(57)【要約】  本発明は、サイクリン依存的キナーゼ(CDK)阻害剤を併用してエリブリン(例えば、エリブリンメシル酸塩)を投与することによって、がん(例えば、エストロゲン受容体ポジティブ(ER+)乳がん)の治療及び予防を必要する患者の上記がんを治療及び予防する方法を特徴とする。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
がんを患っている又はがんが発症するリスクを有する対象を治療する方法であって、
前記方法は、(a)エリブリン又はその医薬的に許容可能な塩、及び(b)サイクリン依存的キナーゼ(CDK)阻害剤を前記対象に投与するステップを有する、方法。
【請求項２】
エリブリンの前記医薬的に許容可能な塩は、エリブリンメシル酸塩である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記CDK阻害剤は、CDK 4阻害剤、CDK 6阻害剤又はCDK 4/6阻害剤である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記CDK阻害剤は、パルボシクリブ、リボシクリブ、G1T-28、アベマシクリブ及びMM-D37Kからなる群より選択される、請求項１から３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
前記CDK阻害剤は、パルボシクリブである、請求項１から４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
前記方法は、(a)エリブリンメシル酸塩及び(b)前記CDK阻害剤を前記対象に投与するステップからなる、請求項１から５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
前記方法は、(a)エリブリンメシル酸塩及び(b)パルボシクリブを前記対象に投与するステップからなる、請求項１から６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
(b)は、前記投与計画の間、一定期間保留される、請求項１から７のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
(b)は、(a)の投与前、その間、又は、その後に1日又は２日以上の間、保留される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
(b)は、(a)の投与前、その間、又は、その後に2日間、保留される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
(b)は、(a)の投与前の約24-48時間以内には投与されない、請求項１から１０のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
(b)は、(a)の投与後の約24時間以内には投与されない、請求項１から１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
(a)は、21日サイクルの1及び8日目に投与される、請求項１から１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
(b)は、前記21日サイクルの2-6(又は、7)及び9-13(又は、14)日目の任意の日又は任意の複数日に投与される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
(a)は、28日サイクルの8及び15日目に投与される、請求項１から１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】
(b)は、前記28日サイクルの2-6(又は、7)、9-13(又は、14)及び16-20(又は、21)日目の任意の日又は任意の複数日に投与される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記対象は、ヒトである、請求項１から１６のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
前記対象は、がんと診断されている、がんの治療中である又はがん治療後の回復期にいるものである、請求項１から１７のいずれかに記載の方法。
【請求項１９】
がんは、一次腫瘍、局所進行性又は転移性である、請求項１から１８のいずれかに記載の方法。
【請求項２０】
前記がんは、乳がん、肉腫、子宮体がん、卵巣がん、前立腺がん、白血病、リンパ腫、肺がん、神経内分泌腫瘍、褐色細胞腫及び甲状腺がんからなる群より選択される、請求項１から１９のいずれかに記載の方法。
【請求項２１】
前記がんは、トリプルネガティブ乳がん、トリプルポジティブ乳がん、HER2ネガティブ乳がん、HER2ポジティブ乳がん、エストロゲン受容体ポジティブ乳がん、エストロゲン受容体ネガティブ乳がん、プロゲステロン受容体ポジティブ乳がん、プロゲステロン受容体ネガティブ乳がん、非浸潤性乳管癌腫(DCIS)、侵襲性腺管癌腫、侵襲性小葉癌腫、炎症性乳がん、乳房ページェット病及び葉状腫瘍からなる群より選択される乳がんである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記がんは、ホルモン反応性がんである、請求項１から２１のいずれかに記載の方法。
【請求項２３】
前記対象は、成人患者である、請求項１から２２のいずれかに記載の方法。
【請求項２４】
前記対象は、小児患者である、請求項１から２２のいずれかに記載の方法。
【請求項２５】
前記エリブリン又はその医薬的に許容可能な塩は、静脈内注入により投与される、請求項１から２４のいずれかに記載の方法。
【請求項２６】
前記静脈内注入は、約1〜約20分間である請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記静脈内注入は、約2〜約5分間である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記エリブリン又はその医薬的に許容可能な塩は、約0.1mg/m2〜約20mg/m2の範囲の量において、投与される、請求項１から２７のいずれかに記載の方法。
【請求項２９】
前記エリブリン又はその医薬的に許容可能な塩は、約1.1mg/m2又は1.4mg/m2の量において、投与される請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記CDK阻害剤は、1日1〜2回、5-350mgの範囲の量で経口的に投与される、請求項１から２９のいずれかに記載の方法。
【請求項３１】
前記CDK阻害剤は、パルボシクリブであり、1回の投与あたり約125mg、100mg、75mg、50mg又は25mgの量において投与される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記治療は、(i)がん細胞の数を低下させること、(ii)腫瘍体積を低下させること、(iii)腫瘍退縮率を増加させること、(iv)末梢器官へのがん細胞浸潤を低下又は遅延させること、(v)腫瘍転移を低下又は遅延させること、(vi)腫瘍成長を低下又は阻害すること、(vii)がんの発生若しくは再発を予防又は遅延させること及び/又は疾患若しくは腫瘍がない生存期間を延長させること、(viii)全体の生存期間を増加させること、(ix)治療の頻度を低下させること、及び/又は(x)がんと関連した1又は複数の症状を緩和することである、請求項１から３１のいずれかに記載の方法。
【請求項３３】
対象の腫瘍のサイズを減少させる方法であって、(a)エリブリン又はその医薬的に許容可能な塩、及び(b) CDK阻害剤を前記対象に投与するステップを有する、方法。
【請求項３４】
エリブリンの前記医薬的に許容可能な塩は、エリブリンメシル酸塩である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記CDK阻害剤は、パルボシクリブである、請求項３３又は３４に記載の方法。
【請求項３６】
1又は複数の追加の治療薬剤の投与を更に有する、請求項１から３５のいずれかに記載の方法。
【請求項３７】
前記1又は複数の追加の治療薬剤は、抗ホルモン剤である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記抗ホルモン剤は、フルベストラント、タモキシフェン、トレミフェン及びアロマターゼ阻害薬(例えばレトロゾール) から選択される、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記1又は複数の追加の治療薬剤は、免疫調節剤、化学療法/抗腫瘍剤、抗菌剤、制吐剤、及び抗炎症剤から選択される、請求項３６に記載の方法。
【請求項４０】
前記免疫調節剤は、抗体又はワクチンである、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
対象の腫瘍サイズを減少させる又はがんを治療するためのキットであって、(a)エリブリン又はその医薬的に許容可能な塩、及び(b) 任意に投与形態のCDK阻害剤を備える、キット。
【請求項４２】
エリブリンの前記医薬的に許容可能な塩は、エリブリンメシル酸塩である、請求項４１に記載のキット。
【請求項４３】
前記CDK阻害剤は、パルボシクリブ、リボシクリブ、G1T-28、アベマシクリブ又はMM-D37Kである、請求項４１又は４２に記載のキット。
【請求項４４】
がんを患っている又はがんが発症するリスクを有する対象の治療方法における使用のためのエリブリン又はその医薬的に許容可能な塩であって、
前記方法は、(a)エリブリン又はその医薬的に許容可能な塩、及び(b) CDK阻害剤を前記対象に投与するステップを有する、エリブリン又はその医薬的に許容可能な塩。
【請求項４５】
がんを患っている又はがんが発症するリスクを有する対象の治療方法のための医薬品の製造における使用のためのエリブリン又はその医薬的に許容可能な塩であって、
前記治療方法は、(a)エリブリン又はその医薬的に許容可能な塩、及び(b) CDK阻害剤を前記対象に投与するステップを有する、エリブリン又はその医薬的に許容可能な塩。
【請求項４６】
1又は複数の追加の治療薬剤を投与するステップを更に有する、請求項４４又は４５に記載の使用。
【請求項４７】
前記1又は複数の追加の治療薬剤は、抗ホルモン剤である、請求項４６に記載の使用。
【請求項４８】
前記抗ホルモン剤は、フルベストラント、タモキシフェン、トレミフェン及びアロマターゼ阻害薬(例えばレトロゾール) から選択される、請求項４７に記載の使用。
【請求項４９】
前記1又は複数の追加の治療薬剤は、免疫調節剤、化学療法/抗腫瘍剤、抗菌剤、制吐剤、及び抗炎症剤から選択される、請求項４６に記載の使用。
【請求項５０】
前記免疫調節剤は、抗体又はワクチンである、請求項４９に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
がんは、特定のタイプの細胞の非制御成長によって、特徴づけられ、かかる細胞を含む組織において、発生し、診断時に更に別の組織までがんが広がらなかった場合、例えば、手術(放射線又は他のタイプの局所的な治療法)によって、治療できる。しかしながら、がんが起源となるその組織から転移した証拠がある場合、治療のための種々のアプローチが一般的に用いられる。実際、転移の程度を確定的に決定することができないため、なんらかの拡散の証拠が検出されたときに、治療のための体系的なアプローチが通常行われる。これらのアプローチには、細胞(例えばがん細胞)の急速な分裂成長を妨げる化学療法薬の投与を含めることができる。他のアプローチは、免疫療法の使用を伴うものであり、これは、対象におけるがん性細胞に対する免疫反応を誘発又は高める。
【０００２】
ハリコンドリンBは、海洋性スポンジクロイソカイメンから最初に分離され、その後アキシネラ種、ファケリアカルテリ(Phakellia carteri)及びリソデンドリクス(Lissodendoryx)種で見つかった、構造的に複雑な大環状化合物である。ハリコンドリンBの全合成は、1992年に公開された(Aicher et al., J. Am. Chem. Soc. 114:3162-3164, 1992)。ハリコンドリンBは、インビトロで、微小管重合、微小管アセンブリ、ベータS-微小管架橋、微小管へのGTP及びビンブラスチン結合及び微小管依存GTP加水分解を阻害することを示した。この分子は、インビトロで、及び、インビボ抗がん特性を有することも示した。抗がん活性を有するハリコンドリンBアナログは、米国特許第6,214,865号B1に記載されている。
【０００３】
エリブリンは、ハリコンドリンBの合成アナログである。エリブリンは、ER-086526としても知られており、CAS番号253128-41-5及び米国NCI表示番号NSC-707389も割り当てられている。エリブリンのメシル酸塩(エリブリンメシル酸塩。ハラヴェン（登録商標）の商品名で販売され、E7389としても知られている)は、乳がんを患っている特定の患者の治療、及び脂肪肉腫を患っている特定の患者の治療に関して、ある管轄区域においては承認されている。アメリカにおいて、例えば、ハラヴェン（登録商標）は、アジュバント又は転移性疾患治療のいずれかにおいて、アンスラサイクリン及びタキサンを含む、転移性疾患治療のための少なくとも2つの化学療法投与計画を以前に受けた乳がんを患っている患者の治療及び2次治療としての脂肪肉腫治療に関して承認されている。
【０００４】
エリブリンメシル酸塩の化学名は、11,15:18,21:24,28-トリエポキシ-7,9-エタノ-12,15-メタノ-9H,15H-フロ[3,2-i]フロ[2',3:5,6]ピラノ[4,3-b][1,4]ジオキサシクロペンタコシン-5(4H)-オン、2-[(2S)-3-アミノ-2-ヒドロキシプロピル]ヘキサコサヒドロ-3-メトキシ-26-メチル-20,27-ビス(メチレン)-, (2R,3R,3aS,7R,8aS,9S,10aR,11S,12R,13aR,13bS,15S,18S,21S,24S,26R,28R,29aS)-メタンスルホネート(塩)であり、以下のように表すことができる。
【化１】
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【０００５】
がんは、一般的に、細胞周期を制御する1又は複数の経路の破壊によって、特徴づけられる。サイクリン-ファミリータンパク質及びサイクリン依存的キナーゼ(CDK)から構成される複合体は、他の要素と協同して、細胞増殖を制御するシグナル伝達経路を制御する。多くのがんにおいて、CDKは制御されないことから、抗がん薬開発において、CDKを標的としている。細胞周期の種々のポイントで作用するCDK(例えば、CDK1 = CDK20)には種々のクラスが多く存在する。CDK阻害剤は、選択的に、特異的CDKに、又は、広くスペクトルのCDK又は他の酵素に作用できる。パルボシクリブ(PD0332991、イブランス（登録商標）)は、選択的CDK4及びCDK6阻害剤の例である。パルボシクリブの化学名は6-アセチル-8-シクロペンチル-5-メチル-2-[(5-ピペラジン-1-イルピリジン-2-イル)アミノ]ピリド[2,3-d]ピリミジン-7-オンであり、以下のように表すことができる。
【化２】
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【発明の開示】
【０００６】
本発明は、エリブリン又はその医薬的に許容可能な塩(例えば、エリブリンメシル酸塩)及びCDK阻害剤(例えば、CDK4/6阻害剤(例：パルボシクリブ))の投与によるがん(例えば、エストロゲン受容体ポジティブ(ER+)乳がん)を治療及び予防する方法を提供する。「エリブリン」という用語が本願明細書で使用されている場合、文脈で別途明示しない限り、エリブリン又はその医薬的に許容可能な塩(例えば、エリブリンメシル酸塩)を明示するものである。
【０００７】
本発明は、がんを患っている又はがんが発症するリスクを有する対象(例えば、ヒト対象(例：成人患者又は小児患者))を治療する方法を提供する。本方法は、(a)エリブリン又はその医薬的に許容可能な塩(例えば、エリブリンメシル酸塩)、及び(b)サイクリン依存的キナーゼ(CDK)阻害剤(例えば、CDK4阻害剤、CDK6阻害剤又はCDK4/6阻害剤、例えば、1又は複数のパルボシクリブ、リボシクリブ、G1T-28、アベマシクリブ及びMM-D37K)を対象に投与するステップを有する。
【０００８】
ある実施形態において、(b)は、前記投与計画の間、一定期間保留される。例えば、(b)は、(a)の投与前、その間、又は、その後に1日又は２日以上の間、保留できる、又は(b)は、(a)の投与前、その間、又は、その後に2日間、保留できる。したがって、例えば(b)は、(a)の投与前の約24-48時間以内に投与しなくてもよい、及び/又は(b)は、(a)の投与後の約24時間以内に投与しなくてもよい。
【０００９】
各種実施形態において、(a)は、21日サイクルの1及び8日目に投与される。ある実施形態において、(b)は、上記21日サイクルの2-6(又は、7)及び9-13(又は、14)日目の任意の日又は任意の複数日に投与される。他の実施態様において、(a)は、28日サイクルの8及び15日目に投与される。その一方で、更なる実施形態において、(b)は、上記28日サイクルの2-6(又は、7)、9-13(又は、14)及び16-20(又は、21)日目の任意の日又は任意の複数日に投与される。
【００１０】
上記対象は、任意に、がんと診断されている、がんの治療中である又はがん治療後の回復期にいるものであってもよい。がんは、例えば、一次腫瘍、局所進行性又は転移性であってもよい。様々な例として、がんは、乳がん、肉腫、子宮体がん、卵巣がん、前立腺がん、白血病、リンパ腫、肺がん、神経内分泌腫瘍、褐色細胞腫及び甲状腺がんからなる群より選択される。ある種の実施形態において、がんは、トリプルネガティブ乳がん、トリプルポジティブ乳がん、HER2ネガティブ乳がん、HER2ポジティブ乳がん、エストロゲン受容体ポジティブ乳がん、エストロゲン受容体ネガティブ乳がん、プロゲステロン受容体ポジティブ乳がん、プロゲステロン受容体ネガティブ乳がん、非浸潤性乳管癌腫(DCIS)、侵襲性腺管癌腫、侵襲性小葉癌腫、炎症性乳がん、乳房ページェット病及び葉状腫瘍からなる群より選択される乳がんである。更に、がんは、任意にホルモン反応性がん(例えば、ホルモン反応性乳がん)であってもよい。
【００１１】
各種実施形態において、エリブリン又はその医薬的に許容可能な塩は、静脈内注入により投与される。静脈内注入は、任意に、約1〜約20分間(例えば、約2〜約5分間)とすることができる。いくつかの実施形態において、エリブリン又はその医薬的に許容可能な塩は、約0.1mg/m2〜約20mg/m2(例えば、1.1mg/m2又は1.4mg/m2)の範囲の量において投与される。
【００１２】
いくつかの実施形態において、CDK阻害剤は、1日1〜2回、5-350mgの範囲の量で経口的に投与される。したがって、例えば、CDK阻害剤が、例えば、パルボシクリブである場合、1回の投与あたり約125mg、100mg、75mg、50mg又は25mgの量において投与できる。
【００１３】
本発明の方法は、任意に、1又は複数の以下の効果を有し、上記治療は、(i)がん細胞の数を低下させること、(ii)腫瘍体積を低下させること、(iii)腫瘍退縮率を増加させること、(iv)末梢器官へのがん細胞浸潤を低下又は遅延させること、(v)腫瘍転移を低下又は遅延させること、(vi)腫瘍成長を低下又は阻害すること、(vii)がんの発生若しくは再発を予防又は遅延させること及び/又は疾患若しくは腫瘍がない生存期間を延長させること、(viii)全体の生存期間を増加させること、(ix)治療の頻度を低下させること、及び/又は(x)がんと関連した1又は複数の症状を緩和することである。
【００１４】
本発明には、対象の腫瘍のサイズを減少させる方法も含まれ、本方法は、(a)エリブリン又はその医薬的に許容可能な塩(例えば、エリブリンメシル酸塩)、(b)CDK阻害剤(例えば、パルボシクリブ、また、上記箇所又は本願明細書の他の箇所を参照)を上記対象に投与するステップを有する又はからなる。
【００１５】
本発明は、対象の腫瘍サイズを減少させる又はがんを治療するためのキットを更に提供する。上記キットは、(a)エリブリン又はその医薬的に許容可能な塩(例えば、エリブリンメシル酸塩)、及び(b)(任意に投与形態の)CDK阻害剤(例えば、パルボシクリブ、リボシクリブ、G1T-28、アベマシクリブ又はMM-D37K)を備える。
【００１６】
本発明には、がんを患っている又はがんが発症するリスクを有する対象を治療する方法に用いられるエリブリン又はその医薬的に許容可能な塩(例えば、エリブリンメシル酸塩)も含まれる。上記方法は、(a)エリブリン又はその医薬的に許容可能な塩(例えば、エリブリンメシル酸塩)、及び(b)CDK阻害剤(例えば、パルボシクリブ、リボシクリブ、G1T-28、アベマシクリブ又はMM-D37K)を上記対象に投与するステップを有する。更に、本発明には、がんを患っている又はがんが発症するリスクを有する対象を治療するための医薬品を製造する方法に用いられるエリブリン又はその医薬的に許容可能な塩(例えば、エリブリンメシル酸塩)も含まれる。上記方法は、(a)エリブリン又はその医薬的に許容可能な塩(例えば、エリブリンメシル酸塩)、及び(b)CDK阻害剤(例えば、パルボシクリブ、リボシクリブ、G1T-28、アベマシクリブ又はMM-D37K)を上記対象に投与するステップを有する。
【００１７】
本発明の方法は、がん治療を向上させるアプローチを提供する。例えば、本願明細書に記載されている併用療法は、相乗効果を得るために用いることができ、例えば、上記併用の効果は、当業者によって、測定できる個々に投与される薬の効果の合計よりも大きい。相加効果も有益であり、成し遂げることも可能である。
【００１８】
本発明の他の特徴及び効果は、以下の記載、図面及び特許請求の範囲から明白である。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】図1は、明示のヒト乳癌腫(MCF-7、T-47D及びZR-75-1)に対する、エリブリン及びパルボシクリブの単独、並びに、その併用でのインビトロ成長阻害活性を示している一連のグラフである。
【００２０】
【図２】図2は、明示のヒト乳癌腫(MDA-MB-134VI、MDA-MB-175VII及びMDA-MB-415)に対する、エリブリン及びパルボシクリブの単独、並びに、その併用でのインビトロ成長阻害活性を示している一連のグラフである。
【００２１】
【図３】図3は、明示のヒト乳癌腫(MDA-MB-231、HCC70及びHCC1806)に対する、エリブリン及びパルボシクリブの単独、並びに、その併用でのインビトロ成長阻害活性を示している一連のグラフである。
【００２２】
【図４】図4は、明示のヒト乳癌腫(BT-549、Hs578t及びMDA-MB-436)に対する、エリブリン及びパルボシクリブの単独、並びに、その併用でのインビトロ成長阻害活性を示している一連のグラフである。
【００２３】
【図５】図5は、患者由来異種移植片(PDX)マウス(OD-BRE-0192)の腫瘍体積に対する0.1mg/kgのエリブリン(IV)及び75mg/kgのパルボシクリブ(PO)の効果を示しているグラフである。x軸に沿って明示される日数は、腫瘍を埋め込んだ後の日数である。
【００２４】
【図６】図6は、PDXマウス(OD-BRE-0192)の腫瘍体積に対する0.1mg/kgのエリブリン(IV)及び150mg/kgのパルボシクリブ(PO)の効果を示しているグラフである。x軸に沿って明示される日数は、腫瘍を埋め込んだ後の日数である。
【００２５】
【図７】図7は、PDXマウス(OD-BRE-0192)の腫瘍体積に対する0.25mg/kgのエリブリン(IV)及び75mg/kgのパルボシクリブ(PO)の効果を示しているグラフである。x軸に沿って明示される日数は、腫瘍を埋め込んだ後の日数である。
【００２６】
【図８】図8は、PDXマウス(OD-BRE-0192)の腫瘍体積に対する0.25mg/kgのエリブリン(IV)及び150mg/kgのパルボシクリブ(PO)の効果を示しているグラフである。x軸に沿って明示される日数は、腫瘍を埋め込んだ後の日数である。
【００２７】
【図９】図9は、患者由来異種移植片(PDX)マウス(OD-BRE-0745)の腫瘍体積に対する0.1mg/kgのエリブリン(IV)及び75mg/kgのパルボシクリブ(PO)の効果を示しているグラフである。x軸に沿って明示される日数は、腫瘍を埋め込んだ後の日数である。
【００２８】
【図１０】図10は、PDXマウス(OD-BRE-0745)の腫瘍体積に対する0.1mg/kgのエリブリン(IV)及び150mg/kgのパルボシクリブ(PO)の効果を示しているグラフである。x軸に沿って明示される日数は、腫瘍を埋め込んだ後の日数である。
【００２９】
【図１１】図11は、PDXマウス(OD-BRE-0745)の腫瘍体積に対する0.25mg/kgのエリブリン(IV)及び75mg/kgのパルボシクリブ(PO)の効果を示しているグラフである。x軸に沿って明示される日数は、腫瘍を埋め込んだ後の日数である。
【００３０】
【図１２】図12は、PDXマウス(OD-BRE-0745)の腫瘍体積に対する0.25mg/kgのエリブリン(IV)及び150mg/kgのパルボシクリブ(PO)の効果を示しているグラフである。x軸に沿って明示される日数は、腫瘍を埋め込んだ後の日数である。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
本発明は、サイクリン依存的キナーゼ(CDK)阻害剤(例えば、CDK4/6阻害剤(例：パルボシクリブ))との併用におけるエリブリン又はその医薬的に許容可能な塩(例えば、エリブリンメシル酸塩)の投与を伴う、がん(例えば、エストロゲン受容体ポジティブ(ER+)乳がん)を治療又は予防する方法を提供する。
【００３２】
本発明の方法によるがんの治療は、(i)がん細胞の数を低下させる、(ii)腫瘍体積を低下させる、(iii)腫瘍退縮率を増加させる、(iv)末梢器官へのがん細胞浸潤を低下又は遅延させる、(v)腫瘍転移を低下又は遅延させる、(vi)腫瘍成長を低下又は阻害する、(vii)がんの発生若しくは再発を予防又は遅延させる及び/又は疾患若しくは腫瘍がない生存期間を延長させる、(viii)全体の生存期間を増加させる、(ix)治療の頻度を低下させる、及び/又は(x)がんと関連した1又は複数の症状を緩和できる。
【００３３】
医薬組成物、用量及び方法
エリブリン及び/又はCDK阻害剤(例えば、CDK4/6阻害剤(例えばパルボシクリブ) )を含む医薬組成物は、従来技術において、知られている標準的な方法を用いて調製したり、購入したりすることができる。一般的に、本発明において、使用するエリブリン及びCDK阻害剤は、別々の医薬組成物中に含まれているが、それらは、任意に、単一の組成物中に含めることができる。エリブリンは、一般的に、静脈内投与のために液体状態で提供される一方で、CDK阻害剤は、選択される阻害剤によっては、例えば、経口製剤又は静脈内製剤として任意に調製できる。
【００３４】
例えば、本発明において、使用する医薬組成物は、生理的に許容可能な希釈液、担体、賦形剤又は安定剤に、所望の純度を有する活性成分を混合又は溶解することによって、調製できる(例えば、RemingtonのPharmaceutical Sciences(22版)を参照、編集者A. Gennaro、2012、Lippincott, Williams & Wilkins, Philadelphia, PA)。許容可能な希釈液には、水及び生理食塩水が含まれ、任意に緩衝液(例えばリン酸塩、クエン酸塩又は他の有機酸)、ブチルオキシトルエン(BHT)、ブチルヒドロキシアニゾール(BHA)、アスコルビン酸を含む抗酸化剤、低分子量(約10残基未満)ポリペプチド、タンパク質(例えば血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリン)、親水性ポリマー(例えばポリビニルピロリドン、アミノ酸(例えばグリシン)、グルタミン、アスパラギン、アルギニン又はリジン)、グルコース、マンノース又はデキストリンを含む単糖、二糖又は他の糖質、キレート剤(例えばEDTA)、糖アルコール(例えばマンニトール又はソルビトール)、塩-形成性対イオン(例えばナトリウム)、及び/又は非イオン性界面活性剤(例えばTWEENTM、PLURONICSTM又はPEG)が挙げられる。
【００３５】
経口用剤形のための組成物を調製する際に、通常の医薬媒体のいずれか、例えば、水、グリコール、オイル、アルコール、香料、防腐剤、染色剤を使用できる。加えて、キャリア(例えばデンプン、糖、微結晶性セルロース、希釈液、造粒剤、潤滑油、結合剤、崩壊剤など)は、経口用固体(例えば粉末、カプセル及びタブレット)の調製の場合に使用できる。
【００３６】
任意に、本発明の製剤は、医薬的に許容可能な防腐剤を含有する。いくつかの実施形態において、保存濃度は、0.1から2.0%(一般的にはv/v)の範囲である。好適な防腐剤として、製薬技術において、知られているもの(例えばベンジルアルコール、石炭酸、m-クレゾール、メチルパラベン及びプロピルパラベン)が挙げられる。更に、エリブリン及び/又はCDK阻害剤の製剤は、任意に、医薬的に許容可能な塩、例えば、約生理的濃度の、例えば、塩化ナトリウムが含まれる。したがって、一例として、エリブリン(例えば、エリブリンメシル酸塩)は、0.9%の塩化ナトリウム注射液(USP)に調製される。
【００３７】
上述した（及び他のところで述べた）製剤は、薬の投与のために用いることができる。したがって、上記薬は、静脈内、腫瘍内、腫瘍周囲、動脈内、皮内、膀胱内、眼内、筋肉内、皮内、腹腔内、肺、皮下及び経皮ルートを含むルートによって、投与できる。例えば、経口、経粘膜、経皮、吸入、腟内及び直腸投与ルートを含む他のルートを用いることもできる。
【００３８】
本願明細書に記載の投与されるエリブリン及びCDK阻害剤の用量は、標的疾患のタイプ、デリバリー方法の選択だけでなく、患者の年齢、性別及び体重、症状の重症度、他の要因に応じて著しく異なるものとすることができる。使用する用量は、(例えばこれらの)要因に基づいて、当業者が決定できる。本発明の方法及び投与計画で用いることができるエリブリン及びCDK阻害剤の例は、更に以下で述べる。
【００３９】
エリブリン
例えば、エリブリンの合成方法は、米国特許第6,214,865号、米国特許第7,982,060号、米国特許第8,350,067号、及び米国特許第8,093,410号に記載されており、それぞれを本願明細書に引用したものとする。上述した通り、エリブリンメシル酸塩は、購入可能であり、ハラヴェン(登録商標)として市販されている。
【００４０】
エリブリンは、本発明において、塩の形態で任意に用いることができる。無機酸性塩や有機酸塩であったとしても、使用する塩に関して特段の制限は存在しない。例えば、塩は、メシル酸塩(例えば、エリブリンメシル酸塩)、塩酸塩、硫酸塩、クエン酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硝酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、スーパーリン酸塩、イソニコチン酸塩、酢酸の酸性塩、乳酸塩、ケイ酸塩(salicic acid salt)、酒石酸塩、パントテン酸塩(pantotenic acid salt)、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、サッカリン酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、p-トルエンスルホン酸塩、パモン酸塩(パモエート)などから選択される。さらに、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、ナトリウム、亜鉛及びジエタノールアミンの塩を使用できる。
【００４１】
エリブリン(例えば、エリブリンメシル酸塩)の1日あたりの用量は、例えば、0.001mg/m2〜約100mg/m2の範囲(例えば、約0.1mg/m2〜約50mg/m2の範囲、約0.7mg/m2〜約1.5mg/m2の範囲、又はこれらの範囲内の任意の一つの量(例えば、1.4mg/m2又は1.1mg/m2))とすることができる。エリブリンは日、週、月又は年に一回、単一用量として投与したり、エリブリンを複数回用量として日、週、月又は年毎に投与したりすることができる。例えば、1つの投与プロトコールにおいて、エリブリンは、21日サイクルのうち1及び8日目に一回投与できる。より具体的には、エリブリンメシル酸塩の推奨用量は、1.4mg/m2であり、21日サイクルのうち1及び8日目に2〜5分にわたって静脈内に投与される。軽度の肝障害(チャイルドピューA)患者のエリブリンメシル酸塩の推奨用量は、21日サイクルのうち1及び8日目に2〜5分にわたる静脈内投与で、1.1mg/m2である。その一方で、中程度の肝障害(チャイルドピューB)患者のエリブリンメシル酸塩の推奨用量は、21日サイクルのうち1及び8日目に2〜5分にわたる静脈内投与で、0.7mg/m2である。更に、中程度の腎臓機能障害(30-50mL/分のクレアチニンクリアランス)の患者のエリブリンメシル酸塩の推奨用量は、21日サイクルの1及び8日目に2〜5分にわたる静脈内投与で、1.1mg/m2である。本発明の方法によれば、エリブリンメシル酸塩のこれらの用量又はこれらよりも低い他の用量が、併用療法の状況において、任意に用いることができる。
【００４２】
CDK阻害剤
本発明において、用いることができるCDK阻害剤は、CDK 4及び/又は6に特異的とすることができる、又は、CDKの1つ、2つ以上又は全てのクラスに対して活性があるとすることができる。様々な例において、本発明において、用いられるCDK阻害剤は、CDK 4/6二重阻害剤である。CDK阻害剤は、それらの特異性に基づいて分類、又は、代わり、それらの作用メカニズム又は化学構造に基づいて分類できる。例えば、本発明において、用いることができるCDK阻害剤は、それらの作用メカニズムに基づいて、ATP-競合阻害剤(例えば、CDKのATPポケットに結合する分子)又はATP非競合阻害剤(例えば、基質競合的CDK阻害剤、タンパク質-タンパク質インターフェースCDK阻害剤、アロステリックCDK阻害剤、共有結合性CDK阻害剤又はペプチドミメティック)に分類できる。加えて、本発明において、用いることができるCDK阻害剤は、それらの化学構造に基づいて、以下のクラスの1つに任意に含まれる:アルカロイド-誘導体(例えば、スタウロスポリン及び7-ヒドロキシスタウロスポリン[UCN01])、アミノアクリジン、フラボノイド誘導体(フラボピリドール(flavopiroidol)[アルボシジブ])、フラボン誘導体、インドール誘導体、インドリノン誘導体、パウロン誘導体、プリン誘導体、ピリミジン誘導体、ピリジン誘導体、ピラゾール誘導体、チアゾール誘導体及びトリアゾール誘導体。
【００４３】
1つの特定の例において、本発明において、使用するCDK阻害剤は、選択的CDK 4及びCDK 6阻害剤であるパルボシクリブである。パルボシクリブの合成方法は、例えば、米国特許第6,936,612号及び米国特許番号7,781,583に記載されており、各々は、本願明細書で引用したものとする。パルボシクリブは、日、週、月又は年に一回の単一用量として投与したり、パルボシクリブを複数回用量として日、週、月又は年毎に、任意に経口ルートによって、投与したりすることができる。例えば、1つの投与プロトコールにおいて、パルボシクリブは、21又は28日サイクルのうち1及び8日目に一回(例えば、経口ルートによって、)投与できる。他の例として、パルボシクリブは、毎日、週二回、毎週、隔週又は毎月、投与される。パルボシクリブの各用量は、例えば、5-350mg(例えば、5、25、30、35、40、45、50、75、100、125、150、200、250、300、又は350mg)であってもよく、経口ルートによって、任意に投与される。
【００４４】
他の特定の例において、本発明において、使用するCDK阻害剤は、リボシクリブ、G1T-28、アベマシクリブ及びMM-D37Kからなる群より選択されるCDK 4/6阻害剤であり、当業者が適宜決定することで投与できる。したがって、例えば、リボシクリブは200-1000mg/日(例えば、400-800、500-700又は600mg/日)の範囲における量において、任意に投与できる一方で、アベマシクリブは50-500mg/日(例えば、100-400又は200-300mg/日)の範囲における量において、任意に投与できる。パルボシクリブが本発明において、用いることができるCDK阻害剤であると本願明細書に明示されている場合、リボシクリブ、G1T-28、アベマシクリブ及びMM-D37Kのいずれか1つが使用に適切であることを理解すべきである。
【００４５】
併用投与計画
上述した通り、本発明方法によれば、エリブリン(例えば、エリブリンメシル酸塩)及びCDK阻害剤(例えば、CDK4/6阻害剤(例えば、パルボシクリブ))は、併用投与される。いくつかの実施形態において、エリブリン(例えば、エリブリンメシル酸塩)及びCDK阻害剤(例えば、CDK4/6阻害剤(例えば、パルボシクリブ))は、実質的に同時に投与される。いくつかの実施形態において、エリブリン(例えば、エリブリンメシル酸塩)及びCDK阻害剤(例えば、CDK4/6阻害剤(例えば、パルボシクリブ))は、別々に投与される。例えば、エリブリンが最初に投与されて、次に、CDK阻害剤が投与される、又は、CDK阻害剤が最初に投与されて、次に、エリブリンが投与される。いくつかの実施形態において、エリブリン(例えば、エリブリンメシル酸塩)及びCDK阻害剤(例えば、CDK4/6阻害剤(例えば、パルボシクリブ))は、実質的に同時に投与されて、次に、エリブリン又はCDK阻害剤が投与される。いくつかの実施形態において、エリブリン(例えば、エリブリンメシル酸塩)又はCDK阻害剤(例えば、CDK4/6阻害剤(例えば、パルボシクリブ))が、最初に投与されて、次に、エリブリン及びCDK阻害剤が実質的に同時に投与される。投与は、同日に開始してもよく、1つの薬剤を用いた治療を、他の治療の、例えば、1、2、3、4、5、又は6週前に開始してもよく、これは、当業者が適宜決定できる。
【００４６】
様々な例において、エリブリン及びCDK阻害剤(例えば、CDK4/6阻害剤(例：パルボシクリブ))は、複数日(例えば、1又は複数のサイクルの、例えば21又は28日目)を含む投与計画に従って投与される。一般的に、エリブリンは、一旦それが特定の日に投与されると、数日間(例えば、4、5、6、又は7日間又は1、2又は3週間)は再び投与されないように投与される。例えば、エリブリンについて承認された投薬計画は、21日サイクルの1及び8日目である。任意に、複数ある薬の内の1つは、サイクル中に一定期間(例えば、特定の日数)保留される。例えば、CDK阻害剤は、投与計画の間、一定期間(例えば、1、2、3、4日又はそれらよりも多くの日)、保留にすることができる。より詳細には、CDK阻害剤は、例えば、エリブリン投与の前、その間、及び/又はその後の1日又は2日以上(例えば、2、3、4日又はそれらよりも多くの日)、任意に保留できる。したがって、CDK阻害剤は、エリブリンが投与される日だけでなく、エリブリンの投与前及び/又は後の1日又は2日以上(例えば、2、3、4日又はそれらよりも多くの日)、保留することもできる。
【００４７】
特定の例において、CDK阻害剤(例えば、CDK4/6阻害剤(例：パルボシクリブ))は、エリブリン投与前の約24-48時間以内には投与されない、及び/又はエリブリン投与後の約24時間以内には投与されない。したがって、例えば、エリブリンは、21日サイクルの1及び8日目に投与してもよく、CDK阻害剤(例えば、CDK4/6阻害剤(例：パルボシクリブ))は、当業者が適宜決定することで、このサイクルの2-6(又は、7)及び9-13(又は、14)日目の内の任意の1日又は2日以上に投与できる。他の例では、エリブリンは、28日サイクルの1、8及び15日目に投与してもよく、CDK阻害剤(例えば、CDK4/6阻害剤(例：パルボシクリブ))は、当業者が適宜決定することで、このサイクルの2-6(又は、7)、9-13(又は、14)及び16-20(又は、21)日目の内の任意の1日又は2日以上に投与できる。
【００４８】
上記併用投与計画において、エリブリンは、例えば、2〜5分にわたる静脈内注入によって、1.4mg/m2の標準1日投与量で投与できる。あるいは、エリブリンの投与量は、例えば、好中球減少症の発生といった要因に起因して当業者が適宜決定することで、例えば、1.1mg/m2、0.9mg/m2又は0.7mg/m2まで減らすことができる。エリブリン及びCDK阻害剤をサイクルの同じ1日目にそれぞれ投与する投与計画においては、その日の第一のエリブリン投与量を減らすこと(例えば、1.1mg/m2)が望ましい場合もある。例えば、好中球減少症の発生の場合には、更に減らすことを検討することもできる減らした投与量は、任意に2-5分にわたって静脈内注入によって、投与することもできる。
【００４９】
上上記併用投与計画において、使用するCDK阻害剤(例えば、CDK4/6阻害剤(例：パルボシクリブ))の量は、上記の通り(例えば、パルボシクリブに関して、経口投与量当たり5-350mg(例：投与量当たり125mg))とすることができる。あるいは、投与されるCDK阻害剤(例えば、CDK4/6阻害剤(例：パルボシクリブ))の量は、当業者が適宜決定することで、減らす(例えば、パルボシクリブに関して、(経口投与量当たり100、75、50、又は25 mgに減らす)ことができる。
【００５０】
エリブリン及び1又は複数のCDK阻害剤(例えば、CDK4/6阻害剤(例：パルボシクリブ))に加え、本発明の方法は、1又は複数の追加の治療薬剤の投与を含むこともできる。これらの薬剤の中で、抗ホルモン剤(例えば、フルベストラント、タモキシフェン、トレミフェン又はアロマターゼ阻害剤(例えば、レトロゾール))、免疫調節剤(例えば、抗体又はワクチン)、化学療法/抗腫瘍剤、抗菌剤、制吐剤及び抗炎症剤が適している。フルベストラントの場合、例えば、追加の治療薬剤は、例えば、1、15及び29日目に5mLの注入を2回で殿部領域に500mgの量をi.m.で投与し、その後で、毎月1回投与できる。この量及び投与計画を変更したものも、当業者が適宜決定することで、本発明において、用いることができる。
【００５１】
他の例において、エリブリン(例えば、エリブリンメシル酸塩)及び1又は複数のCDK阻害剤(例えば、CDK4/6阻害剤(例：パルボシクリブ、リボシクリブ、G1T-28、アベマシクリブ又はMM-D37K))を唯一の治療薬剤(例えば、唯一の抗がん剤)として治療投与計画において、用いることができる。したがって、本発明の方法は、(a)エリブリン又はその医薬的に許容可能な塩(例えば、エリブリンメシル酸塩)、及び(b)CDK阻害剤(例えば、CDK4/6阻害剤(例：パルボシクリブ))の投与からなることができる。
【００５２】
がん
本発明の方法は、対象(例えば、ヒト患者)のがん(例えば、ER+乳がん(例えばER+/ヒト上皮成長因子受容体2ネガティブ(HER2-)乳がん))を(例えば、遅延進行を含む)治療又は予防及び/又は腫瘍サイズを減少させるために用いることができる。ER+乳がんは、細胞内部又は細胞上にエストロゲン受容体を有し、一般的に、エストロゲンに応答して増殖が刺激されるがん細胞によって、特徴づけられる。対象は、がん(例えば、ER+乳がん)と診断されている、がんが発症するリスクがある、がんの治療中である、又は、がんの治療後の回復期間にいるものとすることができる。更に、本方法は、転移及び/又は再発を治療又は予防するために用いることができる。本治療は、単独での化学療法とすることができるが、腫瘍の除去又はそのサイズを小さくする外科手術(例えば、術前補助治療)、放射線治療、抗ホルモン療法、免疫療法及び/又は除去療法との併用療法も本発明に含まれる。がんは、局所的に進行した又は転移性の原発腫瘍であってもよくて、任意に、上述の通り、ホルモン応答性であってもよい。
【００５３】
したがって、発明の方法は、がん(例えば乳がん、肉腫、子宮体がん、卵巣がん、前立腺がん、白血病、リンパ腫、肺がん、神経内分泌腫瘍、褐色細胞腫、肝細胞癌腫及び甲状腺がん)を治療又は予防するために用いることができる。
【００５４】
具体的には、乳がんに関して、本発明の方法は、例えば、エストロゲン受容体ポジティブ乳がん、エストロゲン受容体-ポジティブ/HER2ネガティブ乳がん、トリプルポジティブ乳がん、HER2ネガティブ乳がん、トリプルネガティブ乳がん、HER2ポジティブ乳がん、エストロゲン受容体ネガティブ乳がん、プロゲステロン受容体ポジティブ乳がん及びプロゲステロン受容体ネガティブ乳がんを治療又は予防するために用いることができる。乳がんは、更に、非浸潤性乳管癌腫(DCIS)、侵襲性腺管癌腫、侵襲性小葉癌腫、局所的進行型乳がん、転移性乳がん、炎症性乳がん、乳房ページェット病及び葉状腫瘍であってもよい。例えば、エストロゲン受容体-ポジティブ/HER2ネガティブ乳がんを含むエストロゲン受容体ポジティブ乳がんは、特に注目に値する。
【００５５】
本発明の方法に従って治療できる患者は、その人はがん(例えば、本願明細書に記載のがんタイプ)を患っている、成人(例えば、18又は21歳より年上の人)だけでなく、小児患者(例えば、18又は21歳の以下の患者)も含まれる。小児患者に関して、治療できるがんの特定の例には、例えば、上記した肉腫及び白血病が含まれる。
【００５６】
キット
本発明は、エリブリン(例えば、エリブリンメシル酸塩)を有する容器及び/又は本願明細書に記載のCDK阻害剤(例えば、パルボシクリブ、上記も参照)を有する容器を含むキットも提供する。かかるキットのエリブリン及び/又はCDK阻害剤は、がん(例えば、ER+乳がん、上述のリストを参照)を治療する必要のある患者のがんを治療するのに十分な量(例えば、単回投与又は複数回投与に十分な量)にて提供してもよい。したがって、上記キットは、複数の容器を含み、それぞれ、単一用量のエリブリン及び/又はCDK阻害剤医薬組成物を有効量含んでいてもよい。任意に、医薬組成物を投与するために必要な機器又はデバイスがキットに含まれていてもよい。更に、上記キットには、エリブリン及び/又は本願明細書に記載のCDK阻害剤を用いてがん(例えば、ER+乳がん)患者を治療するための追加の要素(例えば指示書又は投与計画)が含まれていてもよい。
【００５７】
本発明を、以下の実施例にて例示する。これは、決して、本発明を限定することを目的とするものではない。
【実施例】
【００５８】
エリブリン及びパルボシクリブの2つの試験薬剤の成長阻害活性を、細胞株に基づくアッセイ(実施例1)及び患者由来異種移植片(PDX)動物モデル(実施例2)において、単独及び併用下で決定した。
【００５９】
実施例1
エリブリン及びパルボシクリブを単独及び併用下で12のヒト乳がん細胞株に対して試験した(表1)。ヒト乳房腫瘍細胞株は、Her2-及びエストロゲン受容体ポジティブ(ER+)又はトリプルネガティブ(Her2-、ER-及びプロゲステロン受容体ネガティブ[PR-])のいずれかである、それらのプロファイル特性に基づいて選択した。
【表１】
2020528052.tif 000005
【００６０】
素材及び方法細胞培養
MCF-7ヒト乳がん細胞を、10% ウシ胎児血清(FBS)、2mM グルタミン、10mM 4-(2-ヒドロキシエチル)-1-ピペラジンエタンスルホン酸(HEPES)、0.075% 重炭酸ナトリウム、100ユニット/mL ペニシリンGナトリウム、100μg/mL 硫酸ストレプトマイシン及び25μg/mL ゲンタミシンを含むRPMI 1640培地で培養した。T-47Dヒト乳がん細胞を、10% FBS、4.5g/L グルコース、2mM グルタミン、10mM HEPES、0.2ユニット/mL インスリン、1mM ピルビン酸ナトリウム、100ユニット/mL ペニシリンGナトリウム、100μg/mL 硫酸ストレプトマイシン及び25μg/mL ゲンタミシンを含むRPMI 1640培地で培養した。ZR-75-1ヒト乳がん細胞を、10% FBS、4.5g/L グルコース、2mM グルタミン、10mM HEPES、1mM ピルビン酸ナトリウム、100ユニット/mL ペニシリンGナトリウム、100μg/mL 硫酸ストレプトマイシン及び25μg/mL ゲンタミシンを含むRPMI 1640培地で培養した。MDA-MB-134-VIヒト乳がん細胞を、20% FBS、2mM グルタミン、100ユニット/mL ペニシリンGナトリウム、100μg/mL 硫酸ストレプトマイシン及び25μg/mL ゲンタミシンを含むリーボビッツL-15培地で培養した。MDA-MB-175-VIIヒト乳がん細胞を、10% FBS、2mM グルタミン、10mM HEPES、100ユニット/mL ペニシリンGナトリウム、100μg/mL 硫酸ストレプトマイシン及び25μg/mL ゲンタミシンを含むリーボビッツL-15培地で培養した。MDA-MB-415ヒト乳腺/乳房がん細胞を、15% FBS、10μg/mL ヒトインスリン、10μg/mL グルタチオン、2mM グルタミン、100ユニット/mL ペニシリンGナトリウム、100μg/mL 硫酸ストレプトマイシン及び25μg/mL ゲンタミシンを含むリーボビッツL-15培地で培養した。MDA-MB231、HCC1806、BT-549及びHs578tヒト乳がん細胞を、10% FBS、2mM グルタミン、100ユニット/mL ペニシリンGナトリウム、100μg/mL 硫酸ストレプトマイシン及び25μg/mL ゲンタミシンを含むRPMI 1640培地で培養した。HCC70ヒト乳がん細胞を、10% FBS、2mM グルタミン、4.5g/L グルコース、10mM HEPES、0.075% 重炭酸ナトリウム、1mM ピルビン酸ナトリウム、100ユニット/mL ペニシリンGナトリウム、100μg/mL 硫酸ストレプトマイシン及び25μg/mL ゲンタミシンを含むRPMI 1640培地で培養した。MDA-MB-436ヒト腺癌腫由来がん細胞を、10% FBS、10μg/mL ウシインスリン、16μg/mL グルタチオン、2mM グルタミン、100ユニット/mL ペニシリンGナトリウム、100μg/mL 硫酸ストレプトマイシン及び25μg/mL ゲンタミシンを含むリーボビッツL-15培地で培養した。腫瘍細胞を、5% CO2及び95% 空気の雰囲気下で、37℃の加湿インキュベーター内において、組織培養瓶で培養した(ただし、MDA-MB-134-VI、MDA-MB-175-VII、MDA-MB-415及びMDA-MB-436を除く。これらの細胞は、100% 空気における37℃で培養した)。
【００６１】
治療薬剤
エリブリンは、原液(10mM)で供給し、-80℃で遮光保存した。調査1日目に上記原液を解凍し、10μLの原液を90μLのDMSOで希釈して1000Xストック(1mM)を調整した。1000Xストックを用いて、1% DMSO(培地中)での10X(10μM)薬品溶液を調製した。
【００６２】
パルボシクリブは、SelleckChem(Catalog No. S1116)から取得した。これは、10mMの原液(DMSO)で供給され、-80℃で保存されていた。10mMの原液は、1000Xストックとして提供し、10Xストックは、1%のDMSO(培地)で希釈された10mMの原液を100μMの濃度に希釈することによって、調整した。
【００６３】
増殖測定
選択されたヒト腫瘍細胞を、透明なポリスチレン96ウェル微小培養プレート(Corning（登録商標）Costar(登録商標) 96ウェル平底プレート、Cat. No. 3997)にウェル当たり90μLの合計容量で2,000-10,000細胞/ウェルを播種した。5% CO2及び95% 空気の37℃の加湿インキュベーターにおいて、24時間インキュベートした後(MDA-MB-134-VI、MDA-MB-175-VII、MDA-MB-415及びMDA-MB-436を除く。これらの細胞は、100% 空気における37℃で培養)、10μLの10X薬品溶液を加えた。第一実験において、10μLの10Xエリブリン薬品溶液を、一番高い濃度が1μMの終濃度となるように90μLの細胞播種培地に加え、1：4の割合で希釈して、全部で10個の希釈物(1000、250、62.50、15.62、3.90、0.98、0.24、0.06、0.02及び3.8 x10-3nM)を調整した。パルボシクリブに関して、10μLの10X薬品溶液を、一番高い濃度が10μMの終濃度となるように90μLの細胞播種培地に加え、1：4の割合で希釈して、全部で10個の希釈物(10、2.5、0.625、0.156、0.039、9.75 x 10-3、2.44 x 10-3、6.09 x 10-4、1.52 x 10-4及び3.81 x 10-5μM)を調整した。第二実験である相乗作用測定において、10μLの10X薬品溶液を、一番高い濃度が1μMの終濃度となるように90μLの細胞播種培地に加え、1：4の割合で希釈して、エリブリン及び全ての希釈物にわたって一定用量のパルボシクリブ(10μM)のための全部で10個の希釈物(1000、250、62.50、15.62、3.90、0.98、0.24、0.06、0.02及び3.8 x10-3nM)を調整した。追加の相乗作用測定は、全ての希釈剤にわたって1μMの一定用量のパルボシクリブを用いて上記の通りに完了した。
【００６４】
培養の72時間(合計96時間)後に、播種した細胞及びCell Titer-Glo(登録商標)(Promega #G7571)試薬を室温に移動させて、30分間平衡化した。100μLのCell Titer-Glo(登録商標)試薬を各ウェルに加えた。溶解を誘導するために2分間プレートをシェイクして、ルミネッセンスシグナルを安定させるために、10分間平衡化した。Tecan GENiosマイクロプレート上での発光を測定する前に、培地/Cell Titer-Glo(登録商標)試薬を白色ポリスチレン96ウェル微小培養プレート(Corning(登録商標)Costar(登録商標)96ウェル平底プレート、Cat. No. 3917)に移した。
【００６５】
細胞成長のパーセント阻害は、未処理コントロールウェルに対して算出した。全ての試験は、各濃度レベルで同じもの２つ用いて実施した。試験薬剤のIC50値は、以下の4つのパラメーターロジスティック方程式を使用してデータを曲線にあてはめることによって、Prism 6.05を用いて推定した。
【数１】
2020528052.tif 000006
Topは、コントロール発光の最大%であり、Bottomは、最も高い薬剤濃度でのコントロール発光の最小%であり、Yは、コントロール発光の%であり、Xは、薬剤濃度であり、IC50は、コントロール細胞と比較して細胞成長を50%阻害する薬剤の濃度であり、nは、曲線の傾きである。統計及びグラフィック分析
【００６６】
Windows版Prism(GraphPad) 6.05をグラフ表現及び統計解析に用いた。
【００６７】
結果
エリブリン及びパルボシクリブの阻害活性は、単独で及び併用で、表1にて説明する12のヒト乳がん細胞株のパネルに対して評価した。第一実験(単一薬剤に関するIC50測定)の結果を表2及び図1-4に示す。全体として、エリブリンは、ZR-75-1を除く全ての細胞株について1nMよりも低いIC50を示した。具体的には、エリブリンのIC50値は、MCF-7に対して0.2531nM、T-47Dに対して0.1882nM、ZR-75-1に対して>1000nM、MDA-MD-134VIに対して0.4910nM、MDA-MD-175VIIに対して0.1205nM、MDA-MD-415に対して0.4032、MDA-MD-231に対して0.1486nM、HCC70に対して0.4543nM、HCC1806に対して0.1423nM、BT549に対して0.2889nM、Hs578tに対して0.3545nM及びMDA-MD-436に対して0.8596nMであった。一方では、パルボシクリブは、それほど強力ではなく、IC50値は、MCF-7に対して>10μM、T-47Dに対して>10M、ZR-75-1に対して>10μM、MDA-MB-134VIに対して2.441μMと測定され、MDA-MB-175VIIに対しては測定できず、MDA-MB-415に対して1.629μM、MDA-MB-231に対して0.3919μM、HCC70に対して>10μM、HCC1806に対して>10μM、BT-549に対して>10μM、Hs578tに対して>10μM、MDA-MB-436に対して2.992μMと測定された。
【表２】
2020528052.tif 000007
【００６８】
相乗作用測定は、第二実験にて説明したように、実行した。エリブリンは、3.8pMから1μMの範囲の濃度で、そして、全ての希釈物にわたって10μM又は1μMの一定用量のパルボシクリブで試験した。IC50値の結果は、表3及び図1-4に示している。相乗作用効果が、10μM又は1μMの一定用量のパルボシクリブを使用して全ての細胞株にわたって観察されるというわけではなかった。
【００６９】
10μMの一定用量のパルボシクリブを用いたエリブリンのIC50値は、細胞株MCF-7、T-47D、ZR-75-1、MDA-MB-134VI、MDA-MB-415、MDA-MB231及びHCC1806に対しては測定できなかった。一方、MDA-MB-175VIIに対して92.93nM、HCC70に対して21.53nM、BT-549に対して0.8486nM、Hs578tに対して0.7970nM及びMDA-MB-436に対して6.248nMというIC50値が測定された。
【００７０】
1μMの一定用量のパルボシクリブを用いたエリブリンのIC50値は、細胞株T-47D、ZR-75-1、MDA-MB-175VII及びMDA-MB-415に対しては測定できなかった。一方、MCF-7に対して0.5983nM、MDA-MB-134VIに対して21.01nM、MDA-MB231に対して1.452nM、HCC70に対して0.3772nM、HCC1806に対して0.2728nM、BT-549に対して0.3740nM、Hs578tに対して14.58nM及びMDA-MB-436に対して2.021nMというIC50値が測定された。
【表３】
2020528052.tif 000008
【００７１】
実施例2
我々は、免疫抑制性マウスにおいて、成長したHR+/Her2-乳がんの2つの患者由来異種移植片(PDX)モデルにおいて、エリブリン及びパルボシクリブの併用を調べた。各薬剤を単独療法として与えた場合の最小の抗腫瘍効果だけを引き出した用量レベルを用いたところ、両方のPDXモデルから、エリブリン及びパルボシクリブの併用に強い相乗的活性を示す結果が得られた。これらの結果は、力学的に相乗的で、治療的に良好な結果を導くように、両方の薬がG1/S細胞周期チェックポイントで効果を発揮するというシナリオを示唆している。したがって、PDXモデルのこれらの前臨床的結果から、がん患者におけるエリブリンとパルボシクリブとの併用の臨床的使用が支持される。
【００７２】
パルボシクリブとの併用でのエリブリンの抗腫瘍活性は、患者由来ER+/Her2-乳房腫瘍を皮下に有するスイスヌードマウスで研究した。これらの薬は、それらの効果を細胞周期の種々のステージ(細胞分裂時にエリブリン及びG1/Sチェックポイントにおいて、パルボシクリブ)で発揮するため、後述するように、薬をズラして投与する投薬計画を用いた。
【００７３】
材料及び方法
エリブリンメシル酸塩APIは、乾燥粉末の形で提供され、DMSOストックとして調製し、-20℃又はそれよりも低い温度で保存した。マウスへの注入の前に、エリブリンは、0.1mg/mLとなるように0.9% NaClにて希釈した。パルボシクリブは、0.1mg/mLとなるように0.9% NaClにて希釈した。薬は、直近のマウス体重に従って、10mL/kg/投与の投与量で投与した。エリブリンは、マウスの尾静脈への注入によって、静脈内投与(IV、ボーラス)した一方で、パルボシクリブは、栄養チューブを使用して強制経口投与(経口的、PO)によって、投与した。
【００７４】
この実施例に記載されている実験で使用する患者由来乳房腫瘍は、以下の通りである:(i) OD-BRE-0192、ER+、PR+、Her2-luminal B侵入性小葉癌腫、パッセージ11、及び(ii) OD-BRE-0745、ER+、PR+、Her2-luminal B浸潤性管腺癌腫、パッセージ5、両方とも、Oncodesign Biotechnology(フランス)から供給を受けた。
【００７５】
ヌードマウスにおける乳房腫瘍の誘導
患者由来乳がん断片は、モデル当たり30匹の雌スイスヌードマウスの右フランクに皮下的に埋め込んだ。腫瘍体積が500-1000mm3に及んだ場合に腫瘍を外科的に切除して、モデル当たり101匹の雌スイスヌードマウスの右フランクに腫瘍断片(30-50mg)を皮下的に埋め込んだ。全ての断片の埋め込みは、γ線源(2Gy、60Co、BioMEP、フランス)を用いた全身照射の24〜72時間後に実施した。
【００７６】
治療スケジュール
投薬スキームは、細胞周期に基づく拮抗作用の可能性を回避するために工夫した。特に、エリブリン及びパルボシクリブの併用を調べる細胞に基づく以前のインビトロ調査では、2つの薬に対する同時曝露によって、細胞周期に基づく拮抗作用となり得るという可能性が示唆され、エリブリンの抗有糸分裂活性は、パルボシクリブがそのCDK 4/6阻害活性を発揮するG1/S細胞周期チェックポイントに細胞が達するのを阻害し、G1/SチェックポイントのパルボシクリブのCDK 4/6阻害活性は、エリブリンがその抗有糸分裂活性を発揮する細胞分裂に細胞が達するのを阻害する。インビボPDX調査におけるかかる拮抗作用を阻害するために、エリブリン投与前の日又は投与の日にパルボシクリブを与えない「パルボシクリブホリデー」スキームを用いた。このようにして、エリブリンを直近のパルボシクリブ投薬後の48時間未満には投与しないことで、パルボシクリブによるG1/S細胞周期ブロックが復帰するまでの充分な時間を可能にした。上記ホリデーの非対称な性質(エリブリンの前のパルボシクリブのG1/S細胞周期ブロックからの48時間回復対パルボシクリブの前のエリブリンの抗有糸分裂効果からの24時間回復)は、G1/Sブロック(本質的にG0)からの細胞周期への再突入が、エリブリンのレベルが有糸分裂のブロックを誘導するのに必要な閾値よりも低下した後の細胞分裂の再開及び完了よりも本質的に遅いプロセスであるという推定に基づいている。
【００７７】
各モデルに対して、腫瘍が200-300mm3の平均体積に達した段階で治療を始めた。ランダム化の日をD0とした。Vivoマネージャー（登録商標）ソフトウェア(Biosystemes、Couternon、フランス)を用いて、101匹中の72匹の動物をそれらの個々の腫瘍体積に従って9つのグループ（それぞれ8匹の動物）にランダム化した。統計的検定(分散分析)を実施してグループ間の均一性を試験した。エリブリンでの治療は、ランダム化(D0)の日に開始し、パルボシクリブでの治療は、ランダム化(D1)の1日後に開始した。OD-BRE-0192モデルのために使用する治療スケジュールは、以下の通りである:
グループ1のマウスは、5日間連続のパルボシクリブビヒクルの1日1回のPO投与を3サイクル行うことと併用して、7日毎(D0、D7及びD14: Q7Dx3)に1日1回エリブリンビヒクルの静脈注射を3回行った。各パルボシクリブビヒクルサイクルは、2日間のウォッシュアウトにより分離されている(D1からD5、D8からD12、D15からD19:(Q1Dx5)x3W)。
グループ2のマウスは、7日毎(D0、D7及びD14: Q7Dx3)に1日1回エリブリンビヒクル(0.1mg/kg)の静脈注射を3回行った。
グループ3のマウスは、7日毎(D0、D7及びD14: Q7Dx3)に1日1回エリブリンビヒクル(0.25mg/kg)の静脈注射を3回行った。
グループ4のマウスは、5日間連続のパルボシクリブビヒクル(75 mg/kg)の1日1回のPO投与を3サイクル行った。各パルボシクリブビヒクルサイクルは、2日間のウォッシュアウトにより分離されている(D1からD5、D8からD12、D15からD19:(Q1Dx5)x3W)。
グループ5のマウスは、5日間連続のパルボシクリブビヒクル(150 mg/kg)の1日1回のPO投与を3サイクル行った。各パルボシクリブビヒクルサイクルは、2日間のウォッシュアウトにより分離されている(D1からD5、D8からD12、D15からD19:(Q1Dx5)x3W)。
グループ6のマウスは、5日間連続のパルボシクリブビヒクル(75 mg/kg)の1日1回のPO投与を3サイクル行うことと併用して、7日毎(D0、D7及びD14: Q7Dx3)に1日1回エリブリンビヒクル(0.1 mg/kg)の静脈注射を3回行った。各パルボシクリブビヒクルサイクルは、2日間のウォッシュアウトにより分離されている(D1からD5、D8からD12、D15からD19:(Q1Dx5)x3W)。
グループ7のマウスは、5日間連続のパルボシクリブビヒクル(150 mg/kg)の1日1回のPO投与を3サイクル行うことと併用して、7日毎(D0、D7及びD14: Q7Dx3)に1日1回エリブリンビヒクル(0.1 mg/kg)の静脈注射を3回行った。各パルボシクリブビヒクルサイクルは、2日間のウォッシュアウトにより分離されている(D1からD5、D8からD12、D15からD19:(Q1Dx5)x3W)。
グループ8のマウスは、5日間連続のパルボシクリブビヒクル(75 mg/kg)の1日1回のPO投与を3サイクル行うことと併用して、7日毎(D0、D7及びD14: Q7Dx3)に1日1回エリブリンビヒクル(0.25 mg/kg)の静脈注射を3回行った。各パルボシクリブビヒクルサイクルは、2日間のウォッシュアウトにより分離されている(D1からD5、D8からD12、D15からD19:(Q1Dx5)x3W)。
グループ9のマウスは、5日間連続のパルボシクリブビヒクル(150 mg/kg)の1日1回のPO投与を3サイクル行うことと併用して、7日毎(D0、D7及びD14: Q7Dx3)に1日1回エリブリンビヒクル(0.25 mg/kg)の静脈注射を3回行った。各パルボシクリブビヒクルサイクルは、2日間のウォッシュアウトにより分離されている(D1からD5、D8からD12、D15からD19:(Q1Dx5)x3W)。
【００７８】
OD-BRE-0192モデルの治療スケジュールは、以下の表にまとめている。
【表４】
2020528052.tif 000009
【００７９】
OD-BRE-0745モデルに関して、OD-BRE-0192モデルに対する上述の3サイクルを実施した。更に4サイクルを実施して、13日間のエリブリンウォッシュアウト後にエリブリン投与を開始した。この4サイクルに関して、エリブリンは、28日目に投与し、パルボシクリブは、29-33日目に投与した。
【００８０】
動物の体重測定値、腫瘍体積、臨床記録、死亡記録及び処置を含む全ての調査データは、Vivoマネージャー（登録商標）データベース(Biosystemes、ディジョン、フランス)に記録した。生存度及び挙動は、毎日記録した。体重は、1週間に二回測定した。腫瘍の長さ及び幅は、1週間に二回ノギスで測定して、腫瘍体積は、以下の通りに推定した:腫瘍体積 = (幅2 x長)/2。
【００８１】
結果
併用での調査の結果は、図5-8(OD-BRE-0192)及び図9-12(OD-BRE-0745)に示している。x軸に沿って明示されている日数は、腫瘍埋め込み後の日数である。したがって、図5-12のx軸に明示されている0日目は、腫瘍埋め込みの日である。投薬日は、x軸の下に矢印符号にて明示している。投薬は、OD-BRE-0192モデルに対する腫瘍埋め込みから50日目に、OD-BRE-0745モデルに対する腫瘍埋め込みから61日目に開始した。
【００８２】
図5-8に示すように、OD-BRE-0192モデルに関して、ビヒクルのみのコントロール及びいずれかの単独薬と比較すると、エリブリンとパルボシクリブとの併用によって、結果が向上した。併用効果は、より高い薬量での試験(0.25mg/kgのエリブリン及び150mg/kgのパルボシクリブ)で、最も明らかとなる(図8を参照)。
【００８３】
同様に、図9-12に示すように、OD-BRE-0745モデルに関して、ビヒクルのみのコントロール及びいずれかの単独薬と比較すると、エリブリンとパルボシクリブとの併用によって、結果が向上した。しかしながら、より高いパルボシクリブの量での試験(150mg/kgのパルボシクリブ)では、パルボシクリブが反応を圧倒し、エリブリンの貢献を覆い隠している(図10及び12)。したがって、併用効果は、使用するパルボシクリブ(75mg/kg)の量が低いと、より明らかになる(図9及び11を参照)。
【００８４】
エリブリン及びパルボシクリブは、ER+/PR+/Her2- luminal Bヒト乳がんの2つのPDXモデルにおいて、相乗的抗癌活性を示した。全ての用量及び併用は、(<20%の可逆的体重減少及び<10%の死亡率という標準基準に基づく)経験的に決定されているMTD用量レベル以下であった。両方のモデルにおいて、相乗効果は、単一薬剤として投与した場合に最小限の抗がん活性だけが示されるように意図的に選択された投与量で見られた。48時間の「パルボシクリブホリデー」投薬戦略は、細胞周期に基づく潜在的拮抗作用を回避するために使用した。OD-BRE-0192 PDXモデルにおいて、相乗効果は、0.25mg/kgのエリブリンプラス150mg/kgのパルボシクリブが最適であった。OD-BRE-0745 PDXモデルにおいて、相乗効果は、0.25mg/kgのエリブリンと75mg/kgのパルボシクリブの併用が最適であった。
【００８５】
上述のこれらの条件下で、エリブリンとパルボシクリブとの併用は、いずれかの薬剤単独(T/C:それぞれ 55-67%及び88-98%)と比較して、両モデルにおいて、著しく優れた抗が活性(29%及び41%の最小T/C値)を引き出した。したがって、これらの前臨床的PDX結果は、例えば、ER+/Her2-乳がんを患っている適切な患者に対する、エリブリンとパルボシクリブとの併用の臨床的使用を支持するものである。
【００８６】
他の実施形態
本発明がその特定の実施形態と関連付けて記載している一方で、更なる変更形態が可能であり、本願は、本発明の原理に一般的に従う本発明の任意のバリエーション、使用又は適応をカバーし、これには、本発明に関係し且つ本願明細書に記載の必須の特徴に適用し得る技術の範囲内で公知又は慣習的な実務内に入る本開示由来のかかる発展が含まれることを意図していることを理解されよう。
【００８７】
本明細書に記載の全ての刊行物及び特許出願は、それぞれ独立した刊行物又は特許出願がそれらの全部を引用して具体的且つ個々に明示しているように本願明細書で引用されている。
【００８８】
本願明細書での単数形(例えば、「a」及び「the」)の使用は、文脈において、明示の反対がない限り、対応する複数形の適用を除外しない。同様に、複数語の使用は、対応する単数形の適用を除外しない。他の実施形態は、添付の特許請求の範囲内である。
【図１】
2020528052.tif 000010
【図２】
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【図３】
2020528052.tif 000012
【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【国際調査報告】
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