(57)【要約】  本発明は、エレモフィラ−１（１０）−１１（１３）−ジエン−１２，８β−オリド（ＥＰＤ）及びその類似体を調製する方法に向けられている。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の式Ｉ
【化１】
2020523410.tif 000041
ここで、Ｒ１及びＲ２は独立して、Ｒ３、ＳＲ３、ＳＯ２Ｒ３、Ｎ（Ｒ３）２、Ｃ（Ｏ）ＮＲ３、ＮＣ（Ｏ）Ｒ３、ＯＲ３、ＣＯ２Ｒ３、ＯＣ（Ｏ）Ｒ３、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ、又はＩ、好ましくはＯＲ３又はＲ３、から選択され、並びに、
Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８ヒドロカルビル又はポリ（アルケンオキシド）から、好ましくはＨ又はメチルから、選択される、
に従うＥＰＤ又はその類似体を調製する方法において、
下記の式ＩＩ
【化２】
2020523410.tif 000042
の中間体化合物を、メチレン化を含む１以上の工程によって上記式ＩのＥＰＤ又は類似体に転化することを含む方法。
【請求項２】
請求項１に記載の式ＩＩの中間体化合物を調製する方法であって、
下記の式ＩＩＩ
【化３】
2020523410.tif 000043
の化合物を式ＩＩの中間体化合物へ還元することを含む、上記方法。
【請求項３】
下記の式ＩＩａ
【化４】
2020523410.tif 000044
の化合物を式ＩＩＩの化合物に転化することをさらに含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
式ＩＩａの化合物を式ＩＩＩの化合物に転化することが、脱離基ＬＧを導入して、下記の式ＩＩａ−ＬＧ
【化５】
2020523410.tif 000045
の化合物を形成すること、その後に該脱離基を除去して、式ＩＩＩの化合物を形成することを含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
該脱離基が、セレン、ハライド、エステル、又はスルホネート、好ましくはセレン、例えばベンゼンセレニル、又はハライド、例えばブロミド、クロライド、若しくはヨーダイド、からなる群から選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
式ＩＩＩの化合物を式ＩＩの中間体化合物へ還元することが、水素化物、好ましくは水素化ホウ素、より好ましくは水素化ホウ素ナトリウム、を用いて行われる、請求項２〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
下記の式Ｖ
【化６】
2020523410.tif 000046
の化合物を、好ましくは下記の式ＶＩ
【化７】
2020523410.tif 000047
ここで、Ｒ５及びＲ６は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、又は陽イオン、例えばアンモニウム、アルカリ金属イオン、若しくはアルカリ土類金属イオン、から選択される、
の中間体化合物を経由して、式ＩＩａの化合物に転化することをさらに含む、請求項３〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
式ＶＩＩＩ、式ＶＩ、及び式ＩＩａの化合物が、それぞれ式ＶＩＩＩａ、式ＶＩａ、及び式ＩＩａｘによって表されることができる化合物であるようにジアステレオマー的に実質的に純粋であり、好ましくは、ここで、式Ｖａ、式ＶＩＩＩａ、式ＶＩａ及び／又は式ＩＩａｘの化合物は、キラルアミンによる、好ましくはα−メチルベンジルアミンによる、より好ましくは（Ｓ）−（−）α−メチルベンジルアミンによる、式ＶＩａの化合物のキラル分割によってエナンチオオマー的に実質的に純粋に得られる、請求項３〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
請求項２〜８のいずれか１項に記載の方法に従って式ＩＩの中間体化合物を調製することをさらに含む、請求項１に記載のＥＰＤ又はその類似体を調製する方法。
【請求項１０】
ＥＰＤとそのエナンチオマーとの混合物を含むラセミＥＰＤ。
【請求項１１】
ＥＰＤのエナンチオマー。
【請求項１２】
下記の式Ｉ
【化８】
2020523410.tif 000048
ここで、Ｒ１は、Ｈ、Ｃ２〜Ｃ８ヒドロカルビル又はポリ（アルケンオキシド）、ＳＲ３、ＳＯ２Ｒ３、Ｎ（Ｒ３）２、Ｃ（Ｏ）ＮＲ３、ＮＣ（Ｏ）Ｒ３、ＯＲ３、ＣＯ２Ｒ３、ＯＣ（Ｏ）Ｒ３、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、又はＩ、好ましくはＨ又はＯＲ３、から選択され、
Ｒ２は、Ｒ４、ＳＲ４、ＳＯ２Ｒ４、Ｎ（Ｒ４）２、Ｃ（Ｏ）ＮＲ４、ＮＣ（Ｏ）Ｒ４、ＯＲ４、ＣＯ２Ｒ４ＯＣ（Ｏ）Ｒ４、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ、又はＩ、好ましくはＲ４、Ｈ、又はＯＲ４から選択され、並びに、
Ｒ３及びＲ４は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８ヒドロカルビル又はポリ（アルケンオキシド）、好ましくはメチル、から選択される、
に従うＥＰＤ類似体。
【請求項１３】
医薬として使用する為の、好ましくは癌の処置において使用する為の、請求項１０に記載のＥＰＤとそのエナンチオマーとの混合物を含むラセミＥＰＤ、請求項１０に記載のＥＰＤのエナンチオマー、又は請求項１２に記載のＥＰＤ類似体。
【請求項１４】
請求項１又は９に記載の方法におけるＥＰＤ又はその類似体の調製の為に適した、下記の式ＩＩ
【化９】
2020523410.tif 000049
ここで、Ｒ１及びＲ２は独立して、Ｒ３、ＳＲ３、ＳＯ２Ｒ３、Ｎ（Ｒ３）２、Ｃ（Ｏ）ＮＲ３、ＮＣ（Ｏ）Ｒ３、ＯＲ３、ＣＯ２Ｒ３、ＯＣ（Ｏ）Ｒ３、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、又はＩ、好ましくはＯＲ３又はＲ３、から選択され、及び、
Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８ヒドロカルビル又はポリ（アルケンオキシド）から選択される、
に従う中間体化合物。
【請求項１５】
請求項１又は９に記載の方法におけるＥＰＤ又はその類似体の調製の為に適した、下記の式ＩＩａ、式ＩＩａｘ、式ＩＩＩ、式Ｖ、式ＶＩ、又は式ＶＩＩＩ
【化１０】
2020523410.tif 000050
ここで、Ｒ１は、Ｈ、Ｃ２〜Ｃ８ヒドロカルビル又はポリ（アルケンオキシド）、ＳＲ３、ＳＯ２Ｒ３、Ｎ（Ｒ３）２、Ｃ（Ｏ）ＮＲ３、ＮＣ（Ｏ）Ｒ３、ＯＲ３、ＣＯ２Ｒ３、ＯＣ（Ｏ）Ｒ３、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、又はＩ、好ましくはＨ又はＯＲ３、から選択され、
Ｒ２は、Ｒ４、ＳＲ４、ＳＯ２Ｒ４、Ｎ（Ｒ４）２、Ｃ（Ｏ）ＮＲ４、ＮＣ（Ｏ）Ｒ４、ＯＲ４、ＣＯ２Ｒ４ＯＣ（Ｏ）Ｒ４、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ、又はＩ、好ましくはＲ４、Ｈ、又はＯＲ４、から選択され、
Ｒ３及びＲ４は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８ヒドロカルビル又はポリ（アルケンオキシド）、好ましくはメチル、から選択され；並びに
Ｒ５及びＲ６は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、又は陽イオン、例えばアンモニウム、アルカリ金属イオン、若しくはアルカリ土類金属イオン、より選択される、
のうちの１つに従う中間体化合物。
【請求項１６】
請求項１２に記載の式ＩのＥＰＤ類似体、又は請求項１４に記載の式ＩＩ若しくは請求項１５に記載のＩＩａ、式ＩＩａｘ、式ＩＩＩ、式Ｖａ、式ＶＩａ、又は式ＶＩＩＩａの中間体化合物、ここで、それら類似体及び化合物は、エナンチオマー的に実質的に純粋であり、且つ式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩａｘ、式ＩＩＩ、式Ｖａ、式ＶＩａ、若しくは式ＶＩＩＩａで表わされる絶対立体化学、又はその絶対立体化学の逆を有する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒト患者を処置する為の安全且つ有効な医薬を製造する分野にある。より特には、ヒト対象における癌の処置に有用なセスキテルペンラクトン調製物を合成的に製造する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
テルペノイドの生合成及び化学は、十分に研究されている科学分野である。これは、テルペノイドは我々の社会において多くの用途を有するという事実に一部起因する。テルペノイドは、多様な植物源から蒸留によって抽出されることができる。新たな天然テルペノイドが、常に単離されている。天然テルペノイドは、従来のハーブ療法において役割を演じており、且つ抗菌機能、抗新生物機能、及び他の薬学的機能について調査されている。植物テルペノイドは、それらの芳香の質の為に広く使用されている。これらの分子の重要な生物活性は、それらの合成への継続的な興味を保証する。これらの分子の生合成を理解すれことは、機能性テルペノイドに対する新たなアプローチの開発、及び機能との関係のより良い理解に役立ちうる。
【０００３】
これまでに、抗癌剤であるキサンタノジン又はエレモフィラ−１（１０）−１１（１３）−ジエン−１２，８β−オリド（ＥＰＤ）が卵巣癌に対して強力な細胞毒性効果を示すが正常細胞に対しては示さないことが判った（国際公開第２０１２／００５５８１号）。該化合物は、Duke，Van  Haaften，&  Tran，2011年(Green  Sustainable  Chem  Vol(1):123-7)の記載されているように、水蒸気蒸留によりカロメリア・アマラントイデス（Ｃａｌｏｍｅｒｉａ  ａｍａｒａｎｔｈｏｉｄｅｓ）から単離された。ＥＰＤは、下記の構造を帰属された。
【０００４】
【化１】
2020523410.tif 000002
【０００５】
ＥＰＤの絶対立体化学はまだ決定されていないこと、並びに上記式において炭素４、５、７、及び８での立体化学の表示は相対的な立体化学のみを示しうることに留意されたい。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
ＥＰＤを取得する為の現在の方法は、天然源からの単離を伴う。その天然供給源であるカロメリア・アマラントイデス植物に依存することなしに、高純度でこのセスキテルペンラクトンを製造する為に、且つＥＰＤの抗癌効果についての臨床研究に十分な材料を製造する為に、合成手段によってＥＰＤを製造する為の方法を提供することが望ましい。そのような方法は、生物源から単離されるＥＰＤから容易に得られることができないＥＰＤ類似体の製造を可能にすることが更に望ましい。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者等は、合成経路によってＥＰＤ及びその類似体を製造する為の方法を今見出した。医薬製造のそのような合成経路の利点は、製品の品質がより良好に制御されることができ、且つ製品の汚染が防止されることである。これは、ＥＰＤの製造に関する規制要件が満たされることができることを意味する。加えて、本発明は、生物源から単離されるＥＰＤから容易に得られることができないＥＰＤ類似体の調製を可能にする。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１Ａ】図１は、実施例１９に記載されている実験の結果を示す図であり、ここで、多数の本発明の化合物及び参照化合物のイン・ビトロ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）での細胞障害活性がＪＣ癌細胞株統において試験された（Van  Haaften-Day等，Cancer  Res．1983年  for  the  JC  cancer  cell  linesを参照）。
【図１Ｂ】図１は、実施例１９に記載されている実験の結果を示す図であり、ここで、多数の本発明の化合物及び参照化合物のイン・ビトロ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）での細胞障害活性がＪＣ癌細胞株統において試験された（Van  Haaften-Day等，Cancer  Res．1983年  for  the  JC  cancer  cell  linesを参照）。
【図１Ｃ】図１は、実施例１９に記載されている実験の結果を示す図であり、ここで、多数の本発明の化合物及び参照化合物のイン・ビトロ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）での細胞障害活性がＪＣ癌細胞株統において試験された（Van  Haaften-Day等，Cancer  Res．1983年  for  the  JC  cancer  cell  linesを参照）。
【図２】図２は、本発明に従うＥＰＤ及びそのエナンチオマーを含むラセミ混合物のＨ−ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図３】図３は、本発明に従うＥＰＤ及びそのエナンチオマーを含むラセミ混合物のＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。
【図４】図４は、本発明に従い調製されたＥＰＤのＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。
【図５】図５は、本発明に従い調製されたＥＰＤのエナンチオマーのＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。
【図６】図６は、本発明に従う、モノメチル類似体のラセミ混合物のＨ−ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図７】図７は、エナンチオマー的に純粋なＶＩａのＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明は、下記の式Ｉ
【００１０】
【化２】
2020523410.tif 000003
【００１１】
ここで、Ｒ１及びＲ２は独立して、Ｒ３、ＳＲ３、ＳＯ２Ｒ３、Ｎ（Ｒ３）２、Ｃ（Ｏ）ＮＲ３、ＮＣ（Ｏ）Ｒ３、ＯＲ３、ＣＯ２Ｒ３、ＯＣ（Ｏ）Ｒ３、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ、又はＩ、好ましくはＯＲ３又はＲ３、から選択され、並びに、
Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８ヒドロカルビル又はポリ（アルケンオキシド）から、好ましくはＨ又はメチルから、選択される、
に従うＥＰＤ又はその類似体を製造する方法において、
下記の式ＩＩ
【００１２】
【化３】
2020523410.tif 000004
【００１３】
の中間体化合物を、メチレン化を含む１以上の工程によって上記式ＩのＥＰＤ又は類似体に転化することを含む上記方法に向けられている。
【００１４】
「独立して〜から選択される」とは、関係する置換基が同じであってもよく、または異なっていてもよいことを意味する。それはまた、Ｒ３基が、Ｒ１及びＲ２について同じであってもよく、または異なっていてもよいことを意味する。
【００１５】
ポリ（アルケンオキシド）は好ましくは、ポリ（エチレンオキシド）であり、且つ該化合物のより良好な溶解性と、改善された薬物動態とを典型的に提供する。
【００１６】
好ましい実施態様において、Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８ヒドロカルビルから選択される。本発明のより好ましい実施態様において、Ｒ１及びＲ２は、両方がメチルである。なお別の好ましい実施態様において、Ｒ１は水素であり、且つＲ２はメチルである。
【００１７】
典型的な実施態様において、上記式ＩＩの中間体化合物のメチレン化は、脱プロトン化と、ギ酸エチルとの反応、そしてホルムアルデヒドドナー、例えばパラホルムアルデヒド、との反応が連続して続く。
【００１８】
本発明の特定の利点は、製造プロセスにおける方法工程の、立体選択性且つ立体特異性に対する高度の制御である。加えて、本発明は、上記式ＩにおけるＲ１及びＲ２で示されているＥＰＤの類似体の調製を可能にする。別途特に明記されない限り、本明細書で開示される全ての式及び化合物の置換基Ｒ１及びＲ２は、上記式Ｉの化合物についての置換基に従う。
【００１９】
上記式ＩＩの中間体化合物の調製は、本発明の更なる観点である。それ故に、上記式Ｉに従うＥＰＤ及びその類似体の調製は、炭素原子７（上記ＥＰＤの構造を参照）は、他の炭素立体中心（炭素原子４、５、及び８）に関してシスで構成される。本発明者等は、ＥＰＤ及びその類似体のコアのシスコンフィギュレーションが、下記のスキーム１に従って、式ＩＩＩの化合物を式ＩＩの中間体化合物へ還元することによって得られることができることを驚くべきことに見出した。
【００２０】
【化４】
2020523410.tif 000005
【００２１】
収率及び立体特異性の観点における良好な結果が、式ＩＩＩの化合物の式ＩＩの中間体化合物への還元が水素化物ドナー（ｈｙｄｒｉｄｅ  ｄｏｎｏｒ）を用いて行われるところの実施態様において得られた。好ましくは、該水素化物ドナーは、水素化ホウ素、より好ましくは水素化ホウ素ナトリウム、である。好ましい実施態様において、式ＩＩＩの化合物の還元は、触媒、好ましくはルイス酸、より好ましくはニッケルハライド、例えば塩化ニッケル（ＩＩ）、の存在下で行われる。
【００２２】
式ＩＩＩの化合物は好ましくは、上記のスキーム１に示されているように、式ＩＩａの化合物を転化することによって得られる。スキーム１に示されている式ＩＩａの化合物は、立体異性化合物の混合物を含みうる。
【００２３】
本文脈において、本明細書で使用される式が、キラリティーの表示がされていないキラル中心を含む場合、該式は、上記キラル中心のキラリティーの全てのバリエーションを示すことを意味し、且つ付随して、個々の立体異性化合物及びその混合物の全てを示すことを意味する。加えて、本明細書において使用される式がキラリティーが示されているキラル中心を含む場合、キラリティーのこの表示は、別途明示されない限り、同じ式又は化合物における他のステレオジェニック中心に対する該キラル中心の相対的なキラリティーを示すことを意味する。従って、別途明確に記載されない限り、本明細書に記載されている化合物を示す構造式は、該当する場合には、上記化合物のエナンチオマー及び／又はそのジアステレオアイソマーの両方を示す。従って、完全性を期す為に、特定の式に関する語「化合物」は、複数の化合物、すなわち幾つかの異性体、例えばエナンチオマー又はジアステレオ異性体、の混合物を云いうることに留意されたい。従って、例えば、式ＩＩａの化合物は、下記のスキーム２の式ＩＩａａ、式ＩＩａｂ、式ＩＩｂａ、及び式ＩＩｂｂで示されている絶対立体化学を有する個々の化合物及びその組み合わせの全てを云う。
【００２４】
【化５】
2020523410.tif 000006
【００２５】
式ＩＩＩの化合物は典型的には、上記式ＩＩａの化合物内に脱離基ＬＧを導入して、下記の式ＩＩａ−ＬＧ
【００２６】
【化６】
2020523410.tif 000007
【００２７】
の化合物を形成すること、引き続き、該脱離基を除去して、上記式ＩＩＩの化合物を形成することによって調製されることができる。該脱離基は、セレン化合物、ハライド、エステル、又はスルホネート、好ましくはセレン化合物、例えばベンゼンセレニル、又はハライド、例えばブロミド、クロライド、若しくはヨーダイド、からなる群から選択されることができる。
【００２８】
好ましくは、該脱離基ＬＧは、脱プロトン化（例えば、立体障害型の強塩基、例えばリチウムジイソプロピルアミド又はカリウムビス（トリメチルシリル）アミド、を用いた）、及び脱離基ドナーとの反応によって、式ＩＩａの化合物内に導入される。該脱離基がブロミドを含む実施態様において、該脱離基ドナーは、臭素又はＮ−ブロモスクシンイミド又は四臭化炭素でありうる。
【００２９】
該脱離基がセレン化合物、例えばベンゼンセレニル、であるところの実施態様において、該脱離基ドナーは、セレン化剤、例えばフェニルセレン化剤（ｐｈｅｎｙｌ  ｓｅｌｅｎａｔｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）、でありうる。該セレン化合物の除去は、（イン・シチュ（ｉｎ  ｓｉｔｕ））酸化を介して行われることができる。該セレン化合物の導入及び除去はまた、セレンオキシド除去と云われることができる。
【００３０】
本発明の好ましい実施態様において、式ＩＩａの化合物は、下記のスキーム３に示されているように、式Ｖの化合物を、好ましくは式ＶＩの化合物のラクトン化を通じて、転化することによって得られ、ここで、Ｒ５及びＲ６は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、又は陽イオン、例えばアンモニウム、アルカリ金属イオン、若しくはアルカリ土類金属イオン、から選択される。好適なアルカリ金属イオン及びアルカリ土類金属イオンの例は、Ｌｉ、Ｎａ、Ｋ、Ｃａ、Ｍｇ等を含む。式Ｖの化合物のエステル部分（Ｒ５で表わされる）は、別の部分によって置換されうる、又はそのまま保持されうる。好ましくは、上記エステル部分はそのまま保持される。
【００３１】
【化７】
2020523410.tif 000008
【００３２】
式ＶＩの化合物のラクトン化は典型的には、慣用的なエステル化を含む。その好適な例は、酸触媒のエステル化、カルボジイミド媒介のエステル化（例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミド及び４−ジメチルアミノピリジンを使用することによる）等を含む。
【００３３】
上記式Ｖの化合物の上記式ＶＩの化合物への転化は典型的には、下記のスキーム４に示されているように、アセチル化によって式ＶＩＩＩの化合物を形成し、引き続き、還元すること（例えば、水素化ホウ素ナトリウムを用いて）によって行われうる。
【００３４】
【化８】
2020523410.tif 000009
【００３５】
上記式Ｖの化合物は典型的には、下記のスキーム５に示されているように、メチルビニルケトン及び酸、好ましくはメタンスルホン酸及び／又はベンゼンスルホン酸、を用いた、式ＩＸの化合物のロビンソン環化によって得られることができる。該スキーム５において、記号
【００３６】
【化９】
2020523410.tif 000010
【００３７】
は、単結合又は二重結合を表わし、且つ化合物ＩＸのＲ１は、
【００３８】
【化１０】
2020523410.tif 000011
【００３９】
が二重結合である場合、Ｏ、ＮＨ、又はＳから選択されることができる。
【００４０】
【化１１】
2020523410.tif 000012
【００４１】
式ＩＸの特定の化合物の一般的なロビンソン環化（例えば、Ｒ１及びＲ２が両方ともメチルであるところの式Ｉのそれら化合物のロビンソン環化）は知られており、且つ典型的には、強酸、例えば硫酸、を用いて行われる。しかしながら、これらの既知のプロセスは一般的に低い収率に関連付けられている。本発明者等は、該ロビンソン環化の収率が、硫酸よりも強くない酸を使用することによって、例えば有機酸を使用することによって、改善されることができることを驚くべきことに見出した。
【００４２】
従って、本発明の特定の観点は、好ましくは−２．９以上のｐＫａを有する酸の存在下で、メチルビニルケトンを用いた、好ましくは式ＩＸの化合物の、ロビンソン環化である。特に良好な結果が、有機酸、好ましくは有機スルホン酸、例えばベンゼンスルホン酸酸（−２．８のｐＫａを有する）及びメタンスルホン酸（−１．９のｐＫａを有する）、を使用することによって得られた。
【００４３】
上記式Ｖの化合物は、上記式ＶＩＩの化合物のアルキル化によって得られることができる。該アルキル化は、上記スキーム５に示されているように、エノンのα−炭化水素の脱プロトン化、引き続き、求電子試薬、例えばアルキルハロアセテート、の添加によって行われることができる。特に好適なアルキルハロアセテートは、アルキルブロモアセテート、例えばブロモ酢酸ｔｅｒｔ-ブチル及びブロモ酢酸エチル、を含む。一般的に、下記のスキーム５ａに示されているように、該アルキル化は、新たに生成されたステレオジェニック炭素原子の立体化学が、他のステレオジェニック炭素原子のうちの１以上、すなわちＲ１及びＲ２に結合される複数の炭素のうちの一方又は両方、の立体化学によって決定されるという、実質的に立体特異的な意味合いで進む。該立体特異的アルキル化は典型的には、アルキルブロモアセテート、例えばブロモ酢酸エチル又はブロモ酢酸ｔ-ブチル、を使用することによって得られることができる。
【００４４】
【化１２】
2020523410.tif 000013
【００４５】
上記式ＶＩＩの化合物の立体特異的アルキル化は、上記式Ｖによって表わされるジアステレオ異性体の分離無しに、ジアステレオマー的に実質的に純粋な上記式Ｖａの化合物を結果として生じる。
【００４６】
本明細書において、ジアステレオマー的に実質的に純粋とは、他のジアステレオ異性体に対して、所望のジアステレオ異性体の、少なくとも９０：１０、好ましくは少なくとも９５：５、より好ましくは少なくとも９９：１、の比の典型的なジアステレオマー比（ｄｒ：ｄｉａｓｔｅｒｅｏｍｅｒｉｃ  ｒａｔｉｏ）であることを意味する。
【００４７】
上記式Ｖａの化合物のジアステレオマー純度は典型的には、上記式Ｖの化合物の上記式ＶＩＩＩ及び上記式ＶＩの化合物への転化の為に本明細書に上記される工程と同じ化学工程を使用することによって、後続の工程中に維持されることができる（上記のスキーム４を参照）。換言すれば、式ＶＩＩＩ、式ＶＩ、及び式ＩＩａの化合物がまた、式ＶＩＩＩａ、式ＶＩａ、及び式ＩＩａｘについて下記のスキーム５ｂに示されているように、ジアステレオマー的に実質的に純粋に得られることができる。
【００４８】
【化１３】
2020523410.tif 000014
【００４９】
上記式ＶＩＩの化合物のアルキル化の立体特異性が好ましいが、新たに生成されたステレオジェニック中心のキラリティーは典型的に、上記式ＩＩの中間体化合物の調製中に失われる故に、上記式Ｉ又は上記式ＩＩの化合物の調製の為に必要とされない（上記スキーム１における上記式ＩＩＩの化合物を参照）。しかしながら、本明細書の下記において詳細に記載されているように、上記式Ｖａの化合物は、上記式Ｉ及び上記式ＩＩの化合物のエナンチオマー的に純粋な調製において有利に使用されうるという知見から、立体特異的なアルキル化に対する選好性が生ずる。驚くべきことに、上記式ＶＩＩＩａのジアステレオマー的に純粋な化合物は、例えば水素化ホウ素ナトリウムを用いて式ＶＩＩＩａの化合物を還元することによって、上記式ＶＩａの化合物のヒドロキシ部分における所望の立体化学の形成を妨げないことが判った。
【００５０】
本発明は有利には、天然ＥＰＤの合成、及び（天然の）ＥＰＤとそのエナンチオマーとを含むラセミＥＰＤの合成を可能にする。
【００５１】
ＥＰＤの絶対立体化学は、いまだ解明されていないけれども、本発明者等は、ＥＰＤが、ＣＯ２とメタノールの混合物を移動相として使用する、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｘ  Ａｍｙｌｏｓｅ−２タイプ（３．０×１５０ｍｍ；３μｍ）のキラルＨＰＬＣカラムから第２の化合物として溶出するラセミ混合物中の化合物であることを見出し故に、本方法はＥＰＤ及びそのエナンチオマーの調製を可能にする。
【００５２】
本発明の更なる観点は、下記の式Ｉ
【００５３】
【化１４】
2020523410.tif 000015
【００５４】
ここで、Ｒ１は、Ｈ、Ｃ２〜Ｃ８ヒドロカルビル又はポリ（アルケンオキシド）、ＳＲ３、ＳＯ２Ｒ３、Ｎ（Ｒ３）２、Ｃ（Ｏ）ＮＲ３、ＮＣ（Ｏ）Ｒ３、ＯＲ３、ＣＯ２Ｒ３、ＯＣ（Ｏ）Ｒ３、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ、又はＩ、好ましくはＨ又はＯＲ３、から選択され、
Ｒ２は、Ｒ４、ＳＲ４、ＳＯ２Ｒ４、Ｎ（Ｒ４）２、Ｃ（Ｏ）ＮＲ４、ＮＣ（Ｏ）Ｒ４、ＯＲ４、ＣＯ２Ｒ４ＯＣ（Ｏ）Ｒ４、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ、又はＩ、好ましくはＲ４、Ｈ、又はＯＲ４から選択され、並びに、
Ｒ３及びＲ４は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８ヒドロカルビル又はポリ（アルケンオキシド）、好ましくはメチル、から選択される、
に従うＥＰＤ類似体に向けられている。
【００５５】
好ましくは、Ｒ１及びＲ２は両方ともメチルであり、又はＲ１は水素であり且つＲ２はメチルである。
【００５６】
Ｒ１がＨであり、且つＲ２がメチルであるところの式ＩのＥＰＤの類似体はまた、抗腫瘍活性に関連付けられることができることが驚くべきことに見出された。従って、医薬において使用する為の、好ましくは癌を処置する方法において使用する為の、式Ｉの上記ＥＰＤ類似体は特に、本発明の観点である。
【００５７】
特定の実施態様において、上記式Ｉの化合物のＲ１が、ポリ（アルケンオキシド）、ＳＲ３、ＳＯ２Ｒ３、Ｎ（Ｒ３）２、Ｃ（Ｏ）ＮＲ３、ＮＣ（Ｏ）Ｒ３、ＯＲ３、ＣＯ２Ｒ３、又はＯＣ（Ｏ）Ｒ３から選択され、且つＲ３が、Ｈ又はポリ（アルケンオキシド）から選択される。この実施態様は、上記ＥＰＤ類似体の溶解性及び薬物動態特性を改善する為に特に有利であることが見出される。
【００５８】
Ｒ１がポリ（アルケンオキシド）、ＳＲ３、ＳＯ２Ｒ３、Ｎ（Ｒ３）２、Ｃ（Ｏ）ＮＲ３、ＮＣ（Ｏ）Ｒ３、ＯＲ３、ＣＯ２Ｒ３、又はＯＣ（Ｏ）Ｒ３から選択されるところの化合物は、ＩＸの化合物を反応させることによって得られることができ、ここで、
【００５９】
【化１５】
2020523410.tif 000016
【００６０】
は二重結合であり、且つＲ１は、Ｏ、ＮＨ、又はＳから選択される。例えば、特定の実施態様において、上記化合物ＩＸは、下記のスキーム６に示されているように、上記式ＶＩＩの対応する化合物にエナンチオ選択的に転化されることができるウィーランド・ミーシャー（Ｗｉｅｌａｎｄ−Ｍｉｅｓｃｈｅｒ）ケトンである（Paul  Buchschacher等，Organic  Syntheses，Coll．Vol．7，p.368  (1990年)；Vol．63．p.37  (1985年)をまた参照）。
【００６１】
【化１６】
2020523410.tif 000017
【００６２】
本発明の別の観点は、本発明に従う方法において、ＥＰＤ又はその類似体の調製に好適な中間体化合物に向けられている。
【００６３】
本発明のこの観点の特定の実施態様は、下記の式ＩＩ
【００６４】
【化１７】
2020523410.tif 000018
【００６５】
ここで、Ｒ１は独立して、Ｒ３、ＳＲ３、ＳＯ２Ｒ３、Ｎ（Ｒ３）２、Ｃ（Ｏ）ＮＲ３、ＮＣ（Ｏ）Ｒ３、ＯＲ３、ＣＯ２Ｒ３、ＯＣ（Ｏ）Ｒ３、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、Ｉ、好ましくはＯＲ３又はＲ３、から選択され、及び、
Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８ヒドロカルビル又はポリ（アルケンオキシド）から選択される、
の中間体化合物である。
【００６６】
別の特定の実施態様は、下記の式ＩＩａ、式ＩＩａｘ、式ＩＩＩ、式Ｖ、式Ｖａ、式ＶＩ、式ＶＩａ、式ＶＩＩＩ、又は式ＶＩＩＩａ
【００６７】
【化１８】
2020523410.tif 000019
【００６８】
ここで、Ｒ１は、Ｈ、Ｃ２〜Ｃ８ヒドロカルビル又はポリ（アルケンオキシド）、ＳＲ３、ＳＯ２Ｒ３、Ｎ（Ｒ３）２、Ｃ（Ｏ）ＮＲ３、ＮＣ（Ｏ）Ｒ３、ＯＲ３、ＣＯ２Ｒ３、ＯＣ（Ｏ）Ｒ３、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、又はＩ、好ましくはＨ又はＯＲ３、から選択され、
Ｒ２は、Ｒ４、ＳＲ４、ＳＯ２Ｒ４、Ｎ（Ｒ４）２、Ｃ（Ｏ）ＮＲ４、ＮＣ（Ｏ）Ｒ４、ＯＲ４、ＣＯ２Ｒ４ＯＣ（Ｏ）Ｒ４、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ、又はＩ、好ましくはＲ４、Ｈ、又はＯＲ４、から選択され、
Ｒ３及びＲ４は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８ヒドロカルビル又はポリ（アルケンオキシド）、好ましくはメチル、から選択され；並びに
Ｒ５及びＲ６は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、又は陽イオン、例えばアンモニウム、アルカリ金属イオン、若しくはアルカリ土類金属イオン、から選択される、
のうちの１つに従う中間体化合物である。
【００６９】
好ましい実施態様において、式Ｉの化合物は、式Ｉを用いて表わされる絶対立体化学又はその絶対立体化学の逆を有する（ＥＰＤの絶対立体化学はまだ解明されていない故に、上記参照）。本発明の方法は好ましくは、式Ｉの化合物のエナンチオ選択的調製物を含む。
【００７０】
本明細書において上記された上記方法の工程は典型的に、個々の化合物の立体特異的転化を含む。従って、ＥＰＤ及びその類似体に至る途中で中間体化合物のエナンチオマー的に純粋な異性体を提供することによって、エナンチオマー的に純粋なＥＰＤ及びその類似体が、本発明によって調製されることができる。ＥＰＤ及びその類似体のエナンチオマーはまた、この様式で得られることができる。例えば、本明細書において上記されたウィーランド・ミーシャーケトンのエナンチオ選択的合成（Paul  Buchschacher等，Organic  Syntheses，Coll．Vol．7，p.368  (1990年)；Vol．63，p.37  (1985年)をまた参照）は、本明細書に記載された全ての化合物の、本発明に従うエナンチオ選択的合成を可能にする。特に、Ｒ１及びＲ２がそれぞれメチルであるところの上記式ＶＩＩの化合物のエナンチオ選択的合成は、Carneiro等，Journal  of  Organic  Chemistry  75  (2010年)  2877-2882に記載されているように行われることができる。
【００７１】
本明細書に記載されている式Ｉの化合物又は中間体化合物をエナンチオ選択的に調製する為の別の方法は、本発明の別の観点であるジアステレオマー塩の結晶化を介する分割を含む。本発明のこの観点について、上記式ＶＩの化合物が、上記式ＶＩａの化合物として、ジアステレオ異性体的に実質的に純粋に得られることが好ましい。上記式ＶＩａの化合物は、本明細書において上記され且つ上記スキーム５ｂで示されているように、上記式ＶＩＩの化合物の上記式Ｖａの化合物への立体特異的アルキル化、そして引き続き、アセチル化、そして還元によって得られることができる。
【００７２】
本発明者等は、Ｒ６がＨであるところの上記式ＶＩａに従う中間体化合物のエナンチオマーのうちの１つのみが、キラルアミン、例えばフェニルアルキルアミン、を使用することによって選択的に結晶化されることができることを驚くべきことに見出した。この観点において、上記明細書において一般的に説明されているように、上記式ＶＩａは、下記のスキーム７に示されていように、エナンチオマーＶＩａｂ及びエナンチオマーＶＩｂａの混合物を示していることが強調される。従って、式ＶＩａ及びＶＩａｂの化合物の図が同一であるにもかかわらず、該式は、２つの異なるタイプの化合物を表す：式ＶＩａは、式ＶＩａｂの化合物及び式ＶＩｂａの化合物のラセミ混合物を表し、且つ式ＶＩａｂは、エナンチオマー的に純粋な化合物を表す。
【００７３】
【化１９】
2020523410.tif 000020
【００７４】
驚くべきことに、下記のスキーム８に示されているように、キラルアミンを使用することによって、式ＶＩａｂのエナンチオマー又は式ＶＩｂａのエナンチオマーのいずれかで塩が形成され、そして沈殿させることができ、一方、他方のエナンチオマー（その塩は沈殿しない）は溶液中に残る。どの特定のエナンチオマーが塩を形成し、且つどの特定の異性体が溶液中に残るかは、キラルアミンの適切なキラリティーを選択することによって決定されることができる。
【００７５】
【化２０】
2020523410.tif 000021
【００７６】
ここで、Ｒ１及びＲ２は、上記で定義した通りであり、好ましくは両方ともメチルであり、並びに、
Ｒ７及びＲ８は、アミンがキラルアミンであるように２つの異なる部分を表す。
【００７７】
好ましいキラルアミンは、α−メチルベンジルアミン（（１）−フェニルエチルアミンとまた呼ばれる）であり、しかしながら他の類似するアミン、特にキラル分割の為に一般的に使用されているアミン、がまた適用されうる。比較的低コストで容易に入手可能であり且つ分割において良好な結果を示した故に、α−メチルベンジルアミンが好ましい。
【００７８】
キラルアミン、特に（Ｓ）−（−）α−メチルベンジルアミン又は（Ｒ）−（＋）−α−メチルベンジルアミン、を用いた分割の追加の長所は、初期の合成工程中に形成されうる任意の他のジアステレオ異性体が、所望のエナンチオマーから単離されることができることである。特に、本発明者等は、Ｒ１及びＲ２がＭｅである場合、化合物ＶＩＩ、Ｖａ、ＶＩＩＩａ、及びＶＩａの、少量（すなわち、典型的に、所望のジアステレオ異性体に対して１０％（ｍｏｌ／ｍｏｌ）未満）の望ましくないジアステレオ異性体が形成されうること、及びこれらの望ましくないジアステレオ異性体は、（Ｓ）−α−メチルベンジルアミン及び／又は（Ｒ）−α−メチルベンジルアミンを使用することによって除去されることができることを特に見出した。
【００７９】
（Ｓ）−α−メチルベンジルアミン又は（Ｒ）−α−メチルベンジルアミンが、化合物ＶＩａの所望のエナンチオマーを結果として生じるかは、得られたエナンチオマーを式Ｉの化合物Ｉ（すなわち、特定の一方のそのエナンチオマー）に転化し、そして該得られた生成物の滞留時間をＥＰＤのラセミ混合物の滞留時間と比較することによって決定されることができる。（Ｓ）−（−）−α−メチルベンジルアミンを用いての式ＶＩａの化合物のキラル分割は、天然のＥＰＤに導くことができる塩を結果として生じることが判った。その逆に、（Ｒ）−（＋）−α−メチルベンジルアミンを用いての式ＶＩａの化合物のキラル分割は、ＥＰＤのエナンチオマーに導くことができる塩を結果として生じる。
【００８０】
本発明の方法は、本明細書に記載されている全ての化合物の立体化学に対する完全な制御を可能にする故に、式Ｉの化合物、並びに式ＩＩ、式ＩＩａｘ、式ＩＩＩ、式Ｖａ、式ＶＩａ、及び式ＶＩＩＩａに従う中間体化合物が、エナンチオマーの混合物として得られることができる、又は本発明の方法は、式ＶＩＩ及び式ＶＩａのエナンチオマー的に実質的に純粋な化合物の調製を可能にする故に、エナンチオマー的に実質的に純粋であることができる（上記を参照）。本明細書の文脈において、エナンチオマー的に実質的に純粋とは、他のエナンチオマーに対して、所望のエナンチオマーの、少なくとも９０：１０、好ましくは少なくとも９５：５、より好ましくは少なくとも９９：１、のエナンチオマー比（ｅｒ：ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｉｃ  ｒａｔｉｏ）を意味する。式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩａｘ、式ＩＩＩ、式Ｖａ、式ＶＩａ、及び式ＶＩＩＩａに従う化合物の両方のエナンチオマーは、個別に且つエナンチオマー的に実質的に純粋に得られることができる。従って、本発明のなお別の観点は、式Ｉのエナンチオマー的に実質的に純粋なＥＰＤ類似体、又は式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩａｘ、式ＩＩＩ、式Ｖａ、式ＶＩａ、若しくは式ＶＩＩＩａで表わされる絶対立体化学又はその絶対立体化学の逆を有する、式ＩＩ、式ＩＩａｘ、式ＩＩＩ、式Ｖａ、式ＶＩａ、若しくは式ＶＩＩＩａの中間体化合物である。
【実施例】
【００８１】
本発明は、下記の非限定的な実施例によって示されることができる。合成された全ての化合物の構造は、核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法を用いて確認された。
【００８２】
実施例１  ４ａ−メチル−４，４ａ，５，６，７，８−ヘキサヒドロナフタレン−２（３Ｈ）−オンの合成
【００８３】
【化２１】
2020523410.tif 000022
【００８４】
２−メチルシクロヘキサノン（５２．２６ｇ、０．４６６ｍｏｌ）及びメチルビニルケトン（６８．２８ｇ、０．９７４ｍｏｌ）を含む８５０ｍＬのジクロロメタンの溶液が冷やされ、そして工業用ベンゼンスルホン酸（１５０．５ｇ、０．９５２ｍｏｌ）が、−５０〜−５５℃で、５分間にわたり、幾つかの部分に分けて添加された。磁気的に撹拌された混合物が温められ、−２０℃に達したときに、氷とドライアイスの混合物中に置かれた。一晩撹拌後、３００ｍＬの水が加えられ、引き続き、重炭酸ナトリウム（９６ｇ、１．１４２ｍｏｌ）がゆっくりと添加された。混合物が２時間撹拌され、層が分離され、そして濁った水性層が、３００ｍＬのジクロロメタンで抽出された。乾燥及びロータリーエバポレーションを行うと残渣物が残り、それに７００ｍＬのヘプタンが旋回撹拌しながら添加された。３０分間放置後、上清が残渣物からデカンテーションされ、それは３００ｍＬのヘプタンでもう一度処理された。溶液のロータリーエバポレーションを行い、引き続き、１２０〜１５０℃／０．５ｍｂａｒでのクーゲルロール（Ｋｕｇｅｌｒｏｈｒ）蒸留は、５５．５７ｇ（０．３３９ｍｏｌ、７３％）の生成物を与え、それは次工程で使用する為に十分純粋であった。
【００８５】
実施例２  ｔｅｒｔ−ブチル  ２−（（ｒｅｌ２Ｒ，８ａＲ）−８ａ−メチル−３−オキソ−１，２，３，５，６，７，８，８ａ−オクタヒドロナフタレン−２−イル）アセテートの合成
【００８６】
【化２２】
2020523410.tif 000023
【００８７】
リチウムジイソプロピルアミド（ＬＤＡ）溶液が、２．５Ｎのｎ−ブチルリチウムを含むヘキサン（５６ｍＬ、１４０ｍｍｏｌ）を、ジイソプロピルアミン（１４．３０ｇ、１４１．６ｍｍｏｌ）を含む４５ｍＬのテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）に、＜−２０℃で添加することにより作成された。該溶液は更に冷やされ、そして４０ｍＬのＴＨＦに溶解された上記で調製されたケトン（１３．９２ｇ、８４．８８ｍｍｏｌ）が、＜−６０℃で、３０分間にわたり添加された。該溶液が同じ温度で、１時間撹拌され、次にブロモ酢酸ｔ−ブチル（２７．９５ｇ、１４３．３ｍｍｏｌ）を含む３０ｍＬのＴＨＦの溶液が、＜−５５℃で、４５分間にわたり添加された。混合物が９０分間撹拌され、それによって温度が−１７℃まで上昇した。次に、それは−５０℃まで冷やされ、そして２６ｇの塩化アンモニウムを含む１００ｍＬの水の溶液が、直ちに加えられた。別の５０ｍＬの水が加えられ、層が分離され、そして水性層が２×７５ｍＬのヘプタンで抽出された。乾燥及びロータリーエバポレーションは残渣物を与え、それは、１１５ｇのシリカ上で下記の条件でクロマトグラフィーに掛けられた：溶離液としてヘプタンを用いて開始し、そしてトルエン及び酢酸エチルの添加によって溶離液の極性を徐々に増加させた。生成物の画分が一緒にされて、１６．３３ｇ（５８．７４ｍｍｏｌ、６９％）を得た。
【００８８】
実施例３  ｔｅｒｔ−ブチル  ２−（（ｒｅｌ２Ｒ，８ａＲ）−３−アセトキシ−８ａ−メチル−１，２，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドロナフタレン−２−イル）アセテートの合成
【００８９】
【化２３】
2020523410.tif 000024
【００９０】
実施例２（１６．０３ｇ、５７．６６ｍｍｏｌ）のエステルが、２００ｍＬの無水酢酸に溶解された。ヨウ化ナトリウム（１．７０ｇ、１１．３ｍｍｏｌ）が添加され、混合物が冷やされ、そしてクロロトリメチルシラン（３８ｍＬ、２９７．３ｍｍｏｌ）が、−５〜０℃で、３０分間にわたり添加された。混合物が６時間撹拌され、最後の２時間は冷やされなかった。混合物が再度冷やされ、そしてピリジン（４６ｍＬ、０．５６９ｍｏｌ）が、＜−２０℃で、２０分間にわたり加えられた。かなり粘稠の、ようやく撹拌可能な懸濁物が形成された。一晩撹拌し、引き続き、６０℃で、完全なロータリーエバポレーションを行い、残渣物を得、それは１００ｍＬの酢酸エチルと共に撹拌された。濾過、酢酸エチルとの撹拌、濾過、洗浄、及び濾液のロータリーエバポレーションは残渣物を与え、それは９５ｇのシリカ（若干量のピリジンを用いて前処理された）上でクロマトグラフィーに掛けられ、１５．３２ｇのジエノールアセテート（４７．９ｍｍｏｌ、８３％）をもたらした。
【００９１】
実施例４  ｔｅｒｔ−ブチル  ２−（（ｒｅｌ２Ｒ，３Ｓ，８ａＲ）−３−ヒドロキシ−８ａ−メチル−１，２，３，４，６，７，８，８ａ−オクタヒドロナフタレン−２−イル）アセテートの合成
【００９２】
【化２４】
2020523410.tif 000025
【００９３】
実施例３のジエノールアセテートの溶液（１５．３２ｇ、４７．９ｍｍｏｌ）を含む１５ｍＬのＴＨＦが氷中で冷やされ、そして５０ｍＬの無水エタノールが加えられた。水素化ホウ素ナトリウム（３．８０ｇ、１００ｍｍｏｌ）が、幾つかの部分に分けて、約−１０℃で添加された。混合物が一晩撹拌され、氷中で冷やされ、そして６０ｍＬの酢酸エチルが添加された。混合物が１０分間撹拌され、７５ｍＬの氷冷水が加えられ、混合物が１０分間撹拌され、１２５ｍＬのトルエンが加えられ、引き続き、２５．２ｇの塩化アンモニウムが徐々に添加された。混合物は追加の３０分間撹拌され、層が分離され、そして有機層が５０ｍＬの水で洗われた。連続する水性層が、１００ｍＬのトルエンで抽出された。有機層が乾燥され、そしてロータリーエバポレーターで濃縮され、１３．３２ｇの残渣物を与え、それは次工程でそのまま使用された。
【００９４】
実施例５  ２−（（ｒｅｌ２Ｒ，３Ｓ，８ａＲ）−３−ヒドロキシ−８ａ−メチル−１，２，３，４，６，７，８，８ａ−オクタヒドロナフタレン−２−イル）酢酸の合成
【００９５】
【化２５】
2020523410.tif 000026
【００９６】
実施例４の未精製アルコール（１３．０５ｇ）が、１００ｍＬのエタノール、水酸化カリウム（１０．１ｇ、１５３．３ｍｍｏｌ）、及び２５ｍＬの水と共に３時間還流下で加熱された。ほとんどのエタノールは、その後ロータリーエバポレーションによって除去された。残渣物が、５０ｍＬの水で希釈され、次に１５０ｍＬのトルエンで抽出された。トルエン層が、２×３０ｍＬの水で洗われた。一緒にされた水性層が３０ｇのクエン酸で処理され、そして次に１５０ｍＬ及び１００ｍＬのトルエンで抽出された。乾燥及びロータリーエバポレーションは、未精製の酸を与え（ロータリーエバポレーション中にその一部がすでに結晶化した）、それは未精製の酸の別の部分（７．３６ｇのジエノールアセテートの還元、そして生成物の加水分解から得られた）と一緒にされた。トルエン、ジクロロメタン、及びＴＢＭＥ（この溶媒は生成物を溶解し、そしてそれを溶出させる）を連続的に使用して、８５ｇのシリカ上でのクロマトグラフィーは生成物を与え、それはトルエンから再結晶化され、５．４０ｇの所望のヒドロキシ酸をもたらした（それは少量の別の異性体を含む；２４．１ｍｍｏｌ、ジエノールアセテートに基づき、５１％）。濾液が、４．５２ｇのそれほど純粋でないヒドロキシ酸を含んでいた。
【００９７】
実施例６  （ｒｅｌ３ａＲ，４ａＲ，９ａＳ）−４ａ−メチル−３ａ，４，４ａ，５，６，７，９，９ａ−オクタヒドロナフト［２，３−ｂ］フラン−２（３Ｈ）−オンの合成
【００９８】
【化２６】
2020523410.tif 000027
【００９９】
実施例５のヒドロキシ酸（５．２０ｇ、２３．２ｍｍｏｌ）が５０ｍＬのジクロロメタンと混合され、そして溶液が氷中で冷やされた。４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）−ピリジン（２１３ｍｇ）及びＤＣＣ（５．７１ｇ、２７．６７ｍｍｏｌ）が添加され、そして混合物が一晩撹拌された。懸濁物が濾過され、固形分がジクロロメタンで洗われた。濾液がロータリーエバポレーターで濃縮され、そして残渣物が、ヘプタン中での酢酸エチルのグラジエントを使用して、５０ｇのシリカ上でクロマトグラフィーに掛けられた。生成物の画分は、上記したそれほど純粋でないヒドロキシ酸のラクトン化から得られた類似の生成物の画分と一緒にされた。固形化されたラクトンの総収量は、４．５４ｇ（２２．０４ｍｍｏｌ、９５％）であった。
【０１００】
実施例７  （ｒｅｌ４ａＲ，９ａＳ）−４ａ−メチル−４ａ，５，６，７，９，９ａ−ヘキサヒドロナフト［２，３−ｂ］フラン−２（４Ｈ）−オンの合成
【０１０１】
【化２７】
2020523410.tif 000028
【０１０２】
ＬＤＡ溶液が、ジイソプロピルアミン（１．９２ｇ、１９．０ｍｍｏｌ）を含む１５ｍＬのＴＨＦ、及びｎ−ブチルリチウム（７ｍＬのヘキサン中２．５Ｎ、１７．５ｍｍｏｌ）から、＜−１５℃で作成された。１０ｍＬのＴＨＦに溶解された実施例６のラクトン（２．１０ｇ、１０．１９ｍｍｏｌ）が、＜−６５℃で、１０分間にわたり添加された。添加漏斗が１０ｍＬのＴＨＦでリンスされた。溶液が、＜−７０℃で、４５分間撹拌された。１５ｍＬのＴＨＦに溶解された臭化フェニルセレニル（４．０２ｇ、１６．７ｍｍｏｌ）が、＜−６５℃で、１０分間にわたり添加された。混合物が３.５時間撹拌され、それによって温度が１０℃まで上昇した。混合物が６ｇのクエン酸を含む４０ｍＬの水の溶液に注がれた。抽出が７５ｍＬ及び５０ｍＬのトルエンで行われた。連続した有機層が、３０ｍＬの水で洗われ、次に乾燥され、そしてロータリーエバポレーターで濃縮されて、４．８３ｇの残渣物が残った。
【０１０３】
この残渣物が５０ｍＬのＴＨＦに溶解された。酢酸（６６０ｍｇ、１１ｍｍｏｌ）が添加され、そして溶液が氷中で冷やされた。過酸化水素（５．５２ｇの３５％溶液、４７．０ｍｍｏｌ）が数分内に添加され、そして混合物が３.５時間撹拌され、それによって温度が約１２℃まで上昇した。１０ｇの重炭酸ナトリウム及び４０ｍＬの水の混合物が添加され、そして混合物が１時間撹拌された。抽出が２×７５ｍＬのトルエンで行われた。連続した有機層が２５ｍＬの水で洗われ、次に乾燥及びロータリーエバポレーターで濃縮された。残渣物が、ヘプタン中での酢酸エチルのグラジエントを使用して、４５ｇのシリカ上でクロマトグラフィーに掛けられた。これは、６５４ｍｇの不飽和ラクトン（３．２０ｍｍｏｌ、３１％）を与えた。
【０１０４】
実施例８  （ｒｅｌ３ａＳ，４ａＲ，９ａＳ）−４ａ−メチル−３ａ，４，４ａ，５，６，７，９，９ａ−オクタヒドロナフト［２，３−ｂ］フラン−２（３Ｈ）−オンの合成
【０１０５】
【化２８】
2020523410.tif 000029
【０１０６】
塩化ニッケル六水和物（１９３ｍｇ、０．８１ｍｍｏｌ）が、実施例７の不飽和ラクトン（６５４ｍｇ、３．２０ｍｍｏｌ）を含む４５ｍＬのメタノールの溶液に添加された。混合物が冷やされ、そして水素化ホウ素ナトリウム（３８４ｍｇ、１０ｍｍｏｌ）が−４５℃で添加された。混合物が−２７〜−３２℃で、２.５時間撹拌され、次にそれは９０ｍＬのトルエン及び８０ｍＬの２Ｎ冷塩酸の混合物に注がれた。混合物が数分間振盪され、層が分離され、そして有機層が５ｇの重炭酸ナトリウムを含む２５ｍＬの水で洗われた。連続する水性層が、２×４０ｍＬのトルエンで抽出され、そして有機層が乾燥され、そしてロータリーエバポレーターで濃縮された。残渣物が、ヘプタン中での酢酸エチルのグラジエントを使用して、２０ｇのシリカ上でクロマトグラフィーに掛けられた。これは２６０ｍｇの飽和ラクトンを与え、それはそのまま結晶化された（１．２６ｍｍｏｌ、３９％）。
【０１０７】
実施例９  （ｒｅｌ３ａＳ，４ａＲ，９ａＳ）−４ａ−メチル−３−メチレン−３ａ，４，４ａ，５，６，７，９，９ａ−オクタヒドロナフト［２，３−ｂ］フラン−２（３Ｈ）−オン（モノメチル類似体）の合成
【０１０８】
【化２９】
2020523410.tif 000030
【０１０９】
実施例８のラクトン（２６０ｍｇ、１．２６ｍｍｏｌ）が、ギ酸エチル（２８０ｍｇ、３．７８ｍｍｏｌ）及び５ｍＬのＴＨＦと混合された。溶液が、１Ｎのｔ−ＢｕＯＫを含むＴＨＦ（１．６５ｍＬ、１．６５ｍｍｏｌ）に、３０分間にわたり、氷冷で添加された。滴下漏斗が５ｍＬのＴＨＦでフラッシュされた。混合物が一晩撹拌され、次に４５℃で、２.５時間加温され、次に氷中で冷やされた。パラホルムアルデヒド（９８ｍｇ、３．２７ｍｍｏｌ）が添加され、混合物が室温で、３０分間撹拌され、次に５５℃で、１．５時間加温された。混合物が冷やされ、そして５０ｍＬのｔ−ブチルメチルエーテル（ＴＢＭＥ）、引き続き、２ｇの炭酸カリウムを含む２５ｍＬの水が加えられた。１０分間撹拌後、層が分離され、そして水性層が、３０ｍＬのＴＢＭＥで抽出された。連続した有機層が、１５ｍＬの水で洗われ、次に乾燥され、そしてロータリーエバポレーターで濃縮された。残渣物は、実質的に純粋なメチレンラクトンから構成された（２２０ｍｇ、１．０１ｍｍｏｌ、８０％）。
【０１１０】
図６は、本発明に従う、モノメチル類似体のラセミ混合物のＨ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【０１１１】
実施例１０  （ｒｅｌ４ａＳ，５Ｒ）−４ａ，５−ジメチル−４，４ａ，５，６，７，８−ヘキサヒドロナフタレン−２（３Ｈ）−オンの合成
【０１１２】
【化３０】
2020523410.tif 000031
【０１１３】
２，３−ジメチルシクロヘキサノン（４２．９０ｇ、０．３４０ｍｏｌ）及びメチルビニルケトン（５０．１ｇ、０．７１５ｍｏｌ）を含む６００ｍＬのジクロロメタンの溶液が冷やされ、そして工業用ベンゼンスルホン酸（１１２．４ｇ、０．７１０ｍｏｌ）が、＜−５５℃で、５分間にわたり３つの部分に分けて添加された。磁気的に撹拌された混合物が温められ、そして−１７℃に達したときに、氷とドライアイスの混合物中に置かれた。一晩撹拌後、３００ｍＬの冷水が加えられ、引き続き、重炭酸ナトリウム（８０ｇ、０．９５ｍｏｌ）がゆっくりと添加された。混合物が別の３０分間撹拌され、層が分離され、そして水性層が２５０ｍＬのジクロロメタンで抽出された。連続した有機層が、１００ｍＬの水で洗われた。乾燥及びロータリーエバポレーションを行うと残渣物が残り、それに５００ｍＬのヘプタンが回旋撹拌しながら添加された。１時間放置後、上清が残渣物からデカンテーションされ、それは３００ｍＬのヘプタンでもう一度処理された。溶液のロータリーエバポレーションを行い、引き続き、１２０〜１５０℃／０．５ｍｂａｒでのクーゲルロール蒸留は、２９．３５ｇ（０．１６５ｍｏｌ、４８％）の生成物を与え、それは次工程で使用する為に十分純粋であった。
【０１１４】
実施例１１  ｔｅｒｔ−ブチル  ２−（（ｒｅｌ２Ｒ，８Ｒ，８ａＳ）−８，８ａ−ジメチル−３−オキソ−１，２，３，５，６，７，８，８ａ−オクタヒドロナフタレン−２−イル）アセテートの合成
【０１１５】
【化３１】
2020523410.tif 000032
【０１１６】
ＬＤＡ溶液が、２．５Ｎのｎ−ブチルリチウムを含むヘキサン（５６ｍＬ、１４０ｍｍｏｌ）を、ジイソプロピルアミン（１４．６８ｇ、１４５．３ｍｍｏｌ）を含む５０ｍＬのＴＨＦに、＜−３０℃で、１５分間にわたり添加することにより作成された。溶液が更に冷やされ、そして４５ｍＬのＴＨＦに溶解された実施例１０のケトン（１５．１５ｇ、８５．１ｍｍｏｌ）が、＜−６５℃で、３０分間にわたり添加された。溶液が同じ温度で、１時間撹拌され、次にブロモ酢酸ｔ−ブチル（２９．０ｇ、１４８．７ｍｍｏｌ）を含む３０ｍＬのＴＨＦの溶液が、＜−６０℃で、４５分間にわたり添加された。混合物が３時間撹拌され、それによって温度が−１５℃まで上昇した。次に、それは−５０℃まで冷やされ、そして２６ｇの塩化アンモニウムを含む１００ｍＬの水の溶液が、直ちに加えられた。別の５０ｍＬの水が加えられ、層が分離され、そして水性層が、２×７５ｍＬのヘプタンで抽出された。乾燥及びロータリーエバポレーションは残渣物を与え、それは、１１５ｇのシリカ上で下記の条件でクロマトグラフィーに掛けられた：溶離液としてヘプタンを用いて開始し、そしてトルエン及び酢酸エチルの添加によって溶離液の極性を徐々に増加させた。生成物の画分が一緒にされて、１３．８６ｇ（４７．４７ｍｍｏｌ、５６％）を得た。
【０１１７】
実施例１２  ｔｅｒｔ−ブチル  ２−（（ｒｅｌ２Ｒ，８Ｒ，８ａＳ）−３−アセトキシ−８，８ａ−ジメチル−１，２，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドロナフタレン−２−イル）アセテートの合成
【０１１８】
【化３２】
2020523410.tif 000033
【０１１９】
実施例１１のエステル（１３．６６ｇ、４６．７８ｍｍｏｌ）が、２００ｍＬの無水酢酸に溶解された。ヨウ化ナトリウム（１．５０ｇ、１０ｍｍｏｌ）が添加され、混合物が冷やされ、そしてクロロトリメチルシラン（３５ｍＬ、２７４ｍｍｏｌ）が−１０〜−２０℃で、２０分間にわたり添加された。混合物が６時間撹拌され、最後の３時間は室温であった。混合物が再度冷やされ、そしてピリジン（４４ｍＬ、０．５４４ｍｏｌ）が、−５〜−１５℃で、２０分間にわたり加えられた。かなり粘稠の、ようやく撹拌可能な懸濁物が形成された。一晩撹拌し、引き続き、６０℃で、完全なロータリーエバポレーションを行い、残渣物を得、それは１５０ｍＬの酢酸エチルと共に数時間撹拌された。濾過、洗浄、及び濾液のロータリーエバポレーションは残渣物を与え、それは９０ｇのシリカ（若干量のピリジンを用いて前処理された）上でクロマトグラフィーに掛けられ、１３．７７ｇのジエノールアセテート（４１．２２ｍｍｏｌ、８８％）をもたらした。
【０１２０】
実施例１３  ｔｅｒｔ−ブチル  ２−（（ｒｅｌ２Ｒ，３Ｓ，８Ｒ，８ａＳ）−３−ヒドロキシ−８，８ａ−ジメチル−１，２，３，４，６，７，８，８ａ−オクタヒドロナフタレン−２−イル）アセテートの合成
【０１２１】
【化３３】
2020523410.tif 000034
【０１２２】
実施例１２のジエノールアセテート（１３．７７ｇ、４１．２２ｍｍｏｌ）を含む１５ｍＬのＴＨＦの溶液が氷中で冷やされ、そして５０ｍＬの無水エタノールが加えられた。水素化ホウ素ナトリウム（３．２８ｇ、８６．３ｍｍｏｌ）が、幾つかの部分に分けて、約−１０℃で添加された。混合物が一晩撹拌され、氷中で冷やされ、そして５０ｍＬの酢酸エチルが添加された。混合物が１０分間撹拌され、７５ｍＬの氷冷水が加えられ、混合物が１０分間撹拌され、７５ｍＬのトルエンが添加され、引き続き、２０ｇの塩化アンモニウムが徐々に添加された。混合物が追加の４５分間撹拌され、２５ｍＬの水及び１００ｍＬのトルエンが添加され、層が分離され、そして有機層が５０ｍＬの水で洗われた。連続する水性層が、１５０ｍＬのトルエンで抽出された。有機層が乾燥され、そしてロータリーエバポレーターで濃縮され、１３．２０ｇの残渣物を与え、それは次工程でそのまま使用された。
【０１２３】
実施例１３  ２−（（ｒｅｌ２Ｒ，３Ｓ，８Ｒ，８ａＳ）−３−ヒドロキシ−８，８ａ−ジメチル−１，２，３，４，６，７，８，８ａ−オクタヒドロナフタレン−２−イル）酢酸の合成
【０１２４】
【化３４】
2020523410.tif 000035
【０１２５】
実施例１２の未精製のアルコール（１２．９６ｇ）が、１００ｍＬのエタノール、水酸化カリウム（９．５４ｇ、１４４．８ｍｍｏｌ）、及び２５ｍＬの水と共に２時間還流下で加熱された。別の２５ｍＬの水が加えられ、そして混合物が室温で、週末の間撹拌され、次に１時間還流下で加熱された。ほとんどのエタノールは、その後ロータリーエバポレーションによって除去された。残渣物が、５０ｍＬの水で希釈され、次に２００ｍＬのＴＢＭＥで抽出された。有機層が、２×３０ｍＬの水で洗われた（前工程におけるエステルの還元に起因して、少量のジオールを含んだ）。一緒にされた水性層が３０ｇのクエン酸で処理され、そして次に３×１００ｍＬのＴＢＭＥで抽出された。乾燥及びロータリーエバポレーションは、未精製の酸を与え、それに４０ｍＬのトルエンが加えられた。２０ｍＬのヘプタンが撹拌しながら加えられ、そして懸濁物が一晩撹拌された。トルエン／ヘプタン，１／１、での濾過及び洗浄は、４．５４ｇのヒドロキシ酸を与えた（１９．０ｍｍｏｌ、ジエノールアセテートに基づき、４７％）。濾液が、別の４．３３ｇの不純なヒドロキシ酸を含んでいた。
【０１２６】
実施例１４  （ｒｅｌ３ａＲ，４ａＳ，５Ｒ，９ａＳ）−４ａ，５−ジメチル−３ａ，４，４ａ，５，６，７，９，９ａ−オクタヒドロナフト［２，３−ｂ］フラン−２（３Ｈ）−オンの合成
【０１２７】
【化３５】
2020523410.tif 000036
【０１２８】
実施例１３のヒドロキシ酸の懸濁物（４．３３ｇ、１８．２ｍｍｏｌ）及び４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）−ピリジン（１５０ｍｇ）を含む５０ｍＬのジクロロメタン（ＤＣＭ）が、氷中で冷やされた。ジシクロヘキシルカルボジイミド（４．５０ｇ、２１．８ｍｍｏｌ）が添加され、そして１０分後に氷浴が除去され、そして混合物が、室温で、一晩撹拌された。懸濁物が、２０ｍＬのＴＢＭＥで希釈され、そして濾過された。固形分が、５０ｍＬのＤＣＭで洗われた。濾液が５．３ｇの油性残渣物となるまで濃縮され、それは、ヘプタン中で１０％の酢酸エチルを使用して、１００ｇのシリカ上でクロマトグラフィーに掛けられた。生成物の画分が濃縮されて、白色固体として２．２ｇのラクトンを与えた（収率５５％）。
【０１２９】
不純な画分が、４．３３ｇの不純なヒドロキシ酸で行われた別のラクトン化反応の生成物と一緒にされ、そして１００ｇのシリカ上でクロマトグラフィーに再度掛けられた。これは、黄色のオイルとして０．６ｇの不純なラクトンを与え、それは放置すると固形化された。
【０１３０】
１００ｍｇの白色固体サンプルが１０ｍＬのヘプタンから結晶化され、それは３０ｍｇの結晶性固体を与えた。
【０１３１】
実施例１５  （ｒｅｌ４ａＳ，５Ｒ，９ａＳ）−４ａ，５−ジメチル−４ａ，５，６，７，９，９ａ−ヘキサヒドロナフト［２，３−ｂ］フラン−２（４Ｈ）−オンの合成
【０１３２】
【化３６】
2020523410.tif 000037
【０１３３】
ＬＤＡ溶液が、ジイソプロピルアミン（０．８２ｇ、８ｍｍｏｌ）を含む２０ｍＬのＴＨＦ、及びｎ−ブチルリチウム（２ｍＬのヘキサン中２．５Ｎ、５ｍｍｏｌ）から、＜０℃で作成された。１０分後、溶液が−７０℃まで冷やされ、そして１０ｍＬのＴＨＦに溶解された実施例１４のラクトン（０．６６ｇ、３ｍｍｏｌ）が、＜−６５℃で、１分間にわたり添加された。溶液が、＜−７０℃で、３０分間撹拌された。１０ｍＬのＴＨＦに溶解された四臭化炭素（１．３２ｇ、４ｍｍｏｌ）が、＜−６５℃で、１０分間にわたり添加された。混合物（暗黄色から橙色に変化した）が、＜−６５℃で、４時間撹拌された。冷混合物が、１５ｇの塩化アンモニウムを含む１００ｍＬの水の溶液に注がれた。混合物が、３×５０ｍＬのＴＢＭＥで抽出された。一緒にされた有機層が、２０ｍＬの塩水（ｂｒｉｎｅ）で洗われ、次に硫酸ナトリウム上で乾燥され、そして主にα−ブロモラクトンからなる残渣物となるまでロータリーエバポレーターで濃縮された。
【０１３４】
この残渣物が、１０ｍＬのＤＭＦに溶解された。１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（０．６ｇ、４ｍｍｏｌ）が添加され、そして溶液が、室温で、一晩撹拌された。溶液が、５０ｍＬのＴＢＭＥで希釈され、２０ｍＬの０．５Ｎ塩酸、２０ｍＬの水、２０ｍＬの塩水を用いて連続して洗われ、次に硫酸ナトリウム上で乾燥され、そしてロータリーエバポレーターで濃縮された。残渣物が、ヘプタン中での０〜２０％の酢酸エチルのグラジエントを使用して、２４ｇのシリカ上でクロマトグラフィーに掛けられた（ＩＳＣＯ）。これは、放置すると固形化したオイルとして、３１０ｍｇの不飽和ラクトンを与えた（収率４７％）。
【０１３５】
実施例１６  （ｒｅｌ３ａＳ，４ａＳ，５Ｒ，９ａＳ）−４ａ，５−ジメチル−３ａ，４，４ａ，５，６，７，９，９ａ−オクタヒドロナフト［２，３−ｂ］フラン−２（３Ｈ）−オンの合成
【０１３６】
【化３７】
2020523410.tif 000038
【０１３７】
塩化ニッケル六水和物（６０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）が、実施例１５の不飽和ラクトン（２２０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を含む２０ｍＬのメタノールの溶液に添加された。混合物が−４０℃まで冷やされ、そして水素化ホウ素ナトリウム（１１５ｍｇ、３ｍｍｏｌ）が−４０℃で添加された。混合物が−３５〜−２５℃で、３時間撹拌され、次にそれは５０ｍＬのＴＢＭＥ及び１０ｍＬの１Ｎ塩酸の混合物に注がれた。混合物が数分間振盪され、層が分離され、そして水性層が２０ｍＬのＴＢＭＥで抽出された。一緒にされた有機層が、２５ｍＬの飽和した重炭酸ナトリウム水溶液で洗われ、次に硫酸ナトリウム上で乾燥され、そして濃縮され、灰白色固体として１６０ｍｇの飽和したラクトンを得た（７３％）。
【０１３８】
実施例１７  （ｒｅｌ３ａＳ，４ａＳ，５Ｒ，９ａＳ）−４ａ，５−ジメチル−３−メチレン−３ａ，４，４ａ，５，６，７，９，９ａ−オクタヒドロナフト［２，３−ｂ］フラン−２（３Ｈ）−オンの合成
【０１３９】
【化３８】
2020523410.tif 000039
【０１４０】
実施例１６のラクトン（１６０ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）が、ギ酸エチル（１６０ｍｇ、２．１６ｍｍｏｌ）及び５ｍＬのＴＨＦと混合された。この溶液が、氷冷で１５分間にわたり、１Ｎのｔ−ＢｕＯＫを含むＴＨＦ（１．０ｍＬ、１．０ｍｍｏｌ）に添加された。混合物が、室温で、一晩撹拌され、次に５０℃で、２時間加温され、次に氷中で冷やされた。パラホルムアルデヒド（６６ｍｇ、２ｍｍｏｌ）が添加され、そして混合物が５０℃で、２時間加温された。混合物は室温まで冷やされ、そして２５ｍＬのＴＢＭＥ、引き続き、１ｇの炭酸カリウムを含む１５ｍＬの水が加えられた。３０分間撹拌後、層が分離され、そして水性層が、２５ｍＬのＴＢＭＥで抽出された。一緒にされた有機層が、１５ｍＬの水で、次に１５ｍＬの塩水で洗われ、次に硫酸ナトリウム上で乾燥され、そしてロータリーエバポレーターで濃縮され、無色のオイルとして１５０ｍｇのメチレンラクトンを与えた（収率９０％）。５〜１０％の不純物が存在するものの、ＮＭＲはＥＰＤのサンプルと同一であった。ＨＰＬＣ−ＭＳは、２．０分にｍ／ｚ２３３（Ｍ＋１）を有するピークを示す（２１５ｎｍで９５％）。
【０１４１】
キラル調製用のＨＰＬＣ（溶離液としてヘプタン及びイソプロピルアルコールの９：１の混合物を用いるＣｈｉｒａｌｐａｋ  ＩＣタイプ（２５０×２０ｍｍ×５μｍ））を用いてエナンチオマーを分離する為に、３５ｍｇの物質が使用された。ＥＰＤの真正サンプルを用いたスパイキング実験は、第２の溶出ピークがＥＰＤと同一であることを示した。
【０１４２】
図２は、本発明に従うＥＰＤ及びそのエナンチオマーを含むラセミ混合物のＨ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【０１４３】
図３は、本発明に従うＥＰＤ及びそのエナンチオマーを含むラセミ混合物のＨＰＬＣクロマトグラムを示す。ＨＰＬＣクロマトグラフは、移動相としてＣＯ２及びメタノールを用いたｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  ｌｕｘ  ａｍｙｌｏｓｅ−２（３．０×１５０ｍｍ；３μｍ）カラムを含む、ＰＤＡ検出器及びＱＤＡ質量検出器を備えたＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＣ２システムを用いて取得された。
【０１４４】
図４は、本発明に従い調製されたＥＰＤのＨＰＬＣクロマトグラムを示す（図３において上記されたように得られた）。
【０１４５】
図５は、本発明に従い調製されたＥＰＤのエナンチオマーのＨＰＬＣクロマトグラム（図３において上記されたように取得された）を示す。
【０１４６】
実施例１８  （ｒｅｌ４ａＲ，９ａＳ）−４ａ−メチル−４ａ，５，６，７，９，９ａ−ヘキサヒドロナフト［２，３−ｂ］フラン−２（４Ｈ）−オンの合成−臭化フェニルセレニルに対する代替として四臭化炭素でのラクトンの臭素化
【０１４７】
【化３９】
2020523410.tif 000040
【０１４８】
ＬＤＡ溶液が、ジイソプロピルアミン（０．４１ｇ、４．０ｍｍｏｌ）を含む１０ｍＬのＴＨＦ、及びｎ−ブチルリチウム（１ｍＬのヘキサン中２．５Ｎ、２．５ｍｍｏｌ）から、＜−０℃で作成された。５ｍＬのＴＨＦに溶解された実施例６のラクトン（０．３１ｇ、１．５ｍｍｏｌ）が、＜−６５℃で、５分間にわたり添加された。溶液が、＜−７０℃で、３０分間撹拌された。１０ｍＬのＴＨＦに溶解された四臭化炭素（０．６６ｇ、２ｍｍｏｌ）が、＜−６５℃で、１０分間にわたり添加された。混合物（暗黄色から橙色に変化した）が、＜−６０℃で、４時間撹拌された。冷混合物が、７．５ｇの塩化アンモニウムを含む５０ｍＬの水の溶液に注がれた。混合物は、室温に達するまで放置され、次に３×５０ｍＬのＴＢＭＥで抽出された。一緒にされた有機層が、２０ｍＬの塩水で洗われ、次に硫酸ナトリウム上で乾燥され、そしてロータリーエバポレーターで濃縮され、主にα−ブロモラクトンからなる０．６７ｇのオイル残渣物を与えた。
【０１４９】
この残渣物が、５ｍＬのＤＭＦに溶解された。１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（０．２３ｇ、１．５ｍｍｏｌ）が添加され、そして溶液が、室温で、一晩撹拌された。溶液が、５０ｍＬのＴＢＭＥで希釈され、そして２０ｍＬの０．５Ｎ塩酸、３×２０ｍＬの水、２０ｍＬの塩水を用いて連続して洗われ、次に硫酸ナトリウム上で乾燥され、そしてロータリーエバポレーターで濃縮された。残渣物が、ヘプタン中での０〜２０％の酢酸エチルのグラジエントを使用して、２４ｇのシリカ上でクロマトグラフィーに掛けられた（ＩＳＣＯ）。これは、オイルとして１００ｍｇの不飽和ラクトンを与えた（収率３３％）。
【０１５０】
実施例１９  合成された化合物のイン・ビトロ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）活性
ＤＭＳＯ中で下記の溶液が調製された：
溶液３：合成ＥＰＤ（５．２４μｇ／ｍｌ）；
溶液４：ＥＰＤの合成エナンチオマー（４．９４μｇ／ｍｌ）；
溶液５：メチル類似体のラセミ混合物（６．８μｇ／ｍｌ）；
溶液ＥＰＤ：天然のＥＰＤ（すなわち、Duke，Van  Haaften，&  Tran，2011年  Green  Sustainable  Chem  Vol  1:123-7に記載されているようにカロメリア・アマラントイデスから単離された）（４．７μｇ／ｍｌ）。
【０１５１】
化合物の細胞障害活性が、既に記載されている方法を使用して試験された（van  Haaften等  Journal  of  Experimental  &  Clinical  Cancer  Research  (2015年)  34:38）。要するに、卵巣癌細胞株ＪＣ（Van  Haaften-Day等.  Cancer  Res.  1983年）の３×１０４個の細胞が、１０％のウシ胎仔血清（ＦＣＳ、Ｓｉｇｍａ社）、５０Ｕのペニシリン、及び５０μｇ／ｍＬのストレプトマイシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）を含むＤＭＥＭ／Ｆ１２培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）を入れた２４ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ社、デンマーク）に播種された。該細胞が、湿度９５％に設定された９％のＣＯ２インキュベーター中、３７℃でインキュベートされた。２４時間後、溶液１〜６が、細胞培養物に加えられた。
【０１５２】
化合物それぞれの細胞障害活性が、標準的なＰｒｅｓｔｏ  ｂｌｕｅアッセイ法で７２時間後に決定された（方法に関する詳細については、Van  Haaften等  J  Exp  Clin  Cancer  Res.  2015年  34(1)：38を参照）。上記された各化合物の溶液が、１００、２００、及び４００倍にそれぞれ希釈された。
【０１５３】
結果が図１Ａに示されている。溶液３（合成ＥＰＤ）及び溶液４（ＥＰＤの合成エナンチオマー）は、カロメリア・アマラントイデスから単離された天然のＥＰＤと類似した細胞障害活性、又はそれよりも強い細胞障害活性さえも示す。溶液５（（モノ）メチル類似体のラセミ混合物）がまた細胞障害活性を示す。
【０１５４】
更に、合成ＥＰＤ（１〜３μｇ／ｍＬ）の効果が、正常な線維芽細胞に対して試験され、そして子宮頸癌細胞株Ｓｉｈａに対する効果と比較された（図１Ｂ）。結果は、用量依存性の効果が、線維芽細胞よりも癌細胞に対してはるかに高いことを示唆した。１μｇ／ｍＬの濃度では、線維芽細胞の増殖は影響を受けず、一方、癌細胞の増殖はほぼ２０％低下した。２μｇ／ｍＬの濃度では、線維芽細胞の増殖はほぼ２０％低下し、一方、癌細胞の増殖は、８０％超低下し、そして３μｇ／ｍＬの濃度では、線維芽細胞の増殖は３５％低下し、一方、癌細胞の増殖はほぼ９７％低下した。
【０１５５】
また、合成ＥＰＤの効果が、上記方法を使用して卵巣癌細胞株Ａ２７８０ＡＤ（ＡＴＣＣ）に対して試験され、ここで、該実験は７２時間後に終了した。細胞株Ａ２７８０ＡＤ（多剤耐性のヒト卵巣癌細胞株）は、パクリタキセルに対して耐性である。１，１．５，及び２μｇ／ｍＬの合成ＥＰＤでは、７２時間後の細胞株の増殖は、対照値（１００％、培地）の４０％、１３％、及び８％まで、それぞれ低下したことが示された。実際、０．３７５μｇ／ｍＬのパクリタキセルに対する完全な耐性が、細胞株Ａ２７８０ＡＤにおいて観察された。対照としての卵巣癌細胞株ＪＣを使用すると、合成ＥＰＤは、これらの細胞の阻害において、パクリタキセルと少なくとも同程度に有効であったことが観察された（図１Ｃ）。
【０１５６】
実施例２０  ２−（（ｒｅｌ２Ｒ，３Ｓ，８Ｒ，８ａＳ）−３−ヒドロキシ−８，８ａ−ジメチル−１，２，３，４，６，７，８，８ａ−オクタヒドロナフタレン−２−イル）酢酸の分割
（ｒｅｌ４ａＳ，５Ｒ）−４ａ，５−ジメチル−４，４ａ，５，６，７，８−ヘキサヒドロヘキサヒドロナフタレン−２（３Ｈ）−オン（１４．４５ｇ、８１．１８ｍｍｏｌ）が、上記されたように、幾つかの工程を経て未精製の２−（（ｒｅｌ２Ｒ，３Ｓ，８Ｒ，８ａＳ）−３−ヒドロキシ−８，８ａ−ジメチル−１，２，３，４，６，７，８，８ａ−オクタヒドロナフタレン−２−イル）酢酸に転化された。この未精製の酸（エナンチオマーの混合物）は、７５ｍＬのイソプロパノールに溶解され、そして次に（Ｓ）−（−）−メチルベンジルアミン（（Ｓ）−（−）−ＭＢＡ、８．６０ｇ、７１．０ｍｍｏｌ）が添加された。混合物が、３日間撹拌され、そして次に濾過され、固形分が３０ｍＬのイソプロパノール−ＴＨＦ（２／１）で洗われた。２−（（ｒｅｌ２Ｒ，３Ｓ，８Ｒ，８ａＳ）−３−ヒドロキシ−８，８ａ−ジメチル−１，２，３，４，６，７，８，８ａ−オクタヒドロナフタレン−２−イル）酢酸の単一のエナンチオマー（本明細書において（Ｓ）−（−）−ＭＢＡ−塩とまた呼ばれる）である、１．９６ｇの（Ｓ）−（−）−ＭＢＡ−塩が得られた。キラルＨＰＬＣは、該酸は８０〜９０％のエナンチオマー過剰率（ｅｅ：ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｉｃ  ｅｘｃｅｓｓ）（９０：１０〜９５：５のｅｒ）を有すること、及び少量の別のエナンチオマーによって汚染されていることを示した。
【０１５７】
前の濾過工程で得られた濾液は、ロータリーエバポレーターで濃縮され、そして残渣物が１５０ｍＬのＴＢＭＥ及び４５ｍＬの１０％水酸化ナトリウム溶液で撹拌された。層が分離され、そして有機層が３０ｍＬ及び２０ｍＬの水で洗われた。連続する水性層が、１００ｍＬのＴＢＭＥで抽出された。一緒にされた水性層が２０．５ｇのクエン酸で酸性化され、そして次に２×１２５ｍＬのＴＢＭＥで抽出された。乾燥及びロータリーエバポレーションは１０ｇの残渣物を与え、それは４０ｍＬのイソプロパノールに溶解された。（Ｒ）−（＋）−メチルベンジルアミン（５．３８ｇ、４４．４ｍｍｏｌ）が添加され、粘稠な懸濁物を結果として生じた。２０ｍＬのイソプロパノールが添加され、そして混合物が一晩撹拌された。濾過、４０ｍＬのイソプロパノール−ＴＨＦ（２／１）での洗浄、及び空気乾燥は２．０７ｇの（Ｒ）−（＋）−ＭＢＡ−塩（（Ｓ）−（−）−ＭＢＡで得られた塩と同様の他方のエナンチオマーの塩）を与えた。キラルＨＰＬＣは、このエナンチオマーが＞９７％のｅｅで得られたことを示した（すなわち、＞９８：２のｅｒ、図７を参照）。
【０１５８】
前の濾過工程で得られた濾液が、ロータリーエバポレーターで濃縮され、そして酸が、上記されたように、それから放出された。次に、それは、溶離液としてジクロロメタン、次にジクロロメタン−メタノールを使用して、７０ｇのシリカ上でクロマトグラフィーに掛けられた。シス−ラクトン（ＯＨが下向きの酸に由来する、実施例１４の構造を参照；この酸は容易にラクトン化する）が最初に溶出し、トランス酸（２−（（２Ｒ，３Ｓ，８Ｒ，８ａＳ）−３−ヒドロキシ−８，８ａ−ジメチル−１，２，３，４，６，７，８，８ａ−オクタヒドロナフタレン−２−イル）酢酸又はそのエナンチオマー）が後に溶出した。この未精製のトランス酸が（Ｓ）−（−）−メチルベンジルアミン（１．６０ｇ、１３．２ｍｍｏｌ）及び２５ｍＬのイソプロパノールと共に加熱された。溶液が、室温で、一晩撹拌され、そして結果として生じた懸濁物が濾過され、固形分が若干のイソプロパノール−酢酸エチル（１／１）で洗われた。（Ｓ）−（−）−ＭＢＡ−塩の収量は０．３５ｇであった。
【０１５９】
（Ｓ）−（−）−ＭＢＡ−塩（２．３１ｇ）の両方の部分が一緒にされ、そして８０ｍＬのイソプロパノールから再結晶化されて、１．６５ｇの（Ｓ）−（−）−ＭＢＡ−塩を与えた。
【０１６０】
実施例２１  エナンチオマー的に純粋なＥＰＤ及びそのエナンチオマーの合成
実施例２０に従い得られた（Ｓ）−（−）−ＭＢＡ−塩の酸は、洗浄及び抽出によってアミンから放出され、そして実施例１４〜１７に記載されている後続の反応に引き継がれた。最終的に、ＥＰＤは、本明細書で上記されたＨ−ＮＭＲ及びキラルＨＰＬＣによって決定される通りに得られた。
【０１６１】
実施例２０に従い得られた（Ｒ）−（＋）−ＭＢＡ−塩の酸は、アミンから放出され、そして実施例１４〜１７に記載されている後続の反応に引き継がれた。最終的に、ＥＰＤのエナンチオマーは、本明細書で上記されたＨ−ＮＭＲ及びキラルＨＰＬＣによって決定される通りに得られた。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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