(57)【要約】  本発明は、サンプルからの２つ以上の成分の自動化された質量指向分離のための方法であって、溶媒勾配を、その変化する組成により規定するステップと、前記溶媒勾配を質量分析（ＭＳ）に供して勾配信号を生成するステップと、規定された勾配の少なくとも一部を含む勾配を、サンプルが適用された充填クロマトグラフィーカラムを横切って通過させるステップと、前記カラムを出る溶離剤をＭＳに供してサンプル信号を生成するステップと、選択されたｍ／ｚ値の範囲にわたってサンプル信号から勾配信号を減算することによりスペクトルを生成するステップと、生成されたスペクトルに基づいて、分離された成分を各々が含むフラクションを収集するよう、フラクションコレクターに指示するステップとを備える。
2020510842.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
フラッシュクロマトグラフィーによるサンプルの２つ以上の成分の自動化された質量指向分離のための方法であって、
ａ）溶媒勾配を、その変化する組成により規定するステップと、
ｂ）前記溶媒勾配を質量分析（ＭＳ）に供し、複数の勾配信号ｔ１、ｔ２、ｔ３などを所定範囲のｍ／ｚ値にわたって生成することによって、溶媒ノイズレベルを判断するステップと、
ｃ）ステップａ）で規定された勾配の少なくとも一部を含む溶媒勾配を、サンプルが適用された充填フラッシュクロマトグラフィーカラムを横切って通過させることによって、前記サンプルの２つ以上の成分を分離するステップと、
ｄ）前記カラムを出る溶離剤をＭＳに供し、複数のサンプル信号ｔ’１、ｔ’２、ｔ’３などを前記所定範囲のｍ／ｚ値にわたって生成するステップと、
ｅ）ステップｂ）およびステップｄ）で取得したＭＳ信号に基づいてスペクトルを生成するステップと、
ｆ）ステップｅ）で生成されたスペクトルに基づいて、分離された成分を各々が含むフラクションを収集するようフラクションコレクターに指示するステップとを備え、
ステップｅ）では、勾配信号ｔ１、ｔ２、ｔ３などは、サンプル信号ｔ’１、ｔ’２、ｔ’３などから除算され、結果の信号は、選択された範囲のｍ／ｚ値にわたってスペクトルを生成するために用いられ、（ｔ−ｔ’）は、（ｔ−ｔ’）≧０の場合には前記結果の信号として使用され、（ｔ−ｔ’）＜０の場合には０にセットされ、
ステップｃ）からステップｆ）は、ステップｂ）で得られた勾配信号を使用して１回以上繰り返されてもよい、方法。
【請求項２】
ステップｃ）において、ステップａ）に従って規定された溶媒勾配を、前記カラムを横切って通過させる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ステップｅ）において、生成されたすべての信号の合計値を用いて総イオンクロマトグラム（ＴＩＣ）を作成するか、または代替的に、信号の選択を用いて、抽出されたイオンクロマトグラム（ＸＩＣ／ＥＩＣ）を作成する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記クロマトグラフィーカラムはシリカで充填されている、先行する請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記溶媒は、酢酸エチル、ヘキサン、ジクロロメタン、およびアセトンからなる群から選択される、先行する請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記サンプルは生物学的サンプルなどの液体サンプルであり、少なくとも１つの検出された成分がビタミンまたはホルモンである、前記先行するステップのいずれか１つによる方法。
【請求項７】
少なくとも１つのステップがコンピュータによって制御される、前記先行するステップのいずれか１つによる方法。
【請求項８】
データキャリアで提供される請求項７に記載の方法の少なくともステップｅ）を実行するためのソフトウェア。
【請求項９】
２つ以上の成分の自動化された質量指向分離を実行するためのシステムであって、
ｉ．クロマトグラフィーカラムと、
ｉｉ．前記クロマトグラフィーカラムの上流に位置し、１つ以上の溶媒を保持するように構成された少なくとも第１の容器と、
少なくとも前記第１の容器および任意に第２の容器から溶媒を受け取り、結果として生じる溶媒の流れを前記クロマトグラフィーカラムに向けるように構成されたセレクタと、
ｉｉｉ．前記クロマトグラフィーカラムの下流に位置する質量分析計（ＭＳ）と、
ｉｖ．ＭＳ溶媒を保持するように構成された追加の溶媒容器と、
ｖ．前記クロマトグラフィーカラムの下流で溶出液を受け取り、前記溶出液をＭＳ溶媒と組み合わせ、その溶出液と溶媒との混合物を前記ＭＳに渡す、および／または後の別のコレクターユニットへの分離のために前記溶離剤をフラクションコレクターに渡すように構成されたスプリッター装置とを備え、
前記セレクタの下流のポイントからバルブを介して前記クロマトグラフィーカラムの下流であるが前記スプリッター装置の上流のチューブに溶媒を渡すために、キャリブレーションバイパスループが配置される、システム。
【請求項１０】
プロセッサをさらに備え、前記プロセッサは、
（ｉ）勾配信号のセットをサンプル信号のセットから減算するように構成され、前記勾配信号のセットは、前記下流バルブが前記バイパスループからの流れを前記スプリッター装置に向かって移送するように設定され、前記スプリッター装置が前記流れを前記ＭＳに渡すように設定されるときに得られ、前記サンプル信号のセットは、前記下流バルブが前記クロマトグラフィカラムを出る前記溶出液を前記スプリッター装置に渡すように設定され、前記スプリッター装置が前記溶出液の一部を前記ＭＳに向かって分割し、前記溶出液の一部を前記フラクションコレクターに分割するように設定されるときに得られ、前記プロセッサはさらに、
（ｉ）結果のＭＳ信号を用いて生成されたスペクトルに基づいて、前記フラクションコレクターの動作を指示するように構成される、システム。
【請求項１１】
ビタミン、ホルモン、薬物または薬物候補などの有機分子のような化合物の、組み合わせられた同定および精製のための、請求項９または１０に記載のシステム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、液体クロマトグラフィーなどの分離の分野に関する。より具体的には、本発明は、液体または固体サンプルの成分を効率的に分離する質量指向方法、自動化されたそのような方法およびその方法を実行できるコンピュータ、ならびに液体または固体サンプルの成分を質量指向分離するためのシステムに関する。
【背景技術】
【０００２】
背景
多くの診断および準備方法には、例えば、血液もしくは尿サンプルなどの、検査対象の被験者から採取された、または合成および／もしくは製造プロセスから得られた、液体サンプルからの有機分子の検出が含まれる。液体クロマトグラフィーは、任意の準備または診断分離に広く使用されている周知の方法である。
【０００３】
フラッシュクロマトグラフィーは、何十年にもわたって使用されてきたクロマトグラフィー技術であり、固定相として知られる不溶性固体支持体と移動相として知られる溶出溶媒混合物とで満たされたカラムまたはカートリッジを使用して、有機化合物の混合物を分離および精製する。固定相および移動相は通常、極性が大きく異なり、化合物混合物を分離するために連携して機能する。
【０００４】
フラッシュクロマトグラフィーでは、ＵＶ検出器などのさまざまな非破壊検出器、および／または蒸発光散乱検出器（ＥＬＳＤ）もしくは質量分析計（ＭＳ）などの破壊的質量検出器を使用して、移動相において分離された分子を検出し、自動化されたフラクションコレクターに指示して、検出器からの信号に基づいて、分離された分子を別々のバイアルに収集するすることは周知である。
【０００５】
分離された有機化合物は、その後、合成または最終生成物など、さまざまな用途で使用され得る。
【０００６】
質量分析計が自動化されたフラッシュクロマトグラフィーの検出器として使用される場合、一般に総イオン電流（ＴＩＣ）クロマトグラムが生成され、分析のすべてのポイントで検出される質量の範囲全体にわたる合計強度を表す。あるいは、抽出イオンクロマトグラム（ＸＩＣ、ＥＩＣと表記されることもある）が生成され、対象の１つ以上の検体を表す１つ以上のｍ／ｚ値が、クロマトグラフィー実行のデータセット全体から回収される。総強度またはベースピーク強度は、特定の検体のｍ／ｚ値付近の質量許容ウィンドウ内において、そのようなＸＩＣ（ＥＩＣ）分析のすべてのポイントで、プロットされる。
【０００７】
しかしながら、複雑なサンプルでは、個々の種の情報は、結果のクロマトグラムの溶媒によって主に引き起こされるバックグラウンドノイズによって不明瞭になる場合がある。したがって、この分野では、分解能を改善した新しい方法を提供する必要がある。
【０００８】
従来の質量指向フラッシュクロマトグラフィーでは、対象の各質量を識別するために、実際の分離に先行する準備ステップが一般的に実行される。しかしながら、これはユーザに集中する時間のかかるステップである。
【０００９】
ＵＳ２０１４／０３１２２１６（Advion Inc.）は、質量指向フラクション収集のための信号処理に関し、より具体的には、クロマトグラフィーカラムからの溶離剤のフラクションの収集を改善するために質量分析計信号からノイズを除去する方法に関する。この方法は、逆相クロマトグラフィー、順相フラッシュクロマトグラフィー、および超臨界流体クロマトグラフィーに例示されるように、あらゆる形態の液体クロマトグラフィーに広く適用可能であると記載されている。この特許出願は、フラクション収集を実行するためのシステムも記載しており、質量分析によりクロマトグラフィーカラムからの溶離剤を分析することにより生信号が得られ、ベースライン信号が、前記生信号に基づいて計算され、そして、後のフラクション収集で用いられる処理された信号が、生信号からベースライン信号を除算することにより生成される。したがって、記載のノイズ低減は、クロマトグラフィーカラムからの溶離剤上で実行され、検体の実際のクロマトグラフィー分離の直前に行われる分析によって、つまり同じクロマトグラフィー実行で達成される。したがって、提案された方法は、アイソクラティック溶出向けに提案されており、グラジエントクロマトグラフィーでは動作可能ではないようである。さらに、この方法ではノイズ低減計算が純粋な溶媒上で完了することを前提としているため、検体が溶離剤にブレークスルーするタイミングを正確に把握することが重要である。その結果、ＵＳ２０１４／０３１２２１６で提案されている方法は、小規模のクロマトグラフィーカラムにうまく適用するのが難しい場合がある。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
発明の概要
本発明は、改善された分解能、したがって改善されたフラクション収集を提供し得る、２つ以上の成分の質量指向分離の方法に関する。
【００１１】
より具体的には、本発明は、溶媒効果に起因するベースラインドリフトによって一般に引き起こされるノイズを実質的に低減または除去さえし得る。
【００１２】
これは、目的の分離のために規定された溶媒勾配を実際のサンプル分離の前のステップで質量分析計に渡して、各そのような溶媒勾配に固有の溶媒ノイズレベルを判断する方法によって、実現できる。
【発明の効果】
【００１３】
したがって、本発明は、サンプル中に存在するおそらくは興味深い各化合物の個々の質量を判断するために一般的に用いられる時間のかかる調製ステップの必要性を排除し得る。
【００１４】
さらに、本発明による方法では、ノイズの検出に対するサンプルの影響のリスクが実質的に排除される。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】本発明による方法のフローチャートである。
【図２（ａ）】ｍ／ｚセクションのノイズレベルの選択を示す概略質量分析スペクトルである。
【図３】本発明による質量指向分離を実行するためのシステムの概略図である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
定義
ＴＩＣ（総イオンクロマトグラム）は、総イオン電流対保持時間のプロットとして、ＭＳ分析のすべてのポイントで検出される質量の範囲全体にわたる合計強度から作成されたクロマトグラムである。従来の使用では、ＴＩＣにはバックグラウンドノイズとサンプル成分とが含まれる。
【００１７】
抽出イオンクロマトグラム（ＸＩＣまたはＥＩＣ）では、対象の１つ以上の検体を表す１つ以上のｍ／ｚ値が、クロマトグラフィー実行のデータセット全体から抽出される。
【００１８】
発明の詳細な説明
第１の態様では、本発明は、フラッシュクロマトグラフィーによるサンプルの２つ以上の成分の自動化された質量指向分離のための方法に関する。本発明による方法を実行するのに適したシステムを図３に概略的に示し、図３を参照する詳細な説明の部分で説明する。
【００１９】
この方法は、図２のフローチャートに示され、以下のステップを備える。
ａ）溶媒勾配を、その変化する組成により規定するステップと、
ｂ）前記溶媒勾配を、クロマトグラフィカラムに渡すことなく質量分析（ＭＳ）に供し、複数の勾配信号ｔ１、ｔ２、ｔ３などを所定範囲のｍ／ｚ値にわたって生成することによって、溶媒ノイズレベルを判断するステップと、
ｃ）ステップａ）で規定された勾配の少なくとも一部を含む溶媒勾配を、サンプルが適用された充填フラッシュクロマトグラフィーカラムを横切って通過させることによって、サンプルの２つ以上の成分を分離するステップと、
ｄ）前記カラムを出る溶離剤をＭＳに供し、複数のサンプル信号ｔ’１、ｔ’２、ｔ’３などを所定範囲のｍ／ｚ値にわたって生成するステップとを備え、サンプル信号ｔ’１、ｔ’２、ｔ’３は、クロマトグラフィー分離の結果、クロマトグラフィー実行中に時間とともに変動し、この方法はさらに、
ｅ）ステップｂ）およびステップｄ）で取得したＭＳ信号に基づいてスペクトルを生成するステップと、
ｆ）ステップｅ）で生成されたスペクトルに基づいて、分離された成分を各々が含むフラクションを収集するようフラクションコレクターに指示するステップとを備え、
ステップｅ）では、勾配信号ｔ１、ｔ２、ｔ３などは、サンプル信号ｔ’１、ｔ’２、ｔ’３などから除算されて、結果の信号ｒ１、ｒ２、ｒ３などを与え、（ｔｎ’−ｔｎ）≧０である場合、ｒｎ＝（ｔｎ’−ｔｎ）であり、（ｔｎ’−ｔｎ）＜０を用いて、選択された範囲のｍ／ｚ値にわたってスペクトルを生成する場合、ｒｎ＝０であり、
ステップｃ）からステップｆ）は、ステップｂ）で得られた勾配信号を使用して１回以上繰り返されてもよい。
【００２０】
所定の範囲のｍ／ｚ値は通常、自動化された質量指向分離のためのシステムのメーカーによって設定され、通常は質量分析計の特性、たとえばｍ／ｚにおける分解能に関係する。この範囲は、ｍ／ｚにおける所定数の離散セクションで構成される。ｍ／ｚにおける離散セクションは、ｍ／ｚにおける長さが等しくてもよいが、たとえばｍ／ｚの範囲の一部が他の部分よりも多くの情報を担持していると考えられる場合には、ｍ／ｚにおける長さが異なるセクションを有するようにも構想され得る。示されるように、所定の範囲のｍ／ｚ値は、通常、自動化された質量指向分離のためのシステムの基本構成の一部であるが、システムの熟練ユーザには、ｍ／ｚにおける離散セクションを含むｍ／ｚ値の所定の範囲の範囲を修正するオプションを与えて、分離プロセスをさらに調整および最適化してもよい。ｍ／ｚの離散セクションを含む所定の範囲のｍ／ｚ値が、基本構成の一部であろうと、ユーザによって修正されようと、ｍ／ｚの離散セクションを含む所定の範囲のｍ／ｚ値は、ステップｂ）の溶媒ノイズレベルの判断およびサンプルの分画に関係する後のステップｄ〜ステップｆにおいて同じに保つ必要がある。
【００２１】
溶媒ノイズレベルを判断するステップｂ）は、次のサブステップを含む。
ｂ：１）事前実行段階に入るサブステップと、
ｂ：２）規定された溶媒勾配の一部を質量分析計に向けるサブステップと、
ｂ：３）ｍ／ｚにおける離散セクションごとに、
ｂ：４）規定された溶媒勾配についてのノイズレベルを表すスカラー値ｔｎを、対応するｍ／ｚの離散セクションにおいて判断するサブステップとを含む。本発明の一実施形態によれば、スカラー値ｔｎは、ｍ／ｚの対応する離散セクションｎの強度の最大値として選択される。一実施形態によれば、スカラー値ｔｎは、強度の最大値を超える所定の値または所定の割合として選択される。これは、規定された勾配溶媒からのノイズが例えばＴＩＣに絶対に影響を与えないことを確実にすることになるであろう。また、ノイズが許容される特定のある適用例では、スカラー値ｔｎとして、強度の最大値を下回る所定の値または所定の割合を選択することも好適であり得る。たとえば明らかな異常値などを特定して除外するために実験データを処理する一般的な手段も利用できる。
【００２２】
ｂ：４）事前実行段階を終了し、クロマトグラフィー段階に入るサブステップを含む。
単純化された質量分析スペクトルである図３は、勾配信号ｔ１、ｔ２、ｔ３…、ｔｎ、…ｔＮがｍ／ｚにおける各対応する離散セクションごとにどのように選択されるかを示す。ｍ／ｚの各離散セクションの規定された溶媒勾配の最大強度値ｔｎは、クロマトグラフィーカラムでの分離により時間が遅れてはいるが、組み合わされたクロマトグラフィーとＭＳとの実行でも最大強度値を表す。したがって、規定された溶媒勾配と混合されたサンプル関して、規定された溶媒勾配についてのＭＳからの最大強度値ｔｎ単独を、組み合わされたクロマトグラフィーとＭＳとの実行における対応する離散セクションについての最大ノイズレベルとして理解することができる。
【００２３】
溶媒ノイズレベルを判断するステップｂ）は、事前実行と見なすことができる。本発明の方法の一実施形態によれば、ｂ：１）のサブステップは、セレクタを制御して、規定の溶媒勾配を質量分析計溶媒と混合し、それを質量分析計に供給することによって実行され、これにより、事前実行段階中にクロマトグラフがバイパスされることを含むことは、完全に自動的である。
【００２４】
ステップｅ）では、受信したすべての強度の合計値を用いて、総イオンクロマトグラム（ＴＩＣ）を作成できる。代替的に、信号の選択を用いて、抽出されたイオンクロマトグラム（ＸＩＣ／ＥＩＣ）を作成する。当業者が理解するように、結果として生じる信号は決して負になることはないため、（ｔ’１−ｔ１）≧０，（ｔ’２−ｔ２）≧０，（ｔ’３−ｔ３）≧０などの基準は満たされるに違いない。
【００２５】
徐々に変化するイオン強度を含むことになるステップａ）の溶媒勾配は、サンプルの屈折率、用いられるカラムの充填などに関連する考慮事項を含む、クロマトグラフィーの分野で周知の原則に従って、当業者によって容易に規定されることになる。フラッシュクロマトグラフィーで一般的に用いられる溶媒の例には、酢酸エチル、ヘキサン、ジクロロメタン、アセトンなどが含まれる。
【００２６】
さらに、ステップｂ）で生成された勾配信号は、線形勾配などとして用いることができ、その場合、ステップｃ）では、ステップａ）に従って規定された溶媒勾配、すなわち規定された勾配と同一または実質的に同一の溶媒勾配を、コラムを横切って通過させる。
【００２７】
代替的に、ステップｃ）で、規定された勾配の一部のみを、より短い線形勾配またはステップ状勾配などの非線形勾配で用いることができる。
【００２８】
本発明に従って用いられる勾配の傾斜は、意図される分離に応じて、急勾配から実質的に平坦な勾配までのいずれでもよい。
【００２９】
本発明による分離は、ＦＬＡＳＨクロマトグラフィーなどの液体クロマトグラフィーであってもよい。用いられるクロマトグラフィーカラムは、ＦＬＡＳＨクロマトグラフィーの場合のシリカカラムなど、市販されており、従来的に充填されている任意のカラムであってもよい。当業者は、意図される分離のために適切な材料および方法を選択することができる。
【００３０】
サンプルは、事前にまたは分離の直前にカラムに適用されてもよく、乾燥サンプルでも液体サンプルでもよい。より具体的には、サンプルは、そのままで、カラム上に適用されるように単純に適用されてもよいし、好適な溶媒中において溶解した状態で適用されてもよいし、または堆積された乾燥サンプルであってもよい。そのようなサンプル適用例のために好適なサイズのスペースが割り当てられたクロマトグラフィーカラムが利用可能である。
【００３１】
本発明による方法は、物質および／または化合物の、組み合わされた同定ならびに精製に有利に用いられる。本発明は、好適なサイズの核酸およびペプチドを含む有機分子などの、質量分析に成功裏に供され得る任意の標的に関して使用され得る。フラッシュクロマトグラフィーは、一般的に、疾患マーカーや薬物などの、生体サンプル中の物質の検出に用いられるため、サンプルは血液、尿、唾液などに由来する場合がある。
【００３２】
本文脈で用いられるとおりでは、「自動化された」分離という用語は、少なくとも１つのステップが自動化されることを意味する。有利なことに、すべてのステップが自動化されており、本発明の方法は「完全に自動化された」と称されてもよい。本方法の１つ以上のステップは、コンピュータによって制御されてもよい。
【００３３】
したがって、第２の態様では、本発明は、任意の適切なデータキャリア上に提供され、すべてのステップなど、本方法の少なくとも１つの自動化されたステップを実行できる、ソフトウェア、すなわち、コンピュータプログラムに関する。本発明は、本発明による方法の１つ以上のステップを実行するようにプログラムされたコンピュータも包含する。
【００３４】
本発明によるコンピュータプログラムは、システムに本発明による方法を実行させるためのコンピュータ実行可能命令を含むことができる。
【００３５】
したがって、より具体的には、本発明によれば、メモリおよび／またはコンピュータ可読記憶媒体を含むコンピュータプログラム製品が提供され、コンピュータ可読記憶媒体は、上記コンピュータプログラムがその中に具体化される。本明細書で言及されるメモリおよび／またはコンピュータ可読記憶媒体は、ＲＯＭ（読み取り専用メモリ）、ＰＲＯＭ（プログラム可能読み取り専用メモリ）、ＥＰＲＯＭ（消去可能ＰＲＯＭ）、フラッシュメモリ、ＥＥＰＲＯＭ（電気的に消去可能なＰＲＯＭ）、またはハードディスクドライブなどの、本質的に任意のメモリを含むことができる。
【００３６】
第３の態様では、本発明は、例えばフラッシュクロマトグラフィーなど、液体クロマトグラフィーのような、サンプルの２つ以上の成分の自動化された質量指向分離を実行するためのシステムに関する。
【００３７】
本発明によるシステムは、上述のように、任意の種類のクロマトグラフィー充填を保持するように構成されたクロマトグラフィーカラムを備えてもよい。本発明によるシステムは適切な溶媒の変化する成分の液体勾配を与えるために前記溶媒を保持するように構成された１つ以上の容器をさらに備えてもよい。溶媒の液体勾配の調製を容易にするために、本発明によるシステムは、溶媒を受け取り、その適切な割合をカラムに渡すように構成されたセレクタをさらに備えてもよい。セレクタは、手動バルブまたはたとえば制御信号によって制御可能なアクチュエータバルブの形式であってもよい。
【００３８】
本発明によるシステムは、質量分析計（ＭＳ）にさらにリンクされるか、またはそれを含むことができる。当業者が理解するように、本発明は、ＦＬＡＳＨクロマトグラフィーなどの液体クロマトグラフィーと組み合わせて一般的に用いられる任意の従来の質量分析計を利用し得る。本発明に従って用いられるＭＳは、例えば、四重極質量分析計であってもよい。
【００３９】
当業者は、質量分析計を従来のフラクションコレクターと組み合わせて、本発明によれば先行技術の方法のいずれよりも高い純度で得られる１つ以上の標的サンプル成分を収集することもできる。
【００４０】
したがって、本発明は、従来の質量分析計にリンクされた従来の要素を用いるが、サンプルの成分の実際の分離に先行するステップにおいて特定の勾配に起因するノイズレベルを判断することにより、質量分析計における溶媒に起因するノイズを低減することを初めて提案する。別の言い方をすれば、本発明によれば、規定された溶媒勾配は、質量分析中に生成される信号を規定するために、事前実行において質量分析に供される。そのような勾配信号は、クロマトグラフィーカラムから標的成分を溶出するための後続のステップで適用される場合にノイズを構成するであろうため、勾配信号は、本発明に従って、クロマトグラフィーの後続のステップで得られるサンプル信号から除算されるよう提案される。
【００４１】
当業者が理解するように、本発明による事前実行は、勾配で用いられる関連濃度のための信号を得るために用いられるが、事前実行では後続のクロマトグラフィーステップにおけるのと同じ流量を用いることに対する要件はない。したがって、この事前実行の利点は、関連する充填されたクロマトグラフィーカラムで実行される従来の「キャリブレーションラン」よりも速くなる可能性があることである。
【００４２】
同様に、当業者には理解されるように、本発明による事前実行は、どちらの方向にも勾配を実行することができ、後続のクロマトグラフィーステップに計画されているのと同じ組成で開始するか、または、代替的に、計画された最終組成で開始し、計画された開始組成が達成されるまで実行する。
【００４３】
当業者が理解するように、カラムからの溶離剤、またはカラムをバイパスした液体勾配を、従来の質量分析計溶媒と組み合わせるために、カラムの下流でスプリッタタイプのバルブを有利に用いることができる。このバルブまたはスプリッタは、制御信号によって制御可能であるべきである。本発明による方法およびシステムにおけるスプリッタ装置として有用な例示的なバルブが、米国特許第５，８０３，１１７号に記載されている。
【００４４】
したがって、より具体的には、本発明は、図３に概略的に示される、２つ以上の成分の自動化された質量指向分離を実行するためのシステムであってもよく、
ｉ．クロマトグラフィーカラム３０と、
ｉｉ．前記クロマトグラフィーカラム３０の上流に位置し、１つ以上の溶媒を保持するように構成される少なくとも第１の容器３１およびオプションで第２のまたはそれより多い容器３２と、
ｉｉｉ．少なくとも第１の容器３１およびオプションで第２容器３２から溶媒を受け取り、得られた溶媒流をクロマトグラフィーカラム３０に向けるように構成されたセレクタ３４と、
ｉｖ．前記クロマトグラフィーカラム３０の下流に配置された質量分析計（ＭＳ）３５と、
ｖ．ＭＳ溶媒を保持するように構成された追加の溶媒容器３３と、
ｖｉ．クロマトグラフィーカラム３０の下流のポイントから溶出液を受け取り、前記溶出液の少なくとも一部をＭＳ溶媒と組み合わせ、その溶出液と溶媒との混合物をＭＳ３５に向けるよう、および／または後の別のコレクターユニット３８への分離のために前記溶離剤の少なくとも一部をフラクションコレクター３７に向けるように構成されたスプリッター装置３６とを備え、
セレクタの下流のポイントからバルブを介してクロマトグラフィーカラム３０の下流であるがスプリッター装置３６の上流のチューブに溶媒を渡すために、キャリブレーションバイパスループ３９が配置される。
【００４５】
本発明によるシステムは、さらに、プロセッサを備えてもよく、このプロセッサは、
（ｉ）勾配信号のセットをサンプル信号のセットから減算するように構成され、勾配信号のセットは、下流バルブが溶媒の流れをバイパスループを介してスプリッター装置に向けるように設定され、スプリッター装置が前記流れをＭＳ溶媒と組み合わせ、その組み合わされた流れをＭＳに向けるように設定されるときに得られ、サンプル信号のセットは、下流バルブがクロマトグラフィカラムを出る溶出液をスプリッター装置に渡すように設定され、スプリッター装置が前記溶出液の少なくとも一部をＭＳに向け、前記溶出液の一部をフラクションコレクターに向けるように設定されるときに得られ、プロセッサはさらに、
（ｉ）結果の信号を用いて生成されたスペクトルに基づいて、前記フラクションコレクターの動作を指示するように構成される。
【００４６】
より具体的には、本発明に従って用いられる制御ユニットは、電子制御ユニット（ＥＣＵ）またはオンボードコンピュータであり得る。本制御ユニットは、有線または無線通信用のトランシーバに通信可能に結合されるプロセッサを備えてもよい。一例では、プロセッサは、処理回路および／または中央処理装置および／またはプロセッサモジュールおよび／または互いに協働するように構成された複数のプロセッサの選択のいずれか１つであり得る。さらに、制御ユニットはメモリを有利に含むことができる。メモリは、本明細書に記載または示された方法のいずれか１つを実行するべくプロセッサによって実行可能な命令を含んでもよい。プロセッサは、トランシーバおよびメモリのいずれかの選択物に通信可能に結合されてもよい。
【００４７】
本発明によるシステムは、上記のものような化合物の、組み合わされた同定および精製のために有利に用いられる。
【図１】
2020510842.tif 000003
【図２】
2020510842.tif 000004
【図３】
2020510842.tif 000005
【国際調査報告】
2020510842.tif 000006
2020510842.tif 000007
2020510842.tif 000008
2020510842.tif 000009
2020510842.tif 000010
2020510842.tif 000011
2020510842.tif 000012