(57)【要約】  本開示は、カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を提供する。本開示は、カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体を合成する方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ゲラニルピロリン酸：オリベトール酸ゲラニルトランスフェラーゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生するための遺伝子組換え宿主細胞であって、ゲラニルピロリン酸：オリベトール酸ゲラニルトランスフェラーゼポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量のゲラニルピロリン酸およびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる、遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項２】
配列番号１１０と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むゲラニルピロリン酸：オリベトール酸ゲラニルトランスフェラーゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生するための遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項３】
配列番号１００と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むゲラニルピロリン酸：オリベトール酸ゲラニルトランスフェラーゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生するための遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項４】
テトラケチドシンターゼ（ＴＫＳ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸およびオリベトール酸（ＯＡＣ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、または融合ＴＫＳおよびＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項５】
前記ＴＫＳポリペプチドが、配列番号１１または配列番号７６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項４に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項６】
前記ＯＡＣポリペプチドが、配列番号１０または配列番号７８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項４または５に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項７】
以下の１つまたは複数をさらに含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の遺伝子組換え宿主細胞：
ａ）アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；
ｂ）ゲラニルピロリン酸を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；または
ｃ）マロニル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸。
【請求項８】
アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含み、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する前記ポリペプチドがアシル活性化酵素（ＡＡＥ）ポリペプチドである、請求項７に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項９】
前記ＡＡＥポリペプチドが、配列番号９０と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項８に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項１０】
前記ＡＡＥポリペプチドが、配列番号９２または配列番号１４９と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項８に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項１１】
アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含み、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する前記ポリペプチドが脂肪酸アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドである、請求項７に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項１２】
前記脂肪酸アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドが、配列番号１４５または配列番号１４７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１１に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項１３】
アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含み、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する前記ポリペプチドが脂肪酸アシル−ＣｏＡシンテターゼ（ＦＡＡ）ポリペプチドである、請求項７に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項１４】
前記ＦＡＡポリペプチドが、配列番号１６９、配列番号１９２、配列番号１９４、配列番号１９６、配列番号１９８または配列番号２００と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１３に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項１５】
ゲラニルピロリン酸を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含み、ゲラニルピロリン酸を生成する前記ポリペプチドがゲラニルピロリン酸シンテターゼ（ＧＰＰＳ）ポリペプチドである、請求項７から１４のいずれか一項に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項１６】
前記ＧＰＰＳポリペプチドが、配列番号７、配列番号８または配列番号６０と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１５に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項１７】
マロニル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含み、マロニル−ＣｏＡを生成する前記ポリペプチドがアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ−１（ＡＣＣ１）ポリペプチドである、請求項７から１６のいずれか一項に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項１８】
前記ＡＣＣ１ポリペプチドが、配列番号９、配列番号９７または配列番号２０７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１７に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項１９】
以下の１つまたは複数をさらに含む、請求項１から１８のいずれか一項に記載の遺伝子組換え宿主細胞：ａ）ＨＭＧ−ＣｏＡシンターゼ（ＨＭＧＳ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；ｂ）３−ヒドロキシ−３−メチル−グルタリル−ＣｏＡレダクターゼ（ＨＭＧＲ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；ｃ）メバロン酸キナーゼ（ＭＫ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；ｄ）ホスホメバロン酸キナーゼ（ＰＭＫ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；ｅ）メバロン酸二リン酸脱炭酸酵素（ＭＶＤ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；またはｆ）イソペンテニル二リン酸イソメラーゼ（ＩＤＩ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸。
【請求項２０】
ＩＤＩポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含む、請求項１９に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項２１】
前記ＩＤＩポリペプチドが、配列番号５８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２０に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項２２】
ＨＭＧＲポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含む、請求項１９から２１のいずれか一項に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項２３】
前記ＨＭＧＲポリペプチドが、配列番号２２と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２２に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項２４】
ＨＭＧＲポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含み、前記ＨＭＧＲポリペプチドが切断型ＨＭＧＲ（ｔＨＭＧＲ）ポリペプチドである、請求項１９から２１のいずれか一項に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項２５】
前記ｔＨＭＧＲポリペプチドが、配列番号１７、配列番号５２、配列番号１１３または配列番号２０８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２４に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項２６】
ＨＭＧＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含む、請求項１９から２５のいずれか一項に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項２７】
前記ＨＭＧＳポリペプチドが、配列番号２３、配列番号２４または配列番号１１５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２６に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項２８】
ＭＫポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含む、請求項１９から２７のいずれか一項に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項２９】
前記ＭＫポリペプチドが、配列番号６４と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２８に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項３０】
ＰＭＫポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含む、請求項１９から２９のいずれか一項に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項３１】
前記ＰＭＫポリペプチドが、配列番号６２または配列番号２０５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項３０に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項３２】
ＭＶＤポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含む、請求項１９から３１のいずれか一項に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項３３】
前記ＭＶＤポリペプチドが、配列番号６６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項３２に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項３４】
アセチル−ＣｏＡの２つの分子を縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含む、請求項１から３３のいずれか一項に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項３５】
アセチル−ＣｏＡの２つの分子を縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成する前記ポリペプチドがアセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドである、請求項３４に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項３６】
前記アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドが、配列番号２５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項３５に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項３７】
ピルビン酸デヒドロゲナーゼ複合体（ＰＤＣ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含む、請求項１から３６のいずれか一項に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項３８】
前記ＰＤＣポリペプチドが、配列番号１１７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項３７に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項３９】
真核細胞である、請求項１から３８のいずれか一項に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項４０】
前記真核細胞が酵母細胞である、請求項３９に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項４１】
前記酵母細胞がサッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）である、請求項４０に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項４２】
前記サッカロミセス・セレビシエがサッカロミセス・セレビシエのプロテアーゼ欠損株である、請求項４１に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項４３】
植物細胞である、請求項１から３９のいずれか一項に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項４４】
原核細胞である、請求項１から３８のいずれか一項に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項４５】
前記１つまたは複数の異種核酸の少なくとも１つが遺伝子組換え宿主細胞の染色体に組み込まれている、請求項１から４４のいずれか一項に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項４６】
前記１つまたは複数の異種核酸の少なくとも１つが染色体外に維持されている、請求項１から４４のいずれか一項に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項４７】
前記１つまたは複数の異種核酸の２つ以上が単一発現ベクター中に存在する、請求項１から４４のいずれか一項に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項４８】
前記異種核酸の少なくとも１つが誘導性プロモーターと作動可能に連結している、請求項１から４４のいずれか一項に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項４９】
前記異種核酸の少なくとも１つが構成的プロモーターと作動可能に連結している、請求項１から４４のいずれか一項に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項５０】
遺伝子組換え宿主細胞の適切な培地での培養が、同様の条件下で培養した非遺伝子組換え宿主細胞と比較して増加した量の前記カンナビノイドまたは前記カンナビノイド誘導体の合成を提供する、請求項１から４９のいずれか一項に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項５１】
カンナビノイドシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含む、請求項１から５０のいずれか一項に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項５２】
前記カンナビノイドシンターゼポリペプチドがテトラヒドロカンナビノール酸（ＴＨＣＡ）シンターゼポリペプチドである、請求項５１に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項５３】
前記ＴＨＣＡシンターゼポリペプチドが、配列番号１４、配列番号８６、配列番号１０４、配列番号１５３または配列番号１５５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項５２に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項５４】
前記カンナビノイドシンターゼポリペプチドがカンナビジオール酸（ＣＢＤＡ）シンターゼポリペプチドである、請求項５１に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項５５】
前記ＣＢＤＡシンターゼポリペプチドが、配列番号８８または配列番号１５１と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項５４に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項５６】
前記カンナビノイドがカンナビゲロール酸、カンナビゲロール、Δ９−テトラヒドロカンナビノール酸、Δ９−テトラヒドロカンナビノール、Δ８−テトラヒドロカンナビノール酸、Δ８−テトラヒドロカンナビノール、カンナビジオール酸、カンナビジオール、カンナビクロメン酸、カンナビクロメン、カンナビノール酸、カンナビノール、カンナビジバリン酸、カンナビジバリン、テトラヒドロカンナビバリン酸、テトラヒドロカンナビバリン、カンナビクロメバリン酸、カンナビクロメバリン、カンナビゲロバリン酸、カンナビゲロバリン、カンナビシクロール酸、カンナビシクロール、カンナビエルソイン酸、カンナビエルソイン、カンナビシトラン酸またはカンナビシトランである、請求項１から５５のいずれか一項に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項５７】
前記カンナビノイドがカンナビゲロール酸である、請求項５６に記載の遺伝子組換え宿主細胞。
【請求項５８】
遺伝子組換え宿主細胞でカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する方法であって、
ａ）請求項１から５７のいずれか一項に記載の遺伝子組換え宿主細胞を適切な培地で培養するステップと；
ｂ）前記産生されたカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を回収するステップと
を含む方法。
【請求項５９】
カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する方法であって、
ａ）請求項１から５７のいずれか一項に記載の遺伝子組換え宿主細胞を、カルボン酸を含む適切な培地で培養するステップと；
ｂ）前記産生されたカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を回収するステップと
を含む方法。
【請求項６０】
カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する方法であって、
ａ）請求項１から５７のいずれか一項に記載の遺伝子組換え宿主細胞を、オリベトール酸またはオリベトール酸誘導体を含む適切な培地で培養するステップと；
ｂ）前記産生されたカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を回収するステップと
を含む方法。
【請求項６１】
遺伝子組換え宿主細胞でカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する方法であって、
ａ）配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量のゲラニルピロリン酸およびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができるゲラニルピロリン酸：オリベトール酸ゲラニルトランスフェラーゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む遺伝子組換え宿主細胞を適切な培地で培養するステップと；
ｂ）前記産生されたカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を回収するステップと
を含む方法。
【請求項６２】
遺伝子組換え宿主細胞でカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する方法であって、
ａ）配列番号１１０と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むゲラニルピロリン酸：オリベトール酸ゲラニルトランスフェラーゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む遺伝子組換え宿主細胞を適切な培地で培養するステップと；
ｂ）前記産生されたカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を回収するステップと
を含む方法。
【請求項６３】
遺伝子組換え宿主細胞でカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する方法であって、
ａ）配列番号１００と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むゲラニルピロリン酸：オリベトール酸ゲラニルトランスフェラーゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む遺伝子組換え宿主細胞を適切な培地で培養するステップと；
ｂ）前記産生されたカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を回収するステップと
を含む方法。
【請求項６４】
前記適切な培地が発酵性糖を含む、請求項５８から６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６５】
前記適切な培地が前処理されたセルロース供給原料を含む、請求項５８から６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６６】
前記適切な培地が非発酵性炭素源を含む、請求項５８から６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６７】
前記非発酵性炭素源がエタノールを含む、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
前記カンナビノイドがカンナビゲロール酸、カンナビゲロール、Δ９−テトラヒドロカンナビノール酸、Δ９−テトラヒドロカンナビノール、Δ８−テトラヒドロカンナビノール酸、Δ８−テトラヒドロカンナビノール、カンナビジオール酸、カンナビジオール、カンナビクロメン酸、カンナビクロメン、カンナビノール酸、カンナビノール、カンナビジバリン酸、カンナビジバリン、テトラヒドロカンナビバリン酸、テトラヒドロカンナビバリン、カンナビクロメバリン酸、カンナビクロメバリン、カンナビゲロバリン酸、カンナビゲロバリン、カンナビシクロール酸、カンナビシクロール、カンナビエルソイン酸、カンナビエルソイン、カンナビシトラン酸またはカンナビシトランである、請求項５８から６７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６９】
配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量のゲラニルピロリン酸およびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる単離または精製ゲラニルピロリン酸：オリベトール酸ゲラニルトランスフェラーゼポリペプチド。
【請求項７０】
配列番号１１０と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む単離または精製ポリペプチド。
【請求項７１】
配列番号１００と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む単離または精製ポリペプチド。
【請求項７２】
配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量のゲラニルピロリン酸およびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができるゲラニルピロリン酸：オリベトール酸ゲラニルトランスフェラーゼポリペプチドをコードする単離または精製核酸。
【請求項７３】
配列番号１１０と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする単離または精製核酸。
【請求項７４】
配列番号１００と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする単離または精製核酸。
【請求項７５】
配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量のゲラニルピロリン酸およびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができるゲラニルピロリン酸：オリベトール酸ゲラニルトランスフェラーゼポリペプチドをコードする核酸を含むベクター。
【請求項７６】
配列番号１１０と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする核酸を含むベクター。
【請求項７７】
配列番号１００と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする核酸を含むベクター。
【請求項７８】
カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生するための遺伝子組換え宿主細胞を作製する方法であって、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量のゲラニルピロリン酸およびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができるゲラニルピロリン酸：オリベトール酸ゲラニルトランスフェラーゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を遺伝子組換え宿主細胞に導入するステップを含む方法。
【請求項７９】
カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生するための遺伝子組換え宿主細胞を作製する方法であって、配列番号１１０と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むゲラニルピロリン酸：オリベトール酸ゲラニルトランスフェラーゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を遺伝子組換え宿主細胞に導入するステップを含む方法。
【請求項８０】
カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生するための遺伝子組換え宿主細胞を作製する方法であって、配列番号１００と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むゲラニルピロリン酸：オリベトール酸ゲラニルトランスフェラーゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を遺伝子組換え宿主細胞に導入するステップを含む方法。
【請求項８１】
カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生するための遺伝子組換え宿主細胞を作製する方法であって、請求項７５から７７のいずれか一項に記載のベクターを前記遺伝子組換え宿主細胞に導入するステップを含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、カンナビノイド、カンナビノイド前駆体、カンナビノイド誘導体（例えば、天然に存在しないカンナビノイド）またはカンナビノイド前駆体誘導体（例えば、天然に存在しないカンナビノイド前駆体）を産生するための方法、ポリペプチド、前記ポリペプチドをコードする核酸および遺伝子組換え宿主細胞を提供する。
【０００２】
関連出願の相互参照：  本出願は、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる、２０１７年４月２７日に出願された米国仮出願第６２／４９１１１４号および２０１７年１０月７日に出願された米国仮出願第６２／５６９５３２号の利益を主張する。
連邦政府資金による研究開発の記載：  本発明は、アメリカ国立科学財団によって授与された助成金番号１３３０９１４および１４４２７２４の下で政府支援を受けてなされた。政府は本発明に一定の権利を有する。
【０００３】
配列表の参照：  本出願に関連する配列表は、紙のコピーの代わりにテキスト形式で提供され、参照により本明細書に組み込まれる。配列表を含むテキストファイルの名前はＤＥＭＴ＿００１＿００ＷＯＳｅｑＬｉｓｔ＿ＳＴ２５＿ｔｘｔである。テキストファイルは約６７３ＫＢで、２０１８年４月２５日に作成され、ＥＦＳ−Ｗｅｂ経由で電子的に提出されている。
【背景技術】
【０００４】
アサ属（Ｃａｎｎａｂｉｓ）の植物は、何千年もの間、その薬効性のためにヒトによって使用されている。現代では、アサ属の生理活性効果は、「カンナビノイド」と呼ばれるクラスの化合物によるとされており、その中にはテトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）およびカンナビジオール（ＣＢＤ）を含む数百の構造類似体が存在する。アサ属材料のこれらの分子および調製物は、近年、慢性疼痛、多発性硬化症、がん関連の悪心および嘔吐、体重減少、食欲不振、痙縮ならびに他の状態の治療薬としての用途を見出している。
【化１】
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【０００５】
一定のカンナビノイドの生理学的効果は、ヒトおよび他の動物に見られる２つの細胞受容体との相互作用によって媒介されると考えられている。カンナビノイド受容体１型（ＣＢ１）は、脳、生殖器系および眼によく見られる。カンナビノイド受容体２型（ＣＢ２）は免疫系によく見られ、動物モデルで炎症に関連する治療効果を媒介する。カンナビノイド受容体および植物由来カンナビノイドとのその相互作用の発見は、内因性リガンドの同定に先行した。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】米国特許出願公開第２０１２０１４４５２３号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
ＴＨＣおよびＣＢＤに加えて、何百もの他のカンナビノイドがアサ属で同定されている。しかし、これらの化合物の多くは低レベルで、より豊富なカンナビノイドと一緒に存在するため、植物から純粋な試料を得て治療可能性を試験することは困難である。同様に、これらの種類の産物を化学的に合成する方法は面倒で費用がかかり、収率が不十分になる傾向がある。したがって、純粋なカンナビノイド、カンナビノイド前駆体、カンナビノイド誘導体またはカンナビノイド前駆体誘導体を調製する追加の方法が必要である。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本開示は、カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体を産生するための方法、ポリペプチド、前記ポリペプチドをコードする核酸および遺伝子組換え宿主細胞を提供する。
【０００９】
本開示の一態様は、ゲラニルピロリン酸：オリベトール酸ゲラニルトランスフェラーゼ（ＧＯＴ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生するための遺伝子組換え宿主細胞であって、前記ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量のゲラニルピロリン酸（ＧＰＰ）およびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒する、遺伝子組換え宿主細胞に関する。
【００１０】
本開示の別の態様は、配列番号１１０と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生するための遺伝子組換え宿主細胞に関する。
【００１１】
本開示の一態様は、配列番号１００と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生するための遺伝子組換え宿主細胞に関する。
【００１２】
前記または以下のいずれかの一定の実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞が、テトラケチドシンターゼ（ＴＫＳ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸およびオリベトール酸（ＯＡＣ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、または融合ＴＫＳおよびＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＴＫＳポリペプチドが、配列番号１１または配列番号７６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＯＡＣポリペプチドが、配列番号１０または配列番号７８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【００１３】
前記または以下のいずれかの一定の実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞が、以下の１つまたは複数をさらに含む：ａ）アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；ｂ）ＧＰＰを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；またはｃ）マロニル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞が、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含み、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドがアシル活性化酵素（ＡＡＥ）ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ＡＡＥポリペプチドが、配列番号９０と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡＡＥポリペプチドが、配列番号９２または配列番号１４９と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞が、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含み、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドが脂肪酸アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドである。いくつかの実施形態では、脂肪酸アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドが、配列番号１４５または配列番号１４７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞が、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含み、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドが脂肪酸アシル−ＣｏＡシンテターゼ（ＦＡＡ）ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ＦＡＡポリペプチドが、配列番号１６９、配列番号１９２、配列番号１９４、配列番号１９６、配列番号１９８または配列番号２００と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞が、ＧＰＰを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含み、ＧＰＰを生成する前記ポリペプチドがゲラニルピロリン酸シンテターゼ（ＧＰＰＳ）ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドが、配列番号７、配列番号８または配列番号６０と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞が、マロニル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含み、マロニル−ＣｏＡを生成するポリペプチドがアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ−１（ＡＣＣ１）ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ＡＣＣ１ポリペプチドが、配列番号９、配列番号９７または配列番号２０７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【００１４】
前記または以下のいずれかの一定の実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞が、以下の１つまたは複数をさらに含む：ａ）ＨＭＧ−ＣｏＡシンターゼ（ＨＭＧＳ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；ｂ）３−ヒドロキシ−３−メチル−グルタリル−ＣｏＡレダクターゼ（ＨＭＧＲ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；ｃ）メバロン酸キナーゼ（ＭＫ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；ｄ）ホスホメバロン酸キナーゼ（ＰＭＫ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；ｅ）メバロン酸二リン酸脱炭酸酵素（ＭＶＤ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；またはｆ）イソペンテニル二リン酸イソメラーゼ（ＩＤＩ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞が、ＩＤＩポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＩＤＩポリペプチドが、配列番号５８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞が、ＨＭＧＲポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＨＭＧＲポリペプチドが、配列番号２２と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞が、ＨＭＧＲポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含み、ＨＭＧＲポリペプチドが切断型ＨＭＧＲ（ｔＨＭＧＲ）ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ｔＨＭＧＲポリペプチドが、配列番号１７、配列番号５２、配列番号１１３または配列番号２０８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞が、ＨＭＧＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＨＭＧＳポリペプチドが、配列番号２３、配列番号２４または配列番号１１５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞が、ＭＫポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＭＫポリペプチドが、配列番号６４と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞が、ＰＭＫポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含む。一部の実施形態では、ＰＭＫポリペプチドが、配列番号６２または配列番号２０５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞が、ＭＶＤポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＭＶＤポリペプチドが、配列番号６６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【００１５】
前記または以下のいずれかの一定の実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞が、アセチル−ＣｏＡの２つの分子を縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含む。いくつかの実施形態では、アセチル−ＣｏＡの２つの分子を縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドがアセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドである。いくつかの実施形態では、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドが、配列番号２５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【００１６】
前記または以下のいずれかの一定の実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞が、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ複合体（ＰＤＣ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＰＤＣポリペプチドが、配列番号１１７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【００１７】
前記または以下のいずれかの一定の実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞が真核細胞である。いくつかの実施形態では、真核細胞が酵母細胞である。いくつかの実施形態では、酵母細胞がサッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）である。いくつかの実施形態では、サッカロミセス・セレビシエがサッカロミセス・セレビシエのプロテアーゼ欠損株である。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞が植物細胞である。
【００１８】
前記または以下のいずれかの一定の実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞が原核細胞である。
【００１９】
前記または以下のいずれかの一定の実施形態では、１つまたは複数の異種核酸の少なくとも１つが遺伝子組換え宿主細胞の染色体に組み込まれている。
【００２０】
前記または以下のいずれかの一定の実施形態では、１つまたは複数の異種核酸の少なくとも１つが染色体外に維持されている。
【００２１】
前記または以下のいずれかの一定の実施形態では、１つまたは複数の異種核酸の２つ以上が単一発現ベクター中に存在する。
【００２２】
前記または以下のいずれかの一定の実施形態では、異種核酸の少なくとも１つが誘導性プロモーターと作動可能に連結している。
【００２３】
前記または以下のいずれかの一定の実施形態では、異種核酸の少なくとも１つが構成的プロモーターと作動可能に連結している。
【００２４】
前記または以下のいずれかの一定の実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞の適切な培地での培養が、同様の条件下で培養した非遺伝子組換え宿主細胞と比較して増加した量のカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体の合成を提供する。
【００２５】
前記または以下のいずれかの一定の実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞が、カンナビノイドシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含む。いくつかの実施形態では、カンナビノイドシンターゼポリペプチドがテトラヒドロカンナビノール酸（ＴＨＣＡ）シンターゼポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ＴＨＣＡシンターゼポリペプチドが、配列番号１４、配列番号８６、配列番号１０４、配列番号１５３または配列番号１５５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、カンナビノイドシンターゼポリペプチドがカンナビジオール酸（ＣＢＤＡ）シンターゼポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ＣＢＤＡシンターゼポリペプチドが、配列番号８８または配列番号１５１と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【００２６】
前記または以下のいずれかの一定の実施形態では、カンナビノイドがカンナビゲロール酸、カンナビゲロール、Δ９−テトラヒドロカンナビノール酸、Δ９−テトラヒドロカンナビノール、Δ８−テトラヒドロカンナビノール酸、Δ８−テトラヒドロカンナビノール、カンナビジオール酸、カンナビジオール、カンナビクロメン酸、カンナビクロメン、カンナビノール酸、カンナビノール、カンナビジバリン酸、カンナビジバリン、テトラヒドロカンナビバリン酸、テトラヒドロカンナビバリン、カンナビクロメバリン酸、カンナビクロメバリン、カンナビゲロバリン酸、カンナビゲロバリン、カンナビシクロール酸、カンナビシクロール、カンナビエルソイン酸、カンナビエルソイン、カンナビシトラン酸またはカンナビシトランである。
【００２７】
本開示の一態様は、遺伝子組換え宿主細胞でカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する方法であって、ａ）遺伝子組換え宿主細胞を適切な培地で培養するステップと；ｂ）産生されたカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を回収するステップとを含む方法に関する。
【００２８】
本開示の別の態様は、遺伝子組換え宿主細胞でカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する方法であって、ａ）遺伝子組換え宿主細胞を、カルボン酸を含む適切な培地で培養するステップと；ｂ）産生されたカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を回収するステップとを含む方法に関する。
【００２９】
本開示の一態様は、遺伝子組換え宿主細胞でカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する方法であって、ａ）遺伝子組換え宿主細胞を、オリベトール酸またはオリベトール酸誘導体を含む適切な培地で培養するステップと；ｂ）産生されたカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を回収するステップとを含む方法に関する。
【００３０】
本開示の別の態様は、遺伝子組換え宿主細胞でカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する方法であって、ａ）配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量のＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒するＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む遺伝子組換え宿主細胞を適切な培地で培養するステップと；ｂ）産生されたカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を回収するステップとを含む方法に関する。
【００３１】
本開示の一態様は、遺伝子組換え宿主細胞でカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する方法であって、ａ）配列番号１１０と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む遺伝子組換え宿主細胞を適切な培地で培養するステップと；ｂ）産生されたカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を回収するステップとを含む方法に関する。
【００３２】
本開示の別の態様は、遺伝子組換え宿主細胞でカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する方法であって、ａ）配列番号１００と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む遺伝子組換え宿主細胞を適切な培地で培養するステップと；ｂ）産生されたカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を回収するステップとを含む方法に関する。
【００３３】
前記または以下のいずれかの一定の実施形態では、適切な培地が発酵性糖を含む。いくつかの実施形態では、適切な培地が前処理されたセルロース供給原料を含む。
【００３４】
前記または以下のいずれかの一定の実施形態では、適切な培地が非発酵性炭素源を含む。いくつかの実施形態では、非発酵性炭素源がエタノールを含む。
【００３５】
本開示の一態様は、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量のＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒する単離または精製ＧＯＴポリペプチドに関する。
【００３６】
本開示の別の態様は、配列番号１１０と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む単離または精製ポリペプチドに関する。
【００３７】
本開示の一態様は、配列番号１００と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む単離または精製ポリペプチドに関する。
【００３８】
本開示の別の態様は、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量のＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒するＧＯＴポリペプチドをコードする単離または精製核酸に関する。
【００３９】
本開示の一態様は、配列番号１１０と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする単離または精製核酸に関する。
【００４０】
本開示の別の態様は、配列番号１００と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする単離または精製核酸に関する。
【００４１】
本開示の一態様は、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量のＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒するＧＯＴポリペプチドをコードする核酸を含むベクターに関する。
【００４２】
本開示の別の態様は、配列番号１１０と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする核酸を含むベクターに関する。
【００４３】
本開示の一態様は、配列番号１００と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする核酸を含むベクターに関する。
【００４４】
本開示の別の態様は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生するための遺伝子組換え宿主細胞を作製する方法であって、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量のＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒するＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を遺伝子組換え宿主細胞に導入するステップを含む方法に関する。
【００４５】
本開示の一態様は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生するための遺伝子組換え宿主細胞を作製する方法であって、配列番号１１０と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を遺伝子組換え宿主細胞に導入するステップを含む方法に関する。
【００４６】
本開示の別の態様は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生するための遺伝子組換え宿主細胞を作製する方法であって、配列番号１００と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を遺伝子組換え宿主細胞に導入するステップを含む方法に関する。
【００４７】
本開示の一態様は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生するための遺伝子組換え宿主細胞を作製する方法であって、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量のＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒するＧＯＴポリペプチドをコードする核酸を含むベクター；配列番号１１０と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする核酸を含むベクター；または配列番号１００と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする核酸を含むベクターを遺伝子組換え宿主細胞に導入するステップを含む方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【００４８】
【図１】カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体を生成するための生合成経路の概略図である。
【図２】経路１ａおよびテトラケチドシンターゼ（ＴＫＳ）ポリペプチド／オリベトール酸シクラーゼ（ＯＡＣ）ポリペプチドを使用した細胞内オリベトール酸産生を示す図である。
【図３】経路１ａおよび１ｂを比較した細胞内オリベトール酸産生を示す図である。
【図４】オリベトール酸産生のための３つの発現構築物の概略図である。
【図５】オリベトール酸産生のための２つの発現構築物の概略図である。
【図６】ゲラニルピロリン酸（ＧＰＰ）産生のための３つの発現構築物の概略図である。
【図７】ＧＰＰ産生のための２つの発現構築物の概略図である。
【図８】カンナビノイド産生のための３つの発現構築物の概略図である。
【図９】発現構築物３＋４または発現構築物３＋５を使用したオリベトール酸の産生を示す図である。
【図１０】構築物３を使用し、ヘキサノエートを含む培地で細胞を培養した；または構築物１を使用したオリベトール酸の産生を示す図である。
【図１１】カルボン酸が乱雑なアシル活性化酵素ポリペプチド（例えば、ＣｓＡＡＥ１；ＣｓＡＡＥ３）によってＣｏＡ型に変換され、オリベトール酸誘導体を生成する、種々の代表的なカルボン酸を供給することによってオリベトール酸誘導体を産生する経路の概略図である。
【図１２】オリベトール酸またはカンナビノイド誘導体の生合成のための基質として使用することができる種々の官能基を有する種々の代表的なカルボン酸を示す図である。図１２はまた、これらのカルボン酸からのオリベトール酸またはカンナビノイド誘導体の産生も示している。
【図１３】様々な酸を供給し、化学反応でこれらの誘導体をさらに誘導体化することによって生成することができる種々の代表的なカンナビノイド誘導体を示す図である。
【図１４】ピロリン酸ネリル（ＮＰＰ）またはＧＰＰを利用したカンナビノイド生合成経路を示す図である。
【図１５】ＮｐｈＢポリペプチドならびに基質オリベトール酸およびＧＰＰを使用したカンナビゲロール酸（ＣＢＧＡ）の生成を示す図である。
【図１６】ＧＰＰを産生する発現構築物を示す図である。
【図１７】ヘキサノイル−ＣｏＡおよび／またはヘキサノエートを産生する発現構築物を示す図である。
【図１８】ヘキサノイル−ＣｏＡおよび／またはヘキサノエートを産生する発現構築物を示す図である。
【図１９】オリベトール酸を産生する発現構築物を示す図である。
【図２０】ＣＢＧＡを産生する発現構築物を示す図である。
【図２１】カンナビジオール酸（ＣＢＤＡ）を産生する発現構築物を示す図である。
【図２２】ＣＢＤＡを産生する発現構築物を示す図である。
【図２３】ＣＢＤＡを産生する発現構築物を示す図である。
【図２４】テトラヒドロカンナビノール酸（ＴＨＣＡ）を産生する発現構築物を示す図である。
【図２５】ＴＨＣＡを産生する発現構築物を示す図である。
【図２６Ａ】ＣＢＧＡの産生を示すＬＣ−ＭＳトレースを示す図である。
【図２６Ｂ】ＣＢＧＡの産生を示すＬＣ−ＭＳトレースを示す図である。
【図２６Ｃ】ＣＢＧＡの産生を示すＬＣ−ＭＳトレースを示す図である。これらの図は、ｙＬ４４４株の酢酸エチル抽出（図２６Ａ）、１０μＭ  ＣＢＧＡ標準の酢酸エチル抽出（図２６Ｂ）およびｙＬ４４４と１０μＭ  ＣＢＧＡ標準の酢酸エチル抽出の混合物（図２６Ｃ）についてのＬＣ−ＭＳトレース（ｍ  ／  ｚ＝３５９．２）を示している。９．２分で観察されたピークは、ｙＬ４４４の酢酸エチル抽出におけるＣＢＧＡの存在を示していた。
【図２７】Ｎ末端切断およびＰｒｏＡシグナル配列を有するＴＨＣＡシンターゼポリペプチドを用いたＴＨＣＡの産生を示す図である。この図は、ｙＸＬ０４６コロニー１（複製１、上）、ｙＸＬ０４６コロニー２（複製２、中）およびＣＢＤＡとＴＨＣＡを含有する標準（標準、下）の酢酸エチル抽出についてのＬＣ−ＭＳトレース（ｍ／ｚ＝３５７．２１４４）を示している。７．９分のピークはＣＢＤＡの存在を示し、９．６分のピークはＴＨＣＡの存在を示していた。
【図２８】Ｎ末端切断およびＰｒｏＡシグナル配列を有するＣＢＤＡシンターゼポリペプチドを用いたＣＢＤＡの産生を示す図である。この図は、ｙＸＬ０４７コロニー１（複製１）、ｙＸＬ０４７コロニー２（複製２）、陰性対照（陰性）およびＣＢＤＡとＴＨＣＡを含有する標準（標準）の酢酸エチル抽出についてのＬＣ−ＭＳトレース（ｍ／ｚ＝３５７．２１４４）を示している。７．９分のピークはＣＢＤＡの存在を示し、９．６分のピークはＴＨＣＡの存在を示していた。
【図２９Ａ】Ｓ２１株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図２９Ｂ】Ｓ２１株の産生に使用される発現構築物を示す図である。図２９Ａおよび図２９Ｂに示される発現構築物はまた、以下の株の産生に使用される：Ｓ２９、Ｓ３１、Ｓ３４、Ｓ３５、Ｓ３７、Ｓ３８、Ｓ３９、Ｓ４１、Ｓ４２、Ｓ４３、Ｓ４４、Ｓ４５、Ｓ４６、Ｓ４７、Ｓ４９、Ｓ５０、Ｓ５１、Ｓ７８、Ｓ８０、Ｓ８１、Ｓ８２、Ｓ８３、Ｓ８４、Ｓ８５、Ｓ８６、Ｓ８７、Ｓ８８、Ｓ８９、Ｓ９０、Ｓ９１、Ｓ９４、Ｓ９５、Ｓ９７、Ｓ１０４、Ｓ１０８、Ｓ１１２、Ｓ１１４、Ｓ１１５、Ｓ１１６、Ｓ１１８、Ｓ１２３、Ｓ１４７、Ｓ１６４、Ｓ１６５、Ｓ１６６、Ｓ１６７、Ｓ１６８、Ｓ１６９およびＳ１７０。
【図３０Ａ】Ｓ３１株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図３０Ｂ】Ｓ３１株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図３０Ｃ】Ｓ３１株の産生に使用される発現構築物を示す図である。図３０Ａ、図３０Ｂおよび図３０Ｃに示される発現構築物はまた、以下の株の産生に使用される：Ｓ９４、Ｓ９５およびＳ９７。
【図３１】Ｓ３５株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図３２】Ｓ３７株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図３３】Ｓ３８株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図３４】Ｓ３９株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図３５】Ｓ４１株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図３６】Ｓ４２株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図３７】Ｓ４３株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図３８】Ｓ４４株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図３９】Ｓ４５株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図４０】Ｓ４６株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図４１】Ｓ４７株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図４２Ａ】Ｓ４９株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図４２Ｂ】Ｓ４９株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図４２Ｃ】Ｓ４９株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図４３Ａ】Ｓ５０株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図４３Ｂ】Ｓ５０株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図４３Ｃ】Ｓ５０株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図４４Ａ】Ｓ５１株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図４４Ｂ】Ｓ５１株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図４４Ｃ】Ｓ５１株の産生に使用される発現構築物を示す図である。図４４Ａ、図４４Ｂおよび図４４Ｃに示される発現構築物はまた、以下の株の産生に使用される：Ｓ７８、Ｓ８０、Ｓ８１、Ｓ８２、Ｓ８３、Ｓ８４、Ｓ８５、Ｓ８６、Ｓ８７、Ｓ８８およびＳ８９。
【図４５】Ｓ７８株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図４６】Ｓ８０株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図４７】Ｓ８１株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図４８】Ｓ８２株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図４９】Ｓ８３株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図５０】Ｓ８４株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図５１】Ｓ８５株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図５２】Ｓ８６株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図５３】Ｓ８７株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図５４】Ｓ８８株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図５５】Ｓ８９株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図５６Ａ】Ｓ９０株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図５６Ｂ】Ｓ９０株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図５６Ｃ】Ｓ９０株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図５７Ａ】Ｓ９１株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図５７Ｂ】Ｓ９１株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図５７Ｃ】Ｓ９１株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図５８】Ｓ９４株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図５９】Ｓ９５株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図６０】Ｓ９７株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図６１】Ｓ１０４株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図６２】Ｓ１０８株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図６３】Ｓ１１２株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図６４】Ｓ１１４株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図６５】Ｓ１１５株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図６６】Ｓ１１６株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図６７】Ｓ１１８株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図６８】Ｓ１２３株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図６９】Ｓ１４７株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図７０】Ｓ１６４株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図７１】Ｓ１６５株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図７２】Ｓ１６６株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図７３】Ｓ１６７株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図７４】Ｓ１６８株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図７５】Ｓ１６９株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図７６】Ｓ１７０株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図７７】ＣｓＰＴ４ポリペプチド発現株（Ｓ２９）から産生されたＣＢＧＡピークのＭＳ／ＭＳスペクトルを示す図である。
【図７８】真正のＣＢＧＡ標準のＭＳ／ＭＳスペクトルを示す図である。
【図７９】１．０６分でＣｓＧＯＴポリペプチドによって産生されたＣＢＧＡ（上）、１．０６分でＣｓＰＴ４ポリペプチドによって産生されたＣＢＧＡ（中）および１．０６分での真正のＣＢＧＡ標準（下）を示す図である。
【図８０】１．０６分でＣｓＧＯＴポリペプチドによって産生されたＣＢＧＡを示す図である（スケール×１０２単位）。
【図８１】１．０６分でＣｓＰＴ４ポリペプチドによって産生されたＣＢＧＡを示す図である（スケール×１０４単位）。
【図８２】１．０６分での真正のＣＢＧＡ標準を示す図である（スケール×１０４単位）。
【図８３】１．０２分でＳ３４によって産生されたＣＢＤＡ（上）および１．０２分での真正のＣＢＤＡ標準（下）を示す図である。
【図８４】１．２９分でＤ１２３株から産生されたＴＨＣＡ（上）および１．２９分での真正のＴＨＣＡ標準（下）を示す図である。
【図８５】Ｓ３４株の産生に使用される発現構築物を示す図である。
【図８６】Ｓ２９株の産生に使用される発現構築物を示す図である。図８６に示される発現構築物はまた、以下の株の産生に使用される：Ｓ３１、Ｓ３４、Ｓ３５、Ｓ３７、Ｓ３８、Ｓ３９、Ｓ４１、Ｓ４２、Ｓ４３、Ｓ４４、Ｓ４５、Ｓ４６、Ｓ４７、Ｓ４９、Ｓ５０、Ｓ５１、Ｓ７８、Ｓ８０、Ｓ８１、Ｓ８２、Ｓ８３、Ｓ８４、Ｓ８５、Ｓ８６、Ｓ８７、Ｓ８８、Ｓ８９、Ｓ９０、Ｓ９１、Ｓ９４、Ｓ９５、Ｓ９７およびＳ１２３。
【発明を実施するための形態】
【００４９】
本開示は、カンナビノイド、カンナビノイド前駆体、カンナビノイド誘導体（例えば、天然に存在しないカンナビノイド）またはカンナビノイド前駆体誘導体（例えば、天然に存在しないカンナビノイド前駆体）を産生するための方法、ポリペプチド、前記ポリペプチドをコードする核酸および遺伝子組換え宿主細胞を提供する。
【００５０】
ゲラニルピロリン酸：オリベトール酸ゲラニルトランスフェラーゼ（ＧＯＴ、酵素委員会番号２．５．１．１０２）ポリペプチドは、カンナビノイドの生合成で重要な役割を果たすが、遺伝子組換え宿主細胞でそれらの活性を再構成することは困難であることが判明しており、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体の産生の進歩を妨げている。本明細書において、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸（ＣＢＧＡ）の産生を触媒する本開示のポリペプチドをコードする新規な遺伝子が同定され、単離され、特徴付けられた。驚くべきことに、本開示のこれらのポリペプチドは、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのＣＢＧＡの産生を触媒する以前に発見されたアサ属ポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量のＧＰＰおよびオリベトール酸からのＣＢＧＡの産生を触媒することができる（例えば、米国特許出願公開第２０１２０１４４５２３号明細書およびそこに開示されているＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ１；本明細書の配列番号８２参照）。ＧＰＰおよびオリベトール酸からのＣＢＧＡの産生を触媒する本開示の新たなポリペプチドはＧＯＴポリペプチド（例えば、ＣｓＰＴ４ポリペプチド）であり、インビボ（例えば、遺伝子組換え宿主細胞内）およびインビトロ（例えば、無細胞）でカンナビノイドおよびカンナビノイド誘導体を生成することができる。これらの新たなＧＯＴポリペプチド、ならびに前記ＧＯＴポリペプチドをコードする核酸は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生するための本開示の方法および遺伝子組換え宿主細胞で有用である。
【００５１】
本開示の方法は、天然に存在するおよび天然に存在しないカンナビノイドまたはカンナビノイド前駆体を産生するように遺伝子操作された微生物（例えば、遺伝子組換え宿主細胞）を使用することを含み得る。天然に存在するカンナビノイドおよびカンナビノイド前駆体ならびに天然に存在しないカンナビノイドおよびカンナビノイド前駆体（例えば、カンナビノイド誘導体およびカンナビノイド前駆体誘導体）は、その複雑な構造のために化学合成を使用して合成するのが困難である。本開示の方法は、生細胞内の代謝経路の構築を可能にして、糖およびカルボン酸などの単純な前駆体からの特注のカンナビノイド、カンナビノイド前駆体、カンナビノイド誘導体またはカンナビノイド前駆体誘導体を生成する。本明細書に開示される１つまたは複数のポリペプチドをコードする本明細書に開示される１つまたは複数の異種核酸を宿主微生物に導入して、安価な供給原料、例えば糖を最終産物：カンナビノイド、カンナビノイド前駆体、カンナビノイド誘導体またはカンナビノイド前駆体誘導体に段階的に変換することを可能にすることができる。これらの産物を、本明細書に開示される１つまたは複数の異種核酸を含む発現構築物またはベクターの選択および構築によって特定して、選択されたカンナビノイド前駆体；カンナビノイド、例えばＴＨＣまたはＣＢＤ、およびアサ属に低レベルで見られるあまり一般的ではないカンナビノイド種；またはカンナビノイド誘導体もしくはカンナビノイド前駆体誘導体の効率的な生物生産（ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ）を可能にすることができる。生物生産はまた、化学合成を使用してすることが困難な定義された立体化学を有するカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の合成を可能にする。
【００５２】
本明細書に開示される核酸には、カンナビノイドＣＢＧＡ；テトラケチドシンターゼ（ＴＫＳ）ポリペプチド；オリベトール酸シクラーゼ（ＯＡＣ）ポリペプチド；およびＣＢＤＡまたはＴＨＣＡシンターゼポリペプチドの生合成を担う、カンナビノイド生合成経路に存在するポリペプチド、例えばＧＯＴポリペプチド（例えば、ＣｓＰＴ４ポリペプチド）の少なくとも１つの活性を有するポリペプチドをコードするものが含まれ得る（図１および図１１参照）。本明細書に開示される核酸は、カンナビノイド前駆体の合成に関与するポリペプチドの少なくとも１つの活性を有するポリペプチドをコードするものも含み得る。これらのポリペプチドには、それだけに限らないが、メバロン酸経路に存在するポリペプチド；アシル−ＣｏＡ化合物もしくはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体（例えば、アシル活性化酵素ポリペプチド、脂肪酸アシル−ＣｏＡシンテターゼポリペプチドもしくは脂肪酸アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチド）を生成するポリペプチド；ＧＰＰを生成するポリペプチド；マロニルＣｏＡを生成するポリペプチド；アセチル−ＣｏＡの２つの分子を縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチド、またはピルビン酸デヒドロゲナーゼ複合体ポリペプチドの少なくとも１つの活性を有するポリペプチドが含まれる（図１および図１１参照）。
【００５３】
本開示はまた、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドによる、カンナビノイド前駆体誘導体またはカンナビノイド誘導体、ならびにカンナビノイドまたはその前駆体の生成を提供する。一定のこのような実施形態では、本明細書に開示される遺伝子組換え宿主細胞が、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で組換えられる。これらのポリペプチドは、ヘキサノイル−ＣｏＡ、アシル−ＣｏＡ化合物、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体、またはアシル−ＣｏＡ化合物の誘導体の産生を可能にし得る。いくつかの実施形態では、ヘキサン酸またはヘキサン酸以外のカルボン酸を、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドを発現する遺伝子組換え宿主細胞に供給して（例えば、細胞を増殖させる培養培地中に存在する）、ヘキサノイル−ＣｏＡ、アシル−ＣｏＡ化合物、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体またはアシル−ＣｏＡ化合物の誘導体を生成する。次いで、これらの化合物を、カンナビノイド生合成経路に存在する、またはカンナビノイド前駆体の合成に関与するポリペプチドの少なくとも１つの活性を有する１つまたは複数のポリペプチドを介して、カンナビノイド誘導体またはカンナビノイド前駆体誘導体、ならびにカンナビノイドまたはその前駆体に変換する（図１および図１１参照）。
【００５４】
驚くべきことに、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチド、ならびにカンナビノイド生合成経路に存在するポリペプチド、例えばＴＫＳポリペプチド、ＯＡＣポリペプチド、ＧＯＴポリペプチド（例えば、ＣｓＰＴ４ポリペプチド）の少なくとも１つの活性を有する多くのポリペプチド、およびＣＢＤＡまたはＴＨＣＡシンターゼポリペプチドが、広範な基質特異性を有することが分かった。この広範な基質特異性により、カンナビノイドおよびカンナビノイド前駆体だけでなく、遺伝子組換え宿主細胞内または本明細書に開示されるポリペプチドの１つもしくは複数を含む無細胞反応混合物中の両方で天然に存在しないカンナビノイド誘導体およびカンナビノイド前駆体誘導体の産生も可能になる。この広範な基質特異性のために、ヘキサノイル−ＣｏＡ、アシル−ＣｏＡ化合物、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体、またはアシル−ＣｏＡ化合物もしくはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドによって遺伝子組換え宿主細胞で産生されたアシル−ＣｏＡ化合物の誘導体を、ＴＫＳおよびＯＡＣポリペプチドによって利用して、オリベトール酸またはその誘導体を生成することができる。次いで、オリベトール酸またはその誘導体をＧＯＴポリペプチドによって利用して、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を得ることができる。あるいは、オリベトール酸またはその誘導体を、ＧＯＴポリペプチドを含む遺伝子組換え宿主細胞に供給して、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を得ることができる。次いで、これらのカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を、ＣＢＤＡまたはＴＨＣＡシンターゼポリペプチドを介してＴＨＣＡもしくはＣＤＢＡ、またはその誘導体に変換することができる。
【００５５】
所望のカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生を可能にすることに加えて、本開示は、農業ベースの産生よりも信頼性が高く経済的なプロセスを提供する。微生物発酵は、農作物に必要な数か月に対して数日で完了することができ、気候変動または土壌汚染（例えば、重金属による）の影響を受けず、高力価で純粋な産物を産生することができる。
【００５６】
本開示はまた、カンナビノイド前駆体またはその誘導体、ならびにＴＨＣおよびＣＢＤを含む高価値カンナビノイド、ならびにその誘導体を経済的に産生するためのプラットフォームも提供する。本開示はまた、実行可能な産生方法が存在しない様々なカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生を提供する。
【００５７】
さらに、本開示は、単純な前駆体からインビボまたはインビトロでカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体を産生するための方法、遺伝子組換え宿主細胞、ポリペプチドおよび前記ポリペプチドをコードする核酸を提供する。本明細書に開示される１つまたは複数のポリペプチドをコードする本明細書に開示される核酸を、微生物（例えば、遺伝子組換え宿主細胞）に導入して、１つまたは複数のポリペプチドの発現または過剰発現を得て、次いで、これらをカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生のためにインビトロまたはインビボで利用することができる。いくつかの実施形態では、インビトロ方法が無細胞である。
【００５８】
カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体を産生し、遺伝子組換え宿主細胞内で生合成経路を作成するために、遺伝子組換え宿主細胞は、本明細書に開示されるポリペプチドをコードする本明細書に開示される異種核酸の組み合わせを発現または過剰発現し得る。
【００５９】
カンナビノイド生合成：  カンナビノイド生合成経路に存在するポリペプチドの少なくとも１つの活性を有するポリペプチドをコードする核酸は、カンナビノイド、カンナビノイド前駆体、カンナビノイド誘導体またはカンナビノイド前駆体誘導体の合成のために、本明細書に開示される方法および遺伝子組換え宿主細胞において有用となり得る。
【００６０】
アサ属では、カンナビノイドが、アサ属でのみ同定されている３つのポリペプチドの作用によって、一般的な代謝産物前駆体であるゲラニルピロリン酸（ＧＰＰ）およびヘキサノイル−ＣｏＡから産生される。ヘキサノイル−ＣｏＡとマロニル−ＣｏＡを組み合わせて、ＴＫＳポリペプチドによって１２炭素テトラケチド中間体が得られる。次いで、このテトラケチド中間体が、ＯＡＣポリペプチドによって環化されて、オリベトール酸が産生される。次いで、オリベトール酸が、ＧＯＴポリペプチド（例えば、ＣｓＰＴ４ポリペプチド）によって一般的なイソプレノイド前駆体ＧＰＰでプレニル化されて、「マザーカンナビノイド」としても知られるカンナビノイドであるＣＢＧＡを産生する。次いで、様々なシンターゼポリペプチドがＣＢＧＡを他のカンナビノイドに変換する、例えば、ＴＨＣＡシンターゼポリペプチドはＴＨＣＡを産生し、ＣＢＤＡシンターゼポリペプチドはＣＢＤＡを産生する等である。熱または光の存在下で、酸性カンナビノイドは脱炭酸を受けて、例えばＴＨＣＡはＴＨＣを産生するまたはＣＢＤＡはＣＢＤを産生することができる。
【００６１】
ＧＰＰおよびヘキサノイル−ＣｏＡは、いくつかの経路を介して生成され得る（図１および図１１参照）。これらの経路に存在するポリペプチドの少なくとも１つの活性を有する１つまたは複数のポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸は、カンナビノイド、カンナビノイド前駆体、カンナビノイド誘導体またはカンナビノイド前駆体誘導体の合成のために、方法および遺伝子組換え宿主細胞において有用となり得る。
【００６２】
ＧＰＰを生成する、またはＧＰＰを生成する生合成経路の一部であるポリペプチドは、メバロン酸（ＭＥＶ）経路に存在するポリペプチドの少なくとも１つの活性を有する１つまたは複数のポリペプチドであり得る。本明細書で使用される「メバロン酸経路」または「ＭＥＶ経路」という用語は、アセチル−ＣｏＡをイソペンテニルピロリン酸（ＩＰＰ）およびジメチルアリルピロリン酸（ＤＭＡＰＰ）に変換する生合成経路を指し得る。メバロン酸経路は、以下のステップを触媒するポリペプチドを含む：（ａ）アセチル−ＣｏＡの２つの分子を縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成する（例えば、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドの作用により）；（ｂ）アセトアセチル−ＣｏＡとアセチル−ＣｏＡを縮合してヒドロキシメチルグルタリル−ＣｏＡ（ＨＭＧ−ＣｏＡ）を形成する（例えば、ＨＭＧ−ＣｏＡシンターゼ（ＨＭＧＳ）ポリペプチドの作用により）；（ｃ）ＨＭＧ−ＣｏＡをメバロン酸に変換する（例えば、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ（ＨＭＧＲ）ポリペプチドの作用により）；（ｄ）メバロン酸をメバロン酸５−リン酸にリン酸化する（例えば、メバロン酸キナーゼ（ＭＫ）ポリペプチドの作用により）；（ｅ）メバロン酸５−リン酸をメバロン酸５−ピロリン酸に変換する（例えば、ホスホメバロン酸キナーゼ（ＰＭＫ）ポリペプチドの作用により）；（ｆ）メバロン酸５−ピロリン酸をイソペンテニルピロリン酸に変換する（例えば、メバロン酸二リン酸脱炭酸酵素（ＭＶＤ）ポリペプチドの作用により）；および（ｇ）イソペンテニルピロリン酸（ＩＰＰ）をジメチルアリルピロリン酸（ＤＭＡＰＰ）に変換する（例えば、イソペンテニルピロリン酸イソメラーゼ（ＩＤＩ）ポリペプチドの作用により）（図１および図１１）。次いで、ゲラニル二リン酸合成酵素（ＧＰＰＳ）ポリペプチドがＩＰＰおよび／またはＤＭＡＰＰに作用してＧＰＰを生成する。さらに、ＧＰＰを生成する、またはＧＰＰを生成する生合成経路の一部であるポリペプチドは、ＭＥＶ経路に存在するポリペプチドの代わりに、デオキシキシルロース−５−リン酸（ＤＸＰ）経路に存在するポリペプチドの少なくとも１つの活性を有する１つまたは複数のポリペプチドであり得る（図１）。
【００６３】
ヘキサノイル−ＣｏＡを生成するポリペプチドには、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチド（例えば、ヘキサノイル−ＣｏＡシンターゼ（ＨＣＳ）ポリペプチド、アシル活性化酵素ポリペプチド、脂肪酸アシル−ＣｏＡシンテターゼポリペプチドまたは脂肪酸アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチド）が含まれ得る。ヘキサノイル−ＣｏＡは、アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）ポリペプチドなどのマロニル−ＣｏＡを生成する１つまたは複数のポリペプチドを含む経路を通しても生成され得る。さらに、ヘキサノイル−ＣｏＡは、ヘキサノイル−ＣｏＡを生成する生合成経路の一部である１つまたは複数のポリペプチドで生成され得るが、これにはそれだけに限らないが、マロニルＣｏＡ−アシルキャリアタンパク質トランスアシラーゼ（ＭＣＴ１）ポリペプチド、ＰａａＨ１ポリペプチド、Ｃｒｔポリペプチド、ＴｅｒポリペプチドおよびＢｋｔＢポリペプチド；ＭＣＴ１ポリペプチド、ＰｈａＢポリペプチド、ＰｈａＪポリペプチド、ＴｅｒポリペプチドおよびＢｋｔＢポリペプチド；短鎖脂肪酸アシル−ＣｏＡチオエステラーゼ（ＳＣＦＡ−ＴＥ）ポリペプチド；または脂肪酸合成酵素（ＦＡＳ）ポリペプチドが含まれる（図１および図１１参照）。ヘキサノイル−ＣｏＡ誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシルＣｏＡ化合物誘導体も、このような経路およびポリペプチドを介して形成され得る。
【化２】
2020517293.tif 000003
【００６４】
ＧＰＰおよびヘキサノイル−ＣｏＡはまた、アセチル−ＣｏＡの２つの分子を縮合してアセトアセチル−ＣｏＡおよびピルビン酸からアセチル−ＣｏＡを生成するピルビン酸デヒドロゲナーゼ複合体ポリペプチドを生成するポリペプチドを含む経路を通して生成され得る（図１および図１１参照）。ヘキサノイルＣｏＡ誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体も、このような経路を介して形成され得る。
【００６５】
一般的な情報：  本開示の実施は、特に指示しない限り、当業者の技能の範囲内である、分子生物学（組換え技術を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学および免疫学の従来の技術を使用する。このような技術は、文献で完全に説明されている：“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，”ｓｅｃｏｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９）；“Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ，ｅｄ．，１９８４）；“Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ”（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．，１９８７）；“Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ”（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）；“Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ”（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９８７および定期的な更新）；“ＰＣＲ：Ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ，”（Ｍｕｌｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９４）。Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２ｎｄ  ｅｄ．，Ｊ．Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．１９９４）、およびＭａｒｃｈ，Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ４ｔｈ  ｅｄ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．１９９２）は、当業者に、本出願で使用される用語の多くの一般的な案内を提供する。
【００６６】
本明細書で使用される「カンナビノイド」または「カンナビノイド化合物」は、これまでにアサ（Ｃａｎｎａｂｉｓ  ｓａｔｉｖａ）のみに見られる独特のメロテルペノイドのクラスのメンバーを指し得る。カンナビノイドには、それだけに限らないが、カンナビクロメン（ＣＢＣ）型（例えば、カンナビクロメン酸）、カンナビゲロール（ＣＢＧ）型（例えば、カンナビゲロール酸）、カンナビジオール（ＣＢＤ）型（例えば、カンナビジオール酸）、Δ９−トランス−テトラヒドロカンナビノール（Δ９−ＴＨＣ）型（例えば、Δ９−テトラヒドロカンナビノール酸）、Δ８−トランス−テトラヒドロカンナビノール（Δ８−ＴＨＣ）型、カンナビシクロール（ＣＢＬ）型、カンナビエルソイン（ＣＢＥ）型、カンナビノール（ＣＢＮ）型、カンナビノジオール（ＣＢＮＤ）型、カンナビトリオール（ＣＢＴ）型、カンナビゲロール酸（ＣＢＧＡ）、カンナビゲロール酸モノメチルエーテル（ＣＢＧＡＭ）、カンナビゲロール（ＣＢＧ）、カンナビゲロールモノメチルエーテル（ＣＢＧＭ）、カンナビゲロバリン酸（ＣＢＧＶＡ）、カンナビゲロバリン（ＣＢＧＶ）、カンナビクロメン酸（ＣＢＣＡ）、カンナビクロメン（ＣＢＣ）、カンナビクロメバリン酸（ＣＢＣＶＡ）、カンナビクロメバリン（ＣＢＣＶ）、カンナビジオール酸（ＣＢＤＡ）、カンナビジオール（ＣＢＤ）、カンナビジオールモノメチルエーテル（ＣＢＤＭ）、カンナビジオール−Ｃ４（ＣＢＤ−Ｃ４）、カンナビジバリン酸（ＣＢＤＶＡ）、カンナビジバリン（ＣＢＤＶ）、カンナビジオールコール（ｃａｎｎａｂｉｄｉｏｒｃｏｌ）（ＣＢＤ−Ｃ１）、Δ９−テトラヒドロカンナビノール酸Ａ（ＴＨＣＡ−Ａ）、Δ９−テトラヒドロカンナビノール酸Ｂ（ＴＨＣＡ−Ｂ）、Δ９−テトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）、Δ９−テトラヒドロカンナビノール酸−Ｃ４（ＴＨＣＡ−Ｃ４）、Δ９−テトラヒドロカンナビノール−Ｃ４（ＴＨＣ−Ｃ４）、Δ９−テトラヒドロカンナビバリン酸（ＴＨＣＶＡ）、Δ９−テトラヒドロカンナビバリン（ＴＨＣＶ）、Δ９−テトラヒドロカンナビオールコール酸（ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｃａｎｎａｂｉｏｒｃｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）（ＴＨＣＡ−Ｃ１）、Δ９−テトラヒドロカンナビオールコール（ＴＨＣ−Ｃ１）、Δ７−シス−イソ−テトラヒドロカンナビバリン、Δ８−テトラヒドロカンナビノール酸（Δ８−ＴＨＣＡ）、Δ８−テトラヒドロカンナビノール（Δ８−ＴＨＣ）、カンナビシクロール酸（ＣＢＬＡ）、カンナビシクロール（ＣＢＬ）、カンナビシクロバリン（ＣＢＬＶ）、カンナビエルソイン酸Ａ（ＣＢＥＡ−Ａ）、カンナビエルソイン酸Ｂ（ＣＢＥＡ−Ｂ）、カンナビエルソイン（ＣＢＥ）、カンナビエルソイン酸酸、カンナビシトラン酸、カンナビノール酸（ＣＢＮＡ）、カンナビノール（ＣＢＮ）、カンナビノールメチルエーテル（ＣＢＮＭ）、カンナビノール−Ｃ４（ＣＢＮ−Ｃ４）、カンナビバリン（ＣＢＶ）、カンナビノール−Ｃ２（ＣＮＢ−Ｃ２）、カンナビオールコール（ＣＢＮ−Ｃ１）、カンナビノジオール（ＣＢＮＤ）、カンナビノジバリン（ＣＢＶＤ）、カンナビトリオール（ＣＢＴ）、１０−エトキシ−９−ヒドロキシ−δ−６ａ−テトラヒドロカンナビノール、８，９−ジヒドロキ���ル−δ−６ａ−テトラアヒドロカンナビノール、カンナビトリオールバリン（ＣＢＴＶＥ）、デヒドロカンナビフラン（ＤＣＢＦ）、カンナビフラン（ＣＢＦ）、カンナビクロマノン（ＣＢＣＮ）、カンナビシトラン（ＣＢＴ）、１０−オキソ−δ−６ａ−テトラヒドロカンナビノール（ＯＴＨＣ）、δ−９−シス−テトラヒドロカンナビノール（シス−ＴＨＣ）、３，４，５，６−テトラヒドロ−７−ヒドロキシ−α−α−２−トリメチル−９−ｎ−プロピル−２，６−メタノ−２Ｈ−１−ベンゾオキソシン−５−メタノール（ＯＨ−イソ−ＨＨＣＶ）、カンナビリプソール（ｃａｎｎａｂｉｒｉｐｓｏｌ）（ＣＢＲ）およびトリヒドロキシ−δ−９−テトラヒドロカンナビノール（トリＯＨ−ＴＨＣ）が含まれ得る。
【００６７】
本明細書で使用される「カンナビノイド前駆体」は、「マザーカンナビノイド」であるカンナビゲロール酸（ＣＢＧＡ）の産生前のカンナビノイド生合成経路に存在する任意の中間体を指し得る。カンナビノイド前駆体には、それだけに限らないが、ＧＰＰ、オリベトール酸、ヘキサノイル−ＣｏＡ、ピルビン酸、アセトアセチル−ＣｏＡ、ブチリル−ＣｏＡ、アセチル−ＣｏＡ、ＨＭＧ−ＣｏＡ、メバロン酸、メバロン酸−５−リン酸、メバロン酸二リン酸およびマロニル−ＣｏＡが含まれ得る。
【００６８】
本明細書に詳述されるアシル−ＣｏＡ化合物は、以下の構造を有する化合物を含み得る：
【化３】
2020517293.tif 000004
（式中、Ｒは、本明細書に開示される１つまたは複数の官能基および／または反応性基を含んでいてもよい脂肪酸側鎖である（すなわち、アシル−ＣｏＡ化合物誘導体）。
【００６９】
本明細書で使用される場合、ヘキサノイルＣｏＡ誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物誘導体、カンナビノイド誘導体またはカンナビノイド前駆体誘導体（例えば、オリベトール酸誘導体）は、本明細書に開示される遺伝子組換え宿主細胞によって、または本明細書に開示されるポリペプチドの１つもしくは複数を含む無細胞反応混合物で産生され、１つまたは複数の官能基および／または反応性基を含むヘキサノイルＣｏＡ、アシル−ＣｏＡ化合物、カンナビノイドまたはカンナビノイド前駆体（例えば、オリベトール酸）を指し得る。官能基には、それだけに限らないが、アジド、ハロ（例えば、塩化物、臭化物、ヨウ化物、フッ素）、メチル、アルキル（分岐および直鎖アルキル基を含む）、アルキニル、アルケニル、メトキシ、アルコキシ、アセチル、アミノ、カルボキシル、カルボニル、オキソ、エステル、ヒドロキシル、チオ、シアノ、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキルアルケニル、シクロアルキルアルキニル、シクロアルケニルアルキル、シクロアルケニルアルケニル、シクロアルケニルアルキニル、ヘテロシクリルアルケニル、ヘテロシクリルアルキニル、ヘテロアリールアルケニル、ヘテロアリールアルキニル、アリールアルケニル、アリールアルキニル、ヘテロシクリル、スピロシクリル、ヘテロスピロシクリル、チオアルキル、スルホン、スルホニル、スルホキシド、アミド、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、アルキルアリールアミノ、ジアリールアミノ、Ｎ−オキシド、イミド、エナミン、イミン、オキシム、ヒドラゾン、ニトリル、アラルキル、シクロアルキルアルキル、ハロアルキル、ヘテロシクリルアルキル、ヘテロアリールアルキル、ニトロ、チオキソなどが含まれ得る。例えば、図１２および図１３を参照されたい。適切な反応性基には、それだけに限らないが、アジド、カルボキシル、カルボニル、アミン（例えば、アルキルアミン（例えば、低級アルキルアミン）、アリールアミン）、ハロゲン化物、エステル（例えば、アルキルエステル（例えば、低級アルキルエステル、ベンジルエステル）、アリールエステル、置換アリールエステル）、シアノ、チオエステル、チオエーテル、ハロゲン化スルホニル、アルコール、チオール、スクシンイミジルエステル、イソチオシアネート、ヨードアセトアミド、マレイミド、ヒドラジン、アルキニル、アルケニルなどが含まれ得る。反応性基は、目的の分子の共有結合を促進し得る。目的の適切な分子には、それだけに限らないが、検出可能な標識；イメージング剤；毒素（細胞毒を含む）；リンカー；ペプチド；薬物（例えば、低分子薬物）；特定の結合対のメンバー；エピトープタグ；標的受容体による結合のためのリガンド；精製を助けるタグ；溶解度を高める分子；生物学的利用能を高める分子；インビボ半減期を延長する分子；特定の細胞型を標的化する分子；特定の組織を標的化する分子；血液脳関門の横断をもたらす分子；表面への選択的付着を促進する分子；等が含まれ得る。官能基および反応性基は、１つまたは複数の追加の官能基または反応性基で置換されてもよい。
【００７０】
本明細書に開示される遺伝子組換え宿主細胞によって、または本明細書に開示されるポリペプチドの１つもしくは複数を含む無細胞反応混合物中で産生されるカンナビノイド誘導体またはカンナビノイド前駆体誘導体はまた、天然に存在するカンナビノイドまたは１つもしくは複数の化学部分を欠く天然に存在しないカンナビノイド前駆体を指し得る。このような化学部分には、それだけに限らないが、メチル、アルキル、アルケニル、メトキシ、アルコキシ、アセチル、カルボキシル、カルボニル、オキソ、エステル、ヒドロキシル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキルアルケニル、シクロアルケニルアルキル、シクロアルケニルアルケニル、ヘテロシクリルアルケニル、ヘテロアリールアルケニル、アリールアルケニル、ヘテロシクリル、アラルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルアルキル、ヘテロアリールアルキルなどが含まれ得る。いくつかの実施形態では、天然に存在するカンナビノイドまたは天然に存在するカンナビノイド前駆体に見られる１つまたは複数の化学部分を欠き、本明細書に開示される遺伝子組換え宿主細胞によって、または本明細書に開示されるポリペプチドの１つもしくは複数を含む無細胞反応混合物中で産生されるカンナビノイド誘導体またはカンナビノイド前駆体誘導体がまた、本明細書に記載される官能基および／または反応性基のいずれかのうちの１つまたは複数を含み得る。官能基および反応性基は、１つまたは複数の追加の官能基または反応性基で置換されてもよい。
【００７１】
本明細書で使用される「核酸」という用語は、リボヌクレオチドまたはデオキシヌクレオチドのいずれかの、任意の長さのヌクレオチドのポリマー形態を指し得る。よって、この用語には、それだけに限らないが、一本鎖、二本鎖もしくは多重鎖のＤＮＡもしくはＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、遺伝子、合成ＤＮＡもしくはＲＮＡ、ＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッド、またはプリンおよびピリミジン塩基もしくは他の天然に存在する、化学的もしくは生化学的に修飾された、天然に存在しない、もしくは誘導体化されたヌクレオチド塩基を含むポリマーが含まれ得る。
【００７２】
「ペプチド」、「ポリペプチド」および「タンパク質」という用語は、本明細書で互換的に使用され、コード化および非コード化アミノ酸、化学的もしくは生化学的に修飾もしくは誘導体化されたアミノ酸、完全長ポリペプチド、ポリペプチドの断片または修飾ペプチド骨格を有するポリペプチドを含むことができる任意の長さのアミノ酸のポリマー形態を指し得る。本明細書に開示されるポリペプチドは、列挙された活性を保持する、切断型または融合形態を含む、修飾または操作された形態として提供され得る。本明細書に開示されるポリペプチドはまた、アミノ酸の挿入、欠失、突然変異、および／または置換により、具体的に列挙される「参照」ポリペプチド（例えば、野生型ポリペプチド）とは異なるが、参照ポリペプチドと実質的に同様の活性を保持する変異体であり得る。
【００７３】
本明細書で使用される場合、「異種」という用語は、自然では通常見られないものを指し得る。「異種ヌクレオチド配列」という用語は、自然の所定の細胞では通常見られないヌクレオチド配列を指し得る。よって、異種ヌクレオチド配列は以下であり得る：（ａ）その宿主細胞に対して外来性である（すなわち、細胞に対して「外因性」である）；（ｂ）宿主細胞に自然に見られる（すなわち、「内因性」である）が、細胞中に不自然な量で存在する（すなわち、宿主細胞に自然に見られるよりも多いまたは少ない量）；または（ｃ）宿主細胞内に自然に見られるが、その自然な場所の外側に位置する。「異種酵素」または「異種ポリペプチド」という用語は、自然の所定の細胞では通常見られない酵素またはポリペプチドを指し得る。この用語は、以下の酵素またはポリペプチドを包含する：（ａ）所与の細胞に対して外因性である（すなわち、宿主細胞に自然に存在しない、または宿主細胞に所与の状況で自然に存在しない核酸によってコードされる）；および（ｂ）宿主細胞に自然に見られる（例えば、酵素またはポリペプチドが、細胞に対して内因性である核酸によってコードされる）が、宿主細胞中で。不自然な量（例えば、自然に見られるよりも多いまたは少ない）で産生される。よって、異種核酸は以下であり得る：（ａ）その宿主細胞に対して外来性である（すなわち、細胞に対して「外因性」である）；（ｂ）宿主細胞に自然に見られる（すなわち、「内因性」である）が、細胞中に不自然な量で存在する（すなわち、宿主細胞に自然に見られるよりも多いまたは少ない量）；または（ｃ）宿主細胞内に自然に見られるが、その自然な場所の外側に位置する。
【００７４】
「作動可能に連結している」とは、そのように記載される成分がそれらの通常の機能を実施するように構成されている要素の配置を指し得る。よって、コード配列に作動可能に連結している制御配列は、コード配列の発現をもたらすことができる。制御配列は、その発現を指示するように機能する限り、コード配列と隣接している必要はない。よって、例えば、介在する翻訳されないが転写される配列が、プロモーター配列とコード配列の間に存在することができ、プロモーター配列を依然としてコード配列と「作動可能に連結している」とみなすことができる。
【００７５】
「単離」とは、その自然状態で通常付随する成分を実質的または本質的に含まないポリペプチドまたは核酸を指し得る。単離ポリペプチドまたは核酸は、自然に見られる形態または設定以外のものであってもよい。したがって、単離ポリペプチドおよび核酸は、天然の細胞に存在するポリペプチドおよび核酸と区別され得る。単離核酸またはポリペプチドは、そのような成分が存在する場合には、単離核酸またはポリペプチドとの混合物中の１つまたは複数の他の成分からさらに精製され得る。
【００７６】
「遺伝子組換え宿主細胞」（「組換え宿主細胞」とも呼ばれる）は、異種核酸、例えば発現ベクターまたは構築物が導入された宿主細胞である。例えば、原核宿主細胞は、異種核酸、例えば原核宿主細胞にとって外来性の（自然では通常は見られない）外因性核酸、または原核宿主細胞に通常は見られない組換え核酸を適切な原核宿主細胞に導入することによる遺伝子組換え原核宿主細胞（例えば、細菌）であり；真核宿主細胞は、異種核酸、例えば真核宿主細胞にとって外来性の外因性核酸、または真核宿主細胞に通常は見られない組換え核酸を適切な真核宿主細胞に導入することによる遺伝子組換え真核宿主細胞である。
【００７７】
本明細書で使用される場合、「無細胞系」とは、調製物中の細胞の実質的に全てが破壊または処理されて、結果として全てまたは選択された細胞成分、例えば細胞小器官、タンパク質、核酸、細胞膜自体（またはその断片もしくは成分）などが、細胞から放出されている、または適切な培地に再懸濁されている、および／または細胞環境から精製されている細胞溶解物、細胞抽出物または他の調製物を指し得る。無細胞系には、精製または単離ポリペプチドならびに適切な試薬および緩衝液から調製された反応混合物が含まれ得る。
【００７８】
いくつかの実施形態では、ポリペプチドの三次元構造または機能を破壊することなく、ポリペプチドのアミノ酸配列に保存的置換を行うことができる。保存的置換は、アミノ酸を互いに類似の疎水性、極性およびＲ鎖長で置換することによって、当業者によって達成され得る。さらに、異なる種の相同タンパク質の整列配列を比較することによって、コードされたタンパク質の基本的機能を変化させることなく種間で突然変異したアミノ酸残基を位置決めすることによって、保存的置換を特定することができる。「保存的アミノ酸置換」という用語は、類似の側鎖を有するアミノ酸残基のタンパク質における互換性を指し得る。例えば、脂肪族側鎖を有するアミノ酸の群は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシンからなり；脂肪族ヒドロキシル側鎖を有するアミノ酸の群は、セリンおよびスレオニンからなり；アミド含有側鎖を有するアミノ酸の群は、アスパラギンおよびグルタミンからなり；芳香族側鎖を有するアミノ酸の群は、フェニルアラニン、チロシンおよびトリプトファンからなり；塩基性側鎖を有するアミノ酸の群は、リジン、アルギニンおよびヒスチジンからなり；酸性側鎖を有するアミノ酸の群は、グルタミン酸およびアスパラギン酸からなり；硫黄含有側鎖を有するアミノ酸の群は、システインおよびメチオニンからなる。代表的な保存的アミノ酸置換基は、バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リジン−アルギニン、アラニン−バリンおよびアスパラギン−グルタミンである。
【００７９】
ポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、別のポリヌクレオチドまたはポリペプチドに対して一定の「配列同一性」％を有し、これは整列させると、２つの配列を比較した場合に、塩基またはアミノ酸の割合が同じであり、同じ相対位置にあることを意味する。配列同一性は、いくつかの異なる様式で決定することができる。配列同一性を決定するために、ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｌｉ．ｇｏｖ／ＢＬＡＳＴ、ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｍｓａ／ｔｃｏｆｆｅｅ／ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｍｓａ／ｍｕｓｃｌｅ／ｍａｆｆｔ．ｃｂｒｃ．ｊｐ／ａｌｉｇｎｍｅｎｔ／ｓｏｆｔｗａｒｅ／を含むサイトでワールドワイドウェブ上で入手可能な種々の方法およびコンピュータープログラム（例えば、ＢＬＡＳＴ、Ｔ−ＣＯＦＦＥＥ、ＭＵＳＣＬＥ、ＭＡＦＦＴ等）を使用して配列を整列させることができる。例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０），Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−１０を参照されたい。
【００８０】
本開示をさらに説明する前に、本開示は説明される特定の実施形態に限定されず、したがって当然、変化し得ることを理解されたい。また、本開示の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ制限されるので、本明細書で使用される用語は特定の実施形態を説明することのみを目的としており、限定を意図するものではないことも理解されたい。
【００８１】
値の範囲が提供される場合、文脈が特に明記しない限り、その範囲の上限と下限との間の下限の単位の１０分の１までの各介在値、およびその言及される範囲内の任意の他の言及される値または介在値が本開示内に包含されることが理解される。これらのより小さな範囲の上限および下限は、より小さな範囲に独立に含まれ得、また言及される範囲内の具体的に除外された限界値を条件として、本開示内に包含される。言及される範囲が限界値の一方または両方を含む場合、これらのいずれかまたは両方を除外した範囲も本開示に含まれる。
【００８２】
特に定義しない限り、本明細書で使用される全ての技術的および科学的用語は、本開示が属する分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと類似または等価のいずれの方法および材料も本開示の実施または試験に使用することができるが、好ましい方法および材料をここで記載する。本明細書で言及される全ての刊行物が、その刊行物が引用されることに関連して方法および／または材料を開示および説明するために参照により本明細書に組み込まれる。
【００８３】
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈上別段の意味を有することが明らかな場合を除き、複数指示対象を含み得ることに留意しなければならない。したがって、例えば、「カンナビノイド化合物」または「カンナビノイド」への言及には複数のこのような化合物が含まれ、「遺伝子組換え宿主細胞」への言及には１つまたは複数の遺伝子組換え宿主細胞および当業者に知られているその等価物などへの言及が含まれ得る。請求項は、任意の要素を除外するように草案され得ることにさらに留意されたい。よって、この記述は、請求項要素の列挙、または「否定的な」制限の使用に関連して、「唯一」、「のみ」などの排他的な用語の使用に先行した基礎として働くことを意図している。
【００８４】
明確にするため、別個の実施形態の文脈で記載される本開示の一定の特徴は、単一の実施形態で組み合わせて提供することもできることが理解される。逆に、簡潔にするため、単一の実施形態の文脈で記載される本開示の種々の特徴は、個別にまたは任意の適切な部分的組合せで提供することもできる。本開示に関連する実施形態の全ての組合わせは、あたかも各々のおよびあらゆる組合わせが個別的かつ明示的に開示されているかのように、本開示によって具体的に包含され、本明細書に開示される。さらに、種々の実施形態およびその要素の全ての部分的組合せも、あたかも各々のおよびあらゆるこのような部分的組合せが本明細書に個別的かつ明示的に開示されているかのように、本開示によって具体的に包含され、本明細書に開示される。
【００８５】
ゲラニルピロリン酸：オリベトール酸ゲラニルトランスフェラーゼポリペプチドおよび前記ポリペプチドをコードする核酸：  本明細書に記載されるように、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒するための新規なポリペプチドが同定され、特徴付けられている。驚くべきことに、本開示のこれらの新たなポリペプチドは、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒する以前に発見されたアサ属ポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量のＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる（例えば、米国特許出願公開番号、米国特許出願公開第２０１２０１４４５２３号明細書およびそこに開示されているＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ１；本明細書の配列番号８２参照）。ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒する本開示の新たなポリペプチドは、新たなゲラニルピロリン酸：オリベトール酸ゲラニルトランスフェラーゼ（ＧＯＴ）ポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドおよびその切断型である。本開示のこれらの新たなポリペプチドは、カンナビノイドおよびカンナビノイド誘導体をインビボ（例えば、遺伝子組換え宿主細胞内）およびインビトロ（例えば、無細胞）で生成することができる。
【００８６】
これらの新たなＧＯＴポリペプチド、ならびに前記ＧＯＴポリペプチドをコードする核酸は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生するための本開示の方法および遺伝子組換え宿主細胞で有用である。いくつかの実施形態では、本開示のＧＯＴポリペプチドが、５−ゲラニルオリベトール酸の産生を触媒することができない。
【００８７】
ＣｓＰＴ４ポリペプチドは、同様にＧＯＴポリペプチドである以前に同定されたＣｓＰＴ１ポリペプチドとは配列および活性が著しく異なる。ＣｓＰＴ１ポリペプチドは、ＣｓＰＴ４ポリペプチドとわずか５７％の相同性を有する。さらに、ＣｓＰＴ１ポリペプチドとは異なり、ＣｓＰＴ４ポリペプチドまたはその切断型の活性は、本開示の遺伝子組換え宿主細胞で容易に再構成され、遺伝子組換え宿主細胞によるカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体の産生を可能にすることができる。ＣｓＰＴ４ポリペプチドの切断型、配列番号１１０に示されるアミノ酸配列（完全長ＣｓＰＴ４ポリペプチドアミノ酸配列）のＮ末端アミノ酸１〜７６を欠くＣｓＰＴ４ｔポリペプチドは、完全長ＣｓＰＴ４ポリペプチドの活性と同様の活性で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を容易に触媒することが分かった。しかしながら、Ｎ末端アミノ酸１〜１１２を欠く（配列番号２１１）、１〜１３１を欠く（配列番号２１３）、１〜１４２を欠く（配列番号２１５）、１〜１６６を欠く（配列番号２１７）または１〜１８６を欠く（配列番号２１９）ＣｓＰＴ４ポリペプチドの他の切断型は、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の形成を触媒することができず、これらの切断型ポリペプチドは触媒活性に必要な残基を欠いていることを示唆した。
【００８８】
驚くべきことに、ＣｓＰＴ４ポリペプチドまたはその切断型は、広範な基質特異性を有し、カンナビノイドだけでなく、カンナビノイド誘導体の生成も可能にすることが分かった。この広範な特異性のため、ＴＫＳおよびＯＡＣポリペプチドにより本明細書に開示される遺伝子組換え宿主細胞で産生されるオリベトール酸またはその誘導体を、ＣｓＰＴ４ポリペプチドまたはその切断型によって利用して、カンナビノイドおよびカンナビノイド誘導体を得ることができる。あるいは、オリベトール酸またはその誘導体を、ＣｓＰＴ４ポリペプチドまたはその切断型を含む本明細書に開示される遺伝子組換え宿主細胞に供給して、カンナビノイドおよびカンナビノイド誘導体を得ることができる。次いで、カンナビノイドおよびカンナビノイド誘導体を、ＣＢＤＡまたはＴＨＣＡシンターゼポリペプチドを介して他のカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体に変換することができる。
【００８９】
ＧＯＴポリペプチドをコードする単離または精製核酸：  本開示のいくつかの実施形態は、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量のＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができるＧＯＴポリペプチドをコードする単離または精製核酸に関する。
【００９０】
本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００に示されるアミノ酸配列を含む、ＧＯＴポリペプチド、切断型ＣｓＰＴ４ポリペプチド（ＣｓＰＴ４ｔポリペプチド、配列番号１１０に示されるアミノ酸配列のＮ末端アミノ酸１〜７６を欠く）をコードする単離または精製核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする単離または精製核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００と少なくとも６５％、少なくとも７０％または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする単離または精製核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする単離または精製核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする単離または精製核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００と少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする単離または精製核酸に関する。
【００９１】
本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００と少なくとも６５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする単離または精製核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００と少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする単離または精製核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００と少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする単離または精製核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００と少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする単離または精製核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００と少なくとも６５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む、ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする単離または精製核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００と少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む、ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする単離または精製核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００と少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む、ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする単離または精製核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００と少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む、ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする単離または精製核酸に関する。
【００９２】
本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０に示されるアミノ酸配列を含む完全長ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする単離または精製核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする単離または精製核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０と少なくとも６５％、少なくとも７０％または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする単離または精製核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする単離または精製核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする単離または精製核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０と少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする単離または精製核酸に関する。
【００９３】
本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０と少なくとも６５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする単離または精製核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０と少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする単離または精製核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０と少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする単離または精製核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０と少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする単離または精製核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０と少なくとも６５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む、ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする単離または精製核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０と少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む、ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする単離または精製核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０と少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む、ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする単離または精製核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０と少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む、ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする単離または精製核酸に関する。
【００９４】
本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１１に示されるヌクレオチド配列を含む単離または精製ＣｓＰＴ４核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１１に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む単離または精製ＣｓＰＴ４核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１１と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む単離または精製ＣｓＰＴ４核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１１と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む単離または精製ＣｓＰＴ４核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１１と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む単離または精製ＣｓＰＴ４核酸に関する。
【００９５】
本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１１と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む単離または精製ＣｓＰＴ４核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１１と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む単離または精製ＣｓＰＴ４核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１１と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む単離または精製ＣｓＰＴ４核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１１と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む単離または精製ＣｓＰＴ４核酸に関する。
【００９６】
本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２５に示されるヌクレオチド配列を含む単離または精製ＣｓＰＴ４核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２５に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む単離または精製ＣｓＰＴ４核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２５と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む単離または精製ＣｓＰＴ４核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２５と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む単離または精製ＣｓＰＴ４核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２５と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む単離または精製ＣｓＰＴ４核酸に関する。
【００９７】
本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２５と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む単離または精製ＣｓＰＴ４核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２５と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む単離または精製ＣｓＰＴ４核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２５と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む単離または精製ＣｓＰＴ４核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２５と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む単離または精製ＣｓＰＴ４核酸に関する。
【００９８】
本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２４に示されるヌクレオチド配列を含む単離または精製ＣｓＰＴ４ｔ核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２４に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む単離または精製ＣｓＰＴ４ｔ核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２４と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む単離または精製ＣｓＰＴ４ｔ核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２４と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む単離または精製ＣｓＰＴ４ｔ核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２４と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む単離または精製ＣｓＰＴ４ｔ核酸に関する。
【００９９】
本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２４と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む単離または精製ＣｓＰＴ４ｔ核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２４と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む単離または精製ＣｓＰＴ４ｔ核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２４と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む単離または精製ＣｓＰＴ４ｔ核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２４と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む単離または精製ＣｓＰＴ４ｔ核酸に関する。
【０１００】
本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２１に示されるヌクレオチド配列を含む単離または精製ＣｓＰＴ４ｔ核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２１に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む単離または精製ＣｓＰＴ４ｔ核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２１と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む単離または精製ＣｓＰＴ４ｔ核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２１と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む単離または精製ＣｓＰＴ４ｔ核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２１と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む単離または精製ＣｓＰＴ４ｔ核酸に関する。
【０１０１】
本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２１と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む単離または精製ＣｓＰＴ４ｔ核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２１と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む単離または精製ＣｓＰＴ４ｔ核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２１と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む単離または精製ＣｓＰＴ４ｔ核酸に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２１と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む単離または精製ＣｓＰＴ４ｔ核酸に関する。
【０１０２】
ここに開示される核酸にハイブリダイズする核酸がさらに含まれる。本明細書に開示されるポリペプチドをコードする核酸中に存在するヌクレオチド配列と少なくとも９０％、９５％または９７％の配列同一性があればハイブリダイゼーションが起こるという点で、ハイブリダイゼーション条件はストリンジェントであり得る。ストリンジェントな条件には、例えば、５０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ（１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１５ｍＭクエン酸三ナトリウム）、５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）、５×デンハルト溶液、１０％デキストラン硫酸および２０μｇ／ｍｌ変性断片化処理済サケ精子ＤＮＡを含む溶液中、４２℃で一晩のインキュベーション、引き続いて０．１×ＳＳＣ中約６５℃でのハイブリダイゼーション支持体の洗浄などの既知のサザンハイブリダイゼーションに使用されているものが含まれ得る。他の既知のハイブリダイゼーション条件は周知であり、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（２００１）に記載されている。
【０１０３】
本明細書に開示される核酸の長さは、意図した用途に依存し得る。例えば、意図した用途が、例えばＰＣＲ増幅またはライブラリーのスクリーニングのためのプライマーまたはプローブとしてである場合、核酸の長さは全長配列未満、例えば１５〜５０ヌクレオチドとなる。一定のこのような実施形態では、プライマーまたはプローブが、ヌクレオチド配列の高度に保存された領域と実質的に同一であっても、ヌクレオチド配列の５’または３’末端のいずれかと実質的に同一であってもよい。場合によっては、これらのプライマーまたはプローブが、「実質的に同一」であるが、依然として配列認識の柔軟性を提供するようにいくつかの位置でユニバーサル塩基を使用し得る。適切なプライマーおよびプローブのハイブリダイゼーション条件が当技術分野で周知であることは注目に値する。開示される核酸のｃＤＮＡ分子も含まれる。
【０１０４】
分離または精製ＧＯＴポリペプチド：  本開示のいくつかの実施形態は、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量のＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる単離または精製ＧＯＴポリペプチドに関する。
【０１０５】
本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００に示されるアミノ酸配列を含む単離または精製ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む単離または精製ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００と少なくとも６５％、少なくとも７０％または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離または精製ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離または精製ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離または精製ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００と少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離または精製ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドに関する。
【０１０６】
本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００と少なくとも６５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離または精製ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００と少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離または精製ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００と少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離または精製ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００と少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離または精製ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００と少なくとも６５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む、単離または精製ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００と少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む、単離または精製ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００と少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む、単離または精製ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００と少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む、単離または精製ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドに関する。
【０１０７】
本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０に示されるアミノ酸配列を含む単離または精製ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む単離または精製ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０と少なくとも６５％、少なくとも７０％または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離または精製ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離または精製ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離または精製ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０と少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離または精製ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドに関する。
【０１０８】
本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０と少なくとも６５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離または精製ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０と少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離または精製ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０と少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離または精製ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０と少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離または精製ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０と少なくとも６５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む、単離または精製ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０と少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む、単離または精製ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０と少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む、単離または精製ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０と少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む、単離または精製ＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドに関する。
【０１０９】
ＧＯＴポリペプチドをコードする核酸を含むベクター：  本開示のいくつかの実施形態は、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量のＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができるＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含むベクターに関する。
【０１１０】
本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００に示されるアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００と少なくとも６５％、少なくとも７０％または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００と少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含むベクターに関する。
【０１１１】
本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００と少なくとも６５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００と少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００と少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００と少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００と少なくとも６５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００と少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００と少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００と少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含むベクターに関する。
【０１１２】
本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０に示されるアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０と少なくとも６５％、少なくとも７０％または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０と少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含むベクターに関する。
【０１１３】
本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０と少なくとも６５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０と少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０と少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０と少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０と少なくとも６５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０と少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０と少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０と少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含むベクターに関する。
【０１１４】
本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１１に示されるヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１１に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１１と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１１と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１１と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４核酸を含むベクターに関する。
【０１１５】
本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１１と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１１と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１１と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１１と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４核酸を含むベクターに関する。
【０１１６】
本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２５に示されるヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２５に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２５と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２５と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２５と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４核酸を含むベクターに関する。
【０１１７】
本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２５と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２５と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２５と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２５と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４核酸を含むベクターに関する。
【０１１８】
本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２１に示されるヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４ｔ核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２１に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４ｔ核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２１と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４ｔ核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２１と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４ｔ核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２１と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４ｔ核酸を含むベクターに関する。
【０１１９】
本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２１と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４ｔ核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２１と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４ｔ核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２１と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４ｔ核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２１と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４ｔ核酸を含むベクターに関する。
【０１２０】
本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２４に示されるヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４ｔ核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２４に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４ｔ核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２４と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４ｔ核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２４と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４ｔ核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２４と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４ｔ核酸を含むベクターに関する。
【０１２１】
本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２４と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４ｔ核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２４と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４ｔ核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２４と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４ｔ核酸を含むベクターに関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２４と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４ｔ核酸を含むベクターに関する。
【０１２２】
ＧＯＴポリペプチドをコードする核酸を含む発現構築物：  本開示のいくつかの実施形態は、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量のＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができるＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含む発現構築物に関する。
【０１２３】
本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００に示されるアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００と少なくとも６５％、少なくとも７０％または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００と少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含む発現構築物に関する。
【０１２４】
本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００と少なくとも６５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００と少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００と少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００と少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００と少なくとも６５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００と少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００と少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１００と少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含む発現構築物に関する。
【０１２５】
本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０に示されるアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０と少なくとも６５％、少なくとも７０％または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０と少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含む発現構築物に関する。
【０１２６】
本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０と少なくとも６５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０と少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０と少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０と少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０と少なくとも６５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０と少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０と少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１０と少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチド、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含む発現構築物に関する。
【０１２７】
本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１１に示されるヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１１に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１１と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１１と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１１と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４核酸を含む発現構築物に関する。
【０１２８】
本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１１と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１１と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１１と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号１１１と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４核酸を含む発現構築物に関する。
【０１２９】
本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２５に示されるヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２５に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２５と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２５と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２５と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４核酸を含む発現構築物に関する。
【０１３０】
本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２５と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２５と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２５と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２５と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４核酸を含む発現構築物に関する。
【０１３１】
本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２１に示されるヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４ｔ核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２１に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４ｔ核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２１と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４ｔ核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２１と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４ｔ核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２１と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４ｔ核酸を含む発現構築物に関する。
【０１３２】
本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２１と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４ｔ核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２１と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４ｔ核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２１と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４ｔ核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２１と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４ｔ核酸を含む発現構築物に関する。
【０１３３】
本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２４に示されるヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４ｔ核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２４に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４ｔ核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２４と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４ｔ核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２４と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４ｔ核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２４と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４ｔ核酸を含む発現構築物に関する。
【０１３４】
本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２４と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４ｔ核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２４と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４ｔ核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２４と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４ｔ核酸を含む発現構築物に関する。本開示のいくつかの実施形態は、配列番号２２４と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４ｔ核酸を含む発現構築物に関する。
【０１３５】
カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体を産生するためのポリペプチド、核酸および遺伝子組換え宿主細胞：  本開示は、カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体、またはカンナビノイド前駆体誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を提供する。本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、本明細書で開示する１つまたは複数のポリペプチドをコードする、本明細書で開示する１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされてもよい。適切な培地で遺伝子組換え宿主細胞を培養することにより、カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体、またはカンナビノイド前駆体誘導体が回収可能量で合成される。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を提供する。
【０１３６】
また、本開示は核酸を提供し、ここで、該核酸は、微生物（例えば、遺伝子組換え宿主細胞）に導入され、１つまたは複数のポリペプチドの発現または過剰発現を起こすことができ、次いで、カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体、またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生のために、インビトロ（例えば、無細胞）またはインビボで利用することができる。いくつかのそのような実施形態では、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体が産生される。
【０１３７】
カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体、またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生に利用することができる１つまたは複数のポリペプチドを本明細書で開示する。例えば、ＧＯＴポリペプチド、ＣＢＤＡまたはＴＨＣＡシンターゼポリペプチド、ＴＫＳポリペプチド、およびＯＡＣポリペプチドのようなカンナビノイド生合成経路に存在するポリペプチドの活性を少なくとも１つ持つ、１つまたは複数のポリペプチド；メバロン酸（ＭＥＶ）経路に存在するポリペプチドの活性を少なくとも１つ持つ、１つまたは複数のポリペプチド；アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチド（例えば、アシル活性化酵素ポリペプチド、脂肪族アシル−ＣｏＡシンテターゼポリペプチド、または脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチド）；ＧＰＰを生成するポリペプチド；マロニル−ＣｏＡを生成するポリペプチド；アセチル−ＣｏＡの２分子を縮合しアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチド；およびピルビン酸デヒドロゲナーゼ複合体ポリペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。さらに、カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体、またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生に利用することができるポリペプチドは、ＭＥＶ経路のポリペプチドの代わりに、ＤＸＰ経路に存在するポリペプチドの活性を少なくとも１つ持つ、１つまたは複数のポリペプチドであってもよい。
【０１３８】
また、カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体、またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生に利用することができるポリペプチドとして、ヘキサノイル−ＣｏＡシンターゼ（ＨＣＳ）ポリペプチドまたはヘキサノイル−ＣｏＡを産生する生合成経路部の部分である、１つまたは複数のポリペプチドも挙げられ、例えば、ＭＣＴ１ポリペプチド、ＰａａＨ１ポリペプチド、Ｃｒｔポリペプチド、Ｔｅｒポリペプチド、およびＢｋｔＢポリペプチド；ＭＣＴ１ポリペプチド、ＰｈａＢポリペプチド、ＰｈａＪポリペプチド、Ｔｅｒポリペプチド、およびＢｋｔＢポリペプチド；短鎖脂肪族アシル−ＣｏＡチオエステラーゼ（ＳＣＦＡ−ＴＥ）ポリペプチドまたは脂肪酸シンターゼ（ＦＡＳ）ポリペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。ヘキサノイル−ＣｏＡ誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体もそのような経路およびポリペプチドによって形成されてもよい。
【０１３９】
また、カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体、またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生に利用することができるポリペプチドとして、ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨ酸化還元バランスを調節するポリペプチド、ピロリン酸ネリルを生成するポリペプチド、およびＮｐｈＢポリペプチドも挙げられる。
【０１４０】
また、本開示は、前記カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体、またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生に利用することができるポリペプチドをコードする核酸も提供する。また、本開示は、１つまたは複数の前記核酸、およびカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体、またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生に利用することができるポリペプチドを含む遺伝子組換え宿主細胞も提供する。
【０１４１】
ゲラニルピロリン酸：オリベトール酸ゲラニルトランスフェラーゼ（ＧＯＴ）ポリペプチド、核酸、および該ポリペプチドを発現する遺伝子組換え宿主細胞：  いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ゲラニルピロリン酸：オリベトール酸ゲラニルトランスフェラーゼ（ＧＯＴ）ポリペプチドをコードする異種核酸の１つまたは複数で遺伝子組換えされている。
【０１４２】
本明細書で開示する代表的なＧＯＴポリペプチドとして、完全長ＧＯＴポリペプチド、ＧＯＴポリペプチドのフラグメント、ＧＯＴポリペプチドの変異体、切断型ＧＯＴポリペプチド、またはＧＯＴポリペプチドの活性を少なくとも１つ持つ融合ポリペプチドが挙げられる。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、芳香族プレニルトランスフェラーゼ（ＰＴ）活性を持つ。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体を組換える。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドはオリベトール酸またはオリベトール酸誘導体を組換える。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、５−ゲラニルオリベトール酸の産生を触媒することができない。
【０１４３】
いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ＧＯＴポリペプチドコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされ、該ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされ、該ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも２００〜５００倍量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされ、該ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも３０倍、少なくとも４０倍、少なくとも５０倍、少なくとも６０倍、少なくとも７０倍、少なくとも８０倍、少なくとも９０倍、少なくとも１００倍、少なくとも２００倍、少なくとも３００倍、少なくとも４００倍、または少なくとも５００倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされ、該ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０〜５０倍、少なくとも５０〜１００倍、少なくとも１００〜２００倍、少なくとも１００〜３００倍、少なくとも１００〜４００倍、少なくとも２００〜４００倍、少なくとも１００〜５００倍、少なくとも２００〜５００倍、または少なくとも３００〜５００倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。
【０１４４】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００あるいは配列番号１１０に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０１４５】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１２、配列番号８２、配列番号９８、配列番号９９、または配列番号２２３に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１２、配列番号８２、配列番号９８、配列番号９９、あるいは配列番号２２３に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１２、配列番号８２、配列番号９８、配列番号９９、または配列番号２２３と少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０１４６】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１３、配列番号１０１、配列番号１０２、または配列番号１０３に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１３、配列番号１０１、配列番号１０２、あるいは配列番号１０３に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１３、配列番号１０１、配列番号１０２、または配列番号１０３と少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０１４７】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号２１１、配列番号２１３、配列番号２１５、配列番号２１７、または配列番号２１９に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号２１１、配列番号２１３、配列番号２１５、配列番号２１７、あるいは配列番号２１９に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号２１１、配列番号２１３、配列番号２１５、配列番号２１７、または配列番号２１９と少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０１４８】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１２に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１２と少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１２と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１２と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、ｏｒまたは１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０１４９】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１３に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１３と少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１３と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１３と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０１５０】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ１ポリペプチドであり、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ１ポリペプチドであり、配列番号８２に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ１ポリペプチドであり、配列番号８２と少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ１ポリペプチドであり、配列番号８２と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ１ポリペプチドであり、配列番号８２と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０１５１】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、切断型ＣｓＰＴ１（ＣｓＰＴ１＿ｔ７５）ポリペプチドであり、配列番号２２３に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ１＿ｔ７５ポリペプチドであり、配列番号２２３に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ１＿ｔ７５ポリペプチドであり、配列番号２２３と少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ１＿ｔ７５ポリペプチドであり、配列番号２２３と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ１＿ｔ７５ポリペプチドであり、配列番号２２３と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０１５２】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＧＯＴｔ７５ポリペプチドであり、配列番号９８に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＧＯＴｔ７５ポリペプチドであり、配列番号９８に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＧＯＴｔ７５ポリペプチドであり、配列番号９８と少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＧＯＴｔ７５ポリペプチドであり、配列番号９８と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＧＯＴｔ７５ポリペプチドであり、配列番号９８と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０１５３】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＧＯＴｔ３３ポリペプチドであり、配列番号９９に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＧＯＴｔ３３ポリペプチドであり、配列番号９９に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＧＯＴｔ３３ポリペプチドであり、配列番号９９と少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＧＯＴｔ３３ポリペプチドであり、配列番号９９と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＧＯＴｔ３３ポリペプチドであり、配列番号９９と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０１５４】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドであり、配列番号１００に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドであり、配列番号１００に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドであり、配列番号１００と少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドであり、配列番号１００と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドであり、配列番号１００と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドであり、配列番号１００と少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０１５５】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドであり、配列番号１００と少なくとも６５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドであり、配列番号１００と少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドであり、配列番号１００と少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドであり、配列番号１００と少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドであり、配列番号１００と少なくとも６５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドであり、配列番号１００と少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドであり、配列番号１００と少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドであり、配列番号１００と少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。
【０１５６】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ７ｔポリペプチドであり、配列番号１０１に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ７ｔポリペプチドであり、配列番号１０１に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ７ｔポリペプチドであり、配列番号１０１と少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ７ｔポリペプチドであり、配列番号１０１と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ７ｔポリペプチドであり、配列番号１０１と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０１５７】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、Ｈ１ＰＴ１Ｌｔポリペプチドであり、配列番号１０２に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、Ｈ１ＰＴ１Ｌｔポリペプチドであり、配列番号１０２に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、Ｈ１ＰＴ１Ｌｔポリペプチドであり、配列番号１０２と少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、Ｈ１ＰＴ１Ｌｔポリペプチドであり、配列番号１０２と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、Ｈ１ＰＴ１Ｌｔポリペプチドであり、配列番号１０２と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０１５８】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、Ｈ１ＰＴ２Ｌｔポリペプチドであり、配列番号１０３に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、Ｈ１ＰＴ２Ｌｔポリペプチドであり、配列番号１０３に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、Ｈ１ＰＴ２Ｌｔポリペプチドであり、配列番号１０３と少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、Ｈ１ＰＴ２Ｌｔポリペプチドであり、配列番号１０３と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、Ｈ１ＰＴ２Ｌｔポリペプチドであり、配列番号１０３と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０１５９】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ４ポリペプチドであり、配列番号１１０に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ４ポリペプチドであり、配列番号１１０に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ４ポリペプチドであり、配列番号１１０と少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ４ポリペプチドであり、配列番号１１０と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ４ポリペプチドであり、配列番号１１０少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ４ポリペプチドであり、配列番号１１０と少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０１６０】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ４ポリペプチドであり、配列番号１１０と少なくとも６５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ４ポリペプチドであり、配列番号１１０と少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ４ポリペプチドであり、配列番号１１０と少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ４ポリペプチドであり、配列番号１１０と少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ４ポリペプチドであり、配列番号１１０と少なくとも６５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ４ポリペプチドであり、配列番号１１０と少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ４ポリペプチドであり、配列番号１１０と少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ４ポリペプチドであり、配列番号１１０と少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。
【０１６１】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、切断型ＣｓＰＴ４（ＣｓＰＴ４＿ｔ１１２）ポリペプチドであり、配列番号２１１に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ４＿ｔ１１２ポリペプチドであり、配列番号２１１に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ４＿ｔ１１２ポリペプチドであり、配列番号２１１と少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ４＿ｔ１１２ポリペプチドであり、配列番号２１１と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ４＿ｔ１１２ポリペプチドであり、配列番号２１１と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０１６２】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、切断型ＣｓＰＴ４（ＣｓＰＴ４＿ｔ１３１）ポリペプチドであり、配列番号２１３に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ４＿ｔ１３１ポリペプチドであり、配列番号２１３に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ４＿ｔ１３１ポリペプチドであり、配列番号２１３と少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ４＿ｔ１３１ポリペプチドであり、配列番号２１３と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ４＿ｔ１３１ポリペプチドであり、配列番号２１３と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０１６３】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、切断型ＣｓＰＴ４（ＣｓＰＴ４＿ｔ１４２）ポリペプチドであり、配列番号２１５に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ４＿ｔ１４２ポリペプチドであり、配列番号２１５に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ４＿ｔ１４２ポリペプチドであり、配列番号２１５と少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ４＿ｔ１４２ポリペプチドであり、配列番号２１５と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ４＿ｔ１４２ポリペプチドであり、配列番号２１５と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０１６４】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、切断型ＣｓＰＴ４（ＣｓＰＴ４＿ｔ１６６）ポリペプチドであり、配列番号２１７に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ４＿ｔ１６６ポリペプチドであり、配列番号２１７に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ４＿ｔ１６６ポリペプチドであり、配列番号２１７と少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ４＿ｔ１６６ポリペプチドであり、配列番号２１７と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ４＿ｔ１６６ポリペプチドであり、配列番号２１７と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０１６５】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、切断型ＣｓＰＴ４（ＣｓＰＴ４＿ｔ１８６）ポリペプチドであり、配列番号２１９に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ４＿ｔ１８６ポリペプチドであり、配列番号２１９に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ４＿ｔ１８６ポリペプチドであり、配列番号２１９と少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ４＿ｔ１８６ポリペプチドであり、配列番号２１９と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、ＣｓＰＴ４＿ｔ１８６ポリペプチドであり、配列番号２１９と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０１６６】
本明細書で開示する代表的なＧＯＴ異種核酸として、例えば、完全長ＧＯＴポリペプチド、ＧＯＴポリペプチドのフラグメント、ＧＯＴポリペプチドの変異体、切断型ＧＯＴポリペプチド、またはＧＯＴポリペプチドの活性を少なくとも１つ持つ融合ポリペプチドのようなＧＯＴポリペプチドをコードする核酸が挙げられる。
【０１６７】
いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、遺伝子組換え宿主細胞において過剰発現されている。過剰発現は、例えば、高コピー数発現ベクター（例えば、１細胞当たり１０〜４０コピーが存在するプラスミド）を使用してＧＯＴポリペプチドをコードする異種核酸のコピー数を増やしおよび／またはＧＯＴポリペプチドをコードする異種核酸を強力プロモーターと作動可能に連結することにより達成してもよい。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＧＯＴポリペプチドをコードする異種核酸の１コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＧＯＴポリペプチドをコードする異種核酸の２コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＧＯＴポリペプチドをコードする異種核酸の３コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＧＯＴポリペプチドをコードする異種核酸の４コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＧＯＴポリペプチドをコードする異種核酸の５コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＧＯＴポリペプチドをコードする異種核酸の４コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＧＯＴポリペプチドをコードする異種核酸の６コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＧＯＴポリペプチドをコードする異種核酸の４コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＧＯＴポリペプチドをコードする異種核酸の７コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＧＯＴポリペプチドをコードする異種核酸の４コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＧＯＴポリペプチドコード異種核酸の８コピーを持つ。
【０１６８】
いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、ＧＯＴポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、該ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドより少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。
【０１６９】
いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１１１、配列番号２２１、配列番号２２４、または配列番号２２５に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１１１、配列番号２２１、配列番号２２４、または配列番号２２５に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１１１、配列番号２２１、配列番号２２４、または配列番号２２５と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０１７０】
いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２２０または配列番号２２２に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２２０または配列番号２２２に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２２０または配列番号２２２と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０１７１】
いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２１０、配列番号２１２、配列番号２１４、配列番号２１６、または配列番号２１８に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２１０、配列番号２１２、配列番号２１４、配列番号２１６、または配列番号２１８に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２１０、配列番号２１２、配列番号２１４、配列番号２１６、または配列番号２１８と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０１７２】
いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１１１に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１１１に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１１１と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１１１と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１１１と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０１７３】
いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１１１と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１１１と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１１１と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１１１と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。
【０１７４】
いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２２５に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２２５に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２２５と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２２５と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２２５と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０１７５】
いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２２５と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２２５と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２２５と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２２５と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。
【０１７６】
いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２２１に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２２１に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２２１と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２２１と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２２１と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０１７７】
いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２２１と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２２１と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２２１と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２２１と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。
【０１７８】
いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２２４に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２２４に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２２４と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２２４と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２２４と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０１７９】
いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２２４と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２２４と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２２４と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２２４と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。
【０１８０】
いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４＿ｔ１１２ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２１０に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４＿ｔ１１２ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２１０に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４＿ｔ１１２ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２１０と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４＿ｔ１１２ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２１０と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４＿ｔ１１２ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２１０と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０１８１】
いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４＿ｔ１３１ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２１２に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４＿ｔ１３１ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２１２に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４＿ｔ１３１ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２１２と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４＿ｔ１３１ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２１２と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４＿ｔ１３１ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２１２と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０１８２】
いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４＿ｔ１４２ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２１４に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４＿ｔ１４２ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２１４に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４＿ｔ１４２ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２１４と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４＿ｔ１４２ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２１４と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４＿ｔ１４２ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２１４と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０１８３】
いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４＿ｔ１６６ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２１６に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４＿ｔ１６６ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２１６に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４＿ｔ１６６ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２１６と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４＿ｔ１６６ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２１６と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４＿ｔ１６６ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２１６と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０１８４】
いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４＿ｔ１８６ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２１８に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４＿ｔ１８６ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２１８に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４＿ｔ１８６ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２１８と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４＿ｔ１８６ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２１８と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ４＿ｔ１８６ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２１８と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０１８５】
いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ１ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２２０に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ１ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２２０に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ１ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２２０と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ１ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２２０と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ１ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２２０と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０１８６】
いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ１＿ｔ７５ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２２２に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ１＿ｔ７５ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２２２に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ１＿ｔ７５ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２２２と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ１＿ｔ７５ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２２２と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＰＴ１＿ｔ７５ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２２２と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０１８７】
カンナビノイドシンターゼポリペプチド、該ポリペプチドを含む核酸、および該ポリペプチドを発現する遺伝子組換え宿主細胞：  いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、カンナビノイドシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされる。
【０１８８】
いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、１つを超えるカンナビノイドシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、２つを超えるカンナビノイドシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、３つを超えるカンナビノイドシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、２つのカンナビノイドシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、３つのカンナビノイドシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、１、２、または３つ以上のカンナビノイドシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、１、２、または３つのカンナビノイドシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。
【０１８９】
いくつかの実施形態では、カンナビノイドシンターゼポリペプチドは、テトラヒドロカンナビノール酸シンターゼ（ＴＨＣＡＳ）ポリペプチドである。ＴＨＣＡＳポリペプチドは、カンナビゲロール酸のＴＨＣＡへの変換を触媒することができる。本明細書で開示する代表的なＴＨＣＡＳポリペプチドとして、ＴＨＣＡＳポリペプチドのフラグメント、完全長ＴＨＣＡＳポリペプチド、ＴＨＣＡＳポリペプチドの変異体、切断型ＴＨＣＡＳポリペプチド、またはＴＨＣＡＳポリペプチドの少なくとも１つ活性を持つ融合ポリペプチドが挙げられる。
【０１９０】
いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ＴＨＣＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、１つを超えるＴＨＣＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、２つを超えるＴＨＣＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、３つを超えるＴＨＣＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、２つのＴＨＣＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、３つのＴＨＣＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、１、２、または３つ以上のＴＨＣＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、１、２、または３つのＴＨＣＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。
【０１９１】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＨＣＡＳポリペプチドは、配列番号１４、配列番号８６、配列番号１０４、配列番号１５３、または配列番号１５５に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＨＣＡＳポリペプチドは、配列番号１４、配列番号８６、配列番号１０４、配列番号１５３、あるいは配列番号１５５に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＨＣＡＳポリペプチドは、配列番号１４、配列番号８６、配列番号１０４、配列番号１５３、または配列番号１５５と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０１９２】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＨＣＡＳポリペプチドは、配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＨＣＡＳポリペプチドは、配列番号１４に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＨＣＡＳポリペプチドは、配列番号１４と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＨＣＡＳポリペプチドは、配列番号１４と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＨＣＡＳポリペプチドは、配列番号１４と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０１９３】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＨＣＡＳポリペプチドは、配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＨＣＡＳポリペプチドは、配列番号８６に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＨＣＡＳポリペプチドは、配列番号８６と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＨＣＡＳポリペプチドは、配列番号８６と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＨＣＡＳポリペプチドは、配列番号８６と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０１９４】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＨＣＡＳポリペプチドは、配列番号１５５に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＨＣＡＳポリペプチドは、配列番号１５５に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＨＣＡＳポリペプチドは、配列番号１５５と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＨＣＡＳポリペプチドは、配列番号１５５と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＨＣＡＳポリペプチドは、配列番号１５５と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０１９５】
いくつかの実施形態では、ＴＨＣＡＳポリペプチドとして、Ｎ−末端トランケーションによって分泌ペプチドが除去され、細胞質に局在化された、組換えＴＨＣＡＳポリペプチドが挙げられる。例えば、いくつかの実施形態では、ＴＨＣＡＳポリペプチドは、配列番号１４に示されるアミノ酸配列のＮ−末端アミノ酸１−２８、または他のＴＨＣＡＳポリペプチドの対応シグナルペプチドを欠いている。
【０１９６】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＨＣＡＳポリペプチドは、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＨＣＡＳポリペプチドは、配列番号１５に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＨＣＡＳポリペプチドは、配列番号１５と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＨＣＡＳポリペプチドは、配列番号１５と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＨＣＡＳポリペプチドは、配列番号１５と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０１９７】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＨＣＡＳポリペプチドは、配列番号１０４に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＨＣＡＳポリペプチドは、配列番号１０４に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＨＣＡＳポリペプチドは、配列番号１０４と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＨＣＡＳポリペプチドは、配列番号１０４と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＨＣＡＳポリペプチドは、配列番号１０４と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０１９８】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＨＣＡＳポリペプチドは、配列番号１５３に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＨＣＡＳポリペプチドは、配列番号１５３に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＨＣＡＳポリペプチドは、配列番号１５３と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＨＣＡＳポリペプチドは、配列番号１５３と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＨＣＡＳポリペプチドは、配列番号１５３と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０１９９】
本明細書で開示する代表的なＴＨＣＡＳ異種核酸として、例えば、ＴＨＣＡＳポリペプチドのフラグメント、ＴＨＣＡＳポリペプチドの変異体、完全長ＴＨＣＡＳポリペプチド、切断型ＴＨＣＡＳポリペプチド、またはＴＨＣＡＳポリペプチドの活性を少なくとも１つ持つ融合ポリペプチドのようなＴＨＣＡＳポリペプチドをコードする核酸が挙げられる。
【０２００】
いくつかの実施形態では、ＴＨＣＡＳポリペプチドは、遺伝子組換え宿主細胞において過剰発現されている。過剰発現は、例えば、高コピー数発現ベクター（例えば、１細胞当たり１０〜４０コピーが存在するプラスミド）を使用してＴＨＣＡＳポリペプチドをコードする異種核酸のコピー数を増やしおよび／またはＴＨＣＡＳポリペプチドをコードする異種核酸を強力プロモーターと作動可能に連結することにより達成してもよい。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＴＨＣＡＳポリペプチドをコードする異種核酸の１コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＴＨＣＡＳポリペプチドをコードする異種核酸の２コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＴＨＣＡＳポリペプチドをコードする異種核酸の３コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＴＨＣＡＳポリペプチドをコードする異種核酸の４コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＴＨＣＡＳポリペプチドをコードする異種核酸の５コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＴＨＣＡＳポリペプチドをコードする異種核酸の６コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＴＨＣＡＳポリペプチドをコードする異種核酸の７コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＴＨＣＡＳポリペプチドをコードする異種核酸の８コピーを持つ。
【０２０１】
いくつかの実施形態では、ＴＨＣＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号８５、配列番号１５４、または配列番号１５６に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＨＣＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号８５、配列番号１５４、または配列番号１５６に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＨＣＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号８５、配列番号１５４、または配列番号１５６と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０２０２】
いくつかの実施形態では、ＴＨＣＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号８５に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＨＣＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号８５に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＨＣＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号８５と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＨＣＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号８５と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０２０３】
いくつかの実施形態では、ＴＨＣＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１５４に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＨＣＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１５４に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＨＣＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１５４と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＨＣＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１５４と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０２０４】
いくつかの実施形態では、ＴＨＣＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１５６に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＨＣＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１５６に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＨＣＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１５６と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＨＣＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１５６と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０２０５】
いくつかの実施形態では、カンナビノイドシンターゼポリペプチドは、カンナビジオール酸シンターゼ（ＣＢＤＡＳ）ポリペプチドである。ＣＢＤＡＳポリペプチドは、カンナビゲロール酸のカンナビジオール酸（ＣＢＤＡ）への変換を触媒することができる。本明細書で開示する代表的なＣＢＤＡＳポリペプチドとして、完全長ＣＢＤＡＳポリペプチド、ＣＢＤＡＳポリペプチドのフラグメント、ＣＢＤＡＳポリペプチドの変異体、切断型ＣＢＤＡＳポリペプチド、またはＣＢＤＡＳポリペプチドの活性を少なくとも１つ持つ融合ポリペプチドが挙げられる。
【０２０６】
いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ＣＢＤＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、１つを超えるＣＢＤＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、２つを超えるＣＢＤＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、３つを超えるＣＢＤＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、２つのＣＢＤＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、３つのＣＢＤＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、１、２、または３つ以上のＣＢＤＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、１、２、または３つのＣＤＢＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。
【０２０７】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＣＢＤＡＳポリペプチドは、配列番号８８または配列番号１５１に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＣＢＤＡＳポリペプチドは、配列番号８８あるいは配列番号１５１に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＣＢＤＡＳポリペプチドは、配列番号８８または配列番号１５１と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０２０８】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＣＢＤＡＳポリペプチドは、配列番号８８に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＣＢＤＡＳポリペプチドは、配列番号８８に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＣＢＤＡＳポリペプチドは、配列番号８８と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＣＢＤＡＳポリペプチドは、配列番号８８と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＣＢＤＡＳポリペプチドは、配列番号８８と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０２０９】
いくつかの実施形態では、ＣＢＤＡＳポリペプチドとして、Ｎ−末端トランケーションによって分泌ペプチドが除去され、細胞質に局在化された組換えＣＢＤＡＳポリペプチドが挙げられる。例えば、いくつかの実施形態では、ＣＢＤＡＳポリペプチドは、配列番号８８に示されるアミノ酸配列のＮ−末端アミノ酸１−２８、または他のＣＢＤＡＳポリペプチドの対応するシグナルペプチドを欠いている。
【０２１０】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＣＢＤＡＳポリペプチドは、配列番号１６に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＣＢＤＡＳポリペプチドは、配列番号１６に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＣＢＤＡＳポリペプチドは、配列番号１６と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＣＢＤＡＳポリペプチドは、配列番号１６と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＣＢＤＡＳポリペプチドは、配列番号１６と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０２１１】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＣＢＤＡＳポリペプチドは、配列番号１０５に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＣＢＤＡＳポリペプチドは、配列番号１０５に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＣＢＤＡＳポリペプチドは、配列番号１０５と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＣＢＤＡＳポリペプチドは、配列番号１０５と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＣＢＤＡＳポリペプチドは、配列番号１０５と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０２１２】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＣＢＤＡＳポリペプチドは、配列番号１５１に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＣＢＤＡＳポリペプチドは、配列番号１５１に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＣＢＤＡＳポリペプチドは、配列番号１５１と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＣＢＤＡＳポリペプチドは、配列番号１５１と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＣＢＤＡＳポリペプチドは、配列番号１５１と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０２１３】
本明細書で開示する代表的なＣＢＤＡＳ異種核酸として、例えば、完全長ＣＢＤＡＳポリペプチド、ＣＢＤＡＳポリペプチドのフラグメント、ＣＢＤＡＳポリペプチドの変異体、切断型ＣＢＤＡＳポリペプチド、またはＣＢＤＡＳポリペプチドの活性を少なくとも１つ持つ融合ポリペプチドのようなＣＢＤＡＳポリペプチドをコードする核酸が挙げられる。
【０２１４】
いくつかの実施形態では、ＣＢＤＡＳポリペプチドは、遺伝子組換え宿主細胞において過剰発現されている。過剰発現は、例えば、高コピー数発現ベクター（例えば、１細胞当たり１０〜４０コピーが存在するプラスミド）を使用してＣＢＤＡＳポリペプチドをコードする異種核酸のコピー数を増やしおよび／またはＣＢＤＡＳポリペプチドをコードする異種核酸を強力プロモーターと作動可能に連結することにより達成してもよい。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＣＢＤＡＳポリペプチドをコードする異種核酸の１コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＣＢＤＡＳポリペプチドをコードする異種核酸の２コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＣＢＤＡＳポリペプチドをコードする異種核酸の３コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＣＢＤＡＳポリペプチドをコードする異種核酸の４コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＣＢＤＡＳポリペプチドをコードする異種核酸の５コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＣＢＤＡＳポリペプチドをコードする異種核酸の６コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＣＢＤＡＳポリペプチドをコードする異種核酸の７コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＣＢＤＡＳポリペプチドをコードする異種核酸の８コピーを持つ。
【０２１５】
いくつかの実施形態では、ＣＢＤＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１５２または配列番号１６７に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＢＤＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１５２または配列番号１６７に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＢＤＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１５２または配列番号１６７と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０２１６】
いくつかの実施形態では、ＣＢＤＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号８７に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＢＤＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号８７に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＢＤＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号８７と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＢＤＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号８７と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０２１７】
いくつかの実施形態では、ＣＢＤＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１５２に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＢＤＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１５２に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＢＤＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１５２と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＢＤＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１５２と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０２１８】
いくつかの実施形態では、ＣＢＤＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１６７に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＢＤＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１６７に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＢＤＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１６７と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＢＤＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１６７と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０２１９】
いくつかの実施形態では、カンナビノイドシンターゼポリペプチドをコードする異種核酸の少なくとも１つは、誘導性プロモーターと作動可能に連結している。いくつかの実施形態では、カンナビノイドシンターゼポリペプチドをコードする異種核酸の少なくとも１つは、構成的プロモーターと作動可能に連結している。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、ＴＨＣＡＳ、ＣＢＤＡＳポリペプチド、または他のカンナビノイドシンターゼポリペプチドのＮ−末端と連結している。
【０２２０】
アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチド、該ポリペプチドを含む核酸、および該ポリペプチドを発現する遺伝子組換え宿主細胞：  いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。そのようなポリペプチドとして、アシル活性化酵素（ＡＡＥ）ポリペプチド、脂肪族アシル−ＣｏＡシンテターゼ（ＦＡＡ）ポリペプチド、または脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２２１】
いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ＡＡＥ、ＦＡＡ、または脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、１つを超えるＡＡＥ、ＦＡＡまたは脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、２つを超えるＡＡＥ、ＦＡＡ、または脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、３つを超えるＡＡＥ、ＦＡＡ、または脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、２つのＡＡＥ、ＦＡＡ、または脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、３つのＡＡＥ、ＦＡＡ、または脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、１、２、または３つ以上のＡＡＥ、ＦＡＡ、または脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、１、２、または３つのＡＡＥ、ＦＡＡ、または脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。
【０２２２】
ＡＡＥポリペプチド、ＦＡＡポリペプチド、および脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドは、カルボン酸をそれらのＣｏＡ形態に変換し、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成することができる。例えば、ＣｓＡＡＥ１およびＣｓＡＡＥ３のような低基質特異性（ｐｒｏｍｉｓｃｕｏｕｓ）アシル活性化酵素ポリペプチド、ＦＡＡポリペプチド、または脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドは、カンナビノイド誘導体（例えば、カンナビゲロール酸誘導体）またはカンナビノイド前駆体誘導体（例えば、オリベトール酸誘導体）、さらにはカンナビノイド（例えば、カンナビゲロール酸）またはその前駆体（例えば、オリベトール酸）の生成を可能にするかもしれない。いくつかの実施形態では、ヘキサン酸またはヘキサン酸以外のカルボン酸を、ＡＡＥポリペプチド、ＦＡＡポリペプチド、または脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドを発現する遺伝子組換え宿主細胞（例えば、これらは、細胞が成長する培養培地中に存在する）に供給し、ヘキサノイル−ＣｏＡ、アシル−ＣｏＡ化合物、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体、またはアシル−ＣｏＡ化合物の誘導体を生成する。いくつかのそのような実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞を含む細胞培養培地は、ヘキサノエートを含む。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞を含む細胞培養培地は、ヘキサノエート以外のカルボン酸を含む。
【０２２３】
本明細書で開示する代表的なＡＡＥ、ＦＡＡ、または脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドとして、完全長ＡＡＥ、ＦＡＡまたは脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチド；ＡＡＥ、ＦＡＡまたは脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドのフラグメント；ＡＡＥ、ＦＡＡ、または脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドの変異体；切断型ＡＡＥ、ＦＡＡ、または脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチド；またはＡＡＥ、ＦＡＡ、または脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドの活性を少なくとも１つ持つ融合ポリペプチドが挙げられる。
【０２２４】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＡＡＥポリペプチドは、ＣｓＡＡＥ１ポリペプチドであり、配列番号９０に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＡＡＥポリペプチドは、ＣｓＡＡＥ１ポリペプチドであり、配列番号９０に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＡＡＥポリペプチドは、ＣｓＡＡＥ１ポリペプチドであり、配列番号９０と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＡＡＥポリペプチドは、ＣｓＡＡＥ１ポリペプチドであり、配列番号９０と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＡＡＥポリペプチドは、ＣｓＡＡＥ１ポリペプチドであり、配列番号９０と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＡＡＥポリペプチドは、ＣｓＡＡＥ１ポリペプチドであり、配列番号９０と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０２２５】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＡＡＥポリペプチドは、ＣｓＡＡＥ３ポリペプチドであり、配列番号９２または配列番号１４９に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＡＡＥポリペプチドは、ＣｓＡＡＥ３ポリペプチドであり、配列番号９２あるいは配列番号１４９に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＡＡＥポリペプチドは、ＣｓＡＡＥ３ポリペプチドであり、配列番号９２または配列番号１４９と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０２２６】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＡＡＥポリペプチドは、ＣｓＡＡＥ３ポリペプチドであり、配列番号９２に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＡＡＥポリペプチドは、ＣｓＡＡＥ３ポリペプチドであり、配列番号９２に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＡＡＥポリペプチドは、ＣｓＡＡＥ３ポリペプチドであり、配列番号９２と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＡＡＥポリペプチドは、ＣｓＡＡＥ３ポリペプチドであり、配列番号９２と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＡＡＥポリペプチドは、ＣｓＡＡＥ３ポリペプチドであり、配列番号９２と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０２２７】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＡＡＥポリペプチドは、ＣｓＡＡＥ３ポリペプチドであり、配列番号：１１２に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＡＡＥポリペプチドは、ＣｓＡＡＥ３ポリペプチドであり、配列番号１１２に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＡＡＥポリペプチドは、ＣｓＡＡＥ３ポリペプチドであり、配列番号１１２と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＡＡＥポリペプチドは、ＣｓＡＡＥ３ポリペプチドであり、配列番号１１２と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＡＡＥポリペプチドは、ＣｓＡＡＥ３ポリペプチドであり、配列番号１１２と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。これらの実施形態において、ＣｓＡＡＥ３ポリペプチドは、ＲＥＬＩＱＫＶＲＳＮＭ  Ｃ−末端アミノ酸を欠いている。
【０２２８】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＡＡＥポリペプチドは、ＣｓＡＡＥ３ポリペプチドであり、配列番号１４９に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＡＡＥポリペプチドは、ＣｓＡＡＥ３ポリペプチドであり、配列番号１４９に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＡＡＥポリペプチドは、ＣｓＡＡＥ３ポリペプチドであり、配列番号１４９と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＡＡＥポリペプチドは、ＣｓＡＡＥ３ポリペプチドであり、配列番号１４９と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＡＡＥポリペプチドは、ＣｓＡＡＥ３ポリペプチドであり、配列番号１４９と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。これらの実施形態において、ＣｓＡＡＥ３ポリペプチドは、ＲＲＥＬＩＱＫＶＲＳＮＭ  Ｃ−末端アミノ酸を欠いている。
【０２２９】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされた脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドは、ＦＡＤＫポリペプチドであり、配列番号１４５または配列番号１４７に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされた脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドは、ＦＡＤＫポリペプチドであり、配列番号１４５あるいは配列番号１４７に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされた脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドは、ＦＡＤＫポリペプチドであり、配列番号１４５または配列番号１４７と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０２３０】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされた脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドは、ＦＡＤＫポリペプチドであり、配列番号１４５に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされた脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドは、ＦＡＤＫポリペプチドであり、配列番号１４５に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされた脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドは、ＦＡＤＫポリペプチドであり、配列番号１４５と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされた脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドは、ＦＡＤＫポリペプチドであり、配列番号１４５と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされた脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドは、ＦＡＤＫポリペプチドであり、配列番号１４５と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０２３１】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされた脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドは、ＦＡＤＫポリペプチドであり、配列番号１４７に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされた脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドは、ＦＡＤＫポリペプチドであり、配列番号１４７に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされた脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドは、ＦＡＤＫポリペプチドであり、配列番号１４７と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされた脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドは、ＦＡＤＫポリペプチドであり、配列番号１４７と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされた脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドは、ＦＡＤＫポリペプチドであり、配列番号１４７と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０２３２】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＦＡＡポリペプチドは、配列番号１６９、配列番号１９２、配列番号１９４、配列番号１９６、配列番号１９８、または配列番号２００に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＦＡＡポリペプチドは、配列番号１６９、配列番号１９２、配列番号１９４、配列番号１９６、配列番号１９８、あるいは配列番号２００に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＦＡＡポリペプチドは、配列番号１６９、配列番号１９２、配列番号１９４、配列番号１９６、配列番号１９８、または配列番号２００と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０２３３】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＦＡＡポリペプチドは、ＦＡＡ２ポリペプチドであり、配列番号１６９に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＦＡＡポリペプチドは、ＦＡＡ２ポリペプチドであり、配列番号１６９に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＦＡＡポリペプチドは、ＦＡＡ２ポリペプチドであり、配列番号１６９と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＦＡＡポリペプチドは、ＦＡＡ２ポリペプチドであり、配列番号１６９と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＦＡＡポリペプチドは、ＦＡＡ２ポリペプチドであり、配列番号１６９と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＦＡＡポリペプチドは、ＦＡＡ２ポリペプチドであり、配列番号１６９と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０２３４】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＦＡＡポリペプチドは、切断型ＦＡＡ２（ｔＦＡＡ２）ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＦＡＡポリペプチドは、ｔＦＡＡ２ポリペプチドであり、配列番号１９４に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＦＡＡポリペプチドは、ｔＦＡＡ２ポリペプチドであり、配列番号１９４に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＦＡＡポリペプチドは、ｔＦＡＡ２ポリペプチドであり、配列番号１９４と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＦＡＡポリペプチドは、ｔＦＡＡ２ポリペプチドであり、配列番号１９４と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＦＡＡポリペプチドは、ｔＦＡＡ２ポリペプチドであり、配列番号１９４と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＦＡＡポリペプチドは、ｔＦＡＡ２ポリペプチドであり、配列番号１９４と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０２３５】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＦＡＡポリペプチドは、変異ＦＡＡ２（ＦＡＡ２ｍｕｔ）ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＦＡＡポリペプチドは、ＦＡＡ２ｍｕｔポリペプチドであり、配列番号１９６に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＦＡＡポリペプチドは、ＦＡＡ２ｍｕｔポリペプチドであり、配列番号１９６に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＦＡＡポリペプチドは、ＦＡＡ２ｍｕｔポリペプチドであり、配列番号１９６と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＦＡＡポリペプチドは、ＦＡＡ２ｍｕｔポリペプチドであり、配列番号１９６と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＦＡＡポリペプチドは、ＦＡＡ２ｍｕｔポリペプチドであり、配列番号１９６と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＦＡＡポリペプチドは、ＦＡＡ２ｍｕｔポリペプチドであり、配列番号１９６と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０２３６】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＦＡＡポリペプチドは、ＦＡＡ１ポリペプチドであり、配列番号１９２に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＦＡＡポリペプチドは、ＦＡＡ１ポリペプチドであり、配列番号１９２に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＦＡＡポリペプチドは、ＦＡＡ１ポリペプチドであり、配列番号１９２と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＦＡＡポリペプチドは、ＦＡＡ１ポリペプチドであり、配列番号１９２と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＦＡＡポリペプチドは、ＦＡＡ１ポリペプチドであり、配列番号１９２と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＦＡＡポリペプチドは、ＦＡＡ１ポリペプチドであり、配列番号１９２と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０２３７】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＦＡＡポリペプチドは、ＦＡＡ３ポリペプチドであり、配列番号１９８に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＦＡＡポリペプチドは、ＦＡＡ３ポリペプチドであり、配列番号１９８に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＦＡＡポリペプチドは、ＦＡＡ３ポリペプチドであり、配列番号１９８と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＦＡＡポリペプチドは、ＦＡＡ３ポリペプチドであり、配列番号１９８と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＦＡＡポリペプチドは、ＦＡＡ３ポリペプチドであり、配列番号１９８と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＦＡＡポリペプチドは、ＦＡＡ３ポリペプチドであり、配列番号１９８と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０２３８】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＦＡＡポリペプチドは、ＦＡＡ４ポリペプチドであり、配列番号２００に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＦＡＡポリペプチドは、ＦＡＡ４ポリペプチドであり、配列番号２００に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＦＡＡポリペプチドは、ＦＡＡ４ポリペプチドであり、配列番号２００と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＦＡＡポリペプチドは、ＦＡＡ４ポリペプチドであり、配列番号２００と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＦＡＡポリペプチドは、ＦＡＡ４ポリペプチドであり、配列番号２００と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＦＡＡポリペプチドは、ＦＡＡ４ポリペプチドであり、配列番号２００と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０２３９】
本明細書で開示する代表的なＡＡＥ、ＦＡＡ、または脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼ異種核酸として、例えば、完全長ＡＡＥ、ＦＡＡまたは脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドのようなＡＡＥ、ＦＡＡまたは脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドをコードする核酸；ＡＡＥ、ＦＡＡ、または脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドのフラグメント；ＡＡＥ、ＦＡＡ、または脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドの変異体；切断型ＡＡＥ、ＦＡＡ、または脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチド；ＡＡＥ、ＦＡＡ、または脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドの活性を少なくとも１つ持つ融合ポリペプチドが挙げられる。
【０２４０】
いくつかの実施形態では、ＡＡＥ、ＦＡＡ、または脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドは、遺伝子組換え宿主細胞において過剰発現されている。過剰発現は、例えば、高コピー数発現ベクター（例えば、１細胞当たり１０〜４０コピーが存在するプラスミド）を使用してＡＡＥ、ＦＡＡ、または脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドをコードする異種核酸のコピー数を増やしおよび／またはＡＡＥ、ＦＡＡ、または脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドをコードする異種核酸を強力プロモーターと作動可能に連結することにより達成してもよい。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＡＡＥ、ＦＡＡ、または脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドをコードする異種核酸の１コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＡＡＥ、ＦＡＡ、または脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドをコードする異種核酸の２コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＡＡＥ、ＦＡＡ、または脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドをコードする異種核酸の３コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＡＡＥ、ＦＡＡ、または脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドをコードする異種核酸の４コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＡＡＥ、ＦＡＡ、または脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドをコードする異種核酸の５コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＡＡＥ、ＦＡＡ、または脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドをコードする異種核酸の６コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＡＡＥ、ＦＡＡ、または脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドをコードする異種核酸の７コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＡＡＥ、ＦＡＡ、または脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドをコードする異種核酸の８コピーを持つ。
【０２４１】
いくつかの実施形態では、ＣｓＡＡＥ１ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１６４または配列番号１６５に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＡＡＥ１ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１６４または配列番号１６５に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＡＡＥ１ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１６４または配列番号１６５と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０２４２】
いくつかの実施形態では、ＣｓＡＡＥ１ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号８９に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＡＡＥ１ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号８９に示されるヌクレオチド配列、そのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＡＡＥ１ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号８９と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＡＡＥ１ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号８９と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０２４３】
いくつかの実施形態では、ＣｓＡＡＥ１ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１６４に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＡＡＥ１ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１６４に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＡＡＥ１ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１６４と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＡＡＥ１ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１６４と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０２４４】
いくつかの実施形態では、ＣｓＡＡＥ１ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１６５に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＡＡＥ１ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１６５に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＡＡＥ１ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１６５と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＡＡＥ１ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１６５と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０２４５】
いくつかの実施形態では、ＣｓＡＡＥ３ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１５０または配列番号１６６に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＡＡＥ３ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１５０または配列番号１６６に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＡＡＥ３ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１５０または配列番号１６６と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０２４６】
いくつかの実施形態では、ＣｓＡＡＥ３ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号９１に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＡＡＥ３ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号９１に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＡＡＥ３ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号９１と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＡＡＥ３ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号９１と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０２４７】
いくつかの実施形態では、ＣｓＡＡＥ３ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１５０に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＡＡＥ３ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１５０に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＡＡＥ３ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１５０と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＡＡＥ３ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１５０と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０２４８】
いくつかの実施形態では、ＣｓＡＡＥ３ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１６６に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＡＡＥ３ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１６６に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＡＡＥ３ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１６６と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣｓＡＡＥ３ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１６６と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０２４９】
いくつかの実施形態では、ＦＡＤＫポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１４６または配列番号１４８に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦＡＤＫポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１４６または配列番号１４８に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦＡＤＫポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１４６または配列番号１４８と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０２５０】
いくつかの実施形態では、ＦＡＤＫポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１４６に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦＡＤＫポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１４６に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦＡＤＫポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１４６と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦＡＤＫポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１４６と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０２５１】
いくつかの実施形態では、ＦＡＤＫポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１４８に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦＡＤＫポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１４８に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦＡＤＫポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１４８と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦＡＤＫポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１４８と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０２５２】
いくつかの実施形態では、ＦＡＡポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１６８、配列番号１９１、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、または配列番号１９９に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦＡＡポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１６８、配列番号１９１、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、または配列番号１９９に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦＡＡポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１６８、配列番号１９１、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、または配列番号１９９と、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０２５３】
いくつかの実施形態では、ＦＡＡ２ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１６８に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦＡＡ２ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１６８に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦＡＡ２ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１６８と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦＡＡ２ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１６８と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦＡＡ２ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１６８と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０２５４】
いくつかの実施形態では、ｔＦＡＡ２ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１９３に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ｔＦＡＡ２ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１９３に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ｔＦＡＡ２ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１９３と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ｔＦＡＡ２ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１９３と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ｔＦＡＡ２ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１９３と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０２５５】
いくつかの実施形態では、ＦＡＡ２ｍｕｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１９５に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦＡＡ２ｍｕｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１９５に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦＡＡ２ｍｕｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１９５と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦＡＡ２ｍｕｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１９５と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦＡＡ２ｍｕｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１９５と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０２５６】
いくつかの実施形態では、ＦＡＡ１ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１９１に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦＡＡ１ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１９１に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦＡＡ１ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１９１と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦＡＡ１ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１９１と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦＡＡ１ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１９１と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０２５７】
いくつかの実施形態では、ＦＡＡ３ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１９７に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦＡＡ３ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１９７に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦＡＡ３ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１９７と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦＡＡ３ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１９７と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦＡＡ３ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１９７と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０２５８】
いくつかの実施形態では、ＦＡＡ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１９９に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦＡＡ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１９９に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦＡＡ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１９９と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦＡＡ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１９９と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦＡＡ４ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１９９と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０２５９】
ヘキサノイル−ＣｏＡ、ヘキサノイル−ＣｏＡ誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物、またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する経路を生成する、またはその一部であるポリペプチド、該ポリペプチドを含む核酸、および該ポリペプチドを発現する遺伝子組換え宿主細胞：  いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ヘキサノイル−ＣｏＡ、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物、またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する生合成経路を生成するまたはその一部である１つまたは複数のポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。
【０２６０】
いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ヘキサノイル−ＣｏＡ、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物、またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する生合成経路を生成するまたは一部である１つを超えるポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ヘキサノイル−ＣｏＡ、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物、またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する生合成経路を生成するまたは一部である２つを超えるポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ヘキサノイル−ＣｏＡ、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物、またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する生合成経路を生成するまたは一部である３つを超えるポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ヘキサノイル−ＣｏＡ、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物、またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する生合成経路を生成するまたは一部である４つを超えるポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ヘキサノイル−ＣｏＡ、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物、またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する生合成経路を生成するまたは一部である５つを超えるポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ヘキサノイル−ＣｏＡ、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物、またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する生合成経路を生成するまたは一部である２つのポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ヘキサノイル−ＣｏＡ、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物、またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する生合成経路を生成するまたは一部である３つのポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ヘキサノイル−ＣｏＡ、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物、またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する生合成経路を生成するまたは一部である４つのポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ヘキサノイル−ＣｏＡ、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物、またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する生合成経路を生成するまたは一部である５つのポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ヘキサノイル−ＣｏＡ、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物、またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する生合成経路を生成するまたは一部である１、２、３、４、または５つ以上のポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ヘキサノイル−ＣｏＡ、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物、またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する生合成経路を生成するまたは一部である１、２、３、４、または５つのポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。
【０２６１】
ヘキサノイル−ＣｏＡ、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物、またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する生合成経路を生成するまたは一部である本明細書で開示する代表的なポリペプチドとして、ヘキサノイル−ＣｏＡ、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物、またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する生合成経路を生成するまたは一部である完全長ポリペプチド；ヘキサノイル−ＣｏＡ、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物、またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する生合成経路を生成するまたは一部であるポリペプチドのフラグメント；ヘキサノイル−ＣｏＡ、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物、またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する生合成経路を生成するまたは一部であるポリペプチドの変異体；ヘキサノイル−ＣｏＡ、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物、またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する生合成経路を生成するまたは一部である切断型ポリペプチド；またはヘキサノイル−ＣｏＡ、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物、またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する生合成経路を生成するまたは一部であるポリペプチドの活性を少なくとも１つ持つ融合ポリペプチドが挙げられる。
【０２６２】
いくつかの実施形態では、ヘキサノイル−ＣｏＡ、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物、またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する１つまたは複数のポリペプチドとして、ヘキサノイル−ＣｏＡシンターゼ（ＨＣＳ）ポリペプチド（例えば、図１の囲み１ａに示すような）が挙げられる。いくつかの実施形態では、ヘキサノイル−ＣｏＡ、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物、またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する１つまたは複数のポリペプチドは、ＨＣＳポリペプチドであり、遺伝子組換え宿主細胞を含む細胞培養培地は、ヘキサノエートを含む。いくつかの実施形態では、ヘキサノイル−ＣｏＡ、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物、またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する１つまたは複数のポリペプチドは、ＨＣＳポリペプチドであり、遺伝子組換え宿主細胞を含む細胞培養培地は、ヘキサノエート以外のカルボン酸を含む。いくつかの実施形態では、ヘキサン酸またはヘキサン酸以外のカルボン酸を、ＨＣＳポリペプチドを発現する遺伝子組換え宿主細胞（例えば、細胞が成長する培養培地に存在する）に供給し、ヘキサノイル−ＣｏＡ、アシル−ＣｏＡ化合物、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体、またはアシル−ＣｏＡ化合物の誘導体を生成する。
【０２６３】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＨＣＳポリペプチドは、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＨＣＳポリペプチドは、配列番号１に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＨＣＳポリペプチドは、配列番号１と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０２６４】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＨＣＳポリペプチドは、ＲｅｖＳポリペプチドであり、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＨＣＳポリペプチドは、ＲｅｖＳポリペプチドであり、配列番号２に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＨＣＳポリペプチドは、ＲｅｖＳポリペプチドであり、配列番号２と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０２６５】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＨＣＳポリペプチドは、ＡｆｌＡポリペプチドであり、配列番号３に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＨＣＳポリペプチドは、ＡｆｌＡポリペプチドであり、配列番号３に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＨＣＳポリペプチドは、ＡｆｌＡポリペプチドであり、配列番号３と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０２６６】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＨＣＳポリペプチドは、ＡｆｌＢポリペプチドであり、配列番号４に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＨＣＳポリペプチドは、ＡｆｌＢポリペプチドであり、配列番号４に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＨＣＳポリペプチドは、ＡｆｌＢポリペプチドであり、配列番号４と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０２６７】
いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ｉ）ＡｆｌＡポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、およびｉｉ）ＡｆｌＢポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。
【０２６８】
いくつかの実施形態では、ヘキサノイル−ＣｏＡ、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物、あるいはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する、またはヘキサノイル−ＣｏＡ、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物、あるいはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する生合成経路の一部である１つまたは複数のポリペプチドは、ＭＣＴ１ポリペプチド、ＰａａＨ１ポリペプチド、Ｃｒｔポリペプチド、Ｔｅｒポリペプチド、およびＢｋｔＢポリペプチドを含む。例えば、Ｍａｃｈａｄｏら（２０１２）、Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、１４：５０４参照。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＰａａＨ１（３−ヒドロキシアシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ）ポリペプチドは、配列番号１８または配列番号４６に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＰａａＨ１ポリペプチドは、配列番号１８あるいは配列番号４６に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＰａａＨ１ポリペプチドは、配列番号１８または配列番号４６と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＣｒｔ（クロトナーゼ）ポリペプチドは、配列番号１９または配列番号４８に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＣｒｔポリペプチドは、配列番号１９あるいは配列番号４８に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＣｒｔポリペプチドは、配列番号１９または配列番号４８と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、���なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴｅｒ（トランス−２−エノイル−ＣｏＡレダクターゼ）ポリペプチドは、配列番号２０または配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴｅｒポリペプチドは、配列番号２０あるいは配列番号５０に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴｅｒポリペプチドは、配列番号２０または配列番号５０と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＢｋｔＢ（β−ケトチオラーゼ）ポリペプチドは、配列番号２１または配列番号４４に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＢｋｔＢポリペプチドは、配列番号２１あるいは配列番号４４に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＢｋｔＢポリペプチドは、配列番号２１または配列番号４４と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０２６９】
いくつかの実施形態では、ヘキサノイル−ＣｏＡ、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物、またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する、またはヘキサノイル−ＣｏＡ、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物、またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する生合成経路の一部である１つまたは複数のポリペプチドは、ＭＣＴ１ポリペプチド、ＰｈａＢポリペプチド、ＰｈａＪポリペプチド、Ｔｅｒポリペプチド、およびＢｋｔＢポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＰｈａＢ（アセトアセチル−ＣｏＡレダクターゼ）ポリペプチドは、配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＰｈａＢポリペプチドは、配列番号９４に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＰｈａＢポリペプチドは、配列番号９４と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＰｈａＪ（（Ｒ）−特異的エノイル−ＣｏＡヒドラターゼ）ポリペプチドは、配列番号９６に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＰｈａＪポリペプチドは、配列番号９６に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＰｈａＪポリペプチドは、配列番号９６と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、使用されるＴｅｒ（トランス−２−エノイル−ＣｏＡレダクターゼ）およびＢｋｔＢ（β−ケトチ���ラーゼ）ポリペプチドは、本明細書で開示するＴｅｒおよびＢｋｔＢポリペプチドから選択される。
【０２７０】
いくつかの実施形態では、ヘキサノイル−ＣｏＡ、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物、またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する、またはヘキサノイル−ＣｏＡ、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物、またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する生合成経路の一部である１つまたは複数のポリペプチドは、アセチル−ＣｏＡおよびマロニル−ＣｏＡを縮合し、アセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドを含む。アセチル−ＣｏＡおよびマロニル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドとして、マロニル−ＣｏＡ−アシル担体タンパク質トランスアシラーゼ（ＭＣＴ１）ポリペプチドが挙げられる。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＭＣＴ１ポリペプチドは、配列番号４２に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＭＣＴ１ポリペプチドは、配列番号４２に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＭＣＴ１ポリペプチドは、配列番号４２と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、アセチル−ＣｏＡおよびマロニル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、アセチル−ＣｏＡおよびマロニル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドは、ＭＣＴ１ポリペプチドである。
【０２７１】
また、ヘキサノイル−ＣｏＡ、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物、またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する１つまたは複数のポリペプチドとして、短鎖脂肪族アシル−ＣｏＡチオエステラーゼ（ＳＣＦＡ−ＴＥ）ポリペプチド（例えば、図１の囲み１ｃで示すような）も挙げられる。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＳＣＦＡ−ＴＥポリペプチドは、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、または配列番号３１に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＳＣＦＡ−ＴＥポリペプチドは、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、あるいは配列番号３１に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＳＣＦＡ−ＴＥポリペプチドは、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、または配列番号３１と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０２７２】
いくつかの実施形態では、ヘキサノイル−ＣｏＡ、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物、またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する生合成経路の一部である１つまたは複数のポリペプチドは、ＦＡＳ１またはＦＡＳ２ポリペプチドのような脂肪酸シンターゼポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＦＡＳ１ポリペプチドは、ＦＡＳ１（Ｉ３０６Ａ，Ｒ１８３４Ｋ）ポリペプチドであり、配列番号１０６に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＦＡＳ１ポリペプチドは、ＦＡＳ１（Ｉ３０６Ａ，Ｒ１８３４Ｋ）ポリペプチドであり、配列番号１０６に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＦＡＳ１ポリペプチドは、ＦＡＳ１（Ｉ３０６Ａ，Ｒ１８３４Ｋ）ポリペプチドであり、配列番号１０６と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＦＡＳ２ポリペプチドは、ＦＡＳ２（Ｇ１２５０Ｓ）ポリペプチドであり、配列番号１０７に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＦＡＳ２ポリペプチドは、ＦＡＳ２（Ｇ１２５０Ｓ）ポリペプチドであり、配列番号１０７に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＦＡＳ２ポリペプチドは、ＦＡＳ２（Ｇ１２５０Ｓ）ポリペプチドであり、配列番号１０７と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０２７３】
本明細書で開示する代表的な異種核酸として、例えば、ヘキサノイル−ＣｏＡ、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物、またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する生合成経路を生成するまたは一部である完全長ポリペプチドのような、ヘキサノイル−ＣｏＡ、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物、またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する生合成経路を生成するまたは一部であるポリペプチドをコードする核酸；ヘキサノイル−ＣｏＡ、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物、またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する生合成経路を生成するまたは一部であるポリペプチドのフラグメント；ヘキサノイル−ＣｏＡ、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物、またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する生合成経路を生成するまたは一部であるポリペプチドの変異体；ヘキサノイル−ＣｏＡ、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物、またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する生合成経路を生成するまたは一部である切断型ポリペプチド；またはヘキサノイル−ＣｏＡ、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物、またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する生合成経路を生成するまたは一部であるポリペプチドの活性を少なくとも１つ持つ融合ポリペプチドが挙げられる。
【０２７４】
いくつかの実施形態では、ヘキサノイル−ＣｏＡ、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物、またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する生合成経路を生成するまたは一部であるポリペプチドは、遺伝子組換え宿主細胞において過剰発現されている。過剰発現は、例えば、高コピー数発現ベクター（例えば、１細胞当たり１０〜４０コピーが存在するプラスミド）を使用してヘキサノイル−ＣｏＡ、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物、またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する生合成経路を生成するまたは一部であるポリペプチドをコードする異種核酸のコピー数を増やしおよび／または異種核酸をコードするヘキサノイル−ＣｏＡ、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物、またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する生合成経路を生成するまたは一部であるポリペプチドをコードする異種核酸を強力プロモーターと作動可能に連結することにより達成してもよい。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ヘキサノイル−ＣｏＡ、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物、またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する生合成経路を生成するまたは一部であるポリペプチドをコードする異種核酸の１コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ヘキサノイル−ＣｏＡ、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物、またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する生合成経路を生成するまたは一部であるポリペプチドをコードする異種核酸の２コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ヘキサノイル−ＣｏＡ、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物、またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する生合成経路を生成するまたは一部であるポリペプチドをコードする異種核酸の３コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ヘキサノイル−ＣｏＡ、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物、またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する生合成経路を生成するまたは一部であるポリペプチドをコードする異種核酸の４コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ヘキサノイル−ＣｏＡ、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物、またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する生合成経路を生成するまたは一部であるポリペプチドをコードする異種核酸の５コピーを持つ。
【０２７５】
いくつかの実施形態では、ＭＣＴ１ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号４１に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＭＣＴ１ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号４１に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＭＣＴ１ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号４１と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢｋｔＢポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号４３に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢｋｔＢポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号４３に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢｋｔＢポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号４３と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＰａａＨ１ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号４５に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＰａａＨ１ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号４５に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＰａａＨ１ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号４５と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｃｒｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号４７に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｃｒｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号４７に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｃｒｔポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号４７と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｔｅｒポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号４９に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｔｅｒポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号４９に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｔｅｒポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号４９と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＰｈａＢポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号９３に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＰｈａＢポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号９３に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＰｈａＢポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号９３と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＰｈａＪポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号９５に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＰｈａＪポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号９５に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＰｈａＪポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号９５と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０２７６】
マロニル−ＣｏＡを生成するポリペプチド、該ポリペプチドを含む核酸、および該ポリペプチドを発現する遺伝子組換え宿主細胞：  いくつかの実施形態では、宿主細胞は、マロニル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、マロニル−ＣｏＡを生成するポリペプチドは、アセチル−ＣｏＡカルボキシレート（ＡＣＣ）ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ＡＣＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。
【０２７７】
本明細書で開示する代表的なＡＣＣポリペプチドとして、完全長ＡＣＣポリペプチド、ＡＣＣポリペプチドのフラグメント、ＡＣＣポリペプチドの変異体、切断型ＡＣＣポリペプチド、またはＡＣＣポリペプチドの活性を少なくとも１つ持つ融合ポリペプチドが挙げられる。
【０２７８】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＡＣＣポリペプチドは、配列番号９、配列番号９７、または配列番号２０７に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＡＣＣポリペプチドは、配列番号９、配列番号９７、あるいは配列番号２０７に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＡＣＣポリペプチドは、配列番号９、配列番号９７、または配列番号２０７と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０２７９】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＡＣＣポリペプチドは、ＡＣＣ１ポリペプチドであり、配列番号９に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＡＣＣポリペプチドは、ＡＣＣ１ポリペプチドであり、配列番号９に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＡＣＣポリペプチドは、ＡＣＣ１ポリペプチドであり、配列番号９と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＡＣＣポリペプチドは、ＡＣＣ１ポリペプチドであり、配列番号９と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＡＣＣポリペプチドは、ＡＣＣ１ポリペプチドであり、配列番号９と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０２８０】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＡＣＣポリペプチドは、ＡＣＣ１（Ｓ６５９Ａ，Ｓ１１５７Ａ）ポリペプチドであり、配列番号９７に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＡＣＣポリペプチドは、ＡＣＣ１（Ｓ６５９Ａ，Ｓ１１５７Ａ）ポリペプチドであり、配列番号９７に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＡＣＣポリペプチドは、ＡＣＣ１（Ｓ６５９Ａ，Ｓ１１５７Ａ）ポリペプチドであり、配列番号９７と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＡＣＣポリペプチドは、ＡＣＣ１（Ｓ６５９Ａ，Ｓ１１５７Ａ）ポリペプチドであり、配列番号９７と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＡＣＣポリペプチドは、ＡＣＣ１（Ｓ６５９Ａ，Ｓ１１５７Ａ）ポリペプチドであり、配列番号９７と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０２８１】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＡＣＣポリペプチドは、ＡＣＣ１（Ｓ６５９Ａ，Ｓ１１５７Ａ）ポリペプチドであり、配列番号２０７に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＡＣＣポリペプチドは、ＡＣＣ１（Ｓ６５９Ａ，Ｓ１１５７Ａ）ポリペプチドであり、配列番号２０７に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＡＣＣポリペプチドは、ＡＣＣ１（Ｓ６５９Ａ，Ｓ１１５７Ａ）ポリペプチドであり、配列番号２０７と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＡＣＣポリペプチドは、ＡＣＣ１（Ｓ６５９Ａ，Ｓ１１５７Ａ）ポリペプチドであり、配列番号２０７と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＡＣＣポリペプチドは、ＡＣＣ１（Ｓ６５９Ａ，Ｓ１１５７Ａ）ポリペプチドであり、配列番号２０７と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０２８２】
本明細書で開示する代表的なＡＣＣ異種核酸として、完全長ＡＣＣポリペプチド、ＡＣＣポリペプチドのフラグメント、ＡＣＣポリペプチドの変異体、切断型ＡＣＣポリペプチド、またはＡＣＣポリペプチドの活性の少なくとも１つを持つ融合ポリペプチドのようなＡＣＣポリペプチドをコードする核酸が挙げられる。
【０２８３】
いくつかの実施形態では、ＡＣＣポリペプチドは、遺伝子組換え宿主細胞において過剰発現されている。例えば、ＲｕｎｇｕｐｈａｎおよびＫｅａｓｌｉｎｇ（２０１４）Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ２１：１０３参照。過剰発現は、例えば、高コピー数発現ベクター（例えば、１細胞当たり１０〜４０コピーが存在するプラスミド）を使用してＡＣＣポリペプチドをコードする異種核酸のコピー数を増やしおよび／またはＡＣＣポリペプチドをコードする異種核酸を強力プロモーターと作動可能に連結することにより達成してもよい。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＡＣＣポリペプチドをコードする異種核酸の１コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＡＣＣポリペプチドをコードする異種核酸の２コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＡＣＣポリペプチドをコードする異種核酸の３コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＡＣＣポリペプチドをコードする異種核酸の４コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＡＣＣポリペプチドをコードする異種核酸の５コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＡＣＣポリペプチドをコードする異種核酸の６コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＡＣＣポリペプチドをコードする異種核酸の７コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＡＣＣポリペプチドをコードする異種核酸の８コピーを持つ。
【０２８４】
いくつかの実施形態では、ＡＣＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２０１に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡＣＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、は、配列番号２０１に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡＣＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２０１と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡＣＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２０１と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡＣＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２０１と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０２８５】
アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体をマロニル−ＣｏＡと縮合してオリベトール酸またはオリベトール酸の誘導体を生成するポリペプチド、該ポリペプチドを含む核酸、および該ポリペプチドを発現する遺伝子組換え宿主細胞：  いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ヘキサノイル−ＣｏＡのようなアシル−ＣｏＡ化合物またはヘキサノイル−ＣｏＡ誘導体のようなアシル−ＣｏＡ化合物誘導体をマロニル−ＣｏＡと縮合して、オリベトール酸またはオリベトール酸の誘導体を生成する１つまたは複数のポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体をマロニル−ＣｏＡと反応させ、オリベトール酸またはオリベトール酸の誘導体を生成するポリペプチドとして、ＴＫＳおよびＯＡＣポリペプチドが挙げられる。ＴＫＳおよびＯＡＣポリペプチドは、カンナビノイドおよびカンナビノイド前駆体の他に、カンナビノイド誘導体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生を可能にする、広基質特異性を持つことが発見されている。
【０２８６】
いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、１つを超えるＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、２つを超えるＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、３つを超えるＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、２つのＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、３つのＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、１、２、または３つ以上のＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、１、２、３つのＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。
【０２８７】
いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、１つを超えるＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、２つを超えるＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、３つを超えるＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、２つのＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、３つのＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、１、２、または３つ以上のＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、１、２、３つのＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。
【０２８８】
本明細書で開示する代表的なＴＫＳまたはＯＡＣポリペプチドとして、完全長ＴＫＳまたはＯＡＣポリペプチド、ＴＫＳまたはＯＡＣポリペプチドのフラグメント、ＴＫＳまたはＯＡＣポリペプチドの変異体、切断型ＴＫＳまたはＯＡＣポリペプチド、またはＴＫＳまたはＯＡＣポリペプチドの活性を少なくとも１つ持つ融合ポリペプチドが挙げられる。
【０２８９】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＫＳポリペプチドは、配列番号１１または配列番号７６に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＫＳポリペプチドは、配列番号１１または配列番号７６に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＫＳポリペプチドは、配列番号１１または配列番号７６と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０２９０】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＯＡＣポリペプチドは、配列番号１０または配列番号７８に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＯＡＣポリペプチドは、配列番号１０または配列番号７８に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＯＡＣポリペプチドは、配列番号１０または配列番号７８と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０２９１】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＫＳポリペプチドは、配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＫＳポリペプチドは、配列番号１１に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＫＳポリペプチドは、配列番号１１と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＫＳポリペプチドは、配列番号１１と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＫＳポリペプチドは、配列番号１１と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０２９２】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＫＳポリペプチドは、配列番号７６に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＫＳポリペプチドは、配列番号７６に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＫＳポリペプチドは、配列番号７６と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＫＳポリペプチドは、配列番号７６と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＫＳポリペプチドは、配列番号７６と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０２９３】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＯＡＣポリペプチドは、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＯＡＣポリペプチドは、配列番号１０に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＯＡＣポリペプチドは、配列番号１０と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＯＡＣポリペプチドは、配列番号１０と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＯＡＣポリペプチドは、配列番号１０と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０２９４】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＯＡＣポリペプチドは、配列番号７８に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＯＡＣポリペプチドは、配列番号７８に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＯＡＣポリペプチドは、配列番号７８と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＯＡＣポリペプチドは、配列番号７８と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＯＡＣポリペプチドは、配列番号７８と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０２９５】
いくつかの実施形態では、ＴＫＳおよびＯＡＣポリペプチドは融合し、１本ポリペプチド鎖（ＴＫＳ／ＯＡＣ融合ポリペプチド）を形成する。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＫＳ／ＯＡＣポリペプチドは、配列番号８０に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＫＳ／ＯＡＣポリペプチドは、配列番号８０に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＫＳ／ＯＡＣポリペプチドは、配列番号８０と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＫＳ／ＯＡＣポリペプチドは、配列番号８０と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＫＳ／ＯＡＣポリペプチドは、配列番号８０と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＴＫＳ／ＯＡＣポリペプチドは、配列番号８０と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０２９６】
本明細書で開示する代表的なＴＫＳまたはＯＡＣ異種核酸として、完全長ＴＫＳまたはＯＡＣポリペプチド、ＴＫＳまたはＯＡＣポリペプチドのフラグメント、ＴＫＳまたはＯＡＣポリペプチドの変異体、切断型ＴＫＳまたはＯＡＣポリペプチド、またはＴＫＳまたはＯＡＣポリペプチドの活性の少なくとも１つを持つ融合ポリペプチドのようなＴＫＳまたはＯＡＣポリペプチドをコードする核酸が挙げられる。
【０２９７】
いくつかの実施形態では、ＴＫＳまたはＯＡＣポリペプチドは、遺伝子組換え宿主細胞において過剰発現されている。過剰発現は、例えば、高コピー数発現ベクター（例えば、１細胞当たり１０〜４０コピーが存在するプラスミド）を使用してＴＫＳおよび／またはＯＡＣポリペプチドをチドコードする異種核酸のコピー数を増やし、および／またはＴＫＳおよび／またはＯＡＣポリペプチドをチドコードする異種核酸を強力プロモーターと作動可能に連結することにより達成してもよい。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＴＫＳおよび／またはＯＡＣポリペプチドをコードする異種核酸の１コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＴＫＳおよび／またはＯＡＣポリペプチドをコードする異種核酸の２コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＴＫＳおよび／またはＯＡＣポリペプチドをコードする異種核酸の３コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＴＫＳおよび／またはＯＡＣポリペプチドをコードする異種核酸の４コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＴＫＳおよび／またはＯＡＣポリペプチドをコードする異種核酸の５コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＴＫＳおよび／またはＯＡＣポリペプチドをコードする異種核酸の６コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＴＫＳおよび／またはＯＡＣポリペプチドをコードする異種核酸の７コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＴＫＳおよび／またはＯＡＣポリペプチドをコードする異種核酸の８コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＴＫＳおよび／またはＯＡＣポリペプチドをコードする異種核酸の９コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＴＫＳおよび／またはＯＡＣポリペプチドをコードする異種核酸の１０コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＴＫＳおよび／またはＯＡＣポリペプチドをコードする異種核酸の１１コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＴＫＳおよび／またはＯＡＣポリペプチドをコードする異種核酸の１２コピーを持つ。
【０２９８】
いくつかの実施形態では、ＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号７７または配列番号１６３に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号７７または配列番号１６３に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号７７または配列番号１６３と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０２９９】
いくつかの実施形態では、ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号７５に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号７５に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号７５と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号７５と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０３００】
いくつかの実施形態では、ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１６２に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１６２に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１６２と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１６２と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１６２と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０３０１】
いくつかの実施形態では、ＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号７７に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号７７に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号７７と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号７７と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０３０２】
いくつかの実施形態では、ＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１６３に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１６３に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１６３と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１６３と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０３０３】
いくつかの実施形態では、ＴＫＳ／ＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号７９に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＫＳ／ＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号７９に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＫＳ／ＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号７９と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＫＳ／ＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号７９と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＫＳ／ＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号７９と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０３０４】
ゲラニルピロリン酸を生成するポリペプチド、該ポリペプチドを含む核酸、および該ポリペプチドを発現する遺伝子組換え宿主細胞：  いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ＧＰＰを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、ＧＰＰを生成するポリペプチドは、ゲラニル二リン酸シンターゼ（ＧＰＰＳ）ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドは、ファルネシル二リン酸シンターゼ（ＦＰＰＳ）ポリペプチド活性も持つ。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドは、組換えＧＰＰＳポリペプチドを誘導する対応する野生型または親のＧＰＰＳポリペプチドよりも減少したＦＰＰＳポリペプチド活性（例えば、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または９０％を超えて、少ないＦＰＰＳポリペプチド活性）を持つように組換えられている。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドは、実質的にＦＰＰＳポリペプチド活性を持たないように組換えられている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。
【０３０５】
本明細書で開示する代表的なＧＰＰＳポリペプチドとして、完全長ＧＰＰＳポリペプチド、ＧＰＰＳポリペプチドのフラグメント、ＧＰＰＳポリペプチドの変異体、切断型ＧＰＰＳポリペプチド、またはＧＰＰＳポリペプチドの活性を少なくとも１つ持つ融合ポリペプチドが挙げられる。いくつかの実施形態では、ＧＰＰを生成するまたはＧＰＰを生成する生合成経路の一部である１つまたは複数のポリペプチドは、メバロン酸（ＭＥＶ）経路に存在するポリペプチドの活性を少なくとも１つ持つ、１つまたは複数のポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ＧＰＰを生成するまたはＧＰＰを生成する生合成経路の一部である１つまたは複数のポリペプチドは、ＤＸＰ経路に存在するポリペプチドの活性を少なくとも１つ持つ、１つまたは複数のポリペプチドである。
【０３０６】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号７、配列番号８、または配列番号６０に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号７、配列番号８、または配列番号６０に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号７、配列番号８、または配列番号６０と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０３０７】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１２１、配列番号１２３、配列番号１２５、配列番号１２７、配列番号１２９、配列番号１３１、配列番号１３３、配列番号１３５、配列番号１３７、配列番号１３９、配列番号１４１、配列番号１４３、または配列番号２０３に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１２１、配列番号１２３、配列番号１２５、配列番号１２７、配列番号１２９、配列番号１３１、配列番号１３３、配列番号１３５、配列番号１３７、配列番号１３９、配列番号１４１、配列番号１４３、あるいは配列番号２０３に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１２１、配列番号１２３、配列番号１２５、配列番号１２７、配列番号１２９、配列番号１３１、配列番号１３３、配列番号１３５、配列番号１３７、配列番号１３９、配列番号１４１、配列番号１４３、または配列番号２０３と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０３０８】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号５または配列番号６に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号５あるいは配列番号６に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号５または配列番号６と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。
【０３０９】
いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ｉ）配列番号５に示されるアミノ酸配列を含むＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、およびｉｉ）配列番号６に示されるアミノ酸配列を含むＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。
【０３１０】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳ（Ｅｒｇ２０）ポリペプチドは、配列番号７に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳ（Ｅｒｇ２０）ポリペプチドは、配列番号７に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳ（Ｅｒｇ２０）ポリペプチドは、配列番号７と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳ（Ｅｒｇ２０）ポリペプチドは、配列番号７と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳ（Ｅｒｇ２０）ポリペプチドは、配列番号７と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０３１１】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳ（Ｅｒｇ２０（Ｋ１９７Ｇ））ポリペプチドは、配列番号８に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳ（Ｅｒｇ２０（Ｋ１９７Ｇ））ポリペプチドは、配列番号８に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳ（Ｅｒｇ２０（Ｋ１９７Ｇ））ポリペプチドは、配列番号８と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳ（Ｅｒｇ２０（Ｋ１９７Ｇ））ポリペプチドは、配列番号８と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳ（Ｅｒｇ２０（Ｋ１９７Ｇ））ポリペプチドは、配列番号８と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳ（Ｅｒｇ２０（Ｋ１９７Ｇ））ポリペプチドは、配列番号８に示されるアミノ酸配列を含み、配列番号７に示されるＧＰＰＳアミノ酸配列に対するＫ１９７Ｇアミノ酸置換を含む。この突然変異によりＧＰＰの比はファルネシル二リン酸（ＦＰＰ）にシフトし、ＣＢＤＡを産生するために必要なＧＰＰの産生が増す。
【０３１２】
いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ＧＰＰＳ大サブユニットポリペプチドおよびＧＰＰＳ小サブユニットポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされており、ここで、ＧＰＰＳ大サブユニットポリペプチドおよびＧＰＰＳ小サブユニットポリペプチドは、一緒になって、ヘテロ二量体ＧＰＰＳポリペプチドを形成する。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳ大サブユニットポリペプチドは、配列番号７２に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳ大サブユニットポリペプチドは、配列番号７２に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳ大サブユニットポリペプチドは、配列番号７２と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳ小サブユニットポリペプチドは、配列番号７４に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳ小サブユニットポリペプチドは、配列番号７４に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳ小サブユニットポリペプチドは、配列番号７４と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０３１３】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、ＥＲＧ２０ｍｕｔ（Ｆ９６Ｗ，Ｎ１２７Ｗ）ポリペプチドであり、配列番号６０に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、ＥＲＧ２０ｍｕｔ（Ｆ９６Ｗ，Ｎ１２７Ｗ）ポリペプチドであり、配列番号６０に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、ＥＲＧ２０ｍｕｔ（Ｆ９６Ｗ，Ｎ１２７Ｗ）ポリペプチドであり、配列番号６０と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、ＥＲＧ２０ｍｕｔ（Ｆ９６Ｗ，Ｎ１２７Ｗ）ポリペプチドであり、配列番号６０と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドはＥＲＧ２０ｍｕｔ（Ｆ９６Ｗ，Ｎ１２７Ｗ）ポリペプチドであり、配列番号６０と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。この突然変異によりＧＰＰの比はファルネシル二リン酸（ＦＰＰ）にシフトし、ＣＢＤＡを産生するのに必要なＧＰＰの産生を増やす。
【０３１４】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１２１に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１２１に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１２１と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１２１と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１２１と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０３１５】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１２３に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１２３に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１２３の少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１２３と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１２３と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０３１６】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１２５に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１２５に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１２５と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１２５と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１２５と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０３１７】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１２７に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１２７に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１２７と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１２７と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１２７と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０３１８】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１２９に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１２９に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１２９と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１２９と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１２９と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０３１９】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１３１に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１３１に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１３１と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１３１と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１３１と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０３２０】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１３３に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１３３に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１３３と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１３３と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１３３と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０３２１】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１３５に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１３５に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１３５と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１３５と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１３５と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０３２２】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１３７に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１３７に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１３７と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１３７と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１３７と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０３２３】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１３９に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１３９に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１３９と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１３９と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１３９と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０３２４】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１４１に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１４１に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１４１と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１４１と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１４１と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０３２５】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１４３に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１４３に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１４３と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１４３と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号１４３と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０３２６】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号２０３に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号２０３に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号２０３と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号２０３と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号２０３と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０３２７】
本明細書で開示する代表的なＧＰＰＳ異種核酸として、完全長ＧＰＰＳポリペプチド、ＧＰＰＳポリペプチドのフラグメント、ＧＰＰＳポリペプチドの変異体、切断型ＧＰＰＳポリペプチド、またはＧＰＰＳポリペプチドの活性の少なくとも１つを持つ融合ポリペプチドのようなＧＰＰＳポリペプチドをコードする核酸が挙げられる。
【０３２８】
いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドは、遺伝子組換え宿主細胞において過剰発現されている。過剰発現は、例えば、高コピー数発現ベクター（例えば、１細胞当たり１０〜４０コピーが存在するプラスミド）を使用してＧＰＰＳポリペプチドをコードする異種核酸のコピー数を増やしおよび／またはＧＰＰＳポリペプチドをコードする異種核酸を強力プロモーターと作動可能に連結することにより達成してもよい。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする異種核酸の１コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする異種核酸の２コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする異種核酸の３コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする異種核酸の４コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする異種核酸の５コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする異種核酸の６コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする異種核酸の７コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする異種核酸の８コピーを持つ。
【０３２９】
いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１２２、配列番号１２４、配列番号１２６、配列番号１２８、配列番号１３０、配列番号１３２、配列番号１３４、配列番号１３６、配列番号１３８、配列番号１４０、配列番号１４２、配列番号１４４、または配列番号２０２に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１２２、配列番号１２４、配列番号１２６、配列番号１２８、配列番号１３０、配列番号１３２、配列番号１３４、配列番号１３６、配列番号１３８、配列番号１４０、配列番号１４２、配列番号１４４、あるいは配列番号２０２に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１２２、配列番号１２４、配列番号１２６、配列番号１２８、配列番号１３０、配列番号１３２、配列番号１３４、配列番号１３６、配列番号１３８、配列番号１４０、配列番号１４２、配列番号１４４、または配列番号２０２と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０３３０】
いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号７１および／または配列番号７３に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号７１および／または配列番号７３に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号７１および／または配列番号７３と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０３３１】
いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸（ＥＲＧ２０ｍｕｔ（Ｆ９６Ｗ，Ｎ１２７Ｗ））は、配列番号５９に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸（ＥＲＧ２０ｍｕｔ（Ｆ９６Ｗ，Ｎ１２７Ｗ））は、配列番号５９に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸（ＥＲＧ２０ｍｕｔ（Ｆ９６Ｗ，Ｎ１２７Ｗ））は、配列番号５９と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸（ＥＲＧ２０ｍｕｔ（Ｆ９６Ｗ，Ｎ１２７Ｗ））は、配列番号５９と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０３３２】
いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸（ＥＲＧ２０ｍｕｔ（Ｆ９６Ｗ，Ｎ１２７Ｗ））は、配列番号１６１に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸（ＥＲＧ２０ｍｕｔ（Ｆ９６Ｗ，Ｎ１２７Ｗ））は、配列番号１６１に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸（ＥＲＧ２０ｍｕｔ（Ｆ９６Ｗ，Ｎ１２７Ｗ））は、配列番号１６１と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸（ＥＲＧ２０ｍｕｔ（Ｆ９６Ｗ，Ｎ１２７Ｗ））は、配列番号１６１と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸（ＥＲＧ２０ｍｕｔ（Ｆ９６Ｗ，Ｎ１２７Ｗ））は、配列番号１６１と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０３３３】
いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１２２に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１２２に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１２２と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１２２と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０３３４】
いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１２４に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１２４に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１２４と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１２４と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０３３５】
いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１２６に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１２６に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１２６と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１２６と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０３３６】
いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１２８に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１２８に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１２８と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１２８と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０３３７】
いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１３０に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１３０に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１３０と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１３０と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０３３８】
いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１３２に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１３２に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１３２と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１３２と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０３３９】
いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１３４に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１３４に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１３４と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１３４と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０３４０】
いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１３６に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１３６に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１３６と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１３６と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０３４１】
いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１３８に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１３８に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１３８と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１３８と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０３４２】
いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１４０に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１４０に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１４０と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１４０と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０３４３】
いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１４２に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１４２に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１４２と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１４２と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０３４４】
いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１４４に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１４４に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１４４と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１４４と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０３４５】
いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２０２に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２０２に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２０２と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２０２と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０３４６】
ＮｐｈＢポリペプチド、該ポリペプチドを含む核酸、および該ポリペプチドを発現する遺伝子組換え宿主細胞：  いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドの代わりにＮｐｈＢポリペプチドを使用して、ＧＰＰおよびオリベトール酸からカンナビゲロール酸を生成する。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ＮｐｈＢポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。
【０３４７】
本明細書で開示する代表的なＮｐｈＢポリペプチドとして、完全長ＮｐｈＢポリペプチド、ＮｐｈＢポリペプチドのフラグメント、ＮｐｈＢポリペプチドの変異体、切断型ＮｐｈＢポリペプチド、またはＮｐｈＢポリペプチドの活性を少なくとも１つを持つ融合ポリペプチドが挙げられる。
【０３４８】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＮｐｈＢポリペプチドは、配列番号８４に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＮｐｈＢポリペプチドは、配列番号８４に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＮｐｈＢポリペプチドは、配列番号８４と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０３４９】
本明細書で開示する代表的なＮｐｈＢ異種核酸として、完全長ＮｐｈＢポリペプチド、ＮｐｈＢポリペプチドのフラグメント、ＮｐｈＢポリペプチドの変異体、切断型ＮｐｈＢポリペプチド、またはＮｐｈＢポリペプチドの活性を少なくとも１つを持つ融合ポリペプチドのようなＮｐｈＢポリペプチドをコードする核酸が挙げられる。
【０３５０】
いくつかの実施形態では、ＮｐｈＢポリペプチドは、遺伝子組換え宿主細胞において過剰発現されている。過剰発現は、例えば、高コピー数発現ベクター（例えば、１細胞当たり１０〜４０コピーが存在するプラスミド）を使用してＮｐｈＢポリペプチドをコードする異種核酸のコピー数を増やしおよび／またはＮｐｈＢポリペプチドをコードする異種核酸を強力プロモーターと作動可能に連結することにより達成してもよい。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＮｐｈＢポリペプチドをコードする異種核酸の１コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＮｐｈＢポリペプチドをコードする異種核酸の２コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＮｐｈＢポリペプチドをコードする異種核酸の３コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＮｐｈＢポリペプチドをコードする異種核酸の４コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＮｐｈＢポリペプチドをコードする異種核酸の５コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＮｐｈＢポリペプチドをコードする異種核酸の６コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＮｐｈＢポリペプチドをコードする異種核酸の７コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＮｐｈＢポリペプチドをコードする異種核酸の８コピーを持つ。
【０３５１】
いくつかの実施形態では、ＮｐｈＢポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号８３に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＮｐｈＢポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号８３に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＮｐｈＢポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号８３と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０３５２】
ピロリン酸ネリルまたはカンナビネロール酸を生成するポリペプチド、該ポリペプチドを含む核酸、および該ポリペプチドを発現する遺伝子組換え宿主細胞：  いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ピロリン酸ネリル（ＮＰＰ）シンターゼ（ＮＰＰＳ）ポリペプチド（図１１）をコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。ＮＰＰおよびオリベトール酸は、カンナビネロール酸（ＣＢＮＲＡ）を生成する基質であってもよい。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、ＮＰＰおよびオリベトール酸誘導体に作用し（本明細書の他で記載するように）ＣＢＮＲＡ誘導体を生成する。カンナビネロール酸またはその誘導体は、ＣＢＤＡＳまたはＴＨＣＡＳポリペプチドの基質としての役目を果たすことができ、ＣＢＤＡあるいはＴＨＣＡ、またはそれぞれの誘導体を生成する。
【０３５３】
本明細書で開示する代表的なＮＰＰＳポリペプチドとして、ＮＰＰＳポリペプチドのフラグメント、ＮＰＰＳポリペプチドの変異体、完全長ＮＰＰＳポリペプチド、切断型ＮＰＰＳポリペプチド、またはＮＰＰＳポリペプチドの活性を少なくとも１つ持つ融合ポリペプチドが挙げられる。
【０３５４】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＮＰＰＳポリペプチドは、配列番号７０に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＮＰＰＳポリペプチドは、配列番号７０に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＮＰＰＳポリペプチドは、配列番号７０と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＮＰＰＳポリペプチドは、配列番号７０と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＮＰＰＳポリペプチドは、配列番号７０と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＮＰＰＳポリペプチドは、配列番号７０と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０３５５】
本明細書で開示する代表的なＮＰＰＳ異種核酸として、完全長ＮＰＰＳポリペプチド、ＮＰＰＳポリペプチドのフラグメント、ＮＰＰＳポリペプチドの変異体、切断型ＮＰＰＳポリペプチド、またはＮＰＰＳポリペプチドの活性を少なくとも１つ持つ融合ポリペプチドのようなＮＰＰＳポリペプチドをコードする核酸が挙げられる。
【０３５６】
いくつかの実施形態では、ＮＰＰＳポリペプチドは、遺伝子組換え宿主細胞において過剰発現されている。過剰発現は、例えば、高コピー数発現ベクター（例えば、１細胞当たり１０〜４０コピーが存在するプラスミド）を使用してＮＰＰＳポリペプチドをコードする異種核酸のコピー数を増やしおよび／またはＮＰＰＳポリペプチドをコードする異種核酸を強力プロモーターと作動可能に連結することにより達成してもよい。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＮＰＰＳポリペプチドをコードする異種核酸の１コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＮＰＰＳポリペプチドをコードする異種核酸の２コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＮＰＰＳポリペプチドをコードする異種核酸の３コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＮＰＰＳポリペプチドをコードする異種核酸の４コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＮＰＰＳポリペプチドをコードする異種核酸の５コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＮＰＰＳポリペプチドをコードする異種核酸の６コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＮＰＰＳポリペプチドをコードする異種核酸の７コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＮＰＰＳポリペプチドをコードする異種核酸の８コピーを持つ。
【０３５７】
いくつかの実施形態では、ＮＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号６９に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＮＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号６９に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＮＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号６９と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＮＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号６９と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＮＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号６９と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０３５８】
ピルビン酸塩からアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチド、該ポリペプチドを含む核酸、および該ポリペプチドを発現する遺伝子組換え宿主細胞：  いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ピルビン酸塩からアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。ピルビン酸塩からアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドとして、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ複合体（ＰＤＣ）ポリペプチドが挙げられる。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ＰＤＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。
【０３５９】
本明細書で開示する代表的なＰＤＣポリペプチドとして、完全長ＰＤＣポリペプチド、ＰＤＣポリペプチドのフラグメント、ＰＤＣポリペプチドの変異体、切断型ＰＤＣポリペプチド、またはＰＤＣポリペプチドの活性を少なくとも１つ持つ融合ポリペプチドが挙げられる。
【０３６０】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＰＤＣポリペプチドは、配列番号１１７に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＰＤＣポリペプチドは、配列番号１１７に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＰＤＣポリペプチドは、配列番号１１７と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＰＤＣポリペプチドは、配列番号１１７と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＰＤＣポリペプチドは、配列番号１１７と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＰＤＣポリペプチドは、配列番号１１７と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０３６１】
本明細書で開示する代表的なＰＤＣ異種核酸として、完全長ＰＤＣポリペプチド、ＰＤＣポリペプチドのフラグメント、ＰＤＣポリペプチドの変異体、切断型ＰＤＣポリペプチド、またはＰＤＣポリペプチドの活性を少なくとも１つ持つ融合ポリペプチドのようなＰＤＣポリペプチドをコードする核酸が挙げられる。
【０３６２】
いくつかの実施形態では、ＰＤＣポリペプチドは、遺伝子組換え宿主細胞において過剰発現されている。過剰発現は、例えば、高コピー数発現ベクター（例えば、１細胞当たり１０〜４０コピーが存在するプラスミド）を使用してＰＤＣポリペプチドをコードする異種核酸のコピー数を増やしおよび／またはＰＤＣポリペプチドをコードする異種核酸を強力プロモーターと作動可能に連結することにより達成してもよい。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＰＤＣポリペプチドをコードする異種核酸の１コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＰＤＣポリペプチドをコードする異種核酸の２コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＰＤＣポリペプチドをコードする異種核酸の３コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＰＤＣポリペプチドをコードする異種核酸の４コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＰＤＣポリペプチドをコードする異種核酸の５コピーを持つ。
【０３６３】
いくつかの実施形態では、ＰＤＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１１８に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＰＤＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１１８に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＰＤＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１１８と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＰＤＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１１８と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＰＤＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１１８と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０３６４】
２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチド、該ポリペプチドを含む核酸、および該ポリペプチドを発現する遺伝子組換え宿主細胞：  いくつかの実施形態では、宿主細胞は、２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドは、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼ（ＥＲＧ１０ｐ）ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。
【０３６５】
本明細書で開示する代表的なアセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドとして、完全長アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチド、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドのフラグメント、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドの変異体、切断型アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチド、またはアセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドの活性を少なくとも１つ持つ融合ポリペプチドが挙げられる。
【０３６６】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたアセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼ（ＥＲＧ１０ｐ）ポリペプチドは、配列番号２５に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたアセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼ（ＥＲＧ１０ｐ）ポリペプチドは、配列番号２５に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたアセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼ（ＥＲＧ１０ｐ）ポリペプチドは、配列番号２５と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたアセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼ（ＥＲＧ１０ｐ）ポリペプチドは、配列番号２５と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたアセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼ（ＥＲＧ１０ｐ）ポリペプチドは、配列番号２５と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたアセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼ（ＥＲＧ１０ｐ）ポリペプチドは、配列番号２５と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０３６７】
本明細書で開示する代表的なアセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼ異種核酸として、完全長アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチド、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドのフラグメント、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドの変異体、切断型アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチド、またはアセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドの活性を少なくとも１つ持つ融合ポリペプチドのようなアセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドをコードする核酸が挙げられる。
【０３６８】
いくつかの実施形態では、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドは、遺伝子組換え宿主細胞において過剰発現されている。過剰発現は、例えば、高コピー数発現ベクター（例えば、１細胞当たり１０〜４０コピーが存在するプラスミド）を使用してアセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドをコードする異種核酸のコピー数を増やしおよび／またはアセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドをコードする異種核酸を強力プロモーター作動可能に連結することにより達成してもよい。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドをコードする異種核酸の１コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドをコードする異種核酸の２コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドをコードする異種核酸の３コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドをコードする異種核酸の４コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドをコードする異種核酸の５コピーを持つ。
【０３６９】
いくつかの実施形態では、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼ（ＥＲＧ１０ｐ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１５７に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＥＲＧ１０ｐポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１５７に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼ（ＥＲＧ１０ｐ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１５７と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼ（ＥＲＧ１０ｐ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１５７と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼ（ＥＲＧ１０ｐ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１５７と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０３７０】
いくつかの実施形態では、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼ（ＥＲＧ１０ｐ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２０９に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＥＲＧ１０ｐポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２０９に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼ（ＥＲＧ１０ｐ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２０９と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼ（ＥＲＧ１０ｐ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２０９と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼ（ＥＲＧ１０ｐ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２０９と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０３７１】
メバロン酸経路ポリペプチド、該ポリペプチドを含む核酸、および該ポリペプチドを発現する遺伝子組換え宿主細胞：  いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、メバロン酸（ＭＥＶ）経路に存在するポリペプチドの活性を少なくとも１つ持つ、１つまたは複数のポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。
【０３７２】
いくつかの実施形態では、ＧＰＰを生成するまたはＧＰＰを生成する生合成経路の一部である１つまたは複数のポリペプチドは、メバロン酸経路に存在するポリペプチドの活性を少なくとも１つ持つ、１つまたは複数のポリペプチドである。メバロン酸経路は、以下の工程を触媒するポリペプチドを含んでもよい。（ａ）２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成する（例えば、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドの作用により）、（ｂ）アセトアセチル−ＣｏＡをアセチル−ＣｏＡと縮合してヒドロキシメチルグルタリル−ＣｏＡ（ＨＭＧ−ＣｏＡ）を形成する（例えば、ＨＭＧＳポリペプチドの作用により）、（ｃ）ＨＭＧ−ＣｏＡをメバロン酸に変換する（例えば、ＨＭＧＲポリペプチドの作用により）、（ｄ）メバロン酸をメバロン酸５−リン酸にリン酸エステル化する（例えば、ＭＫポリペプチドの作用により）、（ｅ）メバロン酸５−リン酸をメバロン酸５−ピロリン酸に変換する（例えば、ＰＭＫポリペプチドの作用により）、（ｆ）メバロン酸５−ピロリン酸を、イソペンテニルピロリン酸に変換する（例えば、メバロン酸ピロリン酸デカルボキシラーゼ（ＭＰＤまたはＭＶＤ）ポリペプチドの作用により）、および（ｇ）イソペンテニルピロリン酸をジメチルアリルピロリン酸に変換する（例えば、イソペンテニルピロリン酸イソメラーゼ（ＩＤＩ）ポリペプチドの作用により）。
【０３７３】
いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ＭＥＶ経路ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、１つ以上のＭＥＶ経路ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、２つを超えるＭＥＶ経路ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、３つを超えるＭＥＶ経路ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、４つを超えるＭＥＶ経路ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、５つを超えるＭＥＶ経路ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、６つを超えるＭＥＶ経路ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、全てのＭＥＶ経路ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。
【０３７４】
いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、２つのＭＥＶ経路ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、３つのＭＥＶ経路ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、４つのＭＥＶ経路ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、５つのＭＥＶ経路ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、６つのＭＥＶ経路ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、１、２、３、４、５、または６つ以上のＭＥＶ経路ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、１、２、３、４、５、６つのＭＥＶ経路ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。
【０３７５】
本明細書で開示する代表的なＭＥＶ経路ポリペプチドとして、完全長ＭＥＶ経路ポリペプチド、ＭＥＶ経路ポリペプチドのフラグメント、ＭＥＶ経路ポリペプチドの変異体、切断型ＭＥＶ経路ポリペプチド、またはＭＥＶ経路ポリペプチドの活性を少なくとも１つ持つ融合ポリペプチドが挙げられる。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のＭＥＶ経路ポリペプチドは、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチド、ＨＭＧＳポリペプチド、ＨＭＧＲポリペプチド、ＭＫポリペプチド、ＰＭＫポリペプチド、ＭＶＤポリペプチド、およびＩＤＩポリペプチドからなる群れから選択される。
【０３７６】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＨＭＧＳポリペプチドは、配列番号２３、配列番号２４、または配列番号１１５に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＨＭＧＳポリペプチドは、配列番号２３、配列番号２４、または配列番号１１５に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＨＭＧＳポリペプチドは、配列番号２３、配列番号２４、または配列番号１１５と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０３７７】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＨＭＧＳポリペプチドは、ＭｖａＳポリペプチドであり、配列番号２３に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＨＭＧＳポリペプチドは、ＭｖａＳポリペプチドであり、配列番号２３に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＨＭＧＳポリペプチドは、ＭｖａＳポリペプチドであり、配列番号２３と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＨＭＧＳポリペプチドは、ＭｖａＳポリペプチドであり、配列番号２３と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＨＭＧＳポリペプチドは、ＭｖａＳポリペプチドであり、配列番号２３と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０３７８】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＨＭＧＳポリペプチドは、ＭｖａＳポリペプチドであり、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＨＭＧＳポリペプチドは、ＭｖａＳポリペプチドであり、配列番号５６に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＨＭＧＳポリペプチドは、ＭｖａＳポリペプチドであり、配列番号５６と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＨＭＧＳポリペプチドは、ＭｖａＳポリペプチドであり、配列番号５６と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＨＭＧＳポリペプチドは、ＭｖａＳポリペプチドであり、配列番号５６と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０３７９】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＨＭＧＳポリペプチドは、ＥＲＧ１３ポリペプチドであり、配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＨＭＧＳポリペプチドは、ＥＲＧ１３ポリペプチドであり、配列番号２４に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＨＭＧＳポリペプチドは、ＥＲＧ１３ポリペプチドであり、配列番号２４と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＨＭＧＳポリペプチドは、ＥＲＧ１３ポリペプチドであり、配列番号２４と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＨＭＧＳポリペプチドは、ＥＲＧ１３ポリペプチドであり、配列番号２４と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０３８０】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＨＭＧＳポリペプチドは、ＥＲＧ１３ポリペプチドであり、配列番号１１５に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＨＭＧＳポリペプチドは、ＥＲＧ１３ポリペプチドであり、配列番号１１５に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＨＭＧＳポリペプチドは、ＥＲＧ１３ポリペプチドであり、配列番号１１５と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＨＭＧＳポリペプチドは、ＥＲＧ１３ポリペプチドであり、配列番号１１５と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＨＭＧＳポリペプチドは、ＥＲＧ１３ポリペプチドであり、配列番号１１５と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０３８１】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＨＭＧＲポリペプチドは、ＭｖａＥポリペプチドであり、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＨＭＧＲポリペプチドは、ＭｖａＥポリペプチドであり、配列番号２２に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＨＭＧＲポリペプチドは、ＭｖａＥポリペプチドであり、配列番号２２と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＨＭＧＲポリペプチドは、ＭｖａＥポリペプチドであり、配列番号２２と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＨＭＧＲポリペプチドは、ＭｖａＥポリペプチドであり、配列番号２２と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＨＭＧＲポリペプチドは、ＭｖａＥポリペプチドであり、配列番号２２と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０３８２】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＨＭＧＲポリペプチドは、ＭｖａＥポリペプチドであり、配列番号５４に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＨＭＧＲポリペプチドは、ＭｖａＥポリペプチドであり、配列番号５４に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＨＭＧＲポリペプチドは、ＭｖａＥポリペプチドであり、配列番号５４と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＨＭＧＲポリペプチドは、ＭｖａＥポリペプチドであり、配列番号５４と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＨＭＧＲポリペプチドは、ＭｖａＥポリペプチドであり、配列番号５４と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０３８３】
いくつかの実施形態では、ＨＭＧＲポリペプチドは、切断型ＨＭＧＲ（ｔＨＭＧＲ）ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたｔＨＭＧＲポリペプチドは、配列番号１７、配列番号５２、配列番号１１３、または配列番号２０８に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたｔＨＭＧＲポリペプチドは、配列番号１７、配列番号５２、配列番号１１３、あるいは配列番号２０８に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたｔＨＭＧＲポリペプチドは、配列番号１７、配列番号５２、配列番号１１３、または配列番号２０８と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０３８４】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたｔＨＭＧＲポリペプチドは、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたｔＨＭＧＲポリペプチドは、配列番号１７に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたｔＨＭＧＲポリペプチドは、配列番号１７と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたｔＨＭＧＲポリペプチドは、配列番号１７と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたｔＨＭＧＲポリペプチドは、配列番号１７と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０３８５】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたｔＨＭＧＲポリペプチドは、配列番号５２に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたｔＨＭＧＲポリペプチドは、配列番号５２に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたｔＨＭＧＲポリペプチドは、配列番号５２と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたｔＨＭＧＲポリペプチドは、配列番号５２と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたｔＨＭＧＲポリペプチドは、配列番号５２と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０３８６】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたｔＨＭＧＲポリペプチドは、配列番号１１３に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたｔＨＭＧＲポリペプチドは、配列番号１１３に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたｔＨＭＧＲポリペプチドは、配列番号１１３と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたｔＨＭＧＲポリペプチドは、配列番号１１３と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたｔＨＭＧＲポリペプチドは、配列番号１１３と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０３８７】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたｔＨＭＧＲポリペプチドは、配列番号２０８に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたｔＨＭＧＲポリペプチドは、配列番号２０８に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたｔＨＭＧＲポリペプチドは、配列番号２０８と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたｔＨＭＧＲポリペプチドは、配列番号２０８と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたｔＨＭＧＲポリペプチドは、配列番号２０８と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０３８８】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＭＫ（ＥＲＧ１２）ポリペプチドは、配列番号６４に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＭＫ（ＥＲＧ１２）ポリペプチドは、配列番号６４に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＭＫ（ＥＲＧ１２）ポリペプチドは、配列番号６４と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＭＫ（ＥＲＧ１２）ポリペプチドは、配列番号６４と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＭＫ（ＥＲＧ１２）ポリペプチドは、配列番号６４と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＭＫ（ＥＲＧ１２）ポリペプチドは、配列番号６４と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０３８９】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＰＭＫポリペプチドは、配列番号６２または配列番号２０５に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＰＭＫポリペプチドは、配列番号６２または配列番号２０５に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＰＭＫポリペプチドは、配列番号６２または配列番号２０５と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０３９０】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＰＭＫポリペプチドは、配列番号６２に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＰＭＫポリペプチドは、配列番号６２に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＰＭＫポリペプチドは、配列番号６２と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＰＭＫポリペプチドは、配列番号６２と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＰＭＫポリペプチドは、配列番号６２と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０３９１】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＰＭＫポリペプチドは、ＥＲＧ８ポリペプチドであり、配列番号２０５に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＰＭＫポリペプチドは、ＥＲＧ８ポリペプチドであり、配列番号２０５に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＰＭＫポリペプチドは、ＥＲＧ８ポリペプチドであり、配列番号２０５と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＰＭＫポリペプチドは、ＥＲＧ８ポリペプチドであり、配列番号２０５と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＰＭＫポリペプチドは、ＥＲＧ８ポリペプチドであり、配列番号２０５と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０３９２】
いくつかの実施形態では、ＰＭＫポリペプチドおよびＭＫポリペプチドは融合し、１本ポリペプチド鎖（ＰＭＫ／ＭＫ融合ポリペプチド）を形成している。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＰＭＫ／ＭＫポリペプチドは、配列番号６８に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＰＭＫ／ＭＫポリペプチドは、配列番号６８に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＰＭＫ／ＭＫポリペプチドは、配列番号６８と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＰＭＫ／ＭＫポリペプチドは、配列番号６８と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＰＭＫ／ＭＫポリペプチドは、配列番号６８と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＰＭＫ／ＭＫポリペプチドは、配列番号６８と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０３９３】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＭＶＤポリペプチドは、ＥＲＧ１９ポリペプチドであり、配列番号６６に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＭＶＤポリペプチドは、ＥＲＧ１９ポリペプチドであり、配列番号６６に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＭＶＤポリペプチドは、ＥＲＧ１９ポリペプチドであり、配列番号６６と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＭＶＤポリペプチドは、ＥＲＧ１９ポリペプチドであり、配列番号６６と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＭＶＤポリペプチドは、ＥＲＧ１９ポリペプチドであり、配列番号６６と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＭＶＤポリペプチドは、ＥＲＧ１９ポリペプチドであり、配列番号６６と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０３９４】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＩＤＩ１ポリペプチドは、配列番号５８に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＩＤＩ１ポリペプチドは、配列番号５８に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＩＤＩ１ポリペプチドは、配列番号５８と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＩＤＩ１ポリペプチドは、配列番号５８と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＩＤＩ１ポリペプチドは、配列番号５８と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＩＤＩ１ポリペプチドは、配列番号５８と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０３９５】
本明細書で開示する代表的なＭＥＶ経路異種核酸として、完全長ＭＥＶ経路ポリペプチド、ＭＥＶ経路ポリペプチドのフラグメント、ＭＥＶ経路ポリペプチドの変異体、切断型ＭＥＶ経路ポリペプチド、またはＭＥＶ経路の一部であるポリペプチドの活性を少なくとも１つ持つ融合ポリペプチドのようなＭＥＶ経路ポリペプチドをコードする核酸が挙げられる。
【０３９６】
いくつかの実施形態では、ＭＥＶ経路ポリペプチドは、遺伝子組換え宿主細胞において過剰発現されている。過剰発現は、例えば、高コピー数発現ベクター（例えば、１細胞当たり１０〜４０コピーが存在するプラスミド）を使用してＭＥＶ経路ポリペプチドをコードする異種核酸のコピー数を増やしおよび／またはＭＥＶ経路ポリペプチドをコードする異種核酸を強力プロモーター作動可能に連結することにより達成してもよい。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＭＥＶ経路ポリペプチドをコードする異種核酸の１コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＭＥＶ経路ポリペプチドをコードする異種核酸の２コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＭＥＶ経路ポリペプチドをコードする異種核酸の３コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＭＥＶ経路ポリペプチドをコードする異種核酸の４コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＭＥＶ経路ポリペプチドをコードする異種核酸の５コピーを持つ。
【０３９７】
いくつかの実施形態では、ＨＭＧＳ（ｍｖａＳ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号５５に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＭＧＳ（ｍｖａＳ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号５５に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＭＧＳ（ｍｖａＳ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号５５と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＭＧＳ（ｍｖａＳ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号５５と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０３９８】
いくつかの実施形態では、ＨＭＧＳ（ＥＲＧ１３）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１１６または配列番号１２０に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＭＧＳ（ＥＲＧ１３）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１１６あるいは配列番号１２０に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＭＧＳ（ＥＲＧ１３）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１１６または配列番号１２０と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０３９９】
いくつかの実施形態では、ＨＭＧＳ（ＥＲＧ１３）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１１６に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＭＧＳ（ＥＲＧ１３）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１１６に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＭＧＳ（ＥＲＧ１３）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１１６と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＭＧＳ（ＥＲＧ１３）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１１６と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０４００】
いくつかの実施形態では、ＨＭＧＳ（ＥＲＧ１３）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１２０に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＭＧＳ（ＥＲＧ１３）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１２０に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＭＧＳ（ＥＲＧ１３）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１２０と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＭＧＳ（ＥＲＧ１３）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１２０と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０４０１】
いくつかの実施形態では、ＨＭＧＲ（ｍｖａＥ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号５３に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＭＧＲ（ｍｖａＥ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号５３に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＭＧＲ（ｍｖａＥ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号５３と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＭＧＲ（ｍｖａＥ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号５３と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０４０２】
いくつかの実施形態では、ｔＨＭＧＲポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号５１、配列番号１１４、または配列番号１１９に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ｔＨＭＧＲポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号５１、配列番号１１４、または配列番号１１９に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ｔＨＭＧＲポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号５１、配列番号１１４、または配列番号１１９と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０４０３】
いくつかの実施形態では、ｔＨＭＧＲポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号５１に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ｔＨＭＧＲポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号５１に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ｔＨＭＧＲポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号５１と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ｔＨＭＧＲポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号５１と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０４０４】
いくつかの実施形態では、ｔＨＭＧＲポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１１４に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ｔＨＭＧＲポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１１４に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ｔＨＭＧＲポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１１４と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ｔＨＭＧＲポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１１４と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０４０５】
いくつかの実施形態では、ｔＨＭＧＲポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１１９に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ｔＨＭＧＲポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１１９に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ｔＨＭＧＲポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１１９と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ｔＨＭＧＲポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１１９と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０４０６】
いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ｔＨＭＧＲポリペプチドをコードする２つ以上の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ｔＨＭＧＲポリペプチドをコードする２つの異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ＨＭＧＲポリペプチドをコードする２つ以上の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ＨＭＧＲポリペプチドをコードする２つの異種核酸で遺伝子組換えされている。
【０４０７】
いくつかの実施形態では、ＭＫ（ＥＲＧ１２）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号６３または配列番号２０６に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＭＫ（ＥＲＧ１２）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号６３あるいは配列番号２０６に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＭＫ（ＥＲＧ１２）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号６３または配列番号２０６と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０４０８】
いくつかの実施形態では、ＭＫ（ＥＲＧ１２）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号６３に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＭＫ（ＥＲＧ１２）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号６３に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＭＫ（ＥＲＧ１２）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号６３と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＭＫ（ＥＲＧ１２）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号６３と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０４０９】
いくつかの実施形態では、ＭＫ（ＥＲＧ１２）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２０６に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＭＫ（ＥＲＧ１２）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２０６に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＭＫ（ＥＲＧ１２）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２０６と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＭＫ（ＥＲＧ１２）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２０６と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０４１０】
いくつかの実施形態では、ＰＭＫ（ＥＲＧ８）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号６１、配列番号１６０、または配列番号２０４に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＰＭＫ（ＥＲＧ８）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号６１、配列番号１６０、または配列番号２０４に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＰＭＫ（ＥＲＧ８）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号６１、配列番号１６０、または配列番号２０４と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０４１１】
いくつかの実施形態では、ＰＭＫ（ＥＲＧ８）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号６１に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＰＭＫ（ＥＲＧ８）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号６１に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＰＭＫ（ＥＲＧ８）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号６１と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＰＭＫ（ＥＲＧ８）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号６１と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０４１２】
いくつかの実施形態では、ＰＭＫ（ＥＲＧ８）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１６０に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＰＭＫ（ＥＲＧ８）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１６０に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＰＭＫ（ＥＲＧ８）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１６０と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＰＭＫ（ＥＲＧ８）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１６０と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０４１３】
いくつかの実施形態では、ＰＭＫ（ＥＲＧ８）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２０４に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＰＭＫ（ＥＲＧ８）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２０４に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＰＭＫ（ＥＲＧ８）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２０４と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＰＭＫ（ＥＲＧ８）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号２０４と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０４１４】
いくつかの実施形態では、ＰＭＫ／ＭＫポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号６７に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＰＭＫ／ＭＫポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号６７に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＰＭＫ／ＭＫポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号６７と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＰＭＫ／ＭＫポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号６７と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＰＭＫ／ＭＫポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号６７と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０４１５】
いくつかの実施形態では、ＭＶＤ（ＥＲＧ１９）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号６５または配列番号１５８に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＭＶＤ（ＥＲＧ１９）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号６５あるいは配列番号１５８に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＭＶＤ（ＥＲＧ１９）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号６５または配列番号１５８と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０４１６】
いくつかの実施形態では、ＭＶＤ（ＥＲＧ１９）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号６５に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＭＶＤ（ＥＲＧ１９）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号６５に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＭＶＤ（ＥＲＧ１９）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号６５と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＭＶＤ（ＥＲＧ１９）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号６５と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０４１７】
いくつかの実施形態では、ＭＶＤ（ＥＲＧ１９）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１５８に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＭＶＤ（ＥＲＧ１９）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１５８に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＭＶＤ（ＥＲＧ１９）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１５８と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＭＶＤ（ＥＲＧ１９）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１５８と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０４１８】
いくつかの実施形態では、ＩＤＩ１ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号５７または配列番号１５９に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＤＩ１ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号５７あるいは配列番号１５９に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＤＩ１ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号５７または配列番号１５９と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０４１９】
いくつかの実施形態では、ＩＤＩ１ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号５７に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＤＩ１ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号５７に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＤＩ１ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号５７と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＤＩ１ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号５７と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０４２０】
いくつかの実施形態では、ＩＤＩ１ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１５９に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＤＩ１ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１５９に示されるヌクレオチド配列、またはそのコドン縮重ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＤＩ１ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１５９と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、または少なくとも８４％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＤＩ１ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸は、配列番号１５９と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０４２１】
ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨ酸化還元バランスを調節するポリペプチド、該ポリペプチドを含む核酸、および該ポリペプチドを発現する遺伝子組換え宿主細胞：  いくつかの実施形態では、宿主細胞は、ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨ酸化還元バランスを調節するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。ＧＰＰ産生には酸化還元不均衡があり、これはＮＡＤＰＨを使用する酵素を、ＮＡＤＨを使用する酵素に変化させ、酸化還元をより良好なバランスにすることによって調節することができる。
【０４２２】
いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨ酸化還元バランスを調節するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨ酸化還元バランスを調節する１つを超えるポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨ酸化還元バランスを調節する２つを超えるポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨ酸化還元バランスを調節する３つを超えるポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨ酸化還元バランスを調節する２つのポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨ酸化還元バランスを調節する３つのポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨ酸化還元バランスを調節する１、２、または３つ以上のポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨ酸化還元バランスを調節する１、２、または３つのポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。
【０４２３】
本明細書で開示する代表的なＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨ酸化還元バランスを調節するポリペプチドとして、ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨ酸化還元バランスを調節する完全長ポリペプチド、ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨ酸化還元バランスを調節するポリペプチドのフラグメント、ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨ酸化還元バランスを調節するポリペプチドの変異体、ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨ酸化還元バランスを調節する切断型ポリペプチド、またはＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨ酸化還元バランスを調節するポリペプチドの活性を少なくとも１つ持つ融合ポリペプチドが挙げられる。
【０４２４】
本明細書で開示する代表的な異種核酸として、ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨ酸化還元バランスを調節する完全長ポリペプチド、ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨ酸化還元バランスを調節するポリペプチドのフラグメント、ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨ酸化還元バランスを調節するポリペプチドの変異体、ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨ酸化還元バランスを調節する切断型ポリペプチド、またはＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨ酸化還元バランスを調節するポリペプチドの活性を少なくとも１つ持つ融合ポリペプチドのようなＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨ酸化還元バランスを調節するポリペプチドをコードする核酸が挙げられる。
【０４２５】
いくつかの実施形態では、ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨ酸化還元バランスを調節するポリペプチドは、遺伝子組換え宿主細胞において過剰発現されている。過剰発現は、例えば、高コピー数発現ベクター（例えば、１細胞当たり１０〜４０コピーが存在するプラスミド）を使用してＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨ酸化還元バランスを調節するポリペプチドをコードする異種核酸のコピー数を増やしおよび／またはＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨ酸化還元バランスを調節するポリペプチドをコードする異種核酸を強力プロモーター作動可能に連結することにより達成してもよい。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨ酸化還元バランスを調節するポリペプチドをコードする異種核酸の１コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨ酸化還元バランスを調節するポリペプチドをコードする異種核酸の２コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨ酸化還元バランスを調節するポリペプチドをコードする異種核酸の３コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨ酸化還元バランスを調節するポリペプチドをコードする異種核酸の４コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨ酸化還元バランスを調節するポリペプチドをコードする異種核酸の５コピーを持つ。
【０４２６】
ＤＸＰ経路ポリペプチド、該ポリペプチドを含む核酸、および該ポリペプチドを発現する遺伝子組換え宿主細胞：  いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、デオキシキシルロース−５−リン酸（ＤＸＰ）経路に存在するポリペプチドの活性の少なくとも１つ持つ、１つまたは複数のポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。
【０４２７】
いくつかの実施形態では、ＧＰＰを生成するまたはＧＰＰを生成する生合成経路の一部である１つまたは複数のポリペプチドは、ＤＸＰ経路のポリペプチドである。本明細書で使用する用語「１−デオキシ−Ｄ−キシルロース５−二リン酸経路」または「ＤＸＰ経路」は、グリセルアルデヒド−３−リン酸およびピルビン酸を、ＤＸＰ経路中間体を経てＩＰＰおよびＤＭＡＰＰに変換する経路を言うこともある。
【０４２８】
ＤＸＰ経路において、ピルビン酸とＤ−グリセルアルデヒド−３−リン酸は、ＩＰＰおよびＤＭＡＰＰへの一連の反応によって変換される。該経路には、以下のポリペプチドの作用が関与する：１−デオキシ−Ｄ−キシルロース−５−リン酸シンターゼ（Ｄｘｓ）ポリペプチド、１−デオキシ−Ｄ−キシルロース−５−リン酸レダクイソメラーゼ（ＩｓｐＣ）ポリペプチド、４−ジホスホシチジル−２−Ｃ−メチル−Ｄ−エリスリトールシンターゼ（ＩｓｐＤ）ポリペプチド、４−ジホスホシチジル−２−Ｃ−メチル−Ｄ−エリスリトールキナーゼ（ＩｓｐＥ）ポリペプチド、２Ｃ−メチル−Ｄ−エリスリトール２，４−シクロ二リン酸シンターゼ（ＩｓｐＦ）ポリペプチド、１−ヒドロキシ−２−メチル−２−（Ｅ）−ブテニル４−二リン酸シンターゼ（ＩｓｐＧ）ポリペプチド、およびイソペンテニル二リン酸イソメラーゼ（ＩｓｐＨ）ポリペプチド。
【０４２９】
いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ＤＸＰ経路ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、１つを超えるＤＸＰ経路ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、２つを超えるＤＸＰ経路ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、３つを超えるＤＸＰ経路ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、４つを超えるＤＸＰ経路ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、５つを超えるＤＸＰ経路ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、６つを超えるＤＸＰ経路ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、全てのＤＸＰ経路ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。
【０４３０】
いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、２つのＤＸＰ経路ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、３つのＤＸＰ経路ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、４つのＤＸＰ経路ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、５つのＤＸＰ経路ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、６つのＤＸＰ経路ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、１、２、３、４、５または６つ以上のＤＸＰ経路ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、１、２、３、４、５または６つのＤＸＰ経路ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。
【０４３１】
本明細書で開示する代表的な、ＤＸＰ経路の一部であるポリペプチドとして、完全長ＤＸＰ経路ポリペプチド、ＤＸＰ経路ポリペプチドのフラグメント、ＤＸＰ経路ポリペプチドの変異体、ＤＸＰ経路切断型ポリペプチド、またはＤＸＰ経路の一部であるポリペプチドの活性を少なくとも１つ持つ融合ポリペプチドが挙げられる。
【０４３２】
ＤＸＰ経路のポリペプチドの例は、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０に示される。
【０４３３】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされた１−デオキシ−Ｄ−キシルロース−５−リン酸シンターゼ（Ｄｘｓ）ポリペプチドは、配列番号３２に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされた１−デオキシ−Ｄ−キシルロース−５−リン酸シンターゼ（Ｄｘｓ）ポリペプチドは、配列番号３２に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされた１−デオキシ−Ｄ−キシルロース−５−リン酸シンターゼ（Ｄｘｓ）ポリペプチドは、配列番号３２と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４３４】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされた１−デオキシ−Ｄ−キシルロース−５−リン酸レダクイソメラーゼポリペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされた１−デオキシ−Ｄ−キシルロース−５−リン酸レダクイソメラーゼポリペプチドは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされた１−デオキシ−Ｄ−キシルロース−５−リン酸レダクイソメラーゼポリペプチドは、配列番号３３と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４３５】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされた２−Ｃ−メチル−Ｄ−エリスリトール４−リン酸シチジリルトランスフェラーゼポリペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされた２−Ｃ−メチル−Ｄ−エリスリトール４−リン酸シチジリルトランスフェラーゼポリペプチドは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされた２−Ｃ−メチル−Ｄ−エリスリトール４−リン酸シチジリルトランスフェラーゼポリペプチドは、配列番号３４と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４３６】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされた４−ジホスホシチジル−２−Ｃ−メチルエリスリトールキナーゼポリペプチドは、配列番号３５に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされた４−ジホスホシチジル−２−Ｃ−メチルエリスリトールキナーゼポリペプチドは、配列番号３５に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされた４−ジホスホシチジル−２−Ｃ−メチルエリスリトールキナーゼポリペプチドは、配列番号３５と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４３７】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされた２Ｃ−メチル−Ｄ−エリスリトール２，４−シクロ二リン酸シンターゼポリペプチドは、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされた２Ｃ−メチル−Ｄ−エリスリトール２，４−シクロ二リン酸シンターゼポリペプチドは、配列番号３６に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされた２Ｃ−メチル−Ｄ−エリスリトール２，４−シクロ二リン酸シンターゼポリペプチドは、配列番号３６と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４３８】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされた４−ヒドロキシ−３−メチルブ−２−テン−１−イル二リン酸シンターゼポリペプチドは、配列番号３７に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされた４−ヒドロキシ−３−メチルブ−２−テン−１−イル二リン酸シンターゼポリペプチドは、配列番号３７に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされた４−ヒドロキシ−３−メチルブ−２−テン−１−イル二リン酸シンターゼポリペプチドは、配列番号３７と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４３９】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされた４−ヒドロキシ−３−メチルブ−２−テニル二リン酸レダクターゼポリペプチドは、配列番号３８に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされた４−ヒドロキシ−３−メチルブ−２−テニル二リン酸レダクターゼポリペプチドは、配列番号３８に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされた４−ヒドロキシ−３−メチルブ−２−テニル二リン酸レダクターゼポリペプチドは、配列番号３８と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４４０】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたイソペンテニル二リン酸（ＩＰＰ）イソメラーゼポリペプチドは、配列番号３９に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたイソペンテニル二リン酸（ＩＰＰ）イソメラーゼポリペプチドは、配列番号３９に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたイソペンテニル二リン酸（ＩＰＰ）イソメラーゼポリペプチドは、配列番号３９と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４４１】
いくつかの実施形態では、ＤＸＰ経路ポリペプチドは変異ＦＰＰシンターゼポリペプチドである。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされた変異ＦＰＰシンターゼポリペプチドは、配列番号４０に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされた変異ＦＰＰシンターゼポリペプチドは、配列番号４０に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされた変異ＦＰＰシンターゼイソメラーゼポリペプチドは、配列番号４０と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４４２】
本明細書で開示する代表的なＤＸＰ経路異種核酸として、完全長ＤＸＰ経路ポリペプチド、ＤＸＰ経路ポリペプチドのフラグメント、ＤＸＰ経路ポリペプチドの変異体、切断型ＤＸＰ経路ポリペプチド、またはＤＸＰ経路の一部であるポリペプチドの活性を少なくとも１つ持つ融合ポリペプチドのようなＤＸＰ経路ポリペプチドをコードする核酸が挙げられる。
【０４４３】
いくつかの実施形態では、ＤＸＰ経路ポリペプチドは、遺伝子組換え宿主細胞において過剰発現されている。過剰発現は、例えば、高コピー数発現ベクター（例えば、１細胞当たり１０〜４０コピーが存在するプラスミド）を使用してＤＸＰ経路ポリペプチドコードする異種核酸のコピー数を増やしおよび／またはＤＸＰ経路ポリペプチドコードする異種核酸を強力プロモーター作動可能に連結することにより達成してもよい。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＤＸＰ経路ポリペプチドをコードする異種核酸の１コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＤＸＰ経路ポリペプチドをコードする異種核酸の２コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＤＸＰ経路ポリペプチドをコードする異種核酸の３コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＤＸＰ経路ポリペプチドをコードする異種核酸の４コピーを持つ。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、ＤＸＰ経路ポリペプチドをコードする異種核酸の５コピーを持つ。
【０４４４】
カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体、またはカンナビノイド前駆体誘導体を生成する遺伝子組換え宿主細胞：  本開示は、カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体、またはカンナビノイド前駆体誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を提供する。本明細書で開示する遺伝子組換え宿主細胞は、カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体、またはカンナビノイド前駆体誘導体を産生するために、本明細書で開示する１つまたは複数のポリペプチドをコードする、本明細書で開示する１つまたは複数の異種核酸を発現するまたは過剰発現するように遺伝子組換えされていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する。また、本開示は、本明細書で開示する１つまたは複数のポリペプチドをコードする、本明細書で開示する１つまたは複数の異種核酸を発現するまたは過剰発現するように遺伝子組換えされている遺伝子組換え宿主細胞も提供する。
【０４４５】
いくつかの実施形態では、カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体、またはカンナビノイド前駆体誘導体を産生するために、遺伝子組換え宿主細胞において本明細書で開示する１つまたは複数のポリペプチドをコードする、本明細書で開示する１つまたは複数の異種核酸の発現または過剰発現を、本明細書で開示する１つまたは複数のポリペプチドをコードする、本明細書で開示する１つまたは複数の他の異種核酸の遺伝子組換え宿主細胞による発現または過剰発現と組み合わせて行ってもよい。いくつかのそのような実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する。
【０４４６】
ＧＯＴポリペプチドを発現する代表的な遺伝子組換え宿主細胞であって、該ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ゲラニルピロリン酸およびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる遺伝子組換え宿主細胞：  本開示のいくつかの実施形態は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞に関し、該遺伝子組換え宿主細胞は、ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含み、ここで、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。
【０４４７】
また、本開示は、ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を発現するまたは過剰発現するように遺伝子組換えされている遺伝子組換え宿主細胞も提供し、ここで、該ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。
【０４４８】
いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む遺伝子組換え宿主細胞であって、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる遺伝子組換え宿主細胞は、さらに、ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸およびＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＴＫＳポリペプチドは、配列番号１１または配列番号７６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＯＡＣポリペプチドは、配列番号１０または配列番号７８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４４９】
いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む遺伝子組換え宿主細胞であって、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる遺伝子組換え宿主細胞は、さらに、１つまたは複数の以下の異種核酸を含む。ａ）アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）ＧＰＰを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、またはｃ）マロニル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸。いくつかのそのような実施形態では、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドは、アシル活性化酵素（ＡＡＥ）ポリペプチドである。いくつかのそのような実施形態では、ＡＡＥポリペプチドは、配列番号９０と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡＡＥポリペプチドは、配列番号９２または配列番号１４９と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドは、脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドである。いくつかのそのような実施形態では、脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドは、配列番号１４５または配列番号１４７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドは、脂肪族アシル−ＣｏＡシンテターゼ（ＦＡＡ）ポリペプチドである。いくつかのそのような実施形態では、ＦＡＡポリペプチドは、配列番号１６９、配列番号１９２、配列番号１９４、配列番号１９６、配列番号１９８、または配列番号２００と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰを生成するポリペプチドは、ＧＰＰＳポリペプチドである。いくつかのそのような実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号７、配列番号８、または配列番号６０と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、マロニル−ＣｏＡを生成するポリペプチドは、ＡＣＣポリペプチドである。いくつかのそのような実施形態では、ＡＣＣポリペプチドは、配列番号９、配列番号９７または配列番号２０７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４５０】
いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む遺伝子組換え宿主細胞であって、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる遺伝子組換え宿主細胞は、さらに１つまたは複数の以下の異種核酸を含む。ａ）ＨＭＧＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）３−ヒドロキシ−３−メチル−グルタリル−ＣｏＡレダクターゼ（ＨＭＧＲ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｃ）ＭＫポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｄ）ＰＭＫポリペプチド、ｅ）ＭＶＤポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、またはｆ）ＩＤＩポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸。いくつかのそのような実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、さらにＩＤＩポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＩＤＩポリペプチドは、配列番号５８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、さらにＨＭＧＲポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＨＭＧＲポリペプチドは、配列番号２２と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＭＧＲポリペプチドは、切断型ＨＭＧＲ（ｔＨＭＧＲ）ポリペプチドである。いくつかのそのような実施形態では、ｔＨＭＧＲポリペプチドは、配列番号１７、配列番号５２、配列番号１１３、または配列番号２０８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、さらにＨＭＧＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＨＭＧＳポリペプチドは、配列番号２３、配列番号２４、または配列番号１１５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、さらにＭＫポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＭＫポリペプチドは、配列番号６４と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、さらにＰＭＫポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＰＭＫポリペプチドは、配列番号６２または配列番号２０５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、さらにＭＶＤポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＭＶＤポリペプチドは、配列番号６６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４５１】
いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む遺伝子組換え宿主細胞であって、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる遺伝子組換え宿主細胞は、さらに、２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む。いくつかのそのような実施形態では、２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドは、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドである。いくつかのそのような実施形態では、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドは、配列番号２５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４５２】
いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む遺伝子組換え宿主細胞であって、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる遺伝子組換え宿主細胞は、さらにＰＤＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＰＤＣポリペプチドは、配列番号１１７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４５３】
いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む遺伝子組換え宿主細胞であって、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる遺伝子組換え宿主細胞は、さらにカンナビノイドシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む。いくつかのそのような実施形態では、カンナビノイドシンターゼポリペプチドは、ＴＨＣＡシンターゼポリペプチドである。いくつかのそのような実施形態では、ＴＨＣＡシンターゼポリペプチドは、配列番号１４、配列番号８６、配列番号１０４、配列番号１５３、または配列番号１５５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、カンナビノイドシンターゼポリペプチドは、ＣＢＤＡシンターゼポリペプチドである。いくつかのそのような実施形態では、ＣＢＤＡシンターゼポリペプチドは、配列番号８８または配列番号１５１と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４５４】
配列番号１１０の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを発現する代表的な遺伝子組換え宿主細胞：  本開示のいくつかの実施形態は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞に関し、該遺伝子組換え宿主細胞は、配列番号１１０と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む。いくつかのそのような実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。
【０４５５】
また、本開示は、配列番号１１０と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を発現するまたは過剰発現するように遺伝子組換えされている遺伝子組換え宿主細胞を提供する。いくつかのそのような実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。
【０４５６】
いくつかの実施形態では、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む遺伝子組換え宿主細胞は、さらにＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸およびＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＴＫＳポリペプチドは、配列番号１１または配列番号７６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＯＡＣポリペプチドは、配列番号１０または配列番号７８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４５７】
いくつかの実施形態では、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む遺伝子組換え宿主細胞は、さらに１つまたは複数の以下の異種核酸を含む。ａ）アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）ＧＰＰを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、またはｃ）マロニル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸。いくつかのそのような実施形態では、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドは、アシル活性化酵素（ＡＡＥ）ポリペプチドである。いくつかのそのような実施形態では、ＡＡＥポリペプチドは、配列番号９０と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡＡＥポリペプチドは、配列番号９２または配列番号１４９と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドは、脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドである。いくつかのそのような実施形態では、脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドは、配列番号１４５または配列番号１４７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドは、脂肪族アシル−ＣｏＡシンテターゼ（ＦＡＡ）ポリペプチドである。いくつかのそのような実施形態では、ＦＡＡポリペプチドは、配列番号１６９、配列番号１９２、配列番号１９４、配列番号１９６、配列番号１９８、または配列番号２００と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰを生成するポリペプチドは、ＧＰＰＳポリペプチドである。いくつかのそのような実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号７、配列番号８、または配列番号６０と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列をフイ組む。いくつかの実施形態では、マロニル−ＣｏＡを生成するポリペプチドは、ＡＣＣポリペプチドである。いくつかのそのような実施形態では、ＡＣＣポリペプチドは、配列番号９、配列番号９７、または配列番号２０７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４５８】
いくつかの実施形態では、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む遺伝子組換え宿主細胞は、さらに、１つまたは複数の以下の異種核酸を含む。ａ）ＨＭＧＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）３−ヒドロキシ−３−メチル−グルタリル−ＣｏＡレダクターゼ（ＨＭＧＲ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｃ）ＭＫポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｄ）ＰＭＫポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｅ）ＭＶＤポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、またはｆ）ＩＤＩポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸。いくつかのそのような実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、さらにＩＤＩポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＩＤＩポリペプチドは、配列番号５８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、さらにＨＭＧＲポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＨＭＧＲポリペプチドは、配列番号２２と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＭＧＲポリペプチドは、切断型ＨＭＧＲ（ｔＨＭＧＲ）ポリペプチドである。いくつかのそのような実施形態では、ｔＨＭＧＲポリペプチドは、配列番号１７、配列番号５２、配列番号１１３、または配列番号２０８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、さらにＨＭＧＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＨＭＧＳポリペプチドは、配列番号２３、配列番号２４、または配列番号１１５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、さらにＭＫポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＭＫポリペプチドは、配列番号６４と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、さらにＰＭＫポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＰＭＫポリペプチドは、配列番号６２または配列番号２０５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、さらにＭＶＤポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＭＶＤポリペプチドは、配列番号６６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４５９】
いくつかの実施形態では、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む遺伝子組換え宿主細胞は、さらに、２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む。いくつかのそのような実施形態では、２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドは、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドである。いくつかのそのような実施形態では、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドは、配列番号２５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４６０】
いくつかの実施形態では、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む遺伝子組換え宿主細胞は、さらにＰＤＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＰＤＣポリペプチドは、配列番号１１７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４６１】
いくつかの実施形態では、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む遺伝子組換え宿主細胞は、さらにカンナビノイドシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む。いくつかのそのような実施形態では、カンナビノイドシンターゼポリペプチドは、ＴＨＣＡシンターゼポリペプチドである。いくつかのそのような実施形態では、ＴＨＣＡシンターゼポリペプチドは、配列番号１４、配列番号８６、配列番号１０４、配列番号１５３、または配列番号１５５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、カンナビノイドシンターゼポリペプチドは、ＣＢＤＡシンターゼポリペプチドである。いくつかのそのような実施形態では、ＣＢＤＡシンターゼポリペプチドは、配列番号８８または配列番号１５１と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４６２】
配列番号１００の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを発現する代表的な遺伝子組換え宿主細胞：  本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を提供し、ここで、該遺伝子組換え宿主細胞は、配列番号１００と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む。いくつかのそのような実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００と少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。
【０４６３】
また、本開示は、配列番号１００と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を発現するまたは過剰発現するように遺伝子組換えされている遺伝子組換え宿主細胞も提供する。いくつかのそのような実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００と少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００に示されるアミノ酸配列、またはその保存的置換アミノ酸配列を含む。
【０４６４】
いくつかの実施形態では、配列番号１００と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む遺伝子組換え宿主細胞は、さらに、ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸およびＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＴＫＳポリペプチドは、配列番号１１または配列番号７６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＯＡＣポリペプチドは、配列番号１０または配列番号７８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４６５】
いくつかの実施形態では、配列番号１００と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む遺伝子組換え宿主細胞は、さらに１つまたは複数の以下の異種核酸を含む。ａ）アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）ＧＰＰを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、またはｃ）マロニル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸。いくつかのそのような実施形態では、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドは、アシル活性化酵素（ＡＡＥ）ポリペプチドである。いくつかのそのような実施形態では、ＡＡＥポリペプチドは、配列番号９０と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡＡＥポリペプチドは、配列番号９２または配列番号１４９と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドは、脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドである。いくつかのそのような実施形態では、脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドは、配列番号１４５または配列番号１４７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドは、脂肪族アシル−ＣｏＡシンテターゼ（ＦＡＡ）ポリペプチドである。いくつかのそのような実施形態では、ＦＡＡポリペプチドは、配列番号１６９、配列番号１９２、配列番号１９４、配列番号１９６、配列番号１９８、または配列番号２００と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰを生成するポリペプチドは、ＧＰＰＳポリペプチドである。いくつかのそのような実施形態では、ＧＰＰＳポリペプチドは、配列番号７、配列番号８、または配列番号６０と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、マロニル−ＣｏＡを生成するポリペプチドは、ＡＣＣポリペプチドである。いくつかのそのような実施形態では、ＡＣＣポリペプチドは、配列番号９、配列番号９７、または配列番号２０７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４６６】
いくつかの実施形態では、配列番号１００と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む遺伝子組換え宿主細胞は、さらに、１つまたは複数の以下の異種核酸を含む。ａ）ＨＭＧＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）３−ヒドロキシ−３−メチル−グルタリル−ＣｏＡレダクターゼ（ＨＭＧＲ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｃ）ＭＫポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｄ）ＰＭＫポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｅ）ＭＶＤポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、またはｆ）ＩＤＩポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸。いくつかのそのような実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、さらにＩＤＩポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＩＤＩポリペプチドは、配列番号５８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、さらにＨＭＧＲポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＨＭＧＲポリペプチドは、配列番号２２と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＭＧＲポリペプチドは、切断型ＨＭＧＲ（ｔＨＭＧＲ）ポリペプチドである。いくつかのそのような実施形態では、ｔＨＭＧＲポリペプチドは、配列番号１７、配列番号５２、配列番号１１３、または配列番号２０８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、さらにＨＭＧＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＨＭＧＳポリペプチドは、配列番号２３、配列番号２４、または配列番号１１５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、さらにＭＫポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＭＫポリペプチドは、配列番号６４と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、さらにＰＭＫポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＰＭＫポリペプチドは、配列番号６２または配列番号２０５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、さらにＭＶＤポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＭＶＤポリペプチドは、配列番号６６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４６７】
いくつかの実施形態では、配列番号１００と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む遺伝子組換え宿主細胞は、さらに、２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む。いくつかのそのような実施形態では、２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドは、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドである。いくつかのそのような実施形態では、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドは、配列番号２５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４６８】
いくつかの実施形態では、配列番号１００と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む遺伝子組換え宿主細胞は、さらにＰＤＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＰＤＣポリペプチドは、配列番号１１７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４６９】
いくつかの実施形態では、配列番号１００と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む遺伝子組換え宿主細胞は、さらにカンナビノイドシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む。いくつかのそのような実施形態では、カンナビノイドシンターゼポリペプチドは、ＴＨＣＡシンターゼポリペプチドである。いくつかのそのような実施形態では、ＴＨＣＡシンターゼポリペプチドは、配列番号１４、配列番号８６、配列番号１０４、配列番号１５３、または配列番号１５５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、カンナビノイドシンターゼポリペプチドは、ＣＢＤＡシンターゼポリペプチドである。いくつかのそのような実施形態では、ＣＢＤＡシンターゼポリペプチドは、配列番号８８または配列番号１５１と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４７０】
ＧＯＴポリペプチドを発現する代表的な遺伝子組換え宿主細胞：  本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を提供し、ここで、該遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸およびｂ）ＴＨＣＡシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＨＣＡシンターゼポリペプチドは、配列番号１４、配列番号８６、配列番号１０４、配列番号１５３、または配列番号１５５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４７１】
本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を提供し、ここで、該遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸およびｂ）ＣＢＤＡシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＢＤＡシンターゼポリペプチドは、配列番号８８または配列番号１５１と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４７２】
本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を提供し、ここで、該遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸ならびにｂ）ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸およびＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＫＳポリペプチドは、配列番号１１または配列番号７６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＯＡＣポリペプチドは、配列番号１０または配列番号７８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４７３】
本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を提供し、ここで、該遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸およびＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ならびにｃ）ＴＨＣＡシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＫＳポリペプチドは、配列番号１１または配列番号７６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＯＡＣポリペプチドは、配列番号１０または配列番号７８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＴＨＣＡシンターゼポリペプチドは、配列番号１４、配列番号８６、配列番号１０４、配列番号１５３、または配列番号１５５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４７４】
本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を提供し、ここで、該遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸およびＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ならびにｃ）ＣＢＤＡシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＫＳポリペプチドは、配列番号１１または配列番号７６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＯＡＣポリペプチドは、配列番号１０または配列番号７８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＣＢＤＡシンターゼポリペプチドは、配列番号８８または配列番号１５１と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４７５】
本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を提供し、ここで、該遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸およびｂ）ＧＰＰを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰを生成するポリペプチドは、ＧＰＰＳポリペプチドであり、配列番号７、配列番号８、または配列番号６０と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４７６】
本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を提供し、ここで、該遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）ＧＰＰを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、およびｃ）ＴＨＣＡシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰを生成するポリペプチドは、ＧＰＰＳポリペプチドであり、配列番号７、配列番号８、または配列番号６０と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＴＨＣＡシンターゼポリペプチドは、配列番号１４、配列番号８６、配列番号１０４、配列番号１５３、または配列番号１５５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４７７】
本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を提供し、ここで、該遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）ＧＰＰを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、およびｃ）ＣＢＤＡシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰを生成するポリペプチドは、ＧＰＰＳポリペプチドであり、配列番号７、配列番号８、または配列番号６０と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＣＢＤＡシンターゼポリペプチドは、配列番号８８または配列番号１５１と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４７８】
本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を提供し、ここで、該遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ならびにｃ）ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸およびＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドは、配列番号９０、配列番号９２、配列番号１４５、配列番号１４７、配列番号１４９、配列番号１６９、配列番号１９２、配列番号１９４、配列番号１９６、配列番号１９８、または配列番号２００と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＴＫＳポリペプチドは、配列番号１１または配列番号７６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＯＡＣポリペプチドは、配列番号１０または配列番号７８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４７９】
本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を提供し、ここで、該遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｃ）ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸およびＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ならびにｄ）ＴＨＣＡシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドは、配列番号９０、配列番号９２、配列番号１４５、配列番号１４７、配列番号１４９、配列番号１６９、配列番号１９２、配列番号１９４、配列番号１９６、配列番号１９８、または配列番号２００と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＴＫＳポリペプチドは、配列番号１１または配列番号７６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＯＡＣポリペプチドは、配列番号１０または配列番号７８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＴＨＣＡシンターゼポリペプチドは、配列番号１４、配列番号８６、配列番号１０４、配列番号１５３、または配列番号１５５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４８０】
本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を提供し、ここで、該遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｃ）ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸およびＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ならびにｄ）ＣＢＤＡシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドは、配列番号９０、配列番号９２、配列番号１４５、配列番号１４７、配列番号１４９、配列番号１６９、配列番号１９２、配列番号１９４、配列番号１９６、配列番号１９８、または配列番号２００と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＴＫＳポリペプチドは、配列番号１１または配列番号７６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＯＡＣポリペプチドは、配列番号１０または配列番号７８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＣＢＤＡシンターゼポリペプチドは、配列番号８８または配列番号１５１と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４８１】
本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を提供し、ここで、該遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｃ）ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸およびＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ならびにｄ）マロニル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドは、配列番号９０、配列番号９２、配列番号１４５、配列番号１４７、配列番号１４９、配列番号１６９、配列番号１９２、配列番号１９４、配列番号１９６、配列番号１９８、または配列番号２００と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＴＫＳポリペプチドは、配列番号１１または配列番号７６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＯＡＣポリペプチドは、配列番号１０または配列番号７８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、マロニル−ＣｏＡを生成するポリペプチドは、ＡＣＣポリペプチドであり、配列番号９、配列番号９７、または配列番号２０７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４８２】
本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を提供し、ここで、該遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｃ）ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸およびＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｄ）マロニル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ならびにｅ）ＴＨＣＡシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドは、配列番号９０、配列番号９２、配列番号１４５、配列番号１４７、配列番号１４９、配列番号１６９、配列番号１９２、配列番号１９４、配列番号１９６、配列番号１９８、または配列番号２００と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＴＫＳポリペプチドは、配列番号１１または配列番号７６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＯＡＣポリペプチドは、配列番号１０または配列番号７８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、マロニル−ＣｏＡを生成するポリペプチドは、ＡＣＣポリペプチドであり、配列番号９、配列番号９７、または配列番号２０７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＴＨＣＡシンターゼポリペプチドは、配列番号１４、配列番号８６、配列番号１０４、配列番号１５３、または配列番号１５５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４８３】
本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を提供し、ここで、該遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｃ）ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸およびＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｄ）マロニル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ならびにｅ）ＣＢＤＡシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドは、配列番号９０、配列番号９２、配列番号１４５、配列番号１４７、配列番号１４９、配列番号１６９、配列番号１９２、配列番号１９４、配列番号１９６、配列番号１９８、または配列番号２００と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＴＫＳポリペプチドは、配列番号１１または配列番号７６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＯＡＣポリペプチドは、配列番号１０または配列番号７８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、マロニル−ＣｏＡを生成するポリペプチドは、ＡＣＣポリペプチドであり、配列番号９、配列番号９７、または配列番号２０７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＣＢＤＡシンターゼポリペプチドは、配列番号８８または配列番号１５１と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４８４】
本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を提供し、ここで、該遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｃ）ＧＰＰを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ならびにｄ）ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸およびＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドは、配列番号９０、配列番号９２、配列番号１４５、配列番号１４７、配列番号１４９、配列番号１６９、配列番号１９２、配列番号１９４、配列番号１９６、配列番号１９８、または配列番号２００と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＧＰＰを生成するポリペプチドは、ＧＰＰＳポリペプチドであり、配列番号７、配列番号８、または配列番号６０と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＴＫＳポリペプチドは、配列番号１１または配列番号７６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＯＡＣポリペプチドは、配列番号１０または配列番号７８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４８５】
本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を提供し、ここで、該遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｃ）ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸およびＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｄ）ＧＰＰを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ならびにｅ）ＴＨＣＡシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドは、配列番号９０、配列番号９２、配列番号１４５、配列番号１４７、配列番号１４９、配列番号１６９、配列番号１９２、配列番号１９４、配列番号１９６、配列番号１９８、または配列番号２００と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＴＫＳポリペプチドは、配列番号１１または配列番号７６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＯＡＣポリペプチドは、配列番号１０または配列番号７８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＧＰＰを生成するポリペプチドは、ＧＰＰＳポリペプチドであり、配列番号７、配列番号８、または配列番号６０と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＴＨＣＡシンターゼポリペプチドは、配列番号１４、配列番号８６、配列番号１０４、配列番号１５３、または配列番号１５５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４８６】
本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を提供し、ここで、該遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｃ）ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸およびＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｄ）ＧＰＰを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ならびにｅ）ＣＢＤＡシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドは、配列番号９０、配列番号９２、配列番号１４５、配列番号１４７、配列番号１４９、配列番号１６９、配列番号１９２、配列番号１９４、配列番号１９６、配列番号１９８、または配列番号２００と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＴＫＳポリペプチドは、配列番号１１または配列番号７６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＯＡＣポリペプチドは、配列番号１０または配列番号７８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＧＰＰを生成するポリペプチドは、ＧＰＰＳポリペプチドであり、配列番号７、配列番号８、または配列番号６０と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＣＢＤＡシンターゼポリペプチドは、配列番号８８または配列番号１５１と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４８７】
本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を提供し、ここで、該遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｃ）ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸およびＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｄ）ＧＰＰを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ならびにｅ）マロニル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドは、配列番号９０、配列番号９２、配列番号１４５、配列番号１４７、配列番号１４９、配列番号１６９、配列番号１９２、配列番号１９４、配列番号１９６、配列番号１９８、または配列番号２００と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＴＫＳポリペプチドは、配列番号１１または配列番号７６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＯＡＣポリペプチドは、配列番号１０または配列番号７８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＧＰＰを生成するポリペプチドは、ＧＰＰＳポリペプチドであり、配列番号７、配列番号８、または配列番号６０と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、マロニル−ＣｏＡを生成するポリペプチドは、ＡＣＣポリペプチドであり、配列番号９、配列番号９７、または配列番号２０７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４８８】
本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を提供し、ここで、該遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｃ）ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸およびＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｄ）マロニル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｅ）ＧＰＰを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ならびにｆ）ＴＨＣＡシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドは、配列番号９０、配列番号９２、配列番号１４５、配列番号１４７、配列番号１４９、配列番号１６９、配列番号１９２、配列番号１９４、配列番号１９６、配列番号１９８、または配列番号２００と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＴＫＳポリペプチドは、配列番号１１または配列番号７６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＯＡＣポリペプチドは、配列番号１０または配列番号７８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、マロニル−ＣｏＡを生成するポリペプチドは、ＡＣＣポリペプチドであり、配列番号９、配列番号９７、または配列番号２０７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＧＰＰを生成するポリペプチドは、ＧＰＰＳポリペプチドであり、配列番号７、配列番号８、または配列番号６０と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＴＨＣＡシンターゼポリペプチドは、配列番号１４、配列番号８６、配列番号１０４、配列番号１５３、または配列番号１５５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４８９】
本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を提供し、ここで、該遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｃ）ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸およびＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｄ）マロニル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｅ）ＧＰＰを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ならびにｆ）ＣＢＤＡシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドは、配列番号９０、配列番号９２、配列番号１４５、配列番号１４７、配列番号１４９、配列番号１６９、配列番号１９２、配列番号１９４、配列番号１９６、配列番号１９８、または配列番号２００と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＴＫＳポリペプチドは、配列番号１１または配列番号７６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＯＡＣポリペプチドは、配列番号１０または配列番号７８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、マロニル−ＣｏＡを生成するポリペプチドは、ＡＣＣポリペプチドであり、配列番号９、配列番号９７、または配列番号２０７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＧＰＰを生成するポリペプチドは、ＧＰＰＳポリペプチドであり、配列番号７、配列番号８、または配列番号６０と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＣＢＤＡシンターゼポリペプチドは、配列番号８８または配列番号１５１と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４９０】
本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を提供し、ここで、該遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）ＧＰＰを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｃ）以下の１つまたは複数のポリペプチド：ＨＭＧＳポリペプチド、ｔＨＭＧＲポリペプチド、ＭＫポリペプチド、ＰＭＫポリペプチド、ＭＶＤポリペプチド、またはＩＤＩポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｄ）２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、およびｅ）ＰＤＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰを生成するポリペプチドは、ＧＰＰＳポリペプチドであり、配列番号７、配列番号８、または配列番号６０と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＩＤＩポリペプチドは、配列番号５８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ｔＨＭＧＲポリペプチドは、配列番号１７、配列番号５２、配列番号１１３、または配列番号２０８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＨＭＧＳポリペプチドは、配列番号２３、配列番号２４、または配列番号１１５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＭＫポリペプチドは、配列番号６４と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＰＭＫポリペプチドは、配列番号６２または配列番号２０５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＭＶＤポリペプチドは、配列番号６６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドは、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドであり、配列番号２５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＰＤＣポリペプチドは、配列番号１１７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４９１】
本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を提供し、ここで、該遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）ＧＰＰを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｃ）ＴＨＣＡシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｄ）以下の１つまたは複数のポリペプチド：ＨＭＧＳポリペプチド、ｔＨＭＧＲポリペプチド、ＭＫポリペプチド、ＰＭＫポリペプチド、ＭＶＤポリペプチド、またはＩＤＩポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｅ）２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、およびｆ）ＰＤＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰを生成するポリペプチドは、ＧＰＰＳポリペプチドであり、配列番号７、配列番号８、または配列番号６０と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＩＤＩポリペプチドは、配列番号５８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ｔＨＭＧＲポリペプチドは、配列番号１７、配列番号５２、配列番号１１３、または配列番号２０８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＨＭＧＳポリペプチドは、配列番号２３、配列番号２４、または配列番号１１５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＭＫポリペプチドは、配列番号６４と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＰＭＫポリペプチドは、配列番号６２または配列番号２０５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＭＶＤポリペプチドは、配列番号６６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドは、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドであり、配列番号２５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＰＤＣポリペプチドは、配列番号１１７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＴＨＣＡシンターゼポリペプチドは、配列番号１４、配列番号８６、配列番号１０４、配列番号１５３、または配列番号１５５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４９２】
本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を提供し、ここで、該遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）ＧＰＰを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｃ）ＣＢＤＡシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｄ）以下の１つまたは複数のポリペプチド：ＨＭＧＳポリペプチド、ｔＨＭＧＲポリペプチド、ＭＫポリペプチド、ＰＭＫポリペプチド、ＭＶＤポリペプチド、またはＩＤＩポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｅ）２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、およびｆ）ＰＤＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰを生成するポリペプチドは、ＧＰＰＳポリペプチドであり、配列番号７、配列番号８、または配列番号６０と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＩＤＩポリペプチドは、配列番号５８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ｔＨＭＧＲポリペプチドは、配列番号１７、配列番号５２、配列番号１１３、または配列番号２０８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＨＭＧＳポリペプチドは、配列番号２３、配列番号２４、または配列番号１１５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＭＫポリペプチドは、配列番号６４と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＰＭＫポリペプチドは、配列番号６２または配列番号２０５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＭＶＤポリペプチドは、配列番号６６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドは、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドであり、配列番号２５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＰＤＣポリペプチドは、配列番号１１７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＣＢＤＡシンターゼポリペプチドは、配列番号８８または配列番号１５１と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４９３】
本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を提供し、ここで、該遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）ＧＰＰを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｃ）以下の１つまたは複数のポリペプチド：ＨＭＧＳポリペプチド、ｔＨＭＧＲポリペプチド、ＭＫポリペプチド、ＰＭＫポリペプチド、ＭＶＤポリペプチド、またはＩＤＩポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｄ）２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｅ）ＰＤＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、およびｆ）アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰを生成するポリペプチドは、ＧＰＰＳポリペプチドであり、配列番号７、配列番号８、または配列番号６０と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＩＤＩポリペプチドは、配列番号５８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ｔＨＭＧＲポリペプチドは、配列番号１７、配列番号５２、配列番号１１３、または配列番号２０８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＨＭＧＳポリペプチドは、配列番号２３、配列番号２４、または配列番号１１５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＭＫポリペプチドは、配列番号６４と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＰＭＫポリペプチドは、配列番号６２または配列番号２０５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＭＶＤポリペプチドは、配列番号６６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドは、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドであり、配列番号２５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドは、配列番号９０、配列番号９２、配列番号１４５、配列番号１４７、配列番号１４９、配列番号１６９、配列番号１９２、配列番号１９４、配列番号１９６、配列番号１９８、または配列番号２００と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＰＤＣポリペプチドは、配列番号１１７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４９４】
本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を提供し、ここで、該遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）ＧＰＰを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｃ）ＴＨＣＡシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｄ）以下の１つまたは複数のポリペプチド：ＨＭＧＳポリペプチド、ｔＨＭＧＲポリペプチド、ＭＫポリペプチド、ＰＭＫポリペプチド、ＭＶＤポリペプチド、またはＩＤＩポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｅ）２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｆ）ＰＤＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、およびｇ）アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰを生成するポリペプチドは、ＧＰＰＳポリペプチドであり、配列番号７、配列番号８、または配列番号６０と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＩＤＩポリペプチドは、配列番号５８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ｔＨＭＧＲポリペプチドは、配列番号１７、配列番号５２、配列番号１１３、または配列番号２０８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＨＭＧＳポリペプチドは、配列番号２３、配列番号２４、または配列番号１１５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＭＫポリペプチドは、配列番号６４と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＰＭＫポリペプチドは、配列番号６２または配列番号２０５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＭＶＤポリペプチドは、配列番号６６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドは、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドであり、配列番号２５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＰＤＣポリペプチドは、配列番号１１７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドは、配列番号９０、配列番号９２、配列番号１４５、配列番号１４７、配列番号１４９、配列番号１６９、配列番号１９２、配列番号１９４、配列番号１９６、配列番号１９８、または配列番号２００と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＴＨＣＡシンターゼポリペプチドは、配列番号１４、配列番号８６、配列番号１０４、配列番号１５３、または配列番号１５５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４９５】
本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を提供し、ここで、該遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）ＧＰＰを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｃ）ＣＢＤＡシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｄ）以下の１つまたは複数のポリペプチド：ＨＭＧＳポリペプチド、ｔＨＭＧＲポリペプチド、ＭＫポリペプチド、ＰＭＫポリペプチド、ＭＶＤポリペプチド、またはＩＤＩポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｅ）２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｆ）ＰＤＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、およびｇ）アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰを生成するポリペプチドは、ＧＰＰＳポリペプチドであり、配列番号７、配列番号８、または配列番号６０と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＩＤＩポリペプチドは、配列番号５８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ｔＨＭＧＲポリペプチドは、配列番号１７、配列番号５２、配列番号１１３、または配列番号２０８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＨＭＧＳポリペプチドは、配列番号２３、配列番号２４、または配列番号１１５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＭＫポリペプチドは、配列番号６４と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＰＭＫポリペプチドは、配列番号６２または配列番号２０５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＭＶＤポリペプチドは、配列番号６６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドは、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドであり、配列番号２５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＰＤＣポリペプチドは、配列番号１１７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドは、配列番号９０、配列番号９２、配列番号１４５、配列番号１４７、配列番号１４９、配列番号１６９、配列番号１９２、配列番号１９４、配列番号１９６、配列番号１９８、または配列番号２００と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＣＢＤＡシンターゼポリペプチドは、配列番号８８または配列番号１５１と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４９６】
本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を提供し、ここで、該遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）ＧＰＰを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｃ）以下の１つまたは複数のポリペプチド：ＨＭＧＳポリペプチド、ｔＨＭＧＲポリペプチド、ＭＫポリペプチド、ＰＭＫポリペプチド、ＭＶＤポリペプチド、またはＩＤＩポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｄ）２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｅ）ＰＤＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｆ）ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸およびＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ならびにｇ）アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰを生成するポリペプチドは、ＧＰＰＳポリペプチドであり、配列番号７、配列番号８、または配列番号６０と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＩＤＩポリペプチドは、配列番号５８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ｔＨＭＧＲポリペプチドは、配列番号１７、配列番号５２、配列番号１１３、または配列番号２０８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＨＭＧＳポリペプチドは、配列番号２３、配列番号２４、または配列番号１１５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＭＫポリペプチドは、配列番号６４と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＰＭＫポリペプチドは、配列番号６２または配列番号２０５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＭＶＤポリペプチドは、配列番号６６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドは、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドであり、配列番号２５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドは、配列番号９０、配列番号９２、配列番号１４５、配列番号１４７、配列番号１４９、配列番号１６９、配列番号１９２、配列番号１９４、配列番号１９６、配列番号１９８、または配列番号２００と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＰＤＣポリペプチドは、配列番号１１７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＴＫＳポリペプチドは、配列番号１１または配列番号７６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＯＡＣポリペプチドは、配列番号１０または配列番号７８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４９７】
本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を提供し、ここで、該遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）ＧＰＰを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｃ）ＴＨＣＡシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｄ）以下の１つまたは複数のポリペプチド：ＨＭＧＳポリペプチド、ｔＨＭＧＲポリペプチド、ＭＫポリペプチド、ＰＭＫポリペプチド、ＭＶＤポリペプチド、またはＩＤＩポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｅ）２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｆ）ＰＤＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｇ）ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸およびＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ならびにｈ）アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰを生成するポリペプチドは、ＧＰＰＳポリペプチドであり、配列番号７、配列番号８、または配列番号６０と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＩＤＩポリペプチドは、配列番号５８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ｔＨＭＧＲポリペプチドは、配列番号１７、配列番号５２、配列番号１１３、または配列番号２０８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＨＭＧＳポリペプチドは、配列番号２３、配列番号２４、または配列番号１１５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＭＫポリペプチドは、配列番号６４と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＰＭＫポリペプチドは、配列番号６２または配列番号２０５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＭＶＤポリペプチドは、配列番号６６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドは、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドであり、配列番号２５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＰＤＣポリペプチドは、配列番号１１７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドは、配列番号９０、配列番号９２、配列番号１４５、配列番号１４７、配列番号１４９、配列番号１６９、配列番号１９２、配列番号１９４、配列番号１９６、配列番号１９８、または配列番号２００と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＴＨＣＡシンターゼポリペプチドは、配列番号１４、配列番号８６、配列番号１０４、配列番号１５３、または配列番号１５５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＴＫＳポリペプチドは、配列番号１１または配列番号７６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＯＡＣポリペプチドは、配列番号１０または配列番号７８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４９８】
本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を提供し、ここで、該遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）ＧＰＰを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｃ）ＣＢＤＡシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｄ）以下の１つまたは複数のポリペプチド：ＨＭＧＳポリペプチド、ｔＨＭＧＲポリペプチド、ＭＫポリペプチド、ＰＭＫポリペプチド、ＭＶＤポリペプチド、またはＩＤＩポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｅ）２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｆ）ＰＤＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｇ）ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸およびＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ならびにｈ）アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰを生成するポリペプチドは、ＧＰＰＳポリペプチドであり、配列番号７、配列番号８、または配列番号６０と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＩＤＩポリペプチドは、配列番号５８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ｔＨＭＧＲポリペプチドは、配列番号１７、配列番号５２、配列番号１１３、または配列番号２０８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＨＭＧＳポリペプチドは、配列番号２３、配列番号２４、または配列番号１１５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＭＫポリペプチドは、配列番号６４と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＰＭＫポリペプチドは、配列番号６２または配列番号２０５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＭＶＤポリペプチドは、配列番号６６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドは、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドであり、配列番号２５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＰＤＣポリペプチドは、配列番号１１７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドは、配列番号９０、配列番号９２、配列番号１４５、配列番号１４７、配列番号１４９、配列番号１６９、配列番号１９２、配列番号１９４、配列番号１９６、配列番号１９８、または配列番号２００と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＣＢＤＡシンターゼポリペプチドは、配列番号８８または配列番号１５１と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＴＫＳポリペプチドは、配列番号１１または配列番号７６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＯＡＣポリペプチドは、配列番号１０または配列番号７８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４９９】
本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を提供し、ここで、該遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）ＧＰＰを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｃ）以下の１つまたは複数のポリペプチド：ＨＭＧＳポリペプチド、ｔＨＭＧＲポリペプチド、ＭＫポリペプチド、ＰＭＫポリペプチド、ＭＶＤポリペプチド、またはＩＤＩポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｄ）２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｅ）ＰＤＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ならびにｆ）ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸およびＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰを生成するポリペプチドは、ＧＰＰＳポリペプチドであり、配列番号７、配列番号８、または配列番号６０と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＩＤＩポリペプチドは、配列番号５８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ｔＨＭＧＲポリペプチドは、配列番号１７、配列番号５２、配列番号１１３、または配列番号２０８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＨＭＧＳポリペプチドは、配列番号２３、配列番号２４、または配列番号１１５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＭＫポリペプチドは、配列番号６４と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＰＭＫポリペプチドは、配列番号６２または配列番号２０５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＭＶＤポリペプチドは、配列番号６６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドは、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドであり、配列番号２５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＰＤＣポリペプチドは、配列番号１１７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＴＫＳポリペプチドは、配列番号１１または配列番号７６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＯＡＣポリペプチドは、配列番号１０または配列番号７８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０５００】
本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を提供し、ここで、該遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）ＧＰＰを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｃ）ＴＨＣＡシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｄ）以下の１つまたは複数のポリペプチド：ＨＭＧＳポリペプチド、ｔＨＭＧＲポリペプチド、ＭＫポリペプチド、ＰＭＫポリペプチド、ＭＶＤポリペプチド、またはＩＤＩポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｅ）２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｆ）ＰＤＣポリペプチド、ならびにｇ）ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸およびＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰを生成するポリペプチドは、ＧＰＰＳポリペプチドであり、配列番号７、配列番号８、または配列番号６０と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＩＤＩポリペプチドは、配列番号５８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ｔＨＭＧＲポリペプチドは、配列番号１７、配列番号５２、配列番号１１３、または配列番号２０８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＨＭＧＳポリペプチドは、配列番号２３、配列番号２４、または配列番号１１５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＭＫポリペプチドは、配列番号６４と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＰＭＫポリペプチドは、配列番号６２または配列番号２０５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＭＶＤポリペプチドは、配列番号６６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドは、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドであり、配列番号２５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＰＤＣポリペプチドは、配列番号１１７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＴＨＣＡシンターゼポリペプチドは、配列番号１４、配列番号８６、配列番号１０４、配列番号１５３、または配列番号１５５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＴＫＳポリペプチドは、配列番号１１または配列番号７６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＯＡＣポリペプチドは、配列番号１０または配列番号７８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０５０１】
本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を提供し、ここで、該遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）ＧＰＰを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｃ）ＣＢＤＡシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｄ）以下の１つまたは複数のポリペプチド：ＨＭＧＳポリペプチド、ｔＨＭＧＲポリペプチド、ＭＫポリペプチド、ＰＭＫポリペプチド、ＭＶＤポリペプチド、またはＩＤＩポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｅ）２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｆ）ＰＤＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ならびにｇ）ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸およびＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰを生成するポリペプチドは、ＧＰＰＳポリペプチドであり、配列番号７、配列番号８、または配列番号６０と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＩＤＩポリペプチドは、配列番号５８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ｔＨＭＧＲポリペプチドは、配列番号１７、配列番号５２、配列番号１１３、または配列番号２０８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＨＭＧＳポリペプチドは、配列番号２３、配列番号２４、または配列番号１１５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＭＫポリペプチドは、配列番号６４と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＰＭＫポリペプチドは、配列番号６２または配列番号２０５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＭＶＤポリペプチドは、配列番号６６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドは、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドであり、配列番号２５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＰＤＣポリペプチドは、配列番号１１７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＣＢＤＡシンターゼポリペプチドは、配列番号８８または配列番号１５１と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＴＫＳポリペプチドは、配列番号１１または配列番号７６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＯＡＣポリペプチドは、配列番号１０または配列番号７８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０５０２】
本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を提供し、ここで、該遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）ＧＰＰを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｃ）以下の１つまたは複数のポリペプチド：ＨＭＧＳポリペプチド、ｔＨＭＧＲポリペプチド、ＭＫポリペプチド、ＰＭＫポリペプチド、ＭＶＤポリペプチド、またはＩＤＩポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｄ）２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｅ）ＰＤＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｆ）ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸およびＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｇ）マロニル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ならびにｈ）アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰを生成するポリペプチドは、ＧＰＰＳポリペプチドであり、配列番号７、配列番号８、または配列番号６０と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＩＤＩポリペプチドは、配列番号５８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ｔＨＭＧＲポリペプチドは、配列番号１７、配列番号５２、配列番号１１３、または配列番号２０８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＨＭＧＳポリペプチドは、配列番号２３、配列番号２４、または配列番号１１５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＭＫポリペプチドは、配列番号６４と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＰＭＫポリペプチドは、配列番号６２または配列番号２０５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＭＶＤポリペプチドは、配列番号６６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドは、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドであり、配列番号２５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドは、配列番号９０、配列番号９２、配列番号１４５、配列番号１４７、配列番号１４９、配列番号１６９、配列番号１９２、配列番号１９４、配列番号１９６、配列番号１９８、または配列番号２００と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＰＤＣポリペプチドは、配列番号１１７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、マロニル−ＣｏＡを生成するポリペプチドは、ＡＣＣポリペプチドであり、配列番号９、配列番号９７、または配列番号２０７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＴＫＳポリペプチドは、配列番号１１または配列番号７６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＯＡＣポリペプチドは、配列番号１０または配列番号７８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０５０３】
本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を提供し、ここで、該遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）ＧＰＰを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｃ）ＴＨＣＡシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｄ）以下の１つまたは複数のポリペプチド：ＨＭＧＳポリペプチド、ｔＨＭＧＲポリペプチド、ＭＫポリペプチド、ＰＭＫポリペプチド、ＭＶＤポリペプチド、またはＩＤＩポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｅ）２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｆ）ＰＤＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｇ）ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸およびＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｈ）マロニル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ならびにｉ）アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰを生成するポリペプチドは、ＧＰＰＳポリペプチドであり、配列番号７、配列番号８、または配列番号６０と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＩＤＩポリペプチドは、配列番号５８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ｔＨＭＧＲポリペプチドは、配列番号１７、配列番号５２、配列番号１１３、または配列番号２０８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＨＭＧＳポリペプチドは、配列番号２３、配列番号２４、または配列番号１１５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＭＫポリペプチドは、配列番号６４と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＰＭＫポリペプチドは、配列番号６２または配列番号２０５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＭＶＤポリペプチドは、配列番号６６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドは、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドであり、配列番号２５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＰＤＣポリペプチドは、配列番号１１７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドは、配列番号９０、配列番号９２、配列番号１４５、配列番号１４７、配列番号１４９、配列番号１６９、配列番号１９２、配列番号１９４、配列番号１９６、配列番号１９８、または配列番号２００と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＴＨＣＡシンターゼポリペプチドは、配列番号１４、配列番号８６、配列番号１０４、配列番号１５３、または配列番号１５５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、マロニル−ＣｏＡを生成するポリペプチドは、ＡＣＣポリペプチドであり、配列番号９、配列番号９７、または配列番号２０７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＴＫＳポリペプチドは、配列番号１１または配列番号７６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＯＡＣポリペプチドは、配列番号１０または配列番号７８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０５０４】
本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を提供し、ここで、該遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）ＧＰＰを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｃ）ＣＢＤＡシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｄ）以下の１つまたは複数のポリペプチド：ＨＭＧＳポリペプチド、ｔＨＭＧＲポリペプチド、ＭＫポリペプチド、ＰＭＫポリペプチド、ＭＶＤポリペプチド、またはＩＤＩポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｅ）２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｆ）ＰＤＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｇ）ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸およびＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｈ）マロニル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ならびにｉ）アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰを生成するポリペプチドは、ＧＰＰＳポリペプチドであり、配列番号７、配列番号８、または配列番号６０と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＩＤＩポリペプチドは、配列番号５８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ｔＨＭＧＲポリペプチドは、配列番号１７、配列番号５２、配列番号１１３、または配列番号２０８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＨＭＧＳポリペプチドは、配列番号２３、配列番号２４、または配列番号１１５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＭＫポリペプチドは、配列番号６４と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＰＭＫポリペプチドは、配列番号６２または配列番号２０５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＭＶＤポリペプチドは、配列番号６６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドは、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドであり、配列番号２５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＰＤＣポリペプチドは、配列番号１１７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドは、配列番号９０、配列番号９２、配列番号１４５、配列番号１４７、配列番号１４９、配列番号１６９、配列番号１９２、配列番号１９４、配列番号１９６、配列番号１９８、または配列番号２００と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＣＢＤＡシンターゼポリペプチドは、配列番号８８または配列番号１５１と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、マロニル−ＣｏＡを生成するポリペプチドは、ＡＣＣポリペプチドであり、配列番号９、配列番号９７、または配列番号２０７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＴＫＳポリペプチドは、配列番号１１または配列番号７６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＯＡＣポリペプチドは、配列番号１０または配列番号７８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０５０５】
本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を提供し、ここで、該遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）ＧＰＰを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｃ）以下の１つまたは複数のポリペプチド：ＨＭＧＳポリペプチド、ｔＨＭＧＲポリペプチド、ＭＫポリペプチド、ＰＭＫポリペプチド、ＭＶＤポリペプチド、またはＩＤＩポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｄ）２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｅ）ＰＤＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｆ）マロニル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ならびにｇ）ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸およびＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰを生成するポリペプチドは、ＧＰＰＳポリペプチドであり、配列番号７、配列番号８、または配列番号６０と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＩＤＩポリペプチドは、配列番号５８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ｔＨＭＧＲポリペプチドは、配列番号１７、配列番号５２、配列番号１１３、または配列番号２０８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＨＭＧＳポリペプチドは、配列番号２３、配列番号２４、または配列番号１１５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＭＫポリペプチドは、配列番号６４と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＰＭＫポリペプチドは、配列番号６２または配列番号２０５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＭＶＤポリペプチドは、配列番号６６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドは、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドであり、配列番号２５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＰＤＣポリペプチドは、配列番号１１７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、マロニル−ＣｏＡを生成するポリペプチドは、ＡＣＣポリペプチドであり、配列番号９、配列番号９７、または配列番号２０７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＴＫＳポリペプチドは、配列番号１１または配列番号７６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＯＡＣポリペプチドは、配列番号１０または配列番号７８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０５０６】
本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を提供し、ここで、該遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）ＧＰＰを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｃ）ＴＨＣＡシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｄ）以下の１つまたは複数のポリペプチド：ＨＭＧＳポリペプチド、ｔＨＭＧＲポリペプチド、ＭＫポリペプチド、ＰＭＫポリペプチド、ＭＶＤポリペプチド、またはＩＤＩポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｅ）２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｆ）ＰＤＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｇ）マロニル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ならびにｈ）ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸およびＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰを生成するポリペプチドは、ＧＰＰＳポリペプチドであり、配列番号７、配列番号８、または配列番号６０と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＩＤＩポリペプチドは、配列番号５８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ｔＨＭＧＲポリペプチドは、配列番号１７、配列番号５２、配列番号１１３、または配列番号２０８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＨＭＧＳポリペプチドは、配列番号２３、配列番号２４、または配列番号１１５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＭＫポリペプチドは、配列番号６４と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＰＭＫポリペプチドは、配列番号６２または配列番号２０５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＭＶＤポリペプチドは、配列番号６６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドは、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドであり、配列番号２５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＰＤＣポリペプチドは、配列番号１１７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＴＨＣＡシンターゼポリペプチドは、配列番号１４、配列番号８６、配列番号１０４、配列番号１５３、または配列番号１５５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、マロニル−ＣｏＡを生成するポリペプチドは、ＡＣＣポリペプチドであり、配列番号９、配列番号９７、または配列番号２０７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＴＫＳポリペプチドは、配列番号１１または配列番号７６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＯＡＣポリペプチドは、配列番号１０または配列番号７８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０５０７】
本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を提供し、ここで、該遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）ＧＰＰを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｃ）ＣＢＤＡシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｄ）以下の１つまたは複数のポリペプチド：ＨＭＧＳポリペプチド、ｔＨＭＧＲポリペプチド、ＭＫポリペプチド、ＰＭＫポリペプチド、ＭＶＤポリペプチド、またはＩＤＩポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｅ）２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｆ）ＰＤＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｇ）マロニル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ならびにｈ）ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸およびＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＰを生成するポリペプチドは、ＧＰＰＳポリペプチドであり、配列番号７、配列番号８、または配列番号６０と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＩＤＩポリペプチドは、配列番号５８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ｔＨＭＧＲポリペプチドは、配列番号１７、配列番号５２、配列番号１１３、または配列番号２０８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＨＭＧＳポリペプチドは、配列番号２３、配列番号２４、または配列番号１１５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＭＫポリペプチドは、配列番号６４と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＰＭＫポリペプチドは、配列番号６２または配列番号２０５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＭＶＤポリペプチドは、配列番号６６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドは、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドであり、配列番号２５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＰＤＣポリペプチドは、配列番号１１７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＣＢＤＡシンターゼポリペプチドは、配列番号８８または配列番号１５１と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、マロニル−ＣｏＡを生成するポリペプチドは、ＡＣＣポリペプチドであり、配列番号９、配列番号９７、または配列番号２０７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＴＫＳポリペプチドは、配列番号１１または配列番号７６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＯＡＣポリペプチドは、配列番号１０または配列番号７８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０５０８】
本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を提供し、ここで、該遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）ＧＰＰを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｃ）マロニル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｄ）アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体とマロニル−ＣｏＡとを縮合し、オリベトール酸またはオリベトール酸の誘導体を生成する１つまたは複数のポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｅ）ゲラニルピロリン酸：オリベトール酸トランスフェラーゼ（ＧＯＴ）ポリペプチドまたはＮｐｈＢポリペプチドのような芳香族プレニルトランスフェラーゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、およびｆ）カンナビノイドシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。
【０５０９】
また、本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞も提供し、ここで、該遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）ピロリン酸ネリル（ＮＰＰ）を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｃ）マロニル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｄ）アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体とマロニル−ＣｏＡとを縮合してオリベトール酸またはオリベトール酸誘導体を生成する１つまたは複数のポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｅ）ＧＯＴポリペプチドまたはＮｐｈＢポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、およびｆ）カンナビノイドシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、適切な培地で遺伝子組換え宿主細胞を培養することにより、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体が回収可能量で合成される。
【０５１０】
本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を提供し、ここで、該遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）ＴＫＳ／ＯＡＣ融合ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、およびｃ）ＧＯＴポリペプチドまたはＮｐｈＢポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、カルボン酸を含む培地で遺伝子組換え宿主細胞を培養することにより、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体が回収可能量で合成される。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、さらに、ＴＨＣＡＳまたはＣＢＤＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、カルボン酸を含む培地で遺伝子組換え宿主細胞を培養することにより、カンナビノイド誘導体またはカンナビノイドが回収可能量に合成される。
【０５１１】
ＮＰＰＳポリペプチドを発現する代表的な遺伝子組換え宿主細胞：  いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）１つまたは複数のメバロン酸経路ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、およびｃ）ＮＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。
【０５１２】
いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）１つまたは複数のメバロン酸経路ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｃ）ＮＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ならびにｄ）ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸およびＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。
【０５１３】
いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）１つまたは複数のメバロン酸経路ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｃ）ＮＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｄ）アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ならびにｅ）ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸およびＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。
【０５１４】
ＧＯＴポリペプチドは、ＮＰＰおよびオリベトール酸を基質として使用して、カンナビネロール酸（ＣＢＮＲＡ）を生成することができる。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドは、ＮＰＰおよびオリベトール酸誘導体に作用し（本明細書の他で記載するように）ＣＢＮＲＡ誘導体を生成する。カンナビネロール酸またはその誘導体は、ＣＢＤＡＳまたはＴＨＣＡＳポリペプチドの基質としての役目を果たすことができ、ＣＢＤＡあるいはＴＨＣＡ、またはそれぞれその誘導体を生成する。
【０５１５】
いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）１分子のアセチル−ＣｏＡと１分子のマロニル−ＣｏＡとを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）１つまたは複数のメバロン酸経路ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｃ）ＮＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、およびｄ）ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０５１６】
いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）１つまたは複数のメバロン酸経路ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｃ）ＮＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、およびｄ）ＧＯＴポリペプチドまたはＮｐｈＢポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０５１７】
いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）１つまたは複数のメバロン酸経路ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｃ）ＮＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｄ）ＧＯＴポリペプチドまたはＮｐｈＢポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、およびｅ）ＣＢＤＡＳまたはＴＨＣＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０５１８】
いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）１分子のアセチル−ＣｏＡと１分子のマロニル−ＣｏＡとを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）１つまたは複数のメバロン酸経路ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｃ）ＮＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｄ）ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸およびＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ならびにｅ）ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０５１９】
いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）１つまたは複数のメバロン酸経路ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｃ）ＮＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｄ）ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸およびＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ならびにｅ）ＧＯＴポリペプチドまたはＮｐｈＢポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０５２０】
いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）１つまたは複数のメバロン酸経路ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｃ）ＮＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｄ）ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸およびＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｅ）ＧＯＴポリペプチドまたはＮｐｈＢポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ならびにｆ）ＣＢＤＡＳまたはＴＨＣＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０５２１】
いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）１分子のアセチル−ＣｏＡと１分子のマロニル−ＣｏＡとを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）１つまたは複数のメバロン酸経路ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｃ）ＮＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｄ）ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸およびＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｅ）アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ならびにｆ）ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０５２２】
いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で、ｂ）１つまたは複数のメバロン酸経路ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で、ｃ）ＮＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で、ｄ）ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸およびＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で、ｅ）アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で、ならびにｆ）ＧＯＴポリペプチドまたはＮｐｈＢポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０５２３】
いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）２分子のアセチル−ＣｏＡを縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）１つまたは複数のメバロン酸経路ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｃ）ＮＰＰＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｄ）ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸およびＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｅ）アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｆ）ＧＯＴポリペプチドまたはＮｐｈＢポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ならびにｇ）ＣＢＤＡＳまたはＴＨＣＡＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、１つまたは複数の異種核酸によってコードされたＧＯＴポリペプチドは、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０５２４】
オリベトール酸またはオリベトール酸誘導体を作成する代表的な遺伝子組換え宿主細胞：  本開示は、オリベトール酸またはオリベトール酸誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を提供し、ここで、遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ならびにｂ）ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸およびＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドは、配列番号９０、配列番号９２、配列番号１４５、配列番号１４７、配列番号１４９、配列番号１６９、配列番号１９２、配列番号１９４、配列番号１９６、配列番号１９８、または配列番号２００と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＴＫＳポリペプチドは、配列番号１１または配列番号７６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＯＡＣポリペプチドは、配列番号１０または配列番号７８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、カルボン酸を含む培地で、本明細書で開示する遺伝子組換え宿主細胞を培養することにより、オリベトール酸またはオリベトール酸誘導体が回収可能量で合成される。
【０５２５】
本開示は、オリベトール酸またはオリベトール酸誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を提供し、ここで、該遺伝子組換え宿主細胞は、ａ）アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、およびｂ）ＴＫＳ／ＯＡＣ融合ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかのそのような実施形態では、カルボン酸を含む培地で遺伝子組換え宿主細胞を培養することにより、オリベトール酸またはオリベトール酸誘導体が回収可能量で合成される。
【０５２６】
適切な宿主細胞：  本開示の遺伝子組換え宿主細胞の生成に適切な親宿主細胞として、原核細胞および真核細胞が挙げられる。いくつかの実施形態では、真核細胞は、酵母細胞である。いくつかの実施形態では、真核細胞は植物細胞である。
【０５２７】
いくつかの実施形態では、宿主細胞（親宿主細胞および遺伝子組換え宿主細胞が挙げられる）は、単細胞生物または単細胞として培養で成長する。いくつかの実施形態では、宿主細胞は真核細胞である。適切な真核宿主細胞として、酵母細胞、昆虫細胞、植物細胞、真菌細胞、および藻類細胞が挙げられるが、これらに限定されない。適切な真核宿主細胞として、ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ）、ピキア・フィンランディカ（Ｐｉｃｈｉａ  ｆｉｎｌａｎｄｉｃａ）、ピキア・トレハロフィラ（Ｐｉｃｈｉａ  ｔｒｅｈａｌｏｐｈｉｌａ）、ピキア・コクラメ（Ｐｉｃｈｉａ  ｋｏｃｌａｍａｅ）、ピキア・メンブラネファシエンス（Ｐｉｃｈｉａ  ｍｅｍｂｒａｎａｅｆａｃｉｅｎｓ）、ピキア・オプンティア（Ｐｉｃｈｉａ  ｏｐｕｎｔｉａｅ）、ピキア・サーモトレランス（Ｐｉｃｈｉａ  ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓ）、ピキア・サリクタリア（Ｐｉｃｈｉａ  ｓａｌｉｃｔａｒｉａ）、ピキア・グエルキューム（Ｐｉｃｈｉａ  ｇｕｅｒｃｕｕｍ）、ピキア・ピジュペリ（Ｐｉｃｈｉａ  ｐｉｊｐｅｒｉ）、ピキア・スティプティス（Ｐｉｃｈｉａ  ｓｔｉｐｔｉｓ）、ピキア・メタノリカ（Ｐｉｃｈｉａ  ｍｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）、ピキア属（Ｐｉｃｈｉａ  ｓｐ．）、サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、サッカロミセス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）、ハンゼヌラ・ポリモルファ（現在ではピキア・アングスタ（Ｐｉｃｈｉａ  ａｎｇｕｓｔａ）として知られる）、クルイウェロマイセス属（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）、クルイウェロマイセス・ラクティス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｌａｃｔｉｓ）、クルイウェロマイセス・マルシアヌス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｍａｒｘｉａｎｕｓ）、シゾサッカロミケス・ポンベ（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅ）、デッケラ・ブルクセレンシス（Ｄｅｋｋｅｒａ  ｂｒｕｘｅｌｌｅｎｓｉｓ）、アークスラ・アデニニボランス（Ａｒｘｕｌａ  ａｄｅｎｉｎｉｖｏｒａｎｓ）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）、アスペルギルス・ニデュランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｄｕｌａｎｓ）、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）、アスペルギルス・オリーゼ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）、トリコデルマ・リーゼイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）、クリソスポリウム・ラクノウェンス（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｌｕｃｋｎｏｗｅｎｓｅ）、フザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓｐ．）、フザリウム・グラミネウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｇｒａｍｉｎｅｕｍ）、フザリウム・ベネナタム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｖｅｎｅｎａｔｕｍ）、ニューロスポラ・クラッサ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ  ｃｒａｓｓａ）、およびクラミドモナス・ラインハルディ（Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ  ｒｅｉｎｈａｒｄｔｉｉ）などが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、サッカロミセス・セレビシエのプロテアーゼ欠損株である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は植物細胞以外の真核細胞である。いくつかの実施形態では、真核細胞は植物細胞である。いくつかの実施形態では、真核細胞は植物細胞であり、ここで、該植物細胞は、カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体、またはカンナビノイド前駆体誘導体を正常に産生しないものである。いくつかの実施形態では、宿主細胞はサッカロミセス・セレビシエである。いくつかの実施形態では、本明細書で開示する遺伝子組換え宿主細胞は、インビトロで培養されたものである。
【０５２８】
いくつかの実施形態では、宿主細胞は原核細胞である。適切な原核細胞として、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、ラクトバシルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）、サルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｓｐ．）、シゲラ属（Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｓｐ．）等の種々の実験室株のいかなるものも挙げられるが、これらに限定されない。例えば、Ｃａｒｒｉｅｒら（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１１７６−１１８１、米国特許第６，４４７，７８４号、およびＳｉｚｅｍｏｒｅら（１９９５）Ｓｃｉｅｎｃｅ２７０：２９９−３０２参照。使用することができるサルモネラ株の例として、サルモネラ・チフィ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉ）およびＳ．チフィムリウム（Ｓ．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）が挙げられるが、これらに限定されない。適切なシゲラ株として、シゲラ・フレックスネリ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｆｌｅｘｎｅｒｉ）、シゲラ・ソネイ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｓｏｎｎｅｉ）、およびシゲラ・ディセンテリア、志賀赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｄｉｓｅｎｔｅｒｉａｅ）が挙げられるが、これらに限定されない。通常、実験室株は、非病原性のものである。他の適切な細菌の限定ではない例示として、バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、シュードモナス・ブチダ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｕｔｉｄａ）、シュードモナス・エルジノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、シュードモナス・メバロニイ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｍｅｖａｌｏｎｉｉ）、ロドバクター・スフェロイデス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐｈａｅｒｏｉｄｅｓ）、ロドバクター・カプスラータ（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｓ）、ロドスピリラム・ラブラム（Ｒｈｏｄｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ  ｒｕｂｒｕｍ）、ロドコッカス属（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．）などが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、宿主細胞は大腸菌である。
【０５２９】
宿主細胞の遺伝子組換え：  本開示は、カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体誘導体、またはカンナビノイド前駆体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を作成する方法であって、本明細書で開示する１つまたは複数の異種核酸を遺伝子組換え宿主細胞に導入することを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する。また、本開示は、本明細書で開示する１つまたは複数のポリペプチドをコードする、本明細書で開示する１つまたは複数の異種核酸を発現するまたは過剰発現するように遺伝子組換えされた遺伝子組換え宿主細胞を作成する方法であって、本明細書で開示する１つまたは複数の異種核酸を遺伝子組換え宿主細胞に導入することを含む方法も提供する。
【０５３０】
いくつかの実施形態では、本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を作成する方法であって、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができるＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を、遺伝子組換え宿主細胞に導入することを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができるＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を発現するまたは過剰発現するように遺伝子組換えされた遺伝子組換え宿主細胞を作成する方法であって、ＧＯＴポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができるＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を遺伝子組換え宿主細胞に導入することを含む方法を提供する。
【０５３１】
いくつかの実施形態では、本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を作成する方法であって、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を、遺伝子組換え宿主細胞に導入することを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を発現するまたは過剰発現するように遺伝子組換えされた遺伝子組換え宿主細胞を作成する方法であって、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を遺伝子組換え宿主細胞に導入することを含む方法を提供する。
【０５３２】
本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を作成する方法であって、配列番号１００と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を、遺伝子組換え宿主細胞に導入することを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号１００と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を発現するまたは過剰発現するように遺伝子組換えされた遺伝子組換え宿主細胞を作成する方法であって、配列番号１００と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を、遺伝子組換え宿主細胞に導入することを含む方法を提供する。
【０５３３】
親宿主細胞を遺伝子組換えして本開示の遺伝子組換え宿主細胞を産生するために、本明細書で開示する１つまたは複数の異種核酸を、確立された技術を使用して、宿主細胞に安定的に、または過渡的に導入する。そのような技術として、電気穿孔法、リン酸カルシウム沈殿法、ＤＥＡＥ−デキストラン介在トランスフェクション、およびリポソーム介在トランスフェクションなどが挙げられるが、これらに限定されない。安定な形質転換に関し、異種核酸は一般的にさらに選択マーカー、例えば、ネオマイシン耐性、アンピシリン耐性、テトラサイクリン耐性、クロラムフェニコール耐性、カナマイシン耐性などの数種の周知の選択マーカーの任意のものも挙げられる。いくつかの実施形態では、親宿主細胞を本明細書で開示する１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えするＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９を使用して、本開示の遺伝子組換え宿主細胞を産生するように親宿主細胞を遺伝子組換えする。
【０５３４】
本明細書で開示する１つまたは複数の核酸は、発現ベクターまたは構築物内に存在し得る。適切な発現ベクターとして、バキュロウィルスベクター、バクテリオファージベクター、プラスミド、ファージミド、コスミド、フォスミド、バクテリア人工染色体、ウィルスベクター（例えば、ワクチニアウィルス、ポリオウィルス、アデノウィルス、アデノ随伴ウィルス、ＳＶ４０、および単純ヘルペスウィルス系のウィルスベクター）、Ｐ１系人工染色体、酵母プラスミド、酵母人工染色体、および対象の特定宿主に特定の他のベクターの任意のもの（例えば、大腸菌および酵母）が挙げられるが、これらに限定されない。したがって、例えば、メバロン酸経路遺伝子産生物をコードする１つまたは複数の核酸は、メバロン酸経路遺伝子産生物を発現する種々の発現ベクターの任意の１つのものの中に含まれる。そのようなベクターとして、染色体ベクター、非染色体ベクター、および合成ＤＮＡ配列が挙げられる。
【０５３５】
当業者には多数の追加の適切な発現ベクターが知られ、多くは市販されている。例示として以下のベクターが提供されている。バクテリア宿主細胞として、ｐＱＥベクター（Ｑｉａｇｅｎ社）、ｐブルースクリプトプラスミド、ｐＮＨベクター、ラムダ−ＺＡＰベクター（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ社）；ｐＴｒｃ９９ａ、ｐＫＫ２２３−３、ｐＤＲ５４０、およびｐＲＩＴ２Ｔ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ社）；真核宿主細胞として、ｐＸＴ１、ｐＳＧ５（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ社）、ｐＳＶＫ３、ｐＢＰＶ、ｐＭＳＧ、およびｐＳＶＬＳＶ４０（Ｐｈａｒｍａｃｉａ社）。しかし、宿主細胞と親和性がある限り、任意の他のプラスミドまたは他のベクターを使用してもよい。
【０５３６】
いくつかの実施形態では、本明細書で開示する１つまたは複数の核酸が単一の発現ベクター内に存在する。いくつかの実施形態では、本明細書で開示する２つ以上の核酸が単一の発現ベクター内に存在する。いくつかの実施形態では、本明細書で開示する３つ以上の核酸が単一の発現ベクター内に存在する。いくつかの実施形態では、本明細書で開示する４つ以上の核酸が単一の発現ベクター内に存在する。いくつかの実施形態では、本明細書で開示する５つ以上の核酸が単一の発現ベクター内に存在する。いくつかの実施形態では、本明細書で開示する６つ以上の核酸が単一の発現ベクター内に存在する。いくつかの実施形態では、本明細書で開示する７つ以上の核酸が単一の発現ベクター内に存在する。
【０５３７】
いくつかの実施形態では、本明細書で開示する２つ以上の核酸が別個の発現ベクター内に存在する。いくつかの実施形態では、本明細書で開示する３つ以上の核酸が別個の発現ベクター内に存在する。いくつかの実施形態では、本明細書で開示する４つ以上の核酸が別個の発現ベクター内に存在する。いくつかの実施形態では、本明細書で開示する５つ以上の核酸が別個の発現ベクター内に存在する。いくつかの実施形態では、本明細書で開示する６つ以上の核酸が別個の発現ベクター内に存在する。いくつかの実施形態では、本明細書で開示する７つ以上の核酸が別個の発現ベクター内に存在する。いくつかの実施形態では、本明細書で開示する８つ以上の核酸が別個の発現ベクター内に存在する。いくつかの実施形態では、本明細書で開示する９つ以上の核酸が別個の発現ベクター内に存在する。いくつかの実施形態では、本明細書で開示する１０以上の核酸が別個の発現ベクター内に存在する。
【０５３８】
いくつかの実施形態では、本明細書で開示する１つまたは複数の核酸が単一の発現構築物内に存在する。いくつかの実施形態では、本明細書で開示する２つ以上の核酸が単一の発現構築物内に存在する。いくつかの実施形態では、本明細書で開示する３つ以上の核酸が単一の発現構築物内に存在する。いくつかの実施形態では、本明細書で開示する４つ以上の核酸が単一の発現構築物内に存在する。いくつかの実施形態では、本明細書で開示する５つ以上の核酸が単一の発現構築物内に存在する。いくつかの実施形態では、本明細書で開示する６つ以上の核酸が単一の発現構築物内に存在する。いくつかの実施形態では、本明細書で開示する７つ以上の核酸が単一の発現構築物内に存在する。
【０５３９】
いくつかの実施形態では、本明細書で開示する２つ以上の核酸が別個の発現構築物内に存在する。いくつかの実施形態では、本明細書で開示する３つ以上の核酸が別個の発現構築物内に存在する。いくつかの実施形態では、本明細書で開示する４つ以上の核酸が別個の発現構築物内に存在する。いくつかの実施形態では、本明細書で開示する５つ以上の核酸が別個の発現構築物内に存在する。いくつかの実施形態では、本明細書で開示する６つ以上の核酸が別個の発現構築物内に存在する。いくつかの実施形態では、本明細書で開示する７つ以上の核酸が別個の発現構築物内に存在する。いくつかの実施形態では、本明細書で開示する８つ以上の核酸が別個の発現構築物内に存在する。いくつかの実施形態では、本明細書で開示する９つ以上の核酸が別個の発現構築物内に存在する。いくつかの実施形態では、本明細書で開示する１０以上の核酸が別個の発現構築物内に存在する。
【０５４０】
本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を作成する方法であって、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができるＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含むベクターを、遺伝子組換え宿主細胞に導入する方法を提供する。本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を作成する方法であって、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含むベクターを、遺伝子組換え宿主細胞に導入することを含む方法を提供する。また、本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を作成する方法であって、配列番号１００と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含むベクターを、遺伝子組換え宿主細胞に導入することを含む方法も提供する。
【０５４１】
また、本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を作成する方法であって、配列番号１１１と少なくとも８０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４異種核酸を含むベクターを、遺伝子組換え宿主細胞に導入することを含む方法も提供する。また、本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を作成する方法であって、配列番号２２５と少なくとも８０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４異種核酸を含むベクターを、遺伝子組換え宿主細胞に導入することを含む方法も提供する。また、本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を作成する方法であって、配列番号２２１と少なくとも８０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４ｔ異種核酸を含むベクターを、遺伝子組換え宿主細胞に導入することを含む方法も提供する。また、本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞を作成する方法であって、配列番号２２４と少なくとも８０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４ｔ異種核酸を含むベクターを、遺伝子組換え宿主細胞に導入することを含む方法も提供する。
【０５４２】
本開示は、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができるＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を発現するまたは過剰発現するように遺伝子組換えされた遺伝子組換え宿主細胞を作成する方法であって、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量で、ＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができるＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含むベクターを、遺伝子組換え宿主細胞に導入することを含む方法を提供する。本開示は、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を発現するまたは過剰発現するように遺伝子組換えされた遺伝子組換え宿主細胞を作成する方法であって、配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含むベクターを、遺伝子組換え宿主細胞に導入することを含む方法を提供する。本開示は、配列番号１００と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を発現するまたは過剰発現するように遺伝子組換えされた遺伝子組換え宿主細胞を作成する方法であって、配列番号１００と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含むベクターを、遺伝子組換え宿主細胞に導入することを含む方法を提供する。
【０５４３】
また、本開示は、配列番号１１１と少なくとも８０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４異種核酸を発現するまたは過剰発現するように遺伝子組換えされた遺伝子組換え宿主細胞を作成する方法であって、配列番号１１１と少なくとも８０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４異種核酸を含むベクターを、遺伝子組換え宿主細胞に導入することを含む方法も提供する。また、本開示は、配列番号２２５と少なくとも８０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４異種核酸を発現するまたは過剰発現するように遺伝子組換えされた遺伝子組換え宿主細胞を作成する方法であって、配列番号２２５と少なくとも８０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４異種核酸を含むベクターを、遺伝子組換え宿主細胞に導入することを含む方法も提供する。また、本開示は、配列番号２２１と少なくとも８０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４ｔ異種核酸を発現するまたは過剰発現するように遺伝子組換えされた遺伝子組換え宿主細胞を作成する方法であって、配列番号２２１と少なくとも８０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４ｔ異種核酸を含むベクターを、遺伝子組換え宿主細胞に導入することを含む方法も提供する。また、本開示は、配列番号２２４と少なくとも８０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４ｔ異種核酸を発現するまたは過剰発現するように遺伝子組換えされた遺伝子組換え宿主細胞を作成する方法であって、配列番号２２４と少なくとも８０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むＣｓＰＴ４ｔ異種核酸を含むベクターを、遺伝子組換え宿主細胞に導入することを含む方法も提供する。
【０５４４】
いくつかの実施形態では、本明細書で開示する１つまたは複数の異種核酸は、高コピー数のプラスミド内に、例えば、１細胞当たり約１０〜５０コピーで存在するプラスミド、または１細胞当たり５０コピーを超える数で存在するプラスミド内に存在する。いくつかの実施形態では、本明細書で開示する１つまたは複数の異種核酸は、低コピー数プラスミド内に存在する。いくつかの実施形態では、本明細書で開示する１つまたは複数の異種核酸は、中コピー数のプラスミド内に存在する。
【０５４５】
発現ベクターまたは構築物においては、利用する宿主／ベクターまたは宿主／構築物系に依っては、構成型および誘導性プロモーターを始めとする数多くの適切な、任意の転写および翻訳調節エレメント、転写促進エレメント、転写終結剤などを使用してもよい（例えば、Ｂｉｔｔｅｒら（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、１５３：５１６−５４４参照）．
【０５４６】
いくつかの実施形態では、本明細書で開示する異種核酸はプロモーターと作動可能に連結される。いくつかの実施形態では、プロモーターは構成的プロモーターである。いくつかの実施形態では、プロモーターは誘導性プロモーターである。いくつかの実施形態では、プロモーターは原核細胞において機能する。いくつかの実施形態では、プロモーターは真核細胞において機能する。いくつかの実施形態では、プロモーターは発現の強力なドライバーであり得る。いくつかの実施形態では、プロモーターは発現の弱いドライバーであり得る。いくつかの実施形態では、プロモーターは発現の中ドライバーであり得る。
【０５４７】
原核宿主細胞で使用される適切なプロモーターとして、バクテリオファージＴ７ＲＮＡポリメラーゼプロモーター；ｔｒｐプロモーター；ｌａｃオペロンプロモーター；ハイブリッドプロモーター、例えば、ｌａｃ／ｔａｃハイブリッドプロモーター、ｔａｃ／ｔｒｃハイブリッドプロモーター、ｔｒｐ／ｌａｃプロモーター、Ｔ７／ｌａｃプロモーター；ｔｒｃプロモーター；ｔａｃプロモーターなど；ａｒａＢＡＤプロモーター；インビボ制御プロモーター、例えば、ｓｓａＧプロモーターまたは関連プロモーター（例えば、米国特許公開公報第２００４０１３１６３７号参照）、ｐａｇＣプロモーター（ＰｕｌｋｋｉｎｅｎおよびＭｉｌｌｅｒ、Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．、１９９１：１７３（１）：８６−９３；Ａｌｐｕｃｈｅ−Ａｒａｎｄａら、ＰＮＡＳ、１９９２；８９（２１）：１００７９−８３）、ｎｉｒＢプロモーター（Ｈａｒｂｏｒｎｅら（１９９２）Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏ．６：２８０５−２８１３）など、（例えば、Ｄｕｎｓｔａｎら（１９９９）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６７：５１３３−５１４１；ＭｃＫｅｌｖｉｅら（２００４）Ｖａｃｃｉｎｅ２２：３２４３−３２５５；およびＣｈａｔｆｉｅｌｄら（１９９２）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１０：８８８−８９２参照）；シグマ７０プロモーター、例えば、コンセンサスシグマ７０プロモーター（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＡＸ７９８９８０、ＡＸ７９８９６１、およびＡＸ７９８１８３参照）；静止期プロモーター、例えば、ｄｐｓプロモーター、ｓｐｖプロモーターなど；病原性アイランドＳＰＩ−２から誘導されるプロモーター（例えば、ＷＯ９６／１７９５１参照）；ａｃｔＡプロモーター（例えば、Ｓｈｅｔｒｏｎ−Ｒａｍａら（２００２）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．７０：１０８７−１０９６参照）；ｒｐｓＭプロモーター（例えば、ＶａｌｄｉｖｉａおよびＦａｌｋｏｗ（１９９６）．Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２２：３６７−３７８参照）；ｔｅｔプロモーター（例えば、Ｈｉｌｌｅｎ，Ｗ．およびＷｉｓｓｍａｎｎ，Ａ．（１９８９）Ｉｎ  Ｓａｅｎｇｅｒ、Ｗ．およびＨｅｉｎｅｍａｎｎ、Ｕ．（ｅｄｓ）、Ｔｏｐｉｃｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｐｒｏｔｅｉｎ−Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ．Ｍａｃｍｉｌｌａｎ、Ｌｏｎｄｏｎ、ＵＫ、第１０巻、１４３−１６２頁参照）；ＳＰ６プロモーター（例えば、Ｍｅｌｔｏｎら（１９８４）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１２：７０３５参照）などが挙げられるが、これらに限定されない。
【０５４８】
原核細胞において使用される適切な構成的プロモーターは、当該分野で公知であり、シグマ７０プロモーター、例えば、コンセンサスシグマ７０プロモーターも挙げられるが、これに限定されない。
【０５４９】
適切な真核生物プロモーターの限定ではない例として、最初期のＣＭＶ、ＨＳＶチミジンキナーゼ、初期および後期ＳＶ４０、レトロウィルスからのＬＴＲ、およびマウスメタロチオネイン−Ｉが挙げられる。適正なベクター、構築物およびプロモーターの選択は、当業者が可能なレベルで十分である。発現ベクターまたは構築物は、翻訳開始のためのリボソーム結合部位および転写終結部位を含んでもよい。発現ベクターまたは構築物は、発現を増幅する適正な配列も含んでよい。
【０５５０】
酵母においては、構成型または誘導性プロモーターを含む数多くのベクターまたは構築物を使用してもよい。概観として、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、第２巻、１９８８、Ａｕｓｕｂｅｌら編、Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈ．Ａｓｓｏｃ．＆Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、Ｃｈ．１３；Ｇｒａｎｔら、１９８７年、Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  Ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｙｅａｓｔ、ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、Ｗｕ＆Ｇｒｏｓｓｍａｎ編、３１９８７、Ａｃａｄ．Ｐｒｅｓｓ、Ｎ．Ｙ．、第１５３巻、５１６−５４４頁；Ｇｌｏｖｅｒ、１９８６、ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ、第ＩＩ巻、ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ、Ｗａｓｈ．、Ｄ．Ｃ．、Ｃｈ．３；およびＢｉｔｔｅｒ、１９８７、Ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｙｅａｓｔ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、Ｂｅｒｇｅｒ＆Ｋｉｍｍｅｌ編、Ａｃａｄ．Ｐｒｅｓｓ、Ｎ．Ｙ．、第１５２巻、６７３−６８４頁；およびＴｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｙｅａｓｔ  Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、１９８２年、Ｓｔｒａｔｈｅｒｎら編、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ、第ＩおよびＩＩ巻参照。ＡＤＨあるいはＬＥＵ２のような構成型酵母プロモーター、またはＧＡＬのような誘導性プロモーターを使用してもよい（Ｃｌｏｎｉｎｇ  ｉｎ  Ｙｅａｓｔ、Ｃｈ．３、Ｒ．Ｒｏｔｈｓｔｅｉｎ  Ｉｎ：ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ第１１巻、Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ、ＤＭ  Ｇｌｏｖｅｒ編、１９８６年、ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ、Ｗａｓｈ．、Ｄ．Ｃ．）。あるいは、外来ＤＮＡ配列の酵母染色体への組込みを促進するベクターを使用してもよい。
【０５５１】
一般に、組換え発現ベクターは、例えば、大腸菌のアンピシリン耐性遺伝子、出芽酵母（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）ＴＲＰ１遺伝子などの宿主細胞の形質転換を可能にする複製の起源および選択マーカー、ならびに高発現遺伝子からコード配列の直接転写を誘導するプロモーターを含む。そのようなプロモーターは、なかでも、３−ホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ）、α−因子、酸性ホスファターゼ、または熱ショックタンパク質のような糖分解性酵素をコードするオペロンから誘導することができる。
【０５５２】
誘導性プロモーターは当該分野で周知である。適切な誘導性プロモーターとして、バクテリオファージλのｐＬ；Ｐｌａｃ；Ｐｔｒｐ；Ｐｔａｃ（Ｐｔｒｐ−ｌａｃハイブリッドプロモーター）；イソプロピル−ベータ−Ｄ−チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）−誘導性プロモーター、例えば、ｌａｃＺプロモーター；テトラサイクリン−誘導性プロモーター；アラビノース誘導性プロモーター、例えば、ＰＢＡＤ（例えば、Ｇｕｚｍａｎら（１９９５）Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１７７：４１２１−４１３０参照）；キシロース−誘導性プロモーター、例えば、Ｐｘｙｌ（例えば、Ｋｉｍら（１９９６）Ｇｅｎｅ１８１：７１−７６参照）；ＧＡＬ１プロモーター；トリプトファンプロモーター；ｌａｃプロモーター；アルコール−誘導性プロモーター、例えば、メタノール−誘導性プロモーター、エタノール−誘導性プロモーター；ラフィノース−誘導性プロモーター；熱誘導性プロモーター、例えば、熱誘導性ラムダＰＬプロモーター、感熱性リプレッサーにより制御されているプロモーター（例えば、ＣＩ８５７−抑制ラムダ系発現ベクター；例えば、Ｈｏｆｆｍａｎｎら（１９９９）ＦＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｌｅｔｔ．１７７（２）：３２７−３４参照）などが挙げられるが、これらに限定されない。
【０５５３】
加えて、発現ベクターまたは構築物は、多くの実施形態において、真核細胞培養に関するジヒドロ葉酸レダクターゼまたはネオマイシン耐性細胞のような、または大腸菌のような原核宿主細胞におけるテトラサイクリンまたはアンピシリン耐性細胞のような、形質転換された宿主細胞の選択について表現型形質を提供する１つまたは複数の選択マーカー遺伝子を含む。
【０５５４】
いくつかの実施形態では、本明細書で開示する１つまたは複数の異種核酸は、本明細書で開示する遺伝子組換え宿主細胞のゲノムに組み込まれている。いくつかの実施形態では、本明細書で開示する１つまたは複数の異種核酸は、エピソームの残る（すなわち、遺伝子組換え宿主細胞のゲノムに組み込まれていない）。いくつかの実施形態では、本明細書で開示する１つまたは複数の異種核酸の少なくとも１つは、染色体外に維持されている。
【０５５５】
いくつかの実施形態では、対象異種核酸または対象組換え発現ベクターあるいは構築物は、植物細胞において、発現のためのプロモーターまたは他の調節エレメントを含む。植物細胞において機能する適切な構成的プロモーターの限定ではない例は、カリフラワーモザイクウィルス３５Ｓプロモーター、タンデム３５Ｓプロモーター（Ｋａｙら、Ｓｃｉｅｎｃｅ２３６：１２９９（１９８７））、カリフラワーモザイクウィルス１９Ｓプロモーター、ノパリンシンターゼ遺伝子プロモーター（Ｓｉｎｇｅｒら、Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１４：４３３（１９９０）；Ａｎ、Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．８１：８６（１９８６）、オクトピンシンターゼ遺伝子プロモーター、およびユビキチンプロモーターである。植物細胞において機能する適切な誘導性プロモーターとして、フェニルアラニンアンモニア−リアーゼ遺伝子プロモーター、カルコンシンターゼ遺伝子プロモーター、感染特異的タンパク質遺伝子プロモーター、銅誘導性調節エレメント（Ｍｅｔｔら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：４５６７−４５７１（１９９３）；Ｆｕｒｓｔら、Ｃｅｌｌ５５：７０５−７１７（１９８８））；テトラサイクリンおよびクロルテトラサイクリン誘導性調節エレメント（Ｇａｔｚら、Ｐｌａｎｔ  Ｊ．２：３９７−４０４（１９９２）；Ｒｏｄｅｒら、Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔ．２４３：３２−３８（１９９４）；Ｇａｔｚ、Ｍｅｔｈ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．５０：４１１−４２４（１９９５））；エクジソン誘導性調節エレメント（Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈｅｒｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８９：６３１４−６３１８（１９９２）；Ｋｒｅｕｔｚｗｅｉｓｅｒら、Ｅｃｏｔｏｘｉｃｏｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｓａｆｅｔｙ２８：１４−２４（１９９４））；熱ショック誘導性調節エレメント（Ｔａｋａｈａｓｈｉら、Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．９９：３８３−３９０（１９９２）；Ｙａｂｅら、Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．３５：１２０７−１２１９（１９９４）；Ｕｅｄａら、Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔ．２５０：５３３−５３９（１９９６））；および構成型発現ｌａｃリプレッサーと組合みわせて使用され、例えば、ＩＰＴＧ−誘導性発現を提供するｌａｃオペロンエレメント（Ｗｉｌｄｅら、ＥＭＢＯ  Ｊ．１１：１２５１−１２５９（１９９２）；亜硝酸ホウレンソウレダクターゼ遺伝子から誘導される硝酸塩誘導性プロモーター（Ｂａｃｋら、Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１７：９（１９９１））；光誘導性プロモーター、例えば、ＲｕＢＰカルボキシラーゼの小サブユニットまたはＬＨＣＰ遺伝子ファミリーに付随したプロモーター（Ｆｅｉｎｂａｕｍら、Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔ．２２６：４４９（１９９１）；ＬａｍおよびＣｈｕａ、Ｓｃｉｅｎｃｅ２４８：４７１（１９９０））；米国公開特許公報第２００４００３８４００号に記載されているような光応答性調節エレメント；サリチル酸誘導性調節エレメント（Ｕｋｎｅｓら、Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ５：１５９−１６９（１９９３）；Ｂｉら、Ｐｌａｎｔ  Ｊ．８：２３５−２４５（１９９５））；植物ホルモン誘導性調節エレメント（Ｙａｍａｇｕｃｈｉ−Ｓｈｉｎｏｚａ��ｉら、Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５：９０５（１９９０）；Ｋａｒｅｓら、Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５：２２５（１９９０））；およびヒトホルモン誘導性調節エレメント、例えば、ヒトグルココルチコイド応答性エレメント（Ｓｃｈｅｎａら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８８：１０４２１（１９９１）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０５５６】
植物組織選択性調節エレメントも、対象異種核酸または対象ベクターあるいは構築物内に含ませることができる。単一組織または限られた数の組織において、異種核酸を異所的に発現するために使用することができる、適切な組織選択性調節エレメントとして、木部選択性調節エレメント、仮道管選択性調節エレメント、繊維選択性調節エレメント、糸状体選択性調節エレメント（例えば、Ｗａｎｇら（２００２）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｂｏｔａｎｙ５３：１８９１−１８９７参照）、腺状突起選択性調節エレメントなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【０５５７】
植物細胞の使用に適切なベクターは当該分野で公知であり、対象異種核酸を植物宿主細胞に導入するために、そのようなベクターの任意のものを使用することができる。適切なベクターとして、例えば、アグロバクテリウム・ツメファシエンス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）のＴｉプラスミド、およびＡ．リゾゲネス（Ａ．ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ）のＲｉ１プラスミドが挙げられる。ＴｉまたはＲｉ１プラスミドは、アグロバクテリウム（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）によって感染で植物細胞に伝染し、植物ゲノムに安定して組み込まれる（Ｊ．Ｓｃｈｅｌｌ、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３７：１１７６−８３（１９８７）。また、例えば、米国特許第６，９００，０１２号に記載するように、植物人工染色体も使用に適する。
【０５５８】
当業者には分かるように、ヌクレオチド配列におけるわずかな変化により、コードされたポリペプチドのアミノ酸配列が、必ずしも変化するとは限らない。コードされたポリペプチドのアミノ酸配列を変化させる特定の遺伝子配列におけるヌクレオチドの同一性の変化により、遺伝子の有効性が減少するまたは増強される結果となり、いくつかの用途（例えば、アンチセンス、共抑制、またはＲＮＡｉ）では、部分配列が、完全長配列と同じくらい効果的に働くことがしばしば起こりうることは当業者には分かるだろう。ヌクレオチド配列を変えたり、短くする方法は、当業者には周知であり、変化した遺伝子の効力を試験する方法も同様である。ある実施形態では、効力は、例えば、従来のガスクロマトグラフィーにより簡単に試験し得る。したがって、遺伝子のそのような変種は全て本開示の一部として含まれる。
【０５５９】
コドン使用頻度：  当業者には周知のように、宿主生物において、特定のアミノ酸をコードするヌクレオチド配列（すなわちコドン）を、より優れて発現する他のコドンに置き換えることにより、宿主生物における異種核酸の発現を改善することができる（すなわち、コドン最適化）。この効果が起こる１つの理由は、異なる生物は異なるコドン選好を示すという事実に依る。いくつかの実施形態では、本明細書で開示する異種核酸は、ヌクレオチド配列が特定の宿主細胞に対するコドン選好を反映するように組換えまたは最適化される。例えば、いくつかの実施形態では、ヌクレオチド配列は、酵母コドン選好で組換えまたは最適化されるだろう。例えば、ＢｅｎｎｅｔｚｅｎおよびＨａｌｌ（１９８２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５７（６）：３０２６−３０３１参照。他の限定ではない例として、いくつかの実施形態では、ヌクレオチド配列は大腸菌コドン選好で組換えまたは最適化されるだろう。例えば、ＧｏｕｙおよびＧａｕｔｉｅｒ（１９８２）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１０（２２）：７０５５−７０７４；Ｅｙｒｅ−Ｗａｌｋｅｒ（１９９６）Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｅｖｏｌ．１３（６）：８６４−８７２参照。また、Ｎａｋａｍｕｒａら（２０００）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２８（１）：２９２も参照。
【０５６０】
統計法が、種々の生物においてコドン使用頻度バイアスを分析するために創り出され、多くのコンピューターアルゴリズムが、コドンが最適かされた遺伝子配列のデザインにおいて、これらの統計解析を実行するために開発されている（Ｌｉｔｈｗｉｃｋ  Ｇ、Ｍａｒｇａｌｉｔ  Ｈ（２００３）Ｈｉｅｒａｒｃｈｙ  ｏｆ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｆｅａｔｕｒｅｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ  ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ．Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ１３：２６６５−７３）。コドンバイアスに依存しないタンパク質発現を増やす、コドン使用頻度における他の組換えも記載されている（Ｗｅｌｃｈら（２００９）Ｄｅｓｉｇｎ  ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ  ｔｏ  ｃｏｎｔｒｏｌ  ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ．ＰＬｏＳ  ＯＮＥ４：ｅ７００２）。
【０５６１】
いくつかの実施形態では、コード配列のコドン使用頻度は、コードされたｍＲＮＡの翻訳のレベルを減らすように修正される。コドン使用頻度を修正することによるｍＲＮＡの翻訳レベルの減少は、配列を組換えて、宿主細胞が滅多にまたは通常使用しないコドンを含ませることにより達成する。特定の生物がアミノ酸をコードするために特定のコドンを使用する時間の比率をまとめた、多くの生物のコドン使用頻度表が入手できる。あるコドンは、他の「レア」コドンより頻繁に使用される。配列における「レア」コドンの使用により、一般に、その翻訳のレートは減少する。したがって、例えば、翻訳のレートは影響されるが、翻訳されたポリペプチドのアミノ酸配列は影響されない、１つまたは複数のレアコドンを導入することにより、コード配列を組換える。アルギニン：ＣＧＴ、ＣＧＣ、ＣＧＡ、ＣＧＧ、ＡＧＡ、およびＡＧＧをコードする６つのコドンがある。大腸菌において、コドンＣＧＴおよびＣＧＣ（各大腸菌において約４０％のアルギニンをコードする）は、コドンＡＧＧ（大腸菌において約２％のアルギニンをコードする）よりもはるかに多く使用される。遺伝子の配列内のＣＧＴコドンをＡＧＧコドンに組換えることによりポリペプチドの配列は変化しないが、遺伝子の翻訳のレートは減少する傾向にあるだろう。
【０５６２】
さらに、本開示が、当業者が理解するようにおよび以下の表で説明するように、コドン使用頻度の縮退を包含することは分かるだろう。
【表１】
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【０５６３】
遺伝子組換え植物：  本開示は、遺伝子組換え植物を提供し、ここで、該遺伝子組換え植物は、カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体、またはカンナビノイド前駆体誘導体を生成するように、本明細書で開示する１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え植物は、カンナビス（Ｃａｎｎａｂｉｓ．）以外の属の植物である。
【０５６４】
本開示は、遺伝子組換え植物を提供し、ここで、該遺伝子組換え植物は、ａ）アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｂ）ＧＰＰを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｃ）マロニル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｄ）アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体とマロニル−ＣｏＡとを縮合してオリベトール酸またはオリベトール酸の誘導体を生成する１つまたは複数のポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｅ）ＧＰＰおよびオリベトール酸を縮合してカンナビゲロール酸またはその誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、ｆ）カンナビノイドシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされた遺伝子組換え植物であって、ポリペプチドは植物内で産生され、ポリペプチドの産生により、遺伝子組換え植物によるカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体、またはカンナビノイド前駆体誘導体が産生される。いくつかの実施形態では、植物は単子葉植物である。いくつかの実施形態では、植物は双子葉植物である。いくつかの実施形態では、ポリペプチドコードする異種核酸の１つまたは複数は、構成的プロモーターと作動可能に連結されている。いくつかの実施形態では、ポリペプチドコードする異種核酸の１つまたは複数は、誘導性プロモーターと作動可能に連結されている。いくつかの実施形態では、ポリペプチドコードする異種核酸の１つまたは複数は、組織特異的プロモーターと作動可能に連結されている。いくつかの実施形態では、組織特異的プロモーターは、糸状体特異的プロモーターと作動可能に連結されている。
【０５６５】
本開示は、カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体、またはカンナビノイド前駆体誘導体を産生する方法を提供し、ここで、該方法は、コードされた１つまたは複数のポリペプチドの産生を好む条件下にトランスジェニック植物を維持することを含み、コードされた１つまたは複数のポリペプチドの産生により、前記カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体、またはカンナビノイド前駆体誘導体が産生される。
【０５６６】
いくつかの実施形態では、トランスジェニック植物のゲノムは対象異種核酸を含む。いくつかの実施形態では、トランスジェニック植物は、遺伝子組換えのために同型である。いくつかの実施形態では、トランスジェニック植物は、遺伝子組換えのために異型である。
【０５６７】
いくつかの実施形態では、対象トランスジェニック植物は、導入遺伝子をコードされた１つまたは複数のポリペプチドを産生し、同じ種のコントロール植物、例えば非トランスジェニック植物、によって産生されたカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体（１つまたは複数のポリペプチドをコードする導入遺伝子を含まない植物）の量より、少なくとも約５０％、少なくとも約２倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約５０倍、または少なくとも約１００倍、またはそれ以上の量で、カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体、またはカンナビノイド前駆体誘導体を産生する。
【０５６８】
いくつかの実施形態では、対象トランスジェニック植物は、カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体、またはカンナビノイド前駆体誘導体を産生する導入遺伝子がコードされた１つまたは複数のポリペプチドにより生成された、またはその下流産生物であるカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体、またはカンナビノイド前駆体誘導体を正常に産生するトランスジェニックバージョンであり、ここで、該トランスジェニック植物は、同じ種のコントロール植物、例えば非トランスジェニック植物（１つまたは複数のポリペプチドをコードする導入遺伝子を含まない植物）、によって産生されたカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の量より、少なくとも約５０％、少なくとも約２倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約５０倍、または少なくとも約１００倍、またはそれより高い倍率の量で、カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体、またはカンナビノイド前駆体誘導体を産生する。
【０５６９】
外因性核酸を植物細胞に導入する方法は当該分野で周知である。そのような植物細胞は「形質転換されている」と考えられる。適切な方法として、ウィルス感染（例えば、二本鎖ＤＮＡウィルス）、トランスフェクション、接合、プロトプラスト融合、電気穿孔法、パーティクルガン法、リン酸カルシウム沈殿法、直接マイクロインジェクション、炭化ケイ素ホイスカ法、アグロバクテリウム介在形質転換、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９介在ゲノム編集などが挙げられる。方法の選択は、一般に、形質転換される細胞の種類および形質転換が行われる場所（例えば、インビトロ、エクスビボ、またはインビボ）の状況に依存する。
【０５７０】
ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９系は、本開示のトランスジェニック（遺伝子組換えされる）植物を生成するために使用することができる。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９系および方法は当該分野で公知である。例えば、ＢｏｒｔｅｓｉおよびＦｉｓｃｈｅｒ（２０１５）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｄｖａｎｃｅｓ  ３３：４１；ならびにＦａｎら（２０１５）Ｓｃｉ．Ｒｅｐｏｒｔｓ５：１２２１７参照。
【０５７１】
土壌細菌アグロバクテリウム・ツメファシエンスに基づく形質転換方法は、外因性核酸を維管束植物に導入するために使用することができる。アグロバクテリウムの野生型は、宿主植物で腫瘍原生クラウンゴール増殖を直接生み出すＴｉ（腫瘍誘発型）プラスミドを含む。植物ゲノムへのＴｉプラスミドの腫瘍誘発Ｔ−ＤＮＡ領域の転移には、Ｔ−ＤＮＡ境界とともに、Ｔｉプラスミドがコードされた病原性遺伝子が必要であり、これらは転移すべき領域を描写する一連の直接ＤＮＡ反復配列である。アグロバクテリウム系ベクターは、Ｔｉプラスミドの組換え型であり、腫瘍誘発機能は、植物宿主に導入すべき関心のあるヌクレオチド配列によって置き換えられる。
【０５７２】
アグロバクテリウム介在形質転換は、一般に、組込みベクターまたは、例えば、アグロバクテリウム宿主内に永久的に存在し、ビルレンス遺伝子を持つヘルパーベクターと、Ｔ−ＤＮＡ配列によって結合される関心のある遺伝子を含むシャトルベクターとの間に、Ｔｉプラスミドの成分が分割されているバイナリーベクター系を使用する。様々なバイナリーベクターが当該分野で周知であり、例えば、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ社（Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ、Ｃａｌｉｆ．）から市販されている。例えば、培養植物細胞または葉組織、根片、子葉下、幹片あるいは塊芽のような創傷組織で、アグロバクテリウムを共培養する方法も当該分野で周知である。例えば、ＧｌｉｃｋおよびＴｈｏｍｐｓｏｎ、（ｅｄｓ．）、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ、Ｆｌａ．：ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ（１９９３）参照。
【０５７３】
アグロバクテリウム介在形質転換は、ユーカリ（Ｅｕｃａｌｙｐｔｕｓ）およびアルファルファ（ルーサン）のようなマメ科牧草；ミヤコグサ、ホワイトクローバー、スティロサンテス（Ｓｔｙｌｏｓａｎｔｈｅｓ）、ロトノニス・バイネシイ（Ｌｏｔｏｎｏｎｉｓ  ｂａｉｎｅｓｓｉｉ）およびイガマメの少なくとも１つの種を始めとする、様々なトランスジェニック維管束植物（Ｗａｎｇら、前出、１９９５）を産生するのに有用である。
【０５７４】
マイクロプロジェクタイル介在形質転換も対象トランスジェニック植物を産生するために使用することができる。この方法は、最初、Ｋｌｅｉｎらによって記載され（Ｎａｔｕｒｅ３２７：７０−７３（１９８７））、塩化カルシウム、スペルミジン、またはポリエチレングリコールとの沈殿によって所望の異種核酸が被覆された、金やタングステンのようなマイクロプロジェクタイルにたよる。ＢＩＯＬＩＳＴＩＣ  ＰＤ−１０００のような道具を使用して、マイクロプロジェクタイル粒子を被子植物組織の中に高速で加速する（Ｂｉｏｒａｄ；Ｈｅｒｃｕｌｅｓ  Ｃａｌｉｆ．）。
【０５７５】
対象異種核酸は、例えば、インビボまたはエクスビボプロトコルによって植物細胞に入り込むことができるような方法で植物に導入してもよい。「インビボ」とは、異種核酸が植物の生体に投与されること、例えば浸潤を意味する。「エクスビボ」は、細胞または外植片を植物の外で組換え、次いで該細胞または器官を植物に再生することを意味する。植物細胞の安定な形質転換のためにまたはトランスジェニック植物の確立のために適切な数多くのベクターまたは構築物が記載されてきており、例えば、ＷｅｉｓｓｂａｃｈおよびＷｅｉｓｓｂａｃｈ、（１９８９）Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、ならびにＧｅｌｖｉｎら、（１９９０）Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｋｌｕｗｅｒ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓに記載されたものが挙げられる。具体的な例として、アグロバクテリウム・ツメファシエンスのＴｉプラスミドから誘導されるもの、およびＨｅｒｒｅｒａ−Ｅｓｔｒｅｌｌａら（１９８３）Ｎａｔｕｒｅ３０３：２０９、Ｂｅｖａｎ（１９８４）Ｎｕｃｌ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．１２：８７１１−８７２１、Ｋｌｅｅ（１９８５）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏ３：６３７−６４２によって開示されたものが挙げられる。あるいは、遊離ＤＮＡデリバリー法を使用することによってＤＮＡを植物および細胞に転移するために、非Ｔｉベクターを使用することもできる。これらの方法を使用することによって、コムギ、コメ（Ｃｈｒｉｓｔｏｕ（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ９：９５７−９６２）およびトウモロコシ（Ｇｏｒｄｏｎ−Ｋａｍｍ（１９９０）Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ２：６０３−６１８）のようなトランスジェニック植物を産生することができる。パーティクルガンを使用することによる直接ＤＮＡデリバリー法に関する単子葉植物（Ｗｅｅｋｓら（１９９３）Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ１０２：１０７７−１０８４；Ｖａｓｉｌ（１９９３）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏ１０：６６７−６７４；ＷａｎおよびＬｅｍｅａｕｘ（１９９４）Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ１０４：３７−４８）について、およびアグロバクテリウム介在ＤＮＡ転移（Ｉｓｈｉｄａら（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ１４：７４５−７５０）について、未成熟胚も良好な標的組織であり得る。ＤＮＡを葉緑体に導入する代表的な方法は、微粒子銃照射（ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ  ｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ）、原形質体のポリエチレングリコール形質転換、およびマイクロインジェクション（Ｄａｎｉｅｌｉら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ１６：３４５−３４８、１９９８；Ｓｔａｕｂら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ１８：３３３−３３８、２０００；Ｏ’Ｎｅｉｌｌら、Ｐｌａｎｔ  Ｊ．３：７２９−７３８、１９９３；Ｋｎｏｂｌａｕｃｈら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ１７：９０６−９０９；米国特許第５，４５１，５１３、５，５４５，８１７、５，５４５，８１８、および５，５７６，１９８号；国際出願ＷＯ９５／１６７８３；およびＢｏｙｎｔｏｎら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ２１７：５１０−５３６（１９９３）、Ｓｖａｂら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：９１３−９１７（１９９３）、およびＭｃＢｒｉｄｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９１：７３０１−７３０５（１９９４））である。微粒子銃照射、原形質体のポリエチレングリコール形質転換およびマイクロインジェクション法に適切ないかなるベクターも、葉緑体形質転換のための標的ベクターとして適切であろう。とりわけ、アグロバクテリウムを利用しない導入方法である場合は、任意の二本鎖ＤＮＡベクターを、形質転換ベクターとして使用してよい。
【０５７６】
遺伝子組換えされ得る植物として、穀物、飼育作物、果物、野菜、油科種子穀物、ヤシ、森林で採れるもの、およびツル植物が挙げられる。組換えし得る植物の具体例として、トウモロコシ、バナナ、ピーナッツ、莢エンドウ、ヒマワリ、タバコ、トマト、キャノーラ、タバコ、穀物、オオムギ、エンバク、ジャガイモ、ダイズ、綿、モロコシ、ハウチワマメ、およびコメが挙げられるが、これらに限定されない。遺伝子組換えすることができる植物として、テオブロマ・カカオ（Ｔｈｅｏｂｒｏｍａ  ｃａｃａｏ．）が挙げられる。
【０５７７】
また、本開示は、形質転換された植物細胞を含む、形質転換された植物細胞、組織、植物および生成物を提供する。対象の形質転換された細胞、ならびにそれを含む組織および生成物の特徴は、ゲノムに組み込まれた対象異種核酸の存在と、カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体、またはカンナビノイド前駆体誘導体を生成するために利用される１つまたは複数のポリペプチドの植物細胞による産生である。本開示の組換え植物細胞は、組換え細胞の集団として、または組織、種子、全植物、幹、果物、葉、根、花、幹、塊芽、穀物、動物飼料、植物分野などとして有用である。
【０５７８】
また、本開示は、対象トランスジェニック植物の再生材料も提供し、ここで、該再生材料として、種子、植物の子孫、およびクローン材料が挙げられ、そのような材料は、カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体、またはカンナビノイド前駆体誘導体を産生する植物のもととなり得る。
【０５７９】
カンナビノイド、カンナビノイド前駆体、カンナビノイド誘導体またはカンナビノイド前駆体誘導体を産生する方法：  本開示は、カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体を産生する方法を提供する。本方法は、本開示の遺伝子組換え宿主細胞を適切な培地で培養するステップと、産生されたカンナビノイド、カンナビノイド前駆体、カンナビノイド前駆体誘導体またはカンナビノイド誘導体を回収するステップとを含み得る。本方法はまた、本開示の遺伝子組換え宿主細胞によって発現または過剰発現される本明細書に開示される１つまたは複数のポリペプチドを使用した、カンナビノイド、カンナビノイド前駆体、カンナビノイド前駆体誘導体またはカンナビノイド誘導体の無細胞産生を含み得る。
【０５８０】
本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する方法を提供する。本方法は、本開示の遺伝子組換え宿主細胞を適切な培地で培養するステップと、産生されたカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を回収するステップとを含み得る。本方法はまた、本開示の遺伝子組換え宿主細胞によって発現または過剰発現される本明細書に開示される１つまたは複数のポリペプチドを使用した、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体の無細胞産生を含み得る。
【０５８１】
本開示の方法または遺伝子組換え宿主細胞で産生することができるカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体には、それだけに限らないが、カンナビクロメン（ＣＢＣ）型（例えば、カンナビクロメン酸）、カンナビゲロール（ＣＢＧ）型（例えば、カンナビゲロール酸）、カンナビジオール（ＣＢＤ）型（例えば、カンナビジオール酸）、Δ９−トランス−テトラヒドロカンナビノール（Δ９−ＴＨＣ）型（例えば、Δ９−テトラヒドロカンナビノール酸）、Δ８−トランス−テトラヒドロカンナビノール（Δ８−ＴＨＣ）型、カンナビシクロール（ＣＢＬ）型、カンナビエルソイン（ＣＢＥ）型、カンナビノール（ＣＢＮ）型、カンナビノジオール（ＣＢＮＤ）型、カンナビトリオール（ＣＢＴ）型、オリベトール酸、ＧＰＰ、上記のいずれかの誘導体、およびＥｌｓｏｈｌｙ  Ｍ．Ａ．ａｎｄ  Ｓｌａｄｅ  Ｄ．，Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．２００５  Ｄｅｃ  ２２；７８（５）：５３９−４８．Ｅｐｕｂ  ２００５  Ｓｅｐ  ３０に列挙されるその他のものが含まれ得る。
【０５８２】
本開示の方法または遺伝子組換え宿主細胞で産生することができるカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体には、それだけに限らないが、カンナビゲロール酸（ＣＢＧＡ）、カンナビゲロール酸モノメチルエーテル（ＣＢＧＡＭ）、カンナビゲロール（ＣＢＧ）、カンナビゲロールモノメチルエーテル（ＣＢＧＭ）、カンナビゲロバリン酸（ＣＢＧＶＡ）、カンナビゲロバリン（ＣＢＧＶ）、カンナビクロメン酸（ＣＢＣＡ）、カンナビクロメン（ＣＢＣ）、カンナビクロメバリン酸（ＣＢＣＶＡ）、カンナビクロメバリン（ＣＢＣＶ）、カンナビジオール酸（ＣＢＤＡ）、カンナビジオール（ＣＢＤ）、カンナビジオールモノメチルエーテル（ＣＢＤＭ）、カンナビジオール−Ｃ４（ＣＢＤ−Ｃ４）、カンナビジバリン酸（ＣＢＤＶＡ）、カンナビジバリン（ＣＢＤＶ）、カンナビジオールコール（ＣＢＤ−Ｃ１）、Δ９−テトラヒドロカンナビノール酸Ａ（ＴＨＣＡ−Ａ）、Δ９−テトラヒドロカンナビノール酸Ｂ（ＴＨＣＡ−Ｂ）、Δ９−テトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）、Δ９−テトラヒドロカンナビノール酸−Ｃ４（ＴＨＣＡ−Ｃ４）、Δ９−テトラヒドロカンナビノール−Ｃ４（ＴＨＣ−Ｃ４）、Δ９−テトラヒドロカンナビバリン酸（ＴＨＣＶＡ）、Δ９−テトラヒドロカンナビバリン（ＴＨＣＶ）、Δ９−テトラヒドロカンナビオールコール酸（ＴＨＣＡ−Ｃ１）、Δ９−テトラヒドロカンナビオールコール（ＴＨＣ−Ｃ１）、Δ７−シス−イソ−テトラヒドロカンナビバリン、Δ８−テトラヒドロカンナビノール酸（Δ８−ＴＨＣＡ）、Δ８−テトラヒドロカンナビノール（Δ８−ＴＨＣ）、カンナビシクロール酸（ＣＢＬＡ）、カンナビシクロール（ＣＢＬ）、カンナビシクロバリン（ＣＢＬＶ）、カンナビエルソイン酸Ａ（ＣＢＥＡ−Ａ）、カンナビエルソイン酸Ｂ（ＣＢＥＡ−Ｂ）、カンナビエルソイン（ＣＢＥ）、カンナビエルソイン酸、カンナビシトラン酸、カンナビノール酸（ＣＢＮＡ）、カンナビノール（ＣＢＮ）、カンナビノールメチルエーテル（ＣＢＮＭ）、カンナビノール−Ｃ４、（ＣＢＮ−Ｃ４）、カンナビバリン（ＣＢＶ）、カンナビノール−Ｃ２（ＣＮＢ−Ｃ２）、カンナビオールコール（ＣＢＮ−Ｃ１）、カンナビノジオール（ＣＢＮＤ）、カンナビノジバリン（ＣＢＶＤ）、カンナビトリオール（ＣＢＴ）、１０−エトキシ−９−ヒドロキシ−δ−６ａ−テトラヒドロカンナビノール、８，９−ジヒドロキシル−δ−６ａ−テトラヒドロカンナビノール、カンナビトリオールバリン（ＣＢＴＶＥ）、デヒドロカンナビフラン（ＤＣＢＦ）、カンナビフラン（ＣＢＦ）、カンナビクロマノン（ＣＢＣＮ）、カンナビシトラン（ＣＢＴ）、１０−オキソ−δ−６ａ−テトラヒドロカンナビノール（ＯＴＨＣ）、δ−９−シス−テトラヒドロカンナビノール（シス−ＴＨＣ）、３，４，５，６−テトラヒドロ−７−ヒドロキシ−α−α−２−トリメチル−９−ｎ−プロピル−２，６−メタノ−２Ｈ−１−ベンゾオキソシン−５−メタノール（ＯＨ−イソ−ＨＨＣＶ）、カンナビリプソール（ＣＢＲ）、トリヒドロキシ−δ−９−テトラヒドロカンナビノール（トリＯＨ−ＴＨＣ）および前記のいずれかの誘導体も含まれ得る。
【０５８３】
本開示の方法または遺伝子組換え宿主細胞で産生することができるさらなるカンナビノイド誘導体には、それだけに限らないが、２−ゲラニル−５−ペンチル−レゾルシル酸、２−ゲラニル−５−（４−ペンチニル）−レゾルシル酸、２−ゲラニル−５−（トランス−２−ペンテニル）−レゾルシル酸、２−ゲラニル−５−（４−メチルヘキシル）−レゾルシル酸、２−ゲラニル−５−（５−ヘキシニル）レゾルシル酸、２−ゲラニル−５−（トランス−２−ヘキセニル）−レゾルシル酸、２−ゲラニル−５−（５−ヘキセニル）−レゾルシル酸、２−ゲラニル−５−ヘプチル−レゾルシル酸、２−ゲラニル−５−（６−ヘプチン酸）−レゾルシル酸、２−ゲラニル−５−オクチル−レゾルシル酸、２−ゲラニル−５−（トランス−２−オクテニル）−レゾルシル酸、２−ゲラニル−５−ノニル−レゾルシル酸、２−ゲラニル−５−（トランス−２−ノネニル）レゾルシル酸、２−ゲラニル−５−デシル−レゾルシル酸、２−ゲラニル−５−（４−フェニルブチル）−レゾルシル酸、２−ゲラニル−５−（５−フェニルペンチル）−レゾルシル酸、２−ゲラニル−５−（６−フェニルヘキシル）−レゾルシル酸、２−ゲラニル−５−（７−フェニルヘプチル）−レゾルシル酸、（６ａＲ，１０ａＲ）−１−ヒドロキシ−６，６，９−トリメチル−３−プロピル−６ａ，７，８，１０ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピラン−２−カルボン酸、（６ａＲ，１０ａＲ）−１−ヒドロキシ−６，６，９−トリメチル−３−（４−メチルヘキシル）−６ａ，７，８，１０ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピラン−２−カルボン酸、（６ａＲ，１０ａＲ）−１−ヒドロキシ−６，６，９−トリメチル−３−（５−ヘキセニル）−６ａ，７，８，１０ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピラン−２−カルボン酸、（６ａＲ，１０ａＲ）−１−ヒドロキシ−６，６，９−トリメチル−３−（５−ヘキセニル）−６ａ，７，８，１０ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピラン−２−カルボン酸、（６ａＲ，１０ａＲ）−１−ヒドロキシ−６，６，９−トリメチル−３−（６−ヘプチニル）−６ａ，７，８，１０ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピラン−２−カルボン酸、３−［（２Ｅ）−３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−イル］−６−（ヘキサン−２−イル）−２，４−ジヒドロキシ安息香酸、３−［（２Ｅ）−３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−イル］−２，４−ジヒドロキシ−６−（２−メチルペンチル）安息香酸酸、３−［（２Ｅ）−３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−イル］−２，４−ジヒドロキシ−６−（３−メチルペンチル）安息香酸、３−［（２Ｅ）−３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−イル］−２，４−ジヒドロキシ−６−（４−メチルペンチル）安息香酸、３−［（２Ｅ）−３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−イル］−２，４−ジヒドロキシ−６−［（１Ｅ）−ペンタ−１−エン−１−イル］安息香酸、３−［（２Ｅ）−３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−イル］−２，４−ジヒドロキシ−６−［（２Ｅ）−ペンタ−２−エン−１−イル］安息香酸、３−［（２Ｅ）−３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−イル］−２，４−ジヒドロキシ−６−［（２Ｅ）−ペンタ−３−エン−１−イル］安息香酸、３−［（２Ｅ）−３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−イル］−２，４−ジヒドロキシ−６−（ペンタ−４−エン−１−イル）安息香酸、３−［（２Ｅ）−３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−イル］−２，４−ジヒドロキシ−６−プロピル安息香酸、３−［（２Ｅ）−３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−イル］−２，４−ジヒドロキシ−６−ブチル安息香酸、３−［（２Ｅ）−３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−イル］−２，４−ジヒドロキシ−６−ヘキシル安息香酸、３−［（２Ｅ）−３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−イル］−２，４−ジヒドロキシ−６−ヘプチル安息香酸、３−［（２Ｅ）−３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−イル］−２，４−ジヒドロキシ−６−オクチル安息香酸、３−［（２Ｅ）−３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−イル］−２，４−ジヒドロキシ−６−ノナニル安息香酸、３−［（２Ｅ）−３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−イル］−２，４−ジヒドロキシ−６−デカニル安息香酸、３−［（２Ｅ）−３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−イル］−２，４−ジヒドロキシ−６−ウンデカニル安息香酸、６−（４−クロロブチル）−３−［（２Ｅ）−３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−イル］−２，４−ジヒドロキシ安息香酸、３−［（２Ｅ）−３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−イル］−２，４−ジヒドロキシ−６−［４−（メチルスルファニル）ブチル］安息香酸および参照により本明細書に組み込まれるＢｏｗ，Ｅ．Ｗ．ａｎｄ  Ｒｉｍｏｌｄｉ，Ｊ．Ｍ．，“Ｔｈｅ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ  ｏｆ  Ｃｌａｓｓｉｃａｌ  Ｃａｎｎａｂｉｎｏｉｄｓ：ＣＢ１／ＣＢ２  Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ，”Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２０１６：８  １７−３９  ｄｏｉ：１０．４１３７／ＰＭＣ．Ｓ３２１７１に列挙されるその他のものも含まれ得る。
【０５８４】
本開示の方法または遺伝子組換え宿主細胞で産生することができるカンナビノイド前駆体誘導体には、それだけに限らないが、ジバリノール酸（ｄｉｖａｒｉｎｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）、５−ペンチル−レゾルシル酸、５−（４−ペンチニル）−レゾルシル酸、５−（トランス−２−ペンテニル）−レゾルシル酸、５−（４−メチルヘキシル）−レゾルシル酸、５−（５−ヘキシニル）−レゾルシル酸、５−（トランス−２−ヘキセニル）−レゾルシル酸、５−（５−ヘキセニル）−レゾルシル酸、５−ヘプチル−レゾルシル酸、５−（６−ヘプチン酸）−レゾルシル酸、５−オクチル−レゾルシル酸、５−（トランス−２−オクテニル）−レゾルシル酸、５−ノニル−レゾルシル酸、５−（トランス−２−ノネニル）−レゾルシル酸、５−デシル−レゾルシル酸、５−（４−フェニルブチル）−レゾルシル酸、５−（５−フェニルペンチル）−レゾルシル酸、５−（６−フェニルヘキシル）−レゾルシル酸および５−（７−フェニルヘプチル）−レゾルシル酸も含まれ得る。
【０５８５】
本開示の方法または遺伝子組換え宿主細胞で産生することができるカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体には、それだけに限らないが、ポリケチドまたはポリケチド誘導体も含まれ得る。
【０５８６】
カンナビノイド誘導体またはカンナビノイド前駆体誘導体は、天然に存在するカンナビノイドまたは天然に存在するカンナビノイド前駆体に見られる１つまたは複数の化学部分を欠いていてもよい。このような化学部分には、それだけに限らないが、メチル、アルキル、アルケニル、メトキシ、アルコキシ、アセチル、カルボキシル、カルボニル、オキソ、エステル、ヒドロキシル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキルアルケニル、シクロアルケニルアルキル、シクロアルケニルアルケニル、ヘテロシクリルアルケニル、ヘテロアリールアルケニル、アリールアルケニル、ヘテロシクリル、アラルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルアルキル、ヘテロアリールアルキルなどが含まれ得る。いくつかの実施形態では、天然に存在するカンナビノイドまたは天然に存在するカンナビノイド前駆体に見られる１つまたは複数の化学部分を欠き、本明細書に開示される遺伝子組換え宿主細胞によって、または本明細書に開示されるポリペプチドの１つもしくは複数を含む無細胞反応混合物中で産生されるカンナビノイド誘導体またはカンナビノイド前駆体誘導体がまた、本明細書に記載される官能基および／または反応性基のいずれかのうちの１つまたは複数を含み得る。官能基および反応性基は、１つまたは複数の追加の官能基または反応性基で置換されてもよい。
【０５８７】
カンナビノイド誘導体またはカンナビノイド前駆体誘導体は、１つまたは複数の官能基および／または反応性基を含むカンナビノイドまたはカンナビノイド前駆体であり得、本明細書に開示される遺伝子組換え宿主細胞によって、または本明細書に開示されるポリペプチドの１つもしくは複数を含む無細胞反応混合物で産生される。官能基には、それだけに限らないが、アジド、ハロ（例えば、塩化物、臭化物、ヨウ化物、フッ素）、メチル、アルキル、アルキニル、アルケニル、メトキシ、アルコキシ、アセチル、アミノ、カルボキシル、カルボニル、オキソ、エステル、ヒドロキシル、チオ、シアノ、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキルアルケニル、シクロアルキルアルキニル、シクロアルケニルアルキル、シクロアルケニルアルケニル、シクロアルケニルアルキニル、ヘテロシクリルアルケニル、ヘテロシクリルアルキニル、ヘテロアリールアルケニル、ヘテロアリールアルキニル、アリールアルケニル、アリールアルキニル、スピロシクリル、ヘテロスピロシクリル、ヘテロシクリル、チオアルキル、スルホン、スルホニル、スルホキシド、アミド、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、アルキルアリールアミノ、ジアリールアミノ、Ｎ−オキシド、イミド、エナミン、イミン、オキシム、ヒドラゾン、ニトリル、アラルキル、シクロアルキルアルキル、ハロアルキル、ヘテロシクリルアルキル、ヘテロアリールアルキル、ニトロ、チオキソなどが含まれ得る。例えば、図１２および図１３を参照されたい。適切な反応性基には、それだけに限らないが、アジド、カルボキシル、カルボニル、アミン（例えば、アルキルアミン（例えば、低級アルキルアミン）、アリールアミン）、ハロゲン化物、エステル（例えば、アルキルエステル（例えば、低級アルキルエステル、ベンジルエステル）、アリールエステル、置換アリールエステル）、シアノ、チオエステル、チオエーテル、ハロゲン化スルホニル、アルコール、チオール、スクシンイミジルエステル、イソチオシアネート、ヨードアセトアミド、マレイミド、ヒドラジン、アルキニル、アルケニル、アセチルなどが含まれ得る。いくつかの実施形態では、反応性基が、カルボキシル、カルボニル、アミン、エステル、チオエステル、チオエーテル、ハロゲン化スルホニル、アルコール、チオール、アルキン、アルケン、アジド、スクシンイミジルエステル、イソチオシアネート、ヨードアセトアミド、マレイミドおよびヒドラジンから選択される。官能基および反応性基は、１つまたは複数の追加の官能基または反応性基で置換されてもよい。
【０５８８】
反応性基は、目的の分子の共有結合を促進し得る。目的の適切な分子には、それだけに限らないが、検出可能な標識；イメージング剤；毒素（細胞毒を含む）；リンカー；ペプチド；薬物（例えば、低分子薬物）；特定の結合対のメンバー；エピトープタグ；標的受容体による結合のためのリガンド；精製を助けるタグ；溶解度を高める分子；等が含まれ得る。リンカーはペプチドリンカーまたは非ペプチドリンカーであり得る。
【０５８９】
いくつかの実施形態では、アジドを含むカンナビノイド誘導体またはカンナビノイド前駆体誘導体を、「クリックケミストリー」を介してアルキン基を含む化合物と反応させて、アジド−アルキン環化付加としても知られる複素環を含む生成物を得ることができる。いくつかの実施形態では、アルキンを含むカンナビノイド誘導体またはカンナビノイド前駆体誘導体を、クリックケミストリーを介してアジド基を含む化合物と反応させて、複素環を含む生成物を得ることができる。
【０５９０】
カンナビノイド誘導体またはカンナビノイド前駆体誘導体への付着に望ましくなり得る追加の分子には、それだけに限らないが、検出可能な標識（例えば、スピン標識、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）型色素、例えば、インビボでの生体分子の構造を研究するため）；低分子薬物；細胞傷害性分子（例えば、薬物）；イメージング剤；標的受容体による結合のためのリガンド；例えばアフィニティークロマトグラフィー（例えばＦＬＡＧエピトープの付着）による精製を助けるタグ；溶解度を高める分子（例えば、ポリ（エチレングリコール）；生物学的利用能を高める分子；インビボ半減期を延長する分子；特定の細胞型を標的化する分子（例えば、標的細胞のエピトープに特異的な抗体）；特定の組織を標的化する分子；血液脳関門の横断をもたらす分子；および表面への選択的付着を促進する分子などが含まれ得る。
【０５９１】
いくつかの実施形態では、目的の分子がイメージング剤を含む。適切なイメージング剤には、陽性造影剤および陰性造影剤が含まれ得る。適切な陽性造影剤には、それだけに限らないが、ガドリニウムテトラアザシクロドデカン四酢酸（Ｇｄ−ＤＯＴＡ）；ガドリニウム−ジエチレントリアミン五酢酸（Ｇｄ−ＤＴＰＡ）；ガドリニウム−１，４，７−トリス（カルボニルメチル）−１０−（２’−ヒドロキシプロピル）−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン（Ｇｄ−ＨＰ−ＤＯ３Ａ）；マンガン（ＩＩ）−ジピリドキサール二リン酸（Ｍｎ−ＤＰＤＰ）；Ｇｄ−ジエチレントリアミン五酢酸−ビス（メチルアミド）（Ｇｄ−ＤＴＰＡ−ＢＭＡ）；等が含まれ得る。適切な陰性造影剤には、それだけに限らないが、超常磁性酸化鉄（ＳＰＩＯ）イメージング剤；およびパーフルオロカーボンが含まれ、適切なパーフルオロカーボンには、それだけに限らないが、フルオロヘプタン、フルオロシクロヘプタン、フルオロメチルシクロヘプタン、フルオロヘキサン、フルオロシクロヘキサン、フルオロペンタン、フルオロシクロペンタン、フルオロメチルシクロペンタン、フルオロジメチルシクロペンタン、フルオロメチルシクロブタン、フルオロジメチルシクロブタン、フルオロトリメチルシクロブタン、フルオロブタン、フルオロシクロブタン、フルオロプロパン、フルオロエーテル、フルオロポリエーテル、フルオロトリエチルアミン、ペルフルオロヘキサン、ペルフルオロペンタン、ペルフルオロブタン、ペルフルオロプロパン、六フッ化硫黄などが含まれ得る。
【０５９２】
本開示の方法または遺伝子組換え宿主細胞で産生され得るさらなるカンナビノイド誘導体およびカンナビノイド前駆体誘導体には、薬物代謝および薬物動態（例えば、溶解度、バイオアベイラビリティ、吸収、分布、血漿半減期および代謝クリアランス）を修正するための有機合成または酵素経路を介して修正された誘導体が含まれ得る。修正例としては、それだけに限らないが、ハロゲン化、アセチル化およびメチル化が挙げられ得る。
【０５９３】
本明細書に記載されるカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体およびカンナビノイド前駆体誘導体は、全ての薬学的に許容される同位体標識カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体およびカンナビノイド前駆体誘導体をさらに含む。「同位体」または「放射標識」化合物は、１つまたは複数の原子が、典型的に自然に見られる（天然に存在する）原子質量または質量数とは異なる原子質量または質量数を有する原子によって置き換えられたまたは置換された化合物である。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体およびカンナビノイド前駆体誘導体において、水素原子が１つまたは複数の重水素またはトリチウムによって置き換えられているまたは置換されている。本開示の一定の同位体標識カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体およびカンナビノイド前駆体誘導体、例えば放射性同位体を組み込んだものは、薬物および／または基質組織分布研究に有用である。放射性同位体トリチウム、すなわち３Ｈ、および炭素１４、すなわち１４Ｃは、容易な組み込みおよび迅速な検出手段の観点から、この目的に特に有用である。重水素、すなわち２Ｈなどの重同位体による置換は、より大きな代謝安定性、例えばインビボ半減期の増加または投与量要求の減少から生じる一定の治療上の利点をもたらし得るので、いくつかの状況で好まれ得る。本明細書に記載されるカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体、およびカンナビノイド前駆体誘導体に組み込むことができる適切な同位体には、それだけに限らないが、２Ｈ（重水素の場合はＤとも表記）、３Ｈ（トリチウムの場合はＴとも表記）、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１３Ｎ、１５Ｎ、１５Ｏ、１７Ｏ、１８Ｏ、１８Ｆ、３５Ｓ、３６Ｃｌ、８２Ｂｒ、７５Ｂｒ、７６Ｂｒ、７７Ｂｒ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉおよび１３１Ｉが含まれ得る。１１Ｃ、１８Ｆ、１５Ｏおよび１３Ｎなどの陽電子放出同位体による置換は、陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）研究に有用となり得る。
【０５９４】
本明細書に開示される生物生産方法は、化学合成を使用してすることが困難な定義された立体化学を有するカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の合成を可能にする。本明細書に開示されるカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体、またはカンナビノイド前駆体誘導体は、エナンチオマーまたはジアステレオマーであり得る。「エナンチオマー」という用語は、重ね合わせることができない互いの鏡像である一対の立体異性体を指し得る。いくつかの実施形態では、カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体が（Ｓ）−エナンチオマーであり得る。いくつかの実施形態では、カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体が（Ｒ）−エナンチオマーであり得る。いくつかの実施形態では、カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体が（＋）または（−）エナンチオマーであり得る。「ジアステレオマー」という用語は、単結合の周りの回転によって重ね合わせることができない立体異性体のセットを指し得る。例えば、シスおよびトランス二重結合、二環式環系のエンドおよびエキソ置換、ならびに異なる相対立体配置を有する複数の立体中心を含む化合物は、ジアステレオマーとみなされ得る。「ジアステレオマー」という用語は、この一連の化合物の任意のメンバーを指し得る。本明細書に開示されるカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体、またはカンナビノイド前駆体誘導体は、二重結合または縮合環を含み得る。一定のこのような実施形態では、立体配置が具体的に定義されていない限り、二重結合または縮合環がシスまたはトランスであり得る。カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体が二重結合を含む場合、立体配置が特に定義されていない限り、置換基はＥまたはＺ配置であり得る。
【０５９５】
いくつかの実施形態では、カンナビノイド、カンナビノイド前駆体、カンナビノイド前駆体誘導体またはカンナビノイド誘導体を細胞溶解物、培養培地、細胞溶解物と培養培地の両方、または本明細書に開示される１つもしくは複数のポリペプチドを含む無細胞反応混合物から回収する場合、回収されるカンナビノイド、カンナビノイド前駆体、カンナビノイド前駆体誘導体またはカンナビノイド誘導体が塩の形態である。一定のこのような実施形態では、塩が薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、、回収されたカンナビノイド、カンナビノイド前駆体、カンナビノイド前駆体誘導体またはカンナビノイド誘導体の塩を、次いで、本明細書に開示されるように精製する。
【０５９６】
本開示は、本明細書に記載されるカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体およびカンナビノイド前駆体誘導体の薬学的に許容される塩を含む。「薬学的に許容される塩」は、生物学的にも他の点でも望ましくないことがない、遊離塩基の生物学的有効性および特性を保持する塩を指す。代表的な薬学的に許容される塩には、それだけに限らないが、例えば、水溶性および水不溶性塩、例えば酢酸塩、アムソネート（ａｍｓｏｎａｔｅ）（４，４−ジアミノスチルベン−２，２−ジスルホン酸塩）、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重炭酸塩、重硫酸塩、重酒石酸塩、ホウ酸塩、臭化物、酪酸塩、カルシウム、エデト酸カルシウム、カンシル酸塩、炭酸塩、塩化物、クエン酸塩、クラブラン酸塩、二塩酸塩、エデト酸塩、エジシル酸塩、エストレート、エシレート、フィウナレート（ｆｉｕｎａｒａｔｅ）、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリコリルアルサニレート（ｇｌｙｃｏｌｌｙｌａｒｓａｎｉｌａｔｅ）、ヘキサフルオロリン酸塩、ヘキシルレゾルシン酸塩、ヒドラバミン、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヒドロキシナフトエ酸塩、ヨウ化物、イセチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリン酸塩、マグネシウム、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、臭化メチル、硝酸メチル、硫酸メチル、ムチン酸塩、ナプシル酸塩、硝酸塩、Ｎ−メチルグルカミンアンモニウム塩、３−ヒドロキシ−２−ナフトエート、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩（１，１−メテン−ビス−２−ヒドロキシ−３−ナフトエート、エンボネート）、パントテン酸塩、リン酸塩／二リン酸塩、ピクリン酸塩、ポリガラクツロン酸塩、プロピオン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、塩基性酢酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、スルホサリチル酸塩、スラメート（ｓｕｒａｍａｔｅ）、タンニン酸塩、酒石酸塩、テオクル酸塩、トシル酸塩、トリエチオジド（ｔｒｉｅｔｈｉｏｄｉｄｅ）および吉草酸塩が含まれる。
【０５９７】
「薬学的に許容される塩」にはまた、酸付加塩と塩基付加塩の両方が含まれる。「薬学的に許容される酸付加塩」とは、遊離塩基の生物学的有効性および特性を保持し、生物学的にも他の点でも望ましくないことがなく、無機酸、例えばそれだけに限らないが、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸など、ならびに有機酸、例えばそれだけに限らないが、酢酸、２，２−ジクロロ酢酸、アジピン酸、アルギン酸、アスコルビン酸、アスパラギン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、４−アセトアミド安息香酸、樟脳酸、カンファー−１０−スルホン酸、カプリン酸、カプロン酸、カプリル酸、炭酸、ケイ皮酸、クエン酸、シクラミン酸、ドデシル硫酸、エタン−１，２−ジスルホン酸酸、エタンスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ギ酸、フマル酸、ガラクタル酸、ゲンチジン酸、グルコヘプトン酸、グルコン酸、グルクロン酸、グルタミン酸、グルタル酸、２−オキソグルタル酸、グリセロリン酸、グリコール酸、馬尿酸、イソ酪酸、乳酸、ラクトビオン酸、ラウリン酸、マレイン酸、リンゴ酸、マロン酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、ムチン酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、１−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸、ニコチン酸、オレイン酸、オロト酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸、プロピオン酸、ピログルタミン酸、ピルビン酸、サリチル酸、４−アミノサリチル酸、セバシン酸、ステアリン酸、コハク酸、酒石酸、チオシアン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、トリフルオロ酢酸、ウンデシレン酸などによって形成される塩を指す。
【０５９８】
「薬学的に許容される塩基付加塩」は、生物学的にも他の点でも望ましくないことがない、遊離酸の生物学的有効性および特性を保持する塩を指す。これらの塩は、無機塩基または有機塩基を遊離酸に添加することによって調製される。無機塩基から誘導される塩には、それだけに限らないが、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅、マンガン、アルミニウム塩などが含まれる。例えば、無機塩には、それだけに限らないが、アンモニウム、ナトリウム、カリウム、カルシウムおよびマグネシウム塩が含まれる。有機塩基から誘導される塩には、それだけに限らないが、第一級、第二級および第三級アミンの塩、天然置換アミンを含む置換アミン、環状アミンおよび塩基性イオン交換樹脂、例えばアンモニア、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、ジエタノールアミン、エタノールアミン、デアノール、２−ジメチルアミノエタノール、２−ジエチルアミノエタノール、ジシクロヘキシルアミン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン、コリン、ベタイン、ベネタミン（ｂｅｎｅｔｈａｍｉｎｅ）、ベンザチン、エチレンジアミン、グルコサミン、メチルグルカミン、テオブロミン、トリエタノールアミン、トロメタミン、プリン、ピペラジン、ピペリジン、Ｎ−エチルピペリジン、ポリアミン樹脂などが含まれる。
【０５９９】
宿主細胞を使用してカンナビノイド、カンナビノイド前駆体、カンナビノイド誘導体またはカンナビノイド前駆体誘導体を生成する方法：  本開示は、遺伝子組換え宿主細胞でカンナビノイド、カンナビノイド前駆体、カンナビノイド前駆体誘導体またはカンナビノイド誘導体を産生する方法であって、本開示の遺伝子組換え宿主細胞を適切な培地で培養するステップと、産生されたカンナビノイド、カンナビノイド前駆体、カンナビノイド前駆体誘導体またはカンナビノイド誘導体を回収するステップとを含む方法を提供する。一定のこのような実施形態では、、産生されたカンナビノイド、カンナビノイド前駆体、カンナビノイド前駆体誘導体またはカンナビノイド誘導体を、次いで、本明細書に開示されるように精製する。
【０６００】
いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞の適切な培地での培養が、同様の条件下で培養した非遺伝子組換え宿主細胞と比較して増加した量のカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の合成を提供する。
【０６０１】
本開示は、カンナビノイド、カンナビノイド前駆体、カンナビノイド前駆体誘導体またはカンナビノイド誘導体を産生する方法であって、本開示の遺伝子組換え宿主細胞を、カルボン酸を含む適切な培地で培養するステップと、産生されたカンナビノイド、カンナビノイド前駆体、カンナビノイド前駆体誘導体またはカンナビノイド誘導体を回収するステップとを含む方法を提供する。一定のこのような実施形態では、、産生されたカンナビノイド、カンナビノイド前駆体、カンナビノイド前駆体誘導体またはカンナビノイド誘導体を、次いで、本明細書に開示されるように精製する。
【０６０２】
いくつかの実施形態では、カンナビノイド、カンナビノイド前駆体、カンナビノイド前駆体誘導体またはカンナビノイド誘導体を、細胞溶解物、培養培地、または細胞溶解物と培養培地の両方から回収する。一定のこのような実施形態では、、回収されたカンナビノイド、カンナビノイド前駆体、カンナビノイド前駆体誘導体またはカンナビノイド誘導体を、次いで、本明細書に開示されるように精製する。
【０６０３】
本開示は、遺伝子組換え宿主細胞でカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する方法であって、本開示の遺伝子組換え宿主細胞を適切な培地で培養するステップと、産生されたカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を回収するステップとを含む方法を提供する。一定のこのような実施形態では、産生されたカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を、次いで、本明細書に開示されるように精製する。
【０６０４】
いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞の適切な培地での培養が、同様の条件下で培養した非遺伝子組換え宿主細胞と比較して増加した量のカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体の合成を提供する。
【０６０５】
本開示は、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する方法であって、本開示の遺伝子組換え宿主細胞を、カルボン酸を含む適切な培地で培養するステップと、産生されたカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を回収するステップとを含む方法を提供する。一定のこのような実施形態では、産生されたカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を、次いで、本明細書に開示されるように精製する。
【０６０６】
いくつかの実施形態では、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を、細胞溶解物、培養培地、または細胞溶解物と培養培地の両方から回収する。一定のこのような実施形態では、、回収されたカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を、次いで、本明細書に開示されるように精製する。
【０６０７】
いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞を、カルボン酸を含む適切な培地で培養して、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する。一定のこのような実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞が、本明細書に記載されるように、ＡＡＥポリペプチド、ＦＡＡポリペプチドまたは脂肪酸アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞が、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体をカンナビノイド、カンナビノイド前駆体、カンナビノイド前駆体誘導体またはカンナビノイド誘導体にさらに変換し得る。
【０６０８】
カルボン酸には、それだけに限らないが、Ｃ３〜Ｃ１８脂肪酸、酪酸、イソ酪酸、吉草酸、ヘキサン酸、ヘプタン酸、オクタン酸、ノナン酸、デカン酸、ウンデカン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、Ｃ１５〜Ｃ１８脂肪酸、フマル酸、イタコン酸、リンゴ酸、コハク酸、マレイン酸、マロン酸、グルタル酸、グルカル酸、シュウ酸、アジピン酸、ピメリン酸、スベリン酸、アゼライン酸、セバシン酸、ドデカン二酸、グルタコン酸、オルトフタル酸、イソフタル酸、テレフタル酸、クエン酸、イソクエン酸、アコニット酸、トリカルバリル酸およびトリメシン酸が含まれ得る。カルボン酸には、Ｃ４〜Ｃ１０カルボン酸が含まれ得る。いくつかの実施形態では、カルボン酸がＣ４カルボン酸である。いくつかの実施形態では、カルボン酸がＣ５カルボン酸である。いくつかの実施形態では、カルボン酸がＣ６カルボン酸である。いくつかの実施形態では、カルボン酸がＣ７カルボン酸である。いくつかの実施形態では、カルボン酸がＣ８カルボン酸である。いくつかの実施形態では、カルボン酸がＣ９カルボン酸である。いくつかの実施形態では、カルボン酸がＣ１０カルボン酸である。いくつかの実施形態では、カルボン酸が酪酸である。いくつかの実施形態では、カルボン酸が吉草酸である。いくつかの実施形態では、カルボン酸がヘキサン酸である。いくつかの実施形態では、カルボン酸がヘプタン酸である。いくつかの実施形態では、カルボン酸がオクタン酸である。いくつかの実施形態では、カルボン酸がノナン酸である。いくつかの実施形態では、カルボン酸がデカン酸である。例えば、図１２を参照されたい。
【０６０９】
いくつかの実施形態では、カルボン酸が、ヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体またはアシル−ＣｏＡ化合物の誘導体を生成するための１つまたは複数の官能基および／または反応性基を含む。官能基には、それだけに限らないが、アジド、ハロ（例えば、塩化物、臭化物、ヨウ化物、フッ素）、メチル、アルキル、アルキニル、アルケニル、メトキシ、アルコキシ、アセチル、アミノ、カルボキシル、カルボニル、オキソ、エステル、ヒドロキシル、チオ、シアノ、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキルアルケニル、シクロアルキルアルキニル、シクロアルケニルアルキル、シクロアルケニルアルケニル、シクロアルケニルアルキニル、ヘテロシクリルアルケニル、ヘテロシクリルアルキニル、ヘテロアリールアルケニル、ヘテロアリールアルキニル、アリールアルケニル、アリールアルキニル、スピロシクリル、ヘテロスピロシクリル、ヘテロシクリル、チオアルキル、スルホン、スルホニル、スルホキシド、アミド、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、アルキルアリールアミノ、ジアリールアミノ、Ｎ−オキシド、イミド、エナミン、イミン、オキシム、ヒドラゾン、ニトリル、アラルキル、シクロアルキルアルキル、ハロアルキル、ヘテロシクリルアルキル、ヘテロアリールアルキル、ニトロ、チオキソなどが含まれ得る。例えば、図１２および図１３を参照されたい。反応性基には、それだけに限らないが、アジド、ハロゲン、カルボキシル、カルボニル、アミン（例えば、アルキルアミン（例えば、低級アルキルアミン）、アリールアミン）、エステル（例えば、アルキルエステル（例えば、低級アルキルエステル、ベンジルエステル）、アリールエステル、置換アリールエステル）、シアノ、チオエステル、チオエーテル、ハロゲン化スルホニル、アルコール、チオール、スクシンイミジルエステル、イソチオシアネート、ヨードアセトアミド、マレイミド、ヒドラジン、アルキニル、アルケニルなどが含まれ得る。いくつかの実施形態では、反応性基が、カルボキシル、カルボニル、アミン、エステル、チオエステル、チオエーテル、ハロゲン化スルホニル、アルコール、チオール、スクシンイミジルエステル、イソチオシアネート、ヨードアセトアミド、マレイミド、アジド、アルキン、アルケンおよびヒドラジンから選択される。官能基および反応性基は、１つまたは複数の追加の官能基または反応性基で置換されてもよい。
【０６１０】
いくつかの実施形態では、カルボン酸が同位体標識または放射標識されている。いくつかの実施形態では、カルボン酸がエナンチオマーまたはジアステレオマーであり得る。いくつかの実施形態では、カルボン酸が（Ｓ）−エナンチオマーであり得る。いくつかの実施形態では、カルボン酸が（Ｒ）−エナンチオマーであり得る。いくつかの実施形態では、カルボン酸が（＋）または（−）エナンチオマーであり得る。いくつかの実施形態では、カルボン酸が二重結合または縮合環を含み得る。一定のこのような実施形態では、立体配置が具体的に定義されていない限り、二重結合または縮合環がシスまたはトランスであり得る。カルボン酸が二重結合を含む場合、立体配置が具体的に定義されていない限り、置換基がＥまたはＺ配置であり得る。
【０６１１】
いくつかの実施形態では、カルボン酸がＣ＝Ｃ基を含む。いくつかの実施形態では、カルボン酸がアルキン基を含む。いくつかの実施形態では、カルボン酸がＮ３基を含む。いくつかの実施形態では、カルボン酸がハロゲンを含む。いくつかの実施形態では、カルボン酸がＣＮ基を含む。いくつかの実施形態では、カルボン酸がヨウ化物を含む。いくつかの実施形態では、カルボン酸が臭化物を含む。いくつかの実施形態では、カルボン酸が塩化物を含む。いくつかの実施形態では、カルボン酸がフッ化物を含む。いくつかの実施形態では、カルボン酸がカルボニルを含む。いくつかの実施形態では、カルボン酸がアセチルを含む。いくつかの実施形態では、カルボン酸がアルキル基を含む。
【０６１２】
カルボン酸には、それだけに限らないが、２−メチルヘキサン酸、３−メチルヘキサン酸、４−メチルヘキサン酸、５−メチルヘキサン酸、２−ヘキセン酸、３−ヘキセン酸、４−ヘキセン酸、５−ヘキセン酸、５−クロロ吉草酸、５−アミノ吉草酸、５−シアノ吉草酸、５−（メチルスルファニル）吉草酸、５−ヒドロキシ吉草酸、５−フェニル吉草酸、２，３−ジメチルヘキサン酸、ｄ３−ヘキサン酸、５−クロロペンタン酸、５−（メチルスルファニル）ペンタン酸、４−ペンチン酸、トランス−２−ペンテン酸、５−ヘキシン酸、トランス−２−ヘキセン酸、６−ヘプチン酸、トランス−２−オクテン酸、トランス−２−ノネン酸酸、４−フェニル酪酸、６−フェニルヘキサン酸、７−フェニルヘプタン酸などが含まれ得る。いくつかの実施形態では、カルボン酸が２−メチルヘキサン酸である。いくつかの実施形態では、カルボン酸が３−メチルヘキサン酸である。いくつかの実施形態では、カルボン酸が４−メチルヘキサン酸である。いくつかの実施形態では、カルボン酸が５−メチルヘキサン酸である。いくつかの実施形態では、カルボン酸が２−ヘキセン酸である。いくつかの実施形態では、カルボン酸が３−ヘキセン酸である。いくつかの実施形態では、カルボン酸が４−ヘキセン酸である。いくつかの実施形態では、カルボン酸が５−ヘキセン酸である。いくつかの実施形態では、カルボン酸が５−クロロ吉草酸である。いくつかの実施形態では、カルボン酸が５−アミノ吉草酸である。いくつかの実施形態では、カルボン酸が５−シアノ吉草酸である。いくつかの実施形態では、カルボン酸が５−（メチルスルファニル）吉草酸である。いくつかの実施形態では、カルボン酸が５−ヒドロキシ吉草酸である。いくつかの実施形態では、カルボン酸が５−フェニル吉草酸である。いくつかの実施形態では、カルボン酸が２，３−ジメチルヘキサン酸である。いくつかの実施形態では、カルボン酸がｄ３−ヘキサン酸である。いくつかの実施形態では、カルボン酸が５−クロロペンタン酸である。いくつかの実施形態では、カルボン酸が５−（メチルスルファニル）ペンタン酸である。いくつかの実施形態では、カルボン酸が４−ペンチン酸である。いくつかの実施形態では、カルボン酸がトランス−２−ペンテン酸である。いくつかの実施形態では、カルボン酸が５−ヘキシン酸である。いくつかの実施形態では、カルボン酸がトランス−２−ヘキセン酸である。いくつかの実施形態では、カルボン酸が６−ヘプチン酸である。いくつかの実施形態では、カルボン酸がトランス−２−オクテン酸である。いくつかの実施形態では、カルボン酸がトランス−２−ノネン酸である。いくつかの実施形態では、カルボン酸が４−フェニル酪酸である。いくつかの実施形態では、カルボン酸が６−フェニルヘキサン酸である。いくつかの実施形態では、カルボン酸が７−フェニルヘプタン酸である。
【０６１３】
本開示はまた、以下のカンナビノイド前駆体または前駆体誘導体を産生する方法を提供する：オリベトール酸またはオリベトール酸誘導体。一定のこのような実施形態では、本方法が、本開示の遺伝子組換え宿主細胞を、カルボン酸を含む適切な培地で培養するステップと、産生されたオリベトール酸またはオリベトール酸誘導体を回収するステップとを含む。一定のこのような実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞が、ａ）ＡＡＥポリペプチド、ＦＡＡポリペプチドまたは脂肪酸アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドなどのアシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；ｂ）ＴＫＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；およびｃ）ＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞が、ａ）ＡＡＥポリペプチド、ＦＡＡポリペプチドまたは脂肪酸アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドなどのアシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；およびｂ）ＴＫＳ／ＯＡＣ融合ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。
【０６１４】
いくつかの実施形態では、本開示の方法または遺伝子組換え宿主細胞によって産生されるオリベトール酸誘導体が、以下の式を有する：
【化４】
2020517293.tif 000006
（式中、Ｒはアルキル（例えば、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル）、置換アルキル、アルキルエステルまたはアルキル−Ｘであり、Ｘが本明細書に開示される反応性基または官能基である）。いくつかの実施形態では、オリベトール酸またはオリベトール酸誘導体を、細胞溶解物、培養培地、または細胞溶解物と培養培地の両方から回収する。一定のこのような実施形態では、、回収されたオリベトール酸またはオリベトール酸誘導体を、次いで、本明細書に開示されるように精製する。いくつかの実施形態では、オリベトール酸またはオリベトール酸誘導体を、遺伝子組換え宿主細胞によってカンナビノイド誘導体またはカンナビノイドにさらに変換する。
【０６１５】
本開示はまた、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する方法であって、本開示の遺伝子組換え宿主細胞を、オリベトール酸またはオリベトール酸誘導体を含む適切な培地で培養するステップと、産生されたカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を回収するステップとを含む方法を提供する。一定のこのような実施形態では、産生されたカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を、次いで、本明細書に開示されるように精製する。本開示はまた、カンナビノイド誘導体を産生する方法であって、本開示の遺伝子組換え宿主細胞を、オリベトール酸またはオリベトール酸誘導体を含む適切な培地で培養するステップと、産生されたカンナビノイド誘導体を回収するステップとを含む方法を提供する。一定のこのような実施形態では、産生されたカンナビノイド誘導体を、次いで、本明細書に開示されるように精製する。
【０６１６】
いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞が、ａ）ＧＯＴポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸およびｂ）ＧＰＰを生成するポリペプチド（例えば、ＧＰＰＳポリペプチド）をコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態では、オリベトール酸またはオリベトール酸誘導体を、カンナビノイド誘導体またはカンナビノイドにさらに変換する。
【０６１７】
本明細書で使用されるオリベトール酸誘導体は、本明細書に開示される１つまたは複数の反応性基および／または官能基を含み得る。いくつかの実施形態では、適切な培地がオリベトール酸誘導体を含む場合、オリベトール酸誘導体がオルセリン酸である。いくつかの実施形態では、適切な培地がオリベトール酸誘導体を含む場合、オリベトール酸誘導体がジバリン酸である。
【０６１８】
いくつかの実施形態では、カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体を産生する方法が、カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生を支持する条件下で本開示のトランスジェニック（遺伝子組換え）植物を増殖させるステップを含み得る。カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体は、植物または植物の一部から精製することができる。本開示は、本開示のトランスジェニック（遺伝子組換え）植物から調製された食品を提供する。
【０６１９】
代表的な細胞培養条件：  適切な培地には、標準培地（例えば、誘導因子などの１つまたは複数の追加の薬剤が補足されていてもよいルリア−ベルターニブロス（例えば、本明細書に開示される異種核酸が誘導性プロモーターの制御下にある場合）；標準酵母培養培地；など）が含まれ得る。いくつかの実施形態では、培養培地に発酵性糖（例えば、ヘキソース糖、例えばグルコース、キシロースなど）を補足することができる。いくつかの実施形態では、培地に、ヘキサノエート、ヘキサノエート以外のカルボン酸、オリベトール酸またはオリベトール酸誘導体を補足することができる。いくつかの実施形態では、培養培地に、前処理されたセルロース供給原料（例えば、小麦草、小麦わら、大麦わら、モロコシ、稲草、サトウキビわら、バガス、スイッチグラス、トウモロコシわら、トウモロコシ繊維、穀物またはこれらの任意の組み合わせ）を補足することができる。いくつかの実施形態では、培養培地にオレイン酸を補足することができる。いくつかの実施形態では、適切な培地が非発酵性炭素源を含む。一定のこのような実施形態では、非発酵性炭素源がエタノールを含む。いくつかの実施形態では、適切な培地が誘導因子を含む。一定のこのような実施形態では、誘導因子がガラクトースを含む。
【０６２０】
適切な培地の炭素源は、グルコースなどの単純な糖から、酵母エキスなどの他のバイオマスのより複雑な加水分解産物まで、有意に異なり得る。塩の添加は、一般に、マグネシウム、窒素、リンおよび硫黄などの必須元素を提供して、細胞がポリペプチドおよび核酸を合成できるようにする。適切な培地に、抗生物質などの選択剤を補足して、一定のプラスミドなどの維持を選択することもできる。例えば、微生物がアンピシリンまたはテトラサイクリンなどの一定の抗生物質に耐性である場合、耐性を欠く細胞が増殖するのを防ぐために、その抗生物質を培地に添加することができる。適切な培地に、特定のアミノ酸などの、所望の生理学的または生化学的特性について選択するために必要に応じて他の化合物を補足することができる。
【０６２１】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される遺伝子組換え宿主細胞を、最小培地で増殖させる。本明細書で使用される場合、「最小培地（ｍｉｎｉｍａｌ  ｍｅｄｉｕｍ）」または「最小培地（ｍｉｎｉｍａｌ  ｍｅｄｉａ）」という用語は、一般に、必ずしも常ではないが、１つまたは複数のアミノ酸（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個またはそれ以上のアミノ酸）の存在なしに、細胞増殖に可能な最小栄養素を含有する増殖培地を指し得る。最小培地は典型的には、（１）細胞（例えば、細菌または酵母）増殖のための炭素源；（２）細胞（例えば、細菌または酵母）の種および増殖条件間で異なる可能性のある種々の塩；および（３）水を含有する。
【０６２２】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される遺伝子組換え宿主細胞を、１つまたは複数の富栄養培地で増殖させる。一定のこのような実施形態では、１つまたは複数の富栄養培地が、水、１０ｇ／Ｌ酵母エキス、２０ｇ／Ｌ  Ｂａｃｔｏペプトンおよび２０ｇ／Ｌデキストロース（グルコース）を含む酵母エキスペプトンデキストロース（ＹＰＤ）培地を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の富栄養培地が、ＹＰ＋２０ｇ／Ｌガラクトースおよび１ｇ／Ｌグルコースを含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の富栄養培地が、カルボン酸（例えば、１ｍＭのオリベトール酸、１ｍＭのオリベトール酸誘導体、２ｍＭのヘキサン酸または２ｍＭのヘキサン酸以外のカルボン酸）をさらに含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の富栄養培地が、１つまたは複数の最小培地と比較して迅速な細胞増殖をもたらす。
【０６２３】
本開示の組換え細胞の維持および増殖に適した材料および方法は、本明細書中、例えば実施例に記載される。細胞（例えば、細菌または酵母）培養物の維持および成長に適した他の材料および方法は、当技術分野で周知である。代表的な技術は、国際公開第２００９／０７６６７６号、米国特許出願第１２／３３５０７１号明細書（米国公開第２００９／０２０３１０２号明細書）、国際公開第２０１０／００３００７号、米国公開番号第２０１０／００４８９６４号明細書、国際公開第２００９／１３２２２０号、米国公開番号第２０１０／０００３７１６号明細書、Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ  Ｇｅｒｈａｒｄｔ  ｅｔ  ａｌ，  ｅｄｓ），  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，  Ｄ．Ｃ．（１９９４）またはＢｒｏｃｋ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ  （１９８９）  Ｓｉｎａｕｅｒ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，  Ｉｎｃ．，  Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ，  ＭＡに見出すことができる。
【０６２４】
標準的な細胞培養条件を使用して、本明細書に開示される遺伝子組換え宿主細胞を培養することができる（例えば、国際公開第２００４／０３３６４６号およびそこに引用されている参考文献参照）。いくつかの実施形態では、細胞を、適切な温度、ガス混合物およびｐＨ（約２０°Ｃ〜約３７°Ｃ、約０．０４％〜約８４％ＣＯ２、約０％〜約１００％溶存酸素および約２〜約９の間のｐＨなど）で増殖および維持する。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される遺伝子組換え宿主細胞を、適切な細胞培養培地中約３４℃で増殖させる。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される遺伝子組換え宿主細胞を、適切な細胞培養培地中約２０℃〜約３７℃で増殖させる。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される遺伝子組換え宿主細胞を、適切な細胞培養培地中約２０℃、約２１℃、約２２℃、約２３℃、約２４℃、約２５℃、約２６℃、約２７°Ｃ、約２８°Ｃ、約２９°Ｃ、約３０°Ｃ、約３１°Ｃ、約３２°Ｃ、約３３°Ｃ、約３４°Ｃ、約３５°Ｃ、約３６°Ｃまたは約３７°Ｃで増殖させる。いくつかの実施形態では、発酵のためのｐＨ範囲が、約ｐＨ３．０〜約ｐＨ９．０の間（例えば、約ｐＨ３．０、約ｐＨ３．５、約ｐＨ４．０、約ｐＨ４．５、約ｐＨ５．０、約ｐＨ５．５、約ｐＨ６．０、約ｐＨ６．５、約ｐＨ７．０、約ｐＨ７．５、約ｐＨ８．０、約ｐＨ８．５、約ｐＨ６．０〜約ｐＨ８．０または約６．５〜約７．０）である。いくつかの実施形態では、発酵のためのｐＨ範囲が約ｐＨ４．５〜約ｐＨ５．５の間である。いくつかの実施形態では、発酵のためのｐＨ範囲が約ｐＨ４．０〜約ｐＨ６．０の間である。いくつかの実施形態では、発酵のためのｐＨ範囲が約ｐＨ３．０〜約ｐＨ６．０の間である。いくつかの実施形態では、発酵のためのｐＨ範囲が約ｐＨ３．０〜約ｐＨ５．５の間である。いくつかの実施形態では、発酵のためのｐＨ範囲が約ｐＨ３．０〜約ｐＨ５．０の間である。いくつかの実施形態では、溶存酸素が、約０％〜約１０％、約０％〜約２０％、約０％〜約３０％、約０％〜約４０％、約０％〜約５０％、約０％〜約６０％、約０％〜約７０％、約０％〜約８０％、約０％〜約９０％、約５％〜約１０％、約５％〜約２０％、約５％〜約３０％、約５％〜約４０％、約５％〜約５０％、約５％〜約６０％、約５％〜約７０％、約５％〜約８０％、約５％〜約９０％、約１０％〜約２０％、約１０％〜約３０％、約１０％〜約４０％または約１０％〜約５０％の間である。いくつかの実施形態では、ＣＯ２レベルが、約０．０４％〜約０．１％ＣＯ２、約０．０４％〜約１％ＣＯ２、約０．０４％〜約５％ＣＯ２、約０．０４％〜約１０％ＣＯ２、約０．０４％〜約２０％ＣＯ２、約０．０４％〜約３０％ＣＯ２、約０．０４％〜約４０％ＣＯ２、約０．０４％〜約５０％ＣＯ２、約０．０４％〜約６０％ＣＯ２、約０．０４％〜約７０％ＣＯ２、約０．１％〜約５％ＣＯ２、約０．１％〜約１０％ＣＯ２、約０．１％〜約２０％ＣＯ２、約０．１％〜約３０％ＣＯ２、約０．１％〜約４０％ＣＯ２、約０．１％〜約５０％ＣＯ２、約１％〜約５％ＣＯ２、約１％〜約１０％ＣＯ２、約１％〜約２０％ＣＯ２、約１％〜約３０％ＣＯ２、約１％〜約４０％ＣＯ２、約１％〜約���０％ＣＯ２、約５％〜約１０％ＣＯ２、約１０％〜約２０％ＣＯ２、約１０％〜約３０％ＣＯ２、約１０％〜約４０％ＣＯ２、約１０％〜約５０％ＣＯ２、約１０％〜約６０％ＣＯ２、約１０％〜約７０％ＣＯ２、約１０％〜約８０％ＣＯ２、約５０％〜約６０％ＣＯ２、約５０％〜約７０％ＣＯ２または約５０％〜約８０％ＣＯ２の間である。本明細書に開示される遺伝子組換え宿主細胞は、細胞の要件に基づいて、好気性、無酸素性、微好気性または嫌気性条件下で増殖させることができる。
【０６２５】
使用することができるバッチ、フェドバッチまたは連続発酵などの標準的な培養条件および発酵モードは、その各々の内容全体が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開番号、国際公開第２００９／０７６６７６号、米国特許出願番号第１２／３３５０７１号明細書（米国公開番号第２００９／０２０３１０２号明細書）、国際公開第２０１０／００３００７号、米国公開番号第２０１０／００４８９６４号明細書、国際公開第２００９／１３２２２０号、米国公開番号第２０１０／０００３７１６号明細書に記載されている。バッチおよびフェドバッチ発酵は一般的であり、当技術分野で周知であり、Ｂｒｏｃｋ，  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ  （１９８９）  Ｓｉｎａｕｅｒ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，  Ｉｎｃ．で例を見出すことができる。
【０６２６】
産生ならびに産生されたカンナビノイド、カンナビノイド前駆体、カンナビノイド誘導体またはカンナビノイド前駆体誘導体の回収：  いくつかの実施形態では、本開示の方法が、約１ｍｇ／Ｌ培養培地〜約１ｇ／Ｌ培養培地の回収可能な量の本開示の遺伝子組換え宿主細胞によるカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生を提供する。いくつかの実施形態では、本開示の方法が、約１ｍｇ／Ｌ培養培地〜約５００ｍｇ／Ｌ培養培地の回収可能な量のカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生を提供する。いくつかの実施形態では、本開示の方法が、約１ｍｇ／Ｌ培養培地〜約１００ｍｇ／Ｌ培養培地の回収可能な量のカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生を提供する。例えば、いくつかの実施形態では、本開示の方法が、約１ｍｇ／Ｌ培養培地〜約５ｍｇ／Ｌ培養培地、約５ｍｇ／Ｌ培養培地〜約１０ｍｇ／Ｌ培養培地、約１０ｍｇ／Ｌ培養培地〜約２５ｍｇ／Ｌ培養培地、約２５ｍｇ／Ｌ培養培地〜約５０ｍｇ／Ｌ培養培地、約５０ｍｇ／Ｌ培養培地〜約７５ｍｇ／Ｌ培養培地または約７５ｍｇ／Ｌ培養培地〜約１００ｍｇ／Ｌ培養培地の回収可能な量のカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生を提供する。いくつかの実施形態では、本開示の方法が、約１００ｍｇ／Ｌ培養培地〜約１５０ｍｇ／Ｌ培養培地、約１５０ｍｇ／Ｌ培養培地〜約２００ｍｇ／Ｌ培養培地、約２００ｍｇ／Ｌ培養培地〜約２５０ｍｇ／Ｌ培養培地、約２５０ｍｇ／Ｌ培養培地〜約５００ｍｇ／Ｌ培養培地、約５００ｍｇ／Ｌ培養培地〜約７５０ｍｇ／Ｌ培養培地または約７５０ｍｇ／Ｌ培養培地〜約１ｇ／Ｌ培養培地の回収可能な量のカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生を提供する。いくつかの実施形態では、本開示の方法が、約５０ｍｇ／Ｌ培養培地〜約１００ｍｇ／Ｌ培養培地、５０ｍｇ／Ｌ培養培地〜約１５０ｍｇ／Ｌ培養培地、約５０ｍｇ／Ｌ培養培地〜約２００ｍｇ／Ｌ培養培地、約５０ｍｇ／Ｌ培養培地〜約２５０ｍｇ／Ｌ培養培地、約５０ｍｇ／Ｌ培養培地〜約５００ｍｇ／Ｌ培養培地または約５０ｍｇ／Ｌ培養培地〜約７５０ｍｇ／Ｌ培養培地の回収可能な量のカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生を提供する。
【０６２７】
いくつかの実施形態では、本開示の方法が、約１００ｍｇ／Ｌ培養培地〜約５００ｍｇ／Ｌ培養培地または５００ｍｇ／Ｌ培養培地超の回収可能な量のカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生を提供する。いくつかの実施形態では、本開示の方法が、約５００ｍｇ／Ｌ培養培地〜約１ｇ／Ｌ培養培地または１ｇ／Ｌ培養培地超の回収可能な量のカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生を提供する。いくつかの実施形態では、本開示の方法が、約１ｇ／Ｌ培養培地〜約１０ｇ／Ｌ培養培地または１０ｇ／Ｌ培養培地超の回収可能な量のカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生を提供する。いくつかの実施形態では、本開示の方法が、約１０ｇ／Ｌ培養培地〜約１００ｇ／Ｌ培養培地または１００ｇ／Ｌ培養培地超の回収可能な量のカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生を提供する。いくつかの実施形態では、本開示の方法が、約１ｇ／Ｌ培養培地〜約２０ｇ／Ｌ培養培地または２０ｇ／Ｌ培養培地超の回収可能な量のカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生を提供する。いくつかの実施形態では、本開示の方法が、約１ｇ／Ｌ培養培地〜約３０ｇ／Ｌ培養培地または３０ｇ／Ｌ培養培地超の回収可能な量のカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生を提供する。いくつかの実施形態では、本開示の方法が、約１ｇ／Ｌ培養培地〜約４０ｇ／Ｌ培養培地または４０ｇ／Ｌ培養培地超の回収可能な量のカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生を提供する。いくつかの実施形態では、本開示の方法が、約１ｇ／Ｌ培養培地〜約５０ｇ／Ｌ培養培地または５０ｇ／Ｌ培養培地超の回収可能な量のカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生を提供する。いくつかの実施形態では、本開示の方法が、約１ｇ／Ｌ培養培地〜約６０ｇ／Ｌ培養培地または６０ｇ／Ｌ培養培地超の回収可能な量のカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生を提供する。いくつかの実施形態では、本開示の方法が、約１ｇ／Ｌ培養培地〜約７０ｇ／Ｌ培養培地または７０ｇ／Ｌ培養培地超の回収可能な量のカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生を提供する。いくつかの実施形態では、本開示の方法が、約１ｇ／Ｌ培養培地〜約８０ｇ／Ｌ培養培地または８０ｇ／Ｌ培養培地超の回収可能な量のカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生を提供する。いくつかの実施形態では、本開示の方法が、約１ｇ／Ｌ培養培地〜約９０ｇ／Ｌ培養培地または９０ｇ／Ｌ培養培地超の回収可能な量のカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生を提供する。いくつかの実施形態では、本開示の方法が、約１０ｇ／Ｌ培養培地〜約２０ｇ／Ｌ培養培地または２０ｇ／Ｌ培養培地超の回収可能な量のカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生を提供する。いくつかの実施形態では、本開示の方法が、約１０ｇ／Ｌ培養培地〜約３０ｇ／Ｌ培養培地または３０ｇ／Ｌ培養培地超の回収可能な量のカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生を提供する。いくつかの実施形態では、本開示の方法が、約１０ｇ／Ｌ培養培地〜約４０ｇ／Ｌ培養培地または４０ｇ／Ｌ培養培地超の回収可能な量のカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生を提供する。いくつかの実施形態では、本開示の方法が、約１０ｇ／Ｌ培養培地〜約５０ｇ／Ｌ培養培地または５０ｇ／Ｌ培養培地超の回収可能な量のカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生を提供する。いくつかの実施形態では、本開示の方法が、約１０ｇ／Ｌ培養培地〜約６０ｇ／Ｌ培養培地または６０ｇ／Ｌ培養培地超の回収可能な量のカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生を提供する。いくつかの実施形態では、本開示の方法が、約１０ｇ／Ｌ培養培地〜約７０ｇ／Ｌ培養培地または７０ｇ／Ｌ培養培地超の回収可能な量のカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生を提供する。いくつかの実施形態では、本開示の方法が、約１０ｇ／Ｌ培養培地〜約８０ｇ／Ｌ培養培地または８０ｇ／Ｌ培養培地超の回収可能な量のカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生を提供する。いくつかの実施形態では、本開示の方法が、約１０ｇ／Ｌ培養培地〜約９０ｇ／Ｌ培養培地または９０ｇ／Ｌ培養培地超の回収可能な量のカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生を提供する。いくつかの実施形態では、本開示の方法が、約５０ｇ／Ｌ培養培地〜約１００ｇ／Ｌ培養培地または１００ｇ／Ｌ培養培地超の回収可能な量のカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生を提供する。いくつかの実施形態では、本開示の方法が、約５０ｇ／Ｌ培養培地〜約６０ｇ／Ｌ培養培地または６０ｇ／Ｌ培養培地超の回収可能な量のカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生を提供する。いくつかの実施形態では、本開示の方法が、約５０ｇ／Ｌ培養培地〜約７０ｇ／Ｌ培養培地または７０ｇ／Ｌ培養培地超の回収可能な量のカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生を提供する。いくつかの実施形態では、本開示の方法が、約５０ｇ／Ｌ培養培地〜約８０ｇ／Ｌ培養培地または８０ｇ／Ｌ培養培地超の回収可能な量のカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生を提供する。いくつかの実施形態では、本開示の方法が、約５０ｇ／Ｌ培養培地〜約９０ｇ／Ｌ培養培地または９０ｇ／Ｌ培養培地超の回収可能な量のカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生を提供する。いくつかの実施形態では、本開示の方法が、約２０ｇ／Ｌ培養培地〜約１００ｇ／Ｌ培養培地または１００ｇ／Ｌ培養培地超の回収可能な量のカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生を提供する。いくつかの実施形態では、本開示の方法が、約２０ｇ／Ｌ培養培地〜約３０ｇ／Ｌ培養培地または３０ｇ／Ｌ培養培地超の回収可能な量のカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生を提供する。いくつかの実施形態では、本開示の方法が、約２０ｇ／Ｌ培養培地〜約４０ｇ／Ｌ培養培地または４０ｇ／Ｌ培養培地超の回収可能な量のカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生を提供する。いくつかの実施形態では、本開示の方法が、約２０ｇ／Ｌ培養培地〜約５０ｇ／Ｌ培養培地または５０ｇ／Ｌ培養培地超の回収可能な量のカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生を提供する。いくつかの実施形態では、本開示の方法が、約２０ｇ／Ｌ培養培地〜約６０ｇ／Ｌ培養培地または６０ｇ／Ｌ培養培地超の回収可能な量のカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生を提供する。いくつかの実施形態では、本開示の方法が、約２０ｇ／Ｌ培養培地〜約７０ｇ／Ｌ培養培地または７０ｇ／Ｌ培養培地超の回収可能な量のカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生を提供する。いくつかの実施形態では、本開示の方法が、約２０ｇ／Ｌ培養培地〜約８０ｇ／Ｌ培養培地または８０ｇ／Ｌ培養培地超の回収可能な量のカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生を提供する。いくつかの実施形態では、本開示の方法が、約２０ｇ／Ｌ培養培地〜約９０ｇ／Ｌ培養培地または９０ｇ／Ｌ培養培地超の回収可能な量のカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生を提供する。
【０６２８】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される遺伝子組換え宿主細胞を、前駆体酸を含む液体培地で培養して、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成する。適切な前駆体酸には、それだけに限らないが、カルボン酸が含まれる。
【０６２９】
いくつかの実施形態では、カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体、カンナビノイド前駆体誘導体またはカンナビノイド前駆体誘導体を産生する方法が、本開示の遺伝子組換え酵母細胞を、カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生を支持する条件下で培養するステップを含み得、カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体が、遺伝子組換え酵母細胞によって産生され、遺伝子組換え酵母細胞を培養する培養培地（例えば、液体培養培地）中に存在する。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え酵母細胞を培養する培養培地が、１ｎｇ／Ｌ〜１ｇ／Ｌ（例えば、１ｎｇ／Ｌ〜５０ｎｇ／Ｌ、５０ｎｇ／Ｌ〜１００ｎｇ／Ｌ、１００ｎｇ／Ｌ〜５００ｎｇ／Ｌ、５００ｎｇ／Ｌ〜１μｇ／Ｌ、１μｇ／Ｌ〜５０μｇ／Ｌ、５０μｇ／Ｌ〜１００μｇ／Ｌ、１００μｇ／Ｌ〜５００μｇ／Ｌ、５００μｇ／Ｌ〜１ｍｇ／Ｌ、１ｍｇ／Ｌ〜５０ｍｇ／Ｌ、５０ｍｇ／Ｌ〜１００ｍｇ／Ｌ、１００ｍｇ／Ｌ〜５００ｍｇ／Ｌまたは５００ｍｇ／Ｌ〜１ｇ／Ｌ）の量のカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体を含む。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え酵母細胞を培養する培養培地が、１ｇ／Ｌ超の量のカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体を含む。
【０６３０】
いくつかの実施形態では、カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体を産生する方法が、本開示の遺伝子組換え酵母細胞を、糖の発酵を支持する条件下およびカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生を支持する条件下で培養するステップを含み得、カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体が、遺伝子組換え酵母細胞によって産生され、遺伝子組換え酵母細胞によって産生されたアルコール中に存在する。本開示は、遺伝子組換え酵母細胞によって産生されたアルコール飲料を提供し、アルコール飲料が、遺伝子組換え酵母細胞によって産生されたカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体を含む。アルコール飲料には、ビール、ワインおよび蒸留アルコール飲料が含まれ得る。いくつかの実施形態では、本開示のアルコール飲料が、１ｎｇ／Ｌ〜１ｇ／Ｌ（例えば、１ｎｇ／Ｌ〜５０ｎｇ／Ｌ、５０ｎｇ／Ｌ〜１００ｎｇ／Ｌ、１００ｎｇ／Ｌ〜５００ｎｇ／Ｌ、５００ｎｇ／Ｌ〜１μｇ／Ｌ、１μｇ／Ｌ〜５０μｇ／Ｌ、５０μｇ／Ｌ〜１００μｇ／Ｌ、１００μｇ／Ｌ〜５００μｇ／Ｌ、５００μｇ／Ｌ〜１ｍｇ／Ｌ、１ｍｇ／Ｌ〜５０ｍｇ／Ｌ、５０ｍｇ／Ｌ〜１００ｍｇ／Ｌ、１００ｍｇ／Ｌ〜５００ｍｇ／Ｌまたは５００ｍｇ／Ｌ〜１ｇ／Ｌ）の量のカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体を含む。いくつかの実施形態では、本開示のアルコール飲料が、１ｇ／Ｌ超の量のカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体を含む。
【０６３１】
いくつかの実施形態では、本開示の方法が、カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の増加した産生を提供する。一定のこのような実施形態では、本明細書に開示される遺伝子組換え宿主細胞の適切な培地での培養が、同様の条件下で培養した非遺伝子組換え宿主細胞と比較して増加した量のカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の合成を提供する。本明細書に開示される遺伝子組換え宿主細胞によるカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生は、同様の条件下で培養した非遺伝子組換え宿主細胞と比較して約５％〜約１００００００倍増加し得る。本明細書に開示される遺伝子組換え宿主細胞によるカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生は、同様の条件下で培養した非遺伝子組換え宿主細胞によるカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生と比較して約１０％〜約１００００００倍（例えば、約５０％〜約１００００００倍、約１〜約５０００００倍、約１〜約５００００倍、約１〜約５０００倍、約１〜約１０００倍、約１〜約５００倍、約１〜約１００倍、約１〜約５０倍、約５〜約１０００００倍、約５〜約１００００倍、約５〜約１０００倍、約５〜約５００倍、約５〜約１００倍、約１０〜約５００００倍、約５０〜約１００００倍、約１００〜約５０００倍、約２００〜約１０００倍、約５０〜約５００倍または約５０〜約２００倍）増加し得る。本明細書に開示される遺伝子組換え宿主細胞によるカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生はまた、同様の条件下で培養した非遺伝子組換え宿主細胞によるカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生と比較して少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１倍、２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍、２００倍、５００倍、１０００倍、２０００倍、５０００倍、１００００倍、２００００倍、５００００倍、１０００００倍、２０００００倍、５０００００倍または１００００００倍のいずれか増加し得る。
【０６３２】
いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞によるカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生がまた、同様の条件下で培養した非遺伝子組換え宿主細胞によるカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生と比較して少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％のいずれか増加し得る。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される遺伝子組換え宿主細胞によるカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生が、同様の条件下で培養した非遺伝子組換え宿主細胞によるカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生と比較して少なくとも約１〜２０％、２〜２０％、５〜２０％、１０〜２０％、１５〜２０％、１〜１５％、１〜１０％、２〜１５％、２〜１０％、５〜１５％、１０〜１５％、１〜５０％、１０〜５０％、２０〜５０％、３０〜５０％、４０〜５０％、５０〜１００％、５０〜６０％、５０〜７０％、５０〜８０％または５０〜９０％のいずれか増加し得る。
【０６３３】
いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞によるカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生が、ＬＣ−ＭＳ分析によって決定される。一定のこのような実施形態では、各カンナビノイド、カンナビノイド前駆体、カンナビノイド誘導体またはカンナビノイド前駆体誘導体を、真正標準から決定される保持時間、および多重反応モニタリング（ＭＲＭ）トランジションによって同定する。
【０６３４】
いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞が酵母細胞である。一定のこのような実施形態では、本明細書に開示される遺伝子組換え宿主細胞を、バイオリアクターで培養する。いくつかの実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞を、ヘキサン酸、ヘキサン酸以外のカルボン酸、オリベトール酸またはオリベトール酸誘導体を補足した適切な培地で培養する。
【０６３５】
いくつかの実施形態では、カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体を、例えば、本明細書に開示される遺伝子組換え宿主細胞を溶解し、カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体を細胞溶解物から回収することによって、細胞溶解物から回収する。他の場合では、カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体を、本明細書に開示される遺伝子組換え宿主細胞を培養する培養培地から回収する。他の場合では、カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体を、細胞溶解物と培養培地の両方から回収する。
【０６３６】
いくつかの実施形態では、回収されたカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体を、次いで、精製する。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞を含む培養物からの全細胞ブロスを、適切な有機溶媒で抽出して、カンナビノイド、カンナビノイド前駆体、カンナビノイド誘導体またはカンナビノイド前駆体誘導体を得ることができる。適切な有機溶媒には、それだけに限らないが、ヘキサン、ヘプタン、酢酸エチル、石油エーテルおよびジエチルエーテル、クロロホルムおよび酢酸エチルが含まれる。いくつかの実施形態では、適切な有機溶媒がヘキサンを含む。いくつかの実施形態では、適切な有機溶媒を、本開示の遺伝子組換え宿主細胞を含む発酵からの全細胞ブロスに１０：１の比（１０部の全細胞ブロス−１部の有機溶媒）で添加し、３０分間撹拌することができる。一定のこのような実施形態では、有機画分を分離し、等量の酸性水（ｐＨ２．５）で２回抽出することができる。次いで、有機層を分離し、濃縮器（減圧下でのロータリーエバポレーターまたは薄膜蒸発器）で乾燥させて、粗カンナビノイド、カンナビノイド前駆体、カンナビノイド誘導体またはカンナビノイド前駆体誘導体結晶を得ることができる。一定のこのような実施形態では、粗結晶を１５分間１０５℃に加熱し、引き続いて１４５℃で５５分間加熱して、粗カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を脱炭酸することができる。一定のこのような実施形態では、粗結晶産物を再溶解し、適切な溶媒（例えば、ｎ−ペンタン）で再結晶し、濾過して不溶性物質を除去することができる。一定のこのような実施形態では、次いで、溶媒を、例えばロータリーエバポレーターによって除去して、純粋な結晶産物を得ることができる。
【０６３７】
いくつかの実施形態では、カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体が純粋である、例えば、少なくとも約４０％純粋、少なくとも約５０％純粋、少なくとも約６０％純粋、少なくとも約７０％純粋、少なくとも約８０％純粋、少なくとも約９０％純粋、少なくとも約９５％純粋、少なくとも約９８％、または９８％超純粋であり、カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の文脈における「純粋」とは、他のカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体、カンナビノイド前駆体誘導体高分子、汚染物質等を含まないカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体を指し得る。
【０６３８】
カンナビノイド、カンナビノイド前駆体、オリベトール酸誘導体、オリベトール酸、カンナビノイド誘導体またはカンナビノイド前駆体誘導体を生成する無細胞法：  本開示の方法は、本開示の遺伝子組換え宿主細胞によって発現または過剰発現される本明細書に開示される１つまたは複数のポリペプチドを使用した、カンナビノイド、カンナビノイド前駆体、カンナビノイド前駆体誘導体またはカンナビノイド誘導体の無細胞産生を含み得る。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞によって発現または過剰発現される本明細書に開示される１つまたは複数のポリペプチドが、カンナビノイド、カンナビノイド前駆体、カンナビノイド前駆体誘導体またはカンナビノイド誘導体の産生のための無細胞系で使用される。一定のこのような実施形態では、カンナビノイド、カンナビノイド前駆体、カンナビノイド前駆体誘導体またはカンナビノイド誘導体の産生に使用するための適切な出発材料を、適切な反応容器で、本開示の遺伝子組換え宿主細胞によって発現または過剰発現される本明細書に開示される１つまたは複数のポリペプチドと混合して反応を行うことができる。本開示の遺伝子組換え宿主細胞によって発現または過剰発現される本明細書に開示される１つまたは複数のポリペプチドを組み合わせて使用して、適切な出発物質からカンナビノイド、カンナビノイド前駆体、カンナビノイド前駆体誘導体またはカンナビノイド誘導体の完全な合成を行うことができる。いくつかの実施形態では、カンナビノイド、カンナビノイド前駆体、カンナビノイド前駆体誘導体またはカンナビノイド誘導体を、本明細書に開示されるポリペプチドの１つまたは複数を含む無細胞反応混合物から回収する。
【０６３９】
いくつかの実施形態では、回収されたカンナビノイド、カンナビノイド前駆体、カンナビノイド前駆体誘導体またはカンナビノイド誘導体を、次いで、精製する。一定のこのような実施形態では、本明細書に開示されるポリペプチドの１つまたは複数を含む無細胞反応混合物を適切な有機溶媒で抽出して、カンナビノイド、カンナビノイド前駆体、カンナビノイド誘導体またはカンナビノイド前駆体誘導体を得ることができる。適切な有機溶媒には、それだけに限らないが、ヘキサン、ヘプタン、酢酸エチル、石油エーテルおよびジエチルエーテル、クロロホルムおよび酢酸エチルが含まれる。いくつかの実施形態では、適切な有機溶媒がヘキサンを含む。いくつかの実施形態では、適切な有機溶媒を、本明細書に開示されるポリペプチドの１つまたは複数を含む無細胞反応混合物に１０：１の比（１０部の反応混合物−１部の有機溶媒）で添加し、３０分間撹拌することができる。一定のこのような実施形態では、有機画分を分離し、等量の酸性水（ｐＨ２．５）で２回抽出することができる。次いで、有機層を分離し、濃縮器（減圧下でのロータリーエバポレーターまたは薄膜蒸発器）で乾燥させて、粗カンナビノイド、カンナビノイド前駆体、カンナビノイド誘導体またはカンナビノイド前駆体誘導体結晶を得ることができる。一定のこのような実施形態では、粗結晶を１５分間１０５℃に加熱し、引き続いて１４５℃で５５分間加熱して、粗カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を脱炭酸することができる。一定のこのような実施形態では、粗結晶産物を再溶解し、適切な溶媒（例えば、ｎ−ペンタン）で再結晶し、濾過して不溶性物質を除去することができる。一定のこのような実施形態では、次いで、溶媒を、例えばロータリーエバポレーターによって除去して、純粋な結晶産物を得ることができる。
【０６４０】
いくつかの実施形態では、プレニル基アクセプター分子、プレニル基ドナー分子、およびＧＯＴポリペプチドを適切な反応容器で混合して反応を行うことができる。一定のこのような実施形態では、ＧＯＴポリペプチドが、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量のＧＰＰおよびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる。いくつかの実施形態では、ＧＯＴポリペプチドが、配列番号１００または配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、プレニル基アクセプター分子が、オリベトール酸またはその誘導体である。いくつかの実施形態では、プレニル基ドナー分子が、ＧＰＰまたはその誘導体である。いくつかの実施形態では、反応によりカンナビゲロール酸またはその誘導体が産生される。
【０６４１】
いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞によって発現または過剰発現される本明細書に開示される１つまたは複数のポリペプチドによるカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体の無細胞産生をＬＣ−ＭＳによって決定する。一定のこのような実施形態では、各カンナビノイド、カンナビノイド前駆体、カンナビノイド誘導体またはカンナビノイド前駆体誘導体を、真正標準から決定される保持時間、および多重反応モニタリング（ＭＲＭ）トランジションによって同定する。
【０６４２】
本開示の非限定的な実施形態の例：  本明細書に開示される本主題の実施形態は、単独でまたは１つもしくは複数の他の実施形態と組み合わせて有益となり得る。前記の説明を限定することなく、Ｉ−１〜Ｉ−５４、ＩＩ−１〜ＩＩ−５５およびＩＩＩ−１〜ＩＩＩ−８１と番号付けされた本開示の一定の非限定的な実施形態を以下に提供する。本開示を読めば当業者には明らかとなるように、個々に番号付けされた実施形態の各々を、前記または以下の個々に番号付けされた実施形態のいずれかと共に使用または組み合わせることができる。これは、実施形態のこのような全ての組み合わせに対する支持を提供することを意図しており、以下に明示的に提供される実施形態の組み合わせに限定されない。本開示のいくつかの実施形態は、実施形態Ｉのものである：
【０６４３】
実施形態Ｉ−１．カンナビノイド化合物またはカンナビノイド前駆体を産生する遺伝子組換え宿主細胞であって、ａ）ヘキサノイル−ＣｏＡまたはヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体を生成する１つまたは複数のポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；ｂ）ゲラニルピロリン酸を生成する１つまたは複数のポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；ｃ）マロニル−ＣｏＡを生成する１つまたは複数のポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；ｄ）ヘキサノイル−ＣｏＡまたはその誘導体とマロニル−ＣｏＡを縮合してオリベトール酸またはオリベトール酸の誘導体を生成する融合ＴＫＳ／ＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；ｅ）切断型ゲラニルピロリン酸：オリベトール酸ゲラニルトランスフェラーゼ（ＧＯＴ）ポリペプチドまたはＮｐｈＢポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；およびｆ）カンナビノイドシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされており、遺伝子組換え宿主細胞の適切な培地での培養が、回収可能な量のカンナビノイド化合物またはカンナビノイド前駆体の合成を提供する遺伝子組換え宿主細胞。
【０６４４】
実施形態Ｉ−２．宿主細胞が真核細胞である、実施形態Ｉ−１の遺伝子組換え宿主細胞。
【０６４５】
実施形態Ｉ−３．宿主細胞が酵母細胞である、実施形態Ｉ−２の遺伝子組換え宿主細胞。
【０６４６】
実施形態Ｉ−４．宿主細胞がサッカロミセス・セレビシエである、実施形態Ｉ−３の遺伝子組換え宿主細胞。
【０６４７】
実施形態Ｉ−５．宿主細胞がサッカロミセス・セレビシエのプロテアーゼ欠損株である、実施形態Ｉ−４の遺伝子組換え宿主細胞。
【０６４８】
実施形態Ｉ−６．宿主細胞が植物細胞である、実施形態Ｉ−２の遺伝子組換え宿主細胞。
【０６４９】
実施形態Ｉ−７．宿主細胞が原核細胞である、実施形態Ｉ−１の遺伝子組換え宿主細胞。
【０６５０】
実施形態Ｉ−８．ヘキサノイル−ＣｏＡまたはヘキサノイル−ＣｏＡ誘導体を生成する１つまたは複数のポリペプチドが、ヘキサノイル−ＣｏＡシンテターゼ（ＨＣＳ）ポリペプチドであり、培地がヘキサノエートを含む、実施形態Ｉ−１の遺伝子組換え宿主細胞。
【０６５１】
実施形態Ｉ−９．ＨＣＳポリペプチドが、配列番号１、配列番号２、配列番号３または配列番号４に示されるアミノ酸配列と少なくとも５０％（少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸を含む、実施形態Ｉ−６の遺伝子組換え宿主細胞。
【０６５２】
実施形態Ｉ−１０．ゲラニルピロリン酸を生成する１つまたは複数のポリペプチドが、ゲラニルピロリン酸シンテターゼ（ＧＰＰＳ）ポリペプチドを含む、実施形態Ｉ−１の遺伝子組換え宿主細胞。
【０６５３】
実施形態Ｉ−１１．ＧＰＰＳポリペプチドが、配列番号５、配列番号６、配列番号７または配列番号８に示されるアミノ酸配列の１つと少なくとも５０％（少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸を含む、実施形態Ｉ−１１の遺伝子組換え宿主細胞。
【０６５４】
実施形態Ｉ−１２．ＧＰＰＳポリペプチドが、内因性ＧＰＰＳポリペプチドがファルネシルピロリン酸シンテターゼ（ＦＰＰＳ）ポリペプチドとして機能する能力を低下させるドミナントネガティブ変異体である、実施形態Ｉ−１０の遺伝子組換え宿主細胞。
【０６５５】
実施形態Ｉ−１３．ＧＰＰＳポリペプチドがＫ１９７Ｇアミノ酸置換を含む、実施形態Ｉ−１０の遺伝子組換え宿主細胞。
【０６５６】
実施形態Ｉ−１４．ＧＰＰＳポリペプチドが、ＧＰＰＳ大サブユニットポリペプチドおよびＧＰＰＳ小サブユニットポリペプチドを含むヘテロ二量体タンパク質、またはホモ二量体もしくは単量体ＧＰＰＳポリペプチドである、実施形態Ｉ−１０の遺伝子組換え宿主細胞。
【０６５７】
実施形態Ｉ−１５．マロニル−ＣｏＡを生成する１つまたは複数のポリペプチド、がアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ−１（ＡＣＣ１）ポリペプチドを含む、実施形態Ｉ−１の遺伝子組換え宿主細胞。
【０６５８】
実施形態Ｉ−１６．ＡＣＣ１ポリペプチドが、配列番号９に示されるアミノ酸配列と少なくとも５０％（少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸を含む、実施形態Ｉ−１５の遺伝子組換え宿主細胞。
【０６５９】
実施形態Ｉ−１７．ヘキサノイル−ＣｏＡを生成する１つまたは複数のポリペプチドが、ＭＣＴ１ポリペプチド、ＰａａＨ１ポリペプチド、Ｃｒｔポリペプチド、ＴｅｒポリペプチドおよびＢｋｔＢポリペプチドを含む、実施形態Ｉ−１の遺伝子組換え宿主細胞。
【０６６０】
実施形態Ｉ−１８．ヘキサノイル−ＣｏＡを生成する１つまたは複数のポリペプチドが、ＭＣＴ１ポリペプチド、ＰｈａＢポリペプチド、ＰｈａＪポリペプチド、ＴｅｒポリペプチドおよびＢｋｔＢポリペプチドを含む、実施形態Ｉ−１の遺伝子組換え宿主細胞。
【０６６１】
実施形態Ｉ−１９．ｉ）ＰａａＨ１ポリペプチドが、配列番号１８または配列番号４６に示されるアミノ酸配列と少なくとも５０％（少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸を含み；ｉｉ）Ｃｒｔポリペプチドが、配列番号１９または配列番号４８に示されるアミノ酸配列と少なくとも５０％（少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸を含み；ｉｉｉ）Ｔｅｒポリペプチドが、配列番号２０または配列番号５０に示されるアミノ酸配列と少なくとも５０％（少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸を含み；ｉｖ）ＢｋｔＢポリペプチドが、配列番号２１または配列番号４４に示されるアミノ酸配列と少なくとも５０％（少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸を含む、実施形態Ｉ−１７の遺伝子組換え宿主細胞。
【０６６２】
実施形態Ｉ−２０．ｉ）ＰｈａＢポリペプチドが、配列番号９４に示されるアミノ酸配列と少なくとも５０％（少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸を含み；ｉｉ）ＰｈａＪポリペプチドが、配列番号９６に示されるアミノ酸配列と少なくとも５０％（少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸を含み；ｉｉｉ）Ｔｅｒポリペプチドが、配列番号２０または配列番号５０に示されるアミノ酸配列と少なくとも５０％（少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸を含み；ｉｖ）ＢｋｔＢポリペプチドが、配列番号２１または配列番号４４に示されるアミノ酸配列と少なくとも５０％（少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸を含む、実施形態Ｉ−１８の遺伝子組換え宿主細胞。
【０６６３】
実施形態Ｉ−２１．ＮＡＤＨ酸化還元バランスを調節する１つまたは複数のポリペプチドをコードする異種核酸で遺伝子組換えされている、実施形態Ｉ−１の遺伝子組換え宿主細胞。
【０６６４】
実施形態Ｉ−２２．ｉ）ＨＭＧ−ＣｏＡシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；ｉｉ）３−ヒドロキシ−３−メチル−グルタリル−ＣｏＡレダクターゼ（ＨＭＧＲ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；ｉｉｉ）ＭＫポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；およびｉｖ）イソペンテニル二リン酸イソメラーゼ（ＩＤＩ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸の１つまたは複数で遺伝子組換えされている、実施形態Ｉ−１の遺伝子組換え宿主細胞。
【０６６５】
実施形態Ｉ−２３．宿主細胞が、異種ＩＤＩポリペプチドを過剰発現するように遺伝子組換えされている、実施形態Ｉ−２２の遺伝子組換え宿主細胞。
【０６６６】
実施形態Ｉ−２４．ＩＤＩポリペプチドが、配列番号５８に示されるアミノ酸配列と少なくとも５０％（少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸を含む、実施形態Ｉ−２３の遺伝子組換え宿主細胞。
【０６６７】
実施形態Ｉ−２５．切断型ＨＭＧＲ（ｔＨＭＧＲ）ポリペプチドを過剰発現するように遺伝子組換えされている、実施形態Ｉ−２２の遺伝子組換え宿主細胞。
【０６６８】
実施形態Ｉ−２６．ｔＨＭＧＲポリペプチドが、配列番号１７に示されるアミノ酸配列と少なくとも５０％（少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸を含む、実施形態Ｉ−２５の遺伝子組換え宿主細胞。
【０６６９】
実施形態Ｉ−２７．ＨＭＧＲポリペプチドが、配列番号２２に示されるアミノ酸配列と少なくとも５０％（少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸を含む、実施形態Ｉ−２２の遺伝子組換え宿主細胞。
【０６７０】
実施形態Ｉ−２８．ＨＭＧＳポリペプチドが、配列番号２３に示されるＭｖａＳポリペプチドアミノ酸配列と少なくとも５０％（少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸を含む、またはＨＭＧＳポリペプチドが、配列番号２４に示されるＥＲＧ１３ポリペプチドアミノ酸配列と少なくとも５０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸を含む、実施形態Ｉ−２２の遺伝子組換え宿主細胞。
【０６７１】
実施形態Ｉ−２９．ＭＫポリペプチドが、配列番号６４に示されるＥＲＧ１２ポリペプチドアミノ酸配列と少なくとも５０％（少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸を含む、実施形態Ｉ−２２の遺伝子組換え宿主細胞。
【０６７２】
実施形態Ｉ−３０．アセチル−ＣｏＡの２つの分子を縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成する１つまたは複数のポリペプチドをコードする異種核酸で遺伝子組換えされている、実施形態Ｉ−１の遺伝子組換え宿主細胞。
【０６７３】
実施形態Ｉ−３１．アセチル−ＣｏＡの２つの分子を縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドがアセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドである、実施形態Ｉ−３０の遺伝子組換え宿主細胞。
【０６７４】
実施形態Ｉ−３２．アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドが、配列番号２５に示されるアミノ酸配列と少なくとも５０％（少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸を含む、実施形態Ｉ−３１の遺伝子組換え宿主細胞。
【０６７５】
実施形態Ｉ−３３．アセチル−ＣｏＡの１つの分子とマロニル−ＣｏＡの１つの分子を縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成する１つまたは複数のポリペプチドをコードする異種核酸で遺伝子組換えされている、実施形態Ｉ−１の遺伝子組換え宿主細胞。
【０６７６】
実施形態Ｉ−３４．１つまたは複数の異種核酸の少なくとも１つが宿主細胞の染色体に組み込まれている、実施形態Ｉ−１からＩ−３３のいずれか１つの遺伝子組換え宿主細胞。
【０６７７】
実施形態Ｉ−３５．１つまたは複数の異種核酸の少なくとも１つが染色体外に維持されている、実施形態Ｉ−１からＩ−３３のいずれか１つの遺伝子組換え宿主細胞。
【０６７８】
実施形態Ｉ−３６．１つまたは複数の異種核酸の２つ以上が単一発現ベクター中に存在する、実施形態Ｉ−１からＩ−３３のいずれか１つの遺伝子組換え宿主細胞。
【０６７９】
実施形態Ｉ−３７．カンナビノイド化合物がカンナビゲロール酸である、実施形態Ｉ−１からＩ−３６のいずれか１つの遺伝子組換え宿主細胞。
【０６８０】
実施形態Ｉ−３８．Δ９−ＴＨＣＡシンターゼポリペプチドをコードする異種核酸で遺伝子組換えされている、実施形態Ｉ−１の遺伝子組換え宿主細胞。
【０６８１】
実施形態Ｉ−３９．ＴＨＣＡシンターゼポリペプチドが、配列番号１４または配列番号１５と少なくとも５０％（少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸を含む、実施形態Ｉ−３８の遺伝子組換え宿主細胞。
【０６８２】
実施形態Ｉ−４０．ＣＢＤＡシンターゼポリペプチドをコードする異種核酸で遺伝子組換えされている、実施形態Ｉ−１の遺伝子組換え宿主細胞。
【０６８３】
実施形態Ｉ−４１．ＣＢＤＡシンターゼポリペプチドが、配列番号８８または配列番号１６と少なくとも５０％（少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸を含む、実施形態Ｉ−４０の遺伝子組換え宿主細胞。
【０６８４】
実施形態Ｉ−４２．異種核酸の少なくとも１つが誘導性プロモーターと作動可能に連結している、実施形態Ｉ−１からＩ−４１のいずれか１つの遺伝子組換え宿主細胞。
【０６８５】
実施形態Ｉ−４３．異種核酸の少なくとも１つが構成的プロモーターと作動可能に連結している、実施形態Ｉ−１からＩ−４１のいずれか１つの遺伝子組換え宿主細胞。
【０６８６】
実施形態Ｉ−４４．カンナビノイド化合物がカンナビクロメン酸、カンナビゲロール酸、Δ９−テトラヒドロカンナビノール酸、カンナビジオール酸、Δ９−テトラヒドロカンナビノール、カンナビジオールまたはカンナビクロメンである、実施形態Ｉ−１の遺伝子組換え宿主細胞。
【０６８７】
実施形態Ｉ−４５．宿主細胞でカンナビノイド化合物またはカンナビノイド前駆体を合成する方法であって、ａ）実施形態Ｉ−１からＩ−４０のいずれか１つの宿主細胞を適切な培地で培養するステップと；ｂ）産生されたカンナビノイド化合物またはカンナビノイド前駆体を回収するステップとを含む方法。
【０６８８】
実施形態Ｉ−４６．培地が発酵性糖を含む、実施形態Ｉ−４５の方法。
【０６８９】
実施形態Ｉ−４７．培地が前処理されたセルロース供給原料を含む、実施形態Ｉ−４５の方法。
【０６９０】
実施形態Ｉ−４８．オリベトール酸誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞であって、ａ）アシル活性化酵素（ＡＡＥ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；およびｂ）ＴＫＳ／ＯＡＣ融合ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている遺伝子組換え宿主細胞。
【０６９１】
実施形態Ｉ−４９．ＡＡＥポリペプチドが、配列番号９０または配列番号９１に示されるＡＡＥアミノ酸配列と少なくとも５０％（少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態Ｉ−４８の遺伝子組換え宿主細胞。
【０６９２】
実施形態Ｉ−５０．カンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞であって、ａ）アシル活性化酵素（ＡＡＥ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；ｂ）ＴＫＳ／ＯＡＣ融合ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；およびｃ）ＧＯＴポリペプチドまたはＮｐｈＢポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている遺伝子組換え宿主細胞。
【０６９３】
実施形態Ｉ−５１．ＴＨＣＡＳポリペプチドをコードする異種核酸で遺伝子組換えされている、実施形態Ｉ−５０の遺伝子組換え宿主細胞。
【０６９４】
実施形態Ｉ−５２．ＣＢＤＡＳポリペプチドをコードする異種核酸で遺伝子組換えされている、実施形態Ｉ−５０の遺伝子組換え宿主細胞。
【０６９５】
実施形態Ｉ−５３．オリベトール酸誘導体を産生する方法であって、実施形態Ｉ−４８または実施形態Ｉ−４９の遺伝子組換え宿主細胞を、カルボン酸を含む培養培地で培養するステップを含む方法。
【０６９６】
実施形態Ｉ−５４．カンナビノイド誘導体を産生する方法であって、実施形態Ｉ−５０からＩ−５２のいずれか１つの遺伝子組換え宿主細胞を、カルボン酸を含む培養培地で培養するステップを含む方法。
【０６９７】
本開示のいくつかの実施形態は、実施形態ＩＩのものである：
【０６９８】
実施形態ＩＩ−１．カンナビノイド化合物、カンナビノイド誘導体またはカンナビノイド前駆体を産生する遺伝子組換え宿主細胞であって、ａ）ヘキサノイル−ＣｏＡまたはヘキサノイル−ＣｏＡの誘導体を生成する１つまたは複数のポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；ｂ）ゲラニルピロリン酸を生成する１つまたは複数のポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；ｃ）マロニル−ＣｏＡを生成する１つまたは複数のポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；ｄ）ヘキサノイル−ＣｏＡまたはその誘導体およびマロニル−ＣｏＡをオリベトール酸またはオリベトール酸の誘導体に変換するＴＫＳポリペプチドおよびＯＡＣポリペプチド、または融合ＴＫＳおよびＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；ｅ）ゲラニルピロリン酸：オリベトール酸ゲラニルトランスフェラーゼ（ＧＯＴ）ポリペプチドまたはＮｐｈＢポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；およびｆ）カンナビノイドシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされており、遺伝子組換え宿主細胞の適切な培地での培養が、回収可能な量のカンナビノイド化合物、カンナビノイド誘導体またはカンナビノイド前駆体の合成を提供する遺伝子組換え宿主細胞。
【０６９９】
実施形態ＩＩ−２．宿主細胞が真核細胞である、実施形態ＩＩ−１の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７００】
実施形態ＩＩ−３．宿主細胞が酵母細胞である、実施形態ＩＩ−２の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７０１】
実施形態ＩＩ−４．宿主細胞がサッカロミセス・セレビシエである、実施形態ＩＩ−３の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７０２】
実施形態ＩＩ−５．宿主細胞がサッカロミセス・セレビシエのプロテアーゼ欠損株である、実施形態ＩＩ−４の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７０３】
実施形態ＩＩ−６．宿主細胞が植物細胞である、実施形態ＩＩ−２の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７０４】
実施形態ＩＩ−７．宿主細胞が原核細胞である、実施形態ＩＩ−１の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７０５】
実施形態ＩＩ−８．ヘキサノイル−ＣｏＡまたはヘキサノイル−ＣｏＡ誘導体を生成する１つまたは複数のポリペプチドが、ヘキサノイル−ＣｏＡシンテターゼ（ＨＣＳ）ポリペプチドであり、培地がヘキサノエートを含む、実施形態ＩＩ−１の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７０６】
実施形態ＩＩ−９．ＨＣＳポリペプチドが、配列番号１、配列番号２、配列番号３または配列番号４に示されるアミノ酸配列と少なくとも５０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸を含む、実施形態ＩＩ−８の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７０７】
実施形態ＩＩ−１０．ゲラニルピロリン酸を生成する１つまたは複数のポリペプチドが、ゲラニルピロリン酸シンテターゼ（ＧＰＰＳ）ポリペプチドを含む、実施形態ＩＩ−１の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７０８】
実施形態ＩＩ−１１．ＧＰＰＳポリペプチドが、配列番号５、配列番号６、配列番号７または配列番号８に示されるアミノ酸配列の１つと少なくとも５０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸を含む、実施形態ＩＩ−１１の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７０９】
実施形態ＩＩ−１２．ＧＰＰＳポリペプチドが、内因性ＧＰＰＳポリペプチドがファルネシルピロリン酸シンテターゼ（ＦＰＰＳ）ポリペプチドとして機能する能力を低下させるドミナントネガティブ変異体である、実施形態ＩＩ−１０の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７１０】
実施形態ＩＩ−１３．ＧＰＰＳポリペプチドがＫ１９７Ｇアミノ酸置換を含む、実施形態ＩＩ−１０の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７１１】
実施形態ＩＩ−１４．ＧＰＰＳポリペプチドが、ＧＰＰＳ大サブユニットポリペプチドおよびＧＰＰＳ小サブユニットポリペプチドを含むヘテロ二量体タンパク質、またはホモ二量体もしくは単量体ＧＰＰＳポリペプチドである、実施形態ＩＩ−１０の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７１２】
実施形態ＩＩ−１５．マロニル−ＣｏＡを生成する１つまたは複数のポリペプチド、がアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ−１（ＡＣＣ１）ポリペプチドを含む、実施形態ＩＩ−１の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７１３】
実施形態ＩＩ−１６．ＡＣＣ１ポリペプチドが、配列番号９に示されるアミノ酸配列と少なくとも５０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸を含む、実施形態ＩＩ−１５の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７１４】
実施形態ＩＩ−１７．ヘキサノイル−ＣｏＡを生成する１つまたは複数のポリペプチドが、ＭＣＴ１ポリペプチド、ＰａａＨ１ポリペプチド、Ｃｒｔポリペプチド、ＴｅｒポリペプチドおよびＢｋｔＢポリペプチドを含む、実施形態ＩＩ−１の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７１５】
実施形態ＩＩ−１８．ヘキサノイル−ＣｏＡを生成する１つまたは複数のポリペプチドが、ＭＣＴ１ポリペプチド、ＰｈａＢポリペプチド、ＰｈａＪポリペプチド、ＴｅｒポリペプチドおよびＢｋｔＢポリペプチドを含む、実施形態ＩＩ−１の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７１６】
実施形態ＩＩ−１９  ｉ）ＰａａＨ１ポリペプチドが、配列番号１８または配列番号４６に示されるアミノ酸配列と少なくとも５０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸を含み；ｉｉ）Ｃｒｔポリペプチドが、配列番号１９または配列番号４８に示されるアミノ酸配列と少なくとも５０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸を含み；ｉｉｉ）Ｔｅｒポリペプチドが、配列番号２０または配列番号５０に示されるアミノ酸配列と少なくとも５０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸を含み；ｉｖ）ＢｋｔＢポリペプチドが、配列番号２１または配列番号４４に示されるアミノ酸配列と少なくとも５０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸を含む、実施形態ＩＩ−１７の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７１７】
実施形態ＩＩ−２０．ｉ）ＰｈａＢポリペプチドが、配列番号９４に示されるアミノ酸配列と少なくとも５０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸を含み；ｉｉ）ＰｈａＪポリペプチドが、配列番号９６に示されるアミノ酸配列と少なくとも５０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸を含み；ｉｉｉ）Ｔｅｒポリペプチドが、配列番号２０または配列番号５０に示されるアミノ酸配列と少なくとも５０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸を含み；ｉｖ）ＢｋｔＢポリペプチドが、配列番号２１または配列番号４４に示されるアミノ酸配列と少なくとも５０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸を含む、実施形態ＩＩ−１８の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７１８】
実施形態ＩＩ−２１．ＮＡＤＨレドックスバランスを調節する１つまたは複数のポリペプチドをコードする異種核酸で遺伝子組換えされている、実施形態ＩＩ−１の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７１９】
実施形態ＩＩ−２２．ｉ）ＨＭＧ−ＣｏＡシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；ｉｉ）３−ヒドロキシ−３−メチル−グルタリル−ＣｏＡレダクターゼ（ＨＭＧＲ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；ｉｉｉ）ＭＫポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；およびｉｖ）イソペンテニル二リン酸イソメラーゼ（ＩＤＩ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸の１つまたは複数で遺伝子組換えされている、実施形態ＩＩ−１の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７２０】
実施形態ＩＩ−２３．宿主細胞が、異種ＩＤＩポリペプチドを過剰発現するように遺伝子組換えされている、実施形態ＩＩ−２２の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７２１】
実施形態ＩＩ−２４．ＩＤＩポリペプチドが、配列番号５８に示されるアミノ酸配列と少なくとも５０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸を含む、実施形態ＩＩ−２３の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７２２】
実施形態ＩＩ−２５．切断型ＨＭＧＲ（ｔＨＭＧＲ）ポリペプチドを過剰発現するように遺伝子組換えされている、実施形態ＩＩ−２２の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７２３】
実施形態ＩＩ−２６．ｔＨＭＧＲポリペプチドが、配列番号１７に示されるアミノ酸配列と少なくとも５０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸を含む、実施形態ＩＩ−２５の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７２４】
実施形態ＩＩ−２７．ＨＭＧＲポリペプチドが、配列番号２２に示されるアミノ酸配列と少なくとも５０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸を含む、実施形態ＩＩ−２２の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７２５】
実施形態ＩＩ−２８．ＨＭＧＳポリペプチドが、配列番号２３に示されるＭｖａＳポリペプチドアミノ酸配列と少なくとも５０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸を含む、またはＨＭＧＳポリペプチドが、配列番号２４に示されるＥＲＧ１３ポリペプチドアミノ酸配列と少なくとも５０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸を含む、実施形態ＩＩ−２２の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７２６】
実施形態ＩＩ−２９．ＭＫポリペプチドが、配列番号６４に示されるＥＲＧ１２ポリペプチドアミノ酸配列と少なくとも５０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸を含む、実施形態ＩＩ−２２の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７２７】
実施形態ＩＩ−３０．アセチル−ＣｏＡの２つの分子を縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成する１つまたは複数のポリペプチドをコードする異種核酸で遺伝子組換えされている、実施形態ＩＩ−１の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７２８】
実施形態ＩＩ−３１．アセチル−ＣｏＡの２つの分子を縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドがアセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドである、実施形態ＩＩ−３０の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７２９】
実施形態ＩＩ−３２．アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドが、配列番号２５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態ＩＩ−３１の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７３０】
実施形態ＩＩ−３３．アセチル−ＣｏＡの１つの分子とマロニル−ＣｏＡの１つの分子を縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成する１つまたは複数のポリペプチドをコードする異種核酸で遺伝子組換えされている、実施形態ＩＩ−１の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７３１】
実施形態ＩＩ−３４．１つまたは複数の異種核酸の少なくとも１つが宿主細胞の染色体に組み込まれている、実施形態ＩＩ−１からＩＩ−３３のいずれか１つの遺伝子組換え宿主細胞。
【０７３２】
実施形態ＩＩ−３５．１つまたは複数の異種核酸の少なくとも１つが染色体外に維持されている、実施形態ＩＩ−１からＩＩ−３３のいずれか１つの遺伝子組換え宿主細胞。
【０７３３】
実施形態ＩＩ−３６．１つまたは複数の異種核酸の２つ以上が単一発現ベクター中に存在する、実施形態ＩＩ−１からＩＩ−３３のいずれか１つの遺伝子組換え宿主細胞。
【０７３４】
実施形態ＩＩ−３７．カンナビノイド化合物がカンナビゲロール酸である、実施形態ＩＩ−１からＩＩ−３６のいずれか１つの遺伝子組換え宿主細胞。
【０７３５】
実施形態ＩＩ−３８．Δ９−ＴＨＣＡシンターゼポリペプチドをコードする異種核酸で遺伝子組換えされている、実施形態ＩＩ−１の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７３６】
実施形態ＩＩ−３９．ＴＨＣＡシンターゼポリペプチドが、配列番号１４または配列番号１５と少なくとも５０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸を含む、実施形態ＩＩ−３８の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７３７】
実施形態ＩＩ−４０．ＣＢＤＡシンターゼポリペプチドをコードする異種核酸で遺伝子組換えされている、実施形態ＩＩ−１の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７３８】
実施形態ＩＩ−４１．ＣＢＤＡシンターゼポリペプチドが、配列番号８８または配列番号１６と少なくとも５０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸を含む、実施形態ＩＩ−４０の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７３９】
実施形態ＩＩ−４２．異種核酸の少なくとも１つが誘導性プロモーターと作動可能に連結している、実施形態ＩＩ−１からＩＩ−４１のいずれか１つの遺伝子組換え宿主細胞。
【０７４０】
実施形態ＩＩ−４３．異種核酸の少なくとも１つが構成的プロモーターと作動可能に連結している、実施形態ＩＩ−１からＩＩ−４１のいずれか１つの遺伝子組換え宿主細胞。
【０７４１】
実施形態ＩＩ−４４．カンナビノイド化合物がカンナビクロメン酸、カンナビゲロール酸、Δ９−テトラヒドロカンナビノール酸、カンナビジオール酸、Δ９−テトラヒドロカンナビノール、カンナビジオールまたはカンナビクロメンである、実施形態ＩＩ−１の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７４２】
実施形態ＩＩ−４５．宿主細胞でカンナビノイド化合物またはカンナビノイド前駆体を合成する方法であって、ａ）実施形態ＩＩ−１からＩＩ−４０のいずれか１つの宿主細胞を適切な培地で培養するステップと；ｂ）産生されたカンナビノイド化合物またはカンナビノイド前駆体を回収するステップとを含む方法。
【０７４３】
実施形態ＩＩ−４６．培地が発酵性糖を含む、実施形態ＩＩ−４５の方法。
【０７４４】
実施形態ＩＩ−４７．培地が前処理されたセルロース供給原料を含む、実施形態ＩＩ−４５の方法。
【０７４５】
実施形態ＩＩ−４８．オリベトール酸誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞であって、ａ）アシル活性化酵素（ＡＡＥ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；およびｂ）ＴＫＳ／ＯＡＣ融合ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている遺伝子組換え宿主細胞。
【０７４６】
実施形態ＩＩ−４９．ＡＡＥポリペプチドが、配列番号９０または配列番号９１に示されるＡＡＥアミノ酸配列と少なくとも５０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態ＩＩ−４８の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７４７】
実施形態ＩＩ−５０．カンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え宿主細胞であって、ａ）アシル活性化酵素（ＡＡＥ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；ｂ）ＴＫＳ／ＯＡＣ融合ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；およびｃ）ＧＯＴポリペプチドまたはＮｐｈＢポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている遺伝子組換え宿主細胞。
【０７４８】
実施形態ＩＩ−５１．ＴＨＣＡＳポリペプチドをコードする異種核酸で遺伝子組換えされている、実施形態ＩＩ−５０の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７４９】
実施形態ＩＩ−５２．ＣＢＤＡＳポリペプチドをコードする異種核酸で遺伝子組換えされている、実施形態ＩＩ−５０の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７５０】
実施形態ＩＩ−５３．オリベトール酸誘導体を産生する方法であって、実施形態ＩＩ−４８またはＩＩ−４９の遺伝子組換え宿主細胞を、カルボン酸を含む培養培地で培養するステップを含む方法。
【０７５１】
実施形態ＩＩ−５４．カンナビノイド誘導体を産生する方法であって、実施形態ＩＩ−５０からＩＩ−５２のいずれか１つの遺伝子組換え宿主細胞を、カルボン酸を含む培養培地で培養するステップを含む方法。
【０７５２】
実施形態ＩＩ−５５．ゲラニルピロリン酸オリベトール酸ゲラニルトランスフェラーゼ（ＧＯＴ）ポリペプチドまたはＮｐｈＢポリペプチドが、それぞれ本明細書に開示されるＣｓＰＴ４ｔポリペプチドまたはＮｐｈＢポリペプチド配列を含む、ＧＯＴポリペプチドのアミノ酸配列と少なくとも５０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸を含む、実施形態ＩＩ−１の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７５３】
本開示のいくつかの実施形態は、実施形態ＩＩＩのものである：
【０７５４】
実施形態ＩＩＩ−１．ゲラニルピロリン酸：オリベトール酸ゲラニルトランスフェラーゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生するための遺伝子組換え宿主細胞であって、ゲラニルピロリン酸：オリベトール酸ゲラニルトランスフェラーゼポリペプチドは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量のゲラニルピロリン酸およびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる、遺伝子組換え宿主細胞。
【０７５５】
実施形態ＩＩＩ−２．配列番号１１０と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むゲラニルピロリン酸：オリベトール酸ゲラニルトランスフェラーゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生するための遺伝子組換え宿主細胞。
【０７５６】
実施形態ＩＩＩ−３．配列番号１００と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むゲラニルピロリン酸：オリベトール酸ゲラニルトランスフェラーゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生するための遺伝子組換え宿主細胞。
【０７５７】
実施形態ＩＩＩ−４．テトラケチドシンターゼ（ＴＫＳ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸およびオリベトール酸（ＯＡＣ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、または融合ＴＫＳおよびＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含む、実施形態ＩＩＩ−１からＩＩＩ−３のいずれか１つの遺伝子組換え宿主細胞。
【０７５８】
実施形態ＩＩＩ−５．ＴＫＳポリペプチドが、配列番号１１または配列番号７６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態ＩＩＩ−４の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７５９】
実施形態ＩＩＩ−６．ＯＡＣポリペプチドが、配列番号１０または配列番号７８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態ＩＩＩ−４またはＩＩＩ−５の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７６０】
実施形態ＩＩＩ−７．以下の１つまたは複数をさらに含む、実施形態ＩＩＩ−１からＩＩＩ−６のいずれか１つの遺伝子組換え宿主細胞：ａ）アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；ｂ）ゲラニルピロリン酸を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；またはｃ）マロニル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸。
【０７６１】
実施形態ＩＩＩ−８．アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含み、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドがアシル活性化酵素（ＡＡＥ）ポリペプチドである、実施形態ＩＩＩ−７の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７６２】
実施形態ＩＩＩ−９．ＡＡＥポリペプチドが、配列番号９０と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態ＩＩＩ−８の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７６３】
実施形態ＩＩＩ−１０．ＡＡＥポリペプチドが、配列番号９２または配列番号１４９と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態ＩＩＩ−８の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７６４】
実施形態ＩＩＩ−１１．アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含み、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドが脂肪酸アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドである、実施形態ＩＩＩ−７の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７６５】
実施形態ＩＩＩ−１２．脂肪酸アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドが、配列番号１４５または配列番号１４７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態ＩＩＩ−１１の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７６６】
実施形態ＩＩＩ−１３．アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含み、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチドが脂肪酸アシル−ＣｏＡシンテターゼ（ＦＡＡ）ポリペプチドである、実施形態ＩＩＩ−７の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７６７】
実施形態ＩＩＩ−１４．ＦＡＡポリペプチドが、配列番号１６９、配列番号１９２、配列番号１９４、配列番号１９６、配列番号１９８または配列番号２００と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態ＩＩＩ−１３の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７６８】
実施形態ＩＩＩ−１５．ゲラニルピロリン酸を生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含み、ゲラニルピロリン酸を生成するポリペプチドがゲラニルピロリン酸シンテターゼ（ＧＰＰＳ）ポリペプチドである、実施形態ＩＩＩ−７からＩＩＩ−１４のいずれか１つの遺伝子組換え宿主細胞。
【０７６９】
実施形態ＩＩＩ−１６．ＧＰＰＳポリペプチドが、配列番号７、配列番号８または配列番号６０と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態ＩＩＩ−１５の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７７０】
実施形態ＩＩＩ−１７．マロニル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含み、マロニル−ＣｏＡを生成するポリペプチドがアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ−１（ＡＣＣ１）ポリペプチドである、実施形態ＩＩＩ−７からＩＩＩ−１６のいずれか１つの遺伝子組換え宿主細胞。
【０７７１】
実施形態ＩＩＩ−１８．ＡＣＣ１ポリペプチドが、配列番号９、配列番号９７または配列番号２０７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態ＩＩＩ−１７の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７７２】
実施形態ＩＩＩ−１９．以下の１つまたは複数をさらに含む、実施形態ＩＩＩ−１からＩＩＩ−１８のいずれか１つの遺伝子組換え宿主細胞：ａ）ＨＭＧ−ＣｏＡシンターゼ（ＨＭＧＳ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；ｂ）３−ヒドロキシ−３−メチル−グルタリル−ＣｏＡレダクターゼ（ＨＭＧＲ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；ｃ）メバロン酸キナーゼ（ＭＫ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；ｄ）ホスホメバロン酸キナーゼ（ＰＭＫ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；ｅ）メバロン酸二リン酸脱炭酸酵素（ＭＶＤ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；またはｆ）イソペンテニル二リン酸イソメラーゼ（ＩＤＩ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸。
【０７７３】
実施形態ＩＩＩ−２０．ＩＤＩポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含む、実施形態ＩＩＩ−１９の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７７４】
実施形態ＩＩＩ−２１．ＩＤＩポリペプチドが、配列番号５８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態ＩＩＩ−２０の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７７５】
実施形態ＩＩＩ−２２．ＨＭＧＲポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含む、実施形態ＩＩＩ−１９からＩＩＩ−２１のいずれか１つの遺伝子組換え宿主細胞。
【０７７６】
実施形態ＩＩＩ−２３．ＨＭＧＲポリペプチドが、配列番号２２と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態ＩＩＩ−２２の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７７７】
実施形態ＩＩＩ−２４．ＨＭＧＲポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含み、ＨＭＧＲポリペプチドが切断型ＨＭＧＲ（ｔＨＭＧＲ）ポリペプチドである、実施形態ＩＩＩ−１９からＩＩＩ−２１のいずれか１つの遺伝子組換え宿主細胞。
【０７７８】
実施形態ＩＩＩ−２５．ｔＨＭＧＲポリペプチドが、配列番号１７、配列番号５２、配列番号１１３または配列番号２０８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態ＩＩＩ−２４の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７７９】
実施形態ＩＩＩ−２６．ＨＭＧＳポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含む、実施形態ＩＩＩ−１９からＩＩＩ−２５のいずれか１つの遺伝子組換え宿主細胞。
【０７８０】
実施形態ＩＩＩ−２７．ＨＭＧＳポリペプチドが、配列番号２３、配列番号２４または配列番号１１５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態ＩＩＩ−２６の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７８１】
実施形態ＩＩＩ−２８．ＭＫポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含む、実施形態ＩＩＩ−１９からＩＩＩ−２７のいずれか１つの遺伝子組換え宿主細胞。
【０７８２】
実施形態ＩＩＩ−２９．ＭＫポリペプチドが、配列番号６４と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態ＩＩＩ−２８の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７８３】
実施形態ＩＩＩ−３０．ＰＭＫポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含む、実施形態ＩＩＩ−１９からＩＩＩ−２９のいずれか１つの遺伝子組換え宿主細胞。
【０７８４】
実施形態ＩＩＩ−３１．ＰＭＫポリペプチドが、配列番号６２または配列番号２０５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態ＩＩＩ−３０の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７８５】
実施形態ＩＩＩ−３２．ＭＶＤポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含む、実施形態ＩＩＩ−１９からＩＩＩ−３１のいずれか１つの遺伝子組換え宿主細胞。
【０７８６】
実施形態ＩＩＩ−３３．ＭＶＤポリペプチドが、配列番号６６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態ＩＩＩ−３２の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７８７】
実施形態ＩＩＩ−３４．アセチル−ＣｏＡの２つの分子を縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含む、実施形態ＩＩＩ−１からＩＩＩ−３３のいずれか１つの遺伝子組換え宿主細胞。
【０７８８】
実施形態ＩＩＩ−３５．アセチル−ＣｏＡの２つの分子を縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドがアセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドである、実施形態ＩＩＩ−３４の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７８９】
実施形態ＩＩＩ−３６．アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドが、配列番号２５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態ＩＩＩ−３５の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７９０】
実施形態ＩＩＩ−３７．ピルビン酸デヒドロゲナーゼ複合体（ＰＤＣ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含む、実施形態ＩＩＩ−１からＩＩＩ−３６のいずれか１つの遺伝子組換え宿主細胞。
【０７９１】
実施形態ＩＩＩ−３８．ＰＤＣポリペプチドが、配列番号１１７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態ＩＩＩ−３７の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７９２】
実施形態ＩＩＩ−３９．真核細胞である、実施形態ＩＩＩ−１からＩＩＩ−３８のいずれか１つの遺伝子組換え宿主細胞。
【０７９３】
実施形態ＩＩＩ−４０．真核細胞が酵母細胞である、実施形態ＩＩＩ−３９の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７９４】
実施形態ＩＩＩ−４１．酵母細胞がサッカロミセス・セレビシエである、実施形態ＩＩＩ−４０の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７９５】
実施形態ＩＩＩ−４２．サッカロミセス・セレビシエがサッカロミセス・セレビシエのプロテアーゼ欠損株である、実施形態ＩＩＩ−４１の遺伝子組換え宿主細胞。
【０７９６】
実施形態ＩＩＩ−４３．植物細胞である、実施形態ＩＩＩ−１からＩＩＩ−３９のいずれか１つの遺伝子組換え宿主細胞。
【０７９７】
実施形態ＩＩＩ−４４．原核細胞である、実施形態ＩＩＩ−１からＩＩＩ−３８のいずれか１つの遺伝子組換え宿主細胞。
【０７９８】
実施形態ＩＩＩ−４５．１つまたは複数の異種核酸の少なくとも１つが遺伝子組換え宿主細胞の染色体に組み込まれている、実施形態ＩＩＩ−１からＩＩＩ−４４のいずれか１つの遺伝子組換え宿主細胞。
【０７９９】
実施形態ＩＩＩ−４６．１つまたは複数の異種核酸の少なくとも１つが染色体外に維持されている、実施形態ＩＩＩ−１からＩＩＩ−４４のいずれか１つの遺伝子組換え宿主細胞。
【０８００】
実施形態ＩＩＩ−４７．１つまたは複数の異種核酸の２つ以上が単一発現ベクター中に存在する、実施形態ＩＩＩ−１からＩＩＩ−４４のいずれか１つの遺伝子組換え宿主細胞。
【０８０１】
実施形態ＩＩＩ−４８．異種核酸の少なくとも１つが誘導性プロモーターと作動可能に連結している、実施形態ＩＩＩ−１からＩＩＩ−４４のいずれか１つの遺伝子組換え宿主細胞。
【０８０２】
実施形態ＩＩＩ−４９．異種核酸の少なくとも１つが構成的プロモーターと作動可能に連結している、実施形態ＩＩＩ−１からＩＩＩ−４４のいずれか１つの遺伝子組換え宿主細胞。
【０８０３】
実施形態ＩＩＩ−５０．遺伝子組換え宿主細胞の適切な培地での培養が、同様の条件下で培養した非遺伝子組換え宿主細胞と比較して増加した量のカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体の合成を提供する、実施形態ＩＩＩ−１からＩＩＩ−４９のいずれか１つの遺伝子組換え宿主細胞。
【０８０４】
実施形態ＩＩＩ−５１．カンナビノイドシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含む、実施形態ＩＩＩ−１からＩＩＩ−５０のいずれか１つの遺伝子組換え宿主細胞。
【０８０５】
実施形態ＩＩＩ−５２．カンナビノイドシンターゼポリペプチドがテトラヒドロカンナビノール酸（ＴＨＣＡ）シンターゼポリペプチドである、実施形態ＩＩＩ−５１の遺伝子組換え宿主細胞。
【０８０６】
実施形態ＩＩＩ−５３．ＴＨＣＡシンターゼポリペプチドが、配列番号１４、配列番号８６、配列番号１０４、配列番号１５３または配列番号１５５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態ＩＩＩ−５２の遺伝子組換え宿主細胞。
【０８０７】
実施形態ＩＩＩ−５４．カンナビノイドシンターゼポリペプチドがカンナビジオール酸（ＣＢＤＡ）シンターゼポリペプチドである、実施形態ＩＩＩ−５１の遺伝子組換え宿主細胞。
【０８０８】
実施形態ＩＩＩ−５５．ＣＢＤＡシンターゼポリペプチドが、配列番号８８または配列番号１５１と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態ＩＩＩ−５４の遺伝子組換え宿主細胞。
【０８０９】
実施形態ＩＩＩ−５６．カンナビノイドがカンナビゲロール酸、カンナビゲロール、Δ９−テトラヒドロカンナビノール酸、Δ９−テトラヒドロカンナビノール、Δ８−テトラヒドロカンナビノール酸、Δ８−テトラヒドロカンナビノール、カンナビジオール酸、カンナビジオール、カンナビクロメン酸、カンナビクロメン、カンナビノール酸、カンナビノール、カンナビジバリン酸、カンナビジバリン、テトラヒドロカンナビバリン酸、テトラヒドロカンナビバリン、カンナビクロメバリン酸、カンナビクロメバリン、カンナビゲロバリン酸、カンナビゲロバリン、カンナビシクロール酸、カンナビシクロール、カンナビエルソイン酸、カンナビエルソイン、カンナビシトラン酸またはカンナビシトランである、実施形態ＩＩＩ−１からＩＩＩ−５５のいずれか１つの遺伝子組換え宿主細胞。
【０８１０】
実施形態ＩＩＩ−５７．カンナビノイドがカンナビゲロール酸である、実施形態ＩＩＩ−５６の遺伝子組換え宿主細胞。
【０８１１】
実施形態ＩＩＩ−５８．遺伝子組換え宿主細胞でカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する方法であって、ａ）実施形態ＩＩＩ−１からＩＩＩ−５７のいずれか１つの遺伝子組換え宿主細胞を適切な培地で培養するステップと；ｂ）産生されたカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を回収するステップとを含む方法。
【０８１２】
実施形態ＩＩＩ−５９．カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する方法であって、ａ）実施形態ＩＩＩ−１からＩＩＩ−５７のいずれか１つの遺伝子組換え宿主細胞を、カルボン酸を含む適切な培地で培養するステップと；ｂ）産生されたカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を回収するステップとを含む方法。
【０８１３】
実施形態ＩＩＩ−６０．カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する方法であって、ａ）実施形態ＩＩＩ−１からＩＩＩ−５７のいずれか１つの遺伝子組換え宿主細胞を、オリベトール酸またはオリベトール酸誘導体を含む適切な培地で培養するステップと；ｂ）産生されたカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を回収するステップとを含む方法。
【０８１４】
実施形態ＩＩＩ−６１．遺伝子組換え宿主細胞でカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する方法であって、ａ）配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量のゲラニルピロリン酸およびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができるゲラニルピロリン酸：オリベトール酸ゲラニルトランスフェラーゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む遺伝子組換え宿主細胞を適切な培地で培養するステップと；ｂ）産生されたカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を回収するステップとを含む方法。
【０８１５】
実施形態ＩＩＩ−６２．遺伝子組換え宿主細胞でカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する方法であって、ａ）配列番号１１０と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むゲラニルピロリン酸：オリベトール酸ゲラニルトランスフェラーゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む遺伝子組換え宿主細胞を適切な培地で培養するステップと；ｂ）産生されたカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を回収するステップとを含む方法。
【０８１６】
実施形態ＩＩＩ−６３．遺伝子組換え宿主細胞でカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する方法であって、ａ）配列番号１００と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むゲラニルピロリン酸：オリベトール酸ゲラニルトランスフェラーゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む遺伝子組換え宿主細胞を適切な培地で培養するステップと；ｂ）産生されたカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を回収するステップとを含む方法。
【０８１７】
実施形態ＩＩＩ−６４．適切な培地が発酵性糖を含む、実施形態ＩＩＩ−５８からＩＩＩ−６３のいずれか１つの方法。
【０８１８】
実施形態ＩＩＩ−６５．適切な培地が前処理されたセルロース供給原料を含む、実施形態ＩＩＩ−５８からＩＩＩ−６３のいずれか１つの方法。
【０８１９】
実施形態ＩＩＩ−６６．適切な培地が非発酵性炭素源を含む、実施形態ＩＩＩ−５８からＩＩＩ−６３のいずれか１つの方法。
【０８２０】
実施形態ＩＩＩ−６７．非発酵性炭素源がエタノールを含む、実施形態ＩＩＩ−６６の方法。
【０８２１】
実施形態ＩＩＩ−６８．カンナビノイドがカンナビゲロール酸、カンナビゲロール、Δ９−テトラヒドロカンナビノール酸、Δ９−テトラヒドロカンナビノール、Δ８−テトラヒドロカンナビノール酸、Δ８−テトラヒドロカンナビノール、カンナビジオール酸、カンナビジオール、カンナビクロメン酸、カンナビクロメン、カンナビノール酸、カンナビノール、カンナビジバリン酸、カンナビジバリン、テトラヒドロカンナビバリン酸、テトラヒドロカンナビバリン、カンナビクロメバリン酸、カンナビクロメバリン、カンナビゲロバリン酸、カンナビゲロバリン、カンナビシクロール酸、カンナビシクロール、カンナビエルソイン酸、カンナビエルソイン、カンナビシトラン酸またはカンナビシトランである、実施形態ＩＩＩ−５８からＩＩＩ−６７のいずれか１つの方法。
【０８２２】
実施形態ＩＩＩ−６９．配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量のゲラニルピロリン酸およびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができる単離または精製ゲラニルピロリン酸：オリベトール酸ゲラニルトランスフェラーゼポリペプチド。
【０８２３】
実施形態ＩＩＩ−７０．配列番号１１０と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む単離または精製ポリペプチド。
【０８２４】
実施形態ＩＩＩ−７１．配列番号１００と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む単離または精製ポリペプチド。
【０８２５】
実施形態ＩＩＩ−７２．配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量のゲラニルピロリン酸およびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができるゲラニルピロリン酸：オリベトール酸ゲラニルトランスフェラーゼポリペプチドをコードする単離または精製核酸。
【０８２６】
実施形態ＩＩＩ−７３．配列番号１１０と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする単離または精製核酸。
【０８２７】
実施形態ＩＩＩ−７４．配列番号１００と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする単離または精製核酸。
【０８２８】
実施形態ＩＩＩ−７５．配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量のゲラニルピロリン酸およびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができるゲラニルピロリン酸：オリベトール酸ゲラニルトランスフェラーゼポリペプチドをコードする核酸を含むベクター。
【０８２９】
実施形態ＩＩＩ−７６．配列番号１１０と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする核酸を含むベクター。
【０８３０】
実施形態ＩＩＩ−７７．配列番号１００と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする核酸を含むベクター。
【０８３１】
実施形態ＩＩＩ−７８．カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生するための遺伝子組換え宿主細胞を作製する方法であって、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量のゲラニルピロリン酸およびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができるゲラニルピロリン酸：オリベトール酸ゲラニルトランスフェラーゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を遺伝子組換え宿主細胞に導入するステップを含む方法。
【０８３２】
実施形態ＩＩＩ−７９．カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生するための遺伝子組換え宿主細胞を作製する方法であって、配列番号１１０と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むゲラニルピロリン酸：オリベトール酸ゲラニルトランスフェラーゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を遺伝子組換え宿主細胞に導入するステップを含む方法。
【０８３３】
実施形態ＩＩＩ−８０．カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生するための遺伝子組換え宿主細胞を作製する方法であって、配列番号１００と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むゲラニルピロリン酸：オリベトール酸ゲラニルトランスフェラーゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を遺伝子組換え宿主細胞に導入するステップを含む方法。
【０８３４】
実施形態ＩＩＩ−８１．カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生するための遺伝子組換え宿主細胞を作製する方法であって、実施形態ＩＩＩ−７５からＩＩＩ−７７のいずれか１つのベクターを遺伝子組換え宿主細胞に導入するステップを含む方法。
【０８３５】
本明細書に開示されるアミノ酸およびヌクレオチド配列を表１に提供する。属および／または種が注記されている場合、配列はその特定の属および／または種のみに限定されると解釈されるべきではなく、前記配列を発現する他の属および／または種も含む。
【表２】
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【実施例】
【０８３６】
以下の実施例は、当業者に本開示を作製および使用する方法の完全な開示および説明を提供するために提示されており、発明者らが開示とみなすものの範囲を限定することを意図しておらず、また以下の実験が行われる全てのまたは唯一の実験であることを表すことも意図していない。使用される数値（例えば、量、温度等）に関して正確性を確保するための努力がなされているが、いくつらの実験誤差および偏差を考慮すべきである。特に指示しない限り、部は重量部であり、分子量は重量平均分子量であり、温度は摂氏度であり、圧力は大気圧または大気圧に近い。標準的な略語が使用され得る、例えばｂｐ、（１または複数の）塩基対；ｋｂ、（１または複数の）キロベース；ｓまたはｓｅｃ、（１または複数の）秒；ｍｉｎ、（１または複数の）分；ｈまたはｈｒ、（１または複数の）時間；ａａ、（１または複数の）アミノ酸；ｋｂ、（１または複数の）キロベース；ｂｐ、（１または複数の）塩基対；ｎｔ、（１または複数の）ヌクレオチド；など。
【０８３７】
＜実施例の一般的な方法＞  酵母の形質転換方法：  本明細書に開示される１つまたは複数の異種核酸を含む各ＤＮＡ構築物（例えば、表１１に詳述される構築物）を、最適化された酢酸リチウム（ＬｉＡｃ）形質転換における標準的な分子生物学技術を用いてサッカロミセス・セレビシエ（ＣＥＮ．ＰＫ２）に組み込んだ。手短に言えば、細胞を振盪（２００ｒｐｍ）しながら３０°Ｃの酵母抽出ペプトンデキストロース（ＹＰＤ）培地で一晩増殖し、１００ｍＬ  ＹＰＤ中に０．１のＯＤ６００まで希釈し、０．６〜０．８のＯＤ６００まで増殖した。各形質転換について、５ｍＬの培養液を遠心分離によって収集し、５ｍＬの滅菌水で洗浄し、再び遠心沈殿し、１ｍＬの１００ｍＭ  ＬｉＡｃに再懸濁し、微量遠心管に移した。細胞を３０秒間遠心沈殿し（１３０００ｘｇ）、上清を除去し、細胞を２４０μＬの５０％ＰＥＧ、３６μＬの１Ｍ  ＬｉＡｃ、１０μＬの煮沸サケ精子ＤＮＡ、および７４μＬのドナーＤＮＡからなる形質転換ミックスに再懸濁した。４２°Ｃで４０分間の熱ショックの後、細胞をＹＰＤ培地で一晩回服した後、選択培地に蒔いた。ＤＮＡ組込みを、組込みに特異的なプライマーを用いたコロニーＰＣＲによって確認した。
【０８３８】
酵母の培養条件：  本明細書に開示される１つまたは複数の異種核酸を含むと予想されるＤＮＡアセンブリーを含むことが確認された酵母コロニー、すなわち遺伝子組換え宿主細胞を、３６０μＬのＹＰＤ（１０ｇ／Ｌ酵母エキス、２０ｇ／Ｌ  Ｂａｃｔｏペプトン、２０ｇ／Ｌデキストロース（グルコース））を含有する９６ウェルマイクロタイタープレートに選抜して入れ、通気性フィルムシールで密封した。細胞を、培養物が炭素枯渇に達するまで、高容量マイクロタイタープレートインキュベーターにより１０００ｒｐｍおよび湿度８０％で振盪して３０°Ｃで３日間培養した。増殖飽和培養物を、飽和培養液から１４．４μＬを採取し、３６０μＬの新鮮な培地で希釈して、ＹＰＧＡＬおよびオリベトール酸またはヘキサン酸、またはオリベトール酸誘導体またはヘキサン酸以外のカルボン酸を含有する新しいプレート（１０ｇ／Ｌ酵母エキス、２０ｇ／Ｌ  Ｂａｃｔｏペプトン、２０ｇ／Ｌガラクトース、１ｇ／Ｌグルコースおよび１ｍＭオリベトール酸または２ｍＭヘキサン酸、または１ｍＭのオリベトール誘導体または２ｍＭのヘキサン酸以外のカルボン酸）内で、通気性フィルムシールで密封して継代培養した。産生培地中の遺伝子組換え宿主細胞を、１０００ｒｐｍおよび湿度８０％の高容量マイクロタイタープレートシェーカーで３０℃でさらに３日間培養したのち、抽出および分析した。完了したら、１００μＬの全細胞ブロスを９００μＬのメタノールで希釈し、箔シールで密封し、１５００ｒｐｍで６０秒間振盪して、カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体を抽出した。振盪後、プレートを１０００ｘｇで６０秒間遠心分離して、いかなる固体も除去した。遠心分離後、１２μＬの上清を２２８μＬのメタノールを含有する新しいアッセイプレートに移し、箔シールで密封し、９００ｒｐｍで６０秒間振盪し、ＬＣ−ＭＳによって分析した。
【０８３９】
分析方法：  試料を、以下の勾配（移動相Ａ：０．１％ギ酸を含むＬＣ−ＭＳグレードの水；移動相Ｂ：０．１％ギ酸を含むＬＣ−ＭＳグレードのアセトニトリル）で、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｐｏｒｏｓｈｅｌｌ  １２０  Ｐｈｅｎｙｌ  Ｈｅｘｙｌ  ２．１ｘ５０ｍｍ、１．９μｍ分析カラムを使用してＬＣ−ＭＳ質量分析計（Ａｇｉｌｅｎｔ  ６４７０）によって分析した：
【表３】
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【０８４０】
質量分析計は、陰イオン多重反応モニタリングモードで操作した。各カンナビノイド、カンナビノイド前駆体、カンナビノイド誘導体またはカンナビノイド前駆体誘導体を、真正標準から決定される保持時間、および多重反応モニタリング（ＭＲＭ）トランジションによって同定した。
【表４】
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【０８４１】
回収および精製：  本開示の遺伝子組換え宿主細胞を含む培養物からの全細胞ブロスを、適切な有機溶媒で抽出して、カンナビノイド、カンナビノイド前駆体、カンナビノイド誘導体またはカンナビノイド前駆体誘導体を得る。適切な有機溶媒には、それだけに限らないが、ヘキサン、ヘプタン、酢酸エチル、石油エーテルおよびジエチルエーテル、クロロホルムおよび酢酸エチルが含まれる。ヘキサンなどの適切な有機溶媒を、本開示の遺伝子組換え宿主細胞を含む発酵からの全細胞ブロスに１０：１の比（１０部の全細胞ブロス−１部の有機溶媒）で添加し、３０分間撹拌する。有機画分を分離し、等量の酸性水（ｐＨ２．５）で２回抽出する。次いで、有機層を分離し、濃縮器（減圧下でのロータリーエバポレーターまたは薄膜蒸発器）で乾燥させて、粗カンナビノイド、カンナビノイド前駆体、カンナビノイド誘導体またはカンナビノイド前駆体誘導体結晶を得る。次いで、粗結晶を１５分間１０５℃に加熱し、引き続いて１４５℃で５５分間加熱して、粗カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を脱炭酸する。粗結晶産物を再溶解し、適切な溶媒（例えば、ｎ−ペンタン）で再結晶し、１μｍフィルタを通して濾過して不溶性物質を除去する。次いで、溶媒を、例えばロータリーエバポレーターによって除去して、純粋な結晶産物を得る。
【０８４２】
カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体のインビトロ酵素アッセイおよび無細胞産生
いくつかの実施形態では、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量のゲラニルピロリン酸およびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒するＧＯＴポリペプチドまたは配列番号１００もしくは配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％もしくは１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含むことが確認された、遺伝子組換え宿主細胞、例えば遺伝子組換え酵母細胞を、３６０μＬのＹＰＤ（１０ｇ／Ｌ  酵母抽出物、２０ｇ／Ｌ  Ｂａｃｔｏペプトン、２０ｇ／Ｌ  デキストロース（グルコース））を含有する９６ウェルマイクロタイタープレートで培養し、通気性フィルムシールで密封する。次いで、細胞を、培養物が炭素枯渇に達するまで、高容量マイクロタイタープレートインキュベーターにより１０００ｒｐｍおよび湿度８０％で振盪して３０°Ｃで３日間培養する。次いで、増殖飽和培養物を２００ｍＬのＹＰＧＡＬ培地内に０．２のＯＤ６００で継代し、３０°Ｃで２０時間振盪しながらインキュベートする。次いで、細胞を３０００ｘｇで４°Ｃで５分間の遠心分離によって収集する。次いで、収集した細胞を５０ｍＬバッファー（５０  ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、１  ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．１  Ｍ  ＫＣｌ、ｐＨ  ７．４、１２５単位のベンゾナーゼ）に再懸濁し、次いで、溶解する（Ｅｍｕｌｓｉｆｌｅｘ  Ｃ３、Ａｖｅｓｔｉｎ，  ＩＮＣ．、６０ｂａｒ、１０分）。遠心分離（１００００×ｇ、１０分、４°Ｃ）によって細胞片を除去する。次いで、その後、上清を超遠心分離（１５００００×ｇ、１時間、４°Ｃ、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｌ−９０Ｋ、ＴＩ−７０）にかける。次いで、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量のゲラニルピロリン酸およびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒するＧＯＴポリペプチドまたは配列番号１００もしくは配列番号１１０と少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドの得られた膜画分を、３．３ｍＬのバッファー（１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、ｐＨ８．０、１０％グリセロール）に再懸濁し、組織粉砕機で可溶化する。次いで、それぞれの膜調製物の０．０２％（ｖ／ｖ）を反応バッファー（５０  ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、１０  ｍＭ  ＭｇＣｌ２、ｐＨ  ８．５）および基質（５００μＭオリベトール酸、５００μＭＧＰＰ）に溶解し、総体積５０μＬにし、３０°Ｃで１時間インキュベートする。次いで、２反応体積の酢酸エチルを添加し、引き続いてボルテックスおよび遠心分離を行うことによって、アッセイを抽出する。有機層を３０分間蒸発させ、アセトニトリル／Ｈ２Ｏ／ギ酸（８０：２０：０．０５％）に再懸濁し、Ｕｌｔｒａｆｒｅｅ（登録商標）−ＭＣカラム（孔径０．２２μｍ、ＰＶＤＦ膜材料）で濾過する。次いで、カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体をＬＣ−ＭＳを介して検出する、および／または回収し、精製する。
【０８４３】
バイオリアクターでの酵母培養：  本明細書に開示される遺伝子組換え宿主細胞を含む単一酵母コロニーを、１２５ｍＬフラスコ中５０ｍＭコハク酸塩（ｐＨ５．０）および２％グルコースを含む１５ｍＬのＶｅｒｄｕｙｎ培地（元々はＶｅｒｄｕｙｎ  ｅｔ  ａｌ，  Ｙｅａｓｔ  ８（７）：５０１−１７に記載されている）において３０℃で、２００ｒｐｍで振盪しながら、ＯＤ６００が４〜９の間になるまで増殖させる。次いで、グリセロールを培養液に添加して２０％濃度にし、遺伝子組換え宿主細胞懸濁液の１ｍＬバイアルを−８０℃で保管する。遺伝子組換え宿主細胞の１〜２本のバイアルを解凍し、５０ｍＭコハク酸（ｐＨ５．０）および４％スクロースを含むＶｅｒｄｕｙｎ培地で２４時間増殖させ、次いで、同じ培地で０．１のＯＤ６００読み取り値で継代する。振盪しながら３０°Ｃで２４時間増殖させた後、６５ｍＬの培養液を使用して、ヘキサン酸（２ｍＭ）、ヘキサン酸以外のカルボン酸（２ｍＭ）、オリベトール酸（１ｍＭ）またはオリベトール酸誘導体（１ｍＭ）を補足した２０ｇ／Ｌガラクトースを含有する５８５ｍＬのＶｅｒｄｕｙｎ発酵培地を含む１．３Ｌ発酵槽（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ  ＤＡＳＧＩＰ  Ｂｉｏｒｅａｃｔｏｒ）に接種する。ポリ−α−オレフィンを抽出剤として発酵槽に添加してもよい。発酵槽を、ＮＨ４ＯＨを添加して３０°ＣおよびｐＨ５．０に維持する。初期バッチ段階では、発酵槽に１分当たり１体積当たり体積０．５の空気（ＶＶＭ）を通気し、３０％の溶存酸素を維持するために撹拌速度を勾配させる。最初の糖が消費された後、溶存酸素の上昇により、１リットル用量当たり１０ｇのガラクトースのパルスで、１時間当たり１リットル当たり１０ｇのガラクトースで、ガラクトース＋ヘキサン酸（１リットル当たり８００ｇのガラクトース＋１リットル当たり９．２８ｇのヘキサン酸）の供給が誘因される（あるいは、ヘキサン酸を本明細書に開示される遺伝子組換え宿主細胞に供給するよりも、オリベトール酸、オリベトール酸誘導体またはヘキサン酸以外のカルボン酸を遺伝子組換え宿主細胞に供給する）。
【０８４４】
パルス間では、供給量を１時間当たり１リットル当たり５ｇのガラクトースに低下させる。溶存酸素が１０％上昇したら、供給速度を１０ｇＬ−１時間−１で再開する。遺伝子組換え宿主細胞密度が増加するにつれて、溶存酸素を０％に到達させ、パルス線量を１リットル当たり５０ｇのガラクトースまで増加させる。酸素移動速度を、体積が増加するにつれて撹拌を調整することによって、１時間当たり１リットル当たり１００ｍＭのフルスケール条件を表す速度で維持する。供給速度を、高い供給速度と低い供給速度を交互に使用するアルゴリズムを使用して、需要を満たすように動的に調整する。低い供給速度の間に、遺伝子組換え宿主細胞はガラクトースおよびヘキサン酸、あるいは、オリベトール酸、オリベトール酸誘導体またはヘキサン酸以外のカルボン酸、および高い供給速度の間に蓄積された任意のオーバーフロー代謝産物を消費するはずである。溶存酸素の上昇は、高い供給速度の再開を誘因する。低い供給速度で費やされた時間の長さは、遺伝子組換え宿主細胞が以前の高い供給速度パルスで過剰または過少供給されている程度を反映している；次いで、この情報を監視および使用して、高い供給速度を上下に調整して、低い供給速度を規定範囲内に保つ。
【０８４５】
時間が経つにつれて、供給速度が、遺伝子組換え宿主細胞からの需要である糖およびヘキサン酸、あるいはオリベトール酸、オリベトール酸誘導体、またはヘキサン酸以外のカルボン酸と一致する。このアルゴリズムにより、カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体；バイオマス；およびＣＯ２以外の発酵産物の正味の蓄積が最小限に抑えられる。いくつかの実施形態では、プロセスが５〜１４日間続く。一定のこのような実施形態では、蓄積されたブロスを毎日除去し、バイオマスおよびカンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体またはカンナビノイド前駆体誘導体濃度について分析する。ＮＨ４Ｈ２ＰＯ４、微量金属およびビタミンの濃縮溶液を定期的に添加して、定常状態濃度を維持する。
【０８４６】
［実施例１］オリベトール酸またはその誘導体の合成：  カンナビノイド経路は、前駆体であるヘキサノイル−ＣｏＡ、マロニル−ＣｏＡおよびゲラニルピロリン酸を使用した４つの生合成ステップで構成される（図１、ボックス４）。サッカロミセス・セレビシエを高レベルのマロニル−ＣｏＡを産生するように前もって操作した。ゲラニルピロリン酸供給を増加させるために、図１、ボックス３に概説される操作戦略を行った。さらに、ＡＣＣ１ポリペプチドをコードする異種核酸を過剰発現させて、マロニル−ＣｏＡへのフラックスを増加させた。
【０８４７】
図１：糖またはヘキサノエートをカンナビノイドΔ９−ＴＨＣおよびＣＢＤに変換するための生合成経路を示す図。
【０８４８】
これまでに、サッカロミセス・セレビシエにおける前駆体ヘキサノイル−ＣｏＡの工学的生合成は記載されていない。図１に概説される、サッカロミセス・セレビシエにおけるヘキサノイル−ＣｏＡ生合成の戦略を考えた：経路１ａ）アサ由来のヘキサノイル−ＣｏＡシンテターゼポリペプチドが、ヘキサノエートをヘキサノイル−ＣｏＡに変換する（図１、ボックス１ａ）。アサのヘキサノイル−ＣｏＡシンテターゼポリペプチドをコードする異種核酸を、サッカロミセス・セレビシエに組み込んだ。得られた細胞にヘキサノエートを供給して、ヘキサノイル−ＣｏＡ供給を増加させた（図２）。
【０８４９】
図２：経路１ａおよびＴＫＳ／ＯＡＣポリペプチドを使用した細胞内オリベトール酸産生。  ＴＫＳポリペプチドをコードする異種核酸およびＯＡＣポリペプチドをコードする異種核酸を発現する酵母菌株ｙＷＬ００４、ならびにＴＫＳポリペプチドをコードする異種核酸、ＯＡＣポリペプチドをコードする異種核酸およびＨＣＳポリペプチドをコードする異種核酸を発現するｙＷＬ００９を、オリベトール酸産生のために、ＹＰＧ中、１ｍＭヘキサノエートの非存在下または存在下で増殖させた。ヘキサノエートの添加により、ｙＷＬ００４株のオリベトール酸産生が６倍増加し、内因性アシル−ＣｏＡリガーゼ活性を示した。ｙＷＬ００９株をもたらすヘキサノイル−ＣｏＡシンテターゼポリペプチドをコードする異種核酸の染色体組込みは、ヘキサノイル−ＣｏＡ供給の増加により、オリベトール酸産生のさらに２倍の増加を示す。
【０８５０】
発酵性糖からのヘキサノイル−ＣｏＡの生合成は、ヘキサノールの産生のために大腸菌で最適化された逆β酸化経路をコードする４つの酵素を含む経路１ｂを組み込むことによって増加した（図１、ボックス１ｂ）（Ｍａｃｈａｄｏ  ｅｔ  ａｌ．２０１２）。ＬＣ−ＭＳ分析により、オリベトール酸収率が操作された菌株ｙＷＬ００９とｙＷＬ００１３との間で類似であったので（図３）、この経路はサッカロミセス・セレビシエでも機能的であり、その活性は経路１ａに匹敵することが確認された。
【０８５１】
図３：経路１ａおよび１ｂを比較した細胞内オリベトール酸産生。  ＴＫＳポリペプチドをコードする異種核酸、ＯＡＣポリペプチドをコードする異種核酸およびＨＣＳポリペプチドをコードする異種核酸を発現する酵母菌株ｙＷＬ００９を、産生条件（１ｍＭのヘキサノエートを含むＹＰＧ）で増殖させ、非産生（ＹＰＤ）ならびに産生（ＹＰＧ）条件下で増殖させたＴＫＳポリペプチドをコードする異種核酸、ＯＡＣポリペプチドをコードする異種核酸およびヘキサノイル−ＣｏＡ供給経路１ｂをコードするｙＷＬ０１３と比較した。ヘキサノイル−ＣｏＡ経路の染色体組込みは、１ｍＭヘキサノエートを含むＹＰＧで増殖させた場合、ｙＷＬ００９株と同様のオリベトール酸産生レベルをもたらす。
【表５】
2020517293.tif 000072
【０８５２】
コドン最適化遺伝子を合成し、表３に列挙されるポリペプチドについてこの試験で使用した。
【表６】
2020517293.tif 000073
2020517293.tif 000074
【０８５３】
［実施例２］オリベトール酸もしくはその誘導体、またはカンナビノイドもしくはその誘導体の合成：  経路１ｂの複数のポリペプチドは、補因子としてＮＡＤＨが必要である。経路１ｂを通るフラックスを最大化するために、ＮＡＤＨ供給について競合する他の生合成経路を修飾する（図１、ボックス２）。１つの標的は、種々のアルコールデヒドロゲナーゼポリペプチドによって媒介されるエタノール経路であるが、グリセロール生合成経路などの、ＮＡＤＨを消費する他の経路も含まれ得る。
【０８５４】
ヘキサノイル−ＣｏＡに向けて考えられる別の経路を経路１ｃに記載する：アフラトキシン生合成遺伝子クラスター（反復Ｉ型ＰＫＳ）は、ヘキサノイル−ＣｏＡの産生のための脂肪酸シンターゼベースの機構（ＦａｓＡおよびＦａｓＢ）をコードする。いくつかの実施形態では、チオエステラーゼポリペプチドをコードする異種核酸およびＣ６耐性チオエステラーゼポリペプチドに類似のＣｏＡリガーゼポリペプチドをコードする異種核酸（ＢＭＣ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．２０１１  Ａｕｇ  １０；１２：４４．ｄｏｉ：１０．１１８６／１４７１−２０９１−１２−４４参照）およびＨＣＳポリペプチドをコードする異種核酸を発現させて、ヘキサノイル−ＡＣＰの放出を促進し、遊離ヘキサノエートをそのアシル−ＣｏＡ化合物に対して活性化する。さらに、種々のＩＩ型ＰＫＳ生合成経路（例えば、ベナスタチン、Ｒ１１２８）が、希少なヘキサノエートＰＫＳスターターユニットを提供および選択するために重要なＦａｂＨ様ＫＳＩＩＩ（例えば、ＢｅｎＱ、ＺｈｕＨ）、ＡＴおよびＡＣＰ成分を含んでいる。最後に、レベロマイシン生合成のＩ型ＰＫＳ経路は、脂肪酸アシル−ＣｏＡリガーゼＲｅｖＳポリペプチドおよびＦａｂＨ様ＫＡＳＩＩＩ成分ＲｅｖＲポリペプチドをコードしており、脂肪酸分解ならびにデノボ脂肪酸生合成を介してヘキサノイル−ＣｏＡを提供することが示唆されている。
【０８５５】
β酸化を介したヘキサノイル−ＣｏＡの競合的消費を回避するために、脂肪酸分解経路を、低下した活性を有するように操作する。あるいは、エネルギー源としての脂肪酸の競合を回避するために、オレイン酸の存在下で酵母を培養する。
【０８５６】
ポリペプチドＰａａＨ１、Ｃｒｔ、ＴｅｒおよびＢｋｔＢを含むヘキサノイル−ＣｏＡ産生のＮＡＤＨ経路をコードする４つの遺伝子の経路を、それぞれＧａｌ１、Ｇａｌ１０、Ｇａｌ７およびＴＥＦ２プロモーターの制御下で構築した（図４）。カセット全体をＡＤＥ２の上流相同領域と下流相同領域との間に挿入し、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９を使用してサッカロミセス・セレビシエのゲノムに組み込んでｙＸＬ００１を生成した（図４に示される構築物１／ｐＸＬ０４４を使用）。ＮＡＤＰＨ経路をコードする４つの遺伝子（ＰｈａＢ、ＰｈａＪ、ＴｅｒおよびＢｋｔＢポリペプチドを含む）の経路を同じ方法でサッカロミセス・セレビシエに導入して、ｙＸＬ００２を生成した（図４に示される構築物１／ｐＸＬ０７２を使用）。１６２２ｂ相同領域に隣接するＧａｌ１プロモーターの制御下にあるＭＣＴ１遺伝子（構築物２；図４）を、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９を使用してｙＸＬ００１およびｙＸＬ００２のゲノムに導入して、ｙＸＬ００３およびｙＸＬ００４を生成した（図４）。
【０８５７】
ＡＣＣ１相同領域に隣接するＧａｌ１およびＧａｌ１０プロモーターの制御下にあるＴＫＳおよびＯＡＣ遺伝子をコードするカセット（構築物４；図５）を、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９を使用してｙＸＬ００３およびｙＸＬ００４のゲノムに導入して、ｙＸＬ００５およびｙＸＬ００６を生成した。Ｇａｌ１プロモーターの制御下にあるＴＫＳ−ＯＡＣ融合ポリペプチドをコードする異種核酸（構築物５；図５）をｙＸＬ００３およびｙＸＬ００４に導入して、ｙＸＬ００７およびｙＸＬ００８を生成した。得られた菌株を、２％デキストロースを補足した１０ｍＬのＹＰ培地に接種した。３０°Ｃで一晩培養し、３０００×ｇで５分間遠心分離した後、ペレットを、２％ガラクトースを補足したＹＰ培地に再懸濁した。２日間の発現後、培養上清を等体積の酢酸エチルで抽出し、蒸発および濾過した後、試料をＬＣ−ＭＳによって分析すると、かなりの量のオリベトール酸の産生が示された（図９および図１０）。
【０８５８】
ＣｓＡＡＥ（構築物３；図４）、ＴＫＳ、およびＯＡＣ遺伝子（構築物４；図５）を、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９を使用してサッカロミセス・セレビシエのゲノムに導入して、ｙＸＬ００９を生成したところ、これは外因的に供給されたヘキサノエートの存在下で高レベルのオリベトール酸を産生することができる（図１１）。
【０８５９】
さらに、増殖培地にＣ４〜Ｃ１０の種々の脂肪酸を補足することによって、ｙＸＬ００９から種々のオリベトール酸誘導体を産生することができる（図１１および図１２）。オリベトール酸誘導体のいくつかを、生物学的または化学的手段によってさらに修飾して、他の化合物に共有結合することができる。例えば、アルキン官能基を含むオリベトール酸誘導体にクリックケミストリーを実施することができる。オリベトール誘導体を生物学グレードのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解し、アジド基（１．０当量）、ＴＢＴＡ（ＤＭＳＯ：ｔＢｕＯＨ  １：１）、ＣｕＳＯ４  ５Ｈ２Ｏ、アスコルビン酸ナトリウムおよびＨＥＰＥＳ−ＫＯＨ  ｐＨ：７．０（最終ＨＥＰＥＳ−ＫＯＨ約２５０ｍＭ）を含有する架橋剤のＤＭＳＯ溶液で処理する。反応物を３７℃の水浴に１２〜１６時間置く。反応混合物の液体クロマトグラフ−質量分析（ＬＣ−ＭＳ）分析により、１６時間後に反応が完了し、さらに修飾されたオリベトール酸が得られることが示される。
【０８６０】
ＡＤＥ１相同性領域に隣接するＧａｌ１およびＧａｌ１０プロモーターの制御下にあるアサのＧＰＰＳ大サブユニット（ＧＰＰＳｌｓｕ）および小サブユニット（ＧＰＰＳｓｓｕ）遺伝子（構築物１０；図７）をｙＸＬ００８およびｙＸＬ００９に導入して、ｙＸＬ０１０およびｙＸＬ０１１を生成した。１０１４ａ相同領域に隣接するＧａｌ１およびＧａｌ１０プロモーターの制御下にあるＮｐｈＢポリペプチドおよびＴＨＣＡＳポリペプチドをコードするカセット（構築物１２；図８）を、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９を使用してｙＸＬ０１０およびｙＸＬ０１１のゲノムに導入して、ｙＸＬ０１２およびｙＸＬ０１３を生成した。得られた菌株を、２％デキストロースを補足した１０ｍＬのＹＰ培地に接種した。３０°Ｃで一晩培養し、３０００×ｇで５分間遠心分離した後、ペレットを、２％ガラクトースを補足したＹＰ培地に再懸濁した。２日間の発現後、培養上清を等体積の酢酸エチルで抽出し、蒸発および濾過した後、試料をＬＣ−ＭＳによって分析すると、ｙＸＬ０１０におけるＮｐｈＢの過剰発現がカンナビゲロール酸の産生をもたらすことが示された（図１４および図１５）。ＴＨＣＡＳポリペプチドの存在下では、カンナビゲロール酸がＴＨＣＡまたはＴＨＣに変換された。ｙＸＬ０１３で、Ｃ４〜Ｃ１０酸を発現培地に添加し、カンナビゲロール酸誘導体を産生し、次いで、これをＴＨＣＡＳポリペプチドで修飾してＴＨＣＡまたはＴＨＣ誘導体を生成した。次いで、これらの誘導体を化学反応によってさらに修飾することができる（図１３）。
【０８６１】
［実施例３］カンナビノイド前駆体、カンナビノイドまたは前記の誘導体の合成：  微生物におけるカンナビノイド産生を再構築するため、（１）メバロン酸（Ｍｖａ）経路を介したＧＰＰ、（２）オリベトール酸または誘導体、（３）ＣＢＧＡまたは誘導体、および（４）カンナビノイドシンターゼポリペプチドによって産生される種々のカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体の産生のための代謝経路を含む、シャーシサッカロミセス・セレビシエ菌株を開発した。
【０８６２】
ＧＰＰの産生：  Ｍｖａ経路遺伝子を過剰発現させ、ＥＲＧ９に抑制性プロモーターを導入することによって、ＧＰＰ過剰産生菌株ＧＴＹ２３を産生した。前記のＥＲＧ２０  Ｆ９６Ｗ−Ｎ１２７Ｗ突然変異体ＥＲＧ２０ｍｕｔを添加して、細胞内のＧＰＰ前駆体の供給源を提供した（図１６）。この菌株を使用して、ＧＯＴポリペプチド候補をスクリーニングした。
【０８６３】
オリベトール酸またはその誘導体の産生：  遺伝子ＣｓＴＫＳとＣｓＯＡＣ、およびヘキサノイル−ＣｏＡを産生する経路を導入することによって、糖からオリベトール酸を産生した。ヘキサノエートおよびヘキサノイル−ＣｏＡの産生のための経路は、当技術分野で知られている（例えば、Ｇａｊｅｗｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ，“Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｆｕｎｇａｌ  ｄｅ  ｎｏｖｏ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｆｏｒ  ｓｈｏｒｔ  ｃｈａｉｎ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，”Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ  ２０１７）。オリベトール酸またはその誘導体を産生するために、ヘキサノイル−ＣｏＡ経路を使用するのではなく、ＣｓＡＡＥ１またはＣｓＡＡＥ３ポリペプチドなどの前に報告されたアシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドを導入し、細胞にヘキサノエートまたはヘキサノエート以外のカルボン酸を外因的に供給した（図１７〜図１９）。これらの経路は、天然に存在しないカンナビノイドの産生を可能にする。
【０８６４】
ＣＢＧＡの産生：  マザーカンナビノイドＣＢＧＡまたはその誘導体を、ＧＯＴポリペプチドによって産生した。アサＧＯＴポリペプチドは１９９０年代に同定されたが、インビボでのＧＯＴポリペプチド活性の再構成を説明する報告はまだ同定されていない。２５種のポリペプチド変異体を、ＧＰＰ経路および外因性に供給されたオリベトール酸を含む菌株で、ＣＢＧＡのインビボ産生についてスクリーニングした。これらの遺伝子を全て、ＧＡＬ１プロモーターによって駆動される染色体に組み込み、酵母エキスペプトンガラクトース（ＹＰＧ）培地で活性についてスクリーニングした。ＧＣ−ＭＳおよびＬＣ−ＭＳ分析により、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドからのＣＢＧＡのインビボ産生が実証された（図２６Ａ〜図２６Ｃ）。ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドの遺伝子配列をＧＯＴポリペプチドと呼ぶ（図２０）。ｙＬ４４４は、ＣＢＧＡの産生に使用される菌株であり、以下の遺伝子型を発現する：ＣＥＮ．ＰＫ２−１Ｄ｛１１１４ａ：：ＧＡＬ１ｐ−ＣｓＰＴ４ｔ−ＴＤＨ１ｔ；３０８ａ：：ＧＡＬ１ｐ−ＥＲＧ２０（Ｆ９６Ｗ−Ｎ１２７Ｗ）−ＴＤＨ１ｔ；ｅｒｇ９：：ＫａｎＭＸ＿ＣＴＲ３ｐ−ＥＲＧ９；ｌｅｕ２−３，１１２：：Ｈｉｓ３ＭＸ６＿ＧＡＬ１ｐ−ＥＲＧ１９／ＧＡＬ１０ｐ−ＥＲＧ８；ｕｒａ３−５２：：ｕｒａ３／ＧＡＬ１ｐ−ＭｖａＳ（Ａ１１０Ｇ）／ＧＡＬ１０ｐ−ＭｖａＥ；ｈｉｓ３＿１：：ｈｐｈＭＸ４＿ＧＡＬ１ｐ−ＥＲＧ１２／ＧＡＬ１０ｐ−ＩＤＩ１；ＭＡＴａ｝（図６および図２０）。ＬＣ−ＭＳを以下の通り行った（図２６Ａ〜図２６Ｃ）：
【表７】
2020517293.tif 000075
【０８６５】
ＴＨＣＡおよびＣＢＤＡの産生：  カンナビノイドシンターゼ遺伝子は、アサ属ゲノムから同定されている（それだけに限らないが、ＴＨＣＡシンターゼ（ＴＨＣＡＳ）、ＣＢＤＡシンターゼ（ＣＢＤＡＳ）、ＪＰ４５０５４７、ＪＰ４５４８６３、ＪＰ４７１５４６、ＪＰ４５２６２２を含む）。ＴＨＣＡおよびＣＢＤＡを産生するために、対応するＴＨＣＡシンターゼおよびＣＢＤＡシンターゼを、それぞれ、ＣｓＰＴ４ｔポリペプチドをコードする異種核酸を含むＣＢＧＡを産生する菌株に導入した。シンターゼは、ポリペプチドタグ、例えばＰｒｏＡシグナル配列（ＭＩＦＤＧＴＴＭＳＩＡＩＧＬＬＳＴＬＧＩＧＡＥＡ、ＵｎｉＰｒｏｔ寄託番号Ｆ２ＱＵＧ８を有するプロテイナーゼＡ由来）が付いたＮ末端切断型ポリペプチドとして導入し、両方のシンターゼの転写はＧＡＬ１０プロモーターの制御下にあった。最終的なプラスミド構築物を、ｐＥＳＣ−ＰｒｏＡ−ＴＨＣＡＳおよびｐＥＳＣ−ＰｒｏＡ−ＣＢＤＡＳと命名した。両プラスミドを、オリベトール酸の存在下で高いＣＢＧＡ産生を有する上記の菌株に個別に形質転換して、菌株ｙＸＬ０４６およびｙＸＬ０４７を得た（図２１〜図２５）。
【０８６６】
ＰＣＲによってＴＨＣＡＳまたはＣＢＤＡＳの形質転換を確認した後、各培養物からの２つのコロニーを規定の培地（ＳＣ−Ｌｅｕ＋２％デキストロース）に接種し、８００ＲＰＭで振盪しながら３０°Ｃでインキュベートした。２日間の増殖後、培養物を誘導培地（ＳＣ−Ｌｅｕ＋２％ガラクトース＋１ｍＭオリベトール酸＋ＣｕＳＯ４）に１：５０に逆希釈し、８００ＲＰＭで４日間振盪しながら３０°Ｃでインキュベートした。４日間のインキュベーション後、等体積の酢酸エチルを発現培養物に添加し、混合物を３回のビーズビーティングにかけた。次いで、混合物を５０００ＲＰＭで遠心沈殿し、有機層をＬＣ−ＭＳ分析に送ったところ、対応する培養物からのＴＨＣＡおよびＣＢＧＡの産生を示した（図２７および図２８）。
【０８６７】
［実施例４］オリベトール酸供給によるＣＢＧＡへの高フラックスが可能なベース酵母菌株の生成：  ＧＡＬ１またはＧＡＬ１０プロモーターの制御下でメバロン酸経路ポリペプチドおよびＧＯＴポリペプチドの遺伝子を発現させることによって、野生型のサッカロミセス・セレビシエ菌株（ＣＥＮ．ＰＫ２）からＣＢＧＡ生産菌株を作製した。Ｓ２１株は、サッカロミセス・セレビシエ由来の以下の染色体に組み込まれたメバロン酸経路遺伝子を含んでいた：ＥＲＧ１０、ＥＲＧ１３、切断型ＨＭＧ１（ｔＨＭＧＲ）、ＥＲＧ１２、ＥＲＧ８、ＥＲＧ１９およびＩＤＩ１。Ｓ２１株はさらに、ピルビン酸からアセチル−ＣｏＡへのフラックスを増加させるために、ザイモモナス・モビリス由来の染色体に組み込まれたピルビン酸デカルボキシラーゼ（ＰＤＣ）を含んでいた。
【０８６８】
菌株をさらに生成するために、ＧＰＰを優先的に生成するＥＲＧ２０の突然変異体、ＥＲＧ２０ｍｕｔを、アサ由来の以下の染色体に組み込まれたＧＯＴを含むＳ２１菌株に付加した：ＣｓＰＴ１（Ｓ１６４）、切断型ＣｓＰＴ１（ＣｓＰＴ１＿ｔ７５、Ｓ１６５）またはＣｓＰＴ４（Ｓ２９）。Ｓ２９、Ｓ１６４およびＳ１６５で使用した構築物を表１１に示す。
【０８６９】
本明細書に開示される１つまたは複数の異種核酸を含むと予想されるＤＮＡアセンブリーを含むことが確認された酵母コロニーを、３６０μＬのＹＰＤ（１０ｇ／Ｌ酵母エキス、２０ｇ／Ｌ  Ｂａｃｔｏペプトン、２０ｇ／Ｌデキストロース（グルコース））を含有する９６ウェルマイクロタイタープレートに選抜して入れ、通気性フィルムシールで密封した。細胞を、培養物が炭素枯渇に達するまで、高容量マイクロタイタープレートインキュベーターにより１０００ｒｐｍおよび湿度８０％で振盪して３０°Ｃで３日間培養した。増殖飽和培養物を、飽和培養物から１４．４μＬを採取し、３６０μＬの新鮮な培地内に希釈し、ＹＰＧＡＬおよびオリベトール酸を含有する新しいプレート（１０ｇ／Ｌ酵母エキス、２０ｇ／Ｌ  Ｂａｃｔｏペプトン、２０ｇ／Ｌガラクトース、１ｇ／Ｌグルコースおよび１ｍＭオリベトール酸）に継代し、通気性フィルムシールで密封した。産生培地中の遺伝子組換え宿主細胞を、１０００ｒｐｍおよび湿度８０％の高容量マイクロタイタープレートシェーカーで３０℃でさらに３日間培養したのち、抽出および分析した。完了したら、１００μＬの全細胞ブロスを９００μＬのメタノールで希釈し、箔シールで密封し、１５００ｒｐｍで６０秒間振盪して、カンナビノイドを抽出した。振盪後、プレートを１０００ｘｇで６０秒間遠心分離して、いかなる固体も除去した。遠心分離後、１２μＬの上清を２２８μＬのメタノールを含有する新しいアッセイプレートに移し、箔シールで密封し、９００ｒｐｍで６０秒間振盪し、ＬＣ−ＭＳによって分析した。
【０８７０】
試料を、以下の勾配（移動相Ａ：０．１％ギ酸を含むＬＣ−ＭＳグレードの水；移動相Ｂ：０．１％ギ酸を含むＬＣ−ＭＳグレードのアセトニトリル）で、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｐｏｒｏｓｈｅｌｌ  １２０  Ｐｈｅｎｙｌ  Ｈｅｘｙｌ  ２．１ｘ５０ｍｍ、１．９μｍ分析カラムを使用してＬＣ−ＭＳ質量分析計（Ａｇｉｌｅｎｔ  ６４７０）によって分析した：
【表８】
2020517293.tif 000076
【０８７１】
質量分析計は、陰イオン多重反応モニタリングモードで操作した。各カンナビノイドを、真正標準から決定される保持時間、およびＭＲＭトランジションによって同定した（図７７および図７８参照）：
【表９】
2020517293.tif 000077
【０８７２】
ＣｓＰＴ１ポリペプチドおよびＣｓＰＴ１＿ｔ７５ポリペプチドは、インビボで等価な量のＣＢＧＡを産生した（１．３ｍｇ／ＬのＣＢＧＡ）。しかしながら、ＣｓＰＴ４ポリペプチドは、インビボで２１６ｍｇ／ＬのＣＢＧＡを産生した（図７９〜図８２参照）。
【０８７３】
［実施例５］ＣｓＰＴ４の最小触媒ドメインの決定：  ＧＰＰおよびオリベトール酸のＣＢＧＡへの変換に必要なＣｓＰＴ４ポリペプチドの最小触媒ドメインを決定するために、ＣｓＰＴ４ポリペプチドの複数のＮ末端切断を生成し（表１１参照）、１ｍＭのオリベトール酸を供給してＳ２１株においてインビボで発現させた。完全長ＣｓＰＴ４ポリペプチドおよびＣｓＰＴ４＿ｔ７６ポリペプチド（ＣｓＰＴ４ｔ）のみがインビボで活性を示した（表４）。
【表１０】
2020517293.tif 000078
【０８７４】
［実施例６］ヘキサン酸（カプロン酸）供給によるＣＢＧＡへの高フラックスが可能なベース酵母菌株の生成：  オリベトール酸によるＣＢＧＡの産生のための高フラックス菌株（Ｓ２９）を、ヘキサン酸によるＣＢＧＡの産生のための高フラックス菌株に変換するために、脂肪酸からのオリベトール酸の産生を担う遺伝子をＧＡＬ１またはＧＡＬ１０プロモーターを使用してＳ２９で発現させた。この菌株は、アサ由来の以下の染色体に組み込まれたオリベトール酸経路遺伝子を含んでいた：ＴＫＳの３つのコピーおよびＯＡＣの３つのコピー。アサＡＡＥ１の２つのコピー（Ｓ７８）、アサＡＡＥ３の２つのコピー（Ｓ８１）またはサッカロミセス・セレビシエＦＡＡ２の２つのコピー（Ｓ８３）を含む３つの異なる菌株を生成した（菌株の情報については表１１参照）。菌株を、実施例４および５のように、但し、１ｍＭのオリベトール酸代わりに２ｍＭのヘキサン酸を培地に添加して増殖および試験した。菌株によるＣＢＧＡの産生が観察された（表５）。
【表１１】
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【０８７５】
［実施例７］ＣＢＤＡおよびＴＨＣＡへの高フラックスが可能なベース酵母菌株の生成：  ＣＢＧＡの産生のための高フラックス菌株を、ＣＢＤＡまたはＴＨＣＡの産生のための高フラックス菌株に変換するために、ＣＢＤＡシンターゼポリペプチド（Ｓ３４）またはＴＨＣＡシンターゼポリペプチド（Ｓ１２３）をコードする異種核酸をＳ２９株に付加した（菌株の情報については表１１参照）。菌株を、培地に１ｍＭのオリベトール酸を用いて実施例４および５のように試験した。ＣＢＤＡおよびＴＨＣＡが図８３および図８４に示されるように菌株によって産生された。
【０８７６】
［実施例８］希少な天然に存在しないＣＢＧＡ誘導体を産生するためのカンナビノイド前駆体誘導体の酵母への供給：  実施例６の菌株（Ｓ７８、Ｓ８１およびＳ８３）を実施例４および５と同様に培養したが、２ｍＭのカルボン酸（表６に詳述）を培地に添加し、実施例４と同様に分析した。表６は、菌株によって産生された産物を詳述している（産物のピーク強度）。
【表１２】
2020517293.tif 000080
2020517293.tif 000081
【０８７７】
［実施例９］希少な天然に存在しないＣＢＤＡ誘導体を産生するためのカンナビノイド前駆体誘導体の酵母への供給：  ＣＢＤＡシンターゼポリペプチドを含む株（Ｓ３４）またはＣＢＤＡシンターゼポリペプチドを含まない株（Ｓ２９）を、１ｍＭのオリベトール酸誘導体（表７に詳述）を用いて実施例４および５のように試験した。表７は、菌株によって産生された産物を詳述している。
【表１３】
2020517293.tif 000082
【０８７８】
［実施例１０］ＣＢＤＡまたはＣＢＧＡを産生するためのカンナビノイド前駆体の酵母への供給：  カンナビノイド前駆体（例えば、ＧＰＰ）を産生する方法は多数あるので、いくつかの異なる遺伝子をインビボで試験してカンナビノイド産生を最適化した。様々なＧＰＰシンターゼポリペプチド、ＣＢＤＡシンターゼポリペプチド、ＴＫＳポリペプチド、ＯＡＣポリペプチド、中鎖および長鎖脂肪酸アシル−ＣｏＡシンテターゼポリペプチドを、以下に記載される種々の組み合わせで試験した（菌株の情報については表１１参照）。
【０８７９】
様々なＧＰＰシンターゼポリペプチドを用いて菌株を構築して、１ｍＭのオリベトール酸を供給した場合の、ＣＢＧＡを産生するための最適なＧＰＰの産生者を同定した。Ｓ２１株を、ＣｓＰＴ４ポリペプチドおよびＧＰＰシンターゼポリペプチドをコードする異種核酸で形質転換した。実施例４に記載されるようにＣＢＧＡ力価を測定した。ＣＢＧＡ力価、力価標準偏差（ＳＤ）および試験した繰り返し数を表８に示す。
【表１４】
2020517293.tif 000083
【０８８０】
ＣＢＤＡの産生を最適化するために、Ｓ２９株を、ＣＢＤＡシンターゼポリペプチドをコードする異種核酸の２つのコピーを含む一連の構築物で形質転換し、１ｍＭのオリベトール酸を用いて実施例４および５のように増殖させた。実施例４に記載されるようにＣＢＤＡを測定した。ＣＢＤＡピーク強度、ピーク強度標準偏差（ＳＤ）および試験した繰り返し数を表９に示す。
【表１５】
2020517293.tif 000084
【０８８１】
ヘキサン酸からのＣＢＧＡの産生を最適化するために、ＴＫＳポリペプチド、ＯＡＣポリペプチド、ならびに中鎖および長鎖脂肪酸アシル−ＣｏＡシンテターゼポリペプチドの様々な組み合わせをインビボで試験した。全ての菌株が、Ｓ２９株の娘または孫娘であった。全ての菌株を、増殖培地に２ｍＭのヘキサン酸を用いて実施例４に記載されるように試験した。ＣＢＧＡ力価、力価標準偏差（ＳＤ）および試験した繰り返し数を表１０に示す。
【表１６】
2020517293.tif 000085
【表１７】
2020517293.tif 000086
2020517293.tif 000087
2020517293.tif 000088
【０８８２】
本開示を、その特定の実施形態を参照して説明してきたが、本開示の真の精神および範囲から逸脱することなく、種々の変更を行うことができ、等価物に置き換えることができることが当業者によって理解されるはずである。さらに、特定の状況、材料、物質の組成、プロセス、１つまたは複数のプロセスステップを、本開示の目的、精神および範囲に適合させるために多くの修正を行うことができる。このような修正は全て、本明細書に添付される特許請求の範囲内にあることを意図している。
【図１】
2020517293.tif 000089
【図２】
2020517293.tif 000090
【図３】
2020517293.tif 000091
【図４】
2020517293.tif 000092
【図５】
2020517293.tif 000093
【図６】
2020517293.tif 000094
【図７】
2020517293.tif 000095
【図８】
2020517293.tif 000096
【図９】
2020517293.tif 000097
【図１０】
2020517293.tif 000098
【図１１−１】
2020517293.tif 000099
【図１１−２】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
2020517293.tif 000110
【図２２】
2020517293.tif 000111
【図２３】
2020517293.tif 000112
【図２４】
2020517293.tif 000113
【図２５】
2020517293.tif 000114
【図２６Ａ】
2020517293.tif 000115
【図２６Ｂ】
2020517293.tif 000116
【図２６Ｃ】
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【図２７】
2020517293.tif 000118
【図２８】
2020517293.tif 000119
【図２９Ａ】
2020517293.tif 000120
【図２９Ｂ】
2020517293.tif 000121
【図３０Ａ】
2020517293.tif 000122
【図３０Ｂ】
2020517293.tif 000123
【図３０Ｃ】
2020517293.tif 000124
【図３１】
2020517293.tif 000125
【図３２】
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【図３３】
2020517293.tif 000127
【図３４】
2020517293.tif 000128
【図３５】
2020517293.tif 000129
【図３６】
2020517293.tif 000130
【図３７】
2020517293.tif 000131
【図３８】
2020517293.tif 000132
【図３９】
2020517293.tif 000133
【図４０】
2020517293.tif 000134
【図４１】
2020517293.tif 000135
【図４２Ａ】
2020517293.tif 000136
【図４２Ｂ】
2020517293.tif 000137
【図４２Ｃ】
2020517293.tif 000138
【図４３Ａ】
2020517293.tif 000139
【図４３Ｂ】
2020517293.tif 000140
【図４３Ｃ】
2020517293.tif 000141
【図４４Ａ】
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【図４４Ｂ】
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【図４４Ｃ】
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【図４５】
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【図４６】
2020517293.tif 000146
【図４７】
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【図４８】
2020517293.tif 000148
【図４９】
2020517293.tif 000149
【図５０】
2020517293.tif 000150
【図５１】
2020517293.tif 000151
【図５２】
2020517293.tif 000152
【図５３】
2020517293.tif 000153
【図５４】
2020517293.tif 000154
【図５５】
2020517293.tif 000155
【図５６Ａ】
2020517293.tif 000156
【図５６Ｂ】
2020517293.tif 000157
【図５６Ｃ】
2020517293.tif 000158
【図５７Ａ】
2020517293.tif 000159
【図５７Ｂ】
2020517293.tif 000160
【図５７Ｃ】
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【図５８】
2020517293.tif 000162
【図５９】
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【図６０】
2020517293.tif 000164
【図６１】
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【図６２】
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【図６３】
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【図６４】
2020517293.tif 000168
【図６５】
2020517293.tif 000169
【図６６】
2020517293.tif 000170
【図６７】
2020517293.tif 000171
【図６８】
2020517293.tif 000172
【図６９】
2020517293.tif 000173
【図７０】
2020517293.tif 000174
【図７１】
2020517293.tif 000175
【図７２】
2020517293.tif 000176
【図７３】
2020517293.tif 000177
【図７４】
2020517293.tif 000178
【図７５】
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【図７６】
2020517293.tif 000180
【図７７】
2020517293.tif 000181
【図７８】
2020517293.tif 000182
【図７９】
2020517293.tif 000183
【図８０】
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【図８１】
2020517293.tif 000185
【図８２】
2020517293.tif 000186
【図８３】
2020517293.tif 000187
【図８４】
2020517293.tif 000188
【図８５】
2020517293.tif 000189
【図８６】
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【配列表】
2020517293000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和1年12月26日(2019.12.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００４】
アサ属（Ｃａｎｎａｂｉｓ）の植物は、何千年もの間、その薬効性のためにヒトによって使用されている。現代では、アサ属の生理活性効果は、「カンナビノイド」と呼ばれるクラスの化合物によるとされており、その中にはテトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）およびカンナビジオール（ＣＢＤ）を含む数百の構造類似体が存在する。アサ属材料のこれらの分子および調製物は、近年、慢性疼痛、多発性硬化症、がん関連の悪心および嘔吐、体重減少、食欲不振、痙縮ならびに他の状態の治療薬としての用途を見出している。
【化１】
2020517293.tif 000191
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１２】
前記または以下のいずれかの一定の実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞が、テトラケチドシンターゼ（ＴＫＳ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸およびオリベトール酸シクラーゼ（ＯＡＣ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、または融合ＴＫＳおよびＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＴＫＳポリペプチドが、配列番号１１または配列番号７６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＯＡＣポリペプチドが、配列番号１０または配列番号７８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
前記または以下のいずれかの一定の実施形態では、遺伝子組換え宿主細胞が、ピルビン酸デカルボキシラーゼ（ＰＤＣ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＰＤＣポリペプチドが、配列番号１１７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５２】
本明細書に開示される核酸には、カンナビノイドＣＢＧＡ；テトラケチドシンターゼ（ＴＫＳ）ポリペプチド；オリベトール酸シクラーゼ（ＯＡＣ）ポリペプチド；およびＣＢＤＡまたはＴＨＣＡシンターゼポリペプチドの生合成を担う、カンナビノイド生合成経路に存在するポリペプチド、例えばＧＯＴポリペプチド（例えば、ＣｓＰＴ４ポリペプチド）の少なくとも１つの活性を有するポリペプチドをコードするものが含まれ得る（図１および図１１参照）。本明細書に開示される核酸は、カンナビノイド前駆体の合成に関与するポリペプチドの少なくとも１つの活性を有するポリペプチドをコードするものも含み得る。これらのポリペプチドには、それだけに限らないが、メバロン酸経路に存在するポリペプチド；アシル−ＣｏＡ化合物もしくはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体（例えば、アシル活性化酵素ポリペプチド、脂肪酸アシル−ＣｏＡシンテターゼポリペプチドもしくは脂肪酸アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチド）を生成するポリペプチド；ＧＰＰを生成するポリペプチド；マロニルＣｏＡを生成するポリペプチド；アセチル−ＣｏＡの２つの分子を縮合してアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチド、またはピルビン酸デカルボキシラーゼポリペプチドの少なくとも１つの活性を有するポリペプチドが含まれる（図１および図１１参照）。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６３】
ヘキサノイル−ＣｏＡを生成するポリペプチドには、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチド（例えば、ヘキサノイル−ＣｏＡシンターゼ（ＨＣＳ）ポリペプチド、アシル活性化酵素ポリペプチド、脂肪酸アシル−ＣｏＡシンテターゼポリペプチドまたは脂肪酸アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチド）が含まれ得る。ヘキサノイル−ＣｏＡは、アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）ポリペプチドなどのマロニル−ＣｏＡを生成する１つまたは複数のポリペプチドを含む経路を通しても生成され得る。さらに、ヘキサノイル−ＣｏＡは、ヘキサノイル−ＣｏＡを生成する生合成経路の一部である１つまたは複数のポリペプチドで生成され得るが、これにはそれだけに限らないが、マロニルＣｏＡ−アシルキャリアタンパク質トランスアシラーゼ（ＭＣＴ１）ポリペプチド、ＰａａＨ１ポリペプチド、Ｃｒｔポリペプチド、ＴｅｒポリペプチドおよびＢｋｔＢポリペプチド；ＭＣＴ１ポリペプチド、ＰｈａＢポリペプチド、ＰｈａＪポリペプチド、ＴｅｒポリペプチドおよびＢｋｔＢポリペプチド；短鎖脂肪酸アシル−ＣｏＡチオエステラーゼ（ＳＣＦＡ−ＴＥ）ポリペプチド；または脂肪酸合成酵素（ＦＡＳ）ポリペプチドが含まれる（図１および図１１参照）。ヘキサノイル−ＣｏＡ誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシルＣｏＡ化合物誘導体も、このような経路およびポリペプチドを介して形成され得る。
【化２】
2020517293.tif 000192
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６４】
ＧＰＰおよびヘキサノイル−ＣｏＡはまた、アセチル−ＣｏＡの２つの分子を縮合してアセトアセチル−ＣｏＡおよびピルビン酸からアセチル−ＣｏＡを生成するピルビン酸デカルボキシラーゼポリペプチドを生成するポリペプチドを含む経路を通して生成され得る（図１および図１１参照）。ヘキサノイルＣｏＡ誘導体、アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体も、このような経路を介して形成され得る。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１３７】
カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体、またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生に利用することができる１つまたは複数のポリペプチドを本明細書で開示する。例えば、ＧＯＴポリペプチド、ＣＢＤＡまたはＴＨＣＡシンターゼポリペプチド、ＴＫＳポリペプチド、およびＯＡＣポリペプチドのようなカンナビノイド生合成経路に存在するポリペプチドの活性を少なくとも１つ持つ、１つまたは複数のポリペプチド；メバロン酸（ＭＥＶ）経路に存在するポリペプチドの活性を少なくとも１つ持つ、１つまたは複数のポリペプチド；アシル−ＣｏＡ化合物またはアシル−ＣｏＡ化合物誘導体を生成するポリペプチド（例えば、アシル活性化酵素ポリペプチド、脂肪族アシル−ＣｏＡシンテターゼポリペプチド、または脂肪族アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチド）；ＧＰＰを生成するポリペプチド；マロニル−ＣｏＡを生成するポリペプチド；アセチル−ＣｏＡの２分子を縮合しアセトアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチド；およびピルビン酸デカルボキシラーゼポリペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。さらに、カンナビノイド、カンナビノイド誘導体、カンナビノイド前駆体、またはカンナビノイド前駆体誘導体の産生に利用することができるポリペプチドは、ＭＥＶ経路のポリペプチドの代わりに、ＤＸＰ経路に存在するポリペプチドの活性を少なくとも１つ持つ、１つまたは複数のポリペプチドであってもよい。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３５８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３５８】
ピルビン酸塩からアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチド、該ポリペプチドを含む核酸、および該ポリペプチドを発現する遺伝子組換え宿主細胞：  いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ピルビン酸塩からアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。ピルビン酸塩からアセチル−ＣｏＡを生成するポリペプチドとして、ピルビン酸デカルボキシラーゼ（ＰＤＣ）ポリペプチドが挙げられる。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子組換え宿主細胞は、ＰＤＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸で遺伝子組換えされている。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０７５７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０７５７】
実施形態ＩＩＩ−４．テトラケチドシンターゼ（ＴＫＳ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸およびオリベトール酸シクラーゼ（ＯＡＣ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、または融合ＴＫＳおよびＯＡＣポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含む、実施形態ＩＩＩ−１からＩＩＩ−３のいずれか１つの遺伝子組換え宿主細胞。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０７９０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０７９０】
実施形態ＩＩＩ−３７．ピルビン酸デカルボキシラーゼ（ＰＤＣ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含む、実施形態ＩＩＩ−１からＩＩＩ−３６のいずれか１つの遺伝子組換え宿主細胞。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０８３１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０８３１】
実施形態ＩＩＩ−７８．カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生するための遺伝子組換え宿主細胞を作製する方法であって、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドよりも少なくとも１０倍高い量のゲラニルピロリン酸およびオリベトール酸からのカンナビゲロール酸の産生を触媒することができるゲラニルピロリン酸：オリベトール酸ゲラニルトランスフェラーゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を宿主細胞に導入するステップを含む方法。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０８３２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０８３２】
実施形態ＩＩＩ−７９．カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生するための遺伝子組換え宿主細胞を作製する方法であって、配列番号１１０と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むゲラニルピロリン酸：オリベトール酸ゲラニルトランスフェラーゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を宿主細胞に導入するステップを含む方法。
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０８３３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０８３３】
実施形態ＩＩＩ−８０．カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生するための遺伝子組換え宿主細胞を作製する方法であって、配列番号１００と少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むゲラニルピロリン酸：オリベトール酸ゲラニルトランスフェラーゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を宿主細胞に導入するステップを含む方法。
【手続補正１４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０８３４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０８３４】
実施形態ＩＩＩ−８１．カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生するための遺伝子組換え宿主細胞を作製する方法であって、実施形態ＩＩＩ−７５からＩＩＩ−７７のいずれか１つのベクターを宿主細胞に導入するステップを含む方法。
【手続補正１５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０８３５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０８３５】
本明細書に開示されるアミノ酸およびヌクレオチド配列を表１に提供する。属および／または種が注記されている場合、配列はその特定の属および／または種のみに限定されると解釈されるべきではなく、前記配列を発現する他の属および／または種も含む。
【表２】
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【手続補正１６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０８８１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０８８１】
ヘキサン酸からのＣＢＧＡの産生を最適化するために、ＴＫＳポリペプチド、ＯＡＣポリペプチド、ならびに中鎖および長鎖脂肪酸アシル−ＣｏＡシンテターゼポリペプチドの様々な組み合わせをインビボで試験した。全ての菌株が、Ｓ２９株の娘または孫娘であ臣龁胣ꢅ臣꺁迨ꪠ苣膀ꋥ隮鿥난臣銼뷯궼臣颃苣떂菣뢅苣ꢔ臣ꚁ껥붖뻤钼臣風볨閁苣讂苣蚁臣ꚩ꣩鞁臣芀볯ꊼ볯ꆼ諥ꆾ胣鮊뻤馨뫦辁럥袼볯꒼볯誁苣뎁ꧨ鎨臣龁맧誂뿨鞁闦銂ꇨ醼볯ꮁꓧ㲺牢ਾ臣芀戼㹲㰊䥄㹖胣ꢡ볯隼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲〲ㄵ㈷㌹琮晩㸢〲〲ㄵ㈷㌹琮晩ꃂ〰㈰㌵⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀ꇨ醼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㈰㔰㜱㤲⸳楴≦㈾㈰㔰㜱㤲⸳楴쉦゠〰㔲㰴愯㰾䐯噉ਾ㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㈰㔰㜱㤲⸳楴≦㈾㈰㔰㜱㤲⸳楴쉦゠〰㔲㰵愯㰾䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲〲ㄵ㈷㌹琮晩㸢〲〲ㄵ㈷㌹琮晩ꃂ〰㈰㘵⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀鯥鮚ꫨ뮟ꃥ誑胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲〲ㄵ㈷㌹琮晩㸢〲〲ㄵ㈷㌹琮晩ꃂ〰㈰㜵⼼㹡⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㈰㔰㜱㤲⸳楴≦㈾㈰㔰㜱㤲⸳楴쉦゠〰㔲㰸愯㰾䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲〲ㄵ㈷㌹琮晩㸢〲〲ㄵ㈷㌹琮晩ꃂ〰㈰㤵⼼㹡⼼䥄㹖㰊戯摯㹹㰊栯浴㹬