(57)【要約】  本明細書で定義されている式ＩまたはＩａで表される擬似三糖アミノグリコシド化合物を製造する合成経路、ならびに、当該化合物を製造するのに有用な供与体化合物および受容体化合物が提供される。立体異性体のクロマトグラフィー分離を回避して、本明細書で定義されている式ＩＩＩで表される化合物を立体選択的に製造する方法も提供される。記載の方法で製造された化合物、およびその使用も提供される。
2020514373.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式ＩＩＩ：
【化１】
2020514373.tif 000032
（式中、ＯＴ１およびＯＴ２は、それぞれ独立して、供与体保護ヒドロキシル基であり；
Ｒ８は、アルキルであり；
Ｄは、保護アミノ基である）
で表される化合物を製造する方法であって：
前記方法は、
式ＩＩＩａ：
【化２】
2020514373.tif 000033
で表される化合物と式Ｒ８ＭｇＸ（Ｘはハライドである）で表されるグリニャール試薬を反応させ、それにより、式ＩＩＩｂ：
【化３】
2020514373.tif 000034
で表される化合物を立体選択的に得ること、
前記式ＩＩＩｂで表される化合物を式ＩＩＩｃ：
【化４】
2020514373.tif 000035
で表される化合物に変換すること、
前記式ＩＩＩｃで表される化合物とアミノ保護性基を反応させ、それにより、前記Ｄを形成すること；および
前記式ＩＩＩｃで表される化合物とヒドロキシ保護性基を反応させ、それにより、前記ＯＴ１およびＯＴ２を形成すること、
を含み、それにより、前記式ＩＩＩで表される化合物を製造する、方法。
【請求項２】
前記アミノ保護性基が、N-ベンジルオキシカルボニルである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ヒドロキシ保護性基のそれぞれがベンゾイルである、請求項１〜２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４】
前記式ＩＩＩａで表される化合物が：
D-リボースをジオキソラン保護D-リボースに変換すること；
５’’位のヒドロキシ基を、それぞれのアルデヒドに酸化すること；および
前記アルデヒドとN-ベンジルヒドロキシルアミン塩酸塩を反応させることにより製造される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
Ｄが、N-ベンジルオキシカルボニル（ＣＢｚ）保護アミノ基で、Ｒ８がメチルで、Ｔ１およびＴ２のそれぞれがベンゾイルである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記式ＩＩＩａで表される化合物をD-リボースから製造すること、前記式ＩＩＩａで表される化合物と前記グリニャール試薬を反応させること、前記式ＩＩＩｂで表される化合物を前記式ＩＩＩｃで表される化合物に変換すること、および、前記式ＩＩＩｃで表される化合物とアミノ保護性基を反応させ、それにより前記Ｄを形成することが、「ワンポット反応」として行われる、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
式Ｉ：
【化５】
2020514373.tif 000036
（式中、
矩形破線は、６’位でのＳ−配置またはＲ−配置を表し；
Ｒ１は、水素、アルキル、シクロアルキルまたはアリールから選択され；
Ｒ４は、水素、アシルおよびアミノ置換α-ヒドロキシアシルから選択され；
Ｒ８は、アルキルである）
で表される擬似三糖アミノグリコシド化合物、または医薬として許容できるその塩を製造する方法であって：
前記方法は、
請求項１〜６のいずれか１項にしたがって、式ＩＩＩで表される化合物を製造すること；
前記式ＩＩＩで表される化合物と、式ＩＩ：
【化６】
2020514373.tif 000037
（式中、
矩形破線は、６’位でのＳ−配置またはＲ−配置を表し；
ＯＰは、受容体保護ヒドロキシル基であり；
ＡＰは、受容体保護アミノ基であり；
Ａは、受容体保護ヒドロキシル基（ＯＰ）であり；
Ｂは、式ＩのＲ４が水素の場合、受容体保護アミン基であり、または、Ｒ４が水素以外のものである場合、Ｒ４を定義する基の保護形態もしくは非保護形態である）
で表される化合物をカップリングすること；
前記受容体保護および供与体保護ヒドロキシル基を脱保護すること；
前記受容体保護および供与体保護アミノ基を脱保護すること；および
存在する場合は、Ｒ４を定義する基の前記保護形態を脱保護すること、
を含み、それにより、式Ｉで表される化合物を製造する、方法。
【請求項８】
前記カップリングが、ＢＦ３エーテラートの存在下で行われる、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記式ＩＩＩの化合物が、前記カップリングの前にその活性化形態に変換される、請求項７または８に記載の方法。
【請求項１０】
前記式ＩＩＩの化合物の活性化形態への変換が、前記活性化形態を単離することなく、インサイチューで行われる、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
Ｒ１がメチルで、Ｒ４が水素で、前記式ＩＩで表される化合物が：
Ｇ４１８スルフェートを6-メチルパロマミンに変換すること；
ヒドロキシル基を前記受容体保護ヒドロキシル基に変換すること；および
アミノ基を前記受容体保護アミノ基に変換することにより製造される、請求項７〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
Ｇ４１８スルフェートを6-メチルパロマミンに変換することが、Ｇ４１８の遊離塩基の形態とＨＣｌのメタノール溶液の接触を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記受容体保護ヒドロキシル基のそれぞれが、O-アセチルである、請求項７〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記受容体保護ヒドロキシル基の脱保護が、アンモニアのメタノール溶液中で行われる、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記受容体保護アミノ基のそれぞれが、N-ベンジルオキシカルボニル（ＣＢｚ）保護アミノ基である、請求項７〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記受容体保護アミノ基の脱保護が、Ｐｄ／Ｃ触媒を用いた水素化により行われる、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
６’位の立体配置がＲ−配置である、請求項７〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
前記式Ｉの化合物が硫酸塩で、前記方法が、式Ｉで表される化合物の遊離塩基の形態を前記硫酸塩に変換することをさらに含む、請求項７〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記変換が、式Ｉで表される化合物の遊離塩基の形態と、Ｈ２ＳＯ４のメタノール溶液の接触により行われる、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
Ｒ１がメチルで、６’位の配置がＲ−配置で、Ｒ４が水素で、Ｒ８がメチルである、請求項７〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記式ＩＩで表される化合物が、請求項２２〜２６のいずれか１項に記載されているように製造される、請求項７〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
式ＩＩ：
【化７】
2020514373.tif 000038
（式中、
破線は、６’位でのＳ−配置またはＲ−配置を表し；
Ｒ１は、水素、アルキル、シクロアルキルまたはアリールであり；
ＯＰは、受容体保護ヒドロキシル基であり；
ＡＰは、受容体保護アミノ基であり；
Ａは、受容体保護ヒドロキシル基（ＯＰ）であり；
Ｂは、受容体保護アミン基、アシル、または保護もしくは非保護アミノ置換α-ヒドロキシアシルである）
で表される化合物を製造する方法であって：
前記方法は、
式ＩＩａ：
【化８】
2020514373.tif 000039
（式中、
Ｒ４は、水素、アシルまたはアミノ置換α-ヒドロキシアシルである）
で表される化合物、または医薬として許容できるその塩を提供すること；
前記アミノ基のそれぞれを、前記受容体保護アミノ基に変換すること；および
前記ヒドロキシ基のそれぞれを前記受容体保護ヒドロキシル基に変換すること、
を含む、方法。
【請求項２３】
前記受容体保護ヒドロキシル基のそれぞれが、O-アセチルである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記受容体保護アミノ基のそれぞれが、N-ベンジルオキシカルボニル（ＣＢｚ）保護アミノ基である、請求項２２〜２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
Ｒ１がメチルで、６’位の配置がＲ−配置で、前記式ＩＩａの化合物の提供が、Ｇ４１８を前記式ＩＩａで表される化合物に変換することを含む、請求項２２〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
前記変換が、Ｇ４１８の遊離塩基の形態とＨＣｌのメタノール溶液の接触を含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
請求項７〜２１のいずれか１項に記載の方法により製造される、式Ｉで表される擬似三糖化合物、または医薬として許容できるその塩。
【請求項２８】
請求項２７に記載の化合物および医薬として許容できる塩を含む、医薬組成物。
【請求項２９】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法により製造される、式ＩＩＩで表される化合物。
【請求項３０】
式ＩＩＩａで表される化合物。
【請求項３１】
式ＩＩＩｂで表される化合物。
【請求項３２】
式ＩＩＩｃで表される化合物。
【請求項３３】
式Ｉａ：
【化９】
2020514373.tif 000040
（式中、
矩形破線は、６’位でのＳ−配置またはＲ−配置を表し；
Ｒ１は、水素、アルキル、シクロアルキルまたはアリールから選択され；
Ｒ２は、置換または無置換アルキル、ＯＲ’およびＮＲ’Ｒ’’から選択され、Ｒ’およびＲ’’は、独立して、水素、置換または無置換アルキル、置換または無置換シクロアルキル、置換または無置換アリール、置換または無置換ヘテロアリール、置換または無置換アルカリールおよびアシルから選択され；
Ｒ４は、水素、アシル、アミノ置換α-ヒドロキシアシル、置換または無置換アルキル、置換または無置換シクロアルキル、置換または無置換アリール、置換または無置換アルカリール、および細胞透過性基から選択され；
Ｒ８は、アルキルである）
で表される擬似三糖アミノグリコシド化合物、または医薬として許容できるその塩を製造する方法であって、
前記方法は、
請求項１〜６のいずれか１項にしたがって、式ＩＩＩで表される化合物を製造すること；および
前記式ＩＩＩで表される化合物と、式ＩＩｂ：
【化１０】
2020514373.tif 000041
（式中、
矩形破線は、６’位でのＳ−配置またはＲ−配置を表し；
ＯＰは、受容体保護ヒドロキシル基であり；
ＡＰは、受容体保護アミノ基であり；
Ａは、式ＩａのＲ２がＯＲ’で、Ｒ’が水素である場合、受容体保護ヒドロキシル基（ＯＰ）であり；式ＩａのＲ２がＮＲ’Ｒ’’で、Ｒ’およびＲ’’の少なくとも１つが水素である場合、受容体保護アミン基（ＡＰ）であり；または、Ｒ２がＯＨ、ＮＨ２、ＮＨＲ’もしくはＮＨＲ’’以外である場合、Ｒ２を定義する基の保護形態もしくは非保護形態であり；
Ｂは、式ＩａのＲ４が水素である場合、受容体保護アミン基（ＡＰ）であり、または、Ｒ４が水素以外である場合、Ｒ４を定義する基の保護形態もしくは非保護形態である）
で表される化合物をカップリングすること；
前記受容体保護および供与体保護ヒドロキシル基を脱保護すること；
前記受容体保護および供与体保護アミノ基を脱保護すること；および
存在する場合は、Ｒ２および／またはＲ４を定義する基の前記保護形態を脱保護すること、
を含み、それにより、式Ｉａで表される化合物を製造する、方法。
【請求項３４】
前記カップリングが、ＢＦ３エーテラートの存在下で行われる、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記式ＩＩＩの化合物が、前記カップリングの前にその活性化形態に変換される、請求項３３〜３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３６】
前記式ＩＩＩの化合物の活性化形態への変換が、前記活性化形態を単離することなく、インサイチューで行われる、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記受容体保護ヒドロキシル基のそれぞれが、O-アセチルである、請求項３３〜３６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３８】
前記受容体保護ヒドロキシル基の脱保護が、アンモニアのメタノール溶液中で行われる、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記受容体保護アミノ基のそれぞれが、N-ベンジルオキシカルボニル（ＣＢｚ）保護アミノ基である、請求項３３〜３８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４０】
前記受容体保護アミノ基の脱保護が、Ｐｄ／Ｃ触媒を用いた水素化により行われる、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
６’位の立体配置がＲ−配置である、請求項３３〜４０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４２】
前記式Ｉａの化合物が硫酸塩で、前記方法が、式Ｉａで表される化合物の遊離塩基の形態を前記硫酸塩に変換することをさらに含む、請求項３３〜４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４３】
前記変換が、式Ｉａで表される化合物の遊離塩基の形態と、Ｈ２ＳＯ４のメタノール溶液の接触により行われる、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
請求項３３〜４３のいずれか１項に記載の方法により製造される、式Ｉａで表される擬似三糖化合物、または医薬として許容できるその塩。
【請求項４５】
請求項４４に記載の化合物および医薬として許容できる塩を含む、医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、その一部の態様ではアミノグリコシドの合成に関し、限定されるものではないが、特に、リードスルー活性および低毒性の擬似三糖アミノグリコシドを製造する新規な方法に関し、この方法はそのようなアミノグリコシドの大規模生成に有用であり、また、そのようなアミノグリコシドの製造に有用な受容体および供与体中間体化合物に関する。
【０００２】
多くのヒト遺伝障害は、３つの終止コドン（ＵＡＡ、ＵＡＧまたはＵＧＡ）の１つが、アミノ酸をコードするコドンに置きかわるナンセンス変異に起因し、翻訳の中途停止、最終的には不活性タンパク質の断片に至る。現在、何百ものそのようなナンセンス変異が公知であり、いくつかは、例えば、嚢胞性線維症（ＣＦ）、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）、毛細血管拡張性運動失調症、ハーラー症候群、血友病Ａ、血友病Ｂ、テイサックス病等を含む致死性疾患の特定のケースを説明することが示された。そうした疾患の多くでは、現在、有効な治療法がない。
【０００３】
アミノグリコシドは、通常、生命をおびやかす感染症の処置に用いられる、きわめて強力な広域スペクトラム抗生物質である。一部のアミノグリコシド化合物は、リボソームに終止コドン変異のリードスルーを誘導し、ｍＲＮＡ分子から完全長タンパク質を生成する能力のため、いくつかの遺伝子疾患の処置における治療的価値を有することが示されている。
【０００４】
しかし、ヒト細胞の細胞質リボソームに対して著しい効果を示すアミノグリコシド化合物の大半は、抗微生物活性、および／または、哺乳類細胞に対する異なる毒性も示す。胃腸（ＧＩ）生物相の平衡を乱すことにより生じる副作用と耐性の出現のため、リードスルー薬物の抗微生物活性は、特にＧＩ生物相に対し、抗生物質の不要な使用として望ましくない。
【０００５】
未成熟終止コドン変異の高いリードスルー活性、哺乳類細胞に対する毒性および低抗微生物活性、ならびに、改善したバイオアベイラビリティおよび／または細胞透過性を示すことにより、遺伝子疾患の処置に有益に使用できるアミノグリコシド化合物を発見するために、広範な研究が行われている。
【０００６】
ここに完全に記載されているように参照として組み込まれるＷＯ２００７／１１３８４１は、未成熟終止コドン変異の高いリードスルー活性、哺乳類細胞に対する細胞毒性および低抗微生物活性を示し、ひいては遺伝子疾患の処置に使用できるように特別に設計された、アミノグリコシドに由来するパロモマイシンの一群を教示する。このアミノグリコシドに由来するパロモマイシンの一群は、パロマミンコアに、特定の操作を導入することにより設計され、これはリードスルー活性の増強、毒性および抗微生物活性の低下につながる。この操作は、パロマミンコアのいくつかの位置で行われた。
【０００７】
【化１】
2020514373.tif 000003
【０００８】
ＷＯ２００７／１１３８４１に記載されているパロマミンコアのそのような操作の１つは、アミノグリコシドコアの６’位におけるヒドロキシル基の有益な役割の決定である。
【０００９】
ＷＯ２００７／１１３８４１で定義され実証されているパロマミンコアの別の操作は、アミノグリコシドコアの３’、５および／または６位における、１つ以上の単糖部分またはオリゴ糖部分の導入である。
【００１０】
ＷＯ２００７／１１３８４１で定義され実証されているパロマミンコアの追加の操作は、パロマミンコアの１位における、(Ｓ)-4-アミノ-2-ヒドロキシブチリル（ＡＨＢ）部分の導入である。
【００１１】
ＷＯ２００７／１１３８４１に記載されているパロマミンコアの追加の操作は、アルキル基、例えばメチル基による６’位の水素の置換である。
【００１２】
やはりここに完全に記載されているように参照として組み込まれるＷＯ２０１２／０６６５４６は、終止コドン変異の効率的リードスルー活性、低細胞毒性および真核生物翻訳系に対する高い選択性を示す擬似三糖アミノグリコシドの別の一群を開示する。これらの擬似三糖アミノグリコシドは、化合物ＮＢ１２４に例示されるように、５’’位のアルキル基を特徴とする。
【００１３】
【化２】
2020514373.tif 000004
【００１４】
ＷＯ２０１２／０６６５４６は、５’’位のＳ−配置を特徴とする、立体異性体の改善した性能についてさらに開示する。
【００１５】
ＷＯ２００７／１１３８４１およびＷＯ２０１２／０６６５４６で開示されている擬似三糖アミノグリコシド化合物の合成は、供与体単糖部分（アミノグリコシド化合物の環ＩＩＩを形成する）と擬似二糖受容体のカップリングに基づく。ＷＯ２００７／１１３８４１およびＷＯ２０１２／０６６５４６の教示によれば、擬似二糖受容体は、パロマミン二糖コアを得るために、パロモマイシンの開裂により、これは望むようにさらに操作される。合成経路は、アミノ保護性基、典型的にはアジド基の使用、ヒドロキシ保護性基の使用、および合成の様々な段階における立体異性体のクロマトグラフィー分離を含む。
【００１６】
さらなる背景技術は、Nudelman, I.ら、Bioorg Med Chem Lett, 2006. 16(24) : p.6310-5；Nudelman, I. ら、Bioorg Med Chem, 2010. 18(11) : p.3735-46；ＷＯ２０１７／０３７７１７およびＷＯ２０１７／０３７７１８を含む。
【００１７】
発明の概要
本発明者らは、現在、例えばＷＯ２０１２／０６６５４６およびＷＯ２０１７／０３７７１８に記載されている擬似三糖アミノグリコシドを生成する新規な合成経路であって、そのようなアミノグリコシド化合物の大規模な生成に適している新規な合成経路を設計し、その実施に成功した。この新たに設計された方法は、以前に記載されているように、単糖供与体と擬似二糖受容体のカップリングに基づくが、受容体を製造するための出発材料としてＧ−４１８を有益に使用し、重要なことには、供与体の望ましい立体異性体の立体選択的合成を使用し、それにより、立体異性体のクロマトグラフィー分離の必要性を避ける。新たに設計された方法は、さらに有利には、工程数の減少、実質的にはクロマトグラフィー分離の数の減少により、有害な試薬の使用の抑制または排除により、より高い収率とコスト効果の改善により特徴付けられる。
【００１８】
したがって、本発明の一部の態様は、供与体グリコシル化合物の望ましい立体異性体を製造する新規な方法、そのような供与体を適切な受容体とカップリングし、それにより、例えばＷＯ２０１２／０６６５４６およびＷＯ２０１７／０３７７１８に記載されている擬似三糖アミノグリコシド化合物を得る新規な方法、ここに記載されている擬似二糖受容体を製造する新規な方法、および、ここに記載されている供与体と受容体をカップリングし、その後、最終的な擬似三糖アミノグリコシドを生成する新規な方法に関する。本発明の一部の態様は、ここに記載されている供与体グリコシル化合物の立体異性体（例えば、式ＩＩＩで表される化合物）の大規模生成に関する。本発明の一部の態様は、例えばＷＯ２０１２／０６６５４６およびＷＯ２０１７／０３７７１８に記載されている擬似三糖アミノグリコシド化合物（例えば、式ＩまたはＩａで表される化合物）の大規模生成に関する。
【００１９】
本発明の一部の態様は、ここに記載されている方法により製造される、供与体化合物、受容体化合物、擬似三糖アミノグリコシドおよび他の中間体化合物に関する。
【００２０】
本発明の一部の態様の一側面によれば、式ＩＩＩ：
【００２１】
【化３】
2020514373.tif 000005
【００２２】
（式中、
ＯＴ１およびＯＴ２は、それぞれ独立して、供与体保護ヒドロキシル基であり；
Ｒ８はアルキル、好ましくはメチルであり；
Ｄは保護アミノ基である）
で表される化合物を製造する方法が提供され、
この方法は、式ＩＩＩの化合物、またはここに記載されている式ＩもしくはＩａで表される化合物の大規模製造（ここでは、大規模生成または製造と定義される）のためのものである。
【００２３】
本発明の一部の態様の一側面によれば、式ＩＩＩ：
【００２４】
【化４】
2020514373.tif 000006
【００２５】
（式中、
ＯＴ１およびＯＴ２は、それぞれ独立して、供与体保護ヒドロキシル基であり；
Ｒ８はアルキル、好ましくはメチルであり；
Ｄは保護アミノ基である）
で表される化合物を製造する方法が提供され、
この方法は、
式ＩＩＩａ：
【００２６】
【化５】
2020514373.tif 000007
【００２７】
で表される化合物と、式Ｒ８ＭｇＸ（Ｘはハライドである）で表されるグリニャール試薬を反応させ、
それにより、式ＩＩＩｂ：
【００２８】
【化６】
2020514373.tif 000008
【００２９】
により表され、以下に示されているようにＳ−配置を特徴とする化合物を立体選択的に得ること、
式ＩＩＩｂで表される化合物を式ＩＩＩｃ：
【００３０】
【化７】
2020514373.tif 000009
【００３１】
で表される化合物に変換すること、
式ＩＩＩｃで表される化合物とアミノ保護性基を反応させ、それによりＤを形成すること；ならびに
式ＩＩＩｃで表される化合物とヒドロキシ保護性基を反応させ、それによりＯＴ１およびＯＴ２を形成することを含み、
それにより、式ＩＩＩで表される化合物を製造する。
【００３２】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、アミノ保護性基はN-ベンジルオキシカルボニルである。
【００３３】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、ヒドロキシ保護性基のそれぞれはベンゾイルである。
【００３４】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、式ＩＩＩａで表される化合物は、
D-リボースをジオキソラン保護D-リボースに変換すること；
５’’位のヒドロキシ基をそれぞれのアルデヒドに酸化すること；および
アルデヒドとN-ベンジルヒドロキシルアミン塩酸塩を反応させることにより製造される。
【００３５】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、ＤはN-ベンジルオキシカルボニル（ＣＢｚ）保護アミノ基であり、Ｒ８はメチルであり、Ｔ１およびＴ２のそれぞれはベンゾイルであり、この方法は、本質的に、ここに記載され、図１に示されている。
【００３６】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、式ＩＩＩａで表される化合物をD-リボースから製造すること、式ＩＩＩａで表される化合物とグリニャール試薬を反応させること、式ＩＩＩｂで表される化合物を式ＩＩＩｃで表される化合物に変換すること、および、式ＩＩＩｃで表される化合物とアミノ保護性基を反応させ、それによりＤを形成することは、「ワンポット反応」として行われる。
【００３７】
本発明の一部の態様の一側面によれば、式Ｉ：
【００３８】
【化８】
2020514373.tif 000010
【００３９】
（式中、
（矩形）破線は、６’位でのＳ−配置またはＲ−配置を表し；
Ｒ１は、水素、アルキル、シクロアルキルまたはアリールから選択され；
Ｒ４は、水素、アシルおよびアミノ置換α-ヒドロキシアシルから選択され；
Ｒ８はアルキル、好ましくはメチルである）
で表される擬似三糖アミノグリコシド化合物、または医薬として許容できるその塩を製造する方法が提供され、
この方法は、
それぞれの態様のいずれか１つ、およびそれらの任意の組合せに従って、式ＩＩＩで表される化合物を製造すること；ならびに、
式ＩＩＩで表される化合物と、式ＩＩ：
【００４０】
【化９】
2020514373.tif 000011
【００４１】
（式中、
（矩形）破線は、６’位でのＳ−配置またはＲ−配置を表し；
ＯＰは、受容体保護ヒドロキシル基であり；
ＡＰは、受容体保護アミノ基であり；
Ａは、受容体保護ヒドロキシル基（ＯＰ）であり；
Ｂは、式ＩのＲ４が水素の場合、受容体保護アミン基であり、または、Ｒ４が水素以外のものである場合、Ｒ４を定義する基の保護形態もしくは非保護形態である）
で表される化合物をカップリングし；
受容体保護および供与体保護ヒドロキシル基を脱保護し；
受容体保護および供与体保護アミノ基を脱保護し；ならびに
存在する場合は、Ｒ４を定義する基の前記保護形態の脱保護を含み、
それにより、式Ｉで表される化合物を製造する。
【００４２】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、カップリングはＢＦ３エーテラートの存在下で行われる。
【００４３】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、式ＩＩＩの化合物は、カップリングの前にその活性化形態に変換される。
【００４４】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、式ＩＩＩの化合物の活性化形態への変換は、活性化形態を単離することなく、インサイチューで行われる。ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、Ｒ１はメチルで、Ｒ４は水素で、式ＩＩで表される化合物は、
Ｇ４１８スルフェートを6-メチルパロマミンに変換すること；
ヒドロキシル基を受容体保護ヒドロキシル基に変換すること；および
アミノ基を受容体保護アミノ基に変換することにより製造される。
【００４５】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、Ｇ４１８スルフェートを6-メチルパロマミンに変換することは、Ｇ４１８の遊離塩基の形態と、ＨＣｌのメタノール溶液を接触させることを含む。
【００４６】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、受容体保護ヒドロキシル基のそれぞれは、O-アセチルである。
【００４７】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、受容体保護ヒドロキシル基の脱保護は、アンモニアのメタノール溶液中で行われる。
【００４８】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、受容体保護アミノ基のそれぞれは、N-ベンジルオキシカルボニル（ＣＢｚ）保護アミノ基である。
【００４９】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、受容体保護アミノ基の脱保護は、Ｐｄ／Ｃ触媒を用いた水素化により行われる。
【００５０】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、６’位での立体配置はＲ−配置である。
【００５１】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、式Ｉの化合物は硫酸塩であり、方法は、式Ｉで表される化合物の遊離塩基の形態を硫酸塩に変換することをさらに含む。
【００５２】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、変換は、式Ｉで表される化合物の遊離塩基の形態を、Ｈ２ＳＯ４のメタノール溶液との接触により行われる。
【００５３】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、Ｒ１はメチルで、６’位での配置がＲ−配置で、Ｒ４は水素で、Ｒ８はメチルである。例示的なそのような方法は、本質的に、ここに記載されているとおりで、図１〜３に示されている。
【００５４】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、式ＩＩで表される化合物は、それぞれの態様のいずれか１つ、およびそれらの任意の組合せに記載されているように製造される。
【００５５】
本発明の一部の態様の一側面によれば、式ＩＩ：
【００５６】
【化１０】
2020514373.tif 000012
【００５７】
（式中、
（矩形）破線は、６’位でのＳ−配置またはＲ−配置を表し；
Ｒ１は、水素、アルキル、シクロアルキルまたはアリールであり；
ＯＰは、受容体保護ヒドロキシル基であり；
ＡＰは、受容体保護アミノ基であり；
Ａは、受容体保護ヒドロキシル基（ＯＰ）であり；
Ｂは、受容体保護アミン基、アシル、または保護もしくは非保護アミノ置換α-ヒドロキシアシルである）
で表される化合物を製造する方法が提供され、
この方法は、
式ＩＩａ：
【００５８】
【化１１】
2020514373.tif 000013
【００５９】
（式中、
Ｒ４は水素、アシルまたはアミノ置換α-ヒドロキシアシルである）
で表される化合物、または医薬として許容できるその塩を提供すること；
アミノ基のそれぞれを受容体保護アミノ基に変換すること；および
ヒドロキシ基のそれぞれを受容体保護ヒドロキシル基に変換することを含む。
【００６０】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、受容体保護ヒドロキシル基のそれぞれはO-アセチルである。
【００６１】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、受容体保護アミノ基のそれぞれはN-ベンジルオキシカルボニル（ＣＢｚ）保護アミノ基である。
【００６２】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、Ｒ１はメチルで、６’位での配置がＲ−配置で、式ＩＩａの化合物を提供することは、Ｇ４１８を式ＩＩａで表される化合物に変換することを含む。
【００６３】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、変換は、Ｇ４１８の遊離塩基形態とＨＣｌのメタノール溶液との接触を含む。
【００６４】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、Ｒ４は水素で、その方法は、本質的に、ここに記載され、図２に示されている。
【００６５】
本発明の一部の態様の一側面によれば、本質的にここに記載されている、式ＩＩＩａで表される化合物を立体選択的に製造する方法が提供される。
【００６６】
本発明の一部の態様の一側面によれば、本質的にここに記載されている、式ＩＩＩｂで表される化合物を製造する方法が提供される。
【００６７】
本発明の一部の態様の一側面によれば、本質的にここに記載されている、式ＩＩＩｃで表される化合物を製造する方法が提供される。
【００６８】
本発明の一部の態様の一側面によれば、式Ｉで表される擬似三糖化合物、または医薬として許容できるその塩が提供され、それぞれの態様のいずれかにおいてここに記載されている方法により製造され、または取得可能である。
【００６９】
本発明の一部の態様の一側面によれば、ここに記載され、請求されている式Ｉで表される擬似三糖化合物、および医薬として許容できる塩を含む、医薬組成物が提供される。
【００７０】
本発明の一部の態様の一側面によれば、遺伝子障害の処置に使用するための、ここに記載され、請求されている式Ｉで表される擬似三糖化合物、またはここに記載されている同化合物を含む組成物が提供される。
【００７１】
本発明の一部の態様の一側面によれば、それぞれの態様のいずれかにおいてここに記載されている方法により製造される、式ＩＩＩで表される化合物が提供される。
【００７２】
本発明の一部の態様の一側面によれば、式ＩＩＩａで表される化合物が提供される。
【００７３】
本発明の一部の態様の一側面によれば、式ＩＩＩｂで表される化合物が提供される。
【００７４】
本発明の一部の態様の一側面によれば、式ＩＩＩｃで表される化合物が提供される。
【００７５】
本発明の一部の態様の一側面によれば、式Ｉａ：
【００７６】
【化１２】
2020514373.tif 000014
【００７７】
（式中；
矩形破線は、６’位でのＳ−配置またはＲ−配置を表し；
Ｒ１は、水素、アルキル、シクロアルキルまたはアリールから選択され；
Ｒ２は、置換または無置換アルキル、ＯＲ’およびＮＲ’Ｒ’’から選択され、Ｒ’およびＲ’’のそれぞれは、独立して、水素、置換または無置換アルキル、置換または無置換シクロアルキル、置換または無置換アリール、置換または無置換ヘテロアリール、置換または無置換アルカリール、およびアシルから選択され；
Ｒ４は、水素、アシル、アミノ置換α-ヒドロキシアシル、置換または無置換アルキル、置換または無置換シクロアルキル、置換または無置換アリール、置換または無置換アルカリールおよび細胞透過性基から選択され；
Ｒ８はアルキルである）
で表される擬似三糖アミノグリコシド化合物、または医薬として許容できるその塩を製造する方法が提供され、
この方法は、
それぞれの態様のいずれか、およびそれらの任意の組合せにおいて、ここに記載されているそれぞれの方法に従って、式ＩＩＩで表される化合物を製造すること；ならびに
式ＩＩＩで表される化合物と、式ＩＩｂ：
【００７８】
【化１３】
2020514373.tif 000015
【００７９】
（式中；
矩形破線は、６’位でのＳ−配置またはＲ−配置を表し；
ＯＰは、受容体保護ヒドロキシル基であり；
ＡＰは、受容体保護アミノ基であり；
Ａは、式ＩａにおけるＲ２がＯＲ’で、Ｒ’が水素である場合、受容体保護ヒドロキシル基（ＯＰ）であり；式ＩａにおけるＲ２がＮＲ’Ｒ’’で、Ｒ’およびＲ’’の少なくとも１つが水素である場合、受容体保護アミン基（ＡＰ）であり；または、Ｒ２がＯＨ、ＮＨ２、ＮＨＲ’もしくはＮＨＲ’’以外である場合、Ｒ２を定義する基の保護形態もしくは非保護形態であり；
Ｂは、式ＩａにおけるＲ４が水素である場合、受容体保護アミン基（ＡＰ）であり、または、Ｒ４が水素以外である場合、Ｒ４を定義する基の保護形態もしくは非保護形態である）
で表される化合物をカップリングすること；
受容体保護および供与体保護ヒドロキシル基を脱保護すること；
受容体保護および供与体保護アミノ基を脱保護すること；ならびに
存在する場合は、Ｒ２を定義する基の保護形態、および／または、Ｒ４を定義する基の保護形態を脱保護することを含み、
それにより、式Ｉａで表される化合物を製造する。
【００８０】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、カップリングはＢＦ３エーテラートの存在下で行われる。
【００８１】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、式ＩＩＩの化合物は、カップリングの前にその活性化形態に変換される。
【００８２】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、式ＩＩＩの化合物を活性化形態に変換は、活性化形態を単離することなく、インサイチューで行われる。
【００８３】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、受容体保護ヒドロキシル基のそれぞれはO-アセチルである。
【００８４】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、受容体保護ヒドロキシル基の脱保護はアンモニアのメタノール溶液中で行われる。
【００８５】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、受容体保護アミノ基のそれぞれはN-ベンジルオキシカルボニル（ＣＢｚ）保護アミノ基である。
【００８６】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、受容体保護アミノ基の脱保護はＰｄ／Ｃ触媒を用いた水素化により行われる。
【００８７】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、６’位での立体配置はＲ−配置である。
【００８８】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、式Ｉａの化合物は硫酸塩で、方法は、式Ｉａで表される化合物の遊離塩基の形態を、硫酸塩に変換することをさらに含む。
【００８９】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、変換は、式Ｉａで表される化合物の遊離塩基の形態と、Ｈ２ＳＯ４のメタノール溶液を接触により行われる。
【００９０】
本発明の一部の態様の一側面によれば、式Ｉａで表される擬似三糖化合物、または医薬として許容できるその塩が提供され、これは、それぞれの態様のいずれか、およびそれらの任意の組合せによる方法によって製造される。
【００９１】
本発明の一部の態様の一側面によれば、ここに記載されている式Ｉａの化合物および医薬として許容できる塩を含む医薬組成物が提供される。
【００９２】
特に定義がない限り、ここで使用されるすべての技術用語および／または科学用語はいずれも、本発明が属する当業者により一般的に理解されるものと同一の意味を有する。
ここに記載されているものに類似した、またはそれに等しい方法および材料を、本発明の態様の実施または試験に使用できるが、例示的な方法および／または材料が、以下に記載されている。矛盾する場合、定義を含めて、本特許明細書が優先される。さらに、材料、方法および実施例は、例証に過ぎず、必ずしも限定することを意図するものではない。
【００９３】
本発明の一部の態様は、添付の図面を参照し、実施例としてのみここに記載される。ここで図面について詳細に具体的に言及すると、示されている事項は一例であり、また、本発明の態様の例証的考察の目的のためであることが強調される。この点において、図面の説明は、本発明の態様がどのように実施され得るかを当業者に明らかにする。
【図面の簡単な説明】
【００９４】
【図１】図１は、本発明の一部の態様による単糖供与体ＢＢ−Ｄ−ＯＨを製造する合成経路の概略図を示す。
【図２】図２は、本発明の一部の態様による擬似二糖受容体ＢＢ−Ａを製造する合成経路の概略図を示す。
【図３】図３は、ＢＢ−ＡとＢＢ−Ｄをカップリングし、これにより、本発明の一部の態様による擬似三糖ＥＬＸ−０２（硫酸塩）を製造する合成経路の概略図を示す。
【図４】図４は、図３に示された方法で製造されたＥＬＸ−０２（硫酸塩）の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【図５】図５は、図３に示された方法で製造されたＥＬＸ−０２（硫酸塩）のマススペクトル分析を示す。
【図６Ａ】図６Ａ〜Ｂは、０〜１２μＭの濃度のＥＬＸ−０２で行われた、レット症候群のＲ２７０Ｘナンセンス変異を抑制する用量反応無細胞アッセイの結果を示し、図６Ａは、変異配列の下流にあるホタルルシフェラーゼの発現レベルを、対照実験（化合物の添加なし）で示された発現レベルに対する割合として示し、図６Ｂは、変異配列の下流および上流におけるホタル／ウミシイタケの発現比を、対照実験における発現レベルに対する割合として示す。
【図６Ｂ】図６Ａ〜Ｂは、０〜１２μＭの濃度のＥＬＸ−０２で行われた、レット症候群のＲ２７０Ｘナンセンス変異を抑制する用量反応無細胞アッセイの結果を示し、図６Ａは、変異配列の下流にあるホタルルシフェラーゼの発現レベルを、対照実験（化合物の添加なし）で示された発現レベルに対する割合として示し、図６Ｂは、変異配列の下流および上流におけるホタル／ウミシイタケの発現比を、対照実験における発現レベルに対する割合として示す。
【００９５】
本発明の特定の態様の説明
本発明は、その一部の態様では、アミノグリコシドの合成に関し、限定されるものではないが、とりわけ、リードスルー活性および低毒性を示す擬似三糖アミノグリコシドを製造する新規な方法に関し、この方法は、そのようなアミノグリコシドと、そのようなアミノグリコシドの製造に有用な受容体および供与体中間体化合物の大規模生成に有用である。
【００９６】
本発明の少なくとも１つの態様を詳細に説明する前に、本発明は、その適用に関し、以下の説明で明らかにされ、また、実施例により例示されている詳細に必ずしも限定されないことは理解されるべきである。本発明は、他の態様とすること、または様々な手段で実施もしくは実行されることが可能である。
【００９７】
本発明者らは、例えばＷＯ２０１２／０６６５４６に記載されている擬似三糖アミノグリコシドの大規模生成に高度に適している新規な方法を設計し、実施に成功した。
【００９８】
ＷＯ２０１２／０６６５４６は、リードスルー活性、哺乳類細胞に対する低毒性、および低下したまたは打消された抗菌活性を示す擬似三糖アミノグリコシド化合物について記載する。
【００９９】
ＷＯ２０１２／０６６５４６に開示されている擬似三糖アミノグリコシド化合物は、供与体単糖化合物と、パロモマイシンに由来する擬似二糖受容体のカップリングにより、グリコシル化反応を経由して、製造される。
【０１００】
ＷＯ２０１２／０６６５４６の教示によれば、供与体化合物は、背景技術のスキーム１：
【０１０１】
【化１４】
2020514373.tif 000016
【０１０２】
に示されているように、出発材料としてチオグリコシド化合物７を使用して製造され、
ここで、「ａ」は1,1-ジメトキシプロパン、ＣＳＡ、アセトン、室温を表し；「ｂ」は、デス-マーチンペルヨージナン（ＤＭＰ）、ＤＣＭ、室温を表し；「ｃ」は、ＭｅＭｇＢｒ、ＴＨＦ、−３０℃を表し；「ｄ」は、ＴｓＣｌ、Ｐｙ、4-ＤＭＡＰ、室温を表し；「ｅ」は、ＮａＮ３、ＨＭＰＡ、ＤＭＦ、７０℃を表し；「ｆ」は、酢酸／水（８：２）、還流を表し；「ｇ」は、ＢｚＣｌ、Ｐｙ、4-ＤＭＡＰ、室温を表し；「ｈ」は、ＮＢＳ、アセトン／水（８：２）、−３０℃を表し；「ｉ」は、ＣＣｌ３ＣＮ、ＤＢＵ、ＤＣＭ、０℃を表す。
【０１０３】
一般に、ＷＯ２０１２／０６６５４６で開示されている合成経路によれば、イソプロピリジンによるＣ２−およびＣ３−ヒドロキシルの選択的保護（2,2-ジメトキシプロパン／アセトン、ＣＳＡ）の後に、デス-マーチンペルヨージナン（ＤＭＰ、ジクロロメタン）を用いる、残りの第一級アルコールの酸化が続き、２工程でアルデヒド化合物８を単離収率７０％で得た。ＭｅＭｇＢｒによる化合物８の処理により、対応する第二級アルコールを、Ｃ５−ジアステレオマーの混合物（４：１比）として単離収率８８％で得た。多量および少量のジアステレオ異性体は、それぞれ（Ｒ）−および（Ｓ）−配置（化合物（Ｒ）−９および（Ｓ）−１０）である。
【０１０４】
この混合物を、フラッシュカラムクロマトグラフィーで分離した。
【０１０５】
背景技術のスキーム１における以下の工程は、各ジアステレオ異性体に対して別々に行った。第二級アルコールのトシル化（ＴｓＣｌ、ピリジン、4-ＤＭＡＰ）の後に、ＮａＮ３（ＤＭＦ、ＨＭＰＡ）による、対応するトシレート（化合物（Ｒ）−１１および（Ｓ）−１２）のＳＮ２置換が続き、配置が逆転したアジド化合物（Ｓ）−１３および（Ｒ）−１４が得られた。酢酸水溶液によるイソプロピリデンケタールの加水分解、続く、生じた第二級アルコールのベンゾイル化により、ベンゾエート化合物（Ｓ）−１５および（Ｒ）−１６が得られた。チオグリコシド化合物（Ｓ）−１５および（Ｒ）−１６を、２つの連続する工程；アセトン水溶液中のＮＢＳによる加水分解、およびＤＢＵ存在下でのＣＣｌ３ＣＮによる生じたヘミアセタールの処理で、対応するトリクロロアセトイミデート化合物（Ｓ）−１７および（Ｒ）−１８に変換した。供与体化合物（Ｓ）−１７および（Ｒ）−１８を、さらに精製することなく、グリコシル化反応に使用した。
【０１０６】
ＷＯ２０１２／０６６５４６で開示されている合成経路によれば、以下の背景技術のスキーム２（ＷＯ２０１２／０６６５４６におけるスキーム４に対応）に示されているとおり、化合物（Ｓ）−１７は、受容体２１９とカップリングし、それにより、擬似三糖アミノグリコシド化合物を生成する。
【０１０７】
【化１５】
2020514373.tif 000017
【０１０８】
ここで、「ａ」は、ＢＦ３・Ｅｔ２Ｏ、ＤＣＭ、４ÅＭＳ、−２０℃を表し；「ｂ」は、ＭｅＮＨ２-ＥｔＯＨ、室温を表し；
「ｃ」は、ＰＭｅ３、ＮａＯＨ、ＴＨＦ、室温を表す。
【０１０９】
受容体２１９の製造は、例えば、Nudelmanら、2010（前掲）に記載されている。一般に、Ｇ４１８は加水分解され、擬似二糖6-メチルパロマミンコアが得られ、これは、次いでＴｆＮ３および無水酢酸と反応させる。
【０１１０】
ＷＯ２０１２／０６６５４６でさらに開示されているように、「Ｓ」ジアステレオ異性体ＮＢ１２４は、「Ｒ」鏡像異性体ＮＢ１２５より優れている。
【０１１１】
この明細書でＥＬＸ−０２またはＥＬＯＸＸ−０２とも呼ばれる化合物ＮＢ１２４の有望な治療活性を考慮して、この化合物の大規模生成に適している方法を考案する目的で、その合成を改善するための広範な努力が行われてきた。
【０１１２】
ＥＬＸ−０２生成の規模を拡大するために行った最初の研究では、供与体（Ｓ）−１７と受容体２１９のカップリング（背景技術のスキーム２参照）を含む一般的な合成経路、および、以前に記載した供与体と受容体を製造する合成経路が維持された。ＥＬＸ−０２を製造する各手順は、１７工程の合成と多数のクロマトグラフィー分離を伴い、いくつかのクロマトグラフィー分離が結晶化に置きかえられたにもかかわらず、供与体の量は実質的（例えば、４モル当量から２モル当量）に減少した。注目すべきことに、ＷＯ２０１２／０６６５４６で開示されている供与体分子を製造するための合成経路に従う限り、（Ｒ）および（Ｓ）立体異性体のクロマトグラフィー分離が必要である（背景技術のスキーム１参照）。
【０１１３】
合成経路のさらなる改善のため、本発明者らは、ここで化合物（Ｓ）−１７と呼ばれ、ＢＢ−Ｄ−ＯＨとも呼ばれる望ましい供与体分子のＳ−立体異性体を製造する新規な方法を発明した。この新たに設計した方法は、供与体の望ましい立体異性体の立体選択的合成を含み、それにより、面倒でコストがかかり、さほど有効ではない、立体異性体のクロマトグラフィー分離の必要性を回避する。
【０１１４】
以下の実施例でさらに詳細に記載され、図１に示されるＢＢ−Ｄ−ＯＨの合成は、出発材料としてD-リボースを使用する。一般に、D-リボースは、メタノール中でアセトンで保護され、1-メトキシアセトニドが得られ、対応するアルデヒドに酸化される。このアルデヒドとベンジルヒドロキシルアミンとの反応により、ニトロンが形成され、次いでこれを、例えばメチルマグネシウムクロライドのようなグリニャール試薬と立体選択的に反応させ、それにより、保護された中間体を単一の望ましい（Ｓ）立体異性体として得る。保護性基の脱保護により、5-アミノ-5,6-ジデオキシ-2,3-ジヒドロキシ-1-メトキシ-α-L-タロフラノシドが得られ、次いで、これをＣＢｚクロリドで再度保護し、結晶化により分離し、精製された固体化合物であるN-ＣＢｚ誘導体を形成する。この７工程の合成は、全収率２６〜２８％（各工程の収率８５〜９０％）の「ワンポット」合成として、中間体の分離および精製をすることなく行われることができ、このことは工業プロセスの点では、事実上、１工程の合成を意味する。得られた2,3-ジヒドロキシ中間体は、その後、塩化ベンゾイルにより保護され（収率７７〜７８％）、続いて、メトキシ基を脱保護する（収率５３〜５７％）。生じた1-ヒドロキシ化合物は、ほぼ定量的収率でＢＢ−Ｄ−ＯＨに変換される。
【０１１５】
ＢＢ−Ｄ−ＯＨを製造するこの合成経路は、事実上４工程の工業用合成を意味し、単一のクロマトグラフィー精製を伴う。
【０１１６】
ＷＯ２０１２／０６６５４６に記載されている合成経路と比較して、合成工程の合計数および重要なことには、クロマトグラフィーの精製の合計数は、実質的に減少し、加えて、立体異性体のクロマト分離が省かれ、この方法が、この供与体化合物、および、当該化合物と適切な受容体分子のカップリングにより製造される最終的な擬似三糖化合物の、大規模生成に高度に適するものにする。
【０１１７】
ＥＬＸ−０２、および例えばＷＯ２０１２／０６６５４６に記載されている類似した擬似三糖アミノグリコシドの生成をさらに改善するために、本発明者らは、ここでＢＢ−Ａとも呼ばれる受容体２１９（背景技術のスキーム２参照）を製造する、供与体ＢＢ−Ｄ−ＯＨ、または、ここではＢＢ−Ｄと表されるその活性化形態と、受容体ＢＢ−Ａをカップリングし、かつ、最終生成物ＥＬＸ−０２の塩を硫酸塩として形成する、新規な合成経路を設計し、その実施に成功した。
【０１１８】
以下の実施例にさらに詳細に記載され、図２に示されているＢＢ−Ａの合成は、出発材料としてＧ４１８スルフェート（ここで、そしてこの技術分野では、単にＧ４１８とも呼ばれる）を使用する。Ｇ４１８は、メタノール中の塩化水素溶液を使用して加水分解される。この新たに使用される試薬により、望ましい6-メチルパロマミンの変換および収率が良好になる。
【０１１９】
パロマミンコアのアミノ基の保護は、以前に記載された、トリフル無水物および危険なアジ化ナトリウムを使用して得られるアジド基の代わりに、ＣＢｚ基を使用して行われる。ＣＢｚ保護6-メチルパロマミンが製造され、クロマトグラフィーによる精製を行うことなく、次の工程で使用される。次の工程では、ヒドロキシ基は、塩化アセチルを使用し、塩基としてピリジンを使用するアセチル化により、溶媒としてピリジンが使用される以前の合成経路と比較して、実質的に減少した量で、保護される。この変更により、この工程の収率が、以前に報告されている６０％から７３〜７８％にさらに上昇する。
【０１２０】
ＢＢ−Ｄにおける保護性基（ＣＢｚ、Ｂｚ）との適合性のため、ＣＢｚ基およびＡｃ基を保護性基として選択した。
【０１２１】
以下の実施例にさらに詳細に記載され、図３に示されている、供与体ＢＢ−ＤまたはＢＢ−Ｄ−ＯＨと受容体ＢＢ−Ａのカップリング反応は、実質的に減少した量のＢＢ−Ｄ（１モルのＢＢ−Ａに対し、１．５モル当量のＢＢ−Ｄ）を使用して行われる。以下の脱アセチル化は、高価な、以前に使用されたエタノール中のメチルアミンの代わりに、メタノール中のアンモニア溶液を使用して行われる。ＣＢｚ基の脱保護は、危険かつ高価なアジド基のトリメチルホスフィン脱保護の代わりに、水素化で行われる。
【０１２２】
全体として、ここに記載された、新たに設計した受容体、その製造方法、およびカップリング方法は、カップリングおよび脱保護反応を良好な収率で行い、危険および／または高価な試薬の使用を回避することができる保護性基を活用する。
【０１２３】
ＷＯ２０１２／０６６５４６に記載されているように、ＮＢ１２４は硫酸塩の形態として使用され、硫酸水溶液を使用してこの塩に変換される。ここに記載されている方法では、メタノール硫酸が使用され、塩形成と沈殿を実質的により効率的にする。
【０１２４】
したがって、本発明の一部の態様は、ＢＢ−Ｄ−ＯＨを製造する新規な方法、ＢＢ−Ｄ−ＯＨを、任意にその活性化形態ＢＢ−Ｄで、適切な受容体とカップリングし、それにより、例えばＷＯ２０１２／０６６５４６で記載されている擬似三糖アミノグリコシド化合物を得る新規な方法、ここに記載されている受容体ＢＢ−Ａを製造する新規な方法、および、ＢＢ−ＡとＢＢ−Ｄ−ＯＨ（またはＢＢ−Ｄ）をカップリングし、その結果、最終的な擬似三糖アミノグリコシドを生成する新規な方法に関する。
【０１２５】
ここでＢＢ−Ｄ−ＯＨとして記載されている供与体、およびその製造方法は、他の単糖、二糖および三糖または擬似糖受容体とカップリングでき、したがって、擬似二糖、擬似三糖、擬似四糖アミノグリコシドの製造方法に活用できる。本発明の一部の態様では、ここに記載されている供与体は、例えばＷＯ２０１７／０３７７１８に記載されている擬似三糖アミノグリコシド化合物の製造に活用される。
【０１２６】
本発明の一部の態様では、ＢＢ−Ａのような受容体分子の製造、供与体と受容体のカップリング、および硫酸塩としての最終生成物の塩の形成のために、ここに記載されている合成経路は、例えばＷＯ２０１７／０３７７１８に記載されている、擬似三糖アミノグリコシド化合物の製造方法に活用される。ここで「立体異性体」という用語は、鏡像異性体およびジアステレオ異性体を包含する。
【０１２７】
ここで使用されるように、「鏡像異性体」という用語は、互いの完全な反転／反射（鏡像）によってのみ、その相手側と重ね合わせることができる化合物の立体異性体を指す。鏡像異性体は、右手と左手というようにお互いを呼ぶので、「掌性」を有すると言われる。鏡像異性体は、それ自体が掌性を有する環境、例えばすべての生物系に存在する場合を除き、同一の化学的および物理的特性を有する。本発明の態様に関して、化合物は、１つ以上のキラル中心を示してもよく、そのそれぞれは、Ｒ−またはＳ−配置、およびその組合せを示し、本発明の一部の態様による化合物は、別段指示がない限り、Ｒ−またはＳ−配置を示すそのキラル中心のいずれか１つを有し得る。
【０１２８】
ここで使用される「ジアステレオ異性体」という用語は、互いに鏡像異性体ではない立体異性体を指す。ジアステレオ異性体性は、化合物の２つ以上の立体異性体が、１つ以上ではあるがすべてではない等価な（関連した）立体中心において、異なる配置を有し、互いに鏡像ではない場合に発生する。２つのジアステレオ異性体が１つの立体中心においてのみ互いに異なる場合、それらはエピマーである。各立体中心（キラル中心）は、２つの異なる配置、したがって２つの異なる立体異性体を生じる。本発明に関して、本発明の一部の態様は、立体配置の組合せ、すなわちジアステレオ異性体で生じる複数のキラル中心を有する化合物を包含する。本発明の一部の態様は、複数のキラル中心を有する化合物に関し、そのそれぞれは、別段指示がない限り、ここに記載され、示されているとおり、Ｒ−またはＳ−配置を示す。
【０１２９】
明細書全体に示される構造式では、キラル炭素が定義されているＲ−またはＳ−配置を特徴とする場合は、その対掌性は、示されている立体配置に応じて当該技術分野で許容できる三角形の破線または太線により表され、特定されない。キラル炭素がＲ−配置またはＳ−配置のいずれかであり得る配置を特徴とする場合、それは矩形の破線により表され、そのように記載される。Ｒ−配置もしくはＳ−配置をとり得るキラル炭素原子、またはそのラセミ混合物は、ここで、単純な線または曲（波）線により示される。
【０１３０】
「受容体」という用語は、ここで、グリコシル化反応中に反応性の（非保護）ヒドロキシル基をＣ５位に有し、グリコシルを受け入れることができる、パロマミンに由来する骨格構造の記述に使用される。
【０１３１】
「供与体」という用語は、ここで、受容体と反応し最終的な擬似三糖化合物を形成するグリコシルの記述に使用される。
【０１３２】
ここで使用されている「グリコシル」という用語は、単糖のヘミアセタール官能基からヒドロキシル基を除去することにより得られる化学構造を指す。
【０１３３】
ここで使用され、当該技術分野で周知の「単糖」という用語は、加水分解ではさらに分解することができない単一の糖質分子からなる単純な形態の糖を指す。本発明の態様による単糖はリボースである。炭水化物の炭素原子の数に従って分類される場合、単糖は、５個の炭素原子を有するペントースである。
【０１３４】
供与体および受容体は、本発明の一部の態様による望ましい擬似三糖アミノグリコシド化合物を形成するように設計される。
【０１３５】
本発明の一部の態様による化合物の合成は、一般に、（ｉ）パロマミン足場に存在する選択された位置の１つ以上のヒドロキシルおよびアミンを選択的に保護し、選択された位置（Ｃ５）は非保護のままにして、これにより、ここで定義されている供与体（グリコシル）化合物を自由に受け入れる、受容体化合物を製造すること；  （ｉｉ）とりわけ、グリコシルに存在する選択された位置の１つ以上のヒドロキシルおよびアミンを選択的に保護し、１つの位置を非保護のままにして、これにより、ここで定義されている受容体化合物と自由にカップリングする、供与体化合物の望ましい立体異性体を製造すること；  （ｉｉｉ）供与体および受容体にカップリング反応を行うこと；  また、（ｉｉｉ）保護性基を除去して、それにより、所望の化合物を得ること、を含む。
【０１３６】
ここで使用される「保護基」という語句は、その機能をブロックするための置換または修飾された基であって、反応条件下で、他の基との反応（例えば、ここに記載されているカップリング反応）から保護する基を指す。保護基は、置換基の除去により、または再度の修飾により、再生成される。
【０１３７】
「アミノ保護基」または「ヒドロキシル保護基」が使用される場合、保護性基は、示された保護基を生成するために、それぞれのアミン基またはヒドロキシ基を修飾するように結合または使用されることを意味する。
【０１３８】
ここで使用される「保護性基」という語句は、化合物の他の官能基が反応する間に特定の官能基をブロックまたは保護するために一般に用いられる置換基または修飾を指す。保護性基は、置換基を取り除くように、または、再度修飾し、それにより望ましい非保護基が生成するように選択される。
【０１３９】
例えば、「アミノ保護性基」または「アミン保護性基」は、化合物のアミノ官能基をブロックまたは保護し、それが化学反応中に関与することを防止する、アミノ基に結合した置換基、またはアミノ基の修飾である。
【０１４０】
アミノ保護性基は、置換基の除去、またはアミン基を再度生成する修飾により、除去される。
【０１４１】
本発明の一部の態様に従って使用可能な例示的なアミノ保護基は、N-ベンジルオキシカルボニル（ＣＢｚ）である。
【０１４２】
「ヒドロキシル保護性基」または「ヒドロキシ保護性基」は、ヒドロキシル官能基をブロックまたは保護し、それが、化学反応中に関与することを防止するヒドロキシル（ヒドロキシ）基の置換基または修飾を指す。ヒドロキシ保護性基は、置換基の除去、またはヒドロキシ基を再度生成する修飾により、除去される。
【０１４３】
適切なヒドロキシ保護基は、イソプロピリデンケタールおよびシクロヘキサノンジメチルケタール（２個の隣接したヒドロキシル基から1,3-ジオキサンを形成する）、4-メトキシ-1-メチルベンゼン（２個の隣接したヒドロキシル基から1,3-ジオキサンを形成する）、O-アセチル、O-クロロアセチル、O-ベンゾイルおよびO-シリルを含む。
【０１４４】
保護性基の全般的説明およびその使用に関しては、T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley&Sons, New York, 1991を参照されたい。
【０１４５】
一部の態様によれば、例示的なヒドロキシ保護基は、O-アセチル（ＡｃＯ−）およびO-ベンゾイルを含む。
【０１４６】
ここで、「保護基」は、適用可能であれば、化合物の１個の反応性官能基が保護されている部分、または、例えば、イソプロピリデンケタールのようなケタールを形成することにより１度に保護されることが可能な２個のヒドロキシル基のような２個の隣接した官能基において１個を超える反応性が同時に保護されている部分を指す。
【０１４７】
擬似三糖アミノグリコシド化合物：
ここに記載されている方法は、例えば式Ｉ：
【０１４８】
【化１６】
2020514373.tif 000018
【０１４９】
（式中；
（矩形）破線は、６’位でのＳ−配置またはＲ−配置、好ましくはＲ−配置を表し；
Ｒ１は、水素、アルキル、シクロアルキルまたはアリールから選択され、好ましくはアルキル、より好ましくはメチルであり；
Ｒ４は、水素、アシルおよびアミノ置換α-ヒドロキシアシルから選択され、好ましくは水素であり；
Ｒ８は、アルキル、シクロアルキルまたはアリールから選択され、好ましくはアルキル、より好ましくはメチルである）
で表される擬似三糖アミノグリコシド化合物の大規模生成（例えば、ここに記載されている）に有用である。
【０１５０】
代表的な化合物は、ＷＯ２０１２／０６６５４６に記載されている。
【０１５１】
式Ｉで表される化合物は、遊離塩基の形態であっても、またはその塩、好ましくは医薬として許容できるその塩の形態であってもよい。
【０１５２】
ここで使用される「医薬として許容できる塩」という語句は、親化合物の荷電化学種とその対イオンを指し、これは、典型的には、親化合物の溶解度特性を変化させ、および／または、親化合物による生物に対する著しい刺激を減少させるが、投与された化合物の生物学的活性および性質を無効にしないように用いられる。あるいは、ここに記載されている化合物の医薬として許容できる塩は、化合物の合成中に、例えば、反応混合物からの化合物の単離中、または化合物の再結晶中に形成できる。
【０１５３】
本発明の態様の一部に関して、ここに記載されている化合物の医薬として許容できる塩は、任意に、医薬として許容できる塩を形成する、選択された塩基に由来する少なくとも１つの対イオンと組み合わせた、正に荷電した（例えば塩基性基がプロトン化した）塩基性基（例えば、アミンおよび／またはグアニジン）を有する少なくとも１個の化合物を含む酸付加塩であってもよい。
【０１５４】
したがって、ここに記載されている化合物の酸付加塩は、化合物の１つ以上の塩基性基と、１当量以上の酸で形成される複合体であってもよい。
【０１５５】
塩における化合物の荷電した基（複数可）と対イオンの化学量論比に応じて、酸付加塩は、モノ付加塩またはポリ付加塩のいずれかであり得る。
【０１５６】
ここで使用される「モノ付加塩」という語句は、対イオンと荷電した化合物の化学量論比が１：１であることを指し、その結果、付加塩は化合物１モル当量当たり対イオン１モル当量を含む。
【０１５７】
ここで使用される「ポリ付加塩」という語句は、対イオンと荷電した化合物の間の化学量論比が１：１を超え、例えば、２：１、３：１、４：１等であることを指し、その結果、付加塩は化合物１モル当量当たり対イオン２モル当量以上を含む。
【０１５８】
医薬として許容できる塩の例は、以下に限定されるものではないが、アンモニウムカチオンおよびその酸付加塩である。
【０１５９】
酸付加塩は、様々な有機および無機酸、例えば、以下に限定されるものではないが、塩酸付加塩が得られる塩酸、臭化水素酸付加塩が得られる臭化水素酸、酢酸付加塩が得られる酢酸、アスコルビン酸付加塩が得られるアスコルビン酸、ベシル酸付加塩が得られるベンゼンスルホン酸、カンファースルホン酸付加塩が得られるカンファースルホン酸、クエン酸付加塩が得られるクエン酸、マレイン酸付加塩が得られるマレイン酸、リンゴ酸付加塩が得られるリンゴ酸、メタンスルホン酸（メシル酸）付加塩が得られるメタンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸付加塩が得られるナフタレンスルホン酸、シュウ酸付加塩が得られるシュウ酸、リン酸付加塩が得られるリン酸、p-トルエンスルホン酸付加塩が得られるトルエンスルホン酸、コハク酸付加塩が得られるコハク酸、硫酸付加塩が得られる硫酸、酒石酸付加塩が得られる酒石酸、および、トリフルオロ酢酸付加塩が得られるトリフルオロ酢酸を含んでもよい。これらの酸付加塩のそれぞれは、これらの用語がここで定義されているように、モノ付加塩またはポリ付加塩のいずれかであり得る。
【０１６０】
本発明の態様は、ここに記載されている化合物のプロドラッグ、溶媒和物および／または水和物をさらに包含する。
【０１６１】
本発明のある態様では、式Ｉで表される例示的な化合物は、ここでＥＬＸ−０２とも呼ばれるＮＢ１２４、または医薬として許容できるその塩、例えば、その硫酸付加塩（例えば２付加塩）である。
【０１６２】
ここに記載されている方法は、擬似三糖アミノグリコシド化合物、例えば式Ｉａ：
【０１６３】
【化１７】
2020514373.tif 000019
【０１６４】
（式中；
矩形破線は、Ｒ配置またはＳ配置である６’位の立体配置を示し；
Ｒ１は、水素、アルキル、シクロアルキルまたはアリールから選択され；
Ｒ２は、置換または無置換アルキル、ＯＲ’およびＮＲ’Ｒ’’から選択され、Ｒ’およびＲ’’は、独立して、水素、置換または無置換アルキル、置換または無置換シクロアルキル、置換または無置換アリール、置換または無置換ヘテロアリール、置換または無置換アルカリールおよびアシルから選択され；
Ｒ４は、水素、アシル、アミノ置換α-ヒドロキシアシル、置換または無置換アルキル、置換または無置換シクロアルキル、置換または無置換アリール、置換または無置換アルカリール、およびここに記載されている細胞透過性基から選択され；
Ｒ８はここに記載されているアルキルである）
または、ここに記載されている医薬として許容できるその塩の大規模生成（例えば、ここに記載されている）に有用である。
【０１６５】
本発明の一部の態様によれば、アミノグリコシド構造の１位におけるアミン置換基は修飾され、その結果、Ｒ４は水素以外である。
【０１６６】
ここで全体として、水素以外の置換基を含むアミンは、ここで「修飾アミン置換基」、または単に「修飾アミン」と呼ばれる。
【０１６７】
本発明の一部の態様によれば、アミノグリコシド構造の１位におけるアミン置換基は、疎水性部分、例えばアルキル、シクロアルキル、アルカリールおよび／もしくはアリール、または、生理学的ｐＨで正に荷電し、化合物の細胞透過性を増加できる基（ここでは「細胞透過性基」または「細胞透過基」とも呼ばれる）、例えば、ここで定義されているグアニンまたはグアニジン基、あるいは、ヒドラジン、ヒドラジド、チオヒドラジド、尿素およびチオ尿素を含むように修飾される。
【０１６８】
ここに記載されている態様のいずれかの一部では、Ｒ１はアルキルで、一部の態様では、これは、メチル、エチル、プロピル、ブチル、イソプロピルおよびイソブチルを含むが、それらに限定されない１〜４個の炭素原子の低級アルキルである。
【０１６９】
ここに記載されている態様のいずれかの一部では、Ｒ１は無置換（非置換）アルキルである。
【０１７０】
ここに記載されている態様のいずれかの一部では、Ｒ１はメチルである。
【０１７１】
あるいは、ここに記載されている態様のいずれかの一部では、Ｒ１は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルを含むが、それらに限定されないシクロアルキルである。
【０１７２】
あるいはさらに、ここに記載されている態様のいずれかの一部では、Ｒ１は、アリール、例えば置換または無置換フェニルである。非限定的な例は、無置換フェニルおよびトルエンを含む。
【０１７３】
あるいはさらに、ここに記載されている態様のいずれかの一部では、Ｒ１は、アルカリール、例えば置換または無置換ベンジルである。
【０１７４】
ここに記載されている態様のいずれかの一部では、Ｒ１はアルキルである。一部の態様では、Ｒ１はメチルである。
【０１７５】
ここに記載されている態様のいずれかの一部では、Ｒ２はＯＲ’である。
【０１７６】
これらの態様の一部では、Ｒ’は水素で、Ｒ２はヒドロキシである。
【０１７７】
他の態様では、Ｒ２はＯＲ’で、Ｒ’は水素以外である。
【０１７８】
これらの態様の一部では、Ｒ’は、ここで定義されている置換もしくは無置換アルキル、または、ここで定義されている置換もしくは無置換シクロアルキルで、Ｒ２はアルコキシである。
【０１７９】
これらの態様の一部では、Ｒ’は、ここで定義されている置換または無置換アリールで、Ｒ２はアリールオキシである。
【０１８０】
これらの態様の一部では、Ｒ’は、ここで定義されているアシルで、Ｒ２はここで定義されているカルボキシレートである。
【０１８１】
あるいは、Ｒ２はＮＲ’Ｒ’’である。
【０１８２】
これらの態様の一部では、Ｒ’およびＲ’’は、いずれも水素である。
【０１８３】
これらの態様の一部では、Ｒ’とＲ’’の一方または両方が水素以外である。
【０１８４】
Ｒ２がＮＲ’Ｒ’’である場合の、式Ｉａの可変基Ｒ２で表され得る例示的な化学基は、
Ｒ’が水素で、Ｒ’’が、ｎが例えば１〜６であるＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ２のようなアルキルアミノである化合物；Ｒ’が水素で、Ｒ’’が、ｎが例えば１〜６であるＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＯＨである化合物；Ｒ’が水素で、Ｒ’’が、ｎが例えば１〜６で、Ｒ’’’が、水素、アルキル、シクロアルキルまたはアリールであるＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’’’である化合物；Ｒ’が水素で、Ｒ’’が、ｎが例えば１〜６で、Ｒ’’’が、水素、アルキル、シクロアルキルまたはアリールであるＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＨ（ＯＲ’’’）２である化合物；ならびに、Ｒ’が水素で、Ｒ’’が、ｎが例えば１〜６で、Ｒ’’’が、水素、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロアリサイクリックであるＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ’’’である化合物を含むが、それらに限定されない。
【０１８５】
ここに記載されている態様のいずれかの一部では、Ｒ２はアルキルで、これらの態様の一部では、Ｒ２は置換アルキル、例えば、１個以上のアミン基で置換されたアルキル（アミノアルキル）である。
【０１８６】
ここに記載されている態様のいずれか、およびそれらの組合せの一部では、式Ｉａの１位（環ＩＩ）のアミン置換基は、ここに記載されている修飾アミンであり、その結果、Ｒ４は水素以外である。
【０１８７】
これらの態様の一部では、Ｒ４は、ここで定義されているアルキル、アルカリール、シクロアルキル、アリール、アシル、または（Ｓ）-4-アミノ-2-ヒドロキシブチリル（ＡＨＢ）もしくは（Ｓ）-4-アミノ-2-ヒドロキシプロピオニル（ＡＨＰ）のようなアミノ置換α-ヒドロキシアシルであり得る。
【０１８８】
Ｒ４がアルキルである態様のいくつかでは、アルキルは、例えば、以下に限定されるものではないが、ここに記載されているように、それぞれ任意に置換されているメチル、エチル、プロピル、ブチル、イソプロピルおよびイソブチルのような１〜４個の炭素原子の低級アルキルであり得る。
【０１８９】
これらの態様の一部では、アルキルは、独立して、以下に限定されるものではないが、エチル、プロピルおよびイソプロピルのような無置換アルキルである。
【０１９０】
これらの態様の一部では、アルキルは、独立して、置換メチル、例えば、限定されるものではないが、ベンジルのようなアルカリールである。
【０１９１】
あるいは、Ｒ４はシクロアルキルで、シクロアルキルは、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルであり得る。
【０１９２】
あるいはさらに、Ｒ４はアリールで、アリールは、例えば、置換または無置換フェニルであり得る。非限定的な例は、無置換フェニルおよびトルエンを含む。
【０１９３】
ここに記載されている態様のいずれかの一部では、Ｒ４は、ここに記載されているアルキル、シクロアルキルまたはアリールである。
【０１９４】
これらの態様の一部では、Ｒ１は、ここで定義されているアルキル、シクロアルキルまたはアリールであり、好ましくはアルキルである。
【０１９５】
ここに記載されている態様のいずれかの一部では、Ｒ４はアルキルで、一部の態様では、１〜４個の炭素原子の低級アルキルである。
【０１９６】
一部の態様では、Ｒ４はアルキル、例えば、それぞれ任意に置換されているエチル、プロピル、ブチル、イソプロピル、イソブチル、tert-ブチルである。
【０１９７】
一部の態様では、Ｒ４はメチルまたはエチルで、好ましくは置換メチルまたはエチルである。これらの態様の一部では、メチルまたはエチルは、例えば、シクロアルキルまたはアリールにより置換されている。そのような置換基は、この技術分野においてそれぞれアルキルシクロアルキルおよびアルカリールとも呼ばれる。例示的なアルカリールはベンジル（−ＣＨ２−フェニル）である。
【０１９８】
一部の態様では、Ｒ４はプロピルまたはイソプロピルである。
【０１９９】
一部の態様では、Ｒ４はベンジルである。
【０２００】
ここに記載されている態様のいずれかの一部では、Ｒ４はここで定義されている細胞透過性基であり、一部の態様では、Ｒ４はグアニジニルである。
【０２０１】
ここに記載されている態様のいずれかの一部では、Ｒ１は、アルキル、シクロアルキルまたはアリールであり、好ましくはここで定義されているアルキルであり、そして、Ｒ４は、ここで定義されているアルキルであり、好ましくは、エチル、プロピル、イソプロピルまたはベンジルである。
【０２０２】
ここに記載されている態様のいずれかの一部では、Ｒ１は、アルキル、シクロアルキルまたはアリールであり、好ましくはここで定義されているアルキルであり；そして、Ｒ４はここで定義されている細胞透過基、好ましくはグアニジンまたはグアニンである。
【０２０３】
ここで細胞透過性基は、ここで「細胞透過基」とも呼ばれ、典型的には、生理学的ｐＨで正に荷電し、化合物の細胞透過性を増加できる基を含む。その例は、ここで定義されているグアニンまたはグアニジン基、あるいは、ここで定義されているヒドラジン、ヒドラジド、チオヒドラジド、尿素およびチオ尿素を含むが、それに限定されない。
【０２０４】
ここに記載されている態様のいずれかの一部では、Ｒ１は、アルキル、シクロアルキルまたはアリールであり、好ましくは、ここで定義されているアルキルであり；Ｒ４は、ここで定義されている細胞透過基、好ましくは、グアニジンまたはグアニン、より好ましくはグアニジンである。
【０２０５】
ここに記載されている態様のいずれかの一部では、Ｒ４は、水素または（Ｓ）-4-アミノ-2-ヒドロキシブチリル（ＡＨＢ）もしくは（Ｓ）-4-アミノ-2-ヒドロキシプロピオニル（ＡＨＰ）のような基である。
【０２０６】
ここに記載されている態様のいずれかの一部では、Ｒ１は、アルキル、シクロアルキルまたはアリールであり、好ましくはここで定義されているアルキルであり；Ｒ４は、水素、またはここで定義されているアミノ置換α-ヒドロキシアシルであり；Ｒ５はグアニジン基（グアニジニル）である。
【０２０７】
式Ｉａについてここに記載されている態様のいずれか１つのいくつか、およびそれらの組合せでは、６’位の配置は、Ｒ−立体配置である。
【０２０８】
式Ｉａについてここに記載されている態様のいずれか１つのいくつか、およびそれらの組合せでは、５’’位の配置は、Ｓ−立体配置である。
【０２０９】
ここで全体として、「アシル」という用語は、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ基を表し、Ｒは、置換または無置換アルキル、シクロアルキル、アリール、アルカリールまたは水素である。
【０２１０】
例示的な態様では、アシルは、Ｒが、アルキル、アルカリールまたはアリールで、そのそれぞれが、１個以上のアミン置換基により任意に置換されている。
【０２１１】
一部の態様では、Ｒは置換アルキルであり、一部の態様では、Ｒは、カルボニル基のα位がヒドロキシで置換され、その結果、アシルは、α-ヒドロキシアシルである。
【０２１２】
一部の態様では、α-ヒドロキシアシルは１個以上のアミン基によりさらに置換され、アミノ置換α-ヒドロキシアシルである。
【０２１３】
ここに記載されているアシル基の態様のいくつかでは、アミン置換基は、例えば、アシルに関し、Ｒのβ、γ、δおよび／またはωの１つ以上の位置にあり得る。
【０２１４】
例示的なアミノ置換α-ヒドロキシアシルは、ここでＡＨＢ基とも呼ばれる（Ｓ）-4-アミノ-2-ヒドロキシブチリル基を含むが、それに限定されない。
本発明の一部の態様によれば、ＡＨＢ基の代用物は、α-ヒドロキシ-β-アミノプロピオニル（ＡＨＰ）基であり得る。追加の例示的なアミノ置換α-ヒドロキシアシルは、L-(−)-γ-アミノ-α-ヒドロキシブチリル、L-(−)-δ-アミノ-α-ヒドロキシバレリル、L-(−)-β-ベンジルオキシカルボニルアミノ-α-ヒドロキシプロピオニル、L-(−)-δ-ベンジルオキシカルボニルアミノ-α-ヒドロキシバレリルを含むが、それらに限定されない。
【０２１５】
ここで、本発明の一部の態様によれば、カルボニル（複数可）、ヒドロキシル（複数可）、および、任意の立体化学を示し低級アルキルを有するアミノ基（複数可）の組合せを含む他のＲは、例えば、2-アミノ-3-ヒドロキシブタノイル、3-アミノ-2-ヒドロキシペンタノイル、5-アミノ-3-ヒドロキシヘキサノイル等を含む、ＡＨＢおよび／またはＡＨＰの代わりの任意の置換基と想定されることは注目される。
【０２１６】
代表的な化合物は、ＷＯ２０１７／０３７７１８に記載されている。
【０２１７】
製造方法：
本発明の態様によれば、ここに記載されている方法の少なくとも一部は、アミノグリコシド化合物またはその中間体の大規模生成、製造または工業化に使用可能である。
【０２１８】
ここで、ここに記載されている化合物の生産で「大規模」とは、出発材料、中間体および／または最終生成物を問わず、化合物の少なくとも１つが、少なくとも１モル、少なくとも２モル、少なくとも３モル、または少なくとも５モル、例えば、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０モル、またはさらにそれを超える量で、そして、それらの値の任意の中間の値を含む量で、使用され、または製造される生産方法を意味する。
【０２１９】
あるいは、またはこれに加え、「大規模」な方法は、１つ以上の出発材料、中間体および／または最終生成物の重量により定義され、その結果、これらの材料の１つ以上は、少なくとも１Ｋｇ、少なくとも２Ｋｇ、少なくとも３Ｋｇまたは少なくとも５Ｋｇ、例えば、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００Ｋｇ、またはさらにそれを超える量で、そして、それらの値の任意の中間の値を含む量で、使用され、または生成される。
【０２２０】
あるいは、またはこれに加え、「大規模」な方法は、少なくとも１０リットル、少なくとも１５リットル、少なくとも２０リットル、少なくとも３０リットル、または少なくとも４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００リットル、またはさらにそれを超える量の、そして、それらの値の任意の中間の値を含む量の体積を有する反応容器において行われる、少なくとも１つの生成工程を含む方法に使用される反応容器の体積により定義される。
【０２２１】
擬似三糖アミノグリコシド化合物を製造する方法：
本発明の一部の態様の一側面によれば、ここに記載されている、式Ｉで表される擬似三糖アミノグリコシド化合物を製造する方法が提供される。この方法は、本発明の一部の態様によれば、ここで定義されている、アミノグリコシド化合物の大規模生成に有用である。
【０２２２】
本発明の一部の態様の一側面によれば、ここに記載されている、式Ｉａで表される擬似三糖アミノグリコシド化合物を製造する方法が提供される。この方法は、本発明の一部の態様によれば、ここで定義されている、アミノグリコシド化合物の大規模生成に有用である。
【０２２３】
本発明の態様によれば、ここに記載されている、式ＩまたはＩａで表される化合物を製造する方法が提供され、この方法は、とりわけ、そのような化合物の大規模生成に使用可能で、この方法は、
ここに記載されている、式ＩＩＩで表される供与体化合物を、ここに記載されているそれぞれの態様のいずれか、およびそれらの任意の組合せに従って製造すること；
供与体化合物と、対応する受容体、例えば、ここで定義されているそれぞれの態様のいずれかの受容体（例えば、式ＩＩ、ＩＩａ、ＩＩｂまたはＩＩｃ）をカップリングすること；ならびに、
すべての保護基を脱保護し、それにより、望ましい擬似三糖アミノグリコシドを得ることを含む。
【０２２４】
本発明の態様によれば、ここに記載されている式Ｉで表される化合物を製造する方法が提供され、この方法は、とりわけ、そのような化合物の大規模生成に使用可能であり、この方法は、
ここに記載されている、式ＩＩＩで表される供与体化合物を、ここに記載されているそれぞれの態様のいずれか、およびそれらの任意の組合せに従って製造すること；
式ＩＩＩで表される供与体化合物と、式ＩＩ：
【０２２５】
【化１８】
2020514373.tif 000020
【０２２６】
（式中；
（矩形）破線は、ここに記載されている、６’位でのＳ−配置またはＲ−配置を表し；
ＯＰは、ここに記載されている受容体保護ヒドロキシル基であり；
ＡＰは、ここに記載されている受容体保護アミノ基であり；
Ａは、ここに記載されている受容体保護ヒドロキシル基（ＯＰ）であり；
Ｂは、ここに記載されているように、式ＩのＲ４が水素の場合、受容体保護アミン基であり、および／または、Ｒ４が水素以外のものである場合、Ｒ４を定義する基の保護形態または非保護形態である）
で表される受容体化合物をカップリングすること；
保護ヒドロキシル基（存在する場合は、保護受容体ヒドロキシ基および保護供与体ヒドロキシ基）を脱保護すること；
保護アミノ基（存在する場合は、保護受容体アミン基および保護供与体アミン基）を脱保護し；ならびに、
任意に、存在する場合は、保護形態で存在する他の基、例えば、存在する場合は、Ｒ４を定義する基の保護形態を、脱保護することを含む。本発明の態様によれば、ここに記載されている、式Ｉａで表される化合物を製造する方法が提供され、この方法は、とりわけ、そのような化合物の大規模生成に使用可能で、この方法は、
ここに記載されている、式ＩＩＩで表される供与体化合物を、ここに記載されているそれぞれの態様のいずれか、およびそれらの任意の組合せに従って製造すること；
前記式ＩＩＩで表される化合物と、式ＩＩｂ：
【０２２７】
【化１９】
2020514373.tif 000021
【０２２８】
（式中；
矩形破線は、６’位でのＳ−配置またはＲ−配置を表し；
ＯＰは、受容体保護ヒドロキシル基であり；
ＡＰは、受容体保護アミノ基であり；
Ａは、式ＩａのＲ２がＯＲ’で、Ｒ’が水素である場合、受容体保護ヒドロキシル基（ＯＰ）であり；式ＩａのＲ２がＮＲ’Ｒ’’で、Ｒ’およびＲ’’の少なくとも１つが水素である場合、受容体保護アミン基（ＡＰ）であり；または、Ｒ２がＯＨ以外、またはＮＨＲ’もしくはＮＨ２以外である場合、Ｒ２を定義する基の保護形態または非保護形態であり；
Ｂは、式ＩａのＲ４が水素である場合、受容体保護アミン基（ＡＰ）であり、または、Ｒ４が水素以外である場合、Ｒ４を定義する基の保護形態もしくは非保護形態である）
で表される化合物をカップリングすること；
前記受容体保護および供与体保護ヒドロキシル基を脱保護すること；
前記受容体保護および供与体保護アミノ基を脱保護すること；ならびに
存在する場合は、Ｒ２を定義する基の前記保護形態、および／または、Ｒ４を定義する基の前記保護形態を脱保護することを含む。
【０２２９】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、カップリングは、他のカップリング剤が想定されるにもかかわらず、ＢＦ３エーテラートの存在下で行われる。
【０２３０】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、カップリングは、ここに記載されている式ＩＩまたはＩＩｂの化合物と、式ＩＩＩ＊：
【０２３１】
【化２０】
2020514373.tif 000022
【０２３２】
（式中、Ｄ、Ｒ８、ＯＴ１およびＯＴ２は、それぞれの態様のいずれかでここで定義されているとおりであり、Ｌはここで定義されている脱離基である）
の化合物の間で行われる。
【０２３３】
ここで使用される「脱離基」という語句は、化学反応中に有機分子からたやすく脱離する、不安定な原子、基または化学構造の一部を表し、通常、脱離する原子、基または化学構造の一部の相対的な安定性により、脱離が促進される。典型的には、強酸の共役塩基である基は、脱離基として働く。一部の態様では、脱離基は、供与体と受容体のカップリング反応を促進する。本発明の態様の一部による適切な脱離基の代表的な例は、限定されるものではないが、イミデート（例えば、トリクロロアセトイミデートのようなアセトイミデート）、アセテート、トシレート、トリフラート、スルホネート、アジド、ハライド、チオヒドロキシ、アルコキシ、シアネート、チオシアネート、ニトロおよびシアノを含む。
【０２３４】
一部の態様では、脱離基の導入は、式ＩＩＩの化合物の活性化形態を表す。
【０２３５】
一部の態様では、式ＩＩＩの化合物は、カップリングの前にその活性化形態に変換される。
【０２３６】
一部の態様では、活性化形態への変換は、インサイチューで行われ、その結果、式ＩＩＩの化合物は、反応容器中で、式ＩＩまたはＩＩｂの化合物、および／またはカップリング剤と接触させる前、またはその最中に、活性化形態（例えば式ＩＩＩ＊）に変換される。
【０２３７】
一部の態様では、式ＩＩＩの化合物のその活性化形態への変換は、カップリングが行われる前に、つまり、ここに記載されているカップリング剤および／または受容体と接触させる前に行われる。
【０２３８】
式ＩＩまたはＩＩｂの受容体の様々な位置における受容体ヒドロキシル保護基および受容体アミノ保護基は、それぞれの位置で、同一であり得、また、異なり得る。
【０２３９】
一部の態様では、例えば、式ＩまたはＩａのＲ４が水素以外である場合、式ＩＩまたはＩＩｂの受容体は、それと供与体との反応の前に、置換基Ｂを生成することにより製造される。
【０２４０】
一部の態様では、式ＩＩまたはＩＩｂの置換基Ｂは保護アミン基を含み、Ｒ４が水素以外の場合、Ｒ４を定義する基の保護形態をさらに含む。例えば、Ｒ４がアミンを含む基である場合、アミンは、ここに記載されているアミノ保護基の形態である。Ｒ４がグアニンまたはグアニジンを含む基である場合、グアニンまたはグアニジンは保護形態である。Ｒ４がヒドロキシを含む基である場合、ヒドロキシはここに記載されているヒドロキシ保護基の形態である。水素以外である場合のＲ４を定義する基の保護形態は、当業者に周知で、すべてが本発明の態様に包含される。
【０２４１】
一部の態様では、式ＩＩｂの置換基Ａは、Ｒ２がＯＲ’で、Ｒ’が水素である場合、保護ヒドロキシ基を含む。
【０２４２】
一部の態様では、式ＩＩｂの置換基Ａは、Ｒ２がＮＲ’Ｒ’’で、Ｒ’とＲ’’の一方または両方が水素である場合、保護アミン基を含む。Ｒ’とＲ’’の一方または両方が水素以外で、アミンを含む場合、当該アミンはここに記載されているアミノ保護基の形態である。Ｒ’とＲ’’の一方または両方が、ヒドロキシを含む基である場合、当該ヒドロキシは、ここに記載されているヒドロキシ保護基の形態である。水素以外である場合のＲ’およびＲ’’を定義する基の保護形態は、当業者に周知で、すべてが本発明の態様に包含される。
【０２４３】
受容体化合物（式ＩＩまたはＩＩｂ）の構造は、本発明の一部の態様に従い、それぞれ、式ＩまたはＩａで表される得られた化合物の環Ｉおよび環ＩＩの絶対構造を決定する。
【０２４４】
供与体化合物の構造は、本発明の一部の態様に従い、式ＩまたはＩａで表される得られた化合物の環ＩＩＩの絶対構造、すなわち、５’’位の立体配置、および式ＩまたはＩａにおけるＲ８のタイプを決定する。
【０２４５】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、受容体ヒドロキシル保護基のそれぞれは、O-アセチルである。
【０２４６】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、O-アセチルヒドロキシ保護基の脱保護は、以下の実施例で説明され、例となるようなアンモニアのメタノール溶液中で行われる。
【０２４７】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、受容体アミノ保護性基のそれぞれは、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢｚ）基である。
【０２４８】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、供与体アミノ保護性基のそれぞれは、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢｚ）基である。
【０２４９】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、供与体ヒドロキシ保護基のそれぞれは、O-ベンゾイル基である。
【０２５０】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、アミノ基の脱保護は、以下の実施例で説明され、例となるような、Ｐｄ／Ｃ触媒を用いた水素化により有利に行われる。
【０２５１】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、式ＩまたはＩａの化合物は硫酸塩で、その遊離塩基として形成された場合、当該方法は、式ＩまたはＩａで表される化合物の硫酸塩への変換をさらに含む。
【０２５２】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、硫酸塩への変換は、供与体と受容体のカップリングで得られる、遊離塩基の形態の式ＩまたはＩａで表される化合物を、以下の実施例で説明され、例となるような、Ｈ２ＳＯ４のメタノール溶液と接触させることにより行われる。
【０２５３】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、式ＩＩまたはＩＩｂで表される受容体化合物は、それぞれの態様のいずれか、およびそれらの任意の組合せにおいて、ここに記載されているように製造される。
【０２５４】
式Ｉにおいて、Ｒ１がメチル、６’位の配置がＲ−配置、Ｒ４が水素、Ｒ８がメチルである化合物を製造する例示的な方法は、以下の実施例に記載されているとおりで、かつ、図１〜３に示されている。ここに記載されている態様のいずれかの一部では、式ＩまたはＩａで表される化合物は、その塩を含め、ここに記載された受容体化合物と、例えば、ＷＯ２０１２／０６６５４６および／またはＷＯ２０１７／０３７７１８で記載された供与体化合物をカップリングすることにより製造される。
【０２５５】
ここに記載されている態様のいずれかの一部では、式ＩまたはＩａで表される化合物は、その塩を含め、ここに記載されたそれぞれの態様のいずれかの供与体化合物と、例えば、ＷＯ２０１２／０６６５４６および／またはＷＯ２０１７／０３７７１８で記載されている受容体化合物をカップリングすることにより製造される。
【０２５６】
ここに記載されている態様のいずれかの一部では、式ＩまたはＩａで表される化合物は、その塩を含めて、ここに記載されている受容体化合物のいずれかと、ここに記載されている供与体化合物のいずれかをカップリングすることにより製造される。
【０２５７】
これらの態様の一部では、カップリング、および／または保護性基とその対応する脱保護、および／または硫酸塩への変換は、それぞれの態様のいずれか、およびそれらの任意の組合せとしてここに記載されているように行われる。
【０２５８】
供与体化合物の製造：
本発明の一部の態様の一側面によれば、式ＩＩＩ：
【０２５９】
【化２１】
2020514373.tif 000023
【０２６０】
（式中；
ＯＴ１およびＯＴ２は、それぞれ独立して、供与体保護ヒドロキシル基であり；
Ｒ８は、式ＩまたはＩａにおいてここで定義されているとおりで、好ましくはアルキル、より好ましくはメチルであり；
Ｄは供与体保護アミノ基である）
で表される供与体化合物を製造する方法が提供される。
【０２６１】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、ここに記載されている方法は、式ＩＩＩの化合物の大規模生成に利用可能である。
【０２６２】
本発明の一部の態様によれば、供与体ヒドロキシ保護性基のそれぞれは、O-ベンゾイルである。
【０２６３】
一部の態様によれば、その方法は、
式ＩＩＩａ：
【０２６４】
【化２２】
2020514373.tif 000024
【０２６５】
で表される化合物と、式Ｒ８ＭｇＸ（Ｘはハライドである）で表されるグリニャール試薬を反応させて、
それにより、式ＩＩＩｂ：
【０２６６】
【化２３】
2020514373.tif 000025
【０２６７】
で表される化合物を立体選択的に得ることにより行われる。
【０２６８】
「立体選択的」は、示された立体異性体が、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、またはさらにそれを超える光学的純度（鏡像異性体純度）で得られることを意味する。
これは、得られた式ＩＩＩｂの化合物の、モルにより、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％は、それぞれ、式ＩＩＩｂの５’’位がＳ−配置であることを意味する。
【０２６９】
この方法は、式ＩＩＩｂで表される化合物を式ＩＩＩｃ：
【０２７０】
【化２４】
2020514373.tif 000026
【０２７１】
で表される化合物に変換すること、
式ＩＩＩｃで表される化合物とアミノ保護性基を反応させ、それにより、Ｄアミノ保護基を形成すること；ならびに
式ＩＩＩｃで表される化合物と、ヒドロキシ保護性基を反応させ、それにより、ＯＴ１およびＯＴ２ヒドロキシ保護基を形成することにより続く。
【０２７２】
この方法は、１’’位でヒドロキシ基を生成することをさらに含んでもよい。
【０２７３】
式ＩＩＩｂで表される化合物を、式ＩＩＩｃで表される化合物に変換し、さらに、式ＩＩＩｃで表される化合物と反応させて、式ＩＩＩで表される供与体化合物を得ることは、５’’位の立体配置を維持することにより行われる。
【０２７４】
「立体配置を維持すること」は、式ＩＩＩｃおよび式ＩＩＩの化合物の光学的純度が、ここに記載されている式ＩＩＩｂの化合物と本質的に同一であることを意味する。
「本質的に同一」は、式ＩＩＩｂの化合物の光学的純度が１０％以下、好ましくは５％以下、４％以下、３％以下、２％以下、１％以下、０．５％以下、または０．１％以下で異なることを意味する。
【０２７５】
一部の態様では、式ＩＩＩｃおよび式ＩＩＩの化合物の光学的純度は、ここに記載されている式ＩＩＩｂの化合物と本質的に同一である。
【０２７６】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、アミノ保護性基は、N-ベンジルオキシカルボニルである。
【０２７７】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、ヒドロキシ保護性基のそれぞれは、ベンゾイルである。
【０２７８】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、その方法は、
D-リボースをジオキソラン保護D-リボースに変換すること；
５’’位のヒドロキシ基をそれぞれのアルデヒドに酸化すること；および
アルデヒドとN-ベンジルヒドロキシルアミン塩酸塩を反応させることによって、式ＩＩＩａで表される化合物を製造することにより行われる。
【０２７９】
例示的な態様では、式ＩＩＩａで表される化合物は、化合物１０３について以下の実施例に記載されているように製造される。
【０２８０】
例示的な態様では、置換基Ｄは、N-ベンジルオキシカルボニル（ＣＢｚ）保護アミノ基で、Ｒ８はメチルで、Ｔ１およびＴ２のそれぞれは、ベンゾイルである。ここでＢＢ−Ｄとも呼ばれるそのような供与体化合物を製造する例示的な方法は、以下の実施例に詳細に記載され、概して図１に示されている。ＬがＯＨの場合、供与体化合物は、ここでＢＢ−Ｄ−ＯＨとも呼ばれる。
【０２８１】
一部の態様では、式ＩＩＩａで表される化合物をD-リボースから製造すること、式ＩＩＩａで表される化合物とグリニャール試薬を反応させること、式ＩＩＩｂで表される化合物を、式ＩＩＩｃで表される化合物に変換すること、および、式ＩＩＩｃで表される化合物とアミノ保護性基を反応させ、それによりＤを形成することは、「ワンポット反応」として、すなわち、これらの反応のそれぞれにおいて得られた中間産物を連続的に反応させ、それにより、次の中間体を得ることにより行われ、および／または中間体化合物を単離することなく行われる。
【０２８２】
ここに記載されている態様のいずれかについて、式ＩＩＩａ、ＩＩＩｂおよびＩＩＩｃの化合物における１’’位のメトキシ基は、ここで定義されている他のヒドロキシ保護性基で置換されることは注目されるべきである。
【０２８３】
ここに記載されている態様のいずれかについて、２’’および３’’位のヒドロキシ基を保護するジオキソラン基は、ここで定義されている他のヒドロキシ保護性基により置きかえられ、この保護性基は、ここに記載されているＯＴ１およびＯＴ２と同一であり得、または異なり得ることはさらに注目されるべきである。
【０２８４】
本発明の一部の態様によれば、ここに記載されている、式ＩＩＩの化合物を製造する方法は、式ＩＶ：
【０２８５】
【化２５】
2020514373.tif 000027
【０２８６】
（式中；
Ｒ８は、ここで定義されているとおりであり
Ｘ１およびＸ２は、それぞれ独立して、水素またはここで定義されているヒドロキシ保護性基である）
の化合物の製造に使用できる。
【０２８７】
その方法は、それぞれの態様のいずれかに記載されている式ＩＩＩｃの化合物を得ること；当該技術分野で周知の手順を用い、それぞれのＯＸ１およびＯＸ２を生成すること（式ＩＩＩｃの化合物でこれらがヒドロキシ保護性基と異なる場合）；ならびに、１’’位のヒドロキシ基を生成すること、により行われる。
【０２８８】
一部の態様では、式ＩＶの化合物は、１’’位のヒドロキシ基を、ここで定義されているそれぞれの脱離基に変換することにより、ここに記載されている式ＩＩＩ＊の化合物の製造に利用可能である。
【０２８９】
受容体化合物を製造する方法：
本発明の一部の態様の一側面によれば、式ＩＩ：
【０２９０】
【化２６】
2020514373.tif 000028
【０２９１】
（式中；
（矩形）破線は、６’位でのＳ−配置またはＲ−配置を表し、好ましくはＲ−配置であり；
Ｒ１は水素、アルキル、シクロアルキルまたはアリールであり、好ましくはアルキル、より好ましくはメチルであり；
ＯＰは、受容体保護ヒドロキシル基であり；
ＡＰは、受容体保護アミノ基であり；
Ａは、受容体保護ヒドロキシル基（ＯＰ）であり；
Ｂは、受容体保護アミン基、アシルまたは保護もしくは非保護アミノ置換α-ヒドロキシアシルであり、好ましくは受容体保護アミノ基である）
で表される受容体化合物を製造する方法が提供される。
【０２９２】
受容体の様々な位置の、受容体ヒドロキシ保護基および受容体アミノ保護基は、各位置で同一であり得、または異なり得る。
【０２９３】
受容体化合物の構造は、本発明の一部の態様に従い、得られた式Ｉの化合物の環Ｉおよび環ＩＩの絶対構造を決定する。
【０２９４】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、ここに記載されている式ＩＩの受容体を製造する方法が提供され、この方法は、当該受容体の大規模生成、または、式Ｉの化合物の大規模生成に利用可能である。
【０２９５】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、式ＩＩの受容体を製造する方法が提供され、この方法は、とりわけ、当該受容体の大規模生成、または式Ｉの化合物の大規模生成に使用でき、この方法は、
式ＩＩａ：
【０２９６】
【化２７】
2020514373.tif 000029
【０２９７】
（式中；
破線は、ここに記載されている６’位での立体配置を表し、
Ｒ４は、水素、アシルまたはアミノ置換α-ヒドロキシアシル、好ましくは水素である）
で表される化合物、または医薬として許容できるその塩を用意すること；
アミノ基のそれぞれをアミノ保護基に変換すること；およびヒドロキシ基のそれぞれをヒドロキシ保護基に変換することを含む。
【０２９８】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、ヒドロキシ保護基のそれぞれは、O-アセチルである。
【０２９９】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、アミノ保護基のそれぞれは、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢｚ）保護アミノ基である。
【０３００】
ここで論じられているように、そのようなアミノ保護基は、以前に記載されたアジド基より実質的に有害ではなく、さらに、有利には、水素化によりアミノ基の脱保護が可能になる。
【０３０１】
本発明の一部の態様によれば、Ｒ１はメチルであり、６’位での配置はＲ−配置であり、式ＩＩａの化合物を得ることは、Ｇ−４１８スルフェートを式ＩＩａで表される化合物に変換することを含む。
【０３０２】
本発明の一部の態様によれば、この変換は、（例えば、当該技術分野で公知の方法で）Ｇ−４１８をその遊離塩基の形態に変換し、Ｇ−４１８の遊離塩基の形態と、ＨＣｌのメタノール溶液との接触を含む。
【０３０３】
ここでＢＢ−Ａと呼ばれる式ＩＩの例示的な受容体を製造する例示的な方法は、実施例に詳細に記載され、図２に示されている。
【０３０４】
本発明の態様による例示的な方法では、ここに記載されている方法は、ここでＮＢ１２４またはＥＬＸ−０２とも呼ばれる、擬似三糖アミノグリコシド化合物の大規模生成に使用可能で、ここに記載されている供与体化合物ＢＢ−Ｄ−ＯＨ、およびここに記載されている受容体化合物ＢＢ−Ａを製造し、ＢＢ−Ｄ−ＯＨ（任意に、これをＢＢ−Ｄのような活性化形態に変換する）とＢＢ−Ａをカップリングし、それにより、望ましい生成物を、可能であればその塩（例えば、硫酸塩）として得ることにより行われる。そのような方法は、図３に示されている。
【０３０５】
本発明の一部の態様の一側面によれば、式ＩＩｂ：
【０３０６】
【化２８】
2020514373.tif 000030
【０３０７】
（式中；
（矩形）破線は、６’位でのＳ−配置またはＲ−配置を表し、好ましくはＲ−配置であり；
Ｒ１は、水素、アルキル、シクロアルキルまたはアリールであり、好ましくはアルキル、より好ましくはメチルであり；
ＯＰは、受容体保護ヒドロキシル基であり；
ＡＰは、受容体保護アミノ基であり；
ＡおよびＢは、式ＩＩｂについてここで定義されているとおりる）
で表される受容体化合物を製造する方法が提供される。
【０３０８】
受容体の様々な位置の、受容体ヒドロキシ保護基および受容体アミノ保護基は、各位置で同一であり得、または異なり得る。
【０３０９】
式ＩＩｂの受容体化合物の構造は、本発明の一部の態様に従い、得られた式Ｉａの化合物の環Ｉおよび環ＩＩの絶対構造を決定する。
【０３１０】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、ここに記載されている式ＩＩｂの受容体を製造する方法が提供され、この方法は、受容体の大規模生成、または式Ｉａの化合物の大規模生成に使用可能である。
【０３１１】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、式ＩＩｂの受容体を製造する方法が提供され、この方法は、とりわけ、受容体の大規模生成、または、式Ｉａの化合物の大規模生成に利用可能であり、この方法は、
式ＩＩｃ：
【０３１２】
【化２９】
2020514373.tif 000031
【０３１３】
（式中；
矩形破線は、６’位でのＳ−配置またはＲ−配置を表し；
Ａは、式ＩａのＲ２がＯＲ’で、Ｒ’が水素である場合、ＯＨであり；式ＩａのＲ２がＮＲ’Ｒ’’で、各Ｒ、Ｒ’’が水素の場合、ＮＨ２であり；式ＩａのＲ２がＮＲ’Ｒ’’で、Ｒ’およびＲ’’の１つが水素の場合、ＮＨＲ’またはＮＨＲ’’であり；または、式ＩａのＲ２で定義された置換または無置換アルキルであり；
Ｂは、式ＩａのＲ４が水素である場合、アミンであり、または、Ｒ４がここで定義されているように水素以外である場合、Ｒ４を定義する基の非保護形態である）
で表される化合物を得ること；
アミノ基のそれぞれをアミノ保護基に変換すること；および、ヒドロキシ基のそれぞれをヒドロキシ保護基に変換することを含む。
【０３１４】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、ヒドロキシ保護基のそれぞれは、O-アセチルである。
【０３１５】
ここに記載されている態様のいずれかの一部によれば、アミノ保護基のそれぞれは、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢｚ）保護アミノ基である。
【０３１６】
本発明の態様は、さらに、ここに記載されている式ＩＩＩａ、ＩＩＩｂおよびＩＩＩｃで表される中間体化合物の製造方法（例えば、ここで定義されている大規模方法）、ならびに、ここに記載されている式ＩＩＩａ、ＩＩＩｂおよびＩＩＩｃで表される化合物に関する。
【０３１７】
治療用途：
ここに示される化合物は、切断型変異の抑制活性、すなわち、未成熟終止コドン変異のリードスルーを誘導する能力を所有するように設計された。そのような活性は、これらの化合物の、遺伝子障害、特に切断型変異を特徴とする障害を処置するための治療活性剤としての使用に適するようにする。
【０３１８】
本発明の一部の態様の一側面によれば、ここで一般式ＩまたはＩａでまとめて表され、ここに記載されている方法により製造される化合物は、遺伝子障害の処置に使用する、または、遺伝子障害の処置のための医薬の製造に使用するためのものである。
【０３１９】
本発明の一部の態様の一側面によれば、遺伝子障害を処置する方法が提供される。この方法は、本発明のこの側面によれば、化合物およびそれらの任意の組合せのそれぞれの態様を含む、ここに記載されている方法により製造され、ここで、一般式ＩまたはＩａで示される１つ以上の化合物の治療有効量を必要とする対象に投与することにより行われる。
【０３２０】
ここで使用される「処置する」という用語は、状態の進展の抑制、実質的な阻害、遅延もしくは好転、状態の臨床的もしくは審美的症状の実質的な改善、または、状態の臨床的もしくは審美的症状の出現の実質的な防止を含む。
【０３２１】
ここで使用される「治療有効量」という語句は、処置される症状の１つ以上をある程度軽減する量の投与されるポリマーを表す。
【０３２２】
ここで使用される「遺伝子障害」という語句は、しばしば、両親から遺伝した１つ以上の欠損遺伝子によって引き起こされ、そして、欠陥のある劣性遺伝子の２つの健常なキャリアが再生産し、または、欠陥のある遺伝子が優性である場合、想定外に発生し得る、慢性的な障害を指す。遺伝子障害は、影響を受ける子孫に対して、１つの変異した遺伝子のコピーのみを必要とする常染色体優性パターン、および、影響を受ける子孫に対して、２つの遺伝子のコピーが変異していなければならない常染色体劣性パターンを含む、様々な遺伝型パターンで発生し得る。
【０３２３】
ここで使用される、「遺伝子障害」という語句は、遺伝的障害、遺伝的疾患、遺伝的状態または遺伝的症候群を包含する。
【０３２４】
本発明の態様のいずれかの一部によれば、遺伝的障害、遺伝的疾患、遺伝的状態または遺伝的症候群は、未成熟終止コドン変異、または切断型変異（ナンセンス変異）を有する遺伝子に関与し、これにより、不適切な翻訳が引き起こされる。不適切な翻訳は、必須タンパク質を機能不全にし、または必須タンパク質の合成の減少または中止を引き起こす。本発明の一部の態様に関して、本発明の態様の範囲内と期待される遺伝子障害は、未成熟終止コドン変異および／またはタンパク質切断表現型に関連する遺伝子障害と呼ばれる。
【０３２５】
本発明の態様のいずれかの一部によれば、未成熟終止コドン変異および／またはタンパク質切断表現型に関連する遺伝子障害は、完全な転写産物（ｍＲＮＡ）のリードスルーの促進により、または、言い換えれば、ナンセンス変異（未成熟終止コドン変異および／または切断型変異）の抑制の促進により処置できる。したがって、遺伝子障害は、リードスルー誘導化合物により処置できる障害であり得る。
【０３２６】
未成熟終止コドン変異および／またはタンパク質切断表現型に関連する遺伝子障害を同定する方法は、当該技術分野で周知で、完全または部分的なゲノム解読、遺伝的バイオマーカーの検出、表現型の分類および遺伝情報の分析を含む。
【０３２７】
そのような方法は、しばしば、変異型／野生型（ＷＴ）配列のペアを生じ、これらのペアは、遺伝子障害が、未成熟終止コドン変異および／またはタンパク質切断表現型に関連するかどうかを同定するための公知の方法論に使用できる。
【０３２８】
そのような遺伝子障害を処置する化合物のリードスルー誘導活性は、当該技術分野において周知の方法で確証できる。
【０３２９】
例えば、変異した遺伝子（遺伝子障害を引き起こす遺伝子）の配列により中断される２つのレポーター遺伝子を含むプラスミドを、完全な細胞または無細胞系のいずれかのタンパク質発現プラットフォームにトランセクトし、テスト化合物の存在下で、前記２つの遺伝子の発現レベル間の比が、典型的には一連の濃度と複製で測定され、野生型の遺伝子発現レベル比、および／または、テスト化合物を含まない対照試料で測定した発現レベル比と比較される。
【０３３０】
リードスルー活性の実験モデル、すなわち未成熟終止コドン変異を含む遺伝子の塩基配列は、未成熟終止コドン変異および／またはタンパク質切断表現型に関連する遺伝子障害を同定する方法の副生成物であることは注目され、さらに、ゲノムデータ獲得の大きな進歩で、この方法は、今や十分に当業者の技術範囲内にあり、また、未成熟終止コドン変異および／またはタンパク質切断表現型に関連すると示されてきた遺伝子障害の事例のように、候補薬物の作用機序が確立されれば、ここに示されるリードスルー誘導化合物のいずれか１つの効能、選択性および安全性の、同定、特徴付け、および評価が、十分に当業者の技術範囲内にあることは、注目される。ここに示されるリードスルー誘導化合物を、さらに薬物開発の日常的プロセスにより得ることは、十分に当業者の技術範囲内にあることはさらに注目される。
【０３３１】
ここでリードスルー活性と呼ばれる、未成熟終止コドン変異および／または切断型変異のリードスルーをテストする方法論は、当該技術分野で公知であり、いくつかの例示的な実験方法が以下の実施例で示され、これにより、本発明の一部の態様によるリードスルー誘導化合物が特徴付けられる。他の方法もリードスルー誘導化合物の特徴付けに使用でき、そのような方法も、本発明の範囲内にあると想定されることは理解されるべきである。例えばここに示される方法は、比較的短時間で数千もの化合物をアッセイできるハイスループットスクリーニング技術にも適合できる。
【０３３２】
薬物としての使用の安全性の観点から、そして、その細胞毒性と効能の観点で候補薬物を評価するために、多くのインビトロ方法論が、ここに示されるリードスルー誘導化合物を特徴付けるために使用されること当業者は認識する。真核生物と原核生物の選択性について、多くのインビトロ方法論がここに示されるリードスルー誘導化合物を特徴付けるために使用されること当業者は認識し、また、そのような方法論は、比較的短時間で何千もの化合物をアッセイできるハイスループットスクリーニング技術にも適合させてもよい。
【０３３３】
少なくとも１つの未成熟終止コドンまたは他のナンセンス変異の存在に関連する、例示的な遺伝子障害、疾患、状態および症候群は、レット症候群、嚢胞性線維症（ＣＦ）、ベッカー型筋ジストロフィー（ＢＭＤ）、先天性筋ジストロフィー（ＣＭＤ）、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）、第ＶＩＩ因子欠乏、家族性心房細動、ヘイリー−ヘイリー病、血友病Ａ、血友病Ｂ、ハーラー症候群、ルイ−バール症候群（毛細血管拡張性運動失調症、ＡＴ）、マッカードル病、ムコ多糖症、腎型シスチン症、多発性嚢胞腎、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）、テイサックス病、アッシャー症候群、Ｘ連鎖腎性尿崩症（ＸＮＤＩ）およびＸ連鎖網膜色素変性を含むが、それらに限定されない。
【０３３４】
ここに記載されている態様のいずれかの一部では、遺伝子障害は、レット症候群である。
【０３３５】
ここに記載されている方法および使用のいずれかにおいて、ここに記載されている化合物は、それ自体、または、ここで定義されている医薬として許容できる担体をさらに含む医薬組成物の一部の形態を利用できる。
【０３３６】
本発明の一部の態様の一側面によれば、活性成分、ここに記載されている化合物、および医薬として許容できる担体を含む医薬組成物が提供される。
【０３３７】
ここで使用される「医薬組成物」は、ここに示される化合物と、他の化学成分、例えば医薬として許容でき、適切な担体および賦形剤の調製物を指す。医薬組成物の目的は化合物の生物への投与の促進である。
【０３３８】
以下において、「医薬として許容できる担体」という用語は、生物に著しい刺激を引き起こさず、投与された化合物の生物学的活性および性質を無効にしない担体または希釈剤を指す。担体の例は、以下に限定されるものではないが、プロピレングリコール、生理食塩水、エマルションおよび有機溶媒と水の混合物、ならびに固体（例えば粉末化された）担体、および気体担体である。
【０３３９】
ここで「賦形剤」という用語は、化合物の投与をさらに促進するために、医薬組成物に添加される不活性物質を指す。賦形剤の例は、以下に限定されるものではないが、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖および様々なタイプのデンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油ならびにポリエチレングリコールを含む。
【０３４０】
製剤化技術および薬物の投与は、"Remington's Pharmaceutical Sciences" Mack Publishing Co., Easton, PAの最新版で見出され得、これは、参照によりここに組み込まれる。
【０３４１】
本発明の医薬組成物は、当該技術分野で周知の方法により、例えば、従来の混合、溶解、造粒、糖衣錠化、研和、乳化、カプセル化、封入または凍結乾燥により製造してもよい。
【０３４２】
したがって、本発明に従って使用する医薬組成物は、ここに示された化合物を、医薬として使用できる調製物に加工することを促進する、賦形剤および助剤を含む１つ以上の医薬として許容できる担体を使用する、従来のやり方で製剤化されてもよい。適正な製剤は、選択された投与経路に依存する。
【０３４３】
一部の態様によれば、投与は経口的に行われる。経口投与に関し、ここに示される化合物は、化合物と、当該技術分野で周知の医薬として許容できる担体を組み合わせることにより容易に製剤化できる。そのような担体は、ここに示される化合物を、患者による経口摂取のために、錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル、液剤、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液などとして製剤化することを可能にする。経口使用のための薬理学的調製物は、固体賦形剤を使用し、任意に、生じた混合物をすり潰し、必要に応じて、錠剤または糖衣錠コアを得るために、適切な助剤を添加した後、顆粒混合物を加工することにより、作ることができる。適切な賦形剤は、詳細には、フィラー、例えばラクトース、スクロース、マンニトールもしくはソルビトールを含む糖；セルロース調製物、例えば、トウモロコシデンプン、コムギデンプン、コメデンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントガム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボメチルセルロースナトリウム；および／または生理学的に許容できるポリマー、例えばポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）である。必要に応じて、崩壊剤、例えば架橋連結ポリビニルピロリドン、寒天またはアルギン酸もしくはその塩、例えばアルギン酸ナトリウムを添加してもよい。
【０３４４】
経口的に使用できる医薬組成物は、ゼラチンでできたプッシュフィット式カプセルならびに、ゼラチンおよびグリセロールまたはソルビトールのような可塑剤でできたシールされた軟カプセルを含む。プッシュフィット式カプセルは、ラクトースのようなフィラー、デンプンのような結合剤、滑石またはステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、および任意に安定剤と混和した活性成分を含有してもよい。軟カプセルでは、ここに示される化合物を、適切な液体、例えば脂肪油、流動パラフィンまたは液体ポリエチレングリコール中で溶解または懸濁してもよい。さらに、安定剤を添加してもよい。経口投与のためのすべての製剤は、選択された投与経路に適する投与量にすべきである。
【０３４５】
注入に関して、ここに示される化合物は、プロピレングリコールやポリエチレングリコールのような有機溶媒の有無を問わず、水溶液、好ましくは生理学的に適合可能な緩衝液、例えばハンクス溶液、リンガー溶液または生理食塩水緩衝液として製剤化してもよい。
【０３４６】
経粘膜投与では、浸透剤が製剤に使用される。そのような浸透剤は一般に当該技術分野で公知である。
【０３４７】
糖衣錠コアは、適切なコーティングにより得られる。この目的のために、濃縮糖溶液を使用してもよく、これは、任意に、アラビアゴム、滑石、ポリビニルピロリドン、カーボポールゲル、ポリエチレングリコール、二酸化チタン、ラッカー溶液および適切な有機溶媒または溶媒混合物を含有してもよい。活性アミノグリコシド化合物の用量の様々な組合せを同定し、または特徴付けるために、染料または顔料を錠剤または糖衣錠コーティングに添加してもよい。
【０３４８】
バッカル投与に関して、組成物は、従来のやり方で製剤化された錠剤またはトローチの形態をとってもよい。
【０３４９】
吸入による投与に関して、ここに示される化合物は、適切な噴射剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタンまたは二酸化炭素の使用により、加圧パックまたはネブライザーからのエーロゾルスプレーの形態（典型的には、粉末状、液状および／または気体状担体を含む）で都合よく送達される。加圧エーロゾルの場合、投与単位は、定量を送達するバルブを設けることにより決定してもよい。吸入器または注入器で使用するためのゼラチンのカプセルおよびカートリッジは、ここに示される化合物と、限定されるものではないが、ラクトースまたはデンプンのような適切な粉末ベースの粉末混合物を含むように製剤化することができる。ここに示される化合物は、例えば、ボーラス注入または連続注入による非経口投与用に製剤化してもよい。注入用の製剤化は、任意に防腐剤が添加された、アンプルまたは複数回投与容器のような単位剤形で示されてもよい。組成物は、油性または水性ビヒクル中の懸濁液、液剤またはエマルションであってもよく、懸濁化剤、安定化剤および／または分散剤のような調合剤を含有してもよい。
【０３５０】
非経口投与用の医薬組成物は、水溶性形態の化合物調製物の水溶液を含む。さらに、ここに示される化合物の懸濁液は、適切な油性注入懸濁液およびエマルション（例えば、油中水、水中油または油中油中水エマルション）として調製してもよい。適切な脂溶性溶媒またはビヒクルは、ゴマ油のような脂肪油、オレイン酸エチルのような合成脂肪酸エステル、トリグリセリドまたはリポソームを含む。水性注入懸濁液は、懸濁液の粘度を上昇させる物質、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトールまたはデキストランを含有してもよい。任意に、懸濁液は、適切な安定剤、または、高度に濃縮した液剤の調製を可能にするためにここに示される化合物の溶解度を上昇させる作用剤も含有してもよい。
【０３５１】
あるいは、ここに示される化合物は、使用する前に、適切なビヒクル、例えば、無菌、パイロジェンフリー水で構成するための粉末形態であってもよい。
【０３５２】
ここに示される化合物は、ココアバターや他のグリセリドのような従来の坐剤ベースを使用して、坐剤または停留浣腸のような直腸組成物として製剤化してもよい。
【０３５３】
ここに記載されている医薬組成物は、ゲル相担体または賦形剤の適切な固体も含んでもよい。そのような担体または賦形剤の例は、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖、デンプン、セルロース誘導体、ゼラチンおよびポリマー、例えばポリエチレングリコールを含むが、それらに限定されない。
【０３５４】
本発明の使用に適した医薬組成物は、活性成分が意図された目的を達成するのに有効な量で含有される組成物を含む。より具体的には、治療有効量は、障害の症状を防止する、緩和する、もしくは改良する、または処置される対象の生存率を延長するのに有効な、ここに示される化合物の量を意味する。
【０３５５】
治療有効量の決定は、とりわけ、ここに示される、詳細な開示を踏まえると、十分に当業者の能力の範囲内である。
【０３５６】
本発明の態様の方法で使用され、ここに示される化合物について、治療有効量または用量は、動物での活性アッセイから最初に評価できる。例えば、用量は、活性アッセイにより判定される変異抑制濃度となる循環濃度範囲（例えば、切断型変異の実質的なリードスルーを達成する試験化合物の濃度）を到達するために動物モデルで製剤化される。そのような情報は、ヒトで有用な用量をより正確に判定するために使用できる。
【０３５７】
ここに示される化合物の毒性および治療的効能は、例えば、対象化合物のＥＣ５０（最大効果の５０％が観察される化合物の濃度）およびＬＤ５０（試験動物の５０％が死亡する致死量）を決定することにより、実験動物を用いる標準の薬学的手順により決定できる。これらの活性アッセイおよび動物研究から得たデータは、ヒトに使用するための投与量範囲の製剤化に使用できる。
【０３５８】
投与量は、用いる剤形および投与経路に応じて変化させてもよい。正確な製剤化、投与経路および投与量は、患者の状態を考慮して個々の医師が選択できる（例えば、Finglら、1975, "The Pharmacological Basis of Therapeutics", Ch.1 p.1参照）。
【０３５９】
投与量および間隔は、最小有効濃度（ＭＥＣ）といわれる、望ましい効果を維持するのに十分な、ここに示される化合物の血漿濃度となるために個々に調整してもよい。ＭＥＣは、各調製物で変化するが、インビトロのデータ；例えば、切断型変異を有する遺伝子すべての１０〜９０％の発現、すなわち変異コドンのリードスルーを達成するのに必要な化合物の濃度から推定できる。ＭＥＣを達成するのに必要な投与量は、個々の特性および投与経路に依存する。ＨＰＬＣアッセイまたはバイオアッセイは、血漿中の濃度を決定するのに使用できる。
【０３６０】
投与間隔は、ＭＥＣ値を使用しても決定できる。調製物は、時間の１０〜９０％、好ましくは３０〜９０％、最も好ましくは５０〜９０％にわたりＭＥＣを超える血漿中濃度を維持するレジメンを使用して投与する必要がある。
【０３６１】
処置される慢性状態の重症度および反応性に応じて、投与は、数日から数週間続く定期的な処置、定期的な処置中に十分な改善が達成されるまで、または、定期的な処置で障害状態の実質的な減少が達成されるまでの過程を伴う、上記徐放性組成物の単回の定期的な投与であることができる。
【０３６２】
もちろん、投与される組成物の量は、処置される対象、病気の重症度、投与法、担当医師の判断などに依存する。本発明の組成物は、必要に応じて、活性成分を含有する１つ以上の単位剤形を含有してもよいパックまたはディスペンサーデバイス、例えばＦＤＡ（米国食品医薬品局）で承認されたキットで提供してもよい。パックまたはディスペンサーデバイスは、投与のための説明書を伴ってもよい。パックまたはディスペンサーは、医薬品の製造、使用または販売を規制する政府当局により指定される形態で容器に付随する通知を伴ってもよく、この通知は、ヒトまたは獣医学的投与用の組成物の形態の当局による承認を反映する。例えば、そのような通知は、処方薬について米国食品医薬品局の承認を受けたラベル、または、承認された製品添付文書であってもよい。適合可能な医薬担体中で製剤化された、この態様による化合物を含む組成物も、以上に詳細に述べたように、調製され、適切な容器に入れられ、示された状態の処置または診断のために表示してもよい。
【０３６３】
したがって、一部の態様では、医薬組成物は、ここで定義されている遺伝子障害の処置に使用するために、パッケージング材料中にパッケージされ、パッケージング材料中または材料上の印刷で識別される。
【０３６４】
ここに記載されている組成物、方法および使用において、化合物は、遺伝子障害の処置に有用な他の作用剤と組み合わせて利用できる。
【０３６５】
定義によれば慢性である遺伝子障害の処置を主に対象とするので、ここに示される化合物、またはそれを含む医薬組成物は、処置される対象の生涯を通じて投与されると予想される。したがって、化合物を含む医薬組成物の投与の様式は、投与が、簡単かつ快適なものでなければならず、好ましくは自己投与であり、患者の健康と生活に対する影響を最小にするものでなければならない。
【０３６６】
ここに示される化合物、またはそれを含む医薬組成物の繰り返しかつ定期的な投与は、例えば、毎日、すなわち１日１回行われ、より好ましくは、投与は、毎週、すなわち週１回行われ、より好ましくは、投与は、毎月、すなわち月１回行われ、最も好ましくは、投与は、数ヶ月（例えば、１．５ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月または６ヶ月）に１回行われる。
【０３６７】
以上で論じられているように、切断型変異リードスルー薬物としての目下公知のアミノグリコシドの使用に関する限定の一部は、それらは、主に抗菌性である（抗生物質として使用される）という事実に関係する。抗菌剤の長期間の使用は、腸内の微生物叢を変化させ、これにより、炎症性腸疾患の紅斑といった他の医学的状態を引き起こす可能性、または悪化する可能性があり、かつ、一部の病理学的な微生物株に耐性の出現を引き起こす可能性があるため、まったく是認されず、生命を脅かすことさえある。
【０３６８】
一部の態様では、ここに示される化合物は、実質的に抗菌活性を有さない。「抗菌活性を有さない」は、特定の株に対するその最小阻害濃度（ＭＩＣ）が、この株に対する抗生物質とみなされる化合物の濃度よりはるかに高いことを意味する。さらに、これらの化合物のＭＩＣは、切断型変異抑制活性を発揮するのに必要とされる濃度より顕著に高い。
【０３６９】
実質的に非殺菌性であるため、ここに示される化合物は、前述の副作用を示さず、ゆえに、良性、および／または有益な微生物を含む可能性のある吸収経路を介して投与でき、微生物は標的とはされず、したがって、保存が必要となる場合がある。ここに示される化合物のこの重要な特性により、抗菌性に関連した有害な蓄積効果を引き起こすことがなく、これらの化合物は、繰り返し、また生涯投与できるので、慢性疾患に対して特に有効な薬物となり、さらに経口または直腸で、すなわちＧＩ管を経由して投与でき、これは、慢性疾患の処置を目的とした薬物にとってきわめて有用かつ重要な特性である。
【０３７０】
一部の態様によれば、ここに示される化合物は、原核細胞翻訳系ではなく、真核細胞翻訳系に選択的になるように選択され、および／または設計され、すなわちその化合物は、原核細胞、例えば細菌に対する活性と比較して、真核細胞、例えば哺乳類（ヒト）でより高い活性を示す。いかなる特定の理論に束縛されるものではないがリボソームは遺伝子の翻訳に関与するところ、ここに示される化合物は１６ＳリボソームＲＮＡのＡ−サイトに結合することにより作用することが知られており、真核生物のリボソームのＡ−サイトにより高い親和性を有し、そうでなければ、原核生物リボソームのＡ−サイト、ならびに、原核生物の対応物と類似するミトコンドリアのリボソームのＡ−サイトではなく、真核生物のＡ−サイトに選択的である。
【０３７１】
ここで使用される「約」という用語は、±５％または±１０％を指す。
【０３７２】
「を含む（comprises）」、「を含む（comprising）」、「を含む（includes）」、「を含む（including）」、「を有する（having）」という用語、およびそれらの複合は、「を含むが、それ（ら）に限定されない」ことを意味する。
【０３７３】
「からなる」という用語は、「を含み、それ（ら）に限定される」ことを意味する。
【０３７４】
「本質的に、・・・からなる」という用語は、組成物、方法または構造が、追加の原料、工程および／または部分を含んでもよいが、追加の原料、工程および／または部分が、特許請求されている組成物、方法または構造の基本的かつ新規な特性を著しく変えない場合に限られることを意味する。
【０３７５】
ここで使用される単数形「a」、「an」および「the」は、文脈からそうでないと明確に示さない限り、複数の言及を含む。例えば、「化合物（a compound）」または「少なくとも１つの化合物(at least one compound)」という用語は、その混合物を含む、複数の化合物を含んでもよい。
【０３７６】
本出願を通じて、本発明の様々な態様は、範囲の型式で示され得る。範囲の型式の記載は、単に利便性および簡潔さのためで、本発明の範囲の不変の限定と解釈されるべきではないことは、理解されるべきである。したがって、範囲の記載は、すべての可能性のあるそこに含まれる範囲、ならびにその範囲内の個々の数値を具体的に開示していると考えられるべきである。例えば、１〜６といった範囲の記載は、そこに含まれる範囲、例えば１〜３、１〜４、１〜５、２〜４、２〜６、３〜６など、ならびに、その範囲内の個々の数、例えば、１、２、３、４、５および６を具体的に開示していると考えられるべきである。これは、その範囲の広さに関係なく適用される。
【０３７７】
ここで数値範囲が示されている場合は常に、示されている範囲内の任意の数字（分数または整数）を含むことを意味する。第１の示す数および第２の示す数「の範囲／間の範囲」、ならびに第１の示す数「から」第２の示す数「の範囲／までの範囲」という語句は、ここでは互換的に用いられ、第１および第２の示す数、ならびにその間のすべての分数および整数を含むことを意味する。
【０３７８】
ここで使用される「方法」という用語は、化学、薬学、生物学、生化学および医学の実務者に公知のやり方、手段、技術および手順、または、実務者が公知のものから容易に開発されるやり方、手段、技術および手順を含むが、これらに限定されるものではない、特定の課題を達成するためのやり方、手段、技術および手順を指す。
【０３７９】
ここで使用される「処置する」という用語は、状態の進展を、無効にすること、実質的に阻害すること、遅くすること、もしくは好転させること、状態の臨床的もしくは審美的症状を実質的に改良すること、または状態の臨床的もしくは審美的症状の外観を実質的に防止することを含む。
【０３８０】
ここに記載されている化合物は、それらのプロドラッグ、水和物または溶媒和物の形態であり得、またはそのような形態で使用され得る。
【０３８１】
ここで使用される「プロドラッグ」という用語は、インビボで活性化合物（活性親薬物）に変換される作用剤を指す。プロドラッグは、典型的には、親薬物の投与の促進に有用である。例えば、これらは、経口投与で生物学的に利用可能であるかもしれないが、親薬物はそうではない。プロドラッグは、医薬組成物中において、親薬物と比較して溶解性が改善しているかもしれない。プロドラッグは、インビボで活性化合物の持続放出を達成するためにも、しばしば使用される。限定されるものではないが、プロドラッグの例は、１つ以上のカルボン酸部分を有し、エステル（「プロドラッグ」）として投与される本発明の化合物である。そのようなプロドラッグは、インビボで加水分解され、それにより、遊離の化合物（親薬物）を提供する。選択されたエステルは、プロドラッグの溶解度特性と加水分解速度の両方に影響を与える可能性がある。
【０３８２】
「溶媒和物」という用語は、可変化学量論（例えば、ジ-、トリ-、テトラ-、ペンタ-、ヘキサ-等）の複合体を指し、これは、溶質（本発明の化合物）および溶媒により形成され、それによって、溶媒は、溶質の生物学的活性を妨げない。適切な溶媒は、例えば、エタノール、酢酸等を含む。
【０３８３】
「水和物」という用語は、以前に定義されており、溶媒が水である溶媒和物を指す。
【０３８４】
ここで使用される「ヒドロキシル」または「ヒドロキシ」という用語は、−ＯＨ基を指す。
【０３８５】
ここで使用される「アミン」という用語は、−ＮＲ’Ｒ’’基を表し、Ｒ’およびＲ’’のそれぞれが、独立して、ここに記載されているとおりで、例えば、水素、アルキル、シクロアルキル、ヘテロアリサイクリック、アリールまたはヘテロアリールであり、これらの用語はここで定義されている。Ｒ’およびＲ’’の一方が水素以外であるアミンは、ここで、「修飾アミン」と呼ばれる。
【０３８６】
ここで使用される「アルキル」という用語は、直鎖および分枝鎖を含む脂肪族炭化水素を表す。アルキルは、１〜２０個の炭素原子、または１〜１０個の炭素原子を有するかもしれず、また、分枝または非分枝であるかもしれない。本発明の一部の態様によれば、アルキルは、１〜６個、または１〜４個の炭素原子を有する低級（またはより低級）アルキル（すなわち、メチル、エチル、プロピルおよびブチル）である。
【０３８７】
数字範囲；例えば「１〜１０」が、ここに記載される場合、置換基、このケースではアルキル基は、１個の炭素原子、２個の炭素原子、３個の炭素原子等、１０個までの炭素原子などを含む可能性があることを意味する。一部の態様では、アルキルは、１〜６または１〜４個の炭素原子を含む低級アルキルである。
【０３８８】
アルキルは、置換または無置換であるかもしれない。置換されている場合、置換基は、例えば、アルキル（分枝アルキルを形成する）、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリサイクリック、ハロ、トリハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシおよびヒドロキシアルキルの１つ以上であり得、これらの用語は以下で定義されている。アリールにより置換されたアルキルは、ここで「アルカリール」とも呼ばれ、その例はベンジルである。
【０３８９】
「アルキル」と表される場合、アルキルは、アルケニルまたはアルキニルによっても置きかえられる。ここで使用される「アルキル」という用語は、飽和または不飽和炭化水素も包含し、この用語は、アルケニルおよびアルキニルをさらに包含する。
【０３９０】
「アルケニル」という用語は、ここで定義されており、少なくとも２個の炭素原子と少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する不飽和アルキル、例えば、アリル、ビニル、3-ブテニル、2-ブテニル、2-ヘキセニルおよびi-プロペニルを表す。アルケニルは、以上で記載されている１個以上の置換基により置換されていてもよく、または無置換であってもよい。
【０３９１】
ここで定義されている「アルキニル」という用語は、少なくとも２個の炭素原子と少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を有する不飽和アルキルである。アルキニルは、以上で記載されている１個以上の置換基により置換されていてもよく、または無置換であってもよい。
【０３９２】
「シクロアルキル」という用語は、すべて炭素が単環式環または縮合環（すなわち、隣接した炭素原子の対を共有する環）の、３個以上の炭素原子を含有する分枝または非分枝基であって、環の１つ以上は、完全共役パイ電子系を有さず、さらに置換されていてもよく、または無置換であってもよい環を指す。例示的なシクロアルキル基は、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルまたはシクロドデシルを含む。シクロアルキルは、置換されていてもよく、または無置換であってもよい。置換されている場合、置換基は、例えば、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリサイクリック、ハロ、トリハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシおよびヒドロキシアルキルの１つ以上であり得、これらの用語は、以下で定義されている。
【０３９３】
「アリール」という用語は、完全共役パイ−電子系を有する、すべて炭素の単環式環または多環式縮合環（すなわち、隣接した炭素原子の対を共有する環）を表す。アリール基は、無置換であってもよく、または１個以上の置換基により置換されていてもよい。置換されている場合、置換基は、例えば、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリサイクリック、ハロ、トリハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシおよびヒドロキシアルキルの１つ以上であり得、これらの用語は、以下で定義されている。
【０３９４】
「ヘテロアリール」という用語は、環（複数可）に１個以上の原子、例えば、窒素、酸素および硫黄を有し、さらに、完全共役パイ電子系を有する単環式環または縮合環（すなわち、隣接した原子の対を共有する環）基を表す。以下に限定されるものではないが、ヘテロアリール基の例は、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピリミジン、キノリン、イソキノリンおよびプリンを含む。代表的な例は、チアジアゾール、ピリジン、ピロール、オキサゾール、インドール、プリンなどである。ヘテロアリール基は、無置換であってもよく、または１個以上の置換基により置換されていてもよい。置換されている場合、置換基は、例えば、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリサイクリック、ハロ、トリハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシおよびヒドロキシアルキルの１つ以上であり得、これらの用語は、以下で定義されている。
【０３９５】
ここで使用される「ヘテロアリサイクリック」という用語は、環（複数可）に窒素、酸素および硫黄のような１個以上の原子を有する単環式環または縮合環基を表す。その環は、１つ以上の二重結合を有してもよい。しかし、その環は、完全共役パイ電子系を有さない。代表的な例は、モルホリン、ピペリジン、ピペラジン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロピランなどである。ヘテロアリサイクリックは、置換されていてもよく、または無置換であってもよい。置換されている場合、置換基は、例えば、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリサイクリック、ハロ、トリハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシおよびヒドロキシアルキルの１つ以上であり得、これらの用語は、以下で定義されている。
【０３９６】
ここで使用される「ハライド」という用語は、ハロ原子のアニオン、すなわちＦ−、Ｃｌ−、Ｂｒ−およびＩ−を指す。
【０３９７】
「ハロ」という用語は、置換基としてのＦ、Ｃｌ、ＢｒおよびＩ原子を指す。
【０３９８】
「アルコキシド」という用語は、Ｒａ−Ｏ−アニオンを指し、Ｒａは、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロアリサイクリックである。
【０３９９】
「アルコキシ」という用語は、ＯＲａ基を指し、Ｒａはここで定義されているが、水素以外である。
【０４００】
ここで使用される「ヒドロキシアルキル」という用語は、１個以上のヒドロキシ基で置換されている、ここで定義されているアルキル基、例えばヒドロキシメチル、2-ヒドロキシエチルおよび4-ヒドロキシペンチルを指す。
【０４０１】
ここで使用される「アミノアルキル」という用語は、１個以上のアミノ基で置換されている、ここで定義されているアルキル基を指す。
【０４０２】
ここで使用される「アルコキシアルキル」という用語は、１個のアルコキシ基で置換されているアルキル基、例えば、メトキシメチル、2-メトキシエチル、4-エトキシブチル、n-プロポキシエチルおよびt-ブチルエチルを指す。
【０４０３】
「トリハロアルキル」という用語は、−ＣＸ３（式中、Ｘは、ここで定義されているハロである）を指す。例示的なハロアルキルは、ＣＦ３である。
【０４０４】
「グアニジノ」または「グアニジン」または「グアニジニル」基は、−ＲａＮＣ（＝ＮＲｄ）−ＮＲｂＲｃ基（式中、Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄのそれぞれは、Ｒ’およびＲ’’についてここで定義されているとおりであり得る）を指す。
【０４０５】
「グアニル」または「グアニン」基は、ＲａＲｂＮＣ（＝ＮＲｄ）−基（式中、Ｒａ、ＲｂおよびＲｄは、ここで定義されているとおり）を指す。
【０４０６】
ここに記載されている態様のいずれかの一部では、グアニジン基は、−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ２である。
【０４０７】
ここに記載されている態様のいずれかの一部では、グアニル基は、Ｈ２Ｎ−Ｃ（＝ＮＨ）−基である。
【０４０８】
ここに記載されているアミン基（修飾アミンを含む）、グアニジン基およびグアニン基の１つは、それらの遊離塩基の形態として示されるが、生理学的ｐＨでのそれらのイオン化形態、および／またはその塩、例えば、ここに記載されている医薬として許容できるその塩を包含することを意味する。
【０４０９】
ここに記載されているアルキル、シクロアルキル、アリール、アルカリール、ヘテロアリール、ヘテロアリサイクリックおよびアシルのいずれか１つについて、代替置換基は、限定されるものではないが、ここで定義されているスルホネート、スルホキシド、チオスルフェート、スルフェート、スルファイト、チオスルファイト、ホスホネート、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、シアノ、ニトロ、アゾ、スルホンアミド、カルボニル、チオカルボニル、C-カルボキシレート、O-カルボキシレート、N-チオカルバメート、O-チオカルバメート、オキソ、チオオキソ、オキシム、アシル、ハロゲン化アシル、アゾ、アジド、尿素、チオ尿素、N-カルバメート、O-カルバメート、C-アミド、N-アミド、ヒドラジンおよびヒドラジドを含む。
【０４１０】
「シアノ」という用語は、−Ｃ≡Ｎ基を表す。
【０４１１】
「ニトロ」という用語は、−ＮＯ２基を表す。
【０４１２】
「スルフェート」という用語は、−Ｏ−Ｓ（＝Ｏ）２−ＯＲａ末端基を表し、この用語は以前に定義されており、または、−Ｏ−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｏ−連結基について記載し、これらの語句は以前に定義されており、Ｒ’は以前に定義されている。
【０４１３】
「チオスルフェート」という用語は、−Ｏ−Ｓ（＝Ｓ）（＝Ｏ）−ＯＲａ末端基または−Ｏ−Ｓ（＝Ｓ）（＝Ｏ）−Ｏ−連結基を表し、これらの語句は以前に定義されており、Ｒａは以前に定義されている。
【０４１４】
「スルファイト」という用語は、−Ｏ−Ｓ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒａ末端基または−Ｏ−Ｓ（＝Ｏ）−Ｏ−連結基を表し、これらの語句は以前に定義されており、Ｒ’は以前に定義されている。
【０４１５】
「チオスルファイト」という用語は、−Ｏ−Ｓ（＝Ｓ）−Ｏ−Ｒａ末端基または−Ｏ−Ｓ（＝Ｓ）−Ｏ−連結基を表し、これらの語句は以前に定義されており、Ｒａは以前に定義されている。
【０４１６】
「スルフィネート」という用語は、−Ｓ（＝Ｏ）−ＯＲａ末端基または−Ｓ（＝Ｏ）−Ｏ−連結基を表し、これらの語句は以前に定義されており、Ｒａは以前に定義されている。
【０４１７】
「スルホキシド」または「スルフィニル」という用語は、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒａ末端基または−Ｓ（＝Ｏ）−連結基を表し、これらの語句は以前に定義されており、Ｒａは以前に定義されている。
【０４１８】
「スルホネート」という用語は、−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｒａ末端基または−Ｓ（＝Ｏ）２−連結基を表し、これらの語句は以前に定義されており、Ｒ’はここで定義されている。
【０４１９】
「S-スルホンアミド」という用語は、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＲａＲｂ末端基または−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＲ’−連結基を表し、これらの語句は以前に定義されており、Ｒａはここで定義されており、Ｒｂは、独立して、Ｒａについてここで定義されているとおりである。
【０４２０】
「N-スルホンアミド」という用語は、ＲａＳ（＝Ｏ）２−ＮＲｂ−末端基または−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＲａ−連結基を表し、これらの語句は以前に定義されており、ＲａおよびＲｂは、ここで定義されている。
【０４２１】
ここで使用される「カルボニル」または「カーボネート」という用語は、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒａ末端基または−Ｃ（＝Ｏ）−連結基を表し、これらの語句は以前に定義されており、Ｒａはここで定義されている。
【０４２２】
ここで使用される「チオカルボニル」という用語は、−Ｃ（＝Ｓ）−Ｒａ末端基または−Ｃ（＝Ｓ）−連結基を表し、これらの語句は以前に定義されており、Ｒａはここで定義されている。
【０４２３】
ここで使用される「オキソ」という用語は、（＝Ｏ）基を表し、ここで、酸素原子は、示された位置の原子（例えば炭素原子）への二重結合で連結される。
【０４２４】
ここで使用される「チオオキソ」という用語は、（＝Ｓ）基を表し、硫黄原子は、示された位置での原子（例えば炭素原子）への二重結合により連結される。
【０４２５】
「オキシム」という用語は、＝Ｎ−ＯＨ末端基または＝Ｎ−Ｏ−連結基を表し、これらの語句は以前に定義されている。
【０４２６】
「ハロゲン化アシル」という用語は、−（Ｃ＝Ｏ）Ｒｄ基を表し、Ｒｄは、以前に定義されているハライドである。
【０４２７】
「アゾ」または「ジアゾ」という用語は、−Ｎ＝ＮＲａ末端基または−Ｎ＝Ｎ−連結基を表し、これらの語句は以前に定義されており、Ｒａは以前に定義されている。
【０４２８】
「アジド」という用語は、−Ｎ３末端基を表す。
【０４２９】
ここで使用される「カルボキシレート」という用語は、C-カルボキシレートおよびO-カルボキシレートを包含する。
【０４３０】
「C-カルボキシレート」という用語は、−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＲａ末端基または−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−連結基を表し、これらの語句は以前に定義されており、Ｒａはここで定義されている。
【０４３１】
「O-カルボキシレート」という用語は、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒａ末端基または−ＯＣ（＝Ｏ）−連結基を表し、これらの語句は以前に定義されており、Ｒａはここで定義されている。
【０４３２】
カルボキシレートは、直鎖状または環状であり得る。環状である場合、Ｒａと炭素原子は共に連結して、C-カルボキシレートとして環を形成し、この基は、ラクトンとも呼ばれる。あるいは、ＲａとＯは共に連結して、O-カルボキシレートとして環を形成する。環状カルボキシレートは、例えば、形成された環における原子が別の基に連結している場合、連結基として機能し得る。
【０４３３】
ここで使用される「チオカルボキシレート」という用語は、C-チオカルボキシレートおよびO-チオカルボキシレートを包含する。
【０４３４】
「C-チオカルボキシレート」という用語は、−Ｃ（＝Ｓ）−ＯＲａ末端基または−Ｃ（＝Ｓ）−Ｏ−連結基を表し、これらの語句は以前に定義されており、Ｒａはここで定義されている。
【０４３５】
「O-チオカルボキシレート」という用語は、−ＯＣ（＝Ｓ）Ｒａ末端基または−ＯＣ（＝Ｓ）−連結基を表し、これらの語句は以前に定義されており、Ｒａはここで定義されている。
【０４３６】
チオカルボキシレートは、直鎖状または環状であり得る。環状である場合、Ｒａと炭素原子は共に連結して、C-チオカルボキシレートとして環を形成し、この基は、チオラクトンとも呼ばれる。あるいは、ＲａとＯは共に連結して、O-チオカルボキシレートとして環を形成する。環状チオカルボキシレートは、例えば、形成された環における原子が別の基に連結している場合、連結基として機能し得る。
【０４３７】
ここで使用される「カルバメート」という用語は、N-カルバメートおよびO-カルバメートを包含する。
【０４３８】
「N-カルバメート」という用語は、ＲｂＯＣ（＝Ｏ）−ＮＲａ−末端基または−ＯＣ（＝Ｏ）−ＮＲａ−連結基を表し、これらの語句は以前に定義されており、ＲａおよびＲｂは、ここで定義されている。
【０４３９】
「O-カルバメート」という用語は、−ＯＣ（＝Ｏ）−ＮＲａＲｂ末端基または−ＯＣ（＝Ｏ）−ＮＲａ−連結基を表し、これらの語句は以前に定義されており、ＲａおよびＲｂは、ここで定義されている。
【０４４０】
カルバメートは、直鎖状または環状であり得る。環状である場合、Ｒａと炭素原子は共に連結して、O-カルバメートとして環を形成する。あるいは、ＲａとＯは共に連結して、N-カルバメートとして環を形成する。環状カルバメートは、例えば、形成された環の原子が別の置換基に連結する場合、連結基として機能し得る。
【０４４１】
ここで使用される「カルバメート」という用語は、N-カルバメートおよびO-カルバメートを包含する。
【０４４２】
ここで使用される「チオカルバメート」という用語は、N-チオカルバメートおよびO-チオカルバメートを包含する。
【０４４３】
「O-チオカルバメート」という用語は、−ＯＣ（＝Ｓ）−ＮＲａＲｂ末端基または−ＯＣ（＝Ｓ）−ＮＲａ−連結基を表し、これらの語句は以前に定義されており、ＲａおよびＲｂは、ここで定義されている。
【０４４４】
「N-チオカルバメート」という用語は、ＲｂＯＣ（＝Ｓ）ＮＲａ−末端基または−ＯＣ（＝Ｓ）ＮＲａ−連結基を表し、これらの語句は以前に定義されており、ＲａおよびＲｂは、ここで定義されている。
【０４４５】
チオカルバメートは、カルバメートについてここに記載されているように、直鎖状または環状であり得る。
【０４４６】
ここで使用される「ジチオカルバメート」という用語は、S-ジチオカルバメートおよびN-ジチオカルバメートを包含する。
【０４４７】
「S-ジチオカルバメート」という用語は、−ＳＣ（＝Ｓ）−ＮＲａＲｂ末端基または−ＳＣ（＝Ｓ）ＮＲ’−連結基を表し、これらの語句は以前に定義されており、ＲａおよびＲｂは、ここで定義されている。
【０４４８】
「N-ジチオカルバメート」という用語は、ＲｂＳＣ（＝Ｓ）ＮＲａ−末端基または−ＳＣ（＝Ｓ）ＮＲａ−連結基を表し、これらの語句は以前に定義されており、ＲａおよびＲｂは、ここで定義されている。
【０４４９】
「尿素」という用語は、ここで「ウレイド」とも呼ばれ、−ＮＲａＣ（＝Ｏ）−ＮＲｂＲｃ末端基または−ＮＲａＣ（＝Ｏ）−ＮＲｂ−連結基を表し、これらの語句は以前に定義されており、ＲａおよびＲｂは、ここで定義されているとおりであり、Ｒｃは、独立して、ＲａおよびＲｂについてここで定義されている。
【０４５０】
「チオ尿素」という用語は、ここで「チオウレイド」とも呼ばれ、−ＮＲａ−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＲｂＲｃ末端基または−ＮＲａ−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＲｂ−連結基を表し、Ｒａ、ＲｂおよびＲｃは、ここで定義されている。
【０４５１】
ここで使用される「アミド」という用語は、C-アミドおよびN-アミドを包含する。
【０４５２】
「C-アミド」という用語は、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲａＲｂ末端基または−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲａ−連結基を表し、これらの語句は以前に定義されており、ＲａおよびＲｂは、ここで定義されている。
【０４５３】
「N-アミド」という用語は、ＲａＣ（＝Ｏ）−ＮＲｂ−末端基またはＲａＣ（＝Ｏ）−Ｎ−連結基を表し、これらの語句は以前に定義されており、ＲａおよびＲｂは、ここで定義されている。
【０４５４】
「ヒドラジン」という用語は、−ＮＲａ−ＮＲｂＲｃ末端基または−ＮＲａ−ＮＲｂ−連結基を表し、これらの語句は以前に定義されており、Ｒａ、ＲｂおよびＲｃは、ここで定義されている。
【０４５５】
ここで使用される「ヒドラジド」という用語は、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲａ−ＮＲｂＲｃ末端基または−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲａ−ＮＲｂ−連結基を表し、これらの語句は以前に定義されており、Ｒａ、ＲｂおよびＲｃは、ここで定義されている。
【０４５６】
ここで使用される「チオヒドラジド」という用語は、−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＲａ−ＮＲｂＲｃ末端基または−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＲａ−ＮＲｂ−連結基を表し、これらの語句は以前に定義されており、Ｒａ、ＲｂおよびＲｃは、ここで定義されている。
【０４５７】
ここで使用される「イミデート」という用語は、−Ｏ−Ｃ（＝ＮＲａ）−Ｒｂ−末端基または−Ｏ−Ｃ（＝ＮＲａ）−連結基を表し、ＲａおよびＲｂは、ここで定義されている。
【０４５８】
明確性のため、別々の態様の文脈で記載されている本発明のある特徴は、単一の態様と組み合わせて示してもよいことが理解される。反対に、簡潔さのため、単一の態様の文脈に記載されている、本発明の様々な特徴は、別々に、または、適切なサブコンビネーションとして、または、本発明の他に記載された態様で適切なように示してもよい。様々な態様の文脈で説明されているある特徴は、その態様がそれらの要素がなければ作用しないというのでなければ、その態様の本質的な特徴とは考えるべきではない。
【０４５９】
以上に説明され、特許請求の範囲に請求されている本発明の様々な態様および側面は、以下の実施例で実験による裏付けが見出される。
【０４６０】
実施例
以下に実施例について言及するが、これは、これまでの説明と共に、本発明の一部の態様を非限定的に説明する。
【０４６１】
例１  ＢＢ−Ｄ−ＯＨの製造
ＢＢ−Ｄ−ＯＨを大規模生成する一般的な合成経路は、図１に示されている。
【０４６２】
以降、全体に「当量」は、重量単位で示す。
【０４６３】
「ｖｏｌ．」、「ｖｏｌ」または「Ｖｏｌ．」という用語は、１体積当量に対する体積比（ｖ／ｖ）を意味する。例えば、１当量に対して１０Ｖｏｌ．という場合、１グラムの化合物に対して、溶媒または任意の試薬の示される体積は、その化合物１グラムの体積の１０倍であることを意味する。
【０４６４】
「ｗ／ｗ」または「％ｗ／ｗ」という用語は、当該化合物が加えられた反応混合物の合計重量に対する当該化合物の重量パーセントを表す。
【０４６５】
「ｖ／ｗ」という用語は、ｍｌ／ｇ単位での重量に対する体積の比を表す。
【０４６６】
「ｖ／ｗまで濃縮した」または「ｖ／ｖまで濃縮した」という語句は、溶媒および試薬／生成物／中間体から示されるｖ／ｗまたはｖ／ｖが達成されるまでの溶媒の除去を表す。
【０４６７】
化合物１０７の製造（図１、ステージ１ａ〜ｇ）
中間体化合物１０１の製造（図１、ステージ１ａ）：メタノール（１０ｖｏｌ．）およびD-リボース（１モル当量）の混合物を２５（±５）℃で５〜１０分間撹拌した。次いで、アセトン（１２ｖｏｌ．）を添加し、反応混合物を２５（±）５℃で５〜１０分間撹拌した。その後、濃ＨＣｌ（０．１ｖｏｌ．）を添加し、反応混合物を、３０℃未満の温度で５〜１０分間撹拌した。次いで、温度を５５（±）５℃（還流）に上昇し、２時間維持した。反応をＴＬＣでモニターした。反応の完了後、反応混合物を１５（±）５℃に冷却し、飽和重炭酸ナトリウム溶液（２．５ｖｏｌ．）を、３０℃未満の温度で添加し、混合物を２５（±）５℃で３０分間撹拌した。その後、真空下、反応混合物を５０℃未満の温度で３〜４ｖ／ｗまで濃縮し、２５（±）５℃に冷却し、水（１０ｖｏｌ．）およびジクロロメタン（ＤＣＭ；１０ｖｏｌ．）で希釈し、２５（±）５℃で１０〜１５分間撹拌した。相を分離し、水性層をＤＣＭ（５ｖｏｌ．）で抽出した。合わせた有機層（ＤＣＭ）を、水（２×５ｖｏｌ．）およびブライン溶液（５ｖｏｌ．）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム（１ｗ／ｗ；１重量％）で脱水し、濾過し、濾液を、減圧下、４０℃未満の温度で最小体積に濃縮した。生じた中間体の試料を、真空下、４０℃未満の温度で１時間脱気し、ＧＣ純度に関する品質チェック（ＱＣ）に送った。中間体化合物１０１を含有する濃縮溶液を、真空下、４５℃未満の温度で、アセトニトリル（２ｖｏｌ．）と共に蒸留し、得られた反応混合物を、２５（±）５℃に冷却し、アセトニトリル（１．５ｖｏｌ．）を２５（±）５℃未満の温度で添加した。得られた混合物を、２５（±）５℃で、きれいな容器中に取り出した。反応容器をアセトニトリル（０．５ｖｏｌ．）で洗浄し、上述のきれいな容器に加えた。
【０４６８】
化合物１０２の製造（図１、ステージ１ｂ）：アセトニトリル（８ｖｏｌ．）およびデス−マーチンペルヨージナン（ＤＭＰ）（１．３モル当量）を、窒素雰囲気下、２５（±）５℃で反応容器に添加し、混合物を５（±）５℃に冷却し、１０〜１５分間撹拌し、５（±）５℃で、アセトニトリルに溶解した化合物１０１（ステージ−１ａ化合物）を、反応混合物に２〜３時間かけてゆっくり添加した。その後、温度を１５（±）３℃に上昇し、反応混合物をさらに２時間撹拌した。反応をＧＣでモニターした。反応の完了後、酢酸エチル（１０ｖｏｌ．）を１５（±）３℃で添加し、得られた反応混合物を５（±）５℃に冷却し、飽和重炭酸塩溶液に溶かしたチオ硫酸ナトリウムの溶液を添加した。反応混合物を、２５（±）５℃で１時間撹拌し、塩化ナトリウム（４ｗ／ｗ；４重量％）を添加し、得られた混合物を２５（±）５℃で１５〜２０分間撹拌し、次いで濾過した。その後、層を分離し、水性層を酢酸エチル（５ｖｏｌ）で抽出し、合わせた有機層を、飽和重炭酸塩溶液、続いてブライン溶液で洗浄し、硫酸ナトリウム（１ｗ／ｗ；１重量％）で脱水した。混合物を濾過し、減圧下、４０℃未満の温度で濾液を最小体積に濃縮した。得られた残渣を、真空下、４０℃未満の温度でＤＣＭ（２ｖｏｌ．）と共に数（２〜３）回蒸留した。その後、ＤＣＭ（１０ｖ／ｗ）を２５（±）５℃とし、混合物を５分間撹拌した。得られた混合物の試料を、ＧＣ分析のためにＱＣに送った。  化合物１０３の製造（図１、ステージ１ｃ）：硫酸マグネシウム（０．５％ｗ／ｗ）を、２５（±５）℃で、ステージ１ｂ）で得られた反応混合物に添加し、得られた混合物を５分間撹拌した。次いで、N-ベンジルヒドロキシルアミン塩酸塩（０．６５モル当量）を添加し、反応混合物を、２５（±）５℃で５〜１０分間撹拌し、その後、１０（±）５℃に冷却し、炭酸ナトリウム（０．２５モル当量×４）を、同じ温度で、５〜１０分の間隔でゆっくり、少しずつ添加した。温度を２５（±）５℃に上昇し、混合物を２時間撹拌した。得られた混合物の試料を、ＧＣ分析のためにＱＣに送った。反応混合物を濾過し、得られた湿ケーキをＤＣＭ（１．５ｖ／ｗ）でスラリー洗浄した。濾過後、合わせた濾液を、水（５ｖ／ｗ）、続いてブライン溶液で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム（１％ｗ／ｗ）で脱水し、濾過し、減圧下、４０℃未満の温度で最小体積に濃縮した。ＴＨＦ（２ｖｏｌ．）を得られた残渣に添加し、真空下、４５℃未満の温度で混合物を蒸留した。その後、ＴＨＦ（１０ｖ／ｗ）を添加し、得られた生成物の試料を、ＭＣとＨＰＬＣ純度に関するＱＣに送った。
【０４６９】
化合物１０４の製造（図１、ステージ１ｄ）：ステージ１ｃで得られた反応混合物を−７０（±）５℃に冷却し、そこに、ＴＨＦ中のメチルマグネシウムクロライドの溶液（２．５ｖ／ｗ）を、−７０（±）５℃で２〜３時間かけて添加した。反応混合物を、−７０（±）５℃で２時間、次いで、０（±）５℃で１時間撹拌した。試料を、ＨＰＬＣ分析のためにＱＣに送った。反応混合物を、窒素雰囲気下、０（±）１０℃で塩化アンモニウム溶液中にゆっくり注ぎ、酢酸エチル（１０ｖ／ｗ）を添加し、得られた混合物を２５（±）５℃で１０分間撹拌した。その後、相を分離し、水性層を酢酸エチル（５ｖ／ｗ）で抽出した。合わせた有機層を、水（５ｖ／ｗ）およびブライン溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウム（１％ｗ／ｗ）で脱水し、濾過し、真空下、４０℃未満の温度で１〜２体積（ｖ／ｖ）まで濃縮した。次いで、反応混合物を２５（±）５℃に冷却し、メタノール（５ｖ／ｗ）を２５（±）５℃で添加し、得られた混合物を、真空下、４０℃未満の温度で２〜３体積（ｖ／ｖ）まで蒸留した。反応混合物を２５（±）５℃に冷却し、２５（±）５℃で１時間、次いで、−４０（±）５℃で２時間撹拌した。得られた固体を濾別し、冷メタノール（−３０（±）５℃）（１ｖ／ｗ）で洗浄し、真空下、３５（±）５℃で６時間乾燥させた。得られた生成物の試料をＬＯＤに関するＱＣに送った。
【０４７０】
化合物１０５の製造（図１、ステージ１ｅ）：メタノール（１０ｖｏｌ．）を、ステージ１ｄで得られた化合物１０４（１モルｌ当量）に添加し、混合物を２５（±）５℃で５〜１０分間撹拌した。パラ-トルエンスルホン酸（ＰＴＳＡ）（１．４モル当量）を添加し、混合物を２５（±）５℃で５〜１０分間撹拌した。次いで、温度を６４（±）３℃（還流）に上昇し、２時間維持した。試料を、ＨＰＬＣモニタリングのためにＱＣに送った。反応混合物を、真空下、４５（±）３℃未満の温度で３〜４ｖ／ｗまで濃縮し、その後、２５（±）５℃に冷却し、２５（±）５℃で水（１０ｖ／ｗ）に希釈し、１０〜１５分間撹拌した。次いで、反応混合物を２５（±）５℃未満の温度で飽和重炭酸ナトリウム溶液にゆっくり添加し、３０〜６０分間撹拌し、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機相を硫酸ナトリウム（１％ｗ／ｗ）で脱水し、濾過し、減圧下、４０（±）５℃未満の温度で最小体積に濃縮した。得られた生成物を、４５（±）５℃未満の温度でメタノール（３ｖｏｌ．）と共に蒸留し、２５（±）５℃に冷却した。メタノール（３ｖｏｌ．）を添加し、得られた混合物の試料を、ＨＰＬＣ純度に関するＱＣに送った。
【０４７１】
化合物１０６の製造（図１、ステージ１ｆ）：ステージ１ｅで得られた化合物１０５の混合物を、オートクレーブに入れ、反応混合物を２５（±）５℃でメタノール（８ｖｏｌ．）で希釈し、得られた混合物を窒素で５〜１０分間脱気した。１０％パラジウム炭素（５０％湿潤、０．１％ｗ／ｗ）を添加し、反応混合物を、２５（±）５℃で窒素で２回フラッシュした（各回、３ｋｇのＨ２を用いる）。次いで、４〜５ｋｇの水素圧力を適用し、反応混合物を、４〜５時間、５０（±）５℃に加熱した。反応をＴＬＣでモニターした。反応の完了後、反応混合物を２５（±）５℃に冷却し、窒素雰囲気下、セライトベッドで濾過し、セライトベッドをメタノールで洗浄した。合わせた濾液を、０．５μｍフィルターを通して濾過し、１０体積となるまで真空下で蒸留した。得られた生成物の試料を、ＧＣ純度に関するＱＣに送った。
【０４７２】
化合物１０７の製造（図１、ステージ１ｇ）：ステージ１ｆで得られた化合物１０６を含有する混合物を、１０（±）５℃に冷却し、炭酸ナトリウム（３．０モル当量）を添加した。反応混合物を１５〜２０分間撹拌し、１０（±）５℃を２時間維持しながら、そこにトルエン溶液中の５０％ＣＢｚクロリド（１．０モル当量）を添加した。反応をＴＬＣでモニターした。反応の完了後、反応混合物を濾過し、２５（±）５℃でメタノール（３ｖｏｌ．）で洗浄した。溶媒を、真空下、４０（±）５℃未満の温度で、１〜２体積となるまで留去し、得られた混合物を２５（±）５℃に冷却し、酢酸エチル（３ｖｏｌ．）で希釈した。相を分離し、有機相を飽和重炭酸ナトリウム溶液（１．５ｖｏｌ．）および水（１ｖｏｌ．）で洗浄し、硫酸ナトリウム（１％ｗ／ｗ）で脱水し、濾過した。
【０４７３】
有機溶媒を、真空下、４０（±）５℃未満の温度で完全に蒸留して、それにより、単離した化合物１０７を得た。
【０４７４】
規模を拡大したバッチを６０Ｋｇ規模で完了し、単離後、３３．９Ｋｇ（全収率２７％）のＳ-異性体化合物１０７（光学的純度９９．５％）を得た。
【０４７５】
化合物１０８の製造（図１、ステージ２）：
化合物１０８の製造に関し、硫酸ナトリウムの濾過後、化合物１０７を含有する溶液を、最小体積まで蒸留し、残渣をアセトニトリル（２ｖｏｌ．）で希釈し、得られた混合物を、真空中、４０（±）５℃で蒸留した。その後、混合物を２５（±）５℃に冷却し、アセトニトリル（２ｖｏｌ．）を添加し、混合物を次の工程に移した。
【０４７６】
２５（±）５℃で、アセトニトリル（８ｖｏｌ．）、続いて、トリエチルアミン（３．２モル当量）および4-N,N-ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ、０．１モル当量）を添加し、反応混合物を５（±）５℃に冷却し、塩化ベンゾイル（５９ｍＬ；１．２モル当量）を添加した。反応混合物を、５（±）５℃で２時間撹拌した。試料を、ＨＰＬＣモニタリングのためにＱＣに送った。反応の完了後、飽和重炭酸ナトリウム溶液（３ｖｏｌ．）を、２５（±）５℃で添加し、得られた混合物を１〜２時間撹拌した。次いで、混合物を酢酸エチル（５ｖｏｌ．）で抽出し、相を分離し、有機相をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、真空下、４０（±）５℃未満の温度で溶媒を完全に蒸発させ、化合物１０８を粘性のある液体として得た。
【０４７７】
規模を拡大したバッチを３０Ｋｇ規模で完了し、単離後、３７．１４Ｋｇ（７５％）の化合物１０８を得た。
【０４７８】
ＢＢ−Ｄ−ＯＨの製造：
ＢＢ−Ｄ−ＯＨの製造に関し、硫酸ナトリウムの濾過後、化合物１０８を含有する溶液を、最小体積まで蒸留し、酢酸を添加した。溶媒を蒸発した。酢酸を、得られた残渣に添加し、混合物を次の工程に移した。
【０４７９】
３０％硫酸溶液（３ｖｏｌ．）を、２５（±）５℃で、１〜２時間かけてゆっくり添加し、次いで、反応混合物を２８（±）５℃に加熱し、この温度で３６時間撹拌した。試料を、ＨＰＬＣによるＳＭ含有量に関するＱＣに送った。反応の完了後、反応混合物を２５（±）５℃に冷却し、ジクロロメタン（１０ｖｏｌ．）で希釈し、３０分間撹拌した。その後、反応混合物を１時間かけて沈降させ、底の有機物と上の水性層に分離した。ＤＣＭ層を水（５ｖｏｌ．×３）、飽和重炭酸ナトリウム溶液およびブライン溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、濾過した。濾液を、真空下、３０（±）５℃未満の温度で濃縮し、それにより、粗生成物を濃厚シロップとして得た。
【０４８０】
ＢＢ−Ｄ−ＯＨの精製：
得られた粗生成物をジクロロメタンに溶解し、２５（±）５℃でシリカゲル（１００〜２００メッシュ）、（３％ｗ／ｗ）に吸収させ、乾燥した。
【０４８１】
２５（±）５℃で、ジクロロメタン（２０ｖｏｌ．）をシリカゲル（１００〜２００メッシュ；１２ｖ／ｗ；１．２ｋｇ）に添加し、混合物を２５（±）５℃でカラムに注いだ。適正なベッドを形成するために、２５（±）５℃で、１０ｖｏｌ．のジクロロメタンをカラムに通過させた。シリカに吸収させたステージ−３粗生成物を、カラムの頂部に充填し、非極性不純物を溶出するために、ジクロロメタン（１０ｖｏｌ．）、続いてジクロロメタン（２０ｖｏｌ．）中の１％酢酸エチルを使用して予備溶出を行った。次いで、化合物１０８の残渣を回収するために、ジクロロメタン（１５０ｖｏｌ．）中の２．５％酢酸エチルを溶離液として使用した。化合物１０８の溶出の完了後、すべてのＢＢ−Ｄ−ＯＨ生成物を溶出するまで、カラムをジクロロメタン中の１５％酢酸エチルで溶出した。純粋な分画を収集し、試料を純度に関するＱＣに送った。すべての許容される分画を合わせ、３０（±）５℃未満の温度で最小体積に濃縮し、ＤＣＭ溶液として保存した。試料に、完全な分析のためにＱＣを施した。
【０４８２】
ある規模を拡大したバッチを、３７．１Ｋｇ規模で完了し、カラムで精製後、２０．６ＫｇのＢＢ−Ｄ（収率５７％）を９２％純度（ＨＰＬＣにより判定）で得た。
【０４８３】
別の規模を拡大したバッチを、３８．７Ｋｇ規模で完了し、カラムで精製後、１９．８Ｋｇ（収率５３％）を９５％純度（ＨＰＬＣにより判定）で得た。
【０４８４】
例２  ＢＢ−Ａの製造
ＢＢ−Ａを大規模生成する一般的な合成経路は、図２に示されている。
【０４８５】
Ｇ４１８スルフェートを、この技術分野で公知の方法を使用して、Ｇ４１８（化合物１１１）の遊離塩基形態に変換した。
【０４８６】
6-メチルパロマミンの製造（化合物１１２、図２、ステージ−２）：
精製したＧ−４１８（遊離塩基として；１．０モル当量）およびＨＣｌのメタノール溶液（ＭｅＯＨ  ＨＣｌ；１０ｖｏｌ）の混合物を、７０（±５）℃で２４時間加熱した。反応の進行をＨＰＬＣでモニターし、２４時間後、Ｇ−４１８は約４％であることが示された。次いで、真空下、７０（±５）℃でメタノール（体積の２／３）を留去した。反応混合物を３０（±５）℃に冷却し、そこにＭｅＯＨ  ＨＣｌ（１０ｖｏｌ）を添加した。得られた混合物を、７０（±５）℃で２４時間加熱した。反応の進行を、ＨＰＬＣでモニターし、４８時間後、Ｇ−４１８は約０．５％であることが示された。次いで、反応混合物を５〜１０℃に冷却し、１〜２時間撹拌し、次いで濾過し、フィルター上で２０〜３０分間乾燥した。得られた固体を、エタノールを含有する反応容器に移した。混合物を０〜１０℃に冷却し、５〜１０℃で１〜２時間撹拌し、次いで濾過し、冷エタノールで洗浄し、真空下、５０（±５）℃で５〜６時間乾燥した。
【０４８７】
Ｇ−４１８の酸開裂の規模を拡大した反応を１６．４Ｋｇ規模で完了し、単離後、０．４７％のＧ４１８を含有する１２．７Ｋｇ（８５％）の6-メチルパロマミンを得た。
【０４８８】
化合物１１３の製造（6-メチルパロマミンのＣＢｚ保護、図２、ステージ−３）：
6-メチルパロマミン（化合物１１２、１モル当量）およびＤＩＰＥＡ（１０モル当量）を、アセトン（１５ｖｏｌ）および水（１５ｖｏｌ）に溶解した。ＣＢｚＣｌ（４モル当量）（トルエン中の５０％溶液として）を３０（±５）℃で添加し、反応混合物を２４時間撹拌した。その後、混合物を水（１０ｖｏｌ）で希釈し、１５〜２０分間撹拌し、次いで濾過した。得られた固体を、３０（±５）℃で、アセトン（２０ｖｏｌ）中で１〜２時間撹拌し、真空下で濾過し、得られたスラリーをアセトン（５ｖｏｌ）で洗浄した。得られた生成物を、真空下、５０〜６０℃で３〜４時間乾燥させ、粗化合物１１３を白色固体として得た。
【０４８９】
ＣＢｚ保護反応を１２．５ｋｇ規模で完了させ、単離後、１５．８Ｋｇのトリス-ＣＢｚ-6-メチルパロマミン（収率８２％；ＨＰＬＣにより純度９３％と判定）を得た。
【０４９０】
ＢＢ−Ａの製造（トリス-ＣＢｚ-6-メチルパロマミンのアセチル保護；図２）：
トリス-ＣＢｚ-6-メチルパロマミン（化合物１１３、１．０モル当量）を、ピリジン（２ｖｏｌ）およびＤＭＦ（３ｖｏｌ）に溶解し、ＤＭＡＰ（０．１モル当量）を添加し、得られた反応混合物を、３０（±５）℃で１０〜１５分間撹拌した。３０（±５）℃で反応混合物に、無水酢酸を、ロットごとに（１＋１＋１＋１＋０．５モル当量）ゆっくりと添加した。反応の進行を、ＨＰＬＣでモニターした。反応の完了後、反応混合物を水（１０ｖｏｌ）および酢酸エチル（１０ｖｏｌ）で希釈し、１０〜１５分間撹拌した。その後、有機層を分離し、水性層を酢酸エチル（５ｖｏｌ）で抽出した。合わせた有機層を２０％ＨＣｌ水溶液（１０ｖｏｌ）、水（１０ｖｏｌ）およびブライン溶液（１０ｖｏｌ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、減圧下で濃縮して、粗生成物を得た。
【０４９１】
粗生成物は、酢酸エチルおよびＤＣＭ（１５〜４０％）を溶離液として使用し、シリカゲル（１００〜２００）メッシュ（２０ｗ／ｗ）カラムで精製した。
生成物を含有する３つの主要な分画を収集し、真空下で濃縮した。
【０４９２】
規模を拡大した反応を１５．５Ｋｇ規模で完了し、単離後、１６．５Ｋｇ（８６％）のＢＢ−Ａを得た。
【０４９３】
例３  ＥＬＸ−０２の製造
ＥＬＸ−０２を大規模生成する一般的な合成経路は、図３に示されている。
【０４９４】
ＢＢ−Ｄの製造（インサイチュー）：
ＤＣＭ（１．５モル当量）中の化合物ＢＢ−Ｄ−ＯＨ（図１）の溶液に、２５（±）５℃でＤＣＭ（８ｖｏｌ．）を添加し、混合物を１０〜２０分間撹拌した。その後、溶液を−５（±）５℃に冷却し、そこにトリクロロアセトニトリル（３モル当量）を、−５（±５）℃で添加し、得られた混合物を５〜１０分間撹拌した。ＤＣＭ（０．５ｖｏｌ．）中のＤＢＵ（０．１５モル当量）溶液を、温度を−５（±５）℃に維持しながら、反応混合物にゆっくり添加し、混合物を２時間撹拌した。反応の進行を、ＨＰＬＣでモニターした。反応の完了後、１０（±）５℃で２０％塩化アンモニウム溶液（１０ｖｏｌ．）を反応混合物にゆっくり添加した。層を分離し、有機層を５（±）５℃で２０％塩化ナトリウム溶液（１０ｖｏｌ．）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム（１％ｗ／ｗ）で脱水した。
【０４９５】
化合物１２１の製造（ＢＢ−ＡとＢＢ−Ｄのカップリング、図３）：
製造されたインサイチューのＢＢ−ＤとＢＢ−Ａ（１モル当量）を含有する有機層を、１０（±）５℃で混合し、１０〜１５分間撹拌した。モレキュラシーブ（０．５％ｗ／ｗ）を添加し、混合物を１０〜１５分間撹拌し、その後、−１５（±）５℃に冷却した。−１５（±）５℃を維持しながら、ＤＣＭ（０．５ｖｏｌ．）中のＢＦ３-エーテラート（０．１モル当量）溶液を、反応混合物にゆっくり添加し、得られた混合物を、この温度で１時間撹拌した。反応の進行を、ＨＰＬＣでモニターした。反応完了後、温度を５（±）５℃に上昇し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（１０ｖｏｌ．）をゆっくり添加した。得られた混合物をセライトベッドで濾過し、セライトベッドをＤＣＭ（５ｖｏｌ．）で洗浄した。有機層を分離し、水性層をＤＣＭ（５ｖｏｌ．）で抽出した。合わせた有機層を、塩化ナトリウム溶液（５ｖｏｌ．）で洗浄し、大気圧下、４５（±）５℃で濃縮した。残渣にメタノール（２ｖｏｌ．）を添加し、その後、真空下、４５（±）５℃で留去した。
【０４９６】
化合物１２２の製造（図２；アセチル脱保護）：
化合物１２１を含有する上記工程の生成物を、１０（±）５℃に冷却し、アンモニアのメタノール溶液（２５ｖ／ｗ）を添加した。反応混合物を、３０（±）５℃で２４時間撹拌し、反応の進行をＨＰＬＣでモニターした。反応の完了後、反応混合物を、真空下、４０（±）５℃で濃縮した。酢酸エチル（２ｖｏｌ．）を残渣に添加し、真空下、４０（±）５℃で溶媒を蒸留した。得られた混合物を３０（±）５℃に冷却し、酢酸エチル（１０ｖｏｌ．）を添加し、混合物を３０〜４０分間撹拌し、濾過し、水（２×１０ｖｏｌ．）およびブライン溶液（１０ｖｏｌ．）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水し、減圧下で濃縮した。得られた残渣を、４０（±）５℃でＭＴＢＥ（２ｖ／ｗ）と共に蒸留し、混合物を３０（±）５℃に冷却した。ＭＴＢＥ（２０ｖ／ｗ）を添加し、混合物を３０（±）５℃で２時間撹拌した。生成物を濾過し、ＭＴＢＥ（２ｖｏｌ．）で洗浄し、化合物１２２（収率８５％；ＨＰＬＣにより純度９８．２％と判定）を得た。
【０４９７】
化合物１２３の製造（ＥＬＸ−０２遊離塩基；図２；ＣＢｚ−脱保護）：
化合物１２２（１モル当量）およびＭｅＯＨ（１０ｖｏｌ．）を、２５±５℃で混合し、水（１ｖｏｌ．）を添加し、得られた混合物を１０〜１５分間撹拌した。１０％Ｐｄ／Ｃ（０．２５％ｗ／ｗ）を添加し、得られた混合物を、水素圧力下で２５（±５）℃で２４〜３６時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣでモニターした。反応の完了後、反応混合物をセライトベッドで濾過し、セライトベッドをＭｅＯＨで洗浄した。濾液を、真空下で４５±５℃で濃縮した。粗生成物（純度９５．８％）をカラムクロマトグラフィーで精製した。
【０４９８】
ＥＬＸ−０２の製造（図２、塩形態）：
ＭｅＯＨ（１０ｖｏｌ．）中のＥＬＸ−０２遊離塩基（化合物１２３、１モル当量）の混合物を、１０〜１５分間撹拌し、次いで、０〜１０℃に冷却した。予め冷却したメタノール硫酸（２．０モル当量）溶液を、０±５℃で混合物にゆっくり添加し、反応混合物を、０〜１０℃で２０〜３０分間、次いで３０±５℃で１〜２時間撹拌し、その後、真空下で４５±５℃で濃縮した。アセトン（１５ｖｏｌ．）を添加し、得られた混合物を、２５±５℃で３０分間撹拌し、濾過し、ケーキをアセトン（５ｖｏｌ．）で洗浄し、真空下、４０±５℃で６時間乾燥させ、ＨＰＬＣによる純度が９５．７８％（生成物ピーク：７６．３６％、硫酸塩ピーク：１９．４２％）であることを特徴とするＥＬＸ−０２を硫酸塩として得た。
【０４９９】
得られた生成物の構造を、それぞれ、図４および５に示されるＨ−ＮＭＲおよびマススペクトルで確認した。
【０５００】
例４  無細胞アッセイによるリードスルー活性
実験方法：
プラスミドを、インビトロ転写し、ウサギ網状赤血球（TNT mix）を使用して翻訳し、次いで、ホタルルシフェラーゼおよびウミシイタケルシフェラーゼの発現を試験した。ＷＴプラスミドは、ホタルルシフェラーゼとウミシイタケルシフェラーゼの両者を発現したが、変異プラスミドは、挿入された配列に見られる終止コドンのため、ウミシイタケルシフェラーゼしか発現しなかった。リードスルーアッセイは、試験化合物および対照について、インビトロ転写／翻訳反応混合物に当該化合物を添加することにより行った。中途ナンセンス／終止コドン変異を抑制した化合物のケースでは、ホタルルシフェラーゼが発現し、その発現の倍の変化が観察された。
【０５０１】
結果：
レット症候群の変異であるＲ２７０Ｘのリードスルー活性は、例１および２で製造したＥＬＸ−０２を使用して試験し、変異の抑制は、ホタル／ウミシイタケ発現比の値に基づいて計算し、ＷＴおよび対照試料（テスト化合物ではない）の発現レベルに対して正規化した。
【０５０２】
図６Ａ〜Ｂは、本発明の態様によるＥＬＸ−０２の０〜１２μＭの濃度で行った、レット症候群の変異であるＲ２７０Ｘナンセンス変異を抑制する用量反応無細胞アッセイの結果を示す。
【０５０３】
図６Ａは、ＥＬＸ−０２の濃度の関数としての、変異Ｒ２７０Ｘのリードスルーと比較したＷＴのリードスルー％（５０％ウミシイタケに対するリードスルー）を示し、終止コドン変異のリードスループロットを図示し、図６Ｂは、ＥＬＸ−０２の濃度の関数としての、変異Ｒ２７０Ｘのリードスルーと比較した、ＥＬＸ−０２に曝露後の非処理対照からのリードスルーの倍増を示し、終止コドン変異のリードスループロットを図示す。ＥＬＸ−０２は、レット症候群の変異Ｒ２７０Ｘのリードスルーに関し、用量依存的増加を示した。
【０５０４】
本発明は、特定の態様に関連して説明されているが、多くの代替、修正および変形が当業者に明らかなことは明白である。したがって、特許請求の範囲の精神および範囲に含まれるそのような代替、修正および変更のすべてを包含することが意図されている。
【０５０５】
本明細書で言及するすべての出版物、特許および特許出願は、その全体を参照することによりこの明細書に組み込まれ、個々の公報、特許または特許出願が、具体的かつ個々に、参照によりこの明細書に組み込まれることが示されるように、本明細書に組み込む。さらに、この出願におけるいかなる参照の引用または特定は、そのような参照が、この発明に対する従来技術として利用できることの承認と解釈されるべきではない。用いられたセクションの見出しの範囲は、これらが、必ずしも限定的なものと解釈されるべきではない。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【国際調査報告】
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