(57)【要約】  本出願は、ファルネシル二リン酸（ＦＰＰ）を、ハロ酸デハロゲナーゼ（ＨＡＤ）様ヒドロラーゼドメインを含み、かつ二官能性テルペンシンターゼ活性を有する少なくとも１種のポリペプチドと接触させることにより、アルビカノール、ドリメノールおよび／またはそれらの誘導体などのドリマンセスキテルペンの製造方法に関する。本方法は、５インビトロまたはインビボで実行され得る。また、本方法で有用なポリペプチドのアミノ酸配列および記載されたポリペプチドをコードする核酸も提供される。本方法はさらに、ポリペプチドを発現するように遺伝的に改変され、アルビカノール、ドリメノールおよび／またはそれらの誘導体などのドリマンセスキテルペンを産生するのに有用な宿主細胞または生物を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ドリマンセスキテルペンの製造方法であって、
ａ．非環式ファルネシル二リン酸（ＦＰＰ）前駆体を、ハロ酸デハロゲナーゼ（ＨＡＤ）様ヒドロラーゼドメインを含み、かつ二官能性テルペンシンターゼ活性を有するポリペプチドと接触させて、ドリマンセスキテルペンを産生する工程であって、ここで、前記ポリペプチドが、
ｉ．配列番号５３（ＤＤｘｘ（Ｄ／Ｅ））に記載のクラスＩテルペンシンターゼ様モチーフ；および
ｉｉ．配列番号５６（ＤｘＤ（Ｔ／Ｓ）Ｔ）に記載のクラスＩＩテルペンシンターゼ様モチーフ
を含む、工程；ならびに
ｂ．任意で、前記ドリマンセスキテルペンまたは前記ドリマンセスキテルペンを含む混合物を単離する工程
を含む、方法。
【請求項２】
前記ドリマンセスキテルペンが、アルビカノールおよび／またはドリメノールを含む、請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記二官能性テルペンシンターゼ活性を有するポリペプチドが、
ａ．配列番号１、配列番号５、配列番号９、配列番号１２、配列番号１５、配列番号１７、配列番号２０、配列番号２３、配列番号２６、配列番号２９、配列番号３２、配列番号３５、配列番号３８、配列番号４１、配列番号４４、配列番号４７、配列番号５０または配列番号６３と、少なくとも４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配；および
ｂ．配列番号５３、配列番号５４または配列番号５５に記載の配列；および
ｃ．配列番号５６、配列番号５７または配列番号５８に記載の配列
を含む、請求項１記載の方法。
【請求項４】
二官能性テルペンシンターゼ活性を有するポリペプチドをコードする核酸で宿主細胞または非ヒト宿主生物を形質転換することを含み、ここで、前記ポリペプチドが、
ａ．配列番号１、配列番号５、配列番号９、配列番号１２、配列番号１５、配列番号１７、配列番号２０、配列番号２３、配列番号２６、配列番号２９、配列番号３２、配列番号３５、配列番号３８、配列番号４１、配列番号４４、配列番号４７、配列番号５０または配列番号６３のアミノ酸配列を含むか；または
ｂ．ｉ．配列番号１、配列番号５、配列番号９、配列番号１２、配列番号１５、配列番号１７、配列番号２０、配列番号２３、配列番号２６、配列番号２９、配列番号３２、配列番号３５、配列番号３８、配列番号４１、配列番号４４、配列番号４７、配列番号５０または配列番号６３と、少なくとも４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列；および
ｉｉ．配列番号５３、配列番号５４または配列番号５５に記載の配列；および
ｉｉｉ．配列番号５６、配列番号５７または配列番号５８に記載の配列
を含む、請求項１から３までのいずれか１項記載の方法。
【請求項５】
ＦＰＰを産生することが可能な非ヒト宿主生物または宿主細胞を培養し、形質転換して、ハロ酸デハロゲナーゼ（ＨＡＤ）様ヒドロラーゼドメインを含むポリペプチドを、前記ポリペプチドの産生を可能にする条件下で発現することをさらに含み、ここで、前記ポリペプチドは、
ａ．配列番号１、配列番号５、配列番号９、配列番号１２、配列番号１５、配列番号１７、配列番号２０、配列番号２３、配列番号２６、配列番号２９、配列番号３２、配列番号３５、配列番号３８、配列番号４１、配列番号４４、配列番号４７、配列番号５０または配列番号６３のアミノ酸配列を含むか；または
ｂ．ｉ．配列番号１、配列番号５、配列番号９、配列番号１２、配列番号１５、配列番号１７、配列番号２０、配列番号２３、配列番号２６、配列番号２９、配列番号３２、配列番号３５、配列番号３８、配列番号４１、配列番号４４、配列番号４７、配列番号５０または配列番号６３と、少なくとも４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列；および
ｉｉ．配列番号５３、配列番号５４または配列番号５５に記載の配列；および
ｉｉｉ．配列番号５６、配列番号５７または配列番号５８に記載の配列
を含む、請求項１から４までのいずれか１項記載の方法。
【請求項６】
前記ポリペプチドが、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１および／または配列番号６２に記載の１つ以上の保存されたモチーフを含む、請求項３から５までのいずれか１項記載の方法。
【請求項７】
前記ドリマンセスキテルペンまたは前記ドリマンセスキテルペンを含む混合物を単離する、請求項１から６までのいずれか１項記載の方法。
【請求項８】
前記ドリマンセスキテルペンを、少なくとも１種の酵素と接触させてドリマンセスキテルペン誘導体を産生することを含む、請求項１から７までのいずれか１項記載の方法。
【請求項９】
前記ドリマンセスキテルペンを、化学合成または生化学合成を使用してドリマンセスキテルペン誘導体に変換することを含む、請求項１から８までのいずれか１項記載の方法。
【請求項１０】
前記クラスＩテルペンシンターゼ様モチーフが、配列番号５４（ＤＤ（Ｋ／Ｑ／Ｒ）（Ｌ／Ｉ／Ｔ）（Ｄ／Ｅ））を含み、前記クラスＩＩテルペンシンターゼ様モチーフが、配列番号５７（Ｄ（Ｖ／Ｍ／Ｌ）ＤＴＴ）を含み、かつ前記ドリマンセスキテルペンが、アルビカノールである、請求項１から７までのいずれか１項記載の方法。
【請求項１１】
前記ポリペプチドが、
ａ．配列番号１、配列番号５、配列番号９、配列番号１２、配列番号１５、配列番号１７、配列番号２０、配列番号２３、配列番号２６、配列番号２９または配列番号３２と、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列、および
ｂ．配列番号５４（ＤＤ（Ｋ／Ｑ／Ｒ）（Ｌ／Ｉ／Ｔ）（Ｄ／Ｅ））の配列、および
ｃ．配列番号５７（Ｄ（Ｖ／Ｍ／Ｌ／Ｆ）ＤＴＴＳ）の配列
を含み、かつ
前記ドリマンセスキテルペンが、アルビカノールである、請求項１から９までのいずれか１項記載の方法。
【請求項１２】
前記ポリペプチドが、
ａ．配列番号３５、配列番号３８、配列番号４１、配列番号４４、配列番号４７、配列番号５０または配列番号６３と、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列、および
ｂ．配列番号５５の配列、および
ｃ．配列番号５８の配列
を含み；かつ
前記ドリマンセスキテルペンが、ドリメノールである、請求項１から７までのいずれか１項記載の方法。
【請求項１３】
ハロ酸デハロゲナーゼ（ＨＡＤ）様ヒドロラーゼドメインを含み、かつ二官能性テルペンシンターゼ活性を有する単離されたポリペプチドであって、配列番号１または配列番号５のアミノ酸配列を含むかまたは
ａ．配列番号１または配列番号５と、少なくとも４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列；および
ｂ．配列番号５３、配列番号５４または配列番号５５に記載の配列；および
ｃ．配列番号５６、配列番号５７または配列番号４８に記載の配列
を含む、単離されたポリペプチド。
【請求項１４】
前記ポリペプチドが、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１および／または配列番号６２に記載の１つ以上の保存されたモチーフをさらに含む、請求項１３記載の単離されたポリペプチド。
【請求項１５】
ａ．請求項１３または１４記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むか；または
ｂ．配列番号３、配列番号４、配列番号７、配列番号８もしくは配列番号６８またはそれらの逆相補的配列と、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むか；または
ｃ．ストリンジェントな条件下で配列番号３、配列番号４、配列番号７、配列番号８または配列番号６８にハイブリダイズするヌクレオチド分子を含むか；または
ｄ．配列番号３、配列番号４、配列番号７、配列番号８、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５１、配列番号５２、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９もしくは配列番号７０またはそれらの逆相補的配列を含む、単離された核酸分子。
【請求項１６】
ａ．請求項１５記載の核酸分子；または
ｂ．請求項１３または１４記載のポリペプチドをコードする核酸
を含む、ベクター。
【請求項１７】
前記ベクターが、原核生物ベクター、ウイルスベクターまたは真核生物ベクターである、請求項１６記載のベクター。
【請求項１８】
前記ベクターが、発現ベクターである、請求項１６または１７記載のベクター。
【請求項１９】
ａ．請求項１５記載の単離された核酸；または
ｂ．請求項１６から１８までのいずれか１項記載のベクター
を含む、宿主細胞または非ヒト宿主生物。
【請求項２０】
前記細胞が、原核細胞である、請求項５または６記載の方法。
【請求項２１】
前記原核細胞が、細菌細胞である、請求項２０記載の方法。
【請求項２２】
前記細菌細胞が、大腸菌である、請求項２１記載の方法。
【請求項２３】
前記細胞が、真核細胞である、請求項５または６記載の方法。
【請求項２４】
前記真核細胞が、酵母細胞または植物細胞である、請求項２３記載の方法。
【請求項２５】
前記酵母細胞が、サッカロミセス・セレビシエである、請求項２４記載の方法。
【請求項２６】
ドリマンセスキテルペンまたはドリマンセスキテルペンおよび１種以上のテルペンを含む混合物を産生するための請求項１３または１４記載のポリペプチドの使用。
【請求項２７】
前記ドリマンセスキテルペンが、アルビカノールである、請求項２６記載のポリペプチドの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
技術分野
本明細書では、アルビカノール、ドリメノールならびに関連化合物および誘導体を製造する生化学的方法であって、新規ポリペプチドの使用を含む、方法が提供される。
【０００２】
背景
テルペンは、ほとんどの生物（微生物、動植物）で見られる。これらの化合物は、イソプレン単位と呼ばれる５つの炭素単位で構成されており、それらの構造に存在するこれらの単位の数によって分類される。したがって、モノテルペン、セスキテルペンおよびジテルペンは、それぞれ、１０個、１５個および２０個の炭素原子を含むテルペンである。例えば、セスキテルペンは、植物界で広く見られる。多くのセスキテルペン分子は、風味および香りの特性、ならびに化粧品、薬用および抗菌効果で知られている。多数のエスキテルペン炭化水素およびセスキテルペノイドが同定されている。化学合成の手法が開発されてきたが、依然として複雑であり、必ずしも費用対効果が高いとは限らない。
【０００３】
テルペンの生合成生産には、テルペンシンターゼと呼ばれる酵素が関与する。植物界には多数のセスキテルペンシンターゼが存在し、すべて同じ基質（ファルネシル二リン酸、ＦＰＰ）を使用しているが、異なる産物プロファイルを有する。セスキテルペンシンターゼをコードする遺伝子およびｃＤＮＡがクローン化され、対応する組換え酵素が特性評価された。
【０００４】
セスキテルペンのための多くの主要な供給源、例えば、ドリメノールは、セスキテルペンを天然に含有する植物であるが、これらの天然源のセスキテルペンの含有量は、低くなり得る。依然として、新しいテルペン、テルペンシンターゼ、ならびにアルビカノールおよび／またはドリメノールおよびそれらの誘導体などのセスキテルペンを生産するより費用対効果の高い方法を発見する必要性が依然としてある。
【０００５】
概要
本明細書では、ドリマンセスキテルペンの製造方法であって、
ａ．非環式ファルネシル二リン酸（ＦＰＰ）前駆体を、ハロ酸デハロゲナーゼ（ＨＡＤ）様ヒドロラーゼドメインを含み、かつ二官能性テルペンシンターゼ活性を有するポリペプチドと接触させて、ドリマンセスキテルペンを産生する工程であって、ここで、ポリペプチドが、
ｉ．配列番号５３（ＤＤｘｘ（Ｄ／Ｅ））に記載のクラスＩテルペンシンターゼ様モチーフ；および
ｉｉ．配列番号５６（ＤｘＤ（Ｔ／Ｓ）Ｔ）に記載のクラスＩＩテルペンシンターゼ様モチーフ
を含む、工程；および
ｂ．任意で、ドリマンセスキテルペンまたはドリマンセスキテルペンを含む混合物を単離する工程
を含む、製造方法が提供される。
【０００６】
一態様では、ドリマンセスキテルペンは、アルビカノールおよび／またはドリメノールを含む。
【０００７】
さらなる態様では、上記の方法において、二官能性テルペンシンターゼ活性を有するポリペプチドは、
ａ．配列番号１、配列番号５、配列番号９、配列番号１２、配列番号１５、配列番号１７、配列番号２０、配列番号２３、配列番号２６、配列番号２９、配列番号３２、配列番号３５、配列番号３８、配列番号４１、配列番号４４、配列番号４７、配列番号５０または配列番号６３と、少なくとも４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配；および
ｂ．配列番号５３、配列番号５４または配列番号５５に記載の配列；および
ｃ．配列番号５６、配列番号５７または配列番号５８に記載の配列
を含む。
【０００８】
一実施形態では、上記の方法は、ドリマンセスキテルペンを、少なくとも１種の酵素と接触させてドリマンセスキテルペン誘導体を産生することを含む。別の実施形態では、上記の方法は、化学合成または生化学合成を使用してドリマンセスキテルペンをドリマンセスキテルペン誘導体に変換することを含む。
【０００９】
一態様では、上記の方法は、上記ポリペプチドをコードする核酸で宿主細胞または非ヒト宿主生物を形質転換することを含む。
【００１０】
一態様では、本方法は、ＦＰＰを産生することが可能な非ヒト宿主生物または宿主細胞を培養し、形質転換して、ＨＡＤ様ヒドロラーゼドメインを含むポリペプチドを、該ポリペプチドの産生を可能にする条件下で発現することをさらに含み、ここで、該ポリペプチドは、
ａ．配列番号１、配列番号５、配列番号９、配列番号１２、配列番号１５、配列番号１７、配列番号２０、配列番号２３、配列番号２６、配列番号２９、配列番号３２、配列番号３５、配列番号３８、配列番号４１、配列番号４４、配列番号４７、配列番号５０または配列番号６３のアミノ酸配列を含むか；または
ｂ．ｉ．配列番号１、配列番号５、配列番号９、配列番号１２、配列番号１５、配列番号１７、配列番号２０、配列番号２３、配列番号２６、配列番号２９、配列番号３２、配列番号３５、配列番号３８、配列番号４１、配列番号４４、配列番号４７、配列番号５０または配列番号６３と、少なくとも４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列；および
ｉｉ．配列番号５３、配列番号５４または配列番号５５に記載の配列；および
ｉｉｉ．配列番号５６、配列番号５７または配列番号５８に記載の配列
を含む。
【００１１】
さらなる態様では、上記の方法において、ポリペプチドは、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、および／または配列番号６２に記載の１つ以上の保存されたモチーフを含む。
【００１２】
一実施形態では、上記の方法のクラスＩテルペンシンターゼ様モチーフは、配列番号５４（ＤＤ（Ｋ／Ｑ／Ｒ）（Ｌ／Ｉ／Ｔ）（Ｄ／Ｅ））を含み、クラスＩＩテルペンシンターゼ様モチーフは、配列番号５７（Ｄ（Ｖ／Ｍ／Ｌ）ＤＴＴ）を含み、かつドリマンセスキテルペンは、アルビカノールである。
【００１３】
一実施形態では、上記の方法では、ポリペプチドは、
ａ．配列番号１、配列番号５、配列番号９、配列番号１２、配列番号１５、配列番号１７、配列番号２０、配列番号２３、配列番号２６、配列番号２９または配列番号３２と、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列、および
ｂ．配列番号５４（ＤＤ（Ｋ／Ｑ／Ｒ）（Ｌ／Ｉ／Ｔ）（Ｄ／Ｅ））の配列、および
ｃ．配列番号５７（Ｄ（Ｖ／Ｍ／Ｌ／Ｆ）ＤＴＴＳ）の配列
を含み；かつ
ドリマンセスキテルペンは、アルビカノールである。
【００１４】
さらなる実施形態では、上記の方法において、ポリペプチドは、
ａ．配列番号３５、配列番号３８、配列番号４１、配列番号４４、配列番号４７、配列番号５０または配列番号６３と、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列、および
ｂ．配列番号５５の配列、および
ｃ．配列番号５８の配列
を含み；かつ
ドリマンセスキテルペンは、ドリメノールである。
【００１５】
また、ＨＡＤ様ヒドロラーゼドメインを含み、かつ二官能性テルペンシンターゼ活性を有する単離されたポリペプチドであって、配列番号１または配列番号５のアミノ酸配列を含むかまたは
ａ．配列番号１または配列番号５と、少なくとも４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列；および
ｂ．配列番号５３、配列番号５４または配列番号５５に記載の配列；および
ｃ．配列番号５６、配列番号５７または配列番号４８に記載の配列
を含む、単離されたポリペプチドも提供される。
【００１６】
一態様では、単離されたポリペプチドは、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、および／または配列番号６２に記載の１つまたは複数の保存されたモチーフをさらに含む。
【００１７】
本明細書では、
ａ．請求項１３または１４記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むか；または
ｂ．配列番号３、配列番号４、配列番号７、配列番号８もしくは配列番号６８またはそれらの逆相補的配列と、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むか；または
ｃ．ストリンジェントな条件下で配列番号３、配列番号４、配列番号７、配列番号８または配列番号６８にハイブリダイズするヌクレオチド分子を含むか；または
ｄ．配列番号３、配列番号４、配列番号７、配列番号８、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５１、配列番号５２、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９もしくは配列番号７０またはそれらの逆相補的配列を含む、単離された核酸分子が提供される。
【００１８】
また、上記の核酸分子または上記のポリペプチドをコードする核酸を含むベクターも提供される。一態様では、ベクターは、発現ベクターである。別の態様では、ベクターは、原核生物ベクター、ウイルスベクターまたは真核生物ベクターである。
【００１９】
上記の核酸または上記のベクターを含む宿主細胞または非ヒト生物がさらに提供される。
【００２０】
一態様では、宿主細胞または非ヒト生物は、原核細胞または真核細胞または微生物または真菌細胞である。
【００２１】
一態様では、原核細胞は、細菌細胞である。さらなる態様では、細菌細胞は、大腸菌（E.coli.）である。
【００２２】
別の態様では、宿主細胞または非ヒト生物は、真核細胞である。一態様では、真核細胞は、酵母細胞または植物細胞である。さらなる態様では、酵母細胞は、サッカロミセス・セレビシエである。
【００２３】
本明細書では、ドリマンセスキテルペンまたはドリマンセスキテルペンおよび１種以上のテルペンを含む混合物を産生するための上記のポリペプチドの使用が提供される。
【００２４】
一態様では、ポリペプチドの上記使用において、ドリマンセスキテルペンは、アルビカノールである。別の態様では、ポリペプチドの上記使用において、ドリマンセスキテルペンは、ドリメノールである。
【００２５】
使用した略語
ｂｐ  塩基対
ｋｂ  キロベース
ＤＮＡ  デオキシリボ核酸
ｃＤＮＡ  相補ＤＮＡ
ＤＴＴ  ジチオトレイトール
ＦＰＰ  ファルネシル二リン酸
ＧＣ  ガスクロマトグラフ
ＨＡＤ  ハロ酸デハロゲナーゼ
ＩＰＴＧ  イソプロピル−Ｄ−チオガラクト−ピラノシド
ＬＢ  溶原ブロス
ＭＳ  質量分析計／質量分析
ＭＶＡ  メバロン酸
ＰＣＲ  ポリメラーゼ連鎖反応
ＲＮＡ  リボ核酸
ｍＲＮＡ  メッセンジャーリボ核酸
ｍｉＲＮＡ  マイクロＲＮＡ
ｓｉＲＮＡ  低分子干渉ＲＮＡ
ｒＲＮＡ  リボソームＲＮＡ
ｔＲＮＡ  トランスファーＲＮＡ
【００２６】
定義
「ポリペプチド」という用語は、連続的に重合したアミノ酸残基、例えば、少なくとも１５残基、少なくとも３０残基、少なくとも５０残基のアミノ酸配列を意味する。本明細書のいくつかの実施形態では、ポリペプチドは、酵素またはその断片またはその変異体であるアミノ酸配列を含む。
【００２７】
「タンパク質」という用語は、アミノ酸が共有ペプチド結合によって連結されている任意の長さのアミノ酸配列を指し、天然に存在するかまたは合成のオリゴペプチド、ペプチド、ポリペプチド、および全長タンパク質を含む。
【００２８】
「単離された」ポリペプチドという用語は、当該技術分野で公知の任意の方法または方法の組み合わせによってその自然環境から除去されるアミノ酸配列を指し、組換え、生化学、および合成方法を含む。
【００２９】
「二官能性テルペンシンターゼ」または「二官能性テルペンシンターゼ活性を有するポリペプチド」という用語は、クラスＩおよびクラスＩＩテルペンシンターゼドメインを含み、かつプロトン開始環化の二官能性テルペンシンターゼ活性およびイオン化開始環化触媒活性を有するポリペプチドを指す。本明細書に記載される二官能性テルペンシンターゼは、ハロ酸デハロゲナーゼ（ＨＡＤ）様ヒドロラーゼスーパーファミリー（Ｉｎｔｅｒｐｒｏのタンパク質スーパーファミリーＩＰＲ０２３２１４、http：//www.ebi.ac.uk/interpro/entry/IPR023214；Ｐｆａｍのタンパク質スーパーファミリーＰＦ１３４１９、http://pfam.xfam.org/family/PF13419）に属するポリペプチドに特徴的なＨＡＤ様ヒドロラーゼドメインを含む。ＨＡＤ様ヒドロラーゼドメインは、ＨＡＤ様ヒドロラーゼファミリーおよび関連機能のメンバーとアミノ酸配列の類似性を有するポリペプチドの一部である。ＨＡＤ様ヒドロラーゼドメインは、このタンパク質ファミリーに特徴的なアミノ酸モチーフまたはシグネチャーを検索することにより、ポリペプチドで同定され得る。このような検索を実行するためのツールは、以下のウェブサイト：ebi.ac.uk/interpro/またはebi.ac.uk/Tools/hmmer/で入手可能である。タンパク質は、通常、１つ以上の機能的領域またはドメインで構成されている。ドメインのさまざまな組み合わせによって、自然界に見られる多様なタンパク質が生み出される。したがって、タンパク質内で発生するドメインを同定することにより、その機能に関する洞察を得ることができる。ＨＡＤ様ヒドロラーゼドメインおよび／または特徴的なＨＡＤ様ヒドロラーゼモチーフを含むポリペプチドは、リガンドのリン酸基または二リン酸基の結合および切断において機能する。二官能性テルペンシンターゼは、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、および／または配列番号６２に示される保存されたモチーフＡ、Ｂ、Ｃ、および／またはＤのうちの１つ以上も含み得る。
【００３０】
「ドリマンセスキテルペン」という用語は、図１に示されるドリマン様炭素骨格構造を有するテルペンを指す。
【００３１】
「クラスＩテルペンシンターゼ」という用語は、イオン化開始反応を触媒するテルペンシンターゼ、例えば、モノテルペンシンターゼおよびセスキテルペンシンターゼを指す。
【００３２】
「クラスＩテルペンシンターゼモチーフ」または「クラスＩテルペンシンターゼ様モチーフ」という用語は、保存されたＤＤｘｘ（Ｄ／Ｅ）モチーフを含むテルペンシンターゼの活性部位を指す。このクラスＩモチーフのアスパラギン酸残基は、例えば、二リン酸基の結合に関与する二価金属イオン（ほとんどの場合Ｍｇ２＋）に結合し、かつイオン化および基質のアリル二リン酸結合の切断を触媒する。
【００３３】
「クラスＩＩテルペンシンターゼ」という用語は、プロトン化開始環化反応を触媒する、例えば、典型的には、トリテルペンおよびラブダンジテルペンの生合成に関与するテルペンシンターゼを指す。クラスＩＩテルペンシンターゼでは、プロトン化開始反応は、例えば、酸性アミノ酸がプロトンを末端二重結合に供与することを含み得る。
【００３４】
「クラスＩＩテルペンシンターゼモチーフ」または「クラスＩＩテルペンシンターゼ様モチーフ」という用語は、保存されたＤｘＤＤまたはＤｘＤ（Ｔ／Ｓ）Ｔモチーフを含むテルペンシンターゼの活性部位を指す。
【００３５】
「アルビカノールシンターゼ」または「アルビカノールシンターゼ活性を有するポリペプチド」または「アルビカノールシンターゼタンパク質」という用語は、その立体異性体のいずれか１つの形またはそれらの混合物の形で、アルビカノールの合成を触媒し、非環式テルペンピロリン酸、特にファルネシル二リン酸（ＦＰＰ）から出発することが可能なポリペプチドを指す。アルビカノールは、唯一の産物であり得るか、セスキテルペンの混合物の一部であり得る。
【００３６】
「ドリメノールシンターゼ」または「ドリメノールシンターゼ活性を有するポリペプチド」または「ドリメノールシンターゼタンパク質」という用語は、その立体異性体のいずれか１つの形またはそれらの混合物の形で、ドリメノールの合成を触媒し、非環式テルペンピロリン酸、特にファルネシル二リン酸（ＦＰＰ）から出発することが可能なポリペプチドを指す。ドリメノールは、唯一の産物であり得るか、セスキテルペンの混合物の一部であり得る。
【００３７】
「生物学的機能」、「機能」、「生物活性」または「活性」という用語は、アルビカノールおよび／またはドリメノールの形成を触媒するか、アルビカノールおよび／またはドリメノールおよび１種以上のテルペンを含む化合物の混合物の形成を触媒する、二官能性テルペンシンターゼの能力を指す。
【００３８】
「テルペンの混合物」または「セスキテルペンの混合物」という用語は、アルビカノールおよび／またはドリメノールを含み、さらに１種以上の追加のテルペンまたはセスキテルペンも含み得るテルペンまたはセスキテルペンの混合物を指す。
【００３９】
「核酸配列」、「核酸」、「核酸分子」、および「ポリヌクレオチド」という用語は、交換可能に使用される、ヌクレオチドの配列を意味する。核酸配列は、一本鎖または二本鎖デオキシリボヌクレオチドまたは任意の長さのリボヌクレオチドであり、かつ遺伝子、エクソン、イントロン、センスおよびアンチセンス相補配列、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ、組換え核酸配列、単離および精製された天然に存在するＤＮＡおよび／またはＲＮＡ配列、合成ＤＮＡおよびＲＮＡ配列、断片、プライマーおよび核酸プローブのコード配列および非コード配列を含み得る。当業者は、ＲＮＡの核酸配列が、チミン（Ｔ）がウラシル（Ｕ）に置き換えられているという違いを有するＤＮＡ配列と同一であることを認識している。「ヌクレオチド配列」という用語は、また、別個の断片の形でポリヌクレオチド分子またはオリゴヌクレオチド分子を含むものとしてまたはより大きな核酸の成分として理解されるべきである。
【００４０】
「単離された核酸」または「単離された核酸配列」は、核酸または核酸配列が天然に存在するものとは異なる環境にある核酸または核酸配列を指し、内因性汚染物質を実質的に含まないものを含み得る。核酸に対して適用される「天然に存在する」という用語は、本明細書で使用される場合、核酸が、自然界の生物の細胞に見られ、かつ実験室で人間によって意図的に改変されていないことを指す。
【００４１】
「組換え核酸配列」は、実験室的方法（例えば、分子クローニング）を使用して、ソース以外から遺伝物質を集め、天然に存在しない核酸配列を創出または改変することにより生じる核酸配列であり、そうでなければ生物学的有機体には見られないだろう。
【００４２】
「組換えＤＮＡ技術」は、例えば、WeigelおよびGlazebrook編のLaboratory Manuals, 2002年, Cold Spring Harbor Lab Press；およびSambrookら, 1989年, Cold Spring Harbor, NY, Cold Spring Harbor Laboratory Pressに記載されるように、組換え核酸配列を準備するための分子生物学手順を指す。
【００４３】
「遺伝子」という用語は、適切な調節領域、例えばプロモーターに作動可能に連結されているＲＮＡ分子、例えば、細胞内のｍＲＮＡに転写される領域を含むＤＮＡ配列を意味する。したがって、遺伝子は、複数の作動可能に連結されている配列、例えば、プロモーター、例えば、翻訳開始に関与する配列を含む５’リーダー配列、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡのコード領域、イントロン、エクソン、および／または例えば、転写終結部位を含む３’非翻訳配列を含み得る。
【００４４】
「キメラ遺伝子」とは、通常、種において本質的に見られない遺伝子、特に、本質的に互いに関連していない核酸配列の１つ以上の部分が存在する遺伝子を指す。例えば、プロモーターは、転写された領域の一部または全部または別の調節領域と本質的に関連していない。「キメラ遺伝子」という用語は、プロモーターまたは転写調節配列が１つ以上のコード配列またはアンチセンス、すなわち、センス鎖の逆相補体または逆方向反復配列（センスおよびアンチセンス、それによってＲＮＡ転写産物が転写時に二本鎖ＲＮＡを形成する）に作動可能に連結されている発現構築物を含むと理解される。「キメラ遺伝子」という用語には、１つ以上のコード配列の部分を組み合わせて新しい遺伝子を産生することにより得られる遺伝子も含まれる。
【００４５】
「３’ＵＴＲ」または「３’非翻訳配列」（「３’非翻訳領域」または「３’末端」とも呼ばれる）は、遺伝子のコード配列の下流に見られる核酸配列を指し、これは、例えば、転写終結部位および（すべてではないがほとんどの真核ｍＲＮＡにおいて）ポリアデニル化シグナル、例えばＡＡＵＡＡＡまたはその変異体を含む。転写の終結後、ｍＲＮＡ転写物は、ポリアデニル化シグナルの下流で切断され、翻訳部位、例えば細胞質へのｍＲＮＡの輸送に関与する、ポリ（Ａ）尾部が付加され得る。
【００４６】
「遺伝子の発現」は、「異種発現」および「過剰発現」を包含し、遺伝子の転写およびｍＲＮＡのタンパク質への翻訳を含む。過剰発現とは、トランスジェニック細胞または生物のｍＲＮＡ、ポリペプチドおよび／または酵素活性のレベルによって測定される遺伝子産物の産生を指し、これは同様の遺伝的背景の非形質転換細胞または生物の産生レベルを超える。
【００４７】
「発現ベクター」は、本明細書で使用される場合、外来または外因性ＤＮＡを宿主細胞に送達するための分子生物学的方法および組換えＤＮＡ技術を使用して操作された核酸分子を意味する。発現ベクターは、通常、ヌクレオチド配列の適切な転写に必要な配列を含む。コード領域は、通常、目的のタンパク質をコードするが、ＲＮＡ、例えばアンチセンスＲＮＡ、ｓｉＲＮＡなどもコードし得る。
【００４８】
「発現ベクター」は、本明細書で使用される場合、ウイルスベクター、バクテリオファージおよびプラスミドを含むがこれらに限定されない任意の線形または環状組換えベクターを含む。当業者は、発現系に従って適切なベクターを選択することができる。一実施形態では、発現ベクターは、転写プロモーター、オペレーターまたはエンハンサーなどの、転写、翻訳、開始および終結を制御する、少なくとも１つの調節配列に作動可能に連結されている本明細書の実施形態の核酸またはｍＲＮＡリボソーム結合部位、および任意で、少なくとも１つの選択マーカーを含む。調節配列が、本明細書の実施形態の核酸に機能的に関連する場合、ヌクレオチド配列は、「作動可能に連結されている」。
【００４９】
「調節配列」は、本明細書の実施形態の核酸配列の発現レベルを決定し、調節配列に作動可能に連結されている核酸配列の転写速度を調節することができる核酸配列を指す。調節配列は、プロモーター、エンハンサー、転写因子、プロモーター要素などを含む。「プロモーター」とは、ＲＮＡポリメラーゼの結合部位と、転写因子結合部位、リプレッサーおよびアクチベータータンパク質結合部位を含むがこれらに限定されない適切な転写に必要な他の因子を提供することにより、コード配列の発現を制御する核酸配列を指す。プロモーターという用語の意味は、「プロモーター調節配列」という用語も含む。プロモーター調節配列は、関連するコード核酸配列の転写、ＲＮＡプロセシングまたは安定性に影響を与え得る上流および下流の要素を含み得る。プロモーターは、天然由来配列および合成配列を含む。コード核酸配列は、通常、転写開始部位で始まる転写の方向に関してプロモーターの下流に位置する。
【００５０】
「構成的プロモーター」という用語は、作動可能に連結されている核酸配列の継続的な転写を可能にする調節されていないプロモーターを指す。
【００５１】
本明細書で使用される場合、「作動可能に連結されている」という用語は、機能的関係にあるポリヌクレオチド要素の連結を指す。核酸は、別の核酸配列と機能的な関係にある場合、「作動可能に連結されている」。例えば、プロモーターまたはむしろ転写調節配列は、コード配列の転写に影響を与える場合、コード配列に作動可能に連結されている。作動可能に連結されているとは、連結されているＤＮＡ配列が、通常、連続していることを意味する。プロモーター配列に関連するヌクレオチド配列は、形質転換される植物に関して同種または異種起源のものであり得る。配列はまた、完全にまたは部分的に合成であってもよい。起源に関係なく、プロモーター配列に関連する核酸配列は、本明細書の実施形態のポリペプチドに結合した後に連結されるプロモーター特性に従って発現またはサイレンシングされる。関連する核酸は、生物全体で常にまたは特定の時間にまたは特定の組織、細胞または細胞区画で発現または抑制されることが望ましいタンパク質をコードし得る。このようなヌクレオチド配列は、特に、それにより改変または形質転換された宿主細胞または生物に望ましい表現型特性を付与するタンパク質をコードする。より具体的には、関連するヌクレオチド配列は、細胞または生物において、アルビカノールおよび／またはドリメノールまたはアルビカノールおよび／またはドリメノールを含む混合物またはアルビカノールおよび／またはドリメノールならびに１種以上のテルペンを含む混合物の産生をもたらす。特に、ヌクレオチド配列は、二官能性テルペンシンターゼをコードする。
【００５２】
「標的ペプチド」とは、タンパク質またはポリペプチドを細胞内オルガネラ、すなわちミトコンドリアまたは色素体または細胞外空間（分泌シグナルペプチド）に標的化するアミノ酸配列を指す。標的ペプチドをコードする核酸配列は、タンパク質またはポリペプチドのアミノ末端、例えばＮ末端をコードする核酸配列に融合され得るか、天然の標的化ポリペプチドを置き換えるために使用され得る。
【００５３】
「プライマー」という用語は、テンプレート核酸配列にハイブリダイズされ、テンプレートに相補的な核酸配列の重合に使用される短い核酸配列を指す。
【００５４】
本明細書で使用される場合、「宿主細胞」または「形質転換細胞」という用語は、少なくとも１つの核酸分子、例えば、所望のタンパク質または核酸配列をコードする組換え遺伝子を宿すように変更された細胞（または生物）を指し、転写時に、アルビカノールおよび／またはドリメノールの産生に有用な二官能性テルペンシンターゼタンパク質を産生する。宿主細胞は、特に、細菌細胞、真菌細胞または植物細胞である。宿主細胞は、宿主細胞の核またはオルガネラゲノムに組み込まれた組換え遺伝子を含み得る。代替的に、宿主は、染色体外に組換え遺伝子を含んでもよい。
【００５５】
相同配列は、オルソログ配列またはパラログ配列を含む。系統発生法、配列類似性およびハイブリダイゼーション法を含むオルソログまたはパラログを同定する方法は、当該技術分野で知られており、本明細書に記載されている。
【００５６】
パラログは、類似した配列および類似した機能を有する２つ以上の遺伝子を生じさせる遺伝子の複製から生じる。パラログは、通常、一緒にクラスター化し、関連する植物種内の遺伝子の複製によって形成される。パラログは、ペアワイズブラスト分析を使用してまたはＣＬＵＳＴＡＬなどのプログラムを使用して遺伝子ファミリーの系統発生分析中に、類似した遺伝子の群に見られる。パラログでは、コンセンサス配列は、関連する遺伝子内の配列に特徴的であり、遺伝子の同様の機能を有していると特定され得る。
【００５７】
オルソログまたはオルソログ配列は、共通の祖先から派生した種に見られるため、互いに類似した配列である。例えば、共通の祖先を有する植物種は、類似の配列および機能を有する多くの酵素を含むことが知られている。当業者は、例えば、ＣＬＵＳＴＡＬまたはＢＬＡＳＴプログラムを使用して、１つの種の遺伝子ファミリーについて多遺伝子ツリーを構築することにより、オルソログ配列を同定し、オルソログの機能を予測することができる。相同配列間で類似の機能を同定または確認するための方法は、（ノックアウト／ノックダウンにおいて）関連するポリペプチドを過剰発現または欠く、宿主細胞または生物、例えば植物または微生物で転写プロファイルを比較することによるものである。当業者は、共通の５０％を超える調節転写物または共通の７０％を超える調節転写物または共通の９０％を超える調節転写物を有する、類似の転写物プロファイルを有する遺伝子が、同様の機能を有することを理解するであろう。本明細書の配列の相同体、パラログ、オルソログおよび他の任意の変異体は、宿主細胞、植物などの生物または二官能性テルペンシンターゼタンパク質を産生する微生物を作製することにより同様に機能すると予想される。
【００５８】
「選択可能なマーカー」という用語は、発現時に選択可能なマーカーを含む細胞を選択するために使用され得る遺伝子を指す。選択可能なマーカーの例を、以下に記載する。当業者は、異なる抗生物質、殺菌剤、栄養要求性または除草剤の選択可能なマーカーが異なる標的種に適用可能であることを知っている。
【００５９】
本出願の目的のための「ドリメノール」は、（−）−ドリメノール（ＣＡＳ：４６８−６８−８）に関する。
【００６０】
本出願の目的のための「アルビカノール」は、（＋）−アルビカノール（ＣＡＳ：５４６３２−０４−１）に関する。
【００６１】
「生物」という用語は、植物または微生物などの非ヒト多細胞生物または単細胞生物を指す。特に、微生物は、細菌、酵母、藻類または真菌である。
【００６２】
「植物」という用語は、植物プロトプラスト、植物組織、再生植物または植物の一部を生じる植物細胞組織培養物または植物器官、例えば、根、茎、葉、花、花粉、胚珠、胚、果物などを含む植物細胞を含むように交換可能に使用される。本明細書の実施形態の方法を実行するために、任意の植物が使用され得る。
【００６３】
特定の生物または細胞は、本明細書に記載の核酸での形質転換の前にまたは前記核酸と一緒に、ＦＰＰを天然に産生する場合またはＦＰＰを天然に産生しないがＦＰＰを産生するために形質転換される場合、「ＦＰＰを産生できる」ことを意味する。天然に存在する生物または細胞よりも大量のＦＰＰを産生するように形質転換された生物または細胞も、「ＦＰＰを産生できる生物または細胞」に含まれる。
【００６４】
本明細書の詳細な説明および添付の特許請求の範囲の場合、「または」の使用は、特に明記しない限り「および／または」を意味する。同様に、「含む（comprise）」、「含む（comprises）」「含む（comprising）」、「含む（include）」、「含む（includes）」および「含む（including）」は、交換可能であり、限定することを意図するものではない。
【００６５】
さらに、様々な実施形態の説明において、「含む（comprising）」という用語を使用する場合、当業者は、いくつかの特定の例では、「から本質的になる」または「からなる」という用語を使用して代替的に記載できることを理解するであろうことを理解されたい。
【００６６】
詳細な説明
本明細書では、配列番号３、配列番号４、配列番号７、配列番号８または配列番号６８のヌクレオチド配列と、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むか、配列番号３、配列番号４、配列番号７、配列番号８、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５１、配列番号５２、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９もしくは配列番号７０またはそれらの逆相補的配列を含む核酸分子が提供される。
【００６７】
一実施形態によれば、核酸分子は、配列番号３、配列番号４、配列番号７、配列番号８、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５１、配列番号５２、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９もしくは配列番号７０またはそれらの逆相補的配列からなる。
【００６８】
一実施形態では、本明細書の実施形態の核酸は、ヒトクチタケ属（Cryptoporus）もしくはエブリコ属（Laricifomes）または他の真菌種に天然に存在し得るか、配列番号３もしくは配列番号７またはそれらの逆相補体を改変することにより得ることができる。
【００６９】
別の実施形態では、核酸は、ヒトクチタケ属またはエブリコ属の真菌から単離されるか、それらに由来する。さらなる実施形態では、核酸は、ヒトクチタケ（Cryptoporus volvatus）またはエブリコ（Laricifomes officinalis）から単離されるか、それらに由来する。
【００７０】
さらに、配列番号３もしくは配列番号７またはそれらの逆相補体を改変することによって得られるヌクレオチド配列であって、当該技術分野において公知の方法を使用して、例えば、欠失、挿入および／または置換突然変異などのあらゆる種類の突然変異を導入することにより、配列番号３もしくは配列番号７の配列またはそれらの逆相補体を改変することによって得られるすべての配列を包含する、ヌクレオチド配列が提供される。配列番号３もしくは配列番号７またはそれらの逆相補体の突然変異によって得られる配列を含む核酸は、本明細書の実施形態に含まれるが、ただし、それらが含む配列が、上記の実施形態のいずれかに定義された配列番号３もしくは配列番号７またはそれらの逆相補体の定義された配列同一性を少なくとも共有することを条件とし、さらに、それらが、ＨＡＤ様ヒドロラーゼドメインを含みかつ二官能性テルペンシンターゼ活性を有するポリペプチドをコードして、ドリマンセスキテルペンを産生することを条件とし、ここで、ポリペプチドは、（１）配列番号５３（ＤＤｘｘ（Ｄ／Ｅ））に記載のクラスＩテルペンシンターゼ様モチーフ、および（２）配列番号５６（ＤｘＤ（Ｔ／Ｓ）Ｔ）に記載のクラスＩＩテルペンシンターゼ様モチーフを含む。二官能性テルペンシンターゼ活性を有するポリペプチドは、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、および／または配列番号６２に記載の１つ以上の保存されたモチーフをさらに含み得る。突然変異は、これらの核酸のあらゆる種類の突然変異、例えば、配列番号３または配列番号７のＤＮＡ配列の１つ以上のヌクレオチドの点突然変異、欠失突然変異、挿入突然変異および／またはフレームシフト突然変異であり得る。一実施形態では、本明細書の実施形態の核酸は切断され得るが、ただし、これが本明細書に記載のポリペプチドをコードすることを条件とする。
【００７１】
変異体核酸は、そのヌクレオチド配列を特定の発現系に適合させるために調製され得る。例えば、アミノ酸が特定のコドンによってコードされている場合、細菌発現システムは、ポリペプチドをより効率的に発現することが知られている。
【００７２】
遺伝暗号の縮重により、２つ以上のコドンが同じアミノ酸配列をコードする場合があり、複数の核酸配列が同じタンパク質またはポリペプチドをコードすることができ、これらのＤＮＡ配列はすべて本明細書の実施形態に含まれる。適切な場合、二官能性テルペンシンターゼをコードする核酸配列は、宿主細胞における発現の増加のために最適化されてもよい。例えば、本明細書の実施形態のヌクレオチドは、発現を改善するために宿主に特有のコドンを使用して合成され得る。一実施形態では、核酸分子は、配列番号４、配列番号８、配列番号１１、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１９、配列番号２２、配列番号２５、配列番号２８、配列番号３１、配列番号３４、配列番号３７、配列番号４０、配列番号４３、配列番号４６、配列番号４９、配列番号５２、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９または配列番号７０またはそれらの逆相補的配列を含む。
【００７３】
一実施形態では、本明細書で提供されるのは、配列番号３、配列番号４、配列番号７、配列番号８、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５１、配列番号５２、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９または配列番号７０のヌクレオチド配列を含む単離配列、組換え配列または合成核酸配列であり、
配列番号１、配列番号５、配列番号９、配列番号１２、配列番号１５、配列番号１７、配列番号２０、配列番号２３、配列番号２６、配列番号２９、配列番号３２、配列番号３５、配列番号３８、配列番号４１、配列番号４４、配列番号４７、配列番号５０もしくは配列番号６３のアミノ酸配列を含む二官能性テルペンシンターゼまたはそれらの機能的断片をコードし、ＦＰＰ前駆体由来の細胞内でドリマンセスキテルペンの産生を触媒する。さらなる実施形態では、ドリマンセスキテルペンは、アルビカノールおよび／またはドリメノールを含む。
【００７４】
本明細書では、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡおよびＲＮＡ配列も提供される。二官能性テルペンシンターゼまたはその変異体をコードする核酸配列は、本明細書では二官能性テルペンシンターゼをコードする配列と呼ばれる。
【００７５】
一実施形態によれば、配列番号３、配列番号４、配列番号７、配列番号８または配列番号６８の核酸は、実施例に記載されるように得られた二官能性テルペンシンターゼをコードする二官能性テルペンシンターゼ遺伝子のコード配列である。
【００７６】
配列番号３、配列番号４、配列番号７、配列番号８または配列番号６８のポリヌクレオチドの断片は、本明細書の実施形態のポリヌクレオチドの長さが、特に、少なくとも１５ｂｐ、少なくとも３０ｂｐ、少なくとも４０ｂｐ、少なくとも５０ｂｐおよび／または少なくとも６０ｂｐである連続したヌクレオチドを指す。特に、ポリヌクレオチドの断片は、少なくとも２５、より具体的には少なくとも５０、より具体的には少なくとも７５、より具体的には少なくとも１００、より具体的には少なくとも１５０、より具体的には少なくとも２００、より具体的には少なくとも３００、より具体的には少なくとも４００、より具体的には少なくとも５００、より具体的には少なくとも６００、より具体的には少なくとも７００、より具体的には少なくとも８００、より具体的には少なくとも９００、より具体的には少なくとも１０００の本明細書の実施形態のポリヌクレオチドの連続ヌクレオチドを含む。限定されることなく、本明細書のポリヌクレオチドの断片は、ＰＣＲプライマーとして、および／またはプローブとしてまたはアンチセンス遺伝子サイレンシングまたはＲＮＡｉのために使用され得る。
【００７７】
本明細書の実施形態のポリヌクレオチドを含む遺伝子は、当該技術分野で公知の方法により、添付の配列表に見られるような利用可能なヌクレオチド配列情報に基づいてクローニングできることは当業者には明らかである。これらには、例えば一方がセンス方向で生成され、センス鎖の合成を開始し、他方が逆相補的に作成され、アンチセンス鎖を生成するような遺伝子のフランキング配列を表すＤＮＡプライマーの設計が含まれる。ポリメラーゼ連鎖反応で使用されるような熱安定性ＤＮＡポリメラーゼは、このような実験を実行するためによく使用されている。代替的に、遺伝子を表すＤＮＡ配列を化学的に合成し、その後、例えば大腸菌などの適合性のある細菌を増殖させることができるＤＮＡベクター分子に導入することができる。
【００７８】
本明細書で提供される関連する実施形態では、二官能性テルペンシンターゼ活性を有するポリペプチドをコードする核酸配列を検出するためのＰＣＲプライマーおよび／またはプローブが提供される。当業者は、配列番号３、配列番号４、配列番号７、配列番号８または配列番号６８に基づいて、二官能性テルペンシンターゼまたはその機能的断片をコードする核酸配列を増幅する縮重または特異的ＰＣＲプライマー対を合成する方法を知っている。二官能性テルペンシンターゼをコードする核酸配列のための検出キットには、二官能性テルペンシンターゼをコードする核酸配列に特異的なプライマーおよび／またはプローブ、ならびにサンプル中の二官能性テルペンシンターゼをコードする核酸配列を検出するためにプライマーおよび／またはプローブを使用する関連プロトコルが含まれてよい。かかる検出キットを使用して、植物、生物、微生物または細胞が改変されているかどうか、すなわち、二官能性テルペンシンターゼをコードする配列で形質転換されているかどうかを判定することができる。
【００７９】
本明細書の実施形態に従って変異体ＤＮＡ配列の機能を試験するために、目的の配列は選択可能またはスクリーニング可能なマーカー遺伝子に作動可能に連結され、レポーター遺伝子の発現は、一過性発現アッセイで、例えば微生物またはプロトプラストまたは安定的に形質転換された植物で試験される。当業者は、発現を駆動できるＤＮＡ配列がモジュールとして構築されることを認識するであろう。したがって、短いＤＮＡ断片の発現レベルは、最長の断片の発現レベルとは異なる場合があり、互いに異なる場合がある。また、本明細書で提供されるのは、本明細書で提供される二官能性テルペンシンターゼタンパク質をコードする核酸配列の機能的等価物、すなわち、ストリンジェントな条件下で配列番号３、配列番号４、配列番号７、配列番号８または配列番号６８の核酸配列にハイブリダイズするヌクレオチド配列である。
【００８０】
本明細書で使用される場合、特定の条件下でのハイブリダイゼーションまたはハイブリダイズという用語は、互いに有意に同一または相同なヌクレオチド配列が互いに結合したままであるハイブリダイゼーションおよび洗浄の条件を説明することを意図している。条件は、少なくとも約７０％、例えば少なくとも約８０％、および例えば少なくとも約８５％、９０％または９５％同一である配列が、互いに結合したままであるようなものであり得る。本明細書では、低ストリンジェンシー、中ストリンジェンシー、および高ストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件の定義が提供される。
【００８１】
Ausubelらに例示されているように、最小限の実験で適切なハイブリダイゼーション条件を当業者が選択することができる（1995年、Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, 第2章, 第4章および第6章）。さらに、ストリンジェンシー条件は、Sambrookら（1989年, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 第2版, Cold Spring Harbor Press, 第7章, 第9章および第11章）に記載されている。本明細書で使用される場合、低ストリンジェンシーの定義された条件は、次のとおりである。ＤＮＡを含むフィルターが、３５％のホルムアミド、５×ＳＳＣ、５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、５ｍＭのＥＤＴＡ、０．１％のＰＶＰ、０．１％のＦｉｃｏｌｌ、１％のＢＳＡ、および５００μｇ／ｍｌの変性サケ精子ＤＮＡを含む溶液中で４０℃で６時間、前処理される。ハイブリダイゼーションは、次の変更を加えた同じ溶液で実行される：０．０２％のＰＶＰ、０．０２％のＦｉｃｏｌｌ、０．２％のＢＳＡ、１００μｇ／ｍｌのサケ精子ＤＮＡ、１０％（ｗｔ／ｖｏｌ）のデキストラン硫酸、および５−２０×１０６  ３２Ｐ標識プローブが使用される。フィルターをハイブリダイゼーション混合物中で４０℃で１８〜２０時間インキュベートし、次に５５℃で１．５時間洗浄する。溶液には、２×ＳＳＣ、２５ｍＭのトリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、５ｍＭのＥＤＴＡ、および０．１％のＳＤＳが含まれる。洗浄液は、新しい溶液に交換され、６０℃でさらに１．５時間インキュベートされる。フィルターは、拭き取り乾燥され、オートラジオグラフィーのために露出される。
【００８２】
本明細書で使用される場合、中ストリンジェンシーの定義された条件は、次のとおりである。ＤＮＡを含むフィルターは、３５％のホルムアミド、５×ＳＳＣ、５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、５ｍＭのＥＤＴＡ、０．１％のＰＶＰ、０．１％のＦｉｃｏｌｌ、１％のＢＳＡ、および５００μｇ／ｍｌの変性サケ精子ＤＮＡを含む溶液中で５０℃で７時間、前処理される。ハイブリダイゼーションは、次の変更を加えた同じ溶液で実行される：０．０２％のＰＶＰ、０．０２％のＦｉｃｏｌｌ、０．２％のＢＳＡ、１００μｇ／ｍｌのサケ精子ＤＮＡ、１０％（ｗｔ／ｖｏｌ）のデキストラン硫酸、および５−２０×１０６  ３２Ｐ標識プローブが使用される。フィルターは、ハイブリダイゼーション混合物中で５０℃で３０時間インキュベートされ、その後、５５℃で１．５時間、洗浄される。溶液には、２×ＳＳＣ、２５ｍＭのトリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、５ｍＭのＥＤＴＡ、および０．１％のＳＤＳが含まれる。洗浄液は、新しい溶液に交換され、６０℃でさらに１．５時間インキュベートされる。フィルターは、拭き取り乾燥され、オートラジオグラフィーのために露出される。
【００８３】
本明細書で使用される場合、高ストリンジェンシーの定義された条件は、次のとおりである。ＤＮＡを含むフィルターのプレハイブリダイゼーションは、６×ＳＳＣ、５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、１ｍＭのＥＤＴＡ、０．０２％のＰＶＰ、０．０２％のＦｉｃｏｌｌ、０．０２％のＢＳＡ、および５００μｇ／ｍｌの変性サケ精子ＤＮＡで構成されるバッファー中で、６５℃で８時間から一晩にわたり行われる。フィルターは、１００μｇ／ｍｌの変性サケ精子ＤＮＡおよび５〜２０×１０６ｃｐｍの３２Ｐ標識プローブを含むプレハイブリダイゼーション混合液中で、６５℃で４８時間ハイブリダイズされる。フィルターの洗浄は、２×ＳＳＣ、０．０１％のＰＶＰ、０．０１％のＦｉｃｏｌｌ、および０．０１％のＢＳＡを含む溶液中で、３７℃で１時間行われる。これは次に、０．１×ＳＳＣで、５０℃で４５分間洗浄される。上記の条件が不適切な場合（例えば、種間ハイブリダイゼーションに使用される場合）、当該技術分野で周知の低、中、および高ストリンジェンシーの他の条件（例えば、種間ハイブリダイゼーションに使用される）が使用され得る。
【００８４】
当業者は、他の生物における相同配列を同定する方法および相同配列間の配列同一性の割合を決定する方法を知っているであろう。次に、このような新しく同定されたＤＮＡ分子の配列決定を行うことができ、この配列は、配列番号３または配列番号７の核酸配列と比較され得る。
【００８５】
２つのペプチドまたはヌクレオチド配列間の同一性の割合は、２つの配列のアラインメントが生成された際にこれらの２つの配列において同一のアミノ酸またはヌクレオチド残基の数の関数である。同一の残基は、アラインメントの特定の位置にある２つの配列において同じ残基として定義される。配列同一性の割合は、本明細書で使用される場合、２つの配列間で同一の残基の数を最短配列の残基の総数で割って１００を掛けることにより、最適な配列から計算される。最適な配列は、同一性の割合が可能な限り高いアラインメントである。ギャップは、最適なアラインメントを得るために、アラインメントの１つ以上の位置で一方または両方の配列に導入され得る。次に、これらのギャップは、配列同一性の割合を計算するための非同一残基として考慮される。アミノ酸または核酸配列の同一性の割合を求める目的のためのアラインメントは、コンピュータープログラムを使用して、例えば、ワールドワイドウェブで利用可能な公的に利用可能なコンピュータープログラムを使用して様々な方法で得ることができる。好ましくは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）のウェブサイトのncbi.nlm.nih.gov/BLAST/bl2seq/wblast2.cgiから入手可能なデフォルトパラメータに設定されたＢＬＡＳＴプログラム（Tatianaら, FEMS Microbiol Lett., 1999年, 174 : 247〜250, 1999年）は、タンパク質または核酸配列の最適なアラインメントを取得し、配列同一性の割合を計算するために使用され得る。
【００８６】
本明細書で提供される関連する実施形態では、配列番号３、配列番号４、配列番号７、配列番号８または配列番号６８による核酸配列に相補的な核酸配列、例えば、抑制性ＲＮＡ、あるいはストリンジェントな条件下で、配列番号３、配列番号４、配列番号７、配列番号８または配列番号６８によるヌクレオチド配列の少なくとも一部にハイブリダイズする核酸配列が提供される。本明細書の実施形態の代替的な実施形態では、宿主細胞における遺伝子発現を変更する方法が提供される。例えば、本明細書の実施形態のポリヌクレオチドは、宿主細胞または宿主生物において特定の状況（例えば、特定の温度または培養条件への暴露時）で増強または過剰発現または誘導され得る。
【００８７】
本明細書で提供されるポリヌクレオチドの発現の変化は、また、変化したおよび対照または野生型生物における異なる発現パターンである異所性発現をもたらし得る。発現の変化は、本明細書の実施形態のポリペプチドと外因性または内因性のモジュレーターとの相互作用からまたはポリペプチドの化学修飾の結果として生じる。この用語はさらに、本明細書の実施形態のポリヌクレオチドの発現パターンの変化も指し、検出レベル未満で変化するかまたは活性が完全に抑制される。一実施形態では、本明細書で提供されるポリペプチドまたは変異体ポリペプチドをコードする単離、組換えまたは合成ポリヌクレオチドも本明細書で提供される。
【００８８】
一実施形態では、ＨＡＤ様ヒドロラーゼスーパーファミリーのドメインを含み、二官能性テルペンシンターゼ活性を有し、かつ配列番号１、配列番号５、配列番号９、配列番号１２、配列番号１５、配列番号１７、配列番号２０、配列番号２３、配列番号２６、配列番号２９、配列番号３２、配列番号３５、配列番号３８、配列番号４１、配列番号４４、配列番号４７、配列番号５０または配列番号６３と、少なくとも４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列；および配列番号５３、配列番号５４または配列番号５５に記載の配列；および配列番号５６、配列番号５７または配列番号５８に記載の配列を含むか、
配列番号１、配列番号５、配列番号９、配列番号１２、配列番号１５、配列番号１７、配列番号２０、配列番号２３、配列番号２６、配列番号２９、配列番号３２、配列番号３５または配列番号３８、配列番号４１、配列番号４４、配列番号４７、配列番号５０または配列番号６３のアミノ酸配列を含む、ポリペプチドをコードする単離された核酸分子が提供される。
【００８９】
一実施形態では、ＨＡＤ様ヒドロラーゼドメインを含み、二官能性テルペンシンターゼ活性を有し、かつ配列番号１または配列番号５と、少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、配列番号１または配列番号５のアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドが本明細書で提供される。
【００９０】
一実施形態によれば、ポリペプチドは、配列番号１または配列番号５のアミノ酸配列からなる。
【００９１】
一実施形態では、本明細書の実施形態のポリペプチドは、ヒトクチタケ属もしくはエブリコ属の真菌または他の真菌種に天然に存在し得るか、配列番号１または配列番号５の変異体であるアミノ酸配列を含み、これは遺伝子工学により得られるか、ヒトクチタケ属もしくはエブリコ属の真菌または他の真菌種に天然に見られるかいずれかである。
【００９２】
別の実施形態によれば、ポリペプチドは、ヒトクチタケ属もしくはエブリコ属の真菌から単離されるか、それらに由来する。さらなる実施形態では、ポリペプチドは、ヒトクチタケまたはエブリコから単離されるか、それらに由来する。
【００９３】
一実施形態では、本明細書に記載の実施形態のいずれかで使用されるまたは本明細書に記載の実施形態のいずれかで使用される核酸によってコードされる二官能性テルペンシンターゼ活性を有する少なくとも１つのポリペプチドは、遺伝子工学によって得られる配列番号１または配列番号５の変異体であるアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ポリペプチドは、配列番号３または配列番号７またはそれらの逆相補体を改変することにより得られたヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む。
【００９４】
ポリペプチドは、また、二官能性テルペンシンターゼ活性を有するという条件で、変異体および切断型ポリペプチドを含むことも意味する。
【００９５】
別の実施形態によれば、本明細書に記載の実施形態のいずれかで使用されるまたは本明細書に記載の実施形態のいずれかで使用される核酸によってコードされる二官能性テルペンシンターゼ活性を有する少なくとも１つのポリペプチドは、遺伝子工学によって得られる配列番号１または配列番号５の変異体であるアミノ酸配列を含むが、ただし、上記の変異体は、ドリマンセスキテルペンを産生するために二官能性テルペンシンターゼ活性を有し、かつ上記の実施形態のいずれかに記載されるように配列番号１または配列番号５と要求される割合の同一性を有することを条件とし、また、上記のポリペプチドは、（１）配列番号５３（ＤＤｘｘ（Ｄ／Ｅ））に記載のクラスＩテルペンシンターゼ様モチーフおよび（２）配列番号５６（ＤｘＤ（Ｔ／Ｓ）Ｔ）に記載のクラスＩＩテルペンシンターゼ様モチーフを含み、かつＰｆａｍドメインＰＦ１３４１９．５およびＰＦ１３２４２．５に対応するドメインを含む。二官能性テルペンシンターゼ活性を有するポリペプチドは、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、および／または配列番号６２に記載の１つ以上の保存されたモチーフをさらに含み得る。
【００９６】
別の実施形態によれば、本明細書に記載の実施形態のいずれかで使用されるまたは本明細書に記載の実施形態のいずれかで使用される核酸によってコードされる二官能性テルペンシンターゼ活性を有する少なくとも１つのポリペプチドは、他の真菌種などの他の生物に天然に見ることができる配列番号１または配列番号５の変異体であるが、ただし、二官能性テルペンシンターゼ活性を有し、かつＰｆａｍドメインＰＦ１３４１９．５およびＰＦ１３２４２．５に対応するドメインを含むことを条件とする。本明細書で使用される場合、ポリペプチドは、本明細書で同定されたアミノ酸配列を含むポリペプチドまたはペプチド断片だけでなく、切断型または変異体ポリペプチドをも含むが、ただし、それらが二官能性テルペンシンターゼ活性を有し、かつ配列番号１または配列番号５の対応する断片と定義された割合の同一性を少なくとも共有することを条件とし、また、上記のポリペプチドは、（１）配列番号５３（ＤＤｘｘ（Ｄ／Ｅ））に記載のクラスＩテルペンシンターゼ様モチーフおよび（２）配列番号５６（ＤｘＤ（Ｔ／Ｓ）Ｔ）に記載のクラスＩＩテルペンシンターゼ様モチーフを含み、かつＰｆａｍドメインＰＦ１３４１９．５およびＰＦ１３２４２．５に対応するドメインを含む。
【００９７】
変異体ポリペプチドの例は、交互ｍＲＮＡスプライシング事象からまたは本明細書に記載のポリペプチドのタンパク質分解切断から生じる天然に存在するタンパク質である。タンパク質分解に起因する変異には、例えば、本明細書の実施形態のポリペプチドからの１つ以上の末端アミノ酸のタンパク質分解除去による、異なるタイプの宿主細胞における発現時のＮ末端またはＣ末端の違いが含まれる。後述するように、本明細書の実施形態の核酸の自然または人工突然変異によって得られた核酸によってコードされるポリペプチドも、本明細書の実施形態に含まれる。
【００９８】
アミノおよびカルボキシル末端での追加のペプチド配列の融合から生じるポリペプチド変異体も、本明細書の実施形態の方法で使用され得る。特に、このような融合体は、ポリペプチドの発現を増強し、タンパク質の精製に有用であるか、所望の環境または発現系でポリペプチドの酵素活性を改善することができる。このような追加のペプチド配列は、例えばシグナルペプチドであり得る。別の態様は、他のオリゴまたはポリペプチドとの融合によって得られるもの、および／またはシグナルペプチドに連結されたものなどの変異体ポリペプチドを使用する方法を包含する。テルペン生合成経路からの別のタンパク質などの別の機能的タンパク質との融合から生じるポリペプチドも、本明細書の実施形態の方法で有利に使用することができる。
【００９９】
変異体はまた、ポリペプチド骨格に共有結合または非共有結合している修飾基の結合により、本明細書の実施形態のポリペプチドと異なっていてもよい。変異体は、導入されたＮ結合またはＯ結合グリコシル化部位、および／またはシステイン残基の付加によって本明細書で提供されるポリペプチドとは異なるポリペプチドも含む。当業者は、アミノ酸配列を改変し、生物学的活性を保持する方法を認識するであろう。
【０１００】
本明細書に開示される配列に示される遺伝子配列に加えて、ＤＮＡ配列多型が所定の集団内に存在することがあり、それが本明細書に開示されるポリペプチドのアミノ酸配列の変化につながり得ることは当業者には明らかである。このような遺伝的多型は、自然対立遺伝子変異のために、異なる集団由来の細胞または集団内に存在し得る。対立遺伝子変異体には機能的同等物も含まれ得る。
【０１０１】
さらなる実施形態はまた、このような配列多型によって具体的に開示された核酸に由来する分子に関する。これらの自然変異は、通常、遺伝子のヌクレオチド配列または本明細書に開示されるポリペプチドのアミノ酸配列に約１〜５％の変動をもたらす。上記のように、本明細書の実施形態のポリペプチドまたはその変異体をコードする核酸は、非ヒト宿主生物、微生物または細胞を改変し、かつ本明細書に記載の方法での使用を意図した非ヒト宿主生物、微生物または細胞を改変するのに有用なツールである。
【０１０２】
本明細書で提供される実施形態は、オルソログおよびパラログを含む二官能性テルペンシンターゼタンパク質のアミノ酸配列、ならびに他の生物における二官能性テルペンシンターゼのオルソログおよびパラログを同定および単離する方法を提供する。特に、二官能性テルペンシンターゼのそのように同定されたオルソログおよびパラログは、二官能性テルペンシンターゼ活性を保持し、ＨＡＤ様ヒドロラーゼスーパーファミリー（Ｉｎｔｅｒｐｒｏのタンパク質スーパーファミリーＩＰＲ０２３２１４またはＰｆａｍタンパク質スーパーファミリーＰＦ１３４１９）のポリペプチドとみなされ、これはＨＡＤ様ヒドロラーゼドメインを含みかつ非環式テルペンピロリン酸前駆体、例えば、ＦＰＰから出発して、アルビカノールおよび／またはドリメノールなどのドリマンセスキテルペンを産生することができる。
【０１０３】
非環式テルペンピロリン酸、例えばＦＰＰとインビトロで接触させるポリペプチドは、標準タンパク質または酵素抽出技術を使用して、それを発現する任意の生物から抽出することにより得ることができる。宿主生物が本明細書の実施形態のポリペプチドを培養培地に放出する単細胞生物または細胞である場合、ポリペプチドは、例えば遠心分離により、任意にその後に洗浄工程および適切な緩衝液への再懸濁を行うことにより培養培地から簡単に収集され得る。生物または細胞がその細胞内にポリペプチドを蓄積する場合、ポリペプチドは、細胞の破壊または溶解により、および任意で細胞溶解物からのポリペプチドのさらなる抽出により得ることができる。細胞溶解物または抽出されたポリペプチドを用いて非環式テルペンピロリン酸と接触させて、テルペンまたはテルペンの混合物を産生することができる。
【０１０４】
次に、例えば、培養細胞または微生物から得られた粗タンパク質抽出物において、単離された形でまたは他のタンパク質と一緒に、二官能性テルペンシンターゼ活性を有するポリペプチドが、最適ｐＨの緩衝液に懸濁され得る。適切な場合、酵素活性を最適化するために、塩、ＤＴＴ、無機カチオンおよび他の種類の酵素補助因子が追加され得る。前駆体ＦＰＰがポリペプチド懸濁液に添加され、これは次に、最適な温度、例えば１５〜４０℃、特に２５〜３５℃、より具体的には３０℃でインキュベートされる。インキュベーション後、産生されたアルビカノールおよび／またはドリメノールなどのドリマンセスキテルペンは、任意に溶液からポリペプチドを除去した後、溶媒抽出および蒸留などの標準的な単離手順によって、インキュベーション溶液から単離され得る。
【０１０５】
別の実施形態によれば、二官能性テルペンシンターゼ活性を有する少なくとも１つのポリペプチドは、アルビカノールおよび／またはドリメノールまたはアルビカノールおよび／またはドリメノールを含むテルペンの混合物を含むドリマンセスキテルペンの産生に使用され得る。
【０１０６】
本明細書の実施形態の方法を実行するための特定のツールの１つは、本明細書に記載のポリペプチド自体である。
【０１０７】
特定の実施形態によれば、ポリペプチドは、セスキテルペンの混合物を産生することができ、ここで、アルビカノールおよび／またはドリメノールは、少なくとも２０％、特に少なくとも３０％、特に少なくとも３５％、特に少なくとも９０％、特に少なくとも９５％、さらに特に少なくとも９８％の産生されたセスキテルペンを表す。本明細書で提供される別の態様では、アルビカノールおよび／またはドリメノールは、９５％以上、より具体的には９８％の選択性で産生される。
【０１０８】
二官能性テルペンシンターゼタンパク質、変異体または断片の機能性または活性は、さまざまな方法を使用して測定され得る。例えば、植物、細菌または酵母細胞での一過性または安定な過剰発現を使用して、タンパク質に活性があるかどうか、すなわちＦＰＰ前駆体からアルビカノールおよび／またはドリメノールを産生するかどうかを試験することができる。二官能性テルペンシンターゼ活性は、機能性を示す、アルビカノールおよび／またはドリメノールの産生に関する本明細書の実施例３に記載のアッセイなどの微生物発現系で評価され得る。本明細書の実施形態の二官能性テルペンシンターゼポリペプチドの変異体または誘導体は、ＦＰＰ前駆体からアルビカノールおよび／またはドリメノールなどのドリマンセスキテルペンを産生する能力を保持している。本明細書で提供される二官能性テルペンシンターゼのアミノ酸配列変異体は、例えば、変更された基質利用、反応速度論、産物分布または他の変更を含む追加の望ましい生物学的機能を有し得る。
【０１０９】
特定のセスキテルペン（例えば、アルビカノールおよび／またはドリメノール）の合成を触媒するポリペプチドの能力は、例えば、実施例３、４および６に詳述される酵素アッセイを実施することにより簡単に確認することができる。
【０１１０】
本明細書に記載の核酸分子を含む少なくとも１つのベクターがさらに提供される。
【０１１１】
本明細書では、原核生物ベクター、ウイルスベクター、および真核生物ベクターの群から選択されるベクターも提供される。
【０１１２】
さらに、本明細書では、発現ベクターであるベクターが提供される。
【０１１３】
一実施形態では、核酸配列をコードするいくつかの二官能性テルペンシンターゼは、特に異なるプロモーターの制御下で、単一の宿主内で共発現される。別の実施形態では、核酸配列をコードするいくつかの二官能性テルペンシンターゼタンパク質は、単一の形質転換ベクター上に存在するか、別々のベクターを使用して両方のキメラ遺伝子を含む形質転換体を選択して同時に同時形質転換（co-transformed）することができる。同様に、１つ以上の遺伝子をコードする二官能性テルペンシンターゼは、他のキメラ遺伝子と一緒に単一の植物、細胞、微生物または生物で発現され得る。
【０１１４】
二官能性テルペンシンターゼタンパク質をコードする本明細書の実施形態の核酸配列は、発現ベクターに挿入され、かつ／または発現ベクターに挿入されたキメラ遺伝子に含まれて、宿主細胞または非ヒト宿主生物において二官能性テルペンシンターゼタンパク質を産生することができる。導入遺伝子を宿主細胞のゲノムに挿入するためのベクターは、当該技術分野で周知であり、かつプラスミド、ウイルス、コスミドおよび人工染色体を含む。キメラ遺伝子が挿入されたバイナリーベクターまたは共組み込み（co-integration）ベクターも、宿主細胞の形質転換に使用され得る。
【０１１５】
本明細書で提供される実施形態は、二官能性テルペンシンターゼ遺伝子の核酸配列を含む組換え発現ベクターを提供するか、例えばプロモーター配列などの関連する核酸配列に作動可能に連結された二官能性テルペンシンターゼ遺伝子の核酸配列を含むキメラ遺伝子を提供する。例えば、配列番号３、配列番号４、配列番号７、配列番号８、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５１、配列番号５２、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９もしくは配列番号７０の核酸配列またはそれらの変異体を含むキメラ遺伝子は、植物細胞、細菌細胞または真菌細胞での発現に適したプロモーター配列に作動可能に連結され、任意に３’非翻訳核酸配列に連結され得る。
【０１１６】
代替的に、転写されるべき核酸配列がプロモーター配列の下流のベクターに挿入されるように、プロモーター配列は既にベクターに存在し得る。ベクターは、複製起点、マルチクローニングサイト、および選択可能なマーカーを有するように設計され得る。
【０１１７】
一実施形態では、本明細書に記載の核酸を含む発現ベクターは、本明細書の実施形態の方法をインビボで実施するのに適した非ヒト宿主生物または宿主細胞を形質転換するためのツールとして使用され得る。
【０１１８】
本明細書で提供される発現ベクターは、本明細書の実施形態の核酸を保有する非ヒト宿主生物および／または宿主細胞における遺伝的に形質転換された非ヒト宿主生物および／または宿主細胞を調製するための方法で、さらに本明細書に記載された、二官能性テルペンシンターゼ活性を有するポリペプチドを作製するための方法で使用され得る。
【０１１９】
本明細書の実施形態の少なくとも１つのポリペプチドを異種発現または過剰発現するように、本明細書の実施形態の少なくとも１つの核酸を保有するように形質転換された組換え非ヒト宿主生物および宿主細胞も、本明細書の実施形態の方法を実施するための非常に有用なツールである。したがって、このような非ヒト宿主生物および宿主細胞が、本明細書で提供される。
【０１２０】
一実施形態では、本明細書に記載の核酸分子の少なくとも１つを含むまたは核酸分子の少なくとも１つを含む少なくとも１つのベクターを含む宿主細胞、微生物または非ヒト宿主生物が提供される。
【０１２１】
上記の実施形態のいずれかによる核酸は、非ヒト宿主生物および細胞を形質転換するために使用することができ、発現されたポリペプチドは、上記のポリペプチドのいずれかであり得る。
【０１２２】
一実施形態では、非ヒト宿主生物または宿主細胞は、原核細胞である。別の実施形態では、非ヒト宿主生物または宿主細胞は、細菌細胞である。さらなる実施形態では、非ヒト宿主生物または宿主細胞は、大腸菌である。
【０１２３】
一実施形態では、非ヒト宿主生物または宿主細胞は、真核細胞である。別の実施形態では、非ヒト宿主生物または宿主細胞は、酵母細胞である。さらなる実施形態では、非ヒト宿主生物または細胞は、サッカロミセス・セレビシエである。
【０１２４】
さらなる実施形態では、非ヒト生物または宿主細胞は、植物細胞または真菌細胞である。
【０１２５】
一実施形態では、非ヒト宿主生物または宿主細胞は、ポリペプチドを発現するが、ただし、生物または細胞は、前記ポリペプチドをコードする核酸を保有するように形質転換されることを条件とし、この核酸はｍＲＮＡに転写され、ポリペプチドが宿主生物または細胞に見られる。非ヒト宿主生物または宿主細胞を形質転換する適切な方法は、既に記載されており、本明細書でも提供される。
【０１２６】
本明細書の実施形態をインビボで実施するために、宿主生物または宿主細胞は、アルビカノールおよび／またはドリメノールなどのドリマンセスキテルペンの産生を促す条件下で培養される。したがって、宿主がトランスジェニック植物である場合、例えば最適な光、水および栄養条件などの最適な成長条件が提供され得る。宿主が単細胞生物である場合、アルビカノールおよび／またはドリメノールなどのドリマンセスキテルペンの産生を促す条件は、宿主の培養培地への適切な補因子の添加を含み得る。また、培養培地は、アルビカノールおよび／またはドリメノールなどのドリマンセスキテルペンの合成を最大化するように選択され得る。最適な培養条件の例は、実施例でより詳細に説明されている。
【０１２７】
本明細書の実施形態の方法をインビボで実施するのに適した非ヒト宿主生物は、任意の非ヒト多細胞生物または単細胞生物であり得る。一実施形態では、本明細書の実施形態をインビボで実施するために使用される非ヒト宿主生物は、植物、原核生物または真菌である。任意の植物、原核生物または真菌が使用され得る。特に有用な植物は、天然に大量のテルペンを産生する植物である。別の実施形態では、本明細書の実施形態の方法をインビボで実施するために使用される非ヒト宿主生物は、微生物である。任意の微生物を使用することができ、例えば、微生物は、大腸菌またはサッカロミセス・セレビシエなどの細菌または酵母であり得る。
【０１２８】
これらの生物の一部は、ＦＰＰを天然に産生しない。本明細書の実施形態の方法を実施するのに適切であるために、非環式テルペンピロリン酸前駆体、例えばＦＰＰを産生しない生物または細胞は、天然に形質転換されて前記前駆体を産生する。それらは、上記の実施形態のいずれかに従って記載される核酸による修飾の前にまたは上記で説明されたように同時に、そのように形質転換され得る。それらが非環式テルペンピロリン酸前駆体、例えばＦＰＰを産生するように、生物、例えば微生物を形質転換する方法は、当該技術分野で既に知られている。
【０１２９】
本明細書の実施形態の方法をインビボで実施するための宿主として、完全な生物の代わりに、単離された高等な真核細胞も使用され得る。適切な真核細胞は、植物または真菌細胞などの任意の非ヒト細胞であり得る。
【０１３０】
さらに、ドリマンセスキテルペンの産生方法であって、非環状テルペンピロリン酸、特にファルネシル二リン酸（ＦＰＰ）を、ＨＡＤ様ヒドロラーゼドメインを含みかつ二官能性テルペンシンターゼ活性を有するポリペプチドと接触させ、ドリマンセスキテルペンを産生すること、ここで、ポリペプチドは、（１）配列番号５３（ＤＤｘｘ（Ｄ／Ｅ））に記載のクラスＩテルペンシンターゼ様モチーフ；および（２）配列番号５６（ＤｘＤ（Ｔ／Ｓ）Ｔ）に記載のクラスＩＩテルペンシンターゼ様モチーフを含む；任意にドリマンセスキテルペンを単離することを含む、ドリマンセスキテルペンの製造方法が本明細書で提供される。
【０１３１】
また、ドリマンセスキテルペンがアルビカノールおよび／またはドリメノールを含む、上記方法も提供される。
【０１３２】
さらに、ポリペプチドが、配列番号１、配列番号５、配列番号９、配列番号１２、配列番号１５、配列番号１７、配列番号２０、配列番号２３、配列番号２６、配列番号２９、配列番号３２、配列番号３５、配列番号３８、配列番号４１、配列番号４４、配列番号４７、配列番号５０または配列番号６３と、少なくとも４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列および（１）配列番号５３、配列番号５４または配列番号５５に記載の配列；および（２）配列番号５６、配列番号５７または配列番号５８に記載の配列を含むか、配列番号１、配列番号５、配列番号９、配列番号１２、配列番号１５、配列番号１７、配列番号２０、配列番号２３、配列番号２６、配列番号２９、配列番号３２、配列番号３５、配列番号３８、配列番号４１、配列番号４４、配列番号４７、配列番号５０または配列番号６３のアミノ酸配列を含んでドリマンセスキテルペンを産生し；任意にドリマンセスキテルペンを単離する、上記方法が提供される。別の態様では、ポリペプチドは、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１および／または配列番号６２に記載の１つ以上の保存されたモチーフをさらに含む。
【０１３３】
一態様では、ドリマンセスキテルペンは、アルビカノールおよび／またはドリメノールである。別の態様では、ドリマンセスキテルペンが単離される。
【０１３４】
本明細書で提供される別の態様では、アルビカノールおよび／またはドリメノールは、６０％、８０％または９０％またはさらに９５％以上の選択性で産生される。さらなる態様では、ドリマンセスキテルペンは、アルビカノールである。
【０１３５】
さらに、本明細書では、ＨＡＤ様ヒドロラーゼドメインを含み、二官能性テルペンシンターゼ活性を有し、かつ配列番号１、配列番号５、配列番号９、配列番号１２、配列番号１５、配列番号１７、配列番号２０、配列番号２３、配列番号２６、配列番号２９、配列番号３２、配列番号３５または配列番号３８、配列番号４１、配列番号４４、配列番号４７、配列番号５０または配列番号６３と、少なくとも４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；かつ（１）配列番号５３、配列番号５４または配列番号５５に記載の配列；および（２）配列番号５６、配列番号５７または配列番号５８に記載の配列を含むかまたは配列番号１、配列番号５、配列番号９、配列番号１２、配列番号１５、配列番号１７、配列番号２０、配列番号２３、配列番号２６、配列番号２９、配列番号３２、配列番号３５または配列番号３８、配列番号４１、配列番号４４、配列番号４７、配列番号５０または配列番号６３のアミノ酸配列を含む、ポリペプチドをコードする核酸で、宿主細胞、微生物または非ヒト宿主生物を形質転換することを含む方法が提供される。
【０１３６】
一実施形態では、本明細書で提供される方法は、ＦＰＰを産生することが可能な非ヒト宿主生物または宿主細胞を培養し、形質転換して、ポリペプチドの産生を可能にする条件下で、該ポリペプチドを発現することを含み、ここで、該ポリペプチドは、配列番号１または配列番号５と、少なくとも４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０１３７】
別の実施形態では、本明細書で提供される方法は、アルビカノールおよび／またはドリメノールなどのセスキテルペンを少なくとも１種の酵素と接触させてセスキテルペン誘導体を産生することを含む。一実施形態では、セスキテルペン誘導体は、生化学的または化学的に得ることができる。一実施形態では、ドリメノール誘導体が提供される。ドリメノールのかかる誘導体の例としては、ドリメニルアセテート（ＣＡＳ４０２６６−９３−１）、ドリメナール（ＣＡＳ１０５４２６−７１−９）、ドリメン酸（ＣＡＳ１１１３１９−８４−７）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１３８】
一実施形態では、アルビカノール誘導体が提供される。アルビカノールのかかる誘導体の例としては、クリプトポリ酸Ｅ（ＣＡＳ１２０００１−１０−７）、クリプトポリ酸Ｄ（ＣＡＳ１１９９７９−９５−２）、クリプトポリ酸Ｂ（ＣＡＳ１１３５９２−８８−４）、クリプトポリ酸Ａ（ＣＡＳ１１３５９２−８７−３）、ラリシノール酸（ＣＡＳ３０２３５５−２３−３）、酢酸アルビカニル（ＣＡＳ８３６７９−７１−４）が挙げられる。
【０１３９】
本明細書に記載の方法のいずれかで産生されたアルビカノールおよび／またはドリメノールは、これらに限定されないが、炭化水素、エステル、アミド、グリコシド、エーテル、エポキシド、アルデヒド、ケトン、アルコール、ジオール、アセタールまたはケタールなどの誘導体に変換され得る。
【０１４０】
アルビカノールおよび／またはドリメノール誘導体は、これらに限定されないが、酸化、還元、アルキル化、アシル化および／または転位などの化学的方法によって得ることができる。
【０１４１】
代替的に、アルビカノールおよび／またはドリメノール誘導体は、アルビカノールおよび／またはドリメノールを、これらに限定されないが、酸化還元酵素、モノオキシゲナーゼ、ジオキシゲナーゼ、トランスフェラーゼなどの酵素に接触させることによる生化学的方法を使用して得ることができる。生化学的変換は、インビトロで単離された酵素、溶解細胞からの酵素を使用してまたはインビボで細胞全体を使用して実行され得る。
【０１４２】
別の特定の実施形態によれば、上記の実施形態のいずれかの方法は、インビボで行われる。このような場合、工程ａ）は、ＦＰＰを産生することが可能な非ヒト宿主生物または宿主細胞を培養し、形質転換して、ドリマンシンターゼ、例えばアルビカノールおよび／またはドリメノールの産生を促す条件下で、配列番号１もしくは配列番号５またはそれらの機能的変異体を含むアミノ酸を含む少なくとも１つのポリペプチドを発現することを含み、該ポリペプチドは、ＨＡＤ様ヒドロラーゼスーパーファミリー（Ｉｎｔｅｒｐｒｏのタンパク質スーパーファミリーＩＰＲ０２３２１４またはＰｆａｍタンパク質スーパーファミリーＰＦ１３４１９）のポリペプチドと見なされ、ＨＡＤ様ヒドロラーゼドメインを含みかつ二官能性テルペンシンターゼ活性を有する。一実施形態では、アルビカノールは、唯一の産物であり得るか、セスキテルペンの混合物の一部であり得る。別の態様では、ドリメノールは、唯一の産物であり得るか、セスキテルペンの混合物の一部であり得る。
【０１４３】
さらなる実施形態によれば、方法は、工程ａ）の前に、配列番号１または配列番号５を含むアミノ酸を含むポリペプチドをコードするか、二官能性テルペンシンターゼ活性を有し、かつ配列番号１、配列番号５、配列番号９、配列番号１２、配列番号１５、配列番号１７、配列番号２０、配列番号２３、配列番号２６、配列番号２９、配列番号３２、配列番号３５または配列番号３８、配列番号４１、配列番号４４、配列番号４７、配列番号５０または配列番号６３と、少なくとも４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列；および（１）配列番号５３、配列番号５４または配列番号５５に記載の配列；および（２）配列番号５６、配列番号５７または配列番号５８に記載の配列を含むポリペプチドをコードする少なくとも１つの核酸で、ＦＰＰを産生することが可能な非ヒト生物または細胞を形質転換し、前記生物が前記ポリペプチドを発現するようにすることをさらに含む。ポリペプチドは、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、および／または配列番号６２に記載の１つ以上の保存されたモチーフをさらに含み得る。
【０１４４】
本明細書の実施形態のこれらの実施形態は、ポリペプチドを予め単離することなくインビボで方法を実施することが可能であるため、特に有利である。反応は、前記ポリペプチドを発現するように形質転換された生物または細胞内で直接起こる。
【０１４５】
本明細書の実施形態は、インビトロまたはインビボのいずれかでＦＰＰ前駆体を本明細書の実施形態のポリペプチドと接触させるアルビカノールおよび／またはドリメノールなどのドリマンセスキテルペンを産生する方法で使用されるべき本明細書の実施形態のポリペプチドを提供する。
【０１４６】
さらに提供されるのは、ドリマンセスキテルペン、例えばアルビカノールおよび／またはドリメノールを産生するための本明細書に記載のポリペプチドの使用である。
【０１４７】
以下の実施例は単なる例示であり、特許請求の範囲、本明細書に記載の実施形態を限定することを意図するものではない。
【図面の簡単な説明】
【０１４８】
【図１】図１は、ドリマン、（＋）−アルビカノール、および（−）−ドリメノールの構造を示す。
【図２】図２は、クラスＩＩテルペンシンターゼおよびクラスＩテルペンシンターゼの酵素活性によるファルネシル二リン酸の環化のメカニズムを示す。
【図３】図３は、ファルネシル二リン酸を過剰産生するように改変された細菌細胞において、組換えＣｖＴｐｓ１酵素によってインビボで産生されたセスキテルペンのＧＣＭＳ分析を示す。Ａ．ＣｖＴｐｓ１およびメバロン酸経路酵素を発現する大腸菌細胞の抽出物の全イオンクロマトグラム。Ｂ．アルビカノールの真正標準の全イオンクロマトグラム。Ｃ．メバロン酸経路酵素のみを発現する大腸菌細胞の抽出物の全イオンクロマトグラム。１、アルビカノール；２、トランス−ファルネソール（内因性ホスファターゼ酵素によるＦＰＰの加水分解から）。
【図４】図４は、ＣｖＴｐｓ１の産物およびアルビカノールの真正標準の質量スペクトルの比較を示す。Ａ．図３Ａにおけるピーク１の質量スペクトル（ＣｖＴｐｓ１の産物）。Ｂ．図３Ｂにおけるピーク１の質量スペクトル（アルビカノールの真正標準）。
【図５】図５は、ＬｏＴｐｓ１およびＣｖＴｐｓ１組換えタンパク質によって産生されたセスキテルペンのＧＣＭＳ分析を示す。ＬｏＴｐｓ１（Ａ）およびＣｖＴｐｓ１（Ｂ）を発現する大腸菌細胞の抽出物の全イオンクロマトグラム。「１」というラベルの付いたピークは、（＋）−アルビカノールである。
【図６】図６Ａ〜Ｃは、クラスＩおよびクラスＩＩモチーフを含む推定テルペンシンターゼのアミノ酸配列アラインメント：ＣｖＴｐｓ１（配列番号１）、ＬｏＴｐｓ１（配列番号５）、ＯＣＨ９３７６７．１（配列番号９）、ＥＭＤ３７６６６．１（配列番号１２）、ＥＭＤ３７６６６−Ｂ（配列番号１５）、ＸＰ＿００１２１７３７６．１（配列番号１７）、ＯＪＪ９８３９４．１（配列番号２０）、ＧＡＯ８７５０１．１（配列番号２３）、ＸＰ＿００８０３４１５１．１（配列番号２６）、ＸＰ＿００７３６９６３１．１（配列番号２９）、ＡＣｇ００６３７２（配列番号３２）、ＫＩＡ７５６７６．１（配列番号３５）、ＸＰ＿００１８２０８６７．２（配列番号３８）、ＣＥＮ６０５４２．１（配列番号４１）、ＸＰ＿００９５４７４６９．１（配列番号４４）、ＫＬＯ０９１２４．１（配列番号４７）、およびＯＪＩ９５７９７．１（配列番号５０）を示す。
【図７】図７は、ＬｏＴｐｓ１、ＣｖＴｐｓ１、ＯＣＨ９３７６７．１、ＥＭＤ３７６６６．１、ＥＭＤ３７６６６−Ｂ、およびＸＰ＿００１２１７３７６．１、組換えタンパク質によって産生されたセスキテルペンのＧＣＭＳクロマトグラムを示す。「１」というラベルの付いたピークは、（＋）−アルビカノールである。
【図８】図８は、ＯＪＪ９８３９４．１、ＧＡＯ８７５０１．１、ＸＰ＿００８０３４１５１．１、ＸＰ＿００７３６９６３１．１、およびＡＣｇ００６３７２組換えタンパク質によって産生されたセスキテルペンのＧＣＭＳクロマトグラムを示す。「１」というラベルの付いたピークは、（＋）−アルビカノールである。
【図９】図９は、ＫＩＡ７５６７６．１、ＸＰ＿００１８２０８６７．２、ＣＥＮ６０５４２．１、ＸＰ＿００９５４７４６９．１、ＫＬＯ０９１２４．１およびＯＪＩ９５７９７．１組換えタンパク質によって産生されたセスキテルペンのＧＣＭＳクロマトグラムを示す。「１」というラベルの付いたピークは、（−）−ドリメノールであり、「２」というラベルの付いたピークは、ファルネソールである。
【図１０】図１０は、ＡｓｔＩおよびＡｓｔＫホスファターゼの有無にかかわらず大腸菌細胞で発現されたＣｖＴｐｓ１およびＡｓｔＣによって産生されたセスキテルペンのＧＣＭＳクロマトグラムを示す。ＡｓｔＣで得られた主要なピークは、ドリム−８−エン−１１−オールであり、ＣｖＴｐｓ１で得られた主要なピークは、（＋）−アルビカノールである。
【図１１】図１１は、ファルネシル二リン酸を過剰産生するように改変された細菌細胞内の組換えＸＰ＿００６４６１１２６．１酵素によってインビボで産生されたセスキテルペンのＧＣＭＳ分析を示す。Ａ．ＸＰ＿００６４６１１２６．１およびメバロン酸経路酵素を発現する大腸菌細胞の抽出物の全イオンクロマトグラム。Ｂ．ドリメノールとして同定された１３．１分のピークの質量スペクトル。
【図１２】図１２は、５種の異なるシンターゼ：マツノオオウズラタケ（Dichomitus squalens）由来のＸＰ＿００７３６９６３１．１、マッシュルーム（Agaricus bisporus）由来のＸＰ＿００６４６１１２６、エブリコ（Laricifomes officinalis）由来のＬｏＴｐｓ１、白色腐朽菌（Gelatoporia subvermispora）由来のＥＭＤ３７６６６．１およびアスペルギルス・テレウス（Aspergillus terreus）由来のＸＰ＿００１２１７３７６．１を発現する改質されたＳ．セレビシエを使用して産生されたドリマンセスキテルペンのＧＣ−ＦＩＤ分析を示す。
【０１４９】
実施例
実施例１
微生物培養ならびにＤＮＡおよびＲＮＡ抽出
ドリマンセスキテルペノイドは、自然界に広く分布している（JansenおよびGroot, 2004年, Nat. Prod. Rep., 21, 449〜477）。ドリマンセスキテルペノイドファミリーの化合物には、図１に示すドリマン炭素骨格を有するセスキテルペン構造が含まれている。例えば、よく見られるドリマンセスキテルペンは、ドリメノールおよびアルビカノール（図１）、ならびに酸化、還元、アシル化、アルキル化または転位などの酵素反応によりドリメノールおよびアルビカノールから誘導される化合物である。ドリマンセスキテルペノイドファミリーは、ドリマンセスキテルペンが別の生合成経路に由来する分子に結合された化合物も含む（JansenおよびGroot, 2004年, Nat. Prod. Rep., 21, 449〜477）。
【０１５０】
クリプトポリン酸Ａ−Ｈは、真菌ヒトクチタケに見られるイソクエン酸のドリマンセキテルペノイドエーテルである（Hashimotoら, 1987年, Tetrahedron Let. 28, 6303〜6304; Asakawaら, 1992年, Phytochemistry 31(2), 579〜592; Hirotaniら, 1991年, Phytochemistry 30(5), 1555〜1559）。クリプトポリン酸では、セスキテルペン部分は、アルビカノールの構造を有し、したがって、これらの化合物は推定上、アルビカノールから生合成的に誘導される。ラリシノール酸は、木材腐朽菌エブリコから単離され得るドリマン型セスキテルペンである（Erbら, 2000年, J. Chem. Soc., Perkin Trans.1, 2307〜2309）。ラリシノール酸は、いくつかの酸化的酵素ステップに従ってアルビカノールに由来する可能性が最も高い。
【０１５１】
本発明者らは、アルビカノールシンターゼの特性を明らかにし、ヒトクチタケおよびエブリコからアルビカノールシンターゼをコードするヌクレオチド配列を同定した。エブリコ（ＡＴＣＣ（登録商標）６４４３０ＴＭ）およびヒトクチタケ（ＡＴＣＣ（登録商標）１２２１２ＴＭ）の株は、それぞれ、収集番号ＡＴＣＣ−６４４３０およびＡＴＣＣ−１２２１２の下でアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ）に保存されている。エブリコ（ＡＴＣＣ（登録商標）６４４３０ＴＭ）およびヒトクチタケ（ＡＴＣＣ（登録商標）１２２１２ＴＭ）の株を、LGC Standards GmbH社（４６４８５ヴェーゼル、独国）から購入した。細胞を、酵母カビ（ＹＭ）培地中で増殖させた（Wickerham, 1939年, J. Tropical Med. Hyg. 42, 176）。
【０１５２】
２つの株のそれぞれについて、ゲノムＤＮＡおよびトータルＲＮＡを抽出して、完全なゲノムおよびトランスクリプトームをシーケンスした。ＹＭ−寒天プレート上で増殖した細胞を使用して、１００ｍｌの液体ＹＭ培地をガラス管に接種した。培養物を、２５℃および１８０ｒｐｍで撹拌しながら６日間インキュベートした。ＲＮＡ抽出のために、培養物０．５ｍｌを取り、液体窒素で凍結した遠心分離により細胞（約１００ｍｇ）を回収し、乳鉢および乳棒を使用して粉砕した。Zymo Research Corp (アーバイン, カリフォルニア州92614, 米国)製のＺＲ  Ｆｕｎｇａｌ／Ｂａｃｔｅｒｉａｌ  ＲＮＡ  ＭｉｎｉＰｒｅｐ（商標）を使用して、トータルＲＮＡプールを抽出した。１００ｍｇの細胞から、ＡＴＣＣ−１２２１２およびＡＴＣＣ−６４４３０について、それぞれ、１８マイクログラムおよび２３マイクログラムのトータルＲＮＡが得られた。ゲノムＤＮＡを、Machery-Nagel（デューレン、独国）製のNucleoSpin（登録商標）Soil Kitを使用して抽出した。遠心分離により培養物から細胞を回収し、製造業者のプロトコルに従ってゲノムＤＮＡを抽出した。５００ｍｇの細胞から、１．０５マイクログラムおよび０．９３マイクログラムのゲノムＤＮＡを、それぞれ、ＡＴＣＣ−１２２１２およびＡＴＣＣ−６４４３０から抽出した。
【０１５３】
実施例２
ゲノムおよびトランスクリプトームのシーケンシング
ゲノムＤＮＡを、ペア読み取りプロトコル（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）を使用して配列決定した。ライブラリを、２５０〜３５０ｂｐの挿入サイズを選択するために準備した。ＨｉＳｅｑ  ２５００  Ｉｌｌｕｍｉｎａシーケンサーでシーケンシングを実行した。読み取りの長さは１２５塩基であった。ＡＴＣＣ−１２２１２およびＡＴＣＣ−６４４３０について、それぞれ、合計２１３０万および３０４０万のペア読み取り（クラスター）を配列決定した。
【０１５４】
トランスクリプトームについては、ＴｒｕＳｅｑ  Ｓｔｒａｎｄｅｄ  ｍＲＮＡ  Ｌｉｂｒａｒｙ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）を使用して、トータルＲＮＡからライブラリを準備した。追加の挿入サイズの選択ステップ（１６０〜２４０ｂｐ）を実行した。ライブラリを、ＨｉＳｅｑ  ２５００  Ｉｌｌｕｍｉｎａシーケンサーで２×１２５塩基のペアエンドで配列決定した。ＡＴＣＣ−１２２１２およびＡＴＣＣ−６４４３０については、それぞれ、１９９０万および１億２６００万の読み取りを配列決定した。
【０１５５】
ヒトクチタケのトランスクリプトームのアセンブリについては、読み取りを、最初に、それらが重複する端でつなぎ合わせた。次に、つなぎ合わせたペア読み取りを、Ｖｅｌｖｅｔ  Ｖ１．２．１０アセンブラー（Zerbino D.R. and Birney E. 2008年, Genome Res. 18(5), 821〜829; www.ebi.ac.uk/〜zerbino/velvet/）およびＯａｓｅｓソフトウェア（Schulz M. Hら, 2012年, Bioinformatics 28(8), 1086〜1092; http://www.ebi.ac.uk/〜zerbino/oases/）を使用してアセンブリングした。ヒトクチタケのトランスクリプトームについて、平均長さ１’７９２塩基の合計２５’８６６コンティグを得た。
【０１５６】
ヒトクチタケのゲノムを、Ｖｅｌｖｅｔ  Ｖ１．２．１０アセンブラー（Zerbino D.R. and Birney E., 2008年, Genome Res.18(5), 821〜829; www.ebi.ac.uk/〜zerbino/velvet/）を使用してアセンブリングした。ゲノムを、平均サイズ２０’０００塩基および合計サイズ２５’３２０’４２１塩基で、１’２６６コンティグでアセンブリングすることができた。ヒトクチタケゲノムコンティグにおけるアブイニシオ（ab-initio）遺伝子予測を、Progenus SA（ジャンブルー、ベルギー）によってＡｕｇｕｓｔｕｓソフトウェアを使用して実行した（Stankeら, Nucleic Acids Res.(2004年) 32, W309〜W312）。合計７７３８の遺伝子を予測した。機能アノテーションを、Ｐｆａｍドメイン検索（Finn, R. D.ら, 2016年, Nucleic Acids Research Database Issue 44 : D279-D285）とＢｌａｓｔ検索（Altschulら, 1990年, J. Mol. Biol. 215, 403〜410）とを組み合わせて実行した。
【０１５７】
エブリコのゲノムおよびトランスクリプトームを、ＣＬＣ  Ｇｅｎｏｍｉｃ  Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈ（QIAGEN社製）を使用してアセンブリングした。ゲノムを、１６’８３１コンティグでアセンブリングし、合計ゲノムサイズは９０’５９１’１９０塩基であった。トランスクリプトームアセンブリは、平均長さが１’９６２塩基の２８’６３３コンティグをもたらした。
【０１５８】
実施例３
ドリマンセスキテルペンシンターゼの同定
クエリ配列として既知のセスキテルペンシンターゼのアミノ酸配列を用いたｔＢｌａｓｔｎ検索（Altschulら, 1990年, J. Mol. Biol. 215, 403〜410）を使用して、６および１０の推定セスキテルペンシンターゼ配列を、それぞれ、ヒトクチタケおよびエブリコで同定した。ゲノムコンティグ上のＲＮＡシーケンシング読み取りのマッピングを使用して、特にイントロ−エクソンジャンクションの局在化のために、配列を手動で修正した。次に、対応するｃＤＮＡを最適な大腸菌発現のためにコドン最適化し、合成し、発現プラスミド（ｐＪ４０１、ＡＴＵＭ、ニューアーク、カリフォルニア州）にクローニングした。機能発現大腸菌細胞および酵素特性解析アッセイは、セスキテルペンシンターゼ活性を示したが、ＦＰＰからのアルビカノールの形成は明らかにしなかった。
【０１５９】
ドリマンセスキテルペンは、おそらく、プロトン化開始環化とそれに続くイオン化開始反応を含む酵素機構により、ファルネシル二リン酸（ＦＰＰ）から産生される（Henquetら, 2017年, Plant J. Mar 4. doi: 10.1111/tpj.13527; Kwon, M.ら, 2014年, FEBS Letters 588, 4597−4603）（図２）。これは、ドリマンシンターゼが、プロトン化開始環化触媒ドメインとイオン化開始環化触媒ドメインの２つの触媒ドメインで構成されることを意味する。
【０１６０】
プロトン化開始環化反応を触媒するテルペンシンターゼは、クラスＩＩ（またはタイプＩＩ）テルペンシンターゼと呼ばれ、通常、トリテルペンおよびラブダンジテルペンの生合成に関与する。クラスＩＩテルペンシンターゼでは、プロトン化により開始される反応には、末端の二重結合にプロトンを供与する酸性アミノ酸が関与する。これらの残基、通常、アスパラギン酸は、酵素の活性部位に位置する保存されたＤｘＤＤモチーフの一部である。
【０１６１】
イオン化開始反応を触媒するテルペンシンターゼは、クラスＩ（またはタイプＩ）テルペンシンターゼ、一般にモノテルペンおよびセスキテルペンシンターゼと呼ばれ、触媒中心は、保存されたＤＤｘｘＤ（配列番号５３の一部）モチーフを含む。このクラスＩモチーフのアスパラギン酸残基は、二リン酸基の結合に関与する二価金属イオン（ほとんどの場合Ｍｇ２＋）に結合し、基質のアリル二リン酸結合のイオン化および切断を触媒する。
【０１６２】
ファルネシル二リン酸からドリマンセスキテルペン（例えば、アルビカノールまたはドリメノール）への推定環化メカニズムは、１０，１１−二重結合のプロトン化から始まり、その後に連続的な転位および炭素結合の形成が続く。この最初の（クラスＩＩ）反応のカルボカチオン中間体は、次にＣ１５もしくはＣ４（または最終的にＣ２）で脱プロトン化を受け、アルビカニル二リン酸またはドリメニル二リン酸中間体をもたらし得る。最後に、クラスＩ触媒ドメインは、アリル二リン酸結合のイオン化、および水分子によって中間化されたカルボカチオンの消光を触媒し、第１級ヒドロキシル基を含むドリマンセスキテルペンをもたらす（図２）。必要に応じて、アルビカニルまたはドリメニル一リン酸および／または二リン酸など、アルビカノールまたはドリメノール合成の残留リン酸化中間体の痕跡は、それぞれ、最終産物のアルビカノールまたはドリメノールに化学的に変換され得る。特定の対応する方法が知られており、例えば、リン酸エステル結合の加水分解的切断を含み得る。また、特定の中間体を、実施例７および８に示すように酵素的に変換することができる。
【０１６３】
上記の考慮事項に基づいて、本発明者らは、ヒトクチタケおよびエブリコのゲノムならびにトランスクリプトームデータを、クラスＩおよびクラスＩＩのテルペンシンターゼモチーフを一緒に含むポリペプチドをコードする配列について検索した。近年、ドリマニル二リン酸シンターゼ（ＡｓｔＣ）を、ニホンコウジカビ(Aspergillus oryzae)で同定した（Shinohara Y.ら, 2016年, Sci Rep.6, 32865）。酵素は、クラスＩＩテルペンシンターゼドメインを含み、かつファルネシル二リン酸のドリマニル二リン酸へのプロトン化開始環化を触媒する。しかしながら、この酵素は、クラスＩテルペンシンターゼ活性を有していないため、アリル二リン酸基のイオン化および切断を触媒しない。本発明者らは、ＡｓｔＣの配列を使用して、ヒトクチタケゲノムで予測された遺伝子から推定されるアミノ酸配列を最初に検索する。予測された遺伝子から推定されたアミノ酸配列に対してＢｌａｓｔｐ検索を使用して、０．７７から３ｅ−０８９の間のＥ値を有する５つの配列を取得した（Altschulら, 1990年, J. Mol. Biol. 215, 403-410）。
【０１６４】
これらの５つの配列の中で、ＣｖＴｐｓ１を、推定上のアルビカノールシンターゼに最も関連性があるものとして選択した。ＣｖＴｐｓ１遺伝子によってコードされるアミノ酸配列は、ＡｓｔＣアミノ酸配列と３８％の同一性を共有した。この配列の分析により、２７５−２７９の位置にクラスＩＩテルペンシンターゼ様モチーフ、ＤＶＤＴが存在することが明らかになった。これは、最後のＡｓｐがＴｈｒに置き換えられている、上記の典型的なクラスＩＩテルペンシンターゼモチーフの変異体である。このＤｘＤＴクラスＩＩモチーフは、いくつかのクラスＩＩジテルペンシンターゼ（Xu M.ら, 2014年, J. Nat. Prod. 77, 2144−2147; Morrone D.ら, 2009年, J. FEBS Lett., 583, 475−480）およびＡｓｔＣに見られる。ＣｖＴｐｓ１配列の別の興味深い特徴は、Ｎ末端領域に典型的なクラスＩモチーフが存在することである（位置１６８−１７２のＤＤＫＬＤ）。ＡｓｔＣに存在しないこのクラスＩモチーフの存在は、ＣｖＴｐｓ１がクラスＩＩ反応に加えてイオン化開始反応を触媒できることを示唆している。ＡｓｔＣとの別の違いは、Ｃ末端伸長の存在であり、ＣｖＴｐｓ１ペプチドは、Ｃ末端に４６個の追加のアミノ酸を含む。したがって、ＣｖＴｐｓ１は、二官能性アルビカノールシンターゼの推定候補として選択された。
【０１６５】
タンパク質ファミリーデータベース、例えば、ＰｆａｍおよびＩｎｔｅｒｐｒｏ（欧州バイオインフォマティクス研究所（ＥＭＢＬ−ＥＢＩ）は、機能アノテーション、タンパク質ドメインおよびタンパク質ドメインシグネチャーを含むタンパク質ファミリーのデータベースである。ＣｖＴｐｓ１のアミノ酸配列は、ＨＭＭＥＲのウェブサイトで入手可能なＨＭＭＥＲアルゴリズムを使用するタンパク質ドメインに特徴的なモチーフの出現について検索した（Finn R.D., 2015年, Nucleic Acids Research Web Server Issue 43:W30-W38; www.ebi.ac.uk/Tools/hmmer/）。古典的なテルペンシンターゼに関連するドメインは、ＣｖＴｐｓ１アミノ酸配列に見られなかった。クエリは、残基１１５および１８７の間の領域で、ハロ酸デハロゲナーゼ（ＨＡＤ）様のヒドロラーゼタンパク質スーパーファミリー（ＰＦ１３４１９．５）に特徴的なドメインを同定した。Ｉｎｔｅｒｐｒｏタンパク質ファミリーデータベースを使用する類似検索（ebi.ac.uk/interpro/ウェブサイトを参照のこと）および保存ドメインデータベース（ncbi.nlm.nih.gov/Structure/cdd/wrpsb.cgiのＮＣＢＩのウェブサイト）は、同じ結果を示した：Ｎ末端領域のＨＡＤ様ヒドロラーゼスーパーファミリーのドメインの予測のみ（それぞれ、ＩＰＲ０２３２１４およびＣＬ２１４６０）。ＨＡＤ様ヒドロラーゼスーパーファミリーは、ホスファターゼ活性を有する酵素を含むさまざまな機能を有する多数のタンパク質を含む（KooninおよびTatusov, 1994年, J. Mol. Biol 244, 125-132; Kuznetsovaら, 2015年, J Biol Chem. 290(30), 18678-18698）。ＣｖＴｐｓ１ポリペプチドにおいて上記で同定したクラスＩテルペンシンターゼ様モチーフは、触媒（ホスファターゼ）活性に関与する保存されたアスパラギン酸残基を含むＨＡＤ様ヒドロラーゼモチーフシグネチャの１つを含む。したがって、この分析により、ＣｖＴｐｓ１のＮ末端領域が、二リン酸基の加水分解に関与していることが確認される（クラスＩテルペンシンターゼ活性）。
【０１６６】
ポリペプチドのＣ末端部分で有意なドメイン予測は得られなかった。クラスＩＩテルペンシンターゼ様モチーフの存在を考慮すると、Ｃ末端部分は、プロトン化開始環化に関与している可能性がある。
【０１６７】
ＣｖＴｐｓ１アミノ酸配列を使用して、エブリコゲノムおよびトランスクリプトームの相同配列を検索した。この検索には、ｔＢｌａｓｔｎアルゴリズムを使用した（Altschulら 1990年, J. Mol. Biol. 215, 403-410）。１つの転写物、ＬｏＴｐｓ１は、ＣｖＴｐｓ１と配列類似性を示した：配列の長さ（５２１アミノ酸）は、ＣｖＴｐｓ１アミノ酸配列の長さに類似しており、２つの配列間の全体的な配列同一性は７１％であり、Ｎ末端領域は典型的なクラスＩテルペンシンターゼモチーフ（位置１６２−１６６のＤＤＫＬＤ）を含み、クラスＩＩテルペンシンターゼモチーフ（ＤＭＤＴ）は位置２６７−２７０に見られ、Ｎ末端領域は予測されるＨＡＤ様ヒドロラーゼドメインを含んでいた。
【０１６８】
実施例４
ＣｖＴｐｓ１およびＬｏＴｐｓ１の異種発現および特性評価
ＣｖＴｐｓ１およびＬｏＴｐｓ１のコード配列を制御し、ゲノムコンティグに対するＲＮＡシーケンシング読み取りのマッピングを使用して、イントロン−エクソン接合部の予測を改善した。得られたｃＤＮＡのコード配列をコドン最適化し、ｐＪ４０１大腸菌発現プラスミド（ｐＪ４０１、ＡＴＵＭ、ニューアーク、カリフォルニア州）にクローン化した。
【０１６９】
ファルネシル二リン酸（ＦＰＰ）を過剰産生するように設計された大腸菌細胞で、酵素を機能的に特性評価した。コンピテント大腸菌細胞を、プラスミドｐＡＣＹＣ−２９２５８−４５０６（国際公開第２０１３０６４４１１号またはSchalkら, 2013年, J. Am. Chem. Soc. 134, 18900−18903に記載）およびｐＪ４０１−ＣｖＴｐｓ１またはｐＪ４０１−ＬｏＴｐｓ１発現プラスミドで形質転換した。ｐＡＣＹＣ−２９２５８−４５０６は、ＦＰＰシンターゼ遺伝子および完全なメバロン酸経路の遺伝子をコードするｃＤＮＡを含む。ＫＲＸ大腸菌細胞（Ｐｒｏｍｅｇａ）を、宿主として使用した。形質転換細胞を、カナマイシン（５０μｇ／ｍｌ）およびクロラムフェニコール（３４μｇ／ｍｌ）ＬＢ−アガロースプレートで選択した。単一コロニーを使用して、同じ抗生物質を補充した５ｍＬの液体ＬＢ培地に接種した。培養物を、３７℃で一晩インキュベートした。翌日、同じ抗生物質を補充した２ｍＬのＴＢ培地に０．２ｍＬの一晩培養物を接種した。３７℃で６時間インキュベートした後、培養物を２８℃に冷却し、０．１ｍＭ  ＩＰＴＧ、０．２％ラムノースおよび１０％容量（０．２ｍｌ）のドデカンを各チューブに加えた。培養物を、２８℃で４８時間インキュベートした。次に、培養物を、２容量のｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（ＭＴＢＥ）で２回抽出し、有機相を５００μＬに濃縮し、ＧＣ−ＭＳで分析した。
【０１７０】
ＧＣ−ＭＳ分析を、Ａｇｉｌｅｎｔ  ５９７５質量検出器に接続されたＡｇｉｌｅｎｔ  ６８９０シリーズＧＣシステムを使用して実行した。ＧＣには、内径０．２５ｍｍ、３０ｍのＤＢ−１ＭＳキャピラリーカラム（Ａｇｉｌｅｎｔ）が装備されていた。キャリアガスは、１ｍＬ／分の一定流量のＨｅであった。入口温度を２５０℃に設定した。初期オーブン温度は８０℃であり、その後に、２２０℃まで１０℃／分の勾配、そして２８０℃まで３０℃／分の第２の勾配が続いた。産物の同定は、質量スペクトルおよび保持指標と、真正標準および内部質量スペクトルデータベースとの比較に基づいていた。
【０１７１】
これらの条件では、組換えＣｒＶｏ０７６０９タンパク質で単一の産物の形成が認められた。この酵素産物の最終濃度は、２００ｍｇ／ｌ培養培地であった。ガスクロマトグラフィーの保持時間、ならびに質量スペクトルは、（＋）−アルビカノールの真正標準のＧＣＭＳデータに準拠していた。構造を確認するために、組換え細胞を、上記の条件でより大きな（５００ｍｌ）容量で培養した。ＭＴＢＥを抽出物から蒸留し、得られたドデカンの懸濁液を、フラッシュクロマトグラフィーにかけた。産物を、ＭＴＢＥおよびシクロヘキサンの１：５の混合物で溶出した。溶媒を蒸留により除去し、純度９８％の産物を得た。アルビカノールの構造を、１Ｈ−および１３Ｃ−ＮＭＲ分析により確認した。旋光度は、Ｂｒｕｋｅｒ  Ａｖａｎｃｅ  ５００  ＭＨｚ分光計を使用して測定した。［α］Ｄ２０＝＋３．８°（０．２６％、ＣＨＣｌ３）の値により、組換えＣｖＴｐｓ１タンパク質による（＋）−アルビカノール（図１に示す構造を有する）の形成を確認した。
【０１７２】
ＬｏＴｐｓ１の活性を、同じ条件で評価した。産物のプロファイルは、組換えＬｏＴｐｓ１酵素の唯一の検出された産物としての（＋）−アルビカノールを含むＣｖＴｐｓ１のプロファイルと同一であった。
【０１７３】
この実験は、ＣｖＴｐｓ１およびＬｏＴｐｓ１が、二官能性クラスＩＩシクラーゼ活性およびクラスＩホスファターゼ活性を有する酵素であることを示す。
【０１７４】
実施例５
他の生物におけるＣｖＴｐｓ１およびＬｏＴｐｓ１に相同な配列の検索。  ＣｖＴｐｓ１  およびＬｏＴｐｓ１  のアミノ酸配列を使用して、公共データベースに存在する他の生物の相同配列を検索した。ＣｖＴｐｓ１およびＬｏＴｐｓ１と相同性を示す配列について、国立生物工学情報センター（NCBI, https://www.ncbi.nlm.nih.gov/）のタンパク質データベースで検索するために、最初にブラスト検索アプローチ（Altschulら, 1990年, J. Mol. Biol. 215, 403-410）を使用した。取得されたアミノ酸を、次に、実施例３に記載したＣｖＴｐｓ１およびＬｏＴｐｓ１の特徴の存在について分析した。さらなる分析および酵素活性の特性評価のために１５個の配列をすべて真菌種から選択した：オバ・リブロサ（Obba rivulosa）由来のＮＣＢＩアクセッションＯＣＨ９３７６７．１、白色腐朽菌由来のＮＣＢＩアクセッションＥＭＤ３７６６６．１、アスペルギルス・テレウス由来のＮＣＢＩアクセッションＸＰ＿００１２１７３７６．１、アスペルギルス・アクレアタス（Aspergillus aculeatus）由来のＮＣＢＩアクセッションＯＪＪ９８３９４．１、アスペルギルス・ウダガワエ（Aspergillus udagawae）由来のＮＣＢＩアクセッションＧＡＯ８７５０１．１、カワラタケ（Trametes versicolor）由来のＮＣＢＩアクセッションＸＰ＿００８０３４１５１．１、マツノオオウズラタケ（Dichomitus squalens）由来のＮＣＢＩアクセッションＸＰ＿００７３６９６３１．１、アスペルギルス・アスタス（Aspergillus ustus）由来のＮＣＢＩアクセッションＫＩＡ７５６７６．１、ニホンコウジカビ由来のＮＣＢＩアクセッションＸＰ＿００１８２０８６７．２、アスペルギルス・カリドウスツス（Aspergillus calidoustus）由来のＮＣＢＩアクセッションＣＥＮ６０５４２．１、ヘテロバシディオン・イレギュラー（Heterobasidion irregulare）由来のＮＣＢＩアクセッションＸＰ＿００９５４７４６９．１、スキゾポラ・パラドキサ（Schizopora paradoxa）由来のＮＣＢＩアクセッションＫＬＯ０９１２４．１、アスペルギルス・ベルシコロル（Aspergillus versicolor）由来のＮＣＢＩアクセッションＯＪＩ９５７９７．１。
【０１７５】
ＥＭＤ３７６６．１の配列を、公開された配列に存在するアミノ酸２６１〜２６６を削除することで修正したが、おそらく、スプライシング予測が正しくないためである（第１表の配列ＥＭＤ３７６６６−Ｂ）。別の配列、ＡＣｇ００６３７２を、牛樟芝（Antrodia cinnamomea）の公開された注釈付き配列から選択した（Luら, 2014年, Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 111(44) : E4743-52, （データセットＳ１））。
【０１７６】
１５個の推定テルペンシンターゼアミノ酸配列は、コンセンサス配列Ｄ（Ｖ／Ｍ／Ｌ／Ｆ）Ｄ（Ｔ／Ｓ）を有するクラスＩＩテルペンシンターゼ様モチーフならびにコンセンサス配列ＤＤ（Ｋ／Ｎ／Ｑ／Ｒ／Ｓ）ｘＤ（ｘは疎水性残基Ｌ、Ｉ、Ｇ、ＴまたはＰである）を有するクラスＩテルペンシンターゼ様モチーフを含む。クラスＩおよびクラスＩＩモチーフは、アミノ酸配列と、ＣｖＴｐｓ１およびＬｏＴｐｓ１の配列とのアラインメントを使用して容易に局在化される（図６）。このようなアラインメントは、例えばプログラムＣｌｕｓｔａｌ  Ｗ（Thompson J. D.ら, 1994年, Nucleic Acids Res. 22(22), 4673-80）を使用して行うことができる。また、ＨＡＤ様ヒドロラーゼドメインの存在を、１５個のアミノ酸配列のＮ末端領域（配列の位置１および１８３から２４３の間）で同定した（第３表）。
【０１７７】
したがって、上記配列の特徴は、タンパク質が、ホスファターゼまたはクラスＩテルペンシンターゼドメインおよびクラスＩＩテルペンシンターゼドメインを、Ｎ末端およびＣ末端領域にそれぞれ含み、したがって二官能性プロトン化開始環化およびイオン化開始触媒活性を有することを示唆する。上記のアミノ酸配列の配列のアラインメントおよびペアワイズ比較（第２表）は、配列同一性の最低値３７％および最高値８９％を示した（２つのＥＭＤ３７６６６．１変異体は考慮しない）。ＣｖＴｐｓ１およびＬｏＴｐｓ１と比較して、最も近い配列は、８５％の同一性を共有し、最も遠い配列は、４２％の同一性のみを共有した。
【表１】
2020523005.tif 000002
【表２】
2020523005.tif 000003
【０１７８】
実施例６
他の真菌ヒドロラーゼ様二官能性セスキテルペンシンターゼの機能的な特性評価。
実施例５に記載された１５個の新しい推定シンターゼをコードするｃＤＮＡをコドン最適化し、ｐＪ４０１大腸菌発現プラスミド（ｐＪ４０１、ＡＴＵＭ、ニューアーク、カリフォルニア州）にクローン化した。実施例４に記載の手順に従って、ファルネシル二リン酸（ＦＰＰ）を過剰産生するように設計された大腸菌細胞で、酵素を機能的に特性評価した。
【０１７９】
１５種の新しい組換え酵素のうち、９種が主要産物として（＋）−アルビカノールを産生した：ＯＣＨ９３７６７．１、ＥＭＤ３７６６６．１、ＥＭＤ３７６６６−Ｂ、ＸＰ＿００１２１７３７６．１、ＯＪＪ９８３９４．１、ＧＡＯ８７５０１．１、ＸＰ＿００８０３４１５１．１、ＸＰ＿００７３６９６３１．１およびＡＣｇ００６３７２（図７および８）。これらの結果により、これらの酵素が二官能性アルビカノールシンターゼ酵素活性を有することが確認される。
【０１８０】
６種の他の新しいシンターゼ、ＫＩＡ７５６７６．１、ＸＰ＿００１８２０８６７．２、ＣＥＮ６０５４２．１、ＸＰ＿００９５４７４６９．１およびＫＬＯ０９１２４．１およびＯＪＩ９５７９７．１は、主要産物として（−）−ドリメノールを産生した（図９）。ドリメノールは、アルビカノールの形成と同様のメカニズムによって産生され、クラスＩＩに続いてクラスＩの酵素活性が関与する。
【０１８１】
ＸＰ＿００１８２０８６７．２について、有意な量のトランス−ファルネソールの形成を検出した（図９）。これはおそらく、このシンターゼの酵素活性が低いためであり、したがって、細菌細胞で産生された有意な量のファルネシル二リン酸は、ドリメノールに変換されなかった。この過剰のファルネシル二リン酸は、内因性アルカリホスファターゼにより加水分解され、産生されたトランス−ファルネソールは、増殖培地で放出された。
【０１８２】
ＣｖＴｐｓ１で同定された２つのＰｆａｍドメイン、すなわち、実施例３に記載されるようにＰＦ１３４１９．５およびＰＦ１３２４２．５も、第３表に示すように、これらの新しい推定シンターゼに見られる。
【表３】
2020523005.tif 000004
【０１８３】
実施例７
インビトロアッセイ。
組換えテルペンシンターゼを含む粗タンパク質抽出物を、ＫＲＸ大腸菌細胞（Ｐｒｏｍｅｇａ）またはＢＬ２１  Ｓｔａｒ（商標）（ＤＥ３）大腸菌（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を使用して調製する。発現プラスミドで形質転換された細胞の単一コロニーを使用して、５ｍｌのＬＢ培地に接種する。３７℃で５〜６時間インキュベートした後、培養物を２５℃のインキュベーターに移し、平衡化のために１時間放置する。次に、タンパク質の発現を、１ｍＭのＩＰＴＧの添加により誘導し、培養物を、２５℃で一晩インキュベートする。翌日、細胞を遠心分離により収集し、０．１容量の５０ｍＭ  ＭＯＰＳＯ  ｐＨ７（３−モルホリノ−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（シグマ−アルドリッチ）、１０％のグリセロールに再懸濁し、超音波処理により溶解する。抽出物を、遠心分離（２０，０００ｇで３０分）により透明にし、可溶性タンパク質を含む上清を、さらなる実験に使用する。
【０１８４】
組換えタンパク質を含むこれらの粗大腸菌タンパク質抽出物を、酵素活性の特性評価に使用する。アッセイを、８０μＭのファルネシル二リン酸（ＦＰＰ、Ｓｉｇｍａ）および０．１〜０．５ｍｇの粗タンパク質の存在下で、２ｍＬの５０ｍＭのＭＯＰＳＯ（ｐＨ７）、１０％のグリセロール、１ｍＭのＤＴＴ、１５ｍＭのＭｇＣｌ２のガラスチューブで実行する。チューブを２５℃で１２〜２４時間インキュベートし、１容量のペンタンで２回抽出する。窒素フラックス下で濃縮した後、実施例４に記載されるようにＧＣ−ＭＳで抽出物を分析し、対照タンパク質を用いたアッセイからの抽出物と比較する。次に、水相を、アルカリホスファターゼ（Ｓｉｇｍａ、６単位／ｍｌ）で処理し、続いてペンタンで抽出し、ＧＣ−ＭＳ分析する。
【０１８５】
アルカリホスファターゼ処理を行わないアッセイでは、アッセイに存在し、組換え酵素によって産生されたセスキテルペン化合物（炭化水素および酸素化セスキテルペン）を検出および識別することができる。アルビカニル二リン酸またはドリメニル二リン酸化合物は、有機溶媒に溶解しないので、ＧＣ−ＭＳ分析では検出されない。アルカリホスファターゼ処理後、アリル二リン酸結合が切断され、アルビカニル二リン酸またはドリメニル二リン酸化合物が存在する場合、セキテルペン部分が放出され、溶媒相で抽出され、ＧＣ−ＭＳ分析で検出される。この例では、クラスＩＩテルペンシンターゼ活性のみを有する酵素（例えば、ＡｓｔＣ、ＮＣＢＩアクセッションＸＰ＿００１８２２０１３．２, Shinohara Y.ら, 2016年, Sci Rep. 6, 32865）と、クラスＩＩテルペンシンターゼ様活性およびＣｖＴｐｓ１やＬｏＴｐｓ１などのクラスＩ（ホスファターゼ）活性を有する酵素とを区別することができる。
【０１８６】
実施例８
テルペンシンターゼおよびホスファターゼの共発現。Shinohara Y.ら, 2016, Sci Rep. 6, 32865には、ドリマンテルペンシンターゼ（ＡｓｔＣ、ＮＣＢＩアクセッションＸＰ＿００１８２２０１３．２）が記載されている。このシンターゼは、二リン酸部分に結合したドリマンセキテルペンを産生する。遊離ドリマンセスキテルペンを産生するには、ＡｓｔＣ酵素を、ホスファターゼ活性を有する酵素と組み合わせなければならない。この刊行物には、ＡｓｔＣによって産生されるドリマン二リン酸のリン酸部分の連続的切断を触媒する２つのホスファターゼＡｓｔＩおよびＡｓｔＫ（ＸＰ＿００１８２２００７．１およびＸＰ＿００３１８９９０３．１）も記載されている。
【０１８７】
合成オペロンを、ＣｖＴｐｓ１タンパク質とＡｓｔＩおよびＡｓｔＫタンパク質とを共発現するように設計した。合成オペロンは、リボソーム結合配列（ＲＢＳ）によって分離された３つのタンパク質のそれぞれをコードする最適化されたｃＤＮＡを含む。同様のオペロンは、ＡｓｔＣを、ＡｓｔＩおよびＡｓｔＫと共発現するように設計した。オペロンを合成し、ｐＪ４０１発現プラスミド（ＡＴＵＭ、ニューアーク、カリフォルニア州）にクローン化した。大腸菌細胞を、これらの発現プラスミドおよびｐＡＣＹＣ−２９２５８−４５０６プラスミド（実施例４）で同時形質転換し、実施例４に記載されるようにセスキテルペンを産生する条件下で細胞を培養した。産生されたセキテルペンを、実施例４に記載されるようにＧＣＭＳで分析し、ＣｖＴｐｓ１またはＡｓｔＣのみの細胞発現のセキテルペンプロファイルと比較した。
【０１８８】
図１０に示すように、ＡｓｔＣでは、酵素を、ホスファターゼ活性を有する酵素（ＡｓｔＩおよびＡｓｔＫ）と共発現させた場合、有意に多量（７８倍の増加）のセスキテルペンが産生される。大腸菌培養におけるドリマンセスキテルペンの典型的な濃度は、ＡｓｔＣ、ＡｓｔＩおよびＡｓｔＫを発現する細胞では２’６００ｍｇ／ｍｌであり、ＡｓｔＣのみを発現する細胞では３４ｍｇ／ｍｌであった。
【０１８９】
対照的に、ＣｖＴｐｓ１では、酵素を、単独で発現させた場合（１０００ｍｇ／ｍｌ）またはホスファターゼと共発現させた場合（１２００ｍｇ／ｍｌ）に産生されるドリマンセスキテルペンの量について、有意な差は認められない。この実験では、ＣｖＴｐｓ１ポリペプチドが、既知のＡｓｔＣシンターゼとは対照的に、シクラーゼ活性に加えてホスファターゼ活性（すなわち、クラスＩおよびクラスＩＩのテルペンシンターゼ活性）を有することが確認される。
【０１９０】
実施例９
ＸＰ＿００６４６１１２６．１の機能的な特性評価
マッシュルーム由来のＮＣＢＩアクセッション番号ＸＰ＿００６４６１１２６．１を、実施例５に記載の方法を使用して選択した。ＸＰ００６４６１１２６．１アミノ酸（配列番号６３）は、それぞれ、ＣｖＴｐｓ１およびＬｏＴｐｓ１アミノ酸配列と４８．９％および４８．１％の同一性を共有した。ＸＰ＿００６４６１１２６．１は、位置２７８と２７１との間にあるクラスＩＩテルペンシンターゼ様モチーフ（ＤＬＤＴ）（配列番号５６の一部）および位置１６７から１７１までにあるクラスＩテルペンシンターゼ様モチーフ（ＤＤＫＬＥ）（配列番号５５の一部）を含む。アミノ酸は、Ｎ末端領域にハロ酸デハロゲナーゼ様ヒドロラーゼスーパーファミリーの特徴的なモチーフも含む。
【０１９１】
ＸＰ＿００６４６１１２６．１をコードするｃＤＮＡは、コドン最適化され、ｐＪ４０１大腸菌発現プラスミド（ｐＪ４０１、ＡＴＵＭ、ニューアーク、カリフォルニア州）にクローニングされた。実施例４に記載される手順に従って、ファルネシル二リン酸（ＦＰＰ）を過剰産生するように設計された大腸菌細胞で、酵素を機能的に特性評価した。結果は、ＸＰ＿００６４６１１２６．１が、ドリメノールを主要な化合物として産生する二官能性ドリメノールシンターゼであることを示す（図１１）。
【０１９２】
実施例１０
真菌ヒドロラーゼ様二官能性セスキテルペンシンターゼを使用するサッカロミセス・セレビシエ細胞におけるインビボでのドリマンセスキテルペンの産生
異なるヒドロラーゼ様二官能性セスキテルペンシンターゼを、サッカロミセス・セレビシエ細胞におけるドリマンセスキテルペンの産生について評価した。
【０１９３】
選択したシンターゼは、以下の通りであった：
ＸＰ＿００７３６９６３１．１、ＮＣＢＩアクセッション番号ＸＰ＿００７３６９６３１．１、マツノオオウズラタケ由来ＸＰ＿００６４６１１２６、ＮＣＢＩアクセッション番号ＸＰ＿００６４６１１２６、マッシュルーム由来
ＬｏＴｐｓ１、配列番号５、エブリコ由来
ＥＭＤ３７６６６．１、ＮＣＢＩアクセッションＥＭＤ３７６６６．１、白色腐朽菌由来
ＸＰ＿００１２１７３７６．１、ＮＣＢＩアクセッション番号ＸＰ＿００１２１７３７６．１、アスペルギルス・テレウス由来
異なるシンターゼをコードするｃＤＮＡのコドン使用頻度を、サッカロミセス・セレビシエでの最適な発現のために変更した（配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０）。
【０１９４】
サッカロミセス・セレビシエの異なる遺伝子の発現のために、Kuijpersら, Microb Cell Fact., 2013, 12:47に既に記載されているように酵母の内因性相同組換えを使用して、一連のプラスミドをインビボで構築した。各プラスミドは、サッカロミセス・セレビシエの同時形質転換に使用した５つのＤＮＡ断片で構成されている。その断片は、以下の通りであった：
断片ａ：プライマー５’−ＡＧＧＴＧＣＡＧＴＴＣＧＣＧＴＧＣＡＡＴＴＡＴＡＡＣＧＴＣＧＴＧＧＣＡＡＣＴＧＴＴＡＴＣＡＧＴＣＧＴＡＣＣＧＣＧＣＣＡＴＴＣＧＡＣＴＡＣＧＴＣＧＴＡＡＧＧＣＣ−３’（配列番号７１）および５’−ＴＣＧＴＧＧＴＣＡＡＧＧＣＧＴＧＣＡＡＴＴＣＴＣＡＡＣＡＣＧＡＧＡＧＴＧＡＴＴＣＴＴＣＧＧＣＧＴＴＧＴＴＧＣＴＧＡＣＣＡＴＣＧＡＣＧＧＴＣＧＡＧＧＡＧＡＡＣＴＴ−３’（配列番号７２）を使用し、テンプレートとしてプラスミドｐＥＳＣ−ＬＥＵ（Agilent Technologies、カリフォルニア州、米国）を用いて、ＰＣＲにより構築された、ＬＥＵ２酵母マーカー；
断片ｂ：プライマー５’−ＴＧＧＴＣＡＧＣＡＡＣＡＡＣＧＣＣＧＡＡＧＡＡＴＣＡＣＴＣＴＣＧＴＧＴＴＧＡＧＡＡＴＴＧＣＡＣＧＣＣＴＴＧＡＣＣＡＣＧＡＣＡＣＧＴＴＡＡＧＧＧＡＴＴＴＴＧＧＴＣＡＴＧＡＧ−３’（配列番号７３）および５’−ＡＡＣＧＣＧＴＡＣＣＣＴＡＡＧＴＡＣＧＧＣＡＣＣＡＣＡＧＴＧＡＣＴＡＴＧＣＡＧＴＣＣＧＣＡＣＴＴＴＧＣＣＡＡＴＧＣＣＡＡＡＡＡＴＧＴＧＣＧＣＧＧＡＡＣＣＣＣＴＡ−３’（配列番号７４）を使用し、テンプレートとしてプラスミドｐＥＳＣ−ＵＲＡを用いて、ＰＣＲにより構築された、ＡｍｐＲ大腸菌マーカー；
断片ｃ：プライマー５’−ＴＴＧＧＣＡＴＴＧＧＣＡＡＡＧＴＧＣＧＧＡＣＴＧＣＡＴＡＧＴＣＡＣＴＧＴＧＧＴＧＣＣＧＴＡＣＴＴＡＧＧＧＴＡＣＧＣＧＴＴＣＣＴＧＡＡＣＧＡＡＧＣＡＴＣＴＧＴＧＣＴＴＣＡ−３’（配列番号７５）および５’−ＣＣＧＡＧＡＴＧＣＣＡＡＡＧＧＡＴＡＧＧＴＧＣＴＡＴＧＴＴＧＡＴＧＡＣＴＡＣＧＡＣＡＣＡＧＡＡＣＴＧＣＧＧＧＴＧＡＣＡＴＡＡＴＧＡＴＡＧＣＡＴＴＧＡＡＧＧＡＴＧＡＧＡＣＴ−３’（配列番号７６）を使用し、テンプレートとしてｐＥＳＣ−ＵＲＡを用いて、ＰＣＲにより得られた、酵母の複製起点；
断片ｄ：プライマー５’−ＡＴＧＴＣＡＣＣＣＧＣＡＧＴＴＣＴＧＴＧＴＣＧＴＡＧＴＣＡＴＣＡＡＣＡＴＡＧＣＡＣＣＴＡＴＣＣＴＴＴＧＧＣＡＴＣＴＣＧＧＴＧＡＧＣＡＡＡＡＧＧＣＣＡＧＣＡＡＡＡＧＧ−３’（配列番号７７）および５’−ＣＴＣＡＧＡＴＧＴＡＣＧＧＴＧＡＴＣＧＣＣＡＣＣＡＴＧＴＧＡＣＧＧＡＡＧＣＴＡＴＣＣＴＧＡＣＡＧＴＧＴＡＧＣＡＡＧＴＧＣＴＧＡＧＣＧＴＣＡＧＡＣＣＣＣＧＴＡＧＡＡ−３’（配列番号７８）を使用し、テンプレートとしてプラスミドｐＥＳＣ−ＵＲＡを用いて、ＰＣＲにより得られた、大腸菌の複製起点、および
断片ｅ：断片「ｄ」の最後の６０ヌクレオチド、酵母遺伝子ＰＧＫ１の停止コドンの２００ヌクレオチド下流、試験されるヒドロラーゼ様二官能性セスキテルペンシンターゼコード配列の１つ、サッカロミセス・セレビシエでの発現のために最適化されたコドン、ＧＡＬ１のプロモーター、および断片「ａ」の始まりに対応する６０ヌクレオチドで構成される断片。これらの断片を、ＤＮＡ合成（ＡＴＵＭ、ニューアーク、カリフォルニア州）によって取得した。
【０１９５】
サッカロミセス・セレビシエにおける内因性ファルネシル二リン酸（ＦＰＰ）プールのレベルを増加させるために、アセチルＣｏＡ  Ｃ−アセチルトランスフェラーゼをコードするＥＲＧ１０から、ＦＰＰシンテターゼをコードするＥＲＧ２０まで、メバロン酸経路に関与するすべての酵母内因性遺伝子の余分なコピーを、Paddonら、Nature、2013、496：528-532に記載されているのと同様に、ガラクトース誘導性プロモーターの制御下で、サッカロミセス・セレビシエ株ＣＥＮ．ＰＫ２−１Ｃ（Ｅｕｒｏｓｃａｒｆ、フランクフルト、独国）のゲノム中に組み込んだ。簡単に言えば、３つのカセットを、それぞれ、ＬＥＵ２、ＴＲＰ１およびＵＲＡ３遺伝子座に組み込んだ。遺伝子ＥＲＧ２０および切断されたＨＭＧ１（Donaldら、Proc Natl Acad Sci USA、1997年、109 : E111-8に記載のｔＨＭＧ１）がＧＡＬ１０／ＧＡＬ１の双方向プロモーターの制御下にあり、遺伝子ＥＲＧ１９およびＥＲＧ１３が同様にＧＡＬ１０／ＧＡＬ１のプロモーターの制御下にある第１のカセットの場合、そのカセットには、ＬＥＵ２の上流および下流セクションに対応する２つの１００ヌクレオチド領域が隣接していた。遺伝子ＩＤＩ１およびｔＨＭＧ１がＧＡＬ１０／ＧＡＬ１プロモーターの制御下にあり、遺伝子ＥＲＧ１３がＧＡＬ７のプロモーター領域の制御下にある第２のカセットの場合、そのカセットには、ＴＲＰ１の上流および下流セクションに対応する２つの１００ヌクレオチド領域が隣接していた。遺伝子ＥＲＧ１０、ＥＲＧ１２、ｔＨＭＧ１およびＥＲＧ８がすべてＧＡＬ１０／ＧＡＬ１プロモーターの制御下にある第３のカセットの場合、そのカセットには、ＵＲＡ３の上流および下流セクションに対応する２つの１００ヌクレオチド領域が隣接していた。３つのカセット内のすべての遺伝子には、独自のターミネーター領域の２００ヌクレオチドが含まれていた。また、GriggsおよびJohnston, Proc Natl Acad Sci USA, 1991年, 88:8597〜8601に記載されるように、それ自身のプロモーターの変異バージョンの制御下にあるＧＡＬ４の余分なコピーを、ＥＲＧ９プロモーター領域の上流に組み込んだ。さらに、ＥＲＧ９の内因性プロモーターを、ＣＴＲ３の酵母プロモーター領域に置き換え、ＹＳＴ０３５株を生成した。最後に、ＹＳＴ０３５を、ＣＥＮ．ＰＫ２−１Ｄ株（Ｅｕｒｏｓｃａｒｆ、フランクフルト、独国）と交配させて、ＹＳＴ０４５と呼ばれる二倍体株を得た。
【０１９６】
ＹＳＴ０４５を、インビボプラスミドアセンブリに必要な断片で形質転換した。酵母の形質転換を、GietzおよびWoods, Methods Enzymol., 2002, 350:87−96に記載されるように、酢酸リチウムプロトコルで実行した。形質転換混合物を、アミノ酸を含まない酵母窒素塩基６．７ｇ／Ｌ（ＢＤ  Ｄｉｆｃｏ、ニュージャージー、米国）、ロイシンを含まないドロップアウトサプリメント１．６ｇ／Ｌ（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、ミズーリ、米国）、グルコース２０ｇ／Ｌおよび寒天２０ｇ／Ｌを含むＳｍＬｅｕ−培地にプレーティングした。プレートを３０℃で３〜４日間インキュベートした。個々のコロニーを使用して、Westfallら, Proc Natl Acad Sci USA, 2012, 109:E111-118に記載されるような培地および有機オーバーレイのような鉱物油（（2705-01, J. T. Baker, Avantor Performance Materials, Inc. センター・バレー、ペンシルベニア州、米国）を含むチューブまたは振盪フラスコ中でドリマンセスキテルペンを産生した。
【０１９７】
これらの培養条件下で、アルビカノールまたはドリメノールを、試験したすべてのヒドロラーゼ様二官能性セスキテルペンシンターゼで産生した。ドリマンセスキテルペンの産生を、ＧＣ−ＭＳ分析を使用して同定し、内部標準を用いてＧＣ−ＦＩＤにより定量化した（図１２を参照）。次の表は、シンターゼＸＰ＿００７３６９６３１．１によって得られた量に対する産生されたドリマンセスキテルペンの量を示す（これらの実験条件下で、ＸＰ＿００７３６９６３１．１を発現する細胞によって産生されるドリマンセスキテルペンの濃度は、８０５〜８５４ｍｇ／Ｌであり、最高の産生量であった）。
【表４】
2020523005.tif 000005
【０１９８】
配列リスト
ＣｖＴｐｓ１
配列番号１−ＣｖＴｐｓ１タンパク質
MTTIHRRHTTLILDLGDVLFRWSPKTETAIPPRQLKEILTSVTWFEYERGQISQTECYERCAAEFKVDPLVIAEAFKQARESLRPNKAFIALIRELRHQMHGDLTVLALSNISLPDYEYIMSLSSDWATVFNRVFPSALVGERKPHLGCYRKVISEMSLEPQTTVFVDDKLDNVASARSLGMHGIVFDNEANVFRQLRNIFGNPVSRGQGYLRKHAGKLESSTDNGLTFEENFTQLIIYEVTQDRSLITLSECPRTWNFFRGQPLFSESFPDDVDTTSVALTVLQPDRALVDSILDQMLEYVDADGIMQTYFDSSRPRIDPFVCVNVLSLFYANGRGRELPHTLEWVYEVLLHRAYHGGSRYYLSPDCFLFFMSRLLKRANDSALQARFRPLFMERVKERVGAAGDSMDLAFRILAAATIGVHCPQDLERLAAAQCEDGGWDMCWFYAFGSTGIKAGNRGLTTALAVAAIRTALGRPPSPSPSNISSSSKLDAPNSFLGIPRPTSPIRFGELFRSWRKNKPTAKSQ
【０１９９】
配列番号２−ＣｖＴｐｓ１転写産物（非コード配列を含む）
CATCCCGCCTTTTGAGCATGGCACACAAACAGCCTTTAAGGAGCTCCTTGGTTGCCTAGTCATGCCTCCACCTGCCCCCTCCTCACTCATCCCCTCGCATCCTAAAACATGACCACGATTCACCGTCGGCACACCACTCTCATCTTGGACCTCGGCGACGTCCTCTTCCGCTGGTCACCAAAGACCGAGACCGCCATCCCCCCTCGGCAGCTTAAGGAGATACTTACCTCCGTCACCTGGTTCGAGTACGAACGAGGCCAGATATCCCAAACAGAATGTTACGAACGATGCGCTGCAGAATTCAAAGTCGACCCCTTAGTGATCGCTGAAGCCTTCAAGCAAGCTCGCGAGTCATTACGGCCCAACAAAGCGTTCATCGCCTTGATTCGCGAACTTCGCCATCAAATGCATGGAGACCTCACGGTCCTCGCCCTTTCCAACATTTCCCTCCCCGATTACGAATATATCATGTCTCTGAGCTCGGATTGGGCAACCGTCTTCAATCGCGTATTCCCTTCTGCACTTGTTGGCGAGCGAAAACCCCATCTGGGGTGCTACCGCAAGGTCATTTCGGAGATGAGCTTGGAACCCCAGACAACCGTATTTGTCGATGATAAGCTAGACAACGTCGCCTCTGCTCGCTCACTTGGCATGCACGGCATCGTATTCGACAACGAAGCCAATGTCTTCCGGCAACTGCGCAATATCTTCGGGAATCCGGTTAGCCGCGGTCAAGGCTATCTTCGCAAGCATGCCGGAAAGCTTGAGTCTTCTACCGACAATGGCTTGACCTTTGAGGAGAACTTCACCCAGCTCATCATCTACGAGGTGACACAAGACAGGAGTCTCATCACGCTCTCAGAATGTCCCCGTACCTGGAATTTCTTTCGAGGTCAACCGCTCTTCTCGGAGTCTTTCCCGGATGATGTGGACACAACATCCGTGGCATTGACAGTACTACAACCCGATAGAGCGCTCGTTGATTCTATTCTAGACCAAATGCTTGAATATGTTGACGCCGACGGCATCATGCAGACATACTTCGACAGCTCGCGACCACGCATAGACCCTTTTGTTTGCGTCAATGTGCTTTCTCTGTTCTACGCAAACGGCCGGGGTCGGGAGCTCCCTCACACACTGGAGTGGGTCTATGAAGTACTCCTGCATCGCGCCTACCATGGAGGCTCACGTTACTACCTATCACCGGACTGCTTTTTATTCTTCATGAGCCGCTTGCTCAAGCGCGCCAACGACTCGGCCCTCCAGGCTCGGTTCCGCCCACTGTTCATGGAGAGAGTGAAAGAACGAGTAGGGGCAGCCGGAGACTCAATGGACCTGGCCTTCCGCATCCTCGCCGCGGCTACCATTGGCGTCCATTGCCCCCAAGATCTAGAAAGATTGGCCGCCGCGCAATGCGAGGACGGTGGATGGGACATGTGCTGGTTCTACGCGTTCGGGTCGACAGGTATCAAGGCGGGCAACCGCGGCCTCACCACGGCCCTTGCCGTCGCAGCTATACGAACCGCCCTCGGGCGCCCCCCCTCTCCCAGCCCCTCCAACATCTCGTCGTCGTCGAAGCTCGACGCTCCCAACAGCTTCTTGGGCATCCCGCGCCCAACCAGCCCCATTCGCTTTGGCGAACTTTTCCGTTCCTGGCGAAAGAACAAACCGACCGCAAAATCTCAATGAATCTCAGGTTCTCGTGCTCTCGTGCTATCTTCGTACTTATGCTACTCGACATTACCCGTCGCTGTCTACAATGATACGGGTACTTTGATGAAACTGTAGATGTATTTGTATCATATTGACCTCCATCCATAGTCACCTAGCTACTGTTCGTGTTATCACCTGTTGCTGTTATATGATACAAGATGCCCAAACGAGAATGTAGAAATGTTCCGTACACTTGTGTACCTGTGATGAAGCTACATAGGCCTTCAATCGATCACTTGGTCC
【０２００】
配列番号３−ＣｖＴｐｓ１  ｃＤＮＡ
ATGACCACGATTCACCGTCGGCACACCACTCTCATCTTGGACCTCGGCGACGTCCTCTTCCGCTGGTCACCAAAGACCGAGACCGCCATCCCCCCTCGGCAGCTTAAGGAGATACTTACCTCCGTCACCTGGTTCGAGTACGAACGAGGCCAGATATCCCAAACAGAATGTTACGAACGATGCGCTGCAGAATTCAAAGTCGACCCCTTAGTGATCGCTGAAGCCTTCAAGCAAGCTCGCGAGTCATTACGGCCCAACAAAGCGTTCATCGCCTTGATTCGCGAACTTCGCCATCAAATGCATGGAGACCTCACGGTCCTCGCCCTTTCCAACATTTCCCTCCCCGATTACGAATATATCATGTCTCTGAGCTCGGATTGGGCAACCGTCTTCAATCGCGTATTCCCTTCTGCACTTGTTGGCGAGCGAAAACCCCATCTGGGGTGCTACCGCAAGGTCATTTCGGAGATGAGCTTGGAACCCCAGACAACCGTATTTGTCGATGATAAGCTAGACAACGTCGCCTCTGCTCGCTCACTTGGCATGCACGGCATCGTATTCGACAACGAAGCCAATGTCTTCCGGCAACTGCGCAATATCTTCGGGAATCCGGTTAGCCGCGGTCAAGGCTATCTTCGCAAGCATGCCGGAAAGCTTGAGTCTTCTACCGACAATGGCTTGACCTTTGAGGAGAACTTCACCCAGCTCATCATCTACGAGGTGACACAAGACAGGAGTCTCATCACGCTCTCAGAATGTCCCCGTACCTGGAATTTCTTTCGAGGTCAACCGCTCTTCTCGGAGTCTTTCCCGGATGATGTGGACACAACATCCGTGGCATTGACAGTACTACAACCCGATAGAGCGCTCGTTGATTCTATTCTAGACCAAATGCTTGAATATGTTGACGCCGACGGCATCATGCAGACATACTTCGACAGCTCGCGACCACGCATAGACCCTTTTGTTTGCGTCAATGTGCTTTCTCTGTTCTACGCAAACGGCCGGGGTCGGGAGCTCCCTCACACACTGGAGTGGGTCTATGAAGTACTCCTGCATCGCGCCTACCATGGAGGCTCACGTTACTACCTATCACCGGACTGCTTTTTATTCTTCATGAGCCGCTTGCTCAAGCGCGCCAACGACTCGGCCCTCCAGGCTCGGTTCCGCCCACTGTTCATGGAGAGAGTGAAAGAACGAGTAGGGGCAGCCGGAGACTCAATGGACCTGGCCTTCCGCATCCTCGCCGCGGCTACCATTGGCGTCCATTGCCCCCAAGATCTAGAAAGATTGGCCGCCGCGCAATGCGAGGACGGTGGATGGGACATGTGCTGGTTCTACGCGTTCGGGTCGACAGGTATCAAGGCGGGCAACCGCGGCCTCACCACGGCCCTTGCCGTCGCAGCTATACGAACCGCCCTCGGGCGCCCCCCCTCTCCCAGCCCCTCCAACATCTCGTCGTCGTCGAAGCTCGACGCTCCCAACAGCTTCTTGGGCATCCCGCGCCCAACCAGCCCCATTCGCTTTGGCGAACTTTTCCGTTCCTGGCGAAAGAACAAACCGACCGCAAAATCTCAATGA
【０２０１】
配列番号４−ＣｖＴｐｓ１最適化ｃＤＮＡ
ATGACTACGATCCACCGCCGCCATACTACGCTGATCCTGGACCTGGGTGATGTTCTGTTCCGCTGGTCCCCGAAAACCGAAACCGCAATTCCGCCTCGTCAGCTGAAAGAAATCTTGACCAGCGTTACCTGGTTCGAGTATGAGCGTGGCCAAATTAGCCAGACCGAATGCTACGAGCGTTGTGCTGCCGAGTTTAAAGTTGATCCGCTGGTTATTGCCGAAGCGTTTAAACAAGCGCGTGAAAGCCTGCGTCCGAACAAAGCGTTTATCGCGTTGATCCGTGAGTTGCGCCACCAGATGCATGGTGACCTGACGGTCCTGGCACTGAGCAACATTAGCCTGCCTGATTATGAGTACATTATGTCGCTGAGCTCCGATTGGGCGACGGTCTTTAATCGCGTGTTTCCGAGCGCACTGGTGGGTGAGCGTAAGCCACACCTGGGTTGCTACCGCAAGGTCATCAGCGAGATGTCTCTGGAGCCGCAGACCACGGTTTTCGTCGATGACAAACTGGACAATGTCGCAAGCGCTCGTAGCCTGGGCATGCATGGCATCGTGTTCGACAACGAAGCGAACGTTTTTCGTCAGCTGCGTAATATCTTCGGTAACCCGGTTAGCCGCGGTCAAGGTTACTTGCGTAAACACGCCGGTAAACTGGAATCTAGCACGGATAATGGTCTGACCTTCGAAGAGAACTTCACTCAATTAATTATTTACGAAGTCACGCAAGACCGCAGCCTGATCACCCTGAGCGAGTGCCCGCGTACCTGGAACTTCTTCCGCGGTCAACCACTGTTTTCTGAGAGCTTTCCGGACGACGTGGACACCACCTCTGTGGCGTTGACCGTTCTGCAGCCGGATCGTGCGTTGGTGGATAGCATCCTGGACCAGATGTTGGAATATGTTGACGCGGATGGTATTATGCAAACCTACTTTGATTCATCCCGTCCGCGCATTGACCCGTTCGTGTGCGTGAATGTCCTGAGCCTGTTCTACGCCAATGGCAGAGGCCGCGAGCTGCCACACACGCTGGAATGGGTCTATGAAGTTCTGCTGCACCGTGCGTACCACGGCGGTAGCCGTTATTACCTGAGCCCGGACTGTTTCCTGTTCTTTATGAGCCGTCTGCTGAAGCGCGCGAATGACTCGGCGCTGCAGGCCCGTTTTCGCCCGCTTTTCATGGAACGTGTGAAAGAGCGTGTGGGCGCAGCCGGCGATAGCATGGACCTGGCGTTCCGCATTCTGGCCGCTGCAACCATCGGCGTTCATTGCCCACAAGATCTGGAGCGTCTGGCAGCAGCGCAGTGCGAAGATGGTGGCTGGGATATGTGTTGGTTTTATGCGTTTGGCAGCACGGGTATCAAGGCTGGCAACCGCGGTCTGACCACCGCGTTGGCTGTCGCCGCAATTCGTACCGCGCTGGGTCGTCCGCCTTCCCCGAGCCCGAGCAATATTTCTAGCTCCAGCAAACTGGACGCGCCGAACTCCTTCCTGGGCATCCCGCGTCCGACCAGCCCGATCCGTTTCGGTGAACTGTTTCGTAGCTGGCGTAAGAACAAGCCGACCGCGAAAAGCCAGTAA
【０２０２】
ＬｏＴｐｓ１
配列番号５−ＬｏＴｐｓ１タンパク質
MYTALILDLGDVLFSWSSTTNTTIPPRQLKEILSSPAWFEYERGRITQAECYERVSAEFSLDATAVAEAFRQARDSLRPNDKFLTLIRELRQQSHGELTVLALSNISLPDYEFIMALDSKWTSVFDRVFPSALVGERKPHLGAFRQVLSEMNLDPHTTVFVDDKLDNVVSARSLGMHGVVFDSQDNVFRMLRNIFGDPIHRGRDYLRQHAGRLETSTDAGVVFEENFTQLIIYELTNDKSLITTSNCARTWNFFRGKPLFSASFPDDMDTTSVALTVLRLDHALVNSVLDEMLKYVDADGIMQTYFDHTRPRMDPFVCVNVLSLFHEQGRGHELPNTLEWVHEVLLHRAYIGGSRYYLSADCFLFFMSRLLQRITDPSVLGRFRPLFIERVRERVGATGDSIDLAFRIIAASTVGIQCPRDLESLLAAQCEDGGWDLCWFYQYGSTGVKAGNRGLTTALAIKAIDSAIARPPSPALSVASSSKSEIPKPIQRSLRPLSPRRFGGFLMPWRRSQRNGVAVSS
【０２０３】
配列番号６−ＬｏＴｐｓ１転写産物（非コード配列を含む）
GCGTCTGCTGCGGTCTCTCACCGCGCCGAGCGACGGGAAGCGGAGGCTTTTTGATGCAGCCAGCTCAGCGCCATCCTCTCACGCAGGGGGTTTGATCCAGATCTGATCGCCTCCGGGTTCTCATCTAGAACGCACGGCGGCTCCCAGGAAGTTCTATCGACCCTCTGCGCGCTGGTCGGCGGCACGATGTGGCTACACCAGTCCCAATCATATCTCACACCCAGCACCATCATCTCGGGCCTCTTCGTCATGTAACCCTCCCAAGCCTATTTTTCAGGGCGTTCCCCCTCACCGGCGCGCTTCTTAAAGAATCCCGAAATGTATACGGCTCTTATCCTTGACCTCGGCGACGTTCTGTTCTCTTGGTCGTCGACGACCAACACGACTATTCCCCCTCGGCAGCTAAAGGAGATCCTCTCATCTCCTGCCTGGTTTGAGTACGAGCGTGGTCGCATAACGCAAGCCGAATGCTACGAGCGTGTCAGCGCCGAGTTCAGCCTAGACGCCACCGCCGTCGCGGAAGCATTCCGGCAAGCTCGCGACTCCTTGCGCCCGAACGACAAGTTCCTCACGTTAATTCGCGAGCTTCGACAACAATCTCATGGGGAGCTCACGGTGCTTGCGCTGTCCAACATATCCCTTCCCGACTATGAATTCATCATGGCCCTCGACTCGAAGTGGACTTCTGTCTTTGACCGCGTCTTCCCTTCTGCCCTCGTGGGCGAACGGAAGCCACACCTTGGAGCGTTTCGCCAGGTTCTGTCCGAGATGAATCTTGACCCGCACACAACTGTGTTCGTCGATGACAAGCTGGACAATGTCGTCTCCGCACGGTCCCTCGGGATGCACGGCGTCGTGTTCGACTCCCAAGACAATGTCTTTCGGATGCTGAGAAACATCTTTGGCGATCCCATTCATCGGGGACGTGACTATCTCCGACAGCACGCCGGACGTCTGGAGACCTCCACGGATGCCGGTGTGGTCTTCGAAGAGAATTTCACGCAACTCATCATCTACGAACTGACGAATGACAAGTCTCTCATCACGACATCAAACTGTGCTCGTACTTGGAATTTCTTTCGTGGGAAGCCTTTGTTCTCAGCATCGTTCCCTGACGACATGGACACGACCTCGGTTGCCTTGACTGTATTACGTTTAGACCACGCCCTCGTGAACTCGGTTTTGGACGAGATGCTAAAGTATGTCGACGCAGACGGCATCATGCAGACCTACTTCGACCATACACGCCCACGCATGGATCCATTTGTCTGCGTCAATGTGCTCTCGTTGTTTCACGAACAAGGTCGTGGCCACGAGCTTCCGAACACCCTCGAATGGGTCCATGAGGTCCTCCTCCACCGCGCGTACATCGGGGGCTCGCGGTACTACCTCTCCGCGGACTGCTTCCTCTTTTTCATGAGCCGCCTCCTGCAGCGCATCACCGACCCGTCCGTCCTTGGCCGCTTCCGTCCACTATTCATAGAGCGCGTTCGGGAGCGTGTAGGTGCGACCGGGGACTCCATCGATCTCGCATTCCGCATCATCGCCGCGTCCACAGTAGGCATCCAGTGTCCACGCGACTTGGAAAGTCTCCTCGCCGCACAGTGTGAAGACGGTGGCTGGGACCTGTGCTGGTTCTACCAGTACGGATCGACCGGTGTCAAGGCGGGCAACCGCGGGCTCACCACCGCTCTGGCGATCAAAGCTATTGACTCCGCCATTGCGAGGCCACCTTCGCCTGCCCTCTCAGTCGCTTCGTCGTCCAAATCGGAGATACCGAAACCCATACAACGGTCCCTTAGGCCCCTTAGCCCCCGCCGGTTTGGCGGTTTCCTGATGCCGTGGCGCAGGTCACAGCGCAATGGCGTGGCGGTCTCTAGTTGAACACTTGACCCTTGACACTTCGCTTTGCACTGCCTGCTCCCCTGCCAATCCTCCCCTACGATCGTATCATCCCTCTCTTGCCCTCGCCTCCCCCTCGTACCCCCTCTCATGGGGTGCCATTTGTAGATATGTACGTAGCGTGATGTAGCGGTACTCGGATCGTTCTCGTACTCGTCTTGCTCTGCCGTCGCTTCCAGCCCGTGCTGTTCTCTCGTTCAGGCTATTCGTTGGTTACGCGTATATCGTAATAGACCGCCCCGGTTCCTCGCCTACAGACACTCGCCCGTCTCGCCACGGACTCGGCTACGGATTCAGACTACATGAGTGGCAGTTATCACACGCAGATCCCTCCTTGGTCGTTCTGTAGTACCCACATATGTAATTGTACCAGTCCACTGTTGCAGATC
【０２０４】
配列番号７−ＬｏＴｐｓ１  ｃＤＮＡ
ATGTATACGGCTCTTATCCTTGACCTCGGCGACGTTCTGTTCTCTTGGTCGTCGACGACCAACACGACTATTCCCCCTCGGCAGCTAAAGGAGATCCTCTCATCTCCTGCCTGGTTTGAGTACGAGCGTGGTCGCATAACGCAAGCCGAATGCTACGAGCGTGTCAGCGCCGAGTTCAGCCTAGACGCCACCGCCGTCGCGGAAGCATTCCGGCAAGCTCGCGACTCCTTGCGCCCGAACGACAAGTTCCTCACGTTAATTCGCGAGCTTCGACAACAATCTCATGGGGAGCTCACGGTGCTTGCGCTGTCCAACATATCCCTTCCCGACTATGAATTCATCATGGCCCTCGACTCGAAGTGGACTTCTGTCTTTGACCGCGTCTTCCCTTCTGCCCTCGTGGGCGAACGGAAGCCACACCTTGGAGCGTTTCGCCAGGTTCTGTCCGAGATGAATCTTGACCCGCACACAACTGTGTTCGTCGATGACAAGCTGGACAATGTCGTCTCCGCACGGTCCCTCGGGATGCACGGCGTCGTGTTCGACTCCCAAGACAATGTCTTTCGGATGCTGAGAAACATCTTTGGCGATCCCATTCATCGGGGACGTGACTATCTCCGACAGCACGCCGGACGTCTGGAGACCTCCACGGATGCCGGTGTGGTCTTCGAAGAGAATTTCACGCAACTCATCATCTACGAACTGACGAATGACAAGTCTCTCATCACGACATCAAACTGTGCTCGTACTTGGAATTTCTTTCGTGGGAAGCCTTTGTTCTCAGCATCGTTCCCTGACGACATGGACACGACCTCGGTTGCCTTGACTGTATTACGTTTAGACCACGCCCTCGTGAACTCGGTTTTGGACGAGATGCTAAAGTATGTCGACGCAGACGGCATCATGCAGACCTACTTCGACCATACACGCCCACGCATGGATCCATTTGTCTGCGTCAATGTGCTCTCGTTGTTTCACGAACAAGGTCGTGGCCACGAGCTTCCGAACACCCTCGAATGGGTCCATGAGGTCCTCCTCCACCGCGCGTACATCGGGGGCTCGCGGTACTACCTCTCCGCGGACTGCTTCCTCTTTTTCATGAGCCGCCTCCTGCAGCGCATCACCGACCCGTCCGTCCTTGGCCGCTTCCGTCCACTATTCATAGAGCGCGTTCGGGAGCGTGTAGGTGCGACCGGGGACTCCATCGATCTCGCATTCCGCATCATCGCCGCGTCCACAGTAGGCATCCAGTGTCCACGCGACTTGGAAAGTCTCCTCGCCGCACAGTGTGAAGACGGTGGCTGGGACCTGTGCTGGTTCTACCAGTACGGATCGACCGGTGTCAAGGCGGGCAACCGCGGGCTCACCACCGCTCTGGCGATCAAAGCTATTGACTCCGCCATTGCGAGGCCACCTTCGCCTGCCCTCTCAGTCGCTTCGTCGTCCAAATCGGAGATACCGAAACCCATACAACGGTCCCTTAGGCCCCTTAGCCCCCGCCGGTTTGGCGGTTTCCTGATGCCGTGGCGCAGGTCACAGCGCAATGGCGTGGCGGTCTCTAGTTGA
【０２０５】
配列番号８−ＬｏＴｐｓ１最適化ｃＤＮＡ
ATGTACACGGCGCTGATTTTGGATTTGGGTGATGTTCTGTTTAGCTGGAGCTCAACGACTAACACCACCATTCCGCCGCGTCAGCTGAAAGAAATCTTGAGCTCCCCGGCGTGGTTCGAGTACGAGCGTGGCCGTATCACCCAGGCAGAGTGTTATGAGCGTGTCAGCGCAGAGTTTAGCCTGGATGCGACGGCCGTGGCTGAGGCTTTTCGTCAGGCACGTGATAGCCTGCGTCCGAACGACAAATTTCTGACCCTGATCCGTGAGCTGCGTCAACAGAGCCACGGTGAATTGACCGTTCTGGCCTTGTCTAACATCAGCCTGCCGGATTACGAATTTATTATGGCACTGGACTCGAAGTGGACCAGCGTGTTTGATCGTGTGTTCCCGAGCGCCCTGGTGGGCGAACGCAAGCCGCACCTGGGCGCGTTCCGCCAAGTCCTGTCCGAGATGAATTTGGACCCGCATACCACCGTTTTTGTGGACGACAAACTGGACAATGTTGTCAGCGCACGCAGCCTGGGTATGCACGGTGTCGTGTTCGACAGCCAAGACAATGTTTTTCGTATGCTGCGTAACATTTTCGGTGACCCAATTCACCGCGGTCGTGACTATCTGCGCCAGCACGCTGGTCGTCTTGAAACGTCCACCGATGCGGGCGTTGTGTTCGAAGAGAACTTCACCCAACTGATCATTTACGAACTGACCAACGATAAGAGCCTGATCACCACCTCTAATTGCGCCCGCACCTGGAACTTCTTCCGCGGCAAACCTCTGTTCTCCGCGAGCTTTCCGGACGATATGGACACTACGTCGGTAGCGCTGACCGTGCTGCGTCTGGACCATGCGCTGGTGAATAGCGTTCTGGATGAAATGCTGAAATACGTCGATGCTGACGGTATTATGCAGACCTACTTTGATCATACGCGTCCTCGTATGGACCCGTTCGTTTGCGTCAATGTGCTGAGCCTGTTTCACGAGCAAGGTCGCGGTCATGAACTGCCGAATACGCTGGAATGGGTGCATGAAGTCCTGCTGCACCGTGCGTATATCGGTGGCAGCCGCTATTATCTGAGCGCGGATTGTTTCCTGTTCTTTATGAGCCGTCTGTTGCAACGTATTACCGACCCGAGCGTTTTAGGTAGATTTCGCCCGCTGTTCATCGAGCGTGTTCGCGAGCGCGTTGGCGCGACTGGCGACAGCATCGACCTGGCATTCCGTATCATCGCGGCCAGCACGGTCGGCATTCAATGCCCGCGTGACCTGGAGTCTCTGCTGGCAGCACAGTGCGAAGATGGTGGCTGGGATCTGTGTTGGTTTTACCAGTACGGCAGCACGGGTGTTAAGGCCGGTAACCGTGGTCTGACCACGGCGTTGGCGATCAAAGCGATTGACAGCGCCATCGCGCGTCCGCCAAGCCCGGCCCTGTCCGTTGCAAGCTCCAGCAAGAGCGAGATTCCGAAGCCGATTCAGCGTAGCCTCCGCCCGTTGAGCCCGCGTCGCTTCGGTGGCTTCCTGATGCCGTGGCGTCGTAGCCAACGCAATGGTGTCGCGGTGAGCTCTTAA
【０２０６】
ＯＣＨ９３７６７．１
配列番号９−ＯＣＨ９３７６７．１タンパク質
MSAAVRYTTLILDLGDVLFTWSPKTKTSISPRILKEILNSATWYEYERGSITQHECYERVGVEFGIAPSEIHNAFKQARDSMESNDELIALVRELKEQSDGELLVFALSNISLPDYEYVLTKPADWSIFDKVFPSALVGERKPHLGIYKHVIAETGVDPRTTVFVDDKIDNVLSARSLGMHGIVFDKHEDVMRALRNIFGDPVRRGREYLRRNARKLESITDHGVAFGENFTQLLILELTSDASLVTLPDRPRTWNFFRGKPLFSEAFPDDLDTTSLALTVLKRDAATVSSVMDEMLKYRDADGIMQTYFDNGRQRLDPFVNANVLTLFYANGRGHELDQSLSWVREVLLYRAYLGGSRYYPSADCFLYFISRLFACTSDPVLHHQLKPLFVERVHERIGVQGDALELAFRLLVCASFNISNQPDMRKLLEMQCQDGGWDGGNLYRFGTTGLKVTNRGLTTAAAVQAIEATQLRPPSPAFSVESPKSPVTPVTPMLEIPALGLSISRPSSPLLGYFKLPWKKSAEVH
【０２０７】
配列番号１０−ＯＣＨ９３７６７．１ｃＤＮＡ
ATGTCCGCAGCAGTTCGGTACACGACCCTCATCCTCGACCTTGGCGACGTCTTGTTCACTTGGTCACCGAAGACGAAGACCAGCATCTCGCCTCGTATTCTGAAGGAGATCCTGAATTCCGCGACCTGGTATGAGTACGAGCGCGGTAGTATCACTCAGCACGAATGTTACGAACGCGTTGGCGTGGAGTTCGGTATTGCGCCGAGCGAGATCCACAACGCGTTCAAGCAGGCTCGGGACTCTATGGAGTCGAATGACGAGCTGATCGCCCTTGTTCGGGAACTGAAGGAGCAGTCAGATGGAGAGCTTCTCGTCTTCGCATTATCGAACATCTCACTGCCGGACTACGAATACGTCCTGACGAAGCCCGCGGACTGGTCCATCTTCGACAAAGTCTTTCCTTCCGCTCTCGTCGGCGAGCGCAAGCCCCATCTCGGCATCTACAAACACGTCATCGCAGAGACGGGCGTTGATCCGCGAACAACCGTCTTCGTGGACGACAAGATCGACAATGTGCTTTCGGCGCGGTCGCTCGGTATGCACGGCATTGTCTTCGACAAACACGAAGACGTAATGCGCGCTCTGCGAAACATTTTCGGTGACCCCGTGCGAAGAGGACGAGAATATTTGCGTCGAAATGCAAGGAAATTGGAATCCATCACAGATCACGGCGTCGCCTTCGGGGAGAACTTCACCCAGCTTCTGATCCTCGAACTTACTAGTGATGCGTCCCTCGTTACTCTCCCTGATCGTCCTCGGACATGGAATTTTTTCCGAGGGAAGCCGCTCTTTTCGGAGGCCTTCCCCGATGACCTTGATACTACTTCCTTGGCACTCACTGTCCTGAAAAGAGATGCCGCCACTGTATCGTCCGTGATGGACGAGATGCTGAAATACAGGGACGCGGACGGCATCATGCAGACATACTTCGACAACGGTCGGCAACGACTCGATCCGTTCGTCAACGCCAACGTTTTGACCCTCTTCTACGCCAACGGTCGCGGACACGAGCTGGATCAGAGCCTCAGCTGGGTTCGCGAAGTCTTGCTCTACCGCGCTTACCTCGGCGGTTCCCGCTACTACCCCTCCGCCGACTGCTTCCTATATTTCATCAGCCGCCTCTTCGCCTGCACCAGCGACCCGGTCCTCCATCATCAACTTAAGCCCCTCTTTGTTGAGCGTGTGCACGAGCGGATAGGAGTGCAGGGCGACGCGCTGGAGCTCGCCTTCCGCCTGCTTGTATGCGCGAGCTTCAACATCTCGAACCAGCCTGACATGCGCAAGCTGCTCGAGATGCAGTGCCAGGACGGAGGCTGGGATGGCGGAAACCTGTATCGTTTCGGCACCACGGGCCTCAAGGTCACGAACCGGGGTCTGACCACCGCAGCAGCCGTGCAAGCCATCGAGGCGACGCAGCTGCGTCCACCATCACCGGCGTTCTCTGTCGAGTCGCCTAAGAGCCCGGTGACGCCGGTGACGCCCATGCTGGAGATTCCAGCGCTGGGTCTCAGCATCTCGCGGCCCTCCAGTCCTCTGTTGGGGTATTTCAAGCTCCCGTGGAAGAAGTCAGCCGAGGTTCATTGA
【０２０８】
配列番号１１−ＯＣＨ９３７６７最適化ｃＤＮＡ
ATGTCTGCAGCTGTTCGTTATACTACTCTGATCCTGGATTTGGGCGATGTTCTGTTCACCTGGTCCCCGAAAACCAAGACCTCTATCAGCCCACGTATCCTGAAAGAAATCCTGAACAGCGCGACCTGGTACGAGTATGAGCGTGGCAGCATCACCCAGCACGAGTGCTACGAGCGTGTTGGCGTCGAATTTGGTATTGCGCCGAGCGAGATTCACAACGCGTTCAAACAAGCCCGCGACAGCATGGAATCCAACGACGAACTGATTGCTCTGGTGCGTGAGCTGAAAGAACAGAGCGATGGTGAGCTGCTGGTCTTTGCCCTGAGCAATATCTCTCTGCCGGATTACGAATACGTTCTGACCAAACCAGCGGACTGGTCAATCTTCGATAAAGTCTTTCCGAGCGCTTTGGTCGGTGAGCGTAAACCGCATCTGGGTATTTACAAACACGTTATTGCGGAAACCGGTGTTGACCCGAGAACGACCGTTTTTGTTGACGATAAGATTGACAACGTCCTGAGCGCACGCAGCCTGGGTATGCATGGTATTGTCTTTGATAAACACGAAGATGTGATGCGTGCTCTGCGCAATATCTTTGGCGACCCGGTGCGTCGCGGTCGTGAGTATTTGCGCCGCAACGCGCGCAAATTGGAGTCCATTACCGATCATGGTGTCGCATTTGGTGAGAATTTCACCCAGCTCCTGATTCTGGAACTGACCAGCGACGCGTCCCTGGTGACGCTGCCGGATCGTCCGCGTACGTGGAACTTCTTCCGCGGCAAGCCGCTGTTTAGCGAAGCGTTCCCGGATGACCTGGACACCACGAGCCTGGCACTGACGGTGCTGAAACGCGATGCAGCAACTGTGAGCTCCGTCATGGACGAAATGCTGAAGTACCGCGACGCGGATGGCATCATGCAGACGTATTTCGACAACGGTCGTCAGCGTCTGGACCCGTTTGTCAACGCCAATGTTCTGACGCTGTTTTACGCGAATGGCCGTGGTCATGAACTGGACCAGAGCTTATCATGGGTGCGTGAAGTGCTGCTGTATCGCGCCTATCTGGGTGGCAGCCGCTACTATCCGAGCGCGGACTGTTTTCTGTACTTCATTAGCCGCTTGTTCGCCTGCACCAGCGATCCGGTTCTGCATCACCAACTGAAGCCATTGTTCGTCGAGCGTGTGCACGAGCGTATTGGTGTTCAGGGCGACGCACTGGAACTGGCGTTCCGTCTGTTGGTGTGTGCGAGCTTCAACATTAGCAATCAGCCGGATATGCGTAAGCTGCTGGAAATGCAATGCCAAGATGGCGGCTGGGACGGTGGTAATCTGTACCGTTTTGGCACCACCGGTTTAAAAGTGACGAATCGTGGTTTGACCACCGCTGCGGCCGTTCAAGCAATTGAAGCAACGCAACTGCGTCCGCCGAGCCCAGCATTTAGCGTAGAGTCGCCTAAGAGCCCGGTTACGCCGGTGACGCCGATGCTGGAAATCCCGGCGCTGGGTCTGTCTATCAGCCGTCCGTCGAGCCCGCTGCTGGGCTATTTCAAGTTGCCGTGGAAGAAAAGCGCCGAAGTGCACTAA
【０２０９】
ＥＭＤ３７６６６．１
配列番号１２−ＥＭＤ３７６６６．１タンパク質
MSAAAQYTTLILDLGDVLFTWSPKTKTSIPPRTLKEILNSATWYEYERGRISQDECYERVGTEFGIAPSEIDNAFKQARDSMESNDELIALVRELKTQLDGELLVFALSNISLPDYEYVLTKPADWSIFDKVFPSALVGERKPHLGVYKHVIAETGIDPRTTVFVDDKIDNVLSARSVGMHGIVFEKQEDVMRALRNIFGDPVRRGREYLRRNAMRLESVTDHGVAFGENFTQLLILELTNDPSLVTLPDRPRTWNFFRGNGGRPSKPLFSEAFPDDLDTTSLALTVLQRDPGVISSVMDEMLNYRDPDGIMQTYFDDGRQRLDPFVNVNVLTFFYTNGRGHELDQCLTWVREVLLYRAYLGGSRYYPSADCFLYFISRLFACTNDPVLHHQLKPLFVERVQEQIGVEGDALELAFRLLVCASLDVQNAIDMRRLLEMQCEDGGWEGGNLYRFGTTGLKVTNRGLTTAAAVQAIEASQRRPPSPSPSVESTKSPITPVTPMLEVPSLGLSISRPSSPLLGYFRLPWKKSAEVH
【０２１０】
配列番号１３−ＥＭＤ３７６６６．１ｃＤＮＡ
ATGTCCGCGGCAGCTCAATACACGACCCTCATTCTCGACCTTGGCGACGTCCTGTTCACCTGGTCACCGAAAACCAAGACGAGCATCCCCCCTCGGACTCTGAAGGAGATTCTCAATTCCGCGACATGGTATGAGTATGAGCGCGGCCGCATCTCTCAGGACGAATGTTACGAACGCGTTGGCACGGAGTTCGGAATCGCGCCTAGCGAAATCGACAACGCGTTCAAGCAAGCTCGGGATTCCATGGAATCCAACGACGAACTGATCGCCCTTGTTCGGGAACTCAAGACGCAGTTGGACGGCGAACTCCTTGTCTTCGCACTCTCAAATATCTCGTTGCCTGACTACGAGTACGTCCTCACGAAACCGGCCGACTGGTCCATCTTCGACAAGGTCTTCCCTTCCGCCCTCGTGGGCGAGCGCAAGCCGCACCTCGGCGTTTACAAGCACGTCATTGCAGAAACGGGCATTGATCCGCGAACCACCGTTTTCGTGGACGACAAGATCGACAACGTGCTCTCAGCGCGGTCTGTAGGTATGCATGGGATCGTTTTCGAGAAGCAGGAAGACGTAATGCGCGCTCTCCGAAACATCTTCGGAGACCCGGTTCGGCGAGGGCGCGAGTACTTGCGCCGTAATGCCATGAGGCTTGAATCGGTTACAGACCATGGTGTGGCGTTTGGCGAGAACTTCACACAACTCCTTATCCTCGAACTAACGAACGATCCCTCCCTCGTTACGCTCCCTGATCGTCCTCGAACATGGAATTTCTTCCGAGGTAACGGGGGACGACCAAGCAAACCATTATTCTCGGAGGCCTTCCCCGATGACTTGGACACTACTTCACTAGCGTTGACTGTCCTCCAAAGAGATCCCGGCGTCATCTCTTCTGTGATGGACGAAATGTTGAACTACAGGGATCCGGACGGCATTATGCAGACATACTTCGACGATGGTCGGCAAAGACTCGATCCATTTGTCAATGTCAATGTCTTAACGTTCTTCTACACCAACGGACGTGGTCATGAACTGGACCAATGCCTTACATGGGTCCGCGAAGTTTTGCTCTATCGCGCCTATCTCGGCGGCTCACGTTATTACCCCTCCGCCGACTGCTTTCTCTACTTCATCAGCCGCCTTTTCGCATGCACGAATGACCCCGTGCTACACCACCAACTCAAACCGCTCTTCGTCGAGCGCGTGCAGGAGCAAATCGGCGTGGAGGGCGATGCGCTCGAGTTGGCGTTCCGATTGCTCGTCTGTGCAAGCCTGGACGTCCAAAACGCGATCGACATGCGCAGGCTGCTCGAGATGCAATGCGAAGATGGCGGCTGGGAGGGCGGGAACCTTTATAGGTTTGGCACGACCGGGCTCAAGGTGACTAACCGGGGCCTGACGACTGCAGCGGCCGTACAGGCCATCGAGGCGTCCCAACGGCGCCCACCATCACCGTCCCCCTCCGTCGAATCTACAAAGAGCCCAATAACCCCTGTGACGCCCATGCTGGAGGTCCCCTCGCTCGGCCTGAGCATCTCGAGGCCGTCCAGCCCTTTACTCGGCTACTTCAGGCTCCCGTGGAAGAAGTCGGCCGAAGTACACTGA
【０２１１】
配列番号１４−ＥＭＤ３７６６６．１最適化ｃＤＮＡ
ATGTCTGCGGCGGCTCAATACACGACTTTGATTCTGGATCTGGGTGATGTTCTGTTCACTTGGTCCCCGAAAACCAAGACCAGCATCCCTCCGCGTACCCTGAAAGAAATCCTGAATAGCGCTACCTGGTATGAGTACGAGCGTGGTCGCATTTCCCAAGACGAGTGTTACGAACGTGTGGGCACCGAGTTCGGCATTGCGCCGAGCGAGATTGACAACGCGTTCAAACAAGCGCGCGATTCGATGGAAAGCAATGATGAACTGATCGCACTGGTCCGTGAGCTGAAAACGCAGCTGGACGGTGAGCTGCTGGTTTTCGCACTGTCCAATATTAGCCTGCCGGATTACGAATACGTCTTGACCAAACCGGCGGACTGGAGCATCTTTGACAAAGTGTTCCCTAGCGCCTTGGTGGGCGAGCGTAAGCCGCATCTGGGCGTTTATAAACACGTTATTGCGGAAACGGGCATTGATCCGCGCACGACGGTTTTCGTGGACGACAAGATTGACAATGTGTTAAGCGCACGCAGCGTCGGTATGCATGGTATCGTGTTTGAGAAACAAGAAGATGTCATGCGTGCACTGCGTAACATCTTTGGTGATCCGGTCCGTCGTGGTCGTGAGTATCTGCGTAGAAACGCAATGCGTCTGGAGTCCGTGACCGACCACGGCGTGGCGTTTGGTGAGAACTTTACCCAGTTGCTGATTCTGGAATTGACGAACGACCCGAGCCTGGTCACCCTGCCTGATCGTCCGCGTACCTGGAACTTTTTTCGCGGCAATGGTGGCCGCCCGAGCAAGCCGCTGTTCAGCGAAGCGTTCCCGGATGATCTGGATACCACGAGCCTGGCGCTGACCGTGCTGCAGCGCGACCCGGGTGTTATCAGCAGCGTTATGGACGAAATGCTGAATTACCGTGACCCGGACGGTATCATGCAGACTTATTTCGATGACGGTCGCCAACGCTTGGACCCATTTGTGAACGTCAATGTTCTGACCTTTTTCTATACGAACGGCCGTGGTCACGAACTGGACCAGTGTCTGACGTGGGTGCGTGAAGTCCTCTTGTATCGTGCGTACCTTGGTGGCTCACGCTACTACCCATCGGCGGATTGCTTCCTGTACTTCATCTCTCGTCTGTTTGCGTGTACCAATGACCCGGTGCTGCACCATCAGCTGAAGCCACTGTTTGTTGAGCGTGTCCAAGAGCAAATTGGTGTCGAGGGTGATGCACTGGAACTGGCTTTTCGTCTGCTGGTCTGCGCCAGCCTGGATGTCCAGAATGCCATCGACATGCGCCGTCTGCTGGAAATGCAGTGCGAAGATGGCGGTTGGGAGGGTGGTAACCTCTACCGCTTCGGCACCACGGGCCTGAAAGTTACCAACCGCGGTCTGACGACCGCAGCCGCCGTTCAAGCGATCGAAGCGAGCCAACGCCGTCCGCCGAGCCCGAGCCCGTCTGTAGAGAGCACGAAAAGCCCGATTACCCCGGTGACCCCGATGCTGGAAGTTCCAAGCCTGGGCTTATCTATCAGCCGTCCGTCCAGCCCGCTGCTGGGTTATTTCCGTTTGCCGTGGAAGAAAAGCGCAGAAGTGCACTAA
【０２１２】
ＥＭＤ３７６６６−Ｂ
配列番号１５−ＥＭＤ３７６６６−Ｂタンパク質
MSAAAQYTTLILDLGDVLFTWSPKTKTSIPPRTLKEILNSATWYEYERGRISQDECYERVGTEFGIAPSEIDNAFKQARDSMESNDELIALVRELKTQLDGELLVFALSNISLPDYEYVLTKPADWSIFDKVFPSALVGERKPHLGVYKHVIAETGIDPRTTVFVDDKIDNVLSARSVGMHGIVFEKQEDVMRALRNIFGDPVRRGREYLRRNAMRLESVTDHGVAFGENFTQLLILELTNDPSLVTLPDRPRTWNFFRGKPLFSEAFPDDLDTTSLALTVLQRDPGVISSVMDEMLNYRDPDGIMQTYFDDGRQRLDPFVNVNVLTFFYTNGRGHELDQCLTWVREVLLYRAYLGGSRYYPSADCFLYFISRLFACTNDPVLHHQLKPLFVERVQEQIGVEGDALELAFRLLVCASLDVQNAIDMRRLLEMQCEDGGWEGGNLYRFGTTGLKVTNRGLTTAAAVQAIEASQRRPPSPSPSVESTKSPITPVTPMLEVPSLGLSISRPSSPLLGYFRLPWKKSAEVH
【０２１３】
配列番号１６−ＥＭＤ３７６６６−Ｂ最適化ｃＤＮＡ
ATGTCTGCGGCTGCTCAATATACTACTTTGATTCTGGATCTGGGCGACGTTCTGTTCACGTGGAGCCCGAAAACCAAGACCAGCATTCCACCGCGTACCCTGAAGGAGATCCTCAATAGCGCGACTTGGTACGAGTATGAGCGTGGCCGCATCAGCCAAGACGAGTGCTACGAACGCGTCGGTACGGAATTTGGCATTGCACCAAGCGAGATTGACAATGCGTTTAAACAAGCGCGTGACAGCATGGAAAGCAATGACGAACTGATCGCGCTGGTCCGTGAGCTGAAAACCCAGCTGGATGGTGAGCTGTTGGTGTTTGCGCTGTCGAACATCTCTCTGCCGGACTACGAGTATGTTCTGACCAAACCGGCGGATTGGAGCATTTTTGATAAAGTGTTTCCGAGCGCGCTGGTTGGTGAGCGCAAGCCGCACCTGGGTGTGTACAAACACGTTATTGCAGAGACTGGCATCGACCCGCGTACGACGGTTTTCGTTGACGACAAGATCGATAACGTTCTGAGCGCACGTAGCGTCGGTATGCACGGTATTGTTTTCGAAAAACAAGAAGATGTTATGCGCGCACTGCGTAATATCTTCGGCGATCCGGTCAGACGTGGCCGTGAGTATCTGCGCCGCAATGCGATGCGTCTGGAATCGGTGACCGATCATGGTGTCGCCTTTGGCGAGAATTTCACCCAGCTGCTGATTTTAGAGCTGACCAATGATCCTAGCCTGGTGACGCTGCCGGATCGTCCGCGTACCTGGAACTTTTTCCGCGGCAAGCCGTTGTTCTCCGAAGCCTTCCCGGACGACCTGGACACGACCAGCCTGGCGCTGACCGTGCTGCAACGTGATCCGGGTGTGATCTCTTCCGTAATGGACGAAATGCTGAACTACCGTGACCCGGACGGTATCATGCAGACCTATTTTGACGACGGTCGTCAGCGTCTGGACCCGTTTGTGAACGTGAATGTCCTGACGTTCTTTTACACCAATGGTCGCGGTCACGAACTGGATCAGTGTCTGACCTGGGTCCGCGAAGTGCTGCTGTATCGTGCATACCTGGGTGGCAGCCGTTATTACCCGAGCGCCGATTGCTTTCTGTACTTTATCAGCCGTCTGTTCGCGTGCACGAACGATCCGGTTCTGCATCACCAGCTGAAGCCGTTATTTGTTGAGCGCGTTCAGGAACAAATTGGTGTCGAGGGTGATGCGCTGGAATTGGCATTCCGCCTGTTGGTCTGCGCCAGCCTTGATGTCCAGAACGCCATTGACATGCGTCGCTTGCTCGAAATGCAGTGTGAGGACGGCGGTTGGGAGGGTGGCAACCTGTACCGTTTCGGTACGACCGGCCTGAAAGTCACGAACCGTGGTCTGACGACGGCAGCTGCGGTGCAAGCAATTGAAGCCAGCCAACGTCGTCCGCCATCCCCGTCACCGAGCGTTGAGTCCACCAAGAGCCCGATTACCCCTGTGACCCCGATGCTTGAAGTTCCGAGCCTGGGTCTGAGCATCTCCCGTCCTAGCAGCCCGCTGTTGGGTTACTTCCGCCTGCCGTGGAAGAAAAGCGCTGAGGTGCATTAA
【０２１４】
ＸＰ＿００１２１７３７６．１
配列番号１７−ＸＰ＿００１２１７３７６．１タンパク質
MAITKGPVKALILDFSNVLCSWKPPSNVAVPPQILKMIMSSDIWHDYECGRYSREDCYARVADRFHISAADMEDTLKQARKSLQVHHETLLFIQQVKKDAGGELMVCGMTNTPRPEQDVMHSINAEYPVFDRIYISGLMGMRKPSICFYQRVMEEIGLSGDAIMFIDDKLENVIAAQSVGIRGVLFQSQQDLRRVVLNFLGDPVHRGLQFLAANAKKMDSVTNTGDTIQDNFAQLLILELAQDRELVKLQAGKRTWNYFIGPPKLTTATFPDDMDTTSMALSVLPVAEDVVSSVLDEMLKFVTDDGIFMTYFDSSRPRVDPVVCINVLGVFCRHNRERDVLPTFHWIRDILINRAYLSGTRYYPSPDLFLFFLARLCLAVRNQSLREQLVLPLVDRLRERVGAPGEAVSLAARILACRSFGIDSARDMDSLRGKQCEDGGWPVEWVYRFASFGLNVGNRGLATAFAVRALESPYGESAVKVMRRIV
【０２１５】
配列番号１８−ＸＰ＿００１２１７３７６．１ｃＤＮＡ
ATGGCTATCACCAAGGGTCCAGTTAAGGCGCTTATTCTTGACTTTTCCAATGTTCTCTGCTCGTGGAAGCCTCCCAGCAATGTTGCGGTGCCGCCCCAGATACTCAAAATGATCATGTCCTCTGACATATGGCATGACTACGAGTGCGGACGGTACTCGAGAGAGGACTGCTATGCCAGAGTGGCAGACCGTTTTCATATCAGCGCCGCGGACATGGAAGACACGCTGAAACAGGCGCGCAAGAGCCTGCAGGTTCACCATGAGACACTGTTGTTTATCCAGCAAGTCAAGAAGGATGCCGGGGGCGAGTTGATGGTGTGTGGGATGACCAACACGCCCCGGCCAGAGCAAGACGTAATGCATTCAATCAACGCGGAGTATCCTGTGTTTGATAGGATATATATATCCGGTCTCATGGGCATGAGGAAGCCGAGCATCTGCTTCTACCAGCGGGTGATGGAGGAGATTGGCCTATCAGGCGATGCGATCATGTTTATAGATGACAAGTTGGAGAATGTCATCGCCGCCCAGTCGGTAGGGATCCGAGGCGTTCTATTTCAGAGTCAGCAAGATCTCCGTCGGGTTGTATTAAATTTCTTGGGCGATCCGGTCCATCGCGGCCTGCAGTTCCTAGCGGCCAATGCGAAAAAGATGGATAGTGTGACCAACACCGGCGATACTATCCAAGATAATTTTGCTCAGCTCCTCATCTTGGAGCTGGCCCAGGACAGGGAATTGGTGAAGCTTCAGGCTGGAAAAAGGACTTGGAATTACTTCATAGGGCCTCCCAAGCTCACAACAGCCACGTTCCCCGATGACATGGACACCACATCTATGGCTCTCTCGGTCCTTCCTGTGGCCGAGGATGTGGTCTCTTCTGTCCTGGATGAGATGCTTAAATTCGTCACCGATGACGGTATCTTTATGACTTACTTCGATTCCTCGCGCCCTCGAGTCGACCCAGTCGTATGTATCAACGTCTTGGGTGTTTTCTGCAGGCATAACCGAGAGCGAGACGTCCTTCCAACGTTCCATTGGATTCGAGACATCCTGATCAACCGGGCATATCTCTCGGGCACCCGATACTACCCATCGCCCGATTTGTTTTTGTTTTTCCTTGCACGCCTCTGCCTGGCAGTCCGGAATCAGAGCCTACGGGAACAACTTGTCTTGCCTCTGGTAGACCGACTGCGTGAGCGGGTGGGCGCACCTGGAGAAGCGGTCTCATTGGCAGCGCGGATCCTTGCCTGCCGTAGCTTTGGTATCGACAGTGCGAGAGACATGGACAGCTTGAGGGGAAAACAATGCGAGGATGGCGGCTGGCCAGTGGAGTGGGTTTACCGGTTTGCCTCTTTCGGCCTGAACGTAGGCAATCGGGGTCTTGCTACTGCCTTCGCGGTCAGGGCGCTCGAAAGCCCCTATGGTGAGTCGGCGGTGAAGGTTATGAGACGCATCGTCTGA
【０２１６】
配列番号１９−ＸＰ＿００１２１７３７６．１最適化ｃＤＮＡ
ATGGCAATCACTAAGGGCCCAGTTAAAGCGCTGATTCTTGATTTTTCTAACGTTCTGTGTAGCTGGAAGCCGCCGAGCAATGTTGCGGTCCCGCCTCAAATTCTGAAGATGATTATGTCGAGCGACATCTGGCATGATTATGAGTGTGGCCGTTACAGCCGTGAGGACTGCTACGCCCGTGTTGCTGACCGTTTTCATATCAGCGCAGCGGACATGGAAGATACCCTGAAACAGGCACGTAAGTCCCTGCAAGTGCACCACGAAACGCTGCTGTTCATCCAACAGGTGAAGAAAGACGCGGGTGGTGAGCTGATGGTTTGCGGCATGACCAACACGCCGCGTCCGGAACAAGACGTGATGCATTCCATCAATGCTGAGTATCCGGTGTTCGACCGTATTTACATTAGCGGCCTGATGGGCATGCGTAAACCGAGCATTTGTTTCTACCAACGCGTAATGGAAGAGATTGGTCTGAGCGGTGACGCCATCATGTTCATTGACGATAAACTGGAAAATGTGATTGCCGCACAGAGCGTGGGTATCCGCGGTGTGCTGTTCCAAAGCCAGCAAGATCTGCGTCGTGTCGTGCTGAACTTTCTGGGCGATCCGGTCCACCGTGGTCTGCAGTTCTTGGCGGCGAACGCAAAGAAAATGGACAGCGTCACGAATACCGGCGACACTATCCAAGACAATTTCGCACAGCTGTTGATCTTAGAGCTGGCGCAGGATCGCGAATTGGTGAAATTGCAGGCCGGTAAACGTACCTGGAACTACTTTATTGGTCCGCCGAAGCTGACCACGGCGACGTTTCCGGATGATATGGACACGACCAGCATGGCGCTGTCGGTGCTGCCTGTCGCGGAAGATGTCGTGAGCTCTGTTCTGGACGAGATGCTGAAGTTCGTGACCGATGATGGTATCTTTATGACCTATTTCGACTCTAGCCGTCCGCGTGTCGATCCGGTTGTCTGCATTAATGTGTTGGGTGTTTTCTGCCGCCACAATCGTGAGCGCGACGTGTTGCCGACCTTTCACTGGATTCGTGATATTCTGATCAACCGCGCATATCTGAGCGGCACGCGCTATTACCCGTCCCCGGATCTGTTTCTGTTTTTCCTGGCTCGTCTGTGCCTGGCCGTTCGCAACCAGAGCCTGCGCGAACAACTGGTTCTCCCGCTGGTTGATCGTCTGCGCGAGCGTGTTGGTGCTCCGGGTGAGGCTGTGAGCCTGGCGGCACGTATCCTGGCGTGCCGTAGCTTCGGTATCGACTCAGCCCGCGACATGGACTCCTTGCGTGGCAAACAGTGTGAAGATGGTGGTTGGCCGGTCGAATGGGTCTATCGCTTCGCGAGCTTTGGTCTGAACGTTGGCAACCGTGGTTTGGCCACCGCGTTTGCGGTTAGAGCGCTGGAGTCCCCATACGGCGAGAGCGCAGTTAAGGTTATGCGCCGTATCGTGTAA
【０２１７】
ＯＪＪ９８３９４．１
配列番号２０−ＯＪＪ９８３９４．１タンパク質
MPSVKALVLDFAGVLCSWTPPAESPLSPAQLKQLMSSEIWFEYERGRYSEEECYAKLVERFSISAADMASTMEQARQSLELNHAVLQLVSEIRKRNPGLKVYGMTNTPHAEQDCVNRIVNSYPVFDHVYLSGLVGMRKPDLGFYRFVLAETGLRPDEVVFVDDKTENVLVAQSVGMHGVVFQNVTDFKQQIINVTGDPVSRGLRYLRSNAKSLLTVTSNNSVIHENFAQLLILELTGDRDLIELEPWDRTWNYFIGVPQSPTSTFPNDLDTTSIALSVLPIHKDVVADVMDEIMLLLDNDGIVPTYFDPTRPRVDPVVCVNVLSLFAQNGRESELLATFNWVLDVLRHRAYLQGTRYYISPDAFLYFLARLSVFLRMSPLRARLMPLLEERVYERIGAHGDAISLAMRIYTCKLLGMSNMLDERALRDMQCEDGGFPTSWVYRFGSTGVKIGNRGLTTALAIKAIEMPLASLWKSWGLTTDIR
【０２１８】
配列番号２１−ＯＪＪ９８３９４．１ｃＤＮＡ
ATGCCCTCCGTCAAAGCACTGGTCCTGGACTTCGCCGGAGTTCTATGCTCATGGACCCCGCCAGCCGAGAGCCCGCTCTCCCCAGCCCAGCTCAAACAACTCATGTCCTCCGAGATATGGTTCGAATACGAGCGCGGGAGATATTCCGAAGAAGAATGTTATGCGAAGCTCGTCGAACGGTTCTCCATCAGCGCTGCGGACATGGCTTCCACCATGGAACAGGCCCGTCAGAGCCTGGAACTGAACCACGCCGTACTTCAGCTTGTCAGCGAGATAAGGAAGCGGAACCCCGGGCTCAAAGTTTATGGCATGACGAACACGCCCCATGCGGAACAGGATTGTGTGAATCGCATCGTGAACAGCTATCCTGTTTTCGACCATGTGTATCTCTCCGGGCTCGTTGGGATGCGCAAACCAGATCTTGGATTCTATCGGTTTGTTCTCGCAGAGACCGGGTTGAGGCCTGACGAGGTCGTGTTCGTCGACGACAAAACGGAGAATGTGTTGGTCGCGCAGTCCGTGGGGATGCACGGCGTGGTGTTCCAGAACGTTACGGATTTCAAGCAGCAGATCATAAACGTGACGGGAGACCCTGTCTCTCGGGGCTTGAGGTATCTCCGCTCGAATGCAAAGAGCCTCCTCACTGTGACTAGCAATAACTCCGTGATCCACGAAAACTTTGCGCAGTTGCTGATTCTGGAGCTGACGGGCGACCGAGACTTGATCGAACTCGAGCCTTGGGATCGAACATGGAACTACTTCATCGGGGTTCCTCAGTCGCCGACGAGCACCTTCCCCAACGACCTGGACACCACCTCTATCGCGCTCTCGGTCCTTCCCATTCATAAGGACGTCGTTGCCGATGTGATGGACGAGATTATGCTTCTCCTAGACAACGACGGGATAGTCCCAACATATTTTGATCCCACTCGCCCTCGAGTCGACCCAGTCGTGTGTGTGAATGTACTCAGCCTGTTTGCCCAAAACGGCCGAGAATCCGAGTTACTCGCCACCTTCAACTGGGTGCTGGACGTGCTGCGACATAGAGCCTACCTGCAGGGCACGAGATATTACATCAGTCCGGACGCCTTCTTGTACTTTCTAGCCAGACTCTCGGTCTTTCTGAGGATGAGTCCACTCCGCGCTCGGCTAATGCCTCTCCTGGAAGAAAGAGTGTATGAGCGAATTGGTGCCCATGGCGACGCCATTTCGCTGGCTATGCGGATCTATACGTGTAAGCTGCTCGGGATGTCGAATATGCTCGATGAAAGAGCATTGCGGGACATGCAGTGTGAGGATGGCGGCTTCCCTACAAGTTGGGTCTATAGATTTGGATCGACCGGAGTGAAGATTGGGAACAGGGGGTTGACTACTGCACTTGCAATAAAGGCCATTGAGATGCCTCTCGCTTCGCTTTGGAAGTCGTGGGGATTGACGACTGACATTCGATAA
【０２１９】
配列番号２２−ＯＪＪ９８３９４．１最適化ｃＤＮＡ
ATGCCGTCGGTTAAAGCGTTGGTTCTGGATTTTGCGGGTGTGTTGTGTTCTTGGACTCCACCGGCGGAAAGCCCGTTGTCCCCAGCGCAGCTGAAGCAGCTGATGAGCAGCGAGATCTGGTTTGAGTATGAGCGTGGCCGCTATAGCGAAGAAGAGTGTTATGCAAAATTGGTGGAGCGTTTCTCTATCTCGGCCGCAGATATGGCGAGCACGATGGAACAGGCCCGTCAATCGCTGGAGTTGAACCACGCCGTGCTGCAATTAGTTTCCGAGATTCGTAAACGTAATCCGGGCTTAAAGGTTTACGGTATGACTAATACCCCGCATGCAGAGCAAGATTGTGTGAACCGTATTGTCAATAGCTATCCGGTTTTTGATCATGTCTACCTGAGCGGTCTGGTGGGTATGCGCAAACCGGATCTGGGCTTTTACCGTTTCGTTCTGGCAGAGACTGGTCTGCGCCCGGATGAAGTCGTGTTCGTTGACGACAAGACCGAAAATGTCCTGGTGGCTCAATCCGTTGGCATGCATGGTGTGGTGTTCCAAAATGTAACCGACTTCAAACAACAGATTATCAATGTCACGGGTGATCCTGTCAGCCGTGGTTTGCGCTACTTGCGTTCCAACGCGAAGTCTCTGCTCACTGTTACCAGCAATAACAGCGTTATCCATGAGAATTTCGCGCAGCTGCTGATCCTGGAACTGACGGGCGACCGTGACCTGATTGAACTGGAACCGTGGGACCGTACGTGGAACTACTTTATCGGCGTGCCGCAAAGCCCGACCAGCACCTTTCCGAACGACCTGGATACGACCAGCATTGCCCTGAGCGTTCTGCCGATTCACAAAGATGTGGTTGCGGACGTGATGGATGAGATTATGCTGCTGCTGGACAATGACGGTATTGTCCCGACCTACTTCGATCCAACCCGTCCGCGTGTTGATCCTGTTGTGTGCGTCAACGTTCTGAGCCTGTTCGCACAGAACGGTCGCGAGTCCGAATTGCTGGCGACGTTCAACTGGGTTTTGGACGTTCTGAGACACCGTGCGTATTTGCAGGGTACGCGCTATTATATCAGCCCGGATGCCTTTCTGTATTTTCTGGCGCGCCTGTCTGTGTTTCTGCGTATGTCTCCGTTGCGCGCTCGTCTGATGCCGCTGCTGGAAGAACGCGTTTATGAGCGTATCGGCGCACACGGCGATGCTATTAGCCTGGCGATGCGCATTTACACCTGTAAGCTGCTGGGCATGAGCAATATGCTGGACGAGCGTGCACTGCGTGACATGCAGTGTGAAGATGGTGGTTTCCCAACCAGCTGGGTGTACCGTTTTGGTAGCACGGGCGTGAAAATTGGTAACCGTGGCTTGACGACCGCACTGGCCATTAAGGCCATCGAAATGCCGCTGGCCAGCCTTTGGAAAAGCTGGGGCCTGACCACCGATATTCGCTAA
【０２２０】
ＧＡＯ８７５０１．１
配列番号２３−ＧＡＯ８７５０１．１タンパク質
MTRQKSPQYKAIIFDLGDVFFTWDAPKDTAVLPNLFKKMLTSPTWSDYERGKLSEESCYERLAEQFDVDSSEIARSLRKAQQSLTTDAAIVSLISEIRALAGHIAIYAMSNISAPAYAAVLQTQPEMGIFDGVFPSGCYGTRKPELLFYKKVLQEIAVPPNQIIFIDDQLENVVSAQSTGMHGIVYTGAGELSRQLRNLVLDPVQRGREFLRRNAGALYSICETGQVIRENFSQLLILEATGDRSLVNLEYQQRSWNFFQGGPPSTSETFPDDVDTTSIALMILPADDNTVNSVLGEISEVANDEGIVNTYFDQTRQRIDPAVCVNVLRLFYTYGRGATLPLTLQWVSDVLEHRAHLHGTRYYPSPEVFLYFVSQLCRFSKREPTLQLLETLLTDRLKERIQVKADTLSLAMRILACLSVGISQVEVDVRELLALQCKDGSWEPGSFYRFGSSKMNVGNRGLTTALATRAVELYQGTRIRSKGTE
【０２２１】
配列番号２４−ＧＡＯ８７５０１．１ｃＤＮＡ
ATGACCCGACAGAAATCGCCTCAATACAAAGCAATCATCTTTGACCTAGGGGATGTCTTTTTCACCTGGGACGCCCCCAAAGACACTGCTGTCTTGCCCAACCTCTTCAAGAAAATGCTTACCTCGCCAACCTGGTCAGATTACGAGCGCGGCAAGTTGAGCGAAGAAAGCTGCTACGAGAGACTGGCCGAACAGTTTGACGTTGACTCGTCGGAAATCGCGCGCAGCTTAAGGAAAGCACAGCAGTCTCTTACCACAGACGCAGCAATCGTGAGCCTGATATCAGAGATCAGAGCGTTGGCCGGACATATTGCCATCTACGCCATGTCCAACATTTCCGCCCCAGCTTATGCAGCTGTGCTCCAGACTCAGCCCGAAATGGGCATCTTTGACGGAGTGTTCCCGTCTGGATGCTATGGGACGAGGAAGCCGGAGCTGTTGTTCTATAAGAAAGTCTTGCAGGAGATTGCAGTGCCGCCAAATCAGATCATCTTTATTGATGATCAGCTAGAGAATGTAGTTTCTGCGCAGTCAACAGGTATGCACGGCATTGTCTACACCGGTGCGGGTGAGCTCAGTCGACAGCTCAGAAATCTGGTGTTGGACCCTGTACAAAGGGGTCGAGAGTTTCTACGGCGCAATGCTGGGGCATTGTATAGTATCTGCGAGACTGGTCAAGTCATCCGGGAAAACTTCTCGCAGCTGCTCATCCTAGAGGCGACGGGTGATAGAAGCCTGGTCAACCTTGAATATCAGCAGCGGAGCTGGAATTTCTTTCAAGGAGGTCCCCCTTCTACGTCGGAAACATTCCCAGATGATGTCGACACAACATCCATTGCCTTGATGATTCTCCCTGCCGATGATAACACAGTCAACTCGGTTCTCGGCGAGATTTCCGAGGTAGCTAATGACGAGGGCATTGTAAATACGTACTTTGACCAGACCCGACAGCGAATCGACCCAGCAGTCTGCGTCAATGTCCTCCGTCTCTTTTATACCTACGGCCGGGGCGCCACTCTCCCATTGACCCTCCAGTGGGTGTCCGACGTTCTTGAGCATCGTGCGCACTTACATGGTACGCGATACTACCCCAGCCCGGAGGTTTTCCTCTACTTTGTCAGTCAACTCTGCCGGTTCTCCAAGAGGGAACCGACGCTGCAGCTGCTGGAGACGTTGCTCACGGATCGCCTCAAGGAGCGCATTCAGGTCAAGGCAGACACTCTGTCACTGGCTATGCGGATCCTGGCATGCTTGTCTGTGGGTATATCACAAGTTGAAGTGGATGTCCGAGAGCTGCTCGCCTTGCAATGCAAGGATGGATCGTGGGAACCCGGCTCGTTTTACCGGTTTGGGTCGTCCAAGATGAACGTTGGTAATCGAGGTCTTACGACTGCGTTGGCGACTAGGGCGGTTGAGTTGTACCAGGGGACTAGAATACGCTCTAAGGGCACCGAGTAG
【０２２２】
配列番号２５−ＧＡＯ８７５０１．１最適化ｃＤＮＡ
ATGACTCGCCAAAAAAGCCCTCAATACAAAGCAATTATCTTCGATCTGGGTGACGTTTTCTTCACCTGGGATGCGCCGAAAGATACGGCCGTACTGCCGAACCTGTTCAAGAAAATGCTGACCTCGCCGACCTGGAGCGACTATGAGCGTGGTAAGCTGTCTGAGGAAAGCTGTTACGAACGCTTGGCCGAGCAATTTGACGTGGACAGCAGCGAGATCGCGCGTAGCCTCCGTAAAGCGCAGCAAAGCCTGACGACCGACGCAGCCATCGTGAGCCTGATCAGCGAGATCCGCGCATTGGCGGGTCACATTGCTATCTATGCTATGTCTAACATTTCTGCGCCAGCATACGCAGCGGTGTTACAGACCCAGCCGGAAATGGGTATCTTTGATGGTGTTTTTCCGAGCGGCTGCTATGGTACGCGTAAACCGGAACTGCTGTTTTACAAAAAAGTGCTTCAAGAAATTGCGGTTCCGCCGAATCAGATTATCTTCATTGACGATCAGCTGGAAAACGTCGTCAGCGCACAGTCCACGGGCATGCATGGCATTGTTTACACCGGTGCCGGTGAGCTGAGCCGTCAACTGCGTAATCTGGTCCTGGACCCGGTGCAGCGTGGTCGTGAGTTCCTGCGCCGTAATGCTGGCGCCCTGTACAGCATTTGTGAGACTGGCCAAGTTATCCGTGAGAACTTCAGCCAGCTGCTGATTCTGGAAGCAACCGGCGATCGTTCGCTGGTGAACCTGGAGTATCAACAACGTTCCTGGAACTTCTTTCAGGGTGGCCCTCCATCCACGAGCGAAACTTTTCCGGATGATGTTGACACGACCTCAATCGCGCTGATGATTTTACCGGCGGACGATAATACCGTCAATAGCGTCCTGGGTGAAATCAGCGAAGTCGCGAATGACGAGGGCATTGTGAATACCTATTTCGATCAGACCCGCCAACGTATCGATCCGGCCGTGTGTGTCAACGTGTTGCGCCTGTTTTACACCTATGGTCGTGGCGCTACGCTGCCGTTGACCCTGCAATGGGTTAGCGACGTGCTGGAGCACCGTGCGCATCTGCACGGCACCCGCTACTATCCGTCCCCAGAGGTTTTCCTGTACTTTGTCTCTCAGCTGTGCCGTTTTTCCAAGCGCGAACCGACCCTGCAGCTGCTGGAAACGCTGTTGACCGACAGACTGAAGGAACGCATCCAAGTTAAGGCAGATACGCTGAGCTTGGCAATGCGTATTTTGGCGTGCCTGAGCGTGGGCATCAGCCAGGTTGAGGTTGACGTCCGCGAACTGCTGGCGCTGCAGTGCAAGGACGGTAGCTGGGAGCCGGGTAGCTTCTACCGTTTCGGTAGCAGCAAGATGAATGTCGGTAACCGCGGTCTGACGACCGCTTTGGCGACCCGTGCGGTTGAGCTGTACCAGGGTACGCGTATTCGTAGCAAGGGCACCGAGTAA
【０２２３】
ＸＰ＿００８０３４１５１．１
配列番号２６−ＸＰ＿００８０３４１５１．１タンパク質
MASPHRRYTTLILDLGDVLFSWSSKTNTPIPPKKLKEILSSLTWFEYERGRISQAECYDRVSSEFSLDAATIAEAFQQARDSLRPNEEFLALIRELRQQTHGQLTVLALSNISLPDYEYIMALDSDWTSVFDRVFPSALVGERKPHLGAYRRVISEMHLDPETTVFVDDKLDNVVSARSLGMHGVVFDSQENVFQTLRNIFGDPIHRGRDYLRRHAGRLETSTDAGVVFEENFTQLIIYELTNDKSLITTSDCPRTWNFFRGKPLFSASFPDDVDTTSVALTVLRPPRTLVNSILDEMLEYVDADGIMQTYFDHSRPRMDPFVCVNVLSLFYEYGRGQDLPKTLEWVYEVLLHRAYIGGSRYYMSADCFLFFMSRLLQRITDPAVLNRLRPLFVERMHERVSAPGDSMELAFRILAGSSVGIQFPRDLEKLLAAQCADGGWDLCWFYQYGSTGVKAGNRGLTTALAIKAIESAIARPPSPALSAVSSSKLEVPKPILQRPLSPRRLGDFLMPWRRAQREVAVSS
【０２２４】
配列番号２７−ＸＰ＿００８０３４１５１．１−ｃＤＮＡ
ATGGCTTCACCTCACCGCAGGTATACGACACTCATCCTAGACCTGGGCGACGTCCTCTTCTCTTGGTCATCCAAGACCAACACACCTATCCCTCCCAAGAAGCTGAAGGAGATCCTCTCGTCCCTGACCTGGTTCGAGTACGAGCGCGGTCGGATATCACAGGCCGAGTGCTATGACCGGGTCAGCTCCGAGTTCAGTCTTGACGCTGCCACCATCGCAGAAGCGTTCCAGCAGGCTCGCGACTCTCTGCGACCGAACGAAGAGTTCCTGGCGTTGATTCGCGAACTCCGCCAACAAACGCATGGTCAGCTTACCGTCCTCGCGCTCTCGAACATCTCACTCCCCGACTATGAATACATCATGGCTCTCGACTCGGACTGGACGTCGGTCTTCGACCGCGTCTTCCCTTCTGCCCTCGTCGGCGAGCGCAAGCCACATCTGGGGGCGTACCGCCGTGTCATCTCTGAGATGCACCTAGACCCAGAAACGACCGTCTTTGTGGACGACAAGCTGGACAACGTGGTGTCCGCGCGATCGCTCGGGATGCACGGCGTGGTCTTCGACTCCCAGGAGAACGTCTTCCAGACGCTGAGGAATATCTTCGGCGACCCGATACATCGCGGACGTGACTATCTCCGCAGGCATGCCGGTCGTCTGGAGACATCTACGGACGCCGGCGTTGTCTTCGAGGAAAACTTTACGCAGCTCATCATCTACGAACTAACAAATGACAAATCCCTCATCACGACATCAGACTGTCCCCGCACTTGGAACTTCTTCCGCGGGAAGCCCTTGTTCTCGGCCTCGTTTCCCGACGATGTGGACACGACGTCGGTTGCCCTGACAGTGTTGCGCCCACCCCGCACGCTTGTCAACTCGATCTTGGACGAGATGCTAGAGTATGTCGACGCCGACGGCATCATGCAGACCTACTTCGACCACTCGCGCCCGCGGATGGATCCGTTCGTCTGTGTCAACGTCCTGTCGCTGTTCTACGAGTACGGCCGGGGACAGGACCTCCCGAAGACCCTCGAATGGGTATACGAGGTTCTGCTGCACCGCGCCTACATCGGCGGCTCGCGGTACTACATGTCCGCGGACTGCTTCCTCTTCTTCATGAGCCGCCTTCTCCAACGTATCACCGACCCAGCCGTCCTGAACCGCCTCCGCCCGTTGTTCGTCGAGCGCATGCACGAACGTGTCAGCGCACCGGGCGACTCCATGGAGCTCGCGTTCCGCATCCTCGCTGGCTCGTCCGTCGGCATCCAGTTCCCACGTGACCTGGAGAAGCTCCTCGCCGCGCAGTGCGCCGACGGCGGCTGGGACCTGTGCTGGTTCTACCAGTATGGGTCCACCGGCGTGAAGGCAGGCAACCGCGGGCTCACCACCGCGCTCGCCATCAAGGCTATCGAGAGCGCTATCGCGCGCCCTCCGTCCCCCGCTCTATCAGCTGTATCGTCGTCGAAACTGGAAGTGCCGAAACCAATTCTCCAGCGTCCCCTCAGCCCGCGCCGGCTTGGCGACTTCCTGATGCCCTGGAGGAGAGCACAGCGCGAGGTCGCGGTTTCCAGCTAG
【０２２５】
配列番号２８−ＸＰ＿００８０３４１５１−最適化されたｃＤＮＡ
ATGGCTAGCCCGCACCGTCGCTATACTACTCTGATTCTGGATTTGGGTGATGTTTTGTTTAGCTGGAGCAGCAAAACCAATACGCCTATTCCGCCGAAAAAGCTGAAAGAAATCCTGTCTAGCCTGACCTGGTTCGAGTACGAGCGCGGTCGCATTTCTCAAGCCGAGTGCTATGACCGTGTGAGCTCTGAGTTTAGCCTGGACGCAGCGACCATTGCAGAGGCATTCCAACAGGCTCGTGACTCGCTGCGCCCGAACGAAGAATTTCTGGCGTTGATTCGTGAGCTGCGCCAGCAGACCCACGGCCAACTCACCGTTCTGGCACTGAGCAACATCTCCCTGCCGGATTACGAGTACATCATGGCTCTGGATAGCGATTGGACCAGCGTCTTTGATAGAGTTTTCCCGAGCGCGCTGGTTGGTGAGCGTAAGCCGCATCTGGGTGCTTACCGTCGTGTCATTAGCGAGATGCATCTGGACCCGGAGACTACGGTGTTTGTGGACGACAAACTGGACAACGTTGTCTCCGCGCGCAGCCTGGGTATGCACGGCGTCGTTTTTGACTCACAAGAAAATGTTTTCCAGACGCTGCGTAACATTTTCGGTGACCCTATCCACCGTGGCCGCGACTATTTGCGTCGTCATGCCGGTCGTTTGGAAACCAGCACCGACGCGGGCGTTGTTTTTGAAGAAAACTTCACCCAGCTGATCATCTACGAACTGACGAATGACAAGAGCCTGATCACCACGAGCGATTGTCCGCGCACCTGGAACTTCTTCCGTGGTAAGCCGCTGTTTAGCGCGTCCTTCCCAGACGATGTCGATACGACTTCGGTGGCCCTGACCGTTCTGCGCCCACCGCGCACCCTGGTAAACAGCATCCTGGACGAAATGTTAGAATACGTCGATGCGGATGGTATTATGCAGACCTATTTCGACCACAGCCGTCCGCGCATGGACCCGTTTGTGTGTGTGAATGTGTTGAGCCTGTTCTATGAGTACGGCCGTGGTCAAGATCTGCCAAAAACCCTGGAATGGGTCTACGAAGTCCTTCTGCATCGTGCCTACATCGGTGGCTCCCGTTATTACATGAGCGCAGATTGCTTTTTGTTCTTTATGTCTCGTCTGCTGCAGCGCATCACGGACCCTGCCGTGCTGAATCGTCTGCGTCCGCTGTTCGTGGAGCGTATGCACGAGCGCGTGTCTGCCCCGGGTGACAGCATGGAACTGGCGTTCCGTATCCTGGCGGGCAGCAGCGTGGGTATTCAATTTCCGCGTGATTTGGAGAAACTGCTGGCTGCGCAGTGTGCGGACGGTGGCTGGGATCTGTGCTGGTTTTATCAATACGGTAGCACCGGCGTTAAGGCCGGCAATCGTGGCCTGACGACGGCACTGGCAATTAAGGCCATTGAGTCCGCGATTGCGCGTCCGCCGAGCCCGGCATTGAGCGCGGTCAGCAGCAGCAAACTGGAAGTGCCGAAGCCGATCTTGCAGCGTCCACTGAGCCCGCGTCGTCTGGGTGACTTCCTGATGCCGTGGCGCCGTGCGCAACGCGAAGTCGCGGTTAGCTCCTAA
【０２２６】
ＸＰ＿００７３６９６３１．１
配列番号２９−ＸＰ＿００７３６９６３１．１タンパク質
MASIHRRYTTLILDLGDVLFRWSPKTETAIPPQQLKDILSSVTWFEYERGRLSQEACYERCAEEFKIEASVIAEAFKQARGSLRPNEEFIALIRDLRREMHGDLTVLALSNISLPDYEYIMSLSSDWTTVFDRVFPSALVGERKPHLGCYRKVISEMNLEPQTTVFVDDKLDNVASARSLGMHGIVFDNQANVFRQLRNIFGDPIRRGQEYLRGHAGKLESSTDNGLIFEENFTQLIIYELTQDRTLISLSECPRTWNFFRGEPLFSETFPDDVDTTSVALTVLQPDRALVNSVLDEMLEYVDADGIMQTYFDRSRPRMDPFVCVNVLSLFYENGRGHELPRTLDWVYEVLLHRAYHGGSRYYLSPDCFLFFMSRLLKRADDPAVQARLRPLFVERVNERVGAAGDSMDLAFRILAAASVGVQCPRDLERLTAGQCDDGGWDLCWFYVFGSTGVKAGNRGLTTALAVTAIQTAIGRPPSPSPSAASSSFRPSSPYKFLGISRPASPIRFGDLLRPWRKMSRSNLKSQ
【０２２７】
配列番号３０−ＸＰ＿００７３６９６３１．１ｃＤＮＡ
ATGGCCTCAATCCACCGTCGATACACTACTCTCATCCTCGACCTCGGCGACGTACTCTTTCGTTGGTCTCCAAAGACTGAGACCGCCATTCCACCTCAACAACTCAAGGATATCCTCTCCTCTGTCACCTGGTTTGAGTACGAACGCGGCAGACTATCCCAGGAAGCATGCTACGAGCGCTGCGCCGAGGAGTTCAAGATAGAGGCCTCGGTCATTGCAGAAGCCTTTAAGCAGGCTCGCGGGTCACTGCGGCCCAACGAGGAGTTCATCGCCTTGATCCGTGACCTCCGCCGTGAGATGCACGGTGACCTTACCGTTCTTGCCCTCTCCAACATCTCCCTCCCCGACTACGAATACATCATGTCGCTAAGCTCAGATTGGACGACCGTCTTCGATCGCGTATTCCCCTCTGCACTCGTTGGCGAGCGCAAGCCTCATCTGGGATGCTATCGCAAGGTCATCTCGGAGATGAACCTAGAACCTCAGACGACTGTGTTCGTGGATGACAAGCTTGACAACGTCGCGTCTGCTCGCTCACTTGGTATGCACGGCATCGTGTTTGACAACCAAGCCAACGTCTTCCGCCAACTCCGCAATATCTTCGGAGACCCCATCCGCCGTGGCCAAGAGTATCTCCGTGGGCATGCTGGCAAACTCGAGTCTTCGACCGACAACGGGTTGATCTTCGAGGAGAACTTCACACAGCTGATCATCTACGAGTTGACGCAAGACAGGACTCTCATCTCGCTTTCAGAATGTCCTCGTACTTGGAATTTCTTCCGAGGCGAACCGCTATTCTCGGAGACCTTCCCGGATGATGTCGACACAACATCTGTGGCGTTGACGGTATTGCAACCGGACAGAGCACTGGTCAACTCCGTTCTAGACGAGATGCTGGAGTATGTCGACGCCGATGGCATCATGCAGACATACTTCGATCGTTCACGACCACGCATGGACCCCTTCGTCTGCGTGAACGTACTCTCCCTGTTCTACGAGAACGGTCGTGGTCACGAGCTCCCTCGCACATTGGACTGGGTCTACGAGGTGCTCCTCCATCGCGCGTACCACGGCGGTTCGCGTTATTACCTGTCGCCCGACTGCTTTCTATTCTTCATGAGCCGCCTACTCAAGCGCGCAGACGATCCAGCAGTCCAGGCTCGGCTCCGCCCGCTCTTCGTCGAGCGGGTGAACGAGCGAGTAGGCGCCGCTGGCGACTCGATGGACCTCGCCTTCCGCATCCTCGCCGCAGCGTCTGTTGGCGTCCAGTGCCCCCGCGATCTGGAAAGGTTGACTGCCGGGCAATGCGACGACGGTGGATGGGACCTCTGCTGGTTCTACGTGTTCGGCTCGACGGGCGTGAAGGCGGGCAACCGCGGCCTCACAACGGCCCTCGCTGTCACGGCCATACAGACGGCCATCGGACGCCCCCCTTCGCCCAGTCCCTCCGCGGCCTCCTCGTCTTTCAGACCTAGTTCCCCTTACAAATTCCTAGGCATTTCGCGCCCAGCTAGCCCCATTCGCTTTGGCGACTTACTTCGCCCATGGCGGAAGATGAGCAGGTCGAACTTGAAGTCTCAATGA
【０２２８】
配列番号３１−ＸＰ＿００７３６９６３１．１最適化されたｃＤＮＡ
ATGGCAAGCATTCATCGTCGCTATACTACGCTGATTCTGGACCTGGGTGATGTTTTGTTCCGCTGGAGCCCGAAAACCGAGACTGCGATTCCTCCGCAACAACTGAAAGACATCCTGAGCAGCGTCACCTGGTTCGAGTACGAGCGTGGCCGTCTGAGCCAAGAGGCTTGCTACGAGCGTTGCGCCGAAGAGTTCAAGATTGAAGCCAGCGTGATTGCGGAAGCGTTCAAACAAGCGCGTGGTAGCCTGCGTCCGAACGAAGAATTTATCGCACTGATCCGTGATCTGCGTCGCGAGATGCATGGTGACCTGACCGTTCTGGCTCTGAGCAATATCTCGTTGCCGGATTACGAGTATATTATGTCTCTGAGCAGCGACTGGACGACGGTCTTTGATCGTGTGTTCCCGTCAGCTCTGGTGGGCGAGCGTAAACCGCACTTGGGTTGCTATCGCAAGGTCATCAGCGAGATGAACCTGGAACCTCAGACCACGGTCTTTGTGGACGATAAACTGGATAATGTCGCAAGCGCGCGTAGCCTGGGTATGCACGGTATCGTGTTTGATAATCAAGCGAATGTGTTTCGCCAGCTGCGTAATATTTTCGGTGATCCAATCCGTCGCGGTCAAGAGTATCTGCGTGGCCATGCCGGTAAATTGGAGAGCAGCACGGACAATGGTTTGATCTTTGAAGAGAACTTCACCCAGCTGATCATTTATGAACTGACCCAGGACCGCACGTTGATCAGCCTGTCGGAGTGTCCGCGTACCTGGAACTTCTTCCGTGGCGAGCCGTTGTTTTCTGAAACCTTCCCGGACGACGTGGACACCACGTCCGTTGCACTGACGGTTCTGCAACCGGATCGCGCACTGGTTAACAGCGTGCTGGACGAAATGCTGGAATATGTCGATGCGGATGGCATCATGCAGACGTATTTCGACCGCTCGCGTCCGCGTATGGACCCGTTTGTTTGCGTCAACGTACTGAGCCTGTTTTACGAGAACGGTCGTGGTCACGAACTGCCGCGCACTCTGGATTGGGTGTACGAAGTCCTGCTCCACCGCGCCTACCACGGTGGTTCCCGTTACTACCTGAGCCCGGACTGTTTCTTGTTTTTTATGAGCCGTCTGCTGAAACGTGCAGACGACCCAGCGGTTCAGGCGAGATTGCGTCCGCTGTTTGTGGAACGCGTTAACGAACGTGTTGGCGCGGCCGGTGATAGCATGGACCTGGCGTTTCGCATTCTGGCCGCAGCGAGCGTGGGTGTGCAGTGTCCGCGCGACCTGGAGCGTCTGACCGCTGGTCAATGCGATGATGGCGGCTGGGATCTGTGTTGGTTCTACGTTTTCGGCAGCACCGGCGTTAAGGCCGGTAATCGTGGTCTGACCACGGCGCTGGCAGTCACCGCGATCCAGACCGCCATCGGCCGTCCGCCTAGCCCGAGCCCGTCCGCGGCAAGCTCCAGCTTCCGCCCGAGCAGCCCGTACAAGTTTCTGGGTATTAGCCGTCCGGCGTCCCCAATTCGCTTCGGTGACCTTCTGCGTCCGTGGCGTAAAATGTCTCGCTCTAACCTGAAGTCCCAGTAA
【０２２９】
ＡＣｇ００６３７２
配列番号３２−ＡＣｇ００６３７２タンパク質
MRRNVLNKATHSQSPLKPNITTLIFDLGDVLLTWSDSTPKSPLPPKIVKGILRSLTWFEYEKGNLTESQTYGQVAQEFGVDASEVKASFEAARDSLKSNPMLLQLIRSLKDSGHVIYAMSNISAPDWEFLKTRADLSDWALFDRVFPSAEAHDRKPNIGFYQHVINETGLNPSNTVFVDDRIENVVSARSAGMHGIVFDDINNVIRQLKNLCEDPIHRARSFLYANKKCLNTVSTDGTIVSENFSQLLILEAIGDESLVDFVRHEGRFNFFQGEAKLIMTNHYPDDFDTTSIGLTVVPYIDDKTRNRVMDEILAYQSEDGIVLVYFDHKRPRIDPVVCVNVLTLFYRYGRGHQLQKTLDWVEQVLINRACASGTFYYATEEQFLFFLSRLIQSSPDVRQRLEGVFKRRVVERFGADGDALAMAMRIHTAASVGLVDHVDLDKLFALQQNDGSWRDSAFYRFPSARQLASNDGLTTAIAIQAIQAAERLREDGNVL
【０２３０】
配列番号３３−ＡＣｇ００６３７２ｃＤＮＡ
ATGAGGCGAAACGTACTCAACAAAGCAACACATTCTCAGTCACCATTGAAGCCCAACATCACGACGCTCATATTTGACTTGGGCGACGTACTTCTCACGTGGTCCGACTCAACACCTAAATCTCCACTGCCCCCAAAAATTGTCAAGGGAATACTACGTTCACTGACCTGGTTTGAGTACGAGAAAGGGAACTTGACAGAGTCCCAGACCTACGGGCAAGTTGCTCAGGAATTTGGAGTGGATGCTTCCGAAGTCAAAGCTTCCTTCGAAGCAGCTCGCGACTCGCTCAAGAGCAACCCAATGCTTCTCCAGTTGATCCGTAGCCTCAAAGACTCTGGCCACGTCATTTACGCAATGTCTAACATATCTGCTCCCGACTGGGAATTTTTGAAGACGCGGGCAGACCTCTCAGATTGGGCTCTTTTTGACAGAGTCTTCCCTTCTGCCGAAGCGCATGACCGCAAGCCGAACATTGGTTTCTATCAGCACGTCATAAACGAGACTGGTCTGAACCCGTCCAACACTGTCTTTGTCGATGACAGGATCGAGAATGTTGTATCCGCACGCTCAGCAGGAATGCACGGGATCGTGTTTGACGACATAAATAATGTGATCCGACAGTTGAAAAACCTCTGCGAGGATCCGATTCACCGCGCACGATCTTTTCTTTATGCAAATAAGAAGTGTTTGAATACGGTTAGCACAGATGGCACAATTGTGAGCGAGAACTTCTCGCAATTGTTGATCCTTGAGGCCATTGGCGACGAAAGCCTAGTCGACTTTGTGAGGCATGAGGGCCGATTCAACTTCTTCCAGGGGGAGGCCAAACTCATCATGACGAATCACTACCCCGATGATTTCGATACTACATCCATAGGTTTAACCGTTGTTCCATATATTGACGACAAGACTAGAAATAGAGTTATGGATGAGATCCTGGCCTACCAAAGCGAAGACGGCATTGTGCTGGTATACTTTGACCACAAGCGCCCCAGGATTGATCCTGTTGTCTGTGTCAATGTCCTCACCCTCTTCTATAGGTATGGCCGTGGGCACCAGCTTCAAAAGACACTGGATTGGGTCGAACAGGTCCTGATCAACCGTGCGTGTGCGTCCGGCACGTTCTATTACGCAACAGAGGAACAATTCCTCTTTTTCCTCTCCCGCCTGATCCAAAGCTCTCCGGACGTACGACAGCGGTTGGAAGGGGTCTTTAAAAGAAGAGTAGTCGAGCGGTTTGGTGCAGACGGCGACGCTCTCGCTATGGCGATGCGCATTCACACCGCGGCGAGCGTGGGCCTCGTTGACCATGTCGATCTTGACAAGCTGTTCGCATTGCAGCAAAATGACGGTTCTTGGAGAGACAGCGCTTTCTACAGATTTCCGTCGGCCAGGCAACTGGCTAGTAACGACGGCTTGACGACTGCAATCGCTATTCAGGCCATTCAAGCTGCGGAGAGGCTCAGGGAGGATGGGAACGTGCTTTGA
【０２３１】
配列番号３４−ＡＣｇ００６３７２最適化ｃＤＮＡ
ATGCGCCGTAATGTCCTGAACAAAGCAACCCATAGCCAGTCACCGTTGAAACCGAATATCACCACGCTGATTTTTGACTTGGGCGATGTCCTGCTGACCTGGAGCGACAGCACTCCGAAATCTCCGTTGCCGCCGAAGATCGTCAAGGGCATCCTGCGTAGCCTGACTTGGTTCGAGTACGAAAAGGGCAATTTGACCGAAAGCCAAACGTATGGTCAGGTCGCGCAAGAATTTGGTGTGGATGCCTCTGAAGTGAAGGCCAGCTTTGAGGCTGCGCGTGATAGCTTGAAATCGAATCCGATGCTGCTGCAGCTGATTCGCAGCCTGAAAGATTCCGGTCACGTGATCTACGCCATGAGCAACATCAGCGCGCCTGATTGGGAATTTCTGAAAACCCGCGCTGACCTGTCTGACTGGGCCCTGTTTGACCGCGTGTTCCCGTCTGCCGAGGCACATGACCGCAAACCGAACATTGGCTTTTACCAACACGTGATCAATGAAACGGGTCTGAATCCATCCAATACCGTGTTCGTTGACGACCGTATTGAAAACGTTGTTAGCGCACGTAGCGCTGGTATGCACGGTATCGTTTTCGATGACATTAACAACGTCATTCGCCAGCTGAAGAATCTGTGCGAGGACCCAATTCACCGTGCACGTTCCTTTTTGTATGCGAACAAAAAGTGCCTGAATACCGTGAGCACCGATGGTACGATCGTCAGCGAGAACTTTAGCCAGCTTCTGATTCTGGAAGCCATTGGTGACGAGTCCCTGGTAGACTTCGTCCGCCATGAGGGCCGTTTTAACTTCTTCCAGGGTGAGGCAAAGCTGATCATGACCAATCACTACCCGGACGATTTCGATACCACGAGCATTGGTCTGACCGTTGTCCCGTATATCGATGACAAAACGCGTAATCGTGTGATGGATGAAATCCTGGCGTATCAGTCCGAGGATGGTATCGTTCTGGTGTACTTCGATCACAAGCGTCCGCGCATTGACCCGGTCGTTTGTGTGAACGTTCTGACGCTGTTCTACCGCTATGGTCGTGGCCATCAACTGCAGAAAACCCTGGACTGGGTTGAGCAAGTCCTGATTAATCGTGCGTGTGCGAGCGGCACGTTCTACTACGCGACCGAAGAACAGTTCCTGTTTTTCCTGAGCCGTCTGATTCAGTCGAGCCCTGACGTGCGCCAACGTCTGGAAGGCGTGTTCAAGCGTCGTGTCGTTGAGCGCTTTGGTGCGGACGGTGATGCCCTGGCAATGGCGATGCGTATCCATACCGCAGCGAGCGTTGGCCTGGTGGACCACGTGGATCTGGATAAGCTGTTCGCGCTGCAACAGAACGACGGTAGCTGGCGCGATAGCGCGTTTTATCGTTTTCCGAGCGCGCGTCAACTCGCGAGCAACGACGGCTTGACCACGGCAATTGCTATTCAGGCCATCCAAGCGGCTGAGAGATTACGTGAGGATGGTAACGTTCTGTAA
【０２３２】
ＫＩＡ７５６７６．１
配列番号３５−ＫＩＡ７５６７６．１タンパク質
MVRALILDLGDVLFNWDAPKSTPVSRKTLSQMLHSDIWGEYECGQLTEPESYKALASRYSCQAQDVADTFYLARESLRLDATFKTFLQDLKQRANGSLRVYGMSNISQPDYEVLLSKADDLSLFDKIFPSGHVGMRKPDLAFFRHVLREISTASEDIVFVDDNLENVTSARSLGMQGIVFRDKEDVQRQLRNLFGSPAERGREYLSINKTKLQSVTTTNIPILDNFGQLLILEATRDPDLVSMHPGQRTWNFFIGSPTLTTDAFPDDMDTTSLGLSIIPPSPEIAASVMDEIVTRLNKDGIVPTYFDSTRPRVDPIVCVNVLTLFAKYGREDELSGTIAWVRDVLYHRAYLAGTRYYASPEAFLFFFTRFTRNLRPGPRKQELTALLSQRLQERNKTPVDALALSMRIIACLTLGIESPADDVATLTGMQCGDGGWPACVIYKYGAGGLGITNRGVSTAFAVKAITTTPLAVQPEVSVSAGAGGSSRPVGADAAAVSLRPRWRAVVQSLHPLSRVGGLVAVIFAALHFNLAWLYNVSLASRIV
【０２３３】
配列番号３６−ＫＩＡ７５６７６．１ｃＤＮＡ
ATGGTCCGCGCACTGATTCTCGATCTCGGCGACGTCCTCTTCAACTGGGACGCCCCAAAGTCAACCCCCGTTTCCCGCAAGACACTCAGCCAGATGCTGCATAGCGACATCTGGGGCGAATACGAATGTGGCCAACTGACAGAGCCGGAAAGCTACAAGGCGCTTGCCAGCCGCTATTCTTGCCAGGCTCAAGATGTTGCAGATACCTTCTATCTAGCCCGCGAATCGCTGAGGCTCGATGCGACCTTCAAGACCTTCCTGCAGGACTTGAAGCAGAGGGCCAACGGCTCACTTCGCGTATATGGGATGTCCAACATCTCCCAGCCCGATTATGAGGTCCTGCTGTCCAAGGCGGATGACTTGAGCCTGTTTGACAAGATCTTCCCATCCGGCCACGTCGGGATGCGTAAGCCTGACCTTGCGTTTTTTCGACATGTCCTGCGTGAGATCTCGACGGCCAGCGAGGATATTGTGTTTGTTGACGACAACCTGGAGAACGTGACATCTGCCCGGTCTCTGGGCATGCAGGGGATTGTCTTTCGCGACAAGGAGGATGTACAGAGACAGCTGCGGAACCTCTTTGGCAGTCCTGCTGAACGTGGAAGGGAGTATTTGTCCATCAACAAGACAAAGCTCCAGAGCGTCACGACGACCAATATCCCCATTCTCGACAACTTTGGCCAGCTCCTTATCCTCGAAGCCACCAGAGACCCAGACCTGGTGTCCATGCATCCTGGACAGAGGACCTGGAACTTTTTCATCGGATCTCCAACTCTGACAACGGACGCCTTCCCAGACGATATGGACACCACCTCACTTGGCCTTTCTATTATACCCCCAAGTCCCGAGATTGCAGCGTCCGTGATGGATGAGATTGTGACCCGCCTGAACAAGGACGGCATTGTCCCAACATATTTTGACAGCACCAGACCCCGCGTCGACCCGATCGTCTGCGTCAACGTTCTCACCCTCTTCGCTAAATACGGCCGCGAAGACGAGCTGTCCGGGACCATAGCCTGGGTGCGCGATGTGCTGTATCACAGGGCCTACCTTGCAGGGACCAGATACTACGCATCCCCAGAAGCATTCCTTTTCTTCTTCACGCGCTTCACCCGAAACCTGCGCCCGGGCCCGCGCAAGCAGGAGCTCACGGCGCTGCTGTCCCAGCGCCTGCAGGAGCGCAACAAGACGCCCGTTGACGCACTTGCGCTCTCGATGCGGATTATTGCGTGCCTCACGCTGGGTATTGAATCCCCCGCTGACGACGTGGCTACCCTCACGGGCATGCAGTGTGGGGATGGCGGGTGGCCGGCCTGTGTCATCTACAAGTACGGCGCCGGTGGGCTGGGGATCACGAACAGGGGGGTCTCGACCGCGTTTGCTGTCAAGGCAATCACTACTACTCCTTTGGCGGTGCAGCCTGAAGTTAGTGTCAGCGCAGGTGCAGGAGGCAGCAGTCGCCCTGTGGGTGCCGATGCTGCTGCAGTCTCGCTCCGCCCGAGATGGCGAGCTGTTGTGCAGAGTCTCCATCCGCTCTCTCGGGTTGGTGGGTTGGTGGCCGTCATTTTTGCTGCACTGCATTTCAACTTGGCCTGGCTTTATAATGTGTCCCTTGCTAGTAGGATCGTTTAG
【０２３４】
配列番号３７−ＫＩＡ７５６７６．１最適化ｃＤＮＡ
ATGGTTCGTGCATTGATTTTGGATTTGGGTGATGTGTTGTTTAACTGGGATGCGCCTAAGAGCACCCCGGTTTCCCGCAAGACTCTGAGCCAAATGCTGCACTCGGATATTTGGGGCGAGTACGAGTGTGGTCAACTGACTGAGCCGGAGTCCTATAAAGCCCTGGCGAGCCGCTATAGCTGCCAGGCGCAAGATGTCGCTGACACCTTTTACCTGGCGCGTGAGAGCCTGCGTCTGGACGCAACGTTTAAGACCTTCCTGCAAGATCTGAAGCAACGCGCCAACGGTTCTCTGCGTGTCTATGGTATGAGCAATATCAGCCAGCCGGATTACGAAGTCCTGCTGAGCAAAGCTGACGATCTCAGCCTGTTTGACAAAATCTTTCCGTCGGGTCACGTTGGTATGAGAAAGCCTGACCTGGCGTTTTTCCGTCACGTTCTGCGTGAGATCAGCACGGCTAGCGAAGATATTGTGTTTGTTGACGACAATTTGGAAAACGTCACGTCTGCACGCTCCCTGGGTATGCAAGGCATCGTCTTTCGTGATAAGGAAGATGTCCAGCGCCAGCTGCGCAATCTGTTCGGTTCCCCGGCAGAGCGCGGTCGTGAGTATCTGAGCATTAATAAGACCAAACTGCAGAGCGTGACCACCACCAATATCCCGATTCTGGACAACTTCGGTCAGTTGCTGATCCTGGAAGCTACCCGTGACCCGGATTTAGTCAGCATGCATCCAGGCCAACGTACGTGGAACTTCTTCATTGGCAGCCCGACCTTGACGACCGACGCGTTTCCGGACGATATGGACACGACTTCTCTGGGCCTGAGCATCATCCCGCCGAGCCCGGAAATTGCAGCAAGCGTTATGGACGAAATCGTCACCCGTCTGAATAAAGATGGTATTGTGCCGACCTACTTCGACAGCACGCGTCCACGTGTGGACCCGATCGTCTGCGTTAACGTCCTGACCTTGTTTGCGAAATATGGTCGTGAAGATGAACTGAGCGGCACGATTGCGTGGGTCCGCGACGTTCTGTATCATCGCGCATACCTGGCGGGCACGCGCTACTACGCGTCCCCAGAGGCCTTCCTGTTCTTCTTTACGCGTTTCACCCGCAATCTGCGTCCGGGTCCGCGTAAACAAGAACTTACGGCGCTGCTGAGCCAGCGTCTGCAGGAACGCAACAAGACGCCGGTTGACGCTCTGGCCCTGAGCATGCGTATCATCGCCTGTCTGACCCTGGGCATTGAGAGCCCGGCAGACGACGTGGCCACCCTGACCGGTATGCAGTGTGGTGATGGTGGCTGGCCGGCGTGCGTGATCTACAAATATGGTGCGGGTGGCTTGGGTATCACGAATCGTGGCGTTAGCACTGCCTTCGCGGTGAAAGCGATTACGACCACCCCGCTGGCAGTGCAGCCAGAAGTCAGCGTCAGCGCTGGTGCCGGCGGCTCCAGCCGCCCGGTTGGTGCGGATGCGGCAGCGGTTAGCTTGCGTCCGCGTTGGCGTGCGGTTGTGCAGAGCCTGCATCCGCTGAGCCGCGTGGGTGGCCTGGTTGCCGTGATCTTCGCGGCACTGCACTTTAACCTGGCGTGGCTGTACAACGTAAGCCTGGCTAGCCGTATTGTGTAA
【０２３５】
ＸＰ＿００１８２０８６７．２
配列番号３８−ＸＰ＿００１８２０８６７．２タンパク質
MTRWKSSQYQAIIFDLGGVILTWDLPEDTVISAQIFKRMLTSQTWSDYERGNLSENGCYQRLAEDFGIDSADIAHTVRQARESLVTDTAIMNIISEIRAGANHIAIFAMSNISQPDYAALLLDHRGMCSFDRVFPSGCYGTRKPELSFYNKVLREIDTPPENVIFVDDQLENVISAQSIGIHGIAYTNAAELGRQLRNLIFDPVERGREFLRRNAGEFHSITETDQIVRENFSQLLILEATGDKSLVSLEYHQKSWNFFQGNPILTTETFPDDVDTTSLALMTLPTDTKTANLLLDQILGLVNADEIVTTYFDQTRERIDPVVCVNVLRLFCTYGRGIALPLTLQWVYDVLAHRAYINGTRYYTSPESFLYFVGQLCRFSTGVLALRPLETLLIDRLKERLQVKADPLSLAMRILTCLSVGVSQVEVDLRELLSMQCEDGSWEHCPFTRYGLSKVSIGNRGLTTAFVVKAVEMCRGS
【０２３６】
配列番号３９−ＸＰ＿００１８２０８６７．２ｃＤＮＡ
ATGACTCGATGGAAATCGTCCCAATACCAAGCAATTATCTTTGACCTAGGCGGTGTCATTTTAACATGGGACCTCCCGGAAGACACTGTGATATCGGCCCAGATCTTTAAGAGAATGCTCACATCGCAGACATGGTCAGATTATGAGCGCGGAAATCTCAGCGAAAATGGTTGCTACCAGAGGTTGGCCGAGGATTTTGGCATTGACTCTGCCGACATTGCACATACCGTTAGACAAGCACGGGAATCCCTTGTCACTGATACCGCTATCATGAACATTATATCTGAGATCAGAGCTGGGGCTAACCATATTGCTATCTTCGCTATGTCGAACATCTCCCAACCAGATTATGCGGCTCTGCTCCTTGATCATCGCGGGATGTGCAGTTTTGACCGGGTGTTCCCATCTGGATGCTACGGGACAAGGAAACCAGAGCTCTCATTCTATAACAAAGTCTTGCGGGAGATTGACACGCCACCGGAAAACGTCATCTTTGTCGATGATCAGCTGGAAAATGTGATCTCTGCGCAGTCCATTGGCATACACGGGATTGCCTATACGAATGCTGCTGAACTCGGTCGACAGCTTAGGAACCTAATATTTGACCCTGTAGAGAGGGGTAGGGAATTCTTACGGCGCAATGCTGGAGAGTTCCATAGCATCACTGAAACCGATCAAATTGTTCGGGAAAATTTCTCACAGTTGCTCATTCTAGAAGCGACTGGTGATAAGAGTCTGGTATCTCTTGAATATCACCAGAAGAGCTGGAATTTCTTCCAAGGAAACCCTATTCTCACGACAGAGACATTCCCAGATGATGTTGACACAACATCTCTTGCCTTGATGACTCTACCTACAGACACAAAAACTGCAAATTTGTTACTCGACCAGATTTTGGGGCTAGTCAACGCTGATGAAATCGTAACAACATACTTTGACCAGACCCGAGAACGGATCGATCCAGTAGTCTGCGTCAATGTCCTTCGTCTCTTTTGCACCTACGGCCGGGGCATTGCGCTCCCTTTGACTCTTCAGTGGGTGTACGACGTCCTCGCTCATCGGGCATATATAAACGGTACACGTTACTACACAAGTCCCGAAAGCTTCCTATACTTCGTCGGTCAACTTTGTCGATTCTCAACAGGGGTACTGGCACTTCGGCCGCTGGAAACGTTGCTTATAGATCGTCTCAAGGAACGTCTTCAGGTCAAAGCAGATCCTCTATCACTCGCTATGCGGATCTTGACCTGTTTGTCCGTTGGTGTGTCTCAAGTTGAAGTCGATCTCCGAGAGTTGCTCTCGATGCAGTGTGAAGATGGCTCGTGGGAACATTGTCCATTCACCCGGTATGGTTTGTCCAAAGTGAGCATTGGCAATCGGGGCCTTACAACTGCTTTTGTGGTCAAGGCGGTTGAAATGTGTCGAGGCAGTTAG
【０２３７】
配列番号４０−ＸＰ＿００１８２０８６７．２最適化されたｃＤＮＡ
ATGACTCGTTGGAAAAGCTCTCAATATCAGGCAATCATTTTCGATCTGGGCGGTGTTATTCTGACCTGGGACTTGCCGGAAGATACGGTTATCTCCGCGCAAATCTTTAAGCGTATGCTGACCAGCCAGACCTGGTCCGATTATGAGCGCGGTAATCTGAGCGAGAACGGCTGCTATCAACGTTTGGCGGAAGATTTCGGCATCGATAGCGCCGATATTGCCCACACCGTCCGTCAGGCACGTGAGTCCCTGGTGACCGACACCGCCATCATGAATATCATCTCCGAGATCCGTGCAGGCGCGAACCACATCGCAATTTTCGCGATGAGCAACATCTCACAGCCGGATTACGCTGCGCTGCTGCTGGACCATCGCGGTATGTGCAGCTTTGACCGCGTCTTTCCGAGCGGTTGTTACGGCACCCGTAAGCCTGAGCTGAGCTTCTACAATAAAGTGCTGCGTGAAATTGACACCCCGCCGGAAAATGTTATTTTCGTTGACGATCAATTGGAAAATGTGATTAGCGCGCAAAGCATTGGTATTCATGGCATTGCGTATACGAATGCCGCGGAACTGGGCCGCCAGCTGAGAAACCTGATCTTCGATCCGGTGGAGCGCGGTCGTGAGTTCCTGCGTCGTAACGCTGGTGAGTTTCACTCTATTACGGAAACGGACCAGATTGTGCGCGAGAACTTCAGCCAGCTGCTGATTCTGGAAGCGACCGGTGACAAAAGCCTGGTTAGCCTGGAATACCACCAAAAGTCGTGGAACTTCTTCCAAGGTAACCCAATCCTGACGACGGAAACCTTCCCGGACGATGTTGACACTACTAGCCTGGCTCTGATGACGCTGCCGACGGACACCAAGACCGCGAATCTGTTGCTGGACCAGATTCTGGGTTTGGTTAATGCCGATGAAATTGTGACTACGTACTTCGACCAGACCCGTGAGCGTATCGATCCAGTGGTCTGTGTGAATGTCCTGCGCCTGTTCTGTACGTACGGCCGCGGCATCGCGCTGCCGCTGACCCTGCAATGGGTCTACGATGTGCTGGCGCACCGCGCATACATTAACGGTACGCGTTATTACACCAGCCCGGAGAGCTTTCTGTATTTTGTCGGTCAGCTCTGTCGTTTTAGCACCGGTGTGCTGGCACTGCGTCCGCTGGAGACTCTGCTGATTGATCGTCTGAAAGAGCGCCTGCAAGTTAAAGCTGACCCGCTGAGCCTGGCAATGCGCATCCTTACGTGCTTATCTGTCGGTGTCAGCCAGGTTGAAGTGGACTTGCGTGAGTTGTTGAGCATGCAGTGCGAGGACGGTAGCTGGGAGCATTGCCCGTTCACCCGCTACGGCCTGAGCAAGGTTTCCATCGGTAACCGTGGCCTGACCACGGCGTTTGTGGTTAAAGCCGTCGAGATGTGCCGTGGCAGCTAA
【０２３８】
ＣＥＮ６０５４２．１
配列番号４１−ＣＥＮ６０５４２．１タンパク質
MVRALILDLGDVLFNWDAPASTPISRKTLGQMLHSEIWGEYERGHLTEDEAYNALAKRYSCEAKDVAHTFVLARESLRLDTKFKTFLQTLKQNANGSLRVYGMSNISKPDFEVLLGKADDWTLFDKIFPSGHVGMRKPDLAFFRYVLKDISTPVEDVVFVDDNLDNVTSARSLGMRSVLFHKKDEVQRQLTNIFGSPAERGLEYLSANKTNLQSATTTDIPIQDNFGQLLILEATEDPSLVRMEPGKRTWNFFIGSPSLTTDTFPDDLDTTSLALSIVPTSPDVVNSVIDEIISRRDKDGIVPTYFDNTRPRVDPIVCVNVLSMFAKYGREHDLPATVAWVRDVLYHRAYLGGTRYYGSAEAFLFFFTRFVRNLRPGTLKQDLHALLSERVRERLNTPVDALALSMRIQACHALGFDAPADIATLITMQDEDGGWPAAVIYKYGAGGLGITNRGVSTAFAVKAITGSPVKTETNIGGDGARAVSAMSSLEARRLQPISSVGDWVRFIIASLHVHLAWLWNVLLLSKVV
【０２３９】
配列番号４２−ＣＥＮ６０５４２．１ｃＤＮＡ
ATGGTCCGCGCACTCATCCTCGATCTCGGCGATGTCCTCTTCAACTGGGACGCGCCTGCGTCCACCCCCATTTCACGCAAGACCCTCGGCCAGATGCTGCATAGTGAGATCTGGGGTGAGTATGAACGTGGCCATTTGACAGAAGACGAGGCATACAACGCACTCGCGAAGCGGTATTCCTGCGAGGCCAAGGATGTCGCACATACCTTTGTCCTGGCACGAGAATCGCTGCGGCTCGACACGAAATTCAAAACGTTTCTGCAGACTCTAAAGCAGAATGCCAACGGCTCCCTTCGTGTCTATGGCATGTCGAATATATCGAAACCGGATTTCGAAGTCCTGCTGGGCAAGGCCGATGACTGGACTCTGTTTGACAAGATCTTCCCCTCTGGCCATGTCGGTATGCGCAAGCCAGATCTTGCCTTCTTCCGCTATGTGCTCAAGGACATTTCAACGCCTGTCGAGGATGTGGTGTTTGTTGACGATAACCTGGACAACGTGACGAGTGCTCGGTCTCTGGGCATGCGCAGCGTCCTCTTTCATAAGAAAGACGAGGTCCAGCGACAGCTCACCAACATCTTTGGCAGCCCTGCTGAGCGGGGCTTGGAGTATCTCTCCGCCAACAAGACGAATCTGCAGAGTGCTACCACGACAGATATCCCAATCCAGGATAACTTTGGCCAACTTCTGATTCTCGAGGCCACTGAAGACCCATCGCTGGTCCGCATGGAGCCCGGTAAGCGAACCTGGAATTTCTTCATCGGTTCTCCATCCCTCACAACCGACACCTTCCCCGACGATCTCGACACCACATCCCTTGCCCTCTCCATCGTACCCACAAGCCCCGACGTCGTCAACTCGGTCATCGACGAGATTATCAGCCGTCGCGACAAGGACGGTATCGTCCCGACTTACTTCGACAACACCCGCCCCCGCGTGGACCCAATCGTCTGCGTAAACGTCCTCTCCATGTTCGCAAAGTACGGCCGCGAGCACGACCTCCCCGCAACAGTTGCGTGGGTCCGCGACGTCTTGTATCATCGAGCATACCTCGGCGGAACACGGTACTACGGGTCAGCTGAGGCCTTCCTCTTCTTCTTCACTCGCTTCGTTCGCAACCTCCGACCGGGAACTCTCAAGCAGGATCTACACGCATTGCTATCAGAGCGCGTGCGCGAGCGACTCAATACCCCCGTCGACGCACTCGCCCTGTCAATGCGCATCCAGGCCTGTCATGCGCTGGGCTTTGACGCCCCCGCAGACATTGCGACGCTCATCACAATGCAGGACGAGGACGGCGGGTGGCCGGCAGCCGTCATCTACAAGTACGGGGCCGGGGGGTTGGGGATCACGAACCGGGGTGTTTCGACTGCGTTTGCCGTAAAGGCGATTACAGGGTCGCCCGTGAAGACTGAAACCAACATAGGCGGCGATGGAGCTCGCGCTGTCTCGGCCATGTCCTCCTTGGAGGCGAGGAGGCTACAGCCGATCTCGTCGGTTGGGGACTGGGTGCGGTTTATCATTGCGTCGTTGCATGTCCATCTGGCTTGGCTTTGGAATGTTTTGCTTTTGAGCAAGGTTGTTTGA
【０２４０】
配列番号４３−ＣＥＮ６０５４２．１最適化ｃＤＮＡ
ATGGTTCGTGCGTTGATTTTGGATTTGGGTGATGTGTTGTTTAATTGGGACGCCCCTGCAAGCACTCCGATCAGCCGTAAGACCCTGGGCCAGATGCTGCATTCCGAGATTTGGGGTGAGTATGAGCGTGGTCACCTGACCGAAGATGAAGCGTACAACGCGCTGGCAAAGCGCTACAGCTGCGAGGCAAAAGACGTGGCGCATACTTTTGTTTTGGCGCGTGAAAGCCTGCGCCTGGATACCAAGTTTAAGACTTTTCTGCAGACCCTGAAACAGAACGCGAACGGCTCGCTGCGTGTTTATGGTATGTCCAATATCAGCAAACCGGATTTTGAAGTGCTGCTGGGTAAAGCTGACGACTGGACCTTGTTCGACAAGATCTTCCCGAGCGGTCATGTCGGTATGCGCAAACCGGACCTGGCTTTCTTTCGTTACGTGCTGAAAGACATCAGCACCCCGGTTGAGGATGTTGTGTTTGTTGACGATAACCTGGATAATGTGACGTCTGCCCGTTCCCTGGGTATGCGTAGCGTCCTGTTCCACAAAAAAGACGAAGTCCAACGTCAGCTGACCAACATTTTCGGTAGCCCTGCTGAGCGCGGTCTGGAGTATCTGTCCGCGAACAAGACCAATCTGCAAAGCGCAACCACCACCGACATCCCTATCCAAGACAACTTTGGTCAATTACTGATTCTGGAAGCCACCGAAGATCCGAGCCTGGTACGCATGGAACCGGGCAAGCGTACCTGGAATTTCTTCATTGGCTCTCCGAGCCTGACGACGGATACCTTCCCGGATGACCTGGACACGACGAGCCTCGCACTGTCCATCGTGCCGACCAGCCCAGATGTTGTTAATAGCGTGATCGATGAGATCATCAGCCGTCGCGACAAGGACGGTATTGTGCCGACGTACTTTGATAACACGCGCCCGCGTGTGGACCCGATTGTTTGTGTTAACGTTCTGTCTATGTTCGCGAAATATGGCCGTGAGCACGATCTGCCGGCGACGGTCGCGTGGGTCCGCGACGTCCTCTATCATCGCGCATACCTGGGTGGCACCAGATACTACGGTAGCGCGGAAGCCTTCCTTTTCTTCTTTACGCGCTTTGTGCGTAATCTGCGTCCGGGCACGCTGAAACAAGATCTGCACGCGTTGCTGAGCGAGCGTGTCCGTGAGCGCCTGAATACCCCGGTGGATGCGCTGGCGCTGAGCATGCGCATTCAGGCTTGCCACGCACTGGGCTTTGACGCCCCAGCTGACATCGCGACGCTGATTACCATGCAAGATGAAGATGGTGGCTGGCCGGCGGCAGTTATCTACAAATATGGTGCGGGTGGCCTGGGCATTACGAACCGTGGTGTGTCCACGGCATTCGCGGTGAAGGCAATCACGGGTAGCCCGGTTAAAACCGAAACCAACATCGGCGGCGACGGTGCCCGTGCAGTGTCGGCCATGAGCAGCCTGGAAGCCCGTCGTTTGCAGCCGATTTCTAGCGTCGGCGACTGGGTCCGTTTCATCATCGCATCACTGCACGTCCACCTGGCGTGGCTGTGGAATGTCCTGCTGCTGAGCAAAGTCGTTTAA
【０２４１】
ＸＰ＿００９５４７４６９．１
配列番号４４−ＸＰ＿００９５４７４６９．１タンパク質
MSMIPRCSNLILDIGDVLFTWSPKTSTSISPRTMKSILSSTTWHQYETGHISQGDCYRLIGNQFSIDPQEVGLAFQQARDSLQPNVDFIHFIRALKAESHGTLRVFAMSNISQPDYAVLRTKDADWAVFDDIFTSADAGVRKPHLGFYKLVLGKIGADPNDTVFVDDKGDNVLSARSLGLHGIVFDSMDNVKRALRYLISDPIRRGREFLQARAGHLESETNTGIEIGDNFAQLLILEATKDRTLVNYMDHPNKWNFFRDQPLLTTEEFPFDLDTTSIGTLATQRDDGTANLVMDEMLQYRDEDGIIQTYFDHERPRIDPIVCVNVLSLFYSRGRGSELAPTLEWVRGVLKHRAYLDGTRYYETGECFLFFLSRLLQSTKDAALHASLKSLFAERVKERIGAPGDALALAMRILACAAVGVRDEIDLRSLLPLQCEDGGWEAGWVYKYGSSGVKIGNRGLTTALALNAIEAVEGRRTRPKSGKISRVSRHSEVAAAPRSSTSSHRSNRSISRTFQAYFKASWTSMKQVAVA
【０２４２】
配列番号４５−ＸＰ＿００９５４７４６９．１ｃＤＮＡ
ATGTCCATGATACCCAGATGCTCGAATCTCATCCTCGACATCGGGGATGTTCTCTTCACATGGTCTCCGAAGACGTCCACTTCGATCTCCCCCCGCACCATGAAGAGCATACTGTCATCGACGACCTGGCACCAATACGAGACCGGGCACATTTCACAGGGCGACTGCTACCGCCTCATAGGCAACCAGTTCTCCATCGATCCTCAGGAAGTCGGACTTGCATTCCAACAAGCTCGGGACTCATTGCAGCCTAATGTTGACTTCATTCACTTCATCCGCGCCCTCAAGGCGGAATCACACGGGACGCTGCGCGTCTTCGCTATGTCCAACATCTCTCAGCCCGATTACGCAGTTCTTCGGACTAAGGACGCCGACTGGGCCGTTTTTGACGATATATTCACGTCTGCAGATGCTGGGGTTCGAAAGCCACACCTTGGGTTCTACAAGTTGGTACTCGGAAAGATCGGCGCCGATCCAAACGATACCGTCTTCGTCGATGACAAGGGGGACAATGTCCTCTCTGCACGGTCTCTCGGCCTTCATGGAATCGTCTTTGACAGTATGGACAACGTCAAGCGAGCCCTGCGCTACTTGATCAGCGACCCCATACGGCGAGGACGAGAGTTTCTCCAAGCGCGAGCCGGCCATTTGGAGTCGGAGACCAATACGGGCATCGAAATCGGTGATAATTTTGCCCAGCTCCTTATTCTCGAGGCCACGAAGGATAGGACACTCGTCAATTATATGGACCATCCGAACAAATGGAATTTCTTCCGAGATCAACCGCTCCTCACAACGGAGGAGTTCCCTTTCGATCTCGATACGACATCTATTGGAACGCTTGCGACGCAGCGCGATGATGGGACTGCCAATCTAGTAATGGATGAGATGCTTCAGTACCGTGATGAGGATGGCATAATACAAACATATTTCGATCATGAACGACCGAGGATAGATCCCATCGTCTGTGTCAACGTCTTGAGCCTTTTCTACTCCCGGGGTCGTGGTTCGGAGCTAGCACCGACACTAGAGTGGGTGCGTGGTGTCCTCAAGCACCGCGCGTATCTCGATGGAACGCGATACTACGAGACAGGCGAATGCTTCCTTTTCTTCCTCAGCCGGCTCTTGCAATCAACCAAGGACGCCGCCTTGCACGCATCGTTGAAATCTTTGTTCGCCGAACGGGTCAAGGAGCGCATAGGGGCACCAGGGGACGCGCTGGCGCTGGCGATGCGTATACTGGCATGCGCAGCAGTGGGCGTGCGGGACGAGATCGATCTTCGATCACTATTACCTCTGCAGTGCGAGGATGGGGGGTGGGAGGCAGGCTGGGTGTACAAGTATGGGTCTTCGGGAGTCAAGATCGGCAATCGTGGCCTCACGACTGCGCTTGCGCTCAATGCCATCGAGGCTGTGGAGGGACGTCGCACGAGGCCGAAGTCGGGTAAGATCAGCCGAGTCAGCCGTCATTCTGAGGTCGCAGCAGCGCCACGGTCTTCCACCAGCAGTCATCGTTCTAATCGCTCGATCTCAAGGACATTCCAGGCGTACTTCAAGGCGTCGTGGACATCGATGAAACAGGTGGCCGTGGCGTGA
【０２４３】
配列番号４６−ＸＰ＿００９５４７４６９．１最適化されたｃＤＮＡ
ATGAGCATGATTCCACGTTGTAGCAATCTGATTCTCGACATCGGTGATGTGTTGTTTACGTGGAGCCCGAAAACCAGCACCAGCATTAGCCCGCGTACCATGAAATCTATCCTGAGCTCTACCACCTGGCATCAATATGAGACTGGCCACATCAGCCAGGGTGATTGCTACCGCCTGATCGGTAATCAGTTCTCCATCGACCCGCAAGAGGTCGGTTTGGCCTTCCAGCAAGCCAGAGACAGCCTGCAACCGAATGTTGATTTCATCCATTTCATTCGTGCCCTGAAAGCTGAGTCGCACGGCACCCTGCGCGTTTTTGCGATGAGCAATATCAGCCAACCTGACTATGCAGTCCTGCGTACGAAAGACGCGGACTGGGCTGTTTTTGATGATATCTTCACGAGCGCGGATGCTGGTGTTCGTAAACCGCACCTGGGTTTTTATAAACTGGTCTTAGGCAAGATTGGCGCGGACCCTAACGACACCGTTTTTGTGGATGATAAGGGTGACAACGTCCTCTCTGCACGTTCCCTGGGTCTGCACGGTATCGTTTTTGATTCAATGGACAACGTGAAGCGCGCACTGCGCTACCTGATTAGCGACCCGATCCGCCGCGGCCGTGAATTTCTGCAGGCCCGTGCGGGTCACCTGGAGTCCGAAACGAACACGGGTATTGAGATTGGTGATAATTTCGCGCAATTGCTGATCCTGGAAGCGACCAAAGATCGTACTCTGGTGAACTACATGGACCACCCGAACAAGTGGAACTTCTTCCGTGACCAGCCGCTGCTGACCACCGAAGAATTTCCGTTCGACCTGGACACGACCAGCATTGGCACGCTGGCCACCCAACGTGACGATGGTACGGCGAATCTGGTAATGGACGAAATGTTGCAGTATCGTGACGAAGATGGCATCATTCAGACCTATTTCGATCATGAGCGCCCGCGTATTGATCCGATTGTTTGTGTGAATGTGCTGTCTCTGTTCTACAGCCGTGGCCGTGGCTCTGAGTTGGCGCCGACGCTGGAATGGGTGCGCGGTGTGTTGAAACATCGTGCGTACCTGGATGGTACGCGTTATTACGAGACTGGTGAGTGTTTCCTGTTTTTCCTGAGCCGTCTGCTGCAGAGCACCAAAGACGCAGCCCTGCACGCGAGCCTGAAGTCCCTGTTTGCAGAGCGTGTTAAAGAGCGCATCGGTGCGCCGGGCGATGCTCTGGCGCTGGCTATGCGCATCCTGGCGTGCGCCGCTGTTGGTGTGCGCGATGAAATTGATTTGCGTAGCCTGCTGCCGCTGCAATGCGAAGATGGCGGCTGGGAAGCGGGCTGGGTCTACAAATACGGCAGCAGCGGTGTGAAGATTGGCAATCGCGGTCTTACCACGGCGCTGGCATTGAATGCTATCGAAGCCGTTGAGGGCCGTCGCACCCGCCCAAAGTCCGGTAAGATCAGCCGTGTTAGCCGTCATAGCGAAGTCGCAGCGGCACCGCGTTCCTCGACGAGCAGCCACCGTAGCAACCGTAGCATTAGCCGCACCTTCCAGGCATATTTTAAAGCGAGCTGGACCAGCATGAAACAAGTCGCAGTGGCGTAA
【０２４４】
ＫＬＯ０９１２４．１
配列番号４７−ＫＬＯ０９１２４．１タンパク質
MSIHGSSMSSYSSTVPSMTSSPASTSTPSSPASSIHEIGPVPEARRKGQCNALIFDLGDVLFTWSAETKTTISPKLLKKILNSLTWFEYEKGNIGEQEAYDAVAKEFGVPSSEVGAAFQCARDSLQSNPRLVSLIRELKSQYDLKVYAMSNISAPDWEVLRTKATPEEWAMFDRVFTSAAARERKPNLGFYRQVVEATGVDPARSVFVDDKLDNVISARSVGLNAIIFDSFENVARQLKNYVADPIGRAEAWLRDNAKKMLSITDAGVVVYENFGQMLILEATGDRSLVDYVEYPRLFNFFQGNGVFTTESFPCDLDSTSIGLTVTNHVDEKTRHSVMDEMLTYKNEDGIIATYFDATRPRIDPVVCANVLTFFYKNGRGEELNETLDWVYDILLHRAYLDGTRYYFGSDTFLFFLSRLLSESPSVYARFAPVFQERVKERMGATGDAMSLAMRIIAAATVKIQDRVDCDALLQTQEDDGGFPIGWMYKYGATGMLLGNKGLSTALAIQAIKAVESFP
【０２４５】
配列番号４８−ＫＬＯ０９１２４．１ｃＤＮＡ
ATGTCGATTCACGGTTCTTCTATGTCCTCCTATTCCTCGACTGTGCCGTCAATGACTTCCTCTCCCGCGTCCACTTCTACTCCGTCGTCTCCTGCATCGTCGATCCATGAGATTGGTCCTGTCCCAGAAGCTCGACGAAAGGGACAGTGCAACGCGCTGATCTTCGACCTCGGAGACGTCCTCTTCACCTGGTCGGCAGAGACTAAGACCACCATTTCCCCGAAACTCCTGAAAAAGATCCTTAACTCCTTAACATGGTTCGAATACGAGAAGGGAAACATCGGGGAGCAGGAGGCGTATGACGCAGTCGCAAAGGAGTTTGGCGTCCCGTCGTCCGAGGTCGGGGCCGCTTTCCAGTGCGCGCGCGATTCGCTACAGAGCAATCCCCGCCTCGTCTCGCTCATCCGTGAGCTGAAGTCGCAATATGATCTCAAGGTGTACGCCATGTCCAACATCTCTGCGCCGGACTGGGAAGTCCTAAGGACGAAGGCGACCCCTGAGGAGTGGGCAATGTTTGACCGCGTCTTCACGAGCGCGGCCGCGCGCGAGCGTAAGCCAAACCTCGGATTCTACAGACAGGTTGTTGAGGCGACCGGCGTCGACCCCGCTCGCTCCGTGTTCGTCGACGATAAACTCGACAATGTCATCTCTGCGCGTTCAGTCGGATTAAATGCGATCATCTTCGACTCATTTGAGAACGTCGCCCGGCAGCTCAAAAACTATGTCGCTGATCCTATCGGACGGGCGGAGGCGTGGTTGCGCGATAACGCAAAGAAGATGTTGTCAATTACGGATGCCGGGGTGGTCGTATACGAGAATTTCGGCCAGATGCTGATCTTGGAGGCAACAGGCGATAGGTCGCTTGTGGACTACGTCGAGTACCCTCGTCTCTTCAACTTCTTCCAAGGCAATGGCGTCTTTACGACCGAGTCATTCCCTTGCGACCTTGATTCGACTTCCATCGGCTTAACCGTCACGAACCACGTCGATGAGAAAACAAGGCACAGCGTCATGGATGAGATGCTGACCTACAAAAATGAGGATGGTATCATTGCGACTTACTTTGATGCCACGCGTCCCCGAATTGACCCCGTCGTCTGCGCCAATGTCTTGACGTTCTTCTACAAGAACGGCCGAGGGGAGGAGCTCAATGAAACACTTGACTGGGTCTACGACATCCTCCTTCATCGCGCGTACCTCGATGGCACACGCTATTATTTCGGCTCAGACACCTTCCTCTTCTTCCTTTCTCGACTTCTCTCCGAATCGCCATCCGTTTACGCCCGTTTCGCTCCGGTGTTCCAGGAGAGAGTCAAGGAGCGCATGGGGGCGACGGGAGATGCGATGTCCCTTGCGATGCGCATCATCGCGGCCGCAACTGTCAAGATCCAAGACCGAGTCGACTGCGACGCTCTGCTGCAGACGCAGGAAGACGACGGTGGATTCCCGATAGGTTGGATGTACAAGTACGGGGCGACCGGGATGCTTCTGGGTAACAAGGGCTTGTCGACAGCTCTGGCAATCCAAGCTATCAAAGCGGTCGAATCTTTCCCTTGA
【０２４６】
配列番号４９−ＫＬＯ０９１２４．１最適化ｃＤＮＡ
GGATCCAAGCTTAAGGAGGTAAAAAATGTCGATTCACGGTAGCAGCATGTCGTCTTATAGCAGCACGGTTCCATCTATGACTAGCAGCCCGGCTTCCACGAGCACGCCGTCCAGCCCGGCCAGCAGCATCCACGAAATCGGCCCGGTCCCTGAGGCGCGTCGCAAGGGCCAATGCAATGCACTGATCTTCGACCTGGGTGATGTTCTGTTTACCTGGAGCGCAGAAACCAAGACCACGATCAGCCCGAAGCTGCTGAAAAAGATTCTGAACAGCTTGACCTGGTTTGAGTATGAGAAAGGCAACATCGGTGAACAAGAAGCCTATGACGCCGTTGCGAAAGAGTTCGGTGTGCCGAGCTCTGAGGTTGGCGCTGCGTTTCAATGTGCGCGTGACTCCCTGCAAAGCAATCCGCGTTTGGTTAGCCTGATTCGTGAGCTGAAGTCCCAGTACGACCTGAAAGTGTACGCTATGAGCAATATTAGCGCGCCAGACTGGGAAGTGCTGCGTACTAAAGCGACCCCGGAAGAGTGGGCAATGTTCGATCGTGTCTTTACTTCTGCGGCGGCGCGTGAGCGTAAGCCGAACTTGGGCTTTTACCGCCAAGTCGTGGAAGCAACCGGTGTCGATCCGGCGCGTAGCGTTTTCGTCGATGATAAACTGGACAATGTGATCAGCGCGCGCTCTGTCGGTCTGAACGCTATTATCTTCGACTCCTTCGAAAACGTCGCCCGTCAGCTGAAGAATTACGTCGCAGACCCGATTGGTCGCGCTGAGGCGTGGCTGCGCGACAACGCAAAGAAAATGCTGAGCATCACCGATGCGGGTGTTGTGGTTTACGAGAATTTTGGCCAGATGCTGATCCTGGAAGCTACCGGTGACCGTAGCCTGGTGGACTATGTGGAGTATCCGCGCCTCTTTAACTTCTTCCAGGGTAACGGCGTTTTTACGACCGAGAGCTTTCCATGCGATCTGGACAGCACCAGCATCGGTCTGACTGTGACCAATCATGTGGACGAAAAGACTCGCCACAGCGTCATGGACGAAATGCTGACCTACAAAAATGAAGATGGTATTATTGCGACGTACTTTGACGCGACGCGCCCGCGCATTGACCCTGTTGTCTGTGCCAATGTTCTGACCTTCTTCTACAAAAACGGTCGTGGTGAAGAATTGAACGAAACCCTGGATTGGGTGTACGACATTCTGCTGCATCGCGCGTATCTGGACGGTACGCGTTATTATTTCGGCTCCGATACGTTCCTGTTTTTCCTGAGCCGTCTGCTGAGCGAGTCTCCGAGCGTTTACGCGCGTTTTGCCCCGGTGTTTCAAGAGCGCGTGAAAGAGCGTATGGGCGCGACCGGTGATGCGATGAGCCTGGCCATGCGTATCATTGCAGCAGCAACCGTAAAGATCCAGGATCGTGTGGATTGCGACGCACTGTTGCAGACCCAAGAAGATGATGGCGGTTTCCCGATTGGTTGGATGTACAAATATGGTGCGACCGGTATGTTGCTGGGCAACAAAGGCCTGAGCACGGCCCTGGCGATCCAGGCAATTAAAGCCGTCGAGTCGTTCCCGTAAGGTACCATATATGAATTCATTAATCTCGAG
【０２４７】
ＯＪＩ９５７９７．１
配列番号５０−ＯＪＩ９５７９７．１タンパク質
MGSTKALVVDFGNVLCTWTPPRELSIPPKKLKQIMSSDIWLDYERGIYKSEDECYLAVATRFGVSPSDLSSVMKKARESLQPNTATLNHLSHLKKTQPGLRIYGLTNTPLPEQSSVRSIAQEWPIFDHIYISGILGMRKPDIGCYRLVLRKIGLPAESVVFIDDSPENILAAQSLGVHSILFQSHDQLSRQLGNVLGDPIQRGHNFLLSNAKQMNSTTDKGVIIRDNFAQLLIIELTQNPDLVALETWDRTWNFFIGPPQLTTESFPNDLDTTSIALSVLPVDKEVVWSVMDEMLTFTNADGIFMTYFDRSRPRVDPVVCTNVLNLFCMHGRESEVAATFDWVLDVLRNSAYLSGSRYYSSPDCFLYFLSRLSCVVRDGTRRRELKSLLKQQVSQRIGADGDSVSLATRLLASNILGITNGRDRSRLLALQETDGGWPAGWVYKFGSSGVQIGNRGLSTALALKSIERQKGPVEAISSEPEAWWPSLRLDRLLNVWPFIDWKGYSPS
【０２４８】
配列番号５１−ＯＪＩ９５７９７．１ｃＤＮＡ
ATGGGTTCCACCAAGGCTCTTGTTGTTGACTTTGGGAATGTTTTGTGTACCTGGACACCACCCAGGGAGTTATCCATCCCGCCCAAGAAGCTGAAACAAATCATGTCTTCTGACATTTGGCTCGACTATGAACGGGGTATCTATAAGTCGGAGGACGAGTGCTACTTGGCGGTTGCAACTCGCTTCGGCGTCTCTCCCAGCGACCTCTCCTCGGTGATGAAAAAGGCCCGCGAGAGCCTGCAACCAAACACCGCAACCCTGAATCATCTGTCTCATCTCAAAAAGACCCAGCCTGGCCTCAGGATATACGGTTTGACCAACACCCCTCTCCCAGAACAAAGCAGTGTACGATCCATCGCCCAGGAATGGCCTATCTTCGACCATATCTACATATCAGGCATCCTCGGAATGCGCAAGCCGGACATTGGCTGCTACAGGCTGGTGCTGCGAAAGATTGGGCTTCCAGCGGAGTCCGTGGTCTTCATTGATGATTCACCCGAGAACATCCTGGCCGCGCAGTCACTGGGAGTACACAGCATACTGTTCCAAAGCCACGACCAGCTCTCTCGTCAGCTTGGCAATGTGCTGGGTGATCCAATCCAGCGGGGCCATAACTTCCTACTCTCGAACGCAAAGCAAATGAATAGTACGACCGACAAGGGAGTTATTATCCGGGACAACTTTGCGCAACTGCTGATCATCGAGCTGACGCAGAACCCAGACCTTGTGGCGTTAGAAACATGGGACCGTACCTGGAATTTTTTTATTGGACCTCCACAATTGACAACTGAAAGCTTTCCCAATGATCTTGACACTACCTCCATCGCTCTCTCGGTTCTTCCGGTTGACAAAGAAGTGGTATGGTCTGTGATGGACGAGATGCTAACGTTTACCAATGCGGATGGGATTTTTATGACCTATTTCGACCGATCACGCCCTCGAGTTGATCCGGTAGTTTGCACCAATGTCCTGAATCTTTTCTGCATGCATGGACGGGAAAGCGAAGTTGCAGCCACATTTGACTGGGTGCTGGACGTTCTTCGAAATTCGGCCTATTTATCAGGATCCAGATACTATTCTTCGCCTGATTGCTTTCTATACTTTCTTTCACGGCTGAGCTGTGTGGTCCGAGACGGCACGCGACGCAGGGAGCTCAAGTCACTGTTGAAACAACAAGTGAGCCAGCGTATTGGCGCTGATGGTGATTCCGTCTCTCTCGCCACTAGGCTACTTGCATCGAACATTTTAGGAATCACAAATGGCCGTGATCGCTCCAGGCTTCTTGCTCTGCAGGAAACTGACGGTGGATGGCCTGCTGGGTGGGTTTATAAATTCGGAAGCTCGGGGGTACAGATTGGCAATCGGGGGCTCAGTACAGCCTTGGCGTTAAAATCAATTGAGCGTCAGAAGGGGCCTGTTGAGGCGATATCCAGTGAGCCAGAAGCGTGGTGGCCATCCCTCAGGCTTGACCGACTTCTCAACGTTTGGCCTTTCATCGACTGGAAGGGATATTCGCCGAGTTGA
【０２４９】
配列番号５２−ＯＪＩ９５７９７．１最適化ｃＤＮＡ
ATGGGTTCTACGAAAGCGTTGGTTGTTGATTTTGGTAATGTTCTGTGCACTTGGACGCCACCACGTGAATTGTCCATCCCGCCGAAGAAACTGAAGCAAATCATGAGCAGCGACATTTGGCTGGACTATGAGCGTGGTATCTACAAATCGGAAGATGAGTGCTACCTGGCAGTTGCGACGCGCTTTGGTGTCAGCCCGTCCGACCTGAGCTCCGTTATGAAAAAAGCCCGTGAGAGCCTGCAGCCGAATACCGCAACGCTGAACCACTTGAGCCATCTGAAGAAAACCCAGCCTGGCCTTCGTATCTACGGCCTGACGAACACCCCGTTGCCGGAACAGAGCTCAGTCCGTAGCATTGCGCAGGAATGGCCGATTTTTGACCACATCTACATTAGCGGCATCTTGGGTATGCGCAAACCGGATATTGGTTGTTACCGTCTGGTTCTGCGTAAGATCGGTCTGCCAGCGGAGTCCGTCGTATTCATCGACGACAGCCCGGAGAACATTCTGGCAGCTCAATCGTTGGGTGTCCATAGCATCCTGTTCCAGTCCCACGATCAGCTGAGCCGTCAGCTGGGCAATGTGCTGGGTGATCCGATTCAGCGCGGTCACAACTTCCTCCTGTCCAACGCGAAGCAAATGAACAGCACCACCGATAAGGGTGTGATTATCCGCGACAACTTCGCCCAGCTGCTGATTATTGAGCTGACCCAAAATCCGGATCTGGTTGCGCTGGAGACTTGGGACCGTACGTGGAATTTCTTTATTGGTCCGCCGCAACTGACCACCGAGAGCTTTCCGAACGACCTGGACACCACGAGCATTGCCCTGAGCGTGTTGCCGGTGGATAAAGAAGTCGTTTGGTCTGTGATGGATGAGATGCTGACCTTCACCAACGCAGACGGCATCTTCATGACCTATTTCGATCGTAGCCGTCCGCGTGTTGACCCGGTCGTTTGTACCAATGTCCTGAATCTGTTTTGCATGCATGGTCGCGAGAGCGAAGTGGCCGCGACGTTCGACTGGGTGCTGGACGTGCTGCGCAACAGCGCGTACCTGAGCGGTTCCCGTTATTACAGCAGCCCGGATTGTTTTCTGTATTTCCTGTCTCGTCTGAGCTGCGTCGTCCGTGATGGCACGCGTCGTCGTGAACTGAAAAGCCTGCTGAAGCAACAAGTTTCTCAACGTATCGGCGCTGACGGTGATTCCGTCAGCCTGGCCACCCGTTTGCTGGCGAGCAACATCCTGGGCATTACTAACGGTCGTGACCGCAGCCGTCTGCTGGCATTGCAAGAAACCGATGGTGGCTGGCCTGCAGGCTGGGTCTATAAGTTTGGTAGCAGCGGCGTGCAAATTGGCAATCGCGGTCTGAGCACCGCGCTGGCTCTGAAGTCTATCGAGCGCCAGAAAGGTCCGGTGGAAGCAATCAGCAGCGAGCCGGAAGCGTGGTGGCCTAGCTTACGCTTGGACCGCTTGCTGAATGTTTGGCCATTTATCGACTGGAAGGGCTACTCCCCGAGCTAA
【０２５０】
クラスＩテルペンシンターゼ様モチーフ
配列番号５３
ＤＤｘｘ（Ｄ／Ｅ）、ここで、位置３のｘはＫ、Ｎ、Ｒ、ＳまたはＱであり、位置４のｘはＬ、Ｉ、Ｇ、ＰまたはＴである
【０２５１】
クラスＩテルペンシンターゼ様モチーフ
配列番号５４
ＤＤ（Ｋ／Ｑ／Ｒ）（Ｌ／Ｉ／Ｔ）（Ｄ／Ｅ）ＮＶ
【０２５２】
クラスＩテルペンシンターゼ様モチーフ
配列番号５５
ＤＤ（Ｎ／Ｋ／Ｓ／Ｑ）（Ｌ／Ｇ／Ｐ）（Ｄ／Ｅ）Ｎ（Ｖ／Ｉ）
【０２５３】
クラスＩＩテルペンシンターゼ様モチーフ
配列番号５６
ＤｘＤ（Ｔ／Ｓ）Ｔ、ここで、位置２のｘは、Ｖ、Ｍ、ＦまたはＬである
【０２５４】
クラスＩＩテルペンシンターゼ様モチーフ
配列番号５７
Ｄ（Ｖ／Ｍ／Ｌ／Ｆ）ＤＴＴＳ
【０２５５】
クラスＩＩテルペンシンターゼ様モチーフ
配列番号５８
Ｄ（Ｖ／Ｍ／Ｌ）Ｄ（Ｔ／Ｓ）ＴＳ
【０２５６】
保存されたモチーフＡ
配列番号５９
ＳｘｘＷｘｘＹＥｘＧ、ここで、ｘは、任意のアミノ酸である
【０２５７】
保存されたモチーフＢ
配列番号６０
ＮＦｘＱｘ（Ｉ／Ｌ）ＩｘＥ、ここで、ｘは、任意のアミノ酸である
【０２５８】
保存されたモチーフＣ
配列番号６１
（Ｄ／Ｅ）（Ｇ／Ｅ）Ｉｘｘ（Ｔ／Ｖ）ＹＦＤｘｘＲｘＲｘＤＰｘＶｘｘＮＶＬ
【０２５９】
保存されたモチーフＤ
配列番号６２
ＱｘｘＤＧｘ（Ｗ／Ｆ）
【０２６０】
ＸＰ＿００６４６１１２６．１
配列番号６３−ＸＰ＿００６４６１１２６．１タンパク質
MAPPQRPFTAIVFDIGDVLFQWSATTKTSISPKTLRSILNCPTWFDYERGRLAENACYAAISQEFNVNPDEVRDAFSQARDSLQANHDFISLIRELKAQANGRLRVYAMSNISLPDWEVLRMKPADWDIFDHVFTSGAVGERKPNLAFYRHVIAATDLQPHQTIFVDDKLENVLSARSLGFTGIVFDEPSEVKRALRNLIGDPVQRGGEFLVRNAGKLGSITRTTAKHESIPLDENFAQLLILEITGNRALVNLVEHPQTWNFFQGKGQLTTEEFPFDLDTTSLGLTILKRSREIADSVMDEMLEYVDPDGIIQTYFDHRRPRFDPVVCVNALSLFYAYGRGEQLRSTLTWVHEVLLNRAYLDGTRYYETAECFLYFMSRLLATSGDPDLHSLLKPLLKERVQERIGADGDSLALAMRILACDFVGIRDEVDLRTLLTLQCEDGGWEVGWMYKYGSSGISIGNRGLATALAIKAVDTMFQPQIRFSESPTDTLVENAIHKRRPSFSEKFLGKRPRSGSFRKPLQWILQGSKLRKSVEIGS
【０２６１】
配列番号６４−ＸＰ＿００６４６１１２６．１ｃＤＮＡ
ATGGCTCCGCCTCAGCGACCCTTTACTGCGATTGTCTTTGACATCGGGGATGTTCTATTCCAATGGTCTGCAACCACCAAAACCTCTATCTCACCAAAGACACTCCGCTCTATTCTCAACTGTCCGACATGGTTTGACTATGAACGTGGACGCCTGGCAGAAAACGCTTGTTATGCCGCTATCTCACAAGAATTCAACGTCAACCCAGACGAAGTTCGCGACGCTTTCAGCCAAGCGCGCGACTCTCTCCAAGCAAACCACGACTTCATCAGTCTCATCCGTGAGCTGAAGGCACAAGCAAATGGTCGTTTACGTGTGTACGCCATGTCGAACATATCTCTTCCTGATTGGGAAGTGCTGCGGATGAAACCTGCTGATTGGGATATTTTCGACCACGTCTTCACATCCGGTGCGGTTGGGGAACGCAAGCCCAATCTCGCCTTTTATCGCCATGTTATCGCGGCCACCGATCTGCAGCCTCATCAGACAATATTTGTTGACGATAAGCTGGAGAATGTTCTCTCAGCACGTTCCCTCGGGTTCACAGGCATCGTGTTTGACGAGCCCTCCGAGGTCAAACGTGCGCTTCGTAACCTCATTGGGGATCCTGTTCAACGAGGAGGTGAATTCTTGGTTCGGAATGCCGGAAAGCTTGGCTCTATCACAAGGACTACTGCAAAGCACGAGTCAATCCCCCTCGACGAGAATTTTGCTCAGCTTCTTATTCTCGAGATAACGGGGAACAGGTGCGTTAGCTTCTTGTAGGGTCTTCTGTCGTAATACTAAATTTTTTCTGGTGTTTAGGGCTTTGGTCAACCTCGTTGAGCATCCTCAAACGTGGAATTTCTTCCAAGGTGCGCTGCTAAAATAAACATCCAGTTGCGTTTCGAAGCTCATTGTGGGCGTCCCGTCACAGGCAAGGGCCAGCTGACAACAGAAGAATTTCCATTCGATCTCGATACAACTTCTCTTGGTCTCACGATCCTCAAGCGAAGCAGGGAAATCGCCGATTCAGTCATGGATGAAATGCTGGAGTATGTCGATCCTGATGGTATCATTCAGGCAAGTTTCATTTATCGGCTTGAGAAAATAAAGACAAAAACGTTCTGATGGGGGGATGTTTCTAGACGTATTTCGATCATCGGAGACCACGTTTTGATCCAGTCGTGTGTGTCAATGCATTAAGCCTCTTCTATGCTTACGGCCGCGGGGAGCAACTGCGGTCGACTTTGACATGGGTACATGAAGTCCTTCTCAATCGAGCCTACTTGGATGGCACACGGTACTACGAAACAGCCGAATGCTTCCTCTATTTCATGAGCCGACTTCTCGCCACTTCAGGCGACCCTGACCTTCACTCCCTTCTTAAACCTCTTCTCAAAGAACGGGTGCAAGAACGCATTGGAGCTGATGGAGACTCTCTTGCACTCGCAATGCGTATTCTCGCCTGTGATTTCGTCGGAATCAGAGATGAAGTGGATTTACGCACACTTCTGACTTTGCAATGTGAAGATGGAGGTTGGGAAGTGGGTTGGATGTACAAGTATGGATCTTCCGGTATCAGTATCGGAAATCGTGGACTGGCCACCGCGCTCGCTATCAAGGCCGTCGACACGATGTTTCAACCCCAAATTCGGTTCTCTGAATCACCCACAGATACTTTGGTTGAAAACGCTATCCACAAACGCCGTCCCTCATTTTCCGAAAAATTCCTCGGCAAACGTCCTCGCAGCGGATCGTTCAGGAAACCTTTACAGTGGATACTGCAAGGTTCCAAGCTTCGCAAATCTGTCGAAATAGGAAGCTAA
【０２６２】
配列番号６５−ＸＰ＿００６４６１１２６．１最適化されたｃＤＮＡ
ATGGCACCACCGCAACGTCCGTTCACTGCAATTGTTTTCGATATTGGCGATGTTTTGTTCCAATGGTCTGCGACCACGAAAACCAGCATTAGCCCGAAAACCCTGCGCAGCATTCTGAATTGTCCGACCTGGTTTGATTATGAGCGCGGCCGTCTGGCGGAAAATGCGTGTTACGCTGCGATCAGCCAAGAATTTAACGTCAACCCGGACGAAGTTCGCGACGCCTTCAGCCAAGCGCGCGACAGCCTGCAGGCGAATCACGACTTCATCAGCCTGATTCGTGAGCTGAAAGCTCAGGCGAACGGTCGTCTGCGTGTCTACGCCATGTCTAATATCAGCCTGCCGGATTGGGAAGTCCTGCGTATGAAGCCAGCCGATTGGGACATCTTTGACCATGTATTTACCAGCGGTGCGGTGGGTGAGCGCAAGCCGAACCTGGCCTTTTATCGTCACGTCATCGCGGCCACGGATCTGCAGCCGCACCAGACGATCTTCGTGGATGACAAACTGGAAAACGTGCTGTCTGCGCGCTCGCTGGGCTTCACGGGTATCGTGTTCGACGAGCCAAGCGAAGTCAAACGTGCGCTGCGTAATCTGATCGGCGACCCGGTGCAGCGTGGTGGCGAGTTCCTGGTTCGTAATGCTGGCAAACTGGGTTCTATCACCCGTACGACCGCAAAACATGAGAGCATCCCGCTGGATGAGAATTTTGCACAACTGTTGATTCTGGAAATTACTGGTAACCGCGCACTGGTCAATCTGGTTGAGCACCCGCAGACGTGGAACTTCTTCCAGGGTAAGGGCCAGCTGACGACCGAAGAATTTCCTTTTGACCTGGATACGACGAGCCTGGGTCTGACGATCCTGAAGCGTAGCCGCGAGATTGCCGACTCCGTCATGGACGAAATGTTGGAATACGTGGACCCTGACGGCATCATTCAGACCTACTTCGATCATCGTCGCCCGCGCTTTGACCCGGTTGTTTGCGTTAATGCCCTGAGCCTGTTCTATGCATACGGCCGTGGTGAGCAACTGCGTTCCACCTTGACCTGGGTGCACGAAGTTCTGTTGAACCGTGCGTATTTGGATGGTACGCGTTACTATGAAACGGCCGAGTGCTTTCTGTATTTCATGTCCCGTCTGCTGGCAACCAGCGGTGACCCGGATCTGCATTCCCTGCTGAAGCCGTTGCTGAAGGAACGCGTGCAAGAGCGCATCGGCGCTGACGGTGACAGCCTGGCGCTGGCGATGCGCATTTTGGCATGTGATTTTGTTGGCATCCGTGATGAAGTGGATCTGCGTACCCTGCTGACCTTACAGTGCGAGGATGGCGGTTGGGAAGTGGGCTGGATGTACAAATACGGTAGCAGCGGTATTAGCATTGGTAACCGTGGTCTGGCAACCGCATTGGCGATCAAAGCTGTTGACACCATGTTTCAACCGCAAATCCGTTTCAGCGAGAGCCCGACCGACACTCTGGTGGAGAACGCGATTCACAAGCGCCGCCCGAGCTTTTCAGAGAAATTTTTAGGTAAGCGTCCGCGTTCCGGTTCGTTCCGTAAACCGCTGCAATGGATTCTGCAGGGCAGCAAGCTGCGCAAGAGCGTCGAGATCGGTAGCTAA
【０２６３】
ＸＰ＿００７３６９６３１．１
配列番号６６−ＸＰ＿００７３６９６３１．１サッカロミセス・セレビシエの発現のために最適化されたｃＤＮＡ
ATGGCTTCTATCCACAGAAGATACACTACTTTGATCTTGGACTTGGGTGACGTTTTGTTCAGATGGTCTCCAAAGACTGAAACTGCTATCCCACCACAACAATTGAAGGACATCTTGTCTTCTGTTACTTGGTTCGAATACGAAAGAGGTAGATTGTCTCAAGAAGCTTGTTACGAAAGATGTGCTGAAGAATTCAAGATCGAAGCTTCTGTTATCGCTGAAGCTTTCAAGCAAGCTAGAGGTTCTTTGAGACCAAACGAAGAATTCATCGCTTTGATCAGAGACTTGAGAAGAGAAATGCACGGTGACTTGACTGTTTTGGCTTTGTCTAACATCTCTTTGCCAGACTACGAATACATCATGTCTTTGTCTTCTGACTGGACTACTGTTTTCGACAGAGTTTTCCCATCTGCTTTGGTTGGTGAAAGAAAGCCACACTTGGGTTGTTACAGAAAGGTTATCTCTGAAATGAACTTGGAACCACAAACTACTGTTTTCGTTGACGACAAGTTGGACAACGTTGCTTCTGCTAGATCTTTGGGTATGCACGGTATCGTTTTCGACAACCAAGCTAACGTTTTCAGACAATTGAGAAACATCTTCGGTGACCCAATCAGAAGAGGTCAAGAATACTTGAGAGGTCACGCTGGTAAGTTGGAATCTTCTACTGACAACGGTTTGATCTTCGAAGAAAACTTCACTCAATTGATCATCTACGAATTGACTCAAGACAGAACTTTGATCTCTTTGTCTGAATGTCCAAGAACTTGGAACTTCTTCAGAGGTGAACCATTGTTCTCTGAAACTTTCCCAGACGACGTTGACACTACTTCTGTTGCTTTGACTGTTTTGCAACCAGACAGAGCTTTGGTTAACTCTGTTTTGGACGAAATGTTGGAATACGTTGACGCTGACGGTATCATGCAAACTTACTTCGACAGATCTAGACCAAGAATGGACCCATTCGTTTGTGTTAACGTTTTGTCTTTGTTCTACGAAAACGGTAGAGGTCACGAATTGCCAAGAACTTTGGACTGGGTTTACGAAGTTTTGTTGCACAGAGCTTACCACGGTGGTTCTAGATACTACTTGTCTCCAGACTGTTTCTTGTTCTTCATGTCTAGATTGTTGAAGAGAGCTGACGACCCAGCTGTTCAAGCTAGATTGAGACCATTGTTCGTTGAAAGAGTTAACGAAAGAGTTGGTGCTGCTGGTGACTCTATGGACTTGGCTTTCAGAATCTTGGCTGCTGCTTCTGTTGGTGTTCAATGTCCAAGAGACTTGGAAAGATTGACTGCTGGTCAATGTGACGACGGTGGTTGGGACTTGTGTTGGTTCTACGTTTTCGGTTCTACTGGTGTTAAGGCTGGTAACAGAGGTTTGACTACTGCTTTGGCTGTTACTGCTATCCAAACTGCTATCGGTAGACCACCATCTCCATCTCCATCTGCTGCTTCTTCTTCTTTCAGACCATCTTCTCCATACAAGTTCTTGGGTATCTCTAGACCAGCTTCTCCAATCAGATTCGGTGACTTGTTGAGACCATGGAGAAAGATGTCTAGATCTAACTTGAAGTCTCAATAA
【０２６４】
ＸＰ＿００６４６１１２６
配列番号６７−ＸＰ＿００６４６１１２６サッカロミセス・セレビシエの発現のために最適化されたｃＤＮＡ
ATGGCTCCACCACAAAGACCATTCACTGCTATCGTTTTCGACATCGGTGACGTTTTGTTCCAATGGTCTGCTACTACTAAGACTTCTATCTCTCCAAAGACTTTGAGATCTATCTTGAACTGTCCAACTTGGTTCGACTACGAAAGAGGTAGATTGGCTGAAAACGCTTGTTACGCTGCTATCTCTCAAGAATTCAACGTTAACCCAGACGAAGTTAGAGACGCTTTCTCTCAAGCTAGAGACTCTTTGCAAGCTAACCACGACTTCATCTCTTTGATCAGAGAATTGAAGGCTCAAGCTAACGGTAGATTGAGAGTTTACGCTATGTCTAACATCTCTTTGCCAGACTGGGAAGTTTTGAGAATGAAGCCAGCTGACTGGGACATCTTCGACCACGTTTTCACTTCTGGTGCTGTTGGTGAAAGAAAGCCAAACTTGGCTTTCTACAGACACGTTATCGCTGCTACTGACTTGCAACCACACCAAACTATCTTCGTTGACGACAAGTTGGAAAACGTTTTGTCTGCTAGATCTTTGGGTTTCACTGGTATCGTTTTCGACGAACCATCTGAAGTTAAGAGAGCTTTGAGAAACTTGATCGGTGACCCAGTTCAAAGAGGTGGTGAATTCTTGGTTAGAAACGCTGGTAAGTTGGGTTCTATCACTAGAACTACTGCTAAGCACGAATCTATCCCATTGGACGAAAACTTCGCTCAATTGTTGATCTTGGAAATCACTGGTAACAGAGCTTTGGTTAACTTGGTTGAACACCCACAAACTTGGAACTTCTTCCAAGGTAAGGGTCAATTGACTACTGAAGAATTCCCATTCGACTTGGACACTACTTCTTTGGGTTTGACTATCTTGAAGAGATCTAGAGAAATCGCTGACTCTGTTATGGACGAAATGTTGGAATACGTTGACCCAGACGGTATCATCCAAACTTACTTCGACCACAGAAGACCAAGATTCGACCCAGTTGTTTGTGTTAACGCTTTGTCTTTGTTCTACGCTTACGGTAGAGGTGAACAATTGAGATCTACTTTGACTTGGGTTCACGAAGTTTTGTTGCACAGAGCTTACTTGGACGGTACTAGATACTACGAAACTGCTGAATGTTTCTTGTACTTCATGTCTAGATTGTTGGCTACTTCTGGTGACCCAGACTTGCACTCTTTGTTGAAGCCATTGTTGAAGGAAAGAGTTCAAGAAAGAATCGGTGCTGACGGTGACTCTTTGGCTTTGGCTATGAGAATCTTGGCTTGTGACTTCGTTGGTATCAGAGACGAAGTTGACTTGAGAACTTTGTTGACTTTGCAATGTGAAGACGGTGGTTGGGAAGTTGGTTGGATGTACAAGTACGGTTCTTCTGGTATCTCTATCGGTAACAGAGGTTTGGCTACTGCTTTGGCTATCAAGGCTGTTGACACTATGTTCCAACCACAAATCAGATTCTCTGAATCTCCAACTGACACTTTGGTTGAAAACGCTATCCACAAGAGAAGACCATCTTTCTCTGAAAAGTTCTTGGGTAAGAGACCAAGATCTGGTTCTTTCAGAAAGCCATTGCAATGGATCTTGCAAGGTTCTAAGTTGAGAAAGTCTGTTGAAATCGGTTCTTAA
【０２６５】
ＬｏＴｐｓ１
配列番号６８−ＬｏＴｐｓ１サッカロミセス・セレビシエの発現のために最適化されたｃＤＮＡ
ATGTACACTGCTTTGATCTTGGACTTGGGTGACGTTTTGTTCTCTTGGTCTTCTACTACTAACACTACTATCCCACCAAGACAATTGAAGGAAATCTTGTCTTCTCCAGCTTGGTTCGAATACGAAAGAGGTAGAATCACTCAAGCTGAATGTTACGAAAGAGTTTCTGCTGAATTCTCTTTGGACGCTACTGCTGTTGCTGAAGCTTTCAGACAAGCTAGAGACTCTTTGAGACCAAACGACAAGTTCTTGACTTTGATCAGAGAATTGAGACAACAATCTCACGGTGAATTGACTGTTTTGGCTTTGTCTAACATCTCTTTGCCAGACTACGAATTCATCATGGCTTTGGACTCTAAGTGGACTTCTGTTTTCGACAGAGTTTTCCCATCTGCTTTGGTTGGTGAAAGAAAGCCACACTTGGGTGCTTTCAGACAAGTTTTGTCTGAAATGAACTTGGACCCACACACTACTGTTTTCGTTGACGACAAGTTGGACAACGTTGTTTCTGCTAGATCTTTGGGTATGCACGGTGTTGTTTTCGACTCTCAAGACAACGTTTTCAGAATGTTGAGAAACATCTTCGGTGACCCAATCCACAGAGGTAGAGACTACTTGAGACAACACGCTGGTAGATTGGAAACTTCTACTGACGCTGGTGTTGTTTTCGAAGAAAACTTCACTCAATTGATCATCTACGAATTGACTAACGACAAGTCTTTGATCACTACTTCTAACTGTGCTAGAACTTGGAACTTCTTCAGAGGTAAGCCATTGTTCTCTGCTTCTTTCCCAGACGACATGGACACTACTTCTGTTGCTTTGACTGTTTTGAGATTGGACCACGCTTTGGTTAACTCTGTTTTGGACGAAATGTTGAAGTACGTTGACGCTGACGGTATCATGCAAACTTACTTCGACCACACTAGACCAAGAATGGACCCATTCGTTTGTGTTAACGTTTTGTCTTTGTTCCACGAACAAGGTAGAGGTCACGAATTGCCAAACACTTTGGAATGGGTTCACGAAGTTTTGTTGCACAGAGCTTACATCGGTGGTTCTAGATACTACTTGTCTGCTGACTGTTTCTTGTTCTTCATGTCTAGATTGTTGCAAAGAATCACTGACCCATCTGTTTTGGGTAGATTCAGACCATTGTTCATCGAAAGAGTTAGAGAAAGAGTTGGTGCTACTGGTGACTCTATCGACTTGGCTTTCAGAATCATCGCTGCTTCTACTGTTGGTATCCAATGTCCAAGAGACTTGGAATCTTTGTTGGCTGCTCAATGTGAAGACGGTGGTTGGGACTTGTGTTGGTTCTACCAATACGGTTCTACTGGTGTTAAGGCTGGTAACAGAGGTTTGACTACTGCTTTGGCTATCAAGGCTATCGACTCTGCTATCGCTAGACCACCATCTCCAGCTTTGTCTGTTGCTTCTTCTTCTAAGTCTGAAATCCCAAAGCCAATCCAAAGATCTTTGAGACCATTGTCTCCAAGAAGATTCGGTGGTTTCTTGATGCCATGGAGAAGATCTCAAAGAAACGGTGTTGCTGTTTCTTCTTAA
【０２６６】
ＥＭＤ３７６６６．１
配列番号６９−ＥＭＤ３７６６６．１サッカロミセス・セレビシエの発現のために最適化されたｃＤＮＡ
ATGTCTGCTGCTGCTCAATACACTACTTTGATCTTGGACTTGGGTGACGTTTTGTTCACTTGGTCTCCAAAGACTAAGACTTCTATCCCACCAAGAACTTTGAAGGAAATCTTGAACTCTGCTACTTGGTACGAATACGAAAGAGGTAGAATCTCTCAAGACGAATGTTACGAAAGAGTTGGTACTGAATTCGGTATCGCTCCATCTGAAATCGACAACGCTTTCAAGCAAGCTAGAGACTCTATGGAATCTAACGACGAATTGATCGCTTTGGTTAGAGAATTGAAGACTCAATTGGACGGTGAATTGTTGGTTTTCGCTTTGTCTAACATCTCTTTGCCAGACTACGAATACGTTTTGACTAAGCCAGCTGACTGGTCTATCTTCGACAAGGTTTTCCCATCTGCTTTGGTTGGTGAAAGAAAGCCACACTTGGGTGTTTACAAGCACGTTATCGCTGAAACTGGTATCGACCCAAGAACTACTGTTTTCGTTGACGACAAGATCGACAACGTTTTGTCTGCTAGATCTGTTGGTATGCACGGTATCGTTTTCGAAAAGCAAGAAGACGTTATGAGAGCTTTGAGAAACATCTTCGGTGACCCAGTTAGAAGAGGTAGAGAATACTTGAGAAGAAACGCTATGAGATTGGAATCTGTTACTGACCACGGTGTTGCTTTCGGTGAAAACTTCACTCAATTGTTGATCTTGGAATTGACTAACGACCCATCTTTGGTTACTTTGCCAGACAGACCAAGAACTTGGAACTTCTTCAGAGGTAACGGTGGTAGACCATCTAAGCCATTGTTCTCTGAAGCTTTCCCAGACGACTTGGACACTACTTCTTTGGCTTTGACTGTTTTGCAAAGAGACCCAGGTGTTATCTCTTCTGTTATGGACGAAATGTTGAACTACAGAGACCCAGACGGTATCATGCAAACTTACTTCGACGACGGTAGACAAAGATTGGACCCATTCGTTAACGTTAACGTTTTGACTTTCTTCTACACTAACGGTAGAGGTCACGAATTGGACCAATGTTTGACTTGGGTTAGAGAAGTTTTGTTGTACAGAGCTTACTTGGGTGGTTCTAGATACTACCCATCTGCTGACTGTTTCTTGTACTTCATCTCTAGATTGTTCGCTTGTACTAACGACCCAGTTTTGCACCACCAATTGAAGCCATTGTTCGTTGAAAGAGTTCAAGAACAAATCGGTGTTGAAGGTGACGCTTTGGAATTGGCTTTCAGATTGTTGGTTTGTGCTTCTTTGGACGTTCAAAACGCTATCGACATGAGAAGATTGTTGGAAATGCAATGTGAAGACGGTGGTTGGGAAGGTGGTAACTTGTACAGATTCGGTACTACTGGTTTGAAGGTTACTAACAGAGGTTTGACTACTGCTGCTGCTGTTCAAGCTATCGAAGCTTCTCAAAGAAGACCACCATCTCCATCTCCATCTGTTGAATCTACTAAGTCTCCAATCACTCCAGTTACTCCAATGTTGGAAGTTCCATCTTTGGGTTTGTCTATCTCTAGACCATCTTCTCCATTGTTGGGTTACTTCAGATTGCCATGGAAGAAGTCTGCTGAAGTTCACTAA
【０２６７】
ＸＰ＿００１２１７３７６．１
配列番号７０−ＸＰ＿００１２１７３７６．１サッカロミセス・セレビシエの発現のために最適化されたｃＤＮＡ
ATGGCTATCACTAAGGGTCCAGTTAAGGCTTTGATCTTGGACTTCTCTAACGTTTTGTGTTCTTGGAAGCCACCATCTAACGTTGCTGTTCCACCACAAATCTTGAAGATGATCATGTCTTCTGACATCTGGCACGACTACGAATGTGGTAGATACTCTAGAGAAGACTGTTACGCTAGAGTTGCTGACAGATTCCACATCTCTGCTGCTGACATGGAAGACACTTTGAAGCAAGCTAGAAAGTCTTTGCAAGTTCACCACGAAACTTTGTTGTTCATCCAACAAGTTAAGAAGGACGCTGGTGGTGAATTGATGGTTTGTGGTATGACTAACACTCCAAGACCAGAACAAGACGTTATGCACTCTATCAACGCTGAATACCCAGTTTTCGACAGAATCTACATCTCTGGTTTGATGGGTATGAGAAAGCCATCTATCTGTTTCTACCAAAGAGTTATGGAAGAAATCGGTTTGTCTGGTGACGCTATCATGTTCATCGACGACAAGTTGGAAAACGTTATCGCTGCTCAATCTGTTGGTATCAGAGGTGTTTTGTTCCAATCTCAACAAGACTTGAGAAGAGTTGTTTTGAACTTCTTGGGTGACCCAGTTCACAGAGGTTTGCAATTCTTGGCTGCTAACGCTAAGAAGATGGACTCTGTTACTAACACTGGTGACACTATCCAAGACAACTTCGCTCAATTGTTGATCTTGGAATTGGCTCAAGACAGAGAATTGGTTAAGTTGCAAGCTGGTAAGAGAACTTGGAACTACTTCATCGGTCCACCAAAGTTGACTACTGCTACTTTCCCAGACGACATGGACACTACTTCTATGGCTTTGTCTGTTTTGCCAGTTGCTGAAGACGTTGTTTCTTCTGTTTTGGACGAAATGTTGAAGTTCGTTACTGACGACGGTATCTTCATGACTTACTTCGACTCTTCTAGACCAAGAGTTGACCCAGTTGTTTGTATCAACGTTTTGGGTGTTTTCTGTAGACACAACAGAGAAAGAGACGTTTTGCCAACTTTCCACTGGATCAGAGACATCTTGATCAACAGAGCTTACTTGTCTGGTACTAGATACTACCCATCTCCAGACTTGTTCTTGTTCTTCTTGGCTAGATTGTGTTTGGCTGTTAGAAACCAATCTTTGAGAGAACAATTGGTTTTGCCATTGGTTGACAGATTGAGAGAAAGAGTTGGTGCTCCAGGTGAAGCTGTTTCTTTGGCTGCTAGAATCTTGGCTTGTAGATCTTTCGGTATCGACTCTGCTAGAGACATGGACTCTTTGAGAGGTAAGCAATGTGAAGACGGTGGTTGGCCAGTTGAATGGGTTTACAGATTCGCTTCTTTCGGTTTGAACGTTGGTAACAGAGGTTTGGCTACTGCTTTCGCTGTTAGAGCTTTGGAATCTCCATACGGTGAATCTGCTGTTAAGGTTATGAGAAGAATCGTTTAA
【０２６８】
プライマー
配列番号７１−断片「ａ」の構築のためのプライマー（ＬＥＵ２酵母マーカー）
AGGTGCAGTTCGCGTGCAATTATAACGTCGTGGCAACTGTTATCAGTCGTACCGCGCCATTCGACTACGTCGTAAGGCC
【０２６９】
配列番号７２−断片「ａ」の構築のためのプライマー（ＬＥＵ２酵母マーカー）
TCGTGGTCAAGGCGTGCAATTCTCAACACGAGAGTGATTCTTCGGCGTTGTTGCTGACCATCGACGGTCGAGGAGAACTT
【０２７０】
配列番号７３−断片「ｂ」の構築のためのプライマー（ＡｍｐＲ大腸菌マーカー）
TGGTCAGCAACAACGCCGAAGAATCACTCTCGTGTTGAGAATTGCACGCCTTGACCACGACACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAG
【０２７１】
配列番号７４−断片「ｂ」の構築のためのプライマー（ＡｍｐＲ大腸菌マーカー）
AACGCGTACCCTAAGTACGGCACCACAGTGACTATGCAGTCCGCACTTTGCCAATGCCAAAAATGTGCGCGGAACCCCTA
【０２７２】
配列番号７５−断片「ｃ」の構築のためのプライマー（酵母の複製起点）
TTGGCATTGGCAAAGTGCGGACTGCATAGTCACTGTGGTGCCGTACTTAGGGTACGCGTTCCTGAACGAAGCATCTGTGCTTCA
【０２７３】
配列番号７６−断片「ｃ」の構築のためのプライマー（酵母の複製起点）
CCGAGATGCCAAAGGATAGGTGCTATGTTGATGACTACGACACAGAACTGCGGGTGACATAATGATAGCATTGAAGGATGAGACT
【０２７４】
配列番号７７−断片「ｄ」の構築のためのプライマー（大腸菌の複製起点）
ATGTCACCCGCAGTTCTGTGTCGTAGTCATCAACATAGCACCTATCCTTTGGCATCTCGGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGG
【０２７５】
配列番号７８−断片「ｄ」の構築のためのプライマー（大腸菌の複製起点）
CTCAGATGTACGGTGATCGCCACCATGTGACGGAAGCTATCCTGACAGTGTAGCAAGTGCTGAGCGTCAGACCCCGTAGAA
【図１】
2020523005.tif 000006
【図２】
2020523005.tif 000007
【図３】
2020523005.tif 000008
【図４】
2020523005.tif 000009
【図５】
2020523005.tif 000010
【図６−１】
2020523005.tif 000011
【図６−２】
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【図６−３】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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