(57)【要約】医薬組成物。医薬組成物は、酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液中にＳＯＳＴ抗体またはその抗体結合断片を含む。さらに、医薬組成物はまた、糖、ノニオン性界面活性剤または他の賦形剤を含んでもよい。数ヶ月間保存した後、医薬組成物は良好抗体安定性を示す。【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗ＳＯＳＴ抗体またはその抗原結合断片、および緩衝液を含む医薬組成物であって、
該緩衝液が、酢酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液、リン酸緩衝液、およびコハク酸緩衝液、好ましくは酢酸緩衝液、より好ましくは酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液からなる群から選択され、
抗ＳＯＳＴ抗体またはその抗原結合断片の濃度が１ｍｇ／ｍｌ〜１２０ｍｇ／ｍｌで含まれる、医薬組成物。
【請求項２】
前記医薬組成物に含まれる抗ＳＯＳＴ抗体またはその抗原結合断片の濃度が、６０ｍｇ／ｍｌ〜１２０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは９０ｍｇ／ｍｌ〜１２０ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは８０ｍｇ／ｍｌ〜１００ｍｇ／ｍｌ、最も好ましくは１００ｍｇ／ｍｌである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記医薬組成物のｐＨが４．８〜５．５、好ましくは５．０〜５．２である、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記緩衝液の濃度が５ｍＭ〜３０ｍＭであり、好ましくは１０ｍＭ〜２０ｍＭであり、最も好ましくは１０ｍＭである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記緩衝液のｐＨが４．８〜５．５であり、好ましくは５．０〜５．５であり、より好ましくは５．０〜５．２であり、最も好ましくは５．０である、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記二糖類をさらに含み、該二糖類がトレハロースおよびショ糖からなる群から選択される、請求項１〜５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記二糖類の濃度が４０ｍｇ／ｍｌ〜９５ｍｇ／ｍｌ、好ましくは４５ｍｇ／ｍｌ〜９０ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは６０ｍｇ／ｍｌ〜９０ｍｇ／ｍｌ、最も好ましくは８０ｍｇ／ｍｌである、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
界面活性剤をさらに含み、該界面活性剤が好ましくはポリソルベートであり、より好ましくはポリソルベート８０である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記界面活性剤の濃度が０．０２ｍｇ／ｍｌ〜０．８ｍｇ／ｍｌであり、好ましくは０．３ｍｇ／ｍｌ〜０．６ｍｇ／ｍｌであり、最も好ましくは０．４ｍｇ／ｍｌである、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
粘度調整剤をさらに含み、
該粘度調整剤は、カルシウム塩、塩化ナトリウム、塩化マグネシウムおよび塩酸アルギニンからなる群から選択され、
好ましくは、前記カルシウム塩が、塩化カルシウムおよび酢酸カルシウムからなる群から選択される、請求項１〜９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記カルシウム塩の濃度が４．５ｍＭ〜２０ｍＭであり、好ましくは４．５ｍＭ〜１０ｍＭであり、最も好ましくは４．５ｍＭである、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
（ａ）１ｍｇ／ｍＬ〜１２０ｍｇ／ｍＬの抗ＳＯＳＴ抗体またはその抗原結合断片と、
（ｂ）５ｍＭ〜３０ｍＭの酢酸緩衝液と、
（ｃ）４５ｍｇ／ｍＬ〜９０ｍｇ／ｍＬのトレハロースと、
（ｄ）０．０２ｍｇ／ｍＬ〜０．８ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０と、
（ｅ）４．５ｍＭ〜２０ｍＭのカルシウム塩と、
を含み、
好ましくはｐＨが４．８〜５．５、より好ましくは５．０〜５．２である、または
（ａ）８０ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬ抗ＳＯＳＴ抗体またはその抗原結合断片と、
（ｂ）ｐＨ４．８〜５．５の１０ｍＭ〜２０ｍＭ酢酸緩衝液と、
（ｃ）６０ｍｇ／ｍＬ〜９０ｍｇ／ｍＬトレハロースと、
（ｄ）０．３ｍｇ／ｍＬ〜０．６ｍｇ／ｍＬポリソルベート８０と、
（ｅ）４．５ｍＭ〜２０ｍＭカルシウム塩と、
を含む、医薬組成物。
【請求項１３】
（ａ）１ｍｇ／ｍＬ〜１２０ｍｇ／ｍＬの抗ＳＯＳＴ抗体またはその抗原結合断片と、
（ｂ）１０ｍＭ〜２０ｍＭ酢酸緩衝液と、
を含み、
ｐＨは５．０〜５．２である、医薬組成物。
【請求項１４】
前記抗ＳＯＳＴ抗体またはその抗原結合断片が、
配列番号３、配列番号９および配列番号５にそれぞれ示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３と、
配列番号６、配列番号７および配列番号８にそれぞれ示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３と、
を含む、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記抗ＳＯＳＴ抗体またはその抗原結合断片が、配列番号１０の重鎖可変領域および配列番号１３の軽鎖可変領域を含む、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
前記抗ＳＯＳＴ抗体の軽鎖アミノ酸配列が、配列番号２５に示される配列と少なくとも９０％の配列同一性を有し、抗ＳＯＳＴ抗体の重鎖アミノ酸配列が、配列番号２２に示される配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する、請求項１〜１３のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１７】
請求項１〜１６のいずれかに記載の医薬品を凍結乾燥する工程を含む、抗ＳＯＳＴ抗体を含む凍結製剤の調製方法。
【請求項１８】
前記凍結乾燥が、予備凍結、一次乾燥および二次乾燥の工程を連続的に含む、請求項１７に記載の抗ＳＯＳＴ抗体を含む凍結製剤の調製方法。
【請求項１９】
請求項１７または請求項１８に記載の製法により調製された抗ＳＯＳＴ抗体を含む凍結製剤。
【請求項２０】
抗ＳＯＳＴ抗体を含む再構成溶液の調製方法であって、
請求項１９に記載の凍結製剤を再構成する工程を含み、
前記再構成用溶剤が注射用水であることが好ましい、調製方法。
【請求項２１】
請求項２０に記載の方法によって調製された抗ＳＯＳＴ抗体を含有する、再構成溶液。
【請求項２２】
前記抗ＳＯＳＴ抗体および／またはその抗原結合断片の濃度が８０ｍｇ／ｍｌ〜１００ｍｇ／ｍｌであり、最も好ましくは１００ｍｇ／ｍｌである、請求項２１に記載の抗ＳＯＳＴ抗体を含有する再構成溶液。
【請求項２３】
前記再構成溶液のｐＨが４．８〜５．５であり、好ましくは５．３である、請求項２１に記載の抗ＳＯＳＴ抗体を含有する再構成溶液。
【請求項２４】
酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液をさらに含み、該酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液の濃度が１０ｍＭ〜３０ｍＭ、好ましくは１０ｍＭである、請求項２１に記載の抗ＳＯＳＴ抗体を含む再構成溶液。
【請求項２５】
二糖類をさらに含み、該二糖類がトレハロースおよびショ糖からなる群より選択される、請求項２１に記載の抗ＳＯＳＴ抗体を含む再構成溶液。
【請求項２６】
前記二糖類の濃度が４５ｍｇ／ｍＬ〜９０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは７５ｍｇ／ｍｌ〜８０ｍｇ／ｍｌ、最も好ましくは８０ｍｇ／ｍｌである、請求項２５に記載の抗ＳＯＳＴ抗体を含有する再構成溶液。
【請求項２７】
前記界面活性剤がポリソルベートであり、好ましくはポリソルベート８０である、界面活性剤をさらに含む、請求項２１に記載の抗ＳＯＳＴ抗体を含む再構成溶液。
【請求項２８】
前記界面活性剤の濃度が０．３ｍｇ／ｍｌ〜０．６ｍｇ／ｍｌであり、好ましくは０．４ｍｇ／ｍｌである、請求項２７に記載の抗ＳＯＳＴ抗体を含む再構成溶液。
【請求項２９】
粘度調整剤をさらに含み、
該粘度調整剤は、カルシウム塩、塩化ナトリウム、塩化マグネシウムおよびアルギニン塩酸塩からなる群から選択され、
好ましくは、前記カルシウム塩が、塩化カルシウムおよび酢酸カルシウムからなる群から選択される、請求項２１に記載の抗ＳＯＳＴ抗体を含む再構成溶液。
【請求項３０】
前記カルシウム塩の濃度が４．５ｍＭ〜２０ｍＭであり、好ましくは４．５ｍＭ〜１０ｍＭであり、最も好ましくは４．５ｍＭであることを特徴とする請求項２９に記載の抗ＳＯＳＴ抗体を含む再構成溶液。
【請求項３１】
凍結製剤を再構成して、請求項１〜１６のいずれかに記載の医薬組成物を形成することを特徴とする、抗ＳＯＳＴ抗体を含む凍結製剤。
【請求項３２】
ＳＯＳＴ関連疾患または状態の治療のための医薬の製造における、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の医薬組成物、または請求項１９もしくは３１に記載の凍結製剤、または請求項２１〜３０のいずれか１項に記載の再構成溶液の使用であって、
ＳＯＳＴ関連疾患または状態が、骨粗鬆症、骨減少症または変形性関節症、関節リウマチ、歯周病および多発性骨髄腫からなる群より選択され、好ましくは、骨粗鬆症である、使用。
【請求項３３】
ＳＯＳＴ関連疾患または状態を治療および予防するための方法であって、
それを必要とする患者に、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の医薬組成物、または請求項１９もしくは３１に記載の凍結製剤、または請求項２１〜３０のいずれか１項に記載の再構成溶液の治療有効量を投与することを含み、
ＳＯＳＴ関連疾患または状態が、骨粗鬆症、骨減少症または変形性関節症、関節リウマチ、歯周病および多発性骨髄腫からなる群より選択され、好ましくは骨粗鬆症である、方法。
【請求項３４】
請求項１〜１６のいずれか１項に記載の医薬組成物を含有する容器、または請求項１９もしくは３１に記載の凍結製剤、または請求項２１〜３０のいずれか１項に記載の再構成溶液を含む物品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、医薬製剤の分野に関し、特に、抗ＳＯＳＴ抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物、および医薬としてのその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
閉経後骨粗鬆症（ＰＭＯ）および老人性骨粗鬆症を含む骨粗鬆症は、全身性骨代謝障害であり、これは、骨量が低く、骨ミクロ組織が低下し、その結果、骨強度が低下し、骨脆弱性が増大し、破断の危険性が増大することを特徴とする。統計によれば、世界で約２億人が骨粗鬆症に罹患しており、発生率は最も一般的な疾患の上位７人まで上昇し、頻繁に発生する疾患であった。６０歳以上の中国人女性における骨粗鬆症の罹患率は６０％と高く、男性の罹患率は４０〜５０％である。
【０００３】
従来の運動、カルシウムやビタミンＤの服用、骨破断予防のための知見の普及などに加え、現在の医療は、骨折を防ぐために骨吸収を減らすことに注力している。抗骨吸収薬には、カルシトニン、ビスホスホネート、エストロゲン置換剤および選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）などが含まれる。ビスホスホネートに代表される骨吸収阻害剤は、骨のさらなる損失を予防することができるが、失われた骨を再建することができない。さらに、これらの骨吸収阻害剤はまた、骨吸収を阻害しながら骨形成を阻害する。ホルモン薬剤は、静脈血栓症および心血管疾患を引き起こす危険性がより高い。より重要なことに、骨同化薬剤は、それらの真の意味において、骨量を改善するだけでなく、骨ミクロ組織を効果的に改善し、骨形成を促進するはずである。しかし、これはまさに、既存の抗骨吸収薬が達成できないものである。過去１５年間、破断の危険性を低減することを目的とした様々な医学的措置が、臨床試験において系統的に研究されてきたが、有効な薬剤に対する大きな必要性が依然として存在する。これまで、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）薬剤のみが、骨形成を刺激することが証明されている。しかしながら、多くの欠点が明らかである。例えば、骨のリモデリングに対するその効果は持続せず、骨破断の修復にはほとんど効果がなく、毎日の経皮注射が１年以上必要であり、低用量投与のみが必要であり、高価であり、２年以上連続して使用することができず、その安全上の課題は、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）、米国等によってブラックボックス警告されている。
【０００４】
スクレロスチンは、薬物開発のための新しい生物学的標的として役立つ；骨粗鬆症は、骨芽細胞の同化を調節することによって処置され得るというメカニズムの基礎をなす。このような標的は、骨代謝を調節することによって、骨粗鬆症の治療の分野におけるギャップを埋める。
【０００５】
スクレロスチンは、ＳＯＳＴ遺伝子の発現によって分泌される糖タンパク質であり、そのアミノ酸配列は、１９０残留分およびシステインを含むループドメインによって特徴付けられる。それは、骨芽細胞、軟骨、肝臓、腎臓、骨髄、心臓、膵臓および他の箇所において非常に低い発現を有する骨細胞において主に発現されることが証明されている。
【０００６】
研究は、スクレロスチンが、低密度リポタンパク質レセプターＬＲＰ５／６に結合することによって、Ｗｎｔシグナル伝達経路を阻害することによって骨形成を調節し得ることを示した。現在、いくつかの企業によって開発された標的に対するモノクローナル抗体薬は、それぞれフェーズＩＩＩまたはフェーズＩＩの臨床試験に入っている。３社が提供した臨床データはいずれも、骨粗鬆症の治療の根底にある機構が標的を介して骨代謝を調節することによるものであることを示し、安全性および有意な効力を示した。抗スクレロスチン抗体、ロモソズマブ（ＡＭＧＥＮ、ＵＣＢ）の臨床報告では、その安全性と耐性は共に良好であり、骨密度はコントロールと比較して治療した骨で有意に増加した。この薬剤は臨床試験のフェーズＩＩＩに進められている。別の２つのモノクローナル抗体薬が、それぞれＬｉｌｌｙおよびＮｏｖａｒｔｉｓによって臨床試験のフェーズＩＩに進められている。これらの抗体の適応は、骨粗鬆症、骨損傷／関連する骨障害などの治療のためのものである。抗スクレロスチン抗体が、伝統的なビスホスホネートを使用する処理と矛盾しないことをいくつかの研究が示しており、これらの２つの薬剤が組み合わせて使用され得ることは、言及する価値がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかしながら、抗体薬物は、大きな分子量、複雑な構造を有し、容易に分解され、重合され、または望ましくない化学修飾される。投与に適した抗体を作製し、安定性を維持し、貯蔵後およびその後の使用中に良好な効果を発揮するためには、抗体薬物の安定な配合組成に関する研究が特に大切である。
【０００８】
例えば、WO2016145961、WO2012028683、WO2012135035などの抗ＳＯＳＴ抗体を含む医薬配合組成物を開発している多くの会社が現在存在する。しかしながら、新しい抗ＳＯＳＴ抗体に関して、投与により適した抗ＳＯＳＴ抗体を含む医薬（配合組成）組成物を開発する必要性が依然として存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、抗ＳＯＳＴ抗体またはその抗原結合断片（フラグメント）、および緩衝液を含む医薬組成物を提供し、緩衝液は、酢酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液、リン酸緩衝液またはコハク酸緩衝液、好ましくは酢酸緩衝液、より好ましくは酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液からなる群より選択される。
【００１０】
代替の実施形態では、医薬組成物において、抗ＳＯＳＴ抗体またはその抗原結合断片の濃度（すなわち、緩衝液中で調製されるＳＯＳＴ抗体またはその抗原結合断片の濃度）は、約１ｍｇ／ｍｌ〜１２０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは約６０ｍｇ／ｍｌ〜１２０ｍｇ／ｍｌ、さらに好ましくは約８０ｍｇ／ｍｌ〜１２０ｍｇ／ｍｌ、最も好ましくは約９０ｍｇ／ｍｌ〜１１０ｍｇ／ｍｌ、さらに好ましくは８０ｍｇ／ｍｌ〜１００ｍｇ／ｍｌである。濃度の非限定的な実施形態には、９０ｍｇ／ｍｌ、９１ｍｇ／ｍｌ、９２ｍｇ／ｍｌ、９３ｍｇ／ｍｌ、９４ｍｇ／ｍｌ、９５ｍｇ／ｍｌ、９６ｍｇ／ｍｌ、９７ｍｇ／ｍｌ、９８ｍｇ／ｍｌ、９９ｍｇ／ｍｌ、１００ｍｇ／ｍｌ、１０１ｍｇ／ｍｌ、１０２ｍｇ／ｍｌ、１０３ｍｇ／ｍｌ、１０４ｍｇ／ｍｌ、１０５ｍｇ／ｍｌ、１０６ｍｇ／ｍｌ、１０７ｍｇ／ｍｌ、１０８ｍｇ／ｍｌ、１０９ｍｇ／ｍｌ、１１０ｍｇ／ｍｌ、最も好ましくは約１００ｍｇ／ｍｌが含まれる。
【００１１】
代替の実施形態において、緩衝液の濃度は、約５ｍＭ〜３０ｍＭ、好ましくは約１０ｍＭ〜２０ｍＭであり、緩衝液の濃度の非限定的な実施形態は、１０ｍＭ、１２ｍＭ、１４ｍＭ、１６ｍＭ、１８ｍＭ、２０ｍＭ、最も好ましくは１０ｍＭを含む。
【００１２】
代替の実施形態では、医薬組成物中の緩衝液のｐＨ値は、約４．８〜５．５、好ましくは約５．０〜５．５であり、ｐＨの非限定的な実施形態は、約５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、最も好ましくは約５．０であってもよい。本開示の緩衝液で医薬組成物を製剤化した後、医薬組成物の最終ｐＨは、緩衝液のｐＨより約０．２〜０．３高い。したがって、代替の実施形態では、本開示における医薬組成物のｐＨは、約４．８〜５．５、好ましくは約５．０〜５．５である。非限定的な実施形態では、医薬組成物のｐＨは、約５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、最も好ましくは約５．２または５．３であってもよい。
【００１３】
さらに、代替の実施形態において、医薬組成物はまた、糖を含む。本発明の「糖類」は、グルコース、ショ糖、トレハロース、ラクトース、マルトース、デキストラン、グリセロール、エリスリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトール、マンニトール、メリビオース、メレジトース、メリトリオース、マンノトリオース、スタキオース、ラクツロース、マルトロース、ソルビトール、マルチトール、ラクチトール、イソマルツロースなどからなる群から選択することができる、単糖類、二糖類、三糖類、多糖類、糖アルコール、還元糖、非還元糖などを含む、従来の組成物（ＣＨ２Ｏ）ｎおよびその誘導体を包含する。糖類は、好ましくは非還元二糖類であり、より好ましくはトレハロースまたはスクロースである。
【００１４】
代替の実施形態では、医薬組成物中の糖類の濃度は、約４０ｍｇ／ｍＬ〜９５ｍｇ／ｍＬ、好ましくは約６０ｍｇ／ｍＬ〜９０ｍｇ／ｍＬであり、糖類の濃度の非限定的な実施形態は、６０ｍｇ／ｍｌ、６５ｍｇ／ｍｌ、７０ｍｇ／ｍｌ、７５ｍｇ／ｍｌ、８０ｍｇ／ｍｌ、８５ｍｇ／ｍｌ、９０ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは８０ｍｇ／ｍｌを含む。
【００１５】
代替の実施形態では、医薬組成物は、ポリソルベート20、ポリソルベート80、ポロキサマー、トリトン、ドデシルスルホン酸ナトリウム、ラウリルスルホン酸ナトリウム、オクチルグリコシドナトリウム、ラウリルスルホベタイン、ミリスチルスルホベタイン、リノレイルスルホベタイン、ステアリルスルホベタイン、ラウリルサルコシン、ミリスチルサルコシン、リノレイルサルコシン、ステアリルサルコシン、リノレイルベタイン、ミリスチルベタイン、セチルベタイン、ラウリルアミドプロピルベタイン、コカラミドプロピルベタイン、リノールアミドプロピルベタイン、ミリスタミドプロピルベタイン、パルミトプロピルベタイン、イソステアラミドプロピルベタイン、ミリスタミドプロピル−ジメチルアミン、パルミトイルアミドプロピル−ジメチルアミン、イソステアラミドプロピル−ジメチルアミン、ナトリウムメチルココアシル、ジソジウムメチルオレイル−タウレート、ポリエチレングリコール，ポリプロピレングリコール、エチレンとプロピレングリコールの共重合体などからなる群より選択され得る界面活性剤も含む。界面活性剤は、好ましくはポリソルベート８０またはポリソルベート２０、より好ましくはポリソルベート８０である。
【００１６】
代替の実施形態では、医薬組成物中の界面活性剤の濃度は、約０．０２ｍｇ／ｍｌ〜０．８ｍｇ／ｍｌ、好ましくは約０．３ｍｇ／ｍｌ〜０．６ｍｇ／ｍｌであり、本界面活性剤の濃度の非限定的な実施形態は、０．３ｍｇ／ｍｌ、０．３５ｍｇ／ｍｌ、０．４ｍｇ／ｍｌ、０．４５ｍｇ／ｍｌ、０．５ｍｇ／ｍｌ、０．５５ｍｇ／ｍｌ、０．６ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは約０．４ｍｇ／ｍｌを含む。
【００１７】
代替の実施形態では、医薬組成物は、粘度調整剤をさらに含む。粘度調整剤は、カルシウム塩、塩化ナトリウム、塩化マグネシウムおよびアルギニン塩酸からなる群から選択することができ、好ましくは塩化カルシウムまたは酢酸カルシウムである。
【００１８】
別の実施態様において、医薬組成物中のカルシウム塩の濃度は好ましくは約４．５ｍＭ〜２０ｍＭであり、好ましくは約４．５ｍＭ〜１０ｍＭであり、限定されない実施態様は、４．５ｍＭ、５ｍＭ、５．５ｍＭ、６．０ｍＭ、６．５ｍＭ、７．０ｍＭ、７．５ｍＭ、８．０ｍＭ、８．５ｍＭ、９．０ｍＭ、９．５ｍＭ、１０ｍＭを含み、最も好ましくは約０．４ｍｇ／ｍｌである。
【００１９】
代替の実施形態では、医薬組成物は、
（ａ）１ｍｇ／ｍｌ〜１２０ｍｇ／ｍｌの抗ＳＯＳＴ抗体またはその抗原結合断片；
（ｂ）５ｍＭ〜３０ｍＭ酢酸緩衝液；
（ｃ）４５ｍｇ／ｍＬ〜９５ｍｇ／ｍＬトレハロース；
（ｄ）０．０２ｍｇ／ｍＬ〜０．８ｍｇ／ｍＬポリソルベート８０；
（ｅ）４．５ｍＭ〜２０ｍＭのカルシウム塩；を含み、
好ましくは、医薬組成物のｐＨは、約４．８〜５．５であり、より好ましくは、約５．０〜５．２である。
【００２０】
代替の実施形態では、医薬組成物は、
（ａ）９０ｍｇ／ｍｌ〜１１０ｍｇ／ｍｌの抗ＳＯＳＴ抗体またはその抗原結合断片；
（ｂ）１０ｍＭ〜２０ｍＭ酢酸緩衝液；
（ｃ）６０ｍｇ／ｍＬ〜９０ｍｇ／ｍＬトレハロース；
（ｄ）０．３ｍｇ／ｍＬ〜０．６ｍｇ／ｍＬポリソルベート８０；
（ｅ）４．５ｍＭ〜１０ｍＭのカルシウム塩；を含み、
好ましくは、医薬組成物のｐＨは５．０〜５．２である。
【００２１】
代替の実施形態では、医薬組成物は、
（ａ）１００ｍｇ／ｍｌ抗ＳＯＳＴ抗体またはその抗原結合断片；
（ｂ）１０ｍＭ酢酸緩衝液；
（ｃ）８０ｍｇ／ｍＬトレハロース；
（ｄ）０．４ｍｇ／ｍＬポリソルベート８０；
（ｅ）４．５ｍＭカルシウム塩；を含み、
好ましくは、医薬組成物のｐＨは５．０であり、
ここで、酢酸緩衝液は酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液である。
【００２２】
代替の実施形態では、医薬組成物は、
（ａ）８０ｍｇ／ｍｌ〜１００ｍｇ／ｍｌの抗ＳＯＳＴ抗体またはその抗原結合断片；
（ｂ）１０ｍＭ〜２０ｍＭ酢酸緩衝液；を含み、
医薬組成物のｐＨは５．０〜５．２である。
【００２３】
代替の実施形態では、医薬組成物は、
（ａ）１００ｍｇ／ｍｌ抗ＳＯＳＴ抗体またはその抗原結合断片；
（ｂ）１０ｍＭ酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ５．０；
（ｃ）８０ｍｇ／ｍＬトレハロース；
（ｄ）０．４ｍｇ／ｍＬポリソルベート８０；
（ｅ）４．５ｍＭ塩化カルシウム；を含む。
【００２４】
代替の実施形態では、医薬組成物中に存在する抗ＳＯＳＴ抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ配列番号３、配列番号９および配列番号５に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３と；
それぞれ配列番号６、配列番号７および配列番号８に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３と、を含む。
【００２５】
代替の実施形態において、抗ＳＯＳＴ抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１０の重鎖可変領域および配列番号１３の軽鎖可変領域を含む。
【００２６】
代替の実施形態では、医薬組成物中に存在する抗ＳＯＳＴ抗体またはその抗原結合断片は、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体からなる群より選択され、好ましくはヒト化抗体である。
【００２７】
代替の実施形態では、医薬組成物中に存在する抗ＳＯＳＴ抗体の軽鎖アミノ酸配列は、Ａｂ−５の軽鎖アミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有し、抗ＳＯＳＴ抗体の重鎖アミノ酸配列は、Ａｂ−５の軽鎖アミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有し、Ａｂ−５抗体の軽鎖配列は配列番号２５に示され、Ａｂ−５抗体の重鎖配列は配列番号２２に示される。
【００２８】
本発明はまた、抗ＳＯＳＴ抗体を含む凍結製剤を調製する方法であって、上記のような医薬組成物を凍結乾燥する工程を含む方法を提供する。
【００２９】
抗ＳＯＳＴ抗体を含む凍結製剤の調製法の代替実施では、凍結乾燥は、連続的に予備凍結、一次乾燥、および二次乾燥を含む。予備凍結は、真空度にかかわらず、５℃〜−４０℃〜−５０℃、最も好ましくは−４５℃で凍結する。一次凍結乾燥の温度は−３０℃〜０℃であり、最も好ましくは−２７℃であり、真空度は０．０５ｍＢａｒ〜０．２ｍＢａｒであり、最も好ましくは０．１ｍＢａｒである。二次乾燥の温度は２０〜３０℃、最も好ましくは２５℃、真空度は０．０５ｍＢａｒ〜０．２ｍＢａｒ、最も好ましくは０．１ｍＢａｒ、０．００５ｍＢａｒ〜０．０２ｍＢａｒ、最も好ましくは０．０１ｍＢａｒである。
【００３０】
本発明はさらに、上記の抗ＳＯＳＴ抗体を含有する凍結製剤の調製法によって調製された抗ＳＯＳＴ抗体を含有する凍結製剤を提供する。
【００３１】
いくつかの実施形態では、凍結製剤は、２〜８℃で少なくとも３ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも１２ヶ月、少なくとも１８ヶ月、または少なくとも２４ヶ月安定である。いくつかの実施形態では、凍結製剤は、４０℃で少なくとも７日間、少なくとも１４日間、または少なくとも２８日間安定である。
【００３２】
本発明はさらに、抗ＳＯＳＴ抗体を含む再構成溶液を調製する方法であって、上記の凍結製剤を再構成する工程を含み、再構成のための溶剤が、注射用水、生理食塩水およびブドウ糖溶液からなる群から選択されるが、これらに限定されない、方法を提供する。本発明による再構成とは、凍結乾燥タンパク質配合組成を希釈剤（注射用水、生理食塩水およびブドウ糖溶液からなる群から選択されるが、これらに限定されない）に溶解して、タンパク質を再構成調製物中に分散させること、すなわち、対応する再構成溶液を得ることができることを意味する。
【００３３】
本開示はさらに、上記のような抗ＳＯＳＴ抗体を含む再構成溶液を調製する方法によって調製される、抗ＳＯＳＴ抗体を含有する再構成溶液を提供する。
【００３４】
抗ＳＯＳＴ抗体を含有する再構成溶液の代替実施では、抗ＳＯＳＴ抗体およびその抗原結合断片の濃度は、８０ｍｇ／ｍｌ〜１００ｍｇ／ｍｌ、最も好ましくは１００ｍｇ／ｍｌである。
【００３５】
抗ＳＯＳＴ抗体を含有する再構成溶液の代替実施形態では、再構成溶液のｐＨは、４．８〜５．５、好ましくは５．３である。
【００３６】
代替の実施形態において、抗ＳＯＳＴ抗体を含む再構成溶液は、酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液をさらに含み、ここで、酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液の濃度は、１０ｍＭ〜３０ｍＭであり、好ましくは１０ｍＭである。
【００３７】
代替の実施形態では、抗ＳＯＳＴ抗体を含む再構成溶液は、二糖類をさらに含み、二糖類は、トレハロースまたはショ糖である。
【００３８】
抗ＳＯＳＴ抗体を含有する再構成溶液の代替の実施形態において、二糖類の濃度は、４５ｍｇ／ｍＬ〜９０ｍｇ／ｍＬ、好ましくは７５ｍｇ／ｍＬ〜８０ｍｇ／ｍＬ、最も好ましくは８０ｍｇ／ｍＬである。
【００３９】
代替の実施形態において、抗ＳＯＳＴ抗体を含む再構成溶液は、界面活性剤をさらに含み、ここで、界面活性剤は、ポリソルベートであり、好ましくは、ポリソルベート８０である。
【００４０】
抗ＳＯＳＴ抗体を含む再構成溶液の代替の実施形態において、界面活性剤の濃度は、０．３ｍｇ／ｍＬ〜０．６ｍｇ／ｍＬであり、好ましくは０．４ｍｇ／ｍＬである。
【００４１】
代替の実施形態において、抗ＳＯＳＴ抗体を含む再構成溶液は、粘度調整剤をさらに含み、ここで、粘度調整剤は、カルシウム塩、塩化ナトリウム、塩化マグネシウムおよびアルギニン塩酸塩からなる群より選択され、好ましくは、カルシウム塩は、塩化カルシウムまたは酢酸カルシウムから選択される。
【００４２】
抗ＳＯＳＴ抗体を含む再構成溶液の代替実施では、カルシウム塩の濃度は４．５ｍＭ〜２０ｍＭ、好ましくは４．５ｍＭ〜１０ｍＭ、最も好ましくは４．５ｍＭである。
【００４３】
本発明はさらに、抗ＳＯＳＴ抗体を含む凍結製剤に関し、凍結製剤は、上記のような医薬組成物を形成するために再構成される。
【００４４】
本開示はさらに、本明細書に記載の安定な医薬組成物のいずれかを含有する容器を含む物品またはキットを提供する。いくつかの実施形態では、バイアルは中性瑚珪酸ガラス製の注射バイアルである。
【００４５】
本発明はさらに、ＳＯＳＴ関連疾患または状態の治療のための医薬の製造における、上記の医薬組成物、または凍結製剤、または再構成溶液の使用を提供し、ここで、ＳＯＳＴ関連疾患または状態は、骨粗鬆症、骨減少症または変形性関節症、関節リウマチ、歯周病および多発性骨髄腫、好ましくは骨粗鬆症からなる群より選択される。
【００４６】
本発明はさらに、治療有効量の医薬組成物、または凍結製剤、または上記のような再構成溶液を、それを必要とする患者に投与することを含み、ＳＯＳＴ関連疾患または状態が、骨粗鬆症、骨減少症または変形性関節症、関節リウマチ、歯周病、および多発性骨髄腫からなる群より選択され、好ましくは骨粗鬆症である、ＳＯＳＴ関連疾患または状態を治療および予防するための方法を提供する。
【００４７】
本発明はさらに、医薬組成物、または凍結製剤、または上記のような再構成溶液を含む容器を含む物品を提供する。
【００４８】
本明細書で発明される様々な実施形態の特徴のうちの１つ、いくつか、またはすべてをさらに組み合わせて、本開示の他の実施形態を得ることができることを理解されたい。本開示のこれらおよび他の態様は、当業者には明らかである。本開示のこれらおよび他の実施形態は、以下の詳細な説明によってさらに説明される。
【発明を実施するための形態】
【００４９】
用語
本開示をより容易に理解するために、特定の技術用語および科学用語を以下に具体的に定義する。本明細書で特に別段の定義がない限り、本明細書で使用される他のすべての技術用語および科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有するものと解釈されるものとする。
【００５０】
「緩衝液」は、その共役酸−塩基類成分のためにｐＨの変化に耐性である緩衝液を指す。このような範囲でｐＨを制御する緩衝液の例としては、酢酸緩衝液、コハク酸緩衝液、グルコン酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液、シュウ酸緩衝液、乳酸緩衝液、リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液、酒石酸緩衝液、フマル酸緩衝液、グリシルグリシンおよび他の有機酸緩衝液が挙げられる。
【００５１】
「ヒスチジン緩衝液」は、ヒスチジンイオンを含む緩衝液を指す。ヒスチジン緩衝液の例には、ヒスチジン−塩酸塩緩衝液、ヒスチジン−酢酸塩緩衝液、ヒスチジン−リン酸塩緩衝液、ヒスチジン−硫酸塩緩衝液など、好ましくはヒスチジン−塩酸塩緩衝液が含まれる。ヒスチジン−塩酸塩緩衝液は、ヒスチジンおよび塩酸またはヒスチジンおよびヒスチジン塩酸塩によって調製される。
【００５２】
「クエン酸緩衝液」は、クエン酸イオンを含む緩衝液を指す。クエン酸緩衝液の例としては、クエン酸−クエン酸ナトリウム緩衝液、クエン酸−クエン酸カリウム緩衝液、クエン酸−クエン酸カルシウム緩衝液、クエン酸−クエン酸マグネシウム緩衝液などが挙げられる。好ましいクエン酸緩衝液はクエン酸−クエン酸ナトリウムである。
【００５３】
「コハク酸緩衝液」は、コハク酸イオンを含む緩衝液を指す。コハク酸緩衝液の例としては、コハク酸−コハク酸ナトリウム緩衝液、コハク酸−コハク酸カリウム緩衝液、コハク酸−コハク酸カルシウム緩衝液などが挙げられる。好ましいコハク酸緩衝液は、コハク酸−コハク酸ナトリウム緩衝液である。
【００５４】
「リン酸緩衝液」は、リン酸イオンを含む緩衝液を指す。リン酸緩衝液の例としては、リン酸水素二ナトリウム−リン酸二水素ナトリウム緩衝液、およびリン酸水素二ナトリウム−リン酸二水素カリウム緩衝液などが挙げられる。好ましいリン酸緩衝剤は、リン酸二酸化水素−リン酸ナトリウム緩衝剤である。
【００５５】
「酢酸緩衝液」は、酢酸イオンを含む緩衝液を指す。酢酸緩衝液の例としては、酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液、酢酸−ヒスチジン緩衝液、酢酸−酢酸カリウム緩衝液、酢酸−酢酸カルシウム緩衝液、酢酸−酢酸マグネシウム緩衝液などが挙げられる。好ましい酢酸緩衝液は酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液である。
【００５６】
「粘度調整剤」は、配合組成の粘性を調整するために添加される従来の医薬物質である。本明細書中で言及される粘度調整剤は、主に、無機塩類およびアミノ酸塩類をいう。好ましくは、無機物塩類は、塩化ナトリウム、塩化カルシウム，塩化マグネシウムおよび酢酸カルシウムからなる群から選択される。好ましくは、アミノ酸塩類は、アルギニン塩酸塩、ヒスチジン塩酸塩、グリシン塩酸塩、およびヒスチジン酢酸塩などからなる群から選択される。
【００５７】
「医薬組成物」とは、本明細書に記載する１以上の化合物またはその生理学的・薬学的に許容されるその塩若しくはそのプロドラッグと他の化学成分との混合物をいう。当該他の化学成分は、例えば、生理学的・薬学的に許容される担体および賦形剤である。医薬組成物の目的は、生物への投与を促進し、活性成分の吸着を促進し、それにより生物学的活性を発揮することである。本明細書で使用する「医薬組成物」および「配合組成」は、相互に排他的ではない。
【００５８】
本開示における医薬組成物の溶液形態に関して、特に明記しない限り、その中に含まれる溶媒は水である。
【００５９】
「凍結製剤」は、医薬組成物または配合組成の液状または液状形態を真空凍結乾燥することによって得られる配合組成または医薬組成物を指す。
【００６０】
本開示の凍結乾燥は、予備凍結、第１の乾燥、および二次乾燥を含む。予備凍結の目的は、生成物を凍結させて結晶性固体を得ることである。予備凍結のための温度および速度は、２つの重要な工程パラメータである。本開示では、予備凍結のための温度は−４５℃に設定され、予備凍結のための速度は１℃／分に設定される。第１の乾燥は、凍結乾燥の主要な段階である一次乾燥としても知られている。その目的は、製品の形状を維持しながら製品から氷を除去し、製品への損傷を最小限に抑えることである。一次凍結のための温度および真空度が適切でない場合、それは生成物を崩壊させるであろう。より高い温度および真空度は、凍結乾燥の効率を促進するが、同時に、製品崩壊の危険性を増大させる。本開示の一次乾燥のための温度は、当該技術分野における従来の温度、例えば、−３０℃〜０℃であってもよい。二次乾燥は、分析乾燥としても知られており、これは、最終真空（０．０１ｍｂａｒ）および温度上昇（２０〜４０℃）によって生成物から結合水を除去するための一次工程である。ほとんどの生物学的製品は温度に敏感であるので、二次乾燥のための温度は、温度範囲の低い点、すなわち２５℃であるように選択される。凍結乾燥の持続時間は、冷凍庫、凍結製剤の投与量、および凍結乾燥剤を含む容器に関連する。当業者は、凍結乾燥の持続時間を調整する技術をよく知っている。
【００６１】
本明細書で使用される場合、「約」という用語は、当業者によって決定される特定の値の許容誤差範囲内にある値を指し、これは、その値がどのように測定または決定されるかに部分的に依存し、すなわち、測定システムの限定、例えば、「約」は、当技術分野の実施当たり１標準偏差以上内を意味することができる。あるいは、「約」または「本質的に含む」は、２０％までの範囲を意味することができる。さらに、特に生物学的システムまたはプロセスに関して、その用語は、値の１桁までまたは５倍までを意味することができる。特定の値が出願および特許請求の範囲に言及される場合、特に明記されない限り、「約」または「本質的に含む」の意味は、その特定の値の許容誤差範囲内にあると仮定されるべきである。
【００６２】
本発明の医薬組成物は、安定な効果を達成することができる：貯蔵後にその物理的安定性および／または化学的安定性および／または生物学的活性を実質的に保持することができる抗体；好ましくは、医薬組成物は、貯蔵後にその物理的安定性、化学的安定性および生物学的活性を実質的に保持する。貯蔵寿命は、一般に、医薬組成物の所定の貯蔵寿命に基づいて選択される。現在、選択された温度で選択された期間の貯蔵後の安定性を測定する、タンパク質安定性を測定するための多くの分析技術が存在する。
【００６３】
安定な抗体医薬製剤は、以下の条件で有意な変化が観察されないものである：冷蔵温度（２〜８℃）で少なくとも３ヶ月、好ましくは６ヶ月、より好ましくは１年、さらにより好ましくは２年までの貯蔵。さらに、安定な液体調製物は、例えば、２５℃の温度で、例えば、１ヶ月、３ヶ月、および６ヶ月の期間、または４０℃で１ヶ月間の貯蔵の際に所望の特性を示す液体調製物を含む。安定性に関する一般的な許容基準は次のとおりである。ＳＥＣ−ＨＰＬＣの評価によると、通常約１０％以内、望ましくは抗体モノマーの約５％以内が分解される。薬学的抗体調製物は、目視分析により、無色または透明〜わずかに乳白色である。調製物の濃度、ｐＨおよび浸透圧は±１０％以下の変化を有する。典型的には、約１０％以下、好ましくは約５％以下の切頭体が観察される。典型的には、約１０％以下、好ましくは約５％以下の凝集が形成される。
【００６４】
抗体は、色彩および／または透明度の目視検査で、または紫外線散乱、サイズエクスクルージョンクロマトグラフィー（ＳＥＣ）および動的光散乱（ＤＬＳ）によって測定して、凝集、沈殿および／または変性の有意な増大を示さない場合、医薬調製物中で「その物理的な安定性を保持する」。タンパク質コンホメーションの変化は、蛍光分光法（タンパク質の三次構造を決定する）およびＦＴＩＲ分光法（タンパク質の二次構造を決定する）によって評価することができる。
【００６５】
抗体は、それが重要な化学的変化を示さない場合、医薬調製物中で「その化学的安定性を保持する」。化学的安定性は、蛋白質の化学的に変化した形態を検出および定量することによって評価することができる。蛋白質の化学構造をしばしば変化させる分解プロセスには、加水分解または切断（サイズ排除クロマトグラフィーおよびＳＤＳ−ＰＡＧＥなどの方法によって評価される）、酸化（マススペクトロスコピーまたはＭＡＬＤＩ／ＴＯＦ／ＭＳと組み合わせたペプチドマッピングなどの方法によって評価される）、脱アミド化（イオン交換クロマトグラフィー、キャピラリー等電点電気泳動、ペプチドマッピング、イソアスパラギン酸測定などの方法によって評価される）、および異性化（イソアスパラギン酸含量、ペプチドマッピングなどを測定することによって評価される）が含まれる。
【００６６】
抗体は、所与の時点での抗体の生物学的活性が、医薬調製物が調製された時点で示される生物学的活性の所定の範囲内である場合、医薬調製物中で「その生物学的活性を保持する」。抗体の生物学的活性は、例えば、抗原結合アッセイによって決定することができる。
【００６７】
本明細書中で使用される場合、用語「スクレロスチン」または「ＳＯＳＴ」または「ＳＯＳＴタンパク質」は、スクレロスチン（ＳＯＳＴ）遺伝子発現産物（タンパク質）をいう。ネズミＳＯＳＴ（ｍ−ＳＯＳＴ）またはカニクイザルＳＯＳＴ  （カニクイザルＳＯＳＴ）など、別段の指定がない限り、この用語は、本開示におけるヒトＳＯＳＴ（ｈ−ＳＯＳＴ）を指す。本開示において使用されるヒト、マウスおよびカニクイザルＳＯＳＴのヌクレオチド配列は、ＧｅｎＢａｎｋから入手され、例えば、ＮＰ＿０７９５１３．１は、ヒトＳＯＳＴタンパク質配列を提供する。
【００６８】
本明細書中で使用されるアミノ酸残留分についての３文字コードおよび１文字コードは、J. Biol. Chem. 243, p. 3558 (1968)に記載される。
【００６９】
本発明で使用される「抗体」は、２つの同一の重鎖と２つの同一の軽鎖との間の鎖間ジスルフィド結合によって互いに連結されたテトラペプチド連鎖構造である免疫グロブリンを指す。
【００７０】
本開示において、本開示の抗体軽鎖は、ヒトまたはマウスκ、λ鎖またはその変形例を含む軽鎖定常領域をさらに含むことができる。
【００７１】
本開示において、本開示の抗体重鎖は、ヒトまたはマウスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４またはその変形例を含む重鎖定常領域をさらに含むことができる。
【００７２】
抗体の重鎖および軽鎖のＮ末端に隣接する約１１０個のアミノ酸配列は、可変領域（Ｆｖ領域）として知られる高度に可変であり；Ｃ末端に近い残りのアミノ酸配列は、定常領域として知られる比較的安定である。可変領域は、３つの超可変領域（ＨＶＲ）および４つの比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。抗体の特異性を決定する３つの超可変領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）としても知られている。各軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）および各重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）は、３つのＣＤＲ領域および４つのＦＲ領域からなり、アミノ末端からカルボキシル末端への順序は、以下の順序である：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、およびＦＲ４。軽鎖の３つのＣＤＲ領域はＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を指し、重鎖の３つのＣＤＲ領域はＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を指す。本明細書中の抗体または抗原結合断片のＬＣＶＲおよびＨＣＶＲ領域におけるＣＤＲアミノ酸残留分の数および位置は、公知のＫａｂａｔ番号付け基準（ＬＣＤＲ１−３、ＨＣＤＲ２−３）に従うか、またはＫａｂａｔおよびｃｈｏｔｈｉａ番号付け基準（ＨＣＤＲ１）に従う。
【００７３】
本開示の抗体は、マウス抗体、キメラ抗体またはヒト化抗体、好ましくはヒト化抗体を含む。
【００７４】
本開示における用語「マウス抗体」は、当該分野の知識および技術に従って調製された、ヒトＳＯＳＴに対するモノクローナル抗体をいう。調製の間、試験被検者にＳＯＳＴ抗原を注入し、次いで、所望の配列または機能特性を有する抗体を発現するハイブリドーマを分離する。
【００７５】
「キメラ抗体」という用語は、マウス抗体の可変領域をヒト抗体の定常領域と融合させることによって形成される抗体であり、キメラ抗体は、マウス抗体によって誘導される免疫反応を軽減することができる。キメラ抗体を構築するために、特定のマウスモノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを構築し、次いで、可変領域遺伝子をマウスハイブリドーマ細胞からクローニングする。続いて、ヒト抗体の定常領域遺伝子を所望に応じてクローニングする。マウス可変領域遺伝子は、ヒト定常領域遺伝子と連結されて、ヒトベクターに挿入され得るキメラ遺伝子を形成し、そして最後に、キメラ抗体分子が、真核生物または原核生物工業システムにおいて発現される。本開示の好ましい実施形態において、ＳＯＳＴキメラ抗体の軽鎖は、ヒトκ、λ鎖、またはその変異体の軽鎖定常領域をさらに含む。ＳＯＳＴキメラ抗体の重鎖は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４の重鎖定常領域、またはその変形例をさらに含む。
【００７６】
「ヒト化抗体」という用語は、ＣＤＲ移植抗体としても知られており、マウスＣＤＲ配列をヒト抗体の可変領域フレームワークに移植することによって生成される抗体、すなわち、異なるタイプのヒト生殖系列抗体フレームワーク配列から産生される抗体を指す。ヒト化抗体は、大量のマウスタンパク質成分を有するキメラ抗体によって誘導される強力な抗体応答の欠点を克服する。このようなフレームワーク配列は、生殖系列抗体遺伝子配列または公衆された参考文献をカバーする公衆ＤＮＡデータベースから得ることができる。例えば、ヒト重鎖および軽鎖可変領域遺伝子の生殖系列ＤＮＡ配列は、「ＶＢａｓｅ」ヒト生殖系列配列データベース（ウェブwww.mrccmep.com.ac.uk/vbaseで入手可能）に見出すことができ、ならびにKabat, E A, et al,1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Edに見出すことができる。免疫原性の低下に伴う活性の低下を回避するために、ヒト抗体の可変領域中のフレームワーク配列を、最小限の逆突然変異または逆突然変異に供して、活性を維持する。本発明のヒト化抗体はまた、ファージディスプレイによってＣＤＲ親和性成熟が行われるヒト化抗体を含む。
【００７７】
本発明における用語「抗スクレロスチン抗体」、「ヒトスクレロスチンに特異的に結合する抗体」、「抗ＳＯＳＴ抗体」、「抗ＳＯＳＴ抗体」、「ＳＯＳＴ抗体」および「ＳＯＳＴに結合する抗体」は、ＳＯＳＴを標的とする診断薬および／または治療薬として使用することができるように、充分な親和性でＳＯＳＴに結合することができる抗体を指す。
【００７８】
本開示における「ＳＯＳＴへの結合」という用語は、ヒトＳＯＳＴと相互作用することができることを指す。
【００７９】
本明細書中で使用される場合、用語「特異的に結合する」は、競合的なＥＬＩＳＡ、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）アッセイ、またはＫＩＮＥＸＡ（登録商標）アッセイのような、当該分野で利用可能な技術によって決定される。例えば、この用語は、本開示の抗体の抗原結合ドメインが、多くの抗原によって担持される特定のエピトープに特異的である場合にも適用可能である。このような場合、抗原結合ドメインを有する抗体は、このようなエピトープを有する種々の抗原に特異的に結合し得る。
【００８０】
本開示において言及される「抗原結合断片」は、抗原結合活性を有するＦａｂ破片、Ｆａｂ’破片、またはＦ（ａｂ’）２破片、ならびにヒトＳＯＳＴに結合するｓｃＦｖ破片、および抗ＳＯＳＴ抗体ＶＨおよびＶＬを利用してヒトＳＯＳＴに結合することができる他の破片を指し、配列番号３〜配列番号９からなる群より選択される、本開示に記載される抗体の１つ以上のＣＤＲ領域を含む。Ｆｖ断片は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、定常領域を含まず、全ての抗原結合部位を有する最小抗体断片である。一般に、Ｆｖ抗体は、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、抗原結合に必要な構造を形成することができる。また、異なるリンカーを使用して、２つの抗体の可変領域を連結して、単鎖抗体または単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）と呼ばれるポリペプチド鎖を形成することができる。
【００８１】
用語「エピトープ」は、１つ以上の抗体によって認識および結合され得る、抗原中に位置する部分をいう。
【００８２】
「保存的修飾」または「保存的置換または置換」は、タンパク質の生物学的活性を変化させることなく頻繁に変化を行うことができるように、類似の特徴（例えば、充電、側鎖の大きさ、疎水性／親水性、背骨コンホメーションおよび剛性など）を有する他のアミノ酸でのタンパク質中のアミノ酸の置換を指す。当業者は、一般に、ポリペプチドの非必須領域における単一のアミノ酸置換が、生物学的活性を実質的に変化させないことを認識する（例えば、Watson et al. (1987) Molecular Biology of the Gene, The Benjamin/Cummings Pub. Co., p. 224 (4thEd.) を参照のこと）。さらに、構造的または機能的に類似したアミノ酸の置換は、生物学的活性を破壊する可能性が低い。
【００８３】
「アミノ酸同一性」は、２つのタンパク質間または２つのポリペプチド間の配列類似性を指す。比較される２つの配列の両方の位置が、同じアミノ酸残留分によって占有される場合、例えば、２つのポリペプチドの各々の位置が、同一のアミノ酸残留分によって占有される場合、分子は、その位置で同一である。配列同一性パーセントおよび配列類似性パーセントを決定するために適切なアルゴリズムの例は、ＢＬＡＳＴおよびＢＬＡＳＴ２．０アルゴリズムであり、これらは、Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215: 403-410 および Altschul et al. (1977) Nucleic Acids Res. 25:3389-3402にそれぞれ記載される。ＢＬＡＳＴ分析を行うためのソフトウェアは、国立バイオテクノロジーインフォメーションセンター（www.ncbi.nlm.nih.gov/）で公的に入手可能である。
【００８４】
抗体および抗原結合断片を産生および精製するための方法は、当該分野で周知であり、そして例えば、Antibody Experimental Technology Guide of Cold Spring Harbor, Chapters 5-8 and 15に見出され得る。本開示の抗体または抗原結合断片は、１つ以上のヒトフレームワーク領域（ＦＲ）を非ヒト由来ＣＤＲ領域に導入するように遺伝子操作される。ヒトＦＲ生殖系列配列は、ＩＭＧＴヒト抗体可変領域生殖系列遺伝子データベースおよびＭＯＥソフトウェアを、それらのウェブサイトhttp://imgt.cines.frを介してImMunoGeneTics (IMGT)から、またはThe Immunoglobulin FactsBook, 2001ISBN012441351から比較することによって得ることができる。
【００８５】
本発明の操作された抗体または抗原結合断片は、常法によって調製および精製され得る。例えば、重鎖および軽鎖をコードするｃＤＮＡ配列をクローニングし、ＧＳ発現ベクターに組み換えることができる。次いで、組み換えられた免疫グロブリン発現ベクターは、ＣＨＯ細胞に安定にトランスフェクトされ得る。当該分野で周知のより推奨される方法として、哺乳動物発現系は、代表的には、Ｆｃ領域における高度に保存されたＮ末端で、抗体のグリコシル化を生じる。安定なクローンは、ヒトＳＯＳＴに特異的に結合する抗体の発現によって得ることができる。陽性クローンは、バイオリアクターにおける抗体産生のために無血清培養培地中で増殖させることができる。抗体が分泌された培養培地は、従来の技術によって精製することができる。例えば、培地は、調節された緩衝液で平衡化されたタンパク質ＡまたはＧセファロースＦＦカラムによって好都合に精製され得る。カラムを洗浄して非特異的結合成分を除去する。結合した抗体をｐＨ傾きにより溶出し、抗体断片をＳＤＳ−ＰＡＧＥにより検出し、次いでプールする。抗体は、一般的な技術を用いて濾過し、濃縮することができる。水溶性混合物および多量体は、分子フルイまたはイオン交換を含む一般的な技術によっても効果的に除去することができる。得られた生成物は、例えば−７０℃で直ちに凍結することができ、または凍結乾燥することができる。
【００８６】
「投与」および「治療」とは、動物、ヒト、実験例被検者、細胞、組織、臓器、または生物学的流体に適用する場合、外因性の医薬、治療、診断薬、細胞、組織、臓器、または体液を動物、ヒト、被検者、細胞、組織、臓器、または生物学的流体と接触させることを意味する。「投与」および「治療」とは、例えば、治療、薬物動態学、診断、研究、および実験例方法を指すことができる。細胞の治療は、細胞と試薬を接触させること、ならびに流体と試薬を接触させることを包含する。「投与」および「治療」とは、例えば、試薬、診断、結合化合物による、または別の細胞による、細胞のインビトロおよびエクスビボ治療も意味する。「治療」とは、ヒト、獣医学、または研究被検者に適用される場合、治療的治療、予防的または予防的手段、研究、および診断的適用を指す。
【００８７】
「治療」は、治療剤が既知の治療活性を有する１つ以上の疾患症状を有する患者に、治療剤（例えば、本開示の結合化合物のいずれかを含む組成物）を、内部または外部で投与することを意味する。典型的には、薬剤は、処置された患者または集団における１つ以上の疾患症状を緩和するのに有効な量で投与され、そのような症状の回帰を誘導するか、または任意の臨床的に測定可能な程度までそのような症状の進行を阻害する。任意の特定の疾患症状を緩和するのに有効な治療剤の量（「治療有効量」とも呼ばれる）は、患者の疾患状態、年齢、および重量、ならびに患者において所望の応答を誘発する薬剤の能力などの因子に従って変動し得る。疾患症状が軽減されたかどうかは、その症状の重症度または進行状況を評価するために医師または他の熟練した医療提供者によって典型的に使用される任意の臨床測定によって評価することができる。本開示の実施形態（例えば、処理方法または製造）は、全ての患者における関心のある疾患症状を軽減するのに有効ではない場合があるが、スチューデントｔ検定、カイ二乗検定、MannおよびWhitneyによるU検定、Kruskal−Wallis検定（H検定）、Jonckheere−Terpstra検定、およびWilcoxon検定など、当技術分野で公知の任意の統計学的検定によって決定される、統計的に有意数の患者における対象疾患症状を軽減すべきである。
【００８８】
「有効量」は、医学的状態の症状または符号を改善または予防するのに十分な量を包含する。有効量はまた、診断を可能にするかまたは容易にするのに十分な量を意味する。特定の患者または獣医学的被検者のための有効量は、処置される状態、患者の全身の健康、投与の経路および照射量、ならびに副作用の重症度などの因子に依存して変化し得る。有効量は、有意な副作用または毒性効果を回避する最大用量または投薬プロトコルであり得る。
【００８９】
「Ｔｍ値」は、タンパク質の熱変性中点、すなわち、タンパク質の半分が展開され、タンパク質の空間構造が破壊される温度を指す。したがって、Ｔｍが高いほど蛋白質の耐熱安定性は高くなる。
【００９０】
実施例および試験例
以下、実施例を参照して本開示をさらに説明する。しかし、本開示の範囲は、これに限定されない。
【００９１】
具体的な条件が記載されていない本発明の実施例または試験例において、実験は、一般に、従来の条件下で、または原料または生成物の製造業者によって示唆される条件に従って行われる。試薬の供給源が特に示されていない場合、試薬は市販の従来の試薬である。
【００９２】
実施形態
ＳＯＳＴ抗原および本出願の抗体の調製・純化方法については、WO2016145961において２０１６年２月１６日を出願日とし、その内容全部を参考として、出願番号PCT/CN2016/073857を開示している。
【００９３】
（第１実施形態）．モノクローナル抗ヒトＳＯＳＴ抗体の産生
抗ヒトＳＯＳＴモノクローナル抗体は、マウスを免疫することによって産生された。実験用ＳＪＬ白色マウス、雌、6週齢(Beijing Weitong Lihua Experimental Animal Technology Co., Ltd., animal production license number: SCXK (Beijing) ２０１２−０００１）を使用した。給餌環境：ＳＰＦレベル。マウスを購入した後、動物を、２０〜２５℃の温度および４０〜６０％の湿度で、１２／１２時間の光／暗サイクルで、実験室環境に１週間維持した。環境に順応させたマウスを２グループ（Ａ／Ｂ）に分け、各グループ１０匹のマウスを用いた。
【００９４】
Ｈｉｓタグ（Ｈｉｓ−ｈ−タグ）を有するＳＯＳＴ組換えタンパク質を免疫原として使用した。Ａグループでは、フロイントアジュバント(Sigma Lot Num: F5881／F5506）を乳化に使用した。最初の免疫化はフロイント完全アジュバント（ＣＦＡ）で行い、残りのブースター免疫化はフロイント不完全アジュバント（ＩＦＡ）で行った。抗原対アジュバントの比は、１：１、２００μｌ／２００μｇ／マウス（最初の免疫化）、および２００μｌ／１００μｇ／マウス（ブースター）であった。Ｂグループでは、Titermax (Sigma Lot Num: T2684）およびAlum (Thermo Lot Num: 77161）を用いて交差免疫を行った。抗原対アジュバントの比（titermax）は１：１であり、抗原対アジュバントの比（Ａｌｕｍ）は３：１、２００μｌ／２００μｇ／マウス（最初の免疫化）、および２００μｌ／１００μｇ／マウス（ブースター）であった。抗原を乳化し、０、１４、２８、４２および５６日目に接種した。
【００９５】
０日目に、Ａ／Ｂ群のマウスに５０μｇ／マウスの乳化抗原を腹腔内（ＩＰ）注射した。１４日目に、マウスに、２５μｇ／マウスを複数の部位（通常、背中の６〜８部位）に皮下（ｓ．ｃ．）注射した。２８日目および４２日目に、抗原の背中または腹腔内注射のいずれかを、背中のしこりおよび腹部の腫脹状態に従って選択した。ブースター免疫は、脾細胞溶融の３日前に、２００μｇ／マウスの生理食塩水で処方された抗原溶液の腹腔内（ＩＰ）注射によって行った。
【００９６】
２２日目、３６日目、５０日目、６４日目に血液検査を行い、マウス血清のヒトスクレロスチンへの結合活性を、試験例１に記載したようにＥＬＩＳＡ法により測定し、その結果を表１に示す。４回目の免疫化の後、プラットフォームになりやすい高い血液力価を有するマウスを脾細胞溶融のために選択した。ハイブリドーマ細胞は、脾細胞を骨髄腫Ｓｐ２／０細胞（ＡＴＣＣ（登録商標）CRL−8287TM）と融合させることによって、最適化されたＰＥＧ媒介融合手順を使用することによって得られた。ヒトＳＯＳＴとヒトＬＲＰ−６との結合を遮断するマウス血清中の抗ヒトＳＯＳＴ抗体の活性を試験例２に従って検出し、良好インビトロ活性を有するモノクローナルハイブリドーマ細胞株Ａｂ−１を選択した。結果を表１に示す。
【００９７】
【表１】
2020528411.tif 000002
【００９８】
（第２実施形態）．マウス抗ヒトスクレロスチン抗体のヒト化
良好インビトロ活性を有するモノクローナルハイブリドーマ細胞株、Ａｂ−１を選択した。モノクローナル抗体の配列をクローニングし、さらにヒト化、組換え発現、活性評価を行った。
【００９９】
ハイブリドーマ配列決定のプロセスは、以下のように行った。ハイブリドーマ細胞を対数増殖期に収集し、ＲＮＡをＴｒｉｚｏｌ（キットの命令に従って、Invitrogen 15596−018）で抽出し、次いで、指示通りにＲＮＡの逆転写（PrimeScript（商標)Reverse Transcriptase、Takara、cat # 2680A）を行った。逆転写によって得られたｃＤＮＡを、マウスＩｇ−プライマーセット（Novagen、TB326 Rev．B 0503）を用いたＰＣＲによって増幅し、配列決定会社によって配列決定した。得られたＤＮＡ配列に対応するアミノ酸配列を配列番号１および配列番号２として示す：
【０１００】
ハイブリドーマ細胞から得られた重鎖可変領域：
EVQLQQSGPELVKPGTSVKIPCQTSGYTFTDYNLDWLKQRPGESLEWIGDIDPNNGDILYNQKFRDKATLTVDTSSNTAYLELRSLTSEDTAVYYCARRWAYYFDYWGQGTTLTISS
(配列番号1）。
【０１０１】
ハイブリドーマ細胞から得られた軽鎖可変領域：
NIVMTQTPKLLFVSAGDRITITCKASQSVSNDVAWYQQKPGQSPKLLIYYTSNRFTGVPDRFTGSGYGTDFTLTINTVQAEDLAVYFCQQDYSSPVTFGAGTKLELK
（配列番号２）。
【０１０２】
マウス抗ヒトＳＯＳＴモノクローナル抗体のヒト化は、当技術分野の多くの文献に開示されているように行った。簡潔には、親抗体（マウス抗体）の定常領域ドメインをヒト定常領域ドメインで置き換え、ヒト抗体生殖系列を、マウス抗体とヒト抗体との間の相同性に従って選択した。本発明において良好活動を示す分子はヒト化されたものであり、その結果は以下のとおりである。
【０１０３】
１．マウス抗スクレロスチン抗体のＣＤＲ領域
ＶＨ／ＶＬ ＣＤＲのアミノ酸残留分を同定し、カバットナンバリングシステムにより注釈を付けた。
【０１０４】
本開示のマウスＡｂ−１のＣＤＲ配列を表２に記載する：
【表２】
2020528411.tif 000003
【０１０５】
２．ヒト生殖系列ＦＲ領域配列の選択
得られたマウス抗体の典型的なＶＨ／ＶＬ ＣＤＲに基づき、重鎖および軽鎖可変領域配列を生殖系列抗体データベースと比較し、ヒト生殖系列軽鎖のフレームワーク領域がヒトκ軽鎖遺伝子由来であり、好ましくはヒト生殖系列軽鎖テンプレートのＩＧＫＶ１−３９＊０１またはＩＧＫＶ４−１＊０１が本発明において選択された、高相同性を有するヒト生殖系列テンプレートを選択した。ヒト生殖系列重鎖のフレームワーク領域は、ヒト重鎖由来であり、好ましくは、ヒト生殖系列重鎖テンプレートのＩＧＨＶ１−１８＊０１が、本開示において選択された。マウス抗体Ａｂ−１のＣＤＲ領域を、選択されたヒト化鋳型上に移植し、ヒト化可変領域を置換し、次いでＩｇＧ定常領域と組換えた。ネズミ抗体の三次元構造に基づき、捕捉された残留分、ＣＤＲ領域と直接相互作用する残留分、ＶＬとＶＨの立体配座に大きな影響を及ぼす残留分について復帰突然変異を行い、化学的不安定性を示すＣＤＲ領域の残留分を最適化し（重鎖ＣＤＲ２を最適化し、新しい重鎖ＣＤＲ２配列DIDPNDGDILYNQKFRD、配列番号９を得）、最終的にヒト化分子を得た。ヒト化分子の重鎖可変領域配列は、配列番号１０〜１２に示され、そして任意に、これらの配列は、配列番号１６〜１８に示される重鎖定常領域のいずれか１つと組み合わされ得る。ヒト化分子の軽鎖可変領域配列を配列番号１３〜１５に示し、これらの配列をそれぞれ配列番号１９に示す軽鎖定常領域配列と組み合わせることができる。
【０１０６】
１）．重鎖可変領域：
Ａｂ−５の重鎖可変領域：
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNLDWLRQAPGEGLEWIGDIDPNDGDILYNQKFRDRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWAYYFDYWGQGTTVTVSS
（配列番号１０）。
【０１０７】
Ａｂ−９の重鎖可変領域：
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNLDWLRQAPGEGLEWIGDIDPNNGDILYNQKFRDRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWAYYFDYWGQGTTVTVSS
（配列番号１１）。
【０１０８】
Ａｂ−１０の重鎖可変領域：
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNLDWVRQAPGQGLEWMGDIDPNNGDILYNQKFRDRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWAYYFDYWGQGTTVTVSS
（配列番号１２）。
【０１０９】
２）各抗体の重鎖定常領域は、以下の配列から任意に選択される：
ヒトＩｇＧ４の重鎖定常領域（Ｋは存在しなかった）：
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG
（配列番号１６）。
【０１１０】
ヒトＩｇＧ４の重鎖定常領域：
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
（配列番号１７）。
【０１１１】
ヒトＩｇＧ２の重鎖定常領域：
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
（配列番号１８）。
【０１１２】
３）Ｌ鎖可変領域：
Ａｂ−５の軽鎖可変領域：
DIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSVSNDVAWYQQKPGKSPKLLIYYTSNRFTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYFCQQDYSSPVTFGGGTKVEIK
（配列番号１３）。
【０１１３】
Ａｂ−９の軽鎖可変領域：
NIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSVSNDVAWYQQKPGKSPKLLIYYTSNRFTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYFCQQDYSSPVTFGGGTKVEIK
（配列番号１４）。
【０１１４】
Ａｂ−１０の軽鎖可変領域：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSVSNDVAWYQQKPGKAPKLLIYYTSNRFTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQDYSSPVTFGGGTKVEIK
（配列番号１５）。
【０１１５】
４）ヒトκ鎖由来の軽鎖定常領域：
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
（配列番号１９）。
【０１１６】
抗体をクローニングし、遺伝子クローニングおよび組換え発現により発現および精製し、次いで結合ＥＬＩＳＡアッセイ、抗原受容体結合のブロッキングアッセイ、Ｂｉａｃｏｒｅ、細胞活性検出などにより検出した。最後に、最良の活性を有するヒト化抗体、Ａｂ−５、Ａｂ−９、およびＡｂ−１０を選択し、配列を以下に示す：
【０１１７】
ヒト化抗体Ａｂ−１０：
重鎖：
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNLDWVRQAPGQGLEWMGDIDPNNGDILYNQKFRDRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWAYYFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
（配列番号２０）。
【０１１８】
軽鎖：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSVSNDVAWYQQKPGKAPKLLIYYTSNRFTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQDYSSPVTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
（配列番号２３）。
【０１１９】
ヒト化抗体Ａｂ−９：
重鎖：
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNLDWLRQAPGEGLEWIGDIDPNNGDILYNQKFRDRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWAYYFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK（配列番号２１）。
【０１２０】
軽鎖：
NIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSVSNDVAWYQQKPGKSPKLLIYYTSNRFTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYFCQQDYSSPVTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
（配列番号２４）。
【０１２１】
ヒト化抗体Ａｂ−５：
重鎖：
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNLDWLRQAPGEGLEWIGDIDPNDGDILYNQKFRDRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWAYYFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG(K)
（配列番号２２）。
注：ヒト化抗体Ａｂ−５の重鎖配列の末端のＫは、抗体発現の間に切断され得るので、Ｋは、最終製品の重鎖の末端に存在するか、または存在し得ないが、これは、産物自体のパフォーマンスに影響を及ぼさない。
【０１２２】
軽鎖：
DIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSVSNDVAWYQQKPGKSPKLLIYYTSNRFTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYFCQQDYSSPVTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
（配列番号２５）。
【０１２３】
医薬組成物（配合組成）の調製方法の例
工程１：抗ＳＯＳＴ抗体（Ａｂ−５など）および安定剤を含む抗ＳＯＳＴ抗体を含む薬物溶液を調製し、濾過し、無菌試験のために溶液をサンプリングする。薬物溶液を０．２２μｍのＰＶＤＦフィルタに通し、濾液を回収した。
【０１２４】
工程２：濾液を１．１ｍｌのロード容量に調整し、栓を備えた２ｍｌのバイアルに濾液をロードし、ロード操作の開始時、中間時、および終了時にそれぞれ試料採取することによって容量差を検出する。
【０１２５】
工程３：キャップ装置を用いてアルミニウムキャップをキャップする。
【０１２６】
工程４：目視検査を行い、不正確なロードなどの欠陥があるかどうかを確認する。ラベルをバイアルに印刷して貼り付ける。バイアルを用紙トレイに配設し、用紙トレイでラベルを印刷して貼り付ける。
【０１２７】
（第３実施形態）．スクリーニング緩衝系
８０ｍｇ／ｍｌのタンパク質濃度を有する抗ＳＯＳＴ抗体Ａｂ−５配合組成試料を、以下の緩衝液を用いて調製した：
１）１０ｍＭ酢酸−酢酸ナトリウム、ｐＨ５．０、
２）１０ｍＭヒスチジン−酢酸、ｐＨ５．０、
３）１０ｍＭヒスチジン−酢酸、ｐＨ５．５、
４）１０ｍＭリン酸水素二ナトリウム−クエン酸、ｐＨ５．５
５）１０ｍＭリン酸水素二ナトリウム−クエン酸、ｐＨ７．０
６）１０ｍＭリン酸水素二ナトリウム−クエン酸、ｐＨ７．５
抗ＳＯＳＴ抗体Ａｂ−５をｐＨ７．０および７．５緩衝液中で置き換えると、他ンパク質は完全に沈殿した。その等電点領域と組み合わせると、緩衝液のｐＨは５．５以下であるべきであることを示す。
【０１２８】
交換に成功した配合組成試料を、１．５ｍＬ／バイアルの体積で２ｍＬバイアルに充填し、塩素化ブチルゴム栓で密封し、振盪（２５℃、３００ｒｐｍ）して、安定性を監視した。３日間振盪した後、リン酸水素二ナトリウム−クエン酸（ｐＨ５．５）系も完全に濁っていた。ヒスチジン−酢酸系は振盪後に乳白色の外観を示し、酢酸系は少量の析出物を示した。ＳＥＣ純度は、両方の系において有意に変化しなかった。従って、抗ＳＯＳＴ抗体配合組成のための緩衝系は、ヒスチジン−酢酸系または酢酸−酢酸ナトリウム系であり得、そしてｐＨの範囲はｐＨ５．０〜５．５とすべきである。これらの中で、酢酸−酢酸ナトリウム（ｐＨ５．０）は比較的良好な緩衝系である。表３参照：
【０１２９】
【表３】
2020528411.tif 000004
【０１３０】
８５ｍｇ／ｍｌの抗ＳＯＳＴ抗体配合組成試料を、以下の緩衝液を用いて調製した：
１）１０ｍＭ酢酸−酢酸ナトリウム、ｐＨ４．８、
２）１０ｍＭ酢酸−酢酸ナトリウム、ｐＨ５．０、
３）１０ｍＭ酢酸−酢酸ナトリウム、ｐＨ５．２、
４）３０ｍＭ酢酸−酢酸ナトリウム、ｐＨ５．０、
５）１０ｍＭコハク酸−コハク酸ナトリウム、ｐＨ５．０。
【０１３１】
配合組成試料を１．５ｍＬ／バイアルの体積で２ｍＬバイアルに充填し、塩素化ブチルゴム栓で密封し、振盪（２５℃、３００ｒｐｍ）し、照らし（４５００Ｌｘ）、安定性を監視した。３日間振盪した後、１０ｍＭ酢酸−酢酸ナトリウム（ｐＨ４．８）系および１０ｍＭコハク酸−コハク酸ナトリウム（ｐＨ５．０）系は完全に濁っていた。１０ｍＭ酢酸−酢酸ナトリウム（ｐＨ５．０）および３０ｍＭ酢酸−酢酸ナトリウム（ｐＨ５．０）系の安定性は比較的良好であり、２つの系の間に有意差はなかった。１０日間の露光後、１０ｍＭ酢酸−酢酸ナトリウム（ｐＨ５．０）および１０ｍＭ酢酸−酢酸ナトリウム（ｐＨ５．２）系に含まれる抗ＳＯＳＴ抗体のＩＥＣメインピーク純度は、他の３グループよりも低下した。したがって、抗ＳＯＳＴ抗体配合組成の最適緩衝系は酢酸−酢酸ナトリウム系であり、濃度は１０〜３０ｍＭ、望ましくは１０ｍＭとなり、ｐＨは４．８より大きくなるはずである。
【０１３２】
【表４】
2020528411.tif 000005
【０１３３】
【表５】
2020528411.tif 000006
【０１３４】
（第４実施形態）．配合組成中の糖類のスクリーニング
抗ＳＯＳＴ抗体溶液は、１０ｍＭのコハク酸−コハク酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）中で調製され、ここで、Ａｂ−５タンパク質の濃度は１ｍｇ／ｍｌであり、そして溶液は、それぞれ、４．５％、６％、７．５％および９％のα、α−二水和物トレハロースまたは６％のショ糖を含む。種々の配合組成に含まれる抗ＳＯＳＴ抗体の耐熱安定性を、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）によって測定した。その結果、抗ＳＯＳＴ抗体Ａｂ‐５の最初の変性温度（Ｔｍｏｎｓｅｔ）は糖類濃度の増加に伴って徐々に増加し、トレハロース中のＴｍｏｎｓｅｔはショ糖のそれより有意に高かった。抗ＳＯＳＴ抗体は、比較的高濃度のトレハロースを有する配合組成において、より良好な耐熱安定性を有することが示唆される。
【０１３５】
注射液に必要な浸透圧を考慮すると、８％α，α−二水和物トレハロースが最も好ましい条件であると考えられる。
【０１３６】
【表６】
2020528411.tif 000007
注意：本開示において、６％の糖濃度は６０ｍｇ／ｍｌ当量にされ；９％の濃度は９０ｍｇ／ｍｌ当量にされ、他の単位変換はこの規則に従う。
【０１３７】
（第５実施形態）．配合組成のスクリーニング粘度調整剤
配合組成の粘度を下げるために、３０ｍｇ／ｍｌの抗ＳＯＳＴ抗体、１０ｍＭの酢酸−酢酸ナトリウム、ｐＨ５．０を含む液に以下の粘度調整剤を加え、粘度を下げることができ、限外濾過効率が向上するかどうかを調べた。
１）９０ｍｇ／ｍｌのα、α−二水和物トレハロース
２）７０ｍｇ／ｍｌのα、α−二水和物トレハロース＋４０ｍＭ塩化ナトリウム
３）９０ｍｇ／ｍｌのα、α−二水和物トレハロース＋１０ｍＭ塩化カルシウム
４）９０ｍｇ／ｍｌのα、α−二水和物トレハロース＋１０ｍＭ塩化マグネシウム
５）１５０ｍＭ塩化ナトリウム
６）１４０ｍＭ塩酸アルギニン
７）１０ｍＭ酢酸カルシウム
８）２０ｍＭ塩化カルシウム
９）４．５ｍＭ塩化カルシウム
【０１３８】
実験結果は、糖類が限外濾過効率を改善するのに役立たないことを示した。塩化ナトリウムおよび塩酸アルギニンは、適度に限外濾過効率を高めることができ、一方、カルシウムおよびマグネシウム塩類は、限外濾過効率を大幅に改善した。これらの中で、カルシウム塩の濃度は４．５〜２０ｍＭの範囲であり、この範囲では限外濾過率に有意差はなかった。
【０１３９】
（第６実施形態）．配合組成のスクリーニング界面活性剤
異なる蛋白質濃度を含む抗ＳＯＳＴ抗体配合組成試料を、異なる濃度およびタイプの界面活性剤を有する緩衝液中で調製し、緩衝液は、１０ｍＭ酢酸−酢酸ナトリウム（ｐＨ５．０）、４．５ｍＭ塩化カルシウム、８０ｍｇ／ｍｌのα、α−二水和物トレハロースを含む。ＤｏＥによる実験設計・解析の範囲は以下のとおりである：
１）タンパク濃度：８０〜１００ｍｇ／ｍｌ、
２）界面活性剤の種類：ポリソルベート２０（ＰＳ２０）、ポリソルベート８０（ＰＳ８０）、
３）ポリソルベート濃度：０．０２〜０．８ｍｇ／ｍｌ。
【０１４０】
配合組成を１．２ｍｌ／分岐の１ｍｌのＢＤ投与シリンジに加え、２５℃／３００ｒｐｍ／１２日で振盪した。結果は、振盪の１２日後にＳＥＣ、非還元ＣＥ−ＳＤＳおよびＩＥＣアッセイによる純度に有意な変化がないことを示した。結果は、薬物送達装置によるＳＯＳＴ抗体配合組成の良好相溶性を示す。同時に、ＭＦＩを用いて、２μｍより大きいサブ可視粒子の数およびその変化を検出し、種々の配合組成間で有意差を示した。ＤｏＥフィッティング結果（有効フィッティングモデル）によれば、ポリソルベート８０および９６ｍｇ／ｍｌより高いタンパク質濃度を用いることにより、粒子数の増加を５００個以内に制御することができる。また、ポリソルベート８０の濃度を約０．３〜０．６ｍｇ／ｍｌとした場合、配合組成中の粒子数は少なくとも０点であった。
【０１４１】
【表７】
2020528411.tif 000008
【０１４２】
【表８】
2020528411.tif 000009
【０１４３】
（第７実施形態）．配合組成の成分の安定性に関する研究
Ａｂ−５を、４．５ｍＭ塩化カルシウム、８０ｍｇ／ｍＬのα、α−二水和物トレハロースまたはショ糖、０．４ｍｇ／ｍＬポリソルベート２０または８０を含む１０ｍＭ酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．０）中１００ｍｇ／ｍＬで調製した。配合組成を１．５ｍＬ／ボトルの２ｍＬバイアルに充填し、塩素化ブチルゴム栓で密封し、それぞれ２５℃および２〜８℃に置いて、安定性を監視した。結果は、２〜８℃で６か月間置いた後、ポリソルベート２０を含む配合組成中に大量の小粒子が現れたことを示し、これは抗ＳＯＳＴ抗体Ａｂ‐５配合組成には適していなかった。ポリソルベート８０を含む配合組成に関して、トレハロースとショ糖との間に有意差はなく、配合組成は２５℃で３ヶ月間、または２〜８℃で６ヶ月間、良好な安定性を示した。
【０１４４】
【表９】
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【０１４５】
【表１０】
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【０１４６】
（第８実施形態）．配合組成の凍結乾燥
抗ＳＯＳＴ抗体配合組成試料は、１０ｍＭ酢酸−酢酸ナトリウム（ｐＨ５．０）、８０ｍｇ／ｍｌトレハロース、０．４ｍｇ／ｍｌポリソルベート８０、および４．５ｍＭ塩化カルシウムを含む緩衝液中で調製し、抗ＳＯＳＴ抗体蛋白質の濃度は１００ｍｇ／ｍｌであった。配合組成を１．１ｍＬ／バイアルで、２ｍＬバイアルに充填し、凍結乾燥箱に入れ、凍結乾燥した。凍結乾燥手順は、予備凍結、一次乾燥、および二次乾燥を含む。凍結乾燥手順が終了した後、プラグを真空下で挿入した。再構成した試料を凍結乾燥法の前後で比較した。結果は、再構成された溶液が液状配合組成の良好性能を維持することを示した。
【０１４７】
【表１１】
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【０１４８】
（第９実施形態）．代替配合組成
本発明によって提供される安定な医薬配合組成物はまた、以下の
（１）１２０ｍｇ／ｍｌ抗ＳＯＳＴ抗体Ａｂ−５、９５ｍｇ／ｍｌトレハロース、０．５ｍｇ／ｍｌポリソルベート８０、５ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液および１５ｍＭ塩化カルシウム、最終ｐＨ５．５；
（２）１２０ｍｇ／ｍｌの抗ＳＯＳＴ抗体Ａｂ−５、９５ｍｇ／ｍｌのトレハロース、０．５ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０、５ｍＭの酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液および１５ｍＭの塩化カルシウム、最終ｐＨ５．４；
（３）１２０ｍｇ／ｍｌの抗ＳＯＳＴ抗体Ａｂ−５、９５ｍｇ／ｍｌのトレハロース、０．５ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０、５ｍＭの酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液および１５ｍＭの塩化カルシウム、最終ｐＨ５．３；
（４）１２０ｍｇ／ｍｌの抗ＳＯＳＴ抗体Ａｂ−５、９５ｍｇ／ｍｌのトレハロース、０．５ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０、５ｍＭの酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液および１５ｍＭの塩化カルシウム、最終ｐＨは５．１である；
（５）１２０ｍｇ／ｍｌの抗ＳＯＳＴ抗体Ａｂ−５、９５ｍｇ／ｍｌのトレハロース、０．５ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０、５ｍＭの酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液および１５ｍＭの塩化カルシウム、最終ｐＨ４．９；
（６）１２０ｍｇ／ｍｌの抗ＳＯＳＴ抗体Ａｂ−５、９５ｍｇ／ｍｌのトレハロース、０．５ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０、５ｍＭの酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液および１５ｍＭの塩化カルシウム、最終ｐＨ４．８；
（７）１１０ｍｇ／ｍｌ抗ＳＯＳＴ抗体Ａｂ−５、４０ｍｇ／ｍｌトレハロース、０．５ｍｇ／ｍｌポリソルベート８０、２０ｍＭ酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液および７．５ｍＭ塩化カルシウム、最終ｐＨ５．４；
（８）１１０ｍｇ／ｍｌ抗ＳＯＳＴ抗体Ａｂ−５、４０ｍｇ／ｍｌトレハロース、０．５ｍｇ／ｍｌポリソルベート８０、２０ｍＭ酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液および７．５ｍＭ塩化カルシウム、最終ｐＨ５．３；
（９）１１０ｍｇ／ｍｌ抗ＳＯＳＴ抗体Ａｂ−５、４０ｍｇ／ｍｌトレハロース、０．５ｍｇ／ｍｌポリソルベート８０、２０ｍＭ酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液および７．５ｍＭ塩化カルシウム、最終ｐＨ５．１；
（１０）１１０ｍｇ／ｍｌ抗ＳＯＳＴ抗体Ａｂ−５、４０ｍｇ／ｍｌトレハロース、０．５ｍｇ／ｍｌポリソルベート８０、２０ｍＭ酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液および７．５ｍＭ塩化カルシウム、最終ｐＨ４．９；
（１１）１００ｍｇ／ｍｌの抗ＳＯＳＴ抗体Ａｂ−５、５０ｍｇ／ｍｌのトレハロース、０．５ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０、２０ｍＭの酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液および６．０ｍＭの塩化カルシウム、最終ｐＨ４．９；
（１２）１００ｍｇ／ｍｌの抗ＳＯＳＴ抗体Ａｂ−５、５０ｍｇ／ｍｌのトレハロース、０．５ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０、２０ｍＭの酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液および６．０ｍＭの塩化カルシウム、最終ｐＨ５．１；
（１３）１００ｍｇ／ｍｌの抗ＳＯＳＴ抗体Ａｂ−５、５０ｍｇ／ｍｌのトレハロース、０．５ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０、２０ｍＭの酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液および６．０ｍＭの塩化カルシウム、最終ｐＨ５．３；
（１４）１００ｍｇ／ｍｌ抗ＳＯＳＴ抗体Ａｂ−５、５０ｍｇ／ｍｌトレハロース、０．５ｍｇ／ｍｌポリソルベート８０、２０ｍＭ酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液および６．０ｍＭ塩化カルシウム、最終ｐＨ５．４。
（１５）９０ｍｇ／ｍｌ抗ＳＯＳＴ抗体Ａｂ−５、４０ｍｇ／ｍｌトレハロース、０．３ｍｇ／ｍｌポリソルベート８０、５ｍＭ酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．８）および１５ｍＭ塩化カルシウム；
（１６）１１０ｍｇ／ｍｌ抗ＳＯＳＴ抗体Ａｂ−５、９５ｍｇ／ｍｌトレハロース、０．６ｍｇ／ｍｌポリソルベート８０、２０ｍＭ酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）および２０ｍＭ塩化カルシウム；
（１７）１００ｍｇ／ｍｌ抗ＳＯＳＴ抗体Ａｂ−５、８０ｍｇ／ｍｌトレハロース、０．４ｍｇ／ｍｌポリソルベート８０、１０ｍＭ酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．０）および４．５ｍＭ塩化カルシウム；
から選択される安定な組み合わせであってもよい。
【配列表】
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【国際調査報告】
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