(57)【要約】ＣＤ３に結合するドメイン、半減期延長ドメイン、およびＢＣＭＡに結合するドメインを含む、Ｂ細胞成熟剤（ＢＣＭＡ）標的三重特異性タンパク質が本明細書で提供される。さらに、その医薬組成物、同様に、ＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質を作るための核酸、組換え発現ベクター、および宿主細胞も提供される。さらに、疾患、疾病、および障害の予防および／または処置において、開示されたＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質を使用する方法も開示される。【選択図】図３０
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｂ細胞成熟剤（ＢＣＭＡ）結合三重特異性タンパク質であって、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は：
（ａ）ヒトＣＤ３に特異的に結合する第１のドメイン（Ａ）；
（ｂ）半減期延長ドメインである第２のドメイン（Ｂ）；および、
（ｃ）ＢＣＭＡに特異的に結合する第３のドメイン（Ｃ）を含み、
ここで、ドメインは、Ｈ２Ｎ−（Ａ）−（Ｃ）−（Ｂ）−ＣＯＯＨ、Ｈ２Ｎ−（Ｂ）−（Ａ）−（Ｃ）−ＣＯＯＨ、Ｈ２Ｎ−（Ｃ）−（Ｂ）−（Ａ）−ＣＯＯＨ、Ｈ２Ｎ−（Ｃ）−（Ａ）−（Ｂ）−ＣＯＯＨ、Ｈ２Ｎ−（Ａ）−（Ｂ）−（Ｃ）−ＣＯＯＨ、または、Ｈ２Ｎ−（Ｂ）−（Ｃ）−（Ａ）−ＣＯＯＨの順序で結合し、ここで、ドメインはリンカーＬ１およびＬ２によって結合される、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質。
【請求項２】
第１のドメインは、各々がヒトＣＤ３に特異的に結合することができる、可変軽鎖ドメインと可変重鎖ドメインとを含む、請求項１に記載のＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質。
【請求項３】
第１のドメインはヒト化されるか、あるいはヒトである、請求項１に記載のＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質。
【請求項４】
第２のドメインはアルブミンに結合する、請求項１に記載のＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質。
【請求項５】
第２のドメインはｓｃＦｖ、可変重鎖ドメイン（ＶＨ）、可変軽鎖ドメイン（ＶＬ）、ＶＨＨドメイン、ペプチド、リガンド、あるいは小分子を含む、請求項１に記載のＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質。
【請求項６】
第３のドメインは、ＢＣＭＡに特異的に結合する、ＶＨＨドメイン、ｓｃＦｖ、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、非Ｉｇドメイン、リガンド、ノッチン、あるいは小分子実体を含む、請求項１に記載のＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質。
【請求項７】
第３のドメインはＶＨＨドメインを含む、請求項６に記載のＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質。
【請求項８】
前記ＶＨＨドメインは、相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、ここで、
（ａ）ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７ＰＸ８Ｇ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）に記載されるとおりであり、Ｘ１はＴあるいはＳであり；Ｘ２はＮ、Ｄ、あるいはＳであり；Ｘ３はＩ、Ｄ、Ｑ、Ｈ、Ｖ、あるいはＥであり；Ｘ４はＦ、Ｓ、Ｅ、Ａ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｉ、Ｄ、Ｑ、Ｐ、Ｒ、あるいはＧであり；Ｘ５はＳ、Ｍ、Ｒ、あるいはＮであり；Ｘ６はＩ、Ｋ、Ｓ、Ｔ、Ｒ、Ｅ、Ｄ、Ｎ、Ｖ、Ｈ、Ｌ、Ａ、Ｑ、あるいはＧであり；Ｘ７はＳ、Ｔ、Ｙ、Ｒ、あるいはＮであり；および、Ｘ８はＭ、Ｇ、あるいはＹであり；
（ｂ）ＣＤＲ２のアミノ酸配列はＡＩＸ９ＧＸ１０Ｘ１１ＴＸ１２ＹＡＤＳＶＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２）に記載される通りであり、ここで、Ｘ９はＨ、Ｎ、あるいはＳであり；Ｘ１０はＦ、Ｇ、Ｋ、Ｒ、Ｐ、Ｄ、Ｑ、Ｈ、Ｅ、Ｎ、Ｔ、Ｓ、Ａ、Ｉ、Ｌ、あるいはＶであり；Ｘ１１はＳ、Ｑ、Ｅ、Ｔ、Ｋ、あるいはＤであり；および、Ｘ１２はＬ、Ｖ、Ｉ、Ｆ、Ｙ、あるいはＷであり；ならびに、
（ｃ）ＣＤＲ３のアミノ酸配列はＶＰＷＧＸ１３ＹＨＰＸ１４Ｘ１５ＶＸ１６（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３）に記載されるとおりであり、ここで、Ｘ１３はＤ、Ｉ、Ｔ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｅ、Ｓ、あるいはＹであり；Ｘ１４はＲ、Ｇ、Ｌ、Ｋ、Ｔ、Ｑ、Ｓ、あるいはＮであり；Ｘ１５はＮ、Ｋ、Ｅ、Ｖ、Ｒ、Ｍ、あるいはＤであり；および、Ｘ１６はＹ、Ａ、Ｖ、Ｋ、Ｈ、Ｌ、Ｍ、Ｔ、Ｒ、Ｑ、Ｃ、Ｓ、あるいはＮであり；ここで、ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９９ではなく、ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６００ではなく、および、ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６０１ではない、請求項７に記載のＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質。
【請求項９】
ＶＨＨドメインは以下の式：
ｆ１−ｒ１−ｆ２−ｒ２−ｆ３−ｒ３−ｆ４
を含み、
式中、ｒ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１であり；ｒ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２であり；および、ｒ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３であり；ここで、ｆ１、ｆ２、ｆ３、およびｆ４は、前記ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質がＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４６あるいは５９８で記載されるアミノ酸配列に対して約８０パーセント（８０％）〜約９９％同一であるように、選択されたフレームワーク残基である、請求項８に記載のＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質。
【請求項１０】
ｒ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：４−１１７のいずれか１つとして記載されるアミノ酸配列を含む、請求項９に記載のＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質。
【請求項１１】
ｒ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：１１８−２３１のいずれか１つとして記載されるアミノ酸配列を含む、請求項９に記載のＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質。
【請求項１２】
ｒ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：２３２−３４５のいずれか１つとして記載されるアミノ酸配列を含む、請求項９に記載のＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質。
【請求項１３】
ＶＨＨドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：３４６−４６０のいずれか１つとして記載されるアミノ酸配列を含む、請求項９に記載のＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質。
【請求項１４】
Ｆ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６１または４６２を含む、請求項９に記載のＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質。
【請求項１５】
Ｆ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６３を含む、請求項９に記載のＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質。
【請求項１６】
Ｆ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６４または４６５を含む、請求項９に記載のＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質。
【請求項１７】
Ｆ４はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６６または４６７を含む、請求項９に記載のＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質。
【請求項１８】
ｒ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７６、１１４、１１５、１１６、または１１７を含む、請求項９に記載のＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質。
【請求項１９】
ｒ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７６を含み、ｒ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９０であり、および、ｒ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０４である、請求項９に記載のＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質。
【請求項２０】
ｒ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１４を含み、ｒ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２８を含み、およびｒ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４２を含む、請求項９に記載のＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質。
【請求項２１】
ｒ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１５を含み、ｒ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２９を含み、およびｒ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４３を含む、請求項９に記載のＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質。
【請求項２２】
ｒ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１７を含み、ｒ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３１を含み、およびｒ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４５を含む、請求項９に記載のＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質。
【請求項２３】
ｒ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１６を含み、ｒ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３０を含み、およびｒ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４４を含む、請求項９に記載のＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質。
【請求項２４】
第３のドメインは、ヒトＶＨＨドメイン、ヒト化されたＶＨＨドメイン、親和性成熟ＶＨＨドメイン、あるいはこれらの組み合わせである、請求項１−２３のいずれか１つに記載のＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質。
【請求項２５】
前記ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、少なくとも１２時間、少なくとも２０時間、少なくとも２５時間、少なくとも３０時間、少なくとも３５時間、少なくとも４０時間、少なくとも４５時間、少なくとも５０時間、あるいは少なくとも１００時間の消失半減期を有する、請求項１−２４のいずれか１つに記載のＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質。
【請求項２６】
ＶＨＨドメインはＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、ならびに、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９８または３４６として記載される配列を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸位置２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、および３４；ＣＤＲ２の位置５２、５４、５５、および５７；ならびに、ＣＤＲ３の位置１０１、１０５、１０６、および１０８から選択された１つ以上のアミノ酸残基が置換され、ここで、
アミノ酸位置２６は、置換される場合、Ｓで置換され；
アミノ酸位置２７は、置換される場合、ＤあるいはＳで置換され；
アミノ酸位置２８は、置換される場合、Ｄ、Ｑ、Ｈ、Ｖ、あるいはＥで置換され；
アミノ酸位置２９は、置換される場合、Ｓ、Ｅ、Ａ、Ｔ、Ｍ、Ｔ、Ｖ、Ｉ、Ｄ、Ｑ、Ｄ、Ｐ、Ｒ、あるいはＧで置換され；
アミノ酸位置３０は、置換される場合、Ｍ、Ｒ、あるいはＮで置換され；
アミノ酸位置３１は、置換される場合、Ｋ、Ｓ、Ｔ、Ｒ、Ｅ、Ｄ、Ｎ、Ｖ、Ｈ、Ｌ、Ａ、Ｑ、あるいはＧで置換され；
アミノ酸位置３２は、置換される場合、Ｔ、Ｙ、Ｒ、あるいはＮで置換され；
アミノ酸位置３４は、置換される場合、ＧあるいはＹで置換され；
アミノ酸位置５２は、置換される場合、ＮあるいはＳで置換され；
アミノ酸位置５４は、置換される場合、Ｇ、Ｋ、Ｒ、Ｐ、Ｄ、Ｑ、Ｈ、Ｅ、Ｎ、Ｔ、Ｓ、Ａ、Ｉ、Ｌ、あるいはＶで置換され；
アミノ酸位置５５は、置換される場合、Ｑ、Ｅ、Ｔ、Ｋ、あるいはＤで置換され；
アミノ酸位置５７は、置換される場合、Ｖ、Ｉ、Ｆ、Ｙ、あるいはＷで置換され；
アミノ酸位置１０１は、置換される場合、Ｉ、Ｔ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｅ、Ｓ、あるいはＹで置換され；
アミノ酸位置１０５は、置換される場合、Ｇ、Ｌ、Ｋ、Ｔ、Ｑ、Ｓ、あるいはＮで置換され；
アミノ酸位置１０６は、置換される場合、Ｋ、Ｅ、Ｖ、Ｒ、Ｍ、あるいはＤで置換され；
アミノ酸位置１０８は、置換される場合、Ａ、Ｖ、Ｋ、Ｈ、Ｌ、Ｍ、Ｔ、Ｒ、Ｑ、Ｃ、Ｓ、あるいはＮで置換される、請求項７に記載のＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質。
【請求項２７】
ＶＨＨドメインは、ヒト、ヒト化され、親和性成熟され、あるいはこれらの組み合わせである、請求項２６に記載のＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質。
【請求項２８】
第３のドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６８として記載される配列を含むヒトＢＣＭＡタンパク質に結合する、請求項１−２７のいずれか１つに記載のＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質。
【請求項２９】
第３のドメインはＢＣＭＡの細胞外ドメインに結合する、請求項１−２７のいずれか１つに記載のＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質。
【請求項３０】
リンカーＬ１とＬ２はそれぞれ独立して、（ＧＳ）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７２）、（ＧＧＳ）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７３）、（ＧＧＧＳ）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７４）、（ＧＧＳＧ）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７５）、（ＧＧＳＧＧ）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７６）、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７７）、（ＧＧＧＧＧ）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７８）、または（ＧＧＧ）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７９）から選択され、ここで、ｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９、あるいは１０である、請求項１−２９のいずれか１つに記載のＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質。
【請求項３１】
リンカーＬ１とＬ２はそれぞれ独立して、（ＧＧＧＧＳ）４（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８０）または（ＧＧＧＧＳ）３（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８１）である、請求項１−３０のいずれか１つに記載のＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質。
【請求項３２】
ドメインはＨ２Ｎ−（Ｃ）−（Ｂ）−（Ａ）−ＣＯＯＨの順序で結合される、請求項１−３１のいずれか１つに記載のＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質。
【請求項３３】
ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は約８０ｋＤａ未満である、請求項１−３２のいずれか１つに記載のＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質。
【請求項３４】
ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は約５０〜約７５ｋＤａである、請求項１−３２のいずれか１つに記載のＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質。
【請求項３５】
ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は約６０ｋＤａ未満である、請求項１−３２のいずれか１つに記載のＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質。
【請求項３６】
ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は少なくとも約５０時間の消失半減期を有する、請求項１−３５のいずれか１つに記載のＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質。
【請求項３７】
ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は少なくとも約１００時間の消失半減期を有する、請求項１−３６のいずれか１つに記載のＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質。
【請求項３８】
ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、同じＢＣＭＡへのＩｇＧと比較して、組織への浸透性を増加させた、請求項１−３７のいずれか１つに記載のＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質。
【請求項３９】
ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８３−５９７からなる群から選択された配列を含む、請求項１−３８のいずれか１つに記載のＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質。
【請求項４０】
ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２０で記載される配列を含む、請求項１−３９のいずれか１つに記載のＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質。
【請求項４１】
請求項１−４０のいずれか１つのＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質、および薬学的に許容可能な担体を含む、医薬組成物。
【請求項４２】
請求項１−４０のいずれか１つのＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質の産生のためのプロセスであって、前記プロセスは、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質の発現を可能にする条件下で、請求項１−４０のいずれか１つのＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質をコードする核酸配列を含むベクターを用いて形質転換されたかトランスフェクトされた宿主を培養する工程と、培養物から生成されたタンパク質を回収および精製する工程とを含む、
プロセス。
【請求項４３】
被験体におけるＢＣＭＡに関連する腫瘍性疾患、自己免疫疾患、あるいは感染症の処置または改善のための方法であって、請求項４１の医薬組成物を被験体に投与する工程を含む、方法。
【請求項４４】
被験体はヒトである、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記方法はさらに、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質と組み合わせて１つ以上の追加の薬剤を投与する工程を含む、請求項４３または４４に記載の方法。
【請求項４６】
腫瘍性疾患の処置あるいは改善を含み、ここで、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＢＣＭＡを発現する腫瘍細胞に選択的に結合する、請求項４３−４５のいずれか１つに記載の方法。
【請求項４７】
腫瘍性疾患の処置あるいは改善を含み、腫瘍性疾患は、原発性癌あるいはその転移を含む、請求項４３−４６のいずれか１つに記載の方法。
【請求項４８】
腫瘍性疾患はＢ細胞系統の癌を含む、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
Ｂ細胞系統の癌は、多発性骨髄腫、白血病、リンパ腫、あるいはその転移である、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
Ｂ細胞成熟剤（ＢＣＭＡ）結合三重特異性タンパク質であって、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は：
（ａ）ヒトＣＤ３に特異的に結合する第１のドメイン（Ａ）；
（ｂ）半減期延長ドメインである第２のドメイン（Ｂ）；および、
（ｃ）ＢＣＭＡに特異的に結合する第３のドメイン（Ｃ）を含み、
ここで、第３のドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：３４６−４６０のいずれか１つとして記載されるアミノ酸配列を含む、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質。
【請求項５１】
Ｂ細胞成熟剤（ＢＣＭＡ）結合三重特異性タンパク質であって、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は：
（ａ）ヒトＣＤ３に特異的に結合する第１のドメイン（Ａ）；
（ｂ）半減期延長ドメインである第２のドメイン（Ｂ）；および、
（ｃ）ＢＣＭＡに特異的に結合する第３のドメイン（Ｃ）を含み、
ここで、第３のドメインは相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、ここで、ＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：４−１１７のいずれか１つとして記載されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：１１８−２３１のいずれか１つとして記載されるアミノ酸配列を含み、および、ＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：２３２−３４５のいずれか１つとして記載されるアミノ酸配列を含む、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質。
【請求項５２】
被験体におけるＢＣＭＡに関連する腫瘍性疾患、自己免疫疾患、あるいは感染症の処置または改善のための方法であって、
ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質を含む医薬組成物を被験体に投与する工程を含み、
ここで、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、
（ａ）ヒトＣＤ３に特異的に結合する第１のドメイン（Ａ）；
（ｂ）半減期延長ドメインである第２のドメイン（Ｂ）；および、
（ｃ）ＢＣＭＡに特異的に結合する第３のドメイン（Ｃ）を含み、
ここで、ドメインは、Ｈ２Ｎ−（Ａ）−（Ｃ）−（Ｂ）−ＣＯＯＨ、Ｈ２Ｎ−（Ｂ）−（Ａ）−（Ｃ）−ＣＯＯＨ、Ｈ２Ｎ−（Ｃ）−（Ｂ）−（Ａ）−ＣＯＯＨ、Ｈ２Ｎ−（Ｃ）−（Ａ）−（Ｂ）−ＣＯＯＨ、Ｈ２Ｎ−（Ａ）−（Ｂ）−（Ｃ）−ＣＯＯＨ、Ｈ２Ｎ−（Ｂ）−（Ｃ）−（Ａ）−ＣＯＯＨの順序で結合し、ここで、ドメインはリンカーＬ１およびＬ２によって結合される、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
相互参照
本出願は、２０１７年１０月１３日に出願された、米国仮特許出願第６２／５７２，３８１号の利益を主張するものであり、該文献はその全体が引用により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
配列表
本出願は配列表を包含しており、これは、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出され、その全体を引用することで本明細書に組み込まれる。２０１８年１０月１１日に作成された上記ＡＳＣＩＩのコピーは、４７５１７−７２３＿６０１＿ＳＬ．ｔｘｔのファイル名であり、７５２，０２０バイトのサイズである。
【背景技術】
【０００３】
癌は冠動脈疾患の次に多い人間の第２位の死因である。世界的にみても毎年数百万人が癌で死んでいる。米国だけでも癌は毎年５０万人をはるかに超える人々の命を奪っており、毎年約１４０万の新しい症例が診断されている。心臓病による死は大幅に減少しているが、癌に起因する死は一般に増えている。来世紀の初めには、癌は死因の第一位になると予測されている。
【０００４】
さらに、原発性の癌を初期に克服した癌患者でさえ、自分たちの生活が劇的に変化するという共通の経験が示されている。多くの癌患者は、再発や治療の失敗の可能性を意識して強い不安を経験する。多くの癌患者は治療後に著しい身体的衰弱を経験する。
【０００５】
一般的に言えば、最も致命的な癌の管理における根本的な問題は、効果的で毒性のない全身療法が欠けていることである。癌は、制御不能な細胞増殖をもたらす遺伝子変異を特徴とする複合的な疾患である。癌細胞はすべての生物に存在し、通常の状況下では、その過剰な増殖は様々な生理学的因子によって厳重に制御されている。
【発明の概要】
【０００６】
個々の細胞あるいは特定の細胞型の選択的な破壊は、様々な臨床設定においてしばしば望まれることである。例えば、腫瘍細胞を特異的に破壊しつつ、健康な細胞と組織を無傷のまま損傷を与えずに残すことが癌治療の主要な目的である。そのような１つの方法は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞あるいは細胞毒性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）などの免疫エフェクター細胞に、腫瘍細胞を攻撃および破壊させるために、腫瘍に対する免疫反応を引き起こすことによるものである。
【０００７】
三重特異性タンパク質を結合するＢ細胞成熟剤（ＢＣＭＡ）が本明細書で提供され、これは：（ａ）ヒトＣＤ３に特異的に結合する第１のドメイン（Ａ）；（ｂ）半減期延長ドメインである第２のドメイン（Ｂ）；および、（ｃ）ＢＣＭＡに特異的に結合する第３のドメイン（Ｃ）を含み、ここで、ドメインは、Ｈ２Ｎ−（Ａ）−（Ｃ）−（Ｂ）−ＣＯＯＨ、Ｈ２Ｎ−（Ｂ）−（Ａ）−（Ｃ）−ＣＯＯＨ、Ｈ２Ｎ−（Ｃ）−（Ｂ）−（Ａ）−ＣＯＯＨ、Ｈ２Ｎ−（Ｃ）−（Ａ）−（Ｂ）−ＣＯＯＨ、Ｈ２Ｎ−（Ａ）−（Ｂ）−（Ｃ）−ＣＯＯＨ、または、Ｈ２Ｎ−（Ｂ）−（Ｃ）−（Ａ）−ＣＯＯＨの順序で結合し、ここで、ドメインはリンカーＬ１およびＬ２によって結合される。
【０００８】
いくつかの実施形態において、第１のドメインは可変軽鎖ドメインと可変重鎖ドメインを含むことができ、その各々はヒトＣＤ３に特異的に結合することができる。第１のドメインはヒト化するか、あるいはヒトになり得る。
【０００９】
いくつかの例では、第２のドメインはアルブミンに結合する。第２のドメインは、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、可変重鎖ドメイン（ＶＨ）、可変軽鎖ドメイン（ＶＬ）、軽鎖が欠けている単鎖抗体結合ドメイン（ＶＨＨドメイン）、ペプチド、リガンド、あるいは小分子を含み得る。
【００１０】
第３のドメインは、場合によっては、ＢＣＭＡに特異的に結合する、軽鎖が欠けている単鎖抗体結合ドメイン（ＶＨＨドメイン）、ｓｃＦｖ、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、非Ｉｇドメイン、リガンド、ノッチン、あるいは、小分子実体である。いくつかの非限定的な例では、第３のドメインはＶＨＨドメインを含む。
【００１１】
本明細書では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質が提供され、ここで、ＶＨＨドメインは、相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、ここで、（ａ）ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７ＰＸ８Ｇ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）に記載されるとおりであり、Ｘ１はＴあるいはＳであり；Ｘ２はＮ、Ｄ、あるいはＳであり；Ｘ３はＩ、Ｄ、Ｑ、Ｈ、Ｖ、あるいはＥであり；Ｘ４はＦ、Ｓ、Ｅ、Ａ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｉ、Ｄ、Ｑ、Ｐ、Ｒ、あるいはＧであり；Ｘ５はＳ、Ｍ、Ｒ、あるいはＮであり；Ｘ６はＩ、Ｋ、Ｓ、Ｔ、Ｒ、Ｅ、Ｄ、Ｎ、Ｖ、Ｈ、Ｌ、Ａ、Ｑ、あるいはＧであり；Ｘ７はＳ、Ｔ、Ｙ、Ｒ、あるいはＮであり；および、Ｘ８はＭ、Ｇ、あるいはＹであり；（ｂ）ＣＤＲ２のアミノ酸配列はＡＩＸ９ＧＸ１０Ｘ１１ＴＸ１２ＹＡＤＳＶＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２）に記載される通りであり、ここで、Ｘ９はＨ、Ｎ、あるいはＳであり；Ｘ１０はＦ、Ｇ、Ｋ、Ｒ、Ｐ、Ｄ、Ｑ、Ｈ、Ｅ、Ｎ、Ｔ、Ｓ、Ａ、Ｉ、Ｌ、あるいはＶであり；Ｘ１１はＳ、Ｑ、Ｅ、Ｔ、Ｋ、あるいはＤであり；および、Ｘ１２はＬ、Ｖ、Ｉ、Ｆ、Ｙ、あるいはＷであり；ならびに、（ｃ）ＣＤＲ３のアミノ酸配列はＶＰＷＧＸ１３ＹＨＰＸ１４Ｘ１５ＶＸ１６（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３）に記載されるとおりであり、ここで、Ｘ１３はＤ、Ｉ、Ｔ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｅ、Ｓ、あるいはＹであり；Ｘ１４はＲ、Ｇ、Ｌ、Ｋ、Ｔ、Ｑ、Ｓ、あるいはＮであり；Ｘ１５はＮ、Ｋ、Ｅ、Ｖ、Ｒ、Ｍ、あるいはＤであり；および、Ｘ１６はＹ、Ａ、Ｖ、Ｋ、Ｈ、Ｌ、Ｍ、Ｔ、Ｒ、Ｑ、Ｃ、Ｓ、あるいはＮである。
【００１２】
１つの実施形態では、ＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９９のアミノ酸配列を含まない。１つの実施形態では、ＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６００のアミノ酸配列を含まない。１つの実施形態では、ＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６０１のアミノ酸配列を含まない。１つの実施形態では、ＣＤＲ１とＣＤＲ２は、それぞれＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９９および６００のアミノ酸配列を含まない。１つの実施形態では、ＣＤＲ１とＣＤＲ３は、それぞれＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９９および６０１のアミノ酸配列を含まない。１つの実施形態では、ＣＤＲ２とＣＤＲ３は、それぞれＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６００および６０１のアミノ酸配列を含まない。１つの実施形態では、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３は、それぞれＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９９、６００、および６０１のアミノ酸配列を含まない。
【００１３】
ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質が本明細書で提供され、ここで、ＶＨＨドメインは以下の式を含み：ｆ１−ｒ１−ｆ２−ｒ２−ｆ３−ｒ３−ｆ４；式中、ｒ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１であり；ｒ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２であり；および、ｒ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３であり；ここで、ｆ１、ｆ２、ｆ３、およびｆ４は、上記のタンパク質がＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９８あるいは３４６で記載されるアミノ酸配列に対して約８０パーセント（８０％）〜約９９％同一であるように、選択されたフレームワーク残基である。ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質が本明細書で提供され、ここで、ＶＨＨドメインは以下の式を含み：ｆ１−ｒ１−ｆ２−ｒ２−ｆ３−ｒ３−ｆ４；式中、ｒ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１であり；ｒ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２であり；および、ｒ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３であり；ここで、ｆ１、ｆ２、ｆ３、およびｆ４は、上記のタンパク質がＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９８あるいは３４６で記載されるアミノ酸配列に対して約８０％〜約９０％同一であるように、選択されたフレームワーク残基である。１つの実施形態では、単一ドメインＢＣＭＡ結合タンパク質のアミノ酸配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９８を含まない。
【００１４】
いくつかの非限定的な例では、ｒ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４−１１７のいずれか１つとして記載されるアミノ酸配列を含む。
【００１５】
いくつかの非限定的な例では、ｒ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１８−２３１のいずれか１つとして記載されるアミノ酸配列を含む。
【００１６】
いくつかの非限定的な例では、ｒ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３２−３４５のいずれか１つとして記載されるアミノ酸配列を含む。
【００１７】
他の非限定的な例では、タンパク質はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４６−４６０のいずれか１つとして記載されるアミノ酸配列を含む。
【００１８】
単一ドメインＢＣＭＡ結合タンパク質では、ｆ１は、いくつかの例において、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６１あるいは４６２を含む。
【００１９】
単一ドメインＢＣＭＡ結合タンパク質では、ｆ２は、いくつかの例において、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６３を含む。
【００２０】
単一ドメインＢＣＭＡ結合タンパク質では、ｆ３は、いくつかの例において、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６４あるいは４６５を含む。
【００２１】
単一ドメインＢＣＭＡ結合タンパク質では、ｆ４は、いくつかの例において、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６６あるいは４６７を含む。
【００２２】
非限定的な一実施例では、ｒ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７６、１１４、１１５、１１６、あるいは１１７を含む。非限定的な一実施例では、ｒ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７６を含む。
【００２３】
非限定的な一実施例では、ｒ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７６を含み、ｒ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９０であり、および、ｒ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０４である。
【００２４】
非限定的な一実施例では、ｒ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１４を含み、ｒ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２８を含み、および、ｒ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４２を含む。
【００２５】
非限定的な一実施例では、ｒ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１５を含み、ｒ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２９を含み、および、ｒ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４３を含む。
【００２６】
非限定的な一実施例では、ｒ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１７を含み、ｒ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３１を含み、および、ｒ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４５を含む。
【００２７】
非限定的な一実施例では、ｒ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１６を含み、ｒ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３０を含み、および、ｒ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４４を含む。
【００２８】
第３のドメインは、場合によっては、ヒトＶＨＨドメイン、ヒト化されたＶＨＨドメイン、親和性成熟ＶＨＨドメイン、あるいはこれらの組み合わせである。
【００２９】
ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、いくつかの例において、少なくとも１２時間、少なくとも２０時間、少なくとも２５時間、少なくとも３０時間、少なくとも３５時間、少なくとも４０時間、少なくとも４５時間、少なくとも５０時間、あるいは少なくとも１００時間の消失半減期を有する。
【００３０】
ＶＨＨドメインであるＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質が本明細書で提供され、ここで、ＶＨＨドメインはＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、ならびに、タンパク質はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４６あるいは５９８として記載される配列を含み、アミノ酸位置、ＣＤＲ１の２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、および／または３４；ＣＤＲ２の位置５２、５４、５５、および／または５７；ならびに、ＣＤＲ３の位置１０１、１０５、１０６、および／または１０８から選択された１つ以上のアミノ酸残基が置換され、ここで、アミノ酸位置２６は、置換される場合、Ｓで置換され；アミノ酸位置２７は、置換される場合、ＤあるいはＳで置換され；アミノ酸位置２８は、置換される場合、Ｄ、Ｑ、Ｈ、Ｖ、あるいはＥで置換され；アミノ酸位置２９は、置換される場合、Ｓ、Ｅ、Ａ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｉ、Ｄ、Ｑ、Ｐ、Ｒ、あるいはＧで置換され；アミノ酸位置３０は、置換される場合、Ｍ、Ｒ、あるいはＮで置換され；アミノ酸位置３１は、置換される場合、Ｋ、Ｓ、Ｔ、Ｒ、Ｅ、Ｄ、Ｎ、Ｖ、Ｈ、Ｌ、Ａ、Ｑ、あるいはＧで置換され；アミノ酸位置３２は、置換される場合、Ｔ、Ｙ、Ｒ、あるいはＮで置換され；アミノ酸位置３４は、置換される場合、ＧあるいはＹで置換され；アミノ酸位置５２は、置換される場合、ＮあるいはＳで置換され；アミノ酸位置５４は、置換される場合、Ｇ、Ｋ、Ｒ、Ｐ、Ｄ、Ｑ、Ｈ、Ｅ、Ｎ、Ｔ、Ｓ、Ａ、Ｉ、Ｌ、あるいはＶで置換され；アミノ酸位置５５は、置換される場合、Ｑ、Ｅ、Ｔ、Ｋ、あるいはＤで置換され；アミノ酸位置５７は、置換される場合、Ｖ、Ｉ、Ｆ、Ｙ、あるいはＷで置換され；アミノ酸位置１０１は、置換される場合、Ｉ、Ｔ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｅ、Ｓ、あるいはＹで置換され；アミノ酸位置１０５は、置換される場合、Ｇ、Ｌ、Ｋ、Ｔ、Ｑ、Ｓ、あるいはＮで置換され；アミノ酸位置１０６は、置換される場合、Ｋ、Ｅ、Ｖ、Ｒ、Ｍ、あるいはＤで置換され；および、アミノ酸位置１０８は、置換される場合、Ａ、Ｖ、Ｋ、Ｈ、Ｌ、Ｍ、Ｔ、Ｒ、Ｑ、Ｃ、Ｓ、あるいはＮで置換される。非限定的な一実施例では、ＶＨＨドメインはヒト、ヒト化され、親和性成熟され、あるいはこれらの組み合わせである。
【００３１】
ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質が本明細書で提供され、ここで、第３のドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６８として記載される配列を含むヒトＢＣＭＡタンパク質に結合する。いくつかの例では、第３のドメインはＢＣＭＡのエピトープに結合し、上記エピトープはＢＣＭＡの細胞外ドメインを含む。いくつかの例では、第３のドメインはＢＣＭＡのエピトープに結合し、上記エピトープはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６８のアミノ酸残基５−５１を含む。
【００３２】
そのようなＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質において、リンカーＬ１とＬ２はそれぞれ独立して、（ＧＳ）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７２）、（ＧＧＳ）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７３）、（ＧＧＧＳ）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７４）、（ＧＧＳＧ）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７５）、（ＧＧＳＧＧ）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７６）、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７７）、（ＧＧＧＧＧ）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７８）、または（ＧＧＧ）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７９）から選択され、ここで、ｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９、あるいは１０である。
【００３３】
非限定的な一実施例では、そのようなＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質において、リンカーＬ１とＬ２はそれぞれ独立して、（ＧＧＧＧＳ）４（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８０）あるいは（ＧＧＧＧＳ）３（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８１）である。
【００３４】
ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質のドメインは、Ｈ２Ｎ−（Ｃ）−（Ｂ）−（Ａ）−ＣＯＯＨの順に結合される。
【００３５】
いくつかの例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は約８０ｋＤａ未満である。他の例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は約５０〜約７５ｋＤａであり得る。他の例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は約６０ｋＤａ未満である。
【００３６】
本明細書に記載されるＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、いくつかの例では、少なくとも約５０時間、約１００時間、またはそれ以上の消失半減期を有する。
【００３７】
ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、いくつかの例では、同じＢＣＭＡに対するＩｇＧと比較して、増大した組織浸透を呈する。
【００３８】
ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、いくつかの例では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８３−５９７からなる群から選択されたアミノ酸配列を含む。ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、いくつかの例では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２０に記載されるアミノ酸配列を含む。
【００３９】
１つの実施形態では、Ｂ細胞成熟剤（ＢＣＭＡ）結合三重特異性タンパク質が本明細書で提供され、これは：（ａ）ヒトＣＤ３に特異的に結合する第１のドメイン（Ａ）；（ｂ）半減期延長ドメインである第２のドメイン（Ｂ）；および、（ｃ）ＢＣＭＡに特異的に結合する第３のドメイン（Ｃ）を含み、ここで、第３のドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：３４６−４６０のいずれか１つとして記載されるアミノ酸配列を含む。
【００４０】
１つの実施形態では、Ｂ細胞成熟剤（ＢＣＭＡ）結合三重特異性タンパク質が本明細書で提供され、これは：（ａ）ヒトＣＤ３に特異的に結合する第１のドメイン（Ａ）；（ｂ）半減期延長ドメインである第２のドメイン（Ｂ）；および、（ｃ）ＢＣＭＡに特異的に結合する第３のドメイン（Ｃ）を含み、ここで、第３のドメインは相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、ここで、ＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：４−１１７のいずれか１つとして記載されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：１１８−２３１のいずれか１つとして記載されるアミノ酸配列を含み、および、ＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：２３２−３４５のいずれか１つとして記載されるアミノ酸配列を含む。
【００４１】
本明細書に記載されるようなＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質および薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物が本明細書で提供される。
【００４２】
さらに、本明細書に記載されるＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質の産生のプロセスも本明細書で提供され、上記プロセスは、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質の発現を可能にする条件下でＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質をコードする核酸配列を含むベクターで形質転換されたかトランスフェクトされた宿主を培養する工程と、培養物から生成されたタンパク質を回収および精製する工程とを含む。
【００４３】
１つの実施形態は、被験体においてＢＣＭＡに関連する、腫瘍性疾患、自己免疫疾患、あるいは感染症の処置または改善のための方法を提供し、上記方法は、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質を含む医薬組成物を被験体に投与する工程を含み、ここで、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、（ａ）ヒトＣＤ３に特異的に結合する第１のドメイン（Ａ）；（ｂ）半減期延長ドメインである第２のドメイン（Ｂ）；および、（ｃ）ＢＣＭＡに特異的に結合する第３のドメイン（Ｃ）を含み、ここで、ドメインは、Ｈ２Ｎ−（Ａ）−（Ｃ）−（Ｂ）−ＣＯＯＨ、Ｈ２Ｎ−（Ｂ）−（Ａ）−（Ｃ）−ＣＯＯＨ、Ｈ２Ｎ−（Ｃ）−（Ｂ）−（Ａ）−ＣＯＯＨ、Ｈ２Ｎ−（Ｃ）−（Ａ）−（Ｂ）−ＣＯＯＨ、Ｈ２Ｎ−（Ａ）−（Ｂ）−（Ｃ）−ＣＯＯＨ、Ｈ２Ｎ−（Ｂ）−（Ｃ）−（Ａ）−ＣＯＯＨの順序で結合し、ここで、ドメインはリンカーＬ１およびＬ２によって結合される。
【００４４】
被験体においてＢＣＭＡに関連する、腫瘍性疾患、自己免疫疾患、あるいは感染症の処置または改善のための方法が本明細書で提供され、上記方法は、本明細書に記載される医薬組成物を被験体に投与する工程を含む。
【００４５】
処置される被験体は、いくつかの例では、ヒトである。
【００４６】
いくつかの例では、上記方法はさらに、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質と組み合わせて１つ以上の追加の薬剤の投与を含む。
【００４７】
本明細書に記載される方法は、腫瘍性疾患の処置あるいは改善に役立ち、ここで、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＢＣＭＡを発現する腫瘍細胞へ選択的に結合する。
【００４８】
上記方法を用いて処置される腫瘍性疾患は、原発性癌あるいはその転移を含む。１つの例では、腫瘍性疾患はＢ細胞系統の癌を含む。
【００４９】
詳述された方法によって処置されるＢ細胞血統の癌としては、限定されないが、多発性骨髄腫、白血病、リンパ腫、あるいはこれらの転移が挙げられる。
【００５０】
引用による組み込み
本明細書で言及されるすべての出版物、特許、および特許出願は、あたかも個々の出版物、特許、または特許出願がそれぞれ参照により本明細書に具体的かつ個別に組み込まれるのと同じ程度にまで、参照により本明細書に組み込まれている。
【図面の簡単な説明】
【００５１】
本発明の新規な特徴はとりわけ添付の請求項で説明される。本発明の特徴および利点のより良い理解は、本発明の原理が用いられる例示的実施形態を説明する以下の詳細な説明と、以下の添付図面とを引用することによって得られるであろう。
【図１】典型的なＢＣＭＡ標的三重特異性抗原結合タンパク質の略図であり、上記タンパク質は、抗ＣＤ３ε単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）と抗ＡＬＢ可変重鎖領域を含む定常コア要素、および、ＶＨＨ、ＶＨ、ｓｃＦｖ、非Ｉｇバインダー、あるいはリガンドであり得る抗ＢＣＭＡ結合ドメインを有する。
【図２】陰性対照と比較してＢＣＭＡを発現する精製されたヒトＴ細胞の死滅における、本開示に係る抗ＢＣＭＡ結合タンパク質を含有する、例示的なＢＣＭＡ標的分子（０１Ｈ０８、０１Ｆ０７、０２Ｆ０２、およびＢＨ２５３）の効果を例証する。
【図３】代表的な精製されたＢＣＭＡ三重特異性分子のＳＤＳ−ＰＡＧＥの画像である。レーン１：０１Ｆ０７−Ｍ３４Ｙ  ＴｒｉＴＡＣ非減少；；レーン２：０１Ｆ０７−Ｍ３４Ｇ−ＴｒｉＴＡＣ非減少；レーン３：０２Ｂ０５  ＴｒｉＴＡＣ非減少；レーン４：０２Ｇ０２−Ｍ３４Ｙ  ＴｒｉＴＡＣ非減少；レーン５：０２Ｇ０２  Ｍ３４Ｇ  ＴｒｉＴＡＣ非減少；レーン６：広範囲のＳＤＳ−ＰＡＧＥ標準（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  ＃１６１０３１７）；レーン７：０１Ｆ０７−Ｍ３４Ｙ  ＴｒｉＴＡＣ非減少；レーン８：０１Ｆ０７−Ｍ３４Ｇ−ＴｒｉＴＡＣ非減少；レーン９：０２Ｂ０５  ＴｒｉＴＡＣ非減少；レーン１０：０２Ｇ０２−Ｍ３４Ｙ  ＴｒｉＴＡＣ非減少；レーン１１：０２Ｇ０２  Ｍ３４Ｇ  ＴｒｉＴＡＣ非減少；レーン１２：広範囲のＳＤＳ−ＰＡＧＥ基準（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  ＃１６１０３１７）
【図４Ａ】陰性対照と比較して、ＢＣＭＡを発現するＪｅｋｏ１、ＭＯＬＰ−８、あるいはＯＰＭ−２の細胞の死滅における、本開示の抗ＢＣＭＡ結合タンパク質を含む例示的なＢＣＭＡ三重特異性標的分子の効果を例証する。
【図４Ｂ】陰性対照と比較して、ＢＣＭＡを発現するＪｅｋｏ１、ＭＯＬＰ−８、あるいはＯＰＭ−２の細胞の死滅における、本開示の抗ＢＣＭＡ結合タンパク質を含む例示的なＢＣＭＡ三重特異性標的分子の効果を例証する。
【図４Ｃ】陰性対照と比較して、ＢＣＭＡを発現するＪｅｋｏ１、ＭＯＬＰ−８、あるいはＯＰＭ−２の細胞の死滅における、本開示の抗ＢＣＭＡ結合タンパク質を含む例示的なＢＣＭＡ三重特異性標的分子の効果を例証する。
【図４Ｄ】陰性対照と比較して、ＢＣＭＡを発現するＪｅｋｏ１、ＭＯＬＰ−８、あるいはＯＰＭ−２の細胞の死滅における、本開示の抗ＢＣＭＡ結合タンパク質を含む例示的なＢＣＭＡ三重特異性標的分子の効果を例証する。
【図４Ｅ】陰性対照と比較して、ＢＣＭＡを発現するＪｅｋｏ１、ＭＯＬＰ−８、あるいはＯＰＭ−２の細胞の死滅における、本開示の抗ＢＣＭＡ結合タンパク質を含む例示的なＢＣＭＡ三重特異性標的分子の効果を例証する。
【図４Ｆ】陰性対照と比較して、ＢＣＭＡを発現するＪｅｋｏ１、ＭＯＬＰ−８、あるいはＯＰＭ−２の細胞の死滅における、本開示の抗ＢＣＭＡ結合タンパク質を含む例示的なＢＣＭＡ三重特異性標的分子の効果を例証する。
【図４Ｇ】陰性対照と比較して、ＢＣＭＡを発現するＪｅｋｏ１、ＭＯＬＰ−８、あるいはＯＰＭ−２の細胞の死滅における、本開示の抗ＢＣＭＡ結合タンパク質を含む例示的なＢＣＭＡ三重特異性標的分子の効果を例証する。
【図４Ｈ】陰性対照と比較して、ＢＣＭＡを発現するＪｅｋｏ１、ＭＯＬＰ−８、あるいはＯＰＭ−２の細胞の死滅における、本開示の抗ＢＣＭＡ結合タンパク質を含む例示的なＢＣＭＡ三重特異性標的分子の効果を例証する。
【図４Ｉ】陰性対照と比較して、ＢＣＭＡを発現するＪｅｋｏ１、ＭＯＬＰ−８、あるいはＯＰＭ−２の細胞の死滅における、本開示の抗ＢＣＭＡ結合タンパク質を含む例示的なＢＣＭＡ三重特異性標的分子の効果を例証する。
【図５】４つの異なるヒトドナー、ドナー０２（Ａ）、ドナー３５（Ｂ）、ドナー８１（Ｃ）、ドナー８６（Ｄ）からの精製されたＴ細胞に対する例示的なＢＣＭＡ三重特異性標的タンパク質（０２Ｂ０５）の結合を例証する。
【図６】ＢＣＭＡ、ＮＣＩ−Ｈ９２９（Ａ）、ＥＪＭ（Ｂ）、ＯＰＭ２（Ｄ）、ＲＰＭＩ８２２６（Ｅ）を発現する細胞に対する、あるいは、ＢＣＭＡ、ＮＣＩ−Ｈ５１０Ａ（Ｃ）、および、ＤＭＳ−１５３（Ｆ）の発現を欠く細胞株に対する、例示的なＢＣＭＡ三重特異性標的タンパク質（０２Ｂ０５）の結合を例証する。
【図７】ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）の存在下または不在下における、例示的なＢＣＭＡ三重特異性標的タンパク質（０２Ｂ０５）およびＢＣＭＡ発現ＥＪＭ細胞を使用する、ＴＤＣＣアッセイの結果を例証する。
【図８】変動するエフェクター細胞対標的細胞比率を使用して、例示的なＢＣＭＡ三重特異性標的タンパク質（０２Ｂ０５）とＢＣＭＡ発現ＥＪＭ細胞を使用するＴＤＣＣアッセイの結果を例証する。
【図９】変動するエフェクター細胞対標的細胞比率を使用して、例示的なＢＣＭＡ三重特異性標的タンパク質（０２Ｂ０５）とＢＣＭＡ発現ＯＰＭ２細胞を使用するＴＤＣＣアッセイの結果を例証する。
【図１０】様々な時点と、１：１のエフェクター細胞対標的細胞比率とを使用して、例示的なＢＣＭＡ三重特異性標的タンパク質（０２Ｂ０５）とＢＣＭＡ発現ＮＣＩ−Ｈ９２９細胞を使用するＴＤＣＣアッセイの結果を例証する。
【図１１】ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）の存在下における、４つの異なるドナーからの例示的なＢＣＭＡ三重特異性標的タンパク質（０２Ｂ０５）、ＢＣＭＡ発現ＥＪＭ細胞、および、Ｔ細胞を使用する、ＴＤＣＣアッセイの結果を例証する。
【図１２】ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）の存在下における、４つの異なるドナーからの例示的なＢＣＭＡ三重特異性標的タンパク質（０２Ｂ０５）、ＢＣＭＡ発現ＮＣＩ−Ｈ９２９細胞、および、Ｔ細胞を使用する、ＴＤＣＣアッセイの結果を例証する。
【図１３】ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）の存在下における、４つの異なるドナーからの例示的なＢＣＭＡ三重特異性標的タンパク質（０２Ｂ０５）、ＢＣＭＡ発現ＯＰＭ２細胞、および、Ｔ細胞を使用する、ＴＤＣＣアッセイの結果を例証する。
【図１４】ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）の存在下における、４つの異なるドナーからの例示的なＢＣＭＡ三重特異性標的タンパク質（０２Ｂ０５）、ＢＣＭＡ発現ＲＰＭＩ８２２６細胞、および、Ｔ細胞を使用する、ＴＤＣＣアッセイの結果を例証する。
【図１５】ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）の存在下における、４つの異なるドナーからの例示的なＢＣＭＡ三重特異性標的タンパク質（０２Ｂ０５）、ＢＣＭＡ非発現ＯＶＣＡＲ８細胞、および、Ｔ細胞を使用する、ＴＤＣＣアッセイの結果を例証する。
【図１６】ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）の存在下における、４つの異なるドナーからの例示的なＢＣＭＡ三重特異性標的タンパク質（０２Ｂ０５）、ＢＣＭＡ非発現ＮＣＩ−Ｈ５１０Ａ細胞、および、Ｔ細胞を使用する、ＴＤＣＣアッセイの結果を例証する。
【図１７】ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）の存在下における、２つの異なるカニクイザルドナーからの例示的なＢＣＭＡ三重特異性標的タンパク質（０２Ｂ０５）、ＢＣＭＡ発現ＮＣＩ−Ｈ９２９細胞、および、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を使用する、ＴＤＣＣアッセイの結果を例証する。
【図１８】ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）の存在下における、２つの異なるカニクイザルドナーからの例示的なＢＣＭＡ三重特異性標的タンパク質（０２Ｂ０５）、ＢＣＭＡ発現ＲＰＭＩ８２２６細胞、および、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を使用する、ＴＤＣＣアッセイの結果を例証する。
【図１９】例示的なＢＣＭＡ三重特異性標的タンパク質（０２Ｂ０５）とＢＣＭＡ発現ＥＪＭ細胞を使用するＴＤＣＣアッセイ後の、Ｔ細胞活性化バイオマーカーＣＤ６９の発現レベルを例証する。
【図２０】例示的なＢＣＭＡ三重特異性標的タンパク質（０２Ｂ０５）とＢＣＭＡ発現ＥＪＭ細胞を使用するＴＤＣＣアッセイ後の、Ｔ細胞活性化バイオマーカーＣＤ２５の発現レベルを例証する。
【図２１】例示的なＢＣＭＡ三重特異性標的タンパク質（０２Ｂ０５）とＢＣＭＡ発現ＯＰＭ２細胞を使用するＴＤＣＣアッセイ後の、Ｔ細胞活性化バイオマーカーＣＤ６９の発現レベルを例証する。
【図２２】例示的なＢＣＭＡ三重特異性標的タンパク質（０２Ｂ０５）とＢＣＭＡ発現ＯＰＭ２細胞を使用するＴＤＣＣアッセイ後の、Ｔ細胞活性化バイオマーカーＣＤ２５の発現レベルを例証する。
【図２３】例示的なＢＣＭＡ三重特異性標的タンパク質（０２Ｂ０５）とＢＣＭＡ発現ＲＰＭＩ８２２６細胞を使用するＴＤＣＣアッセイ後の、Ｔ細胞活性化バイオマーカーＣＤ６９の発現レベルを例証する。
【図２４】例示的なＢＣＭＡ三重特異性標的タンパク質（０２Ｂ０５）とＢＣＭＡ発現ＲＰＭＩ８２２６細胞を使用するＴＤＣＣアッセイ後の、Ｔ細胞活性化バイオマーカーＣＤ２５の発現レベルを例証する。
【図２５】例示的なＢＣＭＡ三重特異性標的タンパク質（０２Ｂ０５）とＢＣＭＡ非発現ＯＶＣＡＲ８細胞を使用するＴＤＣＣアッセイ後の、Ｔ細胞活性化バイオマーカーＣＤ６９の発現レベルを例証する。
【図２６】例示的なＢＣＭＡ三重特異性標的タンパク質（０２Ｂ０５）とＢＣＭＡ非発現ＯＶＣＡＲ８細胞を使用するＴＤＣＣアッセイ後の、Ｔ細胞活性化バイオマーカーＣＤ２５の発現レベルを例証する。
【図２７】例示的なＢＣＭＡ三重特異性標的タンパク質（０２Ｂ０５）とＢＣＭＡ非発現ＮＣＩ−Ｈ５１０Ａ細胞を使用するＴＤＣＣアッセイ後の、Ｔ細胞活性化バイオマーカーＣＤ６９の発現レベルを例証する。
【図２８】例示的なＢＣＭＡ三重特異性標的タンパク質（０２Ｂ０５）とＢＣＭＡ非発現ＮＣＩ−Ｈ５１０Ａ細胞を使用するＴＤＣＣアッセイ後の、Ｔ細胞活性化バイオマーカーＣＤ２５の発現レベルを例証する。
【図２９】濃度を増大させた例示的なＢＣＭＡ標的三重特異性（０２Ｂ０５）タンパク質、あるいは陰性対照ＧＦＰ三重特異性タンパク質を用いて処理されたＴ細胞とＢＣＭＡ発現標的細胞（ＥＪＭ細胞）の共培養中のサイトカイン、ＴＮＦ−αの発現レベルを例証する。
【図３０】様々な濃度の例示的なＢＣＭＡ標的三重特異性（０２Ｂ０５）タンパク質、あるいは対照ビヒクルを用いて処理されたＲＰＭＩ８２２６異種移植片モデルにおける腫瘍成長の減少を例証する。
【図３１】様々な濃度の例示的なＢＣＭＡ標的三重特異性（０２Ｂ０５）タンパク質、あるいは対照ビヒクルを用いて処理されたＪｅｋｏ１異種移植片モデルにおける腫瘍成長の減少を例証する。
【図３２】様々な濃度の例示的なＢＣＭＡ標的三重特異性（０２Ｂ０５）タンパク質を投与されたカニクイザルの血清サンプル中のＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質の濃度を例証する。
【図３３】ＢＣＭＡ三重特異性標的タンパク質に晒されなかったカニクイザルの血清の存在下において、様々な濃度の例示的なＢＣＭＡ標的三重特異性（０２Ｂ０５）タンパク質、ＢＣＭＡ発現ＥＪＭ細胞、および精製されたヒトＴ細胞を投与後１６８時間に採取されたカニクイザルの血清サンプルから得られたＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質を使用するＴＤＣＣアッセイの結果である。
【発明を実施するための形態】
【００５２】
本発明の好ましい実施形態が本明細書中で示され、記載されてきたが、このような実施形態はほんの一例として提供されるものであることは、当業者に明らかであろう。多くの変更、変化、および置換が、本発明から逸脱することなく、当業者の心に思い浮かぶであろう。本明細書に記載される本発明の実施形態の様々な代案が、本発明の実施において利用され得ることを理解されたい。以下の請求項は本発明の範囲を定義するものであり、この請求項とその均等物の範囲内の方法、および構造体がそれによって包含されるものであるということが意図されている。
【００５３】
Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）を標的とする三重特異性タンパク質、その医薬組成物（本明細書では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質、ＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質、あるいはＢＣＭＡ三重特異性抗原結合タンパク質と呼ばれる）、同様に、そのようなタンパク質を作るための核酸、組み換え体発現ベクター、および宿主細胞が本明細書に記載される。さらに、疾患、疾病、および障害の予防および／または処置において、開示されたＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質を使用する方法も提供される。ＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質は、ＣＤ３と同様にＢＣＭＡに特異的に結合することができ、ヒトアルブミン（ＡＬＢ）に対するドメイン結合などの半減期延長ドメインを有する。図１は三重特異性ＢＣＭＡ結合タンパク質の非限定的な例を描く。
【００５４】
「抗体」は典型的には、共有的なジスルフィド結合と非共有的な相互作用によってまとめられている、２つの重（Ｈ）および２つの軽（Ｌ）ポリペプチド鎖を含むＹ字型の四量体タンパク質を指す。ヒト軽鎖は可変ドメイン（ＶＬ）と定常ドメイン（ＣＬ）を含み、定常ドメインは、アミノ酸配列と遺伝子座位に基づいてカッパまたはラムダとして容易に分類され得る。各重鎖は１つの可変ドメイン（ＶＨ）と定常領域を含み、これは、ＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＤの場合には、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３と呼ばれる３つのドメインを含む（ＩｇＭとＩｇＥは第４のドメイン、ＣＨ４を有する）。ＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＤの分類において、ＣＨ１とＣＨ２のドメインは、可変長のプロリンおよびシステイン豊富なセグメントである（通常ＩｇＧ中に約１０〜約６０のアミノ酸）柔軟なヒンジ領域によって離されている。軽鎖と重鎖の両方の可変ドメインは、約１２以上のアミノ酸の「Ｊ」領域によって定常ドメインに結合され、重鎖はさらに約１０のさらなるアミノ酸の「Ｄ」領域を有する。抗体の各クラスは、対になったシステイン残基によって形成された鎖間および鎖内のジスルフィド結合を含む。免疫グロブリン分子には２つのタイプの天然のジスルフィド架橋あるいは結合：鎖間および鎖内のジスルフィド結合がある。鎖間ジスルフィド結合の位置と数は、免疫グロブリンのクラスと種によって変わる。鎖間ジスルフィド結合は、免疫グロブリンの表面に位置し、溶剤に利用可能であり、通常比較的容易に還元される。ヒトＩｇＧ１アイソタイプでは、４つの鎖間ジスルフィド結合があり、各重鎖から軽鎖まで１つ、および、重鎖間に２つある。鎖間ジスルフィド結合は鎖の結合には必要ではない。周知のように、重鎖のシステイン豊富なＩｇＧ１ヒンジ領域は一般に、３つの部分：上部ヒンジ、コアヒンジ、および下部ヒンジからなるように保持されている。当業者は、ＩｇＧ１ヒンジ領域が、鎖間ジスルフィド結合（２つの重／重、２つの重／軽）を含む重鎖内のシステインを含有しており、これがＦａｂの移動を促進する構造的な柔軟性をもたらすことを理解するであろう。ＩｇＧ１の軽鎖と重鎖との間の鎖間ジスルフィド結合は、カッパまたはラムダ軽鎖のＣ２１４と、重鎖の上部ヒンジ領域内のＣ２２０との間で形成される。重鎖間の鎖間ジスルフィド結合は、位置Ｃ２２６とＣ２２９にある（すべて、下のＫａｂａｔ，  ｅｔ  ａｌ．に従ってＥＵの指標に基づき番号を付された）。
【００５５】
本明細書で使用されるように、「抗体」との用語は、その突然変異タンパク質および変異体を含む、ポリクローナル抗体、マルチクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化および霊長類化（ｐｒｉｍａｔｉｚｅｄ）抗体、ＣＤＲ移植抗体、ヒト抗体、組換え生成された抗体、イントラボディ、多特異性抗体、二重特異性抗体、一価抗体、多価抗体、抗イディオタイプ抗体、合成抗体、免疫特異性抗体フラグメント、例えば、Ｆｄ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）断片、単鎖断片（例えば、ＳｃＦｖとＳｃＦｖＦｃ）、ジスルフィド結合Ｆｖｓ（ｓｄＦｖ）、ＶＨとＣＨ１のドメインからなるＦｄ断片、線形抗体、ｓｄＡｂなどの単一ドメイン抗体（ＶＨ、ＶＬ、あるいはＶＨＨドメイン）；ならびに、Ｆｃ融合と他の修飾を含むその誘導体、および、それがＢＣＭＡタンパク質との優先的な会合または結合のための結合部位を有するドメインを含む限り、任意の他の免疫反応性の分子を含む。さらに、文脈上の制約によって他の方法で指定されない限り、この用語はさらに、すべてのクラスの抗体（つまり、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭ）とすべてのサブクラス（つまり、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２）を含む。様々なクラスの抗体に対応する重鎖定常ドメインは典型的には、対応する小文字のギリシャ文字α、δ、ε、γ、およびμによってそれぞれ表示される。任意の脊椎動物種の抗体の軽鎖は、定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、カッパ（κ）およびラムダ（λ）と呼ばれる、２つの明らかに異なるタイプの１つに割り当てられ得る。
【００５６】
いくつかの実施形態において、本開示のＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質のＢＣＭＡ結合ドメインは、ＶＨあるいはＶＨＨドメインなどの重鎖のみの抗体を含む。場合によっては、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、操作されたヒトＶＨドメインである重鎖のみの抗体を含む。いくつかの例において、操作されたヒトＶＨドメインは、ファージディスプレイライブラリのパニングに生成される。いくつかの実施形態において、本開示のＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質のＢＣＭＡ結合ドメインは、ＶＨＨを含む。「ＶＨＨ」との用語は、本明細書で使用されるように、軽鎖を欠いた単鎖抗体結合ドメインを指す。場合によっては、ＶＨＨは、軽鎖を生来欠いているラクダ科あるいは軟骨魚類で見られるタイプの抗体に由来し、あるいは、それに応じて構築することができる合成の非免疫ＶＨＨに派生する。各重鎖は、Ｖ、Ｄ、およびＪのエクソンによってコードされた可変領域を含む。ＶＨＨは、場合によっては、天然のＶＨＨ、例えば、ラクダ科由来のＶＨＨ、あるいは、重鎖可変ドメインを含む組換え型タンパク質である。いくつかの実施形態において、ＶＨＨは、ラクダ、ラマ、ビクーニャ、グアナコ、および軟骨魚類（限定されないが、サメなど）からなる群から選択された種に由来する。別の実施形態では、ＶＨＨは、アルパカ（限定されないが、ワカヤ（Ｈｕａｃａｙａ  Ａｌｐａｃａ）とスーリ（Ｓｕｒｉ  ａｌｐａｃａ）など）に由来する。
【００５７】
本明細書で使用されるように、「可変領域」または「可変ドメイン」とは、可変ドメインの特定の部分が抗体中の配列で大きく異なり、その特定の抗原に対する各々の特定の抗体の結合と特異性で使用されるという事実を指す。しかしながら、可変性は抗体の可変ドメイン全体に均一に分布していない。それは、軽鎖（ＶＬ）と重鎖（ＶＨ）の両方の可変ドメイン中の相補性決定領域（ＣＤＲ）または超可変領域と呼ばれる３つのセグメントに集中している。可変ドメインのより高度に保存された部分はフレームワーク（ＦＲ）と呼ばれる。生来の重鎖および軽鎖の可変ドメインは各々、大部分がβ−シート構成を採用し、３つのＣＤＲによって結合され、ループ接合を形成し、場合によっては、βシート構造の一部を形成する、４つのＦＲ領域を含む。各鎖のＣＤＲはＦＲ領域によって極めて近接して一緒に保持され、他の鎖からのＣＤＲとともに、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）を参照）。定常ドメインは抗体を抗原に結合することに直接関与しないが、抗体依存性の細胞毒性における抗体の関与などの様々なエフェクター機能を示す。場合によっては、遺伝子操作によって得られるＳｃＦｖ断片（あるいは、可変の単鎖断片）は、ペプチドリンカーによって離された抗体のＶＨとＶＬの領域と、単一のポリペプチド鎖において会合する。
【００５８】
本開示のいくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質のＢＣＭＡ結合ドメインは、ＶＨまたはＶＨＨのドメインなどの重鎖のみの抗体を含み、および、３つのＣＤＲを含む。そのような重鎖のみの抗体は、いくつかの実施形態では、最適な結合親和性のために、ＶＬ（可変の軽鎖）領域のとの二量体化に依存しない単量体としてＢＣＭＡを結合する。本開示のいくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質のＣＤ３結合ドメインは、ｓｃＦｖを含む。本開示のいくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質のアルブミン結合ドメインは、ＶＨドメインあるいはＶＨＨドメインを含む単一ドメイン抗体などの重鎖のみの抗体を含む。
【００５９】
各ドメイン、フレームワーク領域、およびＣＤＲに対するアミノ酸の割り当ては、特段の定めのない限り、実施形態によって、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ  （５ｔｈ  Ｅｄ．）、ＵＳ  Ｄｅｐｔ．  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，  ＰＨＳ，  ＮＩＨ，  ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｎｏ．  ９１−３２４２；  Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８７，  ＰＭＩＤ：  ３６８１９８１；  Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８９，  ＰＭＩＤ：  ２６８７６９８；  ＭａｃＣａｌｌｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９６，  ＰＭＩＤ：  ８８７６６５０；  あるいは、Ｄｕｂｅｌ，  Ｅｄ．  （２００７）  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，  ３ｒｄ  Ｅｄ．，  Ｗｉｌｙ−ＶＣＨ  Ｖｅｒｌａｇ  ＧｍｂＨ  ａｎｄ  Ｃｏ  ｏｒ  ＡｂＭ  （Ｏｘｆｏｒｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ／ＭＳＩ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｉａ）によって提供される番号付与方法の１つに従う。本開示のＣＤＲはＫａｂａｔの番号付与の慣習に必ず対応するということを意図するものではない。
【００６０】
「フレームワーク」または「ＦＲ」残基（または領域）との用語は、本明細書で定義されるようなＣＤＲまたは超可変領域の残基以外の可変ドメイン残基を指す。「ヒト・コンセンサス・フレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨフレームワーク配列の選択の際に最も一般的に生じるアミノ酸残基を表すフレームワークである。
【００６１】
本明細書で使用されるように、配列に対する「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」との用語は、最大のパーセント配列同一性を達成するために配列をアラインメントして、必要に応じてギャップを導入した後に、かつ、いかなる保存的置換も配列同一性の一部として考慮せずに、特定の配列中のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基の割合として定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的のためのアラインメントは、当該技術分野内の様々な方法で、例えば、ＥＭＢＯＳＳ  ＭＡＴＣＨＥＲ、ＥＭＢＯＳＳ  ＷＡＴＥＲ、ＥＭＢＯＳＳ  ＳＴＲＥＴＣＨＥＲ、ＥＭＢＯＳＳ  ＮＥＥＤＬＥ、ＥＭＢＯＳＳ  ＬＡＬＩＧＮ、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを用いて達成可能である。当業者は、比較されている配列の完全長での最大のアラインメントを達成するために必要とされるあらゆるアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための適切なパラメータを決定することができる。
【００６２】
本明細書で使用されるように、「消失半減期」は、ＧｏｏｄｍａｎとＧｉｌｌｍａｎのＴｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ２１−２５（Ａｌｆｒｅｄ  Ｇｏｏｄｍａｎ  Ｇｉｌｍａｎ，Ｌｏｕｉｓ  Ｓ．Ｇｏｏｄｍａｎ，ａｎｄ  Ａｌｆｒｅｄ  Ｇｉｌｍａｎ，ｅｄｓ．，６ｔｈ  ｅｄ．１９８０）に記載されるように、その通常の意味で使用される。簡潔にいえば、この用語は、薬物消失の時間経過の定量的尺度を包含することを意味している。薬物濃度が通常、消失プロセスの飽和に必要な濃度に達しないため、ほとんどの薬剤の消失は指数関数的なものである（すなわち、一次速度論に従う）。急激なプロセスの速度は、時間の単位当たりの分数変化率を表すその速度定数ｋによって、または、プロセスの５０％の完了に必要な時間であるその半減期ｔ１／２によって表され得る。これらの２つの定数の単位は、それぞれ時間−１および時間である。一次反応速度定数および反応の半減期は単純に関連づけられ（ｋ×ｔ１／２＝０．６９３）、適宜交換され得る。一次消失速度論は、薬物の一定の割合が時間単位ごとに失われることを規定するため、薬物濃度対時間の対数のプロットは、初期分布段階後（すなわち、薬物吸収と分布が完了した後）の全ての時間で直線状である。薬物消失の半減期は、そのようなグラフから正確に判定され得る。
【００６３】
本明細書で使用されるように、「結合親和性」との用語は、結合標的に対する本開示に記載されたタンパク質の親和性を指し、「Ｋｄ」値を数的に使用して表現される。２つ以上のタンパク質が、その結合標的に対して同等の結合親和性を有すると示されている場合、その結合標的に対するそれぞれのタンパク質の結合に関するＫｄ値は、互いの±２倍以内である。２つ以上のタンパク質が単一の結合標的に対して同等の結合親和性を有すると示されている場合、上記の単一結合標的に対するそれぞれのタンパク質の結合に関するＫｄ値は、互いの±２倍以内である。タンパク質が同等の結合親和性で２つ以上の標的に結合すると示されている場合、２つ以上の標的に対する上記タンパク質の結合に関するＫｄ値は、互いの±２倍以内である。一般に、高いＫｄ値は弱い結合に相当する。いくつかの実施形態では、「Ｋｄ」は、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）−２０００あるいはＢＩＡｃｏｒｅ（商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，  Ｉｎｃ．，  Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，  Ｎ．Ｊ．）を使用して放射標識された抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）または表面プラズモン共鳴アッセイによって測定される。ある実施形態では、「ｏｎ−ｒａｔｅ」あるいは「会合速度（ｒａｔｅ  ｏｆ  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎまたはａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｒａｔｅ）」あるいは「ｋｏｎ」、および「オフ率」あるいは「解離速度（ｒａｔｅ  ｏｆ  ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）または（ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｒａｔｅ）」、または「ｋｏｆｆ」もＢＩＡｃｏｒｅ（商標）−２０００あるいはＢＩＡｃｏｒｅ（商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，  Ｉｎｃ．，  Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，  Ｎ．Ｊ．）を使用して、表面プラズモン共鳴技術で決定される。さらなる実施形態では、「Ｋｄ」、「ｋｏｎ」、および「ｋｏｆｆ」は、ＯＣＴＥＴ（登録商標）システムズ（Ｐａｌｌ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して測定される。ＯＣＴＥＴ（登録商標）Ｓｙｓｔｅｍｓを使用して、結合親和性を測定する例示的な方法では、リガンド、例えば、ビオチン化されたヒトまたはカニクイザルのＢＣＭＡは、ＯＣＴＥＴ（登録商標）ストレプトアビジンキャピラリーセンサー先端表面に固定され、その後、ストレプトアビジンの先端は約２０−５０μｇ／ｍｌのヒトまたはカニクイザルのＢＣＭＡタンパク質を使用してメーカーの説明書に従って活性化される。ＰＢＳ／カゼインの溶液も遮断薬として導入される。結合反応速度測定に関して、ＢＣＭＡ結合タンパク質変異体は、約１０ｎｇ／ｍＬ〜約１００μｇ／ｍＬ、約５０ｎｇ／ｍＬ〜約５μｇ／ｍＬ、または約２ｎｇ／ｍＬ〜約２０μｇ／ｍＬの範囲の濃度で導入される。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合単一ドメインタンパク質は、約２ｎｇ／ｍＬ〜約２０μｇ／ｍＬの範囲の濃度で使用される。完全解離は、陰性対照である、結合タンパク質を含まないアッセイ緩衝液の場合に観察される。その後、結合反応の速度論的パラメータは、適切なツール、例えば、ＦｏｒｔｅＢｉｏソフトウェアを使用して決定される。
【００６４】
用語「約（ａｂｏｕｔ）」または「およそ（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」は、当業者によって決定されるような特定の値の許容可能な誤差範囲内であることを意味し、これは、その値がどのように測定または決定されるか、例えば、測定システムの制限に部分的に依存している。例えば、「約」とは、任意の値での実践につき１または１を超える標準偏差を意味し得る。特定の値が本出願と請求項に記載されている場合、特段の定めのない限り、「約」との用語は、特定の値の許容可能な誤差範囲内を意味するものであると仮定されなければならない。
【００６５】
「個体」、「患者」、または「被験体」との用語は互換的に使用される。いかなる用語も、医療従事者（例えば、医師、正看護婦、ナース−プラクティショナー、医師助手、病棟勤務員、またはホスピス職員）の監督（例えば、持続的または断続的）を特徴とする状況を必要とせず、またはこれに限定されない。
【００６６】
本明細書で使用される用語は、特定の事例のみを記載することを目的としており、本発明を制限することを意図していない。本明細書で使用されるように、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が他に明白に示していない限り、同様に複数形を含むように意図される。さらに、用語「含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」「有すること（ｈａｖｉｎｇ）」、「有する（ｈａｓ）」、「とともに（ｗｉｔｈ）」、またはその変形が、詳細な記載および／または請求項のいずれかで使用される程度まで、そのような用語は、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」に類似した方法で含まれるように意図される。
【００６７】
１つの態様において、ＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質は、ＣＤ３に特異的に結合するドメイン（Ａ）、ヒトアルブミン（ＡＬＢ）に特異的に結合するドメイン（Ｂ）、およびＢＣＭＡに特異的に結合するドメイン（Ｃ）を含む。ＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質中の３つのドメインは任意の順序で配置される。したがって、ＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質のドメイン順序は以下のとおりであることが企図される：
Ｈ２Ｎ−（Ａ）−（Ｂ）−（Ｃ）−ＣＯＯＨ、
Ｈ２Ｎ−（Ａ）−（Ｃ）−（Ｂ）−ＣＯＯＨ、
Ｈ２Ｎ−（Ｂ）−（Ａ）−（Ｃ）−ＣＯＯＨ、
Ｈ２Ｎ−（Ｂ）−（Ｃ）−（Ａ）−ＣＯＯＨ、
Ｈ２Ｎ−（Ｃ）−（Ｂ）−（Ａ）−ＣＯＯＨ、または、
Ｈ２Ｎ−（Ｃ）−（Ａ）−（Ｂ）−ＣＯＯＨ。
【００６８】
いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質は、Ｈ２Ｎ−（Ａ）−（Ｂ）−（Ｃ）−ＣＯＯＨのドメイン順序を有する。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質は、Ｈ２Ｎ−（Ａ）−（Ｃ）−（Ｂ）−ＣＯＯＨのドメイン順序を有する。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質は、Ｈ２Ｎ−（Ｂ）−（Ａ）−（Ｃ）−ＣＯＯＨのドメイン順序を有する。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質は、Ｈ２Ｎ−（Ｂ）−（Ｃ）−（Ａ）−ＣＯＯＨのドメイン順序を有する。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質は、Ｈ２Ｎ−（Ｃ）−（Ｂ）−（Ａ）−ＣＯＯＨのドメイン順序を有する。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質は、Ｈ２Ｎ−（Ｃ）−（Ａ）−（Ｂ）−ＣＯＯＨのドメイン順序を有する。いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡドメイン（抗標的ドメインＴ）、抗ＣＤ３ドメイン（Ｃ）、および抗ＡＬＢドメイン（Ａ）は、抗ＣＤ３：抗ＡＬＢ：抗ＢＣＭＡ（ＣＡＴ）の配向にある。いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡドメイン（抗標的ドメインＴ）、抗ＣＤ３ドメイン（Ｃ）、および抗ＡＬＢドメイン（Ａ）は、抗ＢＣＭＡ：抗ＡＬＢ：抗ＣＤ３（ＴＡＣ）の配向にある。
【００６９】
いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質は、ドメイン順序がＨ２Ｎ−（Ａ）−（Ｂ）−（Ｃ）−ＣＯＯＨ、あるいは、Ｈ２Ｎ−（Ｃ）−（Ｂ）−（Ａ）−ＣＯＯＨとなるように、中央のドメインとしてＨＳＡ結合ドメインを有する。ＡＬＢ結合ドメインが中間ドメインであるそのような実施形態において、ＣＤ３とＢＣＭＡ結合ドメインは、それぞれの標的に結合するためのさらなる柔軟性を与えられることが企図される。
【００７０】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるＢＣＭＡ標的化三重特異性タンパク質は、配列表に記載される配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４３８−５９７）およびそのサブ配列を有するポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、三重特異性抗原結合タンパク質は、配列表に記載される配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：４８３−５９７）に対して少なくとも７０％−９５％またはそれ以上の相同性を有するポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、三重特異性抗原結合タンパク質は、配列表１に記載される配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８３−５９７）に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、それ以上の相同性を有するポリペプチドを含む。
【００７１】
本明細書に記載されるＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質は、細胞傷害性Ｔ細胞を補充することによりＢＣＭＡを発現する細胞を特異的に標的とすることができるように設計される。これは、単独の抗原を対象とする完全長の抗体を使用し、細胞傷害性Ｔ細胞を直接補充することができないＡＤＣＣ（抗体依存性細胞傷害）と比較して、有効性を改善する。対照的に、これらの細胞上で特異的に発現されたＣＤ３分子を結合することにより、ＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質は、非常に特異的なやり方で細胞傷害性Ｔ細胞を、ＢＣＭＡを発現する細胞と架橋することができ、それによって、Ｔ細胞の細胞毒性の可能性を標的細胞へ向けることができる。本明細書に記載されるＢＣＭＡ標三重特異性タンパク質は、ＴＣＲの一部を形成する、表面発現されたＣＤ３タンパク質に結合することによって細胞傷害性Ｔ細胞に結合する。特定の細胞の表面上で発現されたＣＤ３およびＢＣＭＡへの複数のＢＣＭＡ三重特異性抗原結合タンパク質の同時の結合は、Ｔ細胞活性化を引き起こし、特定のＢＣＭＡ発現細胞のその後の溶解を媒介する。したがって、ＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質は、強力で、特異的で、かつ効率的な標的細胞死滅を表示するように企図される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質は、病原性細胞（例えば、ＢＣＭＡを発現する腫瘍細胞）を除去するために細胞傷害性Ｔ細胞による標的細胞の死滅を刺激する。そのような実施形態のいくつかでは、細胞は選択的に除去され、それによって、毒性の副作用の可能性が減少する。
【００７２】
本明細書に記載されるＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質はさらに、従来のモノクローナル抗体とより小さな二重特異性の分子を上回る利点を与える。一般に、組換えタンパク質医薬品の有効性は、タンパク質自体の内因性の薬物動態学に極度に依存する。こうした利点の一つは、本明細書に記載されるＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質が、ＨＳＡに特異的なドメインなどの半減期延長ドメインを持っていることにより、薬物動態学的消失半減期を延長させたことである。この点について、本明細書に記載されるＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質は、実施形態によっては、約２、３、約５、約７、約１０、あるいは約１４日の延長された血清消失半減期を有する。このことは、消失半減期が比較的非常に短いＢｉＴＥまたはＤＡＲＴの分子などの他の結合タンパク質にとは対照的である。例えば、ＢｉＴＥのＣＤ１９×ＣＤ３二重特異性ｓｃＦｖ−ｓｃＦｖ融合分子は、消失半減期が短いため持続点滴（静脈内）による薬物送達を必要とする。ＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質のより長い内因性の半減時間はこの問題を解決し、それによって、低用量の医薬製剤、定期的な投与の減少、および／または新規な医薬組成物などの治療可能性を増加させる。
【００７３】
さらに本明細書に記載されるＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質はさらに、組織への浸透と組織への分布を強化するための最適なサイズを有する。サイズが大きければ、標的組織中でのタンパク質の浸透あるいは分布が制限されるか妨げられる。本明細書に記載されるＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質は、組織への浸透と分布を増強する小さなサイズを有することによりこれを回避する。これに応じて、本明細書に記載されるＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質は、いくつかの実施形態では、約５０ｋＤ−約８０ｋＤ、約５０ｋＤ−約７５ｋＤ、約５０ｋＤ−約７０ｋＤ、あるいは約５０ｋＤ−約６５ｋＤのサイズを有する。したがって、ＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質のサイズは、約１５０ｋＤであるＩｇＧ抗体よりも、および、約５５ｋＤであるが延長された半減期ではなく、ゆえに腎臓ですぐに除去されるＢｉＴＥとＤＡＲＴ二重特異性抗体分子よりも、有利である。
【００７４】
さらなる実施形態では、本明細書に記載されるＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質は、増強された組織への浸透と分布に最適なサイズを有する。これらの実施形態では、ＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質はできるだけ小さくなるように構築され、その一方で、その標的に対する特異性を保持する。これに応じて、これらの実施形態では、本明細書に記載されるＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質は、約２０ｋＤ−約４０ｋＤ、約２５ｋＤ−約３５ｋＤ、−約４０ｋＤ、−約４５ｋＤ、−約５０ｋＤ、−約５５ｋＤ、−約６０ｋＤ、−約６５ｋＤのサイズを有する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質は、約５０ｋＤ、４９ｋＤ、４８ｋＤ、４７ｋＤ、４６ｋＤ、４５ｋＤ、４４ｋＤ、４３ｋＤ、４２ｋＤ、４１ｋＤ、４０ｋＤ、約３９ｋＤ、約３８ｋＤ、約３７ｋＤ、約３６ｋＤ、約３５ｋＤ、約３４ｋＤ、約３３ｋＤ、約３２ｋＤ、約３１ｋＤ、約３０ｋＤ、約２９ｋＤ、約２８ｋＤ、約２７ｋＤ、約２６ｋＤ、約２５ｋＤ、約２４ｋＤ、約２３ｋＤ、約２２ｋＤ、約２１ｋＤ、または約２０ｋＤのサイズを有する。小さなサイズに対する典型的な手法は、ドメインの各々について単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）フラグメントを使用することによる。例えば、特定のＢＣＭＡ三重特異性抗原結合タンパク質は、ＢＣＭＡのために抗ＣＤ３  ｓｄＡｂ、抗ＡＬＢ  ｓｄＡｂ、およびｓｄＡｂを有する。これは、典型的なＢＣＭＡ三重特異性抗原結合タンパク質のサイズを４０ｋＤ未満に減少させる。したがって、いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質のドメインはすべて単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）フラグメントである。他の実施形態では、本明細書に記載される三重特異性ＢＣＭＡ標的タンパク質は、ＡＬＢおよび／またはＢＣＭＡのための小分子実体（ＳＭＥ）バインダーを含む。ＳＭＥバインダーは、平均して約５００〜２０００Ｄａのサイズの小分子であり、ソルターゼライゲーションあるいは抱合などの既知の方法によってＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質に結合される。これらの例では、ＢＣＭＡ標的三重特異性抗原結合タンパク質のドメインの１つは、ソルターゼ認識配列、例えば、ＬＰＥＴＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８２）である。ソルターゼ認識配列を有するＢＣＭＡ標的三重特異性抗原結合タンパク質にＳＭＥバインダーを結合させるために、タンパク質はソルターゼとＳＭＥバインダーでインキュベートされ、それによってソルターゼがＳＭＥバインダーを認識配列に結合させる。既知のＳＭＥバインダーは、ＢＣＭＡに結合するＭＩＰ−１０７２とＭＩＰ−１０９５を含む。
【００７５】
さらに他の実施形態において、本明細書に記載されるＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質のＢＣＭＡに結合するドメインは、ＢＣＭＡに結合するためのノッチンペプチドを含む。ノッチンはシステインノット足場を備えたジスルフィド安定したペプチドであり、約３．５ｋＤの平均サイズを有する。ノッチンは、ＢＣＭＡなどの特定の腫瘍分子への結合について企図されてきた。さらなる実施形態において、本明細書に記載されるＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質のＢＣＭＡに結合するドメインは、天然ＢＣＭＡリガンドを含む。
【００７６】
本明細書に記載されるＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質の別の特徴は、それらがドメインの柔軟な結合を有する単一のポリペプチド設計であるということである。これにより、ＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質の容易な産生と製造が可能になる。なぜなら、このタンパク質はベクターに容易に組み入れられる単一のｃＤＮＡ分子によってコード可能であるからである。さらに、本明細書に記載されるＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質が単量体の単一のポリペプチド鎖であるので、鎖の対形成の問題がなく、二量化のための要件もない。本明細書に記載されるＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質は、Ｆｃγ免疫グロブリンドメインを有する二重特異性のタンパク質などの他の報告されている分子とは異なり、凝集する傾向が低下している。
【００７７】
本明細書に記載されるＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質では、ドメインは内部リンカーＬ１とＬ２によって結合され、ここで、Ｌ１は、ＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質の第１と第２のドメインに結合し、Ｌ２はＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質の第２と第３のドメインに結合する。リンカーＬ１とＬ２は最適化された長さおよび／またはアミノ酸組成物を有する。いくつかの実施形態において、リンカーＬ１とＬ２は同じ長さとアミノ酸組成物を有する。他の実施形態では、Ｌ１とＬ２は異なる。ある実施形態では、内部リンカーＬ１および／またはＬ２は「短い」、つまり、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、あるいは１２のアミノ酸残基からなる。したがって、ある例では、内部リンカーは約１２以下のアミノ酸残基からなる。０のアミノ酸残基の場合、内部リンカーはペプチド結合である。特定の実施形態では、内部リンカーＬ１および／またはＬ２は「長い」、つまり、１５、２０、あるいは２５のアミノ酸残基「からなる」。いくつかの実施形態において、これらの内部リンカーは約３から約１５まで、例えば、８、９、あるいは１０の連続したアミノ酸残基からなる。内部リンカーＬ１とＬ２のアミノ酸組成物に関して、ペプチドは、ＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質に対して柔軟性を与える特性とともに選択され、結合ドメインに干渉せず、同様にプロテアーゼからの切断に抵抗しない。例えば、グリシンとセリンの残基は一般にプロテアーゼ抵抗性を与える。ＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質においてドメインに結合するのに適切な内部リンカーＬ１の例としては、限定されないが、（ＧＳ）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７２）、（ＧＧＳ）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７３）、（ＧＧＧＳ）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７４）、（ＧＧＳＧ）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７５）、（ＧＧＳＧＧ）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７６）、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７７）、（ＧＧＧＧＧ）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７８）、または（ＧＧＧ）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７９）が挙げられ、ここで、ｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９、あるいは１０である。１つの実施形態では、内部リンカーＬ１および／またはＬ２は、（ＧＧＧＧＳ）４（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８０）、あるいは、（ＧＧＧＧＳ）３（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８１）である。
【００７８】
ＣＤ３結合ドメイン
Ｔ細胞の応答の特異性は、ＴＣＲによって（主要組織適合複合体、ＭＨＣの文脈で表示された）抗原の認識によって媒介される。ＴＣＲの一部として、ＣＤ３は、細胞表面に存在する、ＣＤ３γ（ガンマ）鎖、ＣＤ３δ（デルタ）鎖、および２つのＣＤ３ε（イプシロン）鎖を含むタンパク質複合体である。完全なＴＣＲを含むために、ＣＤ３は、ＣＤ３ζ（ゼータ）と同様に、ＴＣＲのα（アルファ）とβ（ベータ）鎖と一緒に結合する。固定された抗ＣＤ３抗体によるなどしてＴ細胞上にＣＤ３をクラスター形成することで、Ｔ細胞受容体の結合に似ているがそのクローンに典型的な特異性とは無関係のＴ細胞活性化を引き起こす。
【００７９】
１つの態様において、本明細書に記載されるＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質は、ＣＤ３に特異的に結合するドメインを含む。１つの態様において、本明細書に記載されるＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質は、ヒトＣＤ３に特異的に結合するドメインを含む。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質は、ＣＤ３γに特異的に結合するドメインを含む。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質は、ＣＤ３δに特異的に結合するドメインを含む。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質は、ＣＤ３εに特異的に結合するドメインを含む。
【００８０】
さらなる実施形態において、本明細書に記載されるＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質は、ＴＣＲに特異的に結合するドメインを含む。ある例では、本明細書に記載されるＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質は、ＴＣＲのα鎖を特異的に結合するドメインを含む。ある例では、本明細書に記載されるＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質は、ＴＣＲのβ鎖を特異的に結合するドメインを含む。
【００８１】
いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ三重特異性抗原結合タンパク質のＣＤ３結合ドメインは、限定されないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体からのドメインを含むＣＤ３に結合するあらゆるドメインであり得る。例によっては、ＢＣＭＡ三重特異性抗原結合タンパク質が最終的に使用される同じ種に由来することがＣＤ３結合ドメインにとっては有益である。例えば、ヒトで使用するためには、抗体または抗体フラグメントの抗原結合ドメインからのヒトまたはヒト化残基を含めることが、ＢＣＭＡ三重特異性抗原結合タンパク質のＣＤ３結合ドメインには有益なことがある。
【００８２】
したがって、１つの態様では、抗原結合ドメインは、ヒト化抗体またはヒト抗体または抗体フラグメント、あるいはマウスの抗体または抗体フラグメントを含む。１つの実施形態では、ヒト化またはヒト抗ＣＤ３結合ドメインは、本明細書に記載されるヒト化またはヒト抗ＣＤ３結合ドメインの１つ以上（例えば、３つすべて）の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ  ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ  ＣＤＲ２）、および軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ  ＣＤＲ３）、および／または、本明細書に記載されるヒト化またはヒト抗ＣＤ３結合ドメインの１つ以上（例えば、３つすべて）の重鎖相補性決定領域１（ＨＣ  ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ  ＣＤＲ２）、および重鎖相補性決定領域３（ＨＣ  ＣＤＲ３）、例えば１つ以上、例えば、３つすべてのＬＣ  ＣＤＲと１つ以上、例えば、３つすべてのＨＣ  ＣＤＲを含む。
【００８３】
いくつかの実施形態において、ヒト化またはヒト抗ＣＤ３結合ドメインは、ＣＤ３に特異的なヒト化またはヒト軽鎖可変領域を含み、ＣＤ３に特異的な軽鎖可変領域は、ヒト軽鎖フレームワーク領域中のヒトあるいはヒト以外の軽鎖ＣＤＲを含む。ある例では、軽鎖フレームワーク領域はλ（ラムダ）軽鎖フレームワークである。他の例では、軽鎖フレームワーク領域はκ（カッパ）軽鎖フレームワークである。
【００８４】
いくつかの実施形態において、ヒト化またはヒト抗ＣＤ３結合ドメインは、ＣＤ３に特異的なヒト化またはヒト重鎖可変領域を含み、ＣＤ３に特異的な重鎖可変領域は、ヒト重鎖フレームワーク領域のヒトまたはヒト以外の重鎖ＣＤＲを含む。
【００８５】
ある例において、重鎖および／または軽鎖の相補性決定領域は、例えば、ムロモナブ−ＣＤ３（ＯＫＴ３）、オテリキシズマブ（ＴＲＸ４）、テプリズマブ（ＭＧＡ０３１）、ビジリズマブ（Ｎｕｖｉｏｎ）、ＳＰ３４、またはＸ３５−３、ＶＩＴ３、ＢＭＡ０３０（ＢＷ２６４／５６）、ＣＬＢ−Ｔ３／３、ＣＲＩＳ７、ＹＴＨ１２．５、Ｆ１１１−４０９、ＣＬＢ−Ｔ３．４．２、ＴＲ−６６、ＷＴ３２、ＳＰｖ−Ｔ３ｂ、１１Ｄ８、ＸＩＩＩ−１４１、ＸＩＩＩ−４６、ＸＩＩＩ−８７、１２Ｆ６、Ｔ３／ＲＷ２−８Ｃ８、Ｔ３／ＲＷ２−４Ｂ６、ＯＫＴ３Ｄ、Ｍ−Ｔ３０１、ＳＭＣ２、Ｆ１０１．０１、ＵＣＨＴ−１、およびＷＴ−３１などの既知の抗ＣＤ３抗体に由来する。
【００８６】
１つの実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメインは、本明細書で提供されるアミノ酸配列の軽鎖と重鎖を含む単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である。本明細書で使用されるように、「単鎖可変フラグメント」あるいは「ｓｃＦｖ」とは、軽鎖の可変領域を含む抗体フラグメントと、重鎖の可変領域を含む少なくとも１つの抗体フラグメントを指し、軽鎖と重鎖の可変領域は、短い柔軟なポリペプチドリンカーによって連続的に結合され、単一のポリペプチド鎖として発現可能であり、およびｓｃＦｖはそれが由来する無傷の抗体の特異性を保持する。実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメインは以下を含む：本明細書で提供される軽鎖可変領域のアミノ酸配列の少なくとも１つ、２つ、あるいは３つの修飾（例えば置換）を有するが、せいぜい３０、２０、あるいは１０の修飾（例えば置換）を有するアミノ酸配列、あるいは本明細書で提供されるアミノ酸配列に９５−９９％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域；および／または、本明細書で提供される重鎖可変領域のアミノ酸配列の少なくとも１つ、２つ、あるいは３つの修飾（例えば置換）を有するが、せいぜい３０、２０、あるいは１０の修飾（例えば置換）を有するアミノ酸配列、あるいは本明細書で提供されるアミノ酸配列に９５−９９％の同一性を有する配列を含む重鎖可変領域。１つの実施形態では、ヒト化またはヒト抗ＣＤ３結合ドメインはｓｃＦｖであり、本明細書に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域は、ｓｃＦｖリンカーによって本明細書に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域に結合される。ｓｃＦｖの軽鎖可変領域と重鎖可変領域は、例えば、以下の配向のいずれかであり得る：軽鎖可変領域−ｓｃＦｖリンカー−重鎖可変領域、あるいは重鎖可変領域−ｓｃＦｖリンカー−軽鎖可変領域。
【００８７】
いくつかの例では、ＣＤ３に結合するｓｃＦｖｓは、既知の方法に従って調製される。例えば、ｓｃＦｖ分子は、柔軟なポリペプチドリンカーを使用して、ＶＨとＶＬの領域を一緒に結合することにより、生成可能である。ｓｃＦｖ分子は、最適化された長さおよび／またはアミノ酸組成物を備えるｓｃＦｖリンカー（例えば、Ｓｅｒ−Ｇｌｙリンカー）を含む。これに応じて、いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖリンカーの長さは、ＣＤ３結合部位を形成するために、ＶＨまたはＶＬのドメインが他の可変ドメインと分子間で結合することができるような長さである。ある実施形態において、こうしたｓｃＦｖリンカーは「短い」、つまり、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、あるいは１２のアミノ酸残基からなる。したがって、ある例では、ｓｃＦｖリンカーは約１２以下のアミノ酸残基からなる。０のアミノ酸残基の場合、ｓｃＦｖリンカーはペプチド結合である。いくつかの実施形態において、これらのｓｃＦｖリンカーは約３から約１５、例えば、８、９、あるいは１０の連続的なアミノ酸残基からなる。ｓｃＦｖリンカーのアミノ酸組成物に関して、柔軟性を与え、可変ドメインに干渉せず、同様に、機能的なＣＤ３結合部位を形成するために２つの可変ドメインを接合する鎖間フォールディングを許可しないペプチドが選択される。例えば、グリシンとセリンの残基を含むｓｃＦｖリンカーは一般にプロテアーゼ抵抗性を与える。いくつかの実施形態において、ｓｃＦｖ中のリンカーはグリシンとセリンの残基を含む。ｓｃＦｖリンカーのアミノ酸配列は、例えば、ＣＤ３結合とｓｃＦｖの産生収率を改善するファージディスプレー方法によって最適化可能である。ｓｃＦｖ中の可変軽鎖ドメインと可変重鎖ドメインを結合するのに適切なペプチドｓｃＦｖリンカーの例としては、限定されないが、（ＧＳ）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７２）、（ＧＧＳ）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７３）、（ＧＧＧＳ）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７４）、（ＧＧＳＧ）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７５）、（ＧＧＳＧＧ）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７６）、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７７）、（ＧＧＧＧＧ）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７８）、または（ＧＧＧ）ｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７９）が挙げられ、ここで、ｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９、あるいは１０である。１つの実施形態では、内部リンカーＬ１および／またはＬ２は、（ＧＧＧＧＳ）４（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８０）、あるいは、（ＧＧＧＧＳ）３（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８１）である。リンカー長さの変動は活性を保持あるいは増強し、活性研究で優れた有効性をもたらすこともある。
【００８８】
いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ三重特異性抗原結合タンパク質のＣＤ３結合ドメインは、１０００ｎＭ以下、５００ｎＭ以下、２００ｎＭ以下、１００ｎＭ以下、８０ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、２０ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、１ｎＭ以下、あるいは０．５ｎＭ以下のＫＤのＣＤ３発現細胞上のＣＤ３に対する親和性を有する。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ三重特異性抗原結合タンパク質のＣＤ３結合ドメインは、１０００ｎＭ以下、５００ｎＭ以下、２００ｎＭ以下、１００ｎＭ以下、８０ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、２０ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、１ｎＭ以下、あるいは０．５ｎＭ以下のＫＤの、ＣＤ３ε、γ、あるいはδに対する親和性を有する。さらなる実施形態では、ＢＣＭＡ三重特異性抗原結合タンパク質のＣＤ３結合ドメインは、ＣＤ３に対する低い親和性（つまり、約１００ｎＭ以上）を有する。
【００８９】
ＣＤ３に結合するための親和性は、例えば、ＢＣＭＡ三重特異性抗原結合タンパク質自体あるいはそのＣＤ３結合ドメインのアッセイプレート上でコーティングされるＣＤ３に結合する能力により；微生物細胞表面上で表示されることで；溶液中などで、判定され得る。ＣＤ３に対する本開示のＢＣＭＡ三重特異性抗原結合タンパク質自体あるいはそのＣＤ３結合ドメインの結合活性は、ビーズ、基質、細胞などに対して、リガンド（例えば、ＣＤ３）、または、ＢＣＭＡ三重特異性抗原結合タンパク質自体あるいはそのＣＤ３結合ドメインを固定することにより、分析され得る。薬剤は、所定の温度で一定の期間インキュベートされた適切な緩衝液に結合パートナーに加えることができる。未結合材料を取り除くために洗浄した後、結合タンパク質は、例えば、ＳＤＳ、高いｐＨの緩衝液などで放出可能であり、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって分析可能である。
【００９０】
半減期延長ドメイン
本明細書では、抗原結合ドメインの半減期を延ばすドメインが企図される。そのようなドメインは、限定されないが、アルブミン結合ドメイン、Ｆｃドメイン、小分子、および、当該技術分野で知られている他の半減期延長ドメインを含むものと企図される。
【００９１】
ヒトアルブミン（ＡＬＢ）（約６７ｋＤａの分子質量）は、血漿中で最も大量のタンパク質であり、約５０ｍｇ／ｍｌ（６００μＭ）で存在し、ヒトにおいて約２０日の半減期を有している。ＡＬＢは、血漿ｐＨを維持するように役立ち、膠質の血圧に寄与し、多くの代謝物質と脂肪酸の担体として機能し、および、血漿の主要な薬物輸送タンパク質として役立つ。
【００９２】
アルブミンとの非共有結合性会合は、短命のタンパク質の消失半減期を延ばす。例えば、Ｆａｂフラグメントに対するアルブミン結合ドメインの組み換え型融合は、Ｆａｂフラグメントだけの投与と比較すると、マウスとウサギそれぞれへの静脈内投与時に、２５倍および５８倍のインビボの除去、ならびに２６倍および３７倍の半減期延長を結果としてもたらした。別の例において、アルブミンとの会合を促進するためにインスリンが脂肪酸でアシル化されると、ウサギまたはブタに皮下注射した時に、遅延性の効果が観察された。総じて、このような研究は、アルブミン結合と遅延性作用との連係を実証する。
【００９３】
１つの態様において、本明細書に記載されるＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質は、半減期延長ドメイン、例えば、ＡＬＢに特異的に結合するドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ三重特異性抗原結合タンパク質のＡＬＢ結合ドメインは、限定されないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体由来のドメインを含む、ＡＬＢに結合する任意のドメインであり得る。いくつかの実施形態において、ＡＬＢ結合ドメインは、ＨＳＡに特異的な単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、単一ドメイン抗体、例えば、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、およびラクダ由来の単一ドメイン抗体の可変ドメイン（ＶＨＨ）、ペプチド、リガンド、または小分子実体である。特定の実施形態において、ＡＬＢ結合ドメインは単一ドメイン抗体である。他の実施形態において、ＨＳＡ結合ドメインはペプチドである。いくつかの実施形態において、ＨＳＡ結合ドメインは小分子である。ＢＣＭＡ三重特異性抗原結合タンパク質のＨＳＡ結合ドメインはかなり小さく、いくつかの実施形態では、２５ｋＤ以下、２０ｋＤ以下、１５ｋＤ以下、または１０ｋＤ以下であることが企図される。特定の例において、ＡＬＢ結合は、ペプチドまたは小分子の実体である場合に、５ｋＤ以下である。
【００９４】
ＢＣＭＡ三重特異性抗原結合タンパク質の半減期延長ドメインは、ＢＣＭＡ三重特異性抗原結合タンパク質自体の薬物動力学と薬物動態の変化をもたらす。上記のように、半減期延長ドメインは消失半減期を延長する。半減期延長ドメインは、三重特異性抗原結合タンパク質の組織分布、浸透、および拡散の変化を含む、薬物動態学的特性も変化させる。いくつかの実施形態において、半減期延長ドメインは、半減期延長ドメインのないタンパク質と比較して、改善された組織（腫瘍を含む）標的化、組織分布、組織浸透、組織内での拡散、増強した有効性をもたらす。１つの実施形態において、治療方法は、減少量の三重特異性抗原結合タンパク質を効果的かつ効率的に利用して、その結果、非腫瘍細胞の細胞毒性の減少などの副作用の減少をもたらす。
【００９５】
さらに、半減期延長ドメインの結合親和性は、特定の三重特異性抗原結合タンパク質の特異的な消失半減期を標的とするように選択され得る。ゆえに、いくつかの実施形態において、半減期延長ドメインには高度な結合親和性がある。他の実施形態では、半減期延長ドメインには中程度の結合親和性がある。さらに他の実施形態において、半減期延長ドメインには、低いまたは最低限の（ｍａｒｇｉｎａｌ）結合親和性がある。典型的な結合親和性は、１０ｎＭ以下（高）、１０ｎＭと１００ｎＭの間（中）、および１００ｎＭ超（低）でのＫＤ濃度を含む。上記のように、ＡＬＢに対する結合親和性は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）など既知の方法により判定される。
【００９６】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるＡＬＢ結合ドメインは、単一ドメイン抗体を含む。
【００９７】
Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）結合ドメイン
Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ、ＴＮＦＲＳＦ１７、ＣＤ２６９）は、最終分化Ｂ細胞上で主として発現する腫瘍壊死ファミリー受容体（ＴＮＦＲ）スーパーファミリーに属する膜貫通タンパク質である。ＢＣＭＡ発現はＢ細胞血統に制限され、形質細胞と形質芽細胞上に存在し、およびある程度までは記憶Ｂ細胞に存在するが、末梢性のナイーブＢ細胞には事実上存在しない。ＢＣＭＡは、多発性骨髄腫（ＭＭ）細胞、白血病細胞、およびリンパ腫細胞上で発現される。
【００９８】
ＢＣＭＡは、ヒトの腸のＴ細胞性リンパ腫で見られるｔ（４；１６）（ｑ２６；ｐ１３）転座の分子分析によって同定され、インフレーム配列は１６ｐ１３．１染色体バンドにマッピングされた。
【００９９】
ヒトＢＣＭＡ  ｃＤＮＡは、１８４のアミノ酸ポリペプチドをコードする５５２ｂｐのオープンリーディングフレームを有する。ＢＣＭＡ遺伝子は、それぞれがＧＴドナーとＡＧ受容体コンセンサスプライシング部位とに隣接している２つのイントロンによって離される３つのエクソンへと組織され、１．２ｋｂの転写産物をコードする。ＢＣＭＡタンパク質の構造は、α−ヘリックス構造中の中央の２４アミノ酸疎水性領域に基づく不可欠な内在性膜貫通タンパク質を含む。
【０１００】
マウスＢＣＭＡ遺伝子は、ヒト１６ｐ１３領域にシンテニーな染色体１６に位置し、２つのイントロンによって離間された３つのエクソンをさらに含む。遺伝子は１８５アミノ酸タンパク質をコードする。マウスＢＣＭＡ  ｍＲＮＡは、形質細胞腫細胞（Ｊ５５８）において最大レベルで、およびＡ２０  Ｂ細胞リンパ腫株において適度なレベルで、４０４ｂｐの転写産物として発現される。マウスＢＣＭＡ  ｍＲＮＡ転写産物は、Ｔ細胞と樹状細胞起原のヒト細胞株とは対照的に、Ｔ細胞性リンパ腫（ＥＬ４、ＢＷ５１４７）と樹状細胞（ＣＢ１Ｄ６、Ｄ２ＳＣ１）株では低いレベルで検出された。マウスＢＣＭＡ  ｃＤＮＡ配列は、ヒトＢＣＭＡ  ｃＤＮＡ配列に６９．３％のヌクレオチド同一性を有し、これらの２つのｃＤＮＡ配列間のコード領域を比較する場合には、わずかに高い同一性（７３．７％）を有する。マウスＢＣＭＡタンパク質は、ヒトＢＣＭＡタンパク質に６２％同一であり、ヒトＢＣＭＡのように、内部膜貫通セグメントであり得る１つの疎水性領域を含有する。マウスとヒトの両方のＢＣＭＡタンパク質のＮ末端の４０アミノ酸ドメインは、ＴＮＦＲの細胞外のドメインで見られるシステイン反復モチーフの形成と一致する、６つの保存されたシステイン残基を有する。ＴＮＦＲスーパーファミリーのメンバーに似て、ＢＣＭＡタンパク質は、第１のシステインからの保存された芳香族残基４−６の残基Ｃ末端を含有する。
【０１０１】
ＢＣＭＡは細胞表面では発現されず、むしろ、ゴルジ体に位置する。ＢＣＭＡ発現の量は、細胞の分化（形質細胞で最も高い）の段階に比例する。
【０１０２】
それは、そのリガンドＢＡＦＦ（Ｂ細胞活性化因子、ＴＡＬＬ−１あるいはＴＮＦＳＦ１３Ｂとも呼ばれる）とＡＰＲＩＬ（Ａ増殖誘導リガンド）との相互作用により、Ｂ細胞の発育とホメオスタシスに関与する。
【０１０３】
ＢＣＭＡは、そのファミリーメンバーＴＡＣＩ（膜貫通アクチベーターおよびシクロフィリンリガンド相互作用物質）およびＢＡＦＦ−Ｒ（Ｂ細胞活性化因子受容体、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１３Ｃとしても知られている）と共に、体液性免疫、Ｂ細胞の発育とホメオスタシスの様々な態様を調節する。ＢＣＭＡの発現はＢ細胞分化においてやや遅れて現れ、骨髄中の形質芽細胞と形質細胞の長期生存に寄与する。ＢＣＭＡはさらに、多発性骨髄腫（ＭＭ）細胞の成長および生存を支えている。
【０１０４】
ＢＣＭＡは、長期的な体液性免疫を維持する形質細胞の生存を媒介する際のその機能的活性について主に知られている。
【０１０５】
癌、多発性骨髄腫、白血病、およびリンパ腫などのＢＣＭＡの過剰発現と関係する固形腫瘍疾患のための処置の選択肢を持つことに対するニーズがある。本開示は、ある実施形態では、腫瘍標的細胞の表面上のＢＣＭＡに特異的に結合する単一ドメインタンパク質を提供する。
【０１０６】
本明細書に記載されるＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質の設計は、ＢＣＭＡに対する結合ドメインが、限定されないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組み換え抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体由来のドメインを含む任意のタイプの結合ドメインになり得るという点で、ＢＣＭＡタンパク質に対する結合ドメインを柔軟なものとすることができる。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡに対する結合ドメインは、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、単一ドメイン抗体、例えば、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、およびラクダ由来の単一ドメイン抗体の可変ドメイン（ＶＨＨ）である。他の実施形態において、ＢＣＭＡに対する結合ドメインは、非Ｉｇ結合ドメイン、すなわち、アンチカリン（ａｎｔｉｃａｌｉｎｓ）、アフィリン（ａｆｆｉｌｉｎｓ）、アフィボディ（ａｆｆｉｂｏｄｙ）分子、アフィマー（ａｆｆｉｍｅｒｓ）、アフィチン（ａｆｆｉｔｉｎｓ）、アルファボディ（ａｌｐｈａｂｏｄｉｅｓ）、アヴィマー（ａｖｉｍｅｒｓ）、ＤＡＲＰｉｎｓ、フィノマー（ｆｙｎｏｍｅｒｓ）、クニッツドメインペプチド、およびモノボディなどの抗体模倣物である。さらなる実施形態において、ＢＣＭＡに対する結合ドメインは、ＢＣＭＡに結合するか、またはそれに会合するリガンドまたはペプチドである。またさらなる実施形態において、ＢＣＭＡに対する結合ドメインはノッチンである。またさらなる実施形態において、ＢＣＭＡに対する結合ドメインは小分子実体である。
【０１０７】
いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６９、４７０、あるいは４７１の配列を含むタンパク質に結合する。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６９、４７０、あるいは４７１と比較して、切断した配列を含むタンパク質に結合する。
【０１０８】
いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合ドメインは、抗ＢＣＭＡの抗体あるいは抗体変異体である。本明細書で使用されるように、「抗体変異体」との用語は、本明細書に記載される抗体の変異体および誘導体を指す。ある実施形態では、本明細書に記載される抗ＢＣＭＡ抗体のアミノ酸配列変異体が企図される。例えば、ある実施形態では、本明細書に記載される抗ＢＣＭＡ抗体のアミノ酸配列変異体は、抗体の結合親和性および／または他の生体特性を改善するために企図される。アミノ酸変異体を調製するための例示的な方法は、限定されないが、抗体をコードするヌクレオチド配列へ適切な修飾を導入すること、あるいはペプチド合成を含む。そのような修飾は、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失、および／または残基への挿入および／または置換を含む。
【０１０９】
最終構築物に到達するために、あらゆる欠失、挿入、および置換の組み合わせをつくることができるが、ただし、最終構築物は所望の特徴（例えば、抗原−結合）を有する。ある実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換を有する抗体変異体が提供される。置換突然変異誘発の対象部位はＣＤＲとフレームワーク領域を含む。そのような置換の例が以下に記載される。アミノ酸置換は、所望の抗体に導入されてもよく、所望の活性、例えば、保持された／改善された抗原結合、減少した免疫原性、あるいは改善されたＴ細胞媒介性の細胞毒性（ＴＤＣＣ）についてスクリーニングされた生成物へ導入されてもよい。保守的および非保存的なアミノ酸置換は抗体変異体の調製について企図される。
【０１１０】
変異体抗ＢＣＭＡ抗体を作製する置換の別の例では、親抗体の１つ以上の超可変領域残基が置換されている。概して、変異体は、親抗体と比較して、所望の特性の改善、例えば、親和性の増加、親和性の減少、免疫原性の減少、ｐＨ依存性の結合の増加に基づいて、選択される。
【０１１１】
いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質のＢＣＭＡ結合ドメインは、ＢＣＭＡに特異的な単一ドメイン抗体、例えば、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、ラマ由来のｓｄＡｂの可変ドメイン（ＶＨＨ）、ペプチド、リガンド、または小分子実体である。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質のＢＣＭＡ結合ドメインは、限定されないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体からのドメインを含む、ＢＣＭＡに結合する任意のドメインである。特定の実施形態において、ＢＣＭＡ結合ドメインは単一ドメイン抗体である。他の実施形態において、ＢＣＭＡ結合ドメインはペプチドである。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合ドメインは小分子である。
【０１１２】
一般に、単一ドメイン抗体との用語は、その最も広い意味において本明細書で使用されるように、特定の生体源あるいは特定の調製方法に限定されないことに着目されたい。単一ドメイン抗体は、その相補性決定領域が単一ドメインポリペプチドの一部である抗体である。例として、限定されないが、重鎖抗体、軽鎖を生来欠いている抗体、従来の４鎖状抗体に由来する単一ドメイン抗体、操作された抗体、および抗体由来のもの以外の単一ドメインスキャホールドが挙げられる。単一ドメイン抗体は、当該技術分野のいずれかであるか、あるいは、将来の単一ドメイン抗体であり得る。単一ドメイン抗体は、限定されないが、マウス、ヒト、ラクダ、ラマ、ヤギ、ウサギ、ウシを含む任意の種に由来し得る。例えば、いくつかの実施形態では、本開示の単一ドメイン抗体は、（１）自然発生の重鎖抗体のＶＨＨドメインの隔離；（２）自然発生のＶＨＨドメインをコードするヌクレオチド配列の発現；（３）自然発生のＶＨＨドメインの「ヒト化」、あるいはそのようなヒト化されたＶＨＨドメインをコードする核酸の発現；（４）任意の動物種に由来する、および、とりわけ人間などからの哺乳動物の種からの自然発生のＶＨドメインの「ラクダ化（ｃａｍｅｌｉｚａｔｉｏｎ）」、あるいは、そのようなラクダ化ＶＨドメインをコードする核酸の発現；（５）「ドメイン抗体」または「Ｄａｂ」の「ラクダ化」、あるいはそのようなラクダ化ＶＨドメインをコードする核酸の発現；（６）タンパク質、ポリペプチド、あるいは他のアミノ酸配列を調製するための合成技術または半合成技術の使用；（７）当該技術分野で知られている技術を使用した単一ドメイン抗体をコードする核酸の調製と、その後の上記のように得られた核酸の発現；および／または、（８）前述の１つ以上の任意の組み合わせ、によって、得られる。
【０１１３】
１つの実施形態では、単一ドメイン抗体は、ＢＣＭＡに対して向けられた自然発生重鎖抗体のＶＨＨドメインに対応する。本明細書にさらに記載されるように、そのようなＶＨＨ配列は通常、ＢＣＭＡ（つまり、ＢＣＭＡに対して向けられた免疫応答および／または重鎖抗体を生じさせるために）を有するラマの種を適切に免疫化することによって、上記ラマ由来の適切な生体サンプル（血液サンプル、血清サンプル、またはＢ細胞のサンプルなど）を得ることによって、および、当該技術分野で知られているあらゆる適切な技術を用いて上記サンプルから始まるＢＣＭＡに対して向けられたＶＨＨ配列を生成することにより、生成または入手可能である。
【０１１４】
別の実施形態において、ＢＣＭＡに対するそのような自然発生ＶＨＨドメインは、ラクダ科の動物のＶＨＨ配列の未処理のライブラリから、例えば、ＢＣＭＡ、あるいは、当該技術分野で知られている少なくとも１つのスクリーニング技術を用いて、その少なくとも１つの部分、断片、抗原決定基、あるいはエピトープを使用して、そのようなライブラリをスクリーニングすることによって、得られる。そのようなライブラリおよび技術は、例えば、ＷＯ９９／３７６８１、ＷＯ０１／９０１９０、ＷＯ０３／０２５０２０、およびＷＯ０３／０３５６９４に記載される。代替的に、未処理のＶＨＨライブラリに由来する改善された合成または半合成のライブラリが使用される。例えば、ＷＯ００／４３５０７に記載されるような、無作為の突然変異誘発および／またはＣＤＲシャッフリングなどの技術によって、未処理のＶＨＨライブラリから得られたＶＨＨライブラリなどである。
【０１１５】
さらなる実施形態において、ＢＣＭＡに対して向けられたＶＨＨ配列を得るためのさらに別の技術は、（つまり、ＢＣＭＡに対して向けられた免疫応答および／または重鎖抗体を産生するために）重鎖抗体を発現することができるトランスジェニック哺乳動物を適切に免疫化すること、上記トランスジェニック哺乳動物から適切な生体サンプル（血液サンプル、血清サンプル、またはＢ細胞のサンプル）を得ること、および、当該技術分野で知られているあらゆる適切な技術を使用して、上記サンプルから開始して、ＢＣＭＡに対して向けられたＶＨＨ配列を生成することを含む。例えば、この目的のために、重鎖抗体発現ラットまたはマウス、およびＷＯ０２／０８５９４５とＷＯ０４／０４９７９４に記載されるような方法と技術を使用することができる。
【０１１６】
いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質の抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体は、自然発生のＶＨＨドメインのアミノ酸配列に対応するが、「ヒト化している」、つまり、自然発生のＶＨＨ配列のアミノ酸配列中（および、とりわけ、フレームワーク配列内）の１つ以上のアミノ酸残基を、（例えば、上に示すような）ヒト由来の従来の４−鎖抗体からのＶＨドメイン中の対応する位置で生じるアミノ酸残基の１つ以上に置き換えることによって「ヒト化している」アミノ酸配列を有する単一ドメイン抗体を含む。これは、例えば、さらに以下の記載に基づいて、当業者に明らかな当該技術分野で知られているやり方で実施可能である。再度、本開示のそのようなヒト化された抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体がそれ自体で知られている任意の適切なやり方で得られ（つまり、上のポイント（１）−（８）で示されたように）、従って、出発物質として自然発生のＶＨＨドメインを含むポリペプチドを使用して得られたポリペプチドに厳密には限定されない。いくつかのさらなる実施形態では、単一ドメイン抗ＢＣＭＡ抗体は、本明細書に記載されるように、自然発生のＶＨドメインのアミノ酸配列に対応するが、「ラクダ化している」、つまり、従来の４−鎖抗体からの自然発生のＶＨドメインのアミノ酸配列中の１つ以上のアミノ酸残基を、重鎖抗体のＶＨＨドメイン中の対応する位置で生じるアミノ酸残基の１つ以上に置き換えることによって「ラクダ化している」、アミノ酸配列を有する単一ドメイン抗体を含む。そのような「ラクダ化」置換は好ましくは、ＶＨ−ＶＬ界面および／またはいわゆるラクダ科に顕著な残基を形成するか、ならびに／あるいは、そこに存在する、アミノ酸位置に挿入される（例えば、ＷＯ  ９４／０４６７８とＤａｖｉｅｓ  ａｎｄ  Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ（１９９４と１９９６）を参照）。好ましくは、ラクダ化単一ドメインを生成または設計するための出発物質または出発点として使用されるＶＨ配列は、好ましくは哺乳動物からのＶＨ配列、より好ましくはＶＨ３配列などのヒトのＶＨ配列である。しかしながら、特定の実施形態では、本開示のそのようなラクダ化された抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体は、当該技術分野で知られているやり方（つまり、上のポイント（１）−（８）で示されように）で得られ、したがって、出発物質としての自然発生のＶＨドメインを含むポリペプチドを用いて得られたポリペプチドに厳密には限定されないということに注意されたい。例えば、本明細書にさらに記載されるように、「ヒト化」および「ラクダ化」の両方は、自然発生のＶＨＨドメインあるいはＶＨドメインをコードするヌクレオチド配列を提供し、および、その後、新しいヌクレオチド配列が「ヒト化」または「ラクダ化」単一ドメイン抗体をそれぞれコードするようなやり方で提供されたヌクレオチド配列中の１つ以上のコドンを変えることによって、実行される。その後、この核酸は、本開示の所望の抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体を提供するために発現可能である。代替的に、他の実施形態では、自然発生のＶＨＨドメインあるいはＶＨドメインのアミノ酸配列にそれぞれ基づいて、本開示の所望のヒト化またはラクダ化抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体のそれぞれのアミノ酸配列がそれぞれ設計され、その後、ペプチド合成の既知の技術を用いてデノボ合成される。いくつかの実施形態において、自然発生のＶＨＨドメインあるいはＶＨドメインのアミノ酸配列あるいはヌクレオチド配列にそれぞれ基づいて、本開示の所望のヒト化またはラクダ化抗ＢＣＭＡ単鎖抗体をコードするヌクレオチド配列がそれぞれ設計され、その後、核酸合成の既知の技術を用いてデノボ合成され、その後、本開示の所望の抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体を得るために、このように得られた核酸を、既知の発現技術を用いて発現させる。
【０１１７】
自然発生のＶＨ配列またはＶＨＨ配列から始まる、本開示の抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体および／またはこの抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体をコードする核酸を得るための他の適切な方法および技術は、例えば、本開示の抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体あるいはこれをコードするヌクレオチド配列または核酸を提供するために、適切なやり方で、１つ以上の自然発生のＶＨ配列の１つ以上の部分（１つ以上のフレームワーク（ＦＲ）配列および／または相補性決定領域（ＣＤＲ）配列など）、１つ以上の自然発生のＶＨＨ配列の１つ以上の部分（１つ以上のＦＲ配列あるいはＣＤＲ配列など）、および／または、１つ以上の合成または半合成の配列を組み合わせることを含む。
【０１１８】
いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合ドメインは、重鎖可変相補性決定領域ＣＤＲ１、重鎖可変ＣＤＲ２、重鎖可変ＣＤＲ３、軽鎖可変ＣＤＲ１、軽鎖可変ＣＤＲ２、および軽鎖可変ＣＤＲ３を含む、抗ＢＣＭＡ特異的抗体を含む。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合ドメインは、限定されないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、あるいは抗原結合フラグメント、例えば、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）２、およびＦｖフラグメント、１つ以上のＣＤＲで構成されたフラグメント、単鎖抗体（例えば、単鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ））、ジスルフィド安定化（ｄｓＦｖ）Ｆｖフラグメント、ヘテロ共役抗体（例えば、二重特異性抗体）、ｐＦｖフラグメント、重鎖単量体または二量体、軽鎖単量体または二量体、ならびに１つの重鎖と１つの軽鎖からなる二量体からのドメインを含む、ＢＣＭＡに結合する任意のドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ結合ドメインは単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体は、重鎖可変相補性決定領域（ＣＤＲ）、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。
【０１１９】
いくつかの実施形態において、本開示のＢＣＭＡ結合タンパク質は、式：ｆ１−ｒ１−ｆ２−ｒ２−ｆ３−ｒ３−ｆ４によって表わされるように、３つの相補性決定領域／配列によって中断された４つのフレームワーク領域／配列（ｆ１−ｆ４）で構成されるアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、式中、ｒ１、ｒ２、およびｒ３はそれぞれ、相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３であり、ｆ１、ｆ２、ｆ３、およびｆ４はフレームワーク残基である。本開示のＢＣＭＡ結合タンパク質のｒ１残基は、例えば、アミノ酸残基２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、および３４を含み；本開示のＢＣＭＡ結合タンパク質のｒ２残基は、例えば、アミノ酸残基、例えば、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、および６３を含み；ならびに、本開示のＢＣＭＡ結合タンパク質のｒ３残基は、例えば、アミノ酸残基、例えば、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、および１０８を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４６−４６０から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０１２０】
１つの実施形態では、ＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９９のアミノ酸配列を含まない。１つの実施形態では、ＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６００のアミノ酸配列を含まない。１つの実施形態では、ＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６０１のアミノ酸配列を含まない。
【０１２１】
いくつかの実施形態において、ＣＤＲ１は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、あるいは１０のアミノ酸置換を有する、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に記載のアミノ酸配列あるいはその変異体を含む。例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３１で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６で��載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３７で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４１で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４３で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４５で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４９で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５０で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５１で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５３で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５６で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５７で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５８で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６０で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６１で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６２で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６３で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６４で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６５で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６６で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６７で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６８で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６９で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７０で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、Ｓ���Ｑ  ＩＤ  ＮＯ：７１で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７２で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７３で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７４で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７５で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７６で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７７で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７８で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７９で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８０で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８１で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８２で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８３で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８４で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８５で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８６で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８７で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８８で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８９で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９０で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９１で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９２で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９３で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９４で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９５で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９６で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９７で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９８で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９９で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１００で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０１で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０２で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０３で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０４で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０５で記載されるアミノ酸配��を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０６で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０７で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０８で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０９で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１０で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１１で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１２で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１３で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１４で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１５で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１６で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１７で記載されるアミノ酸配列を含む。
【０１２２】
いくつかの実施形態において、ＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２における１、２、３、４、５、６、７、８、９、あるいは１０のアミノ酸置換を有する、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２で記載される配列あるいは変異体を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１８で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１９で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２０で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２１で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２２で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２３で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２４で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２５で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２６で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２７で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２８で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２９で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３０で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３１で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３２で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３３で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３４で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３５で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３６で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３７で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３８で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３９で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４０で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４１で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４２で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４３で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４４で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４５で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４６で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４７で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４８で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４９で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５０で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５１で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５２で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５３で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５４で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５５で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５６で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５７で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５８で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５９で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６０で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６１で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６２で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６３で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６４で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６５で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６６で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６７で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６８で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７０で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７１で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７２で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７３で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７４で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７５で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７６で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７７で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７８で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７９で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８０で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８１で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８２で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤ��２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８３で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８４で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８５で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８６で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８７で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８８で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８９で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９０で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９１で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９２で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９３で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９４で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９５で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９６で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９７で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９８で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９９で記載されるアミノ酸配列を。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２００で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０１で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０２で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０３で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０４で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０５で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０６で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０７で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０８で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０９で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１０で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１１で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１２で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１３で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１４で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１５で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１６で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示���なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１７で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１８で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１９で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２０で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２１で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２２で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２３で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２４で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２５で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２６で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２７で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２８で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２９で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３０で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３１で記載されるアミノ酸配列を含む。
【０１２３】
いくつかの実施形態において、ＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３における１、２、３、４、５、６、７、８、９、あるいは１０のアミノ酸置換を有する、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３で記載される配列あるいは変異体を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３２で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３３で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３４で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３５で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３６で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３７で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３８で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３９で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４０で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４１で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４２で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４３で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４４で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４５で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４６で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４７で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４８で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４９で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５０で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５１で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５２で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５３で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５４で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５５で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５６で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５７で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５８で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５９で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６０で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６１で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６２で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６３で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６４で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６５で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６６で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６７で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６８で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６９で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７０で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７１で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７２で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７３で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７４で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７５で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７６で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７７で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７８で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７９で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８０で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８１で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８２で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８３で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８４で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８５で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８６で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８７で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８８で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８９で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９０で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９１で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９２で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９３で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９４で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９５で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９６で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤ��３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９７で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９８で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９９で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３００で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０１で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０２で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０３で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０４で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０５で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０６で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０７で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０８で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０９で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３１０で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３１１で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３１２で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３１３で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３１４で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３１５で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３１６で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３１７で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３１８で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３１９で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２０で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２１で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２２で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２３で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２４で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２５で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２６で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２７で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２８で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２９で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３０で記載されるアミノ酸配列を含む。別の���示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３１で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３２で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３３で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３４で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３５で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３６で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３７で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３８で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３９で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４０で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４１で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４２で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４３で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４４で記載されるアミノ酸配列を含む。別の例示的なＣＤＲ３は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４５で記載されるアミノ酸配列を含む。
【０１２４】
様々な実施形態において、本開示のＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４−１１７から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、あるいは約１００％同一であるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を有する。
【０１２５】
様々な実施形態において、本開示のＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１８−２３１から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、あるいは約１００％同一であるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を有する。
【０１２６】
様々な実施形態において、本開示のＢＣＭＡ結合タンパク質の相補性決定領域は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３２−３４５から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、あるいは約１００％同一であるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を有する。
【０１２７】
様々な実施形態において、本開示のＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４６−４６０から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、あるいは約１００％同一であるアミノ酸配列を有する。
【０１２８】
様々な実施形態において、本開示のＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６１あるいはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６２で記載されるアミノ酸配列と少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、あるいは約１００％同一であるアミノ酸配列を有するフレームワーク１（ｆ１）を有する。
【０１２９】
様々な実施形態において、本開示のＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６３で記載されるアミノ酸配列と少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、あるいは約１００％同一であるアミノ酸配列を有するフレームワーク２（ｆ２）を有する。
【０１３０】
様々な実施形態において、本開示のＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６４あるいはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６５で記載されるアミノ酸配列と少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、あるいは約１００％同一であるアミノ酸配列を有するフレームワーク３（ｆ３）を有する。
【０１３１】
様々な実施形態において、本開示のＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６６あるいはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６７で記載されるアミノ酸配列と少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、あるいは約１００％同一であるアミノ酸配列を有するフレームワーク４（ｆ４）を有する。
【０１３２】
いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４６の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４７の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４８の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４９の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５０の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５１の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５２の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５３の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５４の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５５の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５６の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５７の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５８の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５９の配列を含む単一ドメイン抗体である。
【０１３３】
いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６０の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６１の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６２の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６３の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６４の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６５の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６６の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６７の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６８の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６９の配列を含む単一ドメイン抗体である。
【０１３４】
いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３７０の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３７１の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３７２の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３７３の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３７４の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３７５の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３７６の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３７７の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３７８の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３７９の配列を含む単一ドメイン抗体である。
【０１３５】
いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８０の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８１の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８２の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８３の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８４の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８５の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８６の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８７の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８８の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８９の配列を含む単一ドメイン抗体である。
【０１３６】
いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９０の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９１の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９２の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９３の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９４の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９５の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９６の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９７の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９８の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９９の配列を含む単一ドメイン抗体である。
【０１３７】
いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４００の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０１の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０２の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０３の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０４の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０５の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０６の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０７の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０８の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０９の配列を含む単一ドメイン抗体である。
【０１３８】
いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４１０の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４１１の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４１２の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４１３の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４１４の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４１５の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４１６の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４１７の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４１８の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４１９の配列を含む単一ドメイン抗体である。
【０１３９】
いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２０の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２１の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２２の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２３の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２４の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２５の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２６の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２７の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２８の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２９の配列を含む単一ドメイン抗体である。
【０１４０】
いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４３０の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４３１の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４３２の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４３３の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４３４の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４３５の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４３６の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４３７の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４３８の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４３９の配列を含む単一ドメイン抗体である。
【０１４１】
いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４０の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４１の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４２の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４３の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４４の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４５の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４６の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４７の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４８の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４９の配列を含む単一ドメイン抗体である。
【０１４２】
いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４５０の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４５１の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４５２の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４５３の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４５４の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４５５の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４５６の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４５７の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４５８の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４５９の配列を含む単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６０の配列を含む単一ドメイン抗体である。
【０１４３】
本明細書に記載されるＢＣＭＡ結合タンパク質は、約０．１ｎＭから約５００ｎＭの範囲のｈＫｄを有するヒトのＢＣＭＡに結合することができる。いくつかの実施形態では、ｈＫｄの範囲は約０．１ｎＭから約４５０ｎＭである。いくつかの実施形態では、ｈＫｄの範囲は約０．１ｎＭから約４００ｎＭである。いくつかの実施形態では、ｈＫｄの範囲は約０．１ｎＭから約３５０ｎＭである。いくつかの実施形態では、ｈＫｄの範囲は約０．１ｎＭから約３００ｎＭである。いくつかの実施形態では、ｈＫｄの範囲は約０．１ｎＭから約２５０ｎＭである。いくつかの実施形態では、ｈＫｄの範囲は約０．１ｎＭから約２００ｎＭである。いくつかの実施形態では、ｈＫｄの範囲は約０．１ｎＭから約１５０ｎＭである。いくつかの実施形態では、ｈＫｄの範囲は約０．１ｎＭから約１００ｎＭである。いくつかの実施形態では、ｈＫｄの範囲は約０．１ｎＭから約９０ｎＭである。いくつかの実施形態では、ｈＫｄの範囲は約０．２ｎＭから約８０ｎＭである。いくつかの実施形態では、ｈＫｄの範囲は約０．３ｎＭから約７０ｎＭである。いくつかの実施形態では、ｈＫｄの範囲は約０．４ｎＭから約５０ｎＭである。いくつかの実施形態では、ｈＫｄの範囲は約０．５ｎＭから約３０ｎＭである。いくつかの実施形態では、ｈＫｄの範囲は約０．６ｎＭから約１０ｎＭである。いくつかの実施形態では、ｈＫｄの範囲は約０．７ｎＭから約８ｎＭである。いくつかの実施形態では、ｈＫｄの範囲は約０．８ｎＭから約６ｎＭである。いくつかの実施形態では、ｈＫｄの範囲は約０．９ｎＭから約４ｎＭである。いくつかの実施形態では、ｈＫｄの範囲は約１ｎＭから約２ｎＭである。
【０１４４】
いくつかの実施形態において、前述のＢＣＭＡ結合ドメインのいずれかは、精製しやすくするためにタグ付けされた親和性ペプチドである。いくつかの実施形態において、親和性ペプチドタグはさらに、Ｈｉｓタグあるいは６Ｘ−ｈｉｓ（Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７１）とも呼ばれる、６つの連続するヒスチジン残基である。
【０１４５】
ある実施形態では、本開示のＢＣＭＡ結合ドメインは、溶解可能なＢＣＭＡよりも薄膜境界ＢＣＭＡに優先的に結合する。細胞膜境界ＢＣＭＡは、ＢＣＭＡを発現する細胞の細胞膜表面中あるいはその表面上でのＢＣＭＡの存在を指す。溶解可能なＢＣＭＡは、表現するか、ＢＣＭＡを発現するまたは発現した細胞の細胞膜表面中またはその表面上にはもはや存在しないＢＣＭＡを指す。ある例では、溶解可能なＢＣＭＡは、被験体の血液および／またはリンパ循環の中に存在する。１つの実施形態において、ＢＣＭＡ結合ドメインは、可溶性ＢＣＭＡよりも少なくとも５倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、４０倍、５０倍、１００倍、５００倍、あるいは１０００倍大きい膜結合ＢＣＭＡに結合する。１つの実施形態において、本開示のＢＣＭＡ標的三重特異性抗原結合タンパク質は、可溶性ＢＣＭＡよりも３０倍大きい膜結合ＢＣＭＡに優先的に結合する。可溶性ＢＣＭＡよりも膜結合ＢＣＭＡに対する抗原結合タンパク質の優先的な結合の判定は、当該技術分野で周知のアッセイを使用して容易に判定され得る。
【０１４６】
三重特異性タンパク質
ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８３−５９７からなる群から選択されたアミノ酸配列を含む。
【０１４７】
一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８３のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８４のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８５のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８６のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８７のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８８のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８９のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４９０のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４９１のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４９２のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４９３のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４９４のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４９５のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４９６のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４９７のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４９８のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４９９のアミノ酸配列を含む。
【０１４８】
一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５００のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５０１のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５０２のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５０３のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５０４のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５０５のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５０６のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５０７のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５０８のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５０９のアミノ酸配列を含む。
【０１４９】
一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５１０のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５１１のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５１２のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５１３のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５１４のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５１５のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５１６のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５１７のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５１８のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５１９のアミノ酸配列を含む。
【０１５０】
一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２０のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２１のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２２のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２３のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２４のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２５のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２６のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２７のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２８のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２９のアミノ酸配列を含む。
【０１５１】
一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５３０のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５３１のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５３２のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５３３のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５３４のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５３５のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５３６のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５３７のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５３８のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５３９のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４０のアミノ酸配列を含む。
【０１５２】
一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４１のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４２のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４３のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４４のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４５のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４６のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４７のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５０４８のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４９のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５０のアミノ酸配列を含む。
【０１５３】
一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５１のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５２のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５３のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５４のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５５のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５６のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５７のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５８のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５９のアミノ酸配列を含む。
【０１５４】
一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５６０のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５６１のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５６２のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５６３のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５６４のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５６５のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５６６のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５６７のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５６８のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５６９のアミノ酸配列を含む。
【０１５５】
一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５７０のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５７１のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５７２のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５７３のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５７４のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５７５のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５７６のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５７７のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５７８のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５７９のアミノ酸配列を含む。
【０１５６】
一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５８０のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５８１のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５８２のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５８３のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５８４のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５８５のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５８６のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５８７のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５８８のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５８９のアミノ酸配列を含む。
【０１５７】
一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９０のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９１のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９２のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９３のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９４のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９５のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９６のアミノ酸配列を含む。一実施例では、ＢＣＭＡ結合三重特異性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９７のアミノ酸配列を含む。
【０１５８】
ＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質をコードするポリヌクレオチド
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＢＣＭＡ三重特異性結合タンパク質をコードするポリヌクレオチド分子も提供される。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド分子は、ＤＮＡ構築物として提供される。他の実施形態において、ポリヌクレオチド分子は、メッセンジャーＲＮＡ転写物として提供される。
【０１５９】
ポリヌクレオチド分子は、ペプチドリンカーにより分離されるか、あるいは他の実施形態ではペプチド結合により直接結合される３つの結合ドメインをコードする遺伝子を、適切なプロモーター、および随意に適切な転写ターミネーターに動作可能に結合された１つの遺伝子構築物に組み合わせることによって、ならびに、細菌または他の適切な発現系、例えば、ＣＨＯ細胞などにおいてそれを発現させることによってなどの既知の方法によって構築される。ＢＣＭＡ結合ドメインが小分子である実施形態において、ポリヌクレオチドは、ＣＤ３結合ドメインと半減期延長ドメインとをコードする遺伝子を含んでいる。半減期延長ドメインが小分子である実施形態において、ポリヌクレオチドは、ＣＤ３とＢＣＭＡとに結合するドメインをコードする遺伝子を含んでいる。利用されるベクター系および宿主に依存して、構成的および誘導性のプロモーターを含む、任意数の適切な転写および翻訳要素が使用されてもよい。プロモーターは、それぞれの宿主細胞においてポリヌクレオチドの発現を促進するために選択される。
【０１６０】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、さらなる実施形態を表すベクター、好ましくは発現ベクターへと挿入される。この組換えベクターは、既知の方法に従って構築され得る。とりわけ対象のベクターは、プラスミド、ファージミド、ファージ誘導体、ｖｉｒｉｉ（例えば、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、レンチウイルスなど）、およびコスミドを含む。
【０１６１】
様々な発現ベクター／宿主系は、記載された三重特異性抗原結合タンパク質のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含み、およびこのポリオヌクレオチドを発現させるために利用され得る。Ｅ．ｃｏｌｉにおける発現のための発現ベクターの例は、哺乳動物細胞における発現のためのｐＳＫＫ（Ｌｅ  Ｇａｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．（２００４）２８５（１）：１１１−２７）またはｐｃＤＮＡ５（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）である．
【０１６２】
ゆえに、本明細書に記載されるＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質は、いくつかの実施形態において、上述のようなタンパク質をコードするベクターを宿主細胞に導入することにより、および、タンパク質ドメインが発現され、分離され、随意にさらに精製され得る条件下において、上記宿主細胞を培養することにより、生成される。
【０１６３】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）への組込み
本開示のＢＣＭＡ標的三重特異性抗原結合タンパク質は、特定の例において、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）へと組み込むことができる。操作された免疫エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞は、本明細書に記載されるような抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体を含有する抗ＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質を含むＣＡＲを発現するために使用可能である。１つの実施形態において、本明細書に記載されるような抗ＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質を含むＣＡＲは、ヒンジ領域を介して膜貫通ドメインに、さらには共刺激ドメイン、例えば、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ５、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、あるいは４−１ＢＢから得られる機能的シグナル伝達ドメインに結合される。いくつかの実施形態において、ＣＡＲはさらに、４−１ＢＢおよび／またはＣＤ３ゼータなどの細胞内シグナル伝達ドメインをコードする配列を含む。
【０１６４】
ＢＣＭＡ三重特異性タンパク質の修飾
本明細書に記載されるＢＣＭＡ三重特異性標的タンパク質は、（ｉ）アミノ酸が遺伝子コードによりコードされたものでないアミノ酸残基で置換され、（ｉｉ）成熟ポリペプチドがポリエチレングリコールなどの別の化合物に融合され、または（ｉｉｉ）追加のアミノ酸が、リーダー配列または分泌配列、あるいはタンパク質の精製のための配列などのタンパク質に融合される、誘導体またはアナログを包含する。
【０１６５】
典型的な修飾は、限定されないが、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、ホスファチジルイノシトールの共有結合、架橋結合、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、共有結合の架橋の形成、シスチンの形成、ピログルタメートの形成、ホルミル化、ガンマカルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質分解性の加工、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化（ｓｅｌｅｎｏｙｌａｔｉｏｎ）、硫酸化、タンパク質へのアミノ酸の転移ＲＮＡ媒介性の付加、例えば、アルギニル化（ａｒｇｉｎｙｌａｔｉｏｎ）、およびユビキチン化を含む。
【０１６６】
修飾は、ペプチド骨格、アミノ酸側鎖、およびアミノ末端またはカルボキシル末端を含む、本明細書に記載されるＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質のあらゆる場所で行われる。ＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質の修飾に有用な特定の一般的なペプチド修飾は、グリコシル化、脂質付着、硫酸化、グルタミン酸残基のガンマ−カルボキシル化、ヒドロキシル化、共有結合性修飾によるポリペプチド中のアミノ基またはカルボキシル基、あるいはその両方の遮断、およびＡＤＰ−リボシル化を含む。
【０１６７】
医薬組成物
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＢＣＭＡ三重特異性結合タンパク質、ＢＣＭＡ三重特異性タンパク質のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むベクター、またはこのベクターにより形質転換される宿主細胞、および少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体を含む、医薬組成物も提供される。「薬学的に許容可能な担体」との用語は、限定されないが、成分の生物活性の有効性に干渉せず、および投与される患者に対して毒性ではない担体を含む。適切な薬学的担体の例は、当該技術分野で周知であり、リン酸緩衝食塩水、水、油／水エマルジョンなどのエマルジョン、様々なタイプの湿潤剤、無菌液などを含む。そのような担体は、従来の方法によって製剤することができ、適切な用量で被験体に投与することができる。好ましくは、組成物は滅菌される。これらの組成物はまた、防腐剤、乳化剤および分散剤などのアジュバントを含有し得る。微生物の作用の予防は、様々な抗菌剤および抗真菌剤を含めることによって確かなものとなり得る。さらなる実施形態は、凍結乾燥された形態で包まれるか、水性媒体で包まれる、上記のＢＣＭＡ三重特異性タンパク質の１つ以上を提供する。
【０１６８】
医薬組成物のいくつかの実施形態において、本明細書に記載されるＢＣＭＡ三重特異性標的タンパク質は、ナノ粒子に封入される。いくつかの実施形態において、ナノ粒子は、フラーレン、液晶、リポソーム、量子ドット、超常磁性微粒子、デンドリマー、またはナノロッドである。医薬組成物の他の実施形態において、ＢＣＭＡ三重特異性抗原結合タンパク質はリポソームに結合される。いくつかの例において、ＢＣＭＡ三重特異性抗原結合タンパク質は、リポソームの表面に結合される。いくつかの例において、ＢＣＭＡ三重特異性抗原結合タンパク質は、リポソームのシェル内に封入される。いくつかの例において、リポソームはカチオン性リポソームである。
【０１６９】
本明細書に記載されるＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質は、薬剤としての使用について企図される。投与は、異なる方法、例えば静脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、局所、または皮内の投与により達成される。いくつかの実施形態において、投与経路は、治療の種類、および医薬組成物に含まれる化合物の種類に依存する。投与レジメンは、主治医および他の臨床学的因子により決定される。１人の患者のための投与量は、患者の大きさ、体表面積、年齢、性別、投与される特定の化合物、投与の時間と経路、治療の種類、健康状態、および同時に投与される他の薬物を含む多くの要因に依存する。「有効な量」は、疾患の経過と重症度に影響を及ぼし、それによりそのような病状の減少または寛解を引き起こすのに十分な量の活性成分を指し、既知の方法を用いて決定され得る。
【０１７０】
いくつかの実施形態において、本開示のＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質は、週一回の頻度で最大１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。場合によっては、用量は、約１ｎｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇにおよぶ。いくつかの実施形態において、投与量は、約１ｎｇ／ｋｇ〜約１０ｎｇ／ｋｇ、約５ｎｇ／ｋｇ〜約１５ｎｇ／ｋｇ、約１２ｎｇ／ｋｇ〜約２０ｎｇ／ｋｇ、約１８ｎｇ／ｋｇ〜約３０ｎｇ／ｋｇ、約２５ｎｇ／ｋｇ〜約５０ｎｇ／ｋｇ、約３５ｎｇ／ｋｇ〜約６０ｎｇ／ｋｇ、約４５ｎｇ／ｋｇ〜約７０ｎｇ／ｋｇ、約６５ｎｇ／ｋｇ〜約８５ｎｇ／ｋｇ、約８０ｎｇ／ｋｇ〜約１μｇ／ｋｇ、約０．５μｇ／ｋｇ〜約５μｇ／ｋｇ、約２μｇ／ｋｇ〜約１０μｇ／ｋｇ、約７μｇ／ｋｇ〜約１５μｇ／ｋｇ、約１２μｇ／ｋｇ〜約２５μｇ／ｋｇ、約２０μｇ／ｋｇ〜約５０μｇ／ｋｇ、約３５μｇ／ｋｇ〜約７０μｇ／ｋｇ、約４５μｇ／ｋｇ〜約８０μｇ／ｋｇ、約６５μｇ／ｋｇ〜約９０μｇ／ｋｇ、約８５μｇ／ｋｇ〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．０９５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇである。場合によっては、用量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約０．２ｍｇ／ｋｇ；約０．２５ｍｇ／ｋｇ〜約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．４５ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇ、約０．７５ｍｇ／ｋｇ〜約３ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ〜約４ｍｇ／ｋｇ、約３．５ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ、約４．５ｍｇ／ｋｇ〜約６ｍｇ／ｋｇ、約５．５ｍｇ／ｋｇ〜約７ｍｇ／ｋｇ、約６．５ｍｇ／ｋｇ〜約８ｍｇ／ｋｇ、約７．５ｍｇ／ｋｇ〜約９ｍｇ／ｋｇ、または約８．５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇである。投与の頻度は、いくつかの実施形態において、ほぼ毎日（ａｂｏｕｔ  ｌｅｓｓ  ｔｈａｎ  ｄａｉｌｙ）、隔日、一日一回未満、週に二回、毎週、七日に一回、二週に一回、二週に一回、三週に一回、四週に一回、または月に一回である。場合によっては、投与の頻度は毎週である。場合によっては、投与の頻度は毎週であり、用量は最大１０ｍｇ／ｋｇである。場合によっては、投与の持続期間は約１日〜約４週間以上である。
【０１７１】
処置の方法
特定の実施形態において、本開示のＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質は、ＢＣＭＡを発現する腫瘍細胞を有する被験体に投与すると、インビボで腫瘍細胞の成長を減少させる。腫瘍細胞の成長の減少の測定は、当該技術分野で周知の複数の様々な方法によって判定され得る。非限定的な例には、腫瘍寸法の直接測定、切除した腫瘤の測定、および対照被験体との比較、解析の向上のために同位体または発光分子（例えばルシフェラーゼ）を使用する、または使用しない画像処理技術（例えばＣＴまたはＭＲＩ）を介した測定などが挙げられる。特異的な実施形態において、本開示の三重特異性タンパク質の投与は結果として、対照の抗原結合剤と比較して、腫瘍成長の少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％の、腫瘍細胞のインビボ成長の減少をもたらし、腫瘍の完全寛解および消失を示す。更なる実施形態において、本開示の三重特異性タンパク質の投与は結果として、対照の抗原結合剤と比較して、約５０−１００％、約７５−１００％、または約９０％−１００％の、腫瘍細胞のインビボ成長の減少をもたらす。更なる実施形態において、本開示の三重特異性タンパク質の投与は結果として、対照の抗原結合剤と比較して、約５０−６０％、約７０−８０％、約８０−９０％、または約９０％−１００％の、腫瘍細胞のインビボ成長の減少をもたらす。
【０１７２】
本明細書にはまた、いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるような抗ＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質の投与を含む、個体の免疫系を刺激するための方法と使用が提供される。いくつかの例において、本明細書に記載される抗ＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質の投与は、標的抗原を発現する細胞への細胞毒性を引き起こす、および／または持続させる。
【０１７３】
本明細書にはまた、いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるようなＢＣＭＡ結合タンパク質の投与を含む、個体の免疫系を刺激するための方法と使用が提供される。いくつかの例において、本明細書に記載されるＢＣＭＡ結合タンパク質の投与は、標的抗原を発現する細胞への細胞毒性を引き起こす、および／または持続させる。いくつかの例において、標的抗原を発現する細胞は、癌細胞または腫瘍細胞、または転移性の癌細胞または腫瘍細胞である、末端分化されたＢ細胞である。
【０１７４】
ＢＣＭＡ結合タンパク質、または本明細書に記載されるＢＣＭＡ結合タンパク質を含む多特異性結合タンパク質を個体に投与する工程を含む、ＢＣＭＡに関連する疾患、障害、または疾病の処置のための方法と使用も、本明細書で提供される。
【０１７５】
ＢＣＭＡに関連する疾患、障害、または疾病は、限定されないが、Ｂ細胞系統の癌または転移を含む。
【０１７６】
本開示のＢＣＭＡ結合タンパク質により、およびそれを使用する方法により処置、予防、または管理され得る癌には、限定されないが、原発性癌または転移性癌が挙げられる。
【０１７７】
白血病の例としては、限定されないが、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、同様に、多数のあまり一般的でないタイプ、例えば、ヘアリー細胞白血病（ＨＣＬ）、Ｔ細胞前リンパ球性白血病（Ｔ−ＰＬＬ）、大顆粒リンパ球性白血病、および成人Ｔ細胞白血病などが挙げられる。処置されるべき急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）亜型には、限定されないが、前駆体Ｂ急性リンパ芽球性白血病、前駆体Ｔ急性リンパ芽球性白血病、バーキット白血病、および急性混合型白血病が挙げられる。処置されるべき慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）亜型には、限定されないが、Ｂ細胞前リンパ球性白血病が挙げられる。処置されるべき急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）亜型には、限定されないが、急性前骨髄球性白血病、急性骨髄芽球白血病、および急性巨核芽球性白血病が挙げられる。処置されるべき慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）亜型には、限定されないが、慢性骨髄単球性白血病が挙げられる。
【０１７８】
主題の方法により処置されるべきリンパ腫の例には、限定されないが、ホジキン病、非ホジキン病、または、リンパ腫の任意の亜型が挙げられる。
【０１７９】
そのような多発性骨髄腫の例には、限定されないが、骨などの組織の多発性骨髄腫、例えば、くすぶり型多発性骨髄腫、非分泌型骨髄腫、骨硬化性骨髄腫などが挙げられる。
【０１８０】
そのような障害の検討のために、Ｆｉｓｈｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８５，  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，  ２ｄ  Ｅｄ．，  Ｊ．Ｂ．  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｃｏ．，  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ  ａｎｄ  Ｍｕｒｐｈｙ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９７，  Ｉｎｆｏｒｍｅｄ  Ｄｅｃｉｓｉｏｎｓ：  Ｔｈｅ  Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，  ａｎｄ  Ｒｅｃｏｖｅｒｙ，  Ｖｉｋｉｎｇ  Ｐｅｎｇｕｉｎ，  Ｐｅｎｇｕｉｎ  Ｂｏｏｋｓ  Ｕ．Ｓ．Ａ．，  Ｉｎｃ．，  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ）を参照されたい。
【０１８１】
本明細書で使用されるように、いくつかの実施形態において、「処置」、「処置すること」、または「処置された」とは、望ましくない生理的な疾病、障害、または疾患を遅らせる（減らす）こと、または、有益なまたは望ましい臨床結果を得ることを目的とする治療的処置を指す。本明細書に記載される目的のために、有益なまたは望ましい臨床結果として、限定されないが、症状の緩和；疾病、障害、または疾患の程度の減少；疾病、障害、または疾患の状態の安定化（すなわち、悪化しないこと）；疾病、障害、または疾患の発症を遅らせること、またはその進行を遅らせること；疾病、障害、または疾患の状態の改善；および、検出の可否にかかわらず、疾病、障害、または疾患の緩解（部分的または全体）、またはその亢進または改善が挙げられる。処置は、過剰なレベルの副作用のない臨床的に有意な反応の誘発を含む。処置はさらに、処置を受けない場合の予想される生存時間と比較して、生存時間の延長を含む。他の実施形態において、「処置」、「処置すること」、または「処置された」とは、予防的な処置を指し、その目的は、例えば、疾患の素因のある人（例えば、乳癌などの疾患に対する遺伝子マーカーをつけた個体）など、望ましくない生理的な疾病、障害、または疾患の発症を遅らせるか、またはその重症度を低下させることである。
【０１８２】
本明細書に記載される方法のいくつかの実施形態において、本明細書に記載されるようなＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質は、特定の疾患、障害、または疾病の処置のための薬剤と組み合わせて投与される。薬剤としては、限定されないが、抗体、小分子（例えば、化学療法剤）、ホルモン（ステロイド、ペプチドなど）、放射線療法（γ線、Ｘ線、および／または、放射性同位体、マイクロ波、ＵＶ放射などの指示された送達）、遺伝子治療（例えば、アンチセンス、レトロウイルス治療など）、および他の免疫療法に関する治療が挙げられる。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるような抗ＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質は、下痢止め薬、制吐剤、鎮痛剤、オピオイド、および／または非ステロイド性抗炎症薬と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるような抗ＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質は、抗癌剤と組み合わせて投与される。
【０１８３】
本開示の医薬組成物、投薬形態、およびキットを含む、本開示の様々な実施形態に使用され得る抗癌剤の非限定的な例は、以下を含む：アシビシン；アクラルビシン；アコダゾール塩酸塩；アクロニン；アドゼレシン；アルデスロイキン；アルトレタミン；アムボマイシン；アメタントロンアセテート；アミノグルテチミド；アムサクリン；アナストロゾール；アントラマイシン；アスパラギナーゼ；アスペルリン；アザシチジン；アゼテーパ；アズトマイシン；バチマスタット；ベンゾデパ；ビカルタミド；ビサントレン塩酸塩；ジメシル酸ビスナフィド；ビセレシン；硫酸ブレオマイシン；ブレキナーナトリウム；ブロピリミン；ブスルファン；カクチノマイシン；カルステロン；カラセミド；カルベティマー；カルボプラチン；カルムスチン；塩酸カルビシン；カルゼルシン；セデフィンガル；クロラムブシル；シロレマイシン；シスプラチン；クラドリビン；メシル酸クリスナトール；シクロホスファミド；シタラビン；ダカルバジン；ダクチノマイシン；ダウノルビシン塩酸塩；デシタビン；デクソロマプラチン；デザグアミン；メシル酸デザグアミン；ジアジコン；ドセタキセル；ドキソルビシン；ドキソルビシン塩酸塩；ドロロキシフェン；クエン酸ドロロキシフェン；プロピオン酸ドロモスタノロン；ドゥアゾマイシン；エダトレキセート；エフロルニチン塩酸塩；エルサミトルシン；エンロプラチン；エンプロメート；エピプロピジン；エピルビシン塩酸塩；エルブロゾール；エソルビシン塩酸塩；エストラムスチン；リン酸エストラムスチンナトリウム；エタニダゾール；エトポシド；リン酸エトポシド；エトプリン；塩酸ファドロゾール；ファザラビン；フェンレチニド；フロクスウリジン；リン酸フルダラビン；フルオロウラシル；フルロオシタビン；ホスキドン；ホスストリエシンナトリウム；ゲムシタビン；ゲムシタビン塩酸塩；ヒドロキシ尿素；イダルビシン塩酸塩；イホスファミド；イルモホシン；インターロイキンＩＩ（組み換えインターロイキンＩＩ、またはｒＩＬ２を含む）、インターフェロンα−２ａ；インターフェロンα−２ｂ；インターフェロンα−ｎ１、インターフェロンα−ｎ３；インターフェロンβ−Ｉａ；インターフェロンγ−Ｉｂ；イプロプラチン；イリノテカン塩酸塩；ランレオチドアセテート；レトロゾール；ロイプロリドアセテート；リアロゾール塩酸塩；ロメトレキソールナトリウム；ロムスチン；ロソキサントロン塩酸塩；マソプロコール；メイタンシン；メクロレタミン塩酸塩；酢酸メゲストロール；酢酸メレンゲストロール；メルファラン；メノガリル；メルカプトプリン；メトトレキサート；メトトレキサートナトリウム；メトプリン；メツレデパ；ミチンドミド；ミトカルシン；ミトクロミン；ミトジリン；ミトマルシン；ミトマイシン；ミトスペル；ミトタン；ミトキサントロン塩酸塩；ミコフェノール酸；ノコダゾール；ノガラマイシン；オルマプラチン；オクシスラン；パクリタキセル；ペガスパルガーゼ；ペリオマイシン；ペンタマスチン；硫酸ペプロマイシン；ペルホスファミド；ピポブロマン；ピポスルファン；ピロクサントロン塩酸塩；プリカマイシン；プロメスタン；ポルフィマーナトリウム；ポルフィロマイシン；プレドニマスチン；塩酸プロカルバジン；プロマイシン；ピューロマイシン塩酸塩；ピラゾフリン；リボプリン；ログレチミド；サフィンゴル；サフィンゴル塩酸塩；セムスチン；シムトラゼーネ；スパルホスエートナトリウム；スパルソマイシン；塩酸スピロゲルマニウム；スピロマスチン；スピロプラチン；ストレプトニグリン；ストレプトゾシン；スロフェナール；タリソマイシン；テコガランナトリウム；テガフール；塩酸トレクサトロン；テモポルフィン；テニポシド；テロキシロン；テストラクトン；チアミプリン；チオグアニン；チオテパ；チアゾフリン；チラパザミン；クエン酸トレミフェン；酢酸トレストロン；リン酸トリシビリン；トリメトレキサート；グルクロン酸トリメトレキサート；トリプトレリン；塩酸ツブロゾール；ウラシルマスタード；ウレデパ；バプレオチド；ベルテポルフィン；硫酸ビンブラスチン；硫酸ビンクリスチン；ビンデシン；硫酸ビンデシン；硫酸ビネピジン；硫酸ビングリシネート；硫酸ビンレウロジン；酒石酸ビノレルビン；硫酸ビンゾキジン；硫酸ビンゾキジン；ボロゾール；ゼニプラチン；ジノスタチン；塩酸ゾルビシン。抗癌剤の他の例は、限定されないが以下を含む：２０−ｅｐｉ−１，２５ジヒドロキシビタミンＤ３；５−エチニルウラシル；アビラテロン；アクラルビシン；アキルフルベン；アデシペノール；アドゼレシン；アルデスロイキン；ＡＬＬ−ＴＫアンタゴニスト；アルトレタミン；アムバマスチン；アミドックス；アミホスチン；アミノレブリン酸；アムルビシン；アムサクリン；アナグレリド；アナストロゾール；アンドログラホリド；血管形成阻害剤；アンタゴニストＤ；アンタゴニストＧ；アンタレリックス；抗背方化形態形成タンパク質−１（ａｎｔｉ−ｄｏｒｓａｌｉｚｉｎｇ  ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎ−１）；抗アンドロゲン、前立腺癌；抗エストロゲン；アンチネオプラストン；アンチセンスオリゴヌクレオチド；アフィジコリングリシネート；アポトーシス遺伝子モジュレーター；細胞死レギュレーター；アプリン酸；ａｒａ−ＣＤＰ−ＤＬ−ＰＴＢＡ；アルギニンデアミナーゼ；アスラクリン；アタメスタン；アトリマスチン；アクシナスタチン１；アクシナスタチン２；アクシナスタチン３；アザセトロン；アザトキシン；アザチロシン；バッカチンＩＩＩ誘導体；バラノール；バチマスタット；ＢＣＲ／ＡＢＬアンタゴニスト；ベンゾチロリン；ベンゾイルスタウロスポリン；ベータラクタム誘導体；ベータ−アレチン；ベタクラマイシンＢ；ベツリン酸；ｂＦＧＦ阻害剤；ビカルタミド；ビサントレン；ビサジリジンイルスペルミン；ビスナフィド；ビストラテンＡ；ビセレシン；ブレフレート；ブロピリミン；ブドチタン；ブチオニンスルホキシミン；カルシポトリオール；カルホスチンＣ；カンプトテシン誘導体；カナリポックスＩＬ−２；カペシタビン；カルボキサミド−アミノ−トリアゾール；カルボキシアミドトリアゾール；ＣａＲｅｓｔ  Ｍ３；ＣＡＲＮ  ７００；軟骨由来の阻害剤；カルゼルシン；カゼインキナーゼ阻害剤（ＩＣＯＳ）；カスタノスペルミン；セクロピンＢ；セトロレリックス；クロリン；クロロキノキサリンスルホンアミド；シカプロスト；シス−ポルフィリン；クラドリビン；クロミフェンア���ログ；クロトリマゾール；コリスマイシンＡ；コリスマイシンＢ；コンブレタスタチンＡ４；コンブレタスタチンアナログ；コナゲニン；クラムベシジン（ｃｒａｍｂｅｓｃｉｄｉｎ）８１６；クリスナトール；クリプトファイシン８；クリプトファイシンＡ誘導体；クラシンＡ；シクロペンタンチラキノーズ；シクロプラタム；シペマイシン；シタラビンオクホスフェート；細胞傷害性因子；シトスタチン；ダクリズマブ；デシタビン；デヒドロジデミンＢ；デスロレリン；デキサメタゾン；デキシホスファミド（ｄｅｘｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）；デクスラゾキサン；デクスベラパミル；ジアジコン；ジデミンＢ；ジドックス；ジエチルノルスペルミン；ジヒドロ−５−アザシチジン；ジヒドロタキソール，９−；ジオクサマイシン；ジフェニルスピロマスチン；ドセタキセル；ドコサノール；ドラセトロン；ドキシフルリジン；ドロロキシフェン；ドロナビノール；ズオカルマイシンＳＡ；エブセレン；エコムスチン；エデルホシン；エドレコロマブ；エフロルニチン；エレメン；エミテフール；エピルビシン；エプリステリド；エストラムスチンアナログ；エストロゲンアゴニスト；エストロゲンアンタゴニスト；エタニダゾール；リン酸エトポシド；エキセメスタン；ファドロゾール；ファザラビン；フェンレチニド；フィルグラスチム；フィナステリド；フラボピリドール；フレゼラスチン；フラステロン（ｆｌｕａｓｔｅｒｏｎｅ）；フルダラビン；塩酸フルオロダウノルニシン；ホルフェニメクス；ホルメスタン；ホストリエシン；ホテムスチン；ガドリニウムテクサピリン；硝酸ガリウム；ガロシタビン；ガニレリックス；ゼラチナーゼ阻害剤；ゲムシタビン；グルタチオン阻害剤；ハプスルファム；ヘレグリン；ヘキサメチレンビスアセトアミド；ヒペリシン；イバンドロニック酸；イダルビシン；イドキシフェン；イドラマントン（ｉｄｒａｍａｎｔｏｎｅ）；イルモホシン；イルモスタット；イミダゾアクリドン（ｉｍｉｄａｚｏａｃｒｉｄｏｎｅｓ）；イミキモド；免疫賦活剤ペプチド；インスリン様成長因子Ｉ受容体阻害剤；インターフェロンアゴニスト；インターフェロン；インターロイキン；イオベングアン；ヨードドキソルビシン；イポメアノール、４−；イロプラクト；イルソグラジン；イソベンガゾール；イソホモハリコンドリンＢ；イタセトロン；ジャスプラキノリド；カハラライドＦ；ラメラリン−Ｎトリアセテート；ランレオチド；レイナマイシン；レノグラスチム；硫酸レンチナン；レプトルスタチン；レトロゾール；白血病阻害因子；白血球アルファインターフェロン；ロイプロリド＋エストロゲン＋プロゲステロン；リュープロレリン；レバミソール；リアロゾール；線形ポリアミンアナログ；親油性二糖類ペプチド；親油性白金化合物；リッソクリナミド（ｌｉｓｓｏｃｌｉｎａｍｉｄｅ）７；ロバプラチン；ロンブリシン；ロメテレキソール；ロニダミン；ロソキサントロン；ＨＭＧ−ＣｏＡリダクターゼ阻害剤（限定されないが、ロバスタチン、プラバスタチン、フルバスタチン、スタチン、シンバスタチン、およびアトルバスタチンなど）；ロクソリビン；ラルトテカン；ルテチウムテクサピリン；リソフィリン；細胞溶解ペプチド；マイタンシン；マンノスタチンＡ；���リマスタット；マソプロコール；マスピン；マトリリシン阻害剤；マトリクスメタロプロテイナーゼ阻害剤；メノガリル；メルバロン；メタレリン；メチオニナーゼ；メトクロプラミド；ＭＩＦ阻害剤；ミフェプリストン；ミルテホシン；ミリモスチム；ミスマッチ二本鎖ＲＮＡ；ミトグアゾン；ミトラクトール；マイトマイシンアナログ；ミトナファイド；マイトトキシン繊維芽細胞増殖因子−サポリン；ミトキサントロン；モファロテン；モルグラモスチム；モノクローナル抗体、ヒト胎盤性性腺刺激ホルモン；モノホスホリル脂質Ａ＋ミオバクテリア細胞壁ｓｋ；モピダモール；多剤耐性遺伝子阻害剤；外発性腫瘍抑圧遺伝子１ベースの治療薬；マスタード抗癌剤；ミカペロキサイドＢ；ミコバクテリウム細胞壁抽出物；ミラポロン；Ｎ−アセチルジナリン；Ｎ−置換ベンズアミド；ナファレリン；ナグレスティップ；ナロキソン＋ペンタゾシン；ナパビン；ナフテルピン；ナルトグラスチム；ネダプラチン；ネモルビシン；ニーリドロニック酸；中性エンドペプチターゼ；ニルタミド；ニサマイシン；一酸化窒素モジュレーター；ニトロキシド抗酸化剤；ニトルリン；Ｏ６−ベンジルグアミン；オクトレオチド；オキセノン；オリゴヌクレオチド；オナプリストン；オンダンセトロン；オンダンセトロン；オラシン；経口サイトカイン誘発剤；オルマプラチン；オサテロン；オキサリプラチン；オグサウノマイシン；パクリタキセル；パクリタキセルアナログ；パクリタキセル誘導体；パラウアミン；パルミトイルリゾキシン；パミドロニック酸；パナキシトリオール；パノミフェン；パラバクチン；パゼリプチン；ペガスパルガーゼ；ペルデシン；ペントサンポリサルフェートナトリウム；ペントスタチン；ペントロゾール；ペルフルブロン；ペルホスファミド；ペリルアルコール；フェナジノマイシン；酢酸フェニル；ホスファターゼ阻害剤；ピシバニール；塩酸ピロカルピン；ピラルビシン；ピリトレキシム；プラセチンＡ；プラセチンＢ；プラスミノゲン活性化因子阻害剤；白金複合体；白金化合物；白金トリアミン複合体；ポルフィマーナトリウム；ポルフィロマイシン；プレドニゾン；プロピルビス−アクリドン；プロスタグランジンＪ２；プロテアソーム阻害剤；タンパク質Ａベースの免疫モジュレーター；プロテインキナーゼＣ阻害剤；プロテインキナーゼＣ阻害剤、微細藻類；チロシンホスファターゼタンパク質阻害剤；プリンヌクレオシド
ホスホリラーゼ阻害剤；プルプリン；ピラゾロアクリジン；ピリドキシル化したヘモグロビン・ポリオキシエチレン抱合体；ｒａｆアンタゴニスト；ラルチトレキセド；ラモセトロン；ｒａｓファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤；ｒａｓ阻害剤；ｒａｓ−ＧＡＰ阻害剤；脱メチル化レテリプチン；レニウムＲｅ  １８６エチドロネート；リゾキシン；リボザイム；ＲＩＩレチンアミド；ログレチミド；ロヒツキン；ロムルチド；ロキニメックス；ラビジノンＢ１；ラボキシル；サフィンゴル；セイントピン；ＳａｒＣＮＵ；サルコフィトールＡ；サルグラモスチム；Ｓｄｉ  １模倣物；セムスチン；セネスセンス由来の阻害剤１；センスオリゴヌクレオチド；シグナル伝達阻害剤；シグナル伝達モジュレーター；一本鎖抗原結合タンパク質；シゾフィラン；ソブゾキサン；ナトリウムボロカプテート；フェニル酢酸ナトリウム；サルバロル；ソマトメジン結合タンパク質；ソナーミン；スパルホシック酸；スピカマイシンＤ；スピロマスチン；スプレノペンチン；スポンジスタチン１；スクワラミン；幹細胞阻害剤；幹細胞分割阻害剤；スティピアミド；ストロメリシン阻害剤；サルフィノジン；超活性血管作用性小腸ペプチドアンタゴニスト；サラディスタ；スラミン；スウェインソニン；合成グリコサミノグリカン；タリムスチン；タモキシフェンメチオジド；タウロマスチン；タザロテン；テコガランナトリウム；テガフール；テルラピリウム；テロメラーゼ阻害剤；テモポルフィン；テモゾロミド；テニポシド；テトラクロロデカオキシド；テトラゾミン；サリブラスチン；チオコラリン；トロンボポイエチン；トロンボポイエチン模倣物；チマルファジン；チモポイエチン受容体アゴニスト；チモトリナン；甲状腺刺激ホルモン；スズエチルエチオプロプリン；チラパザミン；チタノセン二塩化物；トプセンチン；トレミフェン；全能性幹細胞因子；翻訳阻害剤；トレチノイン；トリアセチルウリジン；トリシビリン；トリメトレキサート；トリプトレリン；トロピセトロン；テュロステリド；チロシンキナーゼ阻害剤；チルホスチン；ＵＢＣ阻害剤；ウベニメクス；尿生殖洞由来の成長阻害因子；ウロキナーゼ受容体アンタゴニスト；バプレオチド；バリオリンＢ；ベクターシステム、赤血球遺伝子治療薬；ベラレゾール；ベラミン；アメリカツリスガラ；ベルテポルフィン；ビノレルビン；ビンザルチン；ＶＩＴＡＸＩＮ（登録商標）；ボロゾール；ザノテロン；ゼニプラチン；ジラスコルブ；およびジノスタチンスチマラマー。追加の抗癌剤は、５−フルオロウラシルおよびロイコボリンである。サリドマイドおよびトポイソメラーゼ阻害剤を利用する方法での使用時、これらの２つの薬剤は特に有用である。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質は、ゲムシタビンと組み合わせて使用される。
【０１８４】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるような抗ＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質は、手術の前、間、または後に投与される。
【０１８５】
いくつかの実施形態において、抗癌剤は、三重特異性タンパク質の任意の適切な手段を介して抱合される。
【０１８６】
ＢＣＭＡ発現の検出方法およびＢＣＭＡ関連の癌の診断方法
本開示の他の実施形態に従い、インビトロおよび／またはインビボでＢＣＭＡの発現を検出するためのキットが提供される。キットは、前述のＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質（例えば、標識された抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、三重特異性タンパク質）、および標識を検出するための１つ以上の化合物を含む。いくつかの実施形態において、標識は、蛍光標識、酵素標識、放射性標識、核磁気共鳴活性標識、発光標識、および発色団標識から成る群から選択される。
【０１８７】
場合によっては、ＢＣＭＡ発現は生体サンプルにおいて検出される。サンプルは、生検、剖検、および病態の試料由来の組織を含むがこれらに限定されない、任意のサンプルであり得る。生体サンプルはまた、組織の切片、例えば組織学目的のために得られた凍結切片を含む。生体サンプルは更に、血液、血清、血漿、痰、髄液、または尿などの体液を含む。
生体サンプルは、ヒトまたは非ヒト霊長類などの哺乳動物から典型的に得られる。
【０１８８】
本明細書に記載されるアッセイに使用するために得られるべきサンプルは組織を含み、体液は、当該技術分野における従来の手段（例えば均質化、血清単離など）を使用して処理され得る。従って、患者から得たサンプルは、本明細書に記載されるアッセイでの使用前に形質転換される。ＢＣＭＡは、サンプル中に存在する場合、例えば抗体に結合することにより、本明細書に記載された方法において更に形質転換される。
【０１８９】
一実施形態において、被験体のサンプルを本明細書に開示されるような抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と接触させることにより、および、サンプルへの単一ドメイン抗体の結合を検出することにより、被験体が癌を抱えるかどうかを判定する方法が提供される。対照サンプルへの抗体の結合と比較されるような、サンプルへの抗体の結合の増加は、被験体が癌を抱えていると特定する。
【０１９０】
別の実施形態において、癌と診断された被験体のサンプルを本明細書に開示されるような抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と接触させることにより、および、サンプルへの抗体の結合を検出することにより、被験体の癌の診断を確認する方法が提供される。対照サンプルへの抗体の結合と比較されるような、サンプルへの抗体の結合の増加は、被験体の癌の診断を確認する。
【０１９１】
開示された方法のいくつかの例において、三重特異性タンパク質のＢＣＭＡ単一ドメイン抗体は直接標識される。
【０１９２】
いくつかの例において、前記方法は更に、抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体に特異的に結合する第２の抗体をサンプルと接触させる工程；および第２の抗体の結合を検出する工程を含む。対照サンプルへの第２の抗体の結合と比較されるような、サンプルへの第２の抗体の結合の増加は、被験体の癌を検出し、または被験体の癌の診断を確認する。
【０１９３】
場合によっては、癌は、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫、または、ＢＣＭＡを発現する他のあらゆる型の癌である。
【０１９４】
いくつかの例において、対照サンプルは、癌のない被験体のサンプルである。特定の例において、サンプルは血液または組織のサンプルである。
【０１９５】
場合によっては、ＢＣＭＡに結合する（例えば特異的に結合する）抗体は、検出可能な標識により直接標識される。別の実施形態において、ＢＣＭＡに結合する（例えば特異的に結合する）抗体（第１の抗体）は標識されず、ＢＣＭＡに特異的に結合する抗体に結合可能な第２の抗体または他の分子が標識される。第２の抗体は、第１の抗体の特異的な種およびクラスに特異的に結合できるように選択される。例えば、第１の抗体がラマＩｇＧである場合、第２の抗体は抗ラマＩｇＧであり得る。抗体に結合可能な他の分子は、限定されないが、共に市販で入手可能なプロテインＡおよびプロテインＧを含む。抗体または第２の抗体に適したラベルは上述されており、様々な酵素、補欠分子族団、蛍光体、発光体、磁性薬剤、および放射性物質が挙げられる。適切な酵素の非限定的な例には、ホースラディシュペルオキシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、βガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼが挙げられる。適切な補欠分子団複合体の非限定的な例には、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンが挙げられる。適切な蛍光体の非限定的な例には、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリド、またはフィコエリトリンが挙げられる。非限定的で典型的な発光材料はルミノールであり；非限定的で典型的な磁性薬剤はガドリニウムであり、非限定的で典型的な放射性標識には１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓ、または３Ｈが挙げられる。
【０１９６】
代替的な実施形態において、ＢＣＭＡは、検出可能な物質で標識したＢＣＭＡ標準、およびＢＣＭＡに特異的に結合する非標識抗体を利用する、競合イムノアッセイによって、生体サンプル中でアッセイされ得る。このアッセイにおいて、標識されたＢＣＭＡ標準、およびＢＣＭＡに特異的に結合する抗体が組み合わせられ、非標識抗体に結合される標識されたＢＣＭＡ標準の量が判定される。生体サンプル中のＢＣＭＡの量は、ＢＣＭＡに特異的に結合する抗体に結合される標識されたＢＣＭＡ標準の量に反比例する。
【０１９７】
本明細書に開示されるイムノアッセイと方法は、多数の目的のために使用可能である。一実施形態において、ＢＣＭＡに特異的に結合する抗体が、細胞培養における細胞中のＢＣＭＡの産生を検出するために使用されてもよい。別の実施形態において、抗体は、組織サンプルや、血液または血清のサンプルなどの生体サンプル中のＢＣＭＡの量を検出するために使用可能である。いくつかの例において、ＢＣＭＡは細胞表面ＢＣＭＡである。他の例において、ＢＣＭＡは、可溶性ＢＣＭＡ（例えば、細胞培養上清中のＢＣＭＡや、血液または血清のサンプルなどの体液サンプル中の可溶性ＢＣＭＡ）である。
【０１９８】
一実施形態において、キットが、血液サンプルまたは組織サンプルなどの生体サンプル中のＢＣＭＡの検出のために提供される。例えば、被験体における癌診断を確認するために、生検を実行して組織学的検査のための組織サンプルを取得できる。代替的に、血液サンプルを得て、可溶性ＢＣＭＡタンパク質またはフラグメントの存在を検出できる。ポリペプチドを検出するためのキットは典型的に、ＢＣＭＡに特異的に結合する、本開示に係る単一ドメイン抗体を含む。いくつかの実施形態において、ｓｃＦｖフラグメント、ＶＨドメイン、またはＦａｂなどの抗体フラグメントが、キットに含まれる。更なる実施形態において、抗体は標識される（例えば、蛍光標識、放射標識、または酵素標識による）。
【０１９９】
一実施形態において、キットは、ＢＣＭＡに結合する抗体の使用手段を開示する教材を含む。教材は、電子的形態（コンピューターディスクまたはコンパクトディスクなど）で書き込まれ、目視でき（ビデオファイルなど）、または、インターネット、ワールドワイドウェブ、イントラネット、または他のネットワーク上で電子ネットワークを介して提供され得る。キットはまた、キットの設計対象となる特定用途を容易にするための付加的な構成要素を含んでもよい。故に、例えばキットは、標識を検出する手段（酵素標識用の酵素基質、蛍光標識検出用のフィルターセット、第２の抗体などの適切な第２の標識など）を付加的に含み得る。キットは付加的に、緩衝剤、および特定の方法の実施に慣例的に使用される他の試薬を含み得る。そのようなキットおよび適切な内容物は、当業者に周知である。
【０２００】
一実施形態において、診断キットはイムノアッセイを含む。イムノアッセイの詳細は利用される特定のフォーマットに応じて変動し得るが、生体サンプル中のＢＣＭＡを検出する方法は通常、免疫学的反応条件下でＢＣＭＡポリペプチドに特異的に反応する抗体に生体サンプルを接触させる工程を含む。抗体は、免疫複合体を形成するために免疫学的反応条件下で特異的に結合することを可能とされ、免疫複合体（結合抗体）の存在が直接または間接的に検出される。
【０２０１】
細胞表面マーカーの有無を判定する方法が、当該技術分野で周知である。例えば、抗体は、酵素、磁気ビーズ、コロイド状磁気ビーズ、ハプテン、蛍光色素、金属化合物、放射性化合物または薬物を含むがこれらに限定されない、他の化合物へと抱合され得る。抗体はまた、限定されないが放射免疫定量法（ＲＩＡ）、ＥＬＩＳＡ、または免疫組織化学アッセイなどのイムノアッセイに利用可能である。抗体はまた、蛍光活性化細胞分類（ＦＡＣＳ）に使用可能である。ＦＡＣＳは、細胞を分離または選別するために、より洗練された他の検出レベルの中で、複数の色チャネル、低角度および鈍角の光散乱検出チャネル、およびインピーダンスチャネルを利用する（米国特許５，０６１，６２０号を参照）。本明細書に開示されるような、ＢＣＭＡに結合する単一ドメイン抗体の何れかは、これらのアッセイに使用可能である。故に、抗体は、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、ＦＡＣＳ、組織免疫組織化学的検査、ウエスタンブロット、または免疫沈降法を含むがこれらに限定されない、従来のイムノアッセイに使用可能である。
【実施例】
【０２０２】
本出願は、以下の非限定的な実施例を参照することでさらに理解され得るものであり、実施例は本出願の典型的な実施形態として提供される。以下の実施例は、実施形態をより詳細に例示するために提示されるものであるが、本出願の広い範囲を制限するものと解釈されるべきではない。
【０２０３】
実施例１
タンパク質産生
【０２０４】
本開示に係るＢＣＭＡ結合タンパク質を含むＢＣＭＡ標的三重特異性分子の配列を、リーダー配列が先行し６ｘヒスチジンタグが後続する、哺乳動物発現ベクターｐＣＤＮＡ  ３．４（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）へとクローン化した（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７１）。Ｅｘｐｉ２９３細胞（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ａ１４５２７）を、Ｅｘｐｉ２９３培地中の０．２〜８ｘ１ｅ６細胞／ｍｌでＯｐｔｉｍｕｍ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆｌａｓｋｓ（Ｔｈｏｍｓｏｎ）中の懸濁液において維持した。精製されたプラスミドＤＮＡを、Ｅｘｐｉ２９３  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｋｉｔ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ａ１４６３５）プロトコルに従ってＥｘｐｉ２９３細胞へとトランスフェクトし、トランスフェクション後、４−６日間維持した。トランスフェクトされたＥｘｐｉ２９３細胞からの、調製培地中の試験されている典型的な三重特異性タンパク質の量を、プロテインＡチップを備えたＯｃｔｅｔ器機を使用し、かつ標準曲線に対して対照の三重特異性タンパク質を使用して、定量した。
【０２０５】
Ｔ細胞依存性細胞毒性試験
【０２０６】
調整培地の滴定をＴＤＣＣアッセイ（Ｔ細胞依存性細胞細胞毒性試験）に加えて、抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体が、Ｔ細胞とＢＣＭＡ発現細胞株との間にシナプスを形成し、Ｔ細胞にＢＣＭＡ発現細胞株を死滅させるのかどうかを評価した。このアッセイにおいて（Ｎａｚａｒｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１５．  Ｊ．  Ｂｉｏｍｏｌ．  Ｓｃｒｅｅｎ．，  ２０：５１９−２７）、Ｔ細胞および標的癌細胞株を、３８４ウェルのプレート内で１０：１の比率で混合し、試験されている可変量の三重特異性タンパク質を加えた。腫瘍細胞株を操作して、ルシフェラーゼタンパク質を発現させた。４８時間後、残る生存可能な腫瘍細胞を定量するために、ＳＴＥＡＤＹ−ＧＬＯ（登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用した。
【０２０７】
この実施例ではＥＪＭ細胞を使用し、これは多発性骨髄腫および形質細胞性白血病に対するインビトロのモデルとして役立つ細胞株である。ＥＪＭ細胞の生存率を４８時間後に測定する。三重特異性タンパク質がＴ細胞死滅を媒介したことを確認した。図２は、陰性対照と比較した、検査タンパク質０１Ｈ０８、０１Ｆ０７、０２Ｆ０２、およびＢＨ２５３を用いる細胞生存率アッセイの一例を示す。他の様々な三重特異性タンパク質のＴＤＣＣ活性に対するＥＣ５０を、以下の表１に列挙する。
【０２０８】
結合親和性
【０２０９】
本試験において、本開示に係るＢＣＭＡ結合タンパク質を含む三重特異性タンパク質を標的とするＢＣＭＡのヒトＢＣＭＡタンパク質の結合親和性を判定した。親和性測定を表１に列挙する。
【０２１０】
【表１−１】
2020537644.tif 000003
【０２１１】
【表１−２】
2020537644.tif 000004
【０２１２】
【表１−３】
2020537644.tif 000005
【０２１３】
【表１−４】
2020537644.tif 000006
【０２１４】
ＮＤ：判定されず。
【０２１５】
分子０１Ｈ０８、０１Ｆ０７、０１Ｈ０６、０２Ｇ０２、０２Ｂ０５、０１Ｃ０１、０２Ｆ０２、０２Ｅ０５、０１Ｅ０８、０２Ｃ０１、０２Ｅ０６、０２Ｂ０６、０２Ｆ０４、０１Ｇ０８、０２Ｃ０６、０１Ｈ０９、０１Ｆ０４、０１Ｄ０２、０２Ｄ１１、０１Ａ０７、０２Ｃ０３、０２Ｆ０７、０１Ｅ０４、０２Ｈ０９、０１Ｅ０３、０２Ｆ０５、０１Ｂ０５、０１Ｃ０５、０２Ｆ１２、０１Ｈ１１、０２Ｇ０６、０１Ｅ０６、０１Ｇ１１、０２Ａ０５、０１Ａ０８、０２Ｇ０５、０１Ｂ０９、０１Ｇ０１、０１Ｂ０６、０１Ｆ１０、０１Ｅ０５、０２Ｇ０１、０１Ａ０６、０２Ｂ０４、０１Ｄ０６、０２Ｂ０７、０２Ｂ１１、０１Ｈ０４、０１Ｄ０３、０１Ａ０５、０２Ｆ１１、０１Ｄ０４、０１Ｂ０４、０２Ｃ０５、０２Ｅ０３、０１Ｄ０５、０１Ｃ０４、０１Ｅ０７、０１Ｇ０６、０２Ｆ０６、０１Ｂ０１、０１Ｄ０７、０２Ａ０８、０１Ａ０２、０２Ｇ１１、０１Ｇ０４、０２Ｆ０３、０１Ｃ０６、０１Ａ０１では、ＴＤＣＣの効力が少なくとも２倍増加しており、また、親ＣＤＲ、２５３ＢＨ１０を持つ分子と比べて親和性の増加が示された。
【０２１６】
分子０１Ｈ０８、０１Ｆ０７、０１Ｈ０６、０２Ｇ０２、０２Ｂ０５、０１Ｃ０１、０２Ｆ０２、０２Ｅ０５、０１Ｅ０８、０２Ｃ０１、０２Ｅ０６、０２Ｂ０６、０２Ｆ０４、０１Ｇ０８、０２Ｃ０６、０１Ｈ０９、０１Ｆ０４、０１Ｄ０２、０２Ｄ１１、０１Ａ０７、０２Ｃ０３、０２Ｆ０７、０１Ｅ０４、０２Ｈ０９、０１Ｅ０３、０２Ｆ０５、０１Ｂ０５、０１Ｃ０５、０２Ｆ１２、０１Ｈ１１、０２Ｇ０６、０１Ｅ０６、０１Ｇ１１、０２Ａ０５、０１Ａ０８、０２Ｇ０５、０１Ｂ０９では、ＴＤＣＣの効力が少なくとも１０倍増加しており、また、親ＣＤＲ、２５３ＢＨ１０を持つ分子と比べて親和性の増加が示された。
【０２１７】
陰性対照としてこれらアッセイに含まれる抗ＧＦＰ三重特異性分子には、検出可能なＢＣＭＡ結合も、ＴＤＣＣアッセイにおける細胞生存率に対する効果もなかった（図示せず）。
【０２１８】
実施例２
Ｊｅｋｏ１、ＭＯＬＰ８、およびＯＰＭ２細胞に対する、本開示に係る三重特異性タンパク質を標的とする典型的なＢＣＭＡの、結合および細胞毒性活性を評価する方法
【０２１９】
タンパク質産生
【０２２０】
リーダー配列が先行し、６ｘヒスチジンタグが後続する、本開示に係るＢＣＭＡ結合タンパク質を含むＢＣＭＡ標的三重特異性分子の配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７１）を、前述のベクターと方法を用いて発現させたが（Ｒｕｎｎｉｎｇ  Ｄｅｅｒ  ａｎｄ  Ａｌｌｉｓｏｎ，  ２００４．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｐｒｏｇ．  ２０：８８０−９）、例外として、脂質ベースの試薬と非線形化プラスミドＤＮＡを細胞トランスフェクションに使用した。組み換え三重特異性タンパク質を、親和性クロマトグラフィー、イオン交換、および／またはサイズ排除クロマトグラフィーを使用して精製した。精製されたタンパク質を、理論的な吸光係数と吸光光度法を使用して定量した。クマシー染色されたＳＤＳ−ＰＡＧＥの画像は、タンパク質の純度を実証する（図３）。
【０２２１】
細胞毒性アッセイ
【０２２２】
ヒトＴ細胞依存性細胞毒性（ＴＤＣＣ）アッセイを使用して、Ｔ細胞に腫瘍細胞を死滅させる、三重特異性分子を含むＴ細胞エンゲージャー（ｅｎｇａｇｅｒｓ）の能力を測定した（Ｎａｚａｒｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１５．  Ｊ．  Ｂｉｏｍｏｌ  Ｓｃｒｅｅｎ．  ２０：５１９−２７）。このアッセイにおいて、Ｔ細胞および標的癌細胞株の細胞を、３８４ウェルのプレート中で１０：１の比率で混合し、試験される可変量の三重特異性タンパク質を加える。腫瘍細胞株を操作して、ルシフェラーゼタンパク質を発現させる。４８時間後、残る生存可能な腫瘍細胞を定量するために、Ｓｔｅａｄｙ−Ｇｌｏ（登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用した。
【０２２３】
本研究において、精製されたタンパク質の滴定をＴＤＣＣアッセイ（Ｔ細胞依存性細胞毒性試験）に加えて、抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体が、Ｔ細胞と、ＢＣＭＡを発現するＪｅｋｏ１、ＭＯＬＰ８、およびＯＰＭ２がん細胞株との間にシナプスを形成できるかどうかを評価した。Ｊｅｋｏ１はＢ細胞リンパ腫細胞株である。ＭＯＬＰ−８は骨髄細胞株である。ＯＰＭ−２はヒト骨髄細胞株である。
【０２２４】
細胞の生存率を４８時間後に測定した。三重特異性タンパク質がＴ細胞死滅を媒介したことを確認した。図４は、陰性対照と比較した、検査タンパク質を用いる細胞生存率アッセイの一例を示す。他の様々な三重特異性タンパク質のＴＤＣＣ活性に対するＥＣ５０を、以下の表２に列挙する。陰性対照としてこれらアッセイに含まれる抗ＧＦＰ三重特異性分子には、細胞生存率に対する効果はなかった（図示せず）。
【０２２５】
【表２】
2020537644.tif 000007
【０２２６】
結合親和性
【０２２７】
本試験において、本開示に係るＢＣＭＡ結合タンパク質を含む三重特異性タンパク質を標的とするＢＣＭＡのヒトＢＣＭＡタンパク質の結合親和性を判定した。
【０２２８】
【表３】
2020537644.tif 000008
【０２２９】
図３、図４、表２、および表３のデータは、ＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質が発言され、９０％を超える純度に精製され得ることを示す。精製されたタンパク質は、親のＢＣＭＡ標的配列を持つ三重特異性タンパク質に比べて約１３〜２１３倍多くの有力なＴＤＣＣ活性を示す。精製された三重特異性タンパク質は、約３〜７ｎＭの親和性を持つＢＣＭＡに結合する。
【０２３０】
実施例３
異種移植片腫瘍モデル
【０２３１】
本明細書に記載される典型的なＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質を、異種移植片モデルにおいて評価した。
【０２３２】
０日目、ＮＣＧマウスの皮下にＲＰＭＩ−８２２６細胞を接種させ、正常ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を腹腔内に移植した。典型的なＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質による処置（０２Ｂ０５）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２０）も、０日目に開始した（ｑｄｘ１０）（１０日間、一日一回）。三重特異性タンパク質０２Ｂ０５、または対照としてビヒクルの投与量は、５μｇ／ｋｇ、５０μｇ／ｋｇ、または５００μｇ／ｋｇであった。腫瘍容積を２５日間判定した。図３０に示すように、平均の腫瘍容積は、典型的なＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質（０２Ｂ０５）（５０μｇ／ｋｇ、または５００μｇ／ｋｇ）で処置したマウスのほうが、ビヒクルまたは低量のＢＣＭＡ三重特異性タンパク質（０２Ｂ０５）（５μｇ／ｋｇ）で処置したマウスよりも著しく少なかった。
【０２３３】
０日目、ＮＣＧマウスの皮下にＪｅｋｏ１細胞を接種させ、正常ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を腹腔内に移植した。典型的なＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質による処置（０２Ｂ０５）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２０）を、３日目に開始した（ｑｄｘ１０）（１０日間、一日一回）。三重特異性タンパク質０２Ｂ０５、または対照としてビヒクルの投与量は、５μｇ／ｋｇ、５０μｇ／ｋｇ、または５００μｇ／ｋｇであった。腫瘍容積を２５日間判定した。図３１に示すように、平均の腫瘍容積は、典型的なＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質（０２Ｂ０５）（５００μｇ／ｋｇ）で処置したマウスのほうが、ビヒクルまたは低投与量のＢＣＭＡ三重特異性タンパク質（０２Ｂ０５）（５μｇ／ｋｇまたは５０μｇ／ｋｇ）で処置したマウスよりも著しく少なかった。
【０２３４】
実施例４
多発性骨髄腫への、本開示のＢＣＭＡ三重特異性抗原結合タンパク質の投与に対する概念実証臨床試験プロトコル
【０２３５】
これは、多発性骨髄腫に対する処置として、実施例１のＢＣＭＡ三重特異性抗原結合タンパク質を試験するための第Ｉ／ＩＩ相臨床試験である。
【０２３６】
研究成果：
【０２３７】
一次：以前の実施例のＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質の最大耐用量
【０２３８】
二次：以前の実施例のＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質のインビボでの反応が臨床反応に関連するかどうかの判定
【０２３９】
第Ｉ相
【０２４０】
最大耐用量（ＭＴＤ）は、試験の第Ｉ相のセクションで判定される。
【０２４１】
１．１  最大耐用量（ＭＴＤ）は、試験の第Ｉ相のセクションで判定される。
【０２４２】
１．２  適格基準を満たす患者は、以前の実施例のＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質の試験にエントリーする。
【０２４３】
１．３  目標は、参加者に重度または対処不可能な副作用を引き起こすことなく安全に投与可能な、以前の実施例のＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質の最大投与量を同定することである。与えられる投与量は、先の試験に登録された参加者の数、および、投与量に対してどれほど十分に耐性があるかに依存する。全ての参加者が同じ投与量を受けるとは限らない。
【０２４４】
第ＩＩ相
【０２４５】
２．１  続く第ＩＩ相のセクションでは、以前の実施例のＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質の治療薬による治療の結果が少なくとも２０％の反応率となるかどうかを判定することを目標として、ＭＴＤにて処置が行われる。
【０２４６】
第ＩＩ相に対する一次成果−−−以前の実施例のＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質の治療の結果、患者の少なくとも２０％が臨床反応（爆発的な反応、軽微な反応、部分的な反応、または完全な反応）を達成するかどうかを判定する
【０２４７】
適格性
【０２４８】
試験に参加するための適格基準は以下のとおりである：
【０２４９】
多発性骨髄腫を抱える、および重症のまたは切迫した合併症（例えば、切迫した病的骨折、高カルシウム血症、腎不全）のない、以前に処置されていない患者。低度または中度の腫瘤を抱える無症状の患者はすべて、適格である。
【０２５０】
高度の腫瘤、徴候的または切迫した骨折、高カルシウム血症（調整カルシウム＞１１．５ｍｇ％）、貧血症（Ｈｇｂ＜８．５ｇｍ／ｄｌ）、腎不全（クレアチニン＞２．０ｍｇ／ｄｌ）、高血清乳酸デヒドロゲナーゼ（＞３００Ｕ／Ｌ）、または形質細胞性白血病（＞１０００／ｕｌ）を抱える患者は、不適格である。
【０２５１】
明らかな感染症、または原因不明の発熱は、処置の前に解決されねばならない。適切な肝機能（ＳＧＰＴ、ビリルビン、およびＬＤＨを含む）が必要とされる。
【０２５２】
患者は、１以下のＺｕｂｒｏｄパフォーマンスを有していなければならない。
【０２５３】
患者は、自身がこの試験の調査性質を承知していることを示すインフォームドコンセントを書面で提供しなければならない。
【０２５４】
平均余命は１年を超えていなければならない。
【０２５５】
特発性単一クローン性高ガンマグロブリン血症および非分泌性多発性骨髄腫を抱える患者は、不適格である。事前の治療が局所的な放射線療法、α−ＩＦＮ、またはＡＴＲＡによってのみ行われた患者は、適格である。事前に高用量のグルココルチコイドまたはアルキル化剤を受けた患者は、適格ではない。
【０２５６】
実施例５
本開示の典型的なＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質を用いる、ヒトおよびカニクイザルのＢＣＭＡ、ＣＤ３ε、およびアルブミンに対する親和性測定
【０２５７】
この試験の目的は、ヒトＢＣＭＡ、カニクイザルＢＣＭＡ、ヒトＣＤ３ε、カニクイザルＣＤ３ε、ヒトアルブミン、カニクイザルアルブミン、およびマウスアルブミンに対する、本開示の典型的なＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質（０２Ｂ０５）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２０）の親和性を評価することであった。親和性を、Ｏｃｔｅｔの器機を使用して測定した。これらの測定のために、先ずストレプトアビジン先端に、２．５ｎＭのヒトＢＣＭＡ−Ｆｃ、２．５ｎＭのカニクイザルＢＣＭＡ−Ｆｃ、２．５ｎＭのヒトＣＤ３ε−Ｆｃ、２．５ｎＭのカニクイザルＣＤ３ε−Ｆｃ、５０ｎＭのヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、５０ｎＭのカニクイザル血清アルブミン、または５０ｎＭのマウス血清アルブミンを充填した。続いて、典型的なＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質０２Ｂ０５を、先端によりインキュベートし、会合期間（ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｐｅｒｉｏｄ）の後、先端を緩衝液に動かして、典型的なＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質（０２Ｂ０５）の解離を可能にした。ヒトおよびカニクイザルのＢＣＭＡおよびＣＤ３εへの結合に対する親和性を、１５ｍｇ／ｍｌのヒト血清アルブミンの存在下で測定した。これらの試験から算出された平均ＫＤ値を表４に提供する（ｎは独立した測定の数を示し、ｎ／ｄは検査条件下で結合が検出されないことを示す）。ヒトＢＣＭＡ、ヒトＣＤ３ε、カニクイザルＣＤ３ε、ヒト血清アルブミン、カニクイザル血清アルブミン、およびマウス血清アルブミンへの結合が検出された。検査条件下では、カニクイザルＢＣＭＡへの結合は検出されなかった。
【０２５８】
【表４】
2020537644.tif 000009
【０２５９】
実施例６
本開示の典型的なＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質のヒトＴ細胞結合能力
【０２６０】
典型的なＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質０２Ｂ０５（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２０）を、精製されたＴ細胞に結合する能力について検査した。簡単に、ＢＣＭＡ三重特異性タンパク質またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を、４つの異なる匿名のヒトドナーから精製されたＴ細胞によりインキュベートした。未結合のタンパク質の洗浄後、Ｔ細胞を、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７抱合抗体でインキュベートし、この抗体は、０２Ｂ０５  ＢＣＭＡ三重特異性抗原結合タンパク質中の抗アルブミンのドメインを認識する。その後、Ｔ細胞をフローサイトメトリーにより分析する。０２Ｂ０５  ＢＣＭＡ三重特異性抗原結合タンパク質でインキュベートされたヒトＴ細胞には、ＰＢＳでインキュベートされた細胞に比べて、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７に関連付けられる顕著な推移があったことが、観察された。結果を図５Ａ、５Ｂ、５Ｃ、および５Ｄに示す。結論として、この試験は、典型的なＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質がヒトＴ細胞に結合可能であったことを示した。
【０２６１】
実施例７
本開示の典型的なＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質がＢＣＭＡ発現細胞に結合する能力
【０２６２】
典型的なＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質０２Ｂ０５（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２０）を、ＢＣＭＡ発現細胞に結合する能力について検査した。簡単に、０２Ｂ０５  ＢＣＭＡの三重特異性抗原結合性タンパク質を、ＢＣＭＡを発現する細胞株（ＮＣＩ−Ｈ９２９；ＥＪＭ；ＲＰＭＩ−８２２６；ＯＰＭ２）、またはＢＣＭＡを欠く細胞株（ＮＣＩ−Ｈ５１０Ａ；ＤＭＳ−１５３）でインキュベートした。これら細胞中のＢＣＭＡ  ＲＮＡの発現を、図６Ａ−Ｆに列挙されるＦＰＫＭ値（１００万キロベースごとのフラグメント）により示す：ＲＮＡ  ＦＰＫＭ値は、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  Ｌｉｎｅ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ（Ｂｒｏａｄ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，  ＭＡ  ＵＳＡ）からのものである。未結合のタンパク質の洗浄後、細胞を、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７抱合抗体でインキュベートし、この抗体は、０２Ｂ０５  ＢＣＭＡ三重特異性抗原結合タンパク質中の抗アルブミンのドメインを認識する。その後、細胞をフローサイトメトリーにより分析する。陰性対照として、細胞を、三重特異性タンパク質標的化ＧＦＰでインキュベートした。ＢＣＭＡ  ＲＮＡを発現し、かつＢＣＭＡ三重特異性タンパク質でインキュベートされた細胞には、ＧＦＰ三重特異性タンパク質でインキュベートされた細胞に比べてＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ    ６４７染色に関連付けられる顕著な推移があった（図６Ａ、６Ｂ、６Ｄ、および６Ｅにおけるように）。しかし、ＢＣＭＡ  ＲＮＡを欠く細胞は、ＢＣＭＡ三重特異性タンパク質およびＧＦＰ三重特異性タンパク質による同等のＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ    ６４７染色をもたらした（図６Ｃと６Ｆに見られるように）。ゆえに、この試験は、典型的なＢＣＭＡ三重特異性抗原結合が、ＢＣＭＡを発現する細胞に選択的に結合可能であったことを示した。
【０２６３】
実施例８
典型的なＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質がＢＣＭＡを発現する癌細胞のＴ細胞死滅を媒介する能力
【０２６４】
典型的なＢＣＭＡ三重特異性タンパク質０２Ｂ０５（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２０）を、Ｔ細胞にＢＣＭＡ発現細胞を死滅させる能力について、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）の有無にかかわらず、標準ＴＤＣＣアッセイを使用して検査した。典型的なＢＣＭＡ三重特異性タンパク質は抗アルブミンドメインを含んでいるので、この実験を行い、アルブミンへの結合により、ＢＣＭＡ三重特異性抗原結合タンパク質がＴ細胞にＢＣＭＡ発現細胞を死滅させるのを妨げないことを確認した。５つのＢＣＭＡ発現細胞を検査した：ＥＪＭ、Ｊｅｋｏ、ＯＰＭ２、ＭＯＬＰ８、およびＮＣＩ−Ｈ９２９。ＥＪＭ細胞の実験に対する代表的なデータを図７に示す。観察されたものは、ＥＪＭ細胞の生存率が、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）の有無にかかわらず典型的な０２Ｂ０５  ＢＣＭＡ三重特異性抗原結合タンパク質の量の増加につれて減少した一方、対照のＧＦＰ三重特異性タンパク質は細胞生存率に影響を及ぼさなかったことであった。アルブミンの存在下で、より高濃度のＢＣＭＡ三重特異性タンパク質がＥＪＭ細胞の生存率の減少に必要であった。ＨＳＡの存在下または不在下での、ＥＪＭ細胞、同様にＪｅｋｏ、ＯＰＭ２、ＭＯＬ８、およびＮＣＩ−Ｈ９２９細胞に対するＢＣＭＡ三重特異性タンパク質による細胞死滅に関するＥＣ５０値を、表５に提供する。５つすべての細胞株では、典型的な０２Ｂ０５  ＢＣＭＡの三重特異性抗原結合タンパク質は、ＨＳＡの存在下でＴ細胞に標的細胞を死滅させた。
【０２６５】
【表５】
2020537644.tif 000010
【０２６６】
実施例９
標的細胞とエフェクター細胞とのより小さな比率を用いた、ＢＣＭＡを発現する癌細胞のＴ細胞死滅を媒介する、典型的なＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質の能力
【０２６７】
標準ＴＤＣＣアッセイ（実施例１に記載されるような）において、１の標的細胞（ＥＪＭ細胞またはＯＰＭ２細胞）と１０のエフェクター細胞（Ｔ細胞）との比率を、４８時間のアッセイに使用する。この実験において、標的細胞とエフェクター細胞とのより小さな比率を用いてＴ細胞に標的細胞を死滅させる、典型的なＢＣＭＡ三重特異性タンパク質０２Ｂ０５（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２０）の能力を、検査した。より少数のエフェクター細胞の使用時に少数の死滅が観察されることが予測された。ＢＣＭＡを発現する２つの細胞株、ＥＪＭとＯＰＭ２を、１：１、１：３、および１：１０の標的細胞とエフェクター細胞との比率を用いて検査し、実験を１５ｍｇ／ｍｌのＨＳＡの存在下で行った。三重特異性タンパク質を標的とするＧＦＰは、陰性対照として使用された。この実験のデータを、図８（ＥＪＭ細胞でのＴＤＣＣアッセイ）と図９（ＯＰＭ２細胞でのＴＤＣＣアッセイ）に示す。予想通りに、標的細胞のほぼ完全な死滅を、１：１０の標的細胞とエフェクター細胞との比率と共に観察した。死滅の量は、エフェクター細胞の減少により減少した。各比率での細胞死滅に関するＥＣ５０値を表６に列挙する（ｎ／ｄは、不十分な死滅を観察することでＥＣ５０値を算出したことを示す）。より少数のエフェクター細胞しか存在しない場合、ＥＣ５０値は増大した。ゆえに、予想通りに、標的細胞に対するエフェクター細胞の数の減少により、ＢＣＭＡ三重特異性タンパク質のＴＤＣＣ活性は減少した。
【０２６８】
【表６】
2020537644.tif 000011
【０２６９】
実施例１０
標的細胞とエフェクター細胞とのより小さな比率を用いた、経時的研究における、ＢＣＭＡを発現する癌細胞のＴ細胞死滅を媒介する、典型的なＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質の能力
【０２７０】
標準ＴＤＣＣアッセイ（実施例１）において、１の標的細胞ＯＰＭ２と１０のエフェクター細胞（Ｔ細胞）との比率を、４８時間のアッセイに使用する。この実験において、時間経過を、標的細胞（ＥＪＭ細胞）とエフェクター細胞（Ｔ細胞）との１：１の比率を使用して実行した。時間の増加により、１：１の比率が標的細胞死滅をもたらすことが予想された。実験を、１５ｍｇ／ｍｌのＨＳＡの存在下で実行した。三重特異性タンパク質を標的とするＧＦＰを、陰性対照として使用した。標的細胞生存率を、１：１の比率での標的細胞および効果細胞のインキュベーションの後１日目、２日目、３日目、および４日目に、典型的な０２Ｂ０５  ＢＣＭＡ三重特異性抗原結合タンパク質および１５ｍｇ／ｍｌのＨＳＡ、またはＧＦＰ標的三重特異性タンパク質および１５ｍｇ／ｍｌのＨＳＡの存在下で、測定した。標的細胞死滅を１日目に観察できなかったが、ＢＣＭＡ三重特異性抗原結合タンパク質の存在下では他のすべての時点で死滅が観察され、死滅の量は時間と共に増加する（図１０）。ＧＦＰ標的三重特異性タンパク質では、死滅は観察されなかった。各日における細胞死滅に対し算出されたＥＣ５０値を表７に提供する（ｎ／ｄは、不十分な死滅をすることでＥＣ５０値を判定したことを示す）。この試験から導いた結論は、典型的な０２Ｂ０５  ＢＣＭＡ三重特異性タンパク質は、少数のエフェクター細胞でＴ細胞に死滅を導かせることができたが、より完全な死滅にはより多くの時間が必要であることであった。
【０２７１】
【表７】
2020537644.tif 000012
【０２７２】
実施例１１
ヒトＴ細胞にＢＣＭＡ発現細胞を死滅させる、典型的なＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質の能力
【０２７３】
典型的なＢＣＭＡ三重特異性タンパク質０２Ｂ０５（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２０）を、４つの異なる匿名のヒトドナー由来のＴ細胞にＢＣＭＡ発現細胞を死滅させる能力について、１５ｍｇ／ｍｌのヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）の存在下で、実施例１に記載されるような標準ＴＤＣＣアッセイを使用して検査した。ＢＣＭＡ発現細胞株は、ＥＪＭ、ＮＣＩ−Ｈ９２９、ＯＰＭ２、およびＲＰＭＩ８２２６であった。陰性対照として、ＢＣＭＡ発現を欠く２つの細胞株、ＯＶＣＡＲ８とＮＣＩ−Ｈ５１０Ａも、ＴＤＣＣアッセイにおいて検査された。対照のＧＦＰ標的三重特異性タンパク質も陰性対照として使用した。４つのＢＣＭＡ発現細胞株、および４つすべてのＴ細胞ドナーでは、細胞生存率は、ＢＣＭＡ三重特異性タンパク質の量の増加により減少したが、ＧＦＰ三重特異性タンパク質では減少しなかった（図１１、１２、１３、および１４）。細胞死滅に関するＥＣ５０値を表８に提供する。典型的な０２Ｂ０５  ＢＣＭＡ三重特異性抗原結合タンパク質は、ＢＣＭＡ発現を欠く細胞株の死滅を導かなかった（図１５および１６）。ゆえに、典型的な０２Ｂ０５  ＢＣＭＡ三重特異性抗原結合タンパク質は、多数のドナー由来のＴ細胞に、様々なＢＣＭＡ発現細胞株を死滅させることができたことを、推論した。
【０２７４】
【表８】
2020537644.tif 000013
【０２７５】
実施例１２
カニクイザルＴ細胞にＢＣＭＡ発現細胞を死滅させる、典型的なＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質の能力
【０２７６】
典型的なＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質０２Ｂ０５（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２０）を、１５ｍｇ／ｍｌのヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）の存在下で、カニクイザル由来のＴ細胞にＢＣＭＡ発現細胞を死滅させる能力について検査した。実験条件は実施例１に記載の条件と同じであるが、例外としてカニクイザル由来の末梢血単核球（ＰＢＭＣ）をＴ細胞のソースとして使用した。２つのＢＣＭＡ発現細胞株、ＲＰＭＩ８２２６とＮＣＩ−Ｈ９２９を検査した。図１７と１８に示されるように、ＢＣＭＡ三重特異性タンパク質は、カニクイザルＰＢＭＣに存在するＴ細胞に、２つのＢＣＭＡ発現細胞株を死滅させることができた。細胞死滅に関するＥＣ５０値を表９に列挙する。ＧＦＰ三重特異性タンパク質は、ＢＣＭＡ発現細胞の生存率に影響を及ぼさなかった。ゆえに、（実施例５に示されるような）カニクイザルＣＤ３εに結合可能なＢＣＭＡ発現三重特異性タンパク質は、カニクイザルＴ細胞に、ヒトＢＣＭＡを発現する細胞を死滅させることができる。
【０２７７】
【表９】
2020537644.tif 000014
【０２７８】
実施例１３
典型的なＢＣＭＡ三重特異性抗原結合タンパク質および標的腫瘍細胞に媒介された、Ｔ細胞活性化の誘導
【０２７９】
典型的なＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質０２Ｂ０５（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２０）を、ＢＣＭＡ発現細胞の存在下でＴ細胞を活性化させる能力について検査した。ＢＣＭＡ発現細胞株は、ＥＪＭ、ＯＰＭ２、およびＲＰＭＩ８２２６であった。陰性対照として、ＢＣＭＡ発現を欠く２つの細胞株、ＯＶＣＡＲ８とＮＣＩ−Ｈ５１０Ａも含めた。Ｔ細胞を、４つの異なる匿名のヒトドナーから得た。アッセイを、実施例１に記載されるような標準ＴＤＣＣアッセイの条件を使用して設定したが、例外として、アッセイを９６ウェルのフォーマットに合わせて、１５ｍｇ／ｍｌのＨＳＡの存在下で実行した。アッセイの４８時間後、Ｔ細胞活性化を、Ｔ細胞表面上のＴ細胞活性化バイオマーカーＣＤ２５およびＣＤ６９の発現を測定するためにフローサイトメトリーを使用して、評価した。典型的な０２Ｂ０５  ＢＣＭＡ三重特異性抗原結合タンパク質の増加により、ＣＤ６９およびＣＤ２５の発現の増加が、ＢＣＭＡ発現細胞での共培養時にＴ細胞上で観察された（図１９−２４に示されるように）。ゆえに、対照ＧＦＰ三重特異性タンパク質（図１９−２４に示されるような）、またはＢＣＭＡ発現のない標的細胞（図２５−２８に示されるような）では活性化がほとんど〜全く観察されなかったので、観察された発現の増加は、典型的な０２Ｂ０５  ＢＣＭＡの三重特異性抗原結合タンパク質内のＢＣＭＡ結合配列とＢＣＭＡとの相互作用に依存するものであった。それゆえ、典型的な０２Ｂ０５  ＢＣＭＡ三重特異性抗原結合タンパク質は、ＢＣＭＡ発現細胞を含有する共培養中のＴ細胞を活性化した。この結論を追加データにより支持する。例えば、サイトカイン、ＴＮＦαの発現は、濃度を増加させた典型的な０２Ｂ０５  ＢＣＭＡ三重特異性抗原結合タンパク質、または陰性対照ＧＦＰ三重特異性タンパク質により処置された、Ｔ細胞およびＢＣＭＡ発現標的細胞の共培養から集めた培地中で測定された。共培養を、１５ｍｇ／ｍｌのＨＳＡを補足した、（実施例１に記載されるような）標準ＴＤＣＣアッセイの条件を使用して設定した。ＴＮＦαを、電気化学発光アッセイ（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）を使用して測定した。ＴＮＦα発現の強固な誘導を、ＧＦＰ三重特異性タンパク質ではなく、典型的な０２Ｂ０５  ＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質において観察した（図２９）。この結果によりさらに、典型的な０２Ｂ０５  ＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質が、ＢＣＭＡ発現細胞を含有する共培養中のＴ細胞を活性化したことが裏付けられる。
【０２８０】
実施例１４
本開示の典型的なＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質の薬物動態
【０２８１】
カニクイザルに、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、または１ｍｇ／ｋｇで、単回静脈内投与量の典型的なＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質（０２Ｂ０５）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２０）を投与した。投与群ごとに２匹の動物が含まれた。投与後、結成サンプルを集め、２つの異なる電気化学発光アッセイにより分析した。一方のアッセイは、捕捉試薬としてビオチン化ＣＤ３εを使用し、スルホタグ付けした（ｓｕｌｆｏ  ｔａｇｇｅｄ）ＢＣＭＡにより検出した（機能的アッセイと称される）。他方のアッセイは、捕捉試薬として、典型的なＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質中の抗アルブミンのドメインを認識するビオチン化抗体、および、検出試薬として、典型的なＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質中の抗ＣＤ３結合ドメインを認識するスルホタグ付けされた抗体（すなわち抗イディオタイプ抗体）を使用した。電気化学発光アッセイの結果を図３２にプロットする。図３２に見られるように、典型的なＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質は、投与の５０４時間後でも、カニクイザル血清サンプル中で検出された。典型的なＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質を、スルホタグ付けしたＢＣＭＡ（図３２における用語「機能的」を使用して標識された線）、および、抗イディオタイプ抗体（図３２における用語「抗イディオタイプ」を使用して標識された線）の両方によって同定した。
【０２８２】
典型的なＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質が、Ｔ細胞にＢＣＭＡ発現ＥＪＭ細胞を死滅させる能力を保持したことを確認するために、インビボ投与後、１６８時間の時点の血清サンプルを、ＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質にさらされていないカニクイザル由来の１６．７％の血清の存在下で、（実施例１に記載されるような）ＴＤＣＣアッセイにおいて検査し、（図３３に示されるような）電気化学発光アッセイを使用して判定されたタンパク質濃度を使用して、典型的なＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質を滴定した。新たに希釈された典型的な０２Ｂ０５  ＢＣＭＡ三重特異性タンパク質を、１６８時間で検査カニクイザルから集めたＢＣＭＡ三重特異性タンパク質と比較した。ＧＦＰ三重特異性タンパク質を陰性対照として含めた。この試験は、検査カニクイザルの血清から集めた典型的なＢＣＭＡ標的三重特異性タンパク質が、新たに希釈されたタンパク質と同じ活性を有しており、血清サンプル中のタンパク質が、Ｔ細胞にＢＣＭＡ発現標的細胞を死滅させる能力を保持したことを、実証した。
【０２８３】
本発明の好ましい実施形態が本明細書中で示され、記載されてきたが、このような実施形態はほんの一例として提供されるものであることは、当業者に明らかであろう。多数の変形、変更、および置き換えは、本発明から逸脱することなく、当業者によって現在想到されるものである。本明細書に記載される本発明の実施形態の様々な代案が、本発明の実施において利用され得ることを理解されたい。以下の特許請求の範囲は本発明の範囲を定義するものであり、この特許請求の範囲およびその同等物の範囲内の方法と構造は、それにより包含されることが、意図されている。
【０２８４】
【表１０−１】
2020537644.tif 000015
【０２８５】
【表１０−２】
2020537644.tif 000016
【０２８６】
【表１０−３】
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【０２８７】
【表１０−４】
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【０２８８】
【表１０−５】
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【０２８９】
【表１０−６】
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【０２９０】
【表１０−７】
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【０２９１】
【表１０−８】
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【０２９２】
【表１０−９】
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【０２９３】
【表１０−１０】
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【０２９４】
【表１０−１１】
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【０２９５】
【表１０−１２】
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【０２９６】
【表１０−１３】
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【０２９７】
【表１０−１４】
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【０２９８】
【表１０−１５】
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【０２９９】
【表１０−１６】
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【０３００】
【表１０−１７】
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【０３０１】
【表１０−１８】
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【０３０２】
【表１０−１９】
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【０３０３】
【表１０−２０】
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【０３０４】
【表１０−２１】
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【０３０５】
【表１０−２２】
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【０３０６】
【表１０−２３】
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【０３０７】
【表１０−２４】
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【０３０８】
【表１０−２５】
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【０３０９】
【表１０−２６】
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【０３１０】
【表１０−２７】
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【０３１１】
【表１０−２８】
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【０３１２】
【表１０−２９】
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【０３１３】
【表１０−３０】
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【０３１４】
【表１０−３１】
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【０３１５】
【表１０−３２】
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【０３１６】
【表１０−３３】
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【０３１７】
【表１０−３４】
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【０３１８】
【表１０−３５】
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【０３１９】
【表１０−３６】
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【０３２０】
【表１０−３７】
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【０３２１】
【表１０−３８】
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【０３２２】
【表１０−３９】
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【０３２３】
【表１０−４０】
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【０３２４】
【表１０−４１】
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【０３２５】
【表１０−４２】
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【０３２６】
【表１０−４３】
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【０３２７】
【表１０−４４】
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【０３２８】
【表１０−４５】
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【０３２９】
【表１０−４６】
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【０３３０】
【表１０−４７】
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【０３３１】
【表１０−４８】
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【０３３２】
【表１０−４９】
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【０３３３】
【表１０−５０】
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【０３３４】
【表１０−５１】
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【０３３５】
【表１０−５２】
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【０３３６】
【表１０−５３】
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【０３３７】
【表１０−５４】
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【０３３８】
【表１０−５５】
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【０３３９】
【表１０−５６】
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【０３４０】
【表１０−５７】
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【０３４１】
【表１０−５８】
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【０３４２】
【表１０−５９】
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【０３４３】
【表１０−６０】
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【０３４４】
【表１０−６１】
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【０３４５】
【表１０−６２】
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【０３４６】
【表１０−６３】
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【０３４７】
【表１０−６４】
2020537644.tif 000078
【０３４８】
【表１０−６５】
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【０３４９】
【表１０−６６】
2020537644.tif 000080
【０３５０】
【表１０−６７】
2020537644.tif 000081
【０３５１】
【表１０−６８】
2020537644.tif 000082
【０３５２】
【表１０−６９】
2020537644.tif 000083
【０３５３】
【表１０−７０】
2020537644.tif 000084
【０３５４】
【表１０−７１】
2020537644.tif 000085
【０３５５】
【表１０−７２】
2020537644.tif 000086
【０３５６】
【表１０−７３】
2020537644.tif 000087
【図１】
2020537644.tif 000088
【図２】
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【図３】
2020537644.tif 000090
【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
2020537644.tif 000092
【図４Ｃ】
2020537644.tif 000093
【図４Ｄ】
2020537644.tif 000094
【図４Ｅ】
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【図４Ｆ】
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【図４Ｇ】
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【図４Ｈ】
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【図４Ｉ】
2020537644.tif 000099
【図５】
2020537644.tif 000100
【図６】
2020537644.tif 000101
【図７】
2020537644.tif 000102
【図８】
2020537644.tif 000103
【図９】
2020537644.tif 000104
【図１０】
2020537644.tif 000105
【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
2020537644.tif 000127
【図３３】
2020537644.tif 000128
【配列表】
2020537644000001.app
【国際調査報告】
2020537644.tif 000129
2020537644.tif 000130
2020537644.tif 000131
2020537644.tif 000132