(57)【要約】  免疫原性細胞死（ＩＣＤ）誘導剤としての（ピロホスファト）白金（ＩＩ）または白金（ＩＶ）錯体（「ホスファプラチン」）、特に１，２−シクロヘキサンジアミン（ピロホスファト）白金（ＩＩ）の使用、ならびに癌の処置のための免疫チェックポイントタンパク質阻害剤との併用、およびそれらの方法のメカニズム的根拠が開示されている。【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌を有する対象を治療するための方法であって、治療有効量の式ＩまたはＩＩの構造を有するホスファプラチン化合物、
【化１】
2020533305.tif 000012
またはその薬学的に許容される塩を、免疫原性細胞死（ＩＣＤ）を誘発するために対象に投与することを含み、式中、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、ＮＨ３、置換または非置換脂肪族アミン、および置換または非置換芳香族アミンから選択され、Ｒ３は置換または非置換脂肪族ジアミン、および置換または非置換芳香族ジアミンから選択される、方法。
【請求項２】
Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、ＮＨ３、メチルアミン、エチルアミン、プロピルアミン、イソプロピルアミン、ブチルアミン、シクロヘキサンアミン、アニリン、ピリジンおよび置換ピリジンから選択され、Ｒ３は１，２−エチレンジアミンおよびシクロヘキサン−１，２−ジアミンから選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ホスファプラチン化合物が、
【化２】
2020533305.tif 000013
薬学的に許容される塩、およびそれらの混合物からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ホスファプラチン化合物が、
【化３】
2020533305.tif 000014
Ｒ，Ｒ−ピロダック−２である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
癌を有する対象を治療するための方法であって、治療有効量の式ＩＩＩまたはＩＶの構造を有するホスファプラチン化合物、
【化４】
2020533305.tif 000015
またはその薬学的に許容される塩を、対象における免疫原性細胞死（ＩＣＤ）を誘発するために対象に投与することを含み、式中、Ｒ1およびＲ2は、それぞれ独立して、ＮＨ3、置換または非置換脂肪族アミン、および置換または非置換芳香族アミンから選択され、Ｒ3は置換または非置換脂肪族ジアミン、および置換または非置換芳香族ジアミンから選択される、方法。
【請求項６】
Ｒ1およびＲ2は、それぞれ独立して、ＮＨ3、メチルアミン、エチルアミン、プロピルアミン、イソプロピルアミン、ブチルアミン、シクロヘキシルアミン、アニリン、ピリジンおよび置換ピリジンから選択され、Ｒ３は１，２−エチレンジアミン、およびシクロヘキサン−１，２−ジアミンから選択される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
単量体白金（ＩＶ）ピロリン酸錯体が、式（ＩＶ）を有し、式中、Ｒ３は１，２−エチレン−ジアミンまたはシクロヘキサン−１，２−ジアミンである、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記投与が静脈内注射または腹腔内注射を含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
ピロリン酸白金錯体の用量が、対象の体重に基づいて約１ｍｇ〜約２００ｍｇ／Ｋｇの範囲である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記癌が、結腸癌、膵臓癌、胃癌、肝臓癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、およびメラノーマ、骨肉腫、軟骨肉腫，ユーイング腫瘍、悪性線維性組織球腫（ＭＦＨ）、線維肉腫（ｍｉｂｒｏｓａｒｃｏｍａ）、巨細胞腫瘍、脊索腫、紡錘細胞肉腫、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、白血病、小児急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、有毛細胞白血病、若年性骨髄単球性白血病（ＪＭＭＬ）、骨髄異形成症候群、骨髄線維症，骨髄増殖性腫瘍、真性赤血球増加症、血小板血症骨肉腫、軟骨肉腫、ユーイング腫瘍、悪性線維性組織球腫（ＭＦＨ）、線維肉腫（ｍｉｂｒｏｓａｒｃｏｍａ）、巨細胞腫、脊索腫、紡錘細胞肉腫、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫および白血病からなる群から選択される、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記対象に第２の抗癌剤を対象に投与することを併用する、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記第２の抗癌剤が、アルキル化剤、グルココルチコイド、免疫調節薬（ＩＭｉＤ）およびプロテアソーム阻害剤、シクロクレアチン、ＲＮＡｉ剤、核酸、ベクター、５−フルオロウラシル、オキサリプラチン、イリノテカン、カペシタビン、ゲムシタビン、セツキシマブ、タキソール、アバスチン、フォリン酸（ロイコボリン）、レゴラフェニブ、ザルトラップ、トポイソメラーゼＩ阻害剤、ＮＫＴＲ−１０２、チバンチニブ、ＰＸ−８６６、ソラフェニブ、リニファニブ、キナーゼ阻害剤、テラチニブ、ＸＬ２８１（ＢＭＳ）、ロバツムマブ、およびＩＧＦ１−Ｒ阻害剤からなる群から選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
治療有効量の免疫チェックポイントタンパク質阻害剤を対象に投与することをさらに併用する、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記ホスファプラチン化合物が、前記免疫チェックポイントタンパク質阻害剤の投与前に対象に投与される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記ホスファプラチン化合物が、前記免疫チェックポイントタンパク質阻害剤の投与と実質的に同時に対象に投与される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記対象が、免疫チェックポイントタンパク質阻害剤単独での処置に対して低い応答を有するかまたは応答を有さない癌を有する患者である、請求項１３〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記免疫チェックポイントタンパク質阻害剤が、ＰＤ−１阻害剤、ＰＤ−Ｌ１阻害剤、Ｂ７−１／Ｂ７−２阻害剤、ＣＴＬＡ−４阻害剤、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１３〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
前記免疫チェックポイントタンパク質阻害剤が、ペンブロリズマブ（キートルダ）、ニボルマブ（オプジーボ）、ピジリズマブ（ＣＴ−０１１）、アテゾリズマブ（テセントリク）、アベルマブ（バベンシオ）、デュルバルマブ（イムフィンジ）、イピリムマブ（エルボイ）、およびこれらの組み合わせからなる群より選択される抗体である、請求項１３〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記癌が、結腸癌、膵臓癌、胃癌、肝臓癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、膀胱癌、尿路上皮癌、胸腺上皮癌、頭頸部癌、基底細胞癌およびメラノーマなどの皮膚癌、骨肉腫、軟骨肉腫、ユーイング腫瘍、悪性線維性組織球腫（ＭＦＨ）、線維肉腫（ｍｉｂｒｏｓａｒｃｏｍａ）、巨細胞腫、脊索腫、紡錘細胞肉腫、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、白血病、小児急性骨髄性白血病（ＡＭＬ），慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、有毛細胞白血病、若年性骨髄単球性白血病（ＪＭＭＬ）、骨髄異形成症候群、骨髄線維症、骨髄増殖性腫瘍、真性赤血球増加症、血小板血症骨肉腫、軟骨肉腫、ユーイング腫瘍、悪性線維性組織球腫（ＭＦＨ）、線維肉腫（ｍｉｂｒｏｓａｒｃｏｍａ）、巨細胞腫、脊索腫、紡錘細胞肉腫、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫および白血病からなる群より選択される、請求項１３〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記癌が、低レベルの腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）で特徴付けられる、請求項１３〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記ホスファプラチン化合物による免疫原性細胞死の誘導が、前記ホスファプラチン化合物で処置された対象の細胞からの損傷関連分子パターン（ＤＡＭＰ）、高移動度群ボックス１（ＨＭＧＢ１）、カルレチクリン（ＣＲＴ）、およびＤＡＭＰアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）の放出を特徴とする、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［関連出願への相互参照］
本出願は、米国特許法第３５条、§１１９（ｅ）の下で、２０１７年９月８日に出願された米国仮出願第６２／５５５，６７６号の利益を主張し、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
［技術分野］
本発明は癌の治療のための治療剤としてのホスファプラチン化合物の使用およびその方法に関し、特に、組み合わせ相乗効果をもたらし得るそれらの免疫調節作用メカニズムに関する。
【背景技術】
【０００３】
白金系の抗腫瘍剤は、しばしば単にプラチンと呼ばれ、広範囲の異なるタイプの癌を治療するために使用される化合物のクラスである。名前が示すように、プラチン剤はすべて、それらの構造中に白金原子を含有する。これらの薬剤の臨床使用は、シスプラチン、カルボプラチン、およびオキサリプラチンの３つの化合物によって支配されている。これらの薬剤はすべて、核ＤＮＡの結合および損傷を中心とすると考えられている作用メカニズムを含むいくつかの特徴を共有し、転写干渉およびアポトーシスをもたらす。
【０００４】
１９７０年代以降、クリニックで使用されているにもかかわらず、これらの薬剤は現代の癌治療において関連性があり続けており、主に他の細胞毒性剤および標的化薬剤と組み合わせて使用されている。しかし、それらは問題がないわけではない。具体的にはそれらは、これらに限定されないが、腎臓、血液、および末梢神経系を含むいくつかの器官および身体系に関与した実質的な毒性を引き起こし得る。このため、これらの治療を受けている患者の生活の質が低下し、用量が減量され、治療が早期に中止される可能性がある。
【０００５】
忍容性に関わる問題以外では、ＤＮＡ修復経路のアップレギュレーションなどから、治療中および治療後の薬剤耐性が出現する可能性があり、これらの薬剤による治療の継続またはその後の治療は非生産的となる。これは、これらの薬剤の広範な使用を考えると、特に問題のある問題である。
【０００６】
さらに、免疫腫瘍学（Ｉ−Ｏ）薬、特にチェックポイント阻害薬（ＣＰＩ）がより多くの癌適応で使用され、承認されていることにより、これらのＣＰＩは少数の患者でのみ反応を生じることが明らかになりつつある。研究分野は、ＣＰＩが腫瘍微小環境に免疫Ｔ細胞を動員できないことが一因であると判断している。ａ）応答率を改善するために多くの適応症では極めて低いＣＰＩとの併用ができ、ｂ）ＣＰＩ耐性または難治性患者の新興カテゴリーを治療するために使用することができる新規薬剤が必要とされている。そのような組合せが成功するために、研究分野はそのような組合せ剤が優れた忍容性プロファイルを有し、免疫原性細胞死（ＩＣＤ）などの免疫調節応答を引き起こすことができるという優先事項を認識している。
【０００７】
ホスファプラチンは以前に発見された薬剤で、ＤＮＡ損傷および修復経路とは無関係に抗癌活性を誘導し、動物モデルにおいて腎毒性または神経毒性を引き起こさないことに限定されるものであり、先に引用したように、従来のプラチンに関連する限界を克服する機会となる。本発明者らは、本明細書において、ホスファプラチンによって生成されるＩＣＤの免疫調節メカニズムの発見、およびその抗癌治療的使用を開示する。
【発明の概要】
【０００８】
新しいクラスの白金系抗腫瘍剤が、両方ともＲ.Ｂｏｓｅによる米国特許番号７，７００，６４９号、（とりわけ）８，０３４，９６４号で開示された。白金原子はピロリン酸基に共役しており、これらの作用メカニズムは核ＤＮＡの結合や損傷に集中しないので、ホスファプラチン錯体と名付けられたものはシスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチンとは異なって作用する。これにより、以前のプラチナ製剤療法に抵抗性となった患者において、これらの薬剤を活性化することが可能となる。さらに、このメカニズムには、免疫原性細胞死（ＩＣＤ）として知られる稀な形態のアポトーシスの誘導が含まれており、それは癌に対する適応免疫応答を誘導し、免疫チェックポイント阻害剤および他のＩ−Ｏ剤の新たなクラスとの組み合わせの根拠を生み出す。
【０００９】
この方法は癌を有する対象に、治療有効量の式Ｉ〜ＩＶのいずれか１つによる化合物、
【００１０】
【化１】
2020533305.tif 000002
【００１１】
またはその薬学的に許容される塩またはその組成物を、対象における免疫原性細胞死を誘導するために対象に投与することを含むか、または投与することから本質的に構成され、式中、Ｒ1およびＲ2は、それぞれ独立して、ＮＨ3、置換または非置換脂肪族アミン、および置換または非置換芳香族アミンから選択され、Ｒ3は置換または非置換脂肪族ジアミン、および置換または非置換芳香族ジアミンから選択される。
【００１２】
いくつかの好ましい実施態様において、ホスファプラチン化合物は１，２−シクロヘキサンジアミン−（ピロホスファト二水素）白金(ＩＩ)( 「ピロダック−２」）であり、以下からなる群から選択される式の構造を有する：
【００１３】
【化２】
2020533305.tif 000003
【００１４】
それぞれ、ｔｒａｎｓ−（Ｒ、Ｒ）−ｌ、２−シクロヘキサンジアミン（ピロホスファト）白金（ＩＩ）（（「（Ｒ、Ｒ）−ピロダック−２」または「ＰＴ−１１２」）、ｔｒａｎｓ−（Ｓ、Ｓ）−１，２−シクロヘキサンジアミン（ピロホスファト）白金（ＩＩ）（「（Ｓ、Ｓ）−ピロダック−２」）、およびｃｉｓ−１，２−シクロヘキサンジアミン（ピロリン酸）白金（ＩＩ）（「ｃｉｓ−ピロダック−２」）。
【００１５】
いくつかのより好ましい実施形態において、ホスファプラチン化合物は、免疫チェックポイントタンパク質阻害剤と共にＩＣＤ誘導剤として対象に投与される。
【００１６】
本発明の他の態様および利点は以下の図面、説明、および特許請求の範囲を考慮すれば、より良く理解されるのであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】ＰＴ−１１２で処理した細胞からの高移動度グループボックス１（ＨＭＧＢ１）の放出を示す。薬剤処理の４８時間後の細胞の培地中のＨＭＧＢ１を、ＥＬＩＳＡによって測定した。ＨＭＧＢ１放出はＩＣＤおよび樹状細胞への抗原提示に関与する。エラーバーは１ＳＥＭを示し、ｐ値は両側ｔ検定を用いて求められた。
【図２】ＰＴ−１１２で処理した細胞からのカルレチクリン（ＣＲＴ）の細胞表面暴露を示す。ＣＲＴ細胞表面発現を、薬物処理の４８時間後にフローサイトメトリーによって測定した。主ピークの右側に存在するピークは、ＣＲＴについて陽性に染色される細胞、ＩＣＤの顕著な特徴、および食細胞標的化の指標を示す。
【図３】ＰＴ−１１２で処理した細胞からのアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）の放出を示す。薬物処理の４８時間後の細胞の培地中のＡＴＰを、ルミノメトリックアッセイによって測定した。ＰＴ−１１２は単一濃度のミトキサントロン（陽性ＩＣＤ対照）および未処理の陰性対照試料に加えて、シスプラチン（陰性ＩＣＤ対照）と同様に、２つの濃度で試験した。ＡＴＰ放出はＩＣＤの指標であり、抗原提示細胞の動員と活性化に関与する。
【図４】生腫瘍細胞注射を接種する前に異なるワクチンがマウスに与えられる場合に付与される生存の利点を示す。ワクチンは、異なる抗癌剤に曝露され、異なる薬剤に曝露されることによって死滅した同一細胞株の死んだ癌細胞と死につつある癌細胞で構成される。ＰＴ−１１２由来ワクチンで処理した全マウス（１００％）が生存し、ＰＴ−１１２がＩＣＤを強く誘導することを示した。
【図５】免疫適格マウスにＣＴ２６マウス結腸癌細胞を移植し、次いで溶媒コントロール、ＰＴ−１１２、抗ＰＤ−１抗体、またはＰＴ−１１２と抗体の両方で処理したマウス同種移植実験を示す。両方の薬剤の使用は、いずれかの薬剤単独の使用に対して、実質的により多くの抗腫瘍活性をもたらした。各点線は、個々のマウスの腫瘍体積を表す。
【図６】マウス同種移植実験からの腫瘍生検の蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）解析を示し、それにより、免疫適格マウスにＣＴ２６細胞を移植し、その後、対照、ＰＴ−１１２、抗ＰＤ−Ｌ抗体、または組み合わせ処置に無作為化した。バーを対照群に対して正規化した。ＰＴ−１１２投与群では、様々なＴ細胞集団の大幅な増加が認められた。
【図７】マウスをビヒクル対照、ＰＴ−１１２、抗ＰＤ−Ｌ抗体、および組み合わせ処置群に無作為化した、ＣＴ２６細胞株を使用したマウス同種移植実験における、腫瘍生検からの異なる細胞集団の比率に対する種々の処置の効果を示す。ＰＴ−１１２処置群は免疫原性細胞型対免疫抑制性細胞型の比率の大きな増加を有し、ＰＴ−１１２がより免疫原性の腫瘍微小環境を誘導することを示した。
【図８】マウス同種移植実験からの腫瘍生検の蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）解析を示し、それにより、免疫適格マウスにＭＣ３８細胞を移植し、その後、対照、ＰＴ−１１２、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、または組み合わせ処置に無作為化した。バーを対照群に対して正規化した。ＰＴ−１１２投与群では、様々なＴ細胞集団の大幅な増加が認められた。
【図９】ＭＣ３８細胞株を用いたマウス同種移植実験における腫瘍生検からの異なる細胞集団の比率に対する種々の処置の効果を示し、ここで、マウスは、溶媒コントロール、ＰＴ−１１２、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、および組み合わせ処置群に無作為化された。ＰＴ−１１２処置群は免疫原性細胞型対免疫抑制性細胞型の比率の大きな増加を有し、ＰＴ−１１２がより免疫原性の腫瘍微小環境を誘導することを示した。
【図１０】ボルテゾミブ耐性多発性骨髄腫モデルｖｋ１２５９８を移植したマウスにおけるＰＴ−１１２の単独または抗ＰＤ−１抗体との組み合わせの使用を示す。このモデルは、単剤療法の抗ＰＤ−１治療にも抵抗性である。ＰＴ−１１２単独または組み合わせの使用は、応答を示すＭスパイクの大きな低下をもたらした。併用群の方が反応が深かった。
【００１８】
発明の詳細な説明
本発明はホスファプラチン複合体が腫瘍微小環境に対する免疫原性細胞死およびそれに続く免疫Ｔ細胞動員を強力に誘導するという驚くべき発見に基づいており、これは、単独または腫瘍学および血液学内の他の薬剤と組み合わせたそれらの使用に影響を及ぼす他のＰｔ含有化合物とは異なるメカニズム的特性である。
【００１９】
一態様では、本発明が治療有効量の式ＩまたはＩＩの構造を有するホスファプラチン化合物
【００２０】
【化３】
2020533305.tif 000004
【００２１】
またはその薬学的に許容される塩を、対象における免疫原性細胞死を誘導するために対象に投与することを含み、式中、Ｒ1およびＲ2は、それぞれ独立して、ＮＨ3、置換または非置換脂肪族アミン、および置換または非置換芳香族アミンから選択され、Ｒ3は置換または非置換脂肪族ジアミン、および置換または非置換芳香族ジアミンから選択される。
【００２２】
癌は、結腸癌、膵臓癌、胃癌、肝臓癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、膀胱癌、尿路上皮癌、胸腺上皮腫瘍、頭頸部癌、および基底細胞癌および黒色腫のような皮膚癌から選択することができる。いくつかの実施形態において、癌は、骨肉腫、軟骨肉腫、ユーイング腫瘍、悪性線維性組織球腫（ＭＦＨ）、線維肉腫（ｍｉｂｒｏｓａｒｃｏｍａ）、巨細胞腫瘍、脊索腫、紡錘細胞肉腫、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、白血病、小児急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、有毛細胞白血病、若年性骨髄単球性白血病（ＪＭＭＬ）、骨髄異形成症候群、骨髄線維症、骨髄増殖性腫瘍、真性赤血球増加症、および血小板血症などから選択することができる。
【００２３】
いくつかのさらなる実施形態において、癌は、骨肉腫、軟骨肉腫、ユーイング腫瘍、悪性線維性組織球腫（ＭＦＨ）、線維肉腫（ｍｉｂｒｏｓａｒｃｏｍａ）、巨細胞腫瘍、脊索腫、紡錘細胞肉腫、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、白血病などから選択される。１つの好ましい実施形態において、骨または血液癌は、多発性骨髄腫である。
【００２４】
この態様の一実施形態では、Ｒ1およびＲ2が、それぞれ独立して、ＮＨ3、メチルアミン、エチルアミン、プロピルアミン、イソプロピルアミン、ブチルアミン、シクロヘキサンアミン、アニリン、ピリジン、および置換ピリジンから選択され、Ｒ3は１，２−エチレンジアミンおよびシクロヘキサン−１，２−ジアミンから選択される。
【００２５】
この態様の別の実施形態において、ホスファプラチン化合物は、次からなる群：
【００２６】
【化４】
2020533305.tif 000005
【００２７】
薬学的に受容可能な塩、およびこれらの混合物からなる群より選択される。
【００２８】
好ましい実施形態では、ホスファプラチン化合物は次の式を有するＲ，Ｒ−ピロダック−２である：
【００２９】
【化５】
2020533305.tif 000006
【００３０】
１つの態様において、本発明は癌を有する対象を治療するための方法を提供し、治療有効量の式ＩＩＩまたはＩＶの構造を有するホスファプラチン化合物：
【００３１】
【化６】
2020533305.tif 000007
【００３２】
またはその薬学的に許容される塩を、対象における免疫原性細胞死を誘発するために対象に投与することを含み、式中、Ｒ1およびＲ2が、それぞれ独立して、ＮＨ3、置換または非置換脂肪族アミン、および置換または非置換芳香族アミンから選択され、Ｒ3が置換または非置換脂肪族ジアミン、および置換または非置換芳香族ジアミンから選択される。
【００３３】
この態様の一実施形態では、Ｒ1およびＲ2が、それぞれ独立して、ＮＨ3、メチルアミン、エチルアミン、プロピルアミン、イソプロピルアミン、ブチルアミン、シクロヘキサンアミン、アニリン、ピリジン、および置換ピリジンから選択され、Ｒ3は１，２−エチレンジアミンおよびシクロヘキサン−１，２−ジアミンから選択される。
【００３４】
この態様の別の実施形態において、ホスファプラチン化合物は式（ＩＶ）を有し、ここで、Ｒ3は、１，２−エチレンジアミンまたはシクロヘキサン−１，２−ジアミンである。
【００３５】
いくつかの実施形態では、投与が静脈内注射または腹腔内注射を含む。
【００３６】
いくつかの実施形態では、投与が静脈内注射を含む。
【００３７】
いくつかの実施形態では、投与が腹腔内注射を含む。
【００３８】
いくつかの実施形態では、この方法が第２の抗癌剤を対象に投与することと併せて使用される。
【００３９】
いくつかの実施形態では、第２の抗癌剤がアルキル化剤、グルココルチコイド、免疫調節薬（ＩＭｉＤ）およびプロテアソーム阻害剤からなる群から選択される。
【００４０】
いくつかの実施形態において、第２の抗癌剤は、シクロクレアチン、ＲＮＡｉ剤、核酸、ベクター、５−フルオロウラシル、オキサリプラチン、イリノテカン、カペシタビン、ゲムシタビン、セツキシマブ、タキソール、アバスチン、フォリン酸（ロイコボリン）、レゴラフェニブ、ザルトラップ、トポイソメラーゼＩ阻害剤、ＮＫＴＲ−１０２、チバンチニブ、ＰＸ−８６６、ソラフェニブ、リニファニブ、キナーゼ阻害剤、テラチニブ、ＸＬ２８１（ＢＭＳ）、ロバツムマブ、およびＩＧＦ１−Ｒ阻害剤からなる群から選択される。
【００４１】
別の態様において、本発明は、癌を有する対象を処置するための方法であって、治療有効量の式ＩまたはＩＩの構造を有するホスファプラチン化合物：
【００４２】
【化７】
2020533305.tif 000008
【００４３】
または薬学的に許容される塩を、ＩＣＤ誘導剤として免疫チェックポイントタンパク質阻害剤と組み合わせて対象に投与することを含み、式中、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、ＮＨ３、置換または非置換脂肪族アミン、および置換または非置換芳香族アミンから選択され、Ｒ３は置換または非置換脂肪族ジアミン、および置換または非置換芳香族ジアミンから選択される。
【００４４】
この態様のいくつかの実施形態において、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立して、ＮＨ３、メチルアミン、エチルアミン、プロピルアミン、イソプロピルアミン、ブチルアミン、シクロヘキサンアミン、アニリン、ピリジン、および置換ピリジンから選択され、Ｒ３は１，２−エチレンジアミンおよびシクロヘキサン−１，２−ジアミンから選択される。
【００４５】
この態様のいくつかの実施形態では、ホスファプラチン化合物は次からなる群：
【００４６】
【化８】
2020533305.tif 000009
【００４７】
および薬学的に許容される塩、およびそれらの混合物から選択される。
【００４８】
好ましい実施形態において、ホスファプラチン化合物は、以下の式を有するＲ，Ｒ−ピロダック−２（ＰＴ−１１２）である：
【００４９】
【化９】
2020533305.tif 000010
【００５０】
別の態様において、本発明は、癌を有する対象を治療するための方法であって、治療有効量の式ＩＩＩまたはＩＶの構造を有するホスファプラチン化合物：
【００５１】
【化１０】
2020533305.tif 000011
【００５２】
または薬学的に許容される塩を、ＩＣＤ誘導剤として免疫チェックポイントタンパク質阻害剤と組み合わせて対象に投与することを含み、式中、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、ＮＨ３、置換または非置換脂肪族アミン、および置換または非置換芳香族アミンから選択され、Ｒ３は置換または非置換脂肪族ジアミン、および置換または非置換芳香族ジアミンから選択される。
【００５３】
この態様のいくつかの実施形態において、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、ＮＨ３、メチルアミン、エチルアミン、プロピルアミン、イソプロピルアミン、ブチルアミン、シクロヘキサンアミン、アニリン、ピリジン、および置換ピリジンから選択され、Ｒ３は１，２−エチレンジアミンおよびシクロヘキサン−１，２−ジアミンから選択される。
【００５４】
この態様のいくつかの実施形態では、単量体プラチナ（ＩＶ）ピロリン酸錯体がＲ３が１，２−エチレン−ジアミンまたはシクロヘキサン−１，２−ジアミンである式（ＩＶ）を有する。
【００５５】
この態様または以前の態様のいくつかの実施形態において、ホスファプラチン（ＩＶ）または（ＩＩ）化合物は、免疫チェックポイントタンパク質阻害剤の投与前の特定の時点で対象に投与される。
【００５６】
この態様または以前の態様のいくつかの実施形態において、ホスファプラチン（ＩＶ）または（ＩＩ）化合物は、免疫チェックポイントタンパク質阻害剤の投与と実質的に同時に対象に投与される。
【００５７】
この態様または以前の態様のいくつかの実施形態において、ホスファプラチン（ＩＶ）または（ＩＩ）化合物は、免疫チェックポイントタンパク質阻害剤の投与後の特定の時点で対象に投与される。
【００５８】
この態様または以前の態様のいくつかの実施形態において、対象は、以前の免疫チェックポイント阻害剤処置に対して低い応答を有するかまたは応答を有さない癌を有する患者である。
【００５９】
この態様または以前の態様のいくつかの実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１阻害剤、ＰＤ−Ｌ１阻害剤、Ｂ７−１／Ｂ７−２阻害剤、ＣＴＬＡ−４阻害剤など、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される。
【００６０】
この態様または以前の態様のいくつかの態様において、免疫チェックポイントタンパク質阻害剤は、ペンブロリズマブ（キートルダ）、ニボルマブ（オプジーボ）、ピジリズマブ（ＣＴ−０１１）、アテゾリズマブ（テセントリク）、アベルマブ（バベンシオ）、デュルバルマブ（イムフィンジ）、イピリムマブ（エルボイ）など、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される抗体である。
【００６１】
この態様または前の態様のいくつかの実施形態では、投与は静脈内または腹腔内注射を含む。
【００６２】
この態様または以前の態様のいくつかの態様において、癌は、結腸癌、膵臓癌、胃癌、肝臓癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、膀胱癌、尿路上皮癌、胸腺上皮癌、頭頸部癌、基底細胞癌およびメラノーマなどの皮膚癌、骨肉腫、軟骨肉腫、ユーイング腫瘍、悪性線維性組織球腫（ＭＦＨ）、線維肉腫（ｍｉｂｒｏｓａｒｃｏｍａ）、巨細胞腫、脊索腫、紡錘細胞肉腫、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、白血病、小児急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、有毛細胞白血病、若年性骨髄単球性白血病（ＪＭＭＬ）、骨髄異形成症候群、骨髄線維症、骨髄増殖性腫瘍、真性赤血球増加症、血小板血症、軟骨肉腫、ユーイング腫瘍、悪性線維性組織球腫（ＭＦＨ）、線維肉腫（ｍｉｂｒｏｓａｒｃｏｍａ）、巨細胞腫、脊索腫、紡錘細胞肉腫、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、および白血病からなる群より選択される。
【００６３】
この態様または以前の態様のいくつかの実施形態において、時に好ましくは癌は低レベルの腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を特徴とする。
【００６４】
別の態様において、本発明は、癌の処置のための薬剤の製造における、本明細書中に開示されるか否かにかかわらず、免疫チェックポイントタンパク質阻害剤と組み合わせた本明細書中に開示されるピロリン酸白金（ＩＩ）または白金（ＩＶ）複合体のいずれか１つの使用に関する。癌は、このような薬剤での処置に応答する、本明細書中に開示されるかまたは開示されない癌のいずれかであり得る。
【００６５】
好ましい実施形態では、ピロリン酸白金（ＩＩ）錯体はＰＴ−１１２である。
【００６６】
当業者が理解するように、本発明は、癌患者に有益な効果を提供する本明細書に開示される例示実施形態の任意の合理的な組み合わせを包含する。
【００６７】
本明細書における本発明の説明において使用される用語は、特定の実施形態を説明するためだけのものであり、本発明を限定することを意図するものではない。本明細書で使用される単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は文脈が別段の明確な指示をしない限り、複数形も含むことが意図され、その逆もまた同様である。
【００６８】
本明細書で使用される用語「約」は、示された値の±１０％までを意味することが意図される。本明細書または特許請求の範囲において言及される任意の範囲は、範囲自体を含み、また本明細書に包含される任意のものを含むもの（両方の端点を含む）と理解されるべきである。
【００６９】
本明細書で使用される「対象」という用語は、一般に、ヒトおよび動物（例えば、イヌ、ネコ、ウマなど）を含む哺乳動物を指す。
【００７０】
本明細書で使用される「脂肪族アミン」という用語は、アミノ基の窒素原子が芳香環ではなく脂肪族基に結合しているアミン化合物、例えば、メチルアミン、ブチルアミン、エチレンジアミン、シクロヘキシルアミン、シクロヘキサンジアミン等を意味する。本明細書で使用される「脂肪族ジアミン」という用語は、２つのアミノ基を含む脂肪族アミン化合物のサブセットを意味する。
【００７１】
本明細書で使用される「芳香族アミン」という用語は、アミノ基の窒素原子が芳香環に結合しているアミン化合物、例えばアニリン、フェニレンジアミン等、またはピリジン等の複素環式アミンを意味する。本明細書で使用される「芳香族ジアミン」という用語は、２つのアミノ基を含む芳香族アミン化合物のサブセットを意味する。
【００７２】
脂肪族または芳香族アミンと関連して本明細書で使用される「置換された」または「任意に置換された」という用語は、脂肪族または芳香族基がハロゲン、−ＣＮ、ニトロ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４ハロアルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、−Ｏ−Ｃ１−４ハロアルキル、および−Ｏ−Ｃ１−４アルキルからなる群から独立して選択される１〜５個、好ましくは１〜３個の置換基によって任意に置換され得ることを指す。いくつかの実施形態では、時に好ましくは脂肪族および芳香族アミンは非置換である。
【００７３】
「組成物」、「医薬組成物」、または「薬学的に許容される組成物」という語はホスファプラチン化合物と、担体、希釈剤、補助剤、およびビヒクルから選択される少なくとも１つの薬学的に許容される成分とを含む組成物を意味し、これらは、当技術分野で知られているように、一般に、ホスファプラチン錯体と反応しない不活性、非毒性、固形または液状充填剤、希釈剤、またはカプセル化材料を指す。
【００７４】
ホスファプラチン化合物、その医薬塩またはその錯体は、種々の方法、例えば、経口、皮下または非経口（静脈内、動脈内、筋肉内、腹腔内、扁桃内、および鼻腔内投与ならびにくも膜下腔内、および注入技術を含む）で投与され得る。種々のビヒクル、補助剤、添加剤、および希釈剤などの任意の互換性のある担体を含有するホスファプラチンを含む医薬製剤は、注射可能な製剤で患者に投与され得る。非経口的に投与される場合、一般に、単位用量の注射可能な形態（例えば、溶液、懸濁液、エマルジョン）で処方される。注射に適した医薬製剤は滅菌の水溶液または分散液、および滅菌の注射可能な溶液または分散液に再構成するための滅菌の粉末を含む。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど）、それらの適切な混合物、および植物油を含有する溶媒または分散媒体であり得る。滅菌注射用溶液は、必要量の適切な溶媒中にホスファプラチン錯体を、所望に応じて、１つ以上の他の成分と共に組み込むことによって調製することができる。
【００７５】
本開示は、いずれかの癌を有する対象に治療上の利益をもたらし得る任意の用量のホスファプラチン化合物を包含することが意図されているが、対象の体重に基づく１〜２００ｍｇ／Ｋｇの範囲が一般に好ましいことが開示されている。化合物Ｒ，Ｒ−ピロダック−２（ＰＴ−１１２）は、体表面積に基づいて１２〜４２０ｍｇ／ｍ2の安全なヒト用量で使用されている。
【００７６】
いくつかの実施形態では、本発明の方法が、好ましくは他の療法、例えば、幹細胞移植、他の抗癌剤と一緒の化学療法、および／または放射線療法と併せて使用され得る。
【実施例】
【００７７】
以下の非限定的な実施例は、本発明の特定の態様をさらに例示する。
【００７８】
ＰＴ−１１２は米国および中国で臨床開発中の新薬であり、伝統的な白金剤に伴う特定の有害性やＤＮＡダメージ・修復に起因する薬物耐性を最小限に抑えることを目的としている。ピロリン酸抱合Ｐｔ含有抗腫瘍治療剤として、ＰＴ−１１２は、メカニズムおよび毒性の両方において白金療法とは異なる。癌細胞モデルにおける以前の研究において、ＰＴ−１１２曝露は、シスプラチン（シス）またはオキサリプラチン（オキサリ）のいずれかへの曝露と比較して、ＤＮＡおよび全細胞抽出物の両方において圧倒的に少ないＰｔ蓄積をもたらした。それにもかかわらず、ＰＴ−１１２はインビトロシステムにおいて強力な細胞毒性活性を有し、これは、伝統的な白金化合物と比較して、ＰＴ−１１２についてのターゲットの異なるスペクトルを暗示する。免疫原性細胞死（ＩＣＤ）に関連するものを含む癌関連タンパク質および経路への影響、ならびにＰＴ−１１２効力がＤＮＡ修復経路によってどのように影響されるかを調べることにより、ＰＴ−１１２の活性および作用メカニズムを探索した。さらに、ＰＴ−１１２抗癌活性、薬物動態（ＰＫ）、および毒性を、複数のインビボシステムにおいて測定した。
【００７９】
インビトロ実験により、活性およびメカニズムの両方において、ＰＴ−１１２の独特の特徴を明らかにした。具体的には、大部分の細胞株におけるＰＴ−１１２のＩＣ５０値が、広範な白金耐性細胞パネルにおいて、シス、カルボプラチン（ｃａｒｂｏ）、およびオキサリよりも優れていた。シス活性とカルボ活性との間に高度の相関が観察されたが、これらの薬剤とＰＴ−１１２との間では観察されなかった。ＰＴ−１１２とオキサリの相関も観測され、この２つの薬剤に共有されない細胞標的とメカニズムの研究につながった。ＨＣＴ１１６結腸がんモデルにおいて、ＰＴ−１１２はＨ２ＡＸのリン酸化と機器濃度でのＫｕ７０対オキサリの誘発に最小限の影響を与え、これはＰＴ−１１２ががん活性に対するＤＮＡ結合と損傷における信頼度が低いことを意味する。さらに、ＰＴ−１１２の効力は、ヌクレオチド除去修復（ＮＥＲ）欠損ＨＣＴ１１６細胞とそれらの同質遺伝子ＮＥＲに対応する細胞との間で大きな差はなかった。逆に、ＮＥＲ適格細胞は、シス処置に対するＮＥＲ欠損細胞系よりも感受性が低かった。また、ＰＴ−１１２は、ｐ１６およびｐ２１、ならびにＣＤＫおよびＥ２Ｆファミリーの下流メンバーのような、Ｇ１／Ｓ期での細胞周期進行の阻害に関与する多数の蛋白質に加えて、ｐ５３およびＭＤＭ２レベルに顕著な影響を及ぼした。ＰＴ−１１２はまた、真のＩＣＤ誘発剤と考えられるオキサリよりも著しく大きな範囲でＩＣＤ誘発を示す多様な効果を誘発した。これらの効果は、ＨＭＧＢ１およびＡＴＰの放出、カルレチクリン（ＣＲＴ）の細胞表面曝露、およびＳＴＡＴ３の抑制を含む。
【００８０】
インビボ実験は、複数の腫瘍モデルにわたる単一薬剤としてのＰＴ−１１２の活性、ならびに他の白金化合物と比較した薬物動態および毒性の顕著な差異を実証した。具体的には、ＧＸＦ９７胃患者由来異種移植片（ＰＤＸ）モデルにおいて、９０ｍｇ／ｋｇで耐久性応答が観察された（最小ΔＴ／ΔＣ＝２．５％）。これらのコホートでは、他のすべてのマウスが忍容性を示さない高用量であったにもかかわらず、完全奏効の症例が観察された（データは示されていない）。ＣＸＦ２８０結腸ＰＤＸおよびＰＡＮＣ１膵癌モデルにおいて、ＰＴ−１１２投与により持続的な腫瘍増殖遅延が観察された。
【００８１】
ラットのＰＫ実験ではプラズマＰｔ(７２．８％）全体に対して、プラズマ超フィルタ（ＰＵＦ）でＰＴ−１１２由来Ｐｔの大部分が実証されたが、これはＰＵＦ中のＰｔのほうがずっと小さい部分（２８．２％）が観測されたオキサリを用いた文献のデータとは著しく対照的である。重要なことに、血漿中のＰｔはＰＵＦ中には存在しないが、タンパク質結合性であり、治療上の利益のためには生物学的に利用可能ではないと考えられる。親ＰＴ−１１２を検出するために開発されたＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析法もまた、血漿中のＰＴ−１１２の安定性を示すその優勢性を明らかにした。
【００８２】
ラットは腎機能（クレアチニン、ＢＵＮおよびＧＦＲ）に対する最小の影響で、シスよりも７倍高い濃度のＰＴ−１１２に耐性を示した。慢性神経障害のマウスモデルにおいて、ＰＴ−１１２の１回の用量はオキサリのモル濃度の２倍で与えられたとき、無処理コントロールと区別できず、寒冷過敏症の著しい増加を誘発した。慢性神経障害の指標を検証するために４週間にわたる反復用量の後、ＰＴ−１１２は後根神経節（ＤＲＧ）神経組織におけるＰｔの蓄積は最小で、神経行動速度（ＮＣＶ）の著しい損失はなかったが、オキサリ治療はＮＣＶの用量依存低下とＤＲＧにおける著しいＰｔ蓄積を引き起こした。ＮＣＶの減少は慢性神経障害を示し、ＤＲＧ Ｐｔ蓄積によって引き起こされることが示されている。
【００８３】
実施例１
ＰＴ−１１２は免疫原性細胞死（ＩＣＤ）を誘導する
アポトーシスはしばしば寛容原性または非免疫原性であるが、ある種の薬剤はＩＣＤと呼ばれる癌細胞におけるアポトーシスの形態を誘導することができる。癌細胞がＩＣＤ誘導剤への暴露によって死滅すると、損傷関連分子パターン（ＤＡＭＰ）を放出する。これらの分子は、樹状細胞、続いて細胞傷害性Ｔ細胞の活性化を介して、癌細胞の存在に免疫システムをアラートするのに役立つ。包括的なレビューとしては、Ｋｒｏｅｍｅｒ  他、２０１３  ＡｎｎｕＲｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３１：５１−７２を参照されたい。
【００８４】
２つのそのようなＤＡＭＰは、高移動度グループボックス１（ＨＭＧＢ１）およびカルレチクリン（ＣＲＴ）である。ＨＭＧＢ１はＩＣＤ中に死細胞から放出されるが、ＣＲＴはＩＣＤ中に小胞体から細胞表面へ移動する。ＰＴ−１１２曝露がＩＣＤの特徴と考えられるこれらの事象をもたらすかどうかを検証するために、ＨＣＴ１１６結腸直腸癌細胞株を用いたインビトロ実験を行った。いずれの場合も、以前にＩＣＤ誘導剤であることが実証されているので、オキサリプラチンを陽性対照として使用した。
【００８５】
ＨＭＧＢ１の放出について試験するために、ＨＣＴ１１６細胞をＩＣ５０濃度のＰＴ−１１２またはオキサリプラチンで４８時間処理した。続いて、細胞の培地中のＨＭＧＢ１をＥＬＩＳＡによって測定した。オキサリプラチンの使用は培地中のＨＭＧＢ１レベルの上昇によって示されるように、未処理対照細胞に対してＨＭＧＢ１放出をもたらしたが、ＨＭＧＢ１放出の大きさはＰＴ−１１２処理細胞において有意に高かった（図１）。
【００８６】
別の実験で、無処理対照ＨＣＴ１１６細胞を、オキサリプラチンまたはＰＴ−１１２のＩＣ５０濃度に４８時間曝された細胞と比較した。次に、細胞を抗ＣＲＴ抗体で染色し、フローサイトメトリーにより陽性染色を検出した（図２）。両方の処置群は対照と比較して増強された染色を示し、ＰＴ−１１２処置細胞において、より大きな効果が見られた。
【００８７】
上記の実験の両方は、ＰＴ−１１２がオキサリプラチンのＩＣＤ誘導特性を共有するだけでなく、より大きな程度までＩＣＤを誘導することも示す。
【００８８】
ＰＴ−１１２はまた、抗原提示細胞の動員および活性化に関与するＤＡＭＰ ＡＴＰを放出するその能力についても試験された（図３）。ここで、マウスＴＳＡ細胞を、シスプラチン（陰性ＩＣＤ対照、また２つの濃度で）、ミトキサントロン（陽性ＩＣＤ対照）、または薬剤なし対照のいずれかで、２つの異なる濃度で、ＰＴ−１１２に４８時間暴露した。続いて、培地中のＡＴＰをルミノメトリックアッセイにより測定した。実験は、ＰＴ−１１２が、特により高い濃度で、ＡＴＰの強力な放出を引き起こすことを明らかにした。これは、再度、ＰＴ−１１２がＩＣＤを確実に引き起こすことを示している。
【００８９】
ＩＣＤ検証のための「ゴールドスタンダード」は細胞を抗癌剤に暴露することによって生成された死細胞物質をマウスに注射するワクチン実験である。
【００９０】
重要なことは、抗癌剤を除去し、マウスに死んだ細胞および死にかけている細胞のみを注射することである。その後、１〜２週間後に、ワクチンを作製するために使用したのと同じ種類の生腫瘍細胞の注射でマウスに接種する。最初の注射で使用した細胞を殺すために使用した薬剤がＩＣＤを誘導する場合、その注射は有効なワクチンとして働き、マウスは生腫瘍細胞を接種された後に腫瘍を発症しない。ワクチンを作製するために使用される薬剤が細胞を死滅させるがＩＣＤを誘導しない場合、ワクチンはほとんど効果がなく、マウスはその後腫瘍を発症するのであろう。
【００９１】
このワクチン接種実験は、４つの異なる処置群、１つのワクチン接種されていない陰性対照、および異なる薬剤：シスプラチン（陰性対照、非ＩＣＤ誘導物質）、ミトキサントロン（陽性対照ＩＣＤ誘導物質）、およびＰＴ−１１２（実験群）の使用からのワクチンを受ける３つの群を用いて行った（図４）。両陰性対照群のマウスの大多数（８０〜９０％）では、腫瘍が急速に（１週間以内）発生した。陽性対照グループのワクチンは、腫瘍の成長が遅いマウスではなく陰性対照グループのマウスの両方の点でより効果的だった。陽性対照群ワクチンは、腫瘍のないままでいるマウスの割合が高い（４０％）点と、陰性対照群に比べて、腫瘍の増殖が遅くない点で、より効果的であった。対照的に、ＰＴ−１１２ワクチン群のマウスの１００％は１か月以上腫瘍がなかったことから、再度、ＰＴ−１１２がＩＣＤを誘導し、それが特に強力なＩＣＤ誘導物質であることが示された。
【００９２】
腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）のレベルが低い癌は、新興クラスＣＰＩによる治療に反応しない傾向がある。ＣＰＩは、Ｔ細胞上のＰＤ−１レセプターと腫瘍細胞上のＰＤ−Ｌ１レセプターリガンドとの間の免疫抑制相互作用を破壊することによって作用する。ＴＩＬが存在しない場合、ブロックすべき相互作用はなく、チェックポイント阻害薬は無効である。ＩＣＤ誘導剤がＴ細胞の腫瘍への活性化と動員を促進できることを考えると、チェックポイント阻害剤とＩＣＤ誘導剤との併用にはこれらの併用が相乗的であると考える理論的根拠がある。従って、チェックポイント阻害剤の活性を有意に増強するＰＴ−１１２の観察は、ＰＴ−１１２がＩＣＤの誘導剤であるさらなる証拠である。
【００９３】
実施例２
マウス同種移植実験におけるＰＴ−１１２免疫調節の試験、およびＰＤ−１  ＣＰＩとの併用による相乗効果
マウス同種移植実験では、免疫適格マウスにＣＴ２６マウス結腸癌細胞（図５）を移植し、続いてマウスを群（ｎ＝７）に無作為化し、１日目に９０ｍｇ／ｋｇのＰＴ−１１２  ＩＶを週１回、合計６用量投与、２日目に１０ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ−１抗体を週２回、合計６用量投与、またはその２つの組合せで処置を開始した。さらに、対照動物にビヒクルを投与した。治療中および治療後に腫瘍体積をモニタリングした。
【００９４】
結果は、ＰＴ−１１２による治療が抗ＰＤ−１抗体単独での治療より有効であることを示したが（抗ＰＤ−１抗体が１９％  ＴＧＩであったのに対し、ＰＴ−１１２が５４％  ＴＧＩ）、ＰＴ−１１２と抗ＰＤ−１抗体との併用療法はいずれかの薬剤単独より劇的に有効であった（ＰＴ−１１２＋抗ＰＤ−１抗体の併用が８３％  ＴＧＩ）。治療は、抗ＰＤ−１抗体単独で処置した１／７マウスおよびＰＴ−１１２と抗ＰＤ−１抗体との組み合わせで処置した５／７マウスにおいて観察された。
【００９５】
抗ＰＤ−１処置へのＰＴ−１１２の添加時の腫瘍増殖の改善された制御および完全応答（治癒）速度の５倍化は、ＰＴ−１１２誘導ＩＣＤをサポートする。
【００９６】
治療中止後、併用治療群の７匹のマウスのうち４匹にＣＴ２６細胞移植を再接種した；全例において、未処置動物において典型的に高い受容率にもかかわらず、細胞は拒絶され、抗腫瘍反応に対する免疫記憶成分が存在することを示し、これはＣＰＩと併用した場合のＩＣＤの誘導および相乗的結果と一致した。さらに、腫瘍組織を、さらなる処置マウスから取り出し、そして白血球集団における差についてＦＡＣＳを介して分析した。抗ＰＤ−１抗体での処理は測定された細胞集団のいずれにおいても実質的な変化をもたらさなかったが、ＰＴ−１１２での処理は単独または組み合わせで、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＤ８＋）およびヘルパーＴ細胞（ＣＤ４＋）集団において大きな変化を引き起こし（図６）、免疫抑制性Ｔ細胞集団に対する免疫原性Ｔ細胞集団の比において好ましい変化を引き起こした（図７）。
【００９７】
実施例３
さらなるマウス同種移植実験におけるＰＴ−１１２免疫調節の試験、およびＰＤ−Ｌ１  ＣＰＩとの併用による相乗効果
ＭＣ３８マウス癌モデルにおいて、ＰＴ−１１２と抗ＰＤ−Ｌ１抗体との組み合わせを用いた陽性の有効性結果が観察され、実施例２に記載されたものと同様であった（データは示さず）。Ｔ細胞集団に対する異なる処置の効果をよりよく理解するために、追加の免疫適格マウスにＭＣ３８細胞を移植し、その後、対照、ＰＴ−１１２、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、または併用処置群（ｎ＝５）にランダム化した。処置の２週間後（９０ｍｇ／ｋｇ  ＱＷでＰＴ−１１２、１０ｍｇ／ｋｇ  ＢＩＷでＰＤ−Ｌ１）、腫瘍組織を取り出し、ＦＡＣＳを介して白血球集団の差について分析した。抗ＰＤ−Ｌ１抗体による処理は測定された細胞集団のいずれにおいても大きな変化をもたらさなかったが、ＰＴ−１１２による処理は細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＤ８＋）およびヘルパーＴ細胞（ＣＤ４＋）を含む様々な細胞集団において大きな変化を引き起こした（図８）。これらの変化は併用群でさらに顕著であった。データは、１００％と定義される、未処理マウスから収集されたサンプルに対して正規化されることに留意されたい。
【００９８】
すべての白血球集団が免疫原性であるわけではない。調節性Ｔ(ＣＤ４＋／ＦｏｘＰ３＋）細胞のようないくつかの集団は免疫抑制性である。観察された変化が正味の免疫原性または免疫抑制効果を有するかどうかをより良く理解するために、異なる細胞集団の比を計算した（図９）。抗ＰＤ−Ｌ１処理はこれらの比に影響しなかったが、ＰＴ−１１２または両者の組合せによる処理は制御性Ｔ細胞に対するヘルパーＴ細胞の比および制御性Ｔ細胞に対する細胞傷害性Ｔ細胞の比の両方に正の効果を有し、併用処理から最大の効果が得られた。
【００９９】
これらの結果は再び、ＰＴ−１１２がＩＣＤを誘発するという仮説と整合的であり、前述した同種移植実験で観察された強力な相乗効果をＣＴ２６のマウスモデルを用いて説明し、ＣＰＩと併せてＰＴ−１１２の使用をサポートする可能性がある。
【０１００】
実施例４
免疫適格多発性骨髄腫マウスモデルにおけるＰＴ−１１２の効力およびＣＰＩとの相乗作用の試験
異なる実験において、ＰＴ−１１２の使用を、ボルテゾミブ耐性多発性骨髄腫癌モデルｖｋ１２５９８を移植されたマウスにおいて試験したことが、Ｃｈｅｓｉ等、２０１２に記載されている。偽抗体（ラットＩｇＧ）対照群（ｎ＝５）、ＰＴ−１１２＋偽抗体群（ｎ＝８）、またはＰＴ−１１２＋抗ＰＤ−１抗体群（ｎ＝８）におけるマウスのＭスパイクレベルを、疾病の進行をモニターするための手段として測定した（図１０）。
【０１０１】
対照マウスはＭスパイクレベルの急速な増加を示し、これらのマウスは全て治療開始後２１日までに死亡した。ＰＴ−１１２含有群は経時的にＭスパイクレベルが減少し、治療開始後２１日後にいくつかの完全な応答が観察された。注目すべきことに、ＰＴ−１１２処置マウスの全ては、この時点まで生存した。別の実験では抗ＰＤ−１抗体のみによる治療ではこのモデルに有意な有効性は示されなかったにもかかわらず、完全奏効（Ｍスパイク＝０と定義）の数はＰＴ−１１２＋抗ＰＤ−１併用群の方がＰＴ−１１２＋偽抗体群よりも高かった。
【０１０２】
抗ＰＤ−１抗体の観察された活性はＰＴ−１１２と組み合わせて使用された場合にのみ、再び、ＰＴ−１１２がＩＣＤ誘導剤であることをサポートする。
【０１０３】
ＰＴ−１１２は、高度に分化した、多面発現性で忍容性の高い抗癌剤の特徴を有する。具体的には、ＰＴ−１１２が（１)インビトロおよびインビボ癌モデルの両方で効果的に作用する；（２）ＤＮＡ修復経路の影響を最小限に抑え、ＤＮＡが主な標的ではないことを示唆する；（３）Ｇ１／Ｓ細胞周期調節因子とともに一部ｐ５３／ＭＤＭ２経路を介して作用する；（４）ＩＣＤの特徴を誘導する；（５）血漿中で安定である；（６）有意に高い用量でｃｉｓと比較して無視できるほどの腎毒性をもたらす；および（７）シュウ酸とは対照的に、急性または慢性神経障害の測定可能な徴候を生じない。さらに、本明細書で使用される濃度は、毒性水準下の用量でヒト患者において達成可能なＰＴ−１１２血漿レベルに関する。これらの知見は、ＰＴ−１１２が承認されたＰｔ剤に関連するパラダイムから臨床的に関連のある出発点であることを表すことを示唆する。
【０１０４】
前述の非限定的な例および実施形態は、本発明の特定の態様を例示するために記載される。当業者は、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、様々な変更または修正を行うことができることを理解するのであろう。本明細書で言及される全ての参考文献は、その全体が参照により組み込まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【国際調査報告】
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