(57)【要約】  表現型が同一の、ナイーブＴ細胞、幹細胞様メモリーＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、獲得ＮＫ細胞、およびＩ型ＮＫＴ細胞の割合を高める、またはその絶対数を増やす、化合物が同定される。１または複数の治療成績の改善などをもたらす養子免疫療法のための、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、およびＮＫＴ細胞を含む免疫細胞を調節するための組成物および方法が提供される。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
免疫細胞集団と、ＢＥＴ阻害剤、ＣＤＫ阻害剤、ＣＲＡＣチャネル阻害剤、Ｃｏｘ阻害剤、ドパミン拮抗剤、ＥＲＫ５阻害剤、グルココルチコイド、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、Ｌｃｋ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、またはＳｙｋ阻害剤を少なくとも含む１または複数の調節薬と、を含み、前記１または複数の調節薬が接触の直後または後に免疫細胞の治療的有効性を改善する、組成物。
【請求項２】
前記１または複数の調節薬が、
（ａ）細胞の増殖、維持、分化、脱分化、および／もしくは生存率を改善する；
（ｂ）細胞増殖、細胞毒性、残留性、サイトカイン応答、サイトカイン分泌、および／もしくは細胞リコールを改善する；並びに／または
（ｃ）前記免疫細胞集団中の１もしくは複数の目的の免疫細胞亜集団の数もしくは相対比を増加させる、
請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記免疫細胞がＴ細胞、ＮＫＴ細胞、および／またはＮＫ細胞を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
数または相対比の増加が起こる前記１または複数の目的の免疫細胞亜集団が、
（ａ）ナイーブＴ細胞、幹細胞様メモリーＴ細胞、および／もしくはセントラルメモリーＴ細胞；
（ｂ）Ｉ型ＮＫＴ細胞；または
（ｃ）獲得ＮＫ細胞（adaptive NK cell）、
を含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項５】
前記免疫細胞が、末梢血、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位由来組織、腹水、胸水、脾臓組織、または腫瘍から単離された免疫細胞である、またはそれに含まれた免疫細胞である、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記免疫細胞が、
（ａ）健常な対象；
（ｂ）自己免疫疾患、造血器悪性腫瘍、ウイルス感染症、もしくは固形腫瘍を有する対象；
（ｃ）遺伝子改変免疫細胞を以前に投与された対象；または
（ｄ）サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）血清陽性の対象、
から単離された免疫細胞である、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記単離された免疫細胞が、
（ａ）ゲノム操作されており、挿入、欠失、または核酸置換（nucleic acid replacement）を含む；または、
（ｂ）少なくとも１種の遺伝子改変されたモダリティを含む、
請求項５または請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記免疫細胞が、
（ａ）幹細胞、造血幹細胞、造血前駆細胞、もしくは前駆細胞からインビトロで分化された；または
（ｂ）造血系もしくは非造血系の非多能性細胞からインビトロで分化転換された、
免疫細胞である、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
前記幹細胞が誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）または胚性幹細胞（ＥＳＣ）を含む、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記前駆細胞がＣＤ３４＋造血性内皮細胞、多分化能前駆細胞、Ｔ細胞前駆細胞、ＮＫ前駆細胞、またはＮＫＴ前駆細胞である、請求項８に記載の組成物。
【請求項１１】
前記幹細胞、造血幹細胞、造血前駆細胞、または前駆細胞が、
（ａ）ゲノム操作されており、挿入、欠失、または核酸置換を含む；または、
（ｂ）少なくとも１種の遺伝子改変されたモダリティを含む、
幹細胞、造血幹細胞、造血前駆細胞、または前駆細胞である、請求項８に記載の組成物。
【請求項１２】
前記遺伝子改変されたモダリティが、セーフティ・スイッチタンパク質、標的化モダリティ、受容体、シグナル伝達分子、転写因子、薬剤的に活性なタンパク質およびペプチド、薬物標的候補；または、前記免疫細胞の移植、輸送、ホーミング、生存能、自己複製、残留性、免疫応答の制御および調節、並びに／もしくは生存を促進するタンパク質、のうちの少なくとも１つを含む、請求項７または請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記遺伝子改変されたモダリティが、（ｉ）Ｂ２Ｍ、ＴＡＰ１、ＴＡＰ２、タパシン、ＮＬＲＣ５、ＰＤ１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＲＦＸＡＮＫ、ＣＩＩＴＡ、ＲＦＸ５、またはＲＦＸＡＰ、および染色体６ｐ２１領域内のあらゆる遺伝子の発現の欠失または減少；並びに、（ｉｉ）ＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＡＣＤ１６、ｈｎＣＤ１６、４１ＢＢＬ、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４７、ＣＤ１１３、ＣＤ１３１、ＣＤ１３７、ＣＤ８０、ＰＤＬ１、Ａ２ＡＲ、Ｆｃ受容体、または、二重特異性エンゲージャー、多重特異性エンゲージャー、もしくは汎用エンゲージャーとの結合のための表面上トリガー受容体の発現の導入または増加、のうちの１または複数を含む、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記単離された免疫細胞が、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）および／またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする外来性核酸を含む、請求項７に記載の組成物。
【請求項１５】
前記幹細胞、造血幹細胞、造血前駆細胞、または前駆細胞が、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）および／またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含むタンパク質をコードする外来性核酸を含む、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１６】
前記１または複数の調節薬が、
（ａ）表１の化合物のうちの少なくとも１つ、またはその塩、エステル、エーテル、溶媒和物、水和物、立体異性体、もしくはプロドラッグを含む；
（ｂ）ＢＥＴ阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、またはＳｙｋ阻害剤を少なくとも含む；
（ｃ）ＰＤＫ１阻害剤を少なくとも含む；
（ｄ）Ｒａｆ阻害剤を少なくとも含む；
（ｅ）Ｓｙｋ阻害剤を少なくとも含む；
（ｆ）ＧＳＫ２３３４４７０、ＡＺ６２８、ＧＤＣ−０８７９、ダブラフェニブ、Ｒ７８８、パクリチニブ、バルドキソロンメチル、およびＰＲＴ０６２６０７のうちの少なくとも１種を含む；
（ｇ）ＧＳＫ２３３４４７０を少なくとも含む；
（ｈ）バルドキソロンメチルを少なくとも含む；または
（ｉ）ＡＺ６２８を少なくとも含む、
請求項１〜１５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１７】
ペプチド、抗体、抗体フラグメント、サイトカイン、マイトジェン、増殖因子、スモールＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、単核血液細胞、フィーダー細胞、フィーダー細胞の成分または代替要素、１または複数の目的のポリ核酸を含むベクター、化学療法剤または放射性部分、および免疫調節薬（ＩＭｉＤ）、からなる群から選択される１または複数の添加剤をさらに含む、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１８】
ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメトキシエタン（ＤＭＥ）、ジメチルアセトアミド、エタノールおよびこれらの組み合わせ、からなる群から選択される少なくとも１種の有機溶剤をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１９】
Ｔ細胞を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項２０】
前記Ｔ細胞がＣＡＲ−Ｔ細胞を含む、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
養子細胞をベースとした治療法に好適な免疫細胞の治療的有効性を改善するための組成物であって、
ＢＥＴ阻害剤、ＣＤＫ阻害剤、ＣＲＡＣチャネル阻害剤、Ｃｏｘ阻害剤、ドパミン拮抗剤、ＥＲＫ５阻害剤、グルココルチコイド、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、Ｌｃｋ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、およびＳｙｋ阻害剤からなる群から選択される少なくとも１種の調節薬を含み；
前記調節薬が接触後に免疫細胞の治療的有効性を改善する、
前記組成物。
【請求項２２】
前記薬剤が、免疫細胞の、
（ａ）細胞増殖、維持および／もしくは分化を調節する、
（ｂ）細胞増殖、細胞毒性、サイトカイン応答、サイトカイン分泌、リコール、および／もしくは残留性を改善する；
（ｃ）細胞生存率を改善する；並びに／または
（ｄ）１もしくは複数の目的の細胞亜集団の数もしくは相対比を増加させる、
請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
前記免疫細胞がＴ細胞、ＮＫＴ細胞、および／またはＮＫ細胞を含む、請求項２１または請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
数または相対比の増加が起こる前記１または複数の目的の細胞亜集団が、
（ａ）ナイーブＴ細胞、幹細胞様メモリーＴ細胞、および／もしくはセントラルメモリーＴ細胞；
（ｂ）Ｉ型ＮＫＴ細胞；または
（ｃ）獲得ＮＫ細胞、
を含む、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２５】
前記免疫細胞が、末梢血、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位由来組織、腹水、胸水、脾臓組織、または腫瘍から単離された免疫細胞である、またはそれに含まれた免疫細胞である、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２６】
前記免疫細胞が、
（ａ）健常な対象；
（ｂ）自己免疫疾患、造血器悪性腫瘍、ウイルス感染症、もしくは固形腫瘍を有する対象；
（ｃ）遺伝子改変免疫細胞を以前に投与された対象；または
（ｄ）ＣＭＶ血清陽性の対象、
から単離された免疫細胞である、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２７】
前記免疫細胞が、
（ａ）ゲノム操作されており、挿入、欠失、または核酸置換を含む；または
（ｂ）少なくとも１種の遺伝子改変されたモダリティを含む、
免疫細胞である、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２８】
前記免疫細胞が、
（ａ）幹細胞、造血幹細胞、造血前駆細胞、もしくは前駆細胞からインビトロで分化された；または
（ｂ）造血系もしくは非造血系の非多能性細胞からインビトロで分化転換された、
免疫細胞である、請求項21に記載の組成物。
【請求項２９】
前記幹細胞が誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）または胚性幹細胞（ＥＳＣ）を含む、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３０】
前記前駆細胞がＣＤ３４＋造血性内皮細胞、多分化能前駆細胞、Ｔ細胞前駆細胞、ＮＫ前駆細胞、またはＮＫＴ前駆細胞である、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３１】
前記幹細胞、造血幹細胞、造血前駆細胞、または前駆細胞が、
（ａ）ゲノム操作されており、挿入、欠失、もしくは核酸置換を含む、または
（ｂ）少なくとも１種の遺伝子改変されたモダリティを含む、
請求項２８に記載の組成物。
【請求項３２】
前記遺伝子改変されたモダリティが、セーフティ・スイッチタンパク質、標的化モダリティ、受容体、シグナル伝達分子、転写因子、薬剤的に活性なタンパク質およびペプチド、薬物標的候補；または、前記免疫細胞の移植、輸送、ホーミング、生存能、自己複製、残留性、免疫応答の制御および調節、並びに／もしくは生存を促進するタンパク質、のうちの少なくとも１つを含む、請求項２７または請求項３１に記載の組成物。
【請求項３３】
前記遺伝子改変されたモダリティが、（ｉ）Ｂ２Ｍ、ＴＡＰ１、ＴＡＰ２、タパシン、ＮＬＲＣ５、ＰＤ１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＲＦＸＡＮＫ、ＣＩＩＴＡ、ＲＦＸ５、またはＲＦＸＡＰ、および染色体６ｐ２１領域内のあらゆる遺伝子の発現の欠失または減少；並びに、（ｉｉ）ＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＡＣＤ１６、ｈｎＣＤ１６、４１ＢＢＬ、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４７、ＣＤ１１３、ＣＤ１３１、ＣＤ１３７、ＣＤ８０、ＰＤＬ１、Ａ２ＡＲ、Ｆｃ受容体、または、二重特異性エンゲージャー、多重特異性エンゲージャー、もしくは汎用エンゲージャーとの結合のための表面上トリガー受容体の発現の導入または増加、のうちの１または複数を含む、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３４】
前記単離された免疫細胞が、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）および／またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする外来性核酸を含む、請求項２１に記載の組成物。
【請求項３５】
前記幹細胞、造血幹細胞、造血前駆細胞、または前駆細胞が、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）および／またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含むタンパク質をコードする外来性核酸を含む、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３６】
（ａ）表１の化合物のうちの少なくとも１つ、またはその塩、エステル、エーテル、溶媒和物、水和物、立体異性体、もしくはプロドラッグを含む；
（ｂ）ＢＥＴ阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、またはＳｙｋ阻害剤を少なくとも含む；
（ｃ）ＰＤＫ１阻害剤を少なくとも含む；
（ｄ）Ｒａｆ阻害剤を少なくとも含む；
（ｅ）Ｓｙｋ阻害剤を少なくとも含む；
（ｆ）ＧＳＫ２３３４４７０、ＡＺ６２８、ＧＤＣ−０８７９、ダブラフェニブ、Ｒ７８８、パクリチニブ、バルドキソロンメチル、およびＰＲＴ０６２６０７のうちの少なくとも１種を含む；
（ｇ）ＧＳＫ２３３４４７０を少なくとも含む；
（ｈ）バルドキソロンメチルを少なくとも含む；または
（ｉ）ＡＺ６２８を少なくとも含む、
請求項２１に記載の組成物。
【請求項３７】
ペプチド、抗体、抗体フラグメント、サイトカイン、マイトジェン、増殖因子、スモールＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、単核血液細胞、フィーダー細胞、フィーダー細胞の成分または代替要素、１または複数の目的のポリ核酸を含むベクター、化学療法剤または放射性部分、および免疫調節薬（ＩＭｉＤ）、からなる群から選択される１または複数の添加剤をさらに含む、請求項２１に記載の組成物。
【請求項３８】
ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメトキシエタン（ＤＭＥ）、ジメチルアセトアミド、エタノールおよびこれらの組み合わせ、からなる群から選択される少なくとも１種の有機溶剤をさらに含む、請求項２１に記載の組成物。
【請求項３９】
単離された免疫細胞と、ＢＥＴ阻害剤、ＣＤＫ阻害剤、ＣＲＡＣチャネル阻害剤、Ｃｏｘ阻害剤、ドパミン拮抗剤、ＥＲＫ５阻害剤、グルココルチコイド、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、Ｌｃｋ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、およびＳｙｋ阻害剤からなる群から選択される１もしくは複数の調節薬を含む組成物と、の接触から得られる調節された免疫細胞を含む、且つ／または、調節された免疫細胞が、ＢＥＴ、ＣＤＫ、ＣＲＡＣチャネル、Ｃｏｘ、ＩＫＫ、ＪＡＫ、ＬＣＫ、ＰＤＫ１、Ｒａｆ、および／もしくはＳｙｋの発現もしくは活性が途絶もしくは低減した細胞を含む、組成物であって；前記調節された免疫細胞が、調節されていない免疫細胞との比較で養子免疫療法においての治療的有効性が改善した免疫細胞亜集団を少なくとも含む、前記組成物。
【請求項４０】
前記調節された免疫細胞またはその亜集団の、
（ａ）細胞の増殖、維持、分化、脱分化、および／もしくは生存率が改善した；
（ｂ）細胞増殖、細胞毒性、残留性、サイトカイン応答、サイトカイン分泌、および／もしくは細胞リコールが改善した；且つ／または
（ｃ）１もしくは複数の目的の免疫細胞亜集団の数もしくは相対比が増加した、
請求項３９に記載の組成物。
【請求項４１】
前記調節された免疫細胞がＴ細胞、ＮＫＴ細胞、および／またはＮＫ細胞を含む、請求項４０に記載の組成物。
【請求項４２】
数または相対比の増加が起こる前記１または複数の目的の免疫細胞亜集団が、
を含む、請求項４０に記載の組成物。
（ａ）ナイーブＴ細胞、幹細胞様メモリーＴ細胞、および／もしくはセントラルメモリーＴ細胞；
（ｂ）Ｉ型ＮＫＴ細胞；または
（ｃ）獲得ＮＫ細胞、
【請求項４３】
前記単離された免疫細胞が、末梢血、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位由来組織、腹水、胸水、脾臓組織、または腫瘍から得られた免疫細胞である、請求項３９に記載の組成物。
【請求項４４】
前記単離された免疫細胞が、
（ａ）健常な対象；
（ｂ）自己免疫疾患、造血器悪性腫瘍、ウイルス感染症、もしくは固形腫瘍を有する対象；
（ｃ）遺伝子改変免疫細胞を以前に投与された対象；または
（ｄ）ＣＭＶ血清陽性の対象、
から得られた免疫細胞である、請求項３９に記載の組成物。
【請求項４５】
前記単離された免疫細胞が、
（ａ）ゲノム操作されており、挿入、欠失、もしくは核酸置換を含む；または
（ｂ）少なくとも１種の遺伝子改変されたモダリティを含む、
請求項３９に記載の組成物。
【請求項４６】
前記単離された免疫細胞が、
（ａ）幹細胞、造血幹細胞、造血前駆細胞、もしくは前駆細胞からインビトロで分化された；または
（ｂ）造血系もしくは非造血系の非多能性細胞からインビトロで分化転換された、
免疫細胞である、請求項３９に記載の組成物。
【請求項４７】
前記幹細胞が誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）または胚性幹細胞（ＥＳＣ）を含む、請求項４６に記載の組成物。
【請求項４８】
前記前駆細胞がＣＤ３４＋造血性内皮細胞、多分化能前駆細胞、Ｔ細胞前駆細胞、ＮＫ前駆細胞、またはＮＫＴ前駆細胞である、請求項４６に記載の組成物。
【請求項４９】
前記幹細胞、造血幹細胞、造血前駆細胞、または前駆細胞が、
（ａ）ゲノム操作されており、挿入、欠失、もしくは核酸置換を含む、または
（ｂ）少なくとも１種の遺伝子改変されたモダリティを含む、
請求項４６に記載の組成物。
【請求項５０】
前記遺伝子改変されたモダリティが、セーフティ・スイッチタンパク質、標的化モダリティ、受容体、シグナル伝達分子、転写因子、薬剤的に活性なタンパク質およびペプチド、薬物標的候補；または、前記免疫細胞の移植、輸送、ホーミング、生存能、自己複製、残留性、免疫応答の制御および調節、並びに／もしくは生存を促進するタンパク質、のうちの少なくとも１つを含む、請求項４５または請求項４９に記載の組成物。
【請求項５１】
前記遺伝子改変されたモダリティが、（ｉ）Ｂ２Ｍ、ＴＡＰ１、ＴＡＰ２、タパシン、ＮＬＲＣ５、ＰＤ１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＲＦＸＡＮＫ、ＣＩＩＴＡ、ＲＦＸ５、またはＲＦＸＡＰ、および染色体６ｐ２１領域内のあらゆる遺伝子の発現の欠失または減少；並びに、（ｉｉ）ＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＡＣＤ１６、ｈｎＣＤ１６、４１ＢＢＬ、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４７、ＣＤ１１３、ＣＤ１３１、ＣＤ１３７、ＣＤ８０、ＰＤＬ１、Ａ２ＡＲ、Ｆｃ受容体、または、二重特異性エンゲージャー、多重特異性エンゲージャー、もしくは汎用エンゲージャーとの結合のための表面上トリガー受容体の発現の導入または増加、のうちの１または複数を含む、請求項５０に記載の組成物。
【請求項５２】
前記単離された免疫細胞が、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）および／またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする外来性核酸を含む、請求項３９に記載の組成物。
【請求項５３】
前記幹細胞、造血幹細胞、造血前駆細胞、または前駆細胞が、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）および／またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含むタンパク質をコードする外来性核酸を含む、請求項４９に記載の組成物。
【請求項５４】
前記１または複数の調節薬が、
（ａ）表１の化合物のうちの少なくとも１つ、またはその塩、エステル、エーテル、溶媒和物、水和物、立体異性体、もしくはプロドラッグ；
（ｂ）ＢＥＴ阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、またはＳｙｋ阻害剤を少なくとも含む；
（ｃ）ＰＤＫ１阻害剤を少なくとも含む；
（ｄ）Ｒａｆ阻害剤を少なくとも含む；
（ｅ）Ｓｙｋ阻害剤を少なくとも含む；
（ｆ）ＧＳＫ２３３４４７０、ＡＺ６２８、ＧＤＣ−０８７９、ダブラフェニブ、Ｒ７８８、パクリチニブ、バルドキソロンメチル、およびＰＲＴ０６２６０７のうちの少なくとも１種を含む；
（ｇ）ＧＳＫ２３３４４７０を少なくとも含む；
（ｈ）バルドキソロンメチルを少なくとも含む；または
（ｉ）ＡＺ６２８を少なくとも含む、
請求項３９に記載の組成物。
【請求項５５】
ペプチド、抗体、抗体フラグメント、サイトカイン、マイトジェン、増殖因子、スモールＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、単核血液細胞、フィーダー細胞、フィーダー細胞の成分または代替要素、１または複数の目的のポリ核酸を含むベクター、化学療法剤または放射性部分、および免疫調節薬（ＩＭｉＤ）、からなる群から選択される１または複数の添加剤をさらに含む、請求項３９に記載の組成物。
【請求項５６】
ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメトキシエタン（ＤＭＥ）、ジメチルアセトアミド、エタノールおよびこれらの組み合わせ、からなる群から選択される少なくとも１種の有機溶剤をさらに含む、請求項３９に記載の組成物。
【請求項５７】
前記調節された免疫細胞集団が、前記調節薬のうちの１または複数を含む組成物による調節を受けていない免疫細胞集団と比較した場合に、
（ａ）ＣＤ２７、ＣＣＲ７、ＣＤ６２Ｌ、ＴＣＦ７、ＬＥＦ１、ＢＬＩＭＰ−１、ＡＬＤＯＣ、およびＥＮＯ２のうちの少なくとも１つの遺伝子発現の増加；
（ｂ）ＰＤ−１およびＴｉｍ−３のうちの少なくとも１つの遺伝子発現の減少；
（ｃ）セントラルメモリーＴ細胞亜集団の増加；
（ｄ）エフェクターメモリーＴ細胞亜集団および／またはエフェクターＴ細胞亜集団の減少；
（ｅ）増殖および生存能の改善；並びに
（ｆ）腫瘍除去能および残留性の改善、
のうちの少なくとも１つが生じたＴ細胞を含む、請求項３９に記載の組成物。
【請求項５８】
前記Ｔ細胞がＣＡＲ−Ｔ細胞である、請求項５７に記載の組成物。
【請求項５９】
調節されていないＴ細胞集団と比較した場合に、
（ａ）ＣＤ２７、ＣＣＲ７、ＣＤ６２Ｌ、ＴＣＦ７、ＬＥＦ１、ＢＬＩＭＰ−１、ＡＬＤＯＣ、およびＥＮＯ２のうちの少なくとも１つの遺伝子発現の増加；
（ｂ）ＰＤ−１およびＴｉｍ−３のうちの少なくとも１つの遺伝子発現の減少；
（ｃ）セントラルメモリーＴ細胞亜集団の増加；並びに
（ｄ）エフェクターメモリーＴ細胞亜集団および／またはエフェクターＴ細胞亜集団の減少；
のうちの少なくとも１つが生じた、調節されたＴ細胞集団を含む組成物。
【請求項６０】
前記Ｔ細胞集団がＣＡＲ−Ｔ細胞を含む、請求項５９に記載の組成物。
【請求項６１】
前記Ｔ細胞集団が、
増殖および生存能の改善；並びに／または
腫瘍除去能および残留性の改善、
を生じた、請求項５９に記載の組成物。
【請求項６２】
免疫細胞を調節する方法であって、
免疫細胞集団と、ＢＥＴ阻害剤、ＣＤＫ阻害剤、ＣＲＡＣチャネル阻害剤、Ｃｏｘ阻害剤、ドパミン拮抗剤、ＥＲＫ５阻害剤、グルココルチコイド、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、Ｌｃｋ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、およびＳｙｋ阻害剤からなる群から選択される１または複数の調節薬とを、調節されていない免疫細胞と比較して、および／または接触直前の前記細胞集団と比較して、治療的有効性が改善した、且つ／または、養子免疫療法においての治療的有効性を示す１もしくは複数の特性が増加した、調節された免疫細胞を得るのに十分な時間、接触させること、
を含む、前記方法。
【請求項６３】
前記調節された免疫細胞が、前記１または複数の調節薬と接触させていない免疫細胞と比較した場合に、
（ａ）増殖、細胞毒性、サイトカイン応答、サイトカイン放出、細胞リコール、および／もしくは残留性の改善；
（ｂ）細胞増殖、維持、分化、脱分化、および／もしくは生存率の改善；または
（ｃ）１もしくは複数の目的の免疫細胞亜集団の数もしくは相対比の増加、
を生じた細胞を含む、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
前記免疫細胞集団がＴ細胞、ＮＫＴ細胞、および／またはＮＫ細胞を含む、請求項６２に記載の方法。
【請求項６５】
前記１または複数の目的の亜集団を前記調節された免疫細胞から単離すること、
をさらに含む、請求項６２に記載の方法。
【請求項６６】
前記１または複数の目的の亜集団が、
（ａ）ナイーブＴ細胞、幹細胞様メモリーＴ細胞、および／もしくはセントラルメモリーＴ細胞；
（ｂ）Ｉ型ＮＫＴ細胞；または
（ｃ）獲得ＮＫ細胞、
を含む、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
前記単離された免疫細胞が、末梢血、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位由来組織、腹水、胸水、脾臓組織、または腫瘍から得られた免疫細胞である、またはそれに含まれた免疫細胞である、請求項６２に記載の方法。
【請求項６８】
前記単離された免疫細胞が、
（ａ）健常な対象；
（ｂ）自己免疫疾患、造血器悪性腫瘍、ウイルス感染症、もしくは固形腫瘍を有する対象；
（ｃ）遺伝子改変免疫細胞を以前に投与された対象；または
（ｄ）ＣＭＶ血清陽性の対象、
から得られた免疫細胞である、請求項６２に記載の方法。
【請求項６９】
前記単離された免疫細胞が、
（ａ）ゲノム操作されており、挿入、欠失、もしくは核酸置換を含む；または
（ｂ）少なくとも１種の遺伝子改変されたモダリティを含む、
免疫細胞である、請求項６２に記載の方法。
【請求項７０】
前記単離された免疫細胞が、
（ａ）幹細胞、造血幹細胞、造血前駆細胞、もしくは前駆細胞からインビトロで分化された；または
（ｂ）造血系もしくは非造血系の非多能性細胞からインビトロで分化転換された、
免疫細胞である、請求項６２に記載の方法。
【請求項７１】
前記幹細胞が誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）または胚性幹細胞（ＥＳＣ）を含む、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
前記前駆細胞がＣＤ３４＋造血性内皮細胞、多分化能前駆細胞、Ｔ細胞前駆細胞、ＮＫ前駆細胞、またはＮＫＴ前駆細胞である、請求項７０に記載の方法。
【請求項７３】
前記幹細胞、造血幹細胞、造血前駆細胞、または前駆細胞が、
（ａ）ゲノム操作されており、挿入、欠失、もしくは核酸置換を含む、または
（ｂ）少なくとも１種の遺伝子改変されたモダリティを含む、
請求項７０に記載の方法。
【請求項７４】
前記遺伝子改変されたモダリティが、セーフティ・スイッチタンパク質、標的化モダリティ、受容体、シグナル伝達分子、転写因子、薬剤的に活性なタンパク質およびペプチド、薬物標的候補；または、前記免疫細胞の移植、輸送、ホーミング、生存能、自己複製、残留性、免疫応答の制御および調節、並びに／もしくは生存を促進するタンパク質、のうちの少なくとも１つを含む、請求項６９または請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
前記遺伝子改変されたモダリティが、（ｉ）Ｂ２Ｍ、ＴＡＰ１、ＴＡＰ２、タパシン、ＮＬＲＣ５、ＰＤ１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＲＦＸＡＮＫ、ＣＩＩＴＡ、ＲＦＸ５、またはＲＦＸＡＰ、および染色体６ｐ２１領域内のあらゆる遺伝子の発現の欠失または減少；並びに、（ｉｉ）ＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＡＣＤ１６、ｈｎＣＤ１６、４１ＢＢＬ、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４７、ＣＤ１１３、ＣＤ１３１、ＣＤ１３７、ＣＤ８０、ＰＤＬ１、Ａ２ＡＲ、Ｆｃ受容体、または、二重特異性エンゲージャー、多重特異性エンゲージャー、もしくは汎用エンゲージャーとの結合のための表面上トリガー受容体の発現の導入または増加、のうちの１または複数を含む、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
前記単離された免疫細胞が、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）および／またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする外来性核酸を含む、請求項６２に記載の方法。
【請求項７７】
前記幹細胞、造血幹細胞、造血前駆細胞、または前駆細胞が、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）および／またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含むタンパク質をコードする外来性核酸を含む、請求項７０に記載の方法。
【請求項７８】
前記１または複数の調節薬が、
（ａ）表１の化合物、およびその塩、エステル、エーテル、溶媒和物、水和物、立体異性体、もしくはプロドラッグ、のうちの少なくとも１つを含む；
（ｂ）ＢＥＴ阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、またはＳｙｋ阻害剤を少なくとも含む；
（ｃ）ＰＤＫ１阻害剤を少なくとも含む；
（ｄ）Ｒａｆ阻害剤を少なくとも含む；
（ｅ）Ｓｙｋ阻害剤を少なくとも含む；
（ｆ）ＧＳＫ２３３４４７０、ＡＺ６２８、ＧＤＣ−０８７９、ダブラフェニブ、Ｒ７８８、パクリチニブ、バルドキソロンメチル、およびＰＲＴ０６２６０７のうちの少なくとも１種を含む；
（ｇ）ＧＳＫ２３３４４７０を少なくとも含む；
（ｈ）バルドキソロンメチルを少なくとも含む；または
（ｉ）ＡＺ６２８を少なくとも含む、
請求項６２に記載の方法。
【請求項７９】
前記単離された免疫細胞集団がＴ細胞を含む、請求項６２に記載の方法。
【請求項８０】
前記調節された免疫細胞集団が、前記１または複数の調節薬と接触させていないＴ細胞を含む免疫細胞集団と比較した場合に、
（ａ）ＣＤ２７、ＣＣＲ７、ＣＤ６２Ｌ、ＴＣＦ７、ＬＥＦ１、ＢＬＩＭＰ−１、ＡＬＤＯＣ、およびＥＮＯ２のうちの少なくとも１つの遺伝子発現の増加；
（ｂ）ＰＤ−１およびＴｉｍ−３のうちの少なくとも１つの遺伝子発現の減少；
（ｃ）セントラルメモリーＴ細胞亜集団の増加；
（ｄ）エフェクターメモリーＴ細胞亜集団および／またはエフェクターＴ細胞亜集団の減少；
（ｅ）増殖および生存能の改善；並びに
（ｆ）腫瘍除去能および残留性の改善、
のうちの少なくとも１つが生じたＴ細胞を含む、請求項６２に記載の方法。
【請求項８１】
前記Ｔ細胞がＣＡＲ−Ｔ細胞である、請求項７９に記載の方法。
【請求項８２】
請求項６２〜８１に記載のＴ細胞を調節する方法。
【請求項８３】
請求項６２〜８２のいずれか一項に記載の細胞療法用のＴ細胞、ＮＫ細胞、またはＮＫＴ細胞を含む調節された免疫細胞を含む治療用組成物を作製する方法。
【請求項８４】
請求項６２〜８２のいずれか一項において作製された、調節された免疫細胞集団。
【請求項８５】
請求項６２〜８３において作製された、調節されたＴ細胞集団。
【請求項８６】
調節されていないＴ細胞集団と比較した場合に、
（ａ）ＣＤ２７、ＣＣＲ７、ＣＤ６２Ｌ、ＴＣＦ７、ＬＥＦ１、ＢＬＩＭＰ−１、ＡＬＤＯＣ、およびＥＮＯ２のうちの少なくとも１つの遺伝子発現の増加；
（ｂ）ＰＤ−１およびＴｉｍ−３のうちの少なくとも１つの遺伝子発現の減少；
（ｃ）セントラルメモリーＴ細胞亜集団の増加；並びに
（ｄ）エフェクターメモリーＴ細胞亜集団および／またはエフェクターＴ細胞亜集団の減少；
のうちの少なくとも１つが生じた、調節されたＴ細胞集団。
【請求項８７】
請求項６２〜８３のいずれか一項において作製された前記調節された免疫細胞と、治療上許容できる培地と、を含む治療用組成物。
【請求項８８】
ペプチド、サイトカイン、マイトジェン、増殖因子、スモールＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ（二本鎖ＲＮＡ）、単核血液細胞、フィーダー細胞、フィーダー細胞の成分または代替要素、１または複数の目的のポリ核酸を含むベクター、抗体、化学療法剤または放射性部分、および免疫調節薬（ＩＭｉＤ）からなる群から選択される１または複数の追加の添加剤をさらに含む、請求項８７に記載の治療用組成物。
【請求項８９】
治療に十分な量の請求項８７または請求項８８に記載の治療用組成物を、養子免疫療法を必要とする対象に投与することにより、前記対象を治療する方法であって、自家細胞療法であっても他家細胞療法であってもよく、前記対象が自己免疫障害、造血器腫瘍、固形腫瘍、またはＨＩＶ、ＲＳＶ、ＥＢＶ、ＣＭＶ、アデノウイルス、もしくはＢＫポリオーマウイルスが関連した感染症を有する、前記方法。
【請求項９０】
抗体療法、化学療法、または放射線療法と組み合わせて、治療に十分な量の請求項８７に記載の治療用組成物を投与することにより対象を治療する方法であって、前記抗体療法、化学療法、または放射線療法が前記治療用組成物の投与前、投与と同時、投与後である、前記方法。
【請求項９１】
請求項６２〜８３のいずれか一項に記載の方法に従った細胞療法用の治療用組成物を製造するための混合物の使用であって、前記混合物が
（ａ）単離された免疫細胞集団と、
（ｂ）ＢＥＴ阻害剤、ＣＤＫ阻害剤、ＣＲＡＣチャネル阻害剤、Ｃｏｘ阻害剤、ドパミン拮抗剤、ＥＲＫ５阻害剤、グルココルチコイド、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、Ｌｃｋ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、およびＳｙｋ阻害剤からなる群から選択される１または複数の調節薬を含む組成物と、
前記（ｂ）の組成物が接触後に前記（ａ）の細胞の治療的有効性を改善することが可能な、前記使用。
【請求項９２】
前記１または複数の調節薬が、
（ａ）表１の化合物、およびその塩、エステル、エーテル、溶媒和物、水和物、立体異性体、もしくはプロドラッグ、のうちの少なくとも１つを含む；
（ｂ）ＢＥＴ阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、またはＳｙｋ阻害剤を少なくとも含む；
（ｃ）ＰＤＫ１阻害剤を少なくとも含む；
（ｄ）Ｒａｆ阻害剤を少なくとも含む；
（ｅ）Ｓｙｋ阻害剤を少なくとも含む；
（ｆ）ＧＳＫ２３３４４７０、ＡＺ６２８、ＧＤＣ−０８７９、ダブラフェニブ、Ｒ７８８、パクリチニブ、バルドキソロンメチル、およびＰＲＴ０６２６０７のうちの少なくとも１種を含む；
（ｇ）ＧＳＫ２３３４４７０を少なくとも含む；
（ｈ）バルドキソロンメチルを少なくとも含む；または
（ｉ）ＡＺ６２８を少なくとも含む、
請求項９１に記載の使用。
【請求項９３】
前記単離された免疫細胞集団がＴ細胞を含む、請求項９１に記載の使用。
【請求項９４】
調節されていない、Ｔ細胞を含む免疫細胞集団と比較した場合に、前記単離された免疫細胞集団が、接触後に、
（ａ）ＣＤ２７、ＣＣＲ７、ＣＤ６２Ｌ、ＴＣＦ７、ＬＥＦ１、ＢＬＩＭＰ−１、ＡＬＤＯＣ、およびＥＮＯ２のうちの少なくとも１つの遺伝子発現の増加；
（ｂ）ＰＤ−１およびＴｉｍ−３のうちの少なくとも１つの遺伝子発現の減少；
（ｃ）セントラルメモリーＴ細胞亜集団の増加；
（ｄ）エフェクターメモリーＴ細胞亜集団および／またはエフェクターＴ細胞亜集団の減少；
（ｅ）増殖および生存能の改善；並びに
（ｆ）腫瘍除去能および残留性の改善、
のうちの少なくとも１つが生じたＴ細胞を含む、請求項９１に記載の使用。
【請求項９５】
前記Ｔ細胞がＣＡＲ−Ｔ細胞である、請求項９３または請求項９４に記載の使用。
【請求項９６】
請求項６２〜８３のいずれか一項に記載の免疫細胞を製造する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、２０１７年７月１９日に出願された米国仮特許出願第６２／５３４，５３７号、および２０１８年２月９日に出願された同第６２／６２８，７３３号に基づく優先権を主張するものであり、これらの開示の全体が参照によって本明細書に援用される。
【０００２】
発明の技術分野
本開示は、広くは養子免疫細胞療法の分野に関する。より具体的には、本開示は、養子細胞療法に適した免疫細胞を調節するための小分子の使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
養子免疫療法は、がん、腫瘍、または感染症を有する患者に免疫細胞を投与することを通常含み、この投与された免疫細胞によって患者に対する治療効果が通常発揮される治療法である。一般的に、免疫療法に好適な免疫細胞としては、Ｂ細胞、樹状細胞（ＤＣ）、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫＴ（ナチュラルキラーＴ）細胞、および造血幹細胞、造血前駆細胞が挙げられるが、これらに限定はされない。完全で持続的な疾患応答を患者にもたらすことが、これらの細胞をベースとした免疫療法の主要な目標となる。
【０００４】
養子Ｔ細胞療法の有効性の背景にある、ある特定の生物学的メカニズムの諸相として、例えば、限定はされないが、ＣＡＲ−Ｔ細胞、ＴＣＲ−Ｔ細胞、ウイルス特異的Ｔ細胞（ＶＳＴ）、および腫瘍浸潤Ｔ細胞（ＴＩＬ）が挙げられるが、これらにより、移植されたＴ細胞に関連したある種の特性の重要性と、がん治療で最良の成功を収めるためにある状況では乗り越えなければならない場合がある、宿主細胞および腫瘍細胞が引き起こすある種の阻害性障壁と、が注目されている。Ｔ細胞の要素の中で、ある種の相関研究から得られた情報などに基づく、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の結合活性、増殖能および生存能、腫瘍部位への移動、および腫瘍内でのエフェクター機能の保持能が、悪性細胞の根絶を引き起こすために、ある状況では重要となり得る。さらに複雑なことに、特定の望ましい特性が認知される一方で、これらの特性に影響を与える経路または要因が完全には明らかになっていない場合があり、これにより、特定の治療用途のために目的の量および質を有する細胞を得る能力が制限を受ける場合がある提供された実施形態の中には、このようなニーズに対処するものがある。
【０００５】
例としてＣＡＲ−Ｔ細胞療法の以前の方法を用いる場合、治療用組成物は、ＣＡＲ−Ｔの効力と残留性、腫瘍への移動、免疫抑制的な腫瘍内微小環境、腫瘍の不均一性、および患者の安全性などに関連した１または複数の課題に直面する場合がある。
【０００６】
例えば、Ｔ細胞療法および他の細胞療法の治療効果を増強し、且つ／または、投与後の操作された細胞の残留性および／もしくは移動を改善できる、さらなる方法が必要とされている。例えば、目的の免疫細胞サブセットの維持と増殖に有用な組成物および方法が必要とされているだけでなく、増殖中の細胞分化の低減に有用な組成物および方法も必要とされている。また、表現型の分化度が低い細胞（または操作された細胞）を含む、もしくはそれが富化された、且つ／または、例えば様々な養子免疫療法の状況下で、増殖能と残留能がより大きく、且つ／もしくは１もしくは複数の治療成績を改善する能力がより高い免疫細胞サブセットなどの、１または複数の目的の免疫細胞サブセット、を含有する、もしくはそれが濃縮された、すなわち操作されたもしくは治療用の細胞が濃縮された、治療用組成物の作製に有用な組成物および方法も必要とされている。提供された実施形態の中には、このようなニーズに対処するものがある。
【０００７】
ＮＫ細胞ベースの治療法関連でも、さらなる方法および組成物が必要とされている。ナチュラルキラー細胞は、これまで、比較的短命で、二次的な刺激暴露に応答してごく小さな変化しか示さず、限定された標的記憶応答しか示さないことを特徴とする、自然免疫細胞に分類されてきた。しかし、自己寛容およびＮＫ細胞活性の維持などでは、活性化性および抑制性のＮＫ細胞受容体の両方が重要な役割を担っている可能性がある。ＮＫ細胞は、ある状況下で、容易に周囲環境に適応し、同一抗原への二次暴露に対する応答の基礎となる抗原特異的な免疫記憶を作ることができる。例えば、獲得ＮＫ細胞（adaptive NK cell）またはメモリーＮＫ細胞と呼ばれる場合がある、ＮＫ細胞の亜集団は、寿命が長く、初期暴露後の刺激に対する応答が増強されているなど、ＣＤ８＋Ｔ細胞に類似した多くの機能的特徴を有し得る（Min-Oo et al. 2013）。提供された実施形態の中には、このようなニーズに対処するものがある。
【発明の概要】
【０００８】
Ｔ細胞およびＮＫ細胞と同様、ＣＤ１ｄ制限Ｔ細胞の一種であり、自然免疫系および獲得免疫系の両方に関与しており、細胞療法を改善するための調節の標的となり得る、より効果的なＮＫＴ細胞を単離するための改善が可能であると考えられている。
【０００９】
すなわち、目的のＴ細胞サブセット、ＮＫ細胞サブセット、またはＮＫＴ細胞サブセットを量的且つ質的に増強できる製造法であれば、それらの治療効果の有意な増強を実現できる。
【００１０】
当該技術分野では、治療効果が改善された免疫細胞サブセットが必要とされている。
【００１１】
そのような需要に対応し、免疫細胞療法分野における利点を含む他の関連した利点を提供する、方法および組成物が提供される。
【００１２】
本発明は、いくつかの実施形態において、養子免疫療法におけるその治療的有効性を改善するために、１または複数の免疫細胞集団または免疫細胞亜集団を調節するための組成物および方法を提供する。本発明の実施形態の目的は、例えば、より良好な免疫療法の結果をもたらすことが期待される以下の特性（遊走、ホーミング、細胞毒性、維持、増殖、残留性、長寿命、および目的の分化状態）のうちの少なくとも１つにおける改善を示す細胞亜集団の数または相対比を増加させることによる、治療用免疫細胞の増殖、残留性、細胞毒性、および／または細胞リコール／記憶を改善するための、単独であっても組み合わされてもよい、１または複数の化合物を提供する。
【００１３】
本発明の１つの態様は、養子細胞をベースとした治療法に好適な免疫細胞の治療的有効性を改善するための組成物を提供し、前記組成物は、ＢＥＴ阻害剤、ＣＤＫ阻害剤、ＣＲＡＣチャネル阻害剤、Ｃｏｘ阻害剤、ドパミン拮抗剤、ＥＲＫ５阻害剤、グルココルチコイド、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、Ｌｃｋ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、およびＳｙｋ阻害剤からなる群から選択される１または複数の調節薬を含む。前記１または複数の薬剤は、細胞との接触後に、免疫細胞、または１もしくは複数のその亜集団、の治療的有効性を改善する。いくつかの実施形態では、前記免疫細胞の調節はエキソビボにおける調節である。いくつかの実施形態では、前記１または複数の調節薬は、表１の化合物のうちの少なくとも１つ、またはその塩、エステル、エーテル、溶媒和物、水和物、立体異性体、もしくはプロドラッグ、を含む。いくつかの実施形態では、前記１または複数の調節薬は、ＢＥＴ阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、またはＳｙｋ阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、前記１または複数の調節薬は、ＰＤＫ１阻害剤を少なくとも含む。いくつかの他の実施形態では、前記１または複数の調節薬は、Ｒａｆ阻害剤を少なくとも含む。いくつかの他の実施形態では、前記１または複数の調節薬は、Ｓｙｋ阻害剤を少なくとも含む。さらに別の実施形態では、前記１または複数の調節薬は、ＧＳＫ２３３４４７０、ＡＺ６２８、ＧＤＣ−０８７９、ダブラフェニブ、Ｒ７８８、パクリチニブ、バルドキソロンメチル、およびＰＲＴ０６２６０７のうちの少なくとも１つを含む。１つの実施形態では、前記１または複数の調節薬は、ＧＳＫ２３３４４７０を少なくとも含む。別の実施形態では、前記１または複数の調節薬は、ＡＺ６２８を少なくとも含む。さらに別の実施形態では、前記１または複数の調節薬は、Ｒ７８８を含む。いくつかの他の実施形態では、１または複数の調節薬の前記組成物はバルドキソロンメチルを含む。
【００１４】
いくつかの実施形態では、前記１または複数の調節薬は、細胞の増殖、維持および／または分化を調節することにより、前記免疫細胞または１もしくは複数のその亜集団の増殖、細胞毒性、サイトカイン応答、サイトカイン分泌、細胞リコール、および／または残留性を改善する。
【００１５】
１つの実施形態では、前記１または複数の調節薬は、エキソビボおよびインビボの両方において、前記免疫細胞または１もしくは複数のその亜集団の細胞生存率を改善する。
【００１６】
１つの実施形態では、前記１または複数の調節薬は、前記免疫細胞の１または複数の目的の細胞亜集団の数または相対比を増加させる。
【００１７】
いくつかの実施形態において、本発明は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、およびＮＫＴ細胞を包含するがこれらに限定はされない、免疫細胞集団または免疫細胞亜集団の治療効果を改善するための、本明細書において選択された、１または複数の薬剤を提供する。いくつかの実施形態では、養子細胞をベースとした治療法に好適な免疫細胞は、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞、またはＮＫ細胞を含む。いくつかの実施形態では、１または複数の調節薬による処理を受ける免疫細胞はＴ細胞を含み、従って、数または相対比が増加した前記１または複数の目的の細胞亜集団は、ナイーブＴ細胞、幹細胞様メモリーＴ細胞、および／もしくはセントラルメモリーＴ細胞を含む。いくつかの実施形態では、前記薬剤による処理を受ける免疫細胞はＮＫＴ細胞を含み、従って、数または相対比が増加した前記１または複数の目的の細胞亜集団はＩ型ＮＫＴ細胞を含む。いくつかの実施形態では、前記薬剤による処理を受ける免疫細胞はＮＫ細胞を含み、数または相対比が増加した前記１または複数の目的の細胞亜集団は獲得ＮＫ細胞を含む。
【００１８】
いくつかの態様において、本発明は、免疫細胞集団または免疫細胞亜集団と、ＢＥＴ阻害剤、ＣＤＫ阻害剤、ＣＲＡＣチャネル阻害剤、Ｃｏｘ阻害剤、ドパミン拮抗剤、ＥＲＫ５阻害剤、グルココルチコイド、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、Ｌｃｋ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、またはＳｙｋ阻害剤を少なくとも含む１または複数の調節薬と、を含む組成物を提供する。いくつかの実施形態では、前記免疫細胞を、前記１または複数の前記調節薬と接触させることで、そのような摂食を行わなかった免疫細胞と比較して、養子免疫療法における前記免疫細胞の治療的有効性を改善させる。いくつかの実施形態では、前記免疫細胞を前記１または複数の薬剤と接触させることで、同じ処理を受けなかった免疫細胞と比較して、細胞増殖、維持、分化、脱分化、および／または生存率を改善させる。さらにいくつかの他の実施形態では、前記免疫細胞を１または複数の前記調節薬と接触させることで、同じ処理を受けなかった免疫細胞と比較して、細胞増殖、細胞毒性、残留性、および／またはリコールを改善する。
【００１９】
いくつかの実施形態では、１または複数の前記調節薬と接触した前記免疫細胞は、同じ処理を受けなかった免疫細胞と比較して、前記免疫細胞の目的の亜集団の数または相対比が増加している。いくつかの実施形態では、前記免疫細胞は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはＮＫＴ細胞を含む。１つの実施形態では、前記組成物はＴ細胞集団を含み、従って、前記薬剤と接触後の目的の免疫細胞亜集団はナイーブＴ細胞、幹細胞様メモリーＴ細胞、および／もしくはセントラルメモリーＴ細胞を含む。いくつかの実施形態では、前記組成物はＮＫＴ細胞集団を含み、従って、前記薬剤と接触後の目的の免疫細胞亜集団はＩ型ＮＫＴ細胞を含む。さらにいくつかの他の実施形態では、前記免疫細胞はＮＫ細胞集団を含み、従って、前記薬剤と接触後の目的の免疫細胞亜集団は獲得ＮＫ細胞を含む。他の実施形態では、前記獲得ＮＫ細胞は、ＣＤ５７陽性と、ＮＫＧ２Ｃ陽性、ＰＬＺＦ低発現、ＳＹＫ低発現、ＦｃεＲγ低発現、ＥＡＴ−２低発現、ＴＩＧＩＴ低発現、ＰＤ１低発現、ＣＤ７低発現、ＣＤ１６１低発現、ＬＩＬＲＢ１高発現、ＣＤ４５ＲＯ高発現、およびＣＤ４５ＲＡ低発現のうちの少なくとも１つと、を含む。
【００２０】
いくつかの実施形態では、前記組成物の免疫細胞集団または免疫細胞亜集団は、対象の末梢血、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位由来組織、腹水、胸水、脾臓組織、もしくは腫瘍から単離された、またはそれに含まれる、免疫細胞集団または免疫細胞亜集団である。前記対象は、健常対象であってもよいし、自己免疫疾患、造血器悪性腫瘍、ウイルス感染症、もしくは固形腫瘍を有する対象であってもよいし、または、遺伝子改変免疫細胞を以前に投与されたことがある対象であってもよい。いくつかの実施形態では、前記対象はＣＭＶ血清陽性の対象であってもよい。いくつかの他の実施形態では、前記調節のための単離された免疫細胞は、遺伝子改変された免疫細胞（遺伝子操作された免疫細胞、または再構成、変異、ゲノムインプリンティング、および／もしくはエピジェネティック修飾より生じた免疫細胞）である。いくつかの実施形態では、前記調節のための単離された免疫細胞は、少なくとも１種の遺伝子改変されたモダリティを含む。いくつかの実施形態では、前記単離された免疫細胞集団は、ゲノム操作されており、挿入、欠失、および／または核酸置換を含む。いくつかの特定の実施形態では、前記免疫細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、および／または、過剰発現のＣＤ１６もしくはそのバリアント、をコードする外来性核酸を含む。従って、前記遺伝子改変された免疫細胞は、本開示の組成物および方法を用いたエキソビボでの調節のために単離される。いくつかの実施形態では、調節後、対象から単離された前記遺伝子改変された免疫細胞は、同じドナーまたは異なる患者に投与され得る。
【００２１】
いくつかの実施形態では、前記免疫細胞は、以下からなる群から選択される腫瘍抗原または病原体抗原に特異的なＣＡＲを含む：ＡＣｈＲ（胎児アセチルコリン受容体）、ＡＤＧＲＥ２、ＡＦＰ（αフェトプロテイン）、ＢＡＦＦ−Ｒ、ＢＣＭＡ、ＣＡＩＸ（炭酸脱水酵素ＩＸ）、ＣＣＲ１、ＣＣＲ４、ＣＥＡ（癌胎児抗原）、ＣＤ３、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ７、ＣＤ１０、ＣＤ１３、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＬＬＩ、ＣＤ３４、ＣＤ３８、ＣＤ４１、ＣＤ４４、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ５６、ＣＤ６１、ＣＤ６４、ＣＤ６８、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ９９、ＣＤ１１７、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ２６７、ＣＤ２６９、ＣＤＳ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＣＳ１、ＥＧＰ−２（上皮糖タンパク質２）、ＥＧＰ−４０（上皮糖タンパク質４０）、ＥＧＦＲ（ＨＥＲ１）、ＥＧＦＲ−ＶＩＩＩ、ＥｐＣＡＭ（上皮細胞接着分子）、ＥｐｈＡ２、ＥＲＢＢ２（ＨＥＲ２、ヒト上皮増殖因子受容体２）、ＥＲＢＢ３、ＥＲＢＢ４、ＦＢＰ（葉酸塩結合タンパク質）、Ｆｌｔ３受容体、葉酸受容体−α、ＧＤ２（ガングリオシドＧ２）、ＧＤ３（ガングリオシドＧ３）、ＧＰＣ３（グリピカン−３）、ＧＰＩ００、ｈＴＥＲＴ（ヒトテロメラーゼ逆転写酵素）、ＩＣＡＭ−１、インテグリンＢ７、インターロイキン６受容体、ＩＬ１３Ｒａ２（インターロイキン１３受容体３０サブユニットα−２（interleukin-13 receptor 30 subunit alpha-2））、κ−軽鎖、ＫＤＲ（キナーゼインサートドメイン受容体（kinase insert domain receptor））、ＬｅＹ（ルイスＹ（Lewis Y））、Ｌ１ＣＡＭ（Ｌ１細胞接着分子）、ＬＩＬＲＢ２（白血球免疫グロブリン様受容体Ｂ２（leukocyte immunoglobulin like receptor B2））、ＭＡＲＴ１、ＭＡＧＥ−Ａｌ（メラノーマ関連抗原Ａ１）、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＳＬＮ（メソテリン）、ＭＵＣ１６（ムチン１６）、ＭＵＣＩ（ムチンＩ）、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ−ＥＳＯ−１（がん／精巣抗原）、ＰＲＩ（プロテアーゼ３）、ＴＲＢＣＩ、ＴＲＢＣ２、ＴＩＭ−３、ＴＡＣＩ、チロシナーゼ、サバイビン、ｈＴＥＲＴ、腫瘍胎児抗原（ｈ５Ｔ４）、ｐ５３、ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原）、ＰＳＭＡ（前立腺特異的膜抗原）、ｈＲＯＲ１、ＴＡＧ−７２（腫瘍関連糖タンパク質７２）、ＶＥＧＦ−Ｒ２（血管内皮増殖因子Ｒ２）、ＷＴ−１（ウィルムス腫瘍タンパク質）、並びにＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス）抗原、Ｂ型肝炎抗原、Ｃ型肝炎抗原、ＣＭＶ（サイトメガロウイルス）抗原、ＥＢＶ（エプスタイン・バーウイルス）抗原、ＨＰＶ（ヒトパピローマウイルス）抗原。
【００２２】
１つの実施形態では、前記調節のための免疫細胞およびそれから得られた前記調節された免疫細胞は、ＣＤ１９に特異的なＣＡＲを少なくとも含む。別の実施形態では、前記調節のための免疫細胞およびそれから得られた前記調節された免疫細胞は、ＢＣＭＡに特異的なＣＡＲを少なくとも含む。
【００２３】
さらに別の実施形態では、前記免疫細胞は、幹細胞、造血幹細胞、造血前駆細胞、もしくは前駆細胞からインビトロで分化されるか；または、造血系もしくは非造血系の非多能性細胞からインビトロで分化転換される。いくつかの実施形態では、前記組成物の免疫細胞は、ゲノム操作されており、挿入、欠失、核酸置換（例えば、１または複数のヌクレオチドの置換、またはインデル）、またはこれらの組み合わせを含む。いくつかの特定の実施形態では、前記組成物の免疫細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）および／またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする外来性核酸を含む。いくつかの実施形態では、対象の組織から単離された前記免疫細胞は、遺伝子改変され、ＴＣＲまたはＣＡＲを含み得る。いくつかの実施形態では、対象の組織から単離された免疫細胞は、ＣＡＲ−Ｔ細胞である。
【００２４】
いくつかのさらに他の実施形態では、前記組成物の免疫細胞は、幹細胞、造血幹細胞、造血前駆細胞、もしくは前駆細胞からインビトロで分化される。１つの実施形態では、前記幹細胞は、誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）または胚性幹細胞（ＥＳＣ）である。１つの実施形態では、前記前駆細胞は、ＣＤ３４＋造血性内皮細胞、多分化能前駆細胞、Ｔ細胞前駆細胞、ＮＫ前駆細胞、またはＮＫＴ前駆細胞である。いくつかの実施形態では、前記幹細胞、造血幹細胞、造血前駆細胞、または前駆細胞は、ゲノム操作されており、挿入、欠失、もしくは核酸置換を含むか、または少なくとも１種の遺伝子改変されたモダリティを含む。１つの特定の実施形態では、前記幹細胞、造血幹細胞、造血前駆細胞、または前駆細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、および／または過剰発現のＣＤ１６をコードする外来性核酸を含む。いくつかの他の実施形態では、前記組成物の免疫細胞は、造血系または非造血系の非多能性細胞からインビトロで分化転換される。いくつかの実施形態では、前記調節後の目的の免疫細胞亜集団は、少なくとも１つの遺伝子改変されたモダリティを有する免疫細胞を含む。いくつかの実施形態では、前記遺伝子改変されたモダリティは、以下のうちの少なくとも１つを含む：セーフティ・スイッチタンパク質、標的化モダリティ、受容体、シグナル伝達分子、転写因子、薬剤的に活性なタンパク質およびペプチド、薬物標的候補；または、前記免疫細胞の生着、輸送、ホーミング、生存度、自己複製、残留性、免疫応答の制御および調節、並びに／もしくは生存を促進するタンパク質。いくつかの他の実施形態では、前記遺伝子改変モダリティは以下のうちの１または複数を含む：（ｉ）Ｂ２Ｍ、ＴＡＰ１、ＴＡＰ２、タパシン、ＮＬＲＣ５、ＰＤ１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＲＦＸＡＮＫ、ＣＩＩＴＡ、ＲＦＸ５、またはＲＦＸＡＰ、および染色体６ｐ２１領域内のＨＬＡ遺伝子のいずれか、の発現の欠失または低減；並びに、（ｉｉ）ＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＡＣＤ１６、ｈｎＣＤ１６、４１ＢＢＬ、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４７、ＣＤ１１３、ＣＤ１３１、ＣＤ１３７、ＣＤ８０、ＰＤＬ１、Ａ２ＡＲ、Ｆｃ受容体、または二重特異性エンゲージャー、多重特異性エンゲージャー、もしくは汎用エンゲージャーとの結合のための表面上トリガー受容体、の発現の導入または増加。
【００２５】
いくつかの実施形態では、前記免疫細胞および１または複数の前記調節薬を含む前記組成物は、以下からなる群から選択される、さらなる追加の調節薬または他の添加剤／薬剤の１つをさらに含む：ペプチド、サイトカイン、マイトジェン、増殖因子、スモールＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ（二本鎖ＲＮＡ）、単核血液細胞、フィーダー細胞、フィーダー細胞成分または代替要素、１または複数の目的のポリ核酸を含むベクター；抗体、または抗体フラグメント；および化学療法剤、放射性部分、または免疫調節薬（ＩＭｉＤ）。これらの実施形態のいくつかにおいて、前記抗体または抗体フラグメントは、ウイルス抗原に特異的に結合する。他の実施形態では、前記抗体または抗体フラグメントは、腫瘍抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、前記追加の添加剤は、化学療法剤、放射性部分、および免疫調節薬（ＩＭｉＤ）のうちの１または複数を含む。化学療法剤とは、細胞傷害性の抗悪性腫瘍薬を指し、すなわち、優先的に新生細胞を死滅させるか急速増殖細胞の細胞周期を乱す、またはがん幹細胞（stem cancer cell）を根絶することが分かっている、且つ、新生細胞の成長を阻止または低減するために治療的に用いられる、化学薬品を指す。化学療法剤は、抗悪性腫瘍薬、抗悪性腫瘍剤、細胞傷害性薬物または細胞傷害性薬剤と称される場合もあり、当該技術分野において周知である。
【００２６】
１つの特定の実施形態では、前記組成物は、免疫細胞集団または免疫細胞亜集団と、１または複数の調節薬との混合物を含み、前記１または複数の調節薬は、（ｉ）表１の化合物のうちの少なくとも１つ、またはその塩、エステル、エーテル、溶媒和物、水和物、立体異性体、もしくはプロドラッグ、を含むか；（ｉｉ）ＢＥＴ阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、またはＳｙｋ阻害剤を少なくとも含むか；（ｉｉｉ）ＰＤＫ１阻害剤を少なくとも含むか；（ｉｖ）Ｒａｆ阻害剤を少なくとも含むか；（ｖ）Ｓｙｋ阻害剤を少なくとも含むか；（ｖｉ）ＧＳＫ２３３４４７０、ＡＺ６２８、ＧＤＣ−０８７９、ダブラフェニブ、Ｒ７８８、パクリチニブ、バルドキソロンメチル、およびＰＲＴ０６２６０７のうちの少なくとも１つを含むか；（ｖｉｉ）ＧＳＫ２３３４４７０を少なくとも含むか；（ｖｉｉｉ）バルドキソロンメチルを少なくとも含むか；（ｉｘ）ＡＺ６２８を少なくとも含む。
【００２７】
別の実施形態では、免疫細胞集団または免疫細胞亜集団と、１または複数の前記調節薬と、の混合物を含む前記組成物は、ペプチド、抗体、抗体フラグメント、サイトカイン、マイトジェン、増殖因子、スモールＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、単核血液細胞、フィーダー細胞、フィーダー細胞の成分または代替要素、１または複数の目的のポリ核酸を含むベクター、化学療法剤または放射性部分、および免疫調節薬（ＩＭｉＤ）、からなる群から選択される１または複数の添加剤、をさらに含む。さらに別の実施形態では、免疫細胞集団または免疫細胞亜集団と、１または複数の前記調節薬と、の混合物を含む前記組成物は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメトキシエタン（ＤＭＥ）、ジメチルアセトアミド、エタノール、およびこれらの組み合わせ、からなる群から選択される少なくとも１つの有機溶剤も含む。１つの実施形態では、前記組成物中の免疫細胞集団または免疫細胞亜集団はＴ細胞を含む。いくつかの実施形態では、前記細胞集団中のＴ細胞はＣＡＲ−Ｔ細胞を含む。
【００２８】
いくつかの態様において、ＢＥＴ阻害剤、ＣＤＫ阻害剤、ＣＲＡＣチャネル阻害剤、Ｃｏｘ阻害剤、ドパミン拮抗剤、ＥＲＫ５阻害剤、グルココルチコイド、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、Ｌｃｋ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、およびＳｙｋ阻害剤からなる群から選択される少なくとも１つの調節薬から選択される１または複数の薬剤を含む組成物と接触させられた、調節された免疫細胞集団を含む組成物が提供される。いくつかの実施形態では、提供される前記組成物は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、およびＮＫＴ細胞を含むがこれらに限定はされない、調節された免疫細胞の集団または亜集団を有する治療用組成物である。いくつかの実施形態では、前記治療用組成物は、前記調節薬を実質的に含まない緩衝液で洗浄され得る。
【００２９】
いくつかの実施形態では、前記調節された細胞集団は、調節されていない細胞集団と比較して、養子免疫療法における治療的有効性が改善された免疫細胞を含む。いくつかの実施形態では、前記単離された免疫細胞集団は、前記１または複数の薬剤による処理を受けなかった免疫細胞と比較して、細胞増殖、維持、分化、脱分化、および／または生存率が改善されている。いくつかの実施形態では、前記単離された免疫細胞集団は、前記１または複数の薬剤による処理を受けなかった、いくつかの態様においては係る１または複数の薬剤を含んでいない類似の条件下でインキュベートまたは処理された、免疫細胞と比較して、細胞増殖、細胞毒性、サイトカイン応答、サイトカイン分泌、細胞リコール、および残留性が改善されている。いくつかの他の実施形態では、前記単離された免疫細胞集団は、同じ処理を受けなかった免疫細胞と比較して、前記免疫細胞の１または複数の目的の亜集団の数または相対比が増加している。
【００３０】
いくつかの実施形態では、１または複数の前記調節薬で処理された前記単離された免疫細胞集団は、Ｔ細胞を含み、従って、得られる１または複数の目的の免疫細胞亜集団は、ナイーブＴ細胞、幹細胞様メモリーＴ細胞、および／もしくはセントラルメモリーＴ細胞を含む。いくつかの実施形態では、１または複数の薬剤で処理された前記単離された免疫細胞集団は、ＮＫＴ細胞を含み、従って、得られる１または複数の目的の免疫細胞亜集団は、Ｉ型ＮＫＴ細胞を含む。いくつかのさらに他の実施形態では、１または複数の薬剤で処理された前記単離された免疫細胞集団は、ＮＫ細胞を含み、従って、前記１または複数の目的の免疫細胞亜集団は獲得ＮＫ細胞を含む。
【００３１】
提供される前記組成物のいくつかの実施形態では、前記単離された免疫細胞集団は、対象の末梢血、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位由来組織、腹水、胸水、脾臓組織、または腫瘍から単離され得る。前記対象は、健常対象であってもよいし、自己免疫疾患、造血器悪性腫瘍、ウイルス感染症、もしくは固形腫瘍を有する対象であってもよいし、または、遺伝子改変された免疫細胞を以前に投与されたことがある対象であってもよい。いくつかの実施形態では、前記対象はＣＭＶ血清陽性の対象であってもよい。いくつかの他の実施形態では、前記調節のための単離された免疫細胞は、遺伝子改変された免疫細胞（遺伝子操作された免疫細胞、または再構成、変異、ゲノムインプリンティング、および／もしくはエピジェネティック修飾より生じた免疫細胞）である。いくつかの実施形態では、前記調節のための単離された免疫細胞は、少なくとも１種の遺伝子改変されたモダリティを含む。いくつかの実施形態では、前記単離された免疫細胞集団は、ゲノム操作されており、挿入、欠失、および／または核酸置換を含む。いくつかの特定の実施形態では、前記免疫細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、および／または、過剰発現のＣＤ１６もしくはそのバリアント、をコードする外来性核酸を含む。従って、前記遺伝子改変された免疫細胞は、本開示の組成物および方法を用いたエキソビボでの調節のために単離される。いくつかの実施形態では、調節後、対象から単離された前記遺伝子改変された免疫細胞は、同じドナーまたは異なる患者に投与され得る。
【００３２】
提供される前記組成物のいくつかの実施形態では、前記単離された免疫細胞集団は、幹細胞、造血幹細胞、造血前駆細胞、または前駆細胞から分化され得る。いくつかの実施形態では、前記単離された免疫細胞集団は、前記薬剤による処理前または処理中に、幹細胞、造血幹細胞、造血前駆細胞、または前駆細胞から分化され得る。いくつかの実施形態では、前記幹細胞は、誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）または胚性幹細胞（ＥＳＣ）である。いくつかの実施形態では、前記前駆細胞は、ＣＤ３４＋造血性内皮細胞、多分化能前駆細胞、Ｔ細胞前駆細胞、ＮＫ前駆細胞、またはＮＫＴ前駆細胞である。いくつかのさらなる実施形態では、前記幹細胞、造血幹細胞、造血前駆細胞、前駆細胞、前記調節のための派生免疫細胞、または調節された派生免疫細胞は、ゲノム操作されており、例えば、挿入、欠失、および／または核酸置換を含む。１つの特定の実施形態では、前記幹細胞、造血幹細胞、造血前駆細胞、または前駆細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、および／または過剰発現のＣＤ１６をコードする外来性核酸を含む。
【００３３】
提供される前記組成物のいくつかの他の実施形態では、前記単離された免疫細胞集団は、造血系または非造血系の非多能性細胞から分化転換され得る。いくつかの実施形態では、前記単離された免疫細胞集団は、前記薬剤による処理前または処理中に、造血系または非造血系の非多能性細胞から分化転換され得る。
【００３４】
提供される前記組成物のいくつかの実施形態では、前記単離された免疫細胞集団は、組成物で調節されたＴ細胞を含み、前記組成物は、（ｉ）表１の化合物のうちの少なくとも１つ、またはその塩、エステル、エーテル、溶媒和物、水和物、立体異性体、もしくはプロドラッグ、を含むか；（ｉｉ）ＢＥＴ阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、またはＳｙｋ阻害剤を少なくとも含むか；（ｉｉｉ）ＰＤＫ１阻害剤を少なくとも含むか；（ｉｖ）Ｒａｆ阻害剤を少なくとも含むか；（ｖ）Ｓｙｋ阻害剤を少なくとも含むか；（ｖｉ）ＧＳＫ２３３４４７０、ＡＺ６２８、ＧＤＣ−０８７９、ダブラフェニブ、Ｒ７８８、パクリチニブ、バルドキソロンメチル、およびＰＲＴ０６２６０７のうちの少なくとも１つを含むか；（ｖｉｉ）ＧＳＫ２３３４４７０を少なくとも含むか；（ｖｉｉｉ）バルドキソロンメチルを少なくとも含むか；（ｉｘ）ＡＺ６２８を少なくとも含む。
【００３５】
提供される前記組成物のいくつかの実施形態では、前記単離された免疫細胞集団は、Ｔ細胞を含む。いくつかの実施形態では、前記単離された免疫細胞集団は、ＣＡＲ−Ｔ細胞を含む。いくつかの実施形態では、前記調節された免疫細胞は、以下の特性のうちの少なくとも１つを有するＴ細胞を含む：少なくとも１つの前記調節薬を含む組成物と接触させられていないＴ細胞と比較した場合の、（１）ＣＤ２７、ＣＣＲ７、ＣＤ６２Ｌ、ＴＣＦ７、ＬＥＦ１、ＢＬＩＭＰ−１、ＡＬＤＯＣ、およびＥＮＯ２のうちの少なくとも１つの遺伝子発現の増加；（２）ＰＤ−１およびＴｉｍ−３のうちの少なくとも１つの遺伝子発現の減少；（３）セントラルメモリーＴ細胞亜集団の増加；（４）エフェクターメモリーＴ細胞亜集団および／またはエフェクターＴ細胞亜集団の減少；（５）増殖および生存能の改善；並びに、（６）腫瘍除去能（capability in tumor clearance）および残留性の改善。いくつかの実施形態では、上記の特性のうちの少なくとも１つを有する前記Ｔ細胞は、ＣＡＲ−Ｔ細胞である。
【００３６】
本発明の実施形態は、以下の特性のうちの少なくとも１つを有する単離されたＴ細胞集団を含む組成物を提供する：調節を受けていないＴ細胞と比較した場合の、（１）ＣＤ２７、ＣＣＲ７、ＣＤ６２Ｌ、ＴＣＦ７、ＬＥＦ１、ＢＬＩＭＰ−１、ＡＬＤＯＣ、およびＥＮＯ２のうちの少なくとも１つの遺伝子発現の増加；（２）ＰＤ−１およびＴｉｍ−３のうちの少なくとも１つの遺伝子発現の減少；（３）セントラルメモリーＴ細胞亜集団の増加；並びに、（４）エフェクターメモリーＴ細胞亜集団および／またはエフェクターＴ細胞亜集団の減少。いくつかの実施形態では、前記組成物中の単離されたＴ細胞集団は、ＣＡＲ−Ｔ細胞を含む。いくつかの実施形態では、前記組成物中の単離されたＴ細胞集団は、増殖、生存能、残留性、および腫瘍除去のうちの少なくとも１つの能力が改善されている。
【００３７】
本発明の態様は、養子療法用に免疫細胞集団を調節する方法であって、前記免疫細胞集団を、ＢＥＴ阻害剤、ＣＤＫ阻害剤、ＣＲＡＣチャネル阻害剤、Ｃｏｘ阻害剤、ドパミン拮抗剤、ＥＲＫ５阻害剤、グルココルチコイド、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、Ｌｃｋ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、およびＳｙｋ阻害剤からなる群から選択される１または複数の調節薬を含む十分な量の組成物と、十分な時間接触させることで、調節されていない免疫細胞と比較して、養子免疫療法における治療的有効性が改善された調節された免疫細胞集団を得ること、を通常は含む、前記方法を提供する。いくつかの実施形態では、前記養子療法用の調節された免疫細胞は自家免疫細胞である。いくつかの実施形態では、前記養子療法用の調節された免疫細胞は同種他家免疫細胞である。
【００３８】
いくつかの実施形態では、十分な量の調節薬を含む前記組成物は、（ｉ）表１の化合物のうちの少なくとも１つ、またはその塩、エステル、エーテル、溶媒和物、水和物、立体異性体、もしくはプロドラッグ、を含むか；（ｉｉ）ＢＥＴ阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、またはＳｙｋ阻害剤を少なくとも含むか；（ｉｉｉ）ＰＤＫ１阻害剤を少なくとも含むか；（ｉｖ）Ｒａｆ阻害剤を少なくとも含むか；（ｖ）Ｓｙｋ阻害剤を少なくとも含むか；（ｖｉ）ＧＳＫ２３３４４７０、ＡＺ６２８、ＧＤＣ−０８７９、ダブラフェニブ、Ｒ７８８、パクリチニブ、バルドキソロンメチル、およびＰＲＴ０６２６０７のうちの少なくとも１つを含むか；（ｖｉｉ）ＧＳＫ２３３４４７０を少なくとも含むか；（ｖｉｉｉ）バルドキソロンメチルを少なくとも含むか；（ｉｘ）ＡＺ６２８を少なくとも含む。
【００３９】
前記方法のいくつかの実施形態では、前記免疫細胞集団と前記１または複数の調節薬との接触は、１または複数の前記調節薬による処理を受けていない免疫細胞と比較して、増殖、細胞毒性、サイトカイン応答、サイトカイン放出、細胞リコール、および／もしくは残留性を改善し；且つ／または細胞増殖、維持、分化、脱分化、および／もしくは生存率を改善する。前記方法のいくつかの実施形態では、前記免疫細胞集団と１または複数の前記調節薬との接触は、同じ１または複数の薬剤による処理を受けていない免疫細胞と比較して、前記免疫細胞の１または複数の目的の亜集団の数または相対比を増加させる。
【００４０】
いくつかの実施形態では、前記方法は、１または複数の前記調節薬と接触させられた、前記１または複数の目的の免疫細胞亜集団を単離することをさらに含む。
【００４１】
いくつかの実施形態では、前記方法は、前記処理された免疫細胞集団もしくは免疫細胞亜集団、または前記処理された、単離された１もしくは複数の目的の免疫細胞亜集団、またはその治療用組成物を、細胞療法を必要としている対象に投与すること、をさらに含む。いくつかの実施形態では、前記対象は、自己免疫障害、造血器腫瘍、固形腫瘍、または感染症を有する。いくつかの実施形態では、前記対象は、化学療法または放射線療法による治療を受けたことがあった、治療中である、または治療を受ける予定である、対象である。
【００４２】
いくつかの実施形態では、前記免疫細胞集団は、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞、またはＮＫ細胞を含む。前記方法の１つの実施形態では、前記免疫細胞集団はＴ細胞を含み、前記処理後の１または複数の目的の亜集団はナイーブＴ細胞、幹細胞様メモリーＴ細胞、および／もしくはセントラルメモリーＴ細胞を含む。前記方法の１つの実施形態では、前記免疫細胞集団はＮＫＴ細胞を含み、前記処理後の１または複数の目的の亜集団はＩ型ＮＫＴ細胞を含む。前記方法の１つの実施形態では、前記免疫細胞集団はＮＫ細胞を含み、前記処理後の１または複数の目的の亜集団は獲得ＮＫ細胞を含む。
【００４３】
前記通常法のいくつかの実施形態では、前記調節のための免疫細胞は、末梢血、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位由来組織、腹水、胸水、脾臓組織、または腫瘍から単離された免疫細胞である、またはそれに含まれた免疫細胞である。いくつかの実施形態では、前記調節のための免疫細胞は、健常な対象から；自己免疫疾患、造血器悪性腫瘍、ウイルス感染症、もしくは固形腫瘍を有する対象から；遺伝子改変免疫細胞を以前に投与された対象から；またはＣＭＶ血清陽性の対象から、単離される。いくつかの他の実施形態では、前記調節のための単離された免疫細胞は、遺伝子改変された免疫細胞（遺伝子操作された免疫細胞、または再構成、変異、ゲノムインプリンティング、および／もしくはエピジェネティック修飾より生じた免疫細胞）である。いくつかの実施形態では、前記調節のための単離された免疫細胞は少なくとも１種の遺伝子改変されたモダリティを含む。いくつかの実施形態では、前記単離された免疫細胞集団は、ゲノム操作されており、挿入、欠失、および／または核酸置換を含む。いくつかの特定の実施形態では、前記免疫細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、および／または、過剰発現のＣＤ１６もしくはそのバリアント、をコードする外来性核酸を含む。従って、いくつかの態様では、前記ゲノム改変された免疫細胞は、本開示の組成物および方法を用いたエキソビボでの調節のために単離される。いくつかの実施形態では、調節後、対象から単離された前記ゲノム改変された免疫細胞は、同じドナーまたは異なる患者に投与され得る。
【００４４】
いくつかの実施形態では、前記調節のための免疫細胞は、幹細胞、造血幹細胞、造血前駆細胞、もしくは前駆細胞からインビトロで分化される。いくつかの実施形態では、前記調節のための免疫細胞は、造血系もしくは非造血系の非多能性細胞からインビトロで分化転換される。いくつかの実施形態では、前記幹細胞は、誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）または胚性幹細胞（ＥＳＣ）を含む。いくつかの実施形態では、前記前駆細胞は、ＣＤ３４＋造血性内皮細胞、多分化能前駆細胞、Ｔ細胞前駆細胞、ＮＫ前駆細胞、またはＮＫＴ前駆細胞である。さらにいくつかの他の実施形態では、前記幹細胞、造血幹細胞、造血前駆細胞、または前駆細胞は、ゲノム操作されており、挿入、欠失、もしくは核酸置換を含み、且つ／または、少なくとも１種の遺伝子改変されたモダリティを含む。従って、それから派生した目的の調節された免疫細胞亜集団は、少なくとも１つの遺伝子改変されたモダリティを有する免疫細胞を含む。
【００４５】
いくつかの実施形態では、前記遺伝子改変されたモダリティは、以下のうちの少なくとも１つを含む：セーフティ・スイッチタンパク質、標的化モダリティ、受容体、シグナル伝達分子、転写因子、薬剤的に活性なタンパク質およびペプチド、薬物標的候補；または、前記免疫細胞の生着、輸送、ホーミング、生存度、自己複製、残留性、免疫応答の制御および調節、並びに／もしくは生存を促進するタンパク質。いくつかの他の実施形態では、前記遺伝子改変されたモダリティは、Ｂ２Ｍ、ＴＡＰ１、ＴＡＰ２、タパシン、ＮＬＲＣ５、ＰＤ１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＲＦＸＡＮＫ、ＣＩＩＴＡ、ＲＦＸ５、またはＲＦＸＡＰ、および染色体６ｐ２１領域内のＨＬＡ遺伝子のいずれか、の１または複数の欠失または発現減少を含む。いくつかの他の実施形態では、前記遺伝子改変されたモダリティは、ＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＡＣＤ１６、ｈｎＣＤ１６、４１ＢＢＬ、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４７、ＣＤ１１３、ＣＤ１３１、ＣＤ１３７、ＣＤ８０、ＰＤＬ１、Ａ２ＡＲ、Ｆｃ受容体、または二重特異性エンゲージャー、多重特異性エンゲージャー、もしくは汎用エンゲージャーとの結合のための表面上トリガー受容体の、１または複数の発現導入または発現増加を含む。
【００４６】
前記免疫細胞を調節する方法のいくつかの実施形態では、前記「十分な時間」または「十分な長さの時間」とは、１６時間以上、１４時間以上、１２時間以上、１０時間以上、８時間以上、６時間以上、４時間以上、２時間以上、１時間以上、０．５時間以上、０．１時間、または上記の間のあらゆる長さの時間である。従って、前記十分な長さの時間は、例えば、１５時間以上、１３時間以上、１１時間以上、９時間以上、７時間以上、５時間以上、３時間以上、１時間以上、０．５時間以上、または０．１時間以上である。前記方法のいくつかの他の実施形態では、前記十分な長さの時間は、２４時間以上、３６時間以上、４８時間以上、６０時間以上、７２時間以上、または上記の間のあらゆる長さの時間である。従って、前記十分な長さの時間は、例えば、３０時間以上、４２時間以上、５４時間以上、６６時間以上、７８時間以上、または９０時間以上である。
【００４７】
前記方法のいくつかの実施形態では、前記免疫細胞は、調節中および／または調節後に、フィーダーフリーの環境に含まれる。フィーダーフリーの条件は、フィーダー細胞を含まないこと、およびフィーダー馴化培地を含まないことを包含する。前記方法のいくつかの実施形態では、前記免疫細胞は、調節中に、フィーダー細胞と共培養される。
【００４８】
いくつかの実施形態では、前記対象は養子細胞移植の候補であり得る。いくつかの実施形態では、前記対象は骨髄移植または幹細胞移植の候補であり得る。いくつかの実施形態では、前記対象は骨髄移植または幹細胞移植を以前に受けたことがある。いくつかの実施形態では、前記対象は、骨髄破壊的もしくは骨髄非破壊的（non-myeolablative）な化学療法もしくは放射線療法を受けたことがある。
【００４９】
提供される前記方法のいくつかの実施形態では、前記免疫細胞集団はＴ細胞を含む。いくつかの実施形態では、前記免疫細胞集団はＣＡＲ−Ｔ細胞を含む。いくつかの実施形態では、前記調節された細胞集団は、以下の特性のうちの少なくとも１つを有するＴ細胞を含む：１または複数の前記調節薬を含む組成物による調節を受けていないＴ細胞と比較した場合の、（１）ＣＤ２７、ＣＣＲ７、ＣＤ６２Ｌ、ＴＣＦ７、ＬＥＦ１、ＢＬＩＭＰ−１、ＡＬＤＯＣ、およびＥＮＯ２のうちの少なくとも１つの遺伝子発現の増加；（２）ＰＤ−１およびＴｉｍ−３のうちの少なくとも１つの遺伝子発現の減少；（３）セントラルメモリーＴ細胞亜集団の増加；（４）エフェクターメモリーＴ細胞亜集団および／またはエフェクターＴ細胞亜集団の減少；（５）増殖および生存能の改善；並びに、（６）腫瘍除去能および残留性の改善。いくつかの実施形態では、上記の特性のうちの少なくとも１つを有する前記Ｔ細胞は、ＣＡＲ−Ｔ細胞である。本発明の態様は、１または複数の本明細書に記載の特性を有する免疫細胞のいずれかを製造する方法を提供する。
【００５０】
本発明の態様は、免疫細胞集団を調節するための上記の方法のいずれかに従って、細胞療法用の治療用組成物を作製する方法を提供する。
【００５１】
本発明の態様は、細胞療法用の調節された免疫細胞を含む治療用組成物を作製するための、上記の免疫細胞調節法の使用を提供する。いくつかの実施形態では、前記調節された免疫細胞は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、および／またはＮＫＴ細胞を含む。いくつかの実施形態では、前記調節されたＮＫ細胞は獲得ＮＫ細胞を含む。本発明の追加の態様は、本明細書において提供されている前記方法によって作製された、選択的に増殖させられたＮＫ細胞を含む調節された免疫細胞集団を提供する。
【００５２】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書で開示される前記方法および組成物を用いて得られた前記調節された細胞と、治療上許容できる培地と、を含む治療用組成物を提供する。前記治療用組成物のいくつかの実施形態では、前記組成物は、以下からなる群から選択されるさらなる追加の添加剤のうちの１つをさらに含む：ペプチド、サイトカイン、マイトジェン、増殖因子、スモールＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ（二本鎖ＲＮＡ）、単核血液細胞、フィーダー細胞、フィーダー細胞の成分または代替要素、１または複数の目的のポリ核酸を含むベクター、抗体、化学療法剤または放射性部分、および免疫調節薬（ＩＭｉＤ）。
【００５３】
いくつかの実施形態では、養子免疫療法を必要としている対象に、治療に十分な量の前記治療用組成物を投与することによる、対象を治療する方法が提供される。いくつかの実施形態では、前記細胞療法は自家細胞療法である。いくつかの実施形態では、前記細胞療法は同種他家細胞療法である。いくつかの実施形態では、前記治療法を必要としている対象は、自己免疫障害、造血器腫瘍、固形腫瘍、がん、またはＨＩＶ、ＲＳＶ、ＥＢＶ、ＣＭＶ、アデノウイルス、もしくはＢＫポリオーマウイルスと関連した感染症を有する。いくつかの実施形態では、前記調節された免疫細胞を用いて対象を治療する前記方法は、治療用組成物の投与前、投与と同時、または投与後の抗体療法、化学療法、または放射線療法と組み合わせて、前記治療用組成物を投与することにより実施される。
【００５４】
いくつかの態様において、細胞療法用の治療用組成物を製造するための混合物の使用であって、前記混合物が、（ａ）単離された免疫細胞集団と、（ｂ）ＢＥＴ阻害剤、ＣＤＫ阻害剤、ＣＲＡＣチャネル阻害剤、Ｃｏｘ阻害剤、ドパミン拮抗剤、ＥＲＫ５阻害剤、グルココルチコイド、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、Ｌｃｋ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、およびＳｙｋ阻害剤からなる群から選択される１または複数の調節薬を含む組成物と、を含む、前記使用が提供される。いくつかの実施形態では、前記１または複数の調節薬は、（ｉ）表１の化合物、およびその塩、エステル、エーテル、溶媒和物、水和物、立体異性体、もしくはプロドラッグ、のうちの少なくとも１つを含むか；（ｉｉ）ＢＥＴ阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、またはＳｙｋ阻害剤を少なくとも含むか；（ｉｉｉ）ＰＤＫ１阻害剤を少なくとも含むか；（ｉｖ）Ｒａｆ阻害剤を少なくとも含むか；（ｖ）Ｓｙｋ阻害剤を少なくとも含むか；（ｖｉ）ＧＳＫ２３３４４７０、ＡＺ６２８、ＧＤＣ−０８７９、ダブラフェニブ、Ｒ７８８、パクリチニブ、バルドキソロンメチル、およびＰＲＴ０６２６０７のうちの少なくとも１つを含むか；（ｖｉｉ）ＧＳＫ２３３４４７０を少なくとも含むか；（ｖｉｉｉ）バルドキソロンメチルを少なくとも含むか；（ｉｘ）ＡＺ６２８を少なくとも含む。提供されているように、いくつかの実施形態では、細胞療法用の治療用組成物を製造するための前記混合物は、単離されたＴ細胞集団を含む。いくつかの実施形態では、前記Ｔ細胞はＣＡＲ−Ｔ細胞である。
【００５５】
いくつかの実施形態では、１または複数の前記調節薬との接触後、前記免疫細胞は、以下の特性のうちの少なくとも１つを有する調節されたＴ細胞を含む：調節されていないＴ細胞と比較した場合の、（１）ＣＤ２７、ＣＣＲ７、ＣＤ６２Ｌ、ＴＣＦ７、ＬＥＦ１、ＢＬＩＭＰ−１、ＡＬＤＯＣ、およびＥＮＯ２のうちの少なくとも１つの遺伝子発現の増加；（２）ＰＤ−１およびＴｉｍ−３のうちの少なくとも１つの遺伝子発現の減少；（３）セントラルメモリーＴ細胞亜集団の増加；（４）エフェクターメモリーＴ細胞亜集団および／またはエフェクターＴ細胞亜集団の減少；（５）増殖および生存能の改善；並びに、（６）腫瘍除去能および残留性の改善。
【００５６】
この使用の様々な目的および利点が、本発明のある特定の実施形態の説明および例示として記載される、添付の図面と併せた以下の説明から明らかとなる。
【図面の簡単な説明】
【００５７】
【図１−１】図１Ａ〜図１Ｄは、選択された化合物を用いた処理がＴ細胞サブセットを定義するマーカーの発現に影響を与えることを示している：（Ａ）相対的な％ＣＣＲ７＋ＣＤ６２Ｌ＋スコア；（Ｂ）相対的なＣＤ２７  ＭＦＩスコア；（Ｃ）Ｔｃｍミニパネルマーカー遺伝子スコア；および（Ｄ）相対的なＴｉｍ−３  ＭＦＩ（逆数）スコア（化合物の番号および化合物の分類については表１を参照）。
【図１−２】同上。
【００５８】
【図２−１】図２Ａ〜図２Ｃは、選択された化合物を用いた処理がＴ細胞の生存能および増殖に影響を与えることをしめしている：（Ａ）生存能スコア；（Ｂ）増殖スコア（化合物の番号および化合物の分類については表１を参照）；（Ｃ）ＰＤＫ１阻害剤処理はＣＤ８＋ＣＡＲ−Ｔ細胞の増殖を向上させる（ｎ＝５人のドナー）。
【図２−２】同上。
【００５９】
【図３−１】図３Ａ〜図３Ｄは、選択された化合物を用いた処理がＴ細胞のサイトカイン発現プロファイル（ＴＮＦα、ＩＦＮγ、またはＩＬ−２）に影響を与えることを示している：（Ａ）選択されたサイトカインにおいてダブルポジティブまたはトリプルポジティブの各種亜集団の変化倍率；（Ｂ）少なくとも２種のサイトカインを産生する亜集団の変化倍率（ＦＣ：変化倍率（folder change））；（Ｃ）選択されたサイトカインにおいてシングルポジティブの各種亜集団の変化倍率；（Ｄ）選択されたサイトカインにおいてシングルポジティブ、ダブルポジティブ、またはトリプルポジティブの各種亜集団の変化倍率（化合物の番号および化合物の分類については表１または図３Ｄを参照）。
【図３−２】同上。
【図３−３】同上。
【００６０】
【図４−１】図４Ａ〜図４Ｂは、化合物で処理されたＣＡＲ−Ｔ細胞が、ＣＤ１９およびｍＫａｔｅ２を発現する被照射Ｋ５６２細胞を殺滅できることを示している：（Ａ）ｍＫａｔｅ２標識Ｋ５６２細胞の消失を示す、相対的な赤色物体数に基づく、選択された化合物の各々で処理されたＴ細胞による経時的な標的細胞の除去；（Ｂ）標的細胞殺滅の相対ＡＵＣ（曲線下面積）（化合物の番号および化合物の分類については表１を参照）。
【図４−２】同上。
【００６１】
【図５−１】図５Ａ〜図５Ｃは、被照射標的細胞による連続再刺激アッセイの３回目および４回目の終わりに、Ｔ細胞増殖が向上されることを示している：（Ａ）３回目における細胞増殖の倍率；（Ｂ）４回目における細胞増殖の倍率；（Ｃ）４回の標的細胞刺激にわたっての総細胞増殖（化合物の番号および化合物の分類については表１を参照）。
【図５−２】同上。
【００６２】
【図６】図６Ａ〜図６Ｂは、化合物処理が処理されたＴ細胞の代謝プロフィールを変化させ得ることを示している：（Ａ）ＤＭＳＯ、または各種選択された化合物で処理された細胞の酸素消費速度（ＯＣＲ）；（Ｂ）ＤＭＳＯ、または各種選択された化合物で処理された細胞の基底ＯＣＲ（化合物の番号および化合物の分類については表１を参照）。
【００６３】
【図７】図７は、ＣＡＲ−Ｔ群を各化合物で処理した場合の、実験期間中の、残存腫瘍細胞を表す発光のＡＵＣ（曲線下面積）を用いて、選択された化合物の各々で処理されたＣＡＲ−Ｔ細胞のインビボ有効性を示している（化合物の番号および化合物の分類については表１を参照）。
【００６４】
【図８−１】図８Ａ〜図８Ｃは、処理されたＴ細胞の治療適用に関連した、試験された全ての側面に関する、化合物評価の要約を示している。
【図８−２】同上。
【図８−３】同上。
【００６５】
【図９】図９は、インビボにおける、腫瘍除去中および腫瘍除去後の、ＰＤＫ１阻害剤で処理されたＣＡＲ−Ｔ細胞の残留性の増加を示している：（Ａ）脾臓中のＣＤ８＋ＣＡＲ−Ｔ細胞；（Ｂ）脾臓中のＣＤ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞；（Ｃ）骨髄中のＣＤ８＋ＣＡＲ−Ｔ細胞；（Ｄ）骨髄中のＣＤ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞。
【００６６】
【図１０−１】図１０Ａ〜図１０Ｄは、ＰＩ３Ｋ阻害剤またはＰＤＫ１阻害剤のいずれかによる処理が、（ｉ）抗原刺激後および抗原離脱後のＣＡＲ−Ｔ細胞増殖を向上させること：（Ａ）経時的なＣＡＲ−Ｔ細胞増殖；（Ｂ）全体的なＣＡＲ−Ｔ細胞増殖；並びに、（ｉｉ）抗ＣＡＲ抗体被覆ビーズからの刺激を用いた場合の１４日間に亘る増殖曲線のＡＵＣ値を向上させること：（Ｃ）ＣＤ１９−Ｆｃ被覆ビーズを用いた場合のＣＤ１９  ＣＡＲ−Ｔ細胞の増殖；（Ｄ）ＢＣＭＡ−Ｆｃ被覆ビーズを用いた場合のＢＣＭＡ  ＣＡＲ−Ｔ細胞の増殖、を示している。
【図１０−２】同上。
【００６７】
【図１１−１】図１１Ａ〜図１１Ｃは、（Ａ）ＰＤＫ１阻害剤処理が、サイトカイン産生（ＩＬ−２、ＩＦＮγ、およびＴＮＦα）、またはＣＤ１０７ａの細胞表面発現、によって定義される多機能性細胞の区分を増加させることで、ＣＡＲ−Ｔ細胞の機能性を向上さること；（Ｂ）標的細胞による初期刺激後（「０日目」）または再刺激後（「１４日目」）の、ＰＤＫ１阻害剤で処理されたＣＤ１９  ＣＡＲ−Ｔ細胞におけるＩＬ−２、ＩＦＮγ、およびＴＮＦαの産生；並びに（Ｃ）標的細胞による初期刺激後（「０日目」）または再刺激後（「１４日目」）の、ＰＤＫ１阻害剤で処理されたＢＣＭＡ  ＣＡＲ−Ｔ細胞におけるＩＬ−２、ＩＦＮγ、およびＴＮＦαの産生、を示している。
【図１１−２】同上。
【図１１−３】同上。
【００６８】
【図１２】図１２Ａ〜図１２Ｂは、ＰＩ３Ｋ阻害剤またはＰＤＫ１阻害剤のいずれかの存在下で作製されたＣＡＲ−Ｔ細胞が、（Ａ）Ｎａｌｍ６／ＮＳＧ腫瘍モデル；（Ｂ）Ｒａｊｉ／ＮＳＧ腫瘍モデルにおける、生存を改善することを示している。
【００６９】
【図１３−１】図１３Ａ〜図１３Ｅ：（Ａ）２段階腫瘍除去／制御モデルの概略図；（Ｂ）ＣＡＲ−Ｔ細胞を注射されなかったマウスと比較した場合の、ＤＭＳＯ、ＰＩ３Ｋ阻害剤、またはＰＤＫ１阻害剤で処理されたＣＡＲ−Ｔ細胞による一次腫瘍の制御；（Ｃ）ＰＤＫ１阻害剤処理ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＤＭＳＯ処理ＣＡＲ−Ｔ細胞と比較して、最初の腫瘍注射の１１日後に、有意に（ｐ＝０．００６１、一元配置分散分析およびクラスカル・ワリス補正）大きなインビボ有効性を示した；（Ｄ）ＰＤＫ１阻害剤処理ＣＡＲ−Ｔ細胞は二次腫瘍の迅速な制御を示した；（Ｅ）ＰＩ３Ｋ処理ＣＡＲ−Ｔ細胞を投与されたマウスと比較して、ＰＤＫ１処理ＣＡＲ−Ｔ細胞を投与されたマウスの中で、二次腫瘍量は有意に（ｐ＝０．０３７９）より少なくなった。
【図１３−２】同上。
【図１３−３】同上。
【００７０】
【図１４−１】図１４Ａ〜図１４Ｂは、（Ａ）溶媒処理ＣＡＲ−Ｔ細胞、ＰＩ３Ｋ阻害剤処理ＣＡＲ−Ｔ細胞、およびＰＤＫ１阻害剤処理ＣＡＲ−Ｔ細胞における、発現差異のある遺伝子のＺスコアにより正規化された発現レベルによる、色分けされた遺伝子発現ヒートマップ（青＝発現減少、赤＝発現増加）；並びに、（Ｂ）溶媒（ＤＭＳＯ）、ＰＩ３Ｋｉ、またはＰＤＫ１ｉの存在下で作製されたＣＤ４Ｔ細胞およびＣＤ８  Ｔ細胞における遺伝子発現差異であって、いずれかのコホート（ｎ＝３）において調整済みｐ値により有意であった、重複する（青色または緑色のシンボル）またはユニークな（紫色：ＰＤＫ１ｉ処理、赤色：ＰＩ３Ｋｉ処理）遺伝子発現差異、が示されている。
【図１４−２】同上。
【発明を実施するための形態】
【００７１】
Ｔ細胞療法のインビボにおける有効性は製造法に強く影響を受ける可能性があり、その方法で用いられる開始Ｔ細胞集団または原料としてのＴ細胞集団、並びに使用されるエキソビボでの増殖法および活性化法、の両方に依存する。投与されるＴ細胞の分化状態は、インビボにおける残留性および抗腫瘍活性に重大な影響を及ぼす可能性がある。ヘルパーＴ細胞（ＣＤ４＋Ｔ細胞）および細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＤ８＋Ｔ細胞）、特に、ナイーブＴ細胞（Ｔｎ）、幹細胞様メモリーＴ細胞（Ｔｓｃｍ）、およびセントラルメモリーＴ細胞（Ｔｃｍ）は、ＣＣＲ７マーカーおよびＣＤ６２Ｌマーカーの発現を特徴としており、マウスモデル（Sommermeyer et al. 2015）および非ヒト霊長類モデル（Berger et al. 2008）の両方で優れた抗腫瘍活性を媒介する。
【００７２】
製造法において、治療用細胞（または細胞集団）は、典型的には、活性化され、所望により組み換え受容体を発現するよう形質転換または操作され、増殖させられる。この方法は通常、これらの細胞の分化を促して高分化状態の細胞割合を増加させ、Ｔ細胞の場合、この高分化型の細胞とは、表現型の上では、エフェクターメモリーＴ細胞またはエフェクターＴ細胞とみなされている。患者に注入されると、これらの高分化型細胞は、低分化状態の細胞と比較して、増殖能が低くなり、長寿命または残留性の集団として存続する可能性が低くなる。
【００７３】
さらには、患者の中に入れる最終的な細胞の状態、特に細胞のサブタイプは、主に製造法によって定められ得るため、製造法の重要性はどれほど誇張してもし過ぎることはない。細胞を培養し増殖する際に、目的の分化状態および／または獲得免疫細胞の特徴を有する細胞亜集団を選択的に維持または増殖させることは、細胞ベースの療法の有効性を増強する上で、非常に有益となり得る。細胞の製造法を改善することには潜在的な利点が複数あり、例えば、投与時間の減少、細胞の均一性の増加、または目的用量に達する患者の割合の増加が挙げられる。加えて、残留性の増加および毒性の低減などの製造法においての細胞の機能的な改善は、細胞療法の改善にも繋がり得る。
【００７４】
本明細書では、養子免疫療法においての治療的有効性が改善した細胞集団または細胞亜集団を得るために、免疫細胞を調節する組成物および方法が提供される。また、前記治療的有効性が改善した調節された免疫細胞を含む組成物が提供される。また、疾患および異常の治療に、前記治療的有効性が改善した調節された免疫細胞を用いる方法が提供される。いくつかの実施形態では、治療的有効性が改善した免疫細胞は、増殖の改善、生存能の改善、残留性の改善、細胞毒性の改善、および／または細胞リコール／記憶の改善のうちの、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、またはそれ以上を示す。また、例えば治療用細胞組成物中の、上記の特性のうちの少なくとも１つを示す細胞の、数もしくは相対比を増加させることによって、またはその亜集団を濃縮することによって、免疫細胞療法における有効性を改善するための、方法および組成物が提供される。
【００７５】
定義
【００７６】
本明細書で別途定義がない限り、本願に関連して使用される科学用語および技術用語は、当業者が通常理解する意味を有するものとする。さらに、文脈上特に必要がない限り、単数形の用語は複数形を包含するものとし、複数形の用語は単数形を包含するものとする。
【００７７】
本発明が、本明細書に記載された特定の方法、プロトコル、および試薬などに限定されず、従って変更されてもよいことは、理解されたい。本明細書で使用される専門用語は、特定の実施形態を説明することのみを目的としており、本発明の範囲を限定することを意図するものではなく、本発明の範囲は特許請求の範囲によってのみ定義される。
【００７８】
本明細書で使用される場合、冠詞「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、その冠詞の文法上の目的語が、１つである場合も指すし、２つ以上である場合も指す。例として、Ｔ細胞（a T cell）は、１つのＴ細胞または２つ以上のＴ細胞を意味する。
【００７９】
本明細書で使用される場合、用語「Ｔリンパ球」および「Ｔ細胞」は、同義的に使用され、胸腺内での成熟を完了した、且つ、身体内の特定の外来抗原の特定、並びに他の免疫細胞の活性化および非活性化を含む、免疫系における種々の役割を有する、主要な白血球型を指す。Ｔ細胞は、培養Ｔ細胞（例えば初代Ｔ細胞）、培養Ｔ細胞株由来のＴ細胞（例えば、Ｊｕｒｋａｔ、ＳｕｐＴ１など）、または哺乳動物から得られたＴ細胞などの、いかなるＴ細胞であってもよい。Ｔ細胞はＣＤ３＋細胞とすることもできる。Ｔ細胞は、あらゆる種類のＴ細胞とすることができ、ＣＤ４＋／ＣＤ８＋ダブルポジティブＴ細胞、ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞（例えば、Ｔｈ１細胞およびＴｈ２細胞）、ＣＤ８＋Ｔ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞）、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）の中に存在するＴ細胞、末梢血白血球（ＰＢＬ）、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の中に存在するＴ細胞、メモリーＴ細胞、ナイーブＴ細胞、制御性Ｔ細胞、γδＴ細胞などを含むがこれらに限定はされない、あらゆる発生段階のＴ細胞とすることができる。ヘルパーＴ細胞のさらなるの種類としては、Ｔｈ３細胞、Ｔｈ１７細胞、Ｔｈ９細胞、またはＴｆｈ細胞などの細胞が挙げられる。メモリーＴ細胞のさらなる種類としては、セントラルメモリーＴ細胞（Ｔｃｍ細胞）、エフェクターメモリーＴ細胞（Ｔｅｍ細胞およびＴＥＭＲＡ細胞）などの細胞が挙げられる。Ｔ細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように改変されたＴ細胞などの、遺伝子改変Ｔ細胞を指す場合もある。Ｔ細胞は、幹細胞または前駆細胞から分化させてもよい。
【００８０】
本明細書で使用される場合、用語「ナイーブＴ細胞」またはＴｎは、活性化Ｔ細胞またはメモリーＴ細胞と異なり、末梢内で非自己抗原（cognate antigen）と遭遇していない、成熟Ｔ細胞を指す。ナイーブＴ細胞は、一般に、Ｌ−セレクチン（ＣＤ６２Ｌ）の細胞表面発現；活性化マーカーであるＣＤ２５、ＣＤ４４またはＣＤ６９が存在しないこと；およびＣＤ４５ＲＯアイソフォーム（メモリー）が存在しないこと、を特徴とする。また、ナイーブＴ細胞は、ＩＬ−７受容体−α（ＣＤ１２７）サブユニットおよび共通γ鎖（ＣＤ１３２）サブユニットからなる機能的なＩＬ−７受容体も発現している。ナイーブ型の状態では、Ｔ細胞は、静止状態で且つ非分裂性であるため、恒常的な生存機構のために、サイトカインのＩＬ−７およびＩＬ−１５に対する共通γ鎖を必要とすると考えられている。
【００８１】
本明細書で使用される場合、用語「セントラルメモリーＴ細胞」またはＴｃｍは、エフェクターメモリーＴ細胞またはＴｅｍとの比較において、アポトーシス誘発性シグナル伝達遺伝子（例えば、Ｂｉｄ、Ｂｎｉｐ３およびＢａｄ）の発現が少なく、且つ、二次リンパ器官への輸送と関連した遺伝子（例えば、ＣＤ６２Ｌ、ＣＸＣＲ３、ＣＣＲ７）の発現が多い、Ｔ細胞の亜群または亜集団を指す。
【００８２】
本明細書で使用される場合、用語「ステムメモリーＴ細胞（stem memory T cell）」、または「幹細胞様メモリーＴ細胞」、またはＴｓｃｍは、長期に亘る免疫の媒介に重要な特性として、自己複製してＴｃｍ、ＴｅｍおよびＴｅｆｆ（エフェクターＴ細胞）を生み出すことが可能であり、且つ、ＣＤ２７、並びにＣＣＲ７およびＣＤ６２Ｌなどのリンパ系ホーミング分子を発現している、Ｔ細胞の亜群または亜集団を指す。
【００８３】
本明細書で使用される場合、用語「ＮＫ細胞」または「ナチュラルキラー細胞」とは、ＣＤ５６またはＣＤ１６の発現およびＴ細胞受容体（ＣＤ３）の不在によって定義される、末梢血リンパ球サブセットを指す。
【００８４】
本明細書で使用される場合、用語「獲得ＮＫ細胞」および「メモリーＮＫ細胞」は置き換え可能であり、表現型がＣＤ３−且つＣＤ５６＋であり、ＣＤ５７＋、ＮＫＧ２ＣおよびＣＤ５７のうちの少なくとも１つと、所望によりＣＤ１６とを発現して有しているが、以下のうちの１または複数の発現を欠く、ＮＫ細胞サブセットを指す：＋、低ＰＬＺＦ、低ＳＹＫ、ＦｃｅＲγ、および低ＦｃεＲγ、低ＥＡＴ−２、低ＴＩＧＩＴ、低ＰＤ１、低ＣＤ７、低ＣＤ１６１、高ＬＩＬＲＢ１、高ＣＤ４５ＲＯ、および低ＣＤ４５ＲＡ。いくつかの実施形態では、単離されたＣＤ５６＋ＮＫ細胞亜集団は、ＮＫＧ２ＣおよびＣＤ５７の発現を含む。いくつかの他の実施形態では、単離されたＣＤ５６＋ＮＫ細胞亜集団は、ＣＤ５７、ＣＤ１６、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＤ５７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＣＲリガンド、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４０、ＮＫｐ４６、活性化ＫＩＲ、抑制性ＫＩＲ、ＮＫＧ２Ａ、および／またはＤＮＡＭ−１の発現を含む。ＣＤ５６＋は、弱発現であっても強発現であってもよい。
【００８５】
本明細書で使用される場合、用語「ＮＫＴ細胞」または「ナチュラルキラーＴ細胞」とは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現している、ＣＤ１ｄ制限Ｔ細胞を指す。通例の主要組織適合性（ＭＨＣ）分子により提示されるペプチド抗原を検知する通常のＴ細胞と異なり、ＮＫＴ細胞は、非古典的ＭＨＣ分子であるＣＤ１ｄにより提示される脂質抗原を認識する。２種類のＮＫＴ細胞が認知されている。インバリアントＮＫＴ細胞またはＩ型ＮＫＴ細胞は、非常に限定されたＴＣＲレパトア、範囲が限定されたβ鎖（ヒトではＶβ１１）と結合した標準的なα鎖（ヒトではＶα２４−Ｊα１８）、を発現する。第二のＮＫＴ細胞集団は、非古典的または非インバリアントなＩＩ型ＮＫＴ細胞と呼ばれ、より不均一なＴＣＲαβの使用を示す。Ｉ型ＮＫＴ細胞が免疫療法に好適と見なされている。獲得またはインバリアント（Ｉ型）ＮＫＴ細胞は、以下のマーカーのうちの少なくとも１または複数の発現により同定することができる：ＴＣＲ  Ｖａ２４−Ｊａ１８、Ｖｂ１１、ＣＤ１ｄ、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ａＧａｌＣｅｒ、ＣＤ１６１およびＣＤ５６。
【００８６】
本明細書で使用される場合、用語「単離された」などは、その元の環境から分離された細胞または細胞集団を指し、すなわち、単離された細胞の環境が「未単離の」当該細胞が存在する環境に存在する少なくとも１つの成分を実質的に含まないこと、を指す。前記用語は、細胞が、その天然の環境に存在する場合の一部または全ての成分から取り出されていること、例えば、組織標本または生検標本から単離されていること、を包含する。前記用語は、細胞が、非天然環境に存在する場合の少なくとも１、一部または全ての成分から取り出されていること、例えば、細胞培養物または細胞懸濁液から単離されていること、も包含する。従って、単離された細胞は、天然に存在する場合の、または、非天然環境下で増殖、貯蔵もしくは生存した場合の、他の物質、細胞または細胞集団を含む少なくとも１つの成分から、部分的または完全に分離されている。単離された細胞の具体例としては、部分的に純粋な細胞組成物、実質的に純粋な細胞組成物、および非天然の培地中で培養された細胞が挙げられる。単離された細胞は、目的の細胞またはその集団を、環境内の他の物質もしくは細胞から分離することによって得てもよいし、または、１もしくは複数の他の細胞集団もしくは細胞亜集団を環境から除去することによって得てもよい。
【００８７】
本明細書で使用される場合、用語「精製する」などは、純度を増加させることを指す。例えば、純度は少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％に増加され得る。
【００８８】
本明細書で使用される場合、用語「集団」とは、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはＮＫＴ細胞に関連して使用される場合、それぞれ、２個以上のＴ細胞、ＮＫ細胞、またはＮＫＴ細胞を含む細胞群を指す。例としてＴ細胞を用いると、単離されたＴ細胞集団または濃縮されたＴ細胞集団は、１種類のみのＴ細胞を含んでいてもよいし、２種類以上のＴ細胞の混合物を含んでいてもよい。単離されたＴ細胞集団は、１種類のＴ細胞からなる均一集団とすることもできるし、２種類以上のＴ細胞からなる不均一集団とすることもできる。また、単離されたＴ細胞集団は、Ｔ細胞と、Ｔ細胞以外の少なくとも１種の細胞（例えば、Ｂ細胞、マクロファージ、好中球、赤血球、肝細胞、内皮細胞、上皮細胞、筋細胞、脳細胞など）と、を有する不均一集団とすることもできる。不均一集団は、．０１％〜約１００％のＴ細胞を含むことができる。それに応じて、単離されたＴ細胞集団は、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のＴ細胞を含むことができる。単離されたＴ細胞集団は、本明細書で開示されるＴ細胞を含むがこれらに限定はされない、様々な種類のＴ細胞の、１もしくは複数、または全てを含むことができる。２種類以上のＴ細胞を含む単離されたＴ細胞集団では、各種Ｔ細胞の相対比は０．０１％〜９９．９９％の範囲を取り得る。単離された集団は、集団の全てのＴ細胞が単一のＴ細胞のクローンである、Ｔ細胞のクローン集団であってもよい。
【００８９】
単離されたＴ細胞集団、ＮＫ細胞集団、またはＮＫＴ細胞集団は、ヒトの末梢血または臍帯血などの、天然源から得てもよい。当該技術分野では、組織または細胞混合物から細胞を分離して種々の細胞型を分ける様々な方法が開発されている。これらの操作で比較的均一な細胞集団が得られる場合がある。Ｔ細胞は、本明細書に記載のソーティング法またはセレクション法で単離してもよいし、当該技術分野において公知の他の方法で単離してもよい。単離された集団中のＴ細胞の割合は、天然源の中のＴ細胞の割合よりも、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％高くなり得る。単離されたＴ細胞集団は、Ｔ細胞全般について単離されたＴ細胞集団であっても、１または複数の特定の種類のＴ細胞について単離されたＴ細胞集団であってもよい。
【００９０】
本明細書で使用される場合、用語「亜集団」とは、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはＮＫＴ細胞に関連して使用される場合、天然に存在する全ての種類に満たないＴ細胞、ＮＫ細胞、またはＮＫＴ細胞をそれぞれ含むＴ細胞集団、ＮＫ細胞集団、またはＮＫＴ細胞集団を指す。
【００９１】
本明細書で使用される場合、用語「多能性」とは、身体（body）または体細胞（soma）（すなわち、胚本体（embryo proper））の全ての系譜を形成する細胞の能力を指す。例えば、胚性幹細胞は、外胚葉、中胚葉、および内胚葉の三胚葉のそれぞれから細胞を形成することが可能な多能性幹細胞の一種である。多能性は、完全な生物を生じることができない不完全または部分的多能性細胞（例えば、エピブラスト幹細胞またはＥｐｉＳＣ）から、完全な生物を生じることができるより原始的でより多能性の細胞（例えば、胚性幹細胞）まで及ぶ、一連の発生能である。
【００９２】
本明細書で使用される場合、用語「誘導多能性幹細胞」または「ｉＰＳＣ」とは、３つ全ての胚葉または皮層（中胚葉、内胚葉、および外胚葉）の組織に分化可能な細胞へと、誘導または変化（すなわち再プログラム化）された、分化型の成熟した細胞から作製された、幹細胞を指す。
【００９３】
本明細書で使用される場合、用語「胚性幹細胞」は、胚盤胞（embryonic blastocyst）の内部細胞塊の自然発生的な多能性幹細胞を指す。胚性幹細胞は、多能性であり、且つ、発生中に３つの一次胚葉（外胚葉、内胚葉および中胚葉）の全ての誘導体を生じる。胚性幹細胞は胚体外膜または胎盤にはならず、全能性ではない。
【００９４】
本明細書で使用される場合、用語「前駆細胞」とは、前駆細胞が分化により生じ得る細胞と比較して、より大きな発生能を有する細胞、すなわち、より原始的な（例えば、発生経路または進行のより初期の段階にある）細胞表現型を指す。ほとんどの場合、前駆細胞は顕著または非常に高い増殖能を有する。前駆細胞は、発生経路と、細胞が発生および分化を起こす環境とに依存して、発生能がより低い複数の別個の細胞、すなわち分化細胞型、を生じる場合もあれば、単一の分化細胞型を生じる場合もある。
【００９５】
本明細書で使用される場合、用語「再プログラム化」または「脱分化」または「分化能の増加」または「発生能の増加」とは、細胞の分化能を増大させる方法、または細胞低分化状態に脱分化する方法を指す。例えば、分化能が増大した細胞は、再プログラム化されていない状態の同じ細胞と比較して、発生的な柔軟性がより高い（すなわち、より多くの細胞型に分化できる）。言い換えれば、再プログラム化された細胞は、再プログラム化されていない状態の同じ細胞よりも、より低い分化状態にある細胞である。
【００９６】
本明細書で使用される場合、用語「分化」は、特殊化されていない（「運命決定されていない（uncommitted）」）、または特殊化の程度が低い細胞が、例えば血液細胞または筋細胞などの特殊化された細胞の特徴を獲得するプロセスである。分化した、または分化誘導された細胞は、細胞の系譜内で、より特殊化された（「運命決定された」）位置付けとなった細胞である。用語「運命決定された」とは、分化の過程に適用される場合、通常の状況下で、特定の細胞型または細胞型サブセットまで分化を継続し、通常の状況下では、異なる細胞型に分化できない、または、より分化程度の低い細胞型に戻ることができない、ポイントにまで分化経路を進んだ細胞を指す。
【００９７】
本明細書で使用される場合、用語「コードする」とは、定められたヌクレオチド配列（すなわち、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡおよびｍＲＮＡ）または定められたアミノ酸配列を有する、生物学的プロセスにおいて他の重合体および高分子の合成のための鋳型として働く、遺伝子、ｃＤＮＡ、またはｍＲＮＡ等のポリヌクレオチド内の特定のヌクレオチド配列の、固有の特性、並びにそれからもたらされる生物学的特性を指す。すなわち、遺伝子に対応するｍＲＮＡの転写および翻訳によって、細胞または他の生物系においてタンパク質が産生される場合、その遺伝子はそのタンパク質をコードする。ｍＲＮＡ配列と同一であり、配列表に通常示されるヌクレオチド配列であるコード鎖、および、遺伝子またはｃＤＮＡの転写のための鋳型として使用される非コード鎖は共に、その遺伝子またはｃＤＮＡのタンパク質または他の産物コードしていると言える。
【００９８】
本明細書で使用される場合、用語「外来性」は、指示対象の分子または指示対象の活性が宿主細胞に導入されたものであること、または宿主細胞に生来のものではないこと、を意味することを意図している。前記分子は、例えば、宿主染色体への組込みなどによる、宿主の遺伝物質へのコード核酸の導入によって、または、プラスミドなどの非染色体性遺伝物質として、導入することができる。従って、前記用語は、コード核酸の発現に関連して使用される場合、発現可能な形態におけるコード核酸の細胞への導入を指す。用語「内在性」とは、指示対象の分子または活性が、宿主細胞内に存在することを指す。同様に、前記用語は、コード核酸の発現に関連して使用される場合、細胞内に含有され、外来的に導入されない、コード核酸の発現を指す。
【００９９】
本明細書で使用される場合、用語「ポリヌクレオチド」とは、あらゆる長さのヌクレオチド（デオキシリボヌクレオチドもしくはリボヌクレオチドまたはそれらの類似体）の重合形態を指す。ポリヌクレオチドの配列は、アデニン（Ａ）；シトシン（Ｃ）；グアニン（Ｇ）；チミン（Ｔ）の４種のヌクレオチド塩基から構成され、ポリヌクレオチドがＲＮＡである場合、チミンはウラシル（Ｕ）となる。ポリヌクレオチドは、遺伝子または遺伝子断片（例えば、プローブ、プライマー、ＥＳＴまたはＳＡＧＥタグ）、エクソン、イントロン、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、転移ＲＮＡ、リボソームＲＮＡ、リボザイム、ｃＤＮＡ、組換えポリヌクレオチド、分岐ポリヌクレオチド、プラスミド、ベクター、あらゆる配列の単離ＤＮＡ、あらゆる配列の単離ＲＮＡ、核酸プローブ、およびプライマーを包含し得る。また、ポリヌクレオチドは二本鎖分子および一本鎖分子の両方を指す。
【０１００】
本明細書で使用される場合、用語「ペプチド」、「ポリペプチド」、および「タンパク質」は、同義的に使用され、ペプチド結合によって共有結合したアミノ酸残基を有する分子を指す。ポリペプチドは少なくとも２個のアミノ酸を含まなければならないが、ポリペプチドのアミノ酸の最大数に限度は無い。本明細書で使用される場合、前記用語は、当該技術分野において一般にはペプチド、オリゴペプチドおよびオリゴマーなどとも称される短い鎖、並びに、当該技術分野において一般にはポリペプチドまたはタンパク質と称されるより長い鎖、の両方を指す。「ポリペプチド」としては、例えば、生物学的に活性な断片、実質的に相同なポリペプチド、オリゴペプチド、ホモ二量体、ヘテロ二量体、ポリペプチドのバリアント、修飾ポリペプチド、誘導体、類似体、融合タンパク質が特に挙げられる。これらのポリペプチドには、天然ポリペプチド、組換えポリペプチド、合成ポリペプチド、またはこれらの組み合わせが包含される。
【０１０１】
本明細書で使用される場合、用語「エキソビボ」とは、天然条件の変更が最低限であることが好ましい、生物の外側の人工的な環境の中で、生体組織内または生体組織上で行われる、実験法または測定などの、生物の外側で起こる活動を指す。「エキソビボ」法は、生細胞または生組織を、生物から採取し、実験室の装置内で、通常は無菌条件下で、通常は数時間、または最大で約２４時間、ただし状況によっては最大で２〜２８日間、培養すること、を含み得る。そのような組織または細胞は、回収して凍結した後に、エキソビボ処理用に解凍することもできる。生細胞または生組織を用いる、数日間よりも長く継続される組織培養実験または組織培養法は、通常は「インビトロ」と見なされるが、ある実施形態では、この用語はエキソビボと同義的に使用され得る。一方、「インビボ」の活動は生物（例えば、マウス）の中で起こり、そのような活動としては、細胞移植、細胞ホーミング、細胞の自己複製、および細胞の増殖を挙げることができる。
【０１０２】
本明細書で使用される場合、用語「インビトロ」とは、試験管、培養皿、または他の生体外で実施される、または生じる、活動を指す。
【０１０３】
本明細書で使用される場合、「接触する」、「処理する」、または「調節する」といった用語は、免疫細胞に対して行われる行為を指して使用される場合、本明細書では同義的に使用されて、免疫細胞を、本明細書で開示される薬剤のうちの１または複数と共に培養すること、それと共にインキュベートすること、それに暴露すること、を指す。
【０１０４】
本明細書で使用される場合、「未接触」細胞または「未処理」細胞は、対照または溶剤以外の薬剤で処理されていない、例えば、それと共に培養されていない、それと接触させられていない、またはそれと共にインキュベートされていない、細胞である。ＤＭＳＯなどの対照剤と接触させた、または別の溶剤と接触させた細胞は、非接触細胞の例である。
【０１０５】
本明細書で使用される場合、「フィーダー細胞」または「フィーダー」は、第２の種類の細胞と共培養することで、前記第２の種類の細胞が成長、増殖、または分化できる環境を供給するある種の細胞を指す用語であり、これは、フィーダー細胞が前記第２の種類の細胞を支持するための刺激、増殖因子、および栄養分を供給するためである。フィーダー細胞は、フィーダー細胞が支持している細胞と異なる種由来であってもよい。例えば、幹細胞を含む、ある特定の種類のヒト細胞は、マウス胎仔線維芽細胞の初代培養物、または不死化したマウス胎仔線維芽細胞によって支持することができる。別の例では、末梢血由来細胞または形質転換白血病細胞は、ナチュラルキラー細胞の増殖および成熟を支持する。フィーダー細胞が支持している細胞よりも増殖することを防ぐために、フィーダー細胞は通常、他の細胞との共培養の際、照射またはマイトマイシンなどの有糸分裂阻害剤による処理によって不活性化され得る。フィーダー細胞としては、内皮細胞、間質細胞（例えば、上皮細胞または線維芽細胞）、および白血病細胞を挙げることができる。上記を制限することなく、１つの特定のフィーダー細胞型として、ヒト皮膚線維芽細胞などのヒトフィーダーを挙げることができる。別のフィーダー細胞型として、マウス胎仔線維芽細胞（ＭＥＦ）を挙げることができる。一般に、様々なフィーダー細胞を部分的に使用することで、多能性の維持、ある特定の系譜への分化の指示、増殖能の増強、および、エフェクター細胞などの特殊化した細胞型への成熟の促進が可能となる。
【０１０６】
本明細書で使用される場合、「フィーダーフリー」（ＦＦ）環境とは、フィーダー細胞もしくは間質細胞を実質的に含まない、且つ／または、フィーダー細胞の培養により馴化されていない、培養条件、細胞培養物、または培地などの環境を指す。「馴化」培地とは、フィーダー細胞を培地内で一定期間（例えば、少なくとも１日）培養した後に、回収された培地を指す。培地中で培養されたフィーダー細胞に分泌された増殖因子やサイトカインをはじめとして、順化培地には多くの媒介物質が含有される。いくつかの実施形態では、フィーダーフリー環境は、フィーダー細胞も間質細胞も含まず、且つ、フィーダー細胞の培養による馴化もなされていない。
【０１０７】
本明細書で使用される場合、用語「類似体」とは、構造および機能において別の化学物質と類似しており、親化学物質と同じ化学的骨格および機能を保持している場合、１個の元素もしくは基、または２個以上の基（例えば、２、３、または４個の基）だけ構造的な違いがある、化学的分子を指す。そのような変化としては、例えば、酸エステルまたは酸アミドなどの化学部分の付加または置換、アルコールまたはチオールに対するベンジル基、およびアミンに対するｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（tert-butoxylcarbonyl）基などの保護基が挙げられる。また、アルキル置換（例えば、メチル、ジメチル、エチルなど）などのアルキル側鎖に対する変化、ハロゲン付加、側鎖の飽和レベルまたは不飽和レベルに対する変化、並びに、置換フェニルおよび置換フェノキシなどの修飾された基の付加も挙げられる。類似体は複合体も包含することができる（例えば、ビオチン部分またはアビジン部分、西洋わさびペルオキシダーゼなどの酵素、並びに放射性標識部分、生物発光部分、化学発光部分、または蛍光部分）。また、本明細書に記載の薬剤に部分を付加することで、その薬物速度論的特性を変化させることもでき、例えば、望ましい特性の中でも特に、インビボもしくはエキソビボにおける半減期を延長させたり、あるいは、その細胞透過性を増加させたりできる。また、プロドラッグも包含され、プロドラッグは医薬品の多数の望ましい特性（例えば、溶解性、生物学的利用能、製造性など）を増強することが知られている。
【０１０８】
本明細書で使用される場合、用語「増加させる」とは、溶媒または対照分子／組成物で引き起こされる反応と比較して、薬剤が、細胞においてより大きな生理反応（すなわち、下流作用）を生じるまたは引き起こすことができること、を指す（例えば、単離されたＴ細胞集団によるインターロイキン２またはＴＮＦの産生の増加）。この増加は、ある特定の細胞シグナル経路を介したシグナル伝達の増大の結果としての、遺伝子発現の増加とすることができる。量の「増加」は、通常、統計的に有意な量であり、溶媒（薬剤無し）または対照組成物が発生させる反応と比較して、１．１倍、１．２倍、１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、またはそれ以上の倍率（例えば、５００倍、１０００倍）（１より大きい全ての整数と間の小数点、例えば１．５倍、１．６倍、１．７倍、１．８倍など、を含む）の増加を挙げることができる。
【０１０９】
本明細書で使用される場合、用語「減少させる」とは、溶媒または対照分子／組成物で引き起こされる反応と比較して、薬剤が、細胞においてより小さな生理反応（すなわち、下流作用）を生じるまたは引き起こすことができること、を指す。減少は、遺伝子発現の減少、細胞情報伝達の減少、または細胞増殖の減少であり得る。量の「減少」は、通常、統計的に有意な量であり、溶媒（薬剤無し）または対照組成物が発生させる反応と比較して、１／１．１倍、１／１．２倍、１／１．５倍、１／２倍、１／３倍、１／４倍、１／５倍、１／６倍、１／７倍、１／８倍、１／９倍、１／１０倍、１／１５倍、１／２０倍、１／３０倍、またはそれ以下の倍率（例えば、１／５００倍、１／１０００倍）（１より小さい全ての整数と間の小数点、例えば１／１．５倍、１／１．６倍、１／１．７倍、１／１．８倍など、を含む）の減少を挙げることができる。
【０１１０】
本明細書で使用される場合、用語「相乗効果」または「相乗的」とは、２つ以上の独立体が協働することにより個々の効果の和よりも大きな効果が生み出されるような、効果の増強を目的とした２つ以上の独立体の組み合わせを指し、対して「拮抗的」は、組み合わされた２つ以上の独立体が互いの効果を相殺または中和し合う場合に用いられ、また、対して「相加的」は、組み合わされた２つ以上の独立体が個々の効果の和にほぼ等しい効果を生じる場合に使用される。
【０１１１】
本明細書で使用される場合、用語「実質的に含まない」は、細胞集団または培地などの組成物の説明に使用される場合、組成物が、あらゆる供給源の特定の物質を含まないこと、例えば、特定の物質の９５％を含まないこと、９６％を含まないこと、９７％を含まないこと、９８％を含まないこと、９９％を含まないこと、または、常法で測定された場合に検出不能であること、を指す。用語「存在しない（absence of）」にも同様の意味を適用することができ、組成物の特定の物質または成分が存在しないことを指す。
【０１１２】
本明細書で使用される場合、用語「約」または「およそ」とは、数量（quantity）、レベル、値、数、頻度、割合、寸法、大きさ、量（amount）、重量、または長さが、指示対象の数量、レベル、値、数、頻度、割合、寸法、大きさ、量、重量、または長さに対して、１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、または１％ほどの変動があることを指す。数量、レベル、値、数、頻度、割合、寸法、大きさ、量、重量、または長さの範囲は、指示対象の数量、レベル、値、数、頻度、割合、寸法、大きさ、量、重量、または長さの、±１５％、±１０％、±９％、±８％、±７％、±６％、±５％、±４％、±３％、±２％、または±１％であり得る。
【０１１３】
本明細書で使用される場合、用語「対象」とは哺乳動物を指す。対象はヒトであってもヒト以外の哺乳動物であってもよく、ヒト以外の哺乳動物としては例えばイヌ、ネコ、ウシ、ウマ、マウス、ラット、ウサギ、またはそのトランスジェニック種などがある。
【０１１４】
本明細書で使用される場合、「治療する」、「治療」、「治療された」、および「治療すること」といった用語は、治療用組成物または治療法を必要とする対象を指示対象として使用されている場合、目的の薬理学的効果および／または生理学的効果を得ることを指し、例えば、疾患の１または複数の徴候または症状の改善（improvement）または除去または回復（amelioration）または予防の達成が包含されるがこれらに限定はされない。この効果は、症状の改善もしくは除去の達成、または、疾患および／もしくは疾患に起因する有害作用の部分的もしくは完全な治癒の達成の点から、予防的であり、且つ／または、疾患もしくはその症状を完全もしくは部分的に予防することを含み、且つ／または、治療的であり得る。用語「治療」には、哺乳動物、特にヒトにおける、疾患のあらゆる治療が包含され、いくつかの実施形態では、（ａ）前記疾患に罹患し易いが、それに罹患しているとはまだ診断されていない対象において、前記疾患が発生することを予防すること；（ｂ）前記疾患を抑制すること、すなわち、その発生を抑止すること；（ｃ）前記疾患を軽減すること、または前記疾患の後退を引き起こすこと、または前記疾患の症状を完全もしくは部分的に除去すること；並びに、（ｄ）造血系の再構築など、個体を疾患前の状態まで回復させること、が包含される。
【０１１５】
本明細書で使用される場合、「遺伝子改変」とは、遺伝子の編集を指す場合があり、（１）自然発生的な再構成、変異、ジェネティックインプリンティングおよび／もしくはエピジェネティック修飾から生じた改変、または、（２）細胞のゲノムにおける挿入、欠失、もしくは置換を通じたゲノム操作により得られる改変、が包含され得る。遺伝子改変は、本明細書で使用される場合、ドナー、疾患、または治療応答に特異的な、供給源特異的な免疫細胞の、１または複数の保持可能な治療特性も包含し得る。
【０１１６】
本明細書で使用される場合、用語「ジェネティックインプリント」とは、供給源細胞の好ましい治療特性に寄与する遺伝的またはエピジェネティックな情報を指す。具体的に選択されたドナー背景、疾患背景または治療背景から得られる供給源細胞の面で、好ましい治療特性に寄与しているジェネティックインプリントは、根底にある分子現象が特定されているかどうかにかかわらず、保持可能な表現型、すなわち好ましい治療特性、を顕在化させる、あらゆる背景特有の遺伝的またはエピジェネティックな改変を含み得る。ドナー、疾患、または治療応答に特異的な供給源細胞は、ｉＰＳＣおよび派生した造血系細胞において保持可能なジェネティックインプリントを含み得る。そのようなジェネティックインプリントとしては、単一特異的ＴＣＲ、例えば、ウイルス特異的Ｔ細胞またはインバリアントナチュラルキラーＴ（ｉＮＫＴ）細胞からのもの；追跡可能であり且つ望ましい遺伝子多型、例えば、選択されたドナーにおける高親和性ＣＤ１６受容体をコードする点変異についてホモ接合性のもの；並びに、所定のＨＬＡ要求、すなわち、共通のハプロタイプを示す、選択されたＨＬＡ適合ドナー細胞、が挙げられるが、これらに限定はされない。本明細書で使用される場合、好ましい治療特性には、派生細胞の、移植の改善、輸送の改善、ホーミングの改善、生存能の改善、自己複製の改善、残留性の改善、免疫応答の制御および調節の改善、生存の改善、並びに細胞毒性の改善が包含される。好ましい治療特性は、抗原を標的とする受容体の発現；ＨＬＡの提示または欠失；腫瘍内微小環境の免疫抑制作用に対する耐性；バイスタンダー免疫細胞および望ましい免疫調節の誘導；腫瘍以外への効果の減少による標的特異性の改善；化学療法等の治療に対する耐性、にも関連し得る。
【０１１７】
本明細書で使用される場合、用語「セーフティ・スイッチタンパク質（safety switch protein）」とは、細胞療法の潜在的な毒性または有害作用を妨げるように設計された、操作されたタンパク質を指す。場合によって、セーフティ・スイッチタンパク質の発現は、セーフティ・スイッチタンパク質をコードする遺伝子をそのゲノム内に永続的に組み入れた、操作された細胞の移植に関する安全性の懸念に対処するために、条件的に制御される。この条件的制御は、固定ではなく、小分子を介した翻訳後活性化による制御、並びに、組織特異的且つ／または時間的な転写制御、を含み得る。このセーフティ・スイッチは、アポトーシスの誘導、タンパク質合成またはＤＮＡ複製の阻害、増殖停止、転写性および転写後の遺伝子調節、並びに／または抗体を介した枯渇、に介在し得る。場合によって、セーフティ・スイッチタンパク質は、活性化された場合に治療用細胞のアポトーシスおよび／または細胞死を引き起こす、外来性分子（例えばプロドラッグ）によって活性化される。セーフティ・スイッチタンパク質の例としては、カスパーゼ９（またはカスパーゼ３もしくはカスパーゼ７）、チミジンキナーゼ、シトシンデアミナーゼ、Ｂ細胞ＣＤ２０、改変ＥＧＦＲなどの自殺遺伝子、およびこれらのあらゆる組み合わせが挙げられるが、これらに限定はされない。この戦略では、有害事象の場合に投与されるプロドラッグは、自殺遺伝子産物によって活性化され、形質導入細胞を死滅させる。
【０１１８】
「治療上十分な量（therapeutically sufficient amount）」は、本明細書で使用される場合、その意味の中に、目的の治療効果をもたらすとされる、十分且つ／または有効な量の、特定の、治療用且つ／または医薬品としての、組成物を含む。正確な量は、患者の全体的な健康、患者の年齢、並びに異常のステージおよび重症度などの要因に応じて、対象によって異なり得る。特定の実施形態では、治療上十分な量は、治療中の対象の疾患または異常に関連した、少なくとも１つの症状を回復、低減、および／または改善するのに、十分且つ／または有効な量である。
【０１１９】
Ｉ．細胞ベースの養子免疫療法の有効性を改善するための調節薬
本発明は、いくつかの実施形態において、養子細胞をベースとした治療法に好適な免疫細胞（例えば、調節された免疫細胞）の１または複数の特性（例えば、治療的有効性）を改善するのに十分な量の１または複数の調節薬を含む組成物を提供する。いくつかの態様では、治療的有効性が改善された免疫細胞は、前記１または複数の調節薬を含まない条件（例えば類似条件）下で、発生したまたは維持された細胞と比較して、増殖の改善、残留性の改善、細胞毒性の改善、および／または細胞リコール／記憶の改善を示す。いくつかの実施形態では、前記薬剤、または前記調節薬を含む組成物を用いた免疫細胞の調節によって、得られた免疫細胞は、１または複数のそのような改善（例えば、少なくとも１つの特性の改善）を含む。いくつかの態様では、前記少なくとも１つの特性は、以下を包含するが、これらに限定はされず、且つ／または、以下のうちの少なくとも１または複数を含む：表現型の傾き（skewing）（例えば、ＴｅｆｆもしくはＴｅｍからＴｎ、Ｔｃｍ、および／もしくはＴｓｃｍへの傾き、並びに／または、１または複数の他のＴ細胞亜集団と比較した場合の、ナイーブＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞および／またはステムセントラルメモリーＴ細胞の相対数の増加）；細胞増殖の増加、細胞生存率の増加；並びに／または、腫瘍除去能および残留性の増加。いくつかの実施形態では、養子細胞ベースの治療法に好適な免疫細胞などの免疫細胞は、その標的によって分類される１または複数のクラスの調節薬と接触されるか、それで処理されるか、それで調節される。いくつかの実施形態では、前記組成物または調節薬または薬剤の存在下で実行される方法、少なくとも１または複数の工程を通じて、細胞は操作される。上記のように、少なくとも１つの生物学的特性において免疫細胞の治療的有効性を改善できる調節薬のクラスとしては、ＢＥＴ阻害剤、ＣＤＫ阻害剤、ＣＲＡＣチャネル阻害剤、Ｃｏｘ阻害剤、ドパミン拮抗剤、ＥＲＫ５阻害剤、グルココルチコイド、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、Ｌｃｋ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、およびＳｙｋ阻害剤が挙げられる。上記の調節薬の各クラスについて、非限定的且つ例示的な化合物を表１にいくつか列挙する。
【０１２０】
本明細書では同義的に使用されるが、「調節因子」または「調節薬」は、特定の標的（例えば、タンパク質またはタンパク質をコードするポリヌクレオチド）の発現または活性を制御する能力を有する阻害剤または活性化剤を指して用いられる。「調節因子」または「調節薬」は阻害因子および活性化因子（例えば、リガンド、作動薬、拮抗薬）を包含する。調節薬、または調節因子は、本明細書で使用される場合、合成であっても天然であってもよい、有機化合物（例えば、低分子量の化学分子）、ポリペプチド（例えば、ペプチドまたは抗体）、核酸（例えば、二本鎖ＤＮＡ、二本鎖ＲＮＡ、一本鎖ＤＮＡ、一本鎖ＲＮＡ、オリゴヌクレオチド、アンチセンスＲＮＡ、阻害性低分子ＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、リボザイムなど）、オリゴ糖、もしくは脂質；または、同様に機能する（例えば、同じ標的に対する阻害または活性化）相同体、模倣剤、誘導体、類似体、もしくは塩であり得る。
【０１２１】
阻害剤は、例えば、記載の標的タンパク質もしくは他の標的の発現を減少もしくは途絶させ得る；または、標的タンパク質の刺激もしくはそのプロテアーゼ阻害剤の活性を部分的もしくは完全に遮断し得る；または、標的タンパク質の活性を減少する、妨げる、その活性化を遅延する、不活性化する、減感する（desensitize）、もしくは下方制御し得る薬剤であり、例えば拮抗薬である。活性化剤は、例えば、記載の標的タンパク質の発現を誘導もしくは活性化し得る、または、活性化もしくはプロテアーゼ阻害剤の活性を刺激、増加、活性化、促進、増強し得る、記載の標的タンパク質の活性を増感もしくは上方制御し得る薬剤であり、例えば作動薬である。阻害剤および活性化剤に関するアッセイは、例えば、記載の標的タンパク質を発現している細胞に推定上の調節剤を添加し、その後、記載の標的タンパク質の発現および／または活性に対する、機能的影響および影響の程度を確認することを含む。通常、対照試料（調節剤で処理されていない試料、または溶媒単独で処理された試料）に、比活性値１００％を割り当てる。対照に対する活性値が約９０％、所望により８０％、７０％、６０％、５０％、２５％、１０％、５％、または１％、またはそれ以下である場合、記載の標的タンパク質の阻害は達成されている。対照に対する活性値が１１０％、所望により１５０％、２００％、３００％、４００％、５００％、または１０００〜３０００％、またはそれ以上である場合、記載の標的タンパク質の活性化は達成されている。
【０１２２】
免疫細胞の治療的有効性を改善することには、通常、免疫細胞のある種の品質改善が含まれる。本明細書において提供されているいくつかの実施形態の調節薬による処理は、例えば、以下（細胞表現型の傾き、増殖、維持、分化、脱分化、生存、増殖、細胞毒性、残留性、および／または細胞リコール／記憶と記載され得る）の少なくとも１つ、または、例えばある特定の条件下のもしくはある特定の条件に応答したその少なくとも１つの見込み、を調節することにより、処理された免疫細胞のある特定の生物学的特性を増強し、それにより、免疫細胞の治療的有効性を改善することが、本明細書で示される。Ｔ細胞集団において、例えば、ナイーブＴ細胞、幹細胞様メモリーＴ細胞、またはセントラルメモリーＴ細胞への表現型の傾きは、維持、増殖、分化、および／または脱分化の調節を通じて、ナイーブＴ細胞亜集団、幹細胞様メモリーＴ細胞亜集団、もしくはセントラルメモリーＴ細胞亜集団の数もしくは相対比の増加、および／または、エフェクターメモリーＴ細胞亜集団もしくはエフェクターＴ細胞亜集団  数もしくは相対比の減少、をもたらし、これらは、インビボの養子療法における有効性の改善においてＴ細胞の品質がより良好であることを示すものである。１つの実施形態では、ＢＥＴ阻害剤、ＣＤＫ阻害剤、ＣＲＡＣチャネル阻害剤、Ｃｏｘ阻害剤、ドパミン拮抗剤、ＥＲＫ５阻害剤、グルココルチコイド、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、Ｌｃｋ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、およびＳｙｋ阻害剤のうちの少なくとも１つを含む、１または複数の調節薬を用いた治療の後に、ナイーブＴ細胞、幹細胞様メモリーＴ細胞、および／もしくはセントラルメモリーＴ細胞の数または割合が、Ｔ細胞集団内で増加する。１つの実施形態では、ナイーブＴ細胞、幹細胞様メモリーＴ細胞、および／もしくはセントラルメモリーＴ細胞の、表現型の傾き、または数もしくは割合の増加は、薬剤処置後の表面マーカーの発現増加によって示される。１つの実施形態では、ナイーブＴ細胞、幹細胞様メモリーＴ細胞、および／もしくはセントラルメモリーＴ細胞の、表現型の傾き、または数もしくは割合の増加は、薬剤処置後の、エフェクター細胞ではなく、ナイーブＴ細胞またはメモリーＴ細胞と関連した、サイトカインプロファイルによって示される。
【０１２３】
いくつかの他の実施形態では、ＢＥＴ阻害剤、ＣＤＫ阻害剤、ＣＲＡＣチャネル阻害剤、Ｃｏｘ阻害剤、ドパミン拮抗剤、ＥＲＫ５阻害剤、グルココルチコイド、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、Ｌｃｋ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、およびＳｙｋ阻害剤のうちの少なくとも１つが、Ｔ細胞のインビトロ殺滅能を改善することにより、Ｔ細胞の治療的有効性を改善する。
【０１２４】
さらに他の実施形態では、ＢＥＴ阻害剤、ＣＤＫ阻害剤、ＣＲＡＣチャネル阻害剤、Ｃｏｘ阻害剤、ドパミン拮抗剤、ＥＲＫ５阻害剤、グルココルチコイド、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、Ｌｃｋ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、およびＳｙｋ阻害剤のうちの少なくとも１つが、細胞生存および細胞増殖を増加することにより、Ｔ細胞の治療的有効性を改善する。
【０１２５】
さらに他の実施形態では、ＢＥＴ阻害剤、ＣＤＫ阻害剤、ＣＲＡＣチャネル阻害剤、Ｃｏｘ阻害剤、ドパミン拮抗剤、ＥＲＫ５阻害剤、グルココルチコイド、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、Ｌｃｋ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、およびＳｙｋ阻害剤のうちの少なくとも１つが、Ｔ細胞の残留性および腫瘍除去能を増強することにより、Ｔ細胞の治療的有効性を改善する。
【０１２６】
同様に、ＮＫ細胞集団において、例えば、維持、サブタイプの傾き、増殖、分化、および／または脱分化を通じた獲得ＮＫ細胞の数または相対比の増加は、インビボの養子療法における有効性の改善においてＮＫ細胞の品質がより良好であることを示すものである。ＮＫＴ細胞集団に関して、例えば、維持、サブタイプの転換、増殖、分化、および／または脱分化を通じたＩ型ＮＫＴ細胞の数または相対比の増加は、インビボの養子療法における有効性の改善においてＮＫＴ細胞の品質がより良好であることを示すものである。
【０１２７】
表１の、それぞれの標的によって分類／同定された調節薬のクラスは、養子療法においての免疫細胞の治療的有効性を改善する可能性に基づいて、見出されたものである。理論に限定されるものではないが、これらの調節薬は、細胞の代謝、栄養分の感知、増殖、アポトーシス、シグナル伝達、サイトカイン産生、感染プロセスに関する特性、および／または細胞機能の他の側面、の調節を介して、治療用免疫細胞を調節し改善する。
【表１】
2020528885.tif 000002
【０１２８】
用語「ＢＥＴ阻害剤」とは、ＢＥＴ（Bromodomain and Extra-Terminalモチーフ）タンパク質の少なくとも１つの活性を阻害する薬剤を指す。アセチル化リジン残基に結合するブロモドメインを含有するＢＥＴタンパク質は、例えばヒストンにおけるリジンのアセチル化を制御するその能力を介した、ヌクレオソームのリモデリングおよび転写制御と関係付けられている。１つの実施形態では、ＢＥＴ阻害剤がＢＥＴタンパク質のブロモドメインと結合する。１つの実施形態では、ＢＥＴ阻害剤が、ＢＥＴタンパク質とアセチル化ヒストンまたは転写因子との間のタンパク質間相互作用を妨げる。１つの実施形態では、ＢＥＴ阻害剤が、ＢＲＤ２タンパク質、ＢＲＤ３タンパク質、ＢＲＤ４タンパク質、およびＢＲＤＴタンパク質のうちの少なくとも１つ、またはこれらの組み合わせ、の活性を全てまたは部分的に阻害する。１つの実施形態では、前記ＢＥＴ阻害剤は低分子量化学分子である。１つの実施形態では、前記ＢＥＴ阻害剤は抗体である。別の実施形態では、前記ＢＥＴ阻害剤はスモールＲＮＡ（アンチセンスＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ）である。いくつかの実施形態では、前記ＢＥＴ阻害剤は、ＯＴＸ０１５、ＣＰＩ−２０３、ＪＱ１、ＧＳＫ１２１０１５１Ａ、ＧＳＫ５２５７６２、ＴＥＮ−０１０、ＣＰＩ−０６１０、オリノン（olinone）、ＲＶＸ−２０８、ＰＦ−６４０５７６１、Ｉ−ＢＥＴ−７６２、ＧＳＫ６８５３、ＥＥＤ２２６、ミベブレシブ、ＣＰＩ−６３７、ＢＩ−９５６４、ＢＩ−７２７３、ＧＳＫ６０２、ＰＦ−ＣＢＰ１ＨＣｌ、ＳＧＣ−ＣＢＰ３０、ブロモスポリン（bromosporine）、ＵＮＣ６６９、ＭＳ４３６、ＰＦＩ−３、ＰＦＩ−４、ＧＳＫ２８０１、ＧＳＫ１３２４７２６Ａ、ＯＦ−１、ＵＮＣ１２１５、およびこれらの誘導体または類似体を包含するが、これららに限定はされない。１つの実施形態では、免疫細胞調節用のＢＥＴ阻害剤はＯＴＸ０１５を含む。別の実施形態では、免疫細胞調節用のＢＥＴ阻害剤はＣＰＩ−２０３を含む。さらに別の実施形態では、免疫細胞調節用のＢＥＴ阻害剤はＪＱ１を含む。
【０１２９】
用語「ＣＤＫ阻害剤」とは、サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）の少なくとも１つの活性を阻害する薬剤を指す。ＣＤＫは、サイクリンとの結合により活性化され、細胞周期、転写、ｍＲＮＡプロセシング、および細胞分化の制御に関与する、セリンスレオニンプロテインキナーゼファミリーである。ＣＤＫの活性は、サイクリンとの結合に依存しており、ＣＤＫの下流の作用は追加のタンパク質間相互作用を必要とする。１つの実施形態では、ＣＤＫ阻害剤が、サイクリンのＣＤＫへの結合、またはＣＤＫ：サイクリンタンパク質の追加の相互作用タンパク質への結合を阻害する。別の実施形態では、ＣＤＫ阻害剤が、例えば、競合的または非競合的なＡＴＰ結合部位阻害剤として、アロステリック阻害剤として、または共有結合的阻害剤としての作用により、ＣＤＫのキナーゼ機能を阻害する。１つの実施形態では、前記ＣＤＫ阻害剤は低分子量化学分子である。１つの実施形態では、前記ＣＤＫ阻害剤は抗体である。別の実施形態では、前記ＣＤＫ阻害剤はスモールＲＮＡ（アンチセンスＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ）である。いくつかの実施形態では、前記ＣＤＫ阻害剤は、ＰＨＡ−７９３８８７、ＰＨＡ−７６７４９１、ＰＨＡ−８４８１２５（ミルシクリブ（milciclib））、ＰＤ−０３３２９９１（パルボシクリブ）、パルボシクリブイセチオン酸塩、ＣＹＣ２０２（ロスコビチン）、ＳＮＳ−０３２、ＳＣＨ７２７９６５（ディナシクリブ）、フラボピリドール、フラボピリドール塩酸塩、ＡＴ７５１９、ＪＮＪ−７７０６６２１、ＡＺＤ５４３８、ＡＺＤ５４３８、ＡＺＤ５４３８、ＬＹ２８３５２１９（アベマシクリブ）、ＢＭＳ−２６５２４６、Ｒ５４７、リボシクリブ（ＬＥＥ０１１）、ＮＵ６０２７、Ｐ２７６−００、ケンパウロン、ＡＴ７５１９  ＨＣｌ、ＬＤＣ００００６７、ＴＨＺ１、ＳＵ９５１６、Ｋ０３８６１、ＸＬ４１３（ＢＭＳ−８６３２３３）、ＬＹ２８５７７８５、ＲＯ−３３０６、ＯＮ１２３３００、ＬＤＣ４２９７、プルバラノールＡ、ＭＬ１６７、ＴＧ００３、およびこれらの誘導体または類似体を包含するが、これらに限定はされない。１つの実施形態では、免疫細胞調節用のＣＤＫ阻害剤はＰＨＡ−７９３８８７を含む。
【０１３０】
ＣＲＡＣ（Ca2+ release-activated Ca2+）チャネル阻害剤（別名ＣＲＡＣチャネルＣａ流入遮断薬）は、ＣＲＡＣチャネルの開口を妨げることによりカルシウムの移動を乱す。用語「ＣＲＡＣチャネルＣａ流入遮断薬」とは、ＣＲＡＣチャネルの少なくとも１つ活性を阻害する薬剤を指す。ＣＲＡＣチャネルは、ＳＴＩＭタンパク質（小胞体内のＣａ２＋センサー）およびＯｒａｉタンパク質（ポアを形成するサブユニット）を含む２成分複合体である。カルシウムイオン（Ｃａ２＋）が哺乳類細胞の小胞体から枯渇すると、ＳＴＩＭがオリゴマーを形成し、Ｏｒａｉと相互作用してゲートを開通することで、ＣＲＡＣチャネルが活性化されて、小胞体中のＣａ２＋補充がなされる。ＣＲＡＣチャネルを通じたＣａ２＋流入は、サイトカイン産生に必要な、Ｔ細胞受容体の活性化後の重要な下流イベントである。１つの実施形態では、ＣＲＡＣチャネル阻害剤がＣＲＡＣチャネルの活性化を妨げる。１つの実施形態では、ＣＲＡＣチャネル阻害剤がＳＴＩＭタンパク質の少なくとも１つの活性を妨げる。１つの実施形態では、ＣＲＡＣチャネル阻害剤がＯｒａｉタンパク質の少なくとも１つの活性を妨げる。１つの実施形態では、ＣＲＡＣチャネル阻害剤がＳＴＩＭのオリゴマー化を妨げる。１つの実施形態では、ＣＲＡＣチャネル阻害剤がＳＴＩＭのＯｒａｉとの相互作用を遮断する。１つの実施形態では、ＣＲＡＣチャネル阻害剤がＳＴＩＭが高次構造上のアンフォールディングを起こすことを妨げて、ＳＴＩＭを不活性化状態のままにする。別の実施形態では、ＣＲＡＣチャネル阻害剤がＣａ２＋がＯｒａｉに結合することを妨げる。１つの実施形態では、前記ＳＴＩＭはＳＴＩＭ１またはＳＴＩＭ２を含む。１つの実施形態では、前記ＯｒａｉはＯｒａｉ１、Ｏｒａｉ２、またはＯｒａｉ３を含む。１つの実施形態では、前記ＣＲＡＣチャネル阻害剤は低分子量化学分子である。１つの実施形態では、前記ＣＲＡＣチャネル阻害剤は抗体である。別の実施形態では、前記ＣＲＡＣチャネル阻害剤はスモールＲＮＡ（アンチセンスＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ）である。いくつかの実施形態では、前記ＣＲＡＣチャネル阻害剤は、ピラゾール誘導体（ＢＴＰ１、ＢＴＰ２、ＢＴＰ３、ＧＳＫ７９７５Ａ、ＧＳＫ５５０３Ａ）、ランタニド、２−ＡＰＢ、ＤＰＢ１６２−ＡＥ、ＤＰＢ１６３−ＡＥ、イミダゾール化合物（ＳＫＦ−９６３６５）、Ｓｙｎｔａ６６、ＲＯ２９５９、ＣＭ２４８９、ＣＭ３４５７、ＭＬ−９、およびこれらの誘導体または類似体を包含するが、これらに限定はされない。１つの実施形態では、免疫細胞調節用のＣＲＡＣチャネル阻害剤はＢＴＰ２を含む。
【０１３１】
用語「Ｃｏｘ阻害剤」とは、シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）の少なくとも１つの活性を阻害する薬剤を指す。シクロオキシゲナーゼは、トロンボキサン、およびプロスタサイクリンなどのプロスタグランジンを含むプロスタノイドの形成に関与する、アイソザイムファミリーである。１つの実施形態では、ＣＯＸ阻害剤がＣＯＸ−１の活性を阻害する。別の実施形態では、ＣＯＸ阻害剤がＣＯＸ−２の活性を阻害する。さらに別の実施形態では、ＣＯＸ阻害剤がＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２の両方を阻害する。１つの実施形態では、前記ＣＯＸ阻害剤は低分子量化学分子である。１つの実施形態では、前記ＣＯＸ阻害剤は抗体である。別の実施形態では、前記ＣＯＸ阻害剤はスモールＲＮＡ（アンチセンスＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ）である。いくつかの実施形態では、前記ＣＯＸ阻害剤は、エトリコキシブ、セレコキシブ、ロフェコキシブ、メロキシカム、バルデコキシブ、ナプロキセン、ジクロフェナク、リコフェロン、エトドラク、ケトロラク、フルフェナム酸、ブフェキサマク、ピロキシカム、およびこれらの誘導体または類似体を包含するが、これに限定はされない。１つの実施形態では、免疫細胞調節用のシクロオキシゲナーゼ阻害剤はエトリコキシブを含む。
【０１３２】
用語「ドパミン拮抗剤」とは、ドパミン受容体の少なくとも１つの活性を阻害する薬剤を指す。ドパミン受容体はＧタンパク質共役型受容体（ＧＰＣＲ）であるが、そのシグナル伝達は主に、ヘテロ三量体ＧＴＰ結合タンパク質（Ｇタンパク質）との相互作用と、その活性化によって媒介される。加えて、受容体のオリゴマー形成、または足場タンパク質およびシグナル伝達スイッチングタンパク質との受容体の相互作用が、ドパミン受容体のシグナル伝達の制御に重要である。１つの実施形態では、ドパミン拮抗剤がドパミン受容体に結合することで、ドパミン受容体による、下流の反応の惹起に寄与するエフェクター分子の認識および／またはエフェクター分子との相互作用が遮断され、この下流の反応にはイオンチャネル、ホスホリパーゼ、プロテインキナーゼ、および受容体型チロシンキナーゼを含むがこれらに限定はされない。１つの実施形態では、前記ドパミン拮抗剤は低分子量化学分子である。１つの実施形態では、前記ドパミン拮抗剤は抗体である。別の実施形態では、前記ドパミン拮抗剤はスモールＲＮＡ（アンチセンスＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ）である。いくつかの実施形態では、前記ドパミン拮抗剤は、セルチンドール、クレボプリドリンゴ酸塩、アザペロン、フルフェナジン二塩酸塩、アミスルプリド、パリペリドン、アミスルプリド塩酸塩（Amisulpride Hcl）、ブロモプリド、およびこれらの誘導体または類似体を包含するが、これに限定はされない。１つの実施形態では、免疫細胞調節用のドパミン拮抗剤はセルチンドールを含む。
【０１３３】
用語「ＥＲＫ５／ＢＭＫ１阻害剤」または「ＥＲＫ５阻害剤」とは、ＥＲＫ５（extracellular signal regulated kinase 5）（別名ＢＭＫ１（big MAPK 1））の少なくとも１つの活性を阻害する薬剤を指す。ＥＲＫ５はＭＡＰＫファミリーのメンバーである。ＥＲＫ５は増殖因子、サイトカイン、およびストレスによって活性化される可能性があり、完全な活性にはＭＡＰＫキナーゼ５（ＭＥＫ５）によるリン酸化を必要とする。このＥＲＫ５経路は、リン酸化により下流の転写因子を制御することを通じて、細胞増殖および細胞分化の制御において重要な役割を果たす。１つの実施形態では、ＥＲＫ５の阻害剤はＥＲＫ５のリン酸化を妨げる。１つの実施形態では、ＥＲＫ５の阻害剤はＥＲＫ５の二量体化を妨げる。別の実施形態では、ＥＲＫ５の阻害剤はＥＲＫ５のトランス活性化を乱す。さらに別の実施形態では、ＥＲＫ５の阻害剤はＭＥＫ５の活性化を阻害する。１つの実施形態では、前記ＥＲＫ５阻害剤は低分子量化学分子である。１つの実施形態では、前記ＥＲＫ５阻害剤は抗体である。別の実施形態では、前記ＥＲＫ５阻害剤はスモールＲＮＡ（アンチセンスＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ）である。いくつかの実施形態では、前記ＥＲＫ５阻害剤は、ＸＭＤ８−９２、ＤＥＬ−２２３７９、インドリノン−６−カルボキサミド（ＢＩＸ０２１８８、ＢＩＸ０２１８９）、Ｕ０１２６、ＰＤ９８０５９、およびこれらの誘導体または類似体を包含するが、これに限定はされない。１つの実施形態では、免疫細胞調節用のＥＲＫ５阻害剤はＸＭＤ８−９２を含む。
【０１３４】
用語「グルココルチコイド」（ＧＣ）とは、グルココルチコイド受容体（ＧＲ）に結合しそれを活性化する、ステロイドホルモンのクラスを指す。この活性化されたグルココルチコイド受容体複合体は、標的遺伝子のプロモーター内のグルココルチコイド応答配列に直接結合することを通じて、またはプロモーターに結合した転写複合体との相互作用を通じたトランス抑制によって、転写を制御する。グルココルチコイド受容体は生理学的に重要なプロセスの多くで重要な役割を果たす。これらのプロセスとしては、グルコース新生、筋肉におけるグルコース取り込み、および脂肪組織における脂肪分解が挙げられる。加えて、グルココルチコイド受容体を介して作用するグルココルチコイドは、Ｔリンパ球の発生および恒常性におけるその役割により、強力な免疫抑制および抗炎症効果を発揮する。グルココルチコイドは、免疫機能のある側面を低減させる、免疫系のフィードバック機構の一部である。グルココルチコイド受容体を活性化するグルココルチコイド（グルココルチコイド受容体作動薬）の例は、酢酸デキサメタゾン、アムシノニド、フルニソリド、ベクロメタゾン、コルトドキソン、プレドニゾロン、プロピオン酸フルチカゾン、フランカルボン酸モメタゾン、ベタメタゾン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、およびこれらの誘導体または類似体を包含するが、これに限定はされない。１つの実施形態では、免疫細胞調節に使用されるグルココルチコイドはフルニソリドを含む。１つの実施形態では、免疫細胞調節に使用されるグルココルチコイドは酢酸デキサメタゾンを含む。別の実施形態では、免疫細胞調節に使用されるグルココルチコイドはアムシノニドを含む。
【０１３５】
用語「ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤」とは、Ｉ型インスリン様増殖因子受容体（ＩＧＦ−１Ｒ）の少なくとも１つの活性を阻害する薬剤を指す。ＩＧＦ−１Ｒは、最初は単一のポリペプチドとして翻訳される、２つのα鎖と２つのβ鎖とから構成される受容体型チロシンキナーゼである。α鎖はリガンド結合に関与しており、β鎖は膜貫通ドメインおよびキナーゼドメインの両方を含む。ＩＧＦ−１Ｒは、ＩＧＦ−１（インスリン様増殖因子１）およびＩＧＦ−２によって活性化される。リガンド結合に応じて、ＩＧＦ−１Ｒのα鎖はβ鎖のチロシンの自己リン酸化を誘導し、このイベントにより、細胞生存および細胞増殖を促進する細胞内シグナル伝達のカスケードが惹起される。１つの実施形態では、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤がＩＧＦ−１ＲのＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２への結合を妨げる。１つの実施形態では、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤が、ＩＧＦ−１Ｒのβ鎖が介在するキナーゼ活性を妨げる。１つの実施形態では、前記ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤は低分子量化学分子である。１つの実施形態では、前記ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤は抗体である。別の実施形態では、前記ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤はスモールＲＮＡ（アンチセンスＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ）である。いくつかの実施形態では、前記ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤は、ＢＭＳ−５３６９２４、リンシチニブ、ＮＶＰ−ＡＥＷ５４１、ＧＳＫ１９０４５２９Ａ、ＮＶＰ−ＡＤＷ７４２、ＮＴ１５７、チロホスチン、ＧＳＫ１８３８７０５Ａ、ＢＭＳ−７５４８０７、ＰＱ４０１、ピクロポドフィリン、およびこれらの誘導体または類似体を包含するが、これに限定はされない。１つの実施形態では、免疫細胞調節用のＩＧＦ−１Ｒ阻害剤はＢＭＳ−５３６９２４を含む。
【０１３６】
用語「ＩＫＫ阻害剤」とは、ＩＫＫ（Inhibitor of nuclear factor Kappa B Kinase）の少なくとも１つの活性を阻害する薬剤を指す。ＩＫＫはＩＫＫ１、ＩＫＫ２、およびＮＥＭＯから構成される酵素複合体であり、阻害性のＩκＢαタンパク質をリン酸化する。このリン酸化によって、ＮＦ−κＢからＩκＢαが解離する。解離後、ＮＦ−κＢは核内に移行し、免疫応答、炎症、および細胞生存に関与する遺伝子の発現を活性化する。すなわち、ＩＫＫはＮＦ−κＢ活性化の支配的な制御因子と見なすことができる。１つの実施形態では、ＩＫＫ阻害剤がＩκＢαタンパク質のリン酸化を妨げる。１つの実施形態では、ＩＫＫ阻害剤が、ＩＫＫがその基質にリン酸基を移すことを妨げる。１つの実施形態では、ＩＫＫ阻害剤がＩＫＫ複合体のサブユニットの触媒機能を障害する。別の実施形態では、ＩＫＫ阻害剤がＩＫＫ複合体のサブユニットの制御機能を低減する。１つの実施形態では、前記ＩＫＫ阻害剤は低分子量化学分子である。１つの実施形態では、前記ＩＫＫ阻害剤は抗体である。別の実施形態では、前記ＩＫＫ阻害剤はスモールＲＮＡ（アンチセンスＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ）である。いくつかの実施形態では、前記ＩＫＫ阻害剤は、ＴＰＣＡ−１、バルドキソロンメチル、リスベラトロール、ＭＬＮ１２０Ｂ、ＭＲＴ６７３０７、アンレキサノクス、ＢＭＳ−３４５５４１、ＩＫＫ１６、ＢＩ６０５９０６、ＡＣＨＰ塩酸塩、ＰＳ−１１４５、アピゲニン、ＳＣ−５１４、ＩＫＫε−ＩＮ−１、ＩＭＤ−０３５４、ＬＹ２４０９８８１、ＡＺＤ３２６４、イカリイン（イエアリリン（Ieariline））、Ｂａｙ６５−１９４２  Ｈｃｌ、Ｂａｙ６５−１９４２、およびこれらの誘導体または類似体を包含するが、これに限定はされない。１つの実施形態では、免疫細胞調節用のＩＫＫ阻害剤はＴＰＣＡ−１を含む。別の実施形態では、免疫細胞調節用のＩＫＫ阻害剤はバルドキソロンメチルを含む。
【０１３７】
用語「ＪＡＫ阻害剤」とは、ヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）の少なくとも１つの活性を阻害する薬剤を指す。ヤヌスキナーゼは、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路を介して、サイトカイン介在性のシグナルを伝達する細胞内非受容体型チロシンキナーゼのファミリーである。ＪＡＫ（ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、およびＴＹＫ２）は、免疫応答に関与するＩ型およびＩＩ型サイトカイン受容体シグナル伝達経路に関与する下流タンパク質をリン酸化することにより活性化する。例えば、ＪＡＫ１およびＪＡＫ２は、サイトカイン受容体にＳＴＡＴ（Signal Transducers and Activators of Transcription）をリクルートする。ＪＡＫによるリン酸化の後、ＳＴＡＴは二量体化し、核内に移行し、そこでＤＮＡと結合して、遺伝子発現を調節する。１つの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤がＪＡＫの活性化を妨げることで、チロシンキナーゼの酵素活性が阻害される。１つの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤が少なくとも１つのヤヌスキナーゼを阻害する。１つの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤がＪＡＫ１活性化を阻害する。１つの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤がＪＡＫ２活性化を阻害する。別の実施形態では、ＪＡＫ阻害剤がＪＡＫ３活性化を阻害する。さらに別の実施形態では、ＪＡＫ阻害剤がＴＹＫ２活性化を阻害する。１つの実施形態では、前記ＪＡＫ阻害剤は低分子量化学分子である。１つの実施形態では、前記ＪＡＫ阻害剤は抗体である。別の実施形態では、前記ＪＡＫ阻害剤はスモールＲＮＡ（アンチセンスＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ）である。いくつかの実施形態では、前記ＪＡＫ阻害剤は、ルキソリチニブ、パクリチニブ、トファシチニブ、ＣＥＰ３３７７９、タソシチニブ、トファシチニブ（ＣＰ−６９０５５０）クエン酸塩、ＡＺＤ１４８０、フェドラチニブ、ＡＴ９２８３、ＡＧ−４９０（チロホスチンＢ４２）、モメロチニブ（ＣＹＴ３８７）、ＴＧ１０１２０９、ＷＰ１０６６、ガンドチニブ、ＮＶＰ−ＢＳＫ８０５  ２ＨＣｌ、バリシチニブ、ＡＺ９６０、ＷＨＩ−Ｐ１５４、ＸＬ０１９、ＺＭ３９９２３ＨＣｌ、ＦＬＬＬ３２、ＶＸ−５０９、およびこれらの誘導体または類似体を包含するが、これに限定はされない。１つの実施形態では、免疫細胞調節用のＪＡＫ阻害剤はルキソリチニブを含む。１つの実施形態では、免疫細胞調節用のＪＡＫ阻害剤はパクリチニブを含む。別の実施形態では、免疫細胞調節用のＪＡＫ阻害剤はトファシチニブを含む。別の実施形態では、免疫細胞調節用のＪＡＫ阻害剤はＣＥＰ３３７７９を含む。
【０１３８】
用語「Ｌｃｋ阻害剤」とは、リンパ球特異的タンパク質チロシンキナーゼ（lymphocyte-specific protein tyrosine kinase）（Ｌｃｋ）の少なくとも１つの活性を阻害する薬剤を指す。Ｌｃｋは、チロシンキナーゼのＳｒｃファミリーに属しているが、Ｔ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞で発現され、Ｔ細胞受容体の活性化およびそれを介したシグナル伝達の主要な構成要素である。このカスケードの活性化は、ＩＬ−２およびインターフェロン（ＩＦＮ）−γなどの炎症性サイトカインの発現上昇をもたらす。１つの実施形態では、前記Ｌｃｋ阻害剤は低分子量化学分子である。１つの実施形態では、前記Ｌｃｋ阻害剤は抗体である。別の実施形態では、前記Ｌｃｋ阻害剤はスモールＲＮＡ（アンチセンスＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ）である。いくつかの実施形態では、前記Ｌｃｋ阻害剤は、ＫＩＮ００１−０５１、ＲＫ−２４４６６、（７−シクロペンチル−５−（４−フェノキシフェニル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン）、アニリノピリミジン、２，３−ジアリールフロピリミジン、ベンズイミダゾール置換アニリンピリミジン、ピリミドピラジン誘導体、２−アミノ−６−カルボキシアミドベンゾチアゾール（2-amino-6-carboxamidobenzothaizole）、ＢＭＳ−３５４８２５、ＢＭＳ−３５０７５１、ＢＭＳ−３５８２３３、２−（アミノヘテロアリール）−チアゾール−５−カルボキサミド、Ａ−４２０９８３、ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、およびこれらの誘導体または類似体を包含するが、これに限定はされない。１つの実施形態では、免疫細胞調節用のＬｃｋ阻害剤はＫＩＮ００１−０５１を含む。
【０１３９】
用語「ＰＤＫ１阻害剤」とは、ホスホイノシチド依存性キナーゼ１（Phosphoinositide-dependent kinase 1）（ＰＤＫ１）の少なくとも１つの活性を阻害する薬剤を指す。ＰＤＫ１は、ＡＫＴ／ｍＴＯＲと関連した経路およびＡＫＴから独立した経路の両方を制御する。ＰＤＫ１が介在するＡｋｔ非依存的経路は、細胞増殖、生存、および細胞運動性の調節を主な役割とする。ＡＫＴの他に、プロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）、ｐ７０リボソームＳ６キナーゼ（Ｓ６Ｋ）、血清／グルココルチコイド調節キナーゼ（serum- and glucocorticoid-regulated kinase）（ＳＧＫ）、ｐ９０リボソームＳ６キナーゼ（ＲＳＫ）、およびＲＯＣＫ１などのＡＧＣキナーゼも、これらのＡＫＴ非依存的経路のＰＤＫ１の直接的な下流標的に含まれる。また、ＡＫＴ非依存的ＰＤＫ１シグナル伝達の機構は、ＡＫＴシグナル伝達の機構とは異なる。いくつかのＰＤＫ１阻害剤は、他のＡＧＣキナーゼほど強力にではないが、ＡＫＴを阻害する。例えば、ＧＳＫ２３３４４７０は、ＡＫＴを阻害するよりも強力にＳ６ＫおよびＳＧＫを阻害し、これによりＡＫＴ非依存的なＰＤＫ１シグナル伝達が主としてもたらされる。１つの実施形態では、前記ＰＤＫ１阻害剤は低分子量化学分子である。１つの実施形態では、前記ＰＤＫ１阻害剤は抗体である。別の実施形態では、前記ＰＤＫ１阻害剤はスモールＲＮＡ（アンチセンスＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ）である。いくつかの実施形態では、前記ＰＤＫ１阻害剤は、ＧＳＫ２３３４４７０、セレコキシブ、エンザスタウリン、ＡＲ−１２、ＰＨＴ−４２７、２，２−ジクロロアセトフェノン、ＢＸ−７９５、スタウロスポリン、ＢＸ−９１２、ＫＰ３７２−１、ＵＣＮ−０１、およびこれらの誘導体または類似体を包含するが、これに限定はされない。１つの実施形態では、免疫細胞調節用のＰＤＫ１阻害剤はＧＳＫ２３３４４７０を含む。
【０１４０】
用語「Ｒａｆ阻害剤」とは、Ｒａｆ（Rapidly Accelerated Fibrosarcoma）キナーゼの少なくとも１つの活性を阻害する薬剤を指す。Ｒａｆはセリントレオニンキナーゼであり、膜のＲＡＳ−ＧＴＰとの相互作用により活性化される。活性化されたＲａｆは、ＭＥＫ１およびＭＥＫ２をリン酸化し活性化することで、エフェクターＭＡＰキナーゼのＥＲＫ１およびＥＲＫ２をリン酸化により活性化し、細胞の増殖、分化、遊走、および生存に関与するシグナル伝達カスケードをもたらす。１つの実施形態では、前記Ｒａｆ阻害剤はＲａｆキナーゼのＲＡＳ−ＧＴＰとの相互作用を阻害する。別の実施形態では、前記Ｒａｆ阻害剤はＲａｆキナーゼの酵素活性を障害する。１つの実施形態では、前記Ｒａｆ阻害剤は低分子量化学分子である。１つの実施形態では、前記Ｒａｆ阻害剤は抗体である。別の実施形態では、前記Ｒａｆ阻害剤はスモールＲＮＡ（アンチセンスＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ）である。いくつかの実施形態では、前記Ｒａｆ阻害剤は、ＧＤＣ−０８７９、ＡＺ６２８、ダブラフェニブ、ソラフェニブ、ソラフェニブトシル酸塩、ＳＢ５９０８８５、ＺＭ３３６３７２、ＧＷ５０７４、ＴＡＫ−６３２、ＭＬＮ２４８０、ＬＹ０３００９１２０、およびこれらの誘導体または類似体を包含するが、これに限定はされない。１つの実施形態では、免疫細胞調節用のＲａｆ阻害剤はＧＤＣ−０８７９を含む。別の実施形態では、免疫細胞調節用のＲａｆ阻害剤はＡＺ６２８を含む。別の実施形態では、免疫細胞調節用のＲａｆ阻害剤はダブラフェニブを含む。
【０１４１】
用語「Ｓｙｋ阻害剤」とは、Ｓｙｋ（Spleen tyrosine kinase）の少なくとも１つの活性を阻害する薬剤を指す。Ｓｙｋは、造血系細胞によって最も高度の発現される細胞質内のタンパク質チロシンキナーゼであり、Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）およびＦｃ受容体をはじめとする活性化された免疫受容体が惹起する細胞内シグナルの重要な統合者である。免疫受容体の活性化により、受容体に結合したキナーゼによるＩＴＡＭ（免疫受容活性化チロシンモチーフ）のリン酸化と、Ｓｙｋのリクルートが起こる。Ｓｙｋが受容体に結合することで、Ｓｙｋタンパク質の立体構造が変化し、Ｓｙｋが活性化する。次に、活性化されたＳｙｋ−受容体複合体は、アダプタータンパク質（例えばＢＬＮＫ／ＳＬＰ−６５、ＳＬＰ−７６、およびＬＡＴ）をリン酸化し、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ、Ｒａｓ／ＥＲＫ、およびＩＫＫ／ＮＦ−κＢをはじめとする種々の重要な調節性エフェクターをリクルートし、シグナル伝達を行い得る。１つの実施形態では、Ｓｙｋ阻害剤がＳｙｋの活性化を阻害する。１つの実施形態では、Ｓｙｋ阻害剤が、ＳｙｋのＳＨ２（Src homology 2）ドメインにホスホチロシンが結合することを妨げる。別の実施形態では、Ｓｙｋ阻害剤がＳｙｋの酵素活性を阻害する。１つの実施形態では、前記Ｓｙｋ阻害剤は低分子量化学分子である。１つの実施形態では、前記Ｓｙｋ阻害剤は抗体である。別の実施形態では、前記Ｓｙｋ阻害剤は、スモールＲＮＡ（アンチセンスＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ）である。いくつかの実施形態では、前記Ｓｙｋ阻害剤は、ＰＲＴ０６２６０７、ホスタマチニブ（Ｒ７８８）、Ｒ４０６、Ｒ７８８（ホスタマチニブ）二ナトリウム、ＰＲＴ−０６０３１８、ＢＡＹ−６１−３６０６、エントスプレチニブ、ＲＯ９０２１、およびこれらの誘導体または類似体を包含するが、これに限定はされない。１つの実施形態では、免疫細胞調節用のＳｙｋ阻害剤はＰＲＴ０６２６０７を含む。別の実施形態では、免疫細胞調節用のＳｙｋ阻害剤はＲ７８８を含む。
【０１４２】
当業者には理解されることであるが、本発明の範囲には、エステル、エーテル、溶媒和物、水和物、立体異性体、またはプロドラッグを包含するが、これらに限定はされない、その標的に基づいて機能的にそれぞれのクラスに分類される、全ての他の薬剤の類似体または誘導体も包含される。
【０１４３】
いくつかの実施形態では、養子細胞をベースとした治療法に好適な免疫細胞の治療的有効性を改善するための前記組成物は、ＢＥＴ阻害剤、ＣＤＫ阻害剤、ＣＲＡＣチャネル阻害剤、Ｃｏｘ阻害剤、ドパミン拮抗剤、ＥＲＫ５阻害剤、グルココルチコイド、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、Ｌｃｋ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、およびＳｙｋ阻害剤からなる群から選択される少なくとも１クラスの調節薬を含む。
【０１４４】
１つの実施形態では、ＢＥＴ阻害剤、ＣＤＫ阻害剤、ＣＲＡＣチャネル阻害剤、Ｃｏｘ阻害剤、ドパミン拮抗剤、ＥＲＫ５阻害剤、グルココルチコイド、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、Ｌｃｋ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、およびＳｙｋ阻害剤からなる群から選択される少なくとも１クラスの調節薬を含む組成物は、有機溶剤をさらに含む。ある実施形態では、前記有機溶剤は酢酸メチルを実質的に含まない。ある実施形態では、前記有機溶剤は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメトキシエタン（ＤＭＥ）、ジメチルアセトアミド、エタノール、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、前記有機溶剤はＤＭＳＯである。いくつかの実施形態では、前記有機溶剤はエタノールである。いくつかの他の実施形態では、前記有機溶剤はＤＭＳＯおよびエタノールの混合物である。
【０１４５】
いくつかの実施形態では、養子細胞をベースとした治療法に好適な免疫細胞の治療的有効性を改善するための前記組成物は、表１から選択される少なくとも１つの化合物、またはその誘導体もしくは類似体を含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞の治療的有効性を改善するための前記組成物は、ＢＥＴ阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、またはＳｙｋ阻害剤である、少なくとも１つの薬剤を含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞の治療的有効性を改善するための前記組成物は、ＰＤＫ１阻害剤を少なくとも含む。いくつかの他の実施形態では、免疫細胞の治療的有効性を改善するための前記組成物は、Ｒａｆ阻害剤を少なくとも含む。いくつかの他の実施形態では、免疫細胞の治療的有効性を改善するための前記組成物は、Ｓｙｋ阻害剤を少なくとも含む。さらに別の実施形態では、免疫細胞の治療的有効性を改善するための前記組成物は、ＧＳＫ２３３４４７０、ＡＺ６２８、ＧＤＣ−０８７９、ダブラフェニブ、Ｒ７８８、パクリチニブ、およびＰＲＴ０６２６０７のうちの少なくとも１つを含む。１つの実施形態では、免疫細胞調節用の組成物はＧＳＫ２３３４４７０を含む。別の実施形態では、免疫細胞調節用の組成物はＡＺ６２８を含む。さらに別の実施形態では、免疫細胞調節用の組成物はＲ７８８を含む。いくつかの他の実施形態では、１または複数の調節薬の前記組成物はバルドキソロンメチルを含む。
【０１４６】
いくつかの実施形態では、ＢＥＴ阻害剤、ＣＤＫ阻害剤、ＣＲＡＣチャネル阻害剤、Ｃｏｘ阻害剤、ドパミン拮抗剤、ＥＲＫ５阻害剤、グルココルチコイド、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、Ｌｃｋ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、およびＳｙｋ阻害剤のうちの少なくとも１つを含む前記組成物は、ＧＳＫ３阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ＲＯＣＫ阻害剤、およびＴＧＦβ阻害剤のうちの少なくとも１つを含み、前記組成物は養子細胞をベースとした治療法に好適な免疫細胞の治療的有効性を改善する上で有用である。
【０１４７】
いくつかの実施形態では、前記組成物は、ＢＥＴ阻害剤、ＣＤＫ阻害剤、ＣＲＡＣチャネル阻害剤、Ｃｏｘ阻害剤、ドパミン拮抗剤、ＥＲＫ５阻害剤、グルココルチコイド、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、Ｌｃｋ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、およびＳｙｋ阻害剤のうちの２つ以上を含む、調節薬の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、前記２つ以上の薬剤は、前記組成物中で組み合わされた場合に、治療用に細胞を調節することにおいて相加効果を有する。定義の通り、「相加的」とは、組み合わされた２つ以上の薬剤が個々の効果の和にほぼ等しい効果を与える場合を指す。いくつかの実施形態では、前記２つ以上の薬剤は、前記組成物中で組み合わされた場合に、治療用に細胞を調節することにおいて相乗効果を有する。定義の通り、「相乗効果」は、２つ以上の薬剤が協働することにより個々の効果の和よりも大きな効果が生み出されるような、効果の増強である。いくつかの実施形態では、前記組成物中の組み合わされた薬剤のうちの１または複数は、標的の観点から、同一クラスの薬剤である。いくつかの実施形態では、前記組成物中の組み合わされた薬剤のうちの１または複数は、各々が異なる標的に作用するという点で、異なるクラスの薬剤である。
【０１４８】
いくつかの実施形態では、ＢＥＴ阻害剤、ＣＤＫ阻害剤、ＣＲＡＣチャネル阻害剤、ｃｏｘ阻害剤、ドパミン拮抗剤、ＥＲＫ５阻害剤、グルココルチコイド、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、Ｌｃｋ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、およびＳｙｋ阻害剤からなる群から選択される１または複数の調節薬を含む前記組成物は、１または複数の追加の添加剤をさらに含む。１つの実施形態では、前記１または複数の添加剤は、ペプチド、サイトカイン、マイトジェン、増殖因子、スモールＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ（二本鎖ＲＮＡ）、単核血液細胞、フィーダー細胞、フィーダー細胞の成分または代替要素、１または複数の目的のポリ核酸を含むベクター、抗体およびその抗体フラグメント、並びに化学療法剤または放射性部分からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、前記追加の添加剤は抗体、または抗体フラグメントを含む。これらの実施形態のいくつかにおいて、前記抗体または抗体フラグメントは、ウイルス抗原に特異的に結合する。他の実施形態では、前記抗体または抗体フラグメントは、腫瘍抗原に特異的に結合する。
【０１４９】
いくつかの実施形態では、前記組成物の添加剤としての前記サイトカインまたは増殖因子は、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、酸性線維芽細胞増殖因子（ａＦＧＦ）、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）、白血病抑制因子（ＬＩＦ）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、インスリン様増殖因子１（ＩＧＦ−１）、インスリン様増殖因子２（ＩＧＦ−２）、ケラチノサイト増殖因子（ＫＧＦ）、神経成長因子（ＮＧＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、トランスフォーミング増殖因子β（ＴＧＦ−β）、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）トランスフェリン、種々のインターロイキン（例えばＩＬ−１〜ＩＬ−１８）、種々のコロニー刺激因子（例えば顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ））、種々のインターフェロン（例えばＩＦＮ−γ）、並びに、幹細胞因子（ＳＣＦ）、トロンボポエチン（Ｔｐｏ）、並びにエリスロポエチン（Ｅｐｏ）、のうちの１または複数を含む。いくつかの実施形態では、添加剤としての前記サイトカインは、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、インターロイキン７（ＩＬ−７）、インターロイキン１０（ＩＬ−１０）、インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）、インターロイキン−１５、インターロイキン１８（ＩＬ−１８）、インターロイキン２１（ＩＬ−２１）、またはこれらのあらゆる組み合わせを少なくとも含む。いくつかの実施形態では、前記組成物の前記増殖因子は線維芽細胞増殖因子を含む。これらのサイトカインは、市販品、例えばＲ＆Ｄシステムズ社（ミネソタ州ミネアポリス）製、を入手してもよく、さらに、天然であっても組換えであってもよい。特定の実施形態では、増殖因子およびサイトカインは本明細書において企図されている濃度で添加され得る。ある実施形態では、増殖因子およびサイトカインは、実験で決定された濃度、または確立されたサイトカイン技術を指針とした濃度で、添加され得る。
【０１５０】
いくつかの実施形態では、前記組成物の添加剤としてのマイトジェンはコンカナバリンＡを含む。いくつかの他の実施形態では、前記組成物のフィーダー細胞は遺伝子改変されている。いくつかの実施形態では、前記組成物のフィーダー細胞は以下のうちの１または複数を含む：単核血液細胞、胸腺上皮細胞、内皮細胞、線維芽細胞、白血病細胞のＫ５６２、Ｒａｊｉ細胞、またはそのフィーダー細胞成分もしくは代替要素。
【０１５１】
いくつかの実施形態では、前記組成物のスモールＲＮＡは、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、およびアンチセンス核酸のうちの１または複数を含む。いくつかの他の実施形態では、前記組成物のスモールＲＮＡは以下のうちの１または複数を含む：ｍｉＲ−３６２−５ｐ、ｍｉＲ−４８３−３ｐ、ｍｉＲ−２１０、およびｍｉＲ−５９８。
【０１５２】
いくつかの実施形態では、１または複数の目的のポリ核酸を含む前記組成物のベクターは、組込み型ベクターまたは非組込み型ベクターである。いくつかの実施形態では、１または複数の目的のポリ核酸を含む前記組成物のベクターは、アデノウイルスベクター、プラスミドベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、センダイウイルスベクター、およびエピソーマルベクターの骨格をさらに含む。いくつかの実施形態では、動物細胞における発現用のプラスミドベクターは、例えば、ｐＡｌ−１１、ｐＸＴｌ、ｐＲｃ／ＣＭＶ、ｐＲｃ／ＲＳＶ、ｐｃＤＮＡＩ／Ｎｅｏなどを包含する。いくつかの実施形態では、前記ベクター内に含まれる１または複数のポリ核酸は、１または複数のタンパク質またはポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、前記１または複数のポリ核酸は、Ｄｅｌｔａ−ｌｉｋｅ  １（ＤＬＬ１）、Ｄｅｌｔａ−ｌｉｋｅ  ３（ＤＬＬ３）、Ｄｅｌｔａ−ｌｉｋｅ  ４（ＤＬＬ４）、Ｊａｇｇｅｄ１（Ｊａｇ１）、またはＪａｇｇｅｄ２をコードする。いくつかの実施形態では、前記１または複数のポリ核酸はＪａｇｇｅｄ１をコードする。
【０１５３】
いくつかの実施形態では、前記組成物は少なくとも１つの治療薬をさらに含む。１つの実施形態では、前記治療薬は抗体または抗体フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、前記抗体は、ヒト型化抗体、ヒト型化モノクローナル抗体、キメラ抗体であり得る。いくつかの実施形態では、前記抗体または抗体フラグメントは、ウイルス抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、前記組成物の抗体は、抗ＣＤ２０（リツキシマブ（retuximab）、ベルツズマブ、オファツムマブ、ウブリツキシマブ、オカラツズマブ、オビヌツズマブ）、抗Ｈｅｒ２（トラスツズマブ）、抗ＣＤ５２（アレムツズマブ）、抗ＥＧＦＲ（セツキシマブ（certuximab））、および抗ＣＤ３８（ダラツムマブ）、並びにこれらのヒト型化バリアントおよびＦｃ改変バリアントを包含するが、これに限定はされない。さらに、抗ＣＤ１９抗原、抗ＣＤ２０抗原、および抗ＣＤ３３抗原などの腫瘍細胞抗原を標的とする抗体のＦａｂ領域と、免疫細胞の表面タンパク質を認識する別のＦａｂ領域とを融合することによる、二重特異的抗体および三重特異的抗体の設計は、それらの細胞の刺激と、その後の腫瘍細胞の死滅をもたらす。
【０１５４】
いくつかの実施形態では、前記組成物への追加の添加剤は、化学療法剤、放射性部分、および免疫調節薬（ＩＭｉＤ）のうちの１または複数を含む。サリドマイド、レナリドマイド、およびポマリドミドなどの免疫調節薬は、ＮＫ細胞およびＴ細胞の両方を刺激する。化学療法剤とは、細胞傷害性の抗悪性腫瘍薬を指し、すなわち、優先的に新生細胞を死滅させるか急速増殖細胞の細胞周期を乱す、またはがん幹細胞（stem cancer cell）を根絶することが分かっている、且つ、新生細胞の成長を阻止または低減するために治療的に用いられる、化学薬品を指す。化学療法剤は、抗悪性腫瘍薬、抗悪性腫瘍剤、細胞傷害性薬物または細胞傷害性薬剤と称される場合もあり、当該技術分野において周知である。
【０１５５】
いくつかの実施形態では、前記化学療法剤は、アントラサイクリン、アルキル化剤、スルホン酸アルキル、アジリジン、エチレンイミン、メチルメラミン、ナイトロジェンマスタード、ニトロソウレア、抗生物質、代謝拮抗物質、葉酸類似体、プリン類似体、ピリミジン類似体、酵素、ポドフィロトキシン、白金含有薬剤、インターフェロン、およびインターロイキンを含む。例示的な化学療法剤は、アルキル化剤（シクロホスファミド、メクロレタミン、メルファラン（mephalin）、クロラムブシル、ヘキサメチルメラミン（heamethylmelamine）、チオテパ、ブスルファン、カルムスチン、ロムスチン、セムスチン）、代謝拮抗剤（メトトレキサート、フルオロウラシル、フロクスウリジン、シタラビン、６−メルカプトプリン、チオグアニン、ペントスタチン）、ビンカアルカロイド類（ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン）、エピポドフィロトキシン類（エトポシド、エトポシドオルトキノン（etoposide orthoquinone）、およびテニポシド）、抗生剤（ダウノルビシン、ドキソルビシン、ミトキサントロン、ビサントレン（bisanthrene）、アクチノマイシンＤ、プリカマイシン、ピューロマイシン、およびグラミシジンＤ（gramicidine D））、パクリタキセル、コルヒチン、サイトカラシンＢ、エメチン、メイタンシン、およびアムサクリン、を包含するが、これに限定はされない。追加の薬剤としては、アミノグルテチミド（aminglutethimide）、シスプラチン、カルボプラチン、マイトマイシン、アルトレタミン、シクロホスファミド、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、イリノテカン（ＣＰＴ−１１）、アレムツズマブ（alemtuzamab）、アルトレタミン、アナストロゾール、Ｌ−アスパラギナーゼ、アザシチジン、ベバシズマブ、ベキサロテン、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ブスルファン、カルステロン、カペシタビン、セレコキシブ、セツキシマブ、クラドリビン、クロファラビン（clofurabine）、シタラビン、ダカルバジン、デニロイキンジフチトクス、ジエチルスチルベストロール（diethlstilbestrol）、ドセタキセル、ドロモスタノロン、エピルビシン、エルロチニブ、エストラムスチン、エトポシド、エチニルエストラジオール、エキセメスタン、フロクスウリジン、５−フルオロウラシル（5-flourouracil）、フルダラビン、フルタミド、フルベストラント、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、ゴセレリン、ヒドロキシ尿素、イブリツモマブ、イダルビシン、イホスファミド、イマチニブ、インターフェロンα（２ａ、２ｂ）、イリノテカン、レトロゾール、ロイコボリン、ロイプロリド、レバミゾール、メクロレタミン（meclorethamine）、メゲストロール、メルファラン（melphalin）、メルカプトプリン、メトトレキサート、メトキサレン、マイトマイシンＣ、ミトタン、ミトキサントロン、ナンドロロン、ノフェツモマブ、オキサリプラチン、パクリタキセル、パミドロン酸、ペメトレキセド、ペガデマーゼ、ペグアスパラガーゼ（pegasparagase）、ペントスタチン、ピポブロマン、プリカマイシン、ポリフェプロサン、ポルフィマー、プロカルバジン、キナクリン、リツキシマブ、サルグラモスチム、ストレプトゾシン、タモキシフェン、テモゾロミド、テニポシド、テストラクトン、チオグアニン、チオテパ、トポテカ��（topetecan）、トレミフェン、トシツモマブ、トラスツズマブ、トレチノイン、ウラシルマスタード、バルルビシン、ビノレルビン、およびゾレドロネートが挙げられる。
【０１５６】
他の好適な治療薬は、化学療法剤または放射線療法剤として承認予定のものを包含して、ヒトでの使用が承認されており、且つ当該技術分野において公知の治療薬である。そのような薬剤は、多くの標準的な医師および腫瘍学者のリファレンスのいずれか（例えば、Goodman & Gilman’s The Pharmacological Basis of Therapeutics, Ninth Edition, McGraw-Hill, N.Y., 1995）を通じて、または国立がん研究所のウェブサイト（fda.gov/cder/cancer/druglistfrarne.htm）を通じて参照することができ、これらは共に時々更新されている。
【０１５７】
ＩＩ．調節用の免疫細胞およびそれから得られる調節された免疫細胞
本発明は、免疫細胞の治療的有効性を改善するのに十分な量の、ＢＥＴ阻害剤、ＣＤＫ阻害剤、ＣＲＡＣチャネル阻害剤、Ｃｏｘ阻害剤、ドパミン拮抗剤、ＥＲＫ５阻害剤、グルココルチコイド、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、Ｌｃｋ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、またはＳｙｋ阻害剤を少なくとも含む１または複数の調節薬と接触させることにより調節された、調節された免疫細胞の集団または亜集団を提供する。
【０１５８】
本発明はまた、免疫細胞の治療的有効性を改善するのに十分な量の、ＢＥＴ阻害剤、ＣＤＫ阻害剤、ＣＲＡＣチャネル阻害剤、Ｃｏｘ阻害剤、ドパミン拮抗剤、ＥＲＫ５阻害剤、グルココルチコイド、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、Ｌｃｋ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、またはＳｙｋ阻害剤を少なくとも含む１または複数の調節薬と接触させられた、調節された免疫細胞の集団または亜集団を含む組成物を提供する。
【０１５９】
本発明はさらに、単離された免疫細胞の集団または亜集団、並びに、ＢＥＴ阻害剤、ＣＤＫ阻害剤、ＣＲＡＣチャネル阻害剤、Ｃｏｘ阻害剤、ドパミン拮抗剤、ＥＲＫ５阻害剤、グルココルチコイド、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、Ｌｃｋ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、またはＳｙｋ阻害剤を少なくとも含む１または複数の調節薬であって、前記１または複数の薬剤を用いた、前記単離された免疫細胞の集団または亜集団の接触による処理が、養子療法における前記免疫細胞の治療的有効性を改善する、前記単離された免疫細胞の集団または亜集団および前記１または複数の調節薬を提供する。前記処理は、細胞増殖を改善し、細胞毒性を改善し、残留性を改善し、且つ／または、細胞療法の再発率を減少させるように、免疫細胞の生物学的特性を調節し得る。
【０１６０】
いくつかの実施形態では、前記１または複数の調節薬は、少なくとも１つの、表１から選択される化合物、およびその誘導体または類似体を含む。いくつかの実施形態では、前記１または複数の調節薬は、ＢＥＴ阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、またはＳｙｋ阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、前記１または複数の調節薬は、ＰＤＫ１阻害剤を少なくとも含む。いくつかの他の実施形態では、前記１または複数の調節薬は、Ｒａｆ阻害剤を少なくとも含む。いくつかの他の実施形態では、前記１または複数の調節薬は、Ｓｙｋ阻害剤を少なくとも含む。さらに別の実施形態では、前記１または複数の調節薬は、ＧＳＫ２３３４４７０、ＡＺ６２８、ＧＤＣ−０８７９、ダブラフェニブ、Ｒ７８８、パクリチニブ、バルドキソロンメチル、およびＰＲＴ０６２６０７のうちの少なくとも１つを含む。１つの実施形態では、前記１または複数の調節薬は、ＧＳＫ２３３４４７０を含む。別の実施形態では、前記１または複数の調節薬は、ＡＺ６２８を含む。さらに別の実施形態では、前記１または複数の調節薬は、Ｒ７８８を含む。いくつかの他の実施形態では、１または複数の調節薬の前記組成物はバルドキソロンメチルを含む。
【０１６１】
いくつかの実施形態では、前記調節された免疫細胞集団は、Ｔ細胞を含む。いくつかの実施形態では、前記調節された免疫細胞集団は、ＮＫ細胞を含む。いくつかの実施形態では、調節された免疫細胞集団は、ＮＫＴ細胞を含む。
【０１６２】
いくつかの実施形態では、前記１または複数の調節薬と接触させられたＴ細胞の集団または亜集団は、同じ処理を受けていないＴ細胞と比較して、ナイーブＴ細胞（Ｔｎ）、幹細胞様メモリーＴ細胞（Ｔｓｃｍ）、および／またはセントラルメモリーＴ細胞（Ｔｃｍ）の数もしくは相対比の増加、並びに／または、細胞増殖、細胞毒性、細胞リコール、および／もしくは残留性の改善、を含む。いくつかの実施形態では、Ｔｎ、Ｔｓｃｍ、および／またはＴｃｍの数は、ＢＥＴ阻害剤、ＣＤＫ阻害剤、ＣＲＡＣチャネル阻害剤、Ｃｏｘ阻害剤、ドパミン拮抗剤、ＥＲＫ５阻害剤、グルココルチコイド、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、Ｌｃｋ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、またはＳｙｋ阻害剤を少なくとも含む１または複数の調節薬による同一処理を受けていない細胞集団中のＴｎ、Ｔｓｃｍ、および／またはＴｃｍの数と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、もしくはそれ以上増加するか、または、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、もしくは少なくとも２０倍、もしくはそれ以上に増加する。
【０１６３】
いくつかの実施形態では、前記１または複数の調節薬と接触させられたＮＫ細胞の集団または亜集団は、同じ処理を受けていないＮＫ細胞と比較して、獲得（またはメモリー）ＮＫ細胞の数もしくは相対比の増加、並びに／または細胞増殖、細胞毒性、細胞リコール、および／もしくは残留性の改善、を含む。いくつかの実施形態では、獲得ＮＫ細胞の数は、ＢＥＴ阻害剤、ＣＤＫ阻害剤、ＣＲＡＣチャネル阻害剤、Ｃｏｘ阻害剤、ドパミン拮抗剤、ＥＲＫ５阻害剤、グルココルチコイド、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、Ｌｃｋ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、またはＳｙｋ阻害剤を少なくとも含む１または複数の前記調節薬による同一処理を受けていない細胞集団中の獲得ＮＫ細胞の数と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、もしくはそれ以上増加するか、または、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、もしくは少なくとも２０倍、もしくはそれ以上に増加する。１つの実施形態では、前記１または複数の前記薬剤と接触させられたＮＫ細胞の集団または亜集団は、獲得ＮＫ細胞の数または相対比が増加している。１つの実施形態では、前記獲得ＮＫ細胞は、ＣＤ３陰性且つＣＤ５６陽性であることと、ＣＤ５７＋、ＮＫＧ２Ｃ＋、ＰＬＺＦ低発現、ＳＹＫ低発現、ＦｃεＲγ低発現、ＥＡＴ−２低発現、ＴＩＧＩＴ低発現、ＰＤ１低発現、ＣＤ７低発現、ＣＤ１６１低発現、ＬＩＬＲＢ１高発現、ＣＤ４５ＲＯ高発現、およびＣＤ４５ＲＡ低発現のうちの少なくとも１つを特徴とする。いくつかの実施形態では、前記獲得ＮＫ細胞は、ＣＤ５７陽性、ＮＫＧ２Ｃ陽性、ＰＬＺＦ低発現、ＳＹＫ低発現、ＦｃεＲγ低発現、ＥＡＴ−２低発現、ＴＩＧＩＴ低発現、ＰＤ１低発現、ＣＤ７低発現、ＣＤ１６１低発現、ＬＩＬＲＢ１高発現、ＣＤ４５ＲＯ高発現、およびＣＤ４５ＲＡ低発現のうちの少なくとも２つである。例えば、前記獲得ＮＫ細胞はＣＤ５７陽性且つＮＫＧ２Ｃ陽性であり得る。いくつかの実施形態では、前記獲得ＮＫ細胞は、ＣＤ５７陽性、ＮＫＧ２Ｃ陽性、ＰＬＺＦ低発現、ＳＹＫ低発現、ＦｃεＲγ低発現、ＥＡＴ−２低発現、ＴＩＧＩＴ低発現、ＰＤ１低発現、ＣＤ７低発現、ＣＤ１６１低発現、ＬＩＬＲＢ１高発現、ＣＤ４５ＲＯ高発現、およびＣＤ４５ＲＡ低発現のうちの少なくとも３つである。例えば、前記獲得ＮＫ細胞はＳＹＫ陰性、ＦｃεＲγ陰性、且つＥＡＴ−２陰性であり得る。１つの実施形態では、前記１または複数の前記薬剤と接触させられたＮＫ細胞の集団または亜集団は、ＧＳＫ３阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ＲＯＣＫ阻害剤、ＴＧＦβ阻害剤、ＰＤＫ１作動薬、および／またはラパマイシンとさらに接触させられる。１つの実施形態では、前記ＧＳＫ３阻害剤は、ＣＨＩＲ９９０２１、ＢＩＯ、ＴＷＳ１１９、またはケンパウロンである。１つの実施形態では、前記ＧＳＫ３阻害剤はＴＷＳ１１９である。別の実施形態では、前記ＧＳＫ３阻害剤はＣＨＩＲ９９０２１である。さらに別の実施形態では、前記ＧＳＫ３阻害剤はＢＩＯである。
【０１６４】
いくつかの他の実施形態では、１または複数の調節薬と接触させられたＮＫＴ細胞の集団または亜集団は、ＢＥＴ阻害剤、ＣＤＫ阻害剤、ＣＲＡＣチャネル阻害剤、Ｃｏｘ阻害剤、ドパミン拮抗剤、ＥＲＫ５阻害剤、グルココルチコイド、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、Ｌｃｋ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、またはＳｙｋ阻害剤を少なくとも含む１または複数の前記調節薬による処理を受けていない単離されたＮＫＴ細胞集団または単離されたＮＫＴ細胞亜集団と比較して、ＩＩ型ＮＫＴ細胞に対するＩ型ＮＫＴ細胞の数もしくは相対比の増加、並びに／または細胞増殖、細胞毒性、細胞リコール、および／もしくは残留性の改善、を含む。いくつかの実施形態では、Ｉ型ＮＫＴ細胞の数は、１または複数の前記薬剤による同一処理を受けていない細胞集団中のＩ型ＮＫＴ細胞の数と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、もしくはそれ以上増加するか、または、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、もしくは少なくとも２０倍、もしくはそれ以上に増加する。
【０１６５】
いくつかの非限定的な実施形態では、調節された免疫細胞集団中の、ナイーブＴ細胞（Ｔｎ）、幹細胞様メモリーＴ細胞（Ｔｓｃｍ）、セントラルメモリーＴ細胞（Ｔｃｍ）、獲得ＮＫ細胞、および／またはＩ型ＮＫＴ細胞の数または相対比のこの増加は、これらの細胞サブタイプの維持および増殖の改善、並びに／またはより成熟した細胞サブタイプから目的の分化状態の細胞サブタイプへの細胞脱分化／再プログラムの増加、並びに／または相互の表現型の傾きによるものである。
【０１６６】
いくつかの実施形態では、免疫細胞集団を１または複数の前記調節薬と接触させた後、未処理の免疫細胞集団と比較して、調節された細胞集団中のナイーブＴ細胞（Ｔｎ）、幹細胞様メモリーＴ細胞（Ｔｓｃｍ）、セントラルメモリーＴ細胞（Ｔｃｍ）の数が増加しており、前記Ｔｎ、Ｔｓｃｍ、およびＴｃｍはＣＣＲ７および／またはＣＤ６２Ｌの共発現を特徴とする。
【０１６７】
いくつかの実施形態では、免疫細胞集団を１または複数の前記調節薬と接触させた後、未処理の免疫細胞集団と比較して、調節された細胞集団中の獲得ＮＫ細胞の数が増加しており、前記獲得ＮＫ細胞はＣＤ３陰性、ＣＤ５６陽性、ＣＤ１６陽性、ＮＫＧ２Ｃ陽性、且つＣＤ５７陽性を特徴とする。いくつかの他の実施形態では、前記獲得ＮＫ細胞は、ＣＤ３陰性と、ＣＤ５６陽性と、ＣＤ５７陽性、ＮＫＧ２Ｃ陽性、ＰＬＺＦ低発現、ＳＹＫ低発現、ＦｃεＲγ低発現、ＥＡＴ−２低発現、ＴＩＧＩＴ低発現、ＰＤ１低発現、ＣＤ７低発現、ＣＤ１６１低発現、ＬＩＬＲＢ１高発現、ＣＤ４５ＲＯ高発現、およびＣＤ４５ＲＡ低発現のうちの少なくとも１つ、２つまたは３つと、を特徴とする。
【０１６８】
いくつかの実施形態では、免疫細胞集団を１または複数の前記調節薬と接触させた後、未処理の免疫細胞集団と比較して、調節された細胞集団中のＩ型ＮＫＴ細胞の数が増加しており、前記Ｉ型ＮＫＴ細胞はＣＤ３陽性、ＣＤ５６陽性、ＴＣＲ  Ｖα２４陽性、且つ／またはＴＣＲ  Ｖβ１１陽性を特徴とする。
【０１６９】
いくつかの実施形態では、本明細書で開示される調節薬による処理のためのＴ細胞、ＮＫ細胞、またはＮＫＴ細胞の集団または亜集団は、ヒトまたは非ヒト哺乳動物から単離できる。そのような非ヒト哺乳類の例としては、ウサギ、ウマ、ウシ、ヒツジ、ブタ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、およびこれらのトランスジェニック種が挙げられるが、これらに限定はされない。
【０１７０】
前記調節のためのＴ細胞の集団または亜集団は、末梢血、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、および感染部位由来組織、腹水、胸水、脾臓組織、および腫瘍を包含するがこれらに限定はされない、多数の供給源から入手または単離できる。前記骨髄は大腿骨、腸骨稜、腰、肋骨、胸骨、および他の骨から入手できる。さらに、Ｊｕｒｋａｔ、ＳｕｐＴ１などの、当該技術分野において利用可能なＴ細胞株も利用できる。
【０１７１】
前記調節のためのＮＫ細胞の集団または亜集団は、末梢血、臍帯血、および腫瘍を包含するがこれらに限定はされない多数の供給源から、入手または濃縮できる。
【０１７２】
調節のための完全成熟ＮＫＴ細胞は、末梢血から入手または濃縮でき、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、および胸腺組織には、より小さな成熟ＮＫＴ細胞集団が存在する可能性がある。
【０１７３】
本発明のある実施形態では、調節のためのＴ細胞、ＮＫ細胞、および／またはＮＫＴ細胞を含む単離または濃縮された免疫細胞集団または免疫細胞亜集団は、当業者に公知の任意の数の技術（Ｆｉｃｏｌｌ（商標）分離など）を用いて、１ユニットの血液から入手できる。１つの実施形態では、個体の循環血液からのＴ細胞、ＮＫ細胞、またはＮＫＴ細胞は、アフェレーシスによって入手される。このアフェレーシス産物は、通常、Ｔ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、他の有核の白血球、赤血球、および血小板を包含する細胞を含有する。１つの実施形態では、アフェレーシスによって採取された細胞を洗浄することで、血漿画分を除去し、後の処理工程に適した緩衝液または培地中に細胞を置換できる。本発明の１つの実施形態では、前記細胞はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄される。別の実施形態では、前記洗浄液はカルシウムを含んでおらず、且つ、マグネシウムを含んでいなくてもよく、または、二価陽イオンの全てではないがその多くを含んでいなくてもよい。半自動の「フロースルー」遠心分離機（例えば、Ｃｏｂｅ２９９１細胞プロセッサ、バクスター社（Baxter）製ＣｙｔｏＭａｔｅ、またはヘモネティクス社製（Haemonetics）Ｃｅｌｌ  Ｓａｖｅｒ  ５）を製造業者の説明書に従って用いるなど、当業者に公知の方法によって洗浄工程を達成できることは、当業者には容易に理解されるだろう。洗浄後、細胞は、例えば、カルシウム不含、マグネシウム不含のＰＢＳ、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ  Ａ、または緩衝液を含む若しくは含まない他の生理食塩水などの、種々の生体適合性緩衝液に再懸濁できる。あるいは、アフェレーシス試料の望ましくない成分を除去し、細胞を直接培地に再懸濁することもできる。
【０１７４】
別の実施形態では、前記調節のためのＴ細胞、ＮＫ細胞、またはＮＫＴ細胞を含む免疫細胞集団またはその亜集団は、末梢血リンパ球から、赤血球を溶解させ、ＰＥＲＣＯＬＬ（商標）勾配遠心分離または対向流遠心溶出法などによって単球を枯渇させることにより、単離または濃縮される。
【０１７５】
１つの実施形態では、ＣＤ３抗体、ＣＤ２８抗体、ＣＤ４抗体、ＣＤ８抗体、ＣＤ４５ＲＡ抗体、ＣＤ４５ＲＯ抗体、ＣＤ６２Ｌ抗体、ＣＣＲ７抗体、ＣＤ２７抗体、および／またはＣＤ１２２抗体などのポジティブセレクション法またはネガティブセレクション法によって、調節のための特定のＴ細胞亜集団をさらに単離または濃縮できる。例えば、１つの実施形態では、血液細胞（例えばＬｅｕｋｏｐａｋからの血液細胞）をＦｉｃｏｌｌ勾配で精製することにより、血小板および赤血球が除去される。ＥａｓｙＳｅｐシステム（ステムセルテクノロジーズ社（StemCell technologies））によるポジティブ選択またはＭＡＣＳシステム（ミルテニーバイオテク社）によるネガティブセレクションを用いて、残りのＰＢＭＣを精製することで、ＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、またはＣＤ８＋Ｔ細胞などが得られる。腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を腫瘍組織または免疫無防備状態の個体から単離するなど、他の細胞型と比較してＴ細胞が少ないあらゆる状況においては、より長いインキュベーション時間を用いることで、Ｔ細胞を単離することができる。本発明と関連して、複数回のセレクションも使用できることは、当業者に認められることであろう。ある実施形態では、セレクション法を実施し、「選択されなかった」細胞を活性化および増殖のプロセスに用いることが望ましい場合がある。「選択されなかった」細胞はさらなる回数のセレクションにかけることもできる。
【０１７６】
ネガティブセレクションによる調節のためのＴ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞を含む免疫細胞集団またはその亜集団の単離または濃縮は、ネガティブセレクションを受けた細胞に特有の表面マーカーを対象とする抗体を組み合わせて用いることで、達成できる。１つの方法は、ネガティブセレクションを受けた細胞上に存在する細胞表面マーカーを対象とするモノクローナル抗体カクテルを用いる、ネガティブ磁気免疫接着（negative magnetic immuno-adherence）または蛍光標識細胞分取による細胞のソーティングおよび／またはセレクションはである。例えば、ネガティブセレクションによるＣＤ３陽性細胞の濃縮のためには、モノクローナル抗体カクテルには通常、ＣＤ１４抗体、ＣＤ２０抗体、ＣＤ１１ｂ抗体、ＣＤ１６抗体、およびＨＬＡ−ＤＲ抗体が含まれる。ある実施形態では、ＣＤ４＋、ＣＤ２５＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＧＩＴＲ＋、およびＦｏｘＰ３＋を通常は発現する制御性Ｔ細胞について、濃縮を行うこと、またはポジティブセレクションを行うことが望ましい場合がる。あるいは、ある実施形態では、抗ＣＤ２５結合型ビーズまたは他の類似のセレクション法によって、制御性Ｔ細胞が枯渇される。いくつかの実施形態では、ＣＣＲ７およびＣＤ６２Ｌによって、前記Ｔ細胞を含む調節された免疫細胞から、免疫療法のための目的のＴ細胞亜集団が濃縮またはセレクションを受ける。あるいは、目的の細胞は、大きさ、密度、粒度、変形能、抵抗性、または静電容量の差をはじめとする物理的パラメーターに基づいてセレクションをかけてもよい。
【０１７７】
１つの実施形態では、調節のための獲得ＮＫ細胞を含む免疫細胞集団が、ＣＤ１６、ＮＫＧ２Ｃ、およびＣＤ５７の陽性発現などを含む識別子（identifier）を用いた、前記ＮＫ細胞を含む調節された免疫細胞の中の、ＣＤ３−およびＣＤ５６＋の表現型を持つものについてのセレクションによって、濃縮される。さらに、獲得性亜集団のネガティブセレクションは、ＮＫＧ２Ｃおよび／またはＣＤ５７の発現の欠如、且つ、以下のうちの１または複数の発現の欠如に基づき得る：ＰＬＺＦ低発現、ＳＹＫ低発現、ＦｃεＲγ低発現、ＥＡＴ−２低発現、ＴＩＧＩＴ低発現、ＰＤ１低発現、ＣＤ７低発現、ＣＤ１６１低発現、ＬＩＬＲＢ１高発現、ＣＤ４５ＲＯ高発現、およびＣＤ４５ＲＡ低発現。
【０１７８】
１つの実施形態では、調節のためのＮＫＴ細胞の集団または亜集団は、ＮＫ細胞集団の中で、インバリアントなＴＣＲα鎖の発現、特に以下のマーカーの組み合わせ（ＣＤ３＋、ＣＤ５６＋、ＴＣＲ  Ｖα２４＋、および／またはＴＣＲ  Ｖβ１１＋）を表現型として持つものについてセレクションを行うことにより、濃縮される。あるいは、ＮＫＴ細胞は、前記インバリアントなＴＣＲα鎖の発現と組み合わせた、表現型の組み合わせに基づいた、セレクションにかけられ得る。
【０１７９】
対象からの血液試料またはアフェレーシス産物は、本明細書に記載の免疫細胞が単離されるより前の時点で採取され得る。従って、調節される細胞の供給源が任意のいくつかの適切な時点で採取され、細胞療法が有効であろう本明細書に記載される疾患または異常などの、任意のいくつかの疾患または異常に対する細胞ベース免疫療法での後の使用用に、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、およびＮＫＴ細胞などの目的の細胞が単離および凍結され得る。１つの実施形態では、血液試料またはアフェレーシス産物が全般的に健康な対象から採取される。ある実施形態では、血液またはアフェレーシス産物が、疾患を発症する危険性があるが、疾患をまだ発症していない、全般的に健康な対象から採取され、目的の細胞が後の使用用に単離および凍結される。他の実施形態では、特定の疾患（例えば、がん）を有する対象から、血液試料またはアフェレーシス産物が採取される。さらに別の実施形態では、遺伝子改変免疫細胞（遺伝子操作された免疫細胞、または再構成、変異、ゲノムインプリンティングおよび／もしくはエピジェネティック修飾より生じた免疫細胞）を以前に投与された対象から、血液試料またはアフェレーシス産物が採取される。ある実施形態では、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、または他の免疫細胞が、増殖、凍結、および処理を受け、後に使用され得る。ある実施形態では、本明細書に記載の特定の疾患の診断直後であり、いかなる処置も受けていない患者から、試料が採取される。いくつかの実施形態では、前記細胞は、ＣＭＶ（サイトメガロウイルス）血清陽性を示す対象から単離される。別の実施形態では、前記細胞は、任意のいくつかの関連する治療モダリティの前に、対象由来の血液またはアフェレーシス産物から単離され、前記治療モダリティは、以下による治療を包含するがこれらに限定はされない：薬剤、例えばナタリズマブ、エファリズマブ、抗ウイルス剤、化学療法、放射線、免疫抑制剤、例えばシクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキサート、ミコフェノール酸塩、およびＦＫ５０６、抗体、または他の免疫除去剤（immunoablative agent）、例えば、ＣＡＭＰＡＴＨ、抗ＣＤ３抗体、Ｃｙｔｏｘａｎ、フルダラビン、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ミコフェノール酸、ステロイド類、ＦＲ９０１２２８、および照射。別の実施形態では、骨髄または幹細胞の移植、フルダラビンなどの化学療法薬剤、外照射療法（ＸＲＴ）、シクロホスファミド、または、ＯＫＴ３もしくはＣＡＭＰＡＴＨなどの抗体のいずれかを用いるＴ細胞除去療法（T cell ablative therapy）と併せて（例えば、前、同時、または後に）、前記細胞が患者から単離され、後の使用のために凍結される。別の実施形態では、前記細胞は事前に単離され、ＣＤ２０と反応する薬剤（例えば、リツキサン）などのＢ細胞除去療法の後の治療に後に使用するために凍結され得る。
【０１８０】
いくつかの実施形態では、前記Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはＮＫＴ細胞を含む調節のための免疫細胞、および／またはその亜集団は、ゲノム操作されており、挿入、欠失、または核酸置換を含み得る。調節された免疫細胞は、サイトカイン導入遺伝子を発現するか、抑制性受容体が発現停止されているか、または、活性化受容体、もしくは前記免疫細胞をリターゲティングするためのＣＡＲ、を過剰発現し得る。いくつかの実施形態では、対象、もしくはドナーから調節用に単離された、または、対象／ドナーの末梢血、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位由来組織、腹水、胸水、脾臓組織、腫瘍から単離された、もしくはそれに含まれる免疫細胞集団が、遺伝子改変され得る。いくつかの実施形態では、前記単離された免疫細胞集団、およびそれから得られた前記調節された免疫細胞は、ゲノム操作されており、挿入、欠失、および／または核酸置換を含む。いくつかの特定の実施形態では、前記調節のための免疫細胞、およびそれから得られた前記調節された免疫細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、および／または、過剰発現のＣＤ１６もしくはそのバリアント、をコードする外来性核酸を含む。
【０１８１】
通常、前記キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、抗原認識領域を含む外部ドメイン、前記外部ドメインに連結した膜貫通領域、および前記膜貫通領域に連結した内部ドメインを含む。前記内部ドメインは、抗原発現標的細胞に前記抗原認識領域が結合した後に前記ＣＡＲを発現している細胞を活性化する、１または複数のシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、前記抗原は、ペプチドとして、またはインタクトなタンパク質もしくはその部分として、発現され得る。
【０１８２】
抗体は、軽鎖または重鎖免疫グロブリン可変領域を少なくとも含み、抗原決定基を含有するペプチド、脂質、多糖類、または核酸などの、抗原のエピトープを特異的に認識しそれと結合する、その抗原結合性フラグメントを包含する。抗体またはその抗原結合性フラグメントの変形形態は、Ｃａｍｅｌ  Ｉｇ（または、「ラクダ科動物のＶＨＨ」；Muyldermans et al., Protein Eng., 7:1129-1135, 1994）；Ｉｇ  ＮＡＲ（新規の抗原受容体、Nuttall et al., Mol. Immunol., 38:313-326, 2001）、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ）’２フラグメント、Ｆ（ａｂ）’３フラグメント、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖタンパク質（「ｓｃＦｖ」）、ｂｉｓ−ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ミニボディ、二重特異的抗体（diabody）、三重特異的抗体（triabody）、四重抗体（tetrabody）、ジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（disulfide stabilized Fv protein）（「ｄｓＦｖ」）、シングルドメイン抗体（ｓｄＡｂ、ナノボディ（Nanobody））、および抗原結合に関与する完全長抗体の一部、を包含するが、これに限定はされない。用語「抗体」は、キメラ抗体（例えば、ヒト型化マウス抗体）、ヘテロコンジュゲート抗体（例えば、二重特異性抗体）、およびその抗原結合性フラグメントなどの、遺伝子改変型も包含する。また、Pierce Catalog and Handbook, 1994-1995 (Pierce Chemical Co., Rockford, IL); Kuby, J., Immunology, 3rd Ed., W. H. Freeman & Co., New York, 1997.)も参照されたい。ある実施形態では、前記細胞外抗原結合ドメインはヒト型化ｓｃＦｖである。ある実施形態では、前記ｓｃＦｖはマウスｓｃＦｖである。ある実施形態では、前記細胞外抗原結合ドメインはＦａｂであり、架橋されていてもよい。ある実施形態では、前記細胞外抗原結合ドメインはＦ（ａｂ）Ｌである。ある実施形態では、上記分子のいずれかが異種配列を有する融合タンパク質に含まれて、細胞外抗原結合ドメインを形成していてもよい。ある実施形態では、前記ｓｃＦｖは、抗原−Ｆｅ融合タンパク質による、ｓｃＦｖファージライブラリーのスクリーニングにより、特定される。前記ｓｃＦｖは、ヒトＶＬ遺伝子および／またはヒトＶＨ遺伝子を有するマウス由来であってもよい。前記ｓｃＦｖは、ラクダ科動物の重鎖、または細胞表面受容体に対する天然リガンドの部分と置き換えることもできる。
【０１８３】
ある実施形態では、前記調節のための免疫細胞およびそれから得られた前記調節された免疫細胞は、腫瘍抗原に特異的なＣＡＲを含む。ある実施形態では、前記調節のための免疫細胞およびそれから得られた前記調節された免疫細胞は、病原体抗原に特異的なＣＡＲを含む。腫瘍抗原または病原体抗原の例としては、以下が包含されるが、これらに限定はされない：ＡＣｈＲ（胎児アセチルコリン受容体）、ＡＤＧＲＥ２、ＡＦＰ（αフェトプロテイン）、ＢＡＦＦ−Ｒ、ＢＣＭＡ、ＣＡＩＸ（炭酸脱水酵素ＩＸ）、ＣＣＲ１、ＣＣＲ４、ＣＥＡ（癌胎児抗原）、ＣＤ３、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ７、ＣＤ１０、ＣＤ１３、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＬＬＩ、ＣＤ３４、ＣＤ３８、ＣＤ４１、ＣＤ４４、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ５６、ＣＤ６１、ＣＤ６４、ＣＤ６８、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ９９、ＣＤ１１７、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ２６７、ＣＤ２６９、ＣＤＳ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＣＳ１、ＥＧＰ−２（上皮糖タンパク質２）、ＥＧＰ−４０（上皮糖タンパク質４０）、ＥＧＦＲ（ＨＥＲ１）、ＥＧＦＲ−ＶＩＩＩ、ＥｐＣＡＭ（上皮細胞接着分子）、ＥｐｈＡ２、ＥＲＢＢ２（ＨＥＲ２、ヒト上皮増殖因子受容体２）、ＥＲＢＢ３、ＥＲＢＢ４、ＦＢＰ（葉酸塩結合タンパク質）、Ｆｌｔ３受容体、葉酸受容体−α、ＧＤ２（ガングリオシドＧ２）、ＧＤ３（ガングリオシドＧ３）、ＧＰＣ３（グリピカン−３）、ＧＰＩ００、ｈＴＥＲＴ（ヒトテロメラーゼ逆転写酵素）、ＩＣＡＭ−１、インテグリンＢ７、インターロイキン６受容体、ＩＬ１３Ｒａ２（インターロイキン１３受容体３０サブユニットα−２（interleukin-13 receptor 30 subunit alpha-2））、κ−軽鎖、ＫＤＲ（キナーゼインサートドメイン受容体（kinase insert domain receptor））、ＬｅＹ（ルイスＹ（Lewis Y））、Ｌ１ＣＡＭ（Ｌ１細胞接着分子）、ＬＩＬＲＢ２（白血球免疫グロブリン様受容体Ｂ２（leukocyte immunoglobulin like receptor B2））、ＭＡＲＴ１、ＭＡＧＥ−Ａｌ（メラノーマ関連抗原Ａ１）、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＳＬＮ（メソテリン）、ＭＵＣ１６（ムチン１６）、ＭＵＣＩ（ムチンＩ）、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ−ＥＳＯ−１（がん／精巣抗原）、ＰＲＩ（プロテアーゼ３）、ＴＲＢＣＩ、ＴＲＢＣ２、ＴＩＭ−３、ＴＡＣＩ、チロシナーゼ、サバイビン、ｈＴＥＲＴ、腫瘍胎児抗原（ｈ５Ｔ４）、ｐ５３、ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原）、ＰＳＭＡ（前立腺特異的膜抗原）、ｈＲＯＲ１、ＴＡＧ−７２（腫瘍関連糖タンパク質７２）、ＶＥＧＦ−Ｒ２（血管内皮増殖因子Ｒ２）、ＷＴ−１（ウィルムス腫瘍タンパク質）、並びにＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス）抗原、Ｂ型肝炎抗原、Ｃ型肝炎抗原、ＣＭＶ（サイトメガロウイルス）抗原、ＥＢＶ（エプスタイン・バーウイルス）抗原、ＨＰＶ（ヒトパピローマウイルス）抗原など。
【０１８４】
１つの実施形態では、前記調節のための免疫細胞およびそれから得られた前記調節された免疫細胞は、ＣＤ１９に特異的なＣＡＲを少なくとも含む。別の実施形態では、前記調節のための免疫細胞およびそれから得られた前記調節された免疫細胞は、ＢＣＭＡに特異的なＣＡＲを少なくとも含む。
【０１８５】
１つの実施形態では、前記調節のためのゲノム操作された免疫細胞およびそれから得られた前記調節された免疫細胞は、１または複数の遺伝子改変モダリティを含み、前記遺伝子改変モダリティは以下のうちの１または複数を包含する：セーフティ・スイッチタンパク質、標的化モダリティ、受容体、シグナル伝達分子、転写因子、薬剤的に活性なタンパク質およびペプチド、薬物標的候補；または、前記免疫細胞の移植、輸送、ホーミング、生存能、自己複製、残留性、免疫応答の制御および調節、並びに／もしくは生存を促進するタンパク質。いくつかの他の実施形態では、前記遺伝子改変モダリティは以下のうちの１または複数を包含する：（ｉ）Ｂ２Ｍ、ＴＡＰ１、ＴＡＰ２、タパシン、ＮＬＲＣ５、ＰＤ１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＲＦＸＡＮＫ、ＣＩＩＴＡ、ＲＦＸ５、またはＲＦＸＡＰ、および染色体６ｐ２１領域内のＨＬＡ遺伝子のいずれか、の発現の欠失または低減；（ｉｉ）ＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＡＣＤ１６、ｈｎＣＤ１６、４１ＢＢＬ、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４７、ＣＤ１１３、ＣＤ１３１、ＣＤ１３７、ＣＤ８０、ＰＤＬ１、Ａ２ＡＲ、Ｆｃ受容体、または二重特異性エンゲージャー、多重特異性エンゲージャー、もしくは汎用エンゲージャーとの結合のための表面上トリガー受容体、の発現の導入または増加。いくつかの実施形態では、前記調節のためのＴ細胞、ＮＫ細胞、もしくはＮＫＴ細胞、またはそれから得られた調節されたＴ細胞、ＮＫ細胞、もしくはＮＫＴ細胞は、外来性核酸を含む。いくつかの実施形態では、前記外来性核酸は、前記細胞の直接的なゲノム編集によって、前記免疫細胞に導入される。いくつかの他の実施形態では、前記外来性核酸は、分化により前記免疫細胞を生じる、ゲノム操作された造血幹細胞、造血前駆細胞、またはｉＰＳＣから、前記外来性核酸を保持させることにより、前記免疫細胞に導入される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞用の前記外来性核酸は、ＴＣＲ（Ｔ細胞受容体）、ＣＡＲ（キメラ抗原受容体）、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）、三重特異性Ｔ細胞エンゲージャー、多重特異性Ｔ細胞エンゲージャー、または複数の免疫細胞種と適合性の汎用エンゲージャー、をコードし得る。いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞用の前記外来性核酸は、ＴＣＲ、ＣＡＲ、ＣＤ１６もしくはそのバリアント、ＮＹ−ＥＳＯ、二重特異性キラー細胞エンゲージャー（ＢｉＫＥ）、三重特異性キラー細胞エンゲージャー（ＴｒｉＫＥ）、多重特異性キラー細胞エンゲージャー、または複数の免疫細胞種と適合性の汎用エンゲージャー、をコードし得る。いくつかの実施形態では、ＮＫＴ細胞用の前記外来性核酸は、変化したＴＣＲまたはＣＡＲであり得る。いくつかの実施形態では、前記外来性核酸はＣＤ１９  ＣＡＲをコードし得る。いくつかの実施形態では、前記外来性核酸はＢＣＭＡ  ＣＡＲをコードし得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ１６バリアントは、高親和性のＣＤ１６（ＨＡＣＤ１６）、切断不可なＣＤ１６、および高親和性の切断不可なＣＤ１６（ｈｎＣＤ１６）を含む。
【０１８６】
いくつかの実施形態では、前記調節のための免疫細胞集団または免疫細胞亜集団は、インビトロにおいて、幹細胞または前駆細胞から分化される。いくつかの実施形態では、前記単離されたＴ細胞、ＮＫ細胞、またはＮＫＴ細胞の集団または亜集団は、幹細胞、造血幹細胞、造血前駆細胞（ＨＳＣ）、または前駆細胞から分化され得る。前記前駆細胞は、ＣＤ３４＋造血性内皮細胞、多分化能前駆細胞、Ｔ細胞前駆細胞、ＮＫ細胞前駆細胞、またはＮＫＴ細胞前駆細胞であり得る。前記幹細胞は、誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）および胚性幹細胞（ＥＳＣ）などの、多能性幹細胞であり得る。前記ｉＰＳＣは、非天然の、再プログラム化された多能性細胞である。対象の前記細胞が再プログラム化されて多能性状態となった後、前記細胞はＴ細胞、ＮＫ細胞、またはＮＫＴ細胞などの目的の細胞型またはサブタイプへとプログラム化または分化され得る。
【０１８７】
いくつかの実施形態では、前記ｉＰＳＣは、多段階分化用プラットフォームによりＴ細胞、ＮＫ細胞、またはＮＫＴ細胞へと分化し、この多段階分化用プラットフォームでは、様々な発生段階の細胞が、中胚葉幹細胞から完全に分化したＴ細胞、ＮＫ細胞、またはＮＫＴ細胞まで及ぶ造血性表現型をとるように誘導され得る（例えば、開示の全体が本明細書に援用される、米国出願第６２／１０７，５１７号および同第６２／２５１，０１６号、並びにＵＳ２０１８００７２９９２Ａ１を参照）。いくつかの実施形態では、前記Ｔ細胞分化、ＮＫ細胞分化、またはＮＫＴ細胞分化のためのｉＰＳＣ、ＨＳＣ、または前駆細胞は、ゲノム操作されており、挿入、欠失、または核酸置換を含み得る。
【０１８８】
いくつかの実施形態では、前記ゲノム操作されたｉＰＳＣ、ＨＳＣ、または造血前駆細胞は、１または複数の遺伝子改変モダリティを含み、前記遺伝子改変モダリティは以下のうちの１または複数を包含する：セーフティ・スイッチタンパク質、標的化モダリティ、受容体、シグナル伝達分子、転写因子、薬剤的に活性なタンパク質およびペプチド、薬物標的候補；または、前記ｉＰＳＣ、ＨＳＣ、前駆細胞、もしくはその派生細胞の移植、輸送、ホーミング、生存能、自己複製、残留性、免疫応答の制御および調節、並びに／もしくは生存を促進するタンパク質。いくつかの他の実施形態では、前記遺伝子改変モダリティは以下のうちの１または複数を包含する：（ｉ）Ｂ２Ｍ、ＴＡＰ１、ＴＡＰ２、タパシン、ＮＬＲＣ５、ＰＤ１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＲＦＸＡＮＫ、ＣＩＩＴＡ、ＲＦＸ５、またはＲＦＸＡＰ、および染色体６ｐ２１領域内のＨＬＡ遺伝子のいずれか、の発現の欠失もしくは低減；または、（ｉｉ）ＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＡＣＤ１６、ｈｎＣＤ１６、４１ＢＢＬ、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４７、ＣＤ１１３、ＣＤ１３１、ＣＤ１３７、ＣＤ８０、ＰＤＬ１、Ａ２ＡＲ、Ｆｃ受容体、二重特異性エンゲージャー、多重特異性エンゲージャー、もしくは汎用エンゲージャーとの結合のための表面上トリガー受容体、ＴＣＲ（Ｔ細胞受容体）、もしくはＣＡＲ（キメラ抗原受容体）、の発現の導入もしくは増加。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞分化、ＮＫ細胞分化、またはＮＫＴ細胞分化のための前記ｉＰＳＣ、ＨＳＣ、または前駆細胞は、改変されたＨＬＡクラスＩおよび／またはＨＬＡクラスＩＩを含む。いくつかの実施形態では、改変されたＨＬＡクラスＩおよび／またはＨＬＡクラスＩＩを有する、Ｔ細胞分化、ＮＫ細胞分化、またはＮＫＴ細胞分化のための前記ｉＰＳＣ、ＨＳＣ、または前駆細胞は、Ｂ２Ｍ、ＨＬＡ−Ｅ／Ｇ、ＰＤＬ１、Ａ２ＡＲ、ＣＤ４７、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＴＡＰ１、ＴＡＰ２、タパシン、ＮＬＲＣ５、ＰＤ１、ＲＦＫＡＮＫ、ＣＩＩＴＡ、ＲＦＸ５、およびＲＦＸＡＰのうちの少なくとも１つがヌル発現または低発現である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞分化、ＮＫ細胞分化、またはＮＫＴ細胞分化のための前記ｉＰＳＣ、ＨＳＣ、または前駆細胞は、外来性核酸を有する。いくつかの実施形態では、前記外来性核酸は、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）、三重特異性Ｔ細胞エンゲージャー、多重特異性Ｔ細胞エンゲージャー、ＣＤ１６もしくはそのバリアント、ＮＹ−ＥＳＯ、二重特異性キラー細胞エンゲージャー（ＢｉＫＥ）、三重特異性キラー細胞エンゲージャー（ＴｒｉＫＥ）、多重特異性キラー細胞エンゲージャー、または複数の免疫細胞種と適合性の汎用エンゲージャーをコードし得る。いくつかの実施形態では、前記外来性核酸は、Ｔ細胞分化、ＮＫ細胞分化、またはＮＫＴ細胞分化のための前記ｉＰＳＣ、ＨＳＣ、または前駆細胞のｈｎＣＤ１６をコードする。いくつかの実施形態では、前記外来性核酸は、Ｔ細胞分化、ＮＫ細胞分化、またはＮＫＴ細胞分化のための前記ｉＰＳＣ、ＨＳＣ、または前駆細胞のＣＤ１９  ＣＡＲをコードする。いくつかの実施形態では、前記外来性核酸は、Ｔ細胞分化、ＮＫ細胞分化、または���ＫＴ細胞分化のための前記ｉＰＳＣ、ＨＳＣ、または前駆細胞のＢＣＭＡ  ＣＡＲをコードする。
【０１８９】
いくつかの実施形態では、前記免疫細胞集団または免疫細胞亜集団は、非造血系に運命決定した非多能性細胞から造血系細胞に、または一次造血細胞型の非多能性細胞から異なる造血細胞型に、インビトロで分化転換され、Ｔ前駆細胞、ＮＫ前駆細胞、もしくはＮＫＴ前駆細胞、または完全に分化した特殊な免疫細胞型（Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはＮＫＴ細胞など）となり得る（例えば、開示の全体が本明細書に援用される、ＵＳ特許第９，３７６，６６４号および米国出願第１５／０７２，７６９号を参照されたい）。いくつかの実施形態では、前記非造血系に運命決定した非多能性細胞は、体細胞であり、皮膚線維芽細胞、脂肪組織由来細胞、およびヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）などが挙げられる。分化転換に有用な体細胞は不死化された体細胞である場合がある。
【０１９０】
細胞の多能性を誘導する、またはポテンシーを増加するための（Takahashi, K., and Yamanaka, S., Cell 126, 663-676 (2006); Takahashi et al., Cell 131, 861-872 (2007); Yu et al., Science 318, 1917-1920 (2007); Zhou et al., Cell Stem Cell 4, 381-384 (2009); Kim et al., Cell Stem Cell 4, 472-476 (2009); Yamanaka et al., 2009; Saha, K., Jaenisch, R., Cell Stem Cell 5, 584-595 (2009)）、および、再プログラムの効率を改善するための（Shi et al., Cell Stem Cell 2, 525-528 (2008a); Shi et al., Cell Stem Cell 3, 568-574 (2008b); Huangfu et al., Nat Biotechnol 26, 795-797 (2008a); Huangfu et al., Nat Biotechnol 26, 1269-1275 (2008b); Silva et al., Plos Bio 6, e253. Doi: 10.1371/journal. Pbio. 0060253 (2008); Lyssiotis et al., PNAS 106, 8912-8917 (2009); Ichida et al., Cell Stem Cell 5, 491-503 (2009); Maherali, N., Hochedlinger, K., Curr Biol 19, 1718-1723 (2009b); Esteban et al., Cell Stem Cell 6, 71-79 (2010); and Feng et al., Cell Stem Cell 4, 301-312 (2009)）、様々な戦略が追求されている（これらの開示の全体が参照により本明細書に援用される）。
【０１９１】
ＩＩＩ．養子療法用に免疫細胞を調節する方法
本発明は、いくつかの実施形態において、養子細胞をベースとした治療法に好適な免疫細胞集団または免疫細胞亜集団を調節する方法を提供し、前記方法は、前記免疫細胞を、ＢＥＴ阻害剤、ＣＤＫ阻害剤、ＣＲＡＣチャネル阻害剤、Ｃｏｘ阻害剤、ドパミン拮抗剤、ＥＲＫ５阻害剤、グルココルチコイド、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、Ｌｃｋ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、またはＳｙｋ阻害剤を少なくとも含む１または複数の調節薬を含む組成物と接触させることを含み、１または複数の前記薬剤と接触させられた前記免疫細胞集団または免疫細胞亜集団は、前記調節を受けていない細胞と比較して、治療的有効性が改善される。１または複数の前記薬剤による前記調節は、細胞増殖を改善し、細胞毒性を改善し、残留性を改善し、且つ／または、細胞療法における再発率を減少させるように、免疫細胞の生物学的特性を調節し得る。いくつかの実施形態では、前記１または複数の調節薬の組成物は、少なくとも１つの、表１から選択される化合物、およびその誘導体または類似体を含む。いくつかの実施形態では、前記１または複数の調節薬の組成物は、ＢＥＴ阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、またはＳｙｋ阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、前記１または複数の調節薬の組成物は、ＰＤＫ１阻害剤を少なくとも含む。いくつかの他の実施形態では、前記１または複数の調節薬の組成物は、Ｒａｆ阻害剤を少なくとも含む。いくつかの他の実施形態では、前記１または複数の調節薬の組成物は、Ｓｙｋ阻害剤を少なくとも含む。さらに別の実施形態では、前記１または複数の調節薬の組成物は、ＧＳＫ２３３４４７０、ＡＺ６２８、ＧＤＣ−０８７９、ダブラフェニブ、Ｒ７８８、パクリチニブ、バルドキソロンメチル、およびＰＲＴ０６２６０７のうちの少なくとも１つを含む。１つの実施形態では、前記１または複数の調節薬の組成物は、ＧＳＫ２３３４４７０を含む。別の実施形態では、前記１または複数の調節薬の組成物は、ＡＺ６２８を含む。さらに別の実施形態では、前記１または複数の調節薬の組成物は、Ｒ７８８を含む。いくつかの他の実施形態では、前記１または複数の調節薬の組成物は、バルドキソロンメチルを含む。
【０１９２】
１つの実施形態では、免疫細胞集団または免疫細胞亜集団を調節する前記方法は、前記免疫細胞を少なくとも１つの調節薬を含む組成物と接触させることを含み、ここで、前記少なくとも１つの調節薬は、ＢＥＴ阻害剤、ＣＤＫ阻害剤、ＣＲＡＣチャネル阻害剤、Ｃｏｘ阻害剤、ドパミン拮抗剤、ＥＲＫ５阻害剤、グルココルチコイド、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、Ｌｃｋ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、またはＳｙｋ阻害剤を含み；前記接触させられた免疫細胞は少なくとも１つの好ましい治療特性を獲得し、前記好ましい治療特性としては、同じ組成物と接触していない免疫細胞と比較した場合の、細胞増殖の増加；１または複数の目的の細胞亜集団の数または相対比の増加；増殖、細胞毒性、または細胞リコールの改善；および残留性の改善、が挙げられるが、これらに限定はされない。
【０１９３】
いくつかの実施形態では、養子細胞をベースとした治療法に好適な免疫細胞集団または免疫細胞亜集団を調節する前記方法は、前記免疫細胞を、同じ組成物と接触していない免疫細胞と比較して、少なくとも１つの好ましい治療特性を改善するのに十分な量の、少なくとも１つの前記薬剤を含む組成物と接触させることを含む。１つの実施形態では、免疫細胞処理用の前記調節薬は、約０．１ｎＭ〜約５０μＭである。１つの実施形態では、免疫細胞処理用の前記薬剤は、約０．１ｎＭ、約０．５ｎＭ、約１ｎＭ、約５ｎＭ、約１０ｎＭ、約５０ｎＭ、約１００ｎＭ、約５００ｎＭ、約１μΜ、約５μΜ、約１０μΜ、約２０μΜ、もしくは約２５μΜ、または上記の間のあらゆる濃度である。１つの実施形態では、免疫細胞処理用の前記調節薬は、約０．１ｎＭ〜約５ｎＭ、約１ｎＭ〜約１００ｎＭ、約５０ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約１００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約１μΜ、約５００ｎＭ〜約５μΜ、約３μΜ〜約１０μΜ、約５μΜ〜約１５μΜ、約１２μΜ〜約２０μΜ、もしくは約１８μΜ〜約２５μΜ、または上記の間のあらゆる範囲である。
【０１９４】
いくつかの実施形態では、養子細胞をベースとした治療法に好適な免疫細胞集団または免疫細胞亜集団を調節する前記方法は、前記免疫細胞を、同じ組成物と接触していない免疫細胞と比較して、少なくとも１つの好ましい治療特性を改善するのに十分な長さの時間、少なくとも１つの前記調節薬を含む組成物と接触させることを含む。１つの実施形態では、前記免疫細胞は、少なくとも１０分間、３０分間、１時間、２時間、５時間、１２時間、１６時間、１８時間、１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、１０日間、１５日間、２０日間、２５日間、３０日間、または上記の間のあらゆる長さの期間、１または複数の前記薬剤と接触させられる。１つの実施形態では、前記免疫細胞は、約０．５時間〜約２時間、約１時間〜約１２時間、約１０時間〜約２日間、約１日間〜約３日間、約２日間〜約５日間、約３日間〜約６日間、約５日間〜約８日間、約７日間〜約１４日間、約１２日間〜約２２日間、約１４日間〜約２５日間、約２０日間〜約３０日間、１または複数の前記薬剤と接触させられる。いくつかの実施形態では、前記免疫細胞は、１６時間以上、１４時間以上、１２時間以上、１０時間以上、８時間以上、６時間以上、４時間以上、２時間以上、または上記の間のあらゆる長さの時間、１または複数の前記薬剤と接触させられる。従って、前記十分な長さの時間は、例えば、１５時間以上、１３時間以上、１１時間以上、９時間以上、７時間以上、５時間以上、３時間以上、１時間以上である。前記方法のいくつかの他の実施形態では、前記十分な長さの時間は、２４時間以上、３６時間以上、４８時間以上、６０時間以上、７２時間以上、または上記の間のあらゆる長さの時間である。従って、前記十分な長さの時間は、例えば、３０時間以上、４２時間以上、５４時間以上、６６時間以上、７８時間以上、９０時間以上である。
【０１９５】
前記免疫細胞を少なくとも１つの前記薬剤を含む組成物と接触させることを含む、養子細胞をベースとした治療法に好適な免疫細胞集団または免疫細胞亜集団を調節する前記方法は、前記接触後の前記免疫細胞から、ナイーブＴ細胞、幹細胞様メモリーＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、獲得ＮＫ細胞、またはＩ型ＮＫＴ細胞を含む１または複数の目的の亜集団を、富化または単離することをさらに含み得る。
【０１９６】
いくつかの実施形態では、前記調節のための免疫細胞は、ＣＭＶ血清陽性の対象、または遺伝子改変された免疫細胞を以前に投与されたことがある対象、から単離される。いくつかの実施形態では、調節後、前記対象から得られた遺伝子改変された免疫細胞は、自家投与または同種他家投与され得る。いくつかの実施形態では、前記調節のためのドナー由来免疫細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）および／またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする外来性核酸を含む。
【０１９７】
いくつかの他の実施形態では、前記調節のための単離された免疫細胞は、遺伝子改変された免疫細胞（遺伝子操作された免疫細胞、または再構成、変異、ゲノムインプリンティング、および／もしくはエピジェネティック修飾より生じた免疫細胞）である。いくつかの実施形態では、前記調節のための単離された免疫細胞は、上述の少なくとも１種の遺伝子改変されたモダリティを含む。いくつかの実施形態では、前記単離された免疫細胞集団は、挿入、欠失、および／または核酸置換を含むようにゲノム操作されている。いくつかの特定の実施形態では、前記ゲノム操作された免疫細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、および／または、過剰発現のＣＤ１６もしくはそのバリアント、をコードする外来性核酸を含む。
【０１９８】
あるいは、前記調節のための免疫細胞集団は、幹細胞、造血幹細胞、造血前駆細胞、もしくは前駆細胞からインビトロで分化されるか；または、造血系もしくは非造血系の非多能性細胞から分化転換される。いくつかの実施形態では、前記調節のための免疫細胞が派生される、前記幹細胞、造血幹細胞、造血前駆細胞、前駆細胞、または非多能性細胞は、挿入、欠失、および／または核酸置換を含むようにゲノム操作されており、前記挿入、欠失、および／または核酸置換はそれから派生した免疫細胞にも含まれる。いくつかの特定の実施形態では、前記派生した免疫細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、および／または、過剰発現のＣＤ１６もしくはそのバリアント、をコードする外来性核酸を含む。ＩＶ．調節された免疫細胞、免疫細胞集団、または免疫細胞亜集団の治療的使用
【０１９９】
本発明は、ＢＥＴ阻害剤、ＣＤＫ阻害剤、ＣＲＡＣチャネル阻害剤、Ｃｏｘ阻害剤、ドパミン拮抗剤、ＥＲＫ５阻害剤、グルココルチコイド、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、Ｌｃｋ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、またはＳｙｋ阻害剤を少なくとも含む、免疫細胞の治療的有効性を改善するのに十分な量の１または複数の調節薬、と接触させられた、それで処理された、またはそれで調節された、単離された免疫細胞集団または免疫細胞亜集団を含む治療用組成物を提供する。１つの実施形態では、前記接触させられた、処理された、または調節された免疫細胞は、同じ薬剤と接触していない免疫細胞と比較した場合、細胞増殖の増加；１または複数の目的の細胞亜集団の数または相対比の増加；増殖、細胞毒性、または細胞リコールの改善；および残留性の改善、を含むがこれらに限定はされない、少なくとも１つの好ましい治療特性を得る。いくつかの実施形態では、前記１または複数の調節薬は、表１から選択される少なくとも１つの化合物、またはその誘導体もしくは類似体を含む。いくつかの実施形態では、前記１または複数の調節薬は、ＢＥＴ阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、またはＳｙｋ阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、前記１または複数の調節薬は、ＰＤＫ１阻害剤を少なくとも含む。いくつかの他の実施形態では、前記１または複数の調節薬は、Ｒａｆ阻害剤を少なくとも含む。いくつかの他の実施形態では、前記１または複数の調節薬は、Ｓｙｋ阻害剤を少なくとも含む。さらに別の実施形態では、前記１または複数の調節薬は、ＧＳＫ２３３４４７０、ＡＺ６２８、ＧＤＣ−０８７９、ダブラフェニブ、Ｒ７８８、パクリチニブ、バルドキソロンメチル、およびＰＲＴ０６２６０７のうちの少なくとも１つを含む。１つの実施形態では、前記１または複数の調節薬は、ＧＳＫ２３３４４７０を少なくとも含む。別の実施形態では、前記１または複数の調節薬は、ＡＺ６２８を少なくとも含む。さらに別の実施形態では、前記１または複数の調節薬は、Ｒ７８８を含む。いくつかの他の実施形態では、１または複数の調節薬の前記組成物はバルドキソロンメチルを含む。
【０２００】
１つの実施形態では、前記薬剤のうちの１または複数と接触させられた前記単離された免疫細胞集団または免疫細胞亜集団は、ナイーブＴ細胞、幹細胞様メモリーＴ細胞、および／もしくはセントラルメモリーＴ細胞の数または相対比が増加している。１つの実施形態では、前記薬剤のうちの１または複数と接触させられた前記単離された免疫細胞集団または免疫細胞亜集団は、Ｉ型ＮＫＴ細胞の数または相対比が増加している。別の実施形態では、前記薬剤のうちの１または複数と接触させられた前記単離された免疫細胞集団または免疫細胞亜集団は、獲得ＮＫ細胞の数または相対比が増加している。
【０２０１】
また、開示の前記調節された免疫細胞と、１または複数の治療用添加剤／薬剤と、を含む併用型の治療用組成物が本明細書で提供される。前記併用型の治療用組成物のいくつかの実施形態では、前記１または複数の治療用添加剤は、ペプチド、サイトカイン、マイトジェン、増殖因子、スモールＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ（二本鎖ＲＮＡ）、単核血液細胞、フィーダー細胞、フィーダー細胞成分またはその代替要素、１または複数の目的のポリ核酸を含むベクター、抗体、化学療法剤もしくは放射性部分、または免疫調節薬（ＩＭｉＤ）を含む。
【０２０２】
いくつかの実施形態では、前記追加の治療薬は抗体または抗体フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、前記抗体は、ヒト型化抗体、ヒト型化モノクローナル抗体、キメラ抗体であり得る。いくつかの実施形態では、前記抗体または抗体フラグメントは、ウイルス抗原に特異的に結合する。他の実施形態では、前記抗体または抗体フラグメントは、腫瘍抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、前記腫瘍特異的抗原またはウイルス特異的抗原が、前記調節された細胞を活性化することで、標的細胞がより良好に認識および溶解される。いくつかの実施形態では、前記抗原が、追加の治療薬として、前記調節されたＮＫ細胞を活性化することで、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）が利用される。インビボおよびインビトロの両方で、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）が、標的細胞と、ＮＫ細胞上および他の細胞型上のエンゲージ用ＣＤ１６と、に結合することで、ＡＤＣＣにより腫瘍細胞が死滅する。ｍＡｂは、ＮＫ細胞の阻害を阻止することによっても、ＡＤＣＣを増強しＮＫ細胞を刺激し得る。いくつかの実施形態では、前記ＮＫ細胞介在性ＡＤＣＣは、前記調節されたＮＫ細胞によるＣＤ１６およびその遺伝子操作バリアントの発現を介したものである。前記ＣＤ１６の遺伝子操作バリアントは、切断不可ＣＤ１６、高親和性ＣＤ１６（ｈａＣＤ１６）、および高親和性切断不可ＣＤ１６（ｈｎＣＤ１６）を包含するが、これに限定はされない。さらに、抗ＣＤ１９抗原、抗ＣＤ２０抗原、および抗ＣＤ３３抗原などの腫瘍細胞抗原を標的とする抗体のＦａｂ領域と、ＮＫ細胞上のＣＤ１６を認識する別のＦａｂ領域とを融合することによる、二重特異的抗体および三重特異的抗体の設計は、前記ＮＫ細胞の刺激と、その後の腫瘍細胞の死滅をもたらす。いくつかの実施形態では、本明細書において提供されている調節された免疫細胞との併用療法に好適な抗体は、抗ＣＤ２０（リツキシマブ（retuximab）、ベルツズマブ、オファツムマブ、ウブリツキシマブ、オカラツズマブ、オビヌツズマブ）、抗Ｈｅｒ２（トラスツズマブ）、抗ＣＤ５２（アレムツズマブ）、抗ＥＧＦＲ（セツキシマブ（certuximab））、および抗ＣＤ３８（ダラツムマブ）、並びにこれらのヒト型化バリアントおよびＦｃ改変バリアントを包含するが、これに限定はされない。
【０２０３】
いくつかの実施形態では、前記追加の治療薬は、化学療法剤、放射性部分、または免疫調節薬のうちの１または複数を含む。
【０２０４】
化学療法剤とは、細胞傷害性の抗悪性腫瘍薬を指し、すなわち、優先的に新生細胞を死滅させるか急速増殖細胞の細胞周期を乱す、またはがん幹細胞（stem cancer cell）を根絶することが分かっている、且つ、新生細胞の成長を阻止または低減するために治療的に用いられる、化学薬品を指す。化学療法剤は、抗悪性腫瘍薬、抗悪性腫瘍剤、細胞傷害性薬物または細胞傷害性薬剤と称される場合もあり、当該技術分野において周知である。いくつかの実施形態では、前記化学療法剤は、アントラサイクリン、アルキル化剤、スルホン酸アルキル、アジリジン、エチレンイミン、メチルメラミン、ナイトロジェンマスタード、ニトロソウレア、抗生物質、代謝拮抗物質、葉酸類似体、プリン類似体、ピリミジン類似体、酵素、ポドフィロトキシン、白金含有薬剤、インターフェロン、ビンカアルカロイド、エピポドフィロトキシン、またはインターロイキンを含む。例示的な化学療法剤は、シクロホスファミド、メクロレタミン、メルファラン（mephalin）、クロラムブシル、ヘキサメチルメラミン（heamethylmelamine）、チオテパ、ブスルファン、カルムスチン、ロムスチン、セムスチン、メトトレキサート、フルオロウラシル、フロクスウリジン、シタラビン、６−メルカプトプリン、チオグアニン、ペントスタチン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、エトポシド、エトポシドオルトキノン（etoposide orthoquinone）、テニポシド、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ミトキサントロン、ビサントレン（bisanthrene）、アクチノマイシンＤ、プリカマイシン、ピューロマイシン、グラミシジンＤ（gramicidine D）、パクリタキセル、コルヒチン、サイトカラシンＢ、エメチン、メイタンシン、およびアムサクリン、を包含するが、これに限定はされない。追加の薬剤としては、アミノグルテチミド（aminglutethimide）、シスプラチン、カルボプラチン、マイトマイシン、アルトレタミン、シクロホスファミド、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、イリノテカン（ＣＰＴ−１１）、アレムツズマブ（alemtuzamab）、アルトレタミン、アナストロゾール、Ｌ−アスパラギナーゼ、アザシチジン、ベバシズマブ、ベキサロテン、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ブスルファン、カルステロン、カペシタビン、セレコキシブ、セツキシマブ、クラドリビン、クロファラビン（clofurabine）、シタラビン、ダカルバジン、デニロイキンジフチトクス、ジエチルスチルベストロール（diethlstilbestrol）、ドセタキセル、ドロモスタノロン、エピルビシン、エルロチニブ、エストラムスチン、エトポシド、エチニルエストラジオール、エキセメスタン、フロクスウリジン、５−フルオロウラシル（5-flourouracil）、フルダラビン、フルタミド、フルベストラント、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、ゴセレリン、ヒドロキシ尿素、イブリツモマブ、イダルビシン、イホスファミド、イマチニブ、インターフェロンα（２ａ、２ｂ）、イリノテカン、レトロゾール、ロイコボリン、ロイプロリド、レバミゾール、メクロレタミン（meclorethamine）、メゲストロール、メルファラン（melphalin）、メルカプトプリン、メトトレキサート、メトキサレン、マイトマイシンＣ、ミトタン、ミトキサントロン、ナンドロロン、ノフェツモマブ、オキサリプラチン、パクリタ��セル、パミドロン酸、ペメトレキセド、ペガデマーゼ、ペグアスパラガーゼ（pegasparagase）、ペントスタチン、ピポブロマン、プリカマイシン、ポリフェプロサン、ポルフィマー、プロカルバジン、キナクリン、リツキシマブ、サルグラモスチム、ストレプトゾシン、タモキシフェン、テモゾロミド、テニポシド、テストラクトン、チオグアニン、チオテパ、トポテカン（topetecan）、トレミフェン、トシツモマブ、トラスツズマブ、トレチノイン、ウラシルマスタード、バルルビシン、ビノレルビン、およびゾレドロネートが挙げられる。他の好適な薬剤は、化学療法剤または放射線療法剤として承認予定のものを包含して、ヒトでの使用が承認されており、且つ当該技術分野において公知の治療薬である。そのような薬剤は、多くの標準的な医師および腫瘍学者のリファレンスのいずれか（例えば、Goodman & Gilman’s The Pharmacological Basis of Therapeutics, Ninth Edition, McGraw-Hill, N.Y., 1995）を通じて、または国立がん研究所のウェブサイト（fda.gov/cder/cancer/druglistfrarne.htm）を通じて参照することができ、これらは共に時々更新されている。サリドマイド、レナリドマイド、およびポマリドミドなどの免疫調節薬（ＩＭｉＤ）は、ＮＫ細胞およびＴ細胞の両方を刺激する。本明細書において提供されているように、がん治療用に、前記調節された治療用免疫細胞と共に、ＩＭｉＤが使用され得る。
【０２０５】
本発明はまた、ＢＥＴ阻害剤、ＣＤＫ阻害剤、ＣＲＡＣチャネル阻害剤、Ｃｏｘ阻害剤、ドパミン拮抗剤、ＥＲＫ５阻害剤、グルココルチコイド、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、Ｌｃｋ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、およびＳｙｋ阻害剤のうちの少なくとも１つにより調節された免疫細胞を用いることによって、並びに所望により、記載されているような１または複数の追加の治療薬によって、対象を治療する方法、すなわち、異常を抑制、予防、回復する方法、を提供する。
【０２０６】
１つの態様では、前記調節された免疫細胞は、前記調節された免疫細胞を養子免疫療法に適した対象に導入または投与することにより、対象における造血器腫瘍、固形がん、前がん状態、自己免疫障害、ウイルス感染症の治療、予防、または回復に用いることができる。別の態様では、前記調節された免疫細胞は、治療を必要としている対象に前記細胞を導入することにより、抗腫瘍の免疫応答の増強に用いることができる。
【０２０７】
「治療する」、「治療」といった用語は、本明細書においては、目的の薬理的および／または生理的効果を得ることを通常は意味するように使用される。前記効果は、疾患の完全もしくは部分的な防止という観点では、予防的であり、並びに／または、疾患および／もしくは該疾患に起因する有害作用の部分的もしくは完全な治癒という観点では、治療的であり得る。「治療」は、本明細書で使用される場合、哺乳動物における疾患の治療であれば特に限定されず、前記疾患に罹患し易いが、それに罹患しているとはまだ診断されていない対象において、前記疾患が発症することを予防すること；前記疾患を抑制すること、すなわち、その発達を抑止すること；または、前記疾患を軽減すること、すなわち、前記疾患の後退を引き起こすこと、を包含する。前記治療薬または組成物は、疾患または傷害の発生前、発生中、または発生後に投与され得る。患者の望ましくない臨床症状を安定化または低減する、進行中の疾患の治療は、特に重要である。特定の実施形態では、特定の実施形態では、前記治療を必要としている対象は、細胞療法により、少なくとも１つの関連症状が治療、回復、および／または改善され得る疾患、異常、および／または傷害を有する。ある特定の実施形態は、細胞療法を必要としている対象が、限定はされないが、骨髄移植または幹細胞移植の候補、化学療法または放射線療法を受けた対象、過剰増殖性疾患もしくはがん（例えば造血系の過剰増殖性疾患もしくはがん）に罹患している、またはそれに罹患する危険性がある対象、腫瘍（例えば、固形腫瘍）を有する、またはそれを発生する危険性がある対象、ウイルス感染またはウイルス感染と関連した疾患に罹患している、またはそれに罹患する危険性がある対象を包含することが企図される。
【０２０８】
造血器腫瘍の例としては、急性白血病、慢性白血病（急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、リンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、ホジキン病、多発性骨髄腫、および骨髄異形成症候群が挙げられるが、これらに限定はされない。固形がんとしては、脳がん、前立腺がん、乳がん、肺がん、結腸がん、子宮がん、皮膚がん、肝臓がん、骨がん、膵がん、卵巣がん、精巣がん、膀胱がん、腎がん、頭部がん、頸部がん、胃がん、子宮頸部がん、直腸がん、喉頭がん、および食道がんが挙げられるが、これらに限定はされない。種々の自己免疫障害の例として、円形脱毛症、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、皮膚筋炎、糖尿病（１型）、ある種の若年性特発性関節炎、糸球体腎炎、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、特発性血小板減少性紫斑病、重症筋無力症、ある種の心筋炎、多発性硬化症、天疱瘡／類天疱瘡、悪性貧血、結節性多発性動脈炎、多発性筋炎、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、関節リウマチ、強皮症／全身性硬化症、シェーグレン症候群、全身紅はん性、エリテマトーデス、ある種の甲状腺炎、ある種のブドウ膜炎、白斑、多発性血管炎を伴う（ウェゲナー）肉芽腫症が挙げられるが、これらに限定はされない。ウイルス感染症の例としては、ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス）関連障害、ＨＳＶ（単純ヘルペスウイルス）関連障害、ＫＳＨＶ（カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス）関連障害、ＲＳＶ（呼吸器合胞体ウイルス）関連障害、ＥＢＶ（エプスタイン・バーウイルス）関連障害、ＣＭＶ（サイトメガロウイルス）関連障害、ＶＺＶ（水痘帯状疱疹ウイルス）、アデノウイルス関連障害、レンチウイルス関連障害、ＢＫポリオーマウイルス関連障害が挙げられるが、これらに限定はされない。
【０２０９】
本開示の前記調節された免疫細胞を含む治療用組成物は、他の治療の前、間、および／または後に、対象に投与できる。従って、前記併用療法は、追加の治療薬の使用前、使用中、および／または使用後の、調整された細胞の投与または調製を含み得る。上記で提供されているように、前記１または複数の治療用添加剤は、ペプチド、サイトカイン、マイトジェン、増殖因子、スモールＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ（二本鎖ＲＮＡ）、単核血液細胞、フィーダー細胞、フィーダー細胞成分またはその代替要素、１または複数の目的のポリ核酸を含むベクター、抗体、化学療法剤もしくは放射性部分、または免疫調節薬（ＩＭｉＤ）を含む。前記調節された免疫細胞の投与は、追加の治療薬の投与と、数時間だけ、数日間だけ、あるいは数週間でも、時期を離すことができる。さらにまたはあるいは、前記投与は、他の生理活性物質またはモダリティと組み合わせることができ、例えば、抗悪性腫瘍薬、非薬物療法（外科手術など）が挙げられるが、これらに限定はされない。
【０２１０】
自家免疫細胞および同種他家免疫細胞は共に、調節して、上記の細胞療法で使用することができる。
【０２１１】
いくつかの実施形態では、前記治療用組成物中の調節された免疫細胞の数は、少なくとも０．１×１０５細胞、少なくとも１×１０５細胞、少なくとも５×１０５細胞、少なくとも１×１０６細胞、少なくとも５×１０６細胞、少なくとも１×１０７細胞、少なくとも５×１０７細胞、少なくとも１×１０８細胞、少なくとも５×１０８細胞、少なくとも１×１０９細胞、または少なくとも５×１０９細胞である。
【０２１２】
いくつかの実施形態では、前記治療用組成物中の調節された免疫細胞の数は、約０．１×１０５細胞〜約１×１０６細胞；約０．５×１０６細胞〜約１×１０７細胞；約０．５×１０７細胞〜約１×１０８細胞；約０．５×１０８細胞〜約１×１０９細胞；約１×１０９細胞〜約５×１０９細胞；約０．５×１０９細胞〜約８×１０９細胞、または上記の間のあらゆる範囲である。
【０２１３】
いくつかの実施形態では、前記治療用組成物中の調節された免疫細胞の数は、約０．５×１０６細胞〜約１×１０６細胞；約０．５×１０７細胞〜約１×１０７細胞；約０．５×１０８細胞〜約１×１０８細胞；約０．５×１０９細胞〜約５×１０９細胞；約１×１０９細胞〜約８×１０９細胞、または上記の間のあらゆる範囲である。
【０２１４】
いくつかの他の実施形態では、前記治療用組成物中の調節された免疫細胞の数は、約０．１×１０５細胞〜約０．５×１０６細胞；約０．５×１０６細胞〜約０．５×１０７細胞；約０．５×１０７細胞〜約０．５×１０８細胞；約０．５×１０８細胞〜約０．５×１０９細胞；約０．５×１０９細胞〜約８×１０９細胞、または上記の間のあらゆる範囲である。
【０２１５】
１つの実施形態では、前記治療用組成物中の調節された免疫細胞の数は、部分臍帯血または単一臍帯血中の免疫細胞の数であり、すなわち、少なくとも０．１×１０５細胞／体重ｋｇ、少なくとも０．５×１０５細胞／体重ｋｇ、少なくとも１×１０５細胞／体重ｋｇ、少なくとも５×１０５細胞／体重ｋｇ、少なくとも１０×１０５細胞／体重ｋｇ、少なくとも０．７５×１０６細胞／体重ｋｇ、少なくとも１．２５×１０６細胞／体重ｋｇ、少なくとも１．５×１０６細胞／体重ｋｇ、少なくとも１．７５×１０６細胞／体重ｋｇ、少なくとも２×１０６細胞／体重ｋｇ、少なくとも２．５×１０６細胞／体重ｋｇ、少なくとも３×１０６細胞／体重ｋｇ、少なくとも４×１０６細胞／体重ｋｇ、少なくとも５×１０６細胞／体重ｋｇ、少なくとも１０×１０６細胞／体重ｋｇ、少なくとも１５×１０６細胞／体重ｋｇ、少なくとも２０×１０６細胞／体重ｋｇ、少なくとも２５×１０６細胞／体重ｋｇ、少なくとも３０×１０６細胞／体重ｋｇ、１×１０８細胞／体重ｋｇ、５×１０８細胞／体重ｋｇ、１×１０９細胞／体重ｋｇ、または８×１０９細胞／体重ｋｇである。
【０２１６】
本発明により提供された前記調節された免疫細胞は、投与前にエキソビボまたはインビトロで増殖させずに、対象に投与され得る。特定の実施形態では、前記調節された免疫細胞集団は、前記調節薬を除去するために洗浄され得る。いくつかの実施形態では、前記単離された調節された免疫細胞集団から派生した造血系細胞は、組み換え技術により、ＴＣＲ、ＣＡＲまたは他のタンパク質を発現するように作製され得る。
【０２１７】
患者への投与に適した前記治療用組成物は、１もしくは複数の薬剤的に許容できる担体（添加剤）および／もしくは希釈剤（例えば、薬剤的に許容できる培地、例えば、細胞培養培地）、または他の薬剤的に許容できる成分を含み得る。薬剤的に許容できる担体および／または希釈剤は、投与される特定の組成物によって部分的に決定されるが、前記治療用組成物の投与に使用される特定の方法によっても決定される。従って、本発明の治療用組成物には種々様々な好適な製剤が存在する（例えば、Remington’s Pharmaceutical Sciences, 17th ed. 1985を参照、この開示はその全体が参照によって本明細書に援用される）。
【０２１８】
特定の実施形態では、単離された、調節された細胞集団を含む治療用細胞組成物は、薬剤的に許容できる細胞培地、または薬剤的に許容できる担体および／もしくは希釈剤も含む。調節された免疫細胞集団を含む治療用組成物は、個別に、静脈内投与法、腹腔内投与法、経腸投与法、もしくは気管内投与法によって、または、所望の治療目的を果たすための他の好適な化合物と組み合わせて、投与され得る。
【０２１９】
これらの薬剤的に許容できる担体および／または希釈剤は、前記治療用組成物の約３〜約１０のｐＨを維持するのに十分な量で存在し得る。すなわち、前記緩衝剤は、組成物全体の約５％（ｖ／ｖ）にもなり得る。限定はされないが、塩化ナトリウムおよび塩化カリウムなどの電解質も、前記治療用組成物に含ませることができる。１つの態様では、前記治療用組成物のｐＨは約４〜約１０の範囲内である。あるいは、前記治療用組成物のｐＨは、約５〜約９、約６〜約９、または約６．５〜約８の範囲内である。別の実施形態では、前記治療用組成物は、前記ｐＨ範囲の１つに含まれるｐＨを有する緩衝液を含む。別の実施形態では、前記治療用組成物のｐＨは約７である。あるいは、前記治療用組成物は約６．８〜約７．４の範囲内のｐＨを有する。さらなる別の実施形態では、前記治療用組成物のｐＨは約７．４である。
【０２２０】
また本発明は、部分的には、本発明の特定の組成物および／または培養物中の、薬剤的に許容できる細胞培地の使用を提供する。このような組成物はヒト対象への投与に適した組成物である。概して、本発明の調節された免疫細胞の維持、増殖、および／または健康を支持するあらゆる培地が、医薬品用細胞培地としての使用に適している。特定の実施形態では、前記薬剤的に許容できる細胞培地は、無血清、且つ／またはフィーダーフリーの培地である。
【０２２１】
種々の実施形態において、前記無血清培地は動物質を含まず、所望により無タンパク質であってもよい。所望により、前記培地は生物製剤において許容できる組換えタンパク質を含有してもよい。動物質を含まない培地とは、成分が非動物供給源に由来している培地を指す。動物質を含まない培地では、組換えタンパク質が元々含まれていた動物性タンパク質と置き換わっており、栄養分は合成供給源、植物供給源または微生物供給源から得られる。一方、無タンパク質培地は、タンパク質を実質的に含まないものと定義される。上記の培地の例が、例示であって、本発明における使用に適した培地の配合を限定するものではないこと、および、当業者に公知であり利用可能な多くの好適な培地が存在することは、当業者には理解される。
【実施例】
【０２２２】
以下の実施例は例示であり、限定を目的とするものではない。
【０２２３】
実施例１：免疫細胞調節用に選択された化合物
表１の化合物群の、免疫療法におけるＴ細胞に影響を与える能力を評価するために、いくつかのインビトロ系およびインビボモデルを用いてデータ解析を行った。個々の化合物の、ナイーブＴ細胞、幹細胞様メモリーＴ細胞、またはセントラルメモリーＴ細胞に対する影響を、追加のドナーから得られた細胞で評価した。表１の各化合物が、以下の側面の少なくとも１つにおいて、処理されたＴ細胞に正の影響を与えることが示された：（１）表現型から同定されたナイーブＴ細胞、幹細胞様メモリーＴ細胞、またはセントラルメモリーＴ細胞の割合を高くする、またはその絶対数を多くする；（２）標的細胞の殺滅能を改善する；（３）細胞生存および増殖を増加させる；（４）サイトカイン産生を増加させる；並びに、（５）腫瘍除去能の増加、インビボにおける移植後の細胞残留性の改善、腫瘍量を減少させる能力の増加、または高腫瘍線量に暴露後の動物の生存を促進する能力の増加を含む、インビボにおける有効性を有する。
【０２２４】
インビトロにおけるＴ細胞培養
新鮮なリューコパック（leukopak）（オールセルズ社（AllCells）、カリフォルニア州アラメダ；キーバイオロジクス社（Key Biologics）、テネシー州メンフィス）を健常ドナーから採取して、そのリューコパックから、例えば、ＥａｓｙＳｅｐ  Ｈｕｍａｎ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ  Ｋｉｔ（ステム・セル・テクノロジーズ社（Stem Cell Technologies）、バンクーバー、カナダ）を用いて、Ｔ細胞をネガティブセレクションにかけた。新鮮な単離されたＴ細胞を分注して凍結保存した。アッセイ開始日に、Ｔ細胞を解凍し、ＩＬ−２およびペニシリン／ストレプトマイシンをはじめとする添加剤を含むＸ−Ｖｉｖｏ１５で洗浄した。細胞を、平底３８４ウェルプレートに、５×１０５細胞／ｍｌで、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８ビーズと共に播種した。個々の化合物を、１０μＭ〜１０ｎＭの範囲に亘る最終濃度で、各プレートのカラム３からカラム２２までの各ウェルに添加した。陽性対照および陰性対照を追加のウェルに添加した。細胞を約６日間、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。
【０２２５】
表現型プロファイリング：健常ドナーから得たＴ細胞を用いて、これらの試験を実施した。抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズおよび化合物添加の存在下での培養開始の６日後、細胞を回収し、以下の固定処理が可能な生死判別マーカーおよびフルオロフォア結合型抗体で染色した：ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２７、およびＴｉｍ３（ＢＤバイオサイエンス社、カリフォルニア州サンノゼ；およびバイオレジェンド社（BioLegend）、カリフォルニア州サンディエゴ）。蛍光性絶対細胞数計測用ビーズ（スフェロテック社（Spherotech）、イリノイ州レークフォレスト）を、収集の直前に添加した。データ収集はＢＤ  Ｆｏｒｔｅｓｓａ（商標）Ｘ−２０（ＢＤバイオサイエンス社（BD Biosciences））で実施し、データ解析はＴｒｅｅｓｔａｒ（商標）ソフトウェア（フロージョー社（FlowJo）、オレゴン州アシュランド）およびＳｐｏｔｆｉｒｅ（ティブコ社（Tibco）、マサチューセッツ州ボストン）を用いて実施した。ナイーブＴ細胞、幹細胞様メモリーＴ細胞、またはセントラルメモリーＴ細胞の同定にはＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、およびＣＤ２７をはじめとする表面マーカーの発現を用いた。各化合物で処理した後、処理後細胞の表面マーカー発現プロファイルを評価し、それと共に細胞増殖および生存能力の特徴付けを行った。これらの個々のＴｃｍマーカーの発現、およびＣＤ６２Ｌ／ＣＣＲ７ダブルポジティブ細胞に関して、化合物をスコア化した。また、Ｔｅｍとの差異が最大となる、ＣＤ８  Ｔｃｍ細胞で発現される、選択された１２種の遺伝子パネル（表２）に基づいて、遺伝子発現スコアを得た。
【０２２６】
サイトカイン産生：Ｔ細胞の種々の刺激に反応する能力はＴ細胞の機能にとって重要となり得る。Ｔ細胞の非特異的刺激に応答して複数のサイトカインを産生する能力は、Ｔ細胞の「多機能性」の尺度である。化合物がこの「多機能的」応答に影響を与えるかどうかを評価するため、調節されたＴ細胞の、刺激後にインターフェロン−γ（ＩＦＮγ）、ＩＬ−２および／またはＴＮＦαを産生する能力を測定した。ＣＤ８＋Ｔ細胞を前記選択された各化合物で処理した後、細胞をＰＭＡ／イオノマイシン混合物で４時間刺激した。刺激後、種々のフルオロフォアと結合した、これらのサイトカインを認識する抗体を用いる細胞内サイトカイン染色により、サイトカイン産生を測定した。蛍光はフローサイトメトリーを用いて測定した。２種以上のサイトカインを産生していた場合に細胞を多機能的と定義した。特定の１種、２種、または３種のサイトカインを産生しているＴ細胞サブセットの割合を調べ、選択された化合物を用いた調節が行われていない細胞と比較した。
【０２２７】
抗原暴露後の細胞毒性および増殖：いくつかの状況で、臨床試験における養子免疫療法の成功する可能性を示し得る有益な臨床パラメーターとして、処置後の患者における移植細胞の増殖の能力および程度、並びに／または、初期増殖後の残留性および機能の継続（例えば継続的な抗原暴露の状況下）がある。操作されたＴ細胞の複数回の抗原刺激にわたって残留し増殖を継続する能力は、そのようなインビボにおける機能または臨床応答の特徴および／または可能性を示し得る。インビトロにおける連続的な殺滅／再刺激アッセイをモデル系として用いて、各化合物で処理したＴ細胞を、複数回の抗原暴露および抗原離脱にわたって、インビトロにおける増殖および標的抗原を発現している腫瘍細胞の殺滅能を含む各種機能について評価した。このようなアッセイを、化合物で処理した、または処理しなかった細胞に対して実施して、反復的な抗原暴露後の細胞機能、および、そのような状況下における細胞増殖または残留性、に対する個々の化合物の影響を評価した。
【０２２８】
代謝プロファイリング：処理されたＴ細胞の代謝に対する選択された化合物の影響の差を、Ｔ細胞の機能性の変化をもたらし得る要素の１つを表す、ミトコンドリア呼吸の尺度である、酸素消費速度（ＯＣＲ）を用いて、説明した。化合物処理後、Ｓｅａｈｏｒｓｅ（商標）ＸＦｅ９６システム（アジレント・テクノロジー社、サンタクララ）を用いてＯＣＲを測定した。これを行うために、細胞を非緩衝化アッセイ用培地で洗浄し、それに再懸濁した。次に、細胞を９６ウェルアッセイプレートに播種し、Ｓｅａｈｏｒｓｅ（商標）ミトストレス検査用のアッセイにかけた。基底ＯＣＲを測定し、基底ＯＣＲと、アッセイ用プレートにイオノフォアＦＣＣＰを添加した後の最大ＯＣＲとの間の差から、予備呼吸能（Spare Respiratory Capacity）（ＳＲＣ）を求めた。このアッセイでは、２人のドナーについて、平均ＳＲＣおよび基底ＯＣＲを得た。
【０２２９】
インビボプロファイリング：化合物処理後のＣＡＲ−Ｔ細胞の機能性の各側面を調べるため、ＣＤ１９＋異種移植モデルを用いて、化合物処理後ＣＡＲ−Ｔ細胞の腫瘍クリアリング能を特徴付けした。ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞を、前記ＣＡＲをコードするコンストラクトを含むベクターで形質導入し、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８ビーズで活性化した。このＣＤ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞およびＣＤ８＋ＣＡＲ−Ｔ細胞を、溶媒のみまたは化合物の存在下で別々に、Ｇ−Ｒｅｘプレート（ウィルソン・ウォルフ社（Wilson-Wolf）、ミネソタ州セントポール）の中で、増殖させた。６日間の増殖後にこのＣＤ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞およびＣＤ８＋ＣＡＲ−Ｔ細胞を凍結保存した。ＣＡＲ−Ｔ細胞を解凍し、ＣＤ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞およびＣＤ８＋ＣＡＲ−Ｔ細胞を１：１比で混合した。最適以下の治療量（約２．５×１０５）の化合物処理後ＣＤ１９指向性ＣＡＲ−Ｔ細胞を、Ｎａｌｍ−６−ｌｕｃ  ＣＤ１９＋播種性腫瘍を担持するＮＳＧマウスに投与した。Ｎａｌｍ−６−ｌｕｃ  ＣＤ１９＋腫瘍細胞によって発現されるルシフェラーゼの量に依存する、各マウスで測定された総輝度（total radiance）に基づいて、腫瘍量を測定した。
【０２３０】
以下の実施例でさらに詳述されるアッセイおよびデータに基づく、上記の全ての側面に関する網羅的な化合物評価を、図８Ａ〜図８Ｃに示す。本明細書において提供されているように、ＢＥＴ阻害剤、ＣＤＫ阻害剤、ＣＲＡＣチャネルＣａ流入遮断薬、シクロオキシゲナーゼ阻害剤、ドパミン拮抗剤、ＥＲＫ５／ＢＭＫ１阻害剤、グルココルチコイド、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、Ｌｃｋ阻害剤、ＰＤＫ−１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、およびＳｙｋ阻害剤は養子免疫療法用にＴ細胞を調節するのに有用であり、調節されたＴ細胞は治療上の利点に関連した少なくとも１つの目的の特徴を有し、そのような特徴は、ナイーブＴ細胞、幹細胞様メモリーＴ細胞、またはセントラルメモリーＴ細胞のより高い割合；標的細胞殺滅能の改善；および効力、生存、増殖、または残留性の増加を含む。
【０２３１】
実施例２：選択された化合物群による処理下でのＴ細胞の表現型プロファイリング
Ｔ細胞サブセットは、Ｔｃｍ、ナイーブＴ細胞（Ｔｎ）、エフェクターメモリーＴ細胞（Ｔｅｍ）、およびＣＤ４５ＲＡ＋エフェクターメモリーＴ細胞（Ｔｅｍｒａ）を含む。Ｔｎ細胞およびＴｃｍ細胞は分化度が最低限であるため増殖能が最も大きいが、Ｔｅｍｒａ細胞は完全分化度が最も大きいため増殖能が乏しいが、強力なエフェクター機能を有する（D’Asaro et al. 2006）。非ヒト霊長類およびＮＯＤ／Ｓｃｉｄ  ＩＬ−２ＲγＣヌル（ＮＳＧ）マウスの両モデルにおける試験で、セントラルメモリー（Ｔｃｍ）表現型のＴ細胞の、養子移入後の残留性が向上していたことが示された（Berger et al. 2008; Wang et al. 2011）。加えて、ＣＡＲ発現ＣＤ４セントラルメモリーＴ細胞（Ｔｃｍ）およびＣＡＲ発現ＣＤ８セントラルメモリーＴ細胞（Ｔｃｍ）のサブセットを、造血系幹細胞移植後の非ホジキンリンパ腫患者に投与したところ、Ｔｃｍから派生したＣＡＲ−Ｔ細胞が増殖の改善を示したことから、Ｔｃｍがヒトのがんの治療において治療上の利点を有し得ることが示された。
【０２３２】
前記選択された化合物群を、Ｔ細胞の表現型を偏らせる（skew）能力について評価した。セントラルメモリーＴ細胞（Ｔｃｍ）表現型の割合をより高くするまたは絶対数をより多くする化合物の能力は、Ｔ細胞の表現型を偏らせる化合物の能力の１つの指標となる。本明細書において、ＴｃｍはＣＣＲ７およびＣＤ６２Ｌの両方の発現を特徴とする。Ｔ細胞上のＣＤ６２ＬまたはＣＣＲ７のいずれかの発現は、目的のＴ細胞サブセットの指標として、ＣＡＲ−Ｔ細胞療法において好ましい、また他の養子Ｔ細胞療法においても好ましい可能性がある、機能的特徴を示している。表現型試験では、これらの重要な表面タンパク質の発現レベルを測定するために、フローサイトメトリーを用いる。これらの個々のＴｃｍマーカーの発現、およびＣＤ６２Ｌ／ＣＣＲ７ダブルポジティブ細胞に関して、化合物をスコア化した（図１Ａ）。図１Ａのスコアは、４人のドナーから得られた値および次式を用いて求めた：
スコア＝溶媒に対しての正規化標準偏差×有意性（−ｌｏｇ１０（ｐ値））＋１
この図の他のグラフのスコアも同じ式を用いている。
【０２３３】
表面マーカーの表現型試験には、細胞生存率（図２Ａ）および細胞増殖（図２Ｂ）の特徴付けも含まれた。図２Ａ〜図２Ｂのグラフのスコアは次式を用いて得られた：
（試験値−最小値）／（最大値−最小値）×１０
【０２３４】
図１Ａに示すように、ＢＥＴ阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、およびＳｙｋ阻害剤を含む化合物群が、好ましいＴｃｍ表現型をもたらす。例えば、ＰＤＫ１阻害剤（例えば、化合物２１）はＤＭＳＯ溶媒との比較でＣＣＲ７、ＣＤ６２Ｌダブルポジティブ細胞の割合をおよそ７倍に増加させ；Ｒａｆ阻害剤のダブラフェニブ（例えば、化合物２４）はＴｃｍの割合を約１０倍に増加させる。一方、選択された化合物のうち、シクロオキシゲナーゼ阻害剤（エトリコキシブ）、ドパミン拮抗剤（セルチンドール）、およびグルココルチコイド（フルニソリド、酢酸デキサメタゾン、アムシノニド）など、Ｔｃｍの割合向上にごく小さな効果しかないものもいくつかあるが、これらは溶媒処理と比較して細胞生存率および／または増殖を増強するよう作用する（図２Ａ、図２Ｂ、および図８Ａ〜図８Ｃ）。
【０２３５】
さらなる目的の表現型特性として、ＣＤ２７の発現増加も含まれる（図１Ｂ）。ＣＤ２７はＴ細胞の成熟および記憶に関与するＴ細胞副刺激分子である（Hendriks et al. 2000）。すなわち、メモリー細胞表現型（ＣＣＲ７−ＣＤ６２ＬダブルポジティブまたはＣＤ２７発現）および細胞生存率／増殖の両方に正の影響を与える化合物としては以下が挙げられる：ＢＥＴ阻害剤、ＣＲＡＣチャネルＣａ流入遮断薬、ＥＲＫ５／ＢＭＫ１阻害剤、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、およびＳｙｋ阻害剤（図１Ａ、図１Ｂ、図２Ａ、図２Ｂ、および図８Ａ〜図８Ｃ）。
【０２３６】
ＰＤＫ１阻害剤がＣＡＲ−Ｔ細胞増殖を増強できることをさらに確認するために、溶媒（ＤＭＳＯ）、ＰＩ３Ｋ阻害剤、またはＰＤＫ１阻害剤の存在下でＣＡＲ−Ｔ細胞を作製した。抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズによる活性化の１日後の、形質導入時に化合物を添加し、細胞をさらに６日間培養した。５人の健常ドナーからＣＡＲ−Ｔ細胞を作製した。回収後、ＣＤ８＋ＣＡＲ−Ｔ細胞の増殖を、フローサイトメーターで、細胞数計測用ビーズにより評価した。図２Ｃに示すように、５人中４人のドナーで、ＰＤＫ１ｉ処理が、溶媒処理との比較で、ＣＤ８＋ＣＡＲ−Ｔ細胞の増殖を有意に向上させており、全体的に見て、ＰＩ３Ｋ阻害剤で処理されたＣＡＲ−Ｔ細胞と比較した場合に、ＣＡＲ−Ｔ細胞の増殖において、より良好にではないにせよ、同等の性能を示した。
【０２３７】
さらに、種々のＴ細胞サブセット（Ｔｎ、Ｔｓｃｍ、Ｔｃｍ、Ｔｅｍ、およびＴｅｆｆ）間の発現差異に基づいて選択されたユニークな９６種の遺伝子パネルを用いて、化合物処理後のＴ細胞表現型の偏り（skewing）を決定または確認した。ＣＣＲ７、ＳＥＬＬ、ＣＤ２７、ＬＥＦ１、ＩＣＯＳ、ＮＥＬＬ２、ＴＥＳＰＡ１、ＰＲＫＣＡ、ＢＡＣＨ２、ＴＣＦ７、ＦＡＭ１２９Ａ、およびＬＲＮＮ３を含む、１２種の遺伝子群（Ｔｃｍミニパネル）は特に興味深く、この遺伝子群は、Ｔｅｍとの比較で、ＣＤ８  Ｔｃｍ細胞において差異が最も大きく発現されている（表２）。ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、およびＣＤ２７表面マーカー発現に基づく知見と一致して、溶媒と比較してＴｃｍ表現型を大きく増強する多くの化合物の能力が、マーカー遺伝子発現を用いて所与の化合物の細胞表現型を偏らせる能力の総合評価を与える、Ｔｃｍミニパネルスコアによってさらに確認された（図１Ｃ）。
【表２】
2020528885.tif 000003
【０２３８】
図１Ｃに示すように、１つを除く全ての試験化合物（化合物７は未試験）が、溶媒との比較で、Ｔｃｍミニパネルスコアを増加させた。最も高いＴｃｍミニパネルスコアを与える化合物群には、ＢＥＴ阻害剤、ＣＲＡＣチャネルＣａ流入遮断薬、ＥＲＫ５／ＢＭＫ１阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、およびＳｙｋ阻害剤が含まれる（図８Ｂ、カラム５）。
【０２３９】
疲弊マーカー（exhaustion marker）の発現に対するＴ細胞の化合物処理の効果を確認するため、４人の異なるドナーから得た細胞を準備して、表１の各化合物で処理した後、Ｔｉｍ−３発現（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｅｎｔｒｙ識別コード：Ｑ８ＴＤＱ０）についての染色を、フローサイトメトリーにより行った。Ｔ細胞の疲弊（exhaustion）は、エフェクター細胞の機能不良、並びにＰＤ−１およびＴｉｍ−３を含む疲弊マーカーの発現増加を特徴とする。「疲弊」によるＴ細胞の機能障害は、がんまたは感染症の適切な制御を妨げ得る状態である。すなわち、疲弊マーカー発現を減少させる戦略が、養子療法用の細胞では望ましい。図１Ｄに示すように、溶媒との比較で、複数の化合物がＴｉｍ−３発現を減少させている。図１ＤのＴｉｍ−３発現に関するスコアは、Ｔｉｍ−３発現の逆数として示されており；すなわち、１０ははるかに低い発現を例示しており、一方、１は溶媒処理細胞で確認されたより高い発現を規定している。ＢＥＴ阻害剤、ＣＲＡＣチャネルＣａ流入遮断薬、ＥＲＫ５／ＢＭＫ１阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、またはＳｙｋ阻害剤による処理において、Ｔｉｍ−３発現の減少の増強が最も顕著に確認された。本実施例におけるこのデータは、これらの阻害剤によるＴ細胞の処理が、免疫機能障害の一因となる細胞疲弊を低減することにより、Ｔ細胞の抗腫瘍能を増強することを示している。
【０２４０】
上記の解析によれば、表１の全ての化合物が以下のうちの少なくとも１つを可能とする：Ｔｃｍの割合の増加、細胞生存率／増殖の向上、または細胞疲弊の低減。ＢＥＴ阻害剤、ＣＲＡＣチャネルＣａ流入遮断薬、ＥＲＫ５／ＢＭＫ１阻害剤、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤、ＩＫＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、およびＳｙｋ阻害剤は、処理されたＴ細胞の複数の目的の表現型特性を向上させるためのＴ細胞免疫療法の強化において特に有益と思われる（図８Ａ〜図８Ｃ）。
【０２４１】
実施例３：選択された化合物で処理されたＴ細胞によるサイトカイン産生
Ｔ細胞が種々の刺激に応答できることはＴ細胞の機能において重要である。Ｔ細胞の非特異的刺激に応答して複数のサイトカインを産生する能力は、Ｔ細胞の「多機能性」の尺度となる。処理された細胞に対する表現型を偏らせる効果の点から、選択された化合物がこの「多機能的」応答に影響を与えるかどうかを評価するため、処理された細胞の、刺激後にインターフェロン−γ（ＩＦＮγ）、ＩＬ−２およびＴＮＦαを産生する能力を測定した。ＣＤ８＋Ｔ細胞を表１の化合物で処理した後、細胞をＰＭＡ／イオノマイシン混合物で４時間刺激した。刺激後、種々のフルオロフォアと結合した、これらのサイトカインを認識する、蛍光を発する抗体を用いる細胞内サイトカイン染色により、サイトカイン産生を測定した。蛍光はフローサイトメトリーを用いて測定した。３種類のうち少なくとも２種のサイトカインを産生していた場合に、細胞を多機能的と定義した。
【０２４２】
６種の試験化合物に関しての図３Ａから分かるように、５が溶媒よりも大きな多機能性を維持した。ＢＥＴ阻害剤であるＯＴＸ０１５によるＴ細胞の処理は、多機能性亜集団の総数を１６倍近く増加させ、３種全てのサイトカインを産生する細胞は１３倍近く増加させた（図３Ａ、図３Ｂ、および図３Ｄ）。興味深いことに、全ての試験化合物が、１種のサイトカイン（ＩＦＮγまたはＩＬ−２のいずれか）を産生するＴ細胞亜集団を有意に増加させた（図３Ｃ）。例えば、ＩＦＮγのみを産生する亜集団は、ＯＴＸ０１５（ＢＥＴ阻害剤）、ＡＺ６２８（Ｒａｆ阻害剤）、およびＧＳＫ２３３４４７０（ＰＤＫ１阻害剤）での処理後に、それぞれ約３３倍、約１１６倍、および約１０倍に増加し；一方、ＩＬ−２のみを産生する亜集団は、パクリチニブ（ＪＡＫ阻害剤）、トファシチニブ（ＪＡＫ阻害剤）、ＧＳＫ２３３４４７０、およびＡＺ６２８での処理後に、それぞれ、約１１倍、約４倍、約１９倍、および約１８倍に増加した（図３Ｄ）。加えて、ほぼ全ての化合物がＴＮＦ＋ＩＦＮ＋ダブルポジティブ集団を減少させた（図３Ａおよび図３Ｄ）。理論に束縛されるものではないが、１種のサイトカイン（ＩＦＮγまたはＩＬ−２）を産生する亜集団の全体的な増加、およびダブルポジティブＴＮＦ＋ＩＦＮ＋産生亜集団の減少は、特に、細胞表現型のセントラルメモリーＴ細胞への偏りによって説明され得る。例えば、Ｔｃｍは、主に静止状態であり、ＩＬ−２を分泌するが、エフェクター細胞系のサイトカインは分泌しない（Pepper et al., Nat Immunol. 2011, 12(6): 467-471; Flynn et al., Clin. Trans. Immunol. 2014, 3(7): e20-. Doi: 10. 1038/cti.2014. 16; Mahnke et al., Eur. J. Immunol. 2013, 43: 2797-2809）。
【０２４３】
実施例４：化合物で処理されたＴ細胞は、連続再刺激アッセイにおいて増殖の向上を示しながら、標的細胞を死滅させる
インビトロにおける連続的な殺滅／再刺激アッセイは、複数回にわたり、インビトロにおけるＣＡＲ−Ｔ細胞の腫瘍細胞を「除去」する能力を試験するアッセイであり、ＣＡＲに認識される抗原を発現する腫瘍細胞の存在下での、ＣＡＲ−Ｔ増殖を評価するためのモデルとして用いることができる。
【０２４４】
ＣＤ８  Ｔ細胞にＣＡＲを導入した後、その細胞を凍結保存した。解凍後、このＣＡＲ−Ｔ細胞を、近赤外蛍光タンパク質である導入されたｍＫａｔｅ２と、ＣＡＲによって認識される抗原であるＣＤ１９とを発現する、被照射Ｋ５６２腫瘍細胞と、共培養した。ＣＤ１９ＢＢｚ  ＣＡＲ−Ｔ細胞におけるＴｈｙ１．１および標的細胞におけるｍＫａｔｅ２の発現は、この連続的殺滅アッセイにおける、両細胞集団の簡易で信頼性のある同定および計数を可能にする。殺滅開始前に毎回、表１の各化合物を用いた異なる処理から生じたＣＡＲ−Ｔ細胞培養物間で、ＣＡＲ−Ｔ細胞の総数が同じになるよう、且つ、Ｋ５６２標的細胞に対するＣＡＲ−Ｔ細胞の比率が同じになるよう、細胞数を調整した。
【０２４５】
溶媒（ＤＭＳＯのみ）、ＰＤＫ１阻害剤（ＧＳＫ２３３４４７０）、Ｒａｆ阻害剤（ＡＺ６２８）、または別のＲａｆ阻害剤（ＧＤＣ−０８７９）で処理されたＣＡＲ−Ｔ細胞が、例示として図４Ａに含まれる。図４Ａは、溶媒または化合物で処理されたＣＡＲ−Ｔ細胞の存在下または非存在下で共培養された、ｍＫａｔｅ２を発現する標的細胞の、経時的な画像と細胞計数を行う、ＩｎｃｕＣｙｔｅＴＭ（エッセン・バイオサイエンス社（Essen Bioscience）、アナーバー）装置から得られたデータを示している。ＣＡＲ−Ｔ細胞の非存在下で培養された場合、照射のみの標的細胞は、経時的に約１０％の減数を示している。しかし、ＣＡＲ−Ｔ細胞の添加により、標的細胞数のはるかに速い減少がもたらされている。この化合物で処理された細胞は、未処理ＣＡＲ−Ｔ細胞と同様、Ｋ５６２標的細胞を尚も認識し溶解できる。図示されているように、初期の時点（２４〜６５時間）では、化合物で処理された細胞の標的細胞殺滅動態は溶媒処理の場合よりも遅かったが、７２時間後には、溶媒で処理されたＣＡＲ−Ｔ細胞および化合物で処理されたＣＡＲ−Ｔ細胞の両方において、同様の数の標的細胞が残存した（図４Ａ）。インキュベーション時間をさらに長くすると、全ての化合物処理Ｔ細胞により、標的細胞は完全に除去された（データ未記載）。化合物処理細胞の多くで確認されたよりゆっくりとした殺滅動態は、サイトカイン放出症候群をはじめとする腫瘍細胞殺滅のある種の副作用を低減することにより、臨床において有益となり得る。この解析では、ＣＤ１９を発現しないＫ５６２標的細胞がＣＤ１９ＢＢｚ  ＣＡＲ−Ｔ細胞によって殺滅されなかったことから（図示せず）、標的細胞数の減少がＣＤ１９依存性であることも示され、これにより、化合物による処理がＴ細胞の抗原特異性を変化させないことが明らかとなった。
【０２４６】
図４Ａに示すように、Ｉｎｃｕｃｙｔｅを用いて取得されたデータから、経時的な標的細胞数の減少をプロットできる。これから、ＣＡＲ−Ｔ細胞を各化合物で処理した場合の曲線下面積（ＡＵＣ）を算出できる。ＡＵＣは、殺滅速度と、標的細胞を除去するのにかかる時間の長さの両方の影響を受ける、各種処理下のＴ細胞の作用強度（殺滅能）を表す。ＣＡＲ−Ｔ細胞の殺滅能に対する化合物処理の影響を確認するため、標的細胞単独に対するＡＵＣを求めた。図４Ｂに示すように、標的細胞単独のＡＵＣを１．００に設定すると、溶媒で処理されたＴ細胞と共培養された標的細胞の相対ＡＵＣは０．５０となる。また、Ｔ細胞を表１の追加の化合物で処理した場合の相対ＡＵＣを、図４Ｂに示す。興味深いことに、連続的な殺滅／再刺激アッセイの開始時に、化合物で処理されたＣＡＲ−Ｔ細胞のほとんどが、未処理ＣＡＲ−Ｔ細胞のＡＵＣよりも大きなＡＵＣを有しているように見えるが、これは、少なくとも初回の殺滅においては作用強度が減少していることを示している。しかしながら、化合物で処理されたＣＡＲ−Ｔ細胞は、複数回にわたって、標的細胞を除去することができた。理論に束縛されるものではないが、これは、これらの化合物が、完全なエフェクター機能を有するより分化度の高いＴ細胞ほどの効力を最初は持たない、分化度の低い、若い（すなわちメモリー様）Ｔ細胞の集団を維持するという所見によって説明することができる。上記の実施例で示したように、この見解は、これらの処理された細胞の表現型プロファイリングおよび増殖能における所見と一貫している。
【０２４７】
さらに、標的細胞を殺滅中の処理されたＴ細胞の増殖能を評価するために、連続的な再刺激アッセイを実施した。連続再刺激アッセイの３回目および４回目まで、化合物で処理されたＣＡＲ−Ｔ細胞の細胞数の増大が、有意な増殖減少を示す溶媒対照と比較して、はるかにより多いことが示されている（図５Ａおよび図５Ｂ）。すなわち、表１の化合物によって例示される薬剤クラスによる処理は、複数回の殺滅／再刺激を通じて、Ｔ細胞の増殖を増加させることが可能である。各化合物処理下での４回全てを通じたＣＡＲ−Ｔ細胞数の総増殖も求めたところ、処理されたＣＡＲ−Ｔ細胞の全てが、溶媒対照と比較してより多くの増殖を示した（図５Ｃ）。まとめると、これらのデータは、化合物処理が、標的腫瘍細胞に複数回暴露される場合でも、処理されたＴ細胞の増殖を持続させ且つ増加する所望の効果を与え得ることを示している。長期間に亘って示される細胞増殖と併せた殺滅能は、迅速な腫瘍細胞の殺滅によるサイトカイン放出症候群のリスクの減少に加えて、細胞の残留性を示すものである。連続的な再刺激／殺滅アッセイに基づいた、表１の全ての選択された化合物の相対的スコアリングを、図８Ｃのカラム９〜１２にさらにまとめる。図から分かるように、ＢＥＴ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、およびＳｙｋ阻害剤は、標的細胞殺滅能および特異性を維持しながらの、再刺激下のＴ細胞の増殖向上に対して、最も一貫性のある、最も高いレベルの影響を与える。
【０２４８】
実施例５：選択された化合物群による処理下でのＴ細胞の代謝プロフィールの変化
細胞は通常、解糖および酸化的リン酸化という、２つの主要なエネルギー経路を利用する。ストレスまたは仕事の増加に応答してエネルギーを生産する細胞で臨時の能力として利用される、ミトコンドリアの予備呼吸能（spare respiratory capacity）（ＳＲＣ）は、メモリーＴ細胞では増加しているが、ＴｅｍｒａなどのエフェクターＴ細胞では増加していないことが示されている（van der Windt and Pearce 2012）。しかし、ＳＲＣの増加と、酸化的リン酸化への依存が、ＣＤ８＋メモリーＴ細胞にとって必須ではない場合もある（Phan et al. 2016）。Van der Windt and PearceとPhan et al.とによる発表には相違が認められるが、これらの発表から、また本明細書における所見から、Ｔ細胞代謝の変化がＴ細胞機能と関連があることは明らかである。
【０２４９】
化合物処理がＣＤ８＋ＣＡＲ−Ｔ細胞の代謝に影響を与えるかどうかについて調べた。処理後、細胞を非緩衝化アッセイ用培地で洗浄し、それに再懸濁した後、９６ウェルアッセイ用プレートに播種し、Ｓｅａｈｏｒｓｅ（商標）ミトストレス検査用アッセイにかけて、基底ＯＣＲを測定した。イオノフォアＦＣＣＰをアッセイ用プレートに添加した後、細胞の最大ＯＣＲを測定した。次に、基底ＯＣＲと最大ＯＣＲとの差に基づいて、ＳＲＣを求めた。２人のドナーから得られた処理されたＴ細胞の平均的なＳＲＣおよび基底ＯＣＲを、図６Ａ〜図６Ｂに示す。化合物で処理されたＴ細胞の大部分が、溶媒対照と比較して、ＳＲＣおよび基底ＯＣＲの両方がより低くなり、ＩＫＫ阻害剤およびＳｙｋ阻害剤はＳＲＣおよび基底ＯＣＲを有意に減少させた。ＣＤＫ阻害剤またはＬｃｋ阻害剤で処理されたＴ細胞は溶媒対照と同様のＳＲＣを維持し；ＣＲＡＣチャネルＣａ流入遮断薬、ＥＲＫ５／ＢＭＫ１阻害剤、またはＬｃｋ阻害剤で処理されたＴ細胞は溶媒対照と同様の基底ＯＣＲを維持した（図６Ａおよび図６Ｂ）。さらに、ＣＲＡＣチャネルＣａ流入遮断薬で処理されたＴ細胞は、溶媒対照との比較で、同様のＯＣＲを維持しながら、ＳＲＣの増加を示している。これらのデータは、選択された化合物による処理が処理されたＴ細胞の代謝プロフィールを変化させ得ることを示している。
【０２５０】
実施例６：選択された化合物で処理されたＴ細胞のインビボプロファイリング
ＣＡＲ−Ｔ細胞のインビボにおける機能性を調べるために設計されたＣＤ１９＋異種移植モデルを用いて、選択された化合物で処理後の細胞の腫瘍除去能を特徴付けした。簡潔に説明すると、最適以下の治療量の化合物で処理されたＣＤ１９標的化ＣＡＲ−Ｔ細胞を、Ｎａｌｍ−６−ｌｕｃ  ＣＤ１９＋播種性腫瘍を担持するＮＳＧマウスに投与した。このストレス試験（すなわち、腫瘍の制御または除去に失敗するであろう最適量以下のＣＡＲ−Ｔ細胞を用いた試験）によって、化合物処理の結果としてＣＡＲ−Ｔ細胞が獲得したあらゆる優位性の検知が可能となる。ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞にＣＡＲを導入し、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８ビーズで活性化した。これらのＣＤ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞およびＣＤ８＋ＣＡＲ−Ｔ細胞を、溶媒または表１の化合物と共に培養した。６日間の処理が完了した後、これらのＣＤ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞およびＣＤ８＋ＣＡＲ−Ｔ細胞を凍結保存した。処理されたＴ細胞を解凍後、ＣＤ４＋Ｔ細胞とＣＤ８＋Ｔ細胞とを１：１比で混合し、約２．５×１０５細胞の投与量でマウスに投与した。Ｎａｌｍ−６−ｌｕｃ  ＣＤ１９＋腫瘍細胞が発現するルシフェラーゼの量に基づいて各マウスにおける総輝度（total radiance）を測定する、ＩＶＩＳ  Ｌｕｍｉｎａ  Ｓｅｒｉｅｓ  ＩＩＩイメージングシステム（マサチューセッツ州ウォルサム）を用いて、腫瘍量を測定した。
【０２５１】
溶媒（ＤＭＳＯ）またはそれぞれの化合物で処理されたＣＡＲ−Ｔ細胞を投与されたマウスにおける腫瘍成長を比較した。図７は、ＣＡＲ−Ｔ群をそれぞれの化合物で処理した場合の、実験期間中の発光について算出された、ＡＵＣ（曲線下面積）を示している。一般に、ＡＵＣが低いほど、動物内の腫瘍細胞はより少なく、移植細胞が媒介する腫瘍除去はより良好となる。図示されるように、試験化合物の中で、Ｓｙｋ阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、ＰＤＫ１阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、およびＩＧＦ−１Ｒ阻害剤が、ＤＭＳＯとの比較で、腫瘍除去の改善をもたらした（図７）。
【０２５２】
さらに、腫瘍除去中および腫瘍除去後の、化合物で処理されたＣＡＲ−Ｔ細胞のインビボ残留性も調べた。患者におけるＣＡＲ−Ｔ細胞療法の成功の主要な関連要因の１つとして、ＣＡＲ−Ｔ細胞の残留性（すなわち、インビボにおける細胞生存および／または細胞増殖を通じた残留性）がある。ＣＡＲ−Ｔ細胞のインビボ残留性をモデル化するため、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞を別々に増殖させ、ＣＡＲ−Ｔ２Ａ−Ｔｈｙ１をコードするレンチウイルスで遺伝子導入し、ＤＭＳＯまたはＣＡＲ−Ｔ２Ａ−ＧＦＰをコードするレンチウイルスの存在下で培養し、試験化合物（表３）の存在下で培養した。次に、マウスのコホートに、２つの異なる増殖プロトコルから得られたＣＡＲ−Ｔ細胞サブセットから構成される、およそ１：１：１：１比で混合された、治効量（２×１０６）のＣＡＲ−Ｔ細胞を注射した。この注射用混合物中のＣＡＲ−Ｔ細胞サブセットの初期比は、注射前にさらに決定された。このコホートの全てのマウスは、４日前にＮａｌｍ−６−ｌｕｃ細胞を投与されていたが、注射されたＣＡＲ−Ｔ細胞により腫瘍を除去することができた。
【表３】
2020528885.tif 000004
【０２５３】
ＣＡＲ−Ｔ細胞注射の７日後、１５日後、２１日後、および３２日後（０日目：腫瘍移植、４日目：ＣＡＲ−Ｔ細胞注射）に、マウスを屠殺し、脾臓および骨髄の両方で、ＤＭＳＯまたは試験化合物の存在下で増殖したＣＡＲ−Ｔ細胞の相対比を求めた。ＣＡＲ−Ｔ細胞のインビボ残留性に対するＰＤＫ１阻害剤処理の影響を図９に例示する。図から分かるように、ＣＡＲ−Ｔ細胞注射の７日後に回収された細胞の相対比に有意な変化はなく、注射直後に示された頻度がおおよそ反映されていた。しかし、脾臓および骨髄などの二次リンパ器官では、注射の１５日後と、それ以後の全ての時点で、ＰＤＫ１阻害剤で処理されたＣＡＲ−Ｔ（ＣＤ８＋およびＣＤ４＋）細胞の比率は、ＤＭＳＯで処理されたＣＡＲ−Ｔ細胞と比較して、有意に増加していた。これは、ＰＤＫ１阻害剤で処理されたＣＡＲ−Ｔ細胞のインビボにおける残留性および適応度の増加を示すものであり、より持続的なＣＡＲ−Ｔ細胞応答と、腫瘍再発の予防を可能にし得る。
【０２５４】
ＣＡＲ−Ｔ細胞の製造に対するＰＤＫ１阻害剤による調節とＰＩ３Ｋ阻害剤による調節の影響を比較するため、溶媒（ＤＭＳＯ）、ＰＩ３Ｋ阻害剤（例えば、ＰＩ１０３）、またはＰＤＫ１阻害剤（例えば、化合物２１）の存在下で、８日間かけて、ＣＡＲ−Ｔ細胞を製造した。製造プロセスの終わりに、以後の機能解析に先立ち、細胞を凍結した。
【０２５５】
凍結保存されたＣＡＲ−Ｔ細胞を解凍し、抗原を有する照射された標的細胞の存在下で共培養する連続再刺激アッセイにおいて、溶媒、ＰＩ３Ｋ阻害剤、またはＰＤＫ１阻害剤の存在下で製造されたＣＡＲ−Ｔ細胞の、複数回の抗原刺激を通じて増殖する能力を測定した。３〜４日毎に、ＣＡＲ−Ｔ細胞および標的細胞の比をおよそ１：１に再調整した。連続再刺激アッセイを通じて（図１０Ａ）、さらに、総増殖により測定されたように（図１０Ｂ）、ＰＤＫ１阻害剤の存在下で生じたＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＤＭＳＯ溶媒対照およびＰＩ３Ｋ阻害剤で処理されたＣＡＲ−Ｔ細胞と比較して、より多く増殖した。ＣＡＲ−Ｔ細胞の刺激に抗原を有する照射された標的細胞を用いる代わりに、溶媒、ＰＩ３Ｋｉ、またはＰＤＫ１ｉの存在下で製造された、３人の独立したドナー由来の、凍結保存されたＣＡＲ−Ｔ細胞を、Ｔ細胞増殖培地で解凍し、その後、ビーズに結合した抗ＣＡＲ抗体による１４日間に亘る刺激下の増殖のＡＵＣ（曲線下面積）によって測定される、増殖および生存の評価を行った。製造中のＰＤＫ１阻害剤処理は、３人全ての試験ドナーにおいて、ＤＭＳＯの存在下で生じたＣＡＲ−Ｔ細胞と比較して、ＣＤ１９  ＣＡＲ−Ｔ細胞およびＢＣＭＡ  ＣＡＲ−Ｔ細胞の両方の全体的な蓄積を向上させた（図１０Ｃおよび図１０Ｄ）。さらに、ＰＤＫ１阻害剤の存在下で生じた、ＣＤ１９  ＣＡＲ−Ｔ細胞およびＢＣＭＡ  ＣＡＲ−Ｔ細胞の両方の増殖および生存は、ＰＩ３Ｋ阻害剤の存在下で生じたものと同等であった。
【０２５６】
インビトロで繰り返し再刺激を受けたＣＡＲ−Ｔ細胞の多機能性を評価するため、上記のように細胞に３回のインビトロ抗原刺激を行った後、ＤＭＳＯまたはＰＤＫ１阻害剤で処理されたＣＤ１９  ＣＡＲ−Ｔ細胞に対して、細胞内サイトカイン染色を実施した。それぞれの刺激では、ＤＭＳＯまたはＰＤＫ１阻害剤で処理されたＣＡＲ−Ｔ細胞を、照射されたＫ５６２−ＣＤ１９標的細胞と１：１比で一晩共培養した。この共培養の後、ＣＡＲ−Ｔ細胞を、タンパク質輸送阻害剤の存在下、ＰＭＡおよびイオノマイシンで刺激し、さらに４時間インキュベートした。次に、細胞を洗浄し、固定し、透過処理し、フローサイトメトリーによるＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−２、およびＣＤ１０７ａ発現用に染色した。化合物で処理されたＣＡＲ−Ｔ細胞の各タイプにより産生された、サイトカインの組み合わせを算出することにより、多機能性を求めた。図１１Ａに示すように、ＰＤＫ１阻害剤で処理された、ＣＤ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞集団およびＣＤ８＋ＣＡＲ−Ｔ細胞集団の両方が、ＤＭＳＯとの比較で、３または４つのエフェクター機能を引き出し得る細胞をより高い割合で含み、このことは、ＰＤＫ１阻害剤処理を伴うＣＡＲ−Ｔ製造が、ＣＡＲ−Ｔ細胞の多機能性も増加させ得ることを示唆している。サイトカイン産生のさらなる動態解析を、（ｉ）解凍の直後（０日目）、並びに（ｉｉ）抗ＣＡＲ抗体で活性化および増殖を惹起した１４日後に、ＣＡＲ−Ｔ細胞を抗原提示細胞で刺激することによって、ＭＳＤ解析により実施した。図１１Ｂおよび図１１Ｃから分かるように、ＰＤＫ１阻害剤の存在下で生じたＣＤ１９  ＣＡＲ−Ｔ細胞およびＢＣＭＡ  ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＤＭＳＯ処理下で作製されたＣＡＲ−Ｔ細胞と比較して、解凍直後には、総じてより多量のＩＬ−２を産生していた。解凍後のＩＦＮγ産生およびＴＮＦ産生は、ＰＤＫ１阻害剤で処理されたＣＡＲ−Ｔ細胞とＤＭＳＯで処理されたＣＡＲ−Ｔ細胞との間で同等であった。ＣＡＲ活性化の１４日後、ＰＤＫ１処理ＣＡＲ−Ｔ細胞およびＤＭＳＯ処理ＣＡＲ−Ｔ細胞の両方を、抗原提示標的細胞で再度刺激し、サイトカイン産生を同様に評価した。解凍後と比較して、ＩＬ−２、ＩＦＮγ、およびＴＮＦの全体的なサイトカイン産生が、刺激の１４日後には減少していたが、ＰＤＫ１阻害剤の存在下で生じたＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＤＭＳＯ処理ＣＡＲ−Ｔ細胞との比較で、全体的により多量のＩＬ−２を発現した。
【０２５７】
次に、ＰＩ３Ｋ阻害剤またはＰＤＫ１阻害剤の存在下で製造されたＣＡＲ−Ｔ細胞を、腫瘍除去についてさらに特徴付けするために、インビボアッセイを実施した。ＮＳＧマウスにヒト白血病株Ｎａｌｍ−６を注射した。４日後、マウスに、溶媒（「ＤＭＳＯ」、ｎ＝８）、ＰＩ３Ｋ阻害剤（ｎ＝８）、またはＰＤＫ１阻害剤（ｎ＝８）の存在下で生じた、最適量以下（３×１０５）の、新鮮な解凍後のＣＤ１９  ＣＡＲ−Ｔ細胞を処置した。また、一部の腫瘍担持マウス（ｎ＝２）には、ＣＡＲを遺伝子導入されなかった増殖後のＴ細胞を投与した（未導入または「ＵＮＴＤ」）。陰性対照マウス（ｎ＝２、「Ｕｎｍａｎｉｐ」）には、腫瘍もＣＡＲＴ細胞も投与しなかった。図１２Ａから分かるように、この最適量以下のＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＤＭＳＯ下で作製されたＣＡＲ−Ｔ細胞を投与されたマウスを保護できない。一方、この低投与量のＣＡＲ−Ｔ細胞においてでさえ、ＰＤＫ１阻害剤またはＰＩ３Ｋ阻害剤の存在下で作製されたＣＡＲ−Ｔ細胞を投与されたマウスは、生存の延長を示した。さらなる証明において、ＮＳＧマウスに別のヒト腫瘍株であるＲａｊｉを静脈内移植した。７日後、ＤＭＳＯ、ＰＤＫ１阻害剤、またはＰＩ３Ｋ阻害剤の存在下で製造された、最適量以下（２．５×１０５）のＣＤ１９  ＣＡＲ−Ｔ細胞を移植し、その腫瘍担持マウスの生存をモニターした。ＰＤＫ１阻害剤またはＰＩ３Ｋ阻害剤の存在下で作製されたＣＡＲ−Ｔ細胞を投与されたマウスの生存は、ＤＭＳＯ処理ＣＡＲ−Ｔ細胞を投与されたマウスとの比較で、大幅に改善した（図１２Ｂ）。
【０２５８】
選択された化合物で調製されたＣＡＲ−Ｔ細胞による、腫瘍の除去および制御をさらに評価するため、二段階の腫瘍除去モデルを確立した。図１３Ａに示すように、ＮＳＧマウスに５×１０５個のルシフェラーゼ発現Ｎａｌｍ６腫瘍細胞を静脈注射し；４日後、その腫瘍担持マウスに、それぞれＤＭＳＯ、ＰＩ３Ｋｉ（例えば、ＰＩ−１０３）、およびＰＤＫ１阻害剤の存在下で作製された、計３×１０６個のＣＤ１９  ＣＡＲ−Ｔ（ＣＤ４：ＣＤ８が１：１比）を注射し；最初の腫瘍注射の４７日後、ＩＶＩＳイメージングで測定した場合に、腫瘍が永続的に除去されていた全てのマウスに、ＣＤ１９およびルシフェラーゼを両方発現するように操作された５×１０６個のＫ５６２腫瘍細胞を、皮下に再暴露した。二次腫瘍量を隔週のノギス測定およびＩＶＩＳイメージングにより測定した。ＩＶＩＳ対照マウスには腫瘍もＣＡＲ−Ｔ細胞も投与せず、ＩＶＩＳイメージング装置のバックグラウンド発光として用いた。
【０２５９】
図１３Ｂおよび図１３Ｃから分かるように、ＣＡＲ−Ｔ細胞は概して迅速で持続的な腫瘍制御をもたらした。ＤＭＳＯ処理ＣＡＲ−Ｔ細胞を投与された８匹中６匹のマウス、ＰＩ１０３処理ＣＡＲ−Ｔ細胞を投与された８匹中７匹のマウス、およびＰＤＫ１阻害剤処理ＣＡＲ−Ｔ細胞を投与された７匹全てのマウスが、１〜３週間以内に、一次Ｎａｌｍ６腫瘍を形成および除去した。ＣＡＲ−Ｔ細胞を含まない注射を受けた腫瘍担持マウスは、急速な腫瘍成長を示した（図１３Ｂ）。ＰＤＫ１阻害剤処理ＣＡＲ−Ｔ細胞は、最初の腫瘍注射の１１日後に、ＤＭＳＯ処理ＣＡＲ−Ｔ細胞およびＰＤＫ１阻害剤処理ＣＡＲ−Ｔ細胞の両方に対し、有意に（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、ｐ＜０．０００１、クラスカル・ウォリスの一元配置分散分析）大きなインビボ有効性を示した（図１３Ｃ）。それ以後の時点では、全ての群がＮａｌｍ６腫瘍を形成および除去したため、ＣＡＲ−Ｔ処置群の間で有意差はなかった。
【０２６０】
最初の腫瘍注射の４７日後、最初の腫瘍を持続的に除去した全てのマウスに、ＣＤ１９およびルシフェラーゼを両方発現するように操作された５×１０６個のＫ５６２腫瘍細胞を、皮下に再暴露した。図１３Ｄから分かるように、ＤＭＳＯ処理ＣＡＲ−Ｔ細胞を含む６匹中５匹のマウスが、二次腫瘍を制御することができず、急速な腫瘍成長を示した（図１３Ｄ、左パネル）。さらに、ＰＩ−１０３処理ＣＡＲ−Ｔ細胞（図１３Ｄ、中央パネル）はＤＭＳＯ処理ＣＡＲ−Ｔ細胞と比較してより良好な働きを示しているが、ＰＤＫ１処理ＣＡＲ−Ｔ（図１３Ｄ、右パネル）はより優れた、迅速な二次腫瘍制御を示した。７匹中４匹のＰＤＫ１処理ＣＡＲ−Ｔ細胞を投与したマウスの腫瘍がノギス測定による検出レベル未満となったため、Ｋ５６２再暴露の１６日後にその腫瘍部位に対して局所的なＩＶＩＳイメージングを実施して、腫瘍量のより正確な定量を行った（固形腫瘍のＩＶＩＳイメージングが＞１０１０の輝度で飽和することに注意）。図１３Ｅから分かるように、腫瘍対照マウスおよびＤＭＳＯ処理ＣＡＲ−Ｔ細胞を投与されたマウスと比較して、ＰＤＫ１処理ＣＡＲ−Ｔ細胞を投与されたマウスの中で、二次腫瘍量は有意に（＊ｐ＜０．０５、クラスカル・ウォリスの一元配置分散分析）より少なかった。これらの結果は、ＰＤＫ１阻害剤の存在下で製造されたＣＡＲ−Ｔ細胞が、おそらくはインビボにおける（ｉ）残留性、（ｉｉ）エフェクター機能、および／または（ｉｉｉ）腫瘍浸潤の改善のために、二次的な腫瘍再暴露後に、より大きな有効性を示すことを示している。
【０２６１】
健常ドナー（ｎ＝３）由来のＣＤ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞およびＣＤ８＋ＣＡＲ−Ｔ細胞をレンチウイルスによる遺伝子導入で作製し、インビトロにおいて、溶媒対照（ＤＭＳＯ）、ＰＩ３Ｋ阻害剤、またはＰＤＫ１阻害剤の存在下で、８日間増殖させた。細胞を凍結し、その後解凍し、休ませた後、転写プロフィールについて解析した。ＣＤ８＋細胞から得られた全ＲＮＡを、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ  Ｈｕｍａｎ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ  Ａｒｒａｙ  ＧｅｎｅＣｈｉｐ（ＨＴＡ−２．０；サーモフィッシャー社、マサチューセッツ州ウォルサム）で解析した。ユークリッド類似度測定（Euclidean similarity measurement）を用いて、発現差異が有意な３００種を超える遺伝子（発現差異が２倍を超え、Ｆ検定で＜０．０５）について、全試料の完全連結階層的クラスター分析（complete linkage hierarchical clustering）を実施した。図１４Ａの色分けされた遺伝子発現ヒートマップ（青＝発現減少、赤＝発現増加）は、Ｚスコアにより正規化した遺伝子発現レベルを可視化している。このヒートマップは、ＤＭＳＯで処理されたＣＡＲ−Ｔ細胞と比較した場合に、化合物で処理されたＣＡＲ−Ｔ細胞の転写プロフィールが変化していることを示している。さらに、ＰＩ３Ｋｉで処理されたＣＤ８  Ｔ細胞とＰＤＫ１ｉで処理されたＣＤ８  Ｔ細胞との間で発現に差がある遺伝子セットも存在する。ＣＤ４細胞およびＣＤ８細胞について、図１４Ａと同じ細胞調製物を用いた並列の転写解析アプローチとして、ＲＮＡｓｅｑ解析を用いた、ＰＩ３Ｋｉ処理コホートまたはＰＤＫ１ｉ処理コホートにおける遺伝子発現の差異を図１４Ｂに示すが、これは、３人のドナー間で平均された、処理（ＰＤＫ１ｉまたはＰＩ３Ｋｉ）ＣＡＲ−Ｔ細胞と溶媒（ＤＭＳＯ）ＣＡＲ−Ｔ細胞とを比較した場合の、遺伝子発現の差異を示している。図１４Ｂは、いずれかのコホートにおいて調整済みｐ値により有意であった遺伝子について、ＰＤＫ１ｉ処理もしくはＰＩ３Ｋｉ処理による発現差異がある重複遺伝子（青色または緑色のシンボル）、またはＰＩ３Ｋｉ処理細胞で発現差異があるユニークな遺伝子（赤色シンボル）、またはＰＤＫ１ｉ処理細胞で発現差異があるユニークな遺伝子（紫シンボル）、を示している。図から分かるように、溶媒との比較で、いずれかの化合物の存在下で培養されたＣＡＲ−Ｔ細胞間には、転写プロフィールに有意差があった。さらに、ＰＩ３Ｋ阻害剤の存在下で作製されたＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＰＤＫ１阻害剤の存在下で作製されたＣＡＲ−Ｔ細胞によって示されたパターンと全く異なる発現パターンを示しており、これは、これらの阻害剤により媒介されるシグナル経路（例えば、ＡＫＴ非依存性のＰＤＫ１経路に対しＡＫＴ依存性のＰＩ３Ｋ経路）および作用機序が異なる可能性があることを示唆している。
【０２６２】
本明細書に記載された全ての解析から示されるように、ＰＤＫ１阻害剤により誘導されたＣＡＲ−Ｔ細胞は、複数回のインビトロ連続再刺激にわたっての増殖の改善；抗原提示標的細胞への事前の複数回のインビトロ暴露のなかでの、殺腫瘍効率の改善；疲弊に対するより大きな耐性；インビボにおける腫瘍除去中および腫瘍除去後の二次リンパ器官への生着およびホーミングの増加；並びに、腫瘍除去後の生存の延長、を示した。ＰＤＫ１阻害剤により誘導されたＣＡＲ−Ｔ細胞の増殖は、より多機能的で、特異な遺伝子発現シグネチャーを有するＣＡＲ−Ｔ細胞をもたらした。これらの結果は、ＰＤＫ１阻害剤の存在下で作製されたＣＡＲ−Ｔ細胞組成物が、インビボにおいて重要な機能的利点を付与する形で、Ｔ細胞の生物学的性質を変化させ得ることを示している。
【０２６３】
当業者であれば、本明細書に記載の方法、組成物、および製品が、例示的な実施形態の代表的なものであり、本発明の範囲に対する限定を意図していないことを、容易に理解するだろう。本発明の範囲および精神から逸脱しない範囲で、本開示に様々な代替および変更を加えてよいことは、当業者には容易に理解される。
【０２６４】
本明細書に記載された全ての特許及び刊行物は、個々の刊行物が参照により援用されると明確且つ個別に示された場合と同程度に、参照により本明細書に援用される。本明細書に例示として記載された本開示は、本明細書に明確には開示されていない１または複数のいかなる要素、制限が存在せずとも、好適に実施することができる。すなわち、例えば、本明細書におけるどの場合において、用語「を含む」、「から本質的になる」、および「からなる」のいずれも、他の２つの用語のいずれかと置き換えることができる。使用された用語および表現は、限定ではなく説明のための用語として使用されており、そのような用語および表現の使用に際して、図示および説明された特徴のいかなる均等物またはその一部を除外する意図は無く、ただし、特許請求された本開示の範囲内で様々な変更形態が可能であると認識される。すなわち、本開示は好ましい実施形態および任意の特徴によって具体的に開示されたが、本明細書で開示された概念の変更および変形が当業者により行われてもよいこと、並びに、そのような変更および変形が添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲内であると見なされることを理解されたい。
【図１−１】
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【図１−２】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図３−１】
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【図３−２】
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【図３−３】
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【図４−１】
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【図４−２】
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【図５−１】
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【図５−２】
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【図６】
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【図７】
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【図８−１】
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【図８−２】
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【図８−３】
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【図９】
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【図１０−１】
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【図１０−２】
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【図１１−１】
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【図１１−２】
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【図１１−３】
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【図１２】
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【図１３−１】
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【図１３−２】
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【図１３−３】
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【図１４−１】
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【図１４−２】
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【国際調査報告】
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