(57)【要約】  腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）または骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）を標的とする多重特異性分子、およびその使用方法が開示されている。【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離された多重特異性、例えば、二重特異性分子であって、
（ｉ）第１の免疫抑制性骨髄細胞（ＩＭＣ）結合部分（例えば、第１の腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）結合部分；または第１の骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）結合部分）（例えば、抗体分子）、および
（ｉｉ）第２のＩＭＣ結合部分（例えば、第２のＴＡＭ結合部分；または第２のＭＤＳＣ結合部分）（例えば、抗体分子）であって、前記第１および前記第２のＩＭＣ（例えば、ＴＡＭまたはＭＤＳＣ）結合部分が異なり、前記第１および前記第２のＩＭＣ（例えば、ＴＡＭまたはＭＤＳＣ）結合部分が異なるエピトープに結合してもよく、前記第１および前記第２のＩＭＣ（例えば、ＴＡＭまたはＭＤＳＣ）結合部分が異なる抗原に結合してもよい第２のＩＭＣ結合部分
を含む多重特異性分子。
【請求項２】
前記第１のＩＭＣ結合部分が第１のＭＤＳＣ結合部分であり、前記第２のＩＭＣ結合部分は第２のＭＤＳＣ結合部分である、請求項１に記載の多重特異性分子。
【請求項３】
前記第１のＩＭＣ結合部分が第１のＴＡＭ結合部分であり、前記第２のＩＭＣ結合部分は第２のＴＡＭ結合部分である、請求項１に記載の多重特異性分子。
【請求項４】
前記第１のＴＡＭ結合部分がＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ２、ＣＸＣＲ２、ＣＤ８６、ＣＤ１６３、ＣＸ３ＣＲ１、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ２０４、ＣＤ５２、葉酸受容体ベータ、またはＰＤ−Ｌ１に結合し、また、前記第２のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＸＣＲ２、ＣＤ８６、ＣＤ１６３、ＣＸ３ＣＲ１、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ２０４、ＣＤ５２、葉酸受容体ベータ、またはＰＤ−Ｌ１に結合する、請求項３に記載の多重特異性分子。
【請求項５】
前記第１のＴＡＭ結合部分がＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ２、ＣＸＣＲ２、またはＰＤ−Ｌ１（例えば、ヒトＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ２、ＣＸＣＲ２、またはＰＤ−Ｌ１）に結合し、前記第２のＴＡＭ結合部分が、ＣＣＲ２、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＸＣＲ２、またはＰＤ−Ｌ１（例えば、ヒトＣＣＲ２、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＸＣＲ２、またはＰＤ−Ｌ１）に結合する、請求項４に記載の多重特異性分子。
【請求項６】
前記第１のＴＡＭ結合部分がＣＳＦ１Ｒに結合し、前記第２のＴＡＭ結合部分がＣＣＲ２に結合する、請求項４に記載の多重特異性分子。
【請求項７】
前記第１のＴＡＭ結合部分がＣＳＦ１Ｒに結合し、前記第２のＴＡＭ結合部分がＣＸＣＲ２に結合する、請求項４に記載の多重特異性分子。
【請求項８】
前記第１のＴＡＭ結合部分がＣＣＲ２に結合し、前記第２のＴＡＭ結合部分がＣＸＣＲ２に結合する、請求項４に記載の多重特異性分子。
【請求項９】
前記第１のＴＡＭ結合部分がＣＳＦ１Ｒに結合し、前記第２のＴＡＭ結合部分がＰＤ−Ｌ１に結合する、請求項４に記載の多重特異性分子。
【請求項１０】
前記第１のＴＡＭ結合部分が、約１０ｎＭ未満、より典型的には１０〜１００ｐＭの解離定数でＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ２、ＣＸＣＲ２、またはＰＤ−Ｌ１に結合し、また、前記第２のＴＡＭ結合部分は、約１０ｎＭ未満、より典型的には１０〜１００ｐＭの解離定数でＣＣＲ２、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＸＣＲ２、またはＰＤ−Ｌ１に結合する、請求項３〜９のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項１１】
前記第１のＴＡＭ結合部分が、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ２、ＣＸＣＲ２、またはＰＤ−Ｌ１の立体構造または線形エピトープに結合し、また前記第２のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＸＣＲ２、またはＰＤ−Ｌ１のコンフォメーショナルエピトープまたは線形エピトープに結合する、請求項３〜１０のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項１２】
前記多重特異性分子が少なくとも２つの非隣接ポリペプチド鎖を含む、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項１３】
前記第１のＩＭＣ結合部分が第１の抗ＩＭＣ抗体分子を含み、および／または前記第２のＩＭＣ結合部分が第２の抗ＩＭＣ抗体分子を含む、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項１４】
前記第１の抗ＩＭＣ抗体分子および前記第２の抗ＩＭＣ抗体分子が、独立して、完全な抗体（例えば、少なくとも１つ、好ましくは２つの完全な重鎖、および少なくとも１つ、好ましくは２つの完全な軽鎖を含む抗体）、または抗原結合断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体、またはダイアボディ（ｄＡｂ））である、請求項１３に記載の多重特異性分子。
【請求項１５】
前記第１の抗ＩＭＣ抗体分子および／または前記第２の抗ＩＭＣ抗体分子が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４、またはその断片から選択される重鎖定常領域を含む、請求項１３または１４に記載の多重特異性分子。
【請求項１６】
前記第１の抗ＩＭＣ抗体分子および／または前記第２の抗ＩＭＣ抗体分子が、カッパまたはラムダの軽鎖定常領域またはその断片から選択される軽鎖定常領域を含む、請求項１３〜１５のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項１７】
前記第１の抗ＩＭＣ抗体分子がカッパ軽鎖定常領域またはその断片を含み、前記第２の抗ＩＭＣ抗体分子がラムダ軽鎖定常領域またはその断片を含む、請求項１３〜１５のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項１８】
前記第１の抗ＩＭＣ抗体分子がラムダ軽鎖定常領域またはその断片を含み、前記第２の抗ＩＭＣ抗体分子がカッパ軽鎖定常領域またはその断片を含む、請求項１３〜１５のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項１９】
前記第１の抗ＩＭＣ抗体分子および前記第２の抗ＩＭＣ抗体分子が共通の軽鎖可変領域を有する、請求項１３〜１５のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項２０】
ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、およびＩｇＧ４の前記重鎖定常領域、より具体的にはヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４の前記重鎖定常領域から選択される重鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）をさらに含む、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項２１】
前記重鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）が、前記第１の抗ＩＭＣ抗体分子および前記第２の抗ＩＭＣ抗体分子の一方または両方に連結、例えば、共有結合している、請求項２０に記載の多重特異性分子。
【請求項２２】
前記重鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）が、天然に存在する重鎖定常領域と比較して、Ｆｃ受容体結合、抗体グリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能、または補体機能の１つまたは複数を増加または減少させる１つまたは複数の変異を含む、請求項２０または２１に記載の多重特異性分子。
【請求項２３】
前記第１の抗ＩＭＣ抗体分子が第１の重鎖定常領域（例えば、第１のＦｃ領域）を含み、前記第２の抗ＩＭＣ抗体分子が第２の重鎖定常領域（例えば、第２のＦｃ領域）を含み、前記第１の重鎖定常領域は、天然に存在する重鎖定常領域と比較して、前記第１の重鎖定常領域および前記第２の重鎖定常領域のヘテロ二量体化を増加させる１つまたは複数の変異を含み、および／または前記第２の重鎖定常領域は、天然に存在する重鎖定常領域と比較して、前記第２の重鎖定常領域および前記第１の重鎖定常領域のヘテロ二量体化を増加させる１つ以上の突然変異を含む、請求項１３〜２２のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項２４】
前記第１および前記第２の重鎖定常領域（例えば、第１および第２のＦｃ領域）は、一対の空洞突起（「ノブインホール」）、静電気の相互作用、または鎖交換の１つ以上を含み、例えば、天然に存在する重鎖定常領域と比較して、より多量のヘテロ多量体：ホモ多量体が形成されるようにする、請求項２３に記載の多重特異性分子。
【請求項２５】
前記第１および／または前記第２の重鎖定常領域（例えば、第１および／または第２のＦｃ領域、例えば、第１および／または第２のＩｇＧ１  Ｆｃ領域）が、Ｅｕ番号付けシステムに基づいて番号付けされた、３４７、３４９、３５０、３５１、３６６、３６８、３７０、３９２、３９４、３９５、３９７、３９８、３９９、４０５、４０７、または４０９の１つまたは複数から選択された位置でのアミノ酸置換を含む、請求項２３または２４に記載の多重特異性分子。
【請求項２６】
前記第１および／または第２の重鎖定常領域（例えば、第１および／または第２のＦｃ領域、例えば、第１および／または第２のＩｇＧ１  Ｆｃ領域）が、Ｅｕ番号付けシステムに基づいて番号付けされた、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、またはＹ３４９Ｃ（例えば、空洞またはホールに対応）、Ｔ３６６ＷまたはＳ３５４Ｃ（例えば、突起またはノブに対応）、またはそれらの組み合わせから選択されるアミノ酸置換を含む、請求項２３〜２５のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項２７】
リンカー、例えば、前記第１の抗ＩＭＣ抗体分子および前記第２の抗ＩＭＣ抗体分子、前記第１の抗ＩＭＣ抗体分子および前記重鎖定常領域（例えば、前記Ｆｃ領域）、または前記第２の抗ＩＭＣ抗体分子および前記重鎖定常領域（例えば、前記Ｆｃ領域）のうちの１つまたは複数の間のリンカーをさらに含む、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項２８】
前記リンカーが、切断可能なリンカー、切断不可能なリンカー、ペプチドリンカー、柔軟なリンカー、剛直なリンカー、らせんリンカー、または非らせんリンカーから選択される、請求項２７に記載の多重特異性分子。
【請求項２９】
前記リンカーがペプチドリンカーである、請求項２８に記載の多重特異性分子。
【請求項３０】
前記ペプチドリンカーがＧｌｙおよびＳｅｒを含む、請求項２９に記載の多重特異性分子。
【請求項３１】
前記重鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）が抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導する、請求項２０〜３０のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項３２】
前記第１または前記第２のＩＭＣ結合部分がＣＳＦ１Ｒに結合する抗体分子であり、配列番号４８、配列番号６６、または配列番号６９の重鎖可変領域配列からの１、２、または３つのＣＤＲ、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、配列番号４８、配列番号６６、または配列番号６９のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、２つ、３つまたは４つ以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さないＣＤＲを含み、および／または、配列番号５０、配列番号６７、配列番号７０の前記軽鎖可変領域配列からの１、２、または３つのＣＤＲ、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、配列番号５０、配列番号６７、または配列番号７０からのＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、２つ、３つまたは４つ以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さないＣＤＲを含む、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項３３】
ＣＳＦ１Ｒに結合する前記抗体分子が、配列番号４８、配列番号６６、または配列番号６９の前記重鎖可変領域配列、または実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、配列番号４８、配列番号６６、または配列番号６９のアミノ酸配列に９５％から９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、５、１０または１５以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない）を含み、および／または配列番号５０、配列番号６７、または配列番号７０の前記軽鎖可変領域配列、または実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、９５％〜９９．９％同一、または配列番号５０、配列番号６７、または配列番号７０の前記アミノ酸配列に対して少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、５、１０または１５以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない）を含む、請求項３２に記載の多重特異性分子。
【請求項３４】
前記第１または前記第２のＩＭＣ結合部分がＣＣＲ２に結合する抗体分子であり、配列番号４４、配列番号５４、配列番号５９、配列番号６２、配列番号６４の重鎖可変領域配列からの１、２、または３つのＣＤＲ、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、配列番号４４、配列番号５４、配列番号５９、配列番号６２、配列番号６４のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、２つ、３つまたは４つ以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さないＣＤＲを含み、および／または、配列番号４５、配列番号５７、配列番号６０、配列番号６３、配列番号６５の前記軽鎖可変領域配列からの１、２、または３つのＣＤＲ、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、配列番号４５、配列番号５７、配列番号６０、配列番号６３、配列番号６５からのＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、２つ、３つまたは４つ以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さないＣＤＲを含む、請求項１〜３３のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項３５】
ＣＣＲ２に結合する前記抗体分子が、配列番号４４、配列番号５４、配列番号５９、配列番号６２、配列番号６４の前記重鎖可変領域配列、または実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、配列番号４４、配列番号５４、配列番号５９、配列番号６２、配列番号６４のアミノ酸配列に９５％から９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、５、１０または１５以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない）を含み、および／または配列番号４５、配列番号５７、配列番号６０、配列番号６３、配列番号６５の前記軽鎖可変領域配列、または実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、９５％〜９９．９％同一、または配列番号４５、配列番号５７、配列番号６０、配列番号６３、配列番号６５の前記アミノ酸配列に対して少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、５、１０または１５以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない）を含む、請求項３４に記載の多重特異性分子。
【請求項３６】
前記第１または前記第２のＩＭＣ結合部分がＰＤ−Ｌ１に結合する抗体分子であり、配列番号１０９、配列番号１１１、または配列番号１１３の重鎖可変領域配列からの１、２、または３つのＣＤＲ、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、配列番号１０９、配列番号１１１、または配列番号１１３のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、２つ、３つまたは４つ以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さないＣＤＲを含み、および／または、配列番号１１０、配列番号１１２、または配列番号１１４の前記軽鎖可変領域配列からの１、２、または３つのＣＤＲ、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、配列番号１１０、配列番号１１２、または配列番号１１４からのＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、２つ、３つまたは４つ以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さないＣＤＲを含む、請求項１〜３３のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項３７】
ＰＤ−Ｌ１に結合する前記抗体分子が、配列番号１０９、配列番号１１１、または配列番号１１３の前記重鎖可変領域配列、または実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、配列番号１０９、配列番号１１１、または配列番号１１３のアミノ酸配列に９５％から９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、５、１０または１５以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない）を含み、および／または配列番号１１０、配列番号１１２、または配列番号１１４の前記軽鎖可変領域配列、または実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、９５％〜９９．９％同一、または配列番号１１０、配列番号１１２、または配列番号１１４の前記アミノ酸配列に対して少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、５、１０または１５以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない）を含む、請求項３６に記載の多重特異性分子。
【請求項３８】
（ｉ）前記第１のＩＭＣ結合部分は、第１の抗原（例えば、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ２、ＣＸＣＲ２、ＣＤ８６、ＣＤ１６３、ＣＸ３ＣＲ１、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ２０４、ＣＤ５２、葉酸受容体ベータ、またはＰＤ−Ｌ１）に一価で結合し、および／または
（ｉｉ）前記第２のＩＭＣ結合部分は、第２の抗原（例えば、ＣＣＲ２、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＸＣＲ２、ＣＤ８６、ＣＤ１６３、ＣＸ３ＣＲ１、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ２０４、ＣＤ５２、葉酸受容体ベータ、またはＰＤ−Ｌ１）に一価で結合し、
前記第１の抗原は前記第２の抗原とは異なる、請求項１〜３７のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項３９】
（ｉ）前記多重特異性分子は、第１の抗原（例えば、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ２、ＣＸＣＲ２、ＣＤ８６、ＣＤ１６３、ＣＸ３ＣＲ１、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ２０４、ＣＤ５２、葉酸受容体ベータ、またはＰＤ−Ｌ１）に一価で結合し、および／または
（ｉｉ）前記多重特異性分子は、第２の抗原（例えば、ＣＣＲ２、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＸＣＲ２、ＣＤ８６、ＣＤ１６３、ＣＸ３ＣＲ１、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ２０４、ＣＤ５２、葉酸受容体ベータ、またはＰＤ−Ｌ１）に一価で結合し、
前記第１の抗原は前記第２の抗原とは異なる、請求項１〜３８のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項４０】
（ｉ）前記多重特異性分子は、第２抗原の存在下で第１抗原を阻害し、細胞が細胞表面で前記第１抗原と前記第２抗原の両方を発現する場合、前記多重特異性分子は、細胞内の前記第１抗原の活性を、例えば、少なくとも４０、５０、６０、７０、８０、または９０％減少させてもよく、および／または
（ｉｉ）前記多重特異性分子は、前記第２抗原の非存在下で前記第１抗原を阻害しないか、実質的に阻害せず、前記多重特異性分子は、前記細胞が前記細胞表面で前記第２抗原ではなく前記第１抗原を発現する場合、前記第１抗原の活性を低下させない、または前記第１抗原の活性を２、４、６、８、１０、または１５％以上低下させなくてもよい、請求項１〜３９のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項４１】
（ｉ）前記多重特異性分子は、第１抗原の存在下で第２抗原を阻害し、細胞が細胞表面で前記第２抗原と前記第１抗原の両方を発現する場合、前記多重特異性分子は、細胞内の前記第２抗原の活性を、例えば、少なくとも４０、５０、６０、７０、８０、または９０％減少させてもよく、および／または
（ｉｉ）前記多重特異性分子は、前記第１抗原の非存在下で前記第２抗原を阻害しないか、実質的に阻害せず、前記多重特異性分子は、細胞が細胞表面で前記第２抗原ではなく前記第１抗原を発現する場合、前記第２抗原の活性を低下させない、または前記第２抗原の活性を２、４、６、８、１０、または１５％以上低下させなくてもよい、請求項１〜４０のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項４２】
１つ以上の追加の結合部分（例えば、第３の結合部分、第４の結合部分（例えば、三重特異性または四重特異性分子）を含む、請求項１〜４１のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項４３】
第３のＴＡＭ結合部分（例えば、抗体分子）を含む、請求項３〜４２のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項４４】
前記第３のＴＡＭ結合部分が前記第１および前記第２のＴＡＭ結合部分と異なる、請求項４３に記載の多重特異性分子。
【請求項４５】
前記第１のＴＡＭ結合部分がヒトＣＳＦ１Ｒに結合し、前記第２のＴＡＭ結合部分がヒトＣＣＲ２に結合し、前記第３のＴＡＭ結合部分がＣＸＣＲ２に結合する、請求項４３に記載の多重特異性分子。
【請求項４６】
前記多重特異性分子が、腫瘍標的化部分である第３結合部分（例えば、抗体分子）を含む、請求項４２に記載の多重特異性分子。
【請求項４７】
前記腫瘍標的化部分が、ＰＤ−Ｌ１、メソセリン、ＣＤ４７、ガングロシド２（ＧＤ２）、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、前立腺特異的膜抗原（ＰＭＳＡ）、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ロンキナーゼ、ｃ−Ｍｅｔ、未成熟ラミニン受容体、ＴＡＧ−７２、ＢＩＮＧ−４、カルシウム活性化クロライドチャネル２、サイクリンＢ１、９Ｄ７、Ｅｐ−ＣＡＭ、ＥｐｈＡ３、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、テロメラーゼ、ＳＡＰ−１、サバイビン、ＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ−１、ＰＲＡＭＥ、ＳＳＸ−２、メラン−Ａ／ＭＡＲＴ−１、Ｇｐ１００／ｐｍｅｌ１７、チロシナーゼ、ＴＲＰ−１／−２、ＭＣ１Ｒ、β−カテニン、ＢＲＣＡ１／２、ＣＤＫ４、ＣＭＬ６６、フィブロネクチン、ｐ５３、Ｒａｓ、ＴＧＦ−Β受容体、ＡＦＰ、ＥＴＡ、ＭＡＧＥ、ＭＵＣ−１、ＣＡ−１２５、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、β−カテニン、ＣＤＫ４、ＣＤＣ２７、ＣＤ４７、αアクチニン−４、ＴＲＰ１／ｇｐ７５、ＴＲＰ２、ｇｐ１００、Ｍｅｌａｎ−Ａ／ＭＡＲＴ１、ガングリオシド、ＷＴ１、ＥｐｈＡ３、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、ＣＤ２０、ＭＡＲＴ−２、ＭＡＲＴ−１、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＭ１、ＭＵＭ２、ＭＵＭ３、ＮＡ８８−１、ＮＰＭ、ＯＡ１、ＯＧＴ、ＲＣＣ、ＲＵＩ１、ＲＵＩ２、ＳＡＧＥ、ＴＲＧ、ＴＲＰ１、ＴＳＴＡ、葉酸受容体アルファ、Ｌ１−ＣＡＭ、ＣＡＩＸ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ｇｐＡ３３、ＧＤ３、ＧＭ２、ＶＥＧＦＲ、インテグリン（インテグリンアルファＶｂｅｔａ３、インテグリンアルファ５Ｂｅｔａ１）、炭水化物（Ｌｅ）、ＩＧＦ１Ｒ、ＥＰＨＡ３、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、またはＲＡＮＫＬに結合する、請求項４６に記載の多重特異性分子。
【請求項４８】
二重特異性分子である、
（ｉ）前記第１のＴＡＭ結合部分（例えば、第１のＴＡＭ抗原、例えば、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ２、ＣＸＣＲ２、またはＰＤ−Ｌ１に結合する結合部分）は、第１および第２の非隣接ポリペプチドを含み、
（ｉｉ）前記第２のＴＡＭ結合部分（例えば、第２のＴＡＭ抗原、例えば、ＣＣＲ２、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＸＣＲ２、またはＰＤ−Ｌ１に結合する結合部分）は、第３および第４の非隣接ポリペプチドを含み、
（ａ）前記第１のポリペプチドは、例えば、Ｎ−Ｃ配向において、リンカーを介して、前記第１および前記第３のポリペプチドの間の関連を促進する第１のドメイン（例えば、第１のＦｃ領域）に結合してもよい第１のＶＨ、第１のＣＨ１を含み、
（ｂ）前記第２のポリペプチドは、例えば、前記Ｎ−Ｃ配向において、第１のＶＬおよび第１のＣＬを含み、
（ｃ）前記第３のポリペプチドは、例えば、前記Ｎ−Ｃ配向において、リンカーを介して、前記第１および前記第３のポリペプチドの間の関連を促進する第２のドメイン（例えば、第２のＦｃ領域）に結合してもよい第２のＶＨ、第２のＣＨ１を含み、
（ｄ）前記第４のポリペプチドは、例えば、前記Ｎ−Ｃ配向において、第２のＶＬおよび第２のＣＬを含む、請求項４に記載の多重特異性分子。
【請求項４９】
前記第１および前記第２のドメイン（例えば、第１および第２のＦｃ領域）がホモまたはヘテロ二量体を形成する、請求項４８に記載の多重特異性分子。
【請求項５０】
（ｉ）抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）、および
（ｉｉ）抗ＣＣＲ２結合部分（例えば、抗ＣＣＲ２抗体分子）
を含む、単離された多重特異性、例えば、二重特異性分子。
【請求項５１】
多重特異性分子であって、
以下の特性の１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、またはそれ以上）
（ｉ）前記多重特異性分子は、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞、またはＣＳＦ１Ｒ陰性、ＣＣＲ２陽性細胞と比較して、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞に優先的に結合する、例えば、前記多重特異性分子の前記ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞への前記結合は、例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定されたとき、例えば、図１に関して実施例２に記載された方法を使用して測定されたとき、前記ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞、前記ＣＳＦ１Ｒ陰性、ＣＣＲ２陽性細胞への前記多重特異性分子の前記結合よりも少なくとも２、４、６、８、１０、１５、２０、または２５倍強い、
（ｉｉ）前記多重特異性分子は、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞と比較して、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞に優先的に結合する、例えば、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞に結合するための前記多重特異性分子のＥＣ５０は、例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定した場合、例えば、図１に関して実施例２に記載の方法を使用して測定したときに、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞への結合に関する前記多重特異性分子のＥＣ５０の６０、５０、４０、３０、２０、または１０％以下である、
（ｉｉｉ）前記多重特異性分子は、ＣＳＦ１Ｒ陰性、ＣＣＲ２陽性細胞と比較して、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞に優先的に結合する、例えば、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞に結合するための前記多重特異性分子のＥＣ５０は、例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定した場合、例えば、図１に関して実施例２に記載の方法を使用して測定したときに、ＣＳＦ１Ｒ陰性、ＣＣＲ２陽性細胞への結合に関する前記多重特異性分子のＥＣ５０の５０、４０、３０、２０、１０、または５％以下である、
（ｉｖ）前記多重特異性分子は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、好中球、組織常在マクロファージ（クッパー細胞など）、またはランゲルハンス細胞などと比較して、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）または骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）に優先的に結合する、例えば、ＴＡＭまたはＭＤＳＣへの前記多重特異性分子の結合は、例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定した場合、例えば、図５に関して実施例６に記載の方法を使用して測定したときに、前記多重特異性分子のＴ細胞、ＮＫ細胞、好中球、組織常在マクロファージ（クッパー細胞など）、またはランゲルハンス細胞の前記結合よりも少なくとも２、４、６、８、１０、１５、２０、または２５倍強い、
（ｖ）前記多重特異性分子は、単球移動、例えば、単球走化性タンパク質１（ＭＣＰ１）誘発単球移動を阻害し、例えば、トランスウェルプレート移動アッセイを使用して測定した場合、例えば、図２に関して実施例３に記載された方法を使用して測定されるとき、ＭＣＰ１誘発単球移動を少なくとも４０、５０、６０、または７０％減少させる、
（ｖｉ）前記多重特異性分子は、マクロファージの増殖、例えば、骨髄由来マクロファージ、例えば、骨髄由来マクロファージのＣＳＦ−１誘導性の増殖を阻害し、例えば、骨髄由来マクロファージのＣＳＦ−１誘導性の増殖を、例えば、細胞増殖ＭＴＴアッセイを使用して測定した場合、例えば、図３Ｂに関して実施例４に記載の方法を使用して測定した場合、少なくとも５０、６０、７０、または８０％減少させる、
（ｖｉｉ）前記多重特異性分子は、単球、例えば、骨髄由来単球の前記分化、例えば、骨髄由来単球のＣＳＦ−１誘導性の分化を阻害しない、または実質的に阻害しない、例えば、骨髄由来単球のＣＳＦ−１誘導性の分化を、例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定した場合、例えば、図４に関して実施例５に記載の方法を使用して測定した場合、２、４、６、８、または１０％以上減少させない、
（ｖｉｉｉ）前記多重特異性分子は、抑制性骨髄細胞、例えばＴＡＭまたはＭＤＳＣを枯渇させる、例えば、抑制性骨髄細胞、例えばＴＡＭまたはＭＤＳＣの数を、例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定された場合、例えば、図６に関して実施例７に記載された方法を使用して測定されたときｉｎ  ｖｉｖｏで少なくとも８０、８５、９０、９５、９９、または９９．５％減少させる、
（ｉｘ）前記多重特異性分子は、組織に存在するマクロファージ、例えば、クッパー細胞を枯渇させない、または実質的に枯渇させない、例えば、組織に存在するマクロファージ、例えば、クッパー細胞の数を、例えば、免疫組織化学分析を使用して測定した場合、例えば、図７Ｂおよび７Ｄに関して実施例８に記載の方法を使用して測定したときｉｎ  ｖｉｖｏで４、６、８、１０、または１５％以上減少させない、
（ｘ）前記多重特異性分子は、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞のＣＳＦ−１依存性細胞生存を阻害しない、または実質的に阻害しない、例えば、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞のＣＳＦ−１依存性細胞生存を、例えば、細胞生存率ＭＴＴアッセイを使用して測定した場合、例えば、図８Ａに関して実施例９に記載の方法を使用して測定した場合、５、１０、または１５％以上減少させない、
（ｘｉ）前記多重特異性分子は、ｉｎ  ｖｉｖｏでのＣＤ８＋Ｔ細胞腫瘍浸潤を増加させる、例えば、腫瘍のＣＤ３＋Ｔ細胞の％ＣＤ８＋Ｔ細胞を、例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定した場合、例えば、図９に関して実施例１０に記載された方法を使用して測定されるときに、少なくとも１．５、２、または２．５倍増加させる、
（ｘｉｉ）前記多重特異性分子は、ｉｎ  ｖｉｖｏで腫瘍のＴｒｅｇ頻度を低下させる、例えば、フローサイトメトリー分析を用いて測定する場合、例えば、図１０Ａに関して実施例１１に記載されている方法を用いて測定するとき、腫瘍のＴｒｅｇ頻度を少なくとも１５、２０、２５、または３０％低下させる、
（ｘｉｉｉ）前記多重特異性分子は、ｉｎ  ｖｉｖｏでの腫瘍の前記ＣＤ８＋Ｔ細胞／Ｔｒｅｇ比を増加させる、例えば、腫瘍のＣＤ８＋Ｔ細胞／Ｔｒｅｇ比を、例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定される場合、例えば、図１０Ｂに関して実施例１１に記載された方法を使用して測定されるときに、少なくとも２．５、３、３．５、４、または４．５倍増加させる、または
（ｘｉｖ）前記多重特異性分子は、例えば、図１１Ａおよび１１Ｂに関して実施例１２に記載の方法を用いて測定されるときに、腫瘍の増殖を減らすおよび／または腫瘍を有する動物の生存を増加させる、
を有する、請求項５０に記載の多重特異性分子。
【請求項５２】
前記抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分および前記抗ＣＣＲ２結合部分が、独立して、完全な抗体（例えば、少なくとも１つ、好ましくは２つの完全な重鎖、および少なくとも１つ、好ましくは２つの完全な軽鎖を含む抗体）、または抗原結合断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体、またはダイアボディ（ｄＡｂ））である、請求項５０または５１に記載の多重特異性分子。
【請求項５３】
前記抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分および／または抗ＣＣＲ２結合部分が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、もしくはＩｇＧ４、またはその断片から選択される重鎖定常領域を含む、請求項５０〜５２のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項５４】
前記抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分および／または前記抗ＣＣＲ２結合部分が、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）または補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を媒介できる重鎖定常領域を含む、請求項５０〜５２のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項５５】
前記抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分が第１の重鎖定常領域（例えば、第１のＦｃ領域）を含み、前記抗ＣＣＲ２結合部分が第２の重鎖定常領域（例えば、第２のＦｃ領域）を含み、前記第１の重鎖定常領域は、天然に存在する重鎖定常領域と比較して、前記第１の重鎖定常領域および前記第２の重鎖定常領域のヘテロ二量体化を増加させる１つまたは複数の変異を含み、および／または前記第２の重鎖定常領域は、天然に存在する重鎖定常領域と比較して、前記第２の重鎖定常領域および前記第１の重鎖定常領域のヘテロ二量体化を増加させる１つ以上の突然変異を含む、請求項５０〜５２のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項５６】
前記抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分および／または抗ＣＣＲ２結合部分が、カッパまたはラムダの軽鎖定常領域、またはその断片から選択される軽鎖定常領域を含む、請求項５０〜５５のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項５７】
前記抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分がカッパ軽鎖定常領域またはその断片を含み、前記抗ＣＣＲ２結合部分がラムダ軽鎖定常領域またはその断片を含む、請求項５０〜５５のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項５８】
前記抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分がラムダ軽鎖定常領域またはその断片を含み、前記抗ＣＣＲ２結合部分がカッパ軽鎖定常領域またはその断片を含む、請求項５０〜５５のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項５９】
前記抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分および前記抗ＣＣＲ２結合部分が共通の軽鎖可変領域を有する、請求項５０〜５５のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項６０】
ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、およびＩｇＧ４の前記重鎖定常領域、より具体的にはヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４の前記重鎖定常領域から選択される重鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）をさらに含む、請求項５０〜５９のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項６１】
抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）または補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を媒介できる重鎖定常領域をさらに含む、請求項５０〜５９のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項６２】
抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子および抗ＣＣＲ２抗体分子を含み、
（ｉ）前記抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子は第１ポリペプチドおよび第２ポリペプチドを含み、前記第１ポリペプチドは第１軽鎖可変領域（ＶＬ）および第１軽鎖定常領域（ＣＬ）を含み、前記第２ポリペプチドは第１重鎖可変領域（ＶＨ）、第１重鎖定常領域１（ＣＨ１）を含み、また第１のＣＨ２および第１のＣＨ３を含んでもよく、
（ｉｉ）前記抗ＣＣＲ２抗体分子は第３ポリペプチドおよび第４ポリペプチドを含み、前記第３ポリペプチドは第２ＶＬおよび第２ＣＬを含み、前記第４ポリペプチドは第２ＶＨ、第２ＣＨ１を含み、また第２ＣＨ２および第２のＣＨ３を含んでもよい、請求項５０〜６１のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項６３】
（ｉ）前記抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子がＣＳＦ１Ｒに一価で結合する、および／または
（ｉｉ）前記抗ＣＣＲ２抗体分子はＣＣＲ２に一価で結合する、
請求項５０〜６２のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項６４】
前記多重特異性分子がＣＳＦ１Ｒに一価で結合する、および／またはＣＣＲ２に一価で結合する、請求項５０〜６３のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項６５】
前記多重特異性分子がＣＳＦ１Ｒに一価で結合し、ＣＣＲ２に一価で結合する、請求項５０〜６３のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項６６】
（ｉ）前記多重特異性分子は、ＣＣＲ２の存在下でＣＳＦ１Ｒを阻害し、前記多重特異性分子は、細胞内のＣＳＦ１Ｒの活性（例えば、ＣＳＦ１Ｒシグナル伝達、例えば、ＣＳＦ１誘導ＣＳＦ１Ｒシグナル伝達）を、例えば、少なくとも４０、５０、６０、７０、８０、または９０％、前記細胞が前記細胞表面でＣＳＦ１ＲとＣＣＲ２の両方を発現する場合、減少させてもよく、および／または
（ｉｉ）前記多重特異性分子は、ＣＣＲ２の非存在下でＣＳＦ１Ｒを阻害しないか、実質的に阻害せず、前記多重特異性分子は、前記細胞が前記細胞表面でＣＣＲ２ではなくＣＳＦ１Ｒを発現する場合、ＣＳＦ１Ｒ（例えば、ＣＳＦ１Ｒシグナル伝達、例えば、ＣＳＦ１誘導ＣＳＦ１Ｒシグナル伝達）の活性を低下させない、またはＣＳＦ１Ｒの活性を２、４、６、８、１０、または１５％以上低下させなくてもよい、請求項５０〜６５のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項６７】
（ｉ）前記多重特異性分子は、ＣＳＦ１Ｒの存在下でＣＣＲ２を阻害し、前記多重特異性分子は、細胞内のＣＣＲ２の活性を、例えば、少なくとも４０、５０、６０、７０、８０、または９０％、前記細胞が前記細胞表面でＣＣＲ２とＣＳＦ１Ｒの両方を発現する場合、減少させてもよく、および／または
（ｉｉ）前記多重特異性分子は、ＣＳＦ１Ｒの非存在下でＣＣＲ２を阻害しないか、実質的に阻害せず、前記多重特異性分子は、前記細胞が前記細胞表面でＣＳＦ１ＲではなくＣＣＲ２を発現する場合、ＣＣＲ２の活性を低下させない、またはＣＣＲ２の活性を２、４、６、８、１０、または１５％以上低下させなくてもよい、請求項５０〜６６のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項６８】
（ｉ）単球、例えば、炎症性単球、例えば、Ｌｙ６ＣＨｉ  ＣＣＲ２＋ＣＸ３ＣＲ１Ｌｏ炎症性単球の輸送を媒介する分子に結合する第１の結合部分であって、前記第１の結合部分はＣＣＲ２に結合していてもよい第１の結合部分、および
（ｉｉ）炎症組織での単球および／またはマクロファージの前記成熟および／または生存を媒介する分子に結合する第２の結合部分であって、前記第２の結合部分はＣＳＦ１Ｒに結合していてもよい第２の結合部分
を含む、単離された多重特異性、例えば、二重特異性分子。
【請求項６９】
（ｉ）炎症性単球の腫瘍への動員を減少させる第１の結合部分であって、ＣＣＲ２に結合および／または阻害していてもよい第１の結合部分、および
（ｉｉ）腫瘍微小環境内の単球および／またはマクロファージの成熟および／または生存を低減する第２の結合部分であって、ＣＳＦ１Ｒに結合および／または阻害していてもよい第２の結合部分
を含む、単離された多重特異性、例えば、二重特異性分子。
【請求項７０】
１つ以上の追加の結合部分（例えば、第３の結合部分、第４の結合部分（例えば、三重特異性または四重特異性分子）を含み、前記第３の結合部分が第３のＩＭＣ結合部分または腫瘍標的化部分であってよい、請求項５０〜６９のいずれか１項に記載の多重特異性分子。
【請求項７１】
請求項１〜７０のいずれか１項に記載の多重特異性分子（例えば、抗体）をコードする、単離された核酸分子。
【請求項７２】
請求項７１に記載の核酸分子を含む、発現ベクターなどのベクター。
【請求項７３】
請求項７１に記載の核酸分子または請求項７２に記載のベクターを含む、宿主細胞などの細胞。
【請求項７４】
適切な条件下、例えば、遺伝子発現および／またはヘテロ二量体化に適した条件下で、請求項７３に記載の前記細胞、例えば、宿主細胞を培養することを含む、請求項１〜７０のいずれか１項に記載の多重特異性分子を作製、例えば、製造する方法。
【請求項７５】
請求項１〜７０のいずれか１項に記載の前記多重特異性分子と、薬学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤とを含む、医薬組成物。
【請求項７６】
対象の癌を治療する方法であって、それを必要とする前記対象に請求項１〜７０のいずれか１項に記載の前記多重特異性分子を投与することを含み、前記多重特異性分子は前記癌を治療するのに有効な量で投与される方法。
【請求項７７】
対象の癌を治療する方法であって、それを必要とする前記対象に請求項１〜７０のいずれか１項に記載の前記多重特異性分子を投与することを含み、前記多重特異性分子はＴＡＭの数（例えば、前記対象の腫瘍内または腫瘍付近のＴＡＭの数）を減らすのに有効な量で投与され、ＴＡＭの前記増殖（例えば、前記対象の腫瘍内または腫瘍付近のＴＡＭの前記増殖）、または前記対象の腫瘍へのマクロファージ浸潤を減少または阻害する方法。
【請求項７８】
ＴＡＭの集団の一部を減少させることにより対象の癌を治療する方法であって、それを必要とする前記対象に請求項１〜７０のいずれか１項に記載の前記多重特異性分子を投与することを含み、前記多重特異性分子は前記ＴＡＭの集団の一部を阻害または枯渇させるのに有効な量で投与される方法。
【請求項７９】
対象（例えば、固形腫瘍などの癌を有する対象）のＴＡＭの集団の一部の前記増殖を低減させる方法であって、それを必要とする前記対象に請求項１〜７０のいずれか１項に記載の前記多重特異性分子を投与することを含み、前記多重特異性分子は前記ＴＡＭの集団の一部の増殖を低減させるのに有効な量で投与される方法。
【請求項８０】
癌（例えば、腫瘍）を有する対象においてＴＡＭの集団の一部を阻害または枯渇させる方法であって、前記対象に請求項１〜７０のいずれか１項に記載の前記多重特異性分子を投与することを含み、前記多重特異性分子は腫瘍浸潤マクロファージの数を減らすのに有効な量で投与され、腫瘍浸潤マクロファージの前記増殖を阻害する、または腫瘍へのマクロファージ浸潤を減少する方法。
【請求項８１】
前記癌が固形腫瘍癌または転移性病変である、請求項７６〜８０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８２】
前記固形腫瘍癌が、膵臓癌（例えば、膵臓腺癌）、乳癌、結腸直腸癌、肺癌（例えば、小細胞肺癌または非小細胞肺癌）、皮膚癌（例えば、黒色腫）、卵巣癌、肝臓癌、または脳癌（神経膠腫など）の１つまたは複数である、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
前記癌がＴＡＭを含むものとして特徴付けられる、ＴＡＭの存在に関連する、ＴＡＭが前記癌（例えば、腫瘍）の一部であるおよび／または一部を形成する、またはＴＡＭが前記固形腫瘍内またはその近くで検出されている、請求項８１に記載の方法。
【請求項８４】
前記対象の前記癌（例えば、腫瘍）の中または近くにＴＡＭの存在を同定することを含む、請求項７６〜８３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８５】
前記ＴＡＭがＣＸＣＲ２およびＣＣＲ２、ＣＣＲ２およびＣＳＦ１Ｒ、ＣＳＦ１ＲおよびＣＸＣＲ２、またはＣＣＲ２、ＣＸＣＲ２、およびＣＳＦ１Ｒを発現する、請求項７７〜８４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８６】
第２の治療処置を施すことをさらに含む、請求項７６〜８５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８７】
前記第２の治療処置は、治療薬（例えば、化学療法剤、生物学的薬剤、ホルモン療法）、放射線、または手術を含む、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
前記治療薬が、化学療法剤、または生物学的薬剤から選択される、請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
前記治療薬がチェックポイント阻害剤である、請求項８７に記載の方法。
【請求項９０】
前記チェックポイント阻害剤が、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ１抗体（例えば、ニボルマブ、ペンブロリズマブまたはピジリズマブ）、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＬＡＧ３抗体、抗ＣＤ１６０抗体、抗２Ｂ４抗体、抗ＣＤ８０抗体、抗ＣＤ８６抗体、抗Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）抗体、抗Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）抗体、抗ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４またはＣＤ２７０）抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗ＭＨＣクラスＩ抗体、抗ＭＨＣクラスＩＩ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＬＡＩＲ１抗体、および抗Ａ２ａＲ抗体からなる群から選択される、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
対象の癌を治療する方法であって、それを必要とする前記対象に請求項１〜７０のいずれか１項に記載の前記多重特異性分子を投与することを含み、前記多重特異性分子はＭＤＳＣの数（例えば、前記対象の腫瘍内または腫瘍付近のＭＤＳＣの数）を減らすのに有効な量で投与され、ＭＤＳＣの前記増殖（例えば、前記対象の腫瘍内または腫瘍付近のＭＤＳＣの前記増殖）、または前記対象の腫瘍へのＭＤＳＣ浸潤を減少または阻害する方法。
【請求項９２】
ＭＤＳＣの集団の一部を減少させることにより対象の癌を治療する方法であって、それを必要とする前記対象に請求項１〜７０のいずれか１項に記載の前記多重特異性分子を投与することを含み、前記多重特異性分子は前記ＭＤＳＣの集団の一部を阻害または枯渇させるのに有効な量で投与される方法。
【請求項９３】
対象（例えば、固形腫瘍などの癌を有する対象）のＭＤＳＣの集団の一部の前記増殖を低減させる方法であって、それを必要とする前記対象に請求項１〜７０のいずれか１項に記載の前記多重特異性分子を投与することを含み、前記多重特異性分子は前記ＭＤＳＣの集団の一部の増殖を低減させるのに有効な量で投与される方法。
【請求項９４】
癌（例えば、腫瘍）を有する対象においてＭＤＳＣの集団の一部を阻害または枯渇させる方法であって、前記対象に請求項１〜７０のいずれか１項に記載の前記多重特異性分子を投与することを含み、前記多重特異性分子はＭＤＳＣの数を減らすのに有効な量で投与され、ＭＤＳＣの前記増殖を阻害する、またはＭＤＳＣ浸潤を減少する方法。
【請求項９５】
前記癌が固形腫瘍癌または転移性病変である、請求項９１〜９４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９６】
前記固形腫瘍癌が、膵臓癌（例えば、膵臓腺癌）、乳癌、結腸直腸癌、肺癌（例えば、小細胞肺癌または非小細胞肺癌）、皮膚癌（例えば、黒色腫）、卵巣癌、肝臓癌、または脳癌（神経膠腫など）の１つまたは複数である、請求項９５に記載の方法。
【請求項９７】
前記癌がＭＤＳＣを含むものとして特徴付けられる、ＭＤＳＣの存在に関連する、ＭＤＳＣが前記癌（例えば、腫瘍）の一部であるおよび／または一部を形成する、またはＭＤＳＣが前記固形腫瘍内またはその近くで検出されている、請求項９５に記載の方法。
【請求項９８】
前記対象の前記癌（例えば、腫瘍）の中または近くにＭＤＳＣの存在を同定することを含む、請求項９１〜９７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９９】
第２の治療処置を施すことをさらに含む、請求項９１〜９８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１００】
前記第２の治療処置は、治療薬（例えば、化学療法剤、生物学的薬剤、ホルモン療法）、放射線、または手術を含む、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０１】
前記治療薬が、化学療法剤、または生物学的薬剤から選択される、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０２】
前記治療薬がチェックポイント阻害剤である、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０３】
前記チェックポイント阻害剤が、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ１抗体（例えば、ニボルマブ、ペンブロリズマブまたはピジリズマブ）、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＬＡＧ３抗体、抗ＣＤ１６０抗体、抗２Ｂ４抗体、抗ＣＤ８０抗体、抗ＣＤ８６抗体、抗Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）抗体、抗Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）抗体、抗ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４またはＣＤ２７０）抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗ＭＨＣクラスＩ抗体、抗ＭＨＣクラスＩＩ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＬＡＩＲ１抗体、および抗Ａ２ａＲ抗体からなる群から選択される、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０４】
請求項１〜７０のいずれか１項に記載の前記多重特異性分子の有効量を前記対象に投与し、それにより線維性疾患または線維性障害を治療することを含む、それを必要とする対象の線維性疾患または障害を治療する方法。
【請求項１０５】
前記線維性疾患または障害が、肺、肝臓、心臓または脈管構造、腎臓、膵臓、皮膚、胃腸管、骨髄または造血組織、神経系、眼、またはそれらの組み合わせの線維性疾患または障害である、請求項１０４記載の方法。
【請求項１０６】
前記線維性疾患または障害が肺線維症（例えば、特発性肺線維症（ＩＰＦ））または肝線維症（例えば、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ））である、請求項１０４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本願は、２０１７年４月１９日に出願された米国係属番号６２／４８７０６１の優先権を主張し、その内容はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
配列表
本願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。２０１８年４月１８日に作成されたＡＳＣＩＩコピーは、Ｅ２０７０−７００５ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔという名前で、サイズは１５８，２１０バイトである。
【背景技術】
【０００３】
腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）または骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）を標的とする多重特異性分子、およびその使用方法が開示されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本開示は、とりわけ、（ｉ）第１の免疫抑制性骨髄細胞（ＩＭＣ）結合部分（例えば、第１の腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）結合部分；または第１の骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）結合部分）（例えば、抗体分子）；および（ｉｉ）第２のＩＭＣ結合部分（例えば、第１のＴＡＭ結合部分；または第２のＭＤＳＣ結合部分）（例えば、抗体分子）であって、第１および第２のＩＭＣ（例えば、ＴＡＭまたはＭＤＳＣ）結合部分が異なる、第２のＩＭＣ結合部分、を含む新規の多重特異性分子に関する。理論に拘束されることなく、本明細書に開示される多重特異性分子は、ＴＡＭおよび／またはＭＤＳＣを枯渇させると予想される。したがって、本明細書では、とりわけ、前述の部分を含む多重特異性分子（例えば、多重特異性抗体分子）、それをコードする核酸、前述の分子を産生する方法、および前述の分子を使用して癌を治療する方法が提供される。
【０００５】
一態様では、本明細書で、（ｉ）第１の免疫抑制性骨髄細胞（ＩＭＣ）結合部分（例えば、第１の腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）結合部分；または第１の骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）結合部分）（例えば、抗体分子）；および（ｉｉ）第２のＩＭＣ結合部分（例えば、第２のＴＡＭ結合部分；または第２のＭＤＳＣ結合部分）（例えば、抗体分子）であって、第１および第２のＩＭＣ（例えば、ＴＡＭまたはＭＤＳＣ）結合部分が異なる第２のＩＭＣ結合部分を含む多重特異性分子、例えば、二重特異性分子が提供される。一部の実施形態では、第１および第２のＩＭＣ（例えば、ＴＡＭまたはＭＤＳＣ）結合部分は、異なるエピトープに結合する。一部の実施形態では、第１および第２のＩＭＣ（例えば、ＴＡＭまたはＭＤＳＣ）結合部分は、異なる抗原に結合する。
【０００６】
いくつかの実施形態では、第１のＩＭＣ結合部分は第１のＭＤＳＣ結合部分であり、第２のＩＭＣ結合部分は第２のＭＤＳＣ結合部分である。一部の実施形態では、第１のＩＭＣ結合部分は第１のＴＡＭ結合部分であり、第２のＩＭＣ結合部分は第２のＴＡＭ結合部分である。一部の実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ２、ＣＸＣＲ２、ＣＤ８６、ＣＤ１６３、ＣＸ３ＣＲ１、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ２０４、ＣＤ５２、葉酸受容体ベータ、またはＰＤ−Ｌ１に結合し、また、第２のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＸＣＲ２、ＣＤ８６、ＣＤ１６３、ＣＸ３ＣＲ１、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ２０４、ＣＤ５２、葉酸受容体ベータ、またはＰＤ−Ｌ１に結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分はＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ２、ＣＸＣＲ２、またはＰＤ−Ｌ１（例えば、ヒトＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ２、ＣＸＣＲ２、またはＰＤ−Ｌ１）に結合し、第２のＴＡＭ結合部分が、ＣＣＲ２、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＸＣＲ２、またはＰＤ−Ｌ１（例えば、ヒトＣＣＲ２、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＸＣＲ２、またはＰＤ−Ｌ１）に結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分はＣＳＦ１Ｒに結合し、第２のＴＡＭ結合部分はＣＣＲ２に結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分はＣＳＦ１Ｒに結合し、第２のＴＡＭ結合部分はＣＸＣＲ２に結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分はＣＣＲ２に結合し、第２のＴＡＭ結合部分はＣＸＣＲ２に結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分はＣＳＦ１Ｒに結合し、第２のＴＡＭ結合部分はＰＤ−Ｌ１に結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分はＣＣＲ２に結合し、第２のＴＡＭ結合部分はＰＤ−Ｌ１に結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分はＣＸＣＲ２に結合し、第２のＴＡＭ結合部分はＰＤ−Ｌ１に結合する。
【０００７】
一部の実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、約１０ｎＭ未満、より典型的には１０〜１００ｐＭの解離定数でＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ２、ＣＸＣＲ２、またはＰＤ−Ｌ１に結合し、また、第２のＴＡＭ結合部分は、約１０ｎＭ未満、より一般的には１０〜１００ｐＭの解離定数でＣＣＲ２、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＸＣＲ２、またはＰＤ−Ｌ１に結合する。一部の実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分が、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ２、ＣＸＣＲ２、またはＰＤ−Ｌ１の立体構造または線形エピトープに結合し、また第２のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＸＣＲ２、またはＰＤ−Ｌ１の立体構造または線形エピトープに結合する。
【０００８】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、少なくとも２つの非隣接ポリペプチド鎖を含む。いくつかの実施形態では、第１のＩＭＣ結合部分が第１の抗ＩＭＣ抗体分子を含み、および／または第２のＩＭＣ結合部分が第２の抗ＩＭＣ抗体分子を含む。いくつかの実施形態では、第１の抗ＩＭＣ抗体分子および第２の抗ＩＭＣ抗体分子が、独立して、完全な抗体（例えば、少なくとも１つ、好ましくは２つの完全な重鎖、および少なくとも１つ、好ましくは２つの完全な軽鎖を含む抗体）、または抗原結合断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体、またはダイアボディ（ｄＡｂ））である。
【０００９】
いくつかの態様において、第１の抗ＩＭＣ抗体分子および／または第２の抗ＩＭＣ抗体分子が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４、またはその断片から選択される重鎖定常領域を含む。
【００１０】
いくつかの実施形態では、第１の抗ＩＭＣ抗体分子および／または第２の抗ＩＭＣ抗体分子が、カッパまたはラムダの軽鎖定常領域またはその断片から選択される軽鎖定常領域を含む。いくつかの実施形態では、第１の抗ＩＭＣ抗体分子がカッパ軽鎖定常領域またはその断片を含み、第２の抗ＩＭＣ抗体分子がラムダ軽鎖定常領域またはその断片を含む。いくつかの実施形態では、第１の抗ＩＭＣ抗体分子がラムダ軽鎖定常領域またはその断片を含み、第２の抗ＩＭＣ抗体分子がカッパ軽鎖定常領域またはその断片を含む。いくつかの実施形態では、第１の抗ＩＭＣ抗体分子および第２の抗ＩＭＣ抗体分子が共通の軽鎖可変領域を有する。
【００１１】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、およびＩｇＧ４の重鎖定常領域、より具体的にはヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４の重鎖定常領域から選択される重鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）をさらに含む。いくつかの実施形態では、重鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）が、第１の抗ＩＭＣ抗体分子および第２の抗ＩＭＣ抗体分子の一方または両方に連結、例えば、共有結合している。いくつかの実施形態では、重鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）は、Ｆｃ受容体結合、抗体のグリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能、または補完機能の１つまたは複数を増加または減少させるため、変更する、例えば、変異する。いくつかの実施形態では、第１および第２の重鎖定常領域の界面（例えば、Ｆｃ領域）は、例えば、遺伝子操作されていない界面と比較して、二量体化を増加または減少させるように、変更する、例えば、変異する。いくつかの実施形態では、重鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）の二量体化は、一対の空洞突起（「ノブインホール」）、静電気の相互作用、または鎖交換の１つ以上を含む第１および第２のＦｃ領域のＦｃ界面を提供することにより強化され、例えば、遺伝子操作されていない界面と比較して、より多量のヘテロ多量体：ホモ多量体が形成されるようにする。いくつかの実施形態では、重鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）は、例えば、Ｅｕ番号付けシステムに基づいて番号付けされた、ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域の３４７、３４９、３５０、３５１、３６６、３６８、３７０、３９２、３９４、３９５、３９７、３９８、３９９、４０５、４０７、または４０９のうちの１つまたは複数から選択される位置に、アミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、重鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）は、Ｅｕ番号付けシステムに基づいて番号付けされた、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、またはＹ４０７Ｖ（例えば、空洞またはホールに対応する）、またはＴ３６６Ｗ（例えば、突起またはノブに対応する）、またはその組み合わせから選択されるアミノ酸置換を含む。
【００１２】
いくつかの実施形態では、重鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）が、天然に存在する重鎖定常領域と比較して、Ｆｃ受容体結合、抗体グリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能、または補体機能の１つまたは複数を増加または減少させる１つまたは複数の変異を含む。いくつかの実施形態では、第１の抗ＩＭＣ抗体分子が第１の重鎖定常領域（例えば、第１のＦｃ領域）を含み、第２の抗ＩＭＣ抗体分子が第２の重鎖定常領域（例えば、第２のＦｃ領域）を含み、第１の重鎖定常領域は、天然に存在する重鎖定常領域と比較して、第１の重鎖定常領域および第２の重鎖定常領域のヘテロ二量体化を増加させる１つまたは複数の変異を含み、および／または第２の重鎖定常領域は、天然に存在する重鎖定常領域と比較して、第２の重鎖定常領域および第１の重鎖定常領域のヘテロ二量体化を増加させる１つ以上の突然変異を含む。いくつかの実施形態では、第１および第２の重鎖定常領域（例えば、第１および第２のＦｃ領域）は、一対の空洞突起（「ノブインホール」）、静電気の相互作用、または鎖交換の１つ以上を含み、例えば、天然に存在する重鎖定常領域と比較して、より多量のヘテロ多量体：ホモ多量体が形成されるようにする。いくつかの実施形態では、第１および／または第２の重鎖定常領域（例えば、第１および／または第２のＦｃ領域、例えば、第１および／または第２のＩｇＧ１  Ｆｃ領域）が、Ｅｕ番号付けシステムに基づいて番号付けされた、３４７、３４９、３５０、３５１、３６６、３６８、３７０、３９２、３９４、３９５、３９７、３９８、３９９、４０５、４０７、または４０９の１つまたは複数から選択された位置でのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、第１および／または第２の重鎖定常領域（例えば、第１および／または第２のＦｃ領域、例えば、第１および／または第２のＩｇＧ１  Ｆｃ領域）が、Ｅｕ番号付けシステムに基づいて番号付けされた、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、またはＹ３４９Ｃ（例えば、空洞またはホールに対応）、Ｔ３６６ＷまたはＳ３５４Ｃ（例えば、突起またはノブに対応）、またはそれらの組み合わせから選択されるアミノ酸置換を含む。
【００１３】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、リンカー、例えば、第１の抗ＩＭＣ抗体分子および第２の抗ＩＭＣ抗体分子、第１の抗ＩＭＣ抗体分子および重鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）、または第２の抗ＩＭＣ抗体分子および重鎖定常領域のうちの１つまたは複数の間のリンカーをさらに含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、切断可能なリンカー、切断不可能なリンカー、ペプチドリンカー、柔軟なリンカー、剛直なリンカー、らせんリンカー、または非らせんリンカーから選択される。いくつかの実施形態では、リンカーはペプチドリンカーである。いくつかの態様において、ペプチドリンカーはＧｌｙおよびＳｅｒを含む。
【００１４】
いくつかの実施形態では、重鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）は、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を誘導する。
【００１５】
いくつかの実施形態では、第１または第２のＴＡＭ結合部分がＣＳＦ１Ｒに結合する抗体分子であり、配列番号４８、配列番号６６、または配列番号６９の重鎖可変領域配列からの１、２、または３つのＣＤＲ、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、配列番号４８、配列番号６６、または配列番号６９のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、２つ、３つまたは４つ以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さないＣＤＲを含み、および／または、配列番号５０、配列番号６７、配列番号７０の軽鎖可変領域配列からの１、２、または３つのＣＤＲ、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、配列番号５０、配列番号６７、または配列番号７０からのＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、２つ、３つまたは４つ以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さないＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体分子は、配列番号４８、配列番号６６、または配列番号６９の重鎖可変領域配列、または実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、配列番号４８、配列番号６６、または配列番号６９のアミノ酸配列に９５％から９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、５、１０または１５以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない）を含み、および／または配列番号５０、配列番号６７、または配列番号７０の軽鎖可変領域配列、または実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、９５％〜９９．９％同一、または配列番号５０、配列番号６７、または配列番号７０のアミノ酸配列に対して少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、５、１０または１５以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない）を含む。
【００１６】
いくつかの実施形態では、第１または第２のＴＡＭ結合部分がＣＣＲ２に結合する抗体分子であり、配列番号４４、配列番号５４、配列番号５９、配列番号６２、配列番号６４の重鎖可変領域配列からの１、２、または３つのＣＤＲ、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、配列番号４４、配列番号５４、配列番号５９、配列番号６２、配列番号６４のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、２つ、３つまたは４つ以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さないＣＤＲを含み、および／または、配列番号４５、配列番号５７、配列番号６０、配列番号６３、配列番号６５の軽鎖可変領域配列からの１、２、または３つのＣＤＲ、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、配列番号４５、配列番号５７、配列番号６０、配列番号６３、配列番号６５からのＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、２つ、３つまたは４つ以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さないＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、ＣＣＲ２に結合する抗体分子が、配列番号４４、配列番号５４、配列番号５９、配列番号６２、配列番号６４の重鎖可変領域配列、または実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、配列番号４４、配列番号５４、配列番号５９、配列番号６２、配列番号６４のアミノ酸配列に９５％から９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、５、１０または１５以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない）を含み、および／または配列番号４５、配列番号５７、配列番号６０、配列番号６３、配列番号６５の軽鎖可変領域配列、または実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、９５％〜９９．９％同一、または配列番号４５、配列番号５７、配列番号６０、配列番号６３、配列番号６５のアミノ酸配列に対して少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、５、１０または１５以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない）を含む。
【００１７】
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分がＣＣＲ２に結合する抗体分子であり、配列番号４４の重鎖可変領域配列からの１、２または３つのＣＤＲ、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、配列番号４４のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、２つ、３つまたは４つ以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さないＣＤＲを含み；および／または、配列番号４５の軽鎖可変領域配列からの１、２または３つのＣＤＲ、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、配列番号４５のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、２つ、３つまたは４つ以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さないＣＤＲを含み；また第２のＴＡＭ結合部分は、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体分子であり、配列番号４８の重鎖可変領域配列からの１、２または３つのＣＤＲ、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、配列番号４８のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、２つ、３つまたは４つ以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さないＣＤＲを含み、および／または配列番号５０の軽鎖可変領域配列からの１、２、または３つのＣＤＲ、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、配列番号５０のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、２つ、３つまたは４つ以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さないＣＤＲを含む。
【００１８】
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分がＣＣＲ２に結合する抗体分子であり、配列番号５４の重鎖可変領域配列からの１、２または３つのＣＤＲ、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、配列番号５４のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、２つ、３つまたは４つ以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さないＣＤＲを含み；および／また、は、配列番号５７の軽鎖可変領域配列からの１、２、または３つのＣＤＲ、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、配列番号５７のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、２つ、３つまたは４つ以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さないＣＤＲを含み；また第２のＴＡＭ結合部分は、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体分子であり、配列番号６６の重鎖可変領域配列からの１、２または３つのＣＤＲ、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、配列番号６６のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、２つ、３つまたは４つ以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さないＣＤＲを含み、および／または配列番号６７の軽鎖可変領域配列からの１、２、または３つのＣＤＲ、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、配列番号６７のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、２つ、３つまたは４つ以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さないＣＤＲを含む。
【００１９】
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分がＣＣＲ２に結合する抗体分子であり、配列番号５４の重鎖可変領域配列からの１、２または３つのＣＤＲ、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、配列番号５４のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、２つ、３つまたは４つ以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さないＣＤＲを含み；および／または、配列番号５７、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、配列番号５７のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、２つ、３つまたは４つ以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない軽鎖可変領域配列からの１、２、または３つのＣＤＲを含み；また第２のＴＡＭ結合部分は、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体分子であり、配列番号６９の重鎖可変領域配列からの１、２または３つのＣＤＲ、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、配列番号６９のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、２つ、３つまたは４つ以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さないＣＤＲを含み、および／または配列番号７０の軽鎖可変領域配列からの１、２、または３つのＣＤＲ、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、配列番号７０のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、２つ、３つまたは４つ以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さないＣＤＲを含む。
【００２０】
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分がＣＣＲ２に結合する抗体分子であり、配列番号５９の重鎖可変領域配列からの１、２または３つのＣＤＲ、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、配列番号５９のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、２つ、３つまたは４つ以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さないＣＤＲを含み；および／または、配列番号６０の軽鎖可変領域配列からの１、２、または３つのＣＤＲ、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、配列番号６０のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、２つ、３つまたは４つ以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さないＣＤＲを含み；また第２のＴＡＭ結合部分は、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体分子であり、配列番号６６の重鎖可変領域配列からの１、２または３つのＣＤＲ、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、配列番号６６のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、２つ、３つまたは４つ以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さないＣＤＲを含み、および／または配列番号６７の軽鎖可変領域配列からの１、２、または３つのＣＤＲ、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、配列番号６７のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、２つ、３つまたは４つ以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さないＣＤＲを含む。
【００２１】
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分がＣＣＲ２に結合する抗体分子であり、配列番号５９の重鎖可変領域配列からの１、２または３つのＣＤＲ、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、配列番号５９のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、２つ、３つまたは４つ以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さないＣＤＲを含み；および／または、配列番号６０の軽鎖可変領域配列からの１、２、または３つのＣＤＲ、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、配列番号６０のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、２つ、３つまたは４つ以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さないＣＤＲを含み；また第２のＴＡＭ結合部分は、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体分子であり、配列番号６９の重鎖可変領域配列からの１、２または３つのＣＤＲ、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、配列番号６９のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、２つ、３つまたは４つ以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さないＣＤＲを含み、および／または配列番号７０の軽鎖可変領域配列からの１、２、または３つのＣＤＲ、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、配列番号７０のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、２つ、３つまたは４つ以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さないＣＤＲを含む。
【００２２】
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分がＣＣＲ２に結合する抗体分子であり、配列番号６２の重鎖可変領域配列からの１、２または３つのＣＤＲ、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、配列番号６２のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、２つ、３つまたは４つ以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さないＣＤＲを含み；および／または、配列番号６３の軽鎖可変領域配列からの１、２、または３つのＣＤＲ、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、配列番号６３のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、２つ、３つまたは４つ以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さないＣＤＲを含み；また第２のＴＡＭ結合部分は、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体分子であり、配列番号６６の重鎖可変領域配列からの１、２または３つのＣＤＲ、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、配列番号６６のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、２つ、３つまたは４つ以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さないＣＤＲを含み、および／または配列番号６７の軽鎖可変領域配列からの１、２、または３つのＣＤＲ、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、配列番号６７のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、２つ、３つまたは４つ以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さないＣＤＲを含む。
【００２３】
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分がＣＣＲ２に結合する抗体分子であり、配列番号６２の重鎖可変領域配列からの１、２または３つのＣＤＲ、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、配列番号６２のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、２つ、３つまたは４つ以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さないＣＤＲを含み；および／または、配列番号６３の軽鎖可変領域配列からの１、２、または３つのＣＤＲ、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、配列番号６３のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、２つ、３つまたは４つ以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さないＣＤＲを含み；また第２のＴＡＭ結合部分は、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体分子であり、配列番号６９の重鎖可変領域配列からの１、２または３つのＣＤＲ、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、配列番号６９のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、２つ、３つまたは４つ以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さないＣＤＲを含み、および／または配列番号７０の軽鎖可変領域配列からの１、２、または３つのＣＤＲ、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、配列番号７０のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、２つ、３つまたは４つ以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さないＣＤＲを含む。
【００２４】
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分がＣＣＲ２に結合する抗体分子であり、配列番号６４の重鎖可変領域配列からの１、２または３つのＣＤＲ、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、配列番号６４のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、２つ、３つまたは４つ以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さないＣＤＲを含み；および／または、配列番号６５の軽鎖可変領域配列からの１、２、または３つのＣＤＲ、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、配列番号６５のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、２つ、３つまたは４つ以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さないＣＤＲを含み；また第２のＴＡＭ結合部分は、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体分子であり、配列番号６６の重鎖可変領域配列からの１、２または３つのＣＤＲ、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、配列番号６６のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、２つ、３つまたは４つ以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さないＣＤＲを含み、および／または配列番号６７の軽鎖可変領域配列からの１、２、または３つのＣＤＲ、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、配列番号６７のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、２つ、３つまたは４つ以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さないＣＤＲを含む。
【００２５】
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分がＣＣＲ２に結合する抗体分子であり、配列番号６４の重鎖可変領域配列からの１、２または３つのＣＤＲ、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、配列番号６４のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、２つ、３つまたは４つ以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さないＣＤＲを含み；および／または、配列番号６５の軽鎖可変領域配列からの１、２、または３つのＣＤＲ、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、配列番号６５のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、２つ、３つまたは４つ以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さないＣＤＲを含み；また第２のＴＡＭ結合部分は、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体分子であり、配列番号６９の重鎖可変領域配列からの１、２または３つのＣＤＲ、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、配列番号６９のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、２つ、３つまたは４つ以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さないＣＤＲを含み、および／または配列番号７０の軽鎖可変領域配列からの１、２、または３つのＣＤＲ、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、配列番号７０のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、２つ、３つまたは４つ以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さないＣＤＲを含む。
【００２６】
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分がＣＣＲ２に結合する抗体分子であり、配列番号４４の重鎖可変領域配列、または配列番号４４のアミノ酸配列に対して実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、９５％から９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、５、１０または１５以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない）を含み、および／または配列番号４５の軽鎖可変領域配列、または配列番号４５に対して実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、９５％〜９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、５、１０または１５以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない）；および第２のＴＡＭ結合部分がＣＳＦ１Ｒに結合する抗体分子であり、配列番号４８の重鎖可変領域配列、または配列番号４８のアミノ酸配列に対して実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、９５％から９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、５、１０または１５以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない）を含み；および／または配列番号５０の軽鎖可変領域配列、または配列番号５０のアミノ酸配列に対して実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、９５％から９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、５、１０または１５以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない）を含む。
【００２７】
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分がＣＣＲ２に結合する抗体分子であり、配列番号５４の重鎖可変領域配列、または配列番号５４のアミノ酸配列に対して実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、９５％から９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、５、１０または１５以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない）を含み、および／または配列番号５７の軽鎖可変領域配列、または配列番号５７に対して実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、９５％〜９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、５、１０または１５以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない）；および第２のＴＡＭ結合部分がＣＳＦ１Ｒに結合する抗体分子であり、配列番号６６の重鎖可変領域配列、または配列番号６６のアミノ酸配列に対して実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、９５％から９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、５、１０または１５以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない）を含み；および／または配列番号６７の軽鎖可変領域配列、または配列番号６７のアミノ酸配列に対して実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、９５％から９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、５、１０または１５以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない）を含む。
【００２８】
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分がＣＣＲ２に結合する抗体分子であり、配列番号５４の重鎖可変領域配列、または配列番号５４のアミノ酸配列に対して実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、９５％から９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、５、１０または１５以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない）を含み、および／または配列番号５７の軽鎖可変領域配列、または配列番号５７に対して実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、９５％〜９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、５、１０または１５以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない）；および第２のＴＡＭ結合部分がＣＳＦ１Ｒに結合する抗体分子であり、配列番号６９の重鎖可変領域配列、または配列番号６９のアミノ酸配列に対して実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、９５％から９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、５、１０または１５以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない）を含み；および／または配列番号７０の軽鎖可変領域配列、または配列番号７０のアミノ酸配列に対して実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、９５％から９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、５、１０または１５以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない）を含む。
【００２９】
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分がＣＣＲ２に結合する抗体分子であり、配列番号５９の重鎖可変領域配列、または配列番号５９のアミノ酸配列に対して実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、９５％から９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、５、１０または１５以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない）を含み、および／または配列番号６０の軽鎖可変領域配列、または配列番号６０に対して実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、９５％〜９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、５、１０または１５以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない）；および第２のＴＡＭ結合部分がＣＳＦ１Ｒに結合する抗体分子であり、配列番号６６の重鎖可変領域配列、または配列番号６６のアミノ酸配列に対して実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、９５％から９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、５、１０または１５以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない）を含み；および／または配列番号６７の軽鎖可変領域配列、または配列番号６７のアミノ酸配列に対して実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、９５％から９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、５、１０または１５以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない）を含む。
【００３０】
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分がＣＣＲ２に結合する抗体分子であり、配列番号５９の重鎖可変領域配列、または配列番号５９のアミノ酸配列に対して実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、９５％から９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、５、１０または１５以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない）を含み、および／または配列番号６０の軽鎖可変領域配列、または配列番号６０に対して実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、９５％〜９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、５、１０または１５以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない）；および第２のＴＡＭ結合部分がＣＳＦ１Ｒに結合する抗体分子であり、配列番号６９の重鎖可変領域配列、または配列番号６９のアミノ酸配列に対して実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、９５％から９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、５、１０または１５以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない）を含み；および／または配列番号７０の軽鎖可変領域配列、または配列番号７０のアミノ酸配列に対して実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、９５％から９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、５、１０または１５以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない）を含む。
【００３１】
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分がＣＣＲ２に結合する抗体分子であり、配列番号６２の重鎖可変領域配列、または配列番号６２のアミノ酸配列に対して実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、９５％から９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、５、１０または１５以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない）を含み、および／または配列番号６３の軽鎖可変領域配列、または配列番号６３に対して実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、９５％〜９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、５、１０または１５以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない）；および第２のＴＡＭ結合部分がＣＳＦ１Ｒに結合する抗体分子であり、配列番号６６の重鎖可変領域配列、または配列番号６６のアミノ酸配列に対して実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、９５％から９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、５、１０または１５以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない）を含み；および／または配列番号６７の軽鎖可変領域配列、または配列番号６７のアミノ酸配列に対して実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、９５％から９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、５、１０または１５以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない）を含む。
【００３２】
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分がＣＣＲ２に結合する抗体分子であり、配列番号６２の重鎖可変領域配列、または配列番号６２のアミノ酸配列に対して実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、９５％から９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、５、１０または１５以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない）を含み、および／または配列番号６３の軽鎖可変領域配列、または配列番号６３に対して実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、９５％〜９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、５、１０または１５以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない）；および第２のＴＡＭ結合部分がＣＳＦ１Ｒに結合する抗体分子であり、配列番号６９の重鎖可変領域配列、または配列番号６９のアミノ酸配列に対して実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、９５％から９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、５、１０または１５以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない）を含み；および／または配列番号７０の軽鎖可変領域配列、または配列番号７０のアミノ酸配列に対して実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、９５％から９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、５、１０または１５以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない）を含む。
【００３３】
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分がＣＣＲ２に結合する抗体分子であり、配列番号６４の重鎖可変領域配列、または配列番号６４のアミノ酸配列に対して実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、９５％から９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、５、１０または１５以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない）を含み、および／または配列番号６５の軽鎖可変領域配列、または配列番号６５に対して実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、９５％〜９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、５、１０または１５以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない）；および第２のＴＡＭ結合部分がＣＳＦ１Ｒに結合する抗体分子であり、配列番号６６の重鎖可変領域配列、または配列番号６６のアミノ酸配列に対して実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、９５％から９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、５、１０または１５以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない）を含み；および／または配列番号６７の軽鎖可変領域配列、または配列番号６７のアミノ酸配列に対して実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、９５％から９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、５、１０または１５以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない）を含む。
【００３４】
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分がＣＣＲ２に結合する抗体分子であり、配列番号６４の重鎖可変領域配列、または配列番号６４のアミノ酸配列に対して実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、９５％から９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、５、１０または１５以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない）を含み、および／または配列番号６５の軽鎖可変領域配列、または配列番号６５に対して実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、９５％〜９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、５、１０または１５以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない）；および第２のＴＡＭ結合部分がＣＳＦ１Ｒに結合する抗体分子であり、配列番号６９の重鎖可変領域配列、または配列番号６９のアミノ酸配列に対して実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、９５％から９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、５、１０または１５以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない）を含み；および／または配列番号７０の軽鎖可変領域配列、または配列番号７０のアミノ酸配列に対して実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、９５％から９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、５、１０または１５以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない）を含む。
【００３５】
いくつかの実施形態では、第１または第２のＴＡＭ結合部分がＰＤ−Ｌ１に結合する抗体分子であり、配列番号１０９、配列番号１１１、または配列番号１１３の重鎖可変領域配列からの１、２、または３つのＣＤＲ、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、配列番号１０９、配列番号１１１、または配列番号１１３のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、２つ、３つまたは４つ以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さないＣＤＲを含み、および／または、配列番号１１０、配列番号１１２、配列番号１１４の軽鎖可変領域配列からの１、２、または３つのＣＤＲ、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、配列番号１１０、配列番号１１２、または配列番号１１４からのＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、２つ、３つまたは４つ以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さないＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗体分子は、配列番号１０９、配列番号１１１、または配列番号１１３の重鎖可変領域配列、または実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、配列番号１０９、配列番号１１１、または配列番号１１３のアミノ酸配列に９５％から９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、５、１０または１５以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない）を含み、および／または配列番号１１０、配列番号１１２、または配列番号１１４の軽鎖可変領域配列、または実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、９５％〜９９．９％同一、または配列番号１１０、配列番号１１２、または配列番号１１４のアミノ酸配列に対して少なくとも１つのアミノ酸変化を有するが、５、１０または１５以上の変化（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有さない）を含む。
【００３６】
一部の実施形態では、（ｉ）第１のＩＭＣ結合部分は、第１の抗原（ＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ２、ＣＸＣＲ２、ＣＤ８６、ＣＤ１６３、ＣＸ３ＣＲ１、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ２０４、ＣＤ５２、葉酸受容体ベータ、またはＰＤ−Ｌ１）に一価で結合し、および／または（ｉｉ）第２のＩＭＣ結合部分は、第２の抗原（ＣＣＲ２、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＸＣＲ２、ＣＤ８６、ＣＤ１６３、ＣＸ３ＣＲ１、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ２０４、ＣＤ５２、葉酸受容体ベータ、またはＰＤ−Ｌ１）に一価で結合し、第１の抗原は第２の抗原とは異なる。
【００３７】
いくつかの実施形態では、（ｉ）多重特異性分子は、第１の抗原（例えば、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ２、ＣＸＣＲ２、ＣＤ８６、ＣＤ１６３、ＣＸ３ＣＲ１、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ２０４、ＣＤ５２、葉酸受容体ベータ、またはＰＤ−Ｌ１）に一価で結合し、および／または（ｉｉ）多重特異性分子は、第２の抗原（ＣＣＲ２、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＸＣＲ２、ＣＤ８６、ＣＤ１６３、ＣＸ３ＣＲ１、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ２０４、ＣＤ５２、葉酸受容体ベータ、またはＰＤ−Ｌ１）に一価で結合し、第１の抗原は第２の抗原とは異なる。
【００３８】
いくつかの実施形態では、（ｉ）多重特異性分子は、第２抗原の存在下で第１抗原を阻害し、多重特異性分子は、細胞内の第１抗原の活性を、例えば、少なくとも４０、５０、６０、７０、８０、または９０％、細胞が細胞表面で第１抗原と第２抗原の両方を発現する場合、減少させてもよく、および／または（ｉｉ）多重特異性分子は、第２抗原の非存在下で第１抗原を阻害しないか、実質的に阻害せず、多重特異性分子は、細胞が細胞表面で第２抗原ではなく第１抗原を発現する場合、第１抗原の活性を低下させない、または第１抗原の活性を２、４、６、８、１０、または１５％以上低下させなくてもよい。
【００３９】
いくつかの実施形態では、（ｉ）多重特異性分子は、第１抗原の存在下で第２抗原を阻害し、多重特異性分子は、細胞内の第２抗原の活性を、例えば、少なくとも４０、５０、６０、７０、８０、または９０％、細胞が細胞表面で第１抗原と第２抗原の両方を発現する場合、減少させてもよく、および／または（ｉｉ）多重特異性分子は、第１抗原の非存在下で第２抗原を阻害しないか、実質的に阻害せず、多重特異性分子は、細胞が細胞表面で第１抗原ではなく第２抗原を発現する場合、第２抗原の活性を低下させない、または第２抗原の活性を２、４、６、８、１０、または１５％以上低下させなくてもよい。
【００４０】
いくつかの実施形態において、多重特異性分子は、１つ以上の追加の結合部分（例えば、第３の結合部分、第４の結合部分（例えば、三重特異性または四重特異性分子）をさらに含む。いくつかの実施形態において、多重特異性分子は、１つ以上の追加の結合部分（例えば、第３の結合部分、第４の結合部分（例えば、三重特異性または四重特異性分子）をさらに含む。いくつかの実施形態では、多重特異性分子は第３のＴＡＭ結合部分（例えば、抗体分子）を含み、第３のＴＡＭ結合部分は第１および第２のＴＡＭ結合部分とは異なる。いくつかの実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分はヒトＣＳＦ１Ｒに結合し、第２のＴＡＭ結合部分はヒトＣＣＲ２に結合し、第３のＴＡＭ結合部分はＣＸＣＲ２に結合する。
【００４１】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、腫瘍標的化部分である第３の結合部分（例えば、抗体分子）を含む。いくつかの実施形態では、腫瘍標的化部分が、ＰＤ−Ｌ１、メソセリン、ＣＤ４７、ガングロシド２（ＧＤ２）、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、前立腺特異的膜抗原（ＰＭＳＡ）、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ロンキナーゼ、ｃ−Ｍｅｔ、未成熟ラミニン受容体、ＴＡＧ−７２、ＢＩＮＧ−４、カルシウム活性化クロライドチャネル２、サイクリンＢ１、９Ｄ７、Ｅｐ−ＣＡＭ、ＥｐｈＡ３、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、テロメラーゼ、ＳＡＰ−１、サバイビン、ＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ−１、ＰＲＡＭＥ、ＳＳＸ−２、メラン−Ａ／ＭＡＲＴ−１、Ｇｐ１００／ｐｍｅｌ１７、チロシナーゼ、ＴＲＰ−１／−２、ＭＣ１Ｒ、β−カテニン、ＢＲＣＡ１／２、ＣＤＫ４、ＣＭＬ６６、フィブロネクチン、ｐ５３、Ｒａｓ、ＴＧＦ−Β受容体、ＡＦＰ、ＥＴＡ、ＭＡＧＥ、ＭＵＣ−１、ＣＡ−１２５、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、β−カテニン、ＣＤＫ４、ＣＤＣ２７、ＣＤ４７、αアクチニン−４、ＴＲＰ１／ｇｐ７５、ＴＲＰ２、ｇｐ１００、Ｍｅｌａｎ−Ａ／ＭＡＲＴ１、ガングリオシド、ＷＴ１、ＥｐｈＡ３、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、ＣＤ２０、ＭＡＲＴ−２、ＭＡＲＴ−１、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＭ１、ＭＵＭ２、ＭＵＭ３、ＮＡ８８−１、ＮＰＭ、ＯＡ１、ＯＧＴ、ＲＣＣ、ＲＵＩ１、ＲＵＩ２、ＳＡＧＥ、ＴＲＧ、ＴＲＰ１、ＴＳＴＡ、葉酸受容体アルファ、Ｌ１−ＣＡＭ、ＣＡＩＸ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ｇｐＡ３３、ＧＤ３、ＧＭ２、ＶＥＧＦＲ、インテグリン（インテグリンアルファＶｂｅｔａ３、インテグリンアルファ５Ｂｅｔａ１）、炭水化物（Ｌｅ）、ＩＧＦ１Ｒ、ＥＰＨＡ３、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、またはＲＡＮＫＬに結合する。
【００４２】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、第１および第２の非隣接ポリペプチドを含む二重特異性分子であり：（ｉ）第１のポリペプチドは例えば、Ｎ−Ｃ配向において、リンカーを介して、第１および第２のポリペプチドの間の関連を促進する第１のドメイン（例えば、第１の免疫グロブリン定常ドメイン（例えば、本明細書に記載の第１のＦｃ分子）に結合してもよい、例えば、第１のＴＡＭ抗原、例えば、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ２、ＣＸＣＲ２、またはＰＤ−Ｌ１などの第１のＴＡＭ抗原などに結合する第１のＴＡＭ結合部分（例えば、抗体分子（例えば、第１の抗原ドメインの第１の部分、例えば、Ｆａｂ分子の第１のＶＨ−ＣＨ１）を含み、（ｉｉ）第２のポリペプチドは例えば、Ｎ−Ｃ配向において、リンカーを介して、第１および第２のポリペプチドの間の関連を促進する第２のドメイン（例えば、第２の免疫グロブリン定常ドメイン（例えば、本明細書に記載の第２のＦｃ分子）に結合してもよい、第２のＴＡＭ結合部分（例えば、ＣＣＲ２、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＸＣＲ２、またはＰＤ−Ｌ１などの第２のＴＡＭ抗原などに結合するｓｃＦｖなどの抗体分子）を含み、（ｉｉｉ）第３のポリペプチドは、例えば、Ｎ−Ｃ配向において、第１のＴＡＭ抗原に結合する第１の抗原ドメインの第２の部分、例えば、Ｆａｂの第１のＶＬ−ＣＬを含み、例えば、第３のポリペプチドは、第１のポリペプチドに非共有結合的に結合し；（ｉｖ）第４のポリペプチドは、例えば、Ｎ−Ｃ配向において、第２抗原ドメインの第２部分、例えば、第２ＴＡＭ抗原に結合するＦａｂの第２ＶＬ−ＣＬを含み、例えば、第４のポリペプチドは、第２のポリペプチドに非共有結合的に結合する。いくつかの実施形態では、第１および第２のポリペプチドはホモまたはヘテロ二量体である。
【００４３】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は二重特異性分子であり：
（ｉ）第１のＴＡＭ結合部分（例えば、第１のＴＡＭ抗原、例えば、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ２、またはＣＸＣＲ２に結合する結合部分）は、第１および第２の非隣接ポリペプチドを含み、
（ｉｉ）第２のＴＡＭ結合部分（例えば、第２のＴＡＭ抗原、例えば、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ２、またはＣＸＣＲ２に結合する結合部分）は、第３および第４の非隣接ポリペプチドを含み、
（ａ）第１のポリペプチドは、例えば、Ｎ−Ｃ配向において、リンカーを介して、第１および第３のポリペプチドの間の関連を促進する第１のドメイン（例えば、第１のＦｃ領域）に結合してもよい第１のＶＨ、第１のＣＨ１を含み、
（ｂ）第２のポリペプチドは、例えば、Ｎ−Ｃ配向において、第１のＶＬおよび第１のＣＬを含み、
（ｃ）第３のポリペプチドは、例えば、Ｎ−Ｃ配向において、リンカーを介して、第１および第３のポリペプチドの間の関連を促進する第２のドメイン（例えば、第２のＦｃ領域）に結合してもよい第２のＶＨ、第２のＣＨ１を含み、
（ｄ）第４のポリペプチドは、例えば、Ｎ−Ｃ配向において、第２のＶＬおよび第２のＣＬを含む。一部の実施形態では、第１および第２ドメイン（例えば、第１および第２Ｆｃ領域）は、ホモまたはヘテロダイマーを形成する。
【００４４】
一態様において、本発明は、（ｉ）抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）、および（ｉｉ）抗ＣＣＲ２結合部分（例えば、抗ＣＣＲ２抗体分子）を含む、単離された多重特異性、例えば、二重特異性分子を提供する。理論に縛られることを望まないが、抗ＣＳＦ１Ｒ／抗ＣＣＲ２多重特異性分子は、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞、またはＣＳＦ１Ｒ陰性ＣＣＲ２陽性細胞と比較して、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞に優先的に結合する可能性がある。例示的なＣＳＦ１Ｒ陽性ＣＣＲ２陽性細胞には、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）および骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）が含まれるが、これらに限定されない。例示的なＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞には、組織常在性マクロファージ（例えば、クッパー細胞）、およびランゲルハンス細胞が含まれるが、これらに限定されない。例示的なＣＳＦ１Ｒ陰性、ＣＣＲ２陽性細胞には、Ｔ細胞（例えば、活性化Ｔ細胞、例えば、活性化ＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞）、ＮＫ細胞、および好中球が含まれるが、これらに限定されない。理論に拘束されることを望まないが、抗ＣＳＦ１Ｒ／抗ＣＣＲ２多重特異性分子は、ＣＳＦ１Ｒ陽性ＣＣＲ２陰性細胞（例えば、組織内マクロファージ（例えば、クッパー細胞）、またはランゲルハンス細胞）、またはＣＳＦ１Ｒ陰性、ＣＣＲ２陽性細胞（例えば、活性化Ｔ細胞またはＮＫ細胞）と比較して、ＣＳＦ１Ｒ陽性ＣＣＲ２陽性細胞（例えば、腫瘍形成促進性ＴＡＭまたはＭＤＳＣ）に優先的に結合する可能性がある。
【００４５】
いくつかの実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ／抗ＣＣＲ２多重特異性分子は、標的細胞に結合すると、標的細胞の抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）または補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を誘発し得る。いくつかの実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ／抗ＣＣＲ２多重特異性分子は、腫瘍微小環境（例えば、ＴＡＭまたはＭＤＳＣ）中の免疫抑制性骨髄細胞に優先的に結合し、その数を減少させる一方で、恒常性骨髄細胞（例えば、組織常在性マクロファージ（例えば、クッパー細胞））および他の抗腫瘍免疫細胞（例えば、活性化Ｔ細胞およびＮＫ細胞）を残す。恒常性骨髄細胞の枯渇は、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体療法を受けている患者の有害事象の一部を担っている可能性がある。
【００４６】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、以下の特性のうちの１つまたは複数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、またはそれ以上）を有する：
（ｉ）多重特異性分子は、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞、またはＣＳＦ１Ｒ陰性、ＣＣＲ２陽性細胞と比較して、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞に優先的に結合する、例えば、多重特異性分子のＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞への結合は、例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定されたとき、例えば、図１に関して実施例２に記載された方法を使用して測定されたとき、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞、ＣＳＦ１Ｒ陰性、ＣＣＲ２陽性細胞への多重特異性分子の結合よりも少なくとも２、４、６、８、１０、１５、２０、または２５倍強い；
（ｉｉ）多重特異性分子は、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞と比較して、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞に優先的に結合する、例えば、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞に結合するための多重特異性分子のＥＣ５０は、例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定した場合、例えば、図１に関して実施例２に記載の方法を使用して測定したときに、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞への結合に関する多重特異性分子のＥＣ５０の６０、５０、４０、３０、２０、または１０％以下である；
（ｉｉｉ）多重特異性分子は、ＣＳＦ１Ｒ陰性、ＣＣＲ２陽性細胞と比較して、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞に優先的に結合する、例えば、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞に結合するための多重特異性分子のＥＣ５０は、例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定した場合、例えば、図１に関して実施例２に記載の方法を使用して測定したときに、ＣＳＦ１Ｒ陰性、ＣＣＲ２陽性細胞への結合に関する多重特異性分子のＥＣ５０の５０、４０、３０、２０、１０、または５％以下である；
（ｉｖ）多重特異性分子は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、好中球、組織常在マクロファージ（クッパー細胞など）、またはランゲルハンス細胞などと比較して、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）または骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）に優先的に結合する、例えば、ＴＡＭまたはＭＤＳＣへの多重特異性分子の結合は、例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定した場合、例えば、図５に関して実施例６に記載の方法を使用して測定したときに、多重特異性分子のＴ細胞、ＮＫ細胞、好中球、組織常在マクロファージ（クッパー細胞など）、またはランゲルハンス細胞の結合よりも少なくとも２、４、６、８、１０、１５、２０、または２５倍強い；
（ｖ）多重特異性分子は、単球移動、例えば、単球走化性タンパク質１（ＭＣＰ１）誘発単球移動を阻害する、例えば、トランスウェルプレート移動アッセイを使用して測定した場合、例えば、図２に関して実施例３に記載された方法を使用して測定されるとき、単球走化性タンパク質１誘発単球移動を少なくとも４０、５０、６０、または７０％減少させる；
（ｖｉ）多重特異性分子は、マクロファージの増殖、例えば、骨髄由来マクロファージ、例えば、骨髄由来マクロファージのＣＳＦ−１誘導性の増殖を阻害し、例えば、骨髄由来マクロファージのＣＳＦ−１誘導性の増殖を、例えば、細胞増殖ＭＴＴアッセイを使用して測定した場合、例えば、図３Ｂに関して実施例４に記載の方法を使用して測定した場合、少なくとも５０、６０、７０、または８０％減少させる；
（ｖｉｉ）多重特異性分子は、単球、例えば、骨髄由来単球の分化、例えば、骨髄由来単球のＣＳＦ−１誘導性の分化を阻害しない、または実質的に阻害しない、例えば、骨髄由来単球のＣＳＦ−１誘導性の分化を、例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定した場合、例えば、図４に関して実施例５に記載の方法を使用して測定した場合、２、４、６、８、または１０％以上減少させない；
（ｖｉｉｉ）多重特異性分子は、ＴＡＭまたはＭＤＳＣなどの抑制性骨髄細胞を枯渇させる、例えば、ＴＡＭまたはＭＤＳＣなどの抑制性骨髄細胞の数を、例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定された場合、例えば、図６に関して実施例７に記載された方法を使用して測定されたときｉｎ  ｖｉｖｏで少なくとも８０、８５、９０、９５、９９、または９９．５％減少させる；
（ｉｘ）多重特異性分子は、組織に存在するマクロファージ、例えば、クッパー細胞を枯渇させない、または実質的に枯渇させない、例えば、組織に存在するマクロファージ、例えば、クッパー細胞の数を、例えば、免疫組織化学分析を使用して測定した場合、例えば、図７Ｂおよび７Ｄに関して実施例８に記載の方法を使用して測定したときｉｎ  ｖｉｖｏで４、６、８、１０、または１５％以上減少させない；
（ｘ）多重特異性分子は、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞のＣＳＦ−１依存性細胞生存を阻害しない、または実質的に阻害しない、例えば、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞のＣＳＦ−１依存性細胞生存を、例えば、細胞生存率ＭＴＴアッセイを使用して測定した場合、例えば、図８Ａに関して実施例９に記載の方法を使用して測定した場合、５、１０、または１５％以上減少させない；
（ｘｉ）多重特異性分子は、ｉｎ  ｖｉｖｏでのＣＤ８＋Ｔ細胞腫瘍浸潤を増加させる、例えば、腫瘍のＣＤ３＋Ｔ細胞の％ＣＤ８＋Ｔ細胞を、例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定した場合、例えば、図９に関して実施例１０に記載された方法を使用して測定されるときに、少なくとも１．５、２、または２．５倍増加させる；
（ｘｉｉ）多重特異性分子は、ｉｎ  ｖｉｖｏで腫瘍のＴｒｅｇ頻度を低下させる、例えば、フローサイトメトリー分析を用いて測定する場合、例えば、図１０Ａに関して実施例１１に記載されている方法を用いて測定するとき、腫瘍のＴｒｅｇ頻度を少なくとも１５、２０、２５、または３０％低下させる；
（ｘｉｉｉ）多重特異性分子は、ｉｎ  ｖｉｖｏでの腫瘍のＣＤ８＋Ｔ細胞／Ｔｒｅｇ比を増加させる。例えば、腫瘍のＣＤ８＋Ｔ細胞／Ｔｒｅｇ比を、例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定される場合、例えば、図１０Ｂに関して実施例１１に記載された方法を使用して測定されるときに、少なくとも２．５、３、３．５、４、または４．５倍増加させる；または
（ｘｉｖ）多重特異性分子は、例えば、図１１Ａおよび１１Ｂに関して実施例１２に記載の方法を用いて測定されるときに、腫瘍の増殖を減らすおよび／または腫瘍を有する動物の生存を増加させる。
【００４７】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞、またはＣＳＦ１Ｒ陰性、ＣＣＲ２陽性細胞と比較して、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞に優先的に結合する、例えば、多重特異性分子のＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞への結合は、例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定されたとき、例えば、図１に関して実施例２に記載された方法を使用して測定されたとき、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞、ＣＳＦ１Ｒ陰性、ＣＣＲ２陽性細胞への多重特異性分子の結合よりも少なくとも２、４、６、８、１０、１５、２０、または２５倍強い。
【００４８】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞と比較して、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞に優先的に結合する、例えば、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞に結合するための多重特異性分子のＥＣ５０は、例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定した場合、例えば、図１に関して実施例２に記載の方法を使用して測定したときに、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞への結合に関する多重特異性分子のＥＣ５０の６０、５０、４０、３０、２０、または１０％以下である。
【００４９】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、ＣＳＦ１Ｒ陰性、ＣＣＲ２陽性細胞と比較して、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞に優先的に結合する、例えば、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞に結合するための多重特異性分子のＥＣ５０は、例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定した場合、例えば、図１に関して実施例２に記載の方法を使用して測定したときに、ＣＳＦ１Ｒ陰性、ＣＣＲ２陽性細胞への結合に関する多重特異性分子のＥＣ５０の５０、４０、３０、２０、１０、または５％以下である。
【００５０】
いくつかの実施形態において、多重特異性分子は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、好中球、組織常在マクロファージ（クッパー細胞など）、またはランゲルハンス細胞などと比較して、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）または骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）に優先的に結合する、例えば、ＴＡＭまたはＭＤＳＣへの多重特異性分子の結合は、例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定した場合、例えば、図５に関して実施例６に記載の方法を使用して測定したときに、多重特異性分子のＴ細胞、ＮＫ細胞、好中球、組織常在マクロファージ（クッパー細胞など）、またはランゲルハンス細胞の結合よりも少なくとも２、４、６、８、１０、１５、２０、または２５倍強い。
【００５１】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、単球移動、例えば、単球走化性タンパク質１（ＭＣＰ１）誘発単球移動を阻害する、例えば、トランスウェルプレート移動アッセイを使用して測定した場合、例えば、図２に関して実施例３に記載された方法を使用して測定されるとき、単球走化性タンパク質１誘発単球移動を少なくとも４０、５０、６０、または７０％減少させる。
【００５２】
いくつかの実施形態において、多重特異性分子は、マクロファージの増殖、例えば、骨髄由来マクロファージ、例えば、骨髄由来マクロファージのＣＳＦ−１誘導性の増殖を阻害し、例えば、骨髄由来マクロファージのＣＳＦ−１誘導性の増殖を、例えば、細胞増殖ＭＴＴアッセイを使用して測定した場合、例えば、図３Ｂに関して実施例４に記載の方法を使用して測定した場合、少なくとも５０、６０、７０、または８０％減少させる。
【００５３】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、単球、例えば、骨髄由来単球の分化、例えば、骨髄由来単球のＣＳＦ−１誘導性の分化を阻害しない、または実質的に阻害しない、例えば、骨髄由来単球のＣＳＦ−１誘導性の分化を、例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定した場合、例えば、図４に関して実施例５に記載の方法を使用して測定した場合、２、４、６、８、または１０％以上減少させない。
【００５４】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、ＴＡＭまたはＭＤＳＣなどの抑制性骨髄細胞を枯渇させる、例えば、ＴＡＭまたはＭＤＳＣなどの抑制性骨髄細胞の数を、例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定された場合、例えば、図６に関して実施例７に記載された方法を使用して測定されたときｉｎ  ｖｉｖｏで少なくとも８０、８５、９０、９５、９９、または９９．５％減少させる。
【００５５】
いくつかの実施形態において、多重特異性分子は、組織に存在するマクロファージ、例えば、クッパー細胞を枯渇させない、または実質的に枯渇させない、例えば、組織に存在するマクロファージ、例えば、クッパー細胞の数を、例えば、免疫組織化学分析を使用して測定した場合、例えば、図７Ｂおよび７Ｄに関して実施例８に記載の方法を使用して測定したときｉｎ  ｖｉｖｏで４、６、８、１０、または１５％以上減少させない。
【００５６】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞のＣＳＦ−１依存性細胞生存を阻害しない、または実質的に阻害しない、例えば、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞のＣＳＦ−１依存性細胞生存を、例えば、細胞生存率ＭＴＴアッセイを使用して測定した場合、例えば、図８Ａに関して実施例９に記載の方法を使用して測定した場合、５、１０、または１５％以上減少させない。
【００５７】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、ｉｎ  ｖｉｖｏでのＣＤ８＋Ｔ細胞腫瘍浸潤を増加させる、例えば、腫瘍のＣＤ３＋Ｔ細胞の％ＣＤ８＋Ｔ細胞を、例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定した場合、例えば、図９に関して実施例１０に記載された方法を使用して測定されるときに、少なくとも１．５、２、または２．５倍増加させる。
【００５８】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、ｉｎ  ｖｉｖｏで腫瘍のＴｒｅｇ頻度を低下させる、例えば、フローサイトメトリー分析を用いて測定する場合、例えば、図１０Ａに関して実施例１１に記載されている方法を用いて測定するとき、腫瘍のＴｒｅｇ頻度を少なくとも１５、２０、２５、または３０％低下させる。
【００５９】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、ｉｎ  ｖｉｖｏでの腫瘍のＣＤ８＋Ｔ細胞／Ｔｒｅｇ比を増加させる。例えば、腫瘍のＣＤ８＋Ｔ細胞／Ｔｒｅｇ比を、例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定される場合、例えば、図１０Ｂに関して実施例１１に記載された方法を使用して測定されるときに、少なくとも２．５、３、３．５、４、または４．５倍増加させる。
【００６０】
いくつかの実施形態において、多重特異性分子は、例えば、図１１Ａおよび１１Ｂに関して実施例１２に記載の方法を用いて測定されるときに、腫瘍の増殖を減らすおよび／または腫瘍を有する動物の生存を増加させる。
【００６１】
いくつかの実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分および抗ＣＣＲ２結合部分が、独立して、完全な抗体（例えば、少なくとも１つ、好ましくは２つの完全な重鎖、および少なくとも１つ、好ましくは２つの完全な軽鎖を含む抗体）、または抗原結合断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体、またはダイアボディ（ｄＡｂ））である。いくつかの実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分および／または抗ＣＣＲ２結合部分が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、もしくはＩｇＧ４、またはその断片から選択される重鎖定常領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分および／または抗ＣＣＲ２結合部分が、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）または補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を媒介できる重鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分が第１の重鎖定常領域（例えば、第１のＦｃ領域）を含み、抗ＣＣＲ２結合部分が第２の重鎖定常領域（例えば、第２のＦｃ領域）を含み、第１の重鎖定常領域は、天然に存在する重鎖定常領域と比較して、第１の重鎖定常領域および第２の重鎖定常領域のヘテロ二量体化を増加させる１つまたは複数の変異を含み、および／または第２の重鎖定常領域は、天然に存在する重鎖定常領域と比較して、第２の重鎖定常領域および第１の重鎖定常領域のヘテロ二量体化を増加させる１つ以上の突然変異を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分および／または抗ＣＣＲ２結合部分が、カッパまたはラムダの軽鎖定常領域、またはその断片から選択される軽鎖定常領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分がカッパ軽鎖定常領域またはその断片を含み、抗ＣＣＲ２結合部分がラムダ軽鎖定常領域またはその断片を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分がラムダ軽鎖定常領域またはその断片を含み、抗ＣＣＲ２結合部分がカッパ軽鎖定常領域またはその断片を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分および抗ＣＣＲ２結合部分が共通の軽鎖可変領域を有する。いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、およびＩｇＧ４の重鎖定常領域、より具体的にはヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４の重鎖定常領域から選択される重鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）をさらに含む。いくつかの実施形態では、多重特異性分子は抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）または補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を媒介できる重鎖定常領域をさらに含む。
【００６２】
いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子および抗ＣＣＲ２抗体分子を含み、
（ｉ）抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子は第１ポリペプチドおよび第２ポリペプチドを含み、第１ポリペプチドは第１軽鎖可変領域（ＶＬ）および第１軽鎖定常領域（ＣＬ）を含み、第２ポリペプチドは第１重鎖可変領域（ＶＨ）、第１重鎖定常領域１（ＣＨ１）を含み、また第１のＣＨ２および第１のＣＨ３を含んでもよく、
（ｉｉ）抗ＣＣＲ２抗体分子は第３ポリペプチドおよび第４ポリペプチドを含み、第３ポリペプチドは第２ＶＬおよび第２ＣＬを含み、第４ポリペプチドは第２ＶＨ、第２ＣＨ１を含み、また第２ＣＨ２および第２のＣＨ３を含んでもよい。
【００６３】
いくつかの実施形態では、（ｉ）抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子はＣＳＦ１Ｒに一価で結合し、および／または（ｉｉ）抗ＣＣＲ２抗体分子はＣＣＲ２に一価で結合する。いくつかの実施形態では、多重特異性分子は、ＣＳＦ１Ｒに一価で結合し、および／またはＣＣＲ２に一価で結合する。いくつかの実施形態では、多重特異性分子はＣＳＦ１Ｒに一価で結合し、ＣＣＲ２に一価で結合する。
【００６４】
いくつかの実施形態では、
（ｉ）多重特異性分子は、ＣＣＲ２の存在下でＣＳＦ１Ｒを阻害し、多重特異性分子は、細胞内のＣＳＦ１Ｒの活性（例えば、ＣＳＦ１Ｒシグナル伝達、例えば、ＣＳＦ１誘導ＣＳＦ１Ｒシグナル伝達）を、例えば、少なくとも４０、５０、６０、７０、８０、または９０％、細胞が細胞表面でＣＳＦ１ＲとＣＣＲ２の両方を発現する場合、減少させてもよく、および／または
（ｉｉ）多重特異性分子は、ＣＣＲ２の非存在下でＣＳＦ１Ｒを阻害しないか、実質的に阻害せず、多重特異性分子は、細胞が細胞表面でＣＣＲ２ではなくＣＳＦ１Ｒを発現する場合、ＣＳＦ１Ｒ（例えば、ＣＳＦ１Ｒシグナル伝達、例えば、ＣＳＦ１誘導ＣＳＦ１Ｒシグナル伝達）の活性を低下させない、またはＣＳＦ１Ｒの活性を２、４、６、８、１０、または１５％以上低下させなくてもよい。
【００６５】
いくつかの実施形態では、
（ｉ）多重特異性分子は、ＣＳＦ１Ｒの存在下でＣＣＲ２を阻害し、多重特異性分子は、細胞内のＣＣＲ２の活性を、例えば、少なくとも４０、５０、６０、７０、８０、または９０％、細胞が細胞表面でＣＣＲ２とＣＳＦ１Ｒの両方を発現する場合、減少させてもよく、および／または
（ｉｉ）多重特異性分子は、ＣＳＦ１Ｒの非存在下でＣＣＲ２を阻害しないか、実質的に阻害せず、多重特異性分子は、細胞が細胞表面でＣＳＦ１ＲではなくＣＣＲ２を発現する場合、ＣＣＲ２の活性を低下させない、またはＣＣＲ２の活性を２、４、６、８、１０、または１５％以上低下させなくてもよい。
【００６６】
一態様では、本発明は、
（ｉ）単球、例えば、炎症性単球、例えば、Ｌｙ６ＣＨｉ  ＣＣＲ２＋ＣＸ３ＣＲ１Ｌｏ炎症性単球の輸送を媒介する分子に結合する第１の結合部分であって、第１の結合部分はＣＣＲ２に結合していてもよい第１の結合部分、および
（ｉｉ）炎症組織での単球および／またはマクロファージの成熟および／または生存を媒介する分子に結合する第２の結合部分であって、ＣＳＦ１Ｒに結合していてもよい第２の結合部分
を含む、単離された多重特異性、例えば、二重特異性分子を提供する。
【００６７】
一態様では、本発明は、
（ｉ）炎症性単球の腫瘍への動員を減少させる第１の結合部分であって、ＣＣＲ２に結合および／または阻害していてもよい第１の結合部分、および
（ｉｉ）腫瘍微小環境内の単球および／またはマクロファージの成熟および／または生存を低減する第２の結合部分であって、ＣＳＦ１Ｒに結合および／または阻害していてもよい第２の結合部分
を含む、単離された多重特異性、例えば、二重特異性分子を提供する。
【００６８】
一態様において、本発明は、（ｉ）抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）、および（ｉｉ）抗ＰＤ−Ｌ１結合部分（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子）を含む、単離された多重特異性、例えば、二重特異性分子を提供する。
【００６９】
前述の態様および実施形態のいくつかの実施形態では、多重特異性分子は、１つ以上の追加の結合部分（例えば、第３の結合部分、第４の結合部分（例えば、三重特異性または四重特異性分子）をさらに含み、第３の結合部分が第３のＩＭＣ結合部分または腫瘍標的化部分であってよい。いくつかの態様において、腫瘍標的化部分は、国際公開第２０１７１６５４６４号、例えば、国際公開第２０１７１６５４６４号の１０８〜１１８ページに開示されている腫瘍標的化部分であり、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【００７０】
前述の態様および実施形態のいくつかの実施形態では、多重特異性分子はさらに、Ｔ細胞エンゲージャー、ＮＫ細胞エンゲージャー、Ｂ細胞エンゲージャー、樹状細胞エンゲージャー、またはマクロファージ細胞エンゲージャーから選択される免疫細胞エンゲージャーを含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞エンゲージャーは、国際公開第２０１７１６５４６４号、例えば、国際公開第２０１７１６５４６４号の１１９〜１３１ページに開示されている免疫細胞エンゲージャーであり、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。いくつかの実施形態において、免疫細胞エンゲージャーは、免疫細胞、例えば、エフェクター細胞に結合し、活性化する。いくつかの実施形態では、免疫細胞エンゲージャーは、免疫細胞、例えば、エフェクター細胞に結合するが、活性化しない。
【００７１】
いくつかの実施形態では、免疫細胞エンゲージャーは、Ｔ細胞エンゲージャー、例えば、Ｔ細胞への結合および活性化を媒介するＴ細胞エンゲージャー、またはＴ細胞への結合を媒介するが活性化はしないＴ細胞エンゲージャーである。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞エンゲージャーはＣＤ３、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲζ、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ４０、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＤＲ３、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＴＩＭ１、ＳＬＡＭ、ＣＤ２またはＣＤ２２６に結合する、例えば、Ｔ細胞エンゲージャーは抗ＣＤ３抗体分子である。
【００７２】
いくつかの実施形態では、免疫細胞エンゲージャーは、ＮＫ細胞エンゲージャー、例えば、ＮＫ細胞への結合および活性化を媒介するＮＫ細胞エンゲージャー、またはＮＫ細胞への結合を媒介するが活性化はしないＮＫ細胞エンゲージャーである。いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞エンゲージャーは、抗体分子、例えば、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫＧ２Ｄ、ＤＮＡＭ１、ＤＡＰ１０、ＣＤ１６（例えば、ＣＤ１６ａ、ＣＤ１６ｂ、またはその両方）、ＣＲＴＡＭ、ＣＤ２７、ＰＳＧＬ１、ＣＤ９６、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＮＫｐ８０、ＣＤ２４４（別名ＳＬＡＭＦ４または２Ｂ４）、ＳＬＡＭＦ６、ＳＬＡＭＦ７、ＫＩＲ２ＤＳ２、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＫＩＲ３ＤＳ１、ＫＩＲ２ＤＳ３、ＫＩＲ２ＤＳ５、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＣＤ９４、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｅ、またはＣＤ１６０に結合する（例えば、活性化する）抗原結合ドメイン、またはリガンドから選択される。
【００７３】
いくつかの実施形態において、免疫細胞エンゲージャーは、Ｂ細胞エンゲージャー、例えば、ＣＤ４０Ｌ、ＯＸ４０Ｌ、またはＣＤ７０リガンド、またはＯＸ４０、ＣＤ４０またはＣＤ７０に結合する抗体分子である。いくつかの実施形態では、免疫細胞エンゲージャーはマクロファージ細胞エンゲージャー、例えば、ＣＤ２アゴニスト；ＣＤ４０Ｌ；ＯＸ４０Ｌ；ＯＸ４０、ＣＤ４０またはＣＤ７０に結合する抗体分子；Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）のアゴニスト（例えば、ＴＬＲ４、例えば、構成的に活性なＴＬＲ４（ｃａＴＬＲ４）またはＴＬＲ９アゴニスト）；ＣＤ４７；またはＳＴＩＮＧアゴニストである。
【００７４】
いくつかの実施形態において、免疫細胞エンゲージャーは、樹状細胞エンゲージャー、例えば、ＣＤ２アゴニスト、ＯＸ４０抗体、ＯＸ４０Ｌ、４１ＢＢアゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体アゴニストまたはその断片（例えば、ＴＬＲ４、例えば、構成的にアクティブＴＬＲ４（ｃａＴＬＲ４））、ＣＤ４７アゴニスト、またはＳＴＩＮＧアゴニストである。
【００７５】
前述の態様および実施形態のいくつかの実施形態では、多重特異性分子はサイトカイン分子をさらに含む。いくつかの実施形態では、サイトカイン分子は、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、インターロイキン−７（ＩＬ−７）、インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）、インターロイキン−１５（ＩＬ−１５）、インターロイキン−１８（ＩＬ−１８）、インターロイキン−２１（ＩＬ−２１）、またはインターフェロンガンマ、またはその断片もしくは変異体、または前述のサイトカインのいずれかの組み合わせから選択される。いくつかの実施形態では、サイトカイン分子は、国際公開第２０１７１６５４６４号、例えば、国際公開第２０１７１６５４６４号の１０８〜１１８ページに開示されているサイトカイン分子であり、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００７６】
前述の態様および実施形態のいくつかの実施形態では、多重特異性分子は間質修飾部分をさらに含む。いくつかの実施形態において、間質修飾部分は、間質または細胞外マトリックス（ＥＣＭ）成分のレベルまたは産生を減少させる；腫瘍の線維化を減少させる；間質性腫瘍輸送を増加させる；腫瘍灌流を改善する；腫瘍の微小血管を拡大する；腫瘍の間質液圧（ＩＦＰ）を減少させる；または、癌治療薬または細胞治療薬などの薬剤の腫瘍または腫瘍血管系への浸透または拡散を減少または増強する、のうちの１つ以上を引き起こす：。いくつかの実施形態において、間質修飾部分は、国際公開第２０１７１６５４６４号、例えば、国際公開第２０１７１６５４６４号の１３１〜１３６ページに開示されている間質修飾部分であり、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【００７７】
別の態様において、本明細書に提供されるのは、先行する請求項のいずれか１つの多重特異性分子（例えば、抗体）をコードする単離された核酸分子である。
【００７８】
別の態様では、本明細書に記載の多重特異性分子のいずれかをコードするヌクレオチド配列、またはそれと実質的に相同な（例えば、少なくとも９５％から９９．９％同一）ヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子が本明細書で提供される。
【００７９】
別の態様では、本明細書に記載の核酸分子の１つまたは複数を含むベクター、例えば、発現ベクターが本明細書で提供される。
【００８０】
別の態様では、本明細書に記載の核酸分子または本明細書に記載のベクターを含む細胞、例えば、宿主細胞が本明細書で提供される。
【００８１】
別の態様では、本明細書で提供される細胞、例えば、宿主細胞を、適切な条件下、例えば、遺伝子発現および／またはヘテロ二量化に適した条件下で培養することを含む、本明細書に記載の多重特異性分子を作製、例えば、製造する方法が提供される。
【００８２】
別の態様において、本明細書に記載される多重特異性分子および薬学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤を含む医薬組成物が本明細書に提供される。
【００８３】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、過剰増殖性障害、癌、線維性障害または状態、炎症性障害または状態、または自己免疫障害を治療する方法である。一実施形態において、障害は、過剰増殖性障害、例えば、過剰増殖性結合組織障害（例えば、過剰増殖性線維性疾患）である。一実施形態において、線維性（例えば、過剰増殖性線維性）疾患は、多系統性または臓器特異的である。例示的な線維性疾患には、多体系性（例えば、全身性硬化症、多病巣性線維硬化症、骨髄移植レシピエントにおける強皮腫移植片対宿主病、腎性全身性線維症、強皮症）、および臓器特異的障害（例えば、肺、肝臓、心臓、腎臓、膵臓、皮膚およびその他の臓器の線維症）が含まれるが、これらに限定されない。他の実施形態において、線維性疾患は、肝線維症（例えば、肝硬変、ＮＡＳＨ、および本明細書に記載の他の状態）、肺線維症（例えば、ＩＰＦ）、腎線維症、または骨髄の線維症（例えば、骨髄線維症）から選択される。
【００８４】
別の態様において、対象の癌を治療する方法であって、それを必要とする対象に本明細書に記載の多重特異性分子を投与することを含み、多重特異性分子は癌を治療するのに有効な量で投与される方法が、本明細書に提供される。
【００８５】
別の態様では、対象の癌を治療する方法であって、それを必要とする対象に本明細書に記載の多重特異性分子を投与することを含み、多重特異性分子はＴＡＭの数（例えば、対象の腫瘍内または腫瘍付近のＴＡＭの数）を減らすのに有効な量で投与され、ＴＡＭの増殖（例えば、対象の腫瘍内または腫瘍付近のＴＡＭの増殖）、または対象の腫瘍へのマクロファージ浸潤を減少または阻害する方法が本明細書で提供される。
【００８６】
別の態様において、ＴＡＭの集団の一部を減少させることにより対象の癌を治療する方法であって、それを必要とする対象に本明細書に記載の多重特異性分子を投与することを含み、多重特異性分子はＴＡＭの集団の一部を阻害または枯渇させるのに有効な量で投与される方法が本明細書に提供される。
【００８７】
別の態様において、対象（例えば、固形腫瘍などの癌を有する対象）のＴＡＭの集団の一部の増殖を低減させる方法であって、それを必要とする対象に本明細書に記載の多重特異性分子を投与することを含み、多重特異性分子はＴＡＭの集団の一部の増殖を低減させるのに有効な量で投与される方法が本明細書で提供される。
【００８８】
別の態様において、癌（例えば、腫瘍）を有する対象においてＴＡＭの集団の一部を阻害または枯渇させる方法であって、対象に本明細書に記載の多重特異性分子を投与することを含み、多重特異性分子は腫瘍浸潤マクロファージの数を減らすのに有効な量で投与され、腫瘍浸潤マクロファージの増殖を阻害する、または腫瘍へのマクロファージ浸潤を減少する方法が本明細書に提供される。
【００８９】
いくつかの実施形態では、癌は固形腫瘍癌または転移病変である。いくつかの実施形態において、固形腫瘍癌は、膵臓癌（例えば、膵臓腺癌）、乳癌、結腸直腸癌、肺癌（例えば、小細胞肺癌または非小細胞肺癌）、皮膚癌（例えば、黒色腫）、卵巣癌、肝臓癌、または脳癌（神経膠腫など）の１つまたは複数である。いくつかの実施形態では、癌は、癌がＴＡＭを含むものとして特徴付けられる、ＴＡＭの存在に関連する、ＴＡＭが癌（例えば、腫瘍）の一部であるおよび／または一部を形成する、またはＴＡＭが固形腫瘍内またはその近くで検出されている。
【００９０】
いくつかの実施形態では、方法は、対象の癌（例えば、腫瘍）の中または近くにＴＡＭの存在を特定することをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＴＡＭは、ＣＸＣＲ２およびＣＣＲ２、ＣＣＲ２およびＣＳＦ１Ｒ、ＣＳＦ１ＲおよびＣＸＣＲ２、またはＣＣＲ２、ＣＸＣＲ２、およびＣＳＦ１Ｒを発現する。
【００９１】
いくつかの実施形態では、方法は、第２の治療処置を施すことをさらに含む。いくつかの実施形態では、第２の治療処置は、治療薬（例えば、化学療法薬、生物学的薬剤、ホルモン療法）、放射線、または手術を含む。いくつかの実施形態では、治療薬は、化学療法剤、または生物学的薬剤から選択される。いくつかの実施形態では、治療薬はチェックポイント阻害剤である。いくつかの実施形態において、チェックポイント阻害剤が、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ１抗体（例えば、ニボルマブ、ペンブロリズマブまたはピジリズマブ）、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＬＡＧ３抗体、抗ＣＤ１６０抗体、抗２Ｂ４抗体、抗ＣＤ８０抗体、抗ＣＤ８６抗体、抗Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）抗体、抗Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）抗体、抗ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４またはＣＤ２７０）抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗ＭＨＣクラスＩ抗体、抗ＭＨＣクラスＩＩ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＬＡＩＲ１抗体、および抗Ａ２ａＲ抗体からなる群から選択される。
【００９２】
別の態様では、対象の癌を治療する方法であって、それを必要とする対象に本明細書に記載の多重特異性分子を投与することを含み、多重特異性分子はＭＤＳＣの数（例えば、対象の腫瘍内または腫瘍付近のＭＤＳＣの数）を減らすのに有効な量で投与され、ＭＤＳＣの増殖（例えば、対象の腫瘍内または腫瘍付近のＭＤＳＣの数）、または対象の腫瘍へのＭＤＳＣ浸潤を減少または阻害する方法が本明細書で提供される。
【００９３】
別の態様において、ＭＤＳＣの集団の一部を減少させることにより対象の癌を治療する方法であって、それを必要とする対象に本明細書に記載の多重特異性分子を投与することを含み、多重特異性分子はＭＤＳＣの集団の一部を阻害または枯渇させるのに有効な量で投与される方法が本明細書に提供される。
【００９４】
別の態様において、対象（例えば、固形腫瘍などの癌を有する対象）のＭＤＳＣの集団の一部の増殖を低減させる方法であって、それを必要とする対象に本明細書に記載の多重特異性分子を投与することを含み、多重特異性分子はＭＤＳＣの集団の一部の増殖を低減させるのに有効な量で投与される方法が本明細書で提供される。
【００９５】
別の態様では、癌（例えば、腫瘍）を有する対象においてＭＤＳＣの集団の一部を阻害または枯渇させる方法であって、対象に本明細書に記載の多重特異性分子を投与することを含み、多重特異性分子はＭＤＳＣの数を減らすのに有効な量で投与され、ＭＤＳＣの増殖を阻害する、またはＭＤＳＣ浸潤を減少する方法が本明細書で提供される。
【００９６】
いくつかの実施形態では、癌は固形腫瘍癌または転移病変である。いくつかの実施形態において、固形腫瘍癌は、膵臓癌（例えば、膵臓腺癌）、乳癌、結腸直腸癌、肺癌（例えば、小細胞肺癌または非小細胞肺癌）、皮膚癌（例えば、黒色腫）、卵巣癌、肝臓癌、または脳癌（神経膠腫など）の１つまたは複数である。いくつかの実施形態では、癌がＭＤＳＣを含むものとして特徴付けられる、ＭＤＳＣの存在に関連する、ＭＤＳＣが癌（例えば、腫瘍）の一部であるおよび／または一部を形成する、またはＭＤＳＣが固形腫瘍内またはその近くで検出されている。いくつかの実施形態では、方法は、対象の癌（例えば、腫瘍）の中または近くのＭＤＳＣの存在を識別することをさらに含む。
【００９７】
いくつかの実施形態では、方法は、第２の治療処置を施すことをさらに含む。いくつかの実施形態では、第２の治療処置は、治療薬（例えば、化学療法薬、生物学的薬剤、ホルモン療法）、放射線、または手術を含む。いくつかの実施形態では、治療薬は、化学療法剤、または生物学的薬剤から選択される。いくつかの実施形態では、治療薬はチェックポイント阻害剤である。いくつかの実施形態において、チェックポイント阻害剤が、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ１抗体（例えば、ニボルマブ、ペンブロリズマブまたはピジリズマブ）、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＬＡＧ３抗体、抗ＣＤ１６０抗体、抗２Ｂ４抗体、抗ＣＤ８０抗体、抗ＣＤ８６抗体、抗Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）抗体、抗Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）抗体、抗ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４またはＣＤ２７０）抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗ＭＨＣクラスＩ抗体、抗ＭＨＣクラスＩＩ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＬＡＩＲ１抗体、および抗Ａ２ａＲ抗体からなる群から選択される。
【００９８】
一態様において、本明細書に記載の多重特異性分子の有効量を対象に投与し、それにより線維性疾患または線維性障害を治療することを含む、それを必要とする対象の線維性疾患または障害を治療する方法が明細書に提供される。いくつかの実施形態では、線維性疾患または障害が、肺、肝臓、心臓または脈管構造、腎臓、膵臓、皮膚、胃腸管、骨髄または造血組織、神経系、眼、またはそれらの組み合わせの線維性疾患または障害である。一部の実施形態において、線維性疾患または障害が肺線維症（例えば、特発性肺線維症（ＩＰＦ））または肝線維症（例えば、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ））である。
【００９９】
いくつかの実施形態では、線維性状態の治療は、組織線維症の形成または沈着の１つまたは複数を低減または抑制すること；線維性病変のサイズ、細胞性（例えば、線維芽細胞または免疫細胞数）、組成または細胞の含有物を減少させること；線維性病変のコラーゲンまたはヒドロキシプロリン含有量を減らすこと；線維形成タンパク質の発現または活性を低下させること；炎症反応に関連する線維症を軽減させること；線維症に関連する体重減少を減少させること；または生存率を高めることを含む。
【０１００】
いくつかの実施形態において、線維性疾患または障害は原発性線維症である。一実施形態では、線維性疾患または障害は特発性である。他の実施形態において、線維性疾患または障害は、疾患（例えば、感染性疾患、炎症性疾患、自己免疫疾患、悪性疾患または癌性疾患、および／または結合疾患）；毒素；傷害（例えば、環境ハザード（例えば、アスベスト、石炭粉、多環芳香族炭化水素）、喫煙の煙、傷）；医学的治療（例えば、外科的切開、化学療法または放射線）、またはそれらの組み合わせに関連する（例えば、続発する）。
【０１０１】
一態様において、本明細書に記載の多重特異性分子の有効量を対象に投与し、それにより肝疾患または障害を治療することを含む、それを必要とする対象の肝疾患または障害を治療する方法が明細書に提供される。いくつかの実施形態において、肝疾患または肝障害は、肝の機能または生理に影響を及ぼす線維性障害または結合組織障害である。一実施形態では、線維性障害または結合組織障害は、全身性（全身に影響を及ぼす）、多臓器、または臓器特異的（例えば、肝臓特異的）であり得る。線維性肝障害の例には、肝線維症（肝の線維症）、肝硬変、および細胞外マトリックスタンパク質の蓄積に関連する任意の障害、例えば、肝臓のコラーゲン、肝臓の瘢痕、および／または異常な肝血管が含まれるが、これらに限定されない。一実施形態において、肝疾患または障害は肝硬変である。肝硬変は（修復プロセスの結果として）再生結節を伴う肝線維症の最終段階であると考えられ、通常、肝血管系の歪みを伴う。他の実施形態では、肝疾患または障害は肝臓癌である。肝癌の例には、肝癌の例には、肝細胞癌（ＨＣＣ）、原発性肝細胞癌、肝癌、線維層癌、限局性結節性過形成、胆管肉腫、肝内胆管癌、血管肉腫または血管肉腫、肝腺腫、肝血管腫、肝過誤腫、肝芽腫、乳児良性血管内皮腫、肝臓の混合腫瘍、間葉組織の腫瘍、肝臓の肉腫が含まれるが、これらに限定されない。肝臓癌は、乳癌、結腸直腸癌、食道癌、腎臓癌または腎癌、肺癌、卵巣癌、膵臓癌、直腸癌、皮膚癌（例えば、黒色腫）、胃癌（胃腸癌を含む）、および子宮癌などの非肝癌の転移とも関連している場合がある。一実施形態において、肝疾患または肝障害はＨＣＣである。特定の実施形態では、肝臓の疾患または障害は、肝臓の炎症または損傷；ウイルス（例えば、慢性ウイルス）感染（例えば、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｄ型肝炎ウイルス（デルタ型肝炎ウイルス）、Ｅ型肝炎ウイルス、エプスタインバーアデノウイルス、またはサイトメガロウイルス；または住血吸虫症などの寄生虫感染）；アルコール依存症；脂肪肝疾患；代謝障害（例えば、ヘマクロマトーシス、糖尿病、肥満、高血圧、脂質異常症、ガラクトース血症、またはグリコーゲン蓄積症）；自己免疫障害（例えば、自己免疫性肝炎（ＡＩＨ）、自己免疫性肝疾患、ルポイド肝炎、全身性エリテマトーデス、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）、強皮症、または全身性硬化症）；炎症性肝障害（例えば、脂肪性肝炎、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、潰瘍性大腸炎、クローン病、炎症性腸疾患）；遺伝性または先天性肝疾患（例えば、ウィルソン病、ギルバート病、バイラー症候群、グリーンランド・エスキモー家族性胆汁うっ滞、ゼルウィガー症候群、アラジール症候群（ＡＬＧＳ）、進行性家族性肝内胆汁うっ滞（ＰＦＩＣ）、アルファ１アンチトリプシン欠乏症、嚢胞性線維症小児肝硬変、または遺伝性ヘモクロマトーシス）；および肝傷害（例えば、薬物毒性、アルコール依存症、虚血、栄養失調、または身体的外傷）を含むがこれらに限定されない１つまたは複数の傷害によって引き起こされる。一実施形態において、肝疾患または肝障害は、脂肪肝（またはＦＬＤ）、アルコール性肝疾患、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性
脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、アルコール性脂肪性肝炎、単純脂肪症、ライ症候群、および肝細胞における脂質の異常保持に関連するいずれかの障害が含まれる。
【０１０２】
一態様において、本明細書に記載の多重特異性分子の有効量を対象に投与し、それにより炎症性障害または状態を治療することを含む、それを必要とする対象の炎症性障害を治療する方法が明細書に提供される。一実施形態では、炎症性障害または状態は、腎臓の炎症性障害または状態である。一実施形態では、炎症性障害または状態はループス腎炎である。
【０１０３】
特に説明がない限り、本明細書で使用されるすべての専門用語および科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載のものと類似または同等の方法および材料を本発明の実施または試験に使用することができるが、適切な方法および材料を以下に記載する。本明細書で言及されたすべての刊行物、特許出願、特許、および他の参考文献は、その全体が参考として援用される。矛盾する場合、定義を含む本明細書が支配する。さらに、材料、方法、および実施例は例示的なものにすぎず、限定的であることを意図しない。
【０１０４】
本発明の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明および特許請求の範囲から明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【０１０５】
【図１】フロー分析で決定された、ｍＣＣＲ２（丸）、ｍＣＳＦ１Ｒ（四角）、またはｍＣＣＲ２とｍＣＳＦ１Ｒの両方（三角）を発現する一時的にトランスフェクトされたＥｘｐｉＣＨＯ細胞への濃度の増加したＵｎｉＴＩ−０１のｉｎ  ｖｉｔｒｏ結合である。図１では、パーセント蛍光（％）が試験された抗体濃度に対してプロットされている。
【図２】トランスウェル細胞培養システムにおける骨髄由来単球のＭＣＰ−１依存性細胞移動に対するアイソタイプコントロール（ｍＩｇＧ２ａ）、抗マウスＣＣＲ２モノクローナル抗体（ａＣＣＲ２）またはＵｎｉＴＩ−０１の濃度の増加の効果である。
【図３Ａ】ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの骨髄由来単球のマクロファージへのｍＣＳＦ−１依存性分化および増殖に対する、濃度が増加したＵｎｉＴＩ−０１、抗マウスＣＳＦ１Ｒモノクローナル抗体（ａＣＳＦ１Ｒ）、またはアイソタイプコントロール（ｍＩｇＧ２ａ）の効果である。図３Ａは、ｍＣＳＦ１の存在下での細胞培養の０日目または４日目での抗ＣＣＲ２抗体および抗ＣＳＦ１Ｒ抗体による骨髄細胞の染色を示す一対のフローサイトメトリープロットである。
【図３Ｂ】ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの骨髄由来単球のマクロファージへのｍＣＳＦ−１依存性分化および増殖に対する、濃度が増加したＵｎｉＴＩ−０１、抗マウスＣＳＦ１Ｒモノクローナル抗体（ａＣＳＦ１Ｒ）、またはアイソタイプコントロール（ｍＩｇＧ２ａ）の効果である。図３Ｂでは、試験された各条件について増殖％がプロットされている。すべての抗体を１５μｇ／ｍｌでテストした。
【図４】骨髄由来の単球のｍＣＳＦ−１依存性分化および増殖に対する、ＵｎｉＴＩ−０１、抗マウスＣＳＦ１Ｒモノクローナル抗体（ａＣＳＦ１Ｒ）、またはアイソタイプコントロール（ｍＩｇＧ２ａ）の効果であるすべての抗体を１５μｇ／ｍｌでテストした。
【図５】フロー分析により決定された、漸増する濃度のＵｎｉＴＩ−０１の原発腫瘍内Ｍ−ＭＤＳＣおよびＭ２様マクロファージへのｉｎ  ｖｉｔｒｏ結合である。図５は、ＵｎｉＴＩ−０１を使用したＣＤ２０６＋マクロファージ、Ｍ−ＭＤＳＣ、好中球、またはＣＤ３＋Ｔ細胞の染色を示すヒストグラムのパネルである。
【図６】ＥＭＴ６およびＭＣ３８同系腫瘍モデルにおける腫瘍内骨髄細胞集団に対するＵｎｉＴＩ−０１のｉｎ  ｖｉｖｏ投与の効果である。
【図７Ａ】ＥＭＴ６同系腫瘍モデルにおけるクッパー細胞に対するＵｎｉＴＩ−０１のｉｎ  ｖｉｖｏ投与の効果である。図７Ａおよび７Ｂは、それぞれ抗体Ｆ４／８０で染色された腫瘍および肝臓組織の免疫組織化学グラフである。
【図７Ｂ】ＥＭＴ６同系腫瘍モデルにおけるクッパー細胞に対するＵｎｉＴＩ−０１のｉｎ  ｖｉｖｏ投与の効果である。図７Ａおよび７Ｂは、それぞれ抗体Ｆ４／８０で染色された腫瘍および肝臓組織の免疫組織化学グラフである。
【図７Ｃ】それぞれ腫瘍および肝臓組織のＦ４／８０陽性領域の％を示すグラフである。
【図７Ｄ】それぞれ腫瘍および肝臓組織のＦ４／８０陽性領域の％を示すグラフである。
【図８Ａ】ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＣＣＲ２陰性ＮＦＳ−６０細胞におけるＣＳＦ−１依存性細胞生存に対するＵｎｉＴＩ−０１の効果である。図８Ａでは、細胞生存率は、抗ＣＣＲ２／抗ＣＳＦ１Ｒ二重特異性抗体ＵｎｉＴＩ−０１、二価の単一特異性抗ＣＳＦ１Ｒ抗体（ａＣＳＦ１Ｒ）、または一価の単一特異性抗ＣＳＦ１Ｒ抗体（単一−ａＣＳＦ１Ｒ）のためテストされた抗体濃度をプロットしている。
【図８Ｂ】ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＣＣＲ２陰性ＮＦＳ−６０細胞におけるＣＳＦ−１依存性細胞生存に対するＵｎｉＴＩ−０１の効果である。図８Ｂは、抗ＣＣＲ２抗体および抗ＣＳＦ１Ｒ抗体によるＮＦＳ−６０細胞の染色、またはアイソタイプ対照抗体によるＮＦＳ−６０細胞の染色を示す一対のフローサイトメトリープロットである。
【図９】ＥＭＴ６モデルの腫瘍におけるＣＤ８＋Ｔ細胞浸潤に対するＵｎｉＴＩ−０１のｉｎ  ｖｉｖｏ投与の効果である。図９は、示された治療下の腫瘍におけるＣＤ３＋Ｔ細胞中の％ＣＤ８＋Ｔ細胞を示すグラフである。
【図１０Ａ】ＭＣ３８モデルの腫瘍におけるＴｒｅｇ頻度に対するＵｎｉＴＩ−０１のｉｎ  ｖｉｖｏ投与の効果である。図１０Ａは、示された治療下の腫瘍中のＣＤ４＋Ｔ細胞中の％ＦＯＸＰ３＋細胞を示すグラフである。
【図１０Ｂ】ＭＣ３８モデルの腫瘍におけるＴｒｅｇ頻度に対するＵｎｉＴＩ−０１のｉｎ  ｖｉｖｏ投与の効果である。図１０Ｂでは、腫瘍におけるＣＤ８＋Ｔ細胞／Ｔｒｅｇ比が各治療についてプロットされている。
【図１１Ａ】ＵｎｉＴＩ−０１は、ＥＭＴ６腫瘍モデルにおいて抗ＰＤＬ１抗体と組み合わせて治療した場合の抗腫瘍効果、腫瘍退縮および生存率の向上を示す。図１１Ａは、各治療の腫瘍体積を示すグラフのパネルである。
【図１１Ｂ】ＵｎｉＴＩ−０１は、ＥＭＴ６腫瘍モデルにおいて抗ＰＤＬ１抗体と組み合わせて治療した場合の抗腫瘍効果、腫瘍退縮および生存率の向上を示す。図１１Ｂは、示された治療下での生存率を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【０１０６】
ＴＡＭは循環単球に由来し、腫瘍への補充は腫瘍由来の走化性因子によって促進される。ＴＡＭは、Ｂ細胞およびＴ細胞の活性化の阻害、腫瘍関連抗原提示の阻害、細胞傷害性顆粒放出の阻害、血管新生の増加、広範な成長因子および血管新生促進因子の分泌などの応答を引き起こすことにより、腫瘍細胞の増殖と転移を促進できる（例えば、Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ＆Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２０１５）１２，１−４；およびＮｏｙ，Ｒｏｙ  ｅｔ  ａｌ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，Ｖｏｌｕｍｅ４１，Ｉｓｓｕｅ１，４９−６１；およびＱｕａｔｒｏｍｏｎｉ  ｅｔ  ａｌ．Ａｍ  Ｊ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｒｅｓ．２０１２；４（４）：３７６−３８９を参照）。その結果、ＴＡＭの数が多い多くの腫瘍は、腫瘍成長率、局所増殖、遠隔転移が増加している。したがって、ＴＡＭを枯渇させるか、その活性を阻害する治療法は有用であろう。
【０１０７】
特定の用語を以下に定義する。
【０１０８】
本明細書で使用される場合、親配列の「変異体」という用語は、親配列と実質的に同一のアミノ酸配列を有する配列、またはその断片を指す。いくつかの実施形態では、変異体は機能的変異体である。
【０１０９】
本明細書で使用されるとき、冠詞「ａ」および「ａｎ」は、冠詞の文法的対象の１つまたは複数、例えば、少なくとも１つを指す。本明細書で「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語と組み合わせて使用される場合の「ａ」または「ａｎ」という語の使用は、「１つ」を意味する場合があるが、「１つ以上」、「少なくとも１つ」「１つまたは１つより多い」の意味とも一致する。
【０１１０】
本明細書で使用される場合、「約」および「およそ」は、一般に、測定の性質または精度を考慮して、測定された量の許容できる程度の誤差を意味する。例示的な誤差の程度は、与えられた値の範囲の２０パーセント（％）以内、典型的には１０％以内、より典型的には５％以内である。
【０１１１】
本明細書で使用される場合、「抗体分子」は、少なくとも１つの免疫グロブリン可変領域配列を含むタンパク質、例えば、免疫グロブリン鎖またはその断片を指す。抗体分子には、抗体（例えば、全長の抗体）および抗体断片が含まれる。実施形態では、抗体分子は、全長の抗体の抗原結合断片または機能的断片、または全長の免疫グロブリン鎖を含む。例えば、全長の抗体は、天然に存在するか、正常な免疫グロブリン遺伝子断片の組換えプロセスによって形成される免疫グロブリン（Ｉｇ）分子（例えば、ＩｇＧ抗体）である。実施形態では、抗体分子とは、抗体断片などの免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な抗原結合部分を指す。抗体断片、例えば、機能的断片は、抗体の一部、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）２、可変断片（Ｆｖ）、ドメイン抗体（ｄＡｂ）、または単一鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。機能的抗体断片は、無傷の（例えば、全長の）抗体によって認識されるものと同じ抗原に結合する。「抗体断片」または「機能的断片」という用語にはまた、重鎖および軽鎖の可変領域からなる「Ｆｖ」断片、または軽鎖および重鎖可変領域がペプチドリンカー（「ｓｃＦｖタンパク質」）によって接続されている組換え単鎖ポリペプチド分子などの可変領域からなる単離された断片も含まれる。いくつかの実施形態では、抗体断片は、Ｆｃ断片または単一アミノ酸残基などの抗原結合活性を持たない抗体の部分を含まない。例示的な抗体分子には、全長の抗体および抗体断片、例えば、ｄＡｂ（ドメイン抗体）、単鎖、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、およびＦ（ａｂ’）２断片、および単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）が含まれる。
【０１１２】
本明細書で使用する場合、「免疫グロブリン可変領域配列」とは、免疫グロブリン可変領域の構造を形成できるアミノ酸配列を指す。例えば、配列は、天然に存在する可変領域のアミノ酸配列のすべてまたは一部を含んでもよい。例えば、配列は、１つ、２つ、またはそれ以上のＮまたはＣ末端アミノ酸を含んでも含まなくてもよく、またはタンパク質構造の形成に適合する他の変化を含んでもよい。
【０１１３】
実施形態では、抗体分子は単一特異性であり、例えば、単一のエピトープに対する結合特異性を含む。いくつかの実施形態では、抗体分子は多重特異性であり、例えば、複数の免疫グロブリン可変領域配列を含み、第１の免疫グロブリン可変領域配列は第１のエピトープに対する結合特異性を有し、第２の免疫グロブリン可変領域配列は第２のエピトープに対する結合特異性を有する。いくつかの実施形態では、抗体分子は二重特異性抗体分子である。本明細書で使用される場合、「二重特異性抗体分子」は、２つ以上（例えば、２つ、３つ、４つ、またはそれ以上）のエピトープおよび／または抗原に対して特異性を有する抗体分子を指す。
【０１１４】
本明細書で使用される場合、「抗原」（Ａｇ）は、例えば、特定の免疫細胞の活性化および／または抗体の生成を含む、免疫応答を引き起こすことができる分子を指す。ほとんどすべてのタンパク質またはペプチドを含む任意の高分子が抗原になり得る。抗原は、ゲノム組換えまたはＤＮＡから誘導することもできる。例えば、免疫応答を誘発できるタンパク質をコードするヌクレオチド配列または部分ヌクレオチド配列を含むいずれかのＤＮＡは、「抗原」をコードする。実施形態において、抗原は、遺伝子の全長のヌクレオチド配列によってのみコードされる必要はなく、また、抗原はまったく遺伝子によってコードされる必要もない。実施形態において、抗原は、合成され得るか、生物学的サンプル、例えば、組織サンプル、腫瘍サンプル、細胞、または他の生物学的成分を有する流体に由来し得る。本明細書で使用される場合、「腫瘍抗原」または交換可能に、「癌の抗原」は、癌、例えば、免疫応答を引き起こすことができる癌細胞または腫瘍微小環境に存在するまたは関連するいずれかの分子を含む。本明細書で使用される場合、「免疫細胞抗原」は、免疫応答を誘発することができる免疫細胞に存在するか、免疫細胞と関連するいずれかの分子を含む。
【０１１５】
抗体分子の「抗原結合部位」または「結合部分」とは、抗原の結合に関与する抗体分子の一部、例えば、免疫グロブリン（Ｉｇ）分子を指す。実施形態では、抗原結合部位は、重鎖（Ｈ）および軽鎖（Ｌ）の可変（Ｖ）領域のアミノ酸残基によって形成される。超可変領域と呼ばれる重鎖と軽鎖の可変領域内の高度に発散する３つのストレッチは、「フレームワーク領域」（ＦＲ）と呼ばれるより保存された隣接しているストレッチの間に配置される。ＦＲは、免疫グロブリンの超可変領域の間、およびそれに隣接して自然に見られるアミノ酸配列である。実施形態では、抗体分子において、軽鎖の３つの超可変領域と重鎖の３つの超可変領域は、３次元空間で互いに対して配置されて、抗原結合表面を形成し、これは、結合した抗原の３次元表面に相補的である。重鎖および軽鎖のそれぞれの３つの超可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」と呼ばれる。フレームワーク領域とＣＤＲは、例えば、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２、およびＣｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７に定義され、記述されている。各可変鎖（例えば、可変重鎖および可変軽鎖）は、通常、３つのＣＤＲと４つのＦＲで構成され、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、およびＦＲ４というアミノ酸の順に配列されている。
【０１１６】
本明細書で使用される場合、「癌」は、あらゆる種類の発癌プロセスおよび／または癌性増殖を包含することができる。実施形態では、癌には、原発腫瘍ならびに転移組織または悪性に形質転換された細胞、組織、または臓器が含まれる。実施形態では、癌は、癌のすべての組織病理学および病期、例えば、侵襲性／重症度の病期を包含する。実施形態では、癌には再発性癌および／または抵抗性癌が含まれる。「癌」と「腫瘍」という用語は互換的に使用できる。例えば、両方の用語は固形腫瘍と液体腫瘍を包含する。本明細書で使用される場合、「癌」または「腫瘍」という用語には、前癌性ならびに悪性の癌および腫瘍が含まれる。
【０１１７】
本発明の組成物および方法は、特定の配列、またはそれと実質的に同一または類似の配列、例えば、特定の配列と少なくとも８５％、９０％、９５％以上の配列を有するポリペプチドおよび核酸を包含する。アミノ酸配列の文脈において、「実質的に同一」という用語は、本明細書において、第１および第２のアミノ酸配列が共通の構造ドメインおよび／または共通の機能的活性を有することができるよう、第２のアミノ酸配列の位置合わせされたアミノ酸残基とｉ）同一またはｉｉ）その保存的置換である十分または最小数のアミノ酸残基を含む第１のアミノ酸を指す。例えば、参照配列、例えば、本明細書で提供される配列と少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する共通の構造ドメインを含むアミノ酸配列がある。
【０１１８】
ヌクレオチド配列の文脈において、「実質的に同一」という用語は、本明細書において、第１および第２のヌクレオチド配列が、共通の機能的活性を有するポリペプチドをコードするか、共通の構造的ポリペプチドドメインまたは共通の機能的ポリペプチド活性をコードするように、第２の核酸配列の整列したヌクレオチドと同一である十分なまたは最小数のヌクレオチドを含む第１の核酸配列を指すために使用される。例えば、参照配列、例えば、本明細書で提供される配列に対して少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列がある。
【０１１９】
配列間の相同性または配列同一性の計算（これらの用語は本明細書では互換的に使用される）は、次のように実行される。
【０１２０】
２つのアミノ酸配列、または２つの核酸配列の同一性率を決定するために、配列は最適な比較目的のために整列される（例えば、ギャップは最適な配列のために第１および第２のアミノ酸または核酸配列の一方または両方に導入することができ、非相同配列は比較のために無視できる）。好ましい実施形態では、比較のために整列された参照配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、６０％、さらにより好ましくは少なくとも７０％、８０％、９０％、１００％である。次に、対応するアミノ酸の位置またはヌクレオチドの位置のアミノ酸残基またはヌクレオチドが比較される。第１の配列の位置が、第２の配列の対応する位置と同じアミノ酸残基またはヌクレオチドで占められている場合、分子はその位置で同一である（本明細書で使用する場合、アミノ酸または核酸の「同一性」はアミノ酸または核酸の「相同性」と同等である）。
【０１２１】
２つの配列間の同一性率は、２つの配列の最適なアライメントのために導入する必要があるギャップの数と各ギャップの長さを考慮して、シーケンスによって共有される同じ位置の数の関数である。
【０１２２】
２つの配列間の配列の比較および同一性率の決定は、数学的アルゴリズムを用いて達成することができる。好ましい実施形態では、２つのアミノ酸配列間の同一性率は、ＧＣＧソフトウェアパッケージのＧＡＰプログラムに組み込まれたＮｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ（（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４４−４５３）のアルゴリズム（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで入手可能）を使用して決定され、Ｂｌｏｓｓｕｍ  ６２マトリックスまたはＰＡＭ２５０マトリックスのいずれか、１６、１４、１２、１０、８、６、または４のギャップウェイトと、１、２、３、４、５、または６の長さウェイトを使用する。さらに別の好ましい実施形態では、２つのヌクレオチド配列間の同一性率は、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックスおよびギャップウェイト４０、５０、６０、７０、または８０、長さウェイト１、２、３、４、５、または６を使用して、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで入手可能）のＧＡＰプログラムを使用して、決定される。特に好ましいパラメータのセット（および特に指定のない限り使用されるべきパラメータ）は、ギャップペナルティ１２、ギャップ拡張ペナルティ４、フレームシフトギャップペナルティ５のブロッサム６２スコアリングマトリックスである。
【０１２３】
２つのアミノ酸またはヌクレオチド配列間の同一性率は、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれているＥ．ＭｅｙｅｒｓおよびＷ．Ｍｉｌｌｅｒ（（１９８９）ＣＡＢＩＯＳ，４：１１−１７）のアルゴリズムを使用して決定でき、ＰＡＭ１２０ウェイト残余表、ギャップ長ペナルティ１２、ギャップペナルティ４を用いる。
【０１２４】
本明細書に記載の核酸およびタンパク質配列は、例えば、「他のファミリーメンバーまたは関連配列を同定するために、公開データベースに対して検索を実行するための「クエリ配列」として使用できる。そのような検索は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ、ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−１０のＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）を使用して実行できる。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索は、ＮＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝１００、語の長さ＝１２で実施して、本発明の核酸（例えば、配列番号１）分子に相同なヌクレオチド配列を得ることができる。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、語の長さ＝３で実行して、本発明のタンパク質分子に相同なアミノ酸配列を得ることができる。比較のためにギャップのあるアラインメントを取得するには、Ｇａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２に記載されているように、利用できる。ＢＬＡＳＴおよびＧａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、それぞれのプログラムのデフォルトパラメータ（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）を使用することができる。ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖを参照されたい。
【０１２５】
本発明の分子は、追加の保存的または非必須アミノ酸置換を有してもよく、それらはその機能に実質的な影響を及ぼさないことが理解される。
【０１２６】
「アミノ酸」という用語は、アミノ官能性と酸官能性の両方を含み、天然アミノ酸のポリマーに含まれることができる、天然または合成のすべての分子を包含することを意図している。例示的なアミノ酸には、天然アミノ酸；その類似体、誘導体および同族体；変異体側鎖を有するアミノ酸類似体；および前述のいずれかのすべての立体異性体が含まれる。本明細書で使用する場合、「アミノ酸」という用語には、Ｄ−またはＬ−光学異性体およびペプチド模倣物の両方が含まれる。
【０１２７】
「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置換されるものである。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは当技術分野で定義されている。これらのファミリーには、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）のアミノ酸が含まれる。
【０１２８】
用語「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」（単鎖の場合）は、本明細書では互換的に使用され、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指す。ポリマーは、線状でも分岐していてもよく、修飾アミノ酸を含んでもよく、非アミノ酸によって中断されてもよい。この用語には、修飾されたアミノ酸ポリマーも含まれる。例えば、ジスルフィド結合の形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または標識成分との結合などの他の操作が挙げられる。ポリペプチドは、天然源から単離することができ、真核生物または原核生物の宿主から組換え技術により産生することができ、または合成手順の産物であり得る。
【０１２９】
用語「核酸」、「核酸配列」、「ヌクレオチド配列」、または「ポリヌクレオチド配列」、および「ポリヌクレオチド」は互換的に使用される。それらは、デオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチド、またはそれらの類似体のいずれかの長さのヌクレオチドのポリマー形態を指す。ポリヌクレオチドは、一本鎖または二本鎖のいずれかであり得、一本鎖の場合、コード鎖または非コード（アンチセンス）鎖であり得る。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチドおよびヌクレオチド類似体などの修飾ヌクレオチドを含んでもよい。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド成分によって中断される場合がある。ポリヌクレオチドは、標識成分との結合などにより、重合後にさらに修飾されてもよい。核酸は、組換えポリヌクレオチド、またはゲノム、ｃＤＮＡ、半合成、または合成起源のポリヌクレオチドであってもよく、これらは自然には存在しないか、非天然配列で別のポリヌクレオチドに結合している。
【０１３０】
本明細書で使用される場合、「単離された」という用語は、その元の環境または自然環境（例えば、自然に発生する場合は自然環境）から除去されている材料を指す。例えば、生きている動物に存在する天然のポリヌクレオチドまたはポリペプチドは単離されないが、自然のシステムに共存する材料の一部またはすべてから人間の介入によって分離された同じポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、単離されている。そのようなポリヌクレオチドはベクターの一部であり得、および／またはそのようなポリヌクレオチドまたはポリペプチドは組成物の一部であり得、そのようなベクターまたは組成物はそれが自然に見出される環境の一部ではないという点で依然として単離され得る。
【０１３１】
本明細書で使用する場合、「免疫抑制性骨髄細胞」または「ＩＭＣ」という用語は、一般に、免疫抑制を促進する骨髄系統の細胞（例えば、腫瘍微小環境で）を指す（例えば、Ｔ細胞活性化の阻害、Ｔ細胞生存の阻害、制御性Ｔ細胞の誘導および募集の促進による）。免疫抑制性骨髄細胞には、例えば、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）および骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）が含まれる。
【０１３２】
本明細書で使用する場合、「腫瘍関連マクロファージ」または「ＴＡＭ」という用語は、一般に、癌、例えば、腫瘍の微小環境に存在するマクロファージを指す。
【０１３３】
本明細書で使用する場合、「ＴＡＭを減らす」という用語は一般に、ＴＡＭの数を減らすことを指す。減らすことは、（例えば、本明細書に記載の多重特異性分子の投与前のＴＡＭの数と比較して（例えば、本明細書に記載の多重特異性分子の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０回以上の投与の前に））腫瘍または腫瘍の近くのＴＡＭの数を減らすことを含む。減らすことは、（例えば、本明細書に記載の多重特異性分子の投与前のＴＡＭの数と比較して（例えば、本明細書に記載の多重特異性分子の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０回以上の投与の前に））ＴＡＭの数を減らす（例えば、１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、１００％、すべて、または実質的に）ことを含む。
【０１３４】
本明細書で使用される場合、「骨髄由来抑制細胞」または「ＭＤＳＣ」という用語は、一般に、免疫抑制を促進することができ、一般にＣＤ３３、ＣＤ１１ｂおよびＣＤ４５を発現する骨髄由来の細胞を指す。ＭＤＳＣの様々な亜集団が定義されている。例えば、単球ＭＤＳＣ（Ｍ−ＭＤＳＣ）は一般にＣＤ１４およびＣＤ１２４の発現とＨＬＡ−ＤＲの低発現に関連している。いくつかの実施形態では、ＭＤＳＣ集団はＭＯ−ＭＤＳＣ集団である。多形核ＭＤＳＣ（ＰＭＮ−ＭＤＳＣ）は、ＣＤ１５、ＣＤ６６ｂ、およびＣＤ１２４の発現に関連しており、ＨＬＡ−ＤＲの発現関連していない。未熟ＭＤＳＣ（Ｉ−ＭＤＳＣ）は、ＣＤ１１７およびＣＤ３４の発現に関連しており、ＬＩＮおよびＨＬＡ−ＤＲの発現には関連していない。例えば、Ｕｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（２０１５）ＪＣＩ  Ｖｏｌ  １２５（９）、ｐａｇｅ  ３３６５を参照されたい。
【０１３５】
本明細書で使用される場合、「ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞」という用語は、細胞表面でＣＳＦ１ＲとＣＣＲ２の両方を発現する細胞を指す。「ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞」という用語は、細胞表面でＣＣＲ２ではなくＣＳＦ１Ｒを発現している細胞を指す。「ＣＳＦ１Ｒ陰性、ＣＣＲ２陽性細胞」という用語は、細胞表面にＣＳＦ１ＲではなくＣＣＲ２を発現している細胞を指す。
【０１３６】
本明細書で使用する場合、結合部分、例えば、抗体分子は、結合部分、例えば、抗体分子が標的上の単一のエピトープに結合する場合、標的に一価に結合する。いくつかの実施形態では、結合部分は、標的に対して１つのみの抗原結合ドメインを含む。いくつかの実施形態において、結合部分の１分子は、標的の１分子のみに結合することができる。
【０１３７】
本明細書で使用される場合、結合部分、例えば、抗体分子は、結合部分、例えば、抗体分子が標的上の２つのエピトープに結合する場合、標的に二価的に結合する。一部の実施形態では、２つのエピトープは同一である。いくつかの実施形態では、２つのエピトープは異なる。いくつかの実施形態では、結合部分は、標的に対する２つの抗原結合ドメインを含む。いくつかの実施形態において、結合部分の１つの分子は、標的の２つの分子に結合することができる。
【０１３８】
本発明の様々な態様を以下でさらに詳細に説明する。追加の定義は、本明細書全体に記載されている。
【０１３９】
抗原
本開示のＴＡＭ標的化抗原には、例えば、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ２、ＣＸＣＲ２、ＣＤ６８、ＣＤ１６３、ＣＸ３ＣＲ１、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ２０４、ＣＤ５２、および葉酸受容体ベータが含まれる。抗原を標的化するＴＡＭの例示的なアミノ酸配列は、本明細書で提供される。
【０１４０】
ＣＳＦ１Ｒ
ＣＳＦ１Ｒ（マクロファージコロニー刺激因子１受容体としても知られている）は、ＣＳＦ１およびＩＬ３４の細胞表面受容体として作用するチロシンプロテインキナーゼであり、造血前駆細胞、特にマクロファージや単球などの単核食細胞の生存、増殖、分化の調節に重要な役割を果たす。ＣＳＦ１Ｒは、ＩＬ３４およびＣＳＦ１に応答して炎症性ケモカインの放出を促進し、それによって自然免疫および炎症プロセスで重要な役割を果たす。例示的なＣＳＦ１Ｒ未成熟アミノ酸配列は、配列番号８７および８８で提供される。
【０１４１】
ＣＳＦ１Ｒ未熟アミノ酸配列アイソフォーム１（識別子：Ｐ０７３３３−１）：
ＭＧＰＧＶＬＬＬＬＬＶＡＴＡＷＨＧＱＧＩＰＶＩＥＰＳＶＰＥＬＶＶＫＰＧＡＴＶＴＬＲＣＶＧＮＧＳＶＥＷＤＧＰＰＳＰＨＷＴＬＹＳＤＧＳＳＳＩＬＳＴＮＮＡＴＦＱＮＴＧＴＹＲＣＴＥＰＧＤＰＬＧＧＳＡＡＩＨＬＹＶＫＤＰＡＲＰＷＮＶＬＡＱＥＶＶＶＦＥＤＱＤＡＬＬＰＣＬＬＴＤＰＶＬＥＡＧＶＳＬＶＲＶＲＧＲＰＬＭＲＨＴＮＹＳＦＳＰＷＨＧＦＴＩＨＲＡＫＦＩＱＳＱＤＹＱＣＳＡＬＭＧＧＲＫＶＭＳＩＳＩＲＬＫＶＱＫＶＩＰＧＰＰＡＬＴＬＶＰＡＥＬＶＲＩＲＧＥＡＡＱＩＶＣＳＡＳＳＶＤＶＮＦＤＶＦＬＱＨＮＮＴＫＬＡＩＰＱＱＳＤＦＨＮＮＲＹＱＫＶＬＴＬＮＬＤＱＶＤＦＱＨＡＧＮＹＳＣＶＡＳＮＶＱＧＫＨＳＴＳＭＦＦＲＶＶＥＳＡＹＬＮＬＳＳＥＱＮＬＩＱＥＶＴＶＧＥＧＬＮＬＫＶＭＶＥＡＹＰＧＬＱＧＦＮＷＴＹＬＧＰＦＳＤＨＱＰＥＰＫＬＡＮＡＴＴＫＤＴＹＲＨＴＦＴＬＳＬＰＲＬＫＰＳＥＡＧＲＹＳＦＬＡＲＮＰＧＧＷＲＡＬＴＦＥＬＴＬＲＹＰＰＥＶＳＶＩＷＴＦＩＮＧＳＧＴＬＬＣＡＡＳＧＹＰＱＰＮＶＴＷＬＱＣＳＧＨＴＤＲＣＤＥＡＱＶＬＱＶＷＤＤＰＹＰＥＶＬＳＱＥＰＦＨＫＶＴＶＱＳＬＬＴＶＥＴＬＥＨＮＱＴＹＥＣＲＡＨＮＳＶＧＳＧＳＷＡＦＩＰＩＳＡＧＡＨＴＨＰＰＤＥＦＬＦＴＰＶＶＶＡＣＭＳＩＭＡＬＬＬＬＬＬＬＬＬＬＹＫＹＫＱＫＰＫＹＱＶＲＷＫＩＩＥＳＹＥＧＮＳＹＴＦＩＤＰＴＱＬＰＹＮＥＫＷＥＦＰＲＮＮＬＱＦＧＫＴＬＧＡＧＡＦＧＫＶＶＥＡＴＡＦＧＬＧＫＥＤＡＶＬＫＶＡＶＫＭＬＫＳＴＡＨＡＤＥＫＥＡＬＭＳＥＬＫＩＭＳＨＬＧＱＨＥＮＩＶＮＬＬＧＡＣＴＨＧＧＰＶＬＶＩＴＥＹＣＣＹＧＤＬＬＮＦＬＲＲＫＡＥＡＭＬＧＰＳＬＳＰＧＱＤＰＥＧＧＶＤＹＫＮＩＨＬＥＫＫＹＶＲＲＤＳＧＦＳＳＱＧＶＤＴＹＶＥＭＲＰＶＳＴＳＳＮＤＳＦＳＥＱＤＬＤＫＥＤＧＲＰＬＥＬＲＤＬＬＨＦＳＳＱＶＡＱＧＭＡＦＬＡＳＫＮＣＩＨＲＤＶＡＡＲＮＶＬＬＴＮＧＨＶＡＫＩＧＤＦＧＬＡＲＤＩＭＮＤＳＮＹＩＶＫＧＮＡＲＬＰＶＫＷＭＡＰＥＳＩＦＤＣＶＹＴＶＱＳＤＶＷＳＹＧＩＬＬＷＥＩＦＳＬＧＬＮＰＹＰＧＩＬＶＮＳＫＦＹＫＬＶＫＤＧＹＱＭＡＱＰＡＦＡＰＫＮＩＹＳＩＭＱＡＣＷＡＬＥＰＴＨＲＰＴＦＱＱＩＣＳＦＬＱＥＱＡＱＥＤＲＲＥＲＤＹＴＮＬＰＳＳＳＲＳＧＧＳＧＳＳＳＳＥＬＥＥＥＳＳＳＥＨＬＴＣＣＥＱＧＤＩＡＱＰＬＬＱＰＮＮＹＱＦＣ
配列番号８７
ＣＳＦ１Ｒ未熟アミノ酸配列アイソフォーム２（識別子：Ｐ０７３３３−２）：
ＭＧＰＧＶＬＬＬＬＬＶＡＴＡＷＨＧＱＧＩＰＶＩＥＰＳＶＰＥＬＶＶＫＰＧＡＴＶＴＬＲＣＶＧＮＧＳＶＥＷＤＧＰＰＳＰＨＷＴＬＹＳＤＧＳＳＳＩＬＳＴＮＮＡＴＦＱＮＴＧＴＹＲＣＴＥＰＧＤＰＬＧＧＳＡＡＩＨＬＹＶＫＤＰＡＲＰＷＮＶＬＡＱＥＶＶＶＦＥＤＱＤＡＬＬＰＣＬＬＴＤＰＶＬＥＡＧＶＳＬＶＲＶＲＧＲＰＬＭＲＨＴＮＹＳＦＳＰＷＨＧＦＴＩＨＲＡＫＦＩＱＳＱＤＹＱＣＳＡＬＭＧＧＲＫＶＭＳＩＳＩＲＬＫＶＱＫＶＩＰＧＰＰＡＬＴＬＶＰＡＥＬＶＲＩＲＧＥＡＡＱＩＶＣＳＡＳＳＶＤＶＮＦＤＶＦＬＱＨＮＮＴＫＬＡＩＰＱＱＳＤＦＨＮＮＲＹＱＫＶＬＴＬＮＬＤＱＶＤＦＱＨＡＧＮＹＳＣＶＡＳＮＶＱＧＫＨＳＴＳＭＦＦＲＶＶＧＴＰＳＰＳＬＣＰＡ
配列番号８８
ＣＣＲ２
ＣＣＲ２（Ｃ−Ｃケモカイン受容体タイプ２とも呼ばれる）は、ＣＣＬ２、ＣＣＬ７、およびＣＣＬ１３ケモカインのＧタンパク質共役受容体である。ＣＣＲ２は、単球／マクロファージおよびＴ細胞の動員において機能することが知られている。ＣＣＲ２は単球およびＴ細胞の小集団で発現し、マウスとヒトでほぼ同一の発現パターンを示す（Ｍａｃｋ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００１；１６６：４６９７−４７０４）。例示的なＣＣＲ２アミノ酸配列は、配列番号８９および９０に提供されている。
【０１４２】
ＣＣＲ２アミノ酸配列アイソフォームＡ（識別子：Ｐ４１５９７−１）：
ＭＬＳＴＳＲＳＲＦＩＲＮＴＮＥＳＧＥＥＶＴＴＦＦＤＹＤＹＧＡＰＣＨＫＦＤＶＫＱＩＧＡＱＬＬＰＰＬＹＳＬＶＦＩＦＧＦＶＧＮ
ＭＬＶＶＬＩＬＩＮＣＫＫＬＫＣＬＴＤＩＹＬＬＮＬＡＩＳＤＬＬＦＬＩＴＬＰＬＷＡＨＳＡＡＮＥＷＶＦＧＮＡＭＣＫＬＦＴＧＬＹ
ＨＩＧＹＦＧＧＩＦＦＩＩＬＬＴＩＤＲＹＬＡＩＶＨＡＶＦＡＬＫＡＲＴＶＴＦＧＶＶＴＳＶＩＴＷＬＶＡＶＦＡＳＶＰＧＩＩＦＴＫ
ＣＱＫＥＤＳＶＹＶＣＧＰＹＦＰＲＧＷＮＮＦＨＴＩＭＲＮＩＬＧＬＶＬＰＬＬＩＭＶＩＣＹＳＧＩＬＫＴＬＬＲＣＲＮＥＫＫＲＨＲ
ＡＶＲＶＩＦＴＩＭＩＶＹＦＬＦＷＴＰＹＮＩＶＩＬＬＮＴＦＱＥＦＦＧＬＳＮＣＥＳＴＳＱＬＤＱＡＴＱＶＴＥＴＬＧＭＴＨＣＣＩ
ＮＰＩＩＹＡＦＶＧＥＫＦＲＳＬＦＨＩＡＬＧＣＲＩＡＰＬＱＫＰＶＣＧＧＰＧＶＲＰＧＫＮＶＫＶＴＴＱＧＬＬＤＧＲＧＫＧＫＳＩ
ＧＲＡＰＥＡＳＬＱＤＫＥＧＡ
配列番号８９
ＣＣＲ２アミノ酸配列アイソフォームＢ（識別子：Ｐ４１５９７−２）：
ＭＬＳＴＳＲＳＲＦＩＲＮＴＮＥＳＧＥＥＶＴＴＦＦＤＹＤＹＧＡＰＣＨＫＦＤＶＫＱＩＧＡＱＬＬＰＰＬＹＳＬＶＦＩＦＧＦＶＧＮ
ＭＬＶＶＬＩＬＩＮＣＫＫＬＫＣＬＴＤＩＹＬＬＮＬＡＩＳＤＬＬＦＬＩＴＬＰＬＷＡＨＳＡＡＮＥＷＶＦＧＮＡＭＣＫＬＦＴＧＬＹ
ＨＩＧＹＦＧＧＩＦＦＩＩＬＬＴＩＤＲＹＬＡＩＶＨＡＶＦＡＬＫＡＲＴＶＴＦＧＶＶＴＳＶＩＴＷＬＶＡＶＦＡＳＶＰＧＩＩＦＴＫ
ＣＱＫＥＤＳＶＹＶＣＧＰＹＦＰＲＧＷＮＮＦＨＴＩＭＲＮＩＬＧＬＶＬＰＬＬＩＭＶＩＣＹＳＧＩＬＫＴＬＬＲＣＲＮＥＫＫＲＨＲ
ＡＶＲＶＩＦＴＩＭＩＶＹＦＬＦＷＴＰＹＮＩＶＩＬＬＮＴＦＱＥＦＦＧＬＳＮＣＥＳＴＳＱＬＤＱＡＴＱＶＴＥＴＬＧＭＴＨＣＣＩ
ＮＰＩＩＹＡＦＶＧＥＫＦＲＲＹＬＳＶＦＦＲＫＨＩＴＫＲＦＣＫＱＣＰＶＦＹＲＥＴＶＤＧＶＴＳＴＮＴＰＳＴＧＥＱＥＶＳＡＧＬ
配列番号９０
ＣＸＣＲ２
ＣＸＣＲ２（インターロイキン−８受容体としても知られている）は、好中球走化性因子であるＩＬ８のＧタンパク質共役受容体である。ＩＬ８の受容体への結合は、好中球の活性化を引き起こす。この応答は、ホスファチジルイノシトールカルシウムセカンドメッセンジャーシステムを活性化するＧタンパク質を介して仲介される。ＣＸＣＲ２は、高い親和性でＩＬ−８に結合し、またＣＸＣＬ３、ＧＲＯ／ＭＧＳＡおよびＮＡＰ−２にも高い親和性で結合する。ＣＸＣＲ２は循環中の好中球に高レベルで発現し、炎症部位への移動を指示するために重要である（Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．２０１２；１２２（９）：３１２７−３１４４）。例示的なＣＸＣＲ２アミノ酸配列は、配列番号９１に提供されている。
【０１４３】
ＣＸＣＲ２アミノ酸配列（識別子：Ｐ２５０２５−１）：
ＭＥＤＦＮＭＥＳＤＳＦＥＤＦＷＫＧＥＤＬＳＮＹＳＹＳＳＴＬＰＰＦＬＬＤＡＡＰＣＥＰＥＳＬＥＩＮＫＹＦＶＶＩＩＹＡＬＶＦＬ
ＬＳＬＬＧＮＳＬＶＭＬＶＩＬＹＳＲＶＧＲＳＶＴＤＶＹＬＬＮＬＡＬＡＤＬＬＦＡＬＴＬＰＩＷＡＡＳＫＶＮＧＷＩＦＧＴＦＬＣＫＶＶＳＬＬＫＥＶＮＦＹＳＧＩＬＬＬＡＣＩＳＶＤＲＹＬＡＩＶＨＡＴＲＴＬＴＱＫＲＹＬＶＫＦＩＣＬＳＩＷＧＬＳＬＬＬＡＬＰＶ
ＬＬＦＲＲＴＶＹＳＳＮＶＳＰＡＣＹＥＤＭＧＮＮＴＡＮＷＲＭＬＬＲＩＬＰＱＳＦＧＦＩＶＰＬＬＩＭＬＦＣＹＧＦＴＬＲＴＬＦＫ
ＡＨＭＧＱＫＨＲＡＭＲＶＩＦＡＶＶＬＩＦＬＬＣＷＬＰＹＮＬＶＬＬＡＤＴＬＭＲＴＱＶＩＱＥＴＣＥＲＲＮＨＩＤＲＡＬＤＡＴＥＩＬＧＩＬＨＳＣＬＮＰＬＩＹＡＦＩＧＱＫＦＲＨＧＬＬＫＩＬＡＩＨＧＬＩＳＫＤＳＬＰＫＤＳＲＰＳＦＶＧＳＳＳＧＨＴＳＴＴＬ
配列番号９１
例示的な抗体
ＴＡＭ抗原に結合する例示的な抗体は、本明細書の全体および以下にて提供される。例示的な抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、本明細書、および国際公開第２００９０２６３０３号；国際公開第２０１１１２３３８１号；国際公開第２０１６２０７３１２号；国際公開第２０１６１０６１８０号；米国特許出願公開第２０１６０２２０６６９号；米国特許出願公開第２０１６０３２６２５４号；国際公開第２０１３１６９２６４号；国際公開第２０１３０８７６９９号；国際公開第２０１１１４０２４９号；国際公開第２０１１１３１４０７号；国際公開第２０１１１２３３８１号；国際公開第２０１１１０７５５３号；および国際公開第２０１１０７００２４号に記載され、それらのすべては参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。例示的なＣＣＲ２抗体は、本明細書および国際公開第２０１３１９２５９６号；国際公開第２０１００２１６９７号；国際公開第２００１０５７２２６号；および国際公開第２１９９７０３１９４９号に記載され、そのすべてが参照により本明細書に組み込まれる。例示的なＣＸＣＲ２抗体は、国際公開第２０１４１７０３１７号および米国特許出願公開第２０１６００６０３４７号（例えば、ａ）配列番号１４（軽鎖）および配列番号１５（重鎖）；ｂ）配列番号２４（軽鎖）および配列番号２５（重鎖）；ｃ）配列番号３４（軽鎖）および配列番号３５（重鎖）；ｄ）配列番号４４（軽鎖）および配列番号４５（重鎖）；ｅ）配列番号５４（軽鎖）および配列番号５５（重鎖）；ｆ）配列番号６４（軽鎖）および配列番号６５（重鎖）；ｇ）配列番号７４（軽鎖）および配列番号７５（重鎖）；ｈ）配列番号８４（軽鎖）および配列番号８５（重鎖）を参照）に記載されており、これらはすべて参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。例示的な抗ＣＤ１６３抗体は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１２０２５８１０７号（例えば、ＭＡＣ２１５８、ＭＡＣ２−４８を参照）で提供される。例示的な抗ＣＤ５２抗体は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２００５０１５２８９８号に記載されている。例示的な抗葉酸抗体は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第９５２２１９６号に記載されている。例示的な抗ＣＤ５２抗体は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２００５０１５２８９８号に記載されている。例示的な抗ＭＡＲＣＯ抗体は、国際公開第２０１６１９６６１２号に記載されており、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【０１４４】
抗体分子
一実施形態では、多重特異性分子は、第１の腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）抗原に結合する抗体分子、また、第２のＴＡＭ抗原に結合する抗体分子を含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のＴＡＭ抗原は、例えば、哺乳動物、例えば、ヒトである。例えば、抗体分子は、ＴＡＭ抗原上のエピトープ、例えば、線状または立体構造エピトープに特異的に結合する。
【０１４５】
一実施形態では、多重特異性分子は、第１骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）抗原に結合する抗体分子、および第２のＭＤＳＣ抗原に結合する抗体分子を含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のＭＤＳＣ抗原は、例えば、哺乳動物、例えば、ヒトである。例えば、抗体分子は、ＭＤＳＣ抗原上のエピトープ、例えば、線形または立体構造エピトープに特異的に結合する。
【０１４６】
実施形態では、抗体分子は単一特異性抗体分子であり、単一のエピトープに結合する。例えば、それぞれが同じエピトープに結合する複数の免疫グロブリン可変領域配列を有する単一特異性抗体分子が挙げられる。
【０１４７】
実施形態では、抗体分子は多重特異性抗体分子であり、例えば、複数の免疫グロブリン可変領域配列を含み、複数の第１の免疫グロブリン可変領域配列は第１のエピトープに対する結合特異性を有し、複数の第２の免疫グロブリン可変領域配列は第２のエピトープに対する結合特異性を有する。実施形態では、第１および第２のエピトープは同じ抗原、例えば、同じタンパク質（または多量体タンパク質のサブユニット）上にある。実施形態では、第１および第２のエピトープは重複する。実施形態では、第１および第２のエピトープは重複しない。実施形態において、第１および第２のエピトープは、異なる抗原、例えば、異なるタンパク質（または多量体タンパク質の異なるサブユニット）上にある。実施形態では、多重特異性抗体分子は、第３、第４、または第５の免疫グロブリン可変領域を含む。実施形態では、多重特異性抗体分子は、二重特異性抗体分子、三重特異性抗体分子、または四特異性抗体分子である。
【０１４８】
実施形態では、多重特異性抗体分子は二重特異性抗体分子である。二重特異性抗体は、２つ以下の抗原に対して特異性を持っている。二重特異性抗体分子は、第１のエピトープに対する結合特異性を有する第１の免疫グロブリン可変領域配列と、第２のエピトープに対する結合特異性を有する第２の免疫グロブリン可変領域配列によって特徴付けられる。実施形態では、第１および第２のエピトープは同じ抗原、例えば、同じタンパク質（または多量体タンパク質のサブユニット）上にある。実施形態では、第１および第２のエピトープは重複する。実施形態では、第１および第２のエピトープは重複しない。実施形態において、第１および第２のエピトープは、異なる抗原、例えば、異なるタンパク質（または多量体タンパク質の異なるサブユニット）上にある。実施形態において、二重特異性抗体分子は、第１のエピトープに対する結合特異性を有する重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列、ならびに第２のエピトープに対する結合特異性を有する重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列を含む。実施形態では、二重特異性抗体分子は、第１のエピトープに対する結合特異性を有する半抗体と、第２のエピトープに対する結合特異性を有する半抗体とを含む。実施形態では、二重特異性抗体分子は、第１のエピトープに対する結合特異性を有する半抗体またはその断片、および第２のエピトープに対する結合特異性を有する半抗体またはその断片を含む。実施形態において、二重特異性抗体分子は、第１のエピトープに対する結合特異性を有するｓｃＦｖまたはＦａｂ、またはその断片を含み、第２のエピトープに対する結合特異性を有するｓｃＦｖまたはＦａｂ、またはその断片を含む。
【０１４９】
実施形態では、抗体分子は、ダイアボディ、単鎖分子、および抗体の抗原結合断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ）を含む。例えば、抗体分子は、重（Ｈ）鎖可変領域配列（本明細書ではＶＨと略記）、および軽（Ｌ）鎖可変領域配列（本明細書ではＶＬと略記）を含むことができる。実施形態では、抗体分子は、重鎖および軽鎖を含むか、またはそれらからなる（本明細書では半抗体と呼ばれる）。別の例では、抗体分子は２つの重（Ｈ）鎖可変領域配列と２つの軽（Ｌ）鎖可変領域配列を含み、それによりＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｃ、Ｆｄ、Ｆｄ’、Ｆｖ、単鎖抗体（ｓｃＦｖなど）、単一可変領域抗体、ダイアボディ（Ｄａｂ）（二価および二重特異性）、およびキメラ（例えば、ヒト化）抗体などの２つの抗原結合部位を形成し、それは全体の抗体の修飾によって生成される可能性があり、または組換えＤＮＡ技術を使用して新たに合成されるものであり得る。これらの機能的抗体断片は、それぞれの抗原または受容体と選択的に結合する能力を保持している。抗体および抗体断片は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、およびＩｇＥを含むがこれらに限定されない抗体の任意のクラス、および抗体の任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４）からのものであり得る。抗体分子の調製物は、モノクローナルまたはポリクローナルであり得る。抗体分子は、ヒト抗体、ヒト化抗体、ＣＤＲ移植抗体、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏで生成された抗体でもあり得る。抗体は、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４から選択される重鎖定常領域を有することができる。抗体はまた、例えば、カッパまたはラムダから選択される軽鎖を有することができる。「免疫グロブリン」（Ｉｇ）という用語は、本明細書で「抗体」という用語と互換的に使用される。
【０１５０】
抗体分子の抗原結合断片の例には、（ｉ）Ｆａｂ断片、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、およびＣＨ１ドメインからなる一価断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、ヒンジ領域でジスルフィド架橋により連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）ＶＨドメインからなるダイアボディ（ｄＡｂ）断片；（ｖｉ）ラクダ科またはラクダ化された可変領域；（ｖｉｉ）単一鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４２：４２３−４２６；およびＨｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：５８７９−５８８３を参照）；（ｖｉｉｉ）単一ドメイン抗体が含まれる。これらの抗体断片は、当業者に知られている従来の技術を使用して得られ、断片は、無傷の抗体と同じ方法で有用性についてスクリーニングされる。
【０１５１】
抗体分子には、無傷の分子とその機能的断片が含まれる。抗体分子の定常領域は、抗体の特性を修整するために（例えば、Ｆｃ受容体結合、抗体のグリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能、または補完機能の１つまたは複数を増加または減少させるため）変更する、例えば、変異することができる。
【０１５２】
抗体分子は単一ドメイン抗体でもあり得る。単一ドメイン抗体には、その相補性決定領域が単一ドメインポリペプチドの一部である抗体を含めることができる。例には、これらに限定されないが、重鎖抗体、軽鎖を自然に欠く抗体、従来の４鎖抗体に由来する単一ドメイン抗体、遺伝子操作された抗体、および抗体に由来するもの以外の単一ドメイン足場が含まれる。単一ドメイン抗体は、当技術分野のいずれか、またはいずれかの未来の単一ドメイン抗体であり得る。単一ドメイン抗体は、マウス、ヒト、ラクダ、ラマ、魚、サメ、ヤギ、ウサギ、およびウシを含むがこれらに限定されない任意の種に由来し得る。本発明の別の態様によれば、単一ドメイン抗体は、軽鎖を欠く重鎖抗体として知られる天然に存在する単一ドメイン抗体である。そのような単一ドメイン抗体は、例えば、国際公開第９４０４６７８号に開示されている。明確にするために、天然に軽鎖を欠く重鎖抗体に由来するこの可変領域は、本明細書では、４本鎖免疫グロブリンの従来のＶＨと区別するＶＨＨまたはナノボディとして知られている。そのようなＶＨＨ分子は、ラクダ科種、例えば、ラクダ、ラマ、ヒトコブラクダ、アルパカおよびグアナコで産生された抗体に由来し得る。ラクダ科以外の他の種は、自然に軽鎖を欠く重鎖抗体を産生する可能性がある。そのようなＶＨＨは、本発明の範囲内である。
【０１５３】
ＶＨおよびＶＬ領域は、「フレームワーク領域」（ＦＲまたはＦＷ）と呼ばれるより保存された領域が散在する、「相補性決定領域」（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変領域に細分化できる。
【０１５４】
フレームワーク領域とＣＤＲの範囲は、多くの方法によって正確に定義されている（Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７；およびＯｘｆｏｒｄ  ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアで使用されるＡｂＭ定義を参照）。一般的に、例えば、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｖａｒｉａｂｌｅ  Ｄｏｍａｉｎｓ．Ｉｎ：Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｌａｂ  Ｍａｎｕａｌ（Ｅｄ．：Ｄｕｅｂｅｌ，Ｓ．ａｎｄ  Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ，Ｒ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ）を参照されたい。
【０１５５】
本明細書で使用される場合、「相補性決定領域」および場合、「ＣＤＲ」という用語は、抗原特異性および結合親和性を付与する抗体可変領域内のアミノ酸の配列を指す。一般に、各重鎖可変領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）には３つのＣＤＲがあり、各軽鎖可変領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）には３つのＣＤＲがある。
【０１５６】
所定のＣＤＲの正確なアミノ酸配列境界は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１），“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，”５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（“Ｋａｂａｔ”ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ  ｓｃｈｅｍｅ），Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）ＪＭＢ２７３，９２７−９４８（「Ｃｈｏｔｈｉａ」番号付与スキーム）に記述されたものを含む、多くの既知のスキームのいずれかを使用して決定できる。本明細書で使用される場合、「Ｃｈｏｔｈｉａ」番号スキームに従って定義されるＣＤＲは、「超可変ループ」とも呼ばれることがある。
【０１５７】
例えば、Ｋａｂａｔでは、重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲアミノ酸残基には３１−３５（ＨＣＤＲ１）、５０−６５（ＨＣＤＲ２）、および９５−１０２（ＨＣＤＲ３）の番号が付けられている。軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲアミノ酸残基には、２４−３４（ＬＣＤＲ１）、５０−５６（ＬＣＤＲ２）、および８９−９７（ＬＣＤＲ３）の番号が付けられている。Ｃｈｏｔｈｉａの下では、ＶＨのＣＤＲアミノ酸には２６−３２（ＨＣＤＲ１）、５２−５６（ＨＣＤＲ２）、および９５−１０２（ＨＣＤＲ３）の番号が付けられている。ＶＬのアミノ酸残基には、２６−３２（ＬＣＤＲ１）、５０−５２（ＬＣＤＲ２）、および９１−９６（ＬＣＤＲ３）の番号が付けられている。
【０１５８】
各ＶＨおよびＶＬは通常、次の順序、つまりＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４でアミノ末端からカルボキシ末端に配置された３つのＣＤＲと４つのＦＲを含む。
【０１５９】
抗体分子はポリクローナル抗体でもモノクローナル抗体でもよい。
【０１６０】
本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」または場合、「モノクローナル抗体組成物」という用語は、単一分子組成の抗体分子の調製物を指す。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対する単一の結合特異性と親和性を示す。モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ技術によって、またはハイブリドーマ技術を使用しない方法（例えば、組換え法）によって作成できる。
【０１６１】
抗体は、組換えにより産生することができ、例えば、ファージディスプレイまたはコンビナトリアル方法により産生することができる。
【０１６２】
抗体を生成するためのファージディスプレイおよびコンビナトリアル方法は、当技術分野で知られている（例えば、Ｌａｄｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．米国特許第５，２２３，４０９号；Ｋａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．国際公開第９２／１８６１９号；Ｄｏｗｅｒ  ｅｔ  ａｌ．国際公開第９１／１７２７１号；Ｗｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．国際公開第９２／２０７９１号；Ｍａｒｋｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．国際公開第９２／１５６７９号；Ｂｒｅｉｔｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．国際公開第９３／０１２８８号；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．国際公開第９２／０１０４７号；Ｇａｒｒａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．国際公開第９２／０９６９０号；Ｌａｄｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．国際公開第９０／０２８０９号；Ｆｕｃｈｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：１３７０−１３７２；Ｈａｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｈｕｍ  Ａｎｔｉｂｏｄ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ３：８１−８５；Ｈｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４６：１２７５−１２８１；Ｇｒｉｆｆｔｈｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）ＥＭＢＯ  Ｊ  １２：７２５−７３４；Ｈａｗｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２２６：８８９−８９６；Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８；Ｇｒａｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）ＰＮＡＳ  ８９：３５７６−３５８０；Ｇａｒｒａｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：１３７３−１３７７；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｎｕｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ  １９：４１３３−４１３７；およびＢａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）ＰＮＡＳ  ８８：７９７８−７９８２、そのすべての内容は参照により本明細書に組み込まれる）。
【０１６３】
一実施形態では、抗体は完全ヒト抗体（例えば、ヒト免疫グロブリン配列から抗体を産生するように遺伝子操作されたマウスで作製された抗体）、または非ヒト抗体、例えば、げっ歯類（マウスまたはラット）、ヤギ、霊長類（サルなど）、ラクダ抗体である。好ましくは、非ヒト抗体はげっ歯類（マウスまたはラット抗体）である。げっ歯類の抗体を産生する方法は、当技術分野で公知である。
【０１６４】
ヒトモノクローナル抗体は、マウスのシステムではなく、ヒト免疫グロブリン遺伝子を保有するトランスジェニックマウスを使用して生成できる。目的の抗原で免疫したこれらのトランスジェニックマウスからの脾細胞を使用して、ヒトタンパク質からのエピトープに特異的な親和性を有するヒトｍＡｂを分泌するハイブリドーマを産生する（例えば、Ｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．国際公開第９１／００９０６号、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉ  ｅｔ  ａｌ．ＰＣＴ刊行物国際公開第９１／１０７４１号；Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．国際公開第９２／０３９１８号；Ｋａｙ  ｅｔ  ａｌ。国際公開第９２／０３９１７；Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ｅｔ  ａｌ．１９９４  Ｎａｔｕｒｅ３６８：８５６−８５９；Ｇｒｅｅｎ，Ｌ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．１９９４  Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ．７：１３−２１；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．１９９４  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１：６８５１−６８５５；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．１９９３  Ｙｅａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ７：３３−４０；Ｔｕａｉｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．１９９３  ＰＮＡＳ９０：３７２０−３７２４；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．１９９１  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ２１：１３２３−１３２６を参照）。
【０１６５】
抗体分子は、可変領域またはその一部、例えば、ＣＤＲが、非ヒト生物、例えば、ラットまたはマウスで生成されるものであり得る。キメラ、ＣＤＲ移植、およびヒト化抗体は本発明の範囲内である。非ヒト生物、例えば、ラットまたはマウスで生成され、その後、例えば、可変フレームワークまたは定常領域で改変されて、ヒトの抗原性を低下させる抗体分子は、本発明の範囲内である。
【０１６６】
「有効ヒト」タンパク質は、中和抗体応答、例えば、ヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）応答を実質的に誘発しないタンパク質である。ＨＡＭＡは、例えば、慢性または再発性の疾患状態の治療など、抗体分子が繰り返し投与される場合など、多くの状況で問題になる可能性がある。ＨＡＭＡ応答により、血清からの抗体クリアランスが増加するため（例えば、Ｓａｌｅｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．，３２：１８０−１９０（１９９０）を参照）、またアレルギー反応の可能性があるため（例えば、ＬｏＢｕｇｌｉｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ，５：５１１７−５１２３（１９８６）を参照）、抗体の繰り返し投与が無効になる可能性がある。
【０１６７】
キメラ抗体は、当技術分野で知られている組換えＤＮＡ技術によって産生することができる（Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．、国際特許刊行物ＰＣＴ／ＵＳ８６／０２２６９；Ａｋｉｒａ，ｅｔ  ａｌ．、欧州特許第１８４，１８７号；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ，Ｍ．，欧州特許第１７１，４９６号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．、欧州特許第１７３，４９４；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、国際公開第８６／０１５３３号；Ｃａｂｉｌｌｙ  ｅｔ  ａｌ．、米国特許第４，８１６，５６７；Ｃａｂｉｌｌｙ  ｅｔ  ａｌ．、欧州特許第１２５，０２３号；Ｂｅｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８  Ｓｃｉｅｎｃｅ２４０：１０４１−１０４３）；Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）  ＰＮＡＳ８４：３４３９−３４４３；Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：３５２１−３５２６；Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）ＰＮＡＳ８４：２１４−２１８；Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｃａｎｃ．Ｒｅｓ．４７：９９９−１００５；Ｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ  ３１４：４４６−４４９；ａｎｄ  Ｓｈａｗ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，  Ｊ．Ｎａｔｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．８０：１５５３−１５５９を参照）。
【０１６８】
ヒト化抗体またはＣＤＲ移植抗体は、少なくとも１つまたは２つであるが、一般に３つのレシピエントＣＤＲ（免疫グロブリン重鎖および／または軽鎖）すべてがドナーＣＤＲで置換される。抗体は、非ヒトＣＤＲの少なくとも一部で置き換えられてもよいし、ＣＤＲの一部のみが非ヒトＣＤＲで置き換えられてもよい。抗原への結合に必要なＣＤＲの数を置き換えるだけである。好ましくは、ドナーはげっ歯類抗体、例えば、ラットまたはマウス抗体であり、レシピエントはヒトフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークである。通常、ＣＤＲを提供する免疫グロブリンは「ドナー」と呼ばれ、フレームワークを提供する免疫グロブリンは「アクセプター」と呼ばれる。一実施形態では、ドナー免疫グロブリンは非ヒト（例えば、げっ歯類）である。アクセプターフレームワークは、天然に存在する（例えば、ヒト）フレームワークまたはコンセンサスフレームワーク、またはそれらと約８５％以上、好ましくは９０％、９５％、９９％以上同一の配列である。
【０１６９】
本明細書で使用される場合、「コンセンサス配列」という用語は、関連配列のファミリーの中で最も頻繁に生じるアミノ酸（またはヌクレオチド）から形成される配列を指す（Ｗｉｎｎａｋｅｒ，Ｆｒｏｍ  Ｇｅｎｅｓ  ｔｏ  Ｃｌｏｎｅｓ（Ｖｅｒｌａｇｓｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ，Ｗｅｉｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ１９８７を参照）。タンパク質のファミリーでは、コンセンサス配列の各位置は、ファミリーのその位置で最も頻繁に発生するアミノ酸によって占められている。２つのアミノ酸が同じ頻度で発生する場合、どちらかをコンセンサス配列に含めることができる。「コンセンサスフレームワーク」とは、コンセンサス免疫グロブリン配列のフレームワーク領域を指す。
【０１７０】
抗体分子は、当技術分野で公知の方法によりヒト化することができる（例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｌ．，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：１２０２−１２０７，ｂｙ  Ｏｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ４：２１４、およびＱｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．による米国特許第５，５８５，０８９号、米国特許第５，６９３，７６１号および米国特許第５，６９３，７６２号、これらのすべての内容は参照により本明細書に組み込まれる）。
【０１７１】
ヒト化またはＣＤＲ移植抗体分子は、免疫グロブリン鎖の１つ、２つ、またはすべてのＣＤＲを交換できるＣＤＲ移植またはＣＤＲ置換によって生成することができる。例えば、米国特許第５，２２５，５３９号；Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．１９８６  Ｎａｔｕｒｅ３２１：５５２−５２５；Ｖｅｒｈｏｅｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．１９８８  Ｓｃｉｅｎｃｅ２３９：１５３４；Ｂｅｉｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．１９８８  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４１：４０５３−４０６０；Ｗｉｎｔｅｒ、米国特許第５，２２５，５３９号を参照されたい。これらすべての内容は、参照により明示的に本明細書に組み込まれる。Ｗｉｎｔｅｒは、本発明のヒト化抗体を調製するために使用できるＣＤＲ移植法を説明している（１９８７年３月２６日に出願された英国特許第２１８８６３８号；Ｗｉｎｔｅｒ、米国特許第５，２２５，５３９号）。その内容は参照により明示的に組み込まれる。
【０１７２】
また、特定のアミノ酸が置換、削除、または追加されたヒト化抗体分子も本発明の範囲内である。ドナーからアミノ酸を選択するための基準は、米国特許第５，５８５，０８９号、例えば、米国特許第５，５８５，０８９号の第１２〜１６列、例えば、米国特許第５，５８５，０８９号の列１２〜１６に記載されており、その内容は参照により本明細書に組み入れられる。抗体をヒト化する他の技術は、１９９２年１２月２３日公開のＰａｄｌａｎ  ｅｔ  ａｌ．の欧州特許第５１９５９６号に記載されている。
【０１７３】
抗体分子は単鎖抗体であり得る。単鎖抗体（ｓｃＦＶ）を設計することができる（例えば、Ｃｏｌｃｈｅｒ，Ｄ．ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ａｎｎ  Ｎ  Ｙ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ８８０：２６３−８０；およびＲｅｉｔｅｒ，Ｙ．（１９９６）Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ２：２４５−５２を参照されたい）。一本鎖抗体を二量体化または多量体化して、同じ標的タンパク質の異なるエピトープに対する特異性を有する多価抗体を生成することができる。
【０１７４】
さらに他の実施形態では、抗体分子は、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、およびＩｇＥの重鎖定常領域から選択される重鎖定常領域を有する。特に、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４の（例えば、ヒト）重鎖定常領域から選択される。別の実施形態において、抗体分子は、例えば、カッパまたはラムダの（例えば、ヒト）軽鎖定常領域から選択される軽鎖定常領域を有する。定常領域は、抗体の特性を修整するために（例えば、Ｆｃ受容体結合、抗体のグリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能、および／または補完機能の１つまたは複数を増加または減少させるため）変更する、例えば、変異することができる。一実施形態では、抗体はエフェクター機能を有し、また、補数を修正できる。他の実施形態では、抗体はそうではない。エフェクター細胞を補充する、または補数を修正する。別の実施形態では、抗体は、Ｆｃ受容体に結合する能力が低下しているか、まったくない。例えば、それは、Ｆｃ受容体への結合をサポートしないアイソタイプまたはサブタイプ、断片または他の突然変異体であり、例えば、突然変異または欠失したＦｃ受容体結合領域を有する。
【０１７５】
抗体定常領域を変更する方法は、当技術分野で知られている。機能が変化した抗体、例えば、細胞上のＦｃＲなどのエフェクターリガンドに対する親和性の変化、または補体のＣ１成分は、抗体の定常部分の少なくとも１つのアミノ酸残基を異なる残基で置き換えることにより生成できる（例えば、欧州特許第３８８，１５１号、米国特許第５，６２４，８２１号および米国特許第５，６４８，２６０号を参照。これらのすべての内容は参照により本明細書に組み込まれる）。マウスまたは他の種の免疫グロブリンに適用された場合、これらの機能を低下または排除する同様のタイプの変化を説明できる。
【０１７６】
抗体分子は、誘導体化するか、別の機能性分子（例えば、別のペプチドまたはタンパク質）にリンクさせることができる。本明細書で使用される場合、「誘導体化」抗体分子は、改変されたものである。誘導体化の方法には、蛍光部分、放射性ヌクレオチド、毒素、酵素またはビオチンなどの親和性リガンドの添加が含まれるが、これらに限定されない。したがって、本発明の抗体分子は、免疫接着分子を含む、本明細書に記載の抗体の誘導体化および他の改変形態を含むことを意図している。１つまたは複数の他の分子実体に機能的に（化学結合、遺伝子融合、非共有結合または他の方法で）結合でき、例えば、別の抗体（例えば、二重特異性抗体または二重特異性抗体）、別の分子（ストレプトアビジンコア領域またはポリヒスチジンタグなど）と抗体または抗体実体の会合を媒介できる検出可能な薬剤、細胞障害剤、医薬品、および／またはとタンパク質またはペプチドに結合できる。
【０１７７】
誘導体化された抗体分子の１つのタイプは、２つ以上の抗体を架橋することによって生成される（同じタイプまたは異なるタイプの、例えば、二重特異性抗体を作成するため）。適切な架橋剤には、適切なスペーサーによって分離された２つの明確に反応性の基を有するヘテロ二官能性のもの（例えば、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル）またはホモ二官能性（例えば、ジスクシンイミジルスベレート）が含まれる。そのようなリンカーは、イリノイ州ロックフォードのＰｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙから入手可能である。
【０１７８】
多重特異性抗体分子
実施形態では、多重特異性抗体分子は、異なる部位が異なる抗原に特異的である複数の抗原結合部位を含むことができる。実施形態では、多重特異性抗体分子は、同じ抗原上の複数の（例えば、２つ以上の）エピトープに結合することができる。実施形態において、多重特異性抗体分子は、標的細胞（例えば、癌細胞）に特異的な抗原結合部位および免疫エフェクター細胞に特異的な異なる抗原結合部位を含む。一実施形態では、多重特異性抗体分子は二重特異性抗体分子である。二重特異性抗体分子は、５つの異なる構造グループに分類できる：（ｉ）二重特異性免疫グロブリンＧ（ＢｓＩｇＧ）；（ｉｉ）追加の抗原結合部分が付加されたＩｇＧ；（ｉｉｉ）二重特異性抗体断片；（ｉｖ）二重特異性融合タンパク質；および（ｖ）二重特異性抗体コンジュゲートである。
【０１７９】
ＢｓＩｇＧは、各抗原に対して一価の形式である。例示的なＢｓＩｇＧ形式には、ｃｒｏｓｓＭａｂ、ＤＡＦ（２イン１）、ＤＡＦ（４イン１）、ＤｕｔａＭａｂ、ＤＴ−ＩｇＧ、ノブインホール共通ＬＣ、ノブインホールアセンブリ、電荷対、Ｆａｂアーム交換、ＳＥＥＤｂｏｄｙ、ｔｒｉｏｍａｂ、ＬＵＺ−Ｙ、Ｆｃａｂ、κλ−ｂｏｄｙ、直交Ｆａｂが含まれるが、それらに限定されない。Ｓｐｉｅｓｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６７（２０１５）：９５−１０６を参照されたい。例示的なＢｓＩｇＧには、抗ＣＤ３アームおよび抗ＥｐＣＡＭアームを含むカツマキソマブ（Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｔｒｉｏｎ  Ｐｈａｒｍａ、Ｎｅｏｐｈａｒｍ）、およびＣＤ３およびＨＥＲ２をターゲットとするｅｒｔｕｍａｘｏｍａｂ（Ｎｅｏｖｉｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）が含まれる。いくつかの実施形態において、ＢｓＩｇＧは、ヘテロ二量体化のために設計された重鎖を含む。例えば、「ノブイントゥーホール」戦略、ＳＥＥＤプラットフォーム、共通の重鎖（κλボディなど）、およびヘテロダイマーＦｃ領域の使用を使用して、ヘテロ二量体化のために重鎖を設計できる。Ｓｐｉｅｓｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６７（２０１５）：９５−１０６を参照されたい。ＢｓＩｇＧのホモダイマーの重鎖ペアリングを回避するために使用されてきた戦略には、ホールインノブ、デュオボディ、アザイメトリック、チャージペア、ＨＡ−ＴＦ、ＳＥＥＤｂｏｄｙ、および差次的なタンパク質Ａアフィニティが含まれる。Ｉｄを参照されたい。ＢｓＩｇＧは、異なる宿主細胞における抗体成分の別個の発現、およびそれに続くＢｓＩｇＧへの精製／アセンブリにより生成され得る。ＢｓＩｇＧは、単一の宿主細胞での抗体成分の発現によっても産生される。ＢｓＩｇＧは、アフィニティクロマトグラフィを使用して、例えば、タンパク質Ａと連続ｐＨ溶出を使用して精製できる。
【０１８０】
追加の抗原結合部分が付加されたＩｇＧは、二重特異性抗体分子のもう１つの形式である。例えば、単一特異的ＩｇＧは、例えば、重鎖または軽鎖のＮ末端またはＣ末端で、単一抗原特異的ＩｇＧに追加の抗原結合ユニットを付加することにより、二重特異性を持つように設計できる。例示的な追加の抗原結合ユニットには、単一ドメイン抗体（例えば、可変重鎖または可変軽鎖）、遺伝子操作されたタンパク質の足場、および対の抗体可変領域（例えば、単鎖可変断片または可変断片）が含まれる。Ｉｄを参照されたい。付加されるＩｇＧの形式の例には、デュアル可変ドメインＩｇＧ（ＤＶＤ−Ｉｇ）、ＩｇＧ（Ｈ）−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−（Ｈ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−（Ｌ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ、Ｈ）、−Ｆｖ、ＩｇＧ（Ｈ）−Ｖ、Ｖ（Ｈ）−ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）−Ｖ、Ｖ（Ｌ）−ＩｇＧ、ＫＩＨ  ＩｇＧ−ｓｃＦａｂ、２ｓｃＦｖ−ＩｇＧ、ＩｇＧ−２ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ４−Ｉｇ、ｚｙｂｏｄｙ、およびＤＶＩ−ＩｇＧ（４イン１）が含まれる。Ｓｐｉｅｓｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６７（２０１５）：９５−１０６を参照されたい。ＩｇＧ−ｓｃＦｖの例はＭＭ−１４１（Ｍｅｒｒｉｍａｃｋ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）で、ＩＧＦ−１ＲおよびＨＥＲ３に結合する。ＤＶＤ−Ｉｇの例には、ＩＬ−１αおよびＩＬ−１βに結合するＡＢＴ−９８１（ＡｂｂＶｉｅ）と、ＴＮＦおよびＩＬ−１７Ａに結合するＡＢＴ−１２２（ＡｂｂＶｉｅ）とが含まれる。
【０１８１】
二重特異性抗体断片（ＢｓＡｂ）は、抗体定常ドメインの一部またはすべてを欠く二重特異性抗体分子の形式である。例えば、一部のＢｓＡｂにはＦｃ領域がない。実施形態において、二重特異性抗体断片は、単一の宿主細胞におけるＢｓＡｂの効率的な発現を可能にするペプチドリンカーにより接続された重鎖および軽鎖領域を含む。例示的な二重特異性抗体断片には、ナノボディ、ナノボディ−ＨＡＳ、ＢｉＴＥ、ダイアボディ、ＤＡＲＴ、ＴａｎｄＡｂ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ−ＣＨ３、Ｄｉａｂｏｄｙ−ＣＨ３、トリプルボディ、ミニ抗体、ミニボディ、ＴｒｉＢｉミニボディ、ｓｃＦｖ−ＣＨ３  ＫＩＨ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−ＣＨ−ＣＬ−ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）２−ｓｃＦｖ２、ｓｃＦｖ−ＫＩＨ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ、四価ＨＣＡｂ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ−Ｆｃ、Ｄｉａｂｏｄｙ−Ｆｃ、タンデムｓｃＦｖ−Ｆｃ、およびイントラボディが含まれるが、それらに限定されない。Ｉｄを参照されたい。例えば、ＢｉＴＥ形式はタンデムｓｃＦｖで構成され、ｓｃＦｖ構成要素はＴ細胞上のＣＤ３と癌細胞上の表面抗原に結合する。
【０１８２】
二重特異性融合タンパク質には、例えば、追加の特異性および／または機能性を追加するために、他のタンパク質にリンクされた抗体断片が含まれる。二重特異性融合タンパク質の例は、ｉｍｍＴＡＣであり、これはＨＬＡ提示ペプチドを認識する親和性成熟Ｔ細胞受容体に連結された抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含む。実施形態では、ドックアンドロック（ＤＮＬ）法を使用して、より高い原子価の二重特異性抗体分子を生成することができる。また、アルブミン結合タンパク質またはヒト血清アルブミンとの融合により、抗体断片の血清半減期を延長できる。Ｉｄを参照されたい。
【０１８３】
実施形態では、化学的コンジュゲーション、例えば、抗体および／または抗体断片の化学的コンジュゲーションを使用して、ＢｓＡｂ分子を作成することができる。Ｉｄを参照されたい。例示的な二重特異性抗体コンジュゲートは、低分子量の薬物が各Ｆａｂアームの単一の反応性リジンまたは抗体もしくはその断片に部位特異的にコンジュゲートされるＣｏｖＸボディ形式を含む。実施形態では、コンジュゲーションは、低分子量薬物の血清半減期を改善する。例示的なＣｏｖＸボディはＣＶＸ−２４１（ＮＣＴ０１００４８２２）であり、これはＶＥＧＦまたはＡｎｇ２のいずれかを阻害する２つの短いペプチドにコンジュゲートした抗体を含む。Ｉｄを参照されたい。
【０１８４】
抗体分子は、宿主のシステムでの、例えば、少なくとも１つまたは複数の成分の組換え発現により産生することができる。例示的な宿主のシステムには、真核細胞（例えば、哺乳動物細胞、例えば、ＣＨＯ細胞、または昆虫細胞、例えば、ＳＦ９またはＳ２細胞）および原核細胞（例えば、大腸菌）が含まれる。二重特異性抗体分子は、異なる宿主細胞で成分を別々に発現させ、その後の精製／アセンブリにより生成できる。あるいは、抗体分子は、単一の宿主細胞での成分の発現により産生され得る。二重特異性抗体分子の精製は、アフィニティクロマトグラフィなどの様々な方法で、例えば、タンパク質Ａと連続ｐＨ溶出を使用して行うことができる。他の実施形態では、アフィニティータグ、例えば、ヒスチジン含有タグ、ｍｙｃタグ、またはストレプトアビジンタグを精製に使用することができる。
【０１８５】
ＣＳＦ１Ｒを標的とする多重特異性抗体分子
一態様において、本明細書に開示されるのは、ＣＳＦ１Ｒ結合部分を含む多重特異性抗体分子である。一部の実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ結合部分は、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子を含む。例示的な抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子配列は、国際公開第２００９０２６３０３号；国際公開第２０１１１２３３８１号；国際公開第２０１６２０７３１２号；国際公開第２０１６１０６１８０号；米国特許出願公開第２０１６０２２０６６９号；米国特許出願公開第２０１６０３２６２５４号；国際公開第２０１３１６９２６４号；国際公開第２０１３０８７６９９号；国際公開第２０１１１４０２４９号；国際公開第２０１１１３１４０７号；国際公開第２０１１１２３３８１号；国際公開第２０１１１０７５５３号；および国際公開第２０１１０７００２４号に記載され、それらのすべては参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ結合部分は、ＣＤＲ（例えば、１、２、３、４、５、または６つすべてのＣＤＲ）、ＶＨ、ＶＬ、エマクトズマブの重鎖または軽鎖配列、またはそれらと実質的に同一の配列（例えば、少なくとも９５％同一、例えば、９５％から９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸の変更を有するが、５、１０または１５以下の変更（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保守的な置換）を有する）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ結合部分は、ＣＤＲ（例えば、１、２、３、４、５、または６つすべてのＣＤＲ）、ＶＨ、ＶＬ、カビラリズマブの重鎖または軽鎖配列、またはそれらと実質的に同一の配列（例えば、少なくとも９５％同一、例えば、９５％から９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸の変更を有するが、５、１０または１５以下の変更（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保守的な置換）を有する）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ結合部分は、ＣＤＲ（例えば、１、２、３、４、５、または６つすべてのＣＤＲ）、ＶＨ、ＶＬ、ＡＭＧ８２０の重鎖または軽鎖配列、またはそれらと実質的に同一の配列（例えば、少なくとも９５％同一、例えば、９５％から９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸の変更を有するが、５、１０または１５以下の変更（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保守的な置換）を有する）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ結合部分は、ＣＤＲ（例えば、１、２、３、４、５、または６つすべてのＣＤＲ）、ＶＨ、ＶＬ、ＩＭＣ−ＣＳ４の重鎖または軽鎖配列、またはそれらと実質的に同一の配列（例えば、少なくとも９５％同一、例えば、９５％から９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸の変更を有するが、５、１０または１５以下の変更（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保守的な置換）を有する）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ結合部分は、表８に開示されるＶＨまたはＶＬアミノ酸配列、表８に開示されるＶＨまたはＶＬアミノ酸配列のＣＤＲ、またはそれと実質的に同一の配列を含む。
【表１】
2020517256.tif 000002
【０１８６】
ＣＣＲ２を標的とする多重特異性抗体分子
一態様では、本明細書に開示されるのは、ＣＣＲ２結合部分を含む多重特異性抗体分子である。例示的なＣＣＲ２抗体は、本明細書および国際公開第２０１３１９２５９６号；国際公開第２０１００２１６９７号；国際公開第２００１０５７２２６号；および国際公開第２１９９７０３１９４９号に記載され、そのすべてが参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、ＣＣＲ２結合部分は、ＣＤＲ（例えば、１、２、３、４、５、または６つすべてのＣＤＲ）、ＶＨ、ＶＬ、プロザリズマブの重鎖または軽鎖配列、またはそれと実質的に同一の配列（例えば、９５％から９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸の変更を有するが、５、１０または１５以下の変更（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保守的な置換）を有する）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＣＲ２結合部分は、表９に開示されるＶＨまたはＶＬアミノ酸配列、表９に開示されるＶＨまたはＶＬアミノ酸配列のＣＤＲ、またはそれと実質的に同一の配列を含む。
【表２】
2020517256.tif 000003
【０１８７】
ＰＤ−Ｌ１を標的とする多重特異性抗体分子
一態様において、本明細書に開示されるのは、ＰＤ−Ｌ１結合部分を含む多重特異性抗体分子である。いくつかの態様において、ＰＤ−Ｌ１結合部分は抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子を含む。例示的な抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子配列は、国際公開第２０１３０７９１７４号、国際公開第２０１００７７６３４号、国際公開第２００７／００５８７４号、および米国特許出願公開第２０１２００３９９０６号に記載されており、これらのすべては参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合部分は、ＣＤＲ（例えば、１、２、３、４、５、または６つすべてのＣＤＲ）、ＶＨ、ＶＬ、デュルバルマブの重鎖または軽鎖配列、またはそれと実質的に同一の配列（例えば、９５％から９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸の変更を有するが、５、１０または１５以下の変更（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保守的な置換）を有する）を含む。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合部分は、ＣＤＲ（例えば、１、２、３、４、５、または６つすべてのＣＤＲ）、ＶＨ、ＶＬ、アテゾリズマブの重鎖または軽鎖配列、またはそれらと実質的に同一の配列（例えば、少なくとも９５％同一、例えば、９５％から９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸の変更を有するが、５、１０または１５以下の変更（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保守的な置換）を有する）を含む。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合部分は、ＣＤＲ（例えば、１、２、３、４、５、または６つすべてのＣＤＲ）、ＶＨ、ＶＬ、アベルマブの重鎖または軽鎖配列、またはそれらと実質的に同一の配列（例えば、少なくとも９５％同一、例えば、９５％から９９．９％同一、または少なくとも１つのアミノ酸の変更を有するが、５、１０または１５以下の変更（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保守的な置換）を有する）を含む。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合部分は、表１０に開示されるＶＨまたはＶＬアミノ酸配列、表１０に開示されるＶＨまたはＶＬアミノ酸配列のＣＤＲ、またはそれと実質的に同一の配列を含む。
【表３】
2020517256.tif 000004
【０１８８】
ＣＤＲグラフト足場
実施形態では、抗体分子はＣＤＲグラフト足場ドメインである。実施形態では、足場ドメインは、フィブロネクチンドメイン、例えば、フィブロネクチンＩＩＩ型ドメインに基づいている。フィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ３）ドメインの全体的な折り畳みは、最小機能性抗体断片、抗体重鎖の可変領域の折り畳みと密接に関連している。Ｆｎ３の端部には３つのループがある。ＢＣ、ＤＥおよびＦＧループの位置は、抗体のＶＨドメインのＣＤＲ１、２および３の位置にほぼ対応している。Ｆｎ３にはジスルフィド結合がない。したがって、抗体およびそれらの断片とは異なり、Ｆｎ３は還元条件下で安定している（例えば、国際公開第９８／５６９１５号、国際公開第０１／６４９４２号、国際公開第００／３４７８４号を参照）。Ｆｎ３ドメインは、例えば、本明細書に記載の抗原／マーカー／細胞に結合するドメインを選択するために、（例えば、本明細書に記載のＣＤＲまたは超可変ループを使用して）改変または変化させることができる。
【０１８９】
実施形態では、足場ドメイン、例えば、折り畳みドメインは、抗体、例えば、モノクローナル抗体の重鎖可変領域から３つのβ鎖を削除することにより作成された「ミニボディ」足場に基づいている（例えば、Ｔｒａｍｏｎｔａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｊ  Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．７：９；およびＭａｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，ＥＭＢＯ  Ｊ．１３：５３０３−５３０９を参照）。「ミニボディ」を使用して、２つの超可変ループを提示できる。実施形態において、足場ドメインは、Ｖ様ドメイン（例えば、Ｃｏｉａ  ｅｔ  ａｌ．、国際公開第９９／４５１１０号を参照）または、７４残基、２つのジスルフィド結合によって一緒に保持された６本鎖ベータシートサンドイッチであるテンダミスタチン由来のドメインである（例えば、ＭｃＣｏｎｎｅｌｌ  ａｎｄ  Ｈｏｅｓｓ，１９９５，Ｊ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２５０：４６０を参照）。例えば、テンダミスタチンのループは、例えば、本明細書に記載のマーカー／抗原／細胞に結合するドメインを選択するために、（例えば、ＣＤＲまたは超可変ループを使用して）改変または変更することができる。別の例示的な足場ドメインは、ＣＴＬＡ−４の細胞外ドメインに由来するベータサンドイッチ構造である（例えば、国際公開第００／６００７０号を参照）。
【０１９０】
他の例示的な足場ドメインには、Ｔ細胞受容体、ＭＨＣタンパク質；細胞外ドメイン（例えば、フィブロネクチンＩＩＩ型の繰り返し、ＥＧＦの繰り返し）；プロテアーゼ阻害剤（例えば、クニッツドメイン、エコチン、ＢＰＴＩなど）；ＴＰＲの繰り返し；トリフォイル構造；ジンクフィンガードメイン；ＤＮＡ結合タンパク質；特に単量体ＤＮＡ結合タンパク質；ＲＮＡ結合タンパク質；酵素、例えば、プロテアーゼ（特に不活性化されたプロテアーゼ）、ＲＮａｓｅ；シャペロン、例えば、チオレドキシン、および熱ショックタンパク質；および細胞内シグナル伝達ドメイン（ＳＨ２およびＳＨ３ドメインなど）が含まれるが、これらに限定されない。例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２００４０００９５３０号および米国特許出願公開第７，５０１，１２１号を参照されたい。
【０１９１】
実施形態では、足場ドメインは、例えば、以下の基準のうちの１つ以上によって評価および選択される：（１）アミノ酸配列、（２）いくつかの相同ドメインの配列、（３）３次元構造、および／または（４）ｐＨ、温度、塩分、有機溶媒、酸化剤濃度の範囲にわたる安定性データ。実施形態では、足場ドメインは、小さく安定したタンパク質ドメイン、例えば、１００、７０、５０、４０、または３０アミノ酸未満のタンパク質である。ドメインは、１つまたは複数のジスルフィド結合を含んでもよく、または金属、例えば、亜鉛をキレート化してもよい。
【０１９２】
本明細書で定義される多機能性分子の例示的な構造を以下に説明する。例示的な構造については、Ｗｅｉｄｌｅ  Ｕ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｔｈｅ  Ｉｎｔｒｉｇｕｉｎｇ  Ｏｐｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｍｕｌｔｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｆｏｒｍａｔｓ  ｆｏｒ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ＆Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ  １０：１−１８（２０１３）；およびＳｐｉｅｓｓ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｆｏｒｍａｔｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ６７：９５−１０６にてさらに記載されており、それぞれの完全な内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１９３】
ヘテロ二量化抗体分子
ヘテロ二量体化された二重特異性抗体は、天然のＩｇＧ構造に基づいており、２つの結合アームは異なる抗原を認識する。定義された一価（および同時）の抗原の結合を可能にするＩｇＧ由来のフォーマットは、軽鎖の誤対合を最小限に抑える技術（例えば、共通の軽鎖）と組み合わせた強制重鎖ヘテロ二量化によって生成される。強制重鎖ヘテロ二量体化は、例えば、ノブインホールＯＲ鎖交換操作ドメイン（ＳＥＥＤ）を使用して取得できる。
【０１９４】
ノブインホール
米国特許第５，７３１，１１６号、米国特許第７，４７６，７２４号、およびＲｉｄｇｗａｙ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ９（７）：６１７−６２１に記載されているノブインホールには、（１）１つまたは両方の抗体のＣＨ３ドメインをヘテロ二量体化を促進するべく変異させること；および（２）ヘテロ二量体化を促進する条件下で変異抗体を組み合わせることが関与している。「ノブ」または「突起」は通常、親抗体の小さなアミノ酸をより大きなアミノ酸（例えば、Ｔ３６６ＹまたはＴ３６６Ｗ）で置き換えることによって作成される。「ホール」または「空洞」は、親抗体のより大きな残基を、Ｅｕ番号付けシステムに基づいて番号付けされたより小さなアミノ酸（例えば、Ｙ４０７Ｔ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａおよび／またはＹ４０７Ｖ）で置き換えることによって作成される。
【０１９５】
鎖交換操作ドメイン（ＳＥＥＤ）
ＳＥＥＤは、ＩｇＧ１とＩｇＡの間の配列交換に基づいて、優先的にヘテロ二量体化する同一ではない鎖を作成する。ＳＥＥＤ  ＣＨ３ドメインのヒトＩｇＡおよびＩｇＧからの交互配列は、ＡＧおよびＧＡと呼ばれる２つの非対称であるが相補的なドメインを生成する。ＳＥＥＤ設計により、ＡＧおよびＧＡ  ＳＥＥＤ  ＣＨ３ドメインのホモダイマー化を避ける一方で、ＡＧ／ＧＡヘテロダイマーの効率的な生成が可能になる。
【０１９６】
共通の軽鎖とＣｒｏｓｓＭａｂ
二重特異性ＩｇＧの均質な調製物を生成するには、軽鎖の誤対合を避ける必要がある。これを達成する１つの方法は、共通の軽鎖の原理を使用することである。つまり、１つの軽鎖を共有するがまだ特異性のある２つのバインダーを組み合わせる。別の選択肢として、ＣｒｏｓｓＭａｂテクノロジーがある。これは、二重特異性抗体の半分のＦａｂのＣＨ１およびＣＬドメインを交換することにより、非特異的なＬ鎖の誤対合を回避する。このような交差変異体は結合特異性と親和性を保持するが、２つのアームを非常に異なるものにし、Ｌ鎖の誤対合を防ぐ。
【０１９７】
抗体ベースの融合
抗体のＮまたはＣ末端に付加された追加の結合実体を含む様々な形式を生成できる。単鎖またはジスルフィド安定化ＦｖまたはＦａｂとのこれらの融合により、各抗原に対して二価の結合特異性を持つ四価分子が生成される。ｓｃＦｖとｓｃＦａｂとＩｇＧの組み合わせにより、３つ以上の異なる抗原を認識できる分子の生産が可能になる。
【０１９８】
抗体−Ｆａｂ融合
抗体−Ｆａｂ融合体は、第１の標的に対する従来の抗体と、抗体の重鎖のＣ末端に融合する第２の標的に対するＦａｂを含む二重特異性抗体である。通常、抗体とＦａｂには共通の軽鎖がある。抗体融合は、（１）標的融合のＤＮＡ配列を遺伝子操作し、（２）融合タンパク質を発現するために標的ＤＮＡを適切な宿主細胞にトランスフェクトすることにより生成できる。Ｃｏｌｏｍａ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ１５：１５９に記載されているように、抗体とｓｃＦｖの融合は、ＣＨ３ドメインのＣ末端とｓｃＦｖのＮ末端の間の（Ｇｌｙ）−Ｓｅｒリンカーによってリンクされているようである。
【０１９９】
抗体−ｓｃＦｖの融合
抗体−ｓｃＦｖの融合は、従来の抗体と、抗体の重鎖のＣ末端に融合する独自の特異性のｓｃＦｖを含む二重特異性抗体である。ｓｃＦｖは、直接またはリンカーペプチドを介してｓｃＦｖの重鎖を介してＣ末端に融合できる。抗体融合は、（１）標的融合のＤＮＡ配列を遺伝子操作し、（２）融合タンパク質を発現するために標的ＤＮＡを適切な宿主細胞にトランスフェクトすることにより生成できる。Ｃｏｌｏｍａ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ１５：１５９に記載されているように、抗体とｓｃＦｖの融合は、ＣＨ３ドメインのＣ末端とｓｃＦｖのＮ末端の間の（Ｇｌｙ）−Ｓｅｒリンカーによってリンクされているようである。
【０２００】
可変ドメイン免疫グロブリンＤＶＤ
関連する形式はデュアル可変ドメイン免疫グロブリン（ＤＶＤ）で、これは短いリンカー配列によってＶドメインのＮ末端に第２の特異性のあるＶＨおよびＶＬドメインで構成されている。
【０２０１】
Ｆｃ含有実体（ミニ抗体）
ミニ抗体としても知られるＦｃ含有実体は、ｓｃＦｖを定常重領域ドメイン３のＣ末端（ＣＨ３−ｓｃＦｖ）および／または特異性の異なる抗体のヒンジ領域（ｓｃＦｖ−ヒンジ−Ｆｃ）に融合することにより生成できる。ＩｇＧのＣＨ３ドメインのＣ末端に融合したジスルフィド安定化可変領域（ペプチドリンカーなし）を有する三価の実体も作成できる。
【０２０２】
Ｆｃの少ない二重特異性
Ｆｃの少ない二重特異性は、一般的にＦｃ含有実体よりもサイズが小さいという特徴がある。このクラスの一般的な二重特異性には、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ２およびＦａｂ−ｓｃＦｖ分子が含まれる。このクラスには、例えば、ＢｉＴＥ（二重特異性Ｔ細胞誘導剤）、ダイアボディ、ＴａｎｄＡｂｓ（四価タンデム抗体）、およびＤＡＲＴ（二重親和性リターゲティング分子）も含まれる。ＢｉＴＥは、柔軟なリンカーペプチドを介して２つのｓｃＦｖを融合することによって作成される。ダイアボディは、２つの異なる抗体の２つのＶＨおよび２つのＶＬドメインで構成されている。別の鎖上の相補的ドメインのみとの相互作用は、ＶＨおよびＶＬドメインとのみの対合を可能にする短いリンカーペプチドでドメインを結合することにより達成される。第２のバインダーのＶＬに連結された第１のバインダーのＶＨは、第１の抗体のＶＬに連結された第２の抗体のＶＨと共発現される。ＴａｎｄＡｂｓ分子は、分子内ペアリングを妨げる方向にある４つの抗体可変Ｈ鎖とＬ鎖からなるタンパク質の機能的二量化によって生成される。ＤＡＲＴは、ダイアボディの設計コンセプトと同様の設計コンセプトを適用するジスルフィド結合によって安定化される実体である。
【０２０３】
カッパ／ラムダ形式
ラムダ軽鎖ポリペプチドおよびカッパ軽鎖ポリペプチドを含む多重特異性分子（例えば、多重特異性抗体分子）は、ヘテロ二量体化を可能にするために使用できる。ラムダ軽鎖ポリペプチドおよびカッパ軽鎖ポリペプチドを含む二重特異性抗体分子を生成する方法は、２０１７年９月２２日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ２０１７／５３０５３に開示されており、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【０２０４】
実施形態では、多重特異性分子は、多重特異性抗体分子、例えば、２つの結合特異性を含む抗体分子、例えば、二重特異性抗体分子を含む。多重特異性抗体分子には以下が含まれる：
第１のエピトープに特異的なラムダ軽鎖ポリペプチド１（ＬＬＣＰ１）；
第１のエピトープに特異的な重鎖ポリペプチド１（ＨＣＰ１）；
第２のエピトープに特異的なカッパ軽鎖ポリペプチド２（ＫＬＣＰ２）；および
第２のエピトープに特異的な重鎖ポリペプチド２（ＨＣＰ２）。
【０２０５】
「ラムダ軽鎖ポリペプチド１（ＬＬＣＰ１）」は、その用語が本明細書で使用される場合、同族重鎖可変領域と組み合わされたときにそのエピトープとＨＣＰ１との複合体への特異的結合を媒介できるように、十分な軽鎖（ＬＣ）配列を含むポリペプチドを指す。実施形態では、ＣＨ１領域のすべてまたは断片を含む。実施形態において、ＬＬＣＰ１は、ＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、ＬＣ−ＣＤＲ３、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ４、およびＣＨ１、またはそのエピトープおよびＨＣＰ１との複合体の特異的結合を媒介するのに十分な配列を含む。ＬＬＣＰ１は、そのＨＣＰ１とともに、第１のエピトープに特異性を提供する（一方、ＫＬＣＰ２は、そのＨＣＰ２とともに、第２のエピトープに特異性を提供する）。本明細書の他の場所で説明されているように、ＬＬＣＰ１はＨＣＰ２よりもＨＣＰ１に対してより高い親和性を有する。
【０２０６】
「カッパ軽鎖ポリペプチド２（ＫＬＣＰ２）」は、その用語が本明細書で使用される場合、同族重鎖可変領域と組み合わされたときにそのエピトープとＨＣＰ２との複合体への特異的結合を媒介できるように、十分な軽鎖（ＬＣ）配列を含むポリペプチドを指す。実施形態では、それは、ＣＨ１領域のすべてまたは断片を含む。実施形態では、ＫＬＣＰ２は、ＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、ＬＣ−ＣＤＲ３、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ４、およびＣＨ１、またはそのエピトープおよびＨＣＰ２との複合体の特異的結合を媒介するのに十分な配列を含む。ＫＬＣＰ２は、そのＨＣＰ２と一緒に、第２のエピトープに特異性を提供する（一方、ＬＬＣＰ１は、そのＨＣＰ１と一緒に、第１のエピトープに特異性を提供する）。
【０２０７】
「重鎖ポリペプチド１（ＨＣＰ１）」は、その用語が本明細書で使用される場合、同族ＬＬＣＰ１と組み合わせたときにそのエピトープとＨＣＰ１との複合体への特異的結合を媒介できるように、十分な重鎖（ＨＣ）配列、例えば、ＨＣ可変領域配列を含むポリペプチドを指す。実施形態では、それは、ＣＨ１領域のすべてまたは断片を含む。実施形態では、それは、ＣＨ２および／またはＣＨ３領域のすべてまたは断片を含む。実施形態では、ＨＣＰ１は、ＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、ＨＣ−ＣＤＲ３、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ４、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３、またはそれらからの十分な配列を含み、（ｉ）そのエピトープおよびＬＬＣＰ１との複合体の特異的結合を媒介し、（ｉｉ）ＫＬＣＰ２とは対照的にＬＬＣＰ１に対して、本明細書で説明するように、優先的に複合化し、（ｉｉｉ）本明細書に記載されるように、ＨＣＰ１の別の分子とは対照的に、ＨＣＰ２に優先的に複合化する。ＨＣＰ１は、そのＬＬＣＰ１とともに、第１のエピトープに特異性を提供する（一方、ＫＬＣＰ２は、そのＨＣＰ２とともに、第２のエピトープに特異性を提供する）。
【０２０８】
「重鎖ポリペプチド２（ＨＣＰ２）」は、その用語が本明細書で使用される場合、同族ＬＬＣＰ１と組み合わせたときにそのエピトープとＨＣＰ１との複合体への特異的結合を媒介できるように、十分な重鎖（ＨＣ）配列、例えば、ＨＣ可変領域配列を含むポリペプチドを指す。実施形態では、それは、ＣＨ１領域のすべてまたは断片を含む。実施形態では、それはＣＨ２および／またはＣＨ３領域のすべてまたは断片を含む。実施形態では、ＨＣＰ１は、ＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、ＨＣ−ＣＤＲ３、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ４、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３、またはそれらからの十分な配列を含み、（ｉ）そのエピトープおよびＫＬＣＰ２との複合体の特異的結合を媒介し、（ｉｉ）ＬＬＣＰ１とは対照的にＫＬＣＰ２に対して、本明細書で説明するように、優先的に複合化し、（ｉｉｉ）本明細書に記載されるように、ＨＣＰ２の別の分子とは対照的に、ＨＣＰ１に優先的に複合化する。ＨＣＰ２はＫＬＣＰ２と一緒に、第２のエピトープに特異性を提供する（一方、ＬＬＣＰ１は、そのＨＣＰ１と一緒に、第１のエピトープに特異性を提供する）。
【０２０９】
本明細書に開示される多重特異性抗体分子のいくつかの実施形態では：
ＬＬＣＰ１は、ＨＣＰ２よりも、ＨＣＰ１に対して高い親和性を持っている。および／または
ＫＬＣＰ２は、ＨＣＰ１よりも、ＨＣＰ２に対して高い親和性を持っている。
【０２１０】
実施形態において、ＨＣＰ１に対するＬＬＣＰ１の親和性は、ＨＣＰ２に対する親和性よりも十分に大きいため、例えば、ｐＨ７の水性緩衝液、またはｐＨ７の生理食塩水、または生理学的条件下などの所定の条件下で、多重特異性抗体分子の分子の少なくとも７５％、８０、９０、９５、９８、９９、９９．５、または９９．９％が、ＬＬＣＰ１と複合体を形成した、またはＨＣＰ１と結合している。
【０２１１】
本明細書に開示される多重特異性抗体分子のいくつかの実施形態では：
ＨＣＰ１は、ＨＣＰ１の第２の分子よりも、ＨＣＰ２に対して高い親和性を持っている。および／または
ＨＣＰ２は、ＨＣＰ２の第２の分子よりも、ＨＣＰ１に対して高い親和性を持っている。
【０２１２】
実施形態において、ＨＣＰ２に対するＨＣＰ１の親和性は、ＨＣＰ１の第２分子に対する親和性よりも十分に大きいため、例えば、ｐＨ７の水性緩衝液、またはｐＨ７の生理食塩水、または生理学的条件下などの所定の条件下で、多重特異性抗体分子の分子の少なくとも７５％、８０、９０、９５、９８、９９、９９．５、または９９．９％が、ＨＣＰ１と複合体を形成した、またはＨＣＰ２と結合している。
【０２１３】
別の態様において、本明細書に開示されるのは、多重特異性抗体分子を作成または生産する方法である。方法には、
（ｉ）第１の重鎖ポリペプチド（例えば、第１の重鎖可変領域（第１のＶＨ）、第１のＣＨ１、第１の重鎖定常領域（例えば、第１のＣＨ２、第１のＣＨ３、または両方）の１つ、２つ、３つまたはすべてを含む重鎖ポリペプチド）を提供する；
（ｉｉ）第２の重鎖ポリペプチド（例えば、第２の重鎖可変領域（第２のＶＨ）、第２のＣＨ１、第２の重鎖定常領域（例えば、第２のＣＨ２、第２のＣＨ３、または両方）の１つ、２つ、３つまたはすべてを含む重鎖ポリペプチド）を提供する；
（ｉｉｉ）第１の重鎖ポリペプチド（例えば、第１のＶＨ）と優先的に結合するラムダ鎖ポリペプチド（例えば、ラムダ軽可変領域（ＶＬλ）、ラムダ軽定常鎖（ＶＬλ）、または両方）を提供する；および
（ｉｖ）第２の重鎖ポリペプチド（例えば、第２のＶＨ）と優先的に結合するカッパ鎖ポリペプチド（例えば、ラムダ軽可変領域（ＶＬκ）、ラムダ軽定常鎖（ＶＬκ）、またはその両方）を提供すること、
が、（ｉ）〜（ｉｖ）が関連する条件下で含まれる。
【０２１４】
実施形態では、第１および第２の重鎖ポリペプチドは、ヘテロ二量体化を促進するＦｃ界面を形成する。
【０２１５】
実施形態では、（ｉ）〜（ｉｖ）（例えば、（ｉ）〜（ｉｖ）をコードする核酸）は、単一の細胞、例えば、単一の哺乳動物細胞、例えば、ＣＨＯ細胞に導入される。実施形態では、（ｉ）〜（ｉｖ）は細胞内で発現される。
【０２１６】
実施形態では、（ｉ）〜（ｉｖ）（例えば、（ｉ）〜（ｉｖ）をコードする核酸）は、異なる細胞、例えば、異なる哺乳動物細胞、例えば、２つ以上のＣＨＯ細胞に導入される。実施形態では、（ｉ）〜（ｉｖ）は細胞内で発現される。
【０２１７】
一実施形態では、この方法は、例えば、ラムダおよび／またはカッパ特異的精製、例えば、アフィニティクロマトグラフィを使用して、細胞発現抗体分子を精製することをさらに含む。
【０２１８】
実施形態では、方法は、細胞発現された多重特異性抗体分子を評価することをさらに含む。例えば、精製された細胞発現多重特異性抗体分子は、質量分析を含む当技術分野で知られている技術によって分析することができる。一実施形態において、精製された細胞発現抗体分子は切断され、例えば、パパインで消化されて、Ｆａｂ部分を生じ、質量分析を使用して評価される。
【０２１９】
実施形態において、この方法は、例えば、少なくとも７５％、８０、９０、９５、９８、９９、９９．５、または９９．９％の高収率で、正確に対合したカッパ／ラムダ多重特異性、例えば、二重特異性抗体分子を生成する。
【０２２０】
他の実施形態では、多重特異性、例えば、二重特異性抗体分子は、
（ｉ）第１の重鎖ポリペプチド（ＨＣＰ１）（例えば、第１重鎖可変領域（第１のＶＨ）、第１のＣＨ１、第１の重鎖定常領域の１つ、２つ、３つ、またはすべてを含む重鎖ポリペプチド（例えば、第１ＣＨ２、第１ＣＨ３、または両方））、例えば、ＨＣＰ１は第１のエピトープに結合する；
（ｉｉ）第２の重鎖ポリペプチド（ＨＣＰ２）（例えば、第２の重鎖可変領域（第２のＶＨ）、第２のＣＨ１、第２の重鎖定常領域の１、２、３またはすべてを含む重鎖ポリペプチド（例えば、第２のＣＨ２、第２のＣＨ３、または両方））、例えば、ＨＣＰ２は第２のエピトープに結合する；
（ｉｉｉ）第１重鎖ポリペプチド（例えば、第１ＶＨ）と永続的に結合するラムダ軽鎖ポリペプチド（ＬＬＣＰ１）（例えば、ラムダ軽可変領域（ＶＬｌ）、ラムダ軽定常鎖（ＶＬｌ）、またはその両方）、例えば、ＬＬＣＰ１は第１のエピトープに結合する、および
（ｉｖ）第２重鎖ポリペプチド（例えば、第２ＶＨ）と永続的に結合するカッパ軽鎖ポリペプチド（ＫＬＣＰ２）（例えば、ラムダ軽可変領域（ＶＬｋ）、ラムダ軽定常鎖（ＶＬｋ）、またはその両方）、例えば、ＫＬＣＰ２が第２のエピトープに結合する場合
を含む。
【０２２１】
実施形態では、第１および第２の重鎖ポリペプチドは、ヘテロ二量体化を促進するＦｃ界面を形成する。実施形態において、多重特異性抗体分子は、Ｆｃ定常、ＣＨ２−ＣＨ３ドメイン（ノブ改変を有する）に接続された第１の重鎖可変領域にヘテロ二量体化されたハイブリッドＶＬｌ−ＣＬｌを含む第１結合特異性、およびＦｃ定常、ＣＨ２−ＣＨ３ドメイン（ホールの改変を有する）に接続された第２の重鎖可変領域にヘテロ二量体化されたハイブリッドＶＬｋ−ＣＬｋ含む第２結合特異性を有する。
【０２２２】
非隣接ポリペプチドを含む多重特異性分子
一実施形態では、多重特異性分子は単一のポリペプチド鎖ではない。
【０２２３】
一実施形態では、抗体分子は、２つの完全な重鎖と２つの完全な軽鎖を含む。一実施形態では、少なくとも２つまたは少なくとも３つの非隣接ポリペプチド鎖を有する多重特異性分子は、例えば、本書に記載されているような、少なくとも２つの非隣接ポリペプチド鎖に第１および第２の重鎖定常領域（例えば、第１および第２のＦｃ領域）を含む。
【０２２４】
実施形態において、多重特異性分子は二重特異性または二機能性分子であり、第１および第２のポリペプチド（ｉ）および（ｉｉ）は隣接しておらず、例えば、２つの別個のポリペプチド鎖である。いくつかの実施形態では、第１および第２のポリペプチド（ｉ）および（ｉｉ）は、例えば、Ｅｕ番号付けシステムに基づいて番号付けされた、ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域の３４７、３４９、３５０、３５１、３６６、３６８、３７０、３９２、３９４、３９５、３９７、３９８、３９９、４０５、４０７、または４０９のうちの１つまたは複数から選択される位置に、対のアミノ酸置換を含む。例えば、第１の重鎖定常領域（例えば、第１のＦｃ領域）は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、またはＹ４０７Ｖ（例えば、空洞またはホールに対応する）から選択されるアミノ酸置換を含むことができ、第２の重鎖定常領域（例えば、第２のＦｃ領域）は、Ｅｕ番号付けシステムに基づいて番号付けされたＴ３６６Ｗ（例えば、突起またはノブに対応する）を含む。一部の実施形態では、第１および第２のポリペプチドは、ヘテロ二量体の第１および第２のＦｃ領域の第１および第２のメンバーである。
【０２２５】
一部の実施形態では、第１のポリペプチドは、ＮからＣまでの以下の構成を有する：
（ａ）リンカーを介して第１重鎖定常領域に接続されていてもよい第１抗原、例えば、ＣＳＦ１Ｒに結合されるＦａｂ分子の第１ＶＨ−ＣＨ１などの第１の抗原ドメインの第１部分（例えば、ＣＨ３領域に接続されたＣＨ２）（例えば、第１のＦｃ領域）；（ｂ）リンカーを介して第２重鎖定常領域に接続されていてもよい第２抗原、例えば、ＣＣＲ２またはＣＸＣＲ２に結合されるＦａｂ分子の第２ＶＨ−ＣＨ１などの第２の抗原ドメインの第１部分（例えば、ＣＨ３領域に接続されたＣＨ２）（例えば、第１のＦｃ領域）；（ｃ）ＮからＣまで次の構成を有する第３ポリペプチド：第１抗原ドメインの第２部分、例えば、Ｆａｂの第１ＶＬ−ＣＬ、ここでＶＬはカッパサブタイプであり、第１抗原に結合する、例えば、ＣＳＦ１Ｒ（例えば、第１のＶＨ−ＣＨ１によって結合された同じ抗原）；（ｄ）第４のポリペプチドは、ＮからＣまでの以下の構成を有する：第２の抗原ドメインの第２の部分、例えば、Ｆａｂの第２のＶＬ−ＣＬドメイン、ここでＬがラムダサブタイプであり、第２の抗原、例えば、癌抗原、例えば、ＣＣＲ２またはＣＸＣＲ２（例えば、第２のＶＨ−ＣＨ１により結合された同じ抗原）に結合する。
【０２２６】
実施形態において、第１の重鎖定常領域（例えば、第１のＣＨ２−ＣＨ３領域）は、例えば、本明細書に記載されるように、突起またはノブを含む。実施形態において、第２の重鎖定常領域（例えば、第２のＣＨ２−ＣＨ３領域）は、空洞またはホールを含む。実施形態では、第１および第２の重鎖定常領域は、二重特異性分子のヘテロ二量体化を促進する。
【０２２７】
核酸
本発明はまた、本明細書に記載のように、抗体分子の重鎖および軽鎖可変領域およびＣＤＲまたは超可変ループをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を特徴とする。例えば、本発明は、本明細書に開示される抗体分子の１つ以上から選択される抗体分子の重鎖および軽鎖可変領域をそれぞれコードする第１および第２の核酸を特徴とする。核酸は、本明細書の表に記載されているヌクレオチド配列、またはそれと実質的に同一の配列（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％またはそれ以上同一の配列、または本明細書の表に示された配列から３、６、１５、３０、または４５ヌクレオチド以下異なる配列）を含むことができる。
【０２２８】
特定の実施形態では、核酸は、本明細書の表に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域からの少なくとも１、２、または３つのＣＤＲまたは超可変ループをコードするヌクレオチド配列、またはそれに実質的に相同な配列（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％以上同一の配列、および／または１つ以上の置換、例えば、保存された置換を有する配列）を含むことができる。他の実施形態では、核酸は、本明細書の表に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域からの少なくとも１、２、または３つのＣＤＲまたは超可変ループをコードするヌクレオチド配列、またはそれに実質的に相同な配列（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％以上同一の配列、および／または１つ以上の置換、例えば、保存された置換を有する配列）を含むことができる。さらに別の実施形態では、核酸は、本明細書の表に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域からの少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＣＤＲまたは超可変ループをコードするヌクレオチド配列、またはそれに実質的に相同な配列（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％以上同一の配列、および／または１つ以上の置換、例えば、保存された置換を有する配列）を含むことができる。
【０２２９】
特定の実施形態では、核酸は、本明細書の表に記載のヌクレオチド配列を有する重鎖可変領域からの少なくとも１、２、または３つのＣＤＲまたは超可変ループをコードするヌクレオチド配列を含むことができ、配列は実質的に相同である（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％以上同一の配列、および／または本明細書に記載のストリンジェンシー条件下でハイブリダイズできる配列である）。別の実施形態では、核酸は、本明細書の表に記載のヌクレオチド配列を有する軽鎖可変領域からの少なくとも１、２、または３つのＣＤＲまたは超可変ループをコードするヌクレオチド配列を含むことができ、または配列は実質的に相同である（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％以上同一の配列、および／または本明細書に記載のストリンジェンシー条件下でハイブリダイズできる配列である）。さらに別の実施形態では、核酸は、本明細書の表に記載のヌクレオチド配列を有する軽鎖可変領域からの少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＣＤＲまたは超可変ループをコードするヌクレオチド配列を含むことができ、または配列は実質的に相同である（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％以上同一の配列、および／または本明細書に記載のストリンジェンシー条件下でハイブリダイズできる配列である）。
【０２３０】
別の態様において、本願は、本明細書に記載の核酸を含む宿主細胞およびベクターを特徴とする。核酸は、本明細書で以下により詳細に記載されるように、同じ宿主細胞または別個の宿主細胞に存在する単一ベクターまたは別個のベクターに存在してもよい。
【０２３１】
ベクター
本明細書にさらに記載されるのは、本明細書に記載される抗体分子をコードするヌクレオチド配列を含むベクターである。一実施形態では、ベクターは、本明細書に記載の抗体分子をコードするヌクレオチドを含む。一実施形態では、ベクターは本明細書に記載のヌクレオチド配列を含む。ベクターには、ウイルス、プラスミド、コスミド、ラムダファージまたは酵母人工染色体（ＹＡＣ）が含まれるが、これらに限定されない。
【０２３２】
多数のベクターシステムを使用できる。例えば、あるクラスのベクターは、例えば、ウシパピローマウイルス、ポリオーマウイルス、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、バキュロウイルス、レトロウイルス（ラウス肉腫ウイルス、ＭＭＴＶまたはＭＯＭＬＶ）またはＳＶ４０ウイルスなどの動物のウイルスに由来するＤＮＡ要素を利用する。別のクラスのベクターは、セムリキ森林ウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、フラビウイルスなどのＲＮＡウイルスに由来するＲＮＡ要素を利用する。
【０２３３】
さらに、トランスフェクトされた宿主細胞の選択を可能にする１つまたは複数のマーカーを導入することにより、ＤＮＡを染色体に安定して組み込んだ細胞を選択することができる。マーカーは、例えば、栄養要求性宿主に対する原栄養性、殺生物剤耐性（例えば、抗生物質）、または銅などの重金属に対する耐性などを提供し得る。選択可能なマーカー遺伝子は、発現されるＤＮＡ配列に直接リンクされるか、同時形質転換によって同じ細胞に導入される。ｍＲＮＡの最適な合成には、追加の要素も必要になる場合がある。これらの要素には、スプライスシグナル、ならびに転写プロモーター、エンハンサー、および終結シグナルが含まれる場合がある。
【０２３４】
発現ベクターまたは構築物を含むＤＮＡ配列が発現のために調製されると、発現ベクターは適切な宿主細胞にトランスフェクトまたは導入され得る。これを達成するために、例えば、プロトプラスト融合、リン酸カルシウム沈殿、エレクトロポレーション、レトロウイルス形質導入、ウイルストランスフェクション、遺伝子銃、脂質ベースのトランスフェクションまたは他の従来の技法などの様々な技法を使用することができる。プロトプラスト融合の場合、細胞を培地で増殖させ、適切な活性についてスクリーニングする。結果として生じるトランスフェクトされた細胞を培養し、産生された抗体分子を回収する方法および条件は、当業者に知られており、本説明に基づいて、使用される特定の発現ベクターおよび哺乳動物宿主細胞に応じて、変更または最適化することができる。
【０２３５】
細胞
別の態様において、本願は、本明細書に記載の核酸を含む宿主細胞およびベクターを特徴とする。核酸は、同じ宿主細胞または別個の宿主細胞に存在する単一ベクターまたは別個のベクターに存在してもよい。宿主細胞は、真核細胞、例えば、哺乳動物細胞、昆虫細胞、酵母細胞、または原核細胞、例えば、大腸菌であり得る。例えば、哺乳動物細胞は、培養細胞または細胞株であり得る。例示的な哺乳動物細胞には、リンパ球細胞系（例えば、ＮＳＯ）、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）、ＣＯＳ細胞、卵母細胞細胞、およびトランスジェニック動物由来の細胞、例えば、乳腺上皮細胞が含まれる。
【０２３６】
本発明はまた、本明細書に記載の抗体分子をコードする核酸を含む宿主細胞を提供する。
【０２３７】
一実施形態では、宿主細胞は、抗体分子をコードする核酸を含むように遺伝子操作される。
【０２３８】
一実施形態において、宿主細胞は、発現カセットを使用することにより遺伝子操作される。「発現カセット」という語句は、ヌクレオチド配列を指し、これは、そのような配列と適合する宿主における遺伝子の発現に影響を与えることができる。そのようなカセットは、プロモーター、イントロンを伴うまたは伴わないオープンリーディングフレーム、および終結シグナルを含み得る。例えば、誘導性プロモーターなど、発現をもたらすのに必要または有用な追加の因子も使用できる。
【０２３９】
本発明は、本明細書に記載のベクターを含む宿主細胞も提供する。
【０２４０】
細胞は、真核細胞、細菌細胞、昆虫細胞、またはヒト細胞であり得るが、これらに限定されない。適切な真核細胞には、Ｖｅｒｏ細胞、ＨｅＬａ細胞、ＣＯＳ細胞、ＣＨＯ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＢＨＫ細胞およびＭＤＣＫＩＩ細胞が含まれるが、これらに限定されない。適切な昆虫細胞には、Ｓｆ９細胞が含まれるが、これに限定されない。
【０２４１】
使用および併用療法
本明細書に記載の多重特異性分子は、単独で、または第２の治療法または第２の治療薬と組み合わせて、過剰増殖性障害、癌、または線維性障害を治療するために使用できる。
【０２４２】
癌
本明細書に記載の方法は、例えば、本明細書に記載の医薬組成物を使用して、本明細書に記載の多重特異性分子を使用することにより、対象の癌を治療することを含む。また、対象の癌の症状を軽減または改善する方法、ならびに癌の増殖を阻害するおよび／または１つまたは複数の癌細胞を死滅させる方法も提供される。実施形態では、本明細書に記載の方法は、腫瘍のサイズを小さくする、および／または本明細書に記載の、または本明細書に記載の医薬組成物を投与された対象の癌細胞の数を減少させる。
【０２４３】
実施形態では、癌は血液癌である。実施形態では、血液癌は白血病またはリンパ腫である。本明細書で使用される場合、「血液癌」は、造血またはリンパ組織の腫瘍、例えば、血液、骨髄、またはリンパ節に影響を及ぼす腫瘍を指す。例示的な血液悪性腫瘍には、白血病（例えば、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、有毛細胞白血病、急性単球性白血病（ＡＭｏＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、若年性骨髄単球性白血病（ＪＭＭＬ）、または大顆粒リンパ球性白血病、リンパ腫（例えば、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫（例えば、古典的ホジキンリンパ腫または結節リンパ球優勢ホジキンリンパ腫）、菌状息肉腫、非ホジキンリンパ腫（例えば、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（例えば、バーキットリンパ腫、小リンパ球性リンパ腫（ＣＬＬ／ＳＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、免疫芽球大細胞リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、またはマントル細胞リンパ腫）またはＴ細胞非ホジキンリンパ腫（菌状息肉腫、未分化大細胞リンパ腫、または前駆Ｔリンパ芽球性リンパ腫））、原発性中枢神経系リンパ腫、セザリー症候群、ワルデンストロームマクログロブリン血症）、慢性骨髄増殖性新生物、ランゲルハンス細胞組織球症、多発性骨髄腫／形質細胞新生物、骨髄異形成症候群、または骨髄異形成／骨髄増殖性新生物が含まれるが、これらに限定されない。
【０２４４】
実施形態では、癌は固形癌である。例示的な固形癌には、卵巣癌、直腸癌、胃癌、精巣癌、肛門領域の癌、子宮癌、結腸癌、直腸癌、腎細胞癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、小腸癌、食道癌、黒色腫、カポジ肉腫、内分泌系癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頸部癌、皮膚または眼内悪性黒色腫、子宮癌、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、類表皮癌、子宮頸部扁平上皮癌、卵管癌、子宮内膜癌、膣の癌、軟部組織の肉腫、尿道の癌、外陰部の癌、陰茎の癌、膀胱の癌、腎臓または尿管の癌、腎盂癌、脊椎軸腫瘍、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、前述の癌の転移病変、またはそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
【０２４５】
特定の実施形態では、癌は上皮性、間葉性または血液悪性腫瘍である。特定の実施形態において、治療される癌は、固形腫瘍（例えば、カルチノイド、癌腫または肉腫）、軟部組織腫瘍（例えば、ヘム悪性腫瘍）、および転移病変、例えば、本明細書に開示される癌のいずれかの転移病変である。一実施形態では、治療される癌は、線維性または線維形成性固形腫瘍、例えば、限られた腫瘍灌流、圧迫血管、線維性腫瘍間質、または間質液圧の増加のうちの１つ以上を有する腫瘍である。一実施形態では、固形腫瘍は、膵臓（例えば、膵臓腺癌または膵管腺癌）、乳房、結腸、結腸直腸、肺（例えば、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）または非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ））、皮膚、卵巣、肝臓の癌、食道癌、子宮内膜癌、胃癌、頭頸部癌、腎臓、または前立腺癌の１つまたは複数から選択される。
【０２４６】
癌の例には、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、および白血病またはリンパ性悪性腫瘍が含まれるが、これらに限定されない。そのような癌のより具体的な例は以下に記載されており、扁平上皮癌（例えば、上皮扁平上皮癌）、小細胞肺癌を含む肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌および肺扁平上皮癌、腹膜癌、肝細胞癌、胃腸癌といった胃癌、膵臓癌、膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓の癌、膀胱癌、肝癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌または子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌または腎癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝臓の癌、肛門癌、陰茎癌、ならびに頭頸部癌を含む。「癌」という用語には、原発性悪性細胞または腫瘍（例えば、元の悪性腫瘍または腫瘍の部位以外の対象の体内の部位に細胞が移動していないもの）および二次悪性細胞または腫瘍（例えば、転移から生じるもの、悪性細胞または腫瘍細胞の、元の腫瘍の部位とは異なる二次部位への移動）が含まれる。
【０２４７】
癌または悪性腫瘍の他の例には、急性小児リンパ芽球性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、副腎皮質癌、成人（原発）肝細胞癌、成人（原発）肝癌、成人急性リンパ球性白血病、成人急性骨髄性白血病、成人ホジキン病、成人ホジキンリンパ腫、成人リンパ球性白血病、成人非ホジキンリンパ腫、成人原発性肝癌、成人軟部組織肉腫、エイズ関連リンパ腫、エイズ関連悪性腫瘍、肛門癌、星状細胞腫、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳幹グリオーマ、脳腫瘍、乳癌、腎盂および尿管癌、中枢神経系（原発）リンパ腫、中枢神経系リンパ腫、小脳星状細胞腫、脳星状細胞腫、子宮頸癌、小児（原発性）肝細胞癌、小児（原発性）肝臓癌、小児期急性リンパ芽球性白血病、小児期急性骨髄性白血病、小児脳幹グリオーマ、小児小脳星細胞腫、小児脳星状細胞腫、小児頭蓋外胚細胞腫瘍、小児ホジキン病、小児ホジキンリンパ腫、小児視床下部および視覚経路リンパ腫、小児リンパ芽球性白血病、小児髄芽腫、小児非ホジキンリンパ腫、小児松果体およびテント上原始神経外胚葉性腫瘍、小児原発性肝癌、小児横紋筋肉腫、小児軟部組織肉腫、小児視覚経路および視床下部神経膠腫、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、結腸癌、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、膵臓内分泌膵島細胞癌、子宮内膜癌、上衣腫、上皮癌、食道癌、ユーイング肉腫および関連腫瘍、外分泌膵癌、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、肝外胆管癌、眼癌、女性乳癌、ゴーシェ病、胆嚢癌、胃癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管腫瘍、胚細胞腫瘍、妊娠性絨毛腫瘍、有毛細胞白血病、頭頸部癌、肝細胞癌、ホジキン病、ホジキンリンパ腫、高ガンマグロブリン血症、下咽頭癌、腸癌、眼内黒色腫、膵島細胞癌、膵島細胞膵癌、カポジ肉腫、腎臓癌、喉頭癌、口唇および口腔癌、肝臓癌、肺癌、リンパ増殖性疾患、マクログロブリン血症、男性乳癌、悪性腫瘍、悪性胸腺腫、髄芽腫、黒色腫、中皮腫、転移性潜在性扁平上皮頸部癌、転移性原発扁平上皮癌、転移性扁平上皮癌、多発性骨髄腫、多発性骨髄腫／血漿細胞新生物、骨髄異形成症候群、骨髄性白血病、骨髄性白血病、骨髄増殖性疾患、鼻腔および副鼻腔癌、鼻咽頭癌、神経芽細胞腫、妊娠中の非ホジキンリンパ腫、非黒色腫皮膚癌、非小細胞肺癌、潜在性原発性転移性扁平上皮頸部癌、中咽頭癌、骨／悪性線維肉腫、骨肉腫／骨肉腫線維性組織球腫、骨肉腫／骨の悪性線維性組織球腫、卵巣上皮癌、卵巣胚細胞腫瘍、卵巣低悪性腫瘍、膵臓癌、パラプロテイン血症、紫斑病、副甲状腺癌、陰茎癌、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、形質細胞腫瘍／多発性骨髄腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性肝癌、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌、腎盂および尿管癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、サルコイドーシス肉腫、セザリー症候群、皮膚癌、小細胞肺癌、小腸癌、軟部組織肉腫、扁平上皮頸部癌、胃癌、テント上原始神経外胚葉性および松果体腫瘍、Ｔ細胞リンパ腫、精巣腫瘍、胸腺腫、甲状腺癌、腎盂および尿管の移行上皮細胞癌、移行性腎盂および尿管癌、絨毛腫瘍、尿管および腎盂癌、尿道癌、子宮癌、子宮肉腫、膣癌、視覚経路および視床下部神経膠腫、外陰癌、ワルデンストロームのマクログロブリン血症、ウィルムス腫瘍、および上記の臓器系に存在する腫瘍以外の他のいずれかの過増殖性疾患が含まれるが、これらに限定されない。
【０２４８】
他の実施形態において、上記および本明細書に記載の多重特異性分子は、過剰増殖性障害、例えば、過剰増殖性結合組織障害（例えば、過剰増殖性線維性疾患）を治療するために使用される。一実施形態では、過剰増殖性線維性疾患は、全身性または臓器特異的である。例示的な過剰増殖性線維性疾患には、多体系性（例えば、全身性硬化症、多病巣性線維硬化症、骨髄移植レシピエントにおける強皮腫移植片対宿主病、腎性全身性線維症、強皮症）、および臓器特異的障害（例えば、眼、肺、肝臓、心臓、腎臓、膵臓、皮膚およびその他の臓器の線維症）が含まれるが、これらに限定されない。他の実施形態では、障害は肝硬変または結核から選択される。他の実施形態において、障害はハンセン病である。
【０２４９】
実施形態において、多重特異性分子（または医薬組成物）は、治療または予防される疾患に適切な方法で投与される。投与の量と頻度は、患者の状態、患者の病気の種類と重症度などの要因によって決まる。適切な投与量は、臨床治験によって決定される場合がある。例えば、「有効量」または「治療量」が示される場合、投与される医薬組成物（または多重特異性分子）の正確な量は、腫瘍の大きさ、感染または転移、の程度年齢、体重、および対象の状態の個人差を考慮して医師が決定できる。実施形態において、本明細書に記載の医薬組成物は、１０４〜１０９細胞／ｋｇ体重、例えば、１０５〜１０６細胞／ｋｇ体重の用量で投与することができ、それらの範囲内のすべての整数値を含む。実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、これらの用量で複数回投与することができる。実施形態において、本明細書に記載される医薬組成物は、免疫療法に記載される注入技術を使用して投与され得る（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇ．Ｊ．ｏｆ  Ｍｅｄ．３１９：１６７６，１９８８を参照）。
【０２５０】
実施形態では、多重特異性分子または医薬組成物は、対象に非経口投与される。実施形態では、細胞は、静脈内、皮下、腫瘍内、結節内、筋肉内、皮内、または腹腔内にて対象に投与される。実施形態では、細胞は、腫瘍またはリンパ節に直接投与、例えば、注射される。実施形態では、細胞は、輸液（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇ．Ｊ．ｏｆ  Ｍｅｄ．３１９：１６７６，１９８８に記載されているように）または静脈内プッシュとして投与される。実施形態では、細胞は注射可能なデポー製剤として投与される。
【０２５１】
実施形態では、対象は哺乳動物である。実施形態では、対象は、ヒト、サル、ブタ、イヌ、ネコ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウサギ、ラット、またはマウスである。実施形態では、対象はヒトである。実施形態において、対象は、例えば、１８歳未満、例えば、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１歳、またはそれ未満の年齢の小児対象である。実施形態において、対象は、例えば、少なくとも１８歳、例えば、少なくとも１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２５〜３０歳、３０〜３５歳、３５〜４０歳、４０〜５０歳、５０〜６０歳、６０〜７０歳、７０〜８０歳、または８０〜９０歳などの成人である。
【０２５２】
肝臓の状態または障害
本発明はまた、本明細書に記載の多重特異性分子または医薬組成物を使用して肝臓の状態または障害を治療する方法を提供する。
【０２５３】
本明細書で使用される場合、「肝臓障害療法」は、本明細書に記載の肝臓障害を治療または予防するために使用される療法または治療薬を指し、したがって、肝癌療法および他の肝障害療法、例えば、線維性肝障害、脂肪肝疾患、肝炎症障害、自己免疫性肝疾患、および遺伝病、アルコール依存症、薬物毒性、感染、または傷害によって引き起こされる肝障害の療法を包含する。
【０２５４】
肝癌の例には、肝細胞癌（ＨＣＣ）、原発性肝細胞癌、肝癌、線維層癌、限局性結節性過形成、胆管肉腫、肝内胆管癌、血管肉腫または血管肉腫、肝腺腫、肝血管腫、肝過誤腫、肝芽腫、乳児良性血管内皮腫、肝臓の混合腫瘍、間葉組織の腫瘍、肝臓の肉腫が含まれる。肝臓に転移する可能性のある癌の例には、乳癌、結腸直腸癌、食道癌、腎臓癌または腎癌、肺癌、卵巣癌、膵臓癌、直腸癌、皮膚癌（例えば、黒色腫）、胃癌（胃腸癌を含む）、および子宮癌が含まれる。
【０２５５】
実施形態では、肝臓障害は、肝臓の機能または生理に影響を及ぼす線維性障害または結合組織障害である。一実施形態では、線維性障害または結合組織障害は、全身性（全身に影響を及ぼす）、多臓器、または臓器特異的（例えば、肝臓特異的）であり得る。線維性肝障害の例には、肝線維症（肝の線維症）、肝硬変、および細胞外マトリックスタンパク質の蓄積に関連する任意の障害、例えば、肝臓のコラーゲン、肝臓の瘢痕、および／または異常な肝血管が含まれる。肝線維症は、肝臓の炎症または損傷によって引き起こされ、コラーゲンを含む細胞外マトリックスタンパク質および肝臓の瘢痕組織の蓄積を引き起こす。肝硬変は、肝線維症の最終段階であり、（修復プロセスの結果として）再生結節を伴い、肝血管系の歪みを伴う。肝線維症は、慢性ウイルス感染症（Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎など）、アルコール依存症、脂肪肝疾患によって最も一般的に引き起こされる。
【０２５６】
脂肪肝疾患の例には、脂肪肝（またはＦＬＤ）、アルコール性肝疾患、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、アルコール性脂肪性肝炎、単純脂肪症、ライ症候群、および肝細胞における脂質の異常保持に関連するいずれかの障害が含まれる。
【０２５７】
一実施形態では、肝疾患はＮＡＳＨである。
【０２５８】
代謝障害は肝臓にも影響を及ぼし、肝臓障害を引き起こす可能性がある。肝臓の代謝障害または肝臓に影響を与える例には、ヘマクロマトーシス、糖尿病、肥満、高血圧、脂質異常症、ガラクトース血症、およびグリコーゲン蓄積症が含まれる。
【０２５９】
肝臓の自己免疫疾患または肝臓に影響を及ぼす疾患には、全身性疾患または肝臓以外の臓器に主に影響を与えるが、肝細胞または肝機能に二次的な影響を与える疾患が含まれる。そのような自己免疫障害の例には、自己免疫性肝炎（ＡＩＨ）、自己免疫性肝疾患、ループ状肝炎、全身性エリテマトーデス、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）、強皮症、および全身性硬化症が含まれる。
【０２６０】
線維性疾患または障害
別の態様では、本発明は、対象の線維性状態または線維性障害を治療または予防する方法を特徴とする。この方法は、多重特異分子を、単一薬剤として、または別の薬剤または治療様式と組み合わせて、それを必要とする対象に、対象の線維性状態を減少または阻害するのに十分な量で投与することを含む。
【０２６１】
特定の実施形態では、線維症の低減、または線維性状態の治療は、組織線維症の形成または沈着の１つまたは複数を低減または抑制すること；線維性病変のサイズ、細胞性（例えば、線維芽細胞または免疫細胞数）、組成または細胞の含有物を減少させること；線維性病変のコラーゲンまたはヒドロキシプロリン含有量を減らすこと；線維形成タンパク質の発現または活性を低下させること；炎症反応に関連する線維症を軽減させること；線維症に関連する体重減少を減少させること；または生存率を高めることを含む。
【０２６２】
特定の実施形態では、線維性状態は原発性線維症である。一実施形態では、線維性状態は特発性である。他の実施形態において、線維性状態は、疾患（例えば、感染性疾患、炎症性疾患、自己免疫疾患、悪性疾患または癌性疾患、および／または結合疾患）；毒素；傷害（例えば、環境ハザード（例えば、アスベスト、石炭粉、多環芳香族炭化水素）、喫煙の煙、傷）；医学的治療（例えば、外科的切開、化学療法または放射線）、またはそれらの組み合わせに関連する（例えば、続発する）。
【０２６３】
特定の実施形態では、線維性状態は、肺の線維性状態、肝臓の線維性状態（例えば、本明細書に記載）、心臓または血管系の線維性状態、腎臓の線維性状態、皮膚の線維性状態、胃腸管の線維性状態、骨髄または造血組織の線維性状態、神経系の線維性状態、眼の線維性状態、またはそれらの組み合わせである。
【０２６４】
特定の実施形態では、線維性状態は肺の線維性状態である。特定の実施形態では、肺の線維性状態は、肺線維症、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、通常の間質性肺炎（ＵＩＰ）、間質性肺疾患、潜在性線維化肺胞炎（ＣＦＡ）、気管支拡張症、および強皮症の肺疾患の１つまたは複数から選択される。一実施形態では、肺の線維症は、疾患、毒素、傷害、医学的治療、またはそれらの組み合わせに続発する。例えば、肺の線維症は、石綿肺や珪肺などの疾患のプロセス；職業上の危険；環境汚染物質；喫煙；自己免疫性結合組織障害（例えば、関節リウマチ、強皮症、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ））；サルコイドーシスなどの結合組織障害；感染性疾患、例えば、感染症、特に慢性感染症；放射線療法、薬物療法、例えば、化学療法を含むがこれらに限定されない医学的治療（ブレオマイシン、メトトレキサート、アミオダロン、ブスルファン、および／またはニトロフラントインによる治療など）のうちの１つまたは複数に関連している可能性がある（例えば、続発する）。一実施形態では、本発明の方法で治療される肺の線維性状態は、癌治療、例えば、癌（例えば、ブレオマイシンによる扁平上皮癌、精巣癌、ホジキン病の治療）に関連する（例えば、続発する）。一実施形態では、肺の線維性状態は、自己免疫結合組織障害（例えば、強皮症またはループス、例えば、ＳＬＥ）に関連している。
【０２６５】
肺線維症は、石綿肺や珪肺などの疾患のプロセスの二次的な影響として発生する可能性があり、環境汚染物質への暴露が職業上の危険である炭鉱労働者、船舶労働者、サンドブラスターなどの特定の職業でより一般的であることが知られている（Ｇｒｅｅｎ，ＦＨ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｔｏｘｉｃｏｌ  Ｐａｔｈｏｌ．３５：１３６−４７）。肺線維症に寄与する他の要因には、喫煙、および関節リウマチ、強皮症、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）などの自己免疫結合組織障害が含まれる（Ｌｅｓｌｉｅ，ＫＯ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｓｅｍｉｎ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．２８：３６９−７８；Ｓｗｉｇｒｉｓ，  ＪＪ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｃｈｅｓｔ．１３３：２７１−８０；ａｎｄ  Ａｎｔｏｎｉｏｕ，ＫＭ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．２０：６８６−９１）。サルコイドーシスなどの他の結合組織障害には、疾患の一部として肺線維症が含められ（Ｐａｒａｍｏｔｈａｙａｎ，Ｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｒｅｓｐｉｒ  Ｍｅｄ．１０２：１−９）、肺の感染性疾患は、長期的な感染症の結果として線維症、特に慢性感染症を引き起こす可能性がある。
【０２６６】
肺線維症は、特定の医学的治療、特に胸部への放射線療法、ブレオマイシン、メトトレキサート、アミオダロン、ブスルファン、ニトロフラントインなどの特定の薬の副作用になる可能性もある（Ｃａｔａｎｅ，Ｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９７９）Ｉｎｔ  Ｊ  Ｒａｄｉａｔ  Ｏｎｃｏｌ  Ｂｉｏｌ  Ｐｈｙｓ．５：１５１３−８；Ｚｉｓｍａｎ，ＤＡ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｓａｒｃｏｉｄｏｓｉｓ  Ｖａｓｃ  Ｄｉｆｆｕｓｅ  Ｌｕｎｇ  Ｄｉｓ．１８：２４３−５２；Ｒａｋｉｔａ，Ｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９８３）Ａｍ  Ｈｅａｒｔ  Ｊ．１０６：９０６−１６；Ｔｗｏｈｉｇ，ＫＪ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｃｌｉｎ  Ｃｈｅｓｔ  Ｍｅｄ．１１：３１−５４；およびＷｉｔｔｅｎ  ＣＭ．（１９８９）Ａｒｃｈ  Ｐｈｙｓ  Ｍｅｄ  Ｒｅｈａｂｉｌ．７０：５５−７）。他の実施形態において、特発性肺線維症は、明確な原因因子または疾患を特定できない場合に発生する可能性がある。これらの肺線維症の場合、遺伝因子が重要な役割を果たす可能性がある（Ｓｔｅｅｌｅ，ＭＰ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｒｅｓｐｉｒａｔｉｏｎ  ７４：６０１−８；Ｂｒａｓｓ，ＤＭ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｐｒｏｃ  Ａｍ  Ｔｈｏｒａｃ  Ｓｏｃ．４：９２−１００、およびｄｕ  Ｂｏｉｓ  ＲＭ．（２００６）Ｓｅｍｉｎ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．２７：５８１−８）。
【０２６７】
他の実施形態では、肺線維症には、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、急性呼吸促迫症候群、強皮症、胸膜線維症、慢性喘息、急性肺症候群、アミロイドーシス、気管支肺異形成、カプラン病、ドレスラー症候群、組織球症Ｘ、特発性肺血腫症、リンパ管筋腫症、僧帽弁狭窄症、多発性筋炎、肺水腫、肺高血圧症（例えば、特発性肺高血圧症（ＩＰＨ））、塵肺症、放射線療法（例えば、放射線誘発線維症）、リウマチ性疾患、シェイバー病、全身性エリテマトーデス、全身性硬化症、熱帯性肺好酸球増加症、結節性硬化症、ウェーバー・クリスチャン病、ウェゲナー肉芽腫症、ホイップル病、または毒素または刺激物への暴露（例えば、アミオダロン、ブレオマイシン、ブスルファン、カルムスチン、クロラムフェニコール、ヘキサメトニウム、メトトレキサート、メチセルギド、ミトマイシンＣ、ニトロフラントイン、ペニシラミン、ペプロマイシン、およびプラクトロール；タルクまたは粉塵、例えば、石炭粉塵、シリカの吸入）などの医薬的な薬物に関連する肺線維症が含まれるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、肺線維症は、肺の炎症性障害、例えば、喘息、および／またはＣＯＰＤに関連している。
【０２６８】
特定の実施形態では、線維性状態は肝臓の線維性状態である。特定の実施形態では、肝臓の線維性状態は、脂肪肝疾患、脂肪症（例えば、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、胆汁うっ滞性肝疾患（例えば、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ））、肝硬変、アルコール誘発性肝線維症、胆管損傷、胆管線維症、または胆管障害の１つまたは複数から選択される。他の実施形態において、肝線維症または肝線維症には、アルコール依存症、ウイルス感染症、例えば、肝炎（例えば、Ｃ型肝炎、Ｂ型肝炎またはＤ型肝炎）、自己免疫性肝炎、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、進行性の巨大線維症、毒素または刺激物への暴露（例えば、アルコール、医薬品、環境毒素）に関連する肝線維症が含まれるが、これらに限定されない。肝臓の状態および障害の追加の例は、本明細書で提供される「肝臓の状態または障害」と題されたセクションで提供される。
【０２６９】
特定の実施形態では、線維性状態は腎臓の線維性状態である。特定の実施形態では、腎臓の線維性状態は、腎線維症（例えば、慢性腎線維症）、傷害／線維症に関連する腎症（例えば、糖尿病に関連する慢性腎症（例えば、糖尿病性腎症））、ループス、腎臓の強皮症、糸球体腎炎、限局性糸球体硬化症、ヒト慢性腎疾患（ＣＫＤ）に伴うＩｇＡ腎症腎線維症、慢性進行性腎症（ＣＰＮ）、尿細管間質性線維症、尿管閉塞、慢性尿毒症、慢性間質性腎炎、放射線腎症、糸球体硬化症、進行性糸球体腎症（ＰＧＮ）、内皮／血栓性微小血管障害、ＨＩＶ関連腎症、または毒素、刺激物、または化学療法剤への暴露に関連する線維症の１つ以上から選択される。一実施形態では、腎臓の線維性状態は腎臓の強皮症である。いくつかの実施形態において、腎臓の線維性状態は、移植腎症、糖尿病性腎症、ループス腎炎、限局性分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、内皮／血栓性微小血管障害、腎臓の強皮症、ＨＩＶ関連腎症（ＨＩＶＶＡＮ）、または毒素、刺激物、化学療法剤への暴露である。
【０２７０】
特定の実施形態では、線維性状態は、骨髄または造血組織の線維性状態である。特定の実施形態では、骨髄の線維性状態は、原発性骨髄線維症（本明細書では無造血骨髄化生または慢性特発性骨髄線維症とも呼ばれる）などの骨髄の慢性骨髄増殖性新生物の固有の特徴である。他の実施形態において、骨髄線維症は、悪性状態またはクローン増殖性疾患によって引き起こされる状態に関連する（例えば、続発する）。他の実施形態において、骨髄線維症は、血液疾患（例えば、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、骨髄異形成、有毛細胞白血病、リンパ腫（例えば、ホジキンまたは非ホジキンリンパ腫）、多発性骨髄腫または慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）の１つまたは複数から選択される血液学的障害）に関連している。さらに他の実施形態において、骨髄線維症は、非血液学的障害（例えば、骨髄への固形腫瘍転移から選択される非血液学的障害、自己免疫障害（例えば、全身性エリテマトーデス、強皮症、混合性結合組織障害、または多発性筋炎）、感染症（結核、ハンセン病など）、またはビタミンＤ欠乏に伴う二次性副甲状腺機能亢進症に関連する（例えば、続発する）。いくつかの実施形態では、線維性状態は特発性または薬物誘発性の骨髄線維症である。いくつかの実施形態では、骨髄または造血組織の線維性状態は、全身性エリテマトーデスまたは強皮症に関連している。
【０２７１】
他の実施形態において、線維性状態は、ハンセン病または結核に関連している。
【０２７２】
特定の実施形態において、線維性状態は、骨髄の線維性状態である。特定の実施形態において、骨髄の線維性状態は、骨髄線維症（例えば、原発性骨髄線維症（ＰＭＦ））、骨髄化生、慢性特発性骨髄線維症、または原発性骨髄線維症である。他の実施形態では、骨髄線維症は、有毛細胞白血病、リンパ腫、または多発性骨髄腫の１つまたは複数から選択される血液学的障害に関連している。
【０２７３】
他の実施形態において、骨髄線維症は、本態性血小板血症（ＥＴ）、真性赤血球増加症（ＰＶ）、肥満細胞症、慢性好酸球性白血病、慢性好中球性白血病、または他のＭＰＮから選択される１つまたは複数の骨髄増殖性腫瘍（ＭＰＮ）に関連している。
【０２７４】
一実施形態では、線維性状態は原発性骨髄線維症である。原発性骨髄線維症（ＰＭＦ）（文献では特発性骨髄性化生およびＡｇｎｏｇｅｎｉｃ骨髄性化生とも呼ばれる）は、多能性造血前駆細胞のクローン障害である（Ａｂｄｅｌ−Ｗａｈａｂ，Ｏ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．６０：２３３−４５；Ｖａｒｉｃｃｈｉｏ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ．Ｈｅｍａｔｏｌ．２（３）：３１５−３３４；Ａｇｒａｗａｌ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｃａｎｃｅｒ  １−１５）にてレビュー）。
【０２７５】
特定の実施形態において、線維性状態は、心臓の線維性状態である。特定の実施形態では、心臓の線維性状態は、心筋線維症（例えば、放射線心筋炎に関連する心筋線維症、外科手術合併症（例えば、心筋術後線維症）、感染性疾患（例えば、シャーガス病、細菌、旋毛虫症または真菌性心筋炎））；肉芽腫性の代謝性貯蔵障害（例えば、心筋症、ヘモクロマトーシス）；発達障害（例えば、心内膜線維弾性症）；動脈硬化、または毒素または刺激物への暴露（例えば、薬物誘発性心筋症、薬物誘発性心毒性、アルコール性心筋症、コバルト中毒または暴露）である。特定の実施形態において、心筋線維症は、心臓組織の炎症性障害（例えば、心筋サルコイドーシス）に関連している。いくつかの実施形態では、線維性状態は、心筋梗塞に関連する線維性状態である。いくつかの実施形態では、線維性状態は、うっ血性心不全に関連する線維性状態である。
【０２７６】
いくつかの実施形態において、線維性状態は、強皮症またはループスから選択される自己免疫疾患、例えば、全身性エリテマトーデスに関連している。
【０２７７】
いくつかの実施形態において、線維性状態は全身性である。いくつかの実施形態では、線維性状態は、全身性硬化症（例えば、限局性全身性硬化症、びまん性全身性硬化症、または全身性硬化症のサイン強皮症）、腎性全身性線維症、嚢胞性線維症、慢性移植片対宿主病、またはアテローム性動脈硬化症である。
【０２７８】
いくつかの実施形態では、線維症は強皮症である。いくつかの実施形態において、強皮症は、限局性、例えば、形態または線形強皮症である。いくつかの実施形態では、状態は、全身性硬化症、例えば、限定された全身性硬化症、びまん性全身性硬化症、または全身性硬化症のサイン強皮症である。
【０２７９】
他の実施形態では、線維性状態は、筋肉、腱、軟骨、皮膚（例えば、皮膚表皮または内皮）、心臓組織、血管組織（例えば、動脈、静脈）、膵臓組織、肺組織、肝臓組織、腎臓組織、子宮組織、卵巣組織、神経組織、精巣組織、腹膜組織、結腸、小腸、胆道、腸、骨髄、造血組織、または眼（例えば、網膜）組織のうちの１つ以上から選択される組織に影響を及ぼす。
【０２８０】
いくつかの実施形態では、線維性状態は眼の線維性状態である。いくつかの実施形態では、線維性状態は、緑内障、黄斑変性症（例えば、加齢黄斑変性症）、黄斑浮腫（例えば、糖尿病性黄斑浮腫）、網膜症（例えば、糖尿病性網膜症）、またはドライアイ疾患である。
【０２８１】
特定の実施形態において、線維性状態は、皮膚の線維性状態である。特定の実施形態では、皮膚の線維状態は、皮膚線維症（例えば、肥厚性瘢痕、ケロイド）、強皮症、腎性全身性線維症（例えば、重度の腎不全の患者における、ガドリニウムへの暴露後に生じる（ＭＲＩの造影剤として頻繁に使用される）、およびケロイドの１つまたは複数から選択される。
【０２８２】
特定の実施形態において、線維性状態は、胃腸管の線維性状態である。特定の実施形態では、線維性状態は、強皮症に関連する線維症；および放射線誘発腸線維症；バレット食道や慢性胃炎などの前腸の炎症性疾患に関連する線維症、および／または炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、潰瘍性大腸炎、クローン病などの後腸の炎症性疾患に関連する線維症の１つ以上から選択される。いくつかの実施形態では、胃腸管の線維性状態は強皮症に関連する線維症である。
【０２８３】
一実施形態では、線維性状態は慢性線維性状態または障害である。特定の実施形態では、線維性状態は炎症性状態または障害に関連している。
【０２８４】
いくつかの実施形態において、線維症および／または炎症状態は、骨髄炎、例えば、慢性骨髄炎である。
【０２８５】
いくつかの実施形態では、線維症はアミロイドーシスである。特定の実施形態では、アミロイドーシスは慢性骨髄炎に関連している。
【０２８６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の１つ以上の組成物は、１つ以上の他の治療薬と組み合わせて投与される。例示的な治療薬には、抗線維症薬、コルチコステロイド、抗炎症薬、免疫抑制薬、化学療法薬、代謝拮抗薬、および免疫調節薬が含まれるが、これらに限定されない。
【０２８７】
肝線維症の治療のための（１または複数の）組成物と組み合わせて使用するのに適した治療薬の例には、アデホビルジピボキシル、カンデサルタン、コルヒチン、結合ＡＴＧ、ミコフェノール酸モフェチル、およびタクロリムス、シクロスポリンマイクロエマルジョンおよびタクロリムスの組み合わせ、エラストメトリー、エベロリムス、ＦＧ−３０１９、Ｆｕｚｈｅｎｇ  Ｈｕａｙｕ、ＧＩ２６２５７０、グリチルリチン（グリチルリチン酸モノアンモニウム、グリシン、Ｌ−システイン一塩酸塩）、インターフェロンガンマ−１ｂ、イルベサルタン、ロサルタン、オルティプラズ、ＯＲＡＬ  ＩＭＰＡＣＴ（登録商標）、ペグインターフェロンアルファ−２ａ、ペグインターフェロン２ａおよびリバビリンの組み合わせ、ペグインターフェロンアルファ−２ｂ（ＳＣＨ  ５４０３１）、ペグインターフェロンアルファ−２ｂおよびリバビリンの組み合わせ、プラジカンテル、プラゾシン、ラルテグラビル、リバビリン（ＲＥＢＥＴＯＬ（登録商標）、ＳＣＨ  １８９０８）、リトナビルブーストプロテアーゼ阻害剤、ペントキシフィリン、タクロリムス、タウロウルソデオキシコール酸、トコフェロール、ウルソジオール、ワルファリン、およびそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
【０２８８】
併用療法
本明細書で開示される多重特異性分子は、第２の治療薬または処置と組み合わせて使用することができる。
【０２８９】
実施形態において、多重特異性分子および第２の治療薬または処置は、対象が癌と診断された後、例えば、癌が対象から除去される前に投与／実施される。実施形態において、多重特異性分子および第２の治療薬または処置は、同時にまたは同時発生的に投与／実施される。例えば、第２の治療の実施が開始されたとき、１つの治療の実施はまだ行われている。例えば、治療の実施に重複がある。他の実施形態では、多重特異性分子および第２の治療薬または処置は、連続的に投与／実施される。例えば、１つの治療の提供は、他の治療の提供が始まる前に停止する。
【０２９０】
実施形態では、併用療法は、いずれかの薬剤単独での単独療法よりも効果的な治療につながり得る。実施形態において、第１および第２の治療の併用は、第１または第２の治療単独よりも効果的である（例えば、症状および／または癌細胞の大幅な減少をもたらす）。実施形態において、併用療法は、単剤療法として投与される場合に同様の効果を達成するために通常必要とされる第１または第２の治療の用量と比較して、より低い用量の第１または第２の治療の利用を可能にする。実施形態では、併用療法は、部分的に相加的効果、完全に相加的効果、または相加的効果よりも大きい。
【０２９１】
一実施形態において、多重特異性分子は、療法、例えば、癌の治療法（例えば、抗癌剤、免疫療法、光線力学療法（ＰＤＴ）、手術および／または放射線の１つまたは複数）と組み合わせて投与される。用語「化学療法剤（ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ）」、「化学療法剤（ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｇｅｎｔ）」、および「抗癌剤」は、本明細書で互換的に使用される。多重特異性分子の投与および治療、例えば、癌の治療は、連続的（重複ありまたはなし）または同時であり得る。多重特異性分子の投与は、治療過程（例えば、癌治療）の間、継続的または断続的であり得る。本明細書に記載の特定の療法は、癌および非癌性疾患の治療に使用することができる。例えば、本明細書に記載の方法および組成物（例えば、Ａｇｏｓｔｉｎｉｓ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．（２０１１）ＣＡ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ．Ｃｌｉｎ．６１：２５０−２８１でレビュー）を使用して、癌性および非癌性状態（結核など）でＰＤＴの有効性を高めることができる。
【０２９２】
抗癌療法
他の実施形態において、多重特異性分子は、低分子量の化学療法剤と組み合わせて投与される。例示的な低分子量の化学療法剤には、１３−シス−レチノイン酸（イソトレチノイン、ＡＣＣＵＴＡＮＥ（登録商標））、２−ＣｄＡ（２−クロロデオキシアデノシン、クラドリビン、ＬＥＵＳＴＡＴＩＮ（商標））、５−アザシチジン（アザシチジン、ＶＩＤＡＺＡ（登録商標））、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ、フルオロウラシル、ＡＤＲＵＣＩＬ（登録商標））、６−メルカプトプリン（６−ＭＰ、メルカプトプリン、ＰＵＲＩＮＥＴＨＯＬ（登録商標））、６−ＴＧ（６−チオグアニン、チオグアニン、チオグアニンタブロイド（登録商標））、アブラキサン（パクリタキセルタンパク質−結合）、アクチノマイシン−Ｄ（ダクチノマイシン、ＣＯＳＭＥＧＥＮ（登録商標））、アリトレチノイン（ＰＡＮＲＥＴＩＮ（登録商標））、オールトランスレチノイン酸（ＡＴＲＡ、トレチノイン、ＶＥＳＡＮＯＩＤ（登録商標））、アルトレタミン（ヘキサメチルメラミン、ＨＭＭ、ＨＥＸＡＬＥＮ（登録商標））、アメトプテリン（メトトレキサート、メトトレキサートナトリウム、ＭＴＸ、ＴＲＥＸＡＬＬ（商標）、ＲＨＥＵＭＡＴＲＥＸ（登録商標））、アミフォスチン（ＥＴＨＹＯＬ（登録商標））、アラビノシルシトシン（Ａｒａ−Ｃ、シタラビン、ＣＹＴＯＳＡＲ−Ｕ（登録商標））、三酸化ヒ素（ＴＲＩＳＥＮＯＸ（登録商標））、アスパラギナーゼ（エルウィニアＬ−アスパラギナーゼ、Ｌ−アスパラギナーゼ、ＥＬＳＰＡＲ（登録商標）、ＫＩＤＲＯＬＡＳＥ（登録商標））、ＢＣＮＵ（カルムスチン、ＢｉＣＮＵ（登録商標））、ベンダムスチン（ＴＲＥＡＮＤＡ（登録商標））、ベキサロテン（ＴＡＲＧＲＥＴＩＮ（登録商標））、ブレオマイシン（ＢＬＥＮＯＸＡＮＥ（登録商標））、ブスルファン（ＢＵＳＵＬＦＥＸ）（登録商標）、ＭＹＬＥＲＡＮ（登録商標））、カルシウムロイコボリン（シトロボラムファクター、フォリン酸、ロイコボリン）、カンプトテシン−１１（ＣＰＴ−１１、イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標））、カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標））、カルボプラチン（ＰＡＲＡＰＬＡＴＩＮ（登録商標））、カルムスチンウエハー（ｐｒｏｌｉｆｅｐｒｏｓｐａｎ  ２０  ｗｉｔｈ  ｃａｒｍｕｓｔｉｎｅ  ｉｍｐｌａｎｔ、ＧＬＩＡＤＥＬ（登録商標）ウェーハ）、ＣＣＩ−７７９（テムシロリムス、ＴＯＲＩＳＥＬ（登録商標））、ＣＣＮＵ（ロムスチン、ＣｅｅＮＵ）、ＣＤＤＰ（シスプラチン、ＰＬＡＴＩＮＯＬ（登録商標）、ＰＬＡＴＩＮＯＬ−ＡＱ（登録商標））、クロラムブシル（ロイケラン）、シクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標）、ＮＥＯＳＡＲ（登録商標））、ダカルバジン（ＤＩＣ、ＤＴＩＣ、イミダゾールカルボキサミド、ＤＴＩＣ−ＤＯＭＥ（登録商標））、ダウノマイシン（ダウノルビシン、ダウノルビシン塩酸塩、ルビドマイシンハイドロクロライド、セルビジン（登録商標））、デシタビン（ＤＡＣＯＧＥＮ（登録商標））、デキサゾキサン（ＺＩＮＥＣＡＲＤ（登録商標））、ＤＨＡＤ（ミトキサントロン、ＮＯＶＡＮＴＲＯＮＥ（登録商標））、ドセタキセル（タキソテール（登録商標））、ドキソルビシン���アドリアマイシン（登録商標）、ＲＵＢＥＸ（登録商標））、エピルビシン（ＥＬＬＥＮＣＥ（商標））、エストラムスチン（ＥＭＣＹＴ（登録商標））、エトポシド（ＶＰ−１６、リン酸エトポシド、ＴＯＰＯＳＡＲ（登録商標）、ＶＥＰＥＳＩＤ（登録商標）、ＥＴＯＰＯＰＨＯＳ（登録商標））、フロクスウリジン（ＦＵＤＲ（登録商標））、フルダラビン（ＦＬＵＤＡＲＡ（登録商標））、フルオロウラシル（クリーム）（ＣＡＲＡＣ（商標）、ＥＦＵＤＥＸ（登録商標）、ＦＬＵＯＲＯＰＬＥＸ（登録商標））、ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標））、ヒドロキシ尿素（ＨＹＤＲＥＡ（登録商標）、ＤＲＯＸＩＡ（商標）、ＭＹＬＯＣＥＬ（商標））、ｉｄａｒｕｂｉｃｉｎ（ＩＤＡＭＹＣＩＮ（登録商標））、ｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ（ＩＦＥＸ（登録商標））、ｉｘａｂｅｐｉｌｏｎｅ（ＩＸＥＭＰＲＡ（商標））、ＬＣＲ（ｌｅｕｒｏｃｒｉｓｔｉｎｅ、ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ、ＶＣＲ、ＯＮＣＯＶＩＮ（登録商標）、ＶＩＮＣＡＳＡＲ  ＰＦＳ（登録商標））、Ｌ−ＰＡＭ（Ｌ−サルコリシン、メルファラン、フェニルアラニンマスタード、ＡＬＫＥＲＡＮ（登録商標））、メクロレタミン（塩酸メクロレタミン、ムスチン、ナイトロジェンマスタード、ＭＵＳＴＡＲＧＥＮ（登録商標））、メスナ（ＭＥＳＮＥＸ（商標））、マイトマイシン（マイトマイシン−Ｃ、ＭＴＣ、ＭＵＴＡＭＹＣＩＮ（登録商標））、ネララビン（ＡＲＲＡＮＯＮ（登録商標））、オキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ（商標））、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標）、ＯＮＸＡＬ（商標））、ペガスパルガーゼ（ＰＥＧ−Ｌ−アスパラギナーゼ、ＯＮＣＯＳＰＡＲ（登録商標））、ＰＥＭＥＴＲＥＸＥＤ（ＡＬＩＭＴＡ（登録商標））、ペントスタチン（ＮＩＰＥＮＴ（登録商標））、プロカルバジン（ＭＡＴＵＬＡＮＥ（登録商標））、ストレプトゾシン（ＺＡＮＯＳＡＲ（登録商標））、テモゾロミド（ＴＥＭＯＤＡＲ（登録商標））、テニポシド（ＶＭ−２６、ＶＵＭＯＮ（登録商標））、ＴＥＳＰＡ（チオホスホアミド、チオテパ、ＴＳＰＡ、ＴＨＩＯＰＬＥＸ（登録商標））、トポテカン（ＨＹＣＡＭＴＩＮ（登録商標））、ビンブラスチン（硫酸ビンブラスチン、ビンカロイコブラスチン、ＶＬＢ、ＡＬＫＡＢＡＮ−ＡＱ（登録商標）、ＶＥＬＢＡＮ（登録商標））、ビノレルビン（酒石酸ビノレルビン、ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））、およびボリノスタット（ＺＯＬＩＮＺＡ（登録商標））が含まれるが、これらに限定されない。
【０２９３】
別の実施形態では、多重特異性分子は生物製剤と組み合わせて投与される。癌の治療に有用な生物製剤は当技術分野で知られており、本発明の結合分子は、例えば、そのような知られている生物製剤と組み合わせて投与することができる。例えば、ＦＤＡは乳癌の治療のために次の生物学的製剤を承認している：ハーセプチン（登録商標）（トラスツズマブ、ジェネンテック社、サウスサンフランシスコ、カリフォルニア州；ＨＥＲ２陽性乳癌で抗腫瘍活性を有するヒト化モノクローナル抗体）；ＦＡＳＬＯＤＥＸ（登録商標）（フルベストラント、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、ＬＰ、デラウェア州ウィルミントン；乳癌の治療に使用されるエストロゲン受容体拮抗薬）；ＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標）（アナストロゾール、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、ＬＰ；エストロゲンの生成に必要な酵素であるアロマターゼをブロックする非ステロイド性アロマターゼ阻害剤）；アロマシン（登録商標）（エキセメスタン、ファイザー社、ニューヨーク州、ニューヨーク州；乳癌の治療に使用される不可逆的なステロイド性アロマターゼ不活性化剤）；ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）（レトロゾール、ノバルティスファーマシューティカルズ、イーストハノーバー、ニュージャージー州；ＦＤＡにより乳癌の治療が承認された非ステロイドアロマターゼ阻害剤）；およびＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標）（タモキシフェン、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、ＬＰ；ＦＤＡにより乳癌の治療が承認された非ステロイド性抗エストロゲン剤）。本発明の結合分子と組み合わせることができる他の生物製剤には、以下が含まれる：アバスチン（登録商標）（ベバシズマブ、ジェネンテック社。血管新生を阻害するように設計された最初のＦＤＡ承認療法）；およびＺＥＶＡＬＩＮ（登録商標）（イブリツモマブチウキセタン、Ｂｉｏｇｅｎ  Ｉｄｅｃ、ケンブリッジ、マサチューセッツ州；Ｂ細胞リンパ腫の治療のために現在承認されている放射性標識モノクローナル抗体）。
【０２９４】
さらに、ＦＤＡは結腸直腸癌の治療のために以下の生物製剤を承認した：アバスチン（登録商標）；ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標）（セツキシマブ、ＩｍＣｌｏｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｃ．、ニューヨーク州、ニューヨーク、およびブリストル・マイヤーズスクイブ、ニューヨーク州、ニューヨーク；上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）に対するモノクローナル抗体）；ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標）（メシル酸イマチニブ；プロテインキナーゼ阻害剤）；エルガミソール（登録商標）（レバミゾール塩酸塩、Ｊａｎｓｓｅｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、
ＬＰ、タイタスビル、ニュージャージー州；デュークスのステージＣ結腸癌患者の外科的切除後の５−フルオロウラシルとの併用するアジュバント療法として１９９０年にＦＤＡにより承認された免疫調節薬）。
【０２９５】
肺癌の治療のための例示的な生物製剤には、タルセバ（登録商標）（エルロチニブＨＣＬ、ＯＳＩ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｉｎｃ．、ニューヨーク州メルビル、ヒト上皮成長因子受容体１（ＨＥＲ１）経路を標的とするように設計された小分子）が含まれる。
【０２９６】
多発性骨髄腫の治療のための例示的な生物学的製剤には、ベルケイド（登録商標）ベルケイド（ボルテゾミブ、ミレニアムファーマシューティカルズ、ケンブリッジマサチューセッツ、プロテアソーム阻害剤）が含まれる。追加の生物学的製剤には、サリドミド（登録商標）（サリドマイド、クレジーンコーポレーション、ウォーレン、ニュージャージー州；免疫調節剤であり、骨髄腫細胞の成長と生存を阻害する能力、および抗血管新生を含む複数の作用があるようである）が含まれる。
【０２９７】
追加の例示的な癌治療用抗体には、３Ｆ８、アバゴボマブ、アデカツマブ、アフツズマブ、アラシズマブペゴル、アレムツズマブ（ＣＡＭＰＡＴＨ（登録商標）、ＭＡＢＣＡＭＰＡＴＨ（登録商標））、アルテモマブペンテテート（ＨＹＢＲＩ−ＣＥＡＫＥＲ（登録商標））、アナツモマブマフェナトックス、アンルキンズマブ（ＩＭＡ−６３８）、アポリズマブ、アルシツモマブ（ＣＥＡ−ＳＣＡＮ（登録商標））、バビツキシマブ、ベクツモマブ（ＬＹＭＰＨＯＳＣＡＮ（登録商標））、ベリムマブ（ＢＥＮＬＹＳＴＡ（登録商標）、ＬＹＭＰＨＯＳＴＡＴ−Ｂ（登録商標））、ベシレソマブ（ＳＣＩＮＴＩＭＵＮ（登録商標））、ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））、ビバツズマブセスタンシン、ｂｌｉｎａｔｕｍｏｍａｂ、ブレンツキシマブの丸薬、カンツズマブメルタンシン、カプロマブペンデチド（ＰＲＯＳＴＡＳＣＩＮＴ（登録商標））、カツマキソマブ（ＲＥＭＯＶＡＢ（登録商標））、ＣＣ４９、セツキシマブ（Ｃ２２５、アービタックス（登録商標））、シタツズマブボガトックス、シクスツムマブ、クリバツズマブテトラキセタン、コナツムマブ、デセツズマブ、デノスマブ（ＰＲＯＬＩＡ（登録商標））、デツモマブ、ｅｃｒｏｍｅｘｉｍａｂ、エドコロマブ（ＰＡＮＯＲＥＸ（登録商標））、エロツズマブ、エピツモマブシツキセタン、エプラツズマブ、エルツマキソマブ（ＲＥＸＯＭＵＮ（登録商標））、エタラシズマブ、ファルレツズマブ、フィギツムマブ、フレソリムマブ、ガリキシマブ、ゲムツズマブオゾガミシン（ＭＹＬＯＴＡＲＧ（登録商標））、ギレンツキシマブ、グレンバツムマブベドチン、ブリツモマブ（ブリツモマブチウキセタン、ゼバリン（登録商標））、ゴボマブ（ＩＮＤＩＭＡＣＩＳ−１２５（登録商標））、インテツムマブ、ニツズマブオゾガマイシン、イピリムマブ、イラツムマブ、ラベツズマブ（ＣＥＡ−ＣＩＤＥ（登録商標））、レキサタムマブ、ルズズマブ、ルカツムマブ、ルミリキシマブ、マパツムマブ、マツズマブ、ミラツズマブ、ミンレツモマブ、ミトモマブ、ナコロマブタフェナトックス、ナプツモマブエスタフェナトックス、ネシツムマブ、ニモツズマブ（ＴＨＥＲＡＣＩＭ（登録商標）、ＴＨＥＲＡＬＯＣ（登録商標））、ノフェツモマブメルペンタン（ＶＥＲＬＵＭＡ（登録商標））、オファツムマブ（ＡＲＺＥＲＲＡ（登録商標））、オララタム、オポルトツマブモナトックス、オレゴボマブ（ＯＶＡＲＥＸ（登録商標））、パニツムマブ（ＶＥＣＴＩＢＩＸ（登録商標））、ペムツモマブ（ＴＨＥＲＡＧＹＮ（登録商標））、パーツズマブ（ＯＭＮＩＴＡＲＧ（登録商標））、ピンツモマブ、プリツムマブ、ラムシルマブ、ラニビズマブ（ＬＵＣＥＮＴＩＳ（登録商標））、リロツムマブ、リツキシマブ（ＭＡＢＴＨＥＲＡ（登録商標）、リツキサン（登録商標））、ロバツムマブ、ｓａｔｕｍｏｍａｂ  ｐｅｎｄｅｔｉｄｅ、シブロツズマブ、ｓｉｌｔｕｘｉｍａｂ、ソンツズマブ、タカツズマブテトラキセタン（ＡＦＰ−ＣＩＤＥ（登録商標））、タプリツモマブパプトックス、テナツモマブ、ＴＧＮ１４１２、チシリムマブ（トレメリムマブ）、チガツズマブ、ＴＮＸ−６５０、トシツモマブ（ＢＥＸＸＡＲ（登録商標））、トラス���ズマブ（ハーセプチン（登録商標））、トレメリムマブ、ツコツズマブセルモロイキン、ベルツズマブ、ボロシキシマブ、ボツムマブ（ＨＵＭＡＳＰＥＣＴ（登録商標））、ザルツムマブ（ＨＵＭＡＸ−ＥＧＦＲ（登録商標））、およびザノリムマブ（ＨＵＭＡＸ−ＣＤ４（登録商標））が含まれるが、それらに限定されない。
【０２９８】
他の実施形態では、多重特異性分子は、ウイルス性癌治療薬と組み合わせて投与される。例示的なウイルス癌治療薬には、ワクシニアウイルス（ｖｖＤＤ−ＣＤＳＲ）、癌胎児性抗原発現麻疹ウイルス、組換えワクシニアウイルス（ＴＫ−欠失プラスＧＭ−ＣＳＦ）、セネカバレーウイルス−００１、ニューカッスルウイルス、コクサッキーウイルスＡ２１、ＧＬ−ＯＮＣ１、ＥＢＮＡ１  Ｃ末端／ＬＭＰ２キメラタンパク質発現組換え修飾ワクシニアアンカラワクチン、癌胎児性抗原発現麻疹ウイルス、Ｇ２０７腫瘍溶解性ウイルス、ｐ５３を発現する修飾ワクシニアウイルスアンカラワクチン、ＯｎｃｏＶＥＸ  ＧＭ−ＣＳＦ修飾ヘルペスシンプレックス１ウイルス、鶏痘ウイルスワクチンベクター、組換えワクシニア前立腺特異抗原ワクチン、ヒトパピローマウイルス１６／１８  Ｌ１ウイルス様粒子／ＡＳ０４ワクチン、ＭＶＡ−ＥＢＮＡ１／ＬＭＰ２  Ｉｎｊ．ワクチン、４価ＨＰＶワクチン、４価ヒトパピローマウイルス（タイプ６、１１、１６、１８）組換えワクチン（ＧＡＲＤＡＳＩＬ（登録商標））、組換え鶏痘−ＣＥＡ（６Ｄ）／ＴＲＩＣＯＭワクチン；組換えワクシニア−ＣＥＡ（６Ｄ）−ＴＲＩＣＯＭワクチン、組換え修飾ワクシニアＡｎｋａｒａ−５Ｔ４ワクチン、組換え鶏痘−ＴＲＩＣＯＭワクチン、腫瘍崩壊性ヘルペスウイルスＮＶ１０２０、ＨＰＶ  Ｌ１  ＶＬＰワクチンＶ５０４、ヒトパピローマウイルス二価（タイプ１６および１８）ワクチン（ＣＥＲＶＡＲＩＸ（登録商標））、単純ヘルペスウイルスＨＦ１０、Ａｄ５ＣＭＶ−ｐ５３遺伝子、組換えワクシニアＤＦ３／ＭＵＣ１ワクチン、組換えワクシニア−ＭＵＣ−１ワクチン、組換えワクシニア−ＴＲＩＣＯＭワクチン、ＡＬＶＡＣ  ＭＡＲＴ−１ワクチン、ヒトプレプロエンケファリン（ＮＰ２）を発現する複製欠損単純ヘルペスウイルスＩ型（ＨＳＶ−１）ベクター、野生型レオウイルス、レオウイルスタイプ３ディアリング（ＲＥＯＬＹＳＩＮ（登録商標））、腫瘍溶解性ウイルスＨＳＶ１７１６、Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒウイルス標的抗原をコードする組換え改変ワクシニアアンカラ（ＭＶＡ）ベースのワクチン、組換え鶏痘前立腺特異抗原ワクチン、組換えワクシニア前立腺特異抗原ワクチン、組換えワクシニア−Ｂ７．１ワクチン、ｒＡｄ−ｐ５３遺伝子、Ａｄ５−ｄｅｌｔａ２４ＲＧＤ、ＨＰＶワクチン５８０２９９、ＪＸ−５９４（チミジンキナーゼ欠失ワクシニアウイルスとＧＭ−ＣＳＦ）、ＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１／ＡＳ０４、鶏痘ウイルスワクチンベクター、ワクシニアチロシナーゼワクチン、ＭＥＤＩ−５１７  ＨＰＶ−１６／１８  ＶＬＰ  ＡＳ０４ワクチン、単純ヘルペスウイルスＴＫ９９ＵＮのチミジンキナーゼを含むアデノウイルスベクター、ＨｓｐＥ７、ＦＰ２５３／フルダラビン、ＡＬＶＡＣ（２）メラノーマ多抗原治療ワクチン、ＡＬＶＡＣ−ｈＢ７．１、カナリア痘−ｈＩＬ−１２黒色腫ワクチン、Ａｄ−ＲＥＩＣ／Ｄｋｋ−３、ｒＡｄ−ＩＦＮ  ＳＣＨ  ７２１０１５、ＴＩＬ−Ａｄ−ＩＮＦｇ、Ａｄ−ＩＳＦ３５、およびコクサッキーウイルスＡ２１（ＣＶＡ２１、カバタック（登録商標））が含まれるが、これらに限定されない。
【０２９９】
他の実施形態において、多重特異性分子は、ナノ医薬品と組み合わせて投与される。例示的な癌ナノ医薬品には、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）（パクリタキセル結合アルブミンナノ粒子）、ＣＲＬＸ１０１（直鎖シクロデキストリンベースのポリマーに結合したＣＰＴ）、ＣＲＬＸ２８８（ドセタキセルと生分解性ポリマーポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）の結合）、シタラビンリポソーム（リポソームＡｒａ−Ｃ、ＤＥＰＯＣＹＴ（商標））、ダウノルビシンリポソーム（ＤＡＵＮＯＸＯＭＥ（登録商標））、ドキソルビシンリポソーム（ＤＯＸＩＬ（登録商標）、ＣＡＥＬＹＸ（登録商標））、カプセル化ダウノルビシンクエン酸リポソーム（ＤＡＵＮＯＸＯＭＥ（登録商標））、およびＰＥＧ抗ＶＥＧＦアプタマー（ＭＡＣＵＧＥＮ（登録商標））が含まれるが、これらに限定されない。
【０３００】
いくつかの実施形態において、多重特異性分子は、パクリタキセルまたはパクリタキセル製剤、例えば、タキソール（登録商標）、タンパク質結合パクリタキセル（例えば、アブラキサン（登録商標））と組み合わせて投与される。例示的なパクリタキセル製剤には、ナノ粒子アルブミン結合パクリタキセル（ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）、Ａｂｒａｘｉｓ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅが販売）ドコサヘキサエン酸結合パクリタキセル（ＤＨＡ−パクリタキセル、タキソプレキシン、Ｐｒｏｔａｒｇａが販売）、ポリグルタミン酸結合パクリタキセル（ＰＧ−パクリタキセル、パクリタキセル・ポリグルメックス、ＣＴ−２１０３、ＸＹＯＴＡＸ、Ｃｅｌｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃが販売）、腫瘍活性化プロドラッグ（ＴＡＰ）、ＡＮＧ１０５（Ａｎｇｉｏｐｅｐ−２はパクリタキセルの３つの分子に結合し、ＩｍｍｕｎｏＧｅｎにより販売）、パクリタキセル−ＥＣ−１（パクリタキセルはｅｒｂＢ２認識ペプチドＥＣ−１に結合；Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ（２００７）８７：２２５−２３０を参照）、およびグルコース結合パクリタキセル（例えば、２’−パクリタキセルメチル２−グルコピラノシルスクシナート、Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ（２００７）１７：６１７−６２０を参照）が含まれるが、これらに限定されない。
【０３０１】
癌を治療するための例示的なＲＮＡｉおよびアンチセンスＲＮＡ剤には、ＣＡＬＡＡ−０１、ｓｉＧ１２Ｄ  ＬＯＤＥＲ（Ｌｏｃａｌ  Ｄｒｕｇ  ＥｌｕｔｅＲ）、およびＡＬＮ−ＶＳＰ０２が含まれるが、これらに限定されない。
【０３０２】
他の癌治療薬には、サイトカイン（例えば、アルデスロイキン（ＩＬ−２、インターロイキン−２、ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ（登録商標））、アルファインターフェロン（ＩＦＮ−アルファ、インターフェロンアルファ、ＩＮＴＲＯＮ（登録商標）Ａ（インターフェロンアルファ−２ｂ）、ロフェロン−Ａ（登録商標）（インターフェロンアルファ−２ａ））、エポエチンアルファ（ＰＲＯＣＲＩＴ（登録商標））、フィルグラスチム（Ｇ−ＣＳＦ、顆粒球−コロニー刺激因子、ＮＥＵＰＯＧＥＮ（登録商標））、ＧＭ−ＣＳＦ（顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、サルグラモスチム、ＬＥＵＫＩＮＥ（商標））、ＩＬ−１１（インターロイキン−１１、ｏｐｒｅｌｖｅｋｉｎ、ＮＥＵＭＥＧＡ（登録商標））、インターフェロンアルファ−２ｂ（ＰＥＧコンジュゲート）（ＰＥＧインターフェロン、ＰＥＧ−ＩＮＴＲＯＮ（商標））、およびペグフィルグラスチム（ＮＥＵＬＡＳＴＡ（商標）））、ホルモン療法剤（例えば、アミノグルテチミド（ＣＹＴＡＤＲＥＮ（登録商標））、アナストロゾール（ＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標））、ビカルタミド（ＣＡＳＯＤＥＸ（登録商標））、エキセメスタン（アロマシン（登録商標））、フルオキシメステロン（ＨＡＬＯＴＥＳＴＩＮ（登録商標））、フルタミド（ＥＵＬＥＸＩＮ（登録商標））、フルベストラント（ＦＡＳＬＯＤＥＸ（登録商標））、ゴセレリン（ＺＯＬＡＤＥＸ（登録商標））、レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ（登録商標））、リュープロリド（ＥＬＩＧＡＲＤ（商標）、ＬＵＰＲＯＮ（登録商標）、ＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯＴ（登録商標）、ＶＩＡＤＵＲ（商標））、メゲストロール（酢酸メゲストロール、ＭＥＧＡＣＥ（登録商標））、ニルタミド（ＡＮＡＮＤＲＯＮ（登録商標）、ＮＩＬＡＮＤＲＯＮ（登録商標））、オクトレオチド（酢酸オクトレオチド、サンドスタチン（登録商標）、ＳＡＮＤＯＳＴＡＴＩＮ  ＬＡＲ（登録商標））、ラロキシフェン（ＥＶＩＳＴＡ（登録商標））、ロミプロスチム（ＮＰＬＡＴＥ（登録商標））、タモキシフェン（ＮＯＶＡＬＤＥＸ（登録商標））、およびトレミフェン（ＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標）））、ホスホリパーゼＡ２阻害剤（例えば、アナグレリド（ＡＧＲＹＬＩＮ（登録商標）））、生物学的応答修飾因子（例えば、ＢＣＧ（セラシー（登録商標）、ＴＩＣＥ（登録商標））、およびダルベポエチンアルファ（ＡＲＡＮＥＳＰ（登録商標）））、標的治療薬（例えば、ボルテゾミブ（ベルケイド）、ダサチニブ（ＳＰＲＹＣＥＬ（商標））、デニロイキンジフチトックス（ＯＮＴＡＫ（登録商標））、エルロチニブ（タルセバ（登録商標））、エベロリムス（ＡＦＩＮＩＴＯＲ（登録商標））、ゲフィチニブ（イレッサ（登録商標））、メシル酸イマチニブ（ＳＴＩ−５７１、ＧＬＥＥＶＥＣ（商標））、ラパチニブ（ＴＹＫＥＲＢ（登録商標））、ソラフェニブ（ＮＥＸＡＶＡＲ（登録商標））、およびＳＵ１１２４８（スニチニブ、ＳＵＴＥＮＴ（登録商標）））、免疫調節薬および抗血管新生薬（例えば、ＣＣ−５０１３（レナリドマイド、ＲＥＶＬＩＭＩＤ（登録商標））、およびサリドマイド（ＴＨＡＬＯＭＩＤ（登録商標）））、グルココルチコステロイド（例えば、コルチゾン（ヒド��コルチゾン、ヒドロコルチゾンリン酸ナトリウム、ヒドロコルチゾンコハク酸ナトリウム、ＡＬＡ−ＣＯＲＴ（登録商標）、ＨＹＤＲＯＣＯＲＴ  ＡＣＥＴＡＴＥ（登録商標）、リン酸ヒドロコルトンＬＡＮＡＣＯＲＴ（登録商標）、ＳＯＬＵ−ＣＯＲＴＥＦ（登録商標））、デカドロン（デキサメタゾン、デキサメタゾン酢酸塩、デキサメタゾンリン酸ナトリウム、ＤＥＸＡＳＯＮＥ（登録商標）、ＤＩＯＤＥＸ（登録商標）、ＨＥＸＡＤＲＯＬ（登録商標）、ＭＡＸＩＤＥＸ（登録商標））、メチルプレドニゾロン（６−メチルプレドニゾロン、酢酸メチルプレドニゾロン、メチルプレドニゾロンコハク酸ナトリウム、デュラロン（登録商標）、ＭＥＤＲＡＬＯＮＥ（登録商標）、メドロール（登録商標）、Ｍ−ＰＲＥＤＮＩＳＯＬ（登録商標）、ＳＯＬＵ−ＭＥＤＲＯＬ（登録商標））、プレドニゾロン（ＤＥＬＴＡ−ＣＯＲＴＥＦ（登録商標）、ＯＲＡＰＲＥＤ（登録商標）、ＰＥＤＩＡＰＲＥＤ（登録商標）、ＰＲＥＬＯＮＥ（登録商標））、およびプレドニゾン（ＤＥＬＴＡＳＯＮＥ（登録商標）、ＬＩＱＵＩＤ  ＰＲＥＤ（登録商標）、ＭＥＴＩＣＯＲＴＥＮ（登録商標）、ＯＲＡＳＯＮＥ（登録商標）））、およびビスホスホネート（例えば、パミドロネート（ＡＲＥＤＩＡ（登録商標））、およびゾレドロン酸（ＺＯＭＥＴＡ（登録商標））が含まれるが、これらに限定されない。
【０３０３】
いくつかの実施形態において、多重特異性分子は、チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）阻害剤）と組み合わせて使用される。例示的なチロシンキナーゼ阻害剤には、上皮成長因子（ＥＧＦ）経路阻害剤（例えば、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤）、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）経路阻害剤（例えば、ＶＥＧＦに対する抗体、ＶＥＧＦトラップ、血管内皮成長因子受容体（ＶＥＧＦＲ）阻害剤（例えば、ＶＥＧＦＲ−１阻害剤、ＶＥＧＦＲ−２阻害剤、ＶＥＧＦＲ−３阻害剤）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）経路阻害剤（例えば、血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦＲ）阻害剤（例えば、ＰＤＧＦＲ−β阻害剤））、ＲＡＦ−１阻害剤、ＫＩＴ阻害剤、およびＲＥＴ阻害剤が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、多重特異性分子と組み合わせて使用される抗癌剤は、アキシチニブ（ＡＧ０１３７３６）、ボスチニブ（ＳＫＩ−６０６）、セジラニブ（ＲＥＣＥＮＴＩＮ（商標）、ＡＺＤ２１７１）、ダサチニブ（ＳＰＲＹＣＥＬ（登録商標）、ＢＭＳ−３５４８２５）、エルロチニブ（タルセバ（登録商標））、ゲフィチニブ（イレッサ（登録商標））、イマチニブ（グリベック（登録商標）、ＣＧＰ５７１４８Ｂ、ＳＴＩ−５７１）、ラパチニブ（ＴＹＫＥＲＢ（登録商標）、タイバーブ（登録商標））、レスタウルチニブ（ＣＥＰ−７０１）、ネラチニブ（ＨＫＩ−２７２）、ニロチニブ（ＴＡＳＩＧＮＡ（登録商標））、ｓｅｍａｘａｎｉｂ（ｓｅｍａｘｉｎｉｂ、ＳＵ５４１６）、スニチニブ（ＳＵＴＥＮＴ（登録商標）、ＳＵ１１２４８）、トセラニブ（ＰＡＬＬＡＤＩＡ（登録商標））、バンデタニブ（ＺＡＣＴＩＭＡ（登録商標）、ＺＤ６４７４）、ヴァタラニブ（ＰＴＫ７８７、ＰＴＫ／ＺＫ）、トラスツズマブ（ハーセプチン（登録商標））、ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））、リツキシマブ（リツキサン（登録商標））、セツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標））、パニツムマブ（ＶＥＣＴＩＢＩＸ（登録商標））、ラニビズマブ（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標））、ニロチニブ（ＴＡＳＩＧＮＡ（登録商標））、ソラフェニブ（ＮＥＸＡＶＡＲ（登録商標））、アレムツズマブ（ＣＡＭＰＡＴＨ（登録商標））、ゲムツズマブオゾガマイシン（ＭＹＬＯＴＡＲＧ（登録商標））、ＥＮＭＤ−２０７６、ＰＣＩ−３２７６５、ＡＣ２２０、乳酸ドビチニブ（ＴＫＩ２５８、ＣＨＩＲ−２５８）、ＢＩＢＷ  ２９９２（ＴＯＶＯＫ（商標））、ＳＧＸ５２３、ＰＦ−０４２１７９０３、ＰＦ−０２３４１０６６、ＰＦ−２９９８０４、ＢＭＳ−７７７６０７、ＡＢＴ−８６９、ＭＰ４７０、ＢＩＢＦ  １１２０（ＶＡＲＧＡＴＥＦ（登録商標））、ＡＰ２４５３４、ＪＮＪ−２６４８３３２７、ＭＧＣＤ２６５、ＤＣＣ−２０３６、ＢＭＳ−６９０１５４、ＣＥＰ−１１９８１、チボザニブ（ＡＶ−９５１）、ＯＳＩ−９３０、ＭＭ−１２１、ＸＬ−１８４、ＸＬ−６４７、ＸＬ２２８、ＡＥＥ７８８、ＡＧ−４９０、ＡＳＴ−６、ＢＭＳ−５９９６２６、ＣＵＤＣ−１０１、ＰＤ１５３０３５、ペリチニブ（ＥＫＢ−５６９）、バンデタニブ（ザクティマ）、ＷＺ３１４６、ＷＺ４００２、ＷＺ８０４０、ＡＢＴ−８６９（リニファニブ）、ＡＥＥ７８８、ＡＰ２４５３４（ポナチニブ）、ＡＶ−９５１（チボザニブ）、アキシチニブ、ＢＡＹ  ７３−４５０６（レゴラフェニブ）、ブリバニブアラニネート（ＢＭＳ−５８２６６４）、ブリバニブ（ＢＭＳ−５４０２１５）、セジラニブ（ＡＺＤ２１７１）、ＣＨＩＲ−２５８（ドビチニブ）、ＣＰ  ６７３４５１、ＣＹＣ１１６、Ｅ７０８０、Ｋｉ８７５１、マシチニブ（ＡＢ１０１０）、ＭＧＣＤ−２６５、モテサニブ二リン酸（ＡＭＧ−７０６）、ＭＰ−４７０、ＯＳＩ−９３０、パゾパニブ塩酸塩、ＰＤ１７３０７４、ｎソラフェニブトシレート（Ｂａｙ  ４３−９００６）、ＳＵ  ５４０２、ＴＳＵ−６８（ＳＵ６６６８）、ヴァタラニブ、ＸＬ８８０（ＧＳＫ１３６３０８９、ＥＸＥＬ−２８８０）からなる群から選択される。選択されたチロシンキナーゼ阻害剤は、スニチニブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、またはソラフェニブから選択される。一実施形態では、チロシンキナーゼ阻害剤はスニチニブである。
【０３０４】
一実施形態では、多重特異性分子は、抗血管新生剤、または血管ターゲティング剤または血管破壊剤のうちの１つまたは複数と組み合わせて投与される。例示的な抗血管新生剤には、ＶＥＧＦ阻害剤（例えば、抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、ベバシズマブ）；ＶＥＧＦ受容体阻害剤（例えば、イトラコナゾール）；細胞増殖の阻害剤および／または内皮細胞の移動（例えば、カルボキシアミドトリアゾール、ＴＮＰ−４７０）；とりわけ血管新生刺激剤の阻害剤（例えば、スラミン）が含まれるが、これらに限定されない。血管標的薬（ＶＴＡ）または血管破壊薬（ＶＤＡ）は、中枢壊死を引き起こす癌腫瘍の血管系（血管）を損傷するように設計されている（例えば、Ｔｈｏｒｐｅ、Ｐ．Ｅ．（２００４）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．Ｖｏｌ．１０：４１５−４２７にてレビュー）。ＶＴＡは低分子である場合がある。例示的な小分子ＶＴＡには、微小管不安定化薬（例えば、コンブレタスタチンＡ−４リン酸二ナトリウム（ＣＡ４Ｐ）、ＺＤ６１２６、ＡＶＥ８０６２、Ｏｘｉ  ４５０３）；およびｖａｄｉｍｅｚａｎ（ＡＳＡ４０４）が含まれるが、これらに限定されない。
【０３０５】
免疫チェックポイント阻害剤
他の実施形態において、本明細書に記載の方法は、多重特異性分子と組み合わせた免疫チェックポイント阻害剤の使用を含む。この方法は、ｉｎ  ｖｉｖｏの治療プロトコルで使用できる。
【０３０６】
実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はチェックポイント分子を阻害する。例示的なチェックポイント分子には、ＣＴＬＡ４、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４またはＣＤ２７０）、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、およびＡ２ａＲが含まれるがそれらに限定されない。例えば、参照により本明細書に組み込まれるＰａｒｄｏｌｌ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ  １２．４（２０１２）：２５２−６４を参照されたい。
【０３０７】
実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１阻害剤、例えば、ニボルマブ、ペンブロリズマブまたはピジリズマブなどの抗ＰＤ−１抗体である。ニボルマブ（ＭＤＸ−１１０６、ＭＤＸ−１１０６−０４、ＯＮＯ−４５３８、またはＢＭＳ−９３６５５８とも呼ばれる）は、ＰＤ１を特異的に阻害する完全ヒトＩｇＧ４モノクローナル抗体である。例えば、米国特許第８，００８，４４９号および国際公開第２００６／１２１１６８号を参照されたい。ペンブロリズマブ（Ｌａｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ、ＭＫ−３４７５、ＭＫ０３４７５、ＳＣＨ−９００４７５、またはＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）とも呼ばれる、Ｍｅｒｃｋ）は、ＰＤ−１に結合するヒト化ＩｇＧ４モノクローナル抗体である。例えば、Ｈａｍｉｄ、Ｏ．ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ３６９（２）：１３４−４４、米国特許第８，３５４，５０９号および国際公開第２００９／１１４３３５号を参照されたい。ピジリズマブ（ＣＴ−０１１またはＣｕｒｅ  Ｔｅｃｈとも呼ばれる）は、ＰＤ１に結合するヒト化ＩｇＧ１ｋモノクローナル抗体である。例えば、国際公開第２００９／１０１６１１号を参照。一実施形態において、ＰＤ−１の阻害剤は、実質的に同一または類似の配列、例えば、ニボルマブ、ペンブロリズマブまたはピジリズマブの配列と少なくとも８５％、９０％、９５％以上の配列を有する抗体分子である。追加の抗ＰＤ１抗体、例えば、ＡＭＰ  ５１４（Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ）は、例えば、米国特許第８，６０９，０８９号、米国特許出願公開第２０１００２８３３０号、および／または米国特許出願公開第２０１２０１１４６４９号に記載されている。
【０３０８】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、イムノアドヘシン、例えば、定常領域（例えば、重鎖のＦｃ領域）に融合されたＰＤ−１リガンド（例えば、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２）の細胞外／ＰＤ−１結合部分を含むイムノアドヘシンである。実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、Ｂ７−Ｈ１とＰＤ−１との間の相互作用を遮断するＰＤ−Ｌ２  Ｆｃ融合可溶性受容体であるＡＭＰ−２２４（Ｂ７−ＤＣＩｇ、例えば、国際公開第２０１１／０６６３４２号および国際公開第２０１０／０２７８２７号に記載）である。
【０３０９】
実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−Ｌ１阻害剤、例えば、抗体分子である。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤はＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ−４７３６、ＭＳＢ−００１０７１８Ｃ、またはＭＤＸ−１１０５である。いくつかの態様において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体はＭＳＢ００１０７１８Ｃ（Ａ０９−２４６−２とも呼ばれる、Ｍｅｒｃｋ  Ｓｅｒｏｎｏ）であり、ＰＤ−Ｌ１に結合するモノクローナル抗体である。例示的なヒト化抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、例えば、国際公開第２０１３／０７９１７４号に記載されている。一実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、例えば、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０である。ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０抗体は、例えば、国際公開第２０１０／０７７６３４号に記載されている。一実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤はＭＤＸ−１１０５（ＢＭＳ−９３６５５９とも呼ばれる）であり、これは、例えば、国際公開第２００７／００５８７４号に記載されている。一実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤はＭＤＰＬ３２８０Ａ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）であり、これはＰＤ−Ｌ１に対するヒトＦｃ最適化ＩｇＧ１モノクローナル抗体である。例えば、米国特許第７，９４３，７４３号および米国特許出願公開第２０１２００３９９０６号を参照されたい。一実施形態では、ＰＤ−Ｌ１の阻害剤は、実質的に同一または類似の配列、例えば、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ−４７３６、ＭＳＢ−００１０７１８Ｃ、またはＭＤＸ−１１０５の配列と少なくとも８５％、９０％、９５％以上の配列を有する抗体分子である。
【０３１０】
実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−Ｌ２阻害剤、例えば、ＡＭＰ−２２４（これは、ＰＤ１とＢ７−Ｈ１との間の相互作用を遮断するＰＤ−Ｌ２  Ｆｃ融合可溶性受容体である）である。例えば、国際公開第２０１０／０２７８２７号および国際公開第２０１１／０６６３４２号を参照されたい。
【０３１１】
一実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＬＡＧ−３阻害剤、例えば、抗ＬＡＧ−３抗体分子である。実施形態では、抗ＬＡＧ−３抗体はＢＭＳ−９８６０１６（ＢＭＳ９８６０１６とも呼ばれる、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）である。ＢＭＳ−９８６０１６および他のヒト化抗ＬＡＧ−３抗体は、例えば、米国特許出願公開第２０１１／０１５０８９２号、国際公開第２０１０／０１９５７０号、および国際公開第２０１４／００８２１８号に記載されている。
【０３１２】
実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、例えば、米国特許第８，５５２，１５６号、国際公開第２０１１／１５５６０７号、欧州特許第２５８１１１３号および米国特許出願公開第２０１４／０４４７２８号に記載される、抗ＴＩＭ３抗体分子などのＴＩＭ−３阻害剤である。
【０３１３】
実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ−４阻害剤、例えば、抗ＣＴＬＡ−４抗体分子である。例示的な抗ＣＴＬＡ４抗体には、トレメリムマブ（以前はチシリムマブとして知られているファイザー社のＩｇＧ２モノクローナル抗体、ＣＰ−６７５、２０６）、およびイピリムマブ（ＭＤＸ−０１０とも呼ばれる、ＣＡＳ  Ｎｏ．４７７２０２−００−９）が含まれる。他の例示的な抗ＣＴＬＡ−４抗体は、例えば、米国特許第５，８１１，０９７号に記載されている。
【０３１４】
［実施例］
以下の例は例示を目的とするものであり、決して限定することを意図するものではない。
【０３１５】
［実施例１］
複数のαＣＣＲ２／αＣＳＦ１Ｒ二重特異性抗体分子の生成
１．プラスミドの構築
タンパク質配列をコードするＤＮＡは、モンゴルキヌゲネズミ（Ｃｒｉｃｅｔｕｌｕｓ  ｇｒｉｓｅｕｓ）での発現に最適化され、合成され、Ｇａｔｅｗａｙクローニングを使用してｐｃＤＮＡ３．４−ＴＯＰＯ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ａ１４６９７）にクローニングされた。すべての構築物は、Ｉｇカッパリーダー配列（ＡＴＧＧＡＡＡＣＣＧＡＣＡＣＡＣＴＧＣＴＧＣＴＧＴＧＧＧＴＧＣＴＧＣＴＣＴＴＧＴＧＧＧＴＧＣＣＡＧＧＡＴＣＴＡＣＡＧＧＡ（配列番号１１５）、ＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧ（配列番号１１６））を含んでいた。使用した核酸の配列を表１に示す。
【表４】
2020517256.tif 000005
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【表５】
2020517256.tif 000011
【表６】
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2020517256.tif 000013
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【０３１６】
２．発現および精製
プラスミドをＥｘｐｉ２９３細胞（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ａ１４５２７）またはＥｘｐｉＣＨＯ細胞（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ａ２９１２７）のいずれかに同時トランスフェクトした。トランスフェクションは、１：１のノブとホールの重鎖比および３：２の軽鎖と重鎖の比である多重特異性構築物の総ＤＮＡ１ｍｇを使用して実行された。ビオチン化が必要な場合、多重特異性構築物ＤＮＡに加えて、１リットルあたり２５０μｇのＢｉｒＡが添加された。Ｅｘｐｉ２９３細胞へのトランスフェクションは、直線２５，０００  Ｄａポリエチレンイミン（ＰＥＩ、Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｃ  ２３９６６）を全ＤＮＡと３：１の比率で使用して行われた。ＤＮＡおよびＰＥＩをそれぞれ５０ｍＬのＯｐｔｉＭｅｍ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ３１９８５０８８）培地に添加し、滅菌ろ過した。ＤＮＡとＰＥＩを１０分間混合し、１．８〜２．８×１０６細胞／ｍＬの細胞密度と少なくとも９５％の生存率でＥｘｐｉ２９３細胞に加えた。ＥｘｐｉＣＨＯトランスフェクションは、製造元の指示に従って実行された。Ｅｘｐｉ２９３細胞は、トランスフェクション後５〜７日間、３７℃、８％ＣＯ２の加湿インキュベーターで増殖させ、ＥｘｐｉＣＨＯ細胞は５％ＣＯ２で３２℃で１４日間増殖させた。細胞を４５００×ｇでの遠心分離によりペレット化し、上清を０．２μｍの膜でろ過した。タンパク質Ａ樹脂（ＧＥ  １７−１２７９−０３）をろ過した上清に加え、室温で１〜３時間インキュベートした。樹脂をカラムに詰め、３×１０カラム容量のダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  １４１９０−１４４）で洗浄した。結合タンパク質は、２０ｍＭのクエン酸、１００ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ２．９で、カラムから溶出した。必要に応じて、ＤＰＢＳのランニングバッファを使用したＳｕｐｅｒｄｅ×２００カラムでのリガンドアフィニティおよび／またはサイズ排除クロマトグラフィを使用して、タンパク質をさらに精製した。
【表７】
2020517256.tif 000019
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【表８】
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【表９】
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2020517256.tif 000024
2020517256.tif 000025
【表１０】
2020517256.tif 000026
［実施例２］
ｍＣＣＲ２のみ、ｍＣＳＦ１Ｒのみ、またはｍＣＣＲ２とｍＣＳＦ１Ｒの両方を発現する細胞へのＵｎｉＴＩ−０１結合
この例および次のいくつかの例では、表７に示す多重特異性分子＃１（ＵｎｉＴＩ−０１とも呼ばれる）の特性を示した。ＵｎｉＴＩ−０１は、抗ＣＣＲ２／抗ＣＳＦ１Ｒ二重特異性抗体である。また、ＵｎｉＴＩ−０１の可変領域と全長の配列を表１１に示す。いくつかの例では、二重特異性抗体ＵｎｉＴＩ−０１を抗ＣＣＲ２二価単一特異性抗体または抗ＣＳＦ１Ｒ二価単一特異性抗体と比較した。
【表１１】
2020517256.tif 000027
2020517256.tif 000028
2020517256.tif 000029
【０３１７】
ＥｘｐｉＣＨＯ細胞に、製造元の指示に従って、マウスＣＣＲ２、マウスＣＳＦ１Ｒ、またはマウスＣＣＲ２とＣＳＦ１Ｒの両方を一時的にトランスフェクトした。簡単に言えば、トランスフェクションは、細胞密度が５．６〜６．３×１０６細胞／ｍＬで、生存率が少なくとも９５％のＥｘｐｉＣＨＯ細胞で行われた。各トランスフェクションについて、２５μｇのＤＮＡを１ｍＬのＯｐｔｉＰｒｏ  ＳＦＭ（Ｇｉｂｃｏ  １２３０９０５０）で希釈し、スピンＸ遠心チューブフィルター（Ｃｏｒｎｉｎｇ  ８１６０）を使用してろ過した。ＯｐｔｉＰｒｏ  ９２０μＬとｅｘｐｉｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ８０μＬの溶液を、ろ過したＤＮＡに加え、室温で１分間インキュベートした後、細胞に加えた。トランスフェクションの１日目に、１５０μＬのＥｘｐｉＣＨＯエンハンサーを使用して細胞を増強した。
【０３１８】
トランスフェクションの２日目に、細胞を１％ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ）を含むＰＢＳで洗浄し、１００，０００細胞／ウェルで９６ウェルＶ底プレート（Ｂｉｏｔｉ×ＡＰ−０３５０−９ＣＶＳ）をセットするために使用した。ＵｎｉＴＩ−０１を連続希釈で細胞に加え、４°Ｃで１時間インキュベートした。プレートを１％ＢＳＡを含むＰＢＳで２回洗浄した。二次抗体は、ヤギ抗マウスＦｃビオチン抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号３１８０５）の１：５００希釈液で、４°Ｃで４５分間細胞とインキュベートした。プレートを１％ＢＳＡを含むＰＢＳで２回洗浄した。検出には、１．５６×１０−３μｇのストレプトアビジン−ＰＥ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅカタログ番号１２−４３１７−８７）をウェルごとに使用し、４℃で１時間インキュベートした。プレートをＣｙｔｏＦＬＥＸ  Ｓ（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）で読み取った。データは、ＰＥ陽性集団の蛍光強度の中央値に対し、ＰＥ陰性集団の蛍光強度の中央値として計算された。データは、総蛍光強度中央値の割合に対して正規化された。
【０３１９】
理論に縛られることを望まないが、ＵｎｉＴＩ−０１は、ＣＣＲ２またはＣＳＦ１Ｒのいずれかを発現する細胞と比較して、ＣＣＲ２とＣＳＦ１Ｒの両方を発現する細胞に優先的に結合する可能性がある。二重標的結合が標的細胞に対するＵｎｉＴＩ−０１の結合力を増加させるという仮説と一致して、ＵｎｉＴＩ−０１は、単一陽性細胞と比較して、ＣＣＲ２およびＣＳＦ１Ｒ二重陽性細胞への結合の強化を示した（図１）。ＵｎｉＴＩ−０１は、ＣＣＲ２のみを発現する細胞に１５ｎＭのＥＣ５０で結合した。ＣＳＦ１Ｒのみを発現する細胞の場合、ＵｎｉＴＩ−０１のＥＣ５０は１ｎＭであった。ＵｎｉＴＩ−０１は、ＣＣＲ２とＣＳＦ１Ｒの両方を発現した細胞に対して４００ｐＭのＥＣ５０を示した。
【０３２０】
［実施例３］
ＵｎｉＴＩ−０１は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの骨髄由来単球のＭＣＰ１による移動を阻害する
マウス骨髄細胞を、健康なＢａｌｂ／ｃマウスの大腿骨から単離し、ｍＣＳＦ１の存在下で４日間単球に分化した。単球分化は、造血細胞のＣＣＲ２およびＣＳＦ１Ｒ発現のフローサイトメトリー分析により評価された。分化した細胞をカウントし、それぞれ異なる濃度のアイソタイプ（ｍＩｇＧ２ａ）、抗ＣＣＲ２、およびＵｎｉＴＩ−０１とともに、３７℃で３０分間培養した。続いて、トランスウェルインサートプレートの上部チャンバーに抗体処理の細胞を追加した。これには、下部チャンバーにＭＣＰ１（ＣＣＬ２）が含まれていた。トランスウェルプレートの下部チャンバーから培地を収集した後、ＭＣＰ１誘導性の移動を評価し、フローサイトメトリー分析により細胞数の列挙を行った。
【０３２１】
抗ＣＣＲ２／抗ＣＳＦ１Ｒ二重特異性抗体ＵｎｉＴＩ−０１は、用量依存的にトランスウェルを横切る単球のＭＣＰ１誘導移動を阻害した（図２）。３．７μＭ以上の用量では、単球の移動はケモカインの非存在下で観察されるレベルまで減少した（図２）。抗ＣＣＲ２抗体処理でも同様の結果が得られたが、ＩｇＧ２ａによる細胞の処理は移動に影響しなかった（図２）。
【０３２２】
［実施例４］
ＵｎｉＴＩ−０１はｉｎ  ｖｉｔｒｏで骨髄由来マクロファージのｍＣＳＦ−１依存性増殖を阻害する
マウス骨髄細胞を、健康なＢａｌｂ／ｃマウスの大腿骨から単離し、ｍＣＳＦ１の存在下で４日間単球に分化した。フローサイトメトリー分析により、骨髄細胞は０日目にＣＣＲ２を感知できるほどには発現しなかったことが示された（図３Ａ；左パネル）。しかし、ｍＣＳＦ１の存在下で４日間の細胞培養後、骨髄細胞の大部分が単球に分化し、ＣＣＲ２およびＣＳＦ１Ｒの発現を示した（図３Ａ；右パネル）。単球をカウントし、ｍＣＳＦ１の存在下で９６ウェルプレートに播種した。ＵｎｉＴＩ−０１、抗ＣＳＦ１ＲまたはｍＩｇＧ２ａ抗体を、ｍＣＳＦ１を含む細胞に加えた。３７℃で７２時間インキュベートした後、ＭＴＴアッセイキットの製造業者のプロトコルに従って、ＯＤ５７０での比色測定により、細胞増殖代謝活性を評価した。
【０３２３】
ｍＣＳＦ１は、単球のマクロファージへの分化を誘導し、顕微鏡下で長い線維芽細胞として視覚化された。ＵｎｉＴＩ−０１および抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、ｍＣＳＦ１の存在下でマクロファージの増殖を防止した（図３Ｂ）。
【０３２４】
［実施例５］
ＵｎｉＴＩ−０１はｉｎ  ｖｉｔｒｏでｍＣＳＦ−１依存性骨髄由来単球分化を阻害しない
骨髄細胞は、ナイーブ（非腫瘍性）Ｂａｌｂ／ｃマウスの大腿骨と脛骨の両方から抽出された。ＵｎｉＴＩ−０１、抗ＣＳＦ１ＲまたはｍＩｇＧ２抗体は、ｍＣＳＦ−１を添加して単球の分化を可能にする前に、新たに単離した骨髄細胞と３７℃で３０分間プレインキュベートした。３７℃で４日間インキュベートした後、分化した単球を識別するために細胞をフローサイトメトリー染色のために収集した。細胞を蛍光標識抗体で４℃で１５分間染色した後、フローサイトメトリー分析を行った。単球は、Ｌｉｖｅ、ＣＤ４５＋、ＣＤ１１ｂ＋、Ｌｙ６Ｃ＋、Ｌｙ６Ｇ−細胞としてゲーティングされる。
【０３２５】
骨髄前駆細胞が０日目にＣＣＲ２を有意には発現しなかったという観察と一致して（図３Ａ）、抗ＣＣＲ２／抗ＣＳＦ１Ｒ二重特異性抗体ＵｎｉＴＩ−０１は、細胞培養の４日後、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでｍＣＳＦ−１依存性骨髄由来単球分化を阻害しなかった（図４）。対照的に、抗ＣＳＦ１Ｒ二価単一特異性抗体は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでｍＣＳＦ−１依存性骨髄由来単球分化を有意に阻害した（図４）。
【０３２６】
［実施例６］
ＵｎｉＴＩ−０１は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで一次腫瘍内Ｍ−ＭＤＳＣおよびＭ２様マクロファージに特異的に結合する
Ｂ６−アルビノマウスで増殖させたＬＬＣ腫瘍を５００〜８００ｍｍ３の体積で採取し、３７℃で３０分間、リベラーゼＤＬ＋Ｄｎａｓｅ  Ｉを使用して解離し、その後ＧｅｎｔｌｅＭａｃｓで解離プログラムｍ＿ｉｍｐｔｕｍｏｒ＿０１を行った。単一細胞懸濁液を７０μｍストレーナーでろ過し、全細胞を蛍光標識抗体で染色した。この結合試験では、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７抗体ラベリングキット（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して１００μｇのＵｎｉＴＩ−０１を標識し、Ｎａｎｏｄｒｏｐで標識抗体の濃度を判定し、示された連続希釈（５ｕＭ、１ｕＭ、０．１ｕＭ、０．０１ｕＭ）が、Ｆａｃｓバッファで作成された。Ｍ−ＭＤＳＣは生存しているＣＤ４５＋ＣＤ１１ｂ＋Ｌｙ６ＣｈｉｇｈＬｙ６Ｇ−によってゲートされ、Ｍ２マクロファージは生存しているＣＤ４５＋ＣＤ１１ｂ＋Ｆ４／８０＋ＣＤ２０６＋によってゲートされ、ＣＤ３＋Ｔ細胞は生存しているＣＤ４５＋ＣＤ３＋によってゲートされ、好中球は生存しているＣＤ４５＋ＣＤ１１ｂ＋Ｌｙ６Ｇ＋によってゲートされた。細胞を氷上で暗所で１５分間染色し、生存率のためにゾンビバイオレットで染色し、すぐにサイトメーターで取得した。
【０３２７】
ＵｎｉＴＩ−０１のＭ２マクロファージおよびＭ−ＭＤＳＣへの濃度依存的な結合を図５に示す。
【０３２８】
［実施例７］
ＵｎｉＴＩ−０１は、ｉｎ  ｖｉｖｏのいくつかのマウスモデルで抑制性骨髄細胞を枯渇させる
マウスにＭＣ３８結腸癌細胞株（Ｂ６アルビノマウス）またはＥＭＴ６乳癌細胞株（ＢＡＬＢ／ｃマウス）を注射し、腫瘍が１５０−２００ｍｍ３の体積に達すると、同じマウスを無作為化して２つのアームにグループ分けした。１つのアームは、１、４、７、および１０日目に２０ｍｇ／ｋｇの用量でｉｐ経路を介して２０ｍｇ／ｋｇでＵｎｉＴＩ−０１の治療を受け、もう１つのアームは同じスケジュールでＰＢＳ（媒体）を受けた。４回目の投与の２４時間後に、フローサイトメトリー分析のために腫瘍を採取した。腫瘍を約２ｍｍの断片に切り刻み、３７℃で３０分間、リベラーゼ＋ｄｎａｓｅ  Ｉで解離させた後、ｇｅｎｔｌｅＭＡＣで１分間の腫瘍混合プログラムを使用した。単一細胞懸濁液は、７０μＭフィルターでろ過して作成し、計数した。次に、細胞をフローサイトメトリー分析のために染色した。ＴＡＭは生存しているＣＤ４５＋ＣＤ１１ｂ＋Ｌｙ６Ｇ−Ｌｙ６Ｃ−Ｆ４／８０＋によってゲートされ、Ｍ−ＭＤＳＣは生存しているＣＤ４５＋ＣＤ１１ｂ＋Ｌｙ６Ｇ−Ｌｙ６ＣＨｉｇｈによってゲートされた。それぞれの点は単一のマウスを表す。エラーバーは、個々のマウス間の平均および標準誤差を表す。統計は、スチューデントのｔ検定を使用して計算された。
【０３２９】
実施例６で観察されたＭ２マクロファージおよびＭ−ＭＤＳＣへの結合と一致して、抗ＣＣＲ２／抗ＣＳＦ１Ｒ二重特異性抗体ＵｎｉＴＩ−０１は、ＥＭＴ６およびＭＣ３８同系腫瘍モデルの両方でＴＡＭおよびＭ−ＭＤＳＣを減少させた（図６）。
【０３３０】
［実施例８］
ＵｎｉＴＩ−０１は腫瘍関連マクロファージを枯渇させるが、ｉｎ  ｖｉｖｏでクッパー細胞を残す
Ｂａｌｂ／ｃマウスにＥＭＴ６同系乳房細胞株を注射し、腫瘍が１５０〜２００ｍｍ３の体積に達したら、無作為化して３つのアームにグループ分けした。１つのアームは２０ｍｇ／ｋｇの用量でｉｐ経路を介して２０ｍｇ／ｋｇでＵｎｉＴＩ−０１の治療を受け、第２のアームは１０ｍｇ／ｋｇ抗ＣＳＦ１Ｒ抗体の治療を受け、第３のアームは１、４、７および１０日目にＰＢＳを受けた。４回目の投与の２４時間後、マウスを屠殺し、腫瘍と肝臓を採取し、ホルマリン固定してパラフィン包埋した。肝臓および腫瘍のマクロファージ集団を検出するために、組織切片をＦ４／８０抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）で免疫組織化学的に染色し、Ｅｎｖｉｓｉｏｎシステムで検出した。腫瘍または肝臓切片あたり約１０の関心領域をＩｍａｇｅＪソフトウェアで分析した。
【０３３１】
理論に拘束されることを望まないが、ＵｎｉＴＩ−０１は、ＣＣＲ２またはＣＳＦ１Ｒのいずれかを発現する細胞と比較して、ＣＣＲ２とＣＳＦ１Ｒの両方を発現する細胞に優先的に結合し、ＣＣＲ２とＣＳＦ１Ｒの両方を発現する腫瘍関連マクロファージと比較して、ＣＣＲ２を発現しない肝臓に存在するクッパー細胞などの、組織に存在するマクロファージへの影響が少ない可能性がある。
【０３３２】
前述のデータ（図６）と一致して、抗ＣＣＲ２／抗ＣＳＦ１Ｒ二重特異性抗体ＵｎｉＴＩ−０１は、腫瘍関連マクロファージを著しく枯渇させた（図７Ａおよび７Ｃ）。対照的に、ＵｎｉＴＩ−０１は肝臓の組織常在性マクロファージをそれほど枯渇させなかった（図７Ｂおよび７Ｄ）が、抗ＣＳＦ１Ｒ二価単一特異性抗体は両方の区画のマクロファージを有意に減少させた（図７Ａ〜７Ｄ）。
【０３３３】
［実施例９］
ＵｎｉＴＩ−０１はｉｎ  ｖｉｔｒｏでＣＣＲ２陰性ＮＦＳ−６０細胞のＣＳＦ−１依存性細胞生存を阻害しない
ＣＣＲ２陰性、ＣＳＦ１Ｒ陽性ＮＦＳ−６０細胞を、ＵｎｉＴＩ−０１、一価の単一特異性抗ＣＳＦ１Ｒ抗体、二価の単一特異性抗ＣＳＦ１Ｒ抗体、またはｍＩｇＧ２抗体の存在下で、フェノールレッドを含まない培地で３０日間培養した。３７°Ｃで数分間、細胞生存のためにｍＣＳＦ−１を添加した。３７°Ｃで４８時間インキュベートした後、ＭＴＴアッセイキットの製造元のプロトコルに従って、ＯＤ５７０での比色読み取りにより細胞生存率代謝活性を評価した。
【０３３４】
図８Ａに示すように、抗ＣＳＦ１Ｒ二価単一特異性抗体（ａＣＳＦ１Ｒ）は、高抗体濃度でＮＦＳ−６０細胞の生存率を著しく低下させた。対照的に、抗ＣＣＲ２／抗ＣＳＦ１Ｒ二重特異性抗体ＵｎｉＴＩ−０１または一価単一特異性抗ＣＳＦ１Ｒ抗体（モノａＣＳＦ１Ｒ）は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＣＣＲ２陰性ＮＦＳ−６０細胞のＣＳＦ−１依存性細胞の生存を阻害しなかった（図８Ａ）。理論に縛られることを望まないが、このデータは、抗ＣＣＲ２／抗ＣＳＦ１Ｒ二重特異性抗体ＵｎｉＴＩ−０１は、抗ＣＳＦ１Ｒ二価単一特異性抗体と比較して、ＣＣＲ２陰性、ＣＳＦ１Ｒ陽性細胞を阻害する可能性が低い場合があることを示唆している。これは、図７Ｂおよび７Ｄで説明した結果と一致している。ＮＦＳ−６０がＣＣＲ２を発現していないことを確認するために、ＰＢＳバッファとＣＳＦ１ＲおよびＣＣＲ２の蛍光標識抗体を含むＢＳＡで４℃で２０分間細胞を洗浄し、フローサイトメトリー分析を行った。図８Ｂに示すように、ＮＦＳ−６０はＣＳＦ１Ｒを発現したがＣＣＲ２は発現しなかった。
【０３３５】
［実施例１０］
ＵｎｉＴＩ−０１は、ｉｎ  ｖｉｖｏでＥＭＴ６腫瘍のＣＤ８＋Ｔ細胞の浸潤を促進する
Ｂａｌｂ／ｃマウスにＥＭＴ６同系乳房細胞株を注射し、腫瘍が１５０〜２００ｍｍ３の体積に達したら、無作為化して３つのアームにグループ分けした。１つのアームは２０ｍｇ／ｋｇの用量でｉｐ経路を介して２０ｍｇ／ｋｇでＵｎｉＴＩ−０１の治療を受け、第２のアームは１０ｍｇ／ｋｇ抗ＰＤＬ１の治療を受け、第３のアームは１、４、７および１０日目にＰＢＳを受けた。４回目の投与の２４時間後、マウスを屠殺し、フローサイトメトリー分析のために腫瘍を採取した。腫瘍を約２ｍｍの断片に切り刻み、３７℃で３０分間、リベラーゼ＋ｄｎａｓｅ  Ｉで解離させた後、ｇｅｎｔｌｅＭＡＣＳで１分間の腫瘍混合プログラムを使用した。単一細胞懸濁液は、７０μＭフィルターでろ過して作成し、計数した。次に、細胞をフローサイトメトリー分析のために染色した。ＣＤ８Ｔ細胞は、ＣＤ４５およびＣＤ３を発現した生存しているＣＤ８細胞を染色することによりゲーティングされた。それぞれの点は、単一のマウス腫瘍を表す。エラーバーは、個々のマウス間の平均および標準誤差を表す。統計は、一元配置分散分析を使用して計算された。
【０３３６】
抗ＣＣＲ２／抗ＣＳＦ１Ｒ二重特異性抗体ＵｎｉＴＩ−０１は、ｉｎ  ｖｉｖｏでＥＭＴ６腫瘍におけるＣＤ８＋Ｔ細胞浸潤を有意に増加させた（図９）。
【０３３７】
［実施例１１］
ＵｎｉＴＩ−０１は、ｉｎ  ｖｉｖｏでＥＭＴ６腫瘍のＴｒｅｇ頻度を低下させ、ＣＤ８Ｔ細胞／Ｔｒｅｇ比を増加させる
Ｂ６アルビノマウスにＭＣ３８同系結腸細胞株を注射し、腫瘍が１５０〜２００ｍｍ３の体積に達したら、無作為化して３つのアームにグループ分けした。１つのアームは２０ｍｇ／ｋｇの用量でｉｐ経路を介して２０ｍｇ／ｋｇでＵｎｉＴＩ−０１の治療を受け、第２のアームは１０ｍｇ／ｋｇ抗ＰＤＬ１の治療を受け、第３のアームは１、４、７および１０日目にＰＢＳを受けた。４回目の投与の２４時間後、マウスを屠殺し、フローサイトメトリーによる免疫プロファイリングのために腫瘍を採取した。腫瘍を約２ｍｍの断片に切り刻み、３７℃で３０分間、リベラーゼ＋ｄｎａｓｅ  Ｉで解離させた後、ｇｅｎｔｌｅＭＡＣで１分間の腫瘍混合プログラムを使用した。単一細胞懸濁液は、７０μＭフィルターでろ過して作成し、計数した。次に、細胞をフローサイトメトリー分析のために染色した。制御性Ｔ細胞は、生存しているＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔ細胞をゲーティングすることによって分析された。さらに、ＣＤ４５およびＣＤ３を発現した生存しているＣＤ８細胞を染色することにより、ＣＤ８Ｔ細胞をゲーティングした。それぞれの点は、単一のマウス腫瘍を表す。エラーバーは、個々のマウス間の平均および標準誤差を表す。統計は、一元配置分散分析を使用して計算された。
【０３３８】
ＵｎｉＴＩ−０１による治療は、抗ＰＤＬ１抗体による治療と比較して、腫瘍におけるＴｒｅｇの頻度の大幅な減少と、ＣＤ８＋Ｔ細胞／Ｔｒｅｇの比率の大幅な増加をもたらした（図１０Ａおよび１０Ｂ）。
【０３３９】
［実施例１２］
ＵｎｉＴＩ−０１は、抗ＰＤＬ１抗体と組み合わせて使用すると、抗腫瘍効果、腫瘍退縮、生存率の向上を示す
抗ＰＤＬ１抗体と組み合わせたＵｎｉＴＩ−０１の腫瘍増殖阻害は、皮下マウス同系ＥＭＴ６乳癌モデルでテストされた。約８週齢の雌のＢＡＬＢ／ｃ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｓ）を、研究開始の３日前から順応させた。マウスはケージあたり５匹の動物を収容し、使い捨てケージはＩｎｎｏｖｉｖｅ  ＩＶＣマウスラックに入れられた。マウスの病原体を含まないことが以前にテストされたＥＭＴ６細胞（マウスＣＬＥＡＲパネル、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｓ）は、ＢＡＬＢ／ｃマウスの右脇腹に０．５×１０６細胞の密度で０日目に皮下移植された。腫瘍は、デジタルキャリパーを使用して週２回、２次元で測定および記録された。腫瘍の体積（ｍｍ３）は、幅×幅×長さ×０．５２という式を使用して計算された。移植後７日目の腫瘍体積測定に続いて、マウスを無作為化し、平均腫瘍体積７７ｍｍ３に従って４つのアームにグループ分けした。１つのアームはＰＢＳで処理され、第２のアームは１０ｍｇ／ｋｇの用量の抗ＰＤＬ１抗体で処理され、第３のアームは２０ｍｇ／ｋｇの用量でＵｎｉＴＩ−０１で処理され、第４のアームは抗ＰＤＬ１抗体およびＵｎｉＴＩ−０１の併用で処理された。すべての治療はｉｐ経路で行われ、スケジュールは最大４週間の投与で週２回であった。すべての薬剤は、投与前にＰＢＳで新たに処方された。腫瘍の体積の測定は最大８０日間続けられた。腫瘍の体積のデータは、平均値±ＳＥＭとしてプロットされている。さらに、２０００ｍｍ３のＴＶの調査エンドポイントに到達する時間に基づいて生存率が記録され、カプランマイヤー曲線としてプロットされる。統計はログランク検定によって判断され、ｐ値がプロットされる。
【０３４０】
図１１Ａおよび１１Ｂに示されるように、ＵｎｉＴＩ−０１での治療は、担癌動物の生存を改善した。ＵｎｉＴＩ−０１と抗ＰＤＬ１抗体を組み合わせることにより、ｉｎ  ｖｉｖｏでの抗腫瘍効果、腫瘍退縮および生存率がさらに改善された（図１１Ａおよび１１Ｂ）。
【０３４１】
参照による組み込み
本明細書で言及されるすべての出版物および特許は、あたかも個々のそれぞれの出版物または特許が参照により組み込まれることが具体的かつ個別に示されるかのように、参照によりその全体が組み込まれる。
【０３４２】
等価物
当業者は、本明細書に記載の本発明の特定の実施形態に対する多くの同等物を認識するか、日常的な実験のみを使用して確認することができるであろう。そのような同等物は、添付の特許請求の範囲に含まれることが意図されている。
【図１】
2020517256.tif 000030
【図２】
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【図３Ａ】
2020517256.tif 000032
【図３Ｂ】
2020517256.tif 000033
【図４】
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【図５】
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【図６】
2020517256.tif 000036
【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
2020517256.tif 000038
【図７Ｃ】
2020517256.tif 000039
【図７Ｄ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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