(57)【要約】  本発明は、パナキサジオールサポニン誘導体、その調製方法および使用を開示する。  このような化合物は、インビトロおよび動物モデル実験において高い抗炎症作用を示し、このため、抗炎症薬の調製、特に喘息およびＣＯＰＤの治療に適用できる。実験において、上記化合物は、喘息およびＣＯＰＤに対して顕著な作用を有し、高用量群の治療効果がデキサメタゾンおよびブデソニドよりも優れている。有効治療用量よりもはるかい高い場合においても、全血球計算および血糖に対して明らかな影響がなく、抗炎症性医薬品、特に喘息およびＣＯＰＤ治療技術において、将来性が期待できる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）の構造に示されるパナキサジオールサポニン誘導体またはその薬学的に許容される塩：
2020528080.tif 000045
（式中、Ｒ１は、ヒドロキシ基または非グルコースのピラノシル基または
2020528080.tif 000046
から選ばれ、
Ｒ２およびＲ３は、一緒になって＝Ｏまたは＝Ｎ−ＯＲ８を示し、
またはＲ２は、水素であり、且つＲ３は、ヒドロキシ基であり、
Ｒ４およびＲ６は、結合されて結合を形成し、且つＲ５およびＲ７は、独立に水素、Ｃ１−６アルコキシ基、ヒドロキシ基、シアノ基、Ｃ１−６エステル基、グリコシル基から選ばれ、
またはＲ６およびＲ７は、一緒になって＝Ｏまたは＝Ｎ−ＯＨを示し、且つＲ５およびＲ４は、独立に水素、Ｃ１−６アルコキシ基、ヒドロキシ基、シアノ基から選ばれ、
またはＲ４、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、独立に水素、Ｃ１−６アルコキシ基、ヒドロキシ基、シアノ基、Ｃ１−６エステル基、グリコシル基から選ばれ、
Ｒ８は、水素またはＣ１−６アルキル基から選ばれる）。
【請求項２】
Ｒ２およびＲ３は、一緒になって＝Ｎ−ＯＨを示す、請求項１に記載のパナキサジオールサポニン誘導体またはその薬学的に許容される塩。
【請求項３】
Ｒ４およびＲ６は、結合されて結合を形成する、請求項１に記載のパナキサジオールサポニン誘導体またはその薬学的に許容される塩。
【請求項４】
Ｒ５は、グリコシル基から選ばれ、且つＲ１は、ヒドロキシ基を示す、請求項３に記載のパナキサジオールサポニン誘導体またはその薬学的に許容される塩。
【請求項５】
Ｒ６およびＲ７は、一緒になって＝Ｎ−ＯＲ８を示し、且つＲ８は、水素またはメチル基を示す、請求項１に記載のパナキサジオールサポニン誘導体またはその薬学的に許容される塩。
【請求項６】
Ｒ１において、前記非グルコースのピラノシル基は、ラムノシル基、フコシル基、アラビノフラノシル基、キシロシル基、リボシル基、キノボシル基、ガラクトシル基、アミノグルコシル基、６−デオキシ−６−アミノグルコシル基、ラクトシル基およびセロビオシル基から選ばれる、請求項１に記載のパナキサジオールサポニンまたはその薬学的に許容される塩。
【請求項７】
前記グリコシル基は、独立にデオキシグリコシル基またはペントシル基から選ばれる、請求項１〜６のいずれか１項に記載のパナキサジオールサポニン誘導体またはその薬学的に許容される塩。
【請求項８】
パナキサジオールサポニン誘導体の構造が、以下のとおりである、パナキサジオールサポニン誘導体またはその薬学的に許容される塩：
2020528080.tif 000047
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか１項に記載のパナキサジオールサポニン誘導体またはその薬学的に許容される塩および薬学的に許容される添加剤を含む、医薬品組成物。
【請求項１０】
喘息およびＣＯＰＤを予防および／または治療する医薬品の調製における、請求項１〜８のいずれか１項に記載のパナキサジオールサポニン誘導体またはその薬学的に許容される塩の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ジンセノサイド誘導体に関し、特にパナキサジオールサポニン誘導体に関し、および、本発明は、前記化合物の調製方法および使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
喘息は、気管支喘息としても知られており、好酸球、マスト細胞、Ｔリンパ球、好中球、気道上皮細胞などの各種の細胞および細胞成分が関与する慢性気道炎症を特徴とする異質性疾患であり、この慢性炎症は、気道過敏性に関連し、その臨床症状は、再発性の喘息、息切れ、胸部圧迫感および（または）咳喘息である。
【０００３】
喘息は、一般的な呼吸器疾患であり、医学界において認められている４つの難病の１つであり、重症の場合は生命を脅かす可能性があり、死因のトップ１０の１つとされている。調査によると、中国には２５００万人、世界中で約３億人が喘息に苦しんでおり、世界的には、喘息死亡率は約１／１０万であり、世界中で平均２５万人が毎年喘息で亡くなっており、急速に高まっている傾向がある。
【０００４】
喘息は、人々の肉体的および精神的健康を深刻に害するだけでなく、労働力を弱め、生活の質を低下させるだけでなく、治癒することも困難である。再発しやすく、ＷＨＯは、喘息関連の経済的消費が結核とエイズの総消費よりも高いと報告している。
【０００５】
喘息の発症メカニズムは非常に複雑であるため、今まで完全に解明されておらず、現在認められているメカニズムは、以下のとおりである。１、気道炎症メカニズム：上記の細胞（たとえば、好酸球、マスト細胞、Ｔリンパ球、好中球、気道上皮細胞など）に加えて、プロスタグランジン、活性化神経ペプチドなどのメディエーター、およびＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３およびインターフェロン、顆粒球単球コロニー刺激因子などを含む。２、免疫反応およびアレルギー反応メカニズム：たとえば、血清中の総ＩｇＥおよび特異的ＩｇＥの上昇。３、気道中の神経受容体調節メカニズム：アドレナリン作動性神経、コリン作動性神経が喘息に密接に関連している。４、Ｔｈ１／Ｔｈ２細胞の不均衡。５、セカンドメッセンジャーｃＡＭＰ／ｃＧＭＰの不均衡。６、遺伝的遺伝や気道リモデリングなど、喘息の発症に関連するその他のメカニズム。
【０００６】
喘息の病態生理によると、研究者は多くの抗喘息薬を開発しており、一般的には、抗炎症性抗喘息薬、抗アレルギー性抗喘息薬および気管支拡張薬に分類できる。より具体的には、次の複数の種類に分類できる。
【０００７】
１、アレルギー性メディエーターの放出抑制薬
作用メカニズムは、マスト細胞の細胞膜を選択的に安定化させて、マスト細胞が脱顆粒してアレルギーメディエーターを放出することを減らし、様々な非特異的刺激に対する感受性および気道過敏性を低減させ、気管支痙攣の発症を減らすことであり、主な薬物には、クロモグリク酸ナトリウム、ケトチフェンおよびネドクロミルなどがある。クロモグリク酸ナトリウムは、安全性に優れているが、治療効果が理想的ではなく、ケトチフェンは、内因性、外因性およびハイブリッドの発症を防ぐことができ、一定の中枢抑制作用および抗コリン作動性作用があり、ネドクロミルは、現在アレルギー炎症を治療するための強力な抗喘息薬であり、吸入剤として使用され、副作用がほとんどない。
【０００８】
２、気管支拡張薬
このような医薬品は、一般的に使用される抗喘息薬であり、重要な地位を占めている。このような医薬品は、β２受容体アゴニスト、テオフィリン類及びコリン作動性受容体遮断薬に分類できる。２．１  β２受容体アゴニスト：気管支拡張薬であり、β２受容体は、気道および肺組織のさまざまなエフェクター細胞に分布し、Ｇタンパク質を作動させてアデニル酸シクラーゼを活性化することにより気管支平滑筋細胞内のｃＡＭＰレベルを上昇させ、気管支平滑筋を弛緩させ、繊毛運動および粘液除去機能を高め、滲出を減少させ、気道の水腫を減少させ、炎症性細胞メディエーターを阻害し、これらは、作用の状況に応じて、４種類に分類できる。（１）効き目が早く、長時間作用できる、たとえばホルモテロール吸入剤など；（２）効き目が遅く、長時間作用できる、たとえばサルメテロール；（３）効き目が遅く、作用時間が短い、たとえば経口薬であるテルブタリン、サルブタモール、ホルモテロール；（４）効き目が早く、作用時間が短い、たとえば吸入型テルブタリンまたはサルブタモール。２．２  テオフィリン類：メチルキサンチン類の誘導体でありながら、一般的な気管支拡張薬として用されており、気道平滑筋の弛緩作用が段階的であり、徐放型テオフィリンを長期間服用している患者には短時間作用型テオフィリンが推奨されておらず、アミノフィリンと比較してドキソフィリンは、治療効果が顕著であり、副作用が低く、患者の忍容性が良好であり、テオフィリン類医薬品には一定の副作用があるため、血中濃度を監視して投与量を調整する必要がある。２．３  抗コリン薬（Ｍコリン受容体遮断薬）：呼吸道にはＭコリン受容体の３つのサブタイプがあり、現在一般的に使用されている抗コリン薬は、一般的には、非選択的Ｍコリン受容体遮断薬であり、Ｍ２受容体が遮断されているため、この受容体の抑制性フィードバック調節効果がなくなり、それにより気道の収縮反応が強化されるため、喘息の治療のための抗コリン薬としては、現在Ｍ３コリン作動性受容体遮断薬に取り組んでいるが、まだ突破されていない。現在使用されているのは、臭化イプラトロピウムや臭化チオトロピウムなどの吸入剤である。それらのうち、臭化イプラトロピウムは、Ｍ３受容体に対して良好な選択性を有し、臭化チオトロピウムは、長時間作用型抗コリン薬であり、それ以外、オキシトロピウムおよびチオトロピンは利用可能である。これらの薬物は、Ｍコリン受容体を遮断することでグアニル酸レダクターゼを阻害し、それにより細胞内のｃＧＭＰの濃度を低下させて気管支平滑筋を弛緩させるが、効き目が遅いため、二次治療薬として使用される場合が多い。
【０００９】
３．免疫療法剤およびその他
近年、免疫学の発展により、免疫メディエーターや抗体などの免疫過程が明確になったため、モノクローナル抗体、受容体遮断薬およびＤＮＡワクチンのような医薬品は、Ｔｈ１／Ｔｈ２のバランスを調節することにより、抗原特異的ＩｇＧで抗原特異的ＩｇＥの免疫損傷による免疫エフェクター細胞への直接阻害作用をブロックすることで機能し、主にＩｇＥモノクローナル抗体、ＴＮＦ−α、ＩＬ−５、ＩＬ−４およびＩＬ−１３などを含む。現在、それらのほとんどは、有効性と安全性に関するさらなる研究を行っている。さらに、マグネシウムイオンが天然のカルシウム拮抗剤であるため、硫酸マグネシウムは急性重症喘息の治療にも使用されている。
【００１０】
４．抗炎症性抗喘息薬
４．１  ロイコトリエン類：抗ロイコトリエン薬は、単独で喘息を制御するための長時間作用型薬として使用されてもよく、軽度の喘息の代替薬および中等度から重度の喘息の併用薬として使用されてもよいが、その効果がホルモン類の代表的な医薬品よりも低く、このような医薬品には、モンテルカスト、ザフィルルカストおよびジレウトンなどが含まれる。抗ロイコトリエン薬は、肺機能を改善し、喘息の症状を軽減し、ホルモン投与量を減らすことができ、このような医薬品には一定の副作用があるため、注意すべきである。４．２  グルココルチコイド類医薬品：慢性気道炎症は喘息の主な原因であり、コルチコステロイドは、現在気道炎症の制御に最も効果的な薬物である。その作用メカニズムは、多面的であり、その抗炎症作用には血管炎症性細胞および炎症メディエーターに対する作用が含まれる。（１）グルココルチコイドは、血管を直接に収縮させ、血管拡張および液体滲出を抑制できる。（２）炎症領域での白血球の蓄積を抑制し、気道粘膜での炎症性細胞の移動と凝集を抑制する。（３）骨髄単核細胞の放出を減少させて、好中球の放出を増加し、好中球およびマクロファージからの、組織損傷を引き起こし得る有毒な酸素ラジカルの放出を抑制する。（４）線維芽細胞の機能を阻害し、それによりコラーゲンおよびアミノ多糖の生成を阻害する。（５）炎症に関連するサイトカインおよびメディエーターの生成を阻害する。例えば、プロスタグランジン類（ＰＧ）、ロイコトリエン類（ＬＴｓ）、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＴＮＦα、ＧＭ−ｃｓｆなどの生成を阻害する。（６）血漿中の補体成分の濃度を下げる。（７）好塩基球によるヒスタミンの放出を阻害する。（８）ＩｇＧの生成を減らす。（９）ＮＯＡおよび接着分子の生成を阻害する。（１０）、β２受容体の反応性を高め、抗アレルギー作用を果たす。長期の臨床研究により、上記医薬品は、肺機能を改善し、気道反応性を低下させ、症状を軽減し、発作の頻度と程度を減らし、生活の質を改善できることが示されている。
【００１１】
これらのグルココルチコイド薬は、経口投与、吸入、静脈内投与など、さまざまな投与経路を介して投与可能であり、喘息発作の重症度および持続時間に応じて、異なる投与方法、異なる医薬品を使用できる。一般的には、吸入投与が好ましい。それは、吸入投与の場合の用量が少ないので、気道に直接作用して、局所的な抗炎症作用を発揮し、気道反応性を低下させ、発作の頻度と程度を低下させるためであり、プロピオン酸フルチカゾン、ブデソニドおよびシクレソニド（Ｃｉｃｌｅｓｏｎｉｄｅ）などが一般的に使用されている。吸入療法で制御しにくいほど重篤な患者の場合、全身投与が考えられ、ただし、全身性副作用は強く、全身性副作用に注意する必要があり、できるだけ全身投与を利用しない方が好ましい。注射投与よりも経口投与の方が好ましく、経口投与の場合は、プレドニゾン、プレドニゾロンおよびメチルプレドニゾロンは、コルチコステロイドへの作用が小さく、半減期が比較的短いため、１日おきに利用可能であり、重症例では、ヒドロコルチゾンを使用でき、これらの薬物は、コルチコステロイドの副作用を引き起こし、感染を拡大させて潰瘍の疾患を悪化させ、消化管出血、高血圧、血糖値の上昇、水−ナトリウム貯留、低カリウム血症などの不良反応を引き起こす可能性があるため、疾患が制御されると、徐々に用量を減らし、また、維持のために吸入剤を投与するようにすることができる。
【００１２】
グルココルチコイドは、肺や気管の炎症に広く作用しており、作用が非常に強力であるが、グルココルチコイド類医薬品は、長期間使用すると、糖尿病や骨粗鬆症などの副作用を引き起こす可能性があるため、臨床的応用では多くの制限があり、このような薬物の治療指数を高めるために、プロドラッグまたはソフトドラッグの原則を利用して薬物を設計する場合が多く、また、ステロイドの母核の周囲で構造を改変することもでき、たとえば、上記のシクレソニドは、肺に吸入された後、エステル化によって活性化され、活性代謝物を生成して局所的な抗炎症作用を発揮させ、体内での生物学的利用能が低いため（１％未満）、副作用をほとんど引き起こさない。
【００１３】
選択的グルココルチコイド受容体調整剤は、現在、開発中の医薬品の１種であり、その抗炎症作用と副作用が分離されており、それは、新薬研究の重要な方向となっている。
【００１４】
グルココルチコイドは、細胞膜を介して細胞質に入り、細胞質内の特異的な非活性化グルココルチコイド受容体に結合し、受容体の立体構造を変化させ、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ９０）は解離してホルモン（Ｇｃ）と受容体（ＧＲ）の複合体を形成して核に移動し、ＧＲは活性化されて、ＤＮＡ非結合型からＤＮＡ結合型に変化してから、標的遺伝子上の特異的ＤＮＡに結合する。この配列は、ＧＲの活性化に関与し、グルココルチコイド応答エレメント（ＧＲＥ、ｇｉｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ  ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ  ｅｌｅｍｅｎｔｓ）と呼ばれ、下流遺伝子に対して転写抑制または転写活性化の作用を果たし、さらに活性タンパク質またはサイトカインの合成を誘導または阻害する。ここで、転写抑制とは、リガンドにより活性化されたタンパク質間相互作用により核因子ＮＦ−Ｒｂや活性化タンパク質−１（ＡＰ−１）などの炎症誘発性転写因子の転写調節作用を阻害することを指し、それにより抗炎症効果を発生させる。また、ＧＣは、抗炎症性ペプチドリポコルチン（ｌｉｐｏｃｏｒｔｉｎ  ＬＣ）の生成を誘導でき、これは、ホスホリパーゼを阻害することにより、アラキドン酸の生成を阻害し、さらにプロスタグランジン（ＰＧｓ）ロイコトリエンおよび血小板活性化因子（ＰＡＦ）などの炎症性因子を阻害し、ＧＣは、ヒスタミンおよびセロトニンによって引き起こされる炎症反応を阻害し得る抗炎症タンパク質も誘導できる。一方、転写活性化とは、リガンド活性化ＧＲが二量体の形で標的遺伝子のプロモーター／エンハンサー領域内のグルココルチコイド応答要素に結合して遺伝子転写を誘導することを指し、現在、グルココルチコイド副作用の主なメカニズムであると考えられている。そのため、医薬分野の多くの科学者は、現在、転写活性化と転写抑制を分離する、いわゆる選択的グルココルチコイド調整剤を研究しており、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の治療薬として、すでに臨床に入っている化合物が報告されている。したがって、選択的グルココルチコイドに関する大量の文献は、世界中の科学者や医学研究者がこの新しい方法を非常に重視していることを示しており、多くの有名な製薬会社もこの分野に多くの人材とリソースを投資しており、ブレークスルーが期待できる。
【００１５】
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）は、持続的な気流閉塞を特徴とする予防および治療可能な一般的な疾患であり、気流閉塞は、通常、進行性であり、毒性粒子または気体に対する気道および肺の慢性炎症反応の増加に関連し、その合併症の発生は、患者の全体的な疾患の重症度に影響を与える。２０１７年、慢性閉塞性肺疾患のグローバルイニシアチブ（ＧＯＬＰガイドライン）では、呼吸器症状を気道閉塞と同等に重要にし、この疾患の予防および治療における症状の重要性を強調し、特に気道と肺組織の異常、閉塞がこの疾患で一定の作用を果たすことを強調した。
【００１６】
ＣＯＰＤは、世界的に一般的な疾患であり、患者の生活の質に深刻な影響を与え、罹患率および死亡率が高い。現在、世界の死因の第５位であり、２０２０年以降、世界の死因の第３位になると予想されており、ＣＯＰＤの発症率の増加は、タバコの使用と密接に関連している。
【００１７】
また、ＣＯＰＤは、患者や患者の家族、社会に大きな経済的負担を与え、中国の一部の地域に対する調査では、４０歳の人々のＣＯＰＤの有病率は８．２％と高く、世界的な調査では、４億から６億人がＣＯＰＤを患っている。
【００１８】
いくつかの論争にもかかわらず、ほとんどの学者は、現在、肺機能が診断について最良の指標であると考えており、１秒間の努力呼気量／努力呼気量の比の低下（ＦＦＶ０．２／ＦＶＣ）は、気流の閉塞を示す。
【００１９】
現在、喘息とＣＯＰＤは、症状と治療法には重複している部分があると考えられているため、特にＡＣＯ（Ａｓｔｈｍａ−ＣＯＰＤＯｖｅｒｌａｐ）と呼ばれており、これらの患者は、生活の質が低く、肺機能が急速に低下し、病状がしばしば悪化し、経済的負担が増大し、特に、２つの間の因果関係は非常に明確であり、治療には一部の薬物は両方ともに効果があるため、注目を集めている。
【００２０】
ジンセノサイドは、幅広い作用を有する伝統的な漢方薬であり、その化学構造が四環系トリテルペン類に属し、グルココルチコイドに類似している。その薬理学の重要な特徴は、アダプトゲンを有することであり、つまり、その薬理学的作用は、生体の機能的状態によって双方向作用を示すことがよくある。たとえば、下垂体−副腎皮質系では、副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）による副腎肥大を抑制できるとともに、コルチゾンによる副腎萎縮を防ぐことができ、さらに、ラットのコルチコステロイドに対するさまざまなジンセノシドの影響の研究から、ジンセノサイドＲｄの作用が最も強いことが確認され、且つ、ジンセノサイドは、副腎皮質を刺激し、コルチコステロイド分泌を増加させる役割を有することが確認され、さらに、アドレナリン作動性神経系または興奮性Ｈ１受容体によって引き起こされるのではないことが確認されている。したがって、異なるジンセノシドにはコルチコステロイド様作用が異なることも示されている。実際には、近年、一部のジンセノシドはコルチコステロイド受容体に対してアゴニスト作用を有することが示されており、ジンセノシドのいくつかの作用は選択的グルココルチコイド修飾剤に類似している。
【００２１】
ジンセノサイドｃｏｕｍｐｏｕｎｄ  Ｋ（ＣＫ）は、チョウセンニンジンに含まれるプロトパナキサジオール型サポニンがヒトの腸で代謝されると生じる主要代謝物であり、まれなジンセノサイドである。ジンセノサイドＣＫのユニークな生物学的活性は広く注目されており、それについての科学的研究が増えている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２２】
本発明は、パナキサジオールサポニンから、インビトロおよび動物モデル実験において高い抗炎症作用を示し、特に喘息およびＣＯＰＤの治療に適用できる一連の化合物を実現した。
【課題を解決するための手段】
【００２３】
具体的には、本発明の第１態様は、パナキサジオールサポニン誘導体またはその薬学的に許容される塩に関し、前記パナキサジオールサポニン誘導体は、下記一般式（Ｉ）の構造を有する：
2020528080.tif 000002
（式中、Ｒ１は、ヒドロキシ基または非グルコース的ピラノシル基または
2020528080.tif 000003
から選ばれ、
Ｒ２およびＲ３は、＝Ｏまたは＝Ｎ−ＯＲ８を示し、
またはＲ２は、水素であり、且つＲ３は、ヒドロキシ基であり、
Ｒ４およびＲ６は、結合されて結合を形成し、且つＲ５およびＲ７は、独立に水素、Ｃ１−６アルコキシ基、ヒドロキシ基、シアノ基、Ｃ１−６エステル基、グリコシル基から選ばれ、
またはＲ６およびＲ７は、一緒になって＝Ｏまたは＝Ｎ−ＯＨを示し、且つＲ５およびＲ４は、独立に水素、Ｃ１−６アルコキシ基、ヒドロキシ基、シアノ基から選ばれ、
またはＲ４、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、独立に水素、Ｃ１−６アルコキシ基、ヒドロキシ基、シアノ基、Ｃ１−６エステル基、グリコシル基から選ばれ、
Ｒ８は、水素またはＣ１−６アルキル基から選ばれる）。
【００２４】
本発明の別の実施形態によれば、Ｒ２およびＲ３は、一緒になって＝Ｎ−ＯＨを示す。
【００２５】
本発明の別の実施形態によれば、Ｒ４およびＲ６は、結合されて結合を形成する。
【００２６】
本発明の別の実施形態によれば、Ｒ６およびＲ７は、ともに＝Ｎ−ＯＲ８を示し、且つＲ８は、水素またはメチル基を示す。
【００２７】
本発明の別の実施形態によれば、Ｒ４およびＲ６は、結合されて結合を形成し、Ｒ５は、グリコシル基から選ばれ、且つＲ１は、ヒドロキシ基を示す。
【００２８】
なお、前記Ｃ１−６アルコキシ基は、ＲＯ−基を意味し、ここでＲは、Ｃ１−６アルキル基であり、具体的には、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基、ブトキシ基、イソブトキシ基、ｔ−ブトキシ基、ペントキシ基、イソペントキシ基、ｔ−ペントキシ基、ネオペンチルオキシ基、ヘキシルオキシ基、イソヘキシルオキシ基、ｔ−ヘキシルオキシ基、ネオヘキシルオキシ基などを含む。前記アルキル基は、低級アルキル基、ヒドロキシ基、シアノ基から選ばれる置換基によって置換されてもよい。
【００２９】
前記Ｃ１−６アルコキシ基は、好ましくは、非置換のメトキシ基またはエトキシ基である。
【００３０】
前記Ｃ１−６エステル基は、ＲａＣＯＯ−基を意味し、ここでＲａは、Ｃ１−５アルキル基であり、前記Ｃ１−６エステル基は、好ましくは、アセトキシ基である。
【００３１】
前記非グルコースのピラノシル基は、ラムノシル基、フコシル基、アラビノフラノシル基、キシロシル基、リボシル基、キノボシル基、ガラクトシル基、アミノグルコシル基、６−デオキシ−６−アミノグルコシル基、ラクトシル基およびセロビオシル基である。
【００３２】
前記グリコシル基は、グリコシド分子においてヘミアセタールヒドロキシル基を提供する糖部分であり、本発明によるグリコシル基は、好ましくは、デオキシグリコシル基またはペントシル基であり、具体例には、リブロシル基、ラムノシル基、フコシル基、アラビノフラノシル基、キシロシル基、リボシル基、キノボシル基、グルコシル基、ガラクトシル基、アミノグルコシル基、６−デオキシ−６−アミノグルコシル基、ラクトシル基およびセロビオシル基が含まれる。
【００３３】
本発明の別の実施形態によれば、本発明は、下記化合物に関する：
2020528080.tif 000004
。
【００３４】
本発明では、前記薬学的に許容される塩は、好ましくは、本発明の化合物と薬学的に許容される酸とを反応させて得る酸付加塩、または酸性基を有する化合物と塩基性化合物を反応させて生成する塩である。前記酸は、好ましくは、無機酸（たとえば、塩酸、硫酸、リン酸または臭化水素酸など）、および有機酸（たとえば、シュウ酸、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸または安息香酸など）から選ばれ、前記塩基性化合物は、好ましくは、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、炭酸ナトリウム、重炭酸カリウム、アンモニア水または重炭酸アンモニウムなどから選ばれる。上記薬学的に許容される塩は、分離しやすく、一般的な分離方法、たとえば溶媒抽出、希釈、再結晶、カラムクロマトグラフィーおよび分取薄層クロマトグラフィーなどにより精製できる。
【００３５】
本発明の別の態様は、一般式（Ｉ）化合物の合成方法に関し、具体的には、下記反応を含む。
【００３６】
１）３位および１２位で選択的にジアシル基が置換された２０（Ｓ）−パナキサジオールサポニンの調製
前記選択的アシル化処理とは、２０（Ｓ）−パナキサジオールサポニン（ＰＰＤ）を有機溶媒に溶解して、触媒を加えた後、３〜７当量のアシル化剤を加え、加熱して反応させることである。
前記アシル化剤は、酸無水物、活性エステルまたは塩化アシルから選ばれる１種であってもよく、好ましくは、無水酢酸、塩化ベンゾイルである。
前記触媒は、ジメチルアミノピリジン、トリエチルアミン、ピリジン、ジイソプロピルエチルアミンまたはＮ,Ｎ,Ｎ,Ｎ−テトラメチルエチレンジアミンから選ばれる１種またはこれらの組み合わせである。好ましくは、ジメチルアミノピリジン、トリエチルアミンである。
【００３７】
２）アシル基で置換された２０（Ｓ）−パナキサジオールサポニンの選択的な脱アシル化
３,１２−Ｏ−ジアシル置換２０（Ｓ）−パナキサジオールサポニンを有機塩基の存在下で選択的に脱アシル化して、目標化合物を得る。
前記有機塩基は、好ましくは、一価アルカリ金属化合物であり、より好ましくは、ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウムのうちの１種またはこれらの組み合わせである。
前記反応は、好ましくは、有機溶媒の存在下で行われ、前記有機溶媒は、ジクロロメタン、トリクロロメタン、四塩化炭素、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、アセトニトリル、ＴＨＦ、ＤＭＦ、ＤＭＳＯ、ピリジン、ベンゼン、トルエン、キシレン、エチルエーテルまたはこれらの混合物から選ばれる。
【００３８】
３）グリコシド化反応
置換された２０（Ｓ）−パナキサジオールサポニン、グリコシルドナー、ルイス酸触媒および分子篩を、不活性ガスの保護下、グリコシド処理液においてグリコシド化反応させ、反応が終了したとき、クエンチ剤を加えて反応をクエンチし、最後に、カラムクロマトグラフィーにより精製または再結晶で精製し、２０−Ｏ−グリコシド化反応精製物を得る。
前記二置換２０（Ｓ）−パナキサジオールサポニン、グリコシルドナーおよびルイス酸触媒のモル比は、１：（１．０〜５．０）：（０．０１〜０．５）であり、前記二置換２０（Ｓ）−パナキサジオールサポニンと分子篩の質量比は、１：０．１〜７：１である。
前記ルイス酸触媒は、Ｃ３−Ｃ９のハロアミド、Ｃ１−Ｃ６のフルオロヒドロカルビルスルホン酸、Ｃ２−Ｃ８のシリルフルオロヒドロカルビルスルホネート、Ｃ１−Ｃ６のフルオロヒドロカルビルスルホン酸銀、三フッ化ホウ素−エチルエーテル錯体または三フッ化ホウ素−エチルエーテル混合物のうちの１種またはこれらの組み合わせである。
前記分子篩は、３A−５A型アルミノケイ酸塩分子篩である。
前記グリコシド処理液とは、Ｃ１−Ｃ４のクロロアルカン、トルエンまたはエチルエーテルのうちの１種またはこれらの組み合わせである。
前記クエンチ剤は、トリメチルアミン、トリエチルアミンまたはチオ硫酸ナトリウムのうちの１種またはこれらの組み合わせである。
前記カラムクロマトグラフィーによる精製に使用されている溶出液は、石油エーテル、ジクロロメタン、酢酸エチル、トリクロロメタン、メタノール、ｎ−ヘキサンまたはシクロヘキサンのうちの１種またはこれらの混合物である。
前記再結晶精製に使用されている結晶化溶媒は、トリクロロメタン、Ｃ１−Ｃ４のアルキルアルコール、酢酸エチル、アセトン、ｎ−ヘキサン、石油エーテル、シクロヘキサン、ジクロロメタンまたは水のうちの１種またはこれらの組み合わせである。
前記有機溶媒は、ジクロロメタン、トリクロロメタン、ピリジン、ジクロロエタンのうちの１種またはこれらの混合物である。
【００３９】
４）２０−Ｏ−グリコシル類化合物の調製
グリコシド化反応精製物は、ステップ２）に類似した条件下で脱保護基反応または完全脱保護基反応を選択的に発生させることにより生成される。
前記極性溶媒は、テトラヒドロフラン、メタノール、エタノール、ジクロロメタンまたは水のうちの１種またはこれらの組み合わせである。
【００４０】
５）ヒドロキシ基の酸化
２０（Ｓ）−パナキサジオールサポニン誘導体の３位および１２位のヒドロキシ基が酸化剤の存在下で酸化反応し、対応するオキソ誘導体が得られる。
前記酸化剤は、二クロム酸ジピリジニウム、無水クロム酸ピリジン、二クロム酸カリウム、二クロム酸ナトリウム、Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎ酸化剤または三酸化クロムのうちの１種またはこれらの混合物である。
前記酸化反応は、好ましくは、有機溶媒の存在下で加熱して行われる。
【００４１】
６）二重結合の還元
２０（Ｓ）−パナキサジオールサポニン誘導体における二重結合が水素化触媒の作用下で、水素ガスにより還元され、対応する水素化生成物が得られる。
前記水素化触媒としては、Ｐｄ／Ｃまたはほかの公知の水素化触媒が使用できる。
反応は、好ましくは、極性溶媒の存在下で行われ、前記極性溶媒は、好ましくは、メタノール、エタノールである。
【００４２】
７）２０（Ｓ）−ヒドロキシダンマラン−３,２４−ジエン−１２−オン系化合物の合成
２０（Ｓ）−ヒドロキシダンマラン−３−ヒドロキシ−２４−エン−１２−オンと塩化アシルを、塩基性条件下で反応させ、次に、臭化リチウム、炭酸リチウムとＤＭＦにおいて加熱して反応させ、目標化合物を得る。
前記塩化アシルは、塩化ベンゼンスルホニル、塩化パラトルエンスルホニルから選ばれる。
【００４３】
８）１２−β−ヒドロキシ−２０（Ｓ）−ヒドロキシダンマラン−２４−エン−３−オン系化合物の調製
ＰＰＤと活性塩化アシルを、有機溶媒において、有機塩基の存在下、低温で反応させ、ＰＰＤの１２位にアシル基を導入する。このアシル置換ＰＰＤを、有機溶媒において、ＰＤＣおよび無水酢酸の存在下、室温で反応させ、化合物の３位のヒドロキシ基を酸化してカルボニル基にする。次に、ナトリウムアルコキシド／アルコールの存在下、１２位のアシル基を除去すると、目標化合物を得る。
【００４４】
９）２０（Ｓ）−ダンマラン−３,１２−ヒドロキシイミノ−２４−エン系化合物の合成
２０（Ｓ）−ダンマラン−３,１２−二オキソ−２４−エン系化合物とヒドロキシルアミン塩酸塩を、塩基性条件下で反応させて、対応するヒドロキシイミン系化合物を得る。
【００４５】
本発明の別の態様は、医薬品組成物に関し、この医薬品組成物は、上記本発明のパナキサジオールサポニン誘導体またはその薬学的に許容される塩および薬学的に許容される添加剤を含む。
【００４６】
治療目的に応じて、医薬品組成物は、さまざまなタイプの投与単位剤形、たとえば、錠剤、丸剤、粉剤、液体、懸濁液、エマルジョン、顆粒剤、カプセル、座剤および注射剤（溶液および懸濁液）等として製造してもよい。
【００４７】
錠剤形態の医薬品組成物を成形するために、本技術において幅広く使用されている公知の任意の賦形剤を使用してもよい。たとえば、乳糖、白砂糖、塩化ナトリウム、グルコース、尿素、澱粉、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロースおよびケイ酸などの担体；水、エタノール、プロパノール、普通のシロップ、グルコース溶液、澱粉溶液、ゼラチン溶液、カルボキシメチルセルロース、シェラック、メチルセルロース、リン酸カリウム、ポリビニルピロリドンなどのバインダー；乾燥澱粉、アルギン酸ナトリウム、寒天粉や昆布粉、重炭酸ナトリウム、炭酸カルシウム、ポリエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリル、澱粉や乳糖などの崩壊剤；白砂糖、トリステアリン酸グリセリル、ココナッツオイルや水素化油などの崩壊抑制剤；第四級アミン塩基やラウリル硫酸ナトリウムなどの吸着促進剤；グリセリン、澱粉などの湿潤剤；澱粉、乳糖、カオリン、ベントナイトやコロイド状ケイ酸などの吸着剤；および、純粋なタルク、ステアリン酸塩、ホウ酸粉末やポリエチレングリコールなどの潤滑剤である。必要に応じて、一般的なコーティング材料を用いて錠剤を糖衣錠剤、腸溶コーティング錠剤、コーティング錠剤（たとえば、ゼラチンコーティング錠剤）、二層錠剤および多層錠剤としてもよい。
【００４８】
丸剤形態の医薬品組成物を成形するために、本分野において幅広く使用されている公知の任意の賦形剤を使用してもよく、これはたとえば、乳糖、澱粉、ココナッツオイル、硬化植物油、カオリンやタルクなどの担体；アラビアゴム粉、トラガカントガム粉、ゼラチンやエタノールなどのバインダー；寒天および昆布粉などの崩壊剤である。
【００４９】
座剤形態の医薬品組成物を成形するために、本分野において幅広く使用されている公知の任意の添加剤を使用してもよく、たとえば、ポリエチレングリコール、ココナッツオイル、高級アルコール、高級アルコールのエステル、ゼラチンおよび半合成グリセライドなどである。
【００５０】
注射剤形態の医薬品組成物を調製するために、溶液および懸濁液を消毒し、最も好ましくは適量の塩化ナトリウム、グルコースまたはグリセリンなどを加えて、血液と等張圧を有する注射剤を調製する。注射剤を調製するときに、本分野における一般的に使用されている任意の媒体を使用してもよい。たとえば、水、エタノール、プロピレングリコール、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシル化イソステアリルアルコールやポリエチレンソルビタンの脂肪酸エステルなどが挙げられる。また、通常の溶解剤、緩衝剤や止痛剤などを添加してもよい。
【００５１】
本発明の式Ｉに示される化合物およびその薬学的に許容される塩は、医薬品組成物中の含有量に特に制限がなく、広い範囲で選択することができ、通常、１−７０質量％、好ましくは、１−３０質量％である。
【００５２】
本発明では、前記医薬品組成物の投与方法に特に制限がない。患者の年齢、性別、ほかの条件および症状に応じて、適切な剤形の製剤で投与することができる。たとえば、錠剤、丸剤、溶液、懸濁液、エマルジョン、顆粒剤およびカプセルの場合は、経口投与し、注射剤の場合は、単独で投与したり、注射用輸送液（たとえば、グルコース溶液およびアミノ酸溶液）と混合して静脈注射したりし、必要があれば、注射剤を単独で筋肉、皮内、皮下または腹腔内注射してもよく、座剤の場合は、直腸に投与する。
【００５３】
本発明の別の態様は、上記化合物の医薬用途に関し、具体的には、、この化合物は、インビトロおよび動物モデル実験において高い抗炎症作用を示し、このため、抗炎症薬の調製、特に喘息およびＣＯＰＤの治療に適用できる。治療指数よりも遥かに大きい用量でも、血液および血糖に対して顕著な影響を与えることがなく、それは、選択的グルココルチコイドよりも優れている。このため、抗炎症性医薬品、特に喘息およびＣＯＰＤを治療する技術として、将来性が期待できる。
【図面の簡単な説明】
【００５４】
【図１】化合物ＩＡ−１の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルである。
【図２】化合物ＩＤの１Ｈ  ＮＭＲスペクトルである。
【発明を実施するための形態】
【００５５】
実施例１  ３−Ｏ−アセチル−２０（Ｓ）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシルダンマラン−２４−エン−１２−オン（ＩＡ）
１．１  ３,１２−ジ−Ｏ−アセチル−２０（Ｓ）−パナキサジオールサポニン（Ｉ−１ａ）の合成
2020528080.tif 000005
２０（Ｓ）−パナキサジオールサポニン（１２０．０ｇ、０．２６ｍｏｌ）を脱水ピリジン（７５０．０ｍＬ）に溶解して、触媒量のＤＭＡＰを加え、氷浴条件下、Ａｃ２Ｏ（９９．１ｍＬ、１．０４ｍｏｌ）を滴下し、自然に室温に戻し、６．０時間反応させた。反応液を減圧濃縮して、酢酸エチル（２．０Ｌ）で希釈し、順次に希塩酸、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄して、有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、ろ過して、減圧濃縮し、微かに黄色い固体を得て、再結晶（酢酸エチル／石油エーテル）して白色結晶Ｉ−１ａ （１１０．３ｇ、収率７７．８％）を得た。1H NMR(CDCl3) δ 5.15(t, J = 6.6 Hz, 1H, H-24), 4.72(td, J = 10.8, 4.8 Hz, 1H, H-12), 4.48(dd, J = 12.0, 4.2 Hz, 1H, H-3), 2.04(s, 3H, H-COCH3), 2.03(s, 3H, H-COCH3), 1.70(s, 3H), 1.63(s, 3H), 1.12(s, 3H), 1.00(s, 3H), 0.94(s, 3H), 0.87(s, 3H), 0.85(s, 3H), 0.84(s, 3H)。
１．２  ３−β−Ｏ−アセチル−２０（Ｓ）−パナキサジオールサポニン（Ｉ−２ａ）の合成
2020528080.tif 000006
化合物Ｉ−１ａ（１１０．０ｇ、０．２０ｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２  １００．０ｍＬに溶解して、メタノール４００．０ｍＬおよびＭｅＯＮａ（１．１ｇ、０．０２ｍｏｌ）を加え、室温で３．０時間反応させた。適量のカチオン樹脂を加えてｐＨを７に調整し、ろ過して樹脂を除去して濃縮させ、薄い黄色の固体Ｉ−２ａ （９１．７ｇ、９０．３％）を得た。1H NMR(CDCl3) δ 5.15(t, J = 6.6 Hz, 1H, H-24), 4.47(dd, J = 11.0, 5.5 Hz, 1H, H-3), 3.60(td, J = 10.5, 5.0 Hz, 1H, H-12), 2.04(s, 3H, H-COCH3), 1.69(s, 3H), 1.63(s, 3H), 1.19(s, 3H), 0.98(s, 3H), 0.90(s, 3H), 0.87(s, 3H), 0.85(s, 6H)。
１．３  ３−β−Ｏ−アセチル−２０（Ｓ）−ヒドロキシダンマラン−２４−エン−１２−オン（Ｉ−３ａ）の合成
2020528080.tif 000007
化合物Ｉ−２ａ（９１．０ｇ、０．１８ｍｏｌ）を脱水ＣＨ２Ｃｌ２  ５００．０ｍＬに溶解して、ＰＤＣ（１０１．６ｇ、０．２７ｍｏｌ）および無水酢酸（３４．０ｍＬ、０．３６ｍｏｌ）を加え、室温で約５．０時間反応させ、吸引濾過して不溶物を除去し、ろ液を濃縮させて、カラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ｎ−ヘキサン＝１／１０）により分離して白色結晶Ｉ−３ａ（６３．４ｇ、７０．０％）を得た。1H NMR(CDCl3) δ 5.10 (s, 1H, H-24), 4.48 (dd, J= 11.6, 4.4 Hz, 1H, H-3), 2.85 (d, J = 10.2 Hz, 1H, H-13), 2.44-2.37 (m, 1H, H-17), 2.28 (d, J = 14.3 Hz, 1H), 2.23 (d, J = 14.0 Hz, 1H), 2.05 (s, 3H), 1.68 (s, 3H), 1.62 (s, 3H), 1.17 (s, 3H), 1.12 (s, 3H), 0.95 (s, 3H), 0.87 (s, 6H), 0.80 (s, 3H)。
１．４  ３−β−Ｏ−アセチル−２０（Ｓ）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシルダンマラン−２４−エン−１２−オン（ＩＡ）の合成
2020528080.tif 000008
Ｉ−３ａ（２５．０ｇ、４９．９２ｍｍｏｌ）および２,３,４,６−テトラ−Ｏ−アセチルグルコーストリクロロイミデート（３６．９ｇ、７４．８８ｍｍｏｌ）を脱水ＣＨ２Ｃｌ２に溶解して、適量の４A分子篩を加え、アルゴンガス保護下、室温で３０分撹拌後、反応系の温度を−４０℃に下げて、ＴＭＳＯＴｆ（９０１．６９μＬ、４．９９ｍｍｏｌ）を滴下し、−４０℃で反応させた。ＴＬＣ検出で調べて反応が終了した後、Ｅｔ３Ｎを加えて反応を停止し、室温に戻し、吸引濾過して分子篩を除去し、反応液を濃縮させて固体とした。四分の一の濃縮物をジクロロメタンとメタノールの混合溶媒（４００．０ｍＬ、ｖ：ｖ＝１：１）に溶解して、ナトリウムメトキシドをｐＨ＝９−１０となるまで加え、室温で１．０時間反応させた後、ＴＬＣ検出で調べて完全に反応したら、カチオン樹脂を加えて反応液を中和し、ろ過して濃縮させ、カラムクロマトグラフィーをした。白色固体ＩＡ（６．７ｇ、二段階収率８１．０％）を得た。１H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 5.09 (t, J = 6.5 Hz, 1H, H-24), 4.47-4.43 (m, 1H), 4.44 (d, J = 7.6 Hz, 1H, H-1’), 3.80 (dd, J = 11.7, 1.8 Hz, 1H), 3.64 (dd, J = 11.8, 5.3 Hz, 1H), 3.36-3.32 (m, 2H), 3.27 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 3.22-3.18 (m, 1H), 3.10 (t, J = 8.2 Hz, 1H), 2.51 (dd, J = 9.7, 4.4 Hz, 1H), 2.44 (t, J= 13.2 Hz, 1H), 2.11 (dd, J = 12.8, 3.3 Hz, 1H), 2.02 (s, 3H), 1.66 (s, 3H), 1.62 (s, 3H), 1.27 (s, 3H), 1.11 (s, 3H), 1.02 (s, 3H), 0.91 (s, 3H), 0.88 (s, 3H), 0.76 (s, 3H); 13C NMR (150 MHz, CD3OD) δ 215.2, 172.8, 132.0, 126.0, 98.3, 82.5, 82.1, 78.8, 77.4, 75.7, 71.8, 62.9, 57.5, 57.2, 57.1, 56.1, 43.0, 41.9, 40.7, 40.7, 39.4, 39.0, 38.8, 35.5, 33.0, 28.5, 25.9, 25.0, 24.7, 24.6, 22.9, 21.2, 19.4, 17.8, 17.2, 16.9, 16.7, 16.3。MALDI-HRMS calcd for C38H62NaO9 [M+Na]+ 685.4286, found 685.4293。
【００５６】
実施例２  ３−β−Ｏ−アセチル−２０（Ｓ）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸メチルエステルダンマラン−２４−エン−１２−オン（ＩＡ−１）の調製
2020528080.tif 000009
Ｉ−３ａ（４．４ｇ、８．７９ｍｍｏｌ）および２,３,４−トリス−Ｏ−アセチルグルクロン酸メチルエステルトリクロロイミデート（５．０ｇ、１０．４４ｍｍｏｌ）を脱水ＣＨ２Ｃｌ２に溶解して、適量の４A分子篩を加え、アルゴンガス保護下、室温で３０分撹拌後、反応系の温度を−４０℃に下げて、ＴＭＳＯＴｆ（１５７．２１μＬ、０．８７ｍｍｏｌ）を滴下し、−４０℃で反応させた。ＴＬＣ検出で調べて反応が終了した後、Ｅｔ３Ｎを加えて反応を停止し、室温に戻し、吸引濾過して分子篩を除去し、反応液を濃縮させて固体とし、濃縮物をジクロロメタンとメタノールの混合溶媒（１５０．０ｍＬ、ｖ：ｖ＝１：１）に溶解して、ナトリウムメトキシドをｐＨ＝９−１０となるまで加え、室温で１．０時間反応させた後、ＴＬＣ検出で調べて完全に反応したら、カチオン樹脂を加えて反応液を中和し、ろ過して濃縮させ、カラムクロマトグラフィーをした。白色固体ＩＡ−１（３．３ｇ、二段階収率５４．１％）を得た。その１ＨＮＭＲ（４００ ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−Ｄ６）は、図１に示される。13CNMR(150MHz, CD3OD) δ 215.1, 172.8, 171.3, 132.0, 125.9, 98.7, 83.0, 82.1, 77.9, 76.4, 75.2, 73.1, 57.4, 57.2, 57.1, 56.1, 52.8, 43.2, 41.9, 40.7, 40.4, 39.4, 38.9, 38.8, 35.4, 33.0, 28.4, 25.9, 25.0, 24.5, 24.4, 22.7, 21.1, 19.4, 17.8, 17.1, 16.9, 16.7, 16.3。
【００５７】
実施例３  ３β−ヒドロキシ−２０（Ｓ）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシルダンマラン−２４−エン−１２−オン（ＩＢ）
2020528080.tif 000010
実施例のステップ１．４の四分の二の濃縮物をジクロロメタンとメタノールの混合溶媒（４００．０ｍＬ、ｖ：ｖ＝１：１）に溶解して、ナトリウムメトキシドをｐＨ＝９−１０となるまで加え、５０℃で６．０時間反応させた後、ＴＬＣ検出で調べて完全に反応したら、カチオン樹脂を加えて反応液を中和し、ろ過して濃縮させ、カラムクロマトグラフィーをした。白色固体ＩＢ（１１．６ｇ、二段階収率７４．８％）を得た。1H NMR (400 MHz, CD3OD)δ5.09 (t, J = 6.2 Hz, 1H), 4.44 (d, J = 7.6 Hz, 1H, H-1’), 3.80 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 3.64 (dd, J = 11.7, 5.3 Hz, 1H), 3.34-3.31 (m, 2H), 3.28 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 3.21-3.18 (m, 1H), 3.16-3.08 (m, 2H), 2.52-2.40 (m, 2H), 1.67 (s, 3H), 1.62 (s, 4H), 1.27 (s, 3H), 1.11 (s, 3H), 0.98 (s, 3H), 0.97 (s, 3H), 0.79 (s, 4H), 0.74 (s, 3H)。
【００５８】
実施例４  ３β−ヒドロキシ−２０（Ｓ）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシルダンマラン−１２−オン（ＩＢ−１）
2020528080.tif 000011
ＩＢ（７．５ｇ、１２．０８ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（２００．０ｍＬ）に溶解して、Ｐｄ／Ｃ（７５０．０ｍｇ）を加え、Ｈ２置換後、室温で２時間反応させて、ＴＬＣ検出で調べて反応が終了した後、珪藻土でＰｄ／Ｃをろ過除去し、反応液を濃縮させて、カラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ＝１０／１）により分離し、白色固体ＩＢ−１（４．６ｇ、６１．３％）を得た。1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 4.43 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 3.80 (dd, J = 11.6, 1.5 Hz, 1H), 3.64 (dd, J = 11.6, 5.4 Hz, 1H), 3.36-3.31 (m, 2H), 3.27 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 3.21-3.17 (m, 1H), 3.15 (t, J = 6.4, 4.8 Hz, 1H), 3.09 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 2.50-2.40 (m, 2H), 2.11 (dd, J = 12.7, 3.5 Hz, 1H), 1.9-1.91 (m, 1H), 1.84-1.78 (m, 1H), 1.27 (s, 3H), 1.08 (s, 3H), 0.98 (s, 3H), 0.97 (s, 3H), 0.89 (s, 3H), 0.88 (s, 3H), 0.79 (s, 3H), 0.74 (s, 3H); 13C NMR (150 MHz, CD3OD) δ 215.6, 98.3, 82.6, 79.3, 78.8, 77.4, 75.6, 71.8, 62.9, 57.5, 57.2, 57.1, 56.3, 42.9, 41.9, 41.0, 40.7, 40.0, 40.0, 38.8, 35.6, 33.0, 29.0, 28.6, 27.9, 24.9, 23.8, 23.0, 22.9, 19.5, 17.1, 16.7, 16.3, 16.0。MALDI-HRMS calcd for C36H62NaO8 [M+Na]+ 645.4337, found 645.4354。
【００５９】
実施例５  ３β,２５−ジヒドロキシ−２０（Ｓ）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシルダンマラン−１２−オン（ＩＢ−２）
５．１  ２４−ブロモ−２５−ヒドロキシ−３β−Ｏ−アセチル−２０（Ｓ）−Ｏ−（２,３,４,６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシル）ダンマラン−１２−オン（Ｉ−３Ａ−２）の合成
2020528080.tif 000012
Ｉ−３Ａ（７．５ｇ、９．０２ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン１５０ｍＬに溶解して、水１５ｍＬを加え、氷浴下、Ｎ−ブロモスクシンイミド（２．４ｇ、１３．５３ｍｍｏｌ）をバッチ式で加え、氷浴で１時間反応し続けた。ＴＬＣ検出で調べて反応が終了した後、酢酸エチル２００ｍＬで反応液を希釈し、順次に５％チオ硫酸ナトリウム溶液、飽和食塩水で洗浄し、有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過して濃縮させ、カラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／石油エーテル＝１／２）により分離し、白色固体Ｉ−３Ａ−２（７．６ｇ、９０．５％）を得た。1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 5.20(t, J = 9.4 Hz, 1H, H-3’), 5.01(t, J = 9.8 Hz, 1H, H-4’), 4.95(t-like, J = 9.0, 8.2 Hz, 1H, H-2’), 4.68(d, J = 7.8 Hz, 1H, H-1’), 4.46(dd, J = 11.4, 4.7 Hz, 1H, H-3), 4.12-4.18(m, 2H, H-6’), 3.89(d, J = 9.8 Hz, 1H, H-24), 3.70-3.68(m, 1H, H-5’), 2.97(d, J = 9.8 Hz, 1H, H-13), 2.38-2.44(m, 1H, H-17), 2.16(d, J= 8.6 Hz, 2H, H-11), 2.10(s, 3H, H-Ac), 2.04(s, 3H, H-Ac), 2.02(s, 3H, H-Ac), 1.98(s, 6H, H-Ac*2), 1.35(s, 3H, H-26, H-27), 1.19(s, 3H, H-20), 1.04(s, 3H, H-Me), 0.95(s, 3H, H-Me), 0.87(s, 3H, H-Me), 0.85(s, 3H, H-Me), 0.72(s, 3H, H-Me);13C NMR(125 MHz, CDCl3) δ 211.3 (C-12), 170.9, 170.7, 170.2, 169.5, 169.1, 94.7(C-1’), 81.8, 80.3, 73.1, 72.6, 72.1, 71.8, 71.7, 68.6, 62.4, 56.2, 55.8, 55.7, 54.3, 41.4, 40.5, 39.7, 38.6, 38.2, 37.8, 37.5, 34.2, 31.6, 29.1, 27.9, 26.5, 26.2, 23.7, 23.4, 22.8, 21.3, 20.8, 20.6, 18.2, 16.7, 16.4, 16.2, 15.6。MALDI-HRMS calcd for C46H71O14BrNa [M+Na]+ 949.3919, found 949.3919。
５．２  ２５−ヒドロキシ−３β−Ｏ−アセチル−２０（Ｓ）−Ｏ−（２,３,４,６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシル）ダンマラン−１２−オン（Ｉ−３Ａ−３）の合成
2020528080.tif 000013
Ｉ−３Ａ−２（７．２ｇ、７．７６ｍｍｏｌ）をＥｔＯＡｃ  １５０ｍＬに溶解して、ＤＩＥＡ  ３ｍＬ、Ｐｄ／Ｃ  ７２０．０ｍｇを加え、Ｈ２置換後、室温で２時間反応させて、ＴＬＣ検出で調べて反応が終了した後、珪藻土でＰｄ／Ｃをろ過除去し、反応液を濃縮させて、カラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／石油エーテル＝１／１）により分離し、白色固体Ｉ−３Ａ−３（６．０ｇ、９０．９％）を得た。1HNMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.17 (t, J = 9.4 Hz, 1 H, H-3’), 5.00 (t-like, J = 9.9, 9.3 Hz, 1 H, H-4’), 4.93 (t, J = 8.8 Hz, 1 H, H-2’),4.61 (d, J = 7.7 Hz, 1 H, H-1’), 4.46 (dd,J = 11.5, 4.4 Hz, 1 H, H-3), 4.16 (dd, J = 12.1, 6.1 Hz, 1 H, H-6’-1), 4.09 (dd, J = 12.1, 2.0 Hz, 1 H, H-6’-2), 3.64 (ddd, J = 9.9, 6.1, 2.2 Hz, 1 H, H-5’), 2.98 (d, J = 9.9 Hz, 1 H, H-13), 2.45 (td, J = 10.4, 5.5 Hz, 1 H, H-17), 2.07 (s, 3 H, H-Ac), 2.03 (s, 3 H, H-Ac), 2.01 (s, 3 H, H-Ac), 1.98 (s, 6 H, H-Ac, H-Ac), 1.21 (s, 6 H, H-26, H-27), 1.19 (s, 3 H, H-21), 1.02 (s, 3 H, H-Me), 0.95 (s, 3 H, H-Me), 0.87 (s, 3 H, H-Me) , 0.85 (s, 3 H, H-Me), 0.72 (s, 3 H, H-Me); 13CNMR (125 MHz, CDCl3) δ 211.6 (C-12), 170.8 (C-Ac), 170.6 (C-Ac), 170.2 (C-Ac), 169.5 (C-Ac), 169.0 (C-Ac), 94.6 (C-1’), 82.3, 80.4, 73.2, 71.9, 71.5, 70.7, 68.8, 62.6, 56.1, 55.8, 55.6, 54.5, 44.7, 41.2, 40.5, 39.7, 39.6, 38.3, 37.9, 37.5, 34.3, 29.4, 29.3, 27.9, 23.5, 23.5, 23.2, 21.2, 20.8, 20.6, 19.6, 18,2, 16.8, 16.4, 16.2, 15.6。MALDI-HRMS calcd for C46H72O14Na [M+Na]+ 871.4820, found 871.4824。
５．３  ３β,２５−ジヒドロキシ−２０（Ｓ）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシルダンマラン−１２−オン（ＩＢ−２）の合成
2020528080.tif 000014
Ｉ−３Ａ−３（６．０ｇ、７．０７ｍｍｏｌ）を脱水ＣＨ２Ｃｌ２（６０ｍＬ）に溶解して、ＣＨ３ＯＨ  ６０ｍＬを加え、ＭｅＯＮａを加えてｐＨを１０に調整し、４８℃で約６時間反応させた。適量のカチオン樹脂を用いてｐＨを中性に調整し、樹脂をろ過除去して、濃縮させ、カラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３／ＣＨ３ＯＨ＝１５／１）により分離し、白色固体ＩＢ−２（３．９ｇ、８６．６％）を得た。1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 4.44 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 3.81 (dd, J = 11.8, 1.8 Hz, 1H), 3.63 (dd, J = 11.8, 5.5 Hz, 1H), 3.34-3.31 (m, 2H), 3.27 (t, J= 9.0 Hz, 1H), 3.23 - 3.18 (m, 1H), 3.15 (t, J = 6.0, 4.8 Hz, 1H), 3.09 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 2.50 (dd, J = 9.5, 4.3 Hz, 1H), 2.43 (t, J = 13.2 Hz, 1H), 2.11 (dd, J = 12.7, 3.3 Hz, 1H), 1.95-1.90 (m, 1H), 1.27 (s, 3H), 1.17 (s, 6H), 1.11 (s, 3H), 0.98 (s, 3H), 0.97 (s, 3H), 0.79 (s, 3H), 0.75 (s, 3H); 13C NMR (150 MHz, CD3OD) δ 215.6, 98.3, 82.7, 79.3, 78.7, 77.5, 75.6, 71.8, 71.5, 62.9, 57.5, 57.2, 57.2, 56.3, 45.5, 43.3, 41.9, 41.3, 40.7, 40.0, 39.9, 38.8, 35.6, 33.0, 29.4, 29.2, 28.6, 27.9, 25.0, 22.9, 20.6, 19.5, 17.1, 16.7, 16.3, 16.0。MALDI-HRMS calcd for C36H62O9Na [M+Na]+661.4292, found 661.4304。
以上と同じ方法によって、さまざまなグリコシル基が連結されたパナキサジオールサポニン系誘導体を調製した。
【００６０】
実施例６  ３β−ヒドロキシ−２０（Ｓ）−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシルダンマラン−２４−エン−１２−オン（ＩＣ）
白色固体５．２ｇ、二段階収率７０．３％。1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 5.08 (t, J = 6.8 Hz, 1H, H-24), 4.39 (d, J= 6.2 Hz, 1H, H-1’), 3.82 (s, 1H), 3.71 (dd, J= 10.6, 6.6 Hz, 1H), 3.64 (dd, J = 10.8, 6.4 Hz, 1H), 3.46-3.42 (m, 3H), 3.35 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 3.14 (dd, J = 10.7, 4.5 Hz, 1H), 2.52-2.40(m, 2H), 2.11 (dd, J = 12.7, 2.3 Hz, 1H), 1.66 (s, 4H), 1.62 (s, 3H), 1.27 (s, 3H), 1.11 (s, 3H), 0.98 (s, 3H), 0.97 (s, 3H), 0.80 (s, 3H), 0.74 (s, 3H); 13C NMR (150 MHz, CD3OD) δ 215.6, 131.9, 126.0, 98.8, 82.4, 79.3, 76.1, 75.6, 73.1, 70.1, 62.1, 57.5, 57.2, 57.1, 56.4, 43.0, 41.9, 40.7, 40.6, 40.0, 39.9, 38.8, 35.6, 33.0, 28.6, 27.9, 25.9, 24.9, 24.7, 22.9, 19.5, 17.8, 17.1, 16.7, 16.3, 16.0。
MALDI-HRMS calcd for C36H60NaO8 [M+Na]+643.4180, found 643.4190。
【００６１】
実施例７  ３β−ヒドロキシ−２０（Ｓ）−Ｏ−α−Ｄ−マンノピラノシルダンマラン−２４−エン−１２−オン（ＩＤ）
白色固体４．９ｇ、二段階収率６６．２％。その１Ｈ ＮＭＲ（（４００ ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−Ｄ６））は、図２に示される。 13C NMR (150 MHz, CD3OD) δ 214.6, 132.5, 125.4, 95.4, 81.9, 79.3, 75.0, 73.7, 72.9, 68.7, 63.0, 57.4, 57.4, 57.1, 56.2, 42.4, 41.8, 40.7, 40.0, 39.9, 39.4, 38.8, 35.4, 33.2, 28.6, 27.9, 25.9, 24.9, 24.6, 23.8, 19.5, 17.7, 17.0, 16.7, 16.6, 16.0。MALDI-HRMS calcd for C36H60NaO8 [M+Na]+643.4180, found 643.4185。
【００６２】
実施例８  ３β−ヒドロキシ−２０（Ｓ）−Ｏ−β−Ｄ−キシロピラノシルダンマラン−２４−エン−１２−オン（ＩＥ）
白色固体４．５ｇ、二段階収率６３．４％。1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 5.08 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 4.39 (d, J= 7.3 Hz, 1H, H-1’), 3.77 (dd, J = 11.2, 5.2 Hz, 1H), 3.49-3.42 (m, 1H), 3.33 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 3.27 (t, J= 8.8 Hz, 1H), 3.16-3.11 (m, 2H), 3.07 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 2.49 (dd, J= 10.0, 4.4 Hz, 1H), 2.43 (t, J = 13.2 Hz, 1H) 2.11 (dd, J = 12.8, 2.4 Hz, 1H), 1.67 (s, 4H), 1.61 (s, 5H), 1.26 (s, 3H), 1.09 (s, 3H), 0.97 (s, 6H), 0.79 (s, 3H), 0.74 (s, 3H); 13C NMR (150 MHz, CD3OD) δ 215.5, 132.1, 125.8, 98.9, 82.4, 79.3, 78.4, 75.5, 71.3, 66.5, 57.5, 57.2, 57.1, 56.3, 42.9, 41.9, 40.7, 40.7, 40.0, 39.9, 38.8, 35.6, 33.0, 28.6, 27.9, 25.9, 24.9, 24.7, 23.0, 19.5, 17.7, 17.1, 16.7, 16.3, 16.0。MALDI-HRMS calcd for C35H58NaO7 [M+Na]+613.4075, found 613.4078。
【００６３】
実施例９  ３β−ヒドロキシ−２０（Ｓ）−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシルダンマラン−２４−エン−１２−オン（ＩＦ）
白色固体４．８ｇ、二段階収率６６．７％。1H NMR (400 MHz, (CD3)2SO) δ 5.05 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 4.78 (s, 1H), 4.74 (s, 1H), 4.60 (s, 1H), 4.50 (s, 1H), 4.35 (s, 1H), 3.55-3.48 (m, 2H), 3.44 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.15 (t, J = 9.2 Hz, 1H), 2.98 (m, 1H), 2.94 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 2.36 (t, J = 12.8 Hz, 2H), 1.64 (s, 4H), 1.57 (s, 3H), 1.14 (s, 3H), 1.07 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.96 (s, 3H), 0.89 (s, 3H), 0.88 (s, 3H), 0.70 (s, 3H), 0.66 (s, 3H); 13C NMR (150 MHz, (CD3)2SO) δ 201.4, 130.5, 124.6, 94.0, 79.9, 76.5, 72.2, 72.0, 71.0, 68.6, 55.3, 55.3, 55.1, 53.9, 40.7, 38.9, 38.6, 38.1, 37.1, 33.9, 31.7, 28.1, 27., 25.5, 23.7, 23.1, 21.0, 18.1, 17.9, 17.45, 16.4, 15.7, 15.7, 15.3。MALDI-HRMS calcd for C37H62NaO6 [M+Na]+625.4439, found 625.4444。
【００６４】
実施例１０  ３−β−メトキシ−２０（Ｓ）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシルダンマラン−２４−エン−１２−オン（ＩＧ）
１０．１  ３−β−ヒドロキシ−２０（Ｓ）−ヒドロキシダンマラン−２４−エン−１２−オン（Ｉ−４）の合成
2020528080.tif 000015
化合物Ｉ−３ａ（１６．０ｇ、３１．９６ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２  ８０．０ｍＬに溶解して、メタノール８０．０ｍＬを加え、ナトリウムメトキシドをｐＨ＝９−１０トなるまで加え、５０℃で６．０時間反応させた後、ＴＬＣ検出で調べて完全に反応したら、カチオン樹脂を加えて反応液を中和し、ろ過して濃縮させ、カラムクロマトグラフィーにより分離し、薄い黄色の固体Ｉ−４（１４．１ｇ、９６．２％）を得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.10 (s, 1H), 3.20 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 2.85 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 2.40 (q, J = 9.0 Hz, 1H), 2.28 (d, J = 13.6 Hz, 1H ), 2.21 (t, J = 14.4 Hz, 1), 1.68 (s, 3H), 1.62 (s, 3H), 1.17 (s, 3H), 1.11 (s, 3H), 0.99 (s, 3H), 0.93 (s, 3H), 0.80 (s, 6H)。
１０．２  ３−β−メトキシ−２０（Ｓ）−ヒドロキシダンマラン−２４−エン−１２−オン（Ｉ−５ａ）の合成
2020528080.tif 000016
Ｉ−４（７．３ｇ、１５．９１ｍｍｏｌ）を脱水ＤＭＦ（２００．０ｍＬ）に溶解して、ヨードメタン（１．９９ｍＬ、３１．９６ｍｍｏｌ）を加え、氷浴下、６０％水素化ナトリウム（１．９ｇ、４７．９４ｍｍｏｌ）をバッチ式で加え、室温で反応させた。反応終了後、水を緩やかに滴下して反応をクエンチさせ、酢酸エチルで希釈して、順次１ｍｏｌ／Ｌ塩酸、飽和重炭酸ナトリウム、飽和塩化ナトリウムで洗浄し、有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水して、減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＥＡ／ＰＥ、１：６）により分離し、淡黄色液体Ｉ−５ａ（５．９ｇ、７８．４％）を得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.61 (s, 1H), 5.06 (t, J = 7.1 Hz, 1H), 3.52 (s, 3H), 3.23 (dd, J = 11.0, 4.4 Hz, 1H), 2.94-2.86 (m, 1H), 1.66 (s, 3H), 1.60 (s, 3H), 1.17 (s, 3H), 1.00 (s, 3H), 0.99 (s, 3H), 0.97 (s, 3H), 0.84 (s, 3H), 0.80 (s, 3H); 13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ 214.3, 142.7, 125.7, 79.0, 74.5, 55.8, 55.2, 54.0, 52.4, 48.9, 39.0, 38.9, 38.5, 37.3, 36.7, 34.6, 31.6, 28.3, 28.2, 27.3, 26.8, 25.9, 25.2, 22.7, 22.2, 18.3, 17.9, 16.9, 15.8, 15.7。
１０．３  ３−β−メトキシ−２０（Ｓ）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシルダンマラン−２４−エン−１２−オン（ＩＧ）
2020528080.tif 000017
Ｉ−５ａ（５．８ｇ、１２．２７ｍｍｏｌ）および２,３,４,６−テトラ−Ｏ−アセチルグルコーストリクロロイミデート（９．１ｇ、１８．４１ｍｍｏｌ）を脱水ＣＨ２Ｃｌ２に溶解して、適量の４A分子篩を加え、アルゴンガス保護下、室温で３０分撹拌後、反応系の温度を−４０℃に下げて、ＴＭＳＯＴｆ（２２２．３μＬ、１．２３ｍｍｏｌ）を滴下し、−４０℃で反応させた。ＴＬＣ検出で調べて反応が終了した後、Ｅｔ３Ｎを加えて反応を停止し、室温に戻し、吸引濾過して分子篩を除去し、反応液を濃縮させて固体とし、濃縮物をジクロロメタンとメタノールの混合溶媒（１５０．０ｍＬ、ｖ：  ｖ＝１：１）に溶解して、ナトリウムメトキシドをｐＨ＝９−１０となるまで加え、室温で１．０時間反応させた後、ＴＬＣ検出で調べて完全に反応したら、カチオン樹脂を加えて反応液を中和し、ろ過して濃縮させ、カラムクロマトグラフィーをした。白色固体ＩＧ（４．０ｇ、二段階収率５２．０％）を得た。1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 5.09 (t, J = 6.7 Hz, 1H), 4.48 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 3.81 (d, J = 11.3 Hz, 1H), 3.64 (dd, J = 11.8, 7.6 Hz, 1H), 3.48 (s, 3H), 3.38 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 3.23-3.14 (m, 4H), 3.09-3.07 (m, 1H), 2.18-1.95 (m, 5H), 1.66 (s, 3H), 1.62 (s, 3H), 1.33 (s, 3H), 1.03 (s, 3H), 1.00 (s, 3H), 0.97 (s, 3H), 0.88 (s, 3H), 0.79 (s, 3H)。
【００６５】
実施例１１  ２０（Ｓ）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシルダンマラン−３,２４−ジエン−１２−オン（ＩＨ、即ちＲＳＭ−１７）
１１．１  ３−β−Ｏ−パラトルエンスルホニル−２０（Ｓ）−ヒドロキシダンマラン−２４−エン−１２−オン（Ｉ−６）の合成
2020528080.tif 000018
Ｉ−４（３．３ｇ、７．１９ｍｍｏｌ）を脱水ＣＨ２Ｃｌ２およびピリジンに溶解して、氷浴下、塩化パラトルエンスルホニル（１３．７ｇ、７１．９０ｍｍｏｌ）を加え、８０℃で６．０時間反応させた。反応終了後、水を緩やかに滴下して反応をクエンチさせ、酢酸エチルで希釈して、順次に１ｍｏｌ／Ｌ塩酸、飽和重炭酸ナトリウム、飽和塩化ナトリウムで洗浄し、有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水して、減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィーにより分離し、白色固体Ｉ−６（３．８ｇ、８７．５％）を得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ7.79 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 7.33 (d, J = 7.4 Hz, 2H), 5.09 (s, 1H), 4.18 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 3.18 (s, 1H), 2.83 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 2.44 (s, 3H), 2.41-2.34 (m, 1H), 2.20 (d, J = 11.2 Hz, 2H), 1.68 (s, 3H), 1.61 (s, 3H), 1.15 (s, 3H), 1.10 (s, 3H), 0.90 (s, 3H), 0.83 (s, 6H), 0.77 (s, 3H); 13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ 213.8, 144.5, 134.9, 131.7, 129.8, 127.8, 125.0, 90.3, 73.3, 56.3, 56.0, 54.8, 53.3, 46.2, 40.3, 39.3, 38.8, 38.4, 38.0, 37.3, 33.9, 30.9, 28.0, 26.5, 25.9, 24.8, 24.6, 22.6, 21.8, 18.5, 17.8, 17.6, 16.3, 16.0, 15.9。MALDI-HRMS calcd for C37H57O5S [M+H]+613.3921, found 613.3927。
１１．２  ２０（Ｓ）−ヒドロキシダンマラン−３,２４−ジエン−１２−オン（Ｉ−７）の合成
2020528080.tif 000019
Ｉ−６（３．８ｇ、６．２０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５０．０ｍＬ）に溶解して、臭化リチウム（５．２ｇ、４９．６０ｍｍｏｌ）および炭酸リチウム（３．７ｇ、４９．６０ｍｍｏｌ）を加え、１５３℃の条件下で１．５時間反応させた。反応液を室温に冷却して、水を加えて反応を停止し、酢酸エチルで希釈して、順次に１ｍｏｌ／Ｌ塩酸、飽和重炭酸ナトリウム、飽和塩化ナトリウムで洗浄し、有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水して、減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＥＡ／ＰＥ、１：６）により分離し、Ｉ−７（２．３ｇ、８４．２％）を得た。1H NMR (400 MHz , CDCl3)δ5.40 (s , 2H) , 5.11 (s , 1H) , 2.89 (d , J = 9.9 Hz , 1H) , 2.42 (s , 1H) , 2.32-1.96 (m , 5H) , 1.69 (s , 3H) , 1.62 (s , 3H) , 1.21 (s , 3H) , 1.13 (s , 3H) , 0.96 (s , 6H) , 0.92 (s , 3H) , 0.81 (s , 3H); 13C NMR (150 MHz , CDCl3) δ 214.4 , 138.2 , 131.6 , 125.0 , 121.1 , 73.3 , 56.3 , 55.1 , 52.5 , 52.4 , 46.2 , 40.9 , 40.4 , 39.4 , 37.9 , 36.8 , 34.8 , 33.3 , 31.8 , 30.9 , 26.5 , 25.9 , 24.8 , 22.7 , 22.6 , 19.6 , 17.8 , 17.5 , 16.2 , 15.5。MALDI-HRMS calcd for C30H48NaO2 [M+Na]+463.3547 , found 463.3543。
１１．３  ２０（Ｓ）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシルダンマラン−３,２４−ジエン−１２−オン（ＩＨ）
2020528080.tif 000020
Ｉ−７（２．３ｇ、５．２２ｍｍｏｌ）および２,３,４,６−テトラ−Ｏ−ベンゾイルグルコーストリクロロイミデート（４．６ｇ、６．２６ｍｍｏｌ）を脱水ＣＨ２Ｃｌ２（６０．０ｍＬ）に溶解して、適量の４A分子篩を加え、アルゴンガス保護下、室温で３０分撹拌後、反応系の温度を−４０℃に下げて、ＴＭＳＯＴｆ（９４．３μＬ、０．５２ｍｍｏｌ）を滴下し、−４０℃で反応させた。ＴＬＣ検出で調べて反応が終了した後、Ｅｔ３Ｎを加えて反応を停止し、室温に戻し、吸引濾過して分子篩を除去し、反応液を濃縮させて固体とし、濃縮物をジクロロメタンとメタノールの混合溶媒（５０．０ｍＬ、ｖ：ｖ＝１：１）に溶解して、ナトリウムメトキシドをｐＨ＝９−１０となるまで加え、室温で４．０時間反応させた後、ＴＬＣ検出で調べて完全に反応したら、カチオン樹脂を加えて反応液を中和し、ろ過して濃縮させ、カラムクロマトグラフィーをした。白色固体ＩＨ（２．５ｇ、二段階収率７９．５％）を得た。1H NMR (400 MHz, CD3OD)δ5.44-5.36 (m, 2H), 5.09 (t, J= 6.6 Hz, 1H), 4.44 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 3.80 (dd, J = 11.7, 1.5 Hz, 1H), 3.65 (dd, J = 11.7, 5.5 Hz, 1H), 3.37-3.34 (m, 2H), 3.28 (t, J= 8.8 Hz, 1H), 3.20 (dd, J = 8.3, 6.0 Hz, 1H), 3.10 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 2.54-2.45 (m, 2H), 2.08 (dd, J = 12.8, 3.2 Hz, 1H), 1.66 (s, 3H), 1.62 (s, 3H), 1.30 (s, 3H), 1.12 (s, 3H), 1.00 (s, 3H), 0.97 (s, 3H), 0.93 (s, 3H), 0.76 (s, 3H); 13C NMR (150 MHz, CD3OD) δ 215.5, 139.2, 131.9, 126.0, 122.2, 98.3, 82.5, 78.7, 77.4, 75.6, 71.7, 62.9, 57.8, 57.1, 55.1, 53.9, 42.9, 42.2, 41.9, 40.8, 40.7, 38.0, 35.7, 34.8, 33.0, 32.1, 25.9, 24.9, 24.7, 23.0, 22.9, 20.7, 17.8, 17.1, 16.9, 15.7。MALDI-HRMS calcd for C36H58NaO7 [M+Na]+625.4075, found 625.4080。
【００６６】
実施例１２  ２０−Ｏ−β−Ｄ−キシロピラノシル−２０（Ｓ）−パナキサジオールサポニン（ＩＪ）
白色固体。1H NMR(CD3OD): 5.09(t, J=7.1Hz, 1H, H-24), 4.52(d, J=7.7 Hz, 1H, H-1’), 3.78(dd, J=11.5, 5.5 Hz, 1H, H-5’-2), 3.68(td, J=10.4, 4.9 Hz, 1H, H-12), 3.45(ddd, J=10.4, 8.8, 5.5 Hz, 1H, H-4’), 3.29(t, J=8.8 Hz, 1H, H-3’), 3.14(dd, J=11.5, 10.4 Hz, 1H, H-5’-1), 3.13(dd, J=11.0, 4.4 Hz, 1H, H-3), 3.07(dd, J=8.8, 7.7 Hz, 1H, H-12), 1.67(s, 3H), 1.61(s, 3H), 1.32(s, 3H), 1.00(s, 3H), 0.96(s, 3H), 0.91(s, 3H), 0.90(s, 3H), 0.70(s, 3H); 13C NMR(CDCl3): 132.3(C-25), 128.2(C-24), 98.9(C-1’), 84.8(C-20), 79.6(C-3), 78.4(C-3’), 75.3(C-2’), 71.8(C-12), 71.1(C-4’), 66.8(C-5’), 57.3, 53.1, 52.4, 51.0, 40.9, 40.2, 40.0, 38.1, 36.7, 35.9, 31.5, 30.8, 28.6, 28.0, 27.2, 25.9, 23.9, 22.4, 19.4, 18.3, 17.8, 17.3, 16.7, 16.3, 16.1。
【００６７】
実施例１３  ２０−Ｏ−β−Ｌ−ラムノピラノシル−２０（Ｓ）−パナキサジオールサポニン（ＩＫ）
白色固体。1H NMR(CD3OD): 5.13(d, J=1.4 Hz, 1H, H-1’), 5.13(t, J=7.1 Hz, 1H, H-24), 3.79(m, 1H, H-2’), 3.79(m, 1H, H-5’), 3.60(td, J=10.1, 5.5 Hz, 1H, H-12), 3.56(dd, J=9.6, 3.2 Hz, 1H, H-3’), 3.38(t-like, J=9.6, 9.2 Hz, 1H, H-4), 3.13(dd, J=11.5, 4.6 Hz, 1H, H-3), 1.69(s, 3H), 1.62(s, 3H), 1.36(s, 3H), 1.24(d, J=6.0 Hz, 3H, H-5’), 1.00(s, 3H), 0.96(s, 3H), 0.93(s, 3H), 0.91(s, 3H), 0.77(s, 3H); MS: 629[M+Na]+, 607[M+H]+, 589.5[M-OH]+, 443.4, 425.4, 407.4。
【００６８】
実施例１４  ２０−Ｏ−α−Ｌ−アラビノフラノシル−２０（Ｓ）−パナキサジオールサポニン（ＩＬ）
白色固体。1H NMR(CD3OD): 5.10(d, J=7.3 Hz, 1H, H-24), 4.50(d, J=7.3 Hz, 1H, H-1), 3.84(dd, J=12.4,1.4 Hz, 1H, H-5’-1), 3.79(brs, 1H, H-4’), 3.71(td, J=10.6, 5.5 Hz, 1H, H-12), 3.53(dd, J=12.4, 1.4 Hz, 1H, H-5’-2), 3.51(dd, J=6.4, 3.2 Hz, 1H, H-3’), 3.45(dd, J=9.1,7.3 Hz, 1H, H-2’), 3.14(dd, J=11.5, 4.6 Hz, 1H, H-3), 1.67(s, 3H), 1.62(s, 3H), 1.34(s, 3H), 1.01(s, 3H), 0.96(s, 3H), 0.92(s, 3H), 0.91(s, 3H), 0.78(s, 3H)。
【００６９】
実施例１５、１６  ２０（Ｓ）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシルダンマラン−２４−エン−３,１２−ジオン（ＩＩＡ）および２０（Ｓ）−ヒドロキシ−３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシルダンマラン−３,２４−ジエン−１２−オン（ＩＩＡ−１）の合成
１５．１  ２０（Ｓ）−ヒドロキシダンマラン−２４−エン−３,１２−ジオン（ＩＩ−１）の合成
2020528080.tif 000021
ＰＰＤ（４０．０、８６．８２ｍｍｏｌ）を脱水ジクロロメタン５００．０ｍＬに溶解して、ＰＤＣ（９８．０ｇ、２６０．４６ｍｍｏｌ）および無水酢酸（３２．８ｍＬ、３４７．２８ｍｍｏｌ）を加え、室温で約５．０時間反応させ、吸引濾過して不溶物を除去し、ろ液を濃縮させてカラムクロマトグラフィー（ＥＡ／ＰＥ、１：８）により分離し、淡黄色泡沫状固体ＩＩ−１（２４．３ｇ、６１．２％）を得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.11 (t, J = 7.1 Hz, 1H, H-24), 2.90 (d, J = 9.6 Hz, 1H, H-13), 2.55-2.40 (m, 3H), 2.29 (d, J = 7.7 Hz, 2H), 1.69 (s, 3H), 1.62 (s, 3H), 1.23 (s, 3H), 1.11(s, 6H) 1.07 (s, 3H), 1.04 (s, 3H), 0.81 (s, 3H)。
１５．２  ２０（Ｓ）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシルダンマラン−２４−エン−３,１２−ジオン（２Ａ）および２０（Ｓ）−ヒドロキシ−３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシルダンマラン−３,２４−ジエン−１２−オン（２Ａ−１）の合成
2020528080.tif 000022
ＩＩ−１（１１．０ｇ、２４．０８ｍｍｏｌ）および２,３,４,６−テトラ−Ｏ−アセチルグルコーストリクロロイミデート（１７．８ｇ、３６．１２ｍｍｏｌ）を脱水ＣＨ２Ｃｌ２に溶解して、適量の４A分子篩を加え、アルゴンガス保護下、室温で３０分撹拌後、反応系の温度を−４０℃に下げて、ＴＭＳＯＴｆ（４３５．５μＬ、２．４１ｍｍｏｌ）を滴下し、−４０℃で反応させた。ＴＬＣ検出で調べて反応が終了した後、Ｅｔ３Ｎを加えて反応を停止し、室温に戻し、吸引濾過して分子篩を除去し、反応液を濃縮させて固体とし、濃縮物をジクロロメタンとメタノールの混合溶媒（１５０．０ｍＬ、ｖ：ｖ＝１：１）に溶解して、ナトリウムメトキシドをｐＨ＝９−１０となるまで加え、室温で１．０時間反応させた後、ＴＬＣ検出で調べて完全に反応したら、カチオン樹脂を加えて反応液を中和し、ろ過して濃縮させ、カラムクロマトグラフィーをした。白色固体ＩＩＡ（５．８ｇ、二段階収率３８．９％）およびＩＩＡ−１（５．６ｇ、二段階収率３７．６％）を得た。IIA:1H NMR (400 MHz, CD3OD)δ5.10 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 4.45 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 3.80 (dd, J = 11.8, 1.4 Hz, 1H), 3.65 (dd, J = 11.7, 5.4 Hz, 1H), 3.40-3.33 (m, 2H), 3.28 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 3.21 (dd, J = 7.4, 5.1 Hz, 1H), 3.11 (t, J = 8.2 Hz, 1H), 2.54-2.48 (m, 4H), 2.14(dd, J= 12.8, 3.2 Hz, 1H), 1.67 (s, 3H), 1.62 (s, 3H), 1.31 (s, 3H), 1.12 (s, 3H), 1.09 (s, 3H), 1.07 (s, 6H), 0.77 (s, 3H);13C NMR (150 MHz, CD3OD) δ 220.0, 214.8, 131.9, 126.0, 98.3, 82.5, 78.8, 77.4, 75.6, 71.8, 62.9, 57.5, 57.2, 56.1, 55.4, 43.0, 41.8, 40.8, 40.7, 40.3, 38.5, 34.8, 33.0, 27.1, 25.9, 24.9, 24.7, 22.9, 21.4, 20.9, 17.8, 17.1, 16.3, 15.8。MALDI-HRMS calcd for C36H58NaO8 [M+Na]+641.4024, found 625.4041。
IIA-1: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 5.09 (t, J = 6.7 Hz, 1H), 4.94 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 4.59 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 3.83 (d, J = 12.2 Hz, 1H), 3.66 (dd, J= 12.1, 4.7 Hz, 1H), 3.39-3.29 (m, 3H), 3.07 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 2.46 - 2.35 (m, 2H), 2.14 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 2.06-1.92 (m, 3H), 1.66 (s, 3H), 1.61 (s, 3H), 1.27 (s, 3H), 1.15 (s, 3H), 1.01 (s, 6H), 0.99 (s, 3H), 0.77 (s, 3H); 13C NMR (150 MHz, CD3OD) δ215.2, 160.6, 132.1,  125.8, 102.1, 97.2, 78.3, 77.9, 75.1, 75.0, 71.4, 62.5, 57.5, 57.3, 55.0, 54.6, 44.4, 42.1, 41.6, 40.7, 40.6, 38.6, 37.6, 34.7, 32.7, 28.8, 25.9, 25.7, 24.9, 23.9, 20.6, 20.0, 17.7, 17.3, 16.4, 15.7。MALDI-HRMS calcd for C36H58NaO8 [M+Na]+641.4024, found 625.4040。
【００７０】
実施例１７  ２０（Ｓ）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシルダンマラン−１、２４−ジエン−３,１２−ジオン（ＩＩＢ）
１７．１  ２０（Ｓ）−ヒドロキシダンマラン−１、２４−ジエン−３,１２−ジオン（ＩＩ−２）の合成
2020528080.tif 000023
ＩＩ−１（１２．０ｇ、２６．２７ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（８８．０ｍＬ）に溶解して、ＩＢＸ（２４．０ｇ、３９．４１ｍｍｏｌ）を加え、７０℃の条件下で２４．０時間反応させた。反応液を室温に冷却して、水を加えて反応を停止し、エチルエーテルで希釈し、順次飽和重炭酸ナトリウム、飽和塩化ナトリウムで洗浄し、有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水して、減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＥＡ／ＰＥ、１：７）により分離し、ＩＩ−２（８．４ｇ、７０．５％）を得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.98 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 5.81 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 5.07 (s, 1H), 2.88 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 2.47 (d, J = 13.8 Hz, 1H), 2.38 (t, J = 12.5 Hz, 2H), 1.65 (s, 3H), 1.59 (s, 3H), 1.23 (s, 3H), 1.13 (s, 6H), 1.09 (s, 6H), 0.78 (s, 3H)。
１７．２  ２０（Ｓ）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシルダンマラン−１、２４−ジエン−３,１２−ジオン（ＩＩＢ）の合成
2020528080.tif 000024
ＩＩ−２（８．３ｇ、１８．２５ｍｍｏｌ）および２,３,４,６−テトラ−Ｏ−アセチルグルコーストリクロロイミデート（１３．５ｇ、２７．３７ｍｍｏｌ）を脱水ＣＨ２Ｃｌ２に溶解して、適量の４A分子篩を加え、アルゴンガス保護下、室温で３０分撹拌後、反応系の温度を−４０℃に下げて、ＴＭＳＯＴｆ（３３０．７μＬ、１．８３ｍｍｏｌ）を滴下し、−４０℃で反応させた。ＴＬＣ検出で調べて反応が終了した後、Ｅｔ３Ｎを加えて反応を停止し、室温に戻し、吸引濾過して分子篩を除去し、反応液を濃縮させて固体とし、濃縮物をジクロロメタンとメタノールの混合溶媒（１００．０ｍＬ、ｖ：ｖ＝１：１）に溶解して、ナトリウムメトキシドをｐＨ＝９−１０となるまで加え、室温で１．０時間反応させた後、ＴＬＣ検出で調べて完全に反応したら、カチオン樹脂を加えて反応液を中和し、ろ過して濃縮させ、カラムクロマトグラフィーをした。白色固体２Ｂ（５．１ｇ、二段階収率４５．３％）を得た。1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.21 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 5.81 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 5.10 (t, J= 6.3 Hz, 1H), 4.45 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 3.80 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 3.65 (dd, J = 12.0, 4.9 Hz, 1H), 3.40 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 3.35 (t, J = 9.2 Hz, 1H), 3.27 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 3.22-3.19 (m, 1H), 3.11 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 2.64 (t, J = 13.0 Hz, 1H), 2.54-2.49 (m, 2H), 2.39 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 1.66 (s, 3H), 1.62 (s, 3H), 1.35 (s, 3H), 1.21 (s, 3H), 1.14 (s, 6H), 1.11 (s, 4H), 0.76 (s, 3H); 13C NMR (150 MHz, CD3OD) δ 213.8, 207.3, 160.6 131.9, 126.1, 126.0, 98.3, 82.4, 78.7, 77.4, 75.6, 71.7, 62.8, 57.3, 55.0, 50.1, 45.9, 42.9, 42.7, 41.3, 40.7, 40.4, 34.9, 32.8, 28.1, 25.9, 24.9, 24.7, 22.9, 21.8, 20.2, 19.7, 17.8, 17.1, 16.5。MALDI-HRMS calcd for C36H56NaO8 [M+Na]+639.3867, found 639.3873。
【００７１】
実施例１８  ２０（Ｓ）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシルダンマラン−３−メトキシイミノ−２４−エン−１２−オン（ＩＩＩＡ）
１８．１  ３−β−ヒドロキシ−１２−β−Ｏ−トリメチルアセチル−２０（Ｓ）−パナキサジオールサポニン（ＩＩＩ−１）の合成
2020528080.tif 000025
ＰＰＤ（４５．０ｇ、９７．６８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン５００．０ｍＬに溶解して、トリエチルアミン（２７．１ｍＬ、１９５．３６ｍｍｏｌ）を加え、反応系の温度を−５℃に下げて、氷浴下、塩化トリメチルアセチル（２４．１ｍＬ、１９５．３６ｍｍｏｌ）を滴下し、−５℃で３．０時間反応させた。水を加えて反応を停止し、順次に水、飽和塩化ナトリウムで洗浄し、有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水して、減圧濃縮し、粗産物３６．６ｇを得て、そのまま次のステップの反応に用いた。
１８．２  １２−β−Ｏ−トリメチルアセチル−２０（Ｓ）−ヒドロキシダンマラン−２４−エン−３−オン（ＩＩＩ−２）の合成
2020528080.tif 000026
ＩＩＩ−１（３６．６ｇ、６７．１７ｍｍｏｌ）を脱水ジクロロメタン６００．０ｍＬに溶解して、ＰＤＣ（３７．９ｇ、１００．７６ｍｍｏｌ）および無水酢酸（１９．０ｍＬ、２０１．５１ｍｍｏｌ）を加え、室温で約５．０時間反応させ、吸引濾過して不溶物を除去し、ろ液を濃縮させてそのまま次のステップの反応に用いた。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.15 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 4.82 (t, J = 10.4 Hz, 1H), 2.47-2.45 (m, 2H), 2.22 (s, 1H), 1.71 (s, 3H), 1.63 (s, 3H), 1.21 (s, 9H), 1.12 (s, 3H), 1.09 (s, 3H), 1.06 (s, 3H), 1.04 (s, 3H), 0.98 (s, 3H), 0.93 (s, 3H)。
１８．３  １２−β−ヒドロキシ−２０（Ｓ）−ヒドロキシダンマラン−２４−エン−３−オン（ＩＩＩ−３）の合成
2020528080.tif 000027
前のステップの反応濃縮物をジクロロメタンとメタノールの混合溶媒（４００．０ｍＬ、ｖ：  ｖ＝１：１）に溶解して、ナトリウムメトキシドをｐＨ＝９−１０となるまで加え、５０℃で６．０時間反応させた後、ＴＬＣ検出で調べて完全に反応したら、カチオン樹脂を加えて反応液を中和し、ろ過して濃縮させ、カラムクロマトグラフィーをした。白色固体ＩＩＩ−３（１７．９ｇ、三段階収率３９．９％）を得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.16 (s, 1H, H-24), 3.62-3.57 (m, 1H, H-3), 2.54-2.41 (m, 2H), 1.70 (s, 3H), 1.64 (s, 3H), 1.20 (s, 3H), 1.08 (s, 3H), 1.04 (s, 3H), 1.03 (s, 3H), 0.98 (s, 3H), 0.89 (s, 3H)。
１８．４  １２−β−ヒドロキシ−２０（Ｓ）−ヒドロキシダンマラン−３−メトキシイミノ−２４−エン（ＩＩＩ−４ａ）の合成
2020528080.tif 000028
ＩＩＩ−３（２．３ｇ、５．０１ｍｍｏｌ）をピリジン（６０．０ｍＬ）に溶解して、Ｏ−メチルヒドロキシルアミン塩酸塩（６２８．１ｍｇ、７．５２ｍｍｏｌ）を加え、８０℃の条件で４．０時間反応させた。反応液を室温に冷却して、水を加えて反応を停止し、酢酸エチルで希釈して、順次に１ｍｏｌ／Ｌ塩酸、飽和重炭酸ナトリウム、飽和塩化ナトリウムで洗浄し、有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水して、減圧濃縮し、そのまま次のステップに用いた。
１８．５  ２０（Ｓ）−ヒドロキシダンマラン−３−メトキシイミノ−２４−エン−１２−オン（ＩＩＩ−５ａ）の合成
2020528080.tif 000029
ＩＩＩ−４ａを脱水ジクロロメタン１２０．０ｍＬに溶解して、ＰＤＣ（２．８ｇ、７．５２ｍｍｏｌ）および無水酢酸（１．４ｍＬ、１５．０３ｍｍｏｌ）を加え、室温で約５．０時間反応させ、吸引濾過して不溶物を除去し、ろ液を濃縮させてカラムクロマトグラフィーにより分離し、淡黄色泡沫状固体ＩＩＩ−５ａ（１．１ｇ、二段階収率４５．２％）を得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ5.10 (s, 1H, H-24), 3.81 (s, 3H), 3.25 (s, 1H), 2.92 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 2.86 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 2.40 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 1.69 (s, 3H), 1.62 (s, 3H), 1.20 (s, 3H), 1.16 (s, 3H), 1.12 (s, 3H), 1.07 (s, 3H), 1.01 (s, 3H), 0.78 (s, 3H); 13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ 214.0, 165.2, 131.7, 125.0, 73.2, 61.2, 56.4, 56.0, 54.9, 53.1, 46.2, 40.3, 40.2, 39.3, 38.5, 37.9, 37.5, 33.7, 30.9, 27.5, 26.5, 25.9, 24.8, 23.2, 22.6, 19.2, 17.8, 17.5, 15.9, 15.6。MALDI-HRMS calcd for C31H51NNaO3 [M+Na]+508.3761, found 508.3760。
１８．６  ２０（Ｓ）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシルダンマラン−３−メトキシイミノ−２４−エン−１２−オン（ＩＩＩＡ）の合成
2020528080.tif 000030
ＩＩＩ−５ａ（１．１ｇ、２．２６ｍｍｏｌ）および２,３,４,６−テトラ−Ｏ−アセチルグルコーストリクロロイミデート（１．３ｇ、２．７１ｍｍｏｌ）を脱水ＣＨ２Ｃｌ２に溶解して、適量の４A分子篩を加え、アルゴンガス保護下、室温で３０分撹拌後、反応系の温度を−４０℃に下げて、ＴＭＳＯＴｆ（４０．８μＬ、０．２３ｍｍｏｌ）を滴下し、−４０℃で反応させた。ＴＬＣ検出で調べて反応が終了した後、Ｅｔ３Ｎを加えて反応を停止し、室温に戻し、吸引濾過して分子篩を除去し、反応液を濃縮させて固体とし、濃縮物をジクロロメタンとメタノールの混合溶媒（５０．０ｍＬ、ｖ：  ｖ＝１：１）に溶解して、ナトリウムメトキシドをｐＨ＝９−１０となるまで加え、室温で１．０時間反応させた後、ＴＬＣ検出で調べて完全に反応したら、カチオン樹脂を加えて反応液を中和し、ろ過して濃縮させ、カラムクロマトグラフィーをして、白色固体ＩＩＩＡ（８６０．０ｍｇ、二段階収率５８．５％）を得た。1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 5.09 (t, J = 6.7 Hz, 1H), 4.44 (d, J= 7.7 Hz, 1H), 3.80 (d, J = 11.7 Hz, 1H), 3.76 (s, 3H), 3.64 (dd, J= 11.7, 5.3 Hz, 1H), 3.36-3.31 (m, 2H), 3.27 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 3.20 (dd, J = 7.3, 5.1 Hz, 1H), 3.10 (t, J = 8.2 Hz, 1H), 2.88 (dt, J= 8.5, 4.8 Hz, 1H), 2.52-2.43 (m, 2H), 2.31-2.22 (m, 1H), 2.10 (dd, J = 12.7, 2.9 Hz, 1H), 1.66 (s, 3H), 1.62 (s, 3H), 1.29 (s, 3H), 1.14 (s, 3H), 1.11 (s, 3H), 1.07 (s, 3H), 1.05 (s, 3H), 0.74 (s, 3H); 13C NMR (150 MHz, CD3OD) δ 215.1, 166.5, 131.9, 126.0, 98.3, 82.5, 78.7, 77.4, 75.6, 71.7, 62.8, 61.3, 57.5, 57.2, 57.1, 55.8, 42.9, 41.9, 41.1, 40.8, 40.7, 39.6, 38.7, 35.1, 33.0, 28.1, 25.9, 24.9, 24.7, 23.5, 22.9, 20.3, 18.4, 17.8, 17.1, 16.2, 16.1。MALDI-HRMS calcd for C37H61NNaO8 [M+Na]+670.4289, found 670.4294。
【００７２】
実施例１９  ２０（Ｓ）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシルダンマラン−３−ヒドロキシイミノ−２４−エン−１２−オン（ＩＩＩＢ）
１９．１  １２−β−ヒドロキシ−２０（Ｓ）−ヒドロキシダンマラン−３−アリルオキシイミノ−２４−エン（ＩＩＩ−４ｂ）の合成
2020528080.tif 000031
ＩＩＩ−３（５．０ｇ、１０．９０ｍｍｏｌ）をピリジン（１２０．０ｍＬ）に溶解して、Ｏ−アリルヒドロキシルアミン塩酸塩（１．８ｇ、１６．３５ｍｍｏｌ）を加え、８０℃の条件で４．０時間反応させた。反応液を室温に冷却して、水を加えて反応を停止し、酢酸エチルで希釈して、順次に１ｍｏｌ／Ｌ塩酸、飽和重炭酸ナトリウム、飽和塩化ナトリウムで洗浄し、有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水して、減圧濃縮し、直接次のステップに用いた。
１９．２  ２０（Ｓ）−ヒドロキシダンマラン−３−アリルオキシイミノ−２４−エン−１２−オン（ＩＩＩ−５ｂ）の合成
2020528080.tif 000032
ＩＩＩ−４ｂを脱水ジクロロメタン１２０．０ｍＬに溶解して、ＰＤＣ（６．２ｇ、１６．３５ｍｍｏｌ）および無水酢酸（３．１ｍＬ、３２．７０ｍｍｏｌ）を加え、室温で約５．０時間反応させ、吸引濾過して不溶物を除去し、ろ液を濃縮させてカラムクロマトグラフィーにより分離し、淡黄色泡沫状固体ＩＩＩ−５ｂ（３．６ｇ、二段階収率６４．６％）を得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ5.99 (dd, J = 17.4, 11.4 Hz, 1H), 5.26 (d, J = 17.3 Hz, 1H), 5.17 (d, J= 10.5 Hz, 1H), 5.09 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 4.52 (d, J = 2.6 Hz, 2H), 3.24 (s, 1H), 2.97 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 2.86 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 2.43-2.36 (m, 1H), 1.69 (s, 3H), 1.62 (s, 3H), 1.20 (s, 3H), 1.16 (s, 3H), 1.12 (s, 3H), 1.06 (s, 3H), 1.01 (s, 3H), 0.79 (s, 3H); 13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ 214.0, 165.3, 134.9, 131.7, 125.0, 117.0, 74.4, 73.2, 56.4, 56.0, 54.9, 53.1, 46.2, 40.3, 40.3, 39.3, 38.4, 37.9, 37.5, 33.7, 30.9, 27.6, 26.5, 25.9, 24.8, 23.2, 22.6, 19.2, 17.8, 17.8, 17.5, 15.9, 15.5。MALDI-HRMS calcd for C33H53NNaO3 [M+Na]+534.3918, found 534.3921。
１９．３  ２０（Ｓ）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシルダンマラン−３−ヒドロキシイミノ−２４−エン−１２−オン（ＩＩＩＢ）の合成
2020528080.tif 000033
ＩＩＩ−５ｂ（３．６ｇ、７．０３ｍｍｏｌ）および２,３,４,６−テトラ−Ｏ−アセチルグルコーストリクロロイミデート（４．２ｇ、８．４４ｍｍｏｌ）を脱水ＣＨ２Ｃｌ２に溶解して、適量の４A分子篩を加え、アルゴンガス保護下、室温で３０分撹拌後、反応系の温度を−４０℃に下げて、ＴＭＳＯＴｆ（１２７．０μＬ、０．７０ｍｍｏｌ）を滴下し、−４０℃で反応させた。ＴＬＣ検出で調べて反応が終了した後、Ｅｔ３Ｎを加えて反応を停止し、室温に戻し、吸引濾過して分子篩を除去し、反応液を濃縮させて固体とし、濃縮物をジクロロメタンとメタノールの混合溶媒（１００．０ｍＬ、ｖ：ｖ＝１：１）に溶解して、ナトリウムメトキシドをｐＨ＝９−１０となるまで加え、室温で１．０時間反応させた後、ＴＬＣ検出で調べて完全に反応したら、カチオン樹脂を加えて反応液を中和し、ろ過して濃縮させ、濃縮物をエタノールと水の混合溶媒（５０．０ｍＬ、ｖ：ｖ＝４：１）に溶解し、トリフェニルホスフィン（２５６．５ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（７３．２ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（４．１ｍＬ、２９．３４ｍｍｏｌ）およびギ酸（１．１ｍＬ、２９．３４ｍｍｏｌ）を加えて、加熱して１．５時間還流し、反応液を濃縮させて、カラムクロマトグラフィーにより精製し、白色固体ＩＩＩＢ（１．８ｇ、三段階収率４０．４％）を得た。1H NMR (400 MHz, CD3OD)δ5.09 (t, J = 6.5 Hz, 1H), 4.44 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 3.80 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.65 (dd, J = 11.8, 5.3 Hz, 1H), 3.36-3.31 (m, 2H), 3.28 (t, J = 9.2 Hz, 1H), 3.22-3.19(m, 1H), 3.10 (t, J = 8.2 Hz, 1H), 2.96 (dt, J= 14.6, 3.9 Hz, 1H), 2.53-2.44 (m, 2H), 2.33-2.24 (m, 1H), 2.11 (dd, J = 12.2, 2.4 Hz, 1H), 1.66 (s, 3H), 1.62 (s, 3H), 1.30 (s, 3H), 1.14 (s, 3H), 1.11 (s, 3H), 1.07 (s, 3H), 1.06 (s, 3H), 0.74 (s, 3H); 13C NMR (150 MHz, CD3OD) δ 215.2, 166.5, 131.9, 126., 98.3, 82.5, 78.7, 77.4, 75.6, 71.7, 62.8, 57.5, 57.2, 57.1, 55.9, 42.9, 41.9, 41.1, 40.8, 40.7, 39.6, 38.8, 35.1, 33.0, 28.1, 25.9, 24.9, 24.7, 23.4, 22.9, 20.3, 17.8, 17.7, 17.1, 16.12, 16.1。MALDI-HRMS calcd for C36H59NNaO8 [M+Na]+656.4133, found 656.4139。
【００７３】
実施例２０  ２０（Ｓ）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシルダンマラン−３−ヒドロキシ−２−シアノ−２,２４−ジエン−１２−オン（ＩＩＩＣ）
２０．１  ２０（Ｓ）−ヒドロキシダンマラン−３−ヒドロキシ−２−シアノ−２,２４−ジエン−１２−オン（ＩＩＩ−９）
2020528080.tif 000034
ＩＩＩ−３（１０．０ｇ、２１．８０ｍｍｏｌ）を脱水ギ酸エチル（１５０．０ｍＬ）に溶解して、３０％ナトリウムメトキシド（３０ｍＬ）を加え、室温で３．０時間反応させた。反応終了後、酢酸エチルで希釈して、順次に１ｍｏｌ／Ｌ塩酸、飽和重炭酸ナトリウム、飽和塩化ナトリウムで洗浄し、有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水して、減圧濃縮し、濃縮物をエタノール（１５０．０ｍＬ）と水（２６．４ｍＬ）の混合溶媒に溶解し、ヒドロキシルアミン塩酸塩（３．０ｇ、４３．６０ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（３．０ｍＬ、２１．８０ｍｍｏｌ）を加えて、５５℃で１０．０時間反応させた。反応終了後、酢酸エチルで希釈して、順次に１ｍｏｌ／Ｌ塩酸、飽和重炭酸ナトリウム、飽和塩化ナトリウムで洗浄し、有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水して、減圧濃縮し、粗生成物を脱水ジクロロメタン１５０．０ｍＬに溶解して、ＰＤＣ（１２．３ｇ、３２．７０ｍｍｏｌ）および無水酢酸（４．１ｍＬ、４３．６０ｍｍｏｌ）を加え、室温で６．０時間反応させ、吸引濾過して不溶物を除去し、ろ液を濃縮させて、濃縮物を脱水メタノール（１３０．０ｍＬ）に溶解して、３０％ナトリウムメトキシド（５．４ｍＬ）を加え、５５℃で３．５時間反応させた。反応終了後、酢酸エチルで希釈して、順次に１ｍｏｌ／Ｌ塩酸、飽和重炭酸ナトリウム、飽和塩化ナトリウムで洗浄し、有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水して、減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィーにより分離し、白色固体ＩＩＩ−９（３．０ｇ、四段階収率２８．６％）を得た。1H NMR (600 MHz, (CD3)2SO) δ 9.78 (s, 1H), 5.06 (brs, 1H), 3.92 (s, 1H), 2.97 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 2.40 (t, J = 13.1 Hz, 1H), 2.20 (brs, 1H), 1.63 (s, 3H), 1.57 (s, 3H), 1.17 (s, 3H), 1.10 (s, 3H), 1.01 (s, 3H), 0.90 (s, 3H), 0.87 (s, 3H), 0.66 (s, 3H); 13C NMR (150 MHz, (CD3)2SO) δ 210.3, 171.5, 130.1, 125.1, 119.9, 77.9, 72.3, 55.4, 55.4, 51.8, 51.7, 42.3, 41.5, 40.5, 38.1, 35.9, 32.8, 31.4, 26.9, 25.5, 25.3, 23.3, 22.6, 19.0, 17.5, 16.5, 15.2, 14.8。MALDI-HRMS calcd for C31H47NNaO3 [M+Na]+504.3448, found 504.3452。
２０．２  ２０（Ｓ）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシルダンマラン−３−ヒドロキシ−２−シアノ−２,２４−ジエン−１２−オン（ＩＩＩＣ）
2020528080.tif 000035
ＩＩＩ−９（２．０ｇ、４．１５ｍｍｏｌ）および２,３,４,６−テトラ−Ｏ−ベンゾイルグルコーストリクロロイミデート（３．７ｇ、４．９８ｍｍｏｌ）を脱水ＣＨ２Ｃｌ２（９０．０ｍＬ）に溶解して、適量の４A分子篩を加え、アルゴンガス保護下、室温で３０分撹拌後、反応系の温度を０℃に下げて、ＴＭＳＯＴｆ（７５．０μＬ、０．４２ｍｍｏｌ）を滴下し、０℃で反応させた。ＴＬＣ検出で調べて反応が終了した後、Ｅｔ３Ｎを加えて反応を停止し、室温に戻し、吸引濾過して分子篩を除去し、反応液を濃縮させて固体とし、濃縮物をジクロロメタンとメタノールの混合溶媒（５０．０ｍＬ、ｖ：ｖ＝１：１）に溶解して、ナトリウムメトキシドをｐＨ＝９−１０となるまで加え、室温下反応４．０時間後、ＴＬＣ検出で調べて完全に反応したら、カチオン樹脂を加えて反応液を中和し、ろ過して濃縮させ、カラムクロマトグラフィーをした。白色固体ＩＩＩＣ（１．６ｇ、二段階収率５９．９％）を得た。1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 5.09 (t, J = 6.5 Hz, 1H), 4.44 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 3.80 (dd, J= 11.8, 1.9 Hz, 1H), 3.64 (dd, J = 11.9, 5.3 Hz, 1H), 3.38-3.34 (m, 2H), 3.27 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 3.22-3.17 (m, 1H), 3.10 (t, J = 8.2 Hz, 1H), 2.56-2.48 (m, 2H), 1.66 (s, 3H), 1.62 (s, 3H), 1.29 (s, 3H), 1.16 (s, 3H), 1.12 (s, 3H), 1.09 (s, 4H), 1.02 (s, 3H), 0.76 (s, 3H); 13C NMR (150 MHz, CD3OD) δ 214.7, 173.6, 131.9, 126.0, 120.6,  98.3, 82.5, 79.4, 78.7, 77.4, 75.6, 71.7, 62.8, 57.6, 57.1, 54.4, 53.9, 42.9, 42.4, 41.6, 40.7, 40.6, 39.7, 37.7, 34.5, 33.0, 27.9, 25.9, 24.9, 24.7, 22.9, 20.6, 19.8, 17.8, 17.0, 16.0, 15.7。MALDI-HRMS calcd for C37H57NNaO8 [M+Na]+666.3976, found 666.3973。
【００７４】
実施例２１  ２０（Ｓ）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシルダンマラン−３,１２−ヒドロキシイミノ−２４−エン−１２−オン（ＩＶＡ）
2020528080.tif 000036
ＩＩＡ（１．２５ｇ、２．０２ｍｍｏｌ）をピリジン（６０．０ｍＬ）に溶解して、ヒドロキシルアミン塩酸塩（４２１．１ｍｇ、６．０６ｍｍｏｌ）を加え、８０℃の条件下で４．０時間反応させた。反応液を室温に冷却して、水を加えて反応を停止し、酢酸エチルで希釈して、順次に１ｍｏｌ／Ｌ塩酸、飽和重炭酸ナトリウム、飽和塩化ナトリウムで洗浄し、有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水して、減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィーにより精製し、白色固体ＩＶＡ（９１３．０ｍｇ、６９．７％）を得た。1H NMR (400 MHz, CD3OD)δ5.09 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 4.46 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 3.80 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 3.65 (dd, J = 11.5, 5.1 Hz, 1H), 3.37-3.33 (m, 2H),3.30-3.28 (m, 1H), 3.20 (dd, J = 14.6, 7.8 Hz, 1H), 3.11 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 2.94-2.88 (m, 1H), 2.85 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 2.59 (dd, J = 11.0, 6.9 Hz, 1H), 2.38-2.30 (m, 1H), 1.66 (s, 3H), 1.60 (s, 3H), 1.22 (s, 3H), 1.18 (s, 3H), 1.13 (s, 3H), 1.06 (s, 3H), 1.03 (s, 3H), 0.77 (s, 3H); 13C NMR (150 MHz, CD3OD) δ 166.9, 161.8, 131.8, 126.2, 98.4, 83.4, 78.6, 77.3, 75.4, 71.8, 62.9, 57.0, 55.5, 53.2, 43.4, 41.9, 41.1, 40.5, 39.9, 38.8, 35.6, 32.5, 28.2, 25.9, 24.4, 23.4, 22.7, 20.2, 17.8, 17.3, 16.3, 15.8。MALDI-HRMS calcd for C36H60N2NaO8 [M+Na]+671.4242, found 671.4246。
【００７５】
実施例２２  オボアルブミンにより誘発されたｂａｌｂ／ｃマウス喘息に対する化合物の作用の研究
本実験では、前述のパナキサジオールサポニン誘導体（以下、ＧＲ誘導体）およびジンセノサイドＣＫが選択される。
医薬品の調製：所定量の受験サンプルを乳鉢に入れて粉砕し、次に、０．５％ＣＭＣＮａを用いて等量倍増法により対応する体積まで調製した。
陽性対照：
本シリーズは、経口投与するものであり、酢酸デキサメタゾン錠剤（製造元：上海信誼薬場有限公司、ロット番号、規格：０１５１５０９０１、０．７５ｍｇ）は、陽性薬とされた。
ジンセノサイドＣＫ（生産機関：Ｓｈａｎｇｈａｉ  Ｓｔａｎｄａｒｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｃｏ．Ｌｔｄ、ロット番号、規格：３６９０／２０５４８、５０００．０ｍｇ、純度：９２％）
試薬
ＯＶＡ（オボアルブミン）：ロット番号ＳＬＢＦ４８４６Ｖ、規格５００ｇ／瓶、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（米国）。
Ｍｏｕｓｅ  ＩｇＥ  ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ：Ｃａｔ  ＥＫ２７５２、Ｌｏｔ  ２２７５７０１３２、有効期限２０１８．０７、連科生物。
Ｍｏｕｓｅ  ＩｇＥ  ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ：Ｃａｔ  ＥＫ２７５２、Ｌｏｔ  ２２７５７０３４１、有効期限２０１８．０９、連科生物。
Ｍｏｕｓｅ  ＩｇＥ  ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ：Ｃａｔ  ＥＫ２７５２、Ｌｏｔ  ２２７５７０８４２、有効期限２０１９．０２、連科生物。
水酸化アルミニウム佐剤の調製：５％硫酸アルミニウム溶液２５０ｍＬに、激しく撹拌しながら５％水酸化ナトリウム溶液１００ｍＬを加え、生理食塩水を用いて遠心洗浄して２回沈殿させ、次に、沈殿を生理食塩水に懸濁させて２５０ｍＬとした。
機器
ネブライザー：型番：４０３Ｃ型家庭用空気圧縮式ネブライザー、メーカー：魚躍医療。
実験動物
動物は、上海西普爾−必凱実験動物有限公司から購入したものである。ライセンス番号：ＳＣＸＫ（滬）２０１３−００１６。
試験方法
群分けおよび用量
１回目：体重１８−２０ｇの雌Ｂａｌｂ／ｃマウスを、ブランク群、モデル群、デキサメタゾン０．６ｍｇ／ｋｇ群、ＣＫ群、ＧＲ誘導体群に分け、１群５匹とし、経口投与した。
２回目：体重１８−２０ｇの雌Ｂａｌｂ／ｃマウスを、ブランク群、モデル群、デキサメタゾン０．６ｍｇ／ｋｇ群、ＣＫ群、ＧＲ誘導体群に分け、１群５匹とし、経口投与した。
実験方法：
ブランク群を除き、マウスに対して０、１４日目にＯＶＡを腹腔内注射してアレルギーを発症させた（２０μｇ  ＯＶＡ／ｍｉｃｅ）。２１−２５日目にＯＶＡを霧化して投与して誘発させた。最後に誘発させて２４時間後、マウスの内眼角から採血して、血清を取り、ＥＬＩＳＡキッドを用いて血清中のＩｇＥレベルを測定した。
データ分析
データを平均値と標準偏差
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で示し、ＳＰＳＳ１６．０ソフトウェアを用いて一元配置分散分析（ｏｎｅ  ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ）を行うことにより各群の差異を比較し、ｐ＜０．０５の場合は、統計学的に有意である。
６  試験結果
表１−１  ＯＶＡにより引き起こされたマウス喘息モデルの血清中ＩｇＥの濃度に対するサンプルの影響
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モデル群に比べて：＊ｐ＜０．０５、＊＊  ｐ＜０．０１
表１−２  ＯＶＡにより引き起こされたマウス喘息モデルの血清中ＩｇＥの濃度に対するサンプルの影響
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モデル群に比べて：＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１
結論：ＯＶＡにより引き起こされたマウス喘息モデルでは、サンプルＩＤ、ＩＨ、ＩＫ、ＩＬは、マウス血清中のＩｇＥの含有量を有意に低下させ、０．６ｍｇ／ｋｇデキサメタゾンは、同様に、マウス血清中のＩｇＥの含有量を有意に低下させた。ＩＤ、ＩＨ、ＩＫ、ＩＬは、ＯＶＡにより引き起こされた気管支喘息に対して顕著な治療作用を有した。
【００７６】
実施例２３  マウス肺胞洗浄液における炎症性細胞の測定
６週齢のＢＡＬＢ／Ｃマウス（１８−２０ｇ）、合計１４４匹を対照群、プラセボ群、デキサメタゾン群（３ｍｇ／ｋｇ）、残りの各投与群の２４群に分けた。１群６匹とした。対照群に生理食塩水を投与する以外、ほかの処理を一切施されなかった。残りの群のいずれにもアレルギーを発症させ、２０μｇのＯＶＡおよび水酸化アルミニウム２００μｌＰＢＣ（２ｍｇ、エマルジョンに調製）を腹腔内注射し、各動物を０および１４日間で注射してアレルギーを発症させ、霧化した３％ＯＶＡを３０分間吸入させ、２１、２２、２３日目に治療剤を経口投与し、即ち、陽性対照群には、３ｍｇ／ｋｇのデキサメタゾンを投与し、投与群には、１７から２３日目まで経口投与し、対照群およびプラセボ群のそれぞれには、ＰＢＳを投与し、対照群のマウスには、ＰＢＳ（ＯＶＡ無し）を０日および１４日目に投与し、２１、２２および２３日目に生理食塩水を３０分間霧化し、水酸化アルミニウムを３０分間除去し、表２に示した。
表２  マウス肺胞洗浄液に対する炎症性細胞の測定結果
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試験結果から明らかなように、マウスの喘息モデル群のマウス肺胞洗浄液の炎症性細胞の測定結果から炎症性細胞が大量に集まっていることが示され、ＧＲ誘導体群のマウス肺胞洗浄液の炎症性細胞の測定結果から、ＧＲ誘導体群の炎症性細胞がモデル群よりも有意に減少したことが示されている。
【００７７】
実施例２４  煙曝露によるラットＣＯＰＤの誘導に対するＧＲ誘導体の影響の研究
吸入用ブデソニド懸濁液（ロット番号３１８２０５、メーカー：ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ  Ｐｔｙ  Ｌｔｄ．）
黄果樹タバコ、タール量１１ｍｇ／本、貴州中煙工業有限責任公司製。
ネブライザー：型番：４０３Ｃ型家庭用空気圧縮式ネブライザー、メーカー：魚躍医療。
動物肺機能解析システム：型番：ＡｎｉＲｅｓ２００５。メーカー：北京貝蘭博科技有限公司。
受動喫煙動物毒物暴露システム：型番：ＰＡＢ−Ｓ２００。メーカー：北京貝蘭博科技有限公司。
動物Ｗｉｓｔａｒラット、雄、体重１６０ｇ、クリーン飼育、上海斯莱克実験動物有限責任公司から購入、生産ライセンス番号：ＳＣＸＫ（滬）２０１３−００１６。
実験方法：
（１）煙の発生および吸入：
ブランク群を除き、タバコを煙発生器（２０本／回）に置き、ラットを６０ｃｍ×６０ｃｍ×８０ｃｍの霧化吸入箱に入れて、タバコを点火した後、注射器の自動吸引作用により煙を毒物暴露箱に吸引し、５分間以内に燃え尽きるようにした。毎日、４時間以上おきに朝晩２回、１回３０分とし、１８０日間持続した。
（２）ブデソニド投与：
ブデソニド製剤を生理食塩水で希釈した後、霧化カップに入れて投与し、０．２５ｍｇ／ｍＬ群は、霧化液濃度が０．２５ｍｇ／ｍＬであり、１回に４ｍｌとした。１回あたり３０分間霧化して投与した。
（３）ＣＫおよびＧＲ誘導体の投与：
ブランク群、モデル群、ブデソニド、ＣＫおよびＧＲシリーズの誘導体：ＩＢ、ＩＣ、ＩＤ、ＩＶＡ、ＩＨ、ＩＪ、ＩＫ、ＩＬ経口投与群に分け、ＣＫおよびＧＲシリーズの誘導体投与量の勾配を２０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、８０ｍｇ／ｋｇとした。１群５匹とし、群分けした後、１８０日間持続して投与した。実験終了後、肺機能を測定した。ペントバルビタールナトリウムでラットを麻酔した後、気管内挿管術を行い、ＡｎｉＲｅｓ２００５肺機能テスターを用いて各動物について努力肺活量（ＦＶＣ）に関連する指標を計測し、ソフトウェアでラットの関連肺機能指標を分析した。
実験結果：
表３  ＣＯＰＤラットＦＥＶ０．２／ＦＶＣ％（２００ｍｓ内の努力呼気指数）に対する試験物の影響
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モデル群に比べて：＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１
結論：煙曝露によるラットＣＯＰＤの誘導に対する影響のモデルでは、ブデソニドは、吸入投与、残りの化合物は、経口投与であり、ＣＫ、ＩＢ、ＩＣ、ＩＤ、ＩＶＡ、ＩＨ、ＩＪ、ＩＫ、ＩＬ高用量群は、いずれもブデソニドより優れていた。このため、ＧＲシリーズの誘導体は、ＣＯＰＤに対して良好な治療効果を有した。
【００７８】
実施例２５  全血球計算（CBC検査）
３３匹のＩＣＲマウスを、生理食塩水群、１．８ｍｇ／ｋｇ酢酸デキサメタゾン群（Ｄｅｘ）、ＣＫ、ＩＢ、ＩＣ、ＩＤ、ＩＶＡ、ＩＨ、ＩＪ、ＩＫ、ＩＬの１１群にランダムに分けて、いずれも２２５ｍｇ／ｋｇを投与した。それぞれマウスに、６日間持続して強制的経口投与し、最終回の投与をしてから１時間後、十分な血液を取り、全血球計算を行った。
表４  ＧＲシリーズの化合物による血液学検査データ
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注：ブランクに比べて、＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１
血液学データから明らかなように、ブランク対照に比べて、デキサメタゾン１．８ｍｇ／ｋｇ用量群では、リンパ球のパーセンテージがいずれも有意に低下し、好中球のパーセンテージが有意に増加し、白血球数が有意に低下し、単球のパーセンテージが有意に増加したのに対して、ＣＫおよびＧＲ誘導体は、いずれも血液学関連変化を引き起こさなかった。
【００７９】
実施例２６  尾静脈血糖
３３匹のＩＣＲマウスを、生理食塩水群、１．８ｍｇ／ｋｇ酢酸デキサメタゾン群（Ｄｅｘ）、ＣＫ、ＩＢ、ＩＣ、ＩＤ、ＩＶＡ、ＩＨ、ＩＪ、ＩＫ、ＩＬの１１群にランダムに分け、いずれも２２５ｍｇ／ｋｇを投与した。それぞれマウスに、６日間持続して強制的経口投与し、６日目に、朝の８：００頃から絶食させ、翌日の４：００頃に、尾静脈血糖を測定した。
表５  ＧＲシリーズ化合物の血糖データ
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注：ブランクに比べて、＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１
血糖データから明らかなように、ブランク対照に比べて、デキサメタゾンｄは、マウスの血糖上昇を引き起こしたのに対して、ＣＫおよびＧＲ誘導体は、血糖に関する変化を引き起こさなかった。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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