(57)【要約】  本発明は、動物の腸内細菌叢を調節するため、及び／又は免疫系機能を支援するための方法であって、１つ又は複数のソホロリピッドを、それを必要としている動物に投与することを含む方法に関する。ソホロリピッドを含む動物飼料組成物も提供される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
動物の腸内細菌叢を調節するため、及び／又は免疫系機能を支援するための方法であって、１つ又は複数のソホロリピッドを、それを必要としている動物に投与することを含む方法。
【請求項２】
前記動物が、ニワトリ、ブロイラー、産卵ニワトリ、メンドリ及びヒヨコからなる群から選択される家禽動物である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
コクシジウム症、及びクロストリジウム種によって引き起こされる疾患を軽減、治癒又は予防するために、１つ又は複数のソホロリピッドを含む飼料添加物又はプレミックス組成物を前記動物に投与することを含む、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記１つ又は複数のソホロリピッドが、式（Ｉ）
【化１】
2020528414.tif 000013
（式中、
Ｒ１及びＲ２は独立して、Ｈ又はアセチルであり、
Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ８アルキル基であり、且つ
Ｒ４は、６〜２４個の炭素原子を含む直鎖又は分枝状の飽和又は不飽和アルカン単位である）
のソホロリピッド及びその誘導体である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記１つ又は複数のソホロリピッドが、エチル−１７−Ｌ−［（２’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−β−Ｄ−グルコピラノシル）−オキシ］−シス−９−オクタデセノアート−６’’−アセタート；エチル−１７−Ｌ−［（２’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−β−Ｄ−グルコピラノシル）−オキシ］−シス−９−オクタデセノアート−６’−アセタート；エチル−１７−Ｌ−［（２’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−β−Ｄ−グルコピラノシル）−オキシ］−シス−９−オクタデセノアート−６’−６’’−ジアセタート；ブチル−１７−Ｌ−［（２’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−β−Ｄ−グルコピラノシル）−オキシ］−シス−９−オクタデセノアート−６’’−アセタート；ブチル−１７−Ｌ−［（２’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−β−Ｄ−グルコピラノシル）−オキシ］−シス−９−オクタデセノアート−６’−アセタート；及びブチル−１７−Ｌ−［（２’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−β−Ｄ−グルコピラノシル）−オキシ］−シス−９−オクタデセノアート−６’−６’’−ジアセタートからなる群から選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記１つ又は複数のソホロリピッドが、飼料添加物又は飼料プレミックス組成物の形態で前記動物に投与される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記飼料プレミックス組成物がさらに、
ａ）１つ又は複数の担体；
ｂ）１つ又は複数の付加的な酵素；
ｃ）１つ又は複数の微生物；
ｄ）１つ又は複数のビタミン；
ｅ）１つ又は複数のミネラル；
ｆ）１つ又は複数のアミノ酸；
ｇ）１つ又は複数の有機酸；及び
ｈ）１つ又は複数の他の飼料成分
からなるリストから選択される１つ又は複数の成分を含む、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
請求項６又は７に記載の少なくとも１つソホロリピッドと、
ａ）少なくとも１つの脂溶性ビタミン、及び／又は
ｂ）少なくとも１つの水溶性ビタミン、微量ミネラル、及び及び／又は
ｃ）少なくとも１つのミネラル
からなる群から選択される少なくとも１つの付加的な成分とを含む動物プレミックス組成物。
【請求項９】
ａ）１つ又は複数のアミノ酸；
ｂ）１つ又は複数のプレバイオティクス；
ｃ）１つ又は複数の有機酸；
ｄ）１つ又は複数の付加的な酵素；
ｅ）１つ又は複数のプロバイオティクス
からなるリストから選択される１つ又は複数の成分をさらに含む、請求項８に記載の動物プレミックス組成物。
【請求項１０】
飼料１ｋｇ当たり５０〜８００ｇの粗タンパク質含量を有し、請求項８若しくは９に記載の少なくとも１つのソホロリピッド、又は請求項７〜９のいずれか一項に記載のソホロリピッドを含有するプレミックスを含む、動物飼料組成物。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
［背景］
[0001]本発明は、１つ又は複数のソホロリピッドを含有する飼料添加物組成物と、動物の腸内細菌叢を調節するため及び／又は免疫系機能を支援するための方法であって、１つ又は複数のソホロリピッドを、それを必要としている動物に投与することを含む方法とに関する。より具体的には、本発明は、コクシジウム症、及びクロストリジウム種によって引き起こされる疾患を１つ又は複数のソホロリピッドで処置又は予防するための方法に関する。また本発明は、少なくとも１つのソホロリピッドを含む飼料添加物又は飼料プレミックス組成物にも関する。
【０００２】
[0002]飼料又は飼料組成物という用語は、動物による摂取に適した、又は動物による摂取が意図されるあらゆる化合物、調製物、混合物又は組成物を意味する。
【０００３】
[0003]動物という用語は全ての動物を含む。動物の例は、非反芻動物及び反芻動物である。反芻動物には、例えば、ヒツジ、ヤギ、及びウシ（例えば、肉牛及び乳牛などの雌牛）などの動物が含まれる。特定の実施形態では、動物は非反芻動物である。非反芻動物には、ペット動物、例えば、ウマ、ネコ及びイヌ；単胃動物、例えば、ブタ又はイノシシ（子ブタ、成長期のブタ、及び雌ブタを含むが、これらに限定されない）；シチメンチョウ、アヒル及びニワトリ（ブロイラーヒヨコ、産卵ニワトリを含むが、これらに限定されない）などの家禽；魚（サケ、マス、ティラピア、ナマズ及びコイを含むが、これらに限定されない）；並びに甲殻類（小エビ及びエビを含むが、これらに限定されない）が含まれる。
【０００４】
[0004]ソホロリピッドは、選択されたいくつかの非病原性酵母種によって合成され得る界面活性糖脂質化合物である。ソホロリピッドは、１６又は１８個の炭素原子の疎水性脂肪酸テールと、親水性炭水化物ヘッドのソホロースとからなる。ソホロースは、珍しいβ−１，２結合を有するグルコース二糖であり、６’位及び／又は６’’位においてアセチル化され得る。１つの末端又は末端付近のヒドロキシル化脂肪酸は、ソホロース分子にβ−グリコシド結合している。この脂肪酸のカルボキシル末端は遊離している（酸性又は開放形態）か、或いは４’’位又は場合により６’位若しくは６’’位において内部エステル化されている（ラクトン形態）。ヒドロキシル脂肪酸自体は、一般に、１６又は１８個の炭素原子を含み、１つ又は複数の不飽和結合を有することができる。
【０００５】
[0005]その生分解性及び低生態毒性のために、工業用途における生物界面活性剤としてのソホロリピッドの使用がますます探索されている。
【０００６】
[0006]本発明者らは今回驚くべきことに、ソホロリピッドが動物飼料での使用に大きな可能性を有することを見出した。特に、以下で特定される少なくとも１つのソホロリピッドを含む組成物は、コクシジウム症、及びクロストリジウム種によって引き起こされる疾患を軽減、治癒又は予防するために使用され得ることが見出された。
【０００７】
[0007]この技術的問題の解決法は、特許請求の範囲において特徴付けられた実施形態によって提供される。
【０００８】
[0008]［簡単な概要］
[0009]本発明は、動物飼料又は飼料添加物の成分としてのソホロリピッド、並びにそれを含有する組成物、飼料添加物及び飼料に関する。好ましい実施形態では、１つ又は複数のソホロリピッドは経口的に投与される。１つ又は複数のソホロリピッドは、飼料添加物組成物の形態であり得る。別の実施形態では、１つ又は複数のソホロリピッドは、飼料プレミックス製品に添加される。
【０００９】
[0010]したがって、本発明は、動物飼料又は飼料添加物の成分としての前記化合物の使用を提供する。
【００１０】
[0011]本発明はさらに、動物の能力を改善する、特に、胃腸細菌叢の調節剤としての活性を有し、且つ動物飼料を介して適用可能な組成物を調製するためのこれらの化合物の使用を提供する。
【００１１】
[0012]本発明はさらに、家禽などの動物のコクシジウム症、及びクロストリジウム種（特に、クロストリジウム・ペルフリンゲンス（ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ））によって引き起こされる疾患を軽減、治癒又は予防するための動物飼料又は動物飼料添加物の製造における、上記で定義されたソホロリピッドの使用に関する。
【００１２】
[0013]最後に、本発明は、本発明に従うソホロリピッド化合物に基づいた動物飼料添加物を提供する。
【００１３】
[0014]本明細書で使用される「腸」という用語は、胃腸又は消化管（栄養管とも呼ばれる）を指定し、食物を摂取し、それを消化してエネルギー及び栄養分を抽出し、そして残存する廃棄物を排出する、多細胞動物内の臓器系を指す。
【００１４】
[0015]本明細書で使用される腸内「細菌叢」という用語は、腸内に存在し、そして適切な消化を助けること及び／又は免疫系機能を支援することによって健康を維持する天然微生物培養物を指す。
【００１５】
[0016]腸内細菌叢と関連して本明細書で使用される「調節する」という用語は、一般的に、健康で正常に機能している動物においてその機能又は状態を変化、操作、変更又は調整すること、すなわち非治療的使用を意味する。
【００１６】
[0017]コクシジウムは、脊椎動物及び無脊椎動物の両方に感染する腸内寄生虫である単細胞の原生動物に与えられた属名である。この生物はコクシジウム症を引き起こし、通常は小腸、例えば結腸に定住する。コクシジウムによる家畜の感染は成長を著しく低下させ得るだけでなく、生命も脅かし得る。コクシジウム感染による症状には、上皮細胞の喪失、腸粘膜の剥離、及び下痢（多くの場合、失血を伴う）が含まれる。家禽などのいくつかの家畜については、動物の健康にひどい損傷を与えなくても、コクシジウム感染は致死的であり得る。
【００１７】
[0018]家禽はいくつかの理由からコクシジウム症に対して特に弱い：（１）最大成長が通常発現される場合、６〜８日の寄生サイクルは２週間〜４週間の危機的段階で家禽を攻撃する。寄生虫は実質的に腸上皮全体を破壊するので、栄養分の吸収が急激に低下し、顕著な成長抑制が起こる。５又は６週間での屠殺まで回復する十分な時間がない；（２）他のあらゆる動物カテゴリーよりも多く家禽に感染するエイメリア属（Ｅｉｍｅｒｉａ）が７種あり、そのうちの少なくとも４種は、商業的な作業において定期的にみられる。したがって、１つの感染サイクルが完結したときに、既に別のサイクルが初期段階にある可能性があり、したがって、コクシジウム症は慢性的になる；（３）家禽において、ほとんどの病原性種（エイメリア・テネラ（Ｅｉｍｅｒｉａ  ｔｅｎｅｌｌａ）、Ｅ．ネカトリックス（Ｅ．ｎｅｃａｔｒｉｘ）が観察され、これらは、激しい出血を誘発し、場合によっては５０％に至る死亡率をもたらし得る。このようなコクシジウム症の急性症例によって、家禽農場主は容易に破産し得る；且つ（４）ディープリター（ｄｅｅｐ  ｌｉｔｔｅｒ）における家禽の集約的な飼育（１つの小屋に１００，０００羽以上のヒヨコ）は、食糞を介して家禽が糞中のコクシジウムの感染段階に近づくことを容易にし、したがって家禽の群れ全体への疾患の急速な広がりを後押しする。衛生状態が厳しくなければ、疾患は同じ農場の他の家禽小屋にも移り、何年もの間その場所に留まることになる。
【００１８】
[0019]コクシジウム症に対抗するために、動物飼料には抗コクシジウム剤が補充されることが多い。家禽（ニワトリ、シチメンチョウ、ブロイラー及び産卵ニワトリ）での使用がＥＥＣにより承認されている抗コクシジウム剤には、スルホンイミド、アンプロリウム、デコキネート、及びイオノフォアが含まれる。しかしながら、これらの抗コクシジウム剤のいくつかは非天然の無機化合物であり、したがって合成的に製造しなければならない。これは、比較的高価であることを意味する。そのため、天然に存在する抗コクシジウム剤が必要とされている。
【００１９】
[0020]クロストリジウム種によって引き起こされる疾患は、家禽、ブタ、ウサギ及びラットの動物系統においてよく見られる。例えば、疾患の壊死性腸炎と、クロストリジウム・ペルフリンゲンス（ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）の存在との間には関連がある。壊死性腸炎は重度の炎症及び腸管の崩壊（ｓｌｏｕｇｈｉｎｇ）を特徴とし、多くの場合、コクシジウム症と一緒に起こる。
【００２０】
[0021]多数の論文により、ブロイラーの健康及び成長速度に対して大きな影響を与える消化管内のクロストリジウム・ペルフリンゲンス（ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）の量が開示されている。感染トリの典型的な症状は、羽の逆立ち、顕著な抑鬱、食欲不振、緩い／低粘性のフン又は下痢、及び著しく動きたがらないことである。このような論文の例は、Ｂ．Ｓ．Ｂａｉｎｓ（１９７９）”Ａ  ｍａｎｕａｌ  ｆｏｒ  ｐｏｕｌｔｒｙ  ｄｉｓｅａｓｅｓ”（Ｅｄ．Ｒｏｃｈｅ，Ｂａｓｅｌ  Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）；Ｂ  Ｋｏｅｈｌｅｒ，Ｋ  Ｖｏｇｅｌ  ａｎｄ  Ｐ  Ｓｔａｒｏｓｔ（１９７９）”Ｎｅｋｒｏｔｉｓｉｅｒｅｎｄｅ  ｕｎｄ  Ｕｌｚｅｒａｔｉｖｅ  Ｅｎｔｅｒｉｔｉｓ  ｂｅｉ  Ｈｕｅｈｎｅｒｎ  ｄｅｒ  Ｍａｓｔ−ｕｎｄ  Ｌｅｇｅｒｉｃｈｔｕｎｇ  ｕｎｔｅｒ  Ｂｅｄｉｎｇｕｎｇｅｎ  ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｍａｅｓｓｉｇｅｒ  Ｇｅｆｌｕｅｇｅｌｐｒｏｄｕｋｔｉｏｎ”（Ｍｈ．Ｖｅｔ．−Ｍｅｄ．，３２，７０４−７１１）；ｂ  Ｋｏｅｈｌｅｒ，Ｋ  Ｖｏｇｅｌ，Ｗ  Ｗｉｔｔｅ  ａｎｄ  Ｈ  Ｋｕｅｈｎ（１９８３）”Ｖｅｒｇｌｅｉｃｈ  ｄｅｒ  Ｕｒｓａｃｈｅｎ  ｖｏｎ  Ｈｏｓｐｉｔａｌｉｓｍｕｓ  ｄｕｒｃｈ  Ｃｌ．ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ，Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ  ｕｎｄ  Ｓａｌｍｏｎｅｌｌｅｎ  ｕｎｔｅｒ  ｄｅｎ  Ｂｅｄｉｎｇｕｎｇｅｎ  ｄｅｒ  ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｍａｅｓｓｉｇｅｎ  Ｇｅｆｌｕｅｇｅｌｐｒｏｄｕｋｔｉｏｎ  ｕｎｄ  Ｍｏｅｇｌｉｃｈｋｅｉｔｅｎ  ｉｈｒｅｒ  Ｂｅｋａｅｍｐｆｕｎｇ”，（Ｖ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｔｉｅｒｈｙｇ．Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ，２５  ｕｎｄ  ２６．０５．９３，Ｌｅｉｐｚｉｇ，Ｓａｍｍｅｌｂａｎｄ  ｄｅｒ  Ｖｏｒｔｒａｅｇｅ、Ｖｅｔｅｒｉｎａｅｒｍｅｄｉｚｉｎｉｓｃｈｅ  Ｆａｋｕｌｔａｅｔ  Ｌｅｉｐｚｉｇ）；Ｔｈ．Ｖｉｓｓｉｅｎｏｎ，Ｕ  Ｊｏｈａｎｎｓｅｎ  ａｎｄ  Ｂ  Ｋｏｅｈｌｅｒ（１９９４）”Ｕｎｔｅｒｓｕｃｈｕｎｇｅｎ  ｚｕｒ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｅ  ｕｎｄ  Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｅ  ｄｅｒ  Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ−Ｔｙｐ−Ａ−Ｅｎｔｅｒｏｔｏｘａｅｍｉｅ  ｄｅｓ  Ｈｕｈｎｅｓ．１．Ｖｅｒｓｕｃｈｅ  ｚｕｒ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｅｌｌｅｎ  Ｅｒｚｅｕｇｕｎｇ  ｄｅｒ  Ｋｒａｎｋｈｅｉｔ，Ｖｅｒｓｕｃｈｓａｎｓａｔｚ，ｋｌｉｎｉｓｃｈｅｓ  Ｂｉｌｄ  ｕｎｄ  Ｍｏｒａｌｉｔａｅｔｓｒａｔｅｎ”，（Ｍｈ．Ｖｅｔ．−Ｍｅｄ．，４９，２３−２８）；Ｔｈ．Ｖｉｓｓｉｅｎｏｎ，Ｕ  Ｊｏｈａｎｎｓｅｎ，Ｍ  Ｓｏｌｖｅｉｇ  ａｎｄ  Ｂ  Ｋｏｅｈｌｅｒ（１９９４）”Ｕｎｔｅｒｓｕｃｈｕｎｇｅｎ  ｚｕｒ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｅ  ｕｎｄ  Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｅ  ｄｅｒ  Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ−ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ−Ｔｙｐ−Ａ−Ｅｎｔｅｒｏｔｏｘａｅｍｉｅ  ｄｅｓ  Ｈｕｈｎｅｓ．２．Ｐａｔｈｏｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｓｃｈｅ  ｕｎｄ  ｂａｋｔｅｒｉｏｌｏｇｉｓｃｈｅ  Ｂｅｆｕｎｄｅ  ｎａｃｈ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｅｌｌｅｒ  ｉｎｔｒａｄｕｏｄｅｎａｌｅｒ  Ｃｌ．−ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ−Ｔｙｐ−Ａ−Ｉｎｆｅｋｔｉｏｎ”（Ｓｐｏｒｅｎ  ｕｎｄ  ｖｅｇｅｔａｔｉｖｅ  Ｋｅｉｍｅ）ｕｎｄ  Ｔｏｘｉｎａｐｐｌｉｋａｔｉｏｎ（Ｍｈ．Ｖｅｔ．−Ｍｅｄ．，４９，９３−１０２）である。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】コクシジウム症感染の５日後の回腸における炎症誘発性サイトカインの発現を示す。
【図２】コクシジウム症感染の５日後の回腸におけるＴｈ１及びＴｈ２サイトカインの発現を示す。
【図３】コクシジウム症感染の５日後の回腸における密着結合タンパク質の発現を示す。
【図４】コクシジウム症の５日後の血清α−１酸性糖タンパク質（α−１−ＡＧＰ）レベルを示す。
【図５】壊死性腸炎の２日後の回腸における炎症誘発性サイトカインの発現を示す。
【図６】Ｃ．ペルフリンゲンス（Ｃ．ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）感染の２日後の回腸におけるＴｈ１及びＴｈ２サイトカインの発現を示す。
【図７】Ｃ．ペルフリンゲンス（Ｃ．ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）感染の２日後の回腸における密着結合タンパク質の発現を示す。
【図８】血清中のα−１酸性糖タンパク質（α−１−ＡＧＰ）を示す。
【００２２】
［詳細な説明］
[0022]本開示をさらに説明する前に、以下に記載される本開示の特定の実施形態は変化させることが可能であり、それでも添付の特許請求の範囲内に包含され得るので、本開示は、これらの特定の実施形態に限定されないことが理解されるべきである。また、使用される用語は特定の実施形態を説明することを目的としており、限定することは意図されないことも理解されるべきである。代わりに、本開示の範囲は、添付の特許請求の範囲によって確立されることになる。
【００２３】
[0023]本明細書及び添付の特許請求の範囲全体を通して、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」及び「有する（ｈａｖｉｎｇ）」という単語、並びに「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」及び「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」などの変化形は包括的に解釈されるべきである。すなわち、これらの単語は、文脈が許す場合には、具体的に列挙されていない他の要素又は整数の可能な包含を伝達することが意図される。
【００２４】
[0024]本明細書及び添付の特許請求の範囲において、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文脈が他に明確に指示しない限り、複数の参照を含む。例として、「ソホロリピッド（ａ  ｓｏｐｈｏｒｏｌｉｐｉｄ）」は、１つのソホロリピッド又は２つ以上のソホロリピッドを意味することができる。
【００２５】
[0025]他に定義されない限り、本明細書で使用される全ての科学技術用語は、本開示が属する技術分野の当業者に一般に理解されているのと同じ意味を有する。
【００２６】
[0026]ソホロリピッドは、脂肪酸テールと、炭水化物部分のソホロースとを含有し、ソホロ―スは、１３−１，２結合を有するグルコース二糖である。脂肪酸テールは、ソホロース分子にβ−グリコシド結合している。この脂肪酸のカルボキシル末端は遊離している（酸性又は開放形態）か、或いは４’’位又は６’位又は６’’位において内部エステル化されている（ラクトン形態）。脂肪酸テールは、２〜２４個の炭素原子を有し得る。一般的に、脂肪酸テールは１６又は１８個の炭素原子を有し、１つ又は複数の不飽和結合を有することができる。ソホロリピッドに関する総括及び用語については、Ｖａｎ  Ｂｏｇａｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ，Ａｐｐｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ（２００７）７６：２３−３４；Ｖａｎ  Ｂｏｇａｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ，Ｐｒｏｃｅｓｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２０１１）４６：８２１−８３３；及びＬａｎｇ  ｅｔ  ａｌ，Ｆａｔ  Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．１９８９（９１），ｖｏｌ．９，３６３−３６６を参照されたい。国際公開第２００４／０４４２１６号パンフレットは、ソホロリピッドの抗菌特性及びその使用に関連する。
【００２７】
[0027]ソホロリピッドは、特定のタイプの酵母菌株、特に、スタルメレラ・ボンビコラ（Ｓｔａｒｍｅｒｅｌｌａ  ｂｏｍｂｉｃｏｌａ）（カンジダ・ボンビコラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｂｏｍｂｉｃｏｌａ）とも呼ばれる）及びカンジダ・アピコラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｐｉｃｏｌａ）によって天然に産生され得る。このようなソホロリピッドは、天然ソホロリピッドとも呼ばれる。国際公開第２００４／０４４２１６号パンフレット及び国際公開第２０１２／０８０１１６号パンフレットには、Ｃ．ボンビコラ（Ｃ．ｂｏｍｂｉｃｏｌａ）における天然ソホロリピッドの発酵が記載されている。また国際公開第２０１２／０８０１１６号パンフレットには、ソホロリピッドの単離が記載されている。このようなソホロリピッドは、本発明の方法において使用され得る。これらの刊行物のいずれかに基づいて、当業者は、このようなソホロリピッドの生成方法を理解する。
【００２８】
[0028]「ソホロリピッド」という用語は、本明細書では、修飾ソホロリピッドも包含する。Ｂｉｓｈｔ  ｅｔ  ａｌ（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９９，６４：７８０−７８９）は、ソホロリピッドの酵素介在性のアシル化及びエステル化を記載している。国際公開第２００４／０４４２１６号パンフレットには、いくつかの修飾ソホロリピッドの化学合成が記載されている。Ａｓｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｏｉｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｓ’Ｓｏｃｉｅｔｙ（１９８８），ｖｏｌ．６５，ｎｏ．９，１４６０−１４６６）は、ソホロリピッドの微生物産生を開示する。またソホロリピッドは、化学的に修飾することもできる。国際公開第２００６／０６９１７５号パンフレットは、いくつかの修飾ソホロリピッドを開示する。炭水化物部分は、例えば６’位及び／又は６’’位において、アルキル化され得る。例えば、６’位及び６’’位はアセチル化され得る。６’位が脂肪酸テールに最も近いことを除いて、６’位は６’’位と同一である。このような修飾ソホロリピッドは、本発明の方法において使用され得る。これらの刊行物のいずれかに基づいて、当業者は、修飾ソホロリピッドを生成する方法を理解する。
【００２９】
[0029]いくつかの実施形態では、ソホロリピッドは、遊離酸又はそのエステルの形態であり得る。ソホロリピッドは式（Ｉ）のソホロリピッドでよく、式中、Ｒ１及びＲ２は独立してＨ又はアセチルであり；Ｒ３はＣ１〜Ｃ８アルキル基であり；且つＲ４は、６〜２４個の炭素原子を含む直鎖又は分枝状の飽和又は不飽和アルカン単位である。
【化１】
2020528414.tif 000002
【００３０】
[0030]Ｒ１は、Ｈ又はアセチルでよい。
【００３１】
[0031]Ｒ２は、Ｈ又はアセチルでよい。
【００３２】
[0032]Ｒ３は、メチル；エチル；プロピル又はイソプロピル；ｎ−ブチル又はイソブチル；ｎ−ペンチル、イソペンチル、ｔｅｒｔ−ペンチル、２，２−ジメチルプロピル；ｎ−ヘキシル、２−メチルペンチル、３−メチルペンチル、２，２ジメチルブチル、又は２，３ジメチルブチル；ｎ−ヘプタン、２−メチルヘキサン、３−メチルヘキサン、２，２−ジメチルペンタン、２，３−ジメチルペンタン、２，４−ジメチルペンタン、３，３−ジメチルペンタン、３−エチルペンタン、又は２，２，３−トリメチルブタン；ｎ−オクチル、２−メチルヘプタン、３−メチルヘプタン、４−メチルヘプタン、３−エチルへキサン、２，２−ジメチルヘキサン、２，３−ジメチルヘキサン、２，４−ジメチルヘキサン、２，５−ジメチルヘキサン、３，３−ジメチルヘキサン、３，４−ジメチルヘキサン、３−エチル−２−メチルペンタン、３−エチル−３−メチルペンタン、２，２，３−トリメチルペンタン、２，２，４−トリメチルペンタン、２，３，３−トリメチルペンタン、２，３，４−トリメチルペンタン、又は２，２，３，３−テトラメチルブタンでよい。
【００３３】
[0033]好ましい実施形態では、Ｒ３はアルキルエステルである。好ましい実施形態では、アルキルエステルは、エチル基又はブチル基である。
【００３４】
[0034]Ｒ４は、直鎖でも分枝状でもよい。Ｒ４は完全飽和でもよいし、又は１つ若しくは複数の炭素−炭素二重結合を有していてもよい。Ｒ４は、ソホロリピッドの脂肪酸テールの一部を形成する。好ましいＲ４は、１５個の炭素原子を有する。１８個の炭素原子を有する脂肪酸テールの一例はオレアートである。エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）は、別の適切な脂肪酸テールである。好ましい脂肪酸テールは９−オクタデセノアートである。
【００３５】
[0035]好ましい実施形態では、ソホロリピッドは、エチル−１７−Ｌ−［（２’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−β−Ｄ−グルコピラノシル）−オキシ］−シス−９−オクタデセノアート−６’’−アセタート、エチル−１７−Ｌ−［（２’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−β−Ｄ−グルコピラノシル）−オキシ］−シス−９−オクタデセノアート−６’−アセタート、エチル−１７−Ｌ−［（２’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−β−Ｄ−グルコピラノシル）−オキシ］−シス−９−オクタデセノアート−６’−６’’−ジアセタート、ブチル−１７−Ｌ−［（２’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−β−Ｄ−グルコピラノシル）−オキシ］−シス−９−オクタデセノアート−６’’−アセタート、ブチル−１７−Ｌ−［（２’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−β−Ｄ−グルコピラノシル）−オキシ］−シス−９−オクタデセノアート−６’−アセタート、及び／又はブチル−１７−Ｌ−［（２’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−β−Ｄ−グルコピラノシル）−オキシ］−シス−９−オクタデセノアート−６’−６’’−ジアセタートである。
【００３６】
[0036]いくつかの実施形態では、ソホロリピッドは、６’’−モノ−アセチル化エチルソホロリピッド（ＥＳＬ（６’ＯＨ，６’’Ａｃ）又は６Ｂ−Ａｃ−ＥＳＬ）、脱アセチル化エチルソホロリピッド（ＥＳＬ（６’ＯＨ，６’’ＯＨ）又はＥＳＬ）、ジアセチル化エチルソホロリピッド（ＥＳＬ（６’Ａｃ，６’’Ａｃ）又はＤｉ−Ａｃ−ＥＳＬ）、脱アセチル化ブチルソホロリピッド（ＢＳＬ（６’ＯＨ，６’’ＯＨ）又はＢｕＳＬ）、ジアセチル化ソホロリピッド（ＬＳＬ（６’Ａｃ，６’’Ａｃ）又はＬＳＬ）、及び／又はジアセチル化ブチルソホロリピッド（ＢＳＬ（６’Ａｃ，６’’Ａｃ）又はジアセチルＢｕＳＬ）でよい。
【００３７】
[0037]本発明のソホロリピッドは、天然にソホロリピッドを産生する任意の微生物によって産生され得る。酵母などの微生物は、高レベルのソホロリピッドを産生することが実証されている。ソホロリピッドを産生する酵母には、スタルメレラ（カンジダ）・ボンビコラ（Ｓｔａｒｍｅｒｅｌｌａ（Ｃａｎｄｉｄａ）  ｂｏｍｂｉｃｏｌａ）、カンジダ・フロリコラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｆｌｏｒｉｃｏｌａ）、カンジダ・リオドケンシス（Ｃａｎｄｉｄａ  ｒｉｏｄｏｃｅｎｓｉｓ）、カンジダ・ルゴサ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｒｕｇｏｓａ）、カンジダ・クオイ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｋｕｏｉ）、カンジダ・ステラタ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｔｅｌｌａｔａ）、カンジダ・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）、カンジダ・アピコラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｐｉｃｏｌａ）、トルロプシス・ペトロフィラム（Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ  ｐｅｔｒｏｐｈｉｌｕｍ）、ロドトルラ（カンジダ）・ボルゴリエンシス（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ（Ｃａｎｄｉａ）  ｂｏｒｇｏｒｉｅｎｓｉｓ）、ロドトルラ・ムキリギノサ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ  ｍｕｃｉｌｉｇｉｎｏｓａ）、カンジダ・バティスタエ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｂａｔｉｓｔａｅ）、トルロプシス・グロペンギエセリ（Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ  ｇｒｏｐｅｎｇｉｅｓｓｅｒｉ）、クリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）種、シベルリンドネラ・サムトプラカルネンシス（Ｃｙｂｅｒｌｉｎｄｎｅｒａ  ｓａｍｕｔｐｒａｋａｒｎｅｎｓｉｓ）、ピキア・アノマラ（Ｐｉｃｈｉａ  ａｎｏｍａｌａ）、ウイッカーハミーラ・ドメルキアエ（Ｗｉｃｋｅｒｈａｍｉｅｌｌａ  ｄｏｍｅｒｃｑｉａｅ）、及びヤロウイア・リポリティカ（Ｙａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ）が含まれるが、これらに限定されない。
【００３８】
[0038]ソホロリピッドは、例えば、植物油及び脂肪などの炭素源、並びにグルコースなどの糖を含有する液体培地上にソホロリピッド産生酵母を播種し、穏和な温度及び圧力下で培地に通気しながら、培地を攪拌することによって容易に産生され得る。好ましい実施形態では、ソホロリピッドは、使用前に発酵副産物を除去するために発酵培地から単離及び／又は精製される。単離及び／又は精製方法は、当該技術分野において知られている。実質的に精製されたソホロリピッドを得るために任意の適切な単離及び／又は精製方法が使用され得る。
【００３９】
[0039]「実質的に含まない」は、好ましくは、対応する不純物が、対応する乾燥抽出物又は式Ｉの化合物又は式Ｉの化合物の混合物の全重量に関して、微量、例えば、５重量％未満、４重量％未満、３重量％未満、２重量％未満、１重量％未満、０．５重量％未満、０．２重量％未満、０．１重量％未満、０．０１重量％未満、０．００１重量％未満又は０．０００１重量％未満しか存在しないことを意味する。
【００４０】
[0040]いくつかの実施形態では、ソホロリピッドを天然に産生する微生物は、本発明のソホロリピッドの産生を増大させるように修飾されてもよい。
【００４１】
[0041]他の実施形態では、本発明のソホロリピッドは組換えで産生されてもよいし、又は化学的に合成されてもよい。
【００４２】
[0042]本発明はさらに、ソホロリピッド及び少なくとも１つの付加的な化合物を含む組成物を提供し、少なくとも１つの付加的な化合物は、水、溶媒（例えば、エタノール又はＤＭＳＯなど）、酸性度調節剤（例えば、クエン酸など）、固化防止剤（例えば、イソマルトなど）、消泡剤（例えば、メチルエチルセルロース、又は脂肪酸のモノ若しくはジグリセリドなど）、酸化防止剤（例えば、ビタミンＣ又は亜硫酸塩など）、結合剤（例えば、シクロデキストリン、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチル−、メチル−、ヒドロキシプロピル−、ヒドロキシプロピルメチル−、又はメチルエチルセルロースなど）、増量剤（例えば、メチルセルロースなどのセルロース、又はカルナバワックス）、担体（例えば、アルギナートなど）、顔料、界面活性剤、色の保持剤、抗菌剤（例えば、ナタマイシン  ペディオシン、ナイシン、レブリン酸、プロピオン酸、酢酸、ホップス酸（ｈｏｐｓ  ａｃｉｄ）、及び／又はラウリン酸アルギナートなど）、乳化剤（例えば、ポリエチレングリコール、トリアセチン、クエン酸トリエチル、ヒマシ油、コリン塩（酒石酸又は乳酸コリン）、キシリトール、ラクチトール、マルチトール、ポリジメチルシロキサン、ラウリル硫酸ナトリウム、及びレシチンなど）、防腐剤（例えば、ナタマイシンなど）、分散剤（例えば、ポリオキシエチレン化合物（ポリオキシエチレンソルビタンモノラウラート／−モノオレアート／−モノパルミタート／−モノステアラート／−トリステアラートなど）、セルロース、ポリビニルピロリドン、又はプロピレングリコールなど）、及び増粘剤（例えば、アルギナート又はカラギナンなど）を含むが、これらに限定されない。
【００４３】
[0043]本発明によると、ソホロリピッド及び少なくとも１つの付加的な化合物を含む組成物は、「ソホロリピッド組成物」又は「飼料添加物組成物」とも呼ばれる。ソホロリピッド又は飼料添加物組成物の例は、ソホロリピッド水溶液、水性ソホロリピッド懸濁液、及び水性ソホロリピッドエマルションである。
【００４４】
[0044]いくつかの実施形態では、ソホロリピッド組成物は液体組成物である。液体組成物の利点は、飼料製品、特に液体飼料製品に添加するのが便利であり得ることである。所望の量は、例えば、秤量の代わりにメスフラスコ又はシリンダーを用いて測定することができる。液体ソホロリピッド組成物を用いると、ソホロリピッドをより急速又はより効率的に溶解させ、且つより均一に製品全体に分散させることが可能になる。液体ソホロリピッド組成物は、固形分を形成する傾向が低いことがある。好ましい液体ソホロリピッド組成物は、乳化剤又は消泡剤を含み得る。
【００４５】
[0045]或いは、ソホロリピッド又は飼料添加物組成物は固体組成物である。固体組成物の利点は、このような組成物が、液体組成物よりも重量が軽く、より安定性であり得ることである。固体ソホロリピッド組成物は、飼料製品の中又は上に分散され得る。好ましい固体ソホロリピッド組成物は担体及び／又は分散剤を含み、これらの成分は混合特性を改善し得るか、又は投与を容易にし得る。
【００４６】
[0046]本発明の飼料添加物組成物の投与量は個体の要件に応じて異なることになり、動物種、年齢、体重、及び体重増加又はＦＣＲの喪失の理由などの因子が考慮に入れられるであろう。
【００４７】
[0047]実際には、本発明に従う飼料添加物組成物は、直接又はブレンド若しくは飼料プレミックス組成物の一部として動物飼料に添加される。プレミックスは、好ましくは、１つ又は複数の微小成分と、希釈剤及び／又は担体との均一な混合物を指定する。プレミックスは、より大きい混合物中の微小成分の均一な分散を促進するために使用される。
【００４８】
[0048]「動物飼料」という用語は、動物による摂取に適した、又は動物による摂取が意図されるあらゆる化合物、調製物、又は混合物を指す。単胃動物のための動物飼料は、通常、濃縮物と、ビタミン、ミネラル、酵素、直接給与生菌、アミノ酸及び／又は他の飼料成分（例えば、プレミックス中）とを含むが、反芻動物のための動物飼料は一般にまぐさ（粗飼料及び貯蔵牧草を含む）を含み、濃縮物と、ビタミン、ミネラル、酵素  直接給与生菌、アミノ酸及び／又は他の飼料成分（例えば、プレミックス中）とをさらに含み得る。
【００４９】
[0049]濃縮物：「濃縮物」という用語は、高いタンパク質及びエネルギーの濃縮を伴う飼料、例えば、魚粉、糖蜜、オリゴ糖、ソルガム、種子及び穀物（全体、又は例えば、コーン、オート麦、ライ麦、大麦、小麦から破砕、粉砕などによって調製）、油糧種子の圧搾粕（例えば、綿実、ベニバナ、ヒマワリ、大豆（大豆ミールなど）、菜種／キャノーラ、ピーナッツ又はラッカセイ由来）、パーム核油粕、酵母由来の材料、並びに蒸留穀物残渣（例えば、湿潤蒸留穀物残渣（ＷＤＳ）及び可溶性物質添加乾燥蒸留穀物残渣（ＤＤＧＳ））などを意味する。
【００５０】
[0050]好ましい実施形態では、ブレンド又はプレミックス組成物は、上記のソホロリピッド又は飼料添加物組成物と、少なくとももう１つの飼料成分とを含む。
【００５１】
[0051]実施形態において、もう１つの飼料成分は、好ましくは本明細書において以下に記載されるような１つ又は複数の酵素を含む。
【００５２】
[0052]実施形態において、もう１つの飼料成分は、好ましくは本明細書において以下に記載されるような１つ又は複数のプロバイオティクスを含む。
【００５３】
[0053]実施形態において、もう１つの飼料成分は、好ましくは本明細書において以下に記載されるような１つ又は複数のビタミンを含む。
【００５４】
[0054]実施形態において、もう１つの飼料成分は、好ましくは本明細書において以下に記載されるような１つ又は複数のミネラルを含む。
【００５５】
[0055]実施形態において、もう１つの飼料成分は、好ましくは本明細書において以下に記載されるような１つ又は複数のアミノ酸を含む。
【００５６】
[0056]実施形態において、もう１つの飼料成分は、好ましくは本明細書において以下に記載されるような１つ又は複数のプレバイオティクスを含む。
【００５７】
[0057]実施形態において、もう１つの飼料成分は、好ましくは本明細書において以下に記載されるような１つ又は複数の有機酸を含む。
【００５８】
[0058]実施形態において、もう１つの飼料成分は、好ましくは本明細書において以下に記載されるような１つ又は複数のフィトジェニクス（ｐｈｙｔｏｇｅｎｉｅｓ）を含む。
【００５９】
[0059]［付加的な酵素］
[0060]別の実施形態では、本明細書に記載される組成物は、任意選択的に、１つ又は複数の酵素を含む。酵素は、ＮＣ−ＩＵＢＭＢからのハンドブック「Ｅｎｚｙｍｅ  Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ」（１９９２）に基づいて分類することができ、インターネット：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｘｐａｓｙ．ｃｈ／ｅｎｚｙｍｅ／のＥＮＺＹＭＥサイトも参照されたい。ＥＮＺＹＭＥは、酵素の命名に関する情報の宝庫である。これは、主として、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｕｎｉｏｎ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（ＩＵＢ−ＭＢ）のＮｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅの推奨（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，１９９２）に基づいており、これには、ＥＣ（Ｅｎｚｙｍｅ  Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ）番号が提供された、特徴付けされた各種類の酵素が記載されている（Ｂａｉｒｏｃｈ  Ａ．Ｔｈｅ  ＥＮＺＹＭＥ  ｄａｔａｂａｓｅ，２０００，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ２８：３０４−３０５）。このＩＵＢ−ＭＢ  Ｅｎｚｙｍｅ命名法は、その基質特異性と、時折、その分子機構とに基づき；このような分類は、これらの酵素の構造的特徴を反映しない。
【００６０】
[0061]エンドグルカナーゼ、ガラクタナーゼ、マンナナーゼ、デキストラナーゼ、リゾチーム及びガラクトシダーゼなどの特定のグリコシドヒドロラーゼ酵素の別の分類は、Ｈｅｎｒｉｓｓａｔ  ｅｔ  ａｌ，“Ｔｈｅ  ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ−ａｃｔｉｖｅ  ｅｎｚｙｍｅｓ  ｄａｔａｂａｓｅ（ＣＡＺｙ）ｉｎ  ２０１３”，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．（２０１４年１月１日）４２（Ｄ１）：Ｄ４９０−Ｄ４９５に記載されており；ｗｗｗ．ｃａｚｙ．ｏｒｇも参照されたい。
【００６１】
[0062]したがって、本発明の飼料組成物は、ガラクタナーゼ（ＥＣ３．２．１．８９）；アルファ−ガラクトシダーゼ（ＥＣ３．２．１．２２）；プロテアーゼ（ＥＣ３．４）；ホスホリパーゼＡ１（ＥＣ３．１．１．３２）；ホスホリパーゼＡ２（ＥＣ３．１．１．４）；リゾホスホリパーゼ（ＥＣ３．１．１．５）；ホスホリパーゼＣ（３．１．４．３）；ホスホリパーゼＤ（ＥＣ３．１．４．４）；アミラーゼ、例えば、アルファ−アミラーゼ（ＥＣ３．２．１．１）など；アラビノフラノシダーゼ（ＥＣ３．２．１．５５）；ベータ−キシロシダーゼ（ＥＣ３．２．１．３７）；アセチルキシランエステラーゼ（ＥＣ３．１．１．７２）；フェルロイルエステラーゼ（ＥＣ３．１．１．７３）；セルラーゼ（ＥＣ３．２．１．４）；セロビオヒドロラーゼ（ＥＣ３．２．１．９１）；ベータ−グルコシダーゼ（ＥＣ３．２．１．２１）；プルラナーゼ（ＥＣ３．２．１．４１）、アルファ−マンノシダーゼ（ＥＣ３．２．１．２４）、マンナナーゼ（ＥＣ３．２．１．２５）及びベータ−グルカナーゼ（ＥＣ３．２．１．４又はＥＣ３．２．１．６）、又はこれらの任意の組合せを含む群から選択される少なくとも１つの他の酵素も含み得る。
【００６２】
[0063]特定の実施形態では、本発明の飼料組成物は、フィターゼ（ＥＣ３．１．３．８又は３．１．３．２６）を含む。市販のフィターゼの例としては、Ｂｉｏ−ＦｅｅｄＴＭＰｈｙｔａｓｅ（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ）、Ｒｏｎｏｚｙｍｅ（登録商標）Ｐ、Ｒｏｎｏｚｙｍｅ（登録商標）ＮＰ及びＲｏｎｏｚｙｍｅ（登録商標）ＨｉＰｈｏｓ（ＤＳＭ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）、ＮａｔｕｐｈｏｓＴＭ（ＢＡＳＦ）、Ｆｉｎａｓｅ（登録商標）及びＱｕａｎｔｕｍ（登録商標）Ｂｌｕｅ（ＡＢ  Ｅｎｚｙｍｅｓ）、ＯｐｔｉＰｈｏｓ（登録商標）（Ｈｕｖｅｐｈａｒｍａ）Ｐｈｙｚｙｍｅ（登録商標）ＸＰ（Ｖｅｒｅｎｉｕｍ／ＤｕＰｏｎｔ）及びＡｘｔｒａ（登録商標）ＰＨＹ（ＤｕＰｏｎｔ）が挙げられる。他の好ましいフィターゼには、例えば、国際公開第９８／２８４０８号パンフレット、国際公開第００／４３５０３号パンフレット、及び国際公開第０３／０６６８４７号パンフレットに記載されるものが含まれる。
【００６３】
[0064]特定の実施形態では、本発明の飼料組成物は、プロテアーゼ（ＥＣ３．４）を含む。市販のプロテアーゼの例としては、Ｒｏｎｏｚｙｍｅ（登録商標）ＰｒｏＡｃｔ（ＤＳＭ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）が挙げられる。
【００６４】
[0065]［微生物］
[0066]実施形態において、動物飼料組成物は、１つ又は複数の付加的な微生物をさらに含む。特定の実施形態では、動物飼料組成物は、以下の属：ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、ラクトコッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）、ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、ペディオコッカス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ）、エンテロコッカス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、ロイコノストック（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）、カルノバクテリウム（Ｃａｒｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、プロピオニバクテリウム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、クロストリジウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）及びメガスフェラ（Ｍｅｇａｓｐｈａｅｒａ）又はこれらの任意の組合せのうちの１つ又は複数からの細菌をさらに含む。
【００６５】
[0067]好ましい実施形態では、動物飼料組成物は、以下の菌株：バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）、バチルス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｅｒｅｕｓ）、バチルス・プミルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｕｍｉｌｕｓ）、バチルス・ポリミキサ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｏｌｙｍｙｘａ）、バチルス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）、バチルス・コアグランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｏａｇｕｌａｎｓ）、バチルス・サーキュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｉｒｃｕｌａｎｓ）、エンテロコックス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ）、エンテロコッカス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）種、及びペディオコッカス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ）種、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）種、ビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）種、ラクトバチルス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ペディオコッカス・アシディラクティシ（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｓｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ）、ラクトコックス・ラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｌａｃｔｉｓ）、ビフィドバクテリウム・ビフィドゥム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｉｆｉｄｕｍ）、プロピオニバクテリウム・トエニイ（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｈｏｅｎｉｉ）、ラクトバチルス・ファルシミヌス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆａｒｃｉｍｉｎｕｓ）、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）、クロストリジウム・ブチリカム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｕｔｙｒｉｃｕｍ）、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種アニマリス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｎｉｍａｌｉｓ  ｓｓｐ．ａｎｉｍａｌｉｓ）、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）、ラクトバチルス・サリバリウス亜種サリバリウス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  ｓｓｐ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）、メガスフェラ・エルスデニイ（Ｍｅｇａｓｐｈａｅｒａ  ｅｌｓｄｅｎｉｉ）、プロピオニバクテリア（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉａ）種のうちの１つ又は複数からの細菌をさらに含む。
【００６６】
[0068]より好ましい実施形態では、飼料プレミックス又は動物飼料は、バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）の以下の菌株：３Ａ−Ｐ４（ＰＴＡ−６５０６）、１５Ａ−Ｐ４（ＰＴＡ−６５０７）、２２Ｃ−Ｐ１（ＰＴＡ−６５０８）、２０８４（ＮＲＲＬ  Ｂ−５００１３０）、ＬＳＳＡ０１（ＮＲＲＬ−Ｂ−５０１０４）、ＢＳ２７（ＮＲＲＬ  Ｂ−５０１０５）、ＢＳ１８（ＮＲＲＬ  Ｂ−５０６３３）、ＢＳ２７８（ＮＲＲＬ  Ｂ−５０６３４）、ＤＳＭ２９８７０、ＤＳＭ２９８７１、ＮＲＲＬ  Ｂ−５０１３６、ＮＲＲＬ  Ｂ−５０６０５、ＮＲＲＬ  Ｂ−５０６０６、ＮＲＲＬ  Ｂ−５０６２２及びＰＴＡ−７５４７のうちの１つ又は複数からの細菌をさらに含む。
【００６７】
[0069]より好ましい実施形態では、飼料プレミックス又は動物飼料は、バチルス・プミルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｕｍｉｌｕｓ）の以下の菌株：ＮＲＲＬ  Ｂ−５００１６、ＡＴＣＣ７００３８５、ＮＲＲＬ  Ｂ−５０８８５又はＮＲＲＬ  Ｂ−５０８８６のうちの１つ又は複数からの細菌をさらに含む。
【００６８】
[0070]より好ましい実施形態では、飼料プレミックス又は動物飼料は、バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｆｏｒｍｉｓ）の以下の菌株：ＮＲＲＬ  Ｂ５００１５、ＮＲＲＬ  Ｂ−５０６２１又はＮＲＲＬ  Ｂ−５０６２３のうちの１つ又は複数からの細菌をさらに含む。
【００６９】
[0071]より好ましい実施形態では、飼料プレミックス又は動物飼料は、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）の以下の菌株：ＤＳＭ２９８６９、ＤＳＭ２９８７２、ＮＲＲＬ  Ｂ５０６０７、ＰＴＡ−７５４３、ＰＴＡ−７５４９、ＮＲＲＬ  Ｂ−５０３４９、ＮＲＲＬ  Ｂ−５０６０６、ＮＲＲＬ  Ｂ−５００１３、ＮＲＲＬ  Ｂ−５０１５１、ＮＲＲＬ  Ｂ−５０１４１、ＮＲＲＬ  Ｂ−５０１４７又はＮＲＲＬ  Ｂ−５０８８８のうちの１つ又は複数からの細菌を含む。
【００７０】
[0072]動物飼料組成物中の細菌株のそれぞれの細菌数は、１ｘ１０４〜１ｘ１０１４ＣＦＵ／乾燥物質ｋｇであり、好ましくは、１ｘ１０６〜１ｘ１０１２ＣＦＵ／乾燥物質ｋｇであり、より好ましくは、１ｘ１０７〜１ｘ１０１１ＣＦＵ／乾燥物質ｋｇである。より好ましい実施形態では、動物飼料組成物中の細菌株のそれぞれの細菌数は、１ｘ１０８〜１ｘ１０１０ＣＦＵ／乾燥物質ｋｇである。
【００７１】
[0073]動物飼料組成物中の細菌株のそれぞれの細菌数は、１ｘ１０５〜１ｘ１０１５ＣＦＵ／動物／日であり、好ましくは、１ｘ１０７〜１ｘ１０１３ＣＦＵ／動物／日であり、より好ましくは、１ｘ１０８〜１ｘ１０１２ＣＦＵ／動物／日である。より好ましい実施形態では、動物飼料組成物中の細菌株のそれぞれの細菌数は、１ｘ１０９〜１ｘ１０１１ＣＦＵ／動物／日である。
【００７２】
[0074]別の実施形態では、１つ又は複数の細菌株は、安定した胞子の形態で存在する。
【００７３】
[0075]［アミノ酸］
[0076]本発明の飼料組成物はさらに、１つ又は複数のアミノ酸を含み得る。動物飼料で使用されるアミノ酸の例は、リジン、アラニン、ベータ−アラニン、スレオニン、メチオニン及びトリプトファンである。
【００７４】
[0077]［ビタミン及びミネラル］
[0078]別の実施形態では、動物飼料は、１つ又は複数のビタミン、例えば、１つ又は複数の脂溶性ビタミン及び／又は１つ又は複数の水溶性ビタミンを含み得る。別の実施形態では、動物飼料は、任意選択的に、１つ又は複数のミネラル、例えば、１つ又は複数の微量ミネラル及び／又は１つ又は複数の多量ミネラルを含み得る。
【００７５】
[0079]通常、脂溶性及び水溶性ビタミン、並びに微量ミネラルは、飼料への添加が意図されるいわゆるプレミックスの一部を形成するが、多量ミネラルは、通常、別個に飼料に添加される。
【００７６】
[0080]脂溶性ビタミンの非限定的な例としては、ビタミンＡ、ビタミンＤ３、ビタミンＥ、及びビタミンＫ、例えば、ビタミンＫ３が挙げられる。
【００７７】
[0081]水溶性ビタミンの非限定的な例としては、ビタミンＢ１２、ビオチン及びコリン、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ナイアシン、葉酸及びパントテン酸、例えば、Ｃａ−Ｄ−パントテン酸が挙げられる。
【００７８】
[0082]微量ミネラルの非限定的な例としては、ホウ素、コバルト、塩化物、クロム、銅、フッ化物、ヨウ素、鉄、マンガン、モリブデン、セレン及び亜鉛が挙げられる。
【００７９】
[0083]多量ミネラルの非限定的な例としては、カルシウム、マグネシウム、カリウム及びナトリウムが挙げられる。
【００８０】
[0084]これらの成分の栄養要求量（家禽及び子ブタ／ブタにより例証される）は、国際公開第２００１／０５８２７５号パンフレットの表Ａに列挙されている。栄養要求量は、これらの成分が指示される濃度で食餌中に提供されなければならないことを意味する。
【００８１】
[0085]代替として、本発明の動物飼料添加物は、国際公開第０１／５８２７５号パンフレットの表Ａにおいて指定される個々の成分のうちの少なくとも１つを含む。少なくとも１つとは、１つ又は複数、１つ、又は２つ、又は３つ、又は４つなどで、最大１３までの全て、又は最大１５までの全てのいずれかである、個々の成分を意味する。より具体的には、この少なくとも１つの個々の成分は、表Ａの第４列、又は第５列、又は第６列に指示される範囲内の飼料中濃度を提供するような量で本発明の添加物中に含まれる。
【００８２】
[0086]またさらなる実施形態では、本発明の動物飼料添加物は、好ましくは、以下の表１に指定される範囲内の飼料中濃度（それぞれ、ブロイラー食餌について）を提供するように、以下のビタミンの少なくとも１つを含む。
【００８３】
【表１】
2020528414.tif 000003
【００８４】
[0087]［他の飼料成分］
[0088]本発明の飼料組成物はさらに、着色剤、安定剤、成長改善添加物及び芳香化合物／香味料、多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）；活性酸素発生種、抗菌ペプチド及び抗真菌ポリペプチドを含み得る。
【００８５】
[0089]着色剤の例は、ベータ−カロテン、アスタキサンチン、及びルテインなどのカロテノイドである。
【００８６】
[0090]芳香化合物／香味料の例は、クレオソール、アネトール、デカ−、ウンデカ−及び／又はドデカ−ラクトン、イオノン、イロン、ギンゲロール、ピペリジン、プロピリデンファタリド（ｐｒｏｐｙｌｉｄｅｎｅ  ｐｈａｔａｌｉｄｅ）、ブチリデンファタリド（ｂｕｔｙｌｉｄｅｎｅ  ｐｈａｔａｌｉｄｅ）、カプサイシン及びタンニンである。
【００８７】
[0091]安定剤（例えば、酸性化剤）の例は有機酸である。有機酸の例は、安息香酸（ＶｅｖｏＶｉｔａｌｌ（登録商標）、ＤＳＭ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）、ギ酸、酪酸、フマル酸及びプロピオン酸である。
【００８８】
[0092]抗菌ペプチド（ＡＭＰ）の例は、ＣＡＰ１８、ロイコシン（Ｌｅｕｃｏｃｉｎ）Ａ、トリトルプチシン（Ｔｒｉｔｒｐｔｉｃｉｎ）、プロテグリン−１、タナチン（Ｔｈａｎａｔｉｎ）、デフェンシン、ラクトフェリン、ラクトフェリシン、及びオビスピリン（Ｏｖｉｓｐｉｒｉｎ）、例えば、ノビスピリン（Ｎｏｖｉｓｐｉｒｉｎ）（Ｒｏｂｅｒｔ  Ｌｅｈｒｅｒ，２０００）、プレクタシン（Ｐｌｅｃｔａｓｉｎ）、及びスタチンであり、国際公開第０３／０４４０４９号パンフレット及び国際公開第０３／０４８１４８号パンフレットに開示される化合物及びポリペプチド、並びに抗菌活性を保持する上記のものの変異体又は断片が含まれる。
【００８９】
[0093]抗真菌ポリペプチド（ＡＦＰ）の例は、国際公開第９４／０１４５９号パンフレット及び国際公開第０２／０９０３８４号パンフレットに開示されるように、アスペルギルス・ギガンテウス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｇｉｇａｎｔｅｕｓ）、及びアスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）ペプチド、並びに抗真菌活性を保持するその変異体及び断片である。
【００９０】
[0094]多価不飽和脂肪酸の例は、アラキドン酸、ドコサヘキサエン酸、エイコサペンタエン酸及びガンマ−リノール酸などの、Ｃ１８、Ｃ２０及びＣ２２多価不飽和脂肪酸である。
【００９１】
[0095]活性酸素発生種の例は、過ホウ酸塩、過硫酸、又は過炭酸塩などの化学物質；及びオキシダーゼ、オキシゲナーゼ又はシンテターゼなどの酵素である。
【００９２】
[0096]本発明の組成物はさらに少なくとも１つのアミノ酸を含み得る。動物飼料で使用されるアミノ酸の例は、リジン、アラニン、ベータ−アラニン、スレオニン、メチオニン及びトリプトファンである。
【００９３】
[0097]本発明のブレンド又はプレミックス組成物の特定の例は、（ａ）上記で指定される少なくとも１つのソホロリピッド、（ｂ）少なくとも１つの脂溶性ビタミン、（ｃ）少なくとも１つの水溶性ビタミン、（ｄ）少なくとも１つの微量ミネラル、及び／又は（ｅ）少なくとも１つの多量ミネラルを含む。
【００９４】
[0098]また本発明は、本発明の１つ又は複数のソホロリピッドを含む動物飼料組成物にも関する。一実施形態では、本発明は、本明細書に記載される顆粒と、植物ベースの材料とを含む動物飼料に関する。一実施形態では、本発明は、本明細書に記載される動物飼料添加物と、植物ベースの材料とを含む動物飼料に関する。
【００９５】
[0099]動物飼料組成物又は食餌は、比較的高いタンパク質含量を有する。家禽及びブタの食餌は、国際公開第０１／５８２７５号パンフレットの表Ｂ、第２〜３列に指示されるように特徴付けることができる。魚の食餌は、この表Ｂの第４列に指示されるように特徴付けることができる。さらに、このような魚の食餌は、通常、２００〜３１０ｇ／ｋｇの粗脂肪含量を有する。
【００９６】
[00100]本発明に従う好ましい動物飼料組成物は５０〜８００ｇ／ｋｇの粗タンパク質含量を有し、さらに、本明細書で特許請求される少なくとも１つのソホロリピッドを含む。
【００９７】
[00101]さらに、又は（上記の粗タンパク質含量の）代替として、本発明の動物飼料組成物は、１０〜３０ＭＪ／ｋｇの代謝性エネルギー含量；及び／又は０．１〜２００ｇ／ｋｇのカルシウム含量；及び／又は０．１〜２００ｇ／ｋｇの有効態リン含量；及び／又は０．１〜１００ｇ／ｋｇのメチオニン含量；及び／又は０．１〜１５０ｇ／ｋｇのメチオニン＋システイン含量；及び／又は０．５〜５０ｇ／ｋｇのリジン含量を有する。
【００９８】
[00102]特定の実施形態では、代謝性エネルギー、粗タンパク質、カルシウム、リン、メチオニン、メチオニン＋システイン、及び／又はリジンの含量は、国際公開第０１／５８２７５号パンフレットの表Ｂの範囲２、３、４又は５（Ｒ．２〜５）のいずれか１つの範囲内である。
【００９９】
[00103]粗タンパク質は、窒素（Ｎ）に係数６．２５を乗じたもの、すなわち粗タンパク質（ｇ／ｋｇ）＝Ｎ（ｇ／ｋｇ）ｘ６．２５として計算される。窒素含量は、ケルダール法（Ａ．Ｏ．Ａ．Ｃ．，１９８４，Ｏｆｆｉｃｉａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  １４ｔｈ  ｅｄ．，Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｏｆｆｉｃｉａｌ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｓ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  ＤＣ）によって決定される。
【０１００】
[00104]代謝性エネルギーは、ＮＲＣ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｕｔｒｉｅｎｔ  ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ  ｉｎ  ｓｗｉｎｅ，ｎｉｎｔｈ  ｒｅｖｉｓｅｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ  １９８８，ｓｕｂｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｎ  ｓｗｉｎｅ  ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ，ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｎ  ａｎｉｍａｌ  ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ，ｂｏａｒｄ  ｏｆ  ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，ｎａｔｉｏｎａｌ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｃｏｕｎｃｉｌ．Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．，ｐｐ．２−６、及びＥｕｒｏｐｅａｎ  Ｔａｂｌｅ  ｏｆ  Ｅｎｅｒｇｙ  Ｖａｌｕｅｓ  ｆｏｒ  Ｐｏｕｌｔｒｙ  Ｆｅｅｄ−ｓｔｕｆｆｓ，Ｓｐｅｌｄｅｒｈｏｌｔ  ｃｅｎｔｒｅ  ｆｏｒ  ｐｏｕｌｔｒｙ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ，７３６１  ＤＡ  Ｂｅｅｋｂｅｒｇｅｎ，Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ．Ｇｒａｆｉｓｃｈ  ｂｅｄｒｉｊｆ  Ｐｏｎｓｅｎ  ＆  ｌｏｏｉｊｅｎ  ｂｖ，Ｗａｇｅｎｉｎｇｅｎ．ＩＳＢＮ  ９０−７１４６３−１２−５に基づいて計算することができる。
【０１０１】
[00105]完全動物食餌中のカルシウム、有効態リン及びアミノ酸の食餌含量は、Ｖｅｅｖｏｅｄｅｒｔａｂｅｌ  １９９７，ｇｅｇｅｖｅｎｓ  ｏｖｅｒ  ｃｈｅｍｉｓｃｈｅ  ｓａｍｅｎｓｔｅｌｌｉｎｇ，ｖｅｒｔｅｅｒｂａａｒｈｅｉｄ  ｅｎ  ｖｏｅｄｅｒｗａａｒｄｅ  ｖａｎ  ｖｏｅｄｅｒｍｉｄｄｅｌｅｎ，Ｃｅｎｔｒａｌ  Ｖｅｅｖｏｅｄｅｒｂｕｒｅａｕ，Ｒｕｎｄｅｒｗｅｇ  ６，８２１９  ｐｋ  Ｌｅｌｙｓｔａｄ．ＩＳＢＮ  ９０−７２８３９−１３−７などの飼料表に基づいて計算される。
【０１０２】
[00106]特定の実施形態では、本発明の動物飼料組成物は、上記で定義される少なくとも１つの植物性タンパク質を含有する。
【０１０３】
[00107]本発明の動物飼料組成物は、肉骨粉、羽毛粉、及び／又は魚粉などの動物タンパク質も、通常０〜２５％の量で含有し得る。また本発明の動物飼料組成物は、可溶性物質添加乾燥蒸留穀物残渣（ＤＤＧＳ）も、通常０〜３０％の量で含み得る。
【０１０４】
[00108]またさらに特定の実施形態では、本発明の動物飼料組成物は、０〜８０％のトウモロコシ；及び／又は０〜８０％のソルガム；及び／又は０〜７０％の小麦；及び／又は０〜７０％の大麦；及び／又は０〜３０％のオート麦；及び／又は０〜４０％の大豆ミール；及び／又は０〜２５％の魚粉；及び／又は０〜２５％の肉骨粉；及び／又は０〜２０％の乳清を含有する。
【０１０５】
[00109]動物飼料は、植物性タンパク質を含み得る。特定の実施形態では、植物性タンパク質のタンパク質含量は、少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、又は９０％（ｗ／ｗ）である。植物性タンパク質は、マメ科植物及び穀類、例えば、マメ科（Ｆａｂａｃｅａｅ）（マメ科（Ｌｅｇｕｍｉｎｏｓａｅ））、アブラナ科（Ｃｒｕｃｉｆｅｒａｃｅａｅ）、アカザ科（Ｃｈｅｎｏｐｏｄｉａｃｅａｅ）、及びイネ科（Ｐｏａｃｅａｅ）の植物からの材料、例えば、大豆ミール、ルピナスミール、菜種ミール、並びにこれらの組み合わせなどの植物性タンパク質源に由来し得る。
【０１０６】
[00110]特定の実施形態では、植物性タンパク質源は、マメ科（Ｆａｂａｃｅａｅ）の１つ又は複数の植物、例えば、大豆、ルピナス、エンドウ豆、又はマメからの材料である。別の特定の実施形態では、植物性タンパク質源は、アカザ科（Ｃｈｅｎｏｐｏｄｉａｃｅａｅ）の１つ又は複数の植物、例えば、テンサイ、サトウダイコン、ホウレンソウ又はキノアからの材料である。植物性タンパク質源の他の例は、菜種、及びキャベツである。別の特定の実施形態では、大豆は、好ましい植物性タンパク質源である。植物性タンパク質源の他の例は、大麦、小麦、ライ麦、オート麦、トウモロコシ（コーン）、コメ、及びソルガムなどの穀類である。
【０１０７】
[00111]動物飼料（又は動物食餌）は、例えば、マッシュ飼料（非ペレット状）又はペレット飼料として製造することができる。典型的には、粉砕飼料は混合され、当該の種の規格に従って十分な量の必須ビタミン及びミネラルが添加される。ソホロリピッドは、固体又は液体配合物として添加することができる。例えば、マッシュ飼料の場合、固体又は液体ソホロリピッド配合物は、原料の混合ステップの前又は最中に添加され得る。ペレット飼料の場合も、ソホロリピッド調製物（液体又は固体）は、原料の混合ステップの前又は最中に添加され得る。
【０１０８】
[00112]［実施例］
[00113]ソホロリピッドは、例えば、ＨＰＬＣ、ＬＣ−ＭＳ又はＮＭＲ分光法によって分析することができる。適切なＮＭＲ分光法は以下の通りである：約５ｍｇのソホロリピッド及び内部標準（ジメトキシベンゼン）を４ｍｌバイアル中に秤量することができる（微量天秤により０．００１ｍｇ以内まで）。サンプルを２ｍｌのＭｅＯＤ中に溶解させることができる。１ＨＮＭＲスペクトルは、３０秒のパルス間遅延及び１６スキャンにより、３００Ｋのプローブ温度で測定される低温プローブを備えた７００ＭＨｚ  ＮＭＲにおいて記録することができる。適切なＬＣ−ＭＳ法は以下の通りである：カラム：逆相（Ｃ１８）ＵＰＬＣカラム（１．７μｍ、１００ｘ２．１ｍｍ（ＬｘＩＤ）及び勾配溶離。カラムは５０℃に保たれる。勾配溶離は、水中０．１％のギ酸（Ａ）及びアセトニトリル中０．１％のギ酸を以下のように混合することによって実施される：０〜１４分、４０％Ｂ〜１００％Ｂ；１４〜１７分、１００％Ｂ；１７〜１７．１分、１００％Ｂ〜４０％Ｂ、及び１７．１〜２０分、４０％Ｂ。流速は４００ｕｌ／分である。これらの化合物のイオン化モードとして正イオンＡＰＣＩモードが選択され、高分解能質量分析より同定が実施される。定量化は、内部標準補正と組み合わせて外部較正曲線によって実施される。
【０１０９】
[00114]［実施例１：ヒト末梢血白血球（ＰＢＬ）に対するソホロリピッドの毒性の評価］
[00115]種々の濃度（１．２５μｍ、２．５μｍ、５μｍ、１０μｍ、及び２０μｍ）の６つのソホロリピッド：ＬＳＬ（６’Ａｃ，６’’Ａｃ）；ＥＳＬ（６’ＯＨ，６’’Ａｃ）；ＥＳＬ（６’ＯＨ，６’’ＯＨ）；ＥＳＬ（６’Ａｃ，６’’Ａｃ）；ＢＳＬ（６’ＯＨ，６’’ＯＨ）；及びＢＳＬ（６’Ａｃ，６’’Ａｃ）において、Ａｌａｍａｒ  Ｂｌｕｅにより細胞生存率を測定した。
【０１１０】
[00116]結果：検査したあらゆる濃度において、ソホロリピッドはどれも毒性を誘発しなかった。
【０１１１】
[00117]［実施例２：ヒトＰＢＬ中の炎症性メディエーターに対するソホロリピッドの効果の評価］
[00118]ＰＢＬをヒト血液から単離した。異なる濃度（１μｍ、５μｍ、及び１０μｍ）の６つのソホロリピッド：ＬＳＬ（６’Ａｃ，６’’Ａｃ）；ＥＳＬ（６’ＯＨ，６’’Ａｃ）；ＥＳＬ（６’ＯＨ，６ＯＨ）；ＥＳＬ（６’Ａｃ，６’’Ａｃ）；ＢＳＬ（６’ＯＨ，６ＯＨ）；及びＢＳＬ（６’Ａｃ，６’’Ａｃ）の存在下で、ＰＢＬをＬＰＳで処理して炎症反応を誘発した。
【０１１２】
[00119]結果：ＥＳＬ（６’ＯＨ，６’’ＯＨ）は、ＩＬ−１βの分泌、ＩＬ−６の分泌、ＩＬ−８の分泌、ＴＮＦ−αの分泌、及びＭＩＰ−１βの分泌を低下させた。ＥＳＬ（６’Ａｃ，６’’Ａｃ）は、ＩＬ−１βの分泌、ＩＬ−６の分泌、ＩＬ−８の分泌、ＴＮＦ−αの分泌、及びＭＩＰ−１βの分泌を低下させた。ＢＳＬ（６’ＯＨ，６’’ＯＨ）は、ＩＬ−１βの分泌、ＩＬ−６の分泌、ＩＬ−８の分泌、ＴＮＦ−αの分泌、及びＭＩＰ−１βの分泌を低下させた。ＬＳＬ（６’Ａｃ，６’’Ａｃ）は、ＩＬ−８の分泌、ＴＮＦ−αの分泌、及びＭＩＰ−１βの分泌を低下させた。ＥＳＬ（６’ＯＨ，６’’Ａｃ）は、ＴＮＦ−αの分泌、及びＭＩＰ−１βの分泌を低下させた。ＢＳＬ（６’Ａｃ，６’’Ａｃ）は、ＴＮＦ−αの分泌を低下させた。６つ全てのソホロリピッドがＲＡＮＴＥＳの分泌を増大させた。
【０１１３】
[00120]これらの結果は、ソホロリピッドがＰＢＬ中で抗炎症及び抗サイトカイン効果を有することを実証する。
【０１１４】
[00121]［実施例３：ミクログリア中の炎症性メディエーターに対するソホロリピッドの効果の評価］
[00122]Ｅ２２ラット由来の初代ミクログリア培養物からミクログリア細胞を得た。１日目に、ミクログリア細胞を９６ウェルプレートに播種し、２４時間接着させた。３日目に、ミクログリア細胞をソホロリピッドで２４時間前処理した（ｎ＝１１）。４日目に、ミクログリア細胞をリポ多糖（ＬＰＳ）で刺激した。５日目に、上清を採取し、対象のサイトカインについて分析した。
【０１１５】
[00123]ソホロリピッドの前処理は、ＰＧＥ２（ＩＣ５０＝２９．８μＭ）及びＴＮＦ−アルファ（ＩＣ５０＝２１．２μＭ）の両方の分泌を低下させるのに有効であった。
【０１１６】
[00124]［実施例４：結腸上皮細胞に対するソホロリピッドの毒性の評価］
[00125]ＨＴ−２９細胞（結腸腺癌細胞株）はインビトロで成熟腸細胞と似ているので、これらの細胞を使用した。種々の濃度（１．２５μｍ、２．５μｍ、５μｍ、１０μｍ、及び２０μｍ）の６つのソホロリピッド：ＬＳＬ（６’Ａｃ，６’’Ａｃ）；ＥＳＬ（６’ＯＨ，６’’Ａｃ）；ＥＳＬ（６’ＯＨ，６’’ＯＨ）；ＥＳＬ（６’Ａｃ，６’’Ａｃ）；ＢＳＬ（６’ＯＨ，６’’ＯＨ）；及びＢＳＬ（６’Ａｃ，６’’Ａｃ）において、Ａｌａｍａｒ  Ｂｌｕｅにより細胞生存率を測定した。
【０１１７】
[00126]結果：検査したあらゆる濃度において、ソホロリピッドはどれも毒性を誘発しなかった。
【０１１８】
[00127]［実施例５：動物飼料プレミックス組成物］
[00128]動物飼料プレミックス組成物は、２０ｇの少なくとも１つのソホロリピッド組成物を以下のプレミックス（プレミックス１キロ当たり）に添加することによって調製される。
【０１１９】
【表２】
2020528414.tif 000004
【０１２０】
[00129]［実施例６：動物飼料］
[00130]以下の組成（％，ｗ／ｗ）を有するブロイラー飼育食餌は、成分を混合することによって調製される。小麦、ライ麦及びＳＢＭ４８は、Ｍｏｕｌｉｎ  Ｍｏｄｅｒｎｅ  Ｈｉｒｓｉｎｑｕｅ，Ｈｉｒｓｉｎｇｕｅ，Ｆｒａｎｃｅから入手可能である。混合した後、飼料は所望の温度、例えば約７０℃でペレット化される（３ｘ２５ｍｍ）。
【０１２１】
【表３】
2020528414.tif 000005
【０１２２】
[00131]得られた動物飼料は、１ｋｇ当たり２００ｍｇ（２００ｐｐｍ）の少なくとも１つのソホロリピッド組成物を含む。
【０１２３】
[00132]［実施例７：無負荷のブロイラーの能力及び消化性に対するソホロリピッドの食餌補充の効果］
[00133]概要：食餌のＳＬ処理は、種々の免疫学的分析に基づいて、この試験で使用した用量範囲において成長期の商業用ブロイラー家禽に対して明白な免疫調節性及び有益な効果を示した。ＳＬ４は明らかにインビボでの抗寄生虫効果を示し、予備的なインビトロデータはこの結論を裏付けた。さらに、ＳＬ処理には腸内の免疫応答及び腸の完全性に対して明白な免疫調節性効果があった。
【０１２４】
[00134]［実験計画］
[00135]商業用ブロイラーニワトリを用いるＡＲＳコクシジウム症及び壊死性腸炎（ＮＥ）疾患モデルを用いて、ＤＳＭからの４つの異なるソホロリピッド（ＳＬ）サンプルを評価した。各試験について、負の対照（非感染及び未処置）と、コクシジウム症及びＮＥの未処置感染対照とを含めた。
【０１２５】
[00136]全部で６７２羽のトリを使用した。１日齢の商業用ブロイラーニワトリに、０日目から試験終了まで、表１に指示されるように、ＡＲＳ配合の標準食餌（表２）と、２００ｐｐｍ用量のソホロリピッドが補充された食餌とを与えた。
【０１２６】
【表４】
2020528414.tif 000006
【０１２７】
[00140]［材料及び方法：］
[00141]［ニワトリ：］
[00142]全部で６７２羽の１日齢のＲｏｓｓ７０８雄ブロイラーニワトリ（新たに孵化）をＬｏｎｇｅｎｅｃｋｅｒの孵化場（Ｅｌｉｚａｂｅｔｈｔｏｗｎ，ＰＡ）から購入した。Ｂｅｌｔｓｖｉｌｌｅ  ＡＲＳ施設に到着したらすぐに、これらを完全無作為化法で１２の群に分け、Ｂｅｌｔｓｖｉｌｌｅ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅガイドラインに従ってＰｅｔｅｒｓｉｍｅスターターケージに入れ、飼料及び水を自由に与えた。トリを育雛器の囲いの中に１４日齢まで保持し、動物福祉のために毎日調査し、実験期間の最後まで保持されるＰｅｔｅｒｓｉｍｅフィニッシャーケージに移した。輸送及び感染に関する全ての実験手順は、ＢＡＲＣ  Ｓｍａｌｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅにより承認を受けた。
【０１２８】
[00143]［飼料：］
[00144]全てのニワトリに、１日目から７日目まで、抗生物質を含まない低タンパク質食餌（１８％の粗タンパク質、乾燥物質ベース）を与え、７日目から実験の最後まで、高タンパク質食餌（２４％の粗タンパク質、乾燥物質ベース）（ＡＲＳ施設で製造）を与えた。飼料及び水を自由に与えた。補充処理食餌の給餌は０日齢から開始し、実験期間を通して行った。処置レジメンに従って表１に示されるように抗菌製品を飼料に補充した。
【０１２９】
[00145]［ＳＬを標準ニワトリ飼料と混合するために使用される方法：］
[00146]１００ｇのジメチルスルホキシド中に溶解された６０ｇの各ソホロリピッドサンプルに大豆油を添加して、サンプル当たり２０００ｇの総液体量を得た。これに、２００ｐｐｍ（０．０２％）の最終濃度に到達するように、５ｋｇの飼料に対して１ｇのＳＬをゆっくり添加した。週１回ベースで、２００ｇの大豆油を使用して６ｇのＳＬを溶解させ、３０ｋｇの飼料混合物を作った。
【０１３０】
[00147]［Ｂｅｌｔｓｖｉｌｌｅコクシジウム症疾患負荷モデル：］
[00148]１５日齢において、トリ１羽につき１ｘ１０４のＥ．マキシマ（Ｅ．ｍａｘｉｍａ）（Ｂｅｌｔｓｖｉｌｌｅ株４１）オーシストで、トリを経口的に感染させた。Ｅ．マキシマ（Ｅ．ｍａｘｉｍａ）オーシストは、毎月、１０，０００の胞子形成Ｅ．マキシマ（Ｅ．ｍａｘｉｍａ）オーシストで２週齢ブロイラーニワトリを経口的に感染させることによって維持され、その純度についてＤＮＡ検査が実施される。腸の病変を誘発させるため、及び最適なオーシストの排出を得るために、通常、１０，０００の胞子形成オーシストを感染に使用し、糞中オーシストの排出は、５ｄｐｉ〜７ｄｐｉのオーシストを毎日集めることによって調べられる。
【０１３１】
[00149]［Ｂｅｌｔｓｖｉｌｌｅ壊死性腸炎疾患モデル：］
[00150]実験用ＮＥモデルはＡＲＳで開発され、Ｐａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）によって記載されている。１５日齢において、トリ１羽につき１ｘ１０４のＥ．マキシマ（Ｅ．ｍａｘｉｍａ）（Ｂｅｌｔｓｖｉｌｌｅ株４１）オーシストで、トリを経口的に感染させた後、４日後（１９日齢）に経口的にＣ．ペルフリンゲンス（Ｃ．ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）感染（１ｘ１０９ＣＦＵ／トリ、ｎｅｔＢ＋ｄｅｌ１株）を行い、臨床ＮＥ感染を誘発させた。トリを１９日齢から高タンパク質食餌に切り替えて、ＮＥの発症を促進した。
【０１３２】
[00151]［糞中オーシストの採取及び計数：］
[00152]Ｅ．マキシマ（Ｅ．ｍａｘｉｍａ）感染後５〜７日間、各群からの糞サンプルを採取し、寄生虫の生存に対するソホロリピッドの効果を評価した。ＭｃＭａｓｔｅｒカウンティングチャンバを用いて各処置群についてのオーシストの低減速度を計算した。
【０１３３】
[00153]［腸病変のスコア化：］
[00154]コクシジウム症：Ｅ．マキシマ（Ｅ．ｍａｘｉｍａ）感染の５日後に、病変スコアを実施した。１つの群につき８羽のトリを安楽死させ、憩室の前方及び後方１０ｃｍに延在する約２０ｃｍの空腸部分を得た。６人の独立した観察者により盲検的な方法で、腸部分をＮＥ病変について０（なし）〜４（高）のスケールでスコア化した。
【０１３４】
[00155]ＮＥ：Ｃ．ペルフリンゲンス（Ｃ．ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）感染の２日後（Ｅ．マキシマ（Ｅ．ｍａｘｉｍａ）感染の６日後）に、病変スコアを実施した。１つの群につき８羽のトリを安楽死させ、憩室の前方及び後方１０ｃｍに延在する約２０ｃｍの腸部分を得た。６人の独立した観察者により盲検的な方法で、腸部分をＮＥ病変について０（なし）〜４（高）のスケールでスコア化した。
【０１３５】
[00156]［血液サンプル及びニワトリα−１酸性糖タンパク質：］
[00157]各サンプリング日に安楽死の直後に心臓穿刺によって血液サンプルを採取した（８羽／ｔｒｔ）。４℃において１０００ｒｐｍで２０分間の遠心分離によって血清を分離し、さらに使用するまで血清画分を−２０℃で貯蔵した。血清中のニワトリα−１酸性糖タンパク質（α−１−ＡＧＰ）を、製造業者の説明書に従ってＥＬＩＳＡ（Ｌｉｆｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  Ｉｎｃ．，Ｗｅｓｔ  Ｃｈｅｓｔｅｒ，ＰＡ）により測定した。自動マイクロプレートリーダー（Ｂｉｏ−Ｒａｄ，Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，ＣＡ）を用いてＯＤ４５０値を決定した。
【０１３６】
[00159]［腸サンプルの採取：］
[00160]各サンプリング日に処置群につき８羽のトリを無作為に選択し、ＲＮＡ抽出用腸サンプル（回腸）の採取のために使用して、サイトカイン／ケモカイン及び結合タンパク質発現を測定した。トリを頸椎脱臼により安楽死させ、すぐに腸を取り外した。各トリからの回腸の小部分を無菌で採取し、さらなる使用のために−２０℃のＲＮＡｌａｔｅｒ（登録商標）（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）中で貯蔵した。
【０１３７】
[00161]［定量リアルタイムＰＣＲ（ｑＲＴ−ＰＣＲ）による遺伝子発現分析：］
[00162]ｑＲＴ−ＰＣＲのために使用したオリゴヌクレオチドプライマー配列は表３に示される。回腸においてその差次的発現が評価される種々のサイトカイン及び腸密着結合タンパク質には、インターロイキン（ＩＬ）１β、ＩＬ２、ＩＬ４、ＩＬ６、ＩＬ８、ＩＬ１０、ＩＬ１３、ＩＬ１７Ｆ、インターフェロン（ＩＦＮ）γ、腫瘍壊死因子スーパーファミリー（ＴＮＦＳＦ）１５、結合接着分子（ＪＡＭ）２、オクルディン、ゾナオクルデンス（ｚｏｎａ  ｏｃｃｌｕｄｅｎｓ）（ＺＯ）１、及びムチン２（ＭＵＣ２）が含まれる。ＴＪタンパク質及びＭＵＣ２のプライマー配列は、出典がＣｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５であり、表３Ａに示されている。ニワトリサイトカイン／ケモカイン及び密着結合タンパク質の機能の簡単な説明は表３Ｂに示されている。参照遺伝子として、グリセルアルデヒド−３−ホスファートデヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）を使用した。Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ  Ｍｘ３０００Ｐ  ｑＰＣＲシステム（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ．，Ｓａｎｔａ  Ｃｌａｒａ，ＣＡ）及びＲＴ２ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ  ｑＰＣＲマスターミックス（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて、増幅及び検出を実行した。各サンプルをトリプリケートで分析し、テンプレートなしの対照を含めることにより、プライマーの非特異的増幅を点検した。ｌｏｇ１０希釈ＲＮＡを用いて標準曲線を作成し、個々の転写物のレベルは、Ｑ遺伝子プログラムを用いてＧＡＰＤＨのレベルに対して正規化され得る（Ｍｕｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００２）。
【０１３８】
[00163]［抗コクシジウムアッセイ：］
[00164]家禽エイメリア・アセルブリナ（Ｅｉｍｅｒｉａ  ａｃｅｒｖｕｌｉｎａ）のスポロゾイトを胞子形成オーシストから新たに精製して、Ｄｒ．Ｌｉｌｌｅｈｏｊの研究室で開発された方法を用いて、生きているスポロゾイトに対するＳＬの細胞毒性効果を評価した。簡単に、Ｍｉｎｉ−ｂｅａｄ  ｂｅａｔｅｒ（Ｂｉｏｓｐｅｃ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，ＵＳＡ）を用いて、新たな胞子形成オーシストを０．５ｍｍガラスビーズで破壊した。放出されたスポロシストを、Ｐｅｒｃｏｌｌグラジエント中の等密度遠心分離により精製し、氷冷Ｈａｎｋ平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）中で洗浄し、４１℃において０．２５％のトリプシン及び０．０１４Ｍのタウロコール酸（Ｓｉｇｍａ，ＵＳＡ）で処理して、生きているスポロゾイトを放出させた。新たに調製されたスポロゾイトをろ過により集め、３，０００ｘｇ、４℃で１０分間、ＨＢＳＳにより３回洗浄し、ＨＢＳＳ中で１．０ｘ１０６／ｍｌに再懸濁させた。ＣＯ２インキュベーター中、４１Ｃで３時間、種々の濃度のＳＬサンプルと共に、又は陽性対照としてＮＫペプチドと共に（ＮＫリジンペプチドはＤｒ．Ｌｉｌｌｅｈｏｊの研究室で作られ、スポロゾイトを死滅させる）、集めたスポロゾイトを４１℃でインキュベートした。スポロゾイトの生存率を評価するために、ＦＩＴＣで染色した生きているスポロゾイトを用いて、ＣｙＱｕａｎｔ直接細胞増殖アッセイ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，ＵＳＡ）を実行し、Ｓｙｎｅｒｇｙ  ＨＴＸ（Ｂｉｏｔｅｋ，ＵＳＡ）を用いて、蛍光を４８５／５２８ｎｍで測定した。
【０１３９】
【表５】
2020528414.tif 000007
【０１４０】
【表６】
2020528414.tif 000008
【０１４１】
[00169]［結果］
[00170]［１．エイメリア・マキシマ（Ｅｉｍｅｒｉａ  ｍａｘｉｍａ）誘発性コクシジウム症］
【０１４２】
【表７】
2020528414.tif 000009
【０１４３】
[00172]概要：Ｅ．マキシマ（Ｅ．ｍａｘｉｍａ）感染誘発性の病変は腸の中央領域に位置し、これらの病変は通常肥厚した壁を示し、５〜６日目に粘液性の血液の混じった滲出液を伴い、外膜上には不規則な細胞デブリがある。病変は６人の独立したスタッフにより１〜４でスコア化される。
【０１４４】
【表８】
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【０１４５】
[00174]Ｅ．マキシマ（Ｅ．ｍａｘｉｍａ）感染ニワトリは、マキシマム（ｍａｘｉｍｕｍ）による感染の５日後〜８日後にオーシストを排出した。未処置の感染対照と比較して、ＳＬ処置群は全て、数値的に低減されたオーシストの排出（ＳＬ１−２１％低下；ＳＬ２−４８％低下、ＳＬ３−４７％低下、ＳＬ４−７０％低下）を示した。しかしながら、ＳＬ４処置のみが、統計的に有意なオーシスト排出の低下を示した。この結果は、ＳＬ４が強力な抗コクシジウム特性を有することを示す。
【０１４６】
[00175]図１は、コクシジウム症感染の５日後の回腸における炎症誘発性サイトカインの発現を示す。
【０１４７】
[00176]Ｅ．マキシマ（Ｅ．ｍａｘｉｍａ）感染の後、局所サイトカイン応答は大幅に変動する。全てのトリをコクシジウム症感染の５日後に屠殺したので、この試験は、エンドポイントの宿主応答を見るように設計した。コクシジウム症感染の５日後に、感染ニワトリにおいてＴＮＦ様炎症誘発性サイトカインが増大した。ＳＬ処置は、ＴＮＦレベルに影響を与えなかった。ＩＬ−６、ＩＬ−１７及びＩＬ−８などの他の炎症誘発性サイトカインのレベルは、未処置及び感染群と比較して、いくつかのＳＬ処置群、特にＳＬ４群において強く調節され、ＳＬ２群ではより小さい程度に調節された。これらの結果は、ＳＬ４及びＳＬ２が免疫調節脂質であることを示唆する。
【０１４８】
[00177]図２は、コクシジウム症感染の５日後の回腸におけるＴｈ１及びＴｈ２サイトカインの発現を示す。
【０１４９】
[00178]これらのＳＬのいくつかは免疫調節性である。ＳＬ４はＩＬ−４を刺激し、ＳＬ２はコクシジウム誘発性ＩＬ−２を低減し、ＳＬ２及びＳＬ３はコクシジウム誘発性ＩＬ−１３を低減した。
【０１５０】
[00179]図３は、コクシジウム症感染の５日後の回腸における密着結合タンパク質の発現を示す。
【０１５１】
[00180]コクシジウム症の後、一般に、密着結合タンパク質の遺伝子発現の低下がある。しかしながら、この研究で使用したエイメリア（Ｅｉｍｅｒｉａ）の用量は結合タンパク質発現をあまり損なわず、したがって、重度の感染が成された場合よりも少ない効果が見られ得る。Ｃ．ペルフリンゲンス（Ｃ．ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）感染の２日後に、ＳＬ４は、オクルディン及びＺＯ１の２つの主要な結合タンパク質の発現を増強した。ＳＬ４は、コクシジウム症感染後の重要なタンパク質発現の発現を制御することによって、有益な宿主応答を明白に調節している。
【０１５２】
【表９】
2020528414.tif 000011
【０１５３】
[00182]そして図４は、コクシジウム症の５日後の血清α−１酸性糖タンパク質（α−１−ＡＧＰ）レベルを示す。
【０１５４】
[00183]概要：市販のＥＬＩＳＡキットを使用して、感染の５日後に、Ｅ．マキシマ（Ｅ．ｍａｘｉｍａ）に感染したニワトリの血清中の急性期タンパク質レベルを測定した。肝臓内で合成されるこの急性期血漿アルファ−グロブリン糖タンパク質のレベルは、感染後の炎症状態を反映する。統計的には違いはないが、ＳＬ１及びＳＬ２、並びにＳＬ４（より小さい程度）で処置したトリは、数値的に低減された応答を示した。
【０１５５】
[00184]［２．壊死性腸炎］
[00185]図５は、壊死性腸炎の２日後の回腸における炎症誘発性サイトカインの発現を示す。
【０１５６】
[00186]壊死性腸炎感染の後、局所サイトカイン応答は大幅に変動する。したがって、ＮＥ感染後の宿主サイトカイン／ケモカイン応答のより広範な見解を得るために動的応答を調べるべきである。この試験は、全てのトリを壊死性腸炎感染の２日後に屠殺したので、エンドポイントの宿主応答を見るように設計した。壊死性腸炎感染の２日後に、感染ニワトリにおいてＴＮＦ様炎症誘発性サイトカインが増大した。ＳＬ処置は、ＴＮＦレベルに影響を与えなかった。ＩＬ−６、ＩＬ−１７及びＩＬ−８炎症誘発性サイトカインは、ＮＥ感染の２日後に低減された。ＳＬは、ＮＥ感染後にＩＬ−１ベータ、ＩＬ−６、ＩＬ−１７Ｆ、及びＩＬ−８のレベルを調節し、ＳＬ４はより強い調節効果を示した。
【０１５７】
[00187]図６は、Ｃ．ペルフリンゲンス（Ｃ．ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）感染の２日後の回腸におけるＴｈ１及びＴｈ２サイトカインの発現を示す。
【０１５８】
[00188]概要：壊死性腸炎感染の２日後に、ＩＬ−２、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−４は、ＳＬ処置によって調節された。細胞性免疫を促進するＩＦＮ−ガンマは、ＳＬ処置によって増強された。全てのＳＬ群はサイトカイン応答レベルを調節し、ＳＬ４はより強い効果を示した。
【０１５９】
[00189]図７は、Ｃ．ペルフリンゲンス（Ｃ．ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）感染の２日後の回腸における密着結合タンパク質の発現を示す。
【０１６０】
[00190]概要：ＮＥ感染の後、オクルディン及びＺＯ１のレベルは、腸の損傷のためにＮＥ感染未処置群で低下した。ＳＬ処置、特にＳＬ４は、腸内のこれらの結合タンパク質の発現を増強し、腸の完全性及び腸の健康に対するその有益な効果を示した。
【０１６１】
【表１０】
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【０１６２】
[00192]そして図８は、血清中のα−１酸性糖タンパク質（α−１−ＡＧＰ）を示す。
【０１６３】
[00193]市販のＥＬＩＳＡキットを使用して、クロストリジウム・ペルフリンゲンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）感染の２日後に、壊死性腸炎に感染したニワトリの血清中の急性期タンパク質レベルを測定した。肝臓内で合成されるこの急性期血漿アルファ−グロブリン糖タンパク質のレベルは、肝臓（ｌｉｖｅ）感染後の炎症状態を反映する。ＳＬ２群は、数値的に低減された応答を示した。この結果は、ＳＬ２が炎症を調節する能力を有することを示す。
【０１６４】
[00194]上記に記載した要素のそれぞれが、又は２つ以上が一緒に、上記に記載した種類とは異なる他の種類の方法においても有用な用途を見出し得ることは理解されるであろう。さらに分析することなく、上記のことは本開示の趣旨を完全に明らかにし得るので、他者は、現在の知識を適用することにより、従来技術の観点から、添付の特許請求の範囲に記載される本開示の包括的又は具体的な態様の本質的な特徴を正しく構成する特色を省略することなく、本開示を種々の用途に容易に適合させることができる。上述の実施形態は例として提示されているだけであり、本開示の範囲は、以下の特許請求の範囲によってのみ限定されるべきである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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