(57)【要約】  本発明は、SIK3が抗腫瘍免疫応答に対する耐性と関連するという驚くべき研究結果に基づく。特に、本発明はSIK3の阻害剤、特にSIK3の核酸又は小分子阻害剤を用いて増殖性疾患を治療する方法を提供する。SIK3阻害剤を或る特定の炎症性シグナル伝達経路のリガンド又はアゴニストと共に用いて、増殖性障害に関与する細胞をかかるシグナル伝達経路の細胞傷害効果に対して感作する方法、及び／又はかかる細胞を死滅させる方法、及び／又は増殖性疾患を治療する方法も提供される。本発明によって提供される他の方法としては、かかるシグナル伝達経路を利用する治療を増強するか又はそれと関連する或る特定の副作用を克服するためにSIK3阻害剤を用いる方法、並びに被験体から得られたサンプル中のSIK3の検出に基づく診断、予後診断及びモニタリングの方法及びキット、並びにSIK3の阻害剤を特定又は特性評価するのに有用なスクリーニング方法が挙げられる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体における増殖性障害の治療への使用のためのSIK3阻害剤であって、前記治療がSIK3を阻害することと、前記増殖性障害に関与する細胞を細胞性免疫応答に感作することとを伴い、前記治療が該SIK3阻害剤を前記被験体に投与することを含む、SIK3阻害剤。
【請求項２】
SIK3、好ましくは前記増殖性障害に関与する前記細胞中のSIK3の活性を低減するのに有効な治療有効量で投与される、請求項1に記載の使用のためのSIK3阻害剤。
【請求項３】
ABL1及び／又はSRCキナーゼ、好ましくは前記増殖性障害に関与する前記細胞中のABL1及び／又はSRCキナーゼの活性を低減するのに有効でない治療有効量で投与される、請求項1又は2に記載の使用のためのSIK3阻害剤。
【請求項４】
前記治療が、前記細胞性免疫応答により前記増殖性障害に関与する細胞の死滅が誘導されることを含む、請求項1〜3のいずれか一項に記載の使用のためのSIK3阻害剤。
【請求項５】
前記増殖性障害に関与する細胞をTNFによって誘導される死滅に感作するために前記被験体に投与される、請求項1〜4のいずれか一項に記載の使用のためのSIK3阻害剤。
【請求項６】
前記治療がSIK3を阻害することによって行われ、該治療がAbl及び／又はSRCキナーゼを阻害することによって行われない、請求項1〜5のいずれか一項に記載の使用のためのSIK3阻害剤。
【請求項７】
前記治療が前記増殖性障害に関与する前記細胞中のSIK3を阻害することを含み、好ましくは該SIK3の活性が低減し、前記治療が前記増殖性障害に関与する前記細胞中のABL及び／又はSRCを阻害しないことを含み、好ましくは該ABL1及び／又はSRCの活性が低減しない、請求項1〜6のいずれか一項に記載の使用のためのSIK3阻害剤。
【請求項８】
前記増殖性障害に関与する細胞をTNF、及び／又はTNFR1シグナル伝達のアゴニストに曝露する、請求項1〜7のいずれか一項に記載の使用のためのSIK3阻害剤。
【請求項９】
（x）前記被験体が約5 pg/mLを超えるTNFの血漿濃度を有することによって区別され、及び／又は（y）前記増殖性障害が、前記被験体において約1 pg/mLを超えるTNFの腫瘍内濃度を有することによって区別される固形腫瘍である、請求項1〜8のいずれか一項に記載の使用のためのSIK3阻害剤。
【請求項１０】
被験体における増殖性障害の治療への使用のためのSIK3阻害剤であって、前記治療が前記被験体中の前記増殖性障害に関与する細胞を（i）TNF、及び／又はTNFR1シグナル伝達のアゴニスト、並びに（ii）該SIK3阻害剤に曝露することを含む、SIK3阻害剤。
【請求項１１】
前記被験体中の前記増殖性障害に関与する細胞に曝露するTNFの量を増加させる、請求項10に記載の使用のためのSIK3阻害剤。
【請求項１２】
（i）TNF、若しくはTNFR1シグナル伝達のアゴニストを前記被験体に投与するか、（ii）前記増殖性障害に関与する前記細胞のTNF、若しくはTNFR1シグナル伝達のアゴニストへの曝露を誘導することが可能な若しくは誘導する作用物質を前記被験体に投与するか、又は（iii）前記増殖性障害に関与する前記細胞のTNFへの曝露が、前記被験体の血漿中及び／又はかかる細胞の環境内のTNFの量を増加させる薬学的手順、治療的手順若しくは他の手順によって誘導される、請求項10又は11に記載の使用のためのSIK3阻害剤。
【請求項１３】
前記治療が前記SIK3阻害剤を前記被験体に投与することを含む、請求項10〜12のいずれか一項に記載の使用のためのSIK3阻害剤。
【請求項１４】
前記治療が前記SIK3阻害剤をSIK3、特に前記増殖性障害に関与する前記細胞中のSIK3を阻害するのに有効な治療有効量で前記被験体に投与することを含む、請求項10〜13のいずれか一項に記載の使用のためのSIK3阻害剤。
【請求項１５】
前記治療が前記SIK3阻害剤をABL及び／又はSRC、特に前記増殖性障害に関与する前記細胞中のABL及び／又はSRCを阻害するのに有効でない治療有効量で前記被験体に投与することを含む、請求項10〜14のいずれか一項に記載の使用のためのSIK3阻害剤。
【請求項１６】
前記治療がTNF、又はTNFR1シグナル伝達のアゴニストを前記被験体に投与することを含む、請求項10〜15のいずれか一項に記載の使用のためのSIK3阻害剤。
【請求項１７】
前記治療が前記増殖性障害に関与する前記細胞のTNF、又はTNFR1シグナル伝達のアゴニストへの曝露を誘導することが可能な又は誘導する作用物質を前記被験体に投与することを含む、請求項10〜15のいずれか一項に記載の使用のためのSIK3阻害剤。
【請求項１８】
前記増殖性障害に関与する前記細胞のTNFへの曝露が、前記被験体の血漿中及び／又はかかる細胞の環境内のTNFの量を増加させる薬学的手順、治療的手順又は他の手順によって誘導される、請求項10〜15のいずれか一項に記載の使用のためのSIK3阻害剤。
【請求項１９】
前記薬学的手順、治療的手順又は他の手順が癌免疫療法及び／又は放射線療法を含む、請求項18に記載の使用のためのSIK3阻害剤。
【請求項２０】
前記被験体がSIK3の発現及び／又は活性を特徴とする増殖性障害に関与する細胞を有することによって区別され、特にかかる細胞がSIK3のmRNA及び／又はタンパク質を発現し、及び／又はかかるSIK3発現及び／又は活性に陽性である、請求項1〜19のいずれか一項に記載の使用のためのSIK3阻害剤。
【請求項２１】
前記増殖性障害が腫瘍、特に固形腫瘍である、請求項1〜20のいずれか一項に記載の使用のためのSIK3阻害剤。
【請求項２２】
前記被験体が以前に免疫療法により治療され、その腫瘍が進行した、特にその腫瘍が再燃した、再発した又は応答しなかったとして区別される、請求項21に記載の使用のためのSIK3阻害剤。
【請求項２３】
前記被験体が進行した、特に再燃した、再発した、又は以前の放射線療法に応答しなかった腫瘍を有するとして区別される、請求項21又は22に記載の使用のためのSIK3阻害剤。
【請求項２４】
抗TNF剤による治療を受けている被験体における血液学的増殖性障害を続発性障害として発症するリスクを低下させる治療への使用のためのSIK3阻害剤であって、前記治療が該SIK3阻害剤を前記被験体に投与することを含む、SIK3阻害剤。
【請求項２５】
前記被験体が自己免疫障害、好ましくは関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、尋常性乾癬及びクローン病からなる群から選択される自己免疫障害、最も好ましくは関節リウマチを患い、及び／又は前記被験体が自己免疫障害、好ましくは関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、尋常性乾癬及びクローン病からなる群から選択される自己免疫障害、最も好ましくは関節リウマチに対する抗TNF剤による治療を受けている、請求項24に記載の使用のためのSIK3阻害剤。
【請求項２６】
SIK3特異的阻害剤である、請求項1〜25のいずれか一項に記載の使用のためのSIK3阻害剤。
【請求項２７】
ABL1及び／又はSRCキナーゼを阻害するよりも強くSIK3を阻害し、SIK2を阻害するよりも強くSIK3を阻害する、請求項1〜26のいずれか一項に記載の使用のためのSIK3阻害剤。
【請求項２８】
阻害性核酸である、請求項1〜27のいずれか一項に記載の使用のためのSIK3阻害剤。
【請求項２９】
小分子、特に小分子リガンド又は細胞透過性小分子である、請求項1〜27のいずれか一項に記載の使用のためのSIK3阻害剤。
【請求項３０】
以下の式Iの環式化合物、並びにその塩、プロドラッグ、溶媒和物及び立体異性体である、請求項1〜27のいずれか一項に記載の使用のためのSIK3阻害剤：
【化１】
2020517747.tif 000036
式I
（式中、
Qは、1つ以上の基R1で任意に置換された、
（1）5員のヘテロアリール環、
（2）6員のヘテロアリール環、又は、
（3）アリール環、
であり、
Zは、
（1）単結合、
（2）-R16C=CH-、又は、
（3）-(CH2)m-（ここで、mは1又は2である）、
であり、
X1及びX2は各々水素であるか、又は共に=O若しくは=Sを形成し、
R1は、
（1）水素又はR6（ここで、R6はアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロシクロ又はヘテロシクロアルキルであり、各々が非置換であるか、又はZ1、Z2及び1つ以上の（好ましくは、1つ又は2つの）基Z3で置換される）、
（2）-OH又は-OR6、
（3）-SH又は-SR6、
（4）-C(O)2H、-C(O)qR6又は-O-C(O)qR6（ここで、qは1又は2である）、
（5）-SO3H又は-S(O)qR6、
（6）ハロ、
（7）シアノ、
（8）ニトロ、
（9）-Z4-NR7R8、
（10）-Z4-N(R9)-Z5-NR10R11、
（11）-Z4-N(R12)-Z5-R6、
（12）-P(O)(OR6)2、
であり、
R2及びR3は各々独立して、
（1）水素若しくはR6、
（2）-Z4-R6、又は、
（3）-Z13-NR7R8、
であり、
R4及びR5は、
（1）各々独立して、水素若しくはR6、
（2）-Z4-N(R9)-Z5-NR10R11、
（3）-N(R9)Z4R6であるか、又は、
（4）それらが付着する窒素原子と共に、非置換であるか、若しくはZ1、Z2及びZ3で置換された3員〜8員の飽和した若しくは不飽和の複素環を完成させ、該複素環は、それ自体が非置換であるか、若しくはZ1、Z2及びZ3で置換されたベンゼン環が任意に縮合していてもよく、
R7、R8、R9、R10、R11及びR12は、
（1）各々独立して水素若しくはR6であるか、
（2）R7及びR8が共にアルキレン、アルケニレン若しくはヘテロアルキルであってもよく、それらが付着する窒素原子と共に3員〜8員の飽和した若しくは不飽和の環を完成させ、該環は非置換であるか、若しくはZ1、Z2及びZ3で置換され、又は、
（3）R9、R10及びR11のいずれか2つが共にアルキレン若しくはアルケニレンであってもよく、それらが付着する窒素原子と共に3員〜8員の飽和した若しくは不飽和の環を完成させ、該環は非置換であるか、若しくはZ1、Z2及びZ3で置換され、
R13は、
（1）シアノ、
（2）ニトロ、
（3）-NH2、
（4）-NHOアルキル、
（5）-OH、
（6）-NHOアリール、
（7）-NHCOOアルキル、
（8）-NHCOOアリール、
（9）-NHSO2アルキル、
（10）-NHSO2アリール、
（11）アリール、
（12）ヘテロアリール、
（13）-Oアルキル、又は、
（14）-Oアリール、
であり、
R14は、
（1）-NO2、
（2）-COOアルキル、又は、
（3）-COOアリール、
であり、
R15は、
（1）水素、
（2）アルキル、
（3）アリール、
（4）アリールアルキル、又は、
（5）シクロアルキル、
であり、
Z1、Z2及びZ3は各々独立して、
（1）水素若しくはZ6（ここで、Z6は（i）アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アラルキル、アルキルアリール、シクロアルキルアリール、ヘテロシクロ若しくはヘテロシクロアルキル、（ii）それ自体が1つ以上の同じ若しくは異なる基（i）によって置換された基（i）、又は（iii）以下のZ1、Z2及びZ3の定義の基（2）〜（16）の1つ以上によって置換された基（i）若しくは（ii）である）、
（2）-OH若しくは-OZ6、
（3）-SH若しくは-SZ6、
（4）-C(O)qH、-C(O)qZ6若しくは-O-C(O)qZ6、
（5）-SO3H、-S(O)qZ6若しくはS(O)qN(Z9)Z6、
（6）ハロ、
（7）シアノ、
（8）ニトロ、
（9）-Z4-NZ7Z8、
（10）-Z4-N(Z9)-Z5-NZ7Z8、
（11）-Z4-N(Z10)-Z5-Z6、
（12）-Z4-N(Z10)-Z5-H、
（13）オキソ、
（14）-O-C(O)-Z6であるか、
（15）Z1、Z2及びZ3のいずれか2つが共にアルキレン若しくはアルケニレンであってもよく、それらが付着する原子と共に3員〜8員の飽和した若しくは不飽和の環を完成させ、又は、
（16）Z1、Z2及びZ3のいずれか2つが共に-O-(CH2)r-O-（ここで、rは1〜5である）であってもよく、それらが付着する原子と共に4員〜8員の飽和した若しくは不飽和の環を完成させ、
Z4及びZ5は各々独立して、
（1）単結合、
（2）-Z11-S(O)q-Z12-、
（3）-Z11-C(O)-Z12-、
（4）-Z11-C(S)-Z12-、
（5）-Z11-O-Z12-、
（6）-Z11-S-Z12-、
（7）-Z11-O-C(O)-Z12-、又は、
（8）-Z11-C(O)-O-Z12-、
であり、
Z7、Z8、Z9及びZ10は、
（1）各々独立して水素若しくはZ6であるか、
（2）Z7及びZ8、若しくはZ6及びZ10が共にアルキレン若しくはアルケニレンであってもよく、それらが付着する原子と共に3員〜8員の飽和した若しくは不飽和の環を完成させ、該環は非置換であるか、若しくはZ1、Z2及びZ3で置換され、又は、
（3）Z7若しくはZ8がZ9と共にアルキレン若しくはアルケニレンであってもよく、それらが付着する窒素原子と共に3員〜8員の飽和した若しくは不飽和の環を完成させ、該環は非置換であるか、若しくはZ1、Z2及びZ3で置換され、
Z11及びZ12は各々独立して、
（1）単結合、
（2）アルキレン、
（3）アルケニレン、又は、
（4）アルキニレン、
であり、
Z13は、
（1）単結合、
（2）-Z11-S(O)q-Z12-、
（3）-Z11-C(O)-Z12-、
（4）-Z11-C(S)-Z12-、
（5）-Z11-O-Z12-、
（6）-Z11-S-Z12-、
（7）-Z11-O-C(O)-Z12-、
（8）-Z11-C(O)-O-Z12-、
（9）-C(NR13)-、
（10）-C(CHR14)-、又は、
（11）-C(C(R14)2)-、
であり、
ここで、
Qがチアゾールであり、
Zが単結合であり、
R1が水素であり、
X1及びX2が共に=Oを形成し、
R2が水素であり、
R3が-Z4-R6（ここで、Z4は単結合であり、R6は非置換であるか、又はZ1、Z2及び1つ、2つ若しくはそれ以上の基Z3で置換されたアリール又はヘテロアリールである）であり、
R4が水素である場合、
前記式Iの環式化合物は、以下の式II：
【化２】
2020517747.tif 000037
式II
を有し、ここで、
nは1であり、
Aは窒素であり、
Bは硫黄であり、
X3は酸素であり、
R1は水素であり、
R2は水素であり、
R4は水素であり、
R3はRxであり、ここで、Rxは以下の式X:
【化３】
2020517747.tif 000038
式X
を有し、
式XのZ1、Z2及びZ3は上記で規定される通りである）。
【請求項３１】
式Xにおいて、
Z1がメチルであり、
Z2が-Z4-NZ7Z8、-Z4-N(Z9)-Z5-NZ7Z8又はZ4-N(Z10)-Z5-Hであり、ここで、Z4及びZ5〜Z10は本明細書で規定される通りであり、特にZ4が単結合であり、
Z3が水素である、請求項30に記載の使用のためのSIK3阻害剤。
【請求項３２】
式X中のZ2が、
【化４】
2020517747.tif 000039
からなる群から選択される置換基である、請求項30又は31に記載の使用のためのSIK3阻害剤。
【請求項３３】
式IIのR4が水素であり、式IIのR5がR6であり、ここで、R6はアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロシクロ、ヘテロアリール又はヘテロシクロアルキルであり、各々が非置換であるか、又はZ1、Z2及び1つ、2つ若しくはそれ以上の基Z3で置換され（ここで、Z1、Z2及びZ3は上記で規定される通りである）、好ましくはR6がアリール、アラルキル、ヘテロシクロ又はヘテロシクロアルキルであり、各々が非置換であるか、又はZ1、Z2及び1つ、2つ若しくはそれ以上の基Z3で置換される（ここで、Z1、Z2及びZ3は上記で規定される通りである）、請求項30〜32のいずれか一項に記載の使用のためのSIK3阻害剤。
【請求項３４】
R6がアリール又はヘテロアリールであり、各々が非置換であるか、又はZ1、Z2及び1つ、2つ若しくはそれ以上の基Z3で置換され（ここで、Z1、Z2及びZ3は上記で規定される通りである）、R6が1つ、2つ又は3つのZxで置換される単環式アリール又はヘテロアリールであり、少なくとも1つのZxが該単環式アリール又はヘテロアリール上のオルト位にあり、Zxは各々独立して、（i）Zy（ここで、ZyはC1、C2又はC3アルキル、アルケニル又はアルキニルである）、（ii）-OH若しくは-OZy、（iii）-SH若しくは-SZy、（iv）ハロ、又は（v）-SO2-Zy若しくは-SO2-N-(Zy)(Zy)とすることができる、請求項33に記載の使用のためのSIK3阻害剤。
【請求項３５】
R6が1つ、2つ又は3つのZxで任意に置換されたフェニルであり、特に1つのZxが該フェニルのオルト位を置換し、及び／又は特にZxは各々独立して-Cl、-F、-Br、-Me、-OMe、-OEt及び-CNからなる群から選択される（好ましくは-Cl、-F、-Me及び-Brから選択される）、請求項34に記載の使用のためのSIK3阻害剤。
【請求項３６】
前記R6が単環式ヘテロアリールである、請求項34に記載の使用のためのSIK3阻害剤。
【請求項３７】
前記単環式ヘテロアリールR6がピリジニル、好ましくはピリジン-2-イル、又はより好ましくはピリジン-3-イルであり、該単環式ヘテロアリールは1つ、2つ又は3つのZxで任意に置換され、特に1つのZxが該ピリジニルのオルト位を置換し、及び／又は特にZxは各々独立して-Cl、-F、-Br、-Me、-OMe、-OEt及び-CNからなる群から選択される（好ましくは-Cl、-F、-Me及び-Brから選択される）、請求項36に記載の使用のためのSIK3阻害剤。
【請求項３８】
一般式IIにおいて、nが1であり、Aが窒素であり、Bが硫黄であり、X3が酸素であり、R1が水素であり、R2が水素であり、R4が水素であり、R5がR6であり、R6が、
オルト位が-Clで置換されたフェニルである場合、（x）他のオルト位が水素、若しくはメチルではないZx、特に-Cl、-F、-Br、-OMe、-OEt若しくは-CNであるZxであり、メタ位若しくはパラ位の少なくとも1つが上記で規定されるZxで置換されるか、若しくは（y）他のオルト位がメチルであり、メタ位若しくはパラ位の少なくとも2つがZxで置換されるか、若しくは（z）R3が式Yではなく、又は、
オルト位がメチルで置換されたフェニルである場合、（x）他のオルト位が水素、若しくは-ClではないZx、特に-F、-Br、-Me、-OMe、-OEt若しくは-CNであるZxであり、メタ位若しくはパラ位の少なくとも1つが上記で規定されるZxで置換されるか、若しくは（y）他のオルト位が-Clであり、メタ位若しくはパラ位の少なくとも2つがZxで置換されるか、若しくは（z）R3が式Yではない、
請求項30〜35のいずれか一項に記載の使用のためのSIK3阻害剤。
【請求項３９】
【表１】
2020517747.tif 000040
からなる群から選択される環式化合物、並びにそれらの溶媒和物、塩、錯体、立体異性体、多形、結晶形態、ラセミ混合物、ジアステレオマー、鏡像異性体、互変異性体、同位体標識形態、プロドラッグ及び組合せである、請求項1〜27のいずれか一項に記載の使用のためのSIK3阻害剤。
【請求項４０】
環式化合物：
【化５】
2020517747.tif 000041
並びにそれらの溶媒和物、塩、立体異性体、錯体、多形、結晶形態、ラセミ混合物、ジアステレオマー、鏡像異性体、互変異性体、同位体標識形態、プロドラッグ及び組合せである、請求項1〜27のいずれか一項に記載の使用のためのSIK3阻害剤。
【請求項４１】
環式化合物：
【化６】
2020517747.tif 000042
並びにそれらの溶媒和物、塩、立体異性体、錯体、多形、結晶形態、ラセミ混合物、ジアステレオマー、鏡像異性体、互変異性体、同位体標識形態、プロドラッグ及び組合せである、請求項1〜27のいずれか一項に記載の使用のためのSIK3阻害剤。
【請求項４２】
環式化合物：
【化７】
2020517747.tif 000043
並びにそれらの溶媒和物、塩、立体異性体、錯体、多形、結晶形態、ラセミ混合物、ジアステレオマー、鏡像異性体、互変異性体、同位体標識形態、プロドラッグ及び組合せであり、好ましくはかかるSIK3阻害剤がSIK2をSIK3よりも強く阻害し、SIK3をSIK1よりも強く阻害する、請求項1〜27のいずれか一項に記載の使用のためのSIK3阻害剤。
【請求項４３】
請求項36に記載の環式化合物、並びにそれらの溶媒和物、塩、立体異性体、錯体、多形、結晶形態、ラセミ混合物、ジアステレオマー、鏡像異性体、互変異性体、同位体標識形態、プロドラッグ及び組合せ。
【請求項４４】
請求項42に記載の環式化合物、並びにそれらの溶媒和物、塩、立体異性体、錯体、多形、結晶形態、ラセミ混合物、ジアステレオマー、鏡像異性体、互変異性体、同位体標識形態、プロドラッグ及び組合せ。
【請求項４５】
被験体が細胞性免疫応答に対する細胞耐性と関連する腫瘍等の増殖性障害を有する又はそれを発症するリスクがあるかを決定する方法であって、
（a）前記被験体に由来する生体サンプル中の適用可能なバイオマーカーを検出する工程、
を含み、前記サンプル中の前記適用可能なバイオマーカーの検出が、前記被験体における前記増殖性障害又は該増殖性障害を発症するリスクを示し、
前記適用可能なバイオマーカーが、
SIK3、特にSIK3、好ましくはリン酸化SIK3の存在（又は量）又は発現及び／又は活性、  HDAC4、特に、好ましくは前記サンプルに含まれる細胞の細胞質中のリン酸化HDAC4の存在（又は量）又は発現及び／又は活性、
TNFR1、特にTNFR1の存在（又は量）又は発現及び／又は活性、並びに、
LKB1、特にLKB1、好ましくはリン酸化LKB1の存在（又は量）又は発現及び／又は活性、
からなる群から選択される1つ以上である、方法。
【請求項４６】
前記適用可能なバイオマーカーの検出が前記サンプル中、特に該サンプルに含まれる細胞の細胞質中のリン酸化HDAC4の存在若しくは量、又はその活性を決定することを含む、請求項45に記載の方法。
【請求項４７】
前記サンプル中のTNFの存在又は量を決定する工程を更に含み、該サンプル中のTNFの存在又は量が、前記被験体における前記細胞性免疫応答に対する細胞耐性と関連し、及び／又はSIK3の発現若しくは活性と関連する前記増殖性障害又は該増殖性障害を発症するリスクを示し、（i）前記被験体に由来する血漿サンプル中の約5 pg/mLを超えるTNFの血漿濃度、及び／又は（ii）前記被験体に由来する組織サンプルの血漿中の約1 pg/mLを超えるTNFの腫瘍内濃度が、前記被験体における前記細胞性免疫応答に対する細胞耐性と関連する前記増殖性障害又は該増殖性障害を発症するリスクを示す、請求項45又は46に記載の方法。
【請求項４８】
被験体が、細胞性免疫応答に対する細胞耐性と関連し、SIK3の発現又は活性と関連する疾患、障害又は病態を有する又はそれを発症するリスクを有するかを決定する方法であって、
（a）疾患、障害又は病態に関与することが疑われる前記被験体の細胞とSIK3阻害剤とを、（i）リンパ球、T細胞、CTL及びTILからなる群から選択される免疫細胞、又は（ii）炎症性サイトカイン、特にTNFである細胞性免疫応答の存在下で接触させる工程と、
（b）前記被験体のかかる細胞に対する前記細胞性免疫応答を決定する工程と、
を含み、前記被験体のかかる細胞に対する前記細胞性免疫応答の増強が、前記被験体がかかる疾患、障害又は病態を有する又はそれを発症するリスクを有することを示す、方法。
【請求項４９】
被験体における増殖性疾患、障害又は病態のin vitro診断へのSIK3又はHDAC4に特異的に結合することが可能な抗原結合タンパク質（ABP）の使用であって、前記増殖性疾患、障害又は病態が細胞性免疫応答に対する細胞耐性と関連し、SIK3の発現又は活性と関連する、使用。
【請求項５０】
前記ABPがリン酸化SIK3に特異的に結合することが可能である、請求項49に記載の使用。
【請求項５１】
前記ABPがリン酸化HDAC4に特異的に結合することが可能である、請求項49に記載の使用。
【請求項５２】
被験体における増殖性疾患、障害又は病態のin vitro診断へのキットの使用であって、前記増殖性疾患、障害又は病態が細胞性免疫応答に対する細胞耐性と関連し、SIK3の発現又は活性と関連し、前記キットが、（a）（x）SIK3若しくはHDAC4に特異的に結合することが可能な核酸、又は（y）SIK3若しくはHDAC4に特異的に結合するABPのいずれか、並びに（b）任意に（i）被験体から得られたサンプルにおけるSIK3活性の検出に前記ABP又は核酸又はキットを使用する方法を記載する説明書、及び／又は（ii）前記キットの使用又は前記サンプルにおけるSIK3活性の検出に有用な1つ以上の他のアイテム、構成要素、試薬又は他の手段を含む、使用。
【請求項５３】
被験体が、細胞性免疫応答に対する細胞耐性と関連し、SIK3の発現又は活性と関連する疾患、障害又は病態を有する又はそれを発症するリスクを有するかを決定する診断法への使用のためのキットであって、
前記診断法がサンプルを前記被験体から外科的に得る工程を含み、
該キットが、（a）（x）SIK3若しくはHDAC4に特異的に結合することが可能な核酸、又は（y）SIK3若しくはHDAC4に特異的に結合するABPのいずれか、並びに（b）任意に（i）前記サンプルにおけるSIK3活性の検出に前記ABP若しくは核酸若しくはキットを使用する方法を記載する説明書、及び／又は（ii）該キットの使用若しくは前記サンプルにおけるSIK3活性の検出に有用な1つ以上の他のアイテム、構成要素、試薬若しくは他の手段を含む、キット。
【請求項５４】
前記疾患、障害又は病態がSIK3阻害剤による治療に好適な疾患、障害又は病態であるか、及び／又はそうであると決定され、又は前記被験体がSIK3阻害剤による治療に好適な被験体として区別される、請求項45〜48のいずれか一項に記載の方法、請求項49〜52のいずれか一項に記載の使用、又は請求項53に記載のキット。
【請求項５５】
前記被験体が以前に免疫療法により治療され、その腫瘍が進行した、特にその腫瘍が再燃した、再発した又は応答しなかったとして区別される、請求項45〜48若しくは54のいずれか一項に記載の方法、請求項49〜52若しくは54のいずれか一項に記載の使用、又は請求項53若しくは54に記載のキット。
【請求項５６】
前記被験体が以前に放射線療法により治療され、その腫瘍が進行した、特にその腫瘍が再燃した、再発した又は応答しなかったとして区別される、請求項45〜48、54若しくは55のいずれか一項に記載の方法、請求項49〜52、54若しくは55のいずれか一項に記載の使用、又は請求項53〜55のいずれか一項に記載の使用のためのキット。
【請求項５７】
細胞性免疫応答に対する細胞耐性を特徴とし、SIK3の発現又は活性を特徴とする疾患、障害又は病態の治療に好適な化合物を特定及び／又は特性評価する方法であって、
（a）SIK3を発現する第1の細胞と、（i）候補化合物、又は（ii）該候補化合物及び細胞性免疫応答とを接触させる工程と、
（b）（i）前記第1の細胞におけるSIK3（特に、リン酸化SIK3）（例えば、そのタンパク質又はmRNA）の発現、活性、機能及び／又は安定性、及び／又は（ii）前記第1の細胞に対する前記細胞性免疫応答の細胞傷害性を決定する工程と、
を含み、（i）前記候補化合物と接触させていない前記第1の細胞と比較した、該候補化合物と接触させた該第1の細胞におけるSIK3の発現、活性、機能及び／又は安定性の低下、及び／又は（ii）前記候補化合物と接触させていない前記第1の細胞に対する前記細胞性免疫応答の細胞傷害性と比較した、該候補化合物と接触させた該第1の細胞に対する該細胞性免疫応答の細胞傷害性の増強により、前記候補化合物が、細胞性免疫応答に対する細胞耐性を特徴とし、SIK3の発現又は活性を特徴とする疾患、障害又は病態の治療に好適な化合物であることが示される、方法。
【請求項５８】
細胞性免疫応答に対する細胞耐性を特徴とする疾患、障害又は病態の治療に好適な化合物を特定及び／又は特性評価する方法であって、
（a）SIK3を発現する第1の細胞と候補化合物とを接触させる工程と、
（b）
（i）前記第1の細胞におけるSIK3、特にリン酸化SIK3のタンパク質又はmRNAの発現、活性、機能及び／又は安定性、並びに、
（ii）前記第1の細胞に対する細胞性免疫応答の細胞傷害性、
を決定する工程と、
を含み、
（i）前記候補化合物と接触させていない前記第1の細胞と比較した、該候補化合物と接触させた該第1の細胞におけるSIK3の発現、活性、機能及び／又は安定性の低下、並びに、
（ii）前記候補化合物と接触させていない前記第1の細胞に対する前記細胞性免疫応答の細胞傷害性と比較した、該候補化合物と接触させた該第1の細胞に対する該細胞性免疫応答の細胞傷害性の増強、
により、前記候補化合物が細胞性免疫応答に対する細胞耐性を特徴とする疾患、障害若しくは病態、及び／又はSIK3の発現若しくは活性を特徴とする疾患、障害若しくは病態の治療に好適な化合物であることが示され、
前記細胞性免疫応答が、（x）炎症性サイトカイン、特にTNF、又は（y）前記第1の細胞を免疫学的に認識する細胞傷害性免疫細胞である第2の細胞、特にCTLである、方法。
【請求項５９】
前記細胞性免疫応答が炎症性サイトカイン、特にTNFである、請求項58に記載の方法。
【請求項６０】
前記第1の細胞が増殖性障害、特に腫瘍に関与する細胞である、請求項58又は59に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、SIK3が抗腫瘍免疫応答に対する耐性と関連するという驚くべき研究結果に基づく。特に、本発明はSIK3の阻害剤、特にSIK3の核酸又は小分子阻害剤を用いて増殖性疾患を治療する方法を提供する。SIK3阻害剤を或る特定の炎症性シグナル伝達経路のリガンド又はアゴニストと共に用いて、増殖性障害に関与する細胞をかかるシグナル伝達経路の細胞傷害効果に対して感作する方法、及び／又はかかる細胞を死滅させる方法、及び／又は増殖性疾患を治療する方法も提供される。本発明によって提供される他の方法としては、かかるシグナル伝達経路を利用する治療を増強するか又はそれと関連する或る特定の副作用を克服するためにSIK3阻害剤を用いる方法、並びに被験体から得られたサンプル中のSIK3の検出に基づく診断、予後診断及びモニタリングの方法及びキット、並びにSIK3の阻害剤を特定又は特性評価するのに有用なスクリーニング方法が挙げられる。
【背景技術】
【０００２】
癌の治療には、免疫系の1つ以上の構成要素を直接又は間接的に必要とする又は利用するアプローチを含む、療法により腫瘍細胞の除去をもたらすことができる多数のアプローチがある。かかる療法と関連する制限の1つは、癌性細胞が、免疫認識を妨げるか又は腫瘍特異的細胞傷害性T細胞（CTL）応答を下方調節し、それにより免疫応答に対する耐性を生じること等によって患者の免疫系を回避するために免疫チェックポイントを利用することが多いことである（非特許文献1、非特許文献2）。正常条件下では、かかる免疫調節チェックポイントは、生理的条件下での自己免疫寛容の維持に不可欠であるが、それらが癌においても重要な役割を果たし得ることがますます認められている（非特許文献3）。癌性細胞は、免疫系を回避及び抑制するためにこれらの機構を乗っ取ることで、腫瘍へと変わることがある（非特許文献4）。
【０００３】
現行の技術水準の癌療法は、現在知られており、作用機構が理解されている幾つかの免疫調節チェックポイントの遮断を含む。例えば、CTLA4及びPD-L1等の表面発現免疫調節タンパク質に対する遮断抗体（非特許文献5、非特許文献6）は、抗腫瘍免疫を強化することができ、多くの癌型に対して臨床的成果が示されている（非特許文献7）。しかしながら、癌患者の大半がかかるチェックポイント遮断療法に対して反応を示さず（非特許文献8、非特許文献9、非特許文献10）、他の免疫チェックポイント経路が活性であり得ることが示されている。実際に、幾つかの免疫調節経路間の相乗的協調作用により腫瘍に対する免疫寛容が維持され、これにより1つの免疫調節チェックポイントの分岐点のみの遮断が依然として腫瘍エスケープをもたらす可能性がある理由が説明され得る（非特許文献11、非特許文献12）。しかしながら、かかる免疫調節経路の作用機構の中心となる分子的因子については殆ど知られていない。実際に、癌免疫療法の成功には、腫瘍によって発現される「免疫モジュラトーム（immune modulatome）」である免疫調節回路全体の系統的な描写が必要とされる。したがって、今日では依然として、免疫調節チェックポイントとして働くことができる更なる分子標的を特定するという満たされていない必要性、特に医薬、診断及び研究等において、このような考え得るチェックポイント標的を調節し、検出し、他の形で利用する手段及び方法の満たされていない必要性がある。
【０００４】
塩誘導性キナーゼ（SIK）は、アデノシン一リン酸活性化キナーゼ（AMPK）ファミリーに属するセリンチロシンキナーゼ（STK）サブファミリーを構成する。3つのメンバー（SIK1、SIK2及びSIK 3）がこれまでに特定されている。SIK2及びSIK3とのSIK1のアミノ酸相同性は、キナーゼドメインにおいてそれぞれ78%及び68%である。高塩分食を与えたラットの副腎中で多量に発現されるSIK1（SIK及びSNF1LKとしても知られる）のクローニングは、その後の脂肪組織中で主に発現されるSIK2（QIK、KIAA0781及びSNF1LK2としても知られる）及び幾分遍在的なSIK3（QSK、KIAA0999又はL19としても知られる）のクローニングにつながった（非特許文献13）。3つのSIKはN末端キナーゼドメイン（触媒ドメイン）、中央のユビキチン関連ドメイン（LKB1によるリン酸化に重要と考えられる）及び長いC末端配列（PKAによる更なるリン酸化のための部位であると考えられる）を有する同様の構造を有している（図1）。しかしながら、極めて多様な役割が様々なSIKに関係付けられている。例えば、様々なSIKが副甲状腺ホルモンに対する骨細胞応答（非特許文献14）からガストリンによるSIK1の誘導及び胃腺癌細胞の移動の阻害（非特許文献15）まで多様な生物学的過程に関係付けられている。
【０００５】
特に、SIK2及びSIK3の各々が多様な生物学的過程に関係付けられている。SIK2については、これらとしては、（下記により詳細に説明する免疫抑制だけでなく）糖新生、ニューロンの生存、メラニン形成、脂肪肝及び中心体分裂、並びに癌の進行に関係するSIK2、細胞増殖及び化学耐性の維持をSIK2キナーゼに依存する或る特定の卵巣癌、またつい最近では、有糸分裂紡錘体形成に必要とされる中心体キナーゼ、並びに特にARN-3236及びその類縁体（例えばARN-3261）等のSIK2阻害剤の使用を含むパクリタキセルへの卵巣癌の感作の調節におけるその役割から卵巣癌療法及び乳癌療法の潜在的標的してのSIK2が挙げられる（非特許文献16及び非特許文献16中の論考／参照；特許文献1；非特許文献17）。SIK3については、これらとしては、（下記により詳細に説明する免疫抑制だけでなく）マウスにおけるグルコース及び脂質恒常性（非特許文献18）、マウスにおける骨格発達時の軟骨細胞肥大（非特許文献19）、マウスにおける変形性関節症（非特許文献20）、マウスにおける炎症性分子のレベルの増大を伴うリポ多糖（LPS）誘導性内毒素ショックを悪化させるSIK3欠損（非特許文献21）、卵巣癌の腫瘍形成と関連する腫瘍抗原（非特許文献22）、並びに新規の分裂調節因子及び抗有糸分裂治療薬媒介細胞死を増強するための標的（非特許文献23）としてのSIK3、並びにG1/S細胞周期の進行の加速につながるサイクリンD及びEの上方調節を誘導するSIK3過剰発現（非特許文献24）が挙げられる。
【０００６】
SIKによって調節されるとして関係付けられている細胞シグナル伝達経路は、多様であり（非特許文献25）、糖新生がCRTC2/CREBによって調節され、脂質生成がp300/ChREBPによって調節されるだけでなく、Walkinshaw et alは、LKB1がSIK2及びSIK3をリン酸化クラスIIa HDACへと活性化し、それらの細胞質局在化を促進することを示した。また、同じ実験条件下で、SIK1はそれが可能でないことが示された。SIK2とは異なり、SIK3は、そのキナーゼ活性とは独立してクラスIIa HDAC輸送を促進する能力、並びにHDAC4及びHDAC7の構成的核突然変異体の細胞質局在化を刺激する能力等の独自の特性を有することが報告されており、SIKファミリーメンバー間の差異が強調される。さらに、Walkinshawは、PKAがLKB1、SIK2及びSIK3と反対に作用し、クラスIIa HDACの核外輸送を阻害することを報告している。
【０００７】
SIKファミリーメンバーは、その阻害がマクロファージを抗炎症表現型へとリプログラミングする主要な分子スイッチとして特定されており、マクロファージはこの場合、汎SIK小分子阻害剤MRT67307、MRT199665、KIN112及びHG-9-91-01による処理後に、対応するサイトカイン発現の変化（インターロイキン-10（IL-10）の発現の増大及び腫瘍壊死因子α（TNF-α）の発現の減少）を示す（非特許文献26）。Clarkは、HG-9-91-01が最も強力なSIKファミリーメンバー阻害剤であり、SIKファミリーメンバーに対して最も特異的であるようであるが、依然として3つ全てのメンバーの著しい阻害をSIK1に対して最高の効力かつSIK3に対して最低の効力で示し、これらの阻害剤がcAMP応答配列結合タンパク質（CREB）調節転写（transcription）コアクチベーター（CRTC）3の脱リン酸化を誘導することによってIL-10産生を高めることを報告している。IL-10産生に対するSIK阻害剤の効果は、SIK2の薬剤耐性突然変異体を発現するマクロファージにおいて失われた。Clarkは、SIKを標的とする薬物が炎症性腸疾患（例えば、クローン病及び潰瘍性大腸炎）及び／又は自己免疫障害等の望ましくない炎症と関連する障害の治療に可能性を有し得ることを提唱している（特許文献2）。
【０００８】
非特許文献27（特許文献3）は、免疫細胞におけるSIKの抗炎症性の役割を更に支持し、HG-9-91-01に類似の様々な小分子阻害剤の使用（例えば特許文献4、特許文献5、特許文献6）が、樹状細胞（DC）におけるIL-10産生及び抗炎症表現型への活性化DCの変換を増強することを記載している。このIL-10産生に対するSIK阻害（特に、SIK2阻害）の刺激効果は、炎症性サイトカインIL-1-β、IL-6、IL-12及びTNF-αの産生の減少とも関連付けられている。
【０００９】
FDA承認薬を含む150個を超えるキナーゼ阻害剤の群を試験するために、活性化DCによるIL-10産生の上方調節についての表現型スクリーニングを用いることで、Sundbergは、承認薬ダサチニブ及びボスチニブが同様にCRT3/CREBシグナル伝達が関与する機構によってかかるIL-10産生を上方調節し、IL-10産生に対するかかる効果がSIK1及びSIK2に対するこれらの薬物の強力な結合と相関することも特定している。実際に、非特許文献28では、ダサチニブ及びボスチニブの両方が、生化学アッセイにおいて（SIK3の阻害に対するそれらの効力が、SIK1又はSIK2に対するよりも3倍〜5倍低いものの）汎SIK阻害剤であり、これら2つのキナーゼ阻害剤（他のプロテインチロシンキナーゼ阻害剤ではなく）がマクロファージにおけるIL-10産生を高め、「調節性」様マクロファージに特有のサイトカイン産生パターン、特にIL6、IL12及びTNF-αの産生の阻害を誘導することが確認されている。ボスチニブ及びダサチニブによるマクロファージにおけるこのIL10誘導機構がCRTC3脱リン酸化及びCREB依存性遺伝子転写を伴うことも示され、マクロファージにおける薬剤耐性SIK2突然変異体の発現は、ボスチニブ及びダサチニブによるIL10産生を遮断した。
【００１０】
Abl及びSrcファミリープロテインチロシンキナーゼ（特に、BCR-ABL）の小分子阻害剤であるダサチニブ（SPRYCEL）は、フィラデルフィア染色体陽性（Ph+）慢性骨髄性白血病（CML）及びPh+急性リンパ芽球性白血病（ALL）の治療に承認されている。ダサチニブは乳癌、黒色腫、卵巣癌及び非小細胞肺癌等の固形腫瘍を含む多数の他の癌型について調査済み又は調査中であり、特に再発性又は難治性のPh+ ALLの治療について抗PD-1モノクローナル抗体ニボルマブ（OPDIVO）と組み合わせて臨床試験中である。しかしながら、多数の報告により、ダサチニブが、ダサチニブで治療したCML患者における感染の増加及び皮膚癌の形成の誘導を含む免疫抑制と関係付けられており（非特許文献29）、ダサチニブによるかかる免疫応答の阻害を支持する実験的証拠が見られる。例えば、（i）非特許文献30は、ダサチニブがin vitroにて、またin vivoマウスモデルを用いて末梢血Tリンパ球（PBT）中でT細胞活性化及び増殖を阻害することを報告している。かかる阻害活性は、アポトーシスによって誘導されず、炎症性サイトカイン（例えば、TNF-α）の産生の阻害ももたらした。（ii）非特許文献31は、ダサチニブで治療したマウスがLPS投与に応答してTNF-αの血清レベルの低下及びIL-10の血清レベルの増大を有することを報告している。また、（iii）非特許文献32は、ダサチニブが成熟ヒト好中球の炎症誘発機能の阻害を引き起こし、TNF-α産生及び好中球走化性の両方の阻害をもたらすことを報告しており、ダサチニブが好中球関連炎症性疾患に利益をもたらし得ることを報告している。
【００１１】
対照的に、ダサチニブによる長期治療後の或る研究グループによる幾つかの臨床観察結果から、免疫系に対するその効果におけるダサチニブの二重の役割が示唆されている。（i）Ph+白血病患者のサブセット（n=22）が、かかる患者によく見られる大腸炎及び胸膜炎等の副作用と共にT/NK細胞のクローン性増殖を示し（非特許文献33）、（ii）或る特定（n=55）のPh+白血病患者においてダサチニブによって誘導される細胞傷害性リンパ球の急速な動員は、薬物血漿濃度を密接に反映していた（非特許文献34）。或る実験的証拠により、ダサチニブ治療と関連する免疫強化のこの対照的な観察結果が支持されている。（i）非特許文献35は、3つのプロテインチロシンキナーゼ阻害剤のex vivo影響を報告しており、ダサチニブのみが長期誘導ex vivo環境においてγ-δT細胞の増殖及び抗腫瘍応答を示した。（ii）非特許文献36は、CML患者（n=23）に由来する一次サンプルを用いて、ダサチニブがグランザイムB発現T細胞においてTh1型応答を促進することを報告している。また、（iii）非特許文献37は、つい最近、ダサチニブが幾つかのマウス固形腫瘍モデルにおいて腫瘍成長の低減と同時に免疫細胞プロファイルを変化させることを報告している。
【００１２】
様々なSIKの抗炎症性の役割に対する更なる特異性が近年解明されている。例えば、（i）非特許文献38は、SIK1、SIK2及びSIK3のノックイン突然変異体を用いて、全てのSIKファミリーメンバーがIL-10を含む高レベルの抗炎症性サイトカインの分泌を特徴とするマクロファージ表現型に寄与することを示した。しかしながら、突然変異体SIK3ノックインがSIK2とは異なり、IL-10 mRNAの増加を示すが、実際のIL-10分泌では限られた効果しか示さなかったことから、SIK2がIL-10産生にとってSIK3よりも重要であるようである。しかしながら、重要なことには、任意の突然変異体SIKのノックインは、TNF-α産生及び他の炎症性サイトカインの減少をもたらした。（ii）HG-9-91-01及び別のSIK2阻害剤ARN-3236の両方を研究することで、非特許文献39は、ヒト骨髄細胞におけるSIK阻害がTLR及びIL-1Rシグナル伝達を調節し、抗炎症表現型を誘導することを報告している。また、（iii）非特許文献40は、in vivoでのSIK機能の調査のための化学プローブを開発している。MARK3/Par-1キナーゼドメインに基づく結合モデルを用いることで、特にSIK2に対する選択性の増大を示したYKL-05-099等、個々のSIKに対する選択性の増大を有するようにSIK阻害剤を開発することができることが実証された。特許文献40は、以前に観察された抗炎症表現型（TNF-αの産生の減少を含む）をin vivoで繰り返すことができ、YKL-05-099処理が全脾臓白血球においてSIK調節Ser25でのHDAC5のリン酸化の用量依存的な減少をもたらすことを示した。
【００１３】
以前は腫瘍壊死因子α（TNF-α）として知られていた腫瘍壊死因子（TNF）は、実験癌の急速な出血性壊死を誘導するその能力について1975年に初めて特定された（1984年にクローニングされた）が、その歴史は1890年代のColeyの研究にまで遡ることができる。TNFが強力な抗癌サイトカインであるという当初の見込みは、組換えサイトカインが内毒素ショックの兆候及び症状を誘導する可能性があり、治療指数が驚くほど小さいという認識によりすぐに薄れた（非特許文献41）。したがって、驚くことではないが、TNF（タソネルミン；BEROMUN）は、EUでは特定の用途にのみ承認されており、四肢の軟部組織肉腫による切断を防ぐ又は遅らせるためには、穏やかな低温分離式肢灌流によりメルファランと組み合わせて用いられる。しかしながら、最近では、特に抗腫瘍作用及び腫瘍誘発作用の両方におけるその二重の役割、特にNF-κBによって支配されるこれらの作用間の切替え、特に（本発明の教示を用いること等によって）かかる切替えを制御する方法について現在より多くのことが知られているため、TNFの治療的使用の可能性についての興味の復活が見られる。
【００１４】
TNFについて行われている早期抗癌試験の多くと並行して、TNFに対する中和抗体（受動免疫によって誘導される）がマウスを致死的なTNF媒介内毒素血症から保護するという観察結果も相当な注目を集めている。これらの研究は、TNFが強く殺腫瘍性（tumoricidal）であり、かつ必須の炎症メディエーターであることを証明する上で有益であった。実際に、TNFが独立して、かつIL-6の発現を誘導するその能力により高炎症性物質であることがすぐに明らかになった。これらの初期の研究結果は、癌療法に有用であると推定されたものとは反対であるが、炎症を阻害するためにTNFを中和するアプローチに直接つながる影響力の大きい研究である（非特許文献42）。その後、TNFに結合する（及び捕捉する）抗体、又は同様にTNFに結合し（及び捕捉する）、それにより遊離／活性TNFのレベルを低下させる組換えTNF受容体のフラグメントを含む多数の抗TNF治療薬が開発された。抗TNF剤の例としては、キメラマウスFv及びヒトFc抗TNFモノクローナルIgであるインフリキシマブ（IFX）、ヒト化又は完全ヒトFv）抗TNFモノクローナルIgであるアダリムマブ（ADA）、ゴリムマブ（GOL）及びフミケード（humicade；HUM）、TNFR2系ヒトIg Fcであるエタネルセプト（ETA）、並びにペグ化組換え細胞外TNFR1であるオネルセプト（onercept；ONE）、並びにペグ化ヒトIgG1 Fab'であるセルトリズマブペゴル（CET）が挙げられる。かかる承認済み製品は関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、尋常性乾癬及びクローン病等の障害について承認されている。しかしながら、抗TNF生物製剤を受けた患者がリンパ腫及び他の血液学的悪性疾患を発症するという報告も幾つかある。これらには、リンパ腫（ホジキンリンパ腫、未知のサブタイプのB細胞リンパ腫、末梢性T細胞リンパ腫、不特定のリンパ腫及び肝脾T細胞又はγ-δT細胞リンパ腫）及び急性白血病の報告が含まれる（非特許文献42中の参照文献を参照されたい）。血液学的悪性疾患の増加の認識並びにこれら及び他の免疫抑制剤の広範な使用の直接的な結果として、腫瘍のWHO分類は現在、「医原性の免疫不全関連リンパ増殖性疾患」というカテゴリーを含んでいる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１５】
【特許文献１】国際公開第2014/093383号
【特許文献２】国際公開第2013/136070号
【特許文献３】国際公開第2016/023014号
【特許文献４】国際公開第2015/006492号
【特許文献５】国際公開第2016/014551号
【特許文献６】国際公開第2016/014552号
【非特許文献】
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【非特許文献３６】Kreutzman et al 2014 (OncoImmunology 3:e28925)
【非特許文献３７】Hekim et al 2017 (Cancer Immunol DOI: 10.1158/2326-606)
【非特許文献３８】Darling et al 2016 (Biochem DOI: 10.1042/BCJ20160646)
【非特許文献３９】Lombardi et al 2016 (J Leuk Biol 99:711)
【非特許文献４０】Sundberg et al 2016 (ACS Chem Biol 11:2105)
【非特許文献４１】Balkwill 2009, Nature Rev Cancer 9:361
【非特許文献４２】Sedger & McDermott 2014, Cytokine & Growth Factor Reviews 25:543
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
したがって、1つ以上の上記の観点から、増殖性障害（腫瘍等）に関与する細胞を免疫系の影響を受けやすいものとし、特に腫瘍免疫エスケープ機構を回避する新規のアプローチが必要とされる。本発明は特に、既存又は新規の化合物、例えばかかる細胞を免疫系又はその構成要素の細胞傷害性応答に対して感作する化合物を用いる新規の治療アプローチ及び方法を提供しようとするものである。さらに、本発明は、かかる免疫応答又は構成要素に対する細胞耐性を診断、予後診断及び／又はモニタリングする新規の戦略、並びに（as well as）増殖性障害の治療において有用な化合物の特定のためのスクリーニングアプローチを提供しようとするものである。したがって、本発明の目的は、これら又は他の問題の1つ以上に対処する代替的な、改善された、より単純な、より安価な及び／又は総合的な手段又は方法を提供することである。本発明の基礎をなすかかる目的は、本明細書のどこかに開示又は規定される主題、例えば添付の特許請求の範囲の主題によって解決される。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
概して、簡単な説明により、本発明の主な態様は以下のように説明することができる。
【００１９】
第1の態様では、本発明は、SIK3を阻害すること、及び／又は増殖性障害に関与する細胞を細胞性免疫応答に感作することによって被験体における増殖性障害を治療する方法であって、SIK3阻害剤を被験体に投与することを含む、方法に関する。
【００２０】
第2の態様では、本発明は、増殖性障害に関与する細胞を細胞性免疫応答に感作する方法であって、増殖性障害に関与する細胞をSIK3阻害剤に曝露することを含む、方法に関する。
【００２１】
第3の態様では、本発明は、増殖性障害に関与する細胞を死滅させる方法であって、増殖性障害に関与する細胞を（i）TNF、TNF変異体、及び／又はTNFR1シグナル伝達若しくはTNFR2シグナル伝達のアゴニスト、並びに（ii）SIK3阻害剤に曝露することを含む、方法に関する。
【００２２】
第4の態様では、本発明は、被験体における増殖性障害を治療する方法であって、増殖性障害に関与する細胞を（i）TNF、TNF変異体、及び／又はTNFR2シグナル伝達若しくはTNFR1シグナル伝達のアゴニスト、並びに（ii）SIK3阻害剤に曝露することを含む、方法に関する。
【００２３】
第5の態様では、本発明は、増殖性障害に対するTNFによる治療を受けている被験体においてTNFによる治療の治療指数を増大する方法であって、SIK3の阻害剤を被験体に投与することを含む、方法に関する。
【００２４】
第6の態様では、本発明は、増殖性障害を患う被験体を被験体へのTNFの投与を伴う療法に感作する方法であって、SIK3の阻害剤を被験体に投与することを含む、方法に関する。
【００２５】
第7の態様では、本発明は、抗TNF剤による治療を受けている被験体において血液学的増殖性障害のリスクを低下させる方法であって、SIK3の阻害剤を被験体に投与することを含む、方法に関する。
【００２６】
本発明は様々な決定方法、並びにかかる決定方法に有用なアイテム及びキット、並びに化合物を特定する様々な方法にも関する。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】SIK1、SIK2及びSIK3の構造的特徴の比較の画像表示である。N末端キナーゼドメインを灰色の長方形によって表し、中央のユビキチン関連ドメインを白色の長方形によって表し、C末端配列を薄灰色のバーによって表す。
【図２】siRNAをトランスフェクトしたPANC-1-luc細胞のT細胞媒介死滅の評定のためのルシフェラーゼベースの細胞傷害性アッセイを示す図である。グラフは、スクランブル対照siRNA（siCtrl）のシグナルに対して正規化した、TIL#1又はサバイビン特異的T細胞クローンによる20時間のチャレンジ後の腫瘍細胞の残存ルシフェラーゼ活性（RLU）を示す。
【図３−１】（A）PANC-1-luc細胞に、SIK3を標的とする単一の（s1、s2又はs3）又はプールした（プール）siRNA配列のいずれかをトランスフェクトした。スクランブルsiRNAを対照として使用した（siCtrl）。72時間後に、qPCRを用いてmRNA発現を評価した。データをGAPDHに対して正規化する。（B）スクランブル対照siRNA（siCtrl）と比較した、様々なsiRNAによるsiRNAノックダウン後のSIK3タンパク質のウエスタンブロット。（C）PANC-1細胞（指定のsiRNAのトランスフェクションにより各SIK又はPD-L1ノックダウンを有する）をTIL#1 T細胞に曝露した場合の効果のSIK3特異性を実証するルシフェラーゼベースの細胞傷害性アッセイ。（D）（C）中の比率として提示したデータの2つの状況（T細胞の存在対非存在）についての正規化RLU値。
【図３−２】同上
【図４】（A）指定のsiRNAによるトランスフェクション後のTIL#2との6時間の同時培養後のPANC-1細胞のT細胞媒介細胞傷害性の検出のためのクロム放出アッセイ。（B）指定のsiRNAトランスフェクションの72時間後のPANC-1細胞におけるPD-L1及びCEACAM6タンパク質レベルの検出のためのウエスタンブロット分析。スクランブルsiRNAを陰性対照として使用した。
【図５】YOYO-1色素を用いた腫瘍細胞死の評価のためのリアルタイム生細胞顕微鏡検査を示す図である。指定のsiRNAによるトランスフェクションの72時間後に、MCF-7（A）及びSW480（B）を、それぞれサバイビン特異的T細胞クローン又はTIL#1のいずれかと同時培養した。グラフは、細胞死の尺度としてのYOYO-1+細胞の面積／ウェル（μm2／ウェル）を示す。
【図６】（A）M579-ルシフェラーゼ発現黒色腫細胞（M579-A2-luc）に指定のsiRNAをトランスフェクトし、ルシフェラーゼベースの死滅アッセイを同時培養の20時間後に行った。（B）M579-A2-luc細胞にSIK3過剰発現ベクター（SIK3 over）又は対照ベクター（EV）をトランスフェクトし、T細胞媒介細胞傷害性を（A）と同様に評定した。
【図７−１】（A）PANC-1細胞を漸増濃度のSIK阻害剤HG-9-91-01の存在下でTIL#1と同時培養し、図3Cと同様にルシフェラーゼベースの死滅アッセイを用いてT細胞媒介細胞傷害性を測定した。細胞傷害性対生存性の状況間のシグナルを比率として表す。（B）（A）中の比率として示される2つの状況についての絶対シグナルを示す。（C）ルシフェラーゼベースの細胞傷害性アッセイ。PANC-1-luc細胞に指定のsiRNAを72時間トランスフェクトし、続いて規定濃度のダサチニブと共にインキュベートした後、100 ng/mLのrHuTNFで18時間刺激した（又は刺激なし）。（D）qPCRによって決定される（GAPDH発現に対して正規化される）、PANC1-luc及びM579-A1-luc細胞株におけるSIK1、SIK2及びSIK3の発現。（E）PD-L1のsiRNAノックダウン（及びスクランブルsiRNA対照）と比較した、3つのSIKファミリーメンバーの各々のsiRNAノックダウン後のPANC1-luc腫瘍細胞のインフルエンザ（Flu）抗原特異的T細胞媒介細胞傷害性。（F）PD-L1のsiRNAノックダウン（及びスクランブルsiRNA対照）と比較した、3つのSIKファミリーメンバーの各々のsiRNAノックダウン後のM579-A2-luc腫瘍細胞のFlu抗原特異的T細胞媒介細胞傷害性。（G）スクランブルsiRNA対照と比較した、SIK1及びSIK2のsiRNAノックダウン後のM579-A2-luc腫瘍細胞のTNF媒介細胞傷害性に対するダサチニブの効果。
【図７−２】同上
【図７−３】同上
【図７−４】同上
【図８−１】PANC-1-luc細胞に、SIK3を標的とする単一の（s1、s2又はs3）又はプールした（プール）siRNA配列のいずれかをトランスフェクトした。スクランブルsiRNAを対照として使用した（siCtrl）。72時間後に、腫瘍細胞を腫瘍活性化（A）、非刺激（B）又はCD3-CD28ビーズ活性化T細胞（C）の上清（Sup）で処理した。20時間後に、腫瘍細胞の細胞傷害性に対する上清の効果をルシフェラーゼベースの死滅アッセイを用いて測定した。各実験について、siRNAをトランスフェクトした腫瘍細胞を陰性対照として培養培地で処理したが（Unst）、有意な変化は観察されなかった。グラフは、非刺激siCtrl処理と比較したルシフェラーゼ活性の倍率変化として表される、指定の上清による刺激後の残存ルシフェラーゼ活性（RLU）を示す。スクランブル対照siRNA（Scr1）と比較した、SIK3 siRNA（s1、s3又はプール）による72時間のトランスフェクション後のポリクローナル活性化T細胞（D）又は培地のみ（E）のいずれかの上清に曝露したPANC-1細胞のWST-1生存性アッセイ。
【図８−２】同上
【図９−１】（A）CD3-CD28ビーズで刺激したT細胞に由来する上清を100 ng/mL（+）、300 ng/mL（++）又は900 ng/mL（+++）の抗TNF中和抗体と共にインキュベートした。アイソタイプ対照（Ctrl Ab）は900 ng/mLの濃度で使用した。その後、siSIK3をトランスフェクトしたPANC-1-luc細胞を前処理上清に24時間曝し、ルシフェラーゼベースの死滅アッセイを用いて細胞傷害性を測定した。グラフは、腫瘍細胞の残存ルシフェラーゼ活性（RLU）の正規化値を示す。（B）TIL#1からの分泌TNFの検出のためのLuminexアッセイ。TIL#1をPANC-1細胞又はCD3/CD28ビーズ（ポリクローナル刺激）のいずれかと同時培養した。刺激の24時間後に、上清をTNF測定のために回収した。（C）CD3-CD28ビーズにより刺激したT細胞に由来する上清と抗TRAIL及び抗FASL中和抗体とのインキュベーション（（A）に従う）は、抗TNF中和抗体とのインキュベーションとは異なり、SIK3インキュベーション後の細胞傷害性の低下をもたらさなかった。
【図９−２】同上
【図１０】（A）指定のsiRNAをトランスフェクトしたPANC-1-luc細胞の生存性に対するrHuTNF処理の用量応答効果。細胞傷害性を（図9A）と同様に測定した。グラフは、rHuTNFによる処理後の腫瘍細胞の生ルシフェラーゼ活性（RLU）を示す。（B）指定のsiRNAによるトランスフェクション後のPANC-1細胞の生存性に対する100 ng/mL TNF処理の効果。リアルタイム生細胞顕微鏡検査を用いてYOYO-1色素の核内取込みを測定することで、細胞死を評価した。グラフは、同じ実験からの9つの異なる写真の累積データを用いた、6時間の刺激後の画像のYOYO-1+細胞の面積／ウェル（μm2／ウェル）を示す。
【図１１−１】（A）PANC-1細胞によるTNFR1の顕著な発現を示す、R-フィコエリトリンAffiniPure F(ab')2フラグメントヤギ抗マウスIgG（H+L）（Jackson Immuno Research、カタログ番号：115-116-146 46）で検出した、抗TNFR1抗体（Hyculture GmbH、カタログ番号：HM2020B）と共にインキュベートしたPANC-1細胞のFACS分析。抗TNFR1抗体について検出した、抗TNFR2抗体（Acris Antibodies GmbH、カタログ番号：AM20008AF-N）と共にインキュベートした細胞のFACS分析は、PANC-1細胞（C）ではなく、TILS（B）によるTNFR2の顕著な発現を示す。（D）100 ng/mLのrHuTNFによる処理後のSIK3 siRNAをトランスフェクトしたPANC-1-luc細胞に対するTNF及びTNFR1遮断の効果。ルシフェラーゼ強度を図9Aと同様に測定した。（E）100 ng/mLのrHuTNFによる処理後のスクランブル対照siRNAをトランスフェクトしたPANC-1-luc細胞に対するTNF及びTNFR1遮断の効果。ルシフェラーゼ強度を図9Aと同様に測定した。
【図１１−２】同上
【図１２】SIK3又はスクランブル対照（siCtrl）siRNAをトランスフェクトしたPANC-1-luc細胞を100 ng/mLのrHuTNFで処理した。指定の時点の後に、腫瘍細胞を採取し、全タンパク質画分を単離した。Luminexアッセイを活性カスパーゼ8（A）、活性カスパーゼ9（B）及びpJNK（C）について行った。グラフは、GAPDHに対する正規化後の分析物特異的ビーズの蛍光強度の中央値（MFI）を示す。
【図１３】（A）ルシフェラーゼベースの細胞傷害性アッセイ。PANC-1-luc細胞に指定のsiRNAを72時間トランスフェクトし、100 ng/mLのrHuTNFで24時間刺激した。グラフは、腫瘍細胞の残存ルシフェラーゼ活性を示す。（B）PANC-1細胞に指定のsiRNAを72時間トランスフェクトした後、指定の時点について100 ng/mL rHuTNFで刺激した。その後、ELISAをNF-KBの核p65サブユニットの検出のために行った。グラフは、非刺激対照に対する正規化後のλ450nmでの吸光度を示す。（C）PANC-1細胞にSIK3過剰発現ベクター（SIK3 over）又は対照ベクター（EV）のいずれかを48時間一過性にトランスフェクトした。p65 NF-KB ELISAを（B）と同様に行った。
【図１４】4時間後にTNFによって有意に調節され、siRNAによるSIK3ノックダウンによって有意な影響を受けた386個の遺伝子の二次元階層クラスタリング（Zスコア変換、正規化カウントパーミリオン；マンハッタン距離、ウォード法）を示す図である。TNFへの曝露あり及び曝露なしのそれぞれにおける、SIK3 siRNA（siSIK3）での処理によってSIK3が枯渇したPANC1細胞及びスクランブル対照siRNA（siCtrl1）で処理した対照細胞（各条件を二連にした）。
【図１５】shCtrl又はshSIK3レンチウイルス構築物で形質導入されたM579細胞のTIL209媒介溶解の平均±SEMを示すリアルタイム生細胞顕微鏡検査を示す図である。グラフは、YOYO-1+細胞の面積／ウェル（um2／ウェル）を示す。
【図１６】（A）in vivoマウス実験の概略図。shCtrl又はshSIK3で形質導入されたM579細胞の皮下（s.c.）移植を、免疫不全（NOD scid γ；NSG）マウスの左脇腹及び右脇腹のそれぞれに行った。（B）3日目、10日目、17日目及び24日目にマウスにTIL209（n=9）又はPBS単独（n=7）の静脈内（i.v.）注射を行った。（C）TIL209又はPBSのいずれかで処理したマウスにおけるshCtrl又はshSIK3移植M579腫瘍の腫瘍体積（mm3）の平均±SEMを示す腫瘍成長曲線。対応のない片側マンホイットニーU検定を用いて統計学的差異を算出した。（D）腫瘍細胞上のTNFR1（TNFR-I）へのTNFの結合は、カスパーゼ8切断、NF-κB核転座及びSIK3リン酸化を伴う下流のシグナル伝達カスケードをもたらす。NF-κB核内保持は、そのアセチル化によって維持され、HDAC4デアセチラーゼは、NF-κBの負の調節因子として作用する。TNF刺激はpLKB1のレベルを増大させ、これがSIK3活性化の増大をもたらす。SIK3はHDAC4をリン酸化し、それにより核から細胞質へのそのシャトリングが開始される。核HDAC4の欠如はNF-κB核内保持を維持する。核NF-κBは、生存促進及び抗アポトーシス遺伝子のトランス活性化をもたらし、これがカスパーゼ8活性化を妨げる。
【図１７】単独（四角）又は10 ng/mLのTNFと組み合わせた（丸）、様々な濃度での実施例9に記載されるM579-A1-lucを用いたアッセイにおける一般式1の或る特定の化合物の相対腫瘍細胞生存（細胞傷害性／生存性による正規化RLU）を示す図である。表4に用いられる標識を用いて示される、SIKファミリーメンバー並びに関連キナーゼABL1及びSRCについての化合物の指標阻害活性も示す。（A）汎SIK及びABL1 & SRC阻害剤である化合物B1。（B）ABL1 & SRC阻害剤である化合物B8。（C）SIK1、SIK2及びABL1 & SRC阻害剤である化合物B4。
【図１８】10 ng/mLと組み合わせたSIKファミリーメンバー選択的阻害剤についてのlucアッセイにおけるM579 A2腫瘍細胞生存（RLU）を示す図である。（A）強いSIK1及びSIK2阻害剤であるが、弱いSIK3阻害剤である化合物A11。（B）強いSIK2阻害剤であるが、弱いSIK3及び弱いSIK1阻害剤である化合物A6。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
本発明、並びにその特定の非限定的な態様及び／又は実施形態は、以下のようにより詳細に説明することができる。
【００２９】
第1の態様では、本明細書で更に説明、規定、特許請求されるか、又は他の形で開示され得るように、本発明は、SIK3を阻害することによって被験体における増殖性障害を治療する方法であって、SIK3阻害剤を被験体に投与することを含む、方法に関する。
【００３０】
代替的な第1の態様の1つでは、本明細書で更に説明、規定、特許請求されるか、又は他の形で開示され得るように、本発明は、増殖性障害に関与する細胞を細胞性免疫応答に感作することによって被験体における増殖性障害を治療する方法であって、SIK3阻害剤を被験体に投与することを含む、方法に関する。
【００３１】
別の代替的な第1の態様では、本明細書で更に説明、規定、特許請求されるか、又は他の形で開示され得るように、本発明は、SIK3を阻害し、（例えば、それにより）増殖性障害に関与する細胞を細胞性免疫応答に感作することによって被験体における増殖性障害を治療する方法であって、SIK3阻害剤を被験体に投与することを含む、方法に関する。
【００３２】
関連の第1の態様の1つでは、本明細書で更に説明、規定、特許請求されるか、又は他の形で開示され得るように、本発明は、被験体における増殖性障害の治療への使用のためのSIK3の阻害剤であって、治療が、（i）増殖性障害に関与する細胞を細胞性免疫応答に感作すること、及び／又は（ii）SIK3を阻害することを伴う（例えば、それによって行われる）、SIK3の阻害剤に関する。別の関連の第1の態様では、本明細書で更に説明、規定、特許請求されるか、又は他の形で開示され得るように、本発明は、被験体における増殖性疾患の治療のための薬剤の製造へのSIK3阻害剤の使用であって、治療が、（i）増殖性障害に関与する細胞を細胞性免疫応答に感作すること、及び／又は（ii）SIK3を阻害することを伴う（例えば、それによって行われる）、使用に関する。薬剤の製造は、増殖性障害に関与する細胞へのSIK3阻害剤の特異的送達に好適な形態のSIK3阻害剤を調製、配合するか、又は他の形で準備する工程を含むのが好ましい。これらの関連の実施形態の或る特定の実施形態では、かかる治療において、阻害剤は、（i）増殖性障害に関与する細胞を細胞性免疫応答に感作し、及び／又は（i）SIK3を阻害する。或る特定のかかる実施形態では、SIK3阻害剤は、（i）増殖性障害に関与する細胞を細胞性免疫応答に感作すること、及び／又は（ii）SIK3を阻害することが可能なSIK3阻害剤である。
【００３３】
更なる態様では、本明細書で更に説明、規定、特許請求されるか、又は他の形で開示され得るように、本発明は、被験体における増殖性障害の治療において増殖性障害に関与する細胞を細胞性免疫応答に感作する方法であって、SIK3阻害剤を被験体に投与することを含む、方法に関し、別の更なる態様では、本明細書で更に説明、規定、特許請求されるか、又は他の形で開示され得るように、本発明は、被験体における増殖性障害の治療においてSIK3を阻害する方法であって、SIK3阻害剤を被験体に投与することを含む、方法に関する。
【００３４】
関連の更なる態様では、本明細書で更に説明、規定、特許請求されるか、又は他の形で開示され得るように、本発明は、（i）増殖性障害に関与する細胞を細胞性免疫応答に感作し、及び／又は（ii）SIK3を阻害するための薬剤としての使用のためのSIK3の阻害剤（例えば、SIK3阻害剤）に関する。
【００３５】
関連のまた更なる態様では、本明細書で更に説明、規定、特許請求されるか、又は他の形で開示され得るように、本発明は、増殖性障害に関与する細胞（腫瘍又は癌等）を細胞性免疫応答に感作する、例えば増殖性障害に関与する細胞を、細胞性免疫応答によって誘導され得る死滅（細胞死）に感作する、薬剤（例えば、癌免疫薬）としての使用のためのSIK3阻害剤に関する。「癌免疫」薬は、当業者によって認識される薬剤であり、生物（ヒト）中に存在する癌性又は腫瘍性細胞に対するかかる生物の免疫系の1つ以上の構成要素を増強することを目的とした（intended）（例えば、そのように特異的に設計された）薬剤を含む。癌免疫薬は、癌性又は腫瘍性細胞に対するT細胞機能を（例えば、直接）抑制する外来性免疫（阻害性）チェックポイント分子（本明細書の他の部分に記載されるチェックポイント分子等）に結合する薬剤（例えば、抗体）であっても、又は癌免疫薬は、癌性又は腫瘍性細胞に内在する免疫調節因子（本発明と同様のSIK3等）を阻害する薬剤であってもよく、かかる内在性免疫調節因子は、T細胞を能動的に（例えば、直接）抑制せず、むしろ耐性機構を介して免疫応答から腫瘍又は癌細胞を保護する。
【００３６】
かかる態様の特定の実施形態では、増殖性障害に関与する細胞を、細胞性免疫応答による（例えば、それによって誘導される）死滅（細胞死）に感作することができる。
【００３７】
「塩誘導性キナーゼ3」又は「SIK3」（同義語：QSK及びKIAA0999）は、AMP活性化プロテインキナーゼ（AMPK）ファミリーに属するSIK1、SIK2及びSIK3を含むセリン／トレオニンプロテインキナーゼのサブファミリーのメンバーである。本発明の文脈におけるSIK3タンパク質は通例、プロテインキナーゼである。ヒトSIK3タンパク質についての関連情報は、UniProt：Q9Y2K2（2017年3月15日のエントリバージョン138）でアクセス可能であり、本発明の文脈におけるSIK3タンパク質は、好ましくは図1に示されるドメイン構造を有し、より好ましくは配列番号1〜4（SIK3、2017年3月15日のエントリバージョン138）のいずれか又は配列番号13〜16（SIK3、2018年3月28日のエントリバージョン144）のいずれかに示されるアミノ酸配列、特に配列番号1又は13のアミノ酸配列を含む。SIK3は、SIK3の触媒活性に不可欠であることが報告されているリン酸化である、LKB1複合体によるキナーゼドメインのT-ループ中の保存トレオニン残基（163位）のリン酸化によって調節されるセリン／トレオニンキナーゼ活性を有する細胞質タンパク質である（Lizcano, J. M. et al.; EMBO J. 23, 833-843 (2004)）。本明細書で開示される発明の目的上、「リン酸化SIK3」という用語は、SIK3タンパク質がLKB1によってリン酸化され得る（例えば、リン酸化される）ように、十分にリン酸化されたSIK3タンパク質を表すものとし、かかるリン酸化SIK3は、アミノ酸位置163にホスホトレオニン（phosphothreonine）を含むのが好ましい。本発明の文脈におけるリン酸化SIK3は、その細胞生物学的状況で活性化されるSIK3タンパク質である。SIK3遺伝子産物の選択的スプライシングによって生成する少なくとも4つのタンパク質アイソフォーム（SIK3-001〜SIK3-004）が知られている。ヒトSIK3遺伝子は、染色体位置11q23.3（HGNC遺伝子記号Acc：HGNC:29165）に位置し、チンパンジー、アカゲザル、イヌ、ウシ、マウス、ラット、ニワトリ、ゼブラフィッシュ及びカエル等の多くの種において保存されている。SIK3という用語は、本発明の幾つかの実施形態では、例えば、Tatusova & Madden 1999 (FEMS Microbiol Lett 174: 247-250)によって記載される「Blast 2 sequences」アルゴリズムを用いて決定されるように、配列番号1〜4のいずれか又は配列番号13〜16のいずれかに示されるアミノ酸配列、特に配列番号1又は13のアミノ酸配列と実質的に同一であるか、又はそれと少なくとも80%、好ましくは85%、より好ましくは90%、95%、96%、97%、98%、99%若しくは100%の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するヒトSIK3タンパク質の変異体に関する場合もあり、この変異体は、（好ましくは）それぞれの参照SIK3と同一又は実質的に同一の（例えば、HDAC4等の1つ以上のクラスII（例えば、IIa）HDACをリン酸化する）生物活性を保持する。SIK3タンパク質の好ましい変異体は、それぞれの種の集団間及び集団内の配列多型、並びにSIK3の活性ループ又は活性化ループ（T-ループ）中又はそれに極めて接近して位置する、SIK3の野生型配列と比較した突然変異によるその配列変異体を含む。SIK3タンパク質の好ましい変異体はSIK3 T163突然変異、例えばSIK3の活性化に影響を及ぼす突然変異である。好ましい実施形態では、本発明のSIK3タンパク質は、SIK1（同義語：SIK及びSNF1LK）タンパク質ではなく、及び／又はSIK2（同義語：QIK、KIAA0781及びSNF1LK2）タンパク質ではない。ヒトSIK1（UniProt：P57059；2017年3月15日のエン��リバージョン168）及びヒトSIK2（UniProt：Q9H0K1；2017年3月15日のエントリバージョン153）のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号5及び6に示される。SIK3という用語は、その状況に適用可能であれば（より具体的には示さない場合）、SIK3タンパク質（上記のSIK3タンパク質等）又はかかるSIK3タンパク質をコードするmRNA分子を意味し得る。「SIK1」及び「SIK2」についても類似の意味が理解されるものとする。
【００３８】
「SIK3の阻害剤」（又は「SIK3阻害剤」）は、SIK3を阻害する任意の部分であり、これはSIK3、特にSIK3、特にリン酸化SIK3のmRNA及び／又はタンパク質の発現（例えば、量）、機能、活性及び／又は安定性の阻害を意味し得る。SIK3阻害剤は、細胞中のSIK3（例えば、SIK3 mRNA又はタンパク質）の発現を障害、抑制、低減及び／又は低下させることができる。これに関連して、「発現」という用語は、遺伝子をmRNAに転写し、続いてmRNAをタンパク質へと翻訳する細胞過程（或る特定の実施形態では、かかるタンパク質のその後の輸送及び局在化）を意味する。したがって、「遺伝子発現」は、そのように産生されるmRNAの運命に関わらずmRNAの生成のみを指す場合があり、又は代替的／付加的には発現されるmRNAのタンパク質への翻訳（又はかかるタンパク質の輸送及び局在化）を指す場合がある。一方、「タンパク質発現」という用語は、タンパク質を合成し、及び／又はタンパク質を或る特定の細胞内コンパートメントに輸送／局在化する完全な細胞過程を指す場合がある。SIK3阻害剤は、本明細書に記載される1つ以上の活性等のSIK3の1つ以上の活性、例えばクラスII（例えば、IIa）HDAC（例えば、HDAC4）をリン酸化する、及び／又は増殖性障害に関与する細胞を細胞性免疫応答に感作するSIK3の活性の効率、有効性、量又は割合を、（例えば、SIK3タンパク質の発現及び／又はリン酸化SIK3タンパク質の量を減じることによって）減じることができる（例えば、その減少又は低減を誘導する）。SIK3阻害剤は、SIK3（例えば、SIK3 mRNA又はタンパク質）の安定性に対して負の効果を有する場合があり、これはその最も広い意味で理解されるものとし、例えばSIK3タンパク質の半減期を妨げ、低減するか、又はSIK3タンパク質のフォールディング、タンパク質の提示若しくは細胞における輸送／局在化を妨げ、乱す阻害剤を含むものとする。
【００３９】
かかるSIK3阻害部分は、例えばSIK3に結合し、SIK3の発現、機能及び／又は安定性、特にキナーゼとして作用する（例えば、HDAC4をリン酸化する）能力等のSIK3の1つ以上の特性の量又は割合を、例えば細胞中のリン酸化SIK3の量又は活性を低減することにより減少させることによって直接作用することができる。SIK3阻害剤は、例えばSIK3タンパク質又はmRNAに結合し、一部分の除去若しくは付加、又はその三次元立体配座の変更等によりそれを修飾し、またSIK3タンパク質又はmRNAに結合し、その安定性又は立体配座完全性（conformational integrity）を低減することにより、SIK3の機能又は活性の量又は割合を、その発現、安定性を減じることによって減少させる場合もある。SIK3阻害剤は、代替的には、例えば調節分子又は遺伝子領域に結合することで、かかる調節タンパク質又は遺伝子領域の機能を変調し、それにより結果としてSIK3発現の量若しくは割合（例えば、量）、機能／活性及び／又は安定性の減少に影響を及ぼすこと、特にSIK3タンパク質又はmRNAの1つ以上の活性を（例えば、SIK3タンパク質又はmRNAの発現の量若しくは割合、及び／又は安定性を変更することにより）減じることによって間接的に作用することができる。このため、SIK3阻害剤は、SIK3発現の量若しくは割合（例えば、量）、機能／活性及び／又は安定性を減じる、例えばその減少をもたらす任意の機構によって作用することができる。SIK3に直接作用するSIK3阻害剤の非限定的な例としては、（i）SIK3 mRNAに結合し、その発現を低減するsiRNA又はshRNA分子、及び（ii）SIK3の触媒ドメインに結合し、SIK3のキナーゼ活性を低減する小分子部分が挙げられる。SIK3に間接的に作用するSIK3阻害剤の非限定的な例としては、（i）LKB1 mRNAに結合し、その発現を低減するsiRNA又はshRNA分子、及び（ii）LKB1の触媒ドメインに結合し、LKB1のキナーゼ活性を低減する小分子部分（いずれの場合にもLKB1タンパク質の量又は活性を低減し、結果としてリン酸化SIK3タンパク質の量（ひいては、活性）を低減することによる）が挙げられる。間接的SIK3阻害剤は、例えばグルカゴン受容体（又はインスリン受容体）に対するアンタゴニスト（遮断抗体等）であってもよく、この場合、細胞中のSIK3（又はホスホ（phospho）-SIK3）タンパク質の量及び／又は活性が減少する。
【００４０】
SIK3阻害剤の一般的及び具体的な例は、本明細書の他の部分に記載され、本明細書に提示される適用可能な機能的及び／又は構造的特徴を特徴とし得るものを含む。
【００４１】
本明細書で使用される場合、「被験体」には、限定されるものではないが、ヒトだけでなく、カニクイザル等の非ヒト霊長類を含む全ての哺乳動物が含まれる。これにはイヌ、ネコ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ウシ、ウサギ、ブタ及び齧歯類（マウス及びラット等）も含まれる。本発明による特に好ましい被験体が障害、疾患又は病態を患う（又は患うリスクがある）ヒト等のヒト被験体、例えばヒト患者であることが理解される。
【００４２】
本明細書で使用される場合、「療法」は疾患、障害又は病態の治療と同義であり、疾患、障害若しくは病態の症状を軽減すること、疾患、障害若しくは病態の進行を阻害すること、疾患、障害若しくは病態の退行をもたらすこと、及び／又は疾患、障害若しくは病態を治癒することが含まれる。
【００４３】
本発明における「治療」という用語は療法、例えば治療措置、及び疾患（又は障害若しくは病態）の予防又は抑制手段を含むことが意図される。このため、例えば疾患の発症前のSIK3阻害剤の投与の成功は、疾患の治療をもたらす。「治療」は、疾患（又はその症状）を改善又は根絶するための疾患の出現後のSIK3阻害剤の投与も包含する。臨床症状の緩和、恐らくは疾患の改善の可能性がある発症後及び臨床症状後のSIK3阻害剤の投与も疾患の治療となる。「治療を必要とする」被験体には、既に疾患、障害又は病態を有している被験体（ヒト被験体等）、及び疾患、障害又は病態を予防すべき被験体を含む、疾患、障害又は病態を発症しやすい、又はそれを有することが疑われる被験体が含まれる。
【００４４】
本明細書に記載される発明との関連での疾患、障害又は病態は、増殖性障害（かかる障害と関連する病態又は症状を含む）である。
【００４５】
「増殖性障害」は、細胞の異常増殖を特徴とする障害を指す。増殖性障害は、細胞成長の速度に関していかなる限定も示唆せず、単に成長及び細胞分裂に影響を及ぼす正常な制御の喪失を示す。このため、幾つかの実施形態では、増殖性障害の細胞は、正常細胞と同じ細胞分裂速度を有し得るが、かかる成長を制限するシグナルに対して反応を示さない。「増殖性障害」の範囲には、組織又は細胞の異常成長である新生物又は腫瘍が含まれる。癌は、当該技術分野で理解され、周囲組織に浸潤する及び／又は新たなコロニー形成部位に転移する能力を有する細胞の増殖を特徴とする任意の様々な悪性新生物を含む。増殖性障害としては、癌、アテローム性動脈硬化症、関節リウマチ、特発性肺線維症及び肝硬変が挙げられる。また、非癌性増殖性障害としては、乾癬等の皮膚の細胞の過剰増殖、及びその様々な臨床型、ライター症候群、毛孔性紅色粃糠疹、並びに角化の障害の過剰増殖性変形（例えば日光角化症、老人性角化症）、強皮症等が挙げられる。
【００４６】
より特定の実施形態では、増殖性障害は癌又は腫瘍、特に固形腫瘍（かかる癌又は腫瘍と関連する病態又は症状を含む）である。かかる増殖性障害は、限定されるものではないが、頭頚部癌、扁平上皮癌、多発性骨髄腫、孤発性形質細胞腫、腎細胞癌、網膜芽細胞腫、胚細胞腫瘍、肝芽腫、肝細胞癌、黒色腫、腎臓のラブドイド腫瘍、ユーイング肉腫、軟骨肉腫、任意の血液悪性腫瘍（例えば慢性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄単球性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、急性骨髄芽球性（myeloblastic）白血病、慢性骨髄芽球性白血病、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、有毛細胞性白血病、マスト細胞白血病、マスト細胞新生物、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、バーキットリンパ腫、菌状息肉腫、セザリー症候群、皮膚T細胞性リンパ腫、末梢性T細胞リンパ腫、慢性骨髄増殖性障害、骨髄線維症、骨髄化生、全身性肥満細胞症）、及び中枢神経系腫瘍（例えば脳癌、神経膠芽腫、非神経膠芽腫脳癌、髄膜腫、下垂体腺腫、前庭神経鞘腫、未分化神経外胚葉性腫瘍、髄芽腫、星状細胞腫、退形成性星状細胞腫、乏突起神経膠腫、上衣腫及び脈絡叢乳頭腫）、骨髄増殖性障害（例えば真性多血症、血小板血症、特発性骨髄線維症（myelofibrosis））、軟部肉腫、甲状腺癌、子宮体癌、カルチノイド腫瘍、又は肝臓癌を含む。
【００４７】
好ましい一実施形態では、本発明の様々な態様は、例えば本明細書に記載されるものを含む増殖性障害の治療に使用されるSIK3阻害剤に関する。したがって、一実施形態では、増殖性障害は腫瘍、特に固形腫瘍であり得る。
【００４８】
細胞性免疫応答に感作される細胞は、増殖性障害に関与する細胞（例えば、増殖性障害と関連する細胞）であり、或る特定の実施形態では、かかる細胞は、増殖性障害に関与する細胞（例えば、過剰増殖する細胞等の異常に増殖する細胞）である。例えば、かかる細胞は、新生物又は腫瘍の細胞等の細胞の成長及び細胞分裂に影響を及ぼす正常な制御の喪失を特徴とする細胞であり得る。特定の実施形態では、かかる細胞は癌性細胞、すなわち癌若しくは腫瘍の細胞から（from）誘導される又は癌若しくは腫瘍の細胞である細胞であり得る。他の実施形態では、かかる細胞は、過剰増殖を示す細胞、例えば乾癬、ライター症候群、毛孔性紅色粃糠疹又は強皮症に関与する細胞等の皮膚細胞であり得る。
【００４９】
細胞は、例えば細胞が増殖性障害と関連する、例えばかかる増殖性障害における原因因子であるか、又はかかる増殖性障害の影響を受ける場合に、「増殖性障害に関与する」可能性がある。特に、細胞は、細胞が異常な細胞成長又は細胞分裂等の異常増殖を特徴とする場合、また異常な細胞成長又は細胞分裂が増殖性疾患の病理の一環であるか、又は増殖性疾患の原因となる場合に、「増殖性障害に関与する」。「増殖性障害に関与する」細胞は、増殖性障害が腫瘍又は癌である実施形態では、非限定的な例として、腫瘍（又は癌）細胞、すなわちかかる腫瘍又は癌、特に固形腫瘍（の組織）に由来する細胞であり得る。
【００５０】
或る特定の実施形態では、SIK3阻害剤は、増殖性障害に関与する細胞（例えば、腫瘍細胞）においてSIK3を阻害することができる。特定のかかる実施形態では、SIK3阻害剤は、かかる細胞中のSIK1及び／又はSIK2の阻害よりも優先的に、かかる細胞中のSIK3を阻害することができ、及び／又は1つ以上の型の免疫細胞中のSIK1及び／又はSIK2及び／又はSIK3の阻害によりも優先的に、かかる細胞中のSIK3を阻害することができる。例えば、SIK3阻害剤は、マクロファージ及び／又は樹状細胞（特に、IL-10を産生することが可能な又はIL-10を産生するもの）中のSIK1及び／又はSIK2及び／又はSIK3の阻害よりも優先的に、増殖性障害に関与する細胞（例えば、腫瘍細胞）中のSIK3を阻害することができる。
【００５１】
SIK3阻害剤は、特にSIK3を阻害するのに有効であり、及び／又は増殖性障害に関与する細胞を細胞性免疫応答に感作するのに有効な量（用量等）で被験体に投与することができる。かかる投与に好適な量、配合物及び手段は、本明細書の他の部分に記載される。
【００５２】
特定の実施形態では、SIK3阻害剤はSIK3、好ましくは増殖性障害に関与する細胞中の（細胞の）SIK3の活性を低減するのに有効な量（治療有効量等）で投与される。かかる実施形態では、SIK3阻害剤の「治療有効量」は、SIK3の活性を適用可能なレベルまで低減することが可能であるが、SIK3阻害剤の他の活性に対して顕著な（例えば、許容不能な）副作用又は過剰投与を引き起こさない量であり得る。
【００５３】
特定のかかる実施形態では、例えば、かかるSIK3阻害剤の量は、増殖性障害に関与する細胞中の（細胞の）ABL1及び／又はSRCキナーゼ等のABL1及び／又はSRCキナーゼの活性を低減するのに有効でない量であり得る。例としては（本明細書の表4に示される活性を参照して）、SIK3を阻害するのに有効な量でダサチニブを投与した場合、その主要なキナーゼ標的（ABL及びSRC）も、恐らくはダサチニブの過剰投与、又はABL及び／又はSRCの過剰阻害によってもたらされる副作用等の他の副作用が生じる程度にまで阻害され得る。理論に束縛されるものではないが、実際に、生化学的な（及び／又は親和性の）観点から、ダサチニブは、in vivoで同じ細胞中のABL及び／又はSRCを阻害することなくSIK3を阻害することができない可能性があり、かかる細胞に存在する任意のABL又はSRCは、細胞中のダサチニブ（の大部分）をダサチニブがSIK3阻害剤として（効果的に）作用し続けない程度にまで隔離する可能性がある。したがって、或る特定の実施形態では、ダサチニブはin vivoで、例えば増殖性障害（disorder）に関与する細胞中で作用する場合に、本発明の文脈におけるSIK3阻害剤でないとみなされる場合がある。他の或る特定の実施形態では、本発明の文脈におけるAS1阻害剤は、AS1をダサチニブより強く阻害することができ、及び／又はABL及び／又はSRCキナーゼをダサチニブより弱く阻害することができる。例えば、本発明の文脈における好ましいAS1阻害剤は、AS1を約100 nM、50 nM、25 nM又は10 nM未満（約25 nM未満等）の（生化学的）IC50で阻害することができ、ABL及びSRCを、それぞれ約25 nM、50 nM、100 nM又は500 nM超（約100 nM超等）のIC50で阻害し、いずれの場合にも、かかるIC50は、実施例11又は13）に記載される生化学キナーゼアッセイと類似の方法を用いて決定することができる。
【００５４】
いずれの場合にも好ましくは増殖性障害に関与する細胞中の（細胞の）SIK3、ABL及び／又はSRCキナーゼに関して、SIK3の活性が効果的に阻害（低減）され、及び／又はABL及び／又はSRCの活性が効果的に阻害（低減）されないのが好ましい。例えば、「有効な」阻害（又は低減）は、活性（activity）が生理的効果を有する程度（又はそのレベルにまで）（例えば、治療有効レベルにまで）低下する阻害（又は低減）、例えばそれぞれのキナーゼの活性の約10%、20%、50%又は50%超、例えば70%又は90%の低減を含み得る。SIK3については、かかる低減の1つが治療応答を誘発するのに望ましい場合がある。ABL及び／又はSRCについては、所望の低減レベルは、SIK3の低減に所望されるよりも低いレベルであり得る。
【００５５】
「免疫細胞」という用語は、生物、特にヒト等の哺乳動物の免疫系に関与する、かかる生物の任意の細胞を表すことが当該技術分野で認識される。白血球（Leukocytes (white blood cells)）は、自然免疫系に関与する免疫細胞であり、適応免疫系の細胞は、リンパ球として知られる特別な型の白血球である。B細胞及びT細胞が主要なリンパ球の型であり、骨髄中の造血幹細胞に由来する。B細胞は液性免疫応答に関与するが、T細胞は細胞性免疫応答に関与する。本発明の好ましい実施形態では、免疫細胞は骨髄細胞、例えばT細胞であり得る。特に（例えば癌を治療するために、細胞性免疫応答の増大が必要とされる場合等）、T細胞は細胞傷害性T細胞（TC、細胞傷害性Tリンパ球、CTL、T-キラー細胞、細胞傷害性T細胞、CD8+ T細胞又はキラーT細胞としても知られる）であり得る。CTLは癌細胞、（特にウイルスに）感染した細胞、又は他の方法で損傷を受けた細胞の死滅に関与するT細胞である。かかる実施形態に好ましい他の免疫細胞としては、腫瘍浸潤性リンパ球（TIL）を挙げることができる。TILは、血流から出て、腫瘍内に移動した白血球である。通例、TILは、様々な割合での異なる型の細胞（すなわち、T細胞、B細胞、NK細胞、マクロファージ）の混合であり、T細胞が最も豊富な細胞である。TILは多くの場合、間質中及び腫瘍自体に見ることができ、腫瘍細胞の死滅に関わる。腫瘍におけるリンパ球の存在は、より良好な臨床転帰と関連することが多い。
【００５６】
「細胞性免疫応答」という用語は、本明細書で使用される場合、T細胞の成熟、増殖、活性化、移動、浸潤及び／又は分化、及び／又はマクロファージ、ナチュラルキラー細胞、Tリンパ球（又はT細胞）、ヘルパーTリンパ球、メモリーTリンパ球、サプレッサーTリンパ球、制御性Tリンパ球及び／又は細胞傷害性Tリンパ球（CTL）の活性化／調節／移動／浸潤、及び／又はサイトカイン若しくはオータコイド（特に、TNF等の炎症性サイトカイン）等の1つ以上の細胞が分泌可能な若しくは細胞が分泌する因子の産生、放出及び／又は効果、及び／又はかかるプロセスのいずれかの1つ以上の構成要素（例えば、サイトカイン又はオータコイド、特にTNF等の炎症性サイトカイン）のいずれか1つ又は組合せが関与する、それを用いる、及び／又はそれを促進する宿主生物における応答を含み得るが、これに限定されない。「細胞性免疫応答」という用語は、本明細書で使用される場合、遺伝子操作され、in vitroで培養された自己、異種、改変及び／又は移入Tリンパ球が関与する細胞応答を含み得るか、又は遺伝子操作によって作製される、細胞が分泌可能な又は細胞が分泌する因子（例えば、サイトカイン又はオータコイド、特にTNF等の炎症性サイトカイン）を含み得る。細胞性免疫応答は、抗体の放出を伴う免疫応答等の液性免疫応答でないのが好ましい。或る特定の実施形態では、特に増殖性障害が癌又は腫瘍である場合、細胞性免疫応答は抗腫瘍細胞性免疫応答、例えば腫瘍（細胞）成長の低減をもたらす免疫応答、例えば癌又は腫瘍の細胞を死滅させる細胞傷害性細胞性免疫応答（細胞傷害性T細胞及び／又はTNF曝露等）である。
【００５７】
或る特定の実施形態では、細胞が媒介する細胞性免疫応答はインターロイキン-1（IL-1）、IL-12及びIL-18、腫瘍壊死因子（TNF）、インターフェロンγ（IFN-γ）、並びに顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子からなる群から選択されるもの等の炎症性サイトカインを分泌することが可能な（例えば、分泌する）免疫細胞等の細胞によって媒介され得る。特定のかかる実施形態では、炎症性サイトカインは腫瘍壊死因子（TNF）（α）である。
【００５８】
他の実施形態では、細胞性免疫応答は、細胞が分泌可能な又は細胞が分泌する因子（サイトカイン又はオータコイド等）、特に免疫細胞が分泌可能な又は分泌する因子であり得る。特定のかかる実施形態では、細胞性免疫応答は炎症性サイトカイン、特に腫瘍壊死因子（TNF）である。
【００５９】
「感作する」、「感作」及び「感作するため」（等）という用語は、本明細書において細胞性免疫応答に感作される細胞（複数の場合もある）との関連で使用される場合、かかる細胞が、細胞性免疫応答がかかる細胞に対して有し得る1つ以上の効果（例えば、治療効果）に対する感受性の増大を示すことができると当業者によって理解され、そのような意味を含む。特に、そのように感作された細胞は、細胞性免疫応答の存在下で（例えば、細胞性免疫応答に曝露されて）、そのように「感作」されていない類似の細胞よりも容易に（例えば、より急速に、死ぬ又は死滅する細胞の割合がより大きく、及び／又はより少ない細胞性免疫応答の量若しくは曝露により）死滅させることができる。例えば、そのように感作された細胞（複数の場合もある）は、より少数のT細胞又はより低濃度のTNF（例えば約10%、20%、30%、40%、50%又は50%超少ないT細胞又は低い濃度のTNF）への曝露により細胞死（例えば、アポトーシス）を誘導することができる。かかる細胞が細胞性免疫応答に（どの程度）感作されたかを決定する方法は本明細書、例えば実施例中に記載される。したがって、本発明の或る特定の実施形態では、増殖性障害に関与する細胞は、細胞性免疫応答（CTL又は炎症性サイトカイン、例えばTNF等）によって（例えば、アポトーシスの開始による）細胞死／死滅に感作することができる。
【００６０】
本明細書で開示される発明との関連での「腫瘍壊死因子」及び「TNF」という用語（以前は、ひいては代替的には腫瘍壊死因子α及びTNF-αとして知られる）は、当該技術分野においてこれらの明示的意味で知られる任意のタンパク質を指すことが理解されるものとする。特に、TNFという用語は、かかるTNFが存在する任意の生物、好ましくは動物、又はヒト等の哺乳動物の内因性TNFを包含する。例としては、限定されるものではないが、ヒトTNFは、特にPennica et al. 1984 (Nature 312: 724-9)に、またエントリ番号P01375（例えば、2017年3月15日のエントリバージョン224）でUniProtKB/Swiss-Protデータベースに開示される内因性タンパク質、並びにヒト集団間及びヒト集団内の正常な配列多型によるその任意の配列変異体を包含し得る。更なる非限定的な例としては、この用語はウシ（Q06599）、イヌ（P51742）、ヤギ（P13296）、モルモット（P51435）、ネコ（P19101）、ウマ（P29553）、マウス（P06804）、チンパンジー（Q8HZD9）、ブタ（P23563）、ウサギ（P04924）、ラット（P16599）等についてUniProtKB/Swiss-Protデータベースに注釈付けされた内因性TNFタンパク質、並びにそれぞれの種の集団間及び集団内の配列多型によるその任意の配列変異体を包含し得る。さらに、TNFという用語は、その単量体形態、及び好ましくは、通例より活性の高い三量体形態を含む、TNFの可溶性の分泌サイトカイン形態を特に包含する（例えば、Smith & Baglioni 1987. J Biol Chem 262: 6951-4を参照されたい）。可溶型の内因性TNFの一次アミノ酸配列は、例示したそれぞれの生物についての上述のUniProtKB/Swiss-Protデータベースエントリに示される。加えて、TNFという用語は、幾つかの細胞型の表面上に発現される膜結合型のTNFも包含し得る（例えば、Kriegler et al. 1988. Cell 53: 45-53を参照されたい）。さらに、TNFという用語は、例えばTatusova & Madden 1999 (FEMS Microbiol Lett 174: 247-250)に記載される「Blast 2 sequences」アルゴリズムを用いて決定されるように、一次アミノ酸配列が内因性TNFの配列と同一又は実質的に同一（「実質的に同一」は、本明細書全体を通して使用される場合、概して80%以上、例えば85%以上、好ましくは90%以上、より好ましくは95%以上、更により好ましくは98%以上又は99%以上の配列同一性を指す）であり、（好ましくは）例えばFlick & Gifford 1984（J Immunol Methods 68：167-75）に記載される細胞傷害性試験を用いて決定されるように、それぞれの内因性TNFと同一又は実質的に同一の生物活性を保持する合成又は組換えタンパク質も包含し得る。本発明の態様及び実施形態の文脈から見てとれるように、TNFという用語は特に、本明細書では細胞、組織、器官又は生物、好ましくはヒトによって産生される可溶性及び／又は膜結合型、好ましくは可溶性の内因性TNFを指す場合がある。それにもかかわらず、外因性形態の腫瘍壊死因子、特に組み換え技術によって作製される腫瘍壊死因子も「TNF」という用語によって想定され、或る特定の実施形態では、本発明の様々な態様及び実施形態において被験体に投与するか、又は細胞に曝露する若しくは細胞と接触させることができる。或る特定のかかる実施形態では、TNFは、タソネルミン（BEROMUN）等の治療剤として使用される組換えTNFであり得る。
【００６１】
或る特定の実施形態では、細胞性免疫応答はリンパ球（例えば、T細胞）、特に細胞傷害性Tリンパ球（CTL）等の炎症性サイトカイン分泌細胞によって媒介され得る。
【００６２】
特定の実施形態では、細胞性免疫応答は、増殖性障害に関与する細胞の死滅（例えば、アポトーシスによるような細胞死）を誘導することができる。例えば、治療（方法）は、細胞性免疫応答によりかかる増殖性障害に関与する細胞の死滅を誘導することを含み得る（例えば、それを伴い得る）（又はそれによって行われる）。
【００６３】
増殖性障害に関与する細胞は、1つ以上の細胞傷害過程、特にプログラム細胞死（PCD）等のかかる細胞に内在的な細胞傷害過程によって死滅させる（例えば、細胞死へと誘導する）ことができる。細胞死過程としては、ネクローシス（特にネクロトーシス）、アポトーシス、アノイキス、オートファジー、フェロトーシス、分裂期細胞死及び活性化誘導細胞死を挙げることができるが、これらに限定されない。或る特定の好ましい実施形態では、増殖性障害に関与する細胞（例えば、腫瘍細胞）は、細胞性免疫応答（例えば、TNFによる）によりアポトーシスへと誘導することができる。更なる実施形態では、SIK3阻害剤は、細胞性免疫応答の非存在下で（例えば、TNFの非存在下で）かかる細胞を死滅させないように投与される。特定のかかる更なる実施形態では、SIK3阻害剤は、細胞性免疫応答の非存在下でかかる細胞を死滅させるのに有効でない量（例えば、用量）で投与することができる。本明細書の実施例では、かかる細胞を細胞性免疫応答の存在下でのみ死滅させるのに有効なSIK3阻害剤の量を決定することができる様々なアッセイを記載する。
【００６４】
他の特定の実施形態では、細胞性免疫応答には少なくとも1つの免疫細胞エフェクター分子、特に免疫細胞が分泌可能な又は分泌するエフェクター分子が関与し得る。特定のかかる実施形態では、エフェクター分子は炎症性サイトカイン、好ましくは腫瘍壊死因子（TNF）であり得る。
【００６５】
或る特定の実施形態では、エフェクター分子は、Fasリガンド（FasL又はCD95L）及びTNF関連アポトーシス誘導リガンド（TRAIL、CD253又はTNFSF10）から選択される細胞エフェクター分子ではない。
【００６６】
本発明の特定の実施形態では、SIK3阻害剤は、増殖性障害に関与する細胞をTNFによって誘導される死滅に（効果的に）感作する目的で（又はそのために）（例えば、それに有効な量又は用量で）被験体に投与することができる。例えば、SIK3阻害剤は、増殖性障害に関与する細胞をTNFによって誘導される死滅（細胞死）に感作するのに有効な量等の治療有効量で投与することができる。
【００６７】
例えば、SIK3阻害剤は、例えばかかる細胞がTNFの存在下にある又はTNFと接触する場合に、TNFによって媒介されるかかる細胞のアポトーシスを誘導するように（例えば、それに有効な量又は用量で）被験体に投与することができる。更なる実施形態では、SIK3阻害剤は、細胞傷害性（例えば、アポトーシス）の量の低減を誘導するように、例えばTNFの非存在下でかかる細胞の死滅（例えばアポトーシス）を誘導しないように（例えば、それに有効な量又は用量で）被験体に投与することができる。例えば、SIK3阻害剤は、細胞傷害性（例えばアポトーシス）に有効でない、例えばTNFの非存在下でかかる死滅を誘導するのに有効でない量又は用量で投与することができる。
【００６８】
TNFは、腫瘍壊死因子受容体1（TNFR1）及び／又は腫瘍壊死因子受容体2（TNFR2）への結合及び／又はそれを介したシグナル伝達によりアポトーシス促進過程を誘導することができる。したがって、或る特定の実施形態では、SIK3阻害剤は、増殖性障害に関与する細胞を腫瘍壊死因子受容体1（TNFR1）シグナル伝達及び／又は腫瘍壊死因子受容体2（TNFR2）シグナル伝達によって媒介されるアポトーシスに（効果的に）感作するように（例えば、それに有効な量又は用量で）被験体に投与することができる。好ましくは、SIK3阻害剤は、増殖性障害に関与する細胞をそれにより媒介される、特にTNFR1によって媒介されるアポトーシスに（効果的に）感作するように（例えば、それに有効な量又は用量で）被験体に投与することができる。例えば、SIK3阻害剤は、TNFR1シグナル伝達及び／又はTNFR2シグナル伝達、及び／又はそれにより媒介されるアポトーシスを媒介するのに有効な治療有効量で投与することができる。
【００６９】
例えば、或る特定の実施形態では、SIK3阻害剤は、TNFR1シグナル伝達及び／又はTNFR2シグナル伝達による、例えば活性TNFR1シグナル伝達によるかかる細胞のアポトーシスを誘導するように（例えば、それに有効な量又は用量で）投与することができる。特定のかかる実施形態では、SIK3阻害剤は、細胞傷害性（例えば、アポトーシス）の量の低減を（効果的に）誘導するように、例えばTNFR1シグナル伝達及び／又はTNFR2シグナル伝達の非存在下、例えば活性TNFR1シグナル伝達の非存在下でかかる細胞のアポトーシスを誘導しないように（例えば、それに有効な量又は用量、例えば治療有効量で）被験体に投与することができる。例えば、SIK3阻害剤は、かかるシグナル伝達の非存在下で、細胞傷害性（例えば、アポトーシス）に有効でない、例えばかかるアポトーシスを誘導するのに有効でない量又は用量（dose）で投与することができる。
【００７０】
したがって、或る特定の実施形態では、SIK3阻害剤は、細胞傷害性（例えば、アポトーシス）の量の低減を誘導するように、例えば細胞性免疫応答の非存在下で増殖性障害に関与する細胞に対して細胞傷害性でないように（例えば、それに有効な量又は用量で）被験体に投与することができる。
【００７１】
特定の実施形態では、SIK3阻害剤は、治療中に被験体の腫瘍のサイズが増大しても被験体に投与し続けることができる。理論に束縛されるものではないが、かかる治療中の腫瘍サイズの増大は、腫瘍の細胞に対する（増強した）免疫反応を示し得る（例えば、細胞が細胞性免疫応答に感作された）。したがって、SIK3阻害剤は、かかる実施形態では、かかる感度及び関連の（増強した）免疫反応を維持するために投与し続けることができる。
【００７２】
本発明者らは、SIK3の阻害が、驚くべきことにアポトーシス等の細胞が元より備えている細胞傷害過程の制御及び／又は誘発に関与するものを含む多数の重要な生物学的過程又は表現型と関連することを本明細書において実証する。例えば、本発明者らは実施例において、腫瘍細胞を、肝臓キナーゼB1（LKB1、STK11又はNY-REN-19）、ヒストン脱アセチル化酵素4（HDAC4）、活性化B細胞の核因子κ軽鎖エンハンサー（NF-κB）、並びにカスパーゼ8及びカスパーゼ9等のNF-κBによって調節されるアポトーシス促進遺伝子を含むそれらの経路及び構成要素を介して作用する、SIK3の阻害によるTNFのアポトーシス効果に感作することができることを初めて実証する。c-Jun N末端キナーゼ（JNK）がSIK3の阻害によるTNFのアポトーシス効果への感作と関連するシグナル伝達の構成要素であることも実証する。
【００７３】
本実施形態（及び適用可能な場合に他の実施形態）の文脈での「と関連する」という用語は、2つの構成要素、可変要素、効果若しくは表現型が互いに関係すること、及び／又はそれらが互いに関連する（例えば、互いに相関する）こと、及び／又は第1及び第2の構成要素、可変要素、効果若しくは表現型の間に因果関係（causative link）が見られること（例えば、第2のものが第1のものに応答する、第2のものが第1のものの結果である、又は第2のものが第1のものによって引き起こされる）ことを意味し得る。
【００７４】
したがって、かかる実施形態の1つでは、SIK3阻害剤の投与は、増殖性障害に関与する細胞における（例えば、核外へのNF-κBの移動の増強又は増大による）NF-κB活性の障害と関連し得る。
【００７５】
特定のかかる実施形態では、（例えば、核外へのNF-κBの移動の増強による）NF-κB活性のかかる障害は、かかる細胞における（活性化）TNF媒介シグナル伝達及び／又はTNFR1媒介シグナル伝達（又はTNFR2媒介シグナル伝達）と関連し得る。
【００７６】
或る特定の実施形態では、SIK3阻害剤は、増殖性障害に関与する細胞におけるNF-κB活性を減じるか又は阻害するように、例えばかかる細胞の核外へのNF-κBの移動を増強又は増大するように（例えば、それに有効な量又は用量で）被験体に投与することができる。例えば、SIK3阻害剤は、増殖性障害に関与する細胞におけるNF-κB活性を（効果的に）減じるのに有効な（例えば、治療有効）量、特に増殖性障害に関与する細胞の核外へのNF-κBの移動を（効果的に）増強又は増大するのに有効な量で被験体に投与することができる。
【００７７】
代替的な又は更なる実施形態では、SIK3阻害剤の投与は、増殖性障害に関与する細胞における、特にかかる細胞におけるTNF媒介シグナル伝達及び／又はTNFR1媒介シグナル伝達（又はTNFR2媒介シグナル伝達）によるクラスII（例えば、IIa）HDAC、例えばHDAC4の活性、例えばかかる細胞の核へのその移動若しくは局在化、又は核におけるその活性の増大と関連し得る（例えば、その活性を増大するように、例えばそれに有効な量又は用量でSIK3阻害剤を投与する）。
【００７８】
他の代替的な又は更なる実施形態では、SIK3阻害剤の投与は、特に増殖性障害に関与する細胞におけるTNF媒介シグナル伝達及び／又はTNFR1媒介シグナル伝達（又はTNFR2媒介シグナル伝達）による核NF-κBの脱アシル化（例えば、そのp65サブユニットでの脱アシル化）及び／又は1つ以上の抗アポトーシス因子のトランス活性化の減少と関連し得る。例えば、SIK3阻害剤は、核NF-κBの（例えば、そのp65サブユニットでの）脱アシル化及び／又は1つ以上の抗アポトーシス因子のトランス活性化の減少をもたらすように（例えば、それに有効な量又は用量で）投与することができる。
【００７９】
別の代替的な又は更なる実施形態では、SIK3阻害剤の投与は、増殖性障害に関与する細胞における、特にかかる細胞におけるTNF媒介シグナル伝達及び／又はTNFR1媒介シグナル伝達（又はTNFR2媒介シグナル伝達）によるカスパーゼ（Caspase）8及び／又はカスパーゼ9の切断の増大と関連し得る（例えば、それを増大するように、例えばそれに有効な量又は用量でSIK3阻害剤を投与する）。
【００８０】
また他の代替的な又は更なる実施形態では、SIK3阻害剤の投与は、特に増殖性障害に関与する細胞におけるTNF媒介シグナル伝達及び／又はTNFR1媒介シグナル伝達（又はTNFR2媒介シグナル伝達）による1つ以上の抗アポトーシス因子の転写の低減、例えばかかる細胞における1つ以上のNF-κB標的遺伝子の転写の低減と関連し得る。特に、SIK3阻害剤は、特に増殖性障害に関与する細胞におけるTNF媒介シグナル伝達及び／又はTNFR1媒介シグナル伝達（又はTNFR2媒介シグナル伝達）による1つ以上のかかる抗アポトーシス因子の転写を低減するように（例えば、それに有効な量又は用量で）投与される。
【００８１】
一実施形態では、SIK3阻害剤の投与は、増殖性障害に関与する細胞における、特にかかる細胞におけるTNF媒介シグナル伝達及び／又はTNFR1媒介シグナル伝達（又はTNFR2媒介シグナル伝達）によるJNK活性化（例えば、リン酸化による）の増大と関連し得る（例えば、それを増大するように、例えばそれに有効な量又は用量でSIK3阻害剤を投与する）。
【００８２】
別の実施形態では、SIK3阻害剤の投与は、CREB経路のシグナル伝達の顕著な変化、及び／又はCREB及び／又はCREB調節によって媒介される遺伝子発現の顕著な変化と関連しない場合もある。
【００８３】
特定の実施形態では、増殖性障害に関与する細胞におけるTNF（TNFR2）媒介シグナル伝達及び／又はTNFR1媒介シグナル伝達は、かかる細胞中のpLKB1のレベルの増大と関連し得る。
【００８４】
ここで、本発明の知識を与えられた当業者に明らかなように、本発明の治療態様は、1つ以上の上記のこれらの他の経路構成要素の発現、活性、機能又は安定性を、治療効果に相加的又は相乗的に寄与するように適切に変更する1つ以上の他の部分を投与する工程を更に含み得る。例えば、かかる実施形態の1つでは、本発明の治療態様は、（特に、SIK3阻害剤がLKB1の阻害剤でない場合に）LKB1の阻害剤を投与する工程を更に含み得る。別のかかる実施形態では、本発明の治療態様は、増殖性障害に関与する細胞の核内の、HDAC4等の1つ以上のクラスII（例えばIIa）HDAC（ヒストン脱アセチル化酵素）を促進、増強又は増加させる化合物を投与する工程を更に含み得る。また別のかかる実施形態では、本発明の治療態様は、NF-κB（活性化）の阻害剤を投与する工程を更に含み得る。本発明では、2つ以上のかかる他の部分の組合せをSIK3阻害剤と共に治療に使用することができること、及び／又は他の（例えば、抗癌）治療活性剤をSIK3阻害剤と共に使用することも想定される。
【００８５】
第2の態様では、本明細書で更に説明、規定、特許請求されるか、又は他の形で開示され得るように、本発明は、増殖性障害に関与する細胞を細胞性免疫応答に感作させる方法であって、増殖性障害に関与する細胞をSIK3阻害剤に曝露する（例えば、接触させる）ことを含む、方法に関する。かかる方法は通例、in vitro及び／又はex vivo方法として実施することができる。
【００８６】
特定の実施形態では、細胞性免疫応答は、増殖性障害に関与する細胞を死滅させることを含み、例えば該死滅はTNF媒介シグナル伝達、TNFR2媒介シグナル伝達及び／又はTNFR1媒介シグナル伝達に関わる。例えば、かかる細胞の死滅はTNF媒介シグナル伝達、TNFR2媒介シグナル伝達及び／又はTNFR1媒介シグナル伝達によって誘導されるかかる細胞のアポトーシスに関わる場合がある。本発明の様々な態様のこの及び他の適用可能な実施形態において、TNFR2媒介シグナル伝達及び／又はTNFR1媒介シグナル伝達は、TNF、TNFの変異体、及び／又はTNFR2若しくはTNFR1アゴニスト等の任意の適切な誘発分子によって、特に増殖性障害と関連する細胞を誘発分子（例えばTNF、TNF変異体又はTNFR1アゴニスト）に曝露する（例えば、接触させる）ことによって誘発（例えば、活性化）することができる。かかる曝露は、TNFR2及び／又はTNFR1への誘発分子（例えばTNF、TNF変異体又はTNFR1アゴニスト）の結合、特にTNFR1シグナル伝達の誘発（例えば、活性化）をもたらし得る。
【００８７】
第3の態様では、本明細書で更に説明、規定、特許請求されるか、又は他の形で開示され得るように、本発明は、増殖性障害に関与する細胞を死滅させる方法であって、増殖性障害に関与する細胞を（i）TNF、TNF変異体、及び／又はTNFR1シグナル伝達若しくはTNFR2シグナル伝達（好ましくは、TNFR1シグナル伝達）のアゴニストに曝露する（例えば、接触させる）ことと、増殖性障害に関与する細胞を（ii）SIK3阻害剤に曝露する（例えば、接触させる）こととを含む、方法に関する。当業者に理解されるように、かかる方法は通例、in vitro及び／又はex vivo方法として実施することができる。
【００８８】
関連の第3の態様では、本発明は、増殖性障害に関与する細胞の死滅を伴う増殖性疾患の治療への使用のためのSIK3阻害剤であって、治療がかかる細胞を（i）TNF、TNF変異体及び／又はTNFR1若しくはTNFR2アゴニスト、並びに（ii）SIK3阻害剤に曝露することを含む、SIK3阻害剤に関する。
【００８９】
かかる第3の態様の特定の実施形態では、増殖性障害に関与する細胞の死滅は、かかる細胞を細胞性免疫応答に感作すること、特にTNF、TNFR2及び／又はTNFR1媒介シグナル伝達に関わる、かかる細胞のアポトーシスに対する感受性を誘導することによってもたらされる。
【００９０】
増殖性障害に関与する細胞（複数の場合もある）はTNF、TNF変異体、及び／又はTNFR1アゴニスト若しくはTNFR2アゴニストに、細胞をかかる誘発分子に接触させることによって曝露することができ、及び／又はかかる細胞（複数の場合もある）は、かかる細胞（複数の場合もある）とSIK3阻害剤とを接触させる（又はSIK3阻害剤を細胞に導入する）ことによって、SIK3阻害剤に曝露することができる。（i）TNF、TNF変異体、及び／又はTNFR1アゴニスト若しくはTNFR2アゴニスト、及び／又は（ii）SIK3阻害剤の量（又は用量）は通例、有効量であり、これは例えば、細胞（複数の場合もある）をTNF媒介シグナル伝達、TNFR2媒介シグナル伝達及び／又はTNFR1媒介シグナル伝達によって誘導されるアポトーシス（例えば、アポトーシスによるかかる細胞（複数の場合もある）の死滅）に感作するのに有効な量（又は用量）である。本発明のこれらの態様にSKI3阻害剤の更なる特定の特性であるとして組み込まれ得る、これらの活性剤の好適な量（又はそれを決定する方法）は、他の部分に開示される。したがって、或る特定の実施形態では、（i）TNF、TNF変異体、及び／又はTNFR1アゴニスト若しくはTNFR2アゴニスト、並びに（ii）SIK3阻害剤は、増殖性障害を患う被験体に投与することができる（例えば、治療は、被験体への（i）TNF、TNF変異体、及び／又はTNFR1アゴニスト若しくはTNFR2アゴニスト、並びに（ii）SIK3阻害剤の投与を含み得る）。
【００９１】
増殖性障害に関与する細胞（複数の場合もある）は、本明細書の他の部分に記載される細胞とすることができ、特に、かかる細胞（複数の場合もある）は、癌性又は腫瘍細胞とすることができる。例えば、かかる細胞（複数の場合もある）は、固形腫瘍の又は固形腫瘍に由来する細胞とすることができる。
【００９２】
これらの第2及び第3の態様の或る特定の実施形態では、方法はin vitro（及び／又はex vivo）方法である。かかる方法の代替的な実施形態では、増殖性障害に関与する細胞（複数の場合もある）（腫瘍細胞等）は、かかる被験体、特にその治療を必要とする被験体内に存在する。
【００９３】
これらの第1、第2及び第3の（及びそれらの関連の）態様の方法の更なる実施形態では、（例えば、増殖性障害に関与する細胞（複数の場合もある）に対する）かかる方法の（治療）効果は、SIK3を阻害すること、特にSIK3 mRNA又はタンパク質（例えば、リン酸化SIK3タンパク質、及び／又は本明細書の他の部分に記載されるSIK3タンパク質）の発現、量、機能、活性及び／又は安定性を阻害することによってもたらすことができる（例えば、治療がそれを含み得る、それを伴い得る又はそれによって行われ得る）。特に、かかる実施形態では、SIK3活性は、（例えば、効果的に）低減される、例えば治療有効レベルにまで低減される。
【００９４】
これらの第1、第2及び第3の（及びそれらの関連の）態様の方法のまた更なる実施形態では、（例えば、増殖性障害に関与する細胞（複数の場合もある）に対する）かかる方法の（治療）効果は、Abl及び／又はSRCキナーゼを阻害すること、Abl及び／又はSRCキナーゼ又はタンパク質の発現、量、機能、活性及び／又は安定性を（効果的に）阻害することによってもたらされない場合がある（例えば、治療がそれを含まない、それを伴わない又はそれによって行われない場合がある）。特定のかかる実施形態では、ABL1及び／又はSRCの活性は、（効果的に）低減されない、例えば治療有効レベルにまで低減されない。
【００９５】
かかる方法の或る特定の実施形態では、（例えば、かかる有効な量又は用量の）SIK3阻害剤の非存在下では、増殖性障害に関与する細胞（複数の場合もある）（腫瘍細胞（複数の場合もある）等）は、TNF媒介シグナル伝達、TNFR2媒介シグナル伝達及び／又はTNFR1媒介シグナル伝達、及び／又は（例えば、有効な量又は用量の）TNF、TNF変異体、TNFR2アゴニスト又はTNFR1アゴニストへの曝露により、死滅しない又はアポトーシスの開始が誘導されない（例えば、それらは増殖する）。
【００９６】
上記のように、これらの方法の或る特定の実施形態では、SIK3阻害剤は、増殖性障害に関与する細胞（複数の場合もある）（例えば、腫瘍細胞）中の（増殖性障害に関与する細胞の）SIK3を阻害することができる。特定のかかる実施形態では、SIK3阻害剤は、かかる細胞中の（かかる細胞の）SIK1及び／又はSIK2の阻害よりも優先的に、かかる細胞（複数の場合もある）中の（かかる細胞の）SIK3を阻害することができ、及び／又は1つ以上の型の免疫細胞中の（免疫細胞の）SIK1及び／又はSIK2及び／又はSIK3の阻害よりも優先的に、かかる細胞中のSIK3を阻害することができる。例えば、SIK3阻害剤は、マクロファージ及び／又は樹状細胞（特に、IL-10を産生することが可能な又は産生するもの）中の（マクロファージ及び／又は樹状細胞の）SIK1及び／又はSIK2及び／又はSIK3の阻害よりも優先的に、増殖性障害に関与する細胞（複数の場合もある）（例えば、腫瘍細胞）中の（増殖性障害に関与する細胞の）SIK3を阻害することができる。特定の実施形態では、（治療）効果は、増殖性障害に関与する細胞（複数の場合もある）（例えば、腫瘍細胞）中の（増殖性障害に関与する細胞の）SIK3の阻害によってもたらされ（例えば、治療は、SIK3の阻害を含む、それを伴う又はそれによって行われる）、更なるかかる実施形態では、（治療）効果はSIK2、特に他の細胞（増殖性障害に関与する細胞又は免疫細胞等）中の／他の細胞のSIK2を阻害することによってもたされず（又は効果は、SIK2を阻害しないことによってもたされる）（例えば、治療は、SIK2を阻害することを含まない、それを伴わない又はそれによって行われない）、及び／又は（治療）効果はSIK1、特に他の細胞（増殖性障害に関与する細胞又は免疫細胞等）中の／他の細胞のSIK1を阻害することによってもたされない（又は効果は、SIK1を阻害しないことによってもたされる）（例えば、治療は、SIK1を阻害することを含まない、それを伴わない又はそれによって行われない）。
【００９７】
したがって、上記の点からも理解されるように、他の或る特定の実施形態では、他の細胞（特に増殖性障害に関与する細胞、又は免疫細胞）中の、又は他の細胞（特に増殖性障害に関与する細胞、又は免疫細胞）のABL及び／又はSRCは、阻害されない場合がある。
【００９８】
したがって、一実施形態では、増殖性障害に関与する細胞（複数の場合もある）の（例えば、増殖性障害に関与する細胞（複数の場合もある）中の）SIK3が阻害される。別の（又は更なる）実施形態では、SIK2、特にCTL等の免疫細胞の（例えば、免疫細胞中の）SIK2は、（例えば、増殖性障害に関与する細胞（複数の場合もある）中の）SIK3よりも低い程度まで阻害される。また別の（又は更なる）実施形態では、SIK1、特にCTL等の免疫細胞の（例えば、免疫細胞中の）SIK1は、かかるSIK3よりも低い程度まで阻害される。
【００９９】
所与のSIK（SIK1又はSIK2等）は、例えば他のSIK（SIK3等）が所与のSIKよりも約2倍多い量、例えば所与のSIKよりも約5倍、10倍、20倍、50倍、75倍又は100倍多い量で阻害される場合に、別のSIK（SIK3等）よりも「低い程度」まで阻害され得る。特に、他のSIK（SIK3等）は、所与のSIKの約5倍〜20倍、20倍〜50倍又は50倍〜100倍の量で阻害され得る。例えば、SIK3は、SIK1及び／又はSIK2の約20倍〜50倍阻害され得る。例としては、SIK3阻害剤は、SIK3を80%（すなわち、その非阻害活性の僅か20%を有するように）阻害することができるが、SIK1を僅か4%、SIK2を僅か8%しか阻害しない。したがって、SIK3は、SIK1の約20倍、またSIK2の10倍阻害される。特定の実施形態では、SIK3がSIK1とほぼ同じ程度まで阻害される場合があり（例えば、互いに約2倍〜53倍）、SIK2は、SIK3及びSIK1のいずれか（又は両方）よりも低い程度まで阻害される。例えば、かかる実施形態では、SIK3及びSIK1は、（例えば、免疫細胞中の）SIK2が阻害されるよりも約20倍〜50倍阻害される。
【０１００】
SIK阻害剤を用いた他の研究とは対照的に、本発明に従うSIK3阻害剤による治療は、或る特定の実施形態では、1つ以上の抗炎症性サイトカイン（例えば、抗炎症性サイトカインはIL-1ra、IL-4、IL-10、IL-11、IL-13及びTGF-βからなるリストから選択されるものであり得る）の産生の（有効な）増大と関連しない場合があり、特にIL-10の産生の（有効な）増大と関連しない場合がある。それに応じて、他の又は更なる実施形態では、本発明に従うSIK3阻害剤による治療は、1つ以上の炎症性サイトカイン、例えばIL-1-β、IL-6、IL-12及びTNF、IFN-γ及び顆粒球マクロファージコロニー刺激因子からなるリストから選択される炎症性サイトカインの産生の（有効な）減少と関連しない場合があり、特定の実施形態では、TNFの産生の（有効な）減少と関連しない場合がある。したがって、或る特定の実施形態では、SIK3阻害剤は、（i）1つ以上の（例えば、かかる）抗炎症性サイトカインの産生を（効果的に）増大するのに有効でない（治療有効）量、及び／又は（ii）1つ以上の（例えば、かかる）炎症性サイトカインの産生を（効果的に）減少させるのに有効でない（治療有効）量で被験体に投与することができる。
【０１０１】
増殖性障害に関与する或る特定の細胞（例えば、腫瘍細胞）は、或る特定の実施形態では、本発明の様々な態様におけるSIK3阻害剤の感作効果の影響をより受けやすいことが予想され得る。例えば、かかる細胞は、TNFR2シグナル伝達及び／又はTNFR1シグナル伝達の活性化、特にTNFR1の活性化を示す（例えば、それを受ける）細胞であり得る。或る特定の実施形態では、かかる細胞は、TNFR2及び／又はTNFR1を発現する細胞、特にTNFR1を発現する腫瘍細胞である。したがって、或る特定の実施形態では、かかる細胞は、TNFR1シグナル伝達及び／又はTNFR2シグナル伝達の活性化によって区別される又はそれを特徴とする（又は被験体は、そのように区別される又は特徴付けられる、増殖性障害に関与する細胞、例えば腫瘍細胞を有することによって区別される又はそれを特徴とする）。（例えば、被験体の）かかる細胞におけるTNFR1活性化及び／又はTNFR2活性化の状態を、例えばTNFR1シグナル伝達経路及び／又はTNFR2シグナル伝達経路における1つ以上の下流タンパク質を検出又はモニタリングすることによって決定する技法が当業者に知られている。かかるタンパク質は本明細書の他の部分に記載され、NF-κB及び／又はHDAC4を含む。
【０１０２】
関連の一態様では、本発明は、SIK3を阻害することによって被験体における増殖性障害（腫瘍等）を治療する方法であって、（治療）方法がSIK3阻害剤を被験体に投与することを含み、増殖性障害に関与する細胞がTNFR2及び／又はTNFR1シグナル伝達の活性化（例えば、TNFR1シグナル伝達の活性化）を特徴とする（例えば、それを示す又はそれを受ける）、方法に関する。別の関連の態様では、本発明は、増殖性障害の治療への使用のためのSIK3阻害剤であって、増殖性障害に関与する細胞が、TNFR2及び／又はTNFR1シグナル伝達の活性化（例えば、TNFR1シグナル伝達の活性化）によって区別される又はそれを特徴とする（例えば、それを示す又はそれを受ける）、SIK3阻害剤に関する。
【０１０３】
本発明の様々な態様の或る特定の実施形態では、増殖性障害に関与する細胞は、TNF、TNFの変異体、及び／又はTNFR2シグナル伝達若しくはTNFR1シグナル伝達のアゴニスト（好ましくは、TNFR1シグナル伝達のアゴニスト）等の適切な誘発又は活性化分子に曝露される細胞であり、特に有効量のかかる誘発又は活性化分子に曝露される。
【０１０４】
特定の実施形態では、誘発又は活性化分子がTNFである場合、これはヒトTNFである。或る特定のかかる実施形態では、TNFは組換えヒトTNF（rHuTNF）である。しかしながら、他の実施形態では、TNFは内因性TNF、例えば被験体（例えば、ヒト患者）によって産生されるか、さもなければ被験体内に存在する内因性TNFである。
【０１０５】
血漿TNFレベルが卵巣癌における場合を含む多数の型の癌において上昇し、例えばQuantikine human TNF-α Immunoassay PDTA00Cを用いて測定されるように、健常被験体における総TNFの正常上限が1.8 pg/mLであることが研究から示されている（Dobrzycka et al 2009, Eur Cytokine Netw 20:131）。他の癌及びアッセイ（例えば、TNF-α-EASIA Kit（DIAsource））では、食道癌患者及び対照群のTNF血漿レベルは、それぞれ12.35±9.69 pg/mL及び4.62±3.06 pg/mLであった（Aydin et al 2012, Turk J Med Sci 42:762）。したがって、他の実施形態では、増殖性障害に関与する細胞（例えば、腫瘍）は、（例えば、Quantikine human TNF-α Immunoassay PDTA00C又はTNF-α-ELISA Kit（DIAsource）によって測定されるように）約1.5 pg/mL、2.5 pg/mL又は4 pg/mLを超える、例えば約5 pg/mLを超える、特に約10 pg/mLを超えるTNFの血漿濃度を有する被験体内に存在する細胞である。
【０１０６】
したがって、特定の一実施形態では、本発明の治療方法に関わる被験体は、約2 pg/mLを超える又は約5 pg/mLを超えるTNFの血漿濃度を有し得る（すなわち、かかる被験体は、この血漿濃度を示す、有する（possessing）又は呈することによって区別する、例えば本発明の治療法に好適な被験体として区別することができる）（例えば、増殖性障害に関与する細胞は、約2 pg/mL又は5 pg/mLを超えるTNFの血漿濃度を有する被験体内に存在する細胞である）。
【０１０７】
実際に、増殖性障害が腫瘍であるこれらの実施形態では、TNFの腫瘍内濃度は、例えば腫瘍が固形腫瘍であり、生検のためにアクセス可能である場合に腫瘍の特性評価となり得る（Reissfelder et al 2015, J Clin Inv 125:739）。例えば、腫瘍（固形腫瘍、例えば大腸癌等）は、本発明の幾つかの実施形態では、（例えば、Quantikine human TNF-α Immunoassayによって測定されるように）約0.2 pg/mL、0.5 pg/mL又は1 pg/mLを超える、例えば約2 pg/mLを超える、特に約5 pg/mLを超えるTNFの腫瘍内濃度（例えば、腫瘍組織内での）を有し得る。
【０１０８】
したがって、かかる実施形態では、増殖性障害が腫瘍（例えば、固形腫瘍）である場合、（例えば、被験体内の）固形腫瘍は、（約）0.5 pg/mLを超える又は約1 pg/mLを超えるTNFの腫瘍内濃度を有し得る（すなわち、かかる被験体は、この腫瘍内濃度を示す、有する又は呈することによって区別する、例えば本発明の治療法に好適な被験体として区別することができる）。
【０１０９】
したがって、関連の態様では、本発明は、（i）約2 pg/mLを超える（好ましくは約5 pg/mLを超える）TNFの血漿濃度、及び／又は（ii）約0.5 pg/mLを超える（好ましくは約1 pg/mLを超える）TNFの腫瘍内濃度を有することによって区別される被験体における増殖性障害の治療方法（又はかかる治療への使用のためのSIK3阻害剤）であって、SIK3阻害剤を被験体に投与することを含み、SIK3阻害剤が（a）増殖性障害に関与する細胞中のSIK3を阻害し、及び／又は（b）増殖性障害に関与する被験体内の細胞を細胞性免疫応答に感作する、治療方法に関し得る。
【０１１０】
特定のかかる実施形態では、増殖性障害に関与する細胞に曝露されるか、又は被験体に投与されるSIK3阻害剤の量（又は用量）は、TNFの血漿又は腫瘍内濃度と関連があり（例えば、それと相関がある）、TNFの血漿又は腫瘍内濃度がより高い場合に、より多い量（又は用量）のSIK3阻害剤をかかる細胞に曝露する（又はかかる被験体に投与する）。
【０１１１】
他の又は更なる実施形態では、腫瘍は、例えばINF-γ ELISPOTによって決定され得るように、末梢血又は骨髄中に腫瘍反応性T細胞を有する被験体内に存在し得る。また他の又は更なる実施形態では、腫瘍はTreg、CD4+ Tconv及び／又はCD8+ T細胞による浸潤を示す。
【０１１２】
他の実施形態では、増殖性障害に関与する細胞は、TNFの発現及び癌感度の増大と関連するTNFのプロモーター領域内に一塩基多型（SNP）を含む、例えばTNFのプロモーター領域中の-308G/A SNPにAA又はGA遺伝子型を有する。代替的な実施形態では、腫瘍は、TNFの発現の減少及び癌リスクの低下と関連するSNPを含まない、例えば-238G/A SNP又は-857T対立遺伝子（いずれの場合にもTNFのプロモーター領域中）にAA又はGA遺伝子型を含まない（Wang and Lin 2008, Acta Pharmacol Sin 28:1275）。
【０１１３】
本発明は、SIK3活性がTNFの細胞障害効果に対する細胞の感度に影響を与える可能性があるという本発明者らの驚くべき研究結果に基づく代替的な併用治療計画を本明細書により提供する。したがって、第4の態様では、本明細書で更に説明、規定、特許請求されるか、又は他の形で開示され得るように、本発明は、被験体における増殖性障害を治療する方法であって、被験体内の増殖性障害に関与する細胞を（i）TNF、TNF変異体、及び／又はTNFR2シグナル伝達若しくはTNFR1シグナル伝達のアゴニストに曝露する（例えば、接触させる）ことと、被験体内の増殖性障害に関与する細胞を（ii）SIK3阻害剤に曝露する（例えば、接触させる）こととを含む、方法に関する。或る特定の実施形態では、かかる方法の工程（i）は、被験体内の増殖性障害に関与する細胞をTNF変異体に曝露する（例えば、接触させる）ことを含まない。
【０１１４】
或る特定の実施形態では、増殖性障害及び／又はかかる細胞は、腫瘍のものであり、他の実施形態では、構成要素（i）はTNF、特にヒトTNF（rHuTNF等）であり、及び／又は構成要素（i）は、TNFR1シグナル伝達のアゴニストである。
【０１１５】
特定の実施形態では、方法は、被験体内の増殖性障害に関与する細胞に曝露するTNFの量を増加させることを含む（例えば、治療がそれを含む、それを伴う又はそれによって行われる）。
【０１１６】
かかる態様の或る特定の実施形態では、治療は、被験体内の増殖性障害に関与する細胞中の（細胞の）TNFR1シグナル伝達及び／又はTNFR2シグナル伝達を増大することを含む場合がある（例えば、それを伴う又はそれによって行われる）。したがって、関連の態様では、本発明は、被験体における増殖性障害を治療する方法であって、（i）増殖性障害に関与する細胞中の（細胞の）TNFR1シグナル伝達及び／又はTNFR2シグナル伝達を増大することと、（ii）被験体内の増殖性障害に関与する細胞をSIK3阻害剤に曝露する（例えば、接触させる）こととを含む、方法に関する。
【０１１７】
特に、方法は例えば、特に、例えばTNFR1又はTNFR2へのTNF、TNF変異体及び／又はTNFR1アゴニストの結合によるTNFR1シグナル伝達及び／又はTNFR2シグナル伝達の活性化の結果（複数の場合もある）と組み合わせた、SIK3阻害（例えばSIK3、例えばリン酸化SIK3の発現、量、機能、活性及び／又は安定性の阻害）の結果（複数の場合もある）によって達成することができる。
【０１１８】
したがって、治療効果は、或る特定の実施形態では、SIK3を阻害すること、及び／又は増殖性障害に関与する細胞をTNFR1シグナル伝達又はTNFR2シグナル伝達の細胞傷害性（例えば、アポトーシス）効果に感作することを要するか、又はそれによって媒介される（例えば、引き起こされる）場合がある。特定のかかる実施形態では、SIK3活性は、例えば治療有効レベルにまで（効果的に）低減することができる。
【０１１９】
上記のように、腫瘍細胞中のSIK3が阻害され、任意にSIK2及び／又はSIK1、例えば免疫細胞のSIK2又はSIK1が、より低い程度まで阻害される実施形態も本明細書で想定される。
【０１２０】
また、上記のように、（x）治療が、SIK3活性が（例えば、効果的に）低減する、例えば治療有効レベルまで低減するようなSIK3活性の阻害を含む、それを伴う又はそれによって行われ（例えば、SIK3阻害剤を、SIK3活性の阻害に有効な治療有効量等の量で投与する）、及び／又は（y）治療が、Abl及び／又はSRCキナーゼ活性が（例えば、効果的に）低減しない、例えば治療有効レベルまで低減しないようなAbl及び／又はSRCキナーゼの阻害を含む、それを伴う又はそれによって行われる（例えば、SIK3阻害剤を、Abl及び／又はSRCキナーゼの阻害に有効でない治療有効量等の量で投与する）実施形態も本明細書で想定される。
【０１２１】
かかる態様の或る特定の実施形態では、被験体にSIK3阻害剤を投与することができ、及び／又はTNF、TNF変異体、又はTNFR1シグナル伝達若しくはTNFR2シグナル伝達のアゴニストを投与することができる。
【０１２２】
かかる実施形態では、SIK3阻害剤及びTNF、TNF変異体、又はTNFR1アゴニスト若しくはTNFR2アゴニストは、例えば本明細書の他の部分に記載されるような配合物又は投与経路（administrative routes）にて、有効量（又は用量）で曝露する（例えば、投与する）ことができる。TNF、TNF変異体、又はTNFR1アゴニスト若しくはTNFR2アゴニストをリポソーム配合物又は他のナノ粒子配合物としてカプセル化する実施形態が特に想定される。
【０１２３】
TNF、TNF変異体、又はTNFR1アゴニスト若しくはTNFR2アゴニストを曝露／投与し、SIK3阻害剤を曝露／投与する場合、かかる併用治療計画は、かかる曝露／投与が同時である実施形態を含み得る。代替的な実施形態では、かかる曝露／投与は、順次であり得る。特定のこれらの実施形態では、TNF、TNF変異体、又はTNFR1アゴニスト若しくはTNFR2アゴニストを曝露／投与する前にSIK3阻害剤を曝露／投与する。例えば、SIK3阻害剤は、他の構成要素の約14日以内（例えば、前）、例えば他の構成要素の約10日、7日、5日、2日又は1日以内（例えば、前）に順次曝露／投与することができ、SIK3阻害剤を他の構成要素の約48時間、24時間、12時間、8時間、6時間、4時間、2時間、1時間、30分、15分又は5分以内（例えば、前）に順次曝露／投与することができる場合も更に挙げられる。
【０１２４】
TNF若しくはTNF変異体、又はTNFR1アゴニスト若しくはTNFR2アゴニストは、s.c.、i.v.又はi.m.等の従来の経路によって投与することができ、或る特定の実施形態については、腫瘍内に又は分離肝灌流（IHP）等の分離式肢灌流（ILP）によって投与することができ、及び／又は約5 μg/m2/日〜500 μg/m2/日の用量でそのように投与することができる（特に、rHuTNFをそのように投与することができる）。例えば、TNFは、約25 μg/m2/日〜250 μg/m2/日、例えば約50 μg/m2/日〜150 μg/m2/日若しくは約75 μg/m2/日〜100 μg/m2/日投与することができ、又はTNFは、s.c.投与する場合に約50 μg/m2/日〜75 μg/m2/日のMTDまで投与することができるか、若しくはi.v.若しくはi.m.投与する場合に約150 μg/m2/日〜200 μg/m2/日のMTDまで投与することができる。したがって、特定のかかる実施形態では、TNFは約5 μg/m2/日〜500 μg/m2/日、特に約20 μg/m2/日〜200 μg/m2/日の用量で被験体に投与することができる。
【０１２５】
特定の実施形態では、rHuTNFよりも高い抗腫瘍活性及び低い全身毒性を有するTNF変異体等のTNFの変異体を曝露／投与することができる。例えば、TNF変異体は、（i）TNFの-K90R変異体、（ii）TNFにコンジュゲートした腫瘍ホーミングペプチド及び（iii）TNF-抗体コンジュゲートからなる群から選択されるTNF変異体であり得る。
【０１２６】
TNF変異体が関与する本発明のこれらの実施形態では、TNF変異体は、より高い細胞傷害活性及びより低い全身毒性を有するTNFの変異体形態であり得る。
【０１２７】
他の実施形態では、抗TNFR1モノクローナル抗体htr-9（Ferrero et al 2001, Am J Physiol Cell Physiol 281:C1173）等のTNFR1アゴニスト又はTNFR2アゴニストを曝露／投与することができ、他の実施形態ではリンホトキシン-α（Etemadi et al 2013, FEBS J 280:5283）又はその変異体を曝露／投与することができる。
【０１２８】
代替的な実施形態では、増殖性障害に関与する細胞（例えば、腫瘍細胞）は、かかる細胞の（例えば、内因性）TNF、又はTNFの変異体、若しくはTNFR1アゴニスト若しくはTNFR2アゴニスト等の別の誘発分子への曝露をもたらし得る、（例えば、かかる細胞を有する被験体への）作用物質の投与によりTNF（又は増大したTNFR1シグナル伝達及び／又はTNFR2シグナル伝達）に曝露することができる。かかる作用物質は例えば、かかる細胞の（例えば上昇したレベルの）TNFへの曝露を誘導することが可能な（例えば、誘導する）作用物質、特にかかる細胞のTNFレベル、例えば有効量の（例えば、内因性）TNF、例えば本明細書の他の部分に記載されるこれらのレベルの1つよりも高い血漿又は腫瘍内TNFのレベルへの曝露を誘導する作用物質であり得る。
【０１２９】
したがって、本発明は、被験体に増殖性障害に関与する細胞のTNF、TNF変異体、又はTNFR1シグナル伝達若しくはTNFR2シグナル伝達のアゴニストへの曝露を誘導することが可能な（例えば、誘導する）作用物質を投与する、これらの実施形態を含む。本発明は、被験体が、被験体内の増殖性障害に関与する細胞のTNFR1シグナル伝達（及び／又はTNFR2シグナル伝達）を増大し、及び／又は細胞に曝露するTNFの量を増大することが可能な作用物質を投与される、これらの実施形態も含む。
【０１３０】
或る特定のかかる実施形態では、作用物質はウイルス、特にTNF、TNF変異体、又はTNFR1アゴニスト若しくはTNFR2アゴニストである誘発分子を産生するように改変したウイルス（特に、ヒトTNFを産生するように改変したウイルス）である。更なるかかる実施形態には、かかるウイルスが増殖性障害に関与する細胞（複数の場合もある）（例えば、腫瘍細胞）に選択的に感染し、及び／又はかかる細胞の状況で（例えば、感染した場合に）誘発分子を選択的に産生する実施形態が含まれる。ここで明らかなように、かかるウイルスの投与は、増殖性障害に関与する細胞（複数の場合もある）のかかる誘発分子、特に有効量のTNF等のかかる誘発分子への曝露をもたらし得る。
【０１３１】
したがって、或る特定のかかる方法では、作用物質は、増殖性障害に関与する細胞（複数の場合もある）のTNF、TNF変異体、又はTNFR1シグナル伝達若しくはTNFR2シグナル伝達のアゴニストへの曝露を誘導することが可能な（例えば、誘導する）ウイルスであり得る。
【０１３２】
かかるウイルスは、誘発分子の曝露を誘導するのに好適な任意のウイルスであってもよく、特に組換えウイルス、例えば腫瘍細胞に感染し、及び／又は（例えば、腫瘍細胞に感染した後に）TNFを発現するように改変したウイルスであってもよい。そのように改変することができるウイルスの例としては、腫瘍溶解性ウイルス（例えばアデノウイルス、HSV、ワクシニアウイルス、水疱性口内炎ウイルス又はニューカッスル病ウイルスをベースとするウイルス）、例えばTNFを含む炎症性サイトカイン及びケモカインの血漿レベルを増大するためのアデノウイルスベクターの腫瘍内注射が挙げられる（Bernt et al 2005, Cancer Res 65:4343）。特定のかかる実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスは、Kaufman et al 2015 (Nature Rev Drug Disc 14:642)の表1に記載されるDNAウイルスをベースとするウイルス、Kaufman et al 2015の表2に記載されるRNAウイルスをベースとするウイルスであってもよく、好ましくは臨床試験中であるとしてKaufman et al 2015の表3に記載される腫瘍溶解性ウイルスである。
【０１３３】
他のかかる実施形態では、投与される（結果として、TNF、TNF変異体、又はTNFR1アゴニスト若しくはTNFR2アゴニストである誘発分子への増殖性障害に関与する細胞の曝露をもたらす）作用物質は、免疫細胞である。或る特定のかかる実施形態では、免疫細胞は、IL10産生マクロファージでなくてもよく、例えば免疫細胞は、炎症誘発性免疫細胞であってもよい。特定のかかる実施形態では、投与される免疫細胞はリンパ系細胞、例えばT細胞又はナチュラルキラー（NK）細胞、例えばTNFを産生する細胞であり得る。
【０１３４】
本発明のかかる実施形態において作用物質として投与される場合、免疫細胞は、（例えば、注入又は他の送達法による）被験体への免疫細胞の移入を意味する養子細胞移入（ACT）によって投与することができる。かかるプロセスは通例、被験体における免疫機能性及び特性を改善することを目的に行われ、慣例では移入免疫細胞は同じ被験体を起源とするが、代替的には別の（好適な）個体に由来するものであってもよい。
【０１３５】
本発明のこの実施形態において使用される場合、免疫細胞は、本発明の治療法のように被験体から抽出され、遺伝的に改変され、in vitroで培養され、同じ被験体に戻されたT細胞であってもよい。かかる遺伝子改変は、免疫細胞の特異性又は標的化、例えば増殖性障害に関与する細胞（複数の場合もある）（例えば、腫瘍細胞）への免疫細胞の標的化（例えば、その特異性を増大する）を増強するものを含み得る。例えば、かかる実施形態において使用されるT細胞は、T細胞受容体（TCR）の特異性を変更するか、又は抗体様認識をキメラ抗原受容体（CAR）に導入するように改変することができる。特に、CAR免疫細胞がかかる実施形態への使用に想定される。CAR免疫細胞は、（例えば、腫瘍細胞に対する）任意の特異性を免疫エフェクター細胞（例えば、T細胞）に結び付ける、改変された受容体を示す免疫細胞である。通例、これらの受容体は、レトロウイルスベクターによって容易になるそれらのコード配列の移入により、モノクローナル抗体の特異性をT細胞に結び付けるために用いられる。CAR T細胞は、癌の有望な療法である（Song et al 2015, Oncotarget. 6:21533）。ACTを用いて、T細胞を個体（通例、被験体）から摘出し、患者の特定の癌に特異的な受容体を発現するように改変する。これにより被験体の癌細胞を認識することができる、これらのT細胞を、被験体に（再）導入し、TNF（例えば、CAR T細胞によって産生される）の腫瘍細胞への曝露、ひいてはかかる細胞、特に（例えば、SIK3阻害剤の被験体への投与後の）SIK3阻害剤への曝露によりかかるTNF媒介（mediated）細胞傷害性に感作される、かかる細胞の死滅をもたらす。したがって、特定のかかる実施形態では、免疫細胞はCAR T細胞、例えば増殖性障害に関与する被験体の細胞（腫瘍細胞等）に対する特異性が増大するように改変されたCAR T細胞であり得る。
【０１３６】
代替的な実施形態では、増殖性障害に関与する細胞のTNF（例えば、内因性TNF）への曝露は、他の手段又は手順によって誘導することができる。したがって、かかる実施形態では、増殖性障害に関与する細胞の（例えば、有効量の）TNFへの曝露は、被験体の血漿中及び／又はかかる細胞の環境内のTNFの量を増加させる薬学的手順、治療的手順又は他の手順によって誘導することができる（及び／又は増殖性障害に関与する細胞中の／細胞のTNFR1シグナル伝達（及び／又はTNFR2シグナル伝達）の増大が、それによって誘導される）。
【０１３７】
或る特定の実施形態では、このような誘導されるTNFへの曝露は、癌免疫療法の実施によって生じさせることができる。
【０１３８】
一例では、このような誘導されるTNFへの曝露は、抗腫瘍ワクチン（例えば、癌ワクチン）によって生じる。かかる癌ワクチンとしては、それによって抗原（例えば、癌細胞に特異的な又は癌細胞によって選択的に発現される抗原）を、癌細胞に（より）特異的であることが想定される、被験体における免疫応答（通例、適応免疫応答）を生じる又は増大するように被験体に直接又は間接的に導入するものが挙げられる。癌ワクチンは、例えば弱毒化ウイルス、特にかかるウイルス（例えば、HPV又はHBV）に起因する子宮頚癌又は肝癌等の癌に対して使用される弱毒化ウイルスを含み得る。癌ワクチンは代替的には、個々（又は組合せ）の特定の腫瘍抗原（例えば、癌細胞に特異的な又は癌細胞によって選択的に発現される抗原）、例えば同様に被験体における免疫応答を生じる又は増大するように被験体を免疫化するために使用される腫瘍関連抗原（TAA）を再現できる。癌ワクチンは、TAA（複数の場合もある）を再現する組換えタンパク質（例えば、それに由来するペプチド）を含んでいてもよく、又は腫瘍特異的炭水化物抗原であってもよく、したがって投与時に被験体に直接導入される。癌ワクチンは代替的には、タンパク質（又はペプチド）TAAをコードする核酸（DNA又はmRNA等）を含んでいてもよく、被験体への核酸ワクチンの投与の際に、コードされるTAAが被験体内の細胞標的によって発現され、したがって被験体に間接的に導入される。TAAは、共通の腫瘍抗原及び独自の腫瘍抗原という2つのカテゴリーに分けることができる。共通抗原は、多くの腫瘍によって発現される。独自の腫瘍抗原（ネオアンチゲンとしても知られる）は、物理的又は化学的発癌性物質によって誘導される突然変異に起因するため、個々の腫瘍によってのみ発現される。臨床試験中の又は使用が承認された癌ワクチンの例は、当業者に認識され、PROSTVAC（BavarianNordic）、PROVENGE（Dendreon）及びCV9104（CureVac）が挙げられる。また、様々なTAA（ネオアンチゲンを含む）及びかかる腫瘍抗原によるアプローチを癌ワクチンに用いることができることも当業者に認識される。更なる例としては、（1）キーホールリンペットヘモシアニン（KLH）とコンジュゲートした腫瘍抗原としてのレシピエント由来のクローン骨髄腫免疫グロブリンイディオタイプ（Id）による免疫化が、相当量の炎症性サイトカイン（TNFを含む）を生じることが示されていること（Foglietta et al 2013, Bone Marrow Transplant 48: 269）、並びに（2）WT1抗原の合成ミクロコンセンサス（micro-consensus）SynCon DNAワクチンが、自然WT1 DNA免疫原によって誘導されるものを上回る、強いCD4及びCD8 T細胞応答（IFN-γ、CD107a及びTNF応答を含む）等の新たなネオアンチゲン様応答を誘導したことが挙げられる。
【０１３９】
別の例では、このような誘導されるTNFへの曝露は、リガンド（抗体、例えばモノクローナル抗体等）、例えば増殖性障害に関与する細胞（複数の場合もある）（腫瘍細胞等）の表面に、例えばかかる細胞の表面上のTAA又は受容体への結合によって結合するリガンドの投与によって生じさせることができる。細胞表面受容体は、かかるリガンド（抗体）療法の一般的な標的であり、CD52及びCD20を含む。かかる癌抗原に結合すると、例えば抗体は、抗体依存性細胞媒介細胞傷害性を誘導するか、補体系を活性化するか、又は受容体がそのリガンドと相互作用するのを妨げることができ、これら全てが細胞死をもたらし得る。抗体である、承認されたかかるリガンドとしては、アレムツズマブ、オファツムマブ及びリツキシマブが挙げられる。或る特定の実施形態では、SIK3阻害剤と組み合わせて使用されるかかるリガンドとして、T細胞又は他の細胞性免疫応答を活性化するものを挙げることができる。例えば、（1）抗CD137モノクローナル抗体は、サイトカイン誘導キラー（CIK）細胞の増殖及びTNFの発現を劇的に促進することができ（Zhu et al 2009, Biomed Pharmacother 63:509）、（2）アゴニスト抗OX40モノクローナル抗体は、T細胞分化を増すことによって抗腫瘍免疫応答を増強することができる（Redmond et al 2014, Cancer Immunol Res. 2014, 2:142）。
【０１４０】
また別の例では、被験体に投与されるリガンドは、免疫（阻害性）チェックポイント分子に結合するリガンドである。例えば、かかるチェックポイント分子は、A2AR、B7-H3、B7-H4、CTLA-4、IDO、KIR、LAG3、PD-1（又はそのリガンドであるPD-L1及びPD-L2の1つ）、TIM-3（又はそのリガンドであるガレクチン-9）、TIGIT及びVISTAからなる群から選択されるものであり得る。特定のかかる実施形態では、リガンドはCTLA-4、PD-1及びPD-L1から選択されるチェックポイント分子に結合する。他のより特定の実施形態では、リガンドはイピリムマブ、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、BGB-A317、アテゾリズマブ、アベルマブ及びデュルバルマブ（durvalumab）からなる群から選択される抗体、特にイピリムマブ（YERVOY）、ニボルマブ（OPDIVO）、ペムブロリズマブ（KEYTRUDA）及びアテゾリズマブ（TECENTRIQ）からなる群から選択される抗体である。他の実施形態では、免疫（阻害性）チェックポイント分子に結合するリガンドは、高親和性PD-1変異体（例えば、Maute et al, 2015; PNAS 112:E6506）、免疫チェックポイント分子を標的とするペプチド（Aurigene Discovery TechnologiesのAUNP-12等、米国特許国際公開第2011/0318373号）又は免疫チェックポイント分子間の相互作用を遮断するDペプチド（PDL1-PD1相互作用及び(D)PPA-1等、Chang et al, 2015; Anyeg Chem Int 54:11760）等の非抗体ペプチドであり得る。また他の実施形態では、免疫（阻害性）チェックポイント分子に結合するリガンドは、PDL1を標的とするBMS-202若しくはBMS-8（Zak et al ,2016; Oncotarget 7:30323）、BMS-1001若しくはBMS-1166として知られるPDL1/D1の阻害剤（Skalniak et al, 2017; Oncotarget 8:72167）、第1相試験段階であるCuris/AurigenのPDL1及びVISTAアンタゴニストCA-170（Powderly et al, Ann Onc 28: Issue suppl 5, mdx376.007）、又はPDL1及びTIM3を標的とするCuris/AurigenのCA-327等の小分子であり得る。
【０１４１】
また別の特定の実施形態では、このような誘導されるTNFへの曝露は、放射線療法によって生じさせることができる。
【０１４２】
放射線療法は、癌細胞の増殖する能力を遮断することによって癌細胞を破壊し、及び／又は癌細胞に対する免疫反応（死んだ又は死につつある癌細胞の存在に対する応答として生じるもの）を刺激するために放射線を用いる癌又は腫瘍の局所領域治療の方法である。本発明の文脈における放射線療法は、特に電離放射線の治療的使用からなる。該放射線療法及び関連の電離放射線は、一般に使用され、当業者に既知のものである。放射線療法としては、特に電離放射線、例えばγ線、X線及び／又は放射性同位体から発生する放射線の使用が挙げられる。本発明の文脈において、これはより特にX線放射である。放射線療法は、1回以上のサイクル、例えば1週間〜4週間の範囲、より特に3週間であり得るサイクル中に分割形態で実施することができる。サイクルは、投与スキームの最初と最後との間の間隔を規定する。サイクルに3週間かかる場合、放射線療法は、1週間の間隔を空けて3週間にわたって実施することができる。放射線療法は特に、所望の数の週にわたって7日のうち5日に1日1回の照射の割合で実施することができる。（光子）放射線療法に用いられる放射線の量は、グレイ（Gy）で測定され、治療される癌の型及び病期に応じて異なる。治療の場合には、固形上皮性腫瘍に典型的な線量は60 Gy〜80 Gyの範囲であるが、リンパ腫は20 Gy〜40 Gyで治療される。
【０１４３】
SIK3阻害剤を併用治療においてかかる他の手順（例えば、いずれの場合にも本明細書に記載されるような他の作用物質、癌免疫療法、癌ワクチン、抗体又は放射線療法）のいずれかと共に使用する場合、かかる併用治療計画は、かかる曝露／投与が同時である実施形態を含み得る。代替的な実施形態では、かかる投与は、順次であり得る。特定のこれらの実施形態では、かかる他の手順の前にSIK3阻害剤を曝露／投与する。例えば、SIK3阻害剤は、他の手順の約14日以内（例えば、前）、例えば他の手順の約10日、7日、5日、2日又は1日以内（例えば、前）に順次投与することができ、SIK3阻害剤を他の手順の約48時間、24時間、12時間、8時間、6時間、4時間、2時間、1時間、30分、15分又は5分以内（例えば、前）に順次投与することができる場合も更に挙げられる。
【０１４４】
理論に束縛されるものではないが、TNF、TNF変異体、若しくはTNFR1アゴニスト若しくはTNFR2アゴニストの投与前、又はかかる他の手順（例えば、他の作用物質、癌免疫療法、癌ワクチン、抗体又は放射線療法）の実施前のSIK3阻害剤の投与（ひいては、例えば腫瘍細胞におけるSIK3の発現、量、機能、活性又は安定性の阻害）は、増殖性障害に関与する細胞を細胞性免疫応答の細胞障害効果に感作する上で特に有効であることが予測される。
【０１４５】
上記のように、TNFの投与及び／又は抗TNF分子の使用を伴う既存の療法（又は臨床試験段階にある療法）には、或る特定の既知の不利点及び特定の副作用がある。本発明は、かかる不利点及び／又は特定の副作用を軽減（又は低減）するために用いることができる方法を提供する。
【０１４６】
第5の態様では、本明細書で更に説明、規定、特許請求されるか、又は他の形で開示され得るように、本発明は、増殖性障害（例えば、癌疾患又は腫瘍）に対してTNFによる治療を受けている被験体におけるTNFによる治療の治療指数を増大する方法であって、SIK3の阻害剤を被験体に投与することを含む、方法に関する。
【０１４７】
関連の態様では、本発明は、増殖性障害（例えば、癌疾患又は腫瘍）を患う被験体においてTNF療法を補助する方法であって、SIK3の阻害剤を被験体に投与することを含む、方法に関する。
【０１４８】
第6の態様では、本明細書で更に説明、規定、特許請求されるか、又は他の形で開示され得るように、本発明は、増殖性障害（例えば、癌疾患又は腫瘍）を患う被験体を被験体へのTNFの投与を伴う療法に感作する方法であって、SIK3の阻害剤を被験体に投与することを含む、方法に関する。「感作」（等）という用語は、本明細書において療法（例えば、TNFの投与を伴う療法）に感作される被験体との関連で使用される場合、当業者によって理解され、1つ以上の（治療）効果、特にかかる療法が被験体に対して有し得る効能効果への被験体の感受性が増大するという意味を含む。特に、そのように感作された被験体は、かかる療法を受ける場合に、そのように「感作」されていない類似の被験体よりも増大した（例えば、より急速に、応答の程度がより大きく、及び／又はより少ないかかる療法の量若しくは曝露により）応答を示すことができる。
【０１４９】
第7の態様では、本明細書で更に説明、規定、特許請求されるか、又は他の形で開示され得るように、本発明は、抗TNF剤による治療を受けている被験体において（続発性障害として）血液学的増殖性障害の（を発症する）リスクを低下させる方法であって、SIK3の阻害剤を被験体に投与することを含む、方法に関する。例えば、かかる態様は代替的には、抗TNF剤による治療を受けている被験体における（続発性障害としての）血液学的増殖性障害を予防する方法であって、SIK3の阻害剤を被験体に投与することを含む、方法とみなすことができる。
【０１５０】
本発明のこの態様は、抗TNF生物製剤を服用している患者がリンパ腫及び他の血液学的悪性疾患を発症することが報告されるという上記の観察結果に基づく。実際に、かかる障害は通例、抗TNF剤による治療の起こり得る（が、稀な）副作用として添付文書／処方（prescribing）情報に記載される。認識される血液学的悪性疾患の増加、並びにこれら及び他の免疫抑制剤の広範な使用の直接的な結果として、現在では腫瘍のWHO分類に「医原性免疫不全関連リンパ増殖性疾患（iatrogenic immunodeficiency-associated lymphoproliferative disease）」というカテゴリーが含まれている。
【０１５１】
したがって（Therefore）、かかる態様では通例、被験体は、増殖性障害以外の適応症について抗TNF剤による治療を受けており、特定のかかる実施形態では、被験体は、抗TNF治療の開始時に血液学的増殖性障害を患っていない。実際に、通例、被験体は自己免疫障害、好ましくは関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、尋常性乾癬、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、乾癬、化膿性汗腺炎及び難治性喘息からなる群から選択される自己免疫障害、例えば関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、尋常性乾癬及びクローン病からなる群から選択されるもの、特に関節リウマチを患い、及び／又はそれについて抗TNF剤による治療を受けている。
【０１５２】
或る特定の実施形態では、抗TNF剤はインフリキシマブ、アダリムマブ、ゴリムマブ、フミケード、エタネルセプト、オネルセプト及びセルトリズマブペゴル、特にインフリキシマブ又はフミケードからなるリストから選択される抗TNF剤である。
【０１５３】
或る特定の実施形態では、血液学的悪性疾患増殖性障害はリンパ増殖性疾患、特に医原性免疫不全関連リンパ増殖性疾患であり得る。
【０１５４】
かかる第5〜第7の態様の或る特定の実施形態では、（治療）効果（例えば、治療指数の増大、被験体の感作、又はリスクの低下）は、（i）SIK3を阻害すること（例えばSIK3、例えばリン酸化SIK3の発現、量、機能、活性及び／又は安定性の阻害による）、特に増殖性障害に関与する細胞中のSIK3を阻害すること、及び／又は（ii）かかる細胞をTNFの死滅効果に感作するによってもたらされる（例えば、治療がそれを含む又は伴う）。更なる実施形態では、（治療）効果は、SIK2及び／又はSIK1を阻害することによってもたらされない場合があり（例えば、治療がそれを含まない又は伴わない場合がある）、特に免疫細胞中のSIK2及び／又はSIK1（及び／又はSIK3）を阻害することによってもたらされない（例えば、治療がそれを含まない又は伴わない）。
【０１５５】
本発明の又は本発明で使用されるSIK3阻害剤：
SIK3阻害剤がSIK3に特異的（例えば、選択的）（例えば、SIK3特異的阻害剤）であり得る実施形態が本発明の全ての態様に含まれる。
【０１５６】
特定のかかる実施形態では、SIK3阻害剤は、SIK2及び／又はSIK1、及び／又はABL若しくはSRCキナーゼ等の1つ以上の他のキナーゼ（例えば、その発現、量、機能、活性及び／又は安定性）（特に、リン酸化SIK2及び／又はリン酸化SIK1の機能又は活性）を阻害するよりも強くSIK3（例えば、その発現、量、機能、活性及び／又は安定性）（特に、リン酸化SIK3の機能又は活性）を阻害し得る。したがって、或る特定の実施形態では、SIK3阻害剤は、ABL1及び／又はSRCキナーゼを阻害するよりも強くSIK3を阻害する。
【０１５７】
SIK3阻害剤は、SIK3阻害剤がSIK2の阻害よりも優先的に及び／又はSIK1よりもSIK3を阻害する場合、SIK3に「特異的」（例えば、「選択的」）であるか、又はSIK3を「より強く」阻害するとみなすことができる。或る特定のかかる実施形態では、SIK3阻害剤は、Abl、Src及び／又はBcr-Ablを含むが、これらに限定されない1つ以上の他のセリンチロシンキナーゼ（STK）の阻害よりも優先的にSIK3を阻害する。例えば、SIK3特異的阻害剤（例えば、選択的SIK3阻害剤）は、所与の他のSIK（又はSTK）に対するその効力よりも約2倍高い効力、例えば所与の他のSIK（又はSTK）に対するよりも約5倍、10倍、20倍、50倍、100倍、200倍、500倍又は1000倍強力な効力でSIK3を阻害することができる。特に、SIK3阻害剤は、所与の他のSIK（又はSTK）に対するその効力よりも約50倍〜500倍、10倍〜200倍又は50倍〜1000倍の量でSIK3に対して強力であり得る。例えば、SIK3阻害剤は、SIK1及び／又はSIK2に対するよりも約20倍〜500倍の量でSIK3に対して強力であり得る。他の実施形態では、SIK3阻害剤は、例えば本段落に記載される倍量（又はその範囲）でSIK1及び／又はSIK2阻害のIC50よりも低いSIK3阻害のIC50を示す。例としては、SIK3阻害剤は、約2 nMのIC50でSIK3を阻害することができるが、SIK1を100 nMのIC50でしか阻害せず、SIK2を200 nMのIC50でしか阻害しない。したがって、かかるSIK3阻害剤は、SIK1よりも50倍強く、SIK2よりも100倍強くSIK3を阻害する。
【０１５８】
或る特定の実施形態では、SIK3阻害剤は、増殖性障害に関与する細胞中のSIK3を阻害する。例えば、SIK3阻害剤は、かかるSIK3をかかる細胞中のSIK1及び／又はSIK2を阻害するよりも強く、及び／又は免疫細胞中のSIK1及び／又はSIK2及び／又はSIK3（特に、SIK2）を阻害するよりも強く阻害する。
【０１５９】
他の実施形態では、SIK3阻害剤は、SIK3及び別のSIKを阻害することができる。特定のかかる実施形態では、SIK3阻害剤は、SIK2を阻害するよりも強くSIK3及びSIK1を阻害することができる。例えば、SIK3阻害剤は、ほぼ同じ効力（例えば、互いに約2倍〜5倍の範囲）でSIK3及びSIK1を阻害することができ、SIK2を阻害するよりも強く（例えば約5倍、10倍、20倍、50倍、100倍、200倍、500倍又は1000倍を超える量で）SIK3（及びSIK1）を阻害することができる。より特定のかかる実施形態では、SIK3阻害剤は、増殖性障害に関与する細胞中のSIK3及びSIK1を、任意にかかる細胞中のSIK2を阻害するよりも強く、及び／又は免疫細胞中のSIK2を阻害するよりも強く阻害することができる。
【０１６０】
SIK3（任意に、SIK1）、又はABL及び／又はSRCキナーゼ等の他のキナーゼに対するかかる特異性（選択性又は優先的効力）はin vitroで、例えばin vitro生化学アッセイ（例えばDiscoverX、ProQinase、Reaction Biology又はThermoFisherによって提供される）において測定することができる。代替的には、SIK3に対する特異性（選択性又は優先的効力）はin vivoで、例えば細胞ベースのモデル又は動物モデルにおいて測定される。
【０１６１】
したがって、本発明の或る特定の実施形態では、細胞ベースのモデル又は動物モデルにおいて、SIK3阻害剤は、増殖性障害に関与する細胞中のSIK3（例えば、その発現、量、機能、活性及び／又は安定性）（特に、リン酸化SIK3の機能又は活性）を、ABL及び／又はSRCキナーゼ、及び／又はSIK2（及び／又はSIK1）（例えば、その発現、量、機能、活性及び／又は安定性）、特にリン酸化SIK2及び／又はリン酸化SIK1の機能又は活性、及び／又はSIK3-細胞（例えば、免疫細胞中の（細胞の）、又はABL、SRC及びSIK2について増殖性障害に関与する細胞中の／細胞の）、好ましくは免疫細胞中のSIK2を阻害するよりも強く阻害することができる。
【０１６２】
更なる実施形態では、（治療）効果は、例えば免疫細胞中のABL及び／又はSRCキナーゼ、及び／又はSIK2（及び／又はSIK3）（例えば、その発現、量、機能、活性及び／又は安定性）の阻害によってではなく（例えば、増殖性障害に関与する細胞中の）SIK3（例えば、その発現、量、機能、活性及び／又は安定性）の阻害によってもたらすことができる（例えば、治療がそれを含み得る、それを伴い得る又はそれによって行われ得る）。特に、（治療）効果は任意に、かかる細胞中のSIK1の阻害によって付加的にもたらすことができる（例えば、治療がそれを含み得る、それを伴い得る又はそれによって行われ得る）。
【０１６３】
したがって、或る特定の実施形態では、SIK3阻害剤は、増殖性障害に関与する細胞中の（細胞の）SIK3を、かかる細胞中の（細胞の）ABL1及び／又はSRCキナーゼを阻害するよりも強く、（好ましくは）かかる細胞中の（細胞の）SIK2及び／又はSIK1を阻害するよりも強く阻害する。
【０１６４】
他の実施形態では、SIK3阻害剤は、ダサチニブのキナーゼ標的（Abl、Src及び／又はBcr-Abl等）を、ダサチニブがかかる標的を阻害するよりも低い、例えば約2倍、3倍、5倍又は10倍低いIC50で阻害する。
【０１６５】
SIK3の阻害剤は、或る特定の実施形態では、以下の特定の分子及び／又は分子クラスである。SIK3阻害剤はポリペプチド、ペプチド、糖タンパク質、ペプチド模倣薬、抗体若しくは抗体様分子（細胞内抗体（intra-body）等）；DNA若しくはRNA等の核酸、例えばアンチセンスDNA若しくはRNA、リボザイム、RNA若しくはDNAアプタマー、siRNA、shRNA等（ペプチド核酸（PNA）等のその変異体又は誘導体を含む）；標的化遺伝子編集のための遺伝的構築物、例えばCRISPR/Cas9構築物及び／又はガイドRNA/DNA（gRNA/gDNA）及び／又はtracrRNA；ヘテロ二官能性化合物（PROTAC又はHyT分子等）；炭水化物、例えば多糖若しくはオリゴ糖等（その変異体又は誘導体を含む）；脂質、例えば脂肪酸等（その変異体又は誘導体を含む）；又は小分子リガンド若しくは細胞透過性小分子を含むが、これらに限定されない小有機分子から選択されるものであり得る。
【０１６６】
本発明のSIK3阻害剤は、プロドラッグ形態であってもよい。特定の化合物のプロドラッグ形態は、被験体へと投与した後に生理的条件下で化学変換を受けて特定の化合物を生じる、これらの他の化合物（特定の化合物のエステル形態等）である。付加的に、プロドラッグは、ex vivo環境において化学的又は生化学的方法によって特定の化合物へと変換することができる。例えば、プロドラッグは、例えば好適な酵素又は化学試薬と共に経皮パッチリザーバ内に入れることで、特定の化合物へとゆっくりと変換され得る。例示的なプロドラッグは、in vivoで加水分解性のエステル又はアミドである。
【０１６７】
核酸SIK3阻害剤：
或る特定の一連の実施形態では、SIK3阻害剤は核酸である。
【０１６８】
「核酸」、「ポリヌクレオチド」及び「オリゴヌクレオチド」という用語は、全体を通して区別なく使用され、DNA分子（例えば、cDNA又はゲノムDNA）、RNA分子（例えば、mRNA）、ヌクレオチド類縁体を用いて生成したDNA又はRNAの類縁体（例えば、ペプチド核酸及び非自然発生ヌクレオチド類縁体）、及びそのハイブリッドを含む。核酸分子は、一本鎖であっても又は二本鎖であってもよい。
【０１６９】
CRISPR/Cas9構築物及び／又はガイドRNA/DNA（gRNA/gDNA）及び／又はtracrRNAであるSIK3阻害剤の場合、CRISPR/Cas9媒介遺伝子編集アプローチの設計に関する基本原則は、当業者に知られており、例えばWiles MV et al (Mamm Genome 2015, 26:501)又はSavic N and Schwank G (Transl Res 2016, 168:15)に概説されている。
【０１７０】
特定の実施形態（embodiments）では、SIK3阻害剤は、例えば本明細書で下記に詳細に説明されるようなsiRNA又はshRNA分子を含むアンチセンスヌクレオチド分子等の阻害性核酸分子であり得る。
【０１７１】
より特定のかかる実施形態では、阻害性核酸（siRNA又はshRNA等）は、（i）SIK3（例えばリン酸化SIK3）、又は（ii）SIK3の発現、量、機能及び／又は安定性を制御する遺伝子（LKB1又はグルカゴン受容体等）の発現、量、機能、活性又は安定性をコード又は調節する核酸（mRNA等）に結合する、例えば特異的に結合することができ、例えばそれによりSIK3（例えば、リン酸化SIK3）の発現、量、機能、活性及び／又は安定性を調節する。
【０１７２】
核酸であるSIK3の阻害剤は、例えばアンチセンスヌクレオチド分子、RNA、DNA若しくはPNA分子、又はアプタマー分子であり得る。アンチセンスヌクレオチド分子は、アンチセンスヌクレオチド配列を含むことにより、細胞内の標的核酸分子に（例えば、配列相補性に基づいて）結合し、SIK3の発現（転写及び／又は翻訳）のレベルを調節することができるか、又はSIK3の発現、機能及び／又は安定性を制御する別の遺伝子の発現を調節することができる。同様に、触媒リボザイム等のRNA分子は、SIK3遺伝子に結合し、その発現を変更することができるか、又はSIK3の発現、機能及び／又は安定性を制御する他の遺伝子、例えばSIK3の転写因子若しくはそのリプレッサータンパク質、及び／又はLKB1、若しくはグルカゴン受容体に結合し、その発現を変更することができる。アプタマーは、分子標的に結合することが可能な三次元構造を形成する能力をもたらす配列を有する核酸分子である。
【０１７３】
核酸であるSIK3の阻害剤は例えば、RNA干渉に用いられる二本鎖RNA分子であり得る。RNA干渉（RNAi）は、転写後RNA分解又はサイレンシング（翻訳の阻止）による配列特異的遺伝子サイレンシングのプロセスである。RNAiは、配列がサイレンシングすべき標的遺伝子と相同の二本鎖RNA（dsRNA）の使用により開始する。RNAiに好適な二本鎖RNA（dsRNA）は、19塩基対のRNAを形成し、各3'末端に2ヌクレオチドオーバーハングを残す、標的化すべき遺伝子に対応する連続した約21ヌクレオチドのセンス鎖及びアンチセンス鎖を含有する（Elbashir et al., Nature 411:494-498 (2001)、Bass, Nature 411:428-429 (2001)、Zamore, Nat. Struct. Biol. 8:746-750 (2001)）。約25ヌクレオチド〜30ヌクレオチドのdsRNAもRNAiに首尾よく用いられている（Karabinos et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 98:7863-7868 (2001)）。dsRNAは、当該技術分野で既知の方法によってin vitroで合成し、細胞内に導入することができる。
【０１７４】
本発明のアンチセンス分子の特に好ましい例は、低分子干渉RNA（siRNA）又はエンドリボヌクレアーゼにより作製されるsiRNA（esiRNA）である。esiRNAは、大腸菌（Escherichia coli）RNase III又はダイサー等のエンドリボヌクレアーゼによる長い二本鎖RNA（dsRNA）の切断によって生じるsiRNAオリゴの混合物である。esiRNAは、RNA干渉（RNAi）への化学合成siRNAの使用に代替的な概念である。esiRNAは、in vitroでの長い二本鎖RNAの酵素消化である。
【０１７５】
上記のように、RNAi分子（siRNA等）である本発明のモジュレーターは、SIK3に結合し、そのmRNA発現を直接阻害するか又はそれに拮抗し得る。また、RNAi分子（siRNA等）である本発明のモジュレーターは、それ自体がSIK3の発現（又は機能若しくは安定性）を制御する別の遺伝子に結合し、そのmRNA発現を阻害するか又はそれに拮抗し得る。かかる他の遺伝子としては、転写因子又はリプレッサータンパク質又はLKB1又はグルカゴン受容体を挙げることができる。
【０１７６】
SIK3 mRNAを標的とする（又はSIK3の発現、機能及び／又は安定性を制御する遺伝子のmRNAを標的とする）ための本発明によるアンチセンス分子の配列同一性は、本明細書に開示されるSIK3タンパク質をコードする配列の領域（又はかかる他の制御遺伝子（その好ましい例は、LKB1遺伝子である）の領域）に対して、好ましさが増す順に少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%、少なくとも99%及び100%の同一性である。標的遺伝子と調節アンチセンス分子との間の配列同一性の領域は、調節アンチセンス分子の位置及び長さに対応する標的遺伝子の領域であるのが好ましい（例えば、調節siRNA又はshRNA分子に対応する長さ約19 bp〜21 bpの領域にわたる、かかる配列同一性）。配列同一性を決定する手段及び方法は、当該技術分野で既知である。当該技術分野で既知のように、BLAST（Basic Local Alignment Search Tool）プログラムを1つ以上のSIK3 RNAに関する配列同一性の決定に用いるのが好ましい。一方、本発明のsiRNA及びshRNA等の好ましいアンチセンス分子は、好ましくは適切に保護されたリボヌクレオシドホスホロアミダイト及び従来のRNA合成装置を用いて化学的に合成される。RNA合成試薬の供給業者としては、Proligo（Hamburg，Germany）、Dharmacon Research（Lafayette，CO，USA）、Pierce Chemical（Perbio Scienceの一部、Rockford，IL（USA））、Glen Research（Sterling，VA，USA）、ChemGenes（Ashland，MA，USA）及びCruachem（Glasgow，UK）が挙げられる。
【０１７７】
in vivoで遺伝子を可逆的であるが強くサイレンシングするアンチセンス分子、siRNA及びshRNAの能力が、本明細書で下記にも説明する本発明の医薬組成物への使用に、これらの分子を特によく適したものとしている。siRNAをヒトに投与する方法は、De Fougerolles et al., Current Opinion in Pharmacology, 2008, 8:280-285に記載されている。かかる方法は、shRNAのような他の小RNA分子の投与にも好適である。したがって、かかる医薬組成物は、生理食塩水として直接配合して、リポソームベース及びポリマーベースのナノ粒子アプローチにより、コンジュゲートした若しくは複合体形成医薬組成物として、又はウイルス送達系により投与することができる。直接投与には組織への注射、鼻腔内投与及び気管内投与が含まれる。リポソームベース及びポリマーベースのナノ粒子アプローチには、カチオン性脂質であるGenzyme Lipid（GL）67、カチオン性リポソーム、キトサンナノ粒子及びカチオン性細胞透過性ペプチド（CPP）が含まれる。コンジュゲートした又は複合体形成医薬組成物には、PEIと複合体形成したアンチセンス分子、siRNA、shRNA又はmiRNAが含まれる。さらに、ウイルス送達系には、インフルエンザウイルスエンベロープ及びビロソーム（virosomes）が含まれる。
【０１７８】
アンチセンス分子、siRNA、shRNAは、ロックド核酸（LNA）等の修飾ヌクレオチドを含み得る。LNAヌクレオチドのリボース部分は、2'酸素と4'炭素とを接続する追加の架橋で修飾される。架橋は、A型二重鎖に見られることが多い3'-エンド（北）立体配座にリボースを「固定」する。LNAヌクレオチドは、所望の場合にはいつでもオリゴヌクレオチド中のDNA又はRNA残基と混合することができる。かかるオリゴマーは化学合成され、市販されている。ロックされたリボース立体配座は、塩基の積重ね及び骨格の事前組織化を増強する。これによりオリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーション特性（融解温度）が顕著に増大する。siRNAの特に好ましい例は、GapmeR（LNA（商標） GapmeR（Exiqon））である。GapmeRは、SIK3 mRNA（又はSIK3の発現、機能及び／又は安定性を制御する遺伝子のmRNA）の高度に効率的な阻害に使用される強力なアンチセンスオリゴヌクレオチドである。GapmeRは、両側にLNAのブロックを有するDNAモノマーの中央ストレッチを含有する。GapmeRは、好ましくは長さが14ヌクレオチド〜16ヌクレオチドであり、任意に完全にホスホロチオエート化される。DNAギャップは、標的化RNAのRNアーゼH媒介分解を活性化し、核内の転写産物を直接標的化するのにも好適である。
【０１７９】
SIK3の標的化に好ましいアンチセンス分子は、SIK3 mRNAの核酸配列の領域（例えば、上記の領域）に相補的な配列、好ましくは配列番号1〜4、又は配列番号13〜16、特に配列番号1若しくは13のいずれかに示されるアミノ酸配列をコードする配列の領域に相補的な配列、より好ましくは配列番号1〜4、又は配列番号13〜16、特に配列番号1若しくは13のいずれかに示されるアミノ酸配列をコードする配列の約15 bp〜25 bp（約19 bp〜21 bp等）の領域に相補的な配列を有するアンチセンス分子又は構築物である。
【０１８０】
特定の実施形態では、SIK3の標的化のためのアンチセンス分子は、本明細書で「s1」、「s2」、「s3」又は「s4」として識別されるSIK3 siRNA分子（例えば、表A1中；それぞれ配列番号7、8、9及び10）から選択されるsiRNAであり得る。
【０１８１】
表A1：使用される例示的なsiRNA配列
【表Ａ１】
2020517747.tif 000002
【０１８２】
特定の実施形態では、SIK3の標的化のためのアンチセンス分子は、本明細書で「shSIK3」として識別されるshRNA分子（例えば、表A2中；配列番号11）であり得る。
【０１８３】
表A2：使用される例示的なshRNA配列
【表Ａ２】
2020517747.tif 000003
【０１８４】
一実施形態では、本発明のアンチセンス分子を単離することができる。別の実施形態では、本発明のアンチセンス分子は組換え、合成及び／又は修飾されたものであっても、又は任意の他の方法で非天然である、すなわち自然の産物でなくてもよい。例えば、本発明の核酸は、ヒト核酸等の自然の産物と比べて少なくとも1つの核酸置換（又は欠失）修飾、例えば1つ〜約5つのかかる修飾（好ましくは、僅か1つ、2つ又は3つのかかる修飾）を含有し得る。上記のように、本発明のアンチセンス分子は、非天然ヌクレオチドを用いて修飾しても、又は別の化学的部分にコンジュゲートしてもよい。例えば、かかる化学的部分は、安定性若しくは細胞／核透過若しくは標的化の増大をもたらす異種核酸であっても、又はかかる特性をもたらす非核酸化学的部分であっても、又は標識であってもよい。
【０１８５】
或る特定の好ましい実施形態は、本明細書に記載される発明との関連でのSIK3の発現、機能及び／又は安定性の阻害剤として用いられる、遺伝子編集のための遺伝的構築物に関する。ゲノム編集構築物を用いることで、SIK3の発現、安定性及び／又は活性を調節することが可能である。ゲノム編集アプローチは当該技術分野でよく知られており、それぞれの標的ゲノム配列が既知である場合に容易に適用することができる。好ましくは、かかるアプローチは、例えば上記の説明に従う腫瘍細胞を特異的に標的化する、ウイルスベクターを用いた遺伝子療法に用いることができる。
【０１８６】
ゲノム編集の場合、人工的に改変されたヌクレアーゼ、又はいわゆる「分子バサミ」を用いてゲノムからDNAを挿入、置換え又は除去する。このヌクレアーゼは、ゲノム内の所望の位置に特異的な二本鎖切断（DSB）を生じ、誘導された切断を修復するために、相同組換え（HR）及び非相同末端結合（NHEJ）の自然過程による細胞の内因性機構を利用する。そうするために、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ZFN）、転写アクチベーター様エフェクターヌクレアーゼ（TALEN）、CRISPR/Casシステム及び改変メガヌクレアーゼ、再改変ホーミングエンドヌクレアーゼ等の改変ヌクレアーゼがゲノム編集に日常的に用いられる。別の好ましい実施形態によると、SIK3を調節／阻害するゲノム編集アプローチのためには、レアカット（rare-cutting）エンドヌクレアーゼはCas9、Cpfl、TALEN、ZFNであり、又はホーミングエンドヌクレアーゼを用いることができる。また、DNAガイドアルゴノート干渉系（DAIS）を用いた改変が好都合であり得る。基本的には、該ガイドアルゴノート（Ago）タンパク質は、予め選択された遺伝子座に対する切断の特異性を上記Agoタンパク質にもたらす少なくとも1つの外因性オリゴヌクレオチド（DNAガイド）の存在下で、上記細胞に導入されたポリヌクレオチドから異種発現される。TALEN及びCas9システムは、それぞれ国際公開第2013/176915号及び国際公開第2014/191128号に記載されている。ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ZFN）は、Kim, YG; Cha, J.; Chandrasegaran, S. ("Hybrid restriction enzymes: zinc finger fusions to Fok I cleavage domain" (1996). Proc Natl Acad Sci USA 93 (3): 1156-60)に初めて記載されている。Cpflは、Zhang et al. (Cpfl is a single RNA-guided Endonuclease of a Class 2 CRIPR-Cas System (2015) Cell; 163:759-771)によって記載されているクラス2 CRISPR Casシステムである。アルゴノート（AGO）遺伝子ファミリーは、Guo S, Kemphues KJ. ("par-1, a gene required for establishing polarity in C. elegans embryos, encodes a putative Ser/Thr kinase that is asymmetrically distributed" (1995) Cell;81(4):611-20)に初めて記載された。
【０１８７】
CRISPR/Cas9、CRISPR/Cpfl又はアルゴノートゲノム編集システムの使用は、ガイドRNA又はガイドDNA配列のトランスフェクションと組み合わせて使用するのに特に適している。これに関連して、ガイドRNA、及びCas9ニッカーゼ（又は同様の酵素）をコードする核酸配列を、二本鎖核酸標的におけるニック事象を誘導することが可能な複合体を形成するように、標的細胞（好ましくは、腫瘍細胞）にトランスフェクトし、上記核酸標的間の遺伝子配列を切断する。
【０１８８】
或る特定の実施形態では、ガイドRNA-ナノ粒子配合物をCas9とは別に送達するのが有用であり得る。そのような場合、二重送達系は、Cas9がベクターによって送達され得るように提供され、ガイドRNAはナノ粒子配合物中で提供される。ここで、ベクターは、具体的にウイルスベクターではなく、最も広い意味で単に任意の送達手段とみなされる。ガイドRNA-ナノ粒子配合物及びCas9の別々の送達は、順次であってもよく（例えば、第1のCas9ベクターをベクター系によって送達し、続いてsgRNA-ナノ粒子配合物を送達する）、又はsgRNA-ナノ粒子配合物及びCas9を実質的に同時に送達してもよい（すなわち、同時送達）。順次の送達は数日、数週間又は更には数ヶ月間空けて別々の時点で行うことができる。或る特定の実施形態では、1つ以上の送達ビヒクル中で配合された複数のガイドRNA（例えば、一部のガイドRNAをベクター中で提供し、他のガイドRNAをナノ粒子中で配合する）をCas9送達系と共に提供することができる。或る特定の実施形態では、Cas9もナノ粒子配合物中で送達される。そのような場合、ガイドRNA-ナノ粒子配合物及びCas9ナノ粒子配合物は、別個に送達しても、又は実質的に同時に送達してもよい（すなわち、同時送達）。ここで、当業者に明らかなように、かかるゲノム編集アプローチの遺伝子標的は、SIK3の遺伝子であり得る。代替的には、かかる編集の遺伝子標的は、SIK3の発現、機能及び／又は安定性を制御する別の遺伝子、例えばLKB1又はグルカゴン受容体であり得る。
【０１８９】
本発明の好ましい実施形態では、本発明によるゲノム編集アプローチのための化合物は、少なくともSIK3配列の領域（上記の領域等）に相補的なガイドRNA又はDNAの使用を含む。幾つかの付加的な実施形態では、本発明のゲノム編集アプローチに使用される化合物は、相同組換え修復（homology directed repair）の鋳型としてSIK3のかかる領域と相同のドナー配列を含み得る。ドナー配列は、標的細胞においてCRISPRに誘導される修復機構で使用した場合に、相同組換えによりSIK3ゲノム遺伝子座内に挿入／コピーされ、結果として発現されるSIK3の発現、機能及び／又は安定性の低下を特徴とする突然変異SIK3遺伝子を生じるSIK3の突然変異配列を含む。癌療法におけるCRISPR/Cas9ゲノム編集は、例えばKhan FA et al: "CRISPR/Cas9 therapeutics: a cure for cancer and other genetic diseases." （Oncotarget. 2016 May 26. doi: 10.18632/oncotarget.；その全体が引用することにより本明細書の一部をなす）に概説される。
【０１９０】
ヘテロ二官能性化合物
特定の実施形態では、SIK3の阻害剤は、リンカーによって接続された2つのリガンドを含有するヘテロ二官能性化合物であり得る。ここで、一方のリガンドが標的タンパク質（この場合、SIK3、又はSIK3の発現、量、機能、活性及び／又は安定性を制御する遺伝子）に結合し、もう一方のリガンドが細胞タンパク質分解機構の構成要素に結合し、及び／又はそれを動員する、例えばユビキチンリガーゼタンパク質（例えばE3ユビキチンリガーゼ）に結合するか、又は例えばシャペロンタンパク質を動員する。かかるヘテロ二官能性化合物の例としては、PROTAC（「タンパク質分解誘導キメラ分子（PROteolysis TAgeting Chimera）」）又はHyT（「疎水性タグ付け（hydrophobic tagging）」）分子が挙げられ、いずれの場合にも本発明の標的タンパク質に結合するように設計される。PROTAC及びHyT分子の一般原理は、Huang & Dixit 2016 (Cell Research 26:484)に概説され、例えば国際公開第2016/146985号に具体的に例示されている。
【０１９１】
一方のリガンドで標的タンパク質（例えば、SIK3）に結合し、もう一方のリガンドでE3ユビキチンリガーゼタンパク質に結合するPROTACは、それによりリガーゼ及び標的を極めて接近させる。任意の特定の理論に束縛されるものではないが、この接近が対象の標的タンパク質のポリユビキチン化及びその後のプロテアソーム依存性分解を誘発することが一般に理解される。一般的なレベルでのPROTACアプローチの裏付け証拠は、代替的なPROTACがエストロゲン受容体（Cyrus et al 2010, Chem Bio Chem 11:1531）、アンドロゲン受容体（Sakamoto et al 2003, Mol Cell Proteomics 2:1350）、メチオニンアミノペプチダーゼ（aminopeptidase）-2（Sakamoto et al 2001, PNAS 98:8554）、及びアリール炭化水素受容体（Lee et al 2007, Chem Bio Chem 8:2058）を分解するために用いられている既知の概念実証例によって提供される。
【０１９２】
疎水性タグ付けの概念は、PROTACの概念と同様であるが、特定のE3リガーゼを動員するためにリガンドを使用する代わりに、標的タンパク質（例えば、SIK3）を特異的に認識する化学的部分に連結したアダマンタン等の合成疎水性基が分解機構の「リクルーター」の役割を担う。標的タンパク質への結合後に、疎水性タグがミスフォールドした状態を模倣又は誘導する。任意の特定の理論に束縛されるものではないが、嵩高い疎水性側基による標的タンパク質の修飾により、ミスフォールドしたタンパク質のリフォールディングを補助することが第一目的であるシャペロン機構が誘引されることが一般に理解される。共有結合修飾を容易に除去することができないため、標的タンパク質は、フォールディングしないままであり、最終的にユビキチン−プロテアソーム媒介分解によって取り除かれる。
【０１９３】
本発明の文脈におけるかかるヘテロ二官能性化合物の或る特定の実施形態では、標的タンパク質（例えばSIK3）に結合する、化合物中に含有されるリガンドは、かかる標的タンパク質に（好ましくは、特異的に）結合するペプチドであり得る。また、代替的な（alternative）実施形態では、標的タンパク質（例えばSIK3）に結合するリガンドは、かかる標的タンパク質に（好ましくは、特異的に）結合する小分子SIK3阻害剤等の小分子であり得る。例示的な小分子SIK3阻害剤は、本明細書の他の部分に記載され、阻害剤自体（すなわち、ヘテロ二官能性化合物中に含有されない）として有用性を有する、かかる小分子SIK3阻害剤が、或る特定の実施形態ではヘテロ二官能性化合物中に含まれていてもよい。
【０１９４】
小分子SIK3阻害剤：
別の特定の一連の実施形態では、SIK3阻害剤は、小分子（特に、小分子リガンド又は細胞透過性小分子）であり得る。
【０１９５】
より特定のかかる実施形態では、小分子SIK3阻害剤は、（i）SIK3に結合し、SIK3（例えば、リン酸化SIK3）の機能若しくは活性を阻害することができるか、又は（ii）SIK3の発現、量、機能、活性及び／又は安定性を制御する遺伝子（LKB1又はグルカゴン受容体等）に結合し、例えば、それによりSIK3（例えば、リン酸化SIK3）の発現、量、機能、活性及び／又は安定性を調節することができる。
【０１９６】
小分子であるSIK3の阻害剤は例えば、本明細書に記載されるSIK3阻害活性、及び例えば3000ダルトン（Da）未満、好ましくは1500 Da未満、最も好ましくは1000 Da未満の分子量を有する任意の化学構造又は化合物（分子）であり得る。
【０１９７】
通例、小分子は約750 Da未満、例えば約650 Da又は600 Da未満の分子質量を有する化合物である（或る特定の実施形態では、小分子は約550 Da又は500 Da未満であり得る）。さらに、（特に細胞透過性化合物、特に経口活性化合物について）、小分子は、或る特定の実施形態では、（i）5個以下の水素結合ドナー（窒素−水素及び酸素−水素結合の総数）、（ii）10個以下の水素結合アクセプター（全ての窒素又は酸素原子）、及び／又は（iii）5以下のオクタノール−水分配係数log Pを有し得る。したがって、幾つかの実施形態では、SIK3阻害剤は細胞透過性小有機分子、例えばSIK3（特に、リン酸化SIK3）に結合し、その機能又は活性を阻害するものであり得る。
【０１９８】
本発明の全ての態様の特定の一実施形態では、SIK3阻害剤は、ダサチニブである。
【０１９９】
ダサチニブ（又はBMS-354825）は、Bristol-Myers Squibbによって製造され、SPRYCELという商品名で販売されている制癌剤である。ダサチニブの化学名は、N-(2-クロロ-6-メチルフェニル)-2-[[6-[4-(2-ヒドロキシエチル)-1-ピペラジニル]-2-メチル-4-ピリミジニル]アミノ]-5-チアゾールカルボキサミド、特にその一水和物形態である。ダサチニブ（一水和物）の分子式は、C22H26ClN7O2S・H2Oであり、これは506.02（一水和物）の式量に相当し、ダサチニブ（一水和物）は、以下の化学構造を有する：
【化１】
2020517747.tif 000004
【０２００】
本発明の全ての態様の代替的な特定の実施形態では、SIK3阻害剤は、ダサチニブではない。例えば、本発明の全ての態様の特定の一実施形態では、SIK3阻害剤は、ダサチニブの変異体である。小分子（SIK3阻害剤、例えばダサチニブ等）との関連での「変異体」は、参照小分子とは異なる化学構造を有する別の小分子を意味し（すなわち、変異体は異なる小分子である）、ここで、異なる化学構造は、参照小分子のコア構造の1つ以上の構造的特徴を保持する。変異体の化学構造は、参照小分子と比較した少なくとも1つの原子の付加、除去若しくは置換、又は少なくとも1つの原子若しくは基の置換基の付加、修飾、除去若しくは置換、又は原子間の少なくとも1つの化学結合の変化によって参照小分子の化学構造とは異なり得る。例えば、2つ、3つ、4つ、5つ又は6つ以上のかかる原子又は基の置換基を参照小分子の化学構造上で付加、除去又は置換し、参照小分子（例えば、ダサチニブ）のかかる変異体を得ることができる。
【０２０１】
したがって、本発明は特に、SIK3阻害剤がダサチニブの変異体であるこれらの実施形態を含む。
【０２０２】
例えば、幾つかの実施形態では、SIK3阻害剤は、欧州特許第1169038号の請求項3の環式化合物の一水和物であるか、又はその塩である（又は溶媒和物、塩、複合体、多形、結晶形態、ラセミ混合物、ジアステレオマー、鏡像異性体、互変異性体、同位体標識形態、プロドラッグ及び組合せである）。
【０２０３】
或る特定の一実施形態では、SIK3阻害剤は、国際公開第00/62778号の3頁〜13頁に規定される「式I」又は「式II」の環式化合物（本明細書では、それぞれ式I及び式IIWO）（例えば、環式化合物であるダサチニブの変異体）、特に国際公開第00/62778号の13頁及び14頁に規定される、その「好ましい化合物」、及びその塩である。或る特定のかかる実施形態では、化合物は、ダサチニブではない（又はダサチニブの一水和物又は塩ではない）、例えば化合物は、欧州特許第1169038号の請求項3の環式化合物、又はその塩ではない（又は溶媒和物、塩、複合体、多形、結晶形態、ラセミ混合物、ジアステレオマー、鏡像異性体、互変異性体、同位体標識形態、プロドラッグ及びそれらの組合せではない）。国際公開第00/62778号のかかる開示は、かかる特定の目的のためだけに引用することにより本明細書の一部をなす。
【０２０４】
したがって、本発明の特定の実施形態では、SIK3阻害剤は、以下の式Iの環式化合物（例えば、ダサチニブの変異体）、並びにその塩、プロドラッグ、溶媒和物及び立体異性体（又はその溶媒和物、塩、複合体、立体異性体、多形、結晶形態、ラセミ混合物、ジアステレオマー、鏡像異性体、互変異性体、同位体標識形態、プロドラッグ及び組合せ）である：
【化２】
2020517747.tif 000005
式I
（式中、
Qは、1つ以上の基R1で任意に置換された、
（1）5員のヘテロアリール環、
（2）6員のヘテロアリール環、又は、
（3）アリール環、
であり、
Zは、
（1）単結合、
（2）-R16C=CH-、又は、
（3）-(CH2)m-（ここで、mは1又は2である）、
であり、
X1及びX2は各々水素であるか、又は共に=O若しくは=Sを形成し、
R1は、
（1）水素又はR6、
（ここで、R6はアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロシクロ（heterocyclo）又はヘテロシクロアルキルであり、各々が非置換であるか、又はZ1、Z2及び1つ以上の（好ましくは、1つ又は2つの）基Z3で置換される）、
（2）-OH又は-OR6、
（3）-SH又は-SR6、
（4）-C(O)2H、-C(O)qR6又は-O-C(O)qR6（ここで、qは1又は2である）、
（5）-SO3H又は-S(O)qR6、
（6）ハロ、
（7）シアノ、
（8）ニトロ、
（9）-Z4-NR7R8、
（10）-Z4-N(R9)-Z5-NR10R11、
（11）-Z4-N(R12)-Z5-R6、
（12）-P(O)(OR6)2、
であり、
R2及びR3は各々独立して、
（1）水素若しくはR6、
（2）-Z4-R6、又は、
（3）-Z13-NR7R8、
であり、
R4及びR5は、
（1）各々独立して水素若しくはR6、
（2）-Z4-N(R9)-Z5-NR10R11、
（3）-N(R9)Z4R6であるか、又は、
（4）それらが付着する窒素原子と共に、非置換であるか、若しくはZ1、Z2及びZ3で置換された3員〜8員の飽和した若しくは不飽和の複素環を完成させ、該複素環は、それ自体が非置換であるか、若しくはZ1、Z2及びZ3で置換されたベンゼン環が任意に縮合していてもよく、
R7、R8、R9、R10、R11及びR12は、
（1）各々独立して水素若しくはR6であるか、
（2）R7及びR8が共にアルキレン、アルケニレン若しくはヘテロアルキルであってもよく、それらが付着する窒素原子と共に3員〜8員の飽和した若しくは不飽和の環を完成させ、該環は非置換であるか、若しくはZ1、Z2及びZ3で置換され、又は、
（3）R9、R10及びR11のいずれか2つが共にアルキレン若しくはアルケニレンであってもよく、それらが付着する窒素原子と共に3員〜8員の飽和した若しくは不飽和の環を完成させ、該環は非置換であるか、若しくはZ1、Z2及びZ3で置換され、
R13は、
（1）シアノ、
（2）ニトロ、
（3）-NH2、
（4）-NHOアルキル、
（5）-OH、
（6）-NHOアリール、
（7）-NHCOOアルキル、
（8）-NHCOOアリール、
（9）-NHSO2アルキル、
（10）-NHSO2アリール、
（11）アリール、
（12）ヘテロアリール、
（13）-Oアルキル、又は、
（14）-Oアリール、
であり、
R14は、
（1）-NO2、
（2）-COOアルキル、又は、
（3）-COOアリール、
であり、
R15は、
（1）水素、
（2）アルキル、
（3）アリール、
（4）アリールアルキル、又は、
（5）シクロアルキル、
であり、
Z1、Z2及びZ3は各々独立して、
（1）水素若しくはZ6（ここで、Z6は（i）アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アラルキル、アルキルアリール、シクロアルキルアリール、ヘテロシクロ若しくはヘテロシクロアルキル、（ii）それ自体が1つ以上の同じ若しくは異なる基（i）によって置換された基（i）、又は（iii）以下のZ1、Z2及びZ3の定義の基（2）〜（16）の1つ以上によって置換された基（i）若しくは（ii）である）、
（2）-OH若しくは-OZ6、
（3）-SH若しくは-SZ6、
（4）-C(O)qH、-C(O)qZ6若しくは-O-C(O)qZ6、
（5）-SO3H、-S(O)qZ6若しくはS(O)qN(Z9)Z6、
（6）ハロ、
（7）シアノ、
（8）ニトロ、
（9）-Z4-NZ7Z8、
（10）-Z4-N(Z9)-Z5-NZ7Z8、
（11）-Z4-N(Z10)-Z5-Z6、
（12）-Z4-N(Z10)-Z5-H、
（13）オキソ、
（14）-O-C(O)-Z6であるか、
（15）Z1、Z2及びZ3のいずれか2つが共にアルキレン若しくはアルケニレンであってもよく、それらが付着する原子と共に3員〜8員の飽和した若しくは不飽和の環を完成させ、又は、
（16）Z1、Z2及びZ3のいずれか2つが共に-O-(CH2)r-O-（ここで、rは1〜5である）であってもよく、それらが付着する原子と共に4員〜8員の飽和した若しくは不飽和の環を完成させ、
Z4及びZ5は各々独立して、
（1）単結合、
（2）-Z11-S(O)q-Z12-、
（3）-Z11-C(O)-Z12-、
（4）-Z11-C(S)-Z12-、
（5）-Z11-O-Z12-、
（6）-Z11-S-Z12-、
（7）-Z11-O-C(O)-Z12-、又は、
（8）-Z11-C(O)-O-Z12-、
であり、
Z7、Z8、Z9及びZ10は、
（1）各々独立して水素若しくはZ6であるか、
（2）Z7及びZ8、若しくはZ6及びZ10が共にアルキレン若しくはアルケニレンであってもよく、それらが付着する原子と共に3員〜8員の飽和した若しくは不飽和の環を完成させ、該環は非置換であるか、若しくはZ1、Z2及びZ3で置換され、又は、
（3）Z7若しくはZ8がZ9と共にアルキレン若しくはアルケニレンであってもよく、それらが付着する窒素原子と共に3員〜8員の飽和した若しくは不飽和の環を完成させ、該環は非置換であるか、若しくはZ1、Z2及びZ3で置換され、
Z11及びZ12は各々独立して、
（1）単結合、
（2）アルキレン、
（3）アルケニレン、又は、
（4）アルキニレン、
であり、
Z13は、
（1）単結合、
（2）-Z11-S(O)q-Z12-、
（3）-Z11-C(O)-Z12-、
（4）-Z11-C(S)-Z12-、
（5）-Z11-O-Z12-、
（6）-Z11-S-Z12-、
（7）-Z11-O-C(O)-Z12-、
（8）-Z11-C(O)-O-Z12-、
（9）-C(NR13)-、
（10）-C(CHR14)-、又は、
（11）-C(C(R14)2)-、
である）。
【０２０５】
本発明の（又は本発明に使用される）好ましい化合物は、式Iの化合物及びその塩であり、ここで、Qはチアゾールであり、Z、X1、X2、R1、R2、R3、R4及びR5の1つ以上、特に全てが以下の定義から選択される：Zは単結合である；R1は水素、ハロ、アルキル、アリール、アルコキシ、アルコキシカルボニル又はアリールオキシカルボニルから選択され、より好ましくは水素である；X1及びX2は共に=O又は=Sを形成し、より好ましくは=Oを形成する；R2は水素である；R3は-Z4-R6又は-Z13-NR7R8から選択され、より好ましくは-Z4-R6であり、ここで、Z4は単結合であり、R6は非置換であるか、又はZ1、Z2及び1つ以上の（好ましくは、1つ又は2つの）基Z3で置換されたアリール若しくはヘテロアリールである；R4は水素である；及びR5はZ1、Z2及び1つ以上の（例えば、1つ又は2つの）基Z3で置換されたアリール基又はヘテロアリール基から選択される。
【０２０６】
式Iの化合物には、以下の式IIWOの化合物（例えば、ダサチニブの変異体）及びその塩が含まれる：
【化３】
2020517747.tif 000006
式IIWO
（式中、
nは1又は2であり、
Aは炭素及び窒素から選択され、
Bは窒素、酸素及び硫黄から選択され、
X3は酸素又は硫黄であり、
R1、R2、R3、R4及びR5は上記の通りである）。
【０２０７】
以下は、本明細書に用いられる用語の定義である。本明細書の基又は用語に与えられた最初の定義は、他の指示がない限り、本明細書全体を通して、個別に又は別の基の一部としてその基又は用語に適用される。
【０２０８】
「alk」又は「アルキル」という用語は、1個〜12個の炭素原子、好ましくは1個〜8個の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖炭化水素基を指す。「低級アルキル」という表現は、炭素原子数1〜4のアルキル基を指す。
【０２０９】
「アルケニル」という用語は、少なくとも1つの二重結合を有する炭素原子数2〜10、好ましくは2〜4の直鎖又は分枝鎖炭化水素基を指す。アルケニル基が窒素原子に結合する場合、かかる基が二重結合を有する炭素を介して直接結合しないのが好ましい。
【０２１０】
「アルキニル」という用語は、少なくとも1つの三重結合を有する炭素原子数2〜10、好ましくは2〜4の直鎖又は分枝鎖炭化水素基を指す。アルキニル基が窒素原子に結合する場合、かかる基が三重結合を有する炭素を介して直接結合しないのが好ましい。
【０２１１】
「アルキレン」という用語は、単結合によって接続された炭素原子数1〜5の直鎖架橋（例えば、-(CH2)x-、ここでxは1〜5である）を指し、1つ〜3つの低級アルキル基で置換されていてもよい。
【０２１２】
「アルケニレン」という用語は、単結合によって接続された、1つ又は2つの二重結合を有する炭素原子数2〜5の直鎖架橋を指し、1つ〜3つの低級アルキル基で置換されていてもよい。例示的なアルケニレン基は-CH=CH-CH=CH-、-CH2-CH=CH-、-CH2-CH=CH-CH2-、-C(CH3)2CH=CH-及び-CH(C2H5)-CH=CH-である。
【０２１３】
「アルキニレン」という用語は、単結合によって接続された、中に三重結合を有する炭素原子数2〜5の直鎖架橋を指し、1つ〜3つの低級アルキル基で置換されていてもよい。例示的なアルキニレン基は-C≡C-、-CH2-C≡C-、-CH(CH3)-C≡C-及び-C≡C-CH(C2H5)CH2-である。
【０２１４】
「ar」又は「アリール」という用語は、6個〜14個の炭素原子を含有する芳香族環式基（例えば、6員の単環式、10員の二環式又は14員の三環式環系）を指す。例示的なアリール基としては、フェニル、ナフチル、ビフェニル及びアントラセンが挙げられる。
【０２１５】
「シクロアルキル」及び「シクロアルケニル」という用語は、炭素原子数3〜12の環状炭化水素基を指す。
【０２１６】
「ハロゲン」及び「ハロ」という用語は、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素を指す。
【０２１７】
「不飽和の環」という用語は、部分的に不飽和の環及び芳香環を含む。
【０２１８】
「複素環」、「複素環式」又は「ヘテロシクロ」という用語は、少なくとも1つの炭素原子含有環中に少なくとも1個のヘテロ原子を有する芳香族（すなわち、「ヘテロアリール」）環式基、例えば4員〜7員の単環式、7員〜11員の二環式又は10員〜15員の三環式環系を含む、完全に飽和した又は不飽和環系を指す。ヘテロ原子を含有する複素環基の各環は、窒素原子、酸素原子及び／又は硫黄原子から選択される1個、2個、3個又は4個のヘテロ原子を有することができ、ここで、窒素及び硫黄ヘテロ原子は任意に酸化されていてもよく、窒素ヘテロ原子は任意に四級化されていてもよい。複素環基は、環又は環系の任意のヘテロ原子又は炭素原子に付着することができる。
【０２１９】
例示的な単環式複素環基としては、ピロリジニル、ピロリル、ピラゾリル、オキセタニル、ピラゾリニル、イミダゾリル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、オキサゾリル、オキサゾリジニル、イソオキサゾリニル、イソオキサゾリル、チアゾリル、チアジアゾリル、チアゾリジニル、イソチアゾリル、イソチアゾリジニル、フリル、テトラヒドロフリル、チエニル、オキサジアゾリル、ピペリジニル、ピペラジニル、2-オキソピペラジニル、2-オキソピペリジニル、2-オキソピロロジニル、2-オキソアゼピニル、アゼピニル、4-ピペリジニル（piperidinyl）、ピリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、テトラヒドロピラニル、モルホニリル、チアモルホニリル、チアモルホニリル、スルホキシド、チアモルホニリルスルホン、1,3-ジオキソラン及びテトラヒドロ-1,1-ジオキソチエニル、トリアゾリル、チラジニル等が挙げられる。
【０２２０】
例示的な二環式複素環基としては、インドリル、ベンゾチアゾリル、ベンズオキサゾリル、ベンゾジオキソリル、ベンゾチエニル、キヌクリジニル、キノリニル、テトラ−ヒドロイソキノリニル、イソキノリニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾピラニル、インドリジニル、ベンゾフリル、クロモニル、クマリニル、ベンゾピラニル、シンノリニル、キノキサリニル、インダゾリル、ピロロピリジル、フロピリジニル（例えばフロ[2,3-c]ピリジニル、フロ[3,2-b]ピリジニル］又はフロ[2,3-b]ピリジニル）、ジヒドロイソインドリル、ジヒドロキナゾリニル（例えば3,4-ジヒドロ-4-オキソ−キナゾリニル）、テトラヒドロキノリニル等が挙げられる。
【０２２１】
例示的な三環式複素環基としては、カルバゾリル、ベンジドリル（benzidolyl）、フェナントロリニル、アクリジニル、フェナントリジニル、キサンテニル等が挙げられる。
【０２２２】
「ヘテロアリール」という用語は芳香族複素環基を指す。
【０２２３】
例示的なヘテロアリール基としては、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、チアジアゾリル、イソチアゾリル、フリル、チエニル、オキサジアゾリル、ピリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、トリアゾリル、トリアジニル等が挙げられる。
【０２２４】
qが1又は2であるとき、「-C(O)qH」は-C(O)-H又は-C(O)-OHを表し；「-C(O)qR6」又は「-C(O)qZ6」はそれぞれ-C(O)-R6若しくは-C(O)-OR6、又は-C(O)-Z6若しくは-C(O)-OZ6を表し；「-O-C(O)qR6」又は「-O-C(O)qZ6」はそれぞれ-O-C(O)-R6若しくは-O-C(O)-OR6、又は-O-C(O)-Z6若しくは-O-C(O)-OZ6を表し；「-S(O)qR6」又は「-S(O)qZ6」はそれぞれ-SO-H6若しくは-SO2-H6、又は-SO-Z6若しくは-SO2-Z6を表す。
【０２２５】
式Iの化合物は、場合によっては塩を形成し得る。本明細書での式Iの化合物への言及は、他の指示がない限り、その塩への言及を含むことが理解される。「塩（複数の場合もある）」という用語は、本明細書で用いられる場合、無機及び／又は有機の酸及び塩基で形成される酸性基及び／又は塩基性塩を表す。双性イオン（内部又は分子内塩（internal or inner salts））は、本明細書で使用される「塩（複数の場合もある）」という用語に含まれる（例えばR置換基がカルボキシル基等の酸部分を含む場合に形成され得る）。アルキルアンモニウム塩等の第四級アンモニウム塩も本明細書に含まれる。薬学的に許容可能な（すなわち、非毒性の、生理学的に許容可能な）塩が好ましいが、他の塩も、例えば調製時に用いられ得る単離又は精製工程に有用である。式Iの化合物の塩は、例えば化合物Iと或る量、例えば当量の酸又は塩基とを、塩が沈殿する媒体等の媒体中で反応させるか、又は水性媒体中で反応させ、続いて凍結乾燥を行うことによって形成され得る。
【０２２６】
例示的な酸付加塩としては、酢酸塩（酢酸又はトリハロ酢酸、例えばトリフルオロ酢酸で形成されるもの等）、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、硫酸水素塩、ホウ酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、樟脳酸塩、カンファースルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、2-ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、2-ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、シュウ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、3-フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、硫酸塩（硫酸で形成されるもの等）、スルホン酸塩（本明細書に記載されるもの等）、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩等が挙げられる。
【０２２７】
例示的な塩基塩（例えばR置換基がカルボキシキル基等の酸性部分を含むときに形成される）としては、アンモニウム塩、ナトリウム塩、リチウム塩及びカリウム塩等のアルカリ金属塩、カルシウム塩及びマグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩、ベンザチン、ジシクロヘキシルアミン、ヒドラバミン、N-メチル-D-グルカミン、N-メチル-D-グルカミド、t-ブチルアミン等の有機塩基（例えば有機アミン）との塩、並びにアルギニン、リシン等のアミノ酸との塩等が挙げられる。塩基性の窒素含有基は、低級ハロゲン化アルキル（例えば塩化、臭化及びヨウ化メチル、エチル、プロピル及びブチル）、ジアルキルサルフェート（例えばジメチル、ジエチル、ジブチル、及びジアミルサルフェート）、長鎖ハロゲン化物（例えば塩化、臭化及びヨウ化デシル、ラウリル、ミリスチル及びステアリル）、アラルキルハロゲン化物（例えば臭化ベンジル及びフェネチル）等の作用物質で四級化されてもよい。
【０２２８】
式Iの化合物のプロドラッグ及び溶媒和物も本明細書で企図される。「プロドラッグ」という用語は、この文脈で用いられる場合、被験体への投与後に代謝過程又は化学過程による化学変換を受け、式Iの化合物、又はその塩及び／又は溶媒和物を生じる化合物を表す。式Iの化合物の溶媒和物は、好ましくは水和物である。
【０２２９】
鏡像異性体形態及びジアステレオマー形態を含む、式Iの化合物のR置換基上の不斉炭素によって存在し得る立体異性体等の本化合物の全ての立体異性体は、本発明の範囲内に企図される。本発明の化合物の個々の立体異性体は、例えば実質的に他の異性体を含まなくても、又は例えばラセミ体として、若しくは他の全ての、若しくは他の選択される立体異性体と混合されていてもよい。本発明の不斉中心は、IUPACの1974年勧告によって規定されるようにS立体配置又はR立体配置を有し得る。
【０２３０】
本明細書全体を通して、基及びその置換は、安定した部分及び化合物が得られるように選ばれる。
【０２３１】
或る特定のかかる実施形態では、SIK3阻害剤は、式Iの化合物（例えば、ダサチニブの変異体）（ここで、式I又は式IIWOのR2は水素であり、式I又は式IIWOのR3はRxであり、Rxは、以下の式X：
【化４】
2020517747.tif 000007
式X
を有する）、並びにその溶媒和物、塩、複合体、多形、結晶形態、ラセミ混合物、ジアステレオマー、鏡像異性体、互変異性体、同位体標識形態、プロドラッグ及び組合せであり、ここで、式XのZ1、Z2及びZ3は、本明細書又は国際公開第00/62778号で規定される通りである。好ましくは、式Xにおいて、
Z1がメチルであり、及び／又は、
Z2が-Z4-NZ7Z8、-Z4-N(Z9)-Z5-NZ7Z8又はZ4-N(Z10)-Z5-H（ここで、Z4及びZ5〜Z10は、本明細書又は国際公開第00/62778号で規定される通りであり、特にZ4は単結合である）であり、及び／又は、
Z3が水素である。
【０２３２】
特定のかかる実施形態では、式X中のZ2は、以下のものからなる群から選択される置換基である：
【化５】
2020517747.tif 000008
【０２３３】
他の特定の実施形態では、式Xにおいて、Z1は（好ましくは）メチルであり、Z3は水素であり、Z2は（好ましくは）以下のものからなる群から選択される置換基である：
【化６】
2020517747.tif 000009
【０２３４】
他の実施形態では、特に、式Xにおいて、Z1はメチルであり、Z3は水素であり、Z2は、
【化７】
2020517747.tif 000010
でない場合がある。
【０２３５】
或る特定のかかる実施形態では、SIK3阻害剤は、式Iの化合物（例えばダサチニブの変異体）（ここで、式I又は式IIWOのR2は水素であり、式I又は式IIWOのR3はRdasであり、Rdasは以下の式Y：
【化８】
2020517747.tif 000011
式Y
を有する）、並びにその溶媒和物、塩、複合体、多形、結晶形態、ラセミ混合物、ジアステレオマー、鏡像異性体、互変異性体、同位体標識形態、プロドラッグ及び組合せである。
【０２３６】
更なる任意のかかる実施形態では、式IのX1及びX2が共に=O又は=S（好ましくは、=O）を形成し（又は式IIWOのX3が=O又は=S（好ましくは、=O）であり）、式IのZは（好ましくは）結合であり、式IIWOのnは（好ましくは）1であり、式I又は式IIWOのR1は（好ましくは）水素であり、式I又は式IIWOのR4又はR5の一方が（好ましくは）水素であり、式I又は式IIWOのR4又はR5の一方がR6であり、特に式IIWOのR4は水素であり、式IIWOのR5はR6であり、ここでR6はアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロシクロ又はヘテロシクロアルキルであり、各々が非置換であるか、又はZ1、Z2及び1つ以上の（好ましくは、1つ又は2つの）基Z3で置換される（ここで、Z1、Z2及びZ3は、本明細書又は国際公開第00/62778号で規定される通りである）。特定のかかる更なる実施形態では、かかるR6はアリール、アラルキル、ヘテロシクロ又はヘテロシクロアルキル（好ましくはアリール又はヘテロアリール）であり、各々が非置換であるか、又はZ1、Z2及び1つ以上の（好ましくは、1つ又は2つの）基Z3で置換される（ここで、Z1、Z2及びZ3は、本明細書又は国際公開第00/62778号で規定される通りである）。好ましくはかかる実施形態では、R6は、1つ、2つ又は3つのZxで（特に単環式アリール又はヘテロアリール上のオルト位にて少なくとも1つ又は2つで）置換された単環式アリール又はヘテロアリール（特に、6員の単環式アリール又はヘテロアリール、好ましくは6員のヘテロアリール）であり、ここで、Zxは独立して、（i）Zy（ここで、ZyはC1〜5（特にC1、C2又はC3）アルキル、アルケニル又はアルキニルである）、（ii）-OH又は-OZy、（iii）-SH又は-SZy、（iv）ハロ又は（v）-SO2-Zy又は-SO2-N-(Zy)(Zy)であり得る。特定のかかる実施形態では、Zxは非極性置換基であり得る。単環式アリール又はヘテロアリールR6（式IIWOのR5がR6である場合）は、好ましくは、1つ、2つ又は3つ（好ましくは、2つ）のZxで任意に置換されたフェニル又はピリジニル（例えば、ピリジン-2-イル、又はより好ましくはピリジン-3-イル）であり、特に1つのZxがフェニル又はピリジニルのオルト位を置換し、及び／又は特にZxは各々独立して-Cl、-F、-Br、-Me、-OMe、-OEt及び-CNからなる（consisting of）群から選択される（好ましくは-Cl、-F、-Me及び-Brから選択される）。特に、置換されたフェニル又はピリジニルであるかかるR6では、メタ位の少なくとも1つ（又は両方）が水素ではなく（例えば、本明細書で規定されるZxである）、及び／又はパラ位が水素である。
【０２３７】
或る特定のかかる実施形態では、SIK3阻害剤は、国際公開第00/62778号の請求項1〜21のいずれか1つの環式化合物（例えば、環式化合物であるダサチニブの変異体）、及びその塩（又は溶媒和物、塩、複合体、多形、結晶形態、ラセミ混合物、ジアステレオマー、鏡像異性体、互変異性体、同位体標識形態、プロドラッグ及び組合せ）であり得る。或る特定のかかる実施形態では、R2、R3、X1、X2、R4、R5及び／又はR6は、本明細書で規定される通りである。特定のかかる実施形態では、ダサチニブの変異体は、国際公開第00/62778号の請求項22からなる環式化合物及びその塩の群から選択される。国際公開第00/62778号のかかる開示は、かかる特定の目的のためだけに引用することにより本明細書の一部をなす。
【０２３８】
他の特定のかかる実施形態では、SIK3阻害剤は、国際公開第00/62778号の請求項23に規定される「式III」の化合物（例えば、化合物であるダサチニブの変異体）であってもよく、特に国際公開第00/62778号の請求項23又は53に記載される化合物、及びその塩である。国際公開第00/62778号のかかる開示は、かかる特定の目的のためだけに引用することにより本明細書の一部をなす。或る特定のかかる実施形態では、R2、R3、R4、R5及び／又はR6は上記で規定される通りであり、及び／又はX3は（好ましくは）酸素である。
【０２３９】
更に他の特定のかかる実施形態では、SIK3阻害剤は、国際公開第00/62778号の請求項59に規定される化合物（例えば、化合物であるダサチニブの変異体）、及びその塩であり得る。国際公開第00/62778号のかかる開示は、かかる特定の目的のためだけに引用することにより本明細書の一部をなす。或る特定のかかる実施形態では、R2、R3、R4、R5及び／又はR6は上記で規定される通りであり、及び／又はX3は（好ましくは）酸素である。
【０２４０】
更なる特定のかかる実施形態では、SIK3阻害剤は、欧州特許第1169038号の請求項1の「式II」の環式化合物（本明細書では式IIEP）（例えば、環式化合物であるダサチニブの変異体）、及びその塩であり得る。かかる開示は欧州特許第1169038号の段落[0010]〜[0032]と共に、かかる特定の目的のためだけに引用することにより本明細書の一部をなす。
【０２４１】
したがって、かかる実施形態では、式I内に以下の式IIEPの環式化合物又はその塩が含まれる場合に、SIK3阻害剤は、化合物（例えば、ダサチニブの変異体）であり得る：
【化９】
2020517747.tif 000012
式IIEP
（式中、
X3は酸素又は硫黄であり、
R5は、アルキル及びハロから選択される1つ以上の基で置換されるアリール基であり、
R6はZ1、Z2及び1つ以上の基Z3で置換されるアリール又はヘテロアリールであり、ここで、
（a）上記アリールは、少なくとも1つの基Z3で置換され、ここでZ3は-Z4-NZ7Z8であり、Z4は結合であり、Z7は水素又はアルキルであり、Z8はヘテロシクロで置換されたアルキルであり、又は、
（b）上記ヘテロアリールは、少なくとも1つの基Z3で置換され、ここでZ3は-Z4-NZ7Z8であり、Z4は結合であり、Z7は水素又はアルキルであり、Z8はヘテロシクロで置換されたアルキルであり、又は、
（c）上記ヘテロアリールは、少なくとも1つの基Z3で置換され、ここでZ3はアルキルであり、
Z1、Z2及びZ3は、各々独立して、
（1）水素若しくはZ6（ここで、Z6は（i）アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル（cycloalkylalkyl）、シクロアルケニル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アラルキル、アルキルアリール、シクロアルキルアリール、ヘテロシクロ若しくはヘテロシクロアルキル、（ii）それ自体が1つ以上の同じ若しくは異なる基（i）によって置換された基（i）、又は（iii）以下のZ1、Z2及びZ3の定義の基（2）〜（16）の1つ以上によって置換された基（i）若しくは（ii）である）、
（2）-OH若しくは-OZ6、
（3）-SH若しくは-SZ6、
（4）-C(O)qH、-O(O)qZ6若しくは-O-C(O)qZ6（ここで、qは1又は2である）、
（5）-SO3H、-S(O)qZ6若しくはS(O)qN(Z9)Z6、
（6）ハロ、
（7）シアノ、
（8）ニトロ、
（9）-Z4-NZ7Z8、
（10）-Z4-N(Z9)-Z5-NZ7Z8、
（11）-Z4-N(Z10)-Z5-Z6、
（12）-Z4-N(Z10)-Z5-H、
（13）オキソ、
（14）-O-C(O)-Z6であるか、
（15）Z1、Z2及びZ3のいずれか2つが共にアルキレン若しくはアルケニレンであってもよく、それらが付着する原子と共に3員〜8員の飽和した若しくは不飽和の環を完成させ、又は、
（16）Z1、Z2及びZ3のいずれか2つが共に-O-(CH2)r-O-（ここで、rは1〜5である）であってもよく、それらが付着する原子と共に4員〜8員の飽和した若しくは不飽和の環を完成させ、
Z4及びZ5は各々独立して、
（1）単結合、
（2）-Z11-S(O)q-Z12-、
（3）-Z11-C(O)-Z12-、
（4）-Z11-C(S)-Z12-、
（5）-Z11-O-Z12-、
（6）-Z11-S-Z12-、
（7）-Z11-O-C(O)-Z12、又は、
（8）-Z-C(O)-O-Z12-、
であり、
Z7、Z8、Z9及びZ10は、
（1）各々独立して水素若しくはZ6であるか、
（2）Z7及びZ8、若しくはZ6及びZ10が共にアルキレン若しくはアルケニレンであってもよく、それらが付着する原子と共に3員〜8員の飽和した若しくは不飽和の環を完成させ、該環は非置換であるか、若しくはZ1、Z2及びZ3で置換され、又は、
（3）Z7若しくはZ8がZ9と共にアルキレン若しくはアルケニレンであってもよく、それらが付着する窒素原子と共に3員〜8員の飽和した若しくは不飽和の環を完成させ、該環は非置換であるか、若しくはZ1、Z2及びZ3で置換され、
Z11及びZ12は各々独立して、
（1）単結合、
（2）アルキレン、
（3）アルケニレン、又は、
（4）アルキニレン、
である。
【０２４２】
或る特定のかかる実施形態では、式IIEPのR6はRdasであってもよく、及び／又はX3は（好ましくは）酸素であり、及び／又は式IIEPのR5は本明細書で規定されるR6であってもよい。特定のかかる実施形態では、SIK3阻害剤は、欧州特許第1169038号の請求項2からなる環式化合物、及びその塩の群から選択される化合物（例えば、化合物であるダサチニブの変異体）であり得る。かかる開示は、かかる特定の目的のためだけに引用することにより本明細書の一部をなす。
【０２４３】
特定の一態様では、本発明は、本明細書に開示される（例えば、式I、IIWO又はIIEPの）一般的な（又は特定の）式又は構造のいずれかのダサチニブの変異体、及びその塩（又は溶媒和物、塩、複合体、多形、結晶形態、ラセミ混合物、ジアステレオマー、鏡像異性体、互変異性体、同位体標識形態、プロドラッグ及び組合せ）にも関する。
【０２４４】
本発明の或る特定の実施形態では、SIK3阻害剤は、ダサチニブの変異体（ダサチニブではない）であり得る。すなわち、かかる実施形態では、SIK3阻害剤は一般式I（又はIIWO若しくはIIEP）を有するSIK3阻害剤であるが、但し、SIK3阻害剤は、化合物A8ではない。
【０２４５】
式I、IIWO又はIIEPのSIK3阻害剤は、開示、特に国際公開第00/62778号のスキームA〜XI（及び／又は実施例1〜580の手順）に従って合成することができる。かかる開示は、かかる特定の目的のためだけに引用することにより本明細書の一部をなす。代替的には、ダサチニブの変異体であるSIK3阻害剤は、本明細書の実施例10に記載の手順により合成することができる。
【０２４６】
或る特定の実施形態では、SIK3阻害剤は、表A3又は表A4に記載の（環式）化合物（特に、化合物B3、B2又はA6）、並びにその溶媒和物、塩、立体異性体、複合体、多形、結晶形態、ラセミ混合物、ジアステレオマー、鏡像異性体、互変異性体、同位体標識形態、プロドラッグ及び組合せであり、或る特定の態様では、本発明は、これらに関する。
【０２４７】
表A3：本発明の小分子化合物
【表Ａ３】
2020517747.tif 000013
化合物番号
構造
名称
N-(2-クロロ-6-フルオロフェニル)-2-((6-(4-(2-ヒドロキシエチル)ピペラジン-1-イル)-2-メチルピリミジン-4-イル)アミノ)チアゾール-5-カルボキサミド
N-(2,6-ジフルオロフェニル)-2-((6-(4-(2-ヒドロキシエチル)ピペラジン-1-イル)-2-メチルピリミジン-4-イル)アミノ)チアゾール-5-カルボキサミド
N-(2-ブロモ-6-フルオロフェニル)-2-((6-(4-(2-ヒドロキシエチル)ピペラジン-1-イル)-2-メチルピリミジン-4-イル)アミノ)チアゾール-5-カルボキサミド
N-(3-エチニルフェニル)-2-((6-(4-(2-ヒドロキシエチル)ピペラジン-1-イル)-2-メチルピリミジン-4-イル)アミノ)チアゾール-5-カルボキサミド
N-(4-フルオロフェニル)-2-((6-(4-(2-ヒドロキシエチル)ピペラジン-1-イル)-2-メチルピリミジン-4-イル)アミノ)チアゾール-5-カルボキサミド
2-((6-(4-(2-ヒドロキシエチル)ピペラジン-1-イル)-2-メチルピリミジン-4-イル)アミノ)-N-(2-(プロパン-2-スルホニル)フェニル)チアゾール-5-カルボキサミド
N-(4-ブロモ-6-フルオロフェニル)-2-((6-(4-(2-ヒドロキシエチル)ピペラジン-1-イル)-2-メチルピリミジン-4-イル)アミノ)チアゾール-5-カルボキサミド
N-(2-クロロ-6-メチルフェニル)-2-((6-(4-(2-ヒドロキシエチル)ピペラジン-1-イル)-2-メチルピリミジン-4-イル)アミノ)チアゾール-5-カルボキサミド
2-((6-(4-(2-ヒドロキシエチル)ピペラジン-1-イル)-2-メチルピリミジン-4-イル)アミノ)-N-(o-トリル)チアゾール-5-カルボキサミド
N-(2-クロロフェニル)-2-((6-(4-(2-ヒドロキシエチル)ピペラジン-1-イル)-2-メチルピリミジン-4-イル)アミノ)チアゾール-5-カルボキサミド
((6-(4-(2-ヒドロキシエチル)ピペラジン-1-イル)-2-メチルピリミジン-4-イル)アミノ)-N-フェニルチアゾール-5-カルボキサミド
N-(2,6-ジメチルフェニル)-2-((6-(4-(2-ヒドロキシエチル)ピペラジン-1-イル)-2-メチルピリミジン-4-イル)アミノ)チアゾール-5-カルボキサミド
N-(2,6-ジクロロフェニル)-2-((6-(4-(2-ヒドロキシエチル)ピペラジン-1-イル)-2-メチルピリミジン-4-イル)アミノ)チアゾール-5-カルボキサミド
【０２４８】
表A4：式Iの／本発明の他の化合物
【表Ａ４】
2020517747.tif 000014
化合物番号
構造
名称
N-(2-ブロモ-6-クロロフェニル)-2-((6-(4-(2-ヒドロキシエチル)ピペラジン-1-イル)-2-メチルピリミジン-4-イル)アミノ)チアゾール-5-カルボキサミド
N-(2,6-ジブロモフェニル)-2-((6-(4-(2-ヒドロキシエチル)ピペラジン-1-イル)-2-メチルピリミジン-4-イル)アミノ)チアゾール-5-カルボキサミド
N-(4-クロロ-2-メチルピリジン-3-イル)-2-((6-(4-(2-ヒドロキシエチル)ピペラジン-1-イル)-2-メチルピリミジン-4-イル)アミノ)チアゾール-5-カルボキサミド
N-(3-フルオロ-2-メトキシフェニル)-2-((6-(4-(2-ヒドロキシエチル)ピペラジン-1-イル)-2-メチルピリミジン-4-イル)アミノ)チアゾール-5-カルボキサミド
N-(2-クロロ-6-メチルフェニル)-2-((2-メチル-6-(4-メチルピペラジン-1-イル)ピリミジン-4-イル)アミノ)チアゾール-5-カルボキサミド
2-((6-(4-アセチルピペラジン-1-イル)-2-メチルピリミジン-4-イル)アミノ)-N-(2-クロロ-6-メチルフェニル)チアゾール-5-カルボキサミド
N-(2-クロロ-6-メチルフェニル)-2-((6-((2-ヒドロキシエチル)アミノ)-2-メチルピリミジン-4-イル)アミノ)チアゾール-5-カルボキサミド
N-(2-クロロ-6-エトキシフェニル)-2-((6-(4-(2-ヒドロキシエチル)ピペラジン-1-イル)-2-メチルピリミジン-4-イル)アミノ)チアゾール-5-カルボキサミド
N-(3-クロロ-4-フルオロフェニル)-2-((6-(4-(2-ヒドロキシエチル)ピペラジン-1-イル)-2-メチルピリミジン-4-イル)アミノ)チアゾール-5-カルボキサミド
【０２４９】
或る特定の実施形態では、SIK3阻害剤は、SIK3阻害剤又は化合物が化合物A9、B8及び／又はB9でないという条件の1つ以上（好ましくは全て）を満たす、表A3又は表A4に記載の化合物、並びにその溶媒和物、塩、複合体、多形、結晶形態、ラセミ混合物、ジアステレオマー、鏡像異性体、互変異性体、同位体標識形態、プロドラッグ及び組合せであり、或る特定の態様では、本発明はこれらに関する。したがって、他の実施形態では、SIK3阻害剤は、一般式IIWOにおいてX3が酸素であり、nが1であり、R1が水素であり、R2が水素であり、R3がRdasであり、R4又はR5の一方が水素である場合、R4又はR5のもう一方が、（i）2-クロロ-6-エトキシフェニルではなく、及び／又は（ii）3-クロロ-4-フルオロフェニルではないR6であるという条件の1つ以上（好ましくは全て）を満たす、本明細書に開示される（例えば、式I、IIWOの）一般的な（又は特定の）式又は構造のいずれかの化合物、及びその塩（又は溶媒和物、塩、複合体、多形、結晶形態、ラセミ混合物、ジアステレオマー、鏡像異性体、互変異性体、同位体標識形態、プロドラッグ及び組合せ）であり、或る特定の態様では、本発明はこれらに関する。
【０２５０】
他の実施形態（embodiments）では、SIK3阻害剤は、一般式IIWOにおいてnが1であり、Aが窒素であり、Bが硫黄であり、X3が酸素であり、R1が水素であり、R2が水素であり、R4が水素であり、R3が式Yであり、R5がR6である場合、R6は2-クロロ-6-メチルフェニルではないという条件の1つ以上（好ましくは全て）を満たす、本明細書に開示される（例えば、式I、IIWOの）一般的な（又は特定の）式又は構造のいずれかの化合物、及びその塩（又は溶媒和物、塩、複合体、多形、結晶形態、ラセミ混合物、ジアステレオマー、鏡像異性体、互変異性体、同位体標識形態、プロドラッグ及び組合せ）であり、或る特定の態様では、本発明はこれらに関する。
【０２５１】
また他の実施形態では、SIK3阻害剤は、一般式IIWOにおいてnが1であり、Aが窒素であり、Bが硫黄であり、X3が酸素であり、R1が水素であり、R2が水素であり、R4が水素であり、R5がR6であり、R6が、
（i）オルト位が-Clで置換されたフェニルである場合、（x）他のオルト位が水素、若しくはメチルではないZx（上記で規定される）、（例えば-Cl、-F、-Br、-OMe、-OEt又は-CNであるZx）であり、好ましくはメタ位若しくはパラ位の少なくとも1つが上記で規定されるZxで置換されるか、若しくは（y）他のオルト位がメチルであり、オルト位若しくはパラ位の少なくとも2つがZx（上記で規定される）で置換されるか、若しくは（z）R3がRdasではなく、又は、
（ii）オルト位がメチルで置換されたフェニルである場合、（x）他のオルト位が水素、若しくは-ClではないZx（上記で規定される）（例えば-F、-Br、-Me、-OMe、-OEt又は-CNであるZx）であり、好ましくはメタ位若しくはパラ位の少なくとも1つが上記で規定されるZxで置換されるか、若しくは（y）他のオルト位が-Clであり、メタ位若しくはパラ位の少なくとも2つがZx（上記で規定される）で置換されるか、若しくは（z）R3がRdasではない、
という条件の1つ以上（好ましくは全て）を満たす、本明細書に開示される（例えば、式I、IIWOの）一般的な（又は特定の）式又は構造のいずれかの化合物、及びその塩（又は溶媒和物、塩、複合体、多形、結晶形態、ラセミ混合物、ジアステレオマー、鏡像異性体、互変異性体、同位体標識形態、プロドラッグ及び組合せ）であり、或る特定の態様では、本発明はこれらに関する。
【０２５２】
また別の態様では、本発明は、被験体（例えば、治療又は予防を必要とする被験体）において疾患、障害又は病態（増殖性障害、例えば癌又は腫瘍等）を治療又は予防する方法であって、上記被験体に少なくとも1回、有効量の（i）本明細書に開示される一般的な（又は特定の）式若しくは構造（式I、IIWO又はIIEP）のいずれかのダサチニブの変異体、又は（ii）表A3若しくは表A4に記載の化合物（特に、化合物はB3、B2又はA6である）、又は（i）若しくは（ii）の塩（又は溶媒和物、塩、複合体、多形、結晶形態、ラセミ混合物、ジアステレオマー、鏡像異性体、互変異性体、同位体標識形態、プロドラッグ及び組合せ）を投与することを含むか、又は上記被験体に少なくとも1回、有効量の上記の医薬組成物を投与することを含む、方法にも関する。関連の他の態様では、本発明は、医薬、例えば被験体（例えば、それを必要とする被験体）における疾患、障害又は病態（増殖性障害、例えば癌又は腫瘍等）の治療又は予防への使用のための（i）本明細書に開示される一般的な（又は特定の）式若しくは構造（式I、IIWO又はIIEP）のいずれかのダサチニブの変異体、又は（ii）表A3若しくは表A4に記載の化合物、又は（i）若しくは（ii）の塩（又は溶媒和物、塩、複合体、多形、結晶形態、ラセミ混合物、ジアステレオマー、鏡像異性体、互変異性体、同位体標識形態、プロドラッグ及び組合せ）にも関する。特定のかかる実施形態では、化合物はB3、B2又はA6である。他の特定のかかる実施形態では、化合物は式IIWOを有し、nが1であり、Aが窒素であり、Bが硫黄であり、X3が酸素であり、R1が水素であり、R2が水素であり、R4が水素であり、R5がR6であり、R6が1つ、2つ又は3つのZxで置換される単環式ヘテロアリールであり、少なくとも1つのZxが該単環式アリール又はヘテロアリール上のオルト位にあり、Zxは各々独立して、（i）Zy（ここで、ZyはC1、C2又はC3アルキル、アルケニル又はアルキニルである）、（ii）-OH若しくは-OZy、（iii）-SH若しくは-SZy、（iv）ハロ、又は（v）-SO2-Zy若しくは-SO2-N-(Zy)(Zy)とすることができる。
【０２５３】
本発明の全ての態様の別の特定の実施形態では、SIK3阻害剤は、ボスチニブである。
【０２５４】
BOSULIFという商品名で販売されるボスチニブ（SKI-606）は、癌の治療に使用されるチロシンキナーゼ阻害剤である。ボスチニブ（一水和物）の化学名は、3-キノリンカルボニトリル，4-[(2,4-ジクロロ-5-メトキシフェニル)アミノ]-6-メトキシ-7-[3-(4-メチル-1-ピペラジニル)プロポキシ]-，水和物（1:1）である。その化学式は、C26H29Cl2N5O3・H2O（一水和物）であり、その分子量は548.46（一水和物）であり、530.46（無水）に相当する。ボスチニブ（一水和物）は、以下の化学構造を有する：
【化１０】
2020517747.tif 000015
【０２５５】
本発明の全ての態様の代替的な特定の実施形態では、SIK3阻害剤はボスチニブではない。例えば（For example）、本発明の全ての態様の特定のかかる実施形態の1つでは、SIK3阻害剤はボスチニブの変異体、特に米国特許第6,002,008号（その開示は、かかる特定の目的のためだけに引用することにより本明細書の一部をなす）の請求項1〜20のいずれか一項に特許請求される化合物、又は請求項21〜29のいずれか一項に規定される化合物である。
【０２５６】
特に明白な適応症への使用のための（例えば、炎症性腸疾患及び移植片対宿主病等の炎症性障害及び／又は免疫障害の治療のための）他のSIK選択的阻害剤の一般式（及び特異的化学構造）が他に記載されている（例えば、特許文献2、特許文献1、国際公開第2014/140313号及び特許文献3）。
【０２５７】
本発明の全ての態様の異なる特定の実施形態では、SIK3阻害剤は、
特許文献2（その開示は、かかる特定の目的のためだけに引用することにより本明細書の一部をなす）の請求項5〜19及び24のいずれか一項に規定される化合物、
特許文献1（その開示は、かかる特定の目的のためだけに引用することにより本明細書の一部をなす）の請求項1〜28のいずれか一項に特許請求される化合物、又は請求項49に規定される化合物、又はその薬学的に許容可能な塩、
国際公開第2014/140313号（その開示は、かかる特定の目的のためだけに引用することにより本明細書の一部をなす）の請求項1〜9のいずれか一項に特許請求される化合物、又はその立体異性体、互変異性体、ラセミ体、代謝物、プロドラッグ若しくはプレドラッグ、塩、水和物、N-オキシド形態若しくは溶媒和物、及び、
特許文献3（その開示は、かかる特定の目的のためだけに引用することにより本明細書の一部をなす）の請求項1〜230のいずれか一項に規定される化合物、又はその薬学的に許容可能な塩、
から選択されるSIK3阻害剤であり得る。
【０２５８】
したがって、他の実施形態では、SIK3阻害剤は、特許文献1の一般式I、IA若しくはIBの範囲内の化合物であってもよく、又は特許文献1の請求項1〜28のいずれか一項に特許請求される化合物、若しくは請求項49に規定される化合物、若しくはその薬学的に許容可能な塩のようなものである。また他の実施形態では、SIK3阻害剤は、特許文献3の一般式I、II若しくはIII-Aの範囲内の化合物であってもよく、又は特許文献3の請求項1〜230のいずれか一項に規定される化合物、若しくはその薬学的に許容可能な塩である。特定のかかる実施形態では、かかるSIK3阻害剤はSIK3、特にリン酸化SIK3に結合し、その機能又は活性を阻害する細胞透過性小分子であり得る。
【０２５９】
医薬組成物：
療法に用いるために、SIK3阻害剤を動物又はヒトへの投与を容易にするのに適切な医薬組成物へと配合することができる。「組成物」という用語は、物質の混合物を意味する。「医薬組成物」という用語は、医薬用途のための治療活性物質（SIK3阻害剤等）を含む物質の混合物を意味する。
【０２６０】
したがって、別の態様では、（本発明の又は本発明で用いられる）SIK3阻害剤と、薬学的に許容可能な賦形剤、安定化剤又は担体とを含む医薬組成物が本明細書で提供される。好ましい実施形態では、医薬組成物は、表A3又は表A4のSIK3阻害剤を含む。
【０２６１】
別の特定の態様では、本発明は、（i）本明細書に開示される一般的な（又は特定の）式若しくは構造（式I、IIWO又はIIEP）のいずれかのダサチニブの変異体、又は（ii）表A3若しくは表A4に記載の化合物（特に、化合物B3、B2又はA6）、又は（i）若しくは（ii）の塩（又は溶媒和物、塩、複合体、多形、結晶形態、ラセミ混合物、ジアステレオマー、鏡像異性体、互変異性体、同位体標識形態、プロドラッグ及び組合せ）と、薬学的に許容可能な賦形剤、安定化剤又は担体とを含む医薬組成物にも関する。
【０２６２】
例としては、本発明の医薬組成物は0.1%〜100%（w/w）、例えば約0.5%、1%、2%、3%、4%、5%、6%、8%、10%、15%、20%、25%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、96%、97%、98%又は99%、好ましくは約1%〜約20%、約10%〜50%又は約40%〜90%の活性成分（例えば、SIK3阻害剤）を含み得る。
【０２６３】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容可能な」賦形剤、安定化剤又は担体の語は、薬学的な投与に適合するあらゆる溶媒、可溶化剤、増量剤、安定化剤、結合剤、吸収剤、基剤、緩衝剤、滑沢剤、制御放出ビヒクル、希釈剤、乳化剤、湿潤剤、分散媒体、コーティング剤、抗菌又は抗真菌剤、等張化剤及び吸収遅延剤等を含むことを意図する。医薬活性物質のためのかかる媒体及び作用物質の使用は、当該技術分野でよく知られている。任意の従来の媒体又は作用物質が活性化合物とは適合しない場合を除き、組成物へのその使用が企図される。補助剤が組成物に組み込まれていてもよい。
【０２６４】
本発明の（又は本発明に使用される）医薬組成物は通例、その意図された投与経路に適合するように配合される。投与経路の例としては、経口、非経口、例えば髄腔内、動脈内、静脈内、皮内、皮下、経口、経皮（局所）及び経粘膜投与が挙げられる。
【０２６５】
非経口、皮内又は皮下用途に用いられ、本発明の（又は本発明に使用される）化合物（例えば、SIK3阻害剤）を含む溶液又は懸濁液は、以下の構成要素：注射用水、生理食塩溶液、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン等の滅菌希釈剤；プロピレングリコール又は他の合成溶媒；ベンジルアルコール又はメチルパラベン等の抗菌剤；アスコルビン酸又は重硫酸ナトリウム等の酸化防止剤；エチレンジアミン四酢酸等のキレート剤；酢酸塩、クエン酸塩又はリン酸塩等の緩衝剤、並びに塩化ナトリウム又はデキストロース等の等張化剤を含んでいてもよい。pHは、塩酸又は水酸化ナトリウム等の酸又は塩基を用いて調整することができる。非経口調製物は、ガラス又はプラスチック製のアンプル、使い捨て注射器又は複数回投与バイアルに封入することができる。
【０２６６】
注射用途に好適な医薬組成物としては、滅菌注射液又は分散液の即時調製のための滅菌水溶液（水溶性の場合）又は分散液及び滅菌粉末が挙げられる。静脈内投与については、好適な担体として、生理食塩水、静菌水、Kolliphor（商標） EL（以前はCremophor EL（商標）；BASF，Parsippany，N.J.）又はリン酸緩衝生理食塩水（PBS）が挙げられる。いずれの場合にも、注射用組成物は通例、滅菌であり、容易な注射性（syringeability）が存在する程度に流体であるものとする。注射用組成物は通例、製造及び貯蔵の条件下で安定し、細菌及び真菌等の微生物の汚染作用に対して保護されるものとする。担体は、例えば水、エタノール、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコール及び液体ポリエチレン（polyethylene）グリコール等）、並びにその好適な混合物を含有する溶媒又は分散媒であり得る。適当な流動性は、例えばレシチン等のコーティング剤の使用、分散液の場合の所要の（required）粒径の維持、及び界面活性剤の使用によって維持することができる。微生物の作用の防止は、様々な抗菌剤及び抗真菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサール等によって達成することができる。多くの場合、等張剤、例えば糖、マンニトール（mannitol）、ソルビトール等の多価アルコール、及び塩化ナトリウムを組成物に加えることが好ましい。注射用組成物の持続的吸収は、組成物に吸収を遅らせる作用物質、例えばモノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを加えることによって生じさせることができる。
【０２６７】
滅菌注射液は、必要量の本発明の（又は本発明に使用される）化合物（例えば、SIK3阻害剤）を適切な溶媒に、必要に応じて本明細書に記載の成分の1つ又は組合せと共に組み込み、続いて濾過滅菌を行うことによって調製することができる。概して、分散液は、基本分散媒と本明細書に記載のものからの所要の他の成分とを含有する滅菌ビヒクルに、活性化合物を組み込むことによって調製される。滅菌注射液の調製のための滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は、活性成分＋任意の付加的な所望の成分の粉末を、その予め滅菌濾過された溶液から生じる真空乾燥及び凍結乾燥である。
【０２６８】
経口組成物は、本発明の（又は本発明に使用される）化合物（例えば、SIK3阻害剤）を含むだけでなく、概して不活性希釈剤又は食用担体を含む。経口組成物は、ゼラチンカプセルに封入するか、又は錠剤に圧縮することができる。経口治療投与のために、活性化合物に賦形剤を組み込み、錠剤、トローチ又はカプセルの形態で使用することができる。経口組成物は、洗口液として使用される流体担体を用いて調製することもでき、この場合、流体担体中の化合物を経口で適用し、口をゆすぎ（swished）、吐き出すか、又は飲み込む。薬学的に適合する結合剤、及び／又は補助物質（adjuvant materials）が組成物の一部として含まれていてもよい。錠剤、丸薬、カプセル、トローチ等は、以下の成分：微結晶性セルロース、トラガカントゴム若しくはゼラチン等の結合剤；デンプン若しくはラクトース等の賦形剤、アルギン酸、Primogel若しくはトウモロコシデンプン等の崩壊剤；ステアリン酸マグネシウム若しくはStertes等の滑沢剤；コロイド状二酸化ケイ素等の流動促進剤；スクロース若しくはサッカリン等の甘味料；又はペパーミント、サリチル酸メチル若しくはオレンジ香料等の着香料のいずれか、又は同様の性質の化合物を含有していてもよい。
【０２６９】
さらに、本発明の（又は本発明に使用される）化合物（例えば、SIK3阻害剤）は、直腸投与することができる。直腸用組成物は、クリーム、ゲル、エマルション、浣腸剤、懸濁液、坐剤及び錠剤を含むが、これらに限定されない任意の直腸に許容可能な剤形であり得る。好ましい剤形の1つは、ヒトの身体の肛門（rectal orifice）への挿入のために設計された形状及びサイズを有する坐剤である。坐剤は通常、体温で軟化、融解又は溶解する。坐剤賦形剤としては、カカオ脂（ココアバター）、グリセリンゼラチン、水添植物油、様々な分子量のポリエチレングリコールの混合物及びポリエチレングリコールの脂肪酸エステルが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２７０】
吸入による投与については、本発明の（又は本発明に使用される）化合物（例えば、SIK3阻害剤）は通例、好適な噴射剤、例えば二酸化炭素等のガスが入った加圧容器若しくはディスペンサー、又はネブライザーからのエアロゾルスプレーの形態で送達される。
【０２７１】
本発明に使用される免疫細胞（例えば、CAR T細胞）等の細胞は、血流への投与、又は組織若しくは器官への直接の投与に好適な医薬配合物中に含まれ得る。好適な形式は、当業者（医師等）により各々の患者、組織及び器官について、標準手順に従って決定される。好適な薬学的に許容可能な担体及びそれらの配合物は、当該技術分野で既知である（例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed., 1980を参照されたい）。かかる細胞は、医薬組成物に形成する場合、約6.5〜約8.5のpHで溶液中に配合するのが好ましい。溶液を等張にする賦形剤、例えばリン酸ナトリウム等の当該技術分野で既知の緩衝溶液によりpH緩衝した4.5%マンニトール又は0.9%塩化ナトリウムを添加してもよい。デキストロース、ホウ酸、酒石酸ナトリウム、プロピレングリコール、ポリオール（マンニトール及びソルビトール等）、又は他の無機若しくは有機溶質を含むが、これらに限定されない他の薬学的に許容可能な作用物質も溶液を等張にするために使用することができる。一実施形態では、媒体配合物は、細胞の健康及び同一性を維持しながら細胞を保存するように調整される。例えば、抗凝固剤（ACD-A）の水溶液、同量のデキストロース（50%）及びリン酸緩衝生理食塩水（PBS）等を含む予混合物を予め混合し、通例、細胞マトリックス、又は細胞が組織若しくは器官から抽出された環境に合致する又はそれに近づけるような容量に分取する。
【０２７２】
全身投与は、経粘膜又は経皮手段によるものであってもよい。経粘膜又は経皮投与については、透過すべき障壁に適切な浸透剤が配合物中に使用される。かかる浸透剤は概して、当該技術分野で既知であり、例えば経粘膜投与については、界面活性剤、胆汁酸塩及びフシジン酸誘導体が挙げられる。経粘膜投与は、鼻腔用スプレー又は坐剤の使用によって達成することができる。経皮投与については、医薬組成物を、概して当該技術分野で既知の軟膏、膏薬（salves）、ゲル又はクリームへと配合することができる。
【０２７３】
或る特定の実施形態では、医薬組成物は、本発明の（又は本発明に使用される）化合物（例えば、SIK3阻害剤）の持続放出又は制御放出のために配合される。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル及びポリ乳酸等の生分解性の生体適合性ポリマーを使用することができる。かかる配合物を調製する方法は、当業者に明らかである。材料は市販もされており（ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体により感染細胞に標的化されたリポソームを含む）、薬学的に許容可能な担体として使用することもできる。これらは当業者に既知の方法によって調製することができる。
【０２７４】
経口、直腸用又は非経口組成物を、投与の容易さ及び投与量の均等性のために投与単位形態に配合することが特に有利である。投与単位形態は、本明細書で使用される場合、治療すべき被験体の単位投与量として適した物理的に個別の単位を含み、各単位は、所要の医薬担体と関連して所望の治療効果をもたらすように算出された所定量の活性化合物を含有する。本発明の投与単位形態の仕様は、活性化合物の独自の特性及び達成すべき特定の治療効果、並びに個体の治療のためのかかる活性化合物を合成する技術分野に特有の制限によって決まり、それに直接左右される。
【０２７５】
幾つかの実施形態では、SIK3阻害剤を含む医薬組成物は、10 mg〜1000 mgのSIK3阻害剤の単位投与形態である。幾つかの実施形態では、SIK3阻害剤を含む医薬組成物は、10 mg〜200 mgのSIK3阻害剤の単位投与形態である。幾つかの実施形態では、ABPを含む医薬組成物は、200 mg〜400 mgのSIK3阻害剤の単位投与形態である。幾つかの実施形態では、SIK3阻害剤を含む医薬組成物は、400 mg〜600 mgのSIK3阻害剤の単位投与形態である。幾つかの実施形態では、SIK3阻害剤を含む医薬組成物は、600 mg〜800 mgのSIK3阻害剤の単位投与形態である。幾つかの実施形態では、SIK3阻害剤を含む医薬組成物は、800 mg〜1000 mgのSIK3阻害剤の単位投与形態である。
【０２７６】
SIK3阻害剤を含む医薬組成物の例示的な単位剤形は錠剤、カプセル（例えば粉末、顆粒、微小錠剤（microtablets）又はマイクロペレット）、懸濁液又は使い捨ての充填済み注射器である。或る特定の実施形態では、一回量の投与単位を作製するためのキットが提供される。キットは、乾燥させた活性成分の入った第1の容器及び水性配合物の入った第2の容器の両方を含み得る。代替的には、キットは、シングルチャンバー及びマルチチャンバーの充填済み注射器を含み得る。
【０２７７】
かかる活性成分の毒性及び治療効果（例えば、有効性）は、例えばLD50（集団の50%に致死的な用量）及びED50（集団の50%に治療効果がある用量）を決定するための細胞培養物又は実験動物における標準薬学的手順によって決定することができる。毒性作用及び治療効果の用量比は治療指数であり、LD50/ED50の比率で表すことができる。大きな治療指数を示す活性剤が好ましい。毒性の副作用を示す化合物を使用してもよいが、非感染細胞に対する潜在的損傷を最小限に抑え、それにより副作用を低減するために、かかる化合物を罹患組織の部位に標的化する送達系を設計するよう注意を払う必要がある。
【０２７８】
細胞培養アッセイ及び動物研究から得られるデータは、例えばヒトに用いられる、或る投与量範囲の活性成分（例えば、SIK3阻害剤又はTNF、TNFの変異体、又はTNFR1若しくはTNFR2のアゴニスト）を配合する上で用いることができる。かかる活性成分の投与量は、毒性の殆どない又は全くないED50を含む循環濃度の範囲内にあるのが好ましい。投与量は、用いられる剤形及び利用される投与経路に応じてこの範囲内で変化し得る。本発明の治療アプローチに用いられる任意の活性成分については、（治療上）有効な用量を初めに細胞培養アッセイから推定することができる。用量は、細胞培養物において決定されるIC50（すなわち、症状の最大半量の阻害を達成する活性成分の濃度）を含む循環血漿濃度範囲を達成するように、動物モデルにおいて公式化することができる。かかる情報を用いて、例えばヒトへの投与に有用な（例えば、有効な）量又は用量をより正確に決定することができる。医薬組成物は、投与の説明書と共に容器、パック又はディスペンサー内に入れることができる。
【０２７９】
本発明の文脈において、SIK3阻害剤又は医薬組成物の有効量は、研究者、科学者、薬理学者、薬剤師、獣医、医師又は他の臨床家が求めている細胞、組織、系、身体、動物、個体、患者又はヒトの生物学的、生理学的、薬理学的、治療的又は医学的応答、例えば障害、疾患若しくは病態、例えば増殖性障害、例えば癌若しくは腫瘍の影響／症状の緩和、又は腫瘍細胞等の増殖性障害に関与する細胞の死滅若しくは成長の阻害を誘発する量であり得る。有効量は、下記のものを含む標準手順によって決定することができる。
【０２８０】
本明細書で提供される医学的用途及び治療方法の全ての態様及び実施形態に従うと、SIK3阻害剤による治療を必要とする被験体に少なくとも1回投与される有効量は通例、投与1回当たり約0.01 mg/kg〜約100 mg/kg、例えば投与1回当たり約1 mg/kg〜約10 mg/kgである。幾つかの実施形態では、上記被験体に少なくとも1回投与されるSIK3阻害剤の有効量は、投与1回当たり約0.01 mg/kg〜約0.1 mg/kg、投与1回当たり約0.1 mg/kg〜約1 mg/kg、投与1回当たり約1 mg/kg〜約5 mg/kg、投与1回当たり約5 mg/kg〜約10 mg/kg、投与1回当たり約10 mg/kg〜約50 mg/kg又は投与1回当たり約50 mg/kg〜約100 mg/kgである。
【０２８１】
疾患の予防又は治療については、SIK3阻害剤（又はそれを含む医薬組成物）の適切な投与量は、治療すべき疾患のタイプ、重症度及び疾患の経過、SIK3阻害剤及び／又は医薬組成物を予防目的で投与するか又は治療目的で投与するか、以前の療法、患者の病歴、年齢、体格／体重、並びにSIK3阻害剤及び／又は医薬組成物に対する応答、並びに主治医の判断によって決まる。SIK3阻害剤及び／又は医薬組成物は、一度に又は一連の治療にわたって患者に適切に投与される。かかるSIK3阻害剤及び／又は医薬組成物が一連の治療にわたって投与される場合、所与の治療過程についての投与の総数は、合計約2回、3回、4回、5回、6回、7回、8回、9回、10回又は約10回を超える治療からなり得る。例えば、治療は1週間、1ヶ月又は更には数ヶ月にわたって毎日1回（又は1日2回、3回若しくは4回）行うことができる。或る特定の実施形態では、治療過程が生涯にわたって続く場合もある。
【０２８２】
投与されるSIK3阻害剤及び／又は医薬組成物の量は、治療すべき疾患又は適応症のタイプ及び程度、健康全般、年齢、患者の体格／体重、SIK3阻害剤及び／又は医薬組成物のin vivo効力、並びに投与経路等の可変要素によって決まる。初期投与量は、所望の血中レベル又は組織内レベルを迅速に達成するために最大（upper）レベルを超えて増加させることができる。代替的には、初期投与量が最適レベルより少なくてもよく、1日投与量を治療の過程で徐々に増加させることができる。ヒト投与量は、例えば比較的低い初期用量、例えば約0.01 mg/kg〜約20 mg/kgの活性成分から行うように設計された従来の第I相用量漸増研究において最適化することができる。投与頻度は投与経路、投与量及び治療される疾患等の因子に応じて変化し得る。例示的な投与頻度は1日に1回、1週間に1回及び2週間に1回である。本発明の（又は本発明に使用される）SIK3阻害剤の配合は、当業者の能力の範囲内である。本発明の幾つかの実施形態では、かかるSIK3阻害剤を凍結乾燥し、投与時に緩衝生理食塩水中で再構成する。SIK3阻害剤及び／又はその医薬組成物は、治療すべき疾患の再燃の低減を更にもたらすか、又は薬物耐性の発生を低減するか、又は薬物耐性が生じるまでの時間を延長する可能性があり、癌の場合には、無増悪生存及び／又は全生存の期間の延長をもたらす可能性がある。
【０２８３】
本発明の文脈における治療（又は診断）についての増殖性障害の特性：
本発明は、SIK3が抗腫瘍免疫応答に対する耐性と関連するという驚くべき研究結果に基づき、本発明者らは、特に細胞性免疫応答に対する増殖性障害に関与する細胞の耐性を克服することによる増殖性障害（例えば、癌又は腫瘍）の治療と関連がある様々な態様を本明細書に記載する。
【０２８４】
本発明の主題によって治療可能な障害は、宿主生物の防御応答に対する障害（増殖性障害等）に関与する（例えば、その影響を受ける）1つ以上の細胞の耐性、例えば病理学的表現型と関連する耐性を特徴とする障害であるのが好ましい。特定の例は、障害を患う被験体／患者が示す1つ以上の免疫応答、特に細胞性免疫応答に対するかかる細胞（例えば、腫瘍又は癌の細胞）の耐性である。
【０２８５】
「耐性」という用語は、患者自身の免疫応答（TNFを含む細胞性免疫応答等）に対する、又は免疫療法（immune therapy/immunotherapy）、例えば養子T細胞移入又はチェックポイントブロッカーを用いた治療によって助長される免疫応答に対する、増殖性疾患に関与する（例えば、増殖性疾患の又は増殖性疾患の影響を受ける）細胞、例えば腫瘍又は癌細胞の獲得耐性又は自然耐性を指す。したがって、耐性細胞（例えば、耐性腫瘍又は癌細胞）は、障害（腫瘍又は癌等）を有する被験体における液性及び／又は細胞性免疫防御機構を回避し、生き残る可能性が高い。本発明の文脈における腫瘍／癌耐性等の耐性増殖性疾患の治療は、非治療対照と比較して、増殖性疾患に関与する細胞（例えば、腫瘍又は癌の細胞）が免疫応答（細胞性免疫応答又はTNF等）に対する感受性が高くなるか、又はその影響を受けやすくなる、言い換えると、被験体の免疫応答により認識及び／又は中和される（例えば、アポトーシス等の細胞傷害過程による）可能性が高い場合に効果的なものとする。
【０２８６】
したがって、本発明の特定の実施形態では、増殖性障害に関与する細胞（複数の場合もある）は、細胞性免疫応答に対して（細胞性免疫応答に）耐性を示す場合があり、及び／又はかかる細胞（複数の場合もある）は、耐性表現型を有する又は呈する場合がある。
【０２８７】
本発明の好ましい実施形態では、「細胞耐性（"cellular resistance", "cell resistance"）」等の用語は、細胞傷害性Tリンパ球（CTL）応答又はTNF曝露等の細胞性免疫応答に対する被験体細胞（複数の場合もある）（腫瘍又は癌細胞等）の耐性を指す（例えば、腫瘍又は腫瘍細胞が腫瘍細胞を標的とするCTL又はTNF曝露に応答しないか、又は低減した若しくは限られた応答を有する）。腫瘍細胞は、その腫瘍細胞上で発現される抗原に特異的なCTLと接触させた場合、又はTNFと接触させた場合に低減した又は限られた応答を示し得る。低減した又は限られた応答は、90%の細胞傷害性T細胞又はTNF応答への低減、好ましくは80%、70%、60%、50%への低減、又はより好ましくは40%、30%、20%若しくは更にはそれ以下への低減である。この場合、100%は、CTL又はTNFがサンプル中の増殖性障害に関与する被験体細胞の全てを死滅させ得る状態を表す。被験体細胞（例えば、腫瘍細胞）が患者の（細胞媒介又はTNF）免疫応答に耐性を示すか否かは、被験体のかかる細胞（例えば、自己腫瘍細胞）のサンプルと（例えば、自己）T細胞又は（例えば、組換え）TNFとを接触させ、その後、（例えば）腫瘍細胞の生存／増殖率を定量化することによってin vitroで試験することができる。代替手段としては、（細胞媒介）免疫応答の低減は、耐性が獲得される（例えば、療法によって誘導される）前及び後で同じ癌の癌サンプルを比較するか、又はCTL若しくはTNFに対する耐性を有しないことが知られる異なる癌に由来する癌サンプルと比較することによって決定される。一方、本発明の治療は、増殖性障害に関与する細胞をCTL及び／又はTNFに対して感作し、それにより（therefore）かかる細胞の耐性を減少させることを含む。CTL及び／又はTNFに対する（例えば、腫瘍）細胞の耐性の減少は、好ましくはCTL又はTNF媒介毒性の顕著な増大、好ましくは10%、より好ましくは20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%又はそれ以上の増大、更により好ましくは2倍、3倍、4倍、5倍又はそれ以上の増大である。
【０２８８】
特定の実施形態では、増殖性障害に関与する細胞の耐性表現型は、増殖性障害（例えば、癌又は腫瘍）を患う被験体が以前に（免疫）療法により治療され、例えば、かかる以前の（免疫）療法に関わらず、かかる増殖性障害が進行している場合にかかる細胞によって示される。したがって、或る特定の実施形態では、被験体は、以前に免疫療法により治療し、その腫瘍が進行した、特にその腫瘍が再燃した、再発した又は応答しなかったとして区別する（特徴付ける）ことができる。例えば、本発明の様々な治療法に好適な被験体の群は、癌免疫療法による以前の治療後に腫瘍（又は癌）が進行した（例えば、再燃若しくは再発した、又は治療に応答しなかった）被験体であり得る。したがって、或る特定の実施形態では、以前の免疫療法は、免疫チェックポイント阻害剤の投与を含み、例えば以前の免疫療法は、免疫チェックポイント分子に結合する抗体、非抗体ペプチド又は小分子（いずれの場合にも、他の部分に記載されるようなもの）（の投与）を含むものであった。或る特定の実施形態では、このような以前の治療は、養子免疫細胞移入（例えば、TCR又はCAR T細胞療法）、抗腫瘍ワクチン、免疫チェックポイント分子（CTLA-4、PD-1又はPD-L1等）に結合する抗体、又は免疫（阻害性）チェックポイント分子の非抗体ペプチド若しくは小分子リガンド（いずれの場合にも、他の部分に記載されるようなもの）を含む、本明細書の他の部分に記載される任意の免疫療法であり得る。他の免疫療法（例えば、被験体の以前の治療であり得る）は、以下のものを含むものであってもよい：（x）被験体の自然免疫系の刺激をもたらし得る、STINGタンパク質を活性化する薬物の投与（STINGを作動する（agonise）薬物は、2'3'-cGAMPの類縁体である化合物であるAduro BiotechのADU-S100等の環状ジヌクレオチド（CDN）を含み得る）（Fu et al, 2015; Sci Transl Med 7; 283:ra52）；（y）SCH58261、SYN115、ZM241365又はFSPTP等のA2aRアンタゴニストの投与（Leone et al, 2015; Comp Struct Biotech J 13:265によって概説される）；及び／又は（z）IDO1/TDO及びそれらの下流エフェクターの標的化、例えば癌によって誘導される免疫抑制を元に戻す目的で臨床試験段階にあるインドールアミン-2,3-ジオキシゲナーゼの投与（Platten et al, 2015; Front Immun 5:673によって概説される）。
【０２８９】
他の（又は更なる）実施形態では、被験体は腫瘍又は癌を患う場合があり、かかる癌は、以前の放射線療法後に進行した（例えば、再燃若しくは再発した、又は療法に応答しなかった）ものであり得る。したがって、他の実施形態では、被験体は進行した、特に再燃した、再発した、又は以前の放射線療法に応答しなかった腫瘍を有するとして区別する（特徴付ける）ことができる。
【０２９０】
したがって、本発明は、増殖性障害に関与する細胞が以前の免疫療法に供された実施形態も含む。かかる実施形態の一例として、被験体は、以前の免疫療法（例えば、本明細書の他の部分に記載される療法）（例えば、それによる治療）、例えば免疫チェックポイント分子（に対するリガンド）の投与（例えば、免疫チェックポイント阻害剤の投与）による免疫療法、及び／又は本明細書の他の部分に記載されるもののような任意の他の以前の免疫療法を受けていてもよい。
【０２９１】
他の実施形態では、被験体は、以前に自己免疫障害（例えば、関節リウマチ）に対する抗TNF剤により治療されたとして区別する（特徴付ける）ことができる。特に、被験体は、抗TNF剤によるかかる治療の際に（例えば、その結果として）生じた悪性疾患を患っていてもよい。例えば、被験体は、抗TNF剤によるかかる治療の際に（例えば、その結果として）生じた血液学的悪性疾患を患っていてもよく、例えば、被験体は医原性免疫不全関連リンパ増殖性疾患を患う。
【０２９２】
本発明の主題によって治療可能な障害は、或る特定の実施形態では、SIK3の発現を特徴とする障害、特に健常な被験体又は正常細胞と比較した、所与の細胞又は組織（例えば、被験体の増殖性疾患に関与する細胞又は組織）におけるSIK3（特に、リン酸化SIK3）の異常な発現、例えば過剰（又は過小）な発現又は提示又は活性を特徴とする障害である。
【０２９３】
したがって、本発明は、増殖性障害に関与する細胞（例えば、腫瘍の細胞）がSIK3の発現及び／又は活性を特徴とする（特に、かかる細胞がSIK3のmRNA及び／又はタンパク質を発現する、及び／又はかかるSIK3発現及び／又は活性に陽性である）実施形態を含む。特定のかかる実施形態では、被験体は、例えばSIK3の発現及び／又は活性を特徴とする増殖性障害に関与する細胞を有することによって本発明の治療方法に好適であるとして区別され（例えば、特徴付けることができる）、特にかかる細胞は、SIK3のmRNA及び／又はタンパク質を発現し、及び／又はかかるSIK3発現及び／又は活性に陽性である。
【０２９４】
本発明の主題によって治療可能な障害は、他の或る特定の実施形態では、1つ以上の適用可能なバイオマーカーによって特徴付けられる障害（例えば、バイオマーカーによって更に特徴付けられる障害）であり得る。
【０２９５】
「適用可能なバイオマーカー」という用語は、免疫応答（例えば、TNF等の細胞性免疫応答）に対するSIK3媒介細胞耐性に関与することが本発明者らによって驚くべきことに見出された、増殖性障害に関与する細胞によって発現される（SIK3に加えて）任意の1つ（又は複数）の遺伝子を意味する。かかる遺伝子には、（SIK3、特にリン酸化SIK3に加えて）以下のものが含まれる：
（a）TNFR1（又はTNFR2）、例えばTNFR1（又はTNFR2）、特にTNFR1の存在（又はその量）若しくは発現及び／又は活性；
（b）LKB1、例えばLKB1の存在（又はその量）若しくは発現及び／又は活性、特にLKB1又はpLKB1の量若しくは活性の増大；
（c）特に腫瘍細胞の細胞質中の1つ以上のクラスII（例えば、IIa）HDAC、例えばHDAC4、例えばかかるHDACの存在（又はその量）若しくは発現及び／又は活性、特にかかるHDAC若しくはpHDACの量若しくは活性の増大；
（d）NF-κ-Bの発現、特にNF-κ-Bの構成的発現；
（e）特に腫瘍細胞の核内のNF-κ-B、例えばNF-κ-Bの存在（又はその量）若しくは発現及び／又は活性、特にNF-κ-B若しくはアセチル化NF-κ-Bの量若しくは活性の増大；及び／又は、
（f）1つ以上の抗アポトーシス遺伝子、例えば1つ以上の抗アポトーシス遺伝子の存在（又はその量）若しくは発現及び／又は活性、特にNF-κ-Bによる転写制御下のかかる遺伝子の1つ以上。
【０２９６】
本発明の全ての態様の或る特定の実施形態では、増殖性障害は、頭頚部癌、扁平上皮癌、多発性骨髄腫、孤発性形質細胞腫、腎細胞癌、網膜芽細胞腫、胚細胞腫瘍、肝芽腫、肝細胞癌、黒色腫、腎臓のラブドイド腫瘍、ユーイング肉腫、軟骨肉腫、任意の血液悪性腫瘍（例えば慢性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄単球性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、急性骨髄芽球性白血病、慢性骨髄芽球性白血病、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、有毛細胞性白血病、マスト細胞白血病、マスト細胞新生物、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、バーキットリンパ腫、菌状息肉腫、セザリー症候群、皮膚T細胞性リンパ腫、末梢性T細胞リンパ腫、慢性骨髄増殖性疾患、骨髄線維症、骨髄化生、全身性肥満細胞症）、及び中枢神経系腫瘍（例えば脳癌、神経膠芽腫、非神経膠芽腫脳癌、髄膜腫、下垂体腺腫、前庭神経鞘腫、未分化神経外胚葉性腫瘍、髄芽腫、星状細胞腫、退形成性星状細胞腫、乏突起神経膠腫、上衣腫及び脈絡叢乳頭腫）、骨髄増殖性障害（例えば真性多血症、血小板血症、特発性骨髄線維症（myelofibrosis））、軟部肉腫、甲状腺癌、子宮体癌、カルチノイド腫瘍、又は肝臓癌からなる群から選択される腫瘍、特に固形腫瘍である上記のものの1つ、又は増殖性障害に関与する細胞（複数の場合もある）は、かかる腫瘍の1つの細胞又はかかる腫瘍の1つに由来する細胞である。
【０２９７】
特定のかかる実施形態では、増殖性障害は膵癌、乳癌、黒色腫、卵巣癌、食道癌、肉腫（sarcoma）及び大腸癌からなる群から選択される腫瘍であってもよく、又は増殖性障害に関与する細胞は、かかる腫瘍の1つの細胞又はかかる腫瘍の1つに由来する細胞である。
【０２９８】
本発明の治療法のまた他の実施形態では、被験体におけるSIK3阻害剤の投与、SIK3阻害剤への曝露又はSIK3阻害剤との細胞接触は、以下の1つ以上と関連し得る：
上記被験体におけるTIL活性の増大；
上記被験体におけるTIL生存の増大；
上記被験体におけるTIL数の増大；
上記被験体におけるTNF産生の増大；
上記被験体におけるIL10産生の減少；
抗腫瘍及び腫瘍抑制免疫細胞の比率（例えば、CD8 T細胞/Tregの比率又はTeff/MDSCの比率）の増大；
上記被験体の腫瘍へのTILの浸潤の増大；
上記被験体におけるINF-γ産生の増大；
上記被験体におけるIL2産生の増大；
上記被験体におけるTGF-β産生の減少：
上記被験体におけるIL6産生の減少；及び／又は、
上記被験体におけるIDO（インドールアミン-ピロール2,3-ジオキシゲナーゼ）の産生の減少。
【０２９９】
本発明の治療法のまた更なる実施形態では、被験体におけるSIK3阻害剤の投与、SIK3阻害剤への曝露又はSIK3阻害剤との細胞接触は、被験体における細胞性免疫応答を増強する場合があり、特に上記増強は、上記の特徴（a）〜（f）の1つ以上と関連する。
【０３００】
本発明の治療法のまた他の実施形態では、被験体におけるSIK3阻害剤の投与、SIK3阻害剤への曝露又はSIK3阻害剤との細胞接触は、以下の1つ以上と関連しない場合がある：
1つ以上の抗炎症性サイトカイン、特にIL-10の産生の増大；及び／又は、
1つ以上の炎症性サイトカイン、特にTNFの産生の減少。
【０３０１】
検出／診断／モニタリング方法：
SIK3は、細胞性免疫応答に対する細胞耐性と関連する疾患及び／又は病態を検出、診断又はモニタリングするために診断目的で使用することができ、特にSIK3（特に、リン酸化SIK3）の異常な及び／又は局所的な発現／活性をそのように用いることができる。本発明の検出及び診断法の好ましい実施形態では、疾患、障害又は病態は、本明細書の他の部分に記載されるものの1つ以上、より好ましくは膵癌、乳癌、黒色腫、卵巣癌、食道癌、肉腫及び大腸癌等の本明細書の他の部分に記載される障害の1つ以上を含む癌又は腫瘍（固形腫瘍等）である。
【０３０２】
したがって、第8の態様では、哺乳動物被験体（例えば、ヒト）等の被験体が、細胞性免疫応答に対する細胞耐性と関連する表現型（例えば、それと関連する疾患、障害又は病態、特に固形腫瘍を含む癌又は腫瘍等の増殖性障害）、及び／又はSIK3（例えば、増殖性障害に関与する細胞のSIK3）の（異常）発現若しくは活性と関連する表現型を有するか、又は表現型を呈するリスクがあるかを決定する方法であって、
上記被験体に由来する生体サンプル中の適用可能なバイオマーカー（上記のような、SIK3及び／又はHDAC4等）（例えば、そのタンパク質又はmRNA）（例えば、癌又は腫瘍細胞の適用可能なバイオマーカー）を検出する工程、
を含み、サンプル（例えば、サンプルの癌又は腫瘍細胞）中の適用可能なバイオマーカーの検出が、被験体における細胞性免疫応答に対する細胞耐性と関連し、及び／又はSIK3の（異常）発現若しくは活性と関連する表現型（又は表現型を呈するリスク）を示す、方法における1つ以上の他の或る特定の遺伝子（上記のようなSIK3媒介耐性と関連がある適用可能なバイオマーカー）の使用が想定される。
【０３０３】
かかる態様の或る特定の実施形態では、適用可能なバイオマーカーの検出は、サンプル中のSIK3（特に、リン酸化SIK3）、特に被験体の腫瘍細胞と関連するSIK3又は被験体の腫瘍細胞のSIK3の存在若しくは量、又はその活性を決定することを含み得る。他の（代替的な又は更なる）実施形態では、適用可能なバイオマーカーの検出は、上記のような他の適用可能なバイオマーカーの1つ以上の存在又は量を決定することを含み得る。
【０３０４】
関連の態様では、本発明は、被験体に由来する生体サンプル中のSIK3（特に、リン酸化SIK3）の存在又は量を決定する方法であって、
上記サンプルと、SIK3（特に、リン酸化SIK3）に結合することが可能なABPとを接触させる工程と、
生体サンプル中のSIK3（特に、リン酸化SIK3）とABPとの間の結合を検出する工程と、
を含む、方法に関する。
【０３０５】
或る特定の実施形態では、生体サンプルは、（好ましくは）被験体の細胞若しくは組織、又はかかる細胞若しくは組織の抽出物を、特にかかる細胞が増殖性障害に関与する細胞（例えば、固形腫瘍の腫瘍細胞等の腫瘍細胞）である場合に（通常、通例、又は増殖性障害に関与することが疑われる特定の被験体の場合に）含む。腫瘍又はその細胞は、本明細書の他の部分に記載される腫瘍の1つであるか、又は腫瘍の1つに由来し得る。
【０３０６】
かかる態様の特定の実施形態では、方法は、
被験体に由来する生体サンプルを（例えば、サンプルを得ることによって）準備する工程も含み、特にかかる工程は、検出工程の前に行われる。
【０３０７】
特定の実施形態では、かかる検出及び／又は決定法は、診断法、例えば哺乳動物被験体（ヒト被験体又は患者等）が、細胞性免疫応答に対する細胞耐性と関連し、及び／又はSIK3の（異常）発現若しくは活性と関連する疾患、障害又は病態、特に癌又は腫瘍等の増殖性障害、特に（固形）腫瘍、例えば細胞性免疫応答に対する細胞耐性を有する（固形）腫瘍（の存在）を有する（又はかかる疾患、障害若しくは病態を発症するリスクを有する）かを診断する方法として実施することができる。
【０３０８】
これらの検出、決定及び／又は診断法の或る特定の実施形態では、細胞性免疫応答に対する細胞耐性は、T細胞性免疫応答に対する細胞耐性、特にTNF、及び／又はTNFR1シグナル伝達若しくはTNFR2シグナル伝達の死滅効果に対する細胞耐性である。
【０３０９】
したがって、これらの検出及び／又は診断法の特定の実施形態は、サンプル中のTNFの存在又は量を決定する工程を含む場合もあり、ここで、サンプル中のTNFの存在（又は量）は、被験体における細胞性免疫応答に対する細胞耐性と関連し、及び／又はSIK3の（異常）発現若しくは活性と関連する表現型（又は表現型を呈するリスク）を示す。特定のかかる実施形態では、サンプル中のTNFの量は定性的に決定される。好ましくは、被験体が、（i）被験体に由来する血漿サンプル中の約2 pg/mL若しくは5 pg/mLを超えるTNFの血漿濃度、及び／又は（ii）被験体に由来する組織サンプルの血漿中の約0.5 pg/mL若しくは1 pg/mLを超えるTNFの腫瘍内濃度を有するとして区別され、被験体における細胞性免疫応答に対する細胞耐性と関連し、及び／又はSIK3の発現若しくは活性と関連する表現型（又は増殖性障害又は増殖性障害を発症するリスク）（の存在）が示される。
【０３１０】
サンプル中のTNFの存在又は量を決定する方法論（特に、Quantitkine TNF-α Immunoassay等のELISAアッセイを用いたTNFの定量的検出；サンプル中に存在するTNFが上回る場合、被験体における細胞性免疫応答に対する細胞耐性と関連し、及び／又はSIK3の（異常）発現若しくは活性と関連する表現型が示されるTNFの量として）は、本明細書の他の部分に記載される。
【０３１１】
或る特定の実施形態では、生体サンプルは、ヒト患者のような哺乳動物被験体から得られるサンプルである。「生体サンプル」という用語は、その最も広い意味で用いられ、被験体（例えば、ヒト患者）から得られた身体サンプルを指すことができる。例えば、生体サンプルは臨床サンプル、すなわち被験体に由来するサンプルを含み得る。かかるサンプルとしては、細胞を含有していても又は含有していなくてもよい末梢体液、例えば血液、尿、血漿、粘液、胆汁、膵液、上清液及び血清；組織又は細針生検サンプル；腫瘍生検サンプル又は切片（又はその細胞）、並びに既知の診断歴、治療歴及び／又は転帰歴を有する保存（archival）サンプルを挙げることができるが、これらに限定されない。生体サンプルは、組織学的目的で採取された凍結切片等の組織の切片も含み得る。「生体サンプル」という用語は、サンプルを処理することによって得られる任意の物質も包含し得る。得られる物質としては、生体サンプルから単離された細胞（又はそれらの子孫）、サンプルから抽出された核酸及び／又はタンパク質を挙げることができるが、これらに限定されない。生体サンプルの処理は濾過、蒸留、抽出、増幅、濃縮、固定、干渉構成要素の不活性化、試薬の添加等の1つ以上を含み得る。
【０３１２】
幾つかの実施形態では、これらの検出、決定及び／又は診断法は、コンピューターによって実行される方法、又はコンピューターによって支援若しくは支持される方法であってもよい。幾つかの実施形態では、サンプル中の決定すべき適用可能なバイオマーカー（例えば、SIK3）の存在若しくは量（又はその活性）を反映する情報は、少なくとも1つのプロセッサによって得られ、及び／又はサンプル中のかかるマーカーの存在若しくは量（又はその活性）を反映する情報は、別のプロセッサによってユーザーが読み取り可能なフォーマットで提供される。1つ以上のプロセッサが、コンピューターオペレーティングシステムの制御下で又はコンピューターオペレーティングシステムと共に動作するランダムアクセスメモリと接続されていてもよい。プロセッサは1つ以上のサーバー、クラスター、又は他のコンピューター若しくはハードウェアリソースに含まれていても、又はクラウドベースのリソースを用いて実行されてもよい。オペレーティングシステムは例えば、Linux（商標）オペレーティングシステム、Unix（商標）オペレーティングシステムのディストリビューション、又は他のオープンソース若しくは独自のオペレーティングシステム若しくはプラットホームであり得る。プロセッサは、ハードドライブ又はドライブアレイに保存されるデータベース等のデータ記憶装置と通信し、プログラム命令、他のデータにアクセスするか又はそれを保管することができる。プロセッサは、ネットワークインターフェースを介して更に通信し、これがインターネット、又は他の公共若しくは私的ネットワーク等の1つ以上のネットワークを介して通信することで、クエリー又は他の要求をクライアント、又は他のデバイス若しくはサービスから受け取ることができる。幾つかの実施形態では、サンプル中の適用可能なバイオマーカーの存在又は量（又はその活性）を検出する、コンピューターにより実行される方法がキットとして提供される。
【０３１３】
かかる検出、決定及び／又は診断法は、in vitro（例えば、ex vivo）方法として行うことができ、例えば本発明のキット（又はその構成要素）を用いて実施することができる。in vitro方法は、不死化細胞株（例えば、動物又はヒトの体外で複製、培養又は無限に維持されるもの）を使用するか、必要とするか、若しくはその上で実施してもよく、又はin vitroで動物若しくはヒトの身体から直接若しくは新たに得られた細胞（初代細胞等）を使用するか、必要とするか、若しくはそれを用いて実施してもよい（例えば、いわゆる「ex vivo」方法として実施される）。
【０３１４】
これらの検出、決定及び／又は診断法の幾つかの実施形態では、生体サンプルは、被験体に由来する組織サンプル、例えば被験体に由来する腫瘍又は癌のサンプルである。上記のように、かかる組織サンプルは、針生検サンプル等の腫瘍若しくは癌の生検サンプル、又は腫瘍生検切片若しくはその保存サンプルであり得る。かかる組織サンプルは生細胞、死細胞又は固定細胞、例えば腫瘍又は癌に由来する細胞を含んでいてもよく、かかる細胞は、決定すべき適用可能なバイオマーカーを（例えば、異常又は局所的に）発現することが疑われるものであってもよい。
【０３１５】
幾つかの実施形態では、本発明の決定及び／又は診断法は、例えば更なる工程において、適用可能なバイオマーカー（例えばSIK3、特にリン酸化SIK3）の（例えば、そのタンパク質又はmRNAの）検出された量（又はその活性）と、標準又はカットオフ値とを比較することを含んでいてもよく、標準又はカットオフ値を上回る検出量は、被験体における細胞性免疫応答に対する細胞耐性と関連し、及び／又は被験体におけるSIK3の（異常）発現若しくは活性と関連する表現型（又は表現型を呈するリスク）を示す。かかる標準又はカットオフ値は、対照アッセイの使用により決定することができ、又は研究若しくは既知の表現型を有する複数のサンプルによる1つ以上の値から予め決定することができる。例えば、診断試験のためのカットオフ値は、対照臨床研究の状況で患者から採取されたサンプルの分析、並びに所望の（又は得られる）試験の感度及び／又は特異度に応じたカットオフの決定によって決定することができる。
【０３１６】
適用可能なバイオマーカー（例えばSIK3、特にリン酸化SIK3）（例えば、その有無、又はその量）の検出に有用な方法の例としては、かかる適用可能なバイオマーカーに特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメント等の抗原結合タンパク質（「ABP」）を用いる酵素結合免疫吸着法（ELISA）及び放射免疫測定法（RIA）等の免疫測定法が挙げられる。
【０３１７】
「抗原結合タンパク質」（「ABP」）は、本明細書で使用される場合、標的抗原によって提示される又は標的抗原上に存在する1つ以上のエピトープに特異的に結合するタンパク質の意味を含む。通例、抗原結合タンパク質は、抗体（又はそのフラグメント）であるが、他の形態の抗原結合タンパク質も本発明によって想定される。例えば、ABPは、例えばコンビナトリアルタンパク質設計の方法を用いることによって、結合機能を備えるもののような小さく強固な非免疫グロブリン「足場」から得られる別の（非抗体）受容体タンパク質であり得る（Gebauer & Skerra, 2009; Curr Opin Chem Biol, 13:245）。かかる非抗体ABPの特定の例としては、プロテインAのZドメインをベースとするアフィボディ（Affibody）分子（Nygren, 2008; FEBS J 275:2668）；γ-Bクリスタリン（crystalline）及び／又はユビキチンをベースとするアフィリン（Affilins）（Ebersbach et al, 2007; J Mo Biol, 372:172）；シスタチンをベースとするアフィマー（Affimer）（Johnson et al, 2012; Anal Chem 84:6553）；スルホロブス・アシドカルダリウス（Sulfolobus acidcaldarius）に由来するSac7dをベースとするアフィチン（Affitins）（Krehenbrink et al, 2008; J Mol Biol 383:1058）；三重ヘリックスコイルドコイルをベースとするアルファボディ（Alphabodies）（Desmet et al, 2014; Nature Comms 5:5237）；リポカリンをベースとするアンチカリン（Anticalins）（(Skerra, 2008; FEBS J 275:2677）；様々な膜受容体のAドメインをベースとするアビマー（Avimers）（Silverman et al, 2005; Nat Biotechnol 23:1556）；アンキリン反復モチーフをベースとするDARPin（Strumpp et al, 2008; Drug Discov Today, 13:69）；FynのSH3ドメインをベースとするFynomer（Grabulovski et al, 2007; J Biol Chem 282:3196）；様々なプロテアーゼ阻害剤のKunitzドメインをベースとするKunitzドメインペプチド（Nixon et al, Curr opin Drug Discov Devel, 9:261）及びフィブロネクチンの10番目のIII型ドメインをベースとするモノボディ（Monobodies）（Koide & Koide, 2007; Methods Mol Biol 352:95）が挙げられる。
【０３１８】
抗原結合タンパク質は、或る抗原（適用可能なバイオマーカー、例えばSIK3、特にリン酸化SIK3等）に、第2の抗原に結合するよりも優先的に（例えば、より強く又はより広範に）結合する場合に「特異的」である。本明細書においてABPとの関連で使用される「特異的に結合する」等（"specifically binds" (or "binds specifically" and the like)）の用語は、上記ABPが決定すべき適用可能なバイオマーカーに、他のタンパク質（又は他の分子）に結合するよりも優先的に結合する、例えばSIK2及び／又はSIK1及び／又は他のキナーゼの1つ以上と比較して、かかるSIK3に優先的に結合することを意味する。したがって、好ましくは、或る抗原（例えば、SIK3）に対するABPの結合親和性は、他の標的（例えば、SIK3のパラログ、例えばSIK2及び／又はSIK1）に対するその親和性と比較して少なくとも2倍、5倍、少なくとも10倍、少なくとも20倍、少なくとも50倍、少なくとも100倍、少なくとも200倍、少なくとも500倍、少なくとも1000倍、少なくとも2000倍、少なくとも5000倍、少なくとも10000倍、少なくとも105倍又は更には少なくとも106倍、最も好ましくは少なくとも2倍である。
【０３１９】
或る特定の実施形態では、抗原結合タンパク質は、非リン酸化SIK3への結合よりも優先的にリン酸化SIK3に結合する。
【０３２０】
本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、最も広い意味で、そのエピトープへの結合を可能にする任意の免疫グロブリン（Ig）として理解することができる。抗体自体がABPの一種である。完全長「抗体」又は「免疫グロブリン」は概して、2つの同一の軽鎖及び2つの同一の重鎖から構成される、約150 kDaのヘテロ四量体糖タンパク質である。各軽鎖は、1つの共有ジスルフィド結合によって重鎖に連結するが、ジスルフィド連結の数は、種々の免疫グロブリンアイソタイプの重鎖によって異なる。各々の重鎖及び軽鎖は、規則的間隔の鎖内ジスルフィド架橋も有する。各重鎖は、アミノ末端可変ドメイン（VH）に続く3つのカルボキシ末端定常ドメイン（CH）を有する。各軽鎖は、可変N末端ドメイン（VL）及び単一のC末端定常ドメイン（CL）を有する。VH領域及びVL領域は、フレームワーク領域（FR）と称される、より保存される領域が組み入れられた、相補性決定領域（CDR）と称される超可変性領域に更に細分することができる。各々のVH及びVLは、アミノ末端からカルボキシ末端へと以下の順序：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4で配置された、3つのCDR及び4つのFRから構成される。重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）及び古典的補体系の第1成分（C1q）を含む細胞又は因子への免疫グロブリンの結合を媒介することができる。他の形態の抗体としては、2つの重鎖のみからなり、抗体中に通常見られる2つの軽鎖を欠く抗体である重鎖抗体が挙げられる。重鎖抗体としては、ヒトコブラクダ、ラクダ、ラマ及びアルパカ等のラクダ科のhcIgG（IgG様）抗体、並びに軟骨魚類（例えば、サメ）のIgNAR抗体が挙げられる。さらに、また他の形態の抗体としては、単一の単量体可変抗体ドメインからなる抗体フラグメントである単一ドメイン抗体（sdAb、開発業者のAblynxにはナノボディ（Nanobody）と呼ばれる）が挙げられる。単一ドメイン抗体は通例、重鎖抗体から作製されるが、従来の抗体から得ることもできる。
【０３２１】
抗体は、或る特定の実施形態では、ポリクローナル抗体であってもよく、他の実施形態では、モノクローナル抗体であってもよい。
【０３２２】
「ポリクローナル抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、複数回の体細胞組換え及びクローン選択事象によって得られる形質細胞によって産生されることから遺伝学的に異なり、通例、同じ抗原の異なるエピトープを認識する抗体の混合物を指す。
【０３２３】
「モノクローナル抗体」又は「mAb」という用語は、本明細書で使用される場合、それらのアミノ酸配列に基づいて実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を指す。モノクローナル抗体は通例、高度に特異的である。さらに、通例は異なる抗原の決定基（例えば、エピトープ）に対する異なる抗体を含む従来の（ポリクローナル）抗体調製物とは対照的に、各mAbは通例、抗原上の単一の決定基に対するものである。それらの特異性に加えて、mAbは、他の免疫グロブリンで汚染されていない細胞培養（ハイブリドーマ、組換え細胞等）によって合成することができるという点で有利である。本明細書のmAbは、例えばキメラ、ヒト化又はヒトの抗体又は抗体フラグメントを含む。
【０３２４】
「キメラ抗体」という用語は、軽鎖及び／又は重鎖の遺伝子が、マウス及びヒト等の異なる種の対応する配列と同一又は相同の免疫グロブリン可変及び定常領域から通例は遺伝子操作によって構築された抗体を指す。代替的には、重鎖遺伝子が特定の抗体クラス又はサブクラスに由来し、残りの鎖が同じ又は異なる種の別の抗体クラス又はサブクラスに由来する。これにはかかる抗体のフラグメントも含まれる。例えば、典型的な治療用キメラ抗体は、マウス抗体に由来する可変又は抗原結合ドメインと、ヒト抗体に由来する定常又はエフェクタードメインとから構成されるハイブリッドタンパク質であるが、他の哺乳動物種を用いてもよい。
【０３２５】
「ヒト化抗体」という用語は、非ヒト免疫グロブリンに由来する配列を最低限（通例、依然として少なくとも一部分）含有する、特定のキメラ抗体、免疫グロブリン鎖又はそのフラグメント（Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、又は抗体の他の抗原結合部分配列（sub-sequences）等）を指す。殆どの場合、ヒト化抗体は、レシピエント抗体のCDR残基が所望の特異性、親和性及び能力を有するマウス、ラット又はウサギ等の非ヒト種免疫グロブリン（ドナー抗体）に由来するCDR残基に置き換えられたヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。そのため、上記抗体又はそのフラグメントのフレームワーク配列の少なくとも一部分がヒトコンセンサスフレームワーク配列であり得る。場合によっては、ヒト免疫グロブリンのFvフレームワーク残基を、特異性又は親和性を増大するために対応する非ヒト残基に置き換える必要がある。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも移入CDR又はフレームワーク配列にも見られない残基を含み得る。これらの修飾は、抗体の性能を更に改良及び最大化するために行われる。概して、ヒト化抗体は、少なくとも1つ、通例は少なくとも2つの可変ドメインの実質的に全てを含み、CDR領域の全て又は実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのCDR領域に対応し、フレームワーク領域の全て又は実質的に全てがヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のフレームワーク領域である。ヒト化抗体はまた、最適には免疫グロブリン定常領域、通例ヒト免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部分を含む。
【０３２６】
抗体フラグメントは、隣接する軽鎖の定常領域及び重鎖の第1の定常ドメイン（CH1）によって結び付いた、重鎖及び軽鎖の各々の1つの定常ドメイン及び1つの可変ドメインから構成される「Fabフラグメント」を含む。これらは、例えばパパインによるプロテアーゼ消化によって従来の抗体から形成することができるが、同様のFabフラグメントを遺伝子操作によっても作製することができる。Fabフラグメントには、少なくとも1つの遊離スルフヒドリル基を含有するFabフラグメントである「Fab-SH」が含まれる。
【０３２７】
Fab'フラグメントは、重鎖の第1の定常ドメインのカルボキシ末端に、抗体ヒンジ領域に由来する1つ以上のシステインを含む付加的な残基を含有するという点でFabフラグメントとは異なる。Fab'フラグメントには、少なくとも1つの遊離スルフヒドリル基を含有するFab'フラグメントである「Fab'-SH」が含まれる。
【０３２８】
さらに、抗体フラグメントは、鎖間ジスルフィド結合が2つの重鎖間に形成されるように、CH1ドメインとCH2ドメインとの間の定常領域の一部分を含有する、2つの軽鎖及び2つの重鎖を含有するF(ab')2フラグメントを含む。このため、F(ab')2フラグメントは、2つの重鎖間のジスルフィド結合によって結び付いた、2つのFab'フラグメントから構成される。F(ab')2フラグメントは、ヒンジ領域の下を切断する酵素、例えばペプシンを用いたタンパク質分解的切断、又は遺伝子操作によって従来の抗体から作製することができる。
【０３２９】
「Fv領域」は、重鎖及び軽鎖の両方に由来する可変領域を含むが、定常領域を欠く。「一本鎖抗体」又は「scFv」は、重鎖及び軽鎖の可変領域が、抗原結合領域を形成する単一ポリペプチド鎖を形成するように可動性リンカーによって接続されたFv分子である。
【０３３０】
「Fc領域」は、抗体のCH2ドメイン及びCH3ドメインを含む2つの重鎖フラグメントを含む。2つの重鎖フラグメントは、2つ以上のジスルフィド結合及びCH3ドメインの疎水性相互作用によって結び付けられる。
【０３３１】
代替的には、適用可能なバイオマーカー（例えばSIK3、特にリン酸化SIK3）の存在は、かかる適用可能なバイオマーカーをコードするmRNA、又はかかるmRNAのフラグメントの存在の検出によって検出することができる。かかるmRNA（又はフラグメント）の存在を検出する方法は、PCR（定量的RT-PCR等）、ハイブリダイゼーション（例えば、Illuminaチップへの）、核酸シークエンシング等を含み得る。かかる方法は、本明細書に記載の1つ以上の核酸、例えばかかるmRNAに（例えば、特異的に）結合するPCRプライマー若しくはPCRプローブ、又はハイブリダイゼーションプローブを使用する工程を伴う又は含む場合がある。
【０３３２】
かかる検出、決定又は診断用途については、ABP又は核酸は通例、検出可能な標識基で標識される。概して、標識基は、それらが検出されるアッセイに応じて、a）放射性同位体又は重同位体であり得る同位体標識、b）磁性標識（例えば、磁性粒子）、c）レドックス活性部分、d）光学色素（optical dyes）、酵素基（enzymatic groups）（例えば、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、β-ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）、e）ビオチン化基、及びf）二次レポーターによって認識される所定のポリペプチドエピトープ（例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体の結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ等）と様々な種類に分類される。好適な標識基としては、以下のものが挙げられるが、これらに限定されない：放射性同位体又は放射性核種（例えば、3H、14C、15N、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I）、蛍光基（例えば、FITC、ローダミン、ランタニドリン光体）、酵素基（例えば、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、β-ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）、化学発光基、ビオチニル基
、又は二次レポーターによって認識される所定のポリペプチドエピトープ（例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体の結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ）。幾つかの実施形態では、標識基を、立体障害の可能性を低減するために様々な長さのスペーサーアームを介してABP又は核酸に結合させる。タンパク質を標識する様々な方法が当該技術分野で既知であり、用いることができる。例えば、ABP又は核酸は、二次レポーターで標識することができる（例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体の結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ等）。
【０３３３】
したがって、検出／診断法（又はそのためのキット）の特定の実施形態では、適用可能なバイオマーカー（例えば、SIK3）のタンパク質又はmRNAの検出のための手段（例えば、ABP又は核酸）を標識する、例えば検出可能な標識に結合させる。「標識」又は「標識基」という用語は、本明細書に記載されるものを含む任意の検出可能な標識を指す。
【０３３４】
或る特定の実施形態では、本発明の検出／診断法は、免疫組織化学（IHC）アッセイ又は免疫細胞化学（IC）アッセイを伴う。「IHC」及び「ICC」という用語は、当該技術分野で認識されており、特異的エピトープ−抗体相互作用によって決まる局在化した抗原発現のために用いられる技法の意味を含む。IHCは通例、組織切片の使用を指すが、ICCは通例、培養細胞又は細胞懸濁液の使用を表す。どちらの方法においても、陽性染色を通例、分子標識（例えば、蛍光性又は発色性であり得るもの）を用いて可視化する。簡潔に述べると、サンプルを通例、細胞の完全性を保護するために固定し、その後、抗体の非特異的結合を防ぐためにブロッキング試薬とのインキュベーションに供する。続いて、サンプルを通例、一次（場合によっては、二次）抗体と共にインキュベートし、シグナルを顕微分析のために可視化する。
【０３３５】
したがって、本発明の検出／診断法のかかる実施形態は、被験体のIHC又はICC標本の組織又は細胞（例えば、被験体から得られた生体サンプル中に存在するもの）を調製する工程を含み得る。ここで、好ましくは、上記IHC又はICC標本の組織又は細胞によって発現される適用可能なバイオマーカー（例えばSIK3、特にリン酸化SIK3）へのABPの結合の検出は、（i）被験体における細胞性免疫応答に対する細胞耐性と関連する表現型（又は表現型を呈するリスク）、及び／又は（ii）上記被験体がSIK3の（異常）発現若しくは活性と関連する疾患、病態若しくは障害を有する若しくはそれらを発症するリスクを有することを示す。
【０３３６】
かかるIHC/ICC方法では、適用可能なバイオマーカー（例えばSIK3、特にリン酸化SIK3）に（好ましくは特異的に）結合し、上記検証用IHC又はICC標本の組織又は細胞によって発現される適用可能なバイオマーカー（例えば、かかるSIK3）に（検出可能に）結合する以外は哺乳動物組織又は細胞の検証用IHC又はICC標本に結合しない（例えば、検出可能に結合しない）ABPが用いられる。
【０３３７】
或る特定のかかる実施形態では、上記検証用及び／又は被験体IHC又はICC標本は、いずれの場合にも組織及び／又は細胞の凍結切片、パラフィン切片及び樹脂切片からなるリストから選択されるものであり、及び／又は上記IHC又はICC標本のいずれか（又は両方）に含まれる組織及び／又は細胞は固定される。かかるIHC又はICC標本（複数の場合もある）の組織及び／又は細胞は、アルコール、アルデヒド、水銀剤（mercurial agent）、酸化剤又はピクリン酸塩によって固定することができる。
【０３３８】
好ましいかかる実施形態の1つでは、上記検証用及び／又は被験体IHC又はICC標本は、上記組織及び／又は細胞のホルマリン固定パラフィン包埋（FFPE）切片であり、及び／又は上記検証用及び／又は被験体IHC又はICC標本は、抗原賦活化（AR）に供される。かかるARは、プロテアーゼ誘導エピトープ賦活化（PIER）又は熱誘導エピトープ賦活化（HIER）を含み得る。
【０３３９】
かかる方法に用いられるABPは、検証されるのが好ましい。例えば、ABPは、上記検証用IHC又はICC標本の細胞及び／又は組織によって発現される適用可能なバイオマーカー（例えばSIK3、特にリン酸化SIK3）に（検出可能に）結合するが、適用可能なバイオマーカー（例えば、SIK3等）を発現しない対照細胞及び／又は組織の対照IHC又はICC標本に（検出可能に）結合しないことが検証される。好ましくは、上記対照細胞は、適用可能なバイオマーカー（例えば、SIK3）について遺伝子ノックダウン又は遺伝子ノックアウトされた細胞及び／又は組織であり、より好ましくは、上記遺伝子ノックダウン又は遺伝子ノックアウトされた細胞及び／又は組織は、かかる適用可能なバイオマーカーについてsiRNA又はshRNA遺伝子ノックダウン又は遺伝子ノックアウトされる。かかる対照細胞は、PANC1からなるリストから選択される細胞株の細胞を含んでいてもよく、かかる適用可能なバイオマーカー（例えば、SIK3）を発現しない上記対照細胞及び／又は組織は、表A1及び表A2のものから選択されるSIK3 siRNA若しくはshRNAをトランスフェクトした上記細胞株の細胞を含み、及び／又は上記検証用IHC若しくはICC標本は、shSIK3レンチウイルスベクター（例えば、実施例8に記載される）で形質導入したM579細胞の細胞を含む。
【０３４０】
かかるIHC/ICC方法では、ABPは約50 μg/mL、25 μg/mL、20 μg/mL、15 μg/mL、10 μg/mL、7.5 μg/mL、5 μg/mL、2.5 μg/mL、1 μg/mL、0.5 μg/mL、0.2 μg/ml又は0.1 μg/ml未満、特に約5 μg/mL未満、より特に2.5 μg/mL未満の作用濃度で上記検証用及び／又は被験体IHC又はICC標本と共に使用される。好ましくは、上記作用濃度よりも約2倍、5倍、10倍、20倍又は50倍高い濃度、特に上記作用濃度より約2倍高い濃度、より特に上記作用濃度より約5倍高い濃度では、上記ABPは、上記IHC標本の哺乳動物細胞又は組織によって発現される適用可能なバイオマーカー（例えばSIK3、特にリン酸化SIK3）に（検出可能に）結合する以外は、哺乳動物細胞又は組織の上記検証用免疫組織化学（IHC）標本に（検出可能に）結合しない。
【０３４１】
本発明の検出／診断法では、使用されるABPはポリクローナル抗体、好ましくはウサギ抗体であり得る。
【０３４２】
第9の態様では、本発明は、被験体（ヒト被験体又は患者等）が、細胞性免疫応答に対する細胞耐性と関連し、及び／又はSIK3の（異常）発現若しくは活性と関連する疾患、障害又は病態、特に増殖性障害（例えば、癌又は腫瘍）、例えば細胞性免疫応答（例えば、T細胞性免疫応答）に対する細胞耐性を有する増殖性障害を有する（又はそれらを発症するリスクを有する）かを（例えば、in vitro及び／又はex vivo方法によって）決定（又は診断）する方法であって、上記決定／診断が生物学的応答を測定する機能アッセイ、例えば本明細書の他の部分に記載される機能アッセイを伴って行われる、方法に関する。例えば、かかる方法の1つは、
疾患、障害又は病態に関与する被験体の細胞（例えば、腫瘍細胞）（例えば、疾患、障害又は病態に関与することが疑われる細胞）とSIK3阻害剤とを細胞性免疫応答、例えば（i）リンパ球、T細胞、CTL及びTILからなる群から選択される（有効量の）免疫細胞、又は（ii）TNF等の（有効量の）炎症性サイトカインの存在下で接触させる工程と、
被験体のかかる細胞に対する細胞性免疫応答を決定する工程と、
を含む場合があり、（SIK3阻害剤の存在下での）被験体のかかる細胞に対する細胞性免疫応答の増強が、被験体がかかる疾患、障害又は病態を有する（又はそれらを発症するリスクを有する）ことを示す。かかる工程の1つ以上がin vitro工程であってもよい。
【０３４３】
関連の態様では、本発明は、細胞性免疫応答に対する増殖性疾患（例えば、癌又は腫瘍）に関与する細胞の耐性を（例えば、in vitro及び／又はex vivo方法によって）決定する方法であって、
かかる細胞とSIK3阻害剤とを細胞性免疫応答、例えば（i）リンパ球、T細胞、CTL及びTILからなる群から選択される免疫細胞、又は（ii）TNF等の（有効量の）炎症性サイトカインの存在下で接触させる工程と、
かかる細胞に対する細胞性免疫応答を決定する工程と、
を含み、（SIK3阻害剤の存在下での）かかる細胞に対する細胞性免疫応答の増強が、かかる細胞が細胞性免疫応答に対する耐性を有することを示す、方法に関する。かかる工程の1つ以上がin vitro工程であってもよい。
【０３４４】
或る特定の実施形態では、増殖性障害に関与する細胞は、細胞性免疫応答に対する細胞耐性と関連し、及び／又はSIK3の（異常）発現若しくは活性と関連する疾患、障害又は病態を有する（又はそれらを発症するリスクを有する）被験体（ヒト被験体又は患者等）から得られた生体サンプルとして準備される。
【０３４５】
細胞性免疫応答の増強は、例えば被験体の細胞の細胞傷害性の増大、カスパーゼ8及び／又はカスパーゼ9切断の増大、NF-κ-Bの発現及び／又は活性の減少（特に、NF-κ-B又はアセチル化NF-κ-Bの量又は活性の減少（特に腫瘍細胞の核内での））、及び／又は1つ以上の抗アポトーシス遺伝子（特に、NF-κ-Bの転写制御下のかかる遺伝子の1つ以上）の発現及び／又は活性の減少によって決定することができる。かかる生物学的応答を決定する方法は、本明細書の他の部分に記載され、例えば上記のクロム放出細胞傷害性アッセイが挙げられる。
【０３４６】
或る特定の実施形態では、細胞性免疫応答と接触する被験体の細胞は、被験体の細胞（被験体の腫瘍又は癌の細胞等）を含む、被験体に由来する生体サンプルとして（例えば、それを得ることによって）準備される。かかる方法の特定の実施形態は、被験体に由来する生体サンプルを（例えば、それを得ることによって）準備する工程も含み、特に、かかる工程は接触工程の前に行われる。
【０３４７】
関連の態様では、検出、決定及び／又は診断法は、本発明の治療方法によって治療される又は治療が意図される被験体の治療の成功（又は成功若しくはリスク若しくは疾患の緩解の可能性）をモニタリング（又は予測）する方法として用いることができる。例えば、（1）被験体に由来するサンプルが、上記の適用可能なバイオマーカー（例えばSIK3、特にリン酸化SIK3）の1つ以上（又はその指標量）の存在、及び／又はTNF（又はその指標量）の存在を有することが決定される場合、かかる被験体について、本発明の方法（例えば、SIK3阻害剤の投与）による（将来の）治療が成功し得る又は成功する可能性が高いことが示され、及び／又は（2）かかる治療（例えば、SIK3阻害剤の投与）の過程で、上記の適用可能なバイオマーカー（例えば、かかるSIK3）（又はカスパーゼ8及び／又はカスパーゼ9）の1つ以上、又はその発現（又は活性）の低減（例えば、その指標量未満）又は非存在が被験体に由来するサンプルにおいて決定される場合、かかる被験体について、本発明の方法（例えば、SIK3阻害剤の投与）によるかかる治療が成功する若しくは成功した、又は継続した場合に成功する可能性が高いことが示される。
【０３４８】
ここで、本発明の検出、決定及び／又は診断法（及びその任意の実施形態）を、本発明のモニタリング又は予測法の一部として用いられるように実施又は改変することができる方法が当業者には容易に認識される。
【０３４９】
別の態様では、本発明は、ヒト患者等の被験体におけるSIK3の存在若しくは量を特徴とする、及び／又はSIK3の（異常）発現若しくは活性を特徴とする疾患、障害又は病態（増殖性障害、例えば腫瘍又は癌等）を診断及び治療する方法であって、
本発明の検出、決定及び／又は診断法（例えば、上記のもの）を行い、それにより被験体がかかる疾患、障害又は病態を患うかを診断することと、
有効量のSIK3阻害剤（及び／又はかかる阻害剤を含む医薬組成物）をそのように診断された被験体に投与すること、特に本発明の治療方法を被験体に対して実施することと、
を含む、方法に関する。
【０３５０】
この診断及び治療方法の投与（又は治療）工程の更なる実施形態は、この方法の検出、決定又は診断法の工程の方法の特定の実施形態と同様、上記により詳細に説明されている。特定のかかる実施形態には、被験体に投与するSIK3阻害剤の量が、（被験体における）TNFの血漿又は腫瘍内濃度と相関があり、TNFの血漿又は腫瘍内濃度がより高い場合に、より多くの量（又は用量）のSIK3阻害剤がかかる被験体に投与される実施形態が含まれる。
【０３５１】
また別の態様では、本発明は、（例えば、in vitro及び／又はex vivo）診断、例えばヒト患者等の（哺乳動物）被験体における疾患、障害又は病態、特に細胞性免疫応答に対する細胞耐性と関連し、及び／又はSIK3の（異常）発現若しくは活性と関連する疾患、障害又は病態（増殖性障害、例えば腫瘍又は癌等）の検出（又はそれらを発症するリスクの決定）に使用される、適用可能なバイオマーカー（例えばSIK3、特にリン酸化SIK3、又はHDAC4若しくはリン酸化HDAC4）のタンパク質に（好ましくは特異的に）結合するABP、又はかかる適用可能なバイオマーカーのmRNAに（例えば、特異的に）結合することができる核酸に関する。
【０３５２】
したがって、かかる態様の一実施形態は、（例えば、in vitro及び／又はex vivo）診断のための／診断におけるSIK3（特にリン酸化SIK3、又はHDAC4若しくはリン酸化HDAC4）に（例えば特異的に）結合することが可能な又は結合するABPの使用を提供する。特に、細胞性免疫応答に対する細胞耐性と関連し（癌等）、及び／又はSIK3の（異常）発現若しくは活性と関連する被験体における疾患、障害又は病態の診断に使用される、SIK3（特にリン酸化SIK3）に（例えば特異的に）結合するABP（モノクローナル抗体等）が提供される。
【０３５３】
かかる検出に使用されるABP又は核酸は、本明細書の他の部分に記載されるいずれかであり得る。
【０３５４】
検出／診断／モニタリングのキット：
第10の態様では、キット、例えば本発明の診断法又は決定法又は検出法（又はモニタリング若しくは予測法）を行うための、例えばサンプル（例えば、生体サンプル）中、例えばサンプル中の細胞上の適用可能なバイオマーカー（例えばSIK3、特にリン酸化SIK3、又はHDAC4若しくはリン酸化HDAC4）の存在、非存在、量、機能、活性及び／又は発現を決定するためのキットが本明細書で提供される。キットは、上記のようなABP及び／又は核酸と、任意に1つ以上の付加的な構成要素とを含む。
【０３５５】
キットの或る特定の実施形態では、付加的な構成要素は、例えばABPとかかる適用可能なバイオマーカーのタンパク質との結合を検出し、及び／又は核酸とかかる適用可能なバイオマーカーのmRNAとの結合を検出することによる、サンプル中の適用可能なバイオマーカーの存在の検出にABP又は核酸又はキットを使用する方法を記載する説明書を含み得る。かかる説明書は、かかる説明書を含む印刷されたマニュアル若しくはコンピューターで読み取り可能なメモリからなっていても、又はキットと共に用いられる1つ以上の他の構成要素を特定する、得る及び／又は使用するための説明書を含んでいてもよい。
【０３５６】
キットの他の或る特定の実施形態では、付加的な構成要素は、キットの使用又は本発明の検出法の実施に有用な1つ以上の他のアイテム、構成要素、試薬又は他の手段、例えばかかる実施に有用な、本明細書に開示される任意のかかるアイテム、構成要素、試薬又は手段を含み得る。例えば、キットは、反応及び／又は結合バッファー、標識、酵素基質、二次抗体、及び対照サンプル、材料又は部分等を更に含んでいてもよい。
【０３５７】
特定のかかる実施形態では、付加的な構成要素は、適用可能なバイオマーカー（例えばSIK3、特にリン酸化SIK3）のタンパク質の存在を検出する、例えばABPとかかるタンパク質との結合を検出する手段を含み得る。
【０３５８】
ABPの結合を示す様々な手段を使用することができる。例えば、フルオロフォア、他の分子プローブ又は酵素をABPに連結することができ、ABPの存在を様々な方法で観察することができる。疾患、障害又は病態をスクリーニングする方法は、キットの使用、又は単に開示のABPの1つの使用及びそのABPがサンプル中の適用可能なバイオマーカー（例えばSIK3、特にリン酸化SIK3）のタンパク質に結合する程度の決定を伴い得る。当業者に理解されるように、適用可能なバイオマーカー（例えば、かかるSIK3）のタンパク質の高い又は上昇したレベルは、サンプルにおけるそのタンパク質へのより多量のABP結合をもたらす。このため、ABP結合の程度をサンプル中の適用可能なバイオマーカー（例えば、かかるSIK3）の量の決定に用いることができる。かかる適用可能なバイオマーカーの量が所定の量（例えば、適用可能なバイオマーカー（例えば、かかるSIK3）と関連がある障害を有しない個人が有し得る量又は範囲）よりも多い被験体又はサンプルはSIK3、特に腫瘍細胞中のSIKによって媒介される疾患、障害又は病態（例えば、SIK3の（異常）発現、機能、活性及び／又は安定性によって媒介されるもの）を有するとして特徴付けることができる。
【０３５９】
幾つかの実施形態では、キットは、以下の1つ以上を更に含む：適用可能なバイオマーカー（例えばSIK3、特にリン酸化SIK3）のタンパク質又はmRNAの標準、ABP又は核酸の結合の陽性及び／又は陰性対照、サンプルを採取するための容器、上記サンプル中の適用可能なバイオマーカーのタンパク質又はmRNA（適用可能な場合）へのABP又は核酸の結合を検出するための物質、並びに上記検出を行うための試薬（複数の場合もある）。
【０３６０】
別の態様では、本発明の（例えば、in vitro）診断又は検出法を行うための上記のようなキットの使用が本明細書で提供される。関連の他の態様では、本発明は、本発明の（例えば、in vitro及び／又はex vivo）決定／診断法に用いられる上記のようなキットと関連がある。
【０３６１】
別の態様では、被験体が細胞性免疫応答に対する細胞耐性と関連し、SIK3の発現又は活性と関連する疾患、障害又は病態を有する又はそれらを発症するリスクを有するかを決定する診断法への使用のためのキットであって、
診断法が（例えば、組織）サンプルを被験体から外科的に得る工程を含み、
キットが、（a）（x）適用可能なバイオマーカー（上記のように、例えばSIK3又はHDAC4）に特異的に結合することが可能な核酸、又は（y）適用可能なバイオマーカーに特異的に結合するABP（上記のように、例えばSIK3又はHDAC4）のいずれか、並びに（b）任意に（i）（組織）サンプルにおけるSIK3活性の検出にABP又は核酸又はキットを使用する方法を記載する説明書、及び／又は（ii）キットの使用又は（組織）サンプルにおけるSIK3活性の検出に有用な1つ以上の他のアイテム、構成要素、試薬又は他の手段を含む、
キットが本明細書で提供される。
【０３６２】
かかる診断（diagnostic）法では、「外科的に」とは、動物又はヒトの身体に対して実施される著しい介入、例えば生検サンプル、例えば固形腫瘍の組織サンプルの採取を含み得る工程を指す。また、他のそれほど著しくない工程には、例えば（for example）静脈穿刺による血液の採取又はサンプリング又は皮膚プリックが含まれ得る。或る特定の実施形態では、静脈穿刺による血液のサンプリング若しくは皮膚プリック、又はヒト若しくは動物の身体に対して実施される他の著しくない（又はそれほど著しくない）診断法は含まれない。
【０３６３】
上記のように、本発明のキットには、例えばサンプル中の腫瘍細胞における適用可能なバイオマーカー（例えばSIK3、特にリン酸化SIK3、又はHDAC4若しくはリン酸化HDAC4）の量、活性及び／又は発現の決定にキットを使用するための説明書を含む説明書が添付され得る。
【０３６４】
本発明の様々な決定（スクリーニング）／診断態様は、疾患、障害又は病態がSIK3阻害剤を用いた治療に好適なものである、及び／又はそうであると決定される（又はかかる疾患、障害若しくは病態を有する被験体が、そうであると区別される）ことを特定する（例えば、区別する）ために用いることができる。
【０３６５】
本発明のかかる診断態様の特定の実施形態では、被験体（例えば、サンプルを得た被験体）は、以前に免疫療法（例えば、本明細書の他の部分に記載される（described）免疫療法）により治療されており（例えば、免疫療法を受けたとして区別される（特徴付けられる）、その腫瘍は進行している、特にその腫瘍は再燃している、再発している又は応答していない。本発明のかかる診断態様の他の特定の実施形態では、被験体（例えば、サンプルを得た被験体）は、以前に事前の放射線療法により治療されており（例えば、放射線療法を受けたとして区別される（特徴付けられる））、その腫瘍は進行している、特にその腫瘍は再燃している、再発している又は応答していない。
【０３６６】
本発明のかかる診断態様の他の特定の実施形態では、被験体（例えば、サンプルを得た被験体）は、以前に自己免疫障害（例えば、関節リウマチ）に対する抗TNF剤により治療されているか、又は抗TNF剤による治療を受けている（例えば、抗TNF剤の投与によって区別される（特徴付けられる））。特に、被験体は、抗TNF剤によるかかる治療中に（例えば、その結果として）生じる悪性疾患を患っていても、又は悪性疾患を患うリスクが増大していてもよい。例えば、被験体は、抗TNF剤によるかかる治療中に（例えば、その結果として）生じる血液学的悪性疾患を患っていても、又は血液学的悪性疾患を患うリスクが増大していてもよく、例えば被験体は、医原性免疫不全関連リンパ増殖性疾患を患う、又は医原性免疫不全関連リンパ増殖性疾患を患うリスクが増大している。
【０３６７】
本発明のかかる診断態様のまた更なる特定の実施形態では、被験体（例えば、サンプルを得た被験体）は、自己免疫障害（例えば、関節リウマチ）に対する抗TNF剤による治療が検討されている（例えば、抗TNF剤の投与が検討中であることによって区別される（特徴付けられる））。かかる実施形態は、抗TNF剤による自己免疫疾患の治療中に悪性疾患（血液学的悪性疾患、例えば医原性免疫不全関連リンパ増殖性疾患等）を発症するリスクが増大している可能性がある、自己免疫障害（例えば、関節リウマチ）を患う被験体を決定するために用いることができる。
【０３６８】
本発明のスクリーニング方法：
本発明の第11の態様では、細胞性免疫応答に対する細胞耐性を特徴とする疾患、障害若しくは病態（増殖性障害等）、及び／又はSIK3の（異常）発現若しくは活性を特徴とする疾患、障害若しくは病態（増殖性障害等）の治療に好適な化合物等の化合物を特定する（及び／又は特性評価する）方法であって、
SIK3（例えば、SIK3のタンパク質又はmRNA）を発現する第1の細胞と候補化合物とを接触させる工程と、
第1の細胞におけるSIK3（特に、リン酸化SIK3）（例えば、そのタンパク質又はmRNA）の発現、活性（例えばキナーゼ活性）、機能及び／又は安定性を決定する工程と、
を含み、上記候補化合物と接触させていない上記第1の細胞と比較した、候補化合物と接触させた上記第1の細胞におけるSIK3（例えば、そのタンパク質又はmRNA）の発現、活性（例えば、キナーゼ活性）、機能及び／又は安定性の低下が、候補化合物が疾患、障害又は病態の治療に好適な化合物であることを示す、方法が提供される。
【０３６９】
本発明の関連の態様では、細胞性免疫応答に対する細胞耐性を特徴とする疾患、障害若しくは病態（増殖性障害等）、及び／又はSIK3の（異常）発現若しくは活性を特徴とする疾患、障害若しくは病態（増殖性障害等）の治療に好適な化合物等の化合物を特定する（及び／又は特性評価する）方法であって、
SIK3（例えば、SIK3のタンパク質又はmRNA）を発現する第1の細胞と候補化合物及び細胞性免疫応答（の構成要素）とを接触させる工程と、
第1の細胞に対する細胞性免疫応答の細胞傷害性を決定する工程と、
を含み、候補化合物と接触させていない第1の細胞に対する細胞性免疫応答の細胞傷害性と比較した、候補化合物と接触させた第1の細胞に対する細胞性免疫応答の細胞傷害性の増強が、候補化合物が疾患、障害又は病態の治療に好適な化合物であることを示す、方法が提供される。
【０３７０】
本発明のかかるスクリーニング態様の或る特定の実施形態では、第1の細胞におけるSIK3（例えば、そのタンパク質又はmRNA）の活性は、（例えば、SIK3タンパク質の抗体検出又はSIK3 mRNAのPCRによって）直接決定しても、又は第1の細胞、特に第1の細胞の細胞質におけるリン酸化HDAC4の存在若しくは量を決定することによって決定してもよい。例えば、かかる第1の細胞の細胞質中のリン酸化HDAC4の低減は、かかる細胞におけるSIK3の活性の低減を示す。
【０３７１】
かかる態様の或る特定の実施形態では、方法は、第1の細胞及び／又は候補化合物及び／又は細胞性免疫応答（の構成要素）を（例えば、それらを得ることによって）準備する工程も含み、特にかかる工程の各々を接触工程の前に行う。
【０３７２】
通例、かかる態様の方法は、in vitro（又はex vivo）方法である。すなわち、通例、方法は、ヒト又は動物の身体に対して実施されない方法である。例えば、かかる方法の1つ以上の工程がin vitro工程であってもよい。また、通例、かかる方法（methods）は、更なる薬物開発の目的で好適な候補化合物を特定するために実施される。すなわち、典型的な（全てではない）実施形態では、かかる方法は、（特に、ex vivo方法では）化合物が特定のヒト又は動物の治療の候補であるかを決定する（例えば、診断する）ために実施されない。
【０３７３】
SIK3（特に、リン酸化SIK3）の発現、活性、機能及び／又は安定性の低減（又は増強）、又は細胞傷害性の増強（又は低減）は、対照方法を参照して特定するのが好ましい。一例では、対照方法は、任意の候補化合物の非存在下で、又はかかる発現、機能、活性及び／又は安定性に対して既知の効果を有する化合物（陽性又は陰性対照等）を用いて実施される方法、及び／又は細胞性免疫応答（の1つ以上の構成要素）の非存在下で実施される方法であり得る。
【０３７４】
スクリーニング方法の或る特定の実施形態では、細胞性免疫応答（の構成要素）は、第1の細胞を免疫学的に認識することが可能な細胞傷害性免疫細胞、例えば細胞傷害性T-リンパ球（CTL）である第2の細胞である。したがって、かかる実施形態の接触（contacting）工程は、第1の細胞と候補化合物及び第2の細胞とを接触させることを含み、第1の細胞は、SIK3（例えば、SIK3のタンパク質又はmRNA）を発現し、第2の細胞は、第1の細胞を免疫学的に認識することが可能な細胞傷害性免疫細胞、例えば細胞傷害性T-リンパ球（CTL）である。
【０３７５】
スクリーニング方法の関連であるが、代替的な実施形態では、細胞性免疫応答（の構成要素）は、免疫学的に刺激された免疫細胞、例えば細胞傷害性T-リンパ球（CTL）を以前に含有していた無細胞培地である。かかる免疫細胞は、第1の細胞のサンプル、及び／又はCD3-CD28ビーズ刺激等のポリクローナル刺激剤によって刺激することができる。したがって、かかる実施形態の接触工程は、第1の細胞と候補化合物及び無細胞培地とを接触させることを含み、第1の細胞は、SIK3（例えば、SIK3のタンパク質又はmRNA）を発現し、無細胞培地は、免疫学的に刺激された免疫細胞、例えば細胞傷害性T-リンパ球（CTL）、例えば第1の細胞を免疫学的に認識することが可能なものを前もって含有していた。
【０３７６】
スクリーニング方法の他の関連であるが、代替的な実施形態では、細胞性免疫応答（の構成要素）は、TNF等の炎症性サイトカインである。したがって、かかる実施形態の接触工程は、第1の細胞と候補化合物及び炎症性サイトカインとを接触させることを含み、第1の細胞は、SIK3（例えば、SIK3のタンパク質又はmRNA）を発現する。
【０３７７】
特定のかかる実施形態では、炎症性サイトカインは、任意に第1の細胞と約0.01 ng/mL〜約1000 ng/mLの濃度で接触させるTNF（rHuTNF等）である。例えば、TNFは、第1の細胞と約0.05 ng/mL、0.1 ng/mL、0.5 ng/mL、1.0 ng/mL、5.0 ng/mL、10 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL又は500 ng/mL、特に約5 ng/mL〜50 ng/mL又は50 ng/mL〜200 ng/mLのTNFの濃度で接触させることができる。
【０３７８】
第1の細胞は、増殖性障害に関与する細胞（腫瘍等）、例えば腫瘍に由来する細胞であるのが好ましい。腫瘍又はその細胞は、本明細書の他の部分に記載される腫瘍の1つであるか、又は腫瘍の1つに由来し得る。
【０３７９】
スクリーニング方法の或る特定の実施形態では、第1の細胞はSIKの突然変異型、例えばSIK3の突然変異型、及び／又はSIK2の突然変異型及び／又はSIK1の突然変異型を発現する。例えば、非特許文献38に記載されるようなノックインSIK突然変異体が第1の細胞によって発現され得る。スクリーニング方法の或る特定の実施形態では、第1の細胞は、SIK（SIK3、SIK2及び／又はSIK1等）の発現又は活性を阻害するshRNAを発現するか、又はsiRNAを含む。かかるshRNA又はsiRNA配列の例は、本明細書の他の部分に記載される。組換え又は改変された第1の細胞の使用は、特にSIK2及び／又はSIK1と比較されるSIK3に対するその特異性（又は選択性）に関する候補化合物の特性評価を補助し得る。
【０３８０】
スクリーニング方法に用いられる候補化合物は、ポリペプチド、ペプチド、糖タンパク質、ペプチド模倣薬、抗体若しくは抗体様分子（細胞内抗体等）；DNA若しくはRNA等の核酸、例えばアンチセンスDNA若しくはRNA、リボザイム、RNA若しくはDNAアプタマー、siRNA、shRNA等（ペプチド核酸（PNA）等のその変異体又は誘導体を含む）；標的化遺伝子編集のための遺伝的構築物、例えばCRISPR/Cas9構築物及び／又はガイドRNA/DNA（gRNA/gDNA）及び／又はtracrRNA；炭水化物、例えば多糖若しくはオリゴ糖等（その変異体又は誘導体を含む）；脂質、例えば脂肪酸等（その変異体又は誘導体を含む）；又は小分子リガンド若しくは細胞透過性小分子を含むが、これらに限定されない小有機分子から選択されるものであり得る。
【０３８１】
特定の実施形態では、候補化合物は、本明細書の他の部分に記載されるもののような小分子である。
【０３８２】
更なる特定の実施形態では、候補化合物は、本明細書の他の部分に記載されるもののようなSIK3阻害剤である。例えば、或る特定のかかる実施形態では、候補化合物は、SIK3をSIK2及び／又はSIK1の阻害よりも優先的に阻害し、特に、候補化合物は、第1の細胞中のSIK3を、例えば第2の細胞中のSIK2（及び／又はSIK3）の阻害よりも優先的に阻害する。
【０３８３】
かかるSIK3阻害候補化合物は、或る特定の実施形態では、本発明のスクリーニング方法に加えられる前に、SIK3阻害剤（SIK3特異的阻害剤、例えばSIK3選択的阻害剤等）として特定（又は特性評価）されていてもよい。例えば、候補化合物は、候補化合物がSIK3阻害剤（SIK3特異的阻害剤、例えばSIK3選択的阻害剤等）であることを特定又は特性評価するために、先の工程としてPromega、ProQuinase又はThermoFisherによって提供されるもののようなSIK3（及び／又はSIK2若しくはSIK1）生化学アッセイに供することができる。
【０３８４】
上記の点を考慮すると、本発明が以下の番号を付けた項目にも関することが理解される：
項目1.  SIK3を阻害することによって被験体における増殖性障害を治療する方法であって、SIK3阻害剤を被験体に投与することを含む、方法。
項目2.  増殖性障害に関与する細胞を細胞性免疫応答に感作することによって被験体における増殖性障害を治療する方法であって、SIK3阻害剤を前記被験体に投与することを含む、方法。
項目3.  SIK3を阻害し、増殖性障害に関与する細胞を細胞性免疫応答に感作することによって被験体における増殖性障害を治療する方法であって、SIK3阻害剤を被験体に投与することを含む、方法。
項目4.  増殖性障害が腫瘍、特に固形腫瘍である、項目1〜3のいずれか1つの方法。
項目5.  細胞性免疫応答が炎症性サイトカイン分泌細胞、特にリンパ球、好ましくは細胞傷害性Tリンパ球（CTL）によって媒介される、項目2又は3の方法。
項目6.  細胞性免疫応答が増殖性障害に関与する細胞の死滅を誘導する、項目2、3及び5のいずれか1つの方法。
項目7.  細胞性免疫応答に少なくとも1つの免疫細胞エフェクター分子、特に免疫細胞が分泌可能な又は分泌するエフェクター分子が関与する、項目2、3、5及び6のいずれか1つの方法。
項目8.  エフェクター分子が炎症性サイトカイン、特に腫瘍壊死因子（TNF）である、項目7の方法。
項目9.  SIK3阻害剤を、前記増殖性障害に関与する細胞をTNFによって誘導される死滅に感作するように前記被験体に投与する、項目1〜8のいずれか1つの方法。
項目10.  SIK3阻害剤を、増殖性障害に関与する細胞を腫瘍壊死因子受容体1（TNFR1）シグナル伝達によって媒介されるアポトーシスに感作するように被験体に投与する、項目1〜9のいずれか1つの方法。
項目11.  SIK3阻害剤を、細胞性免疫応答の非存在下での増殖性障害に関与する細胞に対する細胞傷害性の量の低減を誘導するように被験体に投与する、項目1〜10のいずれか1つの方法。
項目12.  SIK3阻害剤の投与が、増殖性障害に関与する細胞における、特に増殖性障害に関与する細胞の核外へのNF-κBの移動の増強又は増大によるNF-κB活性の障害と関連する、項目1〜11のいずれか1つの方法。
項目13.  増殖性障害に関与する細胞を細胞性免疫応答に感作する方法であって、増殖性障害に関与する細胞をSIK3阻害剤に曝露することを含む、方法。
項目14.  増殖性障害に関与する細胞を死滅させる方法であって、増殖性障害に関与する細胞を（i）TNF、TNF変異体、及び／又はTNFR1シグナル伝達のアゴニスト、並びに（ii）SIK3阻害剤に曝露することを含む、方法。
項目15.  効果がSIK3を阻害することによってもたらされる、項目1又は14の方法。
項目16.  増殖性障害に関与する細胞中のSIK3が阻害される、項目1〜15のいずれか1つの方法。
項目17.  免疫細胞中のSIK2がSIK3よりも低い程度まで阻害される、項目1〜16のいずれか1つの方法。
項目18.  免疫細胞中のSIK1がSIK3よりも低い程度まで阻害される、項目1〜17のいずれか1つの方法。
項目19.  効果が1つ以上の抗炎症性サイトカインの産生の増大と関連せず、及び／又は1つ以上の炎症性サイトカインの産生の減少と関連しない、項目1〜18のいずれか1つの方法。
項目20.  増殖性障害に関与する細胞がTNFR2シグナル伝達の活性化を受ける、項目1〜19のいずれか1つの方法。
項目21.  増殖性障害に関与する細胞をTNF、TNF変異体、及び／又はTNFR2シグナル伝達のアゴニストに曝露する、項目1〜20のいずれか1つの方法。
項目22.  被験体が約2 pg/mLを超えるTNFの血漿濃度を有する、項目1〜21のいずれか1つの方法。
項目23.  増殖性障害が、被験体において0.5 pg/mLを超えるTNFの腫瘍内濃度を有する固形腫瘍である、項目1〜22のいずれか1つの方法。
項目24.  被験体における増殖性障害を治療する方法であって、被験体内の増殖性障害に関与する細胞を（i）TNF、TNF変異体、及び／又はTNFR1シグナル伝達のアゴニスト、並びに（ii）SIK3阻害剤に曝露することを含む、方法。
項目25.  効果がSIK3を阻害すること、及び／又は増殖性障害に関与する細胞をTNFR1シグナル伝達若しくはTNFR2シグナル伝達の細胞障害効果に感作することによってもたらされる、項目24の方法。
項目26.  SIK3阻害剤を被験体に投与する、項目24又は25の方法。
項目27.  TNF、TNF変異体、又はTNFR1シグナル伝達のアゴニストを被験体に投与する、項目24〜26のいずれか1つの方法。
項目28.  TNFを約5 μg/m2/日〜500 μg/m2/日、特に約20 μg/m2/日〜200 μg/m2/日の用量で被験体に投与する、項目24〜27のいずれか1つの方法。
項目29.  TNF変異体がより高い細胞傷害活性及びより低い全身毒性を有するTNFの変異体形態である、項目24〜27のいずれか1つの方法。
項目30.  増殖性障害に関与する細胞のTNF、TNF変異体、又はTNFR1シグナル伝達のアゴニストへの曝露を誘導することが可能な又は誘導する作用物質を被験体に投与する、項目24〜26のいずれか1つの方法。
項目31.  作用物質が増殖性障害に関与する細胞のTNF、TNF変異体、又はTNFR1シグナル伝達のアゴニストへの曝露を誘導することが可能な又は誘導するウイルスである、項目30の方法。
項目32.  作用物質が免疫細胞であり、特に免疫細胞を養子細胞移入の一環として投与する、項目30の方法。
項目33.  前記増殖性障害に関与する前記細胞のTNFへの曝露が、前記被験体の血漿中及び／又はかかる細胞の環境内のTNFの量を増加させる薬学的手順、治療的手順又は他の手順によって誘導される、項目24〜26のいずれか1つの方法。
項目34.  前記薬学的手順、治療的手順又は他の手順が癌免疫療法及び／又は放射線療法を含む、項目33の方法。
項目35.  増殖性障害に対してTNFによる治療を受けている被験体におけるTNFによる治療の治療指数を増大する方法であって、SIK3の阻害剤を被験体に投与することを含む、方法。
項目36.  増殖性障害を患う被験体を被験体へのTNFの投与を伴う療法に感作する方法であって、SIK3の阻害剤を被験体に投与することを含む、方法。
項目37.  抗TNF剤による治療を受けている被験体において血液学的増殖性障害のリスクを低下させる方法であって、SIK3の阻害剤を被験体に投与することを含む、方法。
項目38.  SIK3阻害剤がSIK3特異的阻害剤である、項目1〜37のいずれか1つの方法。
項目39.  SIK3阻害剤がSIK2を阻害するよりも強くSIK3を阻害する、項目1〜38のいずれか1つの方法。
項目40.  SIK3阻害剤がポリペプチド、ペプチド、糖タンパク質、ペプチド模倣薬、抗体若しくは抗体様分子（細胞内抗体等）；DNA若しくはRNA等の核酸、例えばアンチセンスDNA若しくはRNA、リボザイム、RNA若しくはDNAアプタマー、siRNA、shRNA等（ペプチド核酸（PNA）等のその変異体又は誘導体を含む）；標的化遺伝子編集のための遺伝的構築物、例えばCRISPR/Cas9構築物及び／又はガイドRNA/DNA（gRNA/gDNA）及び／又はtracrRNA；ヘテロ二官能性化合物（PROTAC又はHyT分子等）；炭水化物、例えば多糖若しくはオリゴ糖等（その変異体又は誘導体を含む）；脂質、例えば脂肪酸等（その変異体又は誘導体を含む）；又は小分子リガンド若しくは細胞透過性小分子を含むが、これらに限定されない小有機分子から選択される、項目1〜39のいずれか1つの方法。
項目41.  SIK3阻害剤が阻害性核酸である、項目1〜40のいずれか1つの方法。
項目42.  SIK3阻害剤が小分子、特に小分子リガンド又は細胞透過性小分子である、項目1〜40のいずれか1つの方法。
項目43.  SIK3阻害剤がダサチニブ又はその変異体である、項目1〜40のいずれか1つの方法。
項目44.  SIK3阻害剤が以下の式Iの環式化合物、及びその塩である、項目1〜40のいずれか1つの方法：
【化１１】
2020517747.tif 000016
式I
（式中、
Qは、1つ以上の基R1で任意に置換された、
（1）5員のヘテロアリール環、
（2）6員のヘテロアリール環、又は、
（3）アリール環、
であり、
Zは、
（1）単結合、
（2）-R16C=CH-、又は、
（3）-(CH2)m-（ここで、mは1又は2である）、
であり、
X1及びX2は各々水素であるか、又は共に=O若しくは=Sを形成し、
R1は、
（1）水素又はR6（ここで、R6はアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロシクロ又はヘテロシクロアルキルであり、各々が非置換であるか、又はZ1、Z2及び1つ以上の（好ましくは、1つ又は2つの）基Z3で置換される）、
（2）-OH又は-OR6、
（3）-SH又は-SR6、
（4）-C(O)2H、-C(O)qR6又は-O-C(O)qR6（ここで、qは1又は2である）、
（5）-SO3H又は-S(O)qR6、
（6）ハロ、
（7）シアノ、
（8）ニトロ、
（9）-Z4-NR7R8、
（10）-Z4-N(R9)-Z5-NR10R11、
（11）-Z4-N(R12)-Z5-R6、
（12）-P(O)(OR6)2、
であり、
R2及びR3は各々独立して、
（1）水素若しくはR6、
（2）-Z4-R6、又は、
（3）-Z13-NR7R8、
であり、
R4及びR5は、
（1）各々独立して、水素若しくはR6、
（2）-Z4-N(R9)-Z5-NR10R11、
（3）-N(R9)Z4R6であるか、又は、
（4）それらが付着する窒素原子と共に、非置換であるか、若しくはZ1、Z2及びZ3で置換された3員〜8員の飽和した若しくは不飽和の複素環を完成させ、該複素環は、それ自体が非置換であるか、若しくはZ1、Z2及びZ3で置換されたベンゼン環が任意に縮合していてもよく、
R7、R8、R9、R10、R11及びR12は、
（1）各々独立して水素若しくはR6であるか、
（2）R7及びR8が共にアルキレン、アルケニレン若しくはヘテロアルキルであってもよく、それらが付着する窒素原子と共に3員〜8員の飽和した若しくは不飽和の環を完成させ、該環は非置換であるか、若しくはZ1、Z2及びZ3で置換され、又は、
（3）R9、R10及びR11のいずれか2つが共にアルキレン若しくはアルケニレンであってもよく、それらが付着する窒素原子と共に3員〜8員の飽和した若しくは不飽和の環を完成させ、該環は非置換であるか、若しくはZ1、Z2及びZ3で置換され、
R13は、
（1）シアノ、
（2）ニトロ、
（3）-NH2、
（4）-NHOアルキル、
（5）-OH、
（6）-NHOアリール、
（7）-NHCOOアルキル、
（8）-NHCOOアリール、
（9）-NHSO2アルキル、
（10）-NHSO2アリール、
（11）アリール、
（12）ヘテロアリール、
（13）-Oアルキル、又は、
（14）-Oアリール、
であり、
R14は、
（1）-NO2、
（2）-COOアルキル、又は、
（3）-COOアリール、
であり、
R15は、
（1）水素、
（2）アルキル、
（3）アリール、
（4）アリールアルキル、又は、
（5）シクロアルキル、
であり、
Z1、Z2及びZ3は各々独立して、
（1）水素若しくはZ6（ここで、Z6は（i）アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アラルキル、アルキルアリール、シクロアルキルアリール、ヘテロシクロ若しくはヘテロシクロアルキル、（ii）それ自体が1つ以上の同じ若しくは異なる基（i）によって置換された基（i）、又は（iii）以下のZ1、Z2及びZ3の定義の基（2）〜（16）の1つ以上によって置換された基（i）若しくは（ii）である）、
（2）-OH若しくは-OZ6、
（3）-SH若しくは-SZ6、
（4）-C(O)qH、-C(O)qZ6若しくは-O-C(O)qZ6、
（5）-SO3H、-S(O)qZ6若しくはS(O)qN(Z9)Z6、
（6）ハロ、
（7）シアノ、
（8）ニトロ、
（9）-Z4-NZ7Z8、
（10）-Z4-N(Z9)-Z5-NZ7Z8、
（11）-Z4-N(Z10)-Z5-Z6、
（12）-Z4-N(Z10)-Z5-H、
（13）オキソ、
（14）-O-C(O)-Z6であるか、
（15）Z1、Z2及びZ3のいずれか2つが共にアルキレン若しくはアルケニレンであってもよく、それらが付着する原子と共に3員〜8員の飽和した若しくは不飽和の環を完成させ、又は、
（16）Z1、Z2及びZ3のいずれか2つが共に-O-(CH2)r-O-（ここで、rは1〜5である）であってもよく、それらが付着する原子と共に4員〜8員の飽和した若しくは不飽和の環を完成させ、
Z4及びZ5は各々独立して、
（1）単結合、
（2）-Z11-S(O)q-Z12-、
（3）-Z11-C(O)-Z12-、
（4）-Z11-C(S)-Z12-、
（5）-Z11-O-Z12-、
（6）-Z11-S-Z12-、
（7）-Z11-O-C(O)-Z12-、又は、
（8）-Z11-C(O)-O-Z12-、
であり
Z7、Z8、Z9及びZ10は、
（1）各々独立して水素若しくはZ6であるか、
（2）Z7及びZ8、若しくはZ6及びZ10が共にアルキレン若しくはアルケニレンであってもよく、それらが付着する原子と共に3員〜8員の飽和した若しくは不飽和の環を完成させ、該環は非置換であるか、若しくはZ1、Z2及びZ3で置換され、又は、
（3）Z7若しくはZ8がZ9と共にアルキレン若しくはアルケニレンであってもよく、それらが付着する窒素原子と共に3員〜8員の飽和した若しくは不飽和の環を完成させ、該環は非置換であるか、若しくはZ1、Z2及びZ3で置換され、
Z11及びZ12は各々独立して、
（1）単結合、
（2）アルキレン、
（3）アルケニレン、又は、
（4）アルキニレン、
であり、
Z13は、
（1）単結合、
（2）-Z11-S(O)q-Z12-、
（3）-Z11-C(O)-Z12-、
（4）-Z11-C(S)-Z12-、
（5）-Z11-O-Z12-、
（6）-Z11-S-Z12-、
（7）-Z11-O-C(O)-Z12-、
（8）-Z11-C(O)-O-Z12-、
（9）-C(NR13)-、
（10）-C(CHR14)-、又は、
（11）-C(C(R14)2)-、
である）。
項目45.  かかるSIK3阻害剤がダサチニブの変異体である、項目44の方法。
項目46.  SIK3阻害剤が、
【表Ｂ】
2020517747.tif 000017
並びにそれらの溶媒和物、塩、複合体、多形、結晶形態、ラセミ混合物、ジアステレオマー、鏡像異性体、互変異性体、同位体標識形態、プロドラッグ及び組合せからなる群から選択される、項目1〜40のいずれか1つの方法。
項目47.  増殖性障害に関与する細胞が細胞性免疫応答に対する耐性を示す、項目1〜46のいずれか1つの方法。
項目48.  増殖性障害に関与する細胞が以前の免疫療法に供されており、特に被験体が免疫チェックポイント分子の投与による以前の免疫療法を受けている、項目1〜47のいずれか1つの方法。
項目49.  増殖性障害に関与する細胞がSIK3の発現及び／又は活性を特徴とし、特にかかる細胞がSIK3のmRNA及び／又はタンパク質を発現し、及び／又はかかるSIK3発現及び／又は活性に陽性である、項目1〜48のいずれか1つの方法。
項目50.  増殖性障害が膵癌、乳癌、黒色腫、卵巣癌、食道癌、肉腫及び大腸癌からなる群から選択される腫瘍であり、又は増殖性障害に関与する細胞が、かかる腫瘍の1つの細胞若しくはかかる腫瘍の1つに由来する細胞である、項目1〜49のいずれか1つの方法。
項目51.  被験体が、細胞性免疫応答に対する細胞耐性と関連し、及び／又はSIK3の発現若しくは活性と関連する表現型を有する又は表現型を呈するリスクがあるかを決定する方法であって、
（a）上記被験体に由来する生体サンプル中の適用可能なバイオマーカーを検出する工程、
を含み、サンプル中の適用可能なバイオマーカーの検出が、被験体における細胞性免疫応答に対する細胞耐性と関連し、及び／又はSIK3の発現若しくは活性と関連する表現型又は表現型を呈するリスクを示し、
適用可能なバイオマーカーが、
SIK3、特にSIK3、好ましくはリン酸化SIK3の存在（又は量）又は発現及び／又は活性、
TNFR1、特にTNFR1の存在（又は量）又は発現及び／又は活性、並びに、
LKB1、特にLKB1、好ましくはリン酸化LKB1の存在（又は量）又は発現及び／又は活性、
からなる群から選択されるバイオマーカーである、方法。
項目52.  適用可能なバイオマーカーの検出が、サンプル中のSIK3、特にリン酸化SIK3の存在若しくは量、又はその活性を決定することを含む、項目51による方法。
項目53.  サンプル中のTNFの存在又は量を決定する工程を更に含み、サンプル中のTNFの存在又は量が、被験体における細胞性免疫応答に対する細胞耐性と関連し、及び／又はSIK3の発現若しくは活性と関連する表現型又は表現型を呈するリスクを示す、項目51又は52による方法。
項目54.  被験体が、細胞性免疫応答に対する細胞耐性と関連し、及び／又はSIK3の発現若しくは活性と関連する疾患、障害又は病態を有する又はそれらを発症するリスクを有するかを決定する方法であって、
（a）疾患、障害又は病態に関与する前記被験体の細胞とSIK3阻害剤とを、（i）リンパ球、T細胞、CTL及びTILからなる群から選択される免疫細胞、又は（ii）炎症性サイトカイン、特にTNFである細胞性免疫応答の存在下で接触させる工程と、
（b）前記被験体のかかる細胞に対する前記細胞性免疫応答を決定する工程と、
を含み、前記被験体のかかる細胞に対する前記細胞性免疫応答の増強が、前記被験体がかかる疾患、障害又は病態を有する又はそれらを発症するリスクを有することを示す。方法。
項目55.  哺乳動物被験体における疾患、障害又は病態、細胞性免疫応答に対する細胞耐性と関連し、及び／又はSIK3の発現若しくは活性と関連する疾患、障害又は病態のin vitro診断へのSIK3に特異的に結合することが可能な抗原結合タンパク質（ABP）の使用。
項目56.  前記ABPがリン酸化SIK3に特異的に結合することが可能である、項目55の使用。
項目57.  （a）SIK3に特異的に結合することが可能なABP又は核酸、並びに（b）任意に（i）サンプル中のSIK3の検出にABP若しくは核酸若しくはキットを使用する方法を記載する説明書、及び／又は（ii）キットの使用若しくはサンプル中のSIK3の検出に有用な1つ以上の他のアイテム、構成要素、試薬若しくは他の手段を含む、キット。
項目58.  リン酸化SIK3に特異的に結合することが可能なABPを含む、項目57によるキット。
項目59.  細胞性免疫応答に対する細胞耐性を特徴とし、及び／又はSIK3の発現若しくは活性を特徴とする疾患、障害又は病態の治療に好適な化合物を特定及び／又は特性評価する方法であって、
（a）SIK3を発現する第1の細胞と、（i）候補化合物、又は（ii）該候補化合物及び細胞性免疫応答とを接触させる工程と、
（b）（i）前記第1の細胞におけるSIK3（特に、リン酸化SIK3）（例えば、そのタンパク質又はmRNA）の発現、活性、機能及び／又は安定性、及び／又は（ii）前記第1の細胞に対する前記細胞性免疫応答の細胞傷害性を決定する工程と、
を含み、（i）前記候補化合物と接触させていない前記第1の細胞と比較した、該候補化合物と接触させた該第1の細胞におけるSIK3の発現、活性、機能及び／又は安定性の低下、及び／又は（ii）前記候補化合物と接触させていない前記第1の細胞に対する前記細胞性免疫応答の細胞傷害性と比較した、該候補化合物と接触させた該第1の細胞に対する該細胞性免疫応答の細胞傷害性の増強により、前記候補化合物が、細胞性免疫応答に対する細胞耐性を特徴とし、及び／又はSIK3の発現若しくは活性を特徴とする疾患、障害又は病態の治療に好適な化合物であることが示される、方法。
項目60.  SIK3の発現、活性、機能及び／又は安定性の低減、及び／又は細胞傷害性の増強が、任意の候補化合物の非存在下で実施される方法、又はかかる発現、機能、活性及び／又は安定性に対して既知の効果を有する化合物、特に陽性若しくは陰性対照を用いて実施される方法、及び／又は細胞性免疫応答の非存在下で実施される方法から選択される対照方法を参照して特定される、項目59による方法。
項目61.  細胞性免疫応答が炎症性サイトカイン、特にTNFである、項目59又は60の方法。
項目62.  前記第1の細胞が増殖性障害、特に腫瘍に関与する細胞である、項目59〜61のいずれか1つの方法。
【０３８５】
加えて、本発明が以下の付加的な番号を付けた項目にも関することも理解される：
項目A1.  SIK3を阻害し、増殖性障害に関与する細胞を細胞性免疫応答に感作することによって被験体における増殖性障害の治療への使用のためのSIK3阻害剤であって、該治療は該SIK3阻害剤を被験体に投与することを含む、SIK3阻害剤。
項目A2.  （i）細胞性免疫応答が炎症性サイトカイン分泌細胞、特にリンパ球、好ましくは細胞傷害性Tリンパ球（CTL）によって媒介され、及び／又は（ii）細胞性免疫応答に、炎症性サイトカイン、特に腫瘍壊死因子（TNF）である少なくとも1つの免疫細胞エフェクター分子が関与する、項目A1の使用のためのSIK3阻害剤。
項目A3.  （i）前記被験体が約2 pg/mLを超えるTNFの血漿濃度を有し、及び／又は（ii）前記増殖性障害が、前記被験体において0.5 pg/mLを超えるTNFの腫瘍内濃度を有する固形腫瘍である、項目A1又はA2の使用のためのSIK3阻害剤。
項目A4.  被験体における増殖性障害の治療への使用のためのSIK3阻害剤であって、治療が被験体内の増殖性障害に関与する細胞を（i）TNF、TNF変異体、及び／又はTNFR1シグナル伝達のアゴニスト、並びに（ii）SIK3阻害剤に曝露することを含み、SIK3阻害剤が被験体に投与される、SIK3阻害剤。
項目A5.  （i）TNF、TNF変異体、若しくはTNFR1シグナル伝達のアゴニストを被験体に投与するか、（ii）増殖性障害に関与する細胞のTNF、TNF変異体、若しくはTNFR1シグナル伝達のアゴニストへの曝露を誘導することが可能な若しくは誘導する作用物質を被験体に投与するか、又は（iii）増殖性障害に関与する細胞のTNFへの曝露が、被験体の血漿中及び／又はかかる細胞の環境内のTNFの量を増加させる薬学的手順、治療的手順若しくは他の手順によって誘導される、項目A4の使用のためのSIK3阻害剤。
項目A6.  抗TNF剤による治療を受けている被験体における血液学的増殖性障害のリスクを低下させる治療への使用のためのSIK3阻害剤であって、前記治療がSIK3の阻害剤を前記被験体に投与することを含む、SIK3阻害剤。
項目A7.  SIK2を阻害するよりも強くSIK3を阻害する、項目A1〜A6のいずれか1つの使用のためのSIK3阻害剤。
項目A8.  SIK3阻害剤が（i）阻害性核酸、又は（ii）小分子、特に小分子リガンド若しくは細胞透過性小分子である、項目A1〜A7のいずれか1つの使用のためのSIK3阻害剤。
項目A9.  SIK3阻害剤が以下の式Iの環式化合物及びその塩である、項目A1〜A8のいずれか1つの使用のためのSIK3阻害剤：
【化１２】
2020517747.tif 000018
式I
（式中、
Qは、1つ以上の基R1で任意に置換された、
（1）5員のヘテロアリール環、
（2）6員のヘテロアリール環、又は、
（3）アリール環、
であり、
Zは、
（1）単結合、
（2）-R16C=CH-、又は、
（3）-(CH2)m-（ここで、mは1又は2である）、
であり、
X1及びX2は各々水素であるか、又は共に=O若しくは=Sを形成し、
R1は、
（1）水素又はR6（ここで、R6はアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロシクロ又はヘテロシクロアルキルであり、各々が非置換であるか、又はZ1、Z2及び1つ以上の（好ましくは、1つ又は2つの）基Z3で置換される）、
（2）-OH又は-OR6、
（3）-SH又は-SR6、
（4）-C(O)2H、-C(O)qR6又は-O-C(O)qR6（ここで、qは1又は2である）、
（5）-SO3H又は-S(O)qR6、
（6）ハロ、
（7）シアノ、
（8）ニトロ、
（9）-Z4-NR7R8、
（10）-Z4-N(R9)-Z5-NR10R11、
（11）-Z4-N(R12)-Z5-R6、
（12）-P(O)(OR6)2、
であり、
R2及びR3は各々独立して、
（1）水素若しくはR6、
（2）-Z4-R6、又は、
（3）-Z13-NR7R8、
であり、
R4及びR5は、
（1）各々独立して、水素若しくはR6、
（2）-Z4-N(R9)-Z5-NR10R11、
（3）-N(R9)Z4R6であるか、又は、
（4）それらが付着する窒素原子と共に、非置換であるか、若しくはZ1、Z2及びZ3で置換された3員〜8員の飽和した若しくは不飽和の複素環を完成させ、該複素環は、それ自体が非置換であるか、若しくはZ1、Z2及びZ3で置換されたベンゼン環が任意に縮合していてもよく、
R7、R8、R9、R10、R11及びR12は、
（1）各々独立して水素若しくはR6であるか、
（2）R7及びR8が共にアルキレン、アルケニレン若しくはヘテロアルキルであってもよく、それらが付着する窒素原子と共に3員〜8員の飽和した若しくは不飽和の環を完成させ、該環は非置換であるか、若しくはZ1、Z2及びZ3で置換され、又は、
（3）R9、R10及びR11のいずれか2つが共にアルキレン若しくはアルケニレンであってもよく、それらが付着する窒素原子と共に3員〜8員の飽和した若しくは不飽和の環を完成させ、該環は非置換であるか、若しくはZ1、Z2及びZ3で置換され、
R13は、
（1）シアノ、
（2）ニトロ、
（3）-NH2、
（4）-NHOアルキル、
（5）-OH、
（6）-NHOアリール、
（7）-NHCOOアルキル、
（8）-NHCOOアリール、
（9）-NHSO2アルキル、
（10）-NHSO2アリール、
（11）アリール、
（12）ヘテロアリール、
（13）-Oアルキル、又は、
（14）-Oアリール、
であり、
R14は、
（1）-NO2、
（2）-COOアルキル、又は、
（3）-COOアリール、
であり、
R15は、
（1）水素、
（2）アルキル、
（3）アリール、
（4）アリールアルキル、又は、
（5）シクロアルキル、
であり、
Z1、Z2及びZ3は各々独立して、
（1）水素又はZ6（ここで、Z6は（i）アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アラルキル、アルキルアリール、シクロアルキルアリール、ヘテロシクロ若しくはヘテロシクロアルキル、（ii）それ自体が1つ以上の同じ若しくは異なる基（i）によって置換された基（i）、又は（iii）以下のZ1、Z2及びZ3の定義の基（2）〜（16）の1つ以上によって置換された基（i）若しくは（ii）である）、
（2）-OH若しくは-OZ6、
（3）-SH若しくは-SZ6、
（4）-C(O)qH、-C(O)qZ6若しくは-O-C(O)qZ6、
（5）-SO3H、-S(O)qZ6若しくはS(O)qN(Z9)Z6、
（6）ハロ、
（7）シアノ、
（8）ニトロ、
（9）-Z4-NZ7Z8、
（10）-Z4-N(Z9)-Z5-NZ7Z8、
（11）-Z4-N(Z10)-Z5-Z6、
（12）-Z4-N(Z10)-Z5-H、
（13）オキソ、
（14）-O-C(O)-Z6であるか、
（15）Z1、Z2及びZ3のいずれか2つが共にアルキレン若しくはアルケニレンであってもよく、それらが付着する原子と共に3員〜8員の飽和した若しくは不飽和の環を完成させ、又は、
（16）Z1、Z2及びZ3のいずれか2つが共に-O-(CH2)r-O-（ここで、rは1〜5である）であってもよく、それらが付着する原子と共に4員〜8員の飽和した若しくは不飽和の環を完成させ、
Z4及びZ5は各々独立して、
（1）単結合、
（2）-Z11-S(O)q-Z12-、
（3）-Z11-C(O)-Z12-、
（4）-Z11-C(S)-Z12-、
（5）-Z11-O-Z12-、
（6）-Z11-S-Z12-、
（7）-Z11-O-C(O)-Z12-、又は、
（8）-Z11-C(O)-O-Z12-、
であり、
Z7、Z8、Z9及びZ10は、
（1）各々独立して水素若しくはZ6であるか、
（2）Z7及びZ8、若しくはZ6及びZ10が共にアルキレン若しくはアルケニレンであってもよく、それらが付着する原子と共に3員〜8員の飽和した若しくは不飽和の環を完成させ、該環は非置換であるか、若しくはZ1、Z2及びZ3で置換され、又は、
（3）Z7若しくはZ8がZ9と共にアルキレン若しくはアルケニレンであってもよく、それらが付着する窒素原子と共に3員〜8員の飽和した若しくは不飽和の環を完成させ、該環は非置換であるか、若しくはZ1、Z2及びZ3で置換され、
Z11及びZ12は各々独立して、
（1）単結合、
（2）アルキレン、
（3）アルケニレン、又は、
（4）アルキニレン、
であり、
Z13は、
（1）単結合、
（2）-Z11-S(O)q-Z12-、
（3）-Z11-C(O)-Z12-、
（4）-Z11-C(S)-Z12-、
（5）-Z11-O-Z12-、
（6）-Z11-S-Z12-、
（7）-Z11-O-C(O)-Z12-、
（8）-Z11-C(O)-O-Z12-、
（9）-C(NR13)-、
（10）-C(CHR14)-、又は、
（11）-C(C(R14)2)-、
であり、
ここで、式Iの環式化合物は、以下の式II：
【化１３】
2020517747.tif 000019
式II
を有し、ここで、
nは1又は2であり、
Aは炭素及び窒素から選択され、
Bは窒素、酸素及び硫黄から選択され、
X3は酸素又は硫黄であり、
R1、R2、R3、R4及びR5は上記の通りであり、
ここで、式IIのR2が水素であり、式IIのR3がRxである場合、Rxは以下の式X：
【化１４】
2020517747.tif 000020
式X
を有し、ここで、式XのZ1、Z2及びZ3は上記で規定される通りである）。
項目A10.
【表Ｃ】
2020517747.tif 000021
並びにそれらの溶媒和物、塩、複合体、多形、結晶形態、ラセミ混合物、ジアステレオマー、鏡像異性体、互変異性体、同位体標識形態、プロドラッグ及び組合せからなる群から選択される、項目A1〜A9のいずれか1つの使用のためのSIK3阻害剤。
項目A11.  増殖性障害に関与する細胞が、（i）細胞性免疫応答に対して耐性を示し、及び／又は（ii）以前の免疫療法に供されており、特に被験体が免疫チェックポイント分子の投与による以前の免疫療法を受けている、項目A1〜A5及びA7〜A10のいずれか1つの使用のためのSIK3阻害剤。
項目A12.  増殖性障害に関与する細胞がSIK3の発現及び／又は活性を特徴とし、特にかかる細胞がSIK3のmRNA及び／又はタンパク質を発現し、及び／又はかかるSIK3発現及び／又は活性に陽性である、項目A1〜A5及びA7〜A11のいずれか1つの使用のためのSIK3阻害剤。
項目A13.  被験体が細胞性免疫応答に対する細胞耐性と関連する腫瘍等の増殖性障害を有する又はそれらを発症するリスクがあるかを決定する方法であって、
（a）上記被験体に由来する生体サンプル中の適用可能なバイオマーカーを検出する工程、
を含み、サンプル中の適用可能なバイオマーカーの検出が、被験体における細胞性免疫応答に対する細胞耐性と関連し、及び／又はSIK3の発現若しくは活性と関連する表現型又は表現型を呈するリスクを示し、
適用可能なバイオマーカーが、
SIK3、特にSIK3、好ましくはリン酸化SIK3の存在（又は量）又は発現及び／又は活性、
TNFR1、特にTNFR1の存在（又は量）又は発現及び／又は活性、並びに、
LKB1、特にLKB1、好ましくはリン酸化LKB1の存在（又は量）又は発現及び／又は活性、
からなる群から選択されるバイオマーカーである、方法。
項目A14.  上記被験体に由来する生体サンプル中のTNFの存在又は量を決定する工程を更に含み、サンプル中のTNFの存在又は量が、被験体における細胞性免疫応答に対する細胞耐性と関連し、及び／又はSIK3の発現若しくは活性と関連する表現型又は表現型を呈するリスクを示す、項目A13による方法。
項目A15.  細胞性免疫応答に対する細胞耐性を特徴とする疾患、障害又は病態の治療に好適な化合物を特定及び／又は特性評価する方法であって、
（a）SIK3を発現する第1の細胞と、（i）候補化合物、又は（ii）該候補化合物及び細胞性免疫応答とを接触させる工程と、
（b）（i）前記第1の細胞におけるSIK3（特に、リン酸化SIK3）（例えば、そのタンパク質又はmRNA）の発現、活性、機能及び／又は安定性、及び／又は（ii）前記第1の細胞に対する前記細胞性免疫応答の細胞傷害性を決定する工程と、
を含み、（i）前記候補化合物と接触させていない前記第1の細胞と比較した、該候補化合物と接触させた該第1の細胞におけるSIK3の発現、活性、機能及び／又は安定性の低下、及び／又は（ii）前記候補化合物と接触させていない前記第1の細胞に対する前記細胞性免疫応答の細胞傷害性と比較した、該候補化合物と接触させた該第1の細胞に対する該細胞性免疫応答の細胞傷害性の増強により、前記候補化合物が、細胞性免疫応答に対する細胞耐性を特徴とし、及び／又はSIK3の発現若しくは活性を特徴とする疾患、障害又は病態の治療に好適な化合物であることが示される、方法。
項目A16.  細胞性免疫応答が、（i）炎症性サイトカイン、特にTNF、又は（ii）第1の細胞を免疫学的に認識することが可能な細胞傷害性免疫細胞である第2の細胞、特にCTLである、項目A15による方法。
項目A17.  増殖性障害が腫瘍、特に固形腫瘍である、項目A1〜A5又はA7〜A12のいずれか1つの使用のためのSIK3阻害剤。
【０３８６】
「（本）発明の」、「本発明に従う」、「本発明による」等の用語は、本明細書で使用される場合、本明細書に記載及び／又は特許請求される本発明の全ての態様及び実施形態を指すことを意図したものである。
【０３８７】
本明細書で使用される場合、「含む（comprising）」という用語は、「含む（including）」及び「からなる（consisting of）」の両方を包含すると解釈すべきであり、どちらも具体的に意図され、ひいては個別に開示される、本発明に従う実施形態を意味する。本明細書で使用される場合、「及び／又は」は、他方を含む又は含まない、2つの指定の特徴又は構成要素の各々の具体的な開示とみなすべきである。例えば、「A及び／又はB」は、各々が本明細書に個別に提示されるかのような、（i）A、（ii）B及び（iii）A及びBの各々の具体的な開示とみなすべきである。本発明の文脈において、「約」及び「およそ」という用語は、問題となる特徴の技術的効果が依然として確実であると当業者に理解される正確さの区間を表す。この用語は通例、指定の数値からの±20%、±15%、±10%、例えば±5%の偏差を示す。当業者に理解されるように、所与の技術的効果についてのこのような具体的な数値の偏差は、技術的効果の性質に左右される。例えば、自然の又は生物学的な技術的効果は概して、人為的又は工学的な技術的効果についての偏差よりも大きなかかる偏差を有し得る。当業者に理解されるように、所与の技術的効果についてのこのような具体的な数値の偏差は、技術的効果の性質に左右される。例えば、自然の又は生物学的な技術的効果は概して、人為的又は工学的な技術的効果についての偏差よりも大きなかかる偏差を有し得る。単数名詞に言及する際に不定冠詞又は定冠詞、例えば「a」、「an」又は「the」が用いられる場合、何か他の具体的な指定がない限り、複数のその名詞も含まれる。
【０３８８】
特定の問題又は環境への本発明の教示の適用、及び本発明の変形形態又はその付加的な特徴（更なる態様及び実施形態等）の包含は、本明細書に含まれる教示を考慮すれば、当業者の能力の範囲内であることを理解すべきである。
【０３８９】
文脈上他に指示がない限り、上記に提示される特徴の説明及び定義は、発明の任意の特定の態様又は実施形態に限定されず、記載される全ての態様及び実施形態に等しく当てはまる。
【０３９０】
本明細書に引用される全ての参照文献、特許及び刊行物は、その全体が引用することにより本明細書の一部をなす。
【０３９１】
ここで、本発明の或る特定の態様及び実施形態を例として、本明細書に提示される説明、図面及び表を参照して説明する。本発明の方法、使用及び他の態様のかかる例は、単に代表的なものであり、本発明の範囲をかかる代表的な例にのみ限定するとみなすべきではない。
【実施例】
【０３９２】
実施例1：増殖性疾患の細胞におけるSIK3活性が免疫応答に対する耐性を媒介する
本発明者らは、SIK3が細胞性免疫応答に対する腫瘍細胞の耐性に関与する遺伝子であるという驚くべき研究結果を本明細書に記載する。SIK3のかかる役割は、Khandelwal et al, 2015 (EMBO Mol Med 7:450)によって開発され、記載されているスクリーニングアプローチから応用及び拡張される、T細胞攻撃に対する腫瘍耐性機構に関与する新規の遺伝子を特定するハイスループットスクリーニングアプローチを用いることで、本発明者らによって初めて特定された。簡潔に述べると、siRNAライブラリーを用いることで、2514個の遺伝子を膵臓腺癌（PDAC）腫瘍細胞株であるHLA-A2.1+ルシフェラーゼ発現PANC1細胞（PANC1-luc）において個別にノックダウンした。次いで、各遺伝子のsiRNAをトランスフェクトしたPANC1-luc腫瘍細胞を、HLA-A2.1+ PDAC由来の腫瘍浸潤リンパ球培養物（TIL#1）から磁気精製したCD8+ T細胞と同時培養した。腫瘍細胞のTIL媒介死滅に対するsiRNA媒介遺伝子ノックダウンの影響を、ルシフェラーゼベースの細胞傷害性アッセイ（細胞傷害性状況）を用いて測定した。ノックダウンが細胞生存性に本質的に影響を及ぼす遺伝子を除外するために、TIL#1を添加せずに補完的スクリーニングを行った（生存性状況）。偽陽性遺伝子を、ルシフェラーゼに依存しない生存性スクリーンを用いて更に除外した。
【０３９３】
本発明は、腫瘍細胞のSIK3の阻害によって細胞性免疫応答との同時培養後の腫瘍細胞生存の低減が決定されるという劇的な影響に基づく。ルシフェラーゼベースの死滅アッセイを用いたPANC1-lucに基づくT細胞媒介細胞傷害性アッセイでは、表A1に記載のSIK3 siRNA配列（Dharmacon/GE Healthcare）によるSIK3の阻害は、TIL#1又はサバイビン特異的T細胞クローンのいずれかとの同時培養後の腫瘍細胞生存の劇的な低減を引き起こす（図2）。驚くべきことに、siRNAによるSIK3障害は、PD1-L1のsiRNA枯渇よりも強い腫瘍死滅の増大をもたらした（siRNA配列については表A1を参照されたい）。T細胞の非存在下では、腫瘍細胞に対するSIK3ノックダウンの効果は、使用した特定のsiRNA配列に左右され、s1、s2及びs3は細胞生存性の僅かな低減を示し、プールsiRNAは細胞生存を中程度に増大した。SIK3に固有の生存性への影響を確実に解釈するために、WST-1生存性アッセイ（すなわち、T細胞の非存在下）を行ったが、幾つかのSIK3特異的siRNAによるトランスフェクション後に、PANC-1細胞における有意な影響は観察されなかった（実施例3及び図8Eを参照されたい）。
【０３９４】
PANC1-luc細胞株を以下のように構築した。PANC-1細胞をAmerican Type Cell Culture（ATCC）から入手した。腫瘍細胞にpEGFP-Lucプラスミド（ルートヴィヒマクシミリアン大学ミュンヘンのRudolf Haase博士の厚意により提供された）を、トランスフェクション試薬としてTransIT-LT1（Mirus）を用いてトランスフェクトした。トランスフェクト細胞を、1 mg/mLのG418/Geneticinを用いて選択し、選択の14日後にBD FACSARIA IIセルソーターを用いてEGFP+細胞を選別した。HLA-A0201制限サバイビン95-104（クローンSK-1）特異的CTLクローンを健常ドナーのPBMCから記載のように生成した（Brackertz et al, 2011）。これらの実験については、PANC-1-luc細胞に、SIK3を標的とする単一の（s#）又はプールした（プール）siRNA配列のいずれかをトランスフェクトし、スクランブルsiRNAを対照（siCtrl）として用いて、続いて以下のように簡単に説明される方法によってT細胞へと曝露した。PANC-1-Luc細胞に、白色96ウェルプレート（Perkin Elmer）において、0.1 μLのRNAiMaxをトランスフェクション試薬として用いて37℃、5%CO2で72時間、25 nM siRNAをリバーストランスフェクトした。その後、TIL、サバイビン特異的T細胞又は培養培地（実験に適用可能な場合）をトランスフェクトPANC-1-Luc細胞に所望のエフェクター細胞（T細胞）対標的細胞（腫瘍）比（E:T）で添加し、37℃、5%CO2で24時間インキュベートした。同時培養後に、上清を除去し、残存PANC-1-Luc細胞を、ルシフェラーゼ細胞溶解試薬（0.3%Triton-X水溶液）を用いて10分間溶解させた。溶解後に、ルシフェラーゼアッセイバッファーを添加し、即座にTECAN-Sparkマイクロプレートリーダーを用いてルシフェラーゼ強度を測定した。
【０３９５】
PANC-1細胞はSIK3を発現し、3つの非重複SIK3特異的siRNA（又はsiRNAプール）は各々、スクランブル対照siRNAと比較して効率的なSIK3ノックダウンをmRNAレベルで誘導した（図3A）。ウエスタンブロット分析により、抗SIK3 Ab（Abcam、カタログ番号：ab88495）、及び二次抗体として抗ウサギIgG-HRP（Santa Cruz Biotechnology、カタログ番号：sc2004）を使用して、同じSIK3の個々の及びプールsiRNAを用いたSIK3のノックダウンがタンパク質レベルで確認された（図3B）。さらに、観察された細胞障害効果は、SIK遺伝子ファミリーの他のメンバーのノックダウンによるものではなく、SIK3ノックダウンに特異的であった（図3C）。かかる実験の別々の読取りから観察することができるように（図3D）、SIK3のノックダウンは、腫瘍細胞生存性（T細胞なし）に影響を及ぼすことなく、T細胞の存在下で細胞傷害性を実質的に増大し、SIK1ノックダウンは、いずれの状況においても生存性に影響を及ぼさなかったが、SIK2枯渇は、それ自体が腫瘍細胞生存性を減じ、T細胞の添加は、腫瘍細胞死を相乗的に増大しなかった。
【０３９６】
腫瘍浸潤リンパ球は、SIK3ノックダウンの非存在下では、高いE:T比であっても腫瘍細胞に対して弱い細胞傷害活性を示した。しかしながら、SIK3下方調節は、腫瘍細胞のTIL媒介死滅を一貫して劇的に増大した（図4A）。これらのデータから、SIK3のオンターゲット遺伝子サイレンシングに依存する、観察されたT細胞媒介細胞傷害性の増大が、広範囲のE:T比にわたって観察されることが確認される。驚くべきことに、SIK3障害は、siRNAによるCEACAM6の枯渇よりも強い溶解の増大をもたらした（表A1）。これらのデータは、Khandelwal et al (2015)に記載のようなアッセイを用いてTIL#2との同時培養後にPANC-1細胞の特異的溶解を直接測定するために行った標準的クロム放出（release）アッセイから生成した。ウエスタンブロット分析により、PD-L1だけでなく（as well as）CEACAM6がPANC-1細胞によって発現され、それらの発現を遺伝子特異的siRNA配列のトランスフェクションによりノックダウンすることができることが実証された（図4B）。CEACAM6及びPD-L1は、以下の抗体を用いて検出された：二次抗体として抗ウサギIgG-HRP（Santa Cruz Biotechnology、カタログ番号：sc2004）を用いる抗CEACAM6（Abcam、カタログ番号：ab98109）；二次抗体：抗マウスIgG-HRP（Santa Cruz Biotechnology、カタログ番号sc2005）との抗PD-L1（R&D system；カタログ番号130021）。
【０３９７】
データ情報：図2及び図3Aは、3回の独立実験の累積データを示し、図3B、図3C、図3D及び図4は、少なくとも2回の独立実験の代表的なデータを示す。エラーバーは平均±SEMを表し、P値は両側スチューデントt検定を用いて算出した：*p<0.05、**p<0.01。
【０３９８】
実施例2：SIK3阻害は、様々な癌型に由来する腫瘍細胞を細胞性免疫応答の抗腫瘍効果に感作する
本発明者らは驚くべきことに、実施例1で用いた膵臓細胞株だけでなく他の腫瘍型においても、SIK3が免疫応答に対する耐性の媒介において役割を果たすことを実証することができた。乳癌（MCF-7）及び大腸癌（SW480）細胞株におけるSIK3ノックダウン、並びにその後のサバイビン特異的T細胞又はTIL#1によるチャレンジはそれぞれ、リアルタイム生細胞顕微鏡検査（Essen BioscienceのIncucye Zoom）によって測定されるように、両方の腫瘍型における腫瘍細胞死の有意な増大をもたらした（図5A及び図5B）。
【０３９９】
さらに、ルシフェラーゼ発現M579細胞（M579-A2-luc）を用いた原発性黒色腫同時培養モデルにおいて、SIK3ノックダウンがTIL媒介細胞傷害性を増強し（図6A）、SIK3の過剰発現がHLA-A2.1+適合腫瘍浸潤リンパ球（TIL209）の細胞傷害能を抑える（図6B）ことが観察された。腫瘍浸潤リンパ球209マイクロ培養物（microculture）を、Dudley et al, 2010 (Clin Cancer Res 16:6122-31)に記載されるように黒色腫患者の鼡径リンパ節から増殖させた。M579-A2-luc、PANC1-luc及びMCF7-luc細胞は、Khandelwal et al, 2015に記載のように生成した。
【０４００】
データ情報：図6Bは、3回の独立実験の累積データを示し、図5A、図5B及び図6Aは、少なくとも2回の独立実験の代表的なデータを示す。エラーバーは平均±SEMを表し、P値は両側スチューデントt検定を用いて算出した：*p<0.05、**p<0.01。
【０４０１】
実施例3：SIK3は、腫瘍細胞に内在する機構によって免疫応答に対する腫瘍細胞耐性を媒介する
本発明者らは、SIK3がT細胞の活性又は機能を調節するのではなく、腫瘍耐性の内在性機構に関与することで抗腫瘍T細胞応答に対する耐性を調節するようであるという驚くべき研究結果を得た。腫瘍細胞におけるSIK3のノックダウンは、T細胞におけるIFN-γ、グランザイムB又はパーフォリン産生を増大しなかった（データは示さない）。しかしながら、腫瘍細胞への曝露によって予め活性化したT細胞に由来する（T細胞無含有）馴化培地の単なる添加は、SIK3ノックダウン腫瘍細胞において細胞生存を低減するのに十分であったが（上記のPANC-1-luc細胞のルシフェラーゼベースの死滅アッセイを用いて測定される）（図8A）、非刺激T細胞に由来する（非馴化）培地は、SIK3 siRNAトランスフェクション後の腫瘍細胞生存を変化させなかった（図8B）。この影響は、CD3/CD28ビーズによって活性化した、予め培養したポリクローナルT細胞に由来する馴化培地に腫瘍細胞を曝露した場合に更に顕著であった（図8C）。簡潔に述べると、100000個のTILを培養し、Human Activator CD3/CD28 Dynabeads（Invitrogen）を用いて、製造業者のプロトコルに従い24時間活性化した。この影響は、SIK3枯渇及びポリクローナル活性化T細胞の上清による刺激後の腫瘍細胞生存性の減少を再現する独立生存性アッセイ（WST-1）を用いて確認され（図8D）、生存性の減少がT細胞の非存在下で見られなかったPD-L1ノックダウンと更に比較された（図8E）。WST-1細胞増殖試薬は、製造業者（manufacturer）（Roche）のプロトコルに従って使用した。データ情報：図8A、図8B、図8D及び図8Eは、少なくとも2回の独立実験の代表的なデータを示す。図8Cは3回の独立実験の累積データを示し、エラーバーは平均±SEMを示す。P値は、両側スチューデントt検定を用いて算出した。*p<0.05、**p<0.01。
【０４０２】
実施例4：SIK3活性は、TNF処理腫瘍細胞の運命を決定する
本発明者らは、TNFがかかる腫瘍細胞の固有の耐性によって媒介される細胞性免疫応答において重要な役割を果たすという驚くべき研究結果を更に得た。TNF中和抗体（Abcam、カタログ番号：ab8348）の滴定は、劇的な、またより高い抗TNF抗体濃度で完全な細胞死からの救済をもたらす（図9A）。スクランブル（対照）siRNAをトランスフェクトした腫瘍細胞における同じ処理は、アイソタイプ対照と比較して細胞生存性を変化させなかった（データは示さない）。CD3-CD28ビーズで刺激したT細胞に由来する上清と抗TRAIL及び抗FASL中和抗体とのインキュベーション（（A）の通り）は、抗TNF中和抗体とのインキュベーションとは異なり、SIK3インキュベーション後に細胞傷害性の低減をもたらさなかった（図9C）。
【０４０３】
実際に、SIK3阻害は、TNFの細胞障害効果に対する腫瘍細胞の劇的な感作をもたらす。PANC-1-luc細胞の組換えヒトTNF（rHuTNF；R&D Systems）への曝露は、低濃度のrHuTNFであっても、スクランブル対照（siCtrl）よりもSIK3 siRNAをトランスフェクトした腫瘍細胞においてのみTNFの影響の著しい変化をもたらし（図10A）、この影響は非常に急激に発生した（図10B）。
【０４０４】
データ情報：図9B、図9C、図10A及び図10Bは、少なくとも2回の独立実験の代表的なデータを示す。図9Aは3回の独立実験の累積データを示し、エラーバーは平均±SEMを示す。P値は、両側スチューデントt検定を用いて算出した。*p<0.05、**p<0.01。
【０４０５】
実施例5：TNF受容体1を介したTNFシグナル伝達は、SIK3耐性機構を媒介する
本発明者らは、FACS分析によりPANC-1細胞がTNF受容体1（TNFR1）を発現することを実証した（図11A）。しかしながら、TNF受容体2（TNFR2）は、対照細胞株TIL412上で検出することができたが（図11B）、PANC-1上で検出することができなかった（図11C）。したがって、本発明者らは、TNFR1が観察されるSIK3/TNF媒介効果に関与する主要シグナル伝達経路であることを提案した。腫瘍浸潤リンパ球412マイクロ培養物を、Dudley et al, 2010 (Clin Cancer Res 16:6122-31)に記載されるように黒色腫患者の鼡径リンパ節から増殖させた。
【０４０６】
実際に、TNF刺激後のSIK3枯渇腫瘍細胞におけるTNFR1の遮断は、アイソタイプ抗体対照と比較して、TNFにより誘導される細胞傷害性を無効にしたが（図11D）、siCtrlをトランスフェクトしたPANC-1細胞におけるTNFR1遮断は、アイソタイプ抗体対照と比較して腫瘍細胞生存を顕著に変化させなかった（データは示さない）。
【０４０７】
実施例6：アポトーシス関連遺伝子は、腫瘍細胞においてTNF曝露及びSIK3阻害により上方調節される
本発明者らは、PANC-1細胞の全溶解物中のアポトーシス活性化マーカーを検出するLuminexアッセイを用いて、腫瘍細胞のSIK3/TNF媒介細胞傷害性がカスパーゼ及び他のアポトーシス促進遺伝子によって媒介されることを実証した。カスパーゼ8及び9の両方の切断の増大が、rHuTNF処理により腫瘍細胞においてSIK3枯渇後に検出された（図12A及び図12B）。さらに、SIK3枯渇細胞は、リン酸化c-Jun N末端プロテインキナーゼ（pJNK）のレベルの増大も示した（図12C）。
【０４０８】
実施例7：TNF刺激及びSIK3阻害によって誘発される腫瘍細胞のアポトーシスは、HDAC4によって制御されるNF-KB活性化に支配される
ヒストン脱アセチル化酵素4（HDAC4）は、SIK3の標的とされており、SIK3がHDCA4をリン酸化し、核から細胞質へのHDAC4のシャトリングをもたらす（非特許文献25）。実際に、PANC-1細胞におけるSIK3及びHDAC4の両方のsiRNAノックダウンは、SIK3特異的siRNAのみをトランスフェクトした腫瘍細胞と比較して細胞傷害性の減少を示したが、HDAC4枯渇単独は、スクランブル対照siRNA（siCtrl）トランスフェクションと比較して腫瘍細胞生存性を有意に変化させなかった（図13A）。rHuTNFの非存在下で、siSIK3及びsiHDAC4 siRNAの同時トランスフェクションは、腫瘍細胞生存性に対して大きな影響を示さなかった（データは示さない）。
【０４０９】
マクロファージにおいて、核HDAC4がNF-KB p65サブユニットと物理的に相互作用し、NF-KBの脱アセチル化及びトランス活性化の減少をもたらすことが示されているが（Luan et al 2014, Cell Metab 19:1058）、本発明者らは、腫瘍細胞におけるsiRNA SIK3ノックダウンがrHuTNF刺激後のNF-KB活性化の劇的な障害をもたらすという驚くべき研究結果を得た（図13B）。さらに、トランスフェクトPANC-1細胞の核溶解物のELISAによって検出されるように、SIK3過剰発現はNF-KB核移動の増大を引き起こした（図13C）。
【０４１０】
SIK3/TNF媒介細胞傷害性機構におけるNF-KB転写制御の関与を確認するために、SIK3又はスクランブル対照siRNAのトランスフェクション及びrHuTNF又は細胞培養培地による処理後にPANC-1細胞においてRNA-seq分析を行った。腫瘍細胞におけるSIK3障害は、TNF刺激の非存在下での遺伝子シグネチャーを実質的に変化させた（図14）。それにもかかわらず、予想されるように、（i）SIK3枯渇細胞は、rHuTNF処理の4時間後にNF-KB標的遺伝子転写の障害を示し、（ii）SIK3 mRNAの量は、スクランブル対照siRNAではなくSIK3 siRNAを用いたこれらの実験において枯渇することが見出されるが、興味深いことに、mRNA SIK1及び／又はSIK2の量は枯渇せず、幾らかの増大を示す（データは示さない）。
【０４１１】
実施例8：養子T細胞移入に対する腫瘍耐性は、SIK3阻害によってin vivoで克服することができる
本発明者らは、in vivoモデルにおいて抗腫瘍免疫応答に対する黒色腫細胞の耐性を克服するためにSIK3の阻害を用いることができることを実証した。SIK3を、初代株において、SIK3特異的shRNA（shSIK3）又は対照非標的化shRNA配列（shCtrl）を用いて安定にノックダウンした。SIK3を標的とするshRNA配列を表A2に記載する。形質導入細胞株は、簡潔に述べると以下のように作製した。SIK3 mRNAを標的とするshRNA又は対照shRNAを発現するレンチウイルス形質導入粒子（Sigma-Aldrich）を形質導入に使用した。5×104個のPANC-1-Luc細胞を6ウェルプレートにおいてDMEM 10%FCS 1%P/S中に播種した。24時間後に、レンチウイルス粒子を、感染多重度（MOI）=2を用いて添加した。形質導入の48時間後に、0.4 μg/mlピューロマイシンを用いて細胞を正の選択下に置いた。第1に、shSIK3又はshCtrlにより形質導入された腫瘍細胞をHLA-A2.1+適合TIL209と同時培養し、in vitroリアルタイム生細胞顕微鏡検査を用いてT細胞媒介死滅の程度をモニタリングした。TIL209は、shCtrlと比較して、shSIK3枯渇腫瘍（tumor）細胞に対する死滅有効性の増大を示した（図15A）。第2に、shSIK3及びshCtrlにより形質導入された腫瘍細胞を、それぞれNSG免疫不全マウスの左脇腹及び右脇腹に皮下注射し（図16A）、TIL209の養子細胞移入又はPBS注射を週1回、i.v.で適用した（図16Bのスキーム）。TIL209処理は、shCtrlにより形質導入された細胞と比較してSIK3障害腫瘍細胞における腫瘍成長の遅れを引き起こした（図16C）。in vitroデータ（図15）と一致して、shCtrlとshSIK3との間の腫瘍成長動態の差は、PBS処理マウスにおいて観察されなかった。
【０４１２】
まとめると、これらの結果により、SIK3は、図16Dに図示されるように、その遮断がTNFによる免疫細胞攻撃に対して腫瘍細胞を感作する新規の有力な免疫療法標的とされる。
【０４１３】
実施例9：小分子SIK3阻害剤によるSIK3阻害は、細胞性免疫応答の抗腫瘍効果に対する腫瘍細胞の感度の増強をもたらす
本発明者らは、小分子SIK3阻害剤によるPANC-1細胞におけるSIK3の阻害が、腫瘍細胞においてSIK3のsiRNA媒介ノックダウンによって観察される免疫賦活効果を再現し得ることを実証した。上記のように、HG-9-91-01（非特許文献26）、ボスチニブ及びダサチニブ歯全て、標的の中でも特にSIK3を阻害する。かかる化合物による処理後のPANC-1腫瘍細胞は、Luc-CTLアッセイにおける細胞傷害性対生存性比によって示されるように、TIL及び／又はTNF媒介腫瘍溶解に対する感度の著しい増大を独立して示した（図7A及び図7B）。
【０４１４】
小分子SIK阻害剤を用いて観察される免疫賦活効果がSIK3に特異的であったことを証明するために、本発明者らは、SIK3陽性（対照siRNAで処理した）及びSIK3陰性（SIK3 siRNAで処理した）PANC-1腫瘍細胞の両方を、TNFの存在下（100 ng/mL）及び非存在下において漸増用量のダサチニブ（dasatinib）で処理し、ルシフェラーゼアッセイを用いて腫瘍細胞傷害性を測定した。TNF処理の非存在下で、SIK3陽性及びSIK3陰性（negative）細胞の両方が薬物用量に大幅な耐性を示した（図7C）。しかしながら、TNFの添加後に、SIK3陽性細胞は、顕著な成長刺激を示し、漸増用量のダサチニブにより腫瘍溶解の影響を受けやすくなった。SIK3陰性腫瘍細胞では、TNF処理は顕著な腫瘍溶解を示し、興味深いことに、ダサチニブに対する更なる応答をこれらの細胞において観察することができなかった。これらのデータにより、ダサチニブの免疫賦活効果が、SIK3陰性腫瘍がかかる薬物に対して反応を示さないことからSIK3の阻害によって生じることが示唆される（図7C）。
【０４１５】
ダサチニブ（又はボスチニブ）等のSIK阻害剤を用いて観察される免疫賦活効果が、他のSIKファミリーメンバーの阻害にもSIK3以上に起因する可能性があることから、免疫媒介細胞傷害性に対する腫瘍の感作における3つのSIKファミリーメンバーの各々の役割を試験した。初めに、qPCRによって評定されるように、3つのSIKファミリーメンバーの全てがPANC-1-luc及びM579-A2-luc腫瘍細胞において様々なレベルで発現されることが示された（図7D）。しかしながら、PANC-1-luc細胞におけるSIK1又はSIK2のノックダウンは、TIL（TIL#1）又はFlu抗原特異的T細胞（Trivedi et al 2016, Bio-Protocol 6:e1847に記載のように生成した）の添加後にいかなるT細胞媒介腫瘍溶解も誘導することができなかったが、SIK-3ノックダウン及びT細胞の添加後に、腫瘍溶解の顕著な増大が観察された（TILについては図3C、Flu抗原特異的T細胞については図7E）。M579-A2-luc細胞では、SIK3ノックダウンとは対照的に、SIK1及びSIK2のノックダウンは、Flu特異的T細胞によるT細胞媒介腫瘍溶解に寄与しなかった（図7F）。興味深いことに、SIK1のノックダウンは、それ自体がPANC-1-luc及びM579-A2-luc腫瘍細胞の両方において腫瘍細胞生存性を減少させ、一方でSIK2ノックダウンは、少なくともM579-A2-luc細胞において腫瘍細胞生存を増大した。まとめると、3つのファミリーメンバーの中でも、腫瘍細胞中のSIK3のみがT細胞に対する耐性の媒介に関与することがこれにより証明される。
【０４１６】
この観察結果を更に裏付けるために、SIK1及びSIK2をノックダウンしたM579-A2-luc腫瘍細胞をTNF（100 ng/mL）の存在下でダサチニブにより処理し、それらが依然として薬物に対して反応を示すかを観察した。上記で既に述べたように、Luc CTLアッセイにおいて観察したところ、これらの腫瘍細胞におけるSIK1のノックダウンは、それ自体が（TNFなしで）腫瘍成長を阻害したが、SIK2ノックダウンは腫瘍成長を刺激した（図7F）。TNFによるこれらの細胞の処理後に、どちらの細胞型も、対照siRNAで処理した細胞と同様に（応答曲線の傾きを比較する）、依然として漸増用量のダサチニブに対してそれらの生存性効果を上回って応答した（図7G）。このことは、上記の図（図7C）に示すようなSIK3陰性腫瘍細胞とは対照的であると見出された。これにより、TNFの存在下でのダサチニブの免疫賦活効果がSIK1又はSIK2ではなくSIK3を阻害することによって調整されることが強調される。
【０４１７】
実施例10：一般式Iの小分子化合物の合成
一般式Iの化合物を、下記の手順に従って合成した。
【０４１８】
一般的合成スキーム：
【化Ａ】
2020517747.tif 000022
基本手順
【０４１９】
一般的方法及び材料:
MPLC精製を、Biotage Isolera Fourシステムを用い、工業グレードの有機溶媒、すなわちジクロロメタン及びメタノールにより、KP-Silカートリッジを使用して行った。
【０４２０】
1H NMRスペクトルは、Bruker AVIII 300 MHz又はBruker DPX 400 MHz分光計で記録し、内部標準として溶媒共鳴を用いたppmで報告する（7.26 ppmでのCDCl3、2.50 ppmでのDMSO-d6）。ピークは、（s=シングレット、d=ダブレット、t=トリプレット、q=カルテット、m=マルチプレット又は非分解、bs=ブロードシグナル、Hzでの結合定数（複数の場合もある）、積分値）として報告する。
【０４２１】
逆相HPLCを、以下の系（溶媒A：アセトニトリル、溶媒B：0.1%ギ酸水溶液）を用いて株式会社島津製作所のHPLCシステムで行った。ギ酸は、HPLCグレードとして使用した。全ての分離を常温で行った。分析用RP-HPLC分析（Interchim: Uptisphere Strategy 100 Å、5 μm、100×4.6 mm）については、流量を1.5 ml/分とした。分取RP-HPLC分析（Interchim: Uptisphere Strategy 100 Å、5 μm、100×21.2 mm）については、流量を20 ml/分とした。
【０４２２】
中間体（III）及び（IV）の合成：
エチル2-((6-クロロ-2-メチルピリミジン-4-イル)アミノ)チアゾール-5-カルボキシレート（III）：
【化Ｂ】
2020517747.tif 000023
DMF（105 ml）中の4,6-ジクロロ-2-メチルピリミジンI（5 g、30.7 mmol）及びエチル2-アミノチアゾール-5-カルボキシレートII（5.28 g、30.7 mmol）の溶液に、不活性雰囲気下にて0℃で水素化ナトリウム（2.70 g、67.5 mmol）を少量ずつ添加し、反応混合物を0℃で3時間撹拌した。過剰なNaHを塩化アンモニウムの飽和溶液の添加によってクエンチし、反応混合物を水（2000 ml）に注ぎ入れ、室温で1時間撹拌した。得られた沈殿物を濾別し、風乾させて、エチル2-((6-クロロ-2-メチルピリミジン-4-イル)アミノ)チアゾール-5-カルボキシレートIII（8 g、26.8 mmol、収率87%）を淡黄色の固体として得た。1H NMR(300MHz,CDCl3)  δ 1.34〜1.51(t,3H)、2.75(s,3H)、4.41(q,J=7.1Hz,2H)、6.73(s,1H)、8.14(s,1H)。LCMS:m/z=297.1[M-H]-。
【０４２３】
2-((6-クロロ-2-メチルピリミジン-4-イル)アミノ)チアゾール-5-カルボン酸（IV）：
【化Ｃ】
2020517747.tif 000024
メタノール（65 ml）及び水（25 ml）中のエチル2-((6-クロロ-2-メチルピリミジン-4-イル)アミノ)チアゾール-5-カルボキシレートIII（8 g、26.8 mmol）の懸濁液に、水酸化ナトリウム（8.57 g、214 mmol）を室温で添加し、混合物を室温で16時間撹拌した。LCMS分析により生成物への出発物質の完全な変換が示された。反応混合物を濃縮してメタノールを除去した後、6 M塩酸水溶液を用いて酸性化した。得られた沈殿物を濾別し、水で洗浄し、風乾させて、2-((6-クロロ-2-メチルピリミジン-4-イル)アミノ)チアゾール-5-カルボン酸IV（5.5 g、20.32 mmol、収率76%）をベージュ色の粉末として得た。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)  δ 2.57(s,3H)、6.93(s,1H)、8.04(s,1H)、12.46(bs.1H)。LCMS:m/z=269.0[M-H]-。
【０４２４】
基本手順A：
【化Ｄ】
2020517747.tif 000025
2-((6-クロロ-2-メチルピリミジン-4-イル)アミノ)チアゾール-5-カルボン酸IV（1.0当量）及びアニリン（1.1当量）の混合物に、T3Pを酢酸エチル（1.2当量）及びN-エチル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン（2.0当量）中の50%溶液として25℃で添加した。反応混合物を100℃で16時間撹拌した。室温まで冷却した後、反応混合物を水（200 ml）に注ぎ入れ、最低30分間撹拌した。得られる沈殿物を濾別し、水で洗浄し（5回）、風乾させて、それぞれのアミドを淡褐色から暗褐色の粉末として得て、これを更に精製することなく直接次の工程に使用した。全ての物質をLCMS分析（ESI）によって確認した。
【０４２５】
基本手順B：
【化Ｅ】
2020517747.tif 000026
n-ブタノール（2 ml）中のクロロピリミジン誘導体V（1.0当量）の懸濁液に、2-(ピペラジン-1-イル)エタン-1-オール（5.0当量）及びN-エチル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン（0.4当量）を25℃で添加した。管を密閉し、マイクロ波条件（Biotage Initiator+）下にて120℃で30分間照射した。室温まで冷却した後、反応混合物を水（200 ml）に注ぎ入れ、最低30分間撹拌した。得られる沈殿物を濾別し、水で洗浄し（5回）、風乾させて、最終生成物VIを得た。純度が95%未満である場合、物質をMPLC（SiO2、DCM、10%アンモニア性（ammoniacal）メタノール）又は分取逆相HPLCによって精製した。全ての物質をLCMS分析（ESI）によって確認した。
【０４２６】
基本手順A及びBに従い、表A3に示す一般式Iの化合物を得た。これらの化合物は、下記表1に記載のように特徴付けられた。
【０４２７】
表1：本発明の小分子の合成
【表１】
2020517747.tif 000027
化合物番号
分子量
【０４２８】
実施例11：SIK3の小分子阻害剤の生物活性及び他の特性評価
表1中の合成した化合物の指標IC50を、SIK1、SIK2又はSIK3活性についての生化学アッセイ（ProQinase（Freiburg Germany）によって提供されるFree Choice Kinase Assay）を用いてSIK1、SIK2及びSIK3の各々について決定し、表2Aに示す。
【０４２９】
表2A：本発明の小分子の生物活性
【表２Ａ】
2020517747.tif 000028
化合物番号
IC50ランク
ダサチニブ（dasatinib）
【０４３０】
簡潔に述べると、放射測定プロテインキナーゼアッセイ（33PanQinase（商標） Activity Assay）を3つのプロテインキナーゼのキナーゼ活性の測定に用いた。全てのキナーゼアッセイを、PerkinElmer（Boston，MA，USA）の96-well FlashPlates（商標）において50 μlの反応容量で行った。反応カクテルを4工程にて以下の順序でピペッティングした：
20 μlのアッセイバッファー（標準バッファー）
5 μlのATP溶液（水中）
5 μlの試験化合物（10%DMSO中）
20 μlの酵素／基質ミックス
【０４３１】
全てのプロテインキナーゼについてのアッセイは、70 mM HEPES-NaOH（pH7.5）、3 mM MgCl2、3 mM MnCl2、3 μMオルトバナジウム酸Na、1.2 mM DTT、50 μg/ml PEG20000、ATP（それぞれのキナーゼの見かけのATP-Kmに対応する可変濃度、表2Bを参照されたい）、[γ-33P]-ATP（1ウェル当たりおよそ3.5×105 cpm）、プロテインキナーゼ（可変量、表2Bを参照されたい）及び基質（可変量、表2Bを参照されたい）を含有するものであった。
【０４３２】
1ウェル当たり以下の量の酵素及び基質を使用した。
【０４３３】
表2B：試験したプロテインキナーゼについてのアッセイパラメーター
【表２Ｂ】
2020517747.tif 000029
キナーゼ名
キナーゼ濃度
ATP濃度
基質
基質濃度
*酵素調製物が100%活性酵素のみを含有することを示唆する最大モル酵素アッセイ濃度
【０４３４】
反応カクテルを30℃で60分間インキュベートした。50 μlの2%（v/v）H3PO4で反応を停止し、プレートを吸引し、200 μlの0.9%（w/v）NaClで2回洗浄した。33Piの取込みをマイクロプレートシンチレーションカウンター（Microbeta，Wallac）で決定した。全てのアッセイをBeckmanCoulter/SAGIANTM Core Systemで行った。
【０４３５】
実施例12：腫瘍細胞をTNFの細胞障害効果に感作することができるSIK3の更なる小分子阻害剤の発見及び／又は特性評価
本明細書の式によって説明されるもののような小分子SIK3阻害剤ダサチニブの変異体を、国際公開第2000/62778号に記載される適用可能なスキームに従って合成する。SIK3阻害を、ThermoScientificによって提供されるSelectScreen、ProQinaseによって提供されるFree Choice Kinase Assay又はReaction Biology Incによって提供されるKinase HotSpot等の生化学スクリーンを用いて確認する。SIK3についての（特にSIK1及び／又はSIK2と比較した）特異性／選択性を、生化学キナーゼプロファイリング（例えば、ThermoScientificのSelectScreen、ProQinaseによって提供されるFree Choice Kinase Assay及び／又はDiscoverXのKINOMEScan）を用いて評定する。本明細書の式によって説明されるもののような変異体又は他のSIK3阻害剤（例えば、HG-9-91-01及びYKL-05-099）も合成し、かかる変異体を、SIK3（並びにAbl及び／又はBcr-Abl等の他のキナーゼ）阻害能についての生化学アッセイにおいて同様に試験する。
【０４３６】
SIK3阻害剤であるとして特定される／特徴付けられる変異体（例えば、ダサチニブ）（特に、SIK3特異的／選択的阻害剤であるとして特定される又は特徴付けられるもの）を、細胞アッセイにおいて増殖性疾患の細胞を細胞性免疫応答に感作する有効性（特に、TNFの細胞障害効果への腫瘍細胞の感作）について試験する。例えば、かかるSIK3阻害剤を、図7について説明したものと同様のアッセイにおいて試験する。かかるSIK3阻害剤を、SIK3に対するin vivo SIK特異性／選択性、及び／又はかかる阻害が免疫細胞ではなく腫瘍細胞において媒介されることを更に特性評価するために、SIK3（及び／又はSIK1/SIK2）過剰発現及び／又はsiRNAノックダウン状況において試験することができる。
【０４３７】
特に強力であり、及び／又は好都合なPK特性を有する小分子SIK3阻害剤を、実施例8に記載のマウス黒色腫モデルのような腫瘍耐性を克服するためのin vivoモデルにおいて試験する。
【０４３８】
実施例13：一般式Iの更なる小分子化合物の合成及び特性評価
下記の場合を除き、実施例10の基本手順A及びBに従って、表A4に示す一般式I／本発明の化合物を得た。
【０４３９】
化合物B5、B6及びB7については、実施例10の基本手順Bの代わりに、以下の修正手順B'を用いた。
【０４４０】
基本手順B'：
【化Ｆ】
2020517747.tif 000030
n-ブタノール（2 ml）中のクロロピリミジン誘導体V（1.0当量）の懸濁液に、アミンHNR1R2（5.0当量）及びN-エチル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン（0.4当量）を25℃で添加した。管を密閉し、マイクロ波条件（Biotage Initiator+）下にて120℃で30分間照射した。室温まで冷却した後、反応混合物を水（200 ml）に注ぎ入れ、最低30分間撹拌した。得られる沈殿物を濾別し、水で洗浄し（5回）、風乾させて、最終生成物VIを得た。純度が95%未満である場合、物質をMPLC（SiO2、DCM、10%アンモニア性メタノール）又は分取逆相HPLCによって精製した。全ての物質をLCMS分析（ESI）によって確認した。
【０４４１】
化合物B3については、実施例10の基本手順Aの代わりに、以下の修正手順A'を用いた。
【０４４２】
基本手順A'：
【化Ｇ】
2020517747.tif 000031
2-((6-クロロ-2-メチルピリミジン-4-イル)アミノ)チアゾール-5-カルボン酸IV（1.0当量）及びアニリン／ヘテロアリールアミン（1.1当量）の混合物に、T3Pを酢酸エチル（1.2当量）及びN-エチル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン（2.0当量）中の50%溶液として25℃で添加した。反応混合物を100℃で16時間撹拌した。室温まで冷却した後、反応混合物を水（200 ml）に注ぎ入れ、最低30分間撹拌した。得られる沈殿物を濾別し、水で洗浄し（5回）、風乾させて、それぞれのアミドを淡褐色から暗褐色の粉末として得て、これを更に精製することなく直接次の工程に使用した。全ての物質をLCMS分析（ESI）によって確認した。
【０４４３】
また、実施例10の基本手順Bの代わりに、以下の修正手順B''を用いた。
【０４４４】
基本手順B''：
【化Ｈ】
2020517747.tif 000032
n-ブタノール（2 ml）中のクロロピリミジン誘導体V（1.0当量）の懸濁液に、アミンHNR1R2（5.0当量）及びN-エチル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン（0.4当量）を25℃で添加した。管を密閉し、マイクロ波条件（Biotage Initiator+）下にて120℃で30分間照射した。室温まで冷却した後、反応混合物を水（200 ml）に注ぎ入れ、最低30分間撹拌した。得られる沈殿物を濾別し、水で洗浄し（5回）、風乾させて、最終生成物VIを得た。純度が95%未満である場合、物質をMPLC（SiO2、DCM、10%アンモニア性（ammoniacal）メタノール）又は分取逆相HPLCによって精製した。全ての物質をLCMS分析（ESI）によって確認した。
【０４４５】
表A4に示す化合物は、下記表3に記載のように特徴付けられた。
【０４４６】
表3：式I／本発明の更なる小分子の合成
【表３】
2020517747.tif 000033
化合物番号
分子量
(1H又は19F  NMRが示される；又はND=未確定)
【０４４７】
表3中の合成した化合物の指標IC50を、上記のようなSIK1、SIK2又はSIK3活性についての生化学アッセイ（ProQinase（Freiburg Germany）によって提供されるFree Choice Kinase Assay）を用いてSIK1、SIK2及びSIK3の各々、並びにABL1及びSRCについて決定し、表4に示す。
【０４４８】
表4：式I／本発明の更なる小分子の生物活性
【表４】
2020517747.tif 000034
化合物番号
IC50ランク
ダサチニブ
ND=未確定
【０４４９】
簡潔に述べると、放射測定プロテインキナーゼアッセイ（33PanQinase（商標） Activity Assay）を5つのプロテインキナーゼのキナーゼ活性の測定に用いた。全てのキナーゼアッセイを、PerkinElmer（Boston，MA，USA）の96-well FlashPlates（商標）において50 μlの反応容量で行った。反応カクテルを4工程にて以下の順序でピペッティングした：
25 μlのアッセイバッファー（標準バッファー／「γ-33P」-ATP）
10 μlのATP溶液（水中）
5 μlの試験化合物（10%DMSO中）
20 μlの酵素／基質ミックス
【０４５０】
全てのプロテインキナーゼについてのアッセイは、70 mM HEPES-NaOH（pH7.5）、3 mM MgCl2、3 mM MnCl2、3 μMオルトバナジウム酸Na、1.2 mM DTT、ATP（それぞれのキナーゼの見かけのATP-Kmに対応する可変濃度、表5を参照されたい）、[γ-33P]-ATP（1ウェル当たりおよそ8×105 cpm）、プロテインキナーゼ（可変量、表5を参照されたい）及び基質（可変量、表5を参照されたい）を含有するものであった。
【０４５１】
1ウェル当たり以下の量の酵素及び基質を使用した。
【０４５２】
表5：試験したプロテインキナーゼについてのアッセイパラメーター
【表５】
2020517747.tif 000035
キナーゼ名
キナーゼ濃度
ATP濃度
基質
基質濃度
*酵素調製物が100%活性酵素のみを含有することを示唆する最大モル酵素アッセイ濃度
【０４５３】
反応カクテルを30℃で60分間インキュベートした。50 μlの2%（v/v）H3PO4で反応を停止し、プレートを吸引し、200 μlの0.9%（w/v）NaClで2回洗浄した。33Piの取込みをマイクロプレートシンチレーションカウンター（Microbeta，Wallac）で決定した。全てのアッセイをBeckmanCoulter/SAGIANTM Core Systemで行った。
【０４５４】
実施例14：関連キナーゼに対するSIKファミリーの阻害は、抗腫瘍免疫療法効果の達成に重要である
本発明者らは、本発明の阻害剤の腫瘍免疫療法効果がSIKファミリーメンバー、特にSIK3によって媒介されることを実証することができた。実施例9に記載のルシフェラーゼベースの腫瘍細胞生存性の読取りを用いることで（例えば、図7Gに用いられる）、腫瘍細胞は、阻害剤単独の存在下（四角）と比較して、TNF（10 ng/mL）並びに約10 nM〜100 nMの濃度の汎SIK及びABL1&SRC阻害剤（化合物B1）の存在下（丸）で細胞傷害性の増大を示す（図17A）。しかしながら、対照的に、TNFと組み合わせた、強力なABL1&SRC阻害剤であるが、SIKファミリーメンバー（特に、SIK3）に対して低い阻害活性を有する化合物B8（丸）は、阻害剤単独（四角）と比較して、かかる濃度範囲でM579 A2細胞の細胞傷害性を示すことができない（図17B）。実際に、化合物B4がABL1&SRCの強力な阻害剤であるだけでなく、SIK1及びSIK2の強い阻害剤でもあり、SIK3の弱い阻害剤でしかないにも関わらず、TNFと組み合わせた化合物B4（丸）も、阻害剤単独（四角）と比較して、かかる濃度範囲でM579 A2細胞の細胞傷害性を示すことができない（図17C）。
【０４５５】
まとめると、これらのデータから、他のキナーゼABL1又はSRCではなく、SIKファミリーメンバー、特にSIK3が抗腫瘍免疫療法効果のメディエーターであることが示唆される。
【０４５６】
実施例15：SIK3ではなく、SIK1及びSIK2に選択的な化合物は、抗腫瘍免疫療法効果を示すことができない
本発明者らによるSIKファミリーメンバーに特異的／選択的な化合物の更なる分析は、特に実施例14に示される約20 nM〜100 nMの活性濃度範囲での式Iの化合物によるSIK3の阻害が抗腫瘍免疫療法効果の達成に重要であるという更なる証拠を提供する。実施例9に記載のM579-A2-lucアッセイでは、腫瘍細胞生存（RLUの増大）は、かかる濃度で、（A）10 ng/mL TNFと組み合わせた、強いSIK1及びSIK2の阻害剤であるが、弱いSIK3阻害剤である化合物A11、又は（B）10 ng/mL TNFと組み合わせた、強いSIK2阻害剤であるが、弱いSIK3及び弱いSIK1の阻害剤である化合物A6のいずれによっても影響を受けないままである。
【０４５７】
これらのデータは、実施例14に示すデータと合わせて、SIKファミリーメンバーの中でも、これらの化合物の抗腫瘍免疫療法効果がSIK1又はSIK2ではなく、SIK3阻害によって媒介されることを更に示唆する。
【符号の説明】
【０４５８】
図面訳
図2
Tumour cell survival  腫瘍細胞生存
normalised to control  対照に対して正規化
Survivin TCs  サバイビンTC
No TCs  TCなし
pool  プール
図3
SIK3 mRNA expression  SIK3 mRNA発現
pool  プール
β-actin  β-アクチン
Tumour cell survival  腫瘍細胞生存
cytotoxicity/viability ratio  細胞傷害性／生存性比
Normalized to control  対照に対して正規化
No TCs  TCなし
図4
Specific lysis  特異的溶解
pool  プール
E:T ratio  E:T比
β-Actin  β-アクチン
図5
Tumor cell death (μm2/well)  腫瘍細胞死（μm2／ウェル）
Time (h)  時間（時間）
図6
Tumour cell survival  腫瘍細胞生存
normalised to control  対照に対して正規化
No TCs  TCなし
pool  プール
図7
Tumour cell survival  腫瘍細胞生存
Cytotoxicity/viability ratio  細胞傷害性／生存性比
SIKs inhibitor  SIK阻害剤
No TIL#1  TIL#1なし
Dasatinib Conc.  ダサチニブ濃度
Meida only  培地（Media）のみ
DMSO high  高DMSO
Gene expression of SIK family members  SIKファミリーメンバーの遺伝子発現
Normalized to GAPDH  GAPDHに対して正規化
Flu-specific T cells  Flu特異的T細胞
Flu-specifc T cells  Flu特異的（specific）T細胞
ctrl.2  対照2
pool  プール
no FluT cells  FluT細胞なし
with FluT cells  FluT細胞あり
Dasatinib  ダサチニブ
ctrl. siRNA  対照siRNA
図8
Sup Co-culture  上清の同時培養
Tumour cell survival  腫瘍細胞生存
Normalised to unstim control  非刺激対照に対して正規化
Sup  上清
Unst.  非刺激
Sup Unstimulated TILs  非刺激TILの上清
Sup CD3-CD28 Beads  CD3-CD28ビーズの上清
WST-1 Assay  WST-1アッセイ
Cell viability  細胞生存性
pool  プール
No T cells  T細胞なし
図9
Tumour cell survival  腫瘍細胞生存
Norm. to unstim control  非刺激対照に対して正規化
Polyclonal stim.  ポリクローナル刺激
Ctrl Ab  対照Ab
Anti-TNF-α Ab  抗TNF-α Ab
Unstim.  非刺激
Tumor stim.  腫瘍刺激
conditioned medium  条件培地
normalised to control  対照に対して正規化
Medium  培地
図10
Tumour cell survival  腫瘍細胞生存
Dead tumour cell area (um2/well)  死腫瘍細胞の面積（μm2／ウェル）
Time (h)  時間（時間）
図11
Normalized To Mode  モードに対して正規化
Tumour cell survival  腫瘍細胞生存
Norm. to unstim control  非刺激対照に対して正規化
Ctrl Ab  対照Ab
Anti-TNFR-I Ab  抗TNFR-I Ab
図12
Active CASP 8  活性CASP 8
Unstimulated  非刺激
2h  2時間
4h  4時間
図13
Tumour cell survival  腫瘍細胞生存
Active nuclear NF-kB  活性核NF-kB
Normalized to control  対照に対して正規化
Unstimulated  非刺激
15 min  15分間
30 min  30分間
図14
Z score  Zスコア
図15
Tumor cell death  腫瘍細胞死
Time (h)  時間（時間）
図16
M579 engraftment  M579移植
matrigel  マトリゲル
Tumor volume  腫瘍体積
Days  日数
Tumor cell  腫瘍細胞
T cell  T細胞
Th1 Cytokines  Th1サイトカイン
Apoptosis  アポトーシス
Anti-apoptotic genes  抗アポトーシス遺伝子
Pro-survival genes  生存促進遺伝子
図17
Normalized Cytotoxicity/Viability  正規化細胞傷害性／生存性比
Log10 compound concentration  Log10化合物濃度
Compound B1 (+TNF, circles)  化合物B1（+TNF、丸）
Compound B8 (+TNF, circles)  化合物B8（+TNF、丸）
Compound B4 (+TNF, circles)  化合物B4（+TNF、丸）
図18
Log10 compound concentration  Log10化合物濃度
Compound A11 (+TNF, circles)  化合物A11（+TNF、丸）
Compound A6 (+TNF, circles)  化合物A6（+TNF、丸）
【０４５９】
（配列表）
配列番号1（SIK3アイソフォーム1；UniProt識別番号：Q9Y2K2-1、2017年3月15日のエントリバージョン138）：
10         20         30         40         50
MPARIGYYEI DRTIGKGNFA VVKRATHLVT KAKVAIKIID KTQLDEENLK 
60         70         80         90        100
KIFREVQIMK MLCHPHIIRL YQVMETERMI YLVTEYASGG EIFDHLVAHG 
110        120        130        140        150
RMAEKEARRK FKQIVTAVYF CHCRNIVHRD LKAENLLLDA NLNIKIADFG 
160        170        180        190        200
FSNLFTPGQL LKTWCGSPPY AAPELFEGKE YDGPKVDIWS LGVVLYVLVC 
210        220        230        240        250
GALPFDGSTL QNLRARVLSG KFRIPFFMST ECEHLIRHML VLDPNKRLSM 
260        270        280        290        300
EQICKHKWMK LGDADPNFDR LIAECQQLKE ERQVDPLNED VLLAMEDMGL 
310        320        330        340        350
DKEQTLQSLR SDAYDHYSAI YSLLCDRHKR HKTLRLGALP SMPRALAFQA 
360        370        380        390        400
PVNIQAEQAG TAMNISVPQV QLINPENQIV EPDGTLNLDS DEGEEPSPEA 
410        420        430        440        450
LVRYLSMRRH TVGVADPRTE VMEDLQKLLP GFPGVNPQAP FLQVAPNVNF 
460        470        480        490        500
MHNLLPMQNL QPTGQLEYKE QSLLQPPTLQ LLNGMGPLGR RASDGGANIQ 
510        520        530        540        550
LHAQQLLKRP RGPSPLVTMT PAVPAVTPVD EESSDGEPDQ EAVQSSTYKD 
560        570        580        590        600
SNTLHLPTER FSPVRRFSDG AASIQAFKAH LEKMGNNSSI KQLQQECEQL 
610        620        630        640        650
QKMYGGQIDE RTLEKTQQQH MLYQQEQHHQ ILQQQIQDSI CPPQPSPPLQ 
660        670        680        690        700
AACENQPALL THQLQRLRIQ PSSPPPNHPN NHLFRQPSNS PPPMSSAMIQ 
710        720        730        740        750
PHGAASSSQF QGLPSRSAIF QQQPENCSSP PNVALTCLGM QQPAQSQQVT 
760        770        780        790        800
IQVQEPVDML SNMPGTAAGS SGRGISISPS AGQMQMQHRT NLMATLSYGH 
810        820        830        840        850
RPLSKQLSAD SAEAHSLNVN RFSPANYDQA HLHPHLFSDQ SRGSPSSYSP 
860        870        880        890        900
STGVGFSPTQ ALKVPPLDQF PTFPPSAHQQ PPHYTTSALQ QALLSPTPPD 
910        920        930        940        950
YTRHQQVPHI LQGLLSPRHS LTGHSDIRLP PTEFAQLIKR QQQQRQQQQQ 
960        970        980        990       1000
QQQQQEYQEL FRHMNQGDAG SLAPSLGGQS MTERQALSYQ NADSYHHHTS 
1010       1020       1030       1040       1050
PQHLLQIRAQ ECVSQASSPT PPHGYAHQPA LMHSESMEED CSCEGAKDGF 
1060       1070       1080       1090       1100
QDSKSSSTLT KGCHDSPLLL STGGPGDPES LLGTVSHAQE LGIHPYGHQP 
1110       1120       1130       1140       1150
TAAFSKNKVP SREPVIGNCM DRSSPGQAVE LPDHNGLGYP ARPSVHEHHR 
1160       1170       1180       1190       1200
PRALQRHHTI QNSDDAYVQL DNLPGMSLVA GKALSSARMS DAVLSQSSLM 
1210       1220       1230       1240       1250
GSQQFQDGEN EECGASLGGH EHPDLSDGSQ HLNSSCYPST CITDILLSYK 
1260 
HPEVSFSMEQ AGV     
配列番号2（SIK3アイソフォーム2；UniProt識別番号：Q9Y2K2-2、2017年3月15日のエントリバージョン138）：
10         20         30         40         50
MGLRASRPSK LTWKKWATTA ASNSCSRSVS SCRRCTGGRL MKEPWRRPSS 
60         70         80         90        100
SICYTSRSST IKFSSNKFKT LSVLLSHLHL FRLHVKISQP SLPISSRGAA 
110        120        130        140        150
SSSQFQGLPS RSAIFQQQPE NCSSPPNVAL TCLGMQQPAQ SQQVTIQVQE 
160        170        180        190        200
PVDMLSNMPG TAAGSSGRGI SISPSAGQMQ MQHRTNLMAT LSYGHRPLSK 
210        220        230        240        250
QLSADSAEAH SAHQQPPHYT TSALQQALLS PTPPDYTRHQ QVPHILQGLL 
260        270        280        290        300
SPRHSLTGHS DIRLPPTEFA QLIKRQQQQR QQQQQQQQQQ EYQELFRHMN 
310        320        330        340        350
QGDAGSLAPS LGGQSMTERQ ALSYQNADSY HHHTSPQHLL QIRAQECVSQ 
360        370        380        390        400
ASSPTPPHGY AHQPALMHSE SMEEDCSCEG AKDGFQDSKS SSTLTKGCHD 
410        420        430        440        450
SPLLLSTGGP GDPESLLGTV SHAQELGIHP YGHQPTAAFS KNKVPSREPV 
460        470        480        490        500
IGNCMDRSSP GQAVELPDHN GLGYPARPSV HEHHRPRALQ RHHTIQNSDD 
510        520        530        540        550
AYVQLDNLPG MSLVAGKALS SARMSDAVLS QSSLMGSQQF QDGENEECGA 
560        570        580        590 
SLGGHEHPDL SDGSQHLNSS CYPSTCITDI LLSYKHPEVS FSMEQAGV
配列番号3（SIK3アイソフォーム3；UniProt識別番号：Q9Y2K2-3、2017年3月15日のエントリバージョン138）：
10         20         30         40         50
MPARIGYYEI DRTIGKGNFA VVKRATHLVT KAKVAIKIID KTQLDEENLK 
60         70         80         90        100
KIFREVQIMK MLCHPHIIRL YQVMETERMI YLVTEYASGG EIFDHLVAHG 
110        120        130        140        150
RMAEKEARRK FKQIVTAVYF CHCRNIVHRD LKAENLLLDA NLNIKIADFG 
160        170        180        190        200
FSNLFTPGQL LKTWCGSPPY AAPELFEGKE YDGPKVDIWS LGVVLYVLVC 
210        220        230        240        250
GALPFDGSTL QNLRARVLSG KFRIPFFMST ECEHLIRHML VLDPNKRLSM 
260        270        280        290        300
EQICKHKWMK LGDADPNFDR LIAECQQLKE ERQVDPLNED VLLAMEDMGL 
310        320        330        340        350
DKEQTLQSLR SDAYDHYSAI YSLLCDRHKR HKTLRLGALP SMPRALAFQA 
360        370        380        390        400
PVNIQAEQAG TAMNISVPQV QLINPENQIV EPDGTLNLDS DEGEEPSPEA 
410        420        430        440        450
LVRYLSMRRH TVGVADPRTE VMEDLQKLLP GFPGVNPQAP FLQVAPNVNF 
460        470        480        490        500
MHNLLPMQNL QPTGQLEYKE QSLLQPPTLQ LLNGMGPLGR RASDGGANIQ 
510        520        530        540        550
LHAQQLLKRP RGPSPLVTMT PAVPAVTPVD EESSDGEPDQ EAVQSSTYKD 
560        570        580        590        600
SNTLHLPTER FSPVRRFSDG AASIQAFKAH LEKMGNNSSI KQLQQECEQL 
610        620        630        640        650
QKMYGGQIDE RTLEKTQQQH MLYQQEQHHQ ILQQQIQDSI CPPQPSPPLQ 
660        670        680        690        700
AACENQPALL THQLQRLRIQ PSSPPPNHPN NHLFRQPSNS PPPMSSAMIQ 
710        720        730        740        750
PHGAASSSQF QGLPSRSAIF QQQPENCSSP PNVALTCLGM QQPAQSQQVT 
760        770        780        790        800
IQVQEPVDML SNMPGTAAGS SGRGISISPS AGQMQMQHRT NLMATLSYGH 
810        820        830        840        850
RPLSKQLSAD SAEAHSLNVN RFSPANYDQA HLHPHLFSDQ SRGSPSSYSP 
860        870        880        890        900
STGVGFSPTQ ALKVPPLDQF PTFPPSAHQQ PPHYTTSALQ QALLSPTPPD 
910        920        930        940        950
YTRHQQVPHI LQGLLSPRHS LTGHSDIRLP PTEFAQLIKR QQQQRQQQQQ 
960        970        980        990       1000
QQQQQEYQEL FRHMNQGDAG SLAPSLGGQS MTERQALSYQ NADSYHHHTS 
1010       1020       1030       1040       1050
PQHLLQIRAQ ECVSQASSPT PPHGYAHQPA LMHSESMEED CSCEGAKDGF 
1060       1070       1080       1090       1100
QDSKSSSTLT KGCHDSPLLL STGGPGDPES LLGTVSHAQE LGIHPYGHQP 
1110       1120 
TAAFSKNKVP SRGKCLLTVE VLGQSALIN
配列番号4（SIK3アイソフォーム4；UniProt識別番号：Q9Y2K2-4、2017年3月15日のエントリバージョン138）：
10         20         30         40         50
MPARIGYYEI DRTIGKGNFA VVKRATHLVT KAKVAIKIID KTQLDEENLK 
60         70         80         90        100
KIFREVQIMK MLCHPHIIRL YQVMETERMI YLVTEYASGG EIFDHLVAHG 
110        120        130        140        150
RMAEKEARRK FKQIVTAVYF CHCRNIVHRD LKAENLLLDA NLNIKIADFG 
160        170        180        190        200
FSNLFTPGQL LKTWCGSPPY AAPELFEGKE YDGPKVDIWS LGVVLYVLVC 
210        220        230        240        250
GALPFDGSTL QNLRARVLSG KFRIPFFMST ECEHLIRHML VLDPNKRLSM 
260        270        280        290        300
EQICKHKWMK LGDADPNFDR LIAECQQLKE ERQVDPLNED VLLAMEDMGL 
310        320        330        340        350
DKEQTLQAEQ AGTAMNISVP QVQLINPENQ IVEPDGTLNL DSDEGEEPSP 
360        370        380        390        400
EALVRYLSMR RHTVGVADPR TEVMEDLQKL LPGFPGVNPQ APFLQVAPNV 
410        420        430        440        450
NFMHNLLPMQ NLQPTGQLEY KEQSLLQPPT LQLLNGMGPL GRRASDGGAN 
460        470        480        490        500
IQLHAQQLLK RPRGPSPLVT MTPAVPAVTP VDEESSDGEP DQEAVQRYLA 
510        520        530        540        550
NRSKRHTLAM TNPTAEIPPD LQRQLGQQPF RSRVWPPHLV PDQHRSTYKD 
560        570        580        590        600
SNTLHLPTER FSPVRRFSDG AASIQAFKAH LEKMGNNSSI KQLQQECEQL 
610        620        630        640        650
QKMYGGQIDE RTLEKTQQQH MLYQQEQHHQ ILQQQIQDSI CPPQPSPPLQ 
660        670        680        690        700
AACENQPALL THQLQRLRIQ PSSPPPNHPN NHLFRQPSNS PPPMSSAMIQ 
710        720        730        740        750
PHGAASSSQF QGLPSRSAIF QQQPENCSSP PNVALTCLGM QQPAQSQQVT 
760        770        780        790        800
IQVQEPVDML SNMPGTAAGS SGRGISISPS AGQMQMQHRT NLMATLSYGH 
810        820        830        840        850
RPLSKQLSAD SAEAHSAHQQ PPHYTTSALQ QALLSPTPPD YTRHQQVPHI 
860        870        880        890        900
LQGLLSPRHS LTGHSDIRLP PTEFAQLIKR QQQQRQQQQQ QQQQQEYQEL 
910        920        930        940        950
FRHMNQGDAG SLAPSLGGQS MTERQALSYQ NADSYHHHTS PQHLLQIRAQ 
960        970        980        990       1000
ECVSQASSPT PPHGYAHQPA LMHSESMEED CSCEGAKDGF QDSKSSSTLT 
1010       1020       1030       1040       1050
KGCHDSPLLL STGGPGDPES LLGTVSHAQE LGIHPYGHQP TAAFSKNKVP 
1060       1070       1080       1090       1100
SREPVIGNCM DRSSPGQAVE LPDHNGLGYP ARPSVHEHHR PRALQRHHTI 
1110       1120       1130       1140       1150
QNSDDAYVQL DNLPGMSLVA GKALSSARMS DAVLSQSSLM GSQQFQDGEN 
1160       1170       1180       1190       1200
EECGASLGGH EHPDLSDGSQ HLNSSCYPST CITDILLSYK HPEVSFSMEQ 
AGV
配列番号5（SIK1；UniProt識別番号：P57059-1）：
10         20         30         40         50
MVIMSEFSAD PAGQGQGQQK PLRVGFYDIE RTLGKGNFAV VKLARHRVTK 
60         70         80         90        100
TQVAIKIIDK TRLDSSNLEK IYREVQLMKL LNHPHIIKLY QVMETKDMLY 
110        120        130        140        150
IVTEFAKNGE MFDYLTSNGH LSENEARKKF WQILSAVEYC HDHHIVHRDL 
160        170        180        190        200
KTENLLLDGN MDIKLADFGF GNFYKSGEPL STWCGSPPYA APEVFEGKEY 
210        220        230        240        250
EGPQLDIWSL GVVLYVLVCG SLPFDGPNLP TLRQRVLEGR FRIPFFMSQD 
260        270        280        290        300
CESLIRRMLV VDPARRITIA QIRQHRWMRA EPCLPGPACP AFSAHSYTSN 
310        320        330        340        350
LGDYDEQALG IMQTLGVDRQ RTVESLQNSS YNHFAAIYYL LLERLKEYRN 
360        370        380        390        400
AQCARPGPAR QPRPRSSDLS GLEVPQEGLS TDPFRPALLC PQPQTLVQSV 
410        420        430        440        450
LQAEMDCELQ SSLQWPLFFP VDASCSGVFR PRPVSPSSLL DTAISEEARQ 
460        470        480        490        500
GPGLEEEQDT QESLPSSTGR RHTLAEVSTR LSPLTAPCIV VSPSTTASPA 
510        520        530        540        550
EGTSSDSCLT FSASKSPAGL SGTPATQGLL GACSPVRLAS PFLGSQSATP 
560        570        580        590        600
VLQAQGGLGG AVLLPVSFQE GRRASDTSLT QGLKAFRQQL RKTTRTKGFL 
610        620        630        640        650
GLNKIKGLAR QVCQAPASRA SRGGLSPFHA PAQSPGLHGG AAGSREGWSL 
660        670        680        690        700
LEEVLEQQRL LQLQHHPAAA PGCSQAPQPA PAPFVIAPCD GPGAAPLPST 
710        720        730        740        750
LLTSGLPLLP PPLLQTGASP VASAAQLLDT HLHIGTGPTA LPAVPPPRLA 
760        770        780 
RLAPGCEPLG LLQGDCEMED LMPCSLGTFV LVQ  
配列番号6（SIK2；UniProt識別番号：Q9H0K1-1）：
10         20         30         40         50
MVMADGPRHL QRGPVRVGFY DIEGTLGKGN FAVVKLGRHR ITKTEVAIKI 
60         70         80         90        100
IDKSQLDAVN LEKIYREVQI MKMLDHPHII KLYQVMETKS MLYLVTEYAK 
110        120        130        140        150
NGEIFDYLAN HGRLNESEAR RKFWQILSAV DYCHGRKIVH RDLKAENLLL 
160        170        180        190        200
DNNMNIKIAD FGFGNFFKSG ELLATWCGSP PYAAPEVFEG QQYEGPQLDI 
210        220        230        240        250
WSMGVVLYVL VCGALPFDGP TLPILRQRVL EGRFRIPYFM SEDCEHLIRR 
260        270        280        290        300
MLVLDPSKRL TIAQIKEHKW MLIEVPVQRP VLYPQEQENE PSIGEFNEQV 
310        320        330        340        350
LRLMHSLGID QQKTIESLQN KSYNHFAAIY FLLVERLKSH RSSFPVEQRL 
360        370        380        390        400
DGRQRRPSTI AEQTVAKAQT VGLPVTMHSP NMRLLRSALL PQASNVEAFS 
410        420        430        440        450
FPASGCQAEA AFMEEECVDT PKVNGCLLDP VPPVLVRKGC QSLPSNMMET 
460        470        480        490        500
SIDEGLETEG EAEEDPAHAF EAFQSTRSGQ RRHTLSEVTN QLVVMPGAGK 
510        520        530        540        550
IFSMNDSPSL DSVDSEYDMG SVQRDLNFLE DNPSLKDIML ANQPSPRMTS 
560        570        580        590        600
PFISLRPTNP AMQALSSQKR EVHNRSPVSF REGRRASDTS LTQGIVAFRQ 
610        620        630        640        650
HLQNLARTKG ILELNKVQLL YEQIGPEADP NLAPAAPQLQ DLASSCPQEE 
660        670        680        690        700
VSQQQESVST LPASVHPQLS PRQSLETQYL QHRLQKPSLL SKAQNTCQLY 
710        720        730        740        750
CKEPPRSLEQ QLQEHRLQQK RLFLQKQSQL QAYFNQMQIA ESSYPQPSQQ 
760        770        780        790        800
LPLPRQETPP PSQQAPPFSL TQPLSPVLEP SSEQMQYSPF LSQYQEMQLQ 
810        820        830        840        850
PLPSTSGPRA APPLPTQLQQ QQPPPPPPPP PPRQPGAAPA PLQFSYQTCE 
860        870        880        890        900
LPSAASPAPD YPTPCQYPVD GAQQSDLTGP DCPRSPGLQE APSSYDPLAL 
910        920 
SELPGLFDCE MLDAVDPQHN GYVLVN 
配列番号7（SIK3 siRNA s1）：
10          
GCGCCAGGCU UUAUCUUAU 
配列番号8（SIK3 siRNA s2）：
10          
GAACAGCGAC GAUGCUUAU 
配列番号9（SIK3 siRNA s3）：
10          
GCACUAACCU GCUUGGGUA 
配列番号10（SIK3 siRNA s4）：
10          
GGAGCAGGCA GGCGUGUAA 
配列番号11（SIK3 shRNA shSIK3）：
10         20         30         40         50
CCGGGCCAGG CTTTATCTTA TCAAACTCGA GTTTGATAAG ATAAAGCCTG 
GCTTTTTG
配列番号12（対照shRNA shCtrl）：
10         20         30         40
50CCGGGCGCGA TAGCGCTAAT AATTTCTCGA GAAATTATTA GCGCTATCGC
GCTTTTT
配列番号13（SIK3正準配列／アイソフォーム1；UniProt識別番号：Q9Y2K2-5、2018年3月28日のエントリバージョン144）：
10         20         30         40         50
MAAAAASGAG GAAGAGTGGA GPAGRLLPPP APGSPAAPAA VSPAAGQPRP 
60         70         80         90        100
PAPASRGPMP ARIGYYEIDR TIGKGNFAVV KRATHLVTKA KVAIKIIDKT 
110        120        130        140        150
QLDEENLKKI FREVQIMKML CHPHIIRLYQ VMETERMIYL VTEYASGGEI 
160        170        180        190        200
FDHLVAHGRM AEKEARRKFK QIVTAVYFCH CRNIVHRDLK AENLLLDANL 
210        220        230        240        250
NIKIADFGFS NLFTPGQLLK TWCGSPPYAA PELFEGKEYD GPKVDIWSLG 
260        270        280        290        300
VVLYVLVCGA LPFDGSTLQN LRARVLSGKF RIPFFMSTEC EHLIRHMLVL 
310        320        330        340        350
DPNKRLSMEQ ICKHKWMKLG DADPNFDRLI AECQQLKEER QVDPLNEDVL 
360        370        380        390        400
LAMEDMGLDK EQTLQSLRSD AYDHYSAIYS LLCDRHKRHK TLRLGALPSM 
410        420        430        440        450
PRALAFQAPV NIQAEQAGTA MNISVPQVQL INPENQIVEP DGTLNLDSDE 
460        470        480        490        500
GEEPSPEALV RYLSMRRHTV GVADPRTEVM EDLQKLLPGF PGVNPQAPFL 
510        520        530        540        550
QVAPNVNFMH NLLPMQNLQP TGQLEYKEQS LLQPPTLQLL NGMGPLGRRA 
560        570        580        590        600
SDGGANIQLH AQQLLKRPRG PSPLVTMTPA VPAVTPVDEE SSDGEPDQEA 
610        620        630        640        650
VQSSTYKDSN TLHLPTERFS PVRRFSDGAA SIQAFKAHLE KMGNNSSIKQ 
660        670        680        690        700
LQQECEQLQK MYGGQIDERT LEKTQQQHML YQQEQHHQIL QQQIQDSICP 
710        720        730        740        750
PQPSPPLQAA CENQPALLTH QLQRLRIQPS SPPPNHPNNH LFRQPSNSPP 
760        770        780        790        800
PMSSAMIQPH GAASSSQFQG LPSRSAIFQQ QPENCSSPPN VALTCLGMQQ 
810        820        830        840        850
PAQSQQVTIQ VQEPVDMLSN MPGTAAGSSG RGISISPSAG QMQMQHRTNL 
860        870        880        890        900
MATLSYGHRP LSKQLSADSA EAHSLNVNRF SPANYDQAHL HPHLFSDQSR 
910        920        930        940        950
GSPSSYSPST GVGFSPTQAL KVPPLDQFPT FPPSAHQQPP HYTTSALQQA 
960        970        980        990       1000
LLSPTPPDYT RHQQVPHILQ GLLSPRHSLT GHSDIRLPPT EFAQLIKRQQ 
1010       1020       1030       1040       1050
QQRQQQQQQQ QQQEYQELFR HMNQGDAGSL APSLGGQSMT ERQALSYQNA 
1060       1070       1080       1090       1100
DSYHHHTSPQ HLLQIRAQEC VSQASSPTPP HGYAHQPALM HSESMEEDCS 
1110       1120       1130       1140       1150
CEGAKDGFQD SKSSSTLTKG CHDSPLLLST GGPGDPESLL GTVSHAQELG 
1160       1170       1180       1190       1200
IHPYGHQPTA AFSKNKVPSR EPVIGNCMDR SSPGQAVELP DHNGLGYPAR 
1210       1220       1230       1240       1250
PSVHEHHRPR ALQRHHTIQN SDDAYVQLDN LPGMSLVAGK ALSSARMSDA 
1260       1270       1280       1290       1300
VLSQSSLMGS QQFQDGENEE CGASLGGHEH PDLSDGSQHL NSSCYPSTCI 
1310       1320 
TDILLSYKHP EVSFSMEQAG V
配列番号14（SIK3アイソフォーム2；UniProt識別番号：Q9Y2K2-6、2018年3月28日のエントリバージョン144）：
10         20         30         40         50
MACSTPHGSN RRLPRKCHFS LPTRTPTLCT SLRSVSPLCA GSQMGLRASR 
60         70         80         90        100
PSKLTWKKWA TTAASNSCSR SVSSCRRCTG GRLMKEPWRR PSSSICYTSR 
110        120        130        140        150
SSTIKFSSNK FKTLSVLLSH LHLFRLHVKI SQPSLPISSR GAASSSQFQG 
160        170        180        190        200
LPSRSAIFQQ QPENCSSPPN VALTCLGMQQ PAQSQQVTIQ VQEPVDMLSN 
210        220        230        240        250
MPGTAAGSSG RGISISPSAG QMQMQHRTNL MATLSYGHRP LSKQLSADSA 
260        270        280        290        300
EAHSAHQQPP HYTTSALQQA LLSPTPPDYT RHQQVPHILQ GLLSPRHSLT 
310        320        330        340        350
GHSDIRLPPT EFAQLIKRQQ QQRQQQQQQQ QQQEYQELFR HMNQGDAGSL 
360        370        380        390        400
APSLGGQSMT ERQALSYQNA DSYHHHTSPQ HLLQIRAQEC VSQASSPTPP 
410        420        430        440        450
HGYAHQPALM HSESMEEDCS CEGAKDGFQD SKSSSTLTKG CHDSPLLLST 
460        470        480        490        500
GGPGDPESLL GTVSHAQELG IHPYGHQPTA AFSKNKVPSR EPVIGNCMDR 
510        520        530        540        550
SSPGQAVELP DHNGLGYPAR PSVHEHHRPR ALQRHHTIQN SDDAYVQLDN 
560        570        580        590        600
LPGMSLVAGK ALSSARMSDA VLSQSSLMGS QQFQDGENEE CGASLGGHEH 
610        620        630        640 
PDLSDGSQHL NSSCYPSTCI TDILLSYKHP EVSFSMEQAG V
配列番号15（SIK3アイソフォーム3；UniProt識別番号：Q9Y2K2-7、2018年3月28日のエントリバージョン144）：
10         20         30         40         50
MAAAAASGAG GAAGAGTGGA GPAGRLLPPP APGSPAAPAA VSPAAGQPRP 
60         70         80         90        100
PAPASRGPMP ARIGYYEIDR TIGKGNFAVV KRATHLVTKA KVAIKIIDKT 
110        120        130        140        150
QLDEENLKKI FREVQIMKML CHPHIIRLYQ VMETERMIYL VTEYASGGEI 
160        170        180        190        200
FDHLVAHGRM AEKEARRKFK QIVTAVYFCH CRNIVHRDLK AENLLLDANL 
210        220        230        240        250
NIKIADFGFS NLFTPGQLLK TWCGSPPYAA PELFEGKEYD GPKVDIWSLG 
260        270        280        290        300
VVLYVLVCGA LPFDGSTLQN LRARVLSGKF RIPFFMSTEC EHLIRHMLVL 
310        320        330        340        350
DPNKRLSMEQ ICKHKWMKLG DADPNFDRLI AECQQLKEER QVDPLNEDVL 
360        370        380        390        400
LAMEDMGLDK EQTLQSLRSD AYDHYSAIYS LLCDRHKRHK TLRLGALPSM 
410        420        430        440        450
PRALAFQAPV NIQAEQAGTA MNISVPQVQL INPENQIVEP DGTLNLDSDE 
460        470        480        490        500
GEEPSPEALV RYLSMRRHTV GVADPRTEVM EDLQKLLPGF PGVNPQAPFL 
510        520        530        540        550
QVAPNVNFMH NLLPMQNLQP TGQLEYKEQS LLQPPTLQLL NGMGPLGRRA 
560        570        580        590        600
SDGGANIQLH AQQLLKRPRG PSPLVTMTPA VPAVTPVDEE SSDGEPDQEA 
610        620        630        640        650
VQSSTYKDSN TLHLPTERFS PVRRFSDGAA SIQAFKAHLE KMGNNSSIKQ 
660        670        680        690        700
LQQECEQLQK MYGGQIDERT LEKTQQQHML YQQEQHHQIL QQQIQDSICP 
710        720        730        740        750
PQPSPPLQAA CENQPALLTH QLQRLRIQPS SPPPNHPNNH LFRQPSNSPP 
760        770        780        790        800
PMSSAMIQPH GAASSSQFQG LPSRSAIFQQ QPENCSSPPN VALTCLGMQQ 
810        820        830        840        850
PAQSQQVTIQ VQEPVDMLSN MPGTAAGSSG RGISISPSAG QMQMQHRTNL 
860        870        880        890        900
MATLSYGHRP LSKQLSADSA EAHSLNVNRF SPANYDQAHL HPHLFSDQSR 
910        920        930        940        950
GSPSSYSPST GVGFSPTQAL KVPPLDQFPT FPPSAHQQPP HYTTSALQQA 
960        970        980        990       1000
LLSPTPPDYT RHQQVPHILQ GLLSPRHSLT GHSDIRLPPT EFAQLIKRQQ 
1010       1020       1030       1040       1050
QQRQQQQQQQ QQQEYQELFR HMNQGDAGSL APSLGGQSMT ERQALSYQNA 
1060       1070       1080       1090       1100
DSYHHHTSPQ HLLQIRAQEC VSQASSPTPP HGYAHQPALM HSESMEEDCS 
1110       1120       1130       1140       1150
CEGAKDGFQD SKSSSTLTKG CHDSPLLLST GGPGDPESLL GTVSHAQELG 
1160       1170       1180 
IHPYGHQPTA AFSKNKVPSR GKCLLTVEVL GQSALIN
配列番号16（SIK3アイソフォーム4；UniProt識別番号：Q9Y2K2-8、2018年3月28日のエントリバージョン144）：
10         20         30         40         50
MAAAAASGAG GAAGAGTGGA GPAGRLLPPP APGSPAAPAA VSPAAGQPRP 
60         70         80         90        100
PAPASRGPMP ARIGYYEIDR TIGKGNFAVV KRATHLVTKA KVAIKIIDKT 
110        120        130        140        150
QLDEENLKKI FREVQIMKML CHPHIIRLYQ VMETERMIYL VTEYASGGEI 
160        170        180        190        200
FDHLVAHGRM AEKEARRKFK QIVTAVYFCH CRNIVHRDLK AENLLLDANL 
210        220        230        240        250
NIKIADFGFS NLFTPGQLLK TWCGSPPYAA PELFEGKEYD GPKVDIWSLG 
260        270        280        290        300
VVLYVLVCGA LPFDGSTLQN LRARVLSGKF RIPFFMSTEC EHLIRHMLVL 
310        320        330        340        350
DPNKRLSMEQ ICKHKWMKLG DADPNFDRLI AECQQLKEER QVDPLNEDVL 
360        370        380        390        400
LAMEDMGLDK EQTLQAEQAG TAMNISVPQV QLINPENQIV EPDGTLNLDS 
410        420        430        440        450
DEGEEPSPEA LVRYLSMRRH TVGVADPRTE VMEDLQKLLP GFPGVNPQAP 
460        470        480        490        500
FLQVAPNVNF MHNLLPMQNL QPTGQLEYKE QSLLQPPTLQ LLNGMGPLGR 
510        520        530        540        550
RASDGGANIQ LHAQQLLKRP RGPSPLVTMT PAVPAVTPVD EESSDGEPDQ 
560        570        580        590        600
EAVQRYLANR SKRHTLAMTN PTAEIPPDLQ RQLGQQPFRS RVWPPHLVPD 
610        620        630        640        650
QHRSTYKDSN TLHLPTERFS PVRRFSDGAA SIQAFKAHLE KMGNNSSIKQ 
660        670        680        690        700
LQQECEQLQK MYGGQIDERT LEKTQQQHML YQQEQHHQIL QQQIQDSICP 
710        720        730        740        750
PQPSPPLQAA CENQPALLTH QLQRLRIQPS SPPPNHPNNH LFRQPSNSPP 
760        770        780        790        800
PMSSAMIQPH GAASSSQFQG LPSRSAIFQQ QPENCSSPPN VALTCLGMQQ 
810        820        830        840        850
PAQSQQVTIQ VQEPVDMLSN MPGTAAGSSG RGISISPSAG QMQMQHRTNL 
860        870        880        890        900
MATLSYGHRP LSKQLSADSA EAHSAHQQPP HYTTSALQQA LLSPTPPDYT 
910        920        930        940        950
RHQQVPHILQ GLLSPRHSLT GHSDIRLPPT EFAQLIKRQQ QQRQQQQQQQ 
960        970        980        990       1000
QQQEYQELFR HMNQGDAGSL APSLGGQSMT ERQALSYQNA DSYHHHTSPQ 
1010       1020       1030       1040       1050
HLLQIRAQEC VSQASSPTPP HGYAHQPALM HSESMEEDCS CEGAKDGFQD 
1060       1070       1080       1090       1100
SKSSSTLTKG CHDSPLLLST GGPGDPESLL GTVSHAQELG IHPYGHQPTA 
1110       1120       1130       1140       1150
AFSKNKVPSR EPVIGNCMDR SSPGQAVELP DHNGLGYPAR PSVHEHHRPR 
1160       1170       1180       1190       1200
ALQRHHTIQN SDDAYVQLDN LPGMSLVAGK ALSSARMSDA VLSQSSLMGS 
1210       1220       1230       1240       1250
QQFQDGENEE CGASLGGHEH PDLSDGSQHL NSSCYPSTCI TDILLSYKHP 
1260 
EVSFSMEQAG V
【図１】
2020517747.tif 000044
【図２】
2020517747.tif 000045
【図３−１】
2020517747.tif 000046
【図３−２】
2020517747.tif 000047
【図４】
2020517747.tif 000048
【図５】
2020517747.tif 000049
【図６】
2020517747.tif 000050
【図７−１】
2020517747.tif 000051
【図７−２】
2020517747.tif 000052
【図７−３】
2020517747.tif 000053
【図７−４】
2020517747.tif 000054
【図８−１】
2020517747.tif 000055
【図８−２】
2020517747.tif 000056
【図９−１】
2020517747.tif 000057
【図９−２】
2020517747.tif 000058
【図１０】
2020517747.tif 000059
【図１１−１】
2020517747.tif 000060
【図１１−２】
2020517747.tif 000061
【図１２】
2020517747.tif 000062
【図１３】
2020517747.tif 000063
【図１４】
2020517747.tif 000064
【図１５】
2020517747.tif 000065
【図１６】
2020517747.tif 000066
【図１６−１】
2020517747.tif 000067
【図１６−２】
2020517747.tif 000068
【図１７】
2020517747.tif 000069
【図１８】
2020517747.tif 000070
【配列表】
2020517747000001.app
【国際調査報告】
2020517747.tif 000071
2020517747.tif 000072
2020517747.tif 000073
2020517747.tif 000074
2020517747.tif 000075