(57)【要約】  本出願は、ＨＩＶを強力に阻害するためリポペプチド、その誘導体、又はその医薬組成物、及びその使用に関する。前記リポペプチドは、以下のａ）又はｂ）であり：ａ）抗ウィルス活性を有するポリペプチドを、ポリペプチドのカルボキシル末端に結合された親油性化合物に結合することにより形成されるリポペプチド；ｂ）抗ウィルス活性を有するポリペプチドを、末端保護基、及びポリペプチドのカルボキシル末端に結合された親油性化合物に結合することにより形成されるリポペプチド；ここで前記保護基がアミノ末端保護基及び／又はカルボキシル末端保護基であり、前記ポリペプチドは、ＨＩＶ−１株ＨＸＢ２からのｇｐ４１の配列の位置１２７−１５４でのアミノ酸対応する、２８個のアミノ酸残基の配列を有する。本発明のリポペプチドの抗ＨＩＶ活性は、Ｔ−２０のその活性よりも、数千倍、又はさらに数万倍、高く、そしてまた、抗ＨＩＶリポペプチド、例えばＣ３４−Ｃｈｏｌ、ＬＰ−１９、等のその活性よりも有意に高い。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下のａ）又はｂ）であり：
ａ）抗ウィルス活性を有するポリペプチドを、ポリペプチドのカルボキシル末端に結合された親油性化合物に結合することにより形成されるリポペプチド；
ｂ）抗ウィルス活性を有するポリペプチドを、末端保護基、及びポリペプチドのカルボキシル末端に結合された親油性化合物に結合することにより形成されるリポペプチド；ここで前記保護基がアミノ末端保護基及び／又はカルボキシル末端保護基であり；
ａ）及びｂ）において、ポリペプチドはＰ１〜Ｐ５のいずれか１つであり：
Ｐ１は、以下の式Ｉで示されるような配列を有し：
式Ｉ：Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８Ｘ１９Ｘ２０Ｘ２１Ｘ２２Ｘ２３Ｘ２４Ｘ２５Ｘ２６Ｘ２７Ｘ２８、
前記式Ｉにおいて、Ｘ１〜Ｘ２８はそれぞれアミノ酸残基であり、Ｘ１はＷ、Ｌ又はＹであり、Ｘ２はＥ又はＴであり、Ｘ３はＱ、Ａ又はＳであり、Ｘ４はＫ、Ｎ又はＬであり、Ｘ５はＩ又はＬであり、Ｘ６はＥ、Ｄ、Ｋ、Ｒ又はＡであり、Ｘ７はＥ、Ｄ、Ｋ、Ｒ又はＡであり、Ｘ８はＬ又はＩであり、Ｘ９はＬ又はＩであり、Ｘ１０はＫ、Ｒ、Ｅ、Ｄ又はＡであり、Ｘ１１は Ｋ、Ｒ、Ｅ、Ｄ又はＡであり、Ｘ１２はＡ又はＳであり、Ｘ１３はＥ、Ｄ、Ｋ、Ｒ又はＡであり、Ｘ１４はＥ、Ｄ、Ｋ、Ｒ又はＡであり、Ｘ１５はＱであり、Ｘ１６ Ｑであり、Ｘ１７はＫ、Ｒ、Ｅ、Ｄ又はＡであり、Ｘ１８はＫ、Ｒ、Ｅ、Ｄ又はＡであり、Ｘ１９はＮであり、Ｘ２０はＥ又はＤであり、Ｘ２１はＥ、Ｄ、Ｋ、 Ｒ又はＡであり、Ｘ２２はＥ、Ｄ、Ｋ、Ｒ又はＡであり、Ｘ２３はＬ又はＩであり、Ｘ２４はＫ、Ｒ、Ｅ、Ｄ又はＡであり、Ｘ２５はＫ、Ｒ、Ｅ、Ｄ又はＡであり、Ｘ２６はＬ又はＩであり、Ｘ２７はＥ又はＤであり、Ｘ２８はＫ又はＲであり；
Ｐ２は、Ｐ１のアミノ末端で１〜４個のアミノ酸残基を欠失することにより得られたポリペプチドであり；
Ｐ３は、Ｐ１のカルボキシル末端で１〜３個のアミノ酸残基を欠失することにより得られたポリペプチドであり；
Ｐ４は、Ｐ１のカルボキシル末端にシステイン残基を付加することにより得られたポリペプチドであり；
Ｐ５は、以下の式IIで示されるような配列を有し：
式II：Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８Ｘ１９Ｘ２０Ｘ２１Ｘ２２Ｘ２３Ｘ２４Ｘ２５、
前記式IIにおいて、Ｘ５〜Ｘ２５の定義は、式Ｉにおけるそれらの定義と同じであり；そして
前記ポリペプチドが、  以下のｖ１−ｖ７：
ｖ１: ＨＩＶ−１, ＨＩＶ−２ 及びＳＩＶ;
ｖ２: ＨＩＶ−１及びＨＩＶ−２;
ｖ３: ＨＩＶ−１及びＳＩＶ;
ｖ４: ＨＩＶ−２ 及びＳＩＶ;
ｖ５: ＨＩＶ−１;
ｖ６: ＨＩＶ−２; 及び
ｖ７: ＳＩＶ
から成る群から選択されたいずれか１つのウィルスに対する抗ウィルス活性を有することを特徴とする、リポペプチド、医薬的に許容できるその塩、又はその誘導体。
【請求項２】
前記リポペプチドが、ＬＰ−１９及び／又はＴ−２０及び／又はＣ３４−Ｃｈｏｌよりも高い抗ウィルス活性を有し；
前記リポペプチドの誘導体が、前記リポペプチドのポリペプチドの１又は２以上のアミノ酸残基を、Ｌ−形又はＤ−形アミノ酸、人工的に修飾されたアミノ酸及び／又は天然に存在する希少アミノ酸により置換することにより得られ、そして前記ポリペプチドの生物学的利用能、安定性及び／又は抗ウィルス活性よりも高い生物学的利用能、安定性及び／又は抗ウィルス活性を有することを特徴とする、請求項１に記載のリポペプチド、医薬的に許容できるその塩、又はその誘導体。
【請求項３】
前記Ｐ１が、以下の配列に示されるような配列を有し：
Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＩＥＥＬＸ９ＫＫＸ１２ＥＥＱＱＫＫＮＥＥＥＬＫＫＬＥＫ；
前記Ｐ２は、Ｐ２−１、Ｐ２−２、Ｐ２−３又はＰ２−４であり、ここで
前記Ｐ２−１は、以下の配列で示されるような配列を有し：
Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＩＥＥＬＸ９ＫＫＸ１２ＥＥＱＱＫＫＮＥＥＥＬＫＫＬＥＫ；
前記Ｐ２−２は、以下の配列で示されるような配列を有し：
Ｘ３Ｘ４ＩＥＥＬＸ９ＫＫＸ１２ＥＥＱＱＫＫＮＥＥＥＬＫＫＬＥＫ；
前記Ｐ２−３は、以下の配列で示されるような配列を有し：
Ｘ４ＩＥＥＬＸ９ＫＫＸ１２ＥＥＱＱＫＫＮＥＥＥＬＫＫＬＥＫ；
前記Ｐ２−４は、以下の配列で示されるような配列を有し：
ＩＥＥＬＸ９ＫＫＸ１２ＥＥＱＱＫＫＮＥＥＥＬＫＫＬＥＫ；
前記Ｐ３は、以下の配列で示されるような配列を有し：
Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＩＥＥＬＸ９ＫＫＸ１２ＥＥＱＱＫＫＮＥＥＥＬＫＫ；
前記Ｐ４は、以下の配列で示されるような配列を有し：
Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＩＥＥＬＸ９ＫＫＸ１２ＥＥＱＱＫＫＮＥＥＥＬＫＫＬＥＫＣ；
上記Ｐ１、Ｐ２−１、Ｐ２−２、Ｐ２−３、Ｐ２−４、Ｐ３及びＰ４においては、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ９及びＸ１２は、式Ｉにおけるそれらと同じことを特徴とする、請求項１又は２に記載のリポペプチド、医薬的に許容できるその塩、又はその誘導体。
【請求項４】
前記Ｐ１が、Ｐ−８０/８４/８５/５２、 Ｐ−８７/５１又はＰ５０であり、ここで前記Ｐ−８０／８４／８５／５２が配列表中の配列番号１の配列により表されるポリペプチドであり、前記Ｐ−８７／５１が配列表中の配列番号２の配列により表されるポリペプチドであり、そして前記Ｐ５０が配列表中の配列番号３の配列により表されるポリペプチドであり；
前記Ｐ２−１が、Ｐ−８８/６２であり、ここで前記Ｐ−８８/６２が配列表中の配列番号４の配列により表されるポリペプチドであり；
前記Ｐ２−２が、Ｐ６３又はＰ６０であり、ここで前記Ｐ６３が配列表中の配列番号５の配列により表されるポリペプチドであり、そして前記Ｐ６０が配列表中の配列番号６の配列により表されるポリペプチドであり；
前記Ｐ２−３が、Ｐ−８９/６４であり、ここで前記Ｐ−８９/６４が配列表中の配列番号７の配列により表されるポリペプチドであり；
前記Ｐ２−４が、Ｐ−９０/６５又はＰ６１であり、ここで前記Ｐ−９０/６５が配列表中の配列番号８の配列により表されるポリペプチドであり；そして前記Ｐ６１が配列表中の配列番号９の配列により表されるポリペプチドであり；
前記Ｐ３が、Ｐ−９１/５５であり、ここで前記Ｐ−９１/５５が配列表中の配列番号１０の配列により表されるポリペプチドであり；そして
前記Ｐ４が、Ｐ８３、又はＰ８６であり、ここで前記Ｐ８３が配列表中の配列番号１１の配列により表されるポリペプチドであり、そして前記Ｐ８６が配列表中の配列番号１２の配列により表されるポリペプチドであることを特徴とする、請求項３に記載のリポペプチド、医薬的に許容できるその塩、又はその誘導体。
【請求項５】
前記親油性化合物が、８〜２０個の炭素原子を含む脂肪酸、コレステロール、ジヒドロスフィンゴシン又はビタミンＥであることを特徴とする、請求項１に記載のリポペプチド、医薬的に許容できるその塩、又はその誘導体。
【請求項６】
８〜２０個の炭素原子を含む前記脂肪酸が、ステアリン酸又はパルミチン酸であることを特徴とする、請求項５に記載のリポペプチド、医薬的に許容できるその塩、又はその誘導体。
【請求項７】
前記リポペプチドが、以下の１２のリポペプチドＬＰ−８０／８４／８５／５２、ＬＰ−９０/６５、ＬＰ−８７/５１、ＬＰ−８８/６２、ＬＰ−５０、ＬＰ−８３、ＬＰ−９１/５５、ＬＰ−８６、ＬＰ−６３、ＬＰ−８９/６４、ＬＰ−６０ 及び ＬＰ−６１のいずれか１つであり；
前記ＬＰ−８０／８５／５２がＬＰ−８０／８４／８５／５２ａ又はＬＰ−８０／８４／８５／５２ｂであり、ここで前記ＬＰ−８０／８４／８５／５２ａは、Ｐ−８０／８４／８５／５２と称するポリペプチドを、Ｐ−８０／８４／８５／５２のカルボキシル末端に結合される親油性化合物に結合することにより形成され；前記ＬＰ−８０／８４／８５／５２ｂは、前記ＬＰ−８０／８４／８５／５２ａを、末端保護基に結合することにより形成され；前記ＬＰ−８０／８４／８５／５２ａ及びＬＰ−８０／８４／８５／５２ｂにおいては、Ｐ−８０／８４／８５／５２は、配列表中の配列番号１の配列により表されるポリペプチドであり、そして前記親油性化合物はステアリン酸、ジヒドロスフィンゴシン又はビタミンＥであり；
前記ＬＰ−９０／６５がＬＰ−９０／６５ａ又はＬＰ−９０／６５ｂであり、ここで前記ＬＰ−９０／６５ａは、Ｐ−９０／６５と称するポリペプチドを、Ｐ−９０／６５のカルボキシル末端に結合される親油性化合物に結合することにより形成され；前記ＬＰ−９０／６５ｂは、前記ＬＰ−９０／６５ａを、末端保護基に結合することにより形成され；前記ＬＰ−９０／６５ａ及びＬＰ−９０／６５ｂにおいては、Ｐ−９０／６５は、配列表中の配列番号８の配列により表されるポリペプチドであり、そして前記親油性化合物はステアリン酸、又はパルミチン酸であり；
前記ＬＰ−８７／５１がＬＰ−８７／５１ａ又はＬＰ−８７／５１ｂであり、ここで前記ＬＰ−８７／５１ａは、Ｐ−８７／５１と称するポリペプチドを、Ｐ−８７／５１のカルボキシル末端に結合される親油性化合物に結合することにより形成され；前記ＬＰ−８７／５１ｂは、前記ＬＰ−８７／５１ａを、末端保護基に結合することにより形成され；前記ＬＰ−８７／５１ａ及びＬＰ−８７／５１ｂにおいては、Ｐ−８７／５１は、配列表中の配列番号２の配列により表されるポリペプチドであり、そして前記親油性化合物はジヒドロスフィンゴシン、又はパルミチン酸であり；
前記ＬＰ−８８／６２がＬＰ−８８／６２ａ又はＬＰ−８８／６２ｂであり、ここで前記ＬＰ−８８／６２ａは、Ｐ−８８／６２と称するポリペプチドを、Ｐ−８８／６２のカルボキシル末端に結合される親油性化合物に結合することにより形成され；前記ＬＰ−８８／６２ｂは、前記ＬＰ−８８／６２ａを、末端保護基に結合することにより形成され；前記ＬＰ−８８／６２ａ及びＬＰ−８８／６２ｂにおいては、Ｐ−８８／６２は、配列表中の配列番号４の配列により表されるポリペプチドであり、そして前記親油性化合物はステアリン酸、又はパルミチン酸であり；
前記ＬＰ−５０がＬＰ−５０ａ又はＬＰ−５０ｂであり、前記ＬＰ−５０ａは、Ｐ５０と称するポリペプチドを、Ｐ５０のカルボキシル末端に結合されるパルミチン酸に結合することにより形成され；前記ＬＰ−５０ｂは、ＬＰ−５０ａを、末端保護基に結合することにより形成され；ＬＰ−５０ａ及びＬＰ−５０ｂにおいては、Ｐ５０は配列表中の配列番号３の配列により表されるポリペプチドであり；
前記ＬＰ−８３がＬＰ−８３ａ又はＬＰ−８３ｂであり、前記ＬＰ−８３ａは、Ｐ８３と称するポリペプチドを、Ｐ８３のカルボキシル末端に結合されるコレステロールに結合することにより形成され；前記ＬＰ−８３ｂは、ＬＰ−８３ａを、末端保護基に結合することにより形成され；ＬＰ−８３ａ及びＬＰ−８３ｂにおいては、Ｐ８３は配列表中の配列番号１１の配列により表されるポリペプチドであり；
前記ＬＰ−９１／５５がＬＰ−９１／５５ａ又はＬＰ−９１／５５ｂであり、ここで前記ＬＰ−９１／５５ａは、Ｐ−９１／５５と称するポリペプチドを、Ｐ−９１／５５のカルボキシル末端に結合される親油性化合物に結合することにより形成され；前記ＬＰ−９１／５５ｂは、前記ＬＰ−９１／５５ａを、末端保護基に結合することにより形成され；前記ＬＰ−９１／５５ａ及びＬＰ−９１／５５ｂにおいては、Ｐ−９１／５５は、配列表中の配列番号１０の配列により表されるポリペプチドであり、そして前記親油性化合物はステアリン酸、又はパルミチン酸であり；
前記ＬＰ−８６がＬＰ−８６ａ又はＬＰ−８６ｂであり、前記ＬＰ−８６ａは、Ｐ８６と称するポリペプチドを、Ｐ８６のカルボキシル末端に結合されるコレステロールに結合することにより形成され；前記ＬＰ−８６ｂは、ＬＰ−８６ａを、末端保護基に結合することにより形成され；ＬＰ−８６ａ及びＬＰ−８６ｂにおいては、Ｐ８６は配列表中の配列番号１２の配列により表されるポリペプチドであり；
前記ＬＰ−６３がＬＰ−６３ａ又はＬＰ−６３ｂであり、前記ＬＰ−６３ａは、Ｐ６３と称するポリペプチドを、Ｐ６３のカルボキシル末端に結合されるパルミチン酸に結合することにより形成され；前記ＬＰ−６３ｂは、ＬＰ−６３ａを、末端保護基に結合することにより形成され；ＬＰ−６３ａ及びＬＰ−６３ｂにおいては、Ｐ６３は配列表中の配列番号５の配列により表されるポリペプチドであり；
前記ＬＰ−８９／６４がＬＰ−８９／６４ａ又はＬＰ−８９／６４ｂであり、ここで前記ＬＰ−８９／６４ａは、Ｐ−８９／６４と称するポリペプチドを、Ｐ−８９／６４のカルボキシル末端に結合される親油性化合物に結合することにより形成され；前記ＬＰ−８９／６４ｂは、前記ＬＰ−８９／６４ａを、末端保護基に結合することにより形成され；前記ＬＰ−８９／６４ａ及びＬＰ−８９／６４ｂにおいては、Ｐ−８９／６４は、配列表中の配列番号７の配列により表されるポリペプチドであり、そして前記親油性化合物はステアリン酸、又はパルミチン酸であり；
前記ＬＰ−６０がＬＰ−６０ａ又はＬＰ−６０ｂであり、前記ＬＰ−６０ａは、Ｐ６０と称するポリペプチドを、Ｐ６０のカルボキシル末端に結合されるパルミチン酸に結合することにより形成され；前記ＬＰ−６０ｂは、ＬＰ−６０ａを、末端保護基に結合することにより形成され；ＬＰ−６０ａ及びＬＰ−６０ｂにおいては、Ｐ６０は配列表中の配列番号６の配列により表されるポリペプチドであり；そして
前記ＬＰ−６１がＬＰ−６１ａ又はＬＰ−６１ｂであり、前記ＬＰ−６１ａは、Ｐ６１と称するポリペプチドを、Ｐ６１のカルボキシル末端に結合されるパルミチン酸に結合することにより形成され；前記ＬＰ−６１ｂは、ＬＰ−６１ａを、末端保護基に結合することにより形成され；ＬＰ−６１ａ及びＬＰ−６１ｂにおいては、Ｐ６１は配列表中の配列番号９の配列により表されるポリペプチドであることを特徴とする、請求項６に記載のリポペプチド、医薬的に許容できるその塩、又はその誘導体。
【請求項８】
前記ポリペプチドが、請求項１に定義されるポリペプチドであることを特徴とする、ポリペプチド、医薬的に許容できるその塩、又はその誘導体。
【請求項９】
前記ポリペプチドの誘導体が、以下の１）〜５）：
１）Ｎ末端保護基を、ポリペプチドのアミノ酸末端に結合することにより、及び／又はＣ末端保護基を、ポリペプチドのカルボキシル末端に結合することにより得られる誘導体；
２）オリゴペプチド又は親油性化合物を、ポリペプチドのカルボキシル末端に結合することにより得られる誘導体；
３）オリゴペプチド又は親油性化合物を、ポリペプチドのアミノ末端に結合することにより得られる誘導体；
４）オリゴペプチド又は親油性化合物を、ポリペプチドのカルボキシル末端及びアミノ末端の両端に結合することにより得られる誘導体；及び
５）タンパク質、ポリエチレングリコール又はマレイミドにより前記ポリペプチドを修飾することにより得られる誘導体、から成る群から選択された少なくとも１つであることを特徴とする、請求項８に記載のポリペプチド、医薬的に許容できるその塩、又はその誘導体。
【請求項１０】
ＰＭ１が、請求項１に記載のリポペプチド、医薬的に許容できるその塩又はその誘導体により形成される多量体であり；そして
ＰＭ２が、請求項８に記載のポリペプチド、医薬的に許容されるその塩又はその誘導体により形成される多量体である、ＰＭ１又はＰＭ２の多量体。
【請求項１１】
Ｃ１）及びＣ２）を含む組成物であって、
前記Ｃ１がＣ１１）、Ｃ１２）又は／及びＣ１３）であり、ここで前記Ｃ１１）は、請求項１に記載のリポペプチド、その誘導体又は医薬的に許容できるその塩であり；前記Ｃ１２）は、請求項８に記載のポリペプチド、その誘導体又は医薬的に許容できるその塩であり；前記Ｃ１３）は、請求項１０に記載の多量体であり；
前記Ｃ２）が医薬的に許容できる担体又はアジュバントであり；
以下の機能Ｆ１）−Ｆ５）：
Ｆ１）ウィルスに対する活性の保有；
Ｆ２）ウィルス感染により引起される疾患の治療及び／又は予防及び／又は補助的治療；
Ｆ３）ウィルス及び細胞の融合の阻害；
Ｆ４）細胞中へのウィルスの侵入の阻害；及び
Ｆ３）ウィルスの複製の阻害、
の少なくとも１つの機能を有し、
前記Ｆ１）−Ｆ２）において、前記ウィルスが、以下のｖ１−ｖ７：
ｖ１: ＨＩＶ−１、 ＨＩＶ−２ 及びＳＩＶ;
ｖ２: ＨＩＶ−１及びＨＩＶ−２;
ｖ３: ＨＩＶ−１及びＳＩＶ;
ｖ４: ＨＩＶ−２ 及びＳＩＶ;
ｖ５: ＨＩＶ−１;
ｖ６: ＨＩＶ−２; 及び
ｖ７: ＳＩＶ
から成る群から選択されたいずれか１つのウィルスである、組成物。
【請求項１２】
Ｅ１）−Ｅ５）から成る群から選択された少なくとも１つの製品の製造へのＣ１１）、Ｃ１２）、Ｃ１３）及び／又はＣ１４）の使用であって、
前記Ｃ１１）が請求項１に記載のリポペプチド、その誘導体又は医薬的に許容されるその塩であり；前記Ｃ１２）は、請求項８に記載のポリペプチド、その誘導体又は医薬的に許容されるその塩であり；前記１３）は請求項１０に記載の多量体であり；そして前記Ｃ１４）は、請求項１１に記載の組成物であり；
前記Ｅ１）がウィルスに対する製品であり；
前記Ｅ２）が、ウィルス感染により引き起こされる疾患を治療し、そして／又は予防し、そして／又は補助的に治療するための製品であり；
前記Ｅ３）が、ウィルス及び細胞の融合を阻害するための製品であり；
前記Ｅ４）が、細胞へのウィルスの侵入を阻害するための製品であり；そして
前記Ｅ５）が、ウィルスの複製を阻害するための製品であり；
前記Ｆ１）−Ｆ５）において、前記ウィルスが、以下のｖ１−ｖ７：
ｖ１: ＨＩＶ−１, ＨＩＶ−２ 及びＳＩＶ;
ｖ２: ＨＩＶ−１及びＨＩＶ−２;
ｖ３: ＨＩＶ−１及びＳＩＶ;
ｖ４: ＨＩＶ−２ 及びＳＩＶ;
ｖ５: ＨＩＶ−１;
ｖ６: ＨＩＶ−２; 及び
ｖ７: ＳＩＶ
から成る群から選択されたいずれか１つのウィルスである、使用。
【請求項１３】
Ｃ１１），Ｃ１２）又はＣ１３）であり、
前記Ｃ１１）が請求項１に記載のリポペプチド、その誘導体又は医薬的に許容できるその塩であり；前記Ｃ１２）が請求項８に記載のポリペプチド、その誘導体、又は医薬的に許容できるその塩であり；又は前記Ｃ１３）が請求項１０に記載の多量体であることにより特徴づけられる医薬化合物。
【請求項１４】
前記医薬化合物が、以下の使用Ｕ１）−Ｕ５）：
Ｕ１）ウィルスに対する使用
Ｕ２）ウィルス感染により引起される疾患の治療及び／又は予防及び／又は補助的治療のための使用；
Ｕ３）ウィルス及び細胞の融合の阻害のための使用；
Ｕ４）細胞中へのウィルスの侵入の阻害のための使用；及び
Ｕ５）ウィルスの複製の阻害のための使用、
の少なくとも１つを有し；
前記Ｕ１）−Ｕ５）において、ウィルスは、以下のｖ１−ｖ７：
ｖ１: ＨＩＶ−１, ＨＩＶ−２ 及びＳＩＶ;
ｖ２: ＨＩＶ−１及びＨＩＶ−２;
ｖ３: ＨＩＶ−１及びＳＩＶ;
ｖ４: ＨＩＶ−２ 及びＳＩＶ;
ｖ５: ＨＩＶ−１;
ｖ６: ＨＩＶ−２; 及び
ｖ７: ＳＩＶ
から成る群から選択されたいずれか１つのウィルスであることにより特徴づけられる、請求項１３に記載の医薬化合物。
【請求項１５】
動物におけるウィル感染を阻害するためにＣ１１）、Ｃ１２）、Ｃ１３）又は／及びＣ１４）を対象動物に投与することを含む、動物におけるウィルスにより引起される感染症を治療及び／又は予防する方法であって、
前記Ｃ１１）が請求項１に記載のリポペプチド、その誘導体又は医薬的に許容できるその塩であり；前記Ｃ１２）が請求項８に記載のポリペプチド、その誘導体、又は医薬的に許容できるその塩であり；又は前記Ｃ１３）が請求項１０に記載の多量体であり；そして前記Ｃ１４）が請求項１１に記載の組成物であり；
前記ウィルスが、以下のｖ１−ｖ７：
ｖ１: ＨＩＶ−１, ＨＩＶ−２ 及びＳＩＶ;
ｖ２: ＨＩＶ−１及びＨＩＶ−２;
ｖ３: ＨＩＶ−１及びＳＩＶ;
ｖ４: ＨＩＶ−２ 及びＳＩＶ;
ｖ５: ＨＩＶ−１;
ｖ６: ＨＩＶ−２; 及び
ｖ７: ＳＩＶ
から成る群から選択されたいずれか１つのウィルスである、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＨＩＶを強力に阻害するためのリポペプチド、その誘導体、又はその医薬組成物、及び生物医学分野でのその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）は、現在、ヒト健康及び社会の発展に重大な害を与える感染症である。ＡＩＤＳを引起すヒト免疫不全ウィルスは、ＨＩＶ−１及びＨＩＶ−２の２つのタイプに分類される。世界に約３，６００万人のＨＩＶ感染者がおり、そしてＨＩＶは主要な病原体である（www.unaids.org）。現在、効果的なＡＩＤＳワクチンは入手できず、そして異なる段階でウィルス複製を阻止する薬物がＨＩＶ感染の治療及び予防に大きな役割を果たしている。現在、臨床学的治療に使用される薬物は主に、ヌクレオシド逆転写酵素インヒビター、非ヌクレオシド逆転写酵素インヒビター、プロテアーゼインヒビター、ウィルス侵入インヒビター、及びインテグラーゼインヒビターを含む（www.fda.gov）。臨床学的に広く使用されて来た、非常に効果的な抗ウィルス治療レジメ、すなわち、いわゆる「カクテル」療法は、３〜４の逆転写酵素インヒビター及びプロテアーゼインヒビターから主に成る。ＨＩＶ感染続くために、患者に長期間、薬物を投与することが必要とされ、薬物耐性が容易に導かれ、これが臨床学的治療効果に重度の影響を及ぼす[１]。従って、新規抗−ＨＩＶ薬物の開発は、ＡＩＤＳを予防し、そして制御するための常に重要な戦略であった。
【０００３】
他のタイプの薬物とは異なり、ＨＩＶ侵入インヒビターは、ウィルス複数の初期段階で機能し、そして「敵が国外で拒否された」かのように、標的細胞へのウィルスの侵入を阻止し、従って、ＨＩＶ侵入インヒビターは、治療及び予防の両方で明確な利点を有する。しかしながら、２種のみのＨＩＶ侵入インヒビターが現在、臨床学的適用に承認されている：最初のインヒビターは、ＨＩＶ融合タンパク質ｇｐ４１に由来する３６個のアミノ酸を有するポリペプチド薬物である、ＨＩＶ膜融合インヒビターエンフビルタイド（Ｔ−２０とも呼ばれる）であり、そして２つの目のインヒビターは、補助受容体ＣＣＲ５拮抗薬マラビロックである。２種のＨＩＶ侵入インヒビターの開発の成功のために、ＡＩＤの臨床学的治療のための新しい手段が追加されている。不運なことには、Ｔ−２０は、比較的低活性のために、毎日大量に投与する必要があり（１日２度の９０ｍｇの皮下注射）、そしてマラビロックは、ＣＣＲ５指向性ウィルスに対して選択的に作用し、そしてＣＲＣＲ４指向性ウィルスに対しては効果的でない[２]。
【０００４】
ＨＩＶの標的細胞への侵入は、非共有結合を介してのトランスメンブランサブユニットｇｐ４１への表面サブユニットｇｐ１２０の結合により形成されるその表面エンベロープ糖タンパク質（Ｅｎｖ）により媒介される[３]。最初に、細胞受容体ＣＤ４受容体及び補助受容体（例えば、ＣＣＲ５又はＣＸＣＲ４）へのｇｐ１２０の連続的結合がｇｐ１２０におけるコンホメーション変化のカスケードを引起し、さらに、ｇｐ４１を露出させ、そしてｇｐ４１の膜融合機能を活性化する。ｇｐ４１は構造的に以下の３つの部分に分けられ：膜外領域、トランスメンブラン領域（ＴＭ）、及び膜内領域、ここで膜外領域はさらに、いくつの重要な機能的領域、例えばＮ−末端疎水性融合ペプチド（ＦＰ）領域、Ｎ−末端ヘプタッド領域（ＮＨＲ）、Ｃ−末端ヘプタッド反復領域（ＣＨＲ）及び膜近位外部領域（ＭＰＥＲ）を含む（図１）。１９９７には、ＮＨＲ由来ポリペプチドＮ３６及びＣＨＲ由来ポリペプチドＣ３４の複合体の結晶構造を分析することにより、典型的なα−ヘリカルバンドに構造（６−ＨＢ）が見出され、ここで３つのＮＨＲは、ａ位置及びｄ位置でのアミノ酸の相互作用により中心に位置するヘリカル三量体を形成し、そしてｅ位置及びｇ位置でのアミノ酸は中央三量体の外則に露出され、そしてａの位置及びｄ位置での３つのＣＨＲへリックスと相互作用する[４]。３つのＣＨＲへリックスは、３つの積み重ねられたヘアピン構造と同様に、３つのＮＨＲへリックスにより逆平行の向きに溝にそれぞれ組合される。６−ＨＢ構造に基いて、ＨＩＶ膜融合のメカニズムが深く理解され、露出されたｇｐ４１融合ペプチドが標的細胞の膜中に最初と挿入され、次に、ＣＨＲがＮＨＲに逆結合され、ウィルス膜が標的細胞の膜に近づけられ、安定した６−ＨＢの形成による融合がもたらされ、それにより、ＨＩＶ遺伝物質が最終的に標的細胞に侵入する。６−ＨＢ構造はまた、ＮＨＲへリックスのＣ末端で形成される明確な疎水性の深いポケットが存在し、そしてＣＨＲのＮ末端での３つのアミノ酸、すなわち、いわゆるポケット結合ドメイン（ＰＢＤ）がＮＨＲ疎水性ポケット中に挿入され、ここでそれらの間の相互作用が、６−ＨＢ構造の安定化に重要な役割を果たし、そして従って、ＨＩＶ感染のために必要であることを明らかにしている。長い間、ＮＨＲ疎水性ポケットは抗−ＨＩＶ薬物のための重要な標的として認識されており、そしてＣＨＲのＰＢＤモチーフは、抗−ＨＩＶペプチドインヒビター設計の鍵である[５，６]。
【０００５】
以前の研究は、ｇｐ４１  ＣＨＲ又はＮＨＲに由来するポリペプチドが、有意な抗−ＨＩＶ活性を有し、主に、ウィルス自体の６−ＨＢ構造の形成を防ぐために対応するＮＨＲ又はＣＨＲに競合し、それにより、ウィルス及び細膜膜の融合を阻止することを示している[６]。典型的には、プロトタイプＣＨＲポリペプチドの抗ウィルス活性は、プロトタイプＮＨＲポリペプチドよりも有意に高い。薬物Ｔ−２０は、ＣＨＲポリペプチドの１つに属し、そしてその配列は図１に示されており、これはＨＩＶ−１株ＨＸＢ２からのｇｐ４１の位置１２７〜１６２でのアミノ酸配列に対応する。Ｔ−２０の配列の構造的特徴の１つは、そのＣ末端で疎水性トリプトファンに富むモチーフ（ＴＲＭ：ＷＡＳＬＷＮＷＦ）を有するが、そのＮ末端でＰＢＤ配列（ＷＭＥＷＤＲＥＩ）を欠いていることである。Ｔ−２０のＴＲＭがポリペプチドの細胞膜脂質への結合を媒介し、そして従って、脂質結合ドメイン（ＬＢＤ）であると考えられており、そしてその性質はＴ−２０の抗ウィルス活性のために重要である。臨床学的適用におけるＴ−２０の明確な欠陥により、新世代のＨＩＶ膜融合インヒビターの研究開発は常に国際的ホットトピックであったが、しかし研究のほとんどは、鋳型として３４個のアミノ酸を含むＣＨＲポリペプチドＣ３４に基かれており、そして鋳型としてのＴ−２０の使用はほとんど報告されていない。これは以下の理由である：１）Ｃ３４が最初に６−ＨＢの構造の分析のために使用され、そしてコアＣＨＲ配列であると思われるｇｐ４１の位置１１７−１５０でのアミノ酸配列に対応し；２）Ｃ３４はＮ−末端で重要なＰＢＤ配列を含み、そしてＣ３４は、ＮＨＲ結合活性、及びＴ−２０によりも高い抗ウィルス活性を有し：そして３）Ｃ３４はＴ−２０耐性ウィルス株に対して有意に高められた阻害活性を有する。新しく開発されたＨＩＶ膜融合インヒビター、例えばＴ２６３５、ＳＣ３５ＥＫ、ＳＣ２９ＥＫ、シフビルチド (ＳＦＴ)、アルブビルチド(ＡＢＴ)、Ｃ３４−Ｃｈｏｌ、などは、すべて、Ｃ３４の配列の最適化及び／又は修飾により得られ[６，７]、そしてまた、それらは、Ｔ−２０よりも良好な阻害活性及び安定性も有する。
【０００６】
最近、ＣＨＲポリペプチドの「Ｍ−Ｔフック」構造の発見により、高活性ＨＩＶ膜融合インヒビターを設計する新しいアプローチが提供されている[８−１０]。ＣＨＲポリペプチドのＰＢＤの前面にＭ−Ｔフック構造を形成できる２つのアミノ酸残基（すなわち、Ｍｅｔ１１５及びＴｈｒ１１６）の付加が、標的配列への結合活性及びインヒビターの抗ウィルス活性を有意に高め、特にＴ−２０耐性株に対するインヒビターの活性を増強することができ、そしてインヒビターの薬物耐性に対する遺伝的障壁を特に増強することが研究により示されている[１１，１２]。Ｍ−Ｔフック構造はまた、２４アミノ酸長のＭＴ−ＳＣ２２ＥＫ及び２３アミノ酸長のＨＰ２３及び２Ｐ２３などのＮＨＲ疎水性ポケットを標的とする短いペプチドの設計を可能にする[３−１５]。それらの短いペプチドは、他の長い配列のポリペプチドよりも高い抗ウィルス及び標的配列への結合活性を示す。２Ｐ２３は、ＨＩＶ−１及びそのＴ−２０耐性株に対して有効であるだけでなく、ＨＩＶ−２及びサル免疫不全ウィルス（ＳＩＶ）に対しても非常に有効であり、そして従って、２Ｐ２３は広域ウィルス膜融合インヒビターである[１３]。
【０００７】
細胞膜の脂質ラフトは、コレステロール及びスフィンゴミエリン、並びに多くのトランスメンブランタンパク質及び受容体（例えば、ＨＩＶ受容体ＣＤ４）に富んでおり、そしてウィルス侵入及び感染において重要な役割を果たす。他方では、細胞膜由来のエンベロープウィルス脂質二層膜構造もまた、コレステロール及びスフィンゴミエリンに富んでおり、そしてウィルスエンベロープタンパク質の正常構造及び機能の維持に関与している[１６、１７]。標的細胞中へのＨＩＶ侵入の間、脂質ラフト及びそこに含まれる脂質（例えば、コレステロール及びスフィンゴミエリン）は、ウィルスのｇｐ１２０と、細胞受容体ＣＤ４又は補助受容体との間の相互作用のために適切なプラットフォームを提供する。ウィルス膜融合インヒビター（例えば、ペプチド、タンパク質、抗体、等）を細胞膜の表面に固定することにより、細胞膜でのインヒビターの局部濃度が高められ、それにより、その抗ウィルス活性を有意に高める研究が示されている[１８−２０]。実際、ＨＩＶ膜融合インヒビターは、ＣＨＲポリペプチド、例えばＴ−２０、Ｔ−１２４９及びシフビルチド（Sifuvirtide）に基かれ、それらのポリペプチド自体は、細胞膜と相反作用する能力を有する〔２１−２３〕。Peisajovichなどは、Ｔ−２０のＴＲＭのアミノ酸残基の突然変異分析、及びそのＣ末端での親油性官能基の修飾により抗ウィルス機能を示すためのＴ−２０のＴＲＭと細胞膜との間の相互作用におけるＴＲＭの主要な役割を示している〔２４〕。組換え構成技法による細胞膜の表面上でのT−２０の発現もまた、ウィルスに対するその阻害活性を有意に高めることができる〔２５，２６〕。最近の研究はまた、脂質、いわゆる「リポペプチド」の使用によるポリペプチドの化学的修飾が、細胞膜を標的化する能力及びポリペプチドの抗ウィルス活性を高め、そしてポリペプチドの安定性及び生物学的半減期を有意に改善することができることも示している〔１８−２０、２７〕。ＨＩＶ膜融合インヒビターに関する研究は、ＣＨＲポリペプチドの活性の上昇がＣ末端修飾に依存し、そしてＮ末端就職がＮＨＲポリペプチドのために適切であり、これは６−ＨＢの構造及びウィルス膜融合の機構と一致している。Ｃ末端固定化は、ウィルスのＮＨＲを結合するためにＣＨＲポリペプチドに有益である。対照的に、ＮＨＲポリペプチドに対しては、Ｎ末端細胞膜固定化は、ウィルスのＣＨＲを結合するためにより有益である〔１９，２８，２９〕。非修飾ＣＨＲポリペプチドの設計と同様に、ＨＩＶ膜融合インヒビターとしてのリポペプチドの設計は、鋳型としてＰＢＤを含むＣ３４の使用に焦点を向けて来た。代表的な例は、２００９年Ingallinellaなどにより設計されたリポペプチドＣ３４−Ｃｈｏｌ（図１を参照のこと）であり、それは、柔軟なリンカー及びシステインを介してＣ３４のＣ末端にコレステロールを結合することにより得られ、そして抗ウィルス結果に基けば、それは、最高の活性を有するＨＩＶ膜融合インヒビターであると考えられ、そして動物におけるその代謝半減期がまた、有意に延長される〔２０〕。発明者の研究室においては、３種の脂質化合物、すなわちパルミチン酸（Ｃ１６）、コレステロール及びジヒドロスフィンゴシンを用いて、それぞれ、ＮＨＲポケットを標的とする短いペプチドＨＰ２３及びＨＰ２３Ｌを修飾し、高い活性を有するポリペプチドグループを調製し、ここでＬＰ−１１のインビボ安定性もまた、高く改善されている〔１８〕。最近、発明者の研究室においては、パルミチン酸修飾リポペプチドＬＰ−１９が、より高い抗ウィルス活性及び薬物適性を有する、広域スペクトル抗−ＨＩＶ短ペプチド２Ｐ２３に基いて得られている〔３０〕。研究におけるそれらの進歩は、新しいＨＩＶ膜融合インヒビターの設計のための強固な理論的基礎及び技術的パートを築いた。
【０００８】
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【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明により解決されるべき技術的問題は、いかにしてＨＩＶを強力に阻害するかである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
上記技術的問題を解決するために、本発明は、強力なＨＩＶ膜融合インヒビターを提供する。本発明により提供される強力なＨＩＶ膜融合インヒビターは、ＨＩＶに対して強力な阻害活性を有するリポペプチド、医薬的に許容できるその塩、又はその誘導体であり、ここで前記リポペプチドは、以下のａ）又はｂ）であり：
ａ）抗ウィルス活性を有するポリペプチドを、ポリペプチドのカルボキシル末端に結合された親油性化合物に結合することにより形成されるリポペプチド；
ｂ）抗ウィルス活性を有するポリペプチドを、末端保護基、及びポリペプチドのカルボキシル末端に結合された親油性化合物に結合することにより形成されるリポペプチド；ここで前記保護基がアミノ末端保護基及び／又はカルボキシル末端保護基であり；
ａ）及びｂ）において、ポリペプチドはＰ１〜Ｐ５のいずれか１つであり：
Ｐ１は、以下の式Ｉで示されるような配列を有し：
式Ｉ：Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８Ｘ１９Ｘ２０Ｘ２１Ｘ２２Ｘ２３Ｘ２４Ｘ２５Ｘ２６Ｘ２７Ｘ２８、
前記式Ｉにおいて、Ｘ１〜Ｘ２８はそれぞれアミノ酸残基であり、Ｘ１はＷ、Ｌ又はＹであり、Ｘ２はＥ又はＴであり、Ｘ３はＱ、Ａ又はＳであり、Ｘ４はＫ、Ｎ又はＬであり、Ｘ５はＩ又はＬであり、Ｘ６はＥ、Ｄ、Ｋ、Ｒ又はＡであり、Ｘ７はＥ、Ｄ、Ｋ、Ｒ又はＡであり、Ｘ８はＬ又はＩであり、Ｘ９はＬ又はＩであり、Ｘ１０はＫ、Ｒ、Ｅ、Ｄ又はＡであり、Ｘ１１は Ｋ、Ｒ、Ｅ、Ｄ又はＡであり、Ｘ１２はＡ又はＳであり、Ｘ１３はＥ、Ｄ、Ｋ、Ｒ又はＡであり、Ｘ１４はＥ、Ｄ、Ｋ、Ｒ又はＡであり、Ｘ１５はＱであり、Ｘ１６ Ｑであり、Ｘ１７はＫ、Ｒ、Ｅ、Ｄ又はＡであり、Ｘ１８はＫ、Ｒ、Ｅ、Ｄ又はＡであり、Ｘ１９はＮであり、Ｘ２０はＥ又はＤであり、Ｘ２１はＥ、Ｄ、Ｋ、 Ｒ又はＡであり、Ｘ２２はＥ、Ｄ、Ｋ、Ｒ又はＡであり、Ｘ２３はＬ又はＩであり、Ｘ２４はＫ、Ｒ、Ｅ、Ｄ又はＡであり、Ｘ２５はＫ、Ｒ、Ｅ、Ｄ又はＡであり、Ｘ２６はＬ又はＩであり、Ｘ２７はＥ又はＤであり、Ｘ２８はＫ又はＲであり；
Ｐ２は、Ｐ１のアミノ末端で１〜４個のアミノ酸残基（すなわち、式ＩのＸ１、Ｘ２、Ｘ３及びＸ４の４つのアミノ酸残基の１から４）を欠失することにより得られたポリペプチドであり；
Ｐ３は、Ｐ１のカルボキシル末端で１〜３個のアミノ酸残基（すなわち、式ＩのＸ２６、Ｘ２７、及びＸ２８の３つのアミノ酸残基の１から３）を欠失することにより得られたポリペプチドであり；
Ｐ４は、Ｐ１のカルボキシル末端にシステイン残基を付加することにより得られたポリペプチドであり；
Ｐ５は、以下の式IIで示されるような配列を有し：
式II：Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８Ｘ１９Ｘ２０Ｘ２１Ｘ２２Ｘ２３Ｘ２４Ｘ２５、
前記式IIにおいて、Ｘ５〜Ｘ２５の定義は、式Ｉにおけるそれらの定義と同じであり；そして
前記ポリペプチドが、  以下のｖ１−ｖ７：
ｖ１: ＨＩＶ−１, ＨＩＶ−２ 及びＳＩＶ;
ｖ２: ＨＩＶ−１及びＨＩＶ−２;
ｖ３: ＨＩＶ−１及びＳＩＶ;
ｖ４: ＨＩＶ−２ 及びＳＩＶ;
ｖ５: ＨＩＶ−１;
ｖ６: ＨＩＶ−２; 及び
ｖ７: ＳＩＶ
から成る群から選択されたいずれか１つのウィルスに対する抗ウィルス活性を有する。
【００１１】
上記Ｐ５は本発明のリポペプチドのコア配列であることは実験的に証明されている。コア配列の抗ウィルス活性は、そのＮ末端で１〜４個のアミノ酸残基を付加し、そして／又はそのＣ末端で１〜３個のアミノ酸残基を付加することにより効果的に改善される。
【００１２】
上記リポペプチド、医薬的に許容できるその塩、又はその誘導体においては、リポペプチドは、ＬＰ−１９及び／又はＴ−２０及び／又はＣ３４−Ｃｈｏｌよりも高い抗ウィルス活性を有する。
【００１３】
Ｐ１は、以下の配列に示されるような配列を有し：
Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＩＥＥＬＸ９ＫＫＸ１２ＥＥＱＱＫＫＮＥＥＥＬＫＫＬＥＫ；
Ｐ２は、Ｐ２−１、Ｐ２−２、Ｐ２−３又はＰ２−４であり、ここで
前記Ｐ２−１は、以下の配列で示されるような配列を有し：
Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＩＥＥＬＸ９ＫＫＸ１２ＥＥＱＱＫＫＮＥＥＥＬＫＫＬＥＫ；
前記Ｐ２−２は、以下の配列で示されるような配列を有し：
Ｘ３Ｘ４ＩＥＥＬＸ９ＫＫＸ１２ＥＥＱＱＫＫＮＥＥＥＬＫＫＬＥＫ；
前記Ｐ２−３は、以下の配列で示されるような配列を有し：
Ｘ４ＩＥＥＬＸ９ＫＫＸ１２ＥＥＱＱＫＫＮＥＥＥＬＫＫＬＥＫ；
前記Ｐ２−４は、以下の配列で示されるような配列を有し：
ＩＥＥＬＸ９ＫＫＸ１２ＥＥＱＱＫＫＮＥＥＥＬＫＫＬＥＫ；
Ｐ３は、以下の配列で示されるような配列を有し：
Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＩＥＥＬＸ９ＫＫＸ１２ＥＥＱＱＫＫＮＥＥＥＬＫＫ；
Ｐ４は、以下の配列で示されるような配列を有し：
Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＩＥＥＬＸ９ＫＫＸ１２ＥＥＱＱＫＫＮＥＥＥＬＫＫＬＥＫＣ；
上記Ｐ１、Ｐ２−１、Ｐ２−２、Ｐ２−３、Ｐ２−４、Ｐ３及びＰ４においては、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ９及びＸ１２は、式Ｉにおけるそれらと同じである。
【００１４】
上記ポリペプチド、医薬的に許容できるその塩、又はその誘導体においては、ポリペプチドの配列中のＸｎ（ｎは１〜２８のいずれかの自然数である）を除いて、各大文字はアミノ酸の略語であり、ここでアミノ酸の略語は、当技術分野では良く知られている意味を有し：Ｙはチロシンであり、Ｔはトレオニンであり、Ｓはセリンであり、Ｌはロイシンであり、Ｉはイソロイシンであり、Ｅはグルタミン酸であり、Ｋはリシンであり、Ｑはグルタミンであり、Ｎはアスパラギンであり、Ａはアラニンであり、そしてＷはトリプトファンである。ポリペプチドの配列のアミノ酸のすべては、Ｌ形アミノ酸であり、そしてその１つ又は２以上（例えば、２−５、２−４又は２−３）のアミノ酸はまた、Ｄ形アミノ酸、人工的に修飾されたアミノ酸、自然界に存在する希少アミノ酸、等により置換され得、ポリペプチドの生物学的利用能、安定性及び／又は抗ウィルス活性が改善され、ここでＤ形アミノ酸とは、タンパク質を構成するＬ形アミノ酸に対応するアミノ酸を示し；人工的に修飾されたアミノ酸とは、タンパク質を構成し、メチル化、リン酸化、等により修飾される一般的なＬ形アミノ酸を示し；そして自然界に存在する希少アミノ酸は、タンパク質を構成する珍しいアミノ酸、及びタンパク質を構成しないアミノ酸、例えば５−ヒドロキシリシン、メチルヒスチジン、ガンマアミノ酪酸、ホモセリン、等を含む。
【００１５】
上記リポペプチド、医薬的に許容できるその塩又はその誘導体においては、Ｐ１は、Ｐ−８０ / ８４/８５/５２、Ｐ−８７ / ５１又はＰ５０であり、ここでＰ−８０／８４／８５／５２は、配列表に配列番号１の配列により表されるポリペプチド（すなわち、図２におけるＬＰ−８０、ＬＰ−８４、ＬＰ−８５又はＬＰ−５２の１〜２８の位置でのアミノ酸残基により表されるポリペプチド）であり、Ｐ−８７／５１は、配列表に配列番号２の配列により表されるポリペプチド（すなわち、図２におけるＬＰ−８７、又はＬＰ−５１の１〜２８の位置でのアミノ酸残基により表されるポリペプチド）であり、そしてＰ−５０は、配列表に配列番号３の配列により表されるポリペプチド（すなわち、図２におけるＬＰ−５０の１〜２８の位置でのアミノ酸残基により表されるポリペプチド）である。Ｐ２−１はＰ−８８／６２であり、ここでＰ−８８／６２は、配列表に配列番号４の配列により表されるポリペプチド（すなわち、図２におけるＬＰ−８８又はＬＰ−６２の１〜２７の位置でのアミノ酸残基により表されるポリペプチド）である。Ｐ２−２は、Ｐ６３又はＰ６０であり、ここでＰ６３は、配列表に配列番号５の配列により表されるポリペプチド（すなわち、図２におけるＬＰ−６３の１〜２６の位置でのアミノ酸残基により表されるポリペプチド）であり、そしてＰ６０は、配列表に配列番号６の配列により表されるポリペプチド（すなわち、図２におけるＬＰ−６０の１〜２６の位置でのアミノ酸残基により表されるポリペプチド）である。Ｐ２−３はＰ−８９／６４であり、ここでＰ−８９／６４は、配列表に配列番号７の配列により表されるポリペプチド（すなわち、図２におけるＬＰ−８９又はＬＰ−６４の１〜２５の位置でのアミノ酸残基により表されるポリペプチド）である。Ｐ２−４は、Ｐ−９０／６５又はＰ６１であり、ここでＰ−９０／６５は、配列表に配列番号８の配列により表されるポリペプチド（すなわち、図２におけるＬＰ−９０又はＬＰ−６５の１〜２４の位置でのアミノ酸残基により表されるポリペプチド）であり、そしてＰ６１は、配列表に配列番号９の配列により表されるポリペプチド（すなわち、図２におけるＬＰ−６１の１〜２４の位置でのアミノ酸残基により表されるポリペプチド）である。Ｐ３はＰ−９１／５５であり、ここでＰ−９１／５５は、配列表に配列番号１０の配列により表されるポリペプチド（すなわち、図２におけるＬＰ−９１又はＬＰ−５５の１〜２５の位置でのアミノ酸残基により表されるポリペプチド）である。Ｐ４は、Ｐ−８３又はＰ８６であり、ここでＰ８３は、配列表に配列番号１１の配列により表されるポリペプチド（すなわち、図２におけるＬＰ−８３の１〜２９の位置でのアミノ酸残基により表されるポリペプチド）であり、そしてＰ８６は、配列表に配列番号１２の配列により表されるポリペプチド（すなわち、図２におけるＬＰ−８６の１〜２９の位置でのアミノ酸残基により表されるポリペプチド）である。
【００１６】
上記リポペプチド、医薬的に許容できるその塩又はその誘導体においては、親油性化合物は、８〜２０個のアミノ酸を含む脂肪酸、コレステロール（Ｃｈｏｌ）、ジヒドロスフィンゴシン（ＤＨＳ）、ビタミンＥ（トコフェロール、ＴＯＣ）、等であり得る。
【００１７】
上記リポペプチド、医薬的に許容できるその塩又はその誘導体においては、８〜２０個のアミノ酸を含む脂肪酸は、パルミチン酸（ヘキサデカン酸としても知られている）（Ｃ１６）又はステアリン酸（Ｃ１８）であり得る。
【００１８】
上記リポペプチド、医薬的に許容できるその塩又はその誘導体においては、親油性化合物は、末端アミノ酸の側鎖に結合されても、又はペプチド鎖に直接的に結合されてもよい。Ｃ末端に結合される親油性化合物としての脂肪酸、ジヒドロスフィンゴシン又はビタミンＥによる修飾は、ポリペプチドの末端でのリシン（Ｌｙｓ）の側鎖アミノ酸とのそのアミド化反応により達成され得、そしてコレステロールによる修飾は、ポリペプチドの末端でのシステイン（Ｃｙｓ）の側鎖チオール基と、コレステリルブロモアセテートとの間で行われる高化学的選択性を伴ってのチオエーテル形成反応によりポリペプチド鎖にコレステロールをグラフトすることにより達成され得る。
【００１９】
上記リポペプチド、医薬的に許容できるその塩又はその誘導体においては、リポペプチドは、以下の１２のリポペプチドのいずれか１つであり得る：ＬＰ−８０／８４／８５／５２、ＬＰ−９０/６５、ＬＰ−８７/５１、ＬＰ−８８/６２、ＬＰ−５０、ＬＰ−８３、ＬＰ−９１/５５、ＬＰ−８６、ＬＰ−６３、ＬＰ−８９/６４、ＬＰ−６０ 及び ＬＰ−６１。
【００２０】
前記ＬＰ−８０／８５／５２はＬＰ−８０／８４／８５／５２ａ又はＬＰ−８０／８４／８５／５２ｂであり、ここで前記ＬＰ−８０／８４／８５／５２ａは、Ｐ−８０／８４／８５／５２を、Ｐ−８０／８４／８５／５２のカルボキシル末端に結合される親油性化合物に結合することにより形成され；前記ＬＰ−８０／８４／８５／５２ｂは、前記ＬＰ−８０／８４／８５／５２ａを、末端保護基に結合することにより形成され；前記ＬＰ−８０／８４／８５／５２ａ及びＬＰ−８０／８４／８５／５２ｂにおいては、前記親油性化合物はステアリン酸、ジヒドロスフィンゴシン又はビタミンＥである。
【００２１】
前記ＬＰ−９０／６５はＬＰ−９０／６５ａ又はＬＰ−９０／６５ｂであり、ここで前記ＬＰ−９０／６５ａは、Ｐ−９０／６５を、Ｐ−９０／６５のカルボキシル末端に結合される親油性化合物に結合することにより形成され；前記ＬＰ−９０／６５ｂは、前記ＬＰ−９０／６５ａを、末端保護基に結合することにより形成され；前記ＬＰ−９０／６５ａ及びＬＰ−９０／６５ｂにおいては、前記親油性化合物はステアリン酸、又はパルミチン酸である。
【００２２】
前記ＬＰ−８７／５１はＬＰ−８７／５１ａ又はＬＰ−８７／５１ｂであり、ここで前記ＬＰ−８７／５１ａは、Ｐ−８７／５１を、Ｐ−８７／５１のカルボキシル末端に結合される親油性化合物に結合することにより形成され；前記ＬＰ−８７／５１ｂは、前記ＬＰ−８７／５１ａを、末端保護基に結合することにより形成され；前記ＬＰ−８７／５１ａ及びＬＰ−８７／５１ｂにおいては、前記親油性化合物はジヒドロスフィンゴシン、又はパルミチン酸である。
【００２３】
前記ＬＰ−８８／６２はＬＰ−８８／６２ａ又はＬＰ−８８／６２ｂであり、ここで前記ＬＰ−８８／６２ａは、Ｐ−８８／６２を、Ｐ−８８／６２のカルボキシル末端に結合される親油性化合物に結合することにより形成され；前記ＬＰ−８８／６２ｂは、前記ＬＰ−８８／６２ａを、末端保護基に結合することにより形成され；前記ＬＰ−８８／６２ａ及びＬＰ−８８／６２ｂにおいては、前記親油性化合物はステアリン酸、又はパルミチン酸である。
【００２４】
前記ＬＰ−５０はＬＰ−５０ａ又はＬＰ−５０ｂであり、前記ＬＰ−５０ａは、Ｐ５０を、Ｐ５０のカルボキシル末端に結合されるパルミチン酸に結合することにより形成され；前記ＬＰ−５０ｂは、ＬＰ−５０ａを、末端保護基に結合することにより形成さる。
【００２５】
前記ＬＰ−８３はＬＰ−８３ａ又はＬＰ−８３ｂであり、前記ＬＰ−８３ａは、Ｐ８３を、Ｐ８３のカルボキシル末端に結合されるコレステロールに結合することにより形成され；前記ＬＰ−８３ｂは、ＬＰ−８３ａを、末端保護基に結合することにより形成さる。
【００２６】
前記ＬＰ−９１／５５はＬＰ−９１／５５ａ又はＬＰ−９１／５５ｂであり、ここで前記ＬＰ−９１／５５ａは、Ｐ−９１／５５を、Ｐ−９１／５５のカルボキシル末端に結合される親油性化合物に結合することにより形成され；前記ＬＰ−９１／５５ｂは、前記ＬＰ−９１／５５ａを、末端保護基に結合することにより形成され；前記ＬＰ−９１／５５ａ及びＬＰ−９１／５５ｂにおいては、前記親油性化合物はステアリン酸、又はパルミチン酸である。
【００２７】
前記ＬＰ−８６はＬＰ−８６ａ又はＬＰ−８６ｂであり、前記ＬＰ−８６ａは、Ｐ８６を、Ｐ８６のカルボキシル末端に結合されるコレステロールに結合することにより形成され；前記ＬＰ−８６ｂは、ＬＰ−８６ａを、末端保護基に結合することにより形成さる。前記ＬＰ−６３はＬＰ−６３ａ又はＬＰ−６３ｂであり、前記ＬＰ−６３ａは、Ｐ６３を、Ｐ６３のカルボキシル末端に結合されるパルミチン酸に結合することにより形成され；前記ＬＰ−６３ｂは、ＬＰ−６３ａを、末端保護基に結合することにより形成さる。前記ＬＰ−８９／６４はＬＰ−８９／６４ａ又はＬＰ−８９／６４ｂであり、ここで前記ＬＰ−８９／６４ａは、Ｐ−８９／６４を、Ｐ−８９／６４のカルボキシル末端に結合される親油性化合物に結合することにより形成され；前記ＬＰ−８９／６４ｂは、前記ＬＰ−８９／６４ａを、末端保護基に結合することにより形成され；前記ＬＰ−８９／６４ａ及びＬＰ−８９／６４ｂにおいては、前記親油性化合物はステアリン酸、又はパルミチン酸である。
【００２８】
前記ＬＰ−６０はＬＰ−６０ａ又はＬＰ−６０ｂであり、前記ＬＰ−６０ａは、Ｐ６０を、Ｐ６０のカルボキシル末端に結合されるパルミチン酸に結合することにより形成され；前記ＬＰ−６０ｂは、ＬＰ−６０ａを、末端保護基に結合することにより形成さる。前記ＬＰ−６１はＬＰ−６１ａ又はＬＰ−６１ｂであり、前記ＬＰ−６１ａは、Ｐ６１を、Ｐ６１のカルボキシル末端に結合されるパルミチン酸に結合することにより形成され；前記ＬＰ−６１ｂは、ＬＰ−６１ａを、末端保護基に結合することにより形成さる。
【００２９】
上記リポペプチド、医薬的に許容できるその塩又はその誘導体においては、本発明のリポペプチドは、アミノ末端でＮ末端保護基を含むことができ、ここでＮ末端保護基は、アセチル、アミノ、マレオイル、スクシニル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル、ベンジルオキシ、他の疎水性基、及び高分子キャリアグループから成る群から選択されたいずれかの１つであり得；本発明のリポペプチドは、カルボキシル末端でＣ末端保護基を含むことができ、ここでＣ末端保護基は、アミノ、アミド、カルボキシル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル、他の疎水性基及び高分子キャリアグループから成る群から選択されたいずれか１つであり得る。
【００３０】
上記Ｐ１−Ｐ４から成る群から選択されたいずれか１つのポリペプチド、医薬的に許容できるその塩、又はその誘導体もまた、本発明の範囲内である。
【００３１】
ポリペプチドの誘導体は、特に、以下の１）〜５）から成る群から選択された少なくとも１つであり得る：
１）Ｎ末端保護基を、ポリペプチドのアミノ酸末端に結合することにより、及び／又はＣ末端保護基を、ポリペプチドのカルボキシル末端に結合することにより得られる誘導体；
２）オリゴペプチド又は親油性化合物を、ポリペプチドのカルボキシル末端に結合することにより得られる誘導体；
３）オリゴペプチド又は親油性化合物を、ポリペプチドのアミノ末端に結合することにより得られる誘導体；
４）オリゴペプチド又は親油性化合物を、ポリペプチドのカルボキシル末端及びアミノ末端の両端に結合することにより得られる誘導体；及び
５）タンパク質、ポリエチレングリコール又はマレイミドにより前記ポリペプチドを修飾することにより得られる誘導体。
【００３２】
ＰＭ１又はＰＭ２の多量体もまた、本発明の範囲内であり、ここで
ＰＭ１は、リポペプチド、医薬的に許容できるその塩又はその誘導体により形成される多量体であり；そして
ＰＭ２は、ポリペプチド、医薬的に許容されるその塩又はその誘導体により形成される多量体である。
【００３３】
Ｃ１）及びＣ２）を含む組成物もまた、本発明の範囲内であり、ここで
前記Ｃ１はＣ１１）、Ｃ１２）又は／及びＣ１３）であり、ここで前記Ｃ１１）は、リポペプチド、その誘導体又は医薬的に許容できるその塩であり；前記Ｃ１２）は、ポリペプチド、その誘導体又は医薬的に許容できるその塩であり；前記Ｃ１３）は、多量体であり；
前記Ｃ２）は医薬的に許容できる担体又はアジュバントであり；
前記組成物は、以下の機能Ｆ１）−Ｆ５）：
Ｆ１）ウィルスに対する活性の保有；
Ｆ２）ウィルス感染により引起される疾患の治療及び／又は予防及び／又は補助的治療；
Ｆ３）ウィルス及び細胞の融合の阻害；
Ｆ４）細胞中へのウィルスの侵入の阻害；及び
Ｆ３）ウィルスの複製の阻害、
の少なくとも１つの機能を有し、
前記Ｆ１）−Ｆ２）において、前記ウィルスは、以下のｖ１−ｖ７：
ｖ１: ＨＩＶ−１, ＨＩＶ−２ 及びＳＩＶ;
ｖ２: ＨＩＶ−１及びＨＩＶ−２;
ｖ３: ＨＩＶ−１及びＳＩＶ;
ｖ４: ＨＩＶ−２ 及びＳＩＶ;
ｖ５: ＨＩＶ−１;
ｖ６: ＨＩＶ−２; 及び
ｖ７: ＳＩＶ
から成る群から選択されたいずれか１つのウィルスである。
【００３４】
Ｅ１）−Ｅ５）から成る群から選択された少なくとも１つの製品の製造へのＣ１１）、Ｃ１２）、Ｃ１３）及び／又はＣ１４）の使用もまた、本発明の範囲内であり、ここで
前記Ｃ１４）は、組成物であり；
Ｅ１）は、ウィルスに対する製品、例えば薬物又はワクチンであり；
Ｅ２）は、ウィルス感染、例えばＡＩＤＳにより引起される疾患を治療し、そして／又は予防し、そして／又は補助的に治療するための製品、例えば薬物又はワクチンであり：
Ｅ３）は、ウィルス及び細胞の融合を阻害するための製品、例えば薬物又はワクチンであり；
Ｅ４）は、細胞中へのウィルスの侵入を阻害するための製品、例えば薬物又はウィルスであり；そして
Ｅ５）は、ウィルスの複製を阻害するための製品、例えば薬物又はワクチンでありい；
前記Ｆ１）−Ｆ５）において、前記ウィルスが、以下のｖ１−ｖ７：
ｖ１: ＨＩＶ−１, ＨＩＶ−２ 及びＳＩＶ;
ｖ２: ＨＩＶ−１及びＨＩＶ−２;
ｖ３: ＨＩＶ−１及びＳＩＶ;
ｖ４: ＨＩＶ−２ 及びＳＩＶ;
ｖ５: ＨＩＶ−１;
ｖ６: ＨＩＶ−２; 及び
ｖ７: ＳＩＶ
から成る群から選択されたいずれか１つのウィルスである。
【００３５】
本発明は、医薬化合物を提供する。
【００３６】
本発明により提供される医薬化合物は、Ｃ１１）、Ｃ１２）又はＣ１３）である。
【００３７】
上記医薬化合物において、前記医薬化合物は、以下の使用Ｕ１）−Ｕ５）：
Ｕ１）ウィルスに対する使用
Ｕ２）ウィルス感染により引起される疾患（例えばＡＩＤＳ）の治療及び／又は予防及び／又は補助的治療のための使用；
Ｕ３）ウィルス及び細胞の融合の阻害のための使用；
Ｕ４）細胞中へのウィルスの侵入の阻害のための使用；及び
Ｕ５）ウィルスの複製の阻害のための使用、
の少なくとも１つを有し；
前記Ｕ１）−Ｕ５）において、ウィルスは、以下のｖ１−ｖ７：
ｖ１: ＨＩＶ−１, ＨＩＶ−２ 及びＳＩＶ;
ｖ２: ＨＩＶ−１及びＨＩＶ−２;
ｖ３: ＨＩＶ−１及びＳＩＶ;
ｖ４: ＨＩＶ−２ 及びＳＩＶ;
ｖ５: ＨＩＶ−１;
ｖ６: ＨＩＶ−２; 及び
ｖ７: ＳＩＶ
から成る群から選択されたいずれか１つのウィルスである。
【００３８】
動物においてウィルスにより引起される感染を治療し、又は／そして予防するための方法もまた、本発明の保護の範囲内である。
【００３９】
動物においてウィルスにより引起される感染を治療し、又は／そして予防するための方法は、動物におけるウィル感染を阻害するためにＣ１１）、Ｃ１２）、Ｃ１３）又は／及びＣ１４）を対象動物に投与することを含み、ここで
Ｃ１４）は、組成物であり；そして
前記ウィルスは、以下のｖ１−ｖ７：
ｖ１: ＨＩＶ−１, ＨＩＶ−２ 及びＳＩＶ;
ｖ２: ＨＩＶ−１及びＨＩＶ−２;
ｖ３: ＨＩＶ−１及びＳＩＶ;
ｖ４: ＨＩＶ−２ 及びＳＩＶ;
ｖ５: ＨＩＶ−１;
ｖ６: ＨＩＶ−２; 及び
ｖ７: ＳＩＶ
から成る群から選択されたいずれか１つのウィルスである。
【００４０】
本発明のリポペプチドの医薬的に許容できる塩、及び本発明のポリペプチドの医薬的に許容できる塩は、以下を含む：酢酸塩、ラクトビオン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ラウリン酸塩、安息香酸塩、リンゴ酸塩、重炭酸塩、マレイン酸塩、重硫酸塩、マンデル酸塩、重酒石酸塩、メシレート、ホウ酸塩、臭化メチル、臭化物、硝酸メチル、エデト酸カルシウム、硫酸メチル、カムシレート、ムケート、炭酸塩、ナプシレート、塩化物、硝酸塩、クラブラン酸塩、Ｎ−メチルグルカミン、クエン酸塩、アンモニウム塩、二塩酸塩、オレイン酸塩、エデト酸塩、シュウ酸塩、エジシレート、パモ酸塩、エンボネート、エストレート、パルミテート、エシレート、パントテン酸塩、フマル酸塩、リン酸塩/二リン酸塩、グルセプト酸塩、ポリガラクツロン酸塩、グルコン酸塩、サリチル酸塩、グルタミン酸塩、ステアリン酸塩、グリコ、硫酸塩、ヘキシルレゾルシン酸塩酸塩、塩基性酢酸塩、ヒドラバミン、コハク酸塩、臭化水素酸塩、タンニン酸塩、塩酸塩、酒石酸塩、ヒドロキシナフトエート、テオクレート、ヨウ化物、トシレート、トリエチオダイド、乳酸塩、及び吉草酸塩、等。その使用に依存して、医薬的に許容できる塩は、カチオン、例えばナトリウム、カリウム、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、亜鉛及びビスマスから形成され得、又は塩基、例えばアンモニア、エチレンジアミン、Ｎ−メチルグルタミン、リジン、アルギニン、オルニチン、コリン、Ｎ、Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、ジエタノールアミン、プロカイン、ジエチルアミン、ピペラジン、トリス（ヒドロキシメチルアミノメタン）及び水酸化テトラメチルアンモニウムから形成され得る。それらの塩は、標準方法、例えば有機、又は無機塩基と遊離酸との反応により調製され得る。塩基性基（例えば、アミノ基）の存在下で、酸性塩、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、酢酸塩、パモ酸塩、等は、薬物の形として使用され得；酸性基（例えば、−ＣＯＯＨ）又はアルコール基の存在下で、溶解性及び加水分解性を改善するために文献において知られている酢酸塩、マレイン酸塩、ピバロイルオキシメチル及びエステルなどの医薬的に許容できるエステルが徐放性薬物又はプロドラッグの形として使用され得る。
【００４１】
本発明においては、抗ウィルス活性はまた、特にウィルス及び細胞の融合を阻害し、そして／又は細胞中へのウィルスの侵入を阻害し、そして／又はウィルスの複製を阻害する、ウィルスに対する阻害活性としても言及され得る。有意に長く作用する抗ウィルス効果が非ヒト霊長類（サル）において示される。
【００４２】
本発明により提供されるリポペプチド又はポリペプチド、その誘導体又は医薬的に許容できるその塩、多量体、組成物又は医薬化合物は、種々の段階のＨＩＶ感染及び／又はＳＩＶ感染、例えば発症段階、交感経段階及び無症候性段階のＡＩＤＳを含む、ＨＩＶ（ＨＩＶ−１及び／又はＨＩＶ−２）感染及び／又はＳＩＶ感染を治療するために使用され得る。本発明により提供されるリポペプチド又はポリペプチド、その誘導体又は医薬的に許容できるその塩、多量体、組成物又は医薬化合物はまた、暴露前または疑わしい暴露の後、例えば輸血、臓器移植、体液交換、咬傷、偶発的な針刺し又は手術中の患者の血液への暴露を含む、ＨＩＶ（ＨＩＶ−１及び／又はＨＩＶ−２）感染及び／又はＳＩＶ感染を予防するためにも使用され得る。
【００４３】
実際、本発明により提供されるリポペプチド又はポリペプチド、その誘導体又は医薬的に許容できるその塩、多量体、組成物又は医薬化合物は、ＨＩＶ感染を治療し、そして／又は予防するために、医薬として患者に直接、又は適切な担体又は賦形剤と混合して投与され得る。本明細書における担体の材料は、以下を含むが、但しそれらだけには限定されない：水溶性担体材料（例えば、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、有機酸など）、難溶性の担体材料（例えば、エチルセルロース、ステアリン酸コレステロールなど）、腸溶性担体材料（例えば、酢酸フタル酸セルロース、カルボキシメチルセルロースなど）、ここで前記水溶性担体材料が好ましい。それらの材料を用いることにより、錠剤、カプセル、滴下ピル、エアロゾル、ピル、粉末、溶液、懸濁液、エマルジョン、顆粒、リポソーム、経皮剤、バッカル錠、座薬、注射用凍結乾燥粉末など（但し、それらだけには限定されない）を含む種々の製剤形が調製され得、ここで坐剤は、膣坐剤、膣リング、又は膣への適用に適した軟膏、クリーム又はゲルであり得る。製剤形は、一般的な製剤、徐放性製剤、制御放出製剤及び種々の粒子送達システムであり得る。単位製剤を錠剤に製剤化するためには、当業界において知られている多種多様な担体が使用され得る。担体の例としては、以下を示すことができる：例えば、希釈剤及び吸収剤、例えば、デンプン、デキストリン、硫酸カルシウム、ラクトース、マンニトール、スクロース、塩化ナトリウム、グルコース、尿素、炭酸カルシウム、カオリン、微結晶セルロース、及びケイ酸アルミニウム；湿潤剤及び結合剤、例えば水、グリセロール、ポリエチレングリコール、エタノール、プロパノール、デンプンスラリー、デキストリン、シロップ、蜂蜜、グルコース溶液、アラビアゴム、ゼラチンペースト、カルボキシメチルセルロースナトリウム、シェラック、メチルセルロース、リン酸カリウム、及びポリビニルピロリドン；崩壊剤、例えば乾燥澱粉、アルギン酸塩、寒天粉末、褐藻澱粉、炭酸水素ナトリウムとクエン酸、炭酸カルシウム、ポリオキシエチレン、ソルビトール脂肪酸エステル、ドデシル硫酸ナトリウム、メチルセルロース、及びエチルセルロース；崩壊抑制剤、例えばスクロース、トリステアリン酸グリセリル、カカオバター、水素添加油等；吸収促進剤、例えば第四アンモニウム塩、及びラウリル硫酸ナトリウム；潤滑剤、例えばタルク、シリカ、コーンスターチ、ステアリン酸塩、ホウ酸、流動パラフィン、及びポリエチレングリコール。錠剤はまた、コーティング錠剤、例えば糖衣錠剤、フィルムコーティング錠剤、腸溶錠剤、２層又は多層錠剤に、さらに製剤化され得る。単位製剤形をピルに製剤化するためには、当業界において知られている多種多様な担体が使用され得る。担体の例としては、以下を示すことができる：例えば希釈剤及び吸収剤、例えばグルコース、乳糖、澱粉、カカオバター、硬化植物油、ポリビニルピロリドン、Gelucire、カオリン、及びタルク；結合剤、例えばアラビアゴム、トラガカント、ゼラチン、エタノール、蜂蜜、液糖、ライスペースト、及び小麦粉ペースト; 崩壊剤、例えば寒天粉、乾燥デンプン、アルギン酸塩、ドデシル硫酸ナトリウム、メ��ルセルロース、及びエチルセルロース。単位製剤形を座薬に製剤化するためには、当業界において知られている多種多様な担体が使用され得る。担体の例として以下を示すことができる：例えば、ポリエチレングリコール、レシチン、ココアバター、高級アルコール、高級アルコールエステル、ゼラチン、及び半合成グリセリド。単位製剤形を注射用製剤、例えば溶液エマルジョン、凍結乾燥粉末及び懸濁液に製剤化するためには、以下のすべての従来の希釈剤が使用され得る：例えば、水、エタノール、ポリエチレングリコール、1,3-プロパンジオール、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルなど。さらに、等張注射剤を調製するためには、注射剤に、適切な量の塩化ナトリウム、グルコース又はグリセリンが添加され得、そして従来の共溶媒、緩衝液、ｐＨ調整剤もまた添加され得る。さらに、必要に応じて、着色料、防腐剤、香水、香料、甘味料、及び他の材料が医薬製剤に任意に添加され得る。
【００４４】
上記製剤形は、皮下注射、静脈内注射、筋肉内注射及び腹腔内注射、槽内注射又は注入などを含む注射、経直腸、膣及び舌下投与など管腔内投与、経鼻投与などの呼吸器投与、及び粘膜投与により投与され得る。上記投与経路の中で、注射による投与が好ましく、そして好ましい注射経路は皮下注射である。
【００４５】
本発明のリポペプチド又はポリペプチド、その誘導体、医薬的に許容できるその塩、多量体、組成物又は医薬化合物の投与量は、種々の要因、例えば予防されるか、又は治療される疾患の性質及び重症度、性別、年齢、体重及び患者又は動物の個々の応答、使用される特定の活性成分、投与経路及び投与頻度、などに依存する。上記用量は、単一の単位用量形で又は複数（例えば、２、３又は４）の単位用量形で投与され得る。
【００４６】
任意の特定の患者のための特定の治療的有効量レベルは、治療される障害及びその重症度を含む種々の要因；使用される特定の活性成分の活性；使用される特定の組成物；患者の年齢、体重、一般的な健康、性別及び食事療法；使用される特定の活性成分の投与時間、投与経路及び排泄速度；治療の期間；組合して又は同時に使用される特定の活性成分と共に使用される薬物；及び医学分野において良く知られている類似する要因に依存するであろう。例えば、所望する治療効果を達成するために必要とされるレベルよりも低いレベルでの活性成分の用量で開始し、そして所望する効果が達成されるまで、その用量を徐々に高めることは、当業界における共通した実施である。一般的に、本発明のリポペプチド、その誘導体、又は医薬的に許容できるその塩、多量体、組成物、又は医薬化合物は、哺乳類、特にヒトに、０．００１〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重／日、例えば０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重／日、及び０１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重／日の用量で、及び１〜２回／日、１回／２日、１回／３日、１回／４日、１回／５日、１回／６日又は１回／７日、特に１回／１〜２日又は１〜２回／週の頻度で投与され得る。
【００４７】
本発明のリポペプチド又はポリペプチド、その誘導体、又は医薬的に許容できるその塩、多量体、組成物、又は医薬化合物は、ＨＩＶ感染者の治療又は予防のために単独で直接使用されても、又は改善された全体的治療効果を達成するために、１又は２以上の抗ＨＩＶ剤と組合して、同時に又は間隔をおいて使用され得る。抗ＨＩＶ薬は、逆転写酵素インヒビター、プロテアーゼインヒビター、侵入インヒビター、組込みインヒビター、成熟インヒビター、等を含むが、但しそれらだけには限定されない。上記逆転写酵素インヒビターは、１又は２以上のヌクレオシド逆転写酵素インヒビター、例えばジドブジン（ＡＺＴ）、ラミブジン（３ＴＣ）、ジダノシン（ｄｄＩ）、ザルシタビン（ｄｄＣ）、スタブジン（ｄ４Ｔ）、テノフォビル（ＴＤＦ）、アバカビル（ＡＢＣ）、エムトリシタビン（ＦＴＣ）、等であり得、そしてまた、１又は２以上の非ヌクレオシド逆転写酵素インヒビター、例えばネビラピン（ＮＶＰ）、エファビレンツ（ＥＦＶ）、デラビルジン（ＤＬＶ）、エトラビリン（ＥＴＲ）、等であり得る。上記プロテアーゼインヒビターは、サキナビル（ＳＱＶ−ＨＧＣ）、インディナビル（ＩＤＶ）、リトナビル（ＲＴＶ）、アンプレナビル（ＡＰＶ）、ロピナビル及びリトナビル（ＬＰＶ / ＲＴＶ）、ネルフィナビル（ＮＦＶ）、フォサンプレナビルカルシウム（ＦＰＶ）、レイアタズ（ＡＴＶ）、プレジスタ、等から成る群から選択された１又は２以上のインヒビターであり得る。上記組込みインヒビターは、ラルテグラビル、ドルテグラビル、エルビテグラビ、等から成る群から選択された１又は２以上のインヒビターであり得る。上記侵入インヒビターは、マラビロック、Ｔ−２０、ＴＡＫ−７７９、Ｔ２６３５、ＶＩＲＩＰ（ＶＩＲ−５７６）、シフビルチド、アルブビルチド、可溶性ＣＤ４タンパク質及びその類似体、補助受容体ＣＣＲ５に対する抗体（例えば、ＰＲＯ１４０）、ｇｐ１２０／ｇｐ４１に対するモノクローナル抗体（例えば、ＶＲＣ０１及び１０Ｅ８）、受容体ＣＤに対するモノクローナル抗体（例えば、ＴＮＸ−３５５）、等の１又は２以上のインヒビターであり得る。
【００４８】
本発明のリポペプチドを設計するための戦略は、以下である：Ｔ−２０ポリペプチドの８つのアミノ酸のＣ末端ＴＲＭ配列（ＷＡＳＬＷＮＷＦ）が、親油性化合物、例えば長鎖脂肪酸（例えば、パルミチン酸又はステアリン酸）、コレステロール、ジヒドロスフィゴシン又はビタミンＥにより置換され、Ｔ−２０の最初の２８のアミノ酸に対応する、すなわちＨＩＶ−１株ＨＸＢ２からのｇｐ４１の１２７−１５４の位置でのアミノ酸に対応するポリペプチド配列を含むリポペプチドが生成され；さらに、イオン対の形成に寄与するＥＥ＊＊ＫＫアミノ酸残基が、ポリペプチド配列の非ＮＨＲ結合表面でのアミノ酸（すなわち、ｂ、ｃ及びｆ、ｇの位置でのその対応するアミノ酸）を変異させることにより導入され、そしてＨＩＶ−２及び／又はＳＩＶのその対応するアミノ酸残基が、ポリペプチド配列のＮＨＲ結合表面でのアミノ酸（すなわち、ａ及びｂの位置でのその対応するアミノ酸）を変異させることにより導入される。さらに、導入されたリポペプチドのＣ末端及び／又はＮ末端配列が切断され、２８未満のアミノ酸を有する、すなわち２４〜２７個のアミノ酸を含むリポペプチド組が生成され、そしてＴ−２０の５〜２５の位置でのアミノ酸に対応する、すなわちＨＸＢ２株からのｇｐ４１の１３１〜１５１位置でのアミノ酸に対応する配列は、本発明の強力なＨＩＶインヒビターのコア配列（すおなわち、Ｐ５配列）であることが決定される。本特許のポリペプチドは、顕著な配列構造特性を有し、Ｃ末端に結合される親油性化合物を有する化学薬剤を有し、そして標的配列に結合する、著しく強化された能力、ＨＩＶ（ＨＩＶ−１及び／又はＨＩＶ−２）及び／又はＳＩＶに対する著しく強い阻害活性、及び細胞−細胞融合、ウィルス侵入、及びＨＩＶエンベロープタンパク質（Ｅｎｖ）により介在される感染を阻害する非常に強力な能力を有する。本発明のリポペプチドの抗ＨＩＶ活性は、Ｔ−２０の抗ＨＩＶ活性よりも、数千倍又は数万倍も高く、そしてまた、より高い活性を有する抗ＨＩＶリポペプチド、例えばＣ３４−Ｃｈｏｌ、ＬＰ−１１、ＬＰ−１９、等の抗ＨＩＶ活性よりも有意に高い。一方、本発明のリポペプチドは、安定した長時間作用する効果、容易な合成及び低コストなどの多くの利点を有する。本発明のリポペプチドは、種々のＨＩＶ−１サブタイプ（例えば、Ａ，Ｂ、Ｃ、Ａ／Ｅ及びＢ／Ｃサブタイプ）、Ｔ−２０耐性株及びサル免疫不全ウィルス（ＳＩＶ）に対する非常に強い阻害活性を有する。
【図面の簡単な説明】
【００４９】
【図１】図１は、ＨＩＶ融合タンパク質ｇｐ４１及びポリペプチドベースの膜融合インヒビターの構造及び機能を示す。ここで、ＦＰはｇｐ４１融合ペプチドを言及し；ＮＨＲはＮ末端反復配列を言及し；ＣＨＲはＣ末端反復配列を言及し；そしてＴＭはトランスメンブラン領域を言及する。矢印により示した位置は、「Ｍ−Ｔフック」位置又はトリプトファンに富むモチーフ（ＴＲＭ）位置である。ＮＨＲポリペプチドのＮ３６及びＮ３９配列は、ｇｐ４１の模式図の上にあり、そしてＴ−２０耐性部位及び疎水性ポケット形成部位はそれぞれマークされ、そしてＣＨＲの配列、及びＣＨＲ配列に基くインヒビターの配列は、ｇｐ４１の模式図の下にあり、ここでＭ−Ｔ及びＰＢＤ配列は下線が引かれ、ＴＲＭ配列は斜体で示され、そして本発明のポリペプチド配列の変異アミノ酸は太字で示される。図中のすべてのポリペプチド又はリポペプチドのアミノ酸は、アミノ末端でのアセチル化修飾（Ａｃ−）及びカルボキル末端でのアミド化修飾（−ＮＨ２）を有する。
【００５０】
【図２】図２は、ＨＩＶ膜融合インヒビターの配列構造及びそれらの抗ウィルス活性を示す。ここで、Ｔ−２０のＴＲＭ配列は、斜体で示され、Ｍ−Ｔフック及びＰＢＤ配列は下線が引かれている。ポリペプチドリンカーアームにおいては、ＡＨＸは６−アミノカプロン酸を言及し、ＡＥＥＡは８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸を意味し、ＰＥＧ４、ＰＥＧ８及びＰＥＧ１２は異なる長さのグリコールを言及し、ここでＰＥＧ４は、Ｆｍｏｃ−ＮＨ−ＰＥＧ４−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨであり、ＰＥＧ８は、Ｆｍｏｃ−ＮＨ−ＰＥＧ８−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨであり、そしてＰＥＧ１２は、Ｆｍｏｃ−ＮＨ−ＰＥＧ１２−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨである。Ｃ１６はパルミチン酸を表し、Ｃ１８はステアリン酸を表し、Ｃｈｏｌはコレステロールを表し、ＤＨＳはジヒドロスフィンゴシンを表し、ＴｏｃはビタミンＥを表し、Ｃ１２はドデカン酸（ラウリン酸）を表し、そしてＣ８はオクタン酸（カプリル酸）を表す。ＮＬ４−３擬似ウィルスは、ｇｐ４１とＤ３６Ｇの変異体である。実験を３回、反復し、平均ＩＣ５０値を計算する。いくつかの強力なリポペプチドは太字で示されている。「ＨＸＢ２−細胞融合」は、ＨＩＶ−１により介在される細胞融合を阻害する実験結果を表し、「ＮＬ４−３の侵入」は、ＨＩＶ−１擬似ウィルスにより介在される細胞侵入を阻害する実験結果を表し、そして「ＪＲＣＳＦの複製」は、ＨＩＶ−１複製の阻害の結果を表す。
【００５１】
【図３】図３は、種々のサブタイプのＨＩＶ−１株に対するＨＩＶ膜融合インヒビターの阻害効果を示す。実験は３回、反復され、そして平均ＩＣ５０値が計算される。
【００５２】
【図４】図４は、Ｔ−２０耐性変異株、ＨＩＶ−２株及びＳＩＶ株に対するＨＩＶ膜融合インヒビターの阻害効果を示す。Ｔ−２０耐性変異株及びＳＩＶ株は擬似ウィルスであり、そしてＨＩＶ−２株は感染性ＲＯＤ株である。実験は３回、反復され、そして平均ＩＣ５０値が計算される。
【００５３】
【図５】図５は、ＨＩＶ膜融合インヒビターの注射後、短尾ザルの血清における抗ウィルス活性を示す。図においては、Ｍ２４８、Ｍ２４９、Ｍ２５０、Ｍ２５３及びＭ２５４は、短尾ザルのシリアル番号である。図５においては、Ａは、Ｔ−２０の注射後、短尾ザルの血清における抗ウィルス活性を示し；Ｂは、ＬＰ−１９の注射後、短尾ザルの血清における抗ウィルス活性を示し；Ｃは、ＬＰ−５１の注射後、短尾ザルの血清における抗ウィルス活性を示し；Ｄは、ＬＰ−５２の注射後、短尾ザルの血清置ける抗ウィルス活性を示し、Ｅは、ＬＰ−８０の注射後、短尾ザルの血清における抗ウィルス活性を示し；Ｆは、血清におけるインヒビターの抗ウィルス活性の比較結果を示す。
【００５４】
【図６】図６は、ＨＩＶ膜融合インヒビターとＮＨＲとの間の相互作用の円偏光二色性分析の結果を示す。インヒビターの配列構造は、本発明の図２におけるそれらの配列構造と同じであり、ここで本発明の強力なリポペプチドは、太字でマークされている。インヒビター及びＮ３９ポリペプチドを、ｐＨ７．２でのリン酸緩衝溶液（ＰＢＳ）に溶解し、１０μＭの最終濃度に達する。
【００５５】
【図７】図７は、ＮＨＲとＴ−２０又は代表的リポペプチドとの間の相互作用の円偏光二色性分析の結果を示す。図７においては、ＡはＣＤスキャン結果を示し；Ｂは温度スキャン結果を示す。
【００５６】
【図８】図８は、Ｔ−２０及び代表的リポペプチド自体の二次構造分析の結果を示す。図８においては、Ａ及びＢは、それぞれ、１０μＭでのインヒビターのＣＤスキャン及び温度スキャン結果を示し；Ｃ及びＤは、それぞれ、２０μＭでのインヒビターのＣＤスキャン及び温度巣居案結果を示し；そしてＥ及びＦは、それぞれ、４０μＭでのインヒビターのＣＤスキャン及び温度スキャン結果を示す。
【００５７】
【図９】図９は、ラットにおける８ＬＰ−８０薬物動態分析の結果を示す。図９においては、Ａは、投与後のＬＰ−８０の血清薬物濃度の検出結果を示し；Ｂは、ＬＰ−８０の代謝動態パラメーターを示し、ここでＴ１／２は、最終半減期を示し、Ｃｍａｘは、ピークの濃度を示し、Ｔｍａｘは、ピークまでの時間を示し、ＡＵＣ（０−２１６ｈ）は曲線下の面積（０−２１６ｈ）を示し、Ｖｚは、見掛けの体積分布を示し、ＣＬは、クリアランスを示し、ＭＲＴは平均滞留時間を示し、そしてＦａｂｓは、絶対成分利用能である。
【００５８】
【図１０】図１０は、サル感染モデルにおけるＬＰ−８０の治療効果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００５９】
本発明の実施形態は、実施例を参照して以下に詳細に説明されるが、当業者は、以下の実施例が本発明を説明するためだけであり、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではないことを理解するであろう。実施例に条件が示されていない場合、実施例は、従来の条件又は製造業者により推薦される条件下で実施される。本明細書において使用される試薬又は機器は、その製造者は示されていないが、市販されている従来の製品である。以下の実施例におけるすべてのポリペプチドのアミノ酸は、Ｌ形アミノ酸である。
【実施例】
【００６０】
実施例１：リポペプチドの調製
この実施形態に提供されるリポペプチドの構造式は以下であった：Ａｃ−Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ２１Ｘ１７Ｘ１８Ｘ１９Ｘ２０Ｘ２６Ｘ２７Ｘ２８Ｚ−ＮＨ２、ここでＸ１−Ｘ２８は、ＨＩＶ−１株ＨＸＢ２からのｇｐ４１の配列の１２７〜１５４の位置でのアミノ酸に対応するポリペプチド配列（ＹＴＳＬＩＨＳＬＩＥＥＳＱＮＱＱＥＫＮＥＱＥＬＬＥＬＤＫ）を示し、ここでＸ１は１２７の位置でのＹに対応し、そしてＸ２は１２８の位置でのＴに対応し、Ｘ３は１２９の位置でのＳに対応し、・・・Ｘ２８は１５４の位置でのＫに対応した。多数の突然変異により得られた新規配列は、強力なインヒビターの構成要素であった。代表的なペプチドは、ＬＰ−５０、ＬＰ−５１、ＬＰ−５２、ＬＰ−８０、ＬＰ−８３、ＬＰ−８４、ＬＰ−８５、ＬＰ−８６及び ＬＰ−８７、等を含んだ。Ｘ１−Ｘ２８の定義は、式Ｉにおけるそれらの定義と同じであり、Ｚは親油性化合物であり、Ａｃはアセチル基であり、そしてＮＨ２はアミノ基であった。
【００６１】
この実施例においては、図２に示されるようなリポペプチド又はポリペプチドを合成し、ここで各リポペプチド又はポリペプチドのアミノ末端を、アミノ末端保護基としてアセチル基により連結し、そしてカルボキシル末端を、カルボキシル末端保護基としてアミノ基により連結した。
【００６２】
ここで、パルミチン酸によるポリペプチドの修飾（パルミチン酸修飾リポペプチド：ＬＰ−４０、ＬＰ−４１、ＬＰ−４２、ＬＰ−４３、ＬＰ−４４、ＬＰ−４５、ＬＰ−５０、ＬＰ−５１、ＬＰ−５２、ＬＰ− ５３、ＬＰ−５４、ＬＰ−５５、ＬＰ−５６、ＬＰ−５７、ＬＰ−５８、ＬＰ−５９、ＬＰ−６０、ＬＰ−６１、ＬＰ−６２、ＬＰ−６３、ＬＰ−６４、ＬＰ−６５、ＬＰ−６６、ＬＰ−６７、ＬＰ−６８、ＬＰ−６９、ＬＰ−７０、ＬＰ−７１、ＬＰ−７２、ＬＰ−７３、ＬＰ−７４、ＬＰ−７５、ＬＰ−１１、ＬＰ−１９、Ｃ３４−Ｃ１６）、ステアリン酸によるポリペプチドの修飾（ステアリン酸修飾リポペプチド：ＬＰ−８０、ＬＰ−８８、ＬＰ−８９、ＬＰ−９０、ＬＰ−９１、ＬＰ−９２）、ジヒドロスフィンゴシンによるポリペプチドの修飾）ジヒドロスフィンゴシン修飾リポペプチド：ＬＰ−８４、ＬＰ−８７）、ビタミンＥによるポリペプチドの修飾（ビタミンＥ修飾リポペプチド：ＬＰ−８５）、ドデカン酸によるポリペプチドの修飾（ドデカン酸修飾リポペプチド：ＬＰ−８１）、及びオクタン酸によるポリペプチドの修飾（オクタン酸修飾リポペプチド：ＬＰ−８２）を、ポリペプチドのＣ末端でのリシン（Ｌｙｓ）の側鎖アミノ基とのそのアミド化反応により実施した；背景技術に列挙される文献１８及び２７を参照のこと。以下では、ＬＰ−５２及びＬＰ−８０を、上記リポペプチドの合成を説明するための例として取り上げた。
【００６３】
使用された化学試薬、例えばリンクアミドＭＢＨＡ樹脂、各種Ｆｍｏｃアミノ酸、塩化パルミトイル、塩化ステアロイル、コハク酸ビタミンＥ、Ｄ−エリトロ-ジヒドロスフィンゴシン、Ｎ、Ｎ'−ジスクシンイミジルカーボネート、Ｎ、Ｎ'−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、エタンジチオール（ＥＤＴ）、ニンヒドリン、ヘキサヒドロピリジン（ＰＩＰＥ）、フェノール、Ｎ、Ｎ'−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、クロマトグラフィー的に純粋なアセトニトリル、等はすべて、主要な化学試薬サプライヤーから購入し、そして使用前、さらに精製しなかった。
【００６４】
ポリペプチドの合成：合成を、手動Ｆｍｏｃ固相合成法を用いて、出発材料としてリンクアミドＭＢＨＡ樹脂（０．３４ｍモル／ｇの置換定数）により、Ｃ末端からＮ末端間で実施した。リンク樹脂上のＦｍｏｃ保護基を、２５％ヘキサヒドロピリジン／ＤＭＦ（体積比）により除去し、そして次に、樹脂を２当量のＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）−ＯＨ／ＨＯＢｔ／ＤＩＣをグラフトし、最初のアミノ酸樹脂をＣ末端で導入した。その後、Ｎ末端Ｆｍｏｃ保護基を、２５％ヘキサヒドロピリジン／ＤＭＦ（体積比）により再び除去し、Ｎ末端を遊離アミノ基にした。種々のアミノ酸残基をその手段により順次結合した。使用された材料及びその量は以下の通りであった：Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ （３当量）、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ （３当量）、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（３当量）、 Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ （３当量）、 Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ （３当量）、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ （３当量）、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ  （３当量）、  Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ  （３当量）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ （Ｔｒｔ）−ＯＨ （３当量）、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ （３当量）、 Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ （３当量）、 Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ （３当量）、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ （３当量）、 Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ （３当量）、 Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ （３当量）、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ （３当量）、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ （３当量）、 Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ （３当量）、 Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ （３当量）、 Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ （３当量）、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ （３ 当量）、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ （ＯｔＢｕ） −ＯＨ （３ 当量)、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ （３ 当量）、 Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ （３当量）、 Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ （３当量）、 Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ （３当量）、 Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ （３当量）。最後に、Ｎ末端を、アセチル化（３当量のＡｃ２Ｏ、６当量のジイソプロピルエチルアミン）によりエンドキャップし、主鎖の合成を完結した。各工程の反応時間に以下の通りであった：８分間の保護解除、２回：６０分間の通常のアミノ酸のグラフト。
【００６５】
上記反応の各工程の後、樹脂を６回以上、ＤＭＦにより洗浄する必要があり、そして反応をカイザー試薬により制御した。アミノ酸の縮合反応が不完全である場合、目的の所望するペプチドを得るまで、縮合をもう一度、反復した。
【００６６】
ポリペプチドの修飾：樹脂を、２％ヒドラジン水和物／ＤＭＦ溶液（体積比）により処理し、Ｃ末端Ｌｙｓの側鎖Ｄｄｅ保護基を除去し、そして次に、３当量の塩化パルミトイル又は塩化ステアロイル及び６当量のジイソプロピルエチルアミンと共に混合し、Ｃ末端Ｌｙｓの側鎖アミノ基とのアミド化反応を行い（６０分）、それにより、Ｃ末端Ｌｙｓ残基のパルミトイル化修飾（ＬＰ−５２）、又はステアロイル修飾（ＬＰ−８０）を達成した。ジヒドロスフィンゴシン（ＬＰ−８４、ＬＰ−８７）によるポリペプチドの修飾を、Ｌｙｓの側鎖Ｄｄｅ保護基を除去した後、最初に、Ｎ，Ｎ′−ジスクシンイミジルカーボネートを添加することにより実施し、そして反応を４８時間、実施した。ビタミンＥ（ＬＰ−８５）によるポリペプチドの修飾を、Ｌｙｓの保護された側鎖アミノ基のビタミンＥコハク酸塩による直接的なアミド化により実施した。
【００６７】
側鎖の切断及び保護解除：リポペプチドの合成を完結した後、樹脂を真空下で乾燥した。切断試薬（トリフルオロ酢酸：１，２−エタンジチオール：チオニソール：フェノール：Ｈ２Ｏ：トリイソプロピルシラン＝６８．５：１０：１０：５：３．５：１、ｖ／ｖ）を、乾燥された樹脂に添加し、そして切断を、３０℃で３時間、実施し、それにより、目的のポリペプチドを樹脂から切断し、そして側鎖保護基を切除した。濾過操作を実施した。炉液を、多量の冷無水ジエチルエーテルに添加し、ポリペプチドを沈殿し、次に遠心分離し、ポリペプチドを、ジエチルエーテルにより数回、洗浄し、そして乾燥し、粗リポペプチド生成物を得た。
【００６８】
リポペプチドの精製及び特徴付け：粗リポペプチド生成物の精製を、１０μｍの粒度及び１００オングストローム（Å）の孔直径を有する逆相Ｃ１８又はＣ４シリカゲルを含む１００×２５０ｍｍカラムを用いることにより、逆相高速液体クロマトグラフィー上で実施した。クロマトグラフィー操作条件：線形勾配溶出を行い、ここで溶離液は、移動相Ａ及び移動相Ｂで構成され、移動相Ａは、２０ｍＭの酢酸アンモニウム（ｐＨ４．５）及び５％アセトニトリルを含む水溶液であり、そして移動相Ｂは、８０％（体積％濃度）アセトニトリルの水溶液であり；流速は２５０ｍｌ／分であり；そして紫外線検出波長は２２０ｎｍであった。溶媒を凍結乾燥した後、ふわふわした状態のポリペプチドの純粋生成物を得、その化学構造を、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析により特徴づけ、そしてその純度を、分析高速液体クロマトグラフィー（Ｃ１８−１０×２５０ｍｍ、流速：１ｍｌ／分）により決定した。その結果は、分析されたリポペプチドが９５％以上の純度を有したことを示した。
【００６９】
コレステロール修飾リポペプチド（ＬＰ−８３、ＬＰ−８６、Ｃ３４−Ｃｈｏｌ）の合成方法を、背景技術に記載される参照文献１８及び２０を参照して実施した。最初に、ブロモ酢酸コレステリルを、文献に記載される技術的経路に従って合成し、そして次にポリペプチドのＣ末端システイン（Ｃｙｓ）の側鎖チオール基と、ブロモ酢酸コレステリルとの間で行われる高度に化学的に選択的なチオエーテル形成反応により、ポリペプチド鎖にグラフトし、すなわち、粗ポリペプチド生成物を従来の方法で合成した後、それを純粋ＤＭＳＯに溶解し、少量のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）に溶解された１当量のブロモ酢酸コレステロールをそれに添加し、そして次に、純粋なジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）をアルカリに添加し、ｐＨを調節した。反応を、ＲＰ−ＨＰＬＣにより追跡し、そして一般的に１時間で完結した。リポペプチドを精製し、そして上記のように特徴付け、そして得られたリポペプチドの純度は、９５％以上であった。
【００７０】
実施例２：強力なＨＩＶ膜融合インヒビターの同定
２．１  実験材料及び方法
図２における各リポペプチド及びポリペプチドを、試験物質として使用し、そしてその抗ウィルス活性を、細胞融合阻害アッセイ、擬似ウィルス阻害アッセイ、及びウィルス複製阻害アッセイにより、背景技術に列挙される参考文献１８に従って同定した。具体的な方法は、次の通りであった。
【００７１】
ＨＩＶ−１介在性細胞融合阻害アッセイ：エフェクター細胞（ＨＬ２／３細胞）及び標的細胞（ＴＺＭ−ｂ１細胞）は、国立衛生研究所（ＮＩＨ）のＡＩＤＳ試験プログラム（カタログ番号：それぞれ１２９４及び８１２９）により提供された。両細胞は付着細胞であり、そしてアンピシリン／ストレプトマイシン二重抗生物質及び１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含むＤＭＥＭ細胞培養培地において培養された。最初に、ＴＺＭ−６１を、９６ウェル細胞培養プレート（１×１０４個の細胞／ウェル）、そして３７℃及び５％ＣＯ２下で一晩培養した。試験物質を、ＤＭＥＭ細胞培養培地により３倍に希釈し、そしてＨＬ２／３エフェクター細胞（３×１０４個の細胞／ウェル）と共に混合し、次に、ＴＺＭ−ｂ１標的細胞に添加し、そして完全に融合するまで、６時間、さらに培養した。次に、ルシフェラーゼの活性（相対的蛍光単位、ＲＬＵ）を、Ｐｒｏｍｅｇａ社からのルシフェラーゼレポーター遺伝子キットを用いて、その説明書に従って決定した。各濃度での各サンプルの阻害割合を計算し、そして半分の有効阻害濃度（ＩＣ５０値）を、GraphPad Prismソフトウエア２．０１を用いて計算した。
【００７２】
ＨＩＶ−１擬似ウィルス介在性細胞侵入阻害アッセイ：基本的工程は以下の通りであった：（１）ＨＩＶ−１擬似ウィルスの調製：２９３Ｔ細胞を、ＨＩＶ−１株ＮＬ４−３のエンペロープタンパク質（Ｅｎｖ）を発現するプラスミド（すなわち、背景技術に列挙される参考文献１４の表２におけるＨＩＶ−１株ＮＬ４−３のＤ３６Ｇ変異体のエンベロープタンパク質（ＥＮＶ）をコードする遺伝子を、ベクターｐｃＤＮＡ３．１（−）中に挿入することにより得られる組換え発現プラスミド）及びＨＩＶ−１バックボーンプラスミドｐＳＧ３Δｅｎｖ（国立衛生研究所（ＮＩＨ）のＡＩＤＳ試薬プログラムにより提供される；カタログ番号１１０５１）により、細胞トランスフェクション試薬を用いることにより同時トランスフェクトし、３７℃及び５％ＣＯ２の細胞インキュベーターにおいて６時間インキュベートし、そして次に、培地を交換し、そして細胞をさらに、４８時間インキュベートした。擬似ウィルス粒子を含む細胞培養上清液を、ピペットで取り、そして０．４５μｍのフィルターにより濾過し、上清液を集め、次に、２０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を、それに添加し、最終溶液をポリプロピレン管に移し、そして容易な使用のために−８０℃で貯蔵するか、又はウィルス滴定に直接的にゆだねた。（２）ＨＩＶ−１擬似ウィルスの滴定：ウィルスを、９６ウェルプレートにおいて５倍に希釈し、そして８つの勾配を有する４つの複製ウェルを、１００μｌの最終体積に設定した。ＴＺＭ−ｂ１細胞をトリプシン処理し、そして計数し、そして細胞を、ＤＭＥＭ完全培地により１×１０５個の細胞／ｍｌに希釈し；ウェル当たり１００μｌの細胞希釈溶液（１５μｇ／ｍｌのＤＥＡＥ−デキストランを含む）を添加し、そして３７℃で、及び５％ＣＯ２下で４８時間、培養した。次に、９６ウェルプレートを、細胞培養インキュベーターから取り出した。上清液をウェルから廃棄した。各ウェルに、３０μｌの細胞溶解物を添加し、そして１０分後、１００μｌのルシフェラーゼ検出試薬を添加した。１００μｌの液体を各ウェルからピペットで取り、そして対応する９６ウェル白色プレートに添加し、そしてルミネッセンス値を、マイクロプレート光度計により読み取った。ウィルス力価を、Ｒｅｅｄ−Ｍｕｅｎｃｈ方法により計算した。（３）抗ウィルス活性アッセイ：試験物質をＤＭＳＯに溶解し、そして細胞培養溶液により３倍に希釈し、そして５０μｌの最終体積で９６ウェルプレートに配置した。５０μｌのＤＭＥＭ培地を、負の対照として試験物質の代わりに使用した。各ウェルに、１×１０５個の細胞／ｍｌの濃度で、１００μｌのＴＺＭ−ｂ１標的細胞溶液（１５μｇ／ｍｌのＤＥＡＥ−デキストランを含む）を添加し、そして次に、５０μｌ（ウェル当たり）１００のＴＣＩＤ５０に対応する）の上記で得られたＨＩＶ−１擬似ウィルスを添加した。３７℃で５％ＣＯ２下での４８時間インキュベーションの後、各ウェルの相対光単位（ＲＬＵ）を、ルシフェラーゼ検出試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いることにより決定した。阻害割合（％）及びＩＣ５０値を計算した。
【００７３】
ＨＩＶ−１複製阻害アッセイ：ＨＩＶ−１株ＪＲＣＳＦをコードする分子クローニングプラスミドｐＹＫ−ＪＲＣＳＲは、ＮＩＨのＡＩＤＳ試薬プログラム（カタログ番号２７０８）により提供された。２９３Ｔ細胞を、トランスフェクション試薬を用いることにより、ｐＹＫ−ＪＲＣＳＦによりトランスフェクトし、そして３７℃及び５％ＣＯ２下で６時間、細胞インキュベーターにおいてインキュベートし；次に、培地を交換し、そして細胞を４８時間、さらにインキュベートした。ＪＲＣＳＦウィルス粒子を含む細胞培養上清液を静かにピペットで取り、そして０．４５μｍのフィルターにより濾過し、上清液を集め、次に、２０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）をそれに添加し、そして最終溶液を、ポリプロピレン管に移し、そしてすぐに使用できるように−８０℃で貯蔵するか、又はウィルス滴定に直接ゆだねた。ウィルス滴定は、ＨＩＶ−１擬似ウィルスの上記滴定と同じであった。抗ウィルス活性を検出するために、試験物質をＤＭＳＯに溶解し、そして細胞培養溶液により３倍に希釈し、そして５０μｌの最終体積で９６ウェルプレートに配置した。５０μｌのＤＭＥＭ培地を、負の対照として試験物質の代わりに使用した。各ウェルに、１００μｌのＴＺＭ−ｂ１標的細胞溶液（１０５個の細胞／ｍｌを有し、そして１５μｇ／ｍｌのＤＥＡＣ−デキストランを含む）を添加し、そして次に、５０μｌ（１００のＴＣＩＤ５０／ウェル）の上記で得られたウィルスを添加した。３７℃及び５％ＣＯ２下での４８時間のインキュベーションの後、各ウェルの相対光単位（ＲＬＵ）を、ルシフェラーゼ検出試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて決定し。阻害割合（％）及びＩＣ５０値を計算した。
【００７４】
２．２  実験結果及び分析
２．２．１  Ｔ−２０ベースのリポペプチド（ＬＰ−４０）は強い抗ウィルス活性を有した。
強力な膜融合インヒビターをスクリーニングし、そして同定するために、本発明は、ＮＨＲポケット結合ドメイン（ＰＢＤ）を含まないポリペプチド薬物Ｔ−２０が設計鋳型として使用される新規方法を開発した。ＨＩＶ−１介在性細胞融合、擬似ウィルス侵入及びウィルス複製に対するインヒビターの阻害活性を、３つの抗ウィルスアッセイを用いて評価した（図２）。最初に、Ｔ−２０のＣ末端で８個のアミノ酸を直接欠失することにより、ＴＲＭモチーフを含まないポリペプチドＴ２０−ＴＲＭを合成し、そして２０００ｎＭの高濃度で有意な抗ウィリル活性を有さないことを見出し、これは、Ｔ−２０の機能においてＴＲＭの重要な役割を示した。さらに、リポペプチドＬＰ−４０を、パルミチン酸（Ｃ１６）によりＴ−２０のＴＲＭを置換することにより合成した。ＬＰ−４０は、Ｔ−２０に比較して、有意に改善された抗ウィルス活性を有し、そしてＨＸＢ２介在細胞融合、ＮＬ４−３擬似ウィルス侵入及びＪＲＣＳＦ複製に対するその阻害活性が、それぞれ、Ｔ−２０のその活性の約５９、２１及び１８倍であることが驚くべきことには見出され、これはＴ−２０のＴＲＭに対する親油性化合物の置換がポリペプチドの抗ウィルス活性を有意に改善し、そしてこれが、ＨＩＶ膜融合インヒビターを設計するための重要な戦略であり得ることを示した。
【００７５】
２．２．２  リンカーアームの付加がＬＰ−４０の抗ウィルス活性の有意な低下をもたらした。
本発明者は、以前に、ＮＨＲポケットを標的化する短いペプチド（ＨＰ２３又は２Ｐ２３）の修飾に基いて１組の高い活性の抗ＨＩＶリポペプチドを設計し、そしてポリペプチドのＣ末端への脂質化合物Ｃ１６、コレステロール及びジヒドロスフィンゴシンの直接結合が、ポリペプチドの抗ＨＩＶ活性の有意な低下もたらし、他方では、ポリペプチド配列と化合物修飾因子との間へのリンカーの導入が、ポリペプチドの活性の有意な上昇をもたらし、そして抗ウィルス活性がリンカーアームの長さの上昇と共に高められたことを見出した（背景技術に列挙される参考文献１８及び３０を参照のこと）。最終的に設計された高活性リポペプチド、例えばＬＰ−１１及びＬＰ−１９は長いＰＥＧ８リンカーアームを有し、このことは、リンカーアームの付加がリポペプチドの立体的障害を克服し、機能を促進することを示唆する。ＬＰ−４０の活性をさらに改善するために、ＬＰ−４１、ＬＰ−４２、ＬＰ−４３、ｌＰ−４４及びＬＰ−４５の５つのリポペプチドを、設計し、そして合成し、それらは、リンカーアームとしてＡＨＸ、ＡＥＥＡ、ＰＥＧ４、ＰＥＧ８及びＰＥＧ１２をそれぞれ付加されている（図２）。驚くべきことには、リンカーアームの付加は、リポペプチドの活性の有意な低下をもたらし、そしてその活性の低下は、リンカーアームの長さの上昇と共に顕著になり、これはＨＰ２３及び２Ｐ２３ベースのリポペプチドの結果とは正反対であった。それらの結果は、ＨＰ２３及び２Ｐ２３のベースのリポペプチドが、Ｔ−２０ベースのリポペプチドと比較して、異なる作用の機構を有し、そしてこれが、ＮＨＲでのそれらの異なる結合部位による可能性があることを示唆する。
【００７６】
２．２．３  イオン対の付加がＬＰ−４０の抗ウィルス活性の非常に有意な上昇をもたらした。
本発明はさらに、イオン対を導入することにより、ＬＰ−４０の螺旋構造及び抗ウィルス活性を促進することを試みた。本技術においては、「塩橋構造」の形成に寄与するＥＥ＊＊ＫＫアミノ酸残基が、ポリペプチド配列の非ＮＨＲ結合表面（すなわち、ｂ、ｃ及びｆ、ｇの位置）でアミノ酸を変異させることにより導入された。図１からわかるように、ＬＰ−４０ポリペプチド配列における１１のアミノ酸を、Ｅ又はＫにより置換し、それにより、３対のＥＥ＊＊ＫＫモチーフを、ｉ及びｉ＋４の位置で導入し、そして合成されたリポペプチドを、ＬＰ−５０と命名した。ＬＰ−５０の阻害活性を、３種の抗ウィルスアッセイにより決定し、そしてその結果は信じられないものであった。図２に示されるように、細胞融合、擬似ウィルス及び複製ウィルスを阻害するためのＬＰ−５０のＩＣ５０の値は、それぞれ、２１ｐＭ、７ｐＭ及び２３ｐＭであり、そしてそれぞれ、Ｔ−２０の１１５１倍、１３４５倍及び２２６倍であり、そしてＬＰ−４０の２０倍、６３倍、及び１２倍であった。従って、イオン対の導入は、「塩橋構造」を形成することによりリポペプチドの螺旋構造の安定性を高めることができ、それにより、リポペプチドの抗ウィルス活性を高度に高めた。これは、続く円偏光二色性アッセイにより確かめられた（下記実施例７の実験結果を参照のこと）。
【００７７】
２．２．４  ＨＩＶ−２／ＳＩＶアミノ酸残基の付加がさらに、さらに、ＬＰ−５０の活性を改善した。
ＬＰ−５０の抗ウィルス活性をさらに改善するために、本発明はさらに、ポリペプチドのＮＨＲ結合表面、すなわちａ及びｄの位置、又は隣接位置で、ＨＩＶ−２及び／又はＳＩＶ由来の対応するアミノ酸残基を導入することにより、リポペプチドＬＰ−５１及びＬＰ−５２を合成することを試みた。突然変異されたアミノ酸を、図１に示した。ＬＰ−５１及びＬＰ−５２のポリペプチド配列は、ｇｐ４１の１０個の元のアミノ酸残基のみを保持し、そしてその２８％未満がＴ−２０の配列と同一であった。抗ウィルスアッセイの結果は、ＬＰ−５１の活性はＬＰ−５０の活性に匹敵し、そしてＨＩＶ−１株ＨＢＸ２介在性細胞融合、ＮＬ４−３擬似ウィルス及び複製ＪＲＣＳＦウィルスに対するＬＰ−５２の阻害活性がそれぞれ、約２倍、２倍及び５倍、さらに改善されたことを示した。Ｔ−２０と比較して、３つのアッセイシステムにおけるＨＩＶ活性に対するＬＰ−５２の阻害活性は、それぞれ、Ｔ−２０の活性の１８５９倍、２３５３倍及び１０３８倍であった。従って、ＬＰ−５０、ＬＰ−５１及びＬＰ−５２は非常に強力なＨＩＶ膜融合インヒビターであったことが結論づけられ得た。
【００７８】
２．２．５  有能な抗ＨＩＶリポペプチドのコア配列の同定
上記強力なＨＩＶインヒビターのポリペプチド配列は、２８個の長さのアミノ酸であった。短い配列を含むリポペプチドを設計するための可能性及びキー配列を同定するためには、本発明においては、ＬＰ−４０に基くＣ末端切断リポペプチドＬＰ−５３を最初に合成し、そしてＬＰ−５０に基くＣ末端切断リポペプチドＬＰ−５４を合成し、そしてその抗ウィルス活性が著しく低められたことが見出された（図２）。さらに、ＬＰ−５５及びＬＰ−５６を、鋳型としてＬＰ−５２を用いることにより合成し、ここでＬＰ−５６は、Ｃ末端で３つのアミノ酸残基（ＬＥＲ）を置換するためのリンカーアームとしてＡＥＥＡを含んでいた。抗ウィルスアッセイは、ＨＸＢ２−細胞融合に対するＬＰ−５５及びＬＰ−５６の阻害活性は本質的に変わらなかったが、ＮＬ４−３及びＪＲＣＳＦ感染に対するそれらの阻害活性は低められた（約２倍）ことを示した。それらの実験結果は、リポペプチドのＣ末端での３つのアミノ酸残基（ＬＥＫ）が抗ウィルス活性において重要な役割を果たすことを示した。
【００７９】
１組のＮ末端切断リポペプチド（ＬＰ−６０〜ＬＰ−６８）をさらに合成した。抗ウィルスアッセイは以下のことを明らかにした：ＬＰ−５０に基く２つの切断リポペプチド、すなわちＬＰ−６０及びＬＰ−６１の活性がまた有意に低められたが；しかし驚くべきことには、ＬＰ−５２に基く切断リポペプチド、すなわちＬＰ−６２、ＬＰ−６３及びＬＰ−６５の活性は、ＬＰ−５２のその活性と等しく、そして２５のアミノ酸を含むＬＰ−６４の活性、特に細胞融合に対する阻害活性は有意に低められた。研究によれば、さらなるＮ末端切断がリポペプチド（ＬＰ−６６、ＬＰ−６７）の活性の有意な低下、又はさらに、その抗ウィルス能力の損失（ＬＰ−６８）をもたらしたことが判明した。ＬＰ−６９を、ＬＰ−６５に基いてＣ末端ＬＥＫを切断することにより合成した。ＬＰ−６９の抗ウィルス活性は有意に低められたが、それは、わずか２１個のアミノ酸を有するリポペプチドと比較して、ウィルスに対する強力な阻害活性をまだ有した。それらの研究の結果は、２１個のアミノ酸からなる配列「ＩＥＥＬＸ９ＫＫＸ１２ＥＥＱＱＫＫＮＥＥＥＬＫＫ」が、Ｔ−２０の５〜２５の位置でのアミノ酸に対応する、すなわちＨＩＶ−１株ＨＸＢ２からのｇｐ４１の１３１〜１５１の位置でのアミノ酸配列（ＩＨＳＬＩＥＥＳＱＮＱＱＥＫＮＥＱＥＬＬＥ）に対応する、本発明の強力なリポペプチドのコア配列であったことを示した。コア配列のＮ末端へのＷＥＱＫ（又はＬＥＡＮ又はＹＴＳＬ）の付加、又はＬＥＫのそのＣ末端への付加は、抗ウィルス活性を効果的に高め；アミノ酸モチーフが両末端で保持される場合（例えば、ＬＰ−５２）、そのようなポリペプチドの活性はさらに改善され得る。
【００８０】
結果はまた、ＬＰ−５７の抗ウィルス活性が、ＬＰ−５５のその活性に比較して、約１５〜１５０倍、低められたことを示し、このことは、ＬＰ−５５の３個の末端アミノ酸ＬＫＫが重要であり、そして適切にさらに切断されなかったことを示し；ＬＰ−６６の抗ウィルス活性は、ＬＰ−６５のその活性よりも約５４〜１５８倍、低く、このことは、ＬＰ−６５の最初のアミノ酸（Ｉｌｅ）が重要であり、そして適切にさらに切断されなかったことを示す。同時に、２つの切断されたリポペプチドＬＰ−６５とＬＰ−６１との間の差異は、単に１つのアミノ酸（それぞれ、８の位置でのＳ及びＡ）であるが、しかしそれらの活性は、５〜９倍、異なり、このことは、ＳのＡによる置換が本発明の強力なリポペプチドのために非常に重要であったことを示唆する。
【００８１】
一方、強力な抗ウィルスリポペプチドの配列構造と機能との間の関係を明らかにするために、本発明において、１組のＮ末端伸長リポペプチド（図２におけるＬＰ−７０〜ＬＰ−７５）をさらに設計し、そして合成し、ここでＬＰ−７４はポケット結合ドメイン（ＰＢＤ）配合を含み、ＬＰ−７５はＰＢＤ配列及びＭ−Ｔフック形成配列の両者を含んだ。驚くべきことには、ポリペプチド配列がＮ末端に沿って伸長するにつれて、リポペプチドの抗ウィルス活性は高められなかったが、しかし低められ、そして特に、ＬＰ−７４及びＬＰ−７５の活性は有意に低められた。
【００８２】
２．２．６  強力な抗ＨＩＶリポペプチドの誘導体及びその抗ウィルス活性
強力な抗ＨＩＶリポペプチドの配列及び構造特異性を明らかにするために、本発明において、異なる鎖長の脂肪酸、コレステロール、ジヒドロスフィンゴシン及びビタミンＥを含む異なる親油性化合物により修飾されたリポペプチドを、設計し続け、そして合成した。抗ウィルスアッセイの結果は、図２に示された。ＮＬ４−３侵入及びＪＲＣＳＦ複製に対するステアリン酸（Ｃ１８）修飾ＬＰ−８０の阻害活性は、Ｃ１６修飾ＬＰ−５２のその活性よりもはるかに大きかったが、しかしドデカン酸（Ｃ１２）修飾ＬＰ−８１及びオクタン酸（Ｃ８）修飾ＬＰ−８２の阻害活性は有意に低められた。それらの４種のリポペプチドは、同じポリペプチド配列を有したが、しかしリポペプチドの阻害活性は、脂肪酸の長さにより決定された。従って、Ｃ１８及びＣ１６の鎖長を有する長い鎖の脂肪酸は、ポリペプチド配列を修飾するためにより適切であった。抗ウィルスアッセイの結果はまた、コレステロール（ＬＰ−８３及びＬＰ−８６）、ジヒドロスフィンゴシン（ＬＰ−８４及びＬＰ−８７）及びビタミンＥ（ＬＰ−８５）により修飾されたリポペプチドがまた、強い抗ウィルス効果を有したことを示した。さらに、Ｃ１８修飾された、Ｎ末端切断リポペプチドＬＰ−８８、ＬＰ−８９及びＬＰ−９０はまた、強力な抗ウィルス活性を有した。興味深いことには、２５個のアミノ酸を有するＬＰ−８９は、２４個のアミノ酸を有するＬＰ−９０よりも低い活性を有した。この現象は、Ｃ１６修飾ＬＰ−６４及びＬＰ−６５のその現象に類似した。従って、Ｎ末端リシン（Ｋ）は、コア配列に基く強力な短いポリペプチドには必要ではなかった。２１個のアミノ酸のコア配列に関しては、Ｃ１６及びＣ１８修飾リポペプチド（ＬＰ−６９及びＬＰ−９２）の活性は、実質的に同等であった。
【００８３】
一方、本発明において、ＬＰ−１１、ＬＰ−１９、Ｃ３４−Ｃｈｏｌ及びＣ３４−Ｃ１６を含むいくつかの対照リポペプチドの抗ウィルス活性を決定した（図２を参照のこと）。対照リポペプチドは、ＨＩＶ−１介在性細胞融合、侵入及び複製を効果的に阻害することができ、そしてその活性は、Ｔ−２０のその活性よりも有意に高かったが、しかし、本発明のいくつかの強力なリポペプチド、例えばＣ１６修飾ＬＰ−５２、ＬＰ−５５及びＬＰ−６５、及びＣ１８修飾ＬＰ−８０、ＬＰ−９０及びＬＰ−９１、等のその活性よりも有意に低かったことがわかった。
【００８４】
実施例３；ＨＩＶ−１の異なるサブタイプに対する強力なＨＩＶ膜融合インヒビターの阻害活性
ＡＩＤＳは主に、ＨＩＶ−１により引起され、そしてＡ−Ｄ、Ｆ−Ｈ、Ｊ及びＫサブタイプ、等を含む複数のサブタイプが、ウィルス変化のために生成された。それらの中で、Ａ、Ｂ及びＣサブタイプが、世界でＡＩＤＳ流行を引起す主要ウィルスであり、そしてＢ／Ｃ及びＡ／Ｅ組み換えウィルスは中国において主要なウィルスであった。強力なＨＩＶ膜融合インヒビターの活性をさらに評価するために、本発明において、国際的な代表株及び中国において現在流行しているＨＩＶ−１株を含む、３５のＨＩＶ−１擬似ウィルスグループを調製し、ここで前記株は、３つのサブタイプＡ株、８つのサブタイプＢ株、４つのサブタイプＢ′株、７つのサブタイプＣ株、１つのサブタイプＧ株、１つの組換えＡ／Ｃ株、５つの組換えＡ／Ｅ株、及び６つの組換えＢ／Ｃ株を含んだ。擬似ウィルス調製のために使用されるＥｎｖ発現プラスミドの中で、ＰＶＯ、Ｄｕ１５６及びＣＡＰ  ２１０．２．００．Ｅ８の調製のために使用されるＥｎｖ発現プラスミドが米国のＮＩＨのＡＩＤＳ試薬プログラムから入手されたことを除き、他のプラスミドは、中国医学アカデミー病原体生物学研究所のHe Yuxian教授の実験室により保存されていた；背景技術に列挙される参考文献１３、１４及び１８、及びChong et al. (Chong H, Yao X, Zhang C, Cai L, Cui S, Wang Y, He Y. Biophysical property and broad anti-HIV activity of Albuvirtide, a 3-maleimimidoproprotionic acid-modified peptide fusion inhibitor. PLoS One, 2012; 7 (3): e 32599)の文献を参照のこと。擬似ウィルス及び抗ウィルスアッセイの調製は、実施例２の実施例２．１（ＨＩＶ−１擬似ウィルス介在性細胞侵入阻害アッセイ）におけるそれらの調製と同じであった。比較及び分析のために、この実施例においては、上記３５の擬似ウィルスに対する、Ｔ−２０、 ＬＰ−４０、 ＬＰ−５０、 ＬＰ−５１、ＬＰ−５２、ＬＰ−５５、ＬＰ−６５、 ＬＰ−８０、 ＬＰ−８５、 ＬＰ−９０、及び対照リポペプチドＬＰ−１９、Ｃ３４−Ｃｈｏｌを含む１２のインヒビターの阻害活性を決定した。図３に示されるように、種々のタイプのＨＩＶ−１擬似ウィルスの阻害についてのＴ−２０、 ＬＰ−４０、 ＬＰ−５０、 ＬＰ−５１、ＬＰ−５２、ＬＰ−５５、ＬＰ−６５、 ＬＰ−８０、 ＬＰ−８５、及び ＬＰ−９０の平均ＩＣ５０値は、それぞれ、４１４１０ｐＭ、６３６９ｐＭ、４１ｐＭ、 ３３ｐＭ、 １６ｐＭ、３４ｐＭ、５２ｐＭ、 ６ｐＭ、 ４４ｐＭ及び １４ｐＭであった。異なるサブタイプのＨＩＶ−１に対する本発明の新しく合成されたリポペプチドの阻害活性が、Ｔ−２０のその活性よりも有意に高く、それは、Ｔ−２０の７倍、１１０倍、１２５５倍、２５８８倍、１２１８倍、７９６倍、６９０２倍、９４１倍及び２９５８倍であった。それらの中でＬＰ−８０は、ウィルスに対する最強の阻害活性を示し、そして３５の擬似ウィルスについての平均ＩＣ５０値は６ｐＭであり、そして多くの株についてのＩＣ５０値は、１ｐＭ未満でさえあった。種々のＨＩＶ−１擬似ウィルスを阻害するための対照ＬＰ−１９及びＣ３４−Ｃｈｏｌの平均ＩＣ５０値は、それぞれ４３９ｐＭ及び６６ｐＭであり、そしてその活性は、ＬＰ−５０、 ＬＰ−５１、 ＬＰ−５５、 ｌＰ−６５及びＬＰ−８５のそれらの活性よりも低く、そしてＬＰ−��２、ＬＰ−８０及びＬＰ−９０の活性よりも有意に低かった。ＬＰ−５２及びＬＰ−８０、ＬＰ−６５及びＬＰ−９０のＩＣ５０値を比較することにより、Ｃ１８修飾リポペプチドの抗ウィルス活性が、Ｃ１６修飾リポペプチドのその活性よりも卓越していることが明らかになった。
【００８５】
実施例４：Ｔ−２０耐性株に対する強力なＨＩＶ膜融合インヒビターの阻害活性
Ｔ−２０は、現在臨床使用が承認されている唯一のＨＩＶ膜融合インヒビターであるが、その活性は新世代のポリペプチドのその活性よりも低いだけではなく、また薬物耐性突然変異を容易に誘発し、しばしば、臨床治療の失敗につながる。本発明の強力なリポペプチドの抗ウィルスの広いスペクトル及び利点を完全に反映するために、ＮＨＲの共通Ｔ−２０耐性突然変異部位を担持するＮＬ４−３擬似ウィルスを、この実験例において調製した（図４に示されるように、図４における下付の株名は、背景技術に列挙される参考文献１４の表２における株名であった）。使用されるプラスミド及び擬似ウィルス及び抗ウィルス活性アッセイの調製方法は、本発明者により公開された文献（背景技術に列挙される参考文献１１、１２，、１４及び１８を参照のこと）及び上記実施例２及び３に記載されている。結果は図４に示された。代表的なＮＬ４−３Ｄ３６Ｇ変異体と比較して、野生型ＮＬ４−３ＷＴ自体は、Ｔ−２０に対する耐性を示し、その対応するＩＣ５０値は、それぞれ、１３．６５ｎＭ及び１５２．２３ｎＭであった。しかしながら、Ｔ−２０への単一又は二重変異を含む株の薬物耐性は、数倍、有意に高められた。この結果は、ＬＰ−４０に対するそれらのＴ−２０耐性株の感受性が改善されたことを示した。その実験結果から、Ｔ−２０耐性株に対する塩橋構造を形成するために、ＬＰ−４０に基いてイオン対を導入することにより設計されたリポペプチドＬＰ−５０の阻害活性が、数百又は数千倍、さらに改善されたことが見出された。ＨＩＶ−２／ＳＩＶ配列により修飾されたリポペプチドＬＰ−５１、ＬＰ−５２、ＬＰ−８０及びＬＰ−８５の耐性株を克服する能力は大幅に改善され、それは、ＬＰ−４０のその能力よりも何千倍から何万倍も優れていた。ＬＰ−５２、ＬＰ−５５とＬＰ−６５、ＬＰ−８０とＬＰ−９０とを比較することにより、以下のことが見出された：以前の抗ウィルス活性アッセイについて際立っていたことが示された、Ｃ末端切断リポペプチドＬＰ−５５及びＮ末端切断リポペプチドＬＰ−６５及びＬＰ−９０は、ＬＰ−５２及びＬＰ−８０のその活性に匹敵する、多数のＨＩＶ−１株に対する阻害活性を有したが、それらは、ＬＰ−５２ＬＰ−８０よりも、Ｔ−２０耐性変異体株に対してはるかに低い活性も示した。ＬＰ−５０、 ＬＰ−５１、ＬＰ−５２、ＬＰ−５５、ＬＰ−６５、 ＬＰ−８０、 ＬＰ−８５、及び ＬＰ−９０を含む、本発明の強力なインヒビターとしての代表的リポペプチドは、ほとんどのＴｌ−２０耐性株に対する有意に低められた阻害能力を有したが、しかしそれらはまだ、強い抗ウィルス活性を有し、特にＬＰ−５２及びＬＰ−８０の活性は野外ではまだ希少であったことは、特に強調する価値がある。この実施例はまた、ｇｐ４１のＮＨＲ配列がまだ、本発明の強力なリポペプチドの主要標的であることを１つの局面から明らかにした。
【００８６】
実施例５：ＨＩＶ−２及びＳＩＶに対する強力なＨＩＶ膜融合インヒビターの阻害活性
本発明の強力なリポペプチドの抗ウィルス利点をさらに反映するために、ＨＩＶ−２及びＳＩＶに対するそれらの阻害活性を、この実施例において決定した。使用される抗ウィルス活性アッセイの方法は、本発明者により公開された文献に記載されている（背景技術に列挙される参考文献１３及び３０を参照のこと）。ＨＩＶ−２株ＲＯＤ（ＨＩＶ−２ROD）の分子クローニングプラスミドｐＲＯＤは、ポルトガル、リスボン大学のＮｕｎｏ  Ｔａｖｅｉｒａ教授から提供され、そしてＳＩＶ株ＳＩＶｐｂｊ（ＳＩＶＰＢＪ）及びＳＩＶ２３９エンベロープタンパク質を発現するプラスミド（それぞれ、ｐＳＩＶｐｂｊ−Ｅｎｖ 及び ｐＳＩＶ２３９）は、Ｆｕｄａｎ大学のＸｕ  Ｊｉａｎｇｉｎｇ教授により提供された。感染性ＲＯＤの調製は、上記セクション２．１における感染性ＪＲＣＳＦの調製と同じであり、そして擬似ウィルスＳＩＶｐｂｊ及びＳＩＶ２３９を、上記実施例２及び３に記載されるのと同じ方法により調製した。結果は図４に示されており、これから、以下のことが分かった：ＨＩＶ−２及びＳＩＶ株に対するＴ−２０の阻害活性は極端に弱く、そしてＬＰ−４０の活性は単にわずかに改善された。しかしながら、ＬＰ−５０、 ＬＰ−５１、ＬＰ−５２、ＬＰ−６５、 ＬＰ−８０、 ＬＰ−８５、及び ＬＰ−９０を含む、決定された強力なポリペプチドは、ＨＩＶ−２及びＳＩＶの両者に対して極端に強力な阻害活性を有したことが理解された。従って、本発明の強力なリポペプチドは、ＨＩＶ−１の種々のサブタイプに対して非常に効果的であるのみならず、また、Ｔ−２０耐性株、ＨＩＶ−２及びＳＩＶ株に対しても非常に効果的であり、そして極端に強力で且つ広スペクトルの抗ウィルス活性を有した。ＬＰ−５２、ＬＰ−５５及びＬＰ−６５を比較することにより、Ｎ末端アミノ酸ＷＥＱＫの切断はＨＩＶ−２及びＳＩＶに対する阻害活性に対してほとんど効果をもたず、ところがＣ末端アミノ酸ＬＥＫの切断はその活性に有意に影響を及ぼしたことが見出された。
【００８７】
実施例６：強力なＨＩＶ膜融合インヒビターのインビボ抗ウィルス活性
最近の研究は、リポペプチドベースのＨＩＶ膜融合インヒビターが、抗ウィルス活性を改善したのみならず、またイオビボでの安定した代謝を示し、そして従って、それらは長い半減期を有したことを示した。本発明の強力なリポペプチドの適用価値及び薬物形成の利点をさらに実証するために、リポペプチドＬＰ−５１、ＬＰ−５２及びＬＰ−８０のインビボ抗ウィルス活性を、この実施例において主に分析し、そしてその方法は、本発明者により公開された文献に記載されており（背景技術に列挙される参考文献１８及び３０を参照のこと）、ここでインヒビターは皮下経路でサルに注射され、異なる時点での血液サンプルが収集され、そしてインヒビターの抗ウィルス活性がインビトロで測定され；この方法によれば、インヒビターのインビボ活性が学習され得るだけでなく、またそのインビボ安定性が間接的に反映された。上記の３つの強力なリボペプチドの他に、この実施例は、比較及び分析のために、２つの対照Ｔ−２０及びＬＰ−１９を含んだ。この特定の方法は以下の通りであった：６匹の短尾ザル（アカゲザル）を選択し、半分が雄で、半分が雌で、生後３〜４年で、３．４〜４．７ｋｇの体重であった。Ｔ−２０、ＬＰ−１９、ＬＰ−５１、ＬＰ−５２又はＬＰ−８０（すべての減菌蒸留水に溶解された）を、３ｍｇ／ｋｇ体重で皮下注射し、そして０．４ｍｌの静脈血サンプルを、注射の前（０時）、及びそれぞれ、注射の１、２、４、６、８、１２、１８、２４、３６、４８、６０及び７２時間後、集めた。ＬＰ−８０に関しては、上記の採血時点の他に、注射の９６、１２０、１４４及び１６８時間での４つの採血時点が加えられた。血清を、従来の方法に従って分離した。各インヒビターの注射間隔は、前の分析物の残留物がないことを確かめるために、２週以上であった。ＨＩＶ−１株ＮＬ４−３（ＮＬ４−３Ｄ３６Ｇ）に対する血清活性は、上記実施例の擬似ウィルスに基くアッセイの実験方法に従って測定された。血清を、３倍に希釈した。実験結果は図５に示されている。Ｔ−２０の皮下注射に関しては、阻害ピークは、注射の２及び４時間後で発生し、ここでＮＬ４−３感染性の５０％を阻害するための最大血清希釈倍数は、それぞれ４５倍、及び４６倍であり（図５のＡ）；ＬＰ−１９の皮下注射に関しては、阻害ピークは、注射の６及び８時間後で発生し、ここで最大血清希釈倍数は、それぞれ５３９６倍、及び４７２０倍であった（図５のＢ）。しかしながら、驚くべきことは以下のことであった：ＬＰ−５１又はＬＰ−５２の皮下注射に関しては、阻害ピークは、注射の４及び６時間後に発生し、最大血清希釈倍数は、それぞれ、ＬＰ−５１に関して、７００４８２倍及び５８４３８１倍であり、そしてＬＰ−５２に関しては、最大血清希釈倍数は、７００８０２倍及び６６９１１２倍であり（図５のＣ及びＤ）；そしてＬＰ−８０の皮下注射に関しては、阻害ピークは、注射の６及び８時間後で発生し、最大血清希釈倍数は、それぞれ４９１４０９倍及び５３７２０６倍であった（図５のＥ）。強力なリポペプチドの血清阻害ピークが、Ｔ−２０の血清阻害ピークの１１６７８〜１５２３５倍であり、そしてＬＰ−１９の血清阻害ピークの１００〜１３０倍（最高の値に従って計算された）であることがわかった。よりエキサイティングな結果は、３つのリポペプチドＬＰ−５１、ＬＰ−５２及びＬＰ−８０のインビボ長時間作用効果であり、それらは、それぞれ、注射の７２時間（３日）後でさえ長い血清阻害ピークを有し、その最大血清希釈倍数は、それぞれ１１２２、１８２及び１６１５７倍であった。特にＬＰ−８０の血清阻害ピークは、注射後９０時間（４日）で１９８０倍、注射後１２０時間（５日）及び注射後１４４時間（６日）で２１１倍で維持され、そしてその血清阻害ピークは、４時間でのＴ−２０のそのピークと同じであった（４６倍）（図５のＦ）。従って、本発明のポリペプチドは、強力であるだけでなく、また長期続いて効果的でもあった。
【００８８】
実施例７；強力なＨＩＶ膜融合インヒビターとＮＨＲ標的配列との相互作用
強力な抗ＨＩＶリポペプチドの作用メカニズムを調べるために、円偏光二色性（ＣＤ）分析を用いて、形成された複合体の二次構造（α−へリックス）及びへリックス安定性（Ｔｍ）を含む、インヒビターとＮＨＲ標的配列との間の相互作用を決定した。円偏光二色性分光光度計は、ＪＡＳＣＯ  Ｉｎｃ．によるＪａｓｃｏ−８１５であり、そしてアッセイ方法は、本発明者により公開された論文を参照した（背景技術に列挙される参考文献１８及び３０を参照のこと）。ＮＨＲ由来の標的配列ポリペプチドは、Ａｃ−ＳＴＭＧＡＡＳＭＴＬＴＶＱＡＲＱＬＬＳＧＩＶＱＱＱＮＮＬＬＲＡＩＥＡＱＱＨＬＬ−ＮＨ２であり、これは、Ｔ−２０が結合したＮＨＲ上の標的部位に対応した。Ｎ３９及びインヒビターを、リン酸緩衝溶液（ＰＢＳ）に別々に溶解し、２０μＭの濃度のＰＢＳ溶液（ｐＨ７．２）を調製した。Ｎ３９を、１：１の体積比でインヒビターと共に混合し（それぞれ１０μＭの最終濃度）、混合されたサンプルを３７℃で３０分間置き、完全に反応させ、そして次に、得られた複合体のへリックス含有量及びＴｍ値を、円偏光二色性分光光度計により測定した。装置のスキャン波長範囲は、１ｎｍの波長間隔で１９５−２６０ｎｍであり、そして３回のスキャンにより測定された値を平均した。ＣＤシグナルに基いて、ポリペプチドとへリックス含有量との間の相互作用を決定した。次に、ＣＤシグナル測定のためのサンプルを、温度スキャンサンプルセルに移し、ＣＤ装置のプログラムを、２２０ｎｍの検出波長及び２０〜９８℃のスキャン範囲を有する温度スキャンに設定し、そしてプログラムスキャンを行い、ＣＤシグナル対温度の曲線を得、これに基いて、Ｔｍ値を計算した。Ｔｍ値に基いて、インヒビター及びＮ３９の形成されたヘリカル構造の安定性を判断した。
【００８９】
ＣＤアッセイの結果を、図６に示した。Ｔ−２０がＮ３９と相互作用し、そして得られる複合体が４８．６％のへリックス含有率及び４３．９℃のＴｍ値を有することがわかったが、しかしながら、Ｔ２０−ＴＲＭとＮ３９との間の相互作用は非常に弱く、そして従って、Ｔｍ値は装置により検出できず、さらに、このことは、Ｔ−２０におけるＴＲＭの重要な役割を実証している。リポペプチドＬＰ−４０とＮ３９との間の相互作用は、有意に増強され、そして得られる複合体は、５７．７％のへリックス含有率及び５１．３℃のＴｍ値を有した。リンカーアームの付加は、へリックス含有率の低下をもたらしたが、しかしリンカーアームのほとんどは、Ｔｍ値に対する効果をほとんど有さず、そして最も長いリンカーアーム（ＰＥＧ１２）を有するＬＰ−４５のみが、有意に低められたＴｍ値を有した。驚くべきことには、ＥＥ＊＊ＫＫイオン対の導入が、リポペプチドの結合安定性を非常に増強し、これは、ＬＰ−５０／Ｎ３９複合体のＴｍ値が６３．３℃に高められたことを反映しており；そしてＨＩＶ−２／ＳＩＶアミノ酸の付加はさらに、リポペプチドの結合能力を高め、そしてＬＰ−５１／Ｎ３９及びＬＰ−５２／Ｎ３９複合体のＴｍ値はそれぞれ、７２℃及び７９．１℃であり、それらは、図７に示されるように、Ｔ−２０及びＬＰ−４０複合体のＴｍ値に比較して、有意に高められえた。従って、３つの強力な抗ウィルスリポペプチドが、標的配列、特にＬＰ−５２と非常に安定したヘリカル構造を形成することができた。さらに、ＬＰ−５２／Ｎ３９複合体はまた、最高のへリックス含有率（６３．８％）も有した。
【００９０】
この実施例において、リポペプチドのＣ末端又はＮ末端切断がリポペプチドのそれらの結合能力に種々の程度で影響を及ぼし、そしていくつかのリポペプチドはＴｍ値の低下を示し、そしていくつかはへリックス含有率及びＴｍ値の両方の低下を示したことがわかった。Ｃ末端切断リポペプチド（ＬＰ−５３〜ＬＰ−５９）のＴｍ値は有意に低められ、このことは、ＮＨＲへのリポペプチドの結合において、Ｃ末端での３つのアミノ酸（ＬＥＫ）の重要な役割を示唆している。強力な抗ウィルス活性を有するＬＰ−５５及びＬＰ−５６のＴｍ値もまた、有意に低められたが（７９．１℃から６３．１℃へ）、しかしＴｍ値はＬＰ−５３、ＬＰ−５４、ＬＰ−５７、ＬＰ−５８及びＬＰ−５９のそれらのＴｍ値よりもはるかに高まったことは、注目に値した。特に、ＬＰ−５８及びＬＰ−５９のＴｍ値は、低いヘリックス含有率のために決定され得なかった。Ｎ末端切断リポペプチド（ＬＰ−６０〜ＬＰ−６８）のＴｍ値もまた有意に低められた。ＬＰ−５２に基くＮ末端切断は、リポペプチド（ＬＰ−６２〜ＬＰ−６５）の結合安定性に影響を与えなかったが、しかしその対応する複合体のＴｍ値はまだ、７０℃以上であり、このことは、リポペプチドが強い結合能力をまだ有し、そしてこれが、それらが強い抗ウィルス能力を保持した理由であるかも知れないことを示唆する。２４個のアミノ酸配列を有するリポペプチドＬＰ−６５はまた、より高いヘリックス含有率（６３％）及びＴｍ値（７２．１℃）を有し、そしてさなる切断が対応するリポペプチド、例えばＬＰ−６６、ＬＰ−６７及びＬＰ−６８の結合能力に深刻な影響を及ぼし、それはそれらの抗ウィルスと一致したことは注目に値した。比較すると、Ｃ末端での３角アミノ酸（ＬＥＫ）の除去が結合安定性（Ｔｍ値）に及ぼす効果は、Ｎ末端での１〜４個のアミノ酸（ＷＥＱＫ）の除去の効果よりも有意であり、このことは、リポペプチドのＣ末端が標的への結合においてより重要な役割を果たしたことを示唆する。しかしながら、Ｃ末端及びＮ末端の両方でのアミノ酸が除去されたコア配列リポペプチドＬＰ−６９は、有意に低められた結合安定性、及びＬＰ−５２のＴｍ値よりも２８．１℃低い５１℃のＴｍ値を有した。
【００９１】
別の興味深い現象は、Ｎ末端延長リポペプチドが、ＬＰ−７０〜ＬＰ−７５の性能などの高められたＴｍ値を有したことであり、これはその抗ウィルス活性の低下と矛盾した。ＬＰ−７４及びＬＰ−７５がＮＨＲポケット結合ドメイン（ＰＢＤ）及びＭ−Ｔフックモチーフを含み、これがＮ３９との完全な一致を不可能にしたことは注目する必要がある。
【００９２】
この実施例の結果はまた、ステアリン酸（Ｃ１８）修飾リポペプチドＬＰ−８０がまた、Ｎ３９（Ｔｍ値＝７９℃）への強い結合安定性を有したことも示した。しかしながら、短鎖長脂肪酸により修飾されたリポペプチド、例えばＣ１２脂肪酸により修飾されたＬＰ−８１及びＣ８脂肪酸により修飾されたＬＰ−８２は、有意に低められたヘリックス含有率及び結合能力を有し、それらのＴｍ値はそれぞれ７４．１℃及び６５．１℃であり、そしてそれらの抗ウィルス活性はより有意に低められた（図２を参照のこと）。コレステロール修飾リポペプチドＬＰ−８３及びＬＰ−８６、ビタミンＥ修飾リポペプチドＬＰ−８５、ジヒドロスフィンゴシン修飾リポペプチドＬＰ−８４及びＬＰ−８７すべては、強力なヘリカル結合安定性を有し、これはそれらの抗ウィルス活性と一致した。同様に、ＬＰ−８０に基くＮ末端切断リポペプチド（ＬＰ−８８、ＬＰ−８９、ＬＰ−９０）はまた、強い結合能力、及びそれぞれ７６．５℃、７０℃及び７１．１℃のＴｍ値を有した。しかしながら、Ｃ末端ＬＥＫが除去されたリポペプチドＬＰ−９１、及び両末端で切断を有するコア配列リポペプチドＬＰ−９２は、有意に低められたヘリックス安定性、及びそれぞれ６１℃及び５５．１℃のＴｍ値を有した。
【００９３】
この実施例は、多数の実験結果により、インヒビターの配列構造、結合安定性及び抗ウィルス活性間の相互関係を明らかにし、そして本発明の強力なリポペプチドの作用メカニズムの理解のための重要な情報を提供した。特定のインヒビターの結合能力はその抗ウィルス活性と十分に一致しない場合もあるが、一般的に、本発明の強力なリポペプチドは、非常に高いＴｍ値を有した。この実施例はまた、そのようなリポペプチドの抗ウィルス活性が、そのリポペプチド配列、及びまた、その親油性化合物の性質にも依存することも実証した。
【００９４】
実施例８：強力なＨＩＶ膜融合インヒビターの二次構造分析
強力な抗ＨＩＶリポペプチドの作用のメカニズムを調べるために、円偏光二色性（ＣＤ）分析を用いて、実施例７における方法と同じ方法により、溶液中のＴ−２０及び代表的リポペプチドの二次構造特性を分析した。容易に分析するために、インヒビターのα−へリックス及びＴｍ値を、それぞれ、１０μＭ、２０μＭ及び４０μＭ（ＰＢＳ溶液）の濃度で測定した。結果は、図８に示された。Ｔ−２０は、３種の濃度で不規則な障害構造を示し、ＬＰ−４０は２０μＭ及び４０μＭで少量のヘリカル構造を示し、そして４種の強力なリポペプチド（ＬＰ−５０、ＬＰ−５１、ｌＰ−５２、ＬＰ−８０）は明確なヘリカル構造を示し、それらの中で、ＬＰ−８０はより高いへリックス含有率及びＴｍ値を有した。従って、本発明の強力なリポペプチド自体は、Ｔ−２０とは著しく異なる典型的なヘリカル構造を形成できた。
【００９５】
実施例９：ラットにおける強力なリポペプチドＬＰ−８０の薬物動態分析
上記調査結果は、ＬＰ−８０がより高いインビボ抗ウィルス活性をリポペプチドであり、そして本発明の強力なリポペプチドの中で非常に安定していることを示した。この実施例においては、ＬＰ−８０を、代表として使用し、ＳＤラットの薬物動態特性を分析した。生後５〜８週の１８２〜２１９ｇの体重の１２匹のラットを試験に使用し、そして静脈内投与グループ及び皮下注射投与グループに分け、各グループは６匹から成り、半分は雄、半分は雌であった。ＬＰ−８０の用量は、６ｍｇ／ｋｇ体重（ｍｇ／ｋｇ）であり、そしてＬＰ−８０は減菌蒸留水に溶解された。各グループの動物に関して、血清サンプルを、投与前、及び投与後５分、１５分、３０分、１時間、２時間、４時間、８時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１２０時間、１６８時間及び２１６時間で収集した。ラット血清中のＬＰ−８０の濃度を、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）により定量的に決定し、そして下限を１ｎｇ／ｍｌ（ｎｇ／ｍｌ）として定量化した。薬物動態パラメーターを、非コンパートメント分析モデル（ＮＣＡ）を用いて計算した。実験結果は、図９に示される通りであった。静脈内投与グループ及び皮下注射投与グループにおけるＬＰ−８０の平均最終半減期（Ｔ１／２）は、それぞれ、６．０４時間及び６．２９時間であった。しかしながら、静脈内及び皮下注射後３日（７２時間）での血清中のＬＰ−８０の濃度は、それぞれ、７．７５ｎｇ／ｍｌ及び６．８６ｎｇ／ｍｌ、すなわち２０２１．１２ｐＭ及び１７８９．０２ｐＭのモル濃度であり、そして濃度は、それぞれ、ＨＩＶ−１株ＮＬ４−３及びＪＲＣＳＦを阻害するＬＰ−８０のＩＣ５０値（２ｐＭ）の１０１０．５６倍及び８９４．５１倍であったことは注目に値した。この結果は、薬物動態の観点から、上記実施例６の短尾ザルにおけるＬＰ−８０の強力且つ持続的な抗ウィルス能力をさらに確認した。
【００９６】
実施例１０：サルＡＩＤＳモデルにおける強力なリポペプチドＬＰ−８０の治療効果の評価
この実施例においては、サルのＨＩＶ感染モデルに対するＬＰ−８０の治療効果をさらに調べ、そして技術的経路に関しては、ＬＰ−１９を評価するために本発明者により使用された方法を参照して下さい（すなわち、背景技術に列挙される参考文献３０）。６匹の大人のアカゲザル（ＡからＦの番号付けされた、半分が雄で、半分が雌である）を、試験に使用し、そしてＳＩＶ、ヘルペスウィルスＢ及びサルＴリンパ球向性ウィルスに対する抗体を陰性であると判断した。ＳＨＩＶ株ＳＦ１６２Ｐ３は、米国のＡＩＤＳ  Ｒｅａｇｅｎｔ  Ｐｒｏｇｒａｍにより提供され、そしてサルの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）上で増幅され、そしてＴＣＩＤ５０が決定された。サルに、１，０００ＴＣＩＤ５０のＳＦ１６２Ｐ３ウィルスを静脈内接種し、そしてサルの血漿ウィルス量の変化（ＲＮＡコピー数／ｍｌ）を、定期的に測定した。サルにＳＦ１６２Ｐ３を感染させた後１９７日目、ＬＰ−８０（減菌蒸留水に溶解された）を、皮下投与し、そしてＬＰ−８０を、２ｍｇ／ｋｇ体重（２ｍｇ／ｋｇ）で投与し、２週間、１日１度、及び次に４週間、４日に１度、投与した。血漿サンプルを、所定の時点で収集された血液から単離し、そして血漿ウィルス量（ＲＮＡコピー数／ｍｌ）を、定量的リアルタイム逆転写ポリメラーゼ鎖反応（ｑＲＴ−ＰＣＲ）により決定した。プラスミドＲＮＡを、従来の方法により抽出し、そしてｃＤＮＡサンプルを、逆転写反応により合成した。ＰＣＲプライマーを、ＳＩＶのｇａｇ４７７に向けた（上流のプライマーは、ＧＣＡＧＡＧＧＡＧＧＡＡＡＴＴＡＣＣＣＡＧＴＡＣであり、下流のプライマーは、ＣＡＡＴＴＴＴＡＣＣＣＡＧＧＣＡＴＴＴＡＡＴＧＴＴであり、そして検出プローブは、ＦＡＭ−ＡＣＣＴＧＣＣＡＴＴＡＡＧＣＣＣＧＡ−ＭＧＢであった）。使用されるＰＣＲ装置は、ＰＥ  ＡＢＩ７５００であった。アッセイの感度は、１ｍｍｌの血漿サンプル当たり１００のＲＮＡコピーであった。
【００９７】
実験結果は、図１０に示される通りであった。治療の後、４日目での６匹のサルのうち３匹におけるウィルス量は、検出可能レベルライン以下に低められ；５匹のサルにおけるウィルス量は、治療の後、８日目で検出されず；そしてすべての６匹のカルにおけるウィルス量は、治療の後、１４日目で検出されなかった。すべてのサルにおけるウィルス量は、４日当たり１度の薬物の投与による続く治療の間、検出可能レベルライン以下に制御された。ウィルスは、薬物の投与が停止された後、４日目でリバウンドせず；薬物の投与が停止された後、１０日目で１匹（サルＡ）のサルにおいてウィルスのリバウンドが存在し；薬物の投与が停止された後、１７日目で、サルＣを除く他の５匹のサルにおいてウィルスのリバウンドが存在し；そして薬物の投与が停止された後、２４日目ですべてのサルにおいてウィルス量のリバウンドが存在した。結果は、ＬＰ−８０の強力な抗ウィルス治療効果を実証した。
【００９８】
産業上の利用可能性：
本発明により提供される強力なリポペプチド、その誘導体又は医薬的に許容できるその塩、多量体、組成物、又は医薬化合物は、ＨＩＶ（ＨＩＶ−１及び／又はＨＩＶ−２）及び／又はＳＩＶ感染の治療及び／又は予防のために使用され得る。実際の適用においては、本発明のリポペプチド、その誘導体又は医薬的に許容できるその塩、多量体、組成物、又は医薬化合物は、ＨＩＶ感染の治療及び／又は予防のために、患者に薬物として直接、投与されるか、又は適切な担体又は賦形剤と共に混合され、そして患者に投与され得る。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】令和1年12月19日(2019.12.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下のａ）又はｂ）であり：
ａ）抗ウィルス活性を有するポリペプチドを、ポリペプチドのカルボキシル末端に結合された親油性化合物に結合することにより形成されるリポペプチド；
ｂ）抗ウィルス活性を有するポリペプチドを、末端保護基、及びポリペプチドのカルボキシル末端に結合された親油性化合物に結合することにより形成されるリポペプチド；ここで前記保護基がアミノ末端保護基及び／又はカルボキシル末端保護基であり；
ａ）及びｂ）において、ポリペプチドはＰ１〜Ｐ５のいずれか１つであり：
Ｐ１は、以下の式Ｉで示されるような配列を有し：
式Ｉ：Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８Ｘ１９Ｘ２０Ｘ２１Ｘ２２Ｘ２３Ｘ２４Ｘ２５Ｘ２６Ｘ２７Ｘ２８、
前記式Ｉにおいて、Ｘ１〜Ｘ２８はそれぞれアミノ酸残基であり、Ｘ１はＷ、Ｌ又はＹであり、Ｘ２はＥ又はＴであり、Ｘ３はＱ、Ａ又はＳであり、Ｘ４はＫ、Ｎ又はＬであり、Ｘ５はＩ又はＬであり、Ｘ６はＥ、Ｄ、Ｋ、Ｒ又はＡであり、Ｘ７はＥ、Ｄ、Ｋ、Ｒ又はＡであり、Ｘ８はＬ又はＩであり、Ｘ９はＬ又はＩであり、Ｘ１０はＫ、Ｒ、Ｅ、Ｄ又はＡであり、Ｘ１１は Ｋ、Ｒ、Ｅ、Ｄ又はＡであり、Ｘ１２はＡ又はＳであり、Ｘ１３はＥ、Ｄ、Ｋ、Ｒ又はＡであり、Ｘ１４はＥ、Ｄ、Ｋ、Ｒ又はＡであり、Ｘ１５はＱであり、Ｘ１６ Ｑであり、Ｘ１７はＫ、Ｒ、Ｅ、Ｄ又はＡであり、Ｘ１８はＫ、Ｒ、Ｅ、Ｄ又はＡであり、Ｘ１９はＮであり、Ｘ２０はＥ又はＤであり、Ｘ２１はＥ、Ｄ、Ｋ、 Ｒ又はＡであり、Ｘ２２はＥ、Ｄ、Ｋ、Ｒ又はＡであり、Ｘ２３はＬ又はＩであり、Ｘ２４はＫ、Ｒ、Ｅ、Ｄ又はＡであり、Ｘ２５はＫ、Ｒ、Ｅ、Ｄ又はＡであり、Ｘ２６はＬ又はＩであり、Ｘ２７はＥ又はＤであり、Ｘ２８はＫ又はＲであり；
Ｐ２は、Ｐ１のアミノ末端で１〜４個のアミノ酸残基を欠失することにより得られたポリペプチドであり；
Ｐ３は、Ｐ１のカルボキシル末端で１〜３個のアミノ酸残基を欠失することにより得られたポリペプチドであり；
Ｐ４は、Ｐ１のカルボキシル末端にシステイン残基を付加することにより得られたポリペプチドであり；
Ｐ５は、以下の式IIで示されるような配列を有し：
式II：Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８Ｘ１９Ｘ２０Ｘ２１Ｘ２２Ｘ２３Ｘ２４Ｘ２５、
前記式IIにおいて、Ｘ５〜Ｘ２５の定義は、式Ｉにおけるそれらの定義と同じであり；そして
前記ポリペプチドが、  以下のｖ１−ｖ７：
ｖ１: ＨＩＶ−１, ＨＩＶ−２ 及びＳＩＶ;
ｖ２: ＨＩＶ−１及びＨＩＶ−２;
ｖ３: ＨＩＶ−１及びＳＩＶ;
ｖ４: ＨＩＶ−２ 及びＳＩＶ;
ｖ５: ＨＩＶ−１;
ｖ６: ＨＩＶ−２; 及び
ｖ７: ＳＩＶ
から成る群から選択されたいずれか１つのウィルスに対する抗ウィルス活性を有することを特徴とする、リポペプチド、医薬的に許容できるその塩、又はその誘導体。
【請求項２】
前記リポペプチドが、ＬＰ−１９及び／又はＴ−２０及び／又はＣ３４−Ｃｈｏｌよりも高い抗ウィルス活性を有し；
前記リポペプチドの誘導体が、前記リポペプチドのポリペプチドの１又は２以上のアミノ酸残基を、Ｌ−形又はＤ−形アミノ酸、人工的に修飾されたアミノ酸及び／又は天然に存在する希少アミノ酸により置換することにより得られ、そして前記ポリペプチドの生物学的利用能、安定性及び／又は抗ウィルス活性よりも高い生物学的利用能、安定性及び／又は抗ウィルス活性を有することを特徴とする、請求項１に記載のリポペプチド、医薬的に許容できるその塩、又はその誘導体。
【請求項３】
前記Ｐ１が、以下の配列に示されるような配列を有し：
Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＩＥＥＬＸ９ＫＫＸ１２ＥＥＱＱＫＫＮＥＥＥＬＫＫＬＥＫ；
前記Ｐ２は、Ｐ２−１、Ｐ２−２、Ｐ２−３又はＰ２−４であり、ここで
前記Ｐ２−１は、以下の配列で示されるような配列を有し：
Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＩＥＥＬＸ９ＫＫＸ１２ＥＥＱＱＫＫＮＥＥＥＬＫＫＬＥＫ；
前記Ｐ２−２は、以下の配列で示されるような配列を有し：
Ｘ３Ｘ４ＩＥＥＬＸ９ＫＫＸ１２ＥＥＱＱＫＫＮＥＥＥＬＫＫＬＥＫ；
前記Ｐ２−３は、以下の配列で示されるような配列を有し：
Ｘ４ＩＥＥＬＸ９ＫＫＸ１２ＥＥＱＱＫＫＮＥＥＥＬＫＫＬＥＫ；
前記Ｐ２−４は、以下の配列で示されるような配列を有し：
ＩＥＥＬＸ９ＫＫＸ１２ＥＥＱＱＫＫＮＥＥＥＬＫＫＬＥＫ；
前記Ｐ３は、以下の配列で示されるような配列を有し：
Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＩＥＥＬＸ９ＫＫＸ１２ＥＥＱＱＫＫＮＥＥＥＬＫＫ；
前記Ｐ４は、以下の配列で示されるような配列を有し：
Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＩＥＥＬＸ９ＫＫＸ１２ＥＥＱＱＫＫＮＥＥＥＬＫＫＬＥＫＣ；
上記Ｐ１、Ｐ２−１、Ｐ２−２、Ｐ２−３、Ｐ２−４、Ｐ３及びＰ４においては、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ９及びＸ１２は、式Ｉにおけるそれらと同じことを特徴とする、請求項１又は２に記載のリポペプチド、医薬的に許容できるその塩、又はその誘導体。
【請求項４】
前記Ｐ１が、Ｐ−８０/８４/８５/５２、 Ｐ−８７/５１又はＰ５０であり、ここで前記Ｐ−８０／８４／８５／５２が配列表中の配列番号１の配列により表されるポリペプチドであり、前記Ｐ−８７／５１が配列表中の配列番号２の配列により表されるポリペプチドであり、そして前記Ｐ５０が配列表中の配列番号３の配列により表されるポリペプチドであり；
前記Ｐ２−１が、Ｐ−８８/６２であり、ここで前記Ｐ−８８/６２が配列表中の配列番号４の配列により表されるポリペプチドであり；
前記Ｐ２−２が、Ｐ６３又はＰ６０であり、ここで前記Ｐ６３が配列表中の配列番号５の配列により表されるポリペプチドであり、そして前記Ｐ６０が配列表中の配列番号６の配列により表されるポリペプチドであり；
前記Ｐ２−３が、Ｐ−８９/６４であり、ここで前記Ｐ−８９/６４が配列表中の配列番号７の配列により表されるポリペプチドであり；
前記Ｐ２−４が、Ｐ−９０/６５又はＰ６１であり、ここで前記Ｐ−９０/６５が配列表中の配列番号８の配列により表されるポリペプチドであり；そして前記Ｐ６１が配列表中の配列番号９の配列により表されるポリペプチドであり；
前記Ｐ３が、Ｐ−９１/５５であり、ここで前記Ｐ−９１/５５が配列表中の配列番号１０の配列により表されるポリペプチドであり；そして
前記Ｐ４が、Ｐ８３、又はＰ８６であり、ここで前記Ｐ８３が配列表中の配列番号１１の配列により表されるポリペプチドであり、そして前記Ｐ８６が配列表中の配列番号１２の配列により表されるポリペプチドであることを特徴とする、請求項３に記載のリポペプチド、医薬的に許容できるその塩、又はその誘導体。
【請求項５】
前記親油性化合物が、８〜２０個の炭素原子を含む脂肪酸、コレステロール、ジヒドロスフィンゴシン又はビタミンＥであることを特徴とする、請求項１に記載のリポペプチド、医薬的に許容できるその塩、又はその誘導体。
【請求項６】
８〜２０個の炭素原子を含む前記脂肪酸が、ステアリン酸又はパルミチン酸であることを特徴とする、請求項５に記載のリポペプチド、医薬的に許容できるその塩、又はその誘導体。
【請求項７】
前記リポペプチドが、以下の１２のリポペプチドＬＰ−８０／８４／８５／５２、ＬＰ−９０/６５、ＬＰ−８７/５１、ＬＰ−８８/６２、ＬＰ−５０、ＬＰ−８３、ＬＰ−９１/５５、ＬＰ−８６、ＬＰ−６３、ＬＰ−８９/６４、ＬＰ−６０ 及び ＬＰ−６１のいずれか１つであり；
前記ＬＰ−８０／８５／５２がＬＰ−８０／８４／８５／５２ａ又はＬＰ−８０／８４／８５／５２ｂであり、ここで前記ＬＰ−８０／８４／８５／５２ａは、Ｐ−８０／８４／８５／５２と称するポリペプチドを、Ｐ−８０／８４／８５／５２のカルボキシル末端に結合される親油性化合物に結合することにより形成され；前記ＬＰ−８０／８４／８５／５２ｂは、前記ＬＰ−８０／８４／８５／５２ａを、末端保護基に結合することにより形成され；前記ＬＰ−８０／８４／８５／５２ａ及びＬＰ−８０／８４／８５／５２ｂにおいては、Ｐ−８０／８４／８５／５２は、配列表中の配列番号１の配列により表されるポリペプチドであり、そして前記親油性化合物はステアリン酸、ジヒドロスフィンゴシン又はビタミンＥであり；
前記ＬＰ−９０／６５がＬＰ−９０／６５ａ又はＬＰ−９０／６５ｂであり、ここで前記ＬＰ−９０／６５ａは、Ｐ−９０／６５と称するポリペプチドを、Ｐ−９０／６５のカルボキシル末端に結合される親油性化合物に結合することにより形成され；前記ＬＰ−９０／６５ｂは、前記ＬＰ−９０／６５ａを、末端保護基に結合することにより形成され；前記ＬＰ−９０／６５ａ及びＬＰ−９０／６５ｂにおいては、Ｐ−９０／６５は、配列表中の配列番号８の配列により表されるポリペプチドであり、そして前記親油性化合物はステアリン酸、又はパルミチン酸であり；
前記ＬＰ−８７／５１がＬＰ−８７／５１ａ又はＬＰ−８７／５１ｂであり、ここで前記ＬＰ−８７／５１ａは、Ｐ−８７／５１と称するポリペプチドを、Ｐ−８７／５１のカルボキシル末端に結合される親油性化合物に結合することにより形成され；前記ＬＰ−８７／５１ｂは、前記ＬＰ−８７／５１ａを、末端保護基に結合することにより形成され；前記ＬＰ−８７／５１ａ及びＬＰ−８７／５１ｂにおいては、Ｐ−８７／５１は、配列表中の配列番号２の配列により表されるポリペプチドであり、そして前記親油性化合物はジヒドロスフィンゴシン、又はパルミチン酸であり；
前記ＬＰ−８８／６２がＬＰ−８８／６２ａ又はＬＰ−８８／６２ｂであり、ここで前記ＬＰ−８８／６２ａは、Ｐ−８８／６２と称するポリペプチドを、Ｐ−８８／６２のカルボキシル末端に結合される親油性化合物に結合することにより形成され；前記ＬＰ−８８／６２ｂは、前記ＬＰ−８８／６２ａを、末端保護基に結合することにより形成され；前記ＬＰ−８８／６２ａ及びＬＰ−８８／６２ｂにおいては、Ｐ−８８／６２は、配列表中の配列番号４の配列により表されるポリペプチドであり、そして前記親油性化合物はステアリン酸、又はパルミチン酸であり；
前記ＬＰ−５０がＬＰ−５０ａ又はＬＰ−５０ｂであり、前記ＬＰ−５０ａは、Ｐ５０と称するポリペプチドを、Ｐ５０のカルボキシル末端に結合されるパルミチン酸に結合することにより形成され；前記ＬＰ−５０ｂは、ＬＰ−５０ａを、末端保護基に結合することにより形成され；ＬＰ−５０ａ及びＬＰ−５０ｂにおいては、Ｐ５０は配列表中の配列番号３の配列により表されるポリペプチドであり；
前記ＬＰ−８３がＬＰ−８３ａ又はＬＰ−８３ｂであり、前記ＬＰ−８３ａは、Ｐ８３と称するポリペプチドを、Ｐ８３のカルボキシル末端に結合されるコレステロールに結合することにより形成され；前記ＬＰ−８３ｂは、ＬＰ−８３ａを、末端保護基に結合することにより形成され；ＬＰ−８３ａ及びＬＰ−８３ｂにおいては、Ｐ８３は配列表中の配列番号１１の配列により表されるポリペプチドであり；
前記ＬＰ−９１／５５がＬＰ−９１／５５ａ又はＬＰ−９１／５５ｂであり、ここで前記ＬＰ−９１／５５ａは、Ｐ−９１／５５と称するポリペプチドを、Ｐ−９１／５５のカルボキシル末端に結合される親油性化合物に結合することにより形成され；前記ＬＰ−９１／５５ｂは、前記ＬＰ−９１／５５ａを、末端保護基に結合することにより形成され；前記ＬＰ−９１／５５ａ及びＬＰ−９１／５５ｂにおいては、Ｐ−９１／５５は、配列表中の配列番号１０の配列により表されるポリペプチドであり、そして前記親油性化合物はステアリン酸、又はパルミチン酸であり；
前記ＬＰ−８６がＬＰ−８６ａ又はＬＰ−８６ｂであり、前記ＬＰ−８６ａは、Ｐ８６と称するポリペプチドを、Ｐ８６のカルボキシル末端に結合されるコレステロールに結合することにより形成され；前記ＬＰ−８６ｂは、ＬＰ−８６ａを、末端保護基に結合することにより形成され；ＬＰ−８６ａ及びＬＰ−８６ｂにおいては、Ｐ８６は配列表中の配列番号１２の配列により表されるポリペプチドであり；
前記ＬＰ−６３がＬＰ−６３ａ又はＬＰ−６３ｂであり、前記ＬＰ−６３ａは、Ｐ６３と称するポリペプチドを、Ｐ６３のカルボキシル末端に結合されるパルミチン酸に結合することにより形成され；前記ＬＰ−６３ｂは、ＬＰ−６３ａを、末端保護基に結合することにより形成され；ＬＰ−６３ａ及びＬＰ−６３ｂにおいては、Ｐ６３は配列表中の配列番号５の配列により表されるポリペプチドであり；
前記ＬＰ−８９／６４がＬＰ−８９／６４ａ又はＬＰ−８９／６４ｂであり、ここで前記ＬＰ−８９／６４ａは、Ｐ−８９／６４と称するポリペプチドを、Ｐ−８９／６４のカルボキシル末端に結合される親油性化合物に結合することにより形成され；前記ＬＰ−８９／６４ｂは、前記ＬＰ−８９／６４ａを、末端保護基に結合することにより形成され；前記ＬＰ−８９／６４ａ及びＬＰ−８９／６４ｂにおいては、Ｐ−８９／６４は、配列表中の配列番号７の配列により表されるポリペプチドであり、そして前記親油性化合物はステアリン酸、又はパルミチン酸であり；
前記ＬＰ−６０がＬＰ−６０ａ又はＬＰ−６０ｂであり、前記ＬＰ−６０ａは、Ｐ６０と称するポリペプチドを、Ｐ６０のカルボキシル末端に結合されるパルミチン酸に結合することにより形成され；前記ＬＰ−６０ｂは、ＬＰ−６０ａを、末端保護基に結合することにより形成され；ＬＰ−６０ａ及びＬＰ−６０ｂにおいては、Ｐ６０は配列表中の配列番号６の配列により表されるポリペプチドであり；そして
前記ＬＰ−６１がＬＰ−６１ａ又はＬＰ−６１ｂであり、前記ＬＰ−６１ａは、Ｐ６１と称するポリペプチドを、Ｐ６１のカルボキシル末端に結合されるパルミチン酸に結合することにより形成され；前記ＬＰ−６１ｂは、ＬＰ−６１ａを、末端保護基に結合することにより形成され；ＬＰ−６１ａ及びＬＰ−６１ｂにおいては、Ｐ６１は配列表中の配列番号９の配列により表されるポリペプチドであることを特徴とする、請求項６に記載のリポペプチド、医薬的に許容できるその塩、又はその誘導体。
【請求項８】
前記ポリペプチドが、請求項１に定義されるポリペプチドであることを特徴とする、ポリペプチド、医薬的に許容できるその塩、又はその誘導体。
【請求項９】
前記ポリペプチドの誘導体が、以下の１）〜５）：
１）Ｎ末端保護基を、ポリペプチドのアミノ酸末端に結合することにより、及び／又はＣ末端保護基を、ポリペプチドのカルボキシル末端に結合することにより得られる誘導体；
２）オリゴペプチド又は親油性化合物を、ポリペプチドのカルボキシル末端に結合することにより得られる誘導体；
３）オリゴペプチド又は親油性化合物を、ポリペプチドのアミノ末端に結合することにより得られる誘導体；
４）オリゴペプチド又は親油性化合物を、ポリペプチドのカルボキシル末端及びアミノ末端の両端に結合することにより得られる誘導体；及び
５）タンパク質、ポリエチレングリコール又はマレイミドにより前記ポリペプチドを修飾することにより得られる誘導体、から成る群から選択された少なくとも１つであることを特徴とする、請求項８に記載のポリペプチド、医薬的に許容できるその塩、又はその誘導体。
【請求項１０】
ＰＭ１が、請求項１に記載のリポペプチド、医薬的に許容できるその塩又はその誘導体により形成される多量体であり；そして
ＰＭ２が、請求項８に記載のポリペプチド、医薬的に許容されるその塩又はその誘導体により形成される多量体である、ＰＭ１又はＰＭ２の多量体。
【請求項１１】
Ｃ１）及びＣ２）を含む組成物であって、
前記Ｃ１がＣ１１）、Ｃ１２）又は／及びＣ１３）であり、ここで前記Ｃ１１）は、請求項１に記載のリポペプチド、その誘導体又は医薬的に許容できるその塩であり；前記Ｃ１２）は、請求項８に記載のポリペプチド、その誘導体又は医薬的に許容できるその塩であり；前記Ｃ１３）は、請求項１０に記載の多量体であり；
前記Ｃ２）が医薬的に許容できる担体又はアジュバントであり；
以下の機能Ｆ１）−Ｆ５）：
Ｆ１）ウィルスに対する活性の保有；
Ｆ２）ウィルス感染により引起される疾患の治療及び／又は予防及び／又は補助的治療；
Ｆ３）ウィルス及び細胞の融合の阻害；
Ｆ４）細胞中へのウィルスの侵入の阻害；及び
Ｆ３）ウィルスの複製の阻害、
の少なくとも１つの機能を有し、
前記Ｆ１）−Ｆ２）において、前記ウィルスが、以下のｖ１−ｖ７：
ｖ１: ＨＩＶ−１、 ＨＩＶ−２ 及びＳＩＶ;
ｖ２: ＨＩＶ−１及びＨＩＶ−２;
ｖ３: ＨＩＶ−１及びＳＩＶ;
ｖ４: ＨＩＶ−２ 及びＳＩＶ;
ｖ５: ＨＩＶ−１;
ｖ６: ＨＩＶ−２; 及び
ｖ７: ＳＩＶ
から成る群から選択されたいずれか１つのウィルスである、組成物。
【請求項１２】
Ｅ１）−Ｅ５）から成る群から選択された少なくとも１つの製品の製造へのＣ１１）、Ｃ１２）、Ｃ１３）及び／又はＣ１４）の使用であって、
前記Ｃ１１）が請求項１に記載のリポペプチド、その誘導体又は医薬的に許容されるその塩であり；前記Ｃ１２）は、請求項８に記載のポリペプチド、その誘導体又は医薬的に許容されるその塩であり；前記１３）は請求項１０に記載の多量体であり；そして前記Ｃ１４）は、請求項１１に記載の組成物であり；
前記Ｅ１）がウィルスに対する製品であり；
前記Ｅ２）が、ウィルス感染により引き起こされる疾患を治療し、そして／又は予防し、そして／又は補助的に治療するための製品であり；
前記Ｅ３）が、ウィルス及び細胞の融合を阻害するための製品であり；
前記Ｅ４）が、細胞へのウィルスの侵入を阻害するための製品であり；そして
前記Ｅ５）が、ウィルスの複製を阻害するための製品であり；
前記Ｆ１）−Ｆ５）において、前記ウィルスが、以下のｖ１−ｖ７：
ｖ１: ＨＩＶ−１, ＨＩＶ−２ 及びＳＩＶ;
ｖ２: ＨＩＶ−１及びＨＩＶ−２;
ｖ３: ＨＩＶ−１及びＳＩＶ;
ｖ４: ＨＩＶ−２ 及びＳＩＶ;
ｖ５: ＨＩＶ−１;
ｖ６: ＨＩＶ−２; 及び
ｖ７: ＳＩＶ
から成る群から選択されたいずれか１つのウィルスである、使用。
【請求項１３】
Ｃ１１），Ｃ１２）又はＣ１３）であり、
前記Ｃ１１）が請求項１に記載のリポペプチド、その誘導体又は医薬的に許容できるその塩であり；前記Ｃ１２）が請求項８に記載のポリペプチド、その誘導体、又は医薬的に許容できるその塩であり；又は前記Ｃ１３）が請求項１０に記載の多量体であることにより特徴づけられる医薬化合物。
【請求項１４】
前記医薬化合物が、以下の使用Ｕ１）−Ｕ５）：
Ｕ１）ウィルスに対する使用
Ｕ２）ウィルス感染により引起される疾患の治療及び／又は予防及び／又は補助的治療のための使用；
Ｕ３）ウィルス及び細胞の融合の阻害のための使用；
Ｕ４）細胞中へのウィルスの侵入の阻害のための使用；及び
Ｕ５）ウィルスの複製の阻害のための使用、
の少なくとも１つを有し；
前記Ｕ１）−Ｕ５）において、ウィルスは、以下のｖ１−ｖ７：
ｖ１: ＨＩＶ−１, ＨＩＶ−２ 及びＳＩＶ;
ｖ２: ＨＩＶ−１及びＨＩＶ−２;
ｖ３: ＨＩＶ−１及びＳＩＶ;
ｖ４: ＨＩＶ−２ 及びＳＩＶ;
ｖ５: ＨＩＶ−１;
ｖ６: ＨＩＶ−２; 及び
ｖ７: ＳＩＶ
から成る群から選択されたいずれか１つのウィルスであることにより特徴づけられる、請求項１３に記載の医薬化合物。
【国際調査報告】
2020517741.tif 000012
2020517741.tif 000013
2020517741.tif 000014
2020517741.tif 000015
2020517741.tif 000016
2020517741.tif 000017
2020517741.tif 000018
2020517741.tif 000019
2020517741.tif 000020