(57)【要約】  本教示は一般に、患者における腫瘍微小環境をイメージングするためのコンジュゲートおよび方法、並びに患者の腫瘍微小環境における癌関連線維芽細胞（ＣＡＦ）をイメージングするためのコンジュゲートおよび方法に関する。本教示は一般に、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）阻害剤を含むコンジュゲートの製造方法に関する。【選択図】図１
2020502130.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
構造：Ｂ−Ｌ−Ｘ
［式中、
Ｂは線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）阻害剤を含み；
Ｌは二価リンカーを含み；
Ｘは近赤外（ＮＩＲ）吸収色素、放射性イメージング剤、または癌細胞および／もしくは癌関連線維芽細胞（ＣＡＦ）に対して有効な治療剤を含む。］
を有する、コンジュゲートまたはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２】
Ｂが
【化１】
2020502130.tif 000054
［式中、
Ｒ１およびＲ２は同一または異なっており、かつ、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、およびＣ１−Ｃ４アルキルから成る群から選択され；
Ｒ３はＣ１−Ｃ４アルキル、ニトリル、またはイソニトリルであり；
Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６は同一または異なっており、かつ、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、およびＣ１−Ｃ４アルキルから成る群から選択され；
ｎは１〜８の整数である。］
である構造を有する、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項３】
Ｒ１およびＲ２がそれぞれハロゲンである、請求項２に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項４】
Ｒ１およびＲ２がそれぞれフッ素である、請求項２に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項５】
Ｒ３がニトリルである、請求項２に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項６】
Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６がそれぞれ水素である、請求項２に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項７】
Ｂが
【化２】
2020502130.tif 000055
である構造を有する、請求項２に記載のコンジュゲートまたはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項８】
Ｂが
【化３】
2020502130.tif 000056
である構造を有する、請求項２に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項９】
リンカーが、Ｌｙｓ、Ａｓｎ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｇｌｙ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｐｈｅ、Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、Ｃｙｓ、およびＴｒｐから成る群から選択される、ＤまたはＬ配置の少なくとも１つのアミノ酸、またはその誘導体を含む、請求項１に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１０】
リンカーが、ＧｌｕおよびＣｙｓから成る群から独立して選択される、少なくとも２つのアミノ酸、またはその誘導体を含む、請求項１に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１１】
アミノ酸誘導体が、側鎖のカルボン酸に共有結合し、アミド結合を形成したアミノ糖部位を有するグルタミン酸である、請求項１０に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１２】
アミノ糖部位が１−デオキシ−１−アミノ−Ｄ−グルシトールである、請求項１１に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１３】
リンカーが、式：Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ
［式中、グルタミン酸は適宜、側鎖のカルボン酸に共有結合し、アミド結合を形成したアミノ糖部位で置換されていてもよい。］
で示されるアミノ酸部位を含む、請求項９に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１４】
アミノ糖部位が１−デオキシ−１−アミノ−Ｄ−グルシトールである、請求項１４に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１５】
Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕがカルボン酸側鎖を介して、互いに共有結合される、請求項１４に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１６】
リンカーが、式：
【化４】
2020502130.tif 000057
［式中、
ｍは０〜９の整数であり、ｐは３〜１０の整数であり、ｑは３〜１００の整数である。］
で示される部位を含む、請求項１に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１７】
リンカーが、
【化５】
2020502130.tif 000058
［式中、
Ｒ７およびＲ８はそれぞれ独立して、ＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルであり；
ｔは１〜８の整数である。］
から成る群から選択される部位を含む、請求項１に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１８】
リンカーが式：
【化６】
2020502130.tif 000059
である、請求項１７に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１９】
Ｒ７およびＲ８がＨであり、ｔが２である、請求項１７に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２０】
リンカーがヒドラジンを含む、請求項１に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２１】
Ｌが構造：
【化７】
2020502130.tif 000060
である、請求項１に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２２】
リンカーが、
【化８】
2020502130.tif 000061
［式中、Ｒ６はＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルである。］
から成る群から選択される部位を含む、請求項１に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２３】
式：
【化９】
2020502130.tif 000062
を含む、請求項１に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２４】
Ｘが蛍光色素を含む、請求項１に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２５】
ＸがＮＩＲ色素である、請求項１に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２６】
蛍光色素がフルオレセインマレイミドまたはフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）である、請求項２４に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２７】
ＮＩＲ色素がＳ０４５６である、請求項２５に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２８】
Ｘが構造：
【化１０】
2020502130.tif 000063
を有する、請求項１に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２９】
Ｘが構造：
【化１１】
2020502130.tif 000064
を有する、請求項１に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項３０】
構造：
【化１２】
2020502130.tif 000065
を有する、請求項１に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項３１】
構造：
【化１３】
2020502130.tif 000066
を有する、請求項１に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項３２】
Ｘが式：
【化１４】
2020502130.tif 000067
で示されるキレート剤である、請求項１に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項３３】
Ｘがキレート剤に配位した放射性金属同位体を含む、請求項３２に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項３４】
構造：
【化１５】
2020502130.tif 000068
［式中、
Ｌが二価リンカーを含み；
Ｘが近赤外（ＮＩＲ）吸収色素を含む。］
を有するコンジュゲート。
【請求項３５】
構造：
【化１６】
2020502130.tif 000069
を有する、請求項３４に記載のコンジュゲート。
【請求項３６】
患者から癌関連線維芽細胞（ＣＡＦ）を外科的に除去する方法であって、
患者の腫瘍微小環境にコンジュゲートを送達し、当該腫瘍微小環境は、少なくとも１つのＣＡＦを含み、当該コンジュゲートは、構造：
【化１７】
2020502130.tif 000070
［式中、Ｌは二価リンカーを含み、Ｘは近赤外（ＮＩＲ）吸収色素を含む。］
を有し；
そこで光刺激の適用によって、ＮＩＲ色素の蛍光を生じさせ；
蛍光の結果に基づいて、患者のＣＡＦ含有組織を切除すること
を特徴とする方法。
【請求項３７】
コンジュゲートによってイメージングされるＣＡＦ含有組織が、間質細胞を含む、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
Ａが、ビンカアルカロイド、クリプトフィシン、ボルテゾミブ、チオボルテゾミブ、ツブリシン、アミノプテリン、ラパマイシン、パクリタキセル、ドセタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エベロリムス、α−アマニチン、ベルカリン、ジデムニンＢ、ゲルダナマイシン、プラバラノール（purvalanol）Ａ、イスピネシブ、ブデソニド、ダサチニブ、エポシロン、メイタンシン、およびチロシンキナーゼ阻害剤から成る群から選択される薬物である、請求項１〜２３のいずれか１項に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項３９】
薬物がツブリシンである、請求項１〜２３のいずれか１項に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項４０】
薬物が、式：
【化１８】
2020502130.tif 000071
［式中、
Ｒ１ａ、Ｒ３ａ、Ｒ３ａ’およびＲ３ａ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニルおよびＣ３−Ｃ６シクロアルキルから成る群から選択され、ここで、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニルおよびＣ３−Ｃ６シクロアルキルにおける水素原子は、それぞれ独立して適宜、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−Ｃ１０アリール、５〜７員ヘテロアリール、−ＯＲ１３ａ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１３ａ、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１３ａＲ１３ａ’、−ＯＳ（Ｏ）Ｒ１３ａ、−ＯＳ（Ｏ）２Ｒ１３ａ、−ＳＲ１３ａ、−ＳＣ（Ｏ）Ｒ１３ａ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ１３ａ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ１３ａ、−Ｓ（Ｏ）２ＯＲ１３ａ、−Ｓ（Ｏ）ＮＲ１３ａＲ１３ａ’、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１３ａＲ１３ａ’、−ＯＳ（Ｏ）ＮＲ１３ａＲ１３ａ’、−ＯＳ（Ｏ）２ＮＲ１３ａＲ１３ａ’、−ＮＲ１３ａＲ１３ａ’、−ＮＲ１３ａＣ（Ｏ）Ｒ１４ａ、−ＮＲ１３ａＣ（Ｏ）ＯＲ１４ａ、−ＮＲ１３ａＣ（Ｏ）ＮＲ１４ａＲ１４ａ’、−ＮＲ１３ａＳ（Ｏ）Ｒ１４ａ、−ＮＲ１３ａＳ（Ｏ）２Ｒ１４ａ、−ＮＲ１３ａＳ（Ｏ）ＮＲ１３ａＲ１４ａ’、−ＮＲ１３ａＳ（Ｏ）２ＮＲ１４ａＲ１４ａ’、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１３ａ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１３ａ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１３ａ、または−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１３ａＲ１３ａ’で置換されていてもよく、
Ｒ２ａ、Ｒ４ａおよびＲ１２ａはそれぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニルから成る群から選択され；
Ｒ５ａおよびＲ６ａはそれぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、−ＯＲ１５ａ、−ＳＲ１５ａおよび−ＮＲ１５ａＲ１５ａ’から成る群から選択され、ここで、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニルおよびＣ２−Ｃ６アルキニルにおける水素原子は、それぞれ独立して適宜、ハロゲン、−ＯＲ１６ａ、−ＳＲ１６ａ、−ＮＲ１６ａＲ１６ａ’、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１６ａ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１６ａ、または−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１６ａＲ１６ａ’で置換されていてもよく；あるいは、Ｒ５ａおよびＲ６ａは、それらが結合する炭素原子と一緒になって、−Ｃ（Ｏ）−を形成し；
Ｒ７ａ、Ｒ８ａ、Ｒ９ａ、Ｒ１０ａおよびＲ１１ａはそれぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＮＣＯ、−ＯＲ１７ａ、−ＳＲ１７ａ、−Ｓ（Ｏ）２ＯＲ１７ａ、−ＮＲ１７ａＲ１７ａ’、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１７ａ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１７ａ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１７ａおよび−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１７ａＲ１７ａ’から成る群から選択され、ここで、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニルおよびＣ２−Ｃ６アルキニルにおける水素原子は、それぞれ独立して適宜、ハロゲン、−ＯＲ１８ａ、−ＳＲ１８ａ、−ＮＲ１８ａＲ１８ａ’、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１８ａ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１８ａまたは−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１８ａＲ１８ａ’で置換されていてもよく；
Ｒ１３ａ、Ｒ１３ａ’、Ｒ１４ａ、Ｒ１４ａ’、Ｒ１５ａ、Ｒ１５ａ’、Ｒ１６ａ、Ｒ１６ａ’、Ｒ１７ａおよびＲ１７ａ’はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−Ｃ１０アリールおよび５〜７員ヘテロアリールから成る群から選択され、ここで、Ｃ１−Ｃ７アルキル、Ｃ２−Ｃ７アルケニル、Ｃ２−Ｃ７アルキニル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−Ｃ１０アリール、または５〜７員ヘテロアリールにおける水素原子は、それぞれ独立して適宜、ハロゲン、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＮＨ２、または−ＣＯ２Ｈで置換されていてもよく；
Ｒ１８ａおよびＲ１８ａ’はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−Ｃ１０アリール、５〜７員ヘテロアリール  −Ｃ（Ｏ）Ｒ１９ａ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１９ａ）２、および−Ｓ（Ｏ）２ＯＲ１９ａから成る群から選択され；
Ｒ１９ａはそれぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−Ｃ１０アリールおよび５〜７員ヘテロアリールから選択され；
ａは１、２、または３である。］
で示されるテトラペプチドである、請求項１〜２３のいずれか１項に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項４１】
Ｄが式：
【化１９】
2020502130.tif 000072
［式中、
Ｒ１ａ、Ｒ３ａ、Ｒ３ａ’およびＲ３ａ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニルおよびＣ３−Ｃ６シクロアルキルから成る群から選択され、ここで、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニルおよびＣ３−Ｃ６シクロアルキルにおける水素原子は、それぞれ独立して適宜、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−Ｃ１０アリール、５〜７員ヘテロアリール、−ＯＲ１３ａ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１３ａ、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１３ａＲ１３ａ’、−ＯＳ（Ｏ）Ｒ１３ａ、−ＯＳ（Ｏ）２Ｒ１３ａ、−ＳＲ１３ａ、−ＳＣ（Ｏ）Ｒ１３ａ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ１３ａ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ１３ａ、−Ｓ（Ｏ）２ＯＲ１３ａ、−Ｓ（Ｏ）ＮＲ１３ａＲ１３ａ’、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１３ａＲ１３ａ’、−ＯＳ（Ｏ）ＮＲ１３ａＲ１３ａ’、−ＯＳ（Ｏ）２ＮＲ１３ａＲ１３ａ’、−ＮＲ１３ａＲ１３ａ’、−ＮＲ１３ａＣ（Ｏ）Ｒ１４ａ、−ＮＲ１３ａＣ（Ｏ）ＯＲ１４ａ、−ＮＲ１３ａＣ（Ｏ）ＮＲ１４ａＲ１４ａ’、−ＮＲ１３ａＳ（Ｏ）Ｒ１４ａ、−ＮＲ１３ａＳ（Ｏ）２Ｒ１４ａ、−ＮＲ１３ａＳ（Ｏ）ＮＲ１３ａＲ１４ａ’、−ＮＲ１３ａＳ（Ｏ）２ＮＲ１４ａＲ１４ａ’、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１３ａ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１３ａ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１３ａまたは−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１３ａＲ１３ａ’で置換されていてもよく；
Ｒ２ａ、Ｒ４ａおよびＲ１２ａはそれぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニルから成る群から選択され；
Ｒ５ａはＨ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、−ＯＲ１５ａ、−ＳＲ１５ａおよび−ＮＲ１５ａＲ１５ａ’から成る群から選択され、ここで、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニルおよびＣ２−Ｃ６アルキニルにおける水素原子は、それぞれ独立して適宜、ハロゲン、−ＯＲ１６ａ、−ＳＲ１６ａ、−ＮＲ１６ａＲ１６ａ’、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１６ａ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１６ａまたは−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１６ａＲ１６ａ’で置換されていてもよく；
Ｒ７ａ、Ｒ８ａ、Ｒ９ａ、Ｒ１０ａおよびＲ１１ａはそれぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＮＣＯ、−ＯＲ１７ａ、−ＳＲ１７ａ、−Ｓ（Ｏ）２ＯＲ１７ａ、−ＮＲ１７ａＲ１７ａ’、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１７ａ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１７ａ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１７ａおよび−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１７ａＲ１７ａ’から成る群から選択され、ここで、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニルおよびＣ２−Ｃ６アルキニルにおける水素原子は、それぞれ独立して適宜、ハロゲン、−ＯＲ１８ａ、−ＳＲ１８ａ、−ＮＲ１８ａＲ１８ａ’、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１８ａ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１８ａまたは−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１８ａＲ１８ａ’で置換されていてもよく；
Ｒ１３ａ、Ｒ１３ａ’、Ｒ１４ａ、Ｒ１４ａ’、Ｒ１５ａ、Ｒ１５ａ’、Ｒ１６ａ、Ｒ１６ａ’、Ｒ１７ａおよびＲ１７ａ’はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−Ｃ１０アリールおよび５〜７員ヘテロアリールから成る群から選択され、ここで、Ｃ１−Ｃ７アルキル、Ｃ２−Ｃ７アルケニル、Ｃ２−Ｃ７アルキニル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−Ｃ１０アリール、または５〜７員ヘテロアリールにおける水素原子は、それぞれ独立して適宜、ハロゲン、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＮＨ２または−ＣＯ２Ｈで置換されていてもよく；
Ｒ１８ａおよびＲ１８ａ’はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−Ｃ１０アリール、５〜７員ヘテロアリール  −Ｃ（Ｏ）Ｒ１９ａ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１９ａ）２、および−Ｓ（Ｏ）２ＯＲ１９ａから成る群から選択され；
Ｒ１９ａはそれぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−Ｃ１０アリールおよび５〜７員ヘテロアリールから選択され；
ａは１、２、または３である。］
で示されるテトラペプチドである、請求項１〜２３のいずれか１項に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項４２】
Ｄが式：
【化２０】
2020502130.tif 000073
［式中、
Ｒ９ａはＨ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＮＣＯ、−ＯＲ１７ａ、−ＳＲ１７ａ、−Ｓ（Ｏ）２ＯＲ１７ａ、−ＮＲ１７ａＲ１７ａ’、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１７ａ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１７ａ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１７ａおよび−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１７ａＲ１７ａ’から成る群から選択され、ここで、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニルおよびＣ２−Ｃ６アルキニルにおける水素原子は、それぞれ独立して適宜、ハロゲン、−ＯＲ１８ａ、−ＳＲ１８ａ、−ＮＲ１８ａＲ１８ａ’、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１８ａ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１８ａまたは−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１８ａＲ１８ａ’で置換されていてもよく；
Ｒ１３ａ、Ｒ１７ａおよびＲ１７ａ’はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−Ｃ１０アリールおよび５〜７員ヘテロアリールから成る群から選択され、ここで、Ｃ１−Ｃ７アルキル、Ｃ２−Ｃ７アルケニル、Ｃ２−Ｃ７アルキニル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−Ｃ１０アリール、または５〜７員ヘテロアリールにおける水素原子は、それぞれ独立して適宜、ハロゲン、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＮＨ２または−ＣＯ２Ｈで置換されていてもよく；
Ｒ１８ａおよびＲ１８ａ’はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−Ｃ１０アリール、５〜７員ヘテロアリール  −Ｃ（Ｏ）Ｒ１９ａ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１９ａ）２、および−Ｓ（Ｏ）２ＯＲ１９ａから成る群から選択され；
Ｒ１９ａはそれぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−Ｃ１０アリールおよび５〜７員ヘテロアリールから選択される。］
で示されるテトラペプチドである、請求項１〜２３のいずれか１項に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項４３】
Ａが天然に存在するツブリシンである、請求項１〜２３のいずれか１項に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項４４】
ＡがツブリシンＡ、ツブリシンＢ、ツブリシンＣ、ツブリシンＤ、ツブリシンＥ、ツブリシンＦ、ツブリシンＧ、ツブリシンＨおよびツブリシンＩから成る群から選択される、請求項１〜２３のいずれか１項に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項４５】
薬物がツブリシンＢである、請求項１〜２３のいずれか１項に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項４６】
Ａが式：
【化２１】
2020502130.tif 000074
である、請求項１〜２３のいずれか１項に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項４７】
Ａが式：
【化２２】
2020502130.tif 000075
である、請求項１に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項４８】
式：
【化２３】
2020502130.tif 000076
で示されるコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項４９】
コンジュゲートが、それに配位する、１１１Ｉｎ、９９ｍＴｃ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、６７Ｇａおよび６８Ｇａから成る群から選択される放射性金属同位体を含む、請求項４８に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項５０】
放射性金属同位体が９９ｍＴｃである、請求項４９に記載のコンジュゲート。
【請求項５１】
式：
【化２４】
2020502130.tif 000077
で示されるコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項５２】
式：
【化２５】
2020502130.tif 000078
で示されるコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項５３】
請求項１に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩、および適宜、少なくとも１つの薬学的に許容可能な賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項５４】
ａ．有効量の請求項１、３８〜４７、もしくは５１のいずれか１項に記載のコンジュゲートまたは組成物、またはその薬学的に許容可能な塩を対象に投与すること
を特徴とする、対象における癌を治療する方法。
【請求項５５】
対象がＦＡＰ発現性癌を有する、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
ＦＡＰ発現性癌が原発性または転移性である、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
癌が、前立腺癌、子宮内膜癌、皮膚癌、膵臓癌、乳房癌、腎臓癌、卵巣癌および脳腫瘍から成る群から選択される、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
対象におけるＦＡＰ発現性癌を治療する方法において用いるための、請求項１、３８〜４７、または５１のいずれか１項に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項５９】
方法が、ＦＡＰ発現性癌の治療に有効な分量のコンジュゲートを対象に投与することを特徴とする、請求項５８に記載のコンジュゲート。
【請求項６０】
ＦＡＰ発現性癌が、前立腺癌、子宮内膜癌、皮膚癌、膵臓癌、乳房癌、腎臓癌、卵巣癌および脳腫瘍から成る群から選択される、請求項５９に記載のコンジュゲート。
【請求項６１】
対象においてＦＡＰ発現性癌を治療するための有用な医薬の製造における、請求項１、３８〜４７、または５１のいずれか１項に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩の使用。
【請求項６２】
ＦＡＰ発現性癌が前立腺癌、子宮内膜癌、皮膚癌、膵臓癌、乳房癌、腎臓癌、卵巣癌および脳腫瘍から成る群から選択される、請求項６１に記載の使用。
【請求項６３】
ａ．細胞を請求項１〜３１のいずれか１項に記載のコンジュゲートと接触させて、標識細胞を得ること、および
ｂ．標識細胞を可視化すること
を特徴とする、細胞集団をインビトロでイメージングする方法。
【請求項６４】
細胞集団のインビトロでのイメージング方法に用いるための、請求項１〜３１のいずれか１項に記載のコンジュゲート。
【請求項６５】
方法が、
ａ．細胞を請求項１〜３１のいずれか１項に記載のコンジュゲートと接触させて、標識細胞を得ること、および
ｂ．標識細胞を可視化すること
を特徴とする、請求項６４に記載のコンジュゲート。
【請求項６６】
ａ．有効量の請求項１〜２３、３２、３３、４８〜４９のいずれか１項に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩を患者に投与し、標識細胞を得ること；および
ｂ．イメージングによって標識細胞を可視化すること
を特徴とする、細胞集団をインビボでイメージングする方法。
【請求項６７】
細胞集団をインビトロでイメージングする方法に用いるための、請求項１〜２３、３２、３３、４８、または４９のいずれか１項に記載のコンジュゲート。
【請求項６８】
方法が、
ａ．有効量の請求項１〜２３、３２、３３、４８、または４９のいずれか１項に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩を患者に投与し、標識細胞を得ること；および
ｂ．イメージングによって標識細胞を可視化すること
を特徴とする、請求項６７に記載のコンジュゲート。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は３５ Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９（ｅ）の下で、米国仮特許出願第６２／４３４，３８０号（２０１６年１２月１４日出願）、および米国仮特許出願第６２／５７５，０５０号（２０１７年１０月２０日出願）の優先権を主張し、いずれもその全体が引用によって本明細書に援用される。
【０００２】
本教示は一般に、患者における腫瘍微小環境をイメージングするためのコンジュゲートおよび方法、並びに、いくつかの実施態様において、患者の腫瘍微小環境における癌関連線維芽細胞（ＣＡＦ）をイメージングするためのコンジュゲートおよび方法に関する。本教示はまた、患者における癌細胞および／またはＣＡＦを治療するためのコンジュゲート並びに方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
腫瘍微小環境は、腫瘍の成長および発達において重要な役割を示す。癌細胞に加えて、腫瘍としては、Ｔ細胞、腫瘍関連マクロファージ、骨髄由来免疫抑制細胞、癌関連線維芽細胞（ＣＡＦ）、血管およびリンパ管脈管構造ネットワーク、および細胞外マトリックス（ＥＣＭ）などの浸潤性の免疫および炎症細胞が挙げられる。これらの細胞の助けがなければ、腫瘍は免疫回避、転移性、および耐性を獲得することができないであろう。
【０００４】
ＣＡＦは、腫瘍微小環境において存在する細胞の主な種類の１つであり、ＥＣＭの修飾および分解と共に、多くのケモカイン、サイトカイン、成長因子の分泌において役割を果たす。ＣＡＦは、正常な細胞において限定的に発現する、線維芽細胞活性化タンパク質アルファ（ＦＡＰ）を過剰発現している。
【０００５】
ＦＡＰはプロリン−アミノ酸ペプチド結合を切断することが可能であるプロテアーゼのより大きなファミリーに属する、ＩＩ型膜内在性タンパク質である。同じファミリーの他のメンバーは、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰＩＶ）およびプロリルオリゴペプチダーゼ（ＰＯＰ）である。ＦＡＰはエンドおよびエキソペプチダーゼ活性の両方を発揮する。ＦＡＰは主に細胞表面に局在することが分かっているが、ヒト血漿におけるタンパク質の可溶な形態もまた報告されている。ＦＡＰはホモ二量体として存在する。ＦＡＰは上皮性固形腫瘍、創傷治癒およびリモデリングに関与する組織の９０％を超えるＣＡＦにおいて発現することが分かっている。
【０００６】
腫瘤の効果的な外科的除去は、蛍光ガイド手術によって改善されている。しかし、癌細胞において過剰発現している受容体／タンパク質を標的とするＮＩＲ色素コンジュゲートは、抗原陽性癌細胞のみをイメージングすることができるが、間質細胞はできない。現在、腫瘍微小環境を効率的ににイメージングすることができる方法は存在しない。そのため、これらの細胞をイメージングし、外科的に除去する効率的な方法は存在しない。
【発明の概要】
【０００７】
本発明の範囲は、付属の特許請求の範囲によってのみ定義され、この発明の概要の範囲内の記載によってどのようにも影響されることはない。
【０００８】
本発明のいくつかの実施態様を、以下の列挙する項において記載する：
【０００９】
１．構造：Ｂ−Ｌ−Ｘ
［式中、
Ｂは線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）阻害剤を含み；
Ｌは二価のリンカーを含み；
Ｘは近赤外（ＮＩＲ）吸収色素、放射性イメージング剤、または癌細胞および／もしくは癌関連線維芽細胞（ＣＡＦ）に対して有効な治療剤を含む。］
を有するコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【００１０】
２．Ｂが構造：
【化１】
2020502130.tif 000003
［式中、
Ｒ１およびＲ２は同一または異なっており、かつ、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、およびＣ１−Ｃ４アルキルから成る群から選択され；
Ｒ３はＣ１−Ｃ４アルキル、ニトリル、またはイソニトリルであり；
Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６は同一または異なっており、かつそれぞれは独立して、水素、ハロゲン、およびＣ１−Ｃ４アルキルから成る群から選択され；
ｎは１〜８の整数である。］
を有する、項１に記載のコンジュゲート。
【００１１】
３．Ｒ１およびＲ２がそれぞれハロゲンである、項２に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【００１２】
４．Ｒ１およびＲ２がそれぞれフッ素である、項２または３に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【００１３】
５．Ｒ３がニトリルであり、項２〜４のいずれか１項に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【００１４】
６．Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６がそれぞれ水素である、項２〜５のいずれか１項に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【００１５】
７．Ｂが構造：
【化２】
2020502130.tif 000004
を有する、項２〜６のいずれか１項に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【００１６】
８．Ｂが構造：
【化３】
2020502130.tif 000005
を有する、項２〜７のいずれか１項に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【００１７】
９．リンカーが、Ｌｙｓ、Ａｓｎ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｇｌｙ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｐｈｅ、Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、Ｃｙｓ、およびＴｒｐから成る群から選択される、ＤまたはＬ配置の少なくとも１つのアミノ酸またはその誘導体を含む、前記項のいずれか１項に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【００１８】
１０．リンカーが、ＧｌｕおよびＣｙｓから成る群から独立して選択される、少なくとも２つのアミノ酸またはその誘導体を含む、前記項のいずれか１項に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【００１９】
１１．アミノ酸誘導体が、側鎖のカルボン酸に共有結合し、アミド結合を形成したアミノ糖部位を有するグルタミン酸である、項９または１０に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【００２０】
１２．アミノ糖部位が１−デオキシ−１−アミノ−Ｄ−グルシトールである、項１１に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【００２１】
１３．リンカーが式：Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ
［式中、グルタミン酸は適宜、側鎖のカルボン酸に共有結合し、アミド結合を形成したアミノ糖部位で置換されていてもよい。］
で示されるアミノ酸部位を含む、項９または１０に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【００２２】
１４．アミノ糖部位が１−デオキシ−１−アミノ−Ｄ−グルシトールである、項１４に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【００２３】
１５．Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕがカルボン酸側鎖を介して互いに共有結合する、項１３または１４に記載のコンジュゲート。
【００２４】
１６．リンカーが式：
【化４】
2020502130.tif 000006
［式中、ｍは０〜９の整数であり、ｐは３〜１０の整数であり、ｑは３〜１００の整数である。］
を含む、前記項のいずれか１項に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【００２５】
１７．リンカーが
【化５】
2020502130.tif 000007
［式中、
Ｒ７およびＲ８はそれぞれ独立して、ＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルであり；
ｔは１〜８の整数である。］
から成る群から選択される部分を含む、前記項のいずれか１項に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【００２６】
１８．リンカーが式：
【化６】
2020502130.tif 000008
である、項１７の記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【００２７】
１９．Ｒ７およびＲ８がＨであり；ｔが２である、項１７もまたは１８に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【００２８】
２０．リンカーがヒドラジンである、前記項のいずれか１項に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【００２９】
２１．Ｌが構造：
【化７】
2020502130.tif 000009
を含む、前記項のいずれか１項に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【００３０】
２２．リンカーが
【化８】
2020502130.tif 000010
［式中、Ｒ６はＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルである。］
から成る群から選択される部分を含む、前記項のいずれか１項に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【００３１】
２３．式：
【化９】
2020502130.tif 000011
を含む、項１に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【００３２】
２４．Ｘが蛍光色素を含む、前記項のいずれか１項に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【００３３】
２５．ＸがＮＩＲ色素を含む、前記項のいずれか１項に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【００３４】
２６．蛍光色素がフルオレセインマレイミドまたはフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）である、項２４に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【００３５】
２７．ＮＩＲ色素がＳ０４５６である、項２５に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【００３６】
２８．Ｘが構造：
【化１０】
2020502130.tif 000012
を有する、項１〜２４、もしくは２６のいずれか１項に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【００３７】
２９．Ｘが構造：
【化１１】
2020502130.tif 000013
を有する、項１〜２３、もしくは２５のいずれか１項に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【００３８】
３０．構造：
【化１２】
2020502130.tif 000014
を有する、項１に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【００３９】
３１．構造：
【化１３】
2020502130.tif 000015
を有する、項１に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【００４０】
３２．Ｘが式：
【化１４】
2020502130.tif 000016
で示されるキレート剤である、項１〜２３のいずれか１項に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【００４１】
３３．Ｘがキレート剤に配位する放射性金属同位体を含む、項３２に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【００４２】
３４．構造：
【化１５】
2020502130.tif 000017
［式中、
Ｌは二価リンカーを含み；
Ｘは近赤外（ＮＩＲ）吸収色素を含む。］
を有するコンジュゲート。
【００４３】
３５．構造：
【化１６】
2020502130.tif 000018
を有する、項３４に記載のコンジュゲート。
【００４４】
３６．患者から癌関連線維芽細胞（ＣＡＦ）を外科的に除去する方法であって、
患者の腫瘍微小環境にコンジュゲートを送達すること、ここで、腫瘍微小環境は少なくとも１つのＣＡＦを含み、コンジュゲートは構造：
【化１７】
2020502130.tif 000019
［式中、Ｌは二価リンカーを含み、Ｘは近赤外（ＮＩＲ）吸収色素を含む。］
を有し、
そこで光刺激の適用によって、ＮＩＲ色素の蛍光を生じさせること；および
蛍光の結果に基づいて、患者のＣＡＦ含有組織を切除すること
を特徴とする方法。
【００４５】
３７．コンジュゲートによってイメージングされるＣＡＦ含有組織が間質細胞を含む、項２２に記載の方法。
【００４６】
３８．Ａがビンカアルカロイド、クリプトフィシン、ボルテゾミブ、チオボルテゾミブ、ツブリシン、アミノプテリン、ラパマイシン、パクリタキセル、ドセタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エベロリムス、α−アマニチン、ベルカリン、ジデムニンＢ、ゲルダナマイシン、プラバラノール(purvalanol)Ａ、イスピネシブ、ブデソニド、ダサチニブ、エポシロン、メイタンシン、およびチロシンキナーゼ阻害剤から成る群から選択される薬物である、項１〜２３のいずれか１項に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【００４７】
３９．薬物がツブリシンである、項１〜２３のいずれか１項に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【００４８】
４０．薬物が式：
【化１８】
2020502130.tif 000020
［式中、
Ｒ１ａ、Ｒ３ａ、Ｒ３ａ’およびＲ３ａ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、およびＣ３−Ｃ６シクロアルキルから成る群から選択され、ここで、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニルおよびＣ３−Ｃ６シクロアルキルにおける水素原子は、それぞれ独立して適宜、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−Ｃ１０アリール、５〜７員ヘテロアリール、−ＯＲ１３ａ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１３ａ、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１３ａＲ１３ａ’、−ＯＳ（Ｏ）Ｒ１３ａ、−ＯＳ（Ｏ）２Ｒ１３ａ、−ＳＲ１３ａ、−ＳＣ（Ｏ）Ｒ１３ａ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ１３ａ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ１３ａ、−Ｓ（Ｏ）２ＯＲ１３ａ、−Ｓ（Ｏ）ＮＲ１３ａＲ１３ａ’、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１３ａＲ１３ａ’、−ＯＳ（Ｏ）ＮＲ１３ａＲ１３ａ’、−ＯＳ（Ｏ）２ＮＲ１３ａＲ１３ａ’、−ＮＲ１３ａＲ１３ａ’、−ＮＲ１３ａＣ（Ｏ）Ｒ１４ａ、−ＮＲ１３ａＣ（Ｏ）ＯＲ１４ａ、−ＮＲ１３ａＣ（Ｏ）ＮＲ１４ａＲ１４ａ’、−ＮＲ１３ａＳ（Ｏ）Ｒ１４ａ、−ＮＲ１３ａＳ（Ｏ）２Ｒ１４ａ、−ＮＲ１３ａＳ（Ｏ）ＮＲ１３ａＲ１４ａ’、−ＮＲ１３ａＳ（Ｏ）２ＮＲ１４ａＲ１４ａ’、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１３ａ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１３ａ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１３ａまたは−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１３ａＲ１３ａ’で置換されていてもよく；
Ｒ２ａ、Ｒ４ａおよびＲ１２ａはそれぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニルから成る群から選択され；
Ｒ５ａおよびＲ６ａはそれぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、−ＯＲ１５ａ、−ＳＲ１５ａおよび−ＮＲ１５ａＲ１５ａ’から成る群から選択され、ここで、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニルおよびＣ２−Ｃ６アルキニルにおける水素原子は、それぞれ独立して適宜、ハロゲン、−ＯＲ１６ａ、−ＳＲ１６ａ、−ＮＲ１６ａＲ１６ａ’、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１６ａ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１６ａまたは−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１６ａＲ１６ａ’で置換されていてもよく；あるいは、Ｒ５ａおよびＲ６ａは、それらが結合する炭素原子と一緒になって、−Ｃ（Ｏ）−を形成し；
Ｒ７ａ、Ｒ８ａ、Ｒ９ａ、Ｒ１０ａおよびＲ１１ａはそれぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＮＣＯ、−ＯＲ１７ａ、−ＳＲ１７ａ、−Ｓ（Ｏ）２ＯＲ１７ａ、−ＮＲ１７ａＲ１７ａ’、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１７ａ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１７ａ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１７ａおよび−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１７ａＲ１７ａ’から成る群から選択され、ここで、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニルおよびＣ２−Ｃ６アルキニルにおける水素原子は、それぞれ独立して適宜、ハロゲン、−ＯＲ１８ａ、−ＳＲ１８ａ、−ＮＲ１８ａＲ１８ａ’、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１８ａ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１８ａまたは−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１８ａＲ１８ａ’で置換されていてもよく；
Ｒ１３ａ、Ｒ１３ａ’、Ｒ１４ａ、Ｒ１４ａ’、Ｒ１５ａ、Ｒ１５ａ’、Ｒ１６ａ、Ｒ１６ａ’、Ｒ１７ａおよびＲ１７ａ’はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−Ｃ１０アリールおよび５〜７員ヘテロアリールから成る群から選択され、ここで、Ｃ１−Ｃ７アルキル、Ｃ２−Ｃ７アルケニル、Ｃ２−Ｃ７アルキニル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−Ｃ１０アリール、または５〜７員ヘテロアリールにおける水素原子は、それぞれ独立して適宜、ハロゲン、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＮＨ２または−ＣＯ２Ｈで置換されていてもよく；
Ｒ１８ａおよびＲ１８ａ’はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−Ｃ１０アリール、５〜７員ヘテロアリール  −Ｃ（Ｏ）Ｒ１９ａ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１９ａ）２、および−Ｓ（Ｏ）２ＯＲ１９ａから成る群から選択され；
Ｒ１９ａはそれぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−Ｃ１０アリールおよび５〜７員ヘテロアリールから選択され；
ａは１、２、または３である。］
で示されるテトラペプチドである、項１〜２３のいずれか１項に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【００４９】
４１．Ｄが式：
【化１９】
2020502130.tif 000021
［式中、
Ｒ１ａ、Ｒ３ａ、Ｒ３ａ’およびＲ３ａ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニルおよびＣ３−Ｃ６シクロアルキルから成る群から選択され、ここで、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニルおよびＣ３−Ｃ６シクロアルキルにおける水素原子は、それぞれ独立して適宜、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−Ｃ１０アリール、５〜７員ヘテロアリール、−ＯＲ１３ａ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１３ａ、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１３ａＲ１３ａ’、−ＯＳ（Ｏ）Ｒ１３ａ、−ＯＳ（Ｏ）２Ｒ１３ａ、−ＳＲ１３ａ、−ＳＣ（Ｏ）Ｒ１３ａ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ１３ａ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ１３ａ、−Ｓ（Ｏ）２ＯＲ１３ａ、−Ｓ（Ｏ）ＮＲ１３ａＲ１３ａ’、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１３ａＲ１３ａ’、−ＯＳ（Ｏ）ＮＲ１３ａＲ１３ａ’、−ＯＳ（Ｏ）２ＮＲ１３ａＲ１３ａ’、−ＮＲ１３ａＲ１３ａ’、−ＮＲ１３ａＣ（Ｏ）Ｒ１４ａ、−ＮＲ１３ａＣ（Ｏ）ＯＲ１４ａ、−ＮＲ１３ａＣ（Ｏ）ＮＲ１４ａＲ１４ａ’、−ＮＲ１３ａＳ（Ｏ）Ｒ１４ａ、−ＮＲ１３ａＳ（Ｏ）２Ｒ１４ａ、−ＮＲ１３ａＳ（Ｏ）ＮＲ１３ａＲ１４ａ’、−ＮＲ１３ａＳ（Ｏ）２ＮＲ１４ａＲ１４ａ’、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１３ａ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１３ａ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１３ａまたは−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１３ａＲ１３ａ’で置換されていてもよく；
Ｒ２ａ、Ｒ４ａおよびＲ１２ａはそれぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニルから成る群から選択され；
Ｒ５ａはＨ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、−ＯＲ１５ａ、−ＳＲ１５ａおよび−ＮＲ１５ａＲ１５ａ’から成る群から選択され、ここで、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニルおよびＣ２−Ｃ６アルキニルにおける水素原子は、それぞれ独立して適宜、ハロゲン、−ＯＲ１６ａ、−ＳＲ１６ａ、−ＮＲ１６ａＲ１６ａ’、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１６ａ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１６ａまたは−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１６ａＲ１６ａ’で置換されていてもよく；
Ｒ７ａ、Ｒ８ａ、Ｒ９ａ、Ｒ１０ａおよびＲ１１ａはそれぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＮＣＯ、−ＯＲ１７ａ、−ＳＲ１７ａ、−Ｓ（Ｏ）２ＯＲ１７ａ、−ＮＲ１７ａＲ１７ａ’、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１７ａ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１７ａ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１７ａおよび−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１７ａＲ１７ａ’から成る群から選択され、ここで、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニルおよびＣ２−Ｃ６アルキニルにおける水素原子は、それぞれ独立して適宜、ハロゲン、−ＯＲ１８ａ、−ＳＲ１８ａ、−ＮＲ１８ａＲ１８ａ’、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１８ａ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１８ａまたは−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１８ａＲ１８ａ’で置換されていてもよく；
Ｒ１３ａ、Ｒ１３ａ’、Ｒ１４ａ、Ｒ１４ａ’、Ｒ１５ａ、Ｒ１５ａ’、Ｒ１６ａ、Ｒ１６ａ’、Ｒ１７ａおよびＲ１７ａ’はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−Ｃ１０アリールおよび５〜７員ヘテロアリールから成る群から選択され、ここで、Ｃ１−Ｃ７アルキル、Ｃ２−Ｃ７アルケニル、Ｃ２−Ｃ７アルキニル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−Ｃ１０アリール、または５〜７員ヘテロアリールにおける水素原子は、それぞれ独立して適宜、ハロゲン、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＮＨ２または−ＣＯ２Ｈで置換されていてもよく；
Ｒ１８ａおよびＲ１８ａ’はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−Ｃ１０アリール、５〜７員ヘテロアリール  −Ｃ（Ｏ）Ｒ１９ａ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１９ａ）２、および−Ｓ（Ｏ）２ＯＲ１９ａから成る群から選択され；
Ｒ１９ａはそれぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−Ｃ１０アリールおよび５〜７員ヘテロアリールから選択され；
ａは１、２、または３である。］
で示されるテトラペプチドである、項１〜２３のいずれか１項に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【００５０】
４２．Ｄが式：
【化２０】
2020502130.tif 000022
［式中、
Ｒ９ａはＨ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＮＣＯ、−ＯＲ１７ａ、−ＳＲ１７ａ、−Ｓ（Ｏ）２ＯＲ１７ａ、−ＮＲ１７ａＲ１７ａ’、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１７ａ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１７ａ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１７ａおよび−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１７ａＲ１７ａ’から成る群から選択され、ここで、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニルおよびＣ２−Ｃ６アルキニルにおける水素原子は、それぞれ独立して適宜、ハロゲン、−ＯＲ１８ａ、−ＳＲ１８ａ、−ＮＲ１８ａＲ１８ａ’、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１８ａ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１８ａまたは−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１８ａＲ１８ａ’によって置換されていてもよく；
Ｒ１３ａ、Ｒ１７ａおよびＲ１７ａ’はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−Ｃ１０アリールおよび５〜７員ヘテロアリールから成る群から選択され、ここで、Ｃ１−Ｃ７アルキル、Ｃ２−Ｃ７アルケニル、Ｃ２−Ｃ７アルキニル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−Ｃ１０アリール、または５〜７員ヘテロアリールにおける水素原子は、それぞれ独立して適宜、ハロゲン、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＮＨ２または−ＣＯ２Ｈで置換されていてもよく；
Ｒ１８ａおよびＲ１８ａ’はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−Ｃ１０アリール、５〜７員ヘテロアリール  −Ｃ（Ｏ）Ｒ１９ａ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１９ａ）２、および−Ｓ（Ｏ）２ＯＲ１９ａから成る群から選択され；
Ｒ１９ａはそれぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−Ｃ１０アリールおよび５〜７員ヘテロアリールから選択される。］
で示されるテトラペプチドである、項１〜２３のいずれか１項に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【００５１】
４３．Ａが天然に存在するツブリシンである、項１〜２３のいずれか１項に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【００５２】
４４．ＡがツブリシンＡ、ツブリシンＢ、ツブリシンＣ、ツブリシンＤ、ツブリシンＥ、ツブリシンＦ、ツブリシンＧ、ツブリシンＨおよびツブリシンＩから成る群から選択される、項１〜２３のいずれか１項に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【００５３】
４５．薬物がツブリシンＢである、項１〜２３のいずれか１項に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【００５４】
４６．Ａが式：
【化２１】
2020502130.tif 000023
である、項１〜２３のいずれか１項に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【００５５】
４７．Ａが式：
【化２２】
2020502130.tif 000024
である、前記項のいずれか１項に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【００５６】
４８．式：
【化２３】
2020502130.tif 000025
で示されるコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【００５７】
４９．コンジュゲートが、それに配位する、１１１Ｉｎ、９９ｍＴｃ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、６７Ｇａおよび６８Ｇａから成る群から選択される放射性金属同位体を含む、項４８に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【００５８】
５０．放射性金属同位体が９９ｍＴｃである、項４９に記載のコンジュゲート。
【００５９】
５１．式：
【化２４】
2020502130.tif 000026
で示されるコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【００６０】
５２．式：
【化２５】
2020502130.tif 000027
で示されるコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【００６１】
５３．前記項のいずれかに記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩、および適宜、少なくとも１つの薬学的に許容可能な賦形剤を含む、医薬組成物。
【００６２】
５４．
ａ．有効量の項１〜２３、３８〜４７、もしくは５１のいずれか１項に記載のコンジュゲートまたは組成物；またはその薬学的に許容可能な塩を、対象に投与すること
を特徴とする、対象における癌を治療する方法。
【００６３】
５５．対象がＦＡＰ発現性癌を有する、項５４に記載の方法。
【００６４】
５６．ＦＡＰ発現性癌が原発性または転移性である、項５４または５５に記載の方法。
【００６５】
５７．癌が前立腺癌、子宮内膜癌、皮膚癌、膵臓癌、乳房癌、腎臓癌、卵巣癌および脳腫瘍から成る群から選択される、項４４〜５６のいずれか１項に記載の方法。
【００６６】
５８．対象におけるＦＡＰ発現性癌を治療する方法において用いるための、項１〜２３、３８〜４７、もしくは５１のいずれか１項に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩。
【００６７】
５９．方法がＦＡＰ発現性癌の治療に有効な分量のコンジュゲートを、対象に投与することを特徴とする、項５８に記載のコンジュゲート。
【００６８】
６０．ＦＡＰ発現性癌が前立腺癌、子宮内膜癌、皮膚癌、膵臓癌、乳房癌、腎臓癌、卵巣癌および脳腫瘍から成る群から選択される、項５８または５９に記載のコンジュゲート。
【００６９】
６１．対象におけるＦＡＰ発現性癌の治療に有用な医薬の製造における、項１〜２３、３８〜４７、もしくは５１のいずれか１項に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩の使用。
【００７０】
６２．ＦＡＰ発現性癌が、前立腺癌、子宮内膜癌、皮膚癌、膵臓癌、乳房癌、腎臓癌、卵巣癌および脳腫瘍から成る群から選択される、項６１に記載の使用。
【００７１】
６３．
ａ．細胞を、項１〜３１のいずれか１項に記載のコンジュゲートと接触させて、標識細胞を得ること、および
ｂ．標識細胞を可視化すること
を特徴とする、細胞集団をインビトロでイメージングする方法。
【００７２】
６４．細胞集団のインビトロでのイメージング方法に用いるための、項１〜３１のいずれか１項に記載のコンジュゲート。
【００７３】
６５．方法が
ａ．細胞を項１〜３１のいずれか１項に記載のコンジュゲートと接触させて、標識細胞を得ること、および
ｂ．標識細胞を可視化すること
を特徴とする、項６３に記載のコンジュゲート。
【００７４】
６６．
ａ．有効量の項１〜２３、３２、３３、４８もしくは４９のいずれか１項に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩を患者に投与し、標識細胞を得ること；および
ｂ．標識細胞をイメージングによって可視化すること
を特徴とする、細胞集団をインビボでイメージングする方法。
【００７５】
６７．細胞集団をインビトロでイメージングする方法において用いるための、項１〜２３、３２、３３、４８または４９のいずれか１項に記載のコンジュゲート。
【００７６】
６８．方法が
ａ．有効量の項１〜２３、３２、３３、４８もしくは４９のいずれか１項に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩を患者に投与し、標識細胞を得ること；および
ｂ．イメージングによって標識細胞を可視化すること
を特徴とする、項６７に記載のコンジュゲート。
【図面の簡単な説明】
【００７７】
【図１】図１は化合物３の化学構造およびＬＣ／ＭＳトレースを示す。
【図２】図２は化合物４の化学構造およびＬＣ／ＭＳトレースを示す。
【図３】図３は化合物５の化学構造およびＬＣ／ＭＳトレースを示す。
【図４】図４は化合物７の化学構造およびＬＣ／ＭＳトレースを示す。
【図５】図５は化合物８（ＪＦＬ）の化学構造およびＬＣ／ＭＳトレースを示す。
【図６】図６は化合物１０の化学構造およびＬＣ／ＭＳトレースを示す。
【図７】図７はＪＦＬ−Ｌ１の化学構造およびＬＣ／ＭＳトレースを示す。
【図８】図８はＪＦＬ−Ｌ１−ＦＭの化学構造およびＬＣ／ＭＳトレースを示す。
【図９】図９はＳ０４５６マレイミドの化学構造およびＬＣ／ＭＳトレースを示す。
【図１０】図１０はＪＦＬ−Ｌ１−Ｓ０４５６の化学構造およびＬＣ／ＭＳトレースを示す。
【００７８】
【図１１】図１１はＪＦＬ−Ｌ１−ＦＭのインビトロ共焦点イメージングを示す。
【図１２】図１２は蛍光対濃度によって決定される、ＪＦＬ−Ｌ１−Ｓ０４５６ＦＡＰ形質転換ＨＥＫ２９３細胞のインビトロ結合親和性を示す。
【図１３】図１３はＦａＤｕマウス異種移植片におけるＪＦＬ−Ｌ１−Ｓ０４５６のインビボイメージングを示す。
【図１４】図１４はＫＢマウス異種移植片におけるＪＦＬ−Ｌ１−Ｓ０４５６のインビボイメージングを示す。
【図１５】図１５はＨＴ２９マウス異種移植片におけるＪＦＬ−Ｌ１−Ｓ０４５６のインビボイメージングを示す。
【図１６】図１６はＭＤＡ−ＭＢ２３１マウス異種移植片におけるＪＦＬ−Ｌ１−Ｓ０４５６のインビボイメージングを示す。
【図１７】図１７はＪＦＬ−Ｌ１−ＴｕｂＢＨのＬＣ／ＭＳトレースを示す。
【図１８】図１８ＡはＪＦＬ−Ｌ１−ＴｕｂＢＨによる処理に対する応答における、経時的な腫瘍体積を示し、図１８Ｂは実験において用いたマウスの体重を示す。（▲）対照；（◆）ＦＡＰ−競合；（−）連続−ＦＡＰ−ＴｕｂＢＨ（４０ｎｍｏｌ）；（●）１日 ＦＡＰ−ＴｕｂＢＨ（４０ｎｍｏｌ）。
【図１９】図１９Ａは他の治療との組み合わせでＪＦＬ−Ｌ１−ＴｕｂＢＨおよびＪＦＬ−Ｌ１−ＴｕｂＢＨに対する応答における、経時的な腫瘍体積を示し、図１９Ｂは実験において用いたマウスの体重を示す。（△）対照；（▲）ＦＡＰ−競合；（■）ＦＡＰ−ＴｕｂＢＨ；（▼）葉酸−ＴＬＲ７；（●）葉酸−ＰＩ３Ｋ；（□）ＦＡＰ−ＴｕｂＢＨ＆葉酸−ＴＬＲ７；（○）ＦＡＰ−ＴｕｂＢＨ＆葉酸−ＰＩ３Ｋ。
【図２０】図２０ＡはＪＦＬ−Ｌ１−ＦＭに対する応答における、経時的な腫瘍体積を示し、図２０Ｂは実験において用いたマウスの体重を示す。（○）対照；（■）ＦＡＰ−ＦＭ；（●）ＦＡＰ−競合。
【００７９】
【図２１】図２１Ａ−ＢはＪＦＬ−Ｌ２−Ｓ０４５６のＬＣ／ＭＳトレースを示す。
【図２２】図２２Ａ−ＣはＪＦＬ−Ｌ２−Ｓ０４５６を用いたインビボイメージングを示す。
【図２３】図２３は異なる濃度のＪＦＬ−Ｌ１−Ｓ０４５６を用いたインビボイメージングを示す。
【図２４】図２４Ａ−Ｂはカクテルイメージング：ＦＡＰαおよびＬＨＲＨ−Ｒ標的ＮＩＲコンジュゲートを示す。
【図２５】図２５Ａ−ＢはＪＦＬ−Ｌ３のＬＣ／ＭＳトレースを示す。
【図２６】図２６はＪＦＬ−Ｌ３のインビトロ結合親和性を示す。
【図２７】図２７Ａ−ＣはＪＦＬ−Ｌ３のインビボイメージングを示す。
【発明を実施するための形態】
【００８０】
詳細な説明
本発明のいくつかの実施態様は、以下に列挙する項によって記載され、これらの実施態様と、この詳細な説明の節において記載される実施態様との任意の組み合わせが考慮される。以下に記載される様々な代表的な実施態様の要素および特徴は、同様に本教示の範囲内に属する新たな実施態様を生み出すために、異なる方法で組み合わせてもよいことが理解されるべきである。
【００８１】
１．構造：Ｂ−Ｌ−Ｘ
［式中、Ｂは線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）阻害剤を含み；Ｌは二価リンカーを含み；Ｘは近赤外（ＮＩＲ）吸収色素、放射性イメージング剤、または癌細胞および／もしくは癌関連線維芽細胞（ＣＡＦ）に対して有効な治療剤を含む。］
を有するコンジュゲート。
【００８２】
２．Ｂが構造：
【化２６】
2020502130.tif 000028
［式中、
Ｒ１およびＲ２は同一または異なっており、かつ、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、およびＣ１−Ｃ４アルキルから成る群から選択され；
Ｒ３はＣ１−Ｃ４アルキル、ニトリル、またはイソニトリルであり；
Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６は同一または異なっており、かつ、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、およびＣ１−Ｃ４アルキルから成る群から選択される。］
を有する、項１に記載のコンジュゲート。
【００８３】
３．Ｒ１およびＲ２がそれぞれハロゲンである、前記項のいずれかに記載のコンジュゲート。
【００８４】
４．Ｒ１およびＲ２がそれぞれフッ素である、前記項のいずれかに記載のコンジュゲート。
【００８５】
５．Ｒ３がニトリルである、前記項のいずれかに記載のコンジュゲート。
【００８６】
６．Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６がそれぞれ水素である、前記項のいずれかに記載のコンジュゲート。
【００８７】
７．Ｂが構造：
【化２６】
2020502130.tif 000029
を有する、前記項のいずれかに記載のコンジュゲート。
【００８８】
８．Ｂが構造：
【化２７】
2020502130.tif 000030
を有する、前記項のいずれかに記載のコンジュゲート。
【００８９】
９．Ｌが構造：
【化２８】
2020502130.tif 000031
を含む、前記項のいずれかに記載のコンジュゲート。
【００９０】
１０．Ｌが構造：
【化２９】
2020502130.tif 000032
を含む、前記項のいずれかに記載のコンジュゲート。
【００９１】
１１．ＸがＮＩＲ色素を含む、前記項のいずれかに記載のコンジュゲート。
【００９２】
１２．ＮＩＲ色素がフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）である、前記項のいずれかに記載のコンジュゲート。
【００９３】
１３．ＮＩＲ色素がＳ０４５６である、前記項のいずれかに記載のコンジュゲート。
【００９４】
１４．Ｘが構造：
【化３０】
2020502130.tif 000033
を有する、前記項のいずれかに記載のコンジュゲート。
【００９５】
１５．Ｘが構造：
【化３１】
2020502130.tif 000034
を有する、前記項のいずれかに記載のコンジュゲート。
【００９６】
１６．構造：
【化３２】
2020502130.tif 000035
を有する、前記項のいずれかに記載のコンジュゲート。
【００９７】
１７．構造：
【化３３】
2020502130.tif 000036
を有する、前記項のいずれかに記載のコンジュゲート。
【００９８】
１８．Ｘが放射性イメージング剤を含む、項１〜１０のいずれか１項に記載のコンジュゲート。
【００９９】
１９．Ｘが癌細胞および／またはＣＡＦに対して有効な治療剤を含む、項１〜１０のいずれか１項に記載のコンジュゲート。
【０１００】
２０．構造：
【化３４】
2020502130.tif 000037
［式中、Ｌは二価リンカーを含み；ＸがＮＩＲ色素は近赤外（ＮＩＲ）吸収色素を含む。］
を有するコンジュゲート。
【０１０１】
２１．構造：
【化３５】
2020502130.tif 000038
を有する、項２０に記載のコンジュゲート。
【０１０２】
２２．患者から癌関連線維芽細胞（ＣＡＦ）を外科的に除去する方法であって、
患者の腫瘍微小環境にコンジュゲートを送達すること、ここで、腫瘍微小環境は少なくとも１つのＣＡＦを含み、コンジュゲートは構造：
【化３６】
2020502130.tif 000039
［式中、Ｌは二価リンカーを含み、Ｘは近赤外（ＮＩＲ）吸収色素を含む。］
を有し；
そこで光刺激の適用によって、ＮＩＲ色素の蛍光を生じさせること；および
蛍光の結果に基づいて、患者のＣＡＦ含有組織を切除すること
を特徴とする方法。
【０１０３】
２３．コンジュゲートによってイメージングされるＣＡＦ含有組織が間質細胞を含む、項２２に記載の方法。
【０１０４】
前記および下記の実施態様のそれぞれにおいて、式はコンジュゲートの全ての薬学的に許容可能な塩を含み、表すだけでなく、コンジュゲートの式の任意のおよび全ての水和物および／または溶媒和物も含むことが理解されるべきである。ヒドロキシ、アミノなどの基などのいくつかの官能基は、コンジュゲートの様々な物理的形態において、水および／または様々な溶媒と複合体および／または配位結合体を形成することが理解される。そのため、前記式は、様々な水和物および／または溶媒和物を含み、表すことが理解されるべきである。コンジュゲートの式の非水和物および／または非溶媒和物が、コンジュゲートの式の水和物および／溶媒和物と同様に、そのような式によって記載されることもまた理解されるべきである。
【０１０５】
本記載にわたって、および付属の特許請求の範囲において、以下の定義が理解されるべきである：
【０１０６】
本明細書で用いられる語句「Ｃ１−Ｃ４アルキル」は、１〜４個の炭素原子を含む、直鎖、分岐鎖、または環状炭化水素鎖をいう。本教示に記載されるＣ１−Ｃ４アルキル基の代表的な例としては、限定はされないが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、シクロプロピル、ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、およびシクロブチルが挙げられる。
【０１０７】
本明細書で用いられる用語「ハロゲン」は、フッ素、塩素、ヨウ素または臭素をいう。
【０１０８】
本明細書で用いられる「アミノ酸（別名、「ＡＡ」）」は、アミノ基および酸性基に共有結合するアルファ炭素原子を含む任意の分子を意味する。酸性基としては、カルボキシル基が挙げられる。「アミノ酸」としては、式：
【化３７】
2020502130.tif 000040
［式中、Ｒ’は側鎖であり、Φは少なくとも３つの炭素原子を含む。］
のうち１つを有する分子、またはその誘導体が挙げられる。「アミノ酸」は、Ｄ−アミノ酸およびＬ−アミノ酸の形態などの立体異性体を含む。例示的なアミノ酸基としては、限定はされないが、リジン（Ｌｙｓ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、スレオニン（Ｔｈｒ）、セリン（Ｓｅｒ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、プロリン（Ｐｒｏ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、アルギニン（Ａｒｇ）、グリシン（Ｇｌｙ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、アラニン（Ａｌａ）、バリン（Ｖａｌ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、チロシン（Ｔｙｒ）、システイン（Ｃｙｓ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、ホスホセリン（ＰＳＥＲ）、スルホシステイン、アルギノコハク酸（ＡＳＡ）、ヒドロキシプロリン、ホスホノエタノールアミン（ＰＥＡ）、サルコシン（ＳＡＲＣ）、タウリン（ＴＡＵ）、カルノシン（ＣＡＲＮ）、シトルリン（ＣＩＴ）、アンセリン（ＡＮＳ）、１，３−メチルヒスチジン（ＭＥ−ＨＩＳ）、アルファ−アミノアジピン酸（ＡＡＡ）、ベータ−アラニン（ＢＡＬＡ）、エタノールアミン（ＥＴＮ）、ガンマ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）、ベータ−アミノイソ酪酸（ＢＡＩＡ）、アルファ−アミノ酪酸（ＢＡＢＡ）、Ｌ−アロシスタチオニン（シスタチオニン−Ａ；ＣＹＳＴＡ−Ａ）、Ｌ−シスタチオニン（シスタチオニン−Ｂ；ＣＹＳＴＡ−Ｂ）、シスチン、アロイソロイシン（ＡＬＬＯ−ＩＬＥ）、ＤＬ−ヒドロキシリジン（ヒドロキシリジン（Ｉ））、ＤＬ−アロヒドロキシリジン（ヒドロキシリジン（２））、オルニチン（ＯＲＮ）、ホモシスチン（ＨＣＹ）、およびその誘導体などの、２０個の内在性ヒトアミノ酸およびその誘導体が挙げられる。本明細書に記載される実施態様と関連して、アミノ酸は、アルファ−アミノおよびカルボキシ官能基を介して（すなわち、ペプチド結合形成）、または側鎖の官能基（グルタミン酸の側鎖カルボキシ基など）と、いずれかのアルファ−アミノもしくはカルボキシ官能基のいずれかとを介して、本明細書に記載されるコンジュゲートの他の部分に共有結合することもできる。本明細書に記載されるコンジュゲートに関連して用いられる場合、アミノ酸はそれらが組み込まれているコンジュゲート中に双性イオンとして存在しうることが理解されるであろう。
【０１０９】
いくつかの実施態様において、アミノ酸の誘導体としては、天然のアミノ酸に存在しない側鎖の置換基を含むアミノ酸が挙げられる。誘導体のいくつかの例は、前記で示される。いくつかの実施態様において、グルタミン酸の誘導体としては、グルタミン酸側鎖上のカルボン酸を介してアミド結合を形成する、アミン置換基の共有結合体が挙げられる。いくつかの実施態様において、アミン置換基は以下：
【化３８】
2020502130.tif 000041
に示す１−デオキシ−１−アミノ−Ｄ−グルシトールなどのアミノ糖である。
【０１１０】
本明細書で用いられる語句「治療上の有効量」は、限定はされないが、治療される疾患または障害の症状の軽減などの、研究者、獣医師、医師、他の臨床医によって求められる、対象（すなわち、組織系、動物、またはヒト）における生物学的または医学的応答を引き出す、薬物または医薬品の分量をいう。ある局面において、治療上の有効量は、任意の治療に適用可能な合理的な利益／リスク比で、疾患または疾患の症状を治療または軽減しうる、活性物質の分量である。別の局面において、治療上の有効量は、通常の代謝過程を介して変換された時に、対象において求められる生物学的または医学的応答を生み出すことができる活性な薬物の分量を生じる、不活性なプロドラッグの分量である。
【０１１１】
単剤療法または併用療法を問わず、用量は、本明細書に記載される１つ以上のコンジュゲートの投与の間に生じうる、任意の毒性、または他の望ましくない副作用を基準に、有利に選択されることもまた理解される。さらに、本明細書に記載の併用療法は、そのような毒性、または他の望ましくない副作用を示すコンジュゲートを、より低い用量で投与することを可能にしうることが理解され、ここで、これらのより低い用量は、毒性の閾値を下回るか、または併用療法がなければ投与されていたであろう濃度よりも低い治療濃度域である。
【０１１２】
本明細書で用いられる用語「投与すること」は、本明細書に記載されるコンジュゲートおよび組成物を、宿主動物に導入するための全ての手段、限定はされないが、経口（ｐｏ）、静脈内（ｉｖ）、筋肉内（ｉｍ）、皮下（ｓｃ）、経皮、吸入、バッカル、眼内、舌下、膣内、および直腸投与などを含む。本明細書において記載されるコンジュゲートおよび組成物は、従来の非毒性の薬学的に許容可能な担体、アジュバント、および／またはビヒクルを含む、単位剤形および／または製剤において投与されうる。
【０１１３】
本明細書において用いられる語句「医薬組成物」または「組成物」は、本教示に記載される１つ以上のコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、もしくは水和物と、薬学的に許容可能な賦形剤などの他の化学成分との混合物をいう。医薬組成物の目的は、コンジュゲートの対象への投与を容易にすることである。本教示に記載されるコンジュゲートの送達に適切な医薬組成物およびその製造方法は、当業者に容易に理解されうる。そのような組成物およびその製造方法は、例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th Edition (Mack Publishing Company, 1995)において見つけられうる。
【０１１４】
特に定義されない限り、本明細書において用いられる全ての技術的および科学的用語は、本発明が属する技術分野における当業者に一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書において記載されるものと同様のまたは等価な任意の方法、装置、および物質は、本教示に記載される実施または試験において用いてもよいが、好ましい方法、装置、および物質をこれから記載する。
【０１１５】
いくつかの実施態様において、本教示に記載されるコンジュゲートは、近赤外（ＮＩＲ）吸収色素または放射性イメージング剤などのイメージング剤を含む。本教示に記載されるイメージング剤として用いられうる代表的な化合物としては、限定はされないが、色素、（例えば、ローダミン色素、シアニン色素、フルオレセイン色素など）、ＰＥＴイメージング剤、放射性標識色素が挙げられる。ローダミン色素の代表的な例としては、限定はされないが、５−カルボキシテトラメチルローダミン（５−ＴＡＭＲＡ）、ローダミンＢ、ローダミン６Ｇ、ＴＲＩＴＣ、テキサス・レッド、ローダミン１２３、スルホローダミン１０１が挙げられる。フルオレセイン色素の例としては、限定はされないが、フルオレセイン、フルオレセインマレイミド（ＦＭ）、５−アミノ−フルオレセイン、６−アミノ−フルオレセイン、フルオレセインイソシアネート（ＦＩＴＣ）、ＮＨＳ−フルオレセイン、オレゴン・グリーン、トウキョウ・グリーン、シンガポール・グリーン、フィラデルフィア・グリーンなどが挙げられる。本教示に記載される、用いられうる代表的な近赤外色素としては、限定はされないが、ＬＳ２８８、ＩＲ８００、ＳＰ０５４、Ｓ０１２１、ＫＯＤＡＫ、ＩＲＤ２８、Ｓ２０７６、Ｓ０４５６、およびその誘導体が挙げられる。
【０１１６】
いくつかの実施態様において、放射性標識剤は、本教示に記載されるイメージング剤として用いられうる。いくつかの実施態様において、ローダミン色素またはフルオレセイン色素は、同位体標識されうる。コンジュゲートに組み込むのに適切な同位体の例としては、水素（例えば、２Ｈおよび３Ｈ）、炭素（例えば、１１Ｃ、１３Ｃ、および１４Ｃ）、塩素（例えば、３６Ｃｌ）、フッ素（例えば、１８Ｆ）、ヨウ素（例えば、１２３Ｉおよび１２５Ｉ）、窒素（例えば、１３Ｎおよび１５Ｎ）、酸素（例えば、１５Ｏ、１７Ｏ、および１８Ｏ）、リン（例えば、３２Ｐ）、および硫黄（例えば、３５Ｓ）が挙げられる。
【０１１７】
いくつかの同位体標識コンジュゲート、例えば、放射性同位体を組み込んだものは、薬物および／または基質組織分布試験において有用でありうる。放射性同位体トリチウム（すなわち、３Ｈ）、および炭素−１４（すなわち、１４Ｃ）は、導入の容易さおよび検出の迅速な手段の観点から、本目的に特に有用である。
【０１１８】
１１Ｃ、１８Ｆ、および１３Ｎなどの、ポジトロン放出同位体による置換は、基質受容体占有率の研究のためのポジトロン断層撮影（ＰＥＴ）試験において有用でありうる。同位体標識コンジュゲートは一般に、当業者に既知の従来の技術によって、または従来用いられる非標識試薬の代わりに適切な同位体標識試薬を用いて、付属の実施例において記載されるものと同様の方法によって、調製されうる。
【０１１９】
いくつかの実施態様において、本開示は細胞または組織の集団を、インビトロまたはインビボのいずれかでイメージングするための方法を提供する。そのようなインビトロ方法は、当技術分野において既知の任意の方法によって実施されうることが理解される。いくつかの実施態様において、本明細書に記載されるインビトロイメージング方法は、（ａ）イメージングに適切な本教示に記載されるコンジュゲートを、細胞集団に接触させて、ＦＡＰタンパク質を発現する細胞に結合するコンジュゲートを生じること、および（ｂ）光の照射によって、細胞に結合したコンジュゲートを可視化することを含みうる。光の照射による細胞に結合したコンジュゲートの可視化は、励起波長における照射と、発光波長における検出を含むことが理解される。そのため、いくつかの実施態様において、本明細書に記載されるインビトロイメージング方法は、（ａ）イメージングに適切な本教示に記載されるコンジュゲートを、細胞集団に接触させて、ＦＡＰタンパク質を発現する細胞に結合するコンジュゲートを生じること、（ｂ）ＦＡＰタンパク質を発現する細胞に結合するコンジュゲートに励起波長光を照射すること、および（ｃ）発光波長において、癌細胞から放射する光を検出することを含みうる。
【０１２０】
いくつかの実施態様において、癌腫瘍などの組織は、本明細書に記載される方法によってイメージングされうる。例えば、いくつかの実施態様において、本教示に記載されるインビボイメージング方法は、（ａ）イメージングに適切な本教示に記載されるコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩を患者に投与し、ＦＡＰタンパク質を発現する細胞に結合するコンジュゲートを得ること；および（ｂ）光の照射によってＦＡＰタンパク質を発現している細胞に結合するコンジュゲートを可視化することを含みうる。光の照射によって、細胞に結合したコンジュゲートを可視化することは、励起波長における照射および発光波長における検出を含みうることが理解される。そのため、いくつかの実施態様において、本明細書に記載されるインビボイメージング方法は、（ａ）イメージングに適切な本明細書に記載されるコンジュゲート、またはその薬学的に許容可能な塩を患者に投与し、ＦＡＰタンパク質を発現している細胞に結合したコンジュゲートを生じること；（ｂ）ＦＡＰタンパク質を発現している細胞に結合したコンジュゲートに、励起波長光を照射すること；および（ｃ）発光波長において、癌細胞から放射する光を検出することを含みうる。任意の既知のイメージング技術（診断、または別の方法）、または当技術分野において既知の機器を用いて、光の照射による細胞に結合したコンジュゲートの可視化が行われうることが理解される。
【０１２１】
いくつかの実施態様において、本教示に記載されるコンジュゲートとしては、いくつかの実施態様において、癌細胞および／または癌関連線維芽細胞（ＣＡＦ）に対して治療上有効な治療剤が挙げられる。本教示に記載されるように用いられる治療剤は、薬学的に活性な化合物（例えば、治療剤）などの、細胞機能を調節する、または改変することができる任意の分子、またはイメージングまたは可視化される細胞もしくは組織（例えば、イメージング剤）に、測定可能なシグナルを提供することができる任意の分子でありうる。
【０１２２】
治療剤として用いられうる適切な分子としては、限定はされないが、ペプチド、オリゴペプチド、レトロ−インベルソ オリゴペプチド、タンパク質、少なくとも１つの非ペプチド結合がペプチド結合に置き換わったタンパク質類似体、アポタンパク質、グリコタンパク質、酵素、補酵素、酵素阻害剤、アミノ酸およびその誘導体、受容体および他の膜タンパク質；抗原およびその抗体；ハプテンおよびその抗体；ホルモン、脂質、リン脂質、リポソーム；毒素；抗生物質；鎮痛剤；気管支拡張剤；β遮断薬；抗菌物質；降圧剤；抗不整脈薬、強心配糖体、抗狭心症薬および血管拡張薬などの心血管治療薬；興奮剤、向精神薬、抗躁薬、および抑制薬などの中枢神経系作用薬；抗ウイルス薬；抗ヒスタミン薬；化学療法剤などの癌治療薬；精神安定薬；抗うつ剤；Ｈ−２ アンタゴニスト；抗痙攣薬；制嘔吐薬；プロスタグランジンおよびプロスタグランジン類似体；筋弛緩薬；抗炎症物質；興奮剤；うっ血除去薬；制吐薬；利尿薬；鎮痙薬；抗喘息薬；抗パーキンソン病薬；去痰薬；鎮咳薬；粘液溶解薬；並びに、抗物質および栄養添加剤が挙げられる。
【０１２３】
いくつかの実施態様において、治療剤はツブリシンでありうる。天然のツブリシンは一般に、Ｎ−メチル ピペコリン酸（Ｍｅｐ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、ツブバリン（Ｔｕｖ）と呼ばれる非天然アミノ酸、およびツブチロシン（Ｔｕｔ、チロシンの類似体）と呼ばれる非天然アミノ酸、またはツブフェニルアラニン（Ｔｕｐ、フェニルアラニンの類似体）と呼ばれる非天然アミノ酸のいずれかから成る、直線状のテトラペプチドである。
【０１２４】
いくつかの実施態様において、治療剤は式：
【化３９】
2020502130.tif 000042
［式中、
Ｒ１ａ、Ｒ３ａ、Ｒ３ａ’およびＲ３ａ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニルおよびＣ３−Ｃ６シクロアルキルから成る群から選択され、ここで、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニルおよびＣ３−Ｃ６シクロアルキルにおける水素原子は、それぞれ独立して適宜、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−Ｃ１０アリール、５〜７員ヘテロアリール、−ＯＲ１３ａ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１３ａ、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１３ａＲ１３ａ’、−ＯＳ（Ｏ）Ｒ１３ａ、−ＯＳ（Ｏ）２Ｒ１３ａ、−ＳＲ１３ａ、−ＳＣ（Ｏ）Ｒ１３ａ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ１３ａ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ１３ａ、−Ｓ（Ｏ）２ＯＲ１３ａ、−Ｓ（Ｏ）ＮＲ１３ａＲ１３ａ’、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１３ａＲ１３ａ’、−ＯＳ（Ｏ）ＮＲ１３ａＲ１３ａ’、−ＯＳ（Ｏ）２ＮＲ１３ａＲ１３ａ’、−ＮＲ１３ａＲ１３ａ’、−ＮＲ１３ａＣ（Ｏ）Ｒ１４ａ、−ＮＲ１３ａＣ（Ｏ）ＯＲ１４ａ、−ＮＲ１３ａＣ（Ｏ）ＮＲ１４ａＲ１４ａ’、−ＮＲ１３ａＳ（Ｏ）Ｒ１４ａ、−ＮＲ１３ａＳ（Ｏ）２Ｒ１４ａ、−ＮＲ１３ａＳ（Ｏ）ＮＲ１３ａＲ１４ａ’、−ＮＲ１３ａＳ（Ｏ）２ＮＲ１４ａＲ１４ａ’、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１３ａ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１３ａ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１３ａまたは−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１３ａＲ１３ａ’で置換されていてもよく；
Ｒ２ａ、Ｒ４ａおよびＲ１２ａはそれぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニルから成る群から選択され；
Ｒ５ａおよびＲ６ａはそれぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、−ＯＲ１５ａ、−ＳＲ１５ａおよび−ＮＲ１５ａＲ１５ａ’から成る群から選択され、ここで、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、およびＣ２−Ｃ６アルキニルにおける水素原子は、それぞれ独立して適宜、ハロゲン、−ＯＲ１６ａ、−ＳＲ１６ａ、−ＮＲ１６ａＲ１６ａ’、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１６ａ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１６ａまたは−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１６ａＲ１６ａ’で置換されていてもよく；あるいは、Ｒ５ａおよびＲ６ａは、それらが結合する炭素原子と一緒になって、−Ｃ（Ｏ）−を形成し；
Ｒ７ａ、Ｒ８ａ、Ｒ９ａ、Ｒ１０ａおよびＲ１１ａはそれぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＮＣＯ、−ＯＲ１７ａ、−ＳＲ１７ａ、−Ｓ（Ｏ）２ＯＲ１７ａ、−ＮＲ１７ａＲ１７ａ’、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１７ａ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１７ａ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１７ａおよび−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１７ａＲ１７ａ’から成る群から選択され、ここで、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニルおよびＣ２−Ｃ６アルキニルにおける水素原子は、それぞれ独立して適宜、ハロゲン、−ＯＲ１８ａ、−ＳＲ１８ａ、−ＮＲ１８ａＲ１８ａ’、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１８ａ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１８ａまたは−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１８ａＲ１８ａ’で置換されていてもよく；
Ｒ１３ａ、Ｒ１３ａ’、Ｒ１４ａ、Ｒ１４ａ’、Ｒ１５ａ、Ｒ１５ａ’、Ｒ１６ａ、Ｒ１６ａ’、Ｒ１７ａおよびＲ１７ａ’はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−Ｃ１０アリールおよび５〜７員ヘテロアリールから成る群から選択され、ここで、Ｃ１−Ｃ７アルキル、Ｃ２−Ｃ７アルケニル、Ｃ２−Ｃ７アルキニル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−Ｃ１０アリール、または５〜７員ヘテロアリールにおける水素原子は、それぞれ独立して適宜、ハロゲン、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＮＨ２または−ＣＯ２Ｈで置換されていてもよく；
Ｒ１８ａおよびＲ１８ａ’はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−Ｃ１０アリール、５〜７員ヘテロアリール  −Ｃ（Ｏ）Ｒ１９ａ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１９ａ）２、および−Ｓ（Ｏ）２ＯＲ１９ａから成る群から選択され、
Ｒ１９はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−Ｃ１０アリールおよび５〜７員ヘテロアリールから選択され；
ａは１、２、または３であり；
＊はコンジュゲートの残りへの共有結合を表す。］
で示されるテトラペプチドである。
【０１２５】
いくつかの実施態様において、治療剤は式：
【化４０】
2020502130.tif 000043
［式中、Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ３ａ’、Ｒ３ａ’’、Ｒ４ａ、Ｒ５ａ、Ｒ７ａ、Ｒ８ａ、Ｒ９ａ、Ｒ１０ａ、Ｒ１１ａおよびＲ１２ａは、本明細書で記載される通りであり、＊はコンジュゲートの残りへの共有結合を表す。］
で示されるものである。
【０１２６】
別の実施態様において、治療剤は以下の一般式：
【化４１】
2020502130.tif 000044
［式中、Ｒ９ａおよびＲ１３ａは本明細書に記載される通りであり、＊はコンジュゲートの残りへの共有結合を表す。］
で示される、天然に存在するツブリシン、またはその類似体、もしくは誘導体でありうる。
【０１２７】
前記ツブリシンのそれぞれのコンジュゲートは、本明細書に記載される通りである。
【０１２８】
いくつかの実施態様において、治療剤は以下の一般式：
【化４２】
2020502130.tif 000045
［式中、
【表１】
2020502130.tif 000046
＊はコンジュゲートの残りへの共有結合を表す。］
で示される、天然に存在するツブリシンでありうる。
【０１２９】
いくつかの実施態様において、本教示に記載される方法は、「対象」として、ヒト臨床医学および獣医学的応用の両方のために使用されうる。そのため、「対象」は本教示に記載されるコンジュゲートを投与され、ヒト（「患者」）、または獣医学的応用の場合、実験、農業、飼育、または野生動物でありうる。いくつかの実施態様において、対象はヒト患者、げっ歯類（例えば、マウス、ラット、ハムスターなど）、ウサギ、サル、チンパンジーなどの実験動物、イヌ、ネコ、およびウサギなどの飼育動物、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギなどの農業動物、クマ、パンダ、ライオン、トラ、ヒョウ、ゾウ、シマウマ、キリン、ゴリラ、イルカ、およびクジラなどの監禁した野生動物でありうる。
【０１３０】
いくつかの実施態様において、本明細書に記載される癌は、良性腫瘍および悪性腫瘍などの腫瘍原性である癌細胞集団であってもよく、あるいは、癌は非腫瘍原性であってもよい。癌は自然発生的に、または患者の生殖細胞系において存在する突然変異、または体細胞突然変異などの過程で生じうるか、あるいは、癌は化学的、ウイルス的、または放射線誘発性でありうる。本教示に適用可能な癌としては、限定はされないが、癌、肉腫、リンパ腫、メラノーマ、中皮腫、上咽頭癌、白血病、腺癌、および骨髄腫が挙げられる。
【０１３１】
いくつかの実施態様において、癌は肺癌、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭部癌、頸部癌、皮膚黒色腫、眼内黒色腫、子宮癌、卵巣癌、子宮内膜癌、平滑筋肉腫、直腸癌、胃癌、大腸癌、乳癌、トリプルネガティブ乳癌、卵管癌、子宮内膜癌、頚部癌、膣癌、外陰癌、ホジキン病、食道癌、小腸癌、内分泌系癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、副腎癌、軟部組織肉腫、尿道癌、陰茎癌、前立腺癌、慢性白血病、急性白血病、リンパ球性リンパ腫、胸膜中皮腫、膀胱癌、バーキットリンパ腫、尿管癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂腎癌、中枢神経系腫瘍（ＣＮＳ）、原発性ＣＮＳリンパ腫、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、胆管細胞癌、ハースル細胞甲状腺癌、または食道胃接合部腺癌でありうる。
【０１３２】
本明細書に記載される方法のいくつかの実施態様において、本教示に記載されるコンジュゲートの薬学的に許容可能な塩が提供される。本教示に記載されるコンジュゲートの薬学的に許容可能な塩は、酸付加体およびその塩基性塩を含む。
【０１３３】
適切な酸付加塩は、非毒性の塩を形成する酸から形成される。具体的な例としては、限定はされないが、酢酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸、ベシル酸塩、炭酸水素塩／炭酸塩、重硫酸塩／硫酸塩、ホウ酸塩、カンシル酸塩、クエン酸塩、エジシル酸塩、エシル酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、ヘキサフルオロリン酸塩、ヒベンズ酸塩、塩酸塩／塩化物、臭化水素酸塩／臭化物、ヨウ化水素酸塩／ヨウ化物、イセチオン酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メシル酸塩、メチル硫酸塩、ナフタレート、２−ナプシル酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オロチン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、リン酸塩／リン酸水素／リン酸二水素塩、糖酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、トシル酸塩、およびトリフルオロ酢酸塩が挙げられる。
【０１３４】
本明細書に記載されるコンジュゲートの適切な塩基性塩は、非毒性の塩を形成する塩基から形成される。具体的な例としては、限定はされないが、アルギニン塩、ベンザチン塩、カルシウム塩、コリン塩、ジエチルアミン塩、ジオラミン塩、グリシン塩、リジン塩、マグネシウム塩、メグルミン塩、オラミン塩、カリウム塩、ナトリウム塩、トロメタミン塩、および亜鉛塩が挙げられる。酸および塩基のヘミ塩、例えば、ヘミ硫酸塩およびヘミカルシウム塩もまた形成されうる。
【０１３５】
いくつかの実施態様において、本教示に記載されるコンジュゲートは、１つ以上の薬学的に許容可能な担体と合わせて製剤として投与されうる。担体は賦形剤でありうる。担体の選択は、特定の投与方法、溶解性および安定性における担体の効果、並びに剤形の性質などの要素に応じて変化しうる。本明細書に記載されるコンジュゲートの送達に適した医薬組成物、およびその合成方法は、当業者に容易に明らかであろう。そのような組成物およびその合成方法は、例えば、Remington: The Science ＆ Practice of Pharmacy, 21th Edition (Lippincott Williams ＆ Wilkins, 2005)において存在しうる。
【０１３６】
いくつかの実施態様において、薬学的に許容可能な担体としては、生理学的に適合可能な任意のおよび全ての溶媒、分散媒、コーティング剤、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤など、並びにそれらの組み合わせが挙げられる。いくつかの実施態様において、担体は非経口投与に適切である。薬学的に許容可能な担体としては、滅菌水溶液、または分散液、および注射可能な滅菌水溶液または分散液の即時調製のための滅菌散剤が挙げられる。補助的な活性化合物もまた、本発明の組成物に組み込んでもよい。
【０１３７】
いくつかの実施態様において、液体製剤は懸濁液および溶液を含みうる。そのような製剤は、担体、例えば、水、エタノール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、メチルセルロース、または適切な油、並びに１つ以上の乳化剤および／または懸濁剤を含みうる。液体製剤はまた、固体の再構成によっても調製されうる。
【０１３８】
いくつかの実施態様において、水性懸濁液は適切な賦形剤との混合で活性物質を含みうる。そのような賦形剤は、懸濁剤、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガントガム、およびアラビアゴム；天然に存在するリン脂質でありうる分散剤または湿潤剤、例えば、レシチン；アルキレンオキシドと脂肪族との縮合生成物、例えば、ステアリン酸ポリエチレン；エチレンオキシドと長鎖脂肪酸アルコールとの縮合生成物、例えば、ヘプタデカエチレンオキシセタノール；エチレンオキシドと、脂肪酸に由来する部分エステルおよびヘキシトールとの縮合生成物、例えば、ポリオキシエチレンソルビトールモノオレート；または、エチレンオキシドと、脂肪酸に由来する部分エステルとヘキシトール無水物との縮合生成物、例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレートである。水性懸濁液はまた、１つ以上の防腐剤、例えば、アスコルビン酸、エチル、ｎ−プロピル、もしくはｐ−ヒドロキシ安息香酸；または、１つ以上の着色剤を含みうる。
【０１３９】
いくつかの実施態様において、水の添加による水性懸濁液の調製に適切な分散可能な散剤および顆粒剤は、分散剤または湿潤剤、懸濁剤、および１つ以上の防腐剤との混合で、活性成分を提供する。さらなる賦形剤、例えば着色剤もまた、存在しうる。
【０１４０】
適切な乳化剤は、天然に存在するゴム、例えば、アラビアゴムまたはトラカントゴム；天然に存在するリン脂質、例えば、大豆レシチン；および脂肪酸に由来する部分エステルおよびヘキシトール無水物などのエステル、例えば、ソルビタンモノオレート、および前記部分エステルとエチレンオキシドの縮合生成物、例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレートでありうる。
【０１４１】
いくつかの実施態様において、等張剤、例えば、糖、マンニトール、ソルビトールなどのポリアルコール、または塩化ナトリウムは、組成物に含まれうる。注射可能な組成物の長期的な吸収は、吸収を遅延させる剤、例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチンを組成物中に含むことによってもたらされうる。
【０１４２】
経口製剤の具体的な剤形としては、限定はされないが、錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、シロップなどが挙げられる。
【０１４３】
本明細書に記載される癌の種類、投与経路および／またはコンジュゲートを局所的または全身に投与するかどうかに応じて、約１μｇ／ｋｇから約１ｇ／ｋｇの範囲内の用量など、許容可能な用量の広い範囲が、本明細書において考慮される。用量は単一または分割であってもよく、ｑ．ｄ．、ｂ．ｉ．ｄ．、ｔ．ｉ．ｄ．、またはさらに隔日、隔週（ｂ．ｉ．ｗ．）、週に１回、月に１回、３ヶ月に１回などの様々なプロトコルに応じて投与されてもよい。これらのそれぞれの場合において、本明細書に記載される治療上の有効量は、投与の事例に、あるいは用量プロトコルによって決定される、毎日、毎週、毎月、または３ヶ月の総用量に対応することが理解される。
【０１４４】
いくつかの実施態様において、本教示に記載されるコンジュゲートは、血流、筋肉、または内臓に直接投与されうる。非経口投与などのための適切な経路としては、静脈内、動脈内、腹腔内、くも膜下腔内、硬膜外、脳室内、尿道内、胸骨内、脳内、腫瘍内、筋肉内および皮下送達が挙げられる。非経口投与のための適切な手段としては、針（マイクロニードルなど）注射器、無針注射器、および点滴技術が挙げられる。
【０１４５】
いくつかの実施態様において、非経口製剤は一般に、塩、炭水化物、および緩衝剤（好ましくは３〜９のｐＨ）などの担体または賦形剤を含みうる水溶液であるが、いくつかの応用において、それらは滅菌非水溶液として、または滅菌、発熱物質フリーの水などの適切なビヒクルと共に用いられる乾燥形態として、より適切に製剤化されうる。別の実施態様において、本明細書に記載される任意の液体製剤は、本明細書に記載されるコンジュゲートの非経口剤形に適合しうる。例えば、滅菌条件下における凍結乾燥による、滅菌条件下における非経口製剤の調製は、当業者に周知の標準的な薬学技術を用いて、容易に達成されうる。いくつかの実施態様において、非経口製剤の調製において用いられる、本明細書に記載されるコンジュゲートの溶解度は、溶解促進剤の組み込みなど、適切な製剤技術を用いることによって増加しうる。
【０１４６】
いくつかの実施態様において、非経口投与のための製剤は、即時および／または制御放出のために製剤化されうる。いくつかの実施態様において、本教示に記載される活性剤（すなわち、本明細書に記載されるコンジュゲート）は、除放性製剤において、例えば、除放性ポリマーを含む組成物において投与されうる。活性剤は、インプラントおよびマイクロカプセル化送達システムを含む制御放出製剤など、即時放出からコンジュゲートを保護する担体と共に製剤化されうる。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、ポリ乳酸およびポリ酢酸、ポリグリコール酸共重合体（ＰＧＬＡ）などの、生分解性、生体適合性ポリマーが用いられうる。そのような製剤の製造方法は一般に、当技術分野において既知である。別の実施態様において、本教示に記載のコンジュゲート、または当該コンジュゲートを含む組成物は、適切な場合、持続的に投与されうる。
【０１４７】
いくつかの実施態様において、キットが提供される。本明細書に記載される活性なコンジュゲートの組み合わせが投与される場合、２つ以上の医薬組成物が、当該組成物の連続投与または共投与に適切なキットの形態で組み合わされうる。そのようなキットは、少なくとも１つが本教示に記載されるコンジュゲートを含む、２つ以上の別個の医薬組成物、および容器、分割容器、または分割ホイル小包などの、当該組成物を別個に保持するための手段を含みうる。いくつかの実施態様において、患者の選択および／または治療について、本明細書に記載されるコンジュゲートの使用のための説明を提供するラベルを有する容器中の、本明細書に記載の１つ以上のコンジュゲートを含む組成物が提供される。
【０１４８】
本明細書で用いられる用語「キット」は、本教示に記載される方法の実行において用いられる物質の集合をいう。キットの成分は、交差反応性および安定性に応じて、同じまたは別個の容器中に包装された組み合わせにおいて、液体または固体の形態で提供されうる。キットにおいて提供される成分の分量および特性は、特定の用途について最適な結果を生じるように選択されうる。いくつかの実施態様において、（例えば、患者に）投与される成分は、別個の物理的形態（例えば、１つ以上のの組成物および１つ以上の液体を含むキット）において提供されるが、別の実施態様において、患者に導入される成分の全てが、１つの共通の物理的形態（例えば、１つの組成物または１つの液体）において共に提供されうることが理解される。
【０１４９】
成分それ自体は、容器の材料によって実質的に吸着または変更されない一方で、本教示に記載されるキットに含まれる成分は、異なる成分の活性が実質的に維持されるように、あらゆる種類の容器で供給されうる。そのような容器としては、限定はされないが、アンプル、瓶、試験管、バイアル、フラスコ、シリンジ、袋および封筒（例えば、箔張）などが挙げられる。容器は、限定はされないが、ガラス、有機ポリマー（例えば、ポリカーボネート、ポリスチレン、ポリエチレン、ポリプロピレンなど）、セラミック、金属（例えば、アルミニウム）、金属合金（例えば、鋼）、コルクなどの任意の適切な物質から形成されうる。さらに、容器は、セプタムによって提供されうるものなどの、１つ以上のアクセスポート（例えば、針を介するアクセスのため）を含みうる。セプタムの好ましい物質としては、限定はされないが、例えば、DuPont (Wilmington, Del.)からＴＥＦＬＯＮの商品名で販売されている種類のポリテトラフルオロエチレンなどのゴムおよびポリマーが挙げられる。さらに、容器は、それを除去することによって成分を混合することができる区切りまたは膜によって分離されている２つ以上の区画を含みうる。
【０１５０】
本教示に記載されるキットはまた、限定はされないが、キットの成分を熱交換システムに追加するための説明書などの、当技術分野において既知の、並びに／または商業上およびユーザーの観点から望ましい、他の品目と共に供給されうる。
【０１５１】
本発明に記載されるキットと共に提供される説明資料は、（例えば、紙に）印刷されてもよく、および／または電子可読媒体（例えば、フロッピーディスク、ＣＤ−ＲＯＭ、ＤＶＤ−ＲＯＭ、ジップディスク、ビデオテープ、オーディオテープなど）において供給されてもよい。あるいは、説明書は、（例えば、キットの製造者または販売者によって特定される）インターネットウェブサイトをユーザーに示すことによって、および／または電子メール、テキストメッセージ、ソーシャルメディアなどを介して、およびそれらの組み合わせによって、提供されうる。
【０１５２】
いくつかの実施態様において、滅菌注射可能溶液は、必要に応じて、前記の成分の１つまたは組み合わせと共に、適切な溶媒中に必要な分量の活性剤を組み入れ、次いで濾過滅菌することによって調製されうる。一般に、分散液は、分散媒および前記の任意のさらなる成分を含む滅菌ビヒクル中に、コンジュゲートを組み込むことによって調製される。滅菌注射可能製剤の調製のための滅菌散剤の場合、好ましい調製方法は、真空乾燥および凍結乾燥であり、これによって活性成分に加えて、あらかじめ滅菌濾過したその溶液からの任意のさらなる望ましい成分の粉末を得ることができ、あるいは成分は一緒に滅菌濾過されうる。
【０１５３】
成分は、溶液、マイクロエマルジョン、リポソーム、または高濃度の薬物に適した他の規則的な構造として製剤化されうる。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、およびそれらの適切な混合物を含む溶媒または分散媒でありうる。いくつかの実施態様において、適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散液の場合は必要な粒子サイズを維持することによって、および界面活性剤の使用によって維持されうる。
【０１５４】
本明細書に記載されるコンジュゲートの投与のための、任意の効果的なレジメンが用いられうる。例えば、本明細書に記載されるコンジュゲートは、単一用量として投与されてもよく、あるいは、用量は毎日の複数回用量レジメンとして分割され投与されてもよい。さらに、例えば、週に１〜５日など、時間をずらしたレジメンを、毎日の治療の代わりとして用いてもよく、本明細書に記載の方法の目的のために、そのような間欠的または時間をずらした毎日のレジメンは、毎日の治療と同等であると考えられ、検討される。いくつかの実施態様において、癌を治療するために、患者は本教示に記載されるコンジュゲートを複数回注射することによって治療される。いくつかの実施態様において、患者は本教示に記載されるコンジュゲートを、例えば、１２〜７２時間間隔、または４８〜７２時間間隔で複数回（例えば、約２〜最大で５０回）注射される。本教示に記載されるコンジュゲートのさらなる注射は、最初の注射後数日から数月の間隔で患者に投与され得、さらなる注射は癌の再発を予防しうる。
【０１５５】
本教示に記載されるコンジュゲートを用いた任意の適切な治療過程が用いられうる。いくつかの実施態様において、個々の用量および投与レジメンは、約１５ｍｇの１ヶ月間に投与される総用量を提供するように選択される。いくつかの実施態様において、本教示に記載されるコンジュゲートは、各４週のサイクルの第１、第２、第３週において週に５日、単一の１日用量で投与され、第４週において投与されない。別の実施例において、本教示に記載されるコンジュゲートは、各４週のサイクルの第１、および第３週において、週に３日、単一の１日用量で投与され、第２、および第４週において投与されない。別の実施例において、本教示に記載されるコンジュゲートは、第１および第２週において週に２回（すなわち、３週のサイクルのうち、１、４、８、１１日目）投与される。別の実施例において、本明細書に記載されるコンジュゲートは、第１および第２週において週に１回（すなわち、３週のサイクルのうち、１および８日目）投与される。
【０１５６】
本教示に記載されるコンジュゲートの１日の単位用量は、患者の病状、治療される癌、本明細書に記載されるコンジュゲートの投与経路、および組織分布、並びに併用療法における放射線治療またはさらなる薬剤などの他の治療の共使用の可能性に依存して大きく変化しうる。患者に投与される有効量は、体表面積、質量、および患者の病状の医師による評価に基づく。治療上の有効な用量（本明細書において「治療上の有効量」ともいわれる）は、例えば、約０．５ｍｇ／ｍ２から約２０．０ｍｇ／ｍ２の範囲でありうる。
【０１５７】
本教示に記載されるコンジュゲートは、１つ以上のキラル中心を含んでもよく、あるいは、多数の立体異性体として存在することができる。そのため、本発明は純粋な立体異性体、並びにエナンチオマー、ジアステレオマー、およびエナンチオマーまたはジアステレオマー濃縮混合物などの、立体異性体の混合物を含むことが理解される。本教示に記載されるコンジュゲートは、幾何異性体として存在することができる。そのため、本発明は純粋な幾何異性体、または幾何異性体の混合物を含むことが理解される。
【０１５８】
本明細書に記載のコンジュゲートは、非溶媒和形態、並びに水和物形態などの、溶媒和形態で存在しうることが理解される。一般に、溶媒和形態は、非溶媒和形態と等価であり、本発明の範囲内に含まれる。本明細書に記載されるコンジュゲートは、多数の結晶または非晶質形態で存在しうる。一般に、全ての物理的形態は、本発明によって考慮される使用と等価であり、本発明の範囲内であることが意図される。
【０１５９】
いくつかの実施態様において、本教示に記載されるコンジュゲートの投与のための組成物および／剤形は、少なくとも約９０％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、または約９９％、または約９９．５％の純度で、コンジュゲートから調製される。他の実施態様において、本教示に記載されるコンジュゲートの投与のための組成物および／または剤形は、少なくとも９０％、または少なくとも９５％、または少なくとも９６％、または少なくとも９７％、または少なくとも９８％、または少なくとも９９％、または少なくとも９９．５％の純度で、コンジュゲートから調製される。
【０１６０】
本明細書に記載されるＦＡＰ−標的イメージング剤は、腫瘍微小環境のイメージングを可能にし、蛍光ガイド手術によって、外科医がＣＡＦ細胞を切除することを可能にする。本明細書に記載されるイメージング剤は、他の癌細胞標的イメージング剤との組み合わせで、癌細胞標的イメージング剤では達成できない腫瘍微小環境のＣＡＦ細胞を、外科医が除去することを可能にすることによって、蛍光ガイド手術の結果をさらに向上させることができる。これはまた、癌細胞標的イメージング剤によってのみのイメージングと比較して、ＣＡＦの残りに起因する手術後の腫瘍再発の機会を減少させることができる。
【０１６１】
さらに、本明細書に記載される薬剤および方法は、癌細胞それ自体がＬＨＲＨ−Ｒ、葉酸受容体、ＰＳＭＡなどの癌関連抗原を発現しないが、癌を維持しているＣＡＦがＦＡＰを発現している癌の蛍光ガイド手術について、チャンスを与えうる。腫瘍微小環境の細胞の切除はさらに、術後の癌の再発を減少させることに寄与する。いくつかの実施態様において、ＦＡＰ標的近赤外色素コンジュゲートは、他の癌細胞標的イメージング剤と組み合わせて、癌細胞および腫瘍微小細胞の両方のイメージングを可能にしうる。
【０１６２】
本明細書に記載されるＦＡＰ標的近赤外色素コンジュゲートは、ＦＡＰ阻害剤の標的特異性に加えて、高い腫瘍浸透性、低い光退色、および高いシグナル／ノイズ比を可能にしうる。さらに、色素コンジュゲートは、受容体陰性組織から迅速に明白でありうる。ＦＡＰはほとんどの固形腫瘍のＣＡＦにおいて発現しているため、ＦＡＰ標的ＮＩＲ色素は、多くの種類の癌のイメージングに用いられうる。
【０１６３】
以下の実施例および代表的な手順は、本教示に記載の特徴を示し、単に例示としてのみ提供される。それらは、付属の特許請求の範囲、またはその均等物の範囲を限定することを意図しない。
【０１６４】
材料．ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシトリピロリジノホスホニウム ヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＢｏｐ）、Ｎ、Ｎ−ジメチルメタンアミド（ＤＭＦ）、Ｎ−エチル−Ｎ−イソプロピルプロパン−２−アミン（ＤＩＰＥＡ）、イソプロピルアルコール（ＩＰＡ）、ジクロロメタン（ＤＣＭ）およびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、１、２−エタンジチオール、トリイソプロピルシラン（ＴＩＰＳ）、および他のすべての化学的試薬は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから購入した。ロズウェルパーク記念研究所培地１６４０（ＲＰＭＩ１６４０）などの細胞培養試薬はＧＩＢＣＯから購入し、一方で、ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、１％ ペニシリン−ストレプトマイシン、２ｍＭ グルタミンはLife Technologiesから購入した。
【０１６５】
化合物実施例
【化４３】
2020502130.tif 000047
スキーム１．線維芽細胞活性化タンパク質α（ＦＡＰ）リガンドＪＦＬの合成。試薬および条件  ａ）ＨＡＴＵ、無水ＤＩＰＥＡ、無水ＤＭＦ、室温；ｂ）ＴＦＡＡ、無水ＤＣＭ、無水ピリン、室温；ｃ）ＴＦＡ、室温；ｄ）ＨＡＴＵ、無水ＤＩＰＥＡ、無水ＤＭＦ、室温；ｅ）ＴＦＡ、室温．
【０１６６】
ＪＦＬの合成は、カップリング剤としてＨＡＴＵを用いて、化合物１および２をカップリングさせることによって開始され、化合物３を生じた。化合物３におけるアミド基は、ＴＦＡＡを用いて、ニトリル（化合物４）に変換した。化合物４を次いで、Ｂｏｃ脱保護に付し、次いで化合物６をカップリングさせて、化合物７を生じた。化合物８は、化合物７のＢｏｃ基の脱保護によって得た。化合物８は、あるいは、本明細書ではＦＡＰリガンドＪＦＬとも称される。
【０１６７】
化合物３．無水ＤＭＦ中の１の溶液に、１当量の化合物２およびＨＡＴＵを加えた。上記溶液に、無水ＤＩＰＥＡ（５当量）を加え、アルゴン雰囲気下で６時間攪拌した。粗生成物をＲＰ−ＨＰＬＣ［Ａ＝２ｍＭ 酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ７．０）、Ｂ＝アセトニトリル、３５分間で０％Ｂから８０％Ｂの溶媒勾配］を用いて精製し、必要な生成物を得た。LRMS−LC/MS (m/z): [M+H]+ C13H21F2N3O4についての計算値、 321.32; 観測値 323. 化合物３のＬＣ／ＭＳトレースを図１に示す。
【０１６８】
化合物４．ＨＰＬＣで精製した化合物３を、無水ＤＣＭに溶解させた。この溶液に、無水ピリジン（１当量）、次いでＴＦＡＡ（１当量）を加えた。反応混合物を室温で１時間攪拌した。反応の完了をＬＣ／ＭＳで追跡した。粗生成物を、ＲＰ−ＨＰＬＣ［Ａ＝２ｍＭ 酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ７．０）、Ｂ＝アセトニトリル、３５分間で０％Ｂから８０％Ｂの溶媒勾配］を用いて精製し、目的の生成物を得た。LRMS−LC/MS (m/z): [M+H]+ C13H19F2N3O3についての計算値、 303.31; 観測値 305. 化合物４のＬＣ／ＭＳトレースを図２に示す。
【０１６９】
化合物７．化合物４をＴＦＡ中に溶解させ、室温で３０分間攪拌した。反応の完了をＬＣ／ＭＳで追跡した。ＴＦＡを、ロータリーエバポレーターを用いて留去させ、化合物を高真空で乾燥させ、さらに精製を行わずに用いた。化合物５のＬＣ／ＭＳトレースを図３に示す。化合物５、化合物６（１当量）およびＨＡＴＵ（１当量）のＤＭＦ中の溶液に、ＤＩＰＥＡ（５当量）を加え、アルゴン雰囲気下で６時間攪拌した。反応の完了をＬＣ／ＭＳで追跡した。粗製の化合物７を、ＲＰ−ＨＰＬＣ［Ａ＝２Ｍｍ 酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ７．０）、Ｂ＝アセトニトリル、３５分間で０％Ｂから８０％Ｂの溶媒勾配］を用いて精製し、目的の生成物を得た。LRMS−LC/MS (m/z): [M+H]+ C20H25F2N5O4の計算値、437.45; 観測値 438. 化合物７のＬＣ／ＭＳトレースを図４に示す。
【０１７０】
化合物８．化合物７をＴＦＡ中に溶解させ、室温で３０分間攪拌した。ＴＦＡを、ロータリーエバポレーターを用いて留去し、粗製の化合物８をさらに精製を行わず次の反応に用いた。 LRMS−LC/MS (m/z): [M+H]+ C15H17F2N5O2の計算値、337.33; 観測値 338. 化合物８のＬＣ／ＭＳトレースを図５に示す。
【０１７１】
【化４４】
2020502130.tif 000048
スキーム２．ＪＦＬ−Ｌ１−Ｓ０４５６およびＪＦＬ−Ｌ１−ＦＭの合成。試薬および条件：  ａ）（ｉ）ＨＡＴＵ、無水ＤＩＰＥＡ、無水ＤＭＦ、室温（ｉｉ）ＴＦＡ、室温；ｂ）（ｉ）ＰｙＢｏｐ、無水ＤＭＦ、無水ＤＩＰＥＡ、室温（ｉｉ）ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ／ＴＩＰＳ／ＥＤＴ（９２．５：２．５：２．５：２．５）、１時間；ｃ）ＤＭＳＯ、ＤＩＰＥＡ、Ｓ０４５６マレイミド、室温；ｄ）ＤＭＳＯ、ＤＩＰＥＡ、フルオレセインマレイミド、室温．
【０１７２】
化合物８は、スペーサーに結合し、本明細書においてＪＦＬ−Ｌ１として表示される。リガンドは液相において、標準的な固相ペプチド合成によって、リンカーに部分的に結合させた。これを次いで、ＦＭまたはＳ０４５６のマレイミド誘導体とカップリングし、それぞれＪＦＬ−Ｌ１−ＦＭまたはＪＦＬ−Ｌ１−Ｓ０４５６を得た。中間体および最終的なコンジュゲートはＨＰＬＣによって精製し、ＬＣ／ＭＳおよびＵＰＬＣを用いて特徴づけられた。
【０１７３】
化合物１０．化合物８の無水ＤＭＦ中の溶液に、化合物９（１当量）、ＨＡＴＵ（１当量）およびＤＩＰＥＡ（１０当量）を加えた。反応混合物をアルゴン雰囲気下で６時間攪拌した。反応の完了をＬＣ／ＭＳによって追跡した。粗製の化合物１０をＲＰ−ＨＰＬＣ［Ａ＝２Ｍｍ 酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ７．０）、Ｂ＝アセトニトリル、３５分間で０％Ｂから８０％Ｂの溶媒勾配］を用いて精製し、目的の生成物を得た。LRMS−LC/MS (m/z): [M+H]+ C19H21F2N5O5についての計算値、437.4; 観測値 438. 化合物１０のＬＣ／ＭＳトレースを図６に示す。
【０１７４】
ＪＦＬ−Ｌ１の合成。スキーム２に記載されるように、化合物を固相ペプチド合成によって合成した。ＰｙＢｏｐ、無水ＤＭＦ、無水ＤＩＰＥＡ、化合物１０、およびＨ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）２−クロロトリチル樹脂を合わせた。最終生成物をＴＦＡ：Ｗａｔｅｒ：ＴＩＰＳ：エタンジチオール（９５％：２．５％：２．５％：２．５％）の標準的なカクテル溶液を用いて、樹脂から切断した。粗製ＪＦＬ−Ｌ１を、ＲＰ−ＨＰＬＣ［Ａ＝２Ｍｍ 酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ５．０）、Ｂ＝アセトニトリル、３５分間で０％Ｂから８０％Ｂの溶媒勾配］を用いて精製し、目的の生成物を得た。LRMS−LC/MS (m/z): [M+H]+ C22H26F6N6O6Sの計算値、 540.54; 観測値 541. ＪＦＬ−Ｌ１のＬＣ／ＭＳトレースを図７に示す。
【０１７５】
ＪＦＬ−Ｌ１−ＦＭおよびＪＦＬ−Ｌ１−Ｓ０４５６の合成。ＪＦＬ−Ｌ１を、ＤＭＳＯおよび５当量のＤＩＰＥＡ中に溶解させた。この反応混合物に、１当量のフルオレセインマレイミドまたはＳ０４５６マレイミドのいずれかを加えた。反応混合物をアルゴン雰囲気下で１時間攪拌し、反応の完了をＬＣ／ＭＳで追跡した。粗製の化合物ＪＦＬ−Ｌ１−ＦＭおよびＪＦＬ−Ｌ１−Ｓ０４５６を、ＲＰ−ＨＰＬＣ［Ａ＝２Ｍｍ 酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ７．０）、Ｂ＝アセトニトリル、３５分間で０％Ｂから８０％Ｂの溶媒勾配］を用いて精製し、目的の生成物を得た。ＪＦＬ−Ｌ１−ＦＭおよびＪＦＬ−Ｌ１−Ｓ０４５６のＬＣＭＳ特性は以下の通りである。LRMS−LC/MS (m/z): [M+H]+ C46H39F2N7O13Sの計算値、 967.91; 観測値 968. LRMS−LC/MS (m/z): [M+H]+ C75H85F2N10Na3O22S5の計算値、 1745.82.35; 観測値 1747. ＪＦＬ−Ｌ１−ＦＭのＬＣ／ＭＳトレースを図８に示す。ＪＦＬ−Ｌ１−Ｓ０４５６のＬＣ／ＭＳトレースを図９に示す。
【０１７６】
【化４５】
2020502130.tif 000049
スキーム３．Ｓ０４５６マレイミドの合成。試薬および条件：ａ）ＫＯＨ、Ｈ２Ｏ、室温〜１００℃；ｂ）ＨＡＴＵ、無水ＤＩＰＥＡ、無水ＤＭＦ、室温． Ｓ０４５６マレイミドのＬＣ／ＭＳトレースを図１０に示す。
【０１７７】
ＦＡＰα標的ツブリシンＢヒドラジドの合成
【化４６】
2020502130.tif 000050
スキーム４．ＪＦＬ−Ｌ１−ＴｕｂＢＨの合成、試薬および条件：ａ．（ｉ）ＪＦＬ−Ｌ１、Ｈ２Ｏ／ＮａＨＣＯ３（ｐＨ＝７．０−７．２）、アルゴン、室温．（ｉｉ）活性化ＴｕｂＢＨ、無水ＴＨＦ、アルゴン、室温．
【０１７８】
ＦＡＰ標的ツブリシンＢヒドラジドコンジュゲートを以下に記載するように合成した。簡潔には、ＪＦＬ−Ｌ１をアルゴンしたＨＰＬＣ等級の水に溶解させ、同じ水のＮａＨＣＯ３の飽和溶液を用いてｐＨ７．０に調整した。ＴＨＥ中のジスルフィド活性化ツブリシンＢヒドラジド（１当量）を反応混合液に加え、アルゴン雰囲気下、室温で攪拌した。反応の進行を分析ＬＲＭＳ−ＬＣＭＳで追跡した。粗生成物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ［Ａ＝２Ｍｍ 酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ７．０）、Ｂ＝アセトニトリル、３５分間で０％Ｂから８０％Ｂの溶媒勾配］を用いて精製し、９５％の目的の生成物を得た。LRMS−LC/MS (m/z): [M+H]+ C67H93F2N13O17S3の計算値、 1487; 観測値  [M/2 +1] 744、図１７に示す。
【０１７９】
ＦＡＰ標的ＮＩＲイメージングの合成：ＰＥＧおよびペプチドグリカンリンカー
【化４７】
2020502130.tif 000051
スキーム５．ＪＦＬ−Ｌ２−Ｓ０４５６の合成。試薬および条件：ａ）ＤＭＳＯ、ＤＩＰＥＡ、Ｓ０４５６マレイミド、室温．
【０１８０】
ＪＦＬ−Ｌ２−Ｓ０４５６の合成：ＦＡＰ標的リガンド（ＪＦＬ）を、ＰＥＧおよびペプチドグリカン分子とコンジュゲートさせて、ＪＦＬ−Ｌ２を合成した。簡潔には、ＪＦＬ−Ｌ２は標準的な固相ペプチド合成によって合成し、図２１Ａに示すようにＲＰ−ＨＰＬＣによって精製した。LRMS−LC/MS (m/z): [M+H]+ C48H75F2N9Na3O20Sの計算値、 1168; 観測値 1169、図２１Ｂに示す。１当量の精製したＪＦＬ−Ｌ２およびＳ０４５６−マレイミドの、無水ＤＭＳＯ中の反応混合物に、５当量のＤＩＰＥＡを加えた。反応混合物をアルゴン雰囲気下で攪拌させ、反応の完了をＬＣ−ＭＳを用いて追跡した。粗製ＪＦＬ−Ｌ２−Ｓ０４５６を、ＲＰ−ＨＰＬＣ［Ａ＝２ｍＭ 酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ７．０）、Ｂ＝アセトニトリル、３５分間で０％Ｂから５０％Ｂの溶媒勾配］を用いて精製し、目的の生成物を得た。LRMS−LC/MS (m/z): [M+H]+ C101H134F2N13Na3O36S5の計算値、 2371.5; 観測値 790.
【０１８１】
ＪＦＬ−Ｌ３の合成
【化４８】
2020502130.tif 000052
スキーム６．ＪＦＬ−Ｌ３の合成、試薬および条件：（ａ）（ｉ）２０％ピペリジン／ＤＭＦ、室温、（ｉｉ）Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）、ＰｙＢｏｐ、ＤＭＦ、ＤＩＰＥＡ、（ｂ）（ｉ）２０％ピペリジン／ＤＭＦ、室温、１０分（ｉｉ）Ｆｍｏｃ−ジアミノプロピオン（ＤＡＰ）酸、ＰｙＢｏｐ、ＤＭＦ、ＤＩＰＥＡ、（ｃ）（ｉ）２０％ピペリジン／ＤＭＦ、室温、（ｉｉ）Ｆｍｏｃ−８−アミノ−オクタン酸、ＰｙＢｏｐ、ＤＭＦ、ＤＩＰＥＡ、（ｄ）（ｉ）２０％ピペリジン／ＤＭＦ、室温、１０分（ｉｉ）化合物１０、ＰｙＢｏｐ、ＤＭＦ、ＤＩＰＥＡ、（ｉｉｉ）ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ／ＴＩＰＳ／ＥＤＴ（９２．５：２．５：２．５：２．５）、１時間．＊粗生成物を、ＨＰＬＣを用いて精製し、ＬＣ／ＭＳを用いて特徴づけた。
【０１８２】
ＪＦＬ−Ｌ３の合成：スキームにおいて記載される通り、ＪＦＬ−Ｌ３を標準的な固相ペプチド合成によって合成した。コンジュゲートの全ての要素をＨ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）２−クロロトリチル樹脂上に構築した。ＴＦＡ：水：ＴＩＰＳ：エタンジチオール（９５％：２．５％：２．５％：２．５％）の標準カクテル溶液を用いて、樹脂から標準的なコンジュゲートを切断した。粗生成物を、ＲＰ−ＨＰＬＣ［Ａ＝２Ｍｍ 酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ５．０）、Ｂ＝アセトニトリル、３５分間で０％Ｂから８０％Ｂの溶媒勾配］を用いて精製し、目的の生成物を得た。JFL−L3について、 LRMS−LC/MS (m/z): [M+H]+ C37H52F2N10O11Sの計算値、 882.9; 観測値 882、図２５Ａに示す。
【０１８３】
非放射性ＪＦＬ−Ｌ３の生成：９９ｍＴｃによる放射性標識の前に、ＪＦＬ−Ｌ３をこれまでに公表された方法に従って調製した。簡潔には、０．１ｍｇのＪＦＬ−Ｌ３、８０ｍｇのα−Ｄ−グルコヘプトン酸ナトリウム、および１０ｍｇの塩化スズ（ＩＩ）を、アルゴンパージした水中に溶解させた。溶液のｐＨを、水酸化ナトリウムまたは塩酸で６．８±０．２に調整した。最終的な体積を１０ｍｌの調整し、次いでそれぞれ１ｍｌの上記溶液を含む１０個のバイアルに移し、凍結乾燥させた。凍結乾燥させた粉末をアルゴン下でバイアルに密閉し、−２０℃で保管した。
【０１８４】
ＪＦＬ−Ｌ３の９９ｍＴｃ標識：コンジュゲートの放射性標識を、公表された方法に従って行った。簡潔には、生成したＪＦＬ−Ｌ３のバイアルに、１ｍｌの９９ｍＴｃ過テクネチウム酸ナトリウムを加えて、１００℃で〜１８分間加熱した。キレートした溶液を室温に冷却し、その後インビトロおよびインビボ試験に用いた。図２５Ｂに示すように、コンジュゲートのキレート効率は放射ＨＰＬＣによって確認した。
【０１８５】
ＪＬ−Ｌ３−Ｓ０４５６の合成
【化４９】
2020502130.tif 000053
スキーム７．ＪＬ−Ｌ３−Ｓ０４５６の合成、試薬および条件：（ａ）（ｉ）２０％ピペリジン／ＤＭＦ、室温、（ｉｉ）３、４、５、６−ジ−イソプロピリデン−１−アミノ−デオキシ（Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ−ＯＨ）−Ｄ−グルシトール、ＰｙＢｏｐ、ＤＭＦ、ＤＩＰＥＡ、（ｂ）（ｉ）２０％ピペリジン／ＤＭＦ、室温、１０分（ｉｉ）Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、ＰｙＢｏｐ、ＤＭＦ、ＤＩＰＥＡ、（ｃ）（ｉ）２０％ピペリジン／ＤＭＦ、室温、（ｉｉ）３、４、５、６−ジ−イソプロピリデン−１−アミノ−デオキシ（Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ−ＯＨ）−Ｄ−グルシトール、ＰｙＢｏｐ、ＤＭＦ、ＤＩＰＥＡ、（ｄ）（ｉ）２０％ピペリジン／ＤＭＦ、室温、１０分（ｉｉ）Ｆｍｏｃ−８−アミノ−オクタン酸、ＰｙＢｏｐ、ＤＭＦ、ＤＩＰＥＡ、（ｅ）（ｉ）２０％ピペリジン／ＤＭＦ、室温、１０分（ｉｉ）ＪＬ、ＰｙＢｏｐ、ＤＭＦ、ＤＩＰＥＡ、（ｉｉｉ）ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ／ＴＩＰＳ／ＥＤＴ（９２．５：２．５：２．５：２．５）、１時間、（ｆ）ＪＬ−Ｌ３、Ｓ０４５６マレイミド、無水ＤＭＳＯ、ＤＩＰＥＡ、室温．
【０１８６】
ＪＬ−Ｌ３の合成：スキーム７に記載されるように、リンカーは標準的な固相ペプチド合成によって合成した。ペプチドグリカンサブユニットは他に記載されるように合成した。ＪＬを次いで、固相上でリンカーにカップリングした。最終生成物を、ＴＦＡ：水：ＴＩＰＳ：エタンジチオール（９５％：２．５％：２．５％：２．５％）の標準的なカクテル溶液を用いて、Ｈ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）２−クロロトリチル樹脂から切断した。粗製のＪＬ−Ｌ３を、ＲＰ−ＨＰＬＣ［Ａ＝２Ｍｍ 酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ５．０）、Ｂ＝アセトニトリル、３５分間で０％Ｂから８０％Ｂの溶媒勾配］を用いて生成し、目的の生成物を得た。LRMS−LC/MS (m/z): [M+H]+ C67H94F2N10O23Sの計算値、 1477; 観測値 1478.
【０１８７】
ＮＩＲコンジュゲートＪＬ−Ｌ３−Ｓ０４５６の合成：マレイミドを含むＳ０４５６色素を、スキーム３に記載されるように合成した。１当量のＳ０４５６−マレイミドおよびＪＬ−Ｌ３を無水ＤＭＳＯ中に溶解させ、次いで５当量のＤＩＰＥＡを加えた。反応混合物をアルゴン雰囲気下で１時間攪拌した。反応の完了をＬＣ−ＭＳを用いて追跡した。粗製ＪＬ−Ｌ３−Ｓ０４５６を、ＲＰ−ＨＰＬＣ［Ａ＝２Ｍｍ 酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ７．０）、Ｂ＝アセトニトリル、３５分間で０％Ｂから８０％Ｂの溶媒勾配］を用いて精製し、目的の生成物を得た。ＪＬ−Ｌ３−Ｓ０４５６のＬＣＭＳ特性は以下の通りである。LRMS−LC/MS (m/z): [M+H]+ C120H151F2N14Na3O39S5の計算値、 2680.85; 観測値 2682.
【０１８８】
方法例
細胞培養．癌細胞ＦａＤｕ、ＨＴ２９、ＭＤＡ−ＭＢ２３１、およびＫＢ細胞は、ＲＰＭＩ１６４０、１０％ ＦＢＳ、１％ ペニシリン−ストレプトマイシン、１％ ２ｍＭ グルタミンを含む培地中で、３７℃、５％ＣＯ２および９５％加湿雰囲気下で培養した。ＨＥＫ２９３細胞を形質転換して、ＨＥＫ２９３−ＦＡＰを生成した。ＦＡＰ陽性細胞を、２μｌ／ｍｌのピューロマイシン、１０％ＦＢＳ、１％ペニシリン−ストレプトマイシン、１％ ２ｍＭ グルタミンを補充したＤＭＥＭ培地中で、３７℃、５％ＣＯ２および９５％加湿雰囲気下で培養した。
【０１８９】
共焦点顕微鏡．ＦａＤｕ、ＨＴ２９、ＭＤＡ−ＭＢ２３１およびＫＢ癌細胞（３０，０００）を、４ウェルの共焦点プレート上に播種した。細胞を１００ｍＭ ＪＦＬ−Ｌ１−ＦＭと共にインキュベートし、１時間インキュベートした。非結合の蛍光を、細胞を培地で３回洗浄することによって除去した。細胞結合蛍光を、オリンパス共焦点顕微鏡を用いて観測した。
【０１９０】
インビトロ結合アッセイ．１００，０００個のＨＥＫ２９３−ＦＡＰ細胞を、アミンコート２４ウェルプレート上に播種した。細胞を２４時間、単層で生育させ、過剰なＪＦＬ−Ｌ１の存在下、または非存在下のいずれかで、様々な濃度のＪＦＬ−Ｌ１−Ｓ０４５６と共にインキュベートした。１時間インキュベートした後、細胞を培地で３回洗浄し、非結合の蛍光を除去した。細胞を１％ＳＤＳ中に溶解させ、細胞結合蛍光を蛍光光度計を用いて測定した。
【０１９１】
畜産．５〜６週齢のメス胸腺欠損ｎｕ／ｎｕマウスを、Harlan Laboratoriesから購入した。動物は通常のげっ歯類固形飼料および水を自由に摂取した。動物を通常の１２時間の明暗周期で飼育した。全ての動物手順はパデュー実験動物委員会によって承認された。
【０１９２】
インビボ蛍光イメージングおよび生体内分布．皮下腫瘍異種移植の発生のため、０．２ｍｌの滅菌ＰＢＳ中のＭＤＡ−ＭＢ２３１、ＯＶＣＡＲ−３、およびＨＥＣ−１Ｂの５ｘ１０６細胞を、メスｎｕ／ｎｕマウスの右後側腹部に皮下注射した。腫瘍体積が２００ｍｍ３および３００ｍｍ３に達した後、腫瘍イメージングを開始した。腫瘍保持マウスのそれぞれを、１００倍過剰の非標識コンジュゲートの存在下、または非存在下のいずれかで、１０ナノモルの蛍光色素コンジュゲートを（尾静脈を介して）静脈内注射した。注射の２時間後、動物をＣＯ２を用いて犠死させ、Caliper IVIS Luminal IIを用いてイメージングを得た。全身のイメージングを行った後、対象の臓器を採取してイメージングし、それらの臓器における蛍光の蓄積を検査した。イメージング取得パラメーターは以下の通りであった：ｉ）ランプレベル−高、ｉｉ）励起−７４５ｎｍ、ｉｉｉ）発光−ＩＣＧ、ｉｖ）ビニング（Ｍ）４Ｍ、（ｖ）ｆ−ストップ−４、（ｖｉ）ＦＯＶ−１２．５、（ｖｉｉ）獲得時間、５秒。
【０１９３】
インビトロ結合親和性および共焦点イメージング．癌細胞ＦａＤＵ、ＨＴ２９、ＭＤＡ−ＭＢ２３１およびＫＢを、ＦＡＰの発現のために調査した。この目的のために、癌細胞を共焦点ウェルプレートに播種し、１００ｎＭのＦＡＰ標的ＦＭコンジュゲート（ＪＦＬ−Ｌ１−ＦＭ）と共にインキュベートした。３７℃において１時間インキュベートした後、細胞を洗浄し、過剰な非を除去した。細胞を共焦点顕微鏡で観測し、図１１に示すように、色素の任意の取り込みを調査した。４種類全ての細胞型において、色素コンジュゲートの取り込みは観測されなかった。このことは、これらの癌細胞がＦＡＰに存在していないことを示唆した。
【０１９４】
ＦＡＰ標的ＮＩＲ色素コンジュゲート（ＪＦＬ−Ｌ１−Ｓ０４５６）の結合親和性を得るために、ＦＡＰ形質転換ＨＥＫ２９３細胞を、アミンコート２４ウェルプレートに播種し、過剰なＦＡＰリガンドＪＦＬの存在下または非存在下のいずれかで、様々な濃度の色素コンジュゲートと共にインキュベートした。インキュベーションの１時間後、細胞を洗浄し、任意の過剰な非結合色素を除去した。細胞を１％ＳＤＳ中に溶解させ、次いで蛍光光度計を用いて、細胞結合蛍光の定量を行った。蛍光の定量のために、サンプルを７４５ｎｍで励起させ、７９０ｎｍの発光を測定した。図１２に示すように、Graph pad prismを用いて、細胞結合蛍光を様々な濃度に対してプロットし、見かけのＫＤ値を得た。ＪＦＬ−Ｌ１−Ｓ０４５６の見かけの解離定数は約３．５ｎＭであった。過剰なＪＦＬの存在下でＮＩＲ色素コンジュゲートとインキュベートした時、細胞結合蛍光は競合し、ＪＦＬ−Ｌ１−Ｓ０４５６の取り込みはＦＡＰ介在性であることが示唆された。
【０１９５】
インビボ蛍光イメージング．ＪＦＬ−Ｌ１−Ｓ０４５６がインビボで蓄積する能力を調査するために、マウスにＦａＤｕ（ｎ＝５）、ＨＴ２９（ｎ＝５）、ＭＤＡ−ＭＢ２３１（ｎ＝５）またはＫＢ（ｎ＝５）細胞を移植した。これらの腫瘍含有マウスに、ＮＩＲ色素コンジュゲートを単体で、または過剰なＦＡＰ標的リガンドＪＦＬと共注射して、静脈内注射した。注射の２時間後、マウスを犠死させ、図１３Ａおよび１３Ｂ（ＦａＤｕ）、図１４Ａおよび１４Ｂ（ＫＢ）、図１５Ａおよび１５Ｂ（ＨＴ２９）、並びに図１６Ａおよび１６Ｂ（ＭＤＡ−ＭＢ２３１）に示すようイメージングした。ＦＡＰ介在性の色素コンジュゲートの取り込みが、全腫瘍型において観測され、過剰なＪＦＬは腫瘍において蛍光と競合することができた。他の臓器における色素コンジュゲートの取り込みを調査するために、剖検を行い、臓器を回収し、図１３Ｃおよび１３Ｄ（ＦａＤｕ）、図１４Ｃおよび１４Ｄ（ＫＢ）、図１５Ｃおよび１５Ｄ（ＨＴ２９）、並びに図１６Ｃおよび１６Ｄ（ＭＤＡ−ＭＢ２３１）（上から下の臓器：腫瘍、心臓、肺、脾臓、膵臓、筋肉、胃、小腸、大腸、肝臓、および腎臓）に示すようにイメージングした。腫瘍に加えて、肝臓および腎臓において、色素コンジュゲートの最小限の取り込み、または取り込みが全くないことが観察された。これらの臓器における取り込みは受容体介在性ではなく、腎臓または肝臓経路を介したコンジュゲートの排出に大きく起因した。理論に拘束されることを意図しないが、癌細胞はＦＡＰ陰性であるので、ＮＩＲ色素コンジュゲートのインビボでの取り込みは、ＦＡＰを発現することが知られている癌関連線維芽細胞における蓄積の結果として起こることが予測される。インビボで試験した場合、ＦＡＰ標的色素コンジュゲートは、腫瘍においてＦＡＰ介在性取り込みを示した。他の臓器（腎臓および肝臓）は、近赤外コンジュゲートの最小限の取り込み、または取り込みが全くないことのいずれかを示した。
【０１９６】
インビボ治療試験ＭＤＡ−ＭＢ２３１：５〜６週齢のメスｎｕ／ｎｕ胸腺欠損ヌードマウスに、肩に５百万個の乳癌細胞（ＭＤＡ−ＭＢ−２３１）を皮下注射した。ノギスでの処理の間、毎日または１日おきのいずれかで、腫瘍を２つの垂直な方向で測定し、その体積を０．５ｘＬｘＷ２［式中、Ｌは最長の軸（ミリメートル）であり、ＷはＬに垂直な軸（ミリメートル）である］として計算した。腫瘍の体積が〜１００ｍｍ３に達した後、マウスを無作為に様々な群に分け、治療を開始した。投与溶液を滅菌生理食塩水中に調製し、尾静脈を介して静脈内注射した。毎日または１日おきのいずれかで、対照群におけるマウスに滅菌生理食塩水を注射し、一方で治療群におけるマウスには４０ナノモルのＪＦＬ−Ｌ１−ＴｕｂＢＨを注射した。図１８Ａに示すように、４０ナノモルのＪＦＬ−Ｌ１−ＴｕｂＢＨを投与されることに加えて、競合群のマウスに、リンカー（ＪＦＬ−Ｌ１）にコンジュゲートした１００倍過剰量のＦＡＰ標的リガンドもまた投与した。図１８Ｂに示すように、マウスを各投与時における全体の毒性の測定として秤量した。
【０１９７】
ＦＡＰ標的ツブリシンコンジュゲートのインビボ有効性の調査のために、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１腫瘍異種移植片をＪＦＬ−Ｌ１−Ｓ０４５６で処理した。治療期間中、対照群および競合群におけるマウスは、腫瘍体積の減少を示さなかった。治療群において、マウスに４０ナノモルのＪＦＬ−Ｌ１−ＴｕｂＢＨを投与し、治療剤の投与頻度に応じて２つの別個の群に分けた。対照群および競合群と比較すると、両方の治療群におけるマウスは、腫瘍体積の大きな減少が示された。１日おきにＪＦＬ−Ｌ１−ＴｕｂＢＨで処理したマウスは完全な応答を示さず、むしろ腫瘍増殖の遅延が観察された。一方で、マウスが毎日同じ用量のＪＦＬ−Ｌ１−ＴｕｂＢＨで処理された場合、完全な応答が観測された。研究を通して、マウスの体重を全体の毒性の測定として追跡した。１日おきにＪＦＬ−Ｌ１−ＴｕｂＢＨを投与した完了および治療群の生理食塩水中のマウスは、体重の減少を示さなかった。ＦＡＰ標的ツブリシンで処理したマウスは、約５％の体重の減少を示したが、同じマウスは治療の終了に向けて体重が増加した。
【０１９８】
ＦＡＰ標的ＴｕｂＢＨと、葉酸標的ＰＩ３キナーゼ阻害剤またはＴＬＲ７アゴニストを用いた、インビボ併用療法：
【０１９９】
４〜５週齢メスＢＡＬＢ／ｃマウスに、乳脂肪体近位に１００，０００個の４Ｔ１細胞を注射した。腫瘍体積が〜１００ｍｍ３に達した後、マウスを様々な群に無作為に分け、治療を開始した。ＦＡＰ標的ツブリシンＢヒドラジドコンジュゲート（ＪＦＬ−Ｌ１−ＴｕｂＢＨ）、葉酸標的ＰＩ３キナーゼ阻害剤（ＦＡ−ＰＩ３Ｋ）、および葉酸標的ＴＬＲ７アンタゴニスト（ＦＡ−ＴＬＲ７）の投与溶液を、滅菌生理食塩水中に調製し、尾静脈を介して静脈内注射した。対照群のマウスに滅菌生理食塩水を投与し、一方で治療群のマウスには、ＪＦＬ−Ｌ１−ＴｕｂＢＨもしくはＦＡ−ＰＩ３ＫもしくはＦＡ−ＴＬＲ７を単体で、または他の１つの治療剤（ＪＦＬ−Ｌ１−ＴｕｂＢＨ、ＦＡ−ＰＩ３Ｋ、またはＦＡ−ＴＬＲ７）との組み合わせでのいずれかで投与した。治療に用いられる単回投与の濃度は、２０ｎｍｏｌのＪＦＬ−Ｌ１−ＴｕｂＢＨ、１０ｎｍｏｌのＦＡ−ＰＩ３Ｋ、および１０ｎｍｏｌのＦＡ−ＴＬＲ７であった。マウスに毎日、試験薬剤を注射し、次いで腫瘍体積を測定した（ノギス）。全体の毒性の測定として、マウスの体重もまた、それぞれの投与において追跡した。ＦＡＰ競合群におけるマウスに、過剰なＦＡＰリガンド、ＪＦＬの存在下、ＦＡＰ標的ツブリシンＢヒドラジドを投与した。
【０２００】
図１９Ａに示すように、対照および競合（ＦＡＰ競合）群における、４Ｔ１腫瘍含有マウスは、腫瘍体積の減少を示さなかった。２つの群を比較すると、ＦＡＰ標的ツブリシンＢヒドラジド（ＪＦＬ−Ｌ１−ＴｕｂＢＨ）、または葉酸標的ＰＩ３キナーゼ阻害剤（ＦＡ−ＰＩ３Ｋ）、またはＴＬＲ７アンタゴニスト（ＦＡ−ＴＬＲ７）のいずれかの単一の薬剤で処理したマウスは、腫瘍の増殖を遅延させた。ＦＡＰおよび葉酸標的化学療法剤の併用療法の効果を調査するため、併用療法群におけるマウスを２つの異なる群に分けた。１つの群はＦＡ−ＴＬＲとの組み合わせでＪＦＬ−Ｌ１−ＴｕｂＢＨを投与され、一方で、他の群のマウスはＪＦＬ−Ｌ１−ＴｕｂＢＨと共にＦＡ−ＰＩ３Ｋを投与された。単一の薬剤の治療と比較すると、いずれの併用療法も、付加的な腫瘍体積の減少を示した。治療を通して、全体の毒性の測定としてマウスの体重を追跡した。図１９Ｂに示すように、いずれの群も体重の減少は示さなかった。
【０２０１】
インビボＦＡＰ標的ＣＡＲ Ｔ細胞療法：５百万個の癌細胞を注射することによって、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１皮下腫瘍をメスＮＳＧマウスにおいて発生させた。腫瘍体積が〜１００ｍｍ３に達した後、マウスを無作為に３つの異なる群に分け、治療を開始した。全ての群におけるマウスに、フルオレセインに特異的かつ強固に結合するｓｃＦｖドメインを有する、１５００万個のＣＡＲ Ｔ細胞を投与した。ＣＡＲ Ｔ細胞の投与の２時間後、全ての群におけるマウスに、それぞれの試験薬剤の初回投与を行った。対照群におけるマウスに滅菌生理食塩水を注射し、一方で治療群におけるマウスに、ＪＦＬ−Ｌ１−ＦＭ（１０ｎｍｏｌ）を単体で、または１００倍過剰のＦＡＰリガンド、ＪＦＬとの組み合わせのいずれかで注射した。治療の間、異なる群におけるマウスに、１日おきにそれぞれの試験薬剤を静脈内投与した。全体の毒性の測定として、マウスを各投与においてまた秤量した。
【０２０２】
ＭＤＡ−ＭＢ−２３１マウス異種移植モデルを用いて、ＦＡＰ標的ＦＭコンジュゲート（ＪＦＬ−Ｌ１−ＦＭ）のフルオレセインフラグメントを認識するｓｃＦＶドメインを有するＣＡＲ Ｔ細胞の効果を調査した。図２０Ａに示すように、対照群および競合群におけるマウスは、腫瘍の増殖率において違いを示さなかった。試験の最初において、ＣＡＲ Ｔ細胞およびＦＡＰ標的ＦＭ（ＪＦＬ−Ｌ１−ＦＭ）で処理した試験マウスは、腫瘍体積の減少を示さなかった。しかし、治療の１週間後、腫瘍増殖においてわずかな違いが観測された。図２０Ｂに示すように、任意の試験群で、体重の減少は観察されなかった。ＦＡＰ標的ＣＡＲ Ｔ細胞療法は腫瘍を死滅させる可能性を有するが、ＣＡＲ Ｔ細胞およびＪＦＬ−Ｌ１−Ｆの用量は、治療の初期に腫瘍抑制を誘導するように最適化する必要があることが結果から示唆される。
【０２０３】
ＪＦＬ−Ｌ２−Ｓ０４５６を用いたインビボイメージング：ＭＤＡ−ＭＢ−２３１腫瘍を有する胸腺欠損メスマウスに、５ｎｍｏｌのＪＦＬ−Ｌ２−Ｓ０４５６を静脈内注射した。注射の２時間後、マウスをＣＯ２を用いて犠死させ、IVIS Lumina IIを用いてイメージングを得た。全身のイメージングの完了後、臓器を採取して、さらにイメージングし、これらの臓器におけるＪＦＬ−Ｌ２−Ｓ０４５６の蓄積を調査した。
【０２０４】
図２２Ａ〜Ｃに示すように、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１異種移植片を用いて、ＰＥＧおよびペプチドグリカンリンカー、ＪＦＬ−Ｌ２−Ｓ０４５６から成る、ＦＡＰ標的ＮＩＲコンジュゲートのインビボイメージング能を調査した。全身のイメージングによって、注射の２時間後、コンジュゲートが腫瘍に蓄積されることが分かったことが明らかになった。重要な臓器／組織の生体内分布によってさらに、腫瘍が色素コンジュゲートを最も高く取り込んでいたことが確認された。腫瘍に加えて、ＪＦＬ−Ｌ２−Ｓ０４５６の取り込みを示した他の２つの臓器は、肝臓および腎臓であった。腎臓における取り込みは、肝臓と比較して高かった。腎臓および肝臓は、小分子の排出において重要な役割を示す。これらの臓器におけるＦＡＰ標的色素コンジュゲートの取り込みは、腎臓および肝臓経路を介した、蛍光コンジュゲートの排出によるものであったことがデータから示唆される。他のいずれの臓器においても、取り込みは観測されなかった。
【０２０５】
異なる濃度のＪＦＬ−Ｌ１−Ｓ０４５６を用いたインビボイメージング：ＭＤＡ−ＭＢ−２３１腫瘍含有メス胸腺欠損ヌードマウスに、５、１０、または２０ｎｍｏｌのＪＦＬ−Ｌ１−Ｓ０４５６を静脈内注射した。２時間後、マウスをＣＯ２を用いて犠死させ、IVIS Lumina IIでイメージングした。図２３に示すように、全身のイメージングが完了した後、生体内分布を行い、臓器をイメージングしてＪＦＬ−Ｌ１−Ｓ０４５６の蓄積を調査した。
【０２０６】
用量依存的様式におけるＪＦＬ−Ｌ１−Ｓ０４５６の取り込みを調査するために、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１腫瘍異種移植片に、５、１０、および２０ｎｍｏｌの色素コンジュゲートを投与した。用量の増加と腫瘍の蛍光強度の増加の間の直接的な相関関係が観察された。５ｎｍｏｌの群におけるマウスと比較して、１０ｎｍｏｌの群においては、腫瘍の蛍光強度の２倍の増加が観測された。５および１０ｎｍｏｌの群における腫瘍の蛍光強度は、１０７の範囲にあることが分かったが、一方で２０ｎｍｏｌの群における取り込みは１０８の範囲であった。このように、腫瘍の蛍光強度はより高用量のＪＦＬ−Ｌ１−Ｓ０４５６の投与によって増加することが分かり、最大で２０ｎｍｏｌまで飽和の兆候を示さなかった。
【０２０７】
カクテルイメージング：ＦＡＰαおよびＬＨＲＨ−Ｒ標的ＮＩＲコンジュゲート
メス胸腺欠損マウスにＭＤＡ−ＭＢ−２３１癌細胞を移植し、皮下腫瘍を発生させた。腫瘍含有マウスに、ＦＡＰ標的ＮＩＲコンジュゲート、ＪＦＬ−Ｌ１−Ｓ０４５６（５ｎｍｏｌ）を単体で、または黄体形成ホルモン放出ホルモン受容体標的ＮＩＲコンジュゲート、ＪＬ−Ｌ３−Ｓ０４５６（５ｎｍｏｌ）を単体で、または両方のコンジュゲートのいずれかを、静脈内注射した。注射の２時間後、マウスをＣＯ２で犠死させ、図２４Ａに示すように、Caliper IVIS Lumina IIでイメージングした。図２４Ｂに示すように、全身のイメージングが完了した後、生体内分布を行って、全ての臓器をイメージングして、色素コンジュゲートのと取り込みを調査した。
【０２０８】
ＦＡＰおよびＬＨＲＨ−Ｒのいずれも発現している癌をイメージングするために、ＦＡＰ標的ＮＩＲ色素（ＪＦＬ−Ｌ１−Ｓ０４５６）および黄体形成ホルモン放出受容体（ＬＨＲＨ−Ｒ）標的ＮＩＲ色素（ＪＬ−Ｌ３−Ｓ０４５６）の実現可能性を評価した。ＪＦＬ−Ｌ１−Ｓ０４５６またはＪＬ−Ｌ３−Ｓ０４５６を単体で注射した場合、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１腫瘍における色素コンジュゲートの取り込みは、同様の強度範囲において見られた。同じ腫瘍型に、ＪＦＬ−Ｌ１−Ｓ０４５６およびＪＬ−Ｌ３−Ｓ０４５６と同じ用量で共投与した場合、腫瘍の蛍光強度の増加が観測された。単一の薬剤（ＪＦＬ−Ｌ１−Ｓ０４５６またはＪＬ−Ｌ３−Ｓ０４５６のみ）の群と比較して、組み合わせの群における強度の増加は２倍以上であった。ＦＡＰおよびＬＨＲＨ−Ｒ標的イメージング剤の組み合わせによるカクテルイメージングは、両方の標的について優性である腫瘍のより良いイメージングを提供するために、効率的に用いることができることが結果から示唆される。
【０２０９】
９９ｍＴｃ標的ＪＦＬ−Ｌ３を用いたインビトロ結合試験：ヒトＦＡＰα形質転換ＨＥＫ２９３細胞を、アミンコート２４ウェルプレートに播種し、単層で生育させた。用いた培地を、様々な濃度の９９ｍＴｃ標識ＦＡＰコンジュゲート（ＪＦＬ−Ｌ３）を含む培地で置き換えた。ブロッキング試験のために、細胞を過剰のＪＦＬの存在下で、９９ｍＴｃ標識ＪＦＬ−Ｌ３で処理した。２時間インキュベートした後、細胞を生育培地で３回洗浄し、非結合の放射性コンジュゲートを除去し、０．５ｍｌの０．２５Ｎ ＮａＯＨ中に溶解させた。細胞結合放射能を、ガンマシンチレーション計測器を用いて計測した。Graph Pad Prismを用いたデータ解析によって見かけのＫＤを決定し、これを図２６に示す。
【０２１０】
インビボ放射性イメージング：ＭＤＡ−ＭＢ−２３１腫瘍含有胸腺欠損ヌードマウス（メス）に、１５０μＣｉの９９ｍＴｃ標識ＪＦＬ−Ｌ３を単体で、または１００倍過剰量のＪＦＬの存在下で、静脈内注射した。２時間後、マウスをＣＯ２窒息によって犠死させ、図２７Ａに示すように、KODAK Image Stationでイメージングした。放射性イメージングに用いたパラメーターは：獲得時間＝２分、ｆ−ストップ＝４、焦点面＝７、ＦＯＶ＝２００、ビニング＝４であった。白色光イメージングについて、パラメーターは：獲得時間＝０．０５秒、ｆ−ストップ＝１１、焦点面＝７、ＦＯＶ＝２００、ビニングなしであった。生体内分布試験のために、剖検を行って、臓器／血液／組織を採取した。全ての臓器／血液／組織に関連する放射能を、ガンマ計測器を用いて計測した。
【０２１１】
９９ｍＴｃ放射性イメージングのために、ＦＡＰ標的コンジュゲート（ＪＦＬ−Ｌ３）を標準的な固相ペプチド合成によって合成した。ヒトＦＡＰで形質転換したＨＥＫ細胞においてインビトロで試験した場合、９９ｍＴｃ標識ＦＬ−Ｌ３は、１０．５ｎＭの低いナノモラー結合（ＫＤ）を示した。インビトロ試験の後、図２７Ｂに示すように、放射性標識化合物を静脈内投与することによって、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１腫瘍異種移植片において、９９ｍＴｃ標識ＪＦＬ−Ｌ３のインビボ標的を調査した。ＦＡＰ標的放射性コンジュゲートは、腫瘍および腎臓において蓄積したことが観察された。腫瘍および腎臓以外の他の臓器は、放射性標識化合物の取り込みが非常に低いか全くないことが示された。競合実験において、過剰なＪＦＬは腫瘍において９９ｍＴｃ標識ＪＦＬ−Ｌ３の腫瘍取り込みを阻害することが分かり、これは腫瘍における放射性トレーサーの蓄積がＦＡＰによって介在されることを示唆する。反対に、図２７Ｃに示すように、腎臓における取り込みは、過剰なＪＦＬの投与によって阻害されなかった。このことから、腎臓における放射性トレーサーの取り込みはむしろ非特異的であることが示唆された。親水性の小分子は腎臓経路によって排出されることが多いため、腎臓における取り込みは一過性である可能性がある。このデータから、９９ｍＴｃ標識ＪＦＬ−Ｌ３は、標的抗原を欠く臓器に対して最小限の損傷を生じながら、腫瘍発現ＦＡＰに蓄積することができることが示唆される。
【０２１２】
本明細書と矛盾する開示または定義の場合に、本明細書における開示または定義が優先するとみなされるものとされる事象を除いて、本明細書で引用されるそれぞれのおよび全ての特許公報、非特許公報、および参照文献の全内容は、引用によって本明細書に援用される。
【０２１３】
要素に関する不定冠詞「ａ」および「ａｎ」の使用は、いくつかの実施態様において、そのような要素が複数存在することを排除するものではないことが理解されるべきである。
【０２１４】
前記の詳細な説明および添付の図面は、説明および例示の目的で提供され、付属の特許請求の範囲を限定することを意図しない。本明細書において例示される現在の好ましい実施態様における多くの改変は、当業者に明らかであり、付属の特許請求の範囲およびその均等物の範囲内である。
【０２１５】
付属の特許請求の範囲において列挙される要素および特徴は、同様に本発明の範囲内に含まれる新たな請求項を生成するように、異なる方法で組み合わされてもよいことが理解されるべきである。そのため、以下の付属の従属請求項は単一の独立または従属請求項に従属するのみであるが、これらの従属請求項は、独立であるか従属であるかを問わず、任意の前記の請求項からの別のものに従属させることができ、そのような新たな組み合わせは、本明細書の一部を形成すると理解されるべきであることが理解されるべきである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【国際調査報告】
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