(57)【要約】本開示は、関連共免疫調節ポリペプチドに対する低い結合親和性を示す免疫調節ポリペプチドを含むＴ細胞調節多量体ポリペプチドを提供する。Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドは、Ｔ細胞の活性を調節するのに、また個体における免疫応答を調節するのに有用である。2020533273.tif 000199
2020533273.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）第１のポリペプチドおよび（ｂ）第２のポリペプチドを含む、Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドであって、
（ａ）第１のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順に、（ｉ）エピトープおよび（ｉｉ）第１の主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）ポリペプチドを含み、
（ｂ）第２のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順に、（ｉ）第２のＭＨＣポリペプチドおよび（ｉｉ）任意選択的に免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチドまたは非Ｉｇスキャフォールドを含み、
前記多量体ポリペプチドは１つまたは複数の免疫調節ドメインを含み、前記１つまたは複数の免疫調節ドメインのうちの少なくとも１つは、
（Ａ）前記第１のポリペプチドのＣ末端にあるか、
（Ｂ）前記第２のポリペプチドのＮ末端にあるか、
（Ｃ）前記第２のポリペプチドのＣ末端にあるか、または、
（Ｄ）前記第１のポリペプチドのＣ末端および前記第２のポリペプチドのＮ末端にあり、
前記１つまたは複数の免疫調節ドメインのうちの少なくとも１つは、関連共免疫調節ポリペプチドに対する対応する野生型免疫調節ポリペプチドの親和性と比較して、前記関連共免疫調節ポリペプチドに対する低い親和性を示す変異免疫調節ポリペプチドであり、
前記エピトープは、
（ｉ）前記Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドが第２のＴ細胞に結合する親和性よりも少なくとも２５％高い親和性で、前記Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドが第１のＴ細胞に結合し、ここで、第１のＴ細胞は、前記関連共免疫調節ポリペプチドと、前記エピトープに少なくとも１０−７Ｍの親和性で結合するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）とを、その表面上に発現し、ここで、第２のＴ細胞は、前記関連共免疫調節ポリペプチドをその表面上に発現するが、前記エピトープに少なくとも１０−７Ｍの親和性で結合するＴＣＲをその表面上に発現しない
ように、かつ／または、
（ｉｉ）関連共免疫調節ポリペプチドに対する、野生型免疫調節ポリペプチドを含む対照Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドの結合親和性と、前記関連共免疫調節ポリペプチドに対する、前記野生型免疫調節ポリペプチドの変異体を含む前記Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドの結合親和性の比率が、バイオレイヤー干渉法で測定して１．５：１〜１０６：１の範囲内である
ように、Ｔ細胞上のＴＣＲに少なくとも１０−７Ｍの親和性で結合する、
前記Ｔ細胞調節多量体ポリペプチド。
【請求項２】
（ａ）前記Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドが、それが前記第２のＴ細胞に結合する親和性よりも少なくとも５０％、少なくとも２倍、少なくとも５倍、もしくは少なくとも１０倍高い親和性で、前記第１のＴ細胞に結合する、および／または、
（ｂ）前記変異免疫調節ポリペプチドが、約１０−４Ｍ〜約１０−７Ｍ、約１０−４Ｍ〜約１０−６Ｍ、約１０−４Ｍ〜約１０−５Ｍの親和性で、前記共免疫調節ポリペプチドに結合する、および／または、
（ｃ）関連共免疫調節ポリペプチドに対する、野生型免疫調節ポリペプチドを含む対照Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドの結合親和性と、前記関連共免疫調節ポリペプチドに対する、前記野生型免疫調節ポリペプチドの変異体を含む前記Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドの結合親和性の比率が、バイオレイヤー干渉法で測定して少なくとも１０：１、少なくとも５０：１、少なくとも１０２：１、もしくは、少なくとも１０３：１である、
請求項１に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【請求項３】
前記第２のポリペプチドがＩｇ  Ｆｃポリペプチドを含み、任意選択的に、前記Ｉｇ  Ｆｃポリペプチド、任意選択的に、ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドが、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、およびＰ３３１Ｓから選択される１つまたは複数のアミノ酸置換を含む、請求項１または請求項２に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【請求項４】
前記第１のポリペプチドが、前記エピトープと前記第１のＭＨＣポリペプチドとの間にペプチドリンカーを含む、および／または、前記第１のポリペプチドが、前記変異免疫調節ポリペプチドと前記第２のＭＨＣポリペプチドとの間にペプチドリンカーを含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【請求項５】
前記変異免疫調節ポリペプチドの２つ以上のコピーを含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【請求項６】
前記野生型免疫調節ポリペプチドが、ＩＬ−２、４−１ＢＢＬ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＯＸ−４０Ｌ、ＦａｓＬ、ＪＡＧ１、ＴＧＦβ、ＣＤ７０、およびＩＣＡＭからなる群から選択される、請求項１〜５のいずれか１項に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【請求項７】
（ａ）前記第１のＭＨＣポリペプチドがβ２−ミクログロブリンポリペプチドであり、前記第２のＭＨＣポリペプチドがＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドである、または、
（ｂ）前記第１のＭＨＣポリペプチドがＭＨＣクラスＩＩα鎖ポリペプチドであり、前記第２のＭＨＣポリペプチドがＭＨＣクラスＩＩβ鎖ポリペプチドである、
請求項１〜６のいずれか１項に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【請求項８】
多量体ポリペプチドがＦｃポリペプチドを含み、前記Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドが、ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＧ２  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＧ３  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＧ４  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＡ  Ｆｃポリペプチド、またはＩｇＭ  Ｆｃポリペプチドである、請求項１〜７のいずれか１項に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【請求項９】
（ａ）前記第１のポリペプチドと前記第２のポリペプチドが非共有結合している、または、
（ｂ）前記第１のポリペプチドと前記第２のポリペプチドが互いに共有結合しており、任意選択的に、前記共有結合はジスルフィド結合を介している、
請求項１〜８のいずれか１項に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【請求項１０】
前記エピトープががんエピトープである、請求項１〜９のいずれか１項に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【請求項１１】
前記第１のポリペプチドと前記第２のポリペプチドの一方がＩｇ  Ｆｃポリペプチドを含み、前記Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドには薬物がコンジュゲートしている、請求項１〜１０のいずれか１項に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【請求項１２】
結合親和性がバイオレイヤー干渉法で測定される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【請求項１３】
（Ａ）第１のヘテロ二量体および（Ｂ）第２のヘテロ二量体を含む、多量体Ｔ細胞調節ポリペプチドであって、
（Ａ）第１のヘテロ二量体は、（ａ）第１のポリペプチドおよび（ｂ）第２のポリペプチドを含み、
（ａ）第１のポリペプチドは、（ｉ）ペプチドエピトープおよび（ｉｉ）第１の主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）ポリペプチドを含み、
（ｂ）第２のポリペプチドは、（ｉ）第２のＭＨＣポリペプチドを含み、
前記第１のヘテロ二量体は、１つまたは複数の免疫調節ポリペプチドを含み、
（Ｂ）第２のヘテロ二量体は、（ａ）第１のポリペプチドおよび（ｂ）第２のポリペプチドを含み、
（ａ）第１のポリペプチドは、（ｉ）ペプチドエピトープおよび（ｉｉ）第１のＭＨＣポリペプチドを含み、
（ｂ）第２のポリペプチドは、（ｉ）第２のＭＨＣポリペプチドを含み、
前記第２のヘテロ二量体は、１つまたは複数の免疫調節ポリペプチドを含み、
前記第１のヘテロ二量体と第２のヘテロ二量体は互いに共有結合している、
前記多量体Ｔ細胞調節ポリペプチド。
【請求項１４】
前記第１のヘテロ二量体の前記免疫調節ポリペプチドと前記第２のヘテロ二量体の前記免疫調節ポリペプチドの両方が、ＩＬ−２、４−１ＢＢＬ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＯＸ−４０Ｌ、ＦａｓＬ、ＪＡＧ１、ＴＧＦβ、ＣＤ７０、およびＩＣＡＭからなる群から選択される、請求項１３に記載の多量体Ｔ細胞調節ポリペプチド。
【請求項１５】
請求項１〜１４のいずれか１項に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチドの前記第１および前記第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む、１種または複数種の核酸。
【請求項１６】
（ａ１）請求項１〜１４のいずれか１項に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチドと、
（ｂ１）薬学的に許容される賦形剤と
を含む、または、
（ａ２）請求項１５に記載の１種または複数種の核酸と、
（ｂ２）薬学的に許容される賦形剤と
を含む、
組成物。
【請求項１７】
請求項１〜１４のいずれか１項に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチドの有効量を個体に投与する段階を含む、個体における免疫応答を調節するための方法であって、
前記投与する段階は、エピトープ特異的Ｔ細胞応答およびエピトープ非特異的Ｔ細胞応答を誘導し、
前記エピトープ特異的Ｔ細胞応答と前記エピトープ非特異的Ｔ細胞応答の比率が少なくとも２：１である、
前記方法。
【請求項１８】
標的Ｔ細胞および非標的Ｔ細胞を含むＴ細胞の混合集団を請求項１〜１４のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチドと接触させる段階を含む、共刺激ポリペプチドを標的Ｔ細胞へと選択的に送達するための方法であって、
前記標的Ｔ細胞は、前記多量体ポリペプチド内に存在するエピトープに特異的であり、
前記接触させる段階は、前記多量体ポリペプチド内に存在する前記共刺激ポリペプチドを前記標的Ｔ細胞へと送達する、
前記方法。
【請求項１９】
個体から得たＴ細胞の混合集団において、目的のエピトープに結合する標的Ｔ細胞の存在を検出するための方法であって、
（ａ）Ｔ細胞の前記混合集団を請求項１〜１４のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチドとインビトロで接触させる段階であって、前記多量体ポリペプチドは前記目的のエピトープを含む、段階と、
（ｂ）前記接触させる段階に応答したＴ細胞の活性化および／または増殖を検出する段階であって、活性化および／または増殖Ｔ細胞は前記標的Ｔ細胞の存在を示す、段階と、
を含む、前記方法。
【請求項２０】
関連共免疫調節ポリペプチドに対する対応する親野生型免疫調節ポリペプチドの親和性と比較して、前記関連共免疫調節ポリペプチドに対する低い親和性を示す１つまたは複数の変異免疫調節ポリペプチドを含むＴ細胞調節多量体ポリペプチドを得るための方法であって、
前記方法は、複数のメンバーを含むＴ細胞調節多量体ポリペプチドのライブラリから、前記関連共免疫調節ポリペプチドに対する低い親和性を示すメンバーを選択する段階を含み、
前記複数のメンバーは、（ａ）第１のポリペプチドおよび（ｂ）第２のポリペプチドを含み、
（ａ）第１のポリペプチドは、（ｉ）エピトープおよび（ｉｉ）第１の主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）ポリペプチドを含み、
（ｂ）第２のポリペプチドは、（ｉ）第２のＭＨＣポリペプチドおよび（ｉｉ）任意選択的に免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチドまたは非Ｉｇスキャフォールドを含み、
前記ライブラリの前記メンバーは、前記第１のポリペプチド、前記第２のポリペプチド、または、前記第１のポリペプチドと前記第２のポリペプチドの両方の内部に存在する複数の変異免疫調節ポリペプチドを含む、
前記方法。
【請求項２１】
関連共免疫調節ポリペプチドに対する対応する親野生型免疫調節ポリペプチドの親和性と比較して、前記関連共免疫調節ポリペプチドに対する低い親和性を示す１つまたは複数の変異免疫調節ポリペプチドを含むＴ細胞調節多量体ポリペプチドを得るための方法であって、
（Ａ）複数のメンバーを含むＴ細胞調節多量体ポリペプチドのライブラリを提供する段階であって、
前記複数のメンバーは、（ａ）第１のポリペプチドおよび（ｂ）第２のポリペプチドを含み、
（ａ）第１のポリペプチドは、（ｉ）エピトープおよび（ｉｉ）第１の主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）ポリペプチドを含み、
（ｂ）第２のポリペプチドは、（ｉ）第２のＭＨＣポリペプチドおよび（ｉｉ）任意選択的に免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチドまたは非Ｉｇスキャフォールドを含み、
前記ライブラリの前記メンバーは、前記第１のポリペプチド、前記第２のポリペプチド、または、前記第１のポリペプチドと前記第２のポリペプチドの両方の内部に存在する複数の変異免疫調節ポリペプチドを含む、
段階、および
（Ｂ）前記関連共免疫調節ポリペプチドに対する低い親和性を示すメンバーを前記ライブラリから選択する段階
を含む、前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
相互参照
本出願は、２０１７年９月７日に出願された米国仮特許出願第６２／５５５，４９９号の利益を主張するものであり、その全体は参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
序文
適応免疫応答は、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ、ヒトにおいてはヒト白血球抗原（ＨＬＡ）複合体とも呼ばれる）による、Ｔ細胞の表面上に存在するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）の、抗原提示細胞（ＡＰＣ）の表面上に非共有提示された低分子ペプチド抗原との結合によって行われる。この結合は免疫系の標的化機構を表し、Ｔ細胞調節（活性化または抑制）とエフェクター機能に必要不可欠な分子相互作用である。エピトープ特異的な細胞標的化に続き、標的化Ｔ細胞は、ＡＰＣ上に存在する共刺激タンパク質の、Ｔ細胞上の対応共刺激タンパク質との結合により活性化される。エピトープ／ＴＣＲ結合と、ＡＰＣ共刺激タンパク質のＴ細胞共刺激タンパク質との結合の両方のシグナルは、Ｔ細胞の特異性および活性化または抑制を駆動するのに必要とされる。ＴＣＲは任意のエピトープに特異的であるが、共刺激タンパク質はエピトープ特異的ではなく、その代わりに、全てのＴ細胞上または多くのＴ細胞サブセット上に概ね発現している。
【発明の概要】
【０００３】
概要
本開示は、関連共免疫調節ポリペプチドに対する低い結合親和性を示す免疫調節ポリペプチドを含むＴ細胞調節多量体ポリペプチド（ＴＭＭＰ）を提供する。ＴＭＭＰは、Ｔ細胞の活性を調節するのに、また個体における免疫応答を調節するのに有用である。
【図面の簡単な説明】
【０００４】
【図１】本開示のＴ細胞調節多量体ポリペプチドによる、エピトープ非特異的Ｔ細胞と比較して優先的な、エピトープ特異的Ｔ細胞の活性化を示す図である。
【図２−１】図２Ａ〜Ｇは免疫グロブリンＦｃポリペプチドのアミノ酸配列を提供する図である。
【図２−２】図２−１の説明を参照のこと。
【図２−３】図２−１の説明を参照のこと。
【図２−４】図２−１の説明を参照のこと。
【図３−１】図３Ａ〜Ｃはヒト白血球抗原（ＨＬＡ）クラスＩ重鎖ポリペプチドのアミノ酸配列を提供する図である。シグナル配列には下線を付している。
【図３−２】図３−１の説明を参照のこと。
【図４】ホモサピエンス（ＮＰ＿００４０３９．１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４９）、チンパンジー（ＮＰ＿００１００９０６６．１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４９）、アカゲザル（ＮＰ＿００１０４０６０２．１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５０）、ウシ（ＮＰ＿７７６３１８．１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５１）、および、ハツカネズミ（ＮＰ＿０３３８６５．２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２）に由来する、β−２ミクログロブリン（β２Ｍ）前駆体（すなわち、リーダー配列を含む）のマルチプルアミノ酸配列アライメントを提供する図である。アミノ酸１〜２０はシグナルペプチドである。
【図５−１】図５Ａ〜Ｋは好適なＨＬＡ重鎖の例のアミノ酸配列を提供する図である。
【図５−２】図５−１の説明を参照のこと。
【図５−３】図５−１の説明を参照のこと。
【図５−４】図５−１の説明を参照のこと。
【図６】図６Ａ〜Ｄは本開示のＴ細胞調節多量体ポリペプチドの概略図である。
【図７】図７Ａ〜Ｄは本開示のジスルフィド結合Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドの概略図である。
【図８−１】図８は１１種の成熟ＭＨＣクラスＩ重鎖ペプチド配列（それらのリーダー配列または膜貫通ドメインは含まない）のアライメントを提供する図である。
【図８−２】図８−１の説明を参照のこと。
【発明を実施するための形態】
【０００５】
定義
用語「ポリヌクレオチド」および「核酸」は、本明細書において同じ意味で用いられ、任意の長さを有するヌクレオチドのポリマー形態（リボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドのいずれか）のことを意味する。それゆえ、この用語は、一本鎖、二本鎖、もしくは多本鎖のＤＮＡもしくはＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッド、または、プリン塩基およびピリミジン塩基、もしくは、その他の天然ヌクレオチド塩基、化学的に修飾したヌクレオチド塩基もしくは生化学的に修飾したヌクレオチド塩基、非天然ヌクレオチド塩基、もしくは誘導体化されたヌクレオチド塩基を含むポリマー、を含むがこれらに限定されない。
【０００６】
用語「ペプチド」、「ポリペプチド」および「タンパク質」は、本明細書において同じ意味で用いられ、任意の長さを有するアミノ酸のポリマー形態のことを意味し、コードおよび非コードアミノ酸、化学的にもしくは生化学的に修飾もしくは誘導体化されたアミノ酸、および、修飾ペプチド主鎖を有するポリペプチドを含んでいてもよい。
【０００７】
ポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、別のポリヌクレオチドまたはポリペプチドに対する特定のパーセント「配列同一性」を有し、そのことは、アラインして２つの配列を比較する際に、塩基またはアミノ酸のパーセンテージが同一であり、同一の相対位置にあることを意味する。配列同一性については多数の異なる方法を用いて測定することができる。配列同一性を測定するために、様々な簡便な方法、および、ｗｏｒｌｄ  ｗｉｄｅ  ｗｅｂにおいて、ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｌｉ．ｇｏｖ／ＢＬＡＳＴ、ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｍｓａ／ｔｃｏｆｆｅｅ／、ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｍｓａ／ｍｕｓｃｌｅ／、ｍａｆｆｔ．ｃｂｒｃ．ｊｐ／ａｌｉｇｎｍｅｎｔ／ｓｏｆｔｗａｒｅ／を含むサイトで利用可能なコンピュータプログラム（例えば、ＢＬＡＳＴ、Ｔ−ＣＯＦＦＥＥ、ＭＵＳＣＬＥ、ＭＡＦＦＴなど）を使用して配列をアラインしてもよい。例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０），Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｉ．２１５：４０３−１０を参照されたい。
【０００８】
用語「保存的アミノ酸置換」とは、類似した側鎖を有するアミノ酸残基のタンパク質における互換性のことを意味する。例えば、脂肪族側鎖を有するアミノ酸の基は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、およびイソロイシンから構成され、脂肪族ヒドロキシル側鎖を有するアミノ酸の基はセリンおよびスレオニンから構成され、アミド含有側鎖を有するアミノ酸の基はアスパラギンおよびグルタミンから構成され、芳香族側鎖を有するアミノ酸の基は、フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファンから構成され、塩基性側鎖を有するアミノ酸の基は、リジン、アルギニン、およびヒスチジンから構成され、酸性側鎖を有するアミノ酸の基はグルタミン酸およびアスパラギン酸から構成され、硫黄含有側鎖を有するアミノ酸の基はシステインおよびメチオニンから構成される。例示的な保存的アミノ酸置換基は、バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リジン−アルギニン、アラニン−バリン−グリシン、およびアスパラギン−グルタミンである。
【０００９】
本明細書で使用する場合、用語「免疫学的シナプス」または「免疫シナプス」とは一般に、適応免疫応答の２つの相互作用する免疫細胞間の自然境界面（例えば、抗原提示細胞（ＡＰＣ）または標的細胞と、エフェクター細胞（例えば、リンパ球）、エフェクターＴ細胞、ナチュラルキラー細胞などの間の境界面を含む）のことを意味する。ＡＰＣとＴ細胞の間の免疫学的シナプスは通常、例えば、Ｂｒｏｍｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００１；１９：３７５−９６（その開示全体は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているように、Ｔ細胞抗原受容体と主要組織適合遺伝子複合体分子の相互作用によって開始される。
【００１０】
「Ｔ細胞」は、ＣＤ３を発現する全てのタイプの免疫細胞を含み、例えば、ヘルパーＴ細胞（ＣＤ４＋細胞）、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＤ８＋細胞）、Ｔ抑制細胞（Ｔｒｅｇ）、およびＮＫ−Ｔ細胞を含む。
【００１１】
本明細書で使用する場合、用語「免疫調節ポリペプチド」（「共刺激ポリペプチド」とも呼ばれる）としては、Ｔ細胞上の関連共免疫調節ポリペプチドに特異的に結合し、それにより、例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体がペプチド結合主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）ポリペプチドと結合することによりもたらされた一次シグナルに加えて、増殖、活性化、分化などを含むがこれらに限定されないＴ細胞応答を介在するシグナルをもたらす、抗原提示細胞（ＡＰＣ）（例えば、樹状細胞、Ｂ細胞など）上のポリペプチドが挙げられる。免疫調節ポリペプチドとしては、ＣＤ７、Ｂ７−１（ＣＤ８０）、Ｂ７−２（ＣＤ８６）、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、４−１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、Ｆａｓリガンド（ＦａｓＬ）、誘導性共刺激リガンド（ＩＣＯＳ−Ｌ）、細胞間接着分子（ＩＣＡＭ）、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８３、ＨＬＡ−Ｇ、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＨＶＥＭ、リンフォトキシンβ受容体、３／ＴＲ６、ＩＬＴ３、ＩＬＴ４、ＨＶＥＭ、Ｔｏｌｌリガンド受容体に結合するアゴニストまたは抗体、および、Ｂ７−Ｈ３に特異的に結合するリガンドを挙げることができるがこれらに限定されない。
【００１２】
上に記載したように、「免疫調節ポリペプチド」（本明細書ではまた「ＭＯＤ」と呼ぶ）は、Ｔ細胞上の関連共免疫調節ポリペプチドに特異的に結合する。
【００１３】
本開示のＴ細胞調節多量体ポリペプチドの「免疫調節ドメイン」（「ＭＯＤ」）は、標的Ｔ細胞上に存在し得る関連共免疫調節ポリペプチドに結合する。
【００１４】
本発明で使用する場合、「異種の」とは、天然の核酸またはタンパク質それぞれには見られない、ヌクレオチドまたはポリペプチドのことを意味する。
【００１５】
本明細書で使用する場合、「組換え」とは、特定の核酸（ＤＮＡまたはＲＮＡ）が、天然系に存在する内因性核酸と識別することが可能な構造コードまたは非コード配列を有する構築物をもたらすクローニング工程、制限工程、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）工程および／またはライゲーション工程の様々な組み合わせによる生成物であることを意味する。ポリペプチドをコードするＤＮＡ配列を、ｃＤＮＡフラグメントまたは一続きの合成オリゴヌクレオチドからアセンブルして、細胞内または無細胞転写および翻訳系内に含まれる組換え転写単位が発現可能な合成核酸を得てもよい。
【００１６】
用語「組換え発現ベクター」または「ＤＮＡ構築物」は本明細書において同じ意味で用いられ、ベクターと１つのインサートを含むＤＮＡ分子のことを意味する。組換え発現ベクターは通常、インサート（複数可）を発現および／または増殖させることを目的として、または、その他の組換えヌクレオチド配列を構築するために、作製される。インサート（複数可）は、プロモーター配列に機能的に連結してもしなくてもよく、ＤＮＡ調節配列に機能的に連結してもしなくてもよい。
【００１７】
本発明で使用する場合、用語「親和性」とは、２つの物質（例えば、抗体および抗原）の可逆結合における平衡定数のことを意味し、また解離定数（ＫＤ）で表される。親和性は、無関係なアミノ酸配列に対する抗体親和性の、少なくとも１倍超、少なくとも２倍超、少なくとも３倍超、少なくとも４倍超、少なくとも５倍超、少なくとも６倍超、少なくとも７倍超、少なくとも８倍超、少なくとも９倍超、少なくとも１０倍超、少なくとも２０倍超、少なくとも３０倍超、少なくとも４０倍超、少なくとも５０倍超、少なくとも６０倍超、少なくとも７０倍超、少なくとも８０倍超、少なくとも９０倍超、少なくとも１００倍超、もしくは、少なくとも１，０００倍超、またはそれ以上であってもよい。標的タンパク質に対する抗体の親和性は、例えば、約１００ナノモル（ｎＭ）〜約０．１ｎＭ、約１００ｎＭ〜約１ピコモル（ｐＭ）、もしくは、約１００ｎＭ〜約１フェムトモル（ｆＭ）、またはそれ以上であってもよい。本明細書で使用する場合、用語「結合力」とは、希釈後における、２つ以上の物質の複合体の解離に対する抵抗力のことを意味する。用語「免疫反応性」および「優先的に結合する」は、抗体および／または抗原結合フラグメントに関し、本明細書において同じ意味で用いられる。
【００１８】
本明細書で使用する場合（例えば、Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドのＴ細胞上のポリペプチド（例えば、Ｔ細胞受容体）への結合に関して）、用語「結合」とは、２つの分子間の非共有結合相互作用のことを意味する。非共有結合とは、例えば、塩橋および水素橋などの相互作用を含む、静電結合、疎水結合、イオン結合および／または水素結合の相互作用による、２つの分子間の直接会合のことを意味する。非共有結合相互作用は通常、１０−６Ｍ未満、１０−７Ｍ未満、１０−８Ｍ未満、１０−９Ｍ未満、１０−１０Ｍ未満、１０−１１Ｍ未満、１０−１２Ｍ未満、１０−１３Ｍ未満、１０−１４Ｍ未満、または、１０−１５Ｍ未満の解離定数（ＫＤ）を特徴とする。「親和性」とは非共有結合の強度のことを意味し、高い結合親和性は低いＫＤと相関している。「特異的結合」とは通常、少なくとも約１０−７Ｍ以上、例えば、５×１０−７Ｍ、１０−８Ｍ、５×１０−８Ｍ、１０−９Ｍ、および、それより高い親和性を有する結合のことを意味する。「非特異的結合」とは通常、約１０−７Ｍ未満の親和性を有する結合（例えば、１０−６Ｍ、１０−５Ｍ、１０−４Ｍの親和性を有する結合）（例えば、リガンドの指定結合部位または受容体以外の部分へのリガンドの結合）のことを意味する。しかしながら、一部の文脈、例えば、ＴＣＲとペプチド／ＭＨＣ複合体の間の結合において、「特異的結合」は、１μＭ〜１００μＭ、または、１００μＭ〜１ｍＭの範囲内であってもよい。本明細書で使用する場合、「共有結合（ｃｏｖａｌｅｎｔ  ｂｉｎｄｉｎｇ）」または「共有結合（ｃｏｖａｌｅｎｔ  ｂｏｎｄ）」とは、２つの異なる分子間に１つまたは複数の共有化学結合が形成されることを意味する。
【００１９】
本発明で使用する場合、用語「治療」、「治療すること」などは通常、所望の薬理学的効果および／または生理学的効果を得ることを意味する。その効果は、疾患またはその症状を完全にまたは部分的に予防するという観点において予防的であり得、および／または、疾患および／またはその疾患に起因する副作用の部分的または完全な治癒という観点において治療的であり得る。本発明で使用する場合、「治療」は、哺乳動物における疾患または症状の任意の治療を包含し、（ａ）その疾患または症状にかかりやすいが、まだそれを有すると診断されていない対象における疾患または症状の発症を予防すること、（ｂ）その疾患または症状を抑制すること、すなわち、その発症を阻止すること、または、（ｃ）その疾患を軽減すること、すなわち、その疾患を退行させること、を含む。疾患または障害の発症前、その間、またはその後に、治療薬を投与してもよい。進行中の疾患の治療（治療は患者の望ましくない臨床症状を安定化または抑制する）には特に利点がある。このような治療は、望ましくは、罹患組織の機能が完全に喪失される前に実施される。本治療薬は、望ましくは、疾患の症候期中に、場合によっては、疾患の症候期後に投与される。
【００２０】
用語「個体」、「対象」、「宿主」および「患者」は本明細書において同じ意味で用いられ、診断、処置または治療が望まれる任意の哺乳動物対象のことを意味する。哺乳動物としては、例えば、ヒト、非ヒト霊長類、げっ歯類（例えば、ラット、マウス）、ウサギ目（例えば、ウサギ）、有蹄類（例えば、ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマ、ヤギなど）などが挙げられる。
【００２１】
本発明を更に説明する前に、本発明が記載する特定の実施形態に限定されることはなく、それゆえ当然変化し得るということを理解されたい。本明細書で用いる専門用語は、特定の実施形態を説明するためだけのものであり、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されることから、限定することを意図するものではないということを理解されたい。
【００２２】
数値の範囲を提供する場合、その範囲の上限と下限との間にある各介在値（文脈上明確に指示しない限り、下限値の単位の１０分の１まで）、および、その明示範囲内の任意のその他明示値または介在値が本発明に包含されることを理解されたい。これら狭めた範囲の上限値および下限値は、その狭めた範囲内に独立して含まれていてもよく、また、明示範囲内において特に除外した任意の値に従い、本発明に包含される。明示範囲がそれら上限値および下限値のうちの１つまたは両方を含む場合、それら包含される上限値および下限値のいずれかまたは両方を除外する範囲もまた本発明に包含される。
【００２３】
別途定義しない限り、本明細書で使用する全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者が一般に理解する意味と同一の意味を有する。本明細書に記載の方法および物質と同様または同等の任意の方法および物質を、本発明の実施または試験において使用することもできるが、好ましい方法および物質については以下で説明する。本明細書で言及する全ての刊行物は、それら刊行物が引用する内容と関連させて本方法および／または物質を開示および説明するために、参照により本明細書に組み込まれる。
【００２４】
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈上明確に指示しない限り、複数の指示対象を含むことに留意すべきである。それゆえ、例えば、「多量体Ｔ細胞調節ポリペプチド」への言及は、複数のそのようなポリペプチドを含み、「免疫調節ポリペプチド」への言及は、１つまたは複数の免疫調節ポリペプチドおよび当業者に周知のその同等物などへの言及を含む。更に、特許請求の範囲が任意の要素を除外するように作成されてもよいということに留意されたい。したがって、この記述は、クレーム要素の列挙と関連させて、「単に」、「のみ」などの排他的な用語の使用、または、「否定的な」限定の使用が、先行詞として機能することを意図するものである。
【００２５】
分かりやすく、個々の実施形態との関係において記載した本発明における特定の特徴を、更に、単一の実施形態内において組み合わせて提供してもよいということを理解されたい。逆の言い方をすれば、簡潔とするため、単一の実施形態との関係において記載した本発明における様々な特徴を、更に、別々に、または、任意の好適な副組み合わせで提供してもよい。本発明に属する実施形態の全ての組み合わせは、本発明により明示的に包含され、全ての組み合わせが個別にかつ明確に開示されるかのように本明細書において開示される。加えて、様々な実施形態およびそれらの要素における全ての副組み合わせもまた、本発明により明示的に包含され、全てのこのような副組み合わせが個別にかつ明確に本明細書において開示されるかのように、本明細書において開示される。
【００２６】
本明細書に記載する刊行物は、単に本願の出願日前にそれらの開示を提供したに過ぎない。本明細書におけるいずれの内容も、本発明が、先行発明によりこのような刊行物に先行する権利を持たないことを認めるものとして解釈されるべきではない。更に、提供した刊行物の日付は実際の刊行日とは異なる場合があり、個別に確認する必要が生じる場合がある。
【００２７】
詳細な説明
本開示は、関連共免疫調節ポリペプチドに対する低い結合親和性を示す免疫調節ポリペプチドを含むＴ細胞調節多量体ポリペプチドを提供する。Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドは、Ｔ細胞の活性を調節するのに、また個体における免疫応答を調節するのに有用である。
【００２８】
Ｔ細胞調節多量体ポリペプチド
本開示は、ａ）第１のポリペプチドとｂ）第２のポリペプチドを含むＴ細胞調節多量体ポリペプチド（ＴＭＭＰ）を提供し、多量体ポリペプチドは、エピトープと、第１の主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）ポリペプチドと、第２のＭＨＣポリペプチドと、１つまたは複数の免疫調節ポリペプチドと、任意選択的に、免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチドまたは非Ｉｇスキャフォールドと、を含む。本開示はＴＭＭＰを提供し、多量体ポリペプチドは、ａ）第１のＭＨＣポリペプチドを含む第１のポリペプチドと、ｂ）第２のＭＨＣポリペプチドを含む第２のポリペプチドと、を含む、ヘテロ二量体であり、第１のポリペプチドまたは第２のポリペプチドはエピトープを含み、第１のポリペプチドおよび／または第２のポリペプチドは、同一であるかまたは異なっていてもよい１つまたは複数の免疫調節ポリペプチドと、任意選択的に、Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドまたは非Ｉｇスキャフォールドと、を含む。本開示のＴＭＭＰはまた、本明細書において、「本開示の多量体ポリペプチド」または「ｓｙｎＴａｃ」と呼ばれる。
【００２９】
本開示は、ａ）ｉ）ペプチドエピトープとｉｉ）第１のＭＨＣポリペプチドを含む第１のポリペプチドと、ｂ）第２のＭＨＣポリペプチドを含む第２のポリペプチドと、ｃ）少なくとも１つの免疫調節ポリペプチドと、を含むヘテロ二量体ポリペプチドを含むＴＭＭＰを提供し、第１および／または第２のポリペプチドは、少なくとも１つ（すなわち、１つまたは複数）の免疫調節ポリペプチドを含む。任意選択的に、第１または第２のポリペプチドは、Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドまたは非Ｉｇスキャフォールドを含む。１つまたは複数の免疫調節ポリペプチドのうちの少なくとも１つは、関連共免疫調節ポリペプチドに対する対応する野生型免疫調節ポリペプチドの親和性と比較して、関連共免疫調節ポリペプチドに対する低い親和性を示す変異免疫調節ポリペプチドである。本開示のＴＭＭＰ内に存在するエピトープは、Ｔ細胞上のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）に少なくとも１００μＭ（例えば、少なくとも１０μＭ、少なくとも１μＭ、少なくとも１００ｎＭ、少なくとも１０ｎＭ、または、少なくとも１ｎＭ）の親和性で結合する。本開示のＴＭＭＰは、ＴＭＭＰが第２のＴ細胞に結合する親和性よりも少なくとも２５％高い親和性で第１のＴ細胞に結合し、第１のＴ細胞はその表面上に、関連共免疫調節ポリペプチド、およびエピトープに少なくとも１００μＭの親和性で結合するＴＣＲを発現し、第２のＴ細胞はその表面上に、関連共免疫調節ポリペプチドを発現するが、その表面上に、エピトープに少なくとも１００μＭ（例えば、少なくとも１０μＭ、少なくとも１μＭ、少なくとも１００ｎＭ、少なくとも１０ｎＭ、または、少なくとも１ｎＭ）の親和性で結合するＴＣＲを発現しない。
【００３０】
本開示はＴＭＭＰを提供し、多量体ポリペプチドは、Ａ）ヘテロ二量体であって、ａ）第１のＭＨＣポリペプチドを含む第１のポリペプチドと、ｂ）第２のＭＨＣポリペプチドを含む第２のポリペプチドと、を含む、ヘテロ二量体（第１のポリペプチドまたは第２のポリペプチドはエピトープを含み、第１のポリペプチドおよび／または第２のポリペプチドは、同一であるかまたは異なっていてもよい１つまたは複数の免疫調節ポリペプチドを含み、１つまたは複数の免疫調節ポリペプチドのうちの少なくとも１つは、野生型免疫調節ポリペプチドまたは野生型免疫調節ポリペプチドの変異体であってもよく、変異免疫調節ポリペプチドは、対応する野生型免疫調節ポリペプチドのアミノ酸配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０のアミノ酸置換を含み、第１のポリペプチドまたは第２のポリペプチドは任意選択的に、Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドまたは非Ｉｇスキャフォールドを含む）、Ｂ）ヘテロ二量体であって、ａ）第１のＭＨＣポリペプチドを含む第１のポリペプチドと、ｂ）第２のＭＨＣポリペプチドを含む第２のポリペプチドと、を含む、ヘテロ二量体（第１のポリペプチドまたは第２のポリペプチドはエピトープを含み、第１のポリペプチドおよび／または第２のポリペプチドは、同一であるかまたは異なっていてもよい１つまたは複数の免疫調節ポリペプチドを含み、１つまたは複数の免疫調節ポリペプチドのうちの少なくとも１つは、野生型免疫調節ポリペプチドの変異体であり、変異免疫調節ポリペプチドは、対応する野生型免疫調節ポリペプチドのアミノ酸配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０のアミノ酸置換を含み、１つまたは複数の免疫調節ドメインのうちの少なくとも１つは、関連共免疫調節ポリペプチドに対する対応する野生型免疫調節ポリペプチドの親和性と比較して、関連共免疫調節ポリペプチドに対する低い親和性を示す変異免疫調節ポリペプチドであり、エピトープは、Ｔ細胞上のＴＣＲに少なくとも１０−７Ｍの親和性で結合し、ｉ）ＴＭＭＰポリペプチドは、ＴＭＭＰが第２のＴ細胞に結合する親和性よりも少なくとも２５％高い親和性で第１のＴ細胞に結合し、第１のＴ細胞は、関連共免疫調節ポリペプチドと、エピトープに少なくとも１０−７Ｍの親和性で結合するＴＣＲとを、その表面上に発現し、第２のＴ細胞は、関連共免疫調節ポリペプチドをその表面上に発現するが、エピトープに少なくとも１０−７Ｍの親和性で結合するＴＣＲをその表面上に発現せず、および／または、ｉｉ）関連共免疫調節ポリペプチドに対する対照ＴＭＭＰ（対照は野生型免疫調節ポリペプチドを含む）の結合親和性と、関連共免疫調節ポリペプチドに対する野生型免疫調節ポリペプチドの変異体を含むＴＭＭＰの結合親和性の比率は、バイオレイヤー干渉法で測定して１．５：１〜１０６：１の範囲内であり、変異免疫調節ポリペプチドは、対応する野生型免疫調節ポリペプチドのアミノ酸配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、���９、または２０のアミノ酸置換を含み、第１のポリペプチドまたは第２のポリペプチドは任意選択的に、Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドまたは非Ｉｇスキャフォールドを含む）、または、Ｃ）ヘテロ二量体であって、ａ）第１のポリペプチドであって、Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）エピトープと、ｉｉ）第１のＭＨＣポリペプチドを含む第１のポリペプチドと、ｂ）第２のポリペプチドであって、Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）第２のＭＨＣポリペプチドと、ｉｉ）任意選択的に、免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチドまたは非Ｉｇスキャフォールドを含む第２のポリペプチドと、を含む、ヘテロ二量体（多量体ポリペプチドは、同一であるかまたは異なっていてもよい１つまたは複数の免疫調節ドメインを含み、１つまたは複数の免疫調節ドメインのうちの少なくとも１つは、Ａ）第１のポリペプチドのＣ末端にあるか、Ｂ）第２のポリペプチドのＮ末端にあるか、Ｃ）第２のポリペプチドのＣ末端にあるか、または、Ｄ）第１のポリペプチドのＣ末端および第２のポリペプチドのＮ末端にあり、１つまたは複数の免疫調節ドメインのうちの少なくとも１つは、野生型免疫調節ポリペプチドまたは野生型免疫調節ポリペプチドの変異体であってもよく、変異免疫調節ポリペプチドは、対応する野生型免疫調節ポリペプチドのアミノ酸配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０のアミノ酸置換を含み、任意選択的に、１つまたは複数の免疫調節ドメインのうちの少なくとも１つは、関連共免疫調節ポリペプチドに対する対応する野生型免疫調節ポリペプチドの親和性と比較して、関連共免疫調節ポリペプチドに対する低い親和性を示す変異免疫調節ポリペプチドであり、エピトープは、Ｔ細胞上のＴＣＲに少なくとも１０−７Ｍの親和性で結合し、ｉ）ＴＭＭＰは、ＴＭＭＰが第２のＴ細胞に結合する親和性よりも少なくとも２５％高い親和性で第１のＴ細胞に結合し、第１のＴ細胞は、関連共免疫調節ポリペプチドと、エピトープに少なくとも１０−７Ｍの親和性で結合するＴＣＲとを、その表面上に発現し、第２のＴ細胞は、関連共免疫調節ポリペプチドをその表面上に発現するが、エピトープに少なくとも１０−７Ｍの親和性で結合するＴＣＲをその表面上に発現せず、および／または、ｉｉ）関連共免疫調節ポリペプチドに対する対照ＴＭＭＰ（対照は野生型免疫調節ポリペプチドを含む）の結合親和性と、関連共免疫調節ポリペプチドに対する野生型免疫調節ポリペプチドの変異体を含むＴＭＭＰの結合親和性の比率は、バイオレイヤー干渉法で測定して１．５：１〜１０６：１の範囲内であり、変異免疫調節ポリペプチドは、対応する野生型免疫調節ポリペプチドのアミノ酸配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０のアミノ酸置換を含む。
【００３１】
本開示は、ａ）第１のポリペプチドであって、Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）エピトープと、ｉｉ）第１のＭＨＣポリペプチドを含む第１のポリペプチドと、ｂ）第２のポリペプチドであって、Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）第２のＭＨＣポリペプチドと、ｉｉ）任意選択的に、Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドまたは非Ｉｇスキャフォールドを含む第２のポリペプチドと、を含む、ＴＭＭＰ、を提供する。本開示のＴＭＭＰは１つまたは複数の免疫調節ポリペプチドを含み、１つまたは複数の免疫調節ポリペプチドのうちの少なくとも１つは、Ａ）第１のポリペプチドのＣ末端にあるか、Ｂ）第２のポリペプチドのＮ末端にあるか、Ｃ）第２のポリペプチドのＣ末端にあるか、または、Ｄ）第１のポリペプチドのＣ末端および第２のポリペプチドのＮ末端にある。１つまたは複数の免疫調節ポリペプチドのうちの少なくとも１つは、関連共免疫調節ポリペプチドに対する対応する野生型免疫調節ポリペプチドの親和性と比較して、関連共免疫調節ポリペプチドに対する低い親和性を示す変異免疫調節ポリペプチドである。本開示のＴＭＭＰ内に存在するエピトープは、Ｔ細胞上のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）に少なくとも１００μＭ（例えば、少なくとも１０μＭ、少なくとも１μＭ、少なくとも１００ｎＭ、少なくとも１０ｎＭ、または、少なくとも１ｎＭ）の親和性で結合する。本開示のＴＭＭＰは、ＴＭＭＰが第２のＴ細胞に結合する親和性よりも少なくとも２５％高い親和性で第１のＴ細胞に結合し、第１のＴ細胞はその表面上に、関連共免疫調節ポリペプチド、およびエピトープに少なくとも１００μＭの親和性で結合するＴＣＲを発現し、第２のＴ細胞はその表面上に、関連共免疫調節ポリペプチドを発現するが、その表面上に、エピトープに少なくとも１００μＭ（例えば、少なくとも１０μＭ、少なくとも１μＭ、少なくとも１００ｎＭ、少なくとも１０ｎＭ、または、少なくとも１ｎＭ）の親和性で結合するＴＣＲを発現しない。
【００３２】
一部の例では、本開示のＴＭＭＰ内に存在するエピトープは、約１０−４Ｍ〜約５×１０−４Ｍ、約５×１０−４Ｍ〜約１０−５Ｍ、約１０−５Ｍ〜５×１０−５Ｍ、約５×１０−５Ｍ〜１０−６Ｍ、約１０−６Ｍ〜約５×１０−６Ｍ、約５×１０−６Ｍ〜約１０−７Ｍ、約１０−７Ｍ〜約５×１０−７Ｍ、約５×１０−７Ｍ〜約１０−８Ｍ、または、約１０−８Ｍ〜約１０−９Ｍの親和性で、Ｔ細胞上のＴＣＲに結合する。別の様式で表すと、一部の例では、本開示のＴＭＭＰ内に存在するエピトープは、約１ｎＭ〜約５ｎＭ、約５ｎＭ〜約１０ｎＭ、約１０ｎＭ〜約５０ｎＭ、約５０ｎＭ〜約１００ｎＭ、約０．１μＭ〜約０．５μＭ、約０．５μＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、約７５μＭ〜約１００μＭの親和性で、Ｔ細胞上のＴＣＲに結合する。
【００３３】
本開示のＴＭＭＰ内に存在する免疫調節ポリペプチドは、関連共免疫調節ポリペプチドに対する対応する野生型免疫調節ポリペプチドの親和性よりも少なくとも１０％低い、少なくとも１５％低い、少なくとも２０％低い、少なくとも２５％低い、少なくとも３０％低い、少なくとも３５％低い、少なくとも４０％低い、少なくとも４５％低い、少なくとも５０％低い、少なくとも５５％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも６５％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも７５％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも８５％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または、９５％超低い親和性で、その関連共免疫調節ポリペプチドに結合する。
【００３４】
一部の例では、本開示のＴＭＭＰ内に存在する変異免疫調節ポリペプチドは、関連共免疫調節ポリペプチドに対する１ｎＭ〜１００ｎＭ、または、１００ｎＭ〜１００μＭの結合親和性を有する。例えば、一部の例では、本開示のＴＭＭＰ内に存在する変異免疫調節ポリペプチドは、関連共免疫調節ポリペプチドに対する約１００ｎＭ〜１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、約９００ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１５μＭ、約１５μＭ〜約２０μＭ、約２０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、または、約７５μＭ〜約１００μＭの結合親和性を有する。一部の例では、本開示のＴＭＭＰ内に存在する変異免疫調節ポリペプチドは、関連共免疫調節ポリペプチドに対する約１ｎＭ〜約５ｎＭ、約５ｎＭ〜約１０ｎＭ、約１０ｎＭ〜約５０ｎＭ、約５０ｎＭ〜約１００ｎＭの結合親和性を有する。
【００３５】
免疫調節ポリペプチドの関連共免疫調節ポリペプチドに対する免疫調節ポリペプチドの低い親和性と、ＴＣＲに対するエピトープの親和性を組み合わせることにより、本開示のＴＭＭＰの向上した選択性がもたらされる。例えば、本開示のＴＭＭＰは、ｉ）ＴＭＭＰ内に存在するエピトープ以外のエピトープに特異的なＴＣＲとｉｉ）ＴＭＭＰ内に存在する免疫調節ポリペプチドに結合する共免疫調節ポリペプチドを提示する第２のＴ細胞への結合性と比較して、ｉ）ＴＭＭＰ内に存在するエピトープに特異的なＴＣＲとｉｉ）ＴＭＭＰ内に存在する免疫調節ポリペプチドに結合する共免疫調節ポリペプチドの両方を提示する第１のＴ細胞に選択的に結合する。例えば、本開示のＴＭＭＰは、本開示のＴＭＭＰが第２のＴ細胞に結合する親和性よりも少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも２５倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、または、１００倍超高い親和性で第１のＴ細胞に結合する。
【００３６】
一部の例では、本開示のＴ細胞調節ポリペプチドは、それを必要とする個体に投与する際に、エピトープ特異的Ｔ細胞応答とエピトープ非特異的Ｔ細胞応答の両方を誘導する。言い換えると、一部の例では、本開示のＴ細胞調節ポリペプチドは、それを必要とする個体に投与する際に、ｉ）ＴＭＭＰ内に存在するエピトープに特異的なＴＣＲとｉｉ）ＴＭＭＰ内に存在する免疫調節ポリペプチドに結合する共免疫調節ポリペプチドの両方を提示する第１のＴ細胞の活性を調節することによって、エピトープ特異的Ｔ細胞応答を誘導し、ｉ）ＴＭＭＰ内に存在するエピトープ以外のエピトープに特異的なＴＣＲとｉｉ）ＴＭＭＰ内に存在する免疫調節ポリペプチドに結合する共免疫調節ポリペプチドを提示する第２のＴ細胞の活性を調節することによって、エピトープ非特異的Ｔ細胞応答を誘導する。エピトープ特異的Ｔ細胞応答とエピトープ非特異的Ｔ細胞応答の比率は、少なくとも２：１、少なくとも５：１、少なくとも１０：１、少なくとも１５：１、少なくとも２０：１、少なくとも２５：１、少なくとも５０：１、または、少なくとも１００：１である。エピトープ特異的Ｔ細胞応答とエピトープ非特異的Ｔ細胞応答の比率は、約２：１〜約５：１、約５：１〜約１０：１、約１０：１〜約１５：１、約１５：１〜約２０：１、約２０：１〜約２５：１、約２５：１〜約５０：１、もしくは、約５０：１〜約１００：１、または、１００：１超である。Ｔ細胞の「活性を調節すること」としては、ｉ）細胞傷害性（例えば、ＣＤ８＋）Ｔ細胞を活性化させること、ｉｉ）細胞傷害性（例えば、ＣＤ８＋）Ｔ細胞の細胞傷害活性を誘導すること、ｉｉｉ）細胞傷害性（例えば、ＣＤ８＋）Ｔ細胞による細胞毒（例えば、パーフォリン、グランザイム、グラニュライシン）の産生および放出を誘導すること、ｉｖ）自己反応性Ｔ細胞の活性を抑制すること、などのうちの１つまたは複数を挙げることができる。
【００３７】
免疫調節ポリペプチドの関連共免疫調節ポリペプチドに対する免疫調節ポリペプチドの低い親和性と、ＴＣＲに対するエピトープの親和性を組み合わせることにより、本開示のＴＭＭＰの向上した選択性がもたらされる。それゆえ、例えば、本開示のＴＭＭＰは、ｉ）ＴＭＭＰ内に存在するエピトープ以外のエピトープに特異的なＴＣＲとｉｉ）ＴＭＭＰ内に存在する免疫調節ポリペプチドに結合する共免疫調節ポリペプチドを提示する第２のＴ細胞に本開示のＴＭＭＰが結合する結合力よりも高い結合力で、ｉ）ＴＭＭＰ内に存在するエピトープに特異的なＴＣＲとｉｉ）ＴＭＭＰ内に存在する免疫調節ポリペプチドに結合する共免疫調節ポリペプチドの両方を提示する第１のＴ細胞に結合する。
【００３８】
免疫調節ポリペプチドとその関連共免疫調節ポリペプチドの間の結合親和性は、精製免疫調節ポリペプチドおよび精製関連共免疫調節ポリペプチドを使用したバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）により測定することができる。ＴＭＭＰとその関連共免疫調節ポリペプチドの間の結合親和性は、精製ＴＭＭＰおよび関連共免疫調節ポリペプチドを使用したＢＬＩにより測定することができる。ＢＬＩ法は当業者に周知である。例えば、Ｌａｄ  ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｊ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｓｃｒｅｅｎ．２０（４）：４９８−５０７；およびＳｈａｈ  ａｎｄ  Ｄｕｎｃａｎ（２０１４）Ｊ．Ｖｉｓ．Ｅｘｐ．１８：ｅ５１３８３を参照されたい。
【００３９】
ＢＬＩアッセイは、Ｏｃｔｅｔ  ＲＥＤ  ９６（Ｐａｌ  ＦｏｒｔｅＢｉｏ）装置または類似装置を使用して以下のように実施することができる。ＴＭＭＰ（例えば、本開示のＴＭＭＰ、対照ＴＭＭＰ（対照ＴＭＭＰは野生型免疫調節ポリペプチドを含む））を不溶性支持体（「バイオセンサー」）上に固定する。固定ＴＭＭＰは「標的」である。固定化は、捕捉抗体を不溶性支持体上に固定することにより行うことができ、捕捉抗体はＴＭＭＰを固定する。例えば、固定化は、抗Ｆｃ（例えば、抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ）抗体を不溶性支持体上に固定することにより行うことができ、固定抗Ｆｃ抗体はＴＭＭＰに結合してＴＭＭＰを固定する（ＴＭＭＰはＩｇ  Ｆｃポリペプチドを含む）。数種類の異なる濃度の共免疫調節ポリペプチドを固定ＴＭＭＰに加えて、装置の応答を記録する。アッセイは、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ６．８、５％ポリ（エチレングリコール）６０００、５０ｍＭ  ＫＣｌ、０．１％ウシ血清アルブミン、および０．０２％  Ｔｗｅｅｎ  ２０非イオン性界面活性剤を含む液体培地中で実施する。共免疫調節ポリペプチドの固定ＴＭＭＰへの結合は３０℃で実施する。結合親和性のための陽性対照として、抗ＭＨＣクラスＩモノクローナル抗体を使用してもよい。例えば、７ｎＭのＫＤを有する抗ＨＬＡクラスＩモノクローナル抗体Ｗ６／３２（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  Ｎｏ．ＨＢ−９５；Ｐａｒｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９７９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２３：３４２）を使用してもよい。標準曲線は、抗ＭＨＣクラスＩモノクローナル抗体の系列希釈液を使用して作成してもよい。共免疫調節ポリペプチド、すなわち、抗ＭＨＣクラスＩ  ｍＡｂは「検体」である。ＢＬＩでは、２つの表面、ｉ）固定ポリペプチド（「標的」）およびｉｉ）内部基準レイヤーから反射した白色光の干渉縞を解析する。バイオセンサーチップに結合した分子（「検体」、例えば、共免疫調節ポリペプチド、抗ＨＬＡ抗体）の数が変化すると、干渉縞のシフトが生じるが、干渉縞のこのシフトをリアルタイムで測定してもよい。標的／検体相互作用の親和性を記述する２つの動力学用語は結合速度定数（ｋａ）および解離定数（ｋｄ）である。これら２つの用語の比率（ｋｄ／ａ）により親和性定数（ＫＤ）が求められる。
【００４０】
ＢＬＩアッセイはマルチウェルプレートを用いて実施する。アッセイをランするために、Ｏｃｔｅｔ  Ｄａｔａ  Ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎソフトウェアを用いて、プレートレイアウトを定義し、アッセイ工程を定義し、バイオセンサーを割り当てる。バイオセンサーアセンブリを水和する。水和バイオセンサーアセンブリおよびアッセイプレートをＯｃｔｅｔ装置上で１０分間平衡させる。データが得られると、得られたデータをＯｃｔｅｔ  Ｄａｔａ  Ａｎａｌｙｓｉｓソフトウェアにロードする。リファレンスサブトラクション、ｙ軸アライメント、工程間補正、およびＳａｖｉｔｚｋｙ−Ｇｏｌａｙフィルタリングの方法を指定することにより、Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇウィンドウでデータを処理する。解析用工程（結合および解離）を指定し、カーブフィッティングモデル（１：１）、フィッティング法（大域）、および目的のウィンドウ（秒）を選択することにより、Ａｎａｌｙｓｉｓウィンドウでデータを解析する。フィッティングの質を評価する。３倍の範囲内である場合、それぞれのデータ記録のＫＤ値（検体濃度）を平均してもよい。ＫＤ誤差値は親和性定数値の１桁以内でなければならず、Ｒ２値は０．９５超でなければならない。例えば、Ａｂｄｉｃｈｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｊ．Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３７７：２０９を参照されたい。
【００４１】
本明細書において特に明記しない限り、関連共免疫調節ポリペプチドに対する本開示のＴＭＭＰの親和性、または、関連共免疫調節ポリペプチドに対する対照ＴＭＭＰ（対照ＴＭＭＰは野生型免疫調節ポリペプチドを含む）の親和性について、上記のＢＬＩを用いて測定する。
【００４２】
一部の例では、ｉ）関連共免疫調節ポリペプチドに対する対照ＴＭＭＰ（対照は野生型免疫調節ポリペプチドを含む）の結合親和性と、ｉｉ）関連共免疫調節ポリペプチドに対する野生型免疫調節ポリペプチドの変異体を含む本開示のＴＭＭＰの結合親和性の比率は、ＢＬＩ（上記）で測定して少なくとも１．５：１、少なくとも２：１、少なくとも５：１、少なくとも１０：１、少なくとも１５：１、少なくとも２０：１、少なくとも２５：１、少なくとも５０：１、少なくとも１００：１、少なくとも５００：１、少なくとも１０２：１、少なくとも５×１０２：１、少なくとも１０３：１、少なくとも５×１０３：１、少なくとも１０４：１、少なくとも１０５：１、または少なくとも１０６：１である。一部の例では、ｉ）関連共免疫調節ポリペプチドに対する対照ＴＭＭＰ（対照は野生型免疫調節ポリペプチドを含む）の結合親和性と、ｉｉ）関連共免疫調節ポリペプチドに対する野生型免疫調節ポリペプチドの変異体を含む本開示のＴＭＭＰの結合親和性の比率は、ＢＬＩで測定して１．５：１〜１０６：１、例えば、１．５：１〜１０：１、１０：１〜５０：１、５０：１〜１０２：１、１０２：１〜１０３：１、１０３：１〜１０４：１、１０４：１〜１０５：１、または、１０５：１〜１０６：１の範囲である。
【００４３】
１つの例では、免疫調節ポリペプチドとして、対照ＴＭＭＰが野生型ＩＬ−２ポリペプチドを含み、本開示のＴＭＭＰが変異ＩＬ−２ポリペプチド（野生型ＩＬ−２ポリペプチドのアミノ酸配列と比較して１〜１０のアミノ酸置換を含む）を含み、ｉ）ＩＬ−２受容体（すなわち、関連共免疫調節ポリペプチド）に対する対照ＴＭＭＰの結合親和性と、ｉｉ）ＩＬ−２受容体に対する本開示のＴＭＭＰの結合親和性の比率は、ＢＬＩで測定して少なくとも１．５：１、少なくとも２：１、少なくとも５：１、少なくとも１０：１、少なくとも１５：１、少なくとも２０：１、少なくとも２５：１、少なくとも５０：１、少なくとも１００：１、少なくとも５００：１、少なくとも１０２：１、少なくとも５×１０２：１、少なくとも１０３：１、少なくとも５×１０３：１、少なくとも１０４：１、少なくとも１０５：１、または、少なくとも１０６：１である。一部の例では、免疫調節ポリペプチドとして、対照ＴＭＭＰが野生型ＩＬ−２ポリペプチドを含み、本開示のＴＭＭＰが変異ＩＬ−２ポリペプチド（野生型ＩＬ−２ポリペプチドのアミノ酸配列と比較して１〜１０のアミノ酸置換を含む）を含み、ｉ）ＩＬ−２受容体（すなわち、関連共免疫調節ポリペプチド）に対する対照ＴＭＭＰの結合親和性と、ｉｉ）ＩＬ−２受容体に対する本開示のＴＭＭＰの結合親和性の比率は、ＢＬＩで測定して１．５：１〜１０６：１、例えば、１．５：１〜１０：１、１０：１〜５０：１、５０：１〜１０２：１、１０２：１〜１０３：１、１０３：１〜１０４：１、１０４：１〜１０５：１、または、１０５：１〜１０６：１の範囲である。
【００４４】
別の例では、免疫調節ポリペプチドとして、対照ＴＭＭＰが野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含み、本開示のＴＭＭＰが変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドのアミノ酸配列と比較して１〜１０のアミノ酸置換を含む）を含み、ｉ）ＰＤ−１ポリペプチド（すなわち、関連共免疫調節ポリペプチド）に対する対照ＴＭＭＰの結合親和性と、ｉｉ）ＰＤ−１ポリペプチドに対する本開示のＴＭＭＰの結合親和性の比率は、ＢＬＩで測定して少なくとも１．５：１、少なくとも２：１、少なくとも５：１、少なくとも１０：１、少なくとも１５：１、少なくとも２０：１、少なくとも２５：１、少なくとも５０：１、少なくとも１００：１、少なくとも５００：１、少なくとも１０２：１、少なくとも５×１０２：１、少なくとも１０３：１、少なくとも５×１０３：１、少なくとも１０４：１、少なくとも１０５：１、または、少なくとも１０６：１である。
【００４５】
別の例では、免疫調節ポリペプチドとして、対照ＴＭＭＰが野生型ＣＤ８０ポリペプチドを含み、本開示のＴＭＭＰが変異ＣＤ８０ポリペプチド（野生型ＣＤ８０ポリペプチドのアミノ酸配列と比較して１〜１０のアミノ酸置換を含む）を含み、ｉ）ＣＴＬＡ４ポリペプチド（すなわち、関連共免疫調節ポリペプチド）に対する対照ＴＭＭＰの結合親和性と、ｉｉ）ＣＴＬＡ４ポリペプチドに対する本開示のＴＭＭＰの結合親和性の比率は、ＢＬＩで測定して少なくとも１．５：１、少なくとも２：１、少なくとも５：１、少なくとも１０：１、少なくとも１５：１、少なくとも２０：１、少なくとも２５：１、少なくとも５０：１、少なくとも１００：１、少なくとも５００：１、少なくとも１０２：１、少なくとも５×１０２：１、少なくとも１０３：１、少なくとも５×１０３：１、少なくとも１０４：１、少なくとも１０５：１、または、少なくとも１０６：１である。
【００４６】
別の例では、免疫調節ポリペプチドとして、対照ＴＭＭＰが野生型ＣＤ８０ポリペプチドを含み、本開示のＴＭＭＰが変異ＣＤ８０ポリペプチド（野生型ＣＤ８０ポリペプチドのアミノ酸配列と比較して１〜１０のアミノ酸置換を含む）を含み、ｉ）ＣＤ２８ポリペプチド（すなわち、関連共免疫調節ポリペプチド）に対する対照ＴＭＭＰの結合親和性と、ｉｉ）ＣＤ２８ポリペプチドに対する本開示のＴＭＭＰの結合親和性の比率は、ＢＬＩで測定して少なくとも１．５：１、少なくとも２：１、少なくとも５：１、少なくとも１０：１、少なくとも１５：１、少なくとも２０：１、少なくとも２５：１、少なくとも５０：１、少なくとも１００：１、少なくとも５００：１、少なくとも１０２：１、少なくとも５×１０２：１、少なくとも１０３：１、少なくとも５×１０３：１、少なくとも１０４：１、少なくとも１０５：１、または、少なくとも１０６：１である。
【００４７】
別の例では、免疫調節ポリペプチドとして、対照ＴＭＭＰが野生型４−１ＢＢＬポリペプチドを含み、本開示のＴＭＭＰが変異４−１ＢＢＬポリペプチド（野生型４−１ＢＢＬポリペプチドのアミノ酸配列と比較して１〜１０のアミノ酸置換を含む）を含み、ｉ）４−１ＢＢポリペプチド（すなわち、関連共免疫調節ポリペプチド）に対する対照ＴＭＭＰの結合親和性と、ｉｉ）４−１ＢＢポリペプチドに対する本開示のＴＭＭＰの結合親和性の比率は、ＢＬＩで測定して少なくとも１．５：１、少なくとも２：１、少なくとも５：１、少なくとも１０：１、少なくとも１５：１、少なくとも２０：１、少なくとも２５：１、少なくとも５０：１、少なくとも１００：１、少なくとも５００：１、少なくとも１０２：１、少なくとも５×１０２：１、少なくとも１０３：１、少なくとも５×１０３：１、少なくとも１０４：１、少なくとも１０５：１、または、少なくとも１０６：１である。
【００４８】
別の例では、免疫調節ポリペプチドとして、対照ＴＭＭＰが野生型ＣＤ８６ポリペプチドを含み、本開示のＴＭＭＰが変異ＣＤ８６ポリペプチド（野生型ＣＤ８６ポリペプチドのアミノ酸配列と比較して１〜１０のアミノ酸置換を含む）を含み、ｉ）ＣＤ２８ポリペプチド（すなわち、関連共免疫調節ポリペプチド）に対する対照ＴＭＭＰの結合親和性と、ｉｉ）ＣＤ２８ポリペプチドに対する本開示のＴＭＭＰの結合親和性の比率は、ＢＬＩで測定して少なくとも１．５：１、少なくとも２：１、少なくとも５：１、少なくとも１０：１、少なくとも１５：１、少なくとも２０：１、少なくとも２５：１、少なくとも５０：１、少なくとも１００：１、少なくとも５００：１、少なくとも１０２：１、少なくとも５×１０２：１、少なくとも１０３：１、少なくとも５×１０３：１、少なくとも１０４：１、少なくとも１０５：１、または、少なくとも１０６：１である。
【００４９】
標的Ｔ細胞に対する本開示のＴＭＭＰの結合親和性は、以下の方法、Ａ）ｉ）親野生型免疫調節ポリペプチドに結合する関連共免疫調節ポリペプチドとｉｉ）エピトープに結合するＴ細胞受容体をその表面上に発現する標的Ｔ細胞に、本開示のＴＭＭＰを接触させて（ＴＭＭＰは、ＴＭＭＰが標的Ｔ細胞に結合するような、エピトープタグを含む）、Ｂ）エピトープタグに結合する蛍光標識結合因子（例えば、蛍光標識抗体）に標的Ｔ細胞結合ＴＭＭＰを接触させて、ＴＭＭＰ／標的Ｔ細胞／結合因子複合体を作製して、Ｃ）フローサイトメトリーを使用してＴＭＭＰ／標的Ｔ細胞／結合因子複合体の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を測定することにより、測定してもよい。エピトープタグは、例えば、ＦＬＡＧタグ、ヘマグルチニンタグ、ｃ−ｍｙｃタグ、ポリ（ヒスチジン）タグなどであってもよい。ＴＭＭＰライブラリメンバーの濃度範囲にわたり測定されたＭＦＩにより親和性の指標がもたらされる。ＴＭＭＰライブラリメンバーの濃度範囲にわたり測定されたＭＦＩによりＴＭＭＰの半数効果濃度（ＥＣ５０）がもたらされる。一部の例では、標的Ｔ細胞に対する本開示のＴＭＭＰのＥＣ５０はｎＭ範囲であり、対照Ｔ細胞（対照Ｔ細胞はその表面上に、ｉ）親野生型免疫調節ポリペプチドに結合する関連共免疫調節ポリペプチドとｉｉ）ＴＭＭＰ内に存在するエピトープに結合しないＴ細胞受容体を発現する）に対するＴＭＭＰのＥＣ５０はμＭ範囲である。一部の例では、対照Ｔ細胞に対する本開示のＴＭＭＰのＥＣ５０と、標的Ｔ細胞に対するＴＭＭＰのＥＣ５０の比率は、少なくとも１．５：１、少なくとも２：１、少なくとも５：１、少なくとも１０：１、少なくとも１５：１、少なくとも２０：１、少なくとも２５：１、少なくとも５０：１、少なくとも１００：１、少なくとも５００：１、少なくとも１０２：１、少なくとも５×１０２：１、少なくとも１０３：１、少なくとも５×１０３：１、少なくとも１０４：１、少なくとも１０５：１、または、少なくとも１０６：１である。対照Ｔ細胞に対する本開示のＴＭＭＰのＥＣ５０と、標的Ｔ細胞に対するＴＭＭＰのＥＣ５０の比率は、ＴＭＭＰの選択性の発現である。
【００５０】
一部の例では、直前の段落に記載したとおりに測定すると、本開示のＴＭＭＰは、ｉ）親野生型免疫調節ポリペプチドに結合する関連共免疫調節ポリペプチドとｉｉ）ＴＭＭＰライブラリメンバー内に存在するエピトープ以外のエピトープに結合するＴ細胞受容体とを含む対照Ｔ細胞へのＴＭＭＰライブラリメンバーの結合と比較して、標的Ｔ細胞への選択的結合を示す。
【００５１】
二量体化多量体Ｔ細胞調節ポリペプチド
本開示の多量体Ｔ細胞調節ポリペプチドを二量体化してもよいが、それはすなわち、本開示は、本開示の多量体Ｔ細胞調節ポリペプチドの二量体を含む多量体ポリペプチドを提供するということである。それゆえ、本開示は、多量体Ｔ細胞調節ポリペプチドであって、Ａ）第１のヘテロ二量体と、Ｂ）第２のヘテロ二量体と、を含み、Ａ）第１のヘテロ二量体は、ａ）第１のポリペプチドと、ｂ）第２のポリペプチドと、を含み、ａ）第１のポリペプチドは、ｉ）ペプチドエピトープとｉｉ）第１の主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）ポリペプチドを含み、ｂ）第２のポリペプチドは、ｉ）第２のＭＨＣポリペプチドを含み（第１のヘテロ二量体は１つまたは複数の免疫調節ポリペプチドを含む）、Ｂ）第２のヘテロ二量体は、ａ）第１のポリペプチドと、ｂ）第２のポリペプチドと、を含み、ａ）第１のポリペプチドは、ｉ）ペプチドエピトープとｉｉ）第１のＭＨＣポリペプチドを含み、ｂ）第２のポリペプチドは、ｉ）第２のＭＨＣポリペプチドを含む（第２のヘテロ二量体は１つまたは複数の免疫調節ポリペプチドを含む）（第１のヘテロ二量体と第２のヘテロ二量体は互いに共有結合している）、多量体Ｔ細胞調節ポリペプチドを提供する。一部の例では、２つの多量体Ｔ細胞調節ポリペプチドは、アミノ酸配列において互いに同一である。一部の例では、第１のヘテロ二量体と第２のヘテロ二量体は、第１のヘテロ二量体の第２のポリペプチドのＣ末端領域および第２のヘテロ二量体の第２のポリペプチドのＣ末端領域を介して、互いに共有結合している。一部の例では、第１のヘテロ二量体と第２のヘテロ二量体は、第１のヘテロ二量体の第２のポリペプチドのＣ末端アミノ酸および第２のヘテロ二量体の第２のポリペプチドのＣ末端領域を介して、互いに共有結合しており、例えば、一部の例では、第１のヘテロ二量体の第２のポリペプチドのＣ末端アミノ酸と、第２のヘテロ二量体の第２のポリペプチドのＣ末端領域は、直接またはリンカーを介してのいずれかで、互いに結合している。リンカーはペプチドリンカーであってもよい。ペプチドリンカーは、１アミノ酸〜２００アミノ酸（例えば、１アミノ酸（ａａ）〜５ａａ、５ａａ〜１０ａａ、１０ａａ〜２５ａａ、２５ａａ〜５０ａａ、５０ａａ〜１００ａａ、１００ａａ〜１５０ａａ、または、１５０ａａ〜２００ａａ）の長さを有していてもよい。一部の例では、第１のヘテロ二量体のペプチドエピトープおよび第２のヘテロ二量体のペプチドエピトープは、同一のアミノ酸配列を含む。一部の例では、第１および第２のヘテロ二量体の第１のＭＨＣポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩβ２−ミクログロブリンであり、第１および第２のヘテロ二量体の第２のＭＨＣポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩ重鎖である。一部の例では、第１のヘテロ二量体の免疫調節ポリペプチドおよび第２のヘテロ二量体の免疫調節ポリペプチドは、同一のアミノ酸配列を含む。一部の例では、第１のヘテロ二量体の免疫調節ポリペプチドおよび第２のヘテロ二量体の免疫調節ポリペプチドは、対応する親野生型免疫調節ポリペプチドと比較して１〜１０のアミノ酸置換を含む変異免疫調節ポリペプチドであり、１〜１０のアミノ酸置換により、変異免疫調節ポリペプチドの関���共免疫調節ポリペプチドへの低い結合親和性がもたらされる。一部の例では、第１のヘテロ二量体の免疫調節ポリペプチドと第２のヘテロ二量体の免疫調節ポリペプチドの両方は、ＩＬ−２、４−１ＢＢＬ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＯＸ−４０Ｌ、ＦａｓＬ、ＪＡＧ１（ＣＤ３３９）、ＴＧＦβ、ＣＤ７０、およびＩＣＡＭからなる群から選択される。好適なＭＨＣポリペプチド、免疫調節ポリペプチド、およびペプチドエピトープの例については、以下に記載する。
【００５２】
ＭＨＣポリペプチド
上に記載したように、多量体ポリペプチドはＭＨＣポリペプチドを含む。本開示の目的において、用語「主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）ポリペプチド」とは、ヒトＭＨＣ（ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）とも呼ばれる）ポリペプチド、げっ歯類（例えば、マウス、ラットなど）ＭＨＣポリペプチド、および、その他の哺乳動物種（例えば、ウサギ目、非ヒト霊長類、イヌ科動物、ネコ科動物、有蹄類（例えば、ウマ、ウシ、ヒツジ、ヤギなど））のＭＨＣポリペプチドを含む、様々な種類のＭＨＣポリペプチドを含むことを意味する。用語「ＭＨＣポリペプチド」とは、クラスＩＭＨＣポリペプチド（例えば、β−２ミクログロブリンおよびＭＨＣクラスＩ重鎖）およびＭＨＣクラスＩＩポリペプチド（例えば、ＭＨＣクラスＩＩαポリペプチドおよびＭＨＣクラスＩＩβポリペプチド）を含むことを意味する。
【００５３】
上に記載したように、多量体ポリペプチドの一部の実施形態では、第１および第２のＭＨＣポリペプチドはクラスＩＭＨＣポリペプチドであり、例えば、一部の例では、第１のＭＨＣポリペプチドはＭＨＣクラスＩβ２−ミクログロブリン（β２Ｍ）ポリペプチドであり、第２のＭＨＣポリペプチドはＭＨＣクラスＩ重鎖（Ｈ鎖）である。その他の例では、第１および第２のＭＨＣポリペプチドはクラスＩＩＭＨＣポリペプチドであり、例えば、一部の例では、第１のＭＨＣポリペプチドはＭＨＣクラスＩＩα鎖ポリペプチドであり、第２のＭＨＣポリペプチドはＭＨＣクラスＩＩβ鎖ポリペプチドである。その他の例では、第１のポリペプチドはＭＨＣクラスＩＩβ鎖ポリペプチドであり、第２のＭＨＣポリペプチドはＭＨＣクラスＩＩα鎖ポリペプチドである。
【００５４】
一部の例では、多量体ポリペプチドのＭＨＣポリペプチドはヒトＭＨＣポリペプチドであり、ヒトＭＨＣポリペプチドはまた、「ヒト白血球抗原」（「ＨＬＡ」）」ポリペプチドとも呼ばれる。一部の例では、多量体ポリペプチドのＭＨＣポリペプチドは、クラスＩＨＬＡポリペプチド、例えば、β２−ミクログロブリンポリペプチド、または、クラスＩＨＬＡ重鎖ポリペプチドである。クラスＩＨＬＡ重鎖ポリペプチドとしては、ＨＬＡ−Ａ重鎖ポリペプチド、ＨＬＡ−Ｂ重鎖ポリペプチド、ＨＬＡ−Ｃ重鎖ポリペプチド、ＨＬＡ−Ｅ重鎖ポリペプチド、ＨＬＡ−Ｆ重鎖ポリペプチド、およびＨＬＡ−Ｇ重鎖ポリペプチドが挙げられる。一部の例では、多量体ポリペプチドのＭＨＣポリペプチドは、クラスＩＩＨＬＡポリペプチド、例えば、クラスＩＩＨＬＡα鎖またはクラスＩＩＨＬＡβ鎖である。ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドとしては、ＭＨＣクラスＩＩＤＰαおよびβポリペプチド、ＤＭαおよびβポリペプチド、ＤＯＡαおよびβポリペプチド、ＤＯＢαおよびβポリペプチド、ＤＱαおよびβポリペプチド、ならびに、ＤＲαおよびβポリペプチドが挙げられる。
【００５５】
図８は、１１種の成熟ＭＨＣクラスＩ重鎖ペプチド配列（それらのリーダー配列または膜貫通ドメインは含まない）のアライメントを示している。アラインした配列は、ヒトＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、およびＨＬＡ−Ｃ、マウスＨ２Ｋタンパク質配列、ＨＬＡ−Ａの３種の変異体（ｖａｒ．１、ｖａｒ．２Ｃ、およびｖａｒ．２ＣＰ）、ならびに、３種のヒトＨＬＡ−Ａ変異体（ＨＬＡ−Ａ＊１１０１、ＨＬＡ−Ａ＊２４０２、およびＨＬＡ−Ａ＊３３０３）である。アライメント内に示しているものは、結合エピトープペプチドの不在下でＭＨＣ−β２Ｍ複合体を安定化させるジスルフィド結合を形成するために、システイン残基が挿入され得る位置（成熟タンパク質の８４および１３９）である。更にアライメント内に示しているものは、β２Ｍと鎖内ジスルフィド結合を形成可能（例えば、ａａ１２において）なシステイン残基で置換され得る２３６位（成熟ポリペプチドの）である。それらの位置のそれぞれの上に矢印を示し、残基を太字にしている。アライメント内に示す７番目のＨＬＡ−Ａ配列（ｖａｒ．２ｃ）は、８４位、１３９位および２３６位においてＣ残基で置換された変異体２の配列を示している。残基８４、１３９および２３６の両側に隣接するボックスは、（ｉ）任意の天然アミノ酸、または（ｉｉ）プロリンまたはグリシンを除く任意の天然アミノ酸から独立して選択される１〜５つのアミノ酸で置換され得、ａａｃ１（「アミノ酸クラスター１」）、ａａｃ２（「アミノ酸クラスター２」）、ａａｃ３（「アミノ酸クラスター３」）、ａａｃ４（「アミノ酸クラスター４」）、ａａｃ５（「アミノ酸クラスター５」）、およびａａｃ６（「アミノ酸クラスター６」）で示される、６セットの５残基の片側における５アミノ酸のグループを示している。
【００５６】
一部の例では、ｉ）ａａ１（アミノ酸クラスター１）は、アミノ酸配列ＧＴＬＲＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１９）、または、１つまたは２つのアミノ酸が欠失したまたはその他の天然アミノ酸で置換されている（例えば、ＬがＩ、Ｖ、ＡまたはＦで置換されている）配列であってもよく、ｉｉ）ａａ２（アミノ酸クラスター２）は、アミノ酸配列ＹＮＱＳＥ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２０）、または、１つまたは２つのアミノ酸が欠失したまたはその他の天然アミノ酸で置換されている（例えば、ＮがＱで置換されている、ＱがＮで置換されている、および／または、ＥがＤで置換されている）配列であってもよく、ｉｉｉ）ａａ３（アミノ酸クラスター３）は、アミノ酸配列ＴＡＡＤＭ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２１）、または、１つまたは２つのアミノ酸が欠失したまたはその他の天然アミノ酸で置換されている（例えば、ＴがＳで置換されている、ＡがＧで置換されている、ＤがＥで置換されている、および／または、ＭがＬ、ＶまたはＩで置換されている）配列であってもよく、ｉｖ）ａａ４（アミノ酸クラスター４）は、アミノ酸配列ＡＱＴＴＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２２）、または、１つまたは２つのアミノ酸が欠失したまたはその他の天然アミノ酸で置換されている（例えば、ＡがＧで置換されている、ＱがＮで置換されている、ＴがＳで置換されている、および／または、ＫがＲまたはＱで置換されている）配列であってもよく、ｖ）ａａ５（アミノ酸クラスター５）は、アミノ酸配列ＶＥＴＲＰ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２３）、または、１つまたは２つのアミノ酸が欠失したまたはその他の天然アミノ酸で置換されている（例えば、ＶがＩまたはＬで置換されている、ＥがＤで置換されている、ＴがＳで置換されている、および／または、ＲがＫで置換されている）配列であってもよく、および／または、ｖｉ）ａａ６（アミノ酸クラスター６）は、アミノ酸配列ＧＤＧＴＦ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２４）、または、１つまたは２つのアミノ酸が欠失したまたはその他の天然アミノ酸で置換されている（例えば、ＤがＥで置換されている、ＴがＳで置換されている、または、ＦがＬ、ＷまたはＹで置換されている）配列であってもよい。
【００５７】
表１は、本開示のＴＭＭＰへと組み込み可能なＨＬＡ重鎖の例を示している。
【００５８】
（表１）
2020533273.tif 000003
2020533273.tif 000004
【００５９】
ＨＬＡ−Ａ
１つの例では、多量体ポリペプチドのＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、以下のヒトＨＬＡ−Ａ重鎖アミノ酸配列、
2020533273.tif 000005
に対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または、１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでいてもよい。
【００６０】
ＨＬＡ−Ａ（Ｙ８４Ａ、Ａ２３６Ｃ）
一部の例では、ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドはＹ８４Ａ置換およびＡ２３６Ｃ置換を含む。例えば、一部の例では、ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、以下のヒトＨＬＡ−Ａ重鎖（Ｙ８４Ａ、Ａ２３６Ｃ）アミノ酸配列、
2020533273.tif 000006
（アミノ酸８４はＡｌａであり、アミノ酸２３６はＣｙｓである）
に対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または、１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の例では、Ｃｙｓ−２３６は、Ｒ１２Ｃ置換を含む変異β２ＭポリペプチドのＣｙｓ−１２と鎖間ジスルフィド結合を形成する。
【００６１】
ＨＬＡ−Ａ（Ｙ８４Ｃ、Ａ１３９Ｃ）
一部の例では、ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドはＹ８４Ｃ置換およびＡ１３９Ｃ置換を含む。例えば、一部の例では、ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、以下のヒトＨＬＡ−Ａ重鎖（Ｙ８４Ｃ、Ａ１３９Ｃ）アミノ酸配列、
2020533273.tif 000007
（アミノ酸８４はＣｙｓであり、アミノ酸１３９はＣｙｓである）
に対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または、１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の例では、Ｃｙｓ−８４は、Ｃｙｓ−１３９と鎖内ジスルフィド結合を形成する。
【００６２】
ＨＬＡ−Ａ  Ａ１１（ＨＬＡ−Ａ＊１１０１）
１つの非限定例として、多量体ポリペプチドのＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、以下のヒトＨＬＡ−Ａ  Ａ１１重鎖アミノ酸配列、
2020533273.tif 000008
に対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または、１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでいてもよい。このようなＭＨＣクラスＩ重鎖は、アジア系の個人の集団を含むアジア人集団において顕著であり得る。
【００６３】
ＨＬＡ−Ａ  Ａ１１（Ｙ８４Ａ、Ａ２３６Ｃ）
１つの非限定例として、一部の例では、ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、Ｙ８４Ａ置換とＡ２３６Ｃ置換を含むＨＬＡ−Ａ  Ａ１１対立遺伝子である。例えば、一部の例では、ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、以下のヒトＨＬＡ−Ａ  Ａ１１重鎖（Ｙ８４Ａ、Ａ２３６Ｃ）アミノ酸配列、
2020533273.tif 000009
（アミノ酸８４はＡｌａであり、アミノ酸２３６はＣｙｓである）
に対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または、１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の例では、Ｃｙｓ−２３６は、Ｒ１２Ｃ置換を含む変異β２ＭポリペプチドのＣｙｓ−１２と鎖間ジスルフィド結合を形成する。
【００６４】
ＨＬＡ−Ａ２４（ＨＬＡ−Ａ＊２４０２）
１つの非限定例として、多量体ポリペプチドのＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、以下のヒトＨＬＡ−Ａ２４重鎖アミノ酸配列、
2020533273.tif 000010
に対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または、１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでいてもよい。このようなＭＨＣクラスＩ重鎖は、アジア系の個人の集団を含むアジア人集団において顕著であり得る。一部の例では、アミノ酸８４はＡｌａである。一部の例では、アミノ酸８４はＣｙｓである。一部の例では、アミノ酸２３６はＣｙｓである。一部の例では、アミノ酸８４はＡｌａであり、アミノ酸２３６はＣｙｓである。一部の例では、アミノ酸８４はＣｙｓであり、アミノ酸２３６はＣｙｓである。
【００６５】
ＨＬＡ−Ａ３３（ＨＬＡ−Ａ＊３３０３）
１つの非限定例として、多量体ポリペプチドのＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、以下のヒトＨＬＡ−Ａ３３重鎖アミノ酸配列、
2020533273.tif 000011
に対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または、１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでいてもよい。このようなＭＨＣクラスＩ重鎖は、アジア系の個人の集団を含むアジア人集団において顕著であり得る。一部の例では、アミノ酸８４はＡｌａである。一部の例では、アミノ酸８４はＣｙｓである。一部の例では、アミノ酸２３６はＣｙｓである。一部の例では、アミノ酸８４はＡｌａであり、アミノ酸２３６はＣｙｓである。一部の例では、アミノ酸８４はＣｙｓであり、アミノ酸２３６はＣｙｓである。
【００６６】
ＨＬＡ−Ｂ
別の例では、多量体ポリペプチドのＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、以下のヒトＨＬＡ−Ｂ重鎖アミノ酸配列、
2020533273.tif 000012
に対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または、１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでいてもよい。
【００６７】
ＨＬＡ−Ｂ（Ｙ８４Ａ、Ａ２３６Ｃ）
１つの非限定例として、一部の例では、ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、Ｙ８４Ａ置換とＡ２３６Ｃ置換を含むＨＬＡ−Ｂポリペプチドである。例えば、一部の例では、ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、以下のヒトＨＬＡ−Ｂ重鎖（Ｙ８４Ａ、Ａ２３６Ｃ）アミノ酸配列、
2020533273.tif 000013
（アミノ酸８４はＡｌａであり、アミノ酸２３６はＣｙｓである）
に対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または、１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の例では、Ｃｙｓ−２３６は、Ｒ１２Ｃ置換を含む変異β２ＭポリペプチドのＣｙｓ−１２と鎖間ジスルフィド結合を形成する。
【００６８】
ＨＬＡ−Ｂ（Ｙ８４Ｃ、Ａ１３９Ｃ）
一部の例では、ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドはＹ８４Ｃ置換およびＡ１３９Ｃ置換を含む。例えば、一部の例では、ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、以下のヒトＨＬＡ−Ｂ重鎖（Ｙ８４Ｃ、Ａ１３９Ｃ）アミノ酸配列、
2020533273.tif 000014
（アミノ酸８４はＣｙｓであり、アミノ酸１３９はＣｙｓである）
に対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または、１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の例では、Ｃｙｓ−８４は、Ｃｙｓ−１３９と鎖内ジスルフィド結合を形成する。
【００６９】
ＨＬＡ−Ｃ
別の例では、多量体ポリペプチドのＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、以下のヒトＨＬＡ−Ｃ重鎖アミノ酸配列、
2020533273.tif 000015
に対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または、１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでいてもよい。
【００７０】
ＨＬＡ−Ｃ（Ｙ８４Ａ、Ａ２３６Ｃ）
１つの非限定例として、一部の例では、ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、Ｙ８４Ａ置換とＡ２３６Ｃ置換を含むＨＬＡ−Ｃポリペプチドである。例えば、一部の例では、ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、以下のヒトＨＬＡ−Ｃ重鎖（Ｙ８４Ａ、Ａ２３６Ｃ）アミノ酸配列、
2020533273.tif 000016
（アミノ酸８４はＡｌａであり、アミノ酸２３６はＣｙｓである）
に対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または、１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の例では、Ｃｙｓ−２３６は、Ｒ１２Ｃ置換を含む変異β２ＭポリペプチドのＣｙｓ−１２と鎖間ジスルフィド結合を形成する。
【００７１】
ＨＬＡ−Ｃ（Ｙ８４Ｃ、Ａ１３９Ｃ）
一部の例では、ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドはＹ８４Ｃ置換およびＡ１３９Ｃ置換を含む。例えば、一部の例では、ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、以下のヒトＨＬＡ−Ｃ重鎖（Ｙ８４Ｃ、Ａ１３９Ｃ）アミノ酸配列、
2020533273.tif 000017
（アミノ酸８４はＣｙｓであり、アミノ酸１３９はＣｙｓである）
に対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または、１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の例では、Ｃｙｓ−８４は、Ｃｙｓ−１３９と鎖内ジスルフィド結合を形成する。
【００７２】
多量体ポリペプチドのＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、図５Ａ〜図５Ｋに記載のアミノ酸配列のうちの１つに対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または、１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでいてもよい。
【００７３】
１つの例では、多量体ポリペプチドのＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、図３Ａに記載のヒトＨＬＡ−Ａ重鎖ポリペプチドのアミノ酸配列のアミノ酸２５〜３６５に対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または、１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでいてもよい。
【００７４】
別の例では、多量体ポリペプチドのＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、図３Ｂに記載のヒトＨＬＡ−Ｂ重鎖ポリペプチドのアミノ酸配列のアミノ酸２５〜３６２に対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または、１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでいてもよい。
【００７５】
別の例では、多量体ポリペプチドのＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、図３Ｃに記載のヒトＨＬＡ−Ｃ重鎖ポリペプチドのアミノ酸配列のアミノ酸２５〜３６２に対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または、１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでいてもよい。
【００７６】
別の例では、多量体ポリペプチドのＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、以下のアミノ酸配列、
2020533273.tif 000018
に対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または、１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでいてもよい。
【００７７】
多量体ポリペプチドのβ２−ミクログロブリン（β２Ｍ）ポリペプチドは、ヒトβ２Ｍポリペプチド、非ヒト霊長類β２Ｍポリペプチド、マウスβ２Ｍポリペプチドなどであってもよい。一部の例では、β２Ｍポリペプチドは、図４に記載のβ２Ｍアミノ酸配列に対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または、１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の例では、β２Ｍポリペプチドは、図４に記載のβ２Ｍアミノ酸配列のアミノ酸２１〜１１９に対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または、１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【００７８】
一部の例では、ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、以下のアミノ酸配列、
2020533273.tif 000019
（｛Ｃ｝で示すシステイン残基は、α１へリックスとα２−１へリックスの間にジスルフィド結合を形成する）
を含む。上記の配列において、「ａａ１」は「アミノ酸クラスター１」であり、「ａａ２」は「アミノ酸クラスター２」であり、「ａａ３」は「アミノ酸クラスター３」であり、「ａａ４」は「アミノ酸クラスター４」であるが、例えば、図８を参照されたい。「アミノ酸クラスター」とは、図８に記載の５連続アミノ酸のクラスターのことである。
【００７９】
一部の例では、好適なβ２Ｍポリペプチドは、以下のアミノ酸配列、
2020533273.tif 000020
を含み、ＨＬＡクラスＩ重鎖ポリペプチドは、以下のアミノ酸配列、
2020533273.tif 000021
（｛Ｃ｝で示すシステイン残基は、α１へリックスとα２−１へリックスの間にジスルフィド結合を形成し、（Ｃ）残基は、１２位のβ２Ｍポリペプチドシステインとジスルフィド結合を形成する）
を含む。上記の配列において、「ａａ１」は「アミノ酸クラスター１」であり、「ａａ２」は「アミノ酸クラスター２」であり、「ａａ３」は「アミノ酸クラスター３」であり、「ａａ４」は「アミノ酸クラスター４」であり、「ａａ５」は「アミノ酸クラスター５」であり、「ａａ６」は「アミノ酸クラスター６」であるが、例えば、図８を参照されたい。ａａ１、ａａ２、ａａ３、ａａ４、ａａ５、およびａａ６のそれぞれの存在は、１〜５アミノ酸残基であり、１〜５アミノ酸残基となるように独立して選択され、それらアミノ酸残基は、ｉ）任意の天然（例えば、コード）アミノ酸から独立して選択される、または、ｉｉ）プロリンまたはグリシンを除く任意の天然アミノ酸である。
【００８０】
一部の例では、ＭＨＣポリペプチドは、参照ＭＨＣポリペプチド（参照ＭＨＣポリペプチドは野生型ＭＨＣポリペプチドであってもよい）と比較して単一のアミノ酸置換を含み、その単一のアミノ酸置換は、アミノ酸をシステイン（Ｃｙｓ）残基で置換する。このようなシステイン残基は、本開示の多量体ポリペプチドの第１のポリペプチドのＭＨＣポリペプチド内に存在する場合、本開示の多量体ポリペプチドの第２のポリペプチド鎖内に存在するシステイン残基とジスルフィド結合を形成し得る。
【００８１】
一部の例では、多量体ポリペプチドの第１のポリペプチド内の第１のＭＨＣポリペプチド、および／または、多量体ポリペプチド第２のポリペプチド内の第２のＭＨＣポリペプチドは、アミノ酸をシステインで置換するアミノ酸置換を含み、第１のＭＨＣポリペプチド内の置換システインは、第２のＭＨＣポリペプチド内のシステインとジスルフィド結合を形成し、第１のＭＨＣポリペプチド内のシステインは、第２のＭＨＣポリペプチド内の置換システインとジスルフィド結合を形成する、または、第１のＭＨＣポリペプチド内の置換システインは、第２のＭＨＣポリペプチド内の置換システインとジスルフィド結合を形成する。
【００８２】
例えば、一部の例では、以下の、ＨＬＡβ２−ミクログロブリン内の残基とＨＬＡクラスＩ重鎖内の残基のペア、１）β２Ｍ残基１２、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基２３６、２）β２Ｍ残基１２、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基２３７、３）β２Ｍ残基８、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基２３４、４）β２Ｍ残基１０、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基２３５、５）β２Ｍ残基２４、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基２３６、６）β２Ｍ残基２８、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基２３２、７）β２Ｍ残基９８、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基１９２、８）β２Ｍ残基９９、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基２３４、９）β２Ｍ残基３、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基１２０、１０）β２Ｍ残基３１、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基９６、１１）β２Ｍ残基５３、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基３５、１２）β２Ｍ残基６０、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基９６、１３）β２Ｍ残基６０、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基１２２、１４）β２Ｍ残基６３、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基２７、１５）β２Ｍ残基Ａｒｇ３、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ｇｌｙ１２０、１６）β２Ｍ残基Ｈｉｓ３１、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ｇｌｎ９６、１７）β２Ｍ残基Ａｓｐ５３、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ａｒｇ３５、１８）β２Ｍ残基Ｔｒｐ６０、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ｇｌｎ９６、１９）β２Ｍ残基Ｔｒｐ６０、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ａｓｐ１２２、２０）β２Ｍ残基Ｔｙｒ６３、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ｔｙｒ２７、２１）β２Ｍ残基Ｌｙｓ６、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ｇｌｕ２３２、２２）β２Ｍ残基Ｇｌｎ８、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ａｒｇ２３４、２３）β２Ｍ残基Ｔｙｒ１０、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ｐｒｏ２３５、２４）β２Ｍ残基Ｓｅｒ１１、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ｇｌｎ２４２、２５）β２Ｍ残基Ａｓｎ２４、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ａｌａ２３６、２６）β２Ｍ残基Ｓｅｒ２８、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ｇｌｕ２３２、２７）β２Ｍ残基Ａｓｐ９８、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ｈｉｓ１９２、および、２８）β２Ｍ残基Ｍｅｔ９９、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ａｒｇ２３４、の一方は、システインで置換される（残基番号は成熟ポリペプチドの番号である）。ＭＨＣ／ＨＬＡクラスＩ重鎖のアミノ酸ナンバリングは、シグナルペプチドを含まない成熟ＭＨＣ／ＨＬＡクラスＩ重鎖を基準としている。例えば、図３Ａに記載のアミノ酸配列（シグナルペプチドを含む）において、Ｇｌｙ１２０はＧｌｙ１４４であり、Ｇｌｎ９６はＧｌｎ１２０である、などである。一部の例では、β２ＭポリペプチドはＲ１２Ｃ置換を含み、ＨＬＡクラスＩ重鎖はＡ２３６Ｃ置換を含み、このような例においては、ジスルフィド結合は、β２ＭポリペプチドのＣｙｓ−１２とＨＬＡクラスＩ重鎖のＣｙｓ−２３６の間に形成される。例えば、一部の例では、成熟ＨＬＡ−Ａアミノ酸配列の残基２３６（すなわち、図３Ａに記載のアミノ酸配列の残基２６０）はＣｙｓで置換されている。一部の例では、成熟ＨＬＡ−Ｂアミノ酸配列の残基２３６（すなわち、図３Ｂに記載のアミノ酸配列の残基２６０）はＣｙｓで置換されている。一部の例では、成熟ＨＬＡ−Ｃアミノ酸配列の残基２３６（すなわち、図３Ｃに記載のアミノ酸配列の残基２６０）はＣｙｓで置換されている。一部の例では、図４に記載のアミノ酸配列の残基３２（成熟β２ＭのＡｒｇ−１２に対応する）��Ｃｙｓで置換されている。
【００８３】
一部の例では、β２Ｍポリペプチドは、アミノ酸配列、
2020533273.tif 000022
を含む。一部の例では、β２Ｍポリペプチドは、アミノ酸配列、
2020533273.tif 000023
を含む。
【００８４】
一部の例では、ＨＬＡクラスＩ重鎖ポリペプチドは、アミノ酸配列、
2020533273.tif 000024
を含む。
【００８５】
一部の例では、ＨＬＡクラスＩ重鎖ポリペプチドは、アミノ酸配列、
2020533273.tif 000025
を含む。
【００８６】
一部の例では、ＨＬＡクラスＩ重鎖ポリペプチドは、アミノ酸配列、
2020533273.tif 000026
を含む。
【００８７】
一部の例では、β２Ｍポリペプチドは、以下のアミノ酸配列、
2020533273.tif 000027
を含み、本開示の多量体ポリペプチドのＨＬＡクラスＩ重鎖ポリペプチドは、以下のアミノ酸配列、
2020533273.tif 000028
（下線を付した太字のＣｙｓ残基は、多量体ポリペプチド内において互いにジスルフィド結合を形成する）
を含む。
【００８８】
一部の例では、β２Ｍポリペプチドは、アミノ酸配列、
2020533273.tif 000029
を含む。
【００８９】
一部の例では、本開示のＴＭＭＰの第１のポリペプチドと第２のポリペプチドは、ｉ）第１のポリペプチド鎖内のペプチドエピトープとβ２Ｍポリペプチドを連結するリンカー内に存在するＣｙｓ残基およびｉｉ）第２のポリペプチド鎖内のＭＨＣクラスＩ重鎖内に存在するＣｙｓ残基を介して、互いにジスルフィド結合している。一部の例では、ＭＨＣクラスＩ重鎖内に存在するＣｙｓ残基は、Ｙ８４Ｃ置換として導入されたＣｙｓである。一部の例では、第１のポリペプチド鎖内のペプチドエピトープとβ２Ｍポリペプチドを連結するリンカーは、ＧＣＧＧＳ（Ｇ４Ｓ）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３５）（ｎは１、２、３、４、５、６、７、８、または９である）である。例えば、一部の例では、リンカーはアミノ酸配列
2020533273.tif 000030
を含む。別の例では、リンカーはアミノ酸配列
2020533273.tif 000031
を含む。ジスルフィド結合した本開示の多量体ポリペプチドの第１のポリペプチドと第２のポリペプチドの例については、図７Ａ〜図７Ｄにおいて概略的に示している。
【００９０】
スキャフォールドポリペプチド
ＴＭＭＰはＦｃポリペプチドを含んでいてもよく、または、別の好適なスキャフォールドポリペプチドを含んでいてもよい。
【００９１】
好適なスキャフォールドポリペプチドとしては、抗体ベーススキャフォールドポリペプチドおよび非抗体ベーススキャフォールドが挙げられる。非抗体ベーススキャフォールドとしては、例えば、アルブミン、ＸＴＥＮ（伸長組換え）ポリペプチド、トランスフェリン、Ｆｃ受容体ポリペプチド、エラスチン様ポリペプチド（例えば、Ｈａｓｓｏｕｎｅｈ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．５０２：２１５を参照のこと。例えば、（Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｘ−Ｇｌｙ、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９）（式中、Ｘは、プロリン以外の任意のアミノ酸）のペンタペプチド繰り返し単位を含むポリペプチド、アルブミン結合ポリペプチド、シルク様ポリペプチド（例えば、Ｖａｌｌｕｚｚｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｐｈｉｌｏｓ  Ｔｒａｎｓ  Ｒ  Ｓｏｃ  Ｌｏｎｄ  Ｂ  Ｂｉｏｌ  Ｓｃｉ．３５７：１６５を参照のこと）、シルク−エラスチン様ポリペプチド（ＳＥＬＰ、例えば、Ｍｅｇｅｅｄ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ．５４：１０７５を参照のこと）などが挙げられる。好適なＸＴＥＮポリペプチドとしては、例えば、ＷＯ２００９／０２３２７０、ＷＯ２０１０／０９１１２２、ＷＯ２００７／１０３５１５、ＵＳ２０１０／０１８９６８２、およびＵＳ２００９／００９２５８２に開示されているＸＴＥＮポリペプチドが挙げられるが、Ｓｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２７：１１８６もまた参照されたい。好適なアルブミンポリペプチドとしては、例えば、ヒト血清アルブミンが挙げられる。
【００９２】
好適なスキャフォールドポリペプチドは、一部の例では、半減期延長ポリペプチドである。それゆえ、一部の例では、好適なスキャフォールドポリペプチドは、スキャフォールドポリペプチドを欠く対照多量体ポリペプチドと比較して、多量体ポリペプチドのインビボ半減期（例えば、血清中半減期）を延長する。例えば、一部の例では、スキャフォールドポリペプチドは、スキャフォールドポリペプチドを欠く対照多量体ポリペプチドと比較して、多量体ポリペプチドのインビボ半減期（例えば、血清中半減期）を、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約１００倍、または、１００倍超延長する。１つの例として、一部の例では、Ｆｃポリペプチドは、Ｆｃポリペプチドを欠く対照多量体ポリペプチドと比較して、多量体ポリペプチドのインビボ半減期（例えば、血清中半減期）を、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約１００倍、または、１００倍超延長する。
【００９３】
Ｆｃポリペプチド
一部の例では、多量体ポリペプチドの第１および／または第２のポリペプチド鎖はＦｃポリペプチドを含む。多量体ポリペプチドのＦｃポリペプチドは、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ、ヒトＩｇＧ２  Ｆｃ、ヒトＩｇＧ３  Ｆｃ、ヒトＩｇＧ４  Ｆｃなどであってもよい。一部の例では、Ｆｃポリペプチドは、図２Ａ〜図２Ｇに記載のＦｃ領域のアミノ酸配列に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または、１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の例では、Ｆｃ領域は、図２Ａに記載のヒトＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドに対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または、１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の例では、Ｆｃ領域は、図２Ａに記載のヒトＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドに対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または、１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、Ｎ７７の置換を含み、例えば、ＦｃポリペプチドはＮ７７Ａ置換を含む。一部の例では、Ｆｃポリペプチドは、図２Ａに記載のヒトＩｇＧ２  Ｆｃポリペプチドに対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または、１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、例えば、Ｆｃポリペプチドは、図２Ａに記載のヒトＩｇＧ２  Ｆｃポリペプチドのアミノ酸９９〜３２５に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または、１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の例では、Ｆｃポリペプチドは、図２Ａに記載のヒトＩｇＧ３  Ｆｃポリペプチドに対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または、１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、例えば、Ｆｃポリペプチドは、図２Ａに記載のヒトＩｇＧ３  Ｆｃポリペプチドのアミノ酸１９〜２４６に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または、１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の例では、Ｆｃポリペプチドは、図２Ｂに記載のヒトＩｇＭ  Ｆｃポリペプチドに対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくと��約９９％、または、１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、例えば、Ｆｃポリペプチドは、図２Ｂに記載のヒトＩｇＭ  Ｆｃポリペプチドのアミノ酸１〜２７６に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または、１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の例では、Ｆｃポリペプチドは、図２Ｃに記載のヒトＩｇＡ  Ｆｃポリペプチドに対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または、１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、例えば、Ｆｃポリペプチドは、図２Ｃに記載のヒトＩｇＡ  Ｆｃポリペプチドのアミノ酸１〜２３４に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または、１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【００９４】
一部の例では、多量体ポリペプチド内に存在するＦｃポリペプチドは、図２Ａに記載のアミノ酸配列（ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ）を含む。一部の例では、多量体ポリペプチド内に存在するＦｃポリペプチドは、アスパラギン以外のアミノ酸でのＮ２９７の置換を除く、図２Ａに記載のアミノ酸配列（ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ）を含む。一部の例では、多量体ポリペプチド内に存在するＦｃポリペプチドは、図２Ｃに記載のアミノ酸配列（Ｎ２９７Ａ置換を含むヒトＩｇＧ１  Ｆｃ）を含む。一部の例では、多量体ポリペプチド内に存在するＦｃポリペプチドは、ロイシン以外のアミノ酸でのＬ２３４の置換を除く、図２Ａに記載のアミノ酸配列（ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ）を含む。一部の例では、多量体ポリペプチド内に存在するＦｃポリペプチドは、ロイシン以外のアミノ酸でのＬ２３５の置換を除く、図２Ａに記載のアミノ酸配列（ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ）を含む。
【００９５】
一部の例では、多量体ポリペプチド内に存在するＦｃポリペプチドは、図２Ｅに記載のアミノ酸配列を含む。一部の例では、多量体ポリペプチド内に存在するＦｃポリペプチドは、図２Ｆに記載のアミノ酸配列を含む。一部の例では、多量体ポリペプチド内に存在するＦｃポリペプチドは、図２Ｇに記載のアミノ酸配列（Ｌ２３４Ａ置換とＬ２３５Ａ置換を含むヒトＩｇＧ１  Ｆｃ）を含む。一部の例では、多量体ポリペプチド内に存在するＦｃポリペプチドは、プロリン以外のアミノ酸でのＰ３３１の置換を除く、図２Ａに記載のアミノ酸配列（ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ）を含み、一部の例では、置換はＰ３３１Ｓ置換である。一部の例では、多量体ポリペプチド内に存在するＦｃポリペプチドは、ロイシン以外のアミノ酸でのＬ２３４とＬ２３５の置換を除く、図２Ａに記載のアミノ酸配列（ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ）を含む。一部の例では、多量体ポリペプチド内に存在するＦｃポリペプチドは、ロイシン以外のアミノ酸でのＬ２３４とＬ２３５の置換、および、プロリン以外のアミノ酸でのＰ３３１の置換を除く、図２Ａに記載のアミノ酸配列（ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ）を含む。一部の例では、多量体ポリペプチド内に存在するＦｃポリペプチドは、図２Ｂに記載のアミノ酸配列（Ｌ２３４Ｆ置換、Ｌ２３５Ｅ置換とＰ３３１Ｓ置換を含むヒトＩｇＧ１  Ｆｃ）を含む。一部の例では、多量体ポリペプチド内に存在するＦｃポリペプチドは、Ｌ２３４Ａ置換とＬ２３５Ａ置換を含むＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドである。
【００９６】
リンカー
本開示のＴＭＭＰは１つまたは複数のリンカーを含んでいてもよく、１つまたは複数のリンカーは、ｉ）ＭＨＣクラスＩまたはクラスＩＩポリペプチドとＩｇ  Ｆｃポリペプチドの間（このようなリンカーは本明細書では「Ｌ１」と呼ぶ）、ｉｉ）免疫調節ポリペプチドとＭＨＣクラスＩまたはクラスＩＩポリペプチドの間（このようなリンカーは本明細書では「Ｌ２」と呼ぶ）、ｉｉｉ）第１の免疫調節ポリペプチドと第２の免疫調節ポリペプチドの間（このようなリンカーは本明細書では「Ｌ３」と呼ぶ）、ｉｖ）ペプチド抗原（「エピトープ」）とＭＨＣクラスＩまたはクラスＩＩポリペプチドの間、ｖ）ＭＨＣクラスＩまたはクラスＩＩポリペプチドと二量体化ポリペプチド（例えば、二量体化ペアの第１または第２のメンバー）の間、および、ｖｉ）二量体化ポリペプチド（例えば、二量体化ペアの第１または第２のメンバー）とＩｇ  Ｆｃポリペプチドの間、のうちの１つまたは複数にある。
【００９７】
好適なリンカー（「スペーサー」とも呼ばれる）は、容易に選択することができ、多数の好適な長さ、例えば、４アミノ酸〜１０アミノ酸、５アミノ酸〜９アミノ酸、６アミノ酸〜８アミノ酸、または、７アミノ酸〜８アミノ酸を含む、１アミノ酸〜２５アミノ酸、３アミノ酸〜２０アミノ酸、２アミノ酸〜１５アミノ酸、３アミノ酸〜１２アミノ酸などのいずれかであってもよい。好適なリンカーは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５アミノ酸長であってもよい。一部の例では、リンカーは、２５アミノ酸〜５０アミノ酸の長さ、例えば、２５〜３０、３０〜３５、３５〜４０、４０〜４５、または、４５〜５０アミノ酸長を有する。
【００９８】
例示的なリンカーとしては、グリシンポリマー（Ｇ）ｎ、グリシン−セリンポリマー（例えば、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６０）、および（ＧＧＧＳ）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６１）を含み、ｎは、少なくとも１の整数である）、グリシン−アラニンポリマー、アラニン−セリンポリマー、および、当該技術分野において周知のその他フレキシブルリンカーが挙げられる。グリシンポリマーおよびグリシン−セリンポリマーを使用してもよく、ＧｌｙとＳｅｒの両方は比較的自由であるため、構成要素間の中間テザーとして機能することができる。グリシンポリマーを使用してもよく、グリシンは、アラニンよりも更に相当φ−ψ空間に接近し、より長い側鎖を有する残基と比べはるかに制限を受けない（Ｓｃｈｅｒａｇａ，Ｒｅｖ．Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｃｈｅｍ．１１１７３−１４２（１９９２）を参照されたい）。例示的なリンカーは、
2020533273.tif 000032
などを含むがこれらに限定されないアミノ酸配列を含んでいてもよい。例示的なリンカーとしては、例えば、Ｇｌｙ（Ｓｅｒ４）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５１）（ｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である）を挙げてもよい。一部の例では、リンカーは、アミノ酸配列（ＧＳＳＳＳ）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６８）（ｎは４である）を含む。一部の例では、リンカーは、アミノ酸配列（ＧＳＳＳＳ）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６８）（ｎは５である）を含む。一部の例では、リンカーは、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６９）（ｎは１である）を含む。一部の例では、リンカーは、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６９）（ｎは２である）を含む。一部の例では、リンカーは、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６９）（ｎは３である）を含む。一部の例では、リンカーは、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６９）（ｎは４である）を含む。一部の例では、リンカーは、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６９）（ｎは５である）を含む。一部の例では、リンカーは、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６９）（ｎは６である）を含む。一部の例では、リンカーは、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６９）（ｎは７である）を含む。一部の例では、リンカーは、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６９）（ｎは８である）を含む。一部の例では、リンカーは、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６９）（ｎは９である）を含む。一部の例では、リンカーは、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６９）（ｎは１０である）を含む。一部の例では、リンカーはアミノ酸配列ＡＡＡＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７０）を含む。
【００９９】
一部の例では、本開示の多量体ポリペプチドの第１のポリペプチド内に存在するリンカーポリペプチドは、本開示の多量体ポリペプチドの第２のポリペプチド内に存在するシステイン残基とジスルフィド結合を形成し得るシステイン残基を含む。一部の例では、例えば、好適なリンカーは、アミノ酸配列
2020533273.tif 000033
を含む。別の例では、好適なリンカーは、アミノ酸配列ＧＣＧＧＳ（Ｇ４Ｓ）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３５）（ｎは１、２、３、４、５、６、７、８、または９である）を含んでいてもよい。例えば、一部の例では、リンカーはアミノ酸配列
2020533273.tif 000034
を含む。別の例では、リンカーはアミノ酸配列
2020533273.tif 000035
を含む。
【０１００】
エピトープ
多量体ポリペプチド内に存在するエピトープは、約４アミノ酸〜約２５アミノ酸の長さを有していてもよく、例えば、エピトープは、４アミノ酸（ａａ）〜１０ａａ、１０ａａ〜１５ａａ、１５ａａ〜２０ａａ、または、２０ａａ〜２５ａａの長さを有していてもよい。例えば、本開示の多量体ポリペプチド内に存在するエピトープは、４アミノ酸（ａａ）、５ａａ、６ａａ、７、ａａ、８ａａ、９ａａ、１０ａａ、１１ａａ、１２ａａ、１３ａａ、１４ａａ、１５ａａ、１６ａａ、１７ａａ、１８ａａ、１９ａａ、２０ａａ、２１ａａ、２２ａａ、２３ａａ、２４ａａ、または２５ａａの長さを有していてもよい。一部の例では、多量体ポリペプチド内に存在するエピトープは、５アミノ酸〜１０アミノ酸、例えば、５ａａ、６ａａ、７ａａ、８ａａ、９ａａ、または１０ａａの長さを有する。
【０１０１】
多量体ポリペプチド内に存在するエピトープは、Ｔ細胞が特異的に結合するペプチドであり、それはすなわち、エピトープは、エピトープ特異的Ｔ細胞により結合される。エピトープ特異的Ｔ細胞は、参照アミノ酸配列を有するエピトープには結合するが、参照アミノ酸配列とは異なるエピトープには実質的に結合しない。例えば、エピトープ特異的Ｔ細胞は、参照アミノ酸配列を有するエピトープに結合し、参照アミノ酸配列とは異なるエピトープには、結合するとしても、１０−６Ｍ未満、１０−５Ｍ未満、または、１０−４Ｍ未満の親和性で結合する。エピトープ特異的Ｔ細胞は、エピトープ特異的Ｔ細胞が少なくとも１０−７Ｍ、少なくとも１０−８Ｍ、少なくとも１０−９Ｍ、または、少なくとも１０−１０Ｍの親和性で特異的であるエピトープに結合し得る。
【０１０２】
好適なエピトープとしては、がん関連抗原内に存在するエピトープが挙げられるがこれらに限定されない。がん関連抗原は当該技術分野において周知であり、例えば、Ｃｈｅｅｖｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１５：５３２３を参照されたい。がん関連抗原としては、α葉酸受容体、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４４ｖ７／８、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、上皮糖タンパク質−２（ＥＧＰ−２）、上皮糖タンパク質−４０（ＥＧＰ−４０）、葉酸結合タンパク質（ＦＢＰ）、胎児型アセチルコリン受容体、ガングリオシド抗原ＧＤ２、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＩＬ−１３Ｒ−ａ２、κ軽鎖、ＬｅＹ、Ｌ１細胞接着分子、黒色腫関連抗原（ＭＡＧＥ）、ＭＡＧＥ−Ａ１、メソテリン、ＭＵＣ１、ＮＫＧ２Ｄリガンド、がん胎児性抗原（ｈ５Ｔ４）、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、腫瘍関連糖タンパク質−７２（ＴＡＧ−７２）、血管内皮増殖因子受容体２（ＶＥＧＦ−Ｒ２）が挙げられるがこれらに限定されない。例えば、Ｖｉｇｎｅｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １３：１５；およびＶｉｇｎｅｒｏｎ（２０１５）ＢｉｏＭｅｄ  Ｒｅｓ．Ｉｎｔ’ｌ  Ａｒｔｉｃｌｅ  ＩＤ  ９４８５０１；ならびにｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＥＧＦＲ）ｖＩＩＩ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ（例えば、Ｗｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：２９６５；およびＭｉａｏ  ｅｔ  ａｌ．（２０１４）ＰＬｏＳＯｎｅ  ９：ｅ９４２８１を参照のこと）を参照されたい。一部の例では、エピトープは、ヒトパピローマウイルスＥ７抗原エピトープである（例えば、Ｒａｍｏｓ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３６：６６を参照のこと）。
【０１０３】
一部の例では、好適なペプチドエピトープは、ＭＵＣ１ポリペプチド、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）Ｅ６ポリペプチド、ＬＭＰ２ポリペプチド、ＨＰＶ  Ｅ７ポリペプチド、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）ｖＩＩＩポリペプチド、ＨＥＲ−２／ｎｅｕポリペプチド、黒色腫抗原ファミリーＡ３（ＭＡＧＥ  Ａ３）ポリペプチド、ｐ５３ポリペプチド、変異ｐ５３ポリペプチド、ＮＹ−ＥＳＯ−１ポリペプチド、葉酸加水分解酵素（前立腺特異的膜抗原、ＰＳＭＡ）ポリペプチド、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）ポリペプチド、Ｔ細胞が認識する黒色腫抗原（ｍｅｌａｎＡ／ＭＡＲＴ１）ポリペプチド、Ｒａｓポリペプチド、ｇｐ１００ポリペプチド、プロテイナーゼ３（ＰＲ１）ポリペプチド、ｂｃｒ−ａｂｌポリペプチド、チロシナーゼポリペプチド、サバイビンポリペプチド、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）ポリペプチド、ｈＴＥＲＴポリペプチド、肉腫転座切断点ポリペプチド、滑膜肉腫Ｘ（ＳＳＸ）切断点ポリペプチド、ＥｐｈＡ２ポリペプチド、前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）ポリペプチド、黒色腫アポトーシス抑制（ＭＬ−ＩＡＰ）ポリペプチド、α−フェトプロテイン（ＡＦＰ）ポリペプチド、上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）ポリペプチド、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２  ＥＴＳ  融合）ポリペプチド、ＮＡ１７ポリペプチド、ペアードボックス３（ＰＡＸ３）ポリペプチド、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）ポリペプチド、アンドロゲン受容体ポリペプチド、サイクリンＢ１ポリペプチド、Ｎ−ｍｙｃがん原遺伝子（ＭＹＣＮ）ポリペプチド、Ｒａｓホモログ遺伝子ファミリーメンバーＣ（ＲｈｏＣ）ポリペプチド、チロシナーゼ関連タンパク質−２（ＴＲＰ−２）ポリペプチド、メソテリンポリペプチド、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）ポリペプチド、黒色腫関連抗原−１（ＭＡＧＥ  Ａ１）ポリペプチド、シトクロムＰ４５０  １Ｂ１（ＣＹＰ１Ｂ１）ポリペプチド、胎盤特異的タンパク質１（ＰＬＡＣ１）ポリペプチド、ＢＯＲＩＳポリペプチド（ＣＣＣＴＣ結合因子またはＣＴＣＦとしても周知）、ＥＴＶ６−ＡＭＬポリペプチド、乳癌抗原ＮＹ−ＢＲ−１ポリペプチド（アンキリンリピートドメイン含有タンパク質３０Ａとも呼ばれる）、Ｇタンパク質シグナル伝達制御因子（ＲＧＳ５）ポリペプチド、Ｔ細胞が認識する扁平上皮癌抗原（ＳＡＲＴ３）ポリペプチド、炭酸脱水酵素ＩＸポリペプチド、ペアードボックス５（ＰＡＸ５）ポリペプチド、ＯＹ−ＴＥＳ１（精巣抗原、アクロシン結合タンパク質としても周知）ポリペプチド、精子タンパク質１７ポリペプチド、リンパ球細胞特異的タンパク質チロシンキナーゼ（ＬＣＫ）ポリペプチド、高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷ−ＭＡＡ）、Ａキナーゼアンカリングタンパク質−４（ＡＫＡＰ−４）、滑膜肉腫Ｘ切断点２（ＳＳＸ２）ポリペプチド、Ｘ抗原ファミリーメンバー１（ＸＡＧＥ１）ポリペプチド、Ｂ７ホモログ３（Ｂ７Ｈ３、ＣＤ２７６としても周知）ポリペプチド、レグマインポリペプチド（ＬＧＭＮ１、アスパラギニルエンドペプチダーゼとしても周知）、Ｉｇ相同性ドメインとＥＧＦ相同性ドメインを有するチロシンキナーゼ−２（Ｔｉｅ−２、アンジオポエチン−１受容体としても周知）ポリペプチド、Ｐ抗原ファミリーメン���ー４（ＰＡＧＥ４）ポリペプチド、血管内皮増殖因子受容体２（ＶＥＧＦ２）ポリペプチド、ＭＡＤ−ＣＴ−１ポリペプチド、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）ポリペプチド、血小板由来増殖因子受容体β（ＰＤＧＦβ）ポリペプチド、ＭＡＤ−ＣＴ−２ポリペプチド、Ｆｏｓ関連抗原１（ＦＯＳＬ）ポリペプチド、または、ウィルムス腫瘍−１（ＷＴ−１）ポリペプチドの、約４アミノ酸〜約２０アミノ酸長（例えば、４アミノ酸（ａａ）、５ａａ、６ａａ、７ａａ、８ａａ、９ａａ、１０ａａ、１１ａａ、１２ａａ、１３ａａ、１４ａａ、１５ａａ、１６ａａ、１７ａａ、１８ａａ、１９ａａ、または２０ａａ）のペプチドフラグメントである。
【０１０４】
がん関連抗原のアミノ酸配列は当該技術分野において周知であり、例えば、ＭＵＣ１（ＧｅｎＢａｎｋ  ＣＡＡ５６７３４）、ＬＭＰ２（ＧｅｎＢａｎｋ  ＣＡＡ４７０２４）、ＨＰＶ  Ｅ６（ＧｅｎＢａｎｋ  ＡＡＤ３３２５２）、ＨＰＶ  Ｅ７（ＧｅｎＢａｎｋ  ＡＨＧ９９４８０）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００１３３３８７０）、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＡＡＩ６７１４７）、ＭＡＧＥ−Ａ３（ＧｅｎＢａｎｋ  ＡＡＨ１１７４４）、ｐ５３（ＧｅｎＢａｎｋ  ＢＡＣ１６７９９）、ＮＹ−ＥＳＯ−１（ＧｅｎＢａｎｋ  ＣＡＡ０５９０８）、ＰＳＭＡ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＡＡＨ２５６７２）、ＣＥＡ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＡＡＡ５１９６７）、ｍｅｌａｎ／ＭＡＲＴ１（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００５５０２）、Ｒａｓ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００１１２３９１４）、ｇｐ１００（ＧｅｎＢａｎｋ  ＡＡＣ６０６３４）、ｂｃｒ−ａｂｌ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＡＡＢ６０３８８）、チロシナーゼ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＡＡＢ６０３１９）、サバイビン（ＧｅｎＢａｎｋ  ＡＡＣ５１６６０）、ＰＳＡ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＣＡＤ５４６１７）、ｈＴＥＲＴ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＢＡＣ１１０１０）、ＳＳＸ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００１２６５６２０）、Ｅｐｈ２Ａ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００４４２２）、ＰＡＰ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＡＡＨ１６３４４）、ＭＬ−ＩＡＰ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＡＡＨ１４４７５）、ＡＦＰ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００１１２５）、ＥｐＣＡＭ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００２３４５）、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２  ＥＴＳ  融合）（ＧｅｎＢａｎｋ  ＡＣＡ８１３８５）、ＰＡＸ３（ＧｅｎＢａｎｋ  ＡＡＩ０１３０１）、ＡＬＫ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００４２９５）、アンドロゲン受容体（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００００３５）、サイクリンＢ１（ＧｅｎＢａｎｋ  ＣＡＯ９９２７３）、ＭＹＣＮ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００１２８０１５７）、ＲｈｏＣ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＡＡＨ５２８０８）、ＴＲＰ−２（ＧｅｎＢａｎｋ  ＡＡＣ６０６２７）、メソテリン（ＧｅｎＢａｎｋ  ＡＡＨ０９２７２）、ＰＳＣＡ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＡＡＨ６５１８３）、ＭＡＧＥ  Ａ１（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００４９７９）、ＣＹＰ１Ｂ１（ＧｅｎＢａｎｋ  ＡＡＭ５０５１２）、ＰＬＡＣ１（ＧｅｎＢａｎｋ  ＡＡＧ２２５９６）、ＢＯＲＩＳ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００１２５５９６９）、ＥＴＶ６（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００１９７８）、ＮＹ−ＢＲ１（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿４４３７２３）、ＳＡＲＴ３（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿０５５５２１）、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＥＡＷ５８３５９）、ＰＡＸ５（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿０５７９５３）、ＯＹ−ＴＥＳ１（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿１１５８７８）、精子タンパク質１７（ＧｅｎＢａｎｋ  ＡＡＫ２０８７８）、ＬＣＫ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００１０３６２３６）、ＨＭＷ−ＭＡＡ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００１８８８）、ＡＫＡＰ−４（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００３８７７）、ＳＳＸ２（ＧｅｎＢａｎｋ  ＣＡＡ６０１１１）、ＸＡＧＥ１（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００１０９１０７３、ＸＰ＿００１１２５８３４、ＸＰ＿００１１２５８５６、およびＸＰ＿００１１２５８７２）、Ｂ７Ｈ３（ＧｅｎＢ��ｎｋ  ＮＰ＿００１０１９９０７、ＸＰ＿９４７３６８、ＸＰ＿９５０９５８、ＸＰ＿９５０９６０、ＸＰ＿９５０９６２、ＸＰ＿９５０９６３、ＸＰ＿９５０９６５、およびＸＰ＿９５０９６７）、ＬＧＭＮ１（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００１００８５３０）、ＴＩＥ−２（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿０００４５０）、ＰＡＧＥ４（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００１３０５８０６）、ＶＥＧＦＲ２（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００２２４４）、ＭＡＤ−ＣＴ−１（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００５８９３、ＮＰ＿０５６２１５）、ＦＡＰ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００４４５１）、ＰＤＧＦβ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００２６００）、ＭＡＤ−ＣＴ−２（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００１１３８５７４）、ＦＯＳＬ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００５４２９）、およびＷＴ−１（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿０００３６９）を参照されたい。これらのポリペプチドについてはまた、例えば、Ｃｈｅｅｖｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１５：５３２３，およびその中で引用されている参照文献；Ｗａｇｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｓｃｉ．１１６：１６５３；Ｍａｔｓｕｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ５：２４９；Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ  ３８３：１６８；において論述されている。
【０１０５】
一部の例では、エピトープはＨＰＶ１６Ｅ７／８２〜９０（ＬＬＭＧＴＬＧＩＶ、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７２）である。一部の例では、エピトープはＨＰＶ１６Ｅ７／８６〜９３（ＴＬＧＩＶＣＰＩ、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７３）である。一部の例では、エピトープはＨＰＶ１６Ｅ７／１１〜２０（ＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７４）である。一部の例では、エピトープはＨＰＶ１６Ｅ７／１１〜１９（ＹＭＬＤＬＱＰＥＴ、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７５）である。別の好適なＨＰＶエピトープについては、例えば、Ｒｅｓｓｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（（１９９５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４：５９３４）を参照されたい。
【０１０６】
免疫調節ポリペプチド
共免疫調節ドメインに対する低い親和性を示す好適な免疫調節ドメインは、野生型免疫調節ドメインとの１アミノ酸（ａａ）〜２０ａａの差異を有していてもよい。例えば、一部の例では、本開示のＴＭＭＰ内に存在する変異免疫調節ポリペプチドは、対応する野生型免疫調節ポリペプチドとは、１ａａ、２ａａ、３ａａ、４ａａ、５ａａ、６ａａ、７ａａ、８ａａ、９ａａ、または１０ａａ分、アミノ酸配列が異なる。別の例として、一部の例では、本開示のＴＭＭＰ内に存在する変異免疫調節ポリペプチドは、対応する野生型免疫調節ポリペプチドとは、１１ａａ、１２ａａ、１３ａａ、１４ａａ、１５ａａ、１６ａａ、１７ａａ、１８ａａ、１９ａａ、または２０ａａ分、アミノ酸配列が異なる。１つの例として、一部の例では、本開示のＴＭＭＰ内に存在する変異免疫調節ポリペプチドは、対応する参照（例えば、野生型）免疫調節ポリペプチドと比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０のアミノ酸置換を含む。一部の例では、本開示のＴＭＭＰ内に存在する変異免疫調節ポリペプチドは、対応する参照（例えば、野生型）免疫調節ポリペプチドと比較して、単一のアミノ酸置換を含む。一部の例では、本開示のＴＭＭＰ内に存在する変異免疫調節ポリペプチドは、対応する参照（例えば、野生型）免疫調節ポリペプチドと比較して、２つのアミノ酸置換（例えば、２つ以下のアミノ酸置換）を含む。一部の例では、本開示のＴＭＭＰ内に存在する変異免疫調節ポリペプチドは、対応する参照（例えば、野生型）免疫調節ポリペプチドと比較して、３つのアミノ酸置換（例えば、３つ以下のアミノ酸置換）を含む。一部の例では、本開示のＴＭＭＰ内に存在する変異免疫調節ポリペプチドは、対応する参照（例えば、野生型）免疫調節ポリペプチドと比較して、４つのアミノ酸置換（例えば、４つ以下のアミノ酸置換）を含む。一部の例では、本開示のＴＭＭＰ内に存在する変異免疫調節ポリペプチドは、対応する参照（例えば、野生型）免疫調節ポリペプチドと比較して、５つのアミノ酸置換（例えば、５つ以下のアミノ酸置換）を含む。一部の例では、本開示のＴＭＭＰ内に存在する変異免疫調節ポリペプチドは、対応する参照（例えば、野生型）免疫調節ポリペプチドと比較して、６つのアミノ酸置換（例えば、６つ以下のアミノ酸置換）を含む。一部の例では、本開示のＴＭＭＰ内に存在する変異免疫調節ポリペプチドは、対応する参照（例えば、野生型）免疫調節ポリペプチドと比較して、７つのアミノ酸置換（例えば、７つ以下のアミノ酸置換）を含む。一部の例では、本開示のＴＭＭＰ内に存在する変異免疫調節ポリペプチドは、対応する参照（例えば、野生型）免疫調節ポリペプチドと比較して、８つのアミノ酸置換（例えば、８つ以下のアミノ酸置換）を含む。一部の例では、本開示のＴＭＭＰ内に存在する変異免疫調節ポリペプチドは、対応する参照（例えば、野生型）免疫調節ポリペプチドと比較して、９つのアミノ酸置換（例えば、９つ以下のアミノ酸置換）を含む。一部の例では、本開示のＴＭＭＰ内に存在する変異免疫調節ポリペプチドは、対応する参照（例えば、野生型）免疫調節ポリペプチドと比較して、１０のアミノ酸置換（例えば、１０以下のアミノ酸置換）を含む。
【０１０７】
一部の例では、本開示のＴＭＭＰ内に存在する変異免疫調節ポリペプチドは、対応する参照（例えば、野生型）免疫調節ポリペプチドと比較して、１１のアミノ酸置換（例えば、１１以下のアミノ酸置換）を含む。
【０１０８】
一部の例では、本開示のＴＭＭＰ内に存在する変異免疫調節ポリペプチドは、対応する参照（例えば、野生型）免疫調節ポリペプチドと比較して、１２のアミノ酸置換（例えば、１２以下のアミノ酸置換）を含む。
【０１０９】
一部の例では、本開示のＴＭＭＰ内に存在する変異免疫調節ポリペプチドは、対応する参照（例えば、野生型）免疫調節ポリペプチドと比較して、１３のアミノ酸置換（例えば、１３以下のアミノ酸置換）を含む。
【０１１０】
一部の例では、本開示のＴＭＭＰ内に存在する変異免疫調節ポリペプチドは、対応する参照（例えば、野生型）免疫調節ポリペプチドと比較して、１４のアミノ酸置換（例えば、１４以下のアミノ酸置換）を含む。
【０１１１】
一部の例では、本開示のＴＭＭＰ内に存在する変異免疫調節ポリペプチドは、対応する参照（例えば、野生型）免疫調節ポリペプチドと比較して、１５のアミノ酸置換（例えば、１５以下のアミノ酸置換）を含む。
【０１１２】
一部の例では、本開示のＴＭＭＰ内に存在する変異免疫調節ポリペプチドは、対応する参照（例えば、野生型）免疫調節ポリペプチドと比較して、１６のアミノ酸置換（例えば、１６以下のアミノ酸置換）を含む。
【０１１３】
一部の例では、本開示のＴＭＭＰ内に存在する変異免疫調節ポリペプチドは、対応する参照（例えば、野生型）免疫調節ポリペプチドと比較して、１７のアミノ酸置換（例えば、１７以下のアミノ酸置換）を含む。
【０１１４】
一部の例では、本開示のＴＭＭＰ内に存在する変異免疫調節ポリペプチドは、対応する参照（例えば、野生型）免疫調節ポリペプチドと比較して、１８のアミノ酸置換（例えば、１８以下のアミノ酸置換）を含む。
【０１１５】
一部の例では、本開示のＴＭＭＰ内に存在する変異免疫調節ポリペプチドは、対応する参照（例えば、野生型）免疫調節ポリペプチドと比較して、１９のアミノ酸置換（例えば、１９以下のアミノ酸置換）を含む。
【０１１６】
一部の例では、本開示のＴＭＭＰ内に存在する変異免疫調節ポリペプチドは、対応する参照（例えば、野生型）免疫調節ポリペプチドと比較して、２０のアミノ酸置換（例えば、２０以下のアミノ酸置換）を含む。
【０１１７】
上述したとおり、本開示のＴＭＭＰ内に組み込むのに好適な変異免疫調節ポリペプチドは、関連共免疫調節ポリペプチドに対する対応する野生型免疫調節ポリペプチドの親和性と比較して、関連共免疫調節ポリペプチドに対する低い親和性を示す。
【０１１８】
免疫調節ポリペプチドと関連共免疫調節ポリペプチドの例示的なペアとしては、
ａ）４−１ＢＢＬ（免疫調節ポリペプチド）と４−１ＢＢ（関連共免疫調節ポリペプチド）、
ｂ）ＰＤ−Ｌ１（免疫調節ポリペプチド）とＰＤ１（関連共免疫調節ポリペプチド）、
ｃ）ＩＬ−２（免疫調節ポリペプチド）とＩＬ−２受容体（関連共免疫調節ポリペプチド）、
ｄ）ＣＤ８０（免疫調節ポリペプチド）とＣＤ８６（関連共免疫調節ポリペプチド）、
ｅ）ＣＤ８６（免疫調節ポリペプチド）とＣＤ２８（関連共免疫調節ポリペプチド）、
ｆ）ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）（免疫調節ポリペプチド）とＯＸ４０（ＣＤ１３４）（関連共免疫調節ポリペプチド）、
ｇ）Ｆａｓリガンド（免疫調節ポリペプチド）とＦａｓ（関連共免疫調節ポリペプチド）、
ｈ）ＩＣＯＳ−Ｌ（免疫調節ポリペプチド）とＩＣＯＳ（関連共免疫調節ポリペプチド）、
ｉ）ＩＣＡＭ（免疫調節ポリペプチド）とＬＦＡ−１（関連共免疫調節ポリペプチド）、
ｊ）ＣＤ３０Ｌ（免疫調節ポリペプチド）とＣＤ３０（関連共免疫調節ポリペプチド）、
ｋ）ＣＤ４０（免疫調節ポリペプチド）とＣＤ４０Ｌ（関連共免疫調節ポリペプチド）、
ｌ）ＣＤ８３（免疫調節ポリペプチド）とＣＤ８３Ｌ（関連共免疫調節ポリペプチド）、
ｍ）ＨＶＥＭ（ＣＤ２７０）（免疫調節ポリペプチド）とＣＤ１６０（関連共免疫調節ポリペプチド）、
ｎ）ＪＡＧ１（ＣＤ３３９）（免疫調節ポリペプチド）とＮｏｔｃｈ（関連共免疫調節ポリペプチド）、
ｏ）ＪＡＧ１（免疫調節ポリペプチド）とＣＤ４６（関連共免疫調節ポリペプチド）、
ｐ）ＣＤ８０（免疫調節ポリペプチド）とＣＴＬＡ４（関連共免疫調節ポリペプチド）、
ｑ）ＣＤ８６（免疫調節ポリペプチド）とＣＴＬＡ４（関連共免疫調節ポリペプチド）、および、
ｒ）ＣＤ７０（免疫調節ポリペプチド）とＣＤ２７（関連共免疫調節ポリペプチド）、
が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１１９】
一部の例では、本開示のＴＭＭＰ内に存在する変異免疫調節ポリペプチドは、関連共免疫調節ポリペプチドに対する１００ｎＭ〜１００μＭの結合親和性を有する。例えば、一部の例では、本開示のＴＭＭＰ内に存在する変異免疫調節ポリペプチドは、関連共免疫調節ポリペプチドに対する約１００ｎＭ〜１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、約９００ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１５μＭ、約１５μＭ〜約２０μＭ、約２０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、または、約７５μＭ〜約１００μＭの結合親和性を有する。
【０１２０】
本開示のＴＭＭＰ内に存在する変異免疫調節ポリペプチドは、関連共免疫調節ポリペプチドに対する低い親和性を示す。同様に、変異免疫調節ポリペプチドを含む本開示のＴＭＭＰは、関連共免疫調節ポリペプチドに対する低い親和性を示す。それゆえ、例えば、変異免疫調節ポリペプチドを含む本開示のＴＭＭＰは、関連共免疫調節ポリペプチドに対する１００ｎＭ〜１００μＭの結合親和性を有する。例えば、一部の例では、変異免疫調節ポリペプチドを含む本開示のＴＭＭＰは、関連共免疫調節ポリペプチドに対する約１００ｎＭ〜１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、約９００ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１５μＭ、約１５μＭ〜約２０μＭ、約２０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、または、約７５μＭ〜約１００μＭの結合親和性を有する。
【０１２１】
ＰＤ−Ｌ１変異体
１つの非限定例として、一部の例では、本開示のＴＭＭＰ内に存在する変異免疫調節ポリペプチドは変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドである。野生型ＰＤ−Ｌ１はＰＤ１に結合する。
【０１２２】
野生型ヒトＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、以下のアミノ酸配列、
2020533273.tif 000036
を含んでいてもよい。
【０１２３】
野生型ヒトＰＤ−Ｌ１外部ドメインは、以下のアミノ酸配列、
2020533273.tif 000037
を含んでいてもよい。
【０１２４】
野生型ＰＤ−１ポリペプチドは、以下のアミノ酸配列、
2020533273.tif 000038
を含んでいてもよい。一部の例では、本開示のＴＭＭＰが変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む場合、「関連共免疫調節ポリペプチド」は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３のアミノ酸配列を含むＰＤ−１ポリペプチドである。
【０１２５】
一部の例では、変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２に記載のアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドの結合親和性と比較して、ＰＤ−１（例えば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３に記載のアミノ酸配列を含むＰＤ−１ポリペプチド）に対する低い結合親和性を示す。例えば、一部の例では、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２に記載のアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドの結合親和性よりも少なくとも１０％低い、少なくとも１５％低い、少なくとも２０％低い、少なくとも２５％低い、少なくとも３０％低い、少なくとも３５％低い、少なくとも４０％低い、少なくとも４５％低い、少なくとも５０％低い、少なくとも５５％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも６５％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも７５％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも８５％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または、９５％超低い親和性で、ＰＤ−１（例えば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３に記載のアミノ酸配列を含むＰＤ−１ポリペプチド）に結合する。
【０１２６】
一部の例では、変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、ＰＤ−１に対する１ｎＭ〜１ｍＭの結合親和性を有する。一部の例では、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、ＰＤ−１に対する１００ｎＭ〜１００μＭの結合親和性を有する。別の例として、一部の例では、変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、ＰＤ１（例えば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３に記載のアミノ酸配列を含むＰＤ１ポリペプチド）に対する約１００ｎＭ〜１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、約９００ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１５μＭ、約１５μＭ〜約２０μＭ、約２０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、または、約７５μＭ〜約１００μＭの結合親和性を有する。
【０１２７】
一部の例では、変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２に記載のＰＤ−Ｌ１アミノ酸配列と比較して、単一のアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２に記載のＰＤ−Ｌ１アミノ酸配列と比較して、２〜１０のアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２に記載のＰＤ−Ｌ１アミノ酸配列と比較して、２つのアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２に記載のＰＤ−Ｌ１アミノ酸配列と比較して、３つのアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２に記載のＰＤ−Ｌ１アミノ酸配列と比較して、４つのアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２に記載のＰＤ−Ｌ１アミノ酸配列と比較して、５つのアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２に記載のＰＤ−Ｌ１アミノ酸配列と比較して、６つのアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２に記載のＰＤ−Ｌ１アミノ酸配列と比較して、７つのアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２に記載のＰＤ−Ｌ１アミノ酸配列と比較して、８つのアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２に記載のＰＤ−Ｌ１アミノ酸配列と比較して、９つのアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２に記載のＰＤ−Ｌ１アミノ酸配列と比較して、１０のアミノ酸置換を有する。
【０１２８】
好適なＰＤ−Ｌ１変異体としては、以下のアミノ酸配列、
2020533273.tif 000039
（ＸはＡｓｐ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである。一部の例では、ＸはＡｒｇである）
に対して、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドが挙げられる。
【０１２９】
好適なＰＤ−Ｌ１変異体としては、以下のアミノ酸配列、
2020533273.tif 000040
（ＸはＩｌｅ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｓｐである）
に対して、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドが挙げられる。
【０１３０】
好適なＰＤ−Ｌ１変異体としては、以下のアミノ酸配列、
2020533273.tif 000041
（ＸはＧｌｕ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｒｇである）
に対して、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドが挙げられる。
【０１３１】
ＣＤ８０変異体
一部の例では、本開示のＴＭＭＰ内に存在する変異免疫調節ポリペプチドは変異ＣＤ８０ポリペプチドである。野生型ＣＤ８０はＣＤ２８に結合する。野生型ＣＤ８０はまたＣＤ８６に結合する。
【０１３２】
ヒトＣＤ８０の外部ドメインの野生型アミノ酸配列は、以下、
2020533273.tif 000042
であってもよい。
【０１３３】
野生型ＣＤ２８アミノ酸配列は、以下、
2020533273.tif 000043
であってもよい。一部の例では、本開示のＴＭＭＰが変異ＣＤ８０ポリペプチドを含む場合、「関連共免疫調節ポリペプチド」は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５のアミノ酸配列を含むＣＤ２８ポリペプチドである。
【０１３４】
野生型ＣＤ２８アミノ酸配列は、以下、
2020533273.tif 000044
であってもよい。
【０１３５】
野生型ＣＤ２８アミノ酸配列は、以下、
2020533273.tif 000045
であってもよい。
【０１３６】
一部の例では、変異ＣＤ８０ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤ８０ポリペプチドのＣＤ２８に対する結合親和性と比較して、ＣＤ２８に対する低い結合親和性を示す。例えば、一部の例では、変異ＣＤ８０ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤ８０ポリペプチドのＣＤ２８（例えば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５、６または７のうちの１つに記載のアミノ酸配列を含むＣＤ２８ポリペプチド）に対する結合親和性よりも少なくとも１０％低い、少なくとも１５％低い、少なくとも２０％低い、少なくとも２５％低い、少なくとも３０％低い、少なくとも３５％低い、少なくとも４０％低い、少なくとも４５％低い、少なくとも５０％低い、少なくとも５５％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも６５％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも７５％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも８５％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または、９５％超低い親和性で、ＣＤ２８に結合する。
【０１３７】
一部の例では、変異ＣＤ８０ポリペプチドは、ＣＤ２８に対する１００ｎＭ〜１００μＭの結合親和性を有する。別の例として、一部の例では、本開示の変異ＣＤ８０ポリペプチドは、ＣＤ２８（例えば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤ２８ポリペプチド）に対する約１００ｎＭ〜１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、約９００ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１５μＭ、約１５μＭ〜約２０μＭ、約２０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、または、約７５μＭ〜約１００μＭの結合親和性を有する。
【０１３８】
一部の例では、変異ＣＤ８０ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４に記載のＣＤ８０アミノ酸配列と比較して、単一のアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＣＤ８０ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４に記載のＣＤ８０アミノ酸配列と比較して、２〜１０のアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＣＤ８０ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４に記載のＣＤ８０アミノ酸配列と比較して、２つのアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＣＤ８０ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４に記載のＣＤ８０アミノ酸配列と比較して、３つのアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＣＤ８０ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４に記載のＣＤ８０アミノ酸配列と比較して、４つのアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＣＤ８０ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４に記載のＣＤ８０アミノ酸配列と比較して、５つのアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＣＤ８０ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４に記載のＣＤ８０アミノ酸配列と比較して、６つのアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＣＤ８０ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４に記載のＣＤ８０アミノ酸配列と比較して、７つのアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＣＤ８０ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４に記載のＣＤ８０アミノ酸配列と比較して、８つのアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＣＤ８０ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４に記載のＣＤ８０アミノ酸配列と比較して、９つのアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＣＤ８０ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４に記載のＣＤ８０アミノ酸配列と比較して、１０のアミノ酸置換を有する。
【０１３９】
好適なＣＤ８０変異体としては、以下のアミノ酸配列、
2020533273.tif 000046
（ＸはＡｓｎ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000047
（ＸはＡｓｎ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000048
（ＸはＩｌｅ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000049
（ＸはＬｙｓ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000050
（ＸはＧｌｎ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000051
（ＸはＡｓｐ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000052
（ＸはＬｅｕ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000053
（ＸはＴｙｒ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000054
（ＸはＧｌｎ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000055
（ＸはＭｅｔ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000056
（ＸはＶａｌ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000057
（ＸはＩｌｅ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000058
（ＸはＴｙｒ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000059
（ＸはＡｓｐ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000060
（ＸはＰｈｅ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000061
（ＸはＳｅｒ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、および、
2020533273.tif 000062
（ＸはＰｒｏ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
のうちのいずれか１つに対して、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドが挙げられる。
【０１４０】
ＣＤ８６変異体
一部の例では、本開示のＴＭＭＰ内に存在する変異免疫調節ポリペプチドは変異ＣＤ８６ポリペプチドである。野生型ＣＤ８６はＣＤ２８に結合する。一部の例では、本開示のＴＭＭＰが変異ＣＤ８６ポリペプチドを含む場合、「関連共免疫調節ポリペプチド」は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５のアミノ酸配列を含むＣＤ２８ポリペプチドである。
【０１４１】
野生型ヒトＣＤ８６の全長外部ドメインのアミノ酸配列は、以下、
2020533273.tif 000063
であってもよい。
【０１４２】
野生型ヒトＣＤ８６のＩｇＶドメインのアミノ酸配列は、以下、
2020533273.tif 000064
であってもよい。
【０１４３】
一部の例では、変異ＣＤ８６ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤ８６ポリペプチドのＣＤ２８に対する結合親和性と比較して、ＣＤ２８に対する低い結合親和性を示す。例えば、一部の例では、変異ＣＤ８６ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤ８６ポリペプチドのＣＤ２８（例えば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５、６または７のうちの１つに記載のアミノ酸配列を含むＣＤ２８ポリペプチド）に対する結合親和性よりも少なくとも１０％低い、少なくとも１５％低い、少なくとも２０％低い、少なくとも２５％低い、少なくとも３０％低い、少なくとも３５％低い、少なくとも４０％低い、少なくとも４５％低い、少なくとも５０％低い、少なくとも５５％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも６５％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも７５％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも８５％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または、９５％超低い親和性で、ＣＤ２８に結合する。
【０１４４】
一部の例では、変異ＣＤ８６ポリペプチドは、ＣＤ２８に対する１００ｎＭ〜１００μＭの結合親和性を有する。別の例として、一部の例では、本開示の変異ＣＤ８６ポリペプチドは、ＣＤ２８（例えば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５、６または７のうちの１つに記載のアミノ酸配列を含むＣＤ２８ポリペプチド）に対する約１００ｎＭ〜１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、約９００ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１５μＭ、約１５μＭ〜約２０μＭ、約２０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、または、約７５μＭ〜約１００μＭの結合親和性を有する。
【０１４５】
一部の例では、変異ＣＤ８６ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８に記載のＣＤ８６アミノ酸配列と比較して、単一のアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＣＤ８６ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８に記載のＣＤ８６アミノ酸配列と比較して、２〜１０のアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＣＤ８６ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８に記載のＣＤ８６アミノ酸配列と比較して、２つのアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＣＤ８６ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８に記載のＣＤ８６アミノ酸配列と比較して、３つのアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＣＤ８６ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８に記載のＣＤ８６アミノ酸配列と比較して、４つのアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＣＤ８６ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８に記載のＣＤ８６アミノ酸配列と比較して、５つのアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＣＤ８６ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８に記載のＣＤ８６アミノ酸配列と比較して、６つのアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＣＤ８６ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８に記載のＣＤ８６アミノ酸配列と比較して、７つのアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＣＤ８６ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８に記載のＣＤ８６アミノ酸配列と比較して、８つのアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＣＤ８６ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８に記載のＣＤ８６アミノ酸配列と比較して、９つのアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＣＤ８６ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８に記載のＣＤ８６アミノ酸配列と比較して、１０のアミノ酸置換を有する。
【０１４６】
一部の例では、変異ＣＤ８６ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９に記載のＣＤ８６アミノ酸配列と比較して、単一のアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＣＤ８６ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９に記載のＣＤ８６アミノ酸配列と比較して、２〜１０のアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＣＤ８６ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９に記載のＣＤ８６アミノ酸配列と比較して、２つのアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＣＤ８６ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９に記載のＣＤ８６アミノ酸配列と比較して、３つのアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＣＤ８６ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９に記載のＣＤ８６アミノ酸配列と比較して、４つのアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＣＤ８６ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９に記載のＣＤ８６アミノ酸配列と比較して、５つのアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＣＤ８６ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９に記載のＣＤ８６アミノ酸配列と比較して、６つのアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＣＤ８６ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９に記載のＣＤ８６アミノ酸配列と比較して、７つのアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＣＤ８６ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９に記載のＣＤ８６アミノ酸配列と比較して、８つのアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＣＤ８６ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９に記載のＣＤ８６アミノ酸配列と比較して、９つのアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＣＤ８６ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９に記載のＣＤ８６アミノ酸配列と比較して、１０のアミノ酸置換を有する。
【０１４７】
好適なＣＤ８６変異体としては、以下のアミノ酸配列、
2020533273.tif 000065
（ＸはＡｓｎ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000066
（ＸはＡｓｐ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000067
（ＸはＴｒｐ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000068
（ＸはＨｉｓ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000069
（ＸはＡｓｎ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000070
（ＸはＡｓｐ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000071
（ＸはＴｒｐ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000072
（ＸはＨｉｓ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000073
（ＸはＶａｌ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000074
（ＸはＶａｌ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000075
（ＸはＧｌｎ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000076
（ＸはＧｌｎ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000077
（ＸはＰｈｅ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000078
（ＸはＰｈｅ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000079
（ＸはＬｅｕ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000080
（ＸはＬｅｕ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000081
（ＸはＴｙｒ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000082
（ＸはＴｙｒ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000083
（第１のＸはＡｓｎ以外の任意のアミノ酸であり、第２のＸはＨｉｓ以外の任意のアミノ酸である。一部の例では、第１のＸと第２のＸの両方はＡｌａである）、
2020533273.tif 000084
（第１のＸはＡｓｎ以外の任意のアミノ酸であり、第２のＸはＨｉｓ以外の任意のアミノ酸である。一部の例では、第１のＸと第２のＸの両方はＡｌａである）、
2020533273.tif 000085
（Ｘ１はＡｓｐ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ２はＨｉｓ以外の任意のアミノ酸である。一部の例では、Ｘ１はＡｌａであり、Ｘ２はＡｌａである）、
2020533273.tif 000086
（第１のＸはＡｓｎ以外の任意のアミノ酸であり、第２のＸはＨｉｓ以外の任意のアミノ酸である。一部の例では、第１のＸと第２のＸの両方はＡｌａである）、
2020533273.tif 000087
（Ｘ１はＡｓｎ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ２はＡｓｐ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ３はＨｉｓ以外の任意のアミノ酸である。一部の例では、Ｘ１はＡｌａであり、Ｘ２はＡｌａであり、Ｘ３はＡｌａである）、および、
2020533273.tif 000088
（Ｘ１はＡｓｎ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ２はＡｓｐ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ３はＨｉｓ以外の任意のアミノ酸である。一部の例では、Ｘ１はＡｌａであり、Ｘ２はＡｌａであり、Ｘ３はＡｌａである）、
のうちのいずれか１つに対して、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドが挙げられる。
【０１４８】
４−１ＢＢＬ変異体
一部の例では、本開示のＴＭＭＰ内に存在する変異免疫調節ポリペプチドは変異４−１ＢＢＬポリペプチドである。野生型４−１ＢＢＬは４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）に結合する。
【０１４９】
野生型４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、以下、
2020533273.tif 000089
であってもよい。
【０１５０】
一部の例では、変異４−１ＢＢＬポリペプチドは、ヒト４−１ＢＢＬの腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）相同性ドメイン（ＴＨＤ）の変異体である。
【０１５１】
ヒト４−１ＢＢＬのＴＨＤの野生型アミノ酸配列は、例えば、以下のＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１〜１３、
2020533273.tif 000090
のうちの１つであってもよい。
【０１５２】
野生型４−１ＢＢアミノ酸配列は、以下、
2020533273.tif 000091
であってもよい。一部の例では、本開示のＴＭＭＰが変異４−１ＢＢＬポリペプチドを含む場合、「関連共免疫調節ポリペプチド」は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４のアミノ酸配列を含む４−１ＢＢポリペプチドである。
【０１５３】
一部の例では、変異４−１ＢＢＬポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０〜１３のうちの１つに記載のアミノ酸配列を含む４−１ＢＢＬポリペプチドの結合親和性と比較して、４−１ＢＢに対する低い結合親和性を示す。例えば、一部の例では、本開示の変異４−１ＢＢＬポリペプチドは、同一条件下でアッセイする際、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０〜１３のうちの１つに記載のアミノ酸配列を含む４−１ＢＢＬポリペプチドの４−１ＢＢポリペプチド（例えば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４に記載のアミノ酸配列を含む４−１ＢＢポリペプチド）に対する結合親和性よりも少なくとも１０％低い、少なくとも１５％低い、少なくとも２０％低い、少なくとも２５％低い、少なくとも３０％低い、少なくとも３５％低い、少なくとも４０％低い、少なくとも４５％低い、少なくとも５０％低い、少なくとも５５％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも６５％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも７５％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも８５％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または、９５％超低い結合親和性で、４−１ＢＢに結合する。
【０１５４】
一部の例では、変異４−１ＢＢＬポリペプチドは、４−１ＢＢに対する１００ｎＭ〜１００μＭの結合親和性を有する。別の例として、一部の例では、変異４−１ＢＢＬポリペプチドは、４−１ＢＢ（例えば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４に記載のアミノ酸配列を含む４−１ＢＢポリペプチド）に対する約１００ｎＭ〜１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、約９００ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１５μＭ、約１５μＭ〜約２０μＭ、約２０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、または、約７５μＭ〜約１００μＭの結合親和性を有する。
【０１５５】
一部の例では、変異４−１ＢＢＬポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０〜１３のうちの１つに記載の４−１ＢＢＬアミノ酸配列と比較して、単一のアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異４−１ＢＢＬポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０〜１３のうちの１つに記載の４−１ＢＢＬアミノ酸配列と比較して、２〜１０のアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異４−１ＢＢＬポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０〜１３のうちの１つに記載の４−１ＢＢＬアミノ酸配列と比較して、２つのアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異４−１ＢＢＬポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０〜１３のうちの１つに記載の４−１ＢＢＬアミノ酸配列と比較して、３つのアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異４−１ＢＢＬポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０〜１３のうちの１つに記載の４−１ＢＢＬアミノ酸配列と比較して、４つのアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異４−１ＢＢＬポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０〜１３のうちの１つに記載の４−１ＢＢＬアミノ酸配列と比較して、５つのアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異４−１ＢＢＬポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０〜１３のうちの１つに記載の４−１ＢＢＬアミノ酸配列と比較して、６つのアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異４−１ＢＢＬポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０〜１３のうちの１つに記載の４−１ＢＢＬアミノ酸配列と比較して、７つのアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異４−１ＢＢＬポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０〜１３のうちの１つに記載の４−１ＢＢＬアミノ酸配列と比較して、８つのアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異４−１ＢＢＬポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０〜１３のうちの１つに記載の４−１ＢＢＬアミノ酸配列と比較して、９つのアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異４−１ＢＢＬポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０〜１３のうちの１つに記載の４−１ＢＢＬアミノ酸配列と比較して、１０のアミノ酸置換を有する。
【０１５６】
好適な４−１ＢＢＬ変異体としては、以下のアミノ酸配列、
2020533273.tif 000092
（ＸはＬｙｓ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000093
（ＸはＧｌｎ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000094
（ＸはＭｅｔ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000095
（ＸはＰｈｅ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000096
（ＸはＧｌｎ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000097
（ＸはＬｅｕ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000098
（ＸはＶａｌ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000099
（ＸはＧｌｎ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000100
（ＸはＡｓｎ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000101
（ＸはＶａｌ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000102
（ＸはＬｅｕ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000103
（ＸはＬｅｕ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000104
（ＸはＩｌｅ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000105
（ＸはＡｓｐ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000106
（ＸはＧｌｙ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000107
（ＸはＰｒｏ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000108
（ＸはＬｅｕ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000109
（ＸはＳｅｒ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000110
（ＸはＴｒｐ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000111
（ＸはＴｙｒ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000112
（ＸはＳｅｒ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000113
（ＸはＡｓｐ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000114
（ＸはＰｒｏ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000115
（ＸはＧｌｙ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000116
（ＸはＬｅｕ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000117
（ＸはＧｌｙ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000118
（ＸはＶａｌ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000119
（ＸはＳｅｒ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000120
（ＸはＬｅｕ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000121
（ＸはＴｈｒ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000122
（ＸはＧｌｙ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000123
（ＸはＧｌｙ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000124
（ＸはＬｅｕ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000125
（ＸはＳｅｒ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000126
（ＸはＴｙｒ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000127
（ＸはＧｌｕ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000128
（ＸはＡｓｐ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000129
（ＸはＴｈｒ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000130
（ＸはＬｙｓ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000131
（ＸはＧｌｕ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000132
（ＸはＰｈｅ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000133
（ＸはＰｈｅ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000134
（ＸはＧｌｎ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000135
（ＸはＬｅｕ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000136
（ＸはＧｌｕ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000137
（ＸはＬｅｕ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000138
（ＸはＡｒｇ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000139
（ＸはＡｒｇ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000140
（ＸはＶａｌ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000141
（ＸはＶａｌ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000142
（ＸはＧｌｙ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000143
（ＸはＧｌｕ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000144
（ＸはＧｌｙ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000145
（ＸはＳｅｒ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000146
（ＸはＡｓｐ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000147
（ＸはＬｅｕ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000148
（ＸはＰｒｏ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000149
（ＸはＳｅｒ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000150
（ＸはＳｅｒ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000151
（ＸはＧｌｕ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000152
（ＸはＡｒｇ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000153
（ＸはＡｓｎ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000154
（ＸはＳｅｒ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000155
（ＸはＰｈｅ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000156
（ＸはＧｌｎ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000157
（ＸはＡｒｇ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000158
（ＸはＬｅｕ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000159
（ＸはＧｌｙ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000160
（ＸはＶａｌ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000161
（ＸはＨｉｓ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000162
（ＸはＬｅｕ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000163
（ＸはＨｉｓ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000164
（ＸはＴｈｒ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000165
（ＸはＧｌｕ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000166
（ＸはＡｒｇ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000167
（ＸはＡｒｇ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000168
（ＸはＨｉｓ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000169
（ＸはＴｒｐ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000170
（ＸはＬｅｕ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000171
（ＸはＴｈｒ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000172
（ＸはＧｌｎ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000173
（ＸはＧｌｙ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000174
（ＸはＴｈｒ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、および、
2020533273.tif 000175
（ＸはＶａｌ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
のうちのいずれか１つに対して、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドが挙げられる。
【０１５７】
ＩＬ−２変異体
一部の例では、本開示のＴＭＭＰ内に存在する変異免疫調節ポリペプチドは変異ＩＬ−２ポリペプチドである。野生型ＩＬ−２は、ＩＬ−２受容体（ＩＬ−２Ｒ）、すなわち、ＩＬ−２Ｒα、ＩＬ−２ＲβとＩＬ−２Ｒγを含むヘテロ三量体ポリペプチドに結合する。
【０１５８】
野生型ＩＬ−２アミノ酸配列は、以下、
2020533273.tif 000176
であってもよい。
【０１５９】
野生型ＩＬ−２は、細胞の表面上のＩＬ−２受容体（ＩＬ−２Ｒ）に結合する。ＩＬ−２受容体は、一部の例では、α鎖（ＩＬ−２Ｒα、ＣＤ２５とも呼ばれる）と、β鎖（ＩＬ−２Ｒβ、ＣＤ１２２とも呼ばれる）と、γ鎖（ＩＬ−２Ｒγ、ＣＤ１３２とも呼ばれる）と、を含む、ヘテロ三量体ポリペプチドである。ヒトＩＬ−２Ｒα、ヒトＩＬ−２Ｒβ、および、ヒトＩＬ−２Ｒγのアミノ酸配列は、以下、
ヒトＩＬ−２Ｒα：
2020533273.tif 000177
ヒトＩＬ−２Ｒβ：
2020533273.tif 000178
ヒトＩＬ−２Ｒγ：
2020533273.tif 000179
であってもよい。
【０１６０】
一部の例では、本開示のＴＭＭＰが変異ＩＬ−２ポリペプチドを含む場合、「関連共免疫調節ポリペプチド」は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６、１７および１８のアミノ酸配列を含むポリペプチドを含むＩＬ−２Ｒである。
【０１６１】
一部の例では、変異ＩＬ−２ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５に記載のアミノ酸配列を含むＩＬ−２ポリペプチドの結合親和性と比較して、ＩＬ−２Ｒに対する低い結合親和性を示す。例えば、一部の例では、変異ＩＬ−２ポリペプチドは、同一条件下でアッセイする際、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５に記載のアミノ酸配列を含むＩＬ−２ポリペプチドのＩＬ−２Ｒ（例えば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６〜１８に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドを含むＩＬ−２Ｒ）に対する結合親和性よりも少なくとも１０％低い、少なくとも１５％低い、少なくとも２０％低い、少なくとも２５％低い、少なくとも３０％低い、少なくとも３５％低い、少なくとも４０％低い、少なくとも４５％低い、少なくとも５０％低い、少なくとも５５％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも６５％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも７５％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも８５％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または、９５％超低い結合親和性で、ＩＬ−２Ｒに結合する。
【０１６２】
一部の例では、変異ＩＬ−２ポリペプチドは、ＩＬ−２Ｒに対する１００ｎＭ〜１００μＭの結合親和性を有する。別の例として、一部の例では、変異ＩＬ−２ポリペプチドは、ＩＬ−２Ｒ（例えば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６〜１８に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドを含むＩＬ−２Ｒ）に対する約１００ｎＭ〜１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、約９００ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１５μＭ、約１５μＭ〜約２０μＭ、約２０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、または、約７５μＭ〜約１００μＭの結合親和性を有する。
【０１６３】
一部の例では、変異ＩＬ−２ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５に記載のＩＬ−２アミノ酸配列と比較して、単一のアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＩＬ−２ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５に記載のＩＬ−２アミノ酸配列と比較して、２〜１０のアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＩＬ−２ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５に記載のＩＬ−２アミノ酸配列と比較して、２つのアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＩＬ−２ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５に記載のＩＬ−２アミノ酸配列と比較して、３つのアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＩＬ−２ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５に記載のＩＬ−２アミノ酸配列と比較して、４つのアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＩＬ−２ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５に記載のＩＬ−２アミノ酸配列と比較して、５つのアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＩＬ−２ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５に記載のＩＬ−２アミノ酸配列と比較して、６つのアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＩＬ−２ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５に記載のＩＬ−２アミノ酸配列と比較して、７つのアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＩＬ−２ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５に記載のＩＬ−２アミノ酸配列と比較して、８つのアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＩＬ−２ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５に記載のＩＬ−２アミノ酸配列と比較して、９つのアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異ＩＬ−２ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５に記載のＩＬ−２アミノ酸配列と比較して、１０のアミノ酸置換を有する。
【０１６４】
好適なＩＬ−２変異体としては、以下のアミノ酸配列、
2020533273.tif 000180
（ＸはＰｈｅ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000181
（ＸはＡｓｐ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000182
（ＸはＧｌｕ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000183
（ＸはＨｉｓ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000184
（ＸはＨｉｓ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである。一部の例では、ＸはＡｒｇである。一部の例では、ＸはＡｓｎである。一部の例では、ＸはＡｓｐである。一部の例では、ＸはＣｙｓである。一部の例では、ＸはＧｌｕである。一部の例では、ＸはＧｌｎである。一部の例では、ＸはＧｌｙである。一部の例では、ＸはＩｌｅである。一部の例では、ＸはＬｙｓである。一部の例では、ＸはＬｅｕである。一部の例では、ＸはＭｅｔである。一部の例では、ＸはＰｈｅである。一部の例では、ＸはＰｒｏである。一部の例では、ＸはＳｅｒである。一部の例では、ＸはＴｈｒである。一部の例では、ＸはＴｙｒである。一部の例では、ＸはＴｒｐである。一部の例では、ＸはＶａｌである）、
2020533273.tif 000185
（ＸはＴｙｒ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000186
（ＸはＧｌｎ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、ＸはＡｌａである）、
2020533273.tif 000187
（Ｘ１はＨｉｓ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ２はＰｈｅ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、Ｘ１はＡｌａである。一部の例では、Ｘ２はＡｌａである。一部の例では、Ｘ１はＡｌａであり、Ｘ２はＡｌａである）、
2020533273.tif 000188
（Ｘ１はＡｓｐ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ２はＰｈｅ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、Ｘ１はＡｌａである。一部の例では、Ｘ２はＡｌａである。一部の例では、Ｘ１はＡｌａであり、Ｘ２はＡｌａである）、
2020533273.tif 000189
（Ｘ１はＧｌｕ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ２はＡｓｐ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ３はＰｈｅ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、Ｘ１はＡｌａである。一部の例では、Ｘ２はＡｌａである。一部の例では、Ｘ３はＡｌａである。一部の例では、Ｘ１はＡｌａであり、Ｘ２はＡｌａであり、Ｘ３はＡｌａである）、
2020533273.tif 000190
（Ｘ１はＨｉｓ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ２はＡｓｐ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ３はＰｈｅ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、Ｘ１はＡｌａである。一部の例では、Ｘ２はＡｌａである。一部の例では、Ｘ３はＡｌａである。一部の例では、Ｘ１はＡｌａであり、Ｘ２はＡｌａであり、Ｘ３はＡｌａである）、
2020533273.tif 000191
（Ｘ１はＡｓｐ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ２はＰｈｅ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ３はＧｌｎ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、Ｘ１はＡｌａである。一部の例では、Ｘ２はＡｌａである。一部の例では、Ｘ３はＡｌａである。一部の例では、Ｘ１はＡｌａであり、Ｘ２はＡｌａであり、Ｘ３はＡｌａである）、
2020533273.tif 000192
（Ｘ１はＡｓｐ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ２はＰｈｅ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ３はＴｙｒ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、Ｘ１はＡｌａである。一部の例では、Ｘ２はＡｌａである。一部の例では、Ｘ３はＡｌａである。一部の例では、Ｘ１はＡｌａであり、Ｘ２はＡｌａであり、Ｘ３はＡｌａである）、
2020533273.tif 000193
（Ｘ１はＨｉｓ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ２はＡｓｐ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ３はＰｈｅ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ４はＴｙｒ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、Ｘ１はＡｌａである。一部の例では、Ｘ２はＡｌａである。一部の例では、Ｘ３はＡｌａである。一部の例では、Ｘ４はＡｌａである。一部の例では、Ｘ１はＡｌａであり、Ｘ２はＡｌａであり、Ｘ３はＡｌａであり、Ｘ４はＡｌａである）、
2020533273.tif 000194
（Ｘ１はＡｓｐ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ２はＰｈｅ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ３はＴｙｒ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ４はＧｌｎ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、Ｘ１はＡｌａである。一部の例では、Ｘ２はＡｌａである。一部の例では、Ｘ３はＡｌａである。一部の例では、Ｘ４はＡｌａである。一部の例では、Ｘ１はＡｌａであり、Ｘ２はＡｌａであり、Ｘ３はＡｌａであり、Ｘ４はＡｌａである）、
2020533273.tif 000195
（Ｘ１はＨｉｓ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ２はＡｓｐ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ３はＰｈｅ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ４はＴｙｒ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ５はＧｌｎ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、Ｘ１はＡｌａである。一部の例では、Ｘ２はＡｌａである。一部の例では、Ｘ３はＡｌａである。一部の例では、Ｘ４はＡｌａである。一部の例では、Ｘ５はＡｌａである。一部の例では、Ｘ１はＡｌａであり、Ｘ２はＡｌａであり、Ｘ３はＡｌａであり、Ｘ４はＡｌａであり、Ｘ５はＡｌａである）、および、
2020533273.tif 000196
（Ｘ１はＨｉｓ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ２はＰｈｅ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ３はＧｌｎ以外の任意のアミノ酸である）（一部の例では、Ｘ１はＡｌａである。一部の例では、Ｘ２はＡｌａである。一部の例では、Ｘ３はＡｌａである。一部の例では、Ｘ１はＡｌａであり、Ｘ２はＡｌａであり、Ｘ３はＡｌａである）、
のうちのいずれか１つに対して、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドが挙げられる。
【０１６５】
別のポリペプチド
本開示の多量体ポリペプチドのポリペプチド鎖は、上記のポリペプチドに加えて、１つまたは複数のポリペプチドを含んでいてもよい。好適な別のポリペプチドは、エピトープタグと親和性ドメインを含む。１つまたは複数の別のポリペプチドは、多量体ポリペプチドのポリペプチド鎖のＮ末端、多量体ポリペプチドのポリペプチド鎖のＣ末端、または、多量体ポリペプチドのポリペプチド鎖の内部に含まれていてもよい。
【０１６６】
エピトープタグ
好適なエピトープタグとしては、ヘマグルチニン（ＨＡ、例えば、ＹＰＹＤＶＰＤＹＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５））、ＦＬＡＧ（例えば、ＤＹＫＤＤＤＤＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６））、ｃ−ｍｙｃ（例えば、ＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３７））などが挙げられるがこれらに限定されない。
【０１６７】
親和性ドメイン
親和性ドメインは、結合パートナーと相互作用可能なペプチド配列、例えば、同定または精製に有用な、固体支持体上に固定されたペプチド配列などを含む。複数の連続単一アミノ酸（例えば、ヒスチジンなど）をコードするＤＮＡ配列は、発現タンパク質に融合した場合、ニッケルセファロースなどのレジンカラムへの高親和性結合により、組換えタンパク質のワンステップ精製に使用され得る。例示的な親和性ドメインとしては、Ｈｉｓ５（ＨＨＨＨＨ）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８）、ＨｉｓＸ６（ＨＨＨＨＨＨ）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９）、Ｃ−ｍｙｃ（ＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬ）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３７）、Ｆｌａｇ（ＤＹＫＤＤＤＤＫ）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６）、ＳｔｒｅｐＴａｇ（ＷＳＨＰＱＦＥＫ）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０）、ヘマグルチニン、例えば、ＨＡＴａｇ（ＹＰＹＤＶＰＤＹＡ）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５）、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、チオレドキシン、セルロース結合ドメイン、ＲＹＩＲＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４１）、Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２）、キチン結合ドメイン、Ｓペプチド、Ｔ７ペプチド、ＳＨ２ドメイン、Ｃ末端ＲＮＡタグ、
2020533273.tif 000197
、金属結合ドメイン、例えば、亜鉛結合ドメインまたはカルシウム結合ドメイン（例えば、カルシウム結合タンパク質、例えば、カルモジュリン、トロポニンＣ、カルシニューリンＢ、ミオシン軽鎖、リカバリン、Ｓモジュリン、ビシニン、ＶＩＬＩＰ、ニューロカルシン、ヒポカルシン、フリクエニン、カルトラクチン、カルパイン大サブユニット、Ｓ１００タンパク質、パルブアルブミン、カルビンジンＤ９Ｋ、カルビンジンＤ２８Ｋ、およびカルレチニンに由来する、カルシウム結合ドメインなど）、インテイン、ビオチン、ストレプトアビジン、ＭｙｏＤ、Ｉｄ、ロイシンジッパー配列、およびマルトース結合タンパク質が挙げられる。
【０１６８】
薬物コンジュゲート
本開示の多量体ポリペプチドのポリペプチド鎖は、ポリペプチド鎖に結合（例えば、共有結合）した低分子薬物を含んでいてもよい。例えば、本開示の多量体ポリペプチドがＦｃポリペプチドを含む場合、そのＦｃポリペプチドは、共有結合した低分子薬物を含んでいてもよい。一部の例では、低分子薬物は、がん化学療法剤、例えば、細胞傷害薬である。本開示の多量体ポリペプチドのポリペプチド鎖は、ポリペプチド鎖に結合（例えば、共有結合）した細胞傷害薬を含んでいてもよい。例えば、本開示の多量体ポリペプチドがＦｃポリペプチドを含む場合、そのＦｃポリペプチドは、共有結合した細胞傷害薬を含んでいてもよい。細胞傷害薬はプロドラッグを含む。
【０１６９】
薬物（例えば、がん化学療法剤）は、直接または間接的に、本開示の多量体ポリペプチドのポリペプチド鎖に結合していてもよい。例えば、本開示の多量体ポリペプチドがＦｃポリペプチドを含む場合、薬物（例えば、がん化学療法剤）は、直接または間接的に、Ｆｃポリペプチドに結合していてもよい。直接結合は、アミノ酸側鎖への直接結合を含んでいてもよい。間接的結合は、リンカーを介した結合であってもよい。薬物（例えば、がん化学療法剤）は、チオエーテル結合、アミド結合、カルバメート結合、ジスルフィド結合、またはエーテル結合を介して、本開示の多量体ポリペプチドのポリペプチド鎖（例えば、Ｆｃポリペプチド）に結合していてもよい。
【０１７０】
リンカーとしては、開裂性リンカーおよび非開裂性リンカーが挙げられる。一部の例では、リンカーはプロテアーゼ開裂性リンカーである。好適なリンカーとしては、例えば、ペプチド（例えば、２〜１０アミノ酸長、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０アミノ酸長）、アルキル鎖、ポリ（エチレングリコール）、ジスルフィド基、チオエーテル基、酸に不安定な基、感光性基、ペプチダーゼに不安定な基、および、エステラーゼに不安定な基が挙げられる。好適なリンカーの非限定例は、ｉ）Ｎ−スクシンイミジル−［（Ｎ−マレイミドプロピオンアミド）−テトラエチレングリコール］エステル（ＮＨＳ−ＰＥＧ４−マレイミド）、ｉｉ）Ｎ−スクシンイミジル  ４−（２−ピリジルジチオ）ブタノエート（ＳＰＤＢ）、Ｎ−スクシンイミジル  ４−（２−ピリジルジチオ）２−スルホブタノエート（スルホ−ＳＰＤＢ）、Ｎ−スクシンイミジル  ４−（２−ピリジルジチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１−カルボキシ−（６−アミドカプロエート）（ＬＣ−ＳＭＣＣ）、κ−マレイミドウンデカン酸  Ｎ−スクシンイミジルエステル（ＫＭＵＡ）、γ−マレイミド酪酸  Ｎ−スクシンイミジルエステル（ＧＭＢＳ）、ε−マレイミドカプロン酸  Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＥＭＣＳ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）、Ｎ−（α−マレイミドアセトキシ）−スクシンイミドエステル（ＡＭＡＳ）、スクシンイミジル−６−（β−マレイミドプロピオンアミド）ヘキサノエート（ＳＭＰＨ）、Ｎ−スクシンイミジル  ４−（ｐ−マレイミドフェニル）ブチレート（ＳＭＰＢ）、Ｎ−（ｐ−マレイミドフェニル）イソシアネート（ＰＭＰＩ）、Ｎ−スクシンイミジル  ４（２−ピリジルチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）、Ｎ−スクシンイミジル（４−ヨード−アセチル）アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）、６−マレイミドカプロイル（ＭＣ）、マレイミドプロパノイル（ＭＰ）、ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（ＰＡＢ）、Ｎ−スクシンイミジル  ４−（マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボキシレート（ＳＭＣＣ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１−カルボキシ−（６−アミドカプロエート）（ＳＭＣＣの「長鎖」類似体（ＬＣ−ＳＭＣＣ））、３−マレイミドプロパン酸  Ｎ−スクシンイミジルエステル（ＢＭＰＳ）、Ｎ−スクシンイミジル  ヨードアセテート（ＳＩＡ）、Ｎ−スクシンイミジル  ブロモアセテート（ＳＢＡ）、および、Ｎ−スクシンイミジル  ３−（ブロモアセトアミド）プロピオネート（ＳＢＡＰ）である。
【０１７１】
文献に記載された、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、スルホ−ＳＭＣＣ、マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）、スルホ−ＭＢＳ、またはスクシンイミジル−ヨードアセテートなどの架橋試薬で、ポリペプチド（例えば、Ｆｃポリペプチド）を修飾して、１〜１０の反応性基を導入してもよい。次に、修飾Ｆｃポリペプチドを、チオール含有細胞傷害薬と反応させて、コンジュゲートを作製する。
【０１７２】
例えば、本開示の多量体ポリペプチドがＦｃポリペプチドを含む場合、そのＦｃポリペプチドを含むポリペプチド鎖は、式（Ａ）−（Ｌ）−（Ｃ）（式中、（Ａ）はＦｃポリペプチドを含むポリペプチド鎖であり、（Ｌ）は存在する場合リンカーであり、（Ｃ）は細胞傷害薬であり、（Ｌ）は存在する場合、（Ａ）と（Ｃ）を連結させる）のポリペプチド鎖であってもよい。一部の例では、Ｆｃポリペプチドを含むポリペプチド鎖は、２つ以上の細胞傷害薬（例えば、２、３、４、もしくは、５、または、５超の細胞傷害薬）を含んでいてもよい。
【０１７３】
好適な薬物としては、例えば、ラパマイシンが挙げられる。好適な薬物としては、例えば、全トランス型レチノイン酸（ＡＴＲＡ）などのレチノイド、ビタミンＤ３、ビタミンＤ３類似体などが挙げられる。上に記載したように、一部の例では、薬物は細胞傷害薬である。細胞傷害薬は当技術分野において周知である。好適な細胞傷害薬は、細胞の死をもたらす、細胞死を誘導する、または、何らかの方法で細胞生存能を低下させる、任意の化合物であってもよく、例えば、メイタンシノイドおよびメイタンシノイド類似体、ベンゾジアゼピン、タキソイド、ＣＣ−１０６５およびＣＣ−１０６５類似体、デュオカルマイシンおよびデュオカルマイシン類似体、エンジイン（カリケアミシンなど）、ドラスタチンおよびドラスタチン類似体（アウリスタチンを含む）、トマイマイシン誘導体、レプトマイシン誘導体、メトトレキサート、シスプラチン、カルボプラチン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ならびに、モルホリノドキソルビシンが挙げられる。
【０１７４】
例えば、一部の例では、細胞傷害薬は、真核細胞内における微小管形成を阻害する化合物である。このような薬剤としては、例えば、メイタンシノイド、ベンゾジアゼピン、タキソイド、ＣＣ−１０６５、デュオカルマイシン、デュオカルマイシン類似体、カリケアミシン、ドラスタチン、ドラスタチン類似体、アウリスタチン、トマイマイシン、およびレプトマイシン、または、上記のうちのいずれか１つのプロドラッグが挙げられる。メイタンシノイド化合物としては、例えば、Ｎ（２’）−デアセチル−Ｎ（２’）−（３−メルカプト−１−オキソプロピル）−マイタンシン（ＤＭ１）、Ｎ（２’）−デアセチル−Ｎ（２’）−（４−メルカプト−１−オキソペンチル）−マイタンシン（ＤＭ３）、および、Ｎ（２’）−デアセチル−Ｎ２−（４−メルカプト−４−メチル−１−オキソペンチル）−マイタンシン（ＤＭ４）が挙げられる。ベンゾジアゼピンとしては、例えば、インドリノベンゾジアゼピンおよびオキサゾリジノベンゾジアゼピンが挙げられる。
【０１７５】
細胞傷害薬としては、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テニポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、マイタンシンまたはその類似体もしくは誘導体、アウリスタチンまたはその機能性ペプチド類似体もしくは誘導体、ドラスタチン１０もしくは１５またはその類似体、イリノテカンまたはその類似体、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、ピューロマイシン、カリケアミシンまたはその類似体もしくは誘導体、代謝拮抗薬、６メルカプトプリン、６チオグアニン、シタラビン、フルダラビン、５フルオロウラシル、ダカルバジン、ヒドロキシウレア、アスパラギナーゼ、ゲムシタビン、クラドリビン、アルキル化剤、白金誘導体、デュオカルマイシンＡ、デュオカルマイシンＳＡ、ラケルマイシン（ＣＣ−１０６５）またはその類似体もしくは誘導体、抗生物質、ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］−ベンゾジアゼピン（ＰＤＢ）、ジフテリア毒素、リシン毒素、コレラ毒素、志賀様毒素、ＬＴ毒素、Ｃ３毒素、志賀毒素、百日咳毒素、破傷風毒素、大豆ボーマンバークプロテアーゼ阻害剤、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓエキソトキシン、アロリン、サポリン、モデシン、ゲラニン、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、αサルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンチンタンパク質、Ｐｈｙｔｏｌａｃｃａ  ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質、ツルレイシ阻害剤、クルシン、クロチン、サボンソウ阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン毒素、リボヌクレアーゼ（ＲＮａｓｅ）、ＤＮａｓｅ  Ｉ、ＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌエンテロトキシンＡ、アメリカヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、ジフテリン毒素、およびＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓエンドトキシンが挙げられる。
【０１７６】
多量体Ｔ細胞調節ポリペプチドを作製するための方法
本開示は、関連共免疫調節ポリペプチドに対する対応する親野生型免疫調節ポリペプチドの親和性と比較して、関連共免疫調節ポリペプチドに対するより低い親和性を示す１つまたは複数の変異免疫調節ポリペプチドを含むＴＭＭＰを得るための方法を提供し、その方法は、Ａ）複数のメンバーを含むＴＭＭＰのライブラリを作製することと（それぞれのメンバーは、ａ）第１のポリペプチドであって、ｉ）エピトープとｉｉ）第１の主要ＭＨＣポリペプチドとを含む第１のポリペプチドと、ｂ）第２のポリペプチドであって、ｉ）第２のＭＨＣポリペプチドとｉｉ）任意選択的に、Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドまたは非Ｉｇスキャフォールドとを含む第２のポリペプチドと、を含み、それぞれのメンバーは、第１のポリペプチド上、第２のポリペプチド上、または、第１のポリペプチド上と第２のポリペプチド上の両方に、異なる変異免疫調節ポリペプチドを含む）、Ｂ）ライブラリのそれぞれのメンバーの関連共免疫調節ポリペプチドに対する親和性を測定することと、Ｃ）関連共免疫調節ポリペプチドに対する低い親和性を示すメンバーを選択することと、を含む。一部の例では、親和性は、精製ＴＭＭＰライブラリメンバーおよび関連共免疫調節ポリペプチドを使用したバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）により測定される。ＢＬＩ法は当業者に周知である。ＢＬＩアッセイについては上述したとおりである。例えば、Ｌａｄ  ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｊ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｓｃｒｅｅｎ．２０（４）：４９８−５０７；およびＳｈａｈ  ａｎｄ  Ｄｕｎｃａｎ（２０１４）Ｊ．Ｖｉｓ．Ｅｘｐ．１８：ｅ５１３８３を参照されたい。
【０１７７】
本開示は、Ｔ細胞に対する選択的結合性を示すＴＭＭＰを得るための方法を提供し、その方法は、Ａ）複数のメンバーを含むＴＭＭＰのライブラリを作製することと（それぞれのメンバーは、ａ）第１のポリペプチドであって、ｉ）エピトープとｉｉ）第１のＭＨＣポリペプチドとを含む第１のポリペプチドと、ｂ）第２のポリペプチドであって、ｉ）第２のＭＨＣポリペプチドとｉｉ）任意選択的に、免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチドまたは非Ｉｇスキャフォールドとを含む第２のポリペプチドと、を含み、それぞれのメンバーは、第１のポリペプチド上、第２のポリペプチド上、または、第１のポリペプチド上と第２のポリペプチド上の両方に、異なる変異免疫調節ポリペプチドを含み、変異免疫調節ポリペプチドは、親野生型免疫調節ポリペプチドとは１アミノ酸〜１０アミノ酸分、アミノ酸配列が異なる）、Ｂ）ｉ）親野生型免疫調節ポリペプチドに結合する関連共免疫調節ポリペプチドとｉｉ）エピトープに結合するＴ細胞受容体をその表面上に発現する標的Ｔ細胞に、ＴＭＭＰライブラリメンバーを接触させることと（ＴＭＭＰライブラリメンバーは、ＴＭＭＰライブラリメンバーが標的Ｔ細胞に結合するような、エピトープタグを含む）、Ｃ）エピトープタグに結合する蛍光標識結合因子に、標的Ｔ細胞に結合したＴＭＭＰライブラリメンバーを接触させて、ＴＭＭＰライブラリメンバー／標的Ｔ細胞／結合因子複合体を作製することと、Ｄ）フローサイトメトリーを使用してＴＭＭＰライブラリメンバー／標的Ｔ細胞／結合因子複合体の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を測定することと（ＴＭＭＰライブラリメンバーの濃度範囲にわたり測定されたＭＦＩにより、親和性と明らかな結合力の指標がもたらされる）、Ｅ）ｉ）親野生型免疫調節ポリペプチドに結合する関連共免疫調節ポリペプチドとｉｉ）ＴＭＭＰライブラリメンバー内に存在するエピトープ以外のエピトープに結合するＴ細胞受容体とを含む対照Ｔ細胞へのＴＭＭＰライブラリメンバーの結合と比較して、標的Ｔ細胞に選択的に結合するＴＭＭＰライブラリメンバーを選択することと、を含む。一部の例では、標的Ｔ細胞に選択的に結合することが確認されたＴＭＭＰライブラリメンバーは、ライブラリから単離される。
【０１７８】
一部の例では、親野生型免疫調節ポリペプチドと関連免疫調節ポリペプチドのペアは、
ＩＬ−２とＩＬ−２受容体、
４−１ＢＢＬと４−１ＢＢ、
ＰＤ−Ｌ１とＰＤ−１、
ＣＤ７０とＣＤ２７、
ＴＧＦβとＴＧＦβ受容体、
ＣＤ８０とＣＤ２８、
ＣＤ８６とＣＤ２８、
ＯＸ４０ＬとＯＸ４０、
ＦａｓＬとＦａｓ、
ＩＣＯＳ−ＬとＩＣＯＳ、
ＩＣＡＭとＬＦＡ−１、
ＪＡＧ１とＮｏｔｃｈ、
ＪＡＧ１とＣＤ４６、
ＣＤ８０とＣＴＬＡ４、および、
ＣＤ８６とＣＴＬＡ４、
から選択される。
【０１７９】
本開示は、関連共免疫調節ポリペプチドに対する対応する親野生型免疫調節ポリペプチドの親和性と比較して、関連共免疫調節ポリペプチドに対する低い親和性を示す１つまたは複数の変異免疫調節ポリペプチドを含むＴＭＭＰを得るための方法を提供し、その方法は、複数のメンバーを含むＴＭＭＰのライブラリから、関連共免疫調節ポリペプチドに対する低い親和性を示すメンバーを選択すること（複数のメンバーは、ａ）第１のポリペプチドであって、ｉ）エピトープとｉｉ）第１のＭＨＣポリペプチドとを含む第１のポリペプチドと、ｂ）第２のポリペプチドであって、ｉ）第２のＭＨＣポリペプチドとｉｉ）任意選択的に、Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドまたは非Ｉｇスキャフォールドとを含む第２のポリペプチドと、を含み、ライブラリのメンバーは、第１のポリペプチド、第２のポリペプチド、または、第１のポリペプチドと第２のポリペプチドの両方の内部に存在する複数の変異免疫調節ポリペプチドを含む）、を含む。一部の例では、選択行程は、バイオレイヤー干渉法を使用して、ＴＭＭＰライブラリメンバーと関連共免疫調節ポリペプチドの間の結合親和性を測定することを含む。一部の例では、ＴＭＭＰは上述したとおりである。
【０１８０】
一部の例では、方法は、ａ）ｉ）親野生型免疫調節ポリペプチドに結合する関連共免疫調節ポリペプチドとｉｉ）エピトープに結合するＴ細胞受容体をその表面上に発現する標的Ｔ細胞に、選択ＴＭＭＰライブラリメンバーを接触させることと（ＴＭＭＰライブラリメンバーは、ＴＭＭＰライブラリメンバーが標的Ｔ細胞に結合するような、エピトープタグを含む）、ｂ）エピトープタグに結合する蛍光標識結合因子に、標的Ｔ細胞に結合した選択ＴＭＭＰライブラリメンバーを接触させて、選択ＴＭＭＰライブラリメンバー／標的Ｔ細胞／結合因子複合体を作製することと、ｃ）フローサイトメトリーを使用して選択ＴＭＭＰライブラリメンバー／標的Ｔ細胞／結合因子複合体の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を測定することと（選択ＴＭＭＰライブラリメンバーの濃度範囲にわたり測定されたＭＦＩにより、親和性と明らかな結合力の指標がもたらされる）、を更に含む。標的Ｔ細胞に選択的に結合する選択ＴＭＭＰライブラリメンバーは、ｉ）親野生型免疫調節ポリペプチドに結合する関連共免疫調節ポリペプチドとｉｉ）ＴＭＭＰライブラリメンバー内に存在するエピトープ以外のエピトープに結合するＴ細胞受容体を含む対照Ｔ細胞へのＴＭＭＰライブラリメンバーの結合と比較して、標的Ｔ細胞に選択的に結合することが確認される。一部の例では、結合因子は、エピトープタグに特異的な抗体である。一部の例では、変異免疫調節ポリペプチドは、対応する親野生型免疫調節ポリペプチドと比較して、１〜２０のアミノ酸置換（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０のアミノ酸置換）を含む。一部の例では、ＴＭＭＰは、２つの変異免疫調節ポリペプチドを含む。一部の例では、２つの変異免疫調節ポリペプチドは、同一のアミノ酸配列を含む。一部の例では、第１のポリペプチドは、２つの変異免疫調節ポリペプチドのうちの１つを含み、第２のポリペプチドは、２つの変異免疫調節ポリペプチドのうちの２つ目を含む。一部の例では、２つの変異免疫調節ポリペプチドは、ＴＭＭＰの同一のポリペプチド鎖上にある。一部の例では、２つの変異免疫調節ポリペプチドは、ＴＭＭＰの第１のポリペプチド上にある。一部の例では、２つの変異免疫調節ポリペプチドは、ＴＭＭＰの第２のポリペプチド上にある。
【０１８１】
一部の例では、方法は、選択ＴＭＭＰライブラリメンバーをライブラリから単離することを更に含む。一部の例では、方法は、選択ＴＭＭＰライブラリメンバーをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を提供することを更に含む。一部の例では、核酸は組換え発現ベクター内に存在する。一部の例では、ヌクレオチド配列は、真核細胞において機能的である転写制御エレメントに機能的に連結する。一部の例では、方法は、真核生物宿主細胞に核酸を導入し、液体培地内で細胞を培養して、細胞内でコードされた選択ＴＭＭＰライブラリメンバーを合成することを更に含む。一部の例では、方法は、細胞または細胞を含む液体培地から、合成した選択ＴＭＭＰライブラリメンバーを単離することを更に含む。一部の例では、選択ＴＭＭＰライブラリメンバーはＩｇ  Ｆｃポリペプチドを含む。一部の例では、方法は、薬物をＩｇ  Ｆｃポリペプチドにコンジュゲートすることを更に含む。一部の例では、薬物は、メイタンシノイド、ベンゾジアゼピン、タキソイド、ＣＣ−１０６５、デュオカルマイシン、デュオカルマイシン類似体、カリケアミシン、ドラスタチン、ドラスタチン類似体、アウリスタチン、トマイマイシン、およびレプトマイシン、または、上記のうちのいずれか１つのプロドラッグから選択される細胞傷害薬である。一部の例では、薬物はレチノイドである。一部の例では、親野生型免疫調節ポリペプチドと関連免疫調節ポリペプチドは、ＩＬ−２とＩＬ−２受容体、４−１ＢＢＬと４−１ＢＢ、ＰＤ−Ｌ１とＰＤ−１、ＣＤ７０とＣＤ２７、ＴＧＦβとＴＧＦβ受容体、ＣＤ８０とＣＤ２８、ＣＤ８６とＣＤ２８、ＯＸ４０ＬとＯＸ４０、ＦａｓＬとＦａｓ、ＩＣＯＳ−ＬとＩＣＯＳ、ＩＣＡＭとＬＦＡ−１、ＪＡＧ１とＮｏｔｃｈ、ＪＡＧ１とＣＤ４６、ＣＤ８０とＣＴＬＡ４、および、ＣＤ８６とＣＴＬＡ４、から選択される。
【０１８２】
本開示は、関連共免疫調節ポリペプチドに対する対応する親野生型免疫調節ポリペプチドの親和性と比較して、関連共免疫調節ポリペプチドに対する低い親和性を示す１つまたは複数の変異免疫調節ポリペプチドを含むＴＭＭＰを得るための方法を提供し、その方法は、Ａ）複数のメンバーを含むＴＭＭＰのライブラリを提供することと（複数のメンバーは、ａ）第１のポリペプチドであって、ｉ）エピトープとｉｉ）第１のＭＨＣポリペプチドとを含む第１のポリペプチドと、ｂ）第２のポリペプチドであって、ｉ）第２のＭＨＣポリペプチドとｉｉ）任意選択的に、Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドまたは非Ｉｇスキャフォールドとを含む第２のポリペプチドと、を含み、ライブラリのメンバーは、第１のポリペプチド、第２のポリペプチド、または、第１のポリペプチドと第２のポリペプチドの両方の内部に存在する複数の変異免疫調節ポリペプチドを含む）、Ｂ）関連共免疫調節ポリペプチドに対する低い親和性を示すメンバーをライブラリから選択することと、を含む。一部の例では、選択行程は、バイオレイヤー干渉法を使用して、ＴＭＭＰライブラリメンバーと関連共免疫調節ポリペプチドの間の結合親和性を測定することを含む。一部の例では、ＴＭＭＰは上述したとおりである。
【０１８３】
一部の例では、方法は、ａ）ｉ）親野生型免疫調節ポリペプチドに結合する関連共免疫調節ポリペプチドとｉｉ）エピトープに結合するＴ細胞受容体をその表面上に発現する標的Ｔ細胞に、選択ＴＭＭＰライブラリメンバーを接触させることと（ＴＭＭＰライブラリメンバーは、ＴＭＭＰライブラリメンバーが標的Ｔ細胞に結合するような、エピトープタグを含む）、ｂ）エピトープタグに結合する蛍光標識結合因子に、標的Ｔ細胞に結合した選択ＴＭＭＰライブラリメンバーを接触させて、選択ＴＭＭＰライブラリメンバー／標的Ｔ細胞／結合因子複合体を作製することと、ｃ）フローサイトメトリーを使用して選択ＴＭＭＰライブラリメンバー／標的Ｔ細胞／結合因子複合体の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を測定することと（選択ＴＭＭＰライブラリメンバーの濃度範囲にわたり測定されたＭＦＩにより、親和性と明らかな結合力の指標がもたらされる）、を更に含む。標的Ｔ細胞に選択的に結合する選択ＴＭＭＰライブラリメンバーは、ｉ）親野生型免疫調節ポリペプチドに結合する関連共免疫調節ポリペプチドとｉｉ）ＴＭＭＰライブラリメンバー内に存在するエピトープ以外のエピトープに結合するＴ細胞受容体を含む対照Ｔ細胞へのＴＭＭＰライブラリメンバーの結合と比較して、標的Ｔ細胞に選択的に結合することが確認される。一部の例では、結合因子は、エピトープタグに特異的な抗体である。一部の例では、変異免疫調節ポリペプチドは、対応する親野生型免疫調節ポリペプチドと比較して、１〜２０のアミノ酸置換（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０のアミノ酸置換）を含む。一部の例では、ＴＭＭＰは、２つの変異免疫調節ポリペプチドを含む。一部の例では、２つの変異免疫調節ポリペプチドは、同一のアミノ酸配列を含む。一部の例では、第１のポリペプチドは、２つの変異免疫調節ポリペプチドのうちの１つを含み、第２のポリペプチドは、２つの変異免疫調節ポリペプチドのうちの２つ目を含む。一部の例では、２つの変異免疫調節ポリペプチドは、ＴＭＭＰの同一のポリペプチド鎖上にある。一部の例では、２つの変異免疫調節ポリペプチドは、ＴＭＭＰの第１のポリペプチド上にある。一部の例では、２つの変異免疫調節ポリペプチドは、ＴＭＭＰの第２のポリペプチド上にある。
【０１８４】
一部の例では、方法は、選択ＴＭＭＰライブラリメンバーをライブラリから単離することを更に含む。一部の例では、方法は、選択ＴＭＭＰライブラリメンバーをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を提供することを更に含む。一部の例では、核酸は組換え発現ベクター内に存在する。一部の例では、ヌクレオチド配列は、真核細胞において機能的である転写制御エレメントに機能的に連結する。一部の例では、方法は、真核生物宿主細胞に核酸を導入し、液体培地内で細胞を培養して、細胞内でコードされた選択ＴＭＭＰライブラリメンバーを合成することを更に含む。一部の例では、方法は、細胞または細胞を含む液体培地から、合成した選択ＴＭＭＰライブラリメンバーを単離することを更に含む。一部の例では、選択ＴＭＭＰライブラリメンバーはＩｇ  Ｆｃポリペプチドを含む。一部の例では、方法は、薬物をＩｇ  Ｆｃポリペプチドにコンジュゲートすることを更に含む。一部の例では、薬物は、メイタンシノイド、ベンゾジアゼピン、タキソイド、ＣＣ−１０６５、デュオカルマイシン、デュオカルマイシン類似体、カリケアミシン、ドラスタチン、ドラスタチン類似体、アウリスタチン、トマイマイシン、およびレプトマイシン、または、上記のうちのいずれか１つのプロドラッグから選択される細胞傷害薬である。一部の例では、薬物はレチノイドである。一部の例では、親野生型免疫調節ポリペプチドと関連免疫調節ポリペプチドは、ＩＬ−２とＩＬ−２受容体、４−１ＢＢＬと４−１ＢＢ、ＰＤ−Ｌ１とＰＤ−１、ＴＧＦβとＴＧＦβ受容体、ＣＤ８０とＣＤ２８、ＣＤ８６とＣＤ２８、ＯＸ４０ＬとＯＸ４０、ＦａｓＬとＦａｓ、ＩＣＯＳ−ＬとＩＣＯＳ、ＣＤ７０とＣＤ２７、ＩＣＡＭとＬＦＡ−１、ＪＡＧ１とＮｏｔｃｈ、ＪＡＧ１とＣＤ４６、ＣＤ８０とＣＴＬＡ４、および、ＣＤ８６とＣＴＬＡ４、から選択される。
【０１８５】
核酸
本開示は、本開示のＴＭＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。本開示は、本開示のＴＭＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。
【０１８６】
本開示は、本開示の多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。一部の例では、本開示の多量体ポリペプチドの個々のポリペプチド鎖は、個々の核酸内でコードされる。一部の例では、本開示の多量体ポリペプチドの全てのポリペプチド鎖は、単一の核酸内でコードされる。一部の例では、第１の核酸は、本開示の多量体ポリペプチドの第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、第２の核酸は、本開示の多量体ポリペプチドの第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。一部の例では、単一の核酸は、本開示の多量体ポリペプチドの第１のポリペプチドと本開示の多量体ポリペプチドの第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０１８７】
多量体ポリペプチドの個々のポリペプチド鎖をコードする個々の核酸
本開示は、本開示の多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。上に記載したように、一部の例では、本開示の多量体ポリペプチドの個々のポリペプチド鎖は、個々の核酸内でコードされる。一部の例では、本開示の多量体ポリペプチドの個々のポリペプチド鎖をコードするヌクレオチド配列は、転写制御エレメント、例えば、プロモーター、例えば、真核細胞において機能的であるプロモーターなどに機能的に連結し、プロモーターは、構成的プロモーターまたは誘導性プロモーターであってもよい。
【０１８８】
本開示は、第１の核酸および第２の核酸を提供し、第１の核酸は、本開示の多量体ポリペプチドの第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、第１のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順に、ａ）エピトープ（例えば、Ｔ細胞エピトープ）と、ｂ）第１のＭＨＣポリペプチドと、ｃ）免疫調節ポリペプチドと（例えば、上に記載した低い親和性の変異体）、を含み、第２の核酸は、本開示の多量体ポリペプチドの第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、第２のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順に、ａ）第２のＭＨＣポリペプチドと、ｂ）Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドと、を含む。好適なＴ細胞エピトープ、ＭＨＣポリペプチド、免疫調節ポリペプチド、およびＩｇ  Ｆｃポリペプチドについては上述したとおりである。一部の例では、第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列および第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、転写制御エレメントに機能的に連結する。一部の例では、転写制御エレメントは、真核細胞において機能的であるプロモーターである。一部の例では、核酸は、個々の発現ベクター内に存在する。
【０１８９】
本開示は、第１の核酸および第２の核酸を提供し、第１の核酸は、本開示の多量体ポリペプチドの第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、第１のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順に、ａ）エピトープ（例えば、Ｔ細胞エピトープ）と、ｂ）第１のＭＨＣポリペプチドと、を含み、第２の核酸は、本開示の多量体ポリペプチドの第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、第２のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順に、ａ）免疫調節ポリペプチド（例えば、上に記載した低い親和性の変異体）と、ｂ）第２のＭＨＣポリペプチドと、ｃ）Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドと、を含む。好適なＴ細胞エピトープ、ＭＨＣポリペプチド、免疫調節ポリペプチド、およびＩｇ  Ｆｃポリペプチドについては上述したとおりである。一部の例では、第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列および第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、転写制御エレメントに機能的に連結する。一部の例では、転写制御エレメントは、真核細胞において機能的であるプロモーターである。一部の例では、核酸は、個々の発現ベクター内に存在する。
【０１９０】
多量体ポリペプチド内に存在する２種以上のポリペプチドをコードする核酸
本開示は、本開示の多量体ポリペプチドの第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドを少なくともコードするヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。一部の例では、本開示の多量体ポリペプチドは、第１、第２および第３のポリペプチドを含み、核酸は、第１、第２および第３のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。一部の例では、本開示の多量体ポリペプチドの、第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列および第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列と第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の間に配置されたタンパク質分解開裂性リンカーを含む。一部の例では、本開示の多量体ポリペプチドの、第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列および第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列と第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の間に配置された配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）を含む。一部の例では、本開示の多量体ポリペプチドの、第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列および第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列と第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の間に配置されたリボソームスキッピングシグナル（またはシス作用性加水分解酵素エレメント、ＣＨＹＳＥＬ）を含む。核酸の例については以下に記載するが、タンパク質分解開裂性リンカーは、本開示の多量体ポリペプチドの、第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列と第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の間に配置され、これらの実施形態のいずれかにおいて、ＩＲＥＳまたはリボソームスキッピングシグナルは、タンパク質分解開裂性リンカーをコードするヌクレオチド配列の代わりに使用され得る。
【０１９１】
一部の例では、第１の核酸（例えば、組換え発現ベクター、ｍＲＮＡ、ウイルスＲＮＡなど）は、本開示の多量体ポリペプチドの第１のポリペプチド鎖をコードするヌクレオチド配列を含み、第２の核酸（例えば、組換え発現ベクター、ｍＲＮＡ、ウイルスＲＮＡなど）は、本開示の多量体ポリペプチドの第２のポリペプチド鎖をコードするヌクレオチド配列を含む。一部の例では、第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列と第２のポリペプチドをコードする第２のヌクレオチド配列はそれぞれ、転写制御エレメント、例えば、プロモーター、例えば、真核細胞において機能的であるプロモーターなどに機能的に連結し、プロモーターは、構成的プロモーターまたは誘導性プロモーターであってもよい。
【０１９２】
本開示は、組換えポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を提供し、組換えポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順に、ａ）エピトープ（例えば、Ｔ細胞エピトープ）と、ｂ）第１のＭＨＣポリペプチドと、ｃ）免疫調節ポリペプチド（例えば、上に記載した低い親和性の変異体）と、ｄ）タンパク質分解開裂性リンカーと、ｅ）第２のＭＨＣポリペプチドと、ｆ）免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチドと、を含む。本開示は、組換えポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を提供し、組換えポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順に、ａ）第１のリーダーペプチドと、ｂ）エピトープと、ｃ）第１のＭＨＣポリペプチドと、ｄ）免疫調節ポリペプチド（例えば、上に記載した低い親和性の変異体）と、ｅ）タンパク質分解開裂性リンカーと、ｆ）第２のリーダーペプチドと、ｇ）第２のＭＨＣポリペプチドと、ｈ）Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドと、を含む。本開示は、組換えポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を提供し、組換えポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順に、ａ）エピトープと、ｂ）第１のＭＨＣポリペプチドと、ｃ）タンパク質分解開裂性リンカーと、ｄ）免疫調節ポリペプチド（例えば、上に記載した低い親和性の変異体）と、ｅ）第２のＭＨＣポリペプチドと、ｆ）Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドと、を含む。一部の例では、第１のリーダーペプチドおよび第２のリーダーペプチドはβ２−Ｍリーダーペプチドである。一部の例では、ヌクレオチド配列は転写制御エレメントに機能的に連結する。一部の例では、転写制御エレメントは、真核細胞において機能的であるプロモーターである。
【０１９３】
好適なＭＨＣポリペプチドについては上述したとおりである。一部の例では、第１のＭＨＣポリペプチドはβ２−ミクログロブリンポリペプチドであり、第２のＭＨＣポリペプチドはＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドである。一部の例では、β２−ミクログロブリンポリペプチドは、図４に記載のβ２Ｍアミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の例では、ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−Ｆ、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＬＡ−Ｋ、またはＨＬＡ−Ｌ重鎖である。一部の例では、ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、図３Ａ〜図３Ｃのうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の例では、第１のＭＨＣポリペプチドはＭＨＣクラスＩＩα鎖ポリペプチドであり、第２のＭＨＣポリペプチドはＭＨＣクラスＩＩβ鎖ポリペプチドである。
【０１９４】
好適なＦｃポリペプチドについては上述したとおりである。一部の例では、Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドは、ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＧ２  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＧ３  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＧ４  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＡ  Ｆｃポリペプチド、またはＩｇＭ  Ｆｃポリペプチドである。一部の例では、Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドは、図２Ａ〜図２Ｇに記載のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０１９５】
好適な免疫調節ポリペプチドについては上述したとおりである。
【０１９６】
好適なタンパク質分解開裂性リンカーについては上述したとおりである。一部の例では、タンパク質分解開裂性リンカーは、
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から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０１９７】
一部の例では、エピトープと第１のＭＨＣポリペプチドの間のリンカーは第１のＣｙｓ残基を含み、第２のＭＨＣポリペプチドは、第２のＣｙｓ残基をもたらすアミノ酸置換を含み、第１のＣｙｓ残基と第２のＣｙｓ残基は、リンカーと第２のＭＨＣポリペプチドの間にジスルフィド結合をもたらす。一部の例では、第１のＭＨＣポリペプチドは、第１のＣｙｓ残基をもたらすアミノ酸置換を含み、第２のＭＨＣポリペプチドは、第２のＣｙｓ残基をもたらすアミノ酸置換を含み、第１のＣｙｓ残基と第２のＣｙｓ残基は、第１のＭＨＣポリペプチドと第２のＭＨＣポリペプチドの間にジスルフィド結合をもたらす。
【０１９８】
組換え発現ベクター
本開示は、本開示の核酸を含む組換え発現ベクターを提供する。一部の例では、組換え発現ベクターは非ウイルスベクターである。一部の例では、組換え発現ベクターは、ウイルス性構築物、例えば、組換えアデノ随伴ウイルス性構築物（例えば、米国特許第７，０７８，３８７号を参照のこと）、組換えアデノウイルス性構築物、組換えレンチウイルス性構築物、組換えレトロウイルス性構築物、非一体型ウイルスベクターなどである。
【０１９９】
好適な発現ベクターとしては、ウイルスベクター（例えば、ワクシニアウイルス、ポリオウイルス、アデノウイルス（例えば、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ  ３５：２５４３  ２５４９，１９９４；Ｂｏｒｒａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ６：５１５  ５２４，１９９９；Ｌｉ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｄｓｏｎ，ＰＮＡＳ  ９２：７７００  ７７０４，１９９５；Ｓａｋａｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ５：１０８８  １０９７，１９９９；ＷＯ９４／１２６４９，ＷＯ９３／０３７６９；ＷＯ９３／１９１９１；ＷＯ９４／２８９３８；ＷＯ  ９５／１１９８４およびＷＯ９５／００６５５を参照のこと）、アデノ随伴ウイルス（例えば、Ａｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ９：８１  ８６，１９９８，Ｆｌａｎｎｅｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ９４：６９１６  ６９２１，１９９７；Ｂｅｎｎｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ  ３８：２８５７  ２８６３，１９９７；Ｊｏｍａｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ４：６８３  ６９０，１９９７，Ｒｏｌｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  １０：６４１  ６４８，１９９９；Ａｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍ  Ｍｏｌ  Ｇｅｎｅｔ  ５：５９１  ５９４，１９９６；Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ  ｉｎ  ＷＯ９３／０９２３９，Ｓａｍｕｌｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒ．（１９８９）６３：３８２２−３８２８；Ｍｅｎｄｅｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｖｉｒｏｌ．（１９８８）１６６：１５４−１６５；およびＦｌｏｔｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ（１９９３）９０：１０６１３−１０６１７を参照のこと）、ＳＶ４０、単純ヘルペスウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（例えば、Ｍｉｙｏｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ９４：１０３１９  ２３，１９９７；Ｔａｋａｈａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ７３：７８１２  ７８１６，１９９９を参照のこと）をベースとするウイルスベクター）、レトロウイルスベクター（例えば、マウス白血病ウイルス、脾臓壊死ウイルス、ならびに、レトロウイルス、例えば、ラウス肉腫ウイルス、ハーベイ肉腫ウイルス、トリ白血病ウイルス、レンチウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、骨髄増殖性肉腫ウイルス、および乳癌ウイルスなどに由来するベクター）など、が挙げられるがこれらに限定されない。
【０２００】
多数の好適な発現ベクターが当業者に周知であり、その多くは市販されている。真核生物宿主細胞用に、以下のベクター、ｐＸＴ１、ｐＳＧ５（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）、ｐＳＶＫ３、ｐＢＰＶ、ｐＭＳＧ、および、ｐＳＶＬＳＶ４０（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を例として提供する。しかしながら、宿主細胞に適合する限りにおいて、任意のその他のベクターを使用してもよい。
【０２０１】
利用する宿主／ベクター系に応じて、構成的プロモーターおよび誘導性プロモーター、転写エンハンサーエレメント、転写ターミネーターなどを含む多数の好適な転写および翻訳制御エレメントのいずれかを、発現ベクター内において使用してもよい（例えば、Ｂｉｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１５３：５１６−５４４を参照のこと）。
【０２０２】
一部の例では、ＤＮＡ標的化ＲＮＡおよび／または部位特異的修飾ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、制御エレメント、例えば、プロモーターなどの転写制御エレメントに機能的に連結する。転写制御エレメントは、真核細胞（例えば、哺乳動物細胞）または原核細胞（例えば、細菌細胞または古細菌細胞）のいずれかにおいて機能的であってもよい。一部の例では、ＤＮＡ標的化ＲＮＡおよび／または部位特異的修飾ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、原核細胞と真核細胞の両方においてＤＮＡ標的化ＲＮＡおよび／または部位特異的修飾ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の発現を可能とする複数の制御エレメントに機能的に連結する。
【０２０３】
好適な真核細胞プロモーター（真核細胞において機能的なプロモーター）の非限定例としては、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）前初期、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）チミジンキナーゼ、初期および後期ＳＶ４０、レトロウイルス由来長末端反復配列（ＬＴＲ）、およびマウスメタロチオネイン−Ｉ、の真核細胞プロモーターが挙げられる。適切なベクターおよびプロモーターの選択については、十分に当業者のレベルの範囲内である。発現ベクターはまた、翻訳開始用のリボソーム結合部位および転写ターミネーターを含有していてもよい。発現ベクターはまた、発現を増幅させるための適切な配列を含んでいてもよい。
【０２０４】
遺伝子組換え宿主細胞
本開示は遺伝子組換え宿主細胞を提供し、その宿主細胞は本開示の核酸で遺伝子組換えされている。
【０２０５】
好適な宿主細胞としては、イースト菌などの真核細胞、昆虫細胞、および哺乳動物細胞が挙げられる。一部の例では、宿主細胞は哺乳動物細胞株の細胞である。好適な哺乳動物細胞株としては、ヒト細胞株、非ヒト霊長類細胞株、げっ歯類（例えば、マウス、ラット）細胞株などが挙げられる。好適な哺乳動物細胞株としては、ＨｅＬａ細胞（例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）番号ＣＣＬ−２）、ＣＨＯ細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ９６１８、ＣＣＬ６１、ＣＲＬ９０９６）、２９３細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−１５７３）、Ｖｅｒｏ細胞、ＮＩＨ  ３Ｔ３細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−１６５８）、Ｈｕｈ−７細胞、ＢＨＫ細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ１０）、ＰＣ１２細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１７２１）、ＣＯＳ細胞、ＣＯＳ−７細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１６５１）、ＲＡＴ１細胞、マウスＬ細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＣＬＩ．３）、ヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１５７３）、ＨＬＨｅｐＧ２細胞などが挙げられるがこれらに限定されない。
【０２０６】
一部の例では、宿主細胞は、内因性ＭＨＣβ２−Ｍを合成しないように遺伝子組換えされた哺乳動物細胞である。
【０２０７】
一部の例では、宿主細胞は、内因性ＭＨＣクラスＩ重鎖を合成しないように遺伝子組換えされた哺乳動物細胞である。
【０２０８】
組成物
本開示は、本開示のＴＭＭＰ（ｓｙｎＴａｃ）を含む組成物（医薬組成物を含む）を提供する。本開示は、本開示の多量体ポリペプチドを含む組成物（医薬組成物を含む）を提供する。本開示は、本開示の核酸または組換え発現ベクターを含む組成物（医薬組成物を含む）を提供する。
【０２０９】
多量体ポリペプチドを含む組成物
本開示の組成物は、本開示の多量体ポリペプチドに加えて、塩、例えば、ＮａＣｌ、ＭｇＣｌ２、ＫＣｌ、ＭｇＳＯ４など；緩衝剤、例えば、トリス緩衝剤、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−（２−エタンスルホン酸）（ＨＥＰＥＳ）、２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸ナトリウム塩（ＭＥＳ）、３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、Ｎ−トリス［ヒドロキシメチル］メチル−３−アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）など；可溶化剤；界面活性剤、例えば、Ｔｗｅｅｎ−２０などの非イオン性界面活性剤など；プロテアーゼ阻害剤；グリセロール；など、のうちの１種または複数種を含んでいてもよい。
【０２１０】
組成物は薬学的に許容される賦形剤を含んでいてもよく、その種類は当該技術分野において周知であり、本明細書で詳細に論述する必要はない。薬学的に許容される賦形剤については、例えば、“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ”，１９ｔｈ  Ｅｄ．（１９９５），ｏｒ  ｌａｔｅｓｔ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ；Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）”Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ”，２０ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ；Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（１９９９）Ｈ．Ｃ．Ａｎｓｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ  ７ｔｈ  ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ；およびＨａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ（２０００）Ａ．Ｈ．Ｋｉｂｂｅ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，３ｒｄ  ｅｄ．Ａｍｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃを含む、様々な刊行物において詳細に記載されている。
【０２１１】
医薬組成物は、本開示の多量体ポリペプチドと、薬学的に許容される賦形剤と、を含んでいてもよい。一部の例では、本医薬組成物は対象への投与に好適であり、例えば、滅菌されている。例えば、一部の例では、本医薬組成物はヒト対象への投与に好適であり、例えば、組成物は滅菌されており、検出可能な発熱物質および／またはその他の毒素を含まない。
【０２１２】
タンパク質組成物は、その他の成分、例えば、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、タルカム、セルロース、グルコース、スクロース、マグネシウム、カーボネート、などを含んでいてもよい。組成物は、生理学的条件に近づけるのに必要な薬学的に許容される補助剤、例えば、ｐＨ調整剤およびｐＨ緩衝剤、毒性調整剤など、例えば、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウム、塩酸塩、硫酸塩、溶媒和物（例えば、混合イオン性塩、水、有機物質）、水和物（例えば、水）など、を含んでいてもよい。
【０２１３】
例えば、組成物としては、水性液剤、粉末形状剤、顆粒剤、錠剤、丸剤、坐剤、カプセル剤、懸濁剤、噴霧剤など、を挙げてもよい。組成物は、以下に記載する様々な投与経路に応じて製剤化されてもよい。
【０２１４】
本開示の多量体ポリペプチドが、注射剤として組織へと直接投与される（例えば、皮下、腹腔内、筋肉内および／または静脈内）場合、製剤は、レディートゥーユース剤形、すなわち、非水性形態（例えば、戻すことができる保存安定性のある粉末）または水性形態（例えば、薬学的に許容される担体と、薬学的に許容される賦形剤と、からなる液体など）として提供されてもよい。タンパク質含有製剤はまた、投与後における本タンパク質の血清中半減期を延長するように提供されてもよい。例えば、タンパク質は、コロイド状に調製されるリポソーム製剤として提供されてもよく、あるいは、血清中半減期を延長するためのその他の従来技術を用いて提供されてもよい。リポソームを調製するための様々な方法が利用可能であり、例えば、Ｓｚｏｋａ  ｅｔ  ａｌ．１９８０  Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｂｉｏｅｎｇ．９：４６７，米国特許第４，２３５，８７１号、第４，５０１，７２８号および第４，８３７，０２８号に記載されている。製剤はまた、制御放出形態または徐放形態で提供されてもよい。
【０２１５】
非経口投与に好適な製剤のその他の例としては、等張性滅菌注射用液剤、酸化防止剤、静菌剤、製剤を目的のレシピエントの血液と等張とする溶質、懸濁化剤、可溶化剤、増粘剤、安定化剤、および、防腐剤、が挙げられる。例えば、本医薬組成物は、容器、例えば、注射器などの滅菌容器で提供されてもよい。製剤は、単回用量または複数回用量の密閉容器、例えば、アンプルおよびバイアルなどで提供されてもよく、使用の直前において、注射用の滅菌液体賦形剤（例えば、水）の添加のみを必要とするフリーズドライ（凍結乾燥）状態で保存されてもよい。即時注射用液剤および即時注射用懸濁剤は、滅菌した散剤、顆粒剤および錠剤から調製してもよい。
【０２１６】
製剤中における本開示の多量体ポリペプチドの濃度は、広い範囲（例えば、重量比で、約０．１％未満から、通常は（または少なくとも）約２％から、２０％ほどまで、５０％もしくはそれ以上まで）で変化し得るが、通常は、主に、液量、粘度、ならびに、選択した特定の投与方法および患者のニーズに従った患者基準の因子に基づいて選択される。
【０２１７】
本開示は、本開示の組成物（例えば、液体組成物）を含む容器を提供する。容器は、例えば、注射器、アンプルなどであってもよい。一部の例では、容器は滅菌されている。一部の例では、容器と組成物の両方は滅菌されている。
【０２１８】
本開示は、本開示のＴＭＭＰを含む組成物（医薬組成物を含む）を提供する。組成物は、ａ）本開示のＴＭＭＰと、ｂ）多量体ポリペプチド用の上記の賦形剤と、を含んでいてもよい。一部の例では、賦形剤は薬学的に許容される賦形剤である。
【０２１９】
一部の例では、本開示のＴ細胞多量体ポリペプチドは液体組成物内に存在する。それゆえ、本開示は、本開示のＴ細胞多量体ポリペプチドを含む組成物（例えば、液体組成物（医薬組成物を含む））を提供する。一部の例では、本開示の組成物は、ａ）本開示のＴ細胞多量体ポリペプチドと、ｂ）生理食塩水（例えば、０．９％ＮａＣｌ）と、を含む。一部の例では、組成物は滅菌されている。一部の例では、組成物はヒト対象への投与に好適であり、例えば、組成物は滅菌されており、検出可能な発熱物質および／またはその他の毒素を含まない。それゆえ、本開示は、ａ）本開示のＴ細胞多量体ポリペプチドと、ｂ）生理食塩水（例えば、０．９％ＮａＣｌ）と、を含む組成物を提供し、組成物は滅菌されており、検出可能な発熱物質および／またはその他の毒素を含まない。
【０２２０】
核酸または組換え発現ベクターを含む組成物
本開示は、組成物、例えば、本開示の核酸または組換え発現ベクターを含む医薬組成物を提供する。多種多様な薬学的に許容される賦形剤は当該技術分野において周知であり、本明細書において詳細に論述する必要はない。薬学的に許容される賦形剤については、例えば、Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）”Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ”，２０ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ；Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（１９９９）Ｈ．Ｃ．Ａｎｓｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ  ７ｔｈ  ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ；およびＨａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ（２０００）Ａ．Ｈ．Ｋｉｂｂｅ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，３ｒｄ  ｅｄ．Ａｍｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃを含む、様々な刊行物において詳細に記載されている。
【０２２１】
本開示の組成物は、ａ）ＴＭＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む１種もしくは複数種の核酸または１種もしくは複数種の組換え発現ベクターと、ｂ）緩衝剤、界面活性剤、酸化防止剤、親水性ポリマー、デキストリン、キレート化剤、懸濁化剤、可溶化剤、増粘剤、安定化剤、静菌剤、湿潤剤、および、防腐剤のうちの１種または複数種と、を含んでいてもよい。好適な緩衝剤としては、例えば、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）、ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ−トリス（ヒドロキシメチル）メタン（ビス−トリス）、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’３−プロパンスルホン酸（ＥＰＰＳまたはＨＥＰＰＳ）、グリシルグリシン、Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−エタン−スルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）、重炭酸ナトリウム、３−（Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）−メチル−アミノ）−２−ヒドロキシ−プロパンスルホン酸（ＴＡＰＳＯ）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−２−アミノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−グリシン（トリシン）、トリス（ヒドロキシメチル）−アミノメタン（トリス）、などが挙げられるがこれらに限定されない。好適な塩としては、例えば、ＮａＣｌ、ＭｇＣｌ２、ＫＣｌ、ＭｇＳＯ４などが挙げられる。
【０２２２】
本開示の医薬品製剤は、約０．００１％〜約９０％（重量／重量）の量で、本開示の核酸または組換え発現ベクターを含んでいてもよい。以下の製剤の記述において、「本核酸または組換え発現ベクター」は、本開示の核酸または組換え発現ベクターを含むものと理解される。例えば、一部の例では、本製剤は、本開示の核酸または組換え発現ベクターを含む。
【０２２３】
本核酸または組換え発現ベクターは、その他の化合物または化合物の混合物と混合してもよく、それらに封入してもよく、それらにコンジュゲートまたは別の方法で結合させてもよく、このような化合物としては、例えば、リポソームまたは受容体標的化分子が挙げられる。本核酸または組換え発現ベクターは、取り込み、分散および／または吸収を補助する１種または複数種の成分と製剤内で混合してもよい。
【０２２４】
本核酸または組換え発現ベクター組成物は、限定するわけではないが例えば、錠剤、カプセル剤、ゲルカプセル剤、液体シロップ剤、ソフトゲル剤、坐剤、および浣腸剤などの多くの可能な剤形のいずれかへと製剤化してもよい。本核酸または組換え発現ベクター組成物はまた、水性媒体、非水性媒体、または混合媒体中の懸濁剤として製剤化してもよい。水性懸濁剤は、懸濁剤の粘度を上昇させる物質を更に含有していてもよく、それらとしては、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトールおよび／またはデキストランが挙げられる。懸濁剤はまた安定化剤を含有していてもよい。
【０２２５】
本核酸または組換え発現ベクターを含む製剤はリポソーム製剤であってもよい。本明細書で使用する場合、用語「リポソーム」とは、１つの球状二重層または複数の球状二重層で配列された両親媒性脂質からなるベシクルのことを意味する。リポソームは、親油性物質と、送達する組成物を含有する水性の内側部とで形成された膜を有するユニラメラまたはマルチラメラベシクルである。カチオン性リポソームは、負に荷電したＤＮＡ分子と相互作用して安定した複合体を形成することができる、正に荷電したリポソームである。ｐＨ感受性または負に荷電したリポソームは、ＤＮＡと複合体を形成するのではなくＤＮＡを取り込むと考えられている。カチオン性リポソームと非カチオン性リポソームの両方は、本核酸または組換え発現ベクターを送達するのに使用することができる。
【０２２６】
リポソームとしてはまた「立体安定化」リポソームが挙げられ、本明細書で使用する場合、この用語は、１種または複数種の特殊な脂質を含むリポソームのことを意味し、それら特殊な脂質をリポソームに組み込むと、このような特殊な脂質を欠くリポソームと比較して向上した循環寿命がもたらされる。立体安定化リポソームの例は、リポソームのベシクル形成脂質部分の一部が、１種または複数種の糖脂質を含むか、または、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分などの１種または複数種の親水性ポリマーで誘導体化された、立体安定化リポソームである。リポソームおよびその使用については米国特許第６，２８７，８６０号において更に記載されており、その全体は参照により本明細書に組み込まれる。
【０２２７】
本開示の製剤および組成物はまた、界面活性剤を含んでいてもよい。医薬品製品、製剤およびエマルション剤における界面活性剤の使用については、当該技術分野において周知である。界面活性剤およびその使用については米国特許第６，２８７，８６０号において更に記載されている。
【０２２８】
一実施形態では、核酸の効率的な送達を達成するために、様々な浸透促進剤が含まれている。細胞膜間の非親油性薬物の拡散補助に加え、浸透促進剤はまた、親油性薬物の浸透性を向上させる。浸透促進剤は、５つの広範なカテゴリー、すなわち、界面活性剤、脂肪酸、胆汁塩、キレート化剤、および非キレート非界面活性剤、のうちの１つに属するように分類され得る。浸透促進剤およびその使用については米国特許第６，２８７，８６０号において更に記載されており、その全体は参照により本明細書に組み込まれる。
【０２２９】
経口投与用の組成物および製剤としては、散剤もしくは顆粒剤、マイクロ微粒子剤、ナノ微粒子剤、水もしくは水性媒体中の懸濁剤もしくは液剤、カプセル剤、カプセル剤、サッシェ剤、錠剤、または、ミニ錠剤、が挙げられる。増粘剤、風味剤、希釈剤、乳化剤、分散助剤、または結合剤が望ましい場合がある。好適な経口製剤としては、１種または複数種の浸透促進界面活性剤およびキレート化剤と共に本アンチセンス核酸を投与する経口製剤が挙げられる。好適な界面活性剤としては、脂肪酸および／またはエステルまたはその塩、胆汁酸および／またはその塩が挙げられるがこれらに限定されない。好適な胆汁酸／塩および脂肪酸ならびにその使用については、米国特許第６，２８７，８６０号において更に記載されている。浸透促進剤の組み合わせ、例えば、胆汁酸／塩と組み合わせた脂肪酸／塩も好適である。例示的な好適な組み合わせは、ラウリン酸のナトリウム塩、カプリン酸、および、ＵＤＣＡである。更なる浸透促進剤としては、ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテルおよびポリオキシエチレン−２０−セチルエーテルが挙げられるがこれらに限定されない。好適な浸透促進剤としてはまた、プロピレングリコール、ジメチルスルホキシド、トリエタノールアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、２−ピロリドンおよびその誘導体、テトラヒドロフルフリルアルコール、ならびに、ＡＺＯＮＥ（商標）、が挙げられる。
【０２３０】
Ｔ細胞活性を調節するための方法
本開示は、エピトープ特異的Ｔ細胞の活性を選択的に調節するための方法を提供し、その方法は、Ｔ細胞を本開示の多量体ポリペプチドと接触させることを含み、Ｔ細胞を本開示の多量体ポリペプチドと接触させることにより、エピトープ特異的Ｔ細胞の活性を選択的に調節する。一部の例では、接触させることはインビトロで生じる。一部の例では、接触させることはインビボで生じる。一部の例では、接触させることはエクスビボで生じる。
【０２３１】
一部の例では、例えば、標的Ｔ細胞がＣＤ８＋Ｔ細胞である場合、多量体ポリペプチドはクラスＩＭＨＣポリペプチド（例えば、β２−ミクログロブリンおよびクラスＩＭＨＣ重鎖）を含む。一部の例では、例えば、標的Ｔ細胞がＣＤ４＋Ｔ細胞である場合、多量体ポリペプチドはクラスＩＩＭＨＣポリペプチド（例えば、クラスＩＩＭＨＣα鎖、クラスＩＩＭＨＣβ鎖）を含む。
【０２３２】
本開示の多量体ポリペプチドが活性化ポリペプチドである免疫調節ポリペプチドを含む場合、Ｔ細胞を多量体ポリペプチドと接触させることにより、エピトープ特異的Ｔ細胞が活性化される。一部の例では、エピトープ特異的Ｔ細胞は、がん細胞上に存在するエピトープに特異的なＴ細胞であり、エピトープ特異的Ｔ細胞を多量体ポリペプチドと接触させることにより、がん細胞に対するＴ細胞の細胞傷害活性を向上させる。一部の例では、エピトープ特異的Ｔ細胞は、がん細胞上に存在するエピトープに特異的なＴ細胞であり、エピトープ特異的Ｔ細胞を多量体ポリペプチドと接触させることにより、エピトープ特異的Ｔ細胞の数を増加させる。
【０２３３】
一部の例では、エピトープ特異的Ｔ細胞は、ウイルス感染細胞上に存在するエピトープに特異的なＴ細胞であり、エピトープ特異的Ｔ細胞を多量体ポリペプチドと接触させることにより、ウイルス感染細胞に対するＴ細胞の細胞傷害活性を向上させる。一部の例では、エピトープ特異的Ｔ細胞は、ウイルス感染細胞上に存在するエピトープに特異的なＴ細胞であり、エピトープ特異的Ｔ細胞を多量体ポリペプチドと接触させることにより、エピトープ特異的Ｔ細胞の数を増加させる。
【０２３４】
本開示の多量体ポリペプチドが抑制性ポリペプチドである免疫調節ポリペプチドを含む場合、Ｔ細胞を多量体と接触させることにより、エピトープ特異的Ｔ細胞が抑制される。一部の例では、エピトープ特異的Ｔ細胞は、自己抗原内に存在するエピトープに特異的な自己反応性Ｔ細胞であり、接触させることにより自己反応性Ｔ細胞の数を減少させる。
【０２３５】
治療方法
本開示は個体を治療するための方法を提供し、その方法は、個体を治療するのに有効な量の、本開示のＴＭＭＰまたはＴＭＭＰをコードする１種または複数種の核酸を個体に投与することを含む。ヒトまたは動物の体を治療するための方法に使用する本開示のＴＭＭＰも提供する。一部の例では、本開示の治療方法は、本開示の多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む１種または複数種の組換え発現ベクターを必要とする個体にそれを投与することを含む。一部の例では、本開示の治療方法は、本開示のＴＭＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む１種または複数種のｍＲＮＡ分子を必要とする個体にそれを投与することを含む。一部の例では、本開示の治療方法は、本開示のＴＭＭＰを必要とする個体にそれを投与することを含む。治療可能な病気としては、例えば、以下に記載するがんおよび自己免疫疾患が挙げられる。
【０２３６】
一部の例では、本開示のＴＭＭＰは、それを必要とする個体に投与する際に、エピトープ特異的Ｔ細胞応答とエピトープ非特異的Ｔ細胞応答の両方を誘導する。言い換えると、一部の例では、本開示のＴＭＭＰは、それを必要とする個体に投与する際に、ｉ）ＴＭＭＰ内に存在するエピトープに特異的なＴＣＲとｉｉ）ＴＭＭＰ内に存在する免疫調節ポリペプチドに結合する共免疫調節ポリペプチドの両方を提示する第１のＴ細胞の活性を調節することによって、エピトープ特異的Ｔ細胞応答を誘導し、ｉ）ＴＭＭＰ内に存在するエピトープ以外のエピトープに特異的なＴＣＲとｉｉ）ＴＭＭＰ内に存在する免疫調節ポリペプチドに結合する共免疫調節ポリペプチドを提示する第２のＴ細胞の活性を調節することによって、エピトープ非特異的Ｔ細胞応答を誘導する。エピトープ特異的Ｔ細胞応答とエピトープ非特異的Ｔ細胞応答の比率は、少なくとも２：１、少なくとも５：１、少なくとも１０：１、少なくとも１５：１、少なくとも２０：１、少なくとも２５：１、少なくとも５０：１、または、少なくとも１００：１である。エピトープ特異的Ｔ細胞応答とエピトープ非特異的Ｔ細胞応答の比率は、約２：１〜約５：１、約５：１〜約１０：１、約１０：１〜約１５：１、約１５：１〜約２０：１、約２０：１〜約２５：１、約２５：１〜約５０：１、もしくは、約５０：１〜約１００：１、または、１００：１超である。Ｔ細胞の「活性を調節すること」としては、ｉ）細胞傷害性（例えば、ＣＤ８＋）Ｔ細胞を活性化させること、ｉｉ）細胞傷害性（例えば、ＣＤ８＋）Ｔ細胞の細胞傷害活性を誘導すること、ｉｉｉ）細胞傷害性（例えば、ＣＤ８＋）Ｔ細胞による細胞毒（例えば、パーフォリン、グランザイム、グラニュライシン）の産生および放出を誘導すること、ｉｖ）自己反応性Ｔ細胞の活性を抑制すること、などのうちの１つまたは複数を挙げることができる。
【０２３７】
免疫調節ポリペプチドの関連共免疫調節ポリペプチドに対する免疫調節ポリペプチドの低い親和性と、ＴＣＲに対するエピトープの親和性を組み合わせることにより、本開示のＴＭＭＰの向上した選択性がもたらされる。それゆえ、例えば、本開示のＴＭＭＰは、ｉ）ＴＭＭＰ内に存在するエピトープ以外のエピトープに特異的なＴＣＲとｉｉ）ＴＭＭＰ内に存在する免疫調節ポリペプチドに結合する共免疫調節ポリペプチドを提示する第２のＴ細胞に本開示のＴＭＭＰが結合する結合力よりも高い結合力で、ｉ）ＴＭＭＰ内に存在するエピトープに特異的なＴＣＲとｉｉ）ＴＭＭＰ内に存在する免疫調節ポリペプチドに結合する共免疫調節ポリペプチドの両方を提示する第１のＴ細胞に結合する。
【０２３８】
本開示は、個体におけるエピトープ特異的Ｔ細胞の活性を選択的に調節するための方法を提供し、その方法は、有効量の、本開示の多量体ポリペプチド、または、多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む１種または複数種の核酸（例えば、発現ベクター、ｍＲＮＡなど）を個体に投与することを含み、多量体ポリペプチドは、個体におけるエピトープ特異的Ｔ細胞の活性を選択的に調節する。エピトープ特異的Ｔ細胞の活性を選択的に調節することにより、個体における疾患または障害を治療することが可能となる。それゆえ、本開示は、有効量の本開示の多量体ポリペプチドを必要とする個体にそれを投与することを含む治療方法を提供する。
【０２３９】
一部の例では、免疫調節ポリペプチドは活性化ポリペプチドであり、多量体ポリペプチドはエピトープ特異的Ｔ細胞を活性化させる。一部の例では、エピトープはがん関連エピトープであり、多量体ポリペプチドは、がん関連エピトープに特異的なＴ細胞の活性を促進する。
【０２４０】
本開示は、個体におけるがんを治療するための方法を提供し、その方法は、有効量の、本開示の多量体ポリペプチド、または、多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む１種または複数種の核酸（例えば、発現ベクター、ｍＲＮＡなど）を個体に投与することを含み、多量体ポリペプチドはがんエピトープであるＴ細胞エピトープを含み、多量体ポリペプチドは刺激免疫調節ポリペプチドを含む。一部の例では、「有効量」の多量体ポリペプチドとは、それを必要とする個体に１つまたは複数の用量で投与する際に、個体におけるがん細胞の数を減少させる量のことである。例えば、一部の例では、「有効量」の本開示の多量体ポリペプチドとは、それを必要とする個体に１つまたは複数の用量で投与する際に、多量体ポリペプチドを投与する前または多量体ポリペプチドを投与しない状態における、個体におけるがん細胞の数と比較して、個体におけるがん細胞の数を少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または、少なくとも９５％減少させる量のことである。一部の例では、「有効量」の本開示の多量体ポリペプチドとは、それを必要とする個体に１つまたは複数の用量で投与する際に、個体におけるがん細胞の数を検出不能レベルにまで減少させる量のことである。
【０２４１】
一部の例では、「有効量」の本開示の多量体ポリペプチドとは、それを必要とする個体に１つまたは複数の用量で投与する際に、個体における腫瘍重量を減少させる量のことである。例えば、一部の例では、「有効量」の本開示の多量体ポリペプチドとは、それを必要とする個体（腫瘍を有する個体）に１つまたは複数の用量で投与する際に、多量体ポリペプチドを投与する前または多量体ポリペプチドを投与しない状態における、個体における腫瘍重量と比較して、個体における腫瘍重量を少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または、少なくとも９５％減少させる量のことである。一部の例では、「有効量」の本開示の多量体ポリペプチドとは、それを必要とする個体（腫瘍を有する個体）に１つまたは複数の用量で投与する際に、個体における腫瘍体積を減少させる量のことである。例えば、一部の例では、「有効量」の本開示の多量体ポリペプチドとは、それを必要とする個体（腫瘍を有する個体）に１つまたは複数の用量で投与する際に、多量体ポリペプチドを投与する前または多量体ポリペプチドを投与しない状態における、個体における腫瘍体積と比較して、個体における腫瘍体積を少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または、少なくとも９５％減少させる量のことである。一部の例では、「有効量」の本開示の多量体ポリペプチドとは、それを必要とする個体に１つまたは複数の用量で投与する際に、個体の生存期間を延長させる量のことである。例えば、一部の例では、「有効量」の本開示の多量体ポリペプチドとは、それを必要とする個体に１つまたは複数の用量で投与する際に、多量体ポリペプチドを投与しない状態の個体における想定生存期間と比較して、個体の生存期間を少なくとも１ヶ月間、少なくとも２ヶ月間、少なくとも３ヶ月間、３ヶ月間〜６ヶ月間、６ヶ月間〜１年間、１年間〜２年間、２年間〜５年間、５年間〜１０年間、または、１０年間超、延長させる量のことである。
【０２４２】
一部の例では、エピトープ特異的Ｔ細胞は、ウイルス感染細胞上に存在するエピトープに特異的なＴ細胞であり、エピトープ特異的Ｔ細胞を多量体ポリペプチドと接触させることにより、ウイルス感染細胞に対するＴ細胞の細胞傷害活性を向上させる。一部の例では、エピトープ特異的Ｔ細胞は、ウイルス感染細胞上に存在するエピトープに特異的なＴ細胞であり、エピトープ特異的Ｔ細胞を多量体ポリペプチドと接触させることにより、エピトープ特異的Ｔ細胞の数を増加させる。
【０２４３】
それゆえ、本開示は、個体におけるウイルス感染症を治療するための方法を提供し、その方法は、有効量の、本開示の多量体ポリペプチド、または、多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む１種または複数種の核酸を個体に投与することを含み、多量体ポリペプチドはウイルスエピトープであるＴ細胞エピトープを含み、多量体ポリペプチドは刺激免疫調節ポリペプチドを含む。一部の例では、「有効量」の多量体ポリペプチドとは、それを必要とする個体に１つまたは複数の用量で投与する際に、個体におけるウイルス感染細胞の数を減少させる量のことである。例えば、一部の例では、「有効量」の本開示の多量体ポリペプチドとは、それを必要とする個体に１つまたは複数の用量で投与する際に、多量体ポリペプチドを投与する前または多量体ポリペプチドを投与しない状態における、個体におけるウイルス感染細胞の数と比較して、個体におけるウイルス感染細胞の数を少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または、少なくとも９５％減少させる量のことである。一部の例では、「有効量」の本開示の多量体ポリペプチドとは、それを必要とする個体に１つまたは複数の用量で投与する際に、個体におけるウイルス感染細胞の数を検出不能レベルにまで減少させる量のことである。
【０２４４】
それゆえ、本開示は、個体における感染症を治療するための方法を提供し、その方法は、有効量の、本開示のＴＭＭＰ、または、多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む１種または複数種の核酸を個体に投与することを含み、多量体ポリペプチドは病原体関連エピトープであるＴ細胞エピトープを含み、多量体ポリペプチドは刺激免疫調節ポリペプチドを含む。一部の例では、「有効量」の本開示のＴＭＭＰとは、それを必要とする個体に１つまたは複数の用量で投与する際に、個体における病原体の数を減少させる量のことである。例えば、一部の例では、「有効量」の本開示のＴＭＭＰとは、それを必要とする個体に１つまたは複数の用量で投与する際に、多量体ポリペプチドを投与する前または多量体ポリペプチドを投与しない状態における、個体における病原体の数と比較して、個体における病原体の数を少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または、少なくとも９５％減少させる量のことである。一部の例では、「有効量」の本開示の多量体ポリペプチドとは、それを必要とする個体に１つまたは複数の用量で投与する際に、個体における病原体の数を検出不能レベルにまで減少させる量のことである。病原体としては、ウイルス、細菌、原生動物などが挙げられる。
【０２４５】
一部の例では、免疫調節ポリペプチドは抑制性ポリペプチドであり、多量体ポリペプチドはエピトープ特異的Ｔ細胞の活性を抑制する。一部の例では、エピトープは自己エピトープであり、多量体ポリペプチドは、自己エピトープに特異的なＴ細胞の活性を選択的に抑制する。
【０２４６】
本開示は、個体における自己免疫疾患を治療するための方法を提供し、その方法は、有効量の、本開示の多量体ポリペプチド、または、多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む１種または複数種の核酸を個体に投与することを含み、多量体ポリペプチドは自己エピトープであるＴ細胞エピトープを含み、多量体ポリペプチドは抑制性免疫調節ポリペプチドを含む。一部の例では、「有効量」の本開示のＴＭＭＰとは、それを必要とする個体に１つまたは複数の用量で投与する際に、多量体ポリペプチドを投与する前またはＴＭＭＰを投与しない状態における、個体における自己反応性Ｔ細胞の数と比較して、自己反応性Ｔ細胞の数を少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または、少なくとも９５％減少させる量のことである。一部の例では、「有効量」の多量体ポリペプチドとは、それを必要とする個体に１つまたは複数の用量で投与する際に、個体におけるＴｈ２サイトカインの産生を抑制する量のことである。一部の例では、「有効量」の本開示のＴＭＭＰとは、それを必要とする個体に１つまたは複数の用量で投与する際に、個体における自己免疫疾患に関連する１つまたは複数の症状を緩和する量のことである。
【０２４７】
上に記載したように、一部の例では、本治療方法の実施において、本開示のＴＭＭＰは、それを必要とする個体にそれ自体多量体ポリペプチドとして投与される。その他の例では、本治療方法の実施において、本開示のＴＭＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む１種または複数種の核酸は、それを必要とする個体に投与される。それゆえ、その他の例では、本開示の１種または複数種の核酸、例えば、本開示の１種または複数種の組換え発現ベクターは、それを必要とする個体に投与される。
【０２４８】
製剤
好適な製剤については上述したとおりであるが、好適な製剤は薬学的に許容される賦形剤を含む。一部の例では、好適な製剤は、ａ）本開示のＴ細胞調節多量体ポリペプチドと、ｂ）薬学的に許容される賦形剤と、を含む。一部の例では、好適な製剤は、ａ）本開示の多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸と、ｂ）薬学的に許容される賦形剤と、を含み、一部の例では、核酸はｍＲＮＡである。一部の例では、好適な製剤は、ａ）本開示のＴＭＭＰの第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第１の核酸と、ｂ）本開示の多量体ポリペプチドの第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第２の核酸と、ｃ）薬学的に許容される賦形剤と、を含む。一部の例では、好適な製剤は、ａ）本開示のＴＭＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む組換え発現ベクターと、ｂ）薬学的に許容される賦形剤と、を含む。一部の例では、好適な製剤は、ａ）本開示のＴＭＭＰの第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第１の組換え発現ベクターと、ｂ）本開示のＴＭＭＰの第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第２の組換え発現ベクターと、ｃ）薬学的に許容される賦形剤と、を含む。
【０２４９】
好適な薬学的に許容される賦形剤については上述したとおりである。
【０２５０】
用量
好適な用量については、様々な臨床因子に基づき、主治医またはその他の資格のある医療関係者が決定することができる。医学技術分野においては周知のことではあるが、任意の１名の患者の用量は、患者の大きさ、体表面積、年齢、投与する特定のポリペプチドまたは核酸、患者の性別、投与期間および投与経路、全身健康、ならびに、同時に投与するその他の薬物、を含む多くの因子によって決まる。本開示の多量体ポリペプチドは、用量あたり１ｎｇ／ｋｇ（体重）〜２０ｍｇ／ｋｇ（体重）、例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ（体重）〜１０ｍｇ／ｋｇ（体重）、例えば、０．５ｍｇ／ｋｇ（体重）〜５ｍｇ／ｋｇ（体重）の量で投与してもよいが、この例示的な範囲未満またはこの例示的な範囲超の用量は、特に上記の因子を考慮して想定されている。レジメンが持続注入である場合、１分間あたり体重１キログラムあたり１μｇ〜１０ｍｇの範囲であってもよい。本開示の多量体ポリペプチドは、約１ｍｇ／ｋｇ（体重）〜５０ｍｇ／ｋｇ（体重）、例えば、約１ｍｇ／ｋｇ（体重）〜約５ｍｇ／ｋｇ（体重）、約５ｍｇ／ｋｇ（体重）〜約１０ｍｇ／ｋｇ（体重）、約１０ｍｇ／ｋｇ（体重）〜約１５ｍｇ／ｋｇ（体重）、約１５ｍｇ／ｋｇ（体重）〜約２０ｍｇ／ｋｇ（体重）、約２０ｍｇ／ｋｇ（体重）〜約２５ｍｇ／ｋｇ（体重）、約２５ｍｇ／ｋｇ（体重）〜約３０ｍｇ／ｋｇ（体重）、約３０ｍｇ／ｋｇ（体重）〜約３５ｍｇ／ｋｇ（体重）、約３５ｍｇ／ｋｇ（体重）〜約４０ｍｇ／ｋｇ（体重）、または、約４０ｍｇ／ｋｇ（体重）〜約５０ｍｇ／ｋｇ（体重）の量で投与してもよい。
【０２５１】
一部の例では、本開示の多量体ポリペプチドの好適な用量は、体重１ｋｇあたり０．０１μｇ〜１００ｇ、体重１ｋｇあたり０．１μｇ〜１０ｇ、体重１ｋｇあたり１μｇ〜１ｇ、体重１ｋｇあたり１０μｇ〜１００ｍｇ、体重１ｋｇあたり１００μｇ〜１０ｍｇ、または、体重１ｋｇあたり１００μｇ〜１ｍｇである。当業者は、体液または組織中における投与薬剤の測定滞留時間および濃度に基づき、投与の反復速度を容易に概算することができる。奏効した治療に続き、患者に維持療法を受けさせて疾患状態の再発を予防することが望ましい場合があるが、本開示の多量体ポリペプチドは、体重１ｋｇあたり０．０１μｇ〜１００ｇ、体重１ｋｇあたり０．１μｇ〜１０ｇ、体重１ｋｇあたり１μｇ〜１ｇ、体重１ｋｇあたり１０μｇ〜１００ｍｇ、体重１ｋｇあたり１００μｇ〜１０ｍｇ、または、体重１ｋｇあたり１００μｇ〜１ｍｇの範囲の維持量で投与される。
【０２５２】
特定の多量体ポリペプチド、症状の重症度、および、対象の副作用の受けやすさに応じて用量レベルが変化し得るということを、当業者は容易に理解する。任意の化合物の好ましい用量は、当業者が様々な方法を用いて容易に決定することができる。
【０２５３】
一部の例では、複数回用量の、本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸、または、本開示の組換え発現ベクターを投与する。本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸、または、本開示の組換え発現ベクターの投与頻度は、様々な因子、例えば、症状の重症度などのいずれかに応じて変化し得る。例えば、一部の例では、本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸、または、本開示の組換え発現ベクターは、月に１回、月に２回、月に３回、１週おき（ｑｏｗ）、週に１回（ｑｗ）、週に２回（ｂｉｗ）、週に３回（ｔｉｗ）、週に４回、週に５回、週に６回、１日おき（ｑｏｄ）、毎日（ｑｄ）、１日２回（ｑｉｄ）、または、１日３回（ｔｉｄ）で投与される。
【０２５４】
本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸、または、本開示の組換え発現ベクターの投与の持続期間、例えば、本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸、または、本開示の組換え発現ベクターを投与する期間は、様々な因子、例えば、患者の応答などのいずれかに応じて変化し得る。例えば、本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸、または、本開示の組換え発現ベクターを、約１日間〜約１週間、約２週間〜約４週間、約１ヶ月間〜約２ヶ月間、約２ヶ月間〜約４ヶ月間、約４ヶ月間〜約６ヶ月間、約６ヶ月間〜約８ヶ月間、約８ヶ月間〜約１年間、約１年間〜約２年間、もしくは、約２年間〜約４年間、または、それ以上の範囲の期間にわたり投与してもよい。
【０２５５】
投与経路
活性剤（本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸、または、本開示の組換え発現ベクター）は、全身および局所投与経路に加えて、インビボ法およびエクスビボ法を含む任意の利用可能な方法および薬物送達に好適な経路を使用して、個体に投与される。
【０２５６】
一般的かつ薬学的に許容される投与経路としては、腫瘍内、腫瘍周囲、筋肉内、リンパ管内、気管内、頭蓋内、皮下、皮膚内、局所適用、静脈内、動脈内、経直腸、経鼻、経口、ならびに、その他の経腸および非経口投与経路、が挙げられる。必要に応じて投与経路を組み合わせてもよく、または、多量体ポリペプチドおよび／または所望の効果に応じて投与経路を調整してもよい。本開示の多量体ポリペプチド、または、本開示の核酸または組換え発現ベクターを、単回用量または複数回用量で投与してもよい。
【０２５７】
一部の例では、本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸、または、本開示の組換え発現ベクターは、静脈内投与される。一部の例では、本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸、または、本開示の組換え発現ベクターは、筋肉内投与される。一部の例では、本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸、または、本開示の組換え発現ベクターは、リンパ管内に投与される。一部の例では、本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸、または、本開示の組換え発現ベクターは、局所的に投与される。一部の例では、本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸、または、本開示の組換え発現ベクターは、腫瘍内に投与される。一部の例では、本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸、または、本開示の組換え発現ベクターは、腫瘍周囲に投与される。一部の例では、本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸、または、本開示の組換え発現ベクターは、頭蓋内に投与される。一部の例では、本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸、または、本開示の組換え発現ベクターは、皮下投与される。
【０２５８】
一部の例では、本開示の多量体ポリペプチドは静脈内投与される。一部の例では、本開示の多量体ポリペプチドは筋肉内投与される。一部の例では、本開示の多量体ポリペプチドは局所的に投与される。一部の例では、本開示の多量体ポリペプチドは腫瘍内に投与される。一部の例では、本開示の多量体ポリペプチドは腫瘍周囲に投与される。一部の例では、本開示の多量体ポリペプチドは頭蓋内に投与される。一部の例では、多量体ポリペプチドは皮下投与される。一部の例では、本開示の多量体ポリペプチドはリンパ管内に投与される。
【０２５９】
本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸、または、本開示の組換え発現ベクターは、任意の利用可能な一般的な方法、および、全身または局所経路を含む一般的な薬物の送達に好適な経路を使用して、宿主に投与されてもよい。一般的に、本開示の方法における使用を検討する投与経路としては、経腸経路、非経口経路、および、吸入経路が挙げられるが必ずしもこれらに限定されるものではない。
【０２６０】
吸入投与以外の非経口投与経路としては、局所経路、経皮経路、皮下経路、筋肉内経路、眼窩内経路、嚢内経路、脊髄内経路、胸骨内経路、腫瘍内経路、リンパ管内経路、腫瘍周囲経路、および、静脈内経路、すなわち、消化管を通る以外の任意の投与経路、が挙げられるが必ずしもこれらに限定されるものではない。非経口投与を実施して、本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸、または、本開示の組換え発現ベクターの全身または局所送達を達成してもよい。全身送達が望まれる場合、投与は通常、浸潤性または全身吸収性の、医薬品製剤の局所または粘膜投与を含む。
【０２６１】
治療に好適な対象
本開示の方法を用いた治療に好適な対象としては、がんを有すると診断されている個体と、がんの治療を受けてはいるがその治療に反応を示していない個体と、がんの治療を受けており最初は反応を示していたがその後治療に反応しなくなった個体と、を含む、がんを有する個体が挙げられる。本開示の方法を用いた治療に好適な対象としては、感染症を有すると診断されている個体と、感染症の治療を受けてはいるがその治療に反応を示していない個体と、を含む、感染症（例えば、細菌、ウイルス、原生動物などの病原体への感染）を有する個体が挙げられる。本開示の方法を用いた治療に好適な対象としては、細菌感染症を有すると診断されている個体と、細菌感染症の治療を受けてはいるがその治療に反応を示していない個体と、を含む、細菌感染症を有する個体が挙げられる。本開示の方法を用いた治療に好適な対象としては、ウイルス感染症を有すると診断されている個体と、ウイルス感染症の治療を受けてはいるがその治療に反応を示していない個体と、を含む、ウイルス感染症を有する個体が挙げられる。本開示の方法を用いた治療に好適な対象としては、自己免疫疾患を有すると診断されている個体と、自己免疫疾患の治療を受けてはいるがその治療に反応を示していない個体と、を含む、自己免疫疾患を有する個体が挙げられる。
【０２６２】
本開示の非限定態様の例
上記の本主題の実施形態を含む態様は、単独で有益であり得、あるいは、１つまたは複数のその他の態様または実施形態と組み合わせて有益であり得る。上記の記述を限定するものではないが、１〜１３４と番号を振った本開示の特定の非限定態様について以下に記載する。本開示を読解することにより当業者には明らかとなるが、個別に番号を振った態様のそれぞれを使用してもよく、あるいは、個別に番号を振った態様のそれぞれを、個別に番号を振った先行するまたは後に続く態様のいずれかと組み合わせてもよい。このことは、態様の全てのこのような組み合わせに対する支持を提供することを意味し、以下において明確に記載する態様の組み合わせに限定されない。
【０２６３】
態様１．Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドであって、前記多量体ポリペプチドは、
Ａ）ヘテロ二量体であって、ａ）第１の主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）ポリペプチドを含む第１のポリペプチドと、ｂ）第２のＭＨＣポリペプチドを含む第２のポリペプチドと、を含む、前記ヘテロ二量体（前記第１のポリペプチドまたは前記第２のポリペプチドはエピトープを含み、前記第１のポリペプチドおよび／または前記第２のポリペプチドは、同一であるかまたは異なっていてもよい１つまたは複数の免疫調節ポリペプチドを含み、前記１つまたは複数の免疫調節ポリペプチドのうちの少なくとも１つは、野生型免疫調節ポリペプチドまたは野生型免疫調節ポリペプチドの変異体であってもよく、前記変異免疫調節ポリペプチドは、対応する野生型免疫調節ポリペプチドの前記アミノ酸配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０のアミノ酸置換を含み、前記第１のポリペプチドまたは前記第２のポリペプチドは任意選択的に、免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチドまたは非Ｉｇスキャフォールドを含む）、
Ｂ）ヘテロ二量体であって、ａ）第１のＭＨＣポリペプチドを含む第１のポリペプチドと、ｂ）第２のＭＨＣポリペプチドを含む第２のポリペプチドと、を含む、前記ヘテロ二量体（前記第１のポリペプチドまたは前記第２のポリペプチドはエピトープを含み、前記第１のポリペプチドおよび／または前記第２のポリペプチドは、同一であるかまたは異なっていてもよい１つまたは複数の免疫調節ポリペプチドを含み、前記１つまたは複数の免疫調節ポリペプチドのうちの少なくとも１つは、野生型免疫調節ポリペプチドの変異体であり、前記変異免疫調節ポリペプチドは、対応する野生型免疫調節ポリペプチドの前記アミノ酸配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０のアミノ酸置換を含み、前記１つまたは複数の免疫調節ドメインのうちの少なくとも１つは、関連共免疫調節ポリペプチドに対する対応する野生型免疫調節ポリペプチドの親和性と比較して、前記関連共免疫調節ポリペプチドに対する低い親和性を示す変異免疫調節ポリペプチドであり、前記エピトープは、Ｔ細胞上のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）に少なくとも１０−７Ｍの親和性で結合し、ｉ）前記Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドは、前記Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドが第２のＴ細胞に結合する親和性よりも少なくとも２５％高い親和性で第１のＴ細胞に結合し、前記第１のＴ細胞は、前記関連共免疫調節ポリペプチドと、前記エピトープに少なくとも１０−７Ｍの親和性で結合するＴＣＲとを、その表面上に発現し、前記第２のＴ細胞は、前記関連共免疫調節ポリペプチドをその表面上に発現するが、前記エピトープに少なくとも１０−７Ｍの親和性で結合するＴＣＲをその表面上に発現せず、および／または、ｉｉ）関連共免疫調節ポリペプチドに対する対照Ｔ細胞調節多量体ポリペプチド（前記対照は野生型免疫調節ポリペプチドを含む）の結合親和性と、前記関連共免疫調節ポリペプチドに対する前記野生型免疫調節ポリペプチドの変異体を含む前記Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドの結合親和性の比率は、バイオレイヤー干渉法で測定して１．５：１〜１０６：１の範囲内であり、前記変異免疫調節ポリペプチドは、対応する野生型免疫調節ポリペプチドの前記アミノ酸配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０のアミノ酸置換を含み、前記第１のポリペプチドまたは前記第２のポリペプチドは任意選択的に、Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドまたは非Ｉｇスキャフォールドを含む）、または、
Ｃ）ヘテロ二量体であって、ａ）第１のポリペプチドであって、Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）エピトープと、ｉｉ）第１の主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）ポリペプチドを含む前記第１のポリペプチドと、ｂ）第２のポリペプチドであって、Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）第２のＭＨＣポリペプチドと、ｉｉ）任意選択的に、免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチドまたは非Ｉｇスキャフォールドを含む前記第２のポリペプチドと、を含む、前記ヘテロ二量体（前記多量体ポリペプチドは、同一であるかまたは異なっていてもよい１つまたは複数の免疫調節ドメインを含み、前記１つまたは複数の免疫調節ドメインのうちの少なくとも１つは、Ａ）前記第１のポリペプチドのＣ末端にあるか、Ｂ）前記第２のポリペプチドのＮ末端にあるか、Ｃ）前記第２のポリペプチドのＣ末端にあるか、または、Ｄ）前記第１のポリペプチドのＣ末端および前記第２のポリペプチドのＮ末端にあり、前記１つまたは複数の免疫調節ドメインのうちの少なくとも１つは、野生型免疫調節ポリペプチドまたは野生型免疫調節ポリペプチドの変異体であり、前記変異免疫調節ポリペプチドは、対応する野生型免疫調節ポリペプチドの前記アミノ酸配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０のアミノ酸置換を含み、任意選択的に、前記１つまたは複数の免疫調節ドメインのうちの少なくとも１つは、関連共免疫調節ポリペプチドに対する対応する野生型免疫調節ポリペプチドの親和性と比較して、前記関連共免疫調節ポリペプチドに対する低い親和性を示す変異免疫調節ポリペプチドであり、前記エピトープは、Ｔ細胞上のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）に少なくとも１０−７Ｍの親和性で結合し、ｉ）前記Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドは、前記Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドが第２のＴ細胞に結合する親和性よりも少なくとも２５％高い親和性で第１のＴ細胞に結合し、前記第１のＴ細胞は、前記関連共免疫調節ポリペプチドと、前記エピトープに少なくとも１０−７Ｍの親和性で結合するＴＣＲとを、その表面上に発現し、前記第２のＴ細胞は、前記関連共免疫調節ポリペプチドをその表面上に発現するが、前記エピトープに少なくとも１０−７Ｍの親和性で結合するＴＣＲをその表面上に発現せず、および／または、ｉｉ）関連共免疫調節ポリペプチドに対する対照Ｔ細胞調節多量体ポリペプチド（前記対照は野生型免疫調節ポリペプチドを含む）の結合親和性と、前記関連共免疫調節ポリペプチドに対する前記野生型免疫調節ポリペプチドの変異体を含む前記Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドの結合親和性の比率は、バイオレイヤー干渉法で測定して１．５：１〜１０６：１の範囲内であり、前記変異免疫調節ポリペプチドは、対応する野生型免疫調節ポリペプチドの前記アミノ酸配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０のアミノ酸置換を含む）、
である、
前記Ｔ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０２６４】
態様２．前記Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドは、前記Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドが前記第２のＴ細胞に結合する親和性よりも少なくとも５０％高い親和性で、前記第１のＴ細胞に結合する、態様１に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０２６５】
態様３．前記Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドは、前記Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドが前記第２のＴ細胞に結合する親和性よりも少なくとも２倍高い親和性で、前記第１のＴ細胞に結合する、態様１に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０２６６】
態様４．前記Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドは、前記Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドが前記第２のＴ細胞に結合する親和性よりも少なくとも５倍高い親和性で、前記第１のＴ細胞に結合する、態様１に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０２６７】
態様５．前記Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドは、前記Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドが前記第２のＴ細胞に結合する親和性よりも少なくとも１０倍高い親和性で、前記第１のＴ細胞に結合する、態様１に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０２６８】
態様６．前記変異免疫調節ポリペプチドは、約１０−４Ｍ〜約１０−７Ｍの親和性で、前記共免疫調節ポリペプチドに結合する、態様１に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０２６９】
態様７．前記変異免疫調節ポリペプチドは、約１０−４Ｍ〜約１０−６Ｍの親和性で、前記共免疫調節ポリペプチドに結合する、態様１に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０２７０】
態様８．前記変異免疫調節ポリペプチドは、約１０−４Ｍ〜約１０−５Ｍの親和性で、前記共免疫調節ポリペプチドに結合する、態様１に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０２７１】
態様９．関連共免疫調節ポリペプチドに対する対照Ｔ細胞調節多量体ポリペプチド（前記対照は野生型免疫調節ポリペプチドを含む）の結合親和性と、前記関連共免疫調節ポリペプチドに対する前記野生型免疫調節ポリペプチドの変異体を含む前記Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドの結合親和性の比率は、バイオレイヤー干渉法で測定して少なくとも１０：１である、態様１に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０２７２】
態様１０．関連共免疫調節ポリペプチドに対する対照Ｔ細胞調節多量体ポリペプチド（前記対照は野生型免疫調節ポリペプチドを含む）の結合親和性と、前記関連共免疫調節ポリペプチドに対する前記野生型免疫調節ポリペプチドの変異体を含む前記Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドの結合親和性の比率は、バイオレイヤー干渉法で測定して少なくとも５０：１である、態様１に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０２７３】
態様１１．関連共免疫調節ポリペプチドに対する対照Ｔ細胞調節多量体ポリペプチド（前記対照は野生型免疫調節ポリペプチドを含む）の結合親和性と、前記関連共免疫調節ポリペプチドに対する前記野生型免疫調節ポリペプチドの変異体を含む本開示のＴ細胞調節多量体ポリペプチドの結合親和性の比率は、バイオレイヤー干渉法で測定して少なくとも１０２：１である、態様１に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０２７４】
態様１２．関連共免疫調節ポリペプチドに対する対照Ｔ細胞調節多量体ポリペプチド（前記対照は野生型免疫調節ポリペプチドを含む）の結合親和性と、前記関連共免疫調節ポリペプチドに対する前記野生型免疫調節ポリペプチドの変異体を含む前記Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドの結合親和性の比率は、バイオレイヤー干渉法で測定して少なくとも１０３：１である、態様１に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０２７５】
態様１３．前記第２のポリペプチドはＩｇ  Ｆｃポリペプチドを含む、態様１から態様１２のいずれか１つに記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０２７６】
態様１４．前記Ｉｇ  ＦｃポリペプチドはＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドである、態様１３に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０２７７】
態様１５．前記ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドは、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、およびＰ３３１Ｓから選択される１つまたは複数のアミノ酸置換を含む、態様１４に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０２７８】
態様１６．前記ＩｇＧ１  ＦｃポリペプチドはＬ２３４Ａ置換およびＬ２３５Ａ置換を含む、態様１４に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０２７９】
態様１７．前記第１のポリペプチドは、前記エピトープと前記第１のＭＨＣポリペプチドの間のペプチドリンカーを含む、態様１から態様１６のいずれか１つに記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０２８０】
態様１８．前記リンカーは、２０アミノ酸〜４０アミノ酸の長さを有する、態様１７に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０２８１】
態様１９．前記リンカーは、式（ＧＧＧＧＳ）ｎのペプチドであり、式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、または８である、態様１７に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０２８２】
態様２０．前記第１のポリペプチドは、前記変異免疫調節ポリペプチドと前記第２のＭＨＣポリペプチドの間のペプチドリンカーを含む、態様１から態様１９のいずれか１つに記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０２８３】
態様２１．前記リンカーは、２０アミノ酸〜４０アミノ酸の長さを有する、態様１８に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０２８４】
態様２２．前記リンカーは、式（ＧＧＧＧＳ）ｎのペプチドであり、式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、または８である、態様２０に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０２８５】
態様２３．前記変異免疫調節ポリペプチドの２つ以上のコピーを含む、態様１から態様２２のいずれか１つに記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０２８６】
態様２４．前記変異免疫調節ポリペプチドの前記２つ以上のコピーは、同一のアミノ酸配列を含む、態様２３に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０２８７】
態様２５．前記コピー間のペプチドリンカーを含む、態様２３または態様２４に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０２８８】
態様２６．前記リンカーは、２０アミノ酸〜４０アミノ酸の長さを有する、態様２５に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０２８９】
態様２７．前記リンカーは、式（ＧＧＧＧＳ）ｎのペプチドであり、式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、または８である、態様２５に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０２９０】
態様２８．前記変異免疫調節ポリペプチドは、対応する野生型免疫調節ポリペプチドと比較して１〜１０のアミノ酸置換を含む、態様１から態様２７のいずれか１つに記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０２９１】
態様２９．前記野生型免疫調節ポリペプチドは、ＩＬ−２、４−１ＢＢＬ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＯＸ−４０Ｌ、ＦａｓＬ、ＪＡＧ１、ＴＧＦβ、ＣＤ７０、およびＩＣＡＭからなる群から選択される、態様２８に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０２９２】
態様３０．前記第１のＭＨＣポリペプチドはβ２−ミクログロブリンポリペプチドであり、前記第２のＭＨＣポリペプチドはＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドである、態様１から態様２９のいずれか１つに記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０２９３】
態様３１．前記β２−ミクログロブリンポリペプチドは、図４に記載のアミノ酸配列のうちの１つに対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様３０に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０２９４】
態様３２．前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、またはＨＬＡ−Ｃ重鎖である、態様３０に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０２９５】
態様３３．前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、図３Ａ〜図３Ｃのうちの１つに記載のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様３２に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０２９６】
態様３４．前記第１のＭＨＣポリペプチドはＭＨＣクラスＩＩα鎖ポリペプチドであり、前記第２のＭＨＣポリペプチドはＭＨＣクラスＩＩβ鎖ポリペプチドである、態様１から態様２９のいずれか１つに記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０２９７】
態様３５．多量体ポリペプチドはＦｃポリペプチドを含み、前記Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドは、ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＧ２  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＧ３  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＧ４  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＡ  Ｆｃポリペプチド、またはＩｇＭ  Ｆｃポリペプチドである、態様１から態様３４のいずれか１つに記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０２９８】
態様３６．前記Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドは、図２Ａ〜図２Ｄのうちの１つに記載のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様２６に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０２９９】
態様３７．前記第２のポリペプチドは、第２のＭＨＣポリペプチドと前記Ｆｃポリペプチドの間のペプチドリンカーを含む、態様３５または態様３６に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０３００】
態様３８．前記リンカーは、２０アミノ酸〜４アミノ酸の長さを有する、態様３７に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０３０１】
態様３９．前記リンカーは、式（ＧＧＧＧＳ）ｎのペプチドであり、式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、または８である、態様３７に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０３０２】
態様４０．前記第１のポリペプチドと前記第２のポリペプチドは非共有結合している、態様１から態様３９のいずれか１つに記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０３０３】
態様４１．前記第１のポリペプチドと前記第２のポリペプチドは互いに共有結合している、態様１から態様３９のいずれか１つに記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０３０４】
態様４２．前記共有結合はジスルフィド結合を介している、態様４１に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０３０５】
態様４３．前記ジスルフィド結合は、前記第１のＭＨＣポリペプチド内のシステイン残基を前記第２のＭＨＣポリペプチド内のシステイン残基と結合させる、態様４２に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０３０６】
態様４４．前記エピトープはがんエピトープである、態様１から態様４３のいずれか１つに記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０３０７】
態様４５．前記がんエピトープは、ＭＵＣ１ポリペプチド、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）Ｅ６ポリペプチド、ＬＭＰ２ポリペプチド、ＨＰＶ  Ｅ７ポリペプチド、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）ｖＩＩＩポリペプチド、ＨＥＲ−２／ｎｅｕポリペプチド、黒色腫抗原ファミリーＡ３（ＭＡＧＥ  Ａ３）ポリペプチド、ｐ５３ポリペプチド、変異ｐ５３ポリペプチド、ＮＹ−ＥＳＯ−１ポリペプチド、葉酸加水分解酵素（前立腺特異的膜抗原、ＰＳＭＡ）ポリペプチド、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）ポリペプチド、Ｔ細胞が認識する黒色腫抗原（ｍｅｌａｎＡ／ＭＡＲＴ１）ポリペプチド、Ｒａｓポリペプチド、ｇｐ１００ポリペプチド、プロテイナーゼ３（ＰＲ１）ポリペプチド、ｂｃｒ−ａｂｌポリペプチド、チロシナーゼポリペプチド、サバイビンポリペプチド、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）ポリペプチド、ｈＴＥＲＴポリペプチド、肉腫転座切断点ポリペプチド、滑膜肉腫Ｘ（ＳＳＸ）切断点ポリペプチド、ＥｐｈＡ２ポリペプチド、前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）ポリペプチド、黒色腫アポトーシス抑制（ＭＬ−ＩＡＰ）ポリペプチド、α−フェトプロテイン（ＡＦＰ）ポリペプチド、上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）ポリペプチド、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２  ＥＴＳ  融合）ポリペプチド、ＮＡ１７ポリペプチド、ペアードボックス３（ＰＡＸ３）ポリペプチド、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）ポリペプチド、アンドロゲン受容体ポリペプチド、サイクリンＢ１ポリペプチド、Ｎ−ｍｙｃがん原遺伝子（ＭＹＣＮ）ポリペプチド、Ｒａｓホモログ遺伝子ファミリーメンバーＣ（ＲｈｏＣ）ポリペプチド、チロシナーゼ関連タンパク質−２（ＴＲＰ−２）ポリペプチド、メソテリンポリペプチド、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）ポリペプチド、黒色腫関連抗原−１（ＭＡＧＥ  Ａ１）ポリペプチド、シトクロムＰ４５０  １Ｂ１（ＣＹＰ１Ｂ１）ポリペプチド、胎盤特異的タンパク質１（ＰＬＡＣ１）ポリペプチド、ＢＯＲＩＳポリペプチド（ＣＣＣＴＣ結合因子またはＣＴＣＦとしても周知）、ＥＴＶ６−ＡＭＬポリペプチド、乳癌抗原ＮＹ−ＢＲ−１ポリペプチド（アンキリンリピートドメイン含有タンパク質３０Ａとも呼ばれる）、Ｇタンパク質シグナル伝達制御因子（ＲＧＳ５）ポリペプチド、Ｔ細胞が認識する扁平上皮癌抗原（ＳＡＲＴ３）ポリペプチド、炭酸脱水酵素ＩＸポリペプチド、ペアードボックス５（ＰＡＸ５）ポリペプチド、ＯＹ−ＴＥＳ１（精巣抗原、アクロシン結合タンパク質としても周知）ポリペプチド、精子タンパク質１７ポリペプチド、リンパ球細胞特異的タンパク質チロシンキナーゼ（ＬＣＫ）ポリペプチド、高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷ−ＭＡＡ）、Ａキナーゼアンカリングタンパク質−４（ＡＫＡＰ−４）、滑膜肉腫Ｘ切断点２（ＳＳＸ２）ポリペプチド、Ｘ抗原ファミリーメンバー１（ＸＡＧＥ１）ポリペプチド、Ｂ７ホモログ３（Ｂ７Ｈ３、ＣＤ２７６としても周知）ポリペプチド、レグマインポリペプチド（ＬＧＭＮ１、アスパラギニルエンドペプチダーゼとしても周知）、Ｉｇ相同性ドメインとＥＧＦ相同性ドメインを有するチロシンキナーゼ−２（Ｔｉｅ−２、アンジオポエチン−１受容体としても周知）ポリペプチド、Ｐ抗原ファミリーメンバー４（Ｐ���ＧＥ４）ポリペプチド、血管内皮増殖因子受容体２（ＶＥＧＦ２）ポリペプチド、ＭＡＤ−ＣＴ−１ポリペプチド、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）ポリペプチド、血小板由来増殖因子受容体β（ＰＤＧＦβ）ポリペプチド、ＭＡＤ−ＣＴ−２ポリペプチド、Ｆｏｓ関連抗原１（ＦＯＳＬ）ポリペプチド、または、ウィルムス腫瘍−１（ＷＴ−１）ポリペプチドの、４アミノ酸（ａａ）、５ａａ、６ａａ、７ａａ、８ａａ、９ａａ、１０ａａ、１１ａａ、１２ａａ、１３ａａ、１４ａａ、１５ａａ、１６ａａ、１７ａａ、１８ａａ、１９ａａ、または、２０ａａ長のペプチドフラグメントである、態様４４に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０３０８】
態様４６．前記第１のポリペプチドと前記第２のポリペプチドの一方はＩｇ  Ｆｃポリペプチドを含み、前記Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドには薬物がコンジュゲートしている、態様１から態様４５のいずれか１つに記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０３０９】
態様４７．前記薬物は、メイタンシノイド、ベンゾジアゼピン、タキソイド、ＣＣ−１０６５、デュオカルマイシン、デュオカルマイシン類似体、カリケアミシン、ドラスタチン、ドラスタチン類似体、アウリスタチン、トマイマイシン、およびレプトマイシン、または、上記のうちのいずれか１つのプロドラッグから選択される細胞傷害薬である、態様４６に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０３１０】
態様４８．前記薬物はレチノイドである、態様４６に記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０３１１】
態様４９．結合親和性はバイオレイヤー干渉法で測定される、態様１から態様４８のいずれか１つに記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
【０３１２】
態様５０．個体における免疫応答を調節するための方法であって、前記方法は、態様１から態様４９のいずれか１つに記載の有効量のＴ細胞調節多量体ポリペプチドを前記個体に投与することを含み、前記投与することは、エピトープ特異的Ｔ細胞応答およびエピトープ非特異的Ｔ細胞応答を誘導し、前記エピトープ特異的Ｔ細胞応答と前記エピトープ非特異的Ｔ細胞応答の比率は少なくとも２：１である、前記方法。
【０３１３】
態様５１．前記エピトープ特異的Ｔ細胞応答と前記エピトープ非特異的Ｔ細胞応答の比率は少なくとも５：１である、態様５０に記載の方法。
【０３１４】
態様５２．前記エピトープ特異的Ｔ細胞応答と前記エピトープ非特異的Ｔ細胞応答の比率は少なくとも１０：１である、態様５０に記載の方法。
【０３１５】
態様５３．前記エピトープ特異的Ｔ細胞応答と前記エピトープ非特異的Ｔ細胞応答の比率は少なくとも２５：１である、態様５０に記載の方法。
【０３１６】
態様５４．前記エピトープ特異的Ｔ細胞応答と前記エピトープ非特異的Ｔ細胞応答の比率は少なくとも５０：１である、態様５０に記載の方法。
【０３１７】
態様５５．前記エピトープ特異的Ｔ細胞応答と前記エピトープ非特異的Ｔ細胞応答の比率は少なくとも１００：１である、態様５０に記載の方法。
【０３１８】
態様５６．前記個体はヒトである、態様５０から態様５５のいずれか１つに記載の方法。
【０３１９】
態様５７．前記調節することは、がん細胞に対する細胞傷害性Ｔ細胞応答を亢進することを含む、態様５０から態様５６のいずれか１つに記載の方法。
【０３２０】
態様５８．前記調節することは、自己抗原に対するＴ細胞応答を抑制することを含む、態様５０から態様５７のいずれか１つに記載の方法。
【０３２１】
態様５９．前記投与することは、静脈内、皮下、筋肉内、全身、リンパ管内、治療部位の遠位、局所、または、治療部位もしくはその近傍である、態様５０から態様５８のいずれか１つに記載の方法。
【０３２２】
態様６０．前記エピトープ非特異的Ｔ細胞応答は、対応する野生型免疫調節ポリペプチドを含む対照Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドによって誘導され得る前記エピトープ非特異的Ｔ細胞応答未満である、態様５０から態様５９のいずれか１つに記載の方法。
【０３２３】
態様６１．個体におけるがんを治療するための方法であって、前記方法は、態様１から態様４９のいずれか１つに記載の有効量のＴ細胞調節多量体ポリペプチドを前記個体に投与することを含む、前記方法。
【０３２４】
態様６２．態様１から態様４９のいずれか１つに記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチドの前記第１および前記第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む１種または複数種の核酸。
【０３２５】
態様６３．前記第１のポリペプチドは第１のヌクレオチド配列によりコードされ、前記第２のポリペプチドは第２のヌクレオチド配列によりコードされ、前記第１および前記第２のヌクレオチド配列は単一の核酸内に存在する、態様６２に記載の１種または複数種の核酸。
【０３２６】
態様６４．前記第１のポリペプチドは、第１の核酸内に存在する第１のヌクレオチド配列によりコードされ、前記第２のポリペプチドは、第２の核酸内に存在する第２のヌクレオチド配列によりコードされる、態様６２に記載の１種または複数種の核酸。
【０３２７】
態様６５．前記第１のヌクレオチド配列および前記第２のヌクレオチド配列は、転写制御エレメントに機能的に連結する、態様６３に記載の１種または複数種の核酸。
【０３２８】
態様６６．前記第１のヌクレオチド配列は転写制御エレメントに機能的に連結し、前記第２のヌクレオチド配列は転写制御エレメントに機能的に連結する、態様６４に記載の１種または複数種の核酸。
【０３２９】
態様６７．前記単一の核酸は組換え発現ベクター内に存在する、態様６３に記載の１種または複数種の核酸。
【０３３０】
態様６８．前記第１の核酸は第１の組換え発現ベクター内に存在し、前記第２の核酸は第２の組換え発現ベクター内に存在する、態様６７に記載の１種または複数種の核酸。
【０３３１】
態様６９．ａ）態様１から態様４９のいずれか１つに記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチドと、ｂ）薬学的に許容される賦形剤と、を含む、組成物。
【０３３２】
態様７０．ａ）態様６２から態様６８のいずれか１つに記載の１種または複数種の核酸と、ｂ）薬学的に許容される賦形剤と、を含む、組成物。
【０３３３】
態様７１．ａ）態様１から態様４９のいずれか１つに記載のＴ細胞調節多量体ポリペプチドと、ｂ）生理食塩水と、を含む、組成物。
【０３３４】
態様７２．前記生理食塩水は０．９％ＮａＣｌである、態様７１に記載の組成物。
【０３３５】
態様７３．前記組成物は滅菌されている、態様７１または態様７２に記載の組成物。
【０３３６】
態様７４．関連共免疫調節ポリペプチドに対する対応する親野生型免疫調節ポリペプチドの親和性と比較して、前記関連共免疫調節ポリペプチドに対する低い親和性を示す１つまたは複数の変異免疫調節ポリペプチドを含むＴ細胞調節多量体ポリペプチドを得るための方法であって、前記方法は、複数のメンバーを含むＴ細胞調節多量体ポリペプチドのライブラリから、前記関連共免疫調節ポリペプチドに対する低い親和性を示すメンバーを選択することを含み、前記複数のメンバーは、ａ）  第１のポリペプチドであって、ｉ）エピトープとｉｉ）第１の主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）ポリペプチドとを含む前記第１のポリペプチドと、ｂ）第２のポリペプチドであって、ｉ）第２のＭＨＣポリペプチドとｉｉ）任意選択的に、免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチドまたは非Ｉｇスキャフォールドとを含む前記第２のポリペプチドと、を含み、前記ライブラリの前記メンバーは、前記第１のポリペプチド、前記第２のポリペプチド、または、前記第１のポリペプチドと前記第２のポリペプチドの両方の内部に存在する複数の変異免疫調節ポリペプチドを含む、前記方法。
【０３３７】
態様７５．関連共免疫調節ポリペプチドに対する対応する親野生型免疫調節ポリペプチドの親和性と比較して、前記関連共免疫調節ポリペプチドに対する低い親和性を示す１つまたは複数の変異免疫調節ポリペプチドを含むＴ細胞調節多量体ポリペプチドを得るための方法であって、前記方法は、Ａ）複数のメンバーを含むＴ細胞調節多量体ポリペプチドのライブラリを提供することと（前記複数のメンバーは、ａ）第１のポリペプチドであって、ｉ）エピトープとｉｉ）第１の主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）ポリペプチドとを含む前記第１のポリペプチドと、ｂ）第２のポリペプチドであって、ｉ）第２のＭＨＣポリペプチドとｉｉ）任意選択的に、免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチドまたは非Ｉｇスキャフォールドとを含む前記第２のポリペプチドと、を含み、前記ライブラリの前記メンバーは、前記第１のポリペプチド、前記第２のポリペプチド、または、前記第１のポリペプチドと前記第２のポリペプチドの両方の内部に存在する複数の変異免疫調節ポリペプチドを含む）、Ｂ）前記関連共免疫調節ポリペプチドに対する低い親和性を示すメンバーを前記ライブラリから選択することと、を含む、前記方法。
【０３３８】
態様７６．前記選択することは、バイオレイヤー干渉法を使用して、Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドライブラリメンバーと前記関連共免疫調節ポリペプチドの間の結合親和性を測定することを含む、態様７４または態様７５に記載の方法。
【０３３９】
態様７７．前記Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドは、態様１から態様４９のいずれか１つにおいて定義されている、態様７４から態様７６のいずれか１つに記載の方法。
【０３４０】
態様７８．ａ）ｉ）前記親野生型免疫調節ポリペプチドに結合する関連共免疫調節ポリペプチドおよびｉｉ）前記エピトープに結合するＴ細胞受容体をその表面上に発現する標的Ｔ細胞に、前記選択Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドライブラリメンバーを接触させることと（前記Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドライブラリメンバーは、前記Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドライブラリメンバーが前記標的Ｔ細胞に結合するような、エピトープタグを含む）、ｂ）前記エピトープタグに結合する蛍光標識結合因子に、前記標的Ｔ細胞に結合した前記選択Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドライブラリメンバーを接触させて、選択Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドライブラリメンバー／標的Ｔ細胞／結合因子複合体を作製することと、ｃ）フローサイトメトリーを使用して前記選択Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドライブラリメンバー／標的Ｔ細胞／結合因子複合体の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を測定することと（前記選択Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドライブラリメンバーの濃度範囲にわたり測定されたＭＦＩにより親和性と明らかな結合力の指標がもたらされ、前記標的Ｔ細胞に選択的に結合する選択Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドライブラリメンバーは、ｉ）前記親野生型免疫調節ポリペプチドに結合する前記関連共免疫調節ポリペプチドとｉｉ）前記Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドライブラリメンバー内に存在するエピトープ以外のエピトープに結合するＴ細胞受容体を含む対照Ｔ細胞への前記Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドライブラリメンバーの結合と比較して、前記標的Ｔ細胞に選択的に結合することが確認される）、を更に含む、態様７４から態様７７のいずれか１つに記載の方法。
【０３４１】
態様７９．前記結合因子は、前記エピトープタグに特異的な抗体である、態様７８に記載の方法。
【０３４２】
態様８０．前記変異免疫調節ポリペプチドは、対応する親野生型免疫調節ポリペプチドと比較して、１〜２０のアミノ酸置換を含む、態様７４から態様７９のいずれか１つに記載の方法。
【０３４３】
態様８１．前記Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドは２つの変異免疫調節ポリペプチドを含む、態様７４から態様８０のいずれか１つに記載の方法。
【０３４４】
態様８２．前記２つの変異免疫調節ポリペプチドは同一のアミノ酸配列を含む、態様８１に記載の方法。
【０３４５】
態様８３．前記第１のポリペプチドは、前記２つの変異免疫調節ポリペプチドのうちの１つを含み、前記第２のポリペプチドは、前記２つの変異免疫調節ポリペプチドのうちの２つ目を含む、態様８１または態様８２に記載の方法。
【０３４６】
態様８４．前記２つの変異免疫調節ポリペプチドは、前記Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドの同一のポリペプチド鎖上にある、態様８１または態様８２に記載の方法。
【０３４７】
態様８５．前記２つの変異免疫調節ポリペプチドは、前記Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドの前記第１のポリペプチド上にある、態様８４に記載の方法。
【０３４８】
態様８６．前記２つの変異免疫調節ポリペプチドは、前記Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドの前記第２のポリペプチド上にある、態様８４に記載の方法。
【０３４９】
態様８７．前記選択Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドライブラリメンバーを前記ライブラリから単離することを更に含む、態様７４から態様８６のいずれか１つに記載の方法。
【０３５０】
態様８８．前記選択Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドライブラリメンバーをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を提供することを更に含む、態様７４から態様８７のいずれか１つに記載の方法。
【０３５１】
態様８９．前記核酸は組換え発現ベクター内に存在する、態様８８に記載の方法。
【０３５２】
態様９０．前記ヌクレオチド配列は、真核細胞において機能的である転写制御エレメントに機能的に連結する、態様８８または態様８９に記載の方法。
【０３５３】
態様９１．真核生物宿主細胞に前記核酸を導入し、液体培地内で前記細胞を培養して、前記細胞内で前記コードされた選択Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドライブラリメンバーを合成することを更に含む、態様８８から態様９０のいずれか１つに記載の方法。
【０３５４】
態様９２．前記細胞または前記細胞を含む液体培地から、前記合成した選択Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドライブラリメンバーを単離することを更に含む、態様９１に記載の方法。
【０３５５】
態様９３．前記選択Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドライブラリメンバーはＩｇ  Ｆｃポリペプチドを含む、態様７４から態様９２のいずれか１つに記載の方法。
【０３５６】
態様９４．薬物を前記Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドにコンジュゲートすることを更に含む、態様９３に記載の方法。
【０３５７】
態様９５．前記薬物は、メイタンシノイド、ベンゾジアゼピン、タキソイド、ＣＣ−１０６５、デュオカルマイシン、デュオカルマイシン類似体、カリケアミシン、ドラスタチン、ドラスタチン類似体、アウリスタチン、トマイマイシン、およびレプトマイシン、または、上記のうちのいずれか１つのプロドラッグから選択される細胞傷害薬である、態様９４に記載の方法。
【０３５８】
態様９６．前記薬物はレチノイドである、態様９４に記載の方法。
【０３５９】
態様９７．前記親野生型免疫調節ポリペプチドと前記関連免疫調節ポリペプチドは、ＩＬ−２とＩＬ−２受容体、４−１ＢＢＬと４−１ＢＢ、ＰＤ−Ｌ１とＰＤ−１、ＦａｓＬとＦａｓ、ＴＧＦβとＴＧＦβ受容体、ＣＤ８０とＣＤ２８、ＣＤ８６とＣＤ２８、ＯＸ４０ＬとＯＸ４０、ＣＤ７０とＣＤ２７、ＩＣＯＳ−ＬとＩＣＯＳ、ＩＣＡＭとＬＦＡ−１、ＪＡＧ１とＮｏｔｃｈ、ＪＡＧ１とＣＤ４６、ＣＤ８０とＣＴＬＡ４、および、ＣＤ８６とＣＴＬＡ４、から選択される、態様７４から態様９６のいずれか１つに記載の方法。
【０３６０】
態様９８．Ａ）態様１から態様４９のいずれかに記載の第１の多量体ポリペプチドヘテロ二量体と、Ｂ）態様１から態様４９のいずれかに記載の第２の多量体ポリペプチドヘテロ二量体と、を含む、多量体Ｔ細胞調節ポリペプチドであって、前記第１のヘテロ二量体と前記第２のヘテロ二量体は互いに共有結合している、前記多量体Ｔ細胞調節ポリペプチド。
【０３６１】
態様９９．前記第１のヘテロ二量体と前記第２のヘテロ二量体は、前記第１のヘテロ二量体の前記第２のポリペプチドのＣ末端領域および前記第２のヘテロ二量体の前記第２のポリペプチドのＣ末端領域を介して、互いに共有結合している、態様９８に記載の多量体Ｔ細胞調節ポリペプチド。
【０３６２】
態様１００．前記第１のヘテロ二量体の前記ペプチドエピトープおよび前記第２のヘテロ二量体の前記ペプチドエピトープは、同一のアミノ酸配列を含む、態様９８または態様９９に記載の多量体Ｔ細胞調節ポリペプチド。
【０３６３】
態様１０１．前記第１および前記第２のヘテロ二量体の前記第１のＭＨＣポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩβ２−ミクログロブリンであり、前記第１および前記第２のヘテロ二量体の前記第２のＭＨＣポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩ重鎖である、態様９８から態様１００のいずれか１つに記載の多量体Ｔ細胞調節ポリペプチド。
【０３６４】
態様１０２．前記第１のヘテロ二量体の前記１つまたは複数の免疫調節ポリペプチドおよび前記第２のヘテロ二量体の前記１つまたは複数の免疫調節ポリペプチドは、同一のアミノ酸配列を含むか、または、異なるアミノ酸配列を含む、態様９８から態様１０１のいずれか１つに記載の多量体Ｔ細胞調節ポリペプチド。
【０３６５】
態様１０３．前記第１のヘテロ二量体の前記１つまたは複数の免疫調節ポリペプチドおよび前記第２のヘテロ二量体の前記１つまたは複数の免疫調節ポリペプチドは、対応する親野生型免疫調節ポリペプチドと比較して１〜１０のアミノ酸置換を含む変異免疫調節ポリペプチドであり、前記１〜１０のアミノ酸置換により、前記変異免疫調節ポリペプチドの関連共免疫調節ポリペプチドへの低い結合親和性がもたらされる、態様９８から態様１０２のいずれか１つに記載の多量体Ｔ細胞調節ポリペプチド。
【０３６６】
態様１０４．前記第１のヘテロ二量体の前記１つまたは複数の免疫調節ポリペプチドおよび前記第２のヘテロ二量体の前記１つまたは複数の免疫調節ポリペプチドは、ＩＬ−２、４−１ＢＢＬ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＯＸ−４０Ｌ、ＦａｓＬ、ＪＡＧ１、ＴＧＦβ、ＣＤ７０、ＩＣＡＭ、ならびに、ＩＬ−２、４−１ＢＢＬ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＯＸ−４０Ｌ、ＦａｓＬ、ＪＡＧ１、ＴＧＦβ、ＣＤ７０、およびＩＣＡＭの変異体、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、態様９８から態様１０３のいずれか１つに記載の多量体Ｔ細胞調節ポリペプチド。
【０３６７】
態様１０５．前記親野生型免疫調節ポリペプチドと前記関連免疫調節ポリペプチドは、ＩＬ−２とＩＬ−２受容体、４−１ＢＢＬと４−１ＢＢ、ＰＤ−Ｌ１とＰＤ−１、ＦａｓＬとＦａｓ、ＴＧＦβとＴＧＦβ受容体、ＣＤ８０とＣＤ２８、ＣＤ８６とＣＤ２８、ＯＸ４０ＬとＯＸ４０、ＣＤ７０とＣＤ２７、ＩＣＯＳ−ＬとＩＣＯＳ、ＩＣＡＭとＬＦＡ−１、ＪＡＧ１とＮｏｔｃｈ、ＪＡＧ１とＣＤ４６、ＣＤ８０とＣＴＬＡ４、および、ＣＤ８６とＣＴＬＡ４、から選択される、態様１０４に記載の多量体Ｔ細胞調節ポリペプチド。
【０３６８】
態様１０６．前記ペプチドエピトープはがんエピトープである、態様９８から態様１０５のいずれか１つに記載の多量体Ｔ細胞調節ポリペプチド。
【０３６９】
態様１０７．前記がんエピトープは、ＭＵＣ１ポリペプチド、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）Ｅ６ポリペプチド、ＬＭＰ２ポリペプチド、ＨＰＶ  Ｅ７ポリペプチド、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）ｖＩＩＩポリペプチド、ＨＥＲ−２／ｎｅｕポリペプチド、黒色腫抗原ファミリーＡ３（ＭＡＧＥ  Ａ３）ポリペプチド、ｐ５３ポリペプチド、変異ｐ５３ポリペプチド、ＮＹ−ＥＳＯ−１ポリペプチド、葉酸加水分解酵素（前立腺特異的膜抗原、ＰＳＭＡ）ポリペプチド、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）ポリペプチド、Ｔ細胞が認識する黒色腫抗原（ｍｅｌａｎＡ／ＭＡＲＴ１）ポリペプチド、Ｒａｓポリペプチド、ｇｐ１００ポリペプチド、プロテイナーゼ３（ＰＲ１）ポリペプチド、ｂｃｒ−ａｂｌポリペプチド、チロシナーゼポリペプチド、サバイビンポリペプチド、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）ポリペプチド、ｈＴＥＲＴポリペプチド、肉腫転座切断点ポリペプチド、滑膜肉腫Ｘ（ＳＳＸ）切断点ポリペプチド、ＥｐｈＡ２ポリペプチド、前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）ポリペプチド、黒色腫アポトーシス抑制（ＭＬ−ＩＡＰ）ポリペプチド、α−フェトプロテイン（ＡＦＰ）ポリペプチド、上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）ポリペプチド、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２  ＥＴＳ  融合）ポリペプチド、ＮＡ１７ポリペプチド、ペアードボックス３（ＰＡＸ３）ポリペプチド、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）ポリペプチド、アンドロゲン受容体ポリペプチド、サイクリンＢ１ポリペプチド、Ｎ−ｍｙｃがん原遺伝子（ＭＹＣＮ）ポリペプチド、Ｒａｓホモログ遺伝子ファミリーメンバーＣ（ＲｈｏＣ）ポリペプチド、チロシナーゼ関連タンパク質−２（ＴＲＰ−２）ポリペプチド、メソテリンポリペプチド、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）ポリペプチド、黒色腫関連抗原−１（ＭＡＧＥ  Ａ１）ポリペプチド、シトクロムＰ４５０  １Ｂ１（ＣＹＰ１Ｂ１）ポリペプチド、胎盤特異的タンパク質１（ＰＬＡＣ１）ポリペプチド、ＢＯＲＩＳポリペプチド（ＣＣＣＴＣ結合因子またはＣＴＣＦとしても周知）、ＥＴＶ６−ＡＭＬポリペプチド、乳癌抗原ＮＹ−ＢＲ−１ポリペプチド（アンキリンリピートドメイン含有タンパク質３０Ａとも呼ばれる）、Ｇタンパク質シグナル伝達制御因子（ＲＧＳ５）ポリペプチド、Ｔ細胞が認識する扁平上皮癌抗原（ＳＡＲＴ３）ポリペプチド、炭酸脱水酵素ＩＸポリペプチド、ペアードボックス５（ＰＡＸ５）ポリペプチド、ＯＹ−ＴＥＳ１（精巣抗原、アクロシン結合タンパク質としても周知）ポリペプチド、精子タンパク質１７ポリペプチド、リンパ球細胞特異的タンパク質チロシンキナーゼ（ＬＣＫ）ポリペプチド、高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷ−ＭＡＡ）、Ａキナーゼアンカリングタンパク質−４（ＡＫＡＰ−４）、滑膜肉腫Ｘ切断点２（ＳＳＸ２）ポリペプチド、Ｘ抗原ファミリーメンバー１（ＸＡＧＥ１）ポリペプチド、Ｂ７ホモログ３（Ｂ７Ｈ３、ＣＤ２７６としても周知）ポリペプチド、レグマインポリペプチド（ＬＧＭＮ１、アスパラギニルエンドペプチダーゼとしても周知）、Ｉｇ相同性ドメインとＥＧＦ相同性ドメインを有するチロシンキナーゼ−２（Ｔｉｅ−２、アンジオポエチン−１受容体としても周知）ポリペプチド、Ｐ抗原ファミリーメンバー４（���ＡＧＥ４）ポリペプチド、血管内皮増殖因子受容体２（ＶＥＧＦ２）ポリペプチド、ＭＡＤ−ＣＴ−１ポリペプチド、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）ポリペプチド、血小板由来増殖因子受容体β（ＰＤＧＦβ）ポリペプチド、ＭＡＤ−ＣＴ−２ポリペプチド、Ｆｏｓ関連抗原１（ＦＯＳＬ）ポリペプチド、または、ウィルムス腫瘍−１（ＷＴ−１）ポリペプチドの、４アミノ酸（ａａ）、５ａａ、６ａａ、７ａａ、８ａａ、９ａａ、１０ａａ、１１ａａ、１２ａａ、１３ａａ、１４ａａ、１５ａａ、１６ａａ、１７ａａ、１８ａａ、１９ａａ、または、２０ａａ長のペプチドフラグメントである、態様１０６に記載の多量体Ｔ細胞調節ポリペプチド。
【０３７０】
態様１０８．共刺激（すなわち、免疫調節）ポリペプチドを標的Ｔ細胞へと選択的に送達するための方法であって、前記方法は、Ｔ細胞の混合集団を態様１から態様４９および態様９８から態様１０７のいずれか１つに記載の多量体ポリペプチドと接触させることを含み、Ｔ細胞の前記混合集団は前記標的Ｔ細胞および非標的Ｔ細胞を含み、前記標的Ｔ細胞は、前記多量体ポリペプチド内に存在する前記エピトープに特異的であり、前記接触させることは、前記多量体ポリペプチド内に存在する前記１つまたは複数の共刺激ポリペプチドを前記標的Ｔ細胞へと送達する、前記方法。
【０３７１】
態様１０９．Ｔ細胞の前記集団はインビトロである、態様１０８に記載の方法。
【０３７２】
態様１１０．Ｔ細胞の前記集団は個体内のインビボである、態様１０８に記載の方法。
【０３７３】
態様１１１．前記多量体ポリペプチドを前記個体に投与することを含む、態様１１０に記載の方法。
【０３７４】
態様１１２．前記標的Ｔ細胞は抑制性Ｔ細胞である、態様１０８から態様１１１のいずれか１つに記載の方法。
【０３７５】
態様１１３．前記標的Ｔ細胞は細胞傷害性Ｔ細胞である、態様１０８から態様１１１のいずれか１つに記載の方法。
【０３７６】
態様１１４．Ｔ細胞の前記混合集団は、個体から得た混合Ｔ細胞のインビトロ集団であり、前記接触することにより、前記標的Ｔ細胞の活性化および／または増殖がもたらされ、活性化および／または増殖標的Ｔ細胞の集団が作製される、態様１０８に記載の方法。
【０３７７】
態様１１５．活性化および／または増殖標的Ｔ細胞の前記集団を前記個体に投与することを更に含む、態様１１４に記載の方法。
【０３７８】
態様１１６．個体から得たＴ細胞の混合集団において、目的のエピトープに結合する標的Ｔ細胞の存在を検出するための方法であって、前記方法は、ａ）Ｔ細胞の前記混合集団を態様１から態様４９および態様９８から態様１０７のいずれか１つに記載の多量体ポリペプチドとインビトロで接触させることであって、前記多量体ポリペプチドは前記目的のエピトープを含む、前記接触させることと、ｂ）前記接触させることに応答するＴ細胞の活性化および／または増殖を検出することであって、活性化および／または増殖Ｔ細胞は前記標的Ｔ細胞の存在を示す、前記検出することと、を含む、前記方法。
【０３７９】
態様１１７．前記第１のヘテロ二量体の前記１つまたは複数の共刺激ポリペプチドは、ＩＬ−２、４−１ＢＢＬ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＯＸ−４０Ｌ、ＦａｓＬ、ＪＡＧ１、ＴＧＦβ、ＣＤ７０、ＩＣＡＭ、ならびに、ＩＬ−２、４−１ＢＢＬ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＯＸ−４０Ｌ、ＦａｓＬ、ＪＡＧ１、ＴＧＦβ、ＣＤ７０、およびＩＣＡＭの変異体、およびこれらの組み合わせからなる群から選択され、前記第２のヘテロ二量体の前記１つまたは複数の共刺激ポリペプチドは、ＩＬ−２、４−１ＢＢＬ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＯＸ−４０Ｌ、ＦａｓＬ、ＪＡＧ１、ＴＧＦβ、ＣＤ７０、ＩＣＡＭ、ならびに、ＩＬ−２、４−１ＢＢＬ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＯＸ−４０Ｌ、ＦａｓＬ、ＪＡＧ１、ＴＧＦβ、ＣＤ７０、およびＩＣＡＭの変異体、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、態様１０８から態様１１５に記載の方法。
【０３８０】
態様１１８．前記第１のヘテロ二量体の前記１つまたは複数の共刺激ポリペプチドは、ＩＬ−２、ＩＬ−２の変異体、およびこれらの組み合わせからなる群から選択され、前記第２のヘテロ二量体の前記１つまたは複数の共刺激ポリペプチドは、ＩＬ−２、ＩＬ−２の変異体、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、態様１１７に記載の方法。
【０３８１】
態様１１９．前記第１のヘテロ二量体の前記１つまたは複数の共刺激ポリペプチドは、４−１ＢＢＬ、４−１ＢＢＬの変異体、およびこれらの組み合わせからなる群から選択され、前記第２のヘテロ二量体の前記１つまたは複数の共刺激ポリペプチドは、４−１ＢＢＬ、４−１ＢＢＬの変異体、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、態様１１７に記載の方法。
【０３８２】
態様１２０．前記第１のヘテロ二量体の前記１つまたは複数の共刺激ポリペプチドは、ＣＤ８０、ＣＤ８０の変異体、およびこれらの組み合わせからなる群から選択され、前記第２のヘテロ二量体の前記１つまたは複数の共刺激ポリペプチドは、ＣＤ８０、ＣＤ８０の変異体、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、態様１１７に記載の方法。
【０３８３】
態様１２１．前記第１のヘテロ二量体は、それぞれが、ＩＬ−２、４−１ＢＢＬ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＯＸ−４０Ｌ、ＦａｓＬ、ＪＡＧ１、ＴＧＦβ、ＣＤ７０、およびＩＣＡＭ、ならびに、ＩＬ−２、４−１ＢＢＬ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＯＸ−４０Ｌ、ＦａｓＬ、ＪＡＧ１、ＴＧＦβ、ＣＤ７０、およびＩＣＡＭの変異体からなる群から独立して選択される、少なくとも２つの共刺激ポリペプチドを含み、前記第２のヘテロ二量体は、それぞれが、ＩＬ−２、４−１ＢＢＬ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＯＸ−４０Ｌ、ＦａｓＬ、ＪＡＧ１、ＴＧＦβ、ＣＤ７０、およびＩＣＡＭ、ならびに、ＩＬ−２、４−１ＢＢＬ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＯＸ−４０Ｌ、ＦａｓＬ、ＪＡＧ１、ＴＧＦβ、ＣＤ７０、およびＩＣＡＭの変異体からなる群から独立して選択される、少なくとも２つの共刺激ポリペプチドを含む、態様１１７に記載の方法。
【０３８４】
態様１２２．前記第１のヘテロ二量体の前記少なくとも２つの共刺激ポリペプチドのそれぞれは、ＩＬ−２およびＩＬ−２の変異体からなる群から独立して選択され、前記第２のヘテロ二量体の前記少なくとも２つの共刺激ポリペプチドのそれぞれは、ＩＬ−２およびＩＬ−２の変異体からなる群から独立して選択される、態様１２１に記載の方法。
【０３８５】
態様１２３．前記第１のヘテロ二量体の前記少なくとも２つの共刺激ポリペプチドのそれぞれは、４−１ＢＢＬおよび４−１ＢＢＬの変異体からなる群から独立して選択され、前記第２のヘテロ二量体の前記少なくとも２つの共刺激ポリペプチドのそれぞれは、４−１ＢＢＬおよび４−１ＢＢＬの変異体からなる群から独立して選択される、態様１２１に記載の方法。
【０３８６】
態様１２４．前記第１のヘテロ二量体の前記少なくとも２つの共刺激ポリペプチドのそれぞれは、ＣＤ８０およびＣＤ８０の変異体からなる群から独立して選択され、前記第２のヘテロ二量体の前記少なくとも２つの共刺激ポリペプチドのそれぞれは、ＣＤ８０およびＣＤ８０の変異体からなる群から独立して選択される、態様１２１に記載の方法。
【０３８７】
態様１２５．前記第１のヘテロ二量体の前記少なくとも２つの共刺激ポリペプチドのうちの少なくとも１つはＣＤ８０またはＣＤ８０の変異体であり、前記第１のヘテロ二量体の前記少なくとも２つの共刺激ポリペプチドのうちの少なくとも１つは４−１ＢＢＬまたは４−１ＢＢＬの変異体であり、前記第２のヘテロ二量体の前記少なくとも２つの共刺激ポリペプチドのうちの少なくとも１つはＣＤ８０またはＣＤ８０の変異体であり、前記第２のヘテロ二量体の前記少なくとも２つの共刺激ポリペプチドのうちの少なくとも１つは４−１ＢＢＬまたは４−１ＢＢＬの変異体である、態様１２１に記載の方法。
【０３８８】
態様１２６．前記第１のヘテロ二量体の前記１つまたは複数の免疫調節（すなわち、共刺激）ポリペプチドは、ＩＬ−２、４−１ＢＢＬ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＯＸ−４０Ｌ、ＦａｓＬ、ＪＡＧ１、ＴＧＦβ、ＣＤ７０、およびＩＣＡＭ、ならびに、ＩＬ−２、４−１ＢＢＬ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＯＸ−４０Ｌ、ＦａｓＬ、ＪＡＧ１、ＴＧＦβ、ＣＤ７０、およびＩＣＡＭの変異体、およびこれらの組み合わせからなる群から選択され、前記第２のヘテロ二量体の前記１つまたは複数の免疫調節（すなわち、共刺激）ポリペプチドは、ＩＬ−２、４−１ＢＢＬ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＯＸ−４０Ｌ、ＦａｓＬ、ＪＡＧ１、ＴＧＦβ、ＣＤ７０、およびＩＣＡＭ、ならびに、ＩＬ−２、４−１ＢＢＬ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＯＸ−４０Ｌ、ＦａｓＬ、ＪＡＧ１、ＴＧＦβ、ＣＤ７０、およびＩＣＡＭの変異体、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、態様９８から態様１０７のいずれか１つに記載の多量体Ｔ細胞調節ポリペプチド。
【０３８９】
態様１２７．前記第１のヘテロ二量体の前記１つまたは複数の免疫調節ポリペプチドは、ＩＬ−２、ＩＬ−２の変異体、およびこれらの組み合わせからなる群から選択され、前記第２のヘテロ二量体の前記１つまたは複数の免疫調節ポリペプチドは、ＩＬ−２、ＩＬ−２の変異体、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、態様１２６に記載の多量体Ｔ細胞調節ポリペプチド。
【０３９０】
態様１２８．前記第１のヘテロ二量体の前記１つまたは複数の免疫調節ポリペプチドは、４−１ＢＢＬ、４−１ＢＢＬの変異体、およびこれらの組み合わせからなる群から選択され、前記第２のヘテロ二量体の前記１つまたは複数の免疫調節ポリペプチドは、４−１ＢＢＬ、４−１ＢＢＬの変異体、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、態様１２６に記載の多量体Ｔ細胞調節ポリペプチド。
【０３９１】
態様１２９．前記第１のヘテロ二量体の前記１つまたは複数の免疫調節ポリペプチドは、ＣＤ８０、ＣＤ８０の変異体、およびこれらの組み合わせからなる群から選択され、前記第２のヘテロ二量体の前記１つまたは複数の免疫調節ポリペプチドは、ＣＤ８０、ＣＤ８０の変異体、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、態様１２６に記載の多量体Ｔ細胞調節ポリペプチド。
【０３９２】
態様１３０．前記第１のヘテロ二量体は、それぞれが、ＩＬ−２、４−１ＢＢＬ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＯＸ−４０Ｌ、ＦａｓＬ、ＪＡＧ１、ＴＧＦβ、ＣＤ７０、およびＩＣＡＭ、ならびに、ＩＬ−２、４−１ＢＢＬ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＯＸ−４０Ｌ、ＦａｓＬ、ＪＡＧ１、ＴＧＦβ、ＣＤ７０、およびＩＣＡＭの変異体からなる群から独立して選択される、少なくとも２つの免疫調節ポリペプチドを含み、前記第２のヘテロ二量体は、それぞれが、ＩＬ−２、４−１ＢＢＬ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＯＸ−４０Ｌ、ＦａｓＬ、ＪＡＧ１、ＴＧＦβ、ＣＤ７０、およびＩＣＡＭ、ならびに、ＩＬ−２、４−１ＢＢＬ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＯＸ−４０Ｌ、ＦａｓＬ、ＪＡＧ１、ＴＧＦβ、ＣＤ７０、およびＩＣＡＭの変異体からなる群から独立して選択される、少なくとも２つの免疫調節ポリペプチドを含む、態様１２６に記載の多量体Ｔ細胞調節ポリペプチド。
【０３９３】
態様１３１．前記第１のヘテロ二量体の前記少なくとも２つの免疫調節ポリペプチドのそれぞれは、ＩＬ−２およびＩＬ−２の変異体からなる群から独立して選択され、前記第２のヘテロ二量体の前記少なくとも２つの免疫調節ポリペプチドのそれぞれは、ＩＬ−２およびＩＬ−２の変異体からなる群から独立して選択される、態様１３０に記載の多量体Ｔ細胞調節ポリペプチド。
【０３９４】
態様１３２．前記第１のヘテロ二量体の前記少なくとも２つの免疫調節ポリペプチドのそれぞれは、４−１ＢＢＬおよび４−１ＢＢＬの変異体からなる群から独立して選択され、前記第２のヘテロ二量体の前記少なくとも２つの免疫調節ポリペプチドのそれぞれは、４−１ＢＢＬおよび４−１ＢＢＬの変異体からなる群から独立して選択される、態様１３０に記載の多量体Ｔ細胞調節ポリペプチド。
【０３９５】
態様１３３．前記第１のヘテロ二量体の前記少なくとも２つの免疫調節ポリペプチドのそれぞれは、ＣＤ８０およびＣＤ８０の変異体からなる群から独立して選択され、前記第２のヘテロ二量体の前記少なくとも２つの免疫調節ポリペプチドのそれぞれは、ＣＤ８０およびＣＤ８０の変異体からなる群から独立して選択される、態様１３０に記載の多量体Ｔ細胞調節ポリペプチド。
【０３９６】
態様１３４．前記第１のヘテロ二量体の前記少なくとも２つの免疫調節ポリペプチドのうちの少なくとも１つはＣＤ８０またはＣＤ８０の変異体であり、前記第１のヘテロ二量体の前記少なくとも２つの免疫調節ポリペプチドのうちの少なくとも１つは４−１ＢＢＬまたは４−１ＢＢＬの変異体であり、前記第２のヘテロ二量体の前記少なくとも２つの免疫調節ポリペプチドのうちの少なくとも１つはＣＤ８０またはＣＤ８０の変異体であり、前記第２のヘテロ二量体の前記少なくとも２つの免疫調節ポリペプチドのうちの少なくとも１つは４−１ＢＢＬまたは４−１ＢＢＬの変異体である、態様１３０に記載の多量体Ｔ細胞調節ポリペプチド。
【０３９７】
本発明における特定の実施形態を参照して本発明を説明してきたが、本発明の真の趣旨および範囲を逸脱することなく、様々な変更を行うことが可能であること、また均等物で置き換え可能であることを当業者は理解するであろう。更に、特定の状態、材料、物質の組成物、プロセス、１つのプロセス工程または複数のプロセス工程について多くの修正を行い、本発明の目的、趣旨および範囲に適合させることも可能である。全てのこのような修正は、本書に添付する特許請求の範囲の範囲内となることを意図している。
【図１】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図２−３】
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【図２−４】
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【図３−１】
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【図３−２】
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【図４】
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【図５−１】
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【図５−２】
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【図５−３】
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【図５−４】
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【図６】
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【図７】
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【図８−１】
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【図８−２】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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