(57)【要約】  本発明は、疾患の治療における使用のための活性成分の組合せに関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）ＣＶＣ又はこの類縁体、薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物、及び
（ｉｉ）式（Ｉ）の少なくとも１つのＰＰＡＲアゴニスト
【化１】
2020510651.tif 000008
（式中、
Ｙ１は、ハロゲン、Ｒａ又はＧａ−Ｒａ基を表し、
Ａは、ＣＨ＝ＣＨ又はＣＨ２−ＣＨ２基を表し、
Ｙ２は、Ｇｂ−Ｒｂ基を表し、
Ｇａ及びＧｂは、同一であり又は異なり、酸素又は硫黄原子を表し、
Ｒａは、水素原子、非置換（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基若しくは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基（ここで、該アリール基及びアルキル基は、１個以上のハロゲン原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ若しくは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ基で置換されている。）、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキルチオ基又は複素環基を表し、
Ｒｂは、少なくとも１つの−ＣＯＯＲｃ基により置換されている（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基を表し、ここで、Ｒｃは、水素原子、又は１個以上のハロゲン原子で置換されている若しくは置換されていない（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基又は複素環基を表し、
Ｙ４及びＹ５は、同一であり又は異なり、１個以上のハロゲン原子により置換されている若しくは置換されていない（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基又は複素環基を表す。）
を含む、組合せ物。
【請求項２】
（ｉ）ＣＶＣ又はこの薬学的に許容される塩、及び
（ｉｉ）エラフィブラノール又はこれらの薬学的に許容される塩
を含む、請求項１に記載の組合せ物。
【請求項３】
成分（ｉ）及び（ｉｉ）及び薬学的に許容される担体を含む、組成物である、請求項１又は２に記載の組合せ物。
【請求項４】
逐次的使用、別々の使用又は同時使用のための、成分（ｉ）及び（ｉｉ）を含むキットオブパーツである、請求項１又は２に記載の組合せ物。
【請求項５】
成分（ｉ）及び（ｉｉ）が、注射用懸濁液、ゲル、油、ピル、錠剤、坐剤、粉末、カプセル、エアロゾル、軟膏、クリーム、パッチ、又は持続放出及び／若しくは徐放のためのガレヌス形態の手段に製剤化されている、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組合せ物。
【請求項６】
公知の抗線維化活性を有する少なくとも１つの治療活性剤をさらに含み、
前記治療活性剤が、ピルフェニドン若しくは受容体型チロシンキナーゼ阻害剤（ＲＴＫＩ）（例えば、ニンテダニブ、ソラフェニブ及び他のＲＴＫＩ）；又は、アンジオテンシンＩＩ（ＡＴ１）受容体遮断薬；又は、ＣＴＧＦ阻害剤；又は、潜在型ＴＧＦβ複合体の活性化因子（例えば、ＭＭＰ２、ＭＭＰ９、ＴＨＢＳ１若しくは細胞表面インテグリン）、ＴＧＦβＩ型受容体（ＴＧＦＢＲＩ）若しくはＩＩ型受容体（ＴＧＦＢＲＩＩ）及びそれらのリガンド（例えば、ＴＧＦβ、アクチビン、インヒビン、ノダル、抗ミュラー管ホルモン、ＧＤＦ若しくはＢＭＰ）、補助受容体（ＩＩＩ型受容体としても公知）を含む、ＴＧＦβ及びＢＭＰ活性化経路に干渉しやすい抗線維化化合物；又は、調節性若しくは阻害性ＳＭＡＤタンパク質を含む、ＳＭＡＤ依存性古典的経路の成分；又は、ＭＡＰＫシグナル伝達、ＴＡＫ１、Ｒｈｏ様ＧＴＰａｓｅシグナル伝達経路、ホスファチジルイノシトール−３キナーゼ／ＡＫＴ経路、ＴＧＦβ誘導ＥＭＴプロセスの様々な分岐を含む、ＳＭＡＤ非依存性若しくは非古典的経路のメンバー；又は、Ｈｈリガンド若しくは標的遺伝子を含む、古典的及び非古典的ヘッジホッグシグナル伝達経路のメンバー；又は、ＴＧＦβの影響を受けやすい、ＷＮＴ若しくはＮｏｔｃｈ経路のメンバーから選択される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組合せ物。
【請求項７】
ＪＡＫ／ＳＴＡＴ阻害剤並びに他の抗炎症及び／又は免疫抑制剤から選択される、少なくとも１つの治療活性剤をさらに含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組合せ物。
【請求項８】
治療活性剤が、グルココルチコイド、ＮＳＡＩＤＳ、シクロホスファミド、ニトロソウレア、葉酸類縁体、プリン類縁体、ピリミジン類縁体、メトトレキサート、アザチオプリン、メルカプトプリン、シクロスポリン、ミリオシン、タクロリムス、シロリムス、ミコフェノール酸誘導体、フィンゴリモド及び他のスフィンゴシン−１−リン酸受容体モジュレーター；炎症性サイトカイン及び炎症性サイトカイン受容体、Ｔ細胞受容体並びにインテグリンのような標的に対する、モノクローナル及び／又はポリクローナル抗体から選択される、請求項７に記載の組合せ物。
【請求項９】
医薬として使用するための、請求項１〜８のいずれか一項に記載組合せ物。
【請求項１０】
炎症性、代謝性、線維性及び胆汁うっ滞性疾患を治療するための方法における使用のための、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組合せ物。
【請求項１１】
線維性障害が、肝臓、腎臓、皮膚、表皮、内皮、筋肉、腱、軟骨、心臓、膵臓、肺、子宮、神経系、精巣、卵巣、副腎、動脈、静脈、結腸、腸（例えば、小腸）、胆管、軟部組織（例えば、縦隔若しくは後腹膜）、骨髄、関節及び胃の線維症からなる群から選択される、請求項１０に記載の使用のための組合せ物。
【請求項１２】
線維性障害が、肝臓、消化管、肺、心臓、腎臓、筋肉、皮膚、軟部組織、骨髄、腸及び関節の線維症からなる群から選択される、請求項１０又は１１に記載の使用のための組合せ物。
【請求項１３】
疾患が、代謝性肝疾患、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、薬物誘発性肝疾患、アルコール誘発性肝疾患、感染性因子誘発性肝疾患、炎症性肝疾患、免疫系機能障害媒介肝疾患、脂質異常症、心血管疾患、再狭窄、シンドロームＸ、メタボリックシンドローム、糖尿病、肥満、高血圧；原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ）のような、慢性胆管症；胆道閉塞症、家族性肝内胆汁うっ滞症３型（ＰＦＩＣ３）、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、ケロイド、陳旧性心筋梗塞、強皮症／全身性強皮症、炎症性疾患、神経変性疾患、がん、肝がん、肝細胞癌、消化器がん、胃がん；神経線維腫症に関連する髄膜腫；膵神経内分泌腫瘍、膵外分泌腫瘍、白血病、骨髄増殖性／骨髄異形成（ｍｙｅｌｏｄｉｓｐｌａｓｔｉｃ）疾患、肥満細胞症、皮膚線維肉腫；乳、肺、甲状腺又は結腸直腸がんを含む、固形腫瘍；前立腺がん、任意の起源の肝線維症又は硬変、代謝性疾患誘発性肝線維症又は硬変、ＮＡＦＬＤ誘発性線維症又は硬変、ＮＡＳＨ誘発性線維症又は硬変、アルコール誘発性肝線維症又は硬変、薬物誘発性肝線維症又は硬変、感染性因子誘発性肝線維症又は硬変、寄生虫感染誘発性肝線維症又は硬変、細菌感染誘発性肝線維症又は硬変、ウイルス感染誘発性線維症又は硬変、ＨＢＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、ＨＣＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、ＨＩＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、二重ＨＣＶ・ＨＩＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、放射線又は化学療法誘発性線維症又は硬変、胆管線維症；あらゆる慢性胆汁うっ滞性疾患に起因する肝線維症又は硬変；あらゆる原因の消化管線維症；クローン病誘発性線維症、潰瘍性大腸炎誘発性線維症、腸（例えば、小腸）線維症、結腸線維症、胃線維症、皮膚線維症、表皮線維症、内皮線維症；強皮症／全身性強皮症に起因する皮膚線維症；肺線維症；ＣＯＰＤ、喘息、肺気腫、喫煙者肺、結核、肺線維症、特発性肺線維症（ＩＰＦ）のような、慢性炎症性気道疾患に続いての、肺線維症；心線維症、腎線維症、腎性全身性線維症、筋線維症、軟部組織（例えば、縦隔又は後腹膜）線維症、骨髄線維症、関節線維症、腱線維症、軟骨線維症、膵線維症、子宮線維症、神経系線維症、精巣線維症、卵巣線維症、副腎線維症、動脈線維症、静脈線維症、眼線維症、心内膜心筋線維症、縦隔線維症、骨髄線維症、後腹膜線維症、進行性塊状線維症（炭鉱夫塵肺の合併症）、増殖性線維症、腫瘍性線維症、着床前後線維症、及び石綿肺、関節線維症、粘着性関節包炎からなる群から選択される、請求項１０〜１２のいずれか一項に記載の使用のための組合せ物。
【請求項１４】
疾患が、代謝性肝疾患、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、薬物誘発性肝疾患、アルコール誘発性肝疾患、感染性因子誘発性肝疾患、炎症性肝疾患、免疫系機能障害媒介肝疾患、脂質異常症、心血管疾患、再狭窄、シンドロームＸ、メタボリックシンドローム、糖尿病、肥満、高血圧；原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ）のような、慢性胆管症；胆道閉塞症、家族性肝内胆汁うっ滞症３型（ＰＦＩＣ３）、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、肝がん、肝細胞癌、消化器がん、胃がん、結腸直腸がん、代謝性疾患誘発性肝線維症又は硬変、ＮＡＦＬＤ誘発性線維症又は硬変、ＮＡＳＨ誘発性線維症又は硬変、アルコール誘発性肝線維症又は硬変、薬物誘発性肝線維症又は硬変、感染性因子誘発性肝線維症又は硬変、寄生虫感染誘発性肝線維症又は硬変、細菌感染誘発性肝線維症又は硬変、ウイルス感染誘発性線維症又は硬変、ＨＢＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、ＨＣＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、ＨＩＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、二重ＨＣＶ・ＨＩＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、放射線又は化学療法誘発性線維症又は硬変、胆管線維症；あらゆる慢性胆汁うっ滞性疾患に起因する肝線維症又は硬変；あらゆる原因の消化管線維症；クローン病誘発性線維症、潰瘍性大腸炎誘発性線維症、腸（例えば、小腸）線維症、結腸線維症、胃線維症、肺線維症；ＣＯＰＤ、喘息、肺気腫、喫煙者肺、結核、肺線維症、特発性肺線維症（ＩＰＦ）のような、慢性炎症性気道疾患に続いての、肺線維症からなる群から選択される、疾患が、代謝性肝疾患、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、薬物誘発性肝疾患、アルコール誘発性肝疾患、感染性因子誘発性肝疾患、炎症性肝疾患、免疫系機能障害媒介肝疾患、脂質異常症、心血管疾患、再狭窄、シンドロームＸ、メタボリックシンドローム、糖尿病、肥満、高血圧；原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ）のような、慢性胆管症；胆道閉塞症、家族性肝内胆汁うっ滞症３型（ＰＦＩＣ３）、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、肝がん、肝細胞癌、消化器がん、胃がん、結腸直腸がん、代謝性疾患誘発性肝線維症又は硬変、ＮＡＦＬＤ誘発性線維症又は硬変、ＮＡＳＨ誘発性線維症又は硬変、アルコール誘発性肝線維症又は硬変、薬物誘発性肝線維症又は硬変、感染性因子誘発性肝線維症又は硬変、寄生虫感染誘発性肝線維症又は硬変、細菌感染誘発性肝線維症又は硬変、ウイルス感染誘発性線維症又は硬変、ＨＢＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、ＨＣＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、ＨＩＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、二重ＨＣＶ・ＨＩＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、放射線又は化学療法誘発性線維症又は硬変、胆管線維症；あらゆる慢性胆汁うっ滞性疾患に起因する肝線維症又は硬変；あらゆる原因の消化管線維症；クローン病誘発性線維症、潰瘍性大腸炎誘発性線維症、腸（例えば、小腸）線維症、結腸線維症、胃線維症、肺線維症；ＣＯＰＤ、喘息、肺気腫、喫煙者肺、結核、肺線維症、特発性肺線維症（ＩＰＦ）のような、慢性炎症性気道疾患に続いての、肺線維症からなる群から選択される、請求項１０〜１２のいずれか一項に記載の使用のための組合せ物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＰＰＡＲアゴニスト、及びセニクリビロク（ＣＶＣ）としても公知の（Ｓ，Ｅ）−８−（４−（２−ブトキシエトキシ）フェニル）−１−（２−メチルプロピル）−Ｎ−（４−（（（１−プロピル−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル）スルフィニル）フェニル）−１，２，３，４−テトラヒドロベンゾ［ｂ］アゾシン−５−カルボキサミド、又はその誘導体、を含有する医薬組成物、及び併用療法におけるこれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（３１版、２００４年、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ及びＷｉｌｋｉｎｓ）によれば、肝障害は、異なる疾患群に分類することができ、特に、種々の疾患（例えば、ウイルス性疾患、薬物及びアルコール関連肝疾患、免疫介在性肝疾患、代謝性肝疾患、非アルコール性脂肪肝疾患）、及び肝機能不全（例えば、劇症肝不全又は肝細胞癌）の合併症に分類することができる。
【０００３】
特に、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）は、アルコールを殆ど又は全く摂取しない個体における、アルコール誘発性脂肪肝疾患の組織学的特徴を有する、一般的な肝障害である（Ｙｅｈ  Ｍら、２００７年；Ｍａｒｃｈｅｓｉｎｉ  Ｇら、２００３年）。ＮＡＦＬＤは、細胞内の異常な脂質保持（一般に脂肪化と定義される）が原因であり、この事象は、肝臓内での頻度がより高い。この器官が脂質代謝を主として担当するからである。ＮＡＦＬＤは、肝細胞の破壊に起因する肝臓の炎症、脂肪化、壊死及び線維化を特徴とする、脂肪肝及び非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を含む、一連の組織学的形態を有する。ＮＡＦＬＤに関連する状態は様々であり、２型糖尿病、肥満、脂質異常症、メタボリックシンドローム、肝毒性薬物での治療、毒素、感染性因子又は他の外因性原因を含む。
【０００４】
ＮＡＦＬＤは、典型的に、良性の非進行性の臨床経過を辿るが、ＮＡＳＨは、重症になる可能性のある状態であり、２５％もの患者が、高度の線維化、硬変へと進行し、門脈圧亢進症、肝不全及び肝細胞癌の合併症を経験することがあり、このため、早期の正しい評定が必須となる（Ｙｅｈ  Ｍら、２００７年）。
【０００５】
肝線維性疾患、特に、ＮＡＦＬＤ及びＮＡＳＨを有効に治療するための手段は、いまだに不十分である。ＮＡＳＨを有する患者のための治療は確立されておらず、幾つかの治療選択肢は、臨床試験において試験される（Ｖｕｐｐａｌａｎｃｈｉ  Ｒ及びＣｈａｌａｓａｎｉ  Ｎ、２００９年；Ｄｏｗｍａｎ  Ｊ．Ｋら、２００９年）。これらの研究は、多くの異なる化学物質ファミリー（フィブレート、チアゾリジンジオン、ビグアニド、スタチン、カンナビノイド）及び治療標的ファミリー（核内受容体、アンジオテンシン受容体、カンナビノイド受容体、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ）の使用を伴う。最近、チアゾリジンジオン（ロシグリタゾン及びピオグリタゾン）を伴う研究が、これらの薬物は肝臓の状態を向上させ得ること、しかし、これらの薬物での治療には、より高いうっ血性心不全及び骨粗鬆症リスク、並びに患者に対する精神的影響に伴う体重増加のような、望ましくない効果がないわけではないことを示した（Ｄｏｗｍａｎ  Ｊ．Ｋら、２０１０年；Ｓｈｉｒｉ−Ｓｖｅｒｄｌｏｖ  Ｒら、２００６年；Ｎｅｕｓｃｈｗａｎｄｅｒ−Ｔｅｔｒｉら、２００３年）。カンナビノイドの投与を伴う臨床試験は、神経精神崩壊の懸念を生じさせた（Ｖｕｐｐａｎｃｈｉ  Ｒ及びＣｈａｌａｓａｎｉ  Ｎ、２００９年）。現在行われている他の治療法は、ＮＡＳＨ薬に関して抗酸化剤としての評定を模索しているが、これらの治療で確信的証拠を示したものはまだない（Ｎｅｌｓｏｎ  Ａら、２００９年）。
【０００６】
異なる作用機序を有する幾つかの化合物が、現在、第２又は３相臨床試験中である。
【０００７】
ＷＯ２００４００５２３３において開示されているＰＰＡＲ−アルファ／デルタ二重アゴニストである、１−［４−メチルチオフェニル］−３−［３，５−ジメチル−４−カルボキシジメチルメチルオキシフェニル］プロパ−２−エン−１−オン（エラフィブラノール、又はＥＬＡ、旧名ＧＦＴ５０５）は、胆汁うっ滞性疾患（例えば、線維性疾患、消化器病及び肝疾患、特に、原発性胆汁性胆管炎（ｐｒｉｍａｒｙ  ｂｉｌｉａｒｙ  ｃｈｏｌａｎｇｉｔｉｃ）（ＰＢＣ）及びＰＳＣ（原発性硬化性胆管炎））、又は非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）（例えば、肝疾患、特に、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ））を含む、多数の疾患の治療に有利であり得る特性を有する。エラフィブラノールは、ＮＡＳＨに関して今までに行われた最大の介入研究である、肝生検に基づく１年の第２ｂ相試験（ＧＦＴ５０５−２１２７）において、ＮＡＳＨにおける臨床的有効性について評価された。今までに８００名を超える患者及び健常ボランティアに投与されたエラフィブラノールは、ＮＡＳＨに有益な特性、特に、肝機能障害マーカー（ＡＬＡＴ、ＡＳＡＴ、γＧＴ、ＡＬＰを含む）の向上；インスリン感受性及びグルコース恒常性の向上；血漿トリグリセリド及びＬＤＬ−Ｃの低下並びにＨＤＬ−Ｃレベルの上昇を含む、血漿脂質に対する好適な効果；抗炎症特性；動物疾患モデルにおける組織学的ＮＡＳＨパラメーター（脂肪化、炎症、線維化）に対する有効性−抗線維化活性を含む特性を明示し、２年以下の完全な毒性学的総合発癌性研究において安全性の懸念がないことが確認された。エラフィブラノールは、現在、臨床第３相研究においてＮＡＳＨの治療について評価されている。臨床第２相研究におけるＰＢＣの治療についてのこの分子の評価も開始された。
【０００８】
二重ＣＣＲ２／５アンタゴニストであるＣＶＣは、ＮＡＳＨ又は肝線維症の治療のために提案された、もう１つの化合物である。ＣＶＣは、肝線維症を有する成人対象におけるＮＡＳＨの治療について、主要アウトカムがＮＡＳに関して最低２点の改善により定義されるＣＥＮＴＡＵＲ第２ｂ相研究（ｓｔｕｄｙｌ）において以前に評価され、１日１回経口投与され、毎朝、食物と一緒に摂取された、ＣＶＣ  １５０ｍｇでの１年の治療後、小葉炎症又は肝細胞バルーニングのどちらかの少なくとも１点の低下があった。しかし、主要アウトカムは、満たされなかった。研究中に、ＣＶＣで治療された患者のある特定の割合がプラセボと比較して線維化の減少を示すデータが生成された。結果として、ＣＶＣは、１２カ月目の主要エンドポイントが、線維症の（ＮＡＳＨ  ＣＲＮシステムに従って）少なくとも１病期の改善、及び脂肪性肝炎の悪化がないこと、並びに硬変への病理組織学的進行、肝臓関連臨床アウトカム及び原因を問わない死亡率の複合エンドポイントに関してプラセボと比較して優れていることである、ＡＵＲＯＲＡ第３相研究において、ＮＡＳＨ患者における肝線維症の治療について、現在評価されている。
【０００９】
幾つかの機序がＮＡＳＨ発症に関与しているが、製品の如何なる組合せが、ＮＡＳＨ療法を向上させるのに有効であるのかを洞察する情報は、得られていない。本発明は、そのような予想外の向上に関する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】国際公開第２００４／００５２３３号
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（３１版、２００４年、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ及びＷｉｌｋｉｎｓ）
【非特許文献２】Ｙｅｈ  Ｍら、２００７年
【非特許文献３】Ｍａｒｃｈｅｓｉｎｉ  Ｇら、２００３年
【非特許文献４】Ｖｕｐｐａｌａｎｃｈｉ  Ｒ及びＣｈａｌａｓａｎｉ  Ｎ、２００９年
【非特許文献５】Ｄｏｗｍａｎ  Ｊ．Ｋら、２００９年
【非特許文献６】Ｄｏｗｍａｎ  Ｊ．Ｋら、２０１０年
【非特許文献７】Ｓｈｉｒｉ−Ｓｖｅｒｄｌｏｖ  Ｒら、２００６年
【非特許文献８】Ｎｅｕｓｃｈｗａｎｄｅｒ−Ｔｅｔｒｉら、２００３年
【非特許文献９】Ｎｅｌｓｏｎ  Ａら、２００９年
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
（発明の要旨）
本発明は、
（ｉ）ＣＶＣ又はこの類縁体、薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物、及び
（ｉｉ）式（Ｉ）の少なくとも１つのＰＰＡＲアゴニスト
【００１３】
【化１】
2020510651.tif 000002
（式中、
Ｙ１は、ハロゲン、Ｒａ又はＧａ−Ｒａ基を表し、
Ａは、ＣＨ＝ＣＨ又はＣＨ２−ＣＨ２基を表し、
Ｙ２は、Ｇｂ−Ｒｂ基を表し、
Ｇａ及びＧｂは、同一であり又は異なり、酸素又は硫黄原子を表し、
Ｒａは、水素原子、非置換（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基を表し、１個以上のハロゲン原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ若しくは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ基で置換されている、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基若しくは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基を表し、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキルチオ基又は複素環基を表し、
Ｒｂは、少なくとも１つの−ＣＯＯＲｃ基（ここで、Ｒｃは、水素原子を表す。）により置換されている（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、又は１個以上のハロゲン原子で置換されている若しくは置換されていない（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、又は（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基、又は複素環基を表し、
Ｙ４及びＹ５は、同一であり又は異なり、１個以上のハロゲン原子により置換されている若しくは置換されていない（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、又は（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基、又は複素環基を表す。）
を含む組合せ物に関する。
【００１４】
特定の実施形態において、組合せの成分（ｉ）は、ＣＶＣ又はこの薬学的に許容される塩である。
【００１５】
特定の実施形態において、少なくとも１つのＰＰＡＲアゴニストは、１−［４−メチルチオフェニル］−３−［３，５−ジメチル−４−カルボキシジメチルメチルオキシフェニル］プロパ−２−エン−１−オン（エラフィブラノール、又はＥＬＡ、旧名ＧＦＴ５０５）である。
【００１６】
本発明の好ましい実施形態によれば、本発明の組合せ物は、ＣＶＣ及びエラフィブラノールを含む。
【００１７】
さらに、本発明の組合せ物は、抗線維化活性を有することが判っている少なくとも１つの治療活性薬剤をさらに含むことができ、この治療活性薬剤は、受容体型チロシンキナーゼ阻害剤（ＲＴＫＩ）（例えば、ピルフェニドン；又はニンテダニブ、ソラフェニブ及び他のＲＴＫＩ）；又はアンジオテンシンＩＩ（ＡＴ１）受容体遮断薬；又は潜在型ＴＧＦβ複合体の活性化因子（例えば、ＣＴＧＦ阻害剤；又はＭＭＰ２、ＭＭＰ９、ＴＨＢＳ１若しくは細胞表面インテグリン）、ＴＧＦβＩ型受容体（ＴＧＦＢＲＩ）若しくはＩＩ型受容体（ＴＧＦＢＲＩＩ）、及びそれらのリガンド（例えば、ＴＧＦβ、アクチビン、インヒビン、ノダル、抗ミュラー管ホルモン、ＧＤＦ若しくはＢＭＰ）、補助受容体（ＩＩＩ型受容体としても公知）を含む、ＴＧＦβ及びＢＭＰ活性化経路に干渉しやすい任意の抗線維化化合物；又は調節性若しくは阻害性ＳＭＡＤタンパク質を含む、ＳＭＡＤ依存性古典的経路の成分；又はＭＡＰＫシグナル伝達、ＴＡＫ１、Ｒｈｏ様ＧＴＰａｓｅシグナル伝達経路、ホスファチジルイノシトール−３キナーゼ／ＡＫＴ経路、ＴＧＦβ誘導ＥＭＴプロセスの様々な分岐を含む、ＳＭＡＤ非依存性若しくは非古典的経路のメンバー；又は、Ｈｈリガンド若しくは標的遺伝子を含む、古典的及び非古典的ヘッジホッグシグナル伝達経路のメンバー；又は、ＴＧＦβの影響を受けやすい、ＷＮＴ若しくはＮｏｔｃｈ経路の任意のメンバーから選択される。
【００１８】
あるいは、本発明による組合せ物は、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ阻害剤並びに他の抗炎症及び／又は免疫抑制剤から選択される、少なくとも１つの治療活性薬剤をさらに含むことができる。例えば、治療活性薬剤は、グルココルチコイド、ＮＳＡＩＤＳ、シクロホスファミド、ニトロソウレア、葉酸類縁体、プリン類縁体、ピリミジン類縁体、メトトレキサート、アザチオプリン、メルカプトプリン、シクロスポリン、ミリオシン、タクロリムス、シロリムス、ミコフェノール酸誘導体、フィンゴリモド及び他のスフィンゴシン−１−リン酸受容体モジュレーター；炎症性サイトカイン及び炎症性サイトカイン受容体、Ｔ細胞受容体並びにインテグリンのような標的に対する、モノクローナル及び／又はポリクローナル抗体から選択することができる。
【００１９】
本発明の組合せ物は、医薬組成物の形態であることもあり、又はキットオブパーツ（ｋｉｔ  ｏｆ  ｐａｒｔｓ）の形態であることもある。キットオブパーツの形態である場合、本発明の組合せの成分は、同時に、逐次的に又は別々に投与することができる。
【００２０】
本発明は、本発明の組合せ物の治療的使用にも関する。しかるが故に、本発明は、医薬品としての使用のための、本明細書において開示される組合せ物にも関する。
【００２１】
本発明の組合せ物は、免疫性疾患（例えば、自己免疫性疾患）、炎症性疾患、代謝性疾患、線維性疾患及び胆汁うっ滞性疾患のような、疾患の治療又は予防に、特に有用である。したがって、本発明は、免疫（例えば、自己免疫）、炎症性、代謝性、線維性又は胆汁うっ滞性疾患の治療のための方法における使用のための、本発明の組合せ物に関する。本発明は、さらに、免疫（例えば、自己免疫）、炎症性、代謝性、線維性又は胆汁うっ滞性疾患の治療のための医薬品の製造における、本発明の組合せ物の使用に関する。本発明は、さらに、それを必要とする患者における免疫（例えば、自己免疫）、炎症性、代謝性、線維性又は胆汁うっ滞性疾患の治療のための方法であって、前記対象に本発明の組合せ物の治療有効量を投与することを含む方法に関する。
【００２２】
特定の実施形態において、疾患は、代謝性肝疾患、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、薬物誘発性肝疾患、アルコール誘発性肝疾患、感染性因子誘発性肝疾患、炎症性肝疾患、免疫系機能障害媒介肝疾患、脂質異常症、心血管疾患、再狭窄、シンドロームＸ、メタボリックシンドローム、糖尿病、肥満、高血圧；慢性胆管症（例えば、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ））；胆道閉塞症、家族性肝内胆汁うっ滞症３型（ＰＦＩＣ３）、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、ケロイド、陳旧性心筋梗塞、強皮症／全身性強皮症、炎症性疾患、神経変性疾患、がん、肝がん、肝細胞癌、消化器がん、胃がん；神経線維腫症に関連する髄膜腫；膵神経内分泌腫瘍、膵外分泌腫瘍、白血病、骨髄増殖性／骨髄異形成（ｍｙｅｌｏｄｉｓｐｌａｓｔｉｃ）疾患、肥満細胞症、皮膚線維肉腫；乳、肺、甲状腺又は結腸直腸がんを含む、固形腫瘍；前立腺がん、任意の起源の肝線維症又は硬変、代謝性疾患誘発性肝線維症又は硬変、ＮＡＦＬＤ誘発性線維症又は硬変、ＮＡＳＨ誘発性線維症又は硬変、アルコール誘発性肝線維症又は硬変、薬物誘発性肝線維症又は硬変、感染性因子誘発性肝線維症又は硬変、寄生虫感染誘発性肝線維症又は硬変、細菌感染誘発性肝線維症又は硬変、ウイルス感染誘発性線維症又は硬変、ＨＢＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、ＨＣＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、ＨＩＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、二重ＨＣＶ・ＨＩＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、放射線又は化学療法誘発性線維症又は硬変、胆管線維症；あらゆる慢性胆汁うっ滞性疾患に起因する肝線維症又は硬変；あらゆる原因の消化管線維症；クローン病誘発性線維症、潰瘍性大腸炎誘発性線維症、腸（例えば、小腸）線維症、結腸線維症、胃線維症、皮膚線維症、表皮線維症、内皮線維症；強皮症／全身性強皮症に起因する皮膚線維症；肺線維症；慢性炎症性気道疾患に続く肺線維症（例えば、ＣＯＰＤ、喘息、肺気腫、喫煙者肺、結核、肺線維症、特発性肺線維症（ＩＰＦ））；心線維症、腎線維症、腎性全身性線維症、筋線維症、軟部組織（例えば、縦隔又は後腹膜）線維症、骨髄線維症、関節線維症、腱線維症、軟骨線維症、膵線維症、子宮線維症、神経系線維症、精巣線維症、卵巣線維症、副腎線維症、動脈線維症、静脈線維症、眼線維症、心内膜心筋線維症、縦隔線維症、骨髄線維症、後腹膜線維症、進行性塊状線維症（炭鉱夫塵肺の合併症）、増殖性線維症、腫瘍性線維症、着床前後線維症、及び石綿肺、関節線維症、粘着性関節包炎からなる群から選択される。
【００２３】
さらなる特定の実施形態において、疾患は、代謝性肝疾患、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、薬物誘発性肝疾患、アルコール誘発性肝疾患、感染性因子誘発性肝疾患、炎症性肝疾患、免疫系機能障害媒介肝疾患、脂質異常症、心血管疾患、再狭窄、シンドロームＸ、メタボリックシンドローム、糖尿病、肥満、高血圧；慢性胆管症（例えば、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ））；胆道閉塞症、家族性肝内胆汁うっ滞症３型（ＰＦＩＣ３）、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、肝がん、肝細胞癌、消化器がん、胃がん、結腸直腸がん、代謝性疾患誘発性肝線維症又は硬変、ＮＡＦＬＤ誘発性線維症又は硬変、ＮＡＳＨ誘発性線維症又は硬変、アルコール誘発性肝線維症又は硬変、薬物誘発性肝線維症又は硬変、感染性因子誘発性肝線維症又は硬変、寄生虫感染誘発性肝線維症又は硬変、細菌感染誘発性肝線維症又は硬変、ウイルス感染誘発性線維症又は硬変、ＨＢＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、ＨＣＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、ＨＩＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、二重ＨＣＶ・ＨＩＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、放射線又は化学療法誘発性線維症又は硬変、胆管線維症；あらゆる慢性胆汁うっ滞性疾患に起因する肝線維症又は硬変；あらゆる原因の消化管線維症；クローン病誘発性線維症、潰瘍性大腸炎誘発性線維症、腸（例えば、小腸）線維症、結腸線維症、胃線維症、肺線維症；ＣＯＰＤ、喘息、肺気腫、喫煙者肺、結核、肺線維症、特発性肺線維症（ＩＰＦ）のような、慢性炎症性気道疾患に続いての、肺線維症からなる群から選択される。
【００２４】
本発明の組成物及び方法は、そのような疾患の治療又は予防に関してまだ対処されていない需要に対処するものである。
【００２５】
図面及び表の説明
図中、表中及び本文中で使用される略語：
α−ＳＭＡ：アルファ平滑筋アクチン
ＢＭＰ：骨形成タンパク質
ｃＤＮＡ：相補的デオキシリボ核酸
ＣＯＬ１Ａ１：コラーゲン、１型、アルファ１
ＣＤＡＡ：コリン欠乏Ｌ−アミノ酸
ＣＳＡＡ：コリン添加Ｌ−アミノ酸規定
ＣＶＣ：セニクリビロク
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ＤＮＡ：デスオキシリボ核酸
ＤＴＴ：ジチオトレイトール
ＥＬＡ：エラフィブラノール又はＧＦＴ５０５
ＥＬＩＳＡ：酵素結合免疫吸着アッセイ
ＥＭＴ：上皮間葉転換
ＥＯＢ：エクセス・オーバー・ブリス（Ｅｘｃｅｓｓ  Ｏｖｅｒ  Ｂｌｉｓｓ）
ＦＢＳ：ウシ胎仔血清
ＦＤＡ：食品医薬品局
ＦＰＰ：ファルネシルピロリン酸
ＧＤＦ：増殖分化因子
Ｈｈ：ヘッジホッグ
ＧＧＰＰ：ゲラニルゲラニルピロリン酸
ＨＭＧ−ＣｏＡ：３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル−補酵素Ａ
ｈＨＳＣ：ヒト肝星状細胞
ＨＳＣ：肝星状細胞
ＩＣ５０：半最大阻害濃度
ＩｎＭｙｏＦｉｂ：腸筋線維芽細胞
ＬＢＤ：リガンド結合ドメイン
ＭＭＰ２：マトリックスメタロペプチダーゼ２
ＭＭＰ９：マトリックスメタロペプチダーゼ９
μｌ：マイクロリットル
ＬＤＬ：低密度リポタンパク質
ＮＨＬＦ：正常ヒト肺線維芽細胞
ＰＢＳ：リン酸緩衝食塩水
ＰＦＯＲ：ピルビン酸フェレドキシンオキシドレダクターゼ
ＰＰＡＲ：ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体
ＰＰＲＥ：ＰＰＡＲ応答エレメント
ｑＰＣＲ：定量的ポリメラーゼ連鎖反応
ｐＭｏｌ：ピコモル
ｒｈＦＧＦ：組換えヒト塩基性線維芽細胞増殖因子
ＲＮＡ：リボ核酸
ＲＴ：逆転写酵素
ＳｍＢＭ：平滑筋細胞基本培地
ＳｔｅＣＧＳ：星状細胞増殖サプリメント
ＳＴｅＣＭ：星状細胞培地
ＴＧＦβ１：腫瘍増殖因子ベータ１
ＴＧＦＢＲＩ：ＴＧＦβ  Ｉ型受容体
ＴＧＦＢＲＩＩ：ＴＧＦβ  ＩＩ型受容体
ＴＨＢＳ１：トロンボスポンジン１
ＴＭＢ：テトラメチルベンジジン
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】ＴＧＦβ誘発ｈＨＳＣにおけるセニクリビロク及びベンザフィブラートに対するエラフィブラノールの異なる抗線維化効果の図である。  血清欠乏性ＨＳＣを、１時間、エラフィブラノール（Ａ）、セニクリビロク（Ｂ）又はベンザフィブラート（ＰＰＡＲ汎α／γ／δ）と共にプレインキュベートし、その後、線維形成促進性サイトカインＴＧＦβ１（１ｎｇ／ｍｌ）で活性化した。  ４８時間のインキュベーション後、α−ＳＭＡの発現をＥＬＳＩＡにより測定した。  得られた値を、ＴＧＦβ１対照に対する阻害パーセンテージに変換した。データは、平均（４回反復）±標準偏差（ＳＤ）として表示されている。統計解析は、Ｓｉｇｍａ  Ｐｌｏｔ  １１．０ソフトウェアを使用して、一元配置ＡＮＯＶＡ、続いてボンフェローニ事後検定により行った。［＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１；＊＊＊：ｐ＜０．００１（ＴＧＦβ１  １ｎｇ／ｍＬ群に対する比較）］。曲線あてはめ及び半最大阻害濃度（ＩＣ５０）の算出は、ＸＬＦｉｔソフトウェア５．３．１．３で行った。
【図２】エラフィブラノールとセニクリビロクの組合せがＴＧＦβ１誘発ｈＨＳＣにおいてα−ＳＭＡを相乗的に阻害する図である。  組合せを用量応答行列形式で検定し、エクセス・オーバー・ブリス（ＥＯＢ）相加作用モデルに従って分析した。エラフィブラノール（行）及びセニクリビロク（列）の希釈系列を、それらのそれぞれのＤＭＳＯ対照を含めて、調製した。得られた混合物を血清欠乏性ＨＳＣに添加し、１時間後に線維形成促進性サイトカインＴＧＦβ１（１ｎｇ／ｍｌ）で活性化した。  （Ａ）全ての組合せペアについてのＴＧＦβ１対照に対するα−ＳＭＡ阻害パーセンテージ。データは、４回反復の平均として表示されている。  （Ｂ）ＥＯＢスコアは、材料及び方法における記載の通りに算出した。ＥＯＢ値＞１０を有するいずれの化合物ペアも、相乗的と考えられた（薄灰色から黒色に着色されている）。全ての組合せを含む総ＥＯＢスコアも算出した。  （Ｃ）相乗的組合せペアから導出したデータ値を棒グラフ表示でプロットした。データは、平均（４回反復）±標準偏差（ＳＤ）として表示されている。最高単剤に対する組合せ群の比較のためにスチューデントｔ検定を使用して、＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１、＊＊＊：ｐ＜０．００１。
【図３】ベンザフィブラートがＴＧＦβ１誘発ｈＨＳＣにおいてエラフィブラノールと相乗作用して線維化を低減させる図である。  組合せを用量応答行列形式で検定し、エクセス・オーバー・ブリス相加作用モデルに従って分析した。ベンザフィブラート（行）及びセニクリビロク（列）の希釈系列を、それらのそれぞれのＤＭＳＯ対照を含めて、調製した。得られた混合物を血清欠乏性ＨＳＣに添加し、１時間後に線維形成促進性サイトカインＴＧＦβ１（１ｎｇ／ｍｌ）で活性化した。（Ａ）ＴＧＦβ１対照に対するα−ＳＭＡの阻害パーセンテージ。（Ｂ）エクセス・オーバー・ブリスＥＯＢスコアは、材料及び方法における記載の通りに算出した。ＥＯＢ値＞１０を有するいずれの化合物ペアも、相乗的と考えられた（薄灰色から黒色に着色されている）。全ての組合せを含む総ＥＯＢスコアも算出した。（Ｃ）最も効率のよい組合せペアから導出したデータ値を棒グラフ表示でプロットした。データは、平均（４回反復）±標準偏差（ＳＤ）として表示されている。ｎｓ、最高単剤に対して組合せ群を比較して有意でないスチューデントｔ検定。
【図４】ＣＤＦＦ摂食マウスにおけるＮＡＳＨ関連パラメーターに対するエラフィブラノール（ＧＦＴ５０５  ３ｍｇ／ｋｇ／日）、ＣＶＣ（１０ｍｇ／ｋｇ／日）及びこれらの組合せの効果の図である。  疾患活動性を、ＮＡＳスコア（脂肪化、バルーニング及び小葉炎症の等級の合計）により評定した（Ａ）。肝損傷を（Ｂ）血漿ＣＫ１８−Ｍ３０濃度（アポトーシスのマーカー）及び血漿ＡＳＴ（Ｃ）濃度（細胞溶解性のマーカー）により評定した。データは、平均±ＳＤとして表示されている。クラスカル・ウォリス及び未補正ダン事後検定を使用して、§  ｐ＜０．０５、§§  ｐ＜０．０１、§§§  ｐ＜０．００１。スチューデント片側ｔ検定とウェールズ補正を使用して、
【数１】
2020510651.tif 000003
ＨＳＡ、最高単剤モデル。
【図５】ＣＤＦＦ摂食マウスにおける線維化、組織再構築及び炎症に関与する遺伝子の発現に対するエラフィブラノール（ＧＦＴ５０５  ３ｍｇ／ｋｇ／日）、ＣＶＣ（１０ｍｇ／ｋｇ／日）及びこれらの組合せの効果の図である。  α−ＳＭＡ、ＴＧＦβ１、Ｃｏｌ１α１、Ｃｏｌ１α２（線維形成）、ＴＩＭＰ１及びＭＭＰ２（組織再構築）並びにＴＮＦα及びＭＣＰ１（炎症）の発現を、リアルタイム定量的ＰＣＲにより評定した。データは、平均±ＳＤとして表示されている。スチューデント片側ｔ検定とウェールズ補正を使用して、
【数２】
2020510651.tif 000004
ＨＳＡ、最高単剤モデル。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
本発明が、本明細書に記載及び／又は示される特定の製品、方法、条件又はパラメーターに限定されないこと、並びに本明細書において使用される専門用語類が、単に例として特定の実施形態を説明するためのものに過ぎず、請求項記載の発明を限定するように意図されたものではないことを、理解されたい。
【００２８】
別段の定義がない限り、本明細書において使用される全ての技術及び科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般に理解されているのと同じ意味を有する。
【００２９】
下記の用語及び略語は、別段の指示がない限り、下記の意味を有すると解されるものとする。
【００３０】
本開示において、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、複数の言及対象を含み、特定の数値への言及は、文脈による別段の明確な指示がない限り、少なくともその特定の値を含む。したがって、例えば、「溶媒（ａ  ｓｏｌｖｅｎｔ）」への言及は、当業者に向けての１つ以上のそのような溶媒（ｓｏｌｖｅｎｔｓ）及びそれらの等価物への言及である、等々。
【００３１】
本明細書において使用される場合、用語「疾患」は、疾患、障害、状態、症状又は適応症を指す。この用語は、語句「疾患又は障害」と同義で使用される。
【００３２】
上文において使用される場合、用語「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」又は「治療（ｔｈｅｒａｐｙ）」（並びにこれらの異なる語形）は、予防的（例えば、発症予防的）治療、治癒的治療又は緩和的治療を含む。そのような予防的治療、治癒的治療又は緩和的治療は、全部であることもあり、又は一部であることもある。例えば、望ましくない症状の完全除去、又は１つ以上の望ましくない症状の部分的除去は、本明細書において企図されるような「治療」を表す。
【００３３】
上文で及び本開示を通して用いられる場合、用語「治療有効量」は、関連する障害、状態又は副作用の治療に関して、所望の結果を達成するために必要な投薬量であって、必要な期間にわたって有効である量を指す。本発明の成分の有効量が、選択される特定の化合物、成分又は組成物、投与経路、及び個体において所望の応答を惹起する成分の能力によってばかりでなく、緩和すべき状態の病状又は重症度、個体のホルモンレベル、年齢、性別、体重、患者の存在状態、及び治療される状態の重症度、併用薬物療法又はそのときに特定の患者が従う特別食のような因子、並びに当業者が認知する他の因子によっても、患者ごとに異なり、適切な投薬量が最終的には担当医の自由裁量であることは、理解される。投薬レジメンは、治療応答の向上が得られるように調整することができる。有効量は、成分のいかなる毒性又は有害効果よりも、治療有益効果のほうが上回る量でもある。
【００３４】
「薬学的に許容される」は、正当な医学的判断の範囲内で、人間及び動物の組織との接触に適しており、過度の毒性、刺激、アレルギー反応又は他の問題合併症を伴わず、妥当な損益比に見合っている、化合物、材料、組成物及び／又は剤形を指す。
【００３５】
「塩」及び「薬学的に許容される塩」は、酸付加塩と塩基付加塩の両方を含む。「酸付加塩」は、遊離塩基の生物学的有効性及び特性を保持する塩であって、生物学的に望ましからざるものでも、又はその他の点でも望ましからざるものでなく、無機酸及び有機酸とで形成される塩を指す。「塩基付加塩」は、遊離酸の生物学的有効性及び特性を保持する塩であって、生物学的に望ましからざるものでも、又はその他の点でも望ましからざるものでなく、無機塩基又は有機塩基の遊離酸への付加から調製される塩を指す。薬学的に許容される塩の例としては、アミンのような塩基性残基の無機若しくは有機酸付加塩；酸性残基のアルカリ若しくは有機付加塩；及びこれらに類するもの、又は前述の塩の１つ以上を含む組合せが挙げられるが、これらに限定されない。薬学的に許容される塩は、活性薬剤の塩及び第４級アンモニウム塩を含む。例えば、酸塩は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸及びこれらに類するものなどの無機酸から誘導されるものを含み、他の許容される無機塩は、ナトリウム塩、カリウム塩、セシウム塩及びこれらに類するものなどの金属塩；並びにカルシウム塩、マグネシウム塩及びこれらに類するものなどのアルカリ土類金属塩；又は前述の塩の１つ以上を含む組合せを含む。薬学的に許容される有機塩は、酢酸、ピロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パモ酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、メシル酸、エシル酸、ベシル酸、スルファニル酸、２−アセトキシ安息香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸、イセチオン酸、ＨＯＯＣ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ（式中、ｎは０〜４である。）及びこれらに類するものなどの有機酸から調製される塩；トリエチルアミン塩、ピリジン塩、ピコリン塩、エタノールアミン塩、トリエタノールアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン塩及びこれらに類するものなどの有機アミン塩；並びにアルギン酸塩、アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩及びこれらに類するものなどのアミノ酸塩；又は前述の塩の１つ以上を含む組合せを含む。
【００３６】
「溶媒和物」は、溶媒和により形成される複合体（本発明に組み込まれる活性薬剤の分子若しくはイオンと溶媒分子の組合せ）、又は溶質イオン若しくは分子（本発明に組み込まれる活性薬剤）と１つ以上の溶媒分子からなる凝集体を意味する。本発明において、好ましい溶媒和物は、水和物である。
【００３７】
「医薬組成物」は、本開示の化合物、及び哺乳動物、例えばヒト、への生物活性化合物の送達のための当技術分野において一般に許容される媒体の、製剤を指す。したがって、そのような媒体は、全ての薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤を含む。
【００３８】
「投与すること」は、経口投与、皮下投与、舌下投与、経粘膜投与、非経口投与、静脈内投与、動脈内投与、頬側投与、舌下投与、局所投与、膣投与、直腸投与、眼科的投与、耳投与、鼻投与、吸入投与、筋肉内投与、骨内投与、くも膜下腔内投与及び経皮投与又はこれらの組合せのような、あらゆる投与方法を含む。「投与すること」は、特定の化合物を含む剤形を処方すること、又はそのような剤形の処方を充填することも含むことができる。「投与すること」は、特定の化合物又はこの化合物を含む剤形を伴う方法を行うために指示を与えることも含むことができる。
【００３９】
本発明は、（ｉ）少なくともＣＶＣ又はこの誘導体又は類縁体又は薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物、（ｉｉ）式（Ｉ）の少なくともＰＰＡＲアゴニスト
【００４０】
【化２】
2020510651.tif 000005
（式中、
Ｙ１は、ハロゲン、Ｒａ又はＧａ−Ｒａ基を表し、
Ａは、ＣＨ＝ＣＨ又はＣＨ２−ＣＨ２基を表し、
Ｙ２は、Ｇｂ−Ｒｂ基を表し、
Ｇａ及びＧｂは、同一であり又は異なり、酸素又は硫黄原子を表し、
Ｒａは、水素原子、非置換（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基若しくは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基（ここで、該アリール基及びアルキル基は、１個以上のハロゲン原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ若しくは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ基で置換されている。）、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキルチオ基又は複素環基を表し、
Ｒｂは、少なくとも１つの−ＣＯＯＲｃ基により置換されている（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基を表し、ここで、Ｒｃは、水素原子、又は１個以上のハロゲン原子で置換されている若しくは置換されていない（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基又は複素環基を表し、
Ｙ４及びＹ５は、同一であり又は異なり、１個以上のハロゲン原子により置換されている若しくは置換されていない（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基又は複素環基を表す。）
を含む、組合せ物に関する。
【００４１】
式（Ｉ）の化合物の特定の実施形態において、
Ｙ１は、ハロゲン、Ｒａ又はＧａ−Ｒａ基を表し、
Ａは、ＣＨ＝ＣＨ基を表し、
Ｙ２は、Ｇｂ−Ｒｂ基を表し、
Ｇａ及びＧｂは、同一であり又は異なり、酸素又は硫黄原子を表し、
Ｒａは、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル又は（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基（特に、１個以上のハロゲン原子により置換されている又は置換されていない、（Ｃ１〜Ｃ７）アルキル又は（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基）を表し、
Ｒｂは、−ＣＯＯＲ３基により置換されている（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基（ここでＲｃは、水素原子を表すか、又は１〜４個の炭素原子を有するアルキル基を表す。）を表し、
Ｙ４及びＹ５は、独立して、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル基を表す。
【００４２】
式（Ｉ）の化合物の特定の実施形態において、
Ｙ１は、Ｒａ又はＧａ−Ｒａ基を表し、
Ａは、ＣＨ２−ＣＨ２基を表し、
Ｙ２は、Ｇｂ−Ｒｂ基を表し、
Ｇａは、酸素又は硫黄原子を表し、Ｇｂは、酸素原子を表し、
Ｒａは、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル又は（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキル基を表し、
Ｒｂは、少なくとも１つの−ＣＯＯＲｃ基により置換されている（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基を表し、ここでＲｃは、水素原子又は（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル基を表し、
Ｙ４及びＹ５は、独立して、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル基を表す。
【００４３】
式（Ｉ）の化合物の特定の実施形態において、
Ｙ１は、ハロゲン原子又はＲａ若しくはＧａ−Ｒａ基を表し、
Ａは、ＣＨ２−ＣＨ２基を表し、
Ｙ２は、Ｇｂ−Ｒｂ基を表し、
Ｇａは、酸素又は硫黄原子を表し、Ｇｂは、酸素原子を表し、
Ｒａは、１個以上のハロゲン原子により置換されている、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル又は（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基を表し、
Ｒｂは、１個以上のハロゲン原子で置換されている若しくは置換されていない、及び少なくとも１つの−ＣＯＯＲｃ基により置換されている（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基を表し、ここでＲｃは、水素原子又は（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル基を表し、
Ｙ４及びＹ５は、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル基を表す。
【００４４】
式（Ｉ）の化合物の特定の実施形態において、Ｇｂは、酸素原子であり、Ｒｂは、−ＣＯＯＲｃ基により置換されている（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基であり、ここでＲｃは、水素原子、又は非置換直鎖若しくは分岐（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル基を表す。
【００４５】
式（Ｉ）の化合物の特定の実施形態において、Ｙ１は、１個以上のハロゲン原子により置換されている又は置換されていない、直鎖状である又は分岐している、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基を含む、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ基である。
【００４６】
特定の実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、１−［４−メチルチオフェニル］−３−［３，５−ジメチル−４−カルボキシジメチルメチルオキシフェニル］プロパ−２−エン−１−オン（エラフィブラノール又はＧＦＴ５０５）、１−［４−メチルチオフェニル］−３−［３，５−ジメチル−４−イソプロピルオキシカルボニルジメチルメチルオキシフェニル］プロパ−２−エン−１−オン、１−［４−メチルチオフェニル］−３−［３，５−ジメチル−４−ｔｅｒｔブチルオキシカルボニルジメチルメチルオキシフェニル］プロパ−２−エン−１−オン、１−［４−トリフルオロメチルフェニル］−３−［３，５−ジメチル−４−ｔｅｒｔブチルオキシカルボニルジメチルメチルオキシフェニル］プロパ−２−エン−１−オン、１−［４−トリフルオロメチルフェニル］−３−［３，５−ジメチル−４−カルボキシジメチルメチルオキシフェニル］プロパ−２−エン−１−オン、１−［４−トリフルオロメチルオキシフェニル］−３−［３，５−ジメチル−４−ｔｅｒｔブチルオキシカルボニルジメチルメチルオキシフェニル］プロパ−２−エン−１−オン、１−［４−トリフルオロメチルオキシフェニル］−３−［３，５−ジメチル−４−カルボキシジメチルメチルオキシフェニル］プロパ−２−エン−１−オン、２−［２，６−ジメチル−４−［３−［４−（メチルチオ）フェニル］−３−オキソ−プロピル］フェノキシ］−２−メチルプロパン酸、及び２−［２，６−ジメチル−４−［３−［４−（メチルチオ）フェニル］−３−オキソ−プロピル］フェノキシ］−２−メチル−プロパン酸イソプロピルエステルからなる群から選択される。
【００４７】
より特定の実施形態において、ＰＰＡＲアゴニストは、１−［４−メチルチオフェニル］−３−［３，５−ジメチル−４−カルボキシジメチルメチルオキシフェニル］プロパ−２−エン−１−オン（又はエラフィブラノール若しくはＧＦＴ５０５）又はこの薬学的に許容される塩である。
【００４８】
ＣＶＣは、（Ｓ）−８−［４−（２−ブトキシエトキシ）フェニル］−１−イソブチル−Ｎ−［４−［［（１−プロピル−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］スルフィニル］フェニル］−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ベンザゾシン−５−カルボキサミドである。セニクリビロクの物質組成の詳細は、米国特許出願公開第２０１２／０２３２０２８号において開示されている。関連製剤の詳細は、その全体があらゆる目的で参照により本明細書に組み込まれる米国出願第６１／８２３，７６６号において開示されている。一実施形態において、ＣＶＣは、酸付加塩の形態である。特定の実施形態において、ＣＶＣメシル酸塩、例えば、（Ｓ）−８−［４−（２−ブトキシエトキシ）フェニル］−１−イソブチル−Ｎ−［４−［［（１−プロピル−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］スルフィニル］フェニル］−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ベンザゾシン−５−カルボキサミドモノメタンスルホンネート（ｍｏｎｏｍｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｏａｔｅ）のような、ＣＶＣの付加塩が、組合せ物に含まれる。一実施形態において、ＣＶＣメシル酸塩は、淡緑色を帯びた黄色の結晶性粉末のような、結晶性材料である。一実施形態において、ＣＶＣメシル酸塩は、氷酢酸、メタノール、ベンジルアルコール、ジメチルスルホキシド及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶けやすく、ピリジン及び無水酢酸にやや溶けやすく、９９．５％エタノールにやや溶けにくく、アセトニトリル、１−オクタノール及びテトラヒドロフランに溶けにくく、酢酸エチル及びジエチルエーテルにほとんど溶けない。一実施形態において、ＣＶＣメシル酸塩は、ｐＨ１〜２の水溶液に溶けやすく、ｐＨ３の水溶液にやや溶けにくく、ｐＨ４〜１３の水溶液及び水にほとんど溶けない。
【００４９】
特定の態様において、本発明は、
（ｉ）ＣＶＣ又はこの誘導体又は類縁体又は薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物、
（ｉｉ）ＰＰＡＲアゴニスト、特に、式（Ｉ）の化合物又はこの薬学的に許容される塩、特に、エラフィブラノール又はこの薬学的に許容される塩
を含む組合せ物に関する。
【００５０】
特定の実施形態において、組合せ物は、
（ｉ）ＣＶＣ又はこの誘導体又は類縁体又は薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物、
（ｉｉ）ＰＰＡＲアゴニスト、特に、式（Ｉ）の化合物又はこの薬学的に許容される塩、特に、エラフィブラノール又はこの薬学的に許容される塩、及び
（ｉｉｉ）薬学的に許容される担体
を含む組成物である。
【００５１】
特定の実施形態において、組合せ物は、
（ｉ）ＣＶＣ又はこの誘導体又は類縁体又は薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物、
（ｉｉ）ＰＰＡＲアゴニスト、特に、式（ＩＩ）の化合物又はこの薬学的に許容される塩、特に、エラフィブラノール又はこの薬学的に許容される塩
を含むキットオブパーツであって、
特に、本明細書において言及する疾患のいずれかの治療における、逐次的使用、別々の使用又は同時使用のための、キットオブパーツである。
【００５２】
実施形態によれば、組合せ物は、（ｉ）ＣＶＣ又はこの薬学的に許容される塩、及び（ｉｉ）エラフィブラノール又はこの薬学的に許容される塩を含む。
【００５３】
本発明は、免疫（例えば、自己免疫）、炎症性、代謝性、線維性又は胆汁うっ滞性疾患のような疾患の治療のための方法における使用のための、本明細書において定義される通りの組合せ物にさらに関する。
【００５４】
さらなる態様において、本発明は、コラーゲン線維の産生に関与する及び／又は細胞外基質の産生に関与する線維芽細胞の増殖及び／又は活性化の阻害における使用のための、本発明の組合せ物に関する。
【００５５】
本発明によれば、用語「自己免疫疾患」は、体内に通常存在する物質及び組織に対する身体の異常な免疫応答から生じる状態を示すために使用される。この疾患は、ある特定の器官に限定されることもあり（例えば、Ｉ型糖尿病若しくは自己免疫性甲状腺炎の場合）、又は異なる位置の特定の組織を侵すこともある（例えば、グッドパスチャー病、肺及び腎臓における基底膜罹患の場合）。
【００５６】
用語「炎症」は、宿主細胞が関与する保護応答、血管が関与する保護応答、並びに細胞／組織損傷の原因を除去する役割、最初の傷害の結果として生じる壊死細胞／組織を除去する役割、及び修復過程を開始させる役割を果たすことができる、タンパク質及び他の媒介因子が関与する保護応答から生じる状態を示すために、使用される。炎症反応は、疼痛、発熱、発赤、腫脹、血管拡張、血流増加及び機能喪失によって顕在化され得る。
【００５７】
用語「線維症（ｆｉｂｒｏｓｉｓ）」、「線維性疾患」、「線維性障害」及びこれらの悪化は、器官又は組織における線維性結合組織の病的な過剰蓄積状態を意味する。より具体的には、線維症（ｆｉｂｒｏｓｉｓ）は、組織損傷に対する応答としての、結合組織による、持続的線維性瘢痕形成及び細胞外基質の過剰産生を含む、病態形成過程である。生理学的には、結合組織の蓄積は、基礎となる器官又は組織の構造及び機能を完全に破壊し得る。
【００５８】
本発明によれば、線維症は、いずれの器官又は組織線維症であってもよい。特定の器官線維症の説明に役立つ非限定的な例としては、肝臓、腎臓、皮膚、表皮、内皮、筋、腱、軟骨、心臓、膵臓、肺、子宮、神経系、精巣、卵巣、副腎、動脈、静脈、結腸、腸（例えば、小腸）、胆管、軟部組織（例えば、縦隔若しくは後腹膜）、骨髄、関節及び胃の線維症が挙げられる。
【００５９】
好ましい実施形態において、線維性障害は、肝臓、消化管、肺、心臓、腎臓、筋、皮膚、軟部組織（例えば、縦隔又は後腹膜）、骨髄、腸及び関節（例えば、膝、肩又は他の関節）線維症からなる群から選択される。
【００６０】
より好ましい実施形態において、線維性障害は、肝、肺、皮膚、腎及び小腸線維症からなる群から選択される。
【００６１】
本発明のより好ましい実施形態において、治療される線維性障害は、次の非網羅的線維性障害リストからなる群から選択される：非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、肺線維症、特発性肺線維症、皮膚線維症、眼線維症、心内膜心筋線維症、縦隔線維症、骨髄線維症、後腹膜線維症、進行性塊状線維症（炭鉱夫塵肺の合併症）、増殖性線維症、腫瘍性線維症；慢性炎症性気道疾患（ＣＯＰＤ、喘息、肺気腫、喫煙者肺、結核、ＩＰＦ）に続く肺線維症；アルコール又は薬物誘発性肝線維症、肝硬変、感染誘発性肝線維症、放射線又は化学療法誘発性線維症、腎性全身性線維症、クローン病、潰瘍性大腸炎、ケロイド、陳旧性心筋梗塞、強皮症／全身性強皮症、関節線維症；粘着性関節包炎の一部の形態；原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）及び（ＰＢＣ）のような慢性線維化性胆嚢症；胆道閉塞症、家族性肝内胆汁うっ滞症３型（ＰＦＩＣ３）、着床前後線維症並びに石綿肺。
【００６２】
胆汁うっ滞は、肝細胞による分泌不全（肝細胞胆汁うっ滞）に起因する、又は肝内若しくは肝外胆管を通る胆汁の流れの閉塞（閉塞性胆汁うっ滞）に起因する、胆汁の流れの減少と定義される。臨床診療において、胆汁うっ滞は、肝臓からの胆汁の流れが緩徐化又は遮断される、あらゆる状態である。
【００６３】
炎症性疾患、線維性疾患、代謝性疾患及び胆汁うっ滞性疾患の例としては、代謝性肝疾患、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、薬物誘発性肝疾患、アルコール誘発性肝疾患、感染性因子誘発性肝疾患、炎症性肝疾患、免疫系機能障害媒介肝疾患、脂質異常症、心血管疾患、再狭窄、シンドロームＸ、メタボリックシンドローム、糖尿病、肥満、高血圧；原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ）などの慢性胆管症；胆道閉塞症、家族性肝内胆汁うっ滞症３型（ＰＦＩＣ３）、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、ケロイド、陳旧性心筋梗塞、強皮症／全身性強皮症、炎症性疾患、神経変性疾患、がん、肝がん、肝細胞癌、消化器がん、胃がん；神経線維腫症に関連する髄膜腫；膵神経内分泌腫瘍、膵外分泌腫瘍、白血病、骨髄増殖性／骨髄異形成（ｍｙｅｌｏｄｉｓｐｌａｓｔｉｃ）疾患、肥満細胞症、皮膚線維肉腫；乳、肺、甲状腺又は結腸直腸がんを含む、固形腫瘍；前立腺がん、任意の起源の肝線維症又は硬変、代謝性疾患誘発性肝線維症又は硬変、ＮＡＦＬＤ誘発性線維症又は硬変、ＮＡＳＨ誘発性線維症又は硬変、アルコール誘発性肝線維症又は硬変、薬物誘発性肝線維症又は硬変、感染性因子誘発性肝線維症又は硬変、寄生虫感染誘発性肝線維症又は硬変、細菌感染誘発性肝線維症又は硬変、ウイルス感染誘発性線維症又は硬変、ＨＢＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、ＨＣＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、ＨＩＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、二重ＨＣＶ・ＨＩＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、放射線又は化学療法誘発性線維症又は硬変、胆管線維症；あらゆる慢性胆汁うっ滞性疾患に起因する肝線維症又は硬変；あらゆる原因の消化管線維症；クローン病誘発性線維症、潰瘍性大腸炎誘発性線維症、腸（例えば、小腸）線維症、結腸線維症、胃線維症、皮膚線維症、表皮線維症、内皮線維症；強皮症／全身性強皮症に起因する皮膚線維症；肺線維症；ＣＯＰＤ、喘息、肺気腫、喫煙者肺、結核、肺線維症、特発性肺線維症（ＩＰＦ）などの慢性炎症性気道疾患に続く肺線維症；心線維症、腎線維症、腎性全身性線維症、筋線維症、軟部組織（例えば、縦隔又は後腹膜）線維症、骨髄線維症、関節線維症、腱線維症、軟骨線維症、膵線維症、子宮線維症、神経系線維症、精巣線維症、卵巣線維症、副腎線維症、動脈線維症、静脈線維症、眼線維症、心内膜心筋線維症、縦隔線維症、骨髄線維症、後腹膜線維症、進行性塊状線維症（炭鉱夫塵肺の合併症）、増殖性線維症、腫瘍性線維症、着床前後線維症、及び石綿肺、関節線維症、粘着性関節包炎が挙げられる。
【００６４】
好ましくは、疾患は、代謝性肝疾患、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、薬物誘発性肝疾患、アルコール誘発性肝疾患、感染性因子誘発性肝疾患、炎症性肝疾患、免疫系機能障害媒介肝疾患、脂質異常症、心血管疾患、再狭窄、シンドロームＸ、メタボリックシンドローム、糖尿病、肥満、高血圧；原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ）などの慢性胆管症；胆道閉塞症、家族性肝内胆汁うっ滞症３型（ＰＦＩＣ３）、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、肝がん、肝細胞癌、消化器がん、胃がん、結腸直腸がん、代謝性疾患誘発性肝線維症又は硬変、ＮＡＦＬＤ誘発性線維症又は硬変、ＮＡＳＨ誘発性線維症又は硬変、アルコール誘発性肝線維症又は硬変、薬物誘発性肝線維症又は硬変、感染性因子誘発性肝線維症又は硬変、寄生虫感染誘発性肝線維症又は硬変、細菌感染誘発性肝線維症又は硬変、ウイルス感染誘発性線維症又は硬変、ＨＢＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、ＨＣＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、ＨＩＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、二重ＨＣＶ・ＨＩＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、放射線又は化学療法誘発性線維症又は硬変、胆管線維症；あらゆる慢性胆汁うっ滞性疾患に起因する肝線維症又は硬変；あらゆる原因の消化管線維症；クローン病誘発性線維症、潰瘍性大腸炎誘発性線維症、腸（例えば、小腸）線維症、結腸線維症、胃線維症、肺線維症；ＣＯＰＤ、喘息、肺気腫、喫煙者肺、結核、肺線維症、特発性肺線維症（ＩＰＦ）などの慢性炎症性気道疾患に続く肺線維症からなる群から選択される。
【００６５】
したがって、本発明によれば、免疫性疾患（例えば、自己免疫性疾患）、炎症性疾患、代謝性疾患、線維性疾患又は胆汁うっ滞性疾患の治療は、表記の障害を有する対象又は健常対象（特に、そのような疾患を発症するリスクがある対象）に、障害を治癒させ、遅延させ、好転させ、若しくは障害の進行を緩徐化し、それによって患者の状態を向上させるために、本発明の組合せ物、例えば、組合せの成分（ｉ）及び（ｉｉ）を含有する医薬組成物の形態又はキットオブパーツの形態の組合せ物を投与することを含む。
【００６６】
治療される対象は、哺乳動物、好ましくはヒトである。本発明に従って治療される対象は、過去の薬物治療、随伴病態、遺伝子型、リスク因子への曝露、ウイルス感染のような、線維性疾患に関連する幾つかの判定基準に基づいて、並びにイメージング法及び免疫学的、生化学的、酵素的、化学的又は核酸検出法によって評価することができる任意の関連バイオマーカーの検出に基づいて、選択することができる。
【００６７】
特定の実施形態において、組合せ物は、
（ｉ）ＣＶＣ化合物又はこの誘導体、類縁体又は塩若しくは溶媒和物、
（ｉｉ）ＰＰＡＲアゴニスト、特に、式（Ｉ）の化合物又はこの薬学的に許容される塩、特に、エラフィブラノール又はこの薬学的に許容される塩
を含むキットオブパーツであって、
上述の疾患のいずれかの治療における逐次的使用、別々の使用又は同時使用のための、キットオブパーツである。
【００６８】
式（Ｉ）のＰＰＡＲアゴニストは、薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、多形又は共結晶の形態であってもよい。
【００６９】
式（Ｉ）のＰＰＡＲアゴニストはまた、塩の水和物、溶媒和物、多形又は共結晶の形態であってもよい。
【００７０】
本発明によれば、（ｉ）少なくともＣＶＣ又はこの誘導体、類縁体、塩若しくは溶媒和物、（ｉｉ）式（Ｉ）の少なくともＰＰＡＲアゴニスト、及び（ｉｉｉ）任意選択的に１つ以上の薬学的に許容される担体を含む組合せは、本発明の組合せが、免疫性疾患（例えば、自己免疫性疾患）、炎症性疾患、代謝性疾患、線維性疾患又は胆汁うっ滞性疾患、特に、炎症性疾患、代謝性疾患、線維性疾患又は胆汁うっ滞性疾患に対して相乗作用をもたらすように、選択される。そのような相乗作用は、実施例において説明されるエクセス・オーバー・ブリス（ＥＯＢ）法を使用することによる方法などの、当技術分野において周知の方法に従って、判定することができる。したがって、本発明は、ＣＶＣ又はこの薬学的に許容される塩を含む、エラフィブラノール又はこの薬学的に許容される塩の組合せ物であって、これらの化合物が、これらの化合物の各々を単独で投与して得られる治療効果より良好な治療効果を惹起することができるように、各々を相乗的量で含む組合せ物に関する。
【００７１】
本発明は、免疫性疾患（例えば、自己免疫性疾患）、炎症性疾患、代謝性疾患、線維性疾患又は胆汁うっ滞性疾患の治療の方法も提供する。
【００７２】
本発明に従って治療される対象は、過去の薬物治療、随伴病態、遺伝子型、リスク因子への曝露、ウイルス感染のような、免疫性疾患（例えば、自己免疫性疾患）、炎症性疾患、代謝性疾患、線維性疾患及び胆汁うっ滞性疾患に関連する幾つかの判定基準、並びにイメージング法及び免疫学的、生化学的、酵素的、化学的又は核酸検出法によって評価することができる任意の他の関連バイオマーカーに基づいて、選択することができる。
【００７３】
別の実施形態において、本発明の組合せは、治療の際の同時、逐次的又は別々の投与のためのものであり、したがって、異なる組成物に含まれている可能性がある。逐次的投与の場合、ＣＶＣ又はこの誘導体、類縁体、塩若しくは溶媒和物を、式（Ｉ）のＰＰＡＲアゴニスト、優先的にはエラフィブラノールの前に投与してもよく、又は式（Ｉ）のＰＰＡＲアゴニスト、優先的にはエラフィブラノールは、ＣＶＣ若しくはこの誘導体又はその類縁体又は塩若しくは溶媒和物の前に投与される。
【００７４】
ＣＶＣ又はこの誘導体、類縁体、塩若しくは溶媒和物、及び式（Ｉ）ＰＰＡＲアゴニスト、特にエラフィブラノー、の組合せは、ＣＶＣ、この誘導体、類縁体、塩若しくは溶媒和物の、又は式（Ｉ）のＰＰＡＲアゴニスト（特にエラフィブラノール）の、有機又は無機塩基又は酸から得られる薬学的に許容される非毒性塩として製剤化することができる。これらの塩は、化合物の最終精製ステップ中に得ることができ、又は以前に精製された化合物に塩を添合することにより得ることができる。
【００７５】
（ｉ）ＣＶＣ又はこの誘導体、塩若しくは溶媒和物、及び（ｉｉ）式（Ｉ）のＰＰＡＲアゴニスト、特にエラフィブラノール、を含む本発明の医薬組成物は、薬学的背景の中で許容される１つ又は幾つかの賦形剤又はビヒクル（例えば、薬学的使用に適合し、当業者に周知である、生理食塩水、生理的溶液、等張溶液等）も含むことができる。
【００７６】
これらの組成物は、分散剤、可溶化剤、安定剤、保存剤等の中から選択される、１つ又は幾つかの薬剤又はビヒクルも含むことができる。これらの製剤（液体及び／又は注射剤及び／又は固体）に有用な薬剤又はビヒクルは、特に、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ポリソルベート８０、マンニトール、ゼラチン、ラクトース、植物油、アラビアゴム、リポソーム等である。
【００７７】
これらの組成物は、注射用懸濁液、ゲル、油、軟膏、ピル、坐剤、粉末、ジェルキャップ、カプセル、エアロゾル等の形態で、最終的には、ガレヌス形態又は持続放出及び／若しくは徐放を確実にするデバイスによって、製剤化される。この種の製剤には、セルロース、カーボネート又はデンプンのような薬剤を有利に使用することができる。
【００７８】
ＣＶＣ又はこの誘導体、類縁体、塩若しくは溶媒和物、及び（ｉｉ）式（Ｉ）のＰＰＡＲアゴニスト、特にエラフィブラノール、を含む本発明の医薬組成物は、異なる経路により、異なる形態で投与することができる。
【００７９】
例えば、化合物を、全身性の方法によって、経口的に、非経口的に、吸入により、鼻腔用スプレーにより、点鼻により、又は例えば静脈内注射、筋肉内経路による注射、皮下経路による注射、経皮経路による注射、局所経路による注射、動脈内経路による注射等の注射により、投与することができる。
【００８０】
もちろん、投与経路は、当業者に周知の手順に従って、式（Ｉ）の１つ以上のＰＰＡＲアゴニスト、特にエラフィブラノール、との組合せでのＣＶＣ又はこの誘導体、類縁体、塩若しくは溶媒和物の形態に適応される。
【００８１】
式（Ｉ）のＰＰＡＲアゴニスト、特にエラフィブラノール、との組合せでのＣＶＣ又はこの誘導体、類縁体、塩若しくは溶媒和物は、治療有効量で投与される。
【００８２】
投与に関連する頻度及び／又は用量を、当業者は、患者、病態、投与形態等の関数で、適応させることができる。典型的に、本発明の（医薬組成物又はキットオブパーツの形態でのような）組合せは、線維性疾患の治療のために、１０ｍｇ／日〜２０００ｍｇ／日に含まれる（例えば、５０ｍｇ／日〜１０００ｍｇ／日、特に、７０ｍｇ／日〜２００ｍｇ／日）式（Ｉ）の化合物の用量で、投与することができる。
【００８３】
ＣＶＣ又はこの誘導体、類縁体、塩、溶媒和物、エステル及び／若しくはプロドラッグの用量は、１０ｍｇ／日〜約１０００ｍｇ／日に含まれる（例えば、約３０ｍｇ／日〜約５００ｍｇ／日の用量）。特定の実施形態において、ＣＶＣは、１００ｍｇ／日〜２５０ｍｇ／日に含まれる用量で投与される。さらなる特定の実施形態において、ＣＶＣは、１５０ｍｇ／日の用量で投与される。さらなる特定の実施形態において、ＣＶＣ  １５０ｍｇは、１日１回、経口投与され、任意選択的に、毎朝、食物と共に摂取される。
【００８４】
本発明の特定の実施形態において、エラフィブラノールは、１０ｍｇ／日〜２０００ｍｇ／日に含まれる用量で投与される。さらなる特定の実施形態において、エラフィブラノールは、７０ｍｇ／日〜２００ｍｇ／日に含まれる用量（例えば、８０〜１２０ｍｇ／日）で、投与される。別の実施形態において、エラフィブラノールは、８０又は１２０ｍｇ／日の用量で投与される。さらなる特定の実施形態において、エラフィブラノール  ８０又は１２０ｍｇは、１日当たりのエラフィブラノールを含有する２個の錠剤の形態で、毎朝、朝食前にグラス１杯の水と共に経口摂取される。
【００８５】
本発明の好ましい実施形態において、ＣＶＣは、エラフィブラノールと組み合わせて、ＣＶＣについては１００ｍｇ／日〜２５０ｍｇ／日に含まれる用量（例えば、１５０ｍｇ／日）、及びエラフィブラノールについては８０〜１２０ｍｇ／日に含まれる用量（例えば、８０又は１２０ｍｇ／日）で、使用される。
【００８６】
別の好ましい実施形態において、活性成分は、経口摂取を目的とするピルの形態の１つ以上の医薬組成物として投与される。
【００８７】
投与は、必要に応じて、連日又はさらには１日に数回行うことができる。
【００８８】
特定の実施形態において、本発明は、公知の抗炎症活性、抗代謝活性、抗線維化活性又は抗胆汁うっ滞活性を有する他の分子のような、少なくとも１つの他の治療活性薬剤とさらに組み合わせられた、本発明の組合せに関する。本発明のこのさらなる組合せは、炎症性疾患、代謝性疾患、線維性疾患及び胆汁うっ滞性疾患の治療に有用である。
【００８９】
この実施形態の異形実施形態によれば、本発明の組合せ物は、受容体型チロシンキナーゼ阻害剤（ＲＴＫＩ）（例えば、ピルフェニドン、若しくはニンテダニブ、ソラフェニブ及び他のＲＴＫＩ）、若しくは任意の抗線維化化合物（例えば、アンジオテンシンＩＩ（ＡＴ１）受容体遮断薬、若しくはＣＴＧＦ阻害剤）；又は潜在型ＴＧＦβ複合体の活性化因子（例えば、ＭＭＰ２、ＭＭＰ９、ＴＨＢＳ１若しくは細胞表面インテグリン）、ＴＧＦβ受容体Ｉ型（ＴＧＦＢＲＩ）若しくはＩＩ型（ＴＧＦＢＲＩＩ）、及びそれらのリガンド（例えば、ＴＧＦβ、アクチビン、インヒビン、ノダル、抗ミュラー管ホルモン、ＧＤＦ若しくはＢＭＰ）、補助受容体（ＩＩＩ型受容体としても公知）を含む、ＴＧＦβ及びＢＭＰ活性化経路に干渉しやすい任意の抗線維化化合物；又は調節性若しくは阻害性ＳＭＡＤタンパク質を含む、ＳＭＡＤ依存性古典的経路の成分；又はＭＡＰＫシグナル伝達、ＴＡＫ１、Ｒｈｏ様ＧＴＰａｓｅシグナル伝達経路、ホスファチジルイノシトール−３キナーゼ／ＡＫＴ経路、ＴＧＦβ誘導ＥＭＴプロセスの様々な分岐を含む、ＳＭＡＤ非依存性若しくは非古典的経路のメンバー；又は、Ｈｈリガンド若しくは標的遺伝子を含む、古典的及び非古典的ヘッジホッグシグナル伝達経路のメンバー；又は、ＴＧＦβシグナル伝達の影響を受けやすい、ＷＮＴ若しくはＮｏｔｃｈ経路の任意のメンバーと、組み合わせることができる。
【００９０】
したがって、本発明は、医薬組成物、特に、線維性疾患の治療のための方法におけるその使用のための医薬組成物であって、（ｉ）ＣＶＣ又はこの誘導体、類縁体、塩若しくは溶媒和物、及び（ｉｉ）式（Ｉ）の１つ以上のＰＰＡＲアゴニストを、線維性障害を治療するための方法における使用のための、抗線維化活性を有することが判っている少なくとも１つの治療活性薬剤と組み合わせて含み、この治療活性薬剤が、ピルフェニドン；又はニンテダニブ、ソラフェニブ及び他のＲＴＫＩのような、受容体型チロシンキナーゼ阻害剤（ＲＴＫＩ）；又はアンジオテンシンＩＩ（ＡＴ１）受容体遮断薬；又はＣＴＧＦ阻害剤；又はＭＭＰ２、ＭＭＰ９、ＴＨＢＳ１若しくは細胞表面インテグリンのような、潜在型ＴＧＦβ複合体の活性化因子、ＴＧＦβ受容体Ｉ型（ＴＧＦＢＲＩ）若しくはＩＩ型（ＴＧＦＢＲＩＩ）、及びＴＧＦβ、アクチビン、インヒビン、ノダル、抗ミュラー管ホルモン、ＧＤＦ若しくはＢＭＰのような、それらのリガンド、補助受容体（ＩＩＩ型受容体としても公知）を含む、ＴＧＦβ及びＢＭＰ活性化経路に干渉しやすい抗線維化化合物；又は調節性若しくは阻害性ＳＭＡＤタンパク質を含む、ＳＭＡＤ依存性古典的経路の成分；又はＭＡＰＫシグナル伝達、ＴＡＫ１、Ｒｈｏ様ＧＴＰａｓｅシグナル伝達経路、ホスファチジルイノシトール−３キナーゼ／ＡＫＴ経路、ＴＧＦβ誘導ＥＭＴプロセスの様々な分岐を含む、ＳＭＡＤ非依存性若しくは非古典的経路のメンバー；又は、Ｈｈリガンド若しくは標的遺伝子を含む、古典的及び非古典的ヘッジホッグシグナル伝達経路のメンバー；又は、ＴＧＦβシグナル伝達の影響を受けやすい、ＷＮＴ若しくはＮｏｔｃｈ経路の任意のメンバーから選択される、医薬組成物にも関する。
【００９１】
別の特定の実施形態において、ＣＶＣ又はこの誘導体、類縁体、塩若しくは溶媒和物と及び式（Ｉ）の１つ以上のＰＰＡＰアゴニストと同じく組み合わせられ得る分子の他のクラスは、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ阻害剤、又は他の抗炎症及び／若しくは免疫抑制剤を含む。これらの薬剤の非網羅的リストは、これらに限定されないが、グルココルチコイド、ＮＳＡＩＤＳ、シクロホスファミド、ニトロソウレア、葉酸類縁体、プリン類縁体、ピリミジン類縁体、メトトレキサート、アザチオプリン、メルカプトプリン、シクロスポリン、ミリオシン、タクロリムス、シロリムス、ミコフェノール酸誘導体、フィンゴリモド及び他のスフィンゴシン−１−リン酸受容体モジュレーター；炎症性サイトカイン及び炎症性サイトカイン受容体、Ｔ細胞受容体、インテグリンのような標的に対する、モノクローナル及び／又はポリクローナル抗体を含む。
【００９２】
本発明の組合せ物と同じく組み合わせられ得る分子の他のクラスは、ＣＶＣ又はこの誘導体、類縁体、塩若しくは溶媒和物の、及び式（Ｉ）の１つ以上のＰＰＡＰアゴニストの、曝露を増進する又は効果を増強する可能性が高い分子を含む。
【００９３】
別の実施形態において、ＣＶＣ又はこの誘導体、類縁体、塩若しくは溶媒和物、及び式（Ｉ）の１つ以上のＰＰＡＲアゴニストは、単独活性成分として投与される。
【００９４】
したがって、本発明は、免疫（例えば、自己免疫）、炎症性、代謝性、線維性又は胆汁うっ滞性疾患の治療のための方法における使用のための医薬組成物であって、（ｉ）ＣＶＣ又はこの誘導体、類縁体、塩若しくは溶媒和物から選択される化合物、及び（ｉｉ）式（Ｉ）の１つ以上のＰＰＡＲアゴニストを含み、前記（ｉ）及び（ｉｉ）が、組成物中の唯一の活性成分である、医薬組成物にも関する。
【００９５】
さらなる実施形態において、本発明は、免疫（例えば、自己免疫）、炎症性疾患、代謝性、線維性又は胆汁うっ滞性疾患を治療する方法であって、特に、ＣＶＣ又はこの誘導体若しくは類縁体、塩若しくは溶媒和物及び式（Ｉ）の１つ以上のＰＰＡＲアゴニストを含有する特に医薬組成物の形態又はキットオブパーツの形態での、本発明に組合せの投与を含む方法を提供する。
【００９６】
本発明は、以下の非限定的実施例に関連してさらに説明される。
【実施例】
【００９７】
材料及び方法
肝線維形成のインビトロモデル（ｉｎ  ａ  ｖｉｔｒｏ  ｍｏｄｅｌ）におけるエラフィブラノール、ＣＶＣ及びこれらの組合せの評価
化合物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ、Ｆｌｕｋａ  カタログ番号４１６４０）に溶解した。ＣＶＣは、ＣＬＩＮＩＳＣＩＥＮＣＥＳ（参照番号：Ａ１３６４３−１０、バッチ番号：４９７２２３−２５−３）から購入した。ベンザフィブラートは、Ｇｅｎｆｉｔにおいて合成した。
【００９８】
ｈＨＳＣ培養
ヒト初代肝星状細胞（ｈＨＳＣ；Ｉｎｎｏｐｒｏｔ）を、２％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ、ＳｃｉｅｎＣｅｌｌ  カタログ番号００１０）、１％ペニシリン／ストレプトマイシン（ＳｃｉｅｎＣｅｌｌ  カタログ番号０５０３）及び星状細胞増殖サプリメント（ＳｔｅＣＧＳ；ＳｃｉｅｎＣｅｌｌ  カタログ番号５３５２）を補足したＳＴｅＣＭ培地（ＳｃｉｅｎＣｅｌｌ  カタログ番号５３０１）中で、培養した。細胞培養フラスコを、よりよい接着のために、ポリ−Ｌリシン（Ｓｉｇｍａ  カタログ番号Ｐ４７０７）でコーティングした。
【００９９】
組成物の調製：２成分組合せ行列（ＣＶＣ／ＰＰＡＲアゴニスト）
２成分組合せ行列（ＣＶＣ／エラフィブラノール）
セニクリビロク（ＣＶＣ）は、ＣＬＩＮＩＳＣＩＥＮＣＥＳ（参照番号：Ａ１３６４３−１０、ＣＡＳ番号：４９７２２３−２５−３）から購入した。ベンザフィブラート及びエラフィブラノール（ＧＦＴ５０５）は、Ｇｅｎｆｉｔにおいて合成した。
【０１００】
これらの実験のために、チェッカーボード行列を生成した。ＣＶＣ及びエラフィブラノールストックを、ＤＭＳＯで、９６ウェルプレートの行（エラフィブラノール）において５点系列で及び列（セニクリビロク）おいて６点系列で系列希釈した。その後、全単剤濃度の１：１混合により、６×７組合せ行列を生成した。各化合物の試験濃度は、ＴＧＦ−β１で刺激したＨＳＣモデルにおけるα−ＳＭＡ含量を測定することにより得た、単剤としての各化合物のそれぞれのＩＣ５０に基づいて、選択した。
【０１０１】
２成分組合せ行列（ＣＶＣ／ベンザフィブラート）
ベンザフィブラートをジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ、Ｆｌｕｋａ  カタログ番号４１６４０）に溶解し、９６ウェルプレートの行（ベンザフィブラート）において５点系列で及び列（ＣＶＣ）おいて６点系列で系列希釈した。その後、全単剤濃度の１：１混合により、６×７組合せ行列を生成した。各化合物の試験濃度は、ＴＧＦ−β１で刺激したＨＳＣモデルにおけるα−ＳＭＡ含量を測定することにより得た、単剤としての各化合物を測定することにより得た、単剤としての各化合物のそれぞれのＩＣ５０に基づいて、選択した。
【０１０２】
ＴＧＦ−β１及び化合物治療でのｈＨＳＣの活性化
ヒト初代肝星状細胞（ｈＨＳＣ；Ｉｎｎｏｐｒｏｔ）を、上文で説明したような標準条件下で培養した。その後、細胞を、ＥＬＩＳＡによるα−ＳＭＡの測定のために９６ウェルプレートに細胞２×１０４個／ウェルの密度で蒔いた。
【０１０３】
翌日、細胞培養培地を除去し、細胞をＰＢＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  カタログ番号１４１９０）で洗浄した。２４時間、無血清・無ＳｔｅＣＧＳ培地において、ｈＨＳＣを欠乏させた。ＣＶＣ、エラフィブラノール、ベンザフィブラート、並びにＣＶＣ／エラフィブラノール及びＣＶＣ／ベンザフィブラートの２つをペアにした組合せでの治療のために、血清欠乏性ｈＨＳＣを、１時間、それらの化合物と共にプレインキュベートし、続いて、さらに４８時間にわたって線維形成促進性刺激剤ＴＧＦ−β１（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ  カタログ番号１００−２１、１ｎｇ／ｍＬ）を無血清・無ＳｔｅＣＧＳ培地に添加した。
【０１０４】
α−ＳＭＡ  ＥＬＩＳＡ
サンドイッチＥＬＩＳＡを使用して、α−ＳＭＡレベルを測定した。簡単に言うと、ＥＬＩＳＡプレートのウェルを、先ず、捕捉抗体（マウスモノクローナル抗ＡＣＴＡ２、Ａｂｎｏｖａ）で、４℃で終夜、コーティングした。ＰＢＳ＋０．２％Ｔｗｅｅｎ２０で３回洗浄した後、ＰＢＳ＋０．２％ＢＳＡからなるブロッキング溶液を１時間にわたって添加し、続いて別の洗浄サイクルを行った。細胞溶解物を捕捉抗体との結合のために２時間にわたって室温でウェルに移入した。洗浄手順後、検出抗体（ビオチン標識マウスモノクローナル抗ＡＣＴＡ２、Ａｂｎｏｖａ）を２時間にわたって室温で添加し、続いて３回洗浄した。検出のために、ストレプトアビジンＨＲＰコンジュゲート（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  カタログ番号ＤＹ９９８）を、先ず、３０分間、室温で適用した。洗浄後、ＨＲＰ基質ＴＭＢ（ＢＤ、カタログ番号５５５２１４）を添加し、７分間、室温で、暗所でインキュベートした。酸化し次第、ＴＭＢは、水溶性青色反応生成物を形成し、硫酸を添加（溶解停止）するとその反応生成物は黄色になり、これにより、分光光度計を使用する４５０ｎｍでの強度の正確な測定が可能になる。発生する色は、溶解物中に存在するα−ＳＭＡの量と正比例する。
【０１０５】
エクセス・オーバー・ブリス（ＥＯＢ）法による相乗作用の判定
α−ＳＭＡ  ＥＬＩＳＡアッセイにおいて得た値を、先ず、ＴＧＦ−β１対照に対する阻害パーセンテージに変換した。２０％より上の阻害を  生物学的に意義があるとみなした。次いで、これらの阻害パーセンテージを使用して、ＥＯＢ（エクセス・オーバー・ブリス）を決定して、薬の組合せの相乗効果を定義した。期待ブリス相加作用スコア（Ｅ）を、先ず、方程式：
Ｅ＝（Ａ＋Ｂ）−（Ａ×Ｂ）
（式中、Ａ及びＢは、所与の用量でのエラフィブラノール（Ａ）（又はベンザフィブラート）及びセニクリビロク（ＣＶＣ）（Ｂ）の阻害パーセンテージである。）
により決定した。同じ用量での組み合わせたＣＶＣ／エラフィブラノール（又はベンザフィブラート）についてのブリス期待値と阻害実測値との差が、「エクセス・オーバー・ブリス」スコアである。
−  エクセス・オーバー・ブリススコア＝０は、併用治療が相加的（独立した経路の効果について期待通り）であることを示し、
−  エクセス・オーバー・ブリススコア＞０は、相加的より大きい活性（相乗作用）を示し、及び
−  エクセス・オーバー・ブリススコア＜０は、組合せが相加的未満（拮抗作用）であることを示す。
【０１０６】
組合せエラフィブラノール＋ＣＶＣ及びベンザフィブレート＋ＣＶＣについて、さらなる総ブリススコアを、全ＥＯＢの総和により算出した。
【０１０７】
相乗作用を検証するために、ＣＶＣ／エラフィブラノール組合せについての最高ＥＯＢスコアに対応する実験値を棒グラフにプロットした。
【０１０８】
最高単剤に対するＣＶＣ／エラフィブラノール又はＣＶＣ／ベンザフィブラート間の差の実測値の有意性を、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１でスチューデントｔ検定により判定した。
【０１０９】
慢性ＣＤＦＦ食モデル（８週間）におけるエラフィブラノール、ＣＶＣ及びこれらの組合せの評価
単独でのエラフィブラノール、単独でのＣＶＣ、及びこれらの組合せの予防効果を、ＣＤＡＡ＋２％コレステロール＋３０％乳脂肪飼料、及び飲用水中の高フルクトースコーンシロップ５５（４２ｇ／Ｌの最終濃度について５５％フルクトース／４５％グルコース）を摂取したマウスの線維性ＮＡＳＨモデル（Ｍｅｌｌｓら  Ｊ  Ｎｕｔｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ２０１５年）において、評価した。５〜６週齢雄Ｃ５７Ｂｌ／６Ｊマウスに、対照（ＣＳＡＡ）飼料（ｎ＝４）、ＣＤＦＦ飼料（ｎ＝１２）、又はエラフィブラノール  ３ｍｇ／ｋｇ／日、ＣＶＣ  １０ｍｇ／ｋｇ／日若しくは組み合わせた薬物（ＣＶＣ  １０ｍｇ／ｋｇ／日と組み合わせたエラフィブラノール  ３ｍｇ／ｋｇ／日）を補足したＣＤＦＦ飼料（１群当たりｎ＝８）を、８週間にわたって給餌した。
【０１１０】
体重、食物及び水摂取量を、週２回、モニターした。治療の最終日に、後眼窩採血から血漿試料を得、マウスを６時間絶食後に屠殺した。肝臓を、生化学分析及び組織学的分析のために、迅速に切除した。全ての動物手順は、標準的プロトコールに従って行い、実験動物の適正なケア及び使用に関する基準勧告に従って行った。
【０１１１】
組織診断
組織包埋及び切片作製
肝臓薄片を、ホルマリン４％溶液中で固定した。次いで、肝臓片を、３０分間、ＰＢＳで洗浄し、エタノール溶液（７０、８０、９５及び１００％エタノールでの連続浴）において脱水した。肝臓片を、キシレン（Ｈｏｎｅｙｗｅｌｌ  カタログ番号５３４０５６）の３つの異なる浴においてインキュベートし、続いて２つの浴の流動パラフィン（５９℃）中でインキュベートした。次いで、肝臓片をラックに入れ、組織を完全に覆うようにラックにＨｉｓｔｏｗａｘ（登録商標）を穏やかに充填した。
【０１１２】
組織片を含有するパラフィンブロックをラックから取り出し、室温で保管した。肝臓ブロックを３μｍの薄片に切断した。
【０１１３】
ヘマトキシリン／エオシン／サフラニン染色
肝臓切片を脱パラフィンし、再水和し、３分間、Ｍａｙｅｒのヘマトキシリン（Ｍｉｃｒｏｍ、カタログ番号Ｆ／Ｃ０３０３）中でインキュベートした。次いで、肝臓切片を水ですすぎ、エオシンＹ  ０．５％アルコール溶液（ＶＷＲ、カタログ番号１．０２４３９．０５００）及びエリスロシン  ０．５％溶液（ＶＷＲ、カタログ番号１．１５９３６．００１０）中で１分インキュベートし、エタノールですすいだ。次いで、切片を２分間、サフラニン中でインキュベートし、最終的に脱水し、ＣＶ  Ｍｏｕｎｔ媒体（Ｌｅｉｃａ、カタログ番号０４６４３００１１）を使用してマウントした。
【０１１４】
組織学的検査
各肝臓検体源について知らされていない技術者が、組織学的検査を行った。３Ｄ  ＨｉｓｔｅｃｈからのＰａｎｎｏｒａｍｉｃ  ２５０スキャナーを使用して、バーチャルスライドを生成した。動物ごとに、ＮＡＳＨの主要な組織学的病変を要約するスコアを、ＮＡＳＨ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｎｅｔｗｏｒｋに従って帰属させた（Ｋｌｅｉｎｅｒ  ２００５年、Ｂｒｕｎｔ  １９９９年）。簡単に言うと、脂肪化、小葉炎症及び肝細胞バルーニングを点数化した。ＮＡＦＬＤ活動性スコア（ＮＡＳスコア）を、各個体について、脂肪化（０〜３）、小葉炎症（０〜３）及びバルーン傷害（０〜２）等級付けの非重み付き合計として確立した。
【０１１５】
血漿肝臓酵素及びＣＫ１８測定
血漿中のアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）濃度を、Ｄａｙｔｏｎａオートメート用のＲａｎｄｏｘキット（それぞれ、Ｒａｎｄｏｘカタログ番号ＡＬ  ３８０１及びＡＳ  ３８０４）を使用して測定した。アポトーシスの代替マーカーである血漿サイトケラチン１８−Ｍ３０は、Ｍｏｕｓｅ  Ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ  １８−Ｍ３０  ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ（ＣＵＳＡＢＩＯ  カタログ番号ＣＳＢ−Ｅ１４２６５ｍ）を製造業者の推奨基準に従って使用して測定した。
【０１１６】
肝臓遺伝子発現分析
ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を製造業者の説明書に従って使用して、全ＲＮＡをマウス肝臓から単離した。１×ＲＴ緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、０．５ｍＭ  ＤＴＴ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、０．１８ｍＭ  ｄＮＴＰｓ（Ｐｒｏｍｅｇａ）、２００ｎｇ  ｐｄＮ６（Ａｍｅｒｓｈａｍ）及び３０ＵのＲＮａｓｅ阻害剤（Ｐｒｏｍｅｇａ）中の、Ｍ−ＭＬＶ  ＲＴ（モロニーマウス白血病ウイルス逆転写酵素）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  カタログ番号２８０２５）を使用して、全ＲＮＡをｃＤＮＡに逆転写した。
【０１１７】
次いで、ＣＦＸ９６  Ｔｏｕｃｈ（商標）Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ  ＰＣＲ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｂｉｏｒａｄ）を使用して、定量的ＰＣＲを行った。簡単に言うと、ＰＣＲ反応は、１μＬの逆転写反応物、０．５μＬのリバース及びフォワードプライマー（各１０ｐｍｏｌ）並びに１２．５μｌの２×ｉＱ  ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ  Ｓｕｐｅｒｍｉｘ（ＢｉｏＲａｄ）を含有する、２５μｌの全体積で、９６−ＷＰ形式で行い、下記のプライマー配列を使用した：
【０１１８】
【表１】
2020510651.tif 000006
【０１１９】
試料における基準のハウスキーピング遺伝子としてのＧＡＰＤＨ遺伝子の発現を使用して、発現レベルを正規化した。１００％に近いＰＣＲ反応効率及び１に近い補正係数を有するために最良の点（少なくとも３点）を選択することにより、遺伝子ごとに標準曲線を描いた。ハウスキーピング遺伝子と標的遺伝子の両方についての標準曲線方程式を使用して（各標的遺伝子の特異的ＰＣＲ効率を考慮に入れて）発現レベルを決定した。
【０１２０】
結果及び結論：
肝線維形成のインビトロモデル（ｉｎ  ａ  ｖｉｔｒｏ  ｍｏｄｅｌ）におけるエラフィブラノール、ＣＶＣ及びこれらの組合せの評価
分化筋線維芽細胞の異常な存続は、多くの線維性疾患の特徴である。
【０１２１】
肝損傷後、静止ＨＳＣは、（α−ＳＭＡ）陽性筋線維芽細胞への分化を特徴とする活性化過程を辿る。
【０１２２】
ＰＰＡＲアゴニストエラフィブラノールは、線維形成促進性サイトカインＴＧＦβ１で活性化されたｈＨＳＣにおいて抗線維化活性を明示した。α−ＳＭＡマーカーは、３．１７μＭのＩＣ５０で８０％低減された（図１Ａ）。しかし、ベンザフィブラートのような他のＰＰＡＲアゴニストは、弱い抗線維化プロファイルを示した（図１Ｃ）。これは、ＰＰＡＲアゴニストがそれらの抗線維化特性に関して同等でないことを示唆する。単独でのＣＶＣは、ＴＧＦβ活性化ＨＳＣにおいて全ての用量で有意な効果を示さなかった（図１Ｂ）。エラフィブラノールとＣＶＣの組合せが線維化を相乗的に低減させることができるかどうかを評価するために、組合せ行列実験をＴＧＦβ誘発ｈＨＳＣにおいて行った。簡単に言うと、ＣＶＣ及びエラフィブラノール溶液をチェッカーボード形式で系列希釈して、エラフィブラノール／ＣＶＣ比の大パネルを包含する４２組合せ行列を生成した。相乗作用を、先ず、エクセス・オーバー・ブリススコアを算出するにより判定した。これらの実験は、エラフィブラノールが、ＣＶＣと相乗作用して活性化ｈＨＳＣにおけるα−ＳＭＡ産生を低減させることができることを明らかにした（図２Ａ及び２Ｂ）。５μＭの各化合物を用いた、相乗作用の最高の例の１つを、図２Ｃに示す。５μＭの単独のＣＶＣは、抗線維化活性を一切示さないが、５μＭのエラフィブラノールへのその添加は、エラフィブラノールの活性を相乗的に有意に増大させることができ、（５μＭのエラフィブラノールに関する４０％と比較して）６０％までの阻害に達した。対照的に、ＣＶＣとベンザフィブラートの組合せは、それよりはるかに低いＥＯＢスコアを明示し（図３Ａ及び３Ｂ）、どの組合せによっても統計的に有意な結果は得られなかった（図３Ｃ）。
【０１２３】
結論として、本出願人は、式（Ｉ）の化合物の特定のＰＰＡＲアゴニストとの組合せについて予想外の抗線維化活性を発見した。これらの結果は、式（Ｉ）の化合物のＰＰＡＲアゴニストとの組合せが、相乗的であり得ること、及び複数のタイプの線維性疾患において治療的恩恵をもたらすことができることを示唆する。
【０１２４】
慢性ＣＤＦＦ食モデル（８週間）におけるエラフィブラノール、ＣＶＣ及びこれらの組合せの評価
西洋の生活様式は、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）（肝線維症及び硬変に進行することが多く、最終的に肝細胞癌に至ることもある、慢性肝疾患）高い発生率に、常に結び付けられる。現在、ＮＡＳＨのための認可されている治療法はない。複数の治療標的に同時に指向される薬の組合せには、薬物応答を劇的に向上させる可能性、及び最も幅広い患者集団に恩恵をもたらす可能性がある。薬の組合せは、高血圧、脂質異常症又は２型糖尿病のような、他の全身性疾患において以前に試験され、基礎疾患のより良好な制御を示し、罹患率及び死亡率を低下させた。最近の第２Ｂ相研究において、エラフィブラノール（ＰＰＡＲα／δアゴニスト）とＣＶＣの両方が、ＮＡＳＨ誘発性線維症に対する有効性を示した。本発明者らは、有意義なＮＡＳＨ病態アウトカムに対するそれらの作用を比較すること、および組合せの治療的恩恵を探すことを望んだ。
【０１２５】
この目的を達成するために、２％コレステロール及び３０％乳脂肪を補足したコリン欠乏Ｌ−アミノ酸規定食、及び飲用水中の高フルクトースコーンシロップ（ＣＤＦＦ飼料）をＣ５７Ｂｌ／６Ｊマウスに給餌することにより、ＮＡＳＨを誘発した。介入群の動物は、全研究期間にわたってエラフィブラノール（３ｍｇ／ｋｇ／日）若しくはＣＶＣ（１０ｍｇ／ｋｇ／日）のどちらか、又は両方の化合物を摂取した。ＮＡＳＨ発症を、組織診断、肝機能試験、並びに生化学分析及び分子分析により評価した。
【０１２６】
ＣＤＦＦ摂食マウスは、ＮＡＳＨを発生し、重症疾患の浸透率が高かった。高度の脂肪化及び小葉炎症が、全ての動物に存在し、６又は７の高いＮＡＳスコアが得られた（図４Ａ）。バルーニングは、このモデルにおいて明らかでなかったが、肝細胞損傷が高い血漿ＡＳＴ及びＣＫ１８レベルと共に確認された（図４Ｂ〜Ｃ）。線維形成、組織再構築及び炎症に関連する遺伝子の発現は増加され、疾患が重症であるＮＡＳＨ患者において以前に報告された遺伝子シグネチャーと一致した（図５）。
【０１２７】
エラフィブラノールは、脂肪化及び肝小葉炎症を低減させてＮＡＳスコアの全体的な低下をもたらすことにより、ＮＡＳＨ組織診断を向上させた（図４Ａ）。エラフィブラノールはまた、血漿ＡＳＴ及びＣＫ１８濃度低下により示される通り、肝損傷を低減させた（図４Ｂ〜Ｃ）。また、エラフィブラノールは、炎症、組織再構築及び線維形成に関連する遺伝子の発現を減少させた（図５）。単独でのＣＶＣには、これらのパラメーターに対する効果がなかったが、エラフィブラノール＋ＣＶＣ併用治療は、疾患活動性（ＮＡＳ）及び肝細胞損傷（血漿ＡＳＴ及びＣＫ１８の低減）に対して相乗的有益効果をもたらし（図４）、炎症、組織再構築及び線維形成に関連する遺伝子の発現に対しても相乗的有益効果をもたらした（図５）。
【０１２８】
結論として、本出願人は、ＣＤＦＦマウスモデルにおけるＮＡＳＨパラメーター及び線維形成に対する、ＣＶＣと組み合わせたエラフィブラノールの相乗効果を、本明細書において示した。この研究から、エラフィブラノール／ＣＶＣ組合せが、より幅広い患者集団に恩恵をもたらすことを理解することができる。
【０１２９】
【表２】
2020510651.tif 000007
【図１】
2020510651.tif 000009
【図２】
2020510651.tif 000010
【図３】
2020510651.tif 000011
【図４】
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【図５】
2020510651.tif 000013
【配列表】
2020510651000001.app
【国際調査報告】
2020510651.tif 000014
2020510651.tif 000015