(57)【要約】  本発明は、式（Ｉ）の免疫刺激マクロライドを提供し、置換基は、請求項１で定められるとおりである。本マクロライドは、細胞内細菌、真菌及び原虫感染の処置に有用である。
2020510641.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容可能なその塩、水和物、溶媒和物、互変異性体、エナンチオマー又はジアステレオマー
【化１】
2020510641.tif 000066
（式中、ＸはＣ＝Ｏ、−ＮＲ３ＣＨ２−、−ＣＨ２ＮＲ３−、−ＮＲ３（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ３−、Ｃ＝ＮＯＨ及び−ＣＨ（ＯＨ）−から選択され、Ｒ２は式（ＩＩ）又は式（ＩＩＩ）の糖：
【化２】
2020510641.tif 000067
であり、
ここでＲ１は、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、アリール及びヘテロアリール部分から選択され、
ここでアルキル部分は、場合により分枝しているＣ１−Ｃ６アルキル基から選択され、
ここでヘテロアルキル部分は、場合により分枝しているか又は置換され、場合により１つ以上のヘテロ原子を含むＣ１−Ｃ６アルキル基から選択され、
シクロアルキル部分は、場合により置換され、場合により１つ以上のヘテロ原子を含むＣ１−Ｃ６環状アルキル基から選択され、
アリール部分は、場合により置換されるＣ６芳香環から選択され、
ヘテロアリール部分は、１つ以上のヘテロ原子を含む、場合により置換されるＣ１−Ｃ５芳香環から選択され、
ヘテロ原子はＯ、Ｎ、Ｐ及びＳから選択され、
ここで置換基は、独立して、アルキル、ＯＨ、Ｆ、Ｃｌ、ＮＨ２、ＮＨ−アルキル、ＮＨ−アシル、Ｓ−アルキル、Ｓ−アシル、Ｏ−アルキル及びＯ−アシルから選択され、
アシルは、Ｃ１−Ｃ４の場合により分枝しているアシル基から選択され、
Ｒ３はＨ及びＭｅから選択され、
Ｒ４はＨ及びＭｅから選択され、
ＲａはＨ及び−ＣＲ２１Ｒ２２Ｒ２３から選択され、
Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３及びＲ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０は、独立して、Ｈ、Ｍｅ、ＮＲ１１Ｒ１２、ＮＯ２及びＯＲ１１から選択され、
ここで式（ＩＩ）のＲ４と合わせられたＲ２３、式（ＩＩ）のＲ５と合わせられたＲ４、式（ＩＩ）のＲ７と合わせられたＲ５及び式（ＩＩ）のＲ９と合わせられたＲ７は、独立して、各基が接続される炭素原子間に二重結合を残すための結合を表すために連結され得、
Ｒ２２と合わせられたＲ２１、Ｒ６と合わせられたＲ５、Ｒ８と合わせられたＲ７又はＲ１０と合わせられたＲ９はカルボニルで置換され得、
Ｒ１１及びＲ１２は、独立して、Ｈ及びアルキルから選択され、
Ｒ１３は、Ｈ、ＯＨ及びＯＣＨ３から選択され、
Ｒ１４は、Ｈ及びＯＨから選択され、
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９又はＲ１０のうち１つはＮＲ１１Ｒ１２及びＮＯ２から選択され、
ただし、Ｒ１がＥｔであり、Ｒ２が式（ＩＩ）の糖であり、Ｒ１３がＨ又はＯＨであり、Ｒ１４がＨ又はＯＨであり、ＲａがＨであり、Ｒ４がＭｅであり、Ｒ５がＨであり、Ｒ６がＯＨであり、Ｒ７がＨであり、Ｒ８がＮＲ１１Ｒ１２であり、Ｒ９がＨであり、Ｒ１０がＨである場合、ＸはＣ＝Ｏでなくてもよく、
ただし、Ｒ１がＥｔであり、Ｒ２が式（ＩＩ）の糖であり、Ｒ１３がＨ又はＯＨであり、Ｒ１４がＨ又はＯＨであり、ＲａがＨであり、Ｒ４がＭｅであり、Ｒ５がＯＨであり、Ｒ６がＨであり、Ｒ７がＯＨであり、Ｒ８がＭｅであり、Ｒ９がＨであり、Ｒ１０がＨである場合、ＸはＣ＝Ｏでなくてもよく、
ただし、Ｒ１がＥｔであり、Ｒ２が式（ＩＩ）の糖であり、Ｒ１３がＨ又はＯＨであり、Ｒ１４がＨ又はＯＨであり、ＲａがＨであり、Ｒ４がＭｅであり、Ｒ５がＯＨであり、Ｒ６がＨであり、Ｒ７がＨであり、Ｒ８がＮＲ１１Ｒ１２であり、Ｒ９がＨであり、Ｒ１０がＯＨである場合、ＸはＣ＝Ｏでなくてもよい）。
【請求項２】
式中、Ｘが−ＮＲ３ＣＨ２−及び−ＣＨ２ＮＲ３から選択され、Ｒ２が式（ＩＩ）：
【化３】
2020510641.tif 000068
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１がメチル又はエチルである、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７又はＲ８のうち１つがＮＲ１１Ｒ１２である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３及びＲ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０が、独立して、Ｈ、Ｍｅ、ＮＲ１１Ｒ１２及びＯＲ１１から選択される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ１３及びＲ１４がＯＨである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｘが、−ＮＲ３ＣＨ２−及び−ＣＨ２ＮＲ３から選択され、Ｒ２が式（ＩＩ）：
【化４】
2020510641.tif 000069
であり、
Ｒ１がメチル又はエチルであり、
Ｒ３がＨ及びＭｅから選択され、
Ｒ４がＨであり、
Ｒａが、−ＣＲ２１Ｒ２２Ｒ２３であり、
Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３及びＲ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０が、独立して、Ｈ、Ｍｅ、ＮＲ１１Ｒ１２、ＮＯ２及びＯＲ１１から選択され、
Ｒ１１及びＲ１２が、独立して、Ｈ及びアルキルから選択され、ここでアルキル部分が、場合により分枝しているＣ１−Ｃ６アルキル基から選択され、
Ｒ１３が、Ｈ、ＯＨ及びＯＣＨ３から選択され、
Ｒ１４が、Ｈ及びＯＨから選択され、
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９又はＲ１０のうち１つがＮＲ１１Ｒ１２である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ２が式（ＩＩ）による糖であり、ＲａがＨであり、Ｒ４がＭｅであり、Ｒ５がＨであり、Ｒ６がＯＨであり、Ｒ７がＨであり、Ｒ８がＮＲ１１Ｒ１２であり、Ｒ９がＨであり、Ｒ１０がＨである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ１１及びＲ１２が、独立して、Ｈ、Ｍｅ及びＥｔから選択される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｘが−ＮＲ３ＣＨ２−である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ１がＥｔである、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１２】
以下から選択される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物：
【化５−１】
2020510641.tif 000070
【化５−２】
2020510641.tif 000071
【化５−３】
2020510641.tif 000072
【化５−４】
2020510641.tif 000073
【請求項１３】
医学での使用のための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１４】
細胞内感染の処置での使用のための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１５】
細胞内感染が、マイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、マイコバクテリアが引き起こす非定型疾患、マイコバクテリウム・アビウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ）及びＭ．イントラセルラーレ（Ｍ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）（マイコバクテリウム・アビウム−イントラセルラーレ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ−ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）複合体又はＭＡＣとしても知られる）、Ｍ．カンサシ（Ｍ．ｋａｎｓａｓｉｉ）、Ｍ．マリヌム（Ｍ．ｍａｒｉｎｕｍ）、Ｍ．フォーチュイタム（Ｍ．ｆｏｒｔｕｉｔｕｍ）、Ｍ．ゴルジナエ（Ｍ．ｇｏｒｄｉｎａｅ）、マイコプラズマ・ニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、Ｍ．ゲニタリウム（Ｍ．ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍ）、Ｍ．ホミニス（Ｍ．ｈｏｍｉｎｉｓ）、ウレアプラズマ・ウレアリチクム（Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ  ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ）、Ｕ．パルブム（Ｕ．ｐａｒｖｕｍ）、クラミドフィラ・ニューモニエ（Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）及びサルモネラ・チフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）により引き起こされる細菌感染から選択される、請求項１４に記載の使用のための化合物。
【請求項１６】
細胞内感染が、トキソプラズマ・ゴンディ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）、プラスモディウム・ファルシパルム（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）、Ｐ．ビバクス（Ｐ．ｖｉｖａｘ）、トリパノソーマ・クルジ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ）、クリプトスポリジウム（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ）及びリーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ）によって引き起こされる原虫感染から選択される、請求項１３に記載の使用のための化合物。
【請求項１７】
細胞内感染が、ヒストプラズマ・カプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）及びエンセファリトゾーン・クニクリ（Ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｏｚｏｏｎ  ｃｕｎｉｃｕｌｉ）によって引き起こされる真菌感染から選択される、請求項１３に記載の使用のための化合物。
【請求項１８】
３−ヒドロキシル位置でグリコシル化する生体内変換株の培養物への、式（ＶＩ）
【化６】
2020510641.tif 000074
を有するアグリコンの添加を含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物を調製するための方法。
【請求項１９】
生体内変換株が、ＡｎｇＭＩＩ（配列番号１）又はＡｎｇＭＩＩＩ（配列番号２）と７０％以上の相同性を有するグリコシルトランスフェラーゼを発現する、請求項１８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、免疫系を刺激可能である新規マクロライド化合物を提供する。本発明は、特に細胞内細菌、真菌及び原虫感染の治療における、及び免疫系の刺激が有益である場合のウイルス性疾患、慢性炎症状態及び癌の同時処置における、医学での使用のための新規化合物に関する。本化合物は、ワクチン接種における免疫調節アジュバントとしても使用され得る。この新規マクロライドは、免疫系の調整効果を最大化する一方で、治療上望ましくない直接的な抗菌効果を最小化する。本発明はまた、本発明の化合物を調製するための方法、及び医学における本化合物の使用のための方法を提供する。
【背景技術】
【０００２】
細胞内細菌、真菌及び原虫感染は、健常者では無症状であるように見えるため、又は症状が軽度なので感染者が医療支援を求める傾向がないため、健常者では診断されないことが多い。このように、細胞内感染が潜在的に持続し得るか、又は疾患状態に進行し得る。正常なＴ細胞機能を妨害する状態は通常、潜伏感染から疾患進行につながり、マイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）（Ｍｔｂ）などの細胞内感染は、ＨＩＶ感染がＡＩＤＳに進行した患者における一般的な死因である。このように、細胞内感染を処置する方法及び手段が当技術分野で大いに必要とされている。
【０００３】
Ｍｔｂなどの細胞内病原体は、単球及びマクロファージの細胞内区画内に隠れる能力があり、これにより持続感染が引き起こされる。Ｍｔｂは肺におけるＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞によって認識され、適切な応答が開始されるものの、系は菌を死滅させる免疫を作り出せない（ＭａｃＭｉｃｋｉｎｇ，２０１２）。宿主による免疫認識を逃れるために、ＭｔｂはＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞に対するＭＨＣクラスＩＩポケットで提示されるＭｔｂペプチドの認識を阻害する一連の機序を発達させてきた。Ｔｏｌｌ様受容体２はＭｔｂによって阻害されることが実証されており、同様にして、ＩＦＮ−γ誘導性ＭＨＣクラスＩＩ発現を阻害する（Ｎｏｓｓ  ２００１）。加えて、データから、おそらくインバリアント鎖関連機序によって、Ｍｔｂがファゴソームプロセシング及び成熟を阻害する能力を有することが示唆される（Ｒａｍａｃｈａｎｄｒａ  ２００１）。したがって、Ｍｔｂにより産生される免疫回避因子ゆえに、Ｍｔｂ由来のＭＨＣクラスＩＩペプチドの正常な抗原プロセシング、搭載及び提示が損なわれる。
【０００４】
エンドソームリソソーム経路は、病原体を取り込み、それらを１２〜１５ａａ長のペプチドにプロセシングし、ペプチドは、ＨＬＡ−ＤＭによるインバリアント鎖ペプチドＣＬＩＰの除去後、ＭＨＣクラスＩＩポケットに搭載されるように設計されている。抗原搭載後、ＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞の特異的Ｔ細胞受容体に対する提示のための、細胞表面へのＭＨＣクラスＩＩ−ペプチド複合体の輸送が起こる（Ｒｏｃｈｅ  ２０１５）。最近、Ｍｔｂにより発現されるタンパク質ＥｓｘＨは、輸送に必要なエンドソーム選別複合体（ＥＳＣＲＴ）機構を直接阻害することが報告された（Ｐｏｒｔａｌ−Ｃｅｌｈａｙ  ２０１６）。ＥｓｘＨは、抗原提示単球及びマクロファージがＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞を活性化する能力を阻害する。インタクトなＥＳＣＲＴ機構はＴ細胞の抗原プロセシング、提示及び活性化に必要であると思われるので、ＥｓｘＨは、ＭＨＣクラスＩＩ経路を妨害することによってＭｔｂ誘導性免疫回避を説明する連結部である。
【０００５】
ＭＨＣクラスＩＩ提示の重要性は、原発性免疫不全症（ＰＩＤ）の患者においても実証されている。ＩＦＮＧＲ及びＩＬ−１２が関与するＩＦＮ−γ回路に欠陥があるＰＩＤ患者は、ＴＢＣ及び非定型マイコバクテリア感染に陥るリスクが高くなる。ＭＨＣクラスＩＩの発現はＩＦＮ−γの発現に依存し、ＩＦＮ−γ発現により制御され、ＩＦＮ−γ回路の欠陥の結果、ＭＨＣクラスＩＩ発現がさらに減少し、ＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞の活性化が不十分となる。
【０００６】
トキソプラズマ・ゴンディ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）などの原虫は、偏性的な細胞内寄生生物として細胞内に隠れることによって免疫認識を回避するための機序を発達させてきた。この機序は、ＭＨＣクラスＩＩ発現の妨害を含み、したがって特異的なＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞に対して提示されるべきトキソプラズマ・ゴンディ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）の量が減少する。詳細な機序は、ＭＨＣクラスＩＩのＩＦＮ−γ誘導性発現を阻害するトキソプラズマ・ゴンディ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）によって発現される可溶性タンパク質に依存する（Ｌｅｒｏｕｘ  ２０１５）。
【０００７】
さらに、異なる真菌感染がＭＨＣクラスＩＩ発現に依存することが実証されている。クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｏｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）は、ＨＩＶを含む免疫不全の患者において生命を脅かす脳感染を引き起こし得る。クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｏｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）感染のマウスモデルでの研究から、ＩＦＮ−γ依存的に、ミクログリア細胞の活性化及びそれらのＭＨＣクラスＩＩの上方制御が生存に不可欠であることが実証されている（Ｚｈｏｕ  ２００７）。
【０００８】
したがって、Ｍｔｂ及び他の細胞内細菌、トキソプラズマ・ゴンディ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）などの原虫、又はクリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）により代表される真菌によって誘発される免疫回避機序を克服するために、単球、マクロファージ、ミクログリア又は他の感染細胞の細胞表面でのＭＨＣクラスＩＩの発現増加は、病原体の免疫認識及び排除に有益であると思われる。
【０００９】
エリスロマイシン及びアジスロマイシンなどのマクロライドは、細菌感染の処置に長年使用されてきた。エリスロマイシンは、放線菌サッカロポリスポラ・エリスレア（Ｓａｃｃｈａｒｏｐｏｌｙｓｐｏｒａ  ｅｒｙｔｈｒａｅａ）の発酵によって産生されるポリケチド天然物マクロライドである。アジスロマイシンは、エリスロマイシンの半合成アザライド誘導体である。エリスロマイシンなどのマクロライドの抗菌活性を記載する多くの参考文献が存在する。この抗菌機序は、分子が細菌の５０Ｓ細菌リボソーム上のＰ部位に結合し、ゆえにｔＲＮＡ結合を妨害することを通じて達成される。
【００１０】
多くの参考文献は、半合成及び生合成工学を介したエリスロマイシンの類似体の生成を記載している。特に、エリスロマイシン、デソサミン及びミカロース／クラジノース上のグリコシル基の半合成的除去のための方法が記載されている。別のグリコシル基をエリスロマイシンアグリコンに付加するための生体内変換について、さらなる方法が記載されている（例えば、Ｇａｉｓｓｅｒら、２０００，Ｓｃｈｅｌｌら、２００８及び国際公開第２００１０７９５２０号パンフレットを参照）。しかし、この公表されている研究の主な焦点は、抗菌性エリスロマイシン類似体を生成させることであった。
【発明の概要】
【００１１】
直接的な抗菌活性を欠くマクロライドからの免疫刺激活性は以前は報告されていなかった。驚くべきことに、発明者らは、化合物１（図１）などの本発明の化合物が、免疫系のいくつかの細胞型において強力な免疫刺激効果を有することを発見した。１μＭ化合物１による末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の２４〜４８時間のインビトロ刺激後、ＣＤ４  Ｔ細胞及びＢ細胞において活性化マーカーＣＤ６９が上方制御された（図２）。発明者らは、Ｔ細胞及びＢ細胞におけるＭＨＣクラスＩ分子（ＨＬＡ−ＡＢＣ）の上方制御も観察し（図３）、このことから、細胞内感染に由来する抗原の抗原提示における影響が示された。化合物１によるＰＢＭＣ集団中の単球の刺激は、共刺激分子ＣＤ８０ならびに抗原提示分子ＭＨＣクラスＩＩ（ＨＬＡ−ＤＲ）の上方制御につながった（図４）。マクロファージに分化した単球は、化合物１による刺激に応答してＣＤ８０も上方制御した（図５）。さらに、化合物１で刺激したＰＢＭＣは、免疫抑制性サイトカインＩＬ−１０の産生増加を伴うサイトカインプロファイル変化を発現し、このことから、ある一定の条件下での免疫阻害効果が示された。フローサイトメトリーで測定して、化合物１の免疫学的効果をさらに分析したところ、６日間の刺激後の、Ｔ細胞のサイトカイン推進性増殖プロファイルの変化が明らかになった（図７）。さらに、ウイルス特異的Ｔ細胞増殖は化合物１により影響を受けた。サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）抗原及び化合物１の存在下で培養したＣＭＶ感染ドナー由来のＰＢＭＣは、ＩＬ−７受容体α（ＣＤ１２７）の発現増加とともに、活性化ＣＭＶ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の表現型の変化を示した（図８）。ＣＤ１２７はＴ細胞のホメオスタシス、分化及び機能に非常に重要であり、発現の低下はＨＩＶ及び他の慢性ウイルス性疾患の疾患重症度と相関する（Ｃｒａｗｌｅｙら、２０１２）。
【００１２】
要約すると、化合物１は、抗原提示、共刺激及びＴ細胞活性化及び増殖に影響を与えることにより、免疫応答を特異的に活性化及び修飾する驚くべき能力を有する。これらの研究の多くにおいて、化合物２（図１）、（化合物２０として）以前にＳｃｈｅｌｌら２００８で公開された、グリコシル化が変化した別の関連マクロライドエリスロマイシン類似体は、アッセイにおいて殆ど又は全く活性を示さなかったので、陰性対照として含めた。
【００１３】
このように、本発明の一態様において、（「本発明の化合物」又は「式（Ｉ）の化合物」とも呼ばれる）式（Ｉ）の免疫刺激マクロライド又は薬学的に許容可能なその、塩、水和物、溶媒和物、互変異性体、エナンチオマーもしくはジアステレオマーが提供される：
【化１】
2020510641.tif 000003
（式中、ＸはＣ＝Ｏ、−ＮＲ３ＣＨ２−、−ＣＨ２ＮＲ３−、−ＮＲ３（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ３−、Ｃ＝ＮＯＨ及び−ＣＨ（ＯＨ）−から選択され、Ｒ２は式（ＩＩ）又は式（ＩＩＩ）の糖：
【化２】
2020510641.tif 000004
であり、
Ｒ１は、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、アリール及びヘテロアリール部分から選択され、
ここでアルキル部分は、場合により分枝しているＣ１−Ｃ６アルキル基から選択され、
ここでヘテロアルキル部分は、場合により分枝しているか又は置換され、場合により１つ以上のヘテロ原子を含むＣ１−Ｃ６アルキル基から選択され、
シクロアルキル部分は、場合により置換され、場合により１つ以上のヘテロ原子を含むＣ１−Ｃ６環状アルキル基から選択され、
アリール部分は、場合により置換されるＣ６芳香環から選択され、
ヘテロアリール部分は、１つ以上のヘテロ原子を含む場合により置換されるＣ１−Ｃ５芳香環から選択され、
ヘテロ原子はＯ、Ｎ、Ｐ及びＳから選択され、
ここで置換基は、独立して、アルキル、ＯＨ、Ｆ、Ｃｌ、ＮＨ２、ＮＨ−アルキル、ＮＨ−アシル、Ｓ−アルキル、Ｓ−アシル、Ｏ−アルキル及びＯ−アシルから選択され、
アシルは、Ｃ１−Ｃ４の場合により分枝状であるアシル基から選択され、
Ｒ３はＨ及びＭｅから選択され、
Ｒ４はＨ及びＭｅから選択され、
ＲａはＨ及びＣＲ２１Ｒ２２Ｒ２３から選択され、
Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３及びＲ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０は、独立して、Ｈ、Ｍｅ、ＮＲ１１Ｒ１２、ＮＯ２及びＯＲ１１から選択され、
ここで式（ＩＩ）のＲ４と合わせられたＲ２３、式（ＩＩ）のＲ５と合わせられたＲ４、式（ＩＩ）のＲ７と合わせられたＲ５及び式（ＩＩ）のＲ９と合わせられたＲ７は、独立して、各基が接続される炭素原子間に二重結合を残すための結合を表すために連結され得、
Ｒ２３及びＲ４が連結して二重結合を形成する場合、式（ＩＩ）は
【化３】
2020510641.tif 000005
により表され得、
Ｒ４及びＲ５が連結して二重結合を形成する場合、式（ＩＩ）は
【化４】
2020510641.tif 000006
により表され得、
Ｒ５及びＲ７が連結して二重結合を形成する場合、式（ＩＩ）は
【化５】
2020510641.tif 000007
により表され得、
Ｒ７及びＲ９が連結して二重結合を形成する場合、式（ＩＩ）は
【化６】
2020510641.tif 000008
により表され得、
式（ＩＩＩ）のＲ５と合わせられたＲ４、式（ＩＩＩ）のＲ７と合わせられたＲ４及び式（ＩＩＩ）のＲ９と合わせられたＲ７は、独立して、各基が接続される炭素原子間の二重結合を残すための結合を表すために連結され得、
Ｒ４及びＲ５が連結して二重結合を形成する場合、式（ＩＩＩ）は、
【化７】
2020510641.tif 000009
により表され得、
Ｒ４及びＲ７が連結して二重結合を形成する場合、式（ＩＩＩ）は、
【化８】
2020510641.tif 000010
により表され得、
Ｒ７及びＲ９が連結して二重結合を形成する場合、式（ＩＩＩ）は、
【化９】
2020510641.tif 000011
により表され得、
Ｒ２２と合わせられたＲ２１、Ｒ６と合わせられたＲ５、Ｒ８と合わせられたＲ７又はＲ１０と合わせられたＲ９はカルボニルで置換され得、Ｒ１１及びＲ１２は、独立して、Ｈ及びアルキルから選択され、
Ｒ１３は、Ｈ、ＯＨ及びＯＣＨ３から選択され、
Ｒ１４は、Ｈ及びＯＨから選択され、
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９又はＲ１０のうち１つはＮＲ１１Ｒ１２及びＮＯ２から選択され、
ただし、Ｒ１がＥｔであり、Ｒ２が式（ＩＩ）の糖であり、Ｒ１３がＨ又はＯＨであり、Ｒ１４がＨ又はＯＨであり、ＲａがＨであり、Ｒ４がＭｅであり、Ｒ５がＨであり、Ｒ６がＯＨであり、Ｒ７がＨであり、Ｒ８がＮＲ１１Ｒ１２であり、Ｒ９がＨであり、Ｒ１０がＨである場合、ＸはＣ＝Ｏでなくてもよく、
ただし、Ｒ１がＥｔであり、Ｒ２が式（ＩＩ）の糖であり、Ｒ１３がＨ又はＯＨであり、Ｒ１４がＨ又はＯＨであり、ＲａがＨであり、Ｒ４がＭｅであり、Ｒ５がＯＨであり、Ｒ６がＨであり、Ｒ７がＯＨであり、Ｒ８がＭｅであり、Ｒ９がＨであり、Ｒ１０がＨである場合、ＸはＣ＝Ｏでなくてもよく、
ただし、Ｒ１がＥｔであり、Ｒ２が式（ＩＩ）の糖であり、Ｒ１３がＨ又はＯＨであり、Ｒ１４がＨ又はＯＨであり、ＲａがＨであり、Ｒ４がＭｅであり、Ｒ５がＯＨであり、Ｒ６がＨであり、Ｒ７がＨであり、Ｒ８がＮＲ１１Ｒ１２であり、Ｒ９がＨであり、Ｒ１０がＯＨである場合、ＸはＣ＝Ｏでなくてもよい。）。
【００１４】
本発明の別の態様において、式（Ｉの免疫刺激マクロライド：又は薬学的に許容可能なその、塩、水和物、溶媒和物、互変異性体、エナンチオマーもしくはジアステレオマーが提供される：
【化１０】
2020510641.tif 000012
（式中、Ｘは、Ｃ＝Ｏ、−ＮＲ３ＣＨ２−及び−ＣＨ（ＯＨ）−から選択され、Ｒ２は式（ＩＩ）の糖：
【化１１】
2020510641.tif 000013
であり、
Ｒ１は、アルキル又はシクロアルキル部分から選択され、
ここでアルキル部分は、場合によっては分枝状であり、独立して、場合によってはヒドロキシル化されるＣ１−Ｃ６アルキル基から選択され、
ここでシクロアルキル部分は、Ｃ１−Ｃ６の場合によっては置換される環状アルキル基から選択され、
置換基は、アルキル及びＯＨから選択され、
Ｒ３はＨ及びＭｅから選択され、
Ｒ４はＨ及びＭｅから選択され、
ＲａはＨ及びＣＲ２１Ｒ２２Ｒ２３から選択され、
Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３及びＲ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０は、独立して、Ｈ、Ｍｅ、ＮＲ１１Ｒ１２、ＮＯ２及びＯＲ１１から選択され、
ここで式（ＩＩ）のＲ４と合わせられたＲ２３、式（ＩＩ）のＲ５と合わせられたＲ４、式（ＩＩ）のＲ７と合わせられたＲ５及び式（ＩＩ）のＲ９と合わせられたＲ７は、独立して、各基が接続される炭素原子間に二重結合を残すための結合を表すために連結され得、
Ｒ２３及びＲ４が連結して二重結合を形成する場合、式（ＩＩ）は、
【化１２】
2020510641.tif 000014
により表され得、
Ｒ４及びＲ５が連結して二重結合を形成する場合、式（ＩＩ）は、
【化１３】
2020510641.tif 000015
により表され得、
Ｒ５及びＲ７が結合して二重結合を形成する場合、式（ＩＩ）は
【化１４】
2020510641.tif 000016
により表され得、
Ｒ７及びＲ９が結合して二重結合を形成する場合、式（ＩＩ）は
【化１５】
2020510641.tif 000017
により表され得、
Ｒ２２と合わせられたＲ２１、Ｒ６と合わせられたＲ５、Ｒ８と合わせられたＲ７又はＲ１０と合わせられたＲ９はカルボニルで置換され得、
Ｒ１１及びＲ１２は、独立して、Ｈ及びアルキルから選択され、
Ｒ１３は、Ｈ、ＯＨ及びＯＣＨ３から選択され、
Ｒ１４は、Ｈ及びＯＨから選択され、
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９又はＲ１０のうち１つはＮＲ１１Ｒ１２及びＮＯ２から選択され、
ただし、Ｒ１がＥｔであり、Ｒ２が式（ＩＩ）の糖であり、Ｒ１３がＨ又はＯＨであり、Ｒ１４がＨ又はＯＨであり、ＲａがＨであり、Ｒ４がＭｅであり、Ｒ５がＨであり、Ｒ６がＯＨであり、Ｒ７がＨであり、Ｒ８がＮＲ１１Ｒ１２であり、Ｒ９がＨであり、Ｒ１０がＨである場合、ＸはＣ＝Ｏでなくてもよく、
ただし、Ｒ１がＥｔであり、Ｒ２が式（ＩＩ）の糖であり、Ｒ１３がＨ又はＯＨであり、Ｒ１４がＨ又はＯＨであり、ＲａがＨであり、Ｒ４がＭｅであり、Ｒ５がＯＨであり、Ｒ６がＨであり、Ｒ７がＯＨであり、Ｒ８がＭｅであり、Ｒ９がＨであり、Ｒ１０がＨである場合、ＸはＣ＝Ｏでなくてもよく、
ただし、Ｒ１がＥｔであり、Ｒ２が式（ＩＩ）の糖であり、Ｒ１３がＨ又はＯＨであり、Ｒ１４がＨ又はＯＨであり、ＲａがＨであり、Ｒ４がＭｅであり、Ｒ５がＯＨであり、Ｒ６がＨであり、Ｒ７がＨであり、Ｒ８がＮＲ１１Ｒ１２であり、Ｒ９がＨであり、Ｒ１０がＯＨである場合、ＸはＣ＝Ｏでなくてもよい。）。
【００１５】
本発明の別の態様において、式ＩＶを有するアグリコンを３−ヒドロキシル位置でグリコシル化する生体内変換株の培養物に添加することを含む、式（Ｉ）の化合物を作製するための方法が提供される。
【化１６】
2020510641.tif 000018
【００１６】
本発明のこの態様の好ましい実施形態において、生体内変換株は、ＡｎｇＭＩＩ（配列番号１）又はＡｎｇＭＩＩＩ（配列番号２）に対して７０％以上、例えば７５％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の相同性、例えば１００％の相同性など、の相同性を有するグリコシルトランスフェラーゼを発現する。
【００１７】
２つのアミノ酸配列間又は２つの核酸配列間の相同性は、パラメーター「同一性」によって述べられる。配列のアライメント及び相同性スコアの計算は、例えばタンパク質及びＤＮＡアライメントの両方に有用な、完全なＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎアライメントを使用して行われ得る。初期設定のスコア行列ＢＬＯＳＵＭ５０及び単位行列は、それぞれタンパク質及びＤＮＡアライメントに使用される。ギャップにおける最初の残基に対するペナルティは、タンパク質に対しては−１２、ＤＮＡに対しては−１６であり、一方、ギャップにおける追加残基のペナルティは、タンパク質に対しては−２、ＤＮＡに対しては−４である。アライメントはＦＡＳＴＡパッケージバージョンｖ２０ｕ６で生成させ得る。タンパク質配列の多重アライメントは、「ＣｌｕｓｔａｌＷ」を使用して生成させ得る。タンパク質アライメントを鋳型として使用し、ＤＮＡ配列からの対応するコドンでアミノ酸を置き換えて、ＤＮＡ配列の多重アライメントを行い得る。あるいは、アミノ酸配列及びＤＮＡ配列を整列させるために異なるソフトウェアを使用し得る。２つのアミノ酸配列のアライメントは、例えばＥＭＢＯＳＳパッケージ（ｈｔｔｐ：／／ｅｍｂｏｓｓ．ｏｒｇ）バージョン２．８．０からのＮｅｅｄｌｅプログラムを使用することにより決定される。使用される置換行列はＢＬＯＳＵＭ６２、ギャップ開始ペナルティは１０、ギャップ伸長ペナルティは０．５である。
【００１８】
本発明の化合物の関心のある選択は、Ｒ２がＬ−ダウノサミン、Ｌ−アコサミン、Ｌ−リストサミン、Ｄ−リストサミン、４−オキソ−Ｌ−バンコサミン、Ｌ−バンコサミン、Ｄ−フォロサミン、Ｌ−アクチノサミン、３−エピ−Ｌ−バンコサミン、Ｌ−ビセニサミン、Ｌ−マイコサミン、Ｄ−マイコサミン、Ｄ−３−Ｎ−メチル−４−Ｏ−メチル−Ｌ−リストサミン、Ｄ−デソサミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−ピロロサミン、Ｌ−メゴサミン、Ｌ−ノガラミン、Ｌ−ロドサミン、Ｄ−アンゴロサミン、Ｌ−ケダロサミン、２’−Ｎ−メチル−Ｄ−フコサミン、３−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−エレモサミン、Ｄ−ラビドサミン、３−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｄ−マイコサミン／Ｄ−マイカミノース、３−Ｎ−アセチル−Ｄ−ラビドサミン、４−Ｏ−アセチル−Ｄ−ラビドサミン、３−Ｎ−アセチル−４−Ｏ−アセチル−Ｄ−ラビドサミン、Ｄ−グルコサミン、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン、Ｌ−デソサミン、Ｄ−アモサミン、Ｄ−ビオサミン、Ｌ−アビジノサミン、Ｄ−グロサミン、Ｄ−アロサミン及びＬ−シビロサミンから選択される化合物である。
【００１９】
本発明の化合物のまた別の関心のある選択は、Ｒ２が、Ｄ−アンゴロサミン、Ｎ−デスメチルＤ−アンゴロサミン、Ｎ−ジデスメチルＤ−アンゴロサミン、Ｎ−デスメチルＮ−エチルＤ−アンゴロサミン及びＮ−ジデスメチルＮ−ジエチルＤ−アンゴロサミンから選択される化合物である。
【００２０】
本発明の化合物のまた別の関心のある選択は、Ｒ２が、Ｎ−デスメチルＤ−アンゴロサミン、Ｎ−ジデスメチルＤ−アンゴロサミン、Ｎ−デスメチルＮ−エチルＤ−アンゴロサミン及びＮ−ジデスメチルＮ−ジエチルＤ−アンゴロサミンから選択される化合物である。
【００２１】
本発明の化合物のまた別の関心のある選択は、Ｒ２が式（ＩＩ）による糖である化合物である。
【００２２】
本発明の化合物のまた別の関心のある選択は、Ｒ２が式（ＩＩ）による糖であり、ＲａがＨであり、Ｒ４がＭｅであり、Ｒ５がＨであり、Ｒ６がＯＨであり、Ｒ７がＨであり、Ｒ８がＮＲ１１Ｒ１２であり、Ｒ９がＨであり、Ｒ１０がＨである化合物である。
【００２３】
本発明の化合物のまた別の関心のある選択は、Ｒ１１がＨ、Ｍｅ及びＥｔから選択され、Ｒ１２がＨ、Ｍｅ及びＥｔから選択される化合物である。
【００２４】
本発明の化合物のまた別の関心のある選択は、Ｒ１１がＥｔであり、Ｒ１２がＥｔである化合物である。
【００２５】
本発明の化合物のさらに別の関心のある選択は、Ｒ１１がＭｅであり、Ｒ１２がＥｔである化合物である。
【００２６】
本発明の化合物のさらに別の関心のある選択は、ＸがＣ＝Ｏ、−ＮＲ３ＣＨ２−及び−ＣＨ（ＯＨ）−から選択される化合物である。
【００２７】
本発明の化合物のまた別の関心のある選択は、Ｒ１がＭｅ、Ｅｔ及びシクロアルキルから選択される化合物である。
【００２８】
本発明の化合物のまた別の関心のある選択は、Ｒ１がＭｅ及びＥｔから選択される化合物である。
【００２９】
本発明の化合物のまた別の関心のある選択は、Ｘが、−ＮＲ３ＣＨ２−又は−ＣＨ２ＮＲ３−から選択される化合物である。
【００３０】
本発明の化合物のまた別の関心のある選択は、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７又はＲ８のうち１つがＮＲ１１Ｒ１２である化合物である。
【００３１】
本発明の化合物のまた別の関心のある選択は、Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３及びＲ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０が、独立して、Ｈ、Ｍｅ、ＮＲ１１Ｒ１２及びＯＲ１１から選択される化合物である。
【００３２】
本発明の化合物のまた別の関心のある選択は、Ｒ１３及びＲ１４がＯＨである化合物である。
【００３３】
特に関心があるものは、Ｒ１がＥｔであり、Ｒ２が式（ＩＩ）の糖であり、Ｒ１３がＯＨであり、Ｒ１４がＨであり、ＲａがＨであり、Ｒ４がＭｅであり、Ｒ５がＨであり、Ｒ６がＯＨであり、Ｒ７がＨであり、Ｒ８がＮＲ１１Ｒ１２であり、Ｒ９がＨであり、Ｒ１０がＨであり、ＸがＣ＝Ｏである式（Ｉ）の化合物である。
【００３４】
本発明による具体的な化合物としては以下が挙げられる：
【化１７−１】
2020510641.tif 000019
【化１７−２】
2020510641.tif 000020
【化１７−３】
2020510641.tif 000021
【化１７−４】
2020510641.tif 000022
【００３５】
本明細書中の例から分かるように、本発明の化合物の一部は、本明細書中で定義されるような実質的な抗菌活性がない。
【００３６】
一般的な化学的方法
当業者は、本発明の化合物が、公知のように様々な方法で調製され得ることを認識する。以下の経路は、式（Ｉ）の化合物の合成に使用され得るいくつかの方法の単なる例示である。
【００３７】
生体内変換にアグリコンが必要とされる場合、これらは多くの方法で入手し得る。アジスロマイシン及びエリスロマイシンは容易に入手可能であり、適切な出発点とみなされる。ミカロース／クラジノース及び／又はデソサミンは、グリコシド切断など、化学的方法によって除去される。簡潔に述べると、一方法において、酸での処理により糖を除去し得る。アミノ糖の除去を促進するために、最初にジメチルアミンを酸化してＮ−オキシドを形成させ、次いでこれを熱分解により除去することが必要である。次いで、結果として得られる５−Ｏ／３−Ｏ糖を酸性分解により除去し得る。適切な方法は、ＬｅＭａｈｉｅｕら、１９７４及びＤｊｏｋｉｃら１９８８により教示される。最後に、本化合物は、アミノ糖を付加する細菌株を使用して生体内変換される。
【００３８】
適切なアグリコンへの別の経路は、発酵及び適切な遮断変異体からの単離による。例えば、エリスロノリドＢ（３ａ）は、例えば米国特許第３，１２７，３１５号明細書（例えばＮＲＲＬ２３６１、ＮＲＲＬ２３６０、ＮＲＲＬ２３５９及びＮＲＲＬ２３３８）、Ｇａｉｓｓｅｒら２０００（例えばＳ．エリスレア（Ｓ．ｅｒｙｔｈｒａｅａ）ＤＭ  ΔＢＶ  ΔＣＩＩＩ）に記載の株及び工程など、グリコシル化において遮断されたＳ．エリスレア（Ｓ．ｅｒｙｔｈｒａｅａ）の株の発酵によって産生され得る。簡潔に述べると、発酵は、当技術分野で公知の方法によって実施される。通常、種培養を準備し、生産容器に移す。生産期間は４〜１０日間であり、生物は、適切な撹拌及び通気を行いながら２４℃〜３０℃で増殖させる。次いで、アグリコンを抽出及び精製により分離し得る。
【００３９】
本発明のアグリコン又は化合物がアミノ糖又は何らかの他の三級アミンを保持し、発酵により調製される場合、細菌ブロスを抽出し、化合物を精製することが必要である。通常、細菌ブロスはｐＨ８〜１０、理想的には９．５に調整する。次に、適切な有機溶媒でブロスを抽出し得る。この溶媒は水混和性ではなく、理想的には酢酸エチル、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）又は同様の特性がある溶媒である。ブロス及び溶媒は、理想的には、撹拌により、一定期間、例えば３０分間又は１時間混合される。次に、相を分離し、有機抽出物を取り出す。このようにして複数回、理想的には２又は３回、ブロスを抽出し得る。次に、合わせた有機抽出物を真空下で減量させ得る。次に、残渣を弱酸性の水性溶媒中で溶解させるか又は懸濁する。通常、これは塩化アンモニウム水溶液である。次に、これを酢酸エチルなどの水と混和しない有機溶媒で何度か、理想的には２又は３回抽出する。得られた水層を回収し、ｐＨをｐＨ８〜１０、理想的には９．０に調整する。次に、得られた水層を酢酸エチルなどの水と混和しない有機溶媒で何度か、理想的には２又は３回抽出する。有機抽出物を合わせ、真空中で減量させ、さらなる精製を必要とする、標的化合物中で強化された粗製抽出物を得る。
【００４０】
化合物の精製は、クロマトグラフィー又は（再）結晶化によって行い得、必要な方法は当業者にとって周知である。順相シリカにおいてクロマトグラフィーが必要であり、アグリコン又は本発明の化合物がアミノ糖又は他の三級アミンを保持する場合、移動相に塩基性修飾剤を添加することは有益である。例えば、順相シリカ上でのクロマトグラフィーでは、０〜５％水酸化アンモニウム水溶液を添加して溶出するために、ヘキサン、酢酸エチル、メタノール系を使用し得る。理想的には、２％水酸化アンモニウム水溶液を添加する。生体内変換後、適切な溶媒系を使用して、未使用アグリコン及び本発明の化合物の両方を同じ粗製抽出物から別個に精製し得る。さらなる精製が必要な場合、これは場合によっては分取ＨＰＬＣにより実施し得る。
【００４１】
一級又は二級アミンをアルキル化するための還元的アミノ化は、当業者にとって周知である。アミンを溶媒中でアルデヒド又はケトンと混合し、還元剤を添加する。次に、水素化ホウ素ナトリウムは、アミン及びカルボニルの反応から生じるイミン又はヘミアミナールを還元し得、その結果、例えばアルキル化アミンが生じる。水素化ホウ素ナトリウムは、存在する他のカルボニル基、例えばケトン、も還元し得る。ケトンも存在する場合、シアノ水素化ホウ素ナトリウムなど、プロトン化イミンに対してより特異的な還元剤を使用することが好ましいが、最適条件を見つけるために、異なる還元剤、溶媒、温度及び反応時間を試験する必要があり得ることは当業者にとって明らかであろう。
【００４２】
本発明の化合物の一般的使用
本明細書中に記載のような本発明の化合物は、医学、医学研究において、又はそのような使用のための組成物の製造において使用され得る。したがって、以下において、「本発明の化合物」という用語が医学的用途又は医薬組成物に関連して使用される場合、この用語は、このような化合物が、このような用途について知られていないという条件で、式（Ｉ）の化合物を含むことも意図される。特に、式（Ｉ）の化合物の本明細書中で記載のような医療用途には、Ｒ１がＥｔであり、Ｒ２が式（ＩＩ）の糖であり、Ｒ１３がＯＨであり、Ｒ１４がＨであり、ＲａがＨであり、Ｒ４がＭｅであり、Ｒ５がＨであり、Ｒ６がＯＨであり、Ｒ７がＨであり、Ｒ８がＮＲ１１Ｒ１２であり、Ｒ９がＨであり、Ｒ１０がＨであり、ＸがＣ＝Ｏである化合物が含まれる。
【００４３】
本発明の化合物は、直接的な抗菌効果を最小限に抑え、むしろ免疫活性化特性に焦点を合わせるために設計されている。本発明の化合物を細菌Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）、Ｓ．サリバリウス（Ｓ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）、Ｌ．カゼイ（Ｌ．ｃａｓｅｉ）、Ｂ．ロングム（Ｂ．ｌｏｎｇｕｍ）又はＭ．ルテウス（Ｍ．ｌｕｔｅｕｓ）の培養物に添加する場合、抗菌効果は全く認められないか又は最小限しか認められない。宿主細胞に影響を及ぼす単独の免疫刺激特性がある化合物を有することの長所は、細菌耐性の発達が回避されることである。さらに、下痢及び偽膜性大腸炎を引き起こすクロストリジウム・ディフィシレ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）の過剰増殖のリスクを伴う、腸内細菌叢に影響を与えるマクロライドの周知の副作用が回避される。多くの細胞内病原体、例えばＭｔｂ、ならびにウイルス及び癌は、すなわち、Ｔ細胞による検出を回避するため、ＨＬＡ発現を下方制御することによって、免疫認識を回避するための機序を発達させている。介入の本化合物の機序は、感染細胞でのＨＬＡ分子の活性化及び発現上昇に依存する。ＨＬＡ分子は、感染細胞の排除を可能にするＴ細胞に対する認識シグナルを提示するために、細胞内感染病原体由来のペプチドを搭載し、提示する。
【００４４】
本明細書中で開示される本発明の化合物は、細胞内細菌、真菌及び原虫感染、例えば、マイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、マイコバクテリアが引き起こす非定型疾患、マイコバクテリウム・アビウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ）及びＭ．イントラセルラーレ（Ｍ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）（マイコバクテリウム・アビウム−イントラセルラーレ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ−ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）複合体又はＭＡＣとしても知られる。）、Ｍ．カンサシ（Ｍ．ｋａｎｓａｓｉｉ）、Ｍ．マリヌム（Ｍ．ｍａｒｉｎｕｍ）、Ｍ．フォーチュイタム（Ｍ．ｆｏｒｔｕｉｔｕｍ）、Ｍ．ゴルジナエ（Ｍ．ｇｏｒｄｉｎａｅ）、マイコプラズマ・ニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、Ｍ．ゲニタリウム（Ｍ．ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍ）、Ｍ．ホミニス（Ｍ．ｈｏｍｉｎｉｓ）、ウレアプラズマ・ウレアリチクム（Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ  ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ）、Ｕ．パルブム（Ｕ．ｐａｒｖｕｍ）、クラミドフィラ・ニューモニエ（Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）及びサルモネラ・チフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）により引き起こされる細菌感染など、トキソプラズマ・ゴンディ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）、プラスモディウム・ファルシパルム（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）、Ｐ．ビバクス（Ｐ．ｖｉｖａｘ）、トリパノソーマ・クルジ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ）、クリプトスポリジウム（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ）及びリーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ）により引き起こされる原虫感染など、及びヒストプラズマ・カプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）及びエンセファリトゾーン・クニクリ（Ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｏｚｏｏｎ  ｃｕｎｉｃｕｌｉ）により引き起こされる真菌感染などの処置において使用され得る。
【００４５】
本発明の化合物は、これらの感染が単独で、又はウイルス性病原体又はウイルス性疾患が付随して、又は原発性もしくは二次的免疫不全の他の原因が付随して起こる場合の、細胞内細菌、真菌及び原虫感染の処置に使用し得る。原発性免疫不全の原因としては、遺伝性の遺伝的欠損及び体細胞突然変異が挙げられるが、一方で二次的免疫不全は、上記のものなどのウイルス感染により、又は糖尿病などの遺伝性もしくは非遺伝性状態又は栄養失調により、又は免疫抑制剤などの薬剤、薬物乱用又は他の環境要因により引き起こされ得る。
【００４６】
さらに、本明細書中で開示される本発明の化合物は、ウイルス病原体又は、ウイルス性疾患、例えばＨＩＶ、アデノウイルス、アルファウイルス、アルボウイルス、ボルナ病、ブニヤウイルス、カリシウイルス、コンジローマ・アクミナータ（Ｃｏｎｄｙｌｏｍａ  Ａｃｕｍｉｎａｔａ）、コロナウイルス、コクサッキーウイルス、サイトメガロウイルス、デング熱ウイルス、伝染性膿瘡、エプスタイン−バーウイルス、伝染性紅斑、ハンタウイルス、ウイルス性出血熱、ウイルス性肝炎、単純ヘルペスウイルス、帯状疱疹ウイルス、伝染性単核球症、インフルエンザ、ラッサ熱ウイルス、麻疹、耳下腺炎、モルスクム・コンタギオサム（Ｍｏｌｌｕｓｃｕｍ  Ｃｏｎｔａｇｉｏｓｕｍ）、パラミクソウイルス、サシチョウバエ熱、ポリオーマウイルス、リフトバレー熱、風疹、スローディジーズウイルス（Ｓｌｏｗ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｖｉｒｕｓ）、天然痘、亜急性硬化性全脳炎、腫瘍ウイルス感染、西ナイルウイルス、黄熱病ウイルス、狂犬病ウイルス及び呼吸器合胞体ウイルスに感染している患者を処置する場合など、免疫応答刺激が有用である、疾患、障害、状態及び症状に対する処置又は同時処置として使用され得る。
【００４７】
さらに、本発明の化合物は、癌、特に副腎癌、肛門癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳／ＣＮＳ腫瘍、乳癌、キャッスルマン病、子宮頸癌、結腸／直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、眼の癌、胆嚢癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、妊娠性絨毛性疾患、ホジキン病、カポジ肉腫、腎臓癌、喉頭及び下咽頭癌、急性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、急性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄単球性白血病、肝臓癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肺カルチノイド腫瘍、リンパ腫、悪性中皮腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、鼻腔及び副鼻腔癌、上咽頭癌、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、口腔及び中咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵臓癌、陰茎癌、下垂体腫瘍、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、基底及び扁平上皮細胞皮膚癌、黒色腫、メルケル細胞皮膚癌、小腸癌、胃癌、精巣癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌、ワルデンストレームマクログロブリン血症及びウィルムス腫瘍の同時処置での使用に適していることが企図される。
【００４８】
したがって、先行技術のマクロライドを超える本発明の化合物の有利な特性としては、以下のもの：
−直接的な抗菌活性の低下
−ＭＨＣクラスＩ刺激の改善
−免疫調節の改善
−抗原提示細胞の活性化の改善
−Ｔ細胞応答の改善
−抗ウイルス活性の改善
−ＭＨＣクラスＩＩ抗原提示の改善
のうち１つ以上が挙げられ得る。
【００４９】
本発明の化合物を含む医薬組成物
本発明はまた、１つ以上の薬学的に許容可能な希釈剤又は担体と一緒に本発明の化合物を含む医薬組成物も提供する。同様に、本発明はまた、１つ以上の薬学的に許容可能な賦形剤と一緒に本発明の化合物を含む少なくとも１つの医薬組成物を含む医療用キットも提供する。本発明はまた、１つ以上の美容上又は獣医学上許容可能な賦形剤と一緒に本発明の化合物を含む美容用又は獣医用組成物にも関する。
【００５０】
本発明の化合物又は本発明の化合物を含む医薬、美容もしくは獣医用組成物は、非経口、経口、局所、又は粘膜（頬、舌下、経皮、膣、直腸、鼻腔、眼などを含む。）を介して、医療装置（例えばステント）を介して、又は吸入によって、などであるが限定されない、何らかの従来の経路によって投与し得る。処置は、単回投与又はある期間にわたる複数回投与からなり得る。
【００５１】
本発明の化合物及び本発明の医薬組成物の投与計画は、問題となる化合物又は組成物の薬学的特性に応じて変動し得る。投与計画は、単回投与又は１回以上の期間にわたる複数回投与からなり得る。投与は、特定の用途、処置しようとする疾患及び、治療しようとする患者の体調及び特徴（性別、体重及び年齢など）に応じて、１日１回、１日２回、１日３回、１日４回、より少ない頻度、又はより多い頻度であり得る。処置はまた、連続投与、例えば点滴を介した静脈内投与又はデポーもしくは徐放製剤を介したものなどでもあり得る。
【００５２】
本発明の化合物をそのまま投与することは可能であるが、１つ以上の薬学的に許容可能な賦形剤と一緒にそれを医薬組成物として与えることが好ましい。賦形剤は、本発明の化合物と適合性があり、その受容者に有害ではないという意味で「許容可能」でなければならない。適切な賦形剤の例を以下でさらに詳細に記載する。
【００５３】
本医薬組成物は、単位剤型を含む適切な剤型で好都合に提供され得、薬学の技術分野で周知の方法のいずれかによって調製され得る。このような方法は、本発明の化合物を１つ以上の賦形剤との会合に至らせる段階を含む。一般に、本医薬組成物は、本発明の化合物を賦形剤と均一かつ十分に混合し、次いで、必要に応じて、得られた組成物を、例えば錠剤に成形することにより調製される。
【００５４】
本発明の化合物は、通常、経口又はいずれかの非経口経路など、いずれかの従来の投与経路によって、本発明の化合物を含む医薬組成物の形態で、場合によっては薬学的に許容可能な塩の形態で、薬学的に許容可能な剤型で投与される。治療しようとする障害及び患者、ならびに投与経路に応じて、本医薬組成物は、様々な用量及び／又は頻度で投与され得る。
【００５５】
本医薬組成物は、製造及び保管の条件下で安定でなければならず；したがって、必要に応じて、細菌及び真菌などの微生物の汚染作用から保護されるべきである。溶液、分散液、エマルジョン及び懸濁液などの液体処方物の場合、賦形剤は、水、エタノール、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコール及び液体ポリエチレングリコール）、植物油及びそれらの適切な混合物などであるが限定されない溶媒又は分散媒ならびに、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール及び液体ポリエチレングリコール）及び植物油を含む溶媒又は分散媒であり得る。
【００５６】
例えば、本発明の化合物は、香味料又は着色剤を含有し得る、錠剤、カプセル剤、フィルム、坐剤（ｏｖｕｌｅｓ）、エリキシル剤、液剤、エマルジョン又は懸濁剤の形態で、経口、頬側又は舌下投与され得る。
【００５７】
経口投与に適した本発明の医薬組成物は、それぞれが所定量の本発明の化合物を含有する、カプセル、カシェ剤又は錠剤などの別個の単位として；例えば錠剤又はカプセル剤の形態で複数単位として；粉剤又は顆粒剤として；水性液体もしくは非水性液体中の液剤もしくは懸濁剤として；又は水中油液体エマルジョンもしくは油中水液体エマルジョンとして、提供され得る。本医薬組成物は、ボーラス、舐剤又はペーストとしても提供され得る。
【００５８】
経口投与に適した本発明の化合物の液剤又は懸濁剤は、水、アルコール、ポリオールなどを含む１つ以上の溶媒、ならびにｐＨ調整剤、安定化剤、界面活性剤、可溶化剤、分散剤、保存剤、香料などの１つ以上の賦形剤も含有し得る。具体例としては、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、ポリソルベート８０、ポリエチレングリコール及びＰｈｏｓａｌ５０ＰＧ（ホスファチジルコリン、大豆脂肪酸、エタノール、モノ／ジグリセリド、プロピレングリコール及びパルミチン酸アスコルビルからなる。）が挙げられる。本発明の医薬組成物は、エマルジョンの形態でもあり得、ここで式（Ｉ）による化合物は、水中油型エマルジョン又は油中水型エマルジョンなどのエマルジョンで提供され得る。油は、天然油もしくは合成油、又は何らかの油様物質、例えば大豆油又はベニバナ油又はそれらの組み合わせであり得る。
【００５９】
錠剤は、賦形剤、例えば、微結晶セルロース、ラクトース（例えばラクトース一水和物又は無水ラクトース）、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、第二リン酸カルシウム及びグリシン、ブチル化ヒドロキシトルエン（Ｅ３２１）、クロスポビドン、ヒプロメロース、デンプンなどの崩壊剤（好ましくはトウモロコシ、ジャガイモ又はタピオカデンプン）、デンプングリコール酸ナトリウム、クロスカルメロースナトリウム及びある種の複合ケイ酸塩及び、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、マクロゴール８０００、スクロース、ゼラチン及びアカシアなどの造粒結合剤を含有し得る。さらに、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、ベヘン酸グリセリル及びタルクなどの滑沢剤が含まれ得る。
【００６０】
錠剤は、本発明の化合物を、場合によっては１つ以上の賦形剤とともに圧縮又は成形することにより作製され得る。圧縮錠剤は、適切な機械において、粉末又は顆粒などの自由流動形態の本発明の化合物を圧縮し、場合によっては結合剤（例えばポビドン、ゼラチン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）、滑沢剤、不活性希釈剤、保存剤、崩壊剤（例えば、デンプングリコール酸ナトリウム、架橋ポビドン、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム）、界面活性剤及び／又は分散剤と混合することにより調製され得る。成形錠剤は、不活性液体希釈剤で湿らせた粉末化した本発明の化合物の混合物を適切な機械で成形することにより作製され得る。錠剤は、場合によっては、コーティングするか又は切れ目を入れてもよく、所望の放出プロファイルを提供するために、例えば、様々な割合のヒドロキシプロピルメチルセルロースを使用して、それに含有される本発明の化合物の徐放又は制御放出を提供するためにさらに処理又は加工（ｔｒｅａｔｅｄ  ｏｆ  ｐｒｏｃｅｓｓｅｄ）し得る。
【００６１】
同様のタイプの固形医薬組成物は、ゼラチンカプセル中の充填剤としても使用され得る。これに関して好ましい賦形剤としては、ラクトース、デンプン、セルロース、乳糖及び高分子量ポリエチレングリコールが挙げられる。水性懸濁液及び／又はエリキシルの場合、本発明の化合物は、様々な甘味料又は香味料、着色物質又は染料と、乳化剤及び／又は懸濁剤と、及び水、エタノール、プロピレングリコール及びグリセリンなどの希釈剤及びそれらの混合物と組み合わせられ得る。
【００６２】
口腔での局所投与に適した本発明の医薬組成物としては、風味付けされた基剤、通常はスクロース及びアカシア又はトラガカント中で本発明の化合物を含むロゼンジ；ゼラチン及びグリセリン又はスクロース及びアカシアなどの不活性基剤中で本発明の化合物を含むトローチ；及び適切な液体担体中に本発明の化合物を含む洗口液が挙げられる。
【００６３】
局所投与に適合した本発明の医薬組成物は、軟膏、クリーム、懸濁剤、ローション、粉剤、液剤、ペースト、ゲル、含浸包帯、スプレー、エアロゾル又は油、経皮装置、散布剤などとして調製され得る。このような組成物は、本発明の化合物を含有する従来の方法を介して調製され得る。したがって、それらはまた、保存剤、薬物浸透を助ける溶媒、クリーム又は軟膏中の皮膚軟化剤及びローション中のエタノール又はオレイルアルコールなどの適合性の賦形剤も含み得る。賦形剤は、本組成物の約１％ｗ／ｗ〜約９８％ｗ／ｗを構成し得る。好ましくは、賦形剤は、本組成物の約８０％ｗ／ｗ以下を構成する。単なる例示として、クリーム又は軟膏は、所望の粘稠度を有するクリーム又は軟膏を生成させるのに十分な量で、約５〜１０％ｗ／ｗの化合物を含有する十分な量の親水性物質及び水を混合することにより調製される。
【００６４】
経皮投与に適合した本発明の医薬組成物は、長期間にわたり受容者の表皮と密接に接触したままであることが意図された個別のパッチとして与えられ得る。例えば、本発明の化合物は、イオン導入によりパッチから送達され得る。
【００６５】
外部組織、例えば口及び皮膚への適用のために、本発明の医薬組成物は、好ましくは局所軟膏又はクリームとして適用される。軟膏中で処方される場合、本発明の化合物は、パラフィン又は水混和性の軟膏基剤のいずれかとともに使用され得る。
【００６６】
あるいは、本発明の化合物は、水中油型クリーム基剤又は油中水型基剤とともにクリーム中で処方され得る。
【００６７】
非経口投与の場合、本発明の化合物と、水、アルコール、ポリオール、グリセリン及び植物油などであるが限定されず水が好ましい無菌ビヒクルと、を含む液体単位剤型が調製される。本発明の化合物は、使用されるビヒクル及び濃度に応じて、ビヒクル中で、コロイド状にし得るか、懸濁し得るか、又は溶解し得るかのいずれかである。溶液の調製において、本発明の化合物を注射用水中で溶解させ、適切なバイアル又はアンプルに充填して密封する前に、濾過滅菌し得る。
【００６８】
有利には、局所麻酔薬、保存剤及び緩衝剤などの薬剤をビヒクル中で溶解させ得る。安定性を高めるために、バイアルに充填した後、医薬組成物を凍結させ得、次いで真空下で水を除去し得る。次いで、乾燥した凍結乾燥粉末をバイアル中で密封し、使用前に液体を再構成するために付随の注射用水バイアルを供給し得る。
【００６９】
注射用途に適した本発明の医薬組成物は無菌水溶液又は分散液を含む。さらに、このような医薬組成物は、そのような無菌注射用溶液又は分散液の即時調製のための無菌粉末の形態であり得る。全ての場合において、最終注射形態は無菌でなければならず、容易な注射針通過可能性のために効果的に流動性でなければならない。
【００７０】
非経口懸濁液は、本発明の化合物を溶解させる代わりにビヒクル中で懸濁し、滅菌が濾過によって達成され得ないことを除いて、溶液と実質的に同じように調製される。本発明の化合物は、無菌ビヒクル中で懸濁する前にエチレンオキシドに曝露することにより滅菌し得る。有利には、本発明の化合物の均一な分布を促進するために、界面活性剤又は湿潤剤が本医薬組成物中に含まれる。
【００７１】
上記で特に言及した成分に加えて、本発明の医薬組成物は、問題の処方物のタイプを考慮して、当技術分野で従来のものである他の薬剤を含み得ることを理解されたい。例えば、経口投与に適した医薬組成物は、香味料を含み得る。当業者は、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０又はその最新版からの指針に基づいて、適切な処方物を選択する方法及びそれを調製する方法を知っている。当業者はまた、適切な投与経路及び投与量を選択する方法も知っている。
【００７２】
本発明の化合物の個々の投与量の最適な量及び間隔は、処置される状態の性質及び程度、投与の形態、経路及び部位及び処置される特定の対象の年齢及び状態によって決定され、医師が最終的に使用しようとする適切な投与量を決定することは当業者により認められる。この投与量は必要に応じて何度も繰り返し得る。副作用を発症した場合、通常の臨床業務に従って、投与量及び／又は投与頻度を変更し得るか又は減少させ得る。
【００７３】
文脈上別段の要求がない限り、本明細書中で言及される％値は全て％ｗ／ｗである。
【００７４】
定義
冠詞「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、本明細書中で、冠詞の文法的対象の１つ以上（すなわち少なくとも１つ）を指すために使用される。例として、「類似体」は、１つの類似体又は複数の類似体を意味する。
【００７５】
本明細書で使用される場合、「本発明の化合物」及び「式（Ｉ）の化合物」という用語は交換可能に使用され、式（Ｉ）の化合物を指す。
【００７６】
本明細書中で使用される場合、「直接的な抗菌効果」という用語は、細菌のｒＲＮＡ複合体への結合を通じて生じるエリスロマイシン及び類似体の抗菌活性を指す。この効果は、何れの宿主免疫系成分の存在も必要とせず、したがって、インビトロ最小阻害濃度（ＭＩＣ）アッセイ及びディスク阻害アッセイなどの標準的な抗菌アッセイにおいて明らかである。
【００７７】
本明細書中で使用される場合、「実質的な抗菌活性なく」という用語は、Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）、Ｓ．サリバリウス（Ｓ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）、Ｌ．カゼイ（Ｌ．ｃａｓｅｉ）及びＢ．ロングム（Ｂ．ｌｏｎｇｕｍ）におけるその抗菌活性について本明細書中の例１３に従って試験した場合、本発明の化合物のＭＩＣ値が＞６４μｇ／ｍＬであることを意味するものとする。
【００７８】
本明細書中で使用される場合、「アルキル」という用語は、ｓｐ３−ハイブリッド形成炭素原子のみから構成され、例えば直鎖アルキルの場合は−ＣｎＨ２ｎ＋１（式中、ｎは、１及び６の範囲であり得、例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ネオペンチル、イソペンチル、ヘキシル又はイソヘキシルである。）など、水素原子で完全に飽和しているあらゆる直鎖又は分枝鎖を指す。本明細書中で使用される場合、アルキルはさらに置換され得る。
【００７９】
本文脈における「ヘテロアルキル」という用語は、単独で、又は組み合わせて使用される基−Ｘ−Ｃ−１−６アルキルを示し、ここでＣ１−６アルキルは上記で定義されるとおりであり、ＸはＯ、Ｓ、ＮＨ又はＮ−アルキルである。直線状ヘテロアルキル基の例は、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、ペントキシ及びヘキソキシである。分枝ヘテロアルキルの例は、イソプロポキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、イソペントキシ及びイソヘキソキシである。環状ヘテロアルキルの例は、シクロプロピルオキシ、シクロブチルオキシ、シクロペンチルオキシ及びシクロヘキシルオキシである。本明細書中で使用される場合、ヘテロアルキルは、さらに置換され得る。
【００８０】
本明細書中で使用される場合、「シクロアルキル」という用語は、一般式が−ＣｎＨ２ｎ−１である環状／環構造炭素鎖を指し、式中、ｎは、例えば３〜６であり、例えばシクロプロピル、シクロビチル（ｃｙｃｌｏｂｙｔｙｌ）、シクロペンチル又はシクロヘキシルなどである。本明細書中で使用される場合、シクロアルキルは、環状構造で、置換され得るか、又はヘテロ原子（Ｏ、Ｓ、ＮＨ又はＮ−アルキル）を含有し得る。
【００８１】
本明細書中で使用される場合、「アリール」という用語は、炭素環式芳香環系を含むものとする。アリールはまた、以下に列挙される炭素環系の部分的に水素化された誘導体を含むものとする。
【００８２】
本明細書中で使用される場合、「ヘテロアリール」という用語は、フリル、チエニル、ピロリルなどの窒素、酸素及び硫黄の間で選択される１つ以上のヘテロ原子を含有する複素環式不飽和環系を含み、以下に列挙する複素環系の部分水素化誘導体も含むものとする。
【００８３】
本明細書中で使用される場合、「アリール」及び「ヘテロアリール」という用語は、場合によっては未置換であり得るか又はモノ、ジもしくはトリ置換され得るアリール、又は場合によっては未置換であり得るか又はモノ、ジもしくはトリ置換され得るヘテロアリールを指す。「アリール」及び「ヘテロアリール」の例としては、フェニル、ビフェニル、インデニル、ナフチル（１−ナフチル、２−ナフチル）、Ｎ−ヒドロキシテトラゾリル、Ｎ−ヒドロキシトリアゾリル、Ｎ−ヒドロキシイミダゾリル、アントラセニル（１−アントラセニル、２−アントラセニル、３−アントラセニル）、フェナントレニル、フルオレニル、ペンタレニル、アズレニル、ビフェニルエニル、チオフェニル（１−チエニル、２−チエニル）、フリル（１−フリル、２−フリル）、フラニル、チオフェニル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル、１，２，３−トリアゾリル、１，２，４−トリアゾリル、ピラニル、ピリダジニル、ピラジニル、１，２，３−トリアジニル、１，２，４−トリアジニル、１，３，５−トリアジニル、１，２，３−オキサジアゾリル、１，２，４−オキサジアゾリル、１，２，５−オキサジアゾリル、１，３，４−オキサジアゾリル、１，２，３−チアジアゾリル、１，２，４−チアジアゾリル、１，２，５−チアジアゾリル、１，３，４−チアジアゾリル、テトラゾリル、チアジアジニル、インドリル、イソインドリル、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェニル（チアナフテニル）、インドリル、オキサジアゾリル、イソオキサゾリル、キナゾリニル、フルオレニル、キサンテニル、イソインダニル、ベンズヒドリル、アクリジニル、ベンゾイソオキサゾリル、プリニル、キナゾリニル、キノリジニル、キノリニル、イソキノリニル、キノキサリニル、ナフチリジニル、フテリジニル、アゼピニル、ジアゼピニル、ピロリル（２−ピロリル）、ピラゾリル（３−ピラゾリル）、５−チオフェン−２−イル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル、イミダゾリル（１−イミダゾリル、２−イミダゾリル、４−イミダゾリル、５−イミダゾリル）、トリアゾリル（１，２，３−トリアゾール−１−イル、１，２，３−トリアゾール−２−イル、１，２，３−トリアゾール−４−イル、１，２，４−トリアゾール−３−イル）、オキサゾリル（２−オキサゾリル、４−オキサゾリル、５−オキサゾリル）、チアゾリル（２−チアゾリル、４−チアゾリル、５−チアゾリル）、ピリジル（２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル）、ピリミジニル（２−ピリミジニル、４−ピリミジニル、５−ピリミジニル、６−ピリミジニル）、ピラジニル、ピリダジニル（３−ピリダジニル、４−ピリダジニル、５−ピリダジニル）、イソキノリル（１−イソキノリル、３−イソキノリル、４−イソキノリル、５−イソキノリル、６−イソキノリル、７−イソキノリル、８−イソキノリル）、キノリル（２−キノリル、３−キノリル、４−キノリル、５−キノリル、６−キノリル、７−キノリル、８−キノリル）、ベンゾ［ｂ］フラニル（２−ベンゾ［ｂ］フラニル、３−ベンゾ［ｂ］フラニル、４−ベンゾ［ｂ］フラニル、５−ベンゾ［ｂ］フラニル、６−ベンゾ［ｂ］フラニル、７−ベンゾ［ｂ］フラニル）、２，３−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］フラニル（２−（２，３−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］フラニル）、３−（２，３−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］フラニル）、４−（２，３−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］フラニル）、５−（２，３−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］フラニル）、６−（２，３−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］フラニル）、７−（２，３−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］フラニル））、ベンゾ［ｂ］チオフェニル（２−ベンゾ［ｂ］チオフェニル、３−ベンゾ［ｂ］チオフェニル、４−ベンゾ［ｂ］チオフェニル、５−ベンゾ［ｂ］チオフェニル、６−ベンゾ［ｂ］チオフェニル、７−ベンゾ［ｂ］チオフェニル）、２，３−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェニル（２−（２，３−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェニル）、３−（２，３−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェニル）、４−（２，３−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェニル）、５−（２，３−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェニル）、６−（２，３−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェニル）、７−（２，３−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェニル））、インドリル（１−インドリル、２−インドリル、３−インドリル、４−インドリル、５−インドリル、６−インドリル、７−インドリル）、インダゾリル（１−インダゾリル、２−インダゾリル、３−インダゾリル、４−インダゾリル、５−インダゾリル、６−インダゾリル、７−インダゾリル）、ベンゾイミダゾリル、（１−ベンゾイミダゾリル、２−ベンゾイミダゾリル、４−ベンゾイミダゾリル、５−ベンゾイミダゾリル、６−ベンゾイミダゾリル、７−ベンゾイミダゾリル、８−ベンゾイミダゾリル）、ベンゾオキサゾリル（１−ベンゾオキサゾリル、２−ベンゾオキサゾリル）、ベンゾチアゾリル（１−ベンゾチアゾリル、２−ベンゾチアゾリル、４−ベンゾチアゾリル、５−ベンゾチアゾリル、６−ベンゾチアゾリル、７−ベンゾチアゾリル）、カルバゾリル（１−カルバゾリル、２−カルバゾリル、３−カルバゾリル、４−カルバゾリル）が挙げられるが限定されない。部分水素化誘導体の非限定例は、１，２，３，４−テトラヒドロナフチル、１，４−ジヒドロナフチル、ピロリニル、ピラゾリニル、インドリニル、オキサゾリジニル、オキサゾリニル、オキサゼピニルなどである。
【００８４】
本発明の化合物の薬学的に許容可能な塩としては、薬学的に許容可能な無機もしくは有機酸又は塩基から形成される従来の塩、ならびに四級アンモニウム酸付加塩が挙げられる。適切な酸性塩のより具体的な例としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ギ酸、乳酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、パルモイック酸（ｐａｌｍｏｉｃ）、マロン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、ベンゼンスルホン酸ヒドロキシナフトエ酸、ヨウ化水素酸、リンゴ酸、ステロイック酸（ｓｔｅｒｏｉｃ  ａｃｉｄ）、タンニンなどが挙げられる。シュウ酸などの他の酸は、それ自体は薬学的に許容可能ではないが、本発明の化合物及びそれらの薬学的に許容可能な塩を得る際の中間体として有用な塩の調製において有用であり得る。適切な塩基性塩のより具体的な例としては、ナトリウム、リチウム、カリウム、マグネシウム、アルミニウム、カルシウム、亜鉛、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン及びプロカイン塩が挙げられる。
【図面の簡単な説明】
【００８５】
【図１】マクロライドであるエリスロマイシンＡ、化合物１、化合物Ａ、化合物Ｂ及びＥＭ７０３の構造。
【図２】Ｔ細胞及びＢ細胞でのＣＤ６９上方制御。ＰＢＭＣを化合物１、化合物Ａ及び活性化対照ＬＰＳ及びＩＦＮ−γで２４時間処理した。初期活性化マーカーＣＤ６９の発現は、フローサイトメトリーでＣＤ４＋Ｔ細胞集団（左）及びＣＤ１９＋Ｂ細胞集団（右）において測定した。値は、３つ組の試料における、平均蛍光強度、ＭＦＩ及びエラーバー標準偏差を表す。
【図３】Ｔ細胞及びＢ細胞でのＨＬＡ−Ａ、Ｂ、Ｃ上方制御。ＰＢＭＣを化合物１又はＡ及び活性化対照ＬＰＳ及びＩＦＮ−γで２４時間処理した。ＨＬＡ−Ａ、Ｂ、Ｃの発現は、フローサイトメトリーでＣＤ４＋Ｔ細胞集団（左）及びＣＤ１９＋Ｂ細胞集団（右）において測定した。値は、３つ組の試料における、平均蛍光強度、ＭＦＩ及びエラーバー標準偏差を表す。
【図４】血液単球でのＣＤ８０及びＨＬＡ−ＤＲの上方制御。ＰＢＭＣを化合物１又はＡならびに活性化対照ＬＰＳ及びＩＦＮ−γで２４時間処理した。ＣＤ８０及びＨＬＡ−ＤＲの発現は、フローサイトメトリーで単球細胞集団において測定した。値は、３つ組の試料における、平均蛍光強度、ＭＦＩ及びエラーバー標準偏差を表す。
【図５】血液単球でのＣＤ８０上方制御。ＰＢＭＣを化合物１又はＡならびに活性化対照ＩＦＮ−γで２４時間処理した。ＣＤ８０の発現は、フローサイトメトリーで単球細胞集団において測定した。値は、３つ組の試料における、平均蛍光強度、ＭＦＩ及びエラーバー標準偏差を表す。
【図６】ＥＬＩＳＡで測定した、化合物１での４８時間又は１週間にわたる刺激後のＰＢＭＣからのＩＬ−１０の産生。
【図７】増殖色素（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｄｙｅ）Ｃｅｌｌｔｒａｃｅ  ｖｉｏｌｅｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）及びフローサイトメトリーで測定した、化合物１での６日間の刺激後のＣＤ４  Ｔ細胞増殖。未処理細胞（ＵＮＴ）又は化合物Ａを対照として使用した。
【図８】フローサイトメトリーで測定した、化合物１との温置後のＣＭＶ特異的ＣＤ８  Ｔ細胞上のＩＬ−７受容体α（ＣＤ１２７）の上方制御。
【図９】化合物１又はＡの存在下又は非存在下で５日間、ＣＭＶペプチドを用いて増殖させたＰＢＭＣ由来（ＣＭＶ＋ドナー由来）のインターフェロンγ分泌（サイトメトリービーズアッセイにより測定した場合）。
【図１０】指定された化合物で４８時間刺激したマクロファージからのインターフェロンγ分泌（サイトメトリービーズアッセイにより測定した場合）。
【図１１】指定された化合物で４８時間刺激したＰＢＭＣ又はマクロファージからのケモカインＲＡＮＴＥＳ分泌（サイトメトリービーズアッセイにより測定した場合）。
【図１２】指定された化合物で４８時間刺激したＰＢＭＣ又はマクロファージからのＩＬ１２ｐ７０分泌（サイトメトリービーズアッセイにより測定した場合）。
【図１３】指定された化合物で４８時間刺激したＰＢＭＣ、マクロファージ又はＣＤ４  Ｔ細胞からのＩＬ  １ｂ分泌（サイトメトリービーズアッセイにより測定した場合）。
【図１４】指定された用量の化合物１を２４時間前に注射したＣ５７ｂｌ／６マウスの血中の％ＣＤ２５ｈｉｇｈ細胞。ＣＤ２５発現は、フローサイトメトリーにより測定した。
【図１５】指定された化合物を２４時間前に注射した３匹の個別のＣ５７ｂｌ／６マウスの脾臓における％ＭＨＣクラスＩ高ＣＤ１１ｂ＋細胞。ＭＨＣクラスＩ及びＣＤ１１ｂの発現は、フローサイトメトリーにより測定した。
【００８６】
実験
材料
別段の指示がない限り、以下の例で使用する試薬は全て、市販品を入手する。アジスロマイシンＢの供給業者の例としては、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｔｅｘａｓ，ＵＳＡ）及びＴｏｒｏｎｔｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｔｏｒｏｎｔｏ，Ｃａｎａｄａ）が挙げられる。
【００８７】
抗体
抗ＣＤ８０  Ｖ４５０、抗ＣＤ６９  ＰＥ、抗ＨＬＡ−ＤＲ  ＡＰＣ−Ｒ７００、抗ＣＤ１２７−ＡＰＣ及び抗抗ＨＬＡ−Ａ、Ｂ、Ｃ  ＦＩＴＣはＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから購入した。Ｔ細胞増殖アッセイ用のＣｅｌｌｔｒａｃｅ  ｖｉｏｌｅｔは、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎから購入した。ＥＬＩＳＡ抗体はＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから購入した。
【００８８】
培地
２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、Ｌ−グルタミン、ピルビン酸ナトリウム、１０％ウシ胎児血清（Ｇｉｂｃｏ）、１００μｇ／ｍＬペニシリン及び１００μｇ／ｍＬストレプトマイシンを補給したＲＰＭＩ−１６４０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）。
【００８９】
一般的な生物学的方法
免疫刺激に対する本発明の化合物の効果は、以下に記載の方法の１つ以上を使用して試験し得る：
【００９０】
一般的な化合物の方法
化合物分析−溶液中の溶解度及び安定性
【００９１】
発酵ブロス及び化合物の分析
以下に記載のように得られた発酵ブロスのアリコートを、等体積の酢酸エチルとともに３０分間激しく振盪し、次いで遠心分離によって分離するか、又は既に単離された化合物をメタノール：水（９：１、０．１ｍｇ／ｍＬ）中で溶解させ、次に遠心分離によって分離した。上清をＬＣ−ＭＳ及びＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより分析し、４０℃で加熱したＬｕｎａ  ＨＰＬＣカラム（２５０ｘ４．６ｍｍ；Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（Ｍａｃｃｌｅｓｆｉｅｌｄ，ＵＫ））を使用して、塩基不活性化Ｌｕｎａ  Ｃ１８逆相シリカ（粒径５ミクロン）でクロマトグラフィーを行った。クォータナリポンプ、オートサンプラー、カラムオーブン及び、Ｂｒｕｋｅｒ  ＥｓｑｕｉｒｅイオントラップＭＳに接続されたダイオードアレイ検出器から構成されるＡｇｉｌｅｎｔ  １１００  ＨＰＬＣシステム。
【００９２】
移動相Ａ＝水中０．１％ギ酸
移動相Ｂ＝アセトニトリル中０．１％ギ酸
【００９３】
勾配：Ｔ＝０分、Ｂ＝５０％；Ｔ＝４．５分、Ｂ＝５０％；Ｔ＝７分、Ｂ＝１００％；Ｔ＝１０．５分、Ｂ＝１００％；Ｔ＝１０．７５分、Ｂ＝５０％；Ｔ＝１３分、Ｂ＝５０％。
【００９４】
化合物はＬＣ−ＭＳ及びＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより同定し、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより内部標準に対して定量した。
【００９５】
フローサイトメトリーによるマーカー発現の分析
ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ密度遠心分離で健常ドナーから精製した。３７℃、５％ＣＯ２で２４〜７２時間にわたり、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、Ｌ−グルタミン、ピルビン酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ）、１０％ウシ胎児血清、１００μｇ／ｍＬペニシリン及び１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン（Ｈｙｃｌｏｎｅ）を補給した完全ＲＰＭＩ−１６４０培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で細胞を培養し、漸増濃度の化合物１及び２で刺激した。次に、細胞をＰＢＳ中で洗浄し、細胞表面マーカーに特異的なモノクローナル抗体（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）で染色し、ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏ  ＩＩフローサイトメーターを使用してフローサイトムテトリー（ｆｌｏｗ  ｃｙｔｏｍｔｅｔｒｙ）で分析した。全試料を２つ組で試験した。
【００９６】
サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）培養
ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ密度遠心分離で健常ＣＭＶ陽性ドナーから精製した。ＰＢＭＣは、ＰＢＳ中の５μＭ  ｃｅｌｌｔｒａｃｅ  ｖｉｏｌｅｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で１５分間標識し、次に完全細胞培養培地で洗浄した。３７℃、５％ＣＯ２で６〜８日間、Ｌ−グルタミン、ピルビン酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ）、１０％ウシ胎児血清、１００μｇ／ｍＬペニシリン及び１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン（Ｈｙｃｌｏｎｅ）を補給したＡＩＭ−Ｖ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で、ＣＭＶ  ｐｐ６５タンパク質にまたがるペプチドライブラリ（１μｇペプチド／ｍＬ、ＪＰＴ）の存在下で標識ＰＢＭＣを培養した。ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏ  ＩＩフローサイトメーターを使用して、フローサイトメトリーで細胞増殖を評価した。
【００９７】
ＥＬＩＳＡ
完全ＲＰＭＩ培地中、３７℃、５％ＣＯ２で、２．５μＭの化合物１及び１００Ｕ／ｍＬのＩＬ−２（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）とともに４８時間及び７日間温置した後、上清ＩＬ−１０を標準的なサンドイッチＥＬＩＳＡ（抗体は全てＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓより）で測定した。
【００９８】
ＴＬＲ２アッセイ
試料及び対照は、標準的なアッセイ条件を使用したＩｎｖｉｖｏｇｅｎでの細胞レポーターアッセイを使用して、組み換えＨＥＫ−２９３−ＴＬＲ細胞株上で二つ組で試験した。これらの細胞株は、ヒトＴＬＲ２タンパク質ならびに分泌型アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）であるレポーター遺伝子を機能的に過剰発現する。このレポーター遺伝子の産生は、ＮＦκＢ誘導性プロモーターによって推進される。ＴＬＲレポーター細胞株の活性化の結果は、光学密度値（ＯＤ）として与える。
【００９９】
２０μＬの各試験品を使用して、２００μＬの最終反応体積でｈＴＬＲ２レポーター細胞株を刺激した。少なくとも２つの試験濃度−２０μＭ及び１０μＭで試料を２つ組で試験した。
【０１００】
細胞透過性の評価（双方向）
Ｃａｃｏ−２細胞単層の先端（Ａ）面に１０μＭの試験品を添加し（３７℃の、０．３％ＤＭＳＯ及び５μＭ  ＬＹ入りのＨＢＳＳ緩衝液中）、９０分間の温置後に側底（Ｂ）区画への化合物透過性を測定した。能動輸送を調べるために逆方向（側底から先端側）でもこれを行った。試験化合物及び標準対照化合物の両方のレベルを定量化するためにＬＣ−ＭＳ／ＭＳを使用する。流出比は、ＢからＡへの透過性をＡからＢへの透過性により除することによって計算した。
薬物透過性：Ｐａｐｐ＝（ＶＡ／（面積ｘ時間））×（［薬物］アクセプター／（（［薬物］初期、供与体）×希釈係数）
【０１０１】
代謝安定性の評価（ミクロソーム安定性アッセイ）
ミクロソームにおける代謝率は次のように試験した：
ヒト肝臓ミクロソームを緩衝液Ｃ（０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液、１．０ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４）で２．５ｍｇ／ｍＬの濃度に希釈した。ミクロソーム安定性試験は、３０μＬの１．５μＭ化合物添加溶液をウェルに（１．５μＬの５００μＭ添加溶液（１０μＬの１０ｍＭ  ＤＭＳＯ保存溶液を１９０μＬ  ＡＣＮに添加して最終的に１μＭの最終試験濃度にする。）及び１８．７５μＬの２０ｍｇ／ｍＬの肝臓ミクロソームを４７９．７５μＬの緩衝液Ｃに）添加することにより行った。全試料を３７℃でおよそ１５分間予備温置した。これに続いて、穏やかに混合しながら１５μＬのＮＡＤＰＨ溶液（６ｍＭ）を添加することにより反応を開始させた。アリコート（４０μＬ）を０、５、１５、３０及び４５分で取り出し、内部標準を含有するＡＣＮ（１３５μＬ）でクエンチした。タンパク質を遠心分離（４０００ｒｐｍ、１５分）により取り出し、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより化合物濃度について試料プレートを分析した。次に、標準的方法により半減期を計算し、分析物の濃度を元来存在する量と比較した。
【０１０２】
例
例１−化合物１の調製
【化１８】
2020510641.tif 000023
【０１０３】
アジスロマイシンアグリコン（Ａｚ−ＡＧ）（１ａ）の調製
アジスロマイシンアグリコン（１ａ）は、文献（Ｄｊｏｋｉｃら１９８８）に記載の方法を使用して作製した。簡潔に述べると、アジスロマイシンを３−Ｏ及び５−Ｏ糖の酸性除去によりアジスロマイシンアグリコンに変換する。５−Ｏアミノ糖を最初に酸化し、熱分解して開裂を促進する。
【０１０４】
エリスロマイシンアグリコン（エリスロノリド）をグリコシル化可能な生体内変換株の作製：
Ｓ．エリスレア（Ｓ．ｅｒｙｔｈｒａｅａ）１８Ａ１（ｐＡＥＳ５２）の作製
ａｎｇＡＩ、ａｎｇＡＩＩ、ａｎｇＣＶＩ、ａｎｇ−ｏｒｆ１４、ａｎｇＭＩＩＩ、ａｎｇＢ、ａｎｇＭＩ及びａｎｇＭＩＩをａｃｔＩＩ−ＯＲＦ４  ｐａｃｔＩ／ＩＩＩ発現系（Ｒｏｗｅら、１９９８）とともに含有する発現プラスミド、ｐＡＥＳ５２を以下のように作製した。
【０１０５】
アンゴラマイシン糖生合成遺伝子は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ，ＵＳＡ）から入手したＳ．ユーリセルムス（Ｓ．ｅｕｒｙｔｈｅｒｍｕｓ）ＡＴＣＣ２３９５６株のコスミドライブラリから増幅させた。生合成遺伝子クラスター配列は、ＥＵ０３８２７２、ＥＵ２２０２８８及びＥＵ２３２６９３として寄託された（Ｓｃｈｅｌｌら、２００８）。
【０１０６】
生合成遺伝子カセットを前述のようにベクターｐＳＧ１４４において構築し（Ｓｃｈｅｌｌら、２００８，ＥＳＩ）、糖生合成に必要な８個が得られるまで連続遺伝子を追加し、プラスミドｐＡＥＳ５２を作製した。
【０１０７】
ｐＡＥＳ５２を１８Ａ１株に形質転換した（国際公開第２００５０５４２６５号パンフレット）。
【０１０８】
Ｓ．エリスレア（Ｓ．ｅｒｙｔｈｒａｅａ）１８Ａ１へのｐＡＥＳ５２の形質変換
標準的方法を使用してＳ．エリスレア（Ｓ．ｅｒｙｔｈｒａｅａ）１８Ａ１に、プロトプラストにより、ｐＡＥＳ５２を形質転換した（Ｋｉｅｓｅｒら、２０００、Ｇａｉｓｓｅｒら、１９９７）。得られた株はＩＳＯＭ−４５２２と命名し、２０１７年１月２４日にＮＣＩＭＢで受入番号ＮＣＩＭＢ４２７１８で寄託された。
【０１０９】
Ｓ．エリスレア（Ｓ．ｅｒｙｔｈｒａｅａ）ＳＧＴ２の作製（ｐＡＥＳ５４）
ａｃｔＩＩ−ＯＲＦ４  ｐａｃｔＩ／ＩＩＩ発現系（Ｒｏｗｅら、１９９８）とともにａｎｇＡＩ、ａｎｇＡＩＩ、ａｎｇＣＶＩ、ａｎｇ−ｏｒｆ１４、ａｎｇＭＩＩＩ、ａｎｇＢ、ａｎｇＭＩ及びａｎｇＭＩＩを含有する発現プラスミド、ｐＡＥＳ５４を以下のように作製した。
【０１１０】
アンゴラマイシン糖生合成遺伝子は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ，ＵＳＡ）から入手したＳ．ユーリセルムス（Ｓ．ｅｕｒｙｔｈｅｒｍｕｓ）ＡＴＣＣ２３９５６株のコスミドライブラリから増幅させた。生合成遺伝子クラスター配列は、ＥＵ０３８２７２、ＥＵ２２０２８８及びＥＵ２３２６９３として寄託された（Ｓｃｈｅｌｌ，２００８）。
【０１１１】
生合成遺伝子カセットを前述のようにベクターｐＳＧ１４４において構築し（Ｓｃｈｅｌｌ，２００８，ＥＳＩ）、糖生合成に必要な８個が得られるまで連続遺伝子を追加し、プラスミドｐＡＥＳ５２を作製した。
【０１１２】
プラスミドｐＡＥＳ５４は、ａｃｔＩＩ−ＯＲＦ４  ｐａｃｔＩ／ＩＩＩプロモーター系を含有する１１，５４１ｂｐ  ＳｐｅＩ−ＮｈｅＩ断片を連結することによって作製され、ｐＧＰ９からの５，０８７ｂｐのＸｂａＩ−ＳｐｅＩ断片とともに、８個のａｎｇ遺伝子がｐＡＥＳ５２から切り出され、これは、アプラマイシン耐性遺伝子、ｏｒｉＣ、放線菌における移入のためのｏｒｉＴ及び統合型形質転換のためのａｔｔＰ部位を有するｐｈｉＢＴ１インテグラーゼを含有する。（適合性のＮｈｅＩ及びＸｂａＩ部位をライゲーション中に削除した。）
【０１１３】
次に、ｐＡＥＳ５４をＳ．エリスレア（Ｓ．ｅｒｙｔｈｒａｅａ）ＳＧＴ２に形質転換した（Ｇａｉｓｓｅｒら、２０００、国際公開第２００５０５４２６５号パンフレット）。
【０１１４】
Ｓ．エリスレア（Ｓ．ｅｒｙｔｈｒａｅａ）ＳＧＴ２へのｐＡＥＳ５４の形質転換
標準的方法を使用して接合によりＳ．エリスレア（Ｓ．ｅｒｙｔｈｒａｅａ）ＳＧＴ２にｐＡＥＳ５４を移入した。簡潔に述べると、標準的な手順を介してＥ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＥＴ１２５６７  ｐＵＺ８００２に対してｐＡＥＳ５４で形質転換を行い、アプラマイシン（５０μｇ／ｍＬ）、カナマイシン（５０μｇ／ｍＬ）及びクロラムフェニコール（３３μｇ／ｍＬ）選択で２ＴＹ上に広げた。このプレートを３７℃で一晩温置した。これ由来のコロニーを使用して、新鮮な液体２ＴＹ培養物を用意し、これを対数期後期に達するまで３７℃で温置した。細胞を回収し、洗浄し、Ｓ．エリスレア（Ｓ．ｅｒｙｔｈｒａｅａ）ＳＧＴ２の胞子と混合し、Ｒ６のプレート上に広げ、２８℃で温置した。２４時間後、これらのプレートに３ｍｇアプラマイシン及び２．５ｍｇナリジクス酸を含有する１ｍＬの滅菌水を重ね、２８℃でさらに５〜７日間温置した。このプレート上の接合完了体を、アプラマイシン（１００μｇ／ｍＬ）を含有するＲ６の新鮮なプレートに移した。
【０１１５】
代替的な生体内変換株
あるいは、ＢＩＯＴ−２９４５（Ｓｃｈｅｌｌら、２００８）を生体内変換株として使用し得るが、それは、これによってもまたアンゴロサミンがエリスロノリドに付加されるからである。
【０１１６】
アジスロマイシンアグリコンの生体内変換
ＳＶ２培地（４０ｍＬ）及び８μＬチオストレプトン（２５ｍｇ／ｍＬ）を含有するエーレンマイヤーフラスコ（２５０ｍＬ）に、ＩＳＯＭ−４５２２株の胞子ストック０．２ｍＬを接種し、３０℃で温置し、２．５ｃｍスロー（ｔｈｒｏｗ）を用いて３００ｒｐｍで４８時間振盪した。
【０１１７】
【表１】
2020510641.tif 000024
【０１１８】
ＥｒｙＰＰ培地（７ｍＬ）を含有する無菌のバンジされた（ｂｕｎｇｅｄ）ファルコンチューブ（５０ｍＬ）を準備し、抗生物質不含の種フラスコからの培養物（ファルコンチューブあたり０．５ｍＬ）を接種した。ファルコンチューブを３０℃で温置し、２４時間２．５ｃｍスロー（ｔｈｒｏｗ）を用いて３００ｒｐｍで振盪した。
【０１１９】
【表２】
2020510641.tif 000025
【０１２０】
２４時間後、アジスロマイシンアグリコン（ＤＭＳＯ中０．５ｍＭ、５０μＬ）を各ファルコンチューブに添加し、さらに６日間、２．５ｃｍスロー（ｔｈｒｏｗ）を用いて３００ｒｐｍで温置を続けた。
【０１２１】
化合物１の単離
全ブロスをｐＨ９．５に調整し、１体積の酢酸エチルで２回抽出した。遠心分離（３，５００ｒｐｍ、２５分）後、吸引により有機層を回収した。有機層を合わせ、真空下で減量したところ、化合物１を含有した茶色のゴム状物質が出現した。この抽出物を酢酸エチル（２００ｍＬ）と塩化アンモニウム水溶液（２０ｍＬの５０％濃縮溶液）との間で分配した。分離後、有機層をさらなる体積（２００ｍＬ）の塩化アンモニウム水溶液で抽出した。次に、合わせた水層を水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ９．０に調整し、次いで１体積当量の酢酸エチルで２回抽出した。有機層を合わせ、真空下で減量して茶色の固形物を得た。次に、この抽出物をシリカカラムに適用し、次のもので段階的に（５００ｍＬロットで）溶出した。
【表３】
2020510641.tif 000026
【０１２２】
化合物１は主にＦ及びＧにあった。これらの溶媒を合わせ、真空下で減量し、化合物１を含有する茶色の固形物を得た。次に、この物質を分取ＨＰＬＣ（Ｃ１８  Ｇｅｍｉｎｉ  ＮＸカラム、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、溶媒として２０ｍＭ酢酸アンモニウム及びアセトニトリル使用）により精製した。標的化合物を含有する分画をプールし、乾固させ、その後Ｃ１８  ＳＰＥカートリッジ上で脱塩した。
【０１２３】
例２
化合物３の調製（既知の化合物−Ｓｃｈｅｌｌら、２００８の化合物１７に対応）
【化１９】
2020510641.tif 000027
エリスロノリドＢ（３ａ）は、例えば米国特許第３，１２７，３１５号明細書（例えばＮＲＲＬ２３６１、２３６０、２３５９及び２３３８）、Ｇａｉｓｓｅｒら２０００（例えばＳ．エリスレア（Ｓ．ｅｒｙｔｈｒａｅａ）ＤＭ  ΔＢＶ  ΔＣＩＩＩに記載の株及び工程など、グリコシル化において遮断されたＳ．エリスレア（Ｓ．ｅｒｙｔｈｒａｅａ）の株の発酵によって産生され得る。
【０１２４】
アンゴロサミンを３−ヒドロキシル（ＮＣＩＭＢ  ４２７１８など）に付加可能な生体内変換株にエリスロノリドＢ（３ａ）を供給し、標準的方法により発酵ブロスから化合物３を分離した。
【０１２５】
例３
化合物４の調製
【化２０】
2020510641.tif 000028
アジスロマイシンＢアグリコン（４ａ）は、アジスロマイシンＡに対するものと同じように、アジスロマイシンＢからの糖の加水分解によって生成させた。
【０１２６】
次に、３−ヒドロキシルにアンゴロサミンを付加可能な生体内変換株（ＮＣＩＭＢ  ４２７１８など）にアジスロマイシンＢアグリコン（４ａ）を供給し、標準的方法を使用して発酵ブロスから単離した。
【０１２７】
例４
化合物５の調製
【化２１】
2020510641.tif 000029
シクロブチルエリスロノリドＢ（５ａ）は、国際公開第９８／０１５７１号パンフレットに記載の方法を使用して生成させた。簡潔に述べると、Ｓ．エリスレア（Ｓ．ｅｒｙｔｈｒａｅａ）ＤＭΔＢＶΔＣＩＩＩ（Ｇａｉｓｓｅｒら、２０００）に対してｐＩＧ１で形質転換を行った（Ｌｏｎｇら、２００２、国際公開第９８／０１５７１号パンフレット）。シクロブテンカルボン酸を添加して、得られた株を発酵させると、シクロブチルエリスロノリドＢが生成した（５ａ）。標準的方法を使用して発酵ブロスからこれを単離した。
【０１２８】
次に、アンゴロサミンを３−ヒドロキシル（ＮＣＩＭＢ  ４２７１８など）に付加可能な生体内変換株にシクロブチルエリスロノリドＢ（５ａ）を供給し、標準的方法を使用して発酵ブロスから化合物５を単離した。
【０１２９】
例５
化合物６の調製
【化２２】
2020510641.tif 000030
化合物３をＡＴＣＣ  ３１７７１の発酵に添加し、標準的方法を使用して発酵ブロスから化合物６を単離することによって、化合物３のアミノ糖からメチル基を除去した（例２を参照）。
【０１３０】
例６
化合物７の調製
【化２３】
2020510641.tif 000031
化合物３を溶媒中で水素化ホウ素ナトリウムにより処理した。標準的な反応の仕上げ処理後、化合物７を標準的方法によって精製した。
【０１３１】
例７
化合物８の調製
【化２４】
2020510641.tif 000032
１４−デスメチルエリスロノリドＢ（８ａ）は、国際公開第２０００／００６１８号パンフレットに記載の方法を使用して生成させた。簡潔に述べると、Ｓ．エリスレア（Ｓ．ｅｒｙｔｈｒａｅａ）ＤＭΔＢＶΔＣＩＩＩ（Ｇａｉｓｓｅｒら、２０００）に対してｐＰＦＬ４３で形質転換を行った。典型的な方法を使用して、得られた株を発酵させ、クロマトグラフィーを使用して化合物８ａを単離した。
【０１３２】
次に、３−ヒドロキシル（ＮＣＩＭＢ  ４２７１８など）にアンゴロサミンを付加可能な生体内変換株に１４−デスメチルエリスロノリドＢ（８ａ）を供給し、標準的方法を使用して発酵ブロスから分離した。
【０１３３】
例８
化合物９の調製
【化２５】
2020510641.tif 000033
化合物３（例２を参照）をＳ．ロチェイ（Ｓ．ｒｏｃｈｅｉ）ＡＴＣＣ２１２５０の発酵に供給することによって１４−ヒドロキシアンゴロサミンエリスロノリドＢ（９）を生成させ、これによりヒドロキシル基が付加される。次に、標準的方法を使用して、発酵ブロスから化合物９を単離した。
【０１３４】
例９
化合物１０の調製
【化２６】
2020510641.tif 000034
化合物６（６．０ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１ｍＬ）中で溶解させ、アセトアルデヒド（１．０μＬ、０．０２ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で撹拌し、ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（２．１ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を３０分間撹拌し、次いで、濃炭酸水素ナトリウム水溶液（２５ｍＬ）の添加によりクエンチした。水性抽出物を酢酸エチル（３ｘ２５ｍＬ）で抽出した。有機抽出物を合わせ、濃縮ブライン溶液で洗浄し、溶媒を真空下で除去した。次いで、標的化合物１０を分取ＨＰＬＣにより精製した。
【０１３５】
例１０
化合物１２の調製
【化２７】
2020510641.tif 000035
化合物３（例２を参照）を生体内変換し、ＡＴＣＣ  ３１７７１の発酵に添加することによってアミノ糖から両方のメチル基を除去し、標準的方法を使用して化合物１１を発酵ブロスから単離した。
【０１３６】
化合物１１をＴＨＦ中で溶解させ、アセトアルデヒドを添加する。反応物を室温で撹拌し、シアノ水素化ホウ素ナトリウムを添加する。反応物をさらに撹拌し、炭酸水素ナトリウム水溶液を添加することにより反応をクエンチする。水性抽出物をＥｔＯＡｃ（３  ｘ  ｖｏｌ当量）で抽出する。有機抽出物を合わせ、ブラインで洗浄し、溶媒を真空下で除去する。次いで、標準的方法を使用して標的化合物１２を精製する。
【０１３７】
例１１
化合物１４の調製
【化２８】
2020510641.tif 000036
ＡＴＣＣ  ３１７７１の発酵に化合物１（例１を参照）を添加することによってアミノ糖からメチル基を除去するために化合物１（例１を参照）を生体内変換し、標準的方法を使用して化合物１３を発酵ブロスから単離する。
【０１３８】
化合物１３をＴＨＦ中で溶解させ、アセトアルデヒドを添加する。反応物を室温で撹拌し、シアノ水素化ホウ素ナトリウムを添加する。反応物をさらに撹拌し、炭酸水素ナトリウム水溶液を添加することにより反応をクエンチする。水性抽出物をＥｔＯＡｃ（３  ｘ  ｖｏｌ当量）で抽出する。有機抽出物を合わせ、ブラインで洗浄し、溶媒を真空下で除去する。次いで、標準的方法を使用して標的化合物１４を精製する。
【０１３９】
例１２
化合物１６の調製
【化２９】
2020510641.tif 000037
化合物１（例１を参照）をＡＴＣＣ  ３１７７１の発酵に添加することによってアミノ糖から両方のメチル基を除去するために化合物１（例１を参照）を生体内変換し、標準的方法を使用して化合物１５を発酵ブロスから単離する。
【０１４０】
化合物１５をＴＨＦ中で溶解させ、アセトアルデヒドを添加する。反応物を室温で撹拌し、シアノ水素化ホウ素ナトリウムを添加する。反応物をさらに撹拌し、炭酸水素ナトリウム水溶液を添加することにより反応をクエンチする。水性抽出物をＥｔＯＡｃ（３  ｘ  ｖｏｌ当量）で抽出する。有機抽出物を合わせ、ブラインで洗浄し、溶媒を真空下で除去する。次いで、標準的方法を使用して標的化合物１６を精製する。
【０１４１】
例１３
直接的な抗菌活性の評価
最小阻害濃度（ＭＩＣ）アッセイを使用して、一般的な腸内細菌（エシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、ストレプトコッカス・サリバリウス亜種サリバリウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  ｓｕｂｓｐ．  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）、ラクトバチルス・カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃａｓｅｉ）及びビフィドバクテリウム・ロングム亜種インファンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｏｎｇｕｍ  ｓｕｂｓｐ．ｉｎｆａｎｔｉｓ）及び一般的な哺乳類の皮膚分離株ミクロコッカス・ルテウス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｌｕｔｅｕｓ）の４種類の菌株に対するマクロライド化合物の生物学的活性を評価した。ＮＣＩＭＢから入手したＭ．ルテウス（Ｍ．ｌｕｔｅｕｓ）を除き、ＤＳＭＺ（Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ，Ｇｅｒｍａｎｙ）から細菌株を購入し、−８０℃にて２０％グリセロール中で保存した。
【０１４２】
陽性対照（アジスロマイシン及びエリスロマイシン）及び試験化合物１及び２の保存溶液（１００％ＤＭＳＯ）をブロス中で希釈して、２５６μｇ／ｍＬの作業用ストック濃度にした（最終アッセイ試験濃度は１２８μｇ／ｍＬ〜０．００３９１μｇ／ｍＬの範囲）。全ての他の化合物の保存溶液をブロス中で希釈して、１２８μｇ／ｍＬの作業用ストック濃度にした（最終アッセイ試験濃度は６４μｇ／ｍＬ〜０．００１９５μｇ／ｍＬの範囲）。
【０１４３】
３７℃にて好気的に温置したＭ．ルテウス（Ｍ．ｌｕｔｅｕｓ）を除き、細菌株を３７℃にて嫌気性チャンバーにおいて適切なブロス中で培養した。１８時間培養物をブロス中でＯＤ５９５が０．１になるように希釈し、次いでさらに１：１０希釈した。９６ウェルプレートにおいて、二つ組で、試験化合物の２００μＬの作業用ストックをウェル１に移し、ブロス中で連続希釈（１：２）した。１００μＬの細菌懸濁液を各ウェルに分注し、完全に混合した。適切な無菌対照を含め、プレートを嫌気性チャンバー中で、又は好気的に（Ｍ．ルテウス（Ｍ．ｌｕｔｅｕｓ））３７℃で１８時間温置した。ＭＩＣは、目に見える増殖がない最初のウェル中の試験化合物の濃度であるものとした。
【表４】
2020510641.tif 000038
【０１４４】
表１で示されるデータから見られ得るように、化合物１、３、４、５、６、７、８及び９は、試験した菌株の何れに対しても抗菌活性を示さないが、一方でエリスロマイシン及びアジスロマイシンは、多くの株に対して強力な活性を示す。
【０１４５】
例１４
免疫刺激活性の評価
ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ密度遠心分離で健常ドナーから精製した。２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、Ｌ−グルタミン、ピルビン酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ）、１０％ウシ胎児血清、１００μｇ／ｍＬペニシリン及び１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン（Ｈｙｃｌｏｎｅ）を補給した完全ＲＰＭＩ−１６４０培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で細胞を培養した。組織培養プレート中の化合物１及び２の濃度を上昇させ、３７℃、５％ＣＯ２で２４時間（試験１〜４）又は４８時間〜１週間（試験５）、細胞を刺激した。細胞をプレートから取り出し、ＰＢＳで洗浄し、ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎからのモノクローナル抗体及びＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏ  ＩＩフローサイトメーターを使用したフローサイトメトリーで、細胞特異的表面マーカー及びＭＨＣクラスＩの発現について分析した。
【０１４６】
完全ＲＰＭＩ培地中、３７℃、５％ＣＯ２で、２．５μＭの化合物１及び１００Ｕ／ｍＬのＩＬ−２（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）とともに４８時間及び７日間温置した後、上清ＩＬ−１０を標準的なサンドイッチＥＬＩＳＡ（抗体は全てＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓより）で測定した。
【０１４７】
試験１：１μＭ化合物１による末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の２４時間のインビトロ刺激後（図８）、ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＢ細胞において活性化マーカーＣＤ６９が上方制御された（図１）。
【０１４８】
試験２：発明者らは、Ｔ細胞及びＢ細胞における分子ＭＨＣクラスＩ（ＨＬＡ−ＡＢＣ）の上方制御も観察し（図２）、このことから、ウイルス抗原の抗原提示における影響が示された。
【０１４９】
試験３：化合物１によるＰＢＭＣの刺激は、単球における、共刺激分子ＣＤ８０ならびに抗原提示分子ＭＨＣクラスＩＩ（ＨＬＡ−ＤＲ）の上方制御につながった（図３）。
【０１５０】
試験４：マクロファージに分化した単球は、化合物１による刺激に応答してＣＤ８０も上方制御した（図４）。
【０１５１】
試験５：４８時間及び７日間、化合物１で刺激したＰＢＭＣは、サンドイッチＥＬＩＳＡで測定して、免疫抑制性サイトカインＩＬ−１０の産生増加を伴うサイトカインプロファイル変化を発現した。これは、ある一定の条件下での免疫抑制効果を示す（図５）。
【０１５２】
試験６：ＰＢＭＣを化合物１で刺激し、ＩＬ−２（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）及びＣｅｌｌ  Ｔｒａｃｅ  Ｖｉｏｌｅｔ  Ｄｙｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の存在下にてＲＰＭＩ培地中で６日間培養した。フローサイトメトリーにより増殖を測定した。化合物１の免疫学的効果を分析したところ、Ｔ細胞のサイトカイン推進性の増殖プロファイルの変化が明らかになった（図６）。
【０１５３】
試験７：ＣＭＶウイルス特異的Ｔ細胞増殖も化合物１により影響を受けた。サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）抗原及び化合物１の存在下で６日間にわたり培養したＣＭＶ感染ドナー由来のＰＢＭＣは、フローサイトメトリーで測定して、ＩＬ−７受容体α（ＣＤ１２７）の発現増加とともに、活性化ＣＭＶ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の表現型の変化を示した（図７）。ＣＤ１２７はＴ細胞のホメオスタシス、分化及び機能に非常に重要であり、発現の低下はＨＩＶ及び他の慢性ウイルス性疾患の疾患重症度と相関する（Ｃｒａｗｌｅｙら、２０１２）。
【０１５４】
見られ得るように、化合物１は、抗原提示、共刺激及びＴ細胞活性化及び増殖に影響を与えることにより、免疫応答を特異的に活性化及び修飾するという驚くべき能力を有する。これらの研究の多くにおいて、化合物２、（化合物２０として）以前にＳｃｈｅｌｌら２００８で発表された、グリコシル化が変化した別の関連マクロライドエリスロマイシン類似体が含まれ、本アッセイでは活性を殆ど又は全く示さなかった。
【０１５５】
試験８：未処理であるか又は化合物１もしくは化合物２に３日間曝露したかのいずれかでの、ＣＭＶ抗原の存在下で培養したＣＭＶ感染ドナーからのＰＢＭＣ。化合物１への曝露は、高レベルのＩＦＮ−γの分泌を誘導したが、一方で抗原培養単独又は化合物２と合わせられた抗原は、ＩＦＮ−γ分泌を誘導しなかった（図９）。
【０１５６】
試験９：化合物１又は２に４８時間曝露した、健常ドナーからのマクロファージ。化合物１に曝露されたマクロファージのみがＩＦＮ−γを分泌し、一方で未処理マクロファージ及び化合物Ａに曝露したマクロファージはＩＦＮ−γを分泌しなかった（図１０）。したがって、化合物１は、健常ドナーからのマクロファージにおいＩＦＮ−γ分泌を誘導可能である。
【０１５７】
試験１０：化合物１又は２に２日間にわたり曝露したＰＢＭＣ及びマクロファージ（図１１）。ＰＢＭＣでのＲＡＮＴＥＳの基底発現は、化合物２による影響を受けなかったが、一方で化合物１は発現の２倍の上方制御を誘導した。ＲＡＮＴＥＳの発現はマクロファージではごく僅かであり、化合物１は高発現を誘導した。
【０１５８】
試験１１：化合物１及び２に２日間にわたり曝露したＰＢＭＣ及びマクロファージ。ＰＢＭＣ及びマクロファージは化合物１に応答してＩＬ−１２ｐ７０を分泌したが、一方で化合物２は未処理細胞を超える分泌を誘導できなかった（図１２）。
【０１５９】
試験１２：化合物１及び２に２日間にわたり曝露したＰＢＭＣ、マクロファージ及びＣＤ４＋Ｔ細胞。ＩＬ−１β分泌は、化合物１により、マクロファージでは増加し、ＰＢＭＣでは僅かに増加し、一方でＣＤ４＋Ｔ細胞ではＩＬ−１βは誘導されなかった（図１３）。
【０１６０】
試験１３：０．１６５ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇで化合物１をＣ５７ｂｌ／６マウスにｉ．ｖ．投与した。同じ群中の体重と同様に（示さない。）、５ｍｇ／ｋｇの最大用量を投与した動物ではＣＤ２５＋細胞の量が増加した（図１４）。
【０１６１】
試験１４：化合物１又はＡをＣ５７ｂｌ／６マウスにｉ．ｖ．投与した。２４時間後、脾臓を摘出し、ＣＤ１１ｂ＋脾臓細胞でのＭＨＣクラスＩ発現を評価したところ、化合物１は、高いＭＨＣ  Ｉ発現を伴う脾臓細胞の増加を誘導したが、一方で化合物Ａを注射したマウスからの脾臓細胞では効果は観察されなかった。
【０１６２】
例１５
代謝安定性の評価
本発明の化合物の代謝安定性は、標準的なヒトミクロソーム安定性アッセイにおいて評価した（一般的な方法を参照）。半減期が長い化合物ほど、投与後の半減期が長くなることが予想され、これは投与頻度を減少させるのに有用であり得る。半減期が短い化合物ほど、活性物質が患者の系に入ると急速に分解する「ソフトドラッグ」としての使用に有用であり得る。評価した化合物の半減期は、以下の表２で示す：
【表５】
2020510641.tif 000039
【０１６３】
見られ得るように、本発明の化合物の多くは、アジスロマイシン、エリスロマイシン及びＥＭ７０３と比較して、代謝安定性が上昇又は低下している（例えば欧州特許第１３５０５１０号明細書を参照）。
【０１６４】
例１６
ｃａｃｏ−２透過性の評価
標準的なｃａｃｏ−２両方向透過性アッセイにおいて、本発明の化合物の透過性を評価した（一般的な方法を参照）。透過性が上昇した化合物は、細胞透過性がより良好であり、効果の可能性があると予想され、透過性が改善され、及び／又は流出が減少した化合物は、経口バイオアベイラビリティが上昇すると予想される。化合物の透過性及び流出を以下の表３で示す：
【表６】
2020510641.tif 000040
【０１６５】
見られ得るように、本発明の化合物の多くは、アジスロマイシン及びＥＭ７０３と比較して、細胞透過性が上昇し、及び／又は流出が低下している（例えば欧州特許第１３５０５１０号明細書を参照）。
【０１６６】
例１７
ＴＬＲ２刺激の評価
ＴＬＲ２受容体の刺激について測定したＴＬＲ２レポーターアッセイ（一般的な方法を参照）を使用して、化合物を試験した。刺激効果は、分泌型アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）の放出による光学密度（ＯＤ）の上昇として測定し、表４で示す：
【表７】
2020510641.tif 000041
【０１６７】
見られ得るように、化合物１は５μＭまで下げた濃度でＴＬＲ２を刺激し、化合物１７は１０μＭまで下げた濃度でＴＬＲ２を刺激し、一方、エリスロマイシンＡ、アジスロマイシン及び化合物２及び３、（化合物１７及び２０として）Ｓｃｈｅｌｌら、２００８で以前発表されたグリコシル化が変化した関連マクロライドエリスロマイシン類似体は、２０μＭまでの濃度で刺激を殆ど又は全く示さなかった。
【０１６８】
例１８
化合物１７の調製
【化３０】
2020510641.tif 000042
９−デオクソ−８ａ−アザ−８ａ−メチル−８ａ−ホモエリスロマイシン（Ｗｉｌｋｅｎｉｎｇ  １９９３）からアグリコン１７ａを生成させ、続いて糖の加水分解を行った。次に、アンゴロサミンを３−ヒドロキシル（ＮＣＩＭＢ  ４２７１８など）に付加可能な生体内変換株に１７ａを供給し、標準的方法を使用して発酵ブロスから化合物１７を単離した。
【０１６９】
例１９
化合物１８の調製
【化３１】
2020510641.tif 000043
３−ヒドロキシルにアンゴロサミンを付加可能な生体内変換株（ＮＣＩＭＢ  ４２７１８など）に６−デオキシエリスロノリドＢ（６−ＤＥＢ、１８ａ）を供給し、標準的方法を使用して発酵ブロスから単離した。
【０１７０】
参考文献
2020510641.tif 000044
2020510641.tif 000045
【０１７１】
特許及び特許出願を含む本出願において言及される全ての参考文献は、可能な限り最大限に参照により本明細書に組み込まれる。
【０１７２】
本発明の特定の実施形態を以下の項目リストに記載する。
【０１７３】
第１項
式Ｉの化合物
【化３２】
2020510641.tif 000046
（式中、ＸはＣ＝Ｏ、−ＮＲ３ＣＨ２−、−ＣＨ２ＮＲ３−、−ＮＲ３（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ３−、Ｃ＝ＮＯＨ及び−ＣＨ（ＯＨ）−から選択され、Ｒ２は式（ＩＩ）又は式（ＩＩＩ）の糖：
【化３３】
2020510641.tif 000047
であり、
Ｒ１は、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、アリール及びヘテロアリール部分から選択され、
ここでヘテロ原子は、Ｏ、Ｎ、Ｐ及びＳから選択され、
ここでアルキル部分は、場合により分枝しているＣ１−Ｃ６アルキル基から選択され、
ここでヘテロアルキル部分は、場合により分枝しているか又は置換され、場合により１つ以上のヘテロ原子を含むＣ１−Ｃ６アルキル基から選択され、
シクロアルキル部分は、場合により置換され、場合により１つ以上のヘテロ原子を含むＣ１−Ｃ６環状アルキル基から選択され、
アリール部分は、場合により置換されるＣ６芳香環から選択され、
ヘテロアリール部分は、１つ以上のヘテロ原子を含む場合により置換されるＣ１−Ｃ５芳香環から選択され、
ここで置換基は、独立して、アルキル、ＯＨ、Ｆ、Ｃｌ、ＮＨ２、ＮＨ−アルキル、ＮＨ−アシル、Ｓ−アルキル、Ｓ−アシル、Ｏ−アルキル及びＯ−アシルから選択され、
アシルは、Ｃ１−Ｃ４の場合によっては分枝したアシル基から選択され、
Ｒ３はＨ及びＭｅから選択され、
Ｒ４はＨ及びＭｅから選択され、
ＲａはＨ及びＣＲ２１Ｒ２２Ｒ２３から選択され、
Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３及びＲ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０は、独立して、Ｈ、Ｍｅ、ＮＲ１１Ｒ１２、ＮＯ２及びＯＲ１１から選択され、
ここで式（ＩＩ）のＲ４と合わせられたＲ２３、式（ＩＩ）のＲ５と合わせられたＲ４、式（ＩＩ）のＲ７と合わせられたＲ５及び式（ＩＩ）のＲ９と合わせられたＲ７は、独立して、各基が接続される炭素原子間に二重結合を残すための結合を表すために連結され得、
Ｒ２２と合わせられたＲ２１、Ｒ６と合わせられたＲ５、Ｒ８と合わせられたＲ７又はＲ１０と合わせられたＲ９は、カルボニルで置換され得、
Ｒ１１及びＲ１２は、独立して、Ｈ及びアルキルから選択され、
Ｒ１３は、Ｈ、ＯＨ及びＯＣＨ３から選択され、
Ｒ１４は、Ｈ及びＯＨから選択され、
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９又はＲ１０のうち１つが、ＮＲ１１Ｒ１２及びＮＯ２から選択され、
ただし、Ｒ１がＥｔであり、Ｒ２が式（ＩＩ）の糖であり、Ｒ１３がＯＨであり、Ｒ１４がＨであり、ＲａがＨであり、Ｒ４がＭｅであり、Ｒ５がＨであり、Ｒ６がＯＨであり、Ｒ７がＨであり、Ｒ８がＮＲ１１Ｒ１２であり、Ｒ９がＨであり、Ｒ１０がＨである場合、ＸはＣ＝Ｏでなくてもよい。）。
【０１７４】
第２項
第１項の化合物であって、
ただし、Ｒ１がＥｔであり、Ｒ２が式（ＩＩ）の糖であり、Ｒ１３がＨ又はＯＨであり、Ｒ１４がＨ又はＯＨであり、ＲａがＨであり、Ｒ４がＭｅであり、Ｒ５がＨであり、Ｒ６がＯＨであり、Ｒ７がＨであり、Ｒ８がＮＲ１１Ｒ１２であり、Ｒ９がＨであり、Ｒ１０がＨである場合、ＸはＣ＝Ｏでなくてもよく、
ただし、Ｒ１がＥｔであり、Ｒ２が式（ＩＩ）の糖であり、Ｒ１３がＨ又はＯＨであり、Ｒ１４がＨ又はＯＨであり、ＲａがＨであり、Ｒ４がＭｅであり、Ｒ５がＯＨであり、Ｒ６がＨであり、Ｒ７がＯＨであり、Ｒ８がＭｅであり、Ｒ９がＨであり、Ｒ１０がＨである場合、ＸはＣ＝Ｏでなくてもよく、
ただし、Ｒ１がＥｔであり、Ｒ２が式（ＩＩ）の糖であり、Ｒ１３がＨ又はＯＨであり、Ｒ１４がＨ又はＯＨであり、ＲａがＨであり、Ｒ４がＭｅであり、Ｒ５がＯＨであり、Ｒ６がＨであり、Ｒ７がＨであり、Ｒ８がＮＲ１１Ｒ１２であり、Ｒ９がＨであり、Ｒ１０がＯＨである場合、ＸはＣ＝Ｏでなくてもよい、化合物。
【０１７５】
第３項
第１又は２項による化合物（式中、式（ＩＩ）のＲ４と合わせられたＲ２３、式（ＩＩ）のＲ５と合わせられたＲ４、式（ＩＩ）のＲ７と合わせられたＲ５及び式（ＩＩ）のＲ９と合わせられたＲ７は、独立して、各基が接続される炭素原子間に二重結合を残すための結合を表すために連結され得、
Ｒ２３及びＲ４が連結して二重結合を形成する場合、式（ＩＩ）は
【化３４】
2020510641.tif 000048
により表され得、
Ｒ４及びＲ５が連結して二重結合を形成する場合、式（ＩＩ）は
【化３５】
2020510641.tif 000049
により表され得、
Ｒ５及びＲ７が連結して二重結合を形成する場合、式（ＩＩ）は
【化３６】
2020510641.tif 000050
により表され得、
Ｒ７及びＲ９が連結して二重結合を形成する場合、式（ＩＩ）は
【化３７】
2020510641.tif 000051
により表され得、
式（ＩＩＩ）のＲ５と合わせられたＲ４、式（ＩＩＩ）のＲ７と合わせられたＲ４及び式（ＩＩＩ）のＲ９と合わせられたＲ７は、独立して、各基が接続される炭素原子間の二重結合を残すための結合を表すために連結され得、
Ｒ４及びＲ５が連結して二重結合を形成する場合、式（ＩＩＩ）は、
【化３８】
2020510641.tif 000052
により表され得、
Ｒ４及びＲ７が連結して二重結合を形成する場合、式（ＩＩＩ）は、
【化３９】
2020510641.tif 000053
により表され得、
Ｒ７及びＲ９が連結して二重結合を形成する場合、式（ＩＩＩ）は、
【化４０】
2020510641.tif 000054
により表され得る。）。
【０１７６】
第４項
式Ｉによる化合物
【化４１】
2020510641.tif 000055
（式中、Ｘは、Ｃ＝Ｏ、−ＮＲ３ＣＨ２−及び−ＣＨ（ＯＨ）−から選択され、Ｒ２は式（ＩＩ）の糖：
【化４２】
2020510641.tif 000056
であり、
Ｒ１は、アルキル又はシクロアルキル部分から選択され、
ここでアルキル部分は、場合によっては分枝状であるＣ１−Ｃ６アルキル基から選択され、独立して、場合によってはヒドロキシル化され、
ここでシクロアルキル部分は、Ｃ１−Ｃ６の場合によっては置換される環状アルキル基から選択され、
置換基は、アルキル及びＯＨから選択され、
Ｒ３はＨ及びＭｅから選択され、
Ｒ４はＨ及びＭｅから選択され、
ＲａはＨ及びＣＲ２１Ｒ２２Ｒ２３から選択され、
Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３及びＲ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０は、独立して、Ｈ、Ｍｅ、ＮＲ１１Ｒ１２、ＮＯ２及びＯＲ１１から選択され、
ここで式（ＩＩ）のＲ４と合わせられたＲ２３、式（ＩＩ）のＲ５と合わせられたＲ４、式（ＩＩ）のＲ７と合わせられたＲ５及び式（ＩＩ）のＲ９と合わせられたＲ７は、独立して、各基が接続される炭素原子間に二重結合を残すための結合を表すために連結され得、
Ｒ２３及びＲ４が連結して二重結合を形成する場合、式（ＩＩ）は、
【化４３】
2020510641.tif 000057
により表され得、
Ｒ４及びＲ５が連結して二重結合を形成する場合、式（ＩＩ）は、
【化４４】
2020510641.tif 000058
により表され得、
Ｒ５及びＲ７が連結して二重結合を形成する場合、式（ＩＩ）は
【化４５】
2020510641.tif 000059
により表され得、
Ｒ７及びＲ９が連結して二重結合を形成する場合、式（ＩＩ）は
【化４６】
2020510641.tif 000060
により表され得、
Ｒ２２と合わせられたＲ２１、Ｒ６と合わせられたＲ５、Ｒ８と合わせられたＲ７又はＲ１０と合わせられたＲ９はカルボニルで置換され得、
Ｒ１１及びＲ１２は、独立して、Ｈ及びアルキルから選択され、
Ｒ１３は、Ｈ、ＯＨ及びＯＣＨ３から選択され、
Ｒ１４は、Ｈ及びＯＨから選択され、
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９又はＲ１０のうち１つはＮＲ１１Ｒ１２及びＮＯ２から選択され、
ただし、Ｒ１がＥｔであり、Ｒ２が式（ＩＩ）の糖であり、Ｒ１３がＯＨであり、Ｒ１４がＨであり、ＲａがＨであり、Ｒ４がＭｅであり、Ｒ５がＨであり、Ｒ６がＯＨであり、Ｒ７がＨであり、Ｒ８がＮＲ１１Ｒ１２であり、Ｒ９がＨであり、Ｒ１０がＨである場合、ＸはＣ＝Ｏでなくてもよい。）。
【０１７７】
第５項
Ｒ２がＬ−ダウノサミン、Ｌ−アコサミン、Ｌ−リストサミン、Ｄ−リストサミン、４−オキソ−Ｌ−バンコサミン、Ｌ−バンコサミン、Ｄ−フォロサミン、Ｌ−アクチノサミン、３−エピ−Ｌ−バンコサミン、Ｌ−ビセニサミン、Ｌ−マイコサミン、Ｄ−マイコサミン、Ｄ−３−Ｎ−メチル−４−Ｏ−メチル−Ｌ−リストサミン、Ｄ−デソサミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−ピロロサミン、Ｌ−メゴサミン、Ｌ−ノガラミン、Ｌ−ロドサミン、Ｄ−アンゴロサミン、Ｌ−ケダロサミン、２’−Ｎ−メチル−Ｄ−フコサミン、３−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−エレモサミン、Ｄ−ラビドサミン、３−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｄ−マイコサミン／Ｄ−マイカミノース、３−Ｎ−アセチル−Ｄ−ラビドサミン、４−Ｏ−アセチル−Ｄ−ラビドサミン、３−Ｎ−アセチル−４−Ｏ−アセチル−Ｄ−ラビドサミン、Ｄ−グルコサミン、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン、Ｌ−デソサミン、Ｄ−アモサミン、Ｄ−ビオサミン、Ｌ−アビジノサミン、Ｄ−グロサミン、Ｄ−アロサミン及びＬ−シビロサミンから選択される化合物である、第１項〜４項のいずれか一項に記載の化合物。
【０１７８】
第６項
Ｒ２が、Ｄ−アンゴロサミン、Ｎ−デスメチルＤ−アンゴロサミン、Ｎ−ジデスメチルＤ−アンゴロサミン、Ｎ−デスメチルＮ−エチルＤ−アンゴロサミン及びＮ−ジデスメチルＮ−ジエチルＤ−アンゴロサミンから選択される化合物である、第１項〜５項のいずれか一項に記載の化合物。
【０１７９】
第７項
Ｒ２が式（ＩＩ）による糖である、第１項〜６項のいずれか一項に記載の化合物。
【０１８０】
第８項
Ｒ２が式（ＩＩ）による糖であり、式中、ＲａがＨであり、Ｒ４がＭｅであり、Ｒ５がＨであり、Ｒ６がＯＨであり、Ｒ７がＨであり、Ｒ８がＮＲ１１Ｒ１２であり、Ｒ９がＨであり、Ｒ１０がＨである、第１〜７項のいずれか一項に記載の化合物。
【０１８１】
第９項
Ｒ１１がＨ、Ｍｅ及びＥｔから選択され、Ｒ１２がＨ、Ｍｅ及びＥｔから選択される、第１〜８項のいずれか一項に記載の化合物。
【０１８２】
第１０項
Ｒ１１がＥｔであり、Ｒ１２がＥｔである、第１〜９項のいずれか一項に記載の化合物。
【０１８３】
第１１項
Ｒ１１がＭｅであり、Ｒ１２がＥｔである、第１〜８項のいずれか一項に記載の化合物。
【０１８４】
第１２項
ＸがＣ＝Ｏ、−ＮＲ３ＣＨ２−及び−ＣＨ（ＯＨ）−から選択される、第１〜１１項のいずれか一項に記載の化合物。
【０１８５】
第１３項
Ｒ１がＭｅ、Ｅｔ及びシクロアルキルから選択される、第１〜１２項のいずれか一項に記載の化合物。
【０１８６】
第１４項
Ｒ１がＭｅ及びＥｔ及びシクロアルキルから選択される、第１〜１３項のいずれか一項に記載の化合物。
【０１８７】
第１５項
以下から選択される第１〜１４項のいずれか一項に記載の化合物：
【化４７−１】
2020510641.tif 000061
【化４７−２】
2020510641.tif 000062
【化４７−３】
2020510641.tif 000063
【０１８８】
第１６項
医学での使用のための、第１〜１５項のいずれか一項で定められるような化合物。
【０１８９】
第１７項
細胞内感染の処置での使用のための、第１〜１５項のいずれか一項で定められるような化合物。
【０１９０】
第１８項
細胞内感染が細菌、原虫及び真菌感染から選択される、第１７項に記載の使用のための化合物。
【０１９１】
第１９項
細胞内感染が、マイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、マイコバクテリアが引き起こす非定型疾患、マイコバクテリウム・アビウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ）及びＭ．イントラセルラーレ（Ｍ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）（マイコバクテリウム・アビウム−イントラセルラーレ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ−ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）複合体又はＭＡＣとしても知られる。）、Ｍ．カンサシ（Ｍ．ｋａｎｓａｓｉｉ）、Ｍ．マリヌム（Ｍ．ｍａｒｉｎｕｍ）、Ｍ．フォーチュイタム（Ｍ．ｆｏｒｔｕｉｔｕｍ）、Ｍ．ゴルジナエ（Ｍ．ｇｏｒｄｉｎａｅ）、マイコプラズマ・ニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、Ｍ．ゲニタリウム（Ｍ．ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍ）、Ｍ．ホミニス（Ｍ．ｈｏｍｉｎｉｓ）、ウレアプラズマ・ウレアリチクム（Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ  ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ）、Ｕ．パルブム（Ｕ．ｐａｒｖｕｍ）、クラミドフィラ・ニューモニエ（Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）及びサルモネラ・チフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）により引き起こされる細菌感染、トキソプラズマ・ゴンディ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）、プラスモディウム・ファルシパルム（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）、Ｐ．ビバクス（Ｐ．ｖｉｖａｘ）、トリパノソーマ・クルジ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ）、クリプトスポリジウム（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ）及びリーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ）により引き起こされる原虫感染及び、ヒストプラズマ・カプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）及び  エンセファリトゾーン・クニクリ（Ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｏｚｏｏｎ  ｃｕｎｉｃｕｌｉ）により引き起こされる真菌感染から選択される、第１８項で定められるような使用のための化合物。
【０１９２】
第２０項
細胞内感染が、マイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、マイコバクテリアが引き起こす非定型疾患、マイコバクテリウム・アビウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ）及びＭ．イントラセルラーレ（Ｍ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）（マイコバクテリウム・アビウム−イントラセルラーレ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ−ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）複合体又はＭＡＣとしても知られる。）、Ｍ．カンサシ（Ｍ．ｋａｎｓａｓｉｉ）、Ｍ．マリヌム（Ｍ．ｍａｒｉｎｕｍ）、Ｍ．フォーチュイタム（Ｍ．ｆｏｒｔｕｉｔｕｍ）、Ｍ．ゴルジナエ（Ｍ．ｇｏｒｄｉｎａｅ）、マイコプラズマ・ニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、Ｍ．ゲニタリウム（Ｍ．ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍ）、Ｍ．ホミニス（Ｍ．ｈｏｍｉｎｉｓ）、ウレアプラズマ・ウレアリチクム（Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ  ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ）、Ｕ．パルブム（Ｕ．ｐａｒｖｕｍ）、クラミドフィラ・ニューモニエ（Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）及びサルモネラ・チフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）により引き起こされる細菌感染から選択される、第１８項で定められるような使用のための化合物。
【０１９３】
第２１項
細胞内感染がトキソプラズマ・ゴンディ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）、プラスモディウム・ファルシパルム（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａ−ｒｕｍ）、Ｐ．ビバクス（Ｐ．ｖｉｖａｘ）、トリパノソーマ・クルジ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ）、クリプトスポリジウム（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ）及びリーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ）によって引き起こされる原虫感染から選択される、第１８項で定められるような使用のための化合物。
【０１９４】
第２２項
細胞内感染が、ヒストプラズマ・カプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）及びエンセファリトゾーン・クニクリ（Ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｏｚｏｏｎ  ｃｕｎｉｃｕｌｉ）によって引き起こされる真菌感染から選択される、第１８項で定められるような使用のための化合物。
【０１９５】
第２３項
３−ヒドロキシル位置でグリコシル化する生体内変換株の培養物への、式（ＩＶ）
【化４８】
2020510641.tif 000064
を有するアグリコンの添加を含む、第１〜１５項のいずれか一項で定められるような化合物を調製するための方法。
【０１９６】
第２４項
生体内変換株が、ＡｎｇＭＩＩ及びＡｎｇＭＩＩＩと＞７０％の相同性を有するグリコシルトランスフェラーゼを発現する、第２４項に記載の方法。
【配列表フリーテキスト】
【０１９７】
配列表１  ＜２２３＞ＡｎｇＭＩＩ
配列表２  ＜２２３＞ＡｎｇＭＩＩＩ
【０１９８】
2020510641.tif 000065
【図１】
2020510641.tif 000075
【図２】
2020510641.tif 000076
【図３】
2020510641.tif 000077
【図４】
2020510641.tif 000078
【図５】
2020510641.tif 000079
【図６】
2020510641.tif 000080
【図７】
2020510641.tif 000081
【図８−１】
2020510641.tif 000082
【図８−２】
2020510641.tif 000083
【図９】
2020510641.tif 000084
【図１０】
2020510641.tif 000085
【図１１】
2020510641.tif 000086
【図１２】
2020510641.tif 000087
【図１３】
2020510641.tif 000088
【図１４】
2020510641.tif 000089
【図１５】
2020510641.tif 000090
【配列表】
2020510641000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成30年12月19日(2018.12.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容可能なその塩、水和物、溶媒和物、互変異性体、エナンチオマー又はジアステレオマー
【化１】
2020510641.tif 000091
（式中、Ｘは、−ＮＲ３ＣＨ２−、−ＣＨ２ＮＲ３−、−ＮＲ３（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ３−及びＣ＝ＮＯＨから選択され、Ｒ２は式（ＩＩ）又は式（ＩＩＩ）の糖：
【化２】
2020510641.tif 000092
であり、
ここでＲ１は、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、アリール及びヘテロアリール部分から選択され、
ここでアルキル部分は、場合により分枝しているＣ１−Ｃ６アルキル基から選択され、
ここでヘテロアルキル部分は、場合により分枝しているか又は置換され、場合により１つ以上のヘテロ原子を含むＣ１−Ｃ６アルキル基から選択され、
シクロアルキル部分は、場合により置換され、場合により１つ以上のヘテロ原子を含むＣ１−Ｃ６環状アルキル基から選択され、
アリール部分は、場合により置換されるＣ６芳香環から選択され、
ヘテロアリール部分は、１つ以上のヘテロ原子を含む、場合により置換されるＣ１−Ｃ５芳香環から選択され、
ヘテロ原子はＯ、Ｎ、Ｐ及びＳから選択され、
ここで置換基は、独立して、アルキル、ＯＨ、Ｆ、Ｃｌ、ＮＨ２、ＮＨ−アルキル、ＮＨ−アシル、Ｓ−アルキル、Ｓ−アシル、Ｏ−アルキル及びＯ−アシルから選択され、
アシルは、Ｃ１−Ｃ４の場合により分枝しているアシル基から選択され、
Ｒ３はＨ及びＭｅから選択され、
Ｒ４はＨ及びＭｅから選択され、
ＲａはＨ及び−ＣＲ２１Ｒ２２Ｒ２３から選択され、
Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３及びＲ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０は、独立して、Ｈ、Ｍｅ、ＮＲ１１Ｒ１２、ＮＯ２及びＯＲ１１から選択され、
ここで式（ＩＩ）のＲ４と合わせられたＲ２３、式（ＩＩ）のＲ５と合わせられたＲ４、式（ＩＩ）のＲ７と合わせられたＲ５及び式（ＩＩ）のＲ９と合わせられたＲ７は、独立して、各基が接続される炭素原子間に二重結合を残すための結合を表すために連結され得、
Ｒ２２と合わせられたＲ２１、Ｒ６と合わせられたＲ５、Ｒ８と合わせられたＲ７又はＲ１０と合わせられたＲ９はカルボニルで置換され得、
Ｒ１１及びＲ１２は、独立して、Ｈ及びアルキルから選択され、
Ｒ１３は、Ｈ、ＯＨ及びＯＣＨ３から選択され、
Ｒ１４は、Ｈ及びＯＨから選択され、
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９又はＲ１０のうち１つはＮＲ１１Ｒ１２及びＮＯ２から選択される）。
【請求項２】
Ｘが−ＮＲ３ＣＨ２−及び−ＣＨ２ＮＲ３から選択され、Ｒ２が式（ＩＩ）：
【化３】
2020510641.tif 000093
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１がメチル又はエチルである、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７又はＲ８のうち１つがＮＲ１１Ｒ１２である、請求項１〜３のいずれかに記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３及びＲ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０が、独立して、Ｈ、Ｍｅ、ＮＲ１１Ｒ１２及びＯＲ１１から選択される、請求項１〜４のいずれかに記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ１３及びＲ１４がＯＨである、請求項１〜５のいずれかに記載の化合物。
【請求項７】
Ｘが、−ＮＲ３ＣＨ２−及び−ＣＨ２ＮＲ３から選択され、Ｒ２が式（ＩＩ）：
【化４】
2020510641.tif 000094
であり、
Ｒ１がメチル又はエチルであり、
Ｒ３がＨ及びＭｅから選択され、
Ｒ４がＨであり、
Ｒａが、−ＣＲ２１Ｒ２２Ｒ２３であり、
Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３及びＲ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０が、独立して、Ｈ、Ｍｅ、ＮＲ１１Ｒ１２、ＮＯ２及びＯＲ１１から選択され、
Ｒ１１及びＲ１２が、独立して、Ｈ及びアルキルから選択され、ここでアルキル部分が、場合により分枝しているＣ１−Ｃ６アルキル基から選択され、
Ｒ１３が、Ｈ、ＯＨ及びＯＣＨ３から選択され、
Ｒ１４が、Ｈ及びＯＨから選択され、
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９又はＲ１０のうち１つがＮＲ１１Ｒ１２である、請求項１〜６に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ２が式（ＩＩ）による糖であり、ＲａがＨであり、Ｒ４がＭｅであり、Ｒ５がＨであり、Ｒ６がＯＨであり、Ｒ７がＨであり、Ｒ８がＮＲ１１Ｒ１２であり、Ｒ９がＨであり、Ｒ１０がＨである、請求項１〜７のいずれかに記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ１１及びＲ１２が、独立して、Ｈ、Ｍｅ及びＥｔから選択される、請求項１〜８のいずれかに記載の化合物。
【請求項１０】
Ｘが−ＮＲ３ＣＨ２−である、請求項１〜９のいずれかに記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ１がＥｔである、請求項１〜１０のいずれかに記載の化合物。
【請求項１２】
以下から選択される、請求項１〜１１のいずれかに記載の化合物
【化５−１】
2020510641.tif 000095
【化５−２】
2020510641.tif 000096
【請求項１３】
【化６】
2020510641.tif 000097
であり、基礎が１５ページ及び４９ページ８〜１５行目で見出され得る、請求項１〜１２のいずれかに記載の化合物。
【請求項１４】
医学での使用のための、請求項１〜１３のいずれかに記載の化合物。
【請求項１５】
細胞内感染の処置での使用のための、請求項１〜１３のいずれかに記載の化合物。
【請求項１６】
細胞内感染が、マイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、マイコバクテリアが引き起こす非定型疾患、マイコバクテリウム・アビウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ）及びＭ．イントラセルラーレ（Ｍ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）（マイコバクテリウム・アビウム−イントラセルラーレ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ−ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）複合体又はＭＡＣとしても知られる。）、Ｍ．カンサシ（Ｍ．ｋａｎｓａｓｉｉ）、Ｍ．マリヌム（Ｍ．ｍａｒｉｎｕｍ）、Ｍ．フォーチュイタム（Ｍ．ｆｏｒｔｕｉｔｕｍ）、Ｍ．ゴルジナエ（Ｍ．ｇｏｒｄｉｎａｅ）、マイコプラズマ・ニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、Ｍ．ゲニタリウム（Ｍ．ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍ）、Ｍ．ホミニス（Ｍ．ｈｏｍｉｎｉｓ）、ウレアプラズマ・ウレアリチクム（Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ  ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ）、Ｕ．パルブム（Ｕ．ｐａｒｖｕｍ）、クラミドフィラ・ニューモニエ（Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）及びサルモネラ・チフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）により引き起こされる細菌感染から選択される、請求項１５に記載の使用のための化合物。
【請求項１７】
細胞内感染が、トキソプラズマ・ゴンディ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）、プラスモディウム・ファルシパルム（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）、Ｐ．ビバクス（Ｐ．ｖｉｖａｘ）、トリパノソーマ・クルジ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ）、クリプトスポリジウム（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ）及びリーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ）によって引き起こされる原虫感染から選択される、請求項１５に記載の使用のための化合物。
【請求項１８】
細胞内感染が、ヒストプラズマ・カプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）及びエンセファリトゾーン・クニクリ（Ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｏｚｏｏｎ  ｃｕｎｉｃｕｌｉ）によって引き起こされる真菌感染から選択される、請求項１５に記載の使用のための化合物。
【請求項１９】
３−ヒドロキシル位置でグリコシル化する生体内変換株の培養物への、式（ＶＩ）
【化７】
2020510641.tif 000098
を有するアグリコンの添加を含み、前記生体内変換株が、ＡｎｇＭＩＩ（配列番号１）又はＡｎｇＭＩＩＩ（配列番号２）に対して７０％以上の相同性を有するグリコシルトランスフェラーゼを発現する、請求項１〜１３に記載の化合物を調製するための方法。
【国際調査報告】
2020510641.tif 000099
2020510641.tif 000100
2020510641.tif 000101
2020510641.tif 000102