(57)【要約】  本出願はウィルムス（Ｗｉｌｍｓ）腫瘍タンパク１（ＷＴ１）発現細胞を示している被験者を治療する方法について開示している。典型的には、前記方法は、抗ＷＴ１抗原結合ユニットまたはキメラ抗原受容体の免疫応答細胞を、必要とする被験者に用いて腫瘍細胞を殺傷するものである。【選択図】図１
2020523985.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗原結合ユニットであって、軽鎖ＣＤＲ及び重鎖ＣＤＲを含み、
前記抗原結合ユニットは、ＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドに特異的に結合し、前記ＷＴ１ペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列有し、及び
前記抗原結合ユニットは、ＨＬＡと複合している参照ペプチドとは顕著な結合を示さず、前記参照ペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９のアミノ酸配列を有するものであることを特徴とする、前記抗原結合ユニット。
【請求項２】
抗原結合ユニットであり、軽鎖ＣＤＲ及び重鎖ＣＤＲを含み、
前記抗原結合ユニットはＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドに特異的に結合し、前記ＷＴ１ペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列有し、及び
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０のアミノ酸配列を有する参照抗原結合ユニットと比較した場合、前記抗原結合ユニットはＨＬＡと複合している参照ペプチドとより少ない非特異性結合を示し、前記参照ペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９のアミノ酸配列を有するものであることを特徴とする、前記抗原結合ユニット。
【請求項３】
前記ＨＬＡは、ＨＬＡ−Ａ２を含むことを特徴とする、請求項１または２に記載の抗原結合ユニット。
【請求項４】
ＨＬＡと複合している参照ペプチドとの結合レベルは、
ＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドとの結合レベルの１０％を超えないことを特徴とする、請求項１または２に記載の抗原結合ユニット。
【請求項５】
結合特異性は、ＦＡＣＳによって測定されることを特徴とする、請求項４に記載の抗原結合ユニット。
【請求項６】
前記結合特異性は、ＥＬＩＳＡによって測定されることを特徴とする、請求項４に記載の抗原結合ユニット。
【請求項７】
前記抗原結合ユニットは、１．５ｎＭ未満のＫDを示すことを特徴とする、請求項１または２に記載の抗原結合ユニット。
【請求項８】
前記抗原結合ユニットは、５０ｐＭ未満のＫDを示すことを特徴とする、請求項１または２に記載の抗原結合ユニット。
【請求項９】
前記軽鎖ＣＤＲはＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、前記重鎖ＣＤＲはＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、
前記ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５−７及び１１−１５からなるグループから選ばれる配列を有し、及び
前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２−４、８−１０及び１６−１７からなるグループから選ばれる配列を有することを特徴とする、
請求項１または２に記載の抗原結合ユニット。
【請求項１０】
前記軽鎖ＣＤＲは、
ａ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７；
ｂ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３；並びに
ｃ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３
上記ＬＣＤＲ配列の組み合わせから選ばれるアミノ酸配列を含むことを特徴とする、請求項９に記載の抗原結合ユニット。
【請求項１１】
前記重鎖ＣＤＲは、
ａ．ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４；
ｂ．ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０；
ｃ．ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０；並びに
ｄ．ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０
上記ＨＣＤＲ配列の組み合わせから選ばれるアミノ酸配列を含むことを特徴とする、請求項９に記載の抗原結合ユニット。
【請求項１２】
前記抗原結合ユニットは、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、多価抗体またはキメラ抗原受容体であることを特徴とする、請求項１または２に記載の抗原結合ユニット。
【請求項１３】
前記抗原結合ユニットは、ｓＦｃ、Ｆｖ、Ｆａｂまたは（Ｆａｂ）２であることを特徴とする、請求項１または２に記載の抗原結合ユニット。
【請求項１４】
抗原結合ユニットであって、軽鎖ＣＤＲ及び重鎖ＣＤＲを含み、
前記軽鎖ＣＤＲはＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、前記重鎖ＣＤＲはＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、
前記ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５−７及び１１−１５からなるグループから選ばれる配列と少なくとも８０％の配列相同性を有する配列を含み、
前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２−４、８−１０及び１６−１７からなるグループから選ばれる配列と少なくとも８０％の配列相同性を有する配列を含むことを特徴とする、前記抗原結合ユニット。
【請求項１５】
前記軽鎖ＣＤＲはＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、前記重鎖ＣＤＲはＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、
前記ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５−７及び１１−１５からなるグループから選ばれる配列を有し、及び
前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２−４、８−１０及び１６−１７からなるグループから選ばれる配列を有することを特徴とする、請求項１４に記載の抗原結合ユニット。
【請求項１６】
前記軽鎖ＣＤＲは、
ａ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７；
ｂ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３；並びに
ｃ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３
上記ＬＣＤＲ配列の組み合わせから選ばれるアミノ酸配列を含むことを特徴とする、請求項１４に記載の抗原結合ユニット。
【請求項１７】
前記重鎖ＣＤＲは、
ａ．ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４；
ｂ．ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０；
ｃ．ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０；並びに
ｄ．ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０
上記ＨＣＤＲ配列の組み合わせから選ばれるアミノ酸配列を含むことを特徴とする、請求項１４に記載の抗原結合ユニット。
【請求項１８】
前記抗原結合ユニットは、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体またはキメラ抗原受容体であることを特徴とする、請求項１４に記載の抗原結合ユニット。
【請求項１９】
前記抗原結合ユニットは、ｓＦｃ、Ｆｖ、Ｆａｂまたは（Ｆａｂ）２であることを特徴とする、請求項１４に記載の抗原結合ユニット。
【請求項２０】
キメラ抗原受容体であって、細胞外抗原結合ユニット、膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインを含み、
前記細胞外抗原結合ユニットは、ＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドに特異的に結合し、前記ＷＴ１ペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列有し、及び
前記細胞外抗原結合ユニットは、ＨＬＡと複合している参照ペプチドとは顕著な結合を示さず、前記参照ペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９のアミノ酸配列を有することを特徴とする、前記キメラ抗原受容体。
【請求項２１】
キメラ抗原結合受容体であって、細胞外抗原結合ユニット、膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインを含み、
前記細胞外抗原結合ユニットはＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドに特異的に結合し、前記ＷＴ１ペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列有し、及び
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０のアミノ酸配列を有する参照抗原結合ユニットと比較した場合、前記細胞外抗原結合ユニットはＨＬＡと複合している参照ペプチドとより少ない非特異性結合を示し、前記参照ペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９のアミノ酸配列を有するものであることを特徴とする、前記抗原結合ユニット。
【請求項２２】
前記細胞外抗原結合ユニットは、軽鎖ＣＤＲ及び重鎖ＣＤＲを含み、及び
前記軽鎖ＣＤＲはＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、前記重鎖ＣＤＲはＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、
前記ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５−７及び１１−１５からなるグループから選ばれる配列を有し、及び
前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２−４、８−１０及び１６−１７からなるグループから選ばれる配列を有することを特徴とする、請求項２０または２１に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項２３】
前記軽鎖ＣＤＲは、
ａ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７；
ｂ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３；並びに
ｃ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３
上記ＬＣＤＲ配列の組み合わせから選ばれるアミノ酸配列を含むことを特徴とする、請求項２２に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項２４】
前記重鎖ＣＤＲは、
ａ．ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４；
ｂ．ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０；
ｃ．ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０；並びに
ｄ．ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０
上記ＨＣＤＲ配列の組み合わせから選ばれるアミノ酸配列を含むことを特徴とする、請求項２２に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項２５】
前記細胞内ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６のアミノ酸配列を含むことを特徴とする、請求項２０または２１に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項２６】
前記キメラ抗原受容体は、ＷＴ１、またはＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドを含む細胞の細胞毒性を誘導するものであることを特徴とする、請求項２０または２１に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項２７】
キメラ抗原受容体と標的細胞の比が２０：１、１０：１、５：１、３：１、２．５：１、１：１または１：３である場合、細胞毒性のレベルは少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％または４５％であることを特徴とする、請求項２６に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項２８】
請求項１〜１９のいずれかに記載の抗原結合ユニットまたは請求項２０〜２７のいずれかに記載のキメラ抗原受容体、及び薬学上許容される賦形剤を含む、医薬品組成物。
【請求項２９】
請求項１〜１９のいずれかに記載の抗原結合ユニットまたは請求項２０〜２７のいずれかに記載のキメラ抗原受容体をコードするものである、分離された核酸。
【請求項３０】
請求項１〜１９のいずれかに記載の抗原結合ユニットまたは請求項２０〜２７のいずれかに記載のキメラ抗原受容体をコードする核酸配列を含む、ベクター。
【請求項３１】
請求項１〜１９のいずれかに記載の抗原結合ユニットまたは請求項２０〜２７のいずれかに記載のキメラ抗原受容体を発現する、宿主細胞。
【請求項３２】
請求項１〜１９のいずれかに記載の抗原結合ユニットまたは請求項２０〜２７のいずれかに記載のキメラ抗原受容体をコードする核酸を含む、宿主細胞。
【請求項３３】
請求項１〜１９のいずれかに記載の抗原結合ユニットを生産する方法であって、
前記抗原結合ユニットの発現に適した条件下において請求項３１または３２の宿主細胞を培養すること、及び、前記宿主細胞が発現する前記抗原結合ユニットを分離することを含む、前記方法。
【請求項３４】
前記抗原結合ユニットの発現に適した条件下において請求項３１または３２の宿主細胞を培養すること、及び、前記宿主細胞が発現する前記抗原結合ユニットを分離することを含む、請求項２０〜２７のいずれかに記載のキメラ抗原受容体を生産する方法。
【請求項３５】
前記細胞と請求項２０〜２７のいずれかに記載のキメラ抗原受容体とを接触させることを含む、前記ＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドを含む細胞の細胞死を誘導する方法。
【請求項３６】
前記細胞と前記キメラ抗原受容体とを体内において接触させることを特徴とする、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記細胞と前記キメラ抗原受容体とを体外において接触させることを特徴とする、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
前記細胞は、がん細胞であることを特徴とする、請求項３５に記載の方法。
【請求項３９】
前記細胞は、血液がん細胞または固形腫瘍細胞であることを特徴とする、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記細胞は、腎芽腫細胞、結腸がん細胞、直腸がん細胞、卵巣がん細胞、慢性骨髄性白血病細胞または腸がん細胞であることを特徴とする、請求項３８に記載の方法。
【請求項４１】
前記細胞は、中皮腫の細胞であることを特徴とする、請求項３８に記載の方法。
【請求項４２】
前記標的細胞に請求項３１または３２の複数の宿主細胞を施用することを含み、
類似量の前記抗原結合ユニット、キメラ抗原受容体またはそれらをコードする核酸を有しない宿主細胞を施用することに比べ、複数の宿主細胞を前記標的細胞に施用することにより、より大きく標的細胞のアポトーシスを誘導したことを特徴とする、標的細胞の細胞死を誘導する方法。
【請求項４３】
前記複数の宿主細胞を体内において前記標的細胞に施用する、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記複数の宿主細胞を体外において前記標的細胞に施用する、請求項４２に記載の方法。
【請求項４５】
前記標的細胞は、がん細胞であることを特徴とする、請求項４２に記載の方法。
【請求項４６】
前記がん細胞は、血液がん細胞または固形腫瘍細胞であることを特徴とする、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記細胞は、腎芽腫細胞、結腸がん細胞、直腸がん細胞、卵巣がん細胞、慢性骨髄性白血病細胞または腸がん細胞であることを特徴とする、請求項４５に記載の方法。
【請求項４８】
前記細胞は、中皮腫の細胞であることを特徴とする、請求項４５に記載の方法。
【請求項４９】
前記被験者に対して有効量の請求項２０−２７のいずれかに記載のキメラ抗原受容体を施用することを含み、前記キメラ抗原受容体はがん細胞の細胞死を誘導することを特徴とする、治療を必要とする被験者のがんを治療する方法。
【請求項５０】
前記被験者に対して有効量の請求項１−１９のいずれかに記載の抗原結合ユニットまたは請求項２０―２７のいずれかに記載のキメラ抗原受容体を施用することを含む、治療を必要とする被験者のがんを治療する方法。
【請求項５１】
前記被験者に対して有効量の請求項２８の医薬品組成物を施用することを含む、治療を必要とする被験者のがんを治療する方法。
【請求項５２】
前記がん細胞は、血液がんまたは固形腫瘍であることを特徴とする、請求項４９―５１のいずれかに記載の方法。
【請求項５３】
前記がんは、中皮腫であることを特徴とする、請求項４９−５１のいずれかに記載の方法。
【請求項５４】
前記がんは、腎芽腫、結腸がん、直腸がん、卵巣がん、慢性骨髄性白血病または腸がんであることを特徴とする、請求項４９―５１のいずれかに記載の方法。
【請求項５５】
請求項２０―２７のいずれかに記載のキメラ抗原受容体及びＩＬ−１２を含む、免疫応答細胞。
【請求項５６】
前記ＩＬ−１２は、前記免疫応答細胞の表面上に発現することを特徴とする、請求項５５に記載の免疫応答細胞。
【請求項５７】
前記ＩＬ−１２は、前記免疫応答細胞内において発現することを特徴とする、請求項５５に記載の免疫応答細胞。
【請求項５８】
前記免疫応答細胞は、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％または少なくとも６０％の細胞毒性を有することを特徴とする、請求項５５に記載の免疫応答細胞。
【請求項５９】
前記免疫応答細胞は、エフェクター：ターゲット（Ｅ：Ｔ）比が５：１、１０：１、１５：１、２０：１またはそれらの組み合わせのとき、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％または少なくとも６０％の細胞毒性を示すことを特徴とする、請求項５８に記載の免疫応答細胞。
【請求項６０】
前記免疫応答細胞は、標的細胞中において細胞死を誘導することを特徴とする、請求項５５に記載の免疫応答細胞。
【請求項６１】
前記標的細胞は、ＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドを含むことを特徴とする、請求項６０に記載の免疫応答細胞。
【請求項６２】
前記被験者に対して有効量の請求項５５の免疫応答細胞を施用することを含む、必要とする被験者に対してＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドを含む細胞の細胞死を誘導する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
相互引用
本出願は２０１７年５月３１日に提出された国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＣＮ２０１７／０８６６０６号の利益を要求し、当該出願は引用により本明細書に併合される。
【背景技術】
【０００２】
がんは世界中において社会に対して重大な影響を及ぼすものである。２０１６年、米国のみにおいても、１，６８５，２１０件の新しいがん症例が診断され、且つ５９５，６９０人が該疾患のために死亡していると推測される。Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ（Ｅｒｉｋｓｏｎ  ２００７）によれば、２０２０年までに、１８２０万人の米国人（１９人に１人）はがん患者またはがん生存者となり、２００５年の時は１１７０万人であった（２６人に１人）。
【０００３】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は抗原の組換え受容体であり、単一の分子中で、Ｔ細胞及び他の免疫細胞の特異性及び機能を新たに定義する。がん免疫治療における応用では、能動免疫の障碍を回避し、速やかに腫瘍を標的とするＴ細胞が生成される。細胞中で一旦発現されれば、ＣＡＲによって修飾される細胞は被験者の体内において即効且つ長期的な作用を発揮できる。
【０００４】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法は、がん患者のＴ細胞を編集して彼らの腫瘍を識別させるもので、血液がんの治療に対して有効であることが示されている。最近の臨床実験において、ＣＡＲ Ｔ細胞療法は大いに末期血液がん（治療できない形の白血病及びリンパ腫を除く）患者の予後を改善している。逆に、ＣＡＲ−Ｔ細胞は固形腫瘍の背景下においては一連の独特なチャレンジに臨んでいる。これらのチャレンジは、明確に腫瘍及び正常組織上における発現に区別がある抗原を識別することを含み、且つ腫瘍内の腫瘍細胞を効果的に殺傷し、これにより腫瘍の大きさを減少させることを含む。
【発明の概要】
【０００５】
複数種類の固形腫瘍の代替療法及び有効療法が切実に望まれている。本発明はこれらのニーズを満たし、さらに関連のメリットを提供している。
【０００６】
そのため、本発明は抗原結合ユニット（ａｎｔｉｇｅｎ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｕｎｉｔ）を開示し、それは軽鎖ＣＤＲ及び重鎖ＣＤＲを含み、前記抗原結合ユニットはＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドに特異的に結合し、そのうち前記ＷＴ１ペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列有し、且つ前記抗原結合ユニットは、ＨＬＡと複合している参照ペプチド（ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ｐｅｐｔｉｄｅ）とは顕著な結合を示さず、そのうち前記参照ペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９のアミノ酸配列を有する。本明細書はさらに抗原結合ユニットについて開示し、それは軽鎖ＣＤＲ及び重鎖ＣＤＲを含み、前記抗原結合ユニットはＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドに特異的に結合し、そのうち前記ＷＴ１ペプチドはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸配列有し、且つＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６０のアミノ酸配列を有する参照抗原結合ユニットに比較して、前記抗原結合ユニットはより少ないＨＬＡと複合している参照ペプチドとの非特異性結合を示し、前記参照ペプチドはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５８またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９のアミノ酸配列を有する。幾つかの場合において、前記ＨＬＡはＨＬＡ−Ａ２を含む。幾つかの場合において、ＨＬＡと複合している参照ペプチドとの結合レベル（ｂｉｎｄｉｎｇ  ｌｅｖｅｌ）は以下とすることができる：ＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドの結合レベルの１０％。幾つかの場合において、結合特異性はＦＡＣＳ（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｃｅｌｌ  ｓｏｒｔｉｎｇ）によって測定できる。幾つかの場合において、前記結合特異性はＥＬＩＳＡによって測定できる。幾つかの場合において、前記抗原結合ユニットは１．５ｎＭ未満のＫＤを示すものである。幾つかの場合において、前記抗原結合ユニットは５０ｐＭ未満のＫＤを示すものである。幾つかの場合において、前記軽鎖ＣＤＲはＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む；前記重鎖ＣＤＲはＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む；そのうち前記ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５−７及び１１−１５からなるグループから選ばれる配列を有する、前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２−４、８−１０及び１６−１７からなるグループから選ばれる配列を有する。幾つかの場合において、前記軽鎖ＣＤＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３；及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３のＬＣＤＲ配列の組み合わせから選ばれるアミノ酸配列を含む。幾つかの場合において、前記重鎖ＣＤＲは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０；及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０のＨＣＤＲ配列の組み合わせから選ばれるアミノ酸配列を含む。幾つかの場合において、前記抗原��合ユニットはモノクローナル抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体またはキメラ抗原受容体とすることができる。幾つかの場合において、前記抗原結合ユニットはｓＦｃ、Ｆｖ、Ｆａｂまたは（Ｆａｂ）２とすることができる。
【０００７】
本明細書は抗原結合ユニットについて開示し、軽鎖ＣＤＲ及び重鎖ＣＤＲを含み、そのうち前記軽鎖ＣＤＲはＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、前記重鎖ＣＤＲはＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、そのうち前記ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５−７及び１１−１５からなるグループから選ばれる配列と少なくとも８０％の配列相同性を有する配列を含み、前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２−４、８−１０及び１６−１７からなるグループから選ばれる配列と少なくとも８０％の配列相同性を有する配列を含む。幾つかの場合において、前記軽鎖ＣＤＲはＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み；前記重鎖ＣＤＲはＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３はそれぞれ下記からなるグループから選ばれる配列を有する：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５−７及び１１−１５、そのうち前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３はそれぞれ下記からなるグループから選ばれる配列を含む；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２−４、８−１０及び１６−１７。幾つかの場合において、前記軽鎖ＣＤＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３；及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３のＬＣＤＲ配列の組み合わせから選ばれるアミノ酸配列を含む。幾つかの場合において、前記重鎖ＣＤＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０；及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０のＨＣＤＲ配列の組み合わせから選ばれるアミノ酸配列を含む。幾つかの場合において、前記抗原結合ユニットはモノクローナル抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、多価抗体またはキメラ抗原受容体とすることができる。幾つかの場合において、前記抗原結合ユニットはｓＦｃ、Ｆｖ、Ｆａｂまたは（Ｆａｂ）２である。
【０００８】
本明細書はキメラ抗原受容体について開示し、細胞外抗原結合ユニット、膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインを含み、前記細胞外抗原結合ユニットはＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドに特異的に結合し、そのうち前記ＷＴ１ペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列有し、及び前記抗原結合ユニットは、ＨＬＡと複合している参照ペプチド（ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ｐｅｐｔｉｄｅ）とは顕著な結合を示さず、そのうち前記参照ペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９のアミノ酸配列を有するものである。本明細書はキメラ抗原受容体について開示し、細胞外抗原結合ユニット、膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインを含み、前記細胞外抗原結合ユニットはＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドに特異的に結合し、そのうち前記ＷＴ１ペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列有し、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０のアミノ酸配列を有する参照抗原結合ユニットと比較した場合、前記細胞外抗原結合ユニットはＨＬＡと複合している参照ペプチドとより少ない非特異性結合を示し、そのうち前記参照ペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９のアミノ酸配列を有するものである。幾つかの場合において、前記細胞外抗原結合ユニットは、軽鎖ＣＤＲ及び重鎖ＣＤＲを含み、且つ、そのうち前記軽鎖ＣＤＲはＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、前記重鎖ＣＤＲはＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、そのうち前記ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５−７及び１１−１５からなるグループから選ばれる配列を有し、及びそのうち前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２−４、８−１０及び１６−１７からなるグループから選ばれる配列を有する。幾つかの場合において、前記軽鎖ＣＤＲは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３；及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３のＬＣＤＲ配列の組み合わせから選ばれるアミノ酸配列を含む。幾つかの場合において、前記重鎖ＣＤＲは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０；及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０のＨＣＤＲ配列の組み合わせから選ばれるアミノ酸配列を含む。幾つかの場合において、前記細胞内ドメインはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６のアミノ酸配列を含む。幾つかの場合において、前記キメラ抗原受容体は、ＷＴ１、またはＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドを含む細胞の細胞毒性を誘導する。幾つかの場合において、キメラ抗原受容体と標的細胞の比が２０：１、１０：１、５：１、３：１、２．５：１、１：１または１：３である場合、細胞毒性のレベルは少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％��３５％、４０％または４５％である。
【０００９】
本明細書は医薬品組成物について開示し、本明細書が開示する抗原結合ユニット、または本明細書が開示するキメラ抗原受容体、及び薬学上許容される賦形剤を含む。本明細書は分離された核酸について開示し、該核酸は本明細書において開示された抗原結合ユニットまたは本明細書において開示されたキメラ抗原受容体をコードするものである。本明細書はベクターについて開示し、該ベクターは本明細書が開示した抗原結合ユニットまたは本明細書が開示したキメラ抗原受容体をコードする核酸を含むものである。本明細書は宿主細胞について開示し、本明細書が開示する抗原結合ユニットまたは本明細書が開示するキメラ抗原受容体を発現するものである。本明細書は宿主細胞について開示し、本明細書が開示する抗原結合ユニットまたは本明細書が開示するキメラ抗原受容体をコードする核酸を含むものである。本明細書は本明細書が開示する抗原結合ユニットを生産する方法を開示し、前記抗原結合ユニットの発現に適した条件下において本明細書が開示する宿主細胞を培養すること、及び、前記宿主細胞が発現している前記抗原結合ユニットを分離することを含む。本明細書はキメラ抗原受容体を生産する方法を開示し、前記キメラ抗原受容体の発現に適した条件下において宿主細胞を培養すること、及び、前記宿主細胞が発現した前記機キメラ抗原受容体を分離することを含む。
【００１０】
本明細書は前記ＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドを含む細胞の細胞死を誘導する方法を開示し、前記方法は前記細胞と本明細書が開示するキメラ抗原受容体とを接触させることを含む。幾つかの場合において、前記細胞と前記キメラ抗原受容体を体内において接触させる。幾つかの場合において、前記細胞と前記キメラ抗原受容体を体外において接触させる。幾つかの場合において、前記細胞はがん細胞とすることができる。幾つかの場合において、前記細胞は血液がん細胞または固形腫瘍細胞とすることができる。幾つかの場合において、前記細胞は腎芽腫細胞、結腸がん細胞、直腸がん細胞、卵巣がん細胞、慢性骨髄性白血病細胞または腸がん細胞とすることができる。幾つかの場合において、前記細胞は中皮腫の細胞とすることができる。
【００１１】
本明細書は標的細胞の細胞死を誘導する方法を開示し、前記方法は複数の本明細書が開示する宿主細胞を前記標的細胞に施用することを含み、類似量の前記抗原結合ユニット、キメラ抗原受容体またはそれらをコードする核酸を有しない宿主細胞を施用することに比較して、複数の宿主細胞を前記標的細胞に施用することでより大きく標的細胞の細胞死を誘導する。幾つかの場合において、前記複数の宿主細胞を体内において前記標的細胞に施用できる。幾つかの場合において、前記複数の宿主細胞を体外において前記標的細胞に施用できる。幾つかの場合において、前記標的細胞はがん細胞とすることができる。幾つかの場合において、前記がん細胞は血液がん細胞または固形腫瘍細胞とすることができる。幾つかの場合において、前記細胞は腎芽腫細胞、結腸がん細胞、直腸がん細胞、卵巣がん細胞、慢性骨髄性白血病細胞または腸がん細胞とすることができる。幾つかの場合において、前記細胞は中皮腫の細胞とすることができる。
【００１２】
本明細書は治療を必要とする被験者のがんを治療する方法について開示し、前記方法は前記被験者に対して有効量の本明細書が開示するキメラ抗原受容体を施用することを含み、前記キメラ抗原受容体はがん細胞の死亡を誘導するものである。本明細書は治療を必要とする被験者のがんを治療する方法について開示し、前記方法は前記被験者に対して有効量の本明細書が開示する抗原結合ユニットまたは本明細書が開示するキメラ抗原受容体を施用することを含む。本明細書は治療を必要とする被験者のがんを治療する方法について開示し、前記方法は前記被験者に対して有効量の本明細書が開示する医薬品組成物を施用することを含む。幾つかの場合において、前記がんは血液がんまたは固形腫瘍である。幾つかの場合において、前記がんは中皮腫とすることができる。幾つかの場合において、前記がんは腎芽腫、結腸がん、直腸がん、卵巣がん、慢性骨髄性白血病または腸がんとすることができる。
【００１３】
本明細書は免疫応答細胞について開示し、本明細書に記載のキメラ抗原受容体及びＩＬ−１２を含む。幾つかの場合において、前記ＩＬ−１２は免疫応答細胞の表面上において発現される。他の場合において、前記ＩＬ−１２は前記免疫細胞内に発現される。幾つかの実施形態において、前記免疫応答細胞（本明細書に記載のキメラ抗原受容体及びＩＬ−１２を含む）は少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％または少なくとも６０％の細胞毒性を有する。幾つかの場合において、前記免疫応答細胞は、エフェクター：ターゲット（Ｅ：Ｔ）比が５：１、１０：１、１５：１、２０：１またはそれらの組み合わせであるとき、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％または少なくとも６０％の細胞毒性を有する。本明細書に記載の前記キメラ抗原受容体及びＩＬ−１２を含む免疫応答細胞は標的細胞において細胞死を誘導できる。幾つかの場合において、前記標的細胞はＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドを含む。且つ本明細書は、必要とする被験者中にＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドを含む細胞の細胞死を誘導する方法を含み、前記方法は、前記被験者に対して有効量の免疫応答細胞を施用することを含み、当該免疫応答細胞は本明細書に記載のキメラ抗原受容体とＩＬ−１２を含むものである。
【００１４】
（引用により併入）
本明細書中におけるすべての出版物、特許及び特許出願はいずれも引用により、それぞれの出版物、特許及び特許出願が具体的でかつ単独で指摘する引用の程度により併入される。本明細書中の用語及び併入された引用文献の用語が矛盾する場合、本明細書中の用語を基準とする。
【００１５】
付属する請求項において本明細書が開示する新規の特徴について記載している。本明細書が開示する特徴及びメリットは以下の例に示される実施形態（本開示の原理を利用して）及び図面の詳細な説明を通して、より良く理解できる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】ＨＬＡ．Ａ０２０１−ＢＳＰ遺伝子を融合するドラフトを描いたものである。
【図２】図２Ａ及び図２Ｂはそれぞれ分離されたポリペプチドのクロマトグラム及びアガロースゲル精製実施例を示したものである。
【図３】図３はＥＬＩＳＡ測定の実施例データを示したものである。
【図４】図４は結合アッセイの実施例データを示したものである。
【図５】図５はＥＬＩＳＡ測定の実施例データを示したものである。
【図６】図６は選択される抗原結合ユニットの配列の比較を示したものである。
【図７】図７はＫＤ実験の実施例データを示したものである。
【図８】図８は結合アッセイの実施例データを示したものである。
【図９】図９はポリペプチド精製結果の実施例を示したものである。
【図１０】図１０Ａ及び図１０Ｂは細胞毒性実験の実施例データを示したものである。
【図１１】図１１はＩＬ−１２を発現するＣＡＲ−Ｔ細胞遺伝子構築体の実施例を示したものである。
【図１２】図１２Ａ、図１２Ｂ及び図１２ＣはＩＬ−１２を発現するＣＡＲ Ｔ細胞の細胞毒性実験の実施例データを示したものである。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
以下の記載及び実例は本明細書が開示する実施形態を詳細に示したものである。以下のように理解すべきである。本開示は本明細書に記載の特定の実施形態に限定されず、さらに変更可能である。当業者は以下のように考えるべきである。本開示には多くの変更及び修正があり、これらはその範囲にカバーされるものである。別途説明する場合を除き、如何なる実施形態も他の実施形態と組み合わせることができる。
【００１８】
本明細書に使用のように、別途説明する場合を除き、本明細書の幾つかの発明実施形態は数値範囲を考慮する。本発明は多くの場合範囲の形で示すことができる。以下のように理解すべきである。範囲という形は利便性及び簡潔さだけのためであり、本発明の範囲に対する制限と解釈するべきではない。そのため、この範囲に対する記載は具体的に、すべての可能なサブ範囲及び該範囲内の単一の数値を示すと見なされ、明確に記載したのと同じである。例えば、範囲が１〜６という記載は、そのサブ範囲を公開したと見なされ、例えば１〜３、１〜４、１〜５、２〜４、２〜６、３〜６等、及びこの範囲の単一の数字、例えば１、２、３、４、５及び６を開示したと見なされる。範囲の広さに係わらず、適用される。範囲が存在する場合、該範囲は範囲の境界値（端点）を含む。
【００１９】
＜定義＞
本明細書において使用されるものは、別途説明する場合を除き、冠詞「ａ」は一つまたは複数を指し、別途明確な説明がある場合は除く。
【００２０】
本明細書において使用されるものに、別途説明する場合を除き、用語の例えば「含む（ｃｏｎｔａｉｎ）」「含有（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」「含み（ｉｎｃｌｕｄｅ）」「からなる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」は「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」を意味する。
【００２１】
本明細書において使用されるものに、用語の「活性化」（または「活化」）及びその文法上の同義語は細胞が静止状態から活動状態に変わる過程を示す。該過程は抗原に対する反応、遷移及び／または表現型または遺伝的に機能上の活動状態になることを言う。例えば、用語の「活性化」とは、Ｔ細胞が活性化するステップごとの過程を言う。例えば、Ｔ細胞が完全に活性化されるには、少なくとも二つのシグナルを必要とする。第一シグナルはＴＣＲと抗原−ＭＨＣ複合体のコンジュゲーション後に発生し、第二シグナルは共刺激分子のコンジュゲーションにより発生する（表４）。体外において、抗ＣＤ３は第一シグナルをシミュレーションし、抗ＣＤ２８は第二シグナルをシミュレーションすることができる。例えば、エンジニアリング（遺伝子操作）によって改造されるＴ細胞は発現されるＣＡＲによって活性化されることができる。本明細書に使用される「Ｔ細胞活性化」または「Ｔ細胞トリガー」は、充分に刺激され、これにより測定可能な細胞増殖、サイトカイン生産及び／または測定可能なエフェクター機能のＴ細胞を誘導することを言う。
【００２２】
本明細書において使用される、用語の「抗原結合ユニット」とは、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン分子の免疫学活性部分を指し、即ち、抗原と特異的に結合する（抗原と免疫反応を示す）抗原結合部位を含む分子である。用語の「抗原結合ユニット」にカバーされるのは複数の種（ｓｐｅｃｉｅｓ）に由来する免疫グロブリンを示し、これらの種は無脊髄動物及び脊髄動物を含む。構造上において、最も簡単な自然発生の抗体（例えばＩｇＧ）はジスルフィド結合によって互いに連結する４つのポリペプチド鎖、二つの重（Ｈ）鎖及び二つの軽（Ｌ）鎖を含む。免疫グロブリンはマクロ分子を代表し、複数タイプの分子を含み、例えばＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ及びＩｇＥである。用語の「免疫グロブリン分子」は例えばハイブリッド抗体及びまたは改造された抗体及びそのフラグメントを含む。既に示されているように、自然発生の抗体のフラグメントにより抗体の抗原結合機能を持たせる。これらのフラグメントはまとめて「抗原結合ユニット」を通称される。用語「抗原結合ユニット」にカバーされるのは特定の形状を有する如何なるポリペプチド鎖を含む分子構造であり、該形状のエピトープを識別することに適し、一種類または複数種類の非共有結合が互いに作用することにより分子構造及び該エピトープ間の複合体が安定化される。
【００２３】
抗原結合ユニットが、ポリペプチドまたは他の物質を含む他の参照抗原とよりも大きい親和力（ａｆｆｉｎｉｔｙ）または結合力（ａｖｉｄｉｔｙ）で結合するなら、抗原結合ユニットが抗原と「特異的結合する」または「抗原と免疫反応を起こす」ことを意味する。
【００２４】
本明細書において使用される「抗原」とは、抗原結合ユニットによって特異的に識別及び結合する物質を言う。抗原はペプチド、タンパク質、糖タンパク質、多糖及び脂質、これらの部分及びこれらの組み合わせを含むことができる。非制限的で、例示的な抗原は、ヒト、マウス及び他のそれらのホモロジーのＷｉｌｍｓ腫瘍タンパク１（ＷＴ１）を含む。「抗原」とは免疫応答を引き起こす分子を指すこともできる。該免疫反応は抗体の生産に関係し、または特定免疫担当細胞（ｉｍｍｕｎｅ  ｃｏｍｐｅｔｅｎｔ  ｃｅｌｌ）の活性化に関係し、または両者ともである。当業者は、如何なるマクロ分子は、ほぼすべてのタンパク質またペプチドを含み、いずれも抗原とすることができると理解すべきである。
【００２５】
本明細書において使用するように、用語「免疫グロブリン」または「Ｉｇ」は一種のタンパク質を指し、抗体として働くものである。Ｂ細胞が発現する抗体は場合によってキメラ抗原受容体または抗原受容体と称される。これらのタンパク質に含まれる五つのメンバーはＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＤ及びＩｇＥであり、そのうちＩｇＧは最もよく見られる循環抗体である。これらは凝集、補体（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ）による固定及び他の抗体反応において最も有効的な免疫グロブリンであり、細菌及びウイルスを防御することにおいて重要である。例えば、腫瘍細胞抗原はＣＡＲによって識別されることができる。
【００２６】
用語の「抗ＷＴ１抗体」とは充分な親和力により、ＷＴ１またはＷＴ１ペプチドに結合できる抗体または抗体結合部位を意味し、これにより該抗体は、ＷＴ１またはＷＴ１ペプチドと細胞によって発現される他の抗原を区別させるのに用いることができる。一つの実施形態において、抗ＷＴ１抗体と関連しない非ＷＴ１タンパクの結合の程度は、放射免疫測定（ＲＩＡ）によって測定される該抗体とＷＴ１またはＷＴ１ペプチドの結合の程度の約１０％未満である。幾つかの実施形態において、ＷＴ１と結合する抗体は＜１μΜ、＜１００ｎＭ、＜１０ｎＭ、＜５ｎＭ、＜４ｎＭ、＜３ｎＭ、＜２ｎＭ、＜１ｎＭ、＜０．１ｎＭ、＜０．０１ｎＭまたは＜０．００１ｎＭの（例えば、１０−８Ｍまたはより小さい、例えば１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有することができる。幾つかの実施形態において、抗ＷＴ１抗体は異なる種のＷＴ１における保守的ＷＴ１エピトープに結合する。
【００２７】
本明細書において示されるように、用語「自身の」及びその文法上の同義語は同じ存在物に由来するものを指す。例えば、サンプル（例えば、細胞）は移動、処理及び後から同じの被験者（例えば、患者）に戻されることができる。自己プロセス（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｐｒｏｃｅｓｓｌｏｃａｌｉｚｅｄ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｐｒｏｃｅｓｓ）は同種異体プロセスと異なり、同種異体プロセスにおいてドナー及びレシピエントは異なる被験者である。
【００２８】
本明細書に示されるように、「異種移植（Ｘｅｎｏｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ）」及びその文法上の同義語は、細胞、組織または臓器をレシピエントに移植（ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ）、植入（ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ）または注入（ｉｎｆｕｓｉｏｎ）する如何なるプロセスをカバーでき、ここにおいてドナーとレシピエントは異なる種である。本明細書に記載される細胞、臓器及び／または組織の移植は、ヒト（人類）に異種移植されることができる。異種移植は以下を含むがこれらに限られない：血管化の異種移植（ｖａｓｃｕｌａｒｉｚｅｄ  ｘｅｎｏｔｒａｎｓｐｌａｎｔ）、一部血管化の異種移植（ｐａｒｔｉａｌｌｙ  ｖａｓｃｕｌａｒｉｚｅｄ  ｘｅｎｏｔｒａｎｓｐｌａｎｔ）、非血管化の異種移植（ｕｎｖａｓｃｕｌａｒｉｚｅｄ  ｘｅｎｏｔｒａｎｓｐｌａｎｔ）、異種ドレッシング（ｘｅｎｏｄｒｅｓｓｉｎｇｓ）、異種包帯（ｘｅｎｏｂａｎｄａｇｅｓ）及び異種構造（ｘｅｎｏｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ）。
【００２９】
本明細書において使用される「同種異体移植（Ａｌｌｏｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ）」及びその文法上の同義語（例えば、同種異体移植（ａｌｌｏｇｅｎｉｃ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ））は以下をカバーすることができる：レシピエントに細胞、組織または臓器を移植、植入または注入する如何なるプロセス。そのうちレシピエントとドナーは同じ種であるが、異なる個体である。本明細書に記載される細胞、臓器及び／または組織の移植は、ヒト（人類）に対する同種異性移植に用いることができる。同種異体移植は以下を含むがこれらに限られない：血管化の同種異体移植（ｖａｓｃｕｌａｒｉｚｅｄ  ａｌｌｏｔｒａｎｓｐｌａｎｔ）、一部血管化の同種異体移植（ｐａｒｔｉａｌｌｙ  ｖａｓｃｕｌａｒｉｚｅｄ  ａｌｌｏｔｒａｎｓｐｌａｎｔ）、非血管化の同種異体移植（ｕｎｖａｓｃｕｌａｒｉｚｅｄ  ａｌｌｏｔｒａｎｓｐｌａｎｔ）、同種異体ドレッシング（ａｌｌｏｄｒｅｓｓｉｎｇｓ）、同種異体包帯（ａｌｌｏｂａｎｄａｇｅｓ）及び同種異体構造（ａｌｌｏｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ）。
【００３０】
本明細書に使用される「自己移植（Ａｕｔｏｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ）」及びその文法上の同義語（例えば、自己の移植（ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ））は以下をカバーするものである：レシピエントに細胞、組織または臓器を移植、植入または注入する如何なるプロセス。そのうちレシピエントとドナーは同じ個体である。本明細書に記載される細胞、臓器及び／または組織の移植は、ヒト（人類）に対する自己移植に用いることができる。自己移植は以下を含むがこれらに限られない：血管化の自己移植（ｖａｓｃｕｌａｒｉｚｅｄ  ａｕｔｏｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ）、一部血管化の自己移植（ｐａｒｔｉａｌｌｙ  ｖａｓｃｕｌａｒｉｚｅｄ  ａｕｔｏｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ）、非血管化の自己移植（ｕｎｖａｓｃｕｌａｒｉｚｅｄ  ａｕｔｏｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ）、自己ドレッシング（ａｕｔｏｄｒｅｓｓｉｎｇｓ）、自己包帯（ａｕｔｏｂａｎｄａｇｅｓ）及び自己構造（ａｕｔｏｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ）。
【００３１】
本明細書において使用される、用語「キメラ抗原受容体」または「ＣＡＲ」はエンジニアリング化分子（ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ）であり、免疫細胞によって発現でき、該細胞はＴ細胞を含むがこれに限られない。ＣＡＲはＴ細胞の発現時にＴ細胞を再定義して（人工受容体による指令の特異性）標的細胞の殺傷を誘導するものである。ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、マウス、ヒト化または全ヒトのモノクローナル抗体である。「抗ＷＴ１  ＣＡＲ」はＷＴ１またはＷＴ１と結合できるＣＡＲである。
【００３２】
本明細書において使用される、用語の「エピトープ」及びその文法上の同義語は、抗体、Ｂ細胞、Ｔ細胞または遺伝子操作された細胞（ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  ｃｅｌｌｓ）によって識別される抗原の一部である。例えば、エピトープはＴＣＲによって識別されるがんのエピトープである。抗原内の複数のエピトープも識別される。前記エピトープも突然変異されることができる。
【００３３】
本明細書に使われる、用語の「遺伝子操作された（ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ）」及びその文法上の同義語は、核酸（例えば生体のゲノム内の核酸）の一か所または複数箇所が改造されたものである。用語の「遺伝子操作された」とは、遺伝子の改造、追加及び／または欠失を指す。遺伝子操作された細胞は遺伝子を追加、欠失及び／または改造した細胞を指す。
【００３４】
本明細書に使われる、用語の「細胞」または「遺伝子操作された細胞」及びその文法上の同義語は、ヒトまたは非ヒト動物由来の細胞を指す。遺伝子操作された細胞はＣＡＲを発現する細胞を指すこともある。
【００３５】
本明細書に使われる、用語の「適正製造規範（ＧＭＰ）」及びその文法上の同義語は、ＦＤＡによる安全、有効または純正製品である。ＧＭＰは場合によって「ｃＧＭＰ」と呼ばれることもある。「ｃ」は「現在（ｃｕｒｒｅｎｔ）」を意味するものである。製品の製造者は最新の技術及びシステムを用いることで、ＧＭＰ製品の規定に満たすことができる。研究環境に反して、ＧＭＰ適合製品は通常臨床環境において使用されるものである。
【００３６】
「宿主細胞」は個体細胞または細胞培養物を含み、それは本件ベクターのレシピエント、または以前の本件ベクターのレシピエントである。宿主細胞は単一の宿主細胞の子孫を含む。自然的、偶然的にまたは人為的な突然変異により、該子孫細胞は原始親細胞と完全に同じとは限らない（形態学上または全ＤＮＡ相補体のゲノム学上において）。宿主細胞は本発明のベクターを用いて体内トランスフェクションを行う細胞を含む。「宿主細胞」は原核細胞、真核細胞または単細胞として実体培養する細胞株を指すことができ、それは組換えベクターまたは他のポリヌクレオチド転移のレシピエントとして使用できまたは使用され、かつトランスフェクションされた初代細胞（ｏｒｉｇｉｎａｌ  ｃｅｌｌ）の子孫を含む。以下のように理解すべきである：自然的、偶然的にまたは人為的な突然変異により、単一細胞の子孫は形態学またはゲノム上、または全ＤＮＡ相補体において初代親細胞（ｏｒｉｇｉｎａｌ  ｐａｒｅｎｔ）と完全に同じとは限らない。
【００３７】
「細胞株」または「細胞培養物」とは体外で成長または維持される細菌、植物の、昆虫のまたはさらに高等の真核細胞を指す。細胞の子孫は親細胞（ｐａｒｅｎｔ  ｃｅｌｌ）と完全に同じとは限らない（形態学上または全ＤＮＡ相補体のゲノム学上において）。
【００３８】
本明細書において使用される、用語の「トランスフェクション（形質移入）」とは、外因性核酸を真核細胞に導入することである。トランスフェクションは本分野に知られている複数の手段によって行うことができ、リン酸カルシウム−ＤＮＡ共沈殿、ＤＥＡＥ−デキストラン介在のトランスフェクション、ポリブレン介在のトランスフェクション、電気穿孔法、マイクロインジェクション法、リポソーム融合法、リポソームトランスフェクション法、プロトプラスト融合法、レトロウイルス感染法および遺伝子銃法を含む。
【００３９】
用語の「安定的にトランスフェクション」または「安定的トランスフェクションにより」とは、外因性核酸、ＤＮＡまたはＲＮＡをトランスフェクションされる細胞のゲノム中に導入及び組み込まれた（ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ）ものを指す。用語の「安定発現株（ｓｔａｂｌｅ  ｔｒａｎｓｆｅｃｔａｎｔ）」とは、外因性ＤＮＡがゲノムＤＮＡ中に安定的に組み込まれた細胞を言う。
【００４０】
本明細書において使用される、用語の「核酸分子コード」「ＤＮＡ配列コード」及び「ＤＮＡコード」とは、デオキシリボ核酸鎖に沿ったデオキシリボヌクレオチドの順序または配列である。これらのデオキシリボヌクレオチドの順序はポリペプチド（タンパク質）鎖に沿ったアミノ酸配列を決定する。そのため、核酸配列はアミノ酸配列をコードする。
【００４１】
用語の「ポリペプチド」、「ぺプチド」及び「タンパク質」は本明細書において交換して使用でき、如何なる長さのアミノ酸の重合体を指す。該重合体は直鎖、環状または分岐鎖のものであり、修飾されたアミノ酸を含むことができ、かつ非アミノ酸によって中断されることができる。該用語は、すでに修飾されたアミノ酸重合体を含み、例えば、硫酸化、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、ヨウ素化、メチル化、酸化、タンパク質分解処理、リン酸化、イソペンテニル化、ラセミ化、セレン化、輸送ＲＮＡ介在によりアミノ酸をタンパク質に添加（例えばアルギニン化、ユビキチン化）または如何なる他の操作（例えばラベル成分との結合）を行うことができる。本明細書において使用される、用語の「アミノ酸」は天然の及び／または非天然のまたは合成されたアミノ酸であり、グリシン及びＤまたはＬの光学異性体（ｏｐｔｉｃａｌ  ｉｓｏｍｅｒｓ）、及びアミノ酸類似体とペプチド模倣物を含む。「由来」とは、タンパク質のポリペプチドまたはアミノ酸配列、ポリペプチドの由来を言う。好ましくは、該ポリペプチドは該配列またはその一部がコードするポリペプチドと基本的に同じアミノ酸配列を有し、そのうち該部分は少なくとも１０〜２０個のアミノ酸、または少なくとも２０〜３０個のアミノ酸、または少なくも３０〜５０個のアミノ酸からなり、または該配列がコードするポリペプチドが免疫学上において識別できるものである。該用語はさらに、指定された核酸配列によって発現されるポリペプチドを含む。
【００４２】
本明細書において使用される、用語の「被験者」とは如何なる動物をいい、例えば、哺乳動物または有袋類の動物である。本発明の被験者は以下を含むが、これらに限られない：ヒト、非ヒト霊長類動物（例えば、アカゲザルまたは他のタイプのマカク）、マウス、ブタ、ウマ、ロバ、ウシ、ヒツジ、ラット及び如何なる種類の禽類。
【００４３】
本明細書において使用される、用語の「レシピエント」及びその文法上の同義語は、療法または治療を受けるヒトまたはヒトでない動物を言う。
【００４４】
本明細書に使用される、用語の「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、「治療（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、「治療（ｔｒｅａｔ）」等は通常、希望される薬理及び／または生理作用を得ることを言う。疾病またはその症状を完全にまたは部分的に予防することにとって、該効果は予防的で、及び／または、該疾患を完全にまたは部分的に安定化させまたは治癒させる、及び／または該疾病に起因する不良反応を完全にまたは部分的に安定化させまたは治癒させる場合、該効果が治療的であると言う。本明細書において使用される、「治療」は哺乳動物、例えばマウス、ラット、ウサギ、ブタ、霊長類動物（ヒト及びその他のサル類を含む、特にヒト）の疾患の如何なる治療をカバーし、かつ以下を含む：（ａ）該疾患または症状を患いやすいがまだ該疾患または症状を患っていると診断されていない被験者において該疾患または症状が発生することを防止する；（ｂ）疾患の症状を抑制する；（ｃ）疾患の進行を阻止する；（ｄ）疾患の症状を減軽する；（ｅ）疾患または症状の消退を招く；またはそれらの任意の組み合わせ。
【００４５】
用語の「がん」、「新生物」、「腫瘍」及び「癌」は本明細書に交換して使用でき、自発的に成長する細胞に対して、これらは異常な成長表現型を示し、その特徴は細胞増殖に対する制御を顕著に失っていることである。一般的に、本出願において測定または治療の目的細胞は、がん初期（例えば良性の）、悪性の、移転前の、移転性の及び非移転性の細胞を含む。「正常細胞」の前後文において使用する用語の「正常」とは、形質転換（ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ）されていない表現型の細胞または検査される組織タイプの形質転換されていない細胞形態の示す細胞を言う。「がん性表現型」とはがん性細胞特徴を有する複数の生物学現象の如何なる一種を言い、これらの現象ががんのタイプに従って変化する。細胞成長または増殖（例えば、制御を受けない成長または増殖）、細胞周期の調整、細胞遷移、細胞―細胞間相互作用または転移等の異常によりがん性表現型を鑑定できる。
【００４６】
本明細書において使用される、用語の「末梢血リンパ球（ＰＢＬ）及びその文法上の同義語は血液（例えば、末梢血）中にて循環するリンパ球を言う。末梢血リンパ球とは、臓器に位置固定されないリンパ球を指すことができる。末梢血リンパ球はＴ細胞、ＮＫ細胞、Ｂ細胞またはそれらの任意の組み合わせを含む。
【００４７】
用語の「免疫応答細胞」とは免疫反応を引き起こす細胞をいい、Ｔ細胞、Ｂ細胞及びＮＫＴ細胞、それら各自の前駆細胞及び子孫を含むがこれらに限定されない。免疫応答細胞はリンパまたは骨髄系の細胞を指すこともできる。
【００４８】
本明細書において使用される、用語の「Ｔ細胞」及びその文法上の同義語は如何なる由来のＴ細胞を言う。例えば、Ｔ細胞は原始Ｔ細胞、例えば、自己Ｔ細胞、細胞株（ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ）等とすることができる。Ｔ細胞はヒトまたは非ヒトのものとすることができる。
【００４９】
本明細書において使用される、用語の「Ｔ細胞活性化」または「Ｔ細胞トリガー」及びその文法上の同義語は、充分に刺激され、これにより測定可能な細胞増殖、サイトカイン生産及び／または測定可能なエフェクター機能のＴ細胞の状態を誘導することを言う。幾つかの場合において、「完全Ｔ細胞活性化」はＴ細胞の細胞毒性をトリガーするようなものである。本分野に知られる複数種類の測定によりＴ細胞の活性化を測定できる。前記測定は、サイトカインの分泌を測定するＥＬＩＳＡ、ＥＬＩＳＰＯＴ、細胞内サイトカインの発現を測定するフローサイトメトリー（ＣＤ１０７）測定法、増殖を測定するフローサイトメトリー測定法、及び、標的細胞消去を決める細胞毒性測定法（５１Ｃｒ放出測定法）とすることができる。前記測定は通常、コントロール（非遺伝子操作された細胞（非遺伝子改変細胞））と遺伝子操作された細胞（遺伝子改変細胞）（ＣＡＲ  Ｔ）に対して比較を行うことにより、遺伝子操作された細胞と比較した場合の相対的活性化を知ることができる。また、前記測定はインキュベーションされたまたは標的抗原を発現しない標的細胞と接触する遺伝子操作された細胞を比較できる。例えば、前記比較物はＣＤ１９を発現しない標的細胞とインキュベーションされたＣＤ１９−ＣＡＲ  Ｔ細胞とすることができる。
【００５０】
アミノ酸配列に用いる場合、用語の「配列」及びその文法上の同義語はＤＮＡまたはＲＮＡをカバーできる；一本鎖または二本鎖とすることができる。核酸配列は突然変異されることができる。核酸配列は如何なる長さを有することができ、例えば、長さが２〜１，０００，０００個またはより多くのヌクレオチド（またはその間またはその上の如何なる整数の値である）、例えば１００から１０，０００個のヌクレオチド、または約２００から約５００個のヌクレオチドである。
【００５１】
本明細書において使用される、用語の「分離された」とは成分、細胞または他の物と分離することを言い、そのうちポリヌクレオチド、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、抗体、またはそれらのフラグメントは自然界において通常は一緒にあるものである。当業者は以下について容易に知ることができる。非自然的に発生するポリヌクレオチド、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、抗体、またはそれらのフラグメントは「分離」を必要とせずにそれが自然発生する対応物と区分けすることができる。また、「濃縮された」、「分離された」または「希釈された」ポリヌクレオチド、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、抗体、またはそれらのフラグメントが、それらが自然発生した場合の対応物との区別は以下である：単位体積の分子濃度または数量で計算した場合、「濃縮された」とは自然に発生する対応物より大きく、また「分離された」それが自然発生の対応物より少ない。絶対値に基づいて濃縮でき、例えば単位体積溶液中の重量、または、起因混合物に存在する第二種類、干渉のある物質に基づいて測定できる。本発明の実施形態により濃縮させることは濃縮すればするほど好ましい。そのため、例えば、好ましくは２倍濃縮、より好ましくは１０倍濃縮、さらに好ましくは１００倍濃縮、さらにより好ましくは１０００倍濃縮である。物質は人口組み換え過程（例えば化学合成または組換え発現により）により分離された状態で提供できる。
【００５２】
「連結された」及び「融合された」または「融合」は本明細書において、交換して使用できる。これらの用語は化学結合または組換え手段を含む任意の手段によって二つ以上の化学元素または成分を連結させることを言う。「フレーム内融合」とは原始のＯＲＦフレームに対して精確にリードする方式により二つまたはより多くのオープンリードフレーム（ＯＲＦ）を連結させることで形成される連続したより長いＯＲＦである。そのため、得られる組換え融合タンパク質は二つまたはより多くのフラグメントを有る単一タンパク質であり、前記フラグメントは原始ＯＲＦによってコードされるポリぺプチドに対応するものである（これらのフラグメントは自然界においてこのように連結しない）。リードフレームは全体の融合フラグメントによって連続されるが、リードフレームのリンカー配列（例えば  ｆｌｅｘｏｎ）により物理上または空間上においてこれらのフラグメントを分けることができる。
【００５３】
ポリヌクレオチドに応用される「組み換えの（Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ）」とは、該ポリヌクレオチドが下記の異なる組み合わせから生じる生成物を指す：クローン、制限及び／または連結ステップ、及び、自然界と異なる自然界に発見されるポリヌクレオチドの構造体を生成する他のプロセス。
【００５４】
用語の「遺伝子」または「遺伝子フラグメント」は、本明細書において変換して使用できる。これらは少なくとも一つのオープンリードフレームを有するポリヌクレオチドを指し、該リードフレームは転写及び翻訳後に特定のタンパク質をコードできる。遺伝子または遺伝子フラグメントはゲノム、ｃＤＮＡまたは合成されたもので、該ポリヌクレオチドは少なくとも一つの下記オープンリードフレームを含み、コード領域（ｃｏｄｉｎｇ  ｒｅｇｉｏｎ）全体またはそのフラグメントをカバーできる。
【００５５】
「操作可能に（Ｏｐｅｒａｂｌｙ）連結」または「操作的に（ｏｐｅｒａｔｉｖｅｌｙ）連結」とは並置（ｊｕｘｔａｐｏｓｉｔｉｏｎ）を言い、その記載される成分はこれらを予期される方式で作用するのを許す関係である。例えば、プロモーター配列はコード配列の転写を促進するであれば、プロモーター配列は操作可能にコード配列に連結されるということができる。
【００５６】
本明細書において使用される、「発現」とはポリヌクレオチドをｍＲＮＡに転写するプロセス、及び／またはその後転写されたｍＲＮＡ（「転写物」ともいう）をペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質に翻訳する過程を言う。転写物及びコードされるポリペプチドはまとめて遺伝子産物（ｇｅｎｅ  ｐｒｏｄｕｃｔ）と呼ばれる。真核細胞において、ポリヌクレオチドがゲノムＤＮＡに由来するであれば、発現はスプライシングｍＲＮＡ（ｓｐｌｉｃｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍＲＮＡ）を含むことができる。
【００５７】
＜組成物-抗原結合ユニット＞
一つの実施形態において、本明細書は抗原結合ユニットを提供し、それは軽鎖ＣＤＲ及び重鎖ＣＤＲを含み、前記抗原結合ユニットはＨＬＡ複合しているＷＴ１ペプチドに特異的に結合し、前記ＷＴ１ペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列を有し、前記抗原結合ユニットはＨＬＡと複合している参照ペプチドと顕著な結合を示さなく、そのうち前記参照ペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９のアミノ酸配列を有するものである。
【００５８】
もう一つの実施形態において、本明細書は抗原結合ユニットを提供し、軽鎖ＣＤＲ及び重鎖ＣＤＲを含み、前記抗原結合ユニットはＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドに特異的に結合し、前記ＷＴ１ペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列を有し、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０のアミノ酸配列を有する参照抗原結合ユニットと比較して、前記抗原結合ユニットはより少なくＨＬＡと複合している参照ペプチドと非特異的に結合し、前記参照ペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９のアミノ酸配列を有する。
【００５９】
もう一つの実施形態において、本明細書は抗原結合ユニットを提供し、それは軽鎖ＣＤＲ及び重鎖ＣＤＲを含み、前記軽鎖ＣＤＲはＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む；前記重鎖ＣＤＲはＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む；前記ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５−７及び１１−１５からなるグループから選ばれる配列と少なくとも８０％の配列相同性を有するものであり、そのうち前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２−４、８−１０及び１６−１７からなるグループから選ばれる配列と少なくとも８０％の配列相同性を有するものである。
【００６０】
本明細書が開示するいかなる実施形態の幾つかの面において、抗原結合ユニットは軽鎖ＣＤＲを含む。軽鎖ＣＤＲは抗原結合ユニットの軽鎖の相補決定領域とすることができる。軽鎖ＣＤＲはアミノ酸残基の一つの連結配列またはアミノ酸残基の二つまたはより多くの連結配列を有することができ、前記配列は非相補決定領域例えばフレームによって分けられ、かつ隣接する（ｆｌａｎｋｅｄ）のものとなることができる。幾つかの実例において、軽鎖ＣＤＲは二つまたはより多くの軽鎖ＣＤＲを含み、軽鎖ＣＤＲ−１、ＣＤＲ−２等と称されることができる。有利な実例において、軽鎖ＣＤＲは三つの軽鎖ＣＤＲを含み、それぞれ軽鎖ＣＤＲ−１、軽鎖ＣＤＲ−２及び軽鎖ＣＤＲ−３と称されることができる。幾つかの実例において、共同の軽鎖上に存在する一組のＣＤＲは軽鎖ＣＤＲと通称することができる。
【００６１】
本明細書が開示する如何なる実施形態の幾つかの面において、抗原結合ユニットは重鎖ＣＤＲを含む。重鎖ＣＤＲは抗原結合ユニットの重鎖の相補決定領域とすることができる。重鎖ＣＤＲはアミノ酸残基の一つの連続配列またはアミノ酸残基の二つまたはより多くの連結配列を含むことができ、前記配列は非相補決定領域例えばフレームによって分けられ、かつ隣接する（ｆｌａｎｋｅｄ）のものとなることができる。幾つかの実例において、重鎖ＣＤＲは二つまたはより多くの重鎖ＣＤＲを含み、重鎖ＣＤＲ−１，ＣＤＲ−２等と称されることができる。有利な実例において、重鎖ＣＤＲは三つの重鎖ＣＤＲを含み、それぞれ重鎖ＣＤＲ−１、重鎖ＣＤＲ−２及び重鎖ＣＤＲ−３と称されることができる。幾つかの実例において、共同の重鎖上に存在する一組のＣＤＲは重鎖ＣＤＲと通称することができる。
【００６２】
本明細書が開示する如何なる実施形態の幾つかの面において、本件の抗原結合ユニットはＷＴ１またはＷＴ１ペプチドに特異的に結合する。幾つかの実施例において、本件の抗原結合ユニットはＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドに特異的に結合するものである。本明細書に使用されるように、ＷＴ１は既知のＷＴ１配列のオーソログ（ｏｒｔｈｏｌｏｇｕｅｓ）、ホモログ（ｈｏｍｏｌｏｇｕｅｓ）、コドン最適化された形（ｃｏｄｏｎ−ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ  ｆｏｒｍｓ）、切断された形（ｔｒｕｎｃａｔｅｄ  ｆｏｒｍｓ）、フラグメント化された形（ｆｒａｇｍｅｎｔｅｄ  ｆｏｒｍｓ）、突然変異された形（ｍｕｔａｔｅｄ  ｆｏｒｍｓ）または如何なる他の既知の誘導体の形を指すことができる。例えば、ＷＴ１はヒトＷＴ１とすることができ、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号［Ｐ１９５４４］で示され、且つＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の配列を含む。また、ＷＴ１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９のうちの如何なる一つと、少なくとも５０％の同一性を有する配列を含むものである。ＷＴ１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９のうちの少なくとも一つと、少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または９９％を超える同一性を有する配列を含むことができる。
【００６３】
結合特異性は相互決定領域またはＣＤＲ、例えば軽鎖ＣＤＲまたは重鎖ＣＤＲによって決められる。多くの場合において、結合特異性は軽鎖ＣＤＲ及び重鎖ＣＤＲによって決められる。重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲの所定の組み合わせは所定の結合ポケットを提供し、該結合ポケットはＷＴ１またはＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドに対して（他の参照抗原または参照ペプチドと比較して）より大きい親和力及び／または特異性を有する。
【００６４】
抗原結合ユニットと、ＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドとの結合は本分野における既知の如何なる方法によってキャラクタリゼーションまたは表現されることができる。例えば、結合は結合親和力によってキャラクタリゼーションされることができ、該結合親和力は抗原結合ユニットと抗原の間の相互作用の強度とすることができる。結合親和力は本分野において既知の如何なる方法によって知ることができ、例えばインビトロ結合アッセイ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ａｓｓａｙ）である。例えば、インビトロ結合アッセイにおいてＷＴ１及びＨＬＡを発現する細胞に対して測定を行う場合、本明細書が開示する抗原結合ユニットの結合親和力を知ることができる。本件の抗原結合ユニットの結合親和力はＫｄによって示すことができ、Ｋｄは抗体と他の対応抗原との間の平衡解離定数である。幾つかの場合において、本明細書が開示する抗原結合ユニットは特異的にＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドと結合し、Ｋｄ値は約１０μＭから約１ｆＭの範囲である。例えば、抗原結合ユニットは、約１０μＭ、１μＭ、０．１μＭ、１０ｎＭ、１ｎＭ、０．１ｎＭ、１０ｐＭ、１ｐＭ、０．１ｐＭ、１０ｆＭ、１ｆＭ、０．１ｆＭより小さく、または０．１ｆＭ未満のＫｄでＣＤ４７と結合するものである。幾つかの実例において、Ｋｄは１．５ｎＭより小さい。幾つかの例において、Ｋｄは５０ｐＭより小さい。
【００６５】
幾つかの面において、本件の抗原結合ユニットは、ＨＬＡと複合している参照ぺプチドと顕著な結合を示さない。幾つかの実例において、本件の抗原結合ユニットと、ＨＬＡと複合している参照ペプチドとの結合レベルは、前記抗原結合ユニットと、ＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドとの結合レベルの１０％を超えない。例えば、該結合レベルは前記抗原結合ユニットと、ＨLＡと複合しているＷＴ１ペプチドとの結合レベルの１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％または１％未満である。幾つかの例において、該参照ペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９のアミノ酸配列を有する。
【００６６】
幾つかの面において、参照抗原結合ユニットと比較して、本件の抗原結合ユニットはＨＬＡと複合している参照ペプチドより、より少ない非特異的結合を示す。幾つかの実例において、参照抗原結合ユニットと比較して、本件の抗原結合ユニットは、ＨＬＡと複合している参照ペプチドと、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または１００％の、より少ない非特異的結合を示すものである。幾つかの実例において、参照抗原結合ユニットと比較して、本件の抗原結合ユニットは、ＨＬＡと複合している参照ペプチドと、１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍または１０倍を超える、より少ない非特異的結合を示すものである。幾つかの実例において、参照抗原結合ユニットは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０のアミノ酸配列を有する。幾つかの実例において、参照ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９のアミノ酸配列を有する。
【００６７】
本明細書が開示する如何なる実施形態の幾つかの面において、本件の抗原結合ユニットは軽鎖ＣＤＲ及び重鎖ＣＤＲを含む。本件の抗原結合ユニットは表１に示される任意のＬＣＤＲまたはＨＣＤＲを含むことができる。または追加にまたは代替案として、本件の抗原結合ユニットは表１に示される任意のＬＣＤＲまたはＨＣＤＲと少なくとも６０％の同一性を有するＬＣＤＲまたはＨＣＤＲを含む。幾つかの面において、本件ＬＣＤＲまたはＨＣＤＲは表１に示される任意の配列ＩＤ番号（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ）と少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％またはより高い配列相同性を示すものである。
【００６８】
【表１】
2020523985.tif 000003
【００６９】
幾つかの場合において、軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲは軽ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む；重鎖（ＨＣ）ＣＤＲはＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。幾つかの実例において、前記ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５−７及び１１−１５からなるグループから選ばれる配列を有する。幾つかの実例において、前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２−４、８−１０及び１６−１７からなるグループから選ばれる配列を有する。幾つかの例において、前記ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５−７及び１１−１５からなるグループから選ばれる配列を有する。前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２−４、８−１０及び１６−１７からなるグループから選ばれる配列を有する。
【００７０】
本明細書が開示する如何なる実施形態の幾つかの面において、抗原結合ユニットは軽鎖ＣＤＲを含み、前記軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲは三つのＬＣＤＲ（即ちＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３）の組み合わせを含む。三つのＬＣＤＲの組み合わせは表２に示される任意の組み合わせを含むことができる。
【００７１】
【表２】
2020523985.tif 000004
【００７２】
本明細書が開示する如何なる実施形態の幾つかの面において、抗原結合ユニットは重鎖ＣＤＲを含み、前記重鎖（ＨＣ）ＣＤＲは三つのＨＣＤＲ（即ちＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３）の組み合わせを含む。三つのＨＣＤＲの組み合わせは表３に示される任意の組み合わせを含むことができる。
【００７３】
【表３】
2020523985.tif 000005
【００７４】
本明細書が開示する如何なる実施形態の幾つかの面において、抗原結合ユニットは軽鎖ＣＤＲ及び重鎖ＣＤＲを含むことができ、前記軽鎖ＣＤＲ及び前記重鎖ＣＤＲはそれぞれ、表２に示されるＬＣＤＲの任意の組み合わせ及び表３に示されるＨＣＤＲの任意の組み合わせからなるグループから選ばれるＬＣＤＲ及びＨＣＤＲを含む。
【００７５】
幾つかの面において、本件の抗原結合ユニットはモノクローナル抗原結合ユニット、ポリクローナル抗原結合ユニット、ヒト化抗原結合ユニット、キメラ抗原結合ユニット、単価抗原結合ユニット、多価抗原結合ユニット、二重特異抗原結合ユニット、またはそれらの任意の組み合わせである。抗原結合ユニットは複数の形を用いることができ、ｓＦＣ、Ｆｖ、ｃｃＦｖ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２及びＦｄを含むが、これらに限られない。これらの抗体結合ユニットはリシン（ｒｉｃｉｎ）、ペプシン（ｐｅｐｓｉｎ）、パパイン（ｐａｐａｉｎ）または他のプロテアーゼ（ｐｒｏｔｅａｓｅ）の切断作用により完全な免疫グロブリンから生成できる。本件の抗原結合ユニットはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に含まれることもできる。このような実例において、該抗原結合ユニットは通常、細胞外抗原結合ユニットである。
【００７６】
また、組換え免疫グロブリン技術を利用して抗原結合ユニットを設計できる。例えば、ペプチドリンカーにより可変軽鎖領域を可変重鎖領域に連結させることで本発明の「Ｆｖ」免疫グロブリンを生産できる。例えば、ペプチドリンカーはポリグリシンまたはαヘリックスまたはβシートモチーフを形成しないもう一つの配列とすることができる。さらに以下のＦｖとすることができ、ＶＨとＶＬ領域との間の安定化ジスルフィド結合を含み、例えば米国特許第６，１４７，２０３号に記載され、その全部の内容は引用によって本明細書に導入される。これらの抗原結合ユニット中のいかなる一つはいずれも本発明に用いることができる。幾つかの面において、抗原結合ユニットは二つの軽鎖及び二つの重鎖がセットとなっている完全免疫グロブリンである。
【００７７】
抗原結合ユニットは、軽鎖ポリぺプチドと重鎖ポリぺプチドを含むヘテロマルチマー（ｈｅｔｅｒｏｍｕｌｔｉｍｅｒｓ）である。抗原結合ユニットの実例は以下を含むが、これらに限られない：（ｉ）米国特許第６，８３３，４４１号（その全部の内容は本明細書に併入される）によって開示される、ヘテロダイマー配列安定化のｃｃＦｖフラグメント；（ｉｉ）少なくとも一つの本明細書に記載のｃｃＦｖフラグメントを含む如何なる他の単価及び多価分子；（ｉｉｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインからなるＦａｂフラグメント；（ｉｖ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント；（ｖ）抗体シングルアームのＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖフラグメント；（ｖｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、即ち二つのヒンジ領域がジスルフィド結合によって連結されているＦａｂフラグメントを含む二価フラグメント；及び（ｖｉｉ）二重特異性抗体（Ｄｉａｂｏｄｙ）。
【００７８】
ポリクローナル抗体は生産動物に対して抗原組成物を注入するスタンダードプロクトル（ｓｔａｎｄａｒｄ  ｐｒｏｔｏｃｏｌ）によって生成される。以下を参照できる。例えば、Ｈａｒｌｏｗ及びＬａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，１９８８。全体のタンパク質またはタンパク質の比較的大きい部分を利用する場合、該タンパク質と適切なアジュバント（ａｄｊｕｖａｎｔ）（例えば、Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ  アジュバント、Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ完全試薬、水中油型乳液（ｏｉｌ−ｉｎ−ｗａｔｅｒ  ｅｍｕｌｓｉｏｎｓ）等）免疫生産動物を用いて抗体を生成する。比較的小さいペプチドを利用する場合、有利なのはペプチドと比較的大きい分子を結合させて免疫刺激性結合体を製造することである。市販で購入されるこの用途の常用の結合タンパク質は、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）及びキーホールリンペットヘモシアニン（ｋｅｙｈｏｌｅ  ｌｉｍｐｅｔ  ｈｅｍｏｃｙａｎｉｎ，ＫＬＨ）を含む。特定のエピトープに対する抗体を生成するため、全配列ペプチドに由来するペプチドを利用できる。代替案として、タンパク質ターゲットの比較的短いペプチド部分に対する抗体を生成するため、例えばポリぺプチドとキャリアタンパク（ｃａｒｒｉｅｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ）（例えば、オボアルブミン、ＢＳＡまたはＫＬＨ）によって連結されるならば、優れた免疫応答を引き起こすことができる。
【００７９】
ポリクローナルまたはモノクローナル抗原結合ユニット又は抗体は、すでにヒト免疫グロブリンを生産するように遺伝子改造された動物によって生産できる。下記により遺伝子組換え動物を生産できる：まずは自然の動物抗体を生産しない「ノックアウト」動物を生産し、それからヒト抗体遺伝子座（ｌｏｃｕｓ）（例えば、ヒト人工染色体を使用することにより）安定的に該動物を形質転換させる。このような場合、該動物はヒト抗体のみを製造する。米国特許第６，１６２，９６３号及び第６，１５０，５８４号（全体引用により本明細書に併入される）においてこのような動物を生産しさらに抗体を誘導する技術が記載されている。このような抗体は異種ヒト抗体（ｈｕｍａｎ  ｘｅｎｏｇｅｎｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）と呼ぶこともできる。
【００８０】
代替案として、ヒト可変領域を含むファージライブラリーから抗原結合ユニットを生産できる。米国特許第６，１７４，７０８号を参照する（全体引用により本明細書に併入される）。
【００８１】
本明細書が開示する如何なる実施形態の幾つかの面において、抗原結合ユニットはハイブリドーマによって生産される。例えば、本明細書が開示する抗原結合ユニットは、「表１に記載の抗原結合ユニットの一つを発現するハイブリドーマ」からなるグループから選ばれるハイブリドーマから生産されるものである。
【００８２】
モノクローナル抗原結合ユニットまたはモノクローナル抗体に対して、ハイブリドーマは刺激を受けた免疫細胞（例えば、被接種動物の脾臓に由来するもの）を分離することにより形成される。それからこれらの細胞（例えば、骨髄腫細胞または形質転換された細胞）と不死化細胞を融合させ、それらは細胞培養物中において無限に複製でき、これにより永生の、免疫グロブリンを分泌する細胞株を生産する。利用される不死細胞株は選出される（一部の栄養物の利用に必要とされる酵素が足りないか）。多くのこれらの細胞株（例えば、骨髄腫）は当業者に知られるものであり、かつ、例えば以下を含む：チミジンキナーゼ（ＴＫ）またはヒポキサンチン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ｈｙｐｏｘａｎｔｈｉｎｅ−ｇｕａｎｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｂｏｘｙｌ  ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＨＧＰＲＴ）。これらの欠陥は以下を許容する：融合細胞の例えばヒポキサンチンアミノプテリンチミジン培地（ｈｙｐｏｘａｎｔｈｉｎｅ  ａｍｉｎｏｐｔｅｒｉｎｔｈｙｍｉｄｉｎｅ  ｍｅｄｉｕｍ，ＨＡＴ）における増殖する能力により融合細胞を選択する。
【００８３】
また、遺伝子工学により本件の抗原結合ユニットを生産する。下記は本発明に用いることができる：ヒトに対して比較的少ない免疫応答を生じる、ヒト化の、キメラのまた異種ヒト抗原結合ユニット（ｘｅｎｏｇｅｎｉｃ  ｈｕｍａｎ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｕｎｉｔｓ）を施用する。
【００８４】
本明細書が開示する抗原結合ユニットは、低減されたヒトにおいて希望されない免疫応答（例えば、過敏性ショック）を誘導する傾向にあり、さらに低減された免疫応答を誘発する傾向を示し、これにより抗体治療剤または現像剤の重複投薬を防止する（例えば、ヒト抗マウス抗体「ＨＡＭＡ」応答）。これらの抗原結合ユニットは、ヒト化、キメラのまたは異種ヒト抗原結合ユニットを含むがこれらに限られない。
【００８５】
遺伝子工学により、複数の方式によって抗原結合ユニットを修飾できる。幾つかの場合において、抗原結合ユニットは突然変異されることができ、これにより抗原結合ユニットを選択して標的に対してより高い親和力を有する（例えば、ＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチド）。幾つかの場合において、抗原結合ユニットのその標的に対する親和力は、正常組織上において低い水準で発現する標的に対して最適化を行うことができる。このような最適化により潜在の毒性を最小化させることができる。他の場合において、膜結合型の標的に対してより高い親和力を有する抗原結合ユニットのクローンはその可溶型の対応物より優れる。これに対して修飾を行い、これらの標的は異なるレベルの可溶型で測定されることができ、かつこれらの指向性は予期されない毒性をもたらす可能性がある。
【００８６】
幾つかの場合において、本件の抗原結合ユニットはマウスの、ヒト化のまたは全ヒトのものである。抗原結合ユニットは約１％から約１００％人類のものである。幾つかの場合において、抗原結合ユニットは約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または１００％人類のものである。
【００８７】
キメラ抗原結合ユニットまたはキメラ抗体は例えば組換え手段、マウス（または他の動物由来）のハイブリドーマクローンのマウス可変軽鎖及び重鎖領域（ＶＫ及びＶＨ）を組み合わせることで得られるものであり、これによりヒトドメインを有する抗体を生成し、ヒト恒定の軽鎖及び重鎖領域を含む。これらのキメラ抗体の生産は本分野において公知のものであり、かつ標準的な手段によって実現できる（例えば米国特許第５，６２４，６５９号（全体引用により本明細書に併入される）において記載されている）。
【００８８】
非ヒト（例えば、げっ歯類動物または霊長類動物）抗体に用いられる用語の「ヒト化」は、ハイブリッド免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖またはそのフラグメントであり、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含む。ほとんどの部分において、ヒト化抗体はヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）であり、該レシピエントの相補決定領域（ＣＤＲ）の残基は非ヒト種（ドナー抗体）（例えばマウス、ラット、ウサギまたは霊長類動物）のＣＤＲの残基によって置換され、希望される特異性、親和力及び能力を有する。幾つかの場合において、ヒトグロブリンのＦｖフレーム領域（ＦＲ）残基は対応の非ヒト残基によって置換される。また、ヒト化抗体はレシピエント抗体または導入されたＣＤＲまたはフレーム配列に発現されていない残基を含むことができる。これらの修飾はさらに抗体性能を改善及び最適化することができ、且つそれを人体に導入する時の免疫原性を最低に低下させる。幾つかの例において、ヒト化抗体は少なくとも一つ且つ通常は二つの可変ドメインの基本的に全部を含み、そのうち全部または基本的全部のＣＤＲ領域は非ヒト免疫グロブリンのそれらに対応し、全部または基本的に全部のＦＲエリアはヒト免疫グロブリン配列のそれらである。ヒト化抗原はさらに免疫グロブリンの定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部を含むことができ、通常はヒト免疫グロブリンの定常領域である。
【００８９】
ヒト化抗体は以下にエンジニアリング（遺伝子操作）できる：ヒト免疫グロブリンドメインを含み、かつ動物由来性抗体の相補決定領域にのみ導入される。以下によって完成できる：モノクローナル抗原結合ユニットまたはモノクローナル抗体の可変領域の超可変リング（ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ  ｒｅｇｉｏｎ）の配列をチェックし、これらをヒト抗原結合ユニットまたはヒト抗体鎖に適した構造にする。以下を参照できる：米国特許第６，１８７，２８７号（全体引用により本明細書に併入される）。
【００９０】
非ヒト抗体をヒト化させることに用いられる方法は本分野に公知のものである。「ヒト化」抗体とは次のような抗体であり、即ち少なくとも一部の配列は開始の形からよりヒト免疫グロブリンに近い形に改造されたものである。幾つかの変化形において、重（Ｈ）鎖及び軽（Ｌ）鎖定常（Ｃ）領域はヒト配列によって置き換えられる。これらは可変（Ｖ）領域及び異種免疫グロブリンＣ領域の融合ポリぺプチドとすることができる。幾つかの変化形において、相補決定領域（ＣＤＲ）は非ヒト抗体配列を含み、Ｖフレーム領域はヒト配列に変換されたものである。例えばＥＰ０３２９４００を参照すること。幾つかの変化形において、ヒト及びマウスＶ領域の共有配列を設計することにより、共有配列の間に異なるＣＤＲ以外で残基を変換し、Ｖ領域をヒト化させる。
【００９１】
原則的に、ヒト化抗体のフレーム配列はＣＤＲ移植テンプレートとして用いられる：しかし、直接ＣＤＲをこのようなフレームに入れ替えることにより抗原の結合親和力の顕著な損失をもたらしてしまう。Ｇｌａｓｅｒら  （１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９：２６０６；Ｔｅｍｐｅｓｔら（１９９２）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：２６６；及びＳｈａｌａｂｙら（１９９２）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７：２１７。ヒト化抗体（ＨｕＡｂ）と原始マウス抗体（ｍｕＡｂ）の同一性（ホモロジー）が高いほど、ヒト化フレームがマウス由来ＣＤＲ中に親和力を低下させる歪みを導入できる可能性はより少ない。抗体配列データベースの配列相同性調査に基づいて、ＨｕＡｂ  ＩＣ４はｍｕＭ４ＴＳ．２２と優れたフレーム同一性を提供し、他の高度に同一由来のＨｕＡｂも適用できる（特にヒトＩサブグループに由来するκ鎖またはヒトＩＩＩサブグループに由来するＨ鎖）。Ｋａｂａｔら（１９８７）。異なるコンピュータプログラム（例えば、ＥＮＣＡＤ（Ｌｅｖｉｔｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９８３）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１６８：５９５））により、Ｖ領域の理想的な配列を予測する。そのため、本発明は異なる可変（Ｖ）領域のＨｕＡｂをカバーする。適切なＶ領域の配列を決めてさらにこれらの配列を最適化させることは当業者の能力の範囲内にある。低下された免疫原性の抗体を得る方法は、米国特許第５，２７０，２０２号及び欧州特許第６９９，７５５号に記載されている。
【００９２】
親及びヒト化配列の三次元モデルを使用して、親配列及び異なる概念上のヒト化生成物に対して分析するプロセスによりヒト化抗体を製造する。三次元免疫グロブリンモデルは当業者が熟知のものである。下記コンピュータプログラムを得ることができ、選択された候補免疫グロブリン配列の可能な三次元コンフォメーション構造を説明及び示している。これらのディスプレイに対する検査は以下を許している：残基の候補となる免疫グロブリン配列の機能中における可能な作用について分析し、即ち候補免疫グロブリンの抗原結合能力の残基に対する分析に影響する。このような方式により、共有配列及び導入される配列からＦＲ残基を選択及び結合でき、これにより希望の抗体特性（例えば、標的抗原の親和力の向上）を得ることができる。
【００９３】
本件の抗原結合ユニットをヒト化させる過程は以下に示された通りである。移植に用いられるヒト抗体種の同一性、典型的構造及び物理的特徴に基づいて、最も適切な種受容体重鎖及び軽鎖可変エリアを選択する。ｍＶＨ／ＶＬと移植のｈＶＨ／ＶＬのコンピュータモデリングを行い、原型ヒト化抗体配列を生成する。モデリングにおいてフレームの逆突然変異が必要であれば、示されるＦＷ変化を有する第二の変異体が生成される。選択された種のフレーム及びマウスＣＤＲをコードするＤＮＡフラグメントを合成する。合成されたＤＮＡフラグメントをＩｇＧ発現ベクター中にサブクローンし、さらにＤＮＡ配列決定により配列を確認する。ヒト化抗体は例えば２９３Ｆの細胞中において発現され、例えばＭＤＭ食作用測定法及び抗原結合測定法により該タンパク質を測定する。ヒト化抗原結合ユニットと親抗原結合ユニットの抗原親和力の比較を行い、例えばＦＡＣＳにより標的抗原を発現する細胞に対して比較を行う。親和力は親抗原結合ユニットより２倍以上低下すれば、前記のように第二サイクルのヒト化変異体の生産及び測定を行う。
【００９４】
前記のように、抗原結合ユニットは「単価」または「多価」である。前者はそれぞれの抗原結合ユニット上に一つの結合位置を有し、後者は複数の結合位置を有し、同じまたは異なる種類の一つを超える抗原と結合することができる。結合位置の数量により、抗原結合ユニットは二価（二つの抗原結合位置を有する）、三価（三つの抗原結合位置を有する）、四価（四つの抗原結合位置を有する）等とすることができる。
【００９５】
多価の抗原結合ユニットはそれらの結合特異性に基づいてさらに分類できる。「単特異性」抗原結合ユニットは同じ種類の一つまたは複数の抗原に結合できる分子である。「多特異性」抗原結合ユニットは少なくとも二種類の異なる抗原と結合特異性を有する分子である。このような分子は通常、二種類の異なる抗原のみと結合でき（即ち二重特異性抗原結合ユニット）、しかし本明細書において使用する際、該発現は他の特異性を有する抗体（例えば三重抗原特異抗体）をカバーできる。本明細書はさらに多特異性抗原結合ユニットを提供する。ポリ特異性抗原結合ユニットは少なくとも二種類の異なる抗原に結合できる多価分子である。好ましいポリ特異抗原結合ユニットはそれぞれ二種類及び三種類の異なる抗原に対して結合特異性を示す二重特異及び三重特異の分子である。
【００９６】
本明細書が開示する実施形態の幾つかの面において、抗原結合ユニットは二重特異抗原結合ユニットであり、前記抗原結合ユニットは、ＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドと第二抗原に特異的に結合するものである。幾つかの実例において、第二抗原はＷＴ１ではない。幾つかの例において、第二抗原はＰＤ１またはＰＤ−Ｌ１である。幾つかの実例において、第二抗原は他の免疫検査点分子であり、ＣＴＬＡ−４、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＩＣＯＳ、ＣＤ７０、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＴＬ１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ２５、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１１２、ＣＤ１１２Ｒ、ＣＤ２２６、ＣＤ９６、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＣＤ４８、ＣＤ２４４、ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ２００、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、ＬＩＧＨＴ、ＨＨＬＡ２、ＴＭＩＧＤ２、ＢＴＮＬ２、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＭＩＣＡ／Ｂ、ＫＩＲ２ＤＬ−１、ＫＩＲ２ＤＬ−２、ＫＩＲ２ＤＬ−３、及びＫＩＲ３ＤＬ２を含む。幾つかの例において、第二抗原はＥＧＦＲである。幾つかの例において、第二抗原はＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ４４、ＣＤ５２、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ９６、ＣＤ９７、ＣＤ９９、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１５５、ＣＤ１７１、ＰＴＨＲ２、ＨＡＶＣＲ２または他の既知のがん細胞マーカーである。適切な第二抗原の他の実例は以下を含むが、これらに限られない：ＦｃγＲＩ、ＣＤ  １５、ｐ１８５  ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）、ＣＤ３、悪性Ｂ細胞（１Ｄ１０）、ｐ９７、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２、ＯＶＣＡＲ−３、ホスファチジルイノシトール−３、メソセリン、Ｌ−Ｄ１（結腸癌）、Ｔｒｏｐ２、メラニン細胞を刺激するホルモン類似体、ＥｒｂＢ２、ＣＡＭＡ１、ＭｏＶ１８、ＣＡＩＸ（カルボキシルアンヒドラーゼＩＸ）、神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）、葉酸結合タンパク（ＦＢＰ）、ＧＤ２、ＧＤ３、ＥｐＣＡＭ、ＥＧＰ−４０、ＶＥＧＦＲ２、ＭＵＣ−１、ＭＵＣ−１６、ＳＴＥＡＰ１（前立腺の六回膜貫通型上皮抗原）、ＰＳＭＡ、ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原）、ＧＰＣ−３、ＬＭＰ−１、ＤＮＡＭ−１（ＤＮＡＸ補助分子１）、大腸がん関連抗原（ＡＭＯＣ−３１）、サポニン、Ｉｄ−１、ＣＤ７、ＣＤ３８、ＣＤ３０、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＥＡ、リシンＡ鎖、インターフェロン−α（ＩＦＮ−α）、ハイブリドーマイディオタイプ、ビンカアルカロイド、アルカリホスファターゼ、フィブリン、組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔＰＡ）、ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子（ｕＰＡ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、Ｆｃ受容体（例えばＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩまたはＦｃγＲＩＩＩ）、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、Ｔ細胞受容体、インフルエンザ、ＦｃγＲ、ＨＩＶ、ＥＯＴＵＢＥ、ＤＰＴＡ、ハプテン、ウサギＩｇＧ、フェリチン、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、ホルモン、ソマトスタチン、Ｐ物質、ＦＩＴＣ及びβ−ガラクトシダーゼ。他の適切な第二抗原は以下を含むが、これらに限られない：腫瘍細胞抗原、細胞毒性トリガー分子、毒素、フィブリン溶解剤、細胞表面受容体、感染症の標的、ワク��ンアジュバント、診断試薬、検出分子、及びレポーター分子。
【００９７】
＜組成物―キメラ抗原受容体＞
一つの実施形態において、本明細書はキメラ抗原受容体を提供し、それは細胞外抗原結合ユニット、膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインを含む、そのうち前記細胞外抗原結合ユニットはＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドに特異的に結合し、そのうち前記ＷＴ１ペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列を有し、かつその細胞外抗原結合ユニットはＨＬＡと複合している参照ペプチドと顕著な結合を示さなく、該参照ペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９のアミノ酸配列を有する。
【００９８】
一つの実施形態において、本明細書はキメラ抗原受容体を提供し、それは細胞外抗原結合ユニット、膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインを含み、そのうち前記細胞外抗原結合ユニットはＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドに特異的に結合し、前記ＷＴ１ペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列を有するものであり、そのうちＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０のアミノ酸配列を有する参照抗原結合ユニットと比較して、細胞外抗原結合ユニットはより少ないＨＬＡと複合している参照ペプチドとの非特異的結合を示し、参照ペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９のアミノ酸配列を有するものである。
【００９９】
本件の抗ＷＴ１キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は通常、細胞外抗原結合ユニット、膜貫通ドメイン及び免疫応答細胞活性化を制御する細胞内シグナル伝達領域を含むものである。幾つかの場合において、抗ＷＴ１ ＣＡＲはさらにヒンジまたはスペーサを含む。幾つかの場合において、抗ＷＴ１ ＣＡＲはさらに一つまたは複数の共刺激ドメインを含む。
【０１００】
本明細書が開示する如何なる実施形態の一つの面において、本件のキメラ抗原受容体は本明細書が開示する如何なる本件の抗原結合ユニットを含む。幾つかの実例において、本件の抗原結合ユニットは下記細胞外抗原結合ユニットを含み、本件の抗原結合ユニットでありまたは本件の抗原結合ユニットを含む。
【０１０１】
キメラ抗原受容体は通常、細胞外抗原結合ユニットを含む。一つの実施形態において、該細胞外抗原結合ユニットは全ヒトのものとすることができる。他の場合において、該細胞外抗原結合ユニットはヒト化されることができる。他の場合において、該細胞外抗原結合ユニットは、マウスのまたは下記細胞外抗原結合ユニットに嵌合するものであり、少なくとも二種類の異なる動物種に由来するアミノ酸配列からなるものである。幾つかの場合において、細胞外抗原結合ユニットは非ヒトのものである。複数種類の抗原結合ユニットを設計してＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドを標的とするものを設計できる。非制限的な実例は以下を含む：抗体に由来する単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖの）、ライブラリーから選ばれるフラグメント抗原結合ユニット（Ｆａｂ）、単一ドメインフラグメント、または同一由来受容体と接合する天然リガンド。細胞外抗原結合ユニットはｓｃＦｖ、Ｆａｂまたは天然リガンド、及びそれらの如何なる誘導体をカバーできる。細胞外抗原結合ユニットは、完全なる抗体以外の分子を指し、完全なる抗体の一部を含むことができ且つ完全なる抗体と結合する抗原に結合できる。抗体フラグメントの実例は以下を含むがこれらに限られない：Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；二重特異性抗体、線形抗体、単一鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）；抗体フラグメントからなる多重特異性抗体。
【０１０２】
細胞外抗原結合ユニット（例えば、ｓｃＦｖ、Ｆａｂまたは天然リガンド）は抗原特異性を決めるＣＡＲの一部とすることができる。細胞外抗原結合ユニットは如何なる相補標的と結合できる。細胞外抗原結合ユニットは可変領域の配列が知られている抗体に由来することができる。細胞外抗原結合ユニットはすでに得られたマウスハイブリドーマから得られる抗体配列に由来することができる。代替案として、選択可能に、細胞外抗原結合ユニットは、腫瘍細胞または初代細胞（ｐｒｉｍａｒｙ  ｃｅｌｌ）（例えば、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ））の全エクソン配列決定により得ることもできる。
【０１０３】
幾つかの状況において、細胞外抗原結合ユニットの結合特異性は相補決定領域またはＣＤＲ（例えば、軽鎖ＣＤＲまたは重鎖ＣＤＲ）によって決まる。多くの場合において、結合特異性は軽鎖ＣＤＲ及び重鎖ＣＤＲによって決まる。重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲの与えられた組み合わせは所定の結合ポケットを提供することができ、重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲの所定の組み合わせは所定の結合ポケットを提供し、該結合ポケットは抗原（例えば、ＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチド）に比較して（他の参照抗原または参照ペプチドと比較して）より大きい親和力及び／または特異性を有する。例えば、ＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチド特異性のＣＤＲはＣＡＲ細胞外結合ドメインにおいて発現され、これによりＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドを標的とするＣＡＲは、免疫応答細胞がＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドを発現する腫瘍細胞を標的とするようにさせる。
【０１０４】
本明細書が開示する如何なる実施形態の幾つかの面において、細胞外抗原結合ユニット（例えば、ｓｃＦｖ）は、ＨＬＡと複合しているＷＴ１ぺプチドと特異性を有する軽鎖ＣＤＲを含むことができる。軽鎖ＣＤＲは、抗原結合ユニット、例えばＣＡＲのｓｃＦｖの軽鎖相互決定領域とすることができる。軽鎖ＣＤＲはアミノ酸残基の一つの連続とした配列またはアミノ酸残基の二つまたはより多くの連続配列を含み、前記配列は非相補決定領域、例えばフレームによって分けられ、かつ隣接する（ｆｌａｎｋｅｄ）のものとなることができる。幾つかの場合において、軽鎖ＣＤＲは二つまたはより多くの軽鎖ＣＤＲを含み、軽鎖ＣＤＲ−１、ＣＤＲ−２等と称されることができる。幾つかの場合において、軽鎖ＣＤＲは三つの軽鎖ＣＤＲを含み、それぞれ軽鎖ＣＤＲ−１、軽鎖ＣＤＲ−２及び軽鎖ＣＤＲ−３を含む。幾つかの実例において、共同の軽鎖上に存在する一組のＣＤＲは軽鎖ＣＤＲと通称することができる。
【０１０５】
本明細書が開示する如何なる実施形態の幾つかの面において、細胞外抗原結合ユニット、例えばｓｃＦｖは、ＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドと特異性を有する重鎖ＣＤＲを含むことができる。重鎖ＣＤＲは、抗原結合ユニット、例えばｓｃＦｃの重鎖の相補決定領域とすることができる。重鎖ＣＤＲはアミノ酸残基の一つの連続配列またはアミノ酸残基の二つまたはより多くの連結配列を含むことができ、前記配列は、非相補決定領域、例えばフレームによって分けられ、かつ隣接する（ｆｌａｎｋｅｄ）のものとなることができる。幾つかの場合において、重鎖ＣＤＲは二つまたはより多くの重鎖ＣＤＲを含み、重鎖ＣＤＲ−１，ＣＤＲ−２等と称されることができる。一部の場合において、重鎖ＣＤＲは三つの重鎖ＣＤＲを含み、それぞれ重鎖ＣＤＲ−１，重鎖ＣＤＲ−２及び重鎖ＣＤＲ−３を含む。幾つかの場合において、共同の重鎖上に存在する一組のＣＤＲは重鎖ＣＤＲと通称することができる。
【０１０６】
幾つかの場合において、細胞外抗原結合ユニットはＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドを特異的に識別する。幾つかの場合において、細胞外抗原結合ユニットはＷＴ１のＮ末端ペプチド、Ｃ末端ペプチドまたは如何なるペプチドを標的とするものである。幾つかの場合において、ＷＴ１ペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列を有する。
【０１０７】
幾つかの場合において、抗ＷＴ１のＣＡＲ免疫応答細胞はＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドを標的とする細胞外抗原結合ユニットを発現するものである。幾つかの場合において、ＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドと結合するＣＤＲ、軽鎖及び／または重鎖はＣＡＲ免疫応答細胞、例えばＣＡＲ  Ｔ細胞の細胞外抗原結合ユニット内に含まれることができる。幾つかの場合において、修飾された抗ＷＴ１  ＣＤＲは、ＣＡＲ免疫応答細胞の細胞外抗原結合ユニット上に発現でき、かつ原始抗ＷＴ１  ＣＤＲと約５０％から約１００％の同一性を有する。幾つかの場合において、修飾された抗ＷＴ１  ＣＤＲは、未修飾の抗ＷＴ１  ＣＤＲと約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または約１００％の同一性を有する。
【０１０８】
遺伝子工学により、複数の方式によって抗原結合ユニットを修飾できる。幾つかの場合において、細胞外抗原結合ユニットを突然変異させることができ、これにより標的に対してより高い親和力を有する細胞外抗原結合ユニットを選択できる。幾つかの場合において、細胞外抗原結合ユニットのその標的に対する親和力は、正常組織上において低い水準で発現する標的に対して最適化を行うことができる。このような最適化により潜在の毒性を最小化させることができる。他の場合において、膜結合型の標的に対してより高い親和力を有する細胞外抗原結合ユニットのクローンはその可溶型の対応物より優れる。これに対して修飾を行い、これらの標的は異なるレベルの可溶型で測定されることができ、且つこれらの指向性は予期されない毒性をもたらす可能性がある。
【０１０９】
幾つかの場合において、本件の抗原結合ユニットは、マウスの、ヒト化のまたは全ヒトのものである。抗原結合ユニットは、約１％から約１００％人類のものである。幾つかの場合において、抗原結合ユニットは、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または１００％人類のものである。
【０１１０】
幾つかの例において、本件のキメラ抗原受容体は細胞外抗原結合ユニットを含むことができ、それは軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ及び重鎖（ＨＣ）ＣＤＲを含む。
【０１１１】
幾つかの場合において、本件の細胞外抗原結合ユニットは、表１に示される如何なるＬＣＤＲまたはＨＣＤＲを含むことができる。付加的にまたは代替的に、本件の抗原結合ユニットは、表１に示される如何なるＬＣＤＲまたはＨＣＤＲと少なくとも６０％の同一性を有するＬＣＤＲまたはＨＣＤＲを含む。幾つかの面において、本件ＬＣＤＲまたはＨＣＤＲは、表１に示される如何なる配列ＩＤ番号（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ）と少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％またはより高い配列相同性を示すものである。
【０１１２】
幾つかの場合において、軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲは、軽ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む；重鎖（ＨＣ）ＣＤＲはＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。幾つかの実例において、前記ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３は、それぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５−７及び１１−１５からなるグループから選ばれる配列を有する。幾つかの実例において、前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３は、それぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２−４、８−１０及び１６−１７からなるグループから選ばれる配列を有する。幾つかの例において、前記ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３は、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５−７及び１１−１５からなるグループから選ばれる配列を有する。前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３は、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２−４、８−１０及び１６−１７からなるグループから選ばれる配列を有する。
【０１１３】
本明細書が開示する如何なる実施形態の幾つかの面において、細胞外抗原結合ユニットは軽鎖ＣＤＲを含み、そのうち前記軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲは三つのＬＣＤＲ（即ちＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３）の組み合わせを含む。三つのＬＣＤＲの組み合わせは表２に示される任意の組み合わせを含むことができる。
【０１１４】
本明細書が開示する如何なる実施形態の幾つかの面において、細胞外抗原結合ユニットは重鎖ＣＤＲを含み、そのうち前記重鎖（ＨＣ）ＣＤＲは三つのＨＣＤＲ（即ちＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３）の組み合わせを含む。三つのＨＣＤＲの組み合わせは表３に示される任意の組み合わせを含むことができる。
【０１１５】
本明細書が開示する如何なる実施形態の幾つかの面において、細胞外抗原結合ユニットは軽鎖ＣＤＲ及び重鎖ＣＤＲを含み、そのうち前記軽鎖ＣＤＲと前記重鎖ＣＤＲはそれぞれ以下からなるグループから選ばれるＬＣＤＲ及びＨＣＤＲを含む；表２に列挙されるＬＣＤＲの任意の組み合わせ及び表３に示されるＨＣＤＲの任意の組み合わせ。
【０１１６】
幾つかの場合において、細胞外抗原結合ユニットはヒンジまたはスペーサを含む。用語のヒンジ及びスペーサは交換して使用できる。ヒンジはＣＡＲの一部とすることができ、細胞外抗原結合ユニットに対して柔軟性を提供する。幾つかの場合において、ヒンジは細胞の細胞表面上のＣＡＲを測定のために用いることができ、特に細胞外結合ユニットの測定に用いる抗体が作用せずまたは得ることができない場合である。例えば、該エピトープの細胞外抗原結合ユニットが標的とする標的上の位置によって決められ、場合によっては免疫グロブリンのヒンジの長さを最適化させる必要がある。
【０１１７】
幾つかの場合において、ヒンジは免疫グロブリンに属さなく、もう一つの分子に属する可能性があり、例えばＣＤ８α分子の天然ヒンジである。ＣＤ８αヒンジはシステインとプロリン残基を含む可能性があり、これらの残基はＣＤ８共受容体とＭＨＣ分子の相互作用に作用するものである。前記システインとプロリン残基は前記ＣＡＲの性能に影響できる。幾つかの例において、ＣＤ８αヒンジはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：  ３５のアミノ酸配列を含むものである。
【０１１８】
ＣＡＲヒンジはサイズが調整可能で、かつある程度ＣＡＲ免疫反応細胞と標的細胞の間の垂直シナプス距離の正常化に対して保障するものである。免疫応答細胞と標的細胞の間の免疫シナプスのこれらのトポロジーはさらに距離を定義し、該距離は細胞表面標的分子上の膜遠位エピトープであり、ＣＡＲによって機能連結できなく、短ヒンジＣＡＲを使用してもシプナス距離が近いことによるシグナル伝達を実現できない。同じように、膜近位ＣＡＲ標的抗原エピトープについて記載され、これらのシグナル伝達出力値は長ヒンジＣＡＲの状況下にだけ観察される。ヒンジは使用される細胞外抗原結合ユニットによって調整できる。ヒンジは如何なる長さとすることができる。
【０１１９】
膜貫通ドメインはＣＡＲを細胞の形質膜にアンカーできる。ＣＤ２８の天然膜貫通部分はＣＡＲに用いることができる。他の場合において、ＣＤ８αの天然膜貫通部分はＣＡＲに使用できる。「ＣＤ８」はＮＣＢＩレファレンス番号：ＮＰ＿００１７５９と少なくとも８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９または１００％の同一性を有するタンパク質または刺激活性を有するフラグメントである。「ＣＤ８核酸分子」とはＣＤ８ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。幾つかの場合において、膜貫通領域はＣＤ２８の天然膜貫通部分である。「ＣＤ２８」はＮＣＢＩレファレンス番号：ＮＰ＿００６１３０と少なくとも８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９または１００％の同一性のタンパク質または刺激活性を有するフラグメントである。「ＣＤ２８核酸分子」とは、ＣＤ２８ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。幾つかの場合において、膜貫通部分はＣＤ８α領域を含むことができる。
【０１２０】
ＣＡＲの細胞内伝達領域は、少なくとも一種類の免疫応答細胞のエフェクター機能を活性化できる（ＣＡＲは該細胞中に放置されている）。ＣＡＲはＴ細胞のエフェクター機能を誘導し、例えば、細胞溶解活性または補助因子活性（分泌サイトカインを含む）の可能性がある。そのため、用語の細胞内シグナル伝達領域とはタンパク質の一部を意味し、そのエフェクター機能シグナルを伝達し、かつ細胞の特定の機能を誘導する。通常は細胞内シグナル伝達領域全体を用いることができるが、多くの場合、シグナル伝達ドメインの鎖全体を使用する必要はない。幾つかの場合において、細胞内シグナル伝達領域の切断部分を使用する。そのため、幾つかの場合において、用語の細胞内シグナル伝達領域はエフェクター機能シグナルの細胞内シグナル伝達領域を形質移入できる如何なる切断部分を有する。
【０１２１】
ＣＡＲのシグナル伝達ドメインの好ましい実例は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）及び共受容体（これらが共同作用して標的受容体が接合した後にシグナル伝達を開始する）の細胞質配列、及びこれらの配列の如何なる誘導体または変異体及び同じ機能を有する如何なる合成配列を含むことができる。
【０１２２】
幾つかの場合において、前記細胞内シグナル伝達領域は、免疫受容体チロシン活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）のシグナル伝達モチーフである。ＩＴＡＭを含む細胞質シグナル伝達配列の実例は以下を含む：ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ及びＣＤ６６ｄに由来するもの。しかし、好ましい実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインはＣＤ３ζ鎖に由来するものである。
【０１２３】
一つまたは複数のＩＴＡＭモチーフを含むＴ細胞シグナル伝達ドメインの実例はＣＤ３ζドメインであり、Ｔ細胞受容体Ｔ３鎖またはＣＤ２４７とも称される。このドメインはＴ細胞受容体―ＣＤ３複合体の一部であり、かつ下記過程において重要な作用を有するものである：抗原識別をＴ細胞主要エフェクター活性化を有する数種類の細胞内シグナル伝達経路にカップリングさせる。本明細書に記載のように、ＣＤ３ζは、まずＳｗｉｓｓｐｒｏｔのＰ２０９６３により既知のヒトＣＤ３ζ及びそのサブ型に対するもので、基本的に同じ配列のタンパク質を含むものである。キメラ抗原受容体の一部として、全Ｔ細胞受容体Ｔ３ζ鎖を必要とせず、かつＴ細胞受容体Ｔ３ζ鎖のシグナル伝達ドメインの如何なる誘導体（如何なる機能同等物を含む）も適切である。
【０１２４】
細胞内シグナル伝達ドメインは表４の如何なるドメインから選ぶことができる。幾つかの場合において、ドメインを修飾でき、これにより如何なる一つの参照ドメインとの同源性は約５０％から約１００％である。表４のいかなるドメインを修飾でき、これにより修飾されたバージョンは約５０、６０、７０、８０、９０、９５、９６、９７、９８、９９または約１００％の同一性を有することができる。
【０１２５】
ＣＡＲの細胞内シグナル伝達領域は、さらに一つまたは複数の共刺激ドメインを含むことができる。細胞内シグナル伝達領域は単一の共刺激ドメインを含むことができ、例えばシグナル伝達領域は単一の共刺激ドメインを含むことができ、例えばζ鎖（第１世代ＣＡＲ）またはＣＤ２８または４−１ＢＢ（第２世代ＣＡＲ）である。他の実例において、細胞内シグナル伝達領域は二つの共刺激ドメインを含むことができ、例えばＣＤ２８／ＯＸ４０またはＣＤ２８／４−１ＢＢ（第３世代）である。
【０１２６】
これらの共刺激ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインは、例えばＣＤ８と共にキナーゼ経路の下流の活性化を生じさせることができ、遺伝子転写及び機能性細胞応答を支持する。ＣＡＲの共刺激ドメインは、ＣＤ２８（ホスファチジルイノシトール-4,5-ビスリン酸3-キナーゼ）または４−１ＢＢ／ＯＸ４０（ＴＮＦ−受容体関連因子リンカータンパク）経路及びＭＡＰＫ及びＡｋｔの活性化と関連する近位シグナル伝達タンパクを活性化させることができる。
【０１２７】
幾つかの場合において、ＣＡＲによって生じるシグナルはサブ（二次）または共刺激シグナルと複合できる。共刺激シグナル伝達ドメインについて、キメラ抗原受容体状複合体を、幾つかの可能な共同刺激シグナル伝達ドメインを含むように設計できる。本分野において知られるように、ナイーブＴ細胞において、Ｔ細胞受容体の接合のみではＴ細胞を細胞毒性Ｔ細胞に完全活性化するように誘導するに不十分である。完全の、多産のＴ細胞活性化は第二の共刺激シグナルを必要とする。すでに報道されている、Ｔ細胞活性化に対して共刺激を提供する数種類の受容体は、以下を含むが、これらに限られない：ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ２、ＣＤ５、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、４−１ＢＢＬ、ＭｙＤ８８及び４−１ＢＢ。これらの共刺激分子が利用するシグナル伝達経路は主要Ｔ細胞受容体活性化シグナル協同作用と共同の特性を共有する。これらの共刺激シグナル領域が提供するシグナルは、一つまたは複数のＩＴＡＭモチーフ（例えばＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン）に由来する主要エフェクター活性化シグナル協同作用であり、かつ活性化Ｔ細胞のニーズを満たすことができる。
【０１２８】
幾つかの場合において、キメラ抗原受容体複合体に対して共刺激ドメインを添加することでエンジニアリング（遺伝子操作された）細胞の機能及び耐久性を強化できる。一つの実施形態において、Ｔ細胞シグナル伝達ドメイン及び共刺激ドメインは互いに融合し、これによりシグナル伝達領域となる。
【０１２９】
【表４】
2020523985.tif 000006
【０１３０】
幾つかの場合において、本件ＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６うちのいずれかと約５０％から約１００％の配列相同性を有する配列またはその一部を含むことができる。幾つかの場合において、本件ＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１からＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６のうちのいずれかと約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または約１００％の配列相同性を有する配列を含むことができる。
【０１３１】
幾つかの場合において、本件のＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７からＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５（表５）のいずれか一つと約５０％から約１００％の配列相同性を有する配列を含むことができる。幾つかの場合において、本件のＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７からＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５のいずれか一つと約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または約１００％の配列相同性を有する配列を含むことができる。
【０１３２】
【表５】
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【０１３３】
＜本発明のポリヌクレオチドおよびベクター＞
幾つかの実施形態において、本明細書は、本明細書が開示する如何なる抗原結合ユニットまたはキメラ抗原受容体をコードする分離された核酸を提供する。もう一つの実施形態において、本明細書は本明細書が開示する如何なる抗原結合ユニットまたはキメラ抗原受容体をコードする核酸配列を含むベクターを提供する。幾つかの実施形態において、本発明は本明細書が開示する抗原結合ユニットまたは細胞外抗原結合ユニットの軽鎖ＣＤＲ及び重鎖ＣＤＲをコードする分離された核酸を提供する。
【０１３４】
本件の抗原結合ユニットまたはキメラ抗原受容体は組換えＤＮＡ技術、合成化学技術またはその組み合わせによって製造できる。例えば、通常使用されている本分野において知られる標準分子技術を用いて抗原結合ユニットまたはキメラ抗原受容体の希望される成分をコードする配列（軽鎖ＣＤＲ及び重鎖ＣＤＲ）をクローン化して発現ベクター中に組み入れる。これらの配列は、所望のタンパク質配列をコードする他のベクター、各自のテンプレート核酸を使用してＰＣＲから生じるフラグメント、または所望の配列をコードする合成ヌクレオチドの組立体によって組み入れられる。興味のある抗原結合ユニットを含む発現ベクターにより適切な細胞をトランスフェクションすることにより発現系を構築する。
【０１３５】
通常の技術を用いて、従来抗体の軽鎖または重鎖の複数の領域の対応するヌクレオチド配列を容易に得ることができ、さらにそれに対して配列決定を行い、前記通常技術はハイブリッド、ＰＣＲ及びＤＮＡ配列決定を含むことができるがこれらに限られない。モノクローナル抗体を生産するハイブリドーマ細胞は抗体ヌクレオチド配列の好ましい由来である。パブリックのまたは私立の保存データベースから一連のモノクローナル抗体を大量に生産するハイブリドーマ細胞を生産できる。最大の寄託機関はアメリカン・タイプ・. カルチャー・コレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，ａｔｃｃ．ｏｒｇ）であり、該寄託センターは複数種類の優れたキャラタリゼーションを有するハイブリドーマ細胞株の寄託を提供している。代替案として、免疫されたまたは免疫されていないげっ歯動物または人類及び形成臓器（例えば、脾臓及び末梢血リンパ球）から抗体ヌクレオチドを得る。抗体ヌクレオチドの抽出及び合成に適した特定の技術はＯｒｌａｎｄｉら（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ８６：３８３３−３８３７；Ｌａｒｒｉｃｋら（１９８９）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１６０：１２５０−１２５５；Ｓａｓｔｒｙら（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、Ｕ．Ｓ．Ａ．８６：５７２８−５７３２；及び米国特許５，９６９，１０８号に記載されている。
【０１３６】
抗原結合ユニットまたはキメラ抗原受容体をコードするポリヌクレオチドは、例えばヒト重鎖及び軽鎖定常領域のコード配列により同一非ヒト配列に置き換えて修飾することにより行うことができる。このような方式により、原始抗原結合ユニットの結合特異性を保持したキメラ抗体を製造する。
【０１３７】
以下のように理解すべきである。本発明に示されているポリヌクレオチドは、例示的なポリペプチドの機能同等物及びそのフラグメントのそれらをコードするものである。機能上同等のポリぺプチドは、これによりコードされるポリぺプチドのそれらの特性を向上、低下または顕著に影響しないものが含まれる。機能同等物は保守アミノ酸置換基を有するポリペプチド、融合体及び突然変異体のアナログを含む。
【０１３８】
遺伝暗号（ｇｅｎｅｔｉｃ  ｃｏｄｏｎ）の同義性（ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）により、抗原結合ユニットをコードする配列、及び、本発明のポリヌクレオチド及びベクターの配列の構築に適したヌクレオチドは大きく変化する可能性がある。配列変異体は修飾されたＤＮＡまたはアミノ酸配列を有することができ、一つまたは複数の置換、欠失または追加があり、その純作用は希望される抗原結合活性を保持する。例えば、コード領域にて複数種類の置換を行うことができ、これらの置換はコードされるアミノ酸を変化させず、保守性の変化をもたらさない。これらの置換は本発明にカバーされる。保守的アミノ酸置換は以下のグループ内の置換を含む：グリシン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、リジン、アルギニン、 フェニルアラニン、チロシン。保守的置換は、確実に有効的に生産されるポリぺプチドに含まれる一つまたは複数のアミノ酸残基を改変させ、しかし該置換は生産される抗原結合ユニットの抗原結合活性を干渉しないと予測される。コードされるアミノ酸残基を改変しないヌクレオチド置換は、異なる系中の遺伝子発現を最適化することに用いられる。適切な置換は当業者が知っているもので、かつこれを行うことができ、例えば発現系中の好ましいコドンとして用いる。以下例を挙げて保守的置換について説明する。
【０１３９】
【表６】
2020523985.tif 000008
【０１４０】
希望する際、本明細書が開示する組換えポリヌクレオチドは、遺伝子産物の発現及び精製の検出に用いられる異種配列を含む。これらの配列の実例は本分野で知られるものであり、かつレポータータンパク、例えば、β−ガラクトシダーゼ、β−ラクタマーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）、ルシフェラーゼ、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）及びそれらの誘導体をコードするものを含む。他の精製の助けになる異種配列は、エピトープ、例えば、Ｍｙｃ、ＨＡ（インフルエンザウイルス血球レクチン由来）、Ｈｉｓ−６、ＦＬＡＧまたは免疫グロブリンのＦｃ部分、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）およびマルトース結合タンパク（ＭＢＰ）をコードできる。
【０１４１】
本明細書が開示するポリヌクレオチドは上記複数種類の化学機能を有する部分と結合できる。通常用いる部分は、測定可能なシグナルを生成するラベル、シグナルペプチド、免疫反応試薬を強化させる試薬、固体ベクター（ｓｏｌｉｄ  ｓｕｐｐｏｒｔ）とカップリングする試薬、ワクチンベクター、生体反応調整剤（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｍｏｄｉｆｉｅｒ）、順磁性ラベル及び薬物を含む。これらの部分は組換えまたは本分野に知られる他の手段によりポリヌクレオチドを共有結合させる。
【０１４２】
本発明のポリヌクレオチドは他の配列を含むことができ、例えば、同一転写単位内の他のコード配列、プロモーターのような制御エレメント、リボソーム結合部位とポリアデニル化部位、同じまたは異なるプロモーターの制御下における他の転写単位、宿主細胞のクローンニング、発現及び形質転換を許す配列、及び本発明の実施形態に必要な如何なるこのような構築体を提供する。
【０１４３】
本発明に示されるポリヌクレオチドは、化学合成、組換えクローンニング方法、ＰＣＲ、またはそれらの組み合わせによって得ることができる。化学ポリヌクレオチド合成の方法は本分野において知られるもので、ここにおいて詳細に記載しない。当業者は本明細書にて提供する配列データによりＤＮＡ合成装置または商業サービスでの購買により所望のポリヌクレオチドを得ることができる。
【０１４４】
希望される配列のポリヌクレオチドを適切なベクターに挿入することで、該ベクターを適切な宿主細胞に導入して複製及び拡張に用いる。そのため、本発明は一種類または複数種類の本発明のポリヌクレオチドの複数のベクターをカバーする。さらに発現ベクターの選択可能ライブラリーを提供し、それは本明細書が開示する抗原結合ユニットの少なくとも一種のベクターを含むものである。
【０１４５】
本発明のベクターは通常、抗原結合ユニットの発現に必要な転写または翻訳の制御配列を含む。適切な転写または翻訳制御配列は以下を含むがこれらに限られない：複製起点、プロモーター、エンハンサー、リプレッサー結合領域、転写開始位置、リボソーム結合位置、翻訳開始位置、及び、転写と翻訳の終了位置。
【０１４６】
プロモーターに対する選択はベクターを導入される宿主細胞に大きく依存する。これらの制御配列と宿主細胞が相容性を有すれば、通常希望される軽鎖または重鎖遺伝子と関連のプロモーターを利用できる。細胞特異性または組織特異性のプロモーターを用いることもできる。当業者は多くの種類の組織特異性プロモーターを記載及び採用した。選択性動物細胞の操作可能な例示的なプロモーターには、肝細胞特異性プロモーターおよび心筋特異性プロモーターを含む。受け入れ細胞タイプの選択により、当業者は本発明の発現ベクターの構築に適した他の適切な細胞特異性または組織特異性プロモーターを知ることができる。
【０１４７】
既に知られた分子クローニングまたは遺伝子工学技術により、適切な転写制御配列、エンハンサー、ターミネーターまたは本分野に知られている如何なる他の遺伝子素子は操作可能な関係により組み込まれ、本発明に発現される完全の選択可能な融合遺伝子を選択できる。上記エレメント以外に、ベクターはさらに選択マーカー（例えば、該ベクターで形質転換される宿主細胞の生存または成長に必要なタンパク質をコードする遺伝子）を含むことができ、このようなマーカー遺伝子は共同で宿主細胞中に導入されるもう一種のポリヌクレオチド配列に携帯できる。
【０１４８】
本発明のポリヌクレオチド及びベクターは数種類の特定の用途を有する。これらは例えば抗原結合ユニットまたはキメラ抗原受容体の生産に用いられる発現系において有用である。これらのポリヌクレオチドは下記プライマーとして使用でき、それは所望のポリヌクレオチドの増幅に影響する。また、本発明のポリヌクレオチドは薬物組成物として用いることができ、ワクチン、診断薬及び医薬品を含む。
【０１４９】
本発明の宿主細胞は特に、本件のポリヌクレオチド、ベクターの保存データベースとして使用でき、またはその抗原結合特異性に基づいて所望の抗原結合ユニットまたはキメラ抗原受容体を生産及びスクリーニングする運搬体として使用できる。
【０１５０】
そのため、本発明は所望の抗原発生免疫反応の抗原結合ユニットまたはキメラ抗原受容体を鑑別する方法を提供する。このような方法は以下のステップを含む：（ａ）遺伝子上の異なる抗原結合ユニットのライブラリーを作成し、該ライブラリーは少なくとも一つの本件の抗原結合ユニットを含む；（ｂ）抗原結合ユニットのライブラリーと所望の抗原を接触させる；（ｃ）抗原結合ユニットと抗原の間の特異性結合を測定し、これにより所望の抗原と免疫反応を起こす抗原結合ユニットを鑑別する。
【０１５１】
抗原結合ユニットまたはキメラ抗原受容体の所望の抗原に特異的に結合する能力は本分野においてよく確立された複数の方法によって測定できる。Ｈａｒｌｏｗ及びＬａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ｇｈｅｒａｒｄｉら（１９９０）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．１２６：６１−６８参照。一般的に、免疫測定により、例えばラベルを添加した抗原結合ユニットと固体ベクター上または基底上に固定化される抗原反応により、所望の抗原特異性を示す抗原結合ユニットを直接検出できる。一般的に、免疫測定過程において低いレベルを示す非特異性結合の材料を使用して抗原が粘着される基底を製造する。例示的な固体ベクターは下記一種類または複数種類の材料から製造される：プラスチック重合体、ガラス、セルロース、ニトロセルロース、半導体材料および金属。幾つかの実例において、該基底は培養皿、クロマトグラフィービーズ、磁気ビーズ等である。
【０１５２】
このような固相測定により、未反応の抗原結合ユニットは洗浄により除去される。しかし、液相測定において、未反応の抗原結合ユニットは他の分離技術、例えば、ろ過またはクロマトグラフィーによって除去される。抗原とラベル添加の抗原結合ユニットを結合させた後、結合マーカーの量を決められる。該技術の一つの変化は競合性の測定であり、そのうち抗原は原始結合分子により飽和になるよう結合される。一群の本件の抗原結合ユニットを複合体中に導入する際、より高い親和力を示す抗原のみが競争力を有し、かつ抗原との結合を保持する。
【０１５３】
代替案として、細胞選別により所定の抗原との特異性結合を評価でき、これは所望の抗原を選別待ちの細胞上に呈することを含み、それから測定可能試薬とカップリングできる抗原結合ユニットを用いて標的細胞に対してラベリングを行い、それからセルソーター中でラベルを添加していない細胞中からラベルを添加された細胞を分離する。先進的な細胞分離方法は蛍光活性化細胞選別法（ＦＡＣＳ）である。シングルファイル（ｓｉｎｇｌｅ  ｆｉｌｅ）の細胞はレーザービームを通過し、それから蛍光によってラベリングされた抗原結合ユニットが結合するそれぞれの細胞の蛍光を測定する。
【０１５４】
溶出された抗原結合ユニットは後続の分析においてタンパク質配列決定に係ることができ、これにより軽鎖及び重鎖のアミノ酸配列を知る。得られたアミノ酸配列に基づいて、組換えクローニング方法(ＰＣＲ、ライブラリースクリーニング、従来の核酸データベース中における同一性検索またはそれらの任意の組み合わせを含む)により、抗体ポリペプチドをコードするｃＤＮＡを得る。通常用いられるデータベースは以下を含むがこれらに限られない：ＧｅｎＢａｎｋ、ＥＭＢＬ、ＤＤＢＪ、ＰＤＢ、ＳＷＩＳＳ−ＰＲＯＴ、ＥＳＴ、ＳＴＳ、ＧＳＳ及びＨＴＧＳ。
【０１５５】
ファージまたは細菌粒子上に抗原結合ユニットのライブラリーを展開する場合、好ましくはアフィニティークロマトグラフィーを用いて選択する。該方法は通常、ファージ抗原結合ユニットのライブラリーと溶液中の抗原被包プレート、カラム基質、細胞またはビオチン化の抗原と結合し、それから捕獲を行う。固相と結合しているファージまたは細菌を洗浄し、それから可溶性ハプテン、酸またはアルカリによって溶出させる。代替案として、抗原濃度を向上させることでアフィニティ基質上から抗原結合ユニットを解離させることに用いられる。抗原に対して極めて高い親和力または結合力を有する幾つかの抗原結合ユニットに対して、例えばＷＯ  ９２／０１０４７に記載のように、効果的な溶出は高ｐＨまたは温和な還元性溶液を必要とする場合がある。
【０１５６】
選択の効率は幾つかの要素の組み合わせによる可能性があり、洗浄過程中の解離動力学、及び単一ファージまたは細菌上の複数の抗原結合ユニットが同時に固体ベクター上の抗原と結合できるかを含む。例えば、ショート洗浄、多価ディスプレイ及び固体ベクター上における高い抗原被包密度によりスピード解離動力学（及び弱い結合親和力）を有する抗体を保留する。反するように、ロング洗浄、単価ファージ及び低い抗原被包密度により、緩やかな解離動力学（及び優れた親和結合力）を有する抗原結合ユニットを選択することに有利である。
【０１５７】
希望する場合は、関連しない抗原に対して抗原結合ユニットのライブラリーを予め選択することで希望しない抗原結合ユニットを逆選択できる。また、関連抗原に対してライブラリーを予め選択し、これにより例えば抗独特型抗原結合ユニットを分離できる。
【０１５８】
＜本発明の宿主細胞＞
幾つかの実施形態において、本明細書は本明細書が開示する如何なる一種の抗原結合ユニットを発現する宿主細胞を提供する。本件の宿主細胞は通常、本明細書が開示する如何なる一種の抗原結合ユニットをコードする核酸を含む。
【０１５９】
本発明は上記ポリヌクレオチド、ベクターまたはベクターライブラリーによるトランスフェクションの宿主細胞である。多くの適切な手段（電気穿孔、微粒子衝突、リポソームトランスフェクション、感染（そのうちのベクターと感染試薬がカップリング）、塩化カルシウム、塩化ルビジウム、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥ−グルカンまたは他の物質を用いたトランスフェクション）中のいかなる一種によりベクターを適切な原核または真核細胞中に導入する。ベクターに導入する手段の選択は通常、宿主細胞の特徴によって決まる。
【０１６０】
大多数の動物細胞に対して、如何なる上記方法もベクター輸送に適している。好ましい動物細胞は脊椎動物細胞であり、好ましくはｍｇレベルの哺乳動物細胞で、大量に外因性の導入された遺伝子産物を発現できる。好ましい細胞の非制限性の実例はＮＩＨ３Ｔ３細胞、ＣＯＳ、ＨｅＬａ及びＣＨＯ細胞である。
【０１６１】
一旦適切な宿主細胞中に導入されれば、本分野で知られている如何なる核酸またはタンパク質を用いて測定することにより抗原結合ユニットの測定できる。例えば、軽鎖ＣＤＲまたは重鎖ＣＤＲまたは抗原結合ユニットの転写ｍＲＮＡの存在は、抗原結合ユニットポリヌクレオチドの如何なる領域に相補のプローブを用いて、通常のハイブリッドによって測定できる（例えば、ＲＮＡプロット分析（ノーザンブロット分析））、増幅プログラム（例えば、ＲＴ−ＰＣＲ）、ＳＡＧＥ（米国特許第５，６９５，９３７号）及び／またはアレイに基づく技術（米国特許５，４０５，７８３、５，４１２，０８７及び５，４４５，９３４号）を用いて測定及び／または定量できる。
【０１６２】
ベクターの発現は、発現される抗原結合ユニットを検査することによって知ることができる。複数種類の技術が本分野においてタンパク質分析に用いられることができる。それらは放射免疫測定、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着法）、「サンドイッチ」免疫測定、免疫放射測定、In situ免疫測定（例えば、コロイド金、酵素または放射同位体ラベル）、ウエスタンブロット分析、免疫沈降測定、免疫蛍光測定及びＳＤＳ−ＰＡＧＥを含むがこれらに限定されない。
【０１６３】
＜抗原結合ユニットの準備＞
幾つかの実施形態において、本明細書は、本明細書が開示する如何なる抗原結合ユニットまたはキメラ抗原受容体を生産する方法を提供し、該方法は以下を含む：抗原結合ユニットまたはキメラ抗原受容体の発現に適した条件下において、抗原結合ユニットまたはキメラ抗原受容体を発現する宿主細胞を培養し、さらに宿主細胞が発現する抗原結合ユニットまたはキメラ抗原受容体を分離させる。
【０１６４】
本分野において知られる、複数種類のタンパク質精製技術により発現された抗原結合ユニットまたはキメラ抗原受容体を分離させることができる。一般的に、抗原結合ユニットは分泌されたポリペプチドとして培地から分離されるもので、シグナルペプチドを含まずに生産する際、宿主細胞溶解物または細菌ペリプラズムから回収できる。抗原結合ユニットが膜結合であれば、当業者が通常採用する適切な汚れ除去剤（洗剤）溶液により溶解できる。塩沈殿（例えば、硫酸アンモニウム）、イオン交換クロマトグラフィー（例えば、中性ｐＨにおいて稼働しさらにイオン強度を増加させる段階的勾配溶出のカチオンまたはアニオン交換カラム上における）、ゲルろ過クロマトグラフィー（ゲルろ過ＨＰＬＣを含む）、及びマーカー（ｔａｇ）アフィニティカラムまたはアフィニティ樹脂（例えば、タンパク質Ａ、タンパク質Ｇ、ヒドロキシアパタイトと抗免疫グロブリン）上のクロマトグラフィーによってさらに回収された抗原結合ユニットを精製できる。
【０１６５】
また、本発明の方法及び組成物中において下記によって誘導される免疫グロブリンを利用できる：添加された化学的リンカー、測定可能部分（例えば、蛍光染料、酵素、基質、化学発光部分）、特異的結合部分（例えば、ストレプトアビジン、アビジン及びビオチン）または薬物コンジュゲート。
【０１６６】
本明細書はさらに化学機能部分に結合する抗原結合ユニットまたはキメラ抗原受容体を開示している。一般的に、該部分は測定可能シグナルを生成できるラベル（ｌａｂｅｌ）である。これらの結合の抗原結合ユニットまたはキメラ抗原受容体は、例えば検出システム、例えば腫瘍負荷の定量、転移箇所のイメージング及び腫瘍画像形成に用いることができる。このようなラベルは本分野において既知のものであり、放射線同位体、酵素、蛍光化合物、化学発光化合物、生体発光化合物基質補因子及び阻害剤を含むが、これらに限られない。以下を参照できる。このようなラベルの使用を示唆する特許の実例は、米国特許第３，８１７，８３７；３，８５０，７５２；３，９３９，３５０；３，９９６，３４５；４，２７７，４３７；４，２７５，１４９及び４，３６６，２４１号である。該部分は第二試薬、例えば第二抗体、タンパク質Ａまたはビオチン-アビジン複合体により抗原結合ユニットと共有連結、組換え連結または抗原結合ユニットに結合するものである。
【０１６７】
他の機能部分はシグナルペプチド、免疫反応を強化する試薬、個体担体とのカップリングを促進する試薬、ワクチンベクター、生物的応答調整剤、順磁性ラベル及び薬物を含む。シグナルペプチドは短いアミノ酸配列であり、新しく合成されたタンパク質が形質膜を貫通するように指導し、通常は真核細胞の小胞体、及び細菌の内膜または内外膜である。シグナルペプチドはポリぺプチドのＮ−末端部分またはポリぺプチドのＣ−末端部分にあることができ、かつ生体からポリぺプチドが合成され、生合成と細胞からのポリペプチドの分泌の間で酵素的に除去されることができる。このようなペプチドを抗原結合ユニットに混合して合成分子の分泌を許すことができる。
【０１６８】
免疫応答を強化する試薬は細菌性スーパー抗原を含むが、これに限られない。固体担体にカップリングすることを促進する試薬はビオチンまたはアビジンを含むが、これらに限られない。免疫原担体（Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎ  ｃａｒｒｉｅｒｓ）は如何なる生理上許容できる緩衝液を含むが、これに限られない。生体応答調整剤（サイトカイン、特に腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）を含む）、インターロイキン−２、インターロイキン−４、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子子及びγ−インターフェロン）である。
【０１６９】
適切な薬物部分は抗腫瘍試薬を含む。非制限的な実例は以下を含む：放射性同位体、ビンカアルカロイド、例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチンおよび硫酸ビンクリスチン、ドキソルビシン、硫酸ブレオマイシン、カルボプラチン、シスプラチン、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、アクチノマイシン、塩酸ダウノルビシン、塩酸ドキソルビシン、エトポシド、フルオロウラシル、ロムスチン、メチルクロロエチルアミン塩酸塩、メルファラン、メルカプトプリン、メトトレキサート、マイトマイシン、ミトタン、ペントスタチン、臭化パイパー、メチルベンジド塩酸塩（ｐｒｏｃａｒｂａｚｉｎｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、ストレプトゾトシン、パクリタキセル、チオグアニン及びウウラシルマスタード。
【０１７０】
組換え手段により抗原結合ユニットの免疫毒素を含むことができる。本分野において異なる免疫毒素の生産が知られており、かつこれらの方法は例えば以下から見つけることができる「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｔｏｘｉｎ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ：Ａｉｍｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｍａｇｉｃ  Ｂｕｌｌｅｔ，」Ｔｈｏｒｐｅら（１９８２）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｉｎ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、ｐｐ．１６８−１９０；Ｖｉｔａｔｔａ（１９８７）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３８：１０９８−１１０４；及びＷｉｎｔｅｒ及びＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３４９：２９３−２９９。適した毒素は以下を含むが、これらに限られない；リシン、放射性核種、ヨウシュヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、シュードモナス外毒素Ａ、ジフテリア毒素、リシンＡ鎖、マイコトキシン（例えば、局所アスペルギリン及びホスホリパーゼ）。一般的に、以下を参照できる「Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  Ｔｏｘｉｎｓ，」Ｏｌｓｎｅｓ及びＰｉｈｌ、Ｐｈａｒｍａｃ．Ｔｈｅｒ．１５：３５５−３８１（１９８１）；及び「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ」編集Ｂａｌｄｗｉｎ及びＢｙｅｒｓ、ｐｐ．１５９−１７９、２２４−２６６、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（１９８５）。
【０１７１】
例えば、抗原結合ユニット及び機能性部分をコードする融合遺伝子を構築することにより、組み換えにより化学機能性部分を製造できる。代替案として、抗原結合ユニットは複数種類のよく設立された化学プロセス中の如何なる一種類の化学結合により該部分に結合できる。例えば、当該部分がタンパク質である場合、異常二重機能架橋剤、例えば、ＳＰＤＰ、カルボジイミドグルタルアルデヒド等によって結合できる。例えば、これらの部分は第二試薬、例えば第二抗体、タンパク質Ａまたはビオチン-アビジン複合体により共有接続または結合される。順磁性部分及びそれと抗体の結合は本分野において公知のものである。例えば、Ｍｉｌｔｅｎｙｉら（１９９０）  Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  １１：２３１−２３８を参照できる。
【０１７２】
＜使用する方法＞
一つの実施形態において、本明細書は細胞死を誘導する方法について開示し、該細胞はＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドを含み、前記方法は該細胞と本件のキメラ抗原受容体とを接触させることを含む。
【０１７３】
幾つかの例において、該細胞は体内においてキメラ抗原受容体と接触する。他の実例において、該細胞は体外またはインビトロにおいてキメラ抗原受容体と接触する。
【０１７４】
幾つかの例において、該細胞はがん細胞である。例えば、該がん細胞は血液がん細胞、固形腫瘍細胞、中皮腫がん細胞、結腸がん細胞または大腸がん細胞である。
【０１７５】
一つの実施形態において、本明細書は標的細胞の細胞死を誘導する方法を提供し、該方法は標的細胞において、本件抗原結合ユニットまたはキメラ抗原受容体を発現する複数の宿主細胞を施用し、相当数量の抗原結合ユニットまたはキメラ抗原受容体またはこれらをコードする核酸に欠けている宿主細胞を施用する場合と比較して、標的細胞に対して複数の宿主細胞を施用することでより多くの標的細胞の細胞死を誘導できる。
【０１７６】
幾つかの例において、複数の宿主細胞は体内において標的細胞に施用できる。幾つかの実例において、複数の宿主細胞は体外またはインビトロにおいて標的細胞に施用できる。
【０１７７】
幾つかの例において、標的細胞はがん細胞である。例えば、がん細胞は血液がん細胞、固形腫瘍細胞、中皮腫がん細胞、結腸がん細胞または大腸がん細胞である。
【０１７８】
一つの実施形態において、本明細書は被験者のがんを治療する方法を提供し、前記方法は被験者に対して有効量の本件のキメラ抗原受容体またはそれを含む宿主細胞を施用することを含み、そのうちキメラ抗原受容体はがん細胞の細胞死を誘導する。幾つかの実例において、がんは血液がん、固形腫瘍、中皮腫がん、結腸がんまたは大腸がんである。
【０１７９】
一つの実施形態において、本明細書は必要とする被験者に対してがんを治療する方法を提供し、前記方法は被験者に対して有効量の本件の抗原結合ユニットまたはそれを含む宿主細胞を施用することを含み、前記がんは血液がん、固形腫瘍、中皮腫がん、結腸がんまたは大腸がんである。
【０１８０】
一つの実施形態において、本明細書は必要とする被験者に対してがんを治療する方法を提供し、前記方法は被験者に対して有効量の薬物組成物を施用することを含み、前記薬物組成物は本件の薬物賦形剤及び本件の抗原結合ユニットまたは本件のキメラ抗原受容体を含む。幾つかの実例において、前記がんは血液がん、固形腫瘍、中皮腫がん、結腸がんまたは大腸がんである。
【０１８１】
本明細書が開示する方法によって治療される被験者は、がんまたは固形腫瘍とすることができる。通常、がん細胞または固形腫瘍細胞は一種類または複数種類の腫瘍抗原を発現する。一般的に、腫瘍抗原はＷＴ１またはＷＴ１ペプチドであり、例えばＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列を有するＷＴ１ペプチドである。ＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドを発現するがんまたは固形腫瘍の被験者は、ＷＴ−１陽性がんと表現できる。
【０１８２】
ＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドを発現するがんは以下を含むが、これに限られない：肝臓がん、胃がん、食道がん、肺がん、乳がん、頭頸部がん、卵巣がん、腎臓がん、膀胱がん、子宮頸がん、膵臓がん、脂肪肉腫、精巣非セミノーマ性生殖細胞がん（ｔｅｓｔｉｃｕｌａｒ  ｎｏｎｓｅｍｉｎｏｍａｔｏｕｓ  ｇｅｒｍ  ｃｅｌｌ  ｃａｎｃｅｒ）、黒色腫、腺腫、副腎癌、神経鞘腫、悪性、線維性筋腫、中皮腫、結腸、腸、またはそれらの任意の組み合わせである。本件方法は胃腸の扁平上皮がんまたは腺がん、神経内分泌がんに適用できる。他に、本明細書が開示する免疫応答細胞（例えば、本明細書が開示する抗ＷＴ１ ＣＡＲ−Ｔ細胞）は、卵巣がん、胆管がん、中皮腫、乳がん、肺がんの扁平上皮がん、子宮頸部上皮内腫瘍、子宮頸部扁平上皮がん、肝内および肝外がん、胆嚢がん、浸潤性乳管がん、透明細胞がん、好酸球性腺腫、乳頭がん、腺がん、乳頭がん、および乳房の小葉および髄様がんに用いることができる。
【０１８３】
幾つかの場合において、フローサイトメトリーまたは免疫組織化学によりがん細胞または腫瘍細胞のＷＴ１発現評価を行うことができる。がん細胞または腫瘍細胞上のＷＴ１レベルは、低、中または高に分けることができる。
【０１８４】
幾つかの場合において、がんまたは腫瘍細胞は細胞表面上に、ＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドを発現できる。例えば、ＷＴ１に対する抗体を使用して、例えば免疫組織化学またはフローサイトメトリー分析により、ＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドの細胞表面における発現を知ることができる。代替案として、ＷＴ１  ｍＲＮＡは細胞表面上のＷＴ１発現と関連し、かつＩｎ  ｓｉｔｕ  ハイブリダイゼーション及びＲＴ−ＰＣＲの方法によって測定できる。
【０１８５】
本件の抗ＷＴ１ ＣＡＲをコードする組換え遺伝子を細胞中に混入できる。例えば、組換え遺伝子を免疫応答細胞、例えばＴ細胞に混入できる。細胞中に挿入する場合、組換え遺伝子は相補ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）フラグメント（メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）のコピー）、または自身がゲノムＤＮＡの原始領域に位置する遺伝子（イントロンを有するかまたは含まない）とすることができる。
【０１８６】
組換え遺伝子配列をコードする核酸、例えばＤＮＡを、ランダムに細胞の染色体中に挿入できる。核酸、例えばＤＮＡを、細胞に導入する如何なる方法はランダムな組み込みをもたらす。例えば、該方法は以下を含むがこれらに限られない：電気穿孔、ソノポレーション、遺伝子銃の使用、リポソームトランスフェクション、リン酸カルシウムトランスフェクション、デンドリマーの使用、マイクロインジェクション、およびウイルスベクター（アデノウイルス、ＡＡＶおよびレトロウイルスベクター、及び/またはIIグループ  リボザイムを含む）。
【０１８７】
電気穿孔により組み替え遺伝子をコードするＤＮＡを細胞に導入できる。リポソームトランスフェクション、感染または形質転換によりＤＮＡを細胞に導入できる。電気穿孔及び／またはリポソームトランスフェクションは、初代細胞のトランスフェクションに用いることができる。同種組み換えによりＤＮＡを細胞ゲノムに導入できる。幾つかの場合において、ＤＮＡの遺伝子操作の隣接する箇所に位置でき、該位置とゲノム中の標的の二重断裂領域は相補である。幾つかの場合において、ＤＮＡはポリ核酸から切除でき、それを二重断裂領域に挿入することは同種組換えを必要としない。
【０１８８】
挿入待ちの組換え遺伝子はゲノム中の標的方向の二重断裂分裂サイトと類似の遺伝子操作の位置に隣接するものとなることができる、ポリ核酸から組換え遺伝子を切除でき、これにより二重断裂領域を挿入できる。
【０１８９】
さらに遺伝子組換えをコードするＤＮＡを、レポーター遺伝子を含むように設計し、これによりレポーター遺伝子を活性化させることにより組み替え遺伝子またはその発現生成物の存在を測定する。如何なるレポーター遺伝子を使用でき、例えば本文中に公開するものである。細胞培養物中からレポーター遺伝子が活性化されている細胞を選択することで、組換え遺伝子を含む細胞を選択できる。
【０１９０】
本件の抗ＷＴ１ ＣＡＲの発現は発現測定法（例えば、ｑＰＣＲ）またはＲＮＡレベルの測定により検証できる。発現レベルはコピー数を表すこともできる。例えば、発現レベルが極めて高ければ、ゲノム中にＣＡＲの一つ以上のコピーが組み込まれていることを示す。代替案として、高い発現は組み換え遺伝子が高度転写領域に組み込まれていることを示し、例えば、高度発現のプロモーター付近である。発現はタンパクレベル（例えば、ウエスタンブロット）を測定することによって検証できる。
【０１９１】
本件の抗−ＷＴ１ ＣＡＲ免疫応答細胞は、一つまたは複数の組換え遺伝子を含むことができる。一つまたは複数の組換え遺伝子は、抗原上の少なくとも一つのエピトープ（例えば、ＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチド）を識別し及び結合するＣＡＲタンパクとすることができ、または抗原上の突然変異エピトープを結合できる。ＣＡＲは機能性ＣＡＲとすることができる。本発明の抗ＷＴ１ ＣＡＲ免疫応答細胞は、一つまたは複数のＣＡＲを含むことができ、または単一のＣＡＲ及び二級遺伝子操作された（遺伝子操作）細胞の受容体を含むことができる。
【０１９２】
組換え遺伝子は自殺遺伝子をコードできる。がん患者に対する多くの有効治療方法が証明するように、ＣＡＲ免疫応答細胞が応答する客観的な腫瘍消退は毒性を伴う可能性がある。幾つかの場合において、当該標的抗原が、腫瘍組織と正常組織によって共有される場合、ＣＡＲ免疫応答細胞は腫瘍組織及び正常組織（「オン標的／腫瘍外」毒性、「ｏｎ−ｔａｒｇｅｔ／ｏｆｆ−ｔｕｍｏｒ」ｔｏｘｉｃｉｔｙ）を区別させることができない。他の場合において、免疫系の乱れが生じる可能性があることから、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）と称される。前記ＣＲＳは全身性炎症反応症候群またはサイトカインストームを含む、これはＣＡＲ免疫応答細胞が体内において迅速に増幅した結果である。ＣＲＤは発熱及び低血圧を特徴とする病状であり、ひどい場合は、多臓器不全をもたらすことがある。多くの場合、前記毒性は注入されるＣＡＲ免疫応答細胞の体内増幅と関連し、これは免疫系全体の乱れを引き起こすことがあり、免疫系の全体の乱れをひき起こすことができ、高いレベルの炎症誘発性サイトカイン、例えばＴＮＦα及びＩＬ−６を放出できる。
【０１９３】
幾つかの場合において、標的と正常組織とが共有する抗原のＣＡＲ免疫応答細胞を生成でき、これらは瞬時にＣＡＲを発現し、例えば受容体をコードするｍＲＮＡを電気穿孔する後である。また、大量の努力は、安全スイッチを含むことにより、ＣＡＲ免疫応答細胞を遺伝子操作されたさせることを含み、これらの安全スイッチは重度なオン標的毒性の状況下においてＣＡＲ免疫応答細胞を徹底的に消去できる。ＣＡＲをコードするベクターと安全スイッチとを結合させることができ、例えば、誘導可能なｃａｓｐａｓｅ−９遺伝子（二量体化の化学誘導物によって活性化）またはＥＧＦ受容体Ｒの切断形式である（モノクローナル抗体セツキシマブ（ｃｅｔｕｘｉｍａｂ）活性化）またはＲＱＲ８である。
【０１９４】
本件の抗ＷＴ１ ＣＡＲ免疫応答細胞は自殺遺伝子の組換え遺伝子をコードできる。前記組換え遺伝子はさらにＣＡＲ受容体またはもう一つの類似の受容体を含むことができる。自殺遺伝子はＣＡＲ免疫応答細胞を誘導消去できる。自殺遺伝子は前記ＣＡＲ免疫応答細胞中においてアポトーシスを誘導する如何なる遺伝子である。自殺遺伝子は抗ＷＴ１ ＣＡＲと共にウイルスベクター内においてコードできる。
【０１９５】
一つまたは複数の組換え遺伝子は異なる種に由来できる。例えば、一つまたは複数の組換え遺伝子はヒト遺伝子、マウス遺伝子、ラット遺伝子、ブタ遺伝子、ウシ遺伝子、イヌ遺伝子、ネコ遺伝子、サル遺伝子、チンパンジー遺伝子、またはそれらの任意の組み合わせを含む。例えば、組換え遺伝子はヒトに由来することができ、それはヒト遺伝子配列を有する。一つまたは複数の組換え遺伝子は、ヒト遺伝子を含むことができる。幾つかの場合において、一つまたは複数の組換え遺伝子はアデノウイルス遺伝子ではない。
【０１９６】
組換え遺伝子はランダムまたは位置特異的な方式により免疫応答細胞のゲノム中に挿入でき、上文に記載の通りである。例えば、組換え遺伝子を免疫応答細胞のゲノム中のランダムな遺伝子座に挿入できる。これらの組換え遺伝子は機能性のものとすることができ、例えば、ランダムにゲノム中の如何なる位置に挿入でき、完全に機能性のものである。例えば、組換え遺伝子はそれ自身のプロモーターをコードでき、または内因性プロモーター制御下の位置に挿入できる。代替案として、組換え遺伝子を遺伝子中に挿入でき、例えば遺伝子のイントロンまたは遺伝子のエクソン、プロモーターまたは非コード領域である。組換え遺伝子を挿入でき、この挿入により遺伝子、例えば内因性免疫チェックポイントが破壊される。
【０１９７】
幾つかの場合には、一つ以上のコピーの組換え遺伝子をゲノム中の一つ以上のランダムな遺伝子座に挿入できる。例えば、複数のコピーをゲノム中のランダムな遺伝子座に挿入できる。組換え遺伝子をランダムに一回挿入することに比べて、全体の発現増加をもたらすことができる。オプションとして、組換え遺伝子の一つのコピーを遺伝子に挿入でき、これにより組み替え遺伝子のもう一つのコピーを異なる遺伝子に挿入できる。組換え遺伝子を標的とすることができ、これにより免疫応答細胞のゲノム中を特定の遺伝子座に挿入できる。
【０１９８】
幾つかの場合において、本件の抗ＷＴ１  ＣＡＲの配列をコードするポリ核酸はプラスミドベクターの形を用いることができる。プラスミドベクターはプロモーターを含むことができる。幾つかの場合において、プロモーターは構成的（ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅ）である。幾つかの場合において、プロモーターは誘導型とすることができる。プロモーターはＣＭＶ、Ｕ６、ＭＮＤまたはＥＦ１ａに由来できる。幾つかの場合において、プロモーターはＣＡＲ配列と近接のものである。幾つかの場合において、プラスミドベクターはさらにスプライス受容体（ｓｐｌｉｃｅ  ａｃｃｅｐｔｏｒ）を含む。幾つかの場合において、スプライス受容体は本件のＣＡＲ配列と隣接できる。プロモーター配列はＰＫＧまたはＭＮＤプロモーターを含むことができる。ＭＮＤプロモーターは合成プロモーターとすることができ、骨髄性肉腫ウイルスエンハンサーの修飾されたＭｏＭｕＬＶ  ＬＴＲのＵ３領域を含むことができる。
【０１９９】
幾つかの場合において、本件の抗ＷＴ１ ＣＡＲをコードするポリ核酸は非ウイルス技術に設計することにより細胞に輸送できる。幾つかの場合において、ポリ核酸は優れた製造規範（ＧＭＰ）適合の試薬である。
【０２００】
本件の抗ＷＴ１ ＣＡＲをコードするポリ核酸の発現は一つまたは複数のプロモーターによって制御できる。プロモーターは遍在するもので、組み込み型（関連遺伝子の連続転写を許す非規制プロモーター）であり、組織特異のプロモーターまたは誘導型プロモーターである。プロモーター近接箇所または付近に挿入される組換え遺伝子の発現を調節できる。例えば、組換え遺伝子は遍在するプロモーター付近または近接に挿入できる。幾つかの遍在のプロモーターはＣＡＧＧＳプロモーター、ｈＣＭＶプロモーター、ＰＧＫプロモーター、ＳＶ４０プロモーターまたはＲＯＳＡ２６プロモーターとすることができる。
【０２０１】
プロモーターは内因性または外因性のものである。例えば、一つまたは複数の組換え遺伝子を内因または外因のＲＯＳＡ２６プロモーターの近接または付近に挿入できる。また、プロモーターは免疫応答細胞に対して特異性を有する。例えば、ブタＲＯＳＡ２６プロモーターの近接または付近に一つまたは複数の組換え遺伝子を挿入できる。
【０２０２】
組織特異性プロモーターまたは細胞特異性プロモーターは発現位置の制御に用いることができる。例えば、一つまたは複数の組み換え遺伝子を組織特異性プロモーターの近接または付近に挿入できる。組織特異性プロモーターは、ＦＡＢＰプロモーター、Ｌｃｋプロモーター、ＣａｍＫＩＩプロモーター、ＣＤ１９プロモーター、ケラチンプロモーター、アルブミンプロモーター、ａＰ２プロモーター、インスリンプロモーター、ＭＣＫプロモーター、ＭｙＨＣプロモーター、ＷＡＰプロモーター、またはＣｏｌ２Ａプロモーターとすることができる。
【０２０３】
組織特異性プロモーターまたは細胞特異性プロモーターは発現位置の制御に用いることができる。例えば、一つまたは複数の組み換え遺伝子を組織特異性プロモーター近接または付近に挿入できる。組織特異性プロモーターは、ＦＡＢＰプロモーター、Ｌｃｋプロモーター、ＣａｍＫＩＩプロモーター、ＣＤ１９プロモーター、ケラチンプロモーター、アルブミンプロモーター、ａＰ２プロモーター、インスリンプロモーター、ＭＣＫプロモーター、ＭｙＨＣプロモーター、ＷＡＰプロモーター、またはＣｏｌ２Ａプロモーターとすることができる。
【０２０４】
また、誘導型プロモーターも使用できる。これらの誘導型プロモーターは必要の場合に誘導試薬を添加または除去することにより添加及び除去できる。以下のように考えることができる。誘導型プロモーターは以下を含むが、これらに限られない：Ｌａｃ、ｔａｃ、ｔｒｃ、ｔｒｐ、ａｒａＢＡＤ、ｐｈｏＡ、ｒｅｃＡ、ｐｒｏＵ、ｃｓｔ−１、ｔｅｔＡ、ｃａｄＡ、ｎａｒ、ＰＬ、ｃｓｐＡ、Ｔ７、ＶＨＢ、Ｍｘ、及び／またはＴｒｅｘ。
【０２０５】
また、発現に必須でないものの、組換え遺伝子配列は、転写または翻訳制御配列、例えば、プロモーター、エンハンザー、インシュケーター（ｉｎｓｕｌａｔｏｒｓ）、内部リボソーム進入位置（ｉｎｔｅｒｎａｌ  ｒｉｂｏｓｏｍｅ  ｅｎｔｒｙ  ｓｉｔｅｓ）、２Ａペプチド及び／またはポリアデニル化シグナルをコードする配列を含むことができる。
【０２０６】
幾つかの場合において、組換え遺伝子は本件の抗−ＷＴ１ ＣＡＲをコードし、組換え遺伝子はセーフハーバーに挿入され、これにより抗−ＷＴ１ ＣＡＲを発現する。幾つかの場合において、組換え遺伝子をＰＤ１及び／またはＣＴＬＡ−４遺伝子座に導入する。他の場合において、組換え遺伝子はレトロウイルス中に細胞に輸送されランダムに挿入し、ＰＤ１またはＣＴＬＡ−４特異性ヌクレアーゼはｍＲＮＡ形式によって提供される。幾つかの場合において、組換え遺伝子はウイルスベクターシステム（例えば、逆転写ウイルス、ＡＡＶまたはアデノウイルス）によってセーフハーバー（例えば、ＡＡＶＳ１、ＣＣＲ５、アルブミンまたはＨＰＲＴ）と特異性のあるヌクレアーゼのｍＲＮＡと共に輸送される。ＰＤ１及び／またはＣＴＬＡ−４特異性ヌクレアーゼをコードするｍＲＮＡを用いて細胞を処理できる。幾つかの場合において、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドとＨＰＲＴ特異性ヌクレアーゼ及びＰＤ  １−またはＣＴＬＡ−４特異性ヌクレアーゼをコードするｍＲＮＡは共にウイルス輸送系統によって提供される。本明細書が開示する方法及び組成物と共に使用するＣＡＲはあらゆるタイプのこれらのキメラタンパク質を含むことができ、第一世代、第二世代及び第三世代の設計を含む。他の試薬、例えばＣＣＲ２またはｓｉＲＮＡは、ＰＤ−１の発現を減少させることに用いることができる。
【０２０７】
幾つかの場合において、逆転写ウイルスベクター（γ−逆転写ウイルスまたはレトロウイルス）は組換え遺伝子を免疫応答細胞に導入することに用いることができる。例えば、本件のＣＡＲ（例えば、抗ＷＴ１ ＣＡＲ）またはＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドと結合する如何なる受容体をコードする組換え遺伝子をレトロウイルスベクター中にクローンし、かつ発現は、内因性プロモーター、レトロウイルス長末端重複配列、または興味のある標的細胞タイプに対して特異的なプロモーターによって駆動されることができる。非ウイルスベクターを使用することもできる。非ウイルスベクター輸送システムは、ＤＮＡプラスミド、ネイキッド核酸及び例えばリポソームまたはポロキサマー（ｐｏｌｏｘａｍｅｒ）の輸送運搬体と複合の核酸を含むことができる。
【０２０８】
遺伝子を哺乳動物中に転移させる多くのウイルスに基づく系が開発されている。例えば、逆転写ウイルスは遺伝子輸送系に対して便利なプラットフォームを提供している。本分野において知られている技術により選択された遺伝子をベクターに挿入してさらに逆転写ウイルス粒子中にパッケージする。逆転写ウイルス（例えば、レトロウイルス）のベクターは長期遺伝子転移を実現する適切なツールであり、これらは組換え遺伝子の長期安定的な組み込まれた及びその子孫細胞中における繁殖を許すものである。レトロウイルスベクターは腫瘍逆転写ウイルス（例えば、マウス白血病ウイルス）に由来するベクターより多くのメリットを有し、これらは非増殖細胞を形質移入できる。それらは低免疫原性のさらなるメリットを有する。アデノウイルスベクターのメリットはそれらを標的細胞のゲノム中に導入することはなく、これにより関連のマイナスイベントを回避できる。
【０２０９】
本体のＣＡＲをコードする組換え遺伝子を用いて細胞をトランスフェクションできる。組換え遺伝子濃度は約１００ｐｇから約５０ｍｇである。幾つかの場合において、細胞に導入される核酸（例えば、ｓｓＤＮＡ、ｄｓＤＮＡ、ＲＮＡ）の量を改変してトランスフェクション効率および/または細胞生存率を最適化できる。例えば、電気穿孔により１ｍｇのｄｓＤＮＡをそれぞれの細胞サンプル中に添加できる。幾つかの場合において、最良のトランスフェクション効率および/または細胞生存率が必要とする核酸（例えば、ｄｓＤＮＡ）の量は、細胞タイプ特異性である。幾つかの場合において、それぞれのサンプルの核酸（例えば、ｄｓＤＮＡ）の量は、直接、トランスフェクション効率および/または細胞生存率に対応し得る。例えば、一定範囲のトランスフェクション濃度。ベクターによってコードされる組み換え遺伝子を細胞ゲノム中に組み込むことができる。幾つかの場合において、ベクターによってコードされる組換え遺伝子の組み込みは順方向である。他の場合において、ベクターによってコードされる組換え遺伝子の組み込みは逆方向である。
【０２１０】
幾つかの場合において、細胞修飾（例えば、本件のＣＡＲのウイルス輸送）に用いられる開始時細胞密度を改変でき、これによりトランスフェクション効率および/または細胞生存率を最適化できる。幾つかの場合において、ウイルスベクターによってトランスフェクションまたは形質導入する細胞開始密度は約１×１０５細胞より少ないものとすることができる。幾つかの場合において、ウイルスベクターを用いて細胞修飾を行うための初期細胞密度は少なくとも約１×１０５個の細胞から少なくとも約５×１０７個の細胞とすることができる。幾つかの場合において、最良のトランスフェクション効率および/または細胞生存率の初期細胞密度は、細胞タイプ特異型である。例えば、マクロファージ細胞にとって、１．５×１０６個の細胞の初期細胞密度が最適である可能性がある（例えば、最高の細胞生存率及び／またはトランスフェクション効率）。もう一つの例において、ヒト細胞にとって、５×１０６個の細胞の初期細胞密度が最適である可能性がある（例えば、最高の細胞生存率及び／またはトランスフェクション効率）。幾つかの場合において、一定範囲の初期細胞密度は所定の細胞類型に対して最適である。例えば、Ｔ細胞のようなヒト細胞に対して、５．６×１０６〜５×１０７個の細胞の開始細胞濃度が最適である（例えば、最高のトランスフェクション効率および/または細胞生存率を提供する）。
【０２１１】
例えば、ウイルス系の本件ＣＡＲをコードする核酸配列の細胞ゲノム中への組み込み効率は以下または以下を超えることができる：約２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．９％または９９．９％を超える。幾つかの場合において、遺伝子操作された細胞の形質膜上の本件ＣＡＲの測定値は以下または以下を超えることができる：約２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．９％または９９．９％を超え、例えばフローサイトメトリーよって測定されるものである。
【０２１２】
幾つかの場合において、免疫応答細胞はＣＤ４５ＲＯ（−）、ＣＣＲ７（＋）、ＣＤ４５ＲＡ（＋）、ＣＤ６２Ｌ＋（Ｌ−選択タンパク質）、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋及び／またはＩＬ−７Ｒα＋からなる幹記憶ＴＳＣＭ細胞であり、前記幹細胞記憶細胞はさらにＣＤ９５、ＩＬ−２Ｒβ、ＣＸＣＲ３及び／またはＬＦＡ−１を発現でき、さらに前記記憶細胞特有の多くの機能属性を示すものである。代替案として、免疫応答細胞はＬ−選択タンパク質及びＣＣＲ７の中枢記憶ＴＣＭ細胞であり、そのうち中枢記憶細胞は例えばＩＬ−２を分泌でき、しかしＩＦＮγまたはＩＬ−４を分泌しない。免疫応答細胞はＬ−選択タンパク質またはＣＣＲ７のエフェクター記憶ＴＥＭ細胞を含むことができ、さらにエフェクターサイトカイン、例えばＩＦＮγ及びＩＬ−４を生産するものである。
【０２１３】
ベクターは個体患者に施用することにより、通常は全身施用（例えば、静脈内、腹膜内、筋肉内、皮下または頭蓋内注入）または局部施用において体内にて輸送され、下記の通りである。代替案として、ベクターをインビトロで細胞に移送でき、例えば個体患者から移植された細胞（例えば、リンパ球、Ｔ細胞、骨髄抽出物、細胞生検）を、通常は選択されかつベクターに混入した後、細胞をさらに患者に再移植する。選択前または選択後において、細胞を増殖できる。
【０２１４】
抗ＷＴ１ ＣＡＲを発現する適切な免疫応答細胞は、必要とする被験者に対して、自己のまたは非自己の細胞とすることができる。
【０２１５】
被験者から適切な免疫応答細胞の由来を得ることができる。幾つかの場合において、Ｔ細胞を得ることができる。前記Ｔ細胞は複数の由来による得ることができ、ＰＢＭＣ、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、及び感染部位の組織、腹水、胸水、脾臓組織と腫瘍を含む。
【０２１６】
幾つかの場合において、当業者に知られている数種類の技術（例えば、ＦｉｃｏｌｌＴＭ分離法）により被験者から収集した単位血液中からＴ細胞を得る。一つの実施形態において、個体に由来する循環血液の細胞はアフェレシス（ａｐｈｅｒｅｓｉｓ）により得ることができる。アフェレシス生成物は通常リンパ球（Ｔ細胞、単核細胞、粒細胞、Ｂ細胞を含む）、他の有核白血球、赤血球及び血小板を含む。一つの実施形態において、アフェレシス収集技術により収集した細胞から血漿分離成分を除いてさらに細胞を適切な緩衝液または培地中に入れて、後続の処理ステップを行う。
【０２１７】
代替案として、細胞は健康ドナー、がんと診断された患者または感染と診断された患者に由来できる。もう一つの実施形態において、細胞は異なる表現型特徴を示す混合細胞群の一部である。さらに前記方法により形質転換されたＴ細胞から細胞株を得ることができる。また細胞治療ライブラリーから細胞を得ることもできる。本明細書に記載の如何なる方法によって、免疫抑制処理に対して耐性のある修飾された細胞を得ることができる。修飾する前に希望の細胞群を選択できる。または修飾後においてエンジニアリング細胞群を選択できる。エンジニアリング細胞は自家移植に用いることができる。代替案として、細胞を同種異体移植に用いることができる。幾つかの場合において、細胞を下記と同一の患者に施用でき、該患者のサンプルはがん関連標的配列の鑑別に用いられるものである。他の場合において、細胞を下記異なる患者に施用でき、該患者のサンプルをがん関連標的配列の鑑別に用いることができる。
【０２１８】
幾つかの場合において、免疫応答細胞は初代細胞（初代Ｔ細胞、幹細胞または前駆細胞）とすることができる。前駆細胞は造血前駆細胞とすることができる。本発明の細胞はヒト細胞である。適切な細胞はインビトロにて増幅できる。適切な細胞はＣＤ４５ＲＯ（−）、ＣＣＲ７（＋）、ＣＤ４５ＲＡ（＋）、ＣＤ６２Ｌ（＋）、ＣＤ２７（＋）、ＣＤ２８（＋）、ＩＬ−７Ｒα（＋）またはそれらの組み合わせとすることができる。
【０２１９】
幾つかの場合において、適切な初代細胞は末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、末梢血リンパ球（ＰＢＬ）及び他の血液細胞サブグループとすることができ、例えば、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、単核細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、単球前駆細胞、造血幹細胞または非多能性幹細胞とすることができるが、これらに限られない。幾つかの場合において、該細胞は如何なる免疫細胞とすることができ、Ｔ細胞、例えば腫瘍浸潤細胞（ＴＩＬ）、例えばＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、または他の如何なるタイプのＴ細胞とすることができる。Ｔ細胞はさらに、記憶Ｔ細胞、記憶幹Ｔ細胞、またはエフェクターＴ細胞を含むことができる。Ｔ細胞はバルクグループから選ぶこともでき、例えば、全血中からＴ細胞を選択できる。Ｔ細胞はバルクグループから増幅できる。Ｔ細胞は特定の群及び表現型に偏重できる。例えば、Ｔ細胞は下記表現型に偏重できる：ＣＤ４５ＲＯ（−）、ＣＣＲ７（＋）、ＣＤ４５ＲＡ（＋）、ＣＤ６２Ｌ（＋）、ＣＤ２７（＋）、ＣＤ２８（＋）及び／またはＩＬ−７Ｒα（＋）。適切な細胞から選択でき、表中から選択される複数のマーカーの一つを含む：前記リストはＣＤ４５ＲＯ（−）、ＣＣＲ７（＋）、ＣＤ４５ＲＡ（＋）、ＣＤ６２Ｌ（＋）、ＣＤ２７（＋）、ＣＤ２８（＋）及び／またはＩＬ−７Ｒα（＋）を含む。適切な細胞はさらに幹細胞、例えば、胚性幹細胞、人工多能性幹細胞、造血幹細胞、神経幹細胞および間葉系幹細胞を含む。適切な細胞は如何なる数量の初代細胞を含むことができ、例えば、ヒト細胞、非ヒト細胞及び／またはマウス細胞を含む。適切な細胞は前駆細胞とすることができる。適切な細胞は治療対象の被験者（例えば、患者）に由来することができる。適切な細胞は人類（ヒト）ドナーに由来することができる。適切な細胞はＣＤ４５ＲＯ（−）、ＣＣＲ７（＋）、ＣＤ４５ＲＡ（＋）、ＣＤ６２Ｌ＋（Ｌ−ｓｅｌｅｃｔｉｎ）、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋及びＩＬ−７Ｒα＋からなる幹細胞ＴＳＣＭ細胞であり、前記幹記憶細胞はさらにＣＤ９５、ＩＬ−２Ｒβ，ＣＸＣＲ３及びＬＦＡ−１を発現でき、さらに前記韓記憶細胞特有の多くの多機能属性を示す。適切な細胞はＬ−選択タンパク及びＣＣＲ７を含む中枢性記憶ＴＣＭ細胞を含むことができ、前記中枢性記憶細胞は、例えばＩＬ−２を分泌でき、しかしＩＦＮγまたはＩＬ−４を分泌しない。適切な細胞はＬ−選択タンパクまたはＣＣＲ７を含む効果性記憶ＴＥＭ細胞を含むことができ、さらに機能性サイトカイン、例えばＩＦＮγ及びＩＬ−４を生産できる。
【０２２０】
幾つかの場合において、ある方法は、急速細胞増殖の前に、培養されたＴ細胞からＣＤ８＋Ｔ細胞を濃縮させることを含むことができる。ＩＬ−２中においてＴ細胞を培養した後、例えばＣＤ８マイクロビーズにより分離させる（例えば、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳｐｌｕｓ  ＣＤ８マイクロビーズシステム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）を使用する）、Ｔ細胞はＣＤ４＋細胞枯渇させさらにＣＤ８＋細胞を濃縮できる。特定の理論に限定されず、情報によれば、ＣＤ４＋、ＣＤ２５＋調整Ｔ細胞は抗腫瘍応答を阻害できる。そのため、情報によれば、培養されたＴ細胞からＣＤ８＋Ｔ細胞を濃縮させ、さらにＣＤ４＋細胞を減少または消去することで、養子移転（ａｄｏｐｔｉｖｅｌｙ  ｔｒａｎｓｆｅｒ）された抗腫瘍ＣＤ８＋Ｔ細胞に対する影響を低減し、これにより患者の応答率を向上させ、及び／またはＣＤ４＋細胞がサイトカインを生産することによる毒性を低減できる。また、以下のように信じることができる。濃縮されたＣＤ８＋「若年」Ｔ細胞の臨床規模における急速増殖においてバッチＴ細胞よりも高い信頼性及び予測可能性を示す。
【０２２１】
細胞は適正製造規範（ＧＭＰ）に適合する試薬である。細胞は必要とする被験者中において治療、感染、自己免疫性障害または移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の連合療法中の一部である。幾つかの場合において、本発明の細胞は単一療法として必要とする被験者に施用できる。
【０２２２】
幾つかの場合において、本件のＣＡＲを発現する細胞は異種Ｔ細胞群を含むことができる。幾つかの場合において、使用される細胞は多様化の割合のＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞からなるものである。前記ＣＤ４及びＣＤ８細胞は、循環エフェクターＴ細胞の表現型特徴を有することができる。前記ＣＤ４及びＣＤ８細胞はさらにエフェクター記憶細胞の表現型特性を有することができる。もう一つの実施形態において、細胞は中枢性記憶細胞（ｃｅｎｔｒａｌ−ｍｅｍｏｒｙ  ｃｅｌｌｓ）とすることができる。
【０２２３】
ドナーから分離される適切な細胞は如何なる下記発育段階にあることができ、胎児、新生児、青年及び成人を含むがこれらに限られない。例えば、ドナー免疫応答細胞は成人から分離できる。ドナー人類（ヒト）免疫応答細胞は１０、９、８、７、６、５、４、３、２または１歳以下とすることができる。例えば、６歳以下のヒトから免疫応答細胞を分離できる。３歳以下のヒトから免疫応答細胞を分離できる。ドナーの年齢は１０歳を超えることができる。
【０２２４】
適切な細胞を得る方法は以下を含む：所定のマーカーに基づいて選択を行う。例えば、このようなマーカーはＧＦＰ、耐性遺伝子、細胞表面マーカーまたは内因性タグを含むことができる。如何なる内因性マーカーを用いて細胞を選択できる。適切な細胞選択技術はフローサイトメトリー及び／または磁性カラムを含むことができる。続いて、選択された細胞を被験者中に注入する。選択した細胞は大量に増殖できる。選択される細胞は注入前に増殖することができる。
【０２２５】
患者に対して有効的な治療を行うのに必要な細胞数量は細胞の活力及び遺伝子によって細胞が修飾される効率（例えば、組換え遺伝子が一つまたは複数の細胞中に組み込まれる効率、または組換え遺伝子がコードするタンパク質の発現レベル）によって変化する。幾つかの場合において、遺伝子によって修飾される細胞の活力及び組換え遺伝子が組み込まれる効率の積（例えば、掛け算を行う）は被験者に対して得られた細胞を施用する治療学成分に対応する。幾つかの場合、遺伝子によって修飾される細胞の活力の増加は、患者治療に対して必要とする細胞数量の減少に対応する。幾つかの場合において、組換え遺伝子が一つまたは複数の細胞中に組み込まれる効率の増加は、患者に対して有効な治療の施用を行うのに必要な細胞数量の減少に対応する。幾つかの場合において、有効な治療に必要とする細胞の数は以下を含むことができる：細胞生存率が時間に従って変化する関数を決める。幾つかの場合において、有効な治療に必要な細胞数量は以下を含むことができる：組換え遺伝子が一つまたは複数の細胞中に組み込まれる効率変化の時間に対する変数（例えば、細胞培養時間、電気穿孔時間、細胞刺激時間）の関数を決める。幾つかの場合において、治療に有効な細胞は、細胞表面上の抗ＷＴ１ ＣＡＲが約３０％から約１００％発現される細胞群である。幾つかの場合において、治療上有効量の細胞は細胞表面上に約３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．９％から９９．９％以上の抗ＷＴ１ ＣＡＲを発現し、例えばフローサイトメトリーよって測定できる。
【０２２６】
複数種類の細胞は本件ＣＡＲの発現に用いることができ、前記の通りである。抗ＷＴ１ ＣＡＲは真核細胞、例えば哺乳動物細胞の形質膜中に存在でき、適切な哺乳動物細胞は以下を含むがこれらに限られない：細胞毒性細胞、Ｔリンパ球、幹細胞、幹細胞の子孫、前駆細胞、前駆細胞の子孫およびＮＫ細胞。
【０２２７】
真核細胞の形質膜中に存在する場合、本件ＣＡＲはその結合標的の存在下において活性を有する。例えば、抗ＷＴ１  ＣＡＲはＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドの存在下において活性を有する。標的、例えばＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドは、膜上に発現できる。標的は溶解できる（例えば、細胞と結合していない）。標的は細胞、例えば標的細胞の表面上に存在できる。標的は例えば脂質二重層等の固体表面上に存在できる。標的は溶解でき、例えば可溶性抗原である。標的は抗原とすることができる。抗原は細胞例えば標的細胞の表面上に存在できる。抗原は例えば脂質二重層等の固体表面上に存在できる。幾つかの場合において、標的は抗原エピトープである。本明細書が開示する方法において、抗原は通常ＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドであり、かつＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドを発現する細胞はがん細胞または腫瘍細胞である。
【０２２８】
幾つかの場合において、本件ＣＡＲが細胞の形質膜上に存在する場合、標的と結合して活性化された場合、細胞の標的に対する細胞毒性をもたらすことがあり、該標的に結合して活性化される場合、細胞が標的に対して細胞毒活性をもたらし、標的はその細胞表面においてＣＡＲを発現する結合ドメインと結合する抗原である。例えば、幾つかの場合、細胞は細胞毒性細胞とすることができる（例えば、ＮＫ細胞または細胞毒性Ｔリンパ球）。本明細書が開示するＣＡＲは、細胞の脂質膜中に存在する場合、及び標的と結合することで活性化される場合、細胞毒性細胞の標的細胞に対する細胞毒活性を向上でき、前記標的細胞はその細胞表面においてＣＡＲの結合ドメインと結合する抗原を発現できる。例えば、幾つかの場合において、細胞はＮＫ細胞またはＴリンパ球であり、標的と結合しない細胞の細胞毒性と比較して、本明細書が開示するＣＡＲは、細胞の形質膜中に存在する場合、その標的に結合されることで活性化される場合、細胞の細胞毒活性を少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍または１０倍を超える。
【０２２９】
幾つかの場合において、本件ＣＡＲは、標的に結合することで活性化される場合、他のＣＡＲ活性化と関連するイベントをもたらすことがあり、例えば、増殖及び増幅（増加した細胞分裂または抗細胞死反応）である。顕微鏡下において見られる細胞塊を観察することで細胞増殖を測定する。細胞増殖は血液細胞カウンターによって測定できる。幾つかの場合において、似たようなＴ細胞（非ＣＡＲ  Ｔ細胞）と比較して、ＣＡＲ−Ｔ細胞は向上した細胞増殖及び増幅能力を有する。類似の細胞と比較して、増加した細胞増殖は約１倍から約２０倍とすることができる。類似の細胞と比較して、増加した細胞増殖は約１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、１６倍、１７倍、１８倍、１９倍または２０倍である。細胞増殖は一定の時間内で測定できる。例えば、細胞増殖は細胞から被験者体内に注入されるタイミングで起こることができる。他の場合において、細胞増殖は獲得された１日後から約３０日で発生できる。細胞増殖は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０日で発生する。幾つかの場合において、被験者体内に注入する前に急速増殖案（ＲＥＰ）を利用して細胞を増殖できる。幾つかの場合において、ＲＥＰは約１４日間の時間内に発生する可能性がある。
【０２３０】
幾つかの場合において、ＣＡＲはその標的に結合して活性化される場合、他のＣＡＲ活性化と関連するイベント、例えば、細胞内シグナル伝達調節、細胞分裂または細胞死を招くことができる。幾つかの場合において、ＣＡＲの細胞上における発現は細胞の細胞内シグナル伝導を改変できる。他の場合において、ＣＡＲの発現は細胞分化を改変できる。
【０２３１】
一種類または複数種類のサイトカインを本件ＣＡＲまたはそれを含む宿主細胞と共に導入する。サイトカインは移転する細胞（移転した腫瘍特異性細胞）が腫瘍微環境において増殖することを促進することに用いられる。幾つかの場合において、ＩＬ−２は本明細書の前記細胞の増幅を促進できる。また、例えばＩＬ−１５のサイトカインを用いることもできる。免疫治療分野における他の関連サイトカイン、例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−１２及びＩＬ−２１、またはそれらの任意の組み合わせを用いることができる。幾つかの場合において、組換えサイトカインを使用できる。
【０２３２】
幾つかの実施形態において、免疫応答細胞をＩＬ−１２に露出させることによって本明細書に記載の本件ＣＡＲの免疫応答細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）の機能を強化できる。幾つかの場合において、ＩＬ−１２は免疫調整活性を有し、さらにエフェクターＴ細胞、活性化ＮＫ細胞または両者の機能を強化できる。
【０２３３】
幾つかの実施形態において、本件ＣＡＲを含む免疫応答細胞はＩＬ−１２を含むことができ、これにより免疫応答細胞をＩＬ−１２に露出させる。幾つかの場合において、ＩＬ−１２は免疫応答細胞の表面で発現できる。幾つかの場合において、ＩＬ−１２は免疫応答細胞内で発現される。例えば、図１１は本件ＣＡＲ及びＩＬ−１２の例示的な遺伝子構築体を記載している。
【０２３４】
幾つかの実施形態において、免疫応答細胞とＩＬ−１２を分泌する細胞を共同で施用する。ＩＬ−１２を分泌する細胞の実例は樹状細胞及びマクロファージを含む。
【０２３５】
他の場合において、ＩＬ−１２は本明細書に記載の本件ＣＡＲの免疫応答細胞と共に施用できる。幾つかの場合において、本件ＣＡＲを含む免疫応答細胞を施用する前、施用する際、施用した後、またはこれらの組み合わせにおいて、ＩＬ−１２を施用できる。幾つかの場合において、ＩＬ−１２は他のサイトカインと同時または如何なる順序で順次、同じ経路または異なる経路に沿って施用できる。幾つかの実施形態において、免疫応答細胞をＩＬ−１２強化免疫細胞の細胞毒性エフェクター機能に露出させる。幾つかの場合において、ＩＬ−１２に露出する免疫応答細胞の細胞毒性は、ＩＬ−１２に露出していない免疫応答細胞の細胞毒性より、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％高い。
【０２３６】
幾つかの場合において、本明細書の前記本件ＣＡＲを含む免疫応答細胞はＩＬ−１２に露出でき、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％の細胞毒性を有し、または体外細胞毒性測定において、エフェクター標的比（Ｅ：Ｔ）が５：１の場合、少なくとも９０％の細胞毒性を有する。
【０２３７】
幾つかの場合において、本明細書の前記本件ＣＡＲを含む免疫応答細胞はＩＬ−１２に露出でき、かつ、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％の細胞毒性を有し、または体外細胞毒性測定において、エフェクター標的比（Ｅ：Ｔ）が１０：１の場合、少なくとも９０％の細胞毒性を有する。
【０２３８】
幾つかの場合において、本明細書に記載の本件ＣＡＲを含む免疫応答細胞はＩＬ−１２に露出でき、かつ、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％の細胞毒性を有し、または体外細胞毒性測定において、エフェクター標的比（Ｅ：Ｔ）が１５：１の場合、少なくとも９０％の細胞毒性を有する。
【０２３９】
幾つかの場合において、本明細書に記載の本件ＣＡＲを含む免疫応答細胞はＩＬ−１２に露出でき、かつ、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％の細胞毒性を有し、または体外細胞毒性測定において、エフェクター標的比（Ｅ：Ｔ）が２０：１の場合、少なくとも９０％の細胞毒性を有する。
【０２４０】
幾つかの実施形態において、免疫応答細胞をＩＬ−１２強化免疫応答細胞のサイトカイン生産及び／または分泌能力に露出できる。幾つかの場合において、生産及び／または分泌されるサイトカインはインターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）またはＩＬ−２である。他の場合において、免疫応答細胞をＩＬ−１２に露出することによりＩＬ−４介在のＩＦＮ−γ阻害を減少させる。
【０２４１】
幾つかの場合において、Ｔ細胞成長因子と本件ＣＡＲまたはそれを含む宿主細胞を共に施用できる。如何なる適切な経路により成長因子を施用できる。一種類以上のＴ細胞成長因子を施用すれば、これらは同時にまたは如何なる順序で順次、同じ経路または異なる経路により施用できる。Ｔ細胞成長因子、例えばアルデスロイキン（Ａｌｄｅｓｌｅｕｋｉｎ，ＩＬ−２）は、大量瞬時投与（ｂｏｌｕｓ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）の方式により静脈内に施用できる。Ｔ細胞生長因子、例えばＩＬ−２の剤量は当業者が高いと考えるものである。好ましくは、毎日３回、約７２０，０００ＩＵ／ｋｇのＩＬ−２の剤量から許容量まで使用できる。幾つかの場合において、約５〜１５剤のＩＬ−２を施用し、平均的に約９剤である。Ｔ細胞成長因子の剤量は約０から約２０である。Ｔ細胞成長因子は１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または約２０回施用できる。
【０２４２】
ＩＬ−２は急速静脈注射（ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ  ｂｏｌｕｓ）の方式により７２０，０００ＩＵ／ｋｇの剤量（全体重に対して）で施用できる。幾つかの場合において、ＩＬ−２は１５分間の時間以内で施用できる。幾つかの場合において、ＩＬ−２は２０分間の時間以内に施用できる。ＩＬ−２は即時注入により施用できる。幾つかの場合において、ＩＬ−２は１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９分間、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間または６時間の時間以内に施用できる。
【０２４３】
幾つかの場合において、ＩＬ−２は細胞注入後２４時間後に施用を開始でき、約４日間持続する（最大で１２剤）。幾つかの場合において、ＩＬ−２は初回の施用後に約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０日間施用できる。
【０２４４】
ＩＬ−２の投薬は８時間ごとに一回施用できる。幾つかの場合において、ＩＬ−２は初回施用後に約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４時間ごとに一回施用できる。幾つかの場合において、毒性を検出したなら、ＩＬ−２投薬を停止できる。幾つかの場合において、アルディロイキンでよく見られる可逆３級毒性以外に、例えば、下痢、悪心、嘔吐、低血圧、肌の変化、拒食、粘膜炎、嚥下困難または全身症状及び実験室変化で、例えば患者がアルディロイキンによってもたらされる３級または４級毒性が見られるなら、投薬を遅延または停止できる。幾つかの場合において、支援性措置により２４時間以内に容易にこれらの毒性を逆転できる場合、余分の投薬を行うことができる。また、治療する医師の処置により投薬を維持または停止できる。
【０２４５】
幾つかの場合において、抗ＷＴ１ ＣＡＲを発現しない類似免疫応答細胞と比較して、抗ＷＴ１ ＣＡＲの免疫応答細胞は強化された抗腫瘍効果を有する。
【０２４６】
幾つかの場合において、抗腫瘍効果は細胞毒活性を指すことができる。他の場合において、抗腫瘍効果とは持久性を指す。抗腫瘍効果は細胞が腫瘍を標的とする能力を意味することがある。複数種類の体外測定により抗腫瘍効果を測定できる。例えば、インターロイキン２（ＩＬ−２）またはインターフェロン−γ（ＩＦＮγ）の放出のＥＬＩＳＡ測定により細胞毒性能力を測定できる。細胞毒活性はキリングアッセイ（ｋｉｌｌｉｎｇ  ａｓｓａｙ）（例えば、クロム５１放出測定法または共同培養アッセイ）により測定できる。幾つかの場合において、類似の細胞と比較して、抗ＷＴ１  ＣＡＲ免疫応答細胞は強化された抗腫瘍機能及び能力を有する。
【０２４７】
抗ＷＴ１ ＣＡＲ治療効果は複数の形式によって評価できる。効果は抗腫瘍効果を指すことができ、該効果は腫瘍（例えば、ＷＴ１陽性腫瘍）をコントロール、減少させまたは消去する程度である。治療効果はＣＡＲ免疫応答細胞の増殖、持続性、腫瘍標的、及びそれらの任意の組み合わせを指すことができる。
【０２４８】
輸液期間中において、輸液後すぐ、または輸液後数年に渡って、抗ＷＴ１ ＣＡＲ免疫応答細胞療法（例えば、抗ＷＴ１ ＣＡＲＴ細胞療法）の被験者に対して評価を行うことができる。例えば、治療された被験者は外来に戻って評価を行うことができ、時間は約１日から被験者の命の長さまでである。被験者ＣＡＲ免疫応答細胞を初めて施用してから１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、６０、７０、８０または９０年間にわたり治療された被験者を評価することができる。幾つかの場合において、評価計画は、毎日モニタリング、毎週モニタリング、毎月モニタリングまたは毎年モニタリングを含むことができる。幾つかの場合、より頻繁に被験者を観察でき、臨床において指摘される通りである。評価は身体検査、化学評価、全血細胞計数、甲状腺検査、毒性評価、身体区域のコンピュータスキャン（ＣＴ）、アフェレシス、及びこれらの組み合わせを含むことができる。
【０２４９】
幾つかの場合において、被験者にＣＡＲ免疫応答細胞を注入により施用する前及び後の約１から約１０週の間でアフェレシスを行うことができる。他のタイミングにおいて、被験者の外周血リンパ球（ＰＢＬ）はＦｉｃｏｌｌ段階遠心の精製法により全血中から得ることができる。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の均等冷凍を細胞機能の免疫学モニタリングに用いることができる。幾つかの場合において、複数種類の測定は特定の分裂及びサイトカイン放出、メタボロミクス及び生物エネルギー研究（Ｓｅａｈｏｒｓｅ使用）、サイトカイン生産の細胞内ＦＡＣＳ、ＥＬＩＳＡスポット測定及びリンパ球サブグループ分析を含むことで本件ＣＡＲ免疫応答細胞治療の免疫関連要素の評価に用いることができる。一般的に、これらの測定中の約２から約３倍の差異は真正の生物学差異があると示している。幾つかの場合において、抗ＷＴ１ ＣＡＲ免疫応答細胞治療において、体外測定の差異は約１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、高い場合は５倍に達すれば、治療効果があることを示している。
【０２５０】
幾つかの場合において、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャンまたはＭＲＩによって測量するならば、本件ＣＡＲ免疫応答細胞による治療は腫瘍サイズを減少できる。抗−ＷＴ１ ＣＡＲ免疫応答細胞の治療は、腫瘍サイズを少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または約１００％縮小できる。ＣＴスキャンによって測量すれば、ＣＡＲ−Ｔ治療は腫瘍を消去できる。幾つかの場合、抗ＷＴ１ ＣＡＲ免疫応答細胞治療は腫瘍サイズを安定化させることができ、コンピュータ断層スキャン（ＣＴ）によって測定するならば、腫瘍病変直径のベースライン測定値の変化は１０％未満である。例えば、抗ＷＴ１ ＣＡＲ免疫応答細胞を施用した後、腫瘍はさらに拡張することはない。幾つかの場合において、安定化は以下と考えることができる：腫瘍サイズ（治療前の測定値と比較して）の変化は１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％または１％未満である。
【０２５１】
幾つかの場合において、被験者の生存時間に基づいて抗ＷＴ１ ＣＡＲ免疫応答細胞の機能を考えることができる。例えば、抗ＷＴ１ ＣＡＲ免疫応答細胞、例えば抗ＷＴ１ ＣＡＲ Ｔ細胞治療の被験者は、治療されていない被験者または異なる治療の被験者よりも、長く生存できる。
【０２５２】
幾つかの場合において、抗ＷＴ１  ＣＡＲ免疫応答細胞の効果は二次処理（ｓｅｃｏｎｄａｒｙ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）を追加することで改善できる。二次治療は抗ＷＴ１  ＣＡＲ免疫応答細胞と協同作用できる。幾つかの場合において、二次治療は抗ＷＴ１  ＣＡＲ免疫細胞療法の累積作用を生むことができる。二次治療はリンパ球減少、他の形式の細胞療法、抗体療法、化学療法、放射療法、手術、抗血管生成療法及びそれらの任意の組み合わせとすることができる。
【０２５３】
改定された固形腫瘍応答評価基準（Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｉｎ  Ｓｏｌｉｄ  Ｔｕｍｏｒｓ,  ＲＥＣＩＳＴ）指南（１．１バージョン）が提唱する国際基準により応答を評価できる。ＲＥＣＩＳＴ標準において、腫瘍病変最大直径（一方向測定値）及び悪性リンパ節最短直径の変化を使用できる。例えば、測定可能の病変は以下と定義できる：少なくとも一方向（記録される最長直径）上において胸部Ｘ線を用いて精確に測定した結果は＞２０  ｍｍ、ＣＴスキャンにより＞１０ｍｍまたはキャリパーを用いて＞１０ｍｍのものを臨床検査できる。病理的に拡張できかつ測定可能で、ＣＴスキャンによる評価する場合、リンパ節の短軸は＞１５ｍｍとすることができる。すべての他の病変（または疾患部位）、小さな病変（最長直径＜１０  ｍｍまたは短軸?１０から＜１５ｍｍの病理性リンパ節）は、測定できない疾患と考えることができる。骨疾患、軟膜髄膜疾患、腹水、胸膜/心嚢液、皮膚リンパ管炎/肺炎、炎症性乳房疾患は測定できないと考えられる。
【０２５４】
すべての関係臓器のすべての測定可能な病変（それぞれの臓器は２つの病変を有し、全部で５つの病変を有する）は目標病変として鑑別でき、かつベースラインを記録及び測定する。そのサイズ（最長直径の病変）に基づいて標的病変を選択でき、すべての関係臓器を代表し、これ以外に、繰り返し測量に適したそれらの値である。このような場合において、最大の病変は自身に対して繰り返し測定することに適していなく、このような場合、繰り返し測量可能の次の最大の病変を選択できる。すべての標的病変の直径の合計（非リンパ節病変の最長のもの、リンパ節病変の短軸）を計算でき、さらにベースライン総直径と報道する。合計においてリンパ節を含むなら、短軸を合計中に追加する必要がある。ベースライン総直径は参照として利用でき、これを用いて測量可能サイズ内の如何なる客観的な腫瘍消去を測定できる。
【０２５５】
幾つかの場合において、臨床病変は表在のものとすることができ（例えば、皮膚結節及び触れるリンパ節）かつキャリパーで評価した場合に約１０ｍｍ直径（例えば、皮膚結節）の場合、測量可能と考えられる。キャリパーを使用して病変を測定できない場合、ＣＴスキャンまたはＭＲＩを使用できる。幾つかの場合、ＣＴスキャンは約５ｍｍまたはより小さい製品の欠片を生じさせることができる。幾つかの場合、ＣＴスキャンは５ｍｍ、４ｍｍ、３ｍｍ、２ｍｍ、１ｍｍまたは０．５ｍｍのスキャンの厚みを有することができる。例えば、ＣＴスキャンが５ｍｍ以上のスライスの厚みを有する場合、測定可能な病変の最小サイズはスライドの厚みの２倍である。幾つかの場合において、ＭＲＩを行って被験者を評価できる。理想的には、治療効果を決める場合、同じタイプのスキャン装置を使うべきであり、さらに以前のスキャンとなるべく画像をフォローして案を得る。可能であれば、ブレスホールドスキャン技術を用いて身体スキャンを行う。幾つかの場合において、フルオロデオキシグルコース（ＦＤＧ）−ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）は治療効果の測定に用いることができる。
【０２５６】
被験者を評価した後、標的病変を安定疾患（ＳＤ）、進行性疾患（ＰＤ）、一部応答（ＰＲ）及び／または完全応答（ＣＲ）に分けることができる。最小の直径合計を参照として、以下と考えることができる：ＳＤは充分に収縮してＰＲの資格を得ることができず、充分に増大することでＰＤを得ることもできない。最小の合計は参照として（最も小さい場合、ベースライン合計を用いることができる）、ＰＤは目標病巣直径合計が少なくとも２０％増加したものである。幾つかの場合、相対的に２０％増加した以外に、合計はさらに少なくとも約５ｍｍの絶対的増加を示す。直径のベースライン合計値を参照として、ＰＲは目標病変直径の合計の少なくとも３０％を減少させることができる。ＣＲは標的病変を消去できる。
【０２５７】
本件抗−ＷＴ１抗原結合ユニットまたは本件抗−ＷＴ１ ＣＡＲ免疫応答細胞は医薬品に調整でき、診断により疾患（例えば、がん）を有する、必要とする人類または哺乳動物の診断に用いるものである。このような医薬品は一種類または複数種類の化学療法剤または化学療法化合物と共にヒトまたは哺乳動物に施用できる。
【０２５８】
技術者が知っている技術を用いて、本件ＣＡＲ免疫応答細胞（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞群）を調製して被験者に施用できる。ＣＡＲ免疫応答細胞群を含む製剤は薬学上許容される賦形剤を含むことができる。製剤中に含まれる賦形剤は異なる目的を有することができ、これは例えば、Ｔ細胞のサブグループ及び施用モデルによって決まる。通常使用する賦形剤の実例は以下を含むが、これらに限られない：食塩水、緩衝食塩水、デキストロース、注入用水、グリセロール、エタノール、およびこれらの組み合わせ、安定剤、可溶化剤および界面活性剤、緩衝剤および防腐剤、等張化剤、充填剤および潤滑剤。通常は、いかなる非ヒト成分、例えば動物血清が存在しない状況下においてＣＡＲ免疫応答細胞群を含む製剤を製造及び培養できる。製剤は一つの群のＣＡＲ免疫応答細胞、または一つ以上の群で、例えば、二つ、三つ、四つ、五つ、六つまたはより多くの群のＣＡＲ免疫応答細胞を含む。例えば、製剤は一つの群のＣＡＲ Ｔ細胞を含むことができ、または一つ以上の群、例えば二つ、三つ、四つ、五つ、六つまたはより多くの群のＣＡＲ免疫応答細胞を含むことができる。
【０２５９】
技術者に知られているモデル及び技術を用いて、抗−ＷＴ１ ＣＡＲ免疫応答細胞群を含む製剤を被験者に施用できる。例示的なモデルは静脈内注入を含むが、これらに限られない。他のモデルは以下を含むが、これらに限られない：腫瘍内、皮内、皮下（ＳＣ，ｓｑ，ｓｕｂ−Ｑ，Ｈｙｐｏ）、筋肉内（ｉ．ｍ．）、腹膜内（ｉ．ｐ．）、動脈内、髄内、心臓内、関節内（関節）、滑膜内（滑液区域）、頭蓋内、脊椎内及び髄腔内（脊髄液）を含む。製剤の静脈注入に用いられる胃腸外注入の如何なる既知の装置は、このような施用に用いることができる。
【０２６０】
被験者に施用する被験者ＣＡＲ免疫応答細胞を含む群の製剤は、特定の適応症または疾患を有効的に治療及び／または予防する多くのＣＡＲ免疫応答細胞を含む。そのため、被験者ＣＡＲ免疫応答細胞の治療有効群に施用できる。一般的に、約１×１０４から約１×１０１０個のＣＡＲ免疫応答細胞を含む製剤を施用する。多くの場合、前記製剤は約１×１０５から約１×１０９個のＣＡＲ免疫応答細胞、約５×１０５から約５×１０８個のＣＡＲ免疫応答細胞、または約１×１０６から約１×１０７個のＣＡＲ免疫応答細胞を含む。しかし、被験者に施用するＣＡＲ免疫応答細胞の数量は広い範囲内において変化でき、これはがんの位置、由来、身分、広さ及び進行度、治療対象個体の年齢及び状況等によって決まる。医者が使用する適切な剤量を最終的に決めることができる。
【０２６１】
本件ＣＡＲ免疫応答細胞を施用する前、施用すると同時に、または施用した後に、標的腫瘍の分子を被験者に施用できる。標的腫瘍の分子は腫瘍関連抗原または腫瘍特異抗原との結合により被験者の標的細胞と結合する。技術者に知られている技術を用いて標的腫瘍の分子を調製して被験者に施用できる。腫瘍を標的とする分子の製剤は薬学上許容される賦形剤を含むことができる。通常使用する賦形剤の実例は以下を含むが、これらに限られない：食塩水、緩衝食塩水、デキストロース、注入用水、グリセロール、エタノール、およびこれらの組み合わせ、安定剤、可溶化剤および界面活性剤、緩衝剤および防腐剤、等張化剤、充填剤および潤滑剤。
【０２６２】
技術者に知られているモデル及び技術を用いて腫瘍標的分子を被験者に施用できる。例示的モデルは静脈内、腹膜内及び腫瘍内注入を含むが、これらに限られない。他のモデルは以下を含むが、これらに限られない：皮内、皮下（ＳＣ，ｓｑ，ｓｕｂ−Ｑ，Ｈｙｐｏ）、筋肉内（ｉ．ｍ．）、動脈内、髄内、心臓内、関節内（関節）、滑膜内（滑液区域）、頭蓋内、脊椎内及び髄腔内（脊髄液）を含む。幾つかの場合において、ＣＡＲ−Ｔは腫瘍病変（例えば、肝臓病変）局部において施用できる。製剤に用いられる胃腸外注入または輸液のいかなる知られている装置はこのような施用に用いることができる。
【０２６３】
腫瘍標的分子を含む製剤は、特定の適応症または疾患を有効的に治療及び／または予防する量により被験者に施用する。一般的に、少なくとも約０．１ｍｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇ体重の腫瘍標的分子を含む製剤を、治療を必要とする被験者に施用する。多くの場合、施用の経路、症状等を考えて、剤量は毎日約１ｍｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇ体重のマーカータンパク質である。医師が使用する適切な剤量を決める。
【０２６４】
一つの実施形態において、本件キメラ抗原受容体は免疫応答細胞介在の免疫応答の刺激に用いることができる。例えば、Ｔ細胞介在の免疫応答はＴ細胞活性化の免疫応答に係る。活性化された抗原特異性細胞毒性Ｔ細胞はその表面上において異質抗原エピトープを展開する標的細胞（例えば、腫瘍抗原を展開するがん細胞）の細胞死を誘導できる。もう一つの実施形態において、キメラ抗原受容体は哺乳動物中において抗腫瘍免疫を提供できる。Ｔ細胞介在の免疫応答により、被験者は抗腫瘍免疫を示すことになる。
【０２６５】
幾つかの場合において、がんを疾患している被験者を治療する方法は以下に係る：治療を必要とする被験者に対して一種類または複数種類の腫瘍標的分子を含む製剤を施用し、これらの分子はがん細胞と結合し、さらに一種類または複数種類の有効群を治療するＣＡＲ免疫応答細胞を施用し、そのうちＣＡＲ免疫応答細胞は腫瘍標的分子と結合してさらにがん細胞の死亡を誘導できる。もう一つの実施形態は、がんを疾患している被験者を治療する方法に係り、該方法は治療を必要とする被験者に対して一種類または複数種類の治療上有効群の本件抗ＷＴ１ ＣＡＲ免疫応答細胞を施用し、そのうち前記ＣＡＲ免疫応答細胞はがん細胞と結合し、これによりがん細胞の死亡を誘導する。
【０２６６】
抗ＷＴ１ ＣＡＲ免疫応答細胞、及び、抗ＷＴ１ ＣＡＲ免疫応答細胞と標的腫瘍の分子の組み合わせを含む二種の製剤の使用頻度は下記の要素によって改変できる。治療する疾患は、ＣＡＲ免疫応答細胞及び標的腫瘍の分子の素子、及び施用の方法を含む。それぞれの製剤は独立に毎日４、３、２、または１回施用し、１日おきに一回、３日毎に一回、４日毎に一回、５日毎に一回、６日毎に一回、週ごとに一回、８日毎に一回、９日毎に一回、１０日毎に一回、二週間ごとに一回、毎月１回及び２カ月ごとに一回施用できる。
【０２６７】
本明細書が使用する、「化学療法剤」または「化学療法化合物」及びその文法上の同義語はがんの治療に用いることができる化学化合物である。開示されたＣＡＲ免疫応答細胞と組み合わせて使用する化学療法がん製剤は有糸分裂阻害剤（ビンカアルカロイド）を含むがこれらに限られない。これらはビンクリスチン、ビンブラスチン、フィルデシン及びＮａｖｅｌｂｉｎｅTM（ビノレルビン，５’−ｎｏｒａｎｈｙｄｒｏｂｌａｓｔｉｎｅ）を含む。他の実施形態において、化学療法がん製剤はトポイソメラーゼＩ阻害剤、例えばカンプトテシン化合物を含む。本明細書が使用するように、「カンプトテシン化合物」はＣａｍｐｔｏｓａｒTM（イリノテカン塩酸塩）、ＨｙｃａｍｔｉｎTM（トポテカン塩酸塩）及びカンプトテシン及びその類似体から派生した他の化合物を含む。本明細書が開示する方法及び組成物中の他の化学療法がん製剤は、ポドフィロトキシン誘導体、例えば、エトポシド（ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）、テニポシド（ｔｅｎｉｐｏｓｉｄｅ）及びミトポドジド（ｍｉｔｏｐｏｄｏｚｉｄｅ）を含む。本明細書はさらにアルキル化剤と呼ばれる他の化学療法がん製剤をカバーし、腫瘍細胞中の遺伝物質をアルキル化させるものである。これらはシスプラチン、シクロホスファミド、ナイトロジェンマスタード、トリメチレンチオホスファミド、カルムスチン（ｃａｒｍｕｓｔｉｎｅ）、ブスルファン、クロラムブシル、ベラスチン（ｂｅｌｕｓｔｉｎｅ）、ウラシルナイトロジェンマスタード、クロマファジン（ｃｈｌｏｍａｐｈａｚｉｎ）及びダカルバジン（ｄａｃａｒｂａｚｉｎｅ）を含むが、これらに限られない。本明細書の内容は抗代謝物を化学療法剤としてカバーする。これらのタイプの試薬は、シトシンアラビノシド、フルオロウラシル、メトトレキサート、チオプリン、アザチオプリンおよびプロカルバジンを含む。本明細書が開示する方法及び組成物中の化学療法がん製剤のもう一種類は抗生剤を含む。実例は以下を含むが、これらに限られない：ドキソルビシン、ブレオマイシン、アクチノマイシン、ダウノルビシン、ミトラマイシン、マイトマイシン（ｍｉｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、マイトマイシンＣ、およびダウノマイシン（ｄａｕｎｏｍｙｃｉｎ）。これらの化合物は多くの市販で購入できるリポソーム製剤を含む。本明細書はさらに他の化学療法がん製剤をカバーでき、以下を含むが、抗腫瘍抗体に限られない：ダカルバジン（ｄａｃａｒｂａｚｉｎｅ）、アザシチジン（ａｚａｃｙｔｉｄｉｎｅ）、アムサクリン（ａｍｓａｃｒｉｎｅ）、メルファラン（ｍｅｌｐｈａｌａｎ）、イホスファミド及びミトキサントロン（ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ）。
【０２６８】
本件抗ＷＴ１ ＣＡＲ免疫応答細胞は、他の抗腫瘍製剤、細胞毒性／抗腫瘍試薬及び抗血管性製剤と組み合わせて施用できる。細胞毒性／抗腫瘍試薬は、がん細胞を攻撃及び殺傷する製剤として定義できる。幾つかの細胞毒性／抗腫瘍試薬はアルキル化剤とすることができ、腫瘍細胞中の遺伝材料をアルキル化し、例えば、シスプラチン、シクロホスファミド、ナイトロジェンマスタード、トリメチレンチオホスファミド、カルムスチン（ｃａｒｍｕｓｔｉｎｅ）、ブスルファン、クロラムブシル、ベラスチン（ｂｅｌｕｓｔｉｎｅ）、ウラシルナイトロジェンマスタード、クロマファジン（ｃｈｌｏｍａｐｈａｚｉｎ）及びダカルバジン（ｄａｃａｒｂａｚｉｎｅ）である。他の細胞毒性／抗腫瘍試薬は主要細胞の抗代謝物とすることができる。例えば、シトシンアラビノシド、フルオロウラシル、メトトレキサート、チオプリン、アザチオプリンおよびプロカルバジンである。他の細胞毒性／抗腫瘍試薬は抗生剤とすることができ、例えば、ドキソルビシン、ブレオマイシン、アクチノマイシン、ダウノルビシン、ミスロマイシン、マイトマイシン、マイトマイシンＣ及びエリスロマイシンである。これらの化合物は多くの市販で購入できるリポソーム製剤を含む。他の細胞毒性／抗腫瘍製剤は有糸分裂阻害剤（ビンカアルカロイド）とすることができる。これらはビンクリスチン、ビンブラスチン及びエトポシドを含む。複数種類の細胞毒性／抗腫瘍試薬は、パクリタキセルとその誘導体、Ｌ−アスパラギナーゼ、抗腫瘍抗体、ダカルバジン、アザシチジン、アクリジン、メルファラン、ＶＭ−２６、イホスファミド、ミトキサントロン、およびビンデシンを含む。
【０２６９】
抗血管生成剤を使用することもできる。開示される方法及び組成物中に用いられる適切な抗血管生成剤は抗ＶＥＧＦ抗体を含むことができ、ヒト化抗体及びキメラ抗体、抗ＶＥＧＦ適応体及びトアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む。他の血管生成阻害剤は血管阻害剤、アンジオスタチン、エンドスタチン（ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ）、インターフェロン、インターロイキン１（αおよびβを含む）、インターロイキン１２、レチノイン酸、及びメタロプロテイナーゼ−１および−２（ＴＩＭＰ−１及び−２）の組織阻害剤を含む。小分子を使用することもでき、包括トポイソメラーゼＩ阻害剤、例えばテトラヒドロホルム（ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｆｏｒｍ）、抗血管生成活性を有するトトポイソメラーゼＩＩ阻害剤を含む。
【０２７０】
本発明の本件抗ＷＴ１ ＣＡＲ免疫応答細胞と組み合わせて使用する他のがん製剤は以下を含むが、これらに限られない: アシビシン（ａｃｉｖｉｃｉｎ）；  アクラルビシン（ａｃｌａｒｕｂｉｃｉｎ）；アコダゾール塩酸塩（ａｃｏｄａｚｏｌｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；アクロニン（ａｃｒｏｎｉｎｅ）；アドゼレシン（ａｄｏｚｅｌｅｓｉｎ）；アルデスロイキン（ａｌｄｅｓｌｅｕｋｉｎ）；アルトレタミン（ａｌｔｒｅｔａｍｉｎｅ）；アンボマイシン（ａｍｂｏｍｙｃｉｎ）；酢酸アメタントロン（ａｍｅｔａｎｔｒｏｎｅ  ａｃｅｔａｔｅ）；アミノグルテチミド（ａｍｉｎｏｇｌｕｔｅｔｈｉｍｉｄｅ）；アムサクリン（ａｍｓａｃｒｉｎｅ）；アナストロゾール（ａｎａｓｔｒｏｚｏｌｅ）；アントラマイシン（ａｎｔｈｒａｍｙｃｉｎ）；アスパラギナーゼ；アスペルリン（ａｓｐｅｒｌｉｎ）；アバスチン（ａｖａｓｔｉｎ）；アザシチジン（ａｚａｃｉｔｉｄｉｎｅ）；アゼテパ（ａｚｅｔｅｐａ）；アゾトマイシン（ａｚｏｔｏｍｙｃｉｎ）；バチマスタット（ｂａｔｉｍａｓｔａｔ）；ベンゾデパ（ｂｅｎｚｏｄｅｐａ）；ビカルタミド（ｂｉｃａｌｕｔａｍｉｄｅ）、塩酸ビサントレン（ｂｉｓａｎｔｒｅｎｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、ジメシル酸ビスナフィド（ｂｉｓｎａｆｉｄｅ  ｄｉｍｅｓｙｌａｔｅ）、ビゼレシン（ｂｉｚｅｌｅｓｉｎ）、硫酸ブレオマイシン（ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ  ｓｕｌｆａｔｅ）、ブキナイン  ナトリウム（ｂｒｅｑｕｉｎａｒ  ｓｏｄｉｕｍ）；ブロピリミン（ｂｒｏｐｉｒｉｍｉｎｅ）；ブスルファン（ｂｕｓｕｌｆａｎ）；アクチノマイシンｃ；カルステロン（ｃａｌｕｓｔｅｒｏｎｅ）；カラセミド（ｃａｒａｃｅｍｉｄｅ）；カーベタイマー（ｃａｒｂｅｔｉｍｅｒ）；カルボプラチン（ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ）；ムスチン（ｃａｒｍｕｓｔｉｎｅ）；カルビシン塩酸塩（ｃａｒｕｂｉｃｉｎ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；カルゼレシン（ｃａｒｚｅｌｅｓｉｎ）；セデフィンゴール（ｃｅｄｅｆｉｎｇｏｌ）；クロラムブシル（ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）；シロレマイシン（ｃｉｒｏｌｅｍｙｃｉｎ）；シスプラチン（ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）；クラドリビン（ｃｌａｄｒｉｂｉｎｅ）；メシル酸クリナトール（ｃｒｉｓｎａｔｏｌ  ｍｅｓｙｌａｔｅ）；シクロホスファミド；シタラビン（ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ）；ダカルバジン（ｄａｃａｒｂａｚｉｎｅ）；ダクチノマイシン（ｄａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）；ダウノルビシン塩酸塩（ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；デシタビン（ｄｅｃｉｔａｂｉｎｅ）；デキソプラマチン（ｄｅｘｏｒｍａｐｌａｔｉｎ）；デザグアニン（ｄｅｚａｇｕａｎｉｎｅ）；メシレート  デザグアニン；ジアジコン（ｄｉａｚｉｑｕｏｎｅ）；ドセタキセル（ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）；ドキソルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）；塩酸ドキソルビシン、ドロロキシフェン（ｄｒｏｌｏｘｉｆｅｎｅ）；ドロロキシフェンクエン酸塩、プロパンプロピオン酸ドロモスタノロン（ｄｒｏｍｏｓｔａｎｏｌｏｎｅ  ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ）；デュアゾマイシン（ｄｕａｚｏｍｙｃｉｎ）；エダトレキサート（ｅｄａｔｒｅｘａｔｅ）；塩酸エフロルニチン（ｅｆｌｏｒｎｉｔｈｉｎ���  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；エルサミトルシン（ｅｌｓａｍｉｔｒｕｃｉｎ）；エンロプラチン（ｅｎｌｏｐｌａｔｉｎ）；ダカルバジン（ｄａｃａｒｂａｚｉｎｅ）；ダクチノマイシン（ｄａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）；ダウノルビシン塩酸塩（ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；デシタビン（ｄｅｃｉｔａｂｉｎｅ）；デキソプラマチン（ｄｅｘｏｒｍａｐｌａｔｉｎ）；デザグアニン（ｄｅｚａｇｕａｎｉｎｅ）；シレート  デザグアニン；ジアジコン（ｄｉａｚｉｑｕｏｎｅ）；ドセタキセル（ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）；ドキソルビシン；  （ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）；ドキソルビシン塩酸塩；ドロロキシフェン（ｄｒｏｌｏｘｉｆｅｎｅ）；クエン酸ドロロキシフェン、プロピオン酸ドロモスタノロン（ｄｒｏｍｏｓｔａｎｏｌｏｎｅ  ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ）；デュアゾマイシン（ｄｕａｚｏｍｙｃｉｎ）；エダトレキサート（ｅｄａｔｒｅｘａｔｅ）；塩酸エフロルニチン（ｅｆｌｏｒｎｉｔｈｉｎｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；エルサロキシン（ｅｌｓａｍｉｔｒｕｃｉｎ）；エンロプラチン（ｅｎｌｏｐｌａｔｉｎ）；エンプロメート（ｅｎｐｒｏｍａｔｅ）；エピプロピジン（ｅｐｉｐｒｏｐｉｄｉｎｅ）；エピルビシン塩酸塩（ｅｐｉｒｕｂｉｃｉｎ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；エルブロゾール（ｅｒｂｕｌｏｚｏｌｅ）；エルブロゾール  エソルビシン塩酸塩（ｅｓｏｒｕｂｉｃｉｎ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；エストラムスチン（ｅｓｔｒａｍｕｓｔｉｎｅ）；エストラムスチンリン酸ナトリウム（ｅｓｔｒａｍｕｓｔｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｓｏｄｉｕｍ）；エタニダゾール（ｅｔａｎｉｄａｚｏｌｅ）；エトポシド（ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）；  エトポシドリン酸エトポシド；エトプリン（ｅｔｏｐｒｉｎｅ）；ファドロゾール塩酸塩（ｆａｄｒｏｚｏｌｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；ファザラビン（ｆａｚａｒａｂｉｎｅ）；フェンレチニド、フロクスウリジン（ｆｌｏｘｕｒｉｄｉｎｅ）；フルダラビンリン酸塩（ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）；フルオロウラシル（ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ）；フルロシタビン（ｆｌｕｒｏｃｉｔａｂｉｎｅ）；フォシコン（ｆｏｓｑｕｉｄｏｎｅ）；フォストリエシンナトリウム（ｆｏｓｔｒｉｅｃｉｎ  ｓｏｄｉｕｍ）；ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）；ゲムシタビン塩酸塩；ヒドロキシ尿素；  イダルビチン塩酸塩（ｉｄａｒｕｂｉｃｉｎ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；イホスファミド  （ｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）；イルモフォシン（ｉｌｍｏｆｏｓｉｎｅ）；インターロイキンＩＩ（組換えインターロイキンＩＩまたはｒＩＬ２を含む）、インターフェロンα−２ａ；インターフェロンα−２ｂ；インターフェロンα−ｎ１；インターフェロンα−ｎ３；インターフェロンβ−Ｉ；インターフェロンγ−Ｉｂ；  イプロプラチン（ｉｐｒｏｐｌａｔｉｎ）；イリノテカン塩酸塩（ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；  酢酸ランレオチド（ｌａｎｒｅｏｔｉｄｅ  ａｃｅｔａｔｅ）；  レトロゾール（ｌｅｔｒｏｚｏｌｅ）；酢酸リュープロリド（ｌｅｕｐｒｏｌｉｄｅ  ａｃｅｔａｔｅ）；塩酸リアロゾール（ｌｉａｒｏｚｏｌｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏ��ｉｄｅ）；ロメトレキソールナトリウム（ｌｏｍｅｔｒｅｘｏｌ  ｓｏｄｉｕｍ）；ロムスチン（ｌｏｍｕｓｔｉｎｅ）；  塩酸ロソキサントロン（ｌｏｓｏｘａｎｔｒｏｎｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；マソプロコール（ｍａｓｏｐｒｏｃｏｌ）；メイタンシン（ｍａｙｔａｎｓｉｎｅ）；塩酸メクロレタミン（ｍｅｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；酢酸メゲストロール（ｍｅｌｅｎｇｅｓｔｒｏｌ  ａｃｅｔａｔｅ）；メレネストロールアセテート（ｍｅｇｅｓｔｒｏｌ  ａｃｅｔａｔｅ）；メルファラン（ｍｅｌｐｈａｌａｎ）；メノガリル（ｍｅｎｏｇａｒｉｌ）；メルカプトプリン（ｍｅｒｃａｐｔｏｐｕｒｉｎｅ）；メトトレキサート（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）；メトトレキサートナトリウム、メトプリン（ｍｅｔｏｐｒｉｎｅ）；メトピペート（ｍｅｔｕｒｅｄｅｐａ）；ブタミン（ミチンドマイド）；ミトカルシン；ミトクロミン；ミトギリン；ミトマルシン；ミトマイシン  （ｍｉｔｏｓｐｅｒ）；ミチンドマイド（ｍｉｔｉｎｄｏｍｉｄｅ）；ミトカルシン（ｍｉｔｏｃａｒｃｉｎ）；ミトクロミン（ｍｉｔｏｃｒｏｍｉｎ）；ミトギリン（ｍｉｔｏｇｉｌｌｉｎ）；ミトマルシン（ｍｉｔｏｍａｌｃｉｎ）；ミトマイシン（ｍｉｔｏｍｙｃｉｎ）；ミトスパー（ｍｉｔｏｓｐｅｒ）；  ミトタン（ｍｉｔｏｔａｎｅ）；ミトキサントロン塩酸塩（ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；ミコフェノール酸（ｍｙｃｏｐｈｅｎｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）；ノコダゾール（ｎｏｃｏｄａｚｏｌｅ）；ノガラマイシン（ｎｏｇａｌａｍｙｃｉｎ）；オルマプラチン（ｏｒｍａｐｌａｔｉｎ）；オキシスラン（ｏｘｉｓｕｒａｎ）；パクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）；ペガスパルガーゼ（ｐｅｇａｓｐａｒｇａｓｅ）；ペリオマイシン（ｐｅｌｉｏｍｙｃｉｎ）；ペンタムスチン（ｐｅｎｔａｍｕｓｔｉｎｅ）；硫酸ペプロマイシン（ｐｅｐｌｏｍｙｃｉｎ  ｓｕｌｆａｔｅ）；ペルホスファミド（ｐｅｒｆｏｓｆａｍｉｄｅ）；  ピポブロマン（ｐｉｐｏｂｒｏｍａｎ）；  ピオスルファン（ｐｉｐｏｓｕｌｆａｎ）；  ピロキサントロン塩酸塩（ｐｉｒｏｘａｎｔｒｏｎｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；  プリカマイシン（ｐｌｉｃａｍｙｃｉｎ）；  プロメスタン（ｐｌｏｍｅｓｔａｎｅ）；  ポルファムナトリウム（ｐｏｒｆｉｍｅｒ  ｓｏｄｉｕｍ）；  ポルフィロマイシン（ｐｏｒｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）；プレドニムスチン（ｐｒｅｄｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）；  プロカルバジン塩酸塩（ｐｒｏｃａｒｂａｚｉｎｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；  ピューロマイシン（ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ）；  ピューロマイシン塩酸塩（ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；  ピラゾフリン（ｐｙｒａｚｏｆｕｒｉｎ）；リボプリン（ｒｉｂｏｐｒｉｎｅ）；  ログレチミド（ｒｏｇｌｅｔｉｍｉｄｅ）；  サフィンゴール（ｓａｆｉｎｇｏｌ）；  塩酸サフィンゴール；  セムスチン（ｓｅｍｕｓｔｉｎｅ）；  シントラゼン（ｓｉｍｔｒａｚｅｎｅ）；  スパルフォセートナトリウム（ｓｐａｒｆｏｓａｔｅ  ｓｏｄｉｕｍ）；  スパルソマイシン（ｓｐａｒｓｏｍｙｃｉｎ）；  スピロゲルマニウム塩酸塩（ｓｐｉｒｏｇｅｒｍａｎｉｕｍ  ｈｙ��ｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；スピロムスチン（ｓｐｉｒｏｍｕｓｔｉｎｅ）；  スピロムスチン（ｓｐｉｒｏｐｌａｔｉｎ）；  ストレプトニグリン（ｓｔｒｅｐｔｏｎｉｇｒｉｎ）；  ストレプトゾシン（ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｃｉｎ）；  ソロフェナ（ｓｕｌｏｆｅｎｕｒ）；  タリスマイシン（ｔａｌｉｓｏｍｙｃｉｎ）；  テコガランナトリウム（ｔｅｃｏｇａｌａｎ  ｓｏｄｉｕｍ）；  テガフー（ｔｅｇａｆｕｒ）；  塩酸テロキサントロン（ｔｅｌｏｘａｎｔｒｏｎｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；  テモポルフィン（ｔｅｍｏｐｏｒｆｉｎ）；  テニポシド（ｔｅｎｉｐｏｓｉｄｅ）；テロキシロン（ｔｅｒｏｘｉｒｏｎｅ）；  テストラクトン（ｔｅｓｔｏｌａｃｔｏｎｅ）；チアミプリン（ｔｈｉａｍｉｐｒｉｎｅ）；  チオグアニン（ｔｈｉｏｇｕａｎｉｎｅ）；チオテパ（ｔｈｉｏｔｅｐａ）；  チアゾフリン（ｔｉａｚｏｆｕｒｉｎ）；チラパザミン（ｔｉｒａｐａｚａｍｉｎｅ）；クエン酸トレミフェン（ｔｏｒｅｍｉｆｅｎｅ  ｃｉｔｒａｔｅ）；酢酸トレストロン（ｔｒｅｓｔｏｌｏｎｅ  ａｃｅｔａｔｅ）；  リン酸トリシリビン（ｔｒｉｃｉｒｉｂｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）；  トリメトレキセート（ｔｒｉｍｅｔｒｅｘａｔｅ）；トリメチルキセート；トリプトレリン（ｔｒｉｐｔｏｒｅｌｉｎ）；  塩酸ツブロゾール（ｔｕｂｕｌｏｚｏｌｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；ウラシルマスタード（ｕｒａｃｉｌ  ｍｕｓｔａｒｄ）；ウレデパ（ｕｒｅｄｅｐａ）；バプレオチド（ｖａｐｒｅｏｔｉｄｅ）；ベルテポルフィン（ｖｅｒｔｅｐｏｒｆｉｎ）；硫酸ビンブラスチン（ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ  ｓｕｌｆａｔｅ）；硫酸ビンクリスチン（ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ  ｓｕｌｆａｔｅ）；ビンデシン（ｖｉｎｄｅｓｉｎｅ）；硫酸ビンデシン；硫酸ビネピジン（ｖｉｎｅｐｉｄｉｎｅ  ｓｕｌｆａｔｅ）；  硫酸ヴィグリシン（ｖｉｎｇｌｙｃｉｎａｔｅ  ｓｕｌｆａｔｅ）；  硫酸ヴィグリシン（ｖｉｎｌｅｕｒｏｓｉｎｅ  ｓｕｌｆａｔｅ）；  硫酸ビノレルビン（ｖｉｎｏｒｅｌｂｉｎｅ  ｔａｒｔｒａｔｅ）；  硫酸ビンロシジン（ｖｉｎｒｏｓｉｄｉｎｅ  ｓｕｌｆａｔｅ）；  硫酸ビンゾリジン（ｖｉｎｚｏｌｉｄｉｎｅ  ｓｕｌｆａｔｅ）；  ボロゾール（ｖｏｒｏｚｏｌｅ）；  ゼニプラチン（ｚｅｎｉｐｌａｔｉｎ）；
ジノスタチン（ｚｉｎｏｓｔａｔｉｎ）；  塩酸ゾルビシン（ｚｏｒｕｂｉｃｉｎ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）。他の抗がん剤には以下を含むが、これらに限られない：２０−テーブル−１，２５ジヒドロキシビタミンＤ３；  ５−アセチレンウラシル；アビラテロン（ａｂｉｒａｔｅｒｏｎｅ）；アクラルビシン（ａｃｌａｒｕｂｉｃｉｎ）；アシルフルベン；アデシペノール（ａｄｅｃｙｐｅｎｏｌ）；アドゼレシン（ａｄｏｚｅｌｅｓｉｎ）；アルデスロイキン（ａｌｄｅｓｌｅｕｋｉｎ）；ＡＬＬ−ＴＫアンタゴニスト；アルトレタミン（ａｌｔｒｅｔａｍｉｎｅ）；アマムスチン（ａｍｂａｍｕｓｔｉｎｅ）；  アミドックス（ａｍｉｄｏｘ）；アミフォスチン（ａｍｉｆｏｓｔｉｎｅ）；アミノレブリン酸（ａｍｉｎｏｌｅｖｕｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）；アムサクリン（ａｍｒｕｂｉｃｉｎ）；アムサクリン（ａｍｓａｃｒｉｎｅ）；アナグレリド（ａｎａｇｒｅｌｉｄｅ）；アナストロゾール（ａｎａｓｔｒｏｚｏｌｅ）；アンドログラフォライド（ａｎｄｒｏｇｒａｐｈｏｌｉｄｅ）；血管新生阻害剤；アンタゴニストＤ；アンタゴニストＧ；アナレリックス；抗硬膜形態形成タンパク質−１；抗アンドロゲン、前立腺がん；  酸；アフィジコリングリシナート；細胞死遺伝子調節因子；細胞死調節因子；抗背突形成タンパク−１；抗アンドロゲン、前立腺癌、抗エストロゲン、アンチネオプラストン、アンチセンスオリゴヌクレオチド、アフィジコリングリシナート（ａｐｈｉｄｉｃｏｌｉｎ  ｇｌｙｃｉｎａｔｅ）、細胞死遺伝子調節因子、細胞死調節因子；プリン；ａｒａ−ＣＤＰ−ＤＬ−ＰＴＢＡ；アルギニンデアミナーゼ；アスクラクリン（ａｓｕｌａｃｒｉｎｅ）；アタメスタン（ａｔａｍｅｓｔａｎｅ）；アトリムスチン（ａｔｒｉｍｕｓｔｉｎｅ）；アキシナスタチン１、アキシナスタチン２、アキシナスタチン３、アザセトロン（ａｚａｓｅｔｒｏｎ）；アザトキシ（ａｔｒｉｍｕｓｔｉｎｅ）；  アザチロシン（ａｚａｔｙｒｏｓｉｎｅ）；ベリージベレリンＩＩＩ誘導体；バラノール（ｂａｌａｎｏｌ）；バチマスタット（ｂａｔｉｍａｓｔａｔ）；  ＣＡＲ／ＡＢＬアンタゴニスト；ベンゾクロリン（ｂｅｎｚｏｃｈｌｏｒｉｎｓ）；ベンゾイルスタウロスポリン（ｂｅｎｚｏｙｌｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ；）；β−ｅｎｄｏアミド誘導体、β−アレチン、ベタクラマイシンＢ（ｂｅｔａｃｌａｍｙｃｉｎ  Ｂ）；ベツリン酸；ｂＦＧＦ阻害剤；  ビカルタミド（ｂｉｃａｌｕｔａｍｉｄｅ）；  ビサントレン（ｂｉｓａｎｔｒｅｎｅ）；  ビサジリジニルスペルミン（ｂｉｓａｚｉｒｉｄｉｎｙｌｓｐｅｒｍｉｎｅ）；  ビスナフィド（ｂｉｓｎａｆｉｄｅ）；  ビストラテンＡ  （ｂｉｓｔｒａｔｅｎｅ  Ａ）；  ビゼレシン（ｂｉｚｅｌｅｓｉｎ）；ブレフレート（ｂｒｅｆｌａｔｅ）；ブロピリミン（ｂｒｏｐｉｒｉｍｉｎｅ）；ブドチタン（ｂｕｄｏｔｉｔａｎｅ）；ブチニンスルホキシミン（ｂｕｔｈｉｏｎｉｎｅ  ｓｕｌｆｏｘｉｍｉｎｅ）；カルシポトリオール（ｃａｌｃｉｐｏｔｒｉｏｌ）；カルシウムフォトプロテインＣ；カンプトテシン誘導体；カナリアポＩＬ−２；  カペシタビン（ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）；カルボキサミドアミノトリアゾール；カルボキサミドト���アゾール；ＣａＲｅｓｔ  Ｍ３；ＣＡＲＮ  ７００；軟骨由来阻害剤；  カルゼレシン（ｃａｒｚｅｌｅｓｉｎ）；カゼインキナーゼ阻害剤（ＩＣＯＳ）；カスタノスペルミン（ｃａｓｔａｎｏｓｐｅｒｍｉｎｅ）；カイコ抗菌ペプチドＢ；  セトレリリクス（ｃｅｔｒｏｒｅｌｉｘ）；  クロリン（ｃｈｌｏｒｉｎｓ）；クロロキノキサリンスルホンアミド；  シカプロスト（ｃｉｃａｐｒｏｓｔ）；シスポルフィリン；クラドリビン（ｃｌａｄｒｉｂｉｎｅ）；クロミフェン類似体；  クロトリマゾール（ｃｌｏｔｒｉｍａｚｏｌｅ）；コリスマイシンＡ  （ｃｏｌｌｉｓｍｙｃｉｎ  Ａ）；コリスマイシンＢ  （ｃｏｌｌｉｓｍｙｃｉｎ  Ｂ）；コンブレタスタチンＡ４  （ｃｏｍｂｒｅｔａｓｔａｔｉｎ  Ａ４）；コバスタチン類似体；コナゲニン；クランベシジン  ８１６；  クリナトール（ｃｒｉｓｎａｔｏｌ）；クリプトフィシン８  （ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｃｉｎ  ８）；  クリプトフィシンＡ誘導体；キュラシン（ｃｕｒａｃｉｎ）Ａ；  シクロペンタントラキノン；  シクロプラタム（ｃｙｃｌｏｐｌａｔａｍ）；シペマイシン（ｃｙｐｅｍｙｃｉｎ）；シタラビンオクフォスフェート（ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ  ｏｃｆｏｓｆａｔｅ；  ）細胞溶解因子；サイトスタチン（ｃｙｔｏｓｔａｔｉｎ）；クリキシマブ（ｄａｃｌｉｘｉｍａｂ）；デシタビン（ｄｅｃｉｔａｂｉｎｅ）；デヒドロジデムニンＢ  （ｄｅｈｙｄｒｏｄｉｄｅｍｎｉｎ  Ｂ）；デスロレリン（ｄｅｓｌｏｒｅｌｉｎ）；デキサメタゾン（ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ）；デキシフォスファミド（ｄｅｘｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）；デクスラゾキサン（ｄｅｘｒａｚｏｘａｎｅ）；デキスベラパミル（ｄｅｘｖｅｒａｐａｍｉｌ）；ジアジコン（ｄｉａｚｉｑｕｏｎｅ）；  ジデムニンＢ（ｄｉｄｅｍｎｉｎ  Ｂ）；ジドックス（ｄｉｄｏｘ）；ジエチルノルスペルミン（ｄｉｅｔｈｙｌｎｏｒｓｐｅｒｍｉｎｅ）；  ジヒドロ−５−アザシチジン（ｄｉｈｙｄｒｏ−５−ａｚａｃｙｔｉｄｉｎｅ）；ジヒドロタキソール（ｄｉｈｙｄｒｏｔａｘｏｌ），  ９−ジオキサマイシン（ｄｉｏｘａｍｙｃｉｎ）；ジフェニルスピロムスチン（ｄｉｐｈｅｎｙｌ  ｓｐｉｒｏｍｕｓｔｉｎｅ）；ドセタキセル（ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）；  ドコスタキセル；ドラストロン（ｄｏｌａｓｅｔｒｏｎ）；ドキシフルリジン（ｄｏｘｉｆｌｕｒｉｄｉｎｅ）；ドロロキシフェン（ｄｒｏｌｏｘｉｆｅｎｅ）；ドロナビノール（ｄｒｏｎａｂｉｎｏｌ）；  デュオカルマイシンＳＡ（ｄｕｏｃａｒｍｙｃｉｎ  ＳＡ）；  エブセレン（ｅｂｓｅｌｅｎ）；エコムスチン（ｅｃｏｍｕｓｔｉｎｅ）；  エデルフォシン（ｅｄｅｌｆｏｓｉｎｅ）；エドレコロマブ（ｅｄｒｅｃｏｌｏｍａｂ）；  エフロルニチン（ｅｆｌｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）；エレメン（ｅｌｅｍｅｎｅ）；エミテフール（ｅｍｉｔｅｆｕｒ）；エピルビシン（ｅｐｉｒｕｂｉｃｉｎ）；エプリステリド（ｅｐｒｉｓｔｅｒｉｄｅ）；  エストラムスチン類似体；  エストロゲン作動薬；エストロゲン拮抗薬；  エタニダゾール（ｅｔａｎｉｄａｚｏｌｅ）；  リン酸エトポシド（ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）；  エキセメスタン（ｅｘｅｍｅｓｔａｎｅ）；  ファドロゾール（ｆａｄｒｏｚｏｌｅ）；  ファザ��ビン（ｆａｚａｒａｂｉｎｅ）；  フェンレチニド  （ｆｅｎｒｅｔｉｎｉｄｅ）；  フィルグラスチム（ｆｉｌｇｒａｓｔｉｍ）；  フィナステリド（ｆｉｎａｓｔｅｒｉｄｅ）；  フラボピリドール（  ｆｌａｖｏｐｉｒｉｄｏｌ）；フルゼラスチン（ｆｌｅｚｅｌａｓｔｉｎｅ）；  フルアステロン（ｆｌｕａｓｔｅｒｏｎｅ）；  フルダラビン（ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅ）；  フルオロダウノルニシン塩酸塩（ｆｌｕｏｒｏｄａｕｎｏｒｕｎｉｃｉｎ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；  フォルフェニメクス（ｆｏｒｆｅｎｉｍｅｘ）；  フォルメスタン（ｆｏｒｍｅｓｔａｎｅ）；  フォストリエシン（ｆｏｓｔｒｉｅｃｉｎ）；  フォテムスチン（ｆｏｔｅｍｕｓｔｉｎｅ）；  テキサスポルフィリンチンキ（ｇａｄｏｌｉｎｉｕｍ  ｔｅｘａｐｈｙｒｉｎ）；  硝酸ガリウム；  ガロシタビン（ｇａｌｏｃｉｔａｂｉｎｅ）；ガニレリクス（ｇａｎｉｒｅｌｉｘ）；  ゼラチナーゼ阻害剤；  ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）；  グルタチオン阻害剤；  ヘプスルファム（ｈｅｐｓｕｌｆａｍ）；  ヘレグリン（ｈｅｒｅｇｕｌｉｎ）；  ヘキサメチレンビスアセトアミド（ｈｅｘａｍｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｂｉｓａｃｅｔａｍｉｄｅ）；  ヒペリシン（ｈｙｐｅｒｉｃｉｎ）；イバンドロン酸（ｉｂａｎｄｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）；  イダルビシン（ｉｄａｒｕｂｉｃｉｎ）；イドキシフェン（ｉｄｏｘｉｆｅｎｅ）；イドラマントン（ｉｄｒａｍａｎｔｏｎｅ）；イルモフォシン（ｉｌｍｏｆｏｓｉｎｅ）；イロマスタット（ｉｌｏｍａｓｔａｔ）；イミダゾアクリドン（ｉｍｉｄａｚｏａｃｒｉｄｏｎｅｓ）；イミキモド（ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ）；免疫刺激ペプチド；  インスリン様成長因子−１受容体阻害剤；インターフェロンアゴニスト；インターフェロン；インターロイキン；ヨードベンジジン；ヨードドキソルビシン（ｉｏｄｏｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）；イポメアノール（ｉｐｏｍｅａｎｏｌ），  ４−；イロプラクト（ｉｒｏｐｌａｃｔ）；  イルソグラジン（ｉｒｓｏｇｌａｄｉｎｅ）；  イソベンガゾール（ｉｓｏｂｅｎｇａｚｏｌｅ）；  イソホモハリコンドリンＢ  （ｉｓｏｈｏｍｏｈａｌｉｃｏｎｄｒｉｎ  Ｂ）；  イタセトロン（ｉｔａｓｅｔｒｏｎ）；ジャスプラキノリド（ｊａｓｐｌａｋｉｎｏｌｉｄｅ）；  カハラリドＦ（  ｋａｈａｌａｌｉｄｅ  Ｆ）；  ラメラリン−Ｎトリアセテート  （ｌａｍｅｌｌａｒｉｎ−Ｎ  ｔｒｉａｃｅｔａｔｅ）；  ランレオチド（ｌａｎｒｅｏｔｉｄｅ）；  レイナマイシン（ｌｅｉｎａｍｙｃｉｎ）；  レノグラスチム（ｌｅｎｏｇｒａｓｔｉｍ）；  レンチナン（ｌｅｎｔｉｎａｎ  ｓｕｌｆａｔｅ）；  レプトルスタチン（ｌｅｐｔｏｌｓｔａｔｉｎ）；  レトロゾール（ｌｅｔｒｏｚｏｌｅ）；  白血病抑制因子；  白血球αインターフェロン；  リュープロレリン＋エストロゲン＋プロゲステロン；  リュープロレリン（ｌｅｕｐｒｏｒｅｌｉｎ）；  レバミゾール（ｌｅｖａｍｉｓｏｌｅ）；リロゾール（ｌｉａｒｏｚｏｌｅ）；  線状ポリアミン類似体；  親油性ジグリコペプチド；親油性白金化合物；リソクリンアミド７（  ｌｉｓｓｏｃｌｉｎａｍｉｄｅ  ７）；  ロバプラチン（ｌｏｂａｐｌａｔｉｎ）；  ロブリシン（ｌｏｍｂｒｉｃｉｎｅ）；  ロメト���キソール（ｌｏｍｅｔｒｅｘｏｌ）；  クロニダロニダミン（ｌｏｎｉｄａｍｉｎｅ）；  ロソキサントロン（ｌｏｓｏｘａｎｔｒｏｎｅ）；  ロバスタチン（ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ）；ロキソリビン（ｌｏｘｏｒｉｂｉｎｅ）；  ルルトテカン（ｌｕｒｔｏｔｅｃａｎ）；  ルテチウムテキサフィリン（ｌｕｔｅｔｉｕｍ  ｔｅｘａｐｈｙｒｉｎ）；  リソフィリン（ｌｙｓｏｆｙｌｌｉｎｅ）；  可溶性ペプチド；  マイタンシン（ｍａｉｔａｎｓｉｎｅ）；  マンノスタチンＡ（ｍａｎｎｏｓｔａｔｉｎ  Ａ）；  マリマスタット（ｍａｒｉｍａｓｔａｔ）；  マソプロコール（ｍａｓｏｐｒｏｃｏｌ）；  ヒトマスピン（ｍａｓｐｉｎ）；  マトリックス可溶性因子阻害剤（ｍａｔｒｉｌｙｓｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ）；  マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤（ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ）；  メノガリル（ｍｅｎｏｇａｒｉｌ）；  メルバロン（ｍｅｒｂａｒｏｎｅ）；  メテリン（ｍｅｔｅｒｅｌｉｎ）；  メチオニナーゼ（ｍｅｔｈｉｏｎｉｎａｓｅ）；メトクロプラミド（ｍｅｔｏｃｌｏｐｒａｍｉｄｅ）；  ＭＩＦ阻害剤；  ミフェプリストン（ｍｉｆｅｐｒｉｓｔｏｎｅ）；  ミルテフォシン（ｍｉｌｔｅｆｏｓｉｎｅ）；  ミリモスティム（ｍｉｒｉｍｏｓｔｉｍ）；  ミスマッチ二本鎖ＲＮＡ；  ミトグアゾン（ｍｉｔｏｇｕａｚｏｎｅ）；  ミトララクトール（ｍｉｔｏｌａｃｔｏｌ）；  マイトマイシン類似体（ｍｉｔｏｍｙｃｉｎ  ａｎａｌｏｇｕｅｓ）；ミトナフィド（ｍｉｔｏｎａｆｉｄｅ）；  ミトコンドリア線維芽細胞成長因子−サポニン；  ミトキサントロン（ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ）；  モファロテン（ｍｏｆａｒｏｔｅｎｅ）；  モルグラモスティム（ｍｏｌｇｒａｍｏｓｔｉｍ）；モノクローナル抗体；ヒト絨毛性ゴナドトロピン；モノホスホリル脂質Ａ＋マイコバクテリア細胞壁ｓｋ；モピダモール（ｍｏｐｉｄａｍｏｌ）；多剤耐性遺伝子阻害剤；複数の腫瘍抑制因子１に基づく治療；マスタード抗がん剤；ミカペロキシドＢ（ｍｙｃａｐｅｒｏｘｉｄｅ  Ｂ）；マイコバクテリウム細胞壁抽出物；ミリアポロン（ｍｙｒｉａｐｏｒｏｎｅ）；  Ｎ−アセチルジナリン（Ｎ−ａｃｅｔｙｌｄｉｎａｌｉｎｅ）；
Ｎ−置換ベンズアミド（Ｎ−ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ  ｂｅｎｚａｍｉｄｅｓ）；  ナファレリンナグレスチップ（ｎａｆａｒｅｌｉｎ；  ｎａｇｒｅｓｔｉｐ）；  ナロキソン＋ペンタゾシン（ｎａｌｏｘｏｎｅ＋ｐｅｎｔａｚｏｃｉｎｅ）；  ナパビン（ｎａｐａｖｉｎ）；  ナフテルピン（ｎａｐｈｔｅｒｐｉｎ）；  ナルトグラスチム（ｎａｒｔｏｇｒａｓｔｉｍ）；  ネダプラチン（ｎｅｄａｐｌａｔｉｎ）；  ネモルビシン（ｎｅｍｏｒｕｂｉｃｉｎ）；  ネリドロン酸（ｎｅｒｉｄｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）；  中性エンドペプチダーゼ；ニルタミドニサマイシン（ｎｉｌｕｔａｍｉｄｅ；  ｎｉｓａｍｙｃｉｎ）；  酸化窒素調節剤；  ニトロキシド抗酸化剤；  ニトロリン（ｎｉｔｒｕｌｌｙｎ）；  Ｏ６−ベンジルグアニン；  オクトレオチド（ｏｃｔｒｅｏｔｉｄｅ）；  オキセノン（ｏｋｉｃｅｎｏｎｅ）；  オリゴヌクレオチド；  オナプリストン（ｏｎａｐｒｉｓｔｏｎｅ）；  オンダンセトロン（ｏｎｄａｎｓｅｔｒｏｎ）；  オンダンセトロン（ｏｎｄａｎｓｅｔｒｏｎ）；  オラシン（ｏｒａｃｉｎ）；  経口サイトカイン誘導剤；  オーマプラチン（ｏｒｍａｐｌａｔｉｎ）；  オサテロン（ｏｓａｔｅｒｏｎｅ）；オキサリプラチン（ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ）；  オキサノマイシン（ｏｘａｕｎｏｍｙｃｉｎ）；  パクリタキセル；パクリタキセル類似体；パクリタキセル誘導体；パラオアミン（ｐａｌａｕａｍｉｎｅ）；パルミトイルリゾキシン（ｐａｌｍｉｔｏｙｌｒｈｉｚｏｘｉｎ）；パミドロン酸（ｐａｍｉｄｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）；パナキシトリオール（ｐａｎａｘｙｔｒｉｏｌ）；パノミフェン（ｐａｎｏｍｉｆｅｎｅ）；パラバクチン（ｐａｒａｂａｃｔｉｎ）；パゼリプチン（ｐａｚｅｌｌｉｐｔｉｎｅ）；ペガスパルガーゼ（ｐｅｇａｓｐａｒｇａｓｅ）；  ペルデシン（ｐｅｌｄｅｓｉｎｅ）；  ペントサン多硫酸ナトリウム（ｐｅｎｔｏｓａｎ  ｐｏｌｙｓｕｌｆａｔｅ  ｓｏｄｉｕｍ）；  ペントスタチン（ｐｅｎｔｏｓｔａｔｉｎ）；  ペントロゾール（ｐｅｎｔｒｏｚｏｌｅ）；  パーフルブロン（ｐｅｒｆｌｕｂｒｏｎ）；  パーフォスファミド（ｐｅｒｆｏｓｆａｍｉｄｅ）；  ペリリルアルコール（ｐｅｒｉｌｌｙｌ  ａｌｃｏｈｏｌ）；  フェナジノマイシン（ｐｈｅｎａｚｉｎｏｍｙｃｉｎ）；フェニルアセテート（ｐｈｅｎｙｌａｃｅｔａｔｅ）；  ホスファターゼ阻害剤；  ピシバニル（ｐｉｃｉｂａｎｉｌ）；  ピロカルピン塩酸塩（ｐｉｌｏｃａｒｐｉｎｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；  ピラルビシン（ｐｉｒａｒｕｂｉｃｉｎ）；  ピレキシム（ｐｉｒｉｔｒｅｘｉｍ）；プラセチンＡ；  プラセチンＢ；  プラスミノーゲン活性化因子阻害剤；  白金錯体；  白金化合物；  白金−トリアミン錯体；  ポルフィマーナトリウム（ｐｏｒｆｉｍｅｒ  ｓｏｄｉｕｍ）；  ポルフィロマイシン（ｐｏｒｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）；  プレドニゾン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｎｅ）；  プロピルビスアクリドン（ｐｒｏｐｙｌ  ｂｉｓ−ａｃｒｉｄｏｎｅ）；プロスタグランジンＪ２（ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ  Ｊ２）；プロテアソーム阻害剤；プロテインＡをベースとする免疫調節剤；  プロテインキナーゼＣ阻害剤；プロテインキナーゼＣ阻害剤，微細藻類；プロテインチロシンホスファターゼ阻害剤；プリンヌクレオシドリン酸化酵素阻害剤；プルプリン（ｐｕｒｐｕｒｉｎｓ）；ピラゾロアクリジン（ｐｙｒａｚｏｌｏａｃｒｉｄｉｎｅ）；ピリジルオキシ化ヘモグロビンポリオキシエチレンコンジュゲート；ｒａｆアンタゴニスト；  ラルチトレキセド（ｒａｌｔｉｔｒｅｘｅｄ）；  ラモセトロン（ｒａｍｏｓｅｔｒｏｎ）；  ｒａｓファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤；  ｒａｓ阻害剤；  ｒａｓ−ＧＡＰ阻害剤；  脱メチル化されたレテリプチン（ｒｅｔｅｌｌｉｐｔｉｎｅ  ｄｅｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ）；  レニウムＲｅ  １８６リン酸ヒドロキシエチル；  リゾキシン（ｒｈｉｚｏｘｉｎ）；  リボザイム；ＲＩＩレチナミド（ＲＩＩ  ｒｅｔｉｎａｍｉｄｅ）；  ロールチミド（ｒｏｇｌｅｔｉｍｉｄｅ）；  ロヒツカイン（ｒｏｈｉｔｕｋｉｎｅ）；  ロムライド（ｒｏｍｕｒｔｉｄｅ）；  ロキニメックス（ｒｏｑｕｉｎｉｍｅｘ）；  ルビジノンＢ１（ｒｕｂｉｇｉｎｏｎｅ  Ｂ１）；  ルボキシル（ｒｕｂｏｘｙｌ）；  サフィンゴ（ｓａｆｉｎｇｏｌ）；  サントピン（ｓａｉｎｔｏｐｉｎ）；  ＳａｒＣＮＵ；  サルコフィトールＡ（ｓａｒｃｏｐｈｙｔｏｌ  Ａ）；  サルグラモスティム（ｓａｒｇｒａｍｏｓｔｉｍ）；Ｓｄｉ  １模倣体；  セムスチン（ｓｅｍｕｓｔｉｎｅ）；  老化由来阻害剤１；  有意オリゴヌクレオチド；  シグナル伝達阻害剤；シグナル伝達調節因子；単鎖抗原結合タンパク質；シゾフィラン（ｓｉｚｏｆｉｒａｎ）；  ソブゾキサン（ｓｏｂｕｚｏｘａｎｅ）；  ボロカプチン酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ  ｂｏｒｏｃａｐｔａｔｅ）；フェニル酢酸ナトリウム；ソルベロール（ｓｏｌｖｅｒｏｌ）；ソマトスタチン結合タンパク質；ソネルミン（ｓｏｎｅｒｍｉｎ）；スパルホス酸（ｓｐａｒｆｏｓｉｃ  ａｃｉｄ）；スピカマイシンＤ  （ｓｐｉｃａｍｙｃｉｎ  Ｄ）；  スピロムスチン（ｓｐｉｒｏｍｕｓｔｉｎｅ）；スプレノペンチン（ｓｐｌｅｎｏｐｅｎｔｉｎ）；  スポンギスタチン１（ｓｐｏｎｇｉｓｔａｔｉｎ  １）；スクアラミン（ｓｑｕａｌａｍｉｎｅ）；幹細胞阻害剤；  幹細胞分裂阻害剤；スチピアミド（ｓｔｉｐｉａｍｉｄｅ）；ストロマリシン阻害剤；スルフィノシン（ｓｕｌｆｉｎｏｓｉｎｅ）；  超活性血管作動性腸管ペプチド拮抗薬；  スラジスタ（ｓｕｒａｄｉｓｔａ）；  スラミン（ｓｕｒａｍｉｎ）；スワインソニン（ｓｗａｉｎｓｏｎｉｎｅ）；  合成グリコサミノグリカン；タリムスチン（ｔａｌｌｉｍｕｓｔｉｎｅ）；  タモキシフェンメチオジド（ｔａｍｏｘｉｆｅｎ  ｍｅｔｈｉｏｄｉｄｅ）；タウロムスチン（ｔａｕｒｏｍｕｓｔｉｎｅ）；  タザロテン（ｔａｚａｒｏｔｅｎｅ）；  テコガランナトリウム（ｔｅｃｏｇａｌａｎ  ｓｏｄｉｕｍ）；  テガフール（ｔｅｇａｆｕｒ）；  テルラピリリウム（ｔｅｌｌｕｒａｐｙｒｙｌｉｕｍ）；テロメラーゼ阻害剤；  テモポルフィン（ｔｅｍｏｐｏｒｆｉｎ）；  テモゾロミド（ｔｅｍｏｚｏｌｏｍｉｄｅ）；  テニポシド（ｔｅｎｉｐｏｓｉｄｅ）；  テトラクロロドデシルオキシド；  テトラゾミン（ｔｅｔｒａｚｏｍｉｎｅ）；  サリブラスチン（ｔｈａｌｉｂｌａｓｔｉｎｅ）；  チオコラリン（ｔｈｉｏｃｏｒａｌｉｎｅ）；  トロンボポエチン（ｔｈ��ｏｍｂｏｐｏｉｅｔｉｎ）；  トロンボポエチン模倣体；  チマルファシン（ｔｈｙｍａｌｆａｓｉｎ）；  サイモシン受容体アゴニスト；チモトリナン（ｔｈｙｍｏｔｒｉｎａｎ）；甲状腺刺激ホルモン；  エチルエチオプルプリンスズ（ｔｉｎ  ｅｔｈｙｌ  ｅｔｉｏｐｕｒｐｕｒｉｎ）；  チラパザミン（ｔｉｒａｐａｚａｍｉｎｅ）；  チタンジクロロシクロペンタジエン；  トプセンチン；  レミフェン（ｔｏｒｅｍｉｆｅｎｅ）；  全能性幹細胞因子；翻訳阻害剤；レチノイン酸；トリアセチルウリジン（ｔｒｉａｃｅｔｙｌｕｒｉｄｉｎｅ）；  トリシリビン（ｔｒｉｃｉｒｉｂｉｎｅ）；  トリメトレキサート（ｔｒｉｍｅｔｒｅｘａｔｅ）；  トリプトレリン（ｔｒｉｐｔｏｒｅｌｉｎ）；  トロピセトロン（ｔｒｏｐｉｓｅｔｒｏｎ）；  ツロステリド（ｔｕｒｏｓｔｅｒｉｄｅ）；チロシンキナーゼ阻害剤；チルホスチン（ｔｙｒｐｈｏｓｔｉｎｓ）；  ＵＢＣ阻害剤；  ウベニメックス（ｕｂｅｎｉｍｅｘ）；  尿生殖孔由来成長阻害因子；ウロキナーゼ受容体拮抗薬；バペプチド；  バリオリンＢ（ｖａｒｉｏｌｉｎ  Ｂ）；  キャリアシステム，赤血球遺伝子治療；ベラレソル（ｖｅｌａｒｅｓｏｌ）；ベラミン（ｖｅｒａｍｉｎｅ）；ベルジン（ｖｅｒｄｉｎｓ）；ベルテポルフィン（ｖｅｒｔｅｐｏｒｆｉｎ）；ビノレルビン（ｖｉｎｏｒｅｌｂｉｎｅ）；ビンサルチン（ｖｉｎｘａｌｔｉｎｅ）；ビタキシン（ｖｉｔａｘｉｎ）；ボロゾール（ｖｏｒｏｚｏｌｅ）；ザノテロン（ｚａｎｏｔｅｒｏｎｅ）；ゼニプラチン（ｚｅｎｉｐｌａｔｉｎ）；  ジラスコルブ（ｚｉｌａｓｃｏｒｂ）；  及びジノスタチンエステル（ｚｉｎｏｓｔａｔｉｎ  ｓｔｉｍａｌａｍｅｒ）。一つの実施形態において、抗がん剤は、５−フルオロウラシル、タキソール（ｔａｘｏｌ）またはロイコボリン（ｌｅｕｃｏｖｏｒｉｎ）である。
【０２７１】
幾つかの場合において、注入、ガイドチューブ等により本件抗−ＷＴ１ ＣＡＲ免疫応答細胞を導入できる。幾つかの場合において、免疫賦活剤を含むことができ、インターロイキン、例えばＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−６及びＩＬ−１１及びその他のインターロイキン、コロニー刺激因子、例えばＧ−、Ｍ−及びＧＭ−ＣＳＦ、インターフェロン、例えばγ−インターフェロン及びエリスロポエチンを含むが、これらに限られない。幾つかの場合において、ＣＡＲ−Ｔ、免疫枯渇剤及び免疫賦活剤を用いて被験者を治療できる。ＩＬ−２を用いて被験者を治療しＣＡＲ−Ｔ細胞製品の性能を強化できる。幾つかの場合において、免疫賦活剤は組換えタンパクとすることができる。免疫賦活剤はさらにタンパク質の活性部分を含むことができる。幾つかの場合において、免疫賦活剤はタンパク質の一部のみを含むことができる。タンパク質の一部はタンパク質の約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または約１００％とすることができる。
【０２７２】
本件抗−ＷＴ１ ＣＡＲ免疫応答細胞、例えばＣＡＲ Ｔ細胞を含む組成物は便利に無菌液体製剤の形で提供でき、例えば、等張水溶液、懸濁液、エマルジョン、分散液または粘性組成物であり、選択されたｐＨに緩衝できる。液体製剤は通常、ゲル状、他の粘性組成物及び固体組成物より製造しやすい。また、液体組成物はある程度便利に施用でき、特に注入によって施用できる。他の面において、適当な粘度範囲内において粘性組成物を調製して特定組織とより長い接触時間を持てるように提供する。液体または粘性組成物は担体を含むことができ、前記担体は溶媒または分散媒体とすることができ、それは例えば、水、食塩水、リン酸塩緩衝食塩水、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール等）及びそれらの適切な混合物である。無菌注入溶液は本発明の遺伝子修飾されたＣＡＲ免疫応答細胞と必要量の適切な溶媒と異なる量のその他の成分と混合することで製造され、所望の通りである。このような組成物は適切な担体、希釈剤または賦形剤、例えば無菌水、生理塩水、ブドウ糖、デキストロース等と混合できる。該組成物は凍結乾燥されたものとすることもできる。前記組成物は補助物質、例えば、湿潤剤、分散剤または乳化剤（例えば、メチルセルロール）、ｐＨ緩衝剤、ゲル化剤、または粘性付与添加剤、防腐剤、香り増進剤、着色剤等を含むことができ、これは施用される経路及び希望される製剤によって決まる。標準的な教科書を参照でき、例えば「REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCE」、第１７版、１９８５、を引用によって本明細書に導入でき、これにより適切な製剤を製造し、過度の実験を必要としない。組成物の安定性及び無菌性を増強させる異なる添加剤を添加でき、抗微生物防腐剤、抗酸化剤、キレート剤及び緩衝材を含む。複数種類の抗菌及び抗真菌試薬、例えば、パラベン、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール、フェノール、ソルビン酸等により微生物を防止する作用を確保する。吸収が遅延する試薬、例えばモノステアリン酸アルミニウムとゼラチンにより、注入薬物形式の吸収を延長させることができる。しかし、本発明により、使用される如何なる担体、希釈剤または添加剤は、遺伝子修飾されたＣＡＲ免疫応答細胞またはその前駆細胞と適合するものでなければならない。
【０２７３】
幾つかの場合において、組成物は等張性であり、即ちそれらは血液及び涙液と同じ浸透圧を有する。本発明の組成物の所望の等張性は、塩化ナトリウムまたは他の薬学上許容される試薬、例えば、デキストロース、ホウ酸、酒石酸ナトリウム、プロピレングリコールまたはその他の無機または有機溶媒によって実現できる。特に好ましくは、塩化ナトリウムを、ナトリウムイオンを含む緩衝液に用いる。希望される場合は、薬学上許容される増粘剤を用いて組成物の粘性を選択される水準に保持できる。好ましくはメチルセルロースであり、これは容易かつ経済的に得ることができ、かつ使用しやすい。他の適切な増粘剤は、例えば、キサンタンガム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボマー（ｃａｒｂｏｍｅｒ）等である。増粘剤の好ましい濃度は選ばれる試薬による。重要なのは、前記選択された粘度に達することができる使用量を使用する。明らかなように、適切な担体及び他の添加剤の選択は、施用される適切な経路及び特定剤型の性質によって決まり、例えば液体剤型である（例えば、組成物を溶液、懸垂液、ゲルまたは他の液体形式に調製するか、例えば定時放出の形または液体充填の形である）。
【０２７４】
幾つかの場合において、例えばがんを治療する組成物、製剤及び方法中において、施用される組成物または製剤の単位剤量は、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５または１００ｍｇとすることができる。幾つかの場合において、施用される組成物または製剤の全体量は、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０または１００ｇとすることができる。
【０２７５】
幾つかの場合において、如何なる経路により単独で、または薬学上許容される担体または賦形剤と共に、本件抗−ＷＴ１ ＣＡＲ免疫応答細胞、例えばＣＡＲ Ｔ細胞を含む薬物組成物を施用し、かつこのような施用は単剤型及び多剤型によって行うことができる。より具体的に、薬物組成物は、錠剤、カプセル、ロゼンジ、糖衣錠、ハードキャンディー、粉末、スプレー、水性懸濁液、注入液、チンキ剤、シロップ等の形の複数種類の薬学上許容される惰性担体との組み合わせである。このような担体は固体希釈剤または充填剤、無水水性媒質及び各種無毒有機溶媒等を含む。また、このような内服医薬品製剤は通常、該目的に用いる複数種類の試薬により適度に甘くする及び／または調味することができる。
【０２７６】
例えば、細胞は複数種類の関連の治療方式である（例えば、以前、同時または以後）に共に患者に施用でき、下記試薬を用いて治療できるが、これらに限られず、例えば、抗ウイルス療法、シドフォビル（ｃｉｄｏｆｏｖｉｒ）及びインターロイキン−２、またはシタラビン（ＡＲＡ−Ｃとも称される）である。幾つかの場合において、エンジニアリング（遺伝子操作）細胞は、化学療法、放射療法、免疫抑制剤（例えばシクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキサート、ミコフェノール酸及びＦＫ５０６）、抗体または他の免疫消去剤（例えば、ＣＡＭＰＡＴＨ）、抗ＣＤ３抗体または他の抗体療法、細胞毒素、フルダリビン（ｆｌｕｄａｒｉｂｉｎｅ）、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン（ｒａｐａｍｙｃｉｎ）、ミコプリエノール酸（ｍｙｃｏｐｌｉｅｎｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）、ステロイド、ＦＲ９０１２２８，サイトカイン及び放射と組み合わせて使用できる。遺伝子操作された細胞の組成物は、さらに骨髄移植、如何なる化学療法剤、例えばフルダラビン、体外照射療法（ＸＲＴ）、シクロホスファミド、または抗体（例えば、ＯＫＴ３またはＣＡＭＰＡＴＨ）のＴ細胞消去療法と組み合わせて（例えば、以前、同時または以後）において患者に施用できる。幾つかの場合において、遺伝子操作された細胞の組成物はＢ細胞消去療法後に施用でき、例えばＣＤ２０反応の薬剤、例えばＲｉｔｕｘａｎである。例えば、被験者は高剤量の化学療法の標準的治療を受け、それから末梢血幹細胞の移植を行うことができる。幾つかの実施形態において、移植後、被験者は遺伝子操作された細胞、例えば増幅された遺伝子操作された細胞の輸液を受けることができる。また、手術前または後に増幅した遺伝子操作された細胞を施用できる。本明細書に記載の如何なる方法によって得られる遺伝子操作された細胞は、宿主抗移植物（ＨｖＧ）拒絶及び移植物抗宿主疾患（ＧｖＨＤ）の患者を治療するために用いられる。そのため、宿主抗移植物（ＨｖＧ）拒絶及び移植物抗宿主疾患（ＧｖＨＤ）治療の被験者に対する方法を考えることができ、前記患者に対して有効量の遺伝子操作された細胞を施用することにより前記患者を治療でき、前記遺伝子操作された細胞は非活性化のＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ遺伝子を含む。
【０２７７】
＜キット＞
本明細書が開示するのは組成物を含むキットである。本明細書はさらに、がん、病原体感染、免疫疾患、または同種異体移植の治療及び／または予防に用いられるキットについて開示している。一つの実施形態において、キットは治療または予防性組成物を含むことができ、有効量の細胞を含み、該細胞は一種類または複数種類の単位剤型の抗ＷＴ１抗原結合ユニットまたは抗ＷＴ１ ＣＡＲを含む。幾つかの実施形態において、キットは無菌容器を含み、該無菌容器は治療または予防性のワクチンを含む；このような容器は、箱、アンプル、ボトル、バイアル、チューブ、袋、ポーチ、ブリスター包装または本分野で知られる他の適切な容器の形とすることができる。このような容器はプラスチック、ガラス、ラミネート紙、金属箔または他の医薬品の貯蔵に適した材料によって作られる。幾つかの場合において、本件抗ＷＴ１ ＣＡＲ免疫応答細胞（例えばＣＡＲ  Ｔ細胞）細胞は、ＣＡＲ免疫応答細胞を被験者に施用することの説明書と共に提供でき、前記被験者はがん、病原体感染、免疫疾患または同種異体移植を有し、またはがん、病原体感染、免疫疾患または同種異体移植のリスクが発展途中にあるものである。該説明書は通常、該組成物がん、病原体感染、免疫疾患または同種異体移植の治療または予防に用いる際の情報を含むものである。幾つかの場合において、キットは約１×１０４個の細胞から約１×１０１２個の細胞を含む。幾つかの場合において、キットは少なくとも約１×１０５個の細胞、少なくとも約１×１０６個の細胞、少なくとも約１×１０７個の細胞、少なくとも約４×１０７個の細胞、少なくとも約５×１０７個の細胞、少なくとも約６×１０７個の細胞、少なくとも約６×１０７個の細胞、少なくとも約８×１０７個の細胞、少なくとも約９×１０７個の細胞、少なくとも約１×１０８個の細胞、少なくとも約２×１０８個の細胞、少なくとも約３×１０８個の細胞、少なくとも約４×１０８個の細胞、少なくとも約５×１０８個の細胞、少なくとも約６×１０８個の細胞、少なくとも約６×１０８個の細胞、少なくとも約８×１０８個の細胞、少なくとも約９×１０８個の細胞、少なくとも約１×１０９個の細胞、少なくとも約２×１０９個の細胞、少なくとも約３×１０９個の細胞、少なくとも約４×１０９個の細胞、少なくとも約５×１０９個の細胞、少なくとも約６×１０９個の細胞、少なくとも約６×１０９個の細胞、少なくとも約８×１０９個の細胞、少なくとも約９×１０９個の細胞、少なくとも約１×１０１０個の細胞、少なくとも約２×１０１０個の細胞、少なくとも約３×１０１０個の細胞、少なくとも約４×１０１０個の細胞、少なくとも約５×１０１０個の細胞、少なくとも約６×１０１０個の細胞、少なくとも約６×１０１０個の細胞、少なくとも約８×１０１０個の細胞、少なくとも約９×１０１０個の細胞、少なくとも約１×１０１１個の細胞、少なくとも約２×１０１１個の細胞、少なくとも約３×１０１１個の細胞、少なくとも約４×１０１１個の細胞、少なくとも約５×１０１１個の細胞、少なくとも約６×１０１１個の細胞、少なくとも約６×１０１１個の細胞、少なくとも約８×１０１１個の細胞、少なくとも約９×１０１１個の細胞、または少なくとも約１×１０１２個の細胞を含む��例えば、キット中は約５×１０１０個の細胞を含むことができる。もう一つの実例において、キットは３×１０６個の細胞を含むことができる。細胞は約５×１０１０個の細胞に増幅してさらに被験者に施用できる。
【０２７８】
幾つかの場合において、キットは同種異体細胞を含むことができる。幾つかの場合において、キットはゲノム修飾された細胞を含むことができる。幾つかの場合において、キットは既製の（ｏｆｆ−ｔｈｅ−ｓｈｅｌｆ）細胞を含むことができる。幾つかの場合において、キットは増幅して臨床に応用できる細胞を含むことができる。幾つかの場合において、キットは研究目的に用いられる内容物を含むことができる。
【０２７９】
幾つかの場合において、説明書は少なくとも以下の一つを含む：治療剤の説明；腫瘍形成、病原体感染、免疫疾患または同種異体移植、またはこれらの症状の予防または治療に用いられる投薬案及び施用；予防措置；警告；適応症；不適応症（ｃｏｕｎｔｅｒ−ｉｎｄｉｃａｔｉｏｎ）；オーバードーズ情報；不良反応（副作用）；動物薬理学；臨床研究；及び／または参考文献。これらの説明書は直接容器上（あるならば）に印刷でき、または容器上に貼り付けるラベル、または単独のページ、パンフレット、カードまたは容器と共に提供される折り畳まれた印刷物として提供できる。幾つかの場合において、説明書は化学療法剤を施用した後、抗ＷＴ１抗原結合ユニットまたは抗ＷＴ１ ＣＡＲ免疫応答細胞を施用し、例えばＣＡＲ Ｔ細胞のプログラムである。幾つかの場合において、説明書は化学療法剤を施用する前に抗ＷＴ１抗原結合ユニットまたは抗ＷＴ１ ＣＡＲ免疫応答細胞を施用するプログラムを提供する。幾つかの場合において、説明書は化学療法剤を施用すると同時または抗ＷＴ１抗原結合ユニットまたは抗ＷＴ１ ＣＡＲ免疫応答細胞を施用するプログラムを提供する。幾つかの場合において、説明書は、化学療法剤を施用した後の少なくとも１２時間、抗ＷＴ１抗原結合ユニットまたは抗ＷＴ１ ＣＡＲ免疫応答細胞を施用するプログラムを提供する。幾つかの場合において、説明書は化学療法剤を施用した後の少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０時間または２日、３日、４日、５日、６日または７日後に、抗ＷＴ１抗原結合ユニットまたは抗ＷＴ１ ＣＡＲ免疫応答細胞を施用するプログラムを提供する。幾つかの場合において、説明書は化学療法剤を施用した後の少なくとも２４時間に、抗ＷＴ１抗原結合ユニットまたは抗ＷＴ１ ＣＡＲ免疫応答細胞を施用するプログラムを提供する。抗ＷＴ１抗原結合ユニットまたは抗ＷＴ１ ＣＡＲ免疫応答細胞を調製して静脉内注入に用いることができる。抗ＷＴ１抗原結合ユニットまたは抗ＷＴ１ ＣＡＲ免疫応答細胞を調製して、固形腫瘍を含む被験者の肝臓中に動脈内注入を行うことができる。
【０２８０】
幾つかの場合において、キットはシクロホスファミドおよび／またはフルダラビンを含むことができ、それぞれ約６０ｍｇ／ｋｇから約８０ｍｇ／ｋｇ及び約２５ｍｇ／ｍ２から約３５ｍｇ／ｍ２の剤量を必要とする被験者に施用する。幾つかの場合において、キットは小児科剤量の製品を含むことができる。
【０２８１】
組換え方法は本分野において知られるものである。別途説明する場合を除き、本発明の実施は分子生物学（組換え技術を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学及び免疫学の通常の技術を用いることは、本分野の技術範囲内である。このような技術は文献において充分に説明され、例えば以下である。「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ」、第二版（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９）；  「Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」（Ｇａｉｔ，編集、１９８４）；  「Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ」  （Ｆｒｅｓｈｎｅｙ、編集、１９８７）；  「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ」  （Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｉｎｃ．）；「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」（Ｗｅｉ及びＢｌａｃｋｗｅｌｌ，編集）；  「Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ」  （Ｍｉｌｌｅｒ及びＣａｌｏｓ, 編集、１９８７）；  「Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」（Ａｕｓｕｂｅｌら，編集、１９８７）；  「ＰＣＲ：  Ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ」、（Ｍｕｌｌｉｓら、編集、１９９４）；  及び「Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」（Ｃｏｌｉｇａｎら，編集、１９９１）。これらの技術はポリヌクレオチド及びポリペプチドの生産に用いられ、さらに本発明を制定及び実施する際に考慮できる。以下各部分において特に有用の技術について検討する。
【０２８２】
本明細書が開示する方法は移植を含むことができる。移植は細胞製品の養子移植を指すことができる。移植とは自家移植、同種異体移植、異種移植またはその他の移植とすることができる。例えば、移植は異種移植とすることができる。移植は同種異体移植とすることもできる。
【０２８３】
幾つかの場合において、被験者に対して約５×１０１０個の本件抗ＷＴ１ ＣＡＲ免疫応答細胞を施用できる。幾つかの実施形態において、約５×１０１０個の細胞が被験者に施用する細胞の中央値である。幾つかの実施形態において、被験者の治療応答に影響するには、約５×１０１０個の細胞を必要する。幾つかの実施形態において、少なくとも約１×１０７個の細胞、少なくとも約２×１０７個の細胞、少なくとも約３×１０７個の細胞、少なくとも約４×１０７個の細胞、少なくとも約５×１０７個の細胞、少なくとも約６×１０７個の細胞、少なくとも約６×１０７個の細胞、少なくとも約８×１０７個の細胞、少なくとも約９×１０７個の細胞、少なくとも約１×１０８個の細胞、少なくとも約２×１０８個の細胞、少なくとも約３×１０８個の細胞、少なくとも約４×１０８個の細胞、少なくとも約５×１０８個の細胞、少なくとも約６×１０８個の細胞、少なくとも約６×１０８個の細胞、少なくとも約８×１０８個の細胞、少なくとも約９×１０８個の細胞、少なくとも約１×１０９個の細胞、少なくとも約２×１０９個の細胞、少なくとも約３×１０９個の細胞、少なくとも約４×１０９個の細胞、少なくとも約５×１０９個の細胞、少なくとも約６×１０９個の細胞、少なくとも約６×１０９個の細胞、少なくとも約８×１０９個の細胞、少なくとも約９×１０９個の細胞、少なくとも約１×１０１０個の細胞、少なくとも約２×１０１０個の細胞、少なくとも約３×１０１０個の細胞、少なくとも約４×１０１０個の細胞、少なくとも約５×１０１０個の細胞、少なくとも約６×１０１０個の細胞、少なくとも約６×１０１０個の細胞、少なくとも約８×１０１０個の細胞、少なくとも約９×１０１０個の細胞、少なくとも約１×１０１１個の細胞、少なくとも約２×１０１１個の細胞、少なくとも約３×１０１１個の細胞、少なくとも約４×１０１１個の細胞、少なくとも約５×１０１１個の細胞、少なくとも約６×１０１１個の細胞、少なくとも約６×１０１１個の細胞、少なくとも約８×１０１１個の細胞、少なくとも約９×１０１１個の細胞または少なくとも約１×１０１２個の細胞である。例えば、約５×１０１０個の細胞を被験者に施用できる。もう一つの実例において、３×１０６個の細胞から始めて、細胞を約５×１０１０個の細胞に増殖させてさらに被験者に施用できる。幾つかの場合において、細胞は治療に充分な量まで増幅できる。例えば、５×１０７個の細胞は高速増殖することで充分な数量となり治療に用いられることができる。幾つかの場合において、治療に充分な数量は５×１０１０とすることができる。如何なる数量の細胞を輸液して治療に用いることができる。例えば、被験者に１×１０６から５×１０１２（含む）数量の細胞を輸液できる。患者に対してより多くの患者のために生産した細胞を注入できる。幾つかの場合において、患者体内に注入する細胞はすべてが遺伝子操作されたものではない。例えば、患者中に注入する少なくとも９０％の細胞が遺伝子操作されたものである。他の場合において、患者中に注入される少なくとも４０％の細胞が遺伝子操作されたものである。幾つかの実施形態において、方法は以下を含むことができる：被験者に一定量の遺伝子操作された細胞を施用して被験者の治療���答に影響する。幾つかの実施形態において、治療応答に必要とする遺伝子操作された細胞の数量の計算は：細胞生存率及び／または抗ＷＴ１ ＣＡＲ組換え遺伝子が細胞ゲノム中に組み込まれる効率。幾つかの実施形態において、被験者の治療応答に影響するため、被験者に施用する細胞は活細胞とすることができる。幾つかの実施形態において、被験者に治療応答を生じさせるために、少なくとも約９５％、少なくとも約９０％、少なくとも約８５％、少なくとも約８０％、少なくとも約７５％、少なくとも約７０％、少なくとも約６５％、少なくとも約６０％、少なくとも約５５％、少なくとも約５０％、少なくとも約４５％、少なくとも約４０％、少なくとも約３５％、少なくとも約３０％、少なくとも約２５％、少なくとも約２０％、少なくとも約１５％、少なくとも約１０％の細胞が活細胞である。幾つかの実施形態において、被験者の治療応答に影響するため、被験者に施用する細胞は、細胞遺伝子ゲノムに成功的に組み込まれた一種類または複数種類の組換え遺伝子を有する細胞である。幾つかの実施形態において、被験者中において治療応答を生じさせるため、少なくとも約９５％、少なくとも約９０％、少なくとも約８５％、少なくとも約８０％、少なくとも約７５％、少なくとも約７０％、少なくとも約６５％、少なくとも約６０％、少なくとも約５５％、少なくとも約５０％、少なくとも約４５％、少なくとも約４０％、少なくとも約３５％、少なくとも約３０％、少なくとも約２５％、少なくとも約２０％、少なくとも約１５％、少なくとも約１０％の細胞にはすでに一種類または複数種類のＣＡＲ組換え遺伝子が成功的に細胞遺伝子ゲノム中に組み込まれている。
【０２８４】
幾つかの場合において、被験者に対して本件抗ＷＴ１ ＣＡＲ免疫応答細胞を施用でき、施用できるＣＡＲ免疫応答細胞は約１日から約３５日齢である。例えば、施用する細胞は１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４または４０日齢とすることができる。ＣＡＲ免疫応答細胞の年齢は刺激時間に応じて検討することができる。ＣＡＲ免疫応答細胞の年齢はアフェレシスの時間に応じて検討することができる。ＣＡＲ免疫応答細胞の年齢は形質導入の時間に応じて検討することができる。幾つかの実施形態において、被験者に施用されるＣＡＲ免疫応答細胞は約１０から約１４または約２０日齢とすることができる。幾つかの場合において、ＣＡＲ免疫応答細胞の「年齢」はテロメアの長さによって知ることができる。例えば、「若い」ＣＡＲ免疫細胞は「消耗した」または「老いた」ＣＡＲ免疫応答細胞よりテロメアの長さを有する。特定の理論に限定されず、信じられているのは、免疫応答細胞は培養中、毎週損失するテロメアの長さは約０．８ｋｂで、若いＣＡＲ免疫応答細胞培養物は約４４日齢の免疫応答細胞のテロメアよりも大きい（約１．４ｋｂ）テロメアを有する。特定の理論に限定されず、信じられているのは、テロメアの長さは患者中の陽性の客観的臨床応答及び体内細胞の持久性と関連する。
【０２８５】
幾つかの場合において、被験者生体中から細胞を分離し、核酸（例えば、遺伝子またはｃＤＮＡ）を用いて細胞をトランスフェクションし、それから被験者生体（例えば、患者）中に再度輸液する。
【０２８６】
移植する以前、以後及び／または移植期間中の細胞（例えば、遺伝子操作された細胞又は遺伝子操作されるプライマリＴ細胞）は機能を有するものである。例えば、移植される細胞は移植後の少なくともまたは少なくとも約第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０または１００日目において機能を有する。移植した細胞は移植後少なくともまたは少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２カ月に機能を有する。移植された細胞は移植後の少なくともまたは少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５または３０年に機能を有する。幾つかの場合において、移植される細胞は受け入れ者のライフサイクル全体に渡って機能を有するものである。
【０２８７】
また、移植された細胞は正常予測機能の１００％機能を有する。移植された細胞はその正常予測機能の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８または１００％を発揮する。
【０２８８】
移植される細胞はその正常予測機能の１００％以上を発揮することもできる。例えば、移植される細胞はその正常予測機能の１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２５０、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００または約５０００％発揮できる。
【０２８９】
移植は如何なるタイプの移植によって行うことができる。部位は、肝嚢下腔、脾嚢下腔、腎被膜下腔、大網、胃または腸の粘膜下組織、小腸の血管セグメント、静脈嚢、精巣、脳、脾臓、または角膜（ｌｉｖｅｒ  ｓｕｂｃａｐｓｕｌａｒ  ｓｐａｃｅ，  ｓｐｌｅｎｉｃ  ｓｕｂｃａｐｓｕｌａｒ  ｓｐａｃｅ，  ｒｅｎａｌ  ｓｕｂｃａｐｓｕｌａｒ  ｓｐａｃｅ，  ｏｍｅｎｔｕｍ，  ｇａｓｔｒｉｃ  ｏｒ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｓｕｂｍｕｃｏｓａ，  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｓｅｇｍｅｎｔ  ｏｆ  ｓｍａｌｌ  ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ，  ｖｅｎｏｕｓ  ｓａｃ，  ｔｅｓｔｉｓ，  ｂｒａｉｎ，  ｓｐｌｅｅｎ，  ｏｒ  ｃｏｒｎｅａ）を含むが、これらに限られない。例えば、移植は嚢下腔移植とすることができる。移植は筋肉内移植とすることもできる。移植は門脈内移植（ｉｎｔｒａｐｏｒｔａｌ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｉｎｇ）とすることもできる。
【０２９０】
治療後（例えば、本明細書が開示する如何なる治療）において、一種類または複数種類の野生型細胞を被験者に移植した場合と比べて、移植拒絶を改善できる。例えば、移植拒絶は超急性拒絶とすることができる。移植拒絶は急性拒絶とすることもできる。他のタイプの拒絶は慢性拒絶を含むこともできる。移植拒絶は細胞介在の拒絶で、またはＴ細胞介在の拒絶である。移植拒絶はナチュラルキラー細胞介在の拒絶である。
【０２９１】
移植を改善するとは超急性拒絶を減軽することを言い、不良反応または症状の減少、減軽または弱化を含む。移植とは細胞製品の養子移植を指すことができる。
【０２９２】
移植成功のもう一つの指標は、被験者が免疫抑制療法を必要としない日数である。例えば、本明細書が提供する処理（例えば、移植）以後、被験者が免疫抑制療法を少なくともまたは少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０日またはより多くの日数必要としない。これは移植の成功を示している。これは移植された細胞に対して、組織及び／または臓器は拒絶していないことを示している。
【０２９３】
幾つかの場合において、被験者が免疫療法を必要としない日数は少なくとも１日である。被験者が免疫抑制療法を必要としないのは少なくとも７日以内である。被験者が免疫抑制療法を必要としないのは少なくとも１４日である。被験者が免疫抑制療法を必要としないのは少なくとも２１日である。被験者が免疫抑制療法を必要としないのは少なくとも２８日である。被験者が免疫抑制療法を必要としないのは少なくとも６０日である。また、被験者が免疫抑制療法を必要としないのは少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはより多くの年数である。
【０２９４】
移植成功のもう一つの指標は、被験者が免疫抑制療法を必要とする日数の減少とすることができる。例えば、本明細書が前記治療を提供した後、被験体が免疫抑制療法を必要とする日数を少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０日またはより多くの日数減少できる。これは移植成功を示している。これは移植された細胞に対して、組織及び／または臓器は拒絶していないことを示している。
【０２９５】
例えば、被験者が免疫抑制療法を必要とする日数の減少は、少なくとも１日間である。被験者が免疫抑制療法を必要とする日数の減少は、少なくとも７日間である。被験者が免疫抑制療法を必要とする日数の減少は、少なくとも１４日間である。被験者が免疫抑制療法を必要とする日数の減少は、少なくとも２１日間である。被験者が免疫抑制療法を必要とする日数の減少は、少なくとも２８日間である。被験者が免疫抑制療法を必要とする日数の減少は、少なくとも６０日間である。被験者が免疫抑制療法を必要とする日数の減少は、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０年または１０年以上である。
【０２９６】
一種類または複数種類の野生型細胞を被験者に移植する際、低下した免疫抑制療法は（必要とする免疫抑制療法に比べて）より少ない免疫抑制療法を指すことができる。
【０２９７】
免疫抑制療法は、免疫系を抑制する如何なる治療を含むことができる。免疫抑制療法は被験者の移植拒絶を緩和、減少または消去を助けることができる。例えば、免疫抑制療法は免疫抑制薬を含むことができる。移植する前、移植期間中及び／または移植後において使用される免疫抑制薬は以下を含むことができるが、これらに限られない：ＭＭＦ（ミコフェノール酸モルヒネ，Ｃｅｌｌｃｅｐｔ）、ＡＴＧ（抗胸腺細胞グロブリン）、抗ＣＤ１５４（ＣＤ４ＯＬ）、抗ＣＤ４０（２Ｃ１０、ＡＳＫＰ１２４０，ＣＣＦＺ５３３Ｘ２２０１）、アレンディズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ）、抗ＣＤ２０（リツキシマブ）、抗ＩＬ−６Ｒ抗体（トシリズマブ，Ａｃｔｅｍｒａ）、抗ＩＬ−６抗体（サリルマブ（ｓａｒｉｌｕｍａｂ）、オロキズマブ（ｏｌｏｋｉｚｕｍａｂ））、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ（アバタセプト／Ｏｒｅｎｃｉａ）、ベラタセプト（ｂｅｌａｔａｃｅｐｔ，ＬＥＡ２９Ｙ）、ラピムネ（Ｒａｐｉｍｕｎｅ）、エベロリムス（ｅｖｅｒｏｌｉｍｕｓ）、プログラフ（Ｐｒｏｇｒａｆ）、ダクリズマブ（Ｚｅ−ｎａｐａｘ）、バリキシマブ（Ｓｉｍｕｌｅｃｔ）、インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ）、シクロスポリン、デオキシスペルグアリン、可溶性補体受容体１、コブラ毒因子、コンプスタチン（ｃｏｍｐｓｔａｔｉｎ）、抗Ｃ５抗体（エクリズマブ／Ｓｏｌｉｒｉｓ）、メチルプレドニゾロン、ＦＴＹ７２０、エベロリムス、レフルノミド、抗ＩＬ−２Ｒ−Ａｂ、ラパマイシン、抗ＣＸＣＲ３抗体、抗ＩＣＯＳ抗体、抗ＯＸ４０抗体および抗ＣＤ１２２抗体。また、一種類または一種類以上の免疫抑制剤／薬物共にまたは順番に使用できる。一種類または一種類以上の免疫抑制剤／薬物は誘導療法または維持療法に用いることができる。誘導及び維持段階において同じまたは異なる薬物を使用できる。ダクリズマブ（Ｚｅｎａｐａｘ）は誘導治療に用いることができ、タクロリムス（Ｐｒｏｇｒａｆ）とシロリムス（Ｒａｐｉｍｕｎｅ）は維持治療に用いることができる。ダクリズマブ（Ｚｅｎａｐａｘ）は誘導治療に使用し、低剤量のタクロリムス（Ｐｒｏｇｒａｆ）とシロリムス（Ｒａｐｉｍｕｎｅ）を維持治療に用いることもできる。免疫抑制は非医薬品の案によっても実現でき、全身放射性治療、胸腺放射治療及び全部及び／または一部の脾臓切除術を含むが、これらに限られない。これらの技術は一種類または複数種類の免疫抑制薬物と組み合わせて使用できる。
【０２９８】
[実施例]
以下の例示的な実施例を参照してさらに本発明を詳細に説明する。このような実施例は例示的説明を目的とするもので、別途説明する場合を除き、これらに制限されるとの意味はない。そのため、本発明は以下の実施例に制限されると解釈されるべきではなく、本明細書に記載の示唆に基づいて容易にできる任意の及びすべての変化形をカバーすると解釈されるべきである。
【０２９９】
＜実施例１＞ＨＬＡ−ペプチド複合体の準備
ＨＬＡ．Ａ０２０１−ＢＳＰ遺伝子は体外において合成されるものである（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：  ３２）。図１に示されるように、該融合遺伝子は、Ｎ末端からＣ末端にＨＬＡ．Ａ０２０１分子をコードする細胞外領域、シグナルペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：  ３４）を有しない、短い「ＧＳ」コネクター、及びビオチンリガーゼＢｉｒＡ基質ペプチド（ＢＳＰ）を含む。ＮｄｅＩ／ＢａｍＨＩによって切断された融合遺伝子をｐＥＴ−２２ｂ発現ベクター中に挿入することでｐＥＴ２２ｂ−ＨＬＡ．Ａ０２０１−ＢＳＰを構築する。
【０３００】
体外ヒトβ２ｍ遺伝子（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：  ３３）を合成し、さらにＮｄｅＩ／ＢａｍＨＩによって切断された遺伝子をｐＥＴ−２２ｂ発現プラスミドに挿入し、類似的にヒトβ２ｍ発現ベクター（ｐＥＴ２２ｂ−β２ｍ）を構築する。
【０３０１】
それからｐＥＴ２２ｂ−ＨＬＡ．Ａ０２０１−ＢＳＰ及びｐＥＴ２２ｂ−β２ｍをＢＬ２１中に形質転換し、それから高い発現レベルを有するｐＥＴ２２ｂ−ＨＬＡ及びｐＥＴ２２ｂ−β２ｍの菌株をシェーキングテーブルにおいて２ＹＴ培地中において３７℃において終夜培養する。２日目に、終夜培養物を２ＹＴ培地中に接種し、最終濃度は５０μｇ／ｍｌで、さらに２５０ｒｐｍのシェーキングテーブルにおいて３７℃にて３時間培養する。一旦ＯＤ６００が約０．８になれば、イソプロピル−β−チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）を添加して最終濃度が１ｍＭとなるようにする。３７℃及び２２０ｒｐｍにおいて混合物を４時間培養してペプチドになるようにする。４℃遠心（８，０００ｒｐｍ）により細胞を収集し、それから４０ｍｌ緩衝液／４００ｍｌにて細胞を緩衝液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ，２５％ショ糖，１０ｍＭ  ＤＴＴ，１ｍＭ  ＥＤＴＡ，１％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００及び１ｍＭ  ＰＭＳＦ，ｐＨ８．０）中に懸垂させる。それから懸垂液に対して超音波（９９＊３ｓ，３ｓ間隔，４００Ｗ）により３回ホモジナイズさせる。１３，０００ｒｐｍ（１５分間）遠心により上澄み液を収集する。
【０３０２】
それぞれ２００μｌの対照培養物及び発現培養物から細胞を獲得し、それから４℃において遠心する（８，０００ｒｐｍ）。それから細胞を３０μｌのサンプル緩衝液に懸垂させ、１０分間煮沸し、それから１３，０００ｒｐｍにて２分間遠心させる。６μｌ上澄み液を電気泳動することで発現を検証する。
【０３０３】
ホモジナイズされた細胞（６μｌ）に対してそれぞれ上澄み液（可溶性,Ｓ）及び沈殿物（不溶性，Ｉ）の電気泳動を行う。ＳＤＳ−ＰＡＧＥは複合体中におけるＨＬＡ及びβ２ｍの発現を検証した。
【０３０４】
ホモジナイズにより得られた沈殿を緩衝液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ，１ｍ  ＭＤＴＴ，１ｍ  ＭＥＤＴＡ，０．５％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００及び０．１Ｍ  ＮａＣｌ；  ｐＨ８．０）中に懸垂させる。４℃において２ｈ振動させ、それから１３，０００ｒｐｍにて１５分間遠心して沈殿物を収集する。沈殿物を５回洗浄して封入体が白くなるようにする。
【０３０５】
それから洗浄された封入体を３０ｍｌの１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ及びｐＨ  ８．０の８Ｍ尿素中に懸垂させる。振とう及び遠心した後、上澄み液を１．５ｍｌＱカラム中に添加する。５倍カラム体積（ＣＶ）の緩衝液（１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ及び８Ｍ尿素；ｐＨ８．０）を用いて該カラムを平衡化させる。それからＱカラムにより３０ｍｌのサンプルを洗浄し、通過物を収集する。該カラムを通過するもう一つの導電率が３の１５ｍｌ緩衝液（１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ及び８Ｍ尿素；ｐＨ８．０）によりＥ１を収集する；もう一つの導電率が５の１５ｍｌ緩衝液（１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ及び８Ｍ尿素；  ｐＨ８．０）を用いてＥ２を収集する；もう一つの導電率が７の１５ｍｌ緩衝液（１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ及び８Ｍ尿素；ｐＨ８．０）を用いてＥ３を収集する。
【０３０６】
Ｅ１及びＥ２を合わせることでＨＬＡ留分を得て、さらに流出物とＥ２を合わせることによりβ２ｍ成分を得る。２ｍＭ  ＤＴＴ及び１ｍＭ  ＥＤＴＡを成分中に添加し、それからタンパク質を室温において２ｈリフォールディングさせる。限外ろ過によりＨＬＡ及びβ２ｍをそれぞれ約１０ｍｇ／ｍｌの最終濃度になるように濃縮し、それから−８０℃に維持させる。
【０３０７】
表７に示されるペプチドは、ＧＬ  Ｂｉｏｃｈｅｍ（上海）有限責任会社から購入され、異なるＨＬＡ−ペプチド複合体の製造に用いられる。ＲＭＦはＷＴ１の１２６−１３４フラグメントである。関連のないペプチドＹＬＬはＬＭＰ−１に由来する。これらの複合体は本明細書が開示する抗体の特異性の確認に用いられる。
【０３０８】
【表７】
2020523985.tif 000009
【０３０９】
フォールディング緩衝液（０．１Ｍ  Ｔｒｉｓ，２ｍＭ  ＥＤＴＡ，５ｍＭ  ＧＳＨ，０．５ｍＭ  ＳＳＧ及び０．２ｍＭ  ＰＭＳＦ；ｐＨ８．０）を用いて表６のペプチドをリフォールディングさせ、さらに５％グリセリンのＰＢＳ緩衝液を補充して透析を行う。それから濃縮ぺプチドを限界ろ過させ、各種ペプチドが約１．８ｍｌの最終体積となるようにする。濃縮されたペプチドに対してＳｕｐｅｒｄｅｘ７５クロマトグラフィーを用いて精製する。結果は図２に示される通りである。ピーク１は複合していないＨＬＡポリぺプチドに対応する。ピーク２はＨＬＡ−ＷＴ１ペプチド複合体に対応する。ピーク３は複合していないβ２ｍに対応する。
【０３１０】
それからビオチン化キット（ＢｉｒＡ、溶液Ａ、溶液Ｂ、ｄ−ビオチン；Ａｖｉｄｉｔｙ，Ｃｏｌｏｒａｄｏ，ＵＳＡ）によりマーカー複合体を得る。
【０３１１】
＜実施例２＞全ヒトファージディスプレイライブラリーを用いてＲＭＦ／ＨＬＡ複合体に特異的に結合するｓｃＦｖをスクリーニングする
ＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチド（ＲＭＦ）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）を展開するファージライブラリーを生成し、さらに特異的に該複合体と結合するｓｃＦｖをスクリーニングする。多くのＶＨ及びＶＬフラグメントに連結するコネクター（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５３）を有するｓｃＦｖを分離させる。
【０３１２】
＜実施例３＞ＡＢＵ１とＡＢＵ２の結合親和性分析
ＥＬＩＳＡ測定（図３）及びＦＡＣＳ分析（図４）により、抗原結合ユニット１（ＡＢＵ１）及びＡＢＵ２の選択ｓｃＦｖの、ＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチド（ＲＭＦ）との結合親和性について評価する。
【０３１３】
図３はサンプルのＥＬＩＳＡ測定の結果について記載している。図３に示されるように、ＡＢＵ１及びＡＢＵ２はＲＭＦ／ＨＬＡ．Ａ０２０１複合体に対して高度な特異性を有する。
【０３１４】
図４は例の結合親和性測定のＦＡＣＳ結果を示している。該実施例中において、（ＲＥＦ）ｓｃＦｖ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０）を参照して、ＡＢＵ１及びＡＢＵ２について評価する。固有のＷＴ１陰性及びＨＬＡ陽性を示すＴ２細胞株を使用する。それからエンジニアリングＴ２はＷＴ１ペプチド（Ｔ２／ＲＭＦ）、ＹＬＬ陰性対照（Ｔ２／ＹＬＬ）、参照ペプチドＲＭＦＳ１（Ｔ２／ＲＭＦＳ１）または参照ペプチドＲＭＦＳ２（Ｔ２／ＲＭＦＳ２）を発現する。ＡＢＵ１及びＡＢＵ２は特異的にＨＬＡ（Ｔ２／ＲＭＦ）と複合するＷＴ１ペプチドを結合する。ＡＢＵ２に比較して、参照抗原結合ユニット（ＲＥＦ）はＲＭＦＳ１及びＲＭＦＳ２に対してより高い非特異性結合を有する。
【０３１５】
＜実施例４＞親和性成熟
親和性成熟を行い、さらにＡＢＵ３、ＡＢＵ４及びＡＢＵ５の生成をもたらす。ＡＢＵ３−５及びＡＢＵ２及びＷＴ１ペプチド（ＲＭＦ／ＨＬＡ複合体）の結合親和力を評価する。２．５μｇ／ｍｌＲＭＦ，０．５μｇ／ｍｌＲＭＦ，０．２μｇ／ｍｌＲＭＦまたは２．５μｇ／ｍｌ  ＹＬＬの例示的なＥＬＩＳＡ実験によって得られるデータは図５に記載されている。図５に示されるように、すべての測定の抗原結合ユニットに特異性が保持されている。
【０３１６】
ＡＢＵ２、ＡＢＵ３、ＡＢＵ４及びＡＢＵ５に対して配列決定を行い、さらに図６において可変軽鎖及び可変重鎖領域の例示的な比較を記載する。これらの領域は重鎖ＣＤＲ  ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３、及び軽鎖ＣＤＲ  ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
【０３１７】
＜実施例５＞表面プラズマイオン共振を用いた親和力測定
表面プラズマ共振（Ｂｉａｃｏｒｅ(R)  Ｔ２００，ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ）により親和性成熟のＡＢＵ３の結合親和力について評価し、それから親ＡＢＵ２と比較を行う。図７は例の実験のデータについて記載し、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ３．２を用いて、さらに１：１  Ｌａｎｇｍｕｉｒモデルフィッテイングの動物学カーブに対して分析を行ったものである。
【０３１８】
＜実施例６＞フロンタル・アフィテニティクロマトグラフィー（ＦＡＣ）を用いて抗体と異なる細胞株の結合測定を行う
複数の細胞株を用いて親和力が成熟したＡＢＵ３、ＡＢＵ４及びＡＢＵ５及び親ＡＢＵ２の結合親和力を評価し、さらに例示的実験の結果を図８に記載している。
【０３１９】
Ｈ２４５２は中皮腫細胞株で、ＷＴ１陽性及びＨＬＡ陽性である。
ＳＷ４８０は結腸がん細胞株で、ＷＴ１陽性及びＨＬＡ陽性である。
ＳＫＯＶ３は卵巣がん細胞株であり、ＷＴ１陽性及びＨＬＡ陽性である。
ＢＶ１７３はフィラデルフィア染色体（Ｐｈ１）陽性の急性白血病細胞株であり、ＷＴ１陽性及びＨＬＡ陽性である。
Ｋ５６２は赤白血球細胞株で、ＷＴ１陽性及びＨＬＡ陰性である。
Ｔ２は体細胞ハイブリット細胞で、ＷＴ１陰性及びＨＬＡ陽性である。
【０３２０】
図８に示されるように、ＲＥＦはＷＴ１陽性及びＨＬＡ陽性細胞株と結合するのみでなく、さらにＷＴ１陽性及びＨＬＡ陰性細胞株と結合する。相反するように、ＡＢＵ２−５とＷＴ１陽性及びＨＬＡ陽性細胞株は顕著に結合し、しかしＷＴ１陰性またはＨＬＡ陰性細胞株と結合しない。
【０３２１】
＜実施例７＞ＡＤＣＣ測定
ＣｙｔｏＴｏｘ  ９６（Ｐｒｏｍｅｇａ,Ｍａｄｉｓｏｎ,ＵＳＡ）を使用して、乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）の放出により抗体依存性細胞介在の細胞毒性を測定する。ＣＤ１６ａを用いてＮＫ９６細胞をエフェクター細胞として安定的にトランスフェクションさせ、ＷＴ！  ＨＬＡ−Ａ０２０１及びＨＬＡ−Ａ０２０１のＨ２４５２及びＳＷ４８０を標的細胞とする。Ｆｃ−ｓｃＦｖ形式のＡＢＵ３−５のＡＤＣＣ活性を測定し、さらに以下の計算を行う（そのうち、ｓｐｏｎ．Ｒｅｌｅａｓｅは自発的な放出を意味する）：
【数１】
2020523985.tif 000010
【０３２２】
＜実施例８＞ ＷＴ１ ＣＡＲ−Ｔ細胞の構築
ｐＲＲＬＳＩＮ−ｃＰＰＴ．ＥＦ−１αにより複数種類のＡＢＵ３をベースとするキメラ抗原受容体を発現するレトロウイルスプラスミドをクローニングし、以下を含む：ｐＲＲＬＳＩＮ−ｃＰＰＴ．ＥＦ−１α−１Ａ４−２８Ｚ，  ｐＲＲＬＳＩＮ−ｃＰＰＴ．ＥＦ−１α−  １Ａ４−ＢＢＺ，  ｐＲＲＬＳＩＮ−ｃＰＰＴ．ＥＦ−１α−１Ａ４−２８ＢＢＺ，  ｐＲＲＬＳＩＮ−ｃＰＰＴ．ＥＦ−１α−１Ａ４−２８Ｚ−Ｆ２Ａ−ＥＧＦＰ，  ｐＲＲＬＳＩＮ−ｃＰＰＴ．ＥＦ−１α−１Ａ４−ＢＢＺ−Ｆ２Ａ−ＥＧＦＰ，及びｐＲＲＬＳＩＮ−  ｃＰＰＴ．ＥＦ−１α−１Ａ４−２８ＢＢＺ−Ｆ２Ａ−ＥＧＦＰ。ＡＢＵ３−２８Ｚの核酸配列を構築し、これによりＣＤ８αシグナル伝達ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５）、ＡＢＵ３  ｓｃＦｖ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：  ３７）及びＣＤ８ヒンジ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９）、ＣＤ２８膜貫通ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１）、ＣＤ２８細胞内シグナル伝達ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３）及びＣＤ３Ｚ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５）の構築ブロック（ｂｕｉｌｄiｎｇ  ｂｌｏｃｋ）を有する。ＡＢＵ３−２８ＢＢＺ核酸配列を構築し、ＣＤ８αシグナル伝達ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：  ３５）、ＡＢＵ３  ｓｃＦｖ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：  ３７）、及びＣＤ８ヒンジ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：  ３９）、ＣＤ２８膜貫通ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：  ４１）、ＣＤ２８細胞内シグナル伝達ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：  ４３）、ＣＤ１３７細胞内シグナル伝達ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：  ４９）及びＣＤ３Ｚ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：  ４５）の構築ブロックを有する。ｐＲＲＬＳＩＮ−ｃＰＰＴ．ＥＦ−１α−ＥＧＦＰを対照として使用する。
【０３２３】
それからｐＲＳＶ−ＲＥＶ、ｐＭＤＬｇ−ＲＲＥ及びＶＳＶ−Ｇ（Ａｄｄｇｅｎｅ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ，ＵＳＡ）を用いてＡＢＵ３  ＣＡＲを発現するレトロウイルスをパッケージし、さらに２９３Ｔ細胞中にトランスフェクションする（ＡＴＣＣ：ＣＲＬ−１１２６８）。トランスフェクションされた細胞は３７℃にて７２時間生長し、さらに上澄みを収集してウイルスを濃縮させる。さらに滴下を行いレトロウイルスの滴度を決める。それから濃縮されたレトロウイルスをＭＯＩ＝１５（３２℃，１，８００ｒｐｍ）にて活性化されたＴ細胞中に形質導入する。フローサイトメトリーによりＥＧＦＰによってＡＢＵ３−ＣＡＲの発現を測定する。対照物及びＡＢＵ３  ＣＡＲ（ＡＢＵ３−２８Ｚ，ＡＢＵ３−ＢＢＺ及びＡＢＵ３−２８ＢＢＺ）の形質導入効率は６８．４１％，５８．３％，７０．７％及び３２．６％である。
【０３２４】
抗ＷＴ１ ＣＡＲ Ｔ細胞ＡＢＵ３−２８Ｚ及びＡＢＵ３−ＢＢＺの細胞毒性について評価し、及び陰性対照（ＵＴＤ）と比較を行う。例示実験の結果は図１０Ａ及び図１０Ｂに示された通りである。Ｈ２４５２は中皮腫細胞株であり、それはＷＴ１陽性及びＨＬＡ陽性である。ＳＷ４８０は結腸癌細胞株であり、ＷＴ１陽性及びＨＬＡ陽性である。例えば図１０Ａ及び１０Ｂに示されるように、ＳＷ４８０及びＮＣＩ−Ｈ２４５２の細胞毒性によりＣＡＲ Ｔ細胞を実証する。
【０３２５】
ＡＢＵ２，ＡＢＵ４及びＡＢＵ５は他のＣＡＲ Ｔ細胞を構築し、さらにＳＷ４８０及びＮＣＩ−Ｈ２４５２は細胞毒性を有することを実証する。
【０３２６】
＜実施例９＞二重機能抗体
ＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチド及びＣＤ３に特異的に結合する二重機能抗体（ＡＢＵ６）を生成させる。具体的に、例示的実験において、フォワードプライマーＡＢＵ３−ＰＦ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：  ５４）及びリバースプライマーＡＢＵ３−ＰＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：  ５５）を使用してテンプレート（Ｖ１５２−ＡＢＵ３−ｈｕＦＣプラスミド）から抗ＷＴ１  ｓｃＦｖ（ＡＢＵ３）のフラグメント１を増幅する。プライマーＰＣＭＶ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：  ５６）及びＰＨ−Ｒ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：  ５７）を用いてＰＩＨ−ｈｕ９Ｆ２−ＣＤ３プラスミド（ＣＮ２０１６１０６２６３８４．７）から抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのフラグメント２を増幅する。フラグメント１及びフラグメント２を連結してＰＣＭＶ及びＡＢＵ３−ＰＲを用いて増幅させる。ＢａｍＨＩ／ＮｈｅＩにより得られたｓｃＦｖを切断し、さらに切断されたＰＩＨ−ｈｕ９Ｆ２−ＣＤ３プラスミドに導入し二重機能のｓｃＦｖ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：  ６３）が得られる。Ｃ末端の６個の連続ＨｉｓはＮｉ−ＮＴＡ親和力スペクトルによって精製されることを許容する。それから二重機能ｓｃＦｖを２９３Ｆ細胞中にトランスフェクションし、それからＮｉ−ＮＴＡ親和力スペクトルにより精製する。ＳＤＳ  ＰＡＧＥの結果は図９に示され、ＷＴ１／ＣＤ３二重機能ｓｃＦｖは約５５ｋＤａのバンドとして示される。
【０３２７】
＜実施例１０＞ＩＬ−１２を発現するＷＴ  ＣＡＲ−Ｔ細胞
実施例８―９に似た方法により図１１に示されるＡＢＵ３−２８Ｚ−ＩＬ１２  ＣＡＲベクターを構築させる。ＡＢＵ３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７）、ＣＤ２８膜貫通ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１）及び細胞内ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３）、ＣＤ３Ｚ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５）及びＥＧＦＰ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８）のＰＣＲ増幅を行い、ＡＢＵ３−２８Ｚ−ＧＦＰフラグメントを提供し、それから酵素的切断によりそれをｐＲＲＬＳＩＮベクターに挿入してＡＢＵ３−２８Ｚ−ＧＦＰ  ＣＡＲベクターを提供する。ＰＣＲによりＩＬ−２プロモーター配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７）及びＩＬ−１２遺伝子配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６）を増幅させてＩＬ２−ＩＬ１２配列を提供し、それからｐＲＲＬＳＩＮベクターに挿入することでＡＢＵ３−２８Ｚ−ＩＬ１２  ＣＡＲベクターを提供する。ＶＲＲＬＳＩＮ−ＡＢＵ３−２８Ｚ−ＩＬ１２レトロウイルスをパッケージングした。Ｔ細胞を活性化させさらにレトロウイルスを用いて形質導入し、これによりＡＢＵ３−２８Ｚ−ＩＬ１２  ＣＡＲ  Ｔ細胞を提供する。
【０３２８】
ヒト結腸がん細胞株ＳＷ４８０、ヒト中皮腫細胞株Ｈ２４５２及び卵巣がん細胞株ＯＶＣＡＲ３を標的細胞として、これによりＡＢＵ３−２８Ｚ−ＩＬ１２  ＣＡＲ  Ｔ細胞の体外細胞殺傷作用を測定する。それぞれ２０：１、１０：１及び５：１のエフェクター：ターゲット（Ｅ：Ｔ）比でＣＡＲ  Ｔ細胞を添加し、さらに体外にて１８時間培養する。ＣｙｔｏＴｏｘ９６(R)非放射性細胞毒性測定キット（Ｎｏｎ−ＲａｄｉｏａｃｔｉｖｅＣｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔｓ）を使用し、結果は図１２Ａ−Ｃに示される。各種測定のＥ：Ｔ比において、ＡＢＵ３−２８Ｚ−ＩＬ−１２  ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＡＢＵ３−２８Ｚ  ＣＡＲ−Ｔ細胞及びＵＴＤ細胞はよりも大きい細胞毒性を有する。
【０３２９】
【表８】
2020523985.tif 000011
2020523985.tif 000012
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2020523985.tif 000018
【図１】
2020523985.tif 000019
【図２】
2020523985.tif 000020
【図３】
2020523985.tif 000021
【図４】
2020523985.tif 000022
【図５】
2020523985.tif 000023
【図６】
2020523985.tif 000024
【図７】
2020523985.tif 000025
【図８】
2020523985.tif 000026
【図９】
2020523985.tif 000027
【図１０】
2020523985.tif 000028
【図１１】
2020523985.tif 000029
【図１２】
2020523985.tif 000030
【配列表】
2020523985000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和2年3月3日(2020.3.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗原結合ユニットであって、軽鎖ＣＤＲ及び重鎖ＣＤＲを含み、
前記抗原結合ユニットは、ＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドに特異的に結合し、前記ＷＴ１ペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列を有し、及び
前記抗原結合ユニットは、ＨＬＡと複合している参照ペプチドとは顕著な結合を示さず、前記参照ペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９のアミノ酸配列を有するものであり;
好ましくは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０のアミノ酸配列を有する参照抗原結合ユニットと比較した場合、前記抗原結合ユニットはＨＬＡと複合している前記参照ペプチドとより少ない非特異性結合を示し； 更に好ましくは、前記ＨＬＡはＨＬＡ−Ａ２を含み；かつ
ＨＬＡと複合している前記参照ペプチドとの結合レベルは、
ＨＬＡと複合している前記ＷＴ１ペプチドとの結合レベルの１０％を超えないことを特徴とする、抗原結合ユニット。
【請求項２】
結合特異性がＦＡＣＳによって測定されること、または／及び、前記結合特異性がＥＬＩＳＡによって測定されることを特徴とする、請求項１に記載の抗原結合ユニット。
【請求項３】
前記抗原結合ユニットは、１．５ｎＭ未満のＫDを示す；
好ましくは、前記抗原結合ユニットは、５０ｐＭ未満のＫDを示す；
ことを特徴とする、請求項１または２に記載の抗原結合ユニット。
【請求項４】
前記軽鎖ＣＤＲはＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、前記重鎖ＣＤＲはＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、
前記ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５−７及び１１−１５からなるグループから選ばれる配列を有し、及び
前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２−４、８−１０及び１６−１７からなるグループから選ばれる配列を有する；
好ましくは、
前記軽鎖ＣＤＲは、以下のＬＣＤＲ配列の組み合わせから選ばれるアミノ酸配列を含み：
ａ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７；
ｂ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３；並びに
ｃ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３；
前記重鎖ＣＤＲは、以下のＨＣＤＲ配列の組み合わせから選ばれるアミノ酸配列を含む：
ａ．ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４；
ｂ．ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０；
ｃ．ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０；並びに
ｄ．ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０
ことを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗原結合ユニット。
【請求項５】
前記抗原結合ユニットは、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、多価抗体またはキメラ抗原受容体である；
好ましくは、前記抗原結合ユニットは、ｓＦｃ、Ｆｖ、Ｆａｂまたは（Ｆａｂ）２である；
ことを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項に記載の抗原結合ユニット。
【請求項６】
抗原結合ユニットであって、軽鎖ＣＤＲ及び重鎖ＣＤＲを含み、
前記軽鎖ＣＤＲはＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、前記重鎖ＣＤＲはＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、
前記ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５−７及び１１−１５からなるグループから選ばれる配列と少なくとも８０％の配列相同性を有する配列を含み、
前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２−４、８−１０及び１６−１７からなるグループから選ばれる配列と少なくとも８０％の配列相同性を有する配列を含むことを特徴とする、抗原結合ユニット。
【請求項７】
前記軽鎖ＣＤＲはＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、前記重鎖ＣＤＲはＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、
前記ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５−７及び１１−１５からなるグループから選ばれる配列を有し、及び
前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２−４、８−１０及び１６−１７からなるグループから選ばれる配列を有する；
好ましくは、
前記軽鎖ＣＤＲは、以下のＬＣＤＲ配列の組み合わせから選ばれるアミノ酸配列を含み：
ａ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７；
ｂ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３；並びに
ｃ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３；
前記重鎖ＣＤＲは、以下のＨＣＤＲ配列の組み合わせから選ばれるアミノ酸配列を含む：

ａ．ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４；
ｂ．ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０；
ｃ．ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０；並びに
ｄ．ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０；
更に好ましくは、前記抗原結合ユニットは、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体またはキメラ抗原受容体である； 
更に好ましくは、前記抗原結合ユニットは、ｓＦｃ、Ｆｖ、Ｆａｂまたは（Ｆａｂ）２である；
ことを特徴とする、請求項６に記載の抗原結合ユニット。
【請求項８】
キメラ抗原受容体であって、細胞外抗原結合ユニット、膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインを含み、
前記細胞外抗原結合ユニットは、ＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドに特異的に結合し、前記ＷＴ１ペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列を有し、及び
前記細胞外抗原結合ユニットは、ＨＬＡと複合している参照ペプチドとは顕著な結合を示さず、前記参照ペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９のアミノ酸配列を有する；
好ましくは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０のアミノ酸配列を有する参照抗原結合ユニットと比較した場合、前記細胞外抗原結合ユニットは前記ＨＬＡと複合している前記参照ペプチドとより少ない非特異性結合を示し；
更に好ましくは、前記細胞外抗原結合ユニットは、軽鎖ＣＤＲ及び重鎖ＣＤＲを含み、及び
前記軽鎖ＣＤＲはＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、前記重鎖ＣＤＲはＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、
前記ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５−７及び１１−１５からなるグループから選ばれる配列を有し、かつ
前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２−４、８−１０及び１６−１７からなるグループから選ばれる配列を有する； 
更に好ましくは、
前記軽鎖ＣＤＲは、以下のＬＣＤＲ配列の組み合わせから選ばれるアミノ酸配列を含み：
ａ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７；
ｂ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３；並びに
ｃ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３；
前記重鎖ＣＤＲは、以下のＨＣＤＲ配列の組み合わせから選ばれるアミノ酸配列を含む：
ａ．ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４；
ｂ．ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０；
ｃ．ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０；並びに
ｄ．ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０；
更に好ましくは、前記細胞内ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６のアミノ酸配列を含む；
更に好ましくは、前記キメラ抗原受容体は、ＷＴ１、またはＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドを含む細胞の細胞毒性を誘導するものである；
更に好ましくは、キメラ抗原受容体と標的細胞の比が２０：１、１０：１、５：１、３：１、２．５：１、１：１または１：３である場合、細胞毒性のレベルは少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％または４５％である；
ことを特徴とする、キメラ抗原受容体。
【請求項９】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗原結合ユニットまたは請求項８に記載のキメラ抗原受容体、及び薬学上許容される賦形剤を含む、医薬品組成物。
【請求項１０】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗原結合ユニットまたは請求項８に記載のキメラ抗原受容体をコードするものである、分離された核酸。
【請求項１１】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗原結合ユニットまたは請求項８に記載のキメラ抗原受容体をコードする核酸配列を含む、ベクター。
【請求項１２】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗原結合ユニットまたは請求項８に記載のキメラ抗原受容体を発現する、宿主細胞。
【請求項１３】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗原結合ユニットまたは請求項８に記載のキメラ抗原受容体をコードする核酸を含む、宿主細胞。
【請求項１４】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗原結合ユニットを生産する方法であって、
前記抗原結合ユニットの発現に適した条件下において請求項１２または１３の宿主細胞を培養すること、及び、前記宿主細胞が発現する前記抗原結合ユニットを分離することを含む、方法。
【請求項１５】
前記抗原結合ユニットの発現に適した条件下において請求項１２または１３に記載の宿主細胞を培養すること、及び、前記宿主細胞が発現する前記抗原結合ユニットを分離することを含む、請求項８に記載のキメラ抗原受容体を生産する方法。
【請求項１６】
ＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドを含む細胞の細胞死を誘導する方法であって、
前記細胞と請求項８に記載のキメラ抗原受容体とを接触させることを含み；
好ましくは、前記細胞と前記キメラ抗原受容体とは体内において接触させ、または／及び、前記細胞と前記キメラ抗原受容体とは体外において接触させ；
更に好ましくは、前記細胞は、がん細胞であり；
更に好ましくは、前記細胞は、血液がん細胞または固形腫瘍細胞であり；
更に好ましくは、前記細胞は、腎芽腫細胞、結腸がん細胞、直腸がん細胞、卵巣がん細胞、慢性骨髄性白血病細胞または腸がん細胞であり；
更に好ましくは、前記細胞は、中皮腫の細胞である；
ことを特徴とする、方法。
【請求項１７】
標的細胞の細胞死を誘導する方法であって、
前記標的細胞に請求項１２または１３に記載の複数の宿主細胞を施用することを含み、
類似量の前記抗原結合ユニット、キメラ抗原受容体またはそれらをコードする核酸を有しない宿主細胞を施用することに比べ、複数の宿主細胞を前記標的細胞に施用することにより、より大きく標的細胞のアポトーシスを誘導した；
好ましくは、前記複数の宿主細胞を体内において前記標的細胞に施用する、または／及び、前記複数の宿主細胞を体外において前記標的細胞に施用する；
更に好ましくは、前記標的細胞は、がん細胞である；
更に好ましくは、前記がん細胞は、血液がん細胞または固形腫瘍細胞である；
更に好ましくは、前記細胞は、腎芽腫細胞、結腸がん細胞、直腸がん細胞、卵巣がん細胞、慢性骨髄性白血病細胞または腸がん細胞である；
更に好ましくは、前記細胞は、中皮腫の細胞である；
ことを特徴とする、方法。
【請求項１８】
治療を必要とする被験者のがんを治療する方法であって、
前記被験者に対して有効量の請求項８に記載のキメラ抗原受容体を施用することを含み、前記キメラ抗原受容体はがん細胞の細胞死を誘導する；または
前記被験者に対して有効量の請求項１−７のいずれか１項に記載の抗原結合ユニットまたは請求項８に記載のキメラ抗原受容体を施用することを含む；または
前記被験者に対して有効量の請求項９に記載の医薬品組成物を施用することを含む；
ことを特徴とする、方法。
【請求項１９】
前記がん細胞は、血液がんまたは固形腫瘍である；
好ましくは、前記がんは、中皮腫である；
更に好ましくは、前記がんは、腎芽腫、結腸がん、直腸がん、卵巣がん、慢性骨髄性白血病または腸がんである；
ことを特徴とする、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
免疫応答細胞であって、請求項８に記載のキメラ抗原受容体及びＩＬ−１２を含む；
好ましくは、前記ＩＬ−１２は、前記免疫応答細胞の表面上に発現する；
更に好ましくは、前記ＩＬ−１２は、前記免疫応答細胞内において発現する；
更に好ましくは、前記免疫応答細胞は、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％または少なくとも６０％の細胞毒性を有する；
更に好ましくは、前記免疫応答細胞は、エフェクター：ターゲット（Ｅ：Ｔ）比が５：１、１０：１、１５：１、２０：１またはそれらの組み合わせのとき、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％または少なくとも６０％の細胞毒性を示す；
更に好ましくは、前記免疫応答細胞は、標的細胞中において細胞死を誘導する；
更に好ましくは、前記標的細胞は、ＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドを含む；
ことを特徴とする、免疫応答細胞。
【請求項２１】
被験者に対して有効量の請求項２０の免疫応答細胞を施用することを含む、必要とする前記被験者に対してＨＬＡと複合しているＷＴ１ペプチドを含む細胞の細胞死を誘導する方法。
【国際調査報告】
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2020523985.tif 000033
2020523985.tif 000034
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