(57)【要約】  低酸素誘導因子プロリルヒドロキシラーゼ阻害剤化合物（Ｉ）ＧＳＫ１２７８８６３の結晶形ＣＳ１、ＣＳ９、及びその製造方法、並びに貧血の治療及び／又は予防のための医薬製剤を製造するための使用。  【化１】2020533396.tif 000022
2020533396.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
６．４°±０．２°、７．５°±０．２°、７．９°±０．２°の２θ値に、粉末Ｘ線回折パターンにおける特徴ピークを有することを特徴とする、ＧＳＫ１２７８８６３の結晶形ＣＳ１。
【請求項２】
１７．２°±０．２°、２１．０°±０．２°、２４．０°±０．２°、１９．３°±０．２°のうちの１つ以上の２θ値に、粉末Ｘ線回折パターンにおける特徴ピークを有することを特徴とする、請求項１に記載の結晶形ＣＳ１。
【請求項３】
（１）ＧＳＫ１２７８８６３を環状エーテル系溶媒又はケトン系溶媒に溶解し、１０〜５０℃で揮発、晶析させることで目的物を得ること、又は、
（２）ＧＳＫ１２７８８６３を環状エーテル系溶媒に溶解し、貧溶媒を添加して晶析させた後、分離して乾燥させることで目的物を得ること
を特徴とする、ＧＳＫ１２７８８６３の結晶形ＣＳ１の製造方法。
【請求項４】
前記（１）において、前記環状エーテル系溶媒はテトラヒドロフランであり、前記ケトン系溶媒はアセトン、メチルイソブチルケトンのうちの１種又はこれらの任意の組み合わせであり、前記揮発の温度は室温又は５０℃であり、
前記（２）において、前記環状エーテル系溶媒は１，４−ジオキサンであり、前記貧溶媒は水であり、前記晶析の時間は０．５〜２４時間である、請求項３に記載の製造方法。
【請求項５】
前記（１）において、前記ケトン系溶媒はアセトン又はメチルイソブチルケトンであり、前記（２）において、前記晶析の時間は２時間である、請求項４に記載の製造方法。
【請求項６】
４．６°±０．２°、６．６°±０．２°、２１．１°±０．２°の２θ値に、粉末Ｘ線回折パターンにおける特徴ピークを有することを特徴とする、ＧＳＫ１２７８８６３の結晶形ＣＳ９。
【請求項７】
９．４°±０．２°、２０．２°±０．２°、２４．２°±０．２°のうちの１つ以上の２θ値に、粉末Ｘ線回折パターンにおける特徴ピークを有することを特徴とする、請求項６に記載の結晶形ＣＳ９。
【請求項８】
（１）ＧＳＫ１２７８８６３をエーテル系溶媒に溶解し、ポリマーを加え、１０〜７０℃で揮発、晶析させることで目的物を得ること、又は、
（２）ＧＳＫ１２７８８６３をエステル系とアルコール系溶媒との混合系に溶解し、１０〜７０℃で揮発、晶析させることで目的物を得ること
を特徴とする、ＧＳＫ１２７８８６３の結晶形ＣＳ９の製造方法。
【請求項９】
前記（１）において、前記エーテル系溶媒はメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルであり、前記ポリマーは、等質量のポリカプロラクトン、ポリオキシエチレン、ポリメチルメタクリレート、ヒドロキシエチルセルロース及びアルギン酸ナトリウムからなるポリマーであり、前記揮発の温度は５０℃であり、
前記（２）において、前記エステル系溶媒は酢酸エチルであり、前記アルコール系溶媒はエタノールであり、前記エステル系溶媒とアルコール系溶媒の体積比は１：１０〜１０：１であり、前記揮発温度は５０℃である、請求項８に記載の製造方法。
【請求項１０】
前記（２）において、前記エステル系溶媒とアルコール系溶媒の体積比は１：１である、請求項９に記載の製造方法。
【請求項１１】
治療的有効量の請求項１に記載の結晶形ＣＳ１又は請求項６に記載の結晶形ＣＳ９又はこれらの任意の混合物と、薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤とを含む、医薬組成物。
【請求項１２】
低酸素誘導因子プロリルヒドロキシラーゼ阻害剤を含む医薬製剤を製造するための、請求項１に記載の結晶形ＣＳ１又は請求項６に記載の結晶形ＣＳ９又はこれらの任意の混合物の使用。
【請求項１３】
貧血の治療及び／又は予防のための医薬製剤を製造するための、請求項１に記載の結晶形ＣＳ１又は請求項６に記載の結晶形ＣＳ９又はこれらの任意の混合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は医薬結晶技術の分野に関する。具体的には、低酸素誘導因子プロリルヒドロキシラーゼ阻害剤の結晶形及びその製造方法並びに用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＧＳＫ１２７８８６３（Ｄａｐｒｏｄｕｓｔａｔ）は、グラクソ・スミスクラインが開発した、慢性腎疾患に関連する貧血などの貧血の治療に用いられる経口低酸素誘導因子プロリルヒドロキシラーゼ阻害剤である。
【０００３】
いままで、慢性腎疾患関連貧血の標準治療は、組換えヒトエリスロポエチンの注射である。高分子の組換えヒトエリスロポエチンの注射は、心血管の安全性問題が伴う場合が多い。ＧＳＫ１２７８８６３は、低分子の経口低酸素誘導因子プロリルヒドロキシラーゼ阻害剤であり、プロリルヒドロキシラーゼを阻害することで、体内の必要な部位に酸素を運ぶ赤血球の産生を促進することができ、これにより、貧血が緩和される。これは、高地にいる人間の体内で発生する効果に似ている。臨床では、ＧＳＫ１２７８８６３は優れた貧血の緩和効果と安全性を示し、その効果は注射用の組換えヒトエリスロポエチンと同等であり、安全性はより高くなる。さらに、ＧＳＫ１２７８８６３の経口剤は、高分子の組換えヒトエリスロポエチンの注射と比較して、患者への投与がより便利になる。
【０００４】
ＧＳＫ１２７８８６３の化学名はＮ−［（１，３−ジシクロヘキシルヘキサヒドロ−２，４，６−トリオキソピリミジン−５−イル）カルボニル］グリシン（以下、「化合物（Ｉ）」という。）であり、その構造式は下記のとおりである。
【０００５】
【化１】
2020533396.tif 000003
【０００６】
医薬研究の分野では、薬物の結晶形によって、色、融点、溶解性、溶出性、化学的安定性、機械的安定性などが異なり、これらの特性は、医薬製剤の品質、安全性及び有効性に影響を及ぼし、臨床上の薬効の差につながる。したがって、結晶形の研究及び制御は、医薬開発における重要な研究事項である。
【０００７】
今まで、ＧＳＫ１２７８８６３の結晶形に関する報告はない。特許ＣＮ１０１５０５７５２Ｂには、ＧＳＫ１２７８８６３の化学構造及び製造方法は開示されているが、本発明者らはその製造方法を再現してＧＳＫ１２７８８６３の固体を得たところ、該固体は純度が低く、不純物の含有量が非常に高く、しかも吸湿性が高くて、医薬用に適しないことが分かった。本発明者らは優れる特性を有するＧＳＫ１２７８８６３の結晶形ＣＳ１及びＣＳ９を見出した。従来の固体に比較して、本発明に係るＧＳＫ１２７８８６３の結晶形ＣＳ１及びＣＳ９は純度が高く、吸湿性がより低い。さらに、本発明による新しい結晶形は安定性が良好で、分解しにくく、溶解度及び流動性に優れ、製剤として理想的なインビトロ溶出性を有し、ＧＳＫ１２７８８６３を含む医薬製剤の製造の観点からより良い選択肢を提供でき、医薬開発において非常に重要である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は主に、ＧＳＫ１２７８８６３の結晶形及びその製造方法並びに用途を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明の目的に基づき、本発明は化合物（Ｉ）の結晶形ＣＳ１（以下、「結晶形ＣＳ１」という。）を提供する。
【００１０】
前記結晶形ＣＳ１は、６．４°±０．２°、７．５°±０．２°、７．９°±０．２°の２θ値に、Ｃｕ−Ｋα線による粉末Ｘ線回折パターンにおける特徴ピークを有する。
【００１１】
さらに、前記結晶形ＣＳ１は、１７．２°±０．２°、２１．０°±０．２°、２４．０°±０．２°、１９．３°±０．２°のうちの１つ以上の２θ値に、粉末Ｘ線回折パターンにおける特徴ピークを有する。好ましくは、前記結晶形ＣＳ１は、１７．２°±０．２°、２１．０°±０．２°、２４．０°±０．２°、１９．３°±０．２°のすべての２θ値に、粉末Ｘ線回折パターンにおける特徴ピークを有する。
【００１２】
好ましい実施形態において、前記結晶形ＣＳ１は、６．４°±０．２°、７．５°±０．２°、７．９°±０．２°、１７．２°±０．２°、２１．０°±０．２°、２４．０°±０．２°、１９．３°±０．２°の２θ値に、粉末Ｘ線回折パターンにおける特徴ピークを有する。
【００１３】
特に限定するものではないが、本発明の一実施形態において、結晶形ＣＳ１の粉末Ｘ線回折パターンは図１のとおりである。
【００１４】
本発明の目的に基づき、本発明はさらに、下記方法（１）または方法（２）を含むことを特徴とする結晶形ＣＳ１の製造方法を提供する。
（１）ＧＳＫ１２７８８６３を環状エーテル系溶媒又はケトン系溶媒に溶解し、１０〜５０℃で揮発、晶析させることで目的物を得る。
（２）ＧＳＫ１２７８８６３を環状エーテル系溶媒に溶解し、貧溶媒を添加して晶析させた後、分離して乾燥させることで目的物を得る。
【００１５】
さらに、方法（１）において、前記環状エーテル系溶媒はテトラヒドロフランであることが好ましく、前記ケトン系溶媒はアセトン、メチルイソブチルケトンのうちの１種又はこれらの任意の組み合わせであることが好ましく、前記揮発温度は室温又は５０℃であるであることが好ましい。
【００１６】
さらに、方法（１）において、前記ケトン系溶媒は、アセトン又はメチルイソブチルケトンであることがより好ましい。
【００１７】
さらに、方法（２）において、前記環状エーテル系溶媒は１，４−ジオキサンであることが好ましく、前記貧溶媒は水であることが好ましく、前記晶析時間は０．５〜２４時間であることが好ましい。
【００１８】
さらに、方法（２）において、前記晶析時間は２時間であることが好ましい。
【００１９】
本発明の目的に基づき、本発明はさらに、化合物（Ｉ）の結晶形ＣＳ９（以下、「結晶形ＣＳ９」という。）を提供する。
【００２０】
前記結晶形ＣＳ９は、４．６°±０．２°、６．６°±０．２°、２１．１°±０．２°の２θ値に、Ｃｕ−Ｋα線による粉末Ｘ線回折パターンにおける特徴ピークを有する。
【００２１】
さらに、前記結晶形ＣＳ９は、９．４°±０．２°、２０．２°±０．２°、２４．２°±０．２°のうちの１つ以上の２θ値に、粉末Ｘ線回折パターンにおける特徴ピークを有する。好ましくは、前記結晶形ＣＳ１は、９．４°±０．２°、２０．２°±０．２°、２４．２°±０．２°のすべての２θ値に、粉末Ｘ線回折パターンにおける特徴ピークを有する。
【００２２】
好ましい実施形態において、前記結晶形ＣＳ９は、４．６°±０．２°、６．６°±０．２°、２１．１°±０．２°、９．４°±０．２°、２０．２°±０．２°、２４．２°±０．２°の２θ値に、粉末Ｘ線回折パターンにおける特徴ピークを有する。
【００２３】
特に限定するものではないが、本発明の一実施形態において、結晶形ＣＳ９の粉末Ｘ線回折パターンは図６のとおりである。
【００２４】
本発明の目的に基づき、本発明はさらに、下記方法（１）または方法（２）を含むことを特徴とする結晶形ＣＳ９の製造方法を提供する。
（１）ＧＳＫ１２７８８６３をエーテル系溶媒に溶解し、ポリマーを加え、１０〜７０℃で揮発、晶析させることで目的物を得る。
（２）ＧＳＫ１２７８８６３をエステル系とアルコール系溶媒との混合系に溶解し、１０〜７０℃で揮発、晶析させることで目的物を得る。
【００２５】
さらに、方法（１）において、前記エーテル系溶媒はメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルであることが好ましく、前記ポリマーは、等質量のポリカプロラクトン、ポリオキシエチレン、ポリメチルメタクリレート、ヒドロキシエチルセルロース及びアルギン酸ナトリウムからなるポリマーであることが好ましく、前記揮発温度は５０℃であることが好ましい。
【００２６】
さらに、方法（２）において、前記エステル系溶媒は酢酸エチルであることが好ましく、前記アルコール系溶媒はエタノールであることが好ましく、前記エステル系溶媒とアルコール系溶媒の体積比は１：１０〜１０：１であり、前記揮発温度は５０℃であることが好ましい。
【００２７】
さらに、方法（２）において、前記エステル系溶媒とアルコール系溶媒の体積比は１：１であることが好ましい。
【００２８】
本発明の結晶形ＣＳ１及びＣＳ９の製造方法において、
前記「室温」とは、精確な温度値ではなく、１０〜３０℃の温度範囲を指す。
【００２９】
本発明において、原料である前記ＧＳＫ１２７８８６３とは、その固体（結晶又はアモルファス）、半固体、ワックス又はオイル形態を指す。好ましくは、原料である化合物（Ｉ）は、固体粉末形態である。
【００３０】
本発明において、「結晶」又は「結晶形」とは、示されるＸ線回折パターンの特徴によって確認されるものを指す。当業者なら、本発明において言及する物理化学的性質は特定可能なものであり、その実験誤差は機器の条件、試料の準備および試料の純度に依存することを理解できる。特に、Ｘ線回折パターンが一般に装置の条件によって変化することは、当業者には周知である。特に、Ｘ線回折パターンの相対強度も実験条件によって変化し得るため、ピーク強度の順番は唯一または決定的な要素として考えるべきではない。実際には、ＸＲＰＤパターン中の回折ピークの相対強度は結晶の優先配向に関係するものであり、本明細書に示すピーク強度は絶対的なものではなく、例示的なものである。また、ピーク角度の実験誤差は通常５％以下であり、これらの角度の誤差も考慮に入れなければならず、通常±０．２°の誤差が許容される。さらに、試料の高さなどの実験的要素により、ピーク角度の全体的なシフトが生じる可能性があり、通常はある程度のシフトを許容する。したがって、本発明における結晶形のＸ線回折パターンが、本明細書で言及する例のＸ線回折パターンと必ずしも一致しないことは、当業者には理解できる。本明細書でいう「ＸＲＰＤパターンが同一である」とは、絶対的同一を意味せず、同じピークの位置が±０．２°異なってもよく、ピーク強度についてある程度の可変性を許容する意味である。これらのスペクトルにおける特徴ピークと同一または類似のパターンを有する結晶形であれば、本発明の範囲に属する。当業者は、本発明のスペクトルと未知の結晶形のスペクトルを比較することにより、２組のスペクトルにより表されるものが同じ結晶形か、異なる結晶形かを確認することができる。
【００３１】
いくつかの実施形態において、本発明の結晶形ＣＳ１及びＣＳ９は純粋で単一なものであり、他の結晶形を実質的に含まないものである。本発明において、新規な結晶形に関して「実質的に含まない」とは、この結晶形に含まれる他の結晶形が２０％（重量）未満であること、特に１０％（重量）未満であること、さらに５％（重量）未満であること、さらに１％（重量）未満であることを意味する。
【００３２】
なお、本発明に記載の数値及び数値範囲は、数値又は数値範囲そのものとして狭義に解釈されるべきではなく、具体的な技術の環境に応じて、本発明の趣旨及び原則から逸脱しない限り、かかる数値付近で若干変動してもよいことは、当業者には理解できる。本発明では、このような当業者が予見できる変動の範囲は、「約」という用語によって表現されることが多い。
【００３３】
本発明による結晶形は以下の有利な効果を有する。
（１）従来の技術に比較して、本発明による結晶形は吸湿性がより低い。従来の固体は８０％相対湿度での重量増加が１．１４％であるのに対して、本発明の結晶形ＣＳ１及び結晶形ＣＳ９は８０％相対湿度での重量増加がそれぞれ０．５３％、０．２２％であり、吸湿による重量増加がほとんどなく、高湿度条件での安定性が非常に高く、原薬の長期貯蔵及び製剤の製造の観点から好適である。
（２）従来の技術に比較して、本発明による結晶形は純度がより高い。従来の固体は純度が８１．０６％であり、不純物の含有量が高い。具体的な実施例において、本発明による結晶形の純度は９９％超であり、別の具体的な実施例において、本発明による結晶形の純度は９９．５％超である。
（３）本発明の結晶形ＣＳ１及び結晶形ＣＳ９は良好な安定性を有する。本発明の結晶形ＣＳ１及び結晶形ＣＳ９は、２５℃／６０％相対湿度、加速条件である４０℃／７５％相対湿度及び６０℃／７５％相対湿度で開放状態で保存した結果、少なくとも３ヶ月経過しても結晶形の変化はなく、しかも保存中に純度はほとんど変化がなかった。本発明の結晶形ＣＳ１及びＣＳ９と添加剤を混合した医薬製剤は、加速条件である４０℃／７５％相対湿度で１ヶ月保存した結果、製剤内の本発明の結晶形は変化がなかった。本発明による結晶形の安定性が良好であるため、試料の品質の均一性が確保され、薬物の有効性と安全性の確保し、不純物による毒性、薬物有害反応の発生を防ぐ上で重要である。
（４）本発明による結晶形は、生体関連媒体及び純水において良好な溶解性を有するため、結晶形の製剤内の良好な溶出を確保でき、身体における製剤の活性成分の効果的な吸収を促進し、医薬の理想的な生物学的利用能及び薬効を達成させる上で有用である。
（５）本発明の結晶形は、錠剤とした場合、さらに良好な溶出度及び高い溶出速度を有する。ｐＨ＝６．８のリン酸塩バッファー媒体中で１０分になった時の平均溶出度は６７．７％に達し、６０分になった時の平均溶出度は９５．２％に達した。良好なインビトロ溶出度により、薬物の吸収度が高くなり、インビボでの暴露特性がより良くなるため、生物学的利用能及び薬物の効能が高くなる。高いインビトロ溶出速度により、薬物の投与後に、血漿で速やかに最高血漿中濃度に到達することができ、薬物が早く効くことを確保し、薬効を高めることができる。
【００３４】
さらに、本発明は、治療上及び／又は予防上有効な量の本発明の結晶形ＣＳ１又は結晶形ＣＳ９又はこれらの任意の混合物と、少なくとも１種の薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤とを含む医薬組成物を提供する。
【００３５】
さらに、本発明は、低酸素誘導因子プロリルヒドロキシラーゼ阻害剤を含む医薬品を製造するための結晶形ＣＳ１又は結晶形ＣＳ９又はこれらの任意の混合物の使用を提供する。
【００３６】
さらにまた、本発明は、貧血の治療及び／又は予防のための医薬品を製造するための、結晶形ＣＳ１又は結晶形ＣＳ９又はこれらの任意の混合物の使用を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１】図１は本発明の実施例１で得られた結晶形ＣＳ１のＸＲＰＤパターンである。
【図２】図２は本発明の実施例１で得られた結晶形ＣＳ１の１ＨＮＭＲスペクトルである。
【図３】図３は本発明の実施例１で得られた結晶形ＣＳ１のＤＳＣパターンである。
【図４】図４は本発明の実施例１で得られた結晶形ＣＳ１のＴＧＡパターンである。
【図５】図５は本発明の実施例２で得られた結晶形ＣＳ１のＸＲＰＤパターンである。
【図６】図６は本発明の実施例５で得られた結晶形ＣＳ９のＸＲＰＤパターンである。
【図７】図７は本発明の実施例５で得られた結晶形ＣＳ９の１ＨＮＭＲスペクトルである。
【図８】図８は本発明の結晶形ＣＳ９のＤＳＣパターンである。
【図９】図９は本発明の結晶形ＣＳ９のＴＧＡパターンである。
【図１０】図１０は本発明の結晶形ＣＳ１のＤＶＳパターンである。
【図１１】図１１は本発明の結晶形ＣＳ９のＤＶＳパターンである。
【図１２】図１２は従来の固体のＤＶＳパターンである。
【図１３】図１３は本発明の結晶形ＣＳ１の２５℃／６０％相対湿度での保存前と３ヶ月保存後とのＸＲＰＤ比較を示すもの（上図は保存前、下図は保存後）である。
【図１４】図１４は本発明の結晶形ＣＳ１の４０℃／７５％相対湿度での保存前と３ヶ月保存後とのＸＲＰＤ比較を示すもの（上図は保存前、下図は保存後）である。
【図１５】図１５は本発明の結晶形ＣＳ１の６０℃／７５％相対湿度での保存前と３ヶ月保存後とのＸＲＰＤ比較を示すもの（上図は保存前、下図は保存後）である。
【図１６】図１６は本発明の結晶形ＣＳ９の２５℃／６０％相対湿度での保存前と３ヶ月保存後とのＸＲＰＤ比較を示すもの（上図は保存前、下図は保存後）である。
【図１７】図１７は本発明の結晶形ＣＳ９の４０℃／７５％相対湿度での保存前と３ヶ月保存後とのＸＲＰＤ比較を示すもの（上図は保存前、下図は保存後）である。
【図１８】図１８は本発明の結晶形ＣＳ９の６０℃／７５％相対湿度での保存前と３ヶ月保存後とのＸＲＰＤ比較を示すもの（上図は保存前、下図は保存後）である。
【図１９】図１９は本発明の結晶形ＣＳ１を含む錠剤のｐＨ＝６．８リン酸塩バッファーにおける溶出曲線である。
【発明を実施するための形態】
【００３８】
本発明をさらに以下の実施例により説明する。下記の実施例は本発明の結晶形の製造及び使用方法を詳細に説明するものである。本発明の範囲から逸脱しない限り、材料及び方法の両方を適宜変更して実施し得ることは当業者には明白である。
【００３９】
本発明における略語の意味は以下のとおりである。
ＸＲＰＤ：粉末Ｘ線回折
ＤＳＣ：示差走査熱量測定
ＴＧＡ：熱重量分析
１ＨＮＭＲ：液体核磁気共鳴スペクトル
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
【００４０】
データの収集に使用する装置及び方法は下記のとおりである。
本発明における粉末Ｘ線回折パターンは、Ｐａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｅｍｐｙｒｅａｎ粉末Ｘ線回折装置により収集したものである。本発明における粉末Ｘ線回折の測定条件は下記のとおりである。
Ｘ線の光源：Ｃｕ，Ｋα
Ｋα１（Å）：１．５４０５９８；Ｋα２（Å）：１．５４４４２６
Ｋα２／Ｋα１強度比：０．５０
電圧：４５千ボルト（ｋＶ）
電流：４０ミリアンペア（ｍＡ）
走査範囲：３．０度から４０．０度
【００４１】
本発明における示差走査熱量測定（ＤＳＣ）パターンは、ＴＡ  Ｑ２０００により測定したものである。本発明における示差走査熱量測定（ＤＳＣ）の測定条件は下記のとおりである。
走査速度：特に断りのない限り１０℃／ｍｉｎ
保護ガス：Ｎ２
【００４２】
本発明における熱重量分析（ＴＧＡ）パターンは、ＴＡ  Ｑ５００により測定したものである。本発明における熱重量分析（ＴＧＡ）の測定条件は下記のとおりである。
走査速度：１０℃／ｍｉｎ
保護ガス：Ｎ２
【００４３】
水素核磁気共鳴スペクトルデータ（１ＨＮＭＲ）は、ＢｒｕｋｅｒＡｖａｎｃｅ  ＩＩ  ＤＭＸ  ４００Ｍ  ＨＺ核磁気共鳴分光計により測定したものである。１〜５ｍｇの試料を量って、０．５ｍＬの重水素化ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）で溶解させ、２〜１０ｍｇ／ｍＬの溶液とする。
【００４４】
本発明における純度測定のための高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）データは、アジレント１２６０により測定したものである。検出器はＵＶ可変波長検出器（ＶＷＤ）を使用した。本発明におけるＨＰＬＣ条件は下記のとおりである。
カラム：Ｘｂｒｉｄｇｅ  Ｃ８，１５０×４．６ｍｍ，３．５μｍ
移動相：  Ａ：  水中の０．１％  ＴＦＡ  
Ｂ：  アセトニトリル中の０．１％ＴＦＡ  
グラジエント勾配
【００４５】
【表１】
2020533396.tif 000004
流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
注入量：３μＬ
カラム温度：４０℃
希釈剤：ＭｅＯＨ
【００４６】
溶解度測定のための高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）データは、アジレント１２６０により測定したものである。検出器はＵＶ可変波長検出器（ＶＷＤ）を使用した。本発明におけるＨＰＬＣ条件は下記のとおりである。
カラム：Ｘｂｒｉｄｇｅ  Ｃ８，１５０×４．６ｍｍ，５μｍ
移動相：  Ａ：  水中の０．１％  ＴＦＡ  
Ｂ：  アセトニトリル中の０．１％  ＴＦＡ  
グラジエント勾配
【００４７】
【表２】
2020533396.tif 000005
流速：１．１ｍＬ／ｍｉｎ
注入量：５μＬ
カラム温度：４０℃
希釈剤：ＭｅＯＨ
【実施例】
【００４８】
特に断りのない限り、下記実施例は、室温条件で行う。
【００４９】
以下の実施例において、使用するＧＳＫ１２７８８６３原料は、従来技術に基づいて作成したものであり、例えば、ＣＮ１０１５０５７５２Ｂに記載された方法により作成したものである。下記実施例において、従来の固体とは、本発明者らがＣＮ１０１５０５７５２Ｂに記載された方法を再現して得られたＧＳＫ１２７８８６３の固体を意味する。
【００５０】
〔実施例１〜４〕結晶形ＣＳ１の調製
〔実施例１〕
６．４ｍｇのＧＳＫ１２７８８６３原料を量り取って、０．５ｍＬのテトラヒドロフラン溶媒に溶解した後、室温下で約２日間揮発させて固体を析出させた。分析した結果、得られた固体は結晶形ＣＳ１であり、その粉末Ｘ線回折データを図１、表１に示す。
【００５１】
水素核磁気共鳴スペクトルパターンは図２のとおりであり、核磁気データは、１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ｄ６−ＤＭＳＯ）δ  １０．１８（ｓ，１Ｈ），４．６２（ｓ，２Ｈ），４．１１（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ），２．２６（ｄ，Ｊ＝１０．９Ｈｚ，４Ｈ），１．７８（ｄ，Ｊ＝１２．６Ｈｚ，４Ｈ），１．６０（ｔ，Ｊ＝１１．８Ｈｚ，６Ｈ），１．２７（ｄ，Ｊ＝１２．９Ｈｚ，４Ｈ），１．１３（ｓ，２Ｈ）であった。
【００５２】
本実施例で得られた結晶形ＣＳ１のＤＳＣ曲線は図３のとおりであり、２４２℃付近に加熱すると、吸熱ピークが１つ現れ、この吸熱ピークは結晶形ＣＳ１の融化吸熱ピークである。
【００５３】
本実施例で得られた結晶形ＣＳ１のＴＧＡ曲線は図４のとおりであり、１５０℃付近に加熱した際に、約０．６％の質量損失があった。
【００５４】
【表３】
2020533396.tif 000006
【００５５】
〔実施例２〜３〕
下記質量のＧＳＫ１２７８８６３原料を量り取って、下記の表２に示す溶媒に溶解した後、５０℃で揮発させて固体を得た。実施例２及び実施例３で得られた固体をそれぞれ試料２、試料３と記する。分析した結果、試料２及び試料３の固体はいずれも結晶形ＣＳ１であった。試料２を測定し、その粉末Ｘ線回折データを図５、表３に示す。
【００５６】
【表４】
2020533396.tif 000007
【００５７】
【表５】
2020533396.tif 000008
【００５８】
〔実施例４〕
１０．１ｍｇのＧＳＫ１２７８８６３原料を量り取って、０．５ｍＬの１，４−ジオキサン溶媒に溶解し、貧溶媒である水２．０ｍＬを少しずつ滴下し、室温下で２時間撹拌して、遠心、真空乾燥を行って結晶固体を得た。分析した結果、得られた結晶固体は結晶形ＣＳ１であった。
【００５９】
〔実施例５〜６〕結晶形ＣＳ９の調製
〔実施例５〕
４．６ｍｇのＧＳＫ１２７８８６３原料を量り取って、０．７ｍＬのメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル溶媒に加え、等質量のポリカプロラクトン、ポリオキシエチレン、ポリメチルメタクリレート、ヒドロキシエチルセルロース及びアルギン酸ナトリウムからなるポリマーを加え、５０℃で約１日間揮発させて固体を析出させた。分析した結果、得られた固体は結晶形ＣＳ９であり、その粉末Ｘ線回折データを図６、表４に示す。
【００６０】
水素核磁気共鳴スペクトルパターンは図７のとおりであり、核磁気データは、１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ｄ６−ＤＭＳＯ）δ  １０．１８（ｓ，１Ｈ），４．６２（ｓ，２Ｈ），４．１０（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），２．３６−２．１７（ｍ，４Ｈ），１．７８（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，４Ｈ），１．６０（ｓ，６Ｈ），１．３４−１．２１（ｍ，４Ｈ），１．１１（ｄ，Ｊ＝１３．１Ｈｚ，２Ｈ）であった。
【００６１】
【表６】
2020533396.tif 000009
【００６２】
〔実施例６〕
約６．９ｍｇのＧＳＫ１２７８８６３原料を量り取って、体積比１：１の酢酸エチルとエタノールとの混合溶媒０．７ｍＬに溶解し、５０℃で約４日間揮発させて固体を析出させた。分析した結果、得られた固体は結晶形ＣＳ９であった。
【００６３】
本発明の結晶形ＣＳ９のＤＳＣ曲線は図８のとおりであり、１４５℃付近に加熱すると、吸熱シグナルが１つ現れ、２３７℃付近に加熱すると、吸熱ピークが１つ現れた。
本発明の結晶形ＣＳ９のＴＧＡ曲線は図９のとおりであり、１５０℃付近に加熱した際に、約０．２％の質量損失があった。
【００６４】
〔実施例７〕本発明の結晶形ＣＳ１、結晶形ＣＳ９と従来の固体との吸湿性の比較
２５℃の条件下で、本発明の結晶形ＣＳ１、ＣＳ９と従来の固体をそれぞれ約１０ｍｇ用いて、動的水分吸着（ＤＶＳ）によりその吸湿性を測定し、実験結果を表５に示す。結晶形ＣＳ１、ＣＳ９と従来の固体のＤＶＳパターンをそれぞれ図１０、図１１及び図１２に示す。
【００６５】
【表７】
2020533396.tif 000010
【００６６】
その結果によれば、２５℃、８０％相対湿度の条件下では、本発明の結晶形ＣＳ１及び結晶形ＣＳ９は吸湿による重量増加がほとんどなく、高湿度条件下では非常に安定であり、吸湿しにくいことが分かった。これに対して、従来の固体は同じ条件下での吸湿による重量増加が多く、吸湿性が強かった。
【００６７】
低吸湿性の結晶形は、製造時に特別な乾燥条件を求めないので、薬物の製造及び後処理工程が簡素化でき、工業生産に適する。本発明の結晶形ＣＳ１及び結晶形ＣＳ９は従来の固体よりも低い吸湿性を有することで、貯蔵環境の条件が緩和でき、例えば貯蔵時に環境湿度を意図的に制御する必要がないことから、コスト削減につながり、原薬及び製剤の長期貯蔵の観点からも好適である。
【００６８】
〔実施例８〕本発明の結晶形ＣＳ１、結晶形ＣＳ９と従来の固体との純度の比較
ＨＰＬＣにより本発明の結晶形ＣＳ１、結晶形ＣＳ９及び従来の固体の純度を測定し、結果を表６に示す。
【００６９】
【表８】
2020533396.tif 000011
【００７０】
薬物の純度は、薬物の有効性及び安全性の確保、および有害な薬物反応の発生の防止の上で重要である。従来の固体は不純物の含有量が１８．９４％と非常に高いため、薬物の含有量がだいぶ低くなったり、活性が低下したりすることとなる。不純物の含有量が高いと、有毒な副作用も著しく増加する。そのため、従来の固体による原薬は、製剤の製造に直接使用することができない。
【００７１】
本発明の結晶形は高い純度を有することで、製剤における原薬の純度に関する厳しい要件を満足でき、その後の製剤化及び医薬品生産に適する。
【００７２】
〔実施例９〕本発明の結晶形ＣＳ１の安定性に関する研究
本発明の結晶形ＣＳ１を、それぞれ２５℃／６０％相対湿度、４０℃／７５％相対湿度、６０℃／７５％相対湿度で開放状態で保存し、保存前と保存後のＸＲＰＤ比較をそれぞれ図１３、図１４、図１５に示し、結果を表７に示す。
【００７３】
【表９】
2020533396.tif 000012
【００７４】
さらに、本発明者らは結晶形ＣＳ１を、２５℃／６０％相対湿度、４０℃／７５％相対湿度、６０℃／７５％相対湿度で開放状態で３ヶ月保存した場合の保存前と保存後との純度の変化についても研究し、結果を表８に示す。
【００７５】
【表１０】
2020533396.tif 000013
【００７６】
本発明の結晶形ＣＳ１は、２５℃／６０％相対湿度、４０℃／７５％相対湿度、６０℃／７５％相対湿度で少なくとも３ヶ月保存した結果、結晶形の変化はなく、良好な物理的安定性を有するとともに、保存中に純度の変化はほとんどなく、分解しにくく、良好な化学的安定性を有することが分かった。
【００７７】
医薬における最も重要な活性成分として、結晶形が良好な物理的・化学的安定性を有することは極めて重要である。結晶形ＣＳ１は良好な物理的安定性を有することで、原薬が貯蔵及び製剤化プロセスにおいて他の結晶形態に転移しにくいことを保証し、試料の品質の均一性を確保する。
【００７８】
医薬の貯蔵において、純度が低くなると、薬物の含有量が明らかに低くなり、活性が低下する。また、純度が低くなった場合、有毒な副作用が著しく増加し、薬物の効能及び安全性に影響を及ぼすこともある。結晶形ＣＳ１は良好な化学的安定性を有することで、貯蔵中において純度の変化はほとんどなく、薬物の有効性及び安全性を保証し、有害な薬物反応の発生を防ぐ上で重要である。さらに、安定な結晶形は、結晶化プロセスにおいて管理しやすく、不純物及び混晶が発生しにくく、工業生産の観点から好適である。
【００７９】
結晶形ＣＳ１の原薬の安定性結果から、医薬製剤とした場合の安定性も予見でき、高安定性の製剤の製造が可能になる。
【００８０】
〔実施例１０〕本発明の結晶形ＣＳ９の安定性に関する研究
本発明の結晶形ＣＳ９をそれぞれ２５℃／６０％相対湿度、４０℃／７５％相対湿度、６０℃／７５％相対湿度で開放状態で保存し、保存前と保存後のＸＲＰＤ比較をそれぞれ図１６、図１７、図１８に示し、結果を表９に示す。
【００８１】
【表１１】
2020533396.tif 000014
【００８２】
さらに、本発明者らは、結晶形ＣＳ９を２５℃／６０％相対湿度、４０℃／７５％相対湿度、６０℃／７５％相対湿度で開放状態で１ヶ月保存した場合の保存前と保存後との純度の変化についても研究し、結果を表１０に示す。
【００８３】
【表１２】
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【００８４】
本発明の結晶形ＣＳ９は、２５℃／６０％相対湿度、４０℃／７５％相対湿度、６０℃／７５％相対湿度で少なくとも３ヶ月保存した結果、結晶形の変化はなく、また、１ヶ月の保存中において純度の変化はほとんどなかったことから、結晶形ＣＳ９は良好な安定性を有し、他の結晶形に転移しくく、分解しにくいことが分かった。これにより、高安定性の製剤の製造が可能になる。
【００８５】
〔実施例１１〕結晶形ＣＳ１及び結晶形ＣＳ９の動的溶解度
「中国薬典」付録に記載の溶解度測定方法及び生体内の各器官・部分のｐＨの変化に基づき、本発明において、１．２〜７．５などの４つのｐＨの溶媒系を設けた。具体的には、ｐＨ１．８のＳＧＦ（模擬胃液）、ｐＨ５．０のＦｅＳＳＩＦ（摂食状態の模擬腸液）、ｐＨ６．５のＦａＳＳＩＦ（空腹状態の模擬腸液）及び純水であった。
【００８６】
本発明の結晶形ＣＳ１及び結晶形ＣＳ９をそれぞれＳＧＦ、ＦｅＳＳＩＦ、ＦａＳＳＩＦ、純水で飽和溶液とし、所定のタイミングでサンプリングして、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により飽和溶液中の結晶形ＣＳ１及び結晶形ＣＳ９の動的溶解度を測定した。実験結果を表１１及び表１２に示す。
【００８７】
【表１３】
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【００８８】
【表１４】
2020533396.tif 000017
【００８９】
溶解度は薬物の重要な特性の１つであり、人体における薬物の吸収に直接影響する。一方、結晶形によって、薬物の溶解度が大きく異なる可能性があり、体内での吸収挙動も変化し、生物学的利用能に差異をもたらし、結果的に薬物の臨床的安全性及び効能に影響を及ぼす可能性がある。
【００９０】
化合物（Ｉ）は難溶性の薬物である。難溶性の薬物の場合、溶解度の向上がより重要になる。溶解度の向上は、薬物の生物学的利用能の改善、薬物の有用性向上に寄与する。さらに、溶解度が高くなると、薬物の有効性を確保しながら医薬品の投与量を減らすことができるため、医薬品の副作用を軽減させてその安全性を高めることができる。
【００９１】
本発明の結晶形ＣＳ１及び結晶形ＣＳ９は、ＳＧＦ、ＦｅＳＳＩＦ、ＦａＳＳＩＦ、純水での溶解度が良好であり、製剤内の結晶形の良好な溶出を確保し、身体における製剤の活性成分の効果的な吸収を促進し、医薬の理想的な生物学的利用能及び薬効を達成させる上で有用である。
【００９２】
〔実施例１２〕結晶形ＣＳ１及び結晶形ＣＳ９の流動性に関する研究
米国薬局方（ＵＳＰ）１１７４に基づき、圧縮性指数により本発明の結晶形ＣＳ１及びＣＳ９の流動性評価を行った。結晶形ＣＳ１及びＣＳ９のかさ密度及びタップ密度を測定した後、圧縮性指数を求め、結果を表１３に示す。
【００９３】
１．試験方法
試料：結晶形ＣＳ１及び結晶形ＣＳ９
装置：タップデンサー
容器：５ｍｌメスシリンダー
振動回数：５００回
かさ密度＝ｍ／ｖ０（質量／タッピング前の体積）
タップ密度＝ｍ／ｖｔ（質量／タッピング後の体積）
２．計算式：圧縮性指数（％）＝（タップ密度−かさ密度）／タップ密度×１００％
３．試験結果
【００９４】
【表１５】
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【００９５】
結果によれば、本発明の結晶形ＣＳ１及び結晶形ＣＳ９の流動性は、製剤開発の要件を満足でき、製剤の混合均一性及び含有量の均一性を確保し、剤形の重量のバラツキを抑制し、製品の品質を確保することができるため、医薬用に適する。
【００９６】
〔実施例１３〕製剤における結晶形ＣＳ１及び結晶形ＣＳ９に関する研究
１．ＧＳＫ１２７８８６３錠剤の調製
ＧＳＫ１２７８８６３の結晶形ＣＳ１又は結晶形ＣＳ９、微結晶セルロース、クロスカルメロースナトリウム及びステアリン酸マグネシウムを量り取り（各成分の含有量は表１４に示す。）、２分間混合した。手動打錠機により打錠し、直径７ｍｍの円形パンチを用いて、圧力５ＫＮ±１ＫＮで重量１００ｍｇ±１ｍｇの錠剤とした。３５ｃｃのＨＤＰＥ瓶に投入（瓶１本につき１錠）し、各瓶にそれぞれ１ｇの乾燥剤を入れ、シール機でシールした。分析した結果、製剤調製前と調製後、活性成分の結晶形は変化がなかった。
【００９７】
【表１６】
2020533396.tif 000019
【００９８】
２．インビトロ溶出試験
得られた錠剤のインビトロ溶出状況について、中国薬典２０１５年版０９３１の「溶出度と放出度の測定方法」に基づき、以下の条件で溶出度の測定を行った。
溶出媒体：ｐＨ＝６．８リン酸塩バッファー＋質量濃度１％のラウリル硫酸ナトリウム水溶液
溶出方法：パドル方式
媒体の体積：９００ｍＬ
回転速度：７５ｒｐｍ
媒体温度：３７℃
【００９９】
結晶形ＣＳ１の溶出状況を表１５、図１９に示す。結果によれば、上記本発明の結晶形ＣＳ１を活性成分とする錠剤は、１０分になった時の平均溶出度が６７．７％になり、６０分になった時の平均溶出度が９５．２％に達し、良好な溶出度及び高い溶出速度を有すると言える。
【０１００】
溶出は吸収の前提条件である。良好なインビトロ溶出度により、薬物はインビボでより高い時間曲線下面積（ＡＵＣ）を有し、つまり、薬物の吸収度が高くなり、インビボでの暴露特性がより良くなるため、生物学的利用能及び薬物の効能が高くなる。高いインビトロ溶出速度により、薬物はインビボでより短い到達時間（Ｔｍａｘ）と、より高いヒーク濃度（Ｃｍａｘ）を有し、つまり、薬物の投与後に速やかに最高濃度に到達することができ、且つ最高濃度が高く、薬物が早く効くことを確保できる。
【０１０１】
【表１７】
2020533396.tif 000020
【０１０２】
３．製剤における結晶形ＣＳ１及びＣＳ９の安定性
上記製造した錠剤を、４０℃／７５％相対湿度の条件下で１ヶ月保存した。分析した結果、結晶形ＣＳ１、結晶形ＣＳ９を含む錠剤において、結晶形の変化はなかった。結果を表１６に示す。結晶形ＣＳ１及び結晶形ＣＳ９は製剤において良好な安定性を有することが分かった。
【０１０３】
【表１８】
2020533396.tif 000021
【０１０４】
本発明の結晶形ＣＳ１及び結晶形ＣＳ９は製剤における安定性が良好であるため、製剤化プロセス及び製剤の貯蔵において、他の結晶形態に転移しにくく、医薬品の品質の均一性を確保できる。
【０１０５】
以上の実施例は、当業者が本発明を理解して実施することができるように、本発明の技術的思想及び特徴を説明するためのものにすぎず、本発明を限定するものではない。本発明の趣旨を逸脱しない範囲内で行われる同等の変形や改善はすべて、本発明の権利範囲に含まれる。
【図１】
2020533396.tif 000023
【図２】
2020533396.tif 000024
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
2020533396.tif 000029
【図８】
2020533396.tif 000030
【図９】
2020533396.tif 000031
【図１０】
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【図１１】
2020533396.tif 000033
【図１２】
2020533396.tif 000034
【図１３】
2020533396.tif 000035
【図１４】
2020533396.tif 000036
【図１５】
2020533396.tif 000037
【図１６】
2020533396.tif 000038
【図１７】
2020533396.tif 000039
【図１８】
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【図１９】
2020533396.tif 000041
【手続補正書】
【提出日】令和2年3月18日(2020.3.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９４】
【表１５】
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【国際調査報告】
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2020533396.tif 000045
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