（３〜４週）にわたる１日当たり５０〜２００レントゲンの線量から単回の２０００〜６０００レントゲンの線量の範囲に及ぶ。放射性同位体の線量範囲は広範に変動し、同位体の半減期、放出される放射線の強度および種類、ならびに新生物細胞による取込みに依存する。
３．免疫療法
【０２０８】
免疫療法薬は、一般に、免疫エフェクター細胞ならびにがん細胞を標的化および破壊する分子の使用に依拠する。免疫エフェクターは、例えば、腫瘍細胞の表面上の一部のマーカーに特異的な抗体であってよい。抗体は、単独で療法のエフェクターとして働く場合もあるし、または他の細胞を動員して実際に細胞殺傷をもたらすこともある。抗体はまた、薬物または毒素（化学療法薬、放射性核種、リシンＡ鎖、コレラ毒素、百日咳毒素など）にコンジュゲートされて単に標的化剤として働いてもよい。または、エフェクターは、腫瘍細胞標的と直接的または間接的に相互作用する表面分子を持つリンパ球であってよい。様々なエフェクター細胞としては、細胞傷害性Ｔ細胞およびＮＫ細胞の他に、キメラ抗原受容体を発現するように改変されたこれらの細胞種の遺伝子操作されたバリアントが挙げられる。
【０２０９】
他の補完的な免疫療法を上記のレジメンに加えてそれらの有効性をさらに増進させてもよく、それらとしては、骨髄由来の自然免疫系細胞の数を増加させるＧＭ−ＣＳＦ、自然および適応免疫を阻害する制御性Ｔ細胞を取り除く低用量シクロホスファミドまたはＰＩ３Ｋ阻害剤（例えば、ＰＩ３Ｋデルタ阻害剤）ならびに阻害性骨髄由来抑制細胞を除去する５ＦＵ（例えば、カペシタビン）、ＰＩ３Ｋ阻害剤またはヒストンデアセチラーゼ阻害剤が挙げられるがこれらに限定されないことががん免疫療法の当業者により理解されるであろう。例えば、ＰＩ３Ｋ阻害剤としては、ＬＹ２９４００２、ペリホシン、ＢＫＭ１２０、デュベリシブ、ＰＸ−８６６、ＢＡＹ  ８０−６９４６、ＢＥＺ２３５、ＳＦ１１２６、ＧＤＣ−０９４１、ＸＬ１４７、ＸＬ７６５、パロミド５２９、ＧＳＫ１０５９６１５、ＰＷＴ３３５９７、ＩＣ８７１１４、ＴＧ１００−１５、ＣＡＬ２６３、ＰＩ−１０３、ＧＮＥ−４７７、ＣＵＤＣ−９０７、およびＡＥＺＳ−１３６が挙げられるがこれらに限定されない。一部の態様では、ＰＩ３Ｋ阻害剤はＰＩ３Ｋデルタ阻害剤、以下に限定されないが例えば、イデラリシブ、ＲＰ６５３０、ＴＧＲ１２０２、およびＲＰ６５０３である。追加のＰＩ３Ｋ阻害剤は、米国特許出願第２０１５０２９１５９５号、同第２０１１０１９０３１９号、および国際特許出願ＷＯ２０１２１４６６６７、ＷＯ２０１４１６４９４２、ＷＯ２０１２０６２７４８、およびＷＯ２０１５０８２３７６に開示されている。免疫療法はまた、インターロイキン、例えばＩＬ−２、またはインターフェロン、例えばＩＮＦαの投与を含んでもよい。
【０２１０】
局所／アブスコパルウイルス組成物療法および免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせることができる免疫療法の例は、免疫アジュバント（例えば、Mycobacterium  bovis、Plasmodium  falciparum、ジニトロクロロベンゼンおよび芳香族化合物）（米国特許第５，８０１，００５号；米国特許第５，７３９，１６９号；HuiおよびHashimoto、１９９８年；Christodoulidesら、１９９８年）、サイトカイン療法（例えば、インターフェロンα、βおよびγ；インターロイキン（ＩＬ−１、ＩＬ−２）、ＧＭ−ＣＳＦおよびＴＮＦ）（Bukowskiら、１９９８年；Davidsonら、１９９８年；Hellstrandら、１９９８年）遺伝子療法（例えば、ＴＮＦ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ｐ５３）（Qinら、１９９８年；Austin-WardおよびVillaseca、１９９８年；米国特許第５，８３０，８８０号および米国特許第５，８４６，９４５号）およびモノクローナル抗体（例えば、抗ガングリオシドＧＭ２、抗ＨＥＲ−２、抗ｐ１８５）（Pietrasら、１９９８年；Hanibuchiら、１９９８年；米国特許第５，８２４，３１１号）である。ハーセプチン（トラスツズマブ）は、ＨＥＲ２−ｎｅｕ受容体を遮断するキメラ（マウス−ヒト）モノクローナル抗体である。それは抗腫瘍活性を持ち、悪性腫瘍の治療において使用するために承認されている（Dillman、１９９９年）。ハーセプチンおよび化学療法を用いるがんの併用療法は、個々の療法よりも有効であることが示されている。したがって、１つまたは複数の抗がん療法を本明細書に記載されるＡｄ−ｍｄａ７療法と共に用いてよいことが想定される。
【０２１１】
局所／アブスコパルウイルス組成物療法および免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせてよい追加の免疫療法としては、共刺激受容体アゴニスト、自然免疫細胞の刺激因子、または自然免疫の活性化因子が挙げられる。共刺激受容体アゴニストは、抗ＯＸ４０抗体（例えば、ＭＥＤＩ６４６９、ＭＥＤＩ６３８３、ＭＥＤＩ０５６２、およびＭＯＸＲ０９１６）、抗ＧＩＴＲ抗体（例えば、ＴＲＸ５１８、およびＭＫ−４１６６）、抗ＣＤ１３７抗体（例えば、ウレルマブ、およびＰＦ−０５０８２５６６）、抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＣＰ−８７０，８９３、およびＣｈｉ  Ｌｏｂ  ７／４）、または抗ＣＤ２７抗体（例えば、ＣＤＸ−１１２７としても公知のバルリルマブ）であってよい。自然免疫細胞の刺激因子としては、ＫＩＲモノクローナル抗体（例えば、リリルマブ）、細胞傷害性阻害受容体の阻害剤（例えば、ＫＬＲＣおよびＣＤ９４としても公知のＮＫＧ２Ａ、例えば、モノクローナル抗体モナリズマブ、およびＴＡＣＴＩＬＥとしても公知の抗ＣＤ９６）、およびｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニストが挙げられるがこれらに限定されない。ＴＬＲアゴニストは、ＢＣＧ、ＴＬＲ７アゴニスト（例えば、ｐｏｌｙ０ＩＣＬＣ、およびイミキモド）、ＴＬＲ８アゴニスト（例えば、レシキモド）、またはＴＬＲ９アゴニスト（例えば、ＣＰＧ  ７９０９）であってよい。自然免疫細胞、例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、および樹状細胞の活性化因子としては、ＩＤＯ阻害剤、ＴＧＦβ阻害剤、ＩＬ−１０阻害剤が挙げられる。自然免疫の例示的な活性化因子はインドキシモドである。一部の態様では、免疫療法はインターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）アゴニスト（Corralesら、２０１５年）である。
【０２１２】
本開示の方法において使用するために想定される他の免疫療法としては、Tchekmedyianら、２０１５年（参照することにより本明細書に組み込まれる）に記載されるものが挙げられる。免疫療法は、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）およびがん関連線維芽細胞（ＣＡＦ）の抑制を含んでよい。一部の実施形態では、免疫療法は、腫瘍ワクチン（例えば、全腫瘍細胞ワクチン、ペプチド、および組換え腫瘍関連抗原ワクチン）、または養子細胞療法（ＡＣＴ）（例えば、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、ＴＩＬ、およびＬＡＫ細胞）である。Ｔ細胞は、特定の腫瘍抗原に対するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）またはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を有するように操作されてよい。本明細書で使用される場合、キメラ抗原受容体（またはＣＡＲ）は、Ｔ細胞中で発現された時にＣＡＲの特異性をＴ細胞に付与する目的の抗原に特異的な任意の操作された受容体を指すことができる。標準的な分子技術を使用して作出されたら、キメラ抗原受容体を発現するＴ細胞は、養子細胞移入などの技術を用いて患者中に導入することができる。一部の態様では、Ｔ細胞は、γ−ＩＦＮ産生ＣＤ４および／もしくはＣＤ８  Ｔ細胞ならびに／または組合せの投与の前と比べて増進した細胞溶解活性により特徴付けられる個体中の活性化されたＣＤ４および／またはＣＤ８  Ｔ細胞である。ＣＤ４および／またはＣＤ８  Ｔ細胞は、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−αおよびインターロイキンからなる群から選択されるサイトカインの放出の増加を呈し得る。ＣＤ４および／またはＣＤ８  Ｔ細胞はエフェクターメモリーＴ細胞であってよい。ある特定の実施形態では、ＣＤ４および／またはＣＤ８エフェクターメモリーＴ細胞は、ＣＤ４４ｈｌｇｈ  ＣＤ６２Ｌｌｏｗの発現を有することにより特徴付けられる。
【０２１３】
ある特定の態様では、２つまたはそれより多くの免疫療法を局所／アブスコパルウイルス組成物療法および免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせてよく、免疫チェックポイント阻害剤は、Ｔ細胞共刺激受容体のアゴニストと組み合わせて、またはＴＩＬ  ＡＣＴと組み合わせて追加の免疫チェックポイント阻害剤を含む。他の組合せとしては、Ｔ細胞チェックポイント遮断＋共刺激受容体アゴニスト、自然免疫細胞機能を向上させるためのＴ細胞チェックポイント遮断、チェックポイント遮断＋ＩＤＯ阻害、またはチェックポイント遮断＋養子Ｔ細胞移入が挙げられる。ある特定の態様では、免疫療法は、抗ＰＤ−Ｌ１免疫チェックポイント阻害剤（例えば、アベルマブ）、４−１ＢＢ（ＣＤ−１３７）アゴニスト（例えば、ウトミルマブ）、およびＯＸ４０（ＴＮＦＲＳ４）アゴニストの組合せを含む。免疫療法は、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤、例えば５−アザシチジンおよびエンチノスタットと組み合わせてよい。
【０２１４】
免疫療法は、１つまたは複数のがん抗原、特にタンパク質またはその免疫原性断片、前記がん抗原、特にタンパク質またはその免疫原性断片をコードするＤＮＡまたはＲＮＡ、がん細胞溶解液、および／または腫瘍細胞からのタンパク質調製物を含むがんワクチンであってよい。本明細書で使用される場合、がん抗原は、がん細胞中に存在する抗原物質である。原理的に、変異により異常な構造を有するがん細胞中で産生される任意のタンパク質はがん抗原として作用することができる。原理的に、がん抗原は、変異したがん遺伝子および腫瘍抑制因子遺伝子の産物、他の変異した遺伝子の産物、過剰発現または異常発現した細胞タンパク質、発がん性ウイルスにより産生されたがん抗原、がん胎児性抗原、変化した細胞表面糖脂質および糖タンパク質、または細胞種特異的分化抗原であってよい。がん抗原の例としては、ｒａｓおよびｐ５３遺伝子の異常な産物が挙げられる。他の例としては、組織分化抗原、変異体タンパク質抗原、発がん性ウイルス抗原、がん精巣抗原および血管または間質特異的抗原が挙げられる。組織分化抗原は、ある特定の種類の組織に特異的な抗原である。変異体タンパク質抗原は、正常細胞はこれらのタンパク質を含有しないはずであるので、がん細胞にはるかに特異的であると考えられる。正常細胞はそれらのＭＨＣ分子に対して正常なタンパク質抗原を提示するのに対し、がん細胞は変異体バージョンを提示する。一部のウイルスタンパク質はがんの形成に関与し、一部のウイルス抗原はがん抗原でもある。がん精巣抗原は、主に精巣の生殖細胞中で発現されるが、胎児卵巣およびトロホブラスト中でも発現される抗原である。一部のがん細胞はこれらのタンパク質を異常に発現し、したがってこれらの抗原を提示し、これらの抗原に特異的なＴ細胞による攻撃を可能とする。この種類の例示的な抗原は、ＣＴＡＧ１  ＢおよびＭＡＧＥＡ１の他に、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）ｖｌｌｌバリアントを標的化する１４−ｍｅｒの皮内注射用ペプチドワクチンであるリンドペピムトである。リンドペピムトは、本明細書に記載されるＣＤ９５／ＣＤ９５Ｌシグナル伝達系の阻害剤と組み合わせて使用された時に膠芽腫を治療するために特に好適である。また、通常は非常に低い量で産生されるが、がん細胞中でその産生が劇的に増加するタンパク質は、免疫応答を誘発し得る。そのようなタンパク質の例は、メラニン産生のために必要とされる酵素チロシナーゼである。通常、チロシナーゼは微小量で産生されるが、そのレベルは黒色腫細胞中で非常に大きく上昇する。がん胎児性抗原は別の重要なクラスのがん抗原である。例としては、アルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）および癌胎児性抗原（ＣＥＡ）である。これらのタンパク質は、通常、胚発生の初期に産生され、免疫系が充分に発生するまでに消失する。したがって、自己寛容はこれらの抗原に対して発生しない。異常なタンパク質はまた、がんウイルス、例えばＥＢＶおよびＨＰＶに感染した細胞により産生される。これらのウイルスにより感染された細胞は、転写され、結果として生じたタンパク質が免疫応答を生じさせる潜伏性のウイルスＤＮＡを含有する。がんワクチンはペプチドがんワクチンを含んでよく、これは、一部���実施形態では、個別化ペプチドワクチンである。一部の実施形態では、ペプチドがんワクチンは、多価長鎖ペプチドワクチン、マルチペプチドワクチン、ペプチドカクテルワクチン、ハイブリッドペプチドワクチン、またはペプチドパルス樹状細胞ワクチンである。
【０２１５】
免疫療法は、抗体、例えばポリクローナル抗体調製物の部分であってよく、またはモノクローナル抗体であってよい。抗体は、ヒト化抗体、キメラ抗体、抗体断片、二重特異的抗体または一本鎖抗体であってよい。本明細書に開示される抗体は、抗体断片、以下に限定されないが例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２、Ｆｄ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、一本鎖抗体、ジスルフィド連結Ｆｖ（ｓｄｆｖ）およびＶＬまたはＶＨドメインのいずれかを含む断片を含む。一部の態様では、抗体またはその断片は、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ１、Ｅｒｂ−Ｂ１）、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（Ｅｒｂ−Ｂ２）、ＣＤ２０、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦ−１Ｒ）、ＴＲＡＩＬ受容体、上皮細胞接着分子、癌胎児性抗原、前立腺特異的膜抗原、ムチン１、ＣＤ３０、ＣＤ３３、またはＣＤ４０に特異的に結合する。
【０２１６】
本明細書で提供される組成物と組み合わせて使用されてよいモノクローナル抗体の例としては、トラスツズマブ（抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体）；ペルツズマブ（抗ＨＥＲ２  ｍＡｂ）；セツキシマブ（上皮成長因子受容体ＥＧＦＲに対するキメラモノクローナル抗体）；パニツムマブ（抗ＥＧＦＲ抗体）；ニモツズマブ（抗ＥＧＦＲ抗体）；ザルツムマブ（抗ＥＧＦＲ  ｍＡｂ）；ネシツムマブ（抗ＥＧＦＲ  ｍＡｂ）；ＭＤＸ−２１０（ヒト化抗ＨＥＲ−２二重特異的抗体）；ＭＤＸ−２１０（ヒト化抗ＨＥＲ−２二重特異的抗体）；ＭＤＸ−４４７（ヒト化抗ＥＧＦ受容体二重特異的抗体）；リツキシマブ（キメラマウス／ヒト抗ＣＤ２０  ｍＡｂ）；オビヌツズマブ（抗ＣＤ２０  ｍＡｂ）；オファツムマブ（抗ＣＤ２０  ｍＡｂ）；トシツモマブ（Tositumumab）−Ｉ１３１（抗ＣＤ２０  ｍＡｂ）；イブリツモマブチウキセタン（抗ＣＤ２０  ｍＡｂ）；ベバシズマブ（抗ＶＥＧＦ  ｍＡｂ）；ラムシルマブ（抗ＶＥＧＦＲ２  ｍＡｂ）；ラニビズマブ（抗ＶＥＧＦ  ｍＡｂ）；アフリベルセプト（ＩｇＧ１  Ｆｃに融合したＶＥＧＦＲ１およびＶＥＧＦＲ２の細胞外ドメイン）；ＡＭＧ３８６（ＩｇＧ１  Ｆｃに融合したアンジオポエチン１および２結合ペプチド）；ダロツズマブ（抗ＩＧＦ−１Ｒ  ｍＡｂ）；ゲムツズマブオゾガマイシン（抗ＣＤ３３  ｍＡｂ）；アレムツズマブ（抗キャンパス１／ＣＤ５２  ｍＡｂ）；ブレンツキシマブベドチン（抗ＣＤ３０  ｍＡｂ）；カツマキソマブ（上皮細胞接着分子およびＣＤ３を標的化する二重特異的ｍＡｂ）；ナプツモマブ（抗５Ｔ４  ｍＡｂ）；ギレンツキシマブ（抗炭酸脱水酵素ｉｘ）；またはファルレツズマブ（抗葉酸受容体）が挙げられるがこれらに限定されない。他の例としては、Ｐａｎｏｒｅｘ（商標）（１７−１Ａ）（マウスモノクローナル抗体）；Ｐａｎｏｒｅｘ（＠（１７−１Ａ）（キメラマウスモノクローナル抗体）；ＢＥＣ２（ＧＤエピトープを模倣する抗イディオタイプｍＡｂ）（ＢＣＧを伴う）；オンコリム（Oncolym）（Ｌｙｍ−１モノクローナル抗体）；ＳＭＡＲＴ  Ｍ１９５  Ａｂ、ヒト化１３’１ＬＹＭ−１（オンコリム）、Ｏｖａｒｅｘ（Ｂ４３．１３、抗イディオタイプマウスｍＡｂ）；腺癌上のＥＧＰ４０（１７−１Ａ）汎癌性抗原（pancarcinoma  antigen）に結合する３６２２Ｗ９４  ｍＡｂ；ゼナパックス（ＳＭＡＲＴ  Ａｎｔｉ−Ｔａｃ（ＩＬ−２受容体）；ＳＭＡＲＴ  Ｍ１９５  Ａｂ、ヒト化Ａｂ、ヒト化）；ＮｏｖｏＭＡｂ−Ｇ２（汎癌性特異的Ａｂ）；ＴＮＴ（ヒストン抗原に対するキメラｍＡｂ）；ＴＮＴ（ヒストン抗原に対するキメラｍＡｂ）；Ｇｌｉｏｍａｂ−Ｈ（モノクローナルヒト化Ａｂ）；ＧＮＩ−２５０  Ｍａｂ；ＥＭＤ−７２０００（キメラＥＧＦアンタゴニスト）；ＬｙｍｐｈｏＣｉｄｅ（ヒト化ＩＬ．Ｌ．２抗体）；およびＭＤＸ−２６０二重特異的、ＧＤ−２標的化、ＡＮＡ  Ａｂ、ＳＭＡＲＴ  ＩＤＩＯ  Ａｂ、ＳＭＡＲＴ  ＡＢＬ  ３６４  ＡｂまたはＩｍｍｕＲＡＩＴ−ＣＥＡなどの抗体が挙げられる。抗体の例としては、米国特許第５，７３６，１６７号、米国特許第７，０６０，８０８号、および米国特許第５，８２１，３３７号に開示されているものが挙げられる。
【０２１７】
抗体のさらなる例としては、ザヌリムマブ（Zanulimumab）（抗ＣＤ４  ｍＡｂ）、ケリキシマブ（抗ＣＤ４  ｍＡｂ）；イピリムマブ（ＭＤＸ−１０１；抗ＣＴＬＡ−４  ｍＡｂ）；トレメリムマブ（Tremilimumab）（抗ＣＴＬＡ−４  ｍＡｂ）；（ダクリズマブ（抗ＣＤ２５／ＩＬ−２Ｒ  ｍＡｂ）；バシリキシマブ（抗ＣＤ２５／ＩＬ−２Ｒ  ｍＡｂ）；ＭＤＸ−１１０６（抗ＰＤ１  ｍＡｂ）；ＧＩＴＲに対する抗体；ＧＣ１００８（抗ＴＧＦ−β抗体）；メテリムマブ（metelimumab）／ＣＡＴ−１９２（抗ＴＧＦ−β抗体）；レルデリムマブ（lerdelimumab）／ＣＡＴ−１５２（抗ＴＧＦ−β抗体）；ＩＤ１１（抗ＴＧＦ−β抗体）；デノスマブ（抗ＲＡＮＫＬ  ｍＡｂ）；ＢＭＳ−６６３５１３（ヒト化抗４−１ＢＢ  ｍＡｂ）；ＳＧＮ−４０（ヒト化抗ＣＤ４０  ｍＡｂ）；ＣＰ８７０，８９３（ヒト抗ＣＤ４０  ｍＡｂ）；インフリキシマブ（キメラ抗ＴＮＦ  ｍＡｂ；アダリムマブ（ヒト抗ＴＮＦ  ｍＡｂ）；セルトリズマブ（ヒト化Ｆａｂ抗ＴＮＦ）；ゴリムマブ（抗ＴＮＦ）；エタネルセプト（ＩｇＧ１  Ｆｃに融合したＴＮＦＲの細胞外ドメイン）；ベラタセプト（Ｆｃに融合したＣＴＬＡ−４の細胞外ドメイン）；アバタセプト（Ｆｃに融合したＣＴＬＡ−４の細胞外ドメイン）；ベリムマブ（抗Ｂリンパ球刺激剤）；ムロモナブ−ＣＤ３（抗ＣＤ３  ｍＡｂ）；オテリキシズマブ（抗ＣＤ３  ｍＡｂ）；テプリズマブ（抗ＣＤ３  ｍＡｂ）；トシリズマブ（抗ＩＬ６Ｒ  ｍＡｂ）；ＲＥＧＮ８８（抗ＩＬ６Ｒ  ｍＡｂ）；ウステキヌマブ（抗ＩＬ−１２／２３  ｍＡｂ）；ブリアキヌマブ（抗ＩＬ−１２／２３  ｍＡｂ）；ナタリズマブ（抗α４  インテグリン）；ベドリズマブ（抗α４  β７インテグリンｍＡｂ）；Ｔ１  ｈ（抗ＣＤ６  ｍＡｂ）；エプラツズマブ（抗ＣＤ２２  ｍＡｂ）；エファリズマブ（抗ＣＤ１１ａ  ｍＡｂ）；およびアタシセプト（Ｆｃと融合した膜貫通活性化因子およびカルシウムモジュレートリガンド相互作用因子の細胞外ドメイン）が挙げられる。
ａ．受動免疫療法
【０２１８】
がんの受動免疫療法のための多数の異なるアプローチが存在する。それらは大まかに以下に分類することができる：抗体単独の注射；毒素または化学療法剤に連結した抗体の注射；放射活性同位体に連結した抗体の注射；抗イディオタイプ抗体の注射；そして最後に、骨髄中の腫瘍細胞のパージング。
【０２１９】
ヒトモノクローナル抗体は患者においてほとんどまたは全く副作用を生じさせないため、好ましくは、ヒトモノクローナル抗体が受動免疫療法において用いられる。皮膚再発性黒色腫を患う患者の病巣内にガングリオシド抗原に対するヒトモノクローナル抗体が投与されている（IrieおよびMorton、１９８６年）。連日または週毎の病巣内注射後に１０人の患者のうち６人において退縮が観察された。別の研究では、２つのヒトモノクローナル抗体の病巣内注射により中等度の成功が達成された（Irieら、１９８９年）。
【０２２０】
２つの異なる抗原を対象とする１つより多くのモノクローナル抗体またはさらには複数の抗原特異性を有する抗体を投与することが好都合なことがある。治療プロトコールはまた、リンホカインまたはBajorinら（１９８８年）に記載される他の免疫エンハンサーの投与を含んでもよい。ヒトモノクローナル抗体の開発は本明細書の他の箇所にさらに詳細に記載される。
ｂ．能動免疫療法
【０２２１】
能動免疫療法では、通常、別個の細菌アジュバントと共に、抗原ペプチド、ポリペプチドもしくはタンパク質、または自己もしくは同種の腫瘍細胞組成物または「ワクチン」が投与される（RavindranathおよびMorton、１９９１年；MortonおよびRavindranath、１９９６年；Mortonら、１９９２年；Mitchellら、１９９０年；Mitchellら、１９９３年）。黒色腫の免疫療法では、高いＩｇＭ応答が誘発される患者は、多くの場合、ＩｇＭ抗体が誘発されないまたはその誘発が低い患者より生存が良好である（Mortonら、１９９２年）。ＩｇＭ抗体は、多くの場合、一過性の抗体であり、この規則の例外は、抗ガングリオシドまたは抗炭水化物抗体であると思われる。
ｃ．養子免疫療法
【０２２２】
養子免疫療法では、患者の循環リンパ球、または腫瘍浸潤リンパ球がｉｎ  ｖｉｔｒｏで単離され、リンホカイン、例えばＩＬ−２により活性化されまたは腫瘍壊死のための遺伝子を導入され、再投与される（Rosenbergら、１９８８年；１９８９年）。これを達成するために、動物、またはヒト患者に、本明細書に記載されるアジュバントを組み込んだ抗原ペプチド組成物と組み合わせて免疫学的に有効量の活性化リンパ球が投与される。活性化リンパ球は、最も好ましくは、血液または腫瘍試料から以前に単離され、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで活性化（または「増幅」）された患者自身の細胞である。この形態の免疫療法は、いくつもの症例で黒色腫および腎臓癌の退縮を生じさせたが、レスポンダーのパーセンテージは、応答しなかった者と比較してわずかであった。より最近では、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法と称される、ＣＡＲを発現する遺伝子操作されたＴ細胞をそのような養子免疫細胞療法に組み込んだ時に、より高い奏効率が観察されている。同様に、自己および同種の両方のナチュラルキラー細胞が単離され、増幅され、受容体またはリガンドを発現するように遺伝子改変されて、それらの結合性および腫瘍細胞の殺傷が促進されている。
４．他の剤
【０２２３】
処置の治療効果を向上させるために、本明細書で提供される組成物と組み合わせて他の剤を使用してもよいことが想定される。これらの追加の剤としては、免疫調節剤、細胞表面受容体およびＧＡＰジャンクションの上方調節に影響する剤、細胞増殖抑制剤および分化剤、細胞接着の阻害剤、またはアポトーシス誘導因子への過剰増殖性細胞の感受性を増加させる剤が挙げられる。免疫調節剤としては、腫瘍壊死因子；インターフェロンアルファ、ベータ、およびガンマ；ＩＬ−２および他のサイトカイン；Ｆ４２Ｋおよび他のサイトカインアナログ；またはＭＩＰ−１、ＭＩＰ−１ベータ、ＭＣＰ−１、ＲＡＮＴＥＳ、および他のケモカインが挙げられる。細胞表面受容体またはそれらのリガンド、例えば、Ｆａｓ／Ｆａｓリガンド、ＤＲ４またはＤＲ５／ＴＲＡＩＬの上方調節は、過剰増殖性細胞に対するオートクラインまたはパラクライン効果の確立により、本明細書で提供される組成物のアポトーシス誘導能力を増強することがさらに想定される。ＧＡＰジャンクションの数を上昇させることによる細胞間シグナル伝達の増加は、隣接する過剰増殖性細胞集団に対する抗過剰増殖性効果を増加させる。他の実施形態では、細胞増殖抑制剤または分化剤は、治療の抗過剰増殖（anti-hyerproliferative）有効性を向上させるために本明細書で提供される組成物と組み合わせて使用することができる。細胞接着の阻害剤は、本発明の有効性を向上させることが想定される。細胞接着阻害剤の例は、焦点接着キナーゼ（ＦＡＫ）阻害剤およびロバスタチンである。アポトーシスへの過剰増殖性細胞の感受性を増加させる他の剤、例えば抗体ｃ２２５を本明細書で提供される組成物と組み合わせて使用して治療有効性を向上できることがさらに想定される。
【０２２４】
さらなる実施形態では、他の剤は、１つまたは複数の腫瘍溶解性ウイルス、例えば、ｐ５３および／またはＩＬ２４以外の遺伝子、例えばサイトカインを発現するように操作された腫瘍溶解性ウイルスであってよい。腫瘍溶解性ウイルスの例としては、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルス、レンチウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、ワクシニアウイルス、水胞性口内炎ウイルス、ポリオウイルス、ニューカッスル病ウイルス、エプスタイン・バーウイルス、インフルエンザウイルスおよびレオウイルスが挙げられる。特定の実施形態では、他の剤は、ＧＭ−ＣＳＦを発現するように遺伝子操作された腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスであるタリモジーン・ラハーパレプベック（Ｔ−ＶＥＣ）である。タリモジーン・ラハーパレプベック、ＨＳＶ−１［株ＪＳ１］ＩＣＰ３４．５−／ＩＣＰ４７−／ｈＧＭ−ＣＳＦ（以前にはＯｎｃｏＶＥＸＧＭ  ＣＳＦとして公知）は、固形腫瘍中で選択的に複製される免疫増進型ＨＳＶ−１を含む腫瘍内に送達される腫瘍溶解性免疫療法である。（Luiら、Gene  Therapy、１０巻：２９２〜３０３頁、２００３年；米国特許第７，２２３，５９３号および米国特許第７，５３７，９２４号；参照することにより本明細書に組み込まれる）。２０１５年１０月に、米国食品医薬品局は、手術不能の腫瘍を有する患者における黒色腫の治療について、商標名ＩＭＬＹＧＩＣ（商標）の下でＴ−ＶＥＣを承認した。Ｔ−ＶＥＣの投与の特徴および方法は、例えば、ＩＭＬＹＧＩＣ（商標）パッケージ挿入物（Ａｍｇｅｎ、２０１５年）および米国特許出願公開第２０１５／０２０２２９０号（これらの両方は参照することにより本明細書に組み込まれる）に記載されている。例えば、タリモジーン・ラハーパレプベックは、典型的に、１週目の１日目に最大４．０ｍｌの１０６プラーク形成単位／ｍＬ（ＰＦＵ／ｍＬ）の用量の後、４週目の１日目およびその後に２週毎（±３日）に最大４．０ｍｌの１０８ＰＦＵ／ｍＬの用量で、注射可能な皮膚、皮下、および結節性腫瘍への腫瘍内注射により投与される。腫瘍に注射されるタリモジーン・ラハーパレプベックの推奨される体積は腫瘍の大きさに依存し、注射体積ガイドラインにしたがって決定されるべきである。Ｔ−ＶＥＣは黒色腫患者において臨床活性が実証されているが、多くのがん患者はＴ−ＶＥＣ治療に応答しないか、または応答を止める。一実施形態では、局所／アブスコパルウイルス組成物および少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤は、Ｔ−ＶＥＣ療法の後、間または前に投与されて、治療抵抗性を後退させることができる。例示的な腫瘍溶解性ウイルスとしては、Ａｄ５−ｙＣＤ／ｍｕｔＴＫＳＲ３９ｒｅｐ−ｈＩＬ１２、Ｃａｖａｔａｋ（商標）、ＣＧ００７０、ＤＮＸ−２４０１、Ｇ２０７、ＨＦ１０、ＩＭＬＹＧＩＣ（商標）、ＪＸ−５９４、ＭＧ１−ＭＡ３、ＭＶ−ＮＩＳ、ＯＢＰ−３０１、Ｒｅｏｌｙｓｉｎ（登録商標）、Ｔｏｃａ  ５１１、オンコリン（Oncorine）、およびＲＩＧＶＩＲが挙げられるがこれらに限定されない。他の例示的な腫瘍溶解性ウイルスは、例えば、国際特許出願公開ＷＯ２０１５／０２７１６３、ＷＯ２０１４／１３８３１４、ＷＯ２０１４／０４７３５０、およびＷＯ２０１６／００９０１７（これらの全ては参照することにより本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【０２２５】
ある特定の実施形態では、本発明の実施形態と組み合わせてまたは以前に記載された任意の他のがん療法と組み合わせてホルモン療法が使用されてもよい。ホルモンの使用は、ある特定のホルモン、例えばテストステロンまたはエストロゲンのレベルを低下させまたはその効果を遮断するためにある特定のがん、例えば、乳がん、前立腺がん、卵巣がん、または子宮頸がんの治療において用いることができる。この治療は、多くの場合、治療オプションとしてまたは転移のリスクを低減させるために少なくとも１つの他のがん療法と組み合わせて使用される。
【０２２６】
一部の態様では、少なくとも１つの追加の抗がん治療は、ｐ５３活性を遮断するためなどの、ＨＤＭ２（ＭＤＭ２としても公知）および／またはＨＤＭ４の阻害剤（例えば、小分子阻害剤）である。特定の態様では、ＨＤＭ２の小分子阻害剤は、ＨＤＭ２０１、シス−イミダゾリン（例えば、ヌトリン）、ベンゾジアゼピン（ＢＤＰ）、およびスピロオキシインドールである。本発明の方法において使用するための他の例示的なＨＤＭ２および／またはＨＤＭ４阻害剤は、例えば、Carryら、２０１３年；PatelおよびPlayer、２００８年；米国特許第８，８４６，６５７号；国際特許出願公開ＷＯ２０１４１２３８８２；米国特許第９，０７３，８９８号；および国際特許出願公開ＷＯ２０１４１１５０８０（これらの全ては参照することにより本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【０２２７】
一部の態様では、追加の抗がん剤は、プロテインキナーゼまたは成長因子シグナル伝達経路に関与する受容体を阻害するプロテインキナーゼ阻害剤またはモノクローナル抗体、例えば、ＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ、ＡＫＴ、Ｅｒｂ１、Ｅｒｂ２、ＥｒｂＢ、Ｓｙｋ、Ｂｃｒ−Ａｂｌ、ＪＡＫ、Ｓｒｃ、ＧＳＫ−３、ＰＩ３Ｋ、Ｒａｓ、Ｒａｆ、ＭＡＰＫ、ＭＡＰＫＫ、ｍＴＯＲ、ｃ−Ｋｉｔ、ｅｐｈ受容体またはＢＲＡＦ阻害剤である。プロテインキナーゼまたは成長因子シグナル伝達経路阻害剤の非限定的な例としては、アファチニブ、アキシチニブ、ベバシズマブ、ボスチニブ、セツキシマブ、クリゾチニブ、ダサチニブ、エルロチニブ、フォスタマチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、レンバチニブ、ムブリチニブ、ニロチニブ、パニツムマブ、パゾパニブ、ペガプタニブ、ラニビズマブ、ルキソリチニブ、サラカチニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、トラスツズマブ、バンデタニブ、ＡＰ２３４５１、ベムラフェニブ、ＭＫ−２２０６、ＧＳＫ６９０６９３、Ａ−４４３６５４、ＶＱＤ−００２、ミルテホシン、ペリホシン、ＣＡＬ１０１、ＰＸ−８６６、ＬＹ２９４００２、ラパマイシン、テムシロリムス、エベロリムス、リダホロリムス、アルボシジブ、ゲニステイン、セルメチニブ、ＡＺＤ−６２４４、バタラニブ、Ｐ１４４６Ａ−０５、ＡＧ−０２４３２２、ＺＤ１８３９、Ｐ２７６−００、ＧＷ５７２０１６またはこれらの混合物が挙げられる。ある特定の態様では、追加の抗がん剤はチロシンキナーゼ阻害剤、例えばブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害剤である。一部の態様では、本発明において用いられる小分子ＢＴＫ阻害剤は、ＢＴＫタンパク質を（例えば、非可逆的に）阻害する通常５００ダルトンまたはそれ未満の分子量を有する化学合成された分子を指す。例示的なＢＴＫ阻害剤としては、イブルチニブ、アカラブルチニブ（ＡＣＰ−１９６）、ＯＮＯ−４０５９、スペブルチニブ（ＣＣ−２９２）、ＨＭ−７１２２４、ＣＧ−０３６８０６、ＧＤＣ−０８３４、ＯＮＯ−４０４９、ＲＮ−４８６、ＳＮＳ−０６２、ＴＡＳ−５５６７、ＡＶＬ−１０１、ＡＶＬ−２９１、ＰＣＩ−４５２６１、ＨＣＩ−１６８４、ＰＬＳ−１２３、およびＢＧＢ−３１１１が挙げられる。本発明の方法において使用するための追加のＢＴＫ阻害剤は、例えば、ＰＣＴ国際公開ＷＯ２０１４２１０２５５、ＷＯ２０１６０８７９９４、ＷＯ２０１３０１０３８０、ＷＯ２０１５０６１２４７、ＷＯ２０１３０６７２７４、およびＷＯ１９９９０５４２８６ならびに米国特許第６，１６０，０１０号（これらの全ては参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【０２２８】
一部の態様では、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、ブパルリシブ、イデラリシブ、ＢＹＬ−７１９、ダクトリシブ、ＰＦ−０５２１２３８４、ピクチリシブ、コパンリシブ、コパンリシブジヒドロクロリド、ＺＳＴＫ−４７４、ＧＳＫ−２６３６７７１、デュベリシブ、ＧＳ−９８２０、ＰＦ−０４６９１５０２、ＳＡＲ−２４５４０８、ＳＡＲ−２４５４０９、ソノリシブ（sonolisib）、Ａｒｃｈｅｘｉｎ、ＧＤＣ−００３２、ＧＤＣ−０９８０、アピトリシブ、ピララリシブ（pilaralisib）、ＤＬＢＳ  １４２５、ＰＸ−８６６、ボクスタリシブ（voxtalisib）、ＡＺＤ−８１８６、ＢＧＴ−２２６、ＤＳ−７４２３、ＧＤＣ−００８４、ＧＳＫ−２１２６４５８、ＩＮＫ−１１１７、ＳＡＲ−２６０３０１、ＳＦ−１１２６、ＡＭＧ−３１９、ＢＡＹ−１０８２４３９、ＣＨ−５１  ３２７９９、ＧＳＫ−２２６９５５７、Ｐ−７１７０、ＰＷＴ−３３５９７、ＣＡＬ−２６３、ＲＧ−７６０３、ＬＹ−３０２３４１４、ＲＰ−５２６４、ＲＶ−１７２９、タセリシブ、ＴＧＲ−１２０２、ＧＳＫ−４１８、ＩＮＣＢ−０４００９３、パヌリシブ（Panulisib）、ＧＳＫ−１０５９６１５、ＣＮＸ−１３５１、ＡＭＧ−５１１、ＰＱＲ−３０９、１７ベータ−ヒドロキシウォルトマンニン、ＡＥＺＳ−１２９、ＡＥＺＳ−１３６、ＨＭ−５０１６６９９、ＩＰＩ−４４３、ＯＮＣ−２０１、ＰＦ−４９８９２１６、ＲＰ−６５０３、ＳＦ−２６２６、Ｘ−３３９、ＸＬ−４９９、ＰＱＲ−４０１、ＡＥＺＳ−１３２、ＣＺＣ−２４８３２、ＫＡＲ−４１４１、ＰＱＲ−３１１、ＰＱＲ−３１６、ＲＰ−５０９０、ＶＳ−５５８４、Ｘ−４８０、ＡＥＺＳ−１２６、ＡＳ−６０４８５０、ＢＡＧ−９５６、ＣＡＬ−１３０、ＣＺＣ−  ２４７５８、ＥＴＰ−４６３２１、ＥＴＰ−４７１８７、ＧＮＥ−３１７、ＧＳ−５４８２０２、ＨＭ−０３２、ＫＡＲ−１１３９、ＬＹ−２９４００２、ＰＦ−０４９７９０６４、ＰＩ−６２０、ＰＫＩ−４０２、ＰＷＴ−１４３、ＲＰ−６５３０、３−ＨＯＩ−ＢＡ−０１、ＡＥＺＳ−１３４、ＡＳ−０４１１６４、ＡＳ−２５２４２４、ＡＳ−６０５２４０、ＡＳ−６０５８５８、ＡＳ−６０６８３９、ＢＣＣＡ−６２１Ｃ、ＣＡＹ−１０５０５、ＣＨ−５０３３８５５、ＣＨ−５１０８１３４、ＣＵＤＣ−９０８、ＣＺＣ−１９９４５、Ｄ−１０６６６９、Ｄ−８７５０３、ＤＰＴ−ＮＸ７、ＥＴＰ−４６４４４、ＥＴＰ−４６９９２、ＧＥ−２１、ＧＮＥ−１２３、ＧＮＥ−１５１、ＧＮＥ−２９３、ＧＮＥ−３８０、ＧＮＥ−３９０、ＧＮＥ−４７７、ＧＮＥ−４９０、ＧＮＥ−４９３、ＧＮＥ−６１４、ＨＭＰＬ−５１８、ＨＳ−１０４、ＨＳ−１０６、ＨＳ−１１６、ＨＳ−１７３、ＨＳ−１９６、ＩＣ−４８６０６８、ＩＮＫ−０５５、ＫＡＲ１１４１、ＫＹ−１２４２０、ウォルトマンニン、Ｌｉｎ−０５、ＮＰＴ−５２０−３４、ＰＦ−０４６９１５０３、ＰＦ−０６４６５６０３、ＰＧＮＸ−０１、ＰＧＮＸ−０２、ＰＩ６２０、ＰＩ−１０３、ＰＩ−５０９、ＰＩ−５１６、ＰＩ−５４０、ＰＩＫ−７５、ＰＷＴ−４５８、ＲＯ−２４９２、ＲＰ−５１５２、ＲＰ−５２３７、ＳＢ−２０１５、ＳＢ−２３１２、ＳＢ−２３４３、ＳＨＢＭ−１００９、ＳＮ３２９７６、ＳＲ−１３１７９、ＳＲＸ−２５２３、ＳＲＸ−２５５８、ＳＲＸ−２６２６、ＳＲＸ−３６３６、ＳＲＸ−５０００、ＴＧＲ−５２３７、ＴＧＸ−２２１、ＵＣＢ−５８５７、ＷＡＹ−２６６１７５、ＷＡＹ−２６６１７６、ＥＩ−２０１、ＡＥＺＳ−１３１、ＡＱＸ−ＭＮ１００、ＫＣＣ−ＴＧＸ、ＯＸＹ−１１１Ａ、ＰＩ−７０８、ＰＸ−２０００、およびＷＪＤ−００８からなるＰＩ３Ｋ阻害剤の群から選択される。
【０２２９】
追加のがん療法は、例えば、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ１、ＥｒｂＢ−１、ＨＥＲ１）、ＥｒｂＢ−２（ＨＥＲ２／ｎｅｕ）、ＥｒｂＢ−３／ＨＥＲ３、ＥｒｂＢ−４／ＨＥＲ４、ＥＧＦＲリガンドファミリー；インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦＲ）ファミリー、ＩＧＦ結合タンパク質（ＩＧＦＢＰ）、ＩＧＦＲリガンドファミリー（ＩＧＦ−１Ｒ）；血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）ファミリー、ＰＤＧＦＲリガンドファミリー；線維芽細胞増殖因子受容体（ＦＧＦＲ）ファミリー、ＦＧＦＲリガンドファミリー、血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）ファミリー、ＶＥＧＦファミリー；ＨＧＦ受容体ファミリー：ＴＲＫ受容体ファミリー；エフリン（ＥＰＨ）受容体ファミリー；ＡＸＬ受容体ファミリー；白血球チロシンキナーゼ（ＬＴＫ）受容体ファミリー；ＴＩＥ受容体ファミリー、アンジオポエチン１、２；受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体（ＲＯＲ）受容体ファミリー；ジスコイジンドメイン受容体（ＤＤＲ）ファミリー；ＲＥＴ受容体ファミリー；ＫＬＧ受容体ファミリー；ＲＹＫ受容体ファミリー；ＭｕＳＫ受容体ファミリー；トランスフォーミング増殖因子アルファ（ＴＧＦ−α）、ＴＧＦ−α受容体；トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦ−β）、ＴＧＦ−β受容体；インターロイキン１３受容体アルファ２鎖（ＩＬ１３Ｒアルファ２）、インターロイキン６（ＩＬ−６）、ＩＬ−６受容体、インターロイキン４、ＩＬ−４受容体、サイトカイン受容体、クラスＩ（ヘマトポエチンファミリー）およびクラスＩＩ（インターフェロン／ＩＬ−１０ファミリー）受容体、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）ファミリー、ＴＮＦ−α、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体スーパーファミリー（ＴＮＴＲＳＦ）、死受容体ファミリー、ＴＲＡＩＬ受容体；がん精巣（ＣＴ）抗原、系列特異的抗原、分化抗原、アルファ−アクチニン４、ＡＲＴＣ１、切断点クラスター領域−エーベルソン（Ｂｃｒ−ａｂｌ）融合産物、Ｂ−ＲＡＦ、カスパーゼ５（ＣＡＳＰ−５）、カスパーゼ８（ＣＡＳＰ−８）、ベータカテニン（ＣＴＮＮＢ１）、細胞分裂周期２７（ＣＤＣ２７）、サイクリン依存性キナーゼ４（ＣＤＫ４）、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＯＡ−１、ｄｅｋ−ｃａｎ融合タンパク質、ＥＦＴＵＤ−２、伸長因子２（ＥＬＦ２）、Ｅｔｓバリアント遺伝子６／急性骨髄性白血病１遺伝子ＥＴＳ（ＥＴＣ６−ＡＭＬ１）融合タンパク質、フィブロネクチン（ＦＮ）、ＧＰＮＭＢ、低密度脂質受容体／ＧＤＰ−Ｌフコース：ベータ−Ｄガラクトース２−アルファ−Ｌフコシルトランスフェラーゼ（Lfucosyltraosferase）（ＬＤＬＲ／ＦＵＴ）融合タンパク質、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ａ２遺伝子中のアルファ２ドメインのアルファヘリックスの残基１７０におけるアルギニンからイソロイシンへの交換（ＨＬＡ−Ａ＊２０１−Ｒ１７０Ｉ）、ＭＬＡ−Ａ１１、変異型熱ショックタンパク質７０−２（ＨＳＰ７０−２Ｍ）、ＫＩＡＡ０２０５、ＭＡＲＴ２、黒色腫遍在性変異型（melanoma  ubiquitous  mutated）１、２、３（ＭＵＭ−１、２、３）、前立腺酸ホスファターゼ（ＰＡＰ）、ｎｅｏ−ＰＡＰ、ミオシンクラス１、ＮＦＹＣ、ＯＧＴ、ＯＳ−９、ｐｍｌ−ＲＡＲアルファ融合タンパク質、ＰＲＤＸ５、ＰＴＰ��Ｋ、Ｋ−ｒａｓ（ＫＲＡＳ２）、Ｎ−ｒａｓ（ＮＲＡＳ）、ＨＲＡＳ、ＲＢＡＦ６００、ＳＩＲＴ２、ＳＮＲＰＤ１、ＳＹＴ−ＳＳＸ１または−ＳＳＸ２融合タンパク質、トリオースリン酸イソメラーゼ、ＢＡＧＥ、ＢＡＧＥ−１、ＢＡＧＥ−２、３、４、５、ＧＡＧＥ−１、２、３、４、５、６、７、８、ＧｎＴ−Ｖ（異常なＮ−アセチルグルコサミニル（N-acetyl  giucosaminyl）トランスフェラーゼＶ、ＭＧＡＴ５）、ＨＥＲＶ−Ｋ−ＭＥＬ、ＫＫ−ＬＣ、ＫＭ−ＨＮ−１、ＬＡＧＥ、ＬＡＧＥ−１、黒色腫上のＣＴＬ認識抗原（ＣＡＭＥＬ）、ＭＡＧＥ−Ａ１（ＭＡＧＥ−１）、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−ＡＳ、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ８、ＭＡＧＥ−Ａ９、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＭＡＧＥ−Ａ１１、ＭＡＧＥ−Ａ１２、ＭＡＧＥ−３、ＭＡＧＥ−Ｂ１、ＭＡＧＥ−Ｂ２、ＭＡＧＥ−Ｂ５、ＭＡＧＥ−Ｂ６、ＭＡＧＥ−Ｃ１、ＭＡＧＥ−Ｃ２、ムチン１（ＭＵＣ１）、ＭＡＲＴ−１／Ｍｅｌａｎ−Ａ（ＭＬＡＮＡ）、ｇｐ１００、ｇｐ１００／Ｐｍｅ１１７（Ｓ１ＬＶ）、チロシナーゼ（ＴＹＲ）、ＴＲＰ−１、ＨＡＧＥ、ＮＡ−８８、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ−２、ＳＡＧＥ、Ｓｐ１７、ＳＳＸ−１、２、３、４、ＴＲＰ２−１ＮＴ２、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、カリクレイン（Kallikfein）４、マンマグロビンＡ（mammaglobm-A）、ＯＡ１、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、前立腺特異的膜抗原、ＴＲＰ−１／ｇｐ７５、ＴＲＰ−２、アディポフィリン、黒色腫（nielanorna）に存在しないインターフェロン誘導性タンパク質２（ＡＩＭ−２）、ＢＩＮＧ−４、ＣＰＳＦ、サイクリンＤ１、上皮細胞接着分子（Ｅｐ−ＣＡＭ）、ＥｐｂＡ３、線維芽細胞増殖因子５（ＦＧＦ−５）、糖タンパク質２５０（ｇｐ２５０腸カルボキシルエステラーゼ（ｉＣＥ）、アルファ−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、Ｍ−ＣＳＦ、ｍｄｍ−２、ＭＵＣＩ、ｐ５３（ＴＰ５３）、ＰＢＦ、ＦＲＡＭＥ、ＰＳＭＡ、ＲＡＧＥ−１、ＲＮＦ４３、ＲＵ２ＡＳ、ＳＯＸ１０、ＳＴＥＡＰ１、サバイビン（ＢＩＲＣＳ）、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）、テロメラーゼ、ウィルムス腫瘍遺伝子（ＷＴ１）、ＳＹＣＰ１、ＢＲＤＴ、ＳＰＡＮＸ、ＸＡＧＥ、ＡＤＡＭ２、ＰＡＧＥ−５、ＬＩＰ１、ＣＴＡＧＥ−１、ＣＳＡＧＥ、ＭＭＡ１、ＣＡＧＥ、ＢＯＲＩＳ、ＨＯＭ−ＴＥＳ−８５、ＡＦ１５ｑ１４、ＨＣＡ６６Ｉ、ＬＤＨＣ、ＭＯＲＣ、ＳＧＹ−１、ＳＰＯ１１、ＴＰＸ１、ＮＹ−ＳＡＲ−３５、ＦＴＨＬＩ７、ＮＸＦ２  ＴＤＲＤ１、ＴＥＸ  １５、ＦＡＴＥ、ＴＰＴＥ、免疫グロブリンイディオタイプ、ベンス・ジョーンズタンパク質、エストロゲン受容体（ＥＲ）、アンドロゲン受容体（ＡＲ）、ＣＤ４０、ＣＤ３０、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ３３、ＣＤ４、ＣＤ２５、ＣＤ３、がん抗原７２−４（ＣＡ  ７２−４）、がん抗原１５−３（ＣＡ  １５−３）、がん抗原２７−２９（ＣＡ  ２７−２９）、がん抗原１２５（ＣＡ  １２５）、がん抗原１９−９（ＣＡ  １９−９）、ベータ−ヒト絨毛性ゴナドトロピン、１−２ミクログロブリン、扁平細胞癌抗原、ニューロン特異的エノラーゼ（enoJase）、熱ショックタンパク質ｇｐ９６、ＧＭ２、サルグラモスチム、ＣＴＬＡ−４、７��７アラニンプロリン（７０７−ＡＰ）、Ｔ細胞により認識される腺癌抗原４（adenocarcinoma  antigen  recognized  by  T  cells  4）（ＡＲＴ−４）、癌胎児性抗原ペプチド１（ＣＡＰ−１）、カルシウム活性化クロライドチャネル２（ＣＬＣＡ２）、シクロフィリンＢ（Ｃｙｐ−Ｂ）、ヒト印環腫瘍２（ＨＳＴ−２）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）タンパク質（ＨＰＶ−Ｅ６、ＨＰＶ−Ｅ７、メジャーまたはマイナーカプシド抗原、その他）、エプスタイン・バーウイルス（Epstein-Barr  vims）（ＥＢＶ）タンパク質（ＥＢＶ潜伏性膜タンパク質ＬＭＰ１、ＬＭＰ２；その他）、Ｂ型またはＣ型肝炎ウイルスタンパク質、およびＨＩＶタンパク質を標的化する抗体、ペプチド、ポリペプチド、小分子阻害剤、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡまたは遺伝子療法を含むことができると想定される。
ＶＩ．製品またはキット
【０２３０】
ウイルス組成物および一部の実施形態では少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤（例えば、抗ＰＤ−１抗体および／または抗ＣＴｌＡ−４抗体）を含む製品またはキットも本明細書で提供される。製品またはキットは、個体においてがんを治療しもしくはその進行を遅延させるためまたはがんを有する個体の免疫機能を増進させるためにウイルス組成物と組み合わせて少なくとも１つのチェックポイント阻害剤を使用するための使用説明書を含むパッケージ挿入物をさらに含むことができる。免疫チェックポイント阻害剤および本明細書に記載されるウイルス組成物のいずれも製品またはキットに含めることができる。
【０２３１】
一部の実施形態では、少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤（例えば、抗ＰＤ−１抗体および／または抗ＣＴＬＡ−４抗体）およびウイルス組成物は、同じ容器中または別々の容器中にある。好適な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、バッグおよび注射器が挙げられる。容器は、様々な材料、例えば、ガラス、プラスチック（ポリ塩化ビニルまたはポリオレフィンなど）、または金属合金（ステンレス鋼またはハステロイなど）から形成されてよい。一部の実施形態では、容器は配合物を保持し、容器上、または容器に付随するラベルが、使用のための指示を指し示してよい。製品またはキットは、商業的およびユーザーの見地から望ましい他の材料をさらに含んでよく、これには、他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、針、注射器、および使用のための使用説明書を有するパッケージ挿入物が含まれる。一部の実施形態では、製品は、１つまたは複数の別の剤（例えば、化学療法剤、および抗新生物剤）をさらに含む。１つまたは複数の剤のための好適な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、バッグおよび注射器が挙げられる。
【実施例】
【０２３２】
ＶＩＩ．実施例
以下の実施例は、本発明の好ましい実施形態を実証するために含めたものである。以下の実施例に開示される技術は、本発明の実施においてよく機能することが本発明者により発見された技術を提示するものであり、したがってその実施のための好ましい態様を構成すると考えられることが当業者により理解されるべきである。しかしながら、開示される特定の実施形態において多くの変更を行うことができ、それでもなお本発明の精神および範囲から離れることなく同様または類似の結果を得ることができることを当業者は本開示に照らして理解するべきである。
（実施例１）
局所およびアブスコパル効果ならびに以前の免疫療法への抵抗性の後退の誘導のための免疫チェックポイント阻害剤治療と組み合わせたリラキシンウイルス療法
【０２３３】
以前の免疫療法に抵抗性の腫瘍についての局所およびアブスコパル効果の誘導のためのリラキシンウイルス療法の有効性を免疫適格動物腫瘍モデルにおいて実証した。以下の治療方法、用量、およびスケジュールを利用した。
【０２３４】
動物、腫瘍接種および測定：Ｃ５７ＢＬ／６（Ｂ６）マウス（６〜８週齢）を利用した。動物の右の脇腹にＢ１６Ｆ１０黒色腫細胞（ＡＴＣＣ、５×１０５細胞／マウス）を皮下注射して「原発性腫瘍」を形成させた。腫瘍が約５０ｍｍ３の大きさに達した時に原発性局所腫瘍治療を開始し、これを治療１日目とした。ウイルス治療注射を与えなかったその後に移植した対側の腫瘍の成長を評価することによりアブスコパル治療効果を決定した。腫瘍の長さ（Ｌ）および幅（ｗ）を測定することにより腫瘍成長をモニターし、以下の式：体積＝０．５２３Ｌ（ｗ）２を使用して腫瘍体積を算出した。６０日まで動物をモニターし、腫瘍が約２０００ｍｍ３に達した時に屠殺した。
【０２３５】
ウイルスベクター：使用したリラキシン発現ウイルスはKimら、２００６年に記載された通りであった。簡潔に述べれば、リラキシン遺伝子をＥ３アデノウイルス領域に挿入することによりリラキシン発現複製コンピテント（Ａｄ−ΔＥ１Ｂ−ＲＬＸ）アデノウイルスを生成した。４用量のウイルスベクターを４８時間間隔で腫瘍内に投与した。各ウイルス用量は、５０μｌの体積中に５×１０１０個のウイルス粒子を含有した。
【０２３６】
免疫チェックポイント阻害剤：免疫チェックポイント阻害剤療法の間の腫瘍進行の一般的な臨床条件を模倣するために、腹腔内への１０ｍｇ／ｋｇの用量の抗ＰＤ１治療を１日目に開始し、３日毎に３１日目まで投与した。一部の実験では、以前の免疫療法に抵抗性の腫瘍における腫瘍抑制因子療法の効果を評価するために、抗ＰＤ−１療法での腫瘍進行後に腫瘍抑制因子治療を開始し、抗ＰＤ−１治療の開始の２〜３日後に最初の腫瘍抑制因子療法の用量を与えた。他の実験では、初期治療として免疫チェックポイント阻害剤と並行して腫瘍抑制因子療法を開始した。これらの研究は、免疫チェックポイント阻害剤療法に対して高度に抵抗性であることが公知の腫瘍において行った。Ｂ１６Ｆ１０黒色腫モデルは免疫療法に対して高度に抵抗性であることが公知である。これらのモデルでは、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）での対照治療と類似して免疫チェックポイント阻害剤療法で腫瘍は進行する。ｉｎ  ｖｉｖｏで使用するために特異的に製造された抗マウスＰＤ−１抗体（ＣＤ２７９）はＢｉｏＸｃｅｌｌ（商品番号ＢＥ０１４６）から購入し、抗ＰＤ−Ｌ１および免疫モジュレーター抗ＬＡＧ−３の抗体も同様であった。驚くべきことに、局所領域リラキシンウイルス治療は全身性の免疫チェックポイント阻害剤療法への抵抗性を後退させ、免疫チェックポイント阻害剤治療との予想外の相乗作用を実証し、併用療法はウイルス療法で処置されていない遠位の腫瘍に対して優れたアブスコパル効果を誘導した。これらの予想外の治療効果は、手術、放射線、化学療法、サイトカイン療法ならびに骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）、Ｔ−Ｒｅｇおよび樹状細胞をモジュレートすることが公知の剤と組み合わせた時に増進されることが発見された。
【０２３７】
以前の免疫療法で進行している腫瘍におけるＡｄ−リラキシン＋チェックポイント阻害剤：抗ＰＤ−１と組み合わせたＡｄ−リラキシンの治療有効性を（原発性腫瘍および対側の腫瘍における）腫瘍体積、および生存により評価した。原発性腫瘍体積（図１）に関して、抗ＰＤ−１単剤療法で治療された動物において重篤な腫瘍進行があり、ＰＢＳ処置対照において観察された成長とほとんど差がなかった。対照的に、動物を併用療法（Ａｄ−リラキシン＋抗ＰＤ−１）で治療した時に抗ＰＤ−１抵抗性の後退が観察された。８日目までに、Ａｄ−リラキシン＋抗ＰＤ−１での組合せ治療は、抗ＰＤ−１またはＡｄ−リラキシン療法のいずれか単独と比較して腫瘍体積の大きい減少を誘導した。Ｔ検定の統計分析により、Ａｄ−リラキシン＋抗ＰＤ１の抗腫瘍効果はＡｄ−リラキシン単独（ｐ値０．０２５４）または抗ＰＤ−１単独（ｐ値０．０２３１）と比較して有意であると決定された。組み合わせたＡｄ−リラキシンおよび抗ＰＤ−１の増加した有効性は、ＰＢＳ対照での処置と統計的に異ならなかったＡｄ−リラキシンおよび抗ＰＤ−１療法単独での小さい効果と比較して相加より大きかった。
【０２３８】
アブスコパル有効性のＡｄ−リラキシン＋抗ＰＤ−１を図２に示し、Ａｄ−リラキシンまたはＡｄ−リラキシン＋抗ＰＤ−１治療の組合せのいずれかを原発性腫瘍に与えた齧歯動物において経時的な対側の腫瘍体積を評価した。抗ＰＤ−１単独で処置した原発性腫瘍の成長速度と比較して減少した腫瘍成長を有するＴ検定による統計的に有意なアブスコパル効果は、ウイルス療法注射を与えなかった対側の（二次）腫瘍においても観察された。これらの発見は、ウイルス治療（Ａｄ−リラキシン単独およびＡｄ−リラキシン＋抗ＰＤ１）はアブスコパル効果を誘導したことを指し示す。Ａｄ−リラキシン単独で原発性腫瘍を処置した動物における対側の腫瘍は、抗ＰＤ−１単独で処置した原発性腫瘍の成長速度と比較して有意に遅延した腫瘍成長（ｐ＝０．０２７３）を示した。原発性腫瘍成長の抑制において観察された相乗効果に合致して、対側の腫瘍成長に対するいっそう大きいアブスコパル効果（ｐ＝０．０００９）が、組み合わせたＡｄ−リラキシン＋抗ＰＤ−１で原発性腫瘍を治療したマウスにおいて観察された。
【０２３９】
組み合わせたＡｄ−リラキシン＋抗ＰＤ１療法についての増加した生存有効性を図３に示し、図３は、ＰＢＳ、抗ＰＤ−１、Ａｄ−リラキシンまたはＡｄ−リラキシン＋抗ＰＤ−１の組合せのいずれかで治療したマウスのカプラン・マイヤー生存曲線を示す。抗ＰＤ−１単独での治療と比較して組み合わせたＡｄ−リラキシン＋抗ＰＤ−１で原発性腫瘍を治療したマウスにおいてログランク検定により生存の統計的に有意な増加があった（ｐ＝０．００１０）。組み合わせたＡｄ−リラキシン＋抗ＰＤ−１群についてのメジアン生存の増加は、Ａｄ−リラキシン単独および抗ＰＤ−１単独について観察された別々の効果の相加より大きかった。抗ＰＤ−１単独と比較してＡｄ−リラキシン単独で治療したマウスについて生存の統計的に有意な増加はなかった。相加より大きいＡｄ−リラキシン＋抗ＰＤ−１による増加した生存という発見は、組み合わせたＡｄ−リラキシン＋抗ＰＤ−１療法についての原発性腫瘍成長の抑制において観察された相乗効果および対側の腫瘍成長に対するより大きなアブスコパル効果に合致し、組合せ治療の予想外の相乗効果を反映する。
【０２４０】
対側の腫瘍はいかなる治療剤も注射されなかったことを指摘することは重要である。以上を合わせると、免疫チェックポイント阻害剤療法と組み合わせた特定のウイルスを用いる局所領域治療の組合せは全身性の免疫チェックポイント阻害剤への抵抗性を後退させ、免疫チェックポイント阻害剤治療との予想外の相乗作用を実証し、併用療法はウイルス療法で処置されていない遠位の腫瘍に対して優れたアブスコパル効果を誘導したことをこれらの結果は実証する。
（実施例２）
免疫療法への抵抗性の後退のための免疫チェックポイント阻害剤治療と組み合わせたＶＲＸ−００７（ＡＤＰを過剰発現するように操作されたアデノウイルス）
【０２４１】
アデノウイルス死タンパク質（ＡＤＰ）遺伝子療法と組み合わせた免疫チェックポイント阻害剤治療の有効性を免疫適格動物腫瘍モデルにおいて評価した。ＶＲＸ−００７は、ＡＤＰ遺伝子を過剰発現するように操作されたアデノウイルスである。以下の治療方法、用量、およびスケジュールを利用した。
【０２４２】
動物、腫瘍接種および測定：ＡＤＳ免疫適格腫瘍モデル（Zhangら、２０１５年）をこれらの研究のために利用した。大きい充分に確立された腫瘍においてＶＲＸ−００７およびＶＲＸ−００７＋抗ＰＤ−Ｌ１治療の効果を評価および比較するために、ＶＲＸ−００７治療群の動物は１００ｍｍ３より大きい腫瘍を有した。ＰＢＳビヒクル対照（Ｎ＝１０）、抗ＰＤ−Ｌ１免疫チェックポイント阻害剤（Ｎ＝１０）、ＶＲＸ−００７（Ｎ＝４）またはＶＲＸ−００７＋抗ＰＤ−Ｌ１（Ｎ＝４）を含む４つの治療群を比較した。ＶＲＸ−００７遺伝子療法を計３回の投与で連日１０９プラーク形成単位（ｐｆｕ）の用量で腫瘍内に与えた。抗ＰＤ−Ｌ１で治療した群の動物に３日毎に腹腔内注射（ｉ．ｐ．）で２００μｇを与えた。抗マウスＰＤ−Ｌ１抗体（ＣＤ２７４）はＢｉｏＸｃｅｌｌ（商品番号ＢＥ０１０１）から購入した。
【０２４３】
ベースライン値と比べた療法開始の１５日後（または動物の屠殺時）の腫瘍体積の変化のパーセンテージを比較することにより治療有効性を評価した（図４）。ＶＲＸ−００７治療群の動物の数が少ないことから、クラスカル・ウォリス一元配置分散分析（ランクでの一元配置分散分析）を使用し、治療群間の統計的有意差が実証された（ｐ値＝０．０２５８）。ＶＲＸ−００７（ｐ＝０．１２３２）および抗ＰＤ−Ｌ１（ｐ＝０．５８６６）のいずれも別々ではビヒクル対照での処置と統計的に異ならなかったので、組み合わせたＶＲＸ−００７＋抗ＰＤ−Ｌ１療法の統計的に有意な抗腫瘍効果（ｐ＝０．００４７）は予想外かつ驚くべきことに相乗的であった（図４）。組み合わせたＶＲＸ−００７および抗ＰＤ−Ｌ１の増加した有効性は相加より大きく、組合せ治療はまた、抗ＰＤ−Ｌ１療法単独より統計的に優れていた（ｐ＝０．０１５７）。さらには、Ｔ検定の統計分析により、ＶＲＸ−００７＋抗ＰＤ１の抗腫瘍効果はＶＲＸ−００７単独と比較して有意であることが明らかになった（対応のないｐ値＝０．０３５６）。よって、組み合わせたＶＲＸ−００７＋抗ＰＤ−Ｌ１療法の有効性および相乗作用は、いずれの治療も単独では統計的に有意な有効性を実証しなかったので予想外であった。
【０２４４】
上記実施例１および実施例２の発見に基づいて、ウイルス組成物療法の臨床応用は初期がん治療として応用され、またはそれらは、免疫療法、例えば、ＴＶＥＣもしくは免疫チェックポイント阻害剤療法、またはサイトカインもしくはインターロイキンまたは養子細胞療法または放射線または化学療法または小分子療法を含む他の療法への抵抗性の発生後に投与される。
【０２４５】
要約：実施例に記載される動物研究は、チェックポイント阻害剤療法に抵抗性であることが公知の、がんの高度に侵攻性のモデルを使用している。驚くべきことに、ウイルス組成物治療の局所領域投与は、全身性の免疫チェックポイント阻害剤療法への抵抗性を後退させ、免疫チェックポイント阻害剤治療との予想外の相乗作用を実証し、併用療法はウイルス組成物療法で処置されていない遠位の腫瘍に対して優れたアブスコパル効果を誘導した。これらの予想外の全身性治療効果は、放射線、手術、化学療法、サイトカイン療法、骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）（５ＦＵ）、Ｔ−Ｒｅｇ（ＣＴＸ）および樹状細胞（抗ＰＤ−１および抗ＬＡＧ−３）をモジュレートすることが公知の標的化療法および剤などの追加の療法と組み合わせた時に増進されることが見出される。
【０２４６】
本明細書において開示および特許請求された全ての方法は、本開示を考慮して過度の実験なく製造および実施することができる。本発明の組成物および方法を好ましい実施形態に関して記載したが、本発明の概念、精神および範囲から離れることなく、方法に、また本明細書に記載される方法のステップまたはステップの順序においてバリエーションを適用してもよいことが当業者に明らかであろう。より具体的には、同じまたは類似の結果を達成しながら、化学的および生理学的の両方で関連するある特定の剤により本明細書に記載される剤を置換してもよいことが明らかであろう。当業者に明らかな全てのそのような類似の置換および改変は、添付の特許請求の範囲により定義される本発明の精神、範囲および概念に含まれると考えられる。
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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