(57)【要約】本開示は概して、様々な疾患を、ガンを含めて、処置するのに有用なヌクレオチドベースの化合物を提供する。いくらかの態様において、本開示は、操作された脂肪酸残基を含むように化学的に修飾されるオリゴヌクレオチドを、例えば、そのような化合物の半減期を改善すること、または細胞浸透（例は、腫瘍細胞への浸透）を支援することのために提供する。いくらかの態様では、本開示は、そのような修飾ヌクレオチドおよびタンパク質、例えば、アルブミンまたはそのミメティックなどのようなものを含む組成物を提供する。本開示は化合物および組成物の様々な使用を提供する。
2020514383.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
【化１】
2020514383.tif 000015
式中：
A1は有機基であり；または、A1は親水基または水素原子であり；
A2はオリゴヌクレオチドモイエティーであり；
X1は疎水基であり；および
X2は直接結合、有機基、-O-、-S-、-S(=O)-、-S(=O)2-、-S-S-、-N=、=N-、-N(H)-、-N=N-N(H)-、-N(H)-N=N-、-N(OH)-、または-N(=O)-である、
式（I）の化合物。
【請求項２】
A1はカルボン酸基、カルボキシラートアニオン、またはカルボキシラートエステルである、請求項1の化合物。
【請求項３】
A1はカルボン酸基である、請求項2の化合物。
【請求項４】
オリゴヌクレオチドモイエティーには、2から200までのヌクレオチド単位、または3から150までのヌクレオチド単位、または4から100までのヌクレオチド単位、または5から50までのヌクレオチド単位、または6から40までのヌクレオチド単位が含まれる、請求項1ないし3のいずれか一項の化合物。
【請求項５】
オリゴヌクレオチドモイエティーは、ホスファートモイエティーまたはチオホスファートモイエティーを介してX2にコンジュゲートする、請求項1ないし4のいずれか一項の化合物。
【請求項６】
ヌクレオチド単位には、リボースモイエティーまたはデオキシリボースモイエティーが含まれる、請求項4または5の化合物。
【請求項７】
ヌクレオチド単位の各々には、アデニンモイエティー、シトシンモイエティー、グアニンモイエティー、チミンモイエティー、およびウラシルモイエティーからなる群より選ばれる窒素塩基モイエティーが含まれる、請求項4ないし6のいずれか一項の化合物。
【請求項８】
オリゴヌクレオチドモイエティーは、HA1、HA2、HA3、HA4、または関連または非関連siRNA、マイクロRNAミミック、またはアンチセンス配列、および前述のいずれかの薬学的に許容可能な塩である、請求項1ないし7のいずれか一項の化合物。
【請求項９】
Ｘ1はC12-22ヒドロカルビレンであり、それは随意に置換される、請求項1ないし8のいずれか一項の化合物。
【請求項１０】
X1はC12-22アルキレン基である、請求項9の化合物。
【請求項１１】
Ｘ１は-(CH2)12-、-(CH2)14-、-(CH2)16-、-(CH2)18-、-(CH2)20-、または-(CH2)22-である、請求項10の化合物。
【請求項１２】
Ｘ1は-(CH2)16-である、請求項11の化合物。
【請求項１３】
X2は、-C(O)-O-Z1-NH-、-C(O)-O-Z1-O-、または-C(O)-O-Z1-S-であり、式中、Z1は、-OHによって一回以上随意に置換されるC1-6アルキレン基である、請求項12の化合物。
【請求項１４】
Ｚ1はエチレンまたは-CH2-CH(OH)-CH2-である、請求項13の化合物。
【請求項１５】
次の：
請求項1ないし14のいずれか一項の化合物；および
タンパク質であって、そこでは、タンパク質は、ヒト血清アルブミンまたはタンパク質であってその配列がヒト血清アルブミンのものと少なくとも50％等価であるもの
を含む薬剤組成物。
【請求項１６】
タンパク質はヒト血清アルブミンである、請求項15の薬剤組成物。
【請求項１７】
担体をさらに含む、請求項15または16の薬剤組成物。
【請求項１８】
担体には、水が含まれる、請求項17の薬剤組成物。
【請求項１９】
化合物およびタンパク質は、少なくとも102M-1、または少なくとも103M-1、または少なくとも104 M-1、または少なくとも105M-1の結合定数（Kb）により互いに非共有結合的に会合する、請求項18の薬剤組成物。
【請求項２０】
化合物およびタンパク質は担体によって溶媒和される、請求項17ないし19のいずれか一項の薬剤組成物。
【請求項２１】
請求項1ないし16のいずれか一項の一以上の化合物および一以上のタンパク質を含み、そこでは、組成物において、化合物の少なくとも90重量%、または少なくとも95重量%、または少なくとも97重量%、または少なくとも99重量%は、少なくとも102M-1、または少なくとも103M-1、または少なくとも104M-1、または少なくとも105M-1の結合定数（Kb）によりタンパク質に結合する、請求項17ないし20のいずれか一項の薬剤組成物。
【請求項２２】
組成物において、少なくともタンパク質結合粒子の少なくとも90重量%、または少なくとも95重量%、または少なくとも97重量%、または少なくとも99重量%は、動的光散乱によって測定するとき、5nmを超えない、または4nmを超えない半径をもつ、請求項21の薬剤組成物。
【請求項２３】
薬剤組成物は、哺乳動物、例は、ヒトへの非経口的施与に適する、請求項17ないし22のいずれか一項の薬剤組成物。
【請求項２４】
薬剤組成物は、哺乳動物、例は、ヒトへの静脈内施与に適する、請求項17ないし22のいずれか一項の薬剤組成物。
【請求項２５】
次の：
化合物であって、それには、オリゴヌクレオチドモイエティーおよびタンパク質結合モイエティーが含まれるもの；
タンパク質であって、そこでは、タンパク質は、ヒト血清アルブミンまたはタンパク質であってその配列がヒト血清アルブミンのものと少なくとも50％等価であるもの；および
担体であって、それには、水が含まれるもの
を含み；
そこでは、化合物およびタンパク質は、少なくとも102M-1、または少なくとも103M-1、または少なくとも104M-1、または少なくとも105M-1の結合定数（Kb）により互いに非共有結合的に会合し；および
そこでは、化合物およびタンパク質は担体によって溶媒和される、
薬剤組成物。
【請求項２６】
化合物は請求項1ないし16のいずれか一項の化合物である、請求項25の薬剤組成物。
【請求項２７】
タンパク質はヒト血清アルブミンである、請求項25または26の薬剤組成物。
【請求項２８】
請求項1ないし16のいずれか一項の一以上の化合物および一以上のタンパク質を含み、そこでは、組成物において、化合物の少なくとも90重量%、または少なくとも95重量%、または少なくとも97重量%、または少なくとも99重量%は、少なくとも102M-1、または少なくとも103M-1、または少なくとも104M-1、または少なくとも105M-1の結合定数（Kb）によりタンパク質に結合する、請求項25ないし27のいずれか一項の薬剤組成物。
【請求項２９】
組成物において、タンパク質結合粒子の少なくとも90重量%、または少なくとも95重量%、または少なくとも97重量%、または少なくとも99重量%は、動的光散乱によって測定するとき、5nmを超えない、または4nmを超えない半径をもつ、請求項28の薬剤組成物。
【請求項３０】
薬剤組成物は、哺乳動物、例は、ヒトへの非経口的施与に適する、請求項25ないし29のいずれか一項の薬剤組成物。
【請求項３１】
薬剤組成物は、哺乳動物、例は、ヒトへの静脈内施与に適する、請求項25ないし29のいずれか一項の薬剤組成物。
【請求項３２】
ガンを処置するにあたり、次の：
請求項1ないし14のいずれか一項の化合物または請求項15ないし31のいずれか一項の組成物を対象に施すことを含む、方法。
【請求項３３】
対象に免疫療法剤を施すことをさらに含む、請求項32の方法。
【請求項３４】
免疫療法剤の対象への施与は、対象への請求項1ないし14のいずれか一項の化合物または請求項15ないし31のいずれか一項の組成物の施与と同時に、またはその前または後三日を超えないで行う、請求項33の方法。
【請求項３５】
ガン細胞においてアポトーシスを誘導するにあたり、次の：
ガン細胞を請求項1ないし14のいずれか一項の化合物または請求項15ないし31のいずれか一項の組成物と接触させること
を含む、方法。
【請求項３６】
ガン性腫瘍の増殖を抑制するにあたり、次の：
ガン性腫瘍を請求項1ないし14のいずれか一項の化合物または請求項15ないし31のいずれか一項の組成物と接触させること
を含む、方法。
【請求項３７】
請求項1ないし14のいずれか一項の化合物または請求項15ないし31のいずれか一項の組成物の薬としての使用。
【請求項３８】
請求項1ないし14のいずれか一項の化合物または請求項15ないし31のいずれか一項の組成物のガンを処置するための使用。
【請求項３９】
薬の製造における請求項1ないし14のいずれか一項の化合物の使用。
【請求項４０】
ガンを処置するための薬の製造における請求項1ないし14のいずれか一項の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【関連出願への相互参照】
【０００１】
本出願は、2017年3月22日付け出願の米国仮出願第62/475,185号に関して優先権の利益を主張し、それはその全体においてまるでここに記載されているかのように参照によってここに組み込まれる。
【０００２】
テクニカルフィールド
本開示は概して、様々な疾患を、ガンを含めて、処置するのに有用なヌクレオチドベースの化合物を提供する。いくらかの態様において、本開示は、操作された脂肪酸残基を含むように化学的に修飾されるオリゴヌクレオチドを、例えば、そのような化合物の半減期を改善することを支援し、または細胞浸透（例は、腫瘍細胞への浸透）を支援するために提供する。いくらかの態様では、本開示は、そのような修飾ヌクレオチドおよびタンパク質、例えば、アルブミンまたはそのミメティック（mimetics）などのようなものを含む組成物を提供する。本開示は化合物および組成物の様々な使用を提供する。
関連技術の説明
【０００３】
オリゴヌクレオチド（ONs）は、様々な疾患を処置するための無限の可能性を与える化合物のクラスを代表する。ほとんどのONsは、いくらかの種のアンチセンス機構を通して動作し、およびそれゆえに、何らかのRNA種に向けられることが多い。例には、制限されないが、ギャップマー（gapmers）、立体ブロックONs、アンタゴミル（antagomirs）、低分子干渉RNAs（siRNAs）、マイクロRNAミミック（mimic、模倣物などとも言う）、およびスプライススイッチングONsが含まれる。理論的な意味では、そのような化合物は、任意の障害で、その原因が特定の遺伝子に関連していることが知られるものの処置に使用することができる。そのような疾患には、様々なガン、糖尿病、筋萎縮性側索硬化症（ALS）、デュシェンヌ型（Duchenne）筋ジストロフィー、脊髄性筋萎縮、喘息、および関節炎が含まれる。現在、いくつかのON薬物が米国食品医薬品局から承認を受けている：ホミビルセン、サイトメガロウイルス網膜炎の処置について；ミポメルセン、ホモ接合体家族性高コレステロール血（homozygous familial hypercholesterolemia）の処置について；エテプリルセン、デュシェンヌ型筋ジストロフィーの処置について、およびヌシネルセン、脊髄性筋萎縮の処置についてのものである。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
ON薬物の効果的なデリバリーおよびターゲッティングは問題を提起し続けている。例えば、ホミビルセンは、施与後のヌクレアーゼによる分解を防ぐため、ヌクレオチド単位間の合成ポリヌクレオチドホスホロチオアート連結がある。しかし、そのような修飾はそれらの独自の問題を引き起こし、それはそのような化合物が、身体が取り扱いに慣れている化合物に容易には代謝されないからである。また、様々なタンパク質への非特異的結合も問題である。その他、例えば、ミポメルセンなどのようなものには、的外れの副作用のリスクのため、黒枠警告（black-box warnings）が含まれる。そして、多くのそのような化合物は、それらを標的組織にデリバリーする効果的な手段がないため、開発において停滞したままである。それゆえ、ONsは無数の疾患の処置に大きな期待をもたらすが、その希望はまだ実現には程遠い。
【０００５】
したがって、急速な破壊に抵抗し、的外れの副作用を低減し、および/または病態または状態によって影響を受ける特定の組織を標的とするために、ONsをデリバリーする優れた方法を開発する継続的な必要性がある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
概略
本開示は、次の：施与後の優れた半減期、的外れ活性からの副作用の低減、および病変組織の高められた標的化の一以上を与えることができる修飾ON化合物および関連組成物を提供する。いくらかの実施形態において、化合物はONsのプロドラッグであり、プロドラッグは、病変組織への、例えば、哺乳動物においての固形ガン性腫瘍などのようなものへのONsの優れたデリバリーを可能にする。本開示はまた、様々な疾患を、ガンを含めて、処置するための方法および、それらの化合物および組成物の使用も提供する。
【０００７】
第一の態様では、本開示は式（I）：
【化１】
2020514383.tif 000003
の化合物を提供し、式中：A1は有機基、または親水基、または水素原子であり；A2はオリゴヌクレオチドモイエティーであり；X1は疎水基であり；およびX2は、直接結合、有機基、または-O-、-S-、-S(=O)-、-S(=O)2-、-S-S-、-N=、=N-、-N(H)-、-N=N-N(H)-、-N(H)-N=N-、-N(OH)-、または-N(=O)-からなる群より選ばれるヘテロ原子基である。いくらかの実施態様では、A1は、親水基、例えば、カルボン酸基（-COOH）またはその薬学的に許容可能な塩などのようなものである。いくらかの実施態様において、疎水基は、C12-22ヒドロカルビレン基であり、それは随意に置換される。いくらかの実施形態では、X2は-O-、-NH-、または有機基、例えば、-NH-Z1-O-C(O)-または-O-Z1-O-C(O)-などのようなものであり、式中、Z1はC1-6アルキレン基であり、それは随意に-OHによって一回以上置換される。
【０００８】
第二の態様では、本開示は、組成物（例は、薬剤組成物）を提供し、それには、以下の：第一の態様の任意の実施形態の化合物；およびタンパク質が含まれる。いくらかの実施形態では、タンパク質はアルブミンまたはアルブミンミメティックである。
【０００９】
第三の態様において、本開示は、組成物（例は、薬剤組成物）を提供し、それには、以下の：第一の態様の任意の実施形態の化合物；およびタンパク質であって、そこでは、タンパク質は、アルブミンまたはアルブミンミメティックであるもの；および、担体であって、それには、水が含まれるものが含まれ；そこでは、化合物およびタンパク質は互いに非共有結合的に会合し；および、そこでは、化合物およびタンパク質は担体によって溶媒和される。
【００１０】
第四の態様では、本開示は、ガンを処置する方法を提供し、それには、前述の任意の態様の任意の実施形態の化合物または組成物を対象に施すことが含まれる。そのいくらかのさらなる実施形態において、本開示は、ガンを処置する方法を提供し、それには、一以上の免疫療法剤を対象に施すことが含まれる。
【００１１】
第五の態様では、本開示は、ガン細胞においてアポトーシスを誘導する方法を提供し、それには、ガン細胞を第一から第三までの任意の態様の任意の実施形態の化合物または組成物と接触させることが含まれる。そのいくらかのさらなる実施形態において、本開示は、ガン細胞においてアポトーシスを誘導する方法を提供し、それには、ガン細胞を一以上の免疫療法剤と接触させることが含まれる。
【００１２】
第六の態様では、本開示は、ガン性腫瘍の増殖を抑制するための方法を提供し、それには、ガン性腫瘍を第一の態様の任意の実施形態の化合物と接触させることが含まれる。そのいくらかのさらなる実施形態では、本開示は、ガン性腫瘍の増殖を抑制する方法を提供し、それには、ガン性腫瘍を一以上の免疫療法剤と接触させることが含まれる。
【００１３】
第七の態様では、本開示は、第一から第三までの任意の態様の任意の実施形態の化合物または組成物の薬としての使用を提供する。
【００１４】
第八の態様では、本開示は、第一から第三までの任意の態様の任意の実施形態の化合物または組成物のガンを処置するための使用を提供する。そのいくらかのさらなる実施形態において、本開示は、一以上の免疫療法剤と組合せでの使用が含まれる使用を提供する。
【００１５】
第九の態様では、本開示は、第一から第三までの任意の態様の任意の実施形態の化合物または組成物の薬の製造における使用を提供する。
【００１６】
第十の態様では、本開示は、第一から第三までの任意の態様の任意の実施形態の化合物または組成物のガンを処置するための薬剤の製造における使用を提供する。
【００１７】
第十一の態様では、本開示は、第一および第二の態様の化合物ならびに第三および第四の態様の組成物を作成する方法を提供する。
【００１８】
さらなる態様および実施形態は、図面、詳細な記載、請求の範囲、および要約において提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
以下の図面は、ここに開示する化合物、組成物、方法、および使用の様々な実施形態を例示する目的のために提供する。図面は、例示目的だけで提供し、および任意の好適化合物もしくは組成物または任意の好適方法もしくは使用を説明することや、または請求する発明の範囲に対する何らかの制限の源としての役割を果たさせることを意図しない。
【００２０】
【図１】式（I）の化合物の非制限的な例を示し、そこで、化合物には、オリゴヌクレオチドモイエティーが含まれ、それは長鎖二塩基酸モイエティーを含むように修飾される。
【図２】式（I）の非制限的化合物の精製形態の（a）分析HPLCトレース（上）および（b）MALDI-TOF質量スペクトル（下）を示す。
【図３】式（I）の非制限的化合物の精製形態の（a）分析HPLCトレース（上）および（b）MALDI-TOF質量スペクトル（下）を示す。
【図４】式（I）の非制限的化合物の精製形態の（a）分析HPLCトレース（左）および（b）MALDI-TOF質量スペクトル（右）を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
詳細な記載
以下の説明は、ここに開示する本発明の様々な態様および実施形態を列挙する。どの特定の実施形態も本発明の範囲を規定することを意図しない。むしろ、実施形態は、請求される発明の範囲内に含まれる様々な組成物および方法の非制限的な例を提供する。説明は、本技術において通常の技量の者（当業者とも言う）の観点から読むべきである。したがって、通常の熟練した職人によく知られる情報は必ずしも含まない。
定義
【００２２】
以下の用語および語句は、ここで別なふうに提供されない限り、以下に指し示す意味を有する。本開示は、ここで明示的に規定しない他の用語および語句を採用し得る。そのような他の用語および語句は、それらがこの開示の関連内で本技術において通常の技量の人々に関して所有するであろう意味を有すべきである。いくらかの場合には、用語または語句は単数形または複数形において規定されてよい。そのような場合には、それとは反対に明記しない限り、単数形の任意の用語はその複数形の対応物を含んでよく、および逆も同様であることが理解される。
【００２３】
ここで使用するように、単数形「a」、「an」、および「the」は、文脈から別なふうに明確に指図されない限り、複数の指示対象を含む。例えば、「置換基」への言及は、単数の置換基ならびに二以上の置換基、およびその他同種類のものなどを包含する。
【００２４】
ここで使用するように、「例えば」、「例として」、「などのような」、または「含めて」は、より一層一般的な主題をさらに明確にする例を紹介することを意味する。別なふうに明示的に指し示さない限り、そのような例は、本開示において例示する実施形態を理解するための補助としてだけ提供され、およびいかなる様式においても制限することを意図しない。これらの語句は、開示する実施形態について何らの種類の優先傾向（preference）も指し示さない。
【００２５】
ここで使用するように、「炭化水素」は、炭素および水素から構成される有機基に言及し、それは飽和または不飽和であることができ、および芳香族基を含むことができる。「ヒドロカルビル」という用語は、一価または多価（例は、二価以上）の炭化水素モイエティーに言及する。いくらかの場合には、二価のヒドロカルビル基は「ヒドロカルビレン」基と称される。
【００２６】
ここで使用するように、「アルキル」は、1ないし30個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖の飽和炭化水素に言及し、それは随意に置換されてよく、ここでさらに説明するように、複数の置換度が許容される。「アルキル」の例には、ここで使用するように、制限されないが、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、イソブチル、n-ブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、イソペンチル、n-ペンチル、ネオペンチル、n-ヘキシル、および2-エチルヘキシルが含まれる。いくらかの場合には、「アルキル」基は二価であることができ、その場合、その基は代わりに「アルキレン」基と称することができる。また、いくらかの場合には、アルキルまたはアルキレン基において一またはそれよりも多く（一以上とも言う）の炭素原子をヘテロ原子によって置き換えることができ（例は、窒素、酸素、またはいおうから選ばれ、実現可能な場合、N-酸化物、いおう酸化物、二酸化いおう、およびカルボニル基が含まれ）、およびそれぞれ「ヘテロアルキル」または「ヘテロアルキレン」基と称される。非制限的な例には、「オキシアルキル」または「オキシアルキレン」基が含まれ、それらは、アルキルまたはアルキレン基において炭素原子が酸素によって置き換えられる基に言及する。オキシアルキルまたはオキシアルキレン基の非制限的な例には、アルキルまたはアルキレン鎖が含まれ、それには、カルボニル基、およびまたアルコキシラート、ポリアルキレンオキシド、およびその他同種類のものなども含まれる。
【００２７】
任意の基または化合物において炭素原子の数は、条件によって表すことができる。したがって、「Cz」はz個の炭素原子を有する化合物の群に言及し、「Cx-y」はxからyまでの、包括的、炭素原子を含む基または化合物に言及する。例えば、「C1-6アルキル」は、1から6個までの炭素原子を有するアルキル基を代表し、および例えば、制限されないが、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、イソブチル、n-ブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、イソペンチル、n-ペンチル、ネオペンチル、およびn-ヘキシルが含まれる。他のタイプの官能基にも同じ理論が適用され、以下に規定される。
【００２８】
ここで使用するように、「アルケニル」は、2ないし30個の炭素原子を有し、および一以上の炭素-炭素二重結合を有する直鎖または分枝鎖の非芳香族炭化水素に言及し、それは随意に置換されてよく、ここでさらに説明するように、複数の置換度が許容される。「アルケニル」の例には、ここで使用するように、制限されないが、エテニル、2-プロペニル、2-ブテニル、および3-ブテニルが含まれる。いくらかの場合には、「アルケニル」基は二価であることができ、その場合、その基は代わりに「アルケニレン」基と称することができる。また、いくらかの場合、アルケニルまたはアルケニレン基において一以上の炭素原子をヘテロ原子によって置き換えることができ（例は、窒素、酸素、またはいおうから選ばれ、実現可能な場合、N-酸化物、いおう酸化物、二酸化いおう、およびカルボニル基が含まれ）、およびそれぞれ「ヘテロアルケニル」または「ヘテロアルケニレン」基と称する。
【００２９】
ここで使用するように、「シクロアルキル」は、3ないし20個の炭素原子を有する脂肪族飽和または不飽和炭化水素環系に言及し、それは随意に置換され得、ここでさらに説明するように、複数の置換度が許容される。いくらかの実施形態において、本用語は、飽和炭化水素環系だけに言及し、ここでさらに説明するように置換される。「シクロアルキル」の例には、ここで使用するように、制限されないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、シクロヘプチル、シクロオクチル、アダマンチル、およびその他同種類のものなどが含まれる。いくらかの場合、「シクロアルキル」基は二価であることができ、その場合、その基は代わりに「シクロアルキレン」基と称することができる。シクロアルキルおよびシクロアルキレン基はまた、ここでは「環状炭素（carbocyclic rings、炭素環などとも言う）」と称することもできる。また、いくらかの場合には、シクロアルキルまたはシクロアルキレン基において一以上の炭素原子をヘテロ原子によって置き換えることができ（例は、窒素、酸素、けい素、またはいおうから無関係に選ばれ、N-酸化物、いおう酸化物、および二酸化いおうが、実現可能であれば含まれ）、およびそれぞれ「ヘテロシクリル」または「ヘテロシクリレン」基と称される。「複素環」という用語はまた、これらの用語のいずれかと交換可能に使用することもできる。いくらかの実施形態では、シクロアルキルおよびヘテロシクリル基は十分に飽和される。いくらかの他の実施形態では、シクロアルキルおよびヘテロシクリル基は一以上の炭素-炭素二重結合を含むことができる。
【００３０】
ここで使用するように、「ハロゲン」、「ハロゲン原子」、または「ハロ」は、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素原子に言及する。いくらかの実施形態では、本用語はフッ素または塩素原子に言及する。
【００３１】
ここで使用するように、用語「有機基」、「有機モイエティー」、または「有機残基」は、少なくとも一個の炭素原子を有する一価または多価の官能基に言及し、それは随意に、水素原子、ハロゲン原子、窒素原子、酸素原子、リン原子、およびいおう原子からなる群より選ばれる一以上の追加の原子を含み、およびそれは、共有結合した金属原子または半金属原子を含まない。いくらかの実施形態では、これらの用語は、有機基の金属塩、例えば、有機アニオンのアルカリ金属またはアルカリ土類金属の塩などのようなものを含むことができる。
【００３２】
ここで使用するように、「ファーマコフォア（pharmacophore、活性基、薬理作用団などとも言う）」という用語は、有機官能基のあるタイプに言及する。標準ファーマコフォアは、疎水性ファーマコフォア、水素結合供与性（hydrogen-bond donating）ファーマコフォア、水素結合受容性（hydrogen-bond accepting）ファーマコフォア、陽イオン化可能（positive ionizable）ファーマコフォア、および陰イオン化可能ファーマコフォアである。化合物内の有機官能基の分類は、本技術において既知の標準的な分類システムに従って行う。
【００３３】
ここで使用するように、「疎水基」、「疎水性モイエティー」、または「疎水性残基」という用語は、疎水性ファーマコフォアから本質的になる有機基に言及する。いくらかの実施形態では、本用語は、疎水性ファーマコフォアからなる有機基に言及する。
【００３４】
ここで使用するように、「親水基」、「親水性モイエティー」または「親水性残基」という用語は、水素結合ドナー、水素結合アクセプター、陰イオン化可能基、または陽イオン化可能基からなる群より選ばれる一のファーマコフォアを含む有機基に言及する。いくらかの実施形態では、本用語は、水素結合ドナー、水素結合アクセプター、陰イオン化可能基、または陽イオン化可能基からなる群より選ばれるファーマコフォアから本質的になる有機基に言及する。
【００３５】
ここで使用するように、「オリゴヌクレオチドモイエティー」という用語は、互いに連結された二以上のヌクレオチド単位（大抵は、2から200まで、または4から100まで、または5から50までのヌクレオチド単位）を含むモイエティー（一部分などとも言う）に言及する。そのような「オリゴヌクレオチドモイエティー」の非制限的な例は、以下の式：
【化２】
2020514383.tif 000004
のモイエティーであり、式中、G1およびG2は塩基モイエティー、例えば、プリン-およびピリミジンベースのモイエティーで、アデニンモイエティー、グアニンモイエティー、シトシンモイエティー、チミンモイエティー、およびウラシルモイエティーを含むものであり、および式中、鉛直のくねった線（vertical squiggly line）はヌクレオチド単位およびホスホジエステル連結が右側に続くことを指し示す。「オリゴヌクレオチドモイエティー」という用語は、そのような化合物またはモイエティーを作成するために任意の特定の手順に制限されないことに注目される。
【００３６】
ここでは、化学構造を描写する様々な方法を使用する。場合によっては、化合物または部分を描くために、結合線構造法（bond line-structure method）を使用する。その線構造法では、線は化学結合を表し、および炭素原子は明示的には示さない（ただし、線の交差によって暗示する）。水素原子はまた、それらがヘテロ原子に結合する場合を除き、明示的には示さない。しかしながら、ヘテロ原子は明示的に示す。それゆえ、その方法論を使用すると、以下に示す構造は、2-メチルプロパン、1-メトキシプロパン、および1-プロパノールについてのものである：
【化３】
2020514383.tif 000005
その方法論では、芳香環は典型的に、寄与共鳴構造（contributing resonance structures）の一つによってだけ表される。それゆえ、次の構造はベンゼン、ピリジン、およびピロールについてのものである：
【化４】
2020514383.tif 000006
【００３７】
ここで使用するように、「タンパク質結合モイエティー」は、25℃で水において少なくとも100M-1の結合定数（Kb）によりタンパク質上の一以上の部位に非共有結合するモイエティーである。
【００３８】
ここで使用するように「アミノ酸」は、構造H2N-Rx-COOHを有する化合物に言及し、式中、Rxは有機基であり、および式中、NH2はRxと随意に結合し得る（例は、プロリンの場合のようである）。本用語は、任意の既知のアミノ酸を、制限されないが、アルファアミノ酸、ベータアミノ酸、ガンマアミノ酸、デルタアミノ酸、およびその他同種類のものなどを含めて、含む。いくらかの実施形態において、本用語はアルファアミノ酸に言及することができる。
【００３９】
ここで使用するように、「ヒドロキシ酸」は、構造HO-Ry-COOHを有する化合物に言及し、式中、Ryは有機基である。非制限的な例には、グリコール酸、乳酸、およびカプロラクトンが含まれる。
【００４０】
ここで使用するように、「アルカノールアミン」は、構造HO-Rz-NH2を有する化合物に言及し、式中、Rzは随意に置換されたアルキレン基である。非制限的な例には、エタノールアミンが含まれる。
【００４１】
ここで使用するように、「施す」または「施すこと」は、導入すること、例えば、化合物または組成物を対象に対して導入するなどのようなことを意味する。本用語は、任意の特定のデリバリーのモードに制限されず、および例えば、皮下デリバリー、静脈内デリバリー、筋肉内デリバリー、イントラシスターナル（intracisternal、のう内）デリバリー、注入技術によるデリバリー、経皮デリバリー、経口デリバリー、経鼻デリバリー、および直腸デリバリーを含むことができる。さらに、デリバリーのモードに応じて、施すことは、様々な個人によって、例えば、医療専門家（例は、医師、看護師、など）、製造者（pharmacist、薬剤師などとも言う）、または対象（即ち、自己-管理）を含めて、行うことができる。
【００４２】
ここで使用するように、「処置する」または「処置すること」または「処置」は、以下の：疾患、障害、または状態の進行を遅らせること；疾患、障害、または状態をコントロールすること；疾患、障害、または状態に特徴的な一以上の徴候を改善すること；または、疾患、障害、または状態の性質、およびその特徴的な徴候に応じて、疾患、障害、または状態、またはその特徴的な徴候の再発を遅らせることのうちの一以上に言及することができる。
【００４３】
ここで使用するように「対象」は、任意の哺乳動物に、例えば、制限されないが、ヒト、ウマ、ウシ、ヒツジ、ブタ、マウス、ラット、イヌ、ネコ、および霊長類に、例えば、チンパンジー、ゴリラ、およびアカゲザルなどのようなものなどに言及する。いくらかの実施形態では、「対象」は人間である。いくらかのそのような実施形態では、「対象」は、疾患、障害、または状態の特徴的な一以上の徴候を見せるヒトである。「対象」という用語は、病院、診療所、または研究施設に関する特定のステータス（受け入れペイシェント（admitted patient、入院患者などとも言う）、研究参加者、またはその種の他のものなど）を持つ必要はない。
【００４４】
ここで使用するように、「化合物」という用語には、遊離酸、遊離塩基、およびそれらの塩が含まれる。
【００４５】
ここで使用するように、「薬剤組成物」という用語は、哺乳動物宿主に、例は、経口、局所、非経口に、吸入スプレーによって、または直腸に、慣習的な非-毒性の担体、希釈剤、補助剤、ビヒクルおよびその他同種類のものなどを含む単位投薬量調剤物において施され得る組成物を表すために使用する。ここで使用するように、「非経口」という用語には、皮下注射、静脈内、筋肉内、のう内注射、または注入技術によってのものが含まれる。
【００４６】
また、本開示の範囲内には、式（I）によって代表される化合物の個々の鏡像体またはその薬学的に許容可能な塩、ならびにそれらの任意の全体的または部分的ラセミ混合物も含まれる。本開示はまた、式（I）によって代表される化合物の個々の鏡像体またはその薬学的に許容可能な塩、ならびに一以上の立体中心が反転するそのジアステレオ異性体による混合物もカバーする。別なふうに述べない限り、ここに描く構造は、一以上の同位体濃縮（isotopically enriched）原子の存在においてだけ異なる化合物を含むことも意味する。例えば、本構造を有する化合物は、重水素またはトリチウムによっての水素原子の置換、または13C-または14C-濃縮炭素によっての炭素原子の置換を別にすれは、本開示の範囲内である。
【００４７】
ここで使用するように、「混合する（mix）」または「混合した（mixed）」または「混合物」は、二以上の組成物の任意の組合せに広く言及する。二以上の組成物は同じ物理的状態を持つ必要はなく；それゆえ、固体を、例は、スラリー、懸濁物、または溶液を形成するために、液体と「混合する」ことができる。さらに、これらの用語は組成の任意の程度の同質性または均一性を必要としない。このことで、そのような「混合物」は同質または異質であることができ、または均一または不均一であることができる。さらに、本用語は、混合することを遂行するために、任意の特定の機器、例えば、工業用ミキサーなどのようなものの使用を必要としない。
【００４８】
ここで使用するように、「随意に」は、その後に記載されるイベント（群）（event(s)、「（群）」は複数もあり得ることを示す）が発生しても、またはそうしなくてもよいことを意味する。いくらかの実施形態では、随意のイベントは発生しない。いくらかの他の実施形態では、随意のイベントは一以上の回数で発生するものである。
【００４９】
ここで使用するように、「置換した（substituted）」は、指定したモイエティーの一以上の水素原子の、指名した置換基または置換基群による置換に言及し、別なふうに述べない限り、置換が安定な、または化学的に実現可能な化合物をもたらすという条件で、複数の置換度が許容される。安定な化合物または化学的に実現可能な化合物は、水分または他の化学的に反応性の条件の不存在下に少なくとも一週間、約-80℃から約+40℃までの温度に保たれるとき、化学構造が実質変動しないものである。ここで使用するように、「一以上の・・・により置換した」または「一以上の回数置換した・・・」という語句は、上記の安定性および化学的実現可能性の条件が満たされるならば、利用可能な結合部位の数に基づいて可能な置換基の一から最大数までに等しい置換基の数に言及する。
【００５０】
ここで使用するように、「含む（comprise）」または「含む（comprises）」または「含むこと（comprising）」または「で構成された（comprised of）」は、オープンであるグループに言及し、そのグループは、明示的に列挙されたメンバーに加えて追加のメンバーを含むことができることを意味する。例えば、「Aを含む」という語句は、Aが存在しなければならないが、他のメンバーも存在することができることを意味する。用語「含む（include）」、「有する（have、もつとも言う）」、「から構成された（composed of）」、およびそれらの文法上の変形は同じ意味をもつ。対照的に、「からなる（consist of）」または「からなる（consists of）」または「からなること（consisting of）」は、閉じられるグループに言及する。例えば、「Aからなる」という語句は、Aが唯一無二でAが存在することを意味する。ここで使用するように、「から本質的になる（consist essentially of）」、「から本質的になる（consists essentially of）」、および「から本質的になること（consisting essentially of）」という語句は、オープンであるが、クレームされた主題の基本的な特徴に質料的に（materially）影響しないであろう追加の不特定の（unnamed）メンバーだけが含まれるグループに言及する。
【００５１】
ここで使用するように、「または」は、その最も広い合理的な解釈が与えられるべきであり、およびいずれか/またはの解釈（either/or construction）に制限されない。それゆえ、「AまたはBを含むこと」という語句は、Aが存在することができ、およびBはそうでなく、またはBが存在するが、およびAはそうでなく、またはAおよびBの双方が存在することを意味する。さらに、例えば、Aが複数のメンバー、例は、A1およびA2をもつことができるクラスを規定する場合、そのときそのクラスの一以上のメンバーは同時に存在することができる。
【００５２】
ここで使用するように、代表される様々な官能基は、ハイフンもしくはダッシュ（-）またはアスタリスク（*）と組み合わせて使用されるダッシュを有する官能基にて付着の点を有すると理解される。言い換えると、-CH2CH2CH3または*-CH2CH2CH3のケースでは、付着の点は左端でのCH2基であることが理解される。基がアスタリスクまたはダッシュなしで列挙される場合、そのとき付着点は列挙された基のプレーン（単純とも言う）な、および通常の意味によって指し示される。
【００５３】
ここで使用するように、多原子二価種（multi-atom bivalent species）は左から右へと読み取られる。例えば、明細またはクレームがA-D-Eを列挙し、およびDが-OC(O)-として規定される場合、Dが置き換えられた結果として得られる基は：A-OC(O)-Eであり、およびA-C(O)O-Eではない。
【００５４】
他の用語は、たとえこのサブセクションに含まれていなくても、この説明の他の構成部分において規定される。
【００５５】
修飾オリゴヌクレオチド
【００５６】
少なくとも一の態様では、本開示は式（I）：
【化５】
2020514383.tif 000007
の化合物を提供し、式中：A1は親水基、または水素原子、または有機基であり；A2はオリゴヌクレオチドモイエティーであり；X1は疎水基であり；およびX2は、直接結合、有機基、または-O-、-S-、-S(=O)-、-S(=O)2-、-S-S-、-N=、=N-、-N(H)-、-N=N-N(H)-、-N(H)-N=N-、-N(OH)-、または-N(=O)-からなる群より選ばれる基である。
【００５７】
いくらかの実施態様では、A1は有機基である。A1は任意の適切な数の炭素原子を含むことができる。いくらかの実施態様では、例えば、A1は1から100個までの炭素原子、または1から50個までの炭素原子、または1から25個までの炭素原子、または1から10個までの炭素原子、または1から6個までの炭素原子を含む。A1はまた、一以上のヘテロ原子、例えば、窒素、酸素、いおう、またはりんを含むことができる。
【００５８】
任意の上記の実施態様に従ういくらかの実施態様において、A1は親水基またはモイエティーである。親水基の非制限的な例には、以下に制限されないが、カルボン酸モイエティー、エステルモイエティー、アミドモイエティー、尿素モイエティー、アミンモイエティー、エーテルモイエティー、アルコールモイエティー、チオエーテルモイエティー、チオールモイエティー、ケトンモイエティー、アルデヒドモイエティー、スルファートモイエティー、チオスルファートモイエティー、スルファイトモイエティー、チオスルファイトモイエティー、ホスファートモイエティー、ホスホナートモイエティー、ホスフィナートモイエティー、ホスファイトモイエティー、ボラートモイエティー、またはボロナートモイエティーが含まれる。
【００５９】
任意の上記実施態様に従ういくらかの実施態様において、A1は、カルボン酸基（-COOH）、カルボキシラートアニオン（-COOH-）、またはカルボキシラートエステル（-COORa、式中、Raは有機基、例えば、アルキルまたはアルコキシラート基などのようなものである）。いくらかのそのような実施態様では、A1はカルボン酸基である。いくらかのそのような実施態様では、A1はカルボキシラートエステル基である。
【００６０】
任意の前述の実施態様に従ういくらかの実施態様において、A1は水素原子である。任意の前述の実施形態のいくらかの他の実施形態では、A1はヒドロキシル（-OH）基である。
【００６１】
任意の前記実施形態において、X1は、任意の適切な数の炭素原子を有する疎水基であることができる。いくらかの実施形態では、例えば、X1は、1から100個までの炭素原子、または1から50個までの炭素原子、または1から25個までの炭素原子を含む。
【００６２】
任意の前記実施形態のいくらかの実施形態では、X1は、C8-30ヒドロカルビレンであり、それは随意に置換される。いくらかのさらなる実施形態では、X1はC12-22ヒドロカルビレンであり、それは随意に置換される。いくらかのさらなる実施形態では、X1はC12-22アルキレンである。いくらかのさらなる実施形態では、X1は-(CH2)12-、-(CH2)14-、-(CH2)16-、-(CH2)18-、-(CH2)20-、または-(CH2)22-である。いくらかの他の実施形態では、X1は-(CH2)16-である。いくらかのさらなる実施形態では、X1はC12-22アルケニレンである。いくらかのさらなるそのような実施形態では、X1は-(CH2)7-CH=CH-(CH2)7-である。
【００６３】
任意の前記実施形態のいくらかのさらなる実施形態では、X1はC12-22ヒドロカルビレンであり、それは随意に置換される。いくらかのかかる実施形態では、X1はC12-22ヒドロカルビレンである。いくらかのさらなるかかる実施形態では、X1はC14-22ヒドロカルビレンである。いくらかのさらなるかかる実施形態では、X1はC16-22ヒドロカルビレンである。任意の前記実施形態のいくらかの実施形態では、X1はC12-22ヒドロカルビレンであり、そこでは、A1およびX2（またはX2が直接結合である場合、A2）は、少なくとも6による、または少なくとも8による、または少なくとも10による、または少なくとも12による、または少なくとも14による炭素原子で互いに分けられる。いくらかのさらなるかかる実施形態では、X1はC14-22ヒドロカルビレンであり、そこでは、A1およびX2（またはX2が直接結合の場合、A2）は、少なくとも6による、または少なくとも8による、または少なくとも10による、または少なくとも12による、または少なくとも14による炭素原子で互いに分けられる。いくらかのさらなるかかる実施形態において、X1はC16-22ヒドロカルビレンであり、そこでは、A1およびX2（またはX2が直接結合である場合、A2）は、少なくとも6による、または少なくとも8による、または少なくとも10による、または少なくとも12による、または少なくとも14による炭素原子で互いに分けられる。任意の前記実施形態のいくらかのさらなる実施形態では、X1はC12-22直鎖アルキレン、またはC14-22直鎖アルキレン、またはC16-22直鎖アルキレンである。任意の前記実施形態のいくらかのさらなる実施形態では、X1はC12-22直鎖アルケニレン、またはC14-22直鎖アルケニレン、またはC16-22直鎖アルケニレンである。
【００６４】
任意の前記実施形態のいくらかの実施形態では、X2は直接結合である。任意の前記実施形態のいくらかの他の実施形態では、X2は有機基である。いくらかの実施形態では、X2は親水基である。いくらかの実施形態では、X2はヘテロアルキレン基である。
【００６５】
任意の前記実施形態において、そこでX2が有機基であり、X2は任意の適切な数の炭素原子を含むことができる。いくらかの実施形態では、例えば、X2は1から100個までの炭素原子、または1から50個までの炭素原子、または1から25個までの炭素原子、または1から10個までの炭素原子、または1から6個までの炭素原子を含む。
【００６６】
任意の前記実施形態では、そこでX2がヘテロアルキレン基であり、X2は任意の適切な数の炭素原子を含むことができる。いくらかの実施形態では、例えば、X2は1から100個までの炭素原子、または1から50個までの炭素原子、または1から25個までの炭素原子、または1から10個までの炭素原子、または1から6個までの炭素原子を含む。
【００６７】
いくらかの前記実施形態では、X2は一定の基を含むことができる。かかる基のいくらかの非制限的な例は、X2が含むことができるもので、ポリアルキレンオキシド基、例えば、ポリエチレングリコール（PEG）および様々なポリペプチド鎖などのようなものである。
【００６８】
いくらかの実施形態では、X2は、-C(=O)-、-C≡C-、-C(H)=C(H)-、-C(=O)-O-、-O-C(=O)-、-C(=O)-NH-、-NH-C(=O)-、-NH-C(=O)-O-、-O-(C=O)-NH-、-O-C(=O)-O-、-C(=N-NH2)-、-C(=N-Rb)-(式中、Rbは水素原子またはアルキル基であり)、-C(=N-OH)-、-NH-C(=O)-NH-、-NH-C(=S)-NH-、-NH-C(=S)-O-、-O-C(=S)-NH-、-NH-C(=O)-S-、-S-C(=O)-NH-、-NH-C(=S)-S-、-S-C(=S)-NH-、および以下に示す環状構造：
【化６】
2020514383.tif 000008
からなる群より選ばれる有機基であり、式中、Rc、Rd、およびReは、それぞれ無関係に、水素原子またはC1-10アルキルである。いくらかのさらなる実施形態では、X2は-C(=O)-である。
【００６９】
いくらかの実施態様では、X2は、-O-、-S-、-S(=O)-、-S(=O)2-、-S-S-、-N=、=N-、-N(H)-、-N=N-N(H)-、-N(H)-N=N-、-N(OH)-、および-N(O)-からなる群より選ばれる基である。
【００７０】
いくらかの実施態様では、X2は、次の：-O-、-NH-、-S-や、アルキレングリコールから形成される一以上のモイエティー、アルカノールアミンから形成される一以上の単位、アミノ酸から形成される一以上の単位、およびヒドロキシ酸から形成される一以上の単位からなる群より選ばれる一以上のモイエティーを含む。それゆえ、いくらかの実施形態では、X2は、アルキレングリコール、例えば、1ないし25個のエチレングリコール単位を有する短いポリ(エチレングリコール)鎖などのようなものから形成される一以上のモイエティーを含む。いくらかの実施形態では、X2は、アミノ酸から形成される一以上のモイエティー、例えば、1ないし25個のアミノ酸単位を有するオリゴペプチド鎖などのようなものを含む。いくらかの実施形態では、X2は、ヒドロキシ酸から形成される一以上のモイエティー、例えば、グリコール酸、乳酸、またはカプロラクトンから形成されるモイエティーなどのようなものを含む。いくらかの実施形態では、X2は、1ないし25個のエチレングリコール単位を有するポリ（エチレングリコール）鎖および1ないし25個のアミノ酸単位を有するオリゴペプチド、および随意にヒドロキシ酸から形成される一以上の単位の組合せを含む。いくらかの実施形態では、X2は-O-、-S-、-NH-、または有機基であり、例えば、-C(O)-O-Z1-NH-、-C(O)-O-Z1-O-、-C(O)-O-Z1-S-などのようなものであり、式中、Z1はC1-6アルキレン基であり、それは随意に-OHによって一回以上置換される。いくらかのかかる実施形態では、Z1はエチレンである。いくらかのかかる実施形態では、Z1は-CH2-CH(OH)-CH2-である。
【００７１】
任意の上記実施形態において、X2の選定は、官能基のタイプに依存し、それを通して、化学的に不安定または不可能な化合物の作成を避けるために、それがオリゴヌクレオチドモイエティーに連結される。熟練した職人は、化学的に安定な化合物をもたらすX2およびA2の組合せを選ぶことができ、それは、少なくとも一週間、水分または他の化学反応性条件の不存在下、約-80℃から約+40℃までの温度に保たれるとき、化学構造が実質変わらない化合物である。
【００７２】
上記実施形態において、A2は、上記に示す定義に従って、任意の適切なオリゴヌクレオチドモイエティーであることができる。かかるオリゴヌクレオチドモイエティーは、任意の適切な数のヌクレオチド単位を含むことができる。いくらかの実施態様において、オリゴヌクレオチドモイエティーは、2から200までのヌクレオチド単位、または3から150までのヌクレオチド単位、または4から100までのヌクレオチド単位、または5から50までのヌクレオチド単位、または6から40までのヌクレオチド単位を含む。
【００７３】
ここで使用するように、「ヌクレオチド単位」という用語は、ホスファートベースのモイエティー、環状ヒドロキシ置換エーテルモイエティー、および窒素塩基（nitrogenous base、窒素含有塩基とも言う）から形成されるモイエティーに言及する。大抵は、ホスファートベースのモイエティーおよび窒素塩基は、環状ヒドロキシル置換エーテルの環状エーテル基の異なる位置から置換基オフ（substituents off）を形成し、およびオリゴヌクレオチドモイエティーでは、モイエティーの骨格はホスファートベースのモイエティーおよび環状ヒドロキシル置換エーテルモイエティーから形成される交互基（alternating groups）を含む。以下の式のモイエティーは、かかるヌクレオチド単位の非制限的な例を表し、そこで、G3は、窒素塩基から形成されるモイエティー、例えば、アデニンモイエティー、シトシンモイエティー、グアニンモイエティー、チミンモイエティー、またはウラシルモイエティーなどのようなものである：
【化７】
2020514383.tif 000009
【００７４】
任意の前記実施形態のいくらかの実施形態では、ホスファートベースのモイエティーは、ホスファートモイエティー、例えば、上記に示すようなものである。いくつかの実施形態では、一以上の酸素原子を、ホスホロチオアートモイエティーを形成するために、いおうによって置き換えることができる。かかるホスホロチオアートモイエティーの例には、例えば、-P(=S)(O-)-O-などのようなモイエティーが含まれる。いくらかの他の実施形態では、ホスファートのアニオン性酸素原子は、有機基、例えば、アルキルまたはアルキルオキシ基などのようなものによって置き換えられる。
【００７５】
任意の前記実施形態のいくらかの実施形態では、環状ヒドロキシ置換エーテルモイエティーは、環状リボースモイエティー（例は、上記に示すようなものなど）または2-デオキシリボースモイエティーである（そこで、リボースでの2'位置は非置換である）。双方の場合、1'位置での-OH基は窒素塩基モイエティーによって置き換えられる。いくつかの実施形態では、環状ヒドロキシ置換エーテルモイエティーはリボースモイエティーであり、そこで、2'位置でのヒドロキシル基は、有機基によって、例えば、メトキシ基、メトキシエトキシ基、またはアミノエトキシ基などのようなもので置き換えられる。いくつかの実施形態では、環状ヒドロキシ置換エーテルモイエティーはリボースモイエティーであり、そこで、2'位置でのヒドロキシル基はハロゲン原子によって、例えば、フッ素などのようなもので置き換えられる。いくらかの実施形態では、特にそこで、一定のヌクレオチド単位がオリゴヌクレオチド鎖において末端単位である場合、2'位置でのヒドロキシル基は窒素塩基によって、例えば、チミンなどのようなもので置き換えられる。いくらかのかかる実施形態では、末端ヌクレオチドのリボースまたはデオキシリボースの3'位置はヒドロキシル基である。環状ヒドロキシ置換エーテルモイエティーがリボースモイエティー、デオキシリボースモイエティー、または前述のいずれかの誘導体である実施形態では、オリゴヌクレオチドは大抵、上記に示すように、5'および3'位置を通して連結することによって形成される。いくらかのかかる実施形態では、-X2-X1-A1モイエティーは5'位置に最も近くコンジュゲートする（例は、ホスファートベースのモイエティーを介する）。
【００７６】
いくらかの実施形態では、窒素塩基モイエティーは、アデニンモイエティー、グアニンモイエティー、シトシンモイエティー、チミンモイエティー、およびウラシルモイエティーからなる群より選ばれる。いくらかの他の実施形態では、窒素塩基は、前述のものの一定のミメティック、例えば、ジヒドロウラシルなどのようなものから選ぶこともできる。アデニンおよびグアニンモイエティーは典型的に、イミダゾール環でのN-H基を介してリボースまたはデオキシリボースモイエティーに接続する。窒素塩基モイエティーの例を以下および次のページに示す。
【化８】
2020514383.tif 000010
【００７７】
任意の前記実施形態によるオリゴヌクレオチドモイエティーは、一本鎖または二本鎖であることができる。二本鎖の実施形態では、相補的オリゴヌクレオチドは、水素結合および/またはπスタッキングを介してオリゴヌクレオチドモイエティーに非共有結合する。かかる実施形態では、-X2-X1-A1モイエティーは、塩基対間の水素結合および/またはπスタッキングを介して、他の鎖（例は、ガイド鎖）に非共有結合する二つの鎖の一つ（例は、パッセンジャー鎖）にコンジュゲートする。
【００７８】
-X2-X1-A1の選定はオリゴヌクレオチドモイエティーへの接続の性質に依存することができる。
【００７９】
-X2-X1-A1がC(=O)基に、またはP(=O)基に、またはP(=S)基に接続する実施形態では大抵、オリゴヌクレオチドモイエティーに連結するときの場合にそうであるように、そのとき、-X2-X1-A1は、次の：-O-(CH2)n2-C(=O)-OH；-NH-(CH2)n2-C(=O)-OH；-NH-(C1-6アルキレン)-O-C(=O)-(CH2)n1-C(=O)-OH；-O-(C1-6アルキレン)-O-C(=O)-(CH2)n1-C(=O)-OH；-NH-(C1-6アルキレン)-O-C(=O)-(CH2)n1-C(=O)-OCH3；-O-(C1-6アルキレン)-O-C(=O)-(CH2)n1-C(=O)-OCH3；-NH-(C1-6アルキレン)-O-C(=O)-(CH2)n1-CH3；-O-(C1-6アルキレン)-O-C(=O)-(CH2)n1-CH3；-NH-(C1-6アルキレン)-C(=O)-O-[(CH2)2-O-]n3(CH2)n2-C(=O)-OH；および-O-(C1-6アルキレン)-C(=O)-O-[(CH2)2-O-]n3(CH2)n2-C(=O)-OHからなる群より選ばれ；式中、n1は12ないし24の整数であり、n2は13から25までの整数であり、およびn3は1から25までの整数である。さらにいくらかのかかる実施形態において、-X2-X1-A1は、次の：-O-(CH2)n2-C(=O)-OH；-NH-(CH2)n2-C(=O)-OH；-NH-(C1-6アルキレン)-O-C(=O)-(CH2)n1-C(=O)-OH；-O-(C1-6アルキレン)-O-C(=O)-(CH2)n1-C(=O)-OH；-NH-(C1-6アルキレン)-O-C(=O)-(CH2)n1-C(=O)-OCH3；および-O-(C1-6アルキレン)-O-C(=O)-(CH2)n1-C(=O)-OCH3からなる群より選ばれる。いくらかのさらなるかかる実施形態では、-X2-X1-A1は、次の：-O-(CH2)n2-C(=O)-OH；-NH-(CH2)n2-C(=O)-OH；-NH-(C1-6アルキレン)-O-C(=O)-(CH2)n1-C(=O)-OH；および-O-(C1-6アルキレン)-O-C(=O)-(CH2)n1-C(=O)-OHからなる群より選ばれる。任意の前記実施形態のいくらかの実施形態では、n1は14から22まで、または16から20までの整数である。任意の前記実施形態のいくらかの実施形態では、n2は15から23まで、または17から21までの整数である。任意の前記実施形態のいくらかの実施形態では、n3は1から15まで、または1から10まで、または1から6までの整数である。いくらかのかかる実施形態では、-X2-X1-A1は-O-(CH2)n3-OHであり、そこで、n3は14から26までの整数、または16から24までの整数、または18から22までの整数である。
【００８０】
任意の上記実施形態に記載される化合物は、薬学的に許容可能な塩として存在することもできる。「薬学的に許容可能な塩」という用語は、生物学的に、または別なふうに望ましくないものでない化合物の塩に言及し、および大抵は、遊離塩基を適切な有機または無機酸と反応させることによって、または酸を適切な有機または無機塩基と反応させることによって調製される。代表的な塩には、以下の塩が含まれる：酢酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重炭酸塩、重硫酸塩、重酒石酸塩、ホウ酸塩、臭化物、カルシウムエデト酸塩、カムシラート、炭酸塩、塩化物、クラブラン酸塩、クエン酸塩、二塩酸塩、エデト酸塩、エジシラート、エストラート、エシラート、フマル酸塩、グルセプタート、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリコリルアルサニラート（グリコリルアルサニル酸塩）、ヘキシルレゾルシン酸塩、ヒドラバミン（hydrabamine）、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヒドロキシナフトアート、ヨウ化物、イセチオナート、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウラート（ラウリン酸塩）、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メシラート、メチル臭化物、メチル硝酸塩、メチル硫酸塩、マレイン酸一カリウム、ムカート（ムチン酸塩）、ナプシル酸塩（napsylate）、硝酸塩（ナイトラート）、N-メチルグルカミン、シュウ酸塩、パモ酸塩（エンボナート）、パルミタート、パントテン酸塩、リン酸塩/二リン酸塩、ポリガラクツロ酸塩（polygalacturonate）、カリウム、サリチル酸塩、ナトリウム、ステアリン酸塩、塩基性酢酸塩（subacetate）、コハク酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、テオクル酸塩（テオクラート）、トシラート、トリエチオジド、トリメチルアンモニウム、および吉草酸塩である。酸性置換基、例えば、-COOHなどのようなものが存在するとき、剤形として使用するために、アンモニウム、モルホリニウム、ナトリウム、カリウム、バリウム、カルシウム塩、およびその他同種類のものなどを形成することができる。塩基性基、例えば、アミノまたは塩基性ヘテロアリールラジカル、例えば、ピリジルなどのようなものが存在するとき、酸性塩、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、りん酸塩、硫酸塩、トリフルオロ酢酸塩、トリクロロ酢酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、マレイン酸塩、ピルビン酸塩、マロン酸塩、こはく酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、マンデル酸塩、安息香酸塩、けい皮酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ピクリン酸塩、およびその他同種類のものなどを形成することができる。
【００８１】
上記の化合物は、標準的な合成方法、例えば、次の：Sudhir Agrawal（スディール・アグラワル）、Protocols for Oligonucleotides and Analogs-Synthesis and Properties（オリゴヌクレオチドおよび類似体についてのプロトコル−合成および特性）（Methods in Molecular Biology（メソッド・イン・モレキュラー・バイオロジー）、Volume 20（第20巻）、1993、Springer-Verlag New York, LLC（シュプリンガー・フェアラーク・ニュー・ヨーク社））；Piet Herdewijn（ピエト・ヘルデウィジン）、Oligonucleotide Synthesis: Methods and Applications（オリゴヌクレオチド合成：方法と応用）（Methods in Molecular Biology、Volume 288、2005、Edition 1（初版）、Humana Press（ヒュマーナ・プレス））；およびJohn Goodchild（ジョン・グッドチャイルド）、Therapeutic Oligonucleotides: Methods and Protocols（治療用オリゴヌクレオチド：方法とプロトコル）（Methods in Molecular Biology、Volume 764、2011、Edition 1、Humana Press、Springer Science + Business Media, LLC（シュプリンガー・サイエンス＋ビジネス・メディア社））において例示されるなどのようなものによって作成することができる。特定の非制限的な例を下記に実施例において示す。
【００８２】
表3（下記）は、本開示によって企図される化合物の様々な例を示す。表3は、A2-モイエティーと-X2-X1-A1との様々な組合せに言及し、それらは一緒に本開示の化合物を形成する。表1は、A2-モイエティーについて例示的なモイエティーの例を示し、そこでは、A2は示されたモイエティーであることができ、またはその薬学的に許容可能な塩でもあることができる。表2は、-X2-X1-A1について例示的なモイエティーの例を示す。表3は、表1および2からのモイエティーの非制限的な例示的組合せを示し、それは一緒になって本開示の化合物を形成することができる。表3において開示する化合物は、実施例において例示されるものと類似の方法によって、および本技術において通常の技量の者に既知の普通の合成方法によって作成することができる。そのような化合物の適切な作成方法は、次の：Sudhir Agrawal、Protocols for Oligonucleotides and Analogs - Synthesis and Properties（Methods in Molecular Biology、Volume 20、1993、Springer-Verlag New York, LLC）；Piet Herdewijn、Oligonucleotide Synthesis: Methods and Applications（Methods in Molecular Biology、Volume 288、2005、Edition 1、Humana Press）；およびJohn Goodchild、Therapeutic Oligonucleotides: Methods and Protocols（Methods in Molecular Biology、Volume 764、2011、Edition 1、Humana Press、Springer Science + Business Media, LLC）において例示される。
【００８３】
【表１】
2020514383.tif 000011
【００８４】
【表２】
2020514383.tif 000012
【００８５】
【表３】
2020514383.tif 000013
【００８６】
薬剤組成物
【００８７】
一定の態様では、先行する任意の実施形態の化合物は、任意の適切なマナーにおいて薬剤組成物に調剤し得る。大抵は、ガンの処置のための化合物として、かかる薬剤調剤物は、非経口施与のために、例えば、静脈内または動脈内投与などのようなものに適した水性調剤物である。
【００８８】
少なくとも一の態様では、本開示は、式（I）の一以上の化合物（任意の前記実施形態に従う）およびタンパク質を含む薬剤組成物を提供する。いくらかの実施形態では、タンパク質はアルブミンまたはアルブミンミメティックである。いくらかのかかる実施形態において、タンパク質はヒト血清アルブミン（HSA）またはそのミメティック、すなわち、タンパク質はその配列がHSAのものと少なくとも50％等価、またはHSAのものと少なくとも60％等価、または少なくともHSAのものと少なくとも70％等価、またはHSAのものと少なくとも80％等価、またはHSAのものと少なくとも90％等価、またはHSAのものと少なくとも95％等価、HSAのものと少なくとも97％等価、HSAのものと少なくとも99％等価である。いくらかの実施形態では、タンパク質はヒト血清アルブミンである。
【００８９】
任意の前記実施形態の一定の実施形態では、薬剤組成物はまた、担体を、例えば、液状担体などのようなものも含む。いくらかの実施形態では、担体には、水が含まれる。例えば、いくらかのかかる実施形態では、水は薬剤組成物において液状物質の合計容量に基づき、少なくとも50容量％、または少なくとも60容量％、または少なくとも70容量％、または少なくとも80容量％、または少なくとも90容量％を構成する。担体はまた、他の液状原料、例えば、非経口施与のために水性薬剤調剤物において普通に含まれる液状原料などのようなものも含むことができる。
【００９０】
水性担体を有する一定の実施形態では、式（I）の化合物は、薬剤調剤物においてタンパク質に非共有結合する。いくらかの実施形態において、式（I）の化合物およびタンパク質（例は、ヒト血清アルブミン）は、水性組成物において25℃にて少なくとも102M-1、または少なくとも103M-1、または少なくとも104M-1、または少なくとも105M-1の結合定数（Kb）により互いに非共有結合的に会合する（non-covalently associated with）。
【００９１】
水性担体を有するいくらかの実施形態では、式（I）の化合物およびタンパク質は担体によって溶媒和される。いくらかのかかる実施形態において、式（I）の化合物の組成物における少なくとも90重量％、または少なくとも95重量％、または少なくとも97重量％、または少なくとも98重量％、または少なくとも99重量％は、25℃にて水性組成物において少なくとも102M-1、または少なくとも103M-1、または少なくとも104M-1、または少なくとも105M-1の結合定数（Kb）によりタンパク質に非共有結合する。いくらかのさらなるかかる実施形態では、組成物は凝集体またはナノ粒子を実質含まない。例えば、任意の前記実施形態のいくらかの実施形態では、水性組成物におけるタンパク質-化合物（即ち、タンパク質および式（I）の一以上の化合物間の非共有結合コンジュゲート）の5重量％以下（を超えないとも言う）、または4重量％以下、または3重量％以下、または2重量％以下、または1重量％以下は、動的光散乱によって測定して、7nmより大きい半径、または5nmより大きい半径、または4nmより大きい半径をもつ。
【００９２】
式（I）の化合物は、調剤物においてタンパク質に対して任意の適切なモル比を有することができる。例えば、任意の前記実施形態のいくらかの実施形態では、式（I）の化合物のタンパク質に対するモル比は、1：10から20：1まで、または1：5から15：1まで、または1：2から10：1までに及ぶ。任意の前記実施形態のいくらかの実施形態では、式（I）の化合物のタンパク質に対するモル比は、約1：1であり、または約2：1であり、または約3：1であり、または約4：1であり、または約5：1であり、または約6：1であり、または約7：1であり、そこでは、「約」という用語はこの例では、±0.5：1を意味し、「約5：1」は4.5：1から5.5：1までの範囲に言及するようなものである。
【００９３】
少なくとも一態様では、本開示は、次のもの：化合物、それはオリゴヌクレオチドモイエティーおよびタンパク質結合モイエティーが含まれるものであり；タンパク質、そこでは、タンパク質はアルブミンまたはアルブミンミメティックであり；および担体、それには、水が含まれるものである、を含む薬剤組成物を提供する。
【００９４】
いくらかの実施形態において、タンパク質は、ヒト血清アルブミン（HSA）またはそのミメティック、即ち、その配列がHSAのものと少なくとも50％等価、またはHSAのものと少なくとも60％等価、またはHSAのものと少なくとも70％等価、またはHSAのものと少なくとも80％等価、またはHSAのものと少なくとも90％等価、またはHSAのものと少なくとも95％等価、HSAのものと少なくとも97％等価、HSAのものと少なくとも99％等価であるタンパク質である。いくらかの実施形態では、タンパク質はヒト血清アルブミンである。
【００９５】
上記のように、いくらかの実施形態では、担体には、水が含まれる。例えば、いくらかのそのような実施形態では、水は、少なくとも50容量％、または少なくとも60容量％、または少なくとも70容量％、または少なくとも80容量％、または少なくとも90容量％を、薬剤組成物における液状物質の合計容量に基づいて構成する。担体はまた、他の液状原料、例えば、非経口施与用の水性薬剤調剤物に普通に含まれる液状原料などのようなものも含むことができる。
【００９６】
一定の実施形態では、本化合物は、薬剤調剤物においてタンパク質に非共有結合する。いくらかの実施形態では、化合物およびタンパク質（例は、ヒト血清アルブミン）は、水性組成物において25℃にて少なくとも102M-1、または少なくとも103M-1、または少なくとも104M-1、または少なくとも105M-1の結合定数（Kb）により互いに非共有結合的に会合する。
【００９７】
水性担体を有するいくらかの実施形態では、化合物およびタンパク質は担体によって溶媒和される。いくらかのかかる実施形態において、組成物における式（I）の化合物の少なくとも90重量％、または少なくとも95重量％、または少なくとも97重量％、または少なくとも98重量％、または少なくとも99重量％は、水性組成物において25℃にて少なくとも102M-1、または少なくとも103M-1、または少なくとも104M-1、または少なくとも105M-1の結合定数（Kb）によりタンパク質に非共有結合する。いくらかのさらなるそのような実施形態では、組成物は凝集体またはナノ粒子を実質含まない。例えば、任意の前記実施形態のいくらかの実施形態では、水性組成物におけるタンパク質-化合物（即ち、タンパク質および式（I）の一以上の化合物間の非共有結合コンジュゲート）の5重量％以下、または4重量％以下、または3重量％以下、または2重量％以下、または1重量％以下は、動的光散乱によって測定して、7nmより大きい半径、または5nmより大きい半径、または4nmより大きい半径をもつ。
【００９８】
式（I）の化合物は、調剤物においてタンパク質に対して任意の適切なモル比を有することができる。例えば、任意の前述の実施形態のいくらかの実施形態では、式（I）の化合物対タンパク質のモル比は、1：10から20：1まで、または1：5から15：1まで、または1：2から10：1までに及ぶ。任意の前述の実施形態のいくらかの実施形態では、式（I）の化合物対タンパク質のモル比は、約1：1であり、または約2：1であり、または約3：1であり、または約4：1であり、または約5：1であり、または約6：1であり、または約7：1であり、そこでは、「約」という用語はこの例では、±0.5：1を意味し、「約5：1」は4.5：1から5.5：1までの範囲に言及するようなものである。
【００９９】
任意の前述の態様および実施形態の薬剤組成物はまた、一定の追加的な原料、例えば、非経口施与用の薬剤組成物において普通に採用されるものなどのようなものも含むことができる。
【０１００】
方法および使用
【０１０１】
任意の前述の実施形態の化合物または組成物は、ガンおよび関連障害の処置に有用である。したがって、これらの化合物および組成物は、ガン性腫瘍を有するか、または有していた対象への施与のために使用することができる。
【０１０２】
それゆえ、一定の態様では、本開示は、ガンを処置する方法を提供し、任意の前述の態様および実施形態の化合物または組成物を対象に施すことが含まれる。いくらかの実施形態では、対象はヒトである。いくらかの実施形態では、対象は、そのような処置を必要とする対象、例は、そのような処置を必要とするヒトである。
【０１０３】
いくらかの態様では、本開示は、ガン細胞においてアポトーシスを誘導する方法を提供し、ガン細胞を任意の前述の態様および実施形態の化合物または組成物と接触させることが含まれる。
【０１０４】
いくらかの態様では、本開示は、ガン性腫瘍の増殖を抑制する方法を提供し、ガン性腫瘍を任意の前述の態様および実施形態の化合物または組成物と接触させることが含まれる。
【０１０５】
いくらかの態様では、本開示は、薬としての任意の前述の態様および実施形態の化合物または組成物の使用を提供する。
【０１０６】
いくらかの態様では、本開示は、ガンを処置するための任意の前述の態様および実施形態の化合物または組成物の使用を提供する。
【０１０７】
いくらかの態様では、本開示は、薬の製造における任意の前述の態様および実施形態の化合物の使用を提供する。
【０１０８】
いくらかの態様では、本開示は、ガンを処置するための薬の製造における任意の前述の態様および実施形態の化合物の使用を提供する。
【０１０９】
併用療法
任意の前述の実施形態の化合物または組成物は、免疫療法剤と、例えば、チェックポイントインヒビター、トール（toll）様レセプターモジュレーター、および様々な抗体などのようなものと、制限されないが、アレムツズマブ、アテゾリズマブ、イピリムマブ、オファツムマブ、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、およびリツキシマブを含め、併用するとき有用である。
【実施例】
【０１１０】
以下の例は、ここに開示する化合物、組成物、および方法の一定の例示的な実施形態を示す。これらの例は、決して制限的なものと見なされるべきではない。また、これらの例は、任意の好ましい実施形態を表現するものとしてや、またはさらなる研究の任意の方向を指し示すものとしては解釈されるべきでない。
【０１１１】
それらの例は、一定の共通の化学物質についての略語を使用し得る。以下の略語は指し示される化合物に言及する。
【０１１２】
DMF=ジメチルホルムアミド
DCM=ジクロロメタン
NMR=核磁気共鳴
HPLC=高性能液体クロマトグラフィー
RP-HLPC=逆相高性能液体クロマトグラフィー
LRMS=液体クロマトグラフィー/低分解能質量分析
HRMS=液体クロマトグラフィー/高分解能質量分析
Tips=トリイソプロピルシリル
DMAP=4-(ジメチルアミノ)ピリジン
EDC=1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド
THF=テトラヒドロフラン
Dipea=N,N-ジイソプロピルエチルアミン
HATU=1-[ビス(ジメチルアミノ)メチレン]-1H-1,2,3-トリアゾロ-[4,5-b]ピリジニウム3-オキシドヘキサフルオロホスファート
DCC=N,N'-ジシクロヘキシルカルボジイミド
HSA=ヒト血清アルブミン
【０１１３】
例1−オリゴヌクレオチドの例
【０１１４】
オリゴヌクレオチドの固相合成
オリゴヌクレオチドは、第一の5'-Dmt-保護ヌクレオチドを保持する1μモルCPG（1000Å孔径、Glen Research（グレン・リサーチ））をロードした合成カラムにおいて、ABI 394 DNA/RNAシンセサイザー（Applied Biosystems（アプライド・バイオシステムズ））にて合成した。すべてのシアノエチルホスホルアミダイト（CEPAs）はGlen Researchから購入した：DNAヌクレオチドについてDmt-dT-CEPA（10-1030）、RNAヌクレオチドについてDmt-AAc-TOM-CEPA（10-3004）、Dmt-GAc-TOM-CEPA、および2'F-RNAヌクレオチドについてDmt-2'F-CAc-CEPA（10-3415）およびDmt-2'FU-CEPA（10-3430）（2'F-ピリミジンの存在はオリゴヌクレオチド配列において上付き文字Fで指し示す）。5'-アミノ-モディファイア-5（10-1905）を、パッセンジャー鎖にて末端アミンを取り付けるために使用した。3'-フルオレセイン標識配列は、3'-フルオレセイン-dT-CPG（20-2056）にて合成した。4,5-ジシアノイミダゾール（DCC）および5-(ベンジルチオ)-1H-テトラゾール（BTT）は、DNAおよびRNA/2'F-RNAそれぞれの合成のためのアクチベーター（活性化物質とも言う）として使用した。アセトニトリルにおいてTHF/ピリジン/無水酢酸（Cap Mix A）およびTHFにおいて16％1-メチルイミダゾール（Cap Mix B）によりキャッピングを実行した。各サイクルにおいて、りんは、THF/ピリジン/水において0.02Mヨウ素による処理によって酸化した。5'-トリチル保護基はすべて、DCMにおいて3％トリクロロ酢酸により開裂させた。カップリングサイクルは、次のステップ：脱トリチル化、カップリング、キャッピング、および酸化からなった。脱トリチル化時間は60秒、カップリング時間はDNAおよび5'-アミノ-モディファイアについて30秒、RNA/2'F-RNAについて180秒であった。キャッピングは5秒間実行し、酸化は15秒間行った。すべての洗浄および試薬デリバリーステップは、機器のデフォルトの合成サイクルにおいて与えられるように実行した。
【０１１５】
アミン修飾核酸の5'末端へのオクタドデカン二酸（ODDA）のコンジュゲーション
【０１１６】
カップリングの前に、Mmt-カチオンの黄色がもはや目測によって観察されなくなるまで（ca.（約）3-4.5分）、支持体に結合した十分に保護された核酸を、DCMにおいて3％トリクロロ酢酸によりフラッシュすることによって、5'-アミノモディファイアの末端Mmt保護基を開裂させた。支持体をDCMおよびアセトニトリルにより洗浄し、およびアルゴンストリーム下で短時間乾燥した。残留溶媒をデシケーターにおいて除去した。
【０１１７】
小分子とのコンジュゲーション：10当量のODDA-モノ-トリイソプロピルシリルエステル（ODDA-TIPS）、9当量のHATUおよび30当量の無水DMFでのDIPEAの溶液を、5分間予備活性化し、およびその後、5'-アミノ修飾核酸配列を伴う乾燥支持体に加えた。合成カラムを2時間振盪し、支持体をNMPおよびDCMにより洗浄し、および真空において乾燥させた。カップリング反応は、新鮮な活性化ODDA-TIPSで一回繰り返した（2h）。支持体は、未反応のカルボン酸を洗い流すために、NMPおよびDCMで広範囲に洗浄し、および真空において乾燥させた。支持体は、コンジュゲート（共役）が開裂され、および脱保護されるまでデシケーターにおいて貯蔵した。
【０１１８】
核酸コンジュゲートの固形支持体からの放出および脱保護
【０１１９】
CPG結合オリゴヌクレオチドの放出および核酸塩基の脱保護、ならびにシアノエチル保護基の除去は、AMA（30％水酸化アンモニウム、40％水性メチルアミン、1：1、v：v）に支持体を浸漬することによって行った。ピバロイル保護フルオレセイン色素が配列において存在する場合、支持体を最初に室温にて1時間30％水酸化アンモニウムにより処理して、等量の40％メチルアミン水溶液を添加する前にピバロイル保護基を除去した。固形支持体を含むAMA溶液を、室温で2時間インキュベートして、脱保護を終了させた。遠心分離後、上清を除去し、および支持体を4×200μLの水により洗浄した。組み合わせた溶液を二窒素のストリーム下で乾燥させた（2'F-RNAヌクレオチドが配列において存在する場合、熱を避ける必要がある）。2'TOM保護基を除去するため、残留物を115μLの無水DMSOに再溶解し（5分65℃）、および60μLの無水トリエチルアミンを加えた。75μLのフッ化水素トリエチルアミン錯体（NEt3×3HF）を添加し、および溶液を65℃にて2.5時間インキュベートした。後に、溶液をフリーザーにおいて短時間冷却し、および3M酢酸ナトリウムの25μLを加えた。オリゴヌクレオチドを1mLのブタノールにより沈殿させ、および-20℃にて30分間インキュベートした。懸濁物を10分間遠心分離し（12000rcf）、および上清を除去した。沈殿物を2×750μLのエタノールで洗浄し、および真空遠心分離によって短時間乾燥させた。粗オリゴヌクレオチドを水において溶解し、および分析HPLCによって分析し、およびセミ分取HPLCによって精製した。生成物を含むフラクションを真空遠心分離によって≦10mLに減らし、およびSep-Pak(R)（商標）C-18カートリッジ（Waters（ウォーターズ））を使用してオリゴヌクレオチドを脱塩した。カートリッジを10mLのアセトニトリルにより洗浄し、および10mLの水で平衡化した。オリゴヌクレオチドをロードし、10mLの水により洗浄し、約6mLの水：アセトニトリル（1：1、v：v）により溶出し、減圧下で乾燥し、および水において再溶解した。濃度はUV-vis分光法を介して定め、および生成物の同一性および純度を、分析HPLCおよびMALDI-TOF-MSによって検証した。サンプルを分注し、および-20℃にて貯蔵した。合成スキームを以下に例示する。
【０１２０】
【化９】
2020514383.tif 000014
【０１２１】
高性能液体クロマトグラフィー（HPLC）
オリゴヌクレオチドサンプルのHPLCは、55℃での、phenomenex(R) clearity 5u Oligo-RP（フェノメネックス・クラリティ・5uオリゴ-RP）カラム（セミ分取HPLCでは250×10.00mm、分析HPLCでは150×4.60mm、5ミクロン）を備えたHitachi Elite LaChrom（ヒタチ・エリート・ラクロム）機器にて実行した。吸光度を260nmにて測定した。サンプルは、溶媒A（90％の50mM酢酸トリエチルアンモニウム水溶液（pH7.0）、10％メタノール）およびB（メタノール）を使用して線状勾配（勾配I：60分において0％B→80％B、流量：4mL・分-1、勾配II：60分において0％B→70％B、流量：4mL・分-1、勾配III：60分において0％B→40％B、流量：4mL・分-1、勾配IV：60分において0％B→25％B、流量：4mL・分-1、勾配V：50分において0％B→80％B、流量：1mL・分-1、勾配VI：50分において0％B→70％B、流量：1mL・分-1、勾配VII：50分において0％B→40％B、流量：1mL・分-1、勾配VIII：50分において0％B→30％B、流量：1mL・分-1）において溶出した。
【０１２２】
マトリクス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型質量分析（MALDI-TOF-MS）
質量スペクトルは、UCSD Chemistry & Biochemistry Molecular Mass Spectrometry Facility（UCSD化学および生化学分子質量分析施設）にてBruker Biflex（ブルカー・ビフレックス）IV MALDI-TOF機器での負のモードにおいて記録した。2',4',6'-トリヒドロキシアセトフェノン一水和物（THAP）および3-ヒドロキシピコリン酸（3-HPA）の混合物をマトリクスとして使用した。3-HPAマトリクスは、25mgの3-HPAを500μLの水/アセトニトリル（1：1、v：v）において溶解し、およびこの溶液の454μLを45μLの100mg・ml-1クエン酸水素二アンモニウム水溶液により希釈することによって調製した。THAPマトリクスは、15mgのTHAPを150μLのアセトニトリルに溶解すること（飽和溶液、溶媒和は超音波処理により支援した）、およびこの溶液の100μLを、100μLの23mg・ml-1クエン酸水素二アンモニウム水溶液（69μLの100mg・ml-1クエン酸水素二アンモニウム水溶液を、231μLの水により希釈することによって取得）により希釈することによって調製した。MALDI-MS分析に先立ち、ZipTip C18ピペットチップ（Merck Millipore（メルク・ミリポア））を使用して、オリゴヌクレオチドサンプルを脱塩した。ZipTipsを水/アセトニトリル（1：1、v：v、5×10μL）で洗浄し、およびオリゴヌクレオチドを濃縮ストック溶液の吸引および放出によってZipTipに吸着させる前に（10-20×10μL）、0.1M TEAA緩衝剤（5×10μL）により平衡化させた。結合したオリゴヌクレオチドは、0.1M TEAA緩衝剤（5×10μL）により洗浄することによってアンモニウム塩に移し、水（7×10μL）により洗浄することによって脱塩し、および最終的に2.5μLのTHAPマトリクス中に放出させた。この溶液を、事前に結晶化した3-HPAマトリクス（1μL）の頂部上にスポット（1μL）した。機器は、同じターゲットプレート上にスポットした二つの購入オリゴヌクレオチドから構成される標準によりキャリブレーションした。値は質量対電荷比（m/z）において与える。
【０１２３】
核酸コンジュゲートの合成および特徴付け
【０１２４】
3'-フルオレセイン標識を有するサバイビンsiRNA ODDAコンジュゲートパッセンジャー鎖：
HOOC-(CH2)16-CONH-(CH2)2-O-(CH2)2-OPO2H-
GGACFCFACFCFGCFAUFCFUFCFUFACFAdTdTFAM-3'（1）
【０１２５】
化合物1は、核酸の固相合成のための一般的なプロトコルに従い1μモルのdTFAMをロードしたCPGにて合成し、および分取HPLCを介して精製した。
収率：OD495nm=5.2、69ナノモル、7％。
ε495nm=75000L・モル-1・cm-1、Mw=7585.0g・モル-1
分析HPLC：勾配VI。
MALDI-TOF-MS（m/z）：[M-H+]-：7581.3（算出：7584.0）、[M-2H+]2-：3785.9（算出：3791.5）。
【０１２６】
図2は精製化合物の（a）分析HPLCトレース（上部）および（b）MALDI-TOF質量スペクトル（底部）を示す。
【０１２７】
サバイビンsiRNA ODDAコンジュゲートパッセンジャー鎖：
HOOC-(CH2)16-CONH-(CH2)2-O-(CH2)2-OPO2H-
GGACFCFACFCFGCFAUFCFUFCFUFACFAdTdT-3' (2)
【０１２８】
化合物2は、核酸の固相合成のための一般的プロトコルに従い1μモルのdTロードしたCPGにて合成した。ビーズは半分に分け、およびODDA-TIPSは一般的プロトコルに従い接合した。2は分取HPLCを介して精製した。
収率：OD2605nm=10.2、44ナノモル、9％。
ε260nm=232178L・モル-1・cm-1、Mw=7073.5g・モル-1
分析HPLC：勾配VI。
MALDI-TOF-MS（m/z）：[M-H+]-：7070.6（算出：7072.5）、[M-2H+]2-：3531.4（算出：3535.8）。
【０１２９】
図3は精製化合物の（a）分析HPLCトレース（上部）および（b）MALDI-TOF質量スペクトル（底部）を示す。
【０１３０】
サバイビンsiRNA 5'-ヒドロキシル化ガイド鎖：
5'-UFGUFAGAGAUFGCFGGUFGGUFCFCFdTdT-3' (3)
【０１３１】
3は、核酸の固相合成のための一般的なプロトコルに従い1μモルのdTをロードしたCPGにて合成した。ビーズは半分に分けた。3は分取HPLCを介して5'-OH RNAとして精製した。
収量：OD260nm=16.0、64ナノモル、6％。
ε260nm=249575L・モル-1・cm-1、Mw=6758.0g・モル-1
分析HPLC：勾配VII。
MALDI-TOF-MS（m/z）：[M-H+]-：6755.8（算出：6757.0）、[M-2H+]2-：3374.9（算出：3378.0）。
【０１３２】
図4は精製化合物の（a）分析HPLCトレース（左）および（b）MALDI-TOF質量スペクトル（右）を示す。
【０１３３】
ODDA-RNA-HSA複合体の調剤
新たに構成されたHSA（最終濃度600μM）を含むPBS緩衝剤（最終濃度1×）において、一本鎖または二本鎖RNAを望ましい濃度（ゲルシフトアッセイについて：10μM、循環時間研究について：75μM）に溶解した。平衡を確実にするため溶液を夜通し室温にてインキュベートした。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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