(57)【要約】  本発明は、連続製造プロセスを可能にし、そして高収率を確保するＤ−アルロース結晶の新規製造方法に関する。本発明はまた、新規Ｄ−アルロース結晶に関する。本発明はさらに、結果として生じる結晶の収率及び品質を向上させるためのＤ−アルロース結晶の製造方法におけるナノ濾過ユニットの使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
・  Ｄ−アルロースに富む組成物を提供する工程と；
・  結晶化させられる原液を形成するように前記溶液を濃縮する工程と；
・  Ｄ−アルロース結晶及び母液を形成するように前記原液を結晶化させる工程と；
・  少なくとも１つのナノ濾過工程であって、前記工程が、前記Ｄ−アルロースに富む組成物を濃縮する工程の前の工程において行われる工程と
を含むＤ−アルロース結晶の製造プロセス。
【請求項２】
前記ナノ濾過のために用いられる膜が、３００Ｄａ未満の、好ましくは１５０〜２５０Ｄａの範囲のカットオフ閾値を有することを特徴とする、請求項１に記載のプロセス。
【請求項３】
得られる前記原液が、乾燥質量で：
・  ８０％〜９９％、好ましくは８５％〜９８％のＤ−アルロース；
・  ０％〜２０％、好ましくは０．５％〜１５％のＤ−フルクトース；
・  ０％〜１０％、好ましくは０％〜５％のグルコース；
・  ０％〜１．５％、例えば０．１％〜１．２％、好ましくは０．４％〜１．１％のＤ−アルロース二量体
を含むことを特徴とする、請求項１又は２に記載のプロセス。
【請求項４】
前記ナノ濾過の体積濃縮係数が５〜２０の範囲であることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項５】
前記結晶化させる工程が、
ｉ．マスキットを形成するように真空下の断熱晶析装置−エバポレーターで実施される、断熱蒸発冷却段階、
ｉｉ．続いて、結晶を形成するための前記マスキットの冷却による結晶化の段階
を含むことを特徴とする、請求項１〜４のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項６】
前記断熱蒸発冷却段階中の温度が、３０〜４０℃の範囲であり、好ましくは３３〜３７℃の範囲であり、例えばおよそ３５℃であることを特徴とする、請求項５に記載のプロセス。
【請求項７】
連続的であることを特徴とする、請求項１〜６のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項８】
少なくとも１つのリサイクリング工程を含むことを特徴とする、請求項１〜７のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項９】
前記母液の少なくとも一部をリサイクルする工程を含むことを特徴とする、請求項１〜８のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項１０】
Ｄ−アルロースの前記原液を提供する工程が、
・  Ｄ−アルロースに富む組成物を提供する工程；
・  保持液及び透過液を提供するためのＤ−アルロースに富む前記組成物のナノ濾過の工程；
・  ナノ濾過透過液を回収する工程；
・  Ｄ−アルロースの前記原液を提供するようにこの透過液を濃縮する工程
を含むことを特徴とする、請求項１〜９のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項１１】
前記保持液の少なくとも一部をリサイクルする工程を含むことを特徴とする、請求項１
０に記載のプロセス。
【請求項１２】
Ｄ−アルロースに富む前記組成物を提供する工程が、
・  Ｄ−フルクトースを含む組成物を提供する工程；
・  Ｄ−フルクトース及びＤ−アルロースを含む組成物を形成するようにエピマー化させる工程；
・  Ｄ−アルロースに富む組成物及びＤ−フルクトースに富む組成物を提供するためのクロマトグラフィー工程
を含むことを特徴とする、請求項１０又は１１に記載のプロセス。
【請求項１３】
Ｄ−フルクトースに富む前記組成物の少なくとも一部をリサイクルする工程を含むことを特徴とする、請求項１２に記載のプロセス。
【請求項１４】
Ｄ−フルクトースに富む前記組成物のリサイクリング度が５０％〜９５％の範囲であることを特徴とする、請求項１３に記載のプロセス。
【請求項１５】
０．５０％未満の、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）によって測定される、質量含有量のＤ−アルロース二量体を含むＤ−アルロース結晶。
【請求項１６】
０．０１％〜０．４８％の範囲の、優先的には０．０２％〜０．４５％の範囲の、例えば０．０３％〜０．４０％の範囲の、特に０．０４％〜０．３０％の質量含有量のＤ−アルロース二量体を含むことを特徴とする、請求項１５に記載のＤ−アルロース結晶。
【請求項１７】
２００μｍより大きい、有利には２１０〜８００μｍ、優先的には２２０〜３５０μｍの範囲の体積平均サイズＤ４，３を有することを特徴とする、請求項１５又は１６に記載のＤ−アルロース結晶。
【請求項１８】
２００〜４００μｍの範囲で選ばれる所与の体積粒径Ｄ４，３について、０．６０よりも大きい、有利には０．６２〜０．９０、例えば０．６３〜０．８０の範囲のＦｅｒｅｔ最小／Ｆｅｒｅｔ最大比を有することを特徴とする、請求項１５〜１７のいずれか一項に記載のＤ−アルロース結晶。
【請求項１９】
２００〜４００μｍの範囲の体積粒径Ｄ４，３の全てにわたってこのＦｅｒｅｔ最小／Ｆｅｒｅｔ最大比を有することを特徴とする、請求項１７に記載のＤ−アルロース結晶。
【請求項２０】
Ｄ−アルロース結晶の全収率を向上させるためのＤ−アルロース結晶の製造サーキットでのナノ濾過ユニットの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、連続的に作業すること、及び高収率を得ることを可能にするＤ−アルロース結晶の新規製造プロセスに関する。本発明の主題はまた、新規Ｄ−アルロース結晶である。本発明の別の主題は、それの収率及び／又は得られる結晶の品質を向上させるためのＤ−アルロース結晶の製造プロセスにおけるナノ濾過ユニットの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｄ−アルロース（つまりＤ−プシコース）は希少糖であり、その甘味力はサッカロースの７０％に相当する。サッカロースとは対照的に、Ｄ−アルロースは、人間によって代謝されないので体重の増加を引き起こさない。Ｄ−アルロースは、カロリー含量（１グラム当たり０．２ｋｃａｌ）が非常に低く、したがって体脂肪の増加を防ぐ。さらに、研究は、Ｄ−アルロースが非う触性であるか、又はさらには抗う触性であることも示している。したがって、これらの特性は、最近、食品及び医薬品業界から非常に大きな関心を生んでいる。
【０００３】
Ｄ−アルロースを化学的に、例えばモリブデン酸アンモニウム触媒の存在下で酸性媒体中のグルコースの水溶液を反応させることによってＤ−アルロースを得ることは可能であるが、Ｄ−アルロースは、例えば、本出願人名義で国際公開第２０１５／０３２７６１  Ａ１号パンフレットに記載されているようにＤ−フルクトースの水溶液をＤ−プシコースエピメラーゼと反応させることによって、酵素的に一般に得られる。これらの２つのケースで、反応は完全ではない。例えば、エピマー化後にＤ−アルロースへ転化されたＤ−フルクトースの量は、一般に３０％未満である。
【０００４】
したがって、エピマー化反応の終わりに、結果として生じるＤ−アルロース組成物の濃度を高めるために、Ｄ−アルロースを分離する工程を実施することが必要である。この分離を実施するために、エピマー化反応から生じた組成物のクロマトグラフィーが、例えば擬似移動床タイプの連続クロマトグラフィーによって、極めて一般的に実施される。
【０００５】
特開２００１−３５４６９０号公報は、フルクトースとＤ−アルロースとの混合物から出発するＤ−アルロースシロップの製造プロセスであって、前記プロセスが、混合物の様々な生成物の特定の一連の試料を用いる連続クロマトグラフィーの工程からなる分離工程を含むプロセスを記載している。Ｄ−アルロースに富む画分（９８％に達することができるＤ−アルロース濃度）とフルクトースに富む反応物とが回収される。Ｄ−アルロースに富む画分の回収収率は９６％である。
【０００６】
上述の分離工程の終わりに、Ｄ−アルロースに富む液体組成物が得られる。したがって、一般にシロップと呼ばれる、これらの液体組成物が、食品又は医薬品の製造のために使用される。
【０００７】
例として、同様に本出願人名義での、国際公開第２０１５／０９４３４２号パンフレットは、５０％〜９８％のＤ−アルロースと天然タンパクとを含む、Ｄ−アルロースシロップを含む固体食品の製造を記載している。これまでに様々な会社がＤ−アルロースの販売を発表しているのは、主にこのシロップ形態である。
【０００８】
Ｄ−アルロースはまた、粉末形態でも販売されている。しかしながら、以下に説明されるように、前記粉末の製造は、非常に複雑な場合がある。
【０００９】
例えば噴霧乾燥技術を用いて粉末を製造することは可能である。しかしながら、その組成が噴霧乾燥される原材料に依存する噴霧乾燥粉末は、一般に大量の不純物を含む。さらに、これらの噴霧乾燥粉末は、弱結晶質であり；それらは非常に吸湿性であり、これは、したがって耐水性問題の原因になる。これはまた、一般により実質的なケーキング現象を生み出す。
【００１０】
これらの困難性のために、Ｄ−アルロースの噴霧乾燥についての文献の記載は極めて少ない。例として、Ｄ−アルロースとＤ−アロースとからなる混合物の噴霧乾燥を記載している欧州特許第１  ８６０  １９５号明細書が言及され得る。Ｄ−アルロースのエナンチオマー、Ｌ−アルロースに関しては、Ｄ−アルロースの調理マスの噴霧乾燥を記載している特許第４７６１４２４号公報が言及され得る。
【００１１】
本出願人名義の、例えば国際公開第２０１６／０１２８５３号パンフレットに記載されているような、造粒技術を用いて粉末を製造することも可能である。
【００１２】
粉末の別の形態は、Ｄ−アルロースの原液の結晶化によって得られる結晶に関する。
【００１３】
Ｄ−アルロース結晶の製造プロセスは、中国特許出願公開第１０４４４７８８８  Ａ号明細書に記載されている。この文献は、より具体的には実施例において、モリブデン酸塩触媒を使用するグルコースからＤ−アルロースの溶液を製造する工程、次に活性炭を使用してこの溶液を脱色する工程、次に活性炭を除去するために濾過する工程、電気透析によって脱イオン化する工程、７０％〜９０％の範囲の純度を有するＤ−アルロースの溶液を形成するように連続クロマトグラフィーによって分離する工程、Ｄ−アルロースの濃厚溶液を得るように前記溶液を濃縮する工程、引き続くせいぜい９９％の、限界純度を有する結晶性Ｄ−アルロース製品を得るためのエタノールからの結晶化の工程を含むプロセスを記載している。結晶化収率は、前記文献に示されていない。
【００１４】
別の結晶化プロセスもまた、結晶化収率が約５０％である、ＣＪ  Ｃｈｅｉｌｊｅｄａｎｇ名義の国際公開第２０１１／１１９００４号パンフレットに記載されている。Ｄ−アルロース結晶のこの製造プロセスは、Ｄ−アルロースの溶液を提供する工程と、この溶液を精製する工程と、原液を提供するようにＤ−アルロースの溶液を濃縮する工程と、この原液の結晶化の工程とを含み、ここで、結晶化工程は、原液を準安定帯に維持しながら実施される。前記文献に記載される精製工程は、Ｄ−グルコースをフルクトースから分離することを可能にする、クロマトグラフィーによって分離する工程である。しかしながら、前記文献は、結晶形態での粉末の製造が実施するのが困難であることを認めている：
・  第一に、この結晶化は、段落［３６］に示されているように、制御するのが困難であり、その段落には、上澄みの濃度をまた測定しながら（これは、晶析装置の温度を調整するためである）、結晶の連続的観察によって、結晶化が注意して実施されなければならないことが明記されている。しかしながら、前記文献は、この結晶化を行うことが困難である理由に関して言及していない。
・  さらに、得られた結晶は、２００μｎ未満のサイズを有し（段落［８９］を参照されたい）、したがって、サイズが小さいため、遠心分離中に結晶化からの母液から分離するのが困難である。回収された結晶はまた、その後の使用中に取り扱うのが困難である。
【００１５】
同様にＣＪ  Ｃｈｅｉｌｊｅｄａｎｇ名義の、国際公開第２０１６／０６４０８７号パンフレットはまた、実施例３において、原液が４つの別個の時点で晶析装置へ導入されるＤ−アルロース結晶の製造プロセスを記載している。各導入の間に、４つの加熱及び冷却サイクルが実施され、それによって８０時間超続くプロセスをもたらす。国際公開第２０１１／１１９００４号パンフレットに記載されているプロセスと比べて、結晶化収率は向上していない（それは５２．８％である）。得られた結晶は、より大きい平均サイズ（３
７４μｍに等しい平均開口部）を有する。しかしながら、得られた結晶は不純物を示す。さらに、会社ＣＪ  Ｃｈｅｉｌｊｅｄａｎｇによって販売されている結晶は、全く満足できない流動性をもたらす、針状である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
上述から、多くの問題が、Ｄ−アルロース結晶の製造に依然として残っているように思われる。
【００１７】
第一に、Ｄ−アルロース結晶の全収率が過度に低い。用語「Ｄ−アルロース結晶の全収率」は、得られたＤ−アルロース結晶の質量対導入されたＤ−フルクトースの質量の、乾燥質量として表される、比を意味することを意図する。Ｄ−フルクトースに対して約１５％の、この低い収率は、エピマー化工程の収率（３０％未満の）及び結晶化工程の収率（一般に約５０％の）と本質的に関係している。
【００１８】
本プロセスの収率を向上させるために、したがって、「リサイクリング工程」を実施することが必要不可欠である。プロセスにおける用語「リサイクリング工程」は、分離工程中に得られた生成物の何分の一の、手順の先行工程における、再使用を意味することを意図する。本出願において、用語「分離工程」は、生成物Ａと生成物Ｂとを含む組成物を少なくとも、生成物Ａにより富む第１画分と、生成物Ｂにより富む第２画分とへ分離することを可能にする任意の工程を意味することを意図する。画分は、任意の形態でもよく、例えば固体形態、液体形態、又はさらには液体中の固体懸濁液の形態であってもよい。分離工程は、任意のタイプのもの、例えば、液体組成物が少なくとも２つの液体画分へ分離される、クロマトグラフィー工程、あるいは液体成分が固体画分と液体画分とへ分離される結晶化工程であってもよい。
【００１９】
フルクトースに富む画分がリサイクルされる工程は、Ｄ−アルロースシロップの製造プロセスの収率を向上させる目的で既に記載されている。特に、前に引用された特開２００１３５４６９０  Ａ号公報は、エピマー化工程にかけるためにクロマトグラフィー工程中に得られたフルクトースに富む画分のリサイクリングを記載している。これは、液体組成物の形態でのＤ−アルロースの収率を向上させることを可能にする。
【００２０】
Ｄ−アルロース結晶の製造プロセス（例えば、国際公開第２０１１／１１９００４号パンフレットに記載されているものなどの）に前記文献の教示を適用しようとした際に、本出願人はそれらが簡単に置き換え可能ではないことに気付くことができた。
【００２１】
これは、フルクトースに富む画分のリサイクリングが実施される場合に（図１を参照されたい）、得られた原液が結晶化するのが徐々に困難になることに本出願人が気付くことができたためである。実験の部において実証されるように、この結晶化は一定時間後に不可能になる。
【００２２】
さらに、依然として本プロセスのＤ−アルロース結晶の全収率を向上させるという狙いで、本出願人はまた、濃縮後に新たな原液を形成するようにそれらをＤ−アルロース組成物と混合することによって、結晶化からの母液の（すなわち、結晶化工程中に得られた結晶を分離した後に得られるＤ−アルロースに富む溶液の）リサイクリングを行うことを試みた（図２を参照されたい）。母液のこのリサイクリングが同じ困難（これは、フルクトースに富む画分のリサイクリングのケースでよりもさらにより速い）を引き起こすことに気付くことができた（実施例の部を参照されたい）。
【００２３】
上記のこれらの２つのケースでは、Ｄ−アルロース結晶の製造の中断がしたがって行わ
れなければならない。
【００２４】
さらに、本出願人は、リサイクリングを実施しなくても、上に記載された教示をＤ−アルロース結晶を製造するための連続的な工業的プロセスに置き換えると、「不安定性」が観察されることに気付くことができた。これらの不安定性は、本プロセス中にどういうわけか可変の外観を有する結晶のマスキットをもたらす。これは、先験的に、それらの挙動のいかなる予測も行うことが可能であることなく、結晶のマスキットが遠心分離でき得るし、それからある瞬間に遠心分離できないので特にわずらわしい。それらをプロセスにおいて再使用することが望まれる場合には、そのとき、得られたマスキットを再溶融させる必要があり、これは、このプロセスを非常に実用的でなく、かつ、経済的でないものにする。
【００２５】
実際に、シロップ形態で今日主に販売されている、Ｄ−アルロースの工業開発を加速させる目的で、競争力のある価格でそれらを供給できるために、Ｄ−アルロース結晶を製造するための連続的な、安定したプロセスを、工業的規模で、実施できることが必要不可欠である。
【００２６】
膨大な量の研究の後に、本出願人は、上述の問題を解決することができるＤ−アルロース結晶の製造プロセスを得ることに成功した。
【００２７】
向上したプロセス安定性のために、結晶の製造は、例えば国際公開第２０１１／１１９００４号パンフレットに示されているような、いかなる系統的な制御も必要とせず、それは、Ｄ−アルロース結晶を製造するための連続的なプロセスの実施を可能にする。
【００２８】
さらに、本発明のプロセスはまた、多数のリサイクリング工程を可能にし、本プロセスの収率は、大きく高めることができる。
【００２９】
膨大な量の研究を実施することによって、本出願人は、Ｄ−アルロース結晶の製造プロセスにおいて、特定の不純物が、原液の調製プロセスの様々な工程中に生じることに気付くことができた。これらの不純物は、本出願人の知る限りでは、文献に決して報告されていない。本出願人が特定のガスクロマトグラフィー（ＧＣ）技術を用いることによってそれらを特定することが可能であった。いかなる理論にも制約されることなく、本出願人は、これらの不純物が、本プロセスの全体にわたって縮合により生じるＤ−アルロース二量体であると考える。
【００３０】
本出願人はまた、これらのＤ−アルロース二量体が、グルコース又はＤ−フルクトースなどの他の不純物とは対照的に、非常に著しい抗結晶化効果を有することを示すことができた。
【００３１】
意外にも、本出願人は、特定の分離工程が実施されるＤ−アルロース結晶の製造プロセスを実施することによって、Ｄ−アルロースの困難な結晶化というこの問題を排除するのに成功した。この分離工程は、これらの抗結晶化不純物を除去することを可能にする、ナノ濾過からなる。
【００３２】
この新規プロセスは、それが、導入されたＤ−フルクトースに対して２５％を超える、有利には５０％を超える、又は実に６５％を超える全収率を達成することを可能にするため、Ｄ−アルロース結晶の工業開発に大きな進歩を提供する。これは、競争力のある価格でのＤ−アルロース結晶の製造及びまた大規模でそのような結晶の商業開発を想定することを可能にする。
【００３３】
さらに、本出願人は、これらの不純物の存在が、特に大きい結晶を製造しようとする場合に、特にそれらの平均サイズが２００μｎを超える場合に、結晶の形状に影響を及ぼす因子であることに気付いた。
【００３４】
その研究中に、本出願人はまた、製造工程の中に、上述のナノ濾過工程を用いる特有の結晶化プロセスを用いて新規Ｄ−アルロース結晶を製造することに成功した。本発明の別の態様である、これらの結晶は、非常に低い質量百分率のＤ−アルロース二量体を含むという特殊性を特に有する。得られた結晶はまた、異なる形状及び改善された流動性を有することができる。これらの形状及び流動特性は、二量体が非常に少量結晶中に存在するという事実に直接関係している。逆に、大きい結晶を製造することが望まれる場合に、結晶化の間に原液中のＤ−アルロース二量体のかなりの存在は、かなりの量のこれらの二量体を含むＤ−アルロース結晶をもたらし；さらに、針状結晶を形成するようにこれらの結晶の伸長が観察される。実際に、これらの針状結晶は、本発明の結晶よりも少ない流動性を示し得る。
【課題を解決するための手段】
【００３５】
本発明は、したがって、
・  Ｄ−アルロースに富む組成物を提供する工程と；
・  結晶化させられる原液を形成するように前記溶液を濃縮する工程と；
・  Ｄ−アルロース結晶及び母液を形成するように原液を結晶化させる工程と；
・  少なくとも１つのナノ濾過工程であって、前記工程が、Ｄ−アルロースに富む組成物を濃縮する工程の前の工程で行われる工程と
を含む、Ｄ−アルロース結晶の製造プロセスに関する。
【００３６】
上に述べられたように、本出願人は、系統的に、Ｄ−アルロース結晶の製造プロセスにおいて、特定の不純物が本プロセス中に生じることに気付くことができた。前記不純物は、本出願人が知る限りでは、文献に決して報告されていない。これは、Ｄ−アルロースの純度を測定するために従来用いられた高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）技術で、これらの不純物は、クロマトグラム上で検出されないという事実によって説明される（図７及び８を参照されたい）。本出願人がそれらの存在を検出することができたのは、ガスクロマトグラフィー技術を用いることによる（図９及び１０を参照されたい）。
【００３７】
本出願人がこれらの不純物をＤ−アルロース二量体であると特定することは可能であった。本出願人はまた、これらの二量体が、グルコース又はＤ−フルクトースなどの他の不純物とは対照的に、非常に著しい抗結晶化効果を有することを示すことができた。実際に、これらのＤ−アルロース二量体は本プロセス中に生じるため、これらの二量体の量が余りにも高い場合には、それらの存在は、この結晶化を純粋に及び簡単に阻止することによって、遠心分離できないマスキットを形成することによってＤ−アルロース結晶の連続的製造プロセスの収率を制限し得る。さらに、多数の一連の工程が実施される、Ｄ−アルロース結晶を製造するための工業的な、連続的なプロセスにおいて、これらの不純粋物の量は、経時的に変わり得る。これは、マスキットが時々遠心分離でき、時々遠心分離できないので、本プロセスを経時的に不安定にする。
【００３８】
これらの特有の不純物を特定したこと、及びナノ濾過によってこれらのＤ−アルロース二量体を少なくとも部分的に分離することからなる分離工程を実施することによって、それらを除去することに成功したことは、本出願人が評価できることである。
【００３９】
結晶化工程を非常に安定したものにする本発明のプロセスを用いて、その結果、連続的に本プロセスを実施すること、しかしまたＤ−アルロース結晶の全収率を劇的に高めることが可能である。これは、非常に少量のＤ−アルロース二量体を有するＤ−アルロースの
原液を提供することが可能である（これは、上述のナノ濾過工程のおかげである）という事実によって可能にされる。
【００４０】
この原液を使用して、特に前記二量体のその場形成をまた制限する特定の結晶化プロセスを用いて新規Ｄ−アルロース結晶を提供することに成功したことは、本出願人が評価できることである。これは、そのＤ−アルロース二量体の質量百分率が先行技術のものよりも低い結晶をもたらす。本発明の別の主題は、したがって、０．５％未満の、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）によって測定される、質量含有量のＤ−アルロース二量体を含むＤ−アルロース結晶に関する。
【００４１】
国際公開第２０１１／１１９００４  Ａ２号パンフレットに記載されている結晶に関して、それらが非常に微細なサイズを有するため、それらは、結晶化母液から分離することが困難である。母液は、大量のＤ−アルロース二量体を含み、それ故分離後に回収された結晶中の二量体含有量が高く、本発明の結晶よりもはるかに高い。さらに、本出願の比較例３（実施例セクションを参照されたい）は、この文献に記載されているプロセスをさらに改善しても、本出願人が、本発明の結晶を得られなかったことを実証する。
【００４２】
国際公開第２０１６／０６４０８７号パンフレットに記載されている結晶に関しては、それらは、本発明の結晶よりも多い量でＤ−アルロース二量体であり得る、不純物を示す。いかなる理論にも制約されることなく、これらの二量体の存在は、Ｄ−アルロース溶液が、結晶皿中へ導入される前に、すなわち、６０時間に達する期間加熱し続けられるという事実によって説明され得る。さらに、この文献は、原液が調製される方法に関して、特に濃縮工程の条件に関して全く言及していない。実際に、本説明の残りにおいて明らかになるように、結晶化及び濃縮工程の条件の選択は、形成されるＤ−アルロース二量体の量に本質的な影響を及ぼす。したがって、これらの条件の選択は、本プロセス中に形成される二量体の量を制限すること、こうして得られたＤ−アルロース結晶中のＤ−アルロース二量体含有量を減少させることを可能にする。原液を調製する工程の条件の選択は、その中のＤ−アルロース二量体の量に本質的な影響を及ぼすので、この文献は、この発明の結晶の調製に有用な原液も、結晶それら自体も記載していない。
【００４３】
欧州特許第１  ８６０  １９５号明細書は、Ｄ−アルロースが少数部分であり、そしてＤ−アルロース結晶ではない、Ｄ−アロースとＤ−アルロースとの管状タイプの複合結晶性組成物を記載している。
【００４４】
中国特許出願公開第１０４４４７８８８  Ａ号明細書に記載されているエタノールからの結晶化によって得られる結晶性組成物について、この文献は、結晶性組成物の製造プロセスの多数の条件に関して、特に原液を濃縮するための工程に関して言及していない。この点において、これらの結晶性組成物製造試験を再現することは不可能である。しかしながら、結晶化がエタノールなどの有機溶剤中で特異的に実施されなければならないことに気付くことは有用である。しかしながら、このタイプの溶剤中での結晶化が必要な場合にのみ用いられることは公知である。実際に、明らかなコスト及び環境理由で一般に好ましい水。選択された有機溶剤（Ｄ−アルロースのケースではエタノール）は、再処理するためにより高くつき、必然的に困難が伴うが、結晶化を容易にし、水から可能であろう結晶化を可能にするという利点を有する。これは、それ故、Ｄ−アルロースの原液がＤ−アルロース二量体タイプの大量の不純物を含むことを裏付け、これは、原液を調製する様々な工程についての特別な事前の注意が全く払われなかったように思われる（特に条件が、濃縮工程について全く示されていない）という事実によって説明され得る。さらに、精製の観点から、Ｄ−アルロースに近い化学的性質の、これらの二量体がまたエタノールにやや溶けにくく、同様に沈澱するため、エタノールからの結晶化は、（これが可能である場合に）水からの結晶化よりも高純度のＤ−アルロース結晶を得るのに効率的であり得ない。
最後に、また多数である、他の不純物が、この文献において得られた低純度で実証されるように、結晶性組成物中に見いだされる。
【００４５】
エタノールからの結晶化によって得られる結晶性組成物は、Ｔａｋｅｓｈｉｔａらによる刊行物（Ｍａｓｓ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｄ−ｐｓｉｃｏｓｅ  ｆｒｏｍ  Ｄ−ｆｒｕｃｔｏｓｅ  ｂｙ  ａ  ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ  ｂｉｏｒｅａｃｔｏｒ  ｓｙｓｔｅｍ  ｕｓｉｎｇ  ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  Ｄ−ｔａｇａｔｏｓｅ  ３−ｅｐｉｍｅｒａｓｅ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｖｏｌ．９０  Ｎｏ．４，Ｊａｎｕａｒｙ  ２０００，ｐａｇｅｓ  ４５３−４５５）にまた記載されている。この文献は、Ｄ−アルロースを調製する第１工程に焦点を合わせており、Ｄ−アルロース結晶の製造に関して焦点を合わせておらず、それの詳細は再び非常に少ない。原液を調製する工程の条件の選択は、その中のＤ−アルロース二量体の量に本質的な影響を及ぼすので、この文献は、この発明の結晶の調製に有用な原液も、結晶それら自体も記載していない。さらに、この文献において、この結晶化は、Ｄ−アルロースの固化を容易にするためにエタノールから実施されることが明記されており、それは、高い量の非結晶性不純物を実証しており、水からこの文献のＤ−アルロース原液を結晶化させることの不可能性を裏付けている。さらに、この文献において問題の結晶化は、実際には、エタノールの添加による制御されない「沈澱」であるにすぎず、必然的に不純な固体結晶性組成物をもたらす。
【００４６】
他の結晶性組成物がまた、中国特許出願公開第１０３３３３９３５  Ａ号明細書に述べられているが、原液の調製についての条件も、結晶化についてのいかなる条件も（溶剤さえも）示されていないので、それらの調製に関する詳細は全くない。さらに、この文献は、調製試験それ自体を含んでいない。原液を調製する工程の条件の選択は、その中のＤ−アルロース二量体の量に本質的な影響を及ぼすので、この文献は、この発明の結晶の調製に有用な原液も、結晶それら自体も記載していない。さらに、この文献において得られた結晶性組成物の低純度（９８％）は、結晶性組成物が非常に不純であることを示しているように思われる。
【００４７】
本発明の別の主題はまた、Ｄ−アルロース結晶の全収率を向上させるためにＤ−アルロース結晶の製造サーキットでのナノ濾過ユニットの使用に関する。
【図面の簡単な説明】
【００４８】
【図１】図１は、Ｄ−フルクトースに富むクロマトグラフィーラフィネートが、エピマー化反応の最上部でフルクトースと混合されるようにリサイクルされるＤ−アルロース結晶の製造サーキットを図式的に表す。
【図２】図２は、結晶化母液が、エピマー化反応から生じるＤ−フルクトース／Ｄ−アルロース組成物と混合されるようにリサイクルされるＤ−アルロース結晶の製造サーキットを図式的に表す。
【図３】図３は、本発明のプロセスに有用なナノ濾過ユニットを含むＤ−アルロース結晶の製造サーキットを図式的に表す。
【図４】図４は、本発明のプロセスの変形に有用な、真空下の断熱晶析装置−エバポレーターの例を表す。
【図５】図５は、本発明のプロセスの変形に有用な垂直晶析装置の例を表す。
【図６】図６は、ナノ濾過工程に関連して体積濃縮係数の関数としての透過、すなわち流量の曲線を表す。
【図７】図７は、本発明のプロセスにおいて（図３を参照されたい）、すなわち、ナノ濾過前にサンプリングされたＤ−アルロースに富む組成物のＨＰＬＣクロマトグラムを表す。
【図８】図８は、本発明のプロセスにおいて（図３を参照されたい）、すなわち、ナノ濾過後にサンプリングされた透過液のＨＰＬＣクロマトグラムを表す。
【図９】図９は、本発明のプロセスにおいて（図３を参照されたい）、すなわち、ナノ濾過前にサンプリングされたＤ−アルロースに富む組成物の、二量体に特有のゾーンにおける、ＧＣクロマトグラムを表す。
【図１０】図１０は、本発明のプロセスにおいて（図３を参照されたい）、すなわち、ナノ濾過後にサンプリングされた透過液の、二量体に特有のゾーンにおける、ＧＣクロマトグラムを表す。
【図１１】図１１は、比較Ｄ−アルロース結晶の光学顕微鏡法によって得られた画像を表す。
【図１２】図１２は、本発明によるＤ−アルロース結晶の光学顕微鏡法によって得られた画像を表す。
【図１３】図１３は、会社ＣＪ  ＣｈｅｉｌＪｅｄａｎｇ  Ｆｏｏｄ  Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔによって製造され、販売されるＤ−アルロース結晶の光学顕微鏡法によって得られた画像を表す。
【図１４】図１４は、２つのタイプのＤ−アルロース結晶について体積粒径Ｄ４，３の関数としての直径Ｆｅｒｅｔ最小／Ｆｅｒｅｔ最大の比を表す。
【図１５】図１５は、モデル粒子の直径Ｆｅｒｅｔ最小及びＦｅｒｅｔ最大を表す。
【発明を実施するための形態】
【００４９】
Ｄ−アルロース結晶の製造プロセスは、従来、
・  結晶化させられる原液を提供するようにＤ−アルロースに富む組成物を濃縮する工程；
・  Ｄ−アルロース結晶及び母液を形成するように原液を結晶化させる工程；
・  母液とＤ−アルロース結晶とを分離する工程
を含む。
【００５０】
本発明のプロセスは、ナノ濾過工程を含むという特殊性を有する。
【００５１】
このナノ濾過工程は、本発明のプロセスにおいて提供される原液中のＤ−アルロース二量体の量を制限することを可能にする。このナノ濾過工程は、Ｄ−アルロースに富む組成物を濃縮する工程の前の工程において行われる。この工程はしたがって、そのＤ−アルロース二量体含有量が、このナノ濾過工程を用いないもの及び同じプロセスから得られるものよりも低いＤ−アルロースの原液の提供を可能にする。
【００５２】
本発明のプロセスにとって絶対に必要である、ナノ濾過工程において、Ｄ−アルロースの組成物がナノ濾過にかけられる場合に２つの画分が形成される：
・  Ｄ−アルロース二量体に乏しい、透過液；
・  及びまたＤ−アルロース二量体が富化されている、保持液。
【００５３】
本発明のプロセスに有用である結晶の製造サーキットを表す、図３において、流れ６は透過液を表し、流れ１２は保持液を表す。例示的な、しかし非限定的な理由で、本説明の残りにおいて示される流れは、この図３の製造サーキットの流れに言及する。
【００５４】
ナノ濾過透過液は、この原液の製造を可能にする中間物である。
【００５５】
用語「Ｄ−アルロース二量体に乏しい」及び「Ｄ−アルロース二量体が富化された」は、ナノ濾過される組成物のＤ−アルロースオリゴマーの含有量に明らかに関連している。用語「Ｄ−アルロース二量体」は、少なくとも第２の同一の又は異なる単糖と縮合したＤ−アルロースを含む化合物を意味することを意図する。これらの二量体は、例えばＤ−アルロース−Ｄ−アルロース型の二量体である。
【００５６】
これらの二量体は、実施例の部において実証されるように、ＧＣによって検出することができ、ＨＰＬＣ分析中に検出できなかった。乾燥質量として表される、様々な構成物質の質量が、本出願においてはＧＣによって系統的に測定されることはこれから分かる。組成物中の化学種のそれぞれの量を測定するために、試料は、存在する様々な化学種を、メトキシム化トリメチルシリル誘導体へ変換するための処理工程を一般に受ける。化学種のそれぞれの質量は本出願においては、特に言及しない限り、全乾燥質量に対して表される。
【００５７】
グルコースの、フルクトースの及びアルロースの量は、３００℃に加熱される注入器を備えた、３００℃に加熱される水素炎イオン化検出器（ＦＩＤ）を備えた、ならびに０．１８ｍｍの内径及び０．４μｍのフィルム厚さを有する、４０メートルＤＢ１キャピラリーカラムを備えたガスクロマトグラフにおいて測定することができ、カラム温度は、次のようにプログラムされる：３℃／分の速度で２００℃から２６０℃まで、次に１５℃／分で２６０℃から３００℃まで、３００℃で５分保持される。
【００５８】
用語「Ｄ−アルロース二量体の量」は、ＧＣによって測定される、試料中の二量体の総量と、マルトース及びイソマルトースなどのグルコース−グルコース二量体である、おそらく存在する公知の二量体の量との間の差を意味することを意図する。しかしながら、これらのグルコース−グルコース二量体の量は、一般に非常に少ないか、又は存在しない。例えば、本発明に有用な原液中で、グルコース−グルコース二量体の質量は、一般に０．２％未満、多くの場合０．１％未満である。同じことが、本発明の結晶に当てはまる。
【００５９】
グルコース−グルコース二量体の可能な量は、グルコース、フルクトース及びＤ−アルロースについて上記のものと同じ条件下で：
・  本発明のグルコース−グルコース二量体の加水分解を実施することによって；
・  同じクロマトグラムでの及び同じ条件下の全グルコースの量（前記全グルコースは、遊離と称される初期グルコース及びグルコース−グルコース二量体の加水分解から生じたグルコースを含む）を測定することによって；
・  全グルコースのこの量から、試料の初期グルコースの量を差し引くことによって
測定することができる。
【００６０】
二量体の総量は、それに関する限り、使用されるカラムが、０．３２ｍｍの内径及び０．２５μｍのフィルム厚さを有する、３０メートルＤＢ１キャピラリーカラムであり、カラム温度が次のようにプログラムされる：５℃／分の速度で２００℃から２８０℃まで、次に２８０℃で６分間保持され、次に５℃／分で２８０℃から３２０℃まで、３２０℃で５分間保持されるという相違ありで、上記のものと同じ条件下でのガスクロマトグラフにおいて測定することができる。
【００６１】
本方法は、実施例の部においてより詳細に記載される。
【００６２】
本発明に有用なナノ濾過工程を実施するために、ナノ濾過される組成物は、ナノ濾過膜を通過させられる。それは一般に、５％〜１５％の範囲の乾燥物質含有量を有する。
【００６３】
ナノ濾過されるこの組成物の温度は、１０〜８０℃、一般に１５〜５０℃の範囲であり、多くの場合約２０℃であり得る。
【００６４】
当業者は、この分離に有用な膜を選ぶ方法を知っているであろう。このナノ濾過膜は、３００Ｄａ未満の、好ましくは１５０〜２５０Ｄａの範囲のカットオフ閾値を有することができる。理想的には、膜は、少なくとも９８％のＭｇＳＯ４拒絶率を有する。それは特
に、ＧＥ（登録商標）によって製造されるＤａｉｒｙ  ＤＫ又はＤｕｒａｃｏｎ  ＮＦ１タイプの膜であってもよい。
【００６５】
膜に加えられる圧力はまた、広く変わることができ、１〜５０バール、好ましくは５〜４０バール、最も優先的には１５〜３５バールの範囲であり得る。
【００６６】
ナノ濾過工程は、透析濾過段階によって成し遂げることができる。
【００６７】
好ましくは、ナノ濾過の体積濃縮係数（ＶＣＦ）は２〜２０の範囲である。この体積濃縮係数は、当業者によって容易に調整される。
【００６８】
このナノ濾過工程は、連続的に実施することができる。
【００６９】
本発明によれば、Ｄ−アルロースに富む組成物を提供する工程は、
・  Ｄ−フルクトースを含む組成物（流れ１又は１’）を提供する工程；
・  Ｄ−フルクトース及びＤ−アルロースを含む組成物（流れ２）を形成するためのエピマー化工程；
・  Ｄ−アルロースに富む組成物（流れ５）と、Ｄ−フルクトースに富む組成物である、ラフィネート（流れ１４）とを提供するためのクロマトグラフィー工程
を含むことができる。
【００７０】
好ましくは、ナノ濾過工程は、Ｄ−アルロースに富む組成物（流れ５）を提供する工程と、Ｄ−アルロースの原液（流れ７）を形成するための濃縮工程との間で実施される。Ｄ−アルロースに富む前記組成物のナノ濾過工程は、保持液（流れ１２）及び透過液（流れ６）を提供する。
【００７１】
したがって、
・  Ｄ−アルロースに富む組成物を提供する工程；
・  保持液及び透過液を提供するためのＤ−アルロースに富む前記組成物ナノ濾過の工程；
・  ナノ濾過透過液を回収する工程；
・  Ｄ−アルロースの原液を提供するようにこの透過液を濃縮する工程
を含む、本発明の好ましいものの変形。
【００７２】
本発明のプロセスにおいて、ナノ濾過工程は、したがって、原液を提供する濃縮工程の直前に、クロマトグラフィー工程から得られるＤ−アルロースに富む組成物に関して有利に実施される。本プロセスが、結晶化させられる原液中のＤ−アルロース二量体の量を最も効果的に制限し、こうしてＤ−アルロース結晶の全収率を最も実質的に高めることを可能にするのは、この構成においてである。
【００７３】
用語「Ｄ−アルロースに富む組成物」は、乾燥質量で、８０％よりも大きい、有利には８０％〜９９％、優先的には８２％〜９８％の範囲のＤ−アルロース質量含有量を有する組成物を一般に意味することを意図する。
【００７４】
得られる透過液に関して、それの乾燥物質含有量は、例えば３％〜１５％の範囲で変わることができる。透過液は特に、Ｄ−アルロース、Ｄ−フルクトース及びグルコースに加えて、そしてまたおそらく存在する他の糖を含むことができる。この濾液の組成は、非常に異なることができ、ナノ濾過される組成物に依存する。このナノ濾過の終わりに、回収される透過液は、その乾燥質量に対して、０％〜１．２％、例えば０．１％〜１．０％、特に０．１５％〜０．５％のＤ−アルロース二量体を含むことができる。透過液は、追加
の生成物と混合する工程、分離工程、精製工程、エピマー化工程又は濃縮工程などの１つもしくは複数の工程にかけることができる。
【００７５】
得られる保持液に関して、それの乾燥物質含有量はまた、広く、例えば１５％〜４０％の範囲で変わることができる。それは、主にＤ−フルクトース、Ｄ−アルロース、グルコース及びＤ−アルロース二量体を含み得る。一変形によれば、保持液は、回収され、任意選択の濃縮工程後に、Ｄ−アルロースシロップを提供するように、Ｄ−アルロースの追加の組成物と任意選択的に混合される。
【００７６】
Ｄ−アルロース二量体を含むＤ−アルロースに富む組成物がナノ濾過工程にかけられる好ましい変形において、「好ましい透過液」と称される、得られる透過液（流れ６）は好ましくは、乾燥質量で：
・  ８０％〜９９％のＤ−アルロース；
・  ０％〜２０％のＤ−フルクトース；
・  ０％〜１０％のグルコース；
・  ０％〜１．２％のＤ−アルロース二量体
を含む。
【００７７】
上に示されたように、この好ましい透過液は、結晶化させられる原液（流れ７）を得るように濃縮工程に直接かけることができる。
【００７８】
本出願において、Ｄ−アルロース結晶以外の、組成物の全ては一般に水性組成物であることが明記される。言い換えれば、乾燥構成物質の溶剤は水を含む。組成物の溶剤は、一般に水又は水と、例えば、エタノールなどのアルコールとの混合物からなる。優先的には、組成物の溶剤は水である。
【００７９】
したがって、本発明に有用なＤ−アルロースの原液は、一般にＤ−アルロースの水溶液からなる。原液は、一般に少なくとも７５％、例えば８０％〜９５％、優先的には８１％〜９２％、最も優先的には８３％〜８９％の乾燥物質含有量を有する。
【００８０】
この乾燥物質含有量を達成するために、濃縮工程を実施することが必要である。この工程は、Ｄ−アルロースに富む組成物に関して実施することができ、たった一つの要件は、Ｄ−アルロースに富むこの組成物が、先行工程において、本発明に有用なナノ濾過工程を含むプロセスを用いて得られていることである。濃縮工程にかけられるＤ−アルロースに富むこの組成物は、したがって、上記の好ましい透過液、しかしまたクロマトグラフィーによって得られたＤ−アルロースに富む組成物、あるいは透過液と、Ｄ−アルロースに富む追加の組成物との混合物であり得る。優先的には、濃縮工程にかけられるＤ−アルロースに富む組成物は、好ましい透過液である。
【００８１】
Ｄ−アルロース二量体の形成は、濃縮工程中にも起こるため、これらの二量体の形成量を限定することを可能にする条件を選択することが好ましい。濃縮工程は、したがって一般に、真空下で、例えば５〜１００ミリバール、好ましくは２０〜７０ミリバールの範囲の圧力で実施される。この真空は、蒸発のために必要とされる温度を下げること、及びこの濃縮工程の継続時間を減らすことを可能にする。それは、３０〜８０℃、有利には３４〜７０℃、優先的には３７〜５０℃の範囲の温度で実施することができる。この濃縮工程は、一段階エバポレーター、多段階エバポレーター、例えば二段階エバポレーターで実施することができる。濃縮工程の終わりに、本発明に有用なＤ−アルロースの原液が得られる。
【００８２】
この濃縮工程は、連続的に実施することができる。
【００８３】
得られる原液は、乾燥質量で：
・  ８０％〜９９％、好ましくは８５％〜９８％のＤ−アルロース；
・  ０％〜２０％、好ましくは０．５％〜１５％のＤ−フルクトース；
・  ０％〜１０％、好ましくは０％〜５％のグルコース；
・  ０％〜１．５％、例えば０．１％〜１．２％、優先的には０．４％〜１．１％のＤ−アルロース二量体
を含むことができる。
【００８４】
本発明によるプロセスはまた、Ｄ−アルロース結晶の懸濁液を形成するようにＤ−アルロースの前記原液を結晶化させる工程を含む。この懸濁液は、この工程中にまた形成される結晶化からの結晶及び母液を含む。
【００８５】
この結晶化工程は、任意のタイプのものであってもよい。それは、特に、冷却による結晶化工程又は蒸発結晶化による結晶化工程であってもよい。当業者は、特に国際公開第２０１１／１１９００４号パンフレットに記載されている実施条件を見いだす方法を知るであろう。しかしながら、これらの文献に記載されている結晶化工程は、本発明に有用な原液の特殊な調製のせいで、行うことをより困難にされることが指摘されるべきである。
【００８６】
結晶化工程の終わりに、結晶の懸濁液（流れ９）を使用して、特に濾過工程及び／又は遠心分離工程によって、結晶（流れ１０）が母液（流れ１３）から分離される。この分離工程は、より優先的には回分式で実施される。
【００８７】
母液（流れ１３）は、一般に、７０％〜８０％の範囲の乾燥物質含有量を有する。それらは、乾燥質量で：
・  ８０％〜９９％、好ましくは８２％〜９５％のＤ−アルロース；
・  ０％〜２０％、好ましくは０．５％〜１５％のＤ−フルクトース；
・  ０％〜１０％、好ましくは０％〜５％のグルコース；
・  ０％〜３％、例えば０．１％〜２．９％、特に１％〜２．５％のＤ−アルロース二量体
を含むことができる。
【００８８】
得られた結晶は、冷水を使った及び／又はアルコール、特にエタノールを使った浄化工程にかけることができる。これらの結晶（流れ１１）は、次に、任意のタイプの好適な乾燥機で実施することができる乾燥工程によって乾燥させることができる。Ｄ−アルロース結晶は、５％未満、好ましくは１％未満の含水量を有する。
【００８９】
この結晶化工程は、特に、その例が図５に示される、垂直晶析装置を用いて、連続的に実施することができる。
【００９０】
最も好ましい一モードによれば、結晶化工程は、マスキッド（流れ８）を形成するように真空下での断熱晶析装置−エバポレーターにおいて実施される、断熱蒸発冷却段階、引き続いて結晶の懸濁液（流れ９）を形成するように前記マスキッドを冷却することによる結晶化の段階を含む。断熱蒸発冷却は、結晶化させられる原液の即時冷却を引き起こす。好ましくは、晶析装置−エバポレーターは、凝縮器を備えており、この段階中に凝縮した水は、乾燥物質含有量を安定して保つように晶析装置の最上部で壁に沿って連続的に再注入される。本発明のプロセスの特定の構成においてナノ濾過工程と組み合わせられた、２つの別個の段階を含むこの好ましい結晶化工程は、本説明において以下に記載される本発明の結晶を連続的に得ることを可能にする。これは、この好ましい結晶化工程、特に蒸発冷却段階もまた、Ｄ−アルロース二量体のその場形成を非常に大幅に制限することを可能
にするという事実と関係している。いかなる理論にも制約されることなく、本出願人は、原液が晶析装置−エバポレーターへ導入される時点で実質的に瞬時に原液を冷却することができるという事実によってこれを説明しており、原液の自然冷却について記載している、又はさらには国際公開第２０１６／０６４０８７号パンフレットに記載されるような熱交換器を用いる冷却勾配による、既知のＤ−アルロースの結晶化プロセスとは異なる。本発明による結晶は、結晶化工程の第１段階が、それによって結晶化工程の継続時間を短縮する、即時蒸発冷却段階であるが、改善された純度及び改善された特性を示す。実際に、これは、改善された結晶を得るためには結晶化時間を長くする必要があるという、当業者の想定とは反対である。
【００９１】
蒸発冷却段階中に、温度は、３０〜４０℃の範囲であり、好ましくは３３〜３７℃の範囲であり、例えばおよそ３５℃のものであり得る。この温度は、加えられるべき適切な減圧を決定することによって当業者により容易に達成される。したがって、晶析装置−エバポレーター中の圧力は、３０〜５０ミリバールの範囲であり得る。断熱晶析装置は、特に、強制循環又は間接強制循環（ＩＦＣ＊）ＤＴ（通気管用の）又はＤＴＢ（通気管邪魔板用の）プルチューブであり得る。好ましくは、この蒸発冷却段階は連続的である。この段階中に、開始剤は、急冷によって生み出される過飽和による蒸発晶析装置における自発的な核形成現象によって連続的に生み出され：こうして、厳密に言えば、このケースでは、開始剤の導入は全くない。非限定的な意味では、連続的にこの蒸発冷却段階を実施する可能性は、実施例セクションに及び図４に記載されており、ここで、蒸発冷却段階中に形成された結晶の画分（流れ７ｄ）は、晶析装置−エバポレーターに供給するために流れ７ｂに混ぜ込まれ、それによって晶析装置−エバポレーターのこの新たな通過中にさらに成長することができるであろう結晶を、晶析装置−エバポレーターへの導入の時点で、含む流れ７ｃを得ることを可能にする。この例によれば、流れ７ｂは、「微粉」、すなわち、晶析装置の最も微細なＤ−アルロース結晶を含む、晶析装置−エバポレーターにおいて回収されたＤ−アルロースの過飽和シロップからなる、流れ７と流れ７ａとの混合物から得ることができる。この変形によれば、流れ７は、有利には、混合前に、熱交換器を通過することができ、前記通過は、それを流れ７ａと即時混合する前に、流れ７を実質的に即時再加熱することを可能にする。これは、次に、流れ７ａの微粉を再溶融させること、及びこれらの微粉を含まない流れ７ｂを得るように流れ７を冷却することを可能にする。
【００９２】
この段階の終わりに、Ｄ−アルロース結晶のマスキット（流れ８）、すなわち、一般に小さいサイズを有する、結晶の懸濁液が回収される。この蒸発冷却段階中のマスキットの平均滞留時間は、５〜１５時間であり得る。マスキットでの懸濁液中の結晶の体積平均サイズＤ４，３は、一般に５０〜２００μｍの範囲である。
【００９３】
冷却による結晶化の段階は、蒸発冷却段階中に得られたマスキット（流れ８）を冷却することによって連続的に実施される。この結晶化段階の継続時間は、２５〜５０時間の範囲であり得る。結晶化の開始時の温度は、一般に、導入されるマスキットの温度に依存し、特に３０〜４０℃の範囲であり、好ましくは３３〜３７℃の範囲であり、例えばおよそ３５℃のものであり得る。この段階は、一般に、機械攪拌を使って実施される、好ましくは、冷却による結晶化中に、温度は、１時間当たり０．３〜０．５℃の範囲の速度で低下させられる。図５は、晶析装置中の温度を調整することを可能にする様々な熱交換器を、側面に、持った垂直晶析装置の例を示す。この操作中に、マスキットと交換機の水との間の温度差は、好ましくは５℃を超えない。冷却による結晶化の段階は、特に垂直晶析装置では、連続的に好ましくは実施することができる。
【００９４】
したがって、本発明のプロセスの好ましい変形は、
・  Ｄ−アルロースに富む組成物（流れ５）を提供する工程；
・  保持液（流れ１２）及び透過液（流れ６）を提供するための前記Ｄ−アルロースに
富む組成物のナノ濾過の工程；
・  ナノ濾過透過液を回収する工程；
・  Ｄ−アルロースの原液（流れ７）を提供するようにこの透過液を濃縮する工程；
・  結晶化工程であって、
ｉ．マスキット（流れ８）を形成するように真空下の断熱晶析装置−エバポレーターで実施される、断熱蒸発冷却段階、
ｉｉ．引き続いて結晶の懸濁液（流れ９）を形成するための前記マスキッドの冷却による結晶化の段階
を含む結晶化工程
を含む
【００９５】
結晶それら自体に関連する利点以外の、本発明のプロセスのこの好ましい変形の利点は、得られる結晶が、結晶化からの母液からさらにより容易に分離できること、及びより容易に乾燥できることである。これは、得られる結晶の形状と主に関係している。
【００９６】
結晶化工程を開始するために、Ｄ−アルロース開始剤が、選択された晶析装置へ一般に導入される。これらのＤ−アルロース開始剤は、例えば、１０〜１００μｍの範囲のサイズを有する、小さいサイズのＤ−アルロース結晶からなる。開始剤の質量は、用いられる晶析装置のタイプに応じて広く変わることができる。それは、原液中のＤ−アルロースの質量に対して、０．００１％〜１％、多くの場合０．０１％〜０．７％、一般に０．０５％〜０．５％の範囲であり得る。これらの量は、Ｄ−アルロースの原液からの冷却による結晶化の工程が実施される場合に特に好適である。上に述べられたように、蒸発冷却工程が用いられる場合、その場で開始剤を生み出すことも可能である。
【００９７】
好ましくは、結晶化工程は、濃縮工程の１時間未満後に、好ましくは前記工程の３０分未満後に実施される。最も優先的には、結晶化工程は、濃縮工程後即時に実施される。これは、結晶化させられる原液中の二量体の量を、結晶化工程時に、さらに制限することを可能にする。
【００９８】
いったん乾燥後に回収されると、結晶はまた、これらの結晶を篩い分けすること、そして篩い分け後に回収された画分によって結晶のサイズを増大させるか又は減少させることを可能にする、追加の篩い分け工程にかけることができる。例えば、この追加の工程は、篩い分け工程にかけられた結晶のサイズに関して、篩いを通過したより小さい体積平均サイズＤ４，３のＤ−アルロース結晶の画分及びまた篩いに残るより大きい体積平均サイズＤ４，３のＤ−アルロース結晶の画分を回収することを可能にする。結晶集団を修正するために、及び所望のＤ４，３画分を得るために、当業者が篩い網目サイズを選択することは十分である。
【００９９】
本発明によるプロセスが、以前に記載された従来法に現れる、及び詳細に後で記載される他の工程などの、他の工程を含むことができることは言うまでもない。本発明によるプロセスはまた、追加の精製工程、及びまた乾燥物質含有量を調整し、こうして最良条件下で本発明のプロセスの様々な工程を実施する目的で中間の希釈又は濃縮工程を含むことができる。これらの工程の全ては、連続的に実施することができる。
【０１００】
エピマー化工程を実施するために提供されるＤ−フルクトースの組成物（流れ１）は、Ｄ−フルクトース結晶を水に溶解させることによって得ることができる、Ｄ−フルクトースシロップ、又はグルコース／Ｄ−フルクトースシロップであり得る。優先的には、この組成物は、少なくとも９０乾燥重量％のＤ−フルクトース、優先的には少なくとも９４％のＤ−フルクトースを含むグルコース／Ｄ−フルクトースシロップを含む。本説明において後で説明される１つの好ましいモードにおいて、その後のエピマー化工程を実施するた
めに提供されるＤ−フルクトース組成物は、このＤ−フルクトースシロップと、全体として又は部分的にラフィネート（流れ１４又は１６）であってもよい少なくとも１つの被リサイクル画分との混合物（流れ１’）であり、この被リサイクル画分がより大量のＤ−アルロースを含むことが可能である。
【０１０１】
エピマー化工程にかけられるＤ−フルクトース組成物は、
・  ０％〜１０％のＤ−アルロース；
・  ７０％〜１００％のＤ−フルクトース；
・  ０％〜１０％のグルコース；
・  ０％〜１５％のＤ−アルロース二量体
を含むことができる。
【０１０２】
エピマー化工程は、任意選択的に乾燥物質含有量の調整後に、前に提供されたＤ−フルクトース組成物を使用して実施される。この工程は、一般に３０％〜６０％、多くの場合４５％〜５５％の範囲の乾燥物質含有量で実施される。Ｄ−プシコースエピメラーゼ型の酵素又はこの酵素を含む組成物が、この組成物へ導入される。この酵素を含む組成物は、Ｄ−プシコースエピメラーゼを合成するホスト微生物の凍結乾燥物であってもよく、前記微生物は、おそらく枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、特に国際公開第２０１５／０３２７６１  Ａ１号パンフレットに記載されているものである。ｐＨは、使用される酵素に従って、例えば５．５〜８．５の範囲のｐＨで調整される。反応は、４０〜７０℃、多くの場合４５〜６０℃の範囲の温度で加熱することによって実施することができる。反応は、０．１〜１００時間、例えば０．２〜６０時間続くことができる。この反応は、例えば、酵素カラム上で実施することができ、それによってこの工程に関して連続的にまた作業するという利点を有する。連続的に稼働するために、幾つかの反応器を使って順次作業することも可能である。このエピマー化工程を実施するために、国際公開第２０１５／０３２７６１  Ａ１号パンフレットの教示が特に利用されてもよい。
【０１０３】
反応の終わりに、一般に８５／１５〜５５／４５の範囲のＤ−フルクトース／Ｄ−アルロース重量比に従って、多くの場合８０／２０〜６０／４０の範囲のＤ−フルクトース／Ｄ−アルロース重量比に従って、Ｄ−フルクトース及びＤ−アルロースを含む組成物が形成される。この比率は、用いられるエピマー化パラメータにならびに、実に明らかに、エピマー化工程に提供されるＤ−フルクトース組成物中のＤ−アルロースの及びＤ−フルクトースの量に依存し；この組成物中のＤ−アルロースの量は、リサイクリングのケースで特により大きいものであり得る。
【０１０４】
このエピマー化工程の終わりに、必要ならば、特にホスト微生物の凍結乾燥物が使用される場合に、おそらく存在する細胞破片を回収するために濾過工程を実施することができる。この工程は精密濾過工程からなってもよい。図３において、精密濾過された組成物は流れ３に相当し、細胞破片は流れ１７に回収される。
【０１０５】
本発明のプロセスにおいて、追加の精製好適をまた実施することができる。クロマトグラフィー工程の前に、Ｄ−フルクトース及びＤ−アルロースを含む組成物（流れ３）を脱塩する工程が一般に実施され、それは、１つもしくは複数のカチオン性イオン交換樹脂（例えばＤｏｗｅｘ  ８８型のカチオン樹脂）、アニオン性イオン交換樹脂（例えばＤｏｗｅｘ  ６６型のアニオン樹脂）及びカチオン−アニオン混合物に通過させることによって実施することができる。図３において、この組成物は流れ４に相当する。得られたＤ−フルクトース及びＤ−アルロースを含む組成物は、次に脱塩され、一般に１００ｋΩ．ｃｍ−１よりも大きい抵抗率を有する。この脱塩工程の前に、Ｄ−フルクトース及びＤ−アルロースを含む組成物を、例えば活性炭を含むカラム上に通すことによって、脱色する工程を実施することも可能である。
【０１０６】
Ｄ−フルクトース及びＤ−アルロースを含む組成物（流れ４）は、次に、Ｄ−アルロースに富む少なくとも１つの組成物及びＤ−フルクトースに富む１つの組成物を提供するためにクロマトグラフィー工程にかけることができる。本説明において後で詳細に説明される１つの好ましいモードにおいて、クロマトグラフィー工程にかけられる、Ｄ−フルクトース及びＤ−アルロースを含む組成物は、エピマー化工程から生じる組成物（流れ４）と、少なくとも１つの被リサイクル画分（この被リサイクル画分はより多い量のＤ−アルロースをおそらく含む）との混合物（流れ４’）である。
【０１０７】
クロマトグラフィー工程にかけられる組成物は、その乾燥質量に対して：
・  ２２％〜４５％、一般に２５％〜３７％のＤ−アルロース；
・  ４５％〜７５％、一般に４６％〜７０％のＤ−フルクトース；
・  ０％〜１０％のグルコース；
・  ２％〜１０％のＤ−アルロース二量体
を含むことができる。
【０１０８】
このクロマトグラフィー工程を実施するために、任意のタイプの、特に擬似移動床（Ｓｉｍｕｌａｔｅｄ  Ｍｏｖｉｎｇ  Ｂｅｄ）（ＳＭＢ）タイプの、改良型（Ｉｍｐｒｏｖｅｄ）擬似移動床（ＩＳＭＢ）タイプの、分割改良型（Ｄｉｖｉｄｅ  Ｉｍｐｒｏｖｅｄ）擬似移動床（ＤＩＳＭＢ）タイプの、順次（Ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌ）擬似移動床（ＳＳＭＢ）タイプの又は日本三菱クロマトグラフィー改良型（ＮＭＣＩ）タイプの連続クロマトグラフィーを用いることが可能である。水が溶離液として一般に使用される。クロマトグラフは、連続して幾つかのカラム、例えば４〜８のカラムを備えることができる。カラムは、イオン交換樹脂、例えばカルシウムイオンと交換するためのカチオン樹脂を含む。Ｄ−フルクトース及びＤ−アルロースを含む組成物の乾燥物質含有量は、４０％〜７０％の範囲であることができ、一般におよそ５０％である。クロマトグラフィー中の組成物の温度は、一般に４０〜８０℃、好ましくは５５〜６５℃の範囲である。このクロマトグラフィーは、満足できる分離を得るために必要な時間の間続き、数時間続くことができる。
【０１０９】
この工程の終わりに、その乾燥物質含有量に対して、少なくとも８０％のＤ−アルロース、有利には少なくとも９０％のＤ−アルロースを含むことができる、Ｄ−アルロースに富む組成物（流れ５）が得られる。Ｄ−アルロースに富むこの組成物は、５％〜１５％の範囲の乾燥物質含有量を有することができる。この工程の終わりに、その乾燥物質含有量に対して、少なくとも７５％のＤ−フルクトース、多くの場合少なくとも８０％のＤ−フルクトースを一般に含む、ラフィネート（流れ１４）がまた得られる。このラフィネートは、一般に、およそ１５％〜３０％の範囲の乾燥物質含有量を有する。
【０１１０】
クロマトグラフィーの終わりに得られるＤ−アルロースに富む組成物（流れ５）は、したがって、その乾燥質量に対して：
・  ８０％〜９８％のＤ−アルロース；
・  ０％〜２０％のＤ−フルクトース；
・  ０％〜１０％のグルコース；
・  １．５％〜５％のＤ−アルロース二量体
を含むことができる。
【０１１１】
ラフィネートは、それに関する限り、その乾燥質量に対して：
・  １％〜１０％のＤ−アルロース；
・  ７０％〜９９％のＤ−フルクトース；
・  ０％〜１０％のグルコース；
・  ５％〜２０％のＤ−アルロース二量体
を含むことができる。
【０１１２】
導入されたＤ−フルクトースに対して、Ｄ−アルロース結晶の全収率が１５％未満である従来法とは対照的に、本発明のプロセスの収率は、２５％以上であり得る。有利には、Ｄ−アルロース結晶の全収率は、５０％以上、例えば６０％以上、又は実に６５％以上である。この特に改善された収率は、結晶化工程を中断させることなくリサイクリング工程を行うことが可能であるという事実によって可能にされる。
【０１１３】
このように、本発明のプロセスは、少なくとも１つのリサイクリング工程を含むことができる。
【０１１４】
１つの好ましいモードによれば、このリサイクリング工程は、クロマトグラフィー工程から生じるラフィネート（流れ１４）の少なくとも一部をリサイクルする工程からなることができる。このラフィネートは、任意選択的に、混合される前に濃縮されていることができる。それは、有利には、Ｄ−フルクトース組成物（流れ１’）を提供するために、上記の例えばＤ−フルクトース／グルコースシロップの形態での、Ｄ−フルクトース（流れ１）と混合されるように、全体的に又は部分的にリサイクルすることができる。それは、そのとき、エピマー化工程にかけられる、Ｄ−フルクトースシロップよりもＤ−アルロースに一般により富んでいる、このＤ−フルクトース組成物である。
【０１１５】
このリサイクリング工程は、母液（流れ１３）の少なくとも一部をリサイクルする工程からなることができる。これらの母液は、有利には、Ｄ−フルクトース及びＤ−アルロースを含む組成物（流れ４）と混合されるように、全体的に又は部分的にリサイクルすることができる。それは、そのとき、クロマトグラフィー工程にかけられるこの混合物（流れ４’）である。これらの母液は、任意選択的に、混合される前に希釈されていてもよい。
【０１１６】
このリサイクリング工程は、保持液（流れ１２）の少なくとも一部をリサイクルする工程からなることができる。この保持液は、有利には、Ｄ−フルクトース及びＤ−アルロースを含む組成物（流れ４）ならびに任意選択的に被リサイクル母液と混合されるように、全体的に又は部分的にリサイクルすることができる。それは、そのとき、クロマトグラフィー工程にかけられるこの混合物（流れ４’）である。この保持液は、任意選択的に、混合される前に濃縮されていることができる。混合が、保持液及び母液画分と実施されるケースでは、これらの画分を濃縮する又は希釈することは必要ではないかもしれない。比較的大量のＤ−アルロースを有する２つの画分である、保持液及び母液画分のリサイクリングは、クロマトグラフィー工程にかけられる組成物のＤ−アルロースの濃度を高める（その結果としてＤ−フルクトースの量を低下させる）ことを可能にすることが指摘されるべきである。
【０１１７】
被リサイクル画分を濃縮する任意選択の工程を実施するために、原液の製造を可能にする濃縮工程について記載された同じ設備及び条件を用いることが可能である。
【０１１８】
本発明の１つの最も好ましいモードによれば（図３は、本発明のこの好ましいプロセスでの製造のためのサーキットを表す）、本プロセスは、
ａ）Ｄ−フルクトースを含む組成物（流れ１’）を提供する工程；
ｂ）Ｄ−フルクトース及びＤ−アルロースを含む組成物（流れ２）を形成するためのエピマー化工程；
ｃ）Ｄ−アルロースに富む組成物（流れ５）と、Ｄ−フルクトースに富む組成物からなるラフィネート（流れ１４）とを提供するためのクロマトグラフィー工程；
ｄ）透過液（流れ６）及び保持液（流れ１２）を提供するためのＤ−アルロースに富む組成物のナノ濾過の工程；
ｅ）結晶化させられる原液（流れ７）を形成するように透過液を濃縮する工程；
ｆ）結晶（流れ１０）及び母液（流れ１３）を形成するように原液（流れ９）を結晶化させる工程
を含み、前記プロセスにおいて：
・  Ｄ−フルクトース（流れ１）と混合され、工程ａ）の組成物（流れ１’）を提供するようにラフィネート（流れ１４又は１６）の少なくとも一部をリサイクルする工程；
・  ならびに／又はクロマトグラフィー工程ｃ）にかけられる組成物（流れ４’）を提供するために工程ｂ）から生じるＤ−フルクトース及びＤ−アルロースを含む組成物（流れ４）と混合されるようにナノ濾過から生じる保持液（流れ１２）の少なくとも一部をリサイクルする工程；
・  ならびに／又はクロマトグラフィー工程ｃ）にかけられる組成物（流れ４’）を提供するために工程ｂ）から生じるＤ−フルクトース及びＤ−アルロースを含む組成物（流れ４）と混合されるように結晶化工程から生じる母液（流れ１３）の少なくとも一部をリサイクルする工程
が実施される。
【０１１９】
本プロセスは、フラッシング工程を含み、このフラッシング工程はおそらくラフィネート、保持液及び結晶化からの母液から選ばれる被リサイクル画分の少なくとも１つの少なくとも一部をフラッシュする工程である。これは、システムが安定したままであるために、本プロセス中に形成されたＤ−アルロース二量体の一部を製造サーキットから除去することが絶対に必要であるからである。一般に、画分がより多くリサイクルされればされるほど、Ｄ−アルロース二量体の量は、サーキット中により多く増加する。したがって、Ｄ−アルロース二量体の量を低下させるための一可能性は、フラッシュされる量を増加させることである。しかしながら、これは、その結果Ｄ−アルロース結晶の全収率の損失に現れる。本発明のプロセスは、同時に結晶化を可能な状態に保ちながら、本プロセスにおいて得られる様々な画分のリサイクリングを劇的に増加させることを可能にする。
【０１２０】
例として、ラフィネート、保持液及び結晶化画分からの母液が全てリサイクルされる、上に記載された最も好ましいプロセスの変形において、ラフィネートリサイクリング工程は有利には部分リサイクリングであり、Ｄ−アルロース二量体を含むＤ−フルクトース組成物を提供するように、例えばこのラフィネートの５０％〜９５％がリサイクルされ（流れ１６）、５〜５０％がフラッシュされる（流れ１５）；言い換えれば、Ｄ−フルクトースに富む組成物のリサイクリング度は、５０％〜９５％の範囲である。優先的には、リサイクリング度は、７０％〜９２％の範囲である。このケースでは、他の２つのリサイクリングは、有利には全リサイクリングである。
【０１２１】
フラッシュされた画分は次に、任意選択的に濃縮のならびに／又は他の組成物及び／もしくは添加剤との混合の工程の後に、シロップを製造するために使用することができる。
【０１２２】
結晶化工程が経時的に安定したままであるから、本発明によるプロセスは、それが連続的であることできるため、特に有利である。
【０１２３】
前に説明されたように、ナノ濾過の工程と、真空下の断熱晶析装置−エバポレーターにおける結晶化の工程とを組み合わせる本発明の好ましい変形に従って、本出願人はまた、向上した品質の結晶を得ることに成功した。
【０１２４】
本発明による結晶は、０．５０％未満、好ましくは０．３０％未満、又は実に０．２０％未満のＤ−アルロース二量体の質量含有量を有する。これらの結晶は、有利には０．０１％〜０．４８％の範囲の、優先的には０．０２％〜０．４５％の範囲の、例えば０．０３％〜０．４０％、特に０．０４％〜０．３０％、特別に０．０５％〜０．２０％の範囲
の質量含有量のＤ−アルロース二量体を含むことができる。
【０１２５】
本発明による結晶は、有利には９９．００％以上、好ましくは９９．５０％以上、又は実に９９．７０％以上のＤ−アルロースの質量含有量を有する。
【０１２６】
本発明の結晶の一利点は、これらの結晶が少量のＤ−アルロース二量体を示すことである。いかなる理論にも制約されることなく、本出願人は、これらの結晶の製造のための有用な原液が、非常に小さいＤ−アルロース二量体含有量を含むという事実によって、及び実施される結晶化工程がこれらの二量体のその場形成を制限することを可能にするという事実によってこれを説明する。したがって、ナノ濾過工程を、断熱蒸発冷却の段階及び冷却による結晶化の段階と組み合わせることによるこのプロセスを用いて本出願人がこれらの結晶を得ることが可能であった。
【０１２７】
本発明のものよりも高い二量体含有量を含む、先行技術Ｄ−アルロース結晶と関連した一不利点は、特にそれらが大きい場合に、針状晶に似た形状を有するようにこれらの結晶の伸長が観察されることである。
【０１２８】
優先的には、本発明のＤ−アルロース結晶は、２００μｍよりも大きい、有利には２１０〜８００μｍ、優先的には２２０〜３５０μｍの範囲の体積平均サイズＤ４，３を有する。
【０１２９】
より低いＤ−アルロース二量体含有量を有する、本発明の結晶は、図１１、１２及び１３に実証されるように、より「ずんぐりした」形状を有するという利点を有する。
【０１３０】
このよりずんぐりした形状は、本発明のＤ−アルロース結晶が、２００〜４００μｍの範囲で選ばれる所与の体積粒径Ｄ４，３について、０．６０よりも大きい、有利には０．６２〜０．９０、例えば０．６３〜０．８０の範囲のＦｅｒｅｔ最小／Ｆｅｒｅｔ最大比を有するという事実をもたらすことができる。Ｆｅｒｅｔ径は、当業者に周知のパラメータである。それは、キャリパーの原理を用いて、粒子の投影面積から推測される。Ｆｅｒｅｔ最小径は、寸法の最小からなり、一方、Ｆｅｒｅｔ最大径は、寸法の最大からなる。図１５は、所与の粒子に関するＦｅｒｅｔ最小及び最大径の原理を表す。
【０１３１】
好ましくは、本発明の結晶は、２００〜４００μｍの範囲の粒径の全てにわたってこのＦｅｒｅｔ最小／Ｆｅｒｅｔ最大比を示す。
【０１３２】
あるいはまた、及びＤ−アルロース二量体の含有量とは無関係に、本発明の主題は、２００μｍよりも大きい、有利には２１０〜８００μｍ、優先的には２２０〜３５０μｍの範囲の体積平均サイズＤ４，３を有し、そして２００から４００μｍまでに広がる範囲から選ばれる所与の体積粒径Ｄ４，３について、０．６０よりも大きい、有利には０．６２〜０．９０、例えば０．６３〜０．８０の範囲のＦｅｒｅｔ最小／Ｆｅｒｅｔ最大径比を有するＤ−アルロース結晶に関する。好ましくは、本発明の結晶は、２００から４００μｍまでに広がる範囲の粒径の全てにわたってこのＦｅｒｅｔ最小／Ｆｅｒｅｔ最大比を有する。本発明のこれらの結晶は、有利には０．５０％未満、好ましくは０．３０％未満、又は実に０．２０％未満の質量含有量のＤ−アルロース二量体を含む。これらの結晶は、有利には０．０１％〜０．４８％の範囲の、優先的には０．０２％〜０．４５％の範囲の、例えば０．０３％〜０．４０％、特に０．０４％〜０．３０％、特別に０．０５％〜０．２０％の範囲の質量含有量のＤ−アルロース二量体を含み得る。これらの結晶は、有利には９９．００％以上、好ましくは９９．５０％以上、又は実に９９．７０％以上のＤ−アルロースの質量含有量を有する。
【０１３３】
結晶の体積平均サイズＤ４，３及びまたＦｅｒｅｔ最小／Ｆｅｒｅｔ最大径比は、粒径分析計、特に、実施例セクションにおいて用いられるものなどのブランドＳｙｍｐａＴＥＣのＱＩＣＰＩＣ  ＲＯＤＯＳ型の粒径分析計を用いて測定される。結晶が、粒径分析計において全ての方向にランダムに観察されるということを考慮すれば、結晶の集団について粒径分析計によって得られる値は、この集団の結晶のたった一つの顕微鏡画像に関する計算によって得られる値とは異なり、粒径分析によって得られる値が一般により高い。
【０１３４】
好ましくは、結晶は、凝集していない（又は個別化されている）。結晶が凝集していないという事実は、光学顕微鏡法による簡単な観察によって検証することができる。例として、図１３の結晶は、図１１及び１２のものとは異なって、凝集している。
【０１３５】
この異なる形態は、巨視的スケールで、同じ平均サイズの結晶と比べて本発明の結晶の改善された流動性をもたらす。同様に、これらの結晶は、経時的にケーキングに関してより良好な挙動を示すことができる。
【０１３６】
このように、それらの特性のために、本発明の好ましいプロセスを用いて得られた結晶は、容易に流れることができる。それらは、したがって、今まで決して達成されなかった流動性を示す結晶を得ることを可能にする。それらは、したがって、例えば、テーブルシュガーとして有利に使用することができる。
【０１３７】
本発明のＤ−アルロース結晶は、アルロースの既知用途及び、一般に、甘味料に使用することができる。本発明のＤ−アルロース結晶を使用することができる用途の中に、スティック又はドラジェの形態でのチューインガム、しゃぶられるキャンディー及びタブレット、ビスケット、クッキー、マフィン、ケーキ、ゼラチンベースのケーキ、チューイングペースト、特に短いテクスチャのチューイングペースト、アイシング及び粉末飲料に言及され得る。
【０１３８】
本発明の別の主題は、また、プロセスの安全性及び／又はＤ−アルロース結晶の全収率を向上させるためのＤ−アルロース結晶の製造サーキットでのナノ濾過ユニットの使用に関する。この使用は、サーキットへ導入される原材料がＤ−フルクトースを含む場合に特に有利である。
【０１３９】
本発明の別の主題は、また、得られる結晶の品質を向上させるためのＤ−アルロース結晶の製造サーキットでのナノ濾過ユニットの使用に関する。用語「得られる結晶の品質を向上させる」は、特に、Ｄ−アルロース二量体含有量を減らすこと及び／又はＤ−アルロース結晶のＦｅｒｅｔ最小／Ｆｅｒｅｔ最大径比を高めることを意味することを意図する。
【０１４０】
例示として、母液リサイクリング工程及び／又はラフィネートリサイクリング工程及び／又は保持液リサイクリング工程を含む、本発明によるプロセスの他の実施形態は、以下に示される。
【０１４１】
第１実施形態によれば、本プロセスは、
ａ）Ｄ−アルロースに富む組成物を提供する工程；
ｂ）結晶化させられる原液を形成するための濃縮工程
を含み、
・  少なくとも１つのリサイクリング工程が、母液の少なくとも一部をリサイクルする工程からなり；
・  ナノ濾過工程が、透過液及び保持液を形成するようにこれらの被リサイクル母液に関して実施され；
・  透過液が、工程ａ）において提供されたＤ−アルロースに富む組成物と混合され；そして
・  この混合物が、結晶化させられる原液を提供するように濃縮工程ｂ）にかけられ；
・  母液の及び／又は保持液の少なくとも一部がフラッシュされる
ことを特徴とする。
【０１４２】
第２実施形態によれば、本プロセスは、
ａ）Ｄ−アルロースに富む組成物を提供する工程；
ｂ）結晶化させられる原液を形成するための濃縮工程
を含み、
・  少なくとも１つのリサイクリング工程が、母液の少なくとも一部をリサイクルする工程からなり；
・  これらの被リサイクル母液が、工程ａ）において提供されたＤ−アルロースに富む組成物と混合され；
・  ナノ濾過工程が、透過液及び保持液を提供するようにこの混合物に関して実施され；
・  この透過液が、結晶化させられる原液を提供するように濃縮工程ｂ）にかけられ；そして
・  母液の少なくとも一部がフラッシュされる
ことを特徴とする。
【０１４３】
第３実施形態によれば、本プロセスは、
ａ）Ｄ−アルロース及びＤ−フルクトースを含む組成物を提供する工程；
ｂ）Ｄ−アルロースに富む組成物と、Ｄ−フルクトースに富む組成物からなるラフィネートとを提供するためのクロマトグラフィー工程；
ｃ）結晶化させられる原液を形成するようにＤ−アルロースに富む組成物を濃縮する工程
を含み、
・  少なくとも１つのリサイクリング工程が、母液の少なくとも一部をリサイクルする工程からなり；
・  ナノ濾過工程が、透過液及び保持液を形成するようにこれらの被リサイクル母液に関して実施され；
・  透過液が、工程ａ）において提供された組成物と混合され；
・  この混合物が、クロマトグラフィー工程ｂ）にかけられ；そして
・  母液の少なくとも一部がフラッシュされる
ことを特徴とする。
【０１４４】
第４実施形態によれば、本プロセスは、
ａ）Ｄ−アルロース及びＤ−フルクトースを含む組成物を提供する工程；
ｂ）Ｄ−アルロースに富む組成物及びＤ−フルクトースに富む組成物を提供するためのクロマトグラフィー工程；
ｃ）結晶化させられる原液を形成するための濃縮工程
を含み、
・  少なくとも１つのリサイクリング工程が、母液の少なくとも一部をリサイクルする工程からなり；
・  これらの被リサイクル母液が、工程ａ）において提供された組成物と混合され；
・  ナノ濾過工程が、透過液及び保持液を提供するようにこの混合物に関して実施され；
・  この透過液が、クロマトグラフィー工程ｂ）にかけられ；そして
・  母液の少なくとも一部がフラッシュされる
ことを特徴とする。
【０１４５】
第５実施形態によれば、本プロセスは、
ａ）Ｄ−アルロース及びＤ−フルクトースを含む組成物を提供する工程；
ｂ）Ｄ−アルロースに富む組成物及びＤ−フルクトースに富む組成物を提供するためのクロマトグラフィー工程；
ｃ）結晶化させられる原液を形成するための濃縮工程
を含み、
・  少なくとも１つのリサイクリング工程が、母液の少なくとも一部をリサイクルする工程からなり；
・  これらの被リサイクル母液が、工程ａ）において提供された組成物と混合され；
・  クロマトグラフィー工程ｂ）が、この混合物に関して実施され；
・  ナノ濾過工程が、透過液及び保持液を提供するように、このクロマトグラフィー工程ｂ）から生じたＤ−アルロースに富む組成物に関して実施され；
・  この透過液が、濃縮工程ｃ）にかけられ；そして
・  母液の少なくとも一部がフラッシュされる
ことを特徴とする。
【０１４６】
第６実施形態によれば、本プロセスは、
ａ）Ｄ−フルクトースを含む組成物を提供する工程；
ｂ）Ｄ−フルクトース及びＤ−アルロースを含む組成物を形成するためのエピマー化工程；
ｃ）Ｄ−アルロースに富む組成物と、Ｄ−フルクトースに富む組成物からなるラフィネートとを提供するためのこの組成物のクロマトグラフィーの工程；
ｄ）結晶化させられる原液を形成するようにＤ−アルロースに富む組成物を濃縮する工程
を含み、
・  少なくとも１つのリサイクリング工程が、ラフィネートをリサイクルする工程からなり；
・  ナノ濾過工程が、透過液及び保持液を提供するようにこのラフィネートに関して実施され；
・  透過液が、工程ａ）のＤ−フルクトースを含む組成物と混合され；
・  エピマー化工程ｂ）が、この混合物に関して実施され；そして
・  ラフィネートの少なくとも一部がフラッシュされる
ことを特徴とする。
【０１４７】
第７実施形態によれば、本プロセスは、
ａ）Ｄ−フルクトースを含む組成物を提供する工程；
ｂ）Ｄ−フルクトース及びＤ−アルロースを含む組成物を形成するためのエピマー化工程；
ｃ）Ｄ−アルロースに富む組成物と、Ｄ−フルクトースに富む組成物からなるラフィネートとを提供するためのこの組成物のクロマトグラフィーの工程；
ｄ）結晶化させられる原液を形成するための濃縮工程
を含み、
・  リサイクリング工程が、工程ｃ）において得られたラフィネートをリサイクルする工程からなり；
・  第１ナノ濾過工程が、第１透過液及び第１保持液を提供するようにこのラフィネートに関して実施され；
・  第１透過液が、工程ａ）のＤ−フルクトースを含む組成物と混合され；
・  エピマー化工程ｂ）が、この混合物に関して実施され；
・  リサイクリング工程が、母液の少なくとも一部をリサイクルする工程からなり；
・  第２ナノ濾過工程が、第２透過液及び第２保持液を形成するようにこれらの被リサイクル母液に関して実施され；
・  第２透過液が、工程ｃ）において提供されたＤ−アルロースに富む組成物と混合され；
・  この混合物が、結晶化させられる原液を提供するための濃縮工程ｄ）にかけられ；そして
・  ラフィネートの及び／又は母液の少なくとも一部がフラッシュされる
ことを特徴とする。
【０１４８】
第８実施形態によれば、本プロセスは、
ａ）Ｄ−フルクトースを含む組成物を提供する工程；
ｂ）Ｄ−フルクトース及びＤ−アルロースを含む組成物を形成するためのエピマー化工程；
ｃ）Ｄ−アルロースに富む組成物と、Ｄ−フルクトースに富む組成物からなるラフィネートとを提供するためのこの組成物のクロマトグラフィーの工程；
ｄ）結晶化させられる原液を形成するための濃縮工程
を含み、
・  リサイクリング工程が、工程ｃ）において得られたラフィネートをリサイクルする工程からなり；
・  第１ナノ濾過工程が、第１透過液及び第１保持液を提供するようにこのラフィネートに関して実施され；
・  第１透過液が、工程ａ）のＤ−フルクトースを含む組成物と混合され；
・  エピマー化工程ｂ）が、この混合物に関して実施され；
・  リサイクリング工程が、母液の少なくとも一部をリサイクルする工程からなり；
・  これらの被リサイクル母液が、工程ｃ）において提供されたＤ−アルロースに富む組成物と混合され；
・  第２ナノ濾過工程が、第２透過液及び第２保持液を提供するようにこの混合物に関して実施され；
・  この第２透過液が、結晶化させられる原液を提供するための濃縮工程ｄ）にかけられ；そして
・  ラフィネートの及び／又は母液の少なくとも一部がフラッシュされる
ことを特徴とする。
【０１４９】
第９実施形態によれば、本プロセスは、
ａ）Ｄ−フルクトースを含む組成物を提供する工程；
ｂ）Ｄ−フルクトース及びＤ−アルロースを含む組成物を形成するためのエピマー化工程；
ｃ）Ｄ−アルロースに富む組成物と、Ｄ−フルクトースに富む組成物からなるラフィネートとを提供するためのクロマトグラフィー工程；
ｄ）結晶化させられる原液を形成するようにＤ−アルロースに富む組成物を濃縮する工程
を含み、
・  リサイクリング工程が、工程ｃ）において得られたラフィネートをリサイクルする工程からなり；
・  第１ナノ濾過工程が、第１透過液及び第１保持液を提供するようにこのラフィネートに関して実施され；
・  第１透過液が、工程ａ）のＤ−フルクトースを含む組成物と混合され；
・  エピマー化工程ｂ）が、この混合物に関して実施され；
・  リサイクリング工程が、母液の少なくとも一部をリサイクルする工程からなり；
・  第２ナノ濾過工程が、第２透過液及び第２保持液を形成するようにこれらの被リサイクル母液に関して実施され；
・  第２透過液が、工程ｂ）において形成された組成物と混合され；
・  この混合物が、クロマトグラフィー工程ｃ）にかけられ；そして
・  ラフィネートの及び／又は母液の少なくとも一部がフラッシュされる
ことを特徴とする。
【０１５０】
第１０実施形態によれば、本プロセスは、
ａ）Ｄ−フルクトースを含む組成物を提供する工程；
ｂ）Ｄ−フルクトース及びＤ−アルロースを含む組成物を形成するためのエピマー化工程；
ｃ）Ｄ−アルロースに富む組成物と、Ｄ−フルクトースに富む組成物からなるラフィネートとを提供するためのクロマトグラフィー工程；
ｄ）結晶化させられる原液を形成するようにＤ−アルロースに富む組成物を濃縮する工程
を含み
・  リサイクリング工程が、工程ｃ）において得られたラフィネートをリサイクルする工程からなり；
・  第１ナノ濾過工程が、第１透過液及び第１保持液を提供するようにこのラフィネートに関して実施され；
・  第１透過液が、工程ａ）のＤ−フルクトースを含む組成物と混合され；
・  エピマー化工程ｂ）が、この混合物に関して実施され；
・  リサイクリング工程が、母液の少なくとも一部をリサイクルする工程からなり；
・  これらの被リサイクル母液が、工程ｂ）において形成された組成物と混合され；
・  第２ナノ濾過工程が、第２透過液及び第２保持液を提供するようにこの混合物に関して実施され；
・  この第２透過液が、クロマトグラフィー工程ｃ）にかけられ；そして
・  ラフィネートの及び／又は母液の少なくとも一部がフラッシュされる
ことを特徴とする。
【０１５１】
第１１実施形態によれば、本プロセスは、
ａ）Ｄ−フルクトースを含む組成物を提供する工程；
ｂ）Ｄ−フルクトース及びＤ−アルロースを含む組成物を形成するためのエピマー化工程；
ｃ）Ｄ−アルロースに富む組成物と、Ｄ−フルクトースに富む組成物からなるラフィネートとを提供するためのクロマトグラフィー工程；
ｄ）結晶化させられる原液を形成するようにＤ−アルロースに富む組成物を濃縮する工程
を含み、
・  リサイクリング工程が、工程ｃ）において得られたラフィネートをリサイクルする工程からなり；
・  第１ナノ濾過工程が、第１透過液及び第１保持液を提供するようにこのラフィネートに関して実施され；
・  第１透過液が、工程ａ）のＤ−フルクトースを含む組成物と混合され；
・  エピマー化工程ｂ）が、この混合物に関して実施され；
・  リサイクリング工程が、母液の少なくとも一部をリサイクルする工程からなり；
・  これらの被リサイクル母液が、工程ｂ）において形成された組成物と混合され；
・  クロマトグラフィー工程ｃ）が、この混合物に関して実施され；
・  第２ナノ濾過工程が、第２透過液及び第２保持液を形成するように、このクロマトグラフィー工程ｂ）から生じたＤ−アルロースに富む組成物に関して実施され；
・  この第２透過液が、濃縮工程ｃ）にかけられ；そして
・  ラフィネートの及び／又は母液の少なくとも一部がフラッシュされることを特徴とする。
【０１５２】
非限定的に、本発明は、以下の実施例において本発明の利点を例示する目的で詳細にこれから説明される。
【実施例】
【０１５３】
分析方法
ガスクロマトグラフィー
用いられるガスクロマトグラフは、Ｖａｒｉａｎ  ３８００タイプのものであり、
−  スリット−スリットレス注入器（仕切あり又はなしの）；
−  水素炎イオン化検出器（ＦＩＤ）；
−  検出器からの信号を処理するためのコンピュータシステム；
−  自動サンプラー（タイプ８４００）
を備えている。
【０１５４】
様々な量が、メトキシム化トリメチルシリル誘導体の形態でのガスクロマトグラフィーによって測定され、次に内部較正法によって定量化される。
【０１５５】
Ｄ−アルロース、Ｄ−フルクトース及びグルコース含有量の測定
適用される応答係数は、Ｄ−アルロース及びＤ−フルクトースについては１．２５、グルコースについては１．２３である。他の単糖類は検出されなかった。
【０１５６】
試料の調製
自重用の（ｆｏｒ  ｔａｒｉｎｇ）皿に、１００〜３００ｍｇの試験される試料＋ピリジン中０．３ｍｇ／ｍｌでのメチルα−Ｄ−グルコピラノシドからなる１０ｍｌの内部標準液を量り取る。自重用の皿から０．５ｍｌを取り出し、２ｍｌのポットに入れ、窒素流れ下に蒸発乾固させる。２０ｍｇのメトキシルアミン塩酸塩及び１ｍｌのピリジンを添加する。栓をし、７０℃で４０分間Ｒｅａｃｔｉ−ｔｈｅｒｍ（登録商標）インキュベーション系中にそのままにして置く。０．５ｍｌのＮ，Ｏ−ビス（トリメチルシリル）トリフルオロアセトアミド（ＢＳＴＦＡ）を添加する。７０℃で３０分間加熱する。
【０１５７】
クロマトグラフ条件
カラム：ＤＢ１キャピラリー  ４０メートル、０．１８ｍｍの内径、フィルム厚さ  ０．４μｍ、ジメチルポリシロキサンから１００％構成される、非極性（Ｊ＆Ｗ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ参照記号：１２１−１０４３）
カラム温度：１００℃から３℃／分の速度で２６０℃まで、次に１５℃／分で３００℃までプログラミング、３００℃で５分維持する。
注入器温度：３００℃
検出器温度：３００℃（レンジ  １０−１２）
圧力：４０ｐｓｉ（一定流量）
ベクトルガス：ヘリウム
注入モード：スプリット（スプリット流量：１００ｍｌ／分）
注入量：１．０μｌ
【０１５８】
Ｄ−アルロース、Ｄ−フルクトース及びグルコースは、この順に検出された。未知であった、Ｄ−アルロースは、３９．５〜４０分のこれらの条件下での保持時間を有する。
【０１５９】
Ｄ−アルロース二量体及びグルコース−グルコース二量体の含有量の測定
適用される応答係数は、Ｄ−アルロース及びＤ−フルクトースについては１．１５、イソマルトースについては１．０８である。他のグルコース二量体は検出されなかった。
【０１６０】
試料の調製；
自重用の皿に、１００〜３００ｍｇの試験される試料＋ピリジン中０．３ｍｇ／ｍｌでのフェニルベータ−Ｄ−グルコピラノシドからなる１０ｍｌの内部標準液を量り取る。
自重用の皿から０．５ｍｌを取り出し、２ｍｌのポットに入れ、窒素流れ下に蒸発乾固させる。
ピリジン中４０ｇ／ｌでの０．５ｍｌのヒドロキシルアミン塩酸塩の溶液で取り上げ、栓をし、攪拌し、７０℃で４０分間そのままにして置く。
０．４ｍｌのＢＳＴＦＡ及び０．１ｍｌのＮ−トリメチルシリルイミダゾール（ＴＭＩＭ）を添加する。７０℃で３０分間加熱する。
【０１６１】
クロマトグラフ条件
カラム：ＤＢ１キャピラリー  ３０メートル、０．３２ｍｍの内径、フィルム厚さ  ０．２５μｍ（Ｊ＆Ｗ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ参照記号：１２３−１０３２）
カラム温度：２００℃から５℃／分の速度で２８０℃まで（６分間維持すること）、次に５℃／分で３２０℃までプログラミング、３２０℃で５分維持する。
注入器温度：３００℃
検出器温度：３００℃（レンジ  １０−１２）
圧力：１４ｐｓｉ（一定流量）
ベクトルガス：ヘリウム
注入モード：スプリット（スプリット流量：８０ｍｌ／分）
注入量：１．２μｌ
【０１６２】
結果の表現
様々な構成物質の含有量は、粗生成物の１００ｇ当たりのｇ単位で表され、次式で与えられる：
【数１】
2020514294.tif 000002
（式中：
Ｓｉ＝構成物質ｉのピークの表面積
Ｓｅ＝内部標準ピークの表面積
Ｐｅ＝ビーカーへ導入された内部標準の重量（ｍｇ単位での）
Ｐ＝量り取られた試料の重量（ｍｇ単位での）
Ｋｉ＝構成物質ｉの応答係数
【０１６３】
得られた百分率（本明細書では粗物質基準で表される）が構成物質の１つについて２０％を超える場合、試料は希釈され、ＧＣ分析は、２０％未満の質量を得るために推奨される。
【０１６４】
粗物質基準で表される質量は、次に、試験された試料の乾燥物質含有量について割ることによって、乾燥基準で表される。
【０１６５】
Ｄ−アルロースの、Ｄ−フルクトースの及びグルコースの質量は、特性ピークのどれも
共溶出されないため、容易に測定される。
【０１６６】
マルトースの及びＤ−アルロース二量体のピークは、共溶出され得る。しかしながら、本発明の、及び以下の実施例において記載される結晶において、マルトースは決して存在しないことが指摘されるべきである。
【０１６７】
マルトースの特性ピークが検出されない場合、Ｄ−アルロース二量体の表面積Ｓｉは、１０〜１７分の、未知ピークの積分によって測定される。マルトースの特性ピークが検出される場合（それは、本発明のシロップに当てはまり得る）、マルトースの量が測定され、この量が二量体の総量から差し引かれる。
【０１６８】
グルコース−グルコース二量体の総量を測定するために、次のプロトコルが試料に関して実施される：
・  塩酸加水分解
テフロン（Ｔｅｆｌｏｎ）（登録商標）製のスクリューキャップ付き１５ｍｌの加水分解管に、約正確に５０〜５００ｍｇの試料を量り取り（予期される砂糖含有量に従って量り取りを調節すること）、２つの目盛りマーク付きピペットで、２ｍｌの内部標準液（浸透水中５ｍｇ／ｍｌでのガラクチトール）を添加し、３ｍｌの水及び５ｍｌの４Ｎ  ＨＣｌ溶液を添加する。
密閉して栓をし、ボルテックス攪拌機で１分間攪拌する。管を、時々ボルテックスで攪拌して、１００℃に調整された恒温乾燥浴に１時間入れる。
・  脱塩及び濃縮
冷却後に、全体加水分解物を５０ｍｌのビーカーに入れる。ＡＧ４  Ｘ  ４及びＡＧ５０  Ｗ  ８アニオン樹脂の６〜８ｇの５０／５０混合物を添加する。５分間磁気攪拌するままにする。紙上で濾過する。液体を回収し、水に近いｐＨが得られるまで脱塩工程を繰り返す。
・  試料の調製
自重用の皿に、１００〜３００ｍｇの試験される試料＋ピリジン中０．３ｍｇ／ｍｌでのメチルα−Ｄ−グルコピラノシドからなる１０ｍｌの内部標準液を量り取る。自重用の皿から０．５ｍｌを取り出し、２ｍｌのポットに入れ、窒素流れ下に蒸発乾固させる。２０ｍｇのメトキシルアミン塩酸塩及び１ｍｌのピリジンを添加する。栓をし、７０℃で４０分間Ｒｅａｃｔｉ−ｔｈｅｒｍ（登録商標）中にそのままにして置く。０．５ｍｌのＢＳＴＦＡを添加する。７０℃で３０分間加熱する。
【０１６９】
（「遊離の」と称される初期グルコースと、加水分解から生じた、特にマルトース及びイソマルトースの存在と関係したグルコースとを含む）溶液の全グルコースの量は、グルコースのＧＣ分析によって測定される。マルトースの量と、１０〜１７分のピークに帰せられる二量体の総量間の差による、Ｄ−アルロース二量体の量とは、それらから容易に推測される。
【０１７０】
粒径分析
結晶の体積平均サイズＤ４，３値及びまたＦｅｒｅｔ最小／Ｆｅｒｅｔ最大径の比は、その粉末（ドライプロセス）分散系モジュールを備えた、ブランドＳｙｍｐａＴＥＣのＱＩＣＰＩＣ  ＲＯＤＯＳ型の粒径分析計で、製造業者の技術マニュアル及び仕様書に従うことによって測定される。
【０１７１】
Ｄ−アルロース結晶を製造するための連続工業的プロセスの実施
実施例１
実施例１は、Ｄ−アルロース結晶の連続製造方法からなる。用いられるプロセスの工程は、図３に詳細に記載される。プロセスの安定化後の流れの組成及び流量は、表１ａ及び
１ｂに記載される。
【０１７２】
工程１：
５０％乾燥物質含有量（ＤＭ）で９５％のＤ−フルクトースを含む２６％のＦｒｕｃｔａｍｙｌ  Ｄ−フルクトースシロップ（Ｔｅｒｅｏｓ）（流れ１）と、５０ＤＭにされた７４％の流れ１６とからなる１３．１メートルトンの混合物が、１２ｍ３の作業体積の攪拌される回分反応器へ導入される。全体混合物（流れ１’）は５５℃に維持される。国際公開第２０１５／０３２７６１号パンフレットに詳述されるＤ−プシコース３エピメラーゼ酵素の枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ホスト菌株の凍結乾燥物が、反応器中で２．５×１０７単位の活性を有するのに十分な量でタンクへ導入される。５つの反応器が、フルクトース及びアルロースから本質的になるシロップ（流れ２）を１．３ｔ／ｈの流量で連続的に提供するように順次用いられる。反応条件は下記である：
・  温度：５５℃
・  ｐＨ＝７
・  滞留時間４８ｈ
【０１７３】
反応の終わりに、得られた流れ２は、およそ２５％に等しい濃度のＤ−アルロース及びおよそ７５％に等しい濃度のＤ−フルクトースを含む。
【０１７４】
工程２：
流れ２は、回分式運転中に精密濾過膜を通過する。細胞破片を含まない流れ３が、サーキットからフラッシュされる、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）凍結乾燥物から生じる破片を含む精密濾過保持液（流れ１７）と一緒に得られる。精密濾過パラメータは、次のとおりである：
・  膜間差圧：０〜３バール
・  細孔径：０．１μｍ
・  温度：５０℃
・  平均流量：１５  ｌ／ｈ／ｍ２
・  膜：Ｓｅｐｒｏ  ＰＳ３５
・  体積濃縮係数：３３
【０１７５】
【表１】
2020514294.tif 000003
【０１７６】
【表２】
2020514294.tif 000004
【０１７７】
工程３：
流れ３は、２ＢＶ／ｈの平均流量でＤｏｗｅｘ  ８８強カチオン樹脂及び次にＤｏｗｅｘ  ６６弱アニオン樹脂上に通すことによって脱塩される。カーボイは、４５℃の温度に維持され、脱塩の終わりでの流れ４の抵抗率は、出口（流れ４）で１００ｋΩ．ｃｍ−１よりも大きいままである。これが当てはまらない場合には、樹脂は再生される。
【０１７８】
工程４：
流れ４は、流れ４’を形成するように流れ１２（ナノ濾過保持液）と、及び流れ１３（結晶化母液）と混合され、流れ４’は、サーキットの連続擬似移動床（ＳＭＢ）クロマトグラフィー（８つのカラムを備えたＳＣＣ  ＡＲＩ（登録商標））に供給される。平均供
給流量は、５０％ＤＭで１６７３ｋｇ／ｈである。
【０１７９】
クロマトグラフィーパラメータは、次のとおり定義される：
・  体積／カラム：２ｍ３
・  樹脂：Ｄｏｗｅｘ  Ｍｏｎｏｓｐｈｅｒｅ  ９９Ｃａ／３２０
・  温度：６０℃
・  流量  水／流れ４’（体積／体積）：２．４
・  ロード（供給流量／樹脂体積）：０．０９ｈ−１
【０１８０】
２つの画分：ＳＣＣのラフィネート（流れ１４）と、工程５に向かうＤ−アルロースに富む画分（流れ５）とが引き出される。流れ１４の７％が、アルロース二量体を排出するためにフラッシュされ（流れ１５）、一方、残り（流れ１６）は、エバポレーターによって５０％の乾燥物質含有量にされた後に再び工程１に向かう。
【０１８１】
工程５：
流れ５は、回分式モードのナノ濾過設備で処理される。パラメータは次のとおりである：
・  膜間圧力：３０バール
・  温度：２０℃
・  膜：ＧＥ  Ｄｕｒａｃｏｎ  ＮＦ１  ８０４０Ｃ３５
・  体積濃縮係数（ＶＣＦ）：１６
【０１８２】
アルロース二量体は、保持液（流れ１２）に濃縮されていき、この保持液は、リサイクルされ、流れ４と混合され、一方、透過液（流れ６）は回収される。図６は、ＶＣＦの関数としてのシロップの透過の詳細を示す。
【０１８３】
工程６：
流れ６は、その圧力が５０ミリバールよりも下である、２段階エバポレーターを通過する。第１段階を出る際に、流れは、３８℃の温度にあり、３５％の乾燥物質含有量を有する。第２段階を出る際に、流れは、４８℃の温度に達し、８７％の乾燥物質含有量を有する。Ｄ−アルロースの原液（流れ７）が、この工程の終わりに得られる。
【０１８４】
工程７ａ：
このようにして形成された原液（流れ７）は、交換器によって６８℃に加熱された後直ちに、その内部で圧力が３５ミリバールに維持されている、３ｍ３の作業体積の、真空下の断熱晶析装置−エバポレーターへ導入される。
【０１８５】
ここで用いられる真空下の断熱晶析装置−エバポレーターの運転原理は、図４に詳細に記載される：
・  流れ７ａは、３５℃での過飽和Ｄ−アルロースシロップと、微細なＤ−アルロース粒子とからなる。それは、混合物（流れ７ｂ）が混合物の固溶限界（８４％乾燥物質及び４６℃）の直ぐ下にあるような比率で流れ７と混合される。細かい粒子はこうして再溶融される。
・  マスキットは、断熱晶析装置−エバポレーターにおいてレベルを一定に保つように、混合物と同じ速度で、３５℃の温度での断熱晶析装置−エバポレーターから抜き出される。回収されたこのマスキットは、２つの流れ：流れ７ｄ及び流れ８へ分離される。流れ７ｄは、Ｄ−アルロースの原液及びまた結晶化のための開始剤を含む流れ７ｃを形成するように流れ７ｂに同伴される。混合物比は、結晶がそれらの成長を続けることができるように溶解度（８５．５％乾燥物質及び４２．７℃）を再び超えているようなやり方で形成される。
・  流れ７ｃはこうして、結晶化を延長し、そしてマスキットを形成するように真空下の断熱晶析装置−エバポレーターへ導入される。この段階中に凝縮した水は、晶析装置の最上部で壁に沿って連続的に再注入される。
【０１８６】
真空下の断熱晶析装置−エバポレーターにおける蒸発冷却段階中の様々な流れは、表２に報告される。
【０１８７】
【表３】
2020514294.tif 000005
【０１８８】
工程７ｂ：
抜き出されたマスキットは、８ｍ３の作業体積を有し、そして攪拌機を及びまた５つの冷却層を備えている垂直晶析装置の最上部で注入される。マスキットは、４０ｈにわたって３５℃から２０℃にされる、すなわち、およそ０．４℃／ｈの冷却勾配である。晶析装置略図は図５に示される。層中の冷却水の温度は、次のとおりである：
１．入口で３４℃、出口で３２℃
２．入口で３１℃、出口で２９℃
３．入口で２８℃、出口で２６℃
４．入口で２５℃、出口で２２℃
５．入口で２１℃、出口で２０℃
【０１８９】
工程８：
晶析装置の底部で、結晶の懸濁液（流れ９）が回収され、次にＲｏｕｓｓｅｌｅｔ  Ｒｏｂａｔｅｌ  ＳＣ  １００ＫＳＡ遠心乾燥機で遠心分離される。結晶懸濁液は、系統的に遠心分離可能であり、それは、本プロセスが経時的に非常に安定していることを意味する。母液（流れ１３）はリサイクルされ、流れ４及び１２と混合される。湿ったＤ−アルロース結晶が回収される（流れ１０）。水での第１浄化、次に約０．５％ｍ／ｍのエタノールでの最終浄化が、分離を改善するために実施される。浄化された結晶は、３％の水を含む。
【０１９０】
工程９：
湿った結晶は、回転乾燥機を通過し、０．４％の水を含む乾燥結晶が得られる。流動床での最終冷却は、結晶の温度を６０℃から２５℃に下げる。最終結晶が回収され（流れ１１）、次に梱包される。得られたＤ−アルロース結晶の質量対導入されたＤ−フルクトースの質量の、乾燥質量で表される、比である、Ｄ−アルロース結晶の全収率は７２％である。
【０１９１】
実施例２
実施例２は、リサイクリングが全く実施されないという相違ありで実施例１と同一である。流れ７は、０．７％のＤ−アルロース二量体を含む。流れ９の結晶の懸濁液は、経時的に常に遠心分離可能である。結晶の全収率は１２％であるにすぎないが、本プロセスは
、以下に示されるナノ濾過工程を用いない比較例のプロセスとは対照的に、安定しているという利点を有する。
【０１９２】
比較例１
比較例１は、以下の相違ありで、実施例１と同一である：
・  ナノ濾過工程が全く実施されないこと、
・  母液リサイクリング工程が全く実施されないこと、
・  ラフィネート（流れ１４）のリサイクリングが、Ｄ−フルクトースシロップの流れ１と混合されるように全体としてリサイクルされること、
・  結晶化工程が次のとおり実施されること：形成された原液（流れ７）が、実施例１の結晶化工程７ｂのために用いられるものと同一の８ｍ３の作業体積の３つの垂直晶析装置へ順次導入される。冷却勾配は、２０℃まで０．３３℃／ｈである。６０μｍにほぼ等しいＤ４，３を有するＤ−アルロースの開始剤が、０．１％の質量（この量は、晶析装置へ導入されるＤ−アルロースの乾燥重量に対して表される）で各晶析装置へ導入される。
【０１９３】
用いられる製造サーキット（すなわち、用いられるプロセスの様々な工程）は、図１に相当するものである。
【０１９４】
流れ７は１．９％のＤ−アルロース二量体を含む。流れ９が、回収され、工程８に持ち込まれる。流れ９は、必ずしも遠心分離可能であるとは限らないマスキットである。１週間の終わりに、流れ７は２．２％のＤ−アルロース二量体を含み、流れ９のマスキットは、系統的に遠心分離が不可能にさえなる（サイズが余りにも小さい結晶）。
【０１９５】
比較例２
比較例２は、母液（流れ１３）が、クロマトグラフィー工程から生じるＤ−アルロースに富む組成物（流れ５）と混合されるように全体的にリサイクルされるという、かつ、ラフィネート（流れ１４）がリサイクルされず、サーキットからフラッシュされるという相違ありで、比較例１と同一である。
【０１９６】
用いられる製造サーキットは、図２に相当するものである。
【０１９７】
流れ７は１．９％のＤ−アルロース二量体を含む。流れ９が、回収され、工程８に持ち込まれる。この流れ９は、必ずしも遠心分離可能であるとは限らないマスキットである。母液がリサイクルされる瞬間から、流れ７は２．４％のＤ−アルロース二量体を含み、流れ９のマスキットは、系統的に遠心分離が不可能にさえなる（サイズが余りにも小さい結晶）。
【０１９８】
比較例３
比較例３は、ラフィネートがリサイクルされないという相違ありで、比較例１と同一である。
【０１９９】
用いられる製造サーキットは、図１に相当するものである。
【０２００】
流れ７は１．９％のＤ−アルロース二量体を含む。流れ９が、回収され、工程８に持ち込まれる。この流れ９は、必ずしも遠心分離可能であるとは限らないマスキットである。それが遠心分離可能である場合、母液は、回収することができるアルロース結晶から分離する。しかしながら、時々、流れ９は、晶析装置における自発的核形成と同じ意味の、大量の小さい分離できない結晶からなる。そのケースでは、この流れをサーキットから出すことが必要である。これは、本プロセスを工業的に利用できないものにする。
【０２０１】
これらのプロセスについて得られた結果の要約は、表３に報告される。報告される全収率は、１週間の使用にわたっての平均である。
【０２０２】
実施例１及び２ならびに比較例３について得られた結晶、そしてまた会社ＣＪ  Ｃｈｅｉｌｊｅｄａｎｇ  Ｆｏｏｄ  Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔによって販売されるＤ−アルロース結晶の特性は、表４に報告される。
【０２０３】
【表４】
2020514294.tif 000006
【０２０４】
本発明のプロセスは、上に例示された工業的プロセス（実施例１及び２）に実証される、経時的に安定している結晶化を得ることを可能にする。それはまた、非常に十分なリサイクリングを行うこと、こうしてＤ−アルロース結晶の全収率を高めること（実施例２を参照されたい）を可能にする。ナノ濾過工程を用いてＤ−アルロース二量体を確実に分離することなくリサイクリングを行うことによって、上の例示的な比較例１及び２は、マスキットが系統的に遠心分離できなくなるので（サイズが余りにも小さい結晶）、工業的結晶化プロセスが停止されなければならないことを実証した。
【０２０５】
【表５】
2020514294.tif 000007
【０２０６】
実施例２のＤ−アルロース結晶及びＣＪによって販売されるＤ−アルロース結晶について、体積粒径Ｄ４，３の関数としてＦｅｒｅｔ最小／Ｆｅｒｅｔ最大径の比を示す、図１４は、外観の明らかな相違が本発明による結晶と比較結晶との間に観察されるのは、２００μｍ以上の（例えば２００〜４００μｍの範囲の）、大きいサイズの集団についてであることを実証する。したがって、２００〜４００μｍのこの範囲において、Ｆｅｒｅｔ最小／Ｆｅｒｅｔ最大比は、比較結晶については、常に０．５５未満であり、一方、本発明による結晶は、少なくとも０．６３の比を有する。この相違は、本発明による結晶が比較結晶よりもはるかによりずんぐりした外観を有することを視覚的に実証する、図１１及び１２の光学顕微鏡画像と完全に一致している。図１３（光学顕微鏡画像）のＣＪ結晶に関して、それらが個別化されていない針状形結晶であることが指摘される。
【０２０７】
比較例３は、（特に、本出願人が、形成されるＤ−アルロース二量体の量をさらに減らすように、濃縮工程をより最適に実施することに成功したという点において）濃縮工程に関して国際公開第２０１１／１１９００４  Ａ２号パンフレットの教示と厳密には同一ではないが、得られる結晶は、国際公開第２０１１／１１９００４  Ａ２号パンフレットの実施例６に記載された結晶を製造するために（特に、水中での制御された冷却によって専ら実施された結晶化に関して）用いられたものと同じプロセスを用いる。０．７％のＤ−アルロース二量体を含む結晶を製造する、この比較試験３は、それ故、国際公開第２０１１／１１９００４  Ａ２号パンフレットが、本発明の結晶を形成することを可能にしないことを十分に実証している。
【０２０８】
様々な用途における本発明の結晶の使用
実施例２の結晶が、以下の生成物の製造に使用された。
【０２０９】
食事代替飲料の製造
本目的は、少ないカロリーを含む粉末食事代替飲料を生み出すことである。この粉末飲料は、良好な流動性を示すことができ、かつ、それが調合されるときに塊をほとんど形成しないことができなければならない。
【０２１０】
【表６】
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【０２１１】
量り取られた後に、成分は、ドライミキサー中で激しく混合される。飲料は、次に、塊を形成することなく、２１０ｇの水を３０ｇ処方物に添加することによって容易に再構成される。
【０２１２】
本発明の結晶を使用する処方物は、同時にはるかに少ないカロリーを含みながら、サッカロースを含む処方物に完全に似た流動性挙動を有する。
【０２１３】
イエローケーキの製造
本目的は、そのカロリー含有量が２５％だけ低下している、満足できる食感及び外観を有するイエローケーキを提供することである。
【０２１４】
【表７】
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【０２１５】
方法：
１．粉、食塩、Ｎｕｔｒｉｏｓｅ（登録商標）及びイーストを混合する。
２．バターをサッカロース又はアルロースでクリーム状にする。
３．卵黄及びバニラをクリームに添加し、次にクリーム状混合物を形成するようにミルクを添加する。
４．粉を含む混合物をクリーム状混合物に添加し、遅い設定のミキサーで混合し（１分）、次に処方物が十分に混合されるまでより激しく混合する。
５．６００ｇのペーストを９インチのグリースを塗った円形金型に注ぎ込む。
６．１８０℃で２０分間ベーキングする。
【０２１６】
本目的は達成される：本発明の結晶を使用するケーキは、口の中で非常に快適な食感を有し（用語「パン粉の食感」が用いられる）、ケーキは、ベーキング後にその形状を保っている。
【０２１７】
チョコレートクッキーの製造
次の処方物が調製された：
【０２１８】
【表８】
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【０２１９】
方法：
１．乾燥成分を混ぜ合わせる。
２．バターを砂糖又はアルロースでクリーム状にする。
３．卵及びバニラをクリーム状混合物に添加する。
４．粉を含む混合物をクリーム状混合物に添加し、遅い設定のミキサーで混合し（１分）、次に処方物が十分に混合されるまでより激しく混合する。
５．チョコレートチップを添加し、混合する。
６．３０ｇの部分を量り取り、１６０℃で８分間ベーキングする。
【０２２０】
アルロースベースのクッキー生地（列２）は、砂糖ベースの生地（列１）よりも広がらない。しかしながら、列３の生地は、列１の生地と同じように広がる。
【０２２１】
ベーキング中に、アルロースベースのクッキーは、より速く焦げ目がつく。
【０２２２】
クッキーはドーム形を有することが指摘されるべきである。本発明によるクッキーの高さは、膨らみがより少なく、前記クッキーは、砂糖ベースのクッキーとは異なって、ベーキング後に崩れておらず、それによってより良好な外観が保たれる。
【０２２３】
アルロースベースのクッキーは、それほど甘くはないが、良好な味覚を有する。本発明によるクッキーの食感は、ソフトであり、砂糖ベースのクッキーよりもしっとりしている。
【０２２４】
クッキーの水分活性（ｗａ）及び含水率（Ｍ）は、経時的に測定される：
【０２２５】
【表９】
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【０２２６】
アルロースベースのクッキーは、水分に関してより良好な安定性を示す。
【０２２７】
オート麦フレーククッキーの製造
【０２２８】
【表１０】
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【０２２９】
方法：
１．粉、Ｎｕｔｒｉｏｓｅ（登録商標）、重曹、イースト及び食塩を混合する。
２．バターを砂糖又はアルロースでクリーム状にする。
３．卵及びバニラをクリーム状混合物に添加する。
４．粉を含む混合物をクリーム状混合物に添加し、遅い設定のミキサーで混合し（１分）、次に処方物が十分に混合されるまでより激しく混合する。
５．オート麦フレークを添加し、混合する。
６．包含物を添加し、混合する。
７．３０ｇの部分を量り取り、１６０℃で１０分間ベーキングする。
【０２３０】
砂糖の代わりにアルロースを使用して得られたクッキーは、わずかにより焦げ目がつき、ベーキング後にサクサクした食感を有する。
【０２３１】
風船ガムの製造
風船ガムが以下のレシピで製造された：
【０２３２】
【表１１】
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【０２３３】
本風船ガムは、市販の風船ガムに似た、完全に満足できる外観を有する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【国際調査報告】
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