(57)【要約】ＩｇＧ−ｓｃＦｖの形式の抗ＣＤ３３抗体剤を含む、抗ＣＤ３３抗体剤が提供される。様々な方法、およびそれに関連する試薬も提供され、例えば、ＣＤ３３関連疾患、特に例えばＡＭＬなどの白血病の検出、予防および／または治療的処置を目的としたものが含まれる。【選択図】図１Ａ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
二つの同一のイムノグロブリン重鎖と、二つの同一の融合ポリペプチドを含有する二重特異性抗体剤であって、各融合ポリペプチドが、
（ｉ）イムノグロブリン軽鎖および、
（ｉｉ）一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含有し、
前記重鎖および前記融合ポリペプチド軽鎖がＣＤ３３に結合し、前記融合ポリペプチドｓｃＦｖがＣＤ３に結合する、二重特異性抗体剤。
【請求項２】
前記重鎖が各々、配列番号１または配列番号２として特定される重鎖可変ドメイン配列を含有する、請求項１に記載の二重特異性抗体剤。
【請求項３】
前記融合ポリペプチド軽鎖が、配列番号３または配列番号４として特定される軽鎖可変ドメイン配列を含有する、請求項１に記載の二重特異性抗体剤。
【請求項４】
前記重鎖は各々、配列番号９として特定される配列を含有する、請求項１に記載の二重特異性抗体剤。
【請求項５】
前記融合ポリペプチド軽鎖が、配列番号１０として特定される軽鎖配列を含有する、請求項１に記載の二重特異性抗体剤。
【請求項６】
前記ｓｃＦｖが、前記イムノグロブリン軽鎖のＣ末端に融合される、請求項１に記載の二重特異性抗体剤。
【請求項７】
前記融合ポリペプチドがリンカーをさらに含有する、請求項１に記載の二重特異性抗体剤。
【請求項８】
前記融合ポリペプチドが、配列番号１１〜１７および２７のいずれかとして特定される配列を含有するｓｃＦｖを含有する、請求項１に記載の二重特異性抗体剤。
【請求項９】
前記重鎖が、Ｋ３２２ＡおよびＤ２６５Ａから選択される一つまたは複数の変異を有するＦｃ領域を含有する、請求項１に記載の二重特異性抗体剤。
【請求項１０】
前記重鎖は各々、配列番号２４として特定される配列を含有する、請求項１に記載の二重特異性抗体剤。
【請求項１１】
前記融合ポリペプチドは各々、配列番号２６として特定される配列を含有する、請求項１に記載の二重特異性抗体剤。
【請求項１２】
ヒト化抗ＣＤ３３抗体重鎖をコードする単離核酸分子であって、前記核酸は、配列番号２３として特定される、単離核酸分子。
【請求項１３】
融合ポリペプチドをコードする単離核酸分子であって、前記核酸は、配列番号２５として特定される、単離核酸分子。
【請求項１４】
請求項１２および／または請求項１３のいずれかに記載の単離核酸分子を含有する組み換えベクター。
【請求項１５】
請求項１４に記載の組み換えベクターを含有する宿主細胞。
【請求項１６】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の二重特異性抗体剤を作製する方法であって、前記抗体またはその断片の発現が可能となる条件下で、培養培地中で請求項１３に記載の宿主細胞を培養する工程、および前記培養培地から前記抗体またはその断片を分離させる工程、を含む方法。
【請求項１７】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の二重特異性抗体剤を含有する組成物。
【請求項１８】
請求項１５に記載の組成物を含み、薬学的に許容可能な担体または希釈剤をさらに含む、医薬組成物。
【請求項１９】
対象の医学的状態を治療または予防する方法であって、前記医学的状態が、ＣＤ３３の発現により特徴付けられ、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の二重特異性抗体剤の治療有効量を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項２０】
その必要のある対象の癌を治療する方法であって、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の二重特異性抗体剤を投与することを含む、方法。
【請求項２１】
前記癌が、急性骨髄性白血病、混合型白血病、骨髄異形成症候群、慢性骨髄単球性白血病、慢性骨髄性白血病の骨髄性急性転化、および急性リンパ芽球性白血病から選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
活性化Ｔ細胞の調製物を投与することをさらに含む、請求項２０または２１に記載の方法。
【請求項２３】
ＩＬ２の投与をさらに含む、請求項２０〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
イムノグロブリン重鎖と、融合ポリペプチドを含有する二重特異性抗体剤であって、前記融合ポリペプチドが、
（ｉ）イムノグロブリン軽鎖および、
（ｉｉ）一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含有し、
前記重鎖および前記融合ポリペプチド軽鎖がＣＤ３３に結合し、前記融合ポリペプチドｓｃＦｖがベンジル−ＤＯＴＡ金属またはＣＤ１３７に結合する、二重特異性抗体剤。
【請求項２５】
二つの同一のイムノグロブリン重鎖と、二つの同一の融合ポリペプチドを含有する二重特異性抗体剤であって、各融合ポリペプチドが、
（ｉ）イムノグロブリン軽鎖および、
（ｉｉ）一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含有し、
前記重鎖および前記融合ポリペプチド軽鎖がＣＤ３３に結合し、前記融合ポリペプチドｓｃＦｖがベンジル−ＤＯＴＡ金属またはＣＤ１３７に結合する、二重特異性抗体剤。
【請求項２６】
対象の医学的状態を診断する方法であって、前記医学的状態が、ＣＤ３３の発現により特徴付けられ、請求項２４または２５に記載の二重特異性抗体剤の有効量を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項２７】
請求項１〜１０および２４〜２５のいずれか１項に記載の二重特異性結合剤を用いてアーム化されたＴ細胞。
【請求項２８】
請求項１〜１０および２４〜２５のいずれか１項に記載の二重特異性結合剤を用いてアーム化されたＴ細胞の群。
【請求項２９】
請求項２８に記載のＴ細胞群を含有する組成物。
【請求項３０】
請求項１〜１０および２４〜２５のいずれか１項に記載の二重特異性結合剤を含有するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
【請求項３１】
請求項３０に記載のＣＡＲを発現するＣＡＲ−Ｔ細胞。
【請求項３２】
請求項３１に記載のＣＡＲ−Ｔ細胞の群。
【請求項３３】
請求項３２に記載のＣＡＲ−Ｔ細胞群を含有する組成物。
【請求項３４】
請求項３０に記載のＣＡＲを発現するＣＡＲ−ＮＫ細胞。
【請求項３５】
請求項３４に記載のＣＡＲ−ＮＫ細胞の群。
【請求項３６】
請求項３５に記載のＣＡＲ−ＮＫ細胞群を含有する組成物。
【請求項３７】
その必要のある対象の癌を治療する方法であって、請求項２９、３３および３６のいずれか１項に記載の組成物の治療有効量を前記対象に投与することを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
イントロダクション
抗体系の治療薬は、特に癌治療において大きな進展をもたらしている。モノクローナル抗体、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、全長抗体、Ｆａｂ、ＰＥＧ化、放射性標識抗体、薬剤複合体化抗体、多重特異性抗体などをはじめとする様々な抗体形式が開発されている。２０１２年現在、少なくとも３４種の治療用抗体剤が米国または欧州において医薬品の販売承認を得ている（Ｒｅｉｃｈｅｒｔ，ｍＡｂｓ  ４：３，４１３、２０１２年５月／６月を参照。参照により本明細書に組み込まれる）。しかしながら特に有効な抗体剤の開発はいまだ困難である。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００２】
本開示は特にヒトＣＤ３３タンパク質のエピトープに結合する特定の多重特異性抗体剤（例えば、二重特異性抗体剤）を提供する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体剤（例えば、二重特異性抗体剤）は、ヒト化抗ＣＤ３３抗体、例えばヒト化Ｍ１９５（本明細書においてｈｕＭ１９５と呼称される）の結合部分を含む。本開示は、ＣＤ３３に結合する結合部分を含む特定の多重特異性抗体剤が、本明細書に記載される機能的特性を改善したという認識を包含する。
【０００３】
いくつかの実施形態では、本開示の多重特異性抗体剤は、ｈｕＭ１９５に基づく第一の結合部分（すなわち抗ＣＤ３３結合部分）と、第二の結合部分を含む。いくつかの実施形態では、第二の結合部分は、免疫細胞上の因子に結合する。いくつかの実施形態では、第二の結合部分は、Ｔ細胞上の因子（例えばＣＤ３）に結合する。いくつかの実施形態では、第二の結合部分は、有機化合物または無機化合物と相互作用する。本開示は、ＣＤ３３に結合することができるかかる多重特異性抗体剤と、第二の剤が、ＣＤ３３と関連する疾患、例えばＣＤ３３を発現する癌などの疾患の治療および診断に有用であるという認識を包含する。
【０００４】
いくつかの実施形態では、提供される多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）は、二つの同一のイムノグロブリン重鎖および二つの同一の融合ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、各融合ポリペプチドは、イムノグロブリン軽鎖ドメインと、例えば一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）などの結合ドメインを含む（例えば図１Ａを参照）。いくつかの実施形態では、各融合ポリペプチドは、軽鎖に融合されたｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−ＣＬ１、またはＶＨＨ−ＣＬ１、または軽鎖（またはその一部分）に結合された任意の結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、提供される多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）は、配列番号１または２として特定される重鎖可変ドメイン配列を各々含む重鎖を含有する。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドの軽鎖部分は、配列番号３または４として特定される軽鎖可変ドメイン配列を含有する。
【０００５】
いくつかの実施形態では、提供される多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）は、重鎖と融合ポリペプチドを含み、この場合において当該重鎖可変領域は、配列番号１または２に対して少なくとも約７０％（例えば少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一である配列を含み、そして当該融合ポリペプチドの軽鎖部分は、配列番号３または４に対して少なくとも約７０％（例えば少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一である配列を含む。
【０００６】
いくつかの実施形態では、配列番号９として特定される配列を各々含む重鎖を含有する多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）が提供される。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドの軽鎖部分は、配列番号１０として特定される配列を含有する。いくつかの実施形態では、提供される例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤は、重鎖と融合ポリペプチドを含み、この場合において当該重鎖可変領域は、配列番号９に対して少なくとも約５０％（例えば少なくとも約５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一である配列を含み、そして当該融合ポリペプチドの軽鎖部分は、配列番号１０に対して少なくとも約５０％（例えば少なくとも約５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一である配列を含む。
【０００７】
いくつかの実施形態では、提供される多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）は、例えば抗ＣＤ３３軽鎖などのイムノグロブリン軽鎖（またはその抗原結合部分）のＣ末端に融合した第二の標的に結合するｓｃＦｖを含む融合ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドはリンカーをさらに含む。
【０００８】
一部の特定の実施形態では、提供される多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂ  などの二重特異性抗体剤）、またはその配列は、抗ＣＤ３３可変ドメインと、少なくとも１個の他の結合ドメイン、例えば腫瘍細胞障害を目的としたＴ細胞再標的化のための抗ＯＫＴ３、または多重工程前標的化を目的とした例えばＣ８２５などのベンジル−ＤＯＴＡ−金属結合ドメイン、またはアゴニストとして抗４１ＢＢ−ｓｃＦｖを用いた、もしくはＣＤ１３７Ｌを用いたＡＤＣＣを目的としたクローン３５、ＣＤ１３７、またはアゴニストとして４−１ＢＢＬを用いたＡＤＣを目的とした４−１ＢＢＬを含有してもよい。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体剤は、Ｔ細胞抗原に結合するｓｃＦｖを含有する二重特異性抗体剤である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞抗原はＣＤ３である。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体剤は、ヒト化ＯＫＴ３  ｓｃＦｖを含有する。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１１〜１７および２７のいずれかとして特定される配列を含有するｓｃＦｖを含有する。
【０００９】
いくつかの実施形態では、提供される多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）は、配列番号２４として特定される配列を各々含む重鎖を含有する。いくつかの実施形態では、前述の多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）は、配列番号２６として特定される配列を各々含む融合ポリペプチドをさらに含有する。
【００１０】
いくつかの実施形態では、多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂ剤などの二重特異性抗体剤）は、ベンジル−ＤＯＴＡ−金属に特異的に結合するｓｃＦｖを含有する。いくつかの実施形態では、ベンジル−ＤＯＴＡ−金属に特異的に結合するｓｃＦｖは、Ｃ８２５  ｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１８として特定される配列を含有するｓｃＦｖを含有する。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、ベンジル−ＤＯＴＡ−金属結合ｓｃＦｖに融合された抗ＣＤ３３イムノグロブリン軽鎖配列を含有する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３３抗ベンジル−ＤＯＴＡ融合ポリペプチドは、リンカーをさらに含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３３抗ベンジル−ＤＯＴＡ融合ポリペプチドは、配列番号１９として特定される配列を含有する。
【００１１】
いくつかの実施形態では、多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）は、バリアントＦｃ領域を含有し、前述のバリアントＦｃ領域は、野生型Ｆｃ領域と比較して少なくとも１個のアミノ酸改変を含有する。特定の実施形態では、Ｆｃ改変は、エフェクター機能を変える改変を含み得るが、これに限定されない。いくつかの実施形態では、Ｆｃバリアントは、１個または複数の改変された糖型を含有する。すなわちＦｃバリアントは、Ｆｃ領域を含有する分子に共有結合された炭水化物組成物を含有し、前述の炭水化物組成物は、Ｆｃ領域を含有する親分子の炭水化物組成物とは化学的に異なっている。
【００１２】
いくつかの実施形態では、多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）は、Ｋａｂａｔに従い番号付けされた場合、ＣＨ２ドメイン中にＮ２９７Ａ変異を伴うＦｃ領域を含有する。いくつかの実施形態では、Ｎ２９７Ａ変異を含有する重鎖は、グリコシル化を欠く。いくつかの実施形態では、Ｎ２９７Ａ変異を含有する重鎖は、ＦｃＲまたはＣ１ｑ結合を欠く。いくつかの実施形態では、抗体剤は、Ｋ３２２ＡおよびＤ２６５Ａから選択される１個または複数の変異を伴うＦｃ領域を含有する重鎖を含有する。いくつかの実施形態では、抗体剤は、Ｎ２９７Ａ変異およびＫ３２２Ａ変異を含有するＦｃ領域を含有する重鎖を含有する。いくつかの実施形態では、抗体剤は、Ｎ２９７Ａ変異およびＤ２６５Ａ変異を含有するＦｃ領域を含有する重鎖を含有する。いくつかの実施形態では、抗体剤は、Ｎ２９７Ａ変異、Ｄ２６５Ａ変異、およびＫ３２２Ａ変異を含有するＦｃ領域を含有する重鎖を含有する。いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号２０〜２２のいずれか一つとして特定される配列を含有する。
【００１３】
いくつかの実施形態では、多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）は、抗原（例えば、ＣＤ３３）への二価結合により特徴付けられる。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂ剤などの二重特異性抗体剤）は、四価であり、例えば二つの異なる抗原へ二価結合する。
【００１４】
いくつかの実施形態では、多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）は、０．１ｐＭ〜１μＭの範囲のＥＣ５０で、ＡＭＬ細胞株（例えばＨＬ６０）に結合する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）は、典型的な腎排泄閾値を越える分子量（例えば、約７０ｋＤａよりも大きい分子量）を有する。
【００１５】
また、本明細書に記載される多重特異性抗体剤に含まれるポリペプチド配列のいずれかまたはすべてをコードするヌクレオチド配列が、任意で１個または複数の制御因子および／またはベクター配列（例えば統合シグナルおよび／または複製シグナル）とともに提供される。一部の実施形態では、ヒト化抗ＣＤ３３抗体重鎖をコードする核酸分子が提供され、前述の核酸は、配列番号２３として特定される。一部の実施形態では、融合ポリペプチドをコードする核酸分子が提供され、前述の核酸は、配列番号２５として特定される。一部の実施形態では、本開示の二重特異性抗体をコードする核酸配列を含む組み換えベクターも提供される。一部の実施形態では、提供されるヌクレオチド配列および／またはベクターは単離される。
【００１６】
さらに本明細書に記載の核酸を含有する宿主細胞も提供される。一部の実施形態では、宿主細胞は真核細胞であってもよい。一部の実施形態では、宿主細胞は原核細胞であってもよい。特定の実施形態では、宿主細胞は、細菌細胞、酵母細胞、昆虫細胞または哺乳類細胞であってもよい。特定の例示的な原核宿主細胞としては、大腸菌細胞が挙げられる。特定の例示的真核細胞としては例えば、ＣＯＳ細胞、ＣＨＯ細胞（例えば、ＤＧ４４細胞、ＣＨＯ−Ｓ、ＣＨＯ−Ｋ１など）およびＨＥＫ２９３細胞（例えば、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ、ＨＥＫ２９３Ｔなど）が挙げられる。
【００１７】
本明細書に記載の多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂ剤）の作製に関する技術も提供される。一部の実施形態では、多重特異性抗体剤の作製は、例えば多重特異的結合剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂ剤）の発現が可能となる条件下で、培養培地中で宿主細胞を培養する工程を含んでもよい。代替的または追加的に、一部の実施形態では、提供される技術は、多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂ剤）を、それを産生する宿主細胞の培養培地から分離する工程を含む。
【００１８】
本開示は、多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）を含有する組成物も提供する。一部の実施形態では、組成物は、医薬組成物である。一部の実施形態では、医薬組成物は、薬学的に許容可能な担体または希釈剤をさらに含有する。
【００１９】
一部の実施形態では、提供される多重特異性抗体剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）は、医薬組成物の製造に有用であり、および／または使用される。一部の実施形態では、医薬組成物は、多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）と薬学的に許容可能な担体を含有する。医薬組成物を製造する方法も提供される。一部の実施形態では、かかる方法は、多重特異性抗体剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）と、薬学的に許容可能な担体を混合する工程、および／またはかかる混合物を対象への投与用に製剤化する工程を含んでもよい。一部の実施形態では、医薬組成物は、非経口送達用に製剤化される。一部の実施形態では、医薬組成物は、癌（例えばＡＭＬ）治療用である。
【００２０】
一部の実施形態では、その必要のある対象に、多重特異性抗体剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）を含有し、および／または送達する組成物を投与する工程を含む方法が提供される。一部の実施形態では、本開示の多重特異性抗体剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）は、治療剤である。一部の実施形態では、本開示の多重特異性抗体剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）は、診断剤である。
【００２１】
一部の実施形態では、その必要のある対象に、多重特異性抗体剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）を含有し、および／またはＩＬ２が投与された、もしくはＩＬ２が投与される対象へと送達する組成物を投与し、それら両方を対象が受け取る工程を含む方法が提供される。一部の実施形態では、その必要のある対象に、ＩＬ２を含有し、および／または多重特異性抗体剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）を投与された、もしくは投与される対象へと送達する組成物を投与し、それら両方を対象が受け取る工程を含む方法が提供される。
【００２２】
本開示の多重特異性抗体剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）でアーム化される（ａｒｍｅｄ）、および／または活性化されるＴ細胞が本明細書において提供される。一部の実施形態では、前述のＴ細胞の群が提供される。一部の実施形態では、本開示の多重特異性抗体剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）でアーム化される、および／または活性化されるＴ細胞、またはＴ細胞群を含有する組成物が提供される。一部の実施形態では、Ｔ細胞またはＴ細胞群は、本開示の多重特異性抗体剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）でアーム化される。一部の実施形態では、Ｔ細胞またはＴ細胞群は、本開示の多重特異性抗体剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）で活性化される。
【００２３】
一部の実施形態では、本開示の多重特異性抗体剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）を含有する結合ドメインを含有するキメラ抗原受容体構築体（ＣＡＲ：ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）が提供される。一部の実施形態では、ＣＡＲは、第一世代、第二世代、または第三世代のＣＡＲである。一部の実施形態では、ＣＡＲは、膜貫通ドメイン、共刺激性シグナル伝達領域、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインをさらに含有する。一部の実施形態では、ＣＡＲは、本開示のＣＤ３３二重特異性抗体剤を含有する結合ドメイン、膜貫通ドメイン、共刺激性シグナル伝達領域、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインを含む。本明細書において、本開示のＣＡＲを発現するＴ細胞、すなわちＣＡＲ−Ｔ細胞も提供される。一部の実施形態では、本開示の多重特異性抗体剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）を含有する結合ドメインを含むＣＡＲを発現するＣＡＲ−Ｔ細胞の群が提供される。
【００２４】
一部の実施形態では、本開示のＣＡＲを発現するナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、すなわちＣＡＲ−ＮＫ細胞が提供される。一部の実施形態では、本開示の多重特異性抗体剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）を含有する結合ドメインを含むＣＡＲを発現するＣＡＲ−ＮＫ細胞の群が提供される。
【００２５】
一部の実施形態では、対象中のＣＤ３３発現と関連する疾患を治療する、または改善するために使用することができる組成物および方法が提供される。一部の実施形態では、ＣＤ３３の発現と関連する疾患の診断に使用することができる組成物および方法が提供される。一部の実施形態では、ＣＤ３３発現と関連する疾患は、悪性疾患（例えば癌）である。一部の特定の実施形態では、ＣＤ３３発現と関連する疾患は、白血病である。白血病としては、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）（Ｂ細胞型ＡＬＬおよびＴ細胞型ＡＬＬを含む）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、有毛細胞白血病のうちの少なくとも一つが挙げられるが、これに限定されない。一部の特定の実施形態では、提供される組成物および方法を使用して、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）を治療および／または診断することができる。一部の特定の実施形態では、提供される組成物および方法を使用して、白血病の髄外性（ＥＭ：ｅｘｔｒａｍｅｄｕｌｌａｒｙ）の兆候を治療および／または診断することができる。
【００２６】
特に対象中の医学的状態を治療、予防、および／または診断するための技術も提供され、この場合において当該医学的状態は、ＣＤ３３の発現により特徴付けられる。一部の実施形態では、ＣＤ３３の発現により特徴付けられる医学的状態を治療、予防または診断するための技術は、多重特異性抗体剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）の治療有効量を投与することを含む。一部の実施形態では、ＣＤ３３の発現により特徴付けられる医学的状態を治療、予防または診断するための技術は、多重特異性抗体剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）の治療有効量を送達する組成物を投与することを含む。
【００２７】
特にその必要のある対象中の癌を治療、予防または診断するための技術も提供され、当該技術は、本開示の多重特異性抗体剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）を投与することを含む。一部の実施形態では、癌は、急性骨髄性白血病、混合型白血病、骨髄異形成症候群、慢性骨髄単球性白血病、慢性骨髄性白血病の骨髄性急性転化、および急性リンパ芽球性白血病から選択される。一部の実施形態では、癌を治療、予防または診断するための技術は、Ｔ細胞調製物を投与することをさらに含む。一部の実施形態では、調製物のＴ細胞は活性化される。一部の実施形態では、調製物のＴ細胞は、本開示の多重特異性抗体剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）でアーム化される。
【００２８】
特に多重特異性抗体剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）、および／または前述の多重特異性抗体剤を含有する組成物を特徴解析するための技術も提供される。一部の実施形態では、多重特異性抗体剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）、および／または前述の多重特異性抗体剤を含有する組成物は、ＡＭＬ細胞（例えばＨＬ６０）への結合により特徴付けられる。一部の実施形態では、多重特異性抗体剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）、および／または前述の多重特異性抗体剤を含有する組成物は、インビボ保持時間（例えば少なくとも６時間、１２時間、１８時間、２４時間、３６時間、４８時間、６０時間、７２時間、またはそれ以上のインビボ血清半減期）により特徴付けられる。一部の実施形態では、多重特異性抗体剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）、および／または前述の多重特異性抗体剤を含有する組成物は、ＥＬＩＳＡ、免疫組織化学法、ビアコア結合アッセイ、質量分析法、等電点（ＩＥＦ）クロマトグラフィー法、ウェスタンブロッティング法により特徴解析される。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
本明細書に含まれる図面は、以下の図から構成され、解説のみを目的としており、限定ではない。
【００３０】
【図１Ａ】図１Ａ  ＩｇＧ−ｓｃＦｖ二重特異性抗体剤の形式の概略図を示す。図１Ｂ  例示的ＣＤ３３−ＣＤ３二重特異性抗体剤の精製を示す。ＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖサンプルのＳＥ−ＨＰＬＣクロマトグラムが示されており、ｘ軸は分単位での保持時間を表し、ｙ軸はｍＡＵ単位での２８０ｎｍの吸光度を表す。
【図１Ｂ】同上。
【００３１】
【図２】図２  標的細胞に対する例示的ＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖのＦＡＣＳ免疫染色のグラフ結果を示す。ｘ軸は、抗体の対数濃度（μｇ  抗体／細胞１００万個）を表し、ｙ軸はＭＦＩを表す。以下の多数のＣＤ３３（＋）細胞株由来の細胞に対する結合が観察された：Ｕ９３７、ＭＶ−４−１１、ＭＯＬＭ１３、Ｍ−０７ｅ。しかし例えばＭＯＬＴ４細胞およびＣＭＬＴ１細胞など、ＣＤ３３を発現しない、ＣＤ３３（−）の細胞株に対する結合は観察されなかった。
【００３２】
【図３】図３  様々な細胞株における、例示的ＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖを用いたＴ細胞性細胞障害活性アッセイのグラフ結果を示す。標準的な４時間の５１ＣＲ放出アッセイにおいて、ＡＭＬ細胞株を試験した。ｘ軸は、抗体の対数濃度（μｇ  抗体／ｍｌ）を表し、ｙ軸は細胞障害の％を表す。以下の多数のＣＤ３３（＋）細胞株において、相当数の細胞死が観察された：ＴＨＰ１、Ｍ−０７ｅ、Ｕ９３７、ＳＥＴ２、およびＨＬ６０。しかしＣＤ３３（−）のＭＯＬＴ４細胞は影響を受けなかった。
【００３３】
【図４】図４  ＭＯＬＭ１３  ＡＭＬ細胞株における、例示的なＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖを用いたＴ細胞性細胞障害活性のグラフ表示を示す。ＭＯＬＭ１３細胞は、ＦＭＳ様チロシンキナーゼ−３（ＦＬＴ３）遺伝子内縦列重複（ＩＴＤ）変異（ＦＬＴ３／ＩＴＤ）を含有する。ｘ軸は、抗体の対数濃度（μｇ  抗体／ｍｌ）を表し、ｙ軸は細胞障害の％を表す。相当数の細胞死が観察され、ＣＤ３３特異的ＢｓＡｂがＭＯＬＭ１３細胞を溶解しており、ＥＣ５０は２．４ｐＭであった。
【００３４】
【図５】図５  ＡＭＬに対する異種移植片マウスモデルにおける、例示的なＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖを用いた治療のインビボ有効性のグラフ表示を示す。ホタルルシフェラーゼ遺伝子を含有するＭＯＬＭ１３細胞を１００万個、全マウスに投与した。Ｘ軸はＭＯＬＭ１３注入後の時間（日単位）を表し、ｙ軸はＭＯＬＭ１３細胞量の指標としてのルシフェラーゼ遺伝子発現の「全領域フラックス（ｔｏｔａｌ  ａｒｅａ  ｆｌｕｘ）」を表す。下向き三角形は、ＣＤ３３特異的なＢｓＡｂ注射のタイミングを示し、上向き三角形は、ＡＴＣ注射のタイミングを示す。
【００３５】
【図６】図６  進行型ＡＭＬに対する異種移植片マウスモデルにおける、例示的なＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖのインビボ有効性のグラフ表示を示す。ホタルルシフェラーゼ遺伝子を含有するＭＯＬＭ１３細胞を接種した後、１０００万個のヒトＡＴＣを３週間、毎週静脈内注射してマウスを治療した。その後の４週間はＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖを２週間に１回注射した。Ｘ軸はＭＯＬＭ１３注入後の時間（日単位）を表し、ｙ軸はＭＯＬＭ１３細胞量の指標としてのルシフェラーゼ遺伝子発現の「全領域フラックス（ｔｏｔａｌ  ａｒｅａ  ｆｌｕｘ）」を表す。下向き三角形は、ＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖ注射のタイミングを示し、上向き三角形は、ＡＴＣ注射のタイミングを示す。
【００３６】
【図７】図７  ＡＭＬに対する異種移植片マウスモデルにおける、例示的なＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖの三つの異なる投与量のインビボ有効性のグラフ表示を示す。ホタルルシフェラーゼ遺伝子を含有するＭＯＬＭ１３細胞を１００万個、全マウスに投与した。１００μｇ、３０μｇ、および１０μｇのＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖを用いてマウスを治療した。Ｘ軸はＭＯＬＭ１３注入後の時間（日単位）を表し、ｙ軸はＭＯＬＭ１３細胞量の指標としてのルシフェラーゼ遺伝子発現の「全領域フラックス（ｔｏｔａｌ  ａｒｅａ  ｆｌｕｘ）」を表す。下向き三角形は、ＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖ注射のタイミングを示し、上向き三角形は、ＡＴＣ注射のタイミングを示す。
【００３７】
【図８Ａ】図８Ａおよび図８Ｂ  ヒトＡＭＬに対する異種移植片マウスモデルで確立された、Ｔ細胞介在性排除における、例示的ＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖのインビボ効力を示す。メスのＮＳＧマウスに、１００万個のＭＯＬＭ１３  ＡＭＬ細胞を静脈内移植した。腫瘍増殖は、ｐ／ｓの全フラックスとして表される生体発光イメージングによりモニタリングされた。白血病移植後７日で開始し、活性化Ｔ細胞（ＡＴＣ、５〜１０００万量／投与）を、週に１回、３週間注射した。例示的なＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖの投与量を漸減し（１００μｇ〜０．１μｇ）、各Ｔ細胞投与の１日前および１日後に投与した。インビボでのＴ細胞生存をサポートするために、１０００ＩＵのＩＬ２を、週２〜３回、皮下注射した。二つの独立した実験からのデータをプールした。図８Ａ  生体発光イメージングによりモニタリングされた腫瘍増殖を示す。図８Ｂ  生物発光イメージング解析の結果の図（ｐ／ｓの全フラックスとして表される）を示す。
【図８Ｂ】同上。
【００３８】
【図９】図９  インビトロでのヒトＡＭＬ細胞に対する、二価ヘテロ二量体ＩｇＧプラットフォーム（ヘテロ二量体）と比較した、四価の例示的ＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖ（ＢｓＡｂ）の効力を示す。ヒトＡＭＬ細胞株における、ＣＤ３３（＋）に対する四価のＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖと、二価ヘテロ二量体の存在下でのＴＤＣＣを、４時間のクロム放出アッセイにより評価した。
【００３９】
【図１０】図１０  二価ヘテロ二量体ＩｇＧプラットフォーム（ヘテロ二量体）と比較した、四価の例示的ＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖ（ＢｓＡｂ）のインビボ有効性を示す。メスのＮＳＧマウスに、１００万個のＭＯＬＭ１３  ＡＭＬ細胞を静脈内移植した。腫瘍増殖は、生体発光イメージングによりモニタリングされ、ｐ／ｓの全フラックスとして表された。活性化Ｔ細胞（ＡＴＣ、５〜１０００万量／投与）を、白血病移植後７日で開始して３週間、週に１回注射した。例示的なＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖ（ＢｓＡｂ）またはヘテロ二量体ＢｓＡｂ（各々０．１μｇ）を、各Ｔ細胞投与の１日前および１日後に注射した。インビボでのＴ細胞の持続性をサポートするために、１０００ＩＵのＩＬ２を週２回皮下投与した。
【００４０】
【図１１】図１１  ＩＬ２とＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖ（ＢｓＡｂ）再誘導化Ｔ細胞の併用療法のインビボ有効性を示す。メスのＮＳＧマウスに、１００万個のＭＯＬＭ１３  ＡＭＬ細胞を静脈内移植した。腫瘍増殖は、ｐ／ｓの全フラックスとして表される生体発光イメージングによりモニタリングされた。白血病移植後７日で開始し、活性化Ｔ細胞（ＡＴＣ、５〜１０００万量／投与）を、週に１回、３週間注射した。ＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖ（１０μｇ）を、各Ｔ細胞投与の１日前および１日後に投与した。１群のＡＴＣ／ＢｓＡｂは、ＩＬ２（１０００ＩＵ、皮下）を週に２〜３回投与され、「ＩＬ２無し」群は、ＩＬ２投与を全く受けなかった。
【００４１】
【図１２Ａ】図１２Ａ、図１２Ｂ、および図１２Ｃ  リンパ腫モデルのＣＤ３３（＋）ＡＭＬにおける、例示的ＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖ（ＢｓＡｂ）の有効性を示す。図１２ＡメスのＮＳＧマウスに、３００万個のＭＯＬＭ１３  ＡＭＬ細胞を皮下移植した。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）（１０００〜３０００万個／投与）を、白血病注射後７日から始まり、４週間、週に１回注射した。例示的なＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖ（ＢｓＡｂ）（最初の３週間は５０μｇ／投与、残りの週は１５０μｇ／投与）を、各ＰＢＭＣ投与の１日前および１日後に注射した。ＩＬ２はマウスに投与されなかった。図１２Ｂおよび図１２Ｃ  メスのＮＳＧマウスに、２００万個のＴＨＰ１または１００万個のＨＬ６０  ＡＭＬ細胞を皮下移植した。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）（１０００万個／投与）を、白血病注射後７日から始まり、４週間、週に１回注射した。例示的なＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖ（ＢｓＡｂ）（１００μｇ／投与）を、各ＰＢＭＣ投与の１日前および１日後に注射した。ＩＬ２はマウスに投与されなかった。
【図１２Ｂ】同上。
【図１２Ｃ】同上。
【００４２】
【図１３】図１３  例示的ＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖ（ＢｓＡｂ）のＣＤ３３およびＣＤ３に対する結合特性を示す。（Ａ）ｈＭ１９５（抗ＣＤ３３  ＩｇＧ）、ヘテロ二量体ＢｓＡｂ、および例示的ＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖの投与量を減少させて使用して、４℃で３０分間、ＭＯＬＭ１３細胞と反応させた。細胞を洗浄し、蛍光色素複合体化二次抗体を用いて免疫染色し、フローサイトメトリーにより平均蛍光強度（ＭＦＩ）を分析した。（Ｂ）１μｇ／ｍｌのｈＭ１９５（抗ＣＤ３３  ＩｇＧ）、ヘテロ二量体ＩｇＧ  ＢｓＡｂ、および例示的ＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖを用いて、３７℃または４℃にて、３０分間、４時間または２４時間、ＭＯＬＭ１３細胞と反応させた。細胞を洗浄し、蛍光色素複合体化二次抗体を用いて４℃で免疫染色した。結合していない抗体を洗浄した後、ＭＦＩをフローサイトメトリーにより解析した。（Ａ）ｈＯＫＴ３（抗ＣＤ３  ＩｇＧ）、ヘテロ二量体ＢｓＡｂ、および例示的ＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖの投与量を減少させて、４℃で３０分間、活性化Ｔ細胞と反応させた。細胞を洗浄し、蛍光色素複合体化二次抗体を用いて免疫染色し、フローサイトメトリーにより測定されたＭＦＩを分析した。
【００４３】
【図１４】図１４  ＣＤ３４（＋）ＣＤ３８（−）造血幹細胞を用いた例示的ＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖの交差反応性を示す。（Ａ）臍帯血単核細胞を、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ密度勾配遠心分離法を使用して精製し、抗ヒトのＣＤ３抗体、ＣＤ１９抗体、ＣＤ３８抗体、ＣＤ３４抗体、および例示的ＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖで免疫染色した。分析からＴ細胞およびＢ細胞を除外するために、細胞はＣＤ３（−）およびＣＤ１９（−）の群でゲーティングされた。異なる細胞群（ラベル１〜６）を、例示的ＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖへの結合に関して評価した。（Ｂ）造血幹細胞および前駆細胞は、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  ＣＤ３４マイクロビーズを使用して臍帯血単核細胞から単離した。（Ｃ）例示的ＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖの存在下での、精製ＣＤ３４＋細胞およびＭＯＬＭ１３  ＡＭＬ細胞に対するＡＴＣによるＴＤＣＣ（Ｅ：Ｔ比＝１０）は、クロム放出アッセイを使用して検証された。
【発明を実施するための形態】
【００４４】
定義
以下の説明において、組み換えＤＮＡ技術および免疫学で使用される多くの用語が数多く利用されている。本明細書および請求の範囲の明白で一貫性のある理解を提供するために、かかる用語に与えられる範囲を含め、以下の定義を提示する。
【００４５】
投与：本明細書で使用される場合、「投与」という用語は典型的には、組成物であるか、または組成物中に含まれる剤の送達を実現するための、対象またはシステムへの組成物の投与を指す。当業者であれば、適切な状況で、例えばヒトなどの対象への投与に利用されうる様々な経路を認識するであろう。例えば、一部の実施形態では、投与は、眼、口、非経口、局所などでありうる。一部の実施形態では、投与は、気管支（例えば、気管支吸入による）、頬測、皮膚（例えば、皮膚、皮内、皮間、経皮などへの局所適用のうちの１か所または複数個所であってもよく、または含んでもよい）、腸内、動脈内、皮内、胃内、髄内、筋肉内、鼻内、腹腔内、くも膜下腔内、静脈内、脳室内、特定の臓器内（例えば肝内）、粘膜、鼻、口、直腸、皮下、舌下、局所、気管（例えば気管内吸入による）、膣、硝子体であってもよい。一部の実施形態では、投与は、単回投与のみを含んでもよい。一部の実施形態では、投与は、規定数の用量の投与を含んでもよい。一部の実施形態では、投与は、間欠投与（例えば時間で分けて複数回の投与）および／または周期的投与（例えば共通の時間で分けて個別投与）を含んでもよい。一部の実施形態において、投与は、少なくとも選択された期間の連続投与（例えば、かん流）を含んでもよい。
【００４６】
アフィニティ：当該技術分野で公知であるように、「アフィニティ」は、特定のリガンド（例えばエピトープ）がそのパートナー（例えば抗体）に結合した場合の結合力の尺度である。アフィニティは、様々な方法で測定することができる。一部の実施形態において、アフィニティは、定量的アッセイにより測定される。こうした一部の実施形態において、結合パートナーの濃度は、生理学的条件を模倣するように、リガンド濃度を超過して固定されてもよい。別の方法として、または加えて、一部の実施形態では、結合パートナーの濃度、及び／またはリガンドの濃度を変化させてもよい。こうした一部の実施形態において、アフィニティは、同等条件（例えば、濃度）下で、基準に対して比較されてもよい。
【００４７】
「アミノ酸」：本明細書で用いられる場合、「アミノ酸」という用語は、その最も広い意味で、例えば一つまたは複数のペプチド結合の形成を介して、ポリペプチド鎖に組み込まれ得る任意の化合物及び／または物質を意味する。一部の実施形態では、アミノ酸は、一般構造Ｈ２Ｎ−Ｃ（Ｈ）（Ｒ）−ＣＯＯＨを有する。一部の実施形態では、アミノ酸は、天然に存在するアミノ酸である。一部の実施形態では、アミノ酸は非天然アミノ酸であり、一部の実施形態では、アミノ酸はＤ−アミノ酸であり、一部の実施形態では、アミノ酸はＬ−アミノ酸である。「標準アミノ酸」は、天然に存在するペプチドに通常見られる２０個の標準Ｌ−アミノ酸のいずれかを意味する。「非標準アミノ酸」は、合成して調製されるか天然源から得られるかにかかわらず、標準アミノ酸以外の任意のアミノ酸を意味する。一部の実施形態では、アミノ酸（ポリペプチドにおいてカルボキシル末端及び／またはアミノ末端のアミノ酸を含む）は、上記の一般的な構造と比べて構造修飾を含み得る。例えば、一部の実施形態では、アミノ酸は一般的な構造と比較して、メチル化、アミド化、アセチル化、ＰＥＧ化、グリコシル化、リン酸化、および／または置換（例えば、アミノ基、カルボン酸基、一つまたは複数のプロトン、および／またはヒドロキシル基の置換）によって修飾され得る。一部の実施形態では、こうした修飾により、例えば、修飾されたアミノ酸を含むポリペプチドの循環半減期が、未修飾の別の同一アミノ酸を含むポリペプチドと比較して変化し得る。一部の実施形態では、こうした修飾により、修飾されたアミノ酸を含むポリペプチドの関連活性が、未修飾の別の同一アミノ酸を含むポリペプチドと比較して有意には変化しない。文脈から明らかになるように、一部の実施形態では、「アミノ酸」という用語を使用して遊離アミノ酸を指す場合があり、一部の実施形態では、これを使用してポリペプチド内のアミノ酸残基を指す場合がある。
【００４８】
動物：本明細書において使用される場合、「動物」という用語は、動物界のいずれかを指す。一部の実施形態において、「動物」とは、いずれかの性別、および任意の成長段階のヒトを指す。一部の実施形態において、「動物」とは、いずれかの成長段階の非ヒト動物を指す。特定の実施形態において、非ヒト動物は、哺乳類（例えば、げっ歯類、マウス、ラット、ウサギ、サル、イヌ、ネコ、ヒツジ、ウシ、霊長類、及び／又はブタ）である。一部の実施形態において、動物は、哺乳類、鳥類、爬虫類、両生類、魚類、昆虫、及び／又は蠕虫を含むが、これらに限定されない。特定の実施形態において、動物は、ＤＶの感染に感受性である。一部の実施形態において、動物は、トランスジェニック動物、遺伝子操作された動物、及び／又はクローンであってもよい。
【００４９】
抗体：本明細書で用いられる場合、用語「抗体」は、特定の標的抗原への特異的結合を付与するのに十分な標準免疫グロブリン配列エレメントを含むポリペプチドを意味する。当該技術分野で公知であるように、天然に生成されたインタクトな抗体は、およそ１５０  ｋＤの４量体物質であり、該４量体は二つの同一の重鎖ポリペプチド（各約５０  ｋＤ）と二つの同一の軽鎖ポリペプチド（各約２５  ｋＤ）とから構成され、これらは相互に会合して、「Ｙ字型」構造と一般的に称されるものになる。各重鎖は、少なくとも四つのドメイン（各約１１０個のアミノ酸長）から構成され、該四つのドメインは、アミノ末端可変（ＶＨ）ドメイン（Ｙ字構造の端部に位置する）と、それに続く三つの定常ドメイン：ＣＨ１、ＣＨ２、及びカルボキシ末端ＣＨ３（Ｙ字軸の基部に位置する）とからなる。「スイッチ」として知られる短い領域は、重鎖可変領域と定常領域とを接続している。「ヒンジ」は、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを抗体の残りの部分に接続している。このヒンジ領域の二つのジスルフィド結合が、インタクトな抗体において、二つの重鎖ポリペプチドを相互に接続している。各軽鎖は、アミノ末端可変（ＶＬ）ドメインと、それに続くカルボキシ末端定常（ＣＬ）ドメインの二つのドメインから構成され、別の「スイッチ」により相互に離間している。インタクトな抗体４量体は、二つの重鎖−軽鎖２量体から構成され、そこで、その重鎖と軽鎖は単一のジスルフィド結合により互いに連結し、他の二つのジスルフィド結合が重鎖ヒンジ領域を互いに接続し、したがって２量体が相互に接続し、４量体を形成する。また、天然に生成された抗体は、通例ＣＨ２ドメインでグリコシル化される。天然抗体における各ドメインは、圧縮逆平行のベータバレル（ｃｏｍｐｒｅｓｓｅｄ  ａｎｔｉｐａｒａｌｌｅｌ  ｂｅｔａ  ｂａｒｒｅｌ）で互いに束ねられた二つのベータシート（例えば、３本鎖シート、４本鎖シート、または５本鎖シート）から形成された「免疫グロブリンフォールド」により特徴付けられる構造を有する。各可変ドメインは、「相補性決定領域」として知られる三つの超可変ループ（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）と、四つのややインバリアントな「フレームワーク」領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４）とを含む。天然抗体がフォールドする際、ＦＲ領域はドメインに構造的フレームワークを提供するベータシートを形成し、重鎖及び軽鎖の両方に由来するＣＤＲループ領域が３次元空間で合わせられ、その結果、Ｙ字構造の尖端部に位置する単一の超可変抗原結合サイトを作る。天然抗体のＦｃ領域は、補体系の因子に結合し、そしてまた例えば細胞障害活性を介在するエフェクター細胞を含むエフェクター細胞上の受容体にも結合する。当該技術分野で知られているように、Ｆｃ受容体に対するＦｃ領域の親和性および／またはその他の結合性は、グリコシル化またはその他の修飾を介して調節されることができる。一部の実施形態では、本開示に従い作製される、および／または利用される抗体は、修飾された、または改変されたかかるグリコシル化を伴うＦｃドメインを含む、グリコシル化Ｆｃドメインを含む。本開示では、特定の実施形態において、天然抗体に見られるように十分な免疫グロブリンドメイン配列を含む任意のポリペプチドまたはポリペプチドの複合体は、かかるポリペプチドが天然に生成された（例えば、抗原に反応する生物体によって生成された）ものか、あるいは遺伝子組み換え操作、化学合成、または他の人為的システムもしくは方法によって生成されたものかにかかわらず、「抗体」として称され、及び／または使用され得る。一部の実施形態では、抗体はポリクローナルであり、一部の実施形態では、抗体はモノクローナルである。一部の実施形態では、抗体は、マウス抗体、ウサギ抗体、霊長類抗体、またはヒト抗体の特徴を示す定常領域配列を有する。「抗体」という用語は、二重特異性抗体、キメラ抗体、およびその他の利用可能な形式も含む。一部の実施形態において、本明細書に記載される場合、抗体は、全長イムノグロブリン分子（例えばＩｇＧ抗体）、抗体断片のようなイムノグロブリン分子の免疫的に活性な（すなわち特異的に結合する）部分であり、またはこれを含む。抗体断片は、例えば、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｆｖ、及びこれに類するものなどの抗体の一部分である。一部の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ−ｓｃＦｖの形式である。構造に関わらず、抗体断片は、完全な抗体により認識される抗原と同じ抗原に結合する。例えば、Ｍ１９５モノクローナル抗体断片は、Ｍ１９５により認識されるエピトープと結合する。「抗体断片」という用語はさらに、抗体の抗原結合構造を含み、特定の抗原に結合することにより抗体のように作用して複合体を形成する任意の合成タンパク質または遺伝子改変タンパク質を含む。例えば抗体断片としては、可変領域からなる単離断片、重鎖または軽鎖の可変領域からなる「Ｆｖ」断片、軽鎖可変領域と重鎖可変領域がペプチドリンカーにより連結されている組換え一本鎖ポリペプチド分子（ｓｃＦｖタンパク質）、および超可変領域であるか、または超可変領域を模倣するアミノ酸残基からなる最小認識単位が挙げられる。たとえば一部の実施形態では、抗体断片は、親抗体の重鎖または軽鎖中に存在する相補性決定領域（ＣＤＲ）のうちの一つまたは複数、一部の実施形態ではすべてを含有する。一部の実施形態では、抗体は、天然に生成された場合に有するはずである共有結合修飾（例えば、グリカンの結合など）を欠く場合がある。一部の実施形態では、抗体は、共有結合修飾（例えば、グリカン、ペイロード（例えば、検出可能部分、治療部分、触媒部分など）、または他のペンダント基（例えば、ポリエチレングリコールなど）の結合）を含み得る。
【００５０】
抗体剤：本明細書において使用される場合、「抗体剤」という用語は、特定の抗原に特異的に結合する剤を指す。一部の実施形態では、当該用語は、特異的結合を与えるために充分なイムノグロブリン構造要素を含む任意のポリペプチドまたはポリペプチド複合体を包含する。例示的な抗体剤としては、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体が挙げられるが、これに限定されない。一部の実施形態では、抗体剤は、マウス抗体、ウサギ抗体、霊長類抗体、またはヒト抗体の特徴である定常領域配列を一つまたは複数含有してもよい。一部の実施形態では、抗体剤は、当該技術分野で知られるように、ヒト化、霊長類化、キメラ化される配列要素を一つまたは複数含んでもよい。多くの実施形態では、「抗体剤」という用語を使用して、代替的な提示における抗体の構造的特徴および機能的特徴を利用するための、当分野の公知の、もしくは開発された構築体または形式のうちの一つまたは複数を指す。例えば、本開示に従って利用される抗体剤の実施形態は、完全なＩｇＡ抗体、ＩｇＧ抗体、ＩｇＥ抗体またはＩｇＭ抗体、二重特異性抗体または多重特異性抗体（例えばＺｙｂｏｄｉｅｓ（登録商標））、例えばＦａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ’断片、Ｆｄ断片、および単離ＣＤＲ、またはそれらの組み合わせなどの抗体断片、一本鎖Ｆｖｓ、ポリペプチド−Ｆｃ融合体、単一ドメイン抗体（例えばＩｇＮＡＲまたはその断片などのサメ単一ドメイン抗体）、ラクダ科抗体（ｃａｍｅｌｏｉｄ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）、マスク化抗体（例えばＰｒｏｂｏｄｉｅｓ（登録商標））、Ｓｍａｌｌ  Ｍｏｄｕｌａｒ  ＩｍｍｕｎｏＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（ＳＭＩＰｓＴＭ）、一本鎖またはタンデムダイアボディ（ＴａｎｄＡｂ（登録商標））、ＶＨＨ、Ａｎｔｉｃａｌｉｎｓ（登録商標）、Ｎａｎｏｂｏｄｉｅｓ（登録商標）、ミニボディ、ＢｉＴＥ（登録商標）、アンキリンリピートタンパク質またはＤＡＲＰＩＮｓ（登録商標）、Ａｖｉｍｅｒｓ（登録商標）、ＤＡＲＴｓ、ＴＣＲ様抗体、Ａｄｎｅｃｔｉｎｓ（登録商標）、Ａｆｆｉｌｉｎｓ（登録商標）、Ｔｒａｎｓ−ｂｏｄｉｅｓ（登録商標）、Ａｆｆｉｂｏｄｉｅｓ（登録商標）、ＴｒｉｍｅｒＸ（登録商標）、ＭｉｃｒｏＰｒｏｔｅｉｎｓ、Ｆｙｎｏｍｅｒｓ（登録商標）、Ｃｅｎｔｙｒｉｎｓ（登録商標）、およびＫＡＬＢＩＴＯＲ（登録商標）から選択される形式のものがあげられるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、抗体は、天然に生成された場合に有するはずである共有結合修飾（例えば、グリカンの結合など）を欠く場合がある。一部の実施形態では、抗体は、共有結合修飾（例えば、グリカン、ペイロード（例えば、検出可能部分、治療部分、触媒部分など）、または他のペンダント基（例えば、ポリエチレングリコールなど）の結合）を含み得る。多くの実施形態において、抗体剤は、そのアミノ酸配列が、相補性決定領域（ＣＤＲ）として当分野の当業者に認識されている構造要素を一つ以上含有するポリペプチドであるか、又はそのポリペプチドを含有する。一部の実施形態において、抗体剤は、そのアミノ酸配列が、基準抗体中に存在しているものと実質的に同一なＣＤＲを少なくとも一つ（例えば、少なくとも一つの重鎖ＣＤＲ及び／又は少なくとも一つの軽鎖ＣＤＲ）含有するポリペプチドであるか、又はそのポリペプチドを含有する。一部の実施形態において、含有されるＣＤＲは、基準ＣＤＲと比較して、配列が同一であるか、又は１〜５個のアミノ酸置換を含有するかのいずれかの点で、基準ＣＤＲと実質的に同一である。一部の実施形態において、含有されるＣＤＲは、基準ＣＤＲと、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を示す点で、基準ＣＤＲと実質的に同一である。一部の実施形態において、含有されるＣＤＲは、基準ＣＤＲと、少なくとも９６％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を示す点で、基準ＣＤＲと実質的に同一である。一部の実施形態において、含有されるＣＤＲは、当該含有されるＣＤＲ内の少なくとも一つのアミノ酸が、基準ＣＤＲと比較して欠失している、付加されている、又は置換されているが、当該含有されるＣＤＲは、その他では基準ＣＤＲのアミノ酸配列と同一であるアミノ酸配列を有しているという点で、基準ＣＤＲと実質的に同一である。一部の実施形態において、含有されるＣＤＲは、当該含有されるＣＤＲ内の１〜５個のアミノ酸が、基準ＣＤＲと比較して欠失している、付加されている、又は置換されているが、当該含有されるＣＤＲは、その他では基準ＣＤＲのアミノ酸配列と同一であるアミノ酸配列を有しているという点で、基準ＣＤＲと実質的に同一である。一部の実施形態において、含有されるＣＤＲは、当該含有されるＣＤＲ内の少なくとも一つのアミノ酸が、基準ＣＤＲと比較して置換されているが、当該含有されるＣＤＲは、その他では基準ＣＤＲのアミノ酸配列と同一であるアミノ酸配列を有しているという点で、基準ＣＤＲと実質的に同一である。一部の実施形態において、含有されるＣＤＲは、当該含有されるＣＤＲ内の１〜５個のアミノ酸が、基準ＣＤＲと比較して欠失している、付加されている、又は置換されているが、当該含有されるＣＤＲは、その他では基準ＣＤＲのアミノ酸配列と同一であるアミノ酸配列を有しているという点で、基準ＣＤＲと実質的に同一である。一部の実施形態において、抗体剤は、そのアミノ酸配列がイムノグロブリン可変ドメインとして当分野の当業者に認識されている構造要素を含有しているポリペプチドであるか、又はそのポリペプチドを含有する。一部の実施形態において、抗体剤は、イムノグロブリン結合ドメインに対し相同であるか、又は大部分が相同である結合ドメインを有するポリペプチドタンパク質である。
【００５１】
癌：「癌」、「悪性腫瘍」、「新生物」、「腫瘍」、および「癌腫」という用語は、比較的異常な、非制御な、および／または自律的な増殖を呈し、それによる細胞増殖制御の重大な消失を特徴とする異常増殖の表現型を呈する細胞を指すために本明細書において使用される。一部の実施形態では、腫瘍は、前癌性（例えば良性）、悪性、前転移性、転移性、および／または非転移性の細胞であってもよく、またはこれを含んでもよい。本開示は、ある癌を具体的に特定し、その癌に対し、本開示の教示が特に関連し得る。一部の実施形態では、関連する癌は、固形腫瘍を特徴とし得る。一部の実施形態では、関連する癌は、血液腫瘍を特徴とし得る。概して、当該技術分野で公知の様々なタイプの癌の例としては例えば、白血病、リンパ腫（ホジキンおよび非ホジキン）、骨髄腫および骨髄増殖性障害を含む造血系の癌；肉腫、黒色腫、腺腫、固形組織の癌、口、咽喉、喉頭および肺の扁平上皮細胞癌、肝癌、たとえば前立腺癌、子宮頸癌、膀胱癌、子宮および子宮内膜の癌、ならびに腎細胞癌などの泌尿生殖器の癌、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、皮膚黒色腫または眼内黒色腫、内分泌系の癌、甲状腺の癌、副甲状腺の癌、頭頚部癌、乳癌、消化管癌、ならびに神経系の癌、例えば乳頭腫などの良性病変、およびこれらに類するものが挙げられる。一部の実施形態では、関連する造血系の癌としては、急性骨髄性白血病、混合型白血病、骨髄異形成症候群、慢性骨髄単球性白血病、慢性骨髄性白血病の骨髄性急性転化、および急性リンパ芽球性白血病が挙げられる。
【００５２】
キレーター：例えばＤＴＰＡ、ＤＯＴＡ、ベンジル−ＤＯＴＡ、ＴＥＴＡ、またはＮＯＴＡなどのキレートは、複合体中にあるものを含む様々な状況のいずれかで利用され得る。例えばＭｎ、ＦｅおよびＧｄなどの非放射性金属との複合体の形成時、本開示のＢｓＡｂとともに使用される場合には同一のキレーターをＭＲＩに使用することができる。ＮＯＴＡ（１，４，７−トリアザ−シクロノナン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’−トリ酢酸）、ＤＯＴＡ、ベンジル−ＤＯＴＡ、およびＴＥＴＡ（ｐ−ブロモアセトアミド−ベンジル−テトラエチルアミン四酢酸）などの大環状キレーターは、様々な金属および放射性金属、それぞれ特にＧａ、ＹおよびＣｕの放射性核種を用いて使用する。
【００５３】
治療剤：本明細書において使用される「化学療法剤」という用語は、一つまたは複数のアポトーシス促進性剤、細胞増殖抑制剤および／または細胞障害剤を指す、当分野で理解される意味を有し、例えば、望ましくない細胞増殖と関連する一つまたは複数の疾患、障害または状態の治療における使用に利用される、および／または推奨される剤が具体的に挙げられる。多くの実施形態では、化学療法剤は癌の治療に有用である。一部の実施形態では、化学療法剤は、一つもしくは複数のアルキル化剤、一つもしくは複数のアントラサイクリン類、一つもしくは複数の細胞骨格破壊剤（例えば微小管標的化剤、例えばタキサン類、マイタンシン、およびそのアナログ）、一つもしくは複数のエポチロン類、一つもしくは複数のヒストンデアセチラーゼ阻害剤ＨＤＡＣ）、一つもしくは複数のトポイソメラーゼ阻害剤（例えばトポイソメラーゼＩおよび／またはトポイソメラーゼＩＩの阻害剤）、一つもしくは複数のキナーゼ阻害剤、一つもしくは複数のヌクレオチドアナログまたはヌクレオチド前駆体アナログ、一つもしくは複数のペプチド抗生物質、一つもしくは複数のプラチナ系剤、一つもしくは複数のレチノイド類、一つもしくは複数のビンカアルカロイド類、ならびに／または以下のうちの一つもしくは複数の一つまたは複数のアナログ（すなわち関連抗増殖活性を共有するもの）であってもよく、またはそれを含有してもよい。ｈｔｔｐ：／／ｅｎ．ｗｉｋｉｐｅｄｉａ．ｏｒｇ／ｗｉｋｉ／Ｌｉｓｔ＿ｏｆ＿ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ＿ａｇｅｎｔｓ−Ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅｓ一部の特定の実施形態では、化学療法剤は、アクチノマイシン（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、全トランスレチノイン酸（Ａｌｌ−ｔｒａｎｓ  ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）、オーイリスタチン（Ａｕｉｒｉｓｔａｔｉｎ）、アザシチジン（Ａｚａｃｉｔｉｄｉｎｅ）、アザチオプリン（Ａｚａｔｈｉｏｐｒｉｎｅ）、ブレオマイシン（Ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ）、ボルテゾミブ（Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ）、カルボプラチン（Ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ）、カペシタビン（Ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）、シスプラチン（Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）、クロラムブシル（Ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）、シクロホスファミド（Ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、クルクミン（Ｃｕｒｃｕｍｉｎ）、シタラビン（Ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ）、ダウノルビシン（Ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ドセタキセル（Ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）、ドキシフルリジン（Ｄｏｘｉｆｌｕｒｉｄｉｎｅ）、ドキソルビシン（Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）、エピルビシン（Ｅｐｉｒｕｂｉｃｉｎ）、エポチロン（Ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅ）、エトポシド（Ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）、フルオロウラシル（Ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ）、ゲムシタビン（Ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）、ヒドロキシウレア（Ｈｙｄｒｏｘｙｕｒｅａ）、イダルビシン（Ｉｄａｒｕｂｉｃｉｎ）、イマチニブ（Ｉｍａｔｉｎｉｂ）、イリノテカン（Ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ）、マイタンシン（Ｍａｙｔａｎｓｉｎｅ）および／またはそのアナログ（例えばＤＭ１）、メクロレタミン（Ｍｅｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ）、メルカプトプリン（Ｍｅｒｃａｐｔｏｐｕｒｉｎｅ）、メトトレキサート（Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａ��ｅ）、ミトキサントロン（Ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ）、マイタンシノイド（Ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄ）、オキサリプラチン（Ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ）、パクリタキセル（Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、ペメトレキセド（Ｐｅｍｅｔｒｅｘｅｄ）、テニポシド（Ｔｅｎｉｐｏｓｉｄｅ）、チオグアニン（Ｔｉｏｇｕａｎｉｎｅ）、トポテカン（Ｔｏｐｏｔｅｃａｎ）、バルルビシン（Ｖａｌｒｕｂｉｃｉｎ）、ビンブラスチン（Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ）、ビンクリスチン（Ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ）、ビンデシン（Ｖｉｎｄｅｓｉｎｅ）、ビノレルビン（Ｖｉｎｏｒｅｌｂｉｎｅ）またはそれらの組み合わせのうちの１種または複数種であってもよく、または含んでもよい。一部の実施形態では、化学療法剤は、抗体−薬剤複合体を背景として利用されてもよい。一部の実施形態では、化学療法剤は、ｈＬＬ１−ドキソルビシン、ｈＲＳ７−ＳＮ−３８、ｈＭＮ−１４−ＳＮ−３８、ｈＬＬ２−ＳＮ−３８、ｈＡ２０−ＳＮ−３８、ｈＰＡＭ４−ＳＮ−３８、ｈＬＬ１−ＳＮ−３８、ｈＲＳ７−Ｐｒｏ−２−Ｐ−Ｄｏｘ、ｈＭＮ−１４−Ｐｒｏ−２−Ｐ−Ｄｏｘ、ｈＬＬ２−Ｐｒｏ−２−Ｐ−Ｄｏｘ、ｈＡ２０−Ｐｒｏ−２−Ｐ−Ｄｏｘ、ｈＰＡＭ４−Ｐｒｏ−２−Ｐ−Ｄｏｘ、ｈＬＬ１−Ｐｒｏ−２−Ｐ−Ｄｏｘ、Ｐ４／Ｄ１０−ドキソルビシン、ゲムツズマブ  オゾガミシン（ｇｅｍｔｕｚｕｍａｂ  ｏｚｏｇａｍｉｃｉｎ）、ブレンツキシマブ  ベドチン（ｂｒｅｎｔｕｘｉｍａｂ  ｖｅｄｏｔｉｎ）、トラスツズマブ  エムタンシン（ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ  ｅｍｔａｎｓｉｎｅ）、イノツズマブ  オゾガミシン（ｉｎｏｔｕｚｕｍａｂ  ｏｚｏｇａｍｉｃｉｎ）、グレムバツモマブ  ベドチン（ｇｌｅｍｂａｔｕｍｏｍａｂ  ｖｅｄｏｔｉｎ）、ＳＡＲ３４１９、ＳＡＲ５６６６５８、ＢＩＩＢ０１５、ＢＴ０６２、ＳＧＮ−７５、ＳＧＮ−ＣＤ１９Ａ、ＡＭＧ−１７２、ＡＭＧ−５９５、ＢＡＹ−９４−９３４３、ＡＳＧ−５ＭＥ、ＡＳＧ−２２ＭＥ、ＡＳＧ−１６Ｍ８Ｆ、ＭＤＸ−１２０３、ＭＬＮ−０２６４、抗ＰＳＭＡ  ＡＤＣ、ＲＧ−７４５０、ＲＧ−７４５８、ＲＧ−７５９３、ＲＧ−７５９６、ＲＧ−７５９８、ＲＧ−７５９９、ＲＧ−７６００、ＲＧ−７６３６、ＡＢＴ−４１４、ＩＭＧＮ−８５３、ＩＭＧＮ−５２９、ボルセツズマブ  マフォドチン（ｖｏｒｓｅｔｕｚｕｍａｂ  ｍａｆｏｄｏｔｉｎ）、およびロルボツズマブ  メルタンシン（ｌｏｒｖｏｔｕｚｕｍａｂ  ｍｅｒｔａｎｓｉｎｅ）からなる群から選択される抗体−薬剤複合体中に存在するものである。一部の実施形態では、化学療法剤は、Ｇｏｖｉｎｄａｎら、ＴｈｅＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＷｏｒｌｄＪＯＵＲＮＡＬ  １０：２０７０−２０８９，２０１０のうちの一つまたは複数に記載され、または検討される抗体−薬剤複合体中で利用されるとして記載されるものであってもよい。一部の実施形態では、ファルネシル−チオサリチル酸（ＦＴＳ）、４−（４−クロロ−２−メチルフェノキシ）−Ｎ−ヒドロキシブタンアミド（ＣＭＨ）、エストラジオール（Ｅ２）、テトラメトキシスチルベン（ＴＭＳ）、δ−トカトリエノール、サリノマイシンまたはクルクミンのうちの一つまたは複数であってもよく、または含有してもよい。
【００５４】
キメラ抗体：本明細書において使用される場合、そのアミノ酸配列が、第一の種に存在するＶＨおよびＶＬの領域配列、ならびに第一の種とは異なる第二の種に存在する定常領域配列を含む抗体を指す。多くの実施形態において、キメラ抗体は、ヒト定常領域に連結されたマウスＶＨ及びＶＬ領域を有している。一部の実施形態において、非ヒト定常領域（例えば、マウス定常領域）に連結されたヒトＶＨ領域とＶＬ領域を伴う抗体は、「逆キメラ抗体」と呼称される。
【００５５】
同等：本明細書で使用される場合、「同等」という用語は、互いに同一ではない場合があるが、比較を可能とするのに充分な類似性があり、それにより観察された差異または類似性に基づき当業者が合理的に結論を下し得ると認識する、二つ以上の剤、実体、状況、条件群などを指す。一部の実施形態では、条件、状況、個体または群の同等の組み合わせは、複数の実質的に同一の特性と、一つまたは少数の変化した特性を特徴とする。当分野の当業者であれば、文脈において、二つ以上のかかる作用剤、物質、状況、条件群などが同等と見なされるためには、任意の所与の環境下で、どの程度の同一性が必要とされるかを理解するであろう。例えば当業者であれば、状況、個体または群の異なる組み合わせの下、またはそれらを用いて取得された結果における差異、または観察された現象における差異が、変化したそれら特性における変動により引き起こされたという合理的な結論、またはその変動の指標であるという合理的な結論を保証するのに充分な数およびタイプの実質的に同一の特性により特徴付けられる場合に、状況、個体または群の組み合わせが、互いに同等であると認識するであろう。
【００５６】
「複合体」：一部の実施形態では、提供される抗体は、複合体で利用される。一部の特定の実施形態では、ＤＴＰＡ、ＤＯＴＡ、ベンジル−ＤＯＴＡ、ＴＥＴＡまたはＮＯＴＡまたは適切なペプチドなどのキレーターは、例えば蛍光分子、または重金属もしくは放射性核種といった細胞障害剤などの検出用標識と複合体化されることができる。例えば治療上有用な免疫複合体は、光反応性の剤または色素を抗体融合ポリペプチドに複合体化させることにより取得することができる。蛍光色素などの蛍光組成物、ならびに可視光に感受性の例えばポルフィリンなどの色素または色原体を使用して、適切な光を病変部位に誘導することにより、病変部位を検出および治療する。治療において、この治療法は光線照射法、光線療法、または光線力学的療法（Ｊｏｒｉら（編），ＰＨＯＴＯＤＹＮＡＭＩＣ  ＴＨＥＲＡＰＹ  ＯＦ  ＴＵＭＯＲＳ  ＡＮＤ  ＯＴＨＥＲ  ＤＩＳＥＡＳＥＳ（Ｌｉｂｒｅｒｉａ  Ｐｒｏｇｅｔｔｏ  １９８５）；ｖａｎ  ｄｅｎ  Ｂｅｒｇｈ，Ｃｈｅｍ．Ｂｒｉｔａｉｎ  ２２：４３０（１９８６））と称されている。さらにモノクローナル抗体を光反応性の色素と連結させる、光線療法が実現されている。Ｍｅｗら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３０：１４７３（１９８３）；ｉｄｅｍ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４５：４３８０（１９８５）；Ｏｓｅｒｏｆｆら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８３：８７４４（１９８６）；ｉｄｅｍ．，Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ．Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．４６：８３（１９８７）；Ｈａｓａｎら、Ｐｒｏｇ．Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｓ．２８８：４７１（１９８９）；Ｔａｔｓｕｔａら、Ｌａｓｅｒｓ  Ｓｕｒｇ．Ｍｅｄ．９：４２２（１９８９）；Ｐｅｌｅｇｒｉｎら、Ｃａｎｃｅｒ  ６７：２５２９（１９９１）。しかしながら、これら早期の研究には、特に抗体断片または小断片の使用を伴う内視鏡治療アプリケーションの使用が含まれていない。したがって本開示は、光反応性の剤または色素を含有する免疫複合体の治療用途を予期するものである。
【００５７】
〜に対応する：本明細書で使用される場合、「〜に対応する」という用語は、適切な参照化合物または組成物との比較を介して、化合物または組成物中の構造的要素の位置／同一性を指定するために使用されうる。例えば一部の実施形態では、ポリマー中の単量体残基（例えば、ポリペプチド中のアミノ酸残基、またはポリヌクレオチド中の核酸残基）は、適切な参照ポリマー中の残基に対応するものとして特定され得る。例えば当業者であれば、単純性を目的として、ポリペプチド中の残基は多くの場合、参照関連ポリペプチドに基づく正準ナンバリングシステムを使用して指定され、それによって、例えば１９０位の残基に「対応する」アミノ酸は、実際には必ずしも特定のアミノ酸鎖中の１９０番目のアミノ酸ではなく、むしろ参照ポリペプチド中の１９０番目に存在する残基に対応することを認識するであろう。当分野の当業者であれば、どのようにして「対応する」アミノ酸を特定するか、容易に認識するであろう。例えば当業者であれば、様々な配列アライメント戦略を知っているであろう。そのような戦略としては例えば、ＢＬＡＳＴ、ＣＳ−ＢＬＡＳＴ、ＣＵＳＡＳＷ＋＋、ＤＩＡＭＯＮＤ、ＦＡＳＴＡ、ＧＧＳＥＡＲＣＨ／ＧＬＳＥＡＲＣＨ、Ｇｅｎｏｏｇｌｅ、ＨＭＭＥＲ、ＨＨｐｒｅｄ／ＨＨｓｅａｒｃｈ、ＩＤＦ、Ｉｎｆｅｒｎａｌ、ＫＬＡＳＴ、ＵＳＥＡＲＣＨ、ｐａｒａｓａｉｌ、ＰＳＩ−ＢＬＡＳＴ、ＰＳＩ−Ｓｅａｒｃｈ、ＳｃａｌａＢＬＡＳＴ、Ｓｅｑｕｉｌａｂ、ＳＡＭ、ＳＳＥＡＲＣＨ、ＳＷＡＰＨＩ、ＳＷＡＰＨＩ−ＬＳ、ＳＷＩＭＭ、またはＳＷＩＰＥが挙げられ、それらを利用して、例えば本開示に従うポリペプチドおよび／または核酸中の「対応する」残基を特定することができる。
【００５８】
検出可能物質：本明細書で用いられる場合、用語「検出可能物質」は、検出可能な任意のエレメント、分子、官能基、化合物、断片、または部分構造を意味する。一部の実施形態では、検出可能物質は単独で提供されるか、または単独で利用される。一部の実施形態では、検出可能物質は、別の剤と併用して（例えば、合わせて）提供され、及び／または利用される。検出可能物質の例として、以下に限定されないが、種々のリガンド、放射性核種（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、１８Ｆ、１９Ｆ、３２Ｐ、３５Ｓ、１３５Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、６４Ｃｕ、１８７Ｒｅ、１１１Ｉｎ、９０Ｙ、９９ｍＴｃ、１７７Ｌｕ、８９Ｚｒなど）、蛍光染料（特定の例示的な蛍光染料に関しては以下を参照のこと）、化学発光剤（例えば、アクリジニウムエステル、安定化ジオキセタンなど）、生物発光剤、分光分解可能な無機蛍光半導体ナノ結晶（例えば、量子ドット）、金属ナノ粒子（例えば、金、銀、銅、白金など）、ナノクラスタ、常磁性金属イオン、酵素（特定の酵素の例に関しては以下を参照のこと）、比色ラベル（例えば、染料、金コロイドなど）、ビオチン、ジオキシゲニン（ｄｉｏｘｉｇｅｎｉｎ）、ハプテン、及びタンパク質（抗血清またはモノクローナル抗体が使用可能である）が挙げられる。
【００５９】
診断剤：診断剤は、投与された場合に検出可能である物質であるか、またはそれを含む。一部の実施形態では、診断剤は、抗体部分、すなわち本明細書に記載される抗体または抗体断片または小断片と複合体化されて投与され、そして抗原を含有する細胞の位置を示すことにより疾患を診断または検出するのに有用である。
【００６０】
剤型：当業者であれば、「剤型」という用語は、対象への投与のための活性剤（例えば、治療剤または診断剤）の物理的に個別の単位を指すために使用されうることを理解するであろう。典型的には、そのような各単位は、活性剤の所定量を含有する。一部の実施形態では、かかる量は、適正な集団に投与された際に、所望の結果または有益な結果と相関すると判定された投与レジメン（すなわち治療用投与レジメン）に従って投与するのに適切な単位用量（またはその全分率）である。当分野の当業者であれば、特定の対象に投与される治療用組成物または剤の総量が、１人以上の担当医により決定され、そして複数の剤型の投与を含み得ることを理解するであろう。
【００６１】
投与レジメン：当分野の当業者であれば、「投与レジメン」という用語は、対象に個々に、典型的には期間で分けて投与される単位用量（典型的には二つ以上）のセットを指すために使用され得ることを理解するであろう。一部の実施形態では、所与の治療剤は、一つまたは複数の投与を含み得る推奨投与レジメンを有する。一部の実施形態では、投与レジメンは、複数の投与を含み、それら各投与は、他の投与から時間で分けられている。一部の実施形態では、個々の投与は同じ長さの期間で互いに分けられている。一部の実施形態では、投与レジメンは、複数回の投与を含み、そして個々の投与を分ける少なくとも二つの異なる期間を含む。一部の実施形態では、投与レジメン内のすべての投与が、同一の単位用量である。一部の実施形態では、投与レジメン内の異なる投与は、異なる量である。一部の実施形態では、投与レジメンは、第一の投与量の第一の投与、次いで第一の投与量とは異なる第二の投与量の一つまたは複数の追加投与を含む。一部の実施形態では、投与レジメンは、第一の投与量の第一の投与、次いで第一の投与量と同じ量の第二の投与量の一つまたは複数の追加投与を含む。一部の実施形態では、投与レジメンは、関連集団全体に投与されたときに、所望される転帰または有益な転帰と相関する（すなわち治療投与レジメンである）。
【００６２】
エフェクター機能：本明細書において使用される場合、抗体Ｆｃ領域と、Ｆｃ受容体又はリガンドの相互作用から生じる生化学的事象を指す。エフェクター機能としては、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ：ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｃｅｌｌ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）、抗体依存性細胞介在性貪食（ＡＤＣＰ：ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｃｅｌｌ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ）、及び補体介在性細胞傷害（ＣＭＣ：ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）が挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態において、エフェクター機能は、抗原結合後に作動するもの、抗原結合とは無関係に作動するもの、又はその両方である。
【００６３】
エフェクター細胞：本明細書において使用される場合、一つ以上のＦｃ受容体を発現し、一つ以上のエフェクター機能を介在する免疫系の細胞を指す。一部の実施形態において、エフェクター細胞としては、単球、マクロファージ、好中球、樹状細胞、好酸球、肥満細胞、血小板、大型顆粒リンパ球、ランゲルハンス細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球のうちの一つ以上が挙げられるが、これらに限定されず、ならびにヒト、マウス、ラット、ウサギ、及びサルをはじめとする任意の起源に由来し得るが、これらに限定されない。
【００６４】
エピトープ：本明細書において使用される場合、イムノグロブリン（又は抗体又は受容体）結合構成要素により特異的に認識される任意の部分を含む。一部の実施形態において、エピトープは、抗原上の複数の化学的原子又は基から構成される。一部の実施形態において、かかる化学的原子又は基は、抗原が関連３次元構造をとったときに表面に露出される。一部の実施形態において、かかる化学的原子又は基は、抗原がかかる構造をとったときに、空間において互いに物理的に近くなる。一部の実施形態において、少なくともいくつかのかかる化学的原子及び基は、抗原が別の構造（例えば、直線化）をとったとき、互いに物理的に離れる。
【００６５】
Ｆｃリガンド：本明細書において使用される場合、抗体のＦｃ領域に結合し、Ｆｃ−リガンド複合体を形成する、任意の生物体由来の分子、好ましくはポリペプチドを指す。Ｆｃリガンドとしては、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２Ａ）、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６Ａ）、ＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６Ｂ）、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃεＲＩＩ（ＣＤ２３）、ＦｃＲｎ、Ｃｌｑ、Ｃ３、ブドウ球菌プロテインＡ、連鎖球菌プロテインＧ、及びウイルスＦｃγＲが挙げられるが、これらに限定されない。Ｆｃリガンドは、Ｆｃに結合する未発見の分子も含み得る。
【００６６】
相同性：本明細書で使用される場合、「相同性」という用語は、例えば、ポリペプチド分子間など、ポリマー分子間の全体的な関連性を指す。一部の実施形態では、例えば抗体などのポリマー分子は、その配列が少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である場合、相互に「相同」であると見なされる。一部の実施形態では、ポリマー分子は、その配列が少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％類似である場合、相互に「相同」であると見なされる。
【００６７】
宿主細胞：本明細書において使用される場合、外因性ＤＮＡが（組み換え、又はその他で）導入される細胞を指す。本開示を読んだ当業者であれば、かかる用語が、特定の対象の細胞だけではなく、かかる細胞の子孫物も指すことを理解するであろう。突然変異誘発又は環境の影響のいずれかによって、後の世代に若干の改変が発生し得るため、かかる子孫物は、実際には、親細胞と同一ではない場合もあるが、本明細書に使用されている場合、「宿主細胞」という用語の範囲内にいまだ含まれる。一部の実施形態において、宿主細胞は、外因性ＤＮＡ（例えば、組み換え核酸配列）の発現に適した生命界のいずれかから選択される原核細胞及び真核細胞を含む。例示的な細胞としては、原核生物及び真核生物（単細胞又は多細胞）の細胞、細菌細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐｐ．、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐｐ．の株）、マイコバクテリウム細胞、真菌細胞、酵母細胞（例えば、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓ．ｐｏｍｂｅ、Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓ、Ｐ．ｍｅｔｈａｎｏｌｉｃａなど）、植物細胞、昆虫細胞（例えば、ＳＦ−９、ＳＦ−２１、バキュロウイルス感染昆虫細胞、Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ  ｎｉなど）、非ヒト動物細胞、ヒト細胞、又は例えばハイブリドーマもしくはクアドローマなどの細胞融合物が挙げられる。一部の実施形態において、細胞は、ヒト、サル、類人猿、ハムスター、ラット、又はマウスの細胞である。一部の実施形態において、細胞は、真核細胞であり、以下の細胞から選択される：ＣＨＯ（例えば、ＣＨＯ  Ｋｌ、ＤＸＢ−１  １  ＣＨＯ、Ｖｅｇｇｉｅ−ＣＨＯ）、ＣＯＳ（例えば、ＣＯＳ−７）、網膜細胞、Ｖｅｒｏ、ＣＶ１、腎臓（例えば、ＨＥＫ２９３、２９３  ＥＢＮＡ、ＭＳＲ  ２９３、ＭＤＣＫ、ＨａＫ、ＢＨＫ）、ＨｅＬａ、ＨｅｐＧ２、ＷＩ３８、ＭＲＣ  ５、Ｃｏｌｏ２０５、ＨＢ  ８０６５、ＨＬ−６０、（例えば、ＢＨＫ２１）、Ｊｕｒｋａｔ、Ｄａｕｄｉ、Ａ４３１（表皮）、ＣＶ−１、Ｕ９３７、３Ｔ３、Ｌ細胞、Ｃ１２７細胞、ＳＰ２／０、ＮＳ−０、ＭＭＴ  ０６０５６２、Ｓｅｒｔｏｌｉ細胞、ＢＲＬ  ３  Ａ細胞、ＨＴ１０８０細胞、ミエローマ細胞、腫瘍細胞、及び前述の細胞から誘導された細胞株。一部の実施形態では、細胞は、一つまたは複数のウイルス遺伝子を含有する。
【００６８】
ヒト：本明細書で使用される場合、発達のすべての段階のヒトを含むことが意図されている。一部の実施形態では、ヒトは、胚、胎児、幼児、子供、ティーンエージャー、成人、または高齢者である。
【００６９】
ヒト抗体：本明細書において使用される場合、ヒトイムノグロブリン配列から生成された（又はアセンブリされた）可変領域と定常領域を有する抗体を含むことが意図される。一部の実施形態において、抗体（又は抗体構成要素）は、例えば一つ以上のＣＤＲ及び特にＣＤＲ３において、そのアミノ酸配列がヒト生殖イムノグロブリン配列によりコードされない残基又は要素を含む場合であっても（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏの無作為もしくは部位特異的な突然変異誘発、又はｉｎ  ｖｉｖｏの体細胞変異により（元々）導入された配列変化を含む）、「ヒト」であるとみなされる場合がある。
【００７０】
ヒト化：「ヒト化された」抗体は、例えば齧歯類抗体など、一つの種に由来する抗体のＣＤＲが、当該齧歯類抗体の重鎖可変鎖および軽鎖可変鎖から、ヒト重鎖可変ドメインおよびヒト軽鎖可変ドメインへと移植された組み換えタンパク質である。抗体分子の定常ドメインは、ヒト抗体の定常ドメインに由来する。
【００７１】
同一性：本明細書で用いられる場合、用語「同一性」は、ポリマー分子間、例えば、核酸分子（例えば、ＤＮＡ分子及び／またはＲＮＡ分子）間、及び／またはポリペプチド分子間の全体的な関連性を意味する。一部の実施形態では、ポリマー分子は、それらの配列が少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％同一である場合、相互に「実質的に同一」であると見なされる。二つの核酸配列またはポリペプチド配列のパーセント同一性の計算は、例えば、二つの配列を至適比較目的でアライメントすることによって行われ得る（例えば、至適アライメントのためにギャップを第一の配列と第二の配列の一方または両方に導入することができ、また非同一配列を比較目的のために無視することができる）。特定の実施形態では、比較目的でアライメントされる配列の長さは、基準配列の長さの少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または実質的に１００％である。続いて、該当する位置のヌクレオチドを比較する。第一の配列のある位置が、第二の配列における該当する位置と同じ残基（例えば、ヌクレオチドまたはアミノ酸）で占有されている場合、分子はその位置で同一である。二つの配列間のパーセント同一性は、配列により共有される同一位置の数の関数であり、二つの配列の至適比較のために導入すべきギャップの数及び各ギャップの長さを考慮に入れている。配列の比較及び二つの配列間のパーセント同一性の測定は、数学的アルゴリズムを用いて遂行され得る。例えば、二つのヌクレオチド配列間のパーセント同一性は、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれたＭｅｙｅｒｓ及びＭｉｌｌｅｒのアルゴリズム（ＣＡＢＩＯＳ，１９８９，４：１１−１７）を用いて測定され得る。一部の例示的な実施形態では、ＡＬＩＧＮプログラムを使用してなされた核酸配列比較は、ＰＡＭ１２０重量残基表、ギャップ長ペナルティ１２、及びギャップペナルティ４を用いている。あるいは、二つのヌクレオチド配列間のパーセント同一性は、ＧＣＧソフトウェアパッケージのＧＡＰプログラムを用いて、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックスを使用して測定され得る。
【００７２】
免疫複合体：「免疫複合体」は、ペイロード（例えば、治療剤または診断剤）を有する抗体構成要素の複合体（すなわち、共有結合体）である。
【００７３】
免疫調節物質：「免疫調節物質」は、存在する場合、典型的には例えばマクロファージ、Ｂ細胞、および／またはＴ細胞などの免疫細胞を免疫応答カスケード中で刺激して増殖させ、または活性化させる剤である。本明細書に記載の免疫調節物質の例は、サイトカインである。当業者であれば、特定のインターロイキンおよびインターフェロンは、Ｔ細胞またはその他の免疫細胞の増殖を刺激するサイトカインの例であることを理解するであろう。
【００７４】
インビトロ：本明細書で使用される場合、「インビトロ」という用語は、多細胞生物体内ではなく、例えば、試験管または反応槽中、細胞培養液中などの人工的な環境で生じる事象を意味する。
【００７５】
インビボ：本明細書において使用される場合、例えばヒト及び非ヒト動物などの多細胞生物体内で発生する事象を指す。細胞系システムの文脈において、該用語は、生細胞内で生じる事象を意味するのに（例えばインビトロ系との対語として）使用されてもよい。
【００７６】
単離された：本明細書において使用される場合、（１）（自然界、及び／又は実験的設定のいずれでも）最初に生成されたときに関連付けられていた構成要素の少なくとも一部から分離された、ならびに／又は（２）ヒトの手により設計、生成、調製、及び／もしくは製造された、物質ならびに／又は実体を指す。単離された物質、及び／又は実体は、それらが最初に関連づけられていた他の構成要素の約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約９９％超から分離されていてもよい。一部の実施形態において、単離された剤は、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％，又は約９９％超の純度である。本明細書において使用される場合、物質は、他の構成要素が実質的に無い場合、「純粋」である。一部の実施形態において、当分野の当業者に理解されているように、物質は、例えば一つ以上の担体又は賦形剤（例えば、緩衝剤、溶媒、水など）のような特定の他の構成要素と組み合わされた後でも、「単離された」又はさらには「純粋」とみなされることができる。そのような実施形態において、物質の単離割合、又は純度は、かかる担体又は賦形剤を含まずに算出される。一つの例ではあるが、一部の実施形態において、例えば自然界に存在するポリペプチド又はポリヌクレオチドなどの生物ポリマーは、ａ）その誘導の起源又は源を理由として、自然界において、自然状態でそれと付随する構成要素のすべて又は一部と関連づけられていない場合、ｂ）自然界において、それを生成する種と同じ種の他のポリペプチド又は他の核酸が実質的に無い場合、ｃ）自然界においてそれを生成する種のものではない細胞又は他の発現システムに由来する構成要素により発現されている場合、又はその構成要素と別手段で関連づけられている場合に、「単離されている」とみなされる。したがって、例えば一部の実施形態において、化学的に合成された、又は自然界においてそれを生成するものとは異なる細胞システム中で合成された、ポリペプチドは、「単離された」ポリペプチドであるとみなされる。あるいは、又はさらに、一部の実施形態において、一つ以上の精製法に供されたポリペプチドは、ａ）自然界において関連づけられている他の構成要素から分離されている限り、及び／又は最初に生成されたときに関連づけられていた他の構成要素から分離されている限り、「単離された」ポリペプチドであるとみなされることができる。
【００７７】
リンカー：本明細書において使用される場合、異なる要素を互いにつなげる、複数−要素媒介部分を指すために使用される。例えば、当分野の当業者であれば、その構造が２以上の機能性ドメイン又は組織的ドメインを含有するポリペプチドは多くの場合、かかるドメインの間に、それらを互いに連結するアミノ酸の連続配列を含有していることを認識している。一部の実施形態において、リンカー要素を含有するポリペプチドは、一般的な形式としてＳ１−Ｌ−Ｓ２の全体構造を有しており、ここでＳ１とＳ２は、同じであっても、異なっていてもよく、及びリンカーにより互いに結合された二つのドメインを表している。一部の実施形態において、ポリペプチドリンカーは、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００又はそれ以上のアミノ酸の長さである。一部の実施形態において、リンカーは、硬い３次元構造をとる傾向はなく、むしろポリペプチドに対し柔軟性を与える傾向にあるという点で特徴づけられる。ポリペプチド（例えば融合ポリペプチド）を遺伝子操作するときに適切に使用され得る、様々な異なるリンカー要素が当分野に公知である（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．ら、（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８；Ｐｏｌｊａｋ，Ｒ．Ｊら（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２：１  １２１−１１２３を参照のこと）。
【００７８】
多重特異性：「多重特異的」抗体は、異なる構造の少なくとも二つの標的、例えば二つの異なる抗原、同一抗原上の二つの異なるエピトープ、またはハプテンと抗原もしくはエピトープなどに、同時に結合することができる抗体である。一つの特異性は、例えばＢ細胞、Ｔ細胞、骨髄細胞、血漿細胞もしくはマスト細胞の抗原またはエピトープに対するものである。もう一つの特異性は、例えばＢ細胞上のＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ２１、ＣＤ２３、ＣＤ４６、ＣＤ８０、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ７４またはＣＤ２２などの同一細胞型上の異なる抗原に対するものであり得る。多重特異的な多価抗体は、複数の結合部位を有する構築体であり、その結合部位は異なる特異性の部位である。例えば、二重特異性抗体は、一つの結合部位が抗原の一つのエピトープと反応し、他方は同一または異なる抗原の別のエピトープと反応する。
【００７９】
変異体：本明細書で用いられる場合、「変異体」という用語は、基準物質と有意な構造同一性を示すが、基準物質と比べた場合の一つ以上の化学的部分構造の存在またはレベルにおいて、基準物質とは構造的に異なる物質を意味する。多くの実施形態では、変異体は、その基準物質とは機能的にも異なるものである。一般的に、特定の物質が基準物質の「変異体」であると適切に見なされるかどうかは、基準物質との構造同一性の度合いに基づく。当業者によって認識されるように、任意の生物学的または化学的基準物質は、特定の特徴的な構造要素を有する。変異体は、定義によれば、一つ以上のこうした特徴的構造要素を共有する別個の化学物質である。数例を挙げると、低分子は、特徴的なコア構造要素（例えば、大環状のコア）および／または一つもしくは複数の特徴的なペンダント基を有してもよく、それにより当該低分子の変異体は、当該コア構造要素と特徴的なペンダント基を共有するが、他のペンダント基および／またはコア内に存在する結合の種類（一重結合対二重結合、Ｅ対Ｚなど）においては異なるものである。ポリペプチドは、直線もしくは３次元空間において互いに対して所定の位置を占め、および／または特定の生物学的機能に寄与する複数のアミノ酸から構成される特徴的な配列要素を有してもよく、核酸は、直線もしくは３次元空間において互いに対して所定の位置を占める複数のヌクレオチド残基から構成される特徴的な配列を有してもよい。例えば、変異体ポリペプチドは、アミノ酸配列における一つ以上の差異、及び／またはポリペプチド骨格に共有結合された化学的部分構造（例えば、炭水化物、脂質など）における一つ以上の差異の結果として、基準ポリペプチドとは異なっていてもよい。一部の実施形態では、変異体ポリペプチドは、基準ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、または９９％の全体の配列同一性を示す。あるいは、または加えて、一部の実施形態では、変異体ポリペプチドは、基準ポリペプチドと少なくとも一つの特徴的配列エレメントを共有しない。一部の実施形態では、基準ポリペプチドは、一つ以上の生物学的活性を有する。一部の実施形態では、変異体ポリペプチドは、基準ポリペプチドの生物学的活性のうちの一つ以上を共有する。一部の実施形態では、変異体ポリペプチドは、基準ポリペプチドの生物学的活性のうちの一つ以上を欠いている。一部の実施形態では、変異体ポリペプチドは、基準ポリペプチドと比べて、一つ以上の生物学的活性レベルが減少している。
【００８０】
患者：本明細書で使用される場合、「患者」という用語は、例えば、実験目的、診断目的、予防目的、美容目的、および／または治療目的のために、提供される組成物が投与される、または投与されうる任意の生物体を指す。典型的な患者としては、動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長類、および／またはヒトなどの哺乳類）が挙げられる。いくつかの実施形態では、患者はヒトである。いくつかの実施形態では、患者は一つまたは複数の障害または状態を患っているか、または感受性である。いくつかの実施形態では、患者は、障害または症状の一つまたは複数の症状を呈している。いくつかの実施形態では、患者は、一つまたは複数の障害または状態と診断されている。いくつかの実施形態では、障害または症状は、癌であるか、もしくは癌を含み、または一つもしくは複数の腫瘍の存在があるか、またはこれを含む。いくつかの実施形態では、患者は、疾患、障害または症状を診断および／または治療するために、ある治療を受ける、または受けている。
【００８１】
薬学的に許容可能：本明細書で使用される場合、本明細書に開示される組成物を製剤化するために使用される担体、希釈剤、または賦形剤に適用される「薬学的に許容可能」という用語は、当該担体、希釈剤、または賦形剤が当該組成物の他の成分と適合性が無ければならず、かつそのレシピエントに対して有害であってはならない事を意味する。
【００８２】
薬学的に許容可能な担体：本明細書で使用される場合、「薬学的に許容可能な担体」という用語は、物質を封入する液状もしくは固形の充填剤、希釈剤、賦形剤、または溶媒などの薬学的に許容可能な物質、組成物またはビヒクルを意味し、対象化合物の、身体の一つの臓器または一部から、身体の別の臓器または一部への運搬または輸送に関与する。各担体は、製剤の他の成分と適合性があり、患者に有害ではないという意味で「許容可能」でなければならない。薬学的に許容可能な担体として役立ち得る物質のいくつかの例としては、ラクトース、グルコースおよびスクロースなどの糖；コーンスターチ、ジャガイモデンプンなどのデンプン；セルロース、ならびにカルボキシメチルセルロース、エチルセルロースおよび酢酸セルロースなどのセルロース誘導体；粉末トラガカント；モルト；ゼラチン；滑石；ココアバターおよび座薬ろうなどの賦形剤；ピーナッツ油、綿実油、サフラワー油、胡麻油、オリーブオイル、トウモロコシ油および大豆油などの油類；プロピレングリコールなどのグリコール類；グリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコールなどのポリオール類；オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチルなどのエステル類；アガー；水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウムなどの緩衝剤；アルギン酸；発熱物質が含まれていない水；等張生理食塩水；リンゲル溶液；エチルアルコール；ｐＨ緩衝溶液；ポリエステル、ポリカーボネートおよび／またはポリ無水物；ならびに医薬製剤に採用されるその他の非毒性の適合性物質が挙げられる。
【００８３】
ポリペプチド：本明細書において使用される場合、アミノ酸の任意のポリマー鎖を指す。一部の実施形態において、ポリペプチドは、自然界に存在するアミノ酸配列を有する。一部の実施形態において、ポリペプチドは、自然界に存在しないアミノ酸配列を有する。一部の実施形態において、ポリペプチドは、ヒトの手の作用を介して設計された、及び／又は生成されたという点で、遺伝子操作されているアミノ酸配列を有する。一部の実施形態において、ポリペプチドは、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、又はその両方を含有してもよく、又はそれらからなっていてもよい。一部の実施形態において、ポリペプチドは、天然アミノ酸のみ、又は非天然アミノ酸のみを含有してもよく、又はそれらのみからなっていてもよい。一部の実施形態では、ポリペプチドは、Ｄ−アミノ酸、Ｌ−アミノ酸、またはその両方を含んでいてもよい。一部の実施形態では、ポリペプチドは、Ｄ−アミノ酸のみを含んでいてもよい。一部の実施形態では、ポリペプチドは、Ｌ−アミノ酸のみを含んでいてもよい。一部の実施形態において、ポリペプチドは、例えばポリペプチドのＮ末端、ポリペプチドのＣ末端、もしくはそれらの任意の組み合わせで、一つ以上のペンダント基を含有していてもよく、又は一つ以上のアミノ酸側鎖に対する修飾、又はそれらに付加されるなどの、他の修飾を含有していてもよい。一部の実施形態において、かかるペンダント基又は修飾は、それらの組み合わせを含む、アセチル化、アミド化、脂質化、メチル化、ペグ化などからなる群から選択されてもよい。一部の実施形態において、ポリペプチドは、環状であってもよく、及び／又は環状部分を含有してもよい。一部の実施形態において、ポリペプチドは、環状ではなく、及び／又はいずれの環状部分も含有しない。一部の実施形態では、ポリペプチドは直線状である。一部の実施形態において、ポリペプチドは、ステープル化ポリペプチドであってもよく、又はステープル化ポリペプチドを含有してもよい。一部の実施形態において、「ポリペプチド」という用語は、基準ポリペプチドの名称、活性、又は構造に加えられてもよい。かかる例において、本明細書においてそれを使用し、関連活性又は構造を共有するポリペプチドを指し、それによって、同じクラス又はファミリーのポリペプチドのメンバーであるとみなされ得る。本明細書は、そのようなクラスの各々を提供し、及び／又は当分野の当業者は、そのアミノ酸配列及び／又は機能が公知であるクラス内の例示的なポリペプチドを認識している。一部の実施形態において、そのような例示的なポリペプチドは、当該ポリペプチドのクラスまたはファミリーに対する基準のポリペプチドである。一部の実施形態において、ポリペプチドのクラス又はファミリーのメンバーは、当該クラスの基準ポリペプチドと、及び一部の実施形態では当該クラス内のすべてのポリペプチドと、高い配列相同性又は同一性を示し、共通の配列モチーフ（例えば、特徴的な配列要素）を共有し、及び／又は（一部の実施形態では、同等レベルの、又は指定された範囲内の）共通の活性を共有している。例えば、一部の実施形態では、メンバーのポリペプチドは、少なくとも約３０％〜４０％、及び多くの場合には約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％以上を超える基準ポリペプチドとの配列相同性もしくは同一性の程度を全体として示し、ならびに／または、多くの場合には９０％を超える、もしくはさらには９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％を超える極めて高い配列同一性を示す、少なくとも一つの領域（例えば一部の実施形態において、特徴的な配列エレメントであり得るか、または特徴的な配列エレメントを含み得る保存領域）を備える。こうした保存領域は通常、少なくとも３個〜４個、多くの場合には最大２０個まで、またはそれより多いアミノ酸を包含し、一部の実施形態では、保存領域は、少なくとも２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、または１５個以上の連続したアミノ酸のうちの少なくとも一つの連続配列を包含する。一部の実施形態において、有用なポリペプチドは、親ポリペプチドの断片を含有してもよく、または親ポリペプチドの断片からなっていてもよい。一部の実施形態では、有用なポリペプチドは、複数の断片を含有してもよく、または複数の断片からなっていてもよく、それら断片の各々は、対象のポリペプチドに見られる場合とは相互に異なる空間配置で、同じ親ポリペプチドに見られるものであり（例えば、親ポリペプチドでは直接連結されていた断片が、対象のポリペプチドでは空間的に分離されている場合もあり、もしくはその逆の場合もあり、及び／または断片は、対象のポリペプチドにおいて、親ポリペプチドとは異なる順序で存在している場合もある）、したがって、対象のポリペプチドは、その親ポリペプチドの派生物となる。
【００８４】
予防する、または予防：本明細書において疾患、障害、及び／又は状態の発生と関連づけて使用される場合、当該疾患、障害、及び／又は状態の発現リスクを低下させること、ならびに当該疾患、障害、及び／もしくは状態の特徴又は症状の一つ以上の発症を遅延させること、を指す。予防は、疾患、障害、又は状態の発症が、既定の期間、遅延された場合には、完了とみなされ得る。
【００８５】
組換え体：本明細書において使用される場合、組み換え手段により設計、遺伝子操作、調製、発現、生成、製造、および／または単離されたポリペプチドを指すことが意図される。例えば、宿主細胞へとトランスフェクトされた組み換え発現ベクターを使用して発現されたポリペプチド、組み換えコンビナトリアルヒトポリペプチドライブラリから単離されたポリペプチド（例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ，ＴＩＢ  Ｔｅｃｈ  １５：６２，１９９７；Ａｚｚａｚｙ  Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３５：４２５，２００２；Ｇａｖｉｌｏｎｄｏ  ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ２９：１２８，２００２；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  ２１：３７１，２０００）、ヒトイムノグロブリン遺伝子に関してトランスジェニックな動物（例えば、マウス）から単離された抗体（例えば、Ｔａｙｌｏｒ  Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２０：６２８７，１９９２；Ｌｉｔｔｌｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  １２：３６４，２０００；Ｋｅｌｌｅｒｍａｎｎ  Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １３：５９３，２００２；Ｍｕｒｐｈｙ  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １１１：５１５３，２１０４を参照のこと）、または選択配列要素の互いのスプライシングを含む、任意の他の手段により調製、発現、生成または単離されたポリペプチドがある。一部の実施形態は、かかる選択配列要素のうちの一つ以上が、自然界に存在する。一部の実施形態は、かかる選択配列要素のうちの一つ以上が、インシリコで設計されている。一部の実施形態において、一つ以上のかかる選択配列要素は、例えば、天然源又は合成源に由来する、公知の配列要素の（例えば、インビトロまたはインビボの）突然変異誘発から、生じている。例えば、一部の実施形態において、組み換え抗体ポリペプチドは、対象の源生物体（例えば、ヒト、マウスなど）の生殖細胞系列中に存在する配列から構成される。一部の実施形態において、組み換え抗体は、（例えばトランスジェニック動物中の、インビボまたはインビトロの）突然変異誘発から生じたアミノ酸配列を有しており、それによって、当該組み換え抗体のＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列は、生殖細胞系列のＶＨ及びＶＬ配列に由来し、及び関連している一方で、当該生殖細胞系列抗体レパートリー中にｉｎ  ｖｉｖｏで天然には存在し得ない配列であり得る。
【００８６】
回収：本明細書において使用される場合、例えば当分野に公知の精製技術を使用した単離により、従前に関連づけられていた他の構成要素が実質的に無い剤又は実体を提供するプロセスを指す。一部の実施形態において、剤又は実体は、天然源、及び／又は細胞を含有する源から回収される。
【００８７】
基準：本明細書で使用される場合、標準または対照を記載するものであり、それに対して比較が実施される。例えば一部の実施形態において、対象の剤、動物、個体、群、サンプル、配列または価値は、基準または対照の剤、動物、個体、群、サンプル、配列または価値と比較される。一部の実施形態において、基準または対照は、対象の検証又は決定と実質的に同時に、検証、及び／又は決定される。一部の実施形態において、基準または対照は、任意で有形のメディア中に具現化されたヒストリカルな基準または対照である。典型的には、当分野の当業者には理解されるように、基準または対照は、評価の下で同等の条件または環境下で、決定または特徴解析される。当分野の当業者であれば、特定の可能性のある基準または対照に対する信頼を正当化する、および／またはそれらに対する比較を正当化するために充分な類似性が存在するときを理解するであろう。
【００８８】
特異的結合：本明細書において使用される場合、「特異的結合」という用語は、結合が発生する環境下で、可能性のある結合パートナー間を識別する能力を指す。他の可能性のある標的が存在しているときに、一つの特定の標的と相互作用する抗体剤は、相互作用する標的に対し、「特異的に結合する」と言われる。一部の実施形態において、特異的結合は、抗体剤とそのパートナーの間の関連性の程度を検出または決定することにより評価される。一部の実施形態において、特異的結合は、抗体剤‐パートナー複合体の解離の程度を検出または決定することにより評価される。一部の実施形態において、特異的結合は、そのパートナーと別の実体との間の代替的相互作用と競合する抗体剤の能力を検出または決定することにより評価される。一部の実施形態において、特異的結合は、ある範囲の濃度にわたり、かかる検出又は決定を行うことにより評価される。
【００８９】
実質的に：本明細書において使用される場合、「実質的に」という用語は、対象の特徴又は性質のすべて、もしくはほぼすべての範囲又は程度を示す定性的な状態を指す。生物分野の当業者であれば、生物的及び化学的な現象は、完了にまで進行すること、及び／又は完全性にまで進展すること、又は完全な結果に達すること、もしくは回避することは仮にあったとしても稀であることを理解するであろう。したがって本明細書において「実質的に」という用語を使用して、多くの生物的及び化学的な現象に固有な、完全性の欠落の可能性を捕捉する。
【００９０】
治療剤：本明細書で用いられる場合、概して「治療剤」という文言は、生物体に投与された場合に、所望の薬理学的効果を引き出す任意の作用剤を意味する。一部の実施形態では、剤は、適正な集団全体で統計的に有意な効果を示す場合に、治療剤であると見なされる。一部の実施形態では、当該適正な集団は、モデル生物体の集団であってもよい。一部の実施形態では、適正な集団は、特定の年齢群、性別、遺伝的背景、既往臨床症状などの種々の判断基準によって規定され得る。一部の実施形態では、治療剤は、疾患、障害、及び／または状態の一つ以上の症状もしくは特徴を軽減する、改善する、緩和する、抑制する、予防する、その開始を遅延する、その重症度を低減する、及び／またはその発症率を低減するために使用することができる物質である。一部の実施形態では、「治療剤」は、ヒトへの投与用に市販され得る前に、政府当局による承認を受けている、または承認を必要とする剤である。一部の実施形態では、「治療剤」は、ヒトへの投与用に処方箋を必要とする剤である。
【００９１】
治療有効量：本明細書において使用される場合、それが投与される所望の効果をもたらす量を意味する。一部の実施形態において、当該用語は、治療薬投与計画に従っている、疾患、障害、及び／又は状態に罹患している、又は感受性の群に、当該疾患、障害及び／又は状態を治療するために投与されたときに、充分である量を指す。一部の実施形態では、治療有効量は、疾患、障害、及び／または状態の一つ以上の症状の発生率及び／もしくは重症度を低減させる、ならびに／またはその発症を遅延させる量である。当分野の当業者であれば、「治療有効量」という用語が、実際には、特定個体における治療成功の達成が必須ではないことを認識するであろう。むしろ、治療有効量は、こうした治療の必要な患者に投与された場合に、有意な数の対象において、所望される特定の薬理学的反応をもたらす量であってもよい。例えば、一部の実施形態では、「治療有効量」という用語は、本発明療法の背景下でその必要のある個体に投与されたとき、前述の個体で発生している癌を支えるプロセスを妨害、安定化、減弱、もしくは反転させる量、または前述の個体において癌を抑制するプロセスを強化または増加させる量を指す。癌治療を背景として、「治療有効量」とは、癌と診断された個体に投与されたとき、その個体の癌のさらなる発達を防止、安定化、阻害または減少させる量である。本明細書に記載される組成物の特に好ましい「治療有効量」は、悪性腫瘍の発達を（治療的処置において）反転させる、または悪性腫瘍の寛解を実現もしくは延長するのに役立つ。個体の癌を治療するためにその個体に投与される治療有効量は、寛解を促進するために投与される治療有効量または転移を阻害するために投与される治療有効量と同一であっても、異なっていてもよい。ほとんどの癌療法と同様に、本明細書に記載される治療方法は、癌の「治癒」に限定されるか、またはその他の方法で制限されるものではない。むしろ治療方法は、癌を「治療」するための、すなわち、癌を有する個体の健康に望ましいまたは有益な変化をもたらすための、記載の組成物の使用を目的とする。このような利益は、腫瘍学分野の当業者であるヘルスケア提供者に認識されており、患者の状態の安定化、腫瘍サイズの減少（腫瘍退縮）、バイタル機能の改善（例えば、癌性組織または臓器の機能改善）、さらなる転移の減少または阻害、日和見感染の減少、生存性の増加、疼痛の減少、運動機能の改善、認知機能の改善、活力の感覚の改善（生命力、不安感減少）、幸せの感覚の改善、正常な食欲の回復、健康的な体重増加の回復、およびそれらの組み合わせが挙げられる。さらに個体の特定腫瘍の退縮（例えば本明細書に記載の治療の結果としての退縮）は、例えば膵臓腺癌などの腫瘍の部位から（治療経過を通じて）癌細胞サンプルを取得し、そして代謝マーカーおよびシグナル伝達マーカーのレベルに関して当該癌細胞を検証し、当該癌細胞の状態をモニタリングして、癌細胞の退縮がより低い悪性表現型の分子レベルにあることを確認することで、評価されてもよい。例えば本記載方法を採用することで誘導された腫瘍退縮は、上記に検討された血管新生促進性のマーカーのいずれかの減少、本明細書に記載の抗血管新生マーカーの増加、癌と診断された個体で異常な活性を呈する代謝経路、細胞間シグナル伝達経路、または細胞内シグナル伝達経路の正常化（すなわち、癌に罹患していない正常な個体で見いだされる状態への変化）を見出すことにより示唆される。当業者であれば、一部の実施形態において、治療有効量は、単回用量で製剤化及び／または投与され得ることを認識するであろう。一部の実施形態では、治療有効量は、例えば投与レジメンの一部として、複数回用量で製剤化及び／または投与され得る。
【００９２】
治療：本明細書で使用される場合、「治療する」（または「治療する」または「治療すること」）という用語は、特定の疾患、障害、および／または状態（例えば、癌）の一つまたは複数の症状、特徴および／もしくは原因を部分的に、または完全に軽減する、改善する、緩和する、阻害する、発生を遅延させる、重篤度を低下させる、ならびに／または発生率を減少させる治療法の任意の投与を指す。一部の実施形態では、そのような治療は、関連する疾患、障害および／もしくは状態の兆候を示していない対象の治療、ならびに／または当該疾患、障害および／もしくは状態の早期兆候のみを示している対象の治療であってもよい。あるいは、または追加的に、そのような治療は、関連する疾患、障害および／または状態の一つまたは複数の確立された兆候を示す対象の治療であってもよい。一部の実施形態では、治療は、関連する疾患、障害および／または状態に罹患すると診断されている対象の治療であってもよい。一部の実施形態では、治療は、関連する疾患、障害および／または状態の発生リスクの上昇と統計的に相関する感受性因子を一つまたは複数有することが判明している対象の治療であってもよい。
【００９３】
単位用量：本明細書で使用される場合、「単位用量」という表現は、医薬組成物の単回投与として、および／または物理的に個別化された単位として投与される量を指す。多くの実施形態では、単位用量は、所定量の活性剤を含む。一部の実施形態では、単位用量は、剤の完全な単回用量を含む。一部の実施形態では、総単回用量を達成するために複数の単位用量が投与される。一部の実施形態では、複数の単位用量の投与が、意図される効果を生じさせるために必要とされる、または必要とされることが予測される。単位用量は、例えば、所定量の一つまたは複数の治療剤を含有する液体（例えば許容可能な担体）の体積、所定量の一つまたは複数の固形形態の治療剤、所定量の一つまたは複数の治療剤を含有する徐放性製剤または薬物送達デバイスなどが挙げられる。単位用量は、治療剤に加えて様々な成分のいずれかを含有する製剤中に存在し得ることを理解するであろう。例えば、以下に記載されるように、許容可能な担体（例えば、薬学的に許容可能な担体）、希釈剤、安定剤、緩衝剤、保存剤などを含むことができる。当分野の当業者であれば、多くの実施形態では、特定の治療剤のトータルの適正な毎日の投薬量は、単位用量の一部、または複数の単位用量を含み得ること、そして例えば正当な医学的判断の範囲内で担当医により決定され得ることを理解するであろう。一部の実施形態では、任意の特定の対象または生物についての具体的な有効用量レベルは、処置される障害および障害の重篤度を含む様々な因子；使用される特定の活性化合物の活性；使用される特定の組成物；対象の年齢、体重、全身の健康状態、性別および食事；投与時間、および使用される特定の活性化合物の排泄速度；治療の持続時間；使用される特定の化合物と組み合わせてまたは同時に使用される薬物および／または追加療法、ならびに医学分野において周知の同様の因子に依存し得る。
【００９４】
ベクター：本明細書において使用される場合、自身に連結されている他の核酸を運搬することができる核酸分子を指す。ベクターの一つの型は、「プラスミド」であり、これは、追加のＤＮＡセグメントがライゲートされ得る環状二重鎖ＤＮＡループを指す。別の型のベクターはウイルスベクターであり、ここで追加のＤＮＡセグメントは、ウイルスゲノム内にライゲートされ得る。特定のベクターは、自身が導入された宿主細胞（例えば、複製の細菌性起源を有する細菌ベクター、及びエピソーム哺乳類ベクター）中で自己複製することができる。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳類ベクター）は、宿主細胞に導入されたときに、宿主細胞のゲノム内に組み込まれることができ、それによって、宿主ゲノムとともに複製される。さらに、特定のベクターは、自身が操作可能に連結されている遺伝子の発現を指示することができる。かかるベクターは、本明細書において、「発現ベクター」と呼称される。
【００９５】
組み換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、および組織培養ならびに形質転換（例えばエレクトロポレーション法、リポフェクション法）に関し、標準的な技術が使用され得る。酵素反応および精製技術は、製造業者の仕様に従って、または当該技術分野で普遍的に実施されるように、または本明細書に記載されるように実施されうる。前述の技術および手順は、当該技術分野で公知の従来的な方法に従って、および本明細書全体を通して引用および検討される様々な一般的およびより具体的な参照文献中に記載されているように、一般的に実施されることができる。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（２ｄ  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））を参照されたい。本文献は、任意の目的に対し、参照により本明細書に組み込まれる。
［発明を実施するための形態］
【００９６】
免疫療法は、特定のタイプの癌の治療において、いくらかの進展をもたらしてきた。しかしながら、特定の癌に対する治療選択および予後はいまだ継続的な課題となっている。特に、特定の血液系の癌（例えば骨髄性白血病）を有する患者の生存率は依然として悲惨なものである。
ＣＤ３３
【００９７】
ＣＤ３３（Ｓｉｇｌｅｃ−３、ＳＩＧＬＥＣ３、ｇｐ６７、ｐ６７としても知られている）は、シアル酸に結合する６７ｋＤａの細胞膜タンパク質であり、シアル酸結合Ｉｇ関連レクチン（ＳＩＧＬＥＣ：ｓｉａｌｉｃ  ａｃｉｄ−ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｉｇ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｌｅｃｔｉｎ）ファミリーのタンパク質の１種である。Ｓｉｇｌｅｃタンパク質は、例えば造血、神経発達および免疫などの多様な生物プロセスに関与していると考えられている（Ｖｉｎｓｏｎ，Ｍ．ら、１９９６、上記参照）。またＳｉｇｌｅｃタンパク質は、シアル化細胞表面グリカンの認識を介して細胞接着／細胞シグナル伝達を介在することが示唆されている（ＫｅＩｍ，Ｓら、１９９６  Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊ．Ｊ．１３：９１３−９２６；ＫｅＩｍ，Ｓら、１９９８  Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２５５：６６３−  ６７２；Ｖｉｎｓｏｎ，Ｍら、１９９６  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：９２６７−９２７２）。ＣＤ３３の細胞外部分は、二つのイムノグロブリンドメイン（一つはＩｇＶ、一つはＩｇＣ２ドメイン）を含有する。ＣＤ３３の細胞内部分は、免疫受容体抑制性チロシンモチーフ（ＩＴＩＭ：ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ−ｂａｓｅｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｍｏｔｉｆｓ）を含有する。免疫反応において、ＣＤ３３は、シグナル伝達分子の脱リン酸化を介してシグナル伝達を阻害する細胞質ホスファターゼをリクルートすることにより、リガンド誘導型チロシンリン酸化に対する阻害性受容体として作用し得る。
【００９８】
ＣＤ３３は、骨髄細胞上で発現されることが知られている。ＣＤ３３の発現は、多くの悪性細胞上でも報告されている。ＣＤ３３は、例えば急性骨髄性白血病などの癌の治療に対して標的とされてきたが、現在のところ、有効なＣＤ３３関連治療法は市販されていない。
ＣＤ３３抗体剤
【００９９】
ＣＤ３３を標的とする多くの剤が作製されているが、これらの剤は多くの欠点を有しており、半減期が短い、インビボ機能が乏しい、および／または有害事象といった欠点が挙げられる。
【０１００】
ゲムツズマブ  オゾガミシン（Ｇｅｍｔｕｚｕｍａｂ  ｏｚｏｇａｍｉｃｉｎ）（ＧＯ、ＭｙｌｏｔａｒｇＴＭ）は、Ｎ−アセチル−γ−カリケアマイシンジメチルヒドラジド（ＣａｌｉｃｈＤＭＨ）に結合したヒト化ＩｇＧ４  抗ＣＤ３３モノクローナル抗体である（Ｈａｍａｎｎ  ＰＲら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ  Ｃｈｅｍ  １３：４７−５８，２００２）。ＣＤ３３に結合すると、ＧＯは内部移行し、有毒なカリケアマイシンが放出され、ＤＮＡの損傷を誘導し、最終的には細胞死に至る。しかしながら、ＣＤ３３＋ＡＭＬの治療に対して、２０００年にＦＤＡが承認して以降、いくつかの試験において異質な臨床反応が報告され、そして獲得耐性がよく発生した。
【０１０１】
当初はＧＯはＡＭＬを有する患者の治療改善と関連していたが、さらなる臨床試験および市販後評価から、有効性の欠如と致命的な副作用が明らかとなった。臨床試験の中間解析では、ＧＯと化学療法の併用は、化学療法単独より優れていないことが示された（Ｐｅｔｅｒｓｄｏｒｆ  Ｓら、Ｂｌｏｏｄ  １１４：７９０−７９０，２００９およびＰｅｔｅｒｓｄｏｒｆ  ＳＨら、Ｂｌｏｏｄ  １２１：４８５４−６０，２０１３）。その他にもＧＯ治療患者において、致命的な有害事象誘導率が高かった。Ｉｄ．ゆえにＧＯは２０１０年に市場から姿を消し、現在、ＦＤＡはＡＭＬの治療にＧＯを推奨していない。
【０１０２】
リンツズマブ（Ｌｉｎｔｕｚｕｍａｂ）は、ＣＤ３３に対するヒト化ＩｇＧ１モノクローナル抗体である。ＡＭＬの前臨床モデルでは、リンツズマブはいくつかの治療能力を示した（Ｓｕｔｈｅｒｌａｎｄ  ＭＫら、ＭＡｂｓ  ２：４４０−８，２０１０）。しかしながら、不均一な患者集団の場合には、第ＩＩｂ相臨床試験の結果、ＡＭＬを有する成人ではリンツズマブとシタラビンの併用は、シタラビン単独よりも優れていないことが示された（Ｓｅｋｅｒｅｓ  ＭＡら、Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ  ９８：１１９−２８，２０１３）。それによりリンツズマブの臨床開発は、２０１０年に終了した（Ｌａｓｚｌｏ  ＧＳら、Ｂｌｏｏｄ  Ｒｅｖ  ２８：１４３−５３，２０１４）。
【０１０３】
ＡＶＥ９６３３は、ヒト化ＩｇＧ１  抗ＣＤ３３抗体／マイタンシノイド複合体である。単剤としては、ＡＭＬ患者では非常に控えめな活性であった。ゆえにその臨床開発は終了した（Ｌａｓｚｌｏ  ＧＳら、Ｂｌｏｏｄ  Ｒｅｖ  ２８：１４３−５３，２０１４）。
【０１０４】
ＨｕＭ−１９５／ｒＧｅｌは、組換えゲロニン（ｇｅｌｏｎｉｎ）毒素と複合体化されたヒト化抗ＣＤ３３抗体である。第Ｉ相臨床試験では、用量規定毒性として低酸素症と低血圧を伴い、非常に控えめな臨床活性を示した（Ｂｏｒｔｈａｋｕｒ  Ｇら、Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ  ９８：２１７−２１，２０１３）。
【０１０５】
リンツズマブ−Ａｃ２２５（Ａｃｔｉｍａｂ）は、リンツズマブのＡｃ２２５複合体化型である。ＡＭＬの第Ｉ相臨床試験で使用された。予備データは、患者の６７％において骨髄芽細胞の減少を示した。しかし、完全寛解は観察されず、用量規定毒性としてグレード４の血小板減少症が観察された（Ｒａｖａｎｄｉ  Ｆら、Ｂｌｏｏｄ  １２２：１４６０−１４６０，２０１３）。さらに放射性標識抗体の複雑なロジスティックがこれらの不都合な点に加えられる。
【０１０６】
リンツズマブ−Ｂｉ２１３は放射性標識リンツズマブの別形態である。ＡＭＬ患者に対する第Ｉ／ＩＩ相臨床試験の結果は、骨髄芽細胞の著しい減少を示した。それにもかかわらず患者の１６％はグレード３／４の肝機能異常を示し、最大耐性量を投与された患者の１０％が治療により死亡した（Ｒｏｓｅｎｂｌａｔ  ＴＬら、Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １６：５３０３−１１，２０１０）。
【０１０７】
ＡＭＧ３３０は、リンカーを介して結合された抗ＣＤ３３抗体と抗ＣＤ３抗体のｓｃＦｖから構成された二重特異性Ｔ細胞会合体（ＢｉＴＥ（登録商標））である。インビトロでは、ＡＭＧ３３０は、ＡＭＬ患者由来のＴ細胞を活性化し、拡張させた。インビボでは、ＡＭＧ３３０は、皮下ＡＭＬの増殖を遅延させ得たが、腫瘍の縮小にはつながらなかった（Ａｉｇｎｅｒ  Ｍら、Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ２７：１１０７−１５，２０１３）。さらにＡＭＧ３３０は、ヒトＡＭＬ細胞株を注射したマウスの５０％を救った（Ｆｒｉｅｄｒｉｃｈ  Ｍら、Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ  １３：１５４９−５７，２０１４）。しかし薬剤のサイズが小さく、それによりインビボ半減期が短くなるために、臨床活性を持たせるためには２６日間、毎日抗体を注射する必要があった。治療抵抗性／再発性のＡＭＬ患者の治療に関する第Ｉ相臨床試験（ＮＣＴ０２５２０４２７）は、一時中断された後、再度リクルートを開始した。数週間、患者を入院させる必要がある継続的な薬剤点滴は、この剤の不利な点である。
提供される抗体剤
【０１０８】
本開示は、ｈｕＭ１９５のバリアントである多重特異性抗体剤（例えば、二重特異性抗体剤）を開発することが望ましいという認識を包含する。本開示は、かかる多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂ剤）を特に提供する。一部の実施形態では、本開示の多重特異性抗体剤は、ｈｕＭ１９５（すなわち抗ＣＤ３３部分）に基づく第一の結合部分と、第二の結合部分を含有する。本開示は、例えば一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）との抗体融合体など、抗ＣＤ３３部分を含む特定の多重特異性抗体剤を提供する。
【０１０９】
本開示は、少なくとも一部の実施形態では、白血病に対してポリクローナル細胞障害性Ｔリンパ球を誘導する注射可能な多重特異性抗体剤（例えば、非経口投与用のＣＤ３３−ＢｓＡｂ剤）が、望ましい治療剤および／または診断剤となるであろうという認識を包含する。一部の実施形態では、かかる多重特異性抗体剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤（ＢｓＡｂ））に対して想定されるいくつかの利点としては、通常の癌外来診療所において患者が利用可能であること、外来患者として投与され得ること、および／または合理的なコストで提供され得ること、が挙げられる。しかしながら、数多くの可能性のあるＢｓＡｂのプラットフォームがあることを考慮すると（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  Ｒ．，ＭＡｂｓ  ４，２０１２）、最も臨床的に有効な設計に対するコンセンサスが存在する。ほとんどのＣＤ３３−ＣＤ３二重特異性抗体構築体は、ＣＤ３３およびＣＤ３に対して一価である。もし抗体剤が抗ＣＤ３に関して二価であると仮定すると、Ｔ細胞の非特異的活性化は臨床的禁忌であろう（少なくとも部分的にはサイトカインストームの誘発原因であると考えられている）。しかしマウスＯＫＴ３は二価マウスＩｇＧであり、最初にＦＤＡに承認されたモノクローナル抗体であった。１９８６年以来、同種腎移植、心移植および肝移植の後の臓器拒絶の治療に広く使用されてきた。１９９６年に、移植拒絶の予防には安全であることが判明した。数十年の間、より効果的な薬剤によって陳腐化されるごく最近まで市場で販売され続けてきた。一価の剤の一つの大きな弱点は、腫瘍抗原結合の親和性の低さである。本開示は、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）のアフィニティが相当に改善されない限り、正常組織と腫瘍を差別して標的化することは困難であろうという認識を包含する。
【０１１０】
例えば一部の実施形態では、提供される多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）は、ＩｇＧ−ｓｃＦｖの形式を使用する。多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）は、現行のＣＤ３３抗体剤を越える利点を提供し得る。理論に束縛されるものではないが、本開示の多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）は、多くの望ましい特徴を有することが想定される。一部の実施形態では、そのような望ましい特徴としては、以下のうちの一つまたは複数が挙げられる：（１）腫瘍取り込みを最大化する最適なサイズ（１００〜２００ｋｄ）、（２）親和性を維持するための、腫瘍標的へと向かう二価性、（３）哺乳類細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）において、任意のＩｇＧ（重鎖および軽鎖）のように自然に組み立てられ、標準的なプロテインＡアフィニティクロマトグラフィーにより精製可能な足場、（４）抗ＣＤ３構成要素を機能的に一価の状態にする構造的アレンジメントにより、Ｔ細胞の非特異的活性化を減少させる、（５）動物モデルで実証された腫瘍標的化効率を有する足場。さらに、理論に束縛されるものではないが、ＩｇＧ−ｓｃＦｖ形式の本開示の多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）は、Ｔ細胞をベースとした治療法全般を悩ますＰＤ１−ＰＤＬ１阻害を克服し得ることが想定される。一部の実施形態では、本開示の多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖなどの二重特異性抗体剤）は、ＣＤ３受容体を介してポリクローナルなＴ細胞をリクルートすることができる。
【０１１１】
一部の実施形態では、本開示の多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）は、インビトロにおいてピコモル単位のＥＣ５０で、抗腫瘍応答を生じさせ得る。一部の実施形態では、本開示のＣＤ３３−ＢｓＡｂ剤は、インビトロにおいて０．０１ｐＭ〜５００ｎＭの範囲のＥＣ５０で、癌細胞（例えば、ＡＭＬ細胞株などの癌細胞株）の実質的な（例えば、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％を越える）殺傷を誘導することができる。一部の実施形態では、本開示のＣＤ３３−ＢｓＡｂ剤は、インビトロにおいて０．１ｐＭ〜１ｎＭの範囲のＥＣ５０で、癌細胞（例えば、ＡＭＬ細胞株などの癌細胞株）の実質的な（例えば、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％を越える）殺傷を誘導することができる。
【０１１２】
一部の実施形態では、多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）は、前臨床マウスモデルにおいて癌を除去することができる。一部の実施形態では、本開示のＣＤ３３−ＢｓＡｂ剤は、前臨床マウスモデルにおいて、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％まで癌細胞量（例えば癌細胞の存在量）を減少させることができる。一部の特定の実施形態では、ＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖ剤は、前臨床マウスモデルにおいて癌を除去することができる。一部の特定の実施形態では、ＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖ剤は、前臨床マウスモデルにおいて、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％まで骨髄性白血病の癌細胞量（例えば癌細胞の存在量）を減少させることができる。
【０１１３】
一部の実施形態では、多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）は、前臨床マウスモデルにおいて骨髄性白血病を除去することができる。一部の実施形態では、本開示のＣＤ３３−ＢｓＡｂ剤は、前臨床マウスモデルにおいて、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％まで骨髄性白血病の癌細胞量（例えば癌細胞の存在量）を減少させることができる。一部の特定の実施形態では、ＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖ剤は、前臨床マウスモデルにおいて骨髄性白血病を除去することができる。一部の特定の実施形態では、ＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖ剤は、前臨床マウスモデルにおいて、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％まで骨髄性白血病の癌細胞量（例えば癌細胞の存在量）を減少させることができる。一部の実施形態では、提供される多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）は、インビボで有効である。以下の実施例に記載されるように、白血病細胞量が多い場合であっても、ヒト白血病細胞株をインビボで担持する動物において、例示的ＣＤ３３二重特異性抗体剤は、回復を実現した（図５〜７を参照）。従来的な知識では急速なエンドサイトーシスと、腫瘍細胞表面からの抗原の消失が予測されていた、ＣＤ３３に対する二価性にも関わらずである。
【０１１４】
一部の実施形態では、多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）は、前臨床マウスモデルにおいて髄外性白血病細胞量を減少させることができる。一部の実施形態では、本開示のＣＤ３３−ＢｓＡｂ剤は、前臨床マウスモデルにおいて、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％まで髄外性白血病の細胞量（例えば癌細胞の存在量）を減少させることができる。一部の特定の実施形態では、ＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖ剤は、前臨床マウスモデルにおいて髄外性白血病細胞量を減少させる。一部の特定の実施形態では、ＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖ剤は、前臨床マウスモデルにおいて、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％まで髄外性白血病の細胞量（例えば癌細胞の存在量）を減少させることができる。
【０１１５】
一部の実施形態では、本開示の多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂ  などの二重特異性抗体剤）は、ＩｇＧ１軽鎖のカルボキシ末端に融合された抗ＣＤ３ヒト化ＯＫＴ３（ｈｕＯＫＴ３）一本鎖Ｆｖ断片（ＳｃＦｖ）を含む。
【０１１６】
一部の実施形態では、ＣＤ３３に結合する多重特異性抗体剤は、ヒト化Ｍ１９５抗体である。一部の実施形態では、ヒト化Ｍ１９５抗体は、例えばＩＧＨＶ１−３＊０１およびＩＧＨＪ４＊０１など、ヒトのフレームワーク上に移植されたＭ１９５重鎖ＣＤＲ配列（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）を有する重鎖可変領域を含有する。一部の実施形態では、ヒト化Ｍ１９５抗体は、例えばＩＧＫＶ３Ｄ１１＊０２およびＩＧＫＪ４＊０１など、ヒトのフレームワーク上に移植されたＭ１９５軽鎖ＣＤＲ配列を有する軽鎖可変領域を含有する。ヒト化Ｍ１９５の重鎖および軽鎖の可変領域配列の例を以下に提供する：
【０１１７】
配列番号１−Ｈ１可変領域
ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＶＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＭＨＷＶＫＱＡＨＧＱＳＬＥＷＩＧＹＩＹＰＹＮＧＧＴＧＹＮＱＫＦＫＳＫＡＴＬＴＶＤＮＳＡＳＴＡＹＭＥＶＲＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＲＰＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
【０１１８】
配列番号２−Ｈ２可変領域
ＥＶＱＬＶＱＳＧＰＥＶＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＭＨＷＶＲＱＡＨＧＱＳＬＥＷＩＧＹＩＹＰＹＮＧＧＴＧＹＮＱＫＦＫＳＲＡＴＬＴＶＤＮＳＡＳＴＡＹＭＥＶＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＲＰＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
【０１１９】
配列番号３−Ｌ１可変領域
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＶＳＬＧＱＲＡＴＩＳＣＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＩＳＦＭＮＷＦＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＱＧＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＨＰＭＥＥＤＤＴＡＭＹＦＣＱＱＳＫＥＶＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
【０１２０】
配列番号４−Ｌ２可変領域
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＶＳＬＧＥＲＡＴＩＳＣＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＩＳＦＭＮＷＦＱＱＫＰＧＱＰＰＲＬＬＩＹＡＡＳＮＱＧＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＰＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＭＥＰＥＤＦＡＭＹＦＣＱＱＳＫＥＶＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
【０１２１】
一部の実施形態では、提供される多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）は、抗ＣＤ３３重鎖を含み、この場合において当該抗ＣＤ３３重鎖可変領域は、配列番号１または２に対して、少なくとも約５０％（例えば少なくとも約５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一である配列を含む。一部の実施形態では、提供される多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）は、配列番号３または４に対して、少なくとも約５０％（例えば少なくとも約５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一である配列を含有する抗ＣＤ３３軽鎖可変ドメインを含む。
【０１２２】
一部の実施形態では、本開示のＣＤ３３−ＢｓＡｂは、重鎖と軽鎖融合ポリペプチドを含み、この場合において当該重鎖可変領域は、配列番号１または２に対して少なくとも約５０％（例えば少なくとも約５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一である配列を含み、そして当該融合ポリペプチドの軽鎖部分は、配列番号３または４に対して少なくとも約５０％（例えば少なくとも約５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一である配列を含む。
【０１２３】
一部の実施形態では、本開示のＣＤ３３−ＢｓＡｂは、配列番号２４に対して少なくとも約５０％（例えば少なくとも約５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一である配列を含有する重鎖と、配列番号２６に対して少なくとも約５０％（例えば少なくとも約５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一である配列を含む融合ポリペプチドの軽鎖部分を含む。
【０１２４】
配列番号５−Ｈ１  ｃＤＮＡ配列（リーダー配列は下線）
【化１−１】
2020517591.tif 000003
【化１−２】
2020517591.tif 000004
【０１２５】
配列番号６−Ｈ２  ｃＤＮＡ配列（リーダー配列は下線）
【化２−１】
2020517591.tif 000005
【化２−２】
2020517591.tif 000006
【０１２６】
配列番号７−Ｌ１  ｃＤＮＡ配列（リーダー配列は下線）
【化３】
2020517591.tif 000007
【０１２７】
配列番号８−Ｌ２  ｃＤＮＡ配列（リーダー配列は下線）
【化４】
2020517591.tif 000008
【０１２８】
一部の実施形態では、提供される多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）は、抗ＣＤ３３重鎖を含み、この場合において当該抗ＣＤ３３重鎖可変領域は、配列番号５または６に対して、少なくとも約５０％（例えば少なくとも約５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一である配列によりコードされる。一部の実施形態では、提供される多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）は、配列番号７または８に対して、少なくとも約５０％（例えば少なくとも約５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一である配列によりコードされる抗ＣＤ３３軽鎖可変ドメインを含む。
【０１２９】
一部の実施形態では、本開示のＣＤ３３−ＢｓＡｂは、重鎖と軽鎖融合ポリペプチドを含み、この場合において当該重鎖可変領域は、配列番号５または６に対して少なくとも約５０％（例えば少なくとも約５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一である配列によりコードされ、そして当該融合ポリペプチドの軽鎖部分は、配列番号７または８に対して少なくとも約５０％（例えば少なくとも約５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一である配列によりコードされる。
【０１３０】
一部の実施形態では、本開示のＣＤ３３−ＢｓＡｂは、配列番号２３に対して少なくとも約５０％（例えば少なくとも約５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一である配列によりコードされる重鎖と、配列番号２５に対して少なくとも約５０％（例えば少なくとも約５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一である配列によりコードされる融合ポリペプチドの軽鎖部分を含む。
【０１３１】
一部の実施形態では、多重特異性抗体剤は、二つの重鎖と二つの軽鎖を含有するモノクローナル抗ＣＤ３３抗体を含有する。一部の実施形態では、モノクローナル抗ＣＤ３３抗体は、ヒト化Ｍ１９５抗体である。ヒト化Ｍ１９５の重鎖および軽鎖の配列の例を以下に提供する：
【０１３２】
配列番号９−重鎖配列（Ｈ２）
ＥＶＱＬＶＱＳＧＰＥＶＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＭＨＷＶＲＱＡＨＧＱＳＬＥＷＩＧＹＩＹＰＹＮＧＧＴＧＹＮＱＫＦＫＳＲＡＴＬＴＶＤＮＳＡＳＴＡＹＭＥＶＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＲＰＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
【０１３３】
配列番号１０−軽鎖配列（Ｌ２）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＶＳＬＧＥＲＡＴＩＳＣＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＩＳＦＭＮＷＦＱＱＫＰＧＱＰＰＲＬＬＩＹＡＡＳＮＱＧＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＰＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＭＥＰＥＤＦＡＭＹＦＣＱＱＳＫＥＶＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
【０１３４】
一部の実施形態では、提供される多重特異性抗体剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂ  などの二重特異性抗体剤）は、重鎖と軽鎖融合ポリペプチドを含み、この場合において当該重鎖は、配列番号９に対して少なくとも約５０％（例えば少なくとも約５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一である配列を含み、そして当該融合ポリペプチドの軽鎖部分は、配列番号１０に対して少なくとも約５０％（例えば少なくとも約５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一である配列を含む。
【０１３５】
一部の実施形態では、多重特異性抗体剤は、モノクローナル抗体（例えばｈｕＣＤ３３モノクローナル抗体）とｓｃＦｖを含有する。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、モノクローナル抗体（例えば、ｈｕＣＤ３３モノクローナル抗体）の軽鎖に融合される（すなわち共有結合される）。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、モノクローナル抗体（例えば、ｈｕＣＤ３３モノクローナル抗体）の軽鎖のＣ末端に融合される。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、モノクローナル抗体（例えば、ｈｕＣＤ３３モノクローナル抗体）の軽鎖のＣ末端に直接的に融合される。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、モノクローナル抗体（例えば、ｈｕＣＤ３３モノクローナル抗体）の軽鎖のＣ末端にリンカー配列を介して共有結合される。
【０１３６】
一部の実施形態では、多重特異性抗体剤は、二つの重鎖と二つの融合ポリペプチドを含有する。一部の実施形態では、当該二つの重鎖は同一である。一部の実施形態では、当該二つの融合ポリペプチドは同一である。一部の実施形態では、提供される多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）は、二つの同一の重鎖と、二つの同一の軽鎖融合ポリペプチドを含有する。二つの同一の重鎖と、二つの同一の軽鎖融合ポリペプチドを有する当該多重特異性抗体剤は、各標的に対して二価（例えば、ＣＤ３３および第二の標的のそれぞれに対し二価）の結合を伴う四価である。一部の実施形態では、融合ポリペプチドは、ｓｃＦｖ、ＶＨＨ、または任意の他の結合ドメインに融合されたイムノグロブリン軽鎖を含有する。一部の実施形態では、融合ポリペプチドは、ｓｃＦｖに融合されたイムノグロブリン軽鎖を含有する。
【０１３７】
一部の実施形態では、本開示の多重特異性抗体剤の融合ポリペプチドは、リンカーをさらに含有する。例えばＧｌｙ−Ｓｅｒリンカー（例えばＧＧＧＧＳリンカー）など、多数のリンカーが当分野に公知である。一部の実施形態では、融合ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向けて、イムノグロブリン軽鎖、リンカー、およびｓｃＦｖを含有する。リンカーの組成および長さは、必要に応じて変化しうる。
【０１３８】
一部の特定の実施形態では、提供される多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）またはその配列は、抗ＣＤ３３可変ドメインと、例えばＴ細胞上の部分（例えば、ＣＤ３）に結合するドメイン、有機化合物または無機化合物（例えば、ベンジル−ＤＯＴＡ−金属）に結合するドメインなど、別の結合ドメインを含有してもよい。一部の特定の実施形態では、提供される多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）、またはその配列は、抗ＣＤ３３可変ドメインと、腫瘍細胞障害を目的としたＴ細胞再標的化のための抗ＯＫＴ３、または多重工程前標的化を目的としたベンジル−ＤＯＴＡ−金属のＣ８２５、またはアゴニストとして抗４−１ＢＢ−ｓｃＦｖを用いた、またはＣＤ１３７を用いたＡＤＣＣを目的としたクローン３５、ＣＤ１３７、アゴニストとして４−１ＢＢＬを用いたＡＤＣを目的とした４−１ＢＢＬを含む、別の結合ドメインを含有してもよい。
【０１３９】
一部の実施形態では、多重特異性抗体剤は、抗ＣＤ３３結合ドメインと抗ＣＤ３結合ドメインを含む二重特異性抗体剤である。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメインは、ｓｃＦｖである。抗ＣＤ３  ｓｃＦｖ配列の例を以下に提供する：
【０１４０】
配列番号１１−ジスルフィド結合なしのｈｕＯＫＴ３  ｓｃＦｖ：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＲＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＳＲＧＹＴＮＹＮＱＫＦＫＤＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＡＦＬＱＭＤＳＬＲＰＥＤＴＧＶＹＦＣＡＲＹＹＤＤＨＹＳＬＤＹＷＧＱＧＴＰＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＮＷＹＱＱＴＰＧＫＡＰＫＲＷＩＹＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＦＴＦＧＱＧＴＫＬＱＩＴＲ
【０１４１】
配列番号１２−５−ａａリンカーを有するｈｕＯＫＴ３  ｓｃＦｖ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＲＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＣＬＥＷＩＧＹＩＮＰＳＲＧＹＴＮＹＮＱＫＦＫＤＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＡＦＬＱＭＤＳＬＲＰＥＤＴＧＶＹＦＣＡＲＹＹＤＤＨＹＳＬＤＹＷＧＱＧＴＰＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＮＷＹＱＱＴＰＧＫＡＰＫＲＷＩＹＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＦＴＦＧＣＧＴＫＬＱＩＴＲ
【０１４２】
配列番号１３−１０−ａａリンカーを有するｈｕＯＫＴ３  ｓｃＦｖ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＲＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＣＬＥＷＩＧＹＩＮＰＳＲＧＹＴＮＹＮＱＫＦＫＤＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＡＦＬＱＭＤＳＬＲＰＥＤＴＧＶＹＦＣＡＲＹＹＤＤＨＹＳＬＤＹＷＧＱＧＴＰＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＮＷＹＱＱＴＰＧＫＡＰＫＲＷＩＹＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＦＴＦＧＣＧＴＫＬＱＩＴＲ
【０１４３】
配列番号１４−１５−ａａリンカーを有するｈｕＯＫＴ３  ｓｃＦｖ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＲＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＣＬＥＷＩＧＹＩＮＰＳＲＧＹＴＮＹＮＱＫＦＫＤＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＡＦＬＱＭＤＳＬＲＰＥＤＴＧＶＹＦＣＡＲＹＹＤＤＨＹＳＬＤＹＷＧＱＧＴＰＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＮＷＹＱＱＴＰＧＫＡＰＫＲＷＩＹＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＦＴＦＧＣＧＴＫＬＱＩＴＲ
【０１４４】
配列番号１５−２０−ａａリンカーを有するｈｕＯＫＴ３  ｓｃＦｖ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＲＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＣＬＥＷＩＧＹＩＮＰＳＲＧＹＴＮＹＮＱＫＦＫＤＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＡＦＬＱＭＤＳＬＲＰＥＤＴＧＶＹＦＣＡＲＹＹＤＤＨＹＳＬＤＹＷＧＱＧＴＰＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＮＷＹＱＱＴＰＧＫＡＰＫＲＷＩＹＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＦＴＦＧＣＧＴＫＬＱＩＴＲ
【０１４５】
配列番号１６−２５−ａａリンカーを有するｈｕＯＫＴ３  ｓｃＦｖ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＲＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＣＬＥＷＩＧＹＩＮＰＳＲＧＹＴＮＹＮＱＫＦＫＤＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＡＦＬＱＭＤＳＬＲＰＥＤＴＧＶＹＦＣＡＲＹＹＤＤＨＹＳＬＤＹＷＧＱＧＴＰＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＮＷＹＱＱＴＰＧＫＡＰＫＲＷＩＹＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＦＴＦＧＣＧＴＫＬＱＩＴＲ
【０１４６】
配列番号１７−３０−ａａリンカーを有するｈｕＯＫＴ３  ｓｃＦｖ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＲＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＣＬＥＷＩＧＹＩＮＰＳＲＧＹＴＮＹＮＱＫＦＫＤＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＡＦＬＱＭＤＳＬＲＰＥＤＴＧＶＹＦＣＡＲＹＹＤＤＨＹＳＬＤＹＷＧＱＧＴＰＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＮＷＹＱＱＴＰＧＫＡＰＫＲＷＩＹＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＦＴＦＧＣＧＴＫＬＱＩＴＲ
【０１４７】
配列番号２７−ジスルフィド結合を有するｈｕＯＫＴ３  ｓｃＦｖ：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＲＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＣＬＥＷＩＧＹＩＮＰＳＲＧＹＴＮＹＮＱＫＦＫＤＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＡＦＬＱＭＤＳＬＲＰＥＤＴＧＶＹＦＣＡＲＹＹＤＤＨＹＳＬＤＹＷＧＱＧＴＰＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＮＷＹＱＱＴＰＧＫＡＰＫＲＷＩＹＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＦＴＦＧＣＧＴＫＬＱＩＴＲ
【０１４８】
一部の実施形態では、本開示のＣＤ３３−ＢｓＡｂは軽鎖融合ポリペプチドを含み、当該軽鎖融合ポリペプチドは、配列番号１１〜１７および２７のうちのいずれか一つに対し、少なくとも約５０％（例えば、少なくとも約５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一である配列を含む。
【０１４９】
一部の実施形態では、多重特異性抗体剤は、抗ＣＤ３３結合ドメインと抗ベンジル−ＤＯＴＡ結合ドメインを含む二重特異性抗体剤である。そのような二重特異性抗体剤は、例えば、前標的化放射免疫療法（ＰＲＩＴ：ｐｒｅｔａｒｇｅｔｅｄ  ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ）において使用することができる。一部の実施形態では、二重特異性抗体剤（例えば抗ＣＤ３３および抗ベンジル−ＤＯＴＡの剤）は、多重工程前標的化の最初の工程で使用することができ、次いで、洗浄剤としてベンジル−ＤＯＴＡ（金属）−デキストランを使用して血液を清浄化し、第三の工程で例えばベンジル−ＤＯＴＡ（金属）−放射性金属、ベンジル−ＤＯＴＡ（金属）−ナノ粒子、ベンジル−ＤＯＴＡ（金属）−リポソーム、ベンジル−ＤＯＴＡ（金属）−薬剤、ベンジル−ＤＯＴＡ（金属）−ＤＮＡ、ベンジル−ＤＯＴＡ（金属）−ＲＮＡ、およびベンジル−ＤＯＴＡ（金属）−毒素などのベンジル−ＤＯＴＡ（金属）−複合体化治療剤を導入する。Ｃ８２５は、ベンジル−ＤＯＴＡ−金属複合体のタイプごとに異なるアフィニティを有しているため、洗浄剤用の前標的化Ｃ８２５と、ベンジル−ＤＯＴＡ−リガンドのアフィニティは正確に制御することができる。例示的なベンジル−ＤＯＴＡ  ｓｃＦｖ融合ポリペプチドの配列、およびＣＤ３３軽鎖抗ベンジル−ＤＯＴＡ  ｓｃＦｖ融合ポリペプチドの配列を以下に提供する：
【０１５０】
配列番号１８−Ｃ８２５−ＶＨ−（Ｇ４Ｓ）６−ＶＬ
ＳＨＶＫＬＱＥＳＧＰＧＬＶＱＰＳＱＳＬＳＬＴＣＴＶＳＧＦＳＬＴＤＹＧＶＨＷＶＲＱＳＰＧＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＳＧＧＧＴＡＹＮＴＡＬＩＳＲＬＮＩＹＲＤＮＳＫＮＱＶＦＬＥＭＮＳＬＱＡＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＲＧＳＹＰＹＮＹＦＤＡＷＧＣＧＴＴＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＡＶＶＩＱＥＳＡＬＴＴＰＰＧＥＴＶＴＬＴＣＧＳＳＴＧＡＶＴＡＳＮＹＡＮＷＶＱＥＫＰＤＨＣＦＴＧＬＩＧＧＨＮＮＲＰＰＧＶＰＡＲＦＳＧＳＬＩＧＤＫＡＡＬＴＩＡＧＴＱＴＥＤＥＡＩＹＦＣＡＬＷＹＳＤＨＷＶＩＧＧＧＴＲＬＴＶＬＧ
【０１５１】
配列番号１９−（ＣＤ３３−ＶＬ−ＣＬ−（Ｇ４Ｓ）３−マウスＣ８２５−ＶＨ−（Ｇ４Ｓ）６−ＶＬ）
【化５−１】
2020517591.tif 000009
【化５−２】
2020517591.tif 000010
【０１５２】
一部の実施形態では、本開示のＣＤ３３−ＢｓＡｂは軽鎖融合ポリペプチドを含み、当該軽鎖融合ポリペプチドは、配列番号１８または１９に対し、少なくとも約５０％（例えば、少なくとも約５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一である配列を含む。
【０１５３】
一部の実施形態では、多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂ剤などの二重特異性抗体剤）は、バリアントＦｃ領域を含有し、前述のバリアントＦｃ領域は、野生型Ｆｃ領域と比較して少なくとも１個のアミノ酸改変を含有する。特定の実施形態では、Ｆｃ改変は、エフェクター機能を変える改変を含み得るが、これに限定されない。いくつかの実施形態では、Ｆｃバリアントは、１個または複数の改変された糖型を含有する。すなわちＦｃバリアントは、Ｆｃ領域を含有する分子に共有結合された炭水化物組成物を含有し、前述の炭水化物組成物は、Ｆｃ領域を含有する親分子の炭水化物組成物とは化学的に異なっている。バリアントＦｃ配列を有するＣＤ３３重鎖の例を以下に提供する：
【０１５４】
配列番号２０−特異的変異（ＬＡＬＡ）を使用したＦｃサイレンシングを伴うＣＤ３３重鎖
【化６−１】
2020517591.tif 000011
【化６−２】
2020517591.tif 000012
【０１５５】
配列番号２１−特異的変異（ＬＡＬＡ＋Ｋ３２２Ａ）を使用したＦｃサイレンシングを伴うＣＤ３３重鎖
【化７】
2020517591.tif 000013
【０１５６】
配列番号２２−特異的変異（Ｄ２６５Ａ）を使用したＦｃサイレンシングを伴うＣＤ３３重鎖
【化８】
2020517591.tif 000014
【０１５７】
一部の実施形態では、多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂ剤などの二重特異性抗体剤）は、グリコシル化部位が改変されるが、例えば標的結合活性などの抗体の機能性を変化させないことが好ましい。本明細書において使用される場合、「グリコシル化部位」は、オリゴ糖（すなわち、ともに連結された二つ以上の単純糖を含有する炭水化物）が特異的に、及び共有結合的に付加する抗体における任意の特定のアミノ酸配列を含む。オリゴ糖側鎖は、典型的にはＮ結合又はＯ結合のいずれかにより抗体の主鎖に連結されている。Ｎ結合型グリコシル化とは、アスパラギン残基側鎖へのオリゴ糖部分の付加を指す。Ｏ結合型グリコシル化とは、例えばセリン、スレオニンなどのヒドロキシアミノ酸へのオリゴ糖部分の付加を指す。フコースおよび末端Ｎ−アセチルグルコサミンを含む特定のオリゴ糖を欠くＦｃ糖型、ｈｕ３Ｆ８−Ｈ１Ｌ１−ＩｇＧ１ｎは、特にＣＨＯ細胞（およびＣＨＯ−ｓ、ＣＨＯ−Ｋ１などを含むＣＨＯバリアント）で産生され、ＡＤＣＣエフェクター機能の強化を示した。
【０１５８】
一部の実施形態では、本開示は、グリコシル化部位を付加または欠失させることにより、本開示の抗体の炭水化物内容を改変する方法を包含する。抗体の炭水化物内容を改変するための方法は当該技術分野で公知であり、本開示内に包含される。例えば、米国特許第６，２１８，１４９号；ＥＰ０  ３５９  ０９６Ｂ１；米国特許公開第２００２／００２８４８６号；ＷＯ０３／０３５８３５；米国特許出願公開第２００３／０１１５６１４号；米国特許第６，２１８，１４９号；米国特許第６，４７２，５１１号を参照のこと。これらすべてが、その全体で参照により本明細書に組み込まれる。他の実施形態では、本開示は、抗体の一つまたは複数の内因性の炭水化物部分を欠失させることにより、本開示抗体の炭水化物内容を改変する方法を包含する。特定の実施形態では、本開示は、２９７位をアスパラギンからアラニンへと改変することにより、抗体のＦｃ領域のグリコシル化部位を欠失させることを含む。一部の実施形態では、多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂ剤）は、ＣＨ２ドメイン中にＮ２９７Ａ変異を含有する。一部の実施形態では、Ｎ２９７Ａ変異は、非グリコシル化を生じさせ、これによりＦｃＲまたはＣ１ｑ結合が低下する。一部の実施形態では、抗体剤は、Ｎ２９７Ａ変異およびＫ３２２Ａ変異を含有するＦｃ領域を含有する重鎖を含有する。一部の実施形態では、抗体剤は、Ｎ２９７Ａ変異およびＤ２６５Ａ変異を含有するＦｃ領域を含有する重鎖を含有する。一部の実施形態では、抗体剤は、Ｎ２９７Ａ変異、Ｄ２６５Ａ変異、およびＫ３２２Ａ変異を含有するＦｃ領域を含有する重鎖を含有する。
【０１５９】
遺伝子操作された糖型は、限定されないが、エフェクター機能の増強又は低減をはじめとする様々な目的に対し有用であり得る。遺伝子操作された糖型は、当業者の当分野に公知の任意の方法により作製することができ、例えば、遺伝子操作された発現株もしくはバリアント発現株を使用することにより、例えばＤＩ  Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩ１１）などの一つ以上の酵素と共発現させることにより、様々な生物体もしくは様々な生物体由来の細胞株においてＦｃ領域を含有する分子を発現させることにより、又はＦｃ領域を含有する分子が発現された後に炭水化物を改変することにより、作製することができる。改変糖型を作製する方法は当分野において公知であり、Ｕｍａｎａら、１９９９，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １７：１７６−１８０；Ｄａｖｉｅｓら、２００１７  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｅｎｇ  ７４：２８８−２９４；Ｓｈｉｅｌｄｓら、２００２，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７７：２６７３３−２６７４０；Ｓｈｉｎｋａｗａら、２００３，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７８：３４６６−３４７３）米国特許第６，６０２，６８４号、米国特許第１０／２７７，３７０号、米国特許第１０／１１３，９２９；ＰＣＴ  ＷＯ００／６１７３９Ａ１；ＰＣＴ  ＷＯ０１／２９２２４６Ａ１；ＰＣＴ  ＷＯ０２／３１１１４０Ａ１；ＰＣＴ  ＷＯ０２／３０９５４Ａ１；ＰＯＴＩＬＬＥＧＥＮＴ（商標）技術（Ｂｉｏｗａ、Ｉｎｃ．ニュージャージー州プリンストン）；ＧＬＹＣＯＭＡＢ（商標）グリコシル化改変法（ＧＬＹＣＡＲＴ  ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ＡＧ社、スイス、チューリッヒ）に記載される方法などが挙げられるが、これらに限定されない。これら各々が、その全体で参照により本明細書に組み込まれる。例えば、ＷＯ０００６１７３９；ＥＡ０１２２９１２５；ＵＳ２００３０１１５６１４；Ｏｋａｚａｋｉら、２００４，ＪＭＢ，３３６：１２３９−４９を参照のこと。これら各々が、その全体で参照により本明細書に組み込まれる。
【０１６０】
本開示のポリペプチド断片は、本明細書において別段に検討される特定の抗体断片に加えて、タンパク質分解性断片、ならびに欠失断片を含む。
【０１６１】
本開示に従い有用な多重特異性抗体剤のバリアントは、アミノ酸の置換、欠失、または挿入によりアミノ酸配列が変化したポリペプチドを含む。バリアントは、天然であってもよく、または非天然であってもよい。非天然型のバリアントは、当技術分野で公知の突然変異誘導技術を使用して作製されてもよく、または非天然のアミノ酸を使用して作製されてもよい。バリアントポリペプチドは、保存的または非保存的なアミノ酸の置換、欠失、または付加を含有してもよい。
【０１６２】
さらに「誘導体」として、２０個の標準アミノ酸の天然アミノ酸誘導体を一つまたは複数含有するポリペプチドが含まれる。例えば、４−ヒドロキシプロリンがプロリンの代わりとなってもよい。５−ヒドロキシリシンがリシンの代わりとなってもよい。３−メチルヒスチジンがヒスチジンの代わりとなってもよい。ホモセリンがセリンの代わりとなってもよい。そしてオルニチンがリシンの代わりとなってもよい。
【０１６３】
本明細書に記載される配列と実質的に同じアミノ酸配列は、保存的アミノ酸の置換、ならびにアミノ酸の欠失および／または挿入を含有する配列を含む。保存的アミノ酸置換とは、第一のアミノ酸と類似した化学的、及び／又は物理的特性（例えば、電荷、構造、極性、疎水性／親水性）を有する第二のアミノ酸による第一のアミノ酸の置換を指す。保存的置換としては、一つのアミノ酸が、以下の群内の別のアミノ酸により置換されることが挙げられる：リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、およびヒスチジン（Ｈ）；アスパラギン酸（Ｄ）およびグルタミン酸（Ｅ）；アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、チロシン（Ｙ）、Ｋ、Ｒ、Ｈ、Ｄ、およびＥ；アラニン（Ａ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、プロリン（Ｐ）、フェニルアラニン（Ｆ）、トリプトファン（Ｗ）、メチオニン（Ｍ）、システイン（Ｃ）、およびグリシン（Ｇ）；Ｆ、ＷおよびＹ；Ｃ、ＳおよびＴ。
【０１６４】
当然ながら、アミノ酸置換の数は、上記をはじめとする多くの因子に応じて当業者が決定する。一般的に、任意の所与の多重特異性抗体剤に対するアミノ酸の置換、挿入、または欠失の数は、本明細書に記載されるように、例えば１〜３０個、またはその間の任意の範囲もしくは値など、４０、３０、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１個以下であろう。
【０１６５】
機能に必須である本開示の多重特異性抗体剤中のアミノ酸は、部位特異的突然変異誘導法またはアラニンスキャン突然変異誘導法（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ、上記、Ｃｈａｐｔｅｒｓ  ８，１５；Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４４：１０８１−１０８５（１９８９））などの当分野に公知の方法により特定することができる。後者の手順は、分子のすべての残基に単一のアラニン突然変異を導入するものである。得られた突然変異体分子をその後、例えば限定されないが、少なくともＣＤ３３への結合などの生物活性に関して検証する。抗体結合に必須の部位は、例えば結晶化、核磁気共鳴法または光親和性標識法光（Ｓｍｉｔｈら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：８９９−９０４（１９９２）およびｄｅ  Ｖｏｓら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５５：３０６−３１２（１９９２））などの構造解析により特定することもできる。
【０１６６】
一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性抗体剤は、有機部分の共有結合により改変されてもよい。そのような改変により、薬物動態特性（例えば、インビボ血清半減期の延長）が改善された抗体剤を作製してもよい。有機部分は、直鎖状または分岐状の親水性高分子基、脂肪酸基、または脂肪酸エステル基であってもよい。特定の実施形態では、親水性高分子基は、約８００〜約１２０，０００ダルトンの分子量を有してもよく、ポリアルカングリコール（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ））、炭水化物ポリマー、アミノ酸ポリマー、またはポリビニルピロリドンであってもよく、そして脂肪酸基または脂肪酸エステル基は、約８〜約４０個の炭素原子を含有してもよい。
【０１６７】
改変された多重特異性抗体剤は、例えば一つまたは複数の改変剤との反応などの適切な方法を使用して調製されてもよい。「改変剤」という用語は本明細書で使用される場合、活性化基を含有する適切な有機の基（例えば、親水性ポリマー、脂肪酸、脂肪酸エステル）を指す。「活性化基」は、適切な条件下で第二の化学基と反応し、それにより改変剤と第二の化学基の間に共有結合を形成することができる化学的部分または官能基である。例えば、アミン反応性の活性化基としては、トシル酸塩、メシル酸塩、ハロ（クロロ、ブロモ、フルオロ、ヨード）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル（ＮＨＳ）などの求電子基が挙げられる。チオールと反応し得る活性化基としては、例えば、マレイミド、ヨードアセチル、アクリロイル、ピリジルジスルフィド、５−チオール−２−ニトロ安息香酸チオール（ＴＮＢ−チオール）などが挙げられる。アルデヒド官能基をアミン含有分子またはヒドラジド含有分子に連結させることができ、アジド基は、三価のリン基と反応してホスホロアミド酸塩またはホスホロイミド（ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｍｉｄｅ）結合を形成することができる。分子内に活性化基を導入するための適切な方法は当技術分野で公知である（例えば、Ｈｅｒｎａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ：Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．（１９９６）を参照のこと）。活性化基は、例えば二価のＣ１−Ｃ１２基など、有機基（例えば、親水性ポリマー、脂肪酸、脂肪酸エステル）に直接結合してもよく、またはリンカー部分を介して結合してもよい。この場合において一つまたは複数の炭素原子を、酸素、窒素、または硫黄などのヘテロ原子により置換してもよい。適切なリンカー部分としては、例えば２〜３例としてテトラエチレングリコール、−−（ＣＨ２）３−−、−−ＮＨ−−が挙げられる。リンカー部分を含有する改変剤は、例えば、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）の存在下で、モノ−Ｂｏｃ−アルキルジアミン（例えば、モノ−Ｂｏｃ−エチレンジアミン、モノ−Ｂｏｃ−ジアミノヘキサン）と脂肪酸を反応させて、遊離アミンと脂肪酸カルボン酸塩の間にアミド結合を形成させることにより作製されてもよい。Ｂｏｃ保護基は、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を用いて処理することにより生成物から除去されることができ、それにより記載される別のカルボン酸塩に連結され得る一級アミン、または無水マレイン酸と反応し得る一級アミンが暴露され、得られた生成物は環化して、脂肪酸の活性化マレイミド誘導体を生成する。（例えば、Ｔｈｏｍｐｓｏｎら、ＷＯ  ９２／１６２２１を参照のこと。当該全教示は参照により本明細書に組み込まれる）。
【０１６８】
一部の実施形態では、本開示の多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）は、抗原（例えば、ＣＤ３３）に対する高いアフィニティまたは親和性を特徴とする。多重特異性抗体剤の抗原に対するアフィニティまたは親和性は、任意の適切な方法を使用して実験的に決定することができる。（例えば、Ｂｅｒｚｏｆｓｋｙら、”Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ａｎｔｉｇｅｎ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ，”  Ｉｎ  Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｅｄ．，Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９８４）；Ｋｕｂｙ，Ｊａｎｉｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９９２）、および本明細書に記載の方法を参照のこと）。特定の抗体−抗原の相互作用のアフィニティの測定結果は、異なる条件（例えば塩濃度、ｐＨ）の下で測定された場合、変化する可能性がある。したがってアフィニティおよび他の抗原結合パラメータの測定は、多重特異性抗体と抗原の標準化された溶液、および例えば本明細書に記載される緩衝液などの標準化された緩衝液を用いて行われることが好ましい。
【０１６９】
一部の実施形態では、本開示の多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）は、毒性の低さを特徴とする。一部の実施形態では、多重特異性抗体剤は、計測可能な症状の軽減、ならびに低い、および／または許容可能な毒性で、長期間、患者を治療する能力を特徴とする。低い、もしくは許容可能な免疫原性、および／または高い親和性、ならびに他の適切な特性は、得られる治療結果に寄与し得る。「低い免疫原性」は本明細書において、治療された患者の約７５％未満、または好ましくは約５０％未満において、有意なＨＡＨＡ、ＨＡＣＡまたはＨＡＭＡ反応の発現として、および／または治療された患者における低力価の発現として定義される（Ｅｌｌｉｏｔｔら、Ｌａｎｃｅｔ  ３４４：１１２５−１１２７（１９９４）、参照により本明細書に組み込まれる）。
核酸
【０１７０】
本開示は、本開示の多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂ  などの二重特異性抗体剤）、およびその断片をコードするヌクレオチド配列を含有するポリヌクレオチドを提供する。本明細書に記載される多重特異性抗体剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）は、当分野に公知の分子生物学的方法を使用して核酸分子から作製されてもよい。
【０１７１】
一部の実施形態では、核酸構築体は、多重特異性抗体剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）をコードする領域を含む。一部の実施形態では、そのような多重特異性抗体剤は、ＶＨ領域および／またはＶＬ領域を含む。所望される結合特性及び／又は機能的特性を示す抗体の特定及び選択を行った後、各抗体の可変領域を単離、増幅、クローニング、及び配列解析する。ＶＨヌクレオチド配列及びＶＬヌクレオチド配列に対し改変を行ってもよく、当該改変としては、アミノ酸をコードするヌクレオチド配列及び／もしくは制限酵素部位を担持するヌクレオチド配列の付加、アミノ酸をコードするヌクレオチド配列の欠失、又はアミノ酸をコードするヌクレオチド配列の置換が挙げられる。抗体及び／又は抗体構成要素は、ヒト抗体、ヒト化抗体、又はキメラ抗体から生成されてもよい。
【０１７２】
適切な場合には、本明細書に記載の多重特異性抗体剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）をコードする核酸配列を改変して、特定の細胞型または生物体における発現に最適化されたコドンを含ませてもよい（例えば、米国特許第５，６７０，３５６号および第５，８７４，３０４号を参照）。コドン最適化配列は、合成配列であり、及び好ましくは非コドン最適化親ポリヌクレオチドによりコードされる、同一のポリペプチド（又は全長ポリペプチドと実質的に同じ活性を有する全長ポリペプチドの生物学的に活性な断片）をコードする。一部の実施形態において、抗体構成要素の全部又は一部をコードする遺伝物質のコード領域は、特定の細胞型（例えば真核細胞又は原核細胞）に対してコドン使用を最適化するよう改変された配列を含有してもよい。例えば、本明細書に記載されるヒト化重鎖（又は軽鎖）の可変領域に対するコード配列を、細菌細胞における発現に最適化してもよい。あるいは、コード配列は、哺乳類細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）における発現に最適化されてもよい。そのような配列は、コドン最適化配列と記載される場合がある。
【０１７３】
本開示の核酸構築物は、当分野に公知の方法により発現ベクター又はウイルスベクターに挿入され、核酸分子は発現制御配列に制御可能に連結されてもよい。さらに上述の核酸分子、またはその断片のいずれかを含有するベクターが、本開示により提供される。上記の核酸分子、またはその断片のいずれかは、任意の適切なベクター内にクローニングされてもよく、およびこれを使用して、適切な任意の宿主を形質転換またはトランスフェクトしてもよい。ベクターの選択、およびそれらを構築するための方法は、当分野の当業者には普遍的に知られており、一般技術文献に記載されている（概して、”Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ＤＮＡ  Ｐａｒｔ  Ｄ，”  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１５３，ＷｕおよびＧｒｏｓｓｍａｎ編、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（１９８７）を参照のこと）。望ましくは、ベクターは、例えば転写および翻訳の開始コドンならびに終止コドンなどの制御配列を含有し、それら制御配列は、適切な場合にはベクターが導入される宿主のタイプ（例えば細菌、真菌、植物および動物）に特異的であり、ベクターがＤＮＡまたはＲＮＡのいずれであるかを考慮に入れる。ベクターは、宿主の属に特異的な制御配列を含むことが好ましい。ベクターは、宿主の種に特異的な制御配列を含むことが最も好ましい。
【０１７４】
複製システムおよび挿入核酸に加えて、構築体は、一つまたは複数のマーカー遺伝子を含んでもよく、これにより形質転換された宿主またはトランスフェクトされた宿主の選択が可能となる。マーカー遺伝子としては例えば抗生物質、重金属などに対する抵抗性、栄養要求性宿主に栄養を与える補完などが挙げられる。
【０１７５】
適切なベクターとしては、増殖および拡張用、または発現用、またはその両方を目的として設計されたベクターが挙げられる。例えば、クローニングベクターは、ｐＵＣシリーズ、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔシリーズ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ社、カリフォルニア州ラホラ）、ｐＥＴシリーズ（Ｎｏｖａｇｅｎ社、ウィスコンシン州マディソン）、ｐＧＥＸシリーズ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ社、スウェーデン、ウプサラ）、およびｐＥＸシリーズ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ社、カリフォルニア州パロアルト）からなる群から選択される。バクテリオファージベクターの例えばλＧＴ１０、λＧＴ１１、λＺａｐＩＩ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ社）、λＥＭＢＬ４、および  λＮＭ１１４９も使用することができる。植物発現ベクターの例としては、ｐＢＩ１１０、ｐＢＩ１０１．２、ｐＢＩ１０１．３、ｐＢＩ１２１およびｐＢＩＮ１９（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ社）が挙げられる。動物発現ベクターの例としては、ｐＥＵＫ−Ｃ１、ｐＭＡＭおよびｐＭＡＭｎｅｏ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ社）が挙げられる。ＴＯＰＯクローニングシステム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、カリフォルニア州カールスバッド）も製造業者の推奨に従い使用することができる。
【０１７６】
発現ベクターは、上述の単離または精製された核酸分子に動作可能に連結された天然または非天然のプロモーターを含有してもよい。例えば、強、弱、誘導性、組織特異的、および発生段階特異的なプロモーターの選択は、当分野の技術範囲内にある。同様に、上述の核酸分子またはその断片と、プロモーターを組み合わせることも、当分野の技術範囲内にある。
【０１７７】
適切なウイルスベクターとしては、例えば、レトロウイルスベクター、パルボウイルス系ベクター、例えば、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）系ベクター、ＡＡＶ−アデノウイルスキメラベクター、およびアデノウイルス系ベクター、ならびにレンチウイルスベクター、例えば単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）系ベクターが挙げられる。これらのウイルスベクターは、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，２ｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９）；およびＡｕｓｕｂｅｌら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９９４）に記載される標準的な組み換えＤＮＡ技術を使用して作製され得る。
【０１７８】
レトロウイルスベクターは、レトロウイルスに由来する。レトロウイルスは、幅広い宿主細胞を感染させることができるＲＮＡウイルスである。感染により、レトロウイルスのゲノムはその宿主細胞のゲノム内に統合され、宿主細胞のＤＮＡと共に複製される。それによってウイルスＲＮＡと、レトロウイルスゲノム内に組み込まれた任意の核酸配列が常に産生される。したがって、レトロウイルスを使用することで、長期間の治療因子の発現が実現可能となる。遺伝子療法での使用が想定されるレトロウイルスは比較的非病原性であるが、病原性のレトロウイルスも存在する。病原性レトロウイルス、例えばヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）またはヒトＴ細胞リンパ向性ウイルス（ＨＴＬＶ）などを採用する場合、ウイルスゲノムを改変して宿主に対する毒性を除去することを含めなければならない。さらにレトロウイルスベクターを操作して、ウイルス複製の欠損をもたらすこともできる。したがって、レトロウイルスベクターは、インビボでの安定した遺伝子移送に特に有用であるとみなされている。例えばＨＩＶ系ベクターなどのレンチウイルスベクターは、遺伝子送達に使用されるレトロウイルスベクター例である。他のレトロウイルスとは異なり、ＨＩＶ系ベクターは、自身が載せた遺伝子を分裂しない細胞に組み込むことが知られており、従って持続型疾患の治療に使用することができる。
【０１７９】
追加配列をかかるクローニング配列および／または発現配列に加えて、その機能をクローニングおよび／または発現に最適化させ、ポリヌクレオチドの単離を補助する、または細胞内へのポリヌクレオチドの導入を改善することができる。クローニングベクター、発現ベクター、アダプター、およびリンカーの使用は、当分野で公知である。（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ、上記、またはＳａｍｂｒｏｏｋ、上記を参照）。
【０１８０】
一部の実施形態では、本開示の核酸およびベクターは単離および／または精製されてもよい。本開示はまた、上述の単離または精製された核酸分子を、任意でベクターの形態で含有する組成物を提供する。当該組成物は、本明細書でさらに記載される他の構成要素を含有してもよい。
【０１８１】
一部の実施形態では、核酸分子は、適切な宿主細胞内に導入されたときに多重特異性抗体剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）を発現することができるベクター内に挿入される。適切な宿主細胞としては限定されないが、細菌細胞、酵母細胞、昆虫細胞、及び哺乳類細胞が挙げられる。例示的な宿主細胞としては、原核生物（例えば、大腸菌）及び真核生物（例えば、ＣＯＳ細胞またははＣＨＯ細胞）が挙げられる。使用され得る哺乳類宿主細胞としては、ヒトＨｅｌａ  ２９３細胞、Ｈ９細胞およびＪｕｒｋａｔ細胞、マウスＮＩＨ３Ｔ３細胞およびＣ１２７細胞、Ｃｏｓ  １、Ｃｏｓ  ７およびＣＶ  １、ウズラＱＣ１−３細胞、マウスＬ細胞、およびチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（例えば、ＤＧ４４細胞）が上げられる。ベクター内にＤＮＡ断片を挿入するための当業者に公知の任意の方法を使用して、転写／翻訳制御シグナルの制御下で本開示の多重特異性抗体剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）をコードする発現ベクターを構築してもよい。これら方法としては、インビトロの組み換えＤＮＡ法および合成法、ならびにインビボの組み換え法が挙げられる（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｅｄｓ．Ａｕｓｕｂｅｌら、Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌ．Ａｓｓｏｃ．，Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，ＮＹを参照のこと）。
抗体剤の作製
【０１８２】
本開示の多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂ  などの二重特異性抗体剤）は、任意の技術によって精製されてもよく、これによりその後の安定的な抗体剤の形成が可能となる。例えば、理論に束縛されるものではないが、多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂ  などの二重特異性抗体剤）は、限定されないが、プロテインＡ精製、プロテインＧ精製、硫酸アンモニウムまたはエタノール沈殿、酸抽出、陰イオンまたは陽イオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティクロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、およびレクチンクロマトグラフィーをはじめとする公知の方法により組み換え細胞培養液から回収および精製されることができる。高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を精製に採用することもできる。例えば、Ｃｏｌｌｉｇａｎ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，ｏｒ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹ，Ｎ．Ｙ．，（１９９７−２００１）のチャプター１、４、６、８、９および１０を参照のこと。各々が全体で参照により本明細書に組み込まれる。
【０１８３】
本開示の多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）には、天然精製産物、化学合成法による産物、ならびに例えば酵母細胞、高次植物細胞、昆虫細胞および哺乳類細胞をはじめとする真核細胞宿主から組み換え技術により産生された産物が含まれる。組み換え作製法において採用された宿主に応じて、本開示の抗体剤はグリコシル化され得、または非グリコシル化され得るが、グリコシル化されることが好ましい。こうした方法は多くの標準的な実験マニュアルに記載されており、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ、上記，セクション１７．３７−１７．４２；Ａｕｓｕｂｅｌ、上記、チャプター１０、１２、１３、１６、１８および２０、Ｃｏｌｌｉｇａｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、上記、チャプター１２−１４などがある。すべてが全体で参照により本明細書に組み込まれる。
【０１８４】
精製された多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）は、例えば、ＥＬＩＳＡ、ＥＬＩＳＰＯＴ、フローサイトメトリー法、免疫細胞学、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）解析、ＳＡＰＩＤＹＮＥ  ＫＩＮＥＸＡ（商標）速度排除アッセイ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウェスタンブロット法などにより特徴解析されることができ、またはＨＰＬＣ解析ならびに多くの他の本明細書に開示される機能解析法により特徴解析されることができる。本出願全体を通して引用されたすべての引用参照文献（文献、登録特許、公開特許出願、および同時係属特許出願を含む）の内容は、参照により明示的に本明細書に組み込まれる。
抗体剤組成物
【０１８５】
本開示の組成物（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの多重特異性抗体剤を送達する組成物）は、提供される多重特異性抗体剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂ）の、かかる調節、治療もしくは療法を必要とする細胞、組織、臓器、動物または患者への送達における使用のための、少なくとも一つの多重特異性抗体剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂ）を含有する組成物または医薬組成物の任意の適切で有効な量を含んでもよい。
【０１８６】
本開示の組成物（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの多重特異性結合剤を送達する組成物）は、例えば限定されないが、希釈剤、結合剤、安定剤、緩衝液、塩、親油性溶媒、保存剤、アジュバントなどの任意の適切な補助剤の内の少なくとも一つをさらに含有し得る。薬学的に許容可能な補助剤が好ましい。そのような滅菌溶液の非限定的な例、および調製方法は当分野に公知であり、例えば限定されないが、Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｅｄ．，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．（Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．）１９９０がある。当分野に公知、または本明細書に記載されるように、多重特異性抗体剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）、その断片もしくはバリアントの投与様式、可溶性、および／または安定性に適した薬学的に許容可能な担体が日常的に選択され得る。
【０１８７】
本組成物に有用な医薬品賦形剤および添加剤としては、限定されないが、タンパク質、ペプチド、アミノ酸、脂質、および炭水化物（例えば、単糖類、二糖類、三糖類、四糖類、およびオリゴ糖。例えばアルジトール、アルドン酸、エステル化糖などの誘導体化糖類。および多糖類または糖ポリマーをはじめとする糖類）が挙げられる。これらは単一で、または併用して存在することができ、単独で含有され、または１〜９９．９９重量％または体積％で組み合わされる。例示的なタンパク質賦形剤としては、例えばヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、組換えヒトアルブミン（ｒＨＡ）、ゼラチン、カゼインなどの血清アルブミンが挙げられる。緩衝能力においても機能し得る代表的なアミノ酸／抗体構成要素としては、アラニン、グリシン、アルギニン、ベタイン、ヒスチジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、システイン、リシン、ロイシン、イソロイシン、バリン、メチオニン、フェニルアラニン、アスパルタームなどが挙げられる。好ましい一つのアミノ酸はグリシンである。
【０１８８】
本開示での使用に適した炭水化物賦形剤としては、例えば、フルクトース、マルトース、ガラクトース、グルコース、Ｄ−マンノース、ソルボースなどの単糖類；例えばラクトース、スクロース、トレハロース、セロビオースなどの二糖類；例えばラフィノース、メレジトース、マルトデキストリン、デキストラン、デンプンなどの多糖類；および例えばマンニトール、キシリトール、マルチトール、ラクチトール、キシリトール  ソルビトール（グルシトール）、ミオイノシトールなどのアルジトールが挙げられる。特定の実施形態では、本開示で使用するための炭水化物賦形剤は、マンニトール、トレハロース、およびラフィノースである。
【０１８９】
組成物（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂ  などの多重特異性抗体剤を送達する組成物）は、緩衝剤またはｐＨ調節剤を含んでもよい。典型的には、緩衝剤は、有機酸または有機塩基から調製される塩である。代表的緩衝剤は、クエン酸、アスコルビン酸、グルコン酸、炭酸、酒石酸、コハク酸、酢酸、またはフタル酸の塩などの有機酸塩、トリス、トロメタミン塩酸塩、またはリン酸塩の緩衝剤を含む。本組成物で使用するための好ましい緩衝剤は、クエン酸などの有機酸塩である。
【０１９０】
さらに、本開示の組成物（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの多重特異性結合剤を送達する組成物）は、例えばポリビニルピロリドン、フィコール（高分子糖）、デキストレート（例えば、シクロデキストリン、例えば、２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン）、ポリエチレングリコール、香味剤、抗菌剤、甘味剤、抗酸化剤、帯電防止剤、界面活性剤（例えば「ＴＷＥＥＮ  ２０」および「ＴＷＥＥＮ  ８０」などのポリソルベート）、脂質（例えばリン脂質、脂肪酸）、ステロイド（例えばコレステロール）、およびキレート剤（例えばＥＤＴＡ）などのポリマー賦形剤／添加剤を含んでもよい。
【０１９１】
多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂ剤）、その一部、またはそのバリアントを含有する組成物における使用に適したこれら、および追加の公知の医薬賦形剤および／または添加剤は、当分野に公知であり、例えば”Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＆  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ”，１９ｔｈ  ｅｄ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｌｉａｍｓ，（１９９５）、および”Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ”，５２ｎｄ  ｅｄ．，Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ，Ｍｏｎｔｖａｌｅ，Ｎ．Ｊ．（１９９８）に列記されており、これら開示文献は全体で参照により本明細書に組み込まれる。。好ましい担体または賦形剤物質は、炭水化物（例えば、糖類およびアルジトール）および緩衝剤（例えば、クエン酸塩）またはポリマー剤である。
【０１９２】
一部の実施形態では、多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂ剤）を含有する組成物は、安定的に製剤化される。一部の実施形態では、多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂ剤）の安定的な製剤は、生理食塩水または選択された塩を含むリン酸緩衝液、ならびに保存溶液を含有してもよく、保存剤を含有する製剤ならびに医薬投与または獣医用途に適した多用途に保存された製剤を含有してもよい。保存された製剤は、少なくとも一つの公知の保存剤、または少なくとも一つのフェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、コレステロール、ベンジルアルコール、亜硝酸フェニル水銀、フェノキシエタノール、ホルムアルデヒド、クロロブタノール、塩化マグネシウム（例えば六水和物）、アルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチルなど）、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウム、およびチメロサール、またはそれらの混合物の水性希釈剤溶液からなる群から任意で選択される保存剤を含有する。任意の適切な濃度または混合物が当分野で公知であるように使用され得る。例えば、０．００１〜５％、またはその間の任意の範囲もしくは値、例えば限定されないが、０．００１、０．００３、０．００５、０．００９、０．０１、０．０２、０．０３、０．０５、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．３、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、またはその間の任意の範囲もしくは値が挙げられる。非限定的な例としては、保存剤無し、０．１〜２％のｍ−クレゾール（例えば、０．２、０．３、０．４、０．５、０．９、１．０％）、０．１〜３％ベンジルアルコール（例えば、０．５、０．９、１．１、１．５、１．９、２．０、２．５％）、０．００１〜０．５％チメロサール（例えば、０．００５、０．０１）、０．００１〜２．０％フェノール（例えば、０．０５、０．２５、０．２８、０．５、０．９、１．０％）、０．０００５〜１．０％アルキルパラベン類（例えば、０．０００７５、０．０００９、０．００１、０．００２、０．００５、０．００７５、０．００９、０．０１、０．０２、０．０５、０．０７５、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．５、０．７５、０．９、１．０％）などが挙げられる。
【０１９３】
上述のように一部の実施形態において本開示は、包装材料、ならびに適切な緩衝剤および／または保存剤を含む少なくとも一つの多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂ剤）の、任意で水性希釈剤溶液を含有する少なくとも１本のバイアルを含有する製品を提供するものであり、この場合において前述の包装材料は、当該溶液が、１、２、３、４、５、６、９、１２、１８、２０、２４、３０、３６、４０、４８、５４、６０、６６、７２時間以上の期間にわたり保持され得ることを示すラベルを備える。本開示は、包装材料、凍結乾燥された少なくとも一つの多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂ剤）を含有する第一のバイアル、規定の緩衝剤または保存剤の水性希釈剤を含有する第二のバイアル、を含有する製品をさらに提供するものであり、この場合において前述の包装材料は、当該少なくとも一つの多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂ剤）を当該水性希釈剤中で再構築させて、２４時間以上の期間にわたり保持され得る溶液を作製するための説明を提示するラベルを備える。
【０１９４】
一部の実施形態では、水性希釈剤は薬学的に許容可能な保存剤をさらに含有する。一部の実施形態では、保存剤は、フェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、アルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチルなど）、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウム、およびチメロサール、またはそれらの混合物からなる群から選択されてもよい。製剤中で使用される保存剤の濃度は、抗菌効果を生じさせるのに充分な濃度である。当該濃度は、選択された保存剤に依存し、当業者によって容易に決定される。
【０１９５】
その他の賦形剤、例えば等張剤、緩衝剤、抗酸化剤、保存剤エンハンサーを、希釈剤に任意で添加することができる。グリセリンなどの等張剤は、公知の濃度で普遍的に使用される。生理学的に忍容性のある緩衝剤を添加して、ｐＨ制御を改善することができる。製剤は、約ｐＨ４〜約ｐＨ１０などの広範なｐＨをカバーすることができ、好ましい範囲は約ｐＨ５〜約ｐＨ９、最も好ましい範囲は約６．０〜約８．０である。一部の実施形態では、本開示の製剤は、約６．８〜約７．８のｐＨを有する。一部の実施形態では、緩衝剤は、リン酸ナトリウムなどのリン酸緩衝剤が挙げられ、特にリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。
【０１９６】
Ｔｗｅｅｎ２０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウリン酸塩）、Ｔｗｅｅｎ  ４０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノパルミチン酸塩）、Ｔｗｅｅｎ  ８０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレイン酸塩）、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ６８（ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロックコポリマー）、およびＰＥＧ（ポリエチレングリコール）のような薬学的に受容可能な可溶化剤、または例えばポリソルベート２０もしくは８０またはポリキサマー１８４もしくは１８８、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）ポリル類、他のブロックコポリマーなどの非イオン性界面活性剤、ならびに例えばＥＤＴＡおよびＥＧＴＡなどのキレーターといった他の添加剤を任意で製剤または組成物に添加して、凝集を低下させてもよい。これらの添加剤は、ポンプまたはプラスチック容器を使用して製剤が投与される場合に特に有用である場合がある。薬学的に許容可能な界面活性剤の存在は、組成物中のタンパク質（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂ剤）が凝集する傾向を軽減しうる。
【０１９７】
一部の実施形態では、少なくとも一つの多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂ剤）と、フェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、アルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチルなど）、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウム、およびチメロサール、またはそれらの混合物からなる群から選択される保存剤を水性希釈剤中で混合することを含むプロセスによって本開示の製剤を調製することができる。少なくとも一つの多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂ剤）と保存剤は、従来的な溶解および混合の手順を使用して水性希釈剤中で混合することができる。一部の実施形態では、適切な製剤の調製は、例えば、緩衝溶液中の少なくとも一つの抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂ剤）の一定量と、緩衝溶液中の所望の保存剤を、所望の濃度でタンパク質と保存剤が提供されるために充分な量で混合することを含み得る。このプロセスのバリエーションは、当分野の当業者には認識されるであろう。例えば、成分が添加される順序、追加的添加剤が使用されるかどうか、製剤が調製される温度およびｐＨはすべて、濃度および使用される投与手段に対して最適化され得る因子である。
【０１９８】
一部の実施形態では、透明な溶液として患者に提供され、または水、保存剤、ならびに／または例えばリン酸緩衝液および／もしくは生理食塩水などの賦形剤と選択塩を水性希釈剤中で含有する第二のバイアルで再構成される少なくとも一つの凍結乾燥された多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂ剤）のバイアルを含む二重バイアルとして提供される。
【０１９９】
一部の実施形態では、多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂ剤）を含有する製品は、包装材料を含む。一部の実施形態では、包装材料は、規制当局が要求する情報に加えて、製品を使用され得る条件を提示する。一部の実施形態では、包装材料は、多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂ剤）の再構成のための説明を提示する。
【０２００】
一部の実施形態では、組成物は、経口投与用に製剤化される。一部の実施形態では、多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂ剤）は、溶液、懸濁液、エマルション、または凍結乾燥粉末として、薬学的に許容可能な非経口ビヒクルが関連づけられて、または別個に提供されて製剤化される。そのようなビヒクルの例は、水、生理食塩水、リンゲル溶液、デキストロース溶液、および１〜１０％のヒト血清アルブミンである。リポソーム、および例えば固定油などの非水性ビヒクルを使用することもできる。ビヒクル、または凍結乾燥粉末は、等張性（例えば、塩化ナトリウム、マンニトール）および化学安定性（例えば、緩衝剤および保存剤）を維持する添加剤を含んでもよい。一部の実施形態では、公知の技術または適切な技術によって製剤は滅菌される。
【０２０１】
本開示はさらに、特に多重特異性抗体剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）、および／または前述の多重特異性抗体剤を含有する組成物を特徴解析するための技術を提供する。一部の実施形態では、多重特異性抗体剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）、および／または前述の多重特異性抗体剤を含有する組成物は、ＡＭＬ細胞（例えばＨＬ６０）への結合により特徴付けられる。一部の実施形態では、多重特異性抗体剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）、および／または前述の多重特異性抗体剤を含有する組成物は、インビボ保持時間（例えば少なくとも６時間、１２時間、１８時間、２４時間、３６時間、４８時間、６０時間、７２時間、またはそれ以上のインビボ血清半減期）により特徴付けられる。一部の実施形態では、多重特異性抗体剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）、および／または前述の多重特異性抗体剤を含有する組成物は、ＥＬＩＳＡ、免疫組織化学法、ビアコア結合アッセイ、質量分析法、等電点（ＩＥＦ）クロマトグラフィー法、ウェスタンブロッティング法により特徴解析される。
アプリケーション
【０２０２】
本開示は、本開示の少なくとも一つの多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂ剤）を使用して、当該技術分野で公知、または本明細書に記載されるように、細胞、組織、臓器、動物、または患者の少なくとも一つのＣＤ３３関連疾患を調節、治療または診断する技術を提供する。
【０２０３】
本明細書に提供される多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂ）のいずれも、治療方法で使用され得る。例えば、本開示の多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂ）は、例えば癌の治療において、免疫療法剤として使用することができる。
【０２０４】
本開示は、限定されないが、多発性骨髄腫、白血病、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）（Ｂ細胞型ＡＬＬおよびＴ細胞型ＡＬＬを含む）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、有毛細胞白血病、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、リンパ腫、ホジキン病、悪性リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、多発性骨髄腫、カポジ肉腫、大腸癌、腎細胞癌、膵臓癌、前立腺癌、鼻咽頭癌、悪性組織球増殖症、腫瘍随伴症候群／悪性高カルシウム血症、固形腫瘍、腺癌、肉腫、悪性黒色腫、血管腫、転移性疾患、癌関連骨吸収、癌関連骨疼痛、の内の少なくとも一つを含む、細胞、組織、臓器、動物または患者の少なくとも一つの悪性疾患を調節、治療または診断する方法、癌転移を抑制する方法、癌悪液質を緩和する方法、および例えばメサンギウム増殖性糸球体腎炎などの炎症性疾患を治療する方法を含む。一部の特定の実施形態では、提供される組成物および方法を使用して、白血病の髄外性（ＥＭ）の兆候を治療することができる。かかる方法は任意で、当該多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂなど）の投与の前、同時、または後に、放射線療法、抗血管新生剤、化学療法剤、ファルシルトランスフェラーゼ阻害剤などの投与を行うことで、併用して使用することができる。
【０２０５】
治療方法での使用に関し、本開示の多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂ）は、正当な医療行為と矛盾しない様式で製剤化され、投薬され、投与される。この文脈で考慮される因子としては、治療される特定の障害、治療される特定の哺乳類、個別の患者の臨床状態、障害の原因、剤の送達場所、投与方法、投与計画、および医療従事者に公知の他の因子が挙げられる。
【０２０６】
一部の実施形態では、本開示は、疾患を治療するための方法を提供する。一部の実施形態では、当該方法は、かかる疾患を有する個体に、本開示の多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂ）の治療有効量を投与することを含む。一部の実施形態では、薬学的に許容可能な形態で、本開示の多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂ）を含有する組成物が前述の個体に投与される。一部の実施形態では、治療される疾患は、増殖性障害である。一部の実施形態では、疾患は、癌である。一部の実施形態では、当該方法は、治療される疾患が癌である場合、例えば抗癌剤など、少なくとも一つの追加的治療剤の治療有効量を個体に投与することをさらに含む。「個体」は、ヒトを含む哺乳類であり得る。
【０２０７】
一部の実施形態では、本開示の多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂ）は、対象中のＣＤ３３の発現により特徴付けられる医学的状態を診断する方法において使用されてもよい。
【０２０８】
そのような方法はいずれも、かかる調節、治療、診断、および／または療法の必要のある細胞、組織、臓器、動物または患者に対し、少なくとも一つの多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂ）を含有する少なくとも一つの組成物または医薬組成物の有効量を投与することを任意で含み得る。
【０２０９】
一部の実施形態では、多重特異性抗体剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）を含有し、および／またはＩＬ２が投与された、もしくはＩＬ２が投与される対象へと送達する組成物の有効量を投与し、それら両方を当該対象が受け取る工程を含む治療方法が提供される。一部の実施形態では、ＩＬ２を含有し、および／または多重特異性抗体剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）を投与された、もしくは投与される対象へと送達する組成物を投与し、それら両方を対象が受け取る工程を含む方法が提供される。
【０２１０】
本開示のいずれの方法も、ＣＤ３３介在性の障害、またはＣＤ３３発現により特徴付けられる障害を治療する方法を含み得、当該方法は、本開示の少なくとも一つの多重特異性抗体剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂ）を含有する組成物または医薬組成物の有効量を、かかる調節、治療または療法の必要のある細胞、組織、臓器、動物または患者へと投与する工程を含む。そのような方法は、かかる免疫疾患を治療するための同時投与または併用療法を任意でさらに含んでもよく、この場合において本開示の前述の少なくとも一つの多重特異性抗体剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂ）、その特定部分またはそのバリアントを投与する工程は、少なくとも一つの追加的な剤の前、同時、および／または後に投与する工程をさらに含む。
【０２１１】
本開示のいずれの方法も、ＣＤ３３発現により特徴付けられる疾患または障害を診断する方法を含み得、当該方法は、本開示の少なくとも一つの多重特異性抗体剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂ）を含有する組成物または医薬組成物の有効量を、細胞、組織、臓器、動物または患者へと投与する工程を含む。
Ｔ細胞系療法
【０２１２】
腫瘍細胞を破壊する方法は、例えばナチュラルキラー（ＮＫ）細胞または細胞障害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）などの免疫エフェクター細胞を選択的に標的とし、腫瘍細胞を攻撃および破壊させる免疫反応を誘導することを含む。ＣＴＬは、免疫系の最も強力なエフェクター細胞を構成するが、従来的な治療抗体のＦｃドメインにより介在されるエフェクター機構では活性化することができない。
【０２１３】
一部の実施形態では、本開示の多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂ）は、第一の結合ドメインで標的細胞上の表面抗原に結合し、そして第二の結合ドメインでＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体の活性化不変構成要素へと結合することができるため、近年注目を集めている。理論に束縛されることは望まないが、その標的の両方に当該抗体剤が同時に結合することで、標的細胞とＴ細胞の間の一時的な相互作用が推進され、任意の細胞障害性Ｔ細胞の活性化が生じ、その後に標的細胞の溶解がもたらされることが想定される。ゆえに免疫反応を標的細胞へと再誘導させることができ、この免疫反応は、正常なＭＨＣ拘束性のＣＴＬ活性化では関連し得るであろう、標的細胞によるペプチド抗原提示またはＴ細胞の特異性からは独立している。一部の実施形態では、本開示の多重特異性抗体剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂ）は、患者中に存在するＴ細胞を活性化する。
【０２１４】
ＣＴＬは腫瘍標的化の理想的なエフェクターである。その理由は、増殖可能な腫瘍部位へと移動し、サイトカインを放出して、その後に自然炎症性細胞または自然免疫細胞をリクルートして、抗腫瘍ＣＴＬおよびＢ細胞の新たなクローンの発達を含む、追加のインビボ免疫反応（インビボワクチン効果）を誘発させるためである。これは、養子Ｔ細胞療法を過去に受けた成人患者の免疫評価で最も明白である。（Ｔｈａｋｕｒ  Ａら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  ６０：１７０７−２０，２０１１）。例えばＨＥＲ２−ＢｓＡｂでアーム化されたＡＴＣを用いた治療の後、患者の乳癌およびリンパ腫に対し、抗乳癌ＣＴＬ、抗乳癌抗体、血清Ｔｈ１サイトカインパターン、および基準値を越えるＩＬ−１２値をはじめとするワクチン効果が検出された。（Ｌｕｍ  ＬＧら、Ｂｏｎｅ  Ｍａｒｒｏｗ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  ４９：７３−９，２０１４；Ｌｕｍ  ＬＧら、Ｂｉｏｌ  Ｂｌｏｏｄ  Ｍａｒｒｏｗ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  １９：９２５−３３，２０１３；Ｇｒａｂｅｒｔ  ＲＣら、Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １２：５６９−７６，２００６）。
【０２１５】
ＢｓＡｂでアーム化されたＴ細胞
【０２１６】
一部の実施形態では、本開示の多重特異性抗体剤（例えば、ＢｓＡｂおよびＢｉＴＥ抗体剤を含む、抗ＣＤ３ｘ抗標的抗原）を用いて活性化Ｔ細胞（ＡＴＣ）を活性化および／またはアーム化（ａｒｍｉｎｇ）させる方法が提供される。そのようにアーム化されたＡＴＣは、ＭｏＡｂ（例えばｈｕＭ１９５）の標的化特異性と、Ｔ細胞の非ＭＨＣ拘束性パーフォリン／グランザイム介在性細胞障害を組み合わせている。ＢｓＡｂおよびＢｉＴＥは、患者への点滴前に生体外で拡張活性化したＴ細胞をアーム化させることができる。この戦略はすべてのＡＴＣを特異的ＣＴＬへと転換させる（Ｔｈａｋｕｒ  ａｎｄ  Ｌｕｍ，２０１０，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ  １２，３４０−３４９；Ｇｒａｂｅｒｔら、２００６，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １２，５６９−５７６）。
【０２１７】
二重特異性抗体剤は、抗原特異的ＨＬＡ拘束性ＴＣＲではなく、むしろＨＬＡ非拘束性のＣＤ３介在性活性化を介して、Ｔ細胞の標的会合とそのエフェクター機能の発揮を可能にする。ＣＤ３と、例えばＣＤ−１９、ＨＥＲ２−ＮＥＵまたはＣＥＡなどの腫瘍抗原に特異的な特定の二機能性モノクローナル抗体の研究により、これら抗体の、細胞障害性Ｔ細胞と、他の標的抗原を発現する腫瘍細胞をリンクさせる能力が示された（Ｂａｒｇｏｕら、２００８，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２１，９７４−９７７；Ｔｏｐｐら、２００９，Ｂｌｏｏｄ（ＡＳＨ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ）１１４，８４０；Ｋｉｅｗｅら、２００６，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １２，３０８５−３０９１；Ｌｕｔｔｅｒｂｕｅｓｅら、２００９，Ｊ  Ｉｍｍｎｏｔｈｅｒ  ３２，３４１−３５２）。両抗体受容体が会合すると、腫瘍細胞に対して細胞障害性Ｔ細胞反応が開始される。Ｔ細胞反応には、Ｔ細胞受容体と腫瘍細胞の間の細胞障害性シナプスの形成、ならびにパーフォリンおよびグランザイムが介在する腫瘍細胞アポトーシスの誘導が含まれる（Ｏｆｆｎｅｒら、２００６，Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ４３，７６３−７７１；Ｂｒｉｓｃｈｗｅｉｎら、２００６，Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ４３，１１２９−１１４３）。ＣＤ３の会合はさらにＴ細胞を活性化し、増殖と、抗腫瘍効果を高めるエフェクターサイトカインの生成を誘導する（Ｂｒｉｓｃｈｗｅｉｎら、２００６、上記；Ｂｒｉｓｃｈｗｅｉｎら、２００７，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  ３０，７９８−８０７）。さらには、活性化Ｔ細胞は、抗アポトーシスタンパク質のｃ−ＦＬＩＰを発現上昇させ、Ｔ細胞活性化の間に産生されるＴＮＦとＦａｓリガンドの細胞障害性効果から自身を防御する（Ｄｒｅｉｒら、２００２，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  １００，６９０−６９７）。その結果、Ｔ細胞応答は拡大される。結果として、ピコグラム単位の二機能性抗体が、インビトロ（Ｌｕｔｔｅｒｂｕｅｓｅら、２００９、上記；Ｂｒａｎｄｌら、２００７，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  ５６，１５５１−１５６３）およびインビボにおいて著しい抗腫瘍効果を発揮し得る。インビボでは前臨床動物モデルにおいて示されており、特にＢ細胞リンパ腫とＡＬＬの治療におけるＣＤ３／ＣＤ１９二特異性剤の最初の臨床試験の結果において示されている（Ｔｏｐｐら、２００９、上記；Ｋｉｅｗｅら、２００６、上記）。誘導されたＴ細胞反応は、腫瘍部位でナイーブＴ細胞をリクルートし、腫瘍特異的Ｔ細胞の産生を刺激することもできると仮説が立てられている（Ｋｏｅｈｎｅら、２００２，Ｂｌｏｏｄ  ９９，１７３０−１７４０）。二重特異性抗体剤を使用して、Ｔリンパ球に加えて他のエフェクター細胞を再標的化することもできる。これらのエフェクター細胞としては、ＣＤ３３を発現する細胞、組織または臓器に対するＮＫ細胞、Ｂ−リンパ球、樹状細胞、単球、マクロファージ、好中球、間葉系幹細胞、神経幹細胞、およびその他の幹細胞が挙げられる。組織が腫瘍である場合、これらのエフェクター細胞を利用して、診断用または治療用のタンパク質（例えば、サイトカイン、抗体、酵素、または毒素）、放射性同位体を���す、または沈殿させることができる。組織が正常な臓器である場合、エフェクター細胞を同様に利用して、診断用もしくは治療用のタンパク質または同位体を送達させることができる。
【０２１８】
本開示は、本開示の特定の多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂ）が、活性化Ｔ細胞（ＡＴＣ）のアーム化に有用であり得るという認識を包含する。一部の実施形態では、ＡＴＣのアーム化における使用のための多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂ）は、Ｔ細胞抗原のエピトープに結合するドメインをさらに含有してもよい。一部の実施形態では、Ｔ細胞抗原はＣＤ３である。一部の実施形態では、Ｔ細胞抗原のエピトープに結合するドメインは、ヒト化ＯＫＴ３  ｓｃＦｖである。
【０２１９】
一部の実施形態では、本開示の多重特異性抗体剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂ）でアーム化されたＴ細胞群を製造する方法が提供される。当分野で公知のＴ細胞をアーム化する標準的な方法を、本開示の状況下で使用してもよい。本開示の多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂ）の生物活性は、当分野に公知の様々なアッセイにより測定することができる。生物活性としては、例えば、Ｔ細胞増殖の誘導、Ｔ細胞内のシグナル伝達の誘導、Ｔ細胞内の活性化マーカーの発現誘導、Ｔ細胞によるサイトカイン分泌の誘導、例えば腫瘍細胞などの標的細胞の溶解誘導、腫瘍退縮の誘導、および／または生存率の改善が挙げられる。一部の実施形態では、Ｔ細胞群は、１０６個の細胞障害性免疫細胞当たり、０．００１ｎｇ〜１００ｎｇの範囲の本開示の多重特異性抗体剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂ）のアーム化用量を含む。
【０２２０】
一部の実施形態では、本開示の多重特異性抗体剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂ）でアーム化されたＴ細胞群を含有する組成物を提供する。理論に拘束されることは望まないが、本開示の多重特異性抗体剤を、活性化Ｔ細胞（ＡＴＣ）と併用して投与することで、治療反応を強化し得ることが想定される。一部の実施形態では、本開示の多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂ）は、ＡＴＣと併用して投与される。一部の実施形態では、多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂ）を用いた治療は、多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂ）を送達する組成物の投与、およびＡＴＣを送達する組成物の投与を含む。
【０２２１】
ＰＢＭＣ系療法
【０２２２】
一部の実施形態では、本開示の多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂ）は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の調製物と併用して投与される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、同種である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、同系である。一部の実施形態では、多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂ）を用いた治療は、多重特異性抗体剤（例えば、ＣＤ３３−ＢｓＡｂ）を送達する組成物の投与、およびＰＢＭＣを送達する組成物の投与を含む。
【０２２３】
ＣＤ３３−キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）改変Ｔ細胞
【０２２４】
キメラ抗原受容体技術（Ｓａｄｅｌａｉｎ  Ｍら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖ  ３：３８８−９８，２０１３）の出現により、抗ＣＤ３３再指向性遺伝子改変Ｔ細胞の治療研究が急速に拡大している。少なくとも以下の三つの臨床試験が現在、ＣＤ３３を標的とするＣＡＲ−Ｔの治療法としての可能性を調査している：ＮＣＴ０２９５８３９７（骨髄性悪性腫瘍）、ＮＣＴ０２９４４１６２（ＡＭＬ）、ＮＣＴ０１８６４９０２（ＡＭＬ）。しかしながらＣＡＲ−Ｔ療法に関連した懸念点は多い。例えば、ＨＥＲ−２  ＣＡＲ−Ｔ療法の場合、当初、オフターゲット効果からの毒性が観察された。（Ｍｏｒｇａｎ  ＲＡら、Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ  １８：８４３−５１，２０１０）。ＨＥＲ２−ＣＡＲ改変Ｔ細胞の一つの一貫した利点は、低レベルの抗原発現を克服したことが観察されたという点であった。骨肉腫が良い例であり、発現レベルが議論されてきた（Ｔｈｏｍａｓ  ＤＧら、Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ８：７８８−９３，２００２）。ＣＡＲ改変Ｔ細胞は局所領域の、および転移性の異種移植片（Ａｈｍｅｄ  Ｎら、Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ  １７：１７７９−８７，２００９）に対して、および骨肉腫腫瘍始原細胞に対して、非常に有効であることが判明した。（Ｒａｉｎｕｓｓｏ  Ｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  １９：２１２−７，２０１２）。ＢｓＡｂアーム化Ｔ細胞の場合と同様に、Ｔ細胞を点滴する前に、腫瘍縮小のための高用量化学療法を行うことが、ＣＡＲ改変Ｔ細胞の有意義な臨床反応には必要である。
【０２２５】
腫瘍縮小を行うことで確かに点滴されたＴ細胞の生着と拡大が促進されるが、Ｔ細胞点滴を再度試みるために腫瘍縮小を繰り返すことは現実的ではなく、標的化療法の目的を損なってしまう。毒性は別としても、リンパ球療法のための細胞の採取、処理、保存、輸送および生成品放出の規制は、特に細胞を遺伝子改変しなければならない場合、未だ物流的に、および金銭的に困難な課題である。医療費の予算が縮小していることを考慮し、現在の医薬品市場でこれを実現するためには、患者１人あたり２万ドルという現在の費用を大幅に減少させる必要がある。コストが制限因子でなかったとしても、Ｔ細胞の生存率およびホーミング率は、これら細胞を数十億個点滴しても最善ではない。ＢｓＡｂ−アーム化されたＴ細胞の細胞溶解の有効性も、Ｔ細胞表面上のＣＤ３抗原のターンオーバー、ＢｓＡｂの継続的な破砕、そして腫瘍に到達する前にＴ細胞が消費されることを考慮すると、最善ではない。ＢｓＡｂ−アーム化Ｔ細胞、ＣＡＲ−改変Ｔ細胞の両方とも、免疫抑制的な腫瘍微小環境からは逃れられず、その環境ではＴｒｅｇ、腫瘍関連マクロファージ、そして骨髄抑制性細胞が結託して抗腫瘍性能を阻む。Ｔ細胞のアーム化で使用される化学的に複合体化されたＢｓＡｂに関して、特にマウスＯＫＴ３を使用した場合、医薬品の製造は、製品の異種性、凝集塊の形成、その結果としての免疫原性を理由として困難である。さらにＣＡＲ改変Ｔ細胞は、循環Ｔ細胞と同じく、ＢｓＡｂには無い制限であるＰＤ−Ｌ１発現からのアネルギーをはじめとする免疫抑制性の制約を受ける。
【０２２６】
しかしＣＡＲ−Ｔ療法が有用であり、および／または適切であるとみなされる範囲で、当該療法は本開示の多重特異性抗体剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂ、例えば抗ＣＤ３３  Ｉｇ  抗ＣＤ３  ｓｃＦｖ剤）により強化され得ると想定される。
【０２２７】
一部の実施形態では、本開示の多重特異性抗体剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）を含有する結合ドメインを含有するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ：ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）が提供される。一部の実施形態では、ＣＡＲは、第一世代、第二世代、または第三世代のＣＡＲである。一部の実施形態では、ＣＡＲは、膜貫通ドメイン、共刺激性シグナル伝達領域、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインをさらに含有する。一部の実施形態では、ＣＡＲは、本開示のＣＤ３３−二重特異性抗体剤を含有する結合ドメイン、膜貫通ドメイン、共刺激性シグナル伝達領域、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインを含む。本明細書において、本開示のＣＡＲを発現するＴ細胞、すなわちＣＡＲ−Ｔ細胞も提供される。一部の実施形態では、本開示の多重特異性抗体剤（例えばＣＤ３３−ＢｓＡｂなどの二重特異性抗体剤）を含有する結合ドメインを含むＣＡＲを発現するＣＡＲ−Ｔ細胞の集団が提供される。
【０２２８】
本発明の他の特性は、以下の一連の例示的な実施形態に関する記載において明らかであろう。それらは本発明の解説のために提示されるものであり、その限定であるとはみなされない。
【実施例】
【０２２９】
本発明は、以下の非限定的な実施例によってさらに解説されるであろう。これらの実施例は、本発明の理解を補助するために記載されるものであり、その範囲を限定することは決して意図されておらず、そして限定とみなされるべきではない。これら実施例は、当分野の当業者に公知である従来的な方法の詳細な説明（分子クローニング技術など）は含まない。別段の示唆が無い限り、部分は重量部であり、分子量は平均分子量であり、温度は摂氏で示され、圧力は大気圧であるか、または大気圧に近い。
実施例１−例示的なＣＤ３３−ＢｓＡｂの構築
【０２３０】
本実施例は、ＣＤ３３とＣＤ３に特異的であり、ＩｇＧ−ｓｃＦｖの形式の例示的二重特異性抗体剤の作製を記載する。ヒト化Ｍ１９５モノクローナル抗体は、Ｍ１９５の重鎖と軽鎖のＣＤＲを、それぞれＶＨに対するヒトフレームワークのＩＧＨＶ１−３＊０１−ＩＧＨＪ４＊０１、ＶＬに対するＩＧＫＶ３Ｄ−１１＊０２−ＩＧＫＪ４＊０１との相同性に基づきヒトＩｇＧ１フレームワークに移植することにより作製された。二つの重鎖および二つの軽鎖の設計から、４型のｈｕＭ１９５が遺伝子合成され、ＤＧ４４細胞で発現された。例示的な重鎖および軽鎖の可変ドメインのアミノ酸配列としては、それぞれ、配列番号１〜２および３〜４が挙げられる。
【０２３１】
ＩｇＧ−ｓｃＦｖ形式での例示的ＣＤ３３−ＢｓＡｂ（Ｂｉｃｌｏｎｅ  １３３）抗体剤（図１Ａ）が構築された。配列番号９に相当するヒト化抗ＣＤ３３重鎖および  配列番号１０に相当するヒト化抗ＣＤ３３軽鎖が、例示的ＣＤ３３−ＢｓＡｂ剤の構築に使用された。例示的ＣＤ３３−ＢｓＡｂ剤は、Ｎ２９７Ａ変異を伴うｈＩｇＧ１  Ｆｃを含有する定常領域を含んでもよい。Ｎ２９７Ａ変異は、Ｆｃ領域のグリコシル化を除去するために企図される。例示的ＣＤ３３−ＢｓＡｂの重鎖のＤＮＡ配列およびタンパク質配列を以下に提供する。
【０２３２】
配列番号２３−ＢｉＣｌｏｎｅ１３３の重鎖ＤＮＡ配列：（重鎖リーダー配列は下線）
【化９−１】
2020517591.tif 000015
【化９−２】
2020517591.tif 000016
【０２３３】
配列番号２４−ＢｉＣｌｏｎｅ１３３の重鎖アミノ酸配列：（重鎖リーダー配列は下線）
【化１０−１】
2020517591.tif 000017
【化１０−２】
2020517591.tif 000018
【０２３４】
Ｃ末端Ｇｌｙ−Ｓｅｒリンカー（例えば、（Ｇ４Ｓ）３）を含むよう伸長されたヒト化抗ＣＤ３３軽鎖と、次いで例えばヒト化ＯＫＴ３  ｓｃＦｖを含むことでＣＤ３などの第二の部分に対するアフィニティを有するｓｃＦｖとの融合ポリペプチドを含む例示的ＣＤ３３−ＢｓＡｂ抗体剤が構築された。例示的ＣＤ３３−ＢｓＡｂの融合ポリペプチドのＤＮＡ配列およびタンパク質配列を以下に提供する。
【０２３５】
配列番号２５−Ｂｉｃｌｏｎｅ１３３軽鎖のＤＮＡ配列（軽鎖リーダー配列は下線）
【化１１−１】
2020517591.tif 000019
【化１１−２】
2020517591.tif 000020
【０２３６】
配列番号２６−Ｂｉｃｌｏｎｅ１３３軽鎖のアミノ酸配列（軽鎖リーダー配列は下線）
【化１２−１】
2020517591.tif 000021
【化１２−２】
2020517591.tif 000022
【０２３７】
例示的重鎖と例示的融合ポリペプチドの両方をコードするDNAはコドン最適化されて、哺乳類発現ベクター内に挿入され、CHO-S細胞にトランスフェクトされ、安定期な高発現クローンが選択された。上清をシェーカーフラスコから採取し、プロテインAアフィニティクロマトグラフィーで精製した。
【０２３８】
例示的ＣＤ３３  ＢｓＡｂの生化学的純度解析を図１Ｂに示した。例示的ＣＤ３３−ＢｓＡｂは、複数回の凍結解凍サイクルの後もＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびＳＥＣ−ＨＰＬＣで安定性を維持していた（データは示さず）。
【０２３９】
例示的ＣＤ３３−ＢｓＡｂのいくつかの利点としては以下が挙げられる：
【０２４０】
トロゴサイトシス（ｔｒｏｇｏｃｙｔｏｓｉｓ）の回避と非特異的な細網内皮系の除去：例示的ＣＤ３３−ＢｓＡｂは、そのＦｃドメイン中に点変異（Ｎ２９７Ａ）があることで、凝集しない。ゆえにＣＤ１６（ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、およびＦｃγＲＩＩＩＡ）への非特異的結合が阻止される。これにより、Ｔ細胞にとって有害なＣＤ３トロゴサイトシスが回避されることが想定される。ＦｃＲ結合が無いことで、ＢｓＡｂへの競合が少なくなり、Ｔ細胞および腫瘍細胞へＢｓＡｂがより多く送達される。Ｋ３２２Ａ変異と合わせることで、補体結合も排除される。Ｆｃへの結合がなく、補体活性化もない事で、サイトカイン放出症候群も実質的に低減されるであろう。
【０２４１】
アフィニティ精製の容易さ：例示的ＣＤ３３−ＢｓＡｂは、プロテインＡおよびプロテインＧに対し完全なアフィニティを有しており、製造中に精製することが容易である。
実施例２−例示的ＣＤ３３−ＢｓＡｂのインビトロ活性
【０２４２】
本実施例は、ＩｇＧ−ｓｃＦｖ形式の例示的ＣＤ３３−ＢｓＡｂのインビトロ活性を記載する。具体的には、本実施例は、ＣＤ３３発現細胞に特異的に結合して、細胞特異的Ｔ細胞の殺傷を介在する例示的ＣＤ３３−ＢｓＡｂ抗体剤の能力を記載する。
【０２４３】
ＣＤ３３−ＢｓＡｂ（ＢｉＣｌｏｎｅ１３３）はＴ細胞に結合する
【０２４４】
例示的ＣＤ３３−ＢｓＡｂ抗体剤の標的細胞への結合を、ＦＡＣＳ免疫染色により検証した。ＣＤ３３（＋）ＡＭＬ細胞株のＵ９３７、ＭＶ−４−１１、ＭＯＬＭ１３およびＭ−０７ｅにはＣＤ３３−ＢｓＡｂ（ＢｉＣｌｏｎｅ１３３）が結合した一方で、ＣＤ３３（−）白血病細胞株のＭＯＬＴ４とＣＭＬＴ１には結合しなかった（図２）。
【０２４５】
ＣＤ３３−ＢｓＡｂは、白血病抗原特異的なＴ細胞性細胞障害を介在する。
【０２４６】
例示的なＣＤ３３−ＢｓＡｂ抗体剤が、白血病細胞を殺傷するようにＴ細胞を再誘導できるかどうかを評価するために、ＣＤ３３（＋）ＡＭＬ細胞に対するＴ細胞性の細胞障害活性を標準的な４時間の５１Ｃｒ放出アッセイにおいて検証した。ＣＤ３３−ＢｓＡｂ（ＢｉＣｌｏｎｅ１３３）が存在する場合、ＡＭＬ細胞株の大幅な殺傷が、１．１ｐＭという低さのＥＣ５０で観察された（ＨＬ６０  ＡＭＬ細胞に対する）。ＣＤ３３（−）白血病細胞は影響を受けなかった（図３）。
【０２４７】
ＣＤ３３−ＢｓＡｂは、ＦＬＴ３／ＩＴＤ変異を伴うヒト白血病細胞株のＴ細胞性殺傷を再誘導した。
【０２４８】
ＦＭＳ様チロシンキナーゼ−３（ＦＬＴ３）遺伝子内縦列重複（ＩＴＤ）変異（ＦＬＴ３／ＩＴＤ）を有する患者の予後は不良であることが多く報告されている。小児ＡＭＬでは、これら突然変異のマイナスの結果はより顕著である（Ｌｅｖｉｓ  Ｍ，Ｌｅｕｋｅｍｉａ  １７：１７３８−５２，２００３）。例示的ＣＤ３３−ＢｓＡｂ抗体剤が、ＦＬＴ３／ＩＴＤ変異を伴うＡＭＬに、Ｔ細胞を再誘導することができるかどうかを評価するために、この変異を含有するＭＯＬＭ１３  ＡＭＬ細胞株を使用した。図４に示されるように、ＣＤ３３特異的なＢｓＡｂがＭＯＬＭ１３細胞を２．４ｐＭのＥＣ５０で溶解した。
実施例３−例示的ＣＤ３３−ＢｓＡｂのインビボ活性
【０２４９】
本実施例は、ＩｇＧ−ｓｃＦｖ形式の例示的ＣＤ３３−ＢｓＡｂのインビボ活性を記載する。具体的には、本実施例は、ＡＭＬの異種移植片モデルにおける例示的ＣＤ３３−ＢｓＡｂ抗体剤の有効性を記載する。
【０２５０】
ヒト化マウスにおける、ＦＬＴ３／ＩＴＤ変異を含有するヒトＡＭＬ細胞に対するＣＤ３３−ＢｓＡｂの有効性
【０２５１】
インビボの治療実験に対し、ＮＯＤ．Ｃｇ−Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ  Ｉｌ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪ（ＮＳＧ）マウスが使用された。マウスを５群に無作為化し、全てのマウスにホタルルシフェラーゼ遺伝子を含有するＭＯＬＭ１３細胞を１００万個投与した。：１．治療なし；２．ＣＤ３３−ＢｓＡｂのみ；３．活性化Ｔ細胞（ＡＴＣ）のみ；４．ＡＴＣ（ｉｖ、静脈内注射）／ＣＤ３３−ＢｓＡｂ；および５．ＡＴＣ（ｉｐ、腹腔内注射）／ＣＤ３３−ＢｓＡｂ。６日目、白血病が確立されたときに治療を開始した。３週間にわたり、マウスに１０００万個のＡＴＣを毎週注射した。ＢｓＡｂ（１００ｕｇ／マウス）を、Ｔ細胞注射の１日前および１日後に投与した。インビボでのＴ細胞の増殖をサポートするために、１０００ＩＵのインターロイキン−２を、週２回、皮下投与した。生体発光イメージングを毎週実施して、白血病細胞量を評価した。図５に示されるように、ＢｓＡｂの存在下でＡＴＣを投与することで、白血病マウスが治療された。ＡＴＣの腹腔内投与および静脈内投与の両方ともが有効であった。重要なことは、ＡＴＣまたはＢｓＡｂを別個に投与すると、腫瘍増殖の抑制に失敗したことである。腫瘍のシグナルがイメージングで最早検出されなくなったとき、マウスを全身解剖して評価した。残存白血病細胞は検出されなかった。
【０２５２】
進行型ヒトＡＭＬに対するＣＤ３３−ＢｓＡｂのヒト化マウスにおける有効性
【０２５３】
ＣＤ３３−ＢｓＡｂが進行型ＡＭＬを治療し得るかどうかを調査するために、ＮＳＧマウスに１００万個のＭＯＬＭ１３白血病細胞を接種した。白血病注射の７日後から開始して、マウスに１０００万個のヒトＡＴＣを３週間、毎週静脈内注射して治療した。白血病細胞注射の２８日後、マウスを４週間、１週当たり１００ｕｇ／投与量のＢｓＡｂを２回注射して治療した。図６に示されるように、白血病はＢｓＡｂの投与後、急速に治療された。
【０２５４】
ヒトＡＭＬに対する低用量のＣＤ３３−ＢｓＡｂのヒト化マウスにおける有効性
【０２５５】
低用量のＢｓＡｂの治療効果を調査するために、ＮＳＧマウスに１００万個のＭＯＬＭ１３  ＡＭＬ細胞を投与した。６日後、マウスを４群に無作為化した：１．ＡＴＣのみ；２．ＡＴＣ／ＢｓＡｂ  １００μｇ／マウス；３．ＡＴＣ／ＢｓＡｂ  ３０μｇ／マウス；および４．ＡＴＣ／ＢｓＡｂ  １０μｇ／マウス。ＡＴＣは腹腔内注射された。インビボでのＴ細胞の増殖をサポートするために、１０００ＩＵのインターロイキン−２を、週２回、皮下投与した。６日目、白血病が確立されたときに治療を開始した。３週間にわたり、マウスに１０００万個のＡＴＣを毎週注射した。ＢｓＡｂ（上述のとおり、しかし異なる用量で）を、Ｔ細胞注射の１日前および１日後に投与した。生体発光イメージングを毎週実施して、白血病細胞量を評価した。図７に示されるように、ＢｓＡｂおよびＡＴＣの両方を投与されたマウスのみが治療された。ＡＴＣのみの群では白血病細胞が増殖した。重要なことは、１０ｕｇのＢｓＡｂでさえも、１００ｕｇの抗体と同じくらい有効であったことである。
【０２５６】
このように、例示的ＣＤ３３−ＢｓＡｂは、インビボで驚くべき有効性を示した。例えば、白血病細胞量が多い場合であっても、ヒト白血病細胞株をインビボで担持する動物において、例示的ＣＤ３３−ＢｓＡｂは、回復を実現した。さらに、例示的ＣＤ３３−ＢｓＡｂのＰＫは、ＩｇＧのＰＫと類似している。これにより、より低い治療用量と、より低い頻度での注射が可能となるであろう（図７を参照）。
【０２５７】
ヒトＡＭＬに対する例示的ＣＤ３３−ＢｓＡｂは、インビボで、非常に低い用量で有効である。
【０２５８】
例示的ＣＤ３３−ＢｓＡｂ抗体剤（ＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖ）のインビボ効力を検証するために、ＦＭＳ様チロシンキナーゼ遺伝子内縦列重複変異（ＦＬＴ３−ＩＴＤ）変異を担持するルシフェラーゼ（＋）ＭＯＬＭ１３  ＡＭＬ細胞を静脈内注射することにより、ＮＳＧマウスに異種移植片を確立させた。ヒト末梢血Ｔ細胞は、抗ＣＤ３／ＣＤ２８被覆マイクロビーズを用いて７日間活性化され、白血病細胞移植の７日後に開始して３週間、週に１回、注射された。例示的ＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖの投与は、各Ｔ細胞投与の１日前および１日後に投与され、１回投与当たり１００μｇから、１回投与当たり０．０１μｇへと漸減された。例示的ＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖ（ＢｓＡｂ）またはＴ細胞のいずれか単独での注入では殆ど抗腫瘍効果は生じなかったが、ヒトＴ細胞との併用では、最も低い濃度の０．１μｇ／投与のＢｓＡｂとヒトＴ細胞を含む、検証されたすべての濃度の例示的ＣＤ３３−ＢｓＡｂ抗体剤（ＢｓＡｂ）が白血病細胞の増殖を阻害した。注目すべきことに、ヒトＴ細胞の存在下で１μｇ／投与のＢｓＡｂが治癒的であった（より高い濃度であった）（図８Ａおよび図８Ｂを参照のこと）。したがってこれらデータから、Ｔ細胞と併用して投与された例示的ＣＤ３３−ＢｓＡｂ抗体剤（ＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ  ｓｃＦｖ）は、広範な濃度にわたり、インビボで癌細胞量を有効に減少させ得ることが確認される。投与はマウスモデルを使用して示されているが、例えば調整投与量の算出方法など、当分野の当業者に公知の標準的な方法を使用して、動物実験をヒトに拡張させることができる。
実施例４−ＣＤ３３−ＢｓＡｂを四価にすることで、効力が改善される
【０２５９】
本実施例は、例示的二重特異性抗体剤のＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖの効力に対する価数の影響を分析する。異なる生物学的特性を有する二重特異性抗体プラットフォームが設計され、一部が臨床で使用されているが、効率的なＴ細胞会合治療法に対する継続的なニーズが存在する（Ｗｕ  Ｚ，Ｃｈｅｕｎｇ  ＮＶ．Ｔ  ｃｅｌｌ  ｅｎｇａｇｉｎｇ  ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｙ（Ｔ−ＢｓＡｂ）：ｆｒｏｍ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｔｏ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｈｅｒ．２０１７）。しかしながら、本開示は、多くの二重特異性抗体プラットフォームとは異なり、四価（２＋２）のＩｇＧ（Ｌ）−ｓｃＦｖ二重特異性抗体が、有益な特徴を有し得るという認識を包含する。例示的ＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖは、標的細胞上のＣＤ３３に対する二つの結合アームと、Ｔ細胞上のＣＤ３に対する二つの結合アームを有する。価数の関連性を調査するために、二価（１＋１）ＩｇＧ系のＣＤ３３−ＣＤ３二重特異性抗体剤（ヘテロ二量体）を、制御されたＦａｂアーム交換法を使用して作製した。（Ｌａｂｒｉｊｎ  ＡＦ，Ｍｅｅｓｔｅｒｓ  ＪＩ，Ｐｒｉｅｍ  Ｐら、Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｆａｂ−ａｒｍ  ｅｘｃｈａｎｇｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｔａｂｌｅ  ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  ＩｇＧ１．Ｎａｔ  Ｐｒｏｔｏｃ．２０１４；９（１０）：２４５０−２４６３）。ＥＮＲＥＦ  ２  このＣＤ３３−ＣＤ３ヘテロ二量体は、ＣＤ３（ｈｕＯＫＴ３）とＣＤ３３（ｈｕＭ１９５）に対する二つの半ＩｇＧ分子から構成され、それらは選択的に対形成して、ＩｇＧヘテロ二量体二重特異性抗体を形成する。例示的ＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖ（ＢｓＡｂ）とこのヘテロ二量体の効力を比較するために、ＴＨＰ１細胞およびＭＯＬＭ１３細胞を殺傷アッセイに使用した。図９に示されるように、例示的ＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖは、ＴＨＰ１細胞とＭＯＬＭ１３  ＡＭＬ細胞のＴＤＣＣを介在し、ヘテロ二量体により介在されるよりも１２倍高かった。次に、例示的ＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖ（ＢｓＡｂ）と、対応するヘテロ二量体をインビボで比較した。ＭＯＬＭ１３細胞をＮＳＧマウスに静脈内投与で移植し、６日目に、非常に少ない用量のＢｓＡｂ（０．１μｇ／マウス／投与）と活性化Ｔ細胞を用いて治療した。腫瘍増殖は、（ｐ／ｓの全フラックスとして表される）生体発光によりモニタリングされた。Ｔ細胞とヘテロ二量体二組み合わせは、腫瘍抑制において比較的効果が低く、Ｔ細胞単独群と非常に類似していた。一方で例示的ＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖ（ＢｓＡｂ）とＴ細胞は、白血病細胞の増殖を大幅に減少させた（図１０ＡおよびＢ）。まとめると、これらのデータから、四価のＩｇＧ（Ｌ）−ｓｃＦｖは、対応する二価のＩｇＧヘテロ二量体と比較して効力が上昇したことが支持される。
実施例５−例示的ＣＤ３３−ＢｓＡｂとＩＬ２の同時投与により、有効性が改善される
【０２６０】
本実施例は、サイトカインのＩＬ２と併用した、例示的二重特異性抗体剤のＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖの投与の効果を分析する。活性化Ｔ細胞はＩＬ２の存在下で培養されるため、Ｔ細胞投与後にＩＬ２をさらに投与することで有効性が改善されるかどうかを検証した。結果から、例示的ＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖを介して再誘導されたＴ細胞は、ＩＬ２の存在下で抗白血病効果を改善したことが示された。このことから、インビボでのＴ細胞の機能に対する、このサイトカインの有益な役割が示唆される（図１１）。
実施例６  −髄外性白血病に対する例示的ＣＤ３３−ＢｓＡｂの有効性
【０２６１】
本実施例は、治療が困難な腫瘍の治療における、例示的二重特異性抗体剤の有効性を確認する。髄外性白血病（ＥＭ−白血病）は現在、有効的な治療を行うことが非常に困難である。ＥＭ−白血病は、しばしば治療的ジレンマを引き起こす臨床的に重大な広範な事象を含む。骨髄性肉腫（ＭＳ）および皮膚白血病（ＬＣ）は、二つのＥＭ白血病兆候の代表である。ＥＭ関与の根底にある分子機構は十分に定義されておらず、ＥＭ関与の予後的な意義は完全には判明していない。ゆえに、例えばＭＳまたはＬＣなどのＥＭ−白血病を有する患者の最適な治療法を規定することが困難となっている。
【０２６２】
ＥＭ−白血病のモデルは、ＭＯＬＭ１３細胞を皮下に移植することにより作製された。新鮮なヒトＰＢＭＣを、白血病移植の７日後から開始して週に１回腹腔内注射し、例示的二重特異性抗体剤は、各Ｔ細胞投与の１日前および１日後に注射された。このモデルにおいて、ＰＢＭＣは、腹腔から血流を通って移動し、皮下の腫瘍部位へと浸潤することとなる。未治療、またはＰＢＭＣ単独の対照群において、腫瘍は急速に増殖して２０００ｍｍ３の体積を越え、白血病移植後の最初の４週の間に動物を安楽死させなければならなかった。治療群では、最初の増殖スパートの後、ＰＢＭＣと例示的二重特異性抗体剤の両方で治療された動物（ＰＢＭＣ／ＢｓＡｂ群）では急速に退縮した（図１２Ａ）。他のＡＭＬ異種移植片に対する例示的二重特異性抗体剤の効果を検証するために、ＴＨＰ１細胞株とＨＬ６０細胞株を皮下注射し、１週間後、例示的二重特異性抗体剤（ＢｓＡｂ）と共に、または無しで、ＰＢＭＣを用いて治療が行われた。例示的二重特異性抗体剤により再誘導されたＰＢＭＣは有意に白血病細胞の増殖を減速させた。一方でＰＢＭＣ単独では抗腫瘍効果は最小限、または無かった（図１２Ｂおよび図１２Ｃ）。
実施例７−ＣＤ３３の内部移行は、ＣＤ３３−ＢｓＡｂの機能を損なわなかった
【０２６３】
本実施例は、本明細書に提供される特定のＣＤ３３−ＢｓＡｂの、驚くべき内部移行、有効性、および（限定的な）副作用の特性を示す。
【０２６４】
ＣＤ３３は内部移行され、抗体結合後のエフェクター細胞の会合を損なうであろう。この現象は抗体−薬物複合体に関しては有益であるが、ＣＤ３３二重特異性抗体剤を無効化してしまう場合がある。さらには、ＣＤ３３の架橋によって自身のエンドサイトーシスが加速し得るために、ＣＤ３３に対して一価性を維持しなければならないと一般的には想定されている（例えばＢｉＴＥまたはヘテロ二量体）。したがって、価数の影響をエンドサイトーシス率に関して評価した。ＭＯＬＭ１３  ＡＭＬ細胞を、ｈｕＭ１９５（ＣＤ３３に対して二価）、例示的ＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖ（ＣＤ３３に対して二価）、またはヘテロ二量体を用いて、３７℃または４℃（内部移行を遅らせる）で染色した。４℃では、ＣＤ３３に対するＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖの結合、およびＣＤ３３に対するｈｕＭ１９５の結合は同等であった。ヘテロ二量体の結合は、ＣＤ３３に対してほぼ２倍低かった（図１３、Ａ）。３７℃では、ｈｕＭ１９５およびヘテロ二量体の両方ともが、染色後の最初の４時間以内にＣＤ３３の内部移行を生じさせたが、ヘテロ二量体よりもｈｕＭ１９５のほうが内部移行は強力であった（図６Ｂ）。同条件下で、例示的ＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖは、ヘテロ二量体と同じように振る舞ったが、その結果は全く予想外であった。興味深いことに、ＣＤ３に対する例示的ＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖの結合は、２７であり、ＣＤ３に対するｈｕＯＫＴ３とヘテロ二量体の結合よりも２．５倍弱かった（図１３、Ｃ）。ＣＤ３に対する例示的ＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖのこの弱い結合は、サイトカイン放出症候群の可能性を低下させると予測される。予想外なことに、例示的な四価ＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖは、ＴＤＣＣにおいてヘテロ二量体よりも強力であることが判明した（図９）。例示的なＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖを、インビボでＴ細胞投与の１日前に注入した。これらの条件下では内部移行が予想された。しかしそれでもインビボでの抗ＡＭＬ効果は充分であった。このことから、残りのＣＤ３３表面発現（ＭＯＬＭ１３細胞株に関しては２０％）で、例示的ＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖの抗白血病的機能には充分であったことが示唆される。
実施例８−ＣＤ３３は臍帯血造血幹細胞（ＨＳＣ）上には発現されなかった
【０２６５】
ＣＤ３３は、骨髄系統の特異的マーカーであると考えられており、抗ＣＤ３３抗体を用いた治療は、長期的な造血を損なう場合があり、治療可能性を限定する可能性があった。（Ｈａｕｓｗｉｒｔｈ  ＡＷ，Ｆｌｏｒｉａｎ  Ｓ，Ｐｒｉｎｔｚ  Ｄら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．２００７；３７（１）：７３−８２  ＆  Ｔａｕｓｓｉｇ  ＤＣ，Ｐｅａｒｃｅ  ＤＪ，Ｓｉｍｐｓｏｎ  Ｃら、Ｂｌｏｏｄ．２００５；１０６（１３）：４０８６−４０９２）。臍帯血ＣＤ３４＋細胞を、例示的抗ＣＤ３３  ＢｓＡｂを用いて染色したとき（図１４、Ａ）、ほぼすべてのＣＤ３４（＋）ＣＤ３８（−）ＨＳＣが陰性であり、一方ですべてのＣＤ３４（＋）ＣＤ３８（＋）造血前駆細胞（ＨＰＣ）は陽性であった。ＨＰＣであっても、ＣＤ３３の発現は、骨髄細胞上の発現よりも２０倍超低かった。臍帯血から単離されたＣＤ３４（＋）細胞を、標準クロム放出アッセイにおいてＴＤＣＣに対する感受性に関して試験した。例示的ＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖがＭＯＬＭ１３細胞を溶解したこととは対照的に、ＣＤ３４（＋）群はＴＤＣＣに対し比較的非感受性であった（図１４、Ｂ）。高濃度（１μｇ／ｍｌ）の例示的ＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖでは低レベルの殺傷（５％未満）が認められた。これは、残留したＣＤ３４（−）ＣＤ３３（＋）群が原因である可能性があった（この群でのＣＤ３３発現は、ＣＤ３４（＋）ＣＤ３８（＋）造血前駆細胞での発現よりも高かった）（図１４、Ｃ）。
【０２６６】
したがって、これらのデータから、本開示の例示的ＣＤ３３−ＣＤ３  ＩｇＧ−ｓｃＦｖが、治療上有益であり得る予想外の特徴および性能を有し、強固なインビトロおよびインビボでの有効性を呈することが確認される。
均等
【０２６７】
明細書及び請求の範囲において、本明細書で使用される場合、別段であることが明白に示されていない限り、「ａ」及び「ａｎ」という冠詞は、複数の指示対象を含むと理解されるものとする。群の一つ以上のメンバー間に、「ｏｒ」を含む請求項又は記載は、反対であることが示唆されている場合又は文脈から別段であることが明白である場合を除き、群の一つ、二つ以上、又はすべてのメンバーが、所与の産物もしくはプロセス中に存在し、使用され、又はその他に関連している場合に満たされたとみなされる。本発明は、群の正確に一つのメンバーが、所与の産物もしくはプロセス中に存在し、使用され、又はその他に関連している実施形態を含む。本発明はまた、二つ以上の群のメンバー又は群全体のメンバーが、所与の産物もしくはプロセス中に存在し、使用され、又はその他に関連している実施形態を含む。さらに、本発明は、別段の示唆がない限り、又は当分野の当業者に矛盾又は不一致が生じることが明らかではない限り、列記される請求項のうちの一つ以上からの、一つ以上の限定、要素、条項、記述用語などが、同じ基本クレーム（又は関連クレーム、任意の他のクレーム）に応じて他のクレームへと導入される、すべての変動、組み合わせ、及び配列を包含すると理解されたい。要素がリストとして提示される場合（例えば、マーカッシュグループ又は類似した形式）、要素の各下位群もまた開示され、及び任意の要素が当該群から除去され得ることを理解されたい。概して、本発明、又は本発明の態様が、特定の要素、特性などを含有すると呼称される場合、本発明の特定の実施形態又は本発明の態様は、かかる要素、特性などからなる、又は原則的にかかる要素、特性などからなると理解されたい。平易化を目的として、それら実施形態は、各場合において、それら多くの文言を本明細書において具体的には説明していない。また、本発明の任意の実施形態又は態様は、特定の除外が本明細書において列挙されているか否かにかかわらず、請求項から明白に除外され得ることを理解されたい。本発明の背景を記載するため、及びその実施に関して、さらなる詳細を提供するために本明細書に参照されている公表文献、ウェブサイト、及び他の参考資料は、参照により本明細書に援用される。
【図１Ａ】
2020517591.tif 000023
【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
2020517591.tif 000030
【図８Ａ】
2020517591.tif 000031
【図８Ｂ】
2020517591.tif 000032
【図９】
2020517591.tif 000033
【図１０】
2020517591.tif 000034
【図１１】
2020517591.tif 000035
【図１２Ａ】
2020517591.tif 000036
【図１２Ｂ】
2020517591.tif 000037
【図１２Ｃ】
2020517591.tif 000038
【図１３】
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【図１４】
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【配列表】
2020517591000001.app
【国際調査報告】
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