(57)【要約】  本開示は、それを必要とするヒトにおいて免疫性（特発性）血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）を処置又は予防する方法であって、前記ヒトに１〜５用量の範囲内の抗ＦｃＲｎ抗体又はその抗原結合性断片を１〜１２週の処置期間にわたり投与するステップを含み、前記処置期間における総用量は、１ｋｇ当たり１〜３０ｍｇの範囲内にある、方法に関する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
それを必要とするヒトにおいて免疫性（特発性）血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）を処置又は予防する方法であって、前記ヒトに１〜５用量の範囲内の抗ＦｃＲｎ抗体又はその抗原結合性断片を１〜１２週の処置期間にわたり投与するステップを含み、前記処置期間における総用量は、１ｋｇ当たり１〜３０ｍｇの範囲内にある、上記方法。
【請求項２】
ヒトに１〜５用量の範囲内の抗体又はその抗原結合性断片を１〜１２週の処置期間にわたり投与するステップを含む、それを必要とするヒトにおける免疫性（特発性）血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）の処置又は予防における使用のための抗ＦｃＲｎ抗体又はその結合性断片であって、前記処置期間における総用量は、１ｋｇ当たり１〜３０ｍｇの範囲内にある、上記抗ＦｃＲｎ抗体又はその結合性断片。
【請求項３】
１〜５用量の範囲内の抗体又はその抗原結合性断片を１〜１２週の処置期間にわたり投与するステップを含む、免疫性（特発性）血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）の処置又は予防のための医薬の製造のための抗ＦｃＲｎ抗体又はその抗原結合性断片の使用であって、前記処置期間における総用量は、１ｋｇ当たり１〜３０ｍｇの範囲内にある、上記使用。
【請求項４】
前記抗体又はその結合性断片が、
ａ．ＣＤＲ  Ｈ１について配列番号１、ＣＤＲ  Ｈ２について配列番号２及びＣＤＲ  Ｈ３について配列番号３に示される配列を有する３つのＣＤＲを含む可変領域を有する重鎖又は重鎖断片、並びに
ｂ．ＣＤＲ  Ｌ１について配列番号４、ＣＤＲ  Ｌ２について配列番号５及びＣＤＲ  Ｌ３について配列番号６に示される配列を有する３つのＣＤＲを含む可変領域を有する軽鎖又はその軽鎖断片
を含む、請求項１から３までのいずれか一項に記載の方法、抗ＦｃＲｎ抗体若しくはその結合性断片又は使用。
【請求項５】
前記抗体又はその抗原結合性断片がヒト化されている、請求項１から４までのいずれか一項に記載の方法、抗ＦｃＲｎ抗体若しくはその結合性断片又は使用。
【請求項６】
前記抗ＦｃＲｎ抗体又はその結合性断片が、配列番号２９に示される配列又はそれに対して少なくとも８０％同一の、ＦｃＲｎに特異的な配列を含む重鎖を含む、請求項１から５までのいずれか一項に記載の方法、抗ＦｃＲｎ抗体若しくはその結合性断片又は使用。
【請求項７】
前記抗ＦｃＲｎ抗体又はその結合性断片が、配列番号１５に示される配列又はそれに対して少なくとも８０％同一の、ＦｃＲｎに特異的な配列を含む軽鎖を含む、請求項１から６までのいずれか一項に記載の方法、抗ＦｃＲｎ抗体若しくはその結合性断片又は使用。
【請求項８】
前記抗ＦｃＲｎ抗体又はその結合性断片が、配列番号２９に示される配列を有する重鎖可変ドメイン配列及び配列番号１５に示される配列を含む軽鎖可変ドメイン配列を含む、請求項４又は５に記載の方法、抗ＦｃＲｎ抗体若しくはその結合性断片又は使用。
【請求項９】
前記抗体結合性断片が、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ又はＦａｂ’断片である、請求項１から８までのいずれか一項に記載の方法、抗ＦｃＲｎ抗体若しくはその結合性断片又は使用。
【請求項１０】
前記抗ＦｃＲｎ抗体又はその結合性断片が、配列番号３６に示される配列を含む重鎖及び配列番号２２に示される配列を含む軽鎖を含む、請求項９に記載の方法、抗ＦｃＲｎ抗体若しくはその結合性断片又は使用。
【請求項１１】
前記抗体が全長抗体である、請求項１から７までのいずれか一項に記載の方法、抗ＦｃＲｎ抗体又は使用。
【請求項１２】
前記全長抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ４及びＩｇＧ４Ｐからなる群から選択される、請求項１１に記載の方法、抗ＦｃＲｎ抗体又は使用。
【請求項１３】
前記抗ＦｃＲｎ抗体が、配列番号７２又は配列番号８７又は配列番号４３に示される配列を含む重鎖及び配列番号２２に示される配列を含む軽鎖を有する、請求項１１又は１２に記載の方法、抗ＦｃＲｎ抗体又は使用。
【請求項１４】
前記抗ＦｃＲｎ抗体が、ＵＣＢ７６６５（ロザノリクシズマブ）である、請求項１１、１２又は１３に記載の方法、抗ＦｃＲｎ抗体又は使用。
【請求項１５】
前記抗体又はその結合性断片が、配列番号５０に示される配列を含む重鎖及び配列番号４６又は配列番号７８に示される配列を含む軽鎖を有するＦａｂ−ｄｓＦｖである、請求項１から８までのいずれか一項に記載の方法、抗ＦｃＲｎ抗体若しくはその結合性断片又は使用。
【請求項１６】
１００ｐＭ以下のヒトＦｃＲｎについての結合親和性を有する、請求項１から１５までのいずれか一項に記載の方法、抗ＦｃＲｎ抗体若しくはその結合性断片又は使用。
【請求項１７】
ヒトＦｃＲｎについての前記結合親和性が、ｐＨ６及びｐＨ７．４において測定されたとき、１００ｐＭ以下である、請求項１６に記載の方法、抗ＦｃＲｎ抗体若しくはその結合性断片又は使用。
【請求項１８】
前記抗体又は抗原結合性断片が、薬学的に許容される賦形剤、希釈剤若しくは担体の１つ又は複数を含む医薬組成物として提供される、請求項１から１７までのいずれか一項に記載の方法、抗ＦｃＲｎ抗体若しくはその結合性断片又は使用。
【請求項１９】
前記医薬組成物が、１つ又は複数の他の有効成分をさらに含む、請求項１８に記載の方法、抗ＦｃＲｎ抗体若しくはその結合性断片又は使用。
【請求項２０】
前記処置期間が、１、２、３、４、５、６、７又は８週である、請求項１から１９までのいずれか一項に記載の方法、抗ＦｃＲｎ抗体若しくはその結合性断片又は使用。
【請求項２１】
前記処置期間が、１、２、３、４又は５週である、請求項２０に記載の方法、抗ＦｃＲｎ抗体若しくはその結合性断片又は使用。
【請求項２２】
１、２、３、４若しくは５用量の抗体又は結合性断片が投与され、それぞれの用量が、４ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇの範囲内にある、請求項１から２１までのいずれか一項に記載の方法、抗ＦｃＲｎ抗体若しくはその結合性断片又は使用。
【請求項２３】
それぞれの用量が４ｍｇ／Ｋｇであり、例えば、５回の個々の用量として、特に、５週、特に、連続する５週の処置期間にわたり投与される、請求項２２に記載の方法、抗ＦｃＲｎ抗体若しくはその結合性断片又は使用。
【請求項２４】
それぞれの用量が７ｍｇ／Ｋｇであり、例えば、３回の個々の用量として、特に、３週、特に、連続する３週の処置期間にわたり投与される、請求項２２に記載の方法、抗ＦｃＲｎ抗体若しくはその結合性断片又は使用。
【請求項２５】
それぞれの用量が１０ｍｇ／Ｋｇであり、例えば、２回の個々の用量として、特に、２週、特に、連続する２週の処置期間にわたり投与される、請求項２２に記載の方法、抗ＦｃＲｎ抗体若しくはその結合性断片又は使用。
【請求項２６】
単回用量が投与される、請求項２２に記載の方法、抗ＦｃＲｎ抗体若しくはその結合性断片又は使用。
【請求項２７】
前記用量が１５ｍｇ／Ｋｇである、請求項２６に記載の方法、抗ＦｃＲｎ抗体若しくはその結合性断片又は使用。
【請求項２８】
前記用量が２０ｍｇ／Ｋｇである、請求項２６に記載の方法、抗ＦｃＲｎ抗体若しくはその結合性断片又は使用。
【請求項２９】
前記用量が２５ｍｇ／Ｋｇである、請求項２６に記載の方法、抗ＦｃＲｎ抗体若しくはその結合性断片又は使用。
【請求項３０】
前記用量が３０ｍｇ／Ｋｇである、請求項２６に記載の方法、抗ＦｃＲｎ抗体若しくはその結合性断片又は使用。
【請求項３１】
前記総用量が、１０、１５、２０、２１、２５及び３０ｍｇ／Ｋｇから選択される、請求項１から３０までのいずれか一項に記載の方法、抗ＦｃＲｎ抗体若しくはその結合性断片又は使用。
【請求項３２】
前記抗ＦｃＲｎ抗体又はその結合性断片が、皮下又は静脈内投与される、請求項１から３１までのいずれか一項に記載の方法、抗ＦｃＲｎ抗体若しくはその結合性断片又は使用。
【請求項３３】
前記抗ＦｃＲｎ抗体又はその抗原結合性断片が、ヒトＩｇＧのヒトＦｃＲｎへの結合を遮断する、請求項１から３２までのいずれか一項に記載の方法、抗ＦｃＲｎ抗体若しくはその結合性断片又は使用。
【請求項３４】
前記抗ＦｃＲｎ抗体又はその抗原結合性断片が、β２ミクログロブリンに結合しない、請求項１から３３までのいずれか一項に記載の方法、抗ＦｃＲｎ抗体若しくはその結合性断片又は使用。
【請求項３５】
前記方法が、初期用量より低い、１回又は複数回のさらなる用量を投与するステップをさらに含む、請求項１から３４までのいずれか一項に記載の方法、抗ＦｃＲｎ抗体若しくはその結合性断片又は使用。
【請求項３６】
前記抗ＦｃＲｎ抗体又はその抗原結合性断片が、配列番号９４の残基Ｖ１０５、Ｐ１０６、Ｔ１０７、Ａ１０８及びＫ１０９からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸並びに配列番号９４のＰ１００、Ｅ１１５、Ｅ１１６、Ｆ１１７、Ｍ１１８、Ｎ１１９、Ｆ１２０、Ｄ１２１、Ｌ１２２、Ｋ１２３、Ｑ１２４、Ｇ１２８、Ｇ１２９、Ｄ１３０、Ｗ１３１、Ｐ１３２及びＥ１３３からなる群から選択される少なくとも１つの残基、例えば、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９又は１０の残基を含むヒトＦｃＲｎのエピトープに結合する、請求項１から３４までのいずれか一項に記載の方法、抗ＦｃＲｎ抗体若しくはその結合性断片又は使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、ＦｃＲｎに特異的な抗体を使用した、免疫性（特発性）血小板減少症（ＩＴＰ）を処置する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
新生児ＭＨＣクラスＩ様ＦｃＲｎは、免疫グロブリン及びアルブミンを、大部分の細胞からリサイクルし、上皮バリアを超えて双方向性に輸送して、全身及び粘膜免疫に影響する。ＦｃＲｎが、ＩｇＧとアルブミンの両方を、選別エンドソームから細胞表面にリサイクルすることにより、細胞内リソソーム分解からレスキューすることが示された（Ａｎｄｅｒｓｏｎら、２００６年）。ＩｇＧに関して、これは、ＩｇＧと受容体ＦｃＲｎとの相互作用により達成される。したがって、事実、ＦｃＲｎがＩｇＧを救うことにより、分解から救い循環に戻す。アルブミンも同様に、ＦｃＲｎ分子上の異なる結合部位を介してであるが、ＦｃＲｎによりリサイクルされる。ＦｃＲｎのノックアウト又は遮断により、このリサイクルが解除されると、ＩｇＧのエンドソーム異化作用及び血管と血管外（組織）コンパートメントの両方におけるＩｇＧ濃度の顕著な低減が生じることが示された。事実、ＦｃＲｎが遮断されると、内在性ＩｇＧの除去、及びアルブミン結合部位も遮断されると潜在的にはアルブミンの除去も加速する。
【０００３】
免疫性（特発性）血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）としても知られる、特発性又は免疫性血小板減少症（ＩＴＰ）は、血小板減少症が、出血傾向、紫斑病、又は点状出血として現れる、臨床的な障害である。血小板抗原に対する自己抗体は、ＩＴＰの特徴であるとみなされる。形質細胞による病原性ＩｇＧ自己抗体の産生は、ＩＴＰを含む、いくつものＩｇＧにより媒介される自己免疫疾患において中心の根底にある病理学的機序として認められる。一部の患者において、抗体は、単一の糖タンパク質に由来する抗原を認識するが、他の患者において、抗体は、複数の糖タンパク質を認識する。血小板自己抗体が白色髄において形成されるだけでなく、赤色髄において単核マクロファージが免疫グロブリン被覆血小板を破壊するため、脾臓が、ＩＴＰの病態生理学において鍵となる器官である（Ｓａｎｄｌｅｒ、Ｓｅｍｉｎ  Ｈｅｍａｔｏｌ、２０００年；３７（１補遺１）：１０〜２頁）。
【０００４】
近年、この疾患の病期について新たな定義が導入された（Ｒｏｄｅｇｈｉｅｒｏら、２００９年、Ｂｌｏｏｄ、２００９年；１１３（１１）：２３８６〜９３頁）。診断からの時間に基づき、第１期（３カ月以内）は「新たに診断されたＩＴＰ」であり、病期２（３カ月を超えて１２カ月まで）は「持続期」であり、１２カ月以降は「慢性期」が始まる。これらの病期はまた、処置の選択を反映する。
【０００５】
ＩＴＰの処置の主な目標は、血小板カウントを正常レベルまで補正するよりむしろ、主な出血を防ぐ血小板カウントを達成することである。ＩＴＰの管理は、個々の患者に合わせるべきであり、それは、出血、外傷、手術、又は高いリスク因子（例えば、抗凝固療法中の患者）の非存在下で、５０×１０９／Ｌを超える血小板カウントを有する患者においては稀に必要とされる（ＥＭＡ／ＣＨＭＰ／１５３１９１／２０１３、２０１４）。しかしながら、診断時に３０×１０９／Ｌ未満のカウントで出血を伴う成人は、処置を必要とするという一般的な同意がある。
【０００６】
新たに診断されたＩＴＰの第１選択の処置は、一般に、コルチコステロイド及び静脈内免疫グロブリン（ＩＶＩｇ）の使用に合意があり、それに基づいている。応答しないか、又は再発する患者は、第２選択の薬物療法若しくは脾摘出による処置の選択肢に直面するが、最善のアプローチを支持する明確な証拠はない。脾摘出は、およそ６０％のケースにおいて長期有効性をもたらし、最近のガイドラインは、１２カ月後に脾摘出を考慮することを示唆する。脾摘出は、血小板減少症（出血現象様）に起因する急性合併症及び脾臓機能の喪失由来の長期合併症と関連する侵襲的手法である。無脾症対象は、生命を脅かす感染の増大したリスクにある。脾摘出は、静脈性血栓塞栓症又はアテローム性動脈硬化症の罹患率を増大させ得る（Ｇｈａｎｉｍａら、２０１２年）。
【０００７】
第２の系統の薬物療法は、高用量のデキサメタゾン又はメチルプレドニゾロン；高用量のＩＶＩｇ又は抗Ｄ  Ｉｇ；ビンカアルカロイド；ダプソン及びダナゾール；免疫抑制剤シクロホスファミド、アザチオプリン、及びサイクロスポリン；又はミコフェノール酸モフェチル並びに適用可能なら、ヘリコバクターピロリ菌の除菌を含む。抗ＣＤ２０モノクローナル抗体リツキシマブ、ＩＴＰの処置のために許可されないなら、トロンボポエチン−受容体（ＴＰＯ−Ｒ）アゴニストが、第２の系統並びに第３の系統のオプションとみなされる。
【０００８】
処置に関連する罹患率はまた、有意な関与因子であり；長期経過のコルチコステロイド、他の免疫抑制医薬、又は脾摘出は、慢性的な処置抵抗性ＩＴＰを有する患者において安全な範囲の血小板カウントを維持し得、罹患率及び死亡率は、処置に関連し、コルチコステロイド又は脾摘出を用いた療法の合併症を反映する。したがって、ＩＴＰの処置における新規治療オプションの相当な未だ対処されていない医療上の必要が依然として存在する。
【０００９】
したがって、ＩｇＧのＦｃＲｎへの結合を遮断するか、又は低減する剤は、病原性ＩｇＧの除去によるＩＴＰの処置又は予防において有用であり得る。抗ＦｃＲｎ抗体は、国際公開第２００９／１３１７０２号、国際公開第２００７／０８７２８９号、国際公開第２００６／１１８７７２号、国際公開第２０１４／０１９７２７号、国際公開第２０１５／０７１３３０号、国際公開第２０１５／１６７２９３号及び国際公開第２０１６／１２３５２１号において既に記載されている。
【００１０】
ＵＣＢ７６６５（ロザノリクシズマブ）は、ＦｃＲｎへのアルブミン結合を阻害することなく、ＦｃＲｎへのＩｇＧ結合を阻害するよう具体的に設計されたヒト化抗ＦｃＲｎモノクローナル抗体である（本明細書及び国際公開第２０１４／０１９７２７号に記載される）。ＵＣＢ７６６５は、ＩＴＰを有する患者において病原性ＩｇＧの濃度を低減する目的で、ＦｃＲｎ活性の阻害剤として提供されている。ＵＣＢ７６６５は、ラット抗体をヒト化ＩｇＧ４Ｐフォーマットに操作することにより、ヒトＦｃＲｎについての特異性を有するラット抗体から得られた。ＵＣＢ７６６５をコードするコンストラクトは、親ラット重鎖及び軽鎖可変領域由来の相補性決定領域（ＣＤＲ）をヒトＩｇＧ４Ｐ及びカッパ鎖遺伝子バックグラウンド（それぞれ、配列番号４３及び配列番号２２）にグラフトすることにより作製される。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本開示は、初めて、ヒトにおいてＩＴＰの処置における抗ＦｃＲｎ抗体の治療有効性を示し、かかる処置に適した投与レジメンを提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
したがって、１つの態様において、それを必要とするヒトにおいて免疫性（特発性）血小板減少症（ＩＴＰ）を処置又は予防する方法であって、ヒトに１〜５用量の範囲内の抗ＦｃＲｎ抗体又はその抗原結合性断片を１〜１２週の処置期間にわたり投与するステップを含み、処置期間における総用量は、１ｋｇ当たり１〜３０ｍｇの範囲内にある、方法が提供される。
【００１３】
１つの例において、抗ＦｃＲｎ抗体又はその抗原結合性断片は、
ａ．ＣＤＲ  Ｈ１について配列番号１、ＣＤＲ  Ｈ２について配列番号２及びＣＤＲ  Ｈ３について配列番号３に示される配列を有する３つのＣＤＲを含む可変領域を有する重鎖又は重鎖フラグメント、及び
ｂ．ＣＤＲ  Ｌ１について配列番号４、ＣＤＲ  Ｌ２について配列番号５及びＣＤＲ  Ｌ３について配列番号６に示される配列を有する３つのＣＤＲを含む可変領域を有する軽鎖又はその軽鎖断片
を含む。
【００１４】
別の態様において、ヒトに１〜５用量の範囲内の抗体又はその抗原結合性断片を１〜１２週の処置期間にわたり投与するステップを含む、それを必要とするヒトにおける特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）の処置又は予防における使用のための抗ＦｃＲｎ抗体又はその結合性断片であって、処置期間における総用量は、１ｋｇ当たり１〜３０ｍｇの範囲内にある、抗ＦｃＲｎ抗体又はその結合性断片が提供される。
【００１５】
別の態様において、ＣＤＲ  Ｈ１について配列番号１、ＣＤＲ  Ｈ２について配列番号２及びＣＤＲ  Ｈ３について配列番号３に示される配列を有する３つのＣＤＲを含む可変領域を有する重鎖又は重鎖断片、及び
ＣＤＲ  Ｌ１について配列番号４、ＣＤＲ  Ｌ２について配列番号５及びＣＤＲ  Ｌ３について配列番号６に示される配列を有する３つのＣＤＲを含む可変領域を有する軽鎖又はその軽鎖断片
を含む、１〜５用量の範囲内の抗体又は抗原結合性断片を１〜１２週の処置期間において投与するステップを含む、免疫性（特発性）血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）の処置又は予防における使用のための抗ＦｃＲｎ抗体又はその抗原結合性断片であって、処置期間における総用量は、１Ｋｇ当たり１〜３０ｍｇの範囲内にある、抗ＦｃＲｎ抗体又はその抗原結合性断片が提供される。
【００１６】
別の態様において、
ｉ．ＣＤＲ  Ｈ１について配列番号１、ＣＤＲ  Ｈ２について配列番号２及びＣＤＲ  Ｈ３について配列番号３に示される配列を有する３つのＣＤＲを含む可変領域を有する重鎖又は重鎖断片、及び
ｉｉ．ＣＤＲ  Ｌ１について配列番号４、ＣＤＲ  Ｌ２について配列番号５及びＣＤＲ  Ｌ３について配列番号６に示される配列を有する３つのＣＤＲを含む可変領域を有する軽鎖又はその軽鎖断片を含む、１〜５用量の範囲内の抗体又は結合性断片を１〜１２週の処置期間において投与するステップを含む、免疫性（特発性）血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）の処置又は予防のための医薬の製造のための抗ＦｃＲｎ抗体又はその結合性断片であって、処置期間における総用量は、１Ｋｇ当たり１〜３０ｍｇの範囲内にある、抗ＦｃＲｎ抗体又はその結合性断片が提供される。
【００１７】
重要なことに、本発明の抗体は、同等及び高い結合親和性でｐＨ６とｐＨ７．４の両方においてヒトＦｃＲｎに結合することができる。それ故、有利には、抗体は、エンドソーム内であってもＦｃＲｎに結合し続け、これにより、ＩｇＧへのＦｃＲｎ結合の遮断を最大にすることができる。
【００１８】
１つの例において、本発明における使用のための抗ＦｃＲｎ抗体又はその結合性断片は、配列番号９４の残基Ｖ１０５、Ｐ１０６、Ｔ１０７、Ａ１０８及びＫ１０９からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸並びに少なくとも１つの残基、例えば、配列番号９４のＰ１００、Ｅ１１５、Ｅ１１６、Ｆ１１７、Ｍ１１８、Ｎ１１９、Ｆ１２０、Ｄ１２１、Ｌ１２２、Ｋ１２３、Ｑ１２４、Ｇ１２８、Ｇ１２９、Ｄ１３０、Ｗ１３１、Ｐ１３２及びＥ１３３からなる群から選択される少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個の残基を含むヒトＦｃＲｎのエピトープに結合する。
【００１９】
１つの実施形態において、本開示による抗体又は結合性断片は、例えば、配列番号４、配列番号５及び配列番号６から独立して選択される１、２又は３つのＣＤＲを含む、軽鎖又は軽鎖断片であって、特に、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号４であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号５であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号６である、軽鎖又は軽鎖断片を含む。
【００２０】
１つの実施形態において、本開示による抗体又は結合性断片は、配列番号１〜６のＣＤＲ配列を含み、例えば、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号１であり、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号２であり、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号３であり、ＣＤＲ  Ｌ１は配列番号４であり、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号５であり、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号６である。
【００２１】
本開示はまた、本明細書に記載される抗体又は断片をコードする、ＤＮＡのようなポリヌクレオチドを対象とする。
【００２２】
当該ポリヌクレオチドを含む宿主細胞も提供される。
【００２３】
抗体又は断片を発現させる方法は、抗体又は断片をＰＥＧのようなポリマーと結合させる方法として、本明細書において提供される。
【００２４】
本開示はまた、当該抗体及び断片を含む医薬組成物に関する。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】ある特定のアミノ酸及びポリヌクレオチド配列を示す図である。
【図１Ａ】ある特定のアミノ酸及びポリヌクレオチド配列を示す図である。
【図１Ｂ】ある特定のアミノ酸及びポリヌクレオチド配列を示す図である。
【図１Ｃ】ある特定のアミノ酸及びポリヌクレオチド配列を示す図である。
【図１Ｄ】ある特定のアミノ酸及びポリヌクレオチド配列を示す図である。
【図１Ｅ】ある特定のアミノ酸及びポリヌクレオチド配列を示す図である。
【図１Ｆ】ある特定のアミノ酸及びポリヌクレオチド配列を示す図である。
【図１Ｇ】ある特定のアミノ酸及びポリヌクレオチド配列を示す図である。
【図１Ｈ】ある特定のアミノ酸及びポリヌクレオチド配列を示す図である。
【図１Ｉ】ある特定のアミノ酸及びポリヌクレオチド配列を示す図である。
【図１Ｊ】ある特定のアミノ酸及びポリヌクレオチド配列を示す図である。
【図１Ｋ】ある特定のアミノ酸及びポリヌクレオチド配列を示す図である。
【図１Ｌ】ある特定のアミノ酸及びポリヌクレオチド配列を示す図である。
【図１Ｍ】ある特定のアミノ酸及びポリヌクレオチド配列を示す図である。
【図１Ｎ】ある特定のアミノ酸及びポリヌクレオチド配列を示す図である。
【図１Ｐ】ある特定のアミノ酸及びポリヌクレオチド配列を示す図である。
【図１Ｑ】ある特定のアミノ酸及びポリヌクレオチド配列を示す図である。
【図１Ｒ】ある特定のアミノ酸及びポリヌクレオチド配列を示す図である。
【図１Ｓ】ある特定のアミノ酸及びポリヌクレオチド配列を示す図である。
【図１Ｔ】ある特定のアミノ酸及びポリヌクレオチド配列を示す図である。
【図１Ｕ】ある特定のアミノ酸及びポリヌクレオチド配列を示す図である。
【図１Ｖ】ある特定のアミノ酸及びポリヌクレオチド配列を示す図である。
【図１Ｗ】ある特定のアミノ酸及びポリヌクレオチド配列を示す図である。
【図１Ｘ】ある特定のアミノ酸及びポリヌクレオチド配列を示す図である。
【図１Ｙ】ある特定のアミノ酸及びポリヌクレオチド配列を示す図である。
【図１Ｚ】ある特定のアミノ酸及びポリヌクレオチド配列を示す図である。
【図１ＡＡ】ある特定のアミノ酸及びポリヌクレオチド配列を示す図である。
【図１ＢＢ】ある特定のアミノ酸及びポリヌクレオチド配列を示す図である。
【図１ＣＣ】ある特定のアミノ酸及びポリヌクレオチド配列を示す図である。
【図１ＤＤ】ある特定のアミノ酸及びポリヌクレオチド配列を示す図である。
【図１ＥＥ】ある特定のアミノ酸及びポリヌクレオチド配列を示す図である。
【図１ＦＦ】ある特定のアミノ酸及びポリヌクレオチド配列を示す図である。
【図２Ａ】ある特定の配列のアライメントを示す図である。
【図２Ｂ】ある特定の配列のアライメントを示す図である。
【図３】ＩＴＰ投薬レジメンを示す図である。
【図４】ＩＴＰ出血評価ツール（ＩＴＰ−ＢＡＴ）を示す図である。
【図５】ＵＣＢ７６６５投与後の平均ＩｇＧ減少を示す図である。
【図６】ＵＣＢ７６６５投与後の平均血小板数（応答者のみ）を示す図である。
【図７】４、７、１０ｍｇ／ｋｇのＵＣＢ７６６５の複数回投与、及び１５ｍｇ／ｋｇのＵＣＢ７６６５の単回投与後の平均ＩｇＧ減少を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
本明細書において利用される、ＦｃＲｎは、そのアミノ酸配列が番号Ｐ６１７６９の下のＵｎｉＰｒｏｔ内にある、β２ミクログロブリン（β２Ｍ）と一緒に、新生児Ｆｃ受容体としても公知の、そのアミノ酸配列が番号Ｐ５５８９９の下のＵｎｉＰｒｏｔ内にあるヒトＩｇＧ受容体アルファ鎖間の非共有結合複合体を指す。
【００２７】
本明細書において利用される、抗体分子は、抗体又はその結合性断片を指す。
【００２８】
本明細書において使用される、用語「抗体」は、一般に、インタクトな（全体の）抗体、すなわち、２つの重鎖及び２つの軽鎖の構成要素を含むインタクトな（全体の）抗体を指す。抗体は、さらなる追加の結合性ドメイン、例えば、国際公開第２００７／０２４７１５号において開示される分子ＤＶＤ−Ｉｇ自体、又は国際公開第２０１１／０３０１０７号において記載されるいわゆる（ＦａｂＦｖ）２Ｆｃを含んでもよい。したがって、本明細書において利用される、抗体は、２、３又は４価の全長抗体を含む。
【００２９】
抗体の抗原結合性断片は、１本鎖抗体（すなわち、全長重鎖及び軽鎖）；Ｆａｂ、修飾Ｆａｂ、Ｆａｂ’、修飾Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆａｂ−Ｆｖ、Ｆａｂ−ｄｓＦｖ、単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨ又はＶＬ又はＶＨＨ）、ｓｃＦｖ、２、３又は４価抗体、Ｂｉｓ−ｓｃＦｖ、ダイアボディ、トリボディ、トリアボディ、テトラボディ及び上記のいずれかのエピトープ結合性断片（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ及びＨｕｄｓｏｎ、２００５年、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、２３（９）：１１２６〜１１３６頁；Ａｄａｉｒ及びＬａｗｓｏｎ、２００５年、Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｒｅｖｉｅｗｓ−Ｏｎｌｉｎｅ、２（３）、２０９〜２１７頁を参照）を含む。これらの抗体断片を作製する方法及び製造する方法は、当該技術分野において周知である（例えば、Ｖｅｒｍａら、１９９８年、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ、２１６、１６５〜１８１頁を参照）。Ｆａｂ−Ｆｖフォーマットは、国際公開第２００９／０４０５６２号において初めて開示され、そのジスルフィド安定化バージョン、Ｆａｂ−ｄｓＦｖは、国際公開第２０１０／０３５０１２号において初めて開示された。本発明における使用のための他の抗体断片は、国際特許出願公開第２００５／００３１６９号、国際公開第２００５／００３１７０号及び国際公開第２００５／００３１７１号に記載されるＦａｂ並びにＦａｂ’断片を含む。多価の抗体は、複数の特異性、例えば、二重特異性であり得るか、又は単一特異性であり得る（例えば、国際公開第９２／２２５８３号及び国際公開第０５／１１３６０５号を参照）。後者の１つのかかる例は、国際公開第９２／２２５８３号に記載されるＴｒｉ−Ｆａｂ（又はＴＦＭ）である。
【００３０】
典型的なＦａｂ’分子は、重鎖が、可変領域ＶＨ、定常ドメインＣＨ１及び天然又は修飾されたヒンジ領域を含み、軽鎖が、可変領域ＶＬ及び定常ドメインＣＬを含む、重鎖と軽鎖の対を含む。
【００３１】
１つの実施形態において、Ｆ（ａｂ’）２を作製するための本開示によるＦａｂ’の２量体が提供され、例えば、２量体化は、ヒンジを通じてであってもよい。
【００３２】
１つの実施形態において、抗体又はその結合性断片は、結合性ドメインを含む。結合性ドメインは、一般に、６つのＣＤＲ、すなわち重鎖の３つのＣＤＲ及び軽鎖の３つのＣＤＲを含む。１つの実施形態において、ＣＤＲは、フレームワーク内にあり、一緒になって可変領域を形成する。したがって、１つの実施形態において、抗体又は結合性断片は、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含む、抗原に特異的な結合性ドメインを含む。
【００３３】
本発明により提供されるＣＤＲ又は他の配列（例えば、可変ドメイン）に対して、抗体のＦｃＲｎに結合する能力を著しく変化させることなく、１つ又は複数（例えば、１、２、３又は４）のアミノ酸置換、付加及び／或いは欠失が施されてもよいことは認識されよう。任意のアミノ酸置換、付加及び／又は欠失の効果は、例えば、ＦｃＲｎ結合及び遮断を決定するための国際公開第２０１４／０１９７２７号に記載される方法を使用することにより、当業者により容易に試験され得る。
【００３４】
１つの例において、本発明により提供される抗体又は断片において利用されるフレームワーク領域に対して、１つ又は複数（例えば、１、２、３又は４）のアミノ酸置換、付加及び／或いは欠失が施されてもよく、ＦｃＲｎに対する結合親和性は、保持されるか、又は増大される。
【００３５】
抗体可変ドメインにおける残基は、Ｋａｂａｔらにより発明されたシステムに従い、従来法で番号付けされる。このシステムは、Ｋａｂａｔら、１９８７年、「免疫学的対象のタンパク質の配列（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ）」において、米国保健社会福祉省、ＮＩＨ、米国（本明細書において、以下、「Ｋａｂａｔら、（上）」）に記載される。このナンバリングシステムが、別段示される場合を除き、本明細書において使用される。
【００３６】
Ｋａｂａｔ残基命名は、アミノ酸残基の直線的ナンバリングと直接的に常には対応しない。実際の直鎖アミノ酸配列は、基本の可変ドメイン構造のフレームワーク又は相補性決定領域（ＣＤＲ）に関わらず、構造成分の短縮、若しくは構造タンパク質への挿入に対応する、厳密なＫａｂａｔナンバリングにおいてより少ないか又は追加のアミノ酸を含有し得る。残基の正しいＫａｂａｔナンバリングは、「標準的な」Ｋａｂａｔにより番号を付けた配列を有する抗体のアミノ酸配列における相同性の残基のアライメントにより所定の抗体について決定されてもよい。
【００３７】
重鎖可変ドメインのＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに従い、残基３１〜３５（ＣＤＲ−Ｈ１）、残基５０〜６５（ＣＤＲ−Ｈ２）及び残基９５〜１０２（ＣＤＲ−Ｈ３）に位置する。しかしながら、Ｃｈｏｔｈｉａ（Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｃ．及びＬｅｓｋ、Ａ．Ｍ．、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１９６、９０１〜９１７頁（１９８７年））によると、ＣＤＲ−Ｈ１に等しいループは、残基２６から残基３２まで拡大する。したがって、別段示されない限り、本明細書において利用される、「ＣＤＲ−Ｈ１」は、ＫａｂａｔナンバリングシステムとＣｈｏｔｈｉａのトポロジーループ定義の組み合わせにより記載される、残基２６〜３５を指すことが意図される。
【００３８】
軽鎖可変ドメインのＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに従い、残基２４〜３４（ＣＤＲ−Ｌ１）、残基５０〜５６（ＣＤＲ−Ｌ２）及び残基８９〜９７（ＣＤＲ−Ｌ３）に位置する。
【００３９】
本開示の抗体及び断片は、ＦｃＲｎを遮断し、これにより、ＩｇＧの再利用においてそれらが機能することを妨げ得る。本明細書において利用される遮断は、受容体を排除することのような、物理的に遮断することを指すが、抗体又は断片が、例えば、天然のリガンドが、受容体にもはや結合しないことを意味する、立体構造の変化を生じたエピトープに結合する場合を含む。本発明の抗体分子は、ＦｃＲｎに結合し、これにより、ＩｇＧ定常領域へのＦｃＲｎ結合を減少するか、又は妨げる（例えば、阻害する）。
【００４０】
１つの実施形態において、抗体又はその断片は、ＩｇＧに関してＦｃＲｎに競合的に結合する。
【００４１】
１つの例において、抗体又はその結合性断片は、ヒトＩｇＧへのヒトＦｃＲｎの競合的阻害剤として機能する。１つの例において、抗体又はその結合性断片は、ＦｃＲｎ上のＩｇＧ結合部位に結合する。１つの例において、抗体又はその結合性断片は、β２Ｍに結合しない。
【００４２】
本開示における使用のための抗体は、当該技術分野において公知の任意の適当な方法を使用して得られてもよい。融合タンパク質を含むＦｃＲｎポリペプチド／タンパク質、ポリペプチドを（組み換え又は天然に）発現する細胞（例えば、活性化Ｔ細胞）を使用して、ＦｃＲｎを特異的に認識する抗体を産生することができる。ポリペプチドは、「成熟」ポリペプチド又はその生物学的活性断片若しくは誘導体であってもよい。ヒトタンパク質は、番号Ｐ５５８９９の下Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔにおいて記録される。ヒトＦｃＲｎアルファ鎖の細胞外ドメインは、配列番号９４において提供される。β２Ｍの配列は、配列番号９５において提供される。
【００４３】
１つの実施形態において、抗原は、ＦｃＲｎが細胞において内部移行される動的プロセスがほとんどないか、又は存在しないような、細胞の表面上の本ＦｃＲｎに操作されているＦｃＲｎの変異体形態であり、例えば、これは、ＦｃＲｎアルファ鎖の細胞質末端において変異を生じさせることにより達成することができ、Ｏｂｅｒら、２００１年、Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３、１５５１〜１５５９頁に記載される通り、ジロイシンはジアラニンに変異する。
【００４４】
宿主を免疫するために使用するための、ポリペプチドは、当該技術分野において周知のプロセスにより発現系から遺伝子操作された宿主細胞から調製されてもよいか、又はそれらは、天然の生物学的供給源から回収されてもよい。本出願において、用語「ポリペプチド」は、ペプチド、ポリペプチド及びタンパク質を含む。これらは、別段特定されない限り、互換的に使用される。ＦｃＲｎポリペプチドは、ある場合では、例えば、親和性タグ又は同様のものに融合された融合タンパク質のようなより大きなタンパク質の一部であってもよい。
【００４５】
周知又は日常的なプロトコールを使用して、ポリペプチドを動物、好ましくは、非ヒト動物に投与することによる、動物の免疫化が必要である場合、ＦｃＲｎポリペプチドに対して生じた抗体が得られてもよく、例えば、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ（編）、第４巻、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｏｘｆｏｒｄ、英国、１９８６年を参照のこと。ウサギ、マウス、ラット、ヒツジ、ウシ、ラクダ又はブタのような、多くの温血動物が、免疫されてもよい。しかしながら、マウス、ウサギ、ブタ及びラットは、一般に、最も好適である。
【００４６】
モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ技術（Ｋｏｈｌｅｒ  ＆  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ、１９７５年、Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５〜４９７頁）、トリオーマ技術、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（Ｋｏｚｂｏｒら、１９８３年、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ、４：７２頁）及びＥＢＶ−ハイブリドーマ技術（Ｃｏｌｅら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ、７７〜９６頁、Ａｌａｎ  Ｒ  Ｌｉｓｓ、Ｉｎｃ．、１９８５年）のような当該技術分野において公知の任意の方法により調製されてもよい。
【００４７】
本発明における使用のための抗体はまた、例えば、Ｂａｂｃｏｏｋ、Ｊ．ら、１９９６年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９３（１５）：７８４３〜７８４８ｌ頁；国際公開第９２／０２５５１号；国際公開第２００４／０５１２６８号及び国際特許出願公開第２００４／１０６３７７号に記載される方法による特異的な抗体の産生のため選択された単一のリンパ球から作製された免疫グロブリン可変領域ｃＤＮＡをクローニングし、発現させることによる単一のリンパ球抗体方法を使用して作製されてもよい。
【００４８】
抗体についてのスクリーニングは、ヒトＦｃＲｎへの結合を測定するためのアッセイ及び／又は受容体へのＩｇＧ結合を遮断する能力を測定するためのアッセイを使用して行うことができる。結合アッセイの例は、特に、プレートに固定されている、ヒトＦｃＲｎとヒトＦｃの融合タンパク質を使用し、融合タンパク質に結合した抗ＦｃＲｎ抗体を検出するための２次抗体を利用した、ＥＬＩＳＡである。適当なアンタゴニスト及び遮断アッセイの例は、当該技術分野において周知であり、国際公開第２０１４／０１９７２７号に記載される。
【００４９】
ヒト化抗体（ＣＤＲグラフト抗体を含む）は、非ヒト種由来の１つ又は複数の相補性決定領域（ＣＤＲ）及びヒト免疫グロブリン分子由来のフレームワーク領域を有する抗体分子である（例えば、米国特許第５，５８５，０８９号；国際公開第９１／０９９６７号を参照）。ＣＤＲ全体よりむしろＣＤＲの特異性決定残基を移すことがただ必要であり得ることが理解されよう（例えば、Ｋａｓｈｍｉｒｉら、２００５年、Ｍｅｔｈｏｄｓ、３６、２５〜３４頁を参照）。ヒト化抗体は、場合により、ＣＤＲがもたらされた非ヒト種に由来する１つ又は複数のフレームワーク残基を含んでもよい。後者は、しばしば、ドナー残基として言及される。
【００５０】
本明細書において利用される、特異的とは、特異的である抗原を唯一認識する抗体、又は非特異的である抗原への結合と比較して、特異的である抗原に対して有意に高い結合親和性、例えば、少なくとも５、６、７、８、９、１０倍高い結合親和性を有する抗体を指すことが意図される。結合親和性は、本明細書及び国際公開第２０１４／０１９７２７号に記載されるＢＩＡコアのような技術により結合されてもよい。１つの例において、本発明の抗体は、β２ミクログロブリン（β２Ｍ）に結合しない。１つの例において、本発明の抗体は、カニクイザルＦｃＲｎに結合する。１つの例において、本発明の抗体は、ラット又はマウスＦｃＲｎに結合しない。
【００５１】
本開示によるある特定の抗体のアミノ酸配列及びポリヌクレオチド配列は、図において提供される。
【００５２】
本発明において有用な他の抗体は、国際公開第２００９／１３１７０２号、国際公開第２００７／０８７２８９号、国際公開第２００６／１１８７７２号、国際公開第２０１５／０７１３３０号、国際公開第２０１５／１６７２９３号及び国際公開第２０１６／１２３５２１号に記載され、参照により本明細書に組み込まれる。
【００５３】
１つの実施形態において、本開示による抗体又は断片は、ヒト化されている。
【００５４】
本明細書において使用される、用語「ヒト化抗体分子」は、重鎖及び／又は軽鎖が、アクセプター抗体（例えば、ヒト抗体）の重鎖及び／又は軽鎖可変領域フレームワークにグラフトされたドナー抗体（例えば、マウスモノクローナル抗体のような非ヒト抗体）由来の１つ又は複数のＣＤＲ（所望なら、１つ若しくは複数の修飾ＣＤＲを含む）を含有する、抗体分子を指す。概要については、Ｖａｕｇｈａｎら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１６、５３５〜５３９頁、１９９８年を参照。１つの実施形態において、ＣＤＲ全体が移されるよりむしろ、本明細書において上で記載されたＣＤＲの任意の１つ由来の特異性決定残基の１つ又は複数のみが、ヒト抗体フレームワークに移される（例えば、Ｋａｓｈｍｉｒｉら、２００５年、Ｍｅｔｈｏｄｓ、３６、２５〜３４頁を参照）。１つの実施形態において、本明細書において上で記載されたＣＤＲの１つ又は複数由来の特異性決定残基のみが、ヒト抗体フレームワークに移される。別の実施形態において、本明細書において上で記載されたＣＤＲのそれぞれ由来の特異性決定残基のみが、ヒト抗体フレームワークに移される。
【００５５】
ＣＤＲ又は特異性決定残基がグラフトされるとき、マウス、霊長類及びヒトフレームワーク領域を含む、ＣＤＲがもたらされるドナー抗体のクラス／タイプに関して有する、任意の適当なアクセプター可変領域フレームワーク配列が、使用され得る。
【００５６】
好適には、本発明によるヒト化抗体は、ヒトアクセプターフレームワーク領域並びに本明細書において具体的に提供されるＣＤＲの１つ又は複数を含む可変ドメインを有する。したがって、１つの実施形態において、ヒトＦｃＲｎに結合する遮断ヒト化抗体であって、可変ドメインが、ヒトアクセプターフレームワーク領域及び非ヒトドナーＣＤＲを含む、遮断ヒト化抗体が提供される。
【００５７】
本発明において使用され得るヒトフレームワークの例は、ＫＯＬ、ＮＥＷＭ、ＲＥＩ、ＥＵ、ＴＵＲ、ＴＥＩ、ＬＡＹ及びＰＯＭである（Ｋａｂａｔら、上）。例えば、ＫＯＬ及びＮＥＷＭは、重鎖について使用することができ、ＲＥＩは、軽鎖について使用することができ、ＥＵ、ＬＡＹ及びＰＯＭは、重鎖と軽鎖の両方について使用することができる。或いは、ヒト生殖系統配列が使用されてもよく；これらは、ｈｔｔｐ：／／ｖｂａｓｅ．ｍｒｃ−ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／において入手可能である。
【００５８】
本発明のヒト化抗体において、アクセプター重鎖及び軽鎖は、同じ抗体に由来する必要が必ずしもなく、所望なら、異なる鎖がもたされたフレームワーク領域を有する複合鎖を含んでもよい。
【００５９】
本発明のヒト化抗体の重鎖についての１つのかかる好適なフレームワーク領域は、ＪＨ４と一緒のヒトサブグループＶＨ３配列１−３  ３−０７（配列番号５６）に由来する。
【００６０】
したがって、１つの例において、ＣＤＲ−Ｈ１について配列番号１に示される配列、ＣＤＲ−Ｈ２について配列番号２に示される配列及びＣＤＲＨ３について配列番号３に示される配列を含み、重鎖フレームワーク領域が、ＪＨ４と一緒にヒトサブグループＶＨ３配列１−３  ３−０７に由来する、ヒト化抗体が提供される。
【００６１】
ヒトＪＨ４の配列は、次の：（ＹＦＤＹ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳ（配列番号７０）である。ＹＦＤＹモチーフは、ＣＤＲ−Ｈ３の一部であり、フレームワーク４の一部でない（Ｒａｖｅｔｃｈ、ＪＶ．ら、１９８１年、Ｃｅｌｌ、２７、５８３〜５９１頁）。
【００６２】
１つの例において、抗体の重鎖可変ドメインは、配列番号２９に示される配列を含む。
【００６３】
本発明のヒト化抗体の軽鎖についての好適なフレームワーク領域は、ＪＫ２と一緒のヒト生殖系統サブグループＶＫ１配列２−１−（１）Ａ３０（配列番号５４）に由来する。
【００６４】
したがって、１つの例において、ＣＤＲ−Ｌ１について配列番号４に示される配列、ＣＤＲ−Ｌ２について配列番号５に示される配列及びＣＤＲＬ３について配列番号６に示される配列を含み、軽鎖フレームワーク領域が、ＪＫ２と一緒にヒトサブグループＶＫ１配列２−１−（１）Ａ３０に由来する、ヒト化抗体が提供される。
【００６５】
ＪＫ２配列は、次の：（ＹＴ）ＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号７１）である。ＹＴモチーフは、ＣＤＲ−Ｌ３の一部であり、フレームワーク４の一部でない（Ｈｉｅｔｅｒ、ＰＡ．ら、１９８２年、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２５７、１５１６〜１５２２頁）。
【００６６】
１つの例において、抗体の軽鎖可変ドメインは、配列番号１５に示される配列を含む。
【００６７】
本発明のヒト化抗体において、フレームワーク領域は、アクセプター抗体のものと同じ配列を正確に有する必要はない。例えば、普通でない残基は、そのアクセプター鎖クラス又はタイプについてより頻繁に生じる残基に変えられてもよい。或いは、アクセプターフレームワーク領域における選択された残基は、それらが、ドナー抗体において同じ位置にて見られる残基に対応するように変えられてもよい（Ｒｅｉｃｈｍａｎｎら、１９９８年、Ｎａｔｕｒｅ、３３２、３２３〜３２４頁を参照）。かかる変化は、ドナー抗体の親和性を回復させるための最小の必要性を維持すべきである。変えられるのを必要とし得るアクセプターフレームワーク領域における残基を選択するプロトコールは、国際公開第９１／０９９６７号に記載される。
【００６８】
したがって、１つの実施形態において、フレームワークにおける１、２、３、４、又は５つの残基が、代替のアミノ酸残基で置き換えられる。
【００６９】
したがって、１つの例において、少なくとも、重鎖の可変ドメインの位置３、２４、７６、９３及び９４のそれぞれにおける残基（Ｋａｂａｔナンバリング）が、ドナー残基である、ヒト化抗体が提供され、例えば、配列番号２９に示される配列を参照。
【００７０】
１つの実施形態において、重鎖可変ドメインの残基３は、代替のアミノ酸、例えば、グルタミンで置き換えられる。
【００７１】
１つの実施形態において、重鎖可変ドメインの残基２４は、代替のアミノ酸、例えば、アラニンで置き換えられる。
【００７２】
１つの実施形態において、重鎖可変ドメインの残基７６は、代替のアミノ酸、例えば、アスパラギンで置き換えられる。
【００７３】
１つの実施形態において、重鎖の残基９３は、代替のアミノ酸、例えば、アラニンで置き換えられる。
【００７４】
１つの実施形態において、重鎖の残基９４は、代替のアミノ酸、例えば、アルギニンで置き換えられる。
【００７５】
１つの実施形態において、本開示よるヒト化重鎖可変領域において、残基３はグルタミンであり、残基２４はアラニンであり、残基７６はアスパラギンであり、残基９３はアラニンであり、残基９４はアルギニンである。
【００７６】
したがって、１つの例において、少なくとも、軽鎖の可変ドメインの位置３６、３７及び５８のそれぞれにおける残基（Ｋａｂａｔナンバリング）が、ドナー残基である、ヒト化抗体が提供され、例えば、配列番号１５に示される配列を参照。
【００７７】
１つの実施形態において、軽鎖可変ドメインの残基３６は、代替のアミノ酸、例えば、チロシンで置き換えられる。
【００７８】
１つの実施形態において、軽鎖可変ドメインの残基３７は、代替のアミノ酸、例えば、グルタミンで置き換えられる。
【００７９】
１つの実施形態において、軽鎖可変ドメインの残基５８は、代替のアミノ酸、例えば、バリンで置き換えられる。
【００８０】
１つの実施形態において、本開示によるヒト化重鎖可変領域において、残基３６はチロシンであり、残基３７はグルタミンであり、残基５８はバリンである。
【００８１】
１つの実施形態において、本開示は、本明細書において開示される配列に対して８０％、例えば、関連配列、例えば、可変ドメイン配列、ＣＤＲ配列若しくはＣＤＲを除く、可変ドメイン配列の一部又は全体にわたり８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％或いは９９％類似又は同一である抗体配列を提供する。１つの実施形態において、関連配列は、配列番号１５である。１つの実施形態において、関連配列は、配列番号２９である。
【００８２】
１つの実施形態において、本発明は、重鎖を含むヒトＦｃＲｎに結合する抗体分子であって、重鎖の可変ドメインが、配列番号２９に示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％  ９６％、９７％、９８％若しくは９９％の同一性又は類似性を有する配列を含む、抗体分子を提供する。
【００８３】
１つの実施形態において、本発明は、軽鎖を含むヒトＦｃＲｎに結合する抗体分子であって、軽鎖の可変ドメインが、配列番号１５に示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％  ９６％、９７％、９８％若しくは９９％の同一性又は類似性を有する配列を含む、抗体分子を提供する。
【００８４】
１つの実施形態において、本発明は、ヒトＦｃＲｎに結合する抗体分子であって、抗体が、配列番号２９に示される配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％  ９６％、９７％、９８％若しくは９９％の類似又は同一である重鎖可変ドメインを有するが、ＣＤＲ−Ｈ１について配列番号１に示される配列、ＣＤＲ−Ｈ２について配列番号２に示される配列及びＣＤＲ−Ｈ３について配列番号３に示される配列を有する、抗体分子を提供する。
【００８５】
１つの実施形態において、本発明は、ヒトＦｃＲｎに結合する抗体分子であって、抗体が、配列番号１５に示される配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％  ９６％、９７％、９８％若しくは９９％類似又は同一である軽鎖可変ドメインを有するが、ＣＤＲ−Ｌ１について配列番号４に示される配列、ＣＤＲ−Ｌ２について配列番号５に示される配列及びＣＤＲ−Ｌ３について配列番号６に示される配列を有する、抗体分子を提供する。
【００８６】
１つの実施形態において、本発明は、ヒトＦｃＲｎに結合する抗体分子であって、抗体が、配列番号２９に示される配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％  ９６％、９７％、９８％若しくは９９％類似又は同一である重鎖可変ドメイン及び配列番号１５に示される配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％  ９６％、９７％、９８％若しくは９９％類似又は同一である軽鎖可変ドメインを有するが、ＣＤＲ−Ｈ１について配列番号１に示される配列、ＣＤＲ−Ｈ２について配列番号２に示される配列、ＣＤＲ−Ｈ３について配列番号３に示される配列、ＣＤＲ−Ｌ１について配列番号４に示される配列、ＣＤＲ−Ｌ２について配列番号５に示される配列及びＣＤＲ−Ｌ３について配列番号６に示される配列を有する、抗体分子を提供する。
【００８７】
本明細書において使用される、「同一性」は、整列された配列における任意の特定の位置において、アミノ酸残基が、配列間で同一であることを示す。本明細書において使用される、「類似性」は、整列された配列における任意の特定の位置において、アミノ酸残基が、配列間で類似のタイプのものであることを示す。例えば、ロイシンは、イソロイシン又はバリンに置換される。しばしば、１つの別のものに置換され得る他のアミノ酸は、
−フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファン（芳香族性側鎖を有するアミノ酸）；
−リシン、アルギニン及びヒスチジン（塩基性側鎖を有するアミノ酸）；
−アスパラギン酸及びグルタミン酸（酸性側鎖を有するアミノ酸）；
−アスパラギン及びグルタミン（アミド側鎖を有するアミノ酸）；並びに
−システイン及びメチオニン（硫黄含有側鎖を有するアミノ酸）
を含むが、これらに限定されない。同一性及び類似性の程度は、容易に計算することができる（Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．編、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９８８年；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ．Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ、Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．編、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９３年；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａ、Ｐａｒｔ  １、Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．、及びＧｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．編、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ、１９９４年；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、１９８７年、Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ、Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．及びＤｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．編、Ｍ  Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９１年、ＮＣＢＩから入手可能なＢＬＡＳＴ（商標）ソフトウェア（Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ら、１９９０年、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ、２１５：４０３〜４１０頁；Ｇｉｓｈ，Ｗ．＆Ｓｔａｔｅｓ，Ｄ．Ｊ．、１９９３年、Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ、３：２６６〜２７２頁、Ｍａｄｄｅｎ，Ｔ．Ｌ．ら、１９９６年、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ、２６６：１３１〜１４１頁；Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ら、１９９７年、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、２５：３３８９〜３４０２頁；Ｚｈａｎｇ，Ｊ．＆Ｍａｄｄｅｎ，Ｔ．Ｌ．、１９９７年、Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．、７：６４９〜６５６頁）。
【００８８】
本発明の抗体分子は、全長の重鎖及び軽鎖を有する完全な抗体分子又はその断片を含んでもよく、Ｆａｂ、修飾Ｆａｂ、Ｆａｂ’、修飾Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨ又はＶＬ又はＶＨＨ）、ｓｃＦｖ、２、３又は４価抗体、Ｂｉｓ−ｓｃＦｖ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ及び上記のいずれかのエピトープ結合性断片（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ及びＨｕｄｓｏｎ、２００５年、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．、２３（９）：１１２６〜１１３６頁；Ａｄａｉｒ及びＬａｗｓｏｎ、２００５年、Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｒｅｖｉｅｗｓ−Ｏｎｌｉｎｅ、２（３）、２０９〜２１７頁）を含むが、これらに限定されない。これらの抗体断片を作製する方法及び製造する方法は、当該技術分野において周知である（例えば、Ｖｅｒｍａら、１９９８年、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ、２１６、１６５〜１８１頁を参照）。本発明における使用のための他の抗体断片は、国際特許出願公開第２００５／００３１６９号、国際公開第２００５／００３１７０号及び国際公開第２００５／００３１７１号に記載されるＦａｂ並びにＦａｂ’断片を含む。多価の抗体は、複数の特異性、例えば、二重特異性であり得るか、又は単一特異性であり得る（例えば、国際公開第９２／２２８５３号、国際公開第０５／１１３６０５号、国際公開第２００９／０４０５６２号及び国際公開第２０１０／０３５０１２号を参照）。
【００８９】
１つの実施形態において、本開示の抗体分子は、例えば、それぞれ、軽鎖及び重鎖について、配列番号１５及び２９において示される可変領域を含む抗体Ｆａｂ’断片である。１つの実施形態において、抗体分子は、配列番号２２に示される配列を含む軽鎖及び配列番号３６に示される配列を含む重鎖を有する。
【００９０】
１つの実施形態において、本開示の抗体分子は、例えば、それぞれ、軽鎖及び重鎖について、配列番号１５並びに２９において示される可変領域を含む全長ＩｇＧ１抗体である。１つの実施形態において、抗体分子は、配列番号２２に示される配列を含む軽鎖及び配列番号７２に示される配列を含む重鎖を有する。
【００９１】
１つの実施形態において、本開示の抗体分子は、例えば、それぞれ、軽鎖及び重鎖について配列番号１５並びに２９において示される可変領域を含む全長ＩｇＧ４フォーマットである。１つの実施形態において、抗体分子は、配列番号２２に示される配列を含む軽鎖及び配列番号８７に示される配列を含む重鎖を有する。
【００９２】
１つの実施形態において、本開示の抗体分子は、例えば、それぞれ、軽鎖及び重鎖について、配列番号１５並びに２９において示される可変領域を含む全長ＩｇＧ４Ｐフォーマットである。１つの実施形態において、抗体分子は、配列番号２２に示される配列を含む軽鎖及び配列番号４３に示される配列を含む重鎖を有する。
【００９３】
本明細書において利用される、ＩｇＧ４Ｐは、アミノ酸２４１が、プロリンにより置き換えられている、野生型ＩｇＧ４アイソタイプの変異であり、例えば、Ａｎｇａｌら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１９９３年、３０（１）、１０５〜１０８頁に記載される通り、位置２４１におけるセリンは、プロリンに変更されている。
【００９４】
１つの実施形態において、本開示による抗体は、例えば、国際公開第２００９／０４０５６２号、国際公開第２０１００３５０１２号、国際公開第２０１１／０３０１０７号、国際公開第２０１１／０６１４９２号及び国際公開第２０１１／０８６０９１号に記載される通り、免疫グロブリン部分、例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’断片及びそれと直接的若しくは間接的に結合された１つ又は２つの単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）を含むＦｃＲｎ結合抗体融合タンパク質として提供される。
【００９５】
１つの実施形態において、融合タンパク質は、２つのドメイン抗体を、例えば、場合により、ジスルフィド結合により結合された、可変重鎖（ＶＨ）と可変軽鎖（ＶＬ）対として含む。
【００９６】
１つの実施形態において、融合タンパク質のＦａｂ又はＦａｂ’構成要素は、単一ドメイン抗体若しくは複数の抗体に対する同じ又は類似の特異性を有する。１つの実施形態において、Ｆａｂ又はＦａｂ’は、単一ドメイン抗体又は複数の抗体に対する異なる特異性を有し、すなわち、融合タンパク質は多価である。１つの実施形態において、本発明による多価の融合タンパク質は、アルブミン結合部位を有し、例えば、それにおけるＶＨ／ＶＬ対が、アルブミン結合部位をもたらす。１つのかかる実施形態において、重鎖は、配列番号５０に示される配列を含み、軽鎖は、配列番号４６又は配列番号７８に示される配列を含む。
【００９７】
１つの実施形態において、本開示によるＦａｂ又はＦａｂ’は、ＰＥＧ分子又はヒト血清アルブミンに結合される。
【００９８】
ＣＡ１７０＿０１５１９ｇ５７及び１５１９及び１５１９．ｇ５７は、本明細書において互換的に利用され、それらを使用して、いくつもの異なるフォーマットで使用され得る抗体可変領域の特定の対を指す。これらの可変領域は、配列番号２９に示される重鎖配列及び配列番号１５に示される軽鎖配列である（図１）。
【００９９】
抗体分子の提案された機能、特に、要求され得るエフェクター機能に関して有する、本発明の抗体分子の定常領域ドメインが、存在するなら、選択され得る。例えば、定常領域ドメインは、ヒトＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ又はＩｇＭドメインであってもよい。特に、抗体分子が治療上の使用のため意図され、抗体エフェクター機能が要求されるとき、特に、ＩｇＧ１及びＩｇＧ３アイソタイプの、ヒトＩｇＧ定常領域ドメインが使用されてもよい。或いは、抗体分子が、治療目的のため意図され、抗体エフェクター機能が要求されないとき、ＩｇＧ２及びＩｇＧ４アイソタイプが使用されてもよい。これらの定常領域ドメインの配列バリアントがまた使用されてもよいことが、認識される。例えば、Ａｎｇａｌら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１９９３年、３０（１）、１０５〜１０８頁に記載される通り、位置２４１におけるセリンがプロリンに変更されている、ＩｇＧ４分子が使用されてもよい。抗体が、様々な翻訳後修飾を経験してもよいことは、当業者により理解される。これらの修飾のタイプ及び程度は、しばしば、抗体を発現させるために使用される宿主細胞系並びに培養条件に依存する。かかる修飾は、グリコシル化、メチオニン酸化、ジケトピペラジン形成、アスパラギン酸異性体化及びアスパラギン脱アミド化におけるバリエーションを含み得る。高頻度の修飾は、カルボキシペプチダーゼの作用に起因した、カルボキシ末端の塩基性残基（例えば、リシン又はアルギニン）の喪失である（Ｈａｒｒｉｓ、ＲＪ．、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ、７０５：１２９〜１３４頁、１９９５年）。したがって、抗体重鎖のＣ末端のリシンが存在してもよい。
【０１００】
１つの実施形態において、抗体重鎖は、ＣＨ１ドメインを含み、抗体軽鎖は、カッパ又はラムダのいずれかの、ＣＬドメインを含む。
【０１０１】
１つの実施形態において、軽鎖は、配列番号２２に示される配列を有し、重鎖は、配列番号４３に示される配列を有する。
【０１０２】
１つの実施形態において、軽鎖は、配列番号２２に示される配列を有し、重鎖は、配列番号７２に示される配列を有する。
【０１０３】
１つの実施形態において、抗体分子由来のＣ末端のアミノ酸は、翻訳後修飾中に切断される。
【０１０４】
１つの実施形態において、抗体分子由来のＮ末端のアミノ酸は、翻訳後修飾中に切断される。
【０１０５】
本発明により提供される抗体、特に、重鎖配列ｇＨ２０（配列番号２９）及び／若しくは軽鎖配列ｇＬ２０（配列番号１５）を含む抗体により結合される、ヒトＦｃＲｎの特異的領域又はエピトープも本開示により提供される。
【０１０６】
ヒトＦｃＲｎポリペプチドのこの特定の領域又はエピトープは、本発明により提供される抗体のいずれか１つと組み合わせた当該技術分野において公知の任意の適当なエピトープマッピング方法により同定することができる。かかる方法の例は、抗体により認識されるエピトープの配列を含有する抗体に特異的に結合し得る最小の断片を含む、本発明の抗体への結合についてのＦｃＲｎに由来する変動する長さのペプチドをスクリーニングすることを含む。ＦｃＲｎペプチドは、合成的、又はＦｃＲｎポリペプチドのタンパク質消化により生成されてもよい。抗体に結合するペプチドは、例えば、質量分析により同定することができる。別の例において、ＮＭＲ分光法又はＸ線結晶解析を使用して、本発明の抗体により結合されるエピトープを同定することができる。同定されると、本発明の抗体に結合するエピトープ断片は、要求されるなら、同じエピトープに結合するさらなる抗体を得るための免疫原として使用することができる。
【０１０７】
１つの実施形態において、本開示の抗体は、以下に示されるヒトＦｃＲｎアルファ鎖細胞外配列に結合する：
【数１】
2020523419.tif 000003
（配列番号９４）。
【０１０８】
下線を引かれた残基は、ヒトＦｃＲｎのヒトＩｇＧのＦｃ領域との相互作用に重要であることが知られたものであり、太字で強調された残基は、重鎖配列ｇＨ２０（配列番号２９）及び軽鎖配列ｇＬ２０（配列番号１５）を含む本開示の１５１９抗体とのＦｃＲｎの相互作用に関与するものである。
【０１０９】
１つの例において、本発明は、配列番号９４の残基Ｖ１０５、Ｐ１０６、Ｔ１０７、Ａ１０８及びＫ１０９からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸並びに少なくとも１つの残基、例えば、配列番号９４のＰ１００、Ｅ１１５、Ｅ１１６、Ｆ１１７、Ｍ１１８、Ｎ１１９、Ｆ１２０、Ｄ１２１、Ｌ１２２、Ｋ１２３、Ｑ１２４、Ｇ１２８、Ｇ１２９、Ｄ１３０、Ｗ１３１、Ｐ１３２及びＥ１３３からなる群から選択される少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個の残基を含むヒトＦｃＲｎのエピトープに結合する抗ＦｃＲｎ抗体分子を提供する。
【０１１０】
１つの例において、抗体分子のエピトープは、β２Ｍとの複合体におけるＦｃＲｎアルファ鎖細胞外配列（配列番号９４）を使用したＸ線結晶解析により決定される。
【０１１１】
１つの例において、本発明は、配列番号９４の残基Ｖ１０５、Ｐ１０６、Ｔ１０７、Ａ１０８及びＫ１０９からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸並びに少なくとも１つの残基、例えば、配列番号９４のＥ１１５、Ｅ１１６、Ｆ１１７、Ｍ１１８、Ｎ１１９、Ｆ１２０、Ｄ１２１、Ｌ１２２、Ｋ１２３及びＱ１２４からなる群から選択される少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個の残基を含むヒトＦｃＲｎのエピトープに結合する抗ＦｃＲｎ抗体分子を提供する。
【０１１２】
１つの例において、本発明は、配列番号９４の残基Ｖ１０５、Ｐ１０６、Ｔ１０７、Ａ１０８及びＫ１０９からなる群から選択される少なくとも２、３、４又は５つのアミノ酸並びに配列番号９４のＥ１１５、Ｅ１１６、Ｆ１１７、Ｍ１１８、Ｎ１１９、Ｆ１２０、Ｄ１２１、Ｌ１２２、Ｋ１２３及びＱ１２４からなる群から選択される少なくとも１つの残基を含むヒトＦｃＲｎのエピトープに結合する抗ＦｃＲｎ抗体分子を提供する。
【０１１３】
１つの例において、本発明は、配列番号９４の残基Ｖ１０５、Ｐ１０６、Ｔ１０７、Ａ１０８及びＫ１０９からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸並びに配列番号９４のＰ１００、Ｅ１１５、Ｅ１１６、Ｆ１１７、Ｍ１１８、Ｎ１１９、Ｆ１２０、Ｄ１２１、Ｌ１２２、Ｋ１２３、Ｑ１２４、Ｇ１２８、Ｇ１２９、Ｄ１３０、Ｗ１３１、Ｐ１３２及びＥ１３３からなる群から選択される少なくとも１つの残基を含むヒトＦｃＲｎのエピトープに結合する抗ＦｃＲｎ抗体分子を提供する。
【０１１４】
１つの例において、本発明は、配列番号９４の残基Ｖ１０５、Ｐ１０６、Ｔ１０７、Ａ１０８及びＫ１０９からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸並びに配列番号９４のＰ１００、Ｍ１１８、Ｎ１１９、Ｆ１２０、Ｄ１２１、Ｌ１２２、Ｋ１２３、Ｑ１２４及びＧ１２８からなる群から選択される少なくとも１つの残基を含むヒトＦｃＲｎのエピトープに結合する抗ＦｃＲｎ抗体分子を提供する。
【０１１５】
１つの例において、本発明は、配列番号９４の残基Ｖ１０５、Ｐ１０６、Ｔ１０７、Ａ１０８及びＫ１０９並びに配列番号９４のＰ１００、Ｍ１１８、Ｎ１１９、Ｆ１２０、Ｄ１２１、Ｌ１２２、Ｋ１２３、Ｑ１２４及びＧ１２８からなる群から選択される少なくとも１つの残基を含むヒトＦｃＲｎのエピトープに結合する抗ＦｃＲｎ抗体分子を提供する。
【０１１６】
１つの例において、本発明は、配列番号９４の残基Ｖ１０５、Ｐ１０６、Ｔ１０７、Ａ１０８及びＫ１０９並びに配列番号９４のＰ１００、Ｅ１１５、Ｅ１１６、Ｆ１１７、Ｍ１１８、Ｎ１１９、Ｆ１２０、Ｄ１２１、Ｌ１２２、Ｋ１２３、Ｑ１２４、Ｇ１２８、Ｇ１２９、Ｄ１３０、Ｗ１３１、Ｐ１３２及びＥ１３３からなる群から選択される少なくとも１つの残基を含むヒトＦｃＲｎのエピトープに結合する抗ＦｃＲｎ抗体分子を提供する。
【０１１７】
１つの例において、本発明は、配列番号９４の残基Ｐ１００、Ｖ１０５、Ｐ１０６、Ｔ１０７、Ａ１０８及びＫ１０９並びに配列番号９４のＥ１１５、Ｅ１１６、Ｆ１１７、Ｍ１１８、Ｎ１１９、Ｆ１２０、Ｄ１２１、Ｌ１２２、Ｋ１２３、Ｑ１２４、Ｇ１２８、Ｇ１２９、Ｄ１３０、Ｗ１３１、Ｐ１３２及びＥ１３３からなる群から選択される少なくとも１つの残基を含むヒトＦｃＲｎのエピトープに結合する抗ＦｃＲｎ抗体分子を提供する。
【０１１８】
１つの例において、「少なくとも１つの残基」は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又は１６の残基であってもよい。
【０１１９】
１つの例において、本発明は、配列番号９４の残基１００、１０５〜１０９、１１５〜１２４及び１２９〜１３３を含むか、又はからなるヒトＦｃＲｎのエピトープに結合する抗ＦｃＲｎ抗体分子を提供する。
【０１２０】
本発明による抗体分子の結合を交差遮断する抗体、特に、配列番号２９に示される重鎖配列及び配列番号１５に示される軽鎖配列を含む抗体分子は、ＦｃＲｎ活性を遮断するのに同様に有用であり得る。したがって、本発明はまた、本明細書において上で記載された抗体分子のいずれか１つのヒトＦｃＲｎへの結合を交差遮断し、及び／又はこれらの抗体のいずれか１つによりヒトＦｃＲｎへの結合が交差遮断される、抗ＦｃＲｎ抗体分子を提供する。１つの実施形態において、かかる抗体は、本明細書において上で記載された抗体と同じエピトープに結合する。別の実施形態において、交差遮断する中和抗体は、本明細書において上で記載された抗体により結合されるエピトープと接し、及び／又は重複するエピトープに結合する。
【０１２１】
交差遮断抗体は、当該技術分野における任意の適当な方法を使用して、例えば、交差遮断抗体のヒトＦｃＲｎへの結合が、本発明の抗体の結合を妨げるか、又は逆も同様である、競合的ＥＬＩＳＡ又はＢＩＡコアアッセイを使用することにより、同定することができる。かかる交差遮断アッセイは、単離された天然若しくは組換えＦｃＲｎ又は適当な融合タンパク質／ポリペプチドを使用してもよい。１つの例において、結合及び交差遮断は、組換えヒトＦｃＲｎ細胞外ドメイン（配列番号９４）を使用して測定される。１つの例において、組換えヒトＦｃＲｎアルファ鎖細胞外ドメインは、β２ミクログロブリン（β２Ｍ）（配列番号９５）との複合体で使用される。
【０１２２】
１つの実施形態において、ＩｇＧへのＦｃＲｎ結合を遮断する抗ＦｃＲｎ抗体分子、及び重鎖が、配列番号２９に示される配列を含み、軽鎖が、配列番号１５に示される配列を含む、抗体のヒトＦｃＲｎへの結合を交差遮断する抗ＦｃＲｎ抗体分子が提供される。１つの実施形態において、本発明により提供される交差遮断抗体は、配列番号２９に示される重鎖配列及び配列番号１５に示される軽鎖配列を含む抗体の結合を、８０％より高く、例えば、８５％より高く、例えば、９０％より高く、特に、９５％より高く、阻害する。
【０１２３】
或いは又は加えて、本発明のこの態様による抗ＦｃＲｎ抗体は、配列番号２９に示される重鎖配列及び配列番号１５に示される軽鎖配列を含む抗体により、ヒトＦｃＲｎへの結合が交差遮断されてもよい。それ故、ＩｇＧへのＦｃＲｎ結合を遮断する抗ＦｃＲｎ抗体分子並びに配列番号２９に示される重鎖配列及び配列番号１５に示される軽鎖配列を含む抗体により、ヒトＦｃＲｎへの結合が交差遮断される抗ＦｃＲｎ抗体分子がまた、提供される。１つの実施形態において、本発明のこの態様により提供される抗ＦｃＲｎ抗体は、配列番号２９に示される重鎖配列及び配列番号１５に示される軽鎖配列を含む抗体により、ヒトＦｃＲｎへの結合を、８０％より高く、例えば、８５％より高く、９０％より高く、特に、９５％より高く、阻害する。
【０１２４】
１つの実施形態において、本発明により提供される交差遮断抗体は、完全なヒトである。１つの実施形態において、本発明により提供される交差遮断抗体は、ヒト化されている。１つの実施形態において、本発明により提供される交差遮断抗体は、１００ｐＭ以下のヒトＦｃＲｎに対する親和性を有する。１つの実施形態において、本発明により提供される交差遮断抗体は、５０ｐＭ以下のヒトＦｃＲｎに対する親和性を有する。親和性は、本明細書において以下で記載される方法を使用して測定することができる。
【０１２５】
抗体又は断片のような、生物学的分子は、酸性及び／又は塩基性の官能基を含有し、これにより、分子に正味の正又は負の電荷を付与する。全体的な「観察される」電荷の量は、実体の絶対的なアミノ酸配列、３Ｄ構造の荷電基の局所環境及び分子の環境条件に依存する。等電点（ｐＩ）は、特定の分子又はその溶媒が許容可能な表面が、正味の電気的な電荷を有さない、ｐＨである。１つの例において、本発明のＦｃＲｎ抗体及び断片を操作して、適当な等電点を有してもよい。これは、より強固な特性、特に、適当な溶解性及び／若しくは安定性特性並びに／又は改善された精製特徴を有する抗体並びに／或いは断片を生じ得る。
【０１２６】
したがって、１つの態様において、本発明は、元々同定された抗体のものと異なる等電点を有するよう操作されたヒト化ＦｃＲｎ抗体を提供する。抗体は、例えば、酸性のアミノ酸残基を１つ又は複数の塩基性のアミノ酸残基で置き換えることのような、アミノ酸残基を置き換えることにより、操作されてもよい。或いは、塩基性のアミノ酸残基が、導入されてもよいか、又は酸性のアミノ酸残基を、除去することができる。或いは、分子が、許容できない高いｐＩ値を有するなら、酸性残基を導入して、要求されるｐＩまで下げてもよい。ｐＩを操作するとき、抗体又は断片の所望の活性を保持することに注意しなければならないことは、重要である。したがって、１つの実施形態において、操作された抗体又は断片は、「修飾されていない」抗体若しくは断片と同じ又は実質的に同じ活性を有する。
【０１２７】
＊＊ＥｘＰＡＳＹ  ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｘｐａｓｙ．ｃｈ／ｔｏｏｌｓ／ｐｉ＿ｔｏｏｌ．ｈｔｍｌ、及び
ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｕｔ−ａｒｌｅｓ．ｕｐ．ｕｎｉｖ−ｍｒｓ．ｆｒ／ｗ３ｂｂ／ｄ＿ａｂｉｍ／ｃｏｍｐｏ−ｐ．ｈｔｍｌのようなプログラムを使用して、抗体又は断片の等電点を推定してもよい。
【０１２８】
本発明の抗体分子は、適当には、高い結合親和性、特に、ナノモルの範囲の高い結合親和性を有する。親和性は、単離された天然又は組換えＦｃＲｎ又は適当な融合タンパク質／ポリペプチドを使用し、本明細書における実施例に記載される、ＢＩＡコアを含む、当該技術分野において公知の任意の適当な方法を使用して測定され得る。１つの例において、親和性は、本明細書における実施例及び国際公開第２０１４／０１９７２７号に記載される組換えヒトＦｃＲｎ細胞外ドメイン（配列番号９４）を使用して測定される。１つの例において、親和性は、β２ミクログロブリン（β２Ｍ）（配列番号９５）と関連して組換えヒトＦｃＲｎアルファ鎖細胞外ドメイン（配列番号９４）を使用して測定される。適当には、本発明の抗体分子は、約１ｎＭ以下の単離されたヒトＦｃＲｎに対する結合親和性を有する。１つの実施形態において、本発明の抗体分子は、約５００ｐＭ以下の結合親和性（すなわち、より高い親和性）を有する。１つの実施形態において、本発明の抗体分子は、約２５０ｐＭ以下の結合親和性を有する。１つの実施形態において、本発明の抗体分子は、約２００ｐＭ以下の結合親和性を有する。１つの実施形態において、本発明は、約１００ｐＭ以下の結合親和性を有する抗ＦｃＲｎ抗体を提供する。１つの実施形態において、本発明は、約１００ｐＭ以下の結合親和性を有するヒト化抗ＦｃＲｎ抗体を提供する。１つの実施形態において、本発明は、５０ｐＭ以下の結合親和性を有する抗ＦｃＲｎ抗体を提供する。
【０１２９】
重要なことに、本発明の抗体は、同等の結合親和性でｐＨ６とｐＨ７．４の両方においてヒトＦｃＲｎに結合することができる。それ故、有利には、抗体は、エンドソーム内でさえＦｃＲｎに結合し続け、これにより、ＩｇＧへのＦｃＲｎ結合の遮断を最大にすることができる。
【０１３０】
１つの実施形態において、本発明は、ｐＨ６及びｐＨ７．４において測定されたとき、１００ｐＭ以下の結合親和性を有する抗ＦｃＲｎ抗体を提供する。１つの実施形態において、本発明における使用のための抗体は、ｐＨ６及びｐＨ７．４において測定されたとき、５０ｐＭ以下の結合親和性を有する抗ＦｃＲｎ抗体である。
【０１３１】
本発明の抗体又は結合性断片の親和性、並びに結合剤（例えば、抗体）が結合を阻害するその程度は、従来の技術、例えば、Ｓｃａｔｃｈａｒｄら、（Ａｎｎ．ＫＹ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、５１：６６０〜６７２頁（１９４９年））により記載されるものを使用して又はＢＩＡコアのようなシステムを使用した表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により、当業者により決定され得る。表面プラズモン共鳴のため、標的分子が、固相に固定され、フローセルに沿って流れる移動層においてリガンドに曝露される。固定された標的へのリガンド結合が生じるなら、屈折した光の強度における変化を検出することによりリアルタイムでモニターすることができる、局所屈折率が変化し、ＳＰＲアングルにおける変化を生じる。ＳＰＲシグナルの変化速度を解析して、結合反応の結合及び解離フェーズの明らかな速度定位数を得ることができる。これらの値の割合は、明らかな平衡定数（親和性）を付与する（例えば、Ｗｏｌｆｆら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ、５３：２５６０〜６５頁（１９９３年）を参照）。
【０１３２】
本発明において、試験抗体分子の親和性は、典型的には、以下の通り、ＳＰＲを使用して決定される。試験抗体分子は、固相上で捕獲され、β２Ｍとの非共有結合複合体におけるヒトＦｃＲｎアルファ鎖細胞外ドメインは、移動層において捕獲された抗体上を流れ、ヒトＦｃＲｎに対する試験抗体分子の親和性が決定される。試験抗体分子は、任意の適当な方法を使用して、例えば、抗Ｆｃ又は抗Ｆａｂ’特異的捕獲剤を使用して、固相チップ表面上に捕獲されてもよい。１つの例において、親和性は、ｐＨ６において決定される。１つの例において、親和性は、ｐＨ７．４において決定される。
【０１３３】
本発明により提供される抗体の親和性は、当該技術分野において公知の任意の好適な方法を使用して変化され得ることは、認識される。それ故、本発明はまた、ＦｃＲｎに対する改善された親和性を有する、本発明の抗体分子のバリアントに関する。かかるバリアントは、ＣＤＲを変異させること（Ｙａｎｇら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２５４、３９２〜４０３、１９９５年）、鎖の混合（Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０、７７９〜７８３頁、１９９２年）、エシェリキア・コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）の変異誘発株の使用（Ｌｏｗら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２５０、３５９〜３６８頁、１９９６年）、ＤＮＡの混合（Ｐａｔｔｅｎら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、８、７２４〜７３３頁、１９９７年）、ファージディスプレイ（Ｔｈｏｍｐｓｏｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２５６、７７〜８８頁、１９９６年）及び性ＰＣＲ（Ｃｒａｍｅｒｉら、Ｎａｔｕｒｅ、３９１、２８８〜２９１頁、１９９８年）を含む多数の親和性成熟プロトコールにより得ることができる。Ｖａｕｇｈａｎら（上）は、親和性成熟のこれらの方法を考察する。
【０１３４】
１つの実施形態において、本発明の抗体分子は、ヒトＦｃＲｎ活性を遮断する。ＦｃＲｎを遮断する抗体の能力を決定するのに適当なアッセイは、国際公開第２０１４／０１９７２７号に記載される。抗体が、循環ＩｇＧ分子とのＦｃＲｎ相互作用を遮断するかどうかを決定するための適当なアッセイはまた、抗体分子のＩｇＧのインビトロでの再利用を遮断する能力を決定する適当なアッセイと共に、国際公開第２０１４／０１９７２７号に記載される。
【０１３５】
所望されるなら、本発明における使用のための抗体は、１つ又は複数のエフェクター分子（単数又は複数）に結合されてもよい。エフェクター分子が、本発明の抗体に結合され得る単一部分を形成するように結合される単一のエフェクター分子又は２つ以上のかかる分子を含んでもよいことは、認識される。エフェクター分子に結合された抗体断片を得ることが望まれる場合、これは、抗体断片が、エフェクター分子に直接若しくはカップリング剤を介して結合される、標準的化学又は組換えＤＮＡ手法により調製されてもよい。かかるエフェクター分子を抗体に結合させる技術は、当該技術分野において周知である（Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら、Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ、第２編、Ｒｏｂｉｎｓｏｎら編、１９８７年、６２３〜５３頁；Ｔｈｏｒｐｅら、１９８２年、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．、６２：１１９〜５８頁及びＤｕｂｏｗｃｈｉｋら、１９９９年、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、８３、６７〜１２３頁を参照）。特定の化学的手法は、例えば、国際公開第９３／０６２３１号、国際公開第９２／２２５８３号、国際公開第８９／００１９５号、国際公開第８９／０１４７６号及び国際公開第０３／０３１５８１号に記載されるものを含む。或いは、エフェクター分子が、タンパク質又はポリペプチドである場合、結合は、組換えＤＮＡ手法、例えば、国際公開第８６／０１５３３号及び欧州特許第０３９２７４５号に記載される組換えＤＮＡ手法を使用して達成されてもよい。
【０１３６】
本明細書において使用される、用語エフェクター分子は、例えば、抗腫瘍剤、薬物、毒素、生物学的に活性なタンパク質、例えば、酵素、他の抗体又は抗体断片、合成又は天然に生じるポリマー、核酸及びその断片、例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ及びその断片、放射性核種、特に、放射性ヨウ化物、ラジオアイソトープ、キレートされた金属、ナノ粒子並びにＮＭＲ又はＥＳＲ分光法により検出される得る蛍光化合物又は化合物のようなレポーター基を含む。
【０１３７】
エフェクター分子の例は、細胞を（例えば、殺傷する）ための有害である任意の剤を含む細胞毒素又は細胞毒性剤を含んでもよい。例は、コンブレタスタチン、ドラスタチン、エポチロン、スタウロスポリン、メイタンシノイド、スポンジスタチン、リゾキシン、ハリコンドリン、ロリジン、ヘミアステリン、タクソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テニポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラセンジオン、ミトキサントロン、ミスラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、及びピューロマイシン並びにその類似体又は相同体を含む。
【０１３８】
エフェクター分子はまた、代謝拮抗物質（例えば、メトトレキサート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルデカルバジン）、アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオエパクロラムブチル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）及びロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロトスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、及びシス−ジクロロジアンミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（以前のダウノマイシン）及びドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（以前のアクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミスラマイシン、アントラマイシン（ＡＭＣ）、カリチアマイシン又はズオカルマイシン）、並びに抗有糸分裂剤（例えば、ビンクリスチン及びビンブラスチン）を含むが、これらに限定されない。
【０１３９】
他のエフェクター分子は、１１１Ｉｎ及び９０Ｙ、Ｌｕ１７７、ビスマス２１３、カリホルニウム２５２、イリジウム１９２及びタングステン１８８／レニウム１８８のようなキレートされた放射性核種；又は非限定的に、アルキルホスホコリン、トポイソメラーゼＩ阻害剤、タキソイド及びスラミンのような薬物を含み得る。
【０１４０】
他のエフェクター分子は、タンパク質、ペプチド及び酵素を含む。対象となる酵素は、タンパク分解酵素、加水分解酵素、リアーゼ、イソメラーゼ、トランスフェラーゼを含むが、これらに限定されない。対象となるタンパク質、ポリペプチド及びペプチドは、免疫グロブリン、アブリン、リシンＡ、シュードモナス外毒素、又はジフテリア毒素のような毒素、インスリン、腫瘍壊死因子、α−インターフェロン、β−インターフェロン、神経成長因子、血小板由来成長因子又は組織プラスミノーゲンアクチベーターのようなタンパク質、血栓性剤又は抗血管新生剤、例えば、アンジオスタチン若しくはエンドスタチン、又はリンホカイン、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、顆粒球マクロファージ刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、神経成長因子（ＮＧＦ）若しくは他の成長因子及び免疫グロブリンのような生物学的応答修飾因子を含むが、これらに限定されない。
【０１４１】
他のエフェクター物質は、例えば、診断において有用な検出可能な物質を含んでもよい。検出可能な物質の例は、様々な酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質、生物発光物質、放射性核種、ポジトロン放出金属（ポジトロン放出断層撮影における使用のため）、及び非放射性常磁性金属イオンを含む。一般に、診断として使用するための抗体に結合され得る金属イオンについて、米国特許第４，７４１，９００号を参照する。好適な酵素は、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ベータ−ガラクトシダーゼ、又はアセチルコリンエステラーゼを含み；好適な補欠分子族は、ストレプトアビジン、アビジン及びビオチンを含み；好適な蛍光物質は、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリド及びフィコエリトリンを含み；好適な発光物質は、ルミノールを含み；適当な生物発光物質は、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、及びエクオリンを含み；好適な放射性は、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１１１Ｉｎ及び９９Ｔｃを含む。
【０１４２】
別の例において、エフェクター分子は、インビボでの抗体の半減期を増大させ、及び／又は抗体の免疫原性を低減し、及び／又は上皮バリアを超えた免疫システムへの抗体の送達を含んでもよい。このタイプの適当なエフェクター分子の例は、ポリマー、アルブミン、アルブミン結合タンパク質又は国際公開第０５／１１７９８４号に記載されるもののようなアルブミン結合化合物を含む。
【０１４３】
１つの実施形態において、ＦｃＲｎと独立してエフェクター分子によりもたらされる半減期は、有利である。
【０１４４】
エフェクター分子がポリマーである場合、それは、一般に、合成又は天然に生じるポリマー、例えば、場合により、置換された直鎖若しくは分岐鎖ポリアルキレン、ポリアルケニレン若しくはポリオキシアルキレンポリマー、又は分岐若しくは非分岐多糖、例えば、ホモ−若しくはヘテロ−多糖であってもよい。
【０１４５】
上述の合成ポリマー上に存在し得る特定の任意の置換基は、１つ若しくは複数のヒドロキシ、メチル又はメトキシ基を含む。
【０１４６】
合成ポリマーの特定の例は、場合により、置換された直鎖若しくは分岐鎖ポリ（エチレングリコール）、ポリ（プロピレングリコール）ポリ（ビニルアルコール）又はその誘導体、特に、場合により、メトキシポリ（エチレングリコール）又はその誘導体のような置換されたポリ（エチレングリコール）を含む。
【０１４７】
特定の天然に生じるポリマーは、ラクトース、アミロース、デキストラン、グリコーゲン又はその誘導体を含む。
【０１４８】
１つの実施形態において、ポリマーは、ヒト血清アルブミン若しくはその断片のような、アルブミン又はその断片である。
【０１４９】
本明細書において使用される、「誘導体」は、反応性誘導体、例えば、アレイミド等のようなチオール選択性反応基を含むことが意図される。反応基は、ポリマーに直接又はポリマーのリンカーセグメントを通じて結合されてもよい。かかる基の残基は、ある場合では、抗体断片とポリマーの間の結合基として製品の一部を形成することが、認識される。
【０１５０】
ポリマーのサイズは、所望される通り変動されてもよいが、一般に、平均分子量５００Ｄａ〜５００００Ｄａ、例えば、５０００〜４００００Ｄａ、例えば、２００００〜４００００Ｄａの範囲内にある。ポリマーサイズは、特に、製品の意図される使用、例えば、腫瘍のようなある特定の組織に局在化させる又は循環半減期を延長する能力に基づき選択されてもよい（概要については、Ｃｈａｐｍａｎ、２００２年、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ、５４、５３１〜５４５頁を参照）。したがって、例えば、製品が、例えば、腫瘍の処置における使用のため、循環から離れ、組織に浸透することが意図される場合、小分子量ポリマー、例えば、およそ５０００Ｄａの分子量を有するポリマーを使用することが有利であり得る。製品が循環にとどまる適用のため、より大きい分子量ポリマー、例えば、２００００Ｄａ〜４００００Ｄａの範囲内の分子量を有するポリマーを使用することが有利であり得る。
【０１５１】
好適なポリマーは、ポリ（エチレングリコール）のような、ポリアルキレンポリマー又は特に、メトキシポリ（エチレングリコール）若しくはその誘導体、及び特に、約１５０００Ｄａ〜約４００００Ｄａの範囲内の分子量を有するものを含む。
【０１５２】
１つの例において、本発明における使用のための抗体は、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）部分に結合される。１つの特定の例において、抗体は、抗体断片であり、ＰＥＧ分子は、抗体断片に位置する任意の利用可能なアミノ酸側鎖又は末端のアミノ酸官能基、例えば、任意の遊離アミノ、イミノ、チオール、ヒドロキシル又はカルボキシル基を通じて結合されてもよい。かかるアミノ酸は、抗体断片において天然に生じてもよいか、又は組換えＤＮＡ方法（例えば、米国特許第５，２１９，９９６号；米国特許第５，６６７，４２５号；国際公開第９８／２５９７１号、国際公開第２００８／０３８０２４号を参照）を使用して、断片に操作されてもよい。１つの例において、本発明の抗体分子は、修飾が、エフェクター分子の結合を可能にする１つ又は複数のアミノ酸のその重鎖のＣ末端への付加である、修飾されたＦａｂ断片である。好適には、さらなるアミノ酸が、エフェクター分子が結合される１つ又は複数のシステイン残基を含有する修飾されたヒンジ領域を形成する。複数部位を使用して、２つ以上のＰＥＧ分子を結合することができる。
【０１５３】
好適には、ＰＥＧ分子は、抗体断片に位置する少なくとも１つのシステイン残基のチオール基を通じて共有結合される。修飾された抗体断片に結合されたそれぞれのポリマー分子は、断片に位置するシステイン残基の硫黄原子に共有結合されてもよい。共有結合は、一般に、ジスルフィド結合又は、特に、硫黄と炭素結合である。チオール基は、結合ポイントして使用される場合、活性化されたエフェクター分子、例えば、マレイミド及びシステイン誘導体のようなチオール選択性誘導体が使用されてもよい。活性化されたポリマーは、上で記載されたポリマー修飾された抗体断片の調製における出発材料として使用されてもよい。活性化されたポリマーは、α−ハロカルボン酸又はエステル、例えば、ヨードアセトアミド、イミド、例えば、マレイミド、ビニルスルホン又はジスルフィドのようなチオール反応基を含有する任意のポリマーであってもよい。かかる出発材料は、市販で得られてもよいか（例えば、Ｎｅｋｔａｒ、ｆｏｒｍｅｒｌｙ  Ｓｈｅａｒｗａｔｅｒ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ  Ｉｎｃ．、Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ、ＡＬ、米国）、又は従来の化学的手法を使用して、市販の出発材料から調製されてもよい。特定のＰＥＧ分子は、２０Ｋのメトキシ−ＰＥＧ−アミン（Ｎｅｋｔａｒ、ｆｏｒｍｅｒｌｙ  Ｓｈｅａｒｗａｔｅｒ；Ｒａｐｐ  Ｐｏｌｙｍｅｒｅ；及びＳｕｎＢｉｏから得られる）及びＭ−ＰＥＧ−ＳＰＡ（Ｎｅｋｔａｒ、ｆｏｒｍｅｒｌｙ  Ｓｈｅａｒｗａｔｅｒから得られる）を含む。
【０１５４】
１つの実施形態において、抗体は、修飾されたＦａｂ断片、Ｆａｂ’断片又はＰＥＧ化されているｄｉＦａｂであり、すなわち、例えば、欧州特許第０９４８５４４号又は欧州特許第１０９００３７号に記載される方法に従い、それに共有結合されたＰＥＧ（ポリ（エチレングリコール））を有する［「Ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ）  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」、１９９２年、Ｊ．Ｍｉｌｔｏｎ  Ｈａｒｒｉｓ（編）、Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、「Ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ）  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ」、１９９７年、Ｊ．Ｍｉｌｔｏｎ  Ｈａｒｒｉｓ及びＳ．  Ｚａｌｉｐｓｋｙ（編）、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  ＤＣ及び「Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｏｕｐｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、１９９８年、Ｍ．Ａｓｌａｍ及びＡ．Ｄｅｎｔ、Ｇｒｏｖｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ｃｈａｐｍａｎ、Ａ．、２００２年、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ、２００２年、５４：５３１〜５４５頁を参照］。１つの例において、ＰＥＧは、ヒンジ領域におけるシステインに結合される。１つの例において、ＰＥＧ修飾Ｆａｂ断片は、修飾されたヒンジ領域における単一のチオール基に共有結合されたマレイミド基を有する。リシン残基は、マレイミド基又はおよそ２０，０００Ｄａの分子量を有するメトキシポリ（エチレングリコール）ポリマーに結合され得るリシン残基上のアミン基のそれぞれに共有結合されてもよい。それ故、Ｆａｂ断片に結合されたＰＥＧの総分子量は、およそ４０，０００Ｄａであってもよい。
【０１５５】
特定のＰＥＧ分子は、ＰＥＧ２ＭＡＬ４０Ｋ（Ｎｅｋｔａｒ、以前のＳｈｅａｒｗａｔｅｒから得られる）としても知られる、Ｎ，Ｎ’−ビス（メトキシポリ（エチレングリコール）ＭＷ２０，０００）修飾リシンの２−［３−（Ｎ−マレイミド）プロピオナミド］エチルアミドを含む。
【０１５６】
ＰＥＧリンカーの代替の供給源は、ＧＬ２−４００ＭＡ３（式中、以下の構造におけるｍが、５である）及びＧＬ２−４００ＭＡ（式中、ｍが２である）を供給するＮＯＦを含み、ｎは、およそ４５０である。
【化１】
2020523419.tif 000004
【０１５７】
すなわち、それぞれのＰＥＧは、約２０，０００Ｄａである。
【０１５８】
したがって、１つの実施形態において、ＰＥＧは、ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ  ＧＬ２−４００ＭＡ３としても知られる、２，３−ビス（メチルポリオキシエチレン−オキシ）−１−｛［３−（６−マレイミド−１−オキソヘキシル）アミノ］プロピルオキシ｝ヘキサン（２つのアームの分岐ＰＥＧ、−ＣＨ２）３ＮＨＣＯ（ＣＨ２）５−ＭＡＬ、Ｍｗ４０，０００である。
【０１５９】
次のタイプのさらなる代替のＰＥＧエフェクター分子：
【化２】
2020523419.tif 000005
は、Ｄｒ  Ｒｅｄｄｙ、ＮＯＦ及びＪｅｎｋｅｍから入手可能である。
【０１６０】
１つの実施形態において、鎖におけるアミノ酸２２６における又はその周囲のシステインアミノ酸残基、例えば、重鎖のアミノ酸２２６（連続的ナンバリングによる）、例えば、配列番号３６のアミノ酸２２６を通じて結合された、（例えば、本明細書に記載されるＰＥＧを用いて）ＰＥＧ化されている抗体が提供される。
【０１６１】
１つの実施形態において、本開示は、１つ又は複数のＰＥＧポリマー、例えば、４０ｋＤａのポリマー若しくは複数のポリマーのような１又は２つのポリマーを含むＦａｂ’ＰＥＧ分子を提供する。
【０１６２】
１つの実施形態において、ＰＥＧ分子、スターチ分子又はアルブミン分子のような、ポリマーに結合されたＦａｂ’が提供される。
【０１６３】
１つの実施形態において、ＰＥＧ分子、スターチ分子又はアルブミン分子のような、ポリマーに結合されたｓｃＦｖが提供される。
【０１６４】
１つの実施形態において、抗体又は断片を、スターチ分子に結合して、例えば、半減期を増大させる。参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第８，０１７，７３９号に記載される、スターチをタンパク質に結合させる方法。
【０１６５】
１つの実施形態において、
・血漿ＩｇＧ濃度の７０％の低減を引き起こし、
・血漿アルブミン濃度の２０％以下の低減を伴い、及び／又は
・低い血漿ＩｇＧ濃度の長期維持を達成する繰り返し用量の可能性を有する
抗ＦｃＲｎ結合分子が提供される。
【０１６６】
本開示はまた、本発明の抗体分子の重鎖及び／又は軽鎖（単数又は複数）をコードする単離されたＤＮＡ配列を提供する。適当には、ＤＮＡ配列は、本発明の抗体分子の重鎖又は軽鎖をコードする。本発明のＤＮＡ配列は、合成ＤＮＡ、例えば、化学処理、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ又はその任意の組み合わせにより作製される合成ＤＮＡを含んでもよい。
【０１６７】
本発明の抗体分子をコードするＤＮＡ配列は、当業者に周知の方法により得ることができる。例えば、抗体重鎖及び軽鎖の一部又は全てをコードするＤＮＡ配列は、決定されたＤＮＡ配列から、又は対応するアミノ酸配列に基づき、所望される通り合成されてもよい。
【０１６８】
アクセプターフレームワーク配列をコードするＤＮＡは、当業者にとって広く利用可能であり、それらの公知のアミノ酸配列に基づき、容易に合成することができる。
【０１６９】
分子生物学の標準的な技術を使用して、本発明の抗体をコードするＤＮＡ配列を調製してもよい。所望されるＤＮＡ配列は、オリゴヌクレオチド合成技術を使用して、全体又は一部合成されてもよい。部位特異的変異誘発及びポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技術が、適当なものとして使用されてもよい。
【０１７０】
好適なＤＮＡ配列の例が、本明細書において提供される。
【０１７１】
１５１９軽鎖可変領域をコードする好適なＤＮＡ配列の例は、配列番号１６、配列番号１７及び配列番号９０において提供される。１５１９重鎖可変領域をコードする適当なＤＮＡ配列の例は、配列番号３０、配列番号３１及び配列番号９２において提供される。
【０１７２】
１５１９軽鎖（可変及び定常）をコードする適当なＤＮＡ配列の例は、配列番号２３、配列番号７５及び配列番号９１において提供される。
【０１７３】
１５１９重鎖（可変及び定常、フォーマットに依存する）をコードする適当なＤＮＡ配列の例は、配列番号３７、３８及び７６（Ｆａｂ’）、配列番号７２又は８５（ＩｇＧ１）、配列番号４４又は９３（ＩｇＧ４Ｐ）及び配列番号８８（ＩｇＧ４）において提供される。
【０１７４】
したがって、１つの例において、本開示は、配列番号３７に示される配列を含む、本発明の抗体Ｆａｂ’断片の重鎖をコードする単離されたＤＮＡ配列を開示する。配列番号２３に示される配列を含む、本発明の抗体Ｆａｂ’断片の軽鎖をコードする単離されたＤＮＡ配列がまた、提供される。
【０１７５】
１つの例において、本開示は、重鎖をコードするＤＮＡが、配列番号４４又は配列番号９３に示される配列を含み、軽鎖をコードするＤＮＡが、配列番号７５又は配列番号９１に示される配列を含む、本発明のＩｇＧ４（Ｐ）抗体の重鎖及び軽鎖をコードする単離されたＤＮＡ配列を提供する。
【０１７６】
１つの例において、本開示は、重鎖をコードするＤＮＡが、配列番号５１又は配列番号８０に示される配列を含み、軽鎖をコードするＤＮＡが、配列番号４７又は配列番号７９に示される配列を含む、本発明のＦａｂ−ｄｓＦｖ抗体の重鎖及び軽鎖をコードする単離されたＤＮＡ配列を提供する。
【０１７７】
本発明はまた、本発明の１つ若しくは複数のＤＮＡ配列を含むクローニング又は発現ベクターに関する。したがって、本発明の抗体をコードする１つ若しくは複数のＤＮＡ配列を含むクローニング又は発現ベクターが提供される。好適には、クローニング又は発現ベクターは、それぞれ、本発明の抗体分子の軽鎖及び重鎖をコードする、２つのＤＮＡ配列、並びに適当なシグナル配列を含む。１つの例において、ベクターは、重鎖と軽鎖の間の遺伝子間配列を含む（国際公開第０３／０４８２０８号を参照）。
【０１７８】
ベクターが構築され得る一般的な方法、遺伝子導入方法及び培養方法は、当業者に周知である。これに関して、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇにより作成された「分子生物学における現在のプロトコール（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）」、１９９９年、Ｆ．  Ｍ．  Ａｕｓｕｂｅｌ（編）、Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｍａｎｉａｔｉｓ  Ｍａｎｕａｌを参照のこと。
【０１７９】
本発明の抗体をコードする１つ若しくは複数のＤＮＡ配列を含む１つ又は複数のクローニング或いは発現ベクターが提供される。任意の適当な宿主細胞／ベクターシステムが、本発明の抗体分子をコードするＤＮＡ配列の発現のため使用されてもよい。細菌、例えば、エシェリキア・コリ、及び他の微生物システムが使用されてもよいか、又は真核生物、例えば、哺乳類、宿主細胞発現系がまた使用されてもよい。適当な哺乳類宿主細胞は、ＣＨＯ、ミエローマ又はハイブリドーマ細胞を含む。
【０１８０】
本発明における使用のための好適なタイプのチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）は、ＤＨＦＲ選択可能なマーカーとして使用され得る、ＣＨＯ−ＤＧ４４細胞及びＣＨＯ−ＤＸＢ１１細胞のような、ｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞を含むＣＨＯ並びにＣＨＯ−Ｋ１細胞、又はグルタミン合成酵素選択可能なマーカーと共に使用され得るＣＨＯＫ１−ＳＶ細胞を含んでもよい。抗体を発現させる際の他の細胞タイプの使用は、リンパ球細胞系、例えば、ＮＳＯミエローマ細胞及びＳＰ２細胞、ＣＯＳ細胞を含む。
【０１８１】
本開示はまた、本発明のベクターを含有する宿主細胞を、本発明の抗体分子をコードするＤＮＡからのタンパク質の発現を導くのに好適な条件下で培養する工程、及び抗体分子を単離する工程を含む、本発明による抗体分子の作製プロセスを提供する。
【０１８２】
唯一、重鎖又は軽鎖ポリペプチドコード配列が、宿主細胞を遺伝子導入するために使用される必要がある場合において、抗体分子は、重鎖又は軽鎖ポリペプチドのみを含み得る。重鎖と軽鎖の両方を含む製品の作製のため、細胞系統は、２つのベクター、軽鎖ポリペプチドをコードする第１のベクター及び重鎖ポリペプチドをコードする第２のベクターを用いて遺伝子導入されてもよい。或いは、単一のベクター、軽鎖及び重鎖ポリペプチドをコードする配列を含むベクターが、使用されてもよい。
【０１８３】
本開示による抗体及び断片は、宿主細胞から良好なレベルで発現される。したがって、抗体及び／又は断片の特性は、市販の処理の助けとなる。
【０１８４】
したがって、宿主細胞を培養し、抗体又はその断片を発現させ、後に単離し、場合により、単離された抗体又は断片をもたらすのと同じものを精製するプロセスが提供される。１つの実施形態において、プロセスは、エフェクター分子を単離された抗体又は断片に結合させる工程、例えば、ＰＥＧポリマー、特に、本明細書に記載されるＰＥＧポリマーに結合させる工程をさらに含む。
【０１８５】
１つの実施形態において、不純物がカラム上に保持され、抗体が溶出されるような非結合様式において陰イオン交換クロマトグラフィーを行う工程を含む、抗体（特に、本発明による抗体又は断片）を精製するプロセスが提供される。
【０１８６】
１つの実施形態において、精製は、ＦｃＲｎカラム上での親和性捕獲を利用する。
【０１８７】
１つの実施形態において、精製は、チバクロンブルー又はアルブミン融合若しくは結合分子の精製のための類似のものを利用する。
【０１８８】
プロセスにおける使用のための好適なイオン交換樹脂は、Ｑ．ＦＦ樹脂（ＧＥ−Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅにより供給される）を含む。工程は、例えば、ｐＨ約８において行われてもよい。
【０１８９】
プロセスは、例えば、４．５のような、約４〜５のｐＨにおいて行われる、陽イオン交換クロマトグラフィーを利用する開始捕獲工程をさらに含んでもよい。陽イオン交換クロマトグラフィーは、例えば、ＣａｐｔｏＳ樹脂又はＳＰセファロースＦＦ（ＧＥ−Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅにより供給される）のような樹脂を利用してもよい。次に、抗体又は断片は、例えば、２００ｍＭの濃度の、塩化ナトリウムのようなイオン塩溶液を利用して、樹脂から溶出することができる。
【０１９０】
したがって、クロマトグラフ工程又は複数の工程は、必要に応じて、１つ又は複数の洗浄工程を含んでもよい。
【０１９１】
精製プロセスはまた、ダイアフィルトレーション工程のような、１つ又は複数の濾過工程を含んでもよい。
【０１９２】
したがって、１つの実施形態において、実質に精製された形態の、特に、エンドトキシン及び／又は宿主細胞タンパク質若しくはＤＮＡを含まないか、又は実質的に含まない、精製された抗ＦｃＲｎ抗体又は断片、例えば、ヒト化抗体若しくは断片、特に、本発明による抗体又は断片が、提供される。
【０１９３】
上で使用される、精製された形態は、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９％ｗ／ｗ以上純粋のような、少なくとも９０％純粋を指すことが意図される。
【０１９４】
実質的に含まないエンドトキシンは、一般に、抗体製品１ｍｇ当たり１ＥＵ、又は製品１ｍｇ当たり０．５若しくは０．１ＥＵのようなそれ未満のエンドトキシン含有量を指すことが意図される。
【０１９５】
実質的に含まない宿主細胞タンパク質又はＤＮＡは、一般に、必要に応じて、抗体産物１ｍｇ当たり宿主細胞タンパク質及び／若しくはＤＮＡ含有量４００μｇ、又は１ｍｇ当たり１００μｇ以下、特に、１ｍｇ当たり２０μｇのようなそれ未満を指すことを意図される。
【０１９６】
本発明の抗体は、病態の処置及び／又は予防において有用であるので、本発明はまた、薬学的に許容される賦形剤、希釈剤若しくは担体の１つ又は複数と組み合わせた、本発明の抗体分子を含む医薬組成物或いは診断組成物を提供する。したがって、医薬の製造のための本発明の抗体分子の使用が提供される。組成物は、正常には、薬学的に許容される担体を含む、無菌の医薬組成物の一部として、通常供給される。本発明の医薬組成物は、加えて、薬学的に許容される賦形剤を含んでもよい。
【０１９７】
本開示はまた、本発明の抗体分子を、薬学的に許容される賦形剤、希釈剤若しくは担体の１つ又は複数に加え、混同する工程を含む、医薬或いは診断組成物の調製のためのプロセスを提供する。
【０１９８】
抗体分子は、医薬又は診断組成物における唯一の有効成分であってもよいか、又は他の抗体成分又はステロイド若しくは他の薬物分子、特に、半減期がＦｃＲｎ結合に依存しない薬物分子のような非抗体成分を含む他の有効成分を伴ってもよい。
【０１９９】
医薬組成物は、好適には、治療上有効量の本発明の抗体を含む。本明細書において使用される、用語「治療上有効量」は、標的の疾患若しくは状態を処置するか、改善するか、又は予防する、或いは検出可能な治療又は予防効果を発揮するのに必要とされる治療剤の量を指す。任意の抗体について、治療上有効量は、細胞培養アッセイにおいて、又は通常、げっ歯類、ウサギ、イヌ、ブタ若しくは霊長類における動物モデルにおいてのいずれかで推定することができる。動物モデルをまた使用して、適当な濃度範囲及び投与経路を決定してもよい。次に、かかる情報を使用して、ヒトにおける投与に有用な用量及び経路を決定することができる。好適な用量は、以下で本明細書において提供される。
【０２００】
医薬組成物は、便宜的には、１回の用量当たり予め決定された量の本発明の活性剤を含有する単位投薬形態において提示され得る。
【０２０１】
本開示による抗体の治療用量は、インビボで明らかな毒性作用を示さない。
【０２０２】
本発明による抗体又は断片の１つの実施形態において、１回用量は、循環ＩｇＧレベルにおいて最大７０％の低減をもたらし得る。
【０２０３】
本発明の方法又は使用の１つの例において、循環ＩｇＧレベルにおける最大の低減（最下点）は、最大４０％、最大５０％、最大６０％又は最大７０％の低減であってもよい。
【０２０４】
循環ＩｇＧにおける最大の治療低減は、関連する治療用量の投与の約１週間後に観察されてもよい。さらなる治療用量が送達されないなら、ＩｇＧのレベルは、約６週の期間を超えて回復し得る。或いは、循環ＩｇＧにおける最大の治療低減は、関連する治療用量（単数若しくは複数）の投与の約２、３、４、５又は６週間後に観察されてもよい。
【０２０５】
有利には、インビボでのＩｇＧのレベルは、継続用量の本開示による抗体又は断片の投与により、適当に低いレベルにて維持されてもよい。
【０２０６】
組成物は、患者に個別に投与されてもよいか、或いは他の剤、薬物又はホルモンと（例えば、同時、連続若しくは別々の）組み合わせで投与されてもよい。
【０２０７】
１つの実施形態において、本開示による抗体又は断片は、ステロイド、特に、プレドニゾンのような、免疫抑制療法と共に利用される。
【０２０８】
１つの実施形態において、本開示による抗体又は断片は、リツキシマブ又は他のＢ細胞療法と共に利用される。
【０２０９】
１つの実施形態において、本開示による抗体又は断片は、任意のＢ細胞若しくはＴ細胞調節又は免疫調節物質と共に利用される。例は、メトトレキサート、ミコフェニオレート及びアザチオプリンを含む。
【０２１０】
投与頻度は、抗体分子の半減期及びその効果の持続に依存する。抗体分子が、より短い半減期（例えば、２〜１０時間）を有するなら、１日当たり１回又は複数回の用量を与えることが必要であり得る。或いは、抗体分子が、長い半減期（例えば、２〜１５日）及び／又は長続きする薬力学（ＰＤ）特性を有するなら、１日当たり１回、１週間当たり１回又は１若しくは２カ月毎に１回投薬量をただ与える必要があってもよい。適当な投薬レジメンは、以下で本明細書において提供される。
【０２１１】
１つの実施形態において、用量は、２週間毎、すなわち、１月に２回送達される。
【０２１２】
本明細書において利用される半減期は、循環における、例えば、血清／血漿における分子の持続を指すことが意図される。
【０２１３】
本明細書において利用される薬力学は、本開示による分子の特性、特に、生物学的作用の持続を指す。
【０２１４】
薬学的に許容される担体は、それ自体が、組成物を受け取る個体に有害な抗体の作製を誘導すべきでなく、毒性であるべきでない。適当な担体は、タンパク質、ポリペプチド、リポソーム、多糖、ポリ乳酸、ポリグリコール酸，ポリマーアミノ酸、アミノ酸コポリマー及び不活性なウイルス粒子のような大きな、ゆっくり代謝された巨大分子であってもよい。
【０２１５】
薬学的に許容される塩、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩及び硫酸塩のような、鉱酸塩、又は酢酸塩、プロピオン酸塩、マロン酸塩及び安息香酸塩のような、有機酸の塩が、使用され得る。
【０２１６】
治療組成物における薬学的に許容される担体は、加えて、水、食塩水、グリセロール及びエタノールのような液体を追加で含有してもよい。加えて、湿潤剤又は乳化剤又はｐＨ緩衝物質のような、補助剤は、かかる組成物に存在してもよい。かかる担体は、医薬組成物が、患者による摂取のため、錠剤、ピル、糖衣錠、カプセル剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー及び懸濁剤として製剤されることを可能にする。
【０２１７】
投与の好適な形態は、例えば、ボーラス注射若しくは持続点滴による、注射又は注入による非経口投与に適した形態を含む。製品は、注射又は注入用である場合、それは、油性若しくは水性ビヒクル中の懸濁液、溶液又は乳液の形態をとってもよく、剤を懸濁する、保存する、安定化する及び／又は分散させるような、調合剤を含有してもよい。或いは、抗体分子は、適当な無菌の液体との使用前の再構成のための、乾燥形態であってもよい。
【０２１８】
製剤化されると、本発明の組成物は、対象に直接投与することができる。処置されるべき対象は、動物であり得る。しかしながら、１つ又は複数の実施形態において、組成物は、ヒト対象への投与に適合される。
【０２１９】
好適には、例えば、タンパク質のｐＩが、８〜９又はそれ以上の範囲であり、製剤ｐＨ７が適当であり得るなら、本開示による製剤において、最終製剤のｐＨは、抗体又は断片の等電点の値に類似しない。理論に束縛されるものではないが、これは、最終的に、改善された安定性を有する最終製剤を提供し、例えば、抗体又は断片が、溶液中に残留し得ることが考えられる。
【０２２０】
１つの例において、４．０〜７．０の範囲内のｐＨにおける医薬製剤は、１〜２００ｍｇ／ｍＬ本開示による抗体分子、１〜１００ｍＭ緩衝液、０．００１〜１％界面活性剤、ａ）１０〜５００ｍＭ安定剤、ｂ）１０〜５００ｍＭ安定剤及び５〜５００ｍＭ等張化剤、又はｃ）５〜５００ｍＭ等張化剤を含む。
【０２２１】
本発明の医薬組成物は、経口、静脈内、筋肉内、動脈内、髄内、くも膜下腔内、脳室内、経皮、経皮的な（例えば、国際公開第９８／２０７３４号を参照）、皮下、腹腔内、鼻腔内、経腸、局所、舌下、膣内又は直腸経路を含むが、これらに限定されない任意の数の経路により投与され得る。皮下噴射器をまた使用して、本発明の医薬組成が投与されてもよい。典型的には、治療組成物は、注射可能な、液体溶液又は懸濁液のいずれかとして調製されてもよい。注射前に液体ビヒクルにおける溶液に適した固体形態、又は液体ビヒクルにおける注射はまた、調製されてもよい。
【０２２２】
組成物の直接送達は、一般に、皮下、腹腔内、静脈内若しくは筋肉内注射により成されるか、又は組織の間質性空間に送達される。投薬処置は、１回用量スケジュール又は複数回用量スケジュールであってもよい。好ましくは、送達は、皮下である。
【０２２３】
組成物における有効成分が、抗体分子であることは、認識される。したがって、それは、胃腸管における分解の影響を受けやすい。したがって、組成物が、胃腸管を使用した経路により投与されるべきであるなら、それが胃腸管から吸収されると、組成物は、抗体を分解から保護するが、抗体を放出する剤を含有する、
【０２２４】
医薬的に許容される担体の完璧な考察は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｎ．Ｊ．１９９１年）において入手可能である。
【０２２５】
例えば、溶液又は懸濁液の形態で、溶媒において分散された、本発明の抗体を送達することができる。それは、適当な生理学的溶液、例えば、食塩水又は他の薬理学的に許容される溶媒又は緩衝溶液において懸濁することができる。懸濁液は、例えば、凍結乾燥させた抗体を利用することができる。
【０２２６】
治療懸濁液又は溶液製剤はまた、１つ又は複数の賦形剤を含有することができる。賦形剤は、当該技術分野において周知であり、緩衝液（例えば、クエン酸緩衝液、リン酸緩衝液、酢酸緩衝液及び炭酸水素緩衝液）、アミノ酸、尿素、アルコール、アスコルビン酸、リン脂質、タンパク質（例えば、血清アルブミン）、ＥＤＴＡ、塩化ナトリウム、リポソーム、マンニトール、ソルビトール、及びグリセロールを含む。溶液又は懸濁液は、リポソーム又は生分解性微粒子に封入することができる。製剤は、一般に、無菌製造プロセスを利用して、実質的に無菌の形態で提供される。
【０２２７】
これは、作製及び製剤、無菌の緩衝溶媒溶液中の抗体の無菌的懸濁液のため使用される緩衝溶媒／溶液の濾過により無菌化、並びに当業者が慣れ親しんだ方法により製剤を無菌の容器に分散させる工程を含み得る。
【０２２８】
本開示はまた、方法が非ヒト対象において利用され得ることを考慮するが、製剤化されると、本開示の組成物は、ヒト対象に直接投与することができる。ヒトは、本開示のいくつかの態様において、原発性持続性又は慢性原発性ＩＴＰに罹患している。近年、この疾患の病期についての新たな定義が導入された（Ｒｏｄｅｇｈｉｅｒｏら、２００９年、Ｂｌｏｏｄ、１１３（１１）：２３８６〜９３頁）。診断からの時間に基づき、第１期（３カ月以内）は「新たに診断されたＩＴＰ」である、病期２（３カ月を超えて１２カ月まで）は「持続期」であり、１２カ月以降は「慢性期」状態である。これらの病期はまた、処置の系統を反映する。
【０２２９】
原発性ＩＴＰにおける処置の主な目標は、血小板カウントを正常レベルまで補正するよりむしろ、出血を防ぐ又は止めるのに十分な血小板カウントをもたらすことである。慢性ＩＴＰにおいて、処置の目標はまた、より毒性の処置（例えば、脾摘出若しくは免疫抑制）のリスクを回避するか、又は延期し、コルチコステロイド曝露を最低レベルまで最短の時間低減し、長期継続する応答を達成することである。高いリスクの出血又は外科手術の予測時又は予測の際の要求に応じた処置は、しばしば望まれる別のアプローチである。
したがって、１つの例において、本発明の処置方法は、ＩＴＰの要求に応じた処置のため使用されてもよい。
【０２３０】
ＩＴＰの病態形成に関与する自己抗体は、ＩｇＧと非ＩｇＧアイソタイプの両方を含み得る。１つの例において、本開示の処置方法は、ＩｇＧが、優位なアイソタイプであると決定されている、ＩＴＰ患者の処置のため使用されてもよい。
【０２３１】
ＩＴＰの処置の有効性は、血小板カウントを正常レベルまで補正するよりむしろ、主な出血を防ぐ血小板カウントを達成することであるとみなされる。
【０２３２】
したがって、ＩＴＰの管理は、個々の患者に合わせるべきであり、それは、出血、外傷、手術、又は高いリスク因子（例えば、抗凝固療法中の患者）の不存在下で、５０×１０９／Ｌより上の血小板カウントを有するものにおいては稀に指示される（ＥＭＡ／ＣＨＭＰ／１５３１９１／２０１３、２０１４）。
【０２３３】
しかしながら、典型的には、診断時に３０×１０９／Ｌ未満の血小板カウントで出血を伴う成人は、処置を必要とするという一般的な同意がある。
【０２３４】
投与レジメン
組成物は、好ましくは、治療有効量の抗体（又はその抗原結合性断片）を含む。用語「治療有効量」は、本明細書で使用する場合、標的とする疾患若しくは状態を処置、回復若しくは予防するために、又は検出可能な治療若しくは予防効果を呈するために必要とされる治療剤の量を指す。「投与レジメン」は、投与される抗体又はその断片の量（用量）、及び、複数回用量が与えられる場合は、投与のタイミングを企図する。
【０２３５】
ＩＴＰ疾患及び処置有効性を特徴付けるいくつかの方法が存在しており、対象における陽性の生物学的応答を検出するのに適切である。
【０２３６】
１つの評価は血小板数である。
【０２３７】
ＩＴＰの別の役立つ評価はＩＴＰ出血スコアである。
【０２３８】
ＩＴＰに関する国際作業部会は、現在、出血徴候の正確な定義及び出血徴候の重症度の段階分けに基づく、コンセンサスに基づいたＩＴＰ特異的出血評価ツール（ＩＴＰ−ＢＡＴ）を提案している（Ｒｏｄｅｇｈｉｅｒｏら、２０１３、免疫性血小板減少症における出血評価の標準化：国際作業部会からの報告（Ｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｂｌｅｅｄｉｎｇ  ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｉｎ  ｉｍｍｕｎｅ  ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐｅｎｉａ：  ｒｅｐｏｒｔ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｗｏｒｋｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ）、Ｂｌｏｏｄ、１２１（１４）：２５９６〜６０６頁）。ＩＴＰ出血スコアは、ＩＴＰ−ＢＡＴツール  バージョン１．０を使用して評価することができる。
【０２３９】
ＩＴＰ−ＢＡＴについて、出血徴候を３つの主要なドメイン：皮膚（Ｓ）、可視粘膜（Ｍ）及び器官（Ｏ）に、重症度の段階と共に分類した（ＳＭＯＧ）。それぞれの出血徴候は検査時に評価する。重症度は０〜３又は４に段階分けされており、グレード５を任意の致死性の出血とする。医療文書のない対象によって報告された出血は１に段階分けする。それぞれのドメイン内で、同じグレードを、類似の臨床的影響の出血徴候に割り当てる。前回の観察期来院以後の「最も悪い」出血徴候を段階分けし、それぞれのドメイン内の最も高いグレードを記録する。ＳＭＯＧシステムは、ＩＴＰにおける出血の表現型に関する一貫した記載を提供する。図４を参照のこと。
【０２４０】
出血の非存在は、ＳＭＯＧの全てのドメインで、グレード０によって指示される。出血の存在は、ＳＭＯＧの少なくとも１つのドメインで、１又は２以上のグレードによって指示される。
【０２４１】
一例では、有効性（臨床応答）は、血小板数≧３０×１０９／Ｌ及びベースライン数の少なくとも２倍の増加として定義される。
【０２４２】
一例では、有効性（臨床応答）は、血小板数≧３０×１０９／Ｌ及びベースライン値からの少なくとも２倍の増加及び出血の非存在として定義される。
【０２４３】
一例では、有効性（臨床応答）は、血小板数≧５０×１０９／Ｌとして定義される。
【０２４４】
一例では、有効性（臨床応答）は、血小板数≧５０×１０９／Ｌ及び出血の非存在として定義される。
【０２４５】
一例では、有効性（完全な臨床応答）は、≧１００×１０９／Ｌの血小板数として定義される。
【０２４６】
一例では、有効性（完全な臨床応答）は、≧１００×１０９／Ｌの血小板数及び出血の非存在として定義される。
【０２４７】
一例では、臨床応答は、上記のような血小板数が少なくとも７日離れた２回の別々の機会（すなわち、第２の評価は、第１の評価の≧１６８時間後であるべきである）で確認された場合に定義される。
【０２４８】
本明細書で使用する場合、「処置すること」及び「処置」は、ＩＴＰの重症度の任意の減少を指し、「予防すること」又は「予防」は、ＩＴＰの症状の発症の任意の減少又は遅延を指す。当業者は、ＩＴＰ又はそれに関連する症状からの任意の程度の保護又は回復が、対象、例えば、ヒト患者に有益であることを理解するだろう。患者の生活の質は、対象における症状の重症度を任意の程度減少させること及び／又は症状の発生を遅延させることによって改善する。したがって、一態様における方法は、対象がＩＴＰに罹患している又は罹患するリスクがあると判定された後、可能な限り早く実施される。
【０２４９】
一次性ＩＴＰの処置の主要な目標は、血小板数を正常なレベルに戻すことよりもむしろ、出血を予防又は停止するのに十分な血小板数を実現することである。慢性ＩＴＰでは、処置の目標は、より毒性のある処置（例えば、脾臓摘出又は免疫抑制）のリスクを回避又は延期すること、副腎皮質ステロイド曝露を最小レベル及び最短時間に減少すること並びに長期にわたる応答を達成することでもある。高リスクの出血若しくは外科手術の際の又はこれらが予想される際のオンデマンド処置は、しばしば正当化される別の手法である。
【０２５０】
様々な態様では、抗体又はその断片は、血小板数の改善を、例えば、抗体又はその断片の最初の投与後１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１又は１２週で達成する投与レジメンを介して投与される。
【０２５１】
或いは又は加えて、抗体又はその断片は、前処置と比較した、血小板数及びＩＴＰ出血スコアの改善を達成する投与レジメンを介して投与される。好ましくは、血小板数及びＩＴＰ出血スコアの改善は、例えば、抗体又はその断片の最初の投与後１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１又は１２週で観察される。
【０２５２】
改善は、臨床応答について上で述べたようなものであり、例えば、改善は、血小板数の≧３０×１０９／Ｌまでの増加及びベースライン数の少なくとも２倍の増加であり得る。
【０２５３】
或いは、改善は、血小板数の≧３０×１０９／Ｌまでの増加及びベースライン値からの少なくとも２倍の増加及び出血の非存在であり得る。
【０２５４】
或いは、改善は、血小板数の≧５０×１０９／Ｌまでの増加であり得る。
【０２５５】
或いは、改善は、血小板数の≧５０×１０９／Ｌまでの増加及び出血の非存在であり得る。
【０２５６】
或いは、改善は、血小板数の≧１００×１０９／Ｌまでの増加であり得る。
【０２５７】
或いは、改善は、血小板数の≧１００×１０９／Ｌまでの増加及び出血の非存在であり得る。
【０２５８】
一例では、改善は、上記のような血小板数が少なくとも７日離れた２回の別々の機会（すなわち、第２の評価は、第１の評価の≧１６８時間後であるべきである）で確認された場合に定義される。
【０２５９】
ヒト対象についての正確な治療有効量は、疾患状態の重症度、対象の全体的な健康、対象の年齢、体重及び性別、食事、投与の時間及び頻度、薬物の組合せ（単数又は複数）、反応感受性、並びに療法に対する耐性／応答性に依存し得る。一般的に、治療有効量は、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜５００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは、０．１ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇ（例えば、４ｍｇ／ｋｇ〜２５ｍｇ／ｋｇ、例えば、約１０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ又は２１ｍｇ／ｋｇ）であり得る。組成物は、本開示の活性剤の用量当たりの所定量を含有する単位剤形で簡便に提示され得る。本明細書に記載される任意の実施形態の用量範囲及びレジメンには、１〜１０週ごとに（任意の投与経路、例えば、皮下又は静脈内投与のどちらかによって）与えられる、１ｍｇ〜１００ｍｇの単位用量の範囲の投薬量（例えば、４ｍｇ、７ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ若しくは３０ｍｇ）、又は１００〜２００ｍｇの単位用量の範囲の投薬量、例えば、１００ｍｇ、１４０ｍｇ、１６０ｍｇの単位用量が含まれるが、これらに限定されない。
【０２６０】
任意選択で、１回用量の抗体は、１〜２０週ごと、例えば、１週ごと、２週ごと、３週ごと、４週ごと、５週ごと、６週ごと、７週ごと又は８〜１２週ごと（例えば、８週ごと、９週ごと、１０週ごと、１１週ごと若しくは１２週ごと）に投与される。処置期間（すなわち、１回又は複数回の用量の抗体が対象に投与されている期間）は、少なくとも１週、少なくとも２週、少なくとも３週、少なくとも４週、少なくとも５週、少なくとも６週、少なくとも７週又は少なくとも８週以上を含み得る。上記の用量及び投与の間の時間等の、任意の好適な回数の用量が処置期間内に投与されてもよい。例えば、１、２、３、４、又は５回用量の抗体が、対象に、例えば、５週の処置期間にわたり（任意選択で、０週目並びにその後１週ごとに（１週目、２週目、３週目及び４週目）又は３週の処置期間にわたり（任意選択で、０週目並びにその後１週ごとに（１週目及び２週目）投与される。
【０２６１】
したがって、一態様では、それを必要とするヒトにおいて免疫性（特発性）血小板減少症（ＩＴＰ）を処置又は予防する方法であって、ヒトに１〜５用量の範囲内の抗ＦｃＲｎ抗体又はその抗原結合性断片を１〜１２週の処置期間にわたり投与するステップを含み、処置期間における総用量は、１ｋｇ当たり１〜３０ｍｇの範囲内にある、方法が提供される。
【０２６２】
治療有効量は単回用量又は複数回用量で所与の処置期間にわたり送達され得るということが理解されるだろう。例えば、２０ｍｇ／ｋｇの用量が、単回用量として、又は４ｍｇ／ｋｇの５回用量として与えられ得る。
【０２６３】
一例では、それぞれの用量は４ｍｇ／ｋｇであり、例えば、５回の個々の用量として、特に、５週、特に、連続する５週の処置期間にわたり投与される。
【０２６４】
一例では、それぞれの用量は７ｍｇ／ｋｇであり、例えば、３回の個々の用量として、特に、３週、特に、連続する３週の処置期間にわたり投与される。
【０２６５】
一例では、それぞれの用量は１０ｍｇ／ｋｇであり、例えば、２回の個々の用量として、特に、２週、特に、連続する２週の処置期間にわたり投与される。
【０２６６】
一例では、単回用量は、例えば、１５ｍｇ／ｋｇの単回用量として投与される。
【０２６７】
一例では、単回用量は２０ｍｇ／ｋｇである。
【０２６８】
一例では、単回用量は２５ｍｇ／ｋｇである。
【０２６９】
一例では、単回用量は３０ｍｇ／ｋｇである。
【０２７０】
一例では、総用量（すなわち、処置期間にわたり与えられる全用量）は、１０、１５、２０、２１、２５及び３０ｍｇ／ｋｇから選択される。
【０２７１】
一例では、それぞれの用量は４ｍｇ／Ｋｇであり、例えば、５回の個々の用量として、特に、５週、特に、連続する５週の処置期間にわたり投与され、結果的に２０ｍｇ／Ｋｇの総用量になる。
【０２７２】
一例では、それぞれの用量は７ｍｇ／Ｋｇであり、例えば、３回の個々の用量として、特に、３週、特に、連続する３週の処置期間にわたり投与され、結果的に２１ｍｇ／Ｋｇの総用量になる。
【０２７３】
一例では、それぞれの用量は１０ｍｇ／Ｋｇであり、例えば、２回の個々の用量として、特に、２週、特に、連続する２週の処置期間にわたり投与され、結果的に２０ｍｇ／Ｋｇの総用量になる。
【０２７４】
一例では、それぞれの用量は１５ｍｇ／Ｋｇであり、例えば、２回の個々の用量として、特に、２週、特に、連続する２週の処置期間にわたり投与され、結果的に３０ｍｇ／Ｋｇの総用量になる。
【０２７５】
任意選択で、方法は、より高い初期用量（すなわち、「負荷用量」）と、それに続く１回又は複数回のより低い用量（すなわち、初期用量より低い、１回又は複数回の第２の又はさらなる用量（「維持用量」））とを伴う異なる投薬レジメンを有する反復用量投与戦略を用いるが、より低い負荷用量とそれに続くより高い維持用量もまた企図される。一実施形態では、維持用量は、負荷用量の４分の１、３分の１、２分の１、３分の２、４分の３、同じ、１と４分の１、１と３分の１、１と２分の１、１と３分の２、１と４分の３又は２倍以上であり得る。負荷用量を有しない複数回用量レジメンもまた、本開示の一部として企図される。
【０２７６】
用量の頻度は、抗体分子の半減期及びその効果の持続時間に依存し得る。抗体分子が短い半減期（例えば、２〜１０時間）を有する場合、１日当たり１回又は複数回の用量を与えることが必要であり得る。或いは、抗体分子が長い半減期（例えば、２〜１５日）を有する場合、１日当たり１回、１週当たり１回、又はさらには１若しくは２カ月ごとに１回の投薬量を与えることだけが必要であり得る。或いは又は加えて、投薬の頻度は、疾患重症度によって決定され得、例えば、疾患バイオマーカーモニタリングによって、並びに／又は患者血小板レベル及び／若しくは血清ＩｇＧレベルをモニタリングすることによって決定され得る。
【０２７７】
一実施形態では、１回又は複数回の維持用量が、負荷用量の投与後、ある間隔で投与される。この間隔は、それぞれの用量で一貫していても変動してもよい。この間隔は、１日、１週、２週、３週、４週、毎月、６週、８週、隔月又は任意の他の間隔であり得る。一実施形態では、５回の維持用量が負荷用量後２週ごとに投与され、合計６回用量となる。
【０２７８】
したがって、一例では、本発明の処置方法は、初期用量（単数又は複数）より低い、１回又は複数回の第２の又はさらなる用量を投与するステップをさらに含む。
【０２７９】
これらのさらなる用量はより高い「負荷用量」についての初期の処置期間を越えて投与されてもよいということが理解されるだろう。
【０２８０】
したがって、一例では、好ましくは１〜５週の処置期間にわたる２０〜３０ｍｇのより高い初期総投薬に続いて、さらなる維持投薬処置期間があり得る。
【０２８１】
一例では、本発明は、それを必要とするヒトにおいて免疫性（特発性）血小板減少症（ＩＴＰ）を処置又は予防する方法であって、ヒトに、処置期間における総用量が１ｋｇ当たり１〜３０ｍｇの範囲内にある、１〜５用量の範囲内の抗ＦｃＲｎ抗体又はその抗原結合性断片を１〜１２週の処置期間にわたり投与するステップと、それに続く、初期用量より低い、１回又は複数回の第２の又はさらなる用量を投与するステップとを含む、方法を提供する。
【０２８２】
一例では、本発明は、それを必要とするヒトにおいて免疫性（特発性）血小板減少症（ＩＴＰ）を処置又は予防する方法であって、ヒトに、処置期間における総用量が１ｋｇ当たり２０〜３０ｍｇの範囲内にある、１〜５用量の範囲内の抗ＦｃＲｎ抗体又はその抗原結合性断片を１〜５週の処置期間にわたり投与するステップと、それに続く、初期用量（単数又は複数）より低い、１回又は複数回の第２の又はさらなる用量を投与するステップとを含む、方法を提供する。
【０２８３】
一例では、本発明は、それを必要とするヒトにおいて免疫性（特発性）血小板減少症（ＩＴＰ）を処置又は予防する方法であって、ヒトに、処置期間における総用量が１ｋｇ当たり２０ｍｇ又は３０ｍｇ／Ｋｇである、１又は２用量の抗ＦｃＲｎ抗体又はその抗原結合性断片を１又は２週の処置期間にわたり投与するステップと、任意選択で、それに続く、初期用量より低い、１回又は複数回の第２の又はさらなる用量（維持用量）を投与するステップとを含む、方法を提供する。
【０２８４】
一例では、それぞれの用量は１０ｍｇ／ｋｇであり、例えば、２回の個々の用量として、２週、特に、連続する２週の処置期間にわたり投与され、任意選択で、続いて１０ｍｇ／Ｋｇより低い、１回又は複数回のさらなる用量が投与される。
【０２８５】
一例では、それぞれの用量は１５ｍｇ／ｋｇであり、例えば、２回の個々の用量として、２週、特に、連続する２週の処置期間にわたり投与され、任意選択で、続いて１５ｍｇ／Ｋｇより低い、１回又は複数回のさらなる用量が投与される。
【０２８６】
一例では、１５ｍｇ／ｋｇの単回用量が１週の処置期間にわたり投与され、任意選択で、続いて１５ｍｇ／Ｋｇより低い、１回又は複数回のさらなる用量が投与される。
【０２８７】
一例では、２０ｍｇ／ｋｇの単回用量が１週の処置期間にわたり投与され、任意選択で、続いて２０ｍｇ／Ｋｇより低い、１回又は複数回のさらなる用量が投与される。
【０２８８】
一例では、それぞれのより低い（「維持」）用量は、４〜１０ｍｇ／Ｋｇの間、好ましくは４又は７ｍｇ／Ｋｇである。
【０２８９】
上で述べたように、これらの用量は、１週、２週、３週、４週、毎月、６週、８週、隔月等の任意の好適な間隔又は任意の他の間隔で与えられ得る。
【０２９０】
一例では、維持用量は１週ごとの間隔で与えられる。
【０２９１】
一例では、維持用量は２週ごとの間隔で与えられる。
【０２９２】
一例では、維持用量は４週ごとの間隔で与えられる。
【０２９３】
一例では、維持用量は毎月与えられる。
【０２９４】
一例では、より高い初期用量（負荷用量）は、５又は３週の処置期間にわたる毎週間隔の４ｍｇ／Ｋｇの５回用量又は７ｍｇ／Ｋｇの３回用量（それぞれ２０及び２１ｍｇ／ｋｇの総用量）での処置を含み、維持投薬は、２週ごと、３週、４週、毎月、６週、８週、隔月等の任意の好適な間隔又は任意の他の間隔での４ｍｇ／Ｋｇ又は７ｍｇ／Ｋｇの投薬を含み得る。
【０２９５】
本発明の処置方法は、ＩＴＰのオンデマンド処置及び／又は維持療法の両方に好適であり得る。
【０２９６】
投与の間のタイミングは、状態が改善するにつれて減らしてもよく、状態が悪化する場合は、増やして、必要に応じて急性エピソードのためのより高い用量に戻してもよい。
【０２９７】
投与のタイミングはまた、患者血小板レベル及び／又は血清ＩｇＧレベルをモニタリングすることによって決定され得る。
【０２９８】
一例では、本発明の処置方法は、ＩＴＰのオンデマンド処置のために使用され得る。
【０２９９】
ＩＴＰの病因に関与する自己抗体には、ＩｇＧ及び非ＩｇＧアイソタイプの両方が含まれ得る。一例では、本開示の処置方法は、ＩｇＧが優勢なアイソタイプであると判定されているＩＴＰ患者の処置のために使用され得る。
【０３００】
一態様では、それを必要とするヒトにおいて免疫性（特発性）血小板減少症（ＩＴＰ）を処置又は予防する方法であって、ヒトに１〜５用量の範囲内の抗ＦｃＲｎ抗体又はその抗原結合性断片を１〜１２週の処置期間にわたり投与するステップを含み、処置期間における総用量は、１ｋｇ当たり１〜４０ｍｇの範囲内にある、方法が提供される。
【０３０１】
一例では、それぞれの用量は２０ｍｇ／Ｋｇであり、例えば、２回の個々の用量として、特に、２週、特に、連続する２週の処置期間にわたり投与され、結果的に４０ｍｇ／Ｋｇの総用量になる。
【０３０２】
一例では、それぞれの用量は２０ｍｇ／Ｋｇであり、例えば、２回の個々の用量として、特に、２週、特に、連続する２週の処置期間にわたり投与され、結果的に４０ｍｇ／Ｋｇの総用量になり、任意選択で、続いて２０ｍｇ／Ｋｇより低い、１回又は複数回のさらなる用量が投与される。
【０３０３】
含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）は、本明細書の文脈では、含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）を意味すると意図されている。技術的に適切である場合、本発明の実施形態は組み合わせてもよい。
【０３０４】
実施形態は、本明細書において、ある特定の特徴／要素を含んでいるものとして記載されている。本開示はまた、前記特徴／要素からなる又はから本質的になる別々の実施形態にも拡張される。
【０３０５】
特許及び出願等の技術的参考文献は、参照によって本明細書に組み込まれる。
【０３０６】
本発明を、単に例示として、
図１が、ある特定のアミノ酸及びポリヌクレオチド配列を示す図であり、
図２が、ある特定の配列のアライメントを示す図であり、
図３が、ＩＴＰ研究デザイン（ＳｕｂＱ；ＵＣＢ７６６５）非盲検安全性及び忍容性研究を示す図であり、
図４が、ＩＴＰ出血評価ツール（ＩＴＰ−ＢＡＴ）を示す図であり、
図５が、４、７及び１０ｍｇ／ｋｇのＵＣＢ７６６５の複数回投与後のベースラインからの低下（平均ＩｇＧ減少）を示す図であり、
図６が、４、７及び１０ｍｇ／ｋｇのＵＣＢ７６６５の複数回投与後の平均血小板数（応答者のみ）を示す図であり、
図７が、４、７、１０ｍｇ／ｋｇのＵＣＢ７６６５の複数回投与、及び１５ｍｇ／ｋｇのＵＣＢ７６６５の単回投与後のベースラインからの低下（平均ＩｇＧ減少）を示す図である、
添付の図面に言及する以下の実施例でさらに説明する。
【実施例】
【０３０７】
（例１）
ＵＣＢ７６６５は、ＷＯ２０１４０１９７２７に最初に記載され、本明細書において配列番号１〜６で提供されているＣＤＲ配列を含む。ＵＣＢ７６６５は、配列番号２２の軽鎖及び配列番号４３の重鎖を含む。
【０３０８】
ＵＣＢ７６６５はＩＮＮロザノリクシズマブを有する。
【０３０９】
ＵＣＢ７６６５のｈＦｃＲｎ結合についての親和性（ＷＯ２０１４０１９７２７から引用）
表面プラズモン共鳴技術（ＳＰＲ）を使用した生体分子相互作用分析を、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００システム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で実施し、ヒトＦｃＲｎ細胞外ドメインへの結合を決定した。ヒトＦｃＲｎ細胞外ドメインは、ヒトＦｃＲｎアルファ鎖細胞外ドメイン（配列番号９４）とβ２ミクログロブリン（β２Ｍ）（配列番号９５）との間の非共有結合複合体として提供された。１０ｍＭ  ＮａＡｃ、ｐＨ５緩衝液中の親和性精製Ｆ（ａｂ’）２断片ヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ｆ（ａｂ’）２断片特異的（Ｆａｂ’−ＰＥＧ捕捉用）又はＦｃ断片特異的（ＩｇＧ１若しくはＩｇＧ４捕捉用）（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂ，Ｉｎｃ．）を、４０００〜５０００応答単位（ＲＵ）の間の捕捉レベルまで、ＨＢＳ−ＥＰ＋（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を泳動用緩衝液として使用して、アミンカップリング化学を介してＣＭ５センサーチップに固定化した。５０ｍＭ  ホスファート、ｐＨ６＋１５０ｍＭ  ＮａＣｌ＋０．０５％Ｐ２０又はＨＢＳ−Ｐ、ｐＨ７．４（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を、親和性アッセイのための泳動用緩衝液として使用した。抗体を、泳動用緩衝液中で４μｇ／ｍｌ（ＩｇＧ４）に希釈した。１０μｌ／分でのＩｇＧ４の６０秒注射を、固定化した抗ヒトＩｇＧ、Ｆ（ａｂ’）２による捕捉のために使用した。ヒトＦｃＲｎ細胞外ドメインを、３０μｌ／分で３００秒間、捕捉した抗ＦｃＲｎ抗体に対して２０ｎＭ〜１．２５ｎＭまで滴定し、続いて１２００秒解離した。表面を、１０μｌ／分での２×６０秒５０ｍＭ  ＨＣｌによって再生成した。データを、Ｔ２００評価ソフトウェア（バージョン１．０）を使用して分析した。
【表１】
2020523419.tif 000006
【表２】
2020523419.tif 000007
ｐＨ７．４及びｐＨ６における抗ｈＦｃＲｎ１５１９．ｇ５７  ＩｇＧ４Ｐについての親和性データ（３回の実験の平均）
【０３１０】
ＵＣＢ７６６５の結晶学及び結合エピトープ（ＷＯ２０１４０１９７２７から引用）
１５１９ｇ５７  Ｆａｂ’及び脱グリコシル化ヒトＦｃＲｎ細胞外ドメイン（ベータ２ミクログロブリン配列番号９５と会合しているアルファ鎖細胞外ドメイン（配列番号９４））の結晶構造を、結晶化を容易にするためにＦｃＲｎオリゴ糖を排除して、決定した。１５１９．ｇ５７  Ｆａｂ’を１０倍モル過剰のＮ−エチルマレイミドと反応させて、ジＦａｂ’の形成を予防し、任意の存在するジＦａｂ’をＳＥＣ（Ａｋｔａ  ＦＰＬＣにおけるＳ２００）によって除去した。ヒトＦｃＲｎ細胞外ドメインをＰＮＧａｓｅＦによって処理して、Ｎ連結糖を除去した。このために、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）を使用して、ＦｃＲｎ試料濃度を５ｍｇ／ｍｌ及び１ｍｌの合計容量に調整した。２００単位のＰＮＧａｓｅＦ（Ｒｏｃｈｅ）を、このヒトＦｃＲｎの溶液に添加した。これを３７℃で約１８時間インキュベートし、これに続けて、ＳＤＳ  ＰＡＧＥを使用して脱グリコシル化の程度を調べた。反応の完了後、脱グリコシル化ＦｃＲｎを、５０ｍＭ  酢酸ナトリウム、１２５ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ６．０に緩衝液交換した。
【０３１１】
複合体を、試薬の混合物（Ｆａｂ’：ＦｃＲｎ：：１．２：１、ｗ／ｗ）の、室温で６０分間のインキュベーションによって形成し、次いで、ＳＥＣ（Ａｋｔａ  ＦＰＬＣを使用したＳ２００）を使用して精製した。スクリーニングを、Ｑｉａｇｅｎから入手可能である様々な条件（およそ２０００通りの条件）を使用して実施した。インキュベーション及び撮像を、Ｆｏｒｍｕｌａｔｒｉｘ  Ｒｏｃｋ  Ｉｍａｇｅｒ  １０００によって実施した（合計２１日のインキュベーション期間の間）。
【０３１２】
１５１９ｇ５７  Ｆａｂ’の結合後、ＦｃＲｎ構造の明白な変化はなかった（この複合体を、ＦｃＲｎの公開された構造と比較して）。その結晶構造から、二次構造含有率を、αヘリックス９．４％、βシート４５．２％、３〜１０ターン２．５％と算出した。
【０３１３】
１５１９ｇ５７  Ｆａｂ’と相互作用する残基は、全てＦｃＲｎα鎖（β２Ｍではない）にあり、以下に太字で指示される。当該残基は、Ｆｃと結合するのに重大な１つを除く全ての残基を包含する。１５１９ｇ５７はＦｃ結合領域と重複する領域で結合し、これは、１５１９ｇ５７  Ｆａｂ’によるＦｃＲｎの遮断が単なる競合によるものであり、抗ＦｃＲｎがその優れた親和性のために効果的であることを示唆している。
【数２】
2020523419.tif 000008
１５１９ｇ５７  Ｆａｂ’との相互作用に関与する残基（太字）及びＩｇＧのＦｃとの相互作用に重大な残基（下線）を示す、ＦｃＲｎα鎖配列。後者の１つを除く全てが前者に含まれる。
【０３１４】
（例２）
本例は、皮下（ｓｃ）用量として投与されるＵＣＢ７６６５の安全性、忍容性及び有効性を評価するための、第２相多施設非盲検複数用量複数群研究（ＴＰ０００１）を説明する。
【０３１５】
用量選択の根拠
健康な対象における単回用量漸増研究（ＵＰ００１８）により、ＵＣＢ７６６５の用量範囲（１〜７ｍｇ／ｋｇの間）を探索し、全ＩｇＧに対するＰＫ及びＰＤ効果を特徴付けた。予備データは、ＩｇＧの平均絶対的低下及びベースラインＩｇＧからの平均変化率が、ＵＣＢ７６６５  ７ｍｇ／ｋｇ  ｉｖ用量については４９．３％（範囲：４４．６％〜５５．９％）という最大の低下が６日目に観察され、ＵＣＢ７６６５  ７ｍｇ／ｋｇ  ｓｃ用量については４２．８％（範囲：３９．６％〜４８．６％）という最大の低下が９日目に観察された、プールされたｉｖ及びｓｃプラセボ群（ｎ＝１２）と比較して、活性用量群（各群ｎ＝６）において大きかったことを指示している。
【０３１６】
全ＩｇＧを主要エンドポイントとして有する用量曝露−応答関係を、非線形混合効果モデリングを使用して決定した。次いで、導出された集団ＰＫ−ＰＤ（Ｌｏｗｅ［Ｌｏｗｅら、２０１０］のものに基づくＰＫ−ＰＤ構造モデル）を使用して、模範的な血漿交換法によって達成される低下を模倣し、結果的に７０％以上のＩｇＧ減少をもたらし得る適切な反復用量レジメンの選択を、模擬実験によって導いた。
【０３１７】
モデルに基づいた模擬実験は、連続する５週間のＵＣＢ７６６５  ４ｍｇ／ｋｇの毎週用量により＞７０％という最大の平均ＩｇＧ減少が生じることが予期される、ということを実証している。類似の減少がＵＣＢ７６６５  ７ｍｇ／ｋｇの連続する３回の毎週用量後に達成されると予測される。
【０３１８】
ＴＰ００１研究は、持続性（診断後＞３カ月〜最大１２カ月）又は慢性（診断後１２カ月超）一次性ＩＴＰを有する≧１８歳の対象における、４ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、及び２０ｍｇ／ｋｇ（それぞれ、結果的に２０ｍｇ／ｋｇ、２１ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、及び２０ｍｇ／ｋｇの累積用量になる）の皮下（ｓｃ）用量として投与されるＵＣＢ７６６５の安全性、忍容性及び有効性を評価するための、多施設非盲検複数用量複数群研究である。
【０３１９】
合計およそ４８〜６６名の対象（新たに得られている安全性データ、及び相当するＤＭＣの推薦による）が研究の投薬期間に移行することが計画される。個々の対象の研究参加のための最大の研究持続時間はおよそ１６週である。
【０３２０】
研究によりＵＣＢ７６６５の５用量群を評価することが意図される。用量群１の対象は、ＵＣＢ７６６５  ４ｍｇ／ｋｇ  ｓｃの５回用量を１週間隔で受け、用量群２の対象は、ＵＣＢ７６６５  ７ｍｇ／ｋｇ  ｓｃの３回用量を１週間隔で受け、用量群３の対象は、ＵＣＢ７６６５  １０ｍｇ／ｋｇ  ｓｃの２回用量を１週間隔で受け、用量群４は、ＵＣＢ７６６５  １５ｍｇ／ｋｇ  ｓｃの１回用量を受け、用量群５は、ＵＣＢ７６６５  ２０ｍｇ／ｋｇ  ｓｃの１回用量を受ける。図３を参照のこと。
【０３２１】
研究は、スクリーニング期間（最大４週）、投薬群が逐次導入される１日〜４週の投薬期間及び８週の観察期間からなる。スクリーニング来院は研究の１回目の来院に相当する。投薬期間は２回目の来院（ベースライン来院）時に始まり、投薬来院は、用量群１、２及び３については毎週間隔で予定されており、用量群４及び５については１回のみの来院が予定されている。観察期間は、最後の用量投与（又は用量群４及び５については唯一の用量投与）後に開始され、来院は最後の投薬の３日後と、その後は８週の期間の間、毎週の来院（すなわち、最後又は唯一の用量後毎週）が予定されている。研究終了来院は、観察期間の終了時、すなわち、治験用医薬品（ＩＭＰ）の最後又は唯一の用量の８週後に実施される。
【０３２２】
研究の主要な目的は、ＩＴＰを有する対象にｓｃ注入によって投与されたＵＣＢ７６６５の安全性及び忍容性を評価することである。
【０３２３】
研究の副次的な目的は、血小板数の変化によって測定されるようなＵＣＢ７６６５の臨床的有効性を評価すること、及び血清中の全ＩｇＧ濃度の変化によって測定されるようなＵＣＢ７６６５の薬力学（ＰＤ）的効果を評価することである。探索的目的には以下のものが含まれる：血清中の糖タンパク質（ＧＰ）Ｉａ／ＩＩａ、ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ及びＧＰＩｂ／ＩＸに対するＩＴＰ特異的自己抗体に対するＵＣＢ７６６５の効果を評価すること；ＩＴＰ出血スコアの変化によって測定されるような臨床的有効性を評価すること；全タンパク質、アルブミン、αグロブリン及びβ−グロブリン、ＩｇＧサブクラス、ＩｇＭ、ＩｇＡ及びＩｇＥの濃度、並びに血清及び血漿補体レベルに対するＵＣＢ７６６５の効果を評価すること；抗薬物抗体（ＡＤＡ）、すなわち、抗ＵＣＢ７６６５抗体の出現を免疫原性及び薬物動態（ＰＫ）／ＰＤに関して評価すること；血小板数の変化と、全ＩｇＧ、ＩｇＧサブクラス、ＩＴＰ特異的自己抗体の変化との間の関係を評価すること；並びにｓｃ注入によって投与されたＵＣＢ７６６５の血漿濃度を評価すること。
【０３２４】
以下の有効性変数を評価する：研究中及び来院ごとの応答（血小板数≧３０×１０９／Ｌ及びベースライン数の少なくとも２倍の増加）；研究中及び来院ごとの完全な応答（血小板数≧１００×１０９／Ｌ）；研究中及び来院ごとの血小板数≧５０×１０９／Ｌ；研究中の血小板数の最大値及びベースラインからの最大の増加；血小板数の経時的な値及びベースラインからの変化；血小板数についてのベースライン補正効果曲線下面積（ＡＵＥＣ）；応答までの時間（処置開始から応答の達成までの時間）；完全な応答までの時間（処置開始から完全な応答の達成までの時間）；血小板数≧５０×１０９／Ｌを達成するまでの時間；応答の持続時間（応答の達成から応答の喪失［３０×１０９／Ｌ未満の血小板数又はベースライン血小板数の２倍未満の増加として定義］までを測定）；完全な応答の持続時間（完全な応答の達成から完全な応答の喪失［１００×１０９／Ｌ未満の血小板数として定義］までを測定）；血小板数≧５０×１０９／Ｌの持続時間（血小板数≧５０×１０９／Ｌの達成から血小板数の５０×１０９／Ｌ未満への減少までを測定）；臨床応答（血小板数≧３０×１０９／Ｌ及びベースライン値からの少なくとも２倍の増加及び出血の非存在として定義）；臨床応答までの時間（処置開始から臨床応答の達成までの時間）；臨床応答の持続時間（臨床応答の達成から臨床応答の喪失［血小板数＜３０×１０９／Ｌ又はベースライン血小板数からの２倍未満の増加又は出血の存在として定義される臨床応答の喪失］までを測定）；完全な臨床応答（血小板数≧１００×１０９／Ｌ及び出血の非存在として定義）；完全な臨床応答までの時間（処置開始から完全な臨床応答の達成までの時間）；完全な臨床応答の持続時間（完全な臨床応答の達成から完全な臨床応答の喪失［血小板数＜１００×１０９／Ｌ又は出血の存在として定義される完全な臨床応答の喪失］までを測定）；臨床応答なし（血小板数＜３０×１０９／Ｌ及びベースラインからの２倍未満の増加又は出血の存在として定義）；経時的なＩＴＰ出血スコア；並びに患者報告アウトカム（ＰＲＯ）、すなわち、経時的な多発性硬化症の神経学的疲労指数（ＮＦＩ−ＭＳ）要約スコア。ＵＣＢ７６６５の経時的な血漿濃度をＰＫ変数として評価する。ＰＤ変数は、研究中の全ＩｇＧ濃度の最小値及び最大の低下；ＩｇＧサブクラス濃度；並びに血清中の経時的なＩＴＰ特異的自己抗体（ＧＰＩａ／ＩＩａ、ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ及びＧＰＩｂ／ＩＸ）である。
【０３２５】
有効性の評価
血小板数
血小板数の評価のために、血液試料が、標準的な臨床検査評価のために試料を採取するのと同時に、資格のある現場の人員によって採取される。
【０３２６】
血小板数を中央検査室によって決定して、以下の変数を、分析のために統計データベースで計算する：
□来院ごとの応答及び研究中の少なくとも１回の応答
□来院ごとの完全な応答及び研究中の少なくとも１回の完全な応答
□来院ごと及び研究中の少なくとも１回の血小板数≧５０×１０９／Ｌ
□来院ごとの血小板数の値及びベースラインからの変化
□ベースラインから研究終了来院まで算出された血小板数についてのベースライン補正ＡＵＥＣ
□最大値及びベースラインからの最大の増加
□応答までの時間
□完全な応答までの時間
□血小板数≧５０×１０９／Ｌを達成するまでの時間
□応答の持続時間
□完全な応答の持続時間
□血小板数≧５０×１０９／Ｌの持続時間
□臨床応答：血小板数≧３０×１０９／Ｌ及びベースライン値からの少なくとも２倍の増加及び出血の非存在
□臨床応答までの時間：処置開始から臨床応答の達成までの時間
□臨床応答の持続時間：臨床応答の達成から臨床応答の喪失（血小板数＜３０×１０９／Ｌ又はベースライン血小板数からの２倍未満の増加又は出血の存在として定義される臨床応答の喪失）までを測定
□完全な臨床応答：血小板数≧１００×１０９／Ｌ及び出血の非存在
□完全な臨床応答までの時間：処置開始から完全な臨床応答の達成までの時間
□完全な臨床応答の持続時間：完全な臨床応答の達成から完全な臨床応答の喪失（血小板数＜１００×１０９／Ｌ又は出血の存在として定義される完全な臨床応答の喪失）までを測定
□臨床応答なし：血小板数＜３０×１０９／Ｌ又はベースラインからの２倍未満の増加又は出血の存在
【０３２７】
臨床応答変数は、血小板数及びＩＴＰ出血スコアの両方を評価する（以下の基準を満たすことを条件として、どの来院［予定されている又は予定されていない］で得られてもよい確証的な血小板評価を除く）来院についてのみ評価する。臨床応答を定義するために、血小板数は、少なくとも７日離れた２回の別々の機会（すなわち、第２の評価は、第１の評価の≧１６８時間後であるべきである）で確認しなければならない。応答までの時間は、第１の血小板評価（対応するＩＴＰ出血スコア評価と同時に得られる）までの時間とする。第２の評価が臨床応答に対する要求された基準を満足しない場合、対象を、それぞれの来院時の非応答者と見なす。臨床応答（又は臨床応答なし）を定義するために、血小板数は、２回の別々の機会で確認しなければならない。出血の非存在は、ＳＭＯＧの全てのドメインで、グレード０によって指示される。出血の存在は、ＳＭＯＧの少なくとも１つのドメインで、１又は２以上のグレードによって指示される。
【０３２８】
ＩＴＰ出血スコア
ＩＴＰに関する国際作業部会は、現在、出血徴候の正確な定義及び出血徴候の重症度の段階分けに基づく、コンセンサスに基づいたＩＴＰ特異的出血評価ツール（ＩＴＰ−ＢＡＴ）を提案している（Ｒｏｄｅｇｈｉｅｒｏら、２０１３、免疫性血小板減少症における出血評価の標準化：国際作業部会からの報告（Ｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｂｌｅｅｄｉｎｇ  ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｉｎ  ｉｍｍｕｎｅ  ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐｅｎｉａ：  ｒｅｐｏｒｔ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｗｏｒｋｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ）、Ｂｌｏｏｄ、１２１（１４）：２５９６〜６０６頁）。
【０３２９】
ＩＴＰ出血スコアは、ＩＴＰ−ＢＡＴツール  バージョン１．０を使用して評価される。評価は、研究評価の予定に従って実施される。
【０３３０】
ＩＴＰ−ＢＡＴについて、出血徴候を３つの主要なドメイン：皮膚（Ｓ）、可視粘膜（Ｍ）及び器官（Ｏ）に、重症度の段階と共に分類した（ＳＭＯＧ）。それぞれの出血徴候は検査時に評価する。重症度は０〜３又は４に段階分けされており、グレード５を任意の致死性の出血とする。医療文書のない対象によって報告された出血は１に段階分けする。それぞれのドメイン内で、同じグレードを、類似の臨床的影響の出血徴候に割り当てる。前回の観察期来院以後の「最も悪い」出血徴候を段階分けし、それぞれのドメイン内の最も高いグレードを記録する。ＳＭＯＧシステムは、ＩＴＰにおける出血の表現型に関する一貫した記載を提供する。
【０３３１】
標準化されたデータ収集フォームを使用して、情報の収集及び医師と治験責任医師と間の連絡を容易にする。提出時及びその後のそれぞれの評価時の出血症状の段階分けを図４に提示する。
【０３３２】
免疫性血小板減少症を有する患者における（ロザノリクシズマブ−ＵＣＢ７６６５に関する）研究ＴＰ０００１の中間結果
研究ＴＰ０００１中間データのアウトカム（研究は現在、１０、１５及び２０ｍｇ／ｋｇ用量で進行中である）
研究は、最初に、４ｍｇ／ｋｇ及び７ｍｇ／ｋｇコホートの２用量を、１つのコホート当たり１５名の患者（合計３０名の患者）で試験した。これらの患者は研究を完了した。これらの用量のアウトカムに基づいて、（１０ｍｇ／ｋｇ、２回用量）、１５ｍｇ／ｋｇ（単回用量）、及び２０ｍｇ／ｋｇ（単回用量）のさらなる用量が計画されている。現在までに、６名の患者に首尾よく１０ｍｇ／ｋｇを投薬した。
【０３３３】
中間結果：元来デザインされていた研究の患者（研究を完了した、４ｍｇ／ｋｇ及び７ｍｇ／ｋｇ用量コホート）から現在までに得られているデータは、安全性及び忍容性に関するこの第２ａ相研究の肯定的なアウトカム並びに有効性に関する肯定的な兆しを指示している。
【０３３４】
安全性及び忍容性
ＵＣＢ７６６５は、複数回用量後に十分忍容性があり、ＴＥＡＥ又は死に至るＴＥＡＥのための処置中止は報告されなかった。
【０３３５】
薬力学：中間分析において、全ＩｇＧレベルの最大の平均低下は、４ｍｇ／ｋｇ群については２９日目（４３．６％、範囲２１．９〜６８．６）、７ｍｇ／ｋｇ群については２２日目（５０．５％、３５．７〜６５．５）に観察された（図５）。
【０３３６】
現在までのデータは、全ＩｇＧレベルの最大の平均低下が、進行中の研究である１０ｍｇ／ｋｇ群については１５日目に観察されたことを指示している（図５）。
【０３３７】
有効性（血小板応答）
臨床的に関連する血小板数の改善が、異なる応答基準を使用して観察された（以下の表及び応答者のみの平均血小板数を示す図６を参照のこと）。応答基準１の血小板数≧３０×１０９／Ｌ及びベースライン値の少なくとも２倍の増加は、ＥＭＡガイドライン２０１４（慢性一次性免疫性血小板減少症の処置が意図されている医薬品の臨床開発に関するガイドライン（Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ｉｎｔｅｎｄｅｄ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｉｍｍｕｎｅ  ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐｅｎｉａ）、２０１４年２月２０日、ＥＭＡ／ＣＨＭＰ／１５３１９１／２０１３、腫瘍学作業部会）に由来し、応答基準２（研究中の血小板数≧５０×１０９／Ｌ）は、臨床的に意義のある応答として広く受け入れられており、ＦＤＡにおける、ＩＴＰの登録研究の受け入れられた応答基準でもある。応答基準３（血小板数≧１００×１０９／Ｌ）は、２０１４年以降のＩＴＰについてのＥＭＡガイドラインにおける「完全な応答」の定義に由来する。これらの中間結果に基づいて、ＵＣＢ７６６５が臨床的に調節され、関連する規制変数が調節された。研究において交絡するレスキュー薬（例えば、ＩＶＩｇ又はＴＰＯ）を受けた応答者は評価から除外した。
【表３】
2020523419.tif 000009
【０３３８】
図６は、４ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ及び１０ｍｇ／ｋｇ用量（１０ｍｇ／ｋｇ研究は進行中）の（応答者のみの）平均血小板数を示す。現在までに得られている１０ｍｇ／ｋｇの予備データは、応答者について、平均血小板数が４及び７ｍｇ／ｋｇ用量の応答者よりも多いことを示唆している。
【０３３９】
研究は進行中であり、より高い用量が現在評価されている：（１０ｍｇ／ｋｇ、２回用量）、１５ｍｇ／ｋｇ（単回用量）、及び２０ｍｇ／ｋｇ（単回用量）。
【０３４０】
有効性血小板応答（最新の１０ｍｇ／Ｋｇ）
１０ｍｇ／ｋｇ（２回用量）の有効性データを以下の表に示す。臨床的に関連する血小板数の改善が、異なる応答基準を使用して観察された。
【表４】
2020523419.tif 000010
【０３４１】
研究は進行中であり、より高い用量が現在評価されている：１５ｍｇ／ｋｇ（単回用量）、及び２０ｍｇ／ｋｇ（単回用量）。
【０３４２】
図７は、４、７、１０ｍｇ／ｋｇのＵＣＢ７６６５の複数回投与、及び１５ｍｇ／ｋｇのＵＣＢ７６６５の単回投与後のベースラインからの低下（平均ＩｇＧ減少）を示す。現在までのデータは、全ＩｇＧレベルの最大の平均低下が１５ｍｇ／ｋｇ群（１２名の患者）の８日目に観察されたことを指示する（図７）。
【０３４３】
現在までに得られている１５ｍｇ／ｋｇの予備データは、応答者について、血小板応答が１０ｍｇ／ｋｇについて観察されたものに少なくとも匹敵するということを示唆している。
【配列表フリーテキスト】
【０３４４】
配列番号１：＜２２３＞ＣＡ１７０＿１５１９  ＣＤＲＨ１
配列番号２：＜２２３＞ＣＡ１７０＿１５１９  ＣＤＲＨ２
配列番号３：＜２２３＞ＣＡ１７０＿１５１９  ＣＤＲＨ３
配列番号４：＜２２３＞ＣＡ１７０＿１５１９  ＣＤＲＬ１
配列番号５：＜２２３＞ＣＡ１７０＿１５１９  ＣＤＲＬ２
配列番号６：＜２２３＞ＣＡ１７０＿１５１９  ＣＤＲＬ３
配列番号７〜８：＜２２３＞ラットＡｂ  １５１９  ＶＬ領域
配列番号９〜１０：＜２２３＞シグナル配列を有するラットＡｂ  １５１９  ＶＬ領域
配列番号１１〜１２：＜２２３＞ラットＡｂ  １５１９  ＶＨ領域
配列番号１３〜１４：＜２２３＞シグナル配列を有するラットＡｂ  １５１９  ＶＨ領域
配列番号１５：＜２２３＞１５１９  ｇＬ２０  Ｖ領域
配列番号１６：＜２２３＞１５１９  ｇＬ２０  Ｖ領域（大腸菌発現）
配列番号１７：＜２２３＞１５１９  ｇＬ２０  Ｖ領域（哺乳動物発現）
配列番号１８〜１９：＜２２３＞シグナル配列を有する１５１９  ｇＬ２０  Ｖ領域（大腸菌発現）
配列番号２０〜２１：＜２２３＞シグナル配列を有する１５１９  ｇＬ２０  Ｖ領域（哺乳動物発現）
配列番号２２：＜２２３＞１５１９  ｇＬ２０軽鎖（Ｖ＋定常）
配列番号２３：＜２２３＞１５１９  ｇＬ２０軽鎖（Ｖ＋定常、大腸菌発現）
配列番号２４：＜２２３＞１５１９  ｇＬ２０軽鎖（Ｖ＋定常、哺乳動物発現）
配列番号２５〜２６：＜２２３＞シグナル配列を有する１５１９  ｇＬ２０軽鎖（大腸菌発現）
配列番号２７〜２８：＜２２３＞シグナル配列を有する１５１９  ｇＬ２０軽鎖（哺乳動物発現）
配列番号２９：＜２２３＞１５１９  ｇＨ２０  Ｖ領域
配列番号３０、３２〜３３：＜２２３＞１５１９  ｇＨ２０  Ｖ領域（大腸菌発現）
配列番号３１、３４：＜２２３＞１５１９  ｇＨ２０  Ｖ領域（哺乳動物発現）
配列番号３５：＜２２３＞シグナル配列を有する１５１９  ｇＨ２０  Ｖ領域（哺乳動物発現）
配列番号３６：＜２２３＞１５１９ｇＨ２０  Ｆａｂ’重鎖（Ｖ＋ヒトガンマ１  ＣＨ１＋ヒンジ）
配列番号３７：＜２２３＞１５１９ｇＨ２０  Ｆａｂ’重鎖（Ｖ＋ヒトガンマ１  ＣＨ１＋ヒンジ、大腸菌発現）
配列番号３８：＜２２３＞１５１９ｇＨ２０  Ｆａｂ’重鎖（Ｖ＋ヒトガンマ１  ＣＨ１＋ヒンジ、哺乳動物発現）
配列番号３９〜４０：＜２２３＞シグナル配列を有する１５１９  ｇＨ２０  Ｆａｂ’重鎖（大腸菌発現）
配列番号４１〜４２：＜２２３＞シグナル配列を有する１５１９  ｇＨ２０  Ｆａｂ’重鎖（哺乳動物発現）
配列番号４３：＜２２３＞１５１９ｇＨ２０  ＩｇＧ４重鎖（Ｖ＋ヒトガンマ４Ｐ定常）
配列番号４４：＜２２３＞１５１９ｇＨ２０  ＩｇＧ４重鎖（エクソンを有するＶ＋ヒトガンマ４Ｐ定常）
配列番号４５：＜２２３＞シグナル配列を有する１５１９ｇＨ２０  ＩｇＧ４重鎖（Ｖ＋ヒトガンマ４Ｐ定常）
配列番号４６〜４７：＜２２３＞１５１９ｇＬ２０  ＦａｂＦｖ軽鎖
配列番号４８〜４９：＜２２３＞シグナル配列を有する１５１９ｇＬ２０  ＦａｂＦｖ軽鎖
配列番号５０〜５１：＜２２３＞１５１９ｇＨ２０  ＦａｂＦｖ重鎖
配列番号５２〜５３：＜２２３＞シグナル配列を有する１５１９ｇＨ２０  ＦａｂＦｖ重鎖
配列番号５４〜５５：＜２２３＞ヒトＶＫ１  ２−１−（１）  Ａ３０  ＪＫ２アクセプターフレームワーク
配列番号５６〜５７：＜２２３＞ヒトＶＨ３  １−３  ３−０７  ＪＨ４アクセプターフレームワーク
配列番号５８〜５９：＜２２３＞ラットＡｂ  １５４８  ＶＬ領域
配列番号６０〜６１：＜２２３＞ラットＡｂ  １５４８  ＶＨ領域
配列番号６２〜６３：＜２２３＞ラットＡｂ  １６４４  ＶＬ領域
配列番号６４〜６５：＜２２３＞ラットＡｂ  １６４４  ＶＨ領域
配列番号６６〜６７：＜２２３＞ラットＡｂ  １４９６  ＶＫ領域
配列番号６８〜６９：＜２２３＞ラットＡｂ  １４９６  ＶＨ領域
配列番号７０〜７１：＜２２３＞フレームワーク
配列番号７２：＜２２３＞１５１９ｇＨ２０  ＩｇＧ１重鎖（Ｖ＋ヒトガンマ１定常）
配列番号７３：＜２２３＞１５１９ｇＨ２０  ＩｇＧ１重鎖（エクソンを有するＶ＋ヒトガンマ１定常）
配列番号７４：＜２２３＞シグナル配列を有する１５１９ｇＨ２０  ＩｇＧ１重鎖（Ｖ＋ヒトガンマ１定常）
配列番号７５：＜２２３＞１５１９  ｇＬ２０軽鎖（Ｖ＋定常、哺乳動物発現  代替）
配列番号７６：＜２２３＞１５１９ｇＨ２０  Ｆａｂ’重鎖（Ｖ＋ヒトガンマ１  ＣＨ１＋ヒンジ、哺乳動物発現  配列番号３８から１塩基変化）
配列番号７７：＜２２３＞シグナル配列を有する１５１９  ｇＨ２０  Ｆａｂ’重鎖（哺乳動物発現  配列番号４２から１塩基変化）
配列番号７８：＜２２３＞１５１９ｇＬ２０  ＦａｂＦｖ軽鎖（配列番号４６の代替配列）
配列番号７９：＜２２３＞１５１９ｇＬ２０  ＦａｂＦｖ軽鎖（配列番号４７の代替配列）
配列番号８０：＜２２３＞１５１９ｇＨ２０  ＦａｂＦｖ重鎖（配列番号５１の代替配列）
配列番号８１：＜２２３＞ラットＡｂ  １５４８  ＶＬ領域（配列番号５８の代替配列）
配列番号８２：＜２２３＞ラットＡｂ  １５４８  ＶＬ領域（配列番号５９の代替配列）
配列番号８３：＜２２３＞ラットＡｂ  １５４８  ＶＨ領域（配列番号６０の代替配列）
配列番号８４：＜２２３＞ラットＡｂ  １５４８  ＶＨ領域（配列番号６１の代替配列）
配列番号８５：＜２２３＞１５１９ｇＨ２０  ＩｇＧ１重鎖（エクソンを有するＶ＋ヒトガンマ１定常  配列番号７１の１塩基変化）
配列番号８６：＜２２３＞シグナル配列を有する１５１９ｇＨ２０  ＩｇＧ１重鎖（Ｖ＋ヒトガンマ１定常）（配列番号７２から１塩基変化）
配列番号８７：＜２２３＞１５１９ｇＨ２０  ＩｇＧ４重鎖（Ｖ＋ヒトガンマ４定常  Ｐ変異なし）
配列番号８８：＜２２３＞１５１９ｇＨ２０  ＩｇＧ４重鎖（エクソンを有するＶ＋ヒトガンマ４定常  Ｐ変異なし）
配列番号８９：＜２２３＞シグナル配列を有する１５１９ｇＨ２０  ＩｇＧ４重鎖（Ｖ＋ヒトガンマ４定常）−Ｐ変異なし
配列番号９０：＜２２３＞１５１９  ｇＬ２０  Ｖ領域（哺乳動物発現  配列番号１７の代替）
配列番号９１：＜２２３＞１５１９  ｇＬ２０軽鎖（Ｖ＋定常、哺乳動物発現）配列番号２４の代替）
配列番号９２：＜２２３＞１５１９  ｇＨ２０  Ｖ領域（哺乳動物発現  配列番号３１の代替）
配列番号９３：＜２２３＞１５１９ｇＨ２０  ＩｇＧ４重鎖（Ｖ＋ヒトガンマ４Ｐ定常  配列番号４４の代替）
配列番号９４：＜２２３＞ＦｃＲｎアルファ鎖細胞外配列
【図１】
2020523419.tif 000011
【図１Ａ】
2020523419.tif 000012
【図１Ｂ】
2020523419.tif 000013
【図１Ｃ】
2020523419.tif 000014
【図１Ｄ】
2020523419.tif 000015
【図１Ｅ】
2020523419.tif 000016
【図１Ｆ】
2020523419.tif 000017
【図１Ｇ】
2020523419.tif 000018
【図１Ｈ】
2020523419.tif 000019
【図１Ｉ】
2020523419.tif 000020
【図１Ｊ】
2020523419.tif 000021
【図１Ｋ】
2020523419.tif 000022
【図１Ｌ】
2020523419.tif 000023
【図１Ｍ】
2020523419.tif 000024
【図１Ｎ】
2020523419.tif 000025
【図１Ｐ】
2020523419.tif 000026
【図１Ｑ】
2020523419.tif 000027
【図１Ｒ】
2020523419.tif 000028
【図１Ｓ】
2020523419.tif 000029
【図１Ｔ】
2020523419.tif 000030
【図１Ｕ】
2020523419.tif 000031
【図１Ｖ】
2020523419.tif 000032
【図１Ｗ】
2020523419.tif 000033
【図１Ｘ】
2020523419.tif 000034
【図１Ｙ】
2020523419.tif 000035
【図１Ｚ】
2020523419.tif 000036
【図１ＡＡ】
2020523419.tif 000037
【図１ＢＢ】
2020523419.tif 000038
【図１ＣＣ】
2020523419.tif 000039
【図１ＤＤ】
2020523419.tif 000040
【図１ＥＥ】
2020523419.tif 000041
【図１ＦＦ】
2020523419.tif 000042
【図２Ａ】
2020523419.tif 000043
【図２Ｂ】
2020523419.tif 000044
【図３】
2020523419.tif 000045
【図４−１】
2020523419.tif 000046
【図４−２】
2020523419.tif 000047
【図４−３】
2020523419.tif 000048
【図４−４】
2020523419.tif 000049
【図４−５】
2020523419.tif 000050
【図４−６】
2020523419.tif 000051
【図４−７】
2020523419.tif 000052
【図４−８】
2020523419.tif 000053
【図４−９】
2020523419.tif 000054
【図４−１０】
2020523419.tif 000055
【図５】
2020523419.tif 000056
【図６】
2020523419.tif 000057
【図７】
2020523419.tif 000058
【配列表】
2020523419000001.app
【国際調査報告】
2020523419.tif 000059
2020523419.tif 000060
2020523419.tif 000061
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