(57)【要約】本発明は、エンドトキシンを含む微生物汚染物質の検出及び／又は定量化に有用な方法、組成物、及びデバイスを対象とする。実施形態では、携帯型リーダ／デバイスと組み合わせて吸収度に基づくアッセイで有用な乾燥組成物を含むカートリッジが提供される。カートリッジは、ポンプ機構、たとえば２位置シリンジを含み、第１の位置が、真空を生じさせてサンプルをカートリッジの流体入口ポート及び導管内へ導入し、第２の位置が、導管から光学的サンプルウェルへの輸送を提供し、光学的サンプルウェルは乾燥させられた血球溶解物の組成物及び乾燥させられた発色基質を含む。【選択図】  図１Ａ及び図１Ｂ
2020526739.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
サンプル中の微生物汚染物質の存在及び／又は量を判定するカートリッジであって、
ａ．光学的サンプルウェル、流体入口ポート、並びに前記流体入口ポート及び前記光学的サンプルウェルを流体的に連結する導管を含むハウジングと、
ｂ．前記ハウジングに付随し、前記流体入口ポート及び前記導管に流体的に連結されたポンプ機構と、
ｃ．前記光学的サンプルウェル上で乾燥させられた血球溶解物を含む乾燥組成物とを備えるカートリッジ。
【請求項２】
ａ．前記光学的サンプルウェル上で乾燥させられた発色基質、及び／又は
ｂ．前記光学的サンプルウェル上で乾燥させられた前記微生物汚染物質を代表する作用物質
をさらに備える、請求項１に記載のカートリッジ。
【請求項３】
前記ハウジングが、４つの光学的サンプルウェルを含み、各光学的サンプルウェルが、前記血球溶解物を含む前記乾燥組成物を備え、前記乾燥組成物が、前記光学的サンプルウェル上で乾燥させられた発色基質をさらに含み、前記４つの光学的サンプルウェルのうちの２つが、前記光学的サンプルウェル上で乾燥させられた前記微生物汚染物質を代表する作用物質をさらに含む、請求項１又は２に記載のカートリッジ。
【請求項４】
前記ハウジングが、前記光学的サンプルウェルに流体的に連結された液体不透過性膜を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載のカートリッジ。
【請求項５】
前記ハウジングが、互いに機械的に連結された上部区分及び下部区分を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載のカートリッジ。
【請求項６】
前記ポンプ機構が２位置シリンジであり、第１の位置が、真空を生じさせて前記サンプルを前記流体入口ポート及び前記導管内へ導入し、第２の位置が、前記導管から前記光学的サンプルウェルへの輸送を提供する、請求項１〜５のいずれか一項に記載のカートリッジ。
【請求項７】
前記血球溶解物がリムルス変形細胞溶解物である、請求項１〜６のいずれか一項に記載のカートリッジ。
【請求項８】
前記血球溶解物が、タキプレウス変形細胞溶解物又はカルシノスコルピウス変形細胞溶解物である、請求項１〜６のいずれか一項に記載のカートリッジ。
【請求項９】
前記微生物汚染物質を代表する前記作用物質が細菌エンドトキシンである、請求項２〜８のいずれか一項に記載のカートリッジ。
【請求項１０】
サンプル中の微生物汚染物質の存在及び／又は量を判定するカートリッジであって、
ａ．第１の光学的サンプルウェル及び第２の光学的サンプルウェル、流体入口ポート、並びに前記流体入口ポート及び前記第１の光学的サンプルウェル及び前記第２の光学的サンプルウェルを流体的に連結する導管を含むハウジングと、
ｂ．前記ハウジングに取り付けられ、前記流体入口ポート及び前記導管に流体的に連結された２位置シリンジであり、第１の位置が、真空を生じさせて前記サンプルを前記流体入口ポート及び前記導管内へ導入し、第２の位置が、前記導管から前記第１の光学的サンプルウェル及び前記第２の光学的サンプルウェルへの輸送を提供する、２位置シリンジと、
ｃ．前記第１の光学的サンプルウェル及び前記第２の光学的サンプルウェルのそれぞれ上で乾燥させられた血球溶解物及び発色基質を含む乾燥組成物と、
ｄ．前記第２の光学的サンプルウェル上で乾燥させられた前記微生物汚染物質を代表する作用物質とを備えるカートリッジ。
【請求項１１】
前記ハウジングが、４つの光学的サンプルウェルを含み、各光学的サンプルウェルが、前記光学的サンプルウェル上で乾燥させられた前記乾燥組成物を備え、前記４つの光学的サンプルウェルのうちの２つが、前記光学的サンプルウェル上で乾燥させられた前記微生物汚染物質を代表する前記作用物質を含む、請求項１０に記載のカートリッジ。
【請求項１２】
前記ハウジングが、前記光学的サンプルウェルに流体的に連結された液体不透過性膜を含む、請求項１０又は１１に記載のカートリッジ。
【請求項１３】
前記ハウジングが、互いに機械的に連結された上部区分及び下部区分を含む、請求項１０〜１２のいずれか一項に記載のカートリッジ。
【請求項１４】
前記血球溶解物がリムルス変形細胞溶解物である、請求項１０〜１３のいずれか一項に記載のカートリッジ。
【請求項１５】
前記血球溶解物が、タキプレウス変形細胞溶解物又はカルシノスコルピウス変形細胞溶解物である、請求項１０〜１３のいずれか一項に記載のカートリッジ。
【請求項１６】
前記微生物汚染物質を代表する前記作用物質が細菌エンドトキシンである、請求項１５に記載のカートリッジ。
【請求項１７】
サンプル中の微生物汚染物質の存在を検出する方法であって、
ａ．請求項１〜９のいずれか一項に記載のカートリッジの前記流体入口ポート内へ前記サンプルを導入し、前記サンプルを前記導管へ伝達するステップと、
ｂ．前記サンプルを前記導管から前記光学的サンプルウェルへ伝達するステップと、
ｃ．前記光学的サンプルウェル内の前記サンプルの光学的特性を測定するステップとを含み、前記光学的特性の変化が、前記サンプル中の前記微生物汚染物質の存在を示す、方法。
【請求項１８】
前記光学的特性を測定する前記ステップが、事前選択された波長における光の吸収度の変化である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
事前選択された波長における光の吸収度の前記変化が、検量線と比較される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記検量線が保存検量線である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記サンプルを導入する前記ステップが、前記ポンプ機構を介して真空を生じさせて前記サンプルを前記流体入口ポート及び前記導管内へ導入することを含む、請求項１７〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
伝達する前記ステップが、前記ポンプ機構を介して前記サンプルを導管から前記光学的サンプルウェルへ輸送することを含み、前記輸送が、前記光学的サンプルウェルに流体的に連結された液体不透過性膜によって停止される、請求項１７〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
サンプル中の微生物汚染物質の存在を検出する方法であって、
ａ．請求項１０〜１６のいずれか一項に記載のカートリッジの前記流体入口ポート内へ前記サンプルを導入し、前記サンプルを前記導管へ伝達するステップと、
ｂ．前記サンプルを前記導管から前記光学的サンプルウェルへ伝達するステップと、
ｃ．前記光学的サンプルウェル内の前記サンプルの光学的特性を測定するステップとを含み、前記光学的特性の変化が、前記サンプル中の前記微生物汚染物質の存在を示す、方法。
【請求項２４】
前記光学的特性を測定する前記ステップが、事前選択された波長における光の吸収度の変化である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
事前選択された波長における光の吸収度の前記変化が、検量線と比較される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記検量線が保存検量線である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記サンプルを導入する前記ステップが、前記２位置シリンジを介して真空を生じさせて前記サンプルを前記流体入口ポート及び前記導管内へ導入することを含む、請求項２３〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
伝達する前記ステップが、前記２位置シリンジを介して前記サンプルを前記導管から前記光学的サンプルウェルへ輸送することを含み、前記輸送が、前記サンプルウェルのそれぞれの中の前記サンプルの最終体積が約１０％未満しか変動しないように、前記光学的サンプルウェルに流体的に連結された液体不透過性膜によって停止される、請求項２３〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
[0001]本発明は、エンドトキシンを含む微生物汚染物質の検出及び／又は定量化に有用な方法、組成物、及びデバイスを対象とする。実施形態では、携帯型リーダ／デバイスと組み合わせて吸収度に基づくアッセイで有用な乾燥組成物を含むカートリッジが提供される。
【背景技術】
【０００２】
[0002]グラム陽性菌、グラム陰性菌、酵母、菌類、及びかびからの汚染を含む微生物汚染は、深刻な疾患を引き起こす可能性があり、場合により人間の死を招く可能性もある。製薬、医療デバイス、及び食品業界では、特定の標準、たとえば米国食品医薬品局（ＵＳＦＤＡ）又は環境保護庁によって課される標準を満たすために、そのような微生物汚染物質の存在に関する頻繁、正確、且つ繊細な試験を必要とすることが多い。
【０００３】
[0003]好適には様々な状況で容易に使用することができる小型の携帯型デバイスによる、微生物汚染物質の存在に関してサンプルを分析する好都合で迅速な方法が必要とされている。本発明は、これらの必要を満たすものである。
【０００４】
〔発明の概要〕
[0004]実施形態では、サンプル中の微生物汚染物質の存在及び／又は量を判定するカートリッジが本明細書に提供される。実施形態では、カートリッジが、光学的サンプルウェル、流体入口ポート、並びに流体入口ポート及び光学的サンプルウェルを流体的に連結する導管を含むハウジングと、ハウジングに付随し、流体入口ポート及び導管に流体的に連結されたポンプ機構と、光学的サンプルウェル上で乾燥させられた血球溶解物を含む乾燥組成物とを含む。
【０００５】
[0005]追加の実施形態では、ハウジングが、４つの光学的サンプルウェルを含み、各光学的サンプルウェルが、血球溶解物を含む乾燥組成物を備え、乾燥組成物が、光学的サンプルウェル上で乾燥させられた発色基質をさらに含み、４つの光学的サンプルウェルのうちの２つが、光学的サンプルウェル上で乾燥させられた微生物汚染物質を代表する作用物質をさらに含む。
【０００６】
[0006]ハウジングが、光学的サンプルウェルに流体的に連結された液体不透過性膜を含み、ハウジングが、互いに機械的に連結された上部区分及び下部区分を含むことができることが好適である。
【０００７】
[0007]実施形態では、ポンプ機構が２位置シリンジであり、第１の位置が、真空を生じさせてサンプルを流体入口ポート及び導管内へ導入し、第２の位置が、導管から光学的サンプルウェルへの輸送を提供する。
【０００８】
[0008]血球溶解物がリムルス（ｌｉｍｕｌｕｓ）変形細胞溶解物であり、微生物汚染物質を代表する作用物質が細菌エンドトキシンであることが好適である。
【０００９】
[0009]さらに、サンプル中の微生物汚染物質の存在及び／又は量を判定するカートリッジであって、第１の光学的サンプルウェル及び第２の光学的サンプルウェル、流体入口ポート、並びに流体入口ポート及び第１の光学的サンプルウェル及び第２の光学的サンプルウェルを流体的に連結する導管を含むハウジングと、ハウジングに取り付けられ、流体入口ポート及び導管に流体的に連結された２位置シリンジであり、第１の位置が、真空を生じさせてサンプルを流体入口ポート及び導管内へ導入し、第２の位置が、導管から第１の光学的サンプルウェル及び第２の光学的サンプルウェルへの輸送を提供する、２位置シリンジと、第１の光学的サンプルウェル及び第２の光学的サンプルウェルのそれぞれの上で乾燥させられた血球溶解物及び発色基質を含む乾燥組成物と、第２の光学的サンプルウェル上で乾燥させられた微生物汚染物質を代表する作用物質とを含むカートリッジが本明細書に提供される。
【００１０】
[0010]さらに、サンプル中の微生物汚染物質の存在を検出する方法であって、本明細書に記載するカートリッジの流体入口ポート内へサンプルを導入し、サンプルを導管へ伝達するステップと、サンプルを導管から光学的サンプルウェルへ伝達するステップと、光学的サンプルウェル内のサンプルの光学的特性を測定するステップとを含み、光学的特性の変化が、サンプル中の微生物汚染物質の存在を示す、方法が提供される。
【００１１】
[0011]方法の実施形態では、光学的特性を測定するステップが、事前選択された波長における光の吸収度の変化である。サンプルを導入するステップが、２位置シリンジを介して真空を生じさせてサンプルを流体入口ポート及び導管内へ導入することを含むことが好適である。さらなる実施形態では、伝達するステップが、２位置シリンジを介してサンプルを導管から光学的サンプルウェルへ輸送することを含み、輸送が、サンプルウェルのそれぞれの中のサンプルの最終体積が約１０％未満しか変動しないように、光学的サンプルウェルに流体的に連結された液体不透過性膜によって停止される。
【００１２】
[0012]実施形態のさらなる実施形態、特徴、及び利点、並びに様々な実施形態の構造及び動作は、添付の図面を参照して以下に詳細に説明する。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１Ａ】本発明の一実施形態によるエンドトキシン検出のためのカートリッジを示す図である。
【図１Ｂ】本発明の一実施形態によるエンドトキシン検出のためのカートリッジを示す図である。
【図１Ｃ】本発明の一実施形態による光学的サンプルウェルを示す図である。
【図１Ｄ】本発明の一実施形態によるエンドトキシン検出のためのカートリッジ内へのサンプルの導入を示す図である。
【図２】本発明の一実施形態によるエンドトキシン検出のためのカートリッジで使用するための液体透過性膜を示す図である。
【図３】本発明の一実施形態によるエンドトキシン検出のためのカートリッジの上部区分及び下部区分を示す図である。
【図４Ａ】本発明の一実施形態によるエンドトキシン検出のためのカートリッジに対する取付け装置を示す図である。
【図４Ｂ】本発明の一実施形態によるエンドトキシン検出のためのカートリッジに対する追加の取付け装置を示す図である。
【図４Ｃ】本発明の一実施形態によるエンドトキシン検出のためのカートリッジに対する追加の取付け装置を示す図である。
【図４Ｄ】本発明の一実施形態によるエンドトキシン検出のためのカートリッジに対する追加の取付け装置を示す図である。
【図４Ｅ】本発明の一実施形態によるエンドトキシン検出のためのカートリッジに対する追加の取付け装置を示す図である。
【図４Ｆ】本発明の一実施形態によるエンドトキシン検出のためのカートリッジに対する追加の取付け装置を示す図である。
【図５Ａ】本発明の一実施形態によるエンドトキシン検出のためのさらなるカートリッジを示す図である。
【図５Ｂ】本発明の一実施形態によるエンドトキシン検出のためのさらなるカートリッジを示す図である。
【図５Ｃ】本発明の一実施形態によるエンドトキシン検出のためのさらなるカートリッジを示す図である。
【図５Ｄ】本発明の一実施形態によるエンドトキシン検出のためのさらなるカートリッジを示す図である。
【図６Ａ】本発明の一実施形態によるリーダデバイスを示す図である。
【図６Ｂ】本発明の一実施形態によるリーダデバイスを示す図である。
【図６Ｃ】本発明の一実施形態による追加のリーダデバイスを示す図である。
【図７】本発明の一実施形態によるリーダデバイスの構成要素を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
〔発明の詳細な説明〕
[0024]本明細書に図示及び説明する特定の実装は例であり、本出願の範囲を他の形で限定することを何ら意図したものではないことを理解されたい。
【００１５】
[0025]本明細書に参照する公開特許、特許出願、ウェブサイト、会社名、及び科学文献は、それぞれ参照により組み込まれることが具体的且つ個別に記載された場合と同じ程度に、全体として参照により本明細書に組み込まれている。本明細書に引用する参照と本明細書の特有の教示との間のあらゆる矛盾は、後者を優先して解決されるものとする。同様に、当技術分野で理解される単語又は語句の理解と、本明細書で具体的に教示される単語又は語句の定義との間のあらゆる矛盾もまた、後者を優先して解決されるものとする。
【００１６】
[0026]本明細書では、内容が別途明白に指示しない限り、単数形の「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、それらが参照する用語の複数形も具体的に包含する。本明細書では、「約」という用語は、近似的、領域内、大まかに、又は前後を意味するために使用される。「約」という用語が数値範囲とともに使用されるとき、記載されている数値の上下に境界を延ばすことによって、その範囲を修正する。概して、本明細書では、「約」という用語は、記載されている値の上下に２０％の変化によって数値を修正するために使用される。
【００１７】
[0027]本明細書で使用される技術的及び科学的な用語は、別途定義しない限り、本出願が関係する分野の当業者によって一般に理解される意味を有する。本明細書では、当業者には知られている様々な方法論及び材料を参照する。
【００１８】
〔発明の項目〕
１．サンプル中の微生物汚染物質の存在及び／又は量を判定するカートリッジであって、
ａ．少なくとも１つの光学的サンプルウェル、流体入口ポート、並びに流体入口ポート及び少なくとも１つの光学的サンプルウェルを流体的に連結する少なくとも１つの導管を含むハウジングと、
ｂ．ハウジングに付随し、流体入口ポート及び少なくとも１つの導管に流体的に連結されたポンプ機構と、
ｃ．少なくとも１つの光学的サンプルウェル上で乾燥させられた血球溶解物を含む乾燥組成物とを備えるカートリッジ。
【００１９】
２．ａ．少なくとも１つの光学的サンプルウェル上で乾燥させられた発色基質、及び／又は
ｂ．少なくとも１つの光学的サンプルウェル上で乾燥させられた微生物汚染物質を代表する作用物質
をさらに備える、項目１に記載のカートリッジ。
【００２０】
３．ハウジングが、４つの光学的サンプルウェルを含み、各光学的サンプルウェルが、血球溶解物を含む乾燥組成物を備え、乾燥組成物が、光学的サンプルウェル上で乾燥させられた発色基質をさらに含み、４つの光学的サンプルウェルのうちの２つが、光学的サンプルウェル上で乾燥させられた微生物汚染物質を代表する作用物質をさらに含む、項目１又は２に記載のカートリッジ。
【００２１】
４．ハウジングが、少なくとも１つの光学的サンプルウェルに流体的に連結された少なくとも１つの液体不透過性膜を含む、項目１〜３のいずれか一項に記載のカートリッジ。
【００２２】
５．ハウジングが、互いに機械的に連結された上部区分及び下部区分を含む、項目１〜４のいずれか一項に記載のカートリッジ。
【００２３】
６．ポンプ機構が２位置シリンジであり、第１の位置が、真空を生じさせてサンプルを流体入口ポート及び少なくとも１つの導管内へ導入し、第２の位置が、少なくとも１つの導管から少なくとも１つの光学的サンプルウェルへの輸送を提供する、項目１〜５のいずれか一項に記載のカートリッジ。
【００２４】
７．血球溶解物がリムルス変形細胞溶解物（ＬＡＬ）である、項目１〜６のいずれか一項に記載のカートリッジ。
【００２５】
８．ＬＡＬが、コアグロゲンを実質上含まないＬＡＬである、項目７に記載のカートリッジ。
【００２６】
９．ＬＡＬが精製ＬＡＬである、項目７に記載のカートリッジ。
【００２７】
１０．血球溶解物が、タキプレウス（Ｔａｃｈｙｐｌｅｕｓ）変形細胞溶解物又はカルシノスコルピウス（Ｃａｒｃｉｎｏｓｃｏｒｐｉｕｓ）変形細胞溶解物である、項目１〜６のいずれか一項に記載のカートリッジ。
【００２８】
１１．微生物汚染物質を代表する作用物質が細菌エンドトキシンである、項目２〜１０のいずれか一項に記載のカートリッジ。
【００２９】
１２．乾燥組成物が、約１μｇ〜約５０μｇの血球溶解物、及び任意選択で約０．１μｇ〜５μｇの発色基質を含む、項目１〜１１のいずれか一項に記載のカートリッジ。
【００３０】
１３．サンプル中の微生物汚染物質の存在及び／又は量を判定するカートリッジであって、
ａ．少なくとも第１の光学的サンプルウェル及び第２の光学的サンプルウェル、流体入口ポート、並びに流体入口ポート及び第１の光学的サンプルウェル及び第２の光学的サンプルウェルを流体的に連結する少なくとも１つの導管を含むハウジングと、
ｂ．ハウジングに取り付けられ、流体入口ポート及び少なくとも１つの導管に流体的に連結された２位置シリンジであり、第１の位置が、真空を生じさせてサンプルを流体入口ポート及び導管内へ導入し、第２の位置が、導管から第１の光学的サンプルウェル及び第２の光学的サンプルウェルへの輸送を提供する、２位置シリンジと、
ｃ．第１の光学的サンプルウェル及び第２の光学的サンプルウェルのそれぞれの上で乾燥させられた血球溶解物及び発色基質を含む乾燥組成物と、
ｄ．第２の光学的サンプルウェル上で乾燥させられた微生物汚染物質を代表する作用物質とを備えるカートリッジ。
【００３１】
１４．ハウジングが、４つの光学的サンプルウェルを含み、各光学的サンプルウェルが、光学的サンプルウェル上で乾燥させられた乾燥組成物を備え、４つの光学的サンプルウェルのうちの２つが、光学的サンプルウェル上で乾燥させられた微生物汚染物質を代表する作用物質を含む、項目１３に記載のカートリッジ。
【００３２】
１５．ハウジングが、光学的サンプルウェルに流体的に連結された少なくとも１つの液体不透過性膜を含む、項目１３又は１４に記載のカートリッジ。
【００３３】
１６．ハウジングが、互いに機械的に連結された上部区分及び下部区分を含む、項目１３〜１５のいずれか一項に記載のカートリッジ。
【００３４】
１７．血球溶解物がリムルス変形細胞溶解物である、項目１３〜１６のいずれか一項に記載のカートリッジ。
【００３５】
１８．ＬＡＬが、コアグロゲンを実質上含まないＬＡＬである、項目１７に記載のカートリッジ。
【００３６】
１９．ＬＡＬが精製ＬＡＬである、項目１７に記載のカートリッジ。
【００３７】
２０．血球溶解物が、タキプレウス変形細胞溶解物又はカルシノスコルピウス変形細胞溶解物である、項目１３〜１６のいずれか一項に記載のカートリッジ。
【００３８】
２１．微生物汚染物質を代表する作用物質が細菌エンドトキシンである、項目１〜２０のいずれか一項に記載のカートリッジ。
【００３９】
２２．乾燥組成物が、約１μｇ〜約５０μｇの血球溶解物、及び約０．１μｇ〜５μｇの発色基質を含む、項目１３〜２１のいずれか一項に記載のカートリッジ。
【００４０】
２３．サンプル中の微生物汚染物質の存在を検出する方法であって、
ａ．項目１〜１２に記載のカートリッジの流体入口ポート内へサンプルを導入し、サンプルを導管へ伝達するステップと、
ｂ．サンプルを少なくとも１つの導管から少なくとも１つの光学的サンプルウェルへ伝達するステップと、
ｃ．少なくとも１つの光学的サンプルウェル内のサンプルの光学的特性を測定するステップとを含み、光学的特性の変化が、サンプル中の微生物汚染物質の存在を示す、方法。
【００４１】
２４．光学的特性を測定するステップが、事前選択された波長における光の吸収度の変化である、項目１７に記載の方法。
【００４２】
２５．事前選択された波長における光の吸収度の変化が、検量線と比較される、項目１８に記載の方法。
【００４３】
２６．検量線が保存検量線である、項目１９に記載の方法。
【００４４】
２７．サンプルを導入するステップが、ポンプ機構を介して真空を生じさせてサンプルを流体入口ポート及び少なくとも１つの導管内へ導入することを含む、項目１６〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【００４５】
２８．伝達するステップが、ポンプ機構を介してサンプルを少なくとも１つの導管から少なくとも１つの光学的サンプルウェルへ輸送することを含み、輸送が、少なくとも１つの光学的サンプルウェルに流体的に連結された少なくとも１つの液体不透過性膜によって停止される、項目２３〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【００４６】
２９．サンプル中の微生物汚染物質の存在を検出する方法であって、
ａ．項目１３〜２２に記載のカートリッジの流体入口ポート内へサンプルを導入し、サンプルを少なくとも１つの導管へ伝達するステップと、
ｂ．サンプルを導管から光学的サンプルウェルへ伝達するステップと、
ｃ．光学的サンプルウェル内のサンプルの光学的特性を測定するステップとを含み、光学的特性の変化が、サンプル中の微生物汚染物質の存在を示す、方法。
【００４７】
３０．光学的特性を測定するステップが、事前選択された波長における光の吸収度の変化である、項目２９に記載の方法。
【００４８】
３１．事前選択された波長における光の吸収度の変化が、検量線と比較される、項目３０に記載の方法。
【００４９】
３２．検量線が保存検量線である、項目３１に記載の方法。
【００５０】
３３．サンプルを導入するステップが、２位置シリンジを介して真空を生じさせてサンプルを流体入口ポート及び導管内へ導入することを含む、項目２９〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【００５１】
３４．伝達するステップが、２位置シリンジを介してサンプルを導管から光学的サンプルウェルへ輸送することを含み、輸送が、サンプルウェルのそれぞれの中のサンプルの最終体積が約１０％未満しか変動しないように、光学的サンプルウェルに流体的に連結された液体不透過性膜によって停止される、項目２９〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【００５２】
微生物汚染物質に関する試験
[0028]試験サンプル中の微生物汚染物質の存在及び／又は量を検出するために、様々なアッセイが開発されてきた。多くの場合、甲殻類、たとえばカブトガニの血リンパから調製された血球溶解物が利用される。これらのアッセイは、典型的に、血球溶解物が微生物汚染物質に露出されるときに発生する凝固カスケードを様々な形で利用する。血球溶解物の例には、リムルスポリフェムス（Ｌｉｍｕｌｕｓ  ｐｏｌｙｐｈｅｍｕｓ）、タキプレウスギガス（Ｔａｃｈｙｐｌｅｕｓ  ｇｉｇａｓ）、タキプレウストリデンタトゥス（Ｔａｃｈｙｐｌｅｕｓ  ｔｒｉｄｅｎｔａｔｕｓ）、及びカルシノスコルピウスロタンディカウダ（Ｃａｒｃｉｎｏｓｃｏｒｐｉｕｓ  ｒｏｔｕｎｄｉｃａｕｄａ）というカブトガニの血リンパから生成される変形細胞溶解物（ＡＬ）が含まれる。リムルス、タキプレウス、及びカルシノスコルピウス種の血リンパから生成される変形細胞溶解物を、それぞれリムルス変形細胞溶解物（ＬＡＬ）、タキプレウス変形細胞溶解物（ＴＡＬ）、及びカルシノスコルピウス変形細胞溶解物（ＣＡＬ）と呼ぶ。
【００５３】
[0029]ＬＡＬを使用するアッセイには、たとえば、ゲルクロットアッセイ、エンドポイント比濁アッセイ、カイネティック比濁アッセイ、及びエンドポイント発色アッセイ（Ｐｒｉｏｒ（１９９０）、「Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｌｉｍｕｌｕｓ  Ａｍｏｅｂｏｃｙｔｅ  Ｌｙｓａｔｅ  Ｔｅｓｔ」、ＣＲＣ  ＰＲＥＳＳ  ２８−３４）が含まれる。しかしこれらのアッセイには、試薬の費用、アッセイの速度、及び感度範囲の制限を含む１つ又は複数の欠点がある。また、典型的にこれらのアッセイでは、試験施設へ送るべきサンプルを、試験されているサンプルの元から取り除く必要がある。
【００５４】
エンドトキシン検出のためのカートリッジ
[0030]実施形態では、サンプル中の微生物汚染物質の存在及び／又は量を判定するカートリッジが本明細書に提供される。
【００５５】
[0031]図１Ａに示すように、実施形態では、カートリッジ１００が、カートリッジに対して構造的な支持を提供するハウジング１０２を含む。本明細書では、「カートリッジ」は、微生物汚染物質の存在及び／又は量に関して試験されるサンプルを受け取って保持するための自立型の要素を意味する。
【００５６】
[0032]ハウジング１０２は、様々なプラスチック又はガラスを含む任意の好適な材料から準備することができる。ハウジング１０２は、光学的サンプルウェル１０４を含む。図１Ｃは、ハウジング１０２の上面と下面との間の容器又はアンプルを形成するウェル壁１３０を示す光学的サンプルウェル１０４の側面図を示す。光学的サンプルウェル１０４は、好適には、プラスチック又はガラス材料から構築され、好適には、光学的に透明又は透過性であり、光が光学的サンプルウェルの下部及び上部を通過することを可能にし、以て光が光学的サンプルウェル内に収容されたサンプルに接触することを可能にする。実施形態では、光学的サンプルウェル１０４、並びにハウジング１０２の残り部分は、黄色に着色されたガラス又はポリマーから準備することができ、好適には、約４００ｎｍ〜約４５０ｎｍの光が通過することを阻止するが（すなわち、４０５ｎｍ）、他の波長が通過することは可能にする。そのような実施形態は、光学的サンプルウェル１０４を通過する光の量を低減させ、クロストークを低減させ、クロストーク及び迷光を低減させることによって、本明細書に記載する方法の感度を増大させる。
【００５７】
[0033]カートリッジ１００のハウジング１０２はまた、流体入口ポート１０６及び導管１０８をさらに含む。流体入口ポート１０６は、好適には、ハウジング１０２の長い又は細い区間であり、流体入口ポート１０６の内側に導管１０８が収容されており、流体入口ポート１０６は、好適にはサンプル１１２に接触するために、先端１１２に開口を有する。流体入口ポート１０６は、サンプルがサンプル導入方向１１４へ上方に流体入口ポート内へ引き込まれることを可能にするように設計される。導管１０８は、流体入口ポート１０６及び光学的サンプルウェル１０４を流体的に連結する。すなわち、導管１０８は、流体入口ポート１０６の先端１１２と光学的サンプルウェル１０４との間に管状又はマイクロ流体の連結を提供し、ポート内へ引き込まれた後、流体入口ポートから導管１０８を通って光学的サンプルウェル１０４内へ液体サンプルを伝達することを可能にする。実施形態では、導管１０８は、ハウジング１０２の表面に切り込まれたチャネルとして形成することができ、又はポリ（スチレン）などの様々なポリマーから管材若しくはマイクロ管材として形成することができる。
【００５８】
[0034]図１Ａに示すように、サンプルが流体入口ポート１０６内へ導入されると、サンプルは導管１０８内の最初の位置へ進み、光学的サンプルウェル１０４へ伝達されるまで、最初の位置で保持及び維持される。
【００５９】
[0035]実施形態では、カートリッジ１００は、ハウジング１０２に付随するポンプ機構１１０をさらに含む。ポンプ機構１１０は、好適には２位置シリンジであり、バレル１１８と、バレル内で摺動することができるプランジャ１１６とを含む。ポンプ機構１１０は、好適な機構（たとえば、のり、接着剤、機械的なバンド、ラップ、若しくはステープルなど）を介して、ハウジング１０２に直接取り付けることができ、又はハウジング１０２の一体部分（たとえば、ハウジングの上部区分）として準備された要素とすることができる。ポンプ機構１１０は、流体入口ポート１０６及び導管１０８に流体的に連結され、したがってポンプ機構１１０を作動すると、たとえば１１４がサンプル導入方向を示す図１Ａに示すように、サンプルを流体入口ポート１０６内へ、次いで導管１０８内へ引き込むことができる。
【００６０】
[0036]図１Ａは、第１の位置１２４におけるポンプ機構１１０、好適には２位置シリンジの作動を示し、第１の位置１２４で、サンプルは流体入口ポート１０６及び導管１０８内へ伝達されるが、導管１０８内に留まり、さらに光学的サンプルウェル１０４内へ進まない。たとえば、２位置シリンジによって真空を生成して、先端１１２を通ってサンプルを流体入口ポート１０６内へ、次いで導管１０８内へ導入し又は引き込むことができる。この真空は、好適には、光学的サンプルウェル１０４から下流に位置決めされた真空導管１２２（図１Ｂ）によって生成することができる。しかし、他の実施形態では、サンプルを導管内へ最初に導入することを可能にする真空を、導管１０８とサンプルウェル１０４との間に生成することができる。
【００６１】
[0037]図１Ｂは、第２の位置１２６におけるポンプ機構１１０の作動を示し、第２の位置１２６は、導管１０８から光学的サンプルウェル１０４へのサンプルの輸送を提供する。実施形態では、第２の位置１２６で、たとえば真空導管１２２によってさらなる真空を生成し、サンプル流れ方向１２８を介してサンプルを導管１０８から光学的サンプルウェル１０４内へ引き込むことができる。
【００６２】
[0038]サンプルを流体入口ポート１０６内へ、次いで導管１０８内へ導入し又は引き込み、図１Ａに示すようにポンプ機構１１０が第１の位置１２４にある状態でサンプルを導管１０８内で維持することで、サンプリングの場所（たとえば、組立てライン、工場、施設、サンプル槽、又は貯蔵タンク）でサンプルを有するカートリッジ１００を準備し、次いで用意が整った状態で検出又は測定まで維持することが可能になる。この設計の利点は、サンプルの測定を行うまで、サンプルをカートリッジ１００内で一定期間（好適には、数分（たとえば、１０〜３０分）から最高約１〜２時間、又はそれ以上）にわたって保持することができ、したがってサンプル品質の損失のおそれなく複数の異なるサンプルを得ることが可能になることである。加えて、サンプルを得た後にさらなる動作が必要とされる場合、これらの動作を実施し、後にサンプルを分析することができる。
【００６３】
[0039]ポンプ機構１１０、好適には本明細書に記載する２位置シリンジは、図１Ｄに示すようにプライミング（すなわち、抜き出して真空源を生じさせる）して、真空を生成することができ、真空は、プランジャ１１６が第１の位置１２４へ作動させられると、たとえば真空導管１２２を介してサンプル１７０をサンプル入口ポート１０６（図１Ａ参照）まで引き込むことによって、サンプル１７０を流体入口ポート１０６及び導管１０８内へ導入する。プランジャ１１６が第２の位置１２６（図１Ｂ参照）へ作動させられると、サンプル１７０は、好適には真空導管１２２を介した真空の作用によって、光学的サンプルウェル４００へ輸送される。
【００６４】
[0040]実施形態では、流体入口ポート１０６の先端１１２から第１の位置１２４内のサンプルの場所の末端までの長さを含むことができる導管１０８の長さは、約１ｃｍ〜約５ｃｍ、より好適には約１ｃｍ〜約３ｃｍ程度である。導管１０８は、導管１０８の全長を構成する中心源点に連結された長さ約０．２ｍｍ〜約１．５ｍｍ程度の個々のチャネル又は区間を含むことができる。追加の実施形態では、導管１０８は、流体入口ポート１０６の先端１１２から第１の位置１２４におけるサンプルの場所の末端まで延びる連続する単一のチャネルとすることができる。たとえば、導管の区間の長さ又は導管の全長は、約０．２ｍｍ〜約１．０ｍｍ、約０．２ｍｍ〜約０．８ｍｍ、約０．２ｍｍ〜約０．７ｍｍ、約０．４ｍｍ〜約０．６ｍｍ、又は約０．３ｍｍ、約０．４ｍｍ、約０．５ｍｍ、約０．６ｍｍ、約０．７ｍｍ、約０．８ｍｍ、約０．９ｍｍ、若しくは約１．０ｍｍ程度である。導管１０８の直径又は横断面幅は、好適には、約０．１ｍｍ〜約１ｍｍ、約０．５ｍｍ〜約１ｍｍ、約０．５ｍｍ〜約０．８ｍｍ、又は約０．１ｍｍ、約０．２ｍｍ、約０．３、約０．４ｍｍ、約０．５ｍｍ、約０．６ｍｍ、約０．７ｍｍ、若しくは約０．８ｍｍ程度である。約０．５ｍｍ程度の導管１０８の横断面幅を使用することで、ウィッキングの低減及びサンプル損失の防止に役立つ。実施形態では、図１Ａに示すように、導管１０８は、屈曲又は折曲げパターン（又は導管１０８の長さを最大にしながら表面積を最小にする他の類似の向き）を含むことができ、他の実施形態では、導管１０８は、先端１１２から第１の位置１２４におけるサンプルの場所の末端まで実質上まっすぐなチャネルとすることができる。他の実施形態では、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０、又はそれ以上の導管など、２つ以上の導管が存在することができる。
【００６５】
[0041]約０．２ｍｍ〜約１ｍｍ程度の長さを有する導管１０８の区間を使用することで、本明細書に記載するデバイス／リーダを含めて、サンプルが分析のために読み取られている間に、ウィッキング、エアポケットの形成、及びサンプルの損失を低減させるのに役立つ。
【００６６】
[0042]測定及び分析まで導管１０８内で維持することができるサンプルサイズは、好適には、約２５μｌ〜約２００μｌ、より好適には約５０μｌ〜約１５０μｌ、約５０μｌ〜約１００μｌ、約５０μｌ〜約８０μｌ、又は約４０μｌ、約５０μｌ、約６０μｌ、約６５μｌ、約７０μｌ、約７５μｌ、約８０μｌ、約９０μｌ、若しくは約１００μｌ程度である。
【００６７】
[0043]実施形態では、光学的サンプルウェル１０４は、サンプルウェルの１つ又は複数の表面に乾燥組成物１３２を含む。実施形態では、図１Ｃに示すように、乾燥組成物１３２は、光学的サンプルウェル１０４の下部１３６上で乾燥させることができるが、他の実施形態では、乾燥組成物は、光学的サンプルウェル１０４の上部１３８、ウェル壁（側）１３０、及び／又は下部１３６上で乾燥させることができる。
【００６８】
[0044]光学的サンプルウェル１０４のサイズ、したがって好適にはウェルによって維持することができる体積は、ウェル壁１３０の高さ並びにウェルの上部１３６及び下部１３８の直径によって決定される。光学的サンプルウェル１０４の高さは、好適には約１００μｍ〜約２０ｍｍ、より好適には約１００μｍ〜約１０ｍｍ、又は約１００μｍ〜約５ｍｍ程度であり、直径は、約１００μｍ〜約２０ｍｍ、より好適には約１００μｍ〜約１０ｍｍ、又は約１００μｍ〜約５ｍｍ程度である。実施形態では、光学的サンプルウェル１０４は、好適には、約１μＬ〜約５ｍＬのサンプル、又は約１μＬ〜約１ｍＬ、若しくは約１μＬ〜約５００μＬ、約１μＬ〜約５０μＬ、約１μＬ〜約２０μＬ、約１μＬ〜約１０μＬ、又は約１μｌ、約２μｌ、約３μｌ、約４μｌ、約５μｌ、約６μｌ、約７μｌ、約８μｌ、約９μｌ、約１０μｌ、約１１μｌ、約１２μｌ、約１３μｌ、約１４μｌ、若しくは約１５μｌを保持する。
【００６９】
[0045]実施形態では、乾燥組成物１３２は、光学的サンプルウェル１０４上で乾燥させられた血球溶解物を含む。本明細書では、「乾燥組成物」は、光学的ウェル１０４の表面に乾燥ケーク、粉末、結晶、又はフィルムを形成するように凍結乾燥、冷凍乾燥、又はガラス化された物質を含む。冷凍乾燥又はガラス化の方法は、当技術分野では知られている。例示的な実施形態では、本明細書に記載するように、一貫した量の乾燥組成物、したがって再水和組成物を提供するために、各光学的サンプルウェル内の乾燥組成物の量は同じであり、又は互いの約１〜３０％の変動、好適には１０％未満若しくは５％未満の変動範囲内である。
【００７０】
[0046]本明細書では、「血球溶解物」という用語は、（ｉ）甲殻類若しくは昆虫からの抽出、及び／又は（ｉｉ）ホストからの抽出後の生体外培養によって得られる、血球、たとえば変形細胞及び血リンパ細胞の溶解及び／又は膜透過化によって生成される溶解物、又はその一部分若しくは成分を意味する。Ｃａ２＋イオノフォアなどの膜透過化剤との接触によって血リンパ細胞から押し出された（すなわち、溶解以外によって押し出された）、又は細胞溶解以外の他の方法で抽出された血球細胞物質も、血球溶解物であると考えられる。
【００７１】
[0047]例示的な血球溶解物は、甲殻類、たとえばカブトガニ又はイチョウガニの血液から調製された変形細胞溶解物である。本明細書では、「変形細胞溶解物」という用語は、甲殻類、たとえばカブトガニから抽出された変形細胞からの細胞内容物の溶解、押出し、又は抽出によって生成される溶解物、又はその一部分若しくは成分を意味すると理解される。変形細胞溶解物は、酵素カスケードの少なくとも１つの成分を含み、並びに／又は酵母若しくはかびによって生成されるエンドトキシン、たとえばグラム陰性菌エンドトキシン及び／若しくはグルカン、たとえば（１→３）−β−Ｄグルカンの存在下で凝固をもたらす。例示的な変形細胞溶解物は、リムルス属、たとえばリムルスポリフェムス、タキプレウス属、たとえばタキプレウスギガス及びタキプレウストリデンタトゥス、並びにカルシノスコルピウス属、たとえばカルシノスコルピウスロタンディカウダに属するカニを含むカブトガニから導出することができる。
【００７２】
[0048]リムルス変形細胞溶解物（ＬＡＬ）は、その感度、特異性、及びサンプル中に存在しうる他の成分による干渉の回避に対する相対的な容易さから、多くの細菌エンドトキシンアッセイにおいて最適な変形細胞溶解物として用いられる。ＬＡＬは、細菌エンドトキシンを含むサンプル、及び任意選択で特定のＬＡＬ基質と組み合わせられたとき、サンプル中のエンドトキシンと反応して、ゲルなどの検出可能な生成物、混濁度の増大、又は合成発色基質の場合は着色された若しくは発光する生成物をもたらす。生成物は、たとえば目視又は光検出器の使用によって検出することができる。
【００７３】
[0049]細菌エンドトキシンがＬＡＬに接触したとき、エンドトキシンは、当技術分野でＣ因子経路と呼ばれる一連の酵素反応を開始し、これらの酵素反応は、Ｃ因子、Ｂ因子、及びプロクロッティングエンザイムと呼ばれる３つのセリンプロテアーゼ酵素前駆体を伴うことができる。エンドトキシンに露出されると、エンドトキシン感受性因子であるＣ因子が活性化される。その後、活性化されたＣ因子は加水分解してＢ因子を活性化し、その際、活性化されたＢ因子は、プロクロッティングエンザイムを活性化して凝固酵素を生成する。その後、凝固酵素は、無脊椎動物のフィブリノゲン様の凝固性タンパクであるコアグロゲンの特有の箇所、たとえばＡｒｇ１８−Ｔｈｒ１９及びＡｒｇ４６−Ｇｌｙ４７を加水分解して、コアギュリンゲルを生成する。たとえば、米国特許第５，６０５，８０６号を参照されたい。
【００７４】
[0050]エンドトキシンに対する血球溶解物の感度を高める方法には、たとえば、限定ではないが、未精製血球溶解物の劣化、ｐＨの調整、二価カチオンの濃度の調整、コアグロゲンの濃度の調整、クロロホルム抽出、並びに血清アルブミン、生体適合緩衝剤、及び／又は生物学的洗剤の添加が含まれる。
【００７５】
[0051]たとえば、実施形態では、本明細書に記載する乾燥組成物で使用するための血球溶解物は、コアグロゲンを実質上含まない精製血球溶解物とすることができる。別の実施形態では、コアグロゲンを実質上含まない血球溶解物は、コアグロゲンを実質上含まないＬＡＬである。当業者であれば、本開示を読めば、様々な量のコアグロゲンの低減の結果、発色アッセイ、たとえばＬＡＬアッセイにおける速度、感度、及び／又は分離のレベルが増大することが理解されよう。いくつかの実施形態では、「実質上含まない」という用語は、タンパク染色によるＳＤＳ−ＰＡＧＥによって測定され、ウエスタンブロットによって確認された血球溶解物中の総タンパクに対して、５０％未満、４０％未満、３０％未満、２０％未満、１０％未満、５％未満、２％未満、１％未満、又は０．５％未満（ｗｔ／ｗｔ）のコアグロゲンを有する血球溶解物を指す。いくつかの実施形態では、「実質上含まない」という用語は、タンパク染色によるＳＤＳ−ＰＡＧＥによって測定され、ウエスタンブロットによって確認されたＬＡＬ中の総タンパクに対して、５０％未満、４０％未満、３０％未満、２０％未満、１０％未満、５％未満、２％未満、１％未満、又は０．５％未満（ｗｔ／ｗｔ）のコアグロゲンを有するＬＡＬを指す。いくつかの実施形態では、「実質上含まない」という用語は、タンパク染色によるＳＤＳ−ＰＡＧＥによって測定され、ウエスタンブロットによって確認されたＬＡＬ中の総タンパクに対して、５０％未満、４０％未満、３０％未満、２０％未満、１０％未満、５％未満、２％未満、１％未満、又は０．５％未満（ｗｔ／ｗｔ）のコアグロゲンを有する精製ＬＡＬを指す。
【００７６】
[0052]いくつかの実施形態では、「実質上含まない」という用語は、タンパク染色によるＳＤＳ−ＰＡＧＥによって測定され、ウエスタンブロットによって確認された血球溶解物中の総タンパクに対して、１０％未満又は５％未満（ｗｔ／ｗｔ）のコアグロゲンを有する血球溶解物を指す。いくつかの実施形態では、「実質上含まない」という用語は、タンパク染色によるＳＤＳ−ＰＡＧＥによって測定され、ウエスタンブロットによって確認されたＬＡＬ中の総タンパクに対して、１０％未満又は５％未満（ｗｔ／ｗｔ）のコアグロゲンを有するＬＡＬを指す。いくつかの実施形態では、「実質上含まない」という用語は、タンパク染色によるＳＤＳ−ＰＡＧＥによって測定され、ウエスタンブロットによって確認されたＬＡＬ中の総タンパクに対して、１０％未満又は５％未満（ｗｔ／ｗｔ）のコアグロゲンを有する精製ＬＡＬを指す。
【００７７】
[0053]いくつかの実施形態では、「実質上含まない」という用語は、約２０μｇ／μＬ未満、約１５μｇ／μＬ未満、約１０μｇ／μＬ未満、約５μｇ／μＬ未満、約４μｇ／μＬ未満、約３μｇ／μＬ未満、約２μｇ／μＬ未満、又は約１μｇ／μＬ未満の濃度のコアグロゲンを有する血球溶解物を指す。いくつかの実施形態では、「実質上含まない」という用語は、約２０μｇ／μＬ未満、約１５μｇ／μＬ未満、約１０μｇ／μＬ未満、約５μｇ／μＬ未満、約４μｇ／μＬ未満、約３μｇ／μＬ未満、約２μｇ／μＬ未満、又は約１μｇ／μＬ未満の濃度のコアグロゲンを有するＬＡＬを指す。いくつかの実施形態では、「実質上含まない」という用語は、約２０μｇ／μＬ未満、約１５μｇ／μＬ未満、約１０μｇ／μＬ未満、約５μｇ／μＬ未満、約４μｇ／μＬ未満、約３μｇ／μＬ未満、約２μｇ／μＬ未満、又は約１μｇ／μＬ未満の濃度のコアグロゲンを有する精製ＬＡＬを指す。
【００７８】
[0054]いくつかの実施形態では、「実質上含まない」という用語は、２０μｇ／μＬ〜０．００１μｇ／μＬ、１５μｇ／μＬ〜０．０１μｇ／μＬ、１０μｇ／μＬ〜０．１μｇ／μＬ、５μｇ／μＬ〜０．５μｇ／μＬ、４μｇ／μＬ〜０．５μｇ／μＬ、３μｇ／μＬ〜０．５μｇ／μＬ、２μｇ／μＬ〜０．５μｇ／μＬ、又は１μｇ／μＬ未満の濃度のコアグロゲンを有する血球溶解物を指す。いくつかの実施形態では、「実質上含まない」という用語は、２０μｇ／μＬ〜０．００１μｇ／μＬ、１５μｇ／μＬ〜０．０１μｇ／μＬ、１０μｇ／μＬ〜０．１μｇ／μＬ、５μｇ／μＬ〜０．５μｇ／μＬ、４μｇ／μＬ〜０．５μｇ／μＬ、３μｇ／μＬ〜０．５μｇ／μＬ、２μｇ／μＬ〜０．５μｇ／μＬ、又は１μｇ／μＬ未満の濃度のコアグロゲンを有するＬＡＬを指す。いくつかの実施形態では、「実質上含まない」という用語は、２０μｇ／μＬ〜０．００１μｇ／μＬ、１５μｇ／μＬ〜０．０１μｇ／μＬ、１０μｇ／μＬ〜０．１μｇ／μＬ、５μｇ／μＬ〜０．５μｇ／μＬ、４μｇ／μＬ〜０．５μｇ／μＬ、３μｇ／μＬ〜０．５μｇ／μＬ、２μｇ／μＬ〜０．５μｇ／μＬ、又は１μｇ／μＬ未満の濃度のコアグロゲンを有する精製ＬＡＬを指す。
【００７９】
[0055]いくつかの実施形態では、「実質上含まない」という用語は、１０μｇ／μＬ〜１μｇ／μＬ、５μｇ／μＬ〜１μｇ／μＬ、４μｇ／μＬ〜１μｇ／μＬ、３μｇ／μＬ〜１μｇ／μＬ、２μｇ／μＬ〜１μｇ／μＬ、又は１μｇ／μＬ未満の濃度のコアグロゲンを有する血球溶解物を指す。いくつかの実施形態では、「実質上含まない」という用語は、１０μｇ／μＬ〜１μｇ／μＬ、５μｇ／μＬ〜１μｇ／μＬ、４μｇ／μＬ〜１μｇ／μＬ、３μｇ／μＬ〜１μｇ／μＬ、２μｇ／μＬ〜１μｇ／μＬ、又は１μｇ／μＬ未満の濃度のコアグロゲンを有するＬＡＬを指す。いくつかの実施形態では、「実質上含まない」という用語は、１０μｇ／μＬ〜１μｇ／μＬ、５μｇ／μＬ〜１μｇ／μＬ、４μｇ／μＬ〜１μｇ／μＬ、３μｇ／μＬ〜１μｇ／μＬ、２μｇ／μＬ〜１μｇ／μＬ、又は１μｇ／μＬ未満の濃度のコアグロゲンを有する精製ＬＡＬを指す。コアグロゲンの濃度は、たとえば、吸収分光法、ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルバンド若しくはウエスタンブロットバンドの定量化、又はコアグロゲン濃度を測定するための知られている任意の他の方法を使用して判定することができる。いくつかの実施形態では、「コアグロゲンを実質上含まない血球溶解物」又は「コアグロゲンを実質上含まないＬＡＬ」又は「精製ＬＡＬ」中の測定されたコアグロゲン濃度は、従来の検出方法を使用する最小検出量の誤差限界内であるため、厳密に判定することはできない。血球溶解物、たとえばＬＡＬからコアグロゲンを除去するために、異なる方法を使用することができることが、当業者には理解されよう。これらの方法はそれぞれ、効率、精製速度、コスト、及び労力に関して異なることがあるが、当業者の知識の範囲内である。いくつかの実施形態では、血球溶解物、たとえばＬＡＬは、コアグロゲンを実質上含まず、この組成物は、（ａ）リムルスポリフェムスからの溶解変形細胞から導出された溶液を取得するステップと、（ｂ）（ａ）からの溶液と緩衝剤を組み合わせるステップと、（ｃ）（ｂ）からの組合せを、２０ｋＤａ〜５０ｋＤａのメンブレンフィルタを使用する連続タンジェンシャルフローフィルトレーション（ＴＦＦ）にかけて、保持液（ｒｅｔｅｎｔａｔｅ）を生成するステップと、（ｄ）（ｃ）からの保持液を２０，０００×ｇ超で２５分超にわたって遠心分離して、上澄み液を生成するステップとを含む方法によって作られ、この上澄み液が、コアグロゲンを実質上含まない精製ＬＡＬである。
【００８０】
[0056]いくつかの実施形態では、血球溶解物、たとえばＬＡＬは、タンジェンシャルフローフィルトレーションを使用して作ることができる。タンジェンシャルフローフィルトレーション（ＴＦＦ）は、供給流の大部分がフィルタに入るのではなくフィルタの表面を横切って接線方向に進むクロスフローフィルトレーションを指す。ＴＦＦを使用することによって、ＬＡＬタンパク（フィルタを詰まらせる可能性がある）の大部分を構成する保持液は、フィルトレーションプロセス中に実質上洗い流され、コアグロゲンは透過液に浸透する。いくつかの実施形態では、ＴＦＦは、バッチ単位のデッドエンドフィルトレーションとは異なり、連続プロセス、すなわち連続タンジェンシャルフローフィルトレーション又は連続ＴＦＦである。いくつかの実施形態では、連続ＴＦＦは、透過液が生成されるのと同じ速度で、ダイアフィルトレーション溶液、すなわち水又は緩衝剤をサンプルに加えることを含み、したがってフィルタを自由に透過することができる成分は洗い流されるが、サンプル体積は一定のままである。いくつかの実施形態では、ダイアフィルトレーションは、１種のタンジェンシャルフローフィルトレーションである。ダイアフィルトレーションは、最終的に体積を変化させることなく、膜又はフィルタより小さい分子を洗い流し、より大きい分子は保持液中に残す分溜プロセスを指す。ダイアフィルトレーション体積又はＤＶは、ダイアフィルトレーション溶液が加えられる前のサンプルの体積である。実施形態では、タンジェンシャルフローフィルトレーションにおいてより大きいダイアフィルトレーション体積を使用する結果、より多くの透過液が除去される。
【００８１】
[0057]いくつかの実施形態では、血球溶解物は、精製されたリムルス変形細胞溶解物である。コアグロゲンを実質上含まない「精製されたリムルス変形細胞溶解物」（又は「精製ＬＡＬ」）という用語は、ＬＡＬの外観を曇らせる成分を除去するためにさらに処理されている上記で論じたコアグロゲンを実質上含まないＬＡＬを指す。実施形態では、精製ＬＡＬは、コアグロゲンを実質上含まないＬＡＬを遠心分離することによって生じる。いくつかの実施形態では、「精製ＬＡＬ」という用語は、酵素を損傷することなくＬＡＬを目に見えて透明にするのに十分な期間にわたって、１８００ｇ超（すなわち、１８００×重力）、２２００ｇ超、２６００ｇ超、３０００ｇ超、３４００ｇ超、３８００ｇ超、４２００ｇ超、４６００ｇ超、５０００ｇ超、５４００ｇ超、５８００ｇ超、６０００ｇ超、６１００ｇ超、又は６２００ｇ超で遠心分離されたＬＡＬを指す。いくつかの実施形態では、「精製ＬＡＬ」という用語は、酵素を損傷することなくＬＡＬを目に見えて透明にするのに十分な期間にわたって、１８００〜８０００ｇ、２２００ｇ〜７６００ｇ、２６００ｇ〜７２００ｇ、３０００ｇ〜７２００ｇ、３４００ｇ〜７２００ｇ、３８００ｇ〜７２００ｇ、４２００ｇ〜７２００ｇ、４６００ｇ〜７２００ｇ、５０００ｇ〜７２００ｇ、５４００ｇ〜７２００ｇ、５８００ｇ〜７２００ｇ、又は６１００ｇ〜７２００ｇで遠心分離されたＬＡＬを指す。
【００８２】
[0058]いくつかの実施形態では、コアグロゲンを実質上含まない「精製されたリムルス変形細胞溶解物」（又は「精製ＬＡＬ」）という用語は、コアグロゲンを実質上含まないＬＡＬを２０，０００×ｇ超、２２，０００×ｇ超、２４，０００×ｇ超、２５，０００×ｇ超、２６，０００×ｇ超、２８，０００×ｇ超、３０，０００×ｇ超、３５，０００×ｇ超、４０，０００×ｇ超、４５，０００×ｇ超、又は５０，０００×ｇ超で遠心分離することによって、ＬＡＬの外観を曇らせる成分を除去するためにさらに処理されている上記で論じたコアグロゲンを実質上含まないＬＡＬを指す。いくつかの実施形態では、コアグロゲンを実質上含まないＬＡＬは、２０，０００〜５０，０００×ｇ、２０，０００〜４０，０００×ｇ、２５，０００〜５０，０００×ｇ、２５，０００〜４０，０００×ｇ、又は３０，０００〜４０，０００×ｇ超で遠心分離される。いくつかの実施形態では、コアグロゲンを実質上含まないＬＡＬは、２０分超、３０分超、４０分超、又は６０分超にわたって遠心分離される。いくつかの実施形態では、コアグロゲンを実質上含まないＬＡＬは、２０〜１２０分、２０〜９０分、２０〜６０分、２０〜４０分、又は約３０分にわたって遠心分離される。
【００８３】
[0059]いくつかの実施形態では、「精製ＬＡＬ」という用語は、３分超、４分超、５分超、６分超、７分超、８分超、９分超、又は１０分超にわたって遠心分離されたＬＡＬを指す。いくつかの実施形態では、「精製ＬＡＬ」という用語は、３分〜３０分、４分〜２５分、４分〜２０分、５分〜１５分、又は５分〜１０分にわたって遠心分離されたＬＡＬを指す。遠心分離速度をより遅くすると、より長い遠心分離時間を必要とし、時間及び／又は速度を調整することで、それに応じてＬＡＬの視覚的な曇りが低減されることが、当業者には理解されよう。いくつかの実施形態では、「精製ＬＡＬ」という用語は、約３分〜約１０分にわたって約５０００ｇ〜約７０００ｇで、又は５分にわたって約６１２０ｇで遠心分離されたコアグロゲンを実質上含まないＬＡＬを指す。実施形態では、コアグロゲンを実質上含まない精製ＬＡＬは、リムルスポリフェムスからの溶解変形細胞から導出された溶液を２，０００ｒｐｍ（９８０ｇ）で８分にわたって４℃で遠心分離することによって作られる。精製ＬＡＬは、遠心分離後の上澄み液に見られる。いくつかの実施形態では、その結果得られる上澄み液を、次いで緩衝剤と組み合わせ、その結果得られる上澄み液及び緩衝剤の組合せを、次いで３０ｋＤａのメンブレンフィルタを使用するタンジェンシャルフローフィルトレーションにかけて、保持液を生成し、保持液を５，０００ｒｐｍ（６１２０ｇ）で５分にわたって４℃で遠心分離して、上澄み液を生成し、この上澄み液が、コアグロゲンを実質上含まない精製ＬＡＬである。実施形態では、リムルスポリフェムスからの溶解変形細胞から導出される溶液は、複数のリムルスポリフェムス溶解変形細胞のプールである。
【００８４】
[0060]いくつかの実施形態では、光学的サンプルウェル上で乾燥させられた血球溶解物は、リムルスポリフェムスからの溶解変形細胞から導出された溶液を取得することによって取得される。いくつかの実施形態では、この溶液を、次いで緩衝剤と組み合わせ、その結果得られる溶液及び緩衝剤の組合せを、次いで２０ｋＤａ〜５０ｋＤａのメンブレンフィルタを使用する連続タンジェンシャルフローフィルトレーション（ＴＦＦ）にかけて、保持液を生成し、保持液を２０，０００×ｇ超で２５分超にわたって４℃で遠心分離して、上澄み液を生成し、この上澄み液が、コアグロゲンを実質上含まない精製ＬＡＬである。実施形態では、溶解物は、リムルスポリフェムスからの溶解変形細胞又は複数のリムルスポリフェムス溶解変形細胞のプールから導出される。いくつかの実施形態では、連続ＴＦＦは、少なくとも４ダイアフィルトレーション体積（ＤＶ）を含む。いくつかの実施形態では、連続ＴＦＦは、少なくとも５ダイアフィルトレーション体積を含む。いくつかの実施形態では、連続ＴＦＦは、少なくとも６ダイアフィルトレーション体積を含む。いくつかの実施形態では、連続ＴＦＦは、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、又は少なくとも１５ダイアフィルトレーション体積を含む。
【００８５】
[0061]いくつかの実施形態では、本開示によるコアグロゲンを実質上含まない精製ＬＡＬは、本明細書に記載する技術的特徴の任意の組合せを利用する方法によって生成される。したがって、当業者であれば、コアグロゲンを実質上含まないＬＡＬを作るのに十分な記載のフィルタ、フィルタサイズ、フィルタ流量、緩衝剤、遠心分離速度、遠心分離温度、遠心分離時間などのいずれかを使用することができる。たとえば、いくつかの実施形態では、ＬＡＬは、（ｉ）２０，０００×ｇ超、２２，０００×ｇ超、２４，０００×ｇ超、２５，０００×ｇ超、２６，０００×ｇ超、２８，０００×ｇ超、３０，０００×ｇ超、３５，０００×ｇ超、４０，０００×ｇ超、４５，０００×ｇ超、又は５０，０００×ｇ超で遠心分離され、（ｉｉ）２℃〜１０℃、２℃〜８℃、又は４℃の温度で遠心分離され、（ｉｉｉ）２０〜１２０分、２０〜９０分、２０〜６０分、２０〜４０分、又は約３０分にわたって遠心分離され、（ｉｖ）５００ｍＬ／分超、たとえば５００ｍＬ／分〜２０００ｍＬ／分、８００ｍＬ／分〜１５００ｍＬ／分、又は１０００ｍＬ／分〜１２００ｍＬ／分の流量でＴＦＦを受け、（ｖ）５０ｋＤａのフィルタ、４５ｋＤａのフィルタ、４０ｋＤａのフィルタ、３５ｋＤａのフィルタ、３０ｋＤａのフィルタ、２５ｋＤａのフィルタ、又は２０ｋＤａのフィルタを使用するＴＦＦを受け、（ｖｉｉ）少なくとも４ＤＶ、少なくとも５ＤＶ、少なくとも６ＤＶ、少なくとも７ＤＶ、又は少なくとも８ＤＶを使用するＴＦＦを受ける。
【００８６】
[0062]本出願は、血球溶解物、たとえばＬＡＬ又は精製ＬＡＬをさらに提供し、この組成物は、リムルスポリフェムスからの溶解変形細胞から導出された溶液を２，０００ｒｐｍで８分にわたって４℃で遠心分離して、上澄み液を生成するステップと、（ａ）からの上澄み液と緩衝剤を組み合わせるステップと、（ｂ）からの組合せを、３０ｋＤａのメンブレンフィルタを使用するタンジェンシャルフローフィルトレーションにかけて、保持液を生成するステップと、（ｃ）からの保持液を５０００ｒｐｍ（たとえば、６１２０ｇ）で５分にわたって４℃で遠心分離して、上澄み液を生成するステップとを含む方法によって作られ、この上澄み液が、コアグロゲンを実質上含まない精製ＬＡＬである。
【００８７】
[0063]いくつかの実施形態では、本開示による光学的サンプルウェル上で乾燥させられた血球溶解物は、溶解変形細胞、たとえばリムルスポリフェムスから導出された溶液を１０００〜３０００ｒｐｍで２〜１５分にわたって２〜１０℃で遠心分離して、第１の上澄み液を生成するステップ（「第１の遠心分離」）と、上澄み液を緩衝剤と組み合わせるステップと、２０ｋＤａ〜５０ｋＤａのフィルタを使用してこの組合せを濾過して、保持液を生成するステップと、保持液を３０００〜７０００ｒｐｍで２〜１０分にわたって２〜１０℃で遠心分離して、第２の上澄み液を生成するステップ（「第２の遠心分離」）とを含む方法によって作られ、第２の上澄み液が、コアグロゲンを実質上含まない精製血球溶解物、たとえばＬＡＬを含む。実施形態では、濾過は、血球溶解物、たとえばＬＡＬをＴＦＦにかける。いくつかの実施形態では、このとき血球溶解物、たとえばＬＡＬは、ＴＦＦまで緩衝剤中に配置される。いくつかの実施形態では、緩衝剤は、トリス緩衝剤又はＭＥＳ緩衝剤である。いくつかの実施形態では、緩衝剤のｐＨは、約６．０〜約９．０、又は約７．０〜約８．０である。実施形態では、第１の遠心分離は、２０００ｒｐｍで遠心分離することを含む。実施形態では、第１の遠心分離は、８分にわたって遠心分離することを含む。実施形態では、第１の遠心分離は、４℃で遠心分離することを含む。実施形態では、第２の遠心分離は、５０００ｒｐｍで遠心分離することを含む。実施形態では、第２の遠心分離は、５分にわたって遠心分離することを含む。実施形態では、第２の遠心分離は、４℃で遠心分離することを含む。
【００８８】
[0064]ＴＦＦでは、様々な膜を使用することができる。ＴＦＦでは、その結果得られる保持液中で低減すべき所望のタンパクのサイズに応じて、様々な孔径のフィルタを使用することができる。本開示では、血球溶解物、たとえばＬＡＬの凝固カスケード系内に、Ｃ因子、Ｂ因子、Ｇ因子、及びプロクロッティングエンザイムが含まれることが知られており、その結果、コアグロゲンから不溶性コアギュリンゲルへの変換が生じる。本明細書に提供される開示の目的で、任意のＴＦＦ手順（並びに付随するフィルタ孔径、孔タイプ、及び緩衝剤系）を使用することができ、その結果、コアグロゲンが低減され、Ｃ因子、Ｂ因子、Ｇ因子、及びプロクロッティングエンザイムが保持される。したがって、いくつかの実施形態では、ＴＦＦ手順は、５０ｋＤａのフィルタ、４５ｋＤａのフィルタ、４０ｋＤａのフィルタ、３５ｋＤａのフィルタ、３０ｋＤａのフィルタ、２５ｋＤａのフィルタ、又は２０ｋＤａのフィルタを使用する。いくつかの実施形態では、４０ｋＤａ〜２５ｋＤａのフィルタが使用される。いくつかの実施形態では、膜は、１０〜８０ｋＤａのフィルタ、又は２０〜５０ｋＤａのフィルタである。いくつかの実施形態では、フィルタは３０ｋＤａのフィルタである。
【００８９】
[0065]本明細書に開示する方法で使用される膜は、それだけに限定されるものではないが、改質ポリエーテルスルホン（ｍＰＥＳ）、ポリスルホン（ＰＳ）、及びポリエーテルサルホン（ＰＥＳ）を含むことができる。いくつかの実施形態では、コアグロゲンを実質上含まない血球溶解物、たとえばＬＡＬを作ることは、改質ポリエーテルスルホン（ｍＰＥＳ）メンブレンフィルタを使用するＴＦＦを使用して実行される。膜を横切る血球溶解物、たとえばＬＡＬの流量は、血球溶解物、たとえばＬＡＬからのコアグロゲンの除去を最適化するように調整することができる。いくつかの実施形態では、ＴＦＦは、２００ｍＬ／分〜８００ｍＬ／分、３００ｍＬ／分〜６００ｍＬ／分、又は３５０ｍＬ／分〜５００ｍＬ／分の流量で実行される。いくつかの実施形態では、ＴＦＦは、５００ｍＬ／分超、たとえば５００ｍＬ／分〜２０００ｍＬ／分、８００ｍＬ／分〜１５００ｍＬ／分、又は１０００ｍＬ／分〜１２００ｍＬ／分の流量で実行される。いくつかの実施形態では、ＴＦＦは、１０００ｍＬ／分、１１００ｍＬ／分、１２００ｍＬ／分、１３００ｍＬ／分、又は１４００ｍＬ／分で実行される。いくつかの実施形態では、ＴＦＦは、１１００ｍＬ／分で実行される。
【００９０】
[0066]血球溶解物のプロクロッティングエンザイムの活性化を促進することが知られている二価金属塩、並びに凝固酵素を非活性化しうるｐＨの両極端を回避するための緩衝剤も、乾燥組成物内に含むことができる。変形細胞溶解物系に適合していると当技術分野で理解される様々な緩衝剤及び塩を使用することができる。典型的な製剤添加物は、限定ではないが、ＮａＣｌ（約１００〜３００ｍＭのＮａＣｌ）、約１０〜１００ｍＭの二価カチオン（たとえば、Ｍｇ２＋又はＣａ２＋）、生体適合緩衝剤、たとえばトリス（トリス（ヒドロキシ）アミノメタン）を含むことができ、最終ｐＨは約６．０〜約８．０になる。
【００９１】
[0067]加えて、溶解物の乾燥を容易にするために、様々な糖などの安定剤、たとえばマンニトール、スクロース、トレハロース、デキストランなどを加えて、冷凍乾燥又はガラス化を支援することができる。
【００９２】
[0068]タキプレウストリデンタトゥス及びリムルスポリフェムスの両方のカブトガニの血リンパから調製されたＬＡＬ中のエンドトキシン活性化プロクロッティングエンザイムのレベルを測定するために、合成発色基質が使用されてきた（Ｉｗａｎａｇａら（１９７８）、Ｈｅｍｏｓｔａｓｉｓ  ７：１８３−１８８）。発色基質を使用するＬＡＬアッセイ中、ＬＡＬ中のプロクロッティングエンザイム（セリンプロテアーゼ）がエンドトキシンによって活性化され、アルギニンのカルボキシル側で基質のペプチド鎖を切断して、基質から発色性基を解放し、以てたとえば分光測色法によって容易に検出することができるマーカ化合物を解放する。従来のＬＡＬゲル化試験の代わりにＬＡＬアッセイで合成発色基質を使用する１つの利点は、活性化される凝固酵素の量を定量化し、サンプル中のエンドトキシンレベルに相関させることができることである。
【００９３】
[0069]本明細書に記載するカートリッジ、方法、及び組成物では、血球溶解物の凝固酵素によって切断される任意の発色基質を使用することができる。米国特許第５，３１０，６５７号は、たとえば、式Ｒ１−Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ａ４−Ｂ−Ｒ２を有する例示的な発色基質を記載しており、ここでＲ１は、水素、ブロッキング芳香族炭化水素、又はアシル基を表し、Ａ１は、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、又はＬｅｕから選択されたＬ又はＤアミノ酸を表し、Ａ２は、Ｇｌｕ又はＡｓｐを表し、Ａ３は、Ａｌａ又はＣｙｓを表し、Ａ４は、Ａｒｇを表し、Ｂは、エステル及びアミドから選択された連鎖を表し、Ｒ２は、Ｂ連鎖を通ってアルギニンのＣカルボキシル末端に共有結合で取り付けられた発色又は発光発生基を表し、発光発生又は発色部分は、発色基質の残り部分から切断されて、クロモゲン又はフルオロゲンを生成することが可能である。例示的な発色基質は、コンセンサス配列、酢酸−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｒｇ−ｐＮＡを有し、ここでｐＮＡは、パラニトロアニリン基を表す。米国特許第４，１８８，２６４号は、配列Ｒ１−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｒ２のＬアミノ酸からなる構造を有するペプチド基質を記載しており、ここでＲ１は、Ｎ末端修飾アミノ酸を表し、Ｒ２は、酵素加水分解によって解放されて着色化合物ＨＲ２をもたらすことができる基である。米国特許第４，５１０，２４１号は、配列内でＧｌｙ部分がＡｌａ又はＣｙｓに置き換えられていることから以前の基質とは異なる発色ペプチド基質を開示している。別法として、発色基質は、フルオロフォア、たとえば７−アミノ−４−メチルクマリン、７−アミノ−４−トリフルオロメチルクマリン、及び４−メトキシ−２−ナフチルアミン（ｎａｐｈｔｈａｌｙａｍｉｎｅ）を含む。
【００９４】
[0070]様々な濃度の発色基質を使用することができる。いくつかの実施形態では、発色基質の濃度は、０．１ｇ／ｌ〜０．５ｇ／ｌ、０．１ｇ／ｌ〜０．４ｇ／ｌ、０．２ｇ／ｌ〜０．４ｇ／ｌ、０．２ｇ／ｌ〜０．３ｇ／ｌ、又は０．２ｇ／ｌ〜０．２５ｇ／ｌである。
【００９５】
[0071]アッセイの抑制又は促進は、試験サンプル中の物質が血球溶解物の反応と干渉するときに行われる。抑制の結果、反応時間がより長くなり、これは試験サンプル中に実際に存在しうるものより微生物汚染レベルが低いことを示す。促進の結果、反応時間がより短くなり、これは試験サンプル中に実際に存在しうるものより微生物汚染レベルが高いことを示す。
【００９６】
[0072]光学的サンプルウェル上で乾燥させることができる血球溶解物、発色基質、及び／又は微生物汚染物質を代表する作用物質の例示的な量は、本明細書に記載されており、又は当業者であれば別途容易に判定することができる。いくつかの実施形態では、乾燥組成物は、約３０％〜５０％の比の血球溶解物及び１０％〜３０％の比の発色基質（ｖ／ｖ）が提供されるような成分の量を含む。いくつかの実施形態では、乾燥組成物は、約３５％〜約４５％の比の血球溶解物及び１５％〜２５％の比の発色基質、又は約４０％の比の血球溶解物及び２０％の比の発色基質（ｗｔ／ｗｔ）が提供されるような成分の量を含む。他の実施形態では、乾燥組成物は、約３０％〜５０％の比のコアグロゲンを実質上含まないＬＡＬ及び１０％〜３０％の比の発色基質（ｖ／ｖ）が提供されるような成分の量を含む。いくつかの実施形態では、乾燥組成物は、約３５％〜約４５％の比のコアグロゲンを実質上含まないＬＡＬ及び１５％〜２５％の比の発色基質、又は約４０％の比のコアグロゲンを実質上含まないＬＡＬ及び２０％の比の発色基質（ｗｔ／ｗｔ）が提供されるような成分の量を含む。他の実施形態では、乾燥組成物は、約３０％〜５０％の比の精製ＬＡＬ及び１０％〜３０％の比の発色基質（ｖ／ｖ）が提供されるような成分の量を含む。いくつかの実施形態では、乾燥組成物は、約３５％〜約４５％の比の精製ＬＡＬ及び１５％〜２５％の比の発色基質、又は約４０％の比の精製ＬＡＬ及び２０％の比の発色基質（ｗｔ／ｗｔ）が提供されるような成分の量を含む。
【００９７】
[0073]いくつかの実施形態では、乾燥組成物は、約１μｇ〜約５０μｇの血球溶解物及び約０．１μｇ〜５μｇの発色基質、約１μｇ〜約３０μｇの血球溶解物及び約０．５μｇ〜４．０μｇの発色基質、又は約２μｇ〜約２０μｇの血球溶解物及び約１．０μｇ〜約３．０μｇの発色基質、又は約４μｇ〜約２５μｇの血球溶解物及び約１．０μｇ〜約２μｇの発色基質を含む。いくつかの実施形態では、乾燥組成物は、約１μｇ〜約５０μｇのコアグロゲンを実質上含まないＬＡＬ及び約０．１μｇ〜約５μｇの発色基質、又は約１μｇ〜約３０μｇのコアグロゲンを実質上含まないＬＡＬ及び約０．５μｇ〜約５μｇの発色基質、又は約２μｇ〜約２０μｇのコアグロゲンを実質上含まないＬＡＬ及び約１．０μｇ〜約３．０μｇの発色基質、又は約１μｇ〜約３０μｇのコアグロゲンを実質上含まないＬＡＬ及び約１．０μｇ〜約２．０μｇの発色基質を含み、発色基質はＡｃ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｒｇ−ｐＮＡである。いくつかの実施形態では、乾燥組成物は、約４μｇ〜約２５μｇのコアグロゲンを実質上含まないＬＡＬ及び約１μｇ〜約１．５μｇの発色基質を含み、発色基質はＡｃ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｒｇ−ｐＮＡである。いくつかの実施形態では、乾燥組成物は、約１μｇ〜約５０μｇの精製ＬＡＬ及び約０．１μｇ〜約５μｇの発色基質、又は約１μｇ〜約３０μｇの精製ＬＡＬ及び約０．５μｇ〜約５μｇの発色基質、又は約２μｇ〜約２０μｇの精製ＬＡＬ及び約１．０μｇ〜約３．０μｇの発色基質、又は約１μｇ〜約３０μｇの精製ＬＡＬ及び約１．０μｇ〜約２．０μｇの発色基質を含み、発色基質はＡｃ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｒｇ−ｐＮＡである。いくつかの実施形態では、乾燥組成物は、約４μｇ〜約２５μｇの精製ＬＡＬ及び約１μｇ〜約１．５μｇの発色基質を含み、発色基質はＡｃ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｒｇ−ｐＮＡである。いくつかの実施形態では、微生物汚染物質制御は、約０．１ＥＵ／ｍｌ〜１ＥＵ／ｍｌである。いくつかの実施形態では、微生物汚染物質は、約０．１ＥＵ／ｍｌ〜１ＥＵ／ｍｌの濃度の細菌エンドトキシンであり、１μｌ〜１０μｌが使用される。
【００９８】
[0074]好適な実施形態では、約１０％〜約６０％の血球溶解物若しくは約２０％〜約５０％の血球溶解物若しくは約３０％〜約４０％の血球溶解物、又は約１０％〜約６０％のコアグロゲンを実質上含まないＬＡＬ若しくは約２０％〜約５０％のコアグロゲンを実質上含まないＬＡＬ若しくは約３０％〜約４０％のコアグロゲンを実質上含まないＬＡＬを含む製剤を光学的サンプルウェル１０４へ堆積させた後、冷凍乾燥させて乾燥組成物を得る。いくつかの実施形態では、約１０％〜約６０％の精製ＬＡＬ又は約２０％〜約５０％の精製ＬＡＬ又は約３０％〜約４０％の精製ＬＡＬを含む製剤を光学的サンプルウェル１０４へ堆積させた後、冷凍乾燥させて乾燥組成物を得る。冷凍乾燥前に堆積させる血球溶解物、コアグロゲンを実質上含まないＬＡＬ製剤、又は精製ＬＡＬ製剤の体積は、概して、約１μＬ〜約１０μＬ程度である。さらなる実施形態では、製剤は、約２０％〜約３０％又は約２５％〜約３０％の血球溶解物又はコアグロゲンを実質上含まないＬＡＬを含むことができ、堆積体積は、約３μＬ〜約１０μＬ、又は約３μＬ〜約８μＬ、又は約３．５μＬ〜約７μＬである。さらなる実施形態では、製剤は、約２０％〜約３０％又は約２５％〜約３０％の精製ＬＡＬを含むことができ、堆積体積は、約３μＬ〜約１０μＬ、又は約３μＬ〜約８μＬ、又は約３．５μＬ〜約７μＬである。実施形態では、各ウェル内に堆積した精製ＬＡＬの体積は、好適には、ウェルごとに約１０％（体積）の範囲内であり、好適にはウェルごとに約５％未満の変動である。
【００９９】
[0075]カートリッジ１００はまた、ｐＨ試験紙又はサンプルのｐＨを直接判定するために使用することができる他の好適な化合物若しくは組成物などのｐＨ指示薬１０５を含むことができる。図１Ｂに示すように（図１Ａでは、見やすいようにｐＨ指示薬１０５は示されていない）、実施形態では、ｐＨ指示薬１０５は、光学的サンプルウェル１０４に直接付随するが、カートリッジ１００の向きに応じて導管１０８に付随することもできる。いずれの実施形態でも、ｐＨ指示薬１０５は、サンプルのｐＨを測定するために容易に使用することができる。カートリッジ１００はまた、貯蔵及び自動データ収集などを容易にするために、カートリッジを識別するのに有用なバーコード１２０を含むことができる。
【０１００】
[0076]追加の実施形態では、たとえば図１Ａ〜図１Ｂに示すように、ハウジング１０２は、４つの光学的サンプルウェルを含むが、たとえば２、３、４、５、６、７、８、９、１０など、他の又は追加の数の光学的サンプルウェルを利用することもできる。各光学的サンプルウェルは、血球溶解物を含む乾燥組成物を含むことが好適である。各光学的サンプルウェルは、好適には、本明細書に記載するように、光学的サンプルウェル上で乾燥させられた発色基質を、乾燥組成物の要素としてさらに含む。
【０１０１】
[0077]実施形態では、４つの光学的サンプルウェルのうちの２つは、光学的サンプルウェル上で乾燥させられた微生物汚染物質を代表する作用物質をさらに含み、この作用物質は、様々な基質、溶解物などと同様に、本明細書に記載する方法が正確に機能していることを検証するための制御として作用することができる。他の実施形態では、ハウジング１０２は、２つの光学的サンプルウェルを含むことができ、一方のサンプルウェルは制御として、他方は試験ウェルとして作用し、又は４、６、８、１０、１２、１４などの光学的サンプルウェルを含むことができ、光学的サンプルウェルの一部（たとえば、２、４、６、８など）は制御として機能し、他の光学的サンプルウェルは試験ウェルとして機能する。
【０１０２】
[0078]抑制又は促進の欠如を検証するために、制御用の光学的サンプルウェルは、好適には、測定すべき微生物汚染物質を代表する既知量の作用物質で「スパイク」される。微生物汚染物質のスパイクの結果、サンプル中の最終微生物汚染物質濃度が、ログベースで、検量線における微生物汚染物質濃度の最高標準と最低標準との間の中間点に近づくことが好適である。たとえば、検量線が５０エンドトキシン単位（ＥＵ）／ｍＬ〜０．００５ＥＵ／ｍＬに及ぶアッセイでは、サンプルをスパイクして、約０．５ＥＵ／ｍＬの最終微生物汚染物質濃度を含むことができる。検量線が１ＥＵ／ｍＬ〜０．０１ＥＵ／ｍＬに及ぶアッセイでは、微生物汚染物質によるスパイクの結果、約０．１ＥＵ／ｍＬの最終微生物汚染物質濃度を得ることができる。
【０１０３】
[0079]測定すべき微生物汚染物質を代表する作用物質の「スパイク」又は既知量が、光学的サンプルウェルへ、ウェルのうち乾燥組成物とは異なる区間又はエリア内上で乾燥させられることが好適である。たとえば、図１Ｃに示すように、乾燥組成物１３２は、光学的サンプルウェル１０４の下部１３６に位置することができ、微生物汚染物質を代表する作用物質１３４は、光学的サンプルウェルの上部１３８に位置することができる。
【０１０４】
[0080]スパイクされたサンプル（複数可）は、スパイクされていない又は試験サンプルと並行して分析される。次いで、その結果得られるスパイクされていないサンプル中の微生物汚染物質濃度、及びスパイクされたサンプル中で回収された微生物汚染物質が計算及び比較される。回収された微生物汚染物質は、好適には、約２５％の範囲内でスパイクの既知濃度に等しい。サンプル（又は希釈液）が反応を抑制又は促進することが見られた場合、そのサンプルは、抑制又は促進に打ち勝つまで、さらなる希釈液を必要とすることがある。最初は、サンプルの１０倍の希釈液を試験することによって、抑制又は促進を検査することが望ましい。
【０１０５】
[0081]追加の実施形態では、乾燥組成物１３２は、本明細書に記載するカートリッジを追加の反応に使用することができるように、様々な他の試薬／反応物質を含むことができる。そのような実施形態では、冷凍乾燥又はガラス化された乾燥組成物として所定の量の所望の反応物質（たとえば、緩衝剤、酵素、安定剤など）が含まれている光学的サンプルウェル１０４へサンプルを導入することができると、エンドトキシン検出以外に様々な追加の試験の機会のためのプラットホームが提供される。
【０１０６】
[0082]実施形態では、図２に示すように、ハウジング１０２は、光学的サンプルウェル１０４内のサンプル体積の充填及び維持を支援する液体不透過性膜２０２を含む。本明細書では、「液体不透過性膜」は、空気が基質を通過することを可能にするが、液体はほとんど通さず、好適にはいかなる液体も膜を通過させない基質を指す。そのような膜の例には、たとえばポリ（プロピレン）膜、ポリ（テトラフルオロエチレン）（ＰＴＦＥ）膜、他のフルオロポリマーなどを含む様々なゴム及びポリマーが含まれる。液体不透過性膜２０２は、光学的サンプルウェル１０４に流体的に連結されており、したがって光学的サンプルウェルを充填する液体サンプルは、液体不透過性膜に接触し、液体不透過性膜に当たると流れを停止し、したがって光学的サンプルウェルのそれぞれの中のサンプルの体積（複数可）を同じ（又は同じ体積の約１〜１０％の範囲内）になるように維持し、その結果、サンプルを互いに比較することができることが好適である。
【０１０７】
[0083]ハウジング１０２は、好適には、カートリッジ１００を形成するように互いに機械的に連結された２つの個々の区分、上部区分３０２及び下部区分３０４から準備される。ともに連結された２つの区分を利用することで、カートリッジ１００の様々な部分をより容易に準備し、並びに組み立てることが可能になる。たとえば、導管１０８、流体入口ポート１０６、並びに光学的サンプルウェル１０４を構成するチャネル、マイクロチャネル又はチューブは、上部区分及び／又は下部区分に事前に形成又は配置することができ、次いでともに連結して、完成したカートリッジ１００を形成することができる。上部区分３０２及び下部区分３０４を機械的に連結する方法には、様々なのり若しくは接着剤、レーザ溶接、超音波溶接、機械的なねじ、又は自己嵌合式コネクタ、並びにバンド又はクリップが含まれる。追加の実施形態では、２つの区分間の熱溶融又は熱接合によって、機械的連結を実施することができる。実施形態では、ハウジング１０２の上部区分３０２及び下部区分３０４を射出成形し、次いで互いに熱接合又は溶融接合することができ、以て好適には、導管１０８、光学的サンプルウェル１０４、及び流体入口ポート１０６を封じることができる。さらなる実施形態では、ハウジング１０２の上部区分３０２及び下部区分３０４のうちの一方は、不透明なプラスチックを使用して準備することができ、それにより測定中にハウジングを通過する望ましくない光を低減させ、クロストークを低減させる。
【０１０８】
[0084]追加の実施形態では、サンプル中の微生物汚染物質の存在及び／又は量を判定するカートリッジが本明細書に提供される。カートリッジ１００は、好適には、第１及び第２の光学的サンプルウェル１０４、流体入口ポート１０６、並びに流体入口ポート及び第１及び第２の光学的サンプルウェルを流体的に連結する導管１０８を含むハウジング１０２を含む。
【０１０９】
[0085]カートリッジはまた、好適には、ハウジング１０２に取り付けられ、流体入口ポート１０６及び導管１０８に流体的に連結された２位置シリンジを含む。実施形態では、本明細書に記載するように、第１の位置が、真空を生じさせてサンプルを流体入口ポート１０６及び導管１０８内へ導入し、第２の位置が、導管１０８から光学的サンプルウェル１０４への輸送を提供する。また、カートリッジ内には、光学的サンプルウェルのそれぞれの上で乾燥させられた血球溶解物（好適には、リムルス変形細胞溶解物）及び発色基質を含む乾燥組成物１３２、並びに第２の光学的サンプルウェル上で乾燥させられた微生物汚染物質を代表する作用物質が含まれる。
【０１１０】
[0086]実施形態では、ハウジング１０２は、４つの光学的サンプルウェルを含み、各４つの光学的サンプルウェルが、光学的サンプルウェル上で乾燥させられた乾燥組成物を備え、４つの光学的サンプルウェルのうちの２つが、光学的サンプルウェル上で乾燥させられた微生物汚染物質を代表する作用物質を含む。本明細書に記載するように、これらの２つの光学的サンプルウェルは、微生物汚染物質の存在及び／又は量を判定するための制御として使用される微生物汚染物質（たとえば、細菌エンドトキシン）の「スパイク」を含む。
【０１１１】
[0087]本明細書に記載するように、実施形態では、ハウジング１０２は、光学的サンプルウェルのそれぞれに流体的に連結された液体不透過性膜２０２を含む。液体不透過性膜２０２は、サンプルが光学的サンプルウェルを充填するとサンプルの流れを停止させる機構を提供し、以て光学的サンプルウェルのそれぞれの中のサンプルの体積を同じ（又は同じ体積の約１〜１０％の範囲内）になるように維持し、その結果、サンプルを互いに比較することができる。本明細書全体にわたって記載するように、好適には、ハウジング２０２は、カートリッジを形成するように互いに機械的に連結された上部区分３０２及び下部区分３０４を含む。
【０１１２】
[0088]さらに、サンプル中の微生物汚染物質の存在を検出する方法が本明細書に提供される。実施形態では、これらの方法は、好適には、本明細書に記載するカートリッジの流体入口ポート内へサンプルを導入するステップを含む。たとえば、図１Ｄに示すように、サンプル１７０は、容器内に保持することができ、又は反応プロセス若しくはバッチ、又は薬剤溶液から直接引き込むことができる。サンプル１７０は、ポンプ機構１１０、好適には２位置シリンジを介して真空を生じさせてサンプルを流体入口ポート内へ導入することによって、サンプル導入方向１１４を介して導入されることが好適である。サンプルはまた、この最初のプロセスにおいて、さらに好適にはポンプ機構によって、たとえば２位置シリンジを第１の位置１２４に配置することによって生成される真空を介して、導管１０８へ伝達される。図１Ａに示すように、サンプル１７０は導管１０８へ伝達され、したがって導管１０８の実質上すべてを最初の位置まで充填するが、光学的サンプルウェル１０４の充填は始めない。
【０１１３】
[0089]次いで、図１Ｂに示すように、ポンプ機構、好適には２位置シリンジが第２の位置１２６に配置されると、サンプル１７０を導管１０８から光学的サンプルウェル１０４へ伝達する。本明細書に記載するように、サンプルの輸送は、光学的サンプルウェルに流体的に連結された液体不透過性膜２０２によって停止される。本明細書に記載するように、輸送を停止させることで、光学的サンプルウェルのそれぞれの体積を実質上等しく充填することが可能になり（体積は互いの約１０％、好適には約５％、又は約１％の範囲内で変動する）、光学的サンプルウェル間の比較が可能になる。
【０１１４】
[0090]方法は、光学的サンプルウェル内のサンプルの光学的特性を測定するステップをさらに含む。微生物汚染物質の存在を検出する方法では、光学的特性の変化が、サンプル中の微生物汚染物質の存在を示す。
【０１１５】
[0091]本明細書に記載するように、光学的特性は、好適には、事前選択された光の波長におけるサンプルの吸収度であり、光学的特性の変化は、吸収度の変化である。測定される光学的特性は、特定の波長における吸収度、特定の波長における透過度、特定の波長における蛍光性、又は光学的密度の変化（たとえば、増大又は減少）とすることができる。たとえば、光学的特性は、約２００ｎｍ〜約７００ｎｍの範囲内、より好適には約３５０ｎｍ〜約４５０ｎｍの範囲内、若しくは約４００ｎｍ〜約４１０ｎｍ、又は約４０５ｎｍの波長における吸収度又は透過度の変化とすることができる。
【０１１６】
[0092]図５Ａは、本明細書に記載する実施形態による追加のカートリッジ１００の構成を示す。本明細書に記載するように、ハウジング１０２は、好適には、カートリッジ１００を形成するように互いに連結された２つの個々の区分、上部区分３０２及び下部区分３０４から準備される。カートリッジ１００の下部区分３０４は、光学的サンプルウェル１０４の下部１３６を含み、下部１３６において乾燥組成物１３２が乾燥させられている。上部区分３０２は、ウェル壁１３０を形成する開口を含み、上板５０２（好適には、ポリスチレン又は他のポリマー材料から準備された透明のポリマー要素）は、サンプルウェル１０４の上部１３８を含み、上部１３８上で微生物汚染物質を代表する作用物質１３４が乾燥させられている（図１Ｃの構成を参照されたい）。
【０１１７】
[0093]本明細書に記載するように、好適にはサンプルウェル１０４に隣り合う上部区分３０２は、サンプルウェル１０４に流体的に連結された凹み区分５０６を含み、区分５０６内に液体不透過性膜２０２が位置することができ、ウェルが導管１０８から充填されると、サンプルウェル１０４内への液体の流れを停止させる（カートリッジ１００のこの実施形態における導管１０８の場所、並びに好適にはカートリッジ１００の主軸線と位置合わせされるサンプルウェル１０４の向きは、図５Ｃを参照されたい。カートリッジの主軸線に直交しているサンプルウェル１０４の代替の向きは、図３を参照されたい）。また、上板５０２がカートリッジに加えられるときに追加の封止及び一体化を提供するシリコーンの裏当て５０４が含まれる。図５Ｂは、カートリッジ１００の組立て図を示し、上板５０２の位置は、カートリッジ１００の下部区分３０４を封止し、上部区分３０２内に位置する。
【０１１８】
[0094]図５Ａは、流体入口ポート１０６並びにポンプ機構１１０の場所を示し、ポンプ機構１１０は、カートリッジ１００の上部区分３０２へ直接一体化されたバレル１１８を含み、バレル１１８内へプランジャ１１６を挿入することができる（バレル１１８内へ挿入されたプランジャ１１６を示す図５Ｂを参照されたい）。
【０１１９】
[0095]図５Ｄは、本明細書に記載する実施形態によるさらなる追加のカートリッジ１００の構成を示す。本明細書に記載するように、ハウジング１０２は、好適には、カートリッジ１００を形成するように互いに連結された２つの個々の区分、上部区分３０２及び下部区分３０４から準備される。カートリッジ１００の下部区分３０４は、光学的サンプルウェル１０４の下部１３６を含み、下部１３６において乾燥組成物１３２が乾燥させられている。上部区分３０２は、ウェル壁１３０を形成する開口を含み、上板５０２（好適には、ポリスチレン又は他のポリマー材料から準備された透明のポリマー要素）は、サンプルウェル１０４の上部１３８を含み、上部１３８上で微生物汚染物質を代表する作用物質１３４が乾燥させられている（図１Ｃの構成を参照されたい）。
【０１２０】
[0096]好適にはサンプルウェル１０４に隣り合う上部３０２はまた、凹み区分５０６を含むことができる。本明細書に記載するように、実施形態では、個々の不透過性膜５２０の形態の液体不透過性膜が利用され、サンプルウェル１０４に流体的に連結されており、ウェルが導管１０８から充填されると、サンプルウェル１０４内への液体の流れを停止させる（カートリッジ１００のそのような実施形態における導管１０８の場所、並びに好適にはカートリッジ１００の主軸線と位置合わせされるサンプルウェル１０４の向きは、図５Ｃを参照されたい。カートリッジの主軸線に直交しているサンプルウェル１０４の代替の向きは、図３を参照されたい）。たとえば２〜１０、好適には４つの円形又は同様の形状のディスクの形態の個々の不透過性膜５２０を、ウェル壁１３０内へ個々に押し込むことができる液体不透過性膜として使用することで、ぴったりした嵌合及び液体の流れの良好な制御が提供される。個々の不透過性膜は、好適には、ポリ（テトラフルオロエチレン）（ＰＴＦＥ）膜であり、サイズは、直径約数ミリメートル及び厚さ数ミリメートル程度、好適には厚さ約１ｍｍ×直径約２ｍｍである。
【０１２１】
[0097]本明細書に記載するように、カートリッジ１００の上部区分３０２及び下部区分３０４を封止する例示的な機構には、レーザ溶接及び超音波溶接が含まれる。図５Ａに示すように、好適には、上部区分３０２は、少量（たとえば、０．５〜１０重量％、好適には２〜５重量％）のカーボンブラックを含むポリスチレンなどのポリマー材料から準備される。上部区分３０２内にカーボンブラックを含むことで、好適にはポリスチレンなどの透明のポリマー材料である下部区分３０４に、上部区分３０２をレーザ溶接することが可能になる。レーザ溶接を実施する方法は、たとえば開示が全体として参照により本明細書に組み込まれている、Ｋｌｉｅｎの「Ｌａｓｅｒ  Ｗｅｌｄｉｎｇ  ｏｆ  Ｐｌａｓｔｉｃｓ」、Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ、ドイツ（２０１２）に開示されているように、当技術分野では知られている。レーザ溶接を使用することで、単一の膜２０２又は個々の不透過性膜５２０である液体不透過性膜の熱に起因する劣化に関係する問題が緩和される。
【０１２２】
[0098]超音波溶接の方法は、たとえば開示が全体として参照により本明細書に組み込まれている、Ｓｈｏｈの「Ｗｅｌｄｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅｒｍｏｐｌａｓｔｉｃｓ  ｂｙ  ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ」、Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃｓ  １４：２０９−２１７（１９７６）に開示されているように、当技術分野ではよく知られている。超音波溶接を使用することで、膜２０２又は個々の不透過性膜５２０である液体不透過性膜の熱に起因する劣化に関係する問題が緩和される。
【０１２３】
[0099]例示的な実施形態では、光学的サンプルウェル１０４内にサンプルを含む本明細書に記載するカートリッジは、図６Ａに示すように、測定デバイス又はリーダデバイス６０２内へ挿入することができる。図６Ａのリーダデバイス６０２は、例示のみを目的として提供されており、本明細書に記載するカートリッジがどのように読み取られ又は分析されるかを含めて、本発明の範囲を限定するものではないことに留意されたい。
【０１２４】
[00100]好適な実施形態では、カートリッジ１００をリーダデバイス６０２（又は本明細書に記載する他のリーダデバイス）内へ挿入し、たとえば図４Ａに示すように、取付け装置４００によって保持することができる（４２０はリーダデバイス６０２の内側を表し、４２２はリーダデバイス６０２の外側を表す）。取付け装置４００は、ベース４０２、下部加熱器４０４、上部加熱器４０６、及び取付け具４０８などの様々な構成要素を含むことができる。取付け具４０８は、様々な可動部、運動学的な取付け具、斜面（たとえば、斜面／支持プラットホーム４１０）、ピン、ばね、又はピストンとすることができ、６自由度の範囲内で運動を制御することを可能にしながら、カートリッジ１００を挿入し、次いで分析及び測定のために定位置で保持することを可能にする。たとえば、先端にボールがついたねじを取付け具４０８として使用することができ、カートリッジ１００の表面には、カートリッジがリーダデバイス６０２内へ挿入されたときに厳密な繰返し可能な位置決めで動くように、円錐体、溝、又は平坦な特徴を成形又は他の方法で設けることができる。
【０１２５】
[00101]図４Ｂ〜図４Ｆに代替実施形態が示されており、図４Ｂ〜図４Ｆは、図６Ａ若しくは図６Ｃ、又は本明細書に別途記載するリーダデバイス内で使用することができるさらなる取付け装置４５０を示す。図４Ｂ〜図４Ｄは、取付け装置４５０の切欠図を示し、各図には追加の構成要素が加えられている。カートリッジ１００は、斜面４５４（図４Ｂ参照）又は摺動機構を介して取付けピン、たとえば取付けピン４５２上へ持ち上げることができ、次いで取付けピン（複数可）４５２は、カートリッジ（図示せず）内の位置合わせ孔を通過して、カートリッジを定位置で保持する。この繰返し可能な位置決めは、様々な光学素子及び光源並びにリーダ（たとえば、フォトダイオード）を含むリーダデバイス６０２の内部構成要素を介した正確な読取りを確実にするために非常に重要である。図４Ｃに示すように、取付け装置４５０は、ばね板４５６を含むことができ、したがってカートリッジ１００が取付け装置４５０内へ挿入された後、ばね板４５６がカートリッジを定位置で保持することができる。ばね板４５６はまた、サンプルウェル１０４の位置を覆うために、遮光体４５８をさらに含むことができる。取付け装置４５０はまた、好適にはカバー４６０をさらに含み、カバー４６０は、所望される場合は加熱装置として機能することができ、取付け装置４５０の残りの構成要素をともに保持することができる。
【０１２６】
[00102]図４Ｅは、取付け装置４５０の横断面を示し、斜面４５４を摺動する前、及び取付けピン４５２に係合又は位置する前のカートリッジ１００の位置を示す。ばね板４５６がカートリッジ１００の挿入を可能にするように上方へ動くため、取付け装置の上部の上へ延びるばね板４５６の遮光体４５８の部分を見ることができる。斜面４５４の端部に到達すると、カートリッジは取付けピン４５２上へ降下／係合して、カートリッジ１００を定位置で保持する（図４Ｆ参照）。ばね板４５６もまた降下して、取付け装置４５０内のカートリッジ１００にさらなる安定性を提供する。取付けピン４５２はカートリッジ内の位置合わせ孔に係合されるため、見ることはできなくなる。
【０１２７】
[00103]図示のように、取付け装置４００は、好適には、下部加熱器４０４及び上部加熱器４０６を含み、下部加熱器４０４及び上部加熱器４０６は、光学的サンプルウェルへ加熱を提供し、本明細書に記載する酵素反応が発生することを可能にするのに適当な温度にサンプルを加熱する。概して、サンプルと血球溶解物との間の反応を最適化する温度は、約２５℃〜約４０℃又は約３０℃〜約４０℃である。サンプルの加熱時間は、概して、反応を発生させ、サンプルの光学的特性を測定及び記録することを可能にするために、約１０〜３０分程度である。
【０１２８】
[00104]さらに、取付け具４０８を含む取付け装置を使用して、サンプルの光学的特性を測定する前に光学的サンプルウェル１０４内のサンプルを振動又は混合させることができる。乱流を含む流体の流れを使用して、光学的サンプルウェル１０４内のサンプルの混合を促進することができる。追加の実施形態では、ソニケータ、真空デバイス、又は他のデバイスを使用して、サンプルに撹拌を提供し、混合を支援することもできる。
【０１２９】
[00105]図６Ｂは、サンプルの光学的特性の測定を行うことができるようにリーダデバイス６０２内へ挿入されたカートリッジ１００の図を示す。図示のように、リーダデバイス６０２は、好適には、手持ち式又は容易に携帯できるデバイスであり、様々な研究室又は臨床環境に採り入れることができ、簡単なタッチスクリーンコマンドを介して容易に操作及び制御することができる。
【０１３０】
[00106]図６Ｃは、サンプルの光学的特性の測定を行うことができるように追加のリーダデバイス６０４内へ挿入されたカートリッジ１００の図を示す。図示のように、追加のリーダデバイス６０４は、好適には、手持ち式又は容易に携帯できるデバイスであり、様々な研究室又は臨床環境に採り入れることができ、簡単なタッチスクリーンコマンドを介して容易に操作及び制御することができる。追加のリーダデバイス６０４は、カートリッジ１００の全長の挿入に対応することができ、以て測定前にカートリッジをリーダデバイス内に完全に収容することができる。寸法は例示であり、ミリメートル単位で示されている。図示のように、カートリッジ１００の挿入は、好適には、カートリッジのうちサンプルウェルを含む区間がまず挿入され、したがってデバイス内に完全に収容されるように実施される。この挿入方向はまた、導管１０８から光学的サンプルウェル１０４への輸送を提供する第２の位置へ２位置シリンジを動かすのに役立つ。
【０１３１】
[00107]図７は、サンプルの光学的特性の測定を行うために使用することができるリーダデバイス６０２（又は追加のリーダデバイス６０４）の例示的な構成要素を示す。実施形態では、リーダデバイス６０２／６０４は、約３５０ｎｍ〜約４５０ｎｍ、又は約４００ｎｍ〜約４１０ｎｍ、又は約４０５ｎｍの波長の光を生成することが可能な光源７０２、好適にはＬＥＤ光源を含むことができる。さらに、リーダデバイス６０２／６０４内には、ライトパネル７０４（たとえば、ライトガイド、鏡、プリズムなど）が含まれ、光学的サンプルウェル１０４のそれぞれに照明を提供して、検出器７１０、好適にはフォトダイオードのアレイによって読み取ることができる信号チャネル７０８を提供する。正しい光の強度及び波長が提供されているかどうかを判定するための制御として、さらなる基準チャネル７０６が提供される。図示のように、カートリッジ１００は、上部加熱器４０６と下部加熱器４０４との間に位置決めされ、好適には約２５℃〜約４０℃までの加熱をカートリッジ１００に提供し、酵素反応を容易にする。例示的な加熱器は、ポリイミド、たとえばデュポンカプトン（ＤＵＰＯＮＴ  ＫＡＰＴＯＮ）（登録商標）、及びシリコーンゴムの可撓性フィルムから準備することができる。信号チャネル７０８及び検出器７１０の向きは、カートリッジ１００内のサンプルウェル１０４の向きによって決定される。
【０１３２】
[00108]吸収量の判定及び／又は定量化を実行するためのコンピュータ回路などのリーダデバイス６０２／６０４の様々な他の構成要素は、当技術分野ではよく知られており、そのようなデバイス内へ容易に組み込むことができる。
【０１３３】
[00109]カートリッジ１００がリーダデバイス６０２／６０４内へ挿入されると、上部加熱器４０６及び下部加熱器４０４を介して加熱を行い、所望の酵素反応を容易にすることができる。サンプルを含む光学的サンプルウェル１０４を介して、光源７０２からの光が提供され、検出器７１０、好適にはフォトダイオードで吸収度が読み取られる。次いで、様々な光学的サンプルウェルからの吸収度が比較され、好適には光学的サンプルウェルのうちの１つ又は複数が、微生物汚染物質を含む制御として作用する。次いで、たとえば標準較正検量線に対して、サンプル中の量と制御中の量を比較することによって、サンプル中のエンドトキシンの存在及び／又は量を判定することができる。当業者であれば、既知量のエンドトキシンの吸収度を使用して、そのような標準較正検量線を容易に準備することができる。追加の実施形態では、リーダデバイス６０２／６０４には、試験サンプル中のエンドトキシンの量を判定するために操作者が使用することができる保存検量線（すなわち、リーダデバイス６０２若しくは追加のリーダデバイス６０４に維持され、最初に提供される）、又は所定の検量線を提供することもできる。そのような保存検量線又は所定の検量線は、様々なエンドトキシンに対して提供することができ、必要に応じて使用者が、たとえば保守データベースから検量線をダウンロードすることなどによって更新することができる。図６Ａ〜図６Ｃに示すように、複数のカートリッジ１００をリーダデバイス６０２又は追加のリーダデバイス６０４内へ挿入し、同時に読み取ることができ、多くの異なるサンプル中の微生物汚染物質の存在及び／又は数量を同時に判定することを可能にすることができる。
【０１３４】
[00110]実施形態のいずれかの範囲から逸脱することなく、本明細書に記載する方法及び応用例に他の好適な修正及び適合を加えることができることが、関連技術の当業者には容易に明らかである。
【０１３５】
[00111]特定の実施形態について本明細書に図示及び説明したが、特許請求の範囲又は項目は、説明及び図示される部分の特有の形態又は配置に限定されるものではないことを理解されたい。本明細書では、例示的な実施形態を開示しており、特有の用語を用いたが、これらの用語は、限定の目的ではなく、概略的且つ記述的な意味でのみ使用されている。上記の教示に照らして、実施形態の修正及び変更が可能である。したがって、具体的に記載したもの以外の方法でも実施形態を実施することができることを理解されたい。
【０１３６】
[00112]本明細書に記載のすべての公開、特許、及び特許出願は、それぞれ個々の公開、特許、又は特許出願が参照により組み込まれることが具体的且つ個別に記載された場合と同じ程度に、参照により本明細書に組み込まれている。
【図１Ａ】
2020526739.tif 000003
【図１Ｂ】
2020526739.tif 000004
【図１Ｃ】
2020526739.tif 000005
【図１Ｄ】
2020526739.tif 000006
【図２】
2020526739.tif 000007
【図３】
2020526739.tif 000008
【図４Ａ】
2020526739.tif 000009
【図４Ｂ】
2020526739.tif 000010
【図４Ｃ】
2020526739.tif 000011
【図４Ｄ】
2020526739.tif 000012
【図４Ｅ】
2020526739.tif 000013
【図４Ｆ】
2020526739.tif 000014
【図５Ａ】
2020526739.tif 000015
【図５Ｂ】
2020526739.tif 000016
【図５Ｃ】
2020526739.tif 000017
【図５Ｄ】
2020526739.tif 000018
【図６Ａ】
2020526739.tif 000019
【図６Ｂ】
2020526739.tif 000020
【図６Ｃ】
2020526739.tif 000021
【図７】
2020526739.tif 000022
【国際調査報告】
2020526739.tif 000023
2020526739.tif 000024
2020526739.tif 000025