(57)【要約】  本開示は、ＭＩＣＡおよび／またはＭＩＣＢタンパク質の可溶性型に結合する抗体、該抗体を含む組成物、ならびに、上昇したレベルのＭＩＣタンパク質によって特徴付けられる疾患の、診断のためのおよび治療における、該抗体の使用に関する。
2020502042.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＭＩＣタンパク質のアルファ−３−ドメイン中のアミノ酸配列ＧＤＶＬ（配列番号２３）を含むエピトープに特異的に結合する、単離抗体。
【請求項２】
ヒトＭＩＣタンパク質のアルファ−３−ドメイン中のアミノ酸配列ＱＱＷＧＤＶＬＰ（配列番号２２）を含むエピトープに特異的に結合する、単離抗体。
【請求項３】
可溶性ＭＩＣ（ｓＭＩＣ）タンパク質の細胞外ドメインに特異的に結合するが、膜結合型ＭＩＣタンパク質の細胞外ドメインには特異的に結合しない、請求項１または２の単離抗体。
【請求項４】
ｓＭＩＣタンパク質がｓＭＩＣＡであり、そして膜結合型ＭＩＣが膜結合型ＭＩＣＡである、請求項３の単離抗体。
【請求項５】
ｓＭＩＣタンパク質がｓＭＩＣＢであり、そして膜結合型ＭＩＣが膜結合型ＭＩＣＢである、請求項３の単離抗体。
【請求項６】
抗体が、モノクローナル抗体５Ｃ９の平衡解離定数ＫＤとほぼ同じまたはそれより低いＫＤで、ヒト前立腺癌細胞株ＤＵ−１４５によって産生されるｓＭＩＣＢに結合可能である、請求項１〜５のいずれか一項の単離抗体。
【請求項７】
配列番号２５の軽鎖可変領域アミノ酸配列中の１つ、２つまたは３つのＣＤＲ、および配列番号２９の重鎖可変領域アミノ酸配列中の１つ、２つまたは３つのＣＤＲを含む、請求項１〜６のいずれか一項の単離抗体。
【請求項８】
アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）を含むＣＤＲ  Ｌ１；
アミノ酸配列ＫＶＳＮＲＦＳ（配列番号４１）を含むＣＤＲ  Ｌ２；
アミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＦＴ（配列番号４２）を含むＣＤＲ  Ｌ３；
アミノ酸配列ＮＹＬＩＥ（配列番号４３）を含むＣＤＲ  Ｈ１；
アミノ酸配列ＬＩＹＰＧＳＧＧＴＮＹＮＥＫＦＫＧ（配列番号４４）を含むＣＤＲ  Ｈ２；および
アミノ酸配列ＩＹＹＧＮＲＤＹＧＭＤＹ（配列番号４５）を含むＣＤＲ  Ｈ３
を含む、請求項７の単離抗体。
【請求項９】
配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＶＬ、および配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＶＨを含む、請求項１〜８のいずれか一項の単離抗体。
【請求項１０】
ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４より選択されるヒト重鎖アイソタイプを含む、請求項１から９のいずれか一項の単離抗体。
【請求項１１】
モノクローナル抗体を含む、請求項１〜１０のいずれか一項の単離抗体。
【請求項１２】
キメラ抗体を含む、請求項１〜１１のいずれか一項の単離抗体。
【請求項１３】
ヒト化抗体を含む、請求項１〜１１のいずれか一項の単離抗体。
【請求項１４】
抗体断片を含む、請求項１〜１３のいずれか一項の単離抗体。
【請求項１５】
精製抗体を含む、請求項１〜１４のいずれか一項の単離抗体。
【請求項１６】
請求項１〜１５のいずれか一項の単離抗体、および薬学的に許容されうる担体を含む、薬学的組成物。
【請求項１７】
上昇したレベルのｓＭＩＣタンパク質を有する被験体において、ｓＭＩＣタンパク質のレベルを減少させる方法であって、請求項１〜１５のいずれか一項の抗体または請求項１６の薬学的組成物の有効量を、その必要がある被験体に投与する工程を含む、前記方法。
【請求項１８】
ｓＭＩＣタンパク質がｓＭＩＣＡである、請求項１７の方法。
【請求項１９】
ｓＭＩＣタンパク質がｓＭＩＣＢである、請求項１７の方法。
【請求項２０】
上昇したレベルのＭＩＣタンパク質によって特徴付けられる疾患または障害を有する被験体を治療する方法であって、請求項１〜１５のいずれか一項の抗体または請求項１６の薬学的組成物の有効量を、その必要がある被験体に投与する工程を含む、前記方法。
【請求項２１】
疾患または障害がＭＩＣ＋癌または腫瘍である、請求項２０の方法。
【請求項２２】
ＭＩＣ＋癌または腫瘍が、ＭＩＣＡ＋癌または腫瘍を含む、請求項２１の方法。
【請求項２３】
ＭＩＣ＋癌または腫瘍が、ＭＩＣＢ＋癌または腫瘍を含む、請求項２１の方法。
【請求項２４】
ＭＩＣ＋癌または腫瘍が、脳癌、肝臓癌、胃癌、精巣癌、子宮頸癌、卵巣癌、膣癌および外陰癌、黒色腫、扁平上皮癌、悪性中皮腫癌、口腔癌、頭頸部癌、咽喉癌、胸腺癌、胃腸間質腫瘍（ＧＩＳＴ）癌、鼻咽頭癌、食道癌、結腸癌、肛門癌、乳癌、肺癌、前立腺癌、陰茎癌、膀胱癌、膵臓癌、神経芽腫、神経膠腫、肝細胞癌、または腎癌である、請求項２１〜２３のいずれか一項の方法。
【請求項２５】
ｓＭＩＣ＋癌または腫瘍が血液学的悪性腫瘍を含む、請求項２１〜２３のいずれか一項の方法。
【請求項２６】
血液学的悪性腫瘍が白血病またはリンパ腫である、請求項２５の方法。
【請求項２７】
血液学的悪性腫瘍が、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性単球性白血病（ＡＭｏｌ）；リンパ腫、例えばホジキンリンパ腫、および非ホジキンリンパ腫；または多発性骨髄腫より選択される、請求項２５の方法。
【請求項２８】
免疫調節ケモカインまたはサイトカインと組み合わせて抗体を投与する、請求項１７〜２７のいずれか一項の方法。
【請求項２９】
免疫調節ケモカインまたはサイトカインが、ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、またはＣＣＬ−２１である、請求項２８の方法。
【請求項３０】
ケモカインまたはサイトカインがＩＬ−１２またはＩＬ−１５である、請求項２８の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
１．関連出願に対するクロスリファレンス
[0001]本出願は、３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９（ｅ）に基づいて、２０１６年１０月１９日出願の米国仮出願第６２／４１０，２８２号の利益を請求し、該出願の全内容が本明細書に援用される。
２．配列表、表またはコンピュータプログラムに対する言及
[0002]配列表の公式コピーは、ＥＦＳ−Ｗｅｂを通じ、ファイル名「ＮＢＩ−００３＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」、生成日２０１７年１０月１９日、および７２キロバイトのサイズで、ＡＳＣＩＩフォーマットテキストファイルとして、明細書と同時に提出される。ＥＦＳ−Ｗｅｂを通じて提出された配列表は明細書の一部であり、そしてその全体が本明細書に援用される。
【背景技術】
【０００２】
３．背景
[0003]癌の治療に向けての免疫療法アプローチは、異常に増殖している細胞を攻撃し、そして破壊するため、免疫反応を誘導し、刺激し、そして／または抑制することを試みる。免疫療法の戦略には、免疫活性化サイトカインの使用、抗原提示細胞（例えば樹状細胞）活性化、養子細胞移入、ターゲティング化抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）、免疫チェックポイント阻害剤、およびそれら組み合わせが含まれてきた。
【０００３】
[0004]サイトカインに基づく免疫療法は、有効な免疫反応を誘発するための免疫系の多様な武器を活性化するサイトカインの使用を伴う。免疫療法のこの型において、サイトカインは、被験体内に直接投与されるか、または、次いで被験体内に注入により戻される単離免疫系細胞をｅｘ  ｖｉｖｏで活性化するために用いられる（例えば、Ａｎｔｏｎｙら，  ２０１０，  Ｃｕｒｒ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  １７（２９）：３２９７−３０２；  Ｏｃｈｏａら，  ２０１３，  Ｃｕｒｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．  １３（１）：  １５−３０を参照されたい）。
【０００４】
[0005]樹状細胞に基づく免疫療法は、治療しようとする被験体から抗原提示樹状細胞を採取し、そして次いで、抗原、腫瘍溶解物、または腫瘍抗原を発現するベクターで、細胞をパルス処理し、そして次いで、処理した樹状細胞を被験体に注入して、ターゲット抗原を発現している腫瘍細胞に対する免疫反応を刺激する工程を伴う（例えば、Ｍｏｒｓｅら，  ２００３，  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ２５（ｌ）：９５−９；  Ｐａｌｕｃｋａら，  ２０１２，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ．  Ｃａｎｃｅｒ  １２：２６５−２７７）。
【０００５】
[0006]養子細胞療法は、患者またはドナーからＴ細胞を得て、そして次いで、例えば免疫活性化サイトカイン、癌抗原への曝露、および／または組換え遺伝子でのトランスフェクションにより活性化し、そして次いで患者内に注入する点で、樹状細胞療法と類似である。養子Ｔ細胞療法の変形は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲＴ）を発現させるように、Ｔ細胞を操作する。ＣＡＲＴに基づく療法において、組換えキメラ受容体は、ターゲット細胞上の抗原に結合する抗原結合ドメイン、および操作されたＴ細胞を調節可能な、例えばターゲット癌細胞に対して向けられるＴ細胞の活性化および／または増殖を調節可能な細胞内ドメインを有する（例えば、Ｇｒｕｐｐら，  ２０１１，  Ｃｕｒｒ  Ｔｏｐ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ３４４：１４９−７２；  Ｌｉｐｏｗｓｋａ−Ｂｈａｌｌａ，  ２０１２，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．  ６１（７）：９５３−６２を参照されたい）。
【０００６】
[0007]免疫療法はまた、エフェクター免疫細胞、例えばナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、好中球、および好酸球において、抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）機能を使用して、増殖中の細胞をターゲティングすることも可能である。ＡＤＣＣ仲介性療法は、典型的には、ターゲット細胞表面上で発現される抗原に対して向けられる抗体を用い、該細胞表面上で、抗体Ｆｃ領域が、ＡＤＣＣ免疫エフェクター細胞上に存在するＦｃ受容体に結合する。ＡＤＣＣは、一般的に、ターゲット細胞によって発現される抗原およびこうしたターゲット抗原に対する療法抗体の発展によって制限される。
【０００７】
[0008]免疫療法の別の型は、時に「チェックポイント」阻害剤とも称される、免疫細胞活性化を抑制する機構を阻害して、免疫系活性を回復することを伴う。例示的なチェックポイント阻害剤には、プログラム細胞死１タンパク質、ＰＤ−１、およびそのリガンドの１つである、ＰＤ−Ｌ１に対して向けられる抗体が含まれる。ＰＤ−１に対するＰＤ−Ｌ１の結合は、Ｔ細胞活性の阻害を導くことも可能であり、そしてＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−１の相互作用を遮断する抗体は、このＴ細胞抑制を制限することも可能であり、活性化されたＴ細胞が癌細胞を攻撃することを可能にしうる。チェックポイント阻害剤の別のタイプは、ＣＴＬＡ−４に対する抗体であり、ＣＴＬＡ−４は、通常、その同族（ｃｏｇｎａｔｅ）受容体ＣＤ８０／８６に結合し、そしてＣＤ８０／８６とＣＤ２８との間の活性化相互作用を防止するリガンドである。抗ＣＴＬＡ抗体は、ＣＤ８０／８６のＣＴＬＡ−４とのこの抑制性の相互作用を妨害し、それによってＣＤ８０／８６とＣＤ２８との間の活性化相互作用を可能にする。
【０００８】
[0009]癌細胞をターゲティングする、多様な免疫療法アプローチが成功してきているが、多くの患者において有効ではない。例えば、チェックポイント阻害剤療法、例えば抗ＰＤ−１、抗ＰＤ−Ｌ１および抗ＣＴＬＡに反応するのは、治療した患者のおよそ２０％〜３０％である可能性もあり、そしていくつかの癌は、特定のチェックポイント阻害剤での治療に、臨床的に意味のある反応を示さない。ＡＤＣＣに基づく抗体療法に対する反応率もまた、患者のかなりの割合が非反応性である、という点で多様である。ＣＡＲＴに基づく療法に関しては、より高い反応率が観察されるが、研究は大部分、血液学的癌をターゲットとしており、そしてＣＡＲＴ療法を受けている患者には、深刻な副作用、例えばサイトカイン放出症候群を経験しているものもいる。さらに、ＡＤＣＣおよびＣＡＲＴ免疫療法は、どちらも、ターゲット癌細胞上でユニークにまたは優先的に発現される抗原のターゲティングを必要としており、この条件のために、これらの適用は特定の癌タイプに限定されうる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ａｎｔｏｎｙら，  ２０１０，  Ｃｕｒｒ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  １７（２９）：３２９７−３０２
【非特許文献２】Ｏｃｈｏａら，  ２０１３，  Ｃｕｒｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．  １３（１）：  １５−３０
【非特許文献３】Ｍｏｒｓｅら，  ２００３，  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ２５（ｌ）：９５−９
【非特許文献４】Ｐａｌｕｃｋａら，  ２０１２，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ．  Ｃａｎｃｅｒ  １２：２６５−２７７
【非特許文献５】Ｇｒｕｐｐら，  ２０１１，  Ｃｕｒｒ  Ｔｏｐ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ３４４：１４９−７２
【非特許文献６】Ｌｉｐｏｗｓｋａ−Ｂｈａｌｌａ，  ２０１２，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．  ６１（７）：９５３−６２
【発明の概要】
【００１０】
４．概要
[0010]１つの側面において、本開示は、ＭＨＣクラスＩ関連鎖（ＭＩＣ）タンパク質の可溶性および細胞膜結合型の間を区別可能な抗体を提供する。多様な態様において、ＭＩＣタンパク質は、ＭＨＣクラスＩ鎖関連遺伝子Ａ（ＭＩＣＡ）タンパク質またはＭＨＣクラスＩ鎖関連遺伝子Ｂ（ＭＩＣＢ）タンパク質である。本開示の抗体は、可溶性ＭＩＣ（ｓＭＩＣ）に特異的に結合するが、細胞膜結合型ＭＩＣの細胞外ドメインには特異的に結合しない。いくつかの態様において、抗体が結合するエピトープは、ＭＩＣタンパク質のアルファ−３ドメインにあり、そしてアルファ−３ドメインを含有する細胞外ドメインが膜貫通ドメインから脱離した際に、抗体に曝露される。
【００１１】
[0011]いくつかの態様において、抗体は、参照モノクローナル抗体の平衡解離定数ＫＤとほぼ同じまたはそれより低いＫＤで、あるいは参照モノクローナル抗体の平衡会合定数ＫＡとほぼ同じまたはそれより高いＫＡで、ヒト前立腺癌細胞株ＤＵ−１４５によって産生されるｓＭＩＣＢに結合可能であり、ここで参照モノクローナル抗体は５Ｃ９である。いくつかの態様において、抗体は、ヒト前立腺癌細胞株ＤＵ−１４５の異種移植片を接種されたＲａｇ２−／−マウスにおけるヒトｓＭＩＣＢのレベルを減弱させることが可能である。いくつかの態様において、抗体は、Ｒａｇ２−／−マウスにおけるヒト前立腺癌細胞株ＤＵ−１４５の異種移植片の増殖を減弱させることが可能である。
【００１２】
[0012]いくつかの態様において、上記特性を有する抗体は、配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＶＬ中の１つまたはそれより多いＣＤＲ、および／または配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＶＨ中の１つまたはそれより多いＣＤＲを含む。
【００１３】
[0013]いくつかの態様において、上記特性を有する抗体は、可変軽鎖中に以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）：アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）を含むＣＤＲ  Ｌ１；アミノ酸配列ＫＶＳＮＲＦＳ（配列番号４１）を含むＣＤＲ  Ｌ２；およびアミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＦＴ（配列番号４２）を含むＣＤＲ  Ｌ３の１つ、２つまたは３つを含む。いくつかの態様において、上記特性を有する抗体は、可変重鎖中に、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）：アミノ酸配列ＮＹＬＩＥ（配列番号４３）を含むＣＤＲ  Ｈ１；アミノ酸配列ＬＩＹＰＧＳＧＧＴＮＹＮＥＫＦＫＧ（配列番号４４）を含むＣＤＲ  Ｈ２；およびアミノ酸配列ＩＹＹＧＮＲＤＹＧＭＤＹ（配列番号４５）を含むＣＤＲ  Ｈ３の１つ、２つまたは３つを含む。
【００１４】
[0014]いくつかの態様において、上記特性を有する抗体は、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）：アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）を含むＣＤＲ  Ｌ１；アミノ酸配列ＫＶＳＮＲＦＳ（配列番号４１）を含むＣＤＲ  Ｌ２；アミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＦＴ（配列番号４２）を含むＣＤＲ  Ｌ３；アミノ酸配列ＮＹＬＩＥ（配列番号４３）を含むＣＤＲ  Ｈ１；アミノ酸配列ＬＩＹＰＧＳＧＧＴＮＹＮＥＫＦＫＧ（配列番号４４）を含むＣＤＲ  Ｈ２；およびアミノ酸配列ＩＹＹＧＮＲＤＹＧＭＤＹ（配列番号４５）を含むＣＤＲ  Ｈ３の１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つすべてを含む。
【００１５】
[0015]いくつかの態様において、上記特性を有する抗体は、配列番号２４、より詳細には配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＶＬ、および配列番号２８、より詳細には配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＶＨを有する。
【００１６】
[0016]別の側面において、抗体を多様な使用に、例えば診断および療法的治療に適用してもよい。いくつかの態様において、抗体を診断アッセイに用いて、生物学的試料、特にｓＭＩＣの上昇したレベルによって特徴付けられる疾患または障害、例えば特定の癌およびウイルス感染を有すると推測されるかまたは有すると診断された被験体から得た試料における、ｓＭＩＣ、例えばｓＭＩＣＡおよび／またはｓＭＩＣＢの存在を決定してもよい。いくつかの態様において、抗体を用いて、癌に罹患した被験体の予後を評価するため、または被験体における癌治療の有効性を評価するため、ｓＭＩＣＡおよび／またはｓＭＩＣＢのレベルを決定してもよい。
【００１７】
[0017]いくつかの態様において、ｓＭＩＣ、例えばｓＭＩＣＡおよび／またはｓＭＩＣＢのレベルを減少させる必要がある被験体に、本明細書に記載する抗体の有効量を投与することによって、被験体において、ｓＭＩＣ、例えばｓＭＩＣＡおよび／またはｓＭＩＣＢのレベルを減少させる方法において、抗体を使用してもよい。いくつかの態様において、抗体を使用して、ＭＩＣタンパク質の上昇したレベルによって特徴付けられる疾患または障害に罹患した被験体を治療してもよい。いくつかの態様において、疾患または障害は、ＭＩＣ＋腫瘍または癌である。いくつかの態様において、ＭＩＣ＋腫瘍または癌は、ｓＭＩＣタンパク質、例えばｓＭＩＣＡおよび／またはｓＭＩＣＢの上昇したレベルによって特徴付けられる。
【００１８】
[0018]いくつかの態様において、治療すべきＭＩＣ＋腫瘍または癌には、とりわけ、肺、乳房、胃、結腸、膵臓、卵巣、腎臓、前立腺、肝臓、または皮膚（例えば黒色腫）の腫瘍または癌が含まれる。いくつかの態様において、治療すべきＭＩＣ＋腫瘍または癌は、血液学的悪性腫瘍であり、これにはとりわけ、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性単球性白血病（ＡＭｏｌ）；リンパ腫、例えばホジキンリンパ腫、および非ホジキンリンパ腫；ならびに多発性骨髄腫が含まれる。
【００１９】
[0019]いくつかの態様において、抗体を投与して、ＭＩＣタンパク質の上昇した発現によって特徴付けられるウイルス感染を伴う被験体を治療する。例示的なウイルス感染には、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、ヒト・ライノウイルス（ＨＲＶ）およびヒト免疫不全ウイルス１（ＨＩＶ−１）感染が含まれる。
【００２０】
[0020]いくつかの態様において、療法適用を、ＭＩＣの上昇したレベルと関連する特定の障害を治療するために用いる他の療法剤と組み合わせて用いてもよく、これには、以下の詳細な説明にさらに記載されるように、化学療法剤、生物学的剤、および癌ワクチンとの組み合わせが含まれる。
【００２１】
５．図面の簡単な説明
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】[0021]図１Ａおよび図１Ｂは、それぞれ、全長ヒトＭＩＣＡポリペプチドに対応する例示的なアミノ酸配列（アレル＊００１：ＮＣＢＩ寄託番号ＮＰ＿０００２３８．１）（配列番号１）、および全長ヒトＭＩＣＢポリペプチドに対応する例示的なアミノ酸配列（アレル＊００１：ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ寄託番号Ｑ２９９８０．１）（配列番号２）を示す。
【００２３】
[0022]図１Ｃおよび図１Ｄは、それぞれ、ＭＩＣＡ＊００１アレルのＭＩＣＡタンパク質の細胞外アルファ−３ドメインのアミノ酸配列、アミノ酸残基２０５〜２９７（配列番号３）；およびＭＩＣＢ＊００１アレルのＭＩＣＢタンパク質の細胞外アルファ−３ドメインのアミノ酸配列、アミノ酸残基２０５〜２９７（配列番号４）を示す。アミノ酸残基番号付けは、プロセシングされないＭＩＣＡおよびＭＩＣＢタンパク質に基づく。プロセシングされた成熟ＭＩＣＡ＊００１およびＭＩＣＢ＊００１に基づくアミノ酸番号付けは、ＭＩＣＡのアミノ酸残基１８２〜２７４およびＭＩＣＢのアミノ酸残基１８２〜２７４に対応する。
【図２】[0023]図２は、ヒトＭＩＣＡ  ｃＤＮＡに対応する例示的なヌクレオチド配列（アレル＊００１：ＮＣＢＩ寄託番号ＮＭ＿０００２４７．２）（配列番号５）を示す。コード領域を下線で示す。
【図３−１】[0024]図３は、ヒトＭＩＣＢ  ｃＤＮＡに対応する例示的なヌクレオチド配列（アレル＊００１：ＧｅｎＢａｎｋ寄託番号Ｘ９１６２５．１）（配列番号６）を示す。コード領域を下線で示す。
【図３−２】[0024]図３は、ヒトＭＩＣＢ  ｃＤＮＡに対応する例示的なヌクレオチド配列（アレル＊００１：ＧｅｎＢａｎｋ寄託番号Ｘ９１６２５．１）（配列番号６）を示す。コード領域を下線で示す。
【図４−１】[0025]図４は、推定上の可溶性ＭＩＣＡポリペプチドの例示的なアミノ酸配列を示す（Ａ−配列番号７；Ｂ−配列番号８；Ｃ−配列番号９；Ｄ−配列番号１０；Ｅ−配列番号１１；Ｆ−配列番号１２；Ｇ−配列番号１３；Ｈ−配列番号１４）。
【図４−２】[0025]図４は、推定上の可溶性ＭＩＣＡポリペプチドの例示的なアミノ酸配列を示す（Ａ−配列番号７；Ｂ−配列番号８；Ｃ−配列番号９；Ｄ−配列番号１０；Ｅ−配列番号１１；Ｆ−配列番号１２；Ｇ−配列番号１３；Ｈ−配列番号１４）。
【図５−１】[0026]図５は、推定上の可溶性ＭＩＣＢポリペプチドの例示的なアミノ酸配列を示す（Ａ−配列番号１５；Ｂ−配列番号１６；Ｃ−配列番号１７；Ｄ−配列番号１８；Ｅ−配列番号１９；Ｆ−配列番号２０；Ｇ−配列番号２１）。
【図５−２】[0026]図５は、推定上の可溶性ＭＩＣＢポリペプチドの例示的なアミノ酸配列を示す（Ａ−配列番号１５；Ｂ−配列番号１６；Ｃ−配列番号１７；Ｄ−配列番号１８；Ｅ−配列番号１９；Ｆ−配列番号２０；Ｇ−配列番号２１）。
【図６】[0027]図６は、アルファ−１、アルファ−２およびアルファ−３ドメインを含有するｓＭＩＣＡ／Ｂの推定上の構造、ならびにアルファ−３ドメイン中の配列ＱＱＷＧＤＶＬＰ（配列番号２２）の位置を示す。エピトープマッピング研究によって、内部配列ＧＤＶＬ（配列番号２３）が抗体５Ｃ９の結合に有意に影響を及ぼすことが示される。
【図７−１】[0028]図７Ａは、モノクローナル抗体５Ｃ９の可変軽鎖（太字、下線）とともに、リーダー配列（斜字）および定常領域の部分（影付き、斜字）のアミノ酸配列を示し；図７Ｂは、５Ｃ９の可変軽鎖配列ならびに対応するＣＤＲ  Ｌ１、ＣＤＲ  Ｌ２およびＣＤＲ  Ｌ３を示し；図７Ｃおよび図７Ｄは、それぞれ、図７Ａおよび図７Ｂのアミノ酸配列をコードする核酸配列を示し；図７Ｅは、モノクローナル抗体５Ｃ９の可変重鎖（太字、下線）とともに、リーダー配列（斜字）および定常領域の部分（影付き、斜字）のアミノ酸配列を示し；図７Ｆは、５Ｃ９の可変重鎖配列ならびに対応するＣＤＲ  Ｈ１、ＣＤＲ  Ｈ２およびＣＤＲ  Ｈ３を示し；図７Ｇおよび図７Ｈは、それぞれ、図７Ｅおよび図７Ｆのアミノ酸配列をコードする核酸配列を示す。
【図７−２】[0028]図７Ａは、モノクローナル抗体５Ｃ９の可変軽鎖（太字、下線）とともに、リーダー配列（斜字）および定常領域の部分（影付き、斜字）のアミノ酸配列を示し；図７Ｂは、５Ｃ９の可変軽鎖配列ならびに対応するＣＤＲ  Ｌ１、ＣＤＲ  Ｌ２およびＣＤＲ  Ｌ３を示し；図７Ｃおよび図７Ｄは、それぞれ、図７Ａおよび図７Ｂのアミノ酸配列をコードする核酸配列を示し；図７Ｅは、モノクローナル抗体５Ｃ９の可変重鎖（太字、下線）とともに、リーダー配列（斜字）および定常領域の部分（影付き、斜字）のアミノ酸配列を示し；図７Ｆは、５Ｃ９の可変重鎖配列ならびに対応するＣＤＲ  Ｈ１、ＣＤＲ  Ｈ２およびＣＤＲ  Ｈ３を示し；図７Ｇおよび図７Ｈは、それぞれ、図７Ｅおよび図７Ｆのアミノ酸配列をコードする核酸配列を示す。
【図８】[0029]図８は、免疫グロブリン重鎖（配列番号３２〜３５）および軽鎖配列（配列番号３６〜３９）の例示的なヒトフレームワーク領域を示す。対応するＣＤＲ領域の位置を太字−下線で示す。
【図９】[0030]図９は、細胞表面上に発現されるＭＩＣの細胞外ドメインに結合する陽性対照モノクローナル抗体（ｍＡｂ）（下部パネル）とは対照的に、モノクローナル抗体５Ｃ９がＭＩＣタンパク質を発現している細胞に結合しない（上部パネル）ことを示す、ＦＡＣＳ分析結果を提供する。アイソタイプ対照抗体は、ＭＩＣＡに結合しない抗体であり、そして抗体５Ｃ９と同じＩｇクラスにある。
【図１０】[0031]図１０は、前立腺癌細胞株ＤＵ−１４５によって産生されるｓＭＩＣＢに対するモノクローナル抗体５Ｃ９の結合のＥＬＩＳＡに基づく分析を提供する。
【図１１】[0032]図１１は、Ｒａｇ２−／−（ノックアウト）マウス内に異種移植された前立腺癌細胞株ＤＵ−１４５の増殖に対する、５Ｃ９抗体単独、マウスＩＬ−１２単独、または５Ｃ９抗体およびＩＬ−１２の組み合わせでの治療の影響を示す。
【図１２】[0033]図１２は、図１１に示す前立腺癌ＤＵ−１４５異種移植片を用いたｉｎ  ｖｉｖｏ研究に関する、第５８日に測定した腫瘍体積に関する比較データを示す。
【図１３】[0034]図１３は、図１１に示すような、前立腺癌ＤＵ−１４５を異種移植され、そして５Ｃ９抗体単独、ＩＬ−１２単独、ならびに５Ｃ９抗体およびＩＬ−１２の組み合わせで治療されたＲａｇ２−／−マウスにおけるｓＭＩＣＢの測定レベルを示す。ｓＭＩＣＢレベルを、移植後、研究第１０日、第３６日、第４３日、および第５３〜５８日に測定した。それぞれ、研究第３６日、第４３日、および第５３〜５８日の０．０３、０．００１および０．００２のＰ値（スチューデントのＴ検定、２テール）は、アイソタイプ対照に対する、ｍＡｂ  ５Ｃ９に加えてＩＬ−１２の組み合わせ治療群に関するものである。
【図１４】[0035]図１４は、図１１に示すような、前立腺癌ＤＵ−１４５異種移植片を接種され、そして５Ｃ９抗体単独、ＩＬ−１２単独、ならびに５Ｃ９抗体およびＩＬ−１２の組み合わせで治療されたＲａｇ２−／−マウスにおける脾臓の測定体積を示す。実施例５に記載するｉｎ  ｖｉｖｏ研究の終了時に、脾臓サイズを決定した。
【図１５】[0036]図１５は、前立腺癌ＤＵ−１４５異種移植片を接種され、そして５Ｃ９抗体単独、ＩＬ−１２単独、ならびに５Ｃ９抗体およびＩＬ−１２の組み合わせで治療された雄Ｒａｇ２−／−マウスの血清におけるインターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）のレベルを示す。第３６日、ＥＬＩＳＡによって、ＩＦＮ−γレベルを測定した。平均ＩＦＮ−ｇ＋／−ＳＤを示す。「＊」は、スチューデントのＴ検定を用いて計算された、Ｐ＜０．０５である。
【図１６】[0037]図１６は、前立腺癌ＤＵ−１４５異種移植片を接種され、そして５Ｃ９抗体単独、ＩＬ−１２単独、ならびに５Ｃ９抗体およびＩＬ−１２の組み合わせで治療された雄Ｒａｇ２−／−マウスの血清におけるインターフェロン−γ誘導性タンパク質１０（ＩＰ−１０）のレベルを示す。第１０日、第３６日、第４３日および第５８日に、ＥＬＩＳＡによって、ＩＰ−１０レベルを測定した。記号「＊」は、対照に比較し、そしてスチューデントのＴ検定を用いて計算された、Ｐ＜０．０５；「＊＊」は、Ｐ＜０．０１；「＊＊＊」は、Ｐ＜０．００１である。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
６．詳細な説明
[0038]本開示は、ＭＨＣクラスＩ鎖関連遺伝子Ａタンパク質（ＭＩＣＡ）および／またはＭＨＣクラスＩ鎖関連遺伝子Ｂタンパク質（ＭＩＣＢ）の可溶性型を認識する抗体、ＭＩＣタンパク質の上昇したレベルの存在によって特徴付けられる疾患を治療するためのこうした抗体の使用、ならびに可溶性ＭＩＣタンパク質の存在を検出するための診断試薬としての使用を提供する。
【００２５】
[0039]本明細書において、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」には、文脈が明らかに別に示さない限り、複数形が含まれる。さらに、「または」の使用は、別に示さない限り「および／または」を意味する。同様に、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ、ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ、ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ、ｉｎｃｌｕｄｅ、ｉｎｃｌｕｄｅｓ、およびｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」は交換可能であり、そして限定することを意図されない。多様な態様の説明が、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」を用いる場合、当業者は、いくつかの特定の例において、態様を、別に、用語「から本質的になる」または「からなる」を用いて記載してもよいことを理解するであろう。
【００２６】
[0040]ある範囲の値を提供する場合、文脈が別に明らかに示さない限り、下限の単位の十分の一まで、その範囲の上限および下限の間の、および言及される範囲の任意の他の言及されるかまたは介在する値である各介在値が、態様内に含まれることが理解される。これらのより小さい範囲の上限および下限は、独立に、より小さい範囲に含まれることも可能であるし、そしてまた、言及される範囲中の任意の特に排除される限界次第で、説明内に含まれることも可能である。言及される範囲が限界の一方または両方を含む場合、これらの含まれる限界のいずれかまたは両方を排除する範囲もまた、態様の一部として含まれる。
【００２７】
６．１  定義
[0041]別に定義しない限り、本明細書で用いるすべての技術的および科学的用語は、一般の当業者に一般的に理解されるのと同じ意味を有する。したがって、以下の用語は、以下の意味を有すると意図される。
【００２８】
[0042]「抗体」は、最も広い意味で用いられ、そして免疫グロブリンまたはその断片を指し、そして抗体の抗原結合断片または領域を含む任意のこうしたポリペプチドを含む。認識された免疫グロブリン遺伝子には、カッパ、ラムダ、アルファ、ガンマ、デルタ、イプシロンおよびミュー定常領域遺伝子、ならびに無数の免疫グロブリン可変領域遺伝子が含まれる。軽鎖は、一般的に、カッパまたはラムダのいずれかとして分類される。重鎖は、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、またはイプシロンとして分類され、これは次に、それぞれ、免疫グロブリンクラス、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥを定義する。免疫グロブリンクラスはまた、ＩｇＧサブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４；ならびにＩｇＡサブクラスＩｇＡ１およびＩｇＡ２とさらに分類されうる。該用語には、限定されるわけではないが、ポリクローナル、モノクローナル、単一特異性、多重特異性（例えば二重特異性抗体）、天然、ヒト化、ヒト、キメラ、合成、組換え、ハイブリッド、突然変異、移植、抗体断片（例えば全長抗体の部分、一般的にその抗原結合または可変領域、例えばＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ断片）、および望ましい生物学的活性を示す限り、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ生成抗体が含まれる。該用語にはまた、可変重鎖および可変軽鎖がともに連結されて（直接またはペプチドリンカーを通じて）、連続ポリペプチドを形成する、一本鎖抗体、例えば一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖまたはｓｃＦｖ）抗体も含まれる。
【００２９】
[0043]「単離（ｉｓｏｌａｔｅｄ）」は、天然状態からの変化、すなわち元来の環境から変化しそして／または除去されることを指す。例えば、ポリヌクレオチドまたはポリペプチド（例えば抗体）は、天然環境において天然に会合している物質から分離されている場合、単離されている。したがって、「単離抗体」は、天然環境の構成要素から分離され、そして／または回収されているものである。
【００３０】
[0044]「精製抗体」は、抗体が、例えば還元または非還元条件下のＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）またはキャピラリー電気泳動（ＣＥ）−ＳＤＳを用いた決定によって、調製物中の他の混入物質（例えば他のタンパク質）と比較した際、重量にして、少なくとも８０％またはそれより多く、少なくとも８５％またはそれより多く、少なくとも９０％またはそれより多く、少なくとも９５％またはそれより多い、抗体調製物を指す。
【００３１】
[0045]「細胞外ドメイン」および「外部ドメイン（ｅｃｔｏｄｏｍａｉｎ）」は、膜結合したタンパク質に関して用いた際、交換可能に用いられ、そして細胞の脂質膜の細胞外側で曝露されるタンパク質の部分を指す。いくつかの態様において、ＭＩＣＡの細胞外ドメインは、プロセシングされない全長ＭＩＣＡタンパク質のほぼ２４からほぼ２９９のアミノ酸残基由来であり、ここで、アミノ酸番号付けは、ＭＩＣＡ＊００１アレルの参照ＭＩＣＡタンパク質に基づく。いくつかの態様において、ＭＩＣＢの細胞外ドメインは、プロセシングされない全長ＭＩＣＢタンパク質のほぼ２４からほぼ２９９のアミノ酸残基由来であり、ここで、アミノ酸番号付けは、ＭＩＣＢ＊００１アレルの参照ＭＩＣＢタンパク質に基づく。ＭＩＣＡおよびＭＩＣＢの細胞外ドメインを特定するポリペプチド領域が、おおよそのものであり、そしていくつかの態様において、ほぼアミノ酸残基３０７まで伸張することも可能であることが理解されるべきである。ＭＩＣＡ＊００１アレルの例示的なプロセシングされない全長ＭＩＣＡタンパク質を図１Ａ（配列番号１）に示し、そしてＭＩＣＢ＊００１アレルの例示的なプロセシングされない全長ＭＩＣＢタンパク質を図１Ｂ（配列番号２）に示す。
【００３２】
[0046]「特異的に結合する」は、任意の結合剤、例えば抗体の背景において、抗原またはエピトープに、例えば高いアフィニティで特異的に結合し、そして他の関連しない抗原またはエピトープに有意には結合しない結合剤を指す。
【００３３】
[0047]「機能的」は、そのタイプの天然に存在する分子の天然の生物学的活性、または例えばリガンド分子に結合する能力によって判断されるような任意の特定の望ましい活性のいずれかを所持する分子の型を指す。「機能的」ポリペプチドの例には、抗原結合領域を通じて、抗原に特異的に結合する抗体が含まれる。
【００３４】
[0048]「ナチュラルキラー群２Ｄ」、「ＮＫＧ２Ｄ」および「ＮＫＧ２Ｄ受容体」は、多様なタイプの免疫細胞、特にＮＫ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞（例えばγδ  ＣＤ８＋  Ｔ細胞およびαβ  ＣＤ８＋  Ｔ細胞）およびいくつかのＣＤ４＋  Ｔ細胞上に見られる細胞表面分子を指す。ＮＫＧ２Ｄはまた、キラー細胞レクチン様受容体、サブファミリーＣ、メンバー４、またはＫＬＲＣ４とも称される。用語「ＮＫＧ２Ｄ」および「ＮＫＧ２Ｄ受容体」には、ヒトＮＫＧ２Ｄ受容体の変異体、アイソフォーム、および種相同体が含まれる（例えばＤｉｅｆｅｎｂａｃｈら，  ２００２，  Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ３（１２）：１１４２−９に記載されるアイソフォームを参照されたい）。ＮＫＧ２Ｄは、細胞外Ｃ型（すなわちＣａ２＋結合）レクチン様ドメインを含むが、Ｃａ２＋結合部位を欠く、ＩＩ型膜貫通タンパク質である。これは、アダプタータンパク質、例えば、ＤＡＰ１０またはＤＡＰ１２とヘテロ二量体を形成可能であり、そしてＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、ＵＬＢＰ４、ＵＬＢＰ５、およびＵＬＢＰ６を含むタンパク質リガンドを認識する。本明細書において、ＮＫＧ２Ｄに帰因する任意の活性、例えば細胞活性化、抗体による認識等はまた、ＮＫＧ２Ｄ包含複合体、例えばＮＫＧ２Ｄ−ＤＡＰ１０またはＮＫＧ２Ｄ−ＤＡＰ１２ヘテロ二量体を指すことも可能である。ＮＫＧ２Ｄ所持免疫エフェクター細胞、例えばＮＫ細胞と、ＮＫＧ２Ｄリガンド、例えばＭＩＣＡまたはＭＩＣＢを発現する、ストレスを受けた細胞または疾患細胞との相互作用は、ストレスを受けた細胞／疾患細胞に対する細胞免疫反応を増進させる。
【００３５】
[0049]「ＭＩＣＡ」は、ＭＨＣクラスＩ鎖関連遺伝子Ａタンパク質（ＭＩＣＡ）を指し、ヒトＭＩＣＡの変異体、アイソフォーム、および種相同体が含まれる。ＨＬＡクラスＩタンパク質とは異なり、ＭＩＣＡタンパク質は、β２ミクログロブリンと会合することは知られない。ＭＩＣＡ発現は、一般的に、ストレス誘導性であり、そしてＭＩＣＡは、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）受容体ＮＫＧ２Ｄのリガンドとして働く。ＭＩＣＡタンパク質は、３つの細胞外Ｉｇ様ドメイン、すなわちアルファ−１、アルファ−２およびアルファ−３、膜貫通ドメイン、ならびに細胞内ドメインを含む。該タンパク質は、胃上皮の細胞、内皮細胞、線維芽細胞、角化細胞および単球において発現される。ＭＩＣＡの例示的な配列は、本開示の図１Ａ（配列番号１）に提示するＮＣＢＩ寄託番号ＮＰ＿０００２３８．１（アレルＭＩＣＡ＊００１）、およびＮＰ＿００１１７０９９０．１（アレルＭＩＣＡ＊００８．０１）として入手可能である。他の例示的なＭＩＣＡ配列は、本明細書に援用される米国特許公報２０１１０３１１５６１に見出されうる。
【００３６】
[0050]「ＭＩＣＢ」は、ＭＨＣクラスＩ鎖関連遺伝子Ｂタンパク質（ＭＩＣＢ）を指し、ヒトＭＩＣＢの変異体、アイソフォーム、および種相同体が含まれる。ＨＬＡクラスＩタンパク質とは異なり、ＭＩＣＢタンパク質は、β２ミクログロブリンと会合することは知られない。ＭＩＣＢ発現は、一般的に、ストレス誘導性であり、そしてＭＩＣＢは、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）受容体ＮＫＧ２Ｄのリガンドとして働く。ＭＩＣＢは、ＭＩＣＡにアミノ酸レベルで約８４％配列同一性を有する。ＭＩＣＢタンパク質は、３つの細胞外Ｉｇ様ドメイン、すなわちアルファ−１、アルファ−２およびアルファ−３、膜貫通ドメイン、ならびに細胞内ドメインを含む。該タンパク質は、胃上皮、内皮細胞、線維芽細胞、角化細胞および単球において発現される。ＭＩＣＢの例示的な配列は、本開示の図１Ｂ（配列番号２）に提示するＵｎｉＰｒｏｔＫＢ寄託番号Ｑ２９９８０．１として入手可能である。他の例示的なＭＩＣＢ配列は、本明細書に援用される米国特許公報２０１１０３１１５６１に見出されうる。
【００３７】
[0051]「可溶性ＭＩＣＡ」または「ｓＭＩＣＡ」は、アルファ−１、アルファ−２、およびアルファ−３ドメインを含有するが、細胞に付着または係留されておらず、そしてしたがって細胞外に存在する、ＭＩＣＡタンパク質を指す。一般的に、可溶性ＭＩＣＡは、膜貫通ドメインを欠く。いくつかの態様において、ｓＭＩＣＡは、ＮＫＧ２Ｄ受容体への結合において機能性である。本明細書において、ｓＭＩＣＡは、タンパク質分解により細胞から放出される型を含み、こうした型は、タンパク質分解プロセスの非特異性のため、多様でありうる。例示的なｓＭＩＣＡは、図１Ａ（配列番号１）に提示するプロセシングされていない全長ＭＩＣＡのほぼ２４からほぼ２９７のアミノ酸残基を含有するポリペプチドを含む。また、推定上の可溶性ＭＩＣＡタンパク質の例示的なアミノ酸配列を、図４（配列番号７〜１４）に示す。
【００３８】
[0052]「可溶性ＭＩＣＢ」または「ｓＭＩＣＢ」は、ＭＩＣＢタンパク質のアルファ−１、アルファ−２、およびアルファ−３ドメインを含有するが、細胞に付着または係留されておらず、そしてしたがって細胞外に存在する、ＭＩＣＢタンパク質を指す。一般的に、可溶性ＭＩＣＢは、膜貫通ドメインを欠く。本明細書において、ｓＭＩＣＢは、タンパク質分解により細胞から放出される型を含み、こうした型は、タンパク質分解プロセスの非特異性のため、多様でありうる。例示的なｓＭＩＣＢは、図１Ｂ（配列番号２）に提示するプロセシングされていない全長ＭＩＣＢのほぼ２４からほぼ２９７のアミノ酸残基のポリペプチドを含む。また、推定上の可溶性ＭＩＣＡタンパク質の例示的なアミノ酸配列を、図５（配列番号１５〜２１）に示す。
【００３９】
[0053]「脱落性（ｓｈｅｄｄｉｎｇ）」または「脱落した（ｓｈｅｄ）」は、ＮＫＧ２Ｄリガンド、例えばＭＩＣＡおよびＭＩＣＢに関して、ＮＫＧ２Ｄリガンドを発現する細胞の細胞表面からの、ＮＫＧ２Ｄリガンドの可溶性細胞外ドメイン断片の放出を指す。こうした脱落は、細胞表面ＮＫＧ２Ｄリガンドのタンパク質分解的切断によって引き起こされ、細胞表面からの細胞外ドメイン断片の放出を生じることも可能である。いくつかの態様において、可溶性細胞外ドメインまたはその断片は、別の転写物によってコードされてもよい。
【００４０】
[0054]「全長ＭＩＣ」は、アルファ−１、アルファ−２、およびアルファ−３ドメイン；膜貫通ドメイン；ならびに細胞内ドメインを含有するＭＩＣタンパク質を指す。「プロセシングされていない全長ＭＩＣタンパク質」は、翻訳後にプロセシングされていないＭＩＣタンパク質を指す一方、「全長成熟ＭＩＣタンパク質」または「プロセシングされた全長ＭＩＣタンパク質」は、ＭＩＣタンパク質のプロセシングされた型、例えばリーダーペプチドが除去されているＭＩＣタンパク質を指す。プロセシングされていない全長、およびプロセシングされた全長成熟タンパク質は、多型の存在のため、長さが多様でありうる。いくつかの態様において、プロセシングされていない全体の長さ（リーダー配列を含有する）は、ＭＩＣＡに関しては約３３２〜約３８８アミノ酸の範囲である可能性があり、そしていくつかの態様において、ＭＩＣＢに関しては約３８３アミノ酸である。いくつかの態様において、プロセシングされていない全長ＭＩＣタンパク質は、約３３２〜約３８８アミノ酸の範囲である可能性がある。プロセシングされたＭＩＣタンパク質（リーダー配列が除去されている）は、ＭＩＣＡに関しては約３０９〜約３６５アミノ酸の範囲である可能性があり、そしてＭＩＣＢに関しては約３６０アミノ酸である。例示的なプロセシングされていない全長ＭＩＣタンパク質を、ＭＩＣＡに関して図１Ａ（配列番号１）に示し、そしてＭＩＣＢに関して図１Ｂ（配列番号２）に示す。他の例示的な全長ＭＩＣＡおよびＭＩＣＢ配列は、本明細書に援用される米国特許公開公報２０１１０３１１５６１および国際特許公開公報ＷＯ２０１３１１７６４７に見出されうる。
【００４１】
[0055]「膜結合」は、タンパク質またはポリペプチドの背景において、少なくとも膜貫通ドメインまたは他の膜付着ドメインに付着した細胞外ドメインまたはその一部を含有するタンパク質またはポリペプチドを指す。膜結合型には、細胞内ドメインが含まれてもまたは含まれなくてもよい。
【００４２】
[0056]ＭＩＣタンパク質（例えばＭＩＣＡおよびＭＩＣＢ）の「アルファ−１ドメイン」は、ＭＩＣＡおよびＭＩＣＢタンパク質の細胞外ドメイン上のアミノ末端近位Ｉｇ様領域（すなわちＧ様ドメイン）を指す（例えば、本明細書に援用される、ＦｒｉｇｏｕｌおよびＬｅｆｒａｎｃ，  ２００５，  Ｒｅｃｅｎｔ  Ｒｅｓ  Ｄｅｖｅｌ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅｔ．  ３：９５−１４５を参照されたい）。ＭＩＣＡの例示的なアルファ−１ドメインは、ＭＩＣＡ＊００１アレルのプロセシングされていないＭＩＣＡタンパク質のほぼ２４からほぼ１０８のアミノ酸残基を含有する。ＭＩＣＢの例示的なアルファ−１ドメインは、ＭＩＣＢ＊００１アレルのプロセシングされていないＭＩＣＢタンパク質のほぼ２４からほぼ１０８のアミノ酸残基を含有する。
【００４３】
[0057]ＭＩＣタンパク質（例えばＭＩＣＡおよびＭＩＣＢ）の「アルファ−２ドメイン」は、ＭＩＣＡおよびＭＩＣＢタンパク質の細胞外ドメイン上の第二のＩｇ様領域（すなわちＧ様ドメイン）を指す（例えば、本明細書に援用される、ＦｒｉｇｏｕｌおよびＬｅｆｒａｎｃ，  ２００５，  Ｒｅｃｅｎｔ  Ｒｅｓ  Ｄｅｖｅｌ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅｔ．  ３：９５−１４５を参照されたい）。ＭＩＣＡの例示的なアルファ−２ドメインは、ＭＩＣＡ＊００１アレルのプロセシングされていないＭＩＣＡタンパク質のほぼ１０９からほぼ２０１のアミノ酸残基を含有する。ＭＩＣＢタンパク質の例示的なアルファ−２ドメインは、ＭＩＣＢ＊００１アレルのプロセシングされていないＭＩＣＢタンパク質のほぼ１０９からほぼ２０１のアミノ酸残基を含有する。
【００４４】
[0058]ＭＩＣタンパク質（例えばＭＩＣＡおよびＭＩＣＢ）の「アルファ−３ドメイン」は、ＭＩＣＡおよびＭＩＣＢタンパク質の細胞外ドメイン上の、Ｃ様領域とも称される膜貫通近位領域を指す（例えば、本明細書に援用される、ＦｒｉｇｏｕｌおよびＬｅｆｒａｎｃ，  ２００５，  Ｒｅｃｅｎｔ  Ｒｅｓ  Ｄｅｖｅｌ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅｔ．  ３：９５−１４５を参照されたい）。いくつかの態様において、アルファ−３ドメインは、アルファ−３ドメイン中の２つのシステイン残基間に形成されるジスルフィド結合を含有する。ＭＩＣＡの例示的なアルファ−３ドメインは、ＭＩＣＡ＊００１アレルのプロセシングされていないＭＩＣＡタンパク質のほぼ２０５からほぼ２９６またはほぼ２０５からほぼ２９７のアミノ酸残基を含有する。ＭＩＣＢタンパク質の例示的なアルファ−３ドメインは、ＭＩＣＢ＊００１アレルのプロセシングされていないＭＩＣＢタンパク質のほぼ２０５からほぼ２９６またはほぼ２０５からほぼ２９７のアミノ酸残基を含有する。
【００４５】
[0059]「抗原」は、特定の抗体に結合可能な物質、例えば限定なしに、特定のペプチド、タンパク質、核酸、または炭水化物を指す。
[0060]「エピトープ」または「抗原決定基」は、特定の抗体によって認識され、そして特異的に結合されることが可能な抗原の部分を指す。抗原がポリペプチドである場合、エピトープは、連続アミノ酸および／またはタンパク質の三次フォールディングによって並ぶ非連続アミノ酸から形成可能である。直鎖エピトープは、アミノ酸直鎖配列上の連続アミノ酸から形成されるエピトープである。直鎖エピトープは、タンパク質変性の際に保持されうる。コンホメーションまたは構造エピトープは、連続しておらず、そしてしたがって、例えば二次、三次および／または四次構造を通じて、分子のフォールディングによって互いに近接するようになる、アミノ酸の直鎖配列の別個の部分で構成される。コンホメーションまたは構造エピトープは、タンパク質変性に際して失われうる。いくつかの態様において、エピトープは、ユニークな空間的コンホメーションの、少なくとも３個、そしてより一般的には、少なくとも５個または８〜１０個のアミノ酸を含むことも可能である。したがって、本明細書に用いるようなエピトープは、抗体が、特定されたエピトープの部分にのみ結合する、特定されたエピトープを含む。タンパク質上のエピトープの位置をマッピングし、そして性質決定するための多くの方法が当該技術分野に知られ、これには、抗体−抗原複合体の結晶構造の解析、競合アッセイ、遺伝子断片発現アッセイ、突然変異アッセイ、および合成ペプチドに基づくアッセイが含まれ、例えば、Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ中，  第１１章，  ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ監修，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  ニューヨーク州コールドスプリングハーバー（１９９９）に記載される通りである。
【００４６】
[0061]「多型性」または「多型」は、遺伝子またはその一部の２またはそれより多い型の出現を指す。少なくとも２つの異なる型、すなわち２つの異なるヌクレオチド配列がある遺伝子の部分を、「遺伝子の多型領域」と称する。多型領域は、異なるアレルにおいてその同一性が異なる、単一ヌクレオチドであることも可能である。多型領域はまた、長さ数ヌクレオチドであることも可能である。多型タンパク質は、コードする遺伝子配列中の多型による、タンパク質の２つまたはそれより多い型の出現を指す。
【００４７】
[0062]「アレル」は、ＤＮＡの遺伝子配列に沿って、塩基対の特定の配列のセグメントによって占められる位である、遺伝子座の特定の遺伝子配列を指す。
[0063]「タンパク質」、「ポリペプチド」、または「ペプチド」は、長さまたは翻訳後修飾（例えばグリコシル化、リン酸化、脂質化、ミリスチル化、ユビキチン化等）に関わらず、アミド結合によって共有結合される、少なくとも２つのアミノ酸のポリマーを示す。この定義内に含まれるのは、Ｄ−およびＬ−アミノ酸、ならびにＤ−およびＬ−アミノ酸の混合物である。別に明記しない限り、タンパク質、ポリペプチド、またはペプチドのアミノ酸配列は、本明細書において、慣用的なＮ末端からＣ末端の配向で示される。
【００４８】
[0064]「ポリヌクレオチド」および「核酸」は、本明細書において交換可能に用いられ、そしてともに共有結合された２またはそれより多いヌクレオシドを指す。ポリヌクレオチドは、完全にリボヌクレオシドで構成されるもの（すなわちＲＮＡ）、完全に２’デオキシリボヌクレオチドで構成されるもの（すなわちＤＮＡ）、またはリボおよび２’デオキシリボヌクレオシドの混合物であってもよい。ヌクレオシドは、典型的には、糖−リン酸連結（糖−リン酸主鎖）でともに連結されるが、ポリヌクレオチドには、１つまたはそれより多い非標準的連結が含まれてもよい。こうした非標準的連結の限定されない例には、ホスホロアミデート、ホスホロチオエート、およびアミドが含まれる（例えば、Ｅｃｋｓｔｅｉｎ，  Ｆ．，  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：  Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ  （１９９２）を参照されたい）。
【００４９】
[0065]「機能可能であるように連結された」または「機能可能であるように関連する」は、２つまたはそれより多いポリヌクレオチド配列が、その通常の機能を可能にするように配置されている状況を指す。例えば、プロモーターがコード配列の発現を制御可能であるならば、該プロモーターは該コード配列に機能可能であるように連結されている。また、他の制御配列、例えばエンハンサー、リボソーム結合または進入部位、終結シグナル、ポリアデニル化配列、およびシグナル配列を機能可能であるように連結して、転写または翻訳におけるその適切な機能を可能にする。
【００５０】
[0066]「アミノ酸位」および「アミノ酸残基」は、交換可能に用いられ、ポリペプチド鎖中のアミノ酸の位を指す。いくつかの態様において、アミノ酸残基は、「ＸＮ」として表すことも可能であり、ここでＸはアミノ酸を示し、そしてＮはポリペプチド鎖中のその位を示す。２つまたはそれより多い変動、例えば多型が同じアミノ酸位で生じる場合、変異は、変異を分離する「／」で示されることも可能である。特定の残基位で、１アミノ酸残基の別のアミノ酸残基での置換は、ＸＮＹと示されることも可能であり、ここでＸは元来のアミノ酸を示し、Ｎはポリペプチド鎖中の位を示し、そしてＹは交換または置換アミノ酸を示す。より大きなポリペプチドまたはタンパク質に関してポリペプチドまたはペプチド部分を記載するように該用語を用いる場合、言及される最初の数字は、ポリペプチドまたはペプチドが開始する位（すなわちアミノ末端）を示し、そして第二の言及される数字は、ポリペプチドまたはペプチドが終わる位（すなわちカルボキシ末端）を指す。例えば、プロセシングされた全長ＭＩＣＡのアミノ酸位１９０〜１９６由来のペプチドは、アミノ末端がプロセシングされた全長ＭＩＣＡタンパク質の１９０位であり、そしてカルボキシ末端が１９６位であるペプチドを指す。
【００５１】
[0067]「ポリクローナル」抗体は、同じまたは異なる抗原上のいくつかの異なる特異的抗原決定基に結合するかまたはこれと反応することが可能な、異なる抗体分子の組成物を指す。ポリクローナル抗体はまた、「モノクローナル抗体のカクテル」と見なすことも可能である。ポリクローナル抗体は、任意の起源、例えばキメラ、ヒト化、または完全ヒトであることも可能である。
【００５２】
[0068]「モノクローナル抗体」は、実質的に均質な抗体集団から得られる抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、少量で存在しうる、ありうる天然存在突然変異を除いて同一である。各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して向けられる。いくつかの態様において、本開示にしたがって用いるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒら，  １９７５，  Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５−７に記載されるハイブリドーマ法によって作製可能であるし、または組換えＤＮＡ法によって作製可能である。モノクローナル抗体はまた、例えばファージ抗体ライブラリーから単離されることも可能である。
【００５３】
[0069]「キメラ抗体」は、少なくとも２つの異なる供給源由来の構成要素で構成される抗体を指す。キメラ抗体は、別の分子、例えば第二の種に由来する抗体部分に融合した、第一の種に由来する抗体部分を含んでもよい。いくつかの態様において、キメラ抗体は、ヒト由来の抗体部分に融合した、非ヒト動物、例えばマウスまたはラット由来の抗体部分を含む。いくつかの態様において、キメラ抗体は、ヒト由来の抗体の定常領域に融合した、非ヒト動物由来の抗体の可変領域のすべてまたは部分を含む。
【００５４】
[0070]「ヒト化抗体」は、ヒトフレームワーク配列上に移植された、ドナー抗体結合特異性、例えばドナー抗体、例えばマウスモノクローナル抗体、のＣＤＲ領域を含む抗体を指す。「ヒト化抗体」は、典型的には、ドナー抗体と同じエピトープに結合する。
【００５５】
[0071]「全長ヒト抗体」または「ヒト抗体」は、ヒト免疫グロブリンタンパク質配列のみを含む抗体を指す。全長ヒト抗体は、非ヒト細胞、例えばマウスにおいて、マウス細胞において、またはマウス細胞由来のハイブリドーマにおいて産生された際、ネズミ炭水化物鎖を含有する可能性もある。
【００５６】
[0072]「抗体断片」または「抗原結合部分」は、全長抗体の部分、一般的には、その抗原結合または可変ドメインを指す。抗体断片の例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ断片；ディアボディ；直鎖抗体；一本鎖抗体；ならびに２つまたはそれより多い異なる抗原に結合する抗体断片から形成される多重特異性抗体が含まれる。増加した結合化学量論または多様な結合価（２、３または４）を含有する抗体断片のいくつかの例には、トリアボディ、三価抗体およびトリマーボディ、テトラボディ、ｔａｎｄＡｂ（登録商標）、ジ−ディアボディおよび（ｓｃ（Ｆｖ）２）２分子が含まれ、そしてすべて、可溶性抗原に対して、高アフィニティおよびアビディティで結合する結合剤として使用可能である（例えばＣｕｅｓｔａら，  ２０１０，  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  ２８：３５５−６２）。
【００５７】
[0073]「一本鎖Ｆｖ」または「ｓＦｖ」抗体断片は、抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含み、ここでこれらのドメインは、単一ポリペプチド鎖中に存在する。一般的に、Ｆｖポリペプチドは、ＶＨおよびＶＬドメイン間にポリペプチドリンカーをさらに含み、該リンカーは、ｓＦｖが抗原結合に望ましい構造を形成することを可能にする。ｓＦｖの概説に関しては、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ中，  Ｖｏｌ．  １１３，  ｐｐ．  ２６９−３１５，  ＲｏｓｅｎｂｅｒｇおよびＭｏｏｒｅ監修，  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，  ニューヨーク（１９９４）を参照されたい。
【００５８】
[0074]「ディアボディ」は、２つの抗原結合部位を持つ小さい抗体断片を指し、これは、同じポリペプチド鎖中で軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に連結された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む（ＶＨ−ＶＬ）。同じ鎖上の２つのドメイン間での対形成を可能にするには短いリンカーを用いることによって、ドメインは、別の鎖の相補ドメインと対形成することを強いられ、そして２つの抗原結合部位を生成する。
【００５９】
[0075]「抗原結合ドメイン」または「抗原結合部分」は、抗原の一部またはすべてに特異的に結合し、そして相補的である、抗原結合分子の領域または部分を指す。いくつかの態様において、抗原結合ドメインは、特に抗原が大きい場合、抗原の特定の部分（例えばエピトープ）にのみ結合可能である。抗原結合ドメインは、１つまたはそれより多い抗体可変領域、特に抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）および抗体重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびに特にＶＨおよびＶＬ鎖各々の上の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むことも可能である。
【００６０】
[0076]「可変領域」および「可変ドメイン」は、交換可能に用いられ、特定の抗体各々に結合および特異性特性を与えるポリペプチド領域を指す。抗体重鎖中の可変領域は「ＶＨ」と称され、一方、抗体軽鎖中の可変領域は「ＶＬ」と称される。配列中の主要可変性は、一般的に、ＶＬ領域およびＶＨ領域各々において、「超可変領域」または「ＣＤＲ」と称される可変ドメインの３つの領域中に位置し、そして抗原結合部位を形成する。可変ドメインのより保存された部分は、フレームワーク領域ＦＲと称される。
【００６１】
[0077]「相補性決定領域」および「ＣＤＲ」は、交換可能に用いられて、抗体分子の重鎖および軽鎖ポリペプチドの可変領域内に見られる非連続抗原結合領域を指す。いくつかの態様において、ＣＤＲはまた、「超可変領域」とも記載される。一般的に、天然存在抗体は、６つのＣＤＲを含み、３つはＶＨ中（ＣＤＲ  Ｈ１またはＨ１；ＣＤＲ  Ｈ２またはＨ２；およびＣＤＲ  Ｈ３またはＨ３と称される）、そして３つはＶＬ中（ＣＤＲ  Ｌ１またはＬ１；ＣＤＲ  Ｌ２またはＬ２；およびＣＤＲ  Ｌ３またはＬ３と称される）にある。ＣＤＲドメインは、多様なアプローチを用いて描写されてきており、そして異なるアプローチによって特定されるＣＤＲが本明細書に含まれることが理解されるものとする。ＣＤＲを特定するための「Ｋａｂａｔ」アプローチは、配列可変性を用い、そして最も一般的に用いられる（Ｋａｂａｔら，  １９９１，  “Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  第５版”  ＮＩＨ  １：６８８−９６）。「Ｃｈｏｔｈｉａ」は、構造ループの位置を用いる（ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ，  １９８７，  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．  １９６：９０１−１７）。「ＡｂＭ」によって特定されるＣＤＲは、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａアプローチの間の妥協であり、そしてＯｘｆｏｒｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアを用いて描写されうる（Ｍａｒｔｉｎら，  １９８９，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．  ８６：９２６８を参照されたい；また、ワールドワイドウェブｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆ−ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓも参照されたい）。「接触」ＣＤＲ描写は、既知の抗体−抗原結晶構造の分析に基づく（例えば、ＭａｃＣａｌｌｕｍら，  １９９６，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２６２，  ７３２−４５を参照されたい）。これらの方法によって描写されるＣＤＲには、典型的には、互いに比較した際、アミノ酸残基の重複またはサブセットが含まれる。一般的に、各アプローチを用いてＣＤＲを特定する残基は、以下の通りである：
【００６２】
【表１】
2020502042.tif 000003
【００６３】
[0078]特定のＣＤＲを含む正確な残基数は、ＣＤＲの配列およびサイズに応じて多様であることが理解されるものとし、そして当業者は、抗体の可変領域のアミノ酸配列が与えられれば、どの残基が特定のＣＤＲを構成するかをルーチンに決定可能である。
【００６４】
[0079]上記のＫａｂａｔはまた、任意の抗体に適用可能な可変ドメイン配列に関する番号付け系も特定した。当業者は、「Ｋａｂａｔ番号付け」のこの系を、任意の可変ドメイン配列に割り当てることも可能である。したがって、別に明記しない限り、抗体または抗原結合断片における特定のアミノ酸残基の番号への言及は、Ｋａｂａｔ番号付け系にしたがう。
【００６５】
[0080]「フレームワーク領域」または「ＦＲ領域」は、可変領域の一部であるが、ＣＤＲの一部ではないアミノ酸残基を指す（例えばＫａｂａｔ、ＣｈｏｔｈｉａまたはＡｂＭ定義を用いる）。抗体の可変領域は、一般的に、４つのＦＲ領域：ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４を含有する。したがって、ＶＬ領域中のＦＲ領域は、以下の配列：ＦＲＬ１−ＣＤＲ  Ｌ１−ＦＲＬ２−ＣＤＲ  Ｌ２−ＦＲＬ３−ＣＤＲ  Ｌ３−ＦＲＬ４で現れ、一方、ＶＨ領域中のＦＲ領域は、以下の配列：  ＦＲ１Ｈ−ＣＤＲ  Ｈ１−ＦＲＨ２−ＣＤＲ  Ｈ２−ＦＲＨ３−ＣＤＲ  Ｈ３−ＦＲＨ４で現れる。
【００６６】
[0081]「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨフレームワーク配列の選択において、最も一般的に存在するアミノ酸残基に相当するフレームワークを指す。一般的に、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループからである。いくつかの態様において、サブグループ配列は、Ｋａｂａｔら、上記に提示されるサブグループである。いくつかの態様において、ＶＬに関して、サブグループは、Ｋａｂａｔら、上記に記載されるサブグループ・カッパである。いくつかの態様において、ＶＨに関して、サブグループは、Ｋａｂａｔら、上記に記載されるサブグループＩＩＩである。
【００６７】
[0082]「定常領域」または「定常ドメイン」は、可変領域とは異なる免疫グロブリン軽鎖または重鎖の領域を指す。重鎖の定常ドメインは、一般的に：ＣＨ１ドメイン、ヒンジ（例えば、上部、中央、および／または下部ヒンジ領域）、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメインの少なくとも１つを含む。いくつかの態様において、抗体はさらなる定常ドメインＣＨ４および／またはＣＨ５を有してもよい。いくつかの態様において、本明細書に記載する抗体は、ＣＨ１ドメインを含有するポリペプチド；ＣＨ１ドメイン、ヒンジドメインの少なくとも一部、およびＣＨ２ドメインを含むポリペプチド；ＣＨ１ドメインおよびＣＨ３ドメインを含むポリペプチド；ＣＨ１ドメイン、ヒンジドメインの少なくとも一部、およびＣＨ３ドメインを含むポリペプチド、またはＣＨ１ドメイン、ヒンジドメインの少なくとも一部、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメインを含むポリペプチドを含む。いくつかの態様において、抗体は、ＣＨ３ドメインを含むポリペプチドを含む。軽鎖の定常ドメインはＣＬと称され、そしていくつかの態様において、カッパまたはラムダ定常領域であることも可能である。しかし、一般の当業者によって、これらの定常ドメイン（例えば重鎖または軽鎖）は、天然存在免疫グロブリン分子とはアミノ酸配列が多様であるように、修飾されていることも可能であることが理解されるであろう。
【００６８】
[0083]「Ｆｃ領域」または「Ｆｃ部分」は、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を指す。Ｆｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域または非天然存在変異体Ｆｃ領域であってもよい。一般的に、免疫グロブリンのＦｃ領域は、定常ドメインＣＨ２およびＣＨ３を含む。Ｆｃ領域の境界は多様であることが可能であるが、いくつかの態様において、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、そのＣ２２６位のアミノ酸残基から、またはＰ２３０から、カルボキシ末端に渡るように特定されることも可能である。いくつかの態様において、ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域の「ＣＨ２ドメイン」はまた、「Ｃγ２」と示され、一般的に、ほぼアミノ酸残基２３１からほぼアミノ酸残基３４０に渡る。いくつかの態様において、Ｎ連結炭水化物鎖は、損なわれていない（ｉｎｔａｃｔ）天然ＩｇＧ分子の２つのＣＨ２ドメイン間に挿入されていてもよい。いくつかの態様において、ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域のＣＨ３ドメインは、ＣＨ２ドメインよりＣ末端の残基を含み、例えばＦｃ領域のほぼアミノ酸残基３４１からほぼアミノ酸残基４４７である。「機能性Ｆｃ領域」は、天然配列Ｆｃ領域の「エフェクター機能」を所持する。例示的なＦｃ「エフェクター機能」には、とりわけ、Ｃｌｑ結合；補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞仲介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）；食作用；細胞表面受容体の下方制御（例えばＬＴ受容体）等が含まれる。こうしたエフェクター機能は、一般的に、Ｆｃ領域が結合ドメイン（例えば抗体可変ドメイン）と組み合わせられることを必要とし、そして当該技術分野に知られる多様なアッセイを用いて評価可能である。
【００６９】
[0084]「結合アフィニティ」は、リガンドおよびその結合パートナーの間の非共有相互作用の総計の強度を指す。いくつかの態様において、結合アフィニティは、リガンドおよび結合パートナーの間の一対一相互作用を反映する本質的なアフィニティである。アフィニティは、一般的に、平衡会合（ＫＡ）または解離定数（ＫＤ）に関して表され、これらは次に、解離（ｋｏｆｆ）および会合速度定数（ｋｏｎ）の反比である。
【００７０】
[0085]「配列同一性パーセント（％）」および「配列相同性の割合」は、本明細書において交換可能に用いられ、ポリヌクレオチドまたはポリペプチド間の比較を指し、そして比較ウィンドウに渡る２つの最適に整列された配列を比較することによって決定され、ここで比較ウィンドウ中のポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列の部分は、２つの配列の最適な整列のため、参照配列に比較した際にギャップを含むことも可能である。割合は、同一の核酸塩基またはアミノ酸残基が両方の配列で生じる位の数を決定して、マッチした位の数を得て、マッチした位の数を比較ウィンドウ中の位の総数で割り、そして結果に１００を乗じて、配列同一性の割合を得ることによって計算可能である。あるいは、割合は、同一の核酸塩基またはアミノ酸残基のいずれかが、両方の配列で生じるか、あるいは核酸塩基またはアミノ酸残基を、ギャップを含めて整列させて、マッチした位の数を得て、マッチした位の数を比較ウィンドウ中の位の総数で割り、そして結果に１００を乗じて、配列同一性の割合を得ることによって計算可能である。当業者は、２つの配列を整列させるために利用可能な多くの確立されたアルゴリズムがあることを認識する。比較のための配列の最適な整列は、例えばＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ，  １９８１，  Ａｄｖ  Ａｐｐｌ  Ｍａｔｈ．  ２：４８２の局所相同アルゴリズムによって、ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ，  １９７０，  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．  ４８：４４３の相同性整列アルゴリズムによって、ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ，  １９８８，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．  ８５：２４４４−８の類似性に関する検索法によって、そして特に、これらのアルゴリズムのコンピュータ化実行（ｃｏｍｐｐｕｔｅｒｉｚｅｄ  ｉｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎｓ）（例えば、ＢＬＡＳＴ、ＡＬＩＧＮ、ＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ；例えばＭｏｕｎｔ，  Ｄ．Ｗ．，  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ：  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ，  第２版，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  ニューヨーク州コールドスプリングハーバー（２０１３）を参照されたい）によって、実行可能である。
【００７１】
[0086]配列同一性パーセントおよび配列類似性パーセントを決定するために適したアルゴリズムの例は、公的に利用可能なＢＬＡＳＴおよびＢＬＡＳＴ  ２．０、ＦＡＳＴＤＢ、またはＡＬＩＧＮアルゴリズムである（例えばＮＣＢＩ：  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）。当業者は、配列を整列させるために適したパラメータを決定可能である。例えば、ＢＬＡＳＴＮプログラム（ヌクレオチド配列に関して）は、１１のワード長（Ｗ）、１０の期待値（Ｅ）、Ｍ＝５、Ｎ＝−４、および両方の鎖の比較をデフォルトとして使用可能である。ＢＬＡＳＴＰを用いたアミノ酸配列の比較は、３のワード長（Ｗ）、１０の期待値（Ｅ）、およびＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックス（ＨｅｎｉｋｏｆｆおよびＨｅｎｉｋｏｆｆ，  １９８９，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．  ８９：１０９１５−９を参照されたい）をデフォルトとして使用可能である。
【００７２】
[0087]「アミノ酸置換」は、ポリペプチド中の１つのアミノ酸の別のアミノ酸での置換を指す。「保存的アミノ酸置換」は、類似の側鎖を有する残基の交換可能性を指し、そしてしたがって、典型的には、ポリペプチド中のアミノ酸の、アミノ酸の同じまたは類似の定義されるクラス内のアミノ酸での置換を伴う。例えば、そして限定なしに、脂肪族側鎖を含むアミノ酸は、別の脂肪族アミノ酸、例えばアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、およびメチオニンで置換可能であり；ヒドロキシル側鎖を持つアミノ酸は、ヒドロキシル側鎖を持つ別のアミノ酸、例えばセリンおよびスレオニンで置換され；芳香族側鎖を有するアミノ酸は、芳香族側鎖を有する別のアミノ酸、例えばフェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、およびヒスチジンで置換され；塩基性側鎖を持つアミノ酸は、塩基性側鎖を持つ別のアミノ酸、例えば、リジン、アルギニン、およびヒスチジンで置換され；酸性側鎖を持つアミノ酸は、酸性側鎖を持つ別のアミノ酸、例えばアスパラギン酸またはグルタミン酸で置換され；そして疎水性または親水性アミノ酸は、それぞれ、別の疎水性または親水性アミノ酸で置換される。
【００７３】
[0088]「アミノ酸挿入」は、あらかじめ決定されたアミノ酸配列内への少なくとも１つのアミノ酸の取り込みを指す。挿入は、１個または２個のアミノ酸残基の挿入であってもよい；が、約３個〜約５個、あるいは最大約１０個またはそれより多いアミノ酸残基のより大きな挿入が本明細書に意図される。
【００７４】
[0089]「アミノ酸欠失」は、あらかじめ決定されたアミノ酸配列からの１個またはそれより多いアミノ酸残基の除去を指す。欠失は、１個または２個のアミノ酸残基の除去であってもよい；が、約３個〜約５個、あるいは最大約１０個またはそれより多いアミノ酸残基のより大きな欠失が本明細書に意図される。
【００７５】
[0090]「同定する」は、特定された特性の存在または非存在に関して決定することを指す。プロセスには、多様な特性を測定するかまたは検出することが含まれてもよく、エピトープへの結合または結合の欠如が含まれてもよい。
【００７６】
[0091]「被験体」は、限定されるわけではないが、ヒト、非ヒト霊長類、および非霊長類、例えばヤギ、ウマ、およびウシを含む、哺乳動物を指す。いくつかの態様において、用語「被験体」および「患者」は、本明細書においてヒト被験体に関して交換可能に用いられる。
【００７７】
[0092]「生物学的試料」は、患者または被験体から採取された任意の生物学的物質を指す。こうした試料には、細胞試料、組織試料および液体試料が含まれる。「液体試料」には、とりわけ、患者の血液、血漿、血清、尿、脳脊髄液、リンパ液、滑液、胆汁、精液、および唾液が含まれる。試料にはまた、生検試料、全細胞、細胞溶解物、または組織が含まれてもよい。
【００７８】
[0093]「異常」または「異常性」は、疾患または障害に罹患していない生物において観察されるレベルまたは状態とは統計的に異なるレベルまたは状態を指し、そしてシグナルの過剰な量、強度または期間、あるいはシグナルの不十分な量、強度または期間のいずれかとして特徴付けられることも可能である。異常性は、細胞機能、生存性または分化状態の異常として実現することも可能である。異常な相互作用レベルはまた、正常レベルよりも多いまたは少ないことも可能であり、そして生物の正常な能力または機能を損なうことも可能である。
【００７９】
[0094]「上昇した」は、疾患または障害の背景において、疾患または障害の発生と統計的に有意な相関を有する、物質または分子、例えば疾患マーカーまたは指標の、正常よりも高いレベルを指す。レベルを適切な対照、例えば疾患を持たない健康な被験体に比較して、疾患の存在のシグナルとなるレベルを決定することも可能である。
【００８０】
[0095]「癌」および「癌性」は、細胞集団が、制御されない細胞増殖によって特徴付けられる哺乳動物における生理学的状態を指すかまたは記載する。癌の例には、限定されるわけではないが、癌腫、リンパ腫、芽腫、肉腫、および白血病が含まれる。こうした癌のより特定の例には、扁平上皮癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、肺扁平上皮癌、腹膜癌、胃腸癌、膵臓癌、神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝細胞腫、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜またはｅｓо癌腫（ｅｓｏ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、唾液腺癌、腎臓癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝癌腫、ならびに多様なタイプの頭頸部癌が含まれる。
【００８１】
[0096]「増殖性障害」および「増殖性疾患」は、異常な細胞増殖、例えば癌と関連する障害を指す。
[0097]「腫瘍」および「新生物」は、良性（非癌性）または悪性（癌性）いずれかの、前癌性病変を含む、過剰な細胞成長または増殖から生じる任意の組織塊を指す。
【００８２】
[0098]「ＭＩＣ＋疾患または障害」は、疾患または障害の発生と相関する、１つまたはそれより多いＭＩＣタンパク質（例えばＭＩＣＡおよび／またはＭＩＣＢ）またはその部分、例えばｓＭＩＣの上昇したレベルを示す疾患または障害を指す。
【００８３】
[0099]「ＭＩＣＡ＋疾患または障害」は、疾患または障害の発生と相関する、ＭＩＣＡタンパク質またはその一部、例えばｓＭＩＣＡの上昇したレベルを示す疾患または障害を指す。
【００８４】
[0100]「ＭＩＣＢ＋疾患または障害」は、疾患または障害の発生と相関する、ＭＩＣＢタンパク質またはその一部、例えばｓＭＩＣＢの上昇したレベルを示す疾患または障害を指す。
【００８５】
[0101]「ＭＩＣ＋腫瘍」または「ＭＩＣ＋癌」は、ＭＩＣタンパク質またはその部分、例えばｓＭＩＣＡおよび／またはｓＭＩＣＢの上昇したレベルによって特徴付けられる腫瘍、新生物、または癌を指す。
【００８６】
[0102]「ＭＩＣ＋血液学的悪性腫瘍」は、ＭＩＣタンパク質またはその一部、例えばｓＭＩＣＡおよび／またはｓＭＩＣＢの上昇したレベルによって特徴付けられるリンパ系または骨髄系の細胞の増殖性障害を指す。リンパ系障害には、急性リンパ球性白血病および慢性リンパ増殖性障害（例えばリンパ腫、骨髄腫、および慢性リンパ性白血病）が含まれる。リンパ腫には、ホジキン病および非ホジキンリンパ腫、前駆体Ｔ細胞白血病／リンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、ＭＡＬＴリンパ腫、バーキットリンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病／リンパ腫、特定不能の（ｎｏｔ−ｏｔｈｅｒｗｉｓｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｅｄ）末梢Ｔ細胞リンパ腫、および菌状息肉症が含まれる。慢性リンパ性白血病には、Ｔ細胞慢性リンパ性白血病およびＢ細胞慢性リンパ性白血病が含まれる。骨髄性障害には、慢性骨髄性障害および急性骨髄性白血病が含まれる。慢性骨髄性障害には、慢性骨髄増殖性障害および骨髄異形成症候群が含まれる。慢性骨髄増殖性障害には、血管新生性骨髄化生、本態性血小板血症、慢性骨髄性白血病、真性多血症、および非典型的骨髄増殖性障害が含まれる。非典型的骨髄増殖性障害には、非典型的ＣＭＬ、慢性好中球性白血病、マスト細胞病、および慢性好酸球性白血病が含まれる。
【００８７】
[0103]「ＭＩＣ＋ウイルス感染」は、ＭＩＣタンパク質またはその一部、例えばｓＭＩＣＡおよび／またはｓＭＩＣＢの上昇したレベルによって特徴付けられるウイルス感染を指す。
【００８８】
[0104]「治療」または「治療すること」は、しばしば患者とも呼ばれる、哺乳動物、例えばヒトの状態における有益な変化を生じるよう意図されるプロセスを指す。有益な変化には、例えば、１つまたはそれより多い機能回復；症状の減少；重症度の減少；疾患、障害または状態の進行の制限または遅延、または防止；あるいは患者の状態、疾患または障害の悪化の制限または遅延が含まれる。疾患または障害の背景において、「療法」、「治療」または「治療可能」は、療法が疾患または障害に対して、望ましい薬理学的および／または生理学的影響を達成する療法を意味する。効果は、疾患／障害またはその症状を完全にまたは部分的に防止する観点から、予防的であってもよいし、ならびに／あるいは疾患／障害、および／または疾患／障害に帰因しうる不都合な影響の部分的なまたは完全な治癒の観点から、療法性であってもよい。該用語には：（ａ）疾患に対する素因を有しうるが、いまだに該疾患を有するとは診断されていない被験体において、疾患を発生しないように防止し；（ｂ）疾患を阻害し、すなわちその発展を抑止し；あるいは（ｃ）疾患を軽減させる、すなわち疾患の寛解または退縮を引き起こす工程が含まれる。療法剤を、疾患または障害の開始前に、開始中にまたは開始後に投与してもよい。進行しつつある疾患の治療であって、患者における望ましくない臨床的症状を安定化させるかまたは減少させる前記治療が特に興味深い。こうした治療は、罹患した組織中の機能の完全な喪失の前に望ましく行われる。
【００８９】
[0105]「療法的有効用量」または「療法的有効量」は、必要がある哺乳動物への投与に際して、望ましい活性を生じるために十分な、生物学的化合物を含む化合物または薬学的組成物の量を指す。本明細書において、抗体を含む薬学的組成物に関して、用語「療法的有効量／用量」は、哺乳動物への投与に際して、有効な反応を生じるために十分である抗体またはその薬学的組成物の量／用量を指す。
【００９０】
[0106]「薬学的に許容されうる」は、一般的に安全であり、非毒性であり、そして生物学的にまたは別の意味で望ましくないものではない化合物または組成物を指し、そしてこれには、ヒト薬学的および獣医学的使用のために許容されうる化合物または組成物が含まれる。化合物または組成物は、監督機関によって認可されるかまたは認可されうるものであることも可能であり、あるいは米国薬局方または他のヒトを含む動物における使用のために一般的に認識される薬局方に列挙されるものであることも可能である。
【００９１】
[0107]「薬学的に許容されうる賦形剤、担体またはアジュバント」は、少なくとも１つの療法剤（例えば本開示の抗体）と一緒に、被験体に投与可能であり、そして剤の療法量を送達するために十分な用量で投与された際に、その薬理学的活性を破壊せず、そして一般的に安全であり、非毒性であり、そして生物学的にまたは別の意味でのいずれでも望ましくないものではない賦形剤、担体またはアジュバントを指す。
【００９２】
[0108]「併用療法」は、示す療法効果を達成するために、少なくとも２つの別個の療法の提供を伴う療法措置を指す。例えば、併用療法は、２またはそれより多い別個の活性成分、例えば抗体および化学療法剤、または第一のターゲットに対して向けられる抗体および第二のターゲットに対して向けられる第二の抗体の投与を伴うことも可能である。あるいは、併用療法は、単独のまたは別の治療、例えば放射線療法および／または手術の送達を伴う、抗体および／または１またはそれより多い他の療法剤の投与を伴うことも可能である。２またはそれより多い別個の活性成分の投与の背景において、活性成分を同じ組成物の一部として、または異なる組成物として、投与することも可能であることが理解される。別個の組成物として投与する際、すべて特定の内容物が必要とするように、そして主治医または医学的介護者によって決定されるように、異なる活性成分を含む組成物を、同時にまたは異なる時点で、同じまたは異なる経路によって、同じまたは異なる投薬措置を用いて、投与してもよい。
【００９３】
[0109]「免疫刺激剤」または「免疫活性化剤」は、例えば免疫刺激剤の非存在下での免疫反応に比較した際、免疫反応を増進させる剤、例えば化合物または組成物を指す。いくつかの態様において、免疫刺激剤は、免疫系の抑制を防止することによって、または免疫反応を活性化することによって、作用してもよい。
【００９４】
[0110]「ワクチン」は、免疫系反応を誘導するためにヒトまたは動物に投与可能な化合物または組成物を指し；この免疫系反応は、抗体の産生を生じるか、または特定の細胞、特に抗原提示細胞および免疫系エフェクター細胞、例えばＴリンパ球およびＢリンパ球の活性化を生じることも可能である。ワクチン組成物は、予防目的のためのそして／または療法目的のための組成物であることも可能である。「癌ワクチン」は、癌に対する免疫反応を誘発する化合物または組成物を指す。免疫反応は、広い範囲の癌に対するまたは特定の癌に対するものであってもよい。
【００９５】
６．２  ｓＭＩＣ結合抗体
[0111]ＭＨＣクラスＩ鎖関連遺伝子Ａ（ＭＩＣＡ）タンパク質およびＭＨＣクラスＩ鎖関連遺伝子Ｂ（ＭＩＣＢ）タンパク質は、ＭＨＣクラスＩ関連鎖（ＭＩＣ）ファミリーおよび関連ＵＬ−１６結合タンパク質のメンバーであり（Ｌｅｅｌａｙｕｗａｔら，  １９９４，  Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ４０：３３９−５１；  Ｂａｈｒａｍ，  １９９４，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．  ９１：６２５９−６３；  Ｆｏｄｉｌら，  １９９６，  Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ４４：３５１−７；  Ｇｒｏｈら，  １９９９，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．  ９６：６８７９−８４；  Ｂａｕｅｒら，  １９９９，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８５（５４２８）：７２７−９）、そしてＮＫ、ＮＫＴならびにαβおよびγδ両方のＣＤ８＋  Ｔ細胞を含む、免疫エフェクター細胞上のＣ型レクチン様活性化受容体、ナチュラルキラー群２Ｄ（ＮＫＧ２Ｄ）に結合するリガンドとして作用する。ＭＩＣリガンドは、齧歯類ファミリーを除く大部分の哺乳動物において非常に保存されており、そしてＭＨＣクラスＩタンパク質に弱く関連する。ＭＩＣＡおよびＭＩＣＢ糖タンパク質は、アミノ酸配列レベルで約８４％同一である（Ｂａｈｒａｍら，  １９９４，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．  ９１：６２５９−６２６３；  Ｂａｈｒａｍ，  １９９６，  Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ４４：８０−８１；  ＢａｈｒａｍおよびＳｐｉｅｓ．，  １９９６，  Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ４３：２３０−２３３）。ＭＩＣＡおよびＭＩＣＢタンパク質は、ストレス誘導性であり、そしてＭＨＣクラスＩ分子に類似である；が、これらはベータ−２−ミクログロブリンと会合せず、またはペプチドと結合しないことが知られる。
【００９６】
[0112]ＭＩＣタンパク質は、通常、腸上皮において、角化細胞、単球および内皮細胞上で、低レベルで発現されるが、ストレスを受けた、形質転換された、またはいくつかのウイルス感染した細胞において、より高いレベルに誘導される（Ｇｒｏｈら，  １９９９，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．  ９６：６８７９−８４；  Ｂａｕｅｒら，  １９９９，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８５（５４２８）：７２７−９；  Ｚｗｉｒｎｅｒら，  １９９８，  Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ４７：１３９−４１）。ＮＫＧ２Ｄ所持免疫エフェクター細胞と、細胞表面上にＭＩＣリガンドを発現する、ストレスを受けた細胞または疾患細胞との相互作用は、ストレスを受けた細胞／疾患細胞に対する細胞性免疫反応を生じ、最終的にＭＩＣ発現細胞の死で終わる。ＮＫＧ２Ｄ受容体所持免疫細胞へのＭＩＣリガンドの結合は、ナイーブな（ｎａｉｖｅ）Ｔ細胞の活性化を刺激し、そして適切なＴＣＲ連結の非存在下での細胞毒性さえ誘導可能である。ヒトにおいて、ＮＫＧ２Ｄ受容体は、ＤＡＰ１０とともに共刺激分子として機能して、ホスファチジルイノシトールキナーゼ（ＰＩ３Ｋ）経路を通じて、細胞内部にリガンド結合シグナルを伝えることも可能である。
【００９７】
[0113]ＮＫＧ２Ｄリガンドの発現は、多くのタイプの腫瘍において報告されてきており、そして熱ショックプロモーター要素の刺激から生じる遺伝子発現、ならびに環境傷害または癌に関連するゲノム不安定性レベルの増加から生じるＤＮＡ損傷の細胞内検出の結果と考えられる。癌患者において、アルファ−１、−２、および−３ドメインを含むＭＩＣの細胞外ドメインは、細胞から頻繁に脱落し、そしてエフェクター免疫細胞上の意図される受容体、ＮＫＧ２Ｄの下方調節を生じる（例えば、Ｇｒｏｈら，  ２００２，  Ｎａｔｕｒｅ  ４１９：７３４−８を参照されたい）。ある個体では、ＭＩＣＡ糖タンパク質は、細胞内で産生され、これはルーチンに細胞表面膜結合となるように運命づけられず、その代わりエクソソーム内に取り込まれ、そして細胞の外側に放出されて、ここで免疫細胞上のＮＫＧ２Ｄ受容体との相互作用が起こる（Ａｓｈｉｒｕら，  ２０１０，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ７０：４８１−９）。研究によって、これらの腫瘍由来可溶性ＭＩＣＡおよびＭＩＣＢリガンド（ｓＭＩＣＡおよびｓＭＩＣＢ）は、腫瘍細胞表面から脱落し、デコイ分子のように機能し、そしてＮＫ、ＮＫＴおよび多様なＣＤ８＋  Ｔ細胞などの免疫エフェクター細胞上のＮＫＧ２Ｄ受容体の下方調節を導くことが示唆される。ｓＭＩＣＡおよびｓＭＩＣＢの形成は、タンパク質ジスルフィドイソメラーゼＥＲｐ５の関与を必要とし、該酵素は、一過性混合ジスルフィド複合体を形成することも可能であり、膜結合したＭＩＣＡおよびＭＩＣＢのタンパク質分解的切断を可能にするようである（Ｋａｉｓｅｒら，  ２００７，  Ｎａｔｕｒｅ  ４４７（７１４３）：４８２−６）。ｓＭＩＣＡおよびｓＭＩＣＢの形成は、その天然の役割が、形質転換した細胞を探し、そしてこれを破壊することである、生得的防御系のエフェクターが、これらのデコイＭＩＣリガンド分子の免疫抑制作用によって停止される、異常な状況を導く。この機構を通じて、腫瘍細胞は、免疫系から隠れることも可能であり、そして変わらずに増殖し続けることが可能である。さらなる考慮として、持続性ＮＫＧ２Ｄリガンド発現および脱落は、癌患者において、通常はまれな免疫抑制性ＮＫＧ２Ｄ＋  ＣＤ４＋  Ｔ細胞の増殖を促進し、そしてこれは、ｓＭＩＣＡの血清濃度と直接相関し、それによって、免疫抑制性Ｔ細胞のＮＫＧ２Ｄ共刺激および拡大を可能にする（例えば、Ｇｒｏｈら，  ２００６，  Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ７：７５５−６２を参照されたい）。
【００９８】
[0114]ｓＭＩＣＡおよびｓＭＩＣＢの不都合な影響は、健康な個体に比較した際、進行した癌患者の血液における、可溶性ＭＩＣ分子（例えば、ｓＭＩＣＡおよび／またはｓＭＩＣＢ）の有意に上昇したレベルの存在によって裏付けられる（Ｇｒｏｈら，  ２００２，  Ｎａｔｕｒｅ  ４１９：７３４−８；  Ｓａｌｉｈら，  ２００２，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６９：４０９８−１０２）。多くの場合、これらの高レベルは、癌の臨床病期および劣った臨床的転帰の両方に直接相関するようである（Ｄｏｕｂｒｏｖｉｎａら，  ２００３，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １７１：６８９１−９；  Ｗｕら，  ２００４，  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．  １１４：５６０−８；  Ｈｏｌｄｅｎｒｅｉｄｅｒら，  ２００６，  Ｉｎｔｌ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  １１８：６８４−７）。また、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ実験によって、組換えまたは腫瘍細胞由来ｓＭＩＣタンパク質の添加が、エフェクター免疫細胞、例えばＮＫおよびＴ細胞上のＮＫＧ２Ｄ受容体レベルを減少させることも可能であり、そしてこの効果が受容体結合との干渉を通じて、可溶性リガンドに対する中和抗体によって遮断可能であることもまた示されてきている（Ｇｒｏｈら，  ２００２，  Ｎａｔｕｒｅ  ４１９：７３４−８）。したがって、全身性および腫瘍浸潤エフェクター細胞上両方のＮＫＧ２Ｄ発現の減少は、ｓＭＩＣ＋患者において、腫瘍に対する免疫反応を制限しうる。しかし、前述の特異的中和性齧歯類抗体が（ヒト化されていても）、ヒト療法剤として有用でありうる可能性は非常に低く、これはこれらが細胞結合性ＭＩＣリガンドにもまた結合し、そしてしたがって正常条件下で、内因性ＭＩＣリガンドを発現する特定の細胞に対する望ましくない免疫反応を生じうるためである。
【００９９】
[0115]ＭＩＣＡおよびＭＩＣＢの可溶性型は、ウイルス感染プロセスにも関与する。例えば、呼吸上皮細胞における呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染は、ＭＩＣＡの細胞表面発現およびｓＭＩＣＡの循環レベルの上方制御を導く（Ｚｄｒｅｎｇｈｅａら，  ２０１２，  Ｅｕｒ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｊ．  ３９：７１２−２０）。これらのより高いレベルのｓＭＩＣＡは、ウイルスのクリアランスを損ない、そして潜在的に感染延長を補助しうる。かさねて、ＮＫ細胞は、提唱される免疫監視系において、形質転換細胞の検出に機能するのと同様に、ＲＳＶ感染に対する免疫系の反応において、重要な細胞毒性の役割を果たすことが知られる。ｓＭＩＣが誘導するエフェクター免疫細胞上のＮＫＧ２Ｄ受容体の下方調節を通じた、ＮＫ細胞機能の抑制は、免疫検出を回避するウイルス反応、あるいは細胞感染中にひとたび抗ウイルス・ガンマインターフェロンが放出された際に、感染していない傍観者細胞の細胞質溶解を減少させるための細胞安全性機構のいずれかに相当する可能性もある。ウイルスに対する適切な免疫反応の発展と、およびその結果のＲＳＶ感染において起こることが知られるＮＫ細胞機能の損失との間の繊細なバランスを考慮すると、過剰なｓＭＩＣＡレベルは、全体の抗ウイルス反応を減弱させうる。これらのＲＳＶ感染中にｓＭＩＣＡレベルを減少させる試みは、したがって、長期のウイルス感染がしばしば、呼吸管裏打ちに対する深刻な打撃、および治療が困難な二次的細菌感染の結果として死さえ生じる、特に非常に若い、および高齢の患者において、特に是認される。可溶性ＮＫＧ２Ｄリガンドの放出はまた、１型ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ−１）（Ｎｏｌｔｉｎｇら，  ２０１０，  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ４０６：１２−２０）または肝細胞癌（ＨＣＣ）の開始を生じるＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）でのヒトのウイルス感染においても記載されてきている。Ｍａｔｕｓａｌｉら，  ２０１３，  ＦＡＳＥＢ  Ｊ．  ２７（６）：２４４０−５０は、ＨＩＶ−１感染リンパ球から脱落するＮＫＧ２Ｄリガンドが、ＮＫおよびＣＤ８＋  Ｔ細胞において、ＮＫＧ２Ｄ下方制御を誘導し、そしてウイルス感染細胞に対する免疫反応の抑制を導くことを報告した。ｓＭＩＣＡ、ｓＭＩＣＢおよびｓＵＬＢＰ２レベルは、すべて、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＨＩＶ−１感染ＣＤ４＋  Ｔ細胞の培地中で上昇した。さらに、ＨＩＶ−１慢性感染患者は、非ウイルス血症性の高活性抗レトロウイルス剤療法（ＨＡＡＲＴ）治療患者に比較して、７倍高いレベルのｓＭＩＣＡを所持し、そしてｓＵＬＢＰ２に関して同様の傾向が見られたが、ｓＭＩＣＢに関しては見られなかった。本明細書に記載する抗体および方法による、ＨＩＶ−１感染における可溶性ＮＫＧ２Ｄリガンドレベルの減少は、ＮＫＧ２Ｄ細胞表面レベルを増加させ、そしてそれによってＨＩＶ−１感染の免疫監視およびＮＫ制御における全体の改善を提供することによって、ＮＫ細胞の細胞毒性機能を改善するように働きうる。また、Ｋｕｍａｒら，  ２０１２，  ＰＬＯＳ  Ｏｎｅ  ７：１−６  Ｅ４４７４３は、ＨＢＶ誘導性ＨＣＣ症例において、ｓＭＩＣＡの有意な上昇を見出した。実際、上昇したレベルのｓＭＩＣＡを有するＨＢＶ＋  ＨＣＣ患者は、正常レベ���のものよりも有意により劣った生存度を示しており、これはおそらく、より高いｓＭＩＣＡレベルが、ＨＢＶ感染細胞に対する免疫監視系の不活性化を引き起こしうるためでありうる。かさねて、循環ｓＭＩＣリガンドにおける減少は、慢性ウイルス感染に対する改善された免疫反応性と一致する。
【０１００】
[0116]免疫監視における役割を考慮すると、ＭＩＣＡおよびＭＩＣＢならびに同族受容体ＮＫＧ２Ｄは、ＭＩＣＡおよびＭＩＣＢ発現と関連する多様な疾患、例えば癌および自己免疫疾患を治療するための療法剤の開発のためのターゲットであった。例えば、特許公報ＷＯ  ９８／０１９１６７は、細胞ストレスが制御するヒトＭＩＣクラス１遺伝子、ならびに移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）および癌を含む特定の疾患状態の治療を記載する。特許公報ＷＯ  ０３／０８９６１６、ＵＳ２００５０２３３３９１、ＵＳ２０１００３１６６５０；および米国特許第７，７７１，７１８号は、癌および自己免疫疾患または状態の診断、予後、および治療のマーカーとしての、可溶性ＭＩＣポリペプチドを記載する。特許公報米国特許第７，６６６，４１７号およびＷＯ  ２００６／０２４３６７は自己免疫疾患を治療するためのＮＫＧ２Ｄ受容体／ＮＫＧ２Ｄリガンド相互作用遮断剤を記載する。特許公報ＷＯ  ２００８／０３６９８１および米国特許第７，９５９，９１６号は、抗ＭＩＣＡ抗体の使用、および例えばＥＲｐ５抗体によるまたはＥＲｐ５発現の調節による、ＥＲｐ５（タンパク質ジスルフィドイソメラーゼ）活性の調節を通じた、ＭＩＣＡ関連障害の治療法を記載する。米国特許第８，１８２，８０９号もまた、抗ＭＩＣＡ抗体の使用によりＭＩＣ脱落（例えば可溶性ＭＩＣＡの形成）を阻害することによって、癌を治療するための方法を記載する。特許公報ＷＯ２０１４／１４０９０４は、可溶性ＭＩＣタンパク質および細胞膜結合型ＭＩＣタンパク質の間を区別する抗体を記載する。
【０１０１】
[0117]本開示は、ＭＩＣＡおよび／またはＭＩＣＢのアルファ−３ドメイン上のエピトープに結合する結合剤、特に抗体を提供し、この場合、抗体はｓＭＩＣＡおよび／またはｓＭＩＣＢに結合するが、細胞膜結合型ＭＩＣＡおよび／またはＭＩＣＢには結合しない。抗体が、ｓＭＩＣおよび細胞結合型ＭＩＣの間を区別する能力によって療法的アプローチが提供され、該アプローチにおいて、ｓＭＩＣＡおよび／またはｓＭＩＣＢを中和し、それによって、細胞表面上にＭＩＣＡおよび／またはＭＩＣＢタンパク質を発現している細胞、例えばＭＩＣタンパク質を発現している癌細胞、に対する生得的免疫反応を保持しながら、特定のタイプの疾患において、細胞から放出されたｓＭＩＣＡおよび／またはｓＭＩＣＢの有害な影響、例えば免疫抑制、を軽減する。本明細書に記載するように、ｓＭＩＣ（例えばｓＭＩＣＡおよび／またはｓＭＩＣＢ）は一部切除（ｔｒｕｎｃａｔｅｄ）タンパク質であり、典型的には膜貫通ドメインおよび細胞質テールを欠くが、３つの細胞外ドメイン、アルファ−１、アルファ−２、およびアルファ−３を保持する。図１Ａの参照ＭＩＣＡアミノ配列の細胞外ドメインは、アミノ酸残基２４からほぼ２９７に渡り、そして最長、残基３０７までであり、そして図１Ｂの参照ＭＩＣＢアミノ配列に関しては、ほぼアミノ酸残基２４からほぼ２９７に渡り、そして最長、残基３０７までである。図１Ａの参照ＭＩＣＡアミノ配列中のアルファ−３ドメインは、ほぼアミノ酸残基２０５から２９６／２９７に渡る一方、図１Ａの参照ＭＩＣＢアミノ酸配列のアルファ−３ドメインは、ほぼアミノ酸残基２０５から２９６／２９７に渡る。多様なタイプの腫瘍および癌において見られうるｓＭＩＣタンパク質は、可溶性型を生じるプロセスのため、可変カルボキシ末端を有しうる。理論によって束縛されることなく、天然存在可溶性型は、ジスルフィドイソメラーゼである、ＥＲｐ５、ＰＤＩＡ６またはＰ５ともまた称される小胞体タンパク質５の作用から生じるようであり、該酵素は、ＭＩＣＡまたはＭＩＣＢタンパク質と複合体を形成し、そしてアルファ−３ドメイン中のジスルフィド結合を還元する。ｓＭＩＣタンパク質は、細胞膜近傍でのタンパク質分解的切断後に放出される。これらの一部切除は、特定のタンパク質分解認識部位（例えば、Ｗａｎｇら，  ２００９，  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍ．  ３８７：４７６−８１）で生じるのではなく、膜貫通セクションの上流、およびＭＩＣＡの報告される保存されたＮ２３８−Ｔ２３４またはＭＩＣＢ中の相同性配列でのＥＲｐ５結合部位の下流の、アルファ−３ドメイン配列内で、ランダムな様式で起こるようである。
【０１０２】
[0118]いくつかの態様において、本開示の抗体は、ＭＩＣタンパク質、例えばＭＩＣＡおよび／またはＭＩＣＢのアルファ−３ドメイン上のアミノ酸配列ＧＤＶＬ（配列番号２３）を含むエピトープに結合する。配列ＧＤＶＬ（配列番号２３）は、図１Ａに提示するＭＩＣＡ＊００１の参照配列（配列番号１）中のアミノ酸２５４〜２５７位、および図１ＢのＭＩＣＢ＊００１の参照配列（配列番号２）中のアミノ酸２５４〜２５７位に存在する。いくつかの態様において、該抗体は、ＭＩＣタンパク質のアルファ−３ドメインのエピトープ配列ＧＤＶＬ（配列番号２３）中のアミノ酸残基２５４Ｇ、アミノ酸残基２５５Ｄ、アミノ酸残基２５６Ｖ、および／またはアミノ酸残基２５７Ｌの１つまたはそれより多くに結合する。いくつかの態様において、該抗体は、アルファ−３ドメイン中の前述のアミノ酸残基の２、３またはすべてに結合する。
【０１０３】
[0119]いくつかの態様において、エピトープは、アミノ末端および／またはカルボキシ末端にさらなる１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはそれより多いアミノ酸を有してもよく、ここでさらなるアミノ酸は、記載する特定された領域または特定されたアミノ酸配列を取り巻く、天然存在ＭＩＣＡまたはＭＩＣＢアミノ酸配列上に見られるものであってもよい。
【０１０４】
[0120]いくつかの態様において、抗体は、ｓＭＩＣタンパク質、例えばｓＭＩＣＡおよび／またはｓＭＩＣＢのアルファ−３ドメイン上のＱＱＷＧＤＶＬＰ（配列番号２２）を含むアミノ酸配列中のエピトープに結合する。配列ＱＱＷＧＤＶＬＰ（配列番号２２）は、図１Ａに提示するＭＩＣＡ＊００１の参照配列（配列番号１）中のアミノ酸２５１〜２５８位、および図１Ｂに提示するＭＩＣＢ＊００１の参照配列（配列番号２）中のアミノ酸２５１〜２５８位に存在する。いくつかの態様において、該抗体は、ＭＩＣタンパク質のアルファ−３ドメインの配列ＱＱＷＧＤＶＬＰ（配列番号２２）中のアミノ酸残基Ｑ、アミノ酸残基Ｑ、アミノ酸残基Ｗ、アミノ酸残基Ｇ、アミノ酸残基Ｄ、アミノ酸残基Ｖ、アミノ酸残基Ｌ、および／またはアミノ酸残基Ｐの１つまたはそれより多くに結合する。いくつかの態様において、該抗体は、アルファ−３ドメイン中の前述のアミノ酸残基の２、３、４またはそれより多くに結合する。
【０１０５】
[0121]いくつかの態様において、抗体は、ヒト集団に存在するＭＩＣＡの多様なアレル中に存在する特定されたエピトープ、例えば本明細書に援用される、Ｒｏｂｉｎｓｏｎら，  ２００３，  “ＩＭＧＴ／ＨＬＡ  ａｎｄ  ＩＭＧＴ／ＭＨＣ：  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｄａｔａｂａｓｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍａｊｏｒ  ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ  ｃｏｍｐｌｅｘ”，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ３１：３１１−３１４およびＡｎｔｈｏｎｙ  Ｎｏｌａｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅワールドワイドウェブサイトｗｗｗ．ａｎｔｈｏｎｙｎｏｌａｎ．ｏｒｇ．ｕｋ／ＨＩＧ／ｄａｔａ．ｈｔｍｌにおいて入手可能な、同定されるＭＩＣＡアレルに結合する。したがって、いくつかの態様において、抗体は、ＭＩＣＡ＊００１、ＭＩＣＡ＊００２：０１、ＭＩＣＡ＊００２：０２、ＭＩＣＡ＊００２：０３、ＭＩＣＡ＊００２：０４、ＭＩＣＡ＊００４、ＭＩＣＡ＊００５、ＭＩＣＡ＊００６、ＭＩＣＡ＊００７：０１、ＭＩＣＡ＊００７：０２、ＭＩＣＡ＊００７：０３、ＭＩＣＡ＊００７：０４、ＭＩＣＡ＊００７：０５、ＭＩＣＡ＊００７：０６、ＭＩＣＡ＊００８：０１：０１、ＭＩＣＡ＊００８：０１：０２、ＭＩＣＡ＊００８：０２、ＭＩＣＡ＊００８：０３、ＭＩＣＡ＊００８：０４、ＭＩＣＡ＊００８：０５、ＭＩＣＡ＊００９：０１、ＭＩＣＡ＊００９：０２、ＭＩＣＡ＊０１０：０１、ＭＩＣＡ＊０１０：０２、ＭＩＣＡ＊０１１、ＭＩＣＡ＊０１２：０１、ＭＩＣＡ＊０１２：０２、ＭＩＣＡ＊０１２：０３、ＭＩＣＡ＊０１２：０４、ＭＩＣＡ＊０１３、ＭＩＣＡ＊０１４、ＭＩＣＡ＊０１５、ＭＩＣＡ＊０１６、ＭＩＣＡ＊０１７、ＭＩＣＡ＊０１８：０１、ＭＩＣＡ＊０１８：０２、ＭＩＣＡ＊０１９、ＭＩＣＡ＊０２０、ＭＩＣＡ＊０２２、ＭＩＣＡ＊０２３、ＭＩＣＡ＊０２４、ＭＩＣＡ＊０２５、ＭＩＣＡ＊０２６、ＭＩＣＡ＊０２７、ＭＩＣＡ＊０２８、ＭＩＣＡ＊０２９、ＭＩＣＡ＊０３０、ＭＩＣＡ＊０３１、ＭＩＣＡ＊０３２、ＭＩＣＡ＊０３３、ＭＩＣＡ＊０３４、ＭＩＣＡ＊０３５、ＭＩＣＡ＊０３６、ＭＩＣＡ＊０３７、ＭＩＣＡ＊０３８、ＭＩＣＡ＊０３９、ＭＩＣＡ＊０４０、ＭＩＣＡ＊０４１、ＭＩＣＡ＊０４２、ＭＩＣＡ＊０４３、ＭＩＣＡ＊０４４、ＭＩＣＡ＊０４５、ＭＩＣＡ＊０４６、ＭＩＣＡ＊０４７、ＭＩＣＡ＊０４８、ＭＩＣＡ＊０４９、ＭＩＣＡ＊０５０、ＭＩＣＡ＊０５１、ＭＩＣＡ＊０５２、ＭＩＣＡ＊０５３、ＭＩＣＡ＊０５４、ＭＩＣＡ＊０５５、ＭＩＣＡ＊０５６、ＭＩＣＡ＊０５７、ＭＩＣＡ＊０５８、ＭＩＣＡ＊０５９、ＭＩＣＡ＊０６０、ＭＩＣＡ＊０６１、ＭＩＣＡ＊０６２、ＭＩＣＡ＊０６４Ｎ、ＭＩＣＡ＊０６５、ＭＩＣＡ＊０６６、ＭＩＣＡ＊０６７、ＭＩＣＡ＊０６８、ＭＩＣＡ＊０６９、ＭＩＣＡ＊０７０、ＭＩＣＡ＊０７２、ＭＩＣＡ＊０７３、ＭＩＣＡ＊０７４、ＭＩＣＡ＊０７５、ＭＩＣＡ＊０７６、およびＭＩＣＡ＊０７７より選択されるヒトＭＩＣＡアレル変異体を含む、ＭＩＣＡアレル変異体のいずれかに存在する、特定されたエピトープに結合する。
【０１０６】
[0122]いくつかの態様において、抗体は、ヒト集団に存在するＭＩＣＢの多様なアレル中に存在する特定されたエピトープ、例えば本明細書に援用される、Ｒｏｂｉｎｓｏｎら，  ２００３，  “ＩＭＧＴ／ＨＬＡ  ａｎｄ  ＩＭＧＴ／ＭＨＣ：  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｄａｔａｂａｓｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍａｊｏｒ  ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ  ｃｏｍｐｌｅｘ”，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ３１：３１１−３１４およびＡｎｔｈｏｎｙ  Ｎｏｌａｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅワールドワイドウェブサイトｗｗｗ．ａｎｔｈｏｎｙｎｏｌａｎ．ｏｒｇ．ｕｋ／ＨＩＧ／ｄａｔａ．ｈｔｍｌにおいて入手可能な、同定されるＭＩＣＢアレルに結合する。したがって、いくつかの態様において、抗体は、ＭＩＣＢ＊００１、ＭＩＣＢ＊００２：０１：０１、ＭＩＣＢ＊００２：０１：０２、ＭＩＣＢ＊００３、ＭＩＣＢ＊００４：０１：０１、ＭＩＣＢ＊００４：０１：０２、ＭＩＣＢ＊００５：０１、ＭＩＣＢ＊００５：０２：０１、ＭＩＣＢ＊００５：０２：０２、ＭＩＣＢ＊００５：０２：０３、ＭＩＣＢ＊００５：０２：０４、ＭＩＣＢ＊００５：０３、ＭＩＣＢ＊００５：０４、ＭＩＣＢ＊００５：０５、ＭＩＣＢ＊００５：０６、ＭＩＣＢ＊００５：０７、ＭＩＣＢ＊００５：０８、ＭＩＣＢ＊００６、ＭＩＣＢ＊００７、ＭＩＣＢ＊００８、ＭＩＣＢ＊００９Ｎ、ＭＩＣＢ＊０１０、ＭＩＣＢ＊０１１、ＭＩＣＢ＊０１２、ＭＩＣＢ＊０１３、ＭＩＣＢ＊０１４、ＭＩＣＢ＊０１５、ＭＩＣＢ＊０１６、ＭＩＣＢ＊０１８、ＭＩＣＢ＊０１９、ＭＩＣＢ＊０２０、ＭＩＣＢ＊０２１Ｎ、ＭＩＣＢ  ＊０２２；  ＭＩＣＢ＊０２３、ＭＩＣＢ＊０２４、ＭＩＣＢ＊０２５、ＭＩＣＢ＊０２６、ＭＩＣＢ＊０２７、ＭＩＣＢ＊０２８、およびＭＩＣＢ＊０２９より選択されるヒトＭＩＣＢアレル変異体を含む、ＭＩＣＢアレル変異体のいずれかに存在する特定されたエピトープに結合する。
【０１０７】
[0123]上に特定されたエピトープが、本開示の抗体が結合するＭＩＣタンパク質の一部である一方、これは、抗体が、特定されたエピトープに加えて、ＭＩＣタンパク質上の他の部位と相互作用する可能性を排除しないことが理解されるものとする。
【０１０８】
[0124]いくつかの態様において、特定されたエピトープに結合する抗体は、ｓＭＩＣタンパク質、例えばｓＭＩＣＡおよび／またはｓＭＩＣＢに特異的に結合するが、膜結合型ＭＩＣ、例えばＭＩＣＡおよび／またはＭＩＣＢ、特に細胞表面上に存在するＭＩＣタンパク質の細胞外ドメインには特異的に結合しない。いくつかの態様において、抗体は、ｓＭＩＣＡに特異的に結合可能であるが、膜結合型ＭＩＣＡの細胞外ドメインには特異的に結合しない。いくつかの態様において、抗体は、ｓＭＩＣＢに特異的に結合可能であるが、膜結合型ＭＩＣＢの細胞外ドメインには特異的に結合しない。いくつかの態様において、抗体は、ｓＭＩＣＡおよび／またはｓＭＩＣＢのアルファ−３ドメインに結合するが、膜結合型ＭＩＣＡおよび／またはＭＩＣＢの細胞外ドメイン中のアルファ−３ドメインには特異的に結合しない。いくつかの態様において、抗体は、ｓＭＩＣＡのアルファ−３ドメインに結合するが、膜結合型ＭＩＣＡの細胞外ドメイン中のアルファ−３ドメインには特異的に結合しない。いくつかの態様において、抗体は、ｓＭＩＣＢのアルファ−３ドメインに結合するが、膜結合型ＭＩＣＢの細胞外ドメイン中のアルファ−３ドメインには特異的に結合しない。
【０１０９】
[0125]いくつかの態様において、抗体は、ｓＭＩＣＡおよび／またはｓＭＩＣＢのアルファ−３ドメイン中のアミノ酸配列ＧＤＶＬ（配列番号２３）を含むエピトープに結合するが、膜結合型ＭＩＣＡおよび／またはＭＩＣＢのアルファ−３ドメイン中の同じエピトープには特異的に結合しない。いくつかの態様において、抗体は、ｓＭＩＣＡのアルファ−３ドメイン中のアミノ酸配列ＧＤＶＬ（配列番号２３）を含むエピトープに結合するが、膜結合型ＭＩＣＡのアルファ−３ドメイン中の同じエピトープには特異的に結合しない。いくつかの態様において、抗体は、ｓＭＩＣＢのアルファ−３ドメイン中のアミノ酸配列ＧＤＶＬ（配列番号２３）を含むエピトープに結合するが、膜結合型ＭＩＣＢのアルファ−３ドメイン中の同じエピトープには特異的に結合しない。
【０１１０】
[0126]いくつかの態様において、抗体は、ｓＭＩＣＡおよび／またはｓＭＩＣＢのアルファ−３ドメイン中のＱＱＷＧＤＶＬＰ（配列番号２２）を含むアミノ酸配列中のエピトープに結合するが、膜結合型ＭＩＣＡおよび／またはＭＩＣＢのアルファ−３ドメイン中の同じエピトープには特異的に結合しない。いくつかの態様において、抗体は、ｓＭＩＣＡのアルファ−３ドメイン中のＱＱＷＧＤＶＬＰ（配列番号２２）を含むアミノ酸配列中のエピトープに結合するが、膜結合型ＭＩＣＡのアルファ−３ドメイン中の同じエピトープには特異的に結合しない。いくつかの態様において、抗体は、ｓＭＩＣＢのアルファ−３ドメイン中のＱＱＷＧＤＶＬＰ（配列番号２２）を含むアミノ酸配列中のエピトープに結合するが、膜結合型ＭＩＣＢのアルファ−３ドメイン中の同じエピトープには特異的に結合しない。
【０１１１】
[0127]いくつかの態様において、抗体は、アルファ−３ドメインを含有するｓＭＩＣタンパク質、例えばｓＭＩＣＡおよび／またはｓＭＩＣＢ、特にｓＭＩＣＢに、対応する膜結合型ＭＩＣタンパク質に比較した際、少なくとも１０倍またはそれより高い、少なくとも５０倍またはそれより高い、少なくとも１００倍またはそれより高い、少なくとも５００倍またはそれより高い、あるいは少なくとも１０００倍またはそれより高い特異性で結合する。いくつかの態様において、抗体は、ＭＩＣタンパク質、例えばＭＩＣＡおよび／またはＭＩＣＢの単離アルファ−３ドメイン、特にｓＭＩＣＢのアルファ−３ドメインに、対応する膜結合型ＭＩＣタンパク質への結合に比較した際、少なくとも１０倍またはそれより高い、少なくとも５０倍またはそれより高い、少なくとも１００倍またはそれより高い、少なくとも５００倍またはそれより高い、あるいは少なくとも１０００倍またはそれより高い特異性で結合する。いくつかの態様において、示差特異性は、ＭＩＣＡに関する。いくつかの態様において、示差特異性は、ＭＩＣＢに関する。いくつかの態様において、示差特異性は、ヒト前立腺癌細胞株ＤＵ−１４５によって産生されるＭＩＣＢに関する。
【０１１２】
[0128]いくつかの態様において、本開示の抗体には、ｓＭＩＣＡおよび／またはｓＭＩＣＢ上の特定されたエピトープに対する結合に関して、参照抗体と競合する抗体が含まれる。いくつかの態様において、参照抗体と競合する能力は、阻害定数Ｋｉとして測定可能であり、Ｋｉは以下にしたがって計算される：
Ｋｉ＝ＩＣ５０／（１＋［参照抗体濃度］）／ＫＤ
式中、ＩＣ５０は、参照抗体の結合において、５０％阻害を生じる競合抗体濃度であり、そしてＫＤは、参照抗体の平衡解離定数である。
【０１１３】
[0129]いくつかの態様において、抗体は、参照抗体と同じかまたはより高い平衡会合定数ＫＡ、あるいは同じかまたはより低いＫＤで、ｓＭＩＣＡおよび／またはｓＭＩＣＢ上の特定されたエピトープに対する結合に関して、参照抗体と競合する。いくつかの態様において、抗体は、前立腺癌細胞株ＤＵ−１４５によって産生されるｓＭＩＣＢ上の特定されたエピトープに対する結合に関して、参照抗体と競合する。いくつかの態様において、参照抗体はモノクローナル抗体５Ｃ９である。いくつかの態様において、抗体間の競合は、関心対象の抗体または候補抗体が、共通の抗原、例えばｓＭＩＣのアルファ−３ドメインに対する参照抗体の特異的結合を阻害するアッセイによって決定可能である。多くのタイプの競合結合アッセイが知られ、そしてこれらを使用してもよく、例えば固相直接または間接的ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、固相直接または間接的酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ、固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ、固相直接標識アッセイ、および固相直接標識サンドイッチアッセイが含まれる。
【０１１４】
[0130]いくつかの態様において、抗体は、用いる特定のアッセイ条件下で、最大結合の８０％である参照抗体濃度で、そして参照抗体濃度の１０倍高い抗体濃度で、少なくとも約２０％またはそれより高く、例えば少なくとも約２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％またはさらにそれより高く、あるいは前述の値いずれかの間の範囲の割合で、参照抗体の結合を減少させるならば、参照抗体と競合すると見なされる。
【０１１５】
[0131]いくつかの態様において、抗体は、本明細書記載の抗体５Ｃ９に比較した際、等しいかまたはより高い平衡会合定数ＫＡで、前立腺癌細胞株ＤＵ−１４５によって産生されるｓＭＩＣに結合する。いくつかの態様において、抗体は、本明細書記載の抗体５Ｃ９に比較した際、等しいかまたはより高い平衡会合定数ＫＡで、前立腺癌細胞株ＤＵ−１４５によって産生されるｓＭＩＣＡに結合する。いくつかの態様において、抗体は、本明細書記載の抗体５Ｃ９に比較した際、等しいかまたはより高い平衡会合定数ＫＡで、前立腺癌細胞株ＤＵ−１４５によって産生されるｓＭＩＣＢに結合する。
【０１１６】
[0132]いくつかの態様において、抗体は、本明細書記載の抗体５Ｃ９に比較した際、等しいかまたはより低い平衡解離定数ＫＤで、前立腺癌細胞株ＤＵ−１４５によって産生されるｓＭＩＣに結合する。いくつかの態様において、抗体は、本明細書記載の抗体５Ｃ９に比較した際、等しいかまたはより低い平衡解離定数ＫＤで、前立腺癌細胞株ＤＵ−１４５によって産生されるｓＭＩＣＡに結合する。いくつかの態様において、抗体は、本明細書記載の抗体５Ｃ９に比較した際、等しいかまたはより低い平衡解離定数ＫＤで、前立腺癌細胞株ＤＵ−１４５によって産生されるｓＭＩＣＢに結合する。
【０１１７】
[0133]いくつかの態様において、抗体は、約１０４〜約１０１２Ｍ−１、約１０５〜約１０１２Ｍ−１、約１０６〜約１０１２Ｍ−１、約１０７〜約１０１２Ｍ−１、約１０８〜約１０１２Ｍ−１、約１０７〜約１０１１Ｍ−１、約１０８〜約１０１１Ｍ−１、約１０７〜約１０１０Ｍ−１、または約１０８〜約１０１０Ｍ−１の範囲の、ｓＭＩＣＡおよび／またはｓＭＩＣＢタンパク質、またはそのアルファ−３ドメインに関するアフィニティ（ＫＡ＝平衡会合定数、または会合速度定数ｋｏｎ／解離速度定数ｋｏｆｆの比）によって特徴付けられる。いくつかの態様において、結合剤は、少なくとも約１ｘ１０７Ｍ−１またはそれより高い、少なくとも約１ｘ１０８Ｍ−１またはそれより高い、少なくとも約１ｘ１０９Ｍ−１またはそれより高い、少なくとも約１ｘ１０１０Ｍ−１またはそれより高い、少なくとも約１ｘ１０１１Ｍ−１またはそれより高い、あるいは少なくとも約１ｘ１０１２Ｍ−１またはそれより高いＫＡを有する。いくつかの態様において、抗体は、本明細書記載の抗体５Ｃ９のＫＡを有する。いくつかの態様において、抗体は、約１ｘ１０８Ｍ−１〜約１ｘ１０９Ｍ−１またはそれより高いＫＡを有する（例えば抗体５Ｃ９のアフィニティ）。いくつかの態様において、ＫＡは、前立腺癌細胞株ＤＵ−１４５によって産生されるｓＭＩＣＢに関して測定される。
【０１１８】
[0134]いくつかの態様において、抗体は、約１０−４〜約１０−１２Ｍ、約１０−５〜約１０−１２Ｍ、約１０−６〜約１０−１２Ｍ、約１０−７〜約１０−１２Ｍ、約１０−８〜約１０−１２Ｍ、約１０−７〜約１０−１１Ｍ、約１０−８〜約１０−１１Ｍ、約１０−７〜約１０−１０Ｍ、または約１０−８〜約１０−１０Ｍの範囲の、ｓＭＩＣＡおよび／またはｓＭＩＣＢタンパク質、またはそのアルファ−３ドメインに関する平衡解離定数（ＫＤ＝平衡解離定数、または解離速度定数ｋｏｆｆ／会合速度定数ｋｏｎの比）によって特徴付けられる。いくつかの態様において、結合剤は、約１ｘ１０−７Ｍまたはそれより低い、約１ｘ１０−８Ｍまたはそれより低い、約１ｘ１０−９Ｍまたはそれより低い、約１ｘ１０−１０Ｍまたはそれより低い、約１ｘ１０−１１Ｍまたはそれより低い、あるいは約１ｘ１０−１２Ｍまたはそれより低いＫＡを有する。いくつかの態様において、抗体は、本明細書記載の抗体５Ｃ９のＫＤを有する。いくつかの態様において、抗体は、約１ｘ１０−９Ｍ〜約１ｘ１０−１０Ｍまたはそれより低いＫＤを有する（抗体５Ｃ９）。いくつかの態様において、ＫＤは、前立腺癌細胞株ＤＵ−１４５によって産生されるｓＭＩＣＢに関して測定される。
【０１１９】
[0135]いくつかの態様において、抗体は、約１０３〜約１０９Ｍ−１ｓ−１またはそれより大きい、約１０４〜約１０９Ｍ−１ｓ−１またはそれより大きい、約１０５〜約１０９Ｍ−１ｓ−１またはそれより大きい、約１０６〜約１０９Ｍ−１ｓ−１またはそれより大きい、約１０７〜約１０９Ｍ−１ｓ−１またはそれより大きい、約１０４〜約１０８Ｍ−１ｓ−１またはそれより大きい、あるいは約１０５〜約１０８Ｍ−１ｓ−１またはそれより大きい範囲の、ｓＭＩＣＡおよび／またはｓＭＩＣＢタンパク質、またはそのアルファ−３ドメインに関するｋｏｎ会合速度定数によって特徴付けられる。いくつかの態様において、結合剤は、少なくとも約１ｘ１０３Ｍ−１ｓ−１またはそれより大きい，少なくとも約１ｘ１０４Ｍ−１ｓ−１またはそれより大きい，少なくとも約１ｘ１０５Ｍ−１ｓ−１またはそれより大きい，少なくとも約１ｘ１０６Ｍ−１ｓ−１またはそれより大きい，少なくとも約１ｘ１０７Ｍ−１ｓ−１またはそれより大きい，少なくとも約１ｘ１０８Ｍ−１ｓ−１またはそれより大きい、あるいは少なくとも約１ｘ１０９Ｍ−１ｓ−１またはそれより大きい、ｋｏｎ会合速度定数を有する。いくつかの態様において、抗体は、本明細書に記載する抗体５Ｃ９の特徴的なｋｏｎ会合定数を有する。いくつかの態様において、ｋоｎは、前立腺癌細胞株ＤＵ−１４５によって産生されるｓＭＩＣＢに関して測定される。
【０１２０】
[0136]いくつかの態様において、本開示の抗体は、約１０−３〜約１０−１０ｓ−１またはそれ未満の、約１０−４〜約１０−１０ｓ−１またはそれ未満の、約１０−５〜約１０−１０ｓ−１またはそれ未満の、約１０−６〜約１０−１０ｓ−１またはそれ未満の、約１０−７〜約１０−１０ｓ−１またはそれ未満の、約１０−５〜約１０−９ｓ−１またはそれ未満の、約１０−６〜約１０−９ｓ−１またはそれ未満の、約１０−５〜約１０−８ｓ−１またはそれ未満の、あるいは約１０−６〜約１０−８ｓ−１またはそれ未満の、ｓＭＩＣＡおよび／またはｓＭＩＣＢタンパク質、またはそのアルファ−３ドメインに関するｋｏｆｆ解離速度定数によって特徴付けられる。いくつかの態様において、結合剤は、約１０−３ｓ−１またはそれ未満の、約１０−４ｓ−１またはそれ未満の、約１０−５ｓ−１またはそれ未満の、約１０−６ｓ−１またはそれ未満の、約１０−７ｓ−１またはそれ未満の、約１０−８ｓ−１またはそれ未満の、約１０−９ｓ−１またはそれ未満の、あるいは約１０−１０ｓ−１またはそれ未満の、ｋｏｆｆ解離速度定数を有する。いくつかの態様において、抗体は、本明細書記載の抗体５Ｃ９の特徴的なｋｏｆｆ解離速度定数を有する。いくつかの態様において、ｋоｆｆは、前立腺癌細胞株ＤＵ−１４５によって産生されるｓＭＩＣＢに関して測定される。
【０１２１】
[0137]ＫＡまたはＫＤ、ならびにｋｏｎおよびｋｏｆｆ速度定数は、当該技術分野に知られるいくつかの方法のいずれによって、例えば表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）スクリーニング（例えば、本明細書に援用される、Ｐｏｐｏｖら，  １９９６，  Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ３３：４９３−５０２；およびＫａｒｌｓｓｏｎら，  １９９１，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  １４５：２２９−４０に記載されるような、ＢＩＡｃｏｒｅＴＭ  ＳＰＲ分析デバイス）によって決定されてもよい。いくつかの態様において、ＫＡまたはＫＤ、ならびにｋｏｎおよびｋｏｆｆ速度定数は２つの表面から反射される白色光の干渉パターンに基づき（例えば、ＲｉｃｈおよびＭｙｓｚｋａ，  ２００７，  Ａｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ３６１：１−６；  Ｆｒａｎｓｓｏｎら，  ２０１０，  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．  ３９８（２）：２１４−３１を参照されたい）、そしてＯｃｔｅｔ  ＲＥＤ９６（ＦｏｒｔｅＢｉｏ、米国カリフォルニア州メンロパーク）として商業的に入手可能である、Ｂｉｏ−Ｌａｙｅｒインターフェロメトリー（ＢＬＩ）によって決定可能である。アフィニティおよび動力学的パラメータを決定するための他の方法には、平衡透析およびグロブリン沈降技術が含まれる（例えば、Ａｚｉｍｚａｄｅｈら，  １９９０，  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．  ３（３）：１０８−１６を参照されたい）。
【０１２２】
[0138]いくつかの態様において、抗体は、以下：Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、γδ  Ｔ細胞、αβ  Ｔ細胞、および／またはＢ細胞機能、の１つまたはそれより多くの上方制御を含む、免疫反応増進効果を有してもよい。いくつかの態様において、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、γδ  Ｔ細胞、αβ  Ｔ細胞、およびＢ細胞機能の１つまたはそれより多くの上方制御には、本明細書にさらに記載するように、癌進行を阻害するかまたはウイルス感染を阻害することが可能な活性の増進および／または授与も含まれる。
【０１２３】
[0139]いくつかの態様において、明記する特性を持つ抗体は、前立腺癌細胞株ＤＵ−１４５異種移植片、例えばマウスに異種移植されたＤＵ−１４５、特にＲａｇ２−／−マウスに異種移植されたＤＵ−１４５を接種された動物において、より詳細には、実施例５に示すプロセスにしたがって、ｓＭＩＣＢのレベルを減弱させることが可能である。いくつかの態様において、明記する特性を持つ抗体は、異種移植された前立腺癌細胞株ＤＵ−１４５、例えばマウスに異種移植されたＤＵ−１４５、特にＲａｇ２−／−マウスに異種移植されたＤＵ−１４５の増殖を、より詳細には、実施例５に示すプロセスにしたがって、減弱させることが可能である。いくつかの態様において、異種移植されたＤＵ−１４５細胞を含む動物において、抗体がｓＭＩＣＢのレベルを減弱する能力、および／または異種移植されたＤＵ−１４５細胞の増殖を減弱させる能力は、サイトカインＩＬ−１２と組み合わせられる。
【０１２４】
[0140]いくつかの態様において、本開示の抗体は、以下の特性の１つまたはそれより多くを有する：ｓＭＩＣタンパク質のアルファ−３ドメイン上のＱＱＷＧＤＶＬＰ（配列番号２２）を含むアミノ酸配列中のエピトープ、特にアルファ−３ドメイン中のアミノ酸配列ＧＤＶＬ（配列番号２３）を含むエピトープに結合する；ｓＭＩＣ、例えばｓＭＩＣＡおよび／またはｓＭＩＣＢに特異的に結合するが、膜結合型ＭＩＣ、例えばＭＩＣＡおよび／またはＭＩＣＢ、特に細胞表面上に存在するＭＩＣタンパク質の細胞外ドメインには特異的に結合しない；抗体５Ｃ９と比較した際、同等のまたはそれより高い平衡会合定数ＫＡで、前立腺癌細胞株ＤＵ−１４５によって産生されるｓＭＩＣに結合する；抗体５Ｃ９と比較した際、同等のまたはそれより低い平衡解離定数ＫＤで、前立腺癌細胞株ＤＵ−１４５によって産生されるｓＭＩＣに結合する；前立腺癌細胞株ＤＵ−１４５異種移植片を接種されたマウスにおいて、ｓＭＩＣＢのレベルを減弱させることが可能である；異種移植された前立腺癌細胞株ＤＵ−１４５、例えばマウスに異種移植されたＤＵ−１４５、特にＲａｇ２−／−マウスに異種移植されたＤＵ−１４５の増殖を減弱させることが可能である；そして特にＩＬ−１２と組み合わせて用いた際、ＩＦＮ−γの発現を増加させることが可能である。
【０１２５】
[0141]いくつかの態様において、本開示の抗体は、以下の特性を有する：ｓＭＩＣタンパク質のアルファ−３ドメイン上のＱＱＷＧＤＶＬＰ（配列番号２２）を含むアミノ酸配列中のエピトープ、特にアルファ−３ドメイン中のアミノ酸配列ＧＤＶＬを含むエピトープに結合する；が、膜結合型ＭＩＣ、例えばＭＩＣＡおよび／またはＭＩＣＢの細胞外ドメイン、特に細胞表面上に存在するＭＩＣタンパク質中の同じエピトープには特異的に結合しない；そして前立腺癌細胞株ＤＵ−１４５に関する上記特性の少なくとも１つ、例えばｓＭＩＣＢへの結合、ｓＭＩＣＢレベルの減弱、および／または異種移植されたＤＵ−１４５の増殖の減弱を有する。
【０１２６】
[0142]本明細書の態様において、適切な特性を持つ抗体は、ポリクローナル、モノクローナル、非ヒト、キメラ、ヒト化、完全ヒト抗体、操作抗体または抗体断片であってもよい。抗体は、単一特異性（すなわち単一エピトープに結合する−一価）、あるいは二重特異性および三重特異性抗体を含めて、多重特異性（すなわち単一エピトープより多くに結合する−多価）であってもよい（例えば、本明細書に援用される、Ｓｈａｒｋｅｙら，  ２０１０，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｔｈｅｒ  Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．  ２５（１）：１−１２）；米国特許公報２００８００６９８２０を参照されたい）。いくつかの態様において、抗体は、小分子の二価および二重特異性抗体断片である、一本鎖抗体またはディアボディであってもよい。いくつかの態様において、抗体は、非ヒト抗体、例えばヤギ、ウマ、ウシ、ニワトリ、ラクダ、ラマ、ウサギ、ラット、またはマウスから調製されてもよいし、あるいは非ヒト抗体に基づくキメラまたはヒト化抗体を含んでもよい。いくつかの態様において、抗体は、抗体の定常領域の一部またはすべてを含んでもよい。いくつかの態様において、抗体は、ＩｇＡ（例えばＩｇＡ１またはＩｇＡ２）；ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）およびＩｇＭより選択されるアイソタイプに対応する定常領域を含む。
【０１２７】
[0143]いくつかの態様において、抗体は、本明細書および実施例に記載する、抗体５Ｃ９の抗原結合特性を含む。エピトープマッピング研究によって、５Ｃ９抗体が結合するエピトープは、ｓＭＩＣＡおよび／またはｓＭＩＣＢのアルファ−３ドメイン中の少なくともアミノ酸配列ＱＱＷＧＤＶＬＰ（配列番号２２）、特にアミノ酸配列ＧＤＶＬ（配列番号２３）であると同定される。５Ｃ９抗体は、細胞において発現される膜結合型ＭＩＣＡ／ＭＩＣＢには結合しない（例えば図９を参照されたい）。したがって、いくつかの態様において、抗体は、配列番号２４、より詳細には配列番号２５を含む、軽鎖可変領域アミノ酸配列中のＣＤＲ  Ｌ１、ＣＤＲ  Ｌ２、ＣＤＲ  Ｌ３の１つまたはそれより多くを含む：
【０１２８】
【化１】
2020502042.tif 000004
【０１２９】
[0144]いくつかの態様において、抗体は、配列番号２８、より詳細には配列番号２９を含む、重鎖可変領域アミノ酸配列中のＣＤＲ  Ｈ１、ＣＤＲ  Ｈ２、ＣＤＲ  Ｈ３の１つまたはそれより多くを含む：
【０１３０】
【化２】
2020502042.tif 000005
【０１３１】
[0145]いくつかの態様において、抗体は、配列番号２５を含む軽鎖可変領域アミノ酸配列中のＣＤＲ  Ｌ１、ＣＤＲ  Ｌ２、およびＣＤＲ  Ｌ３を含み、そして配列番号２９を含む重鎖可変領域アミノ酸配列中のＣＤＲ  Ｈ１、ＣＤＲ  Ｈ２、およびＣＤＲ  Ｈ３を含む。
【０１３２】
[0146]当該技術分野に理解されるように、そして本明細書に記載するように、抗体のＣＤＲ領域を描写するアミノ酸位／境界は、ＣＤＲ領域を決定するための背景および当該技術分野に知られる多様な方法に応じて、多様でありうる。可変領域内のいくつかの位は、その位が一組の基準の下ではＣＤＲ領域内にある一方、異なる組の基準の下ではＣＤＲ領域外にあるようである点で、ハイブリッドＣＤＲとして見られうる。いくつかの態様において、前述の可変軽鎖および可変重鎖中のＣＤＲは、本明細書に記載されるようなＫａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、またはＡｂＭスキームを用いて描写され、特にＫａｂａｔ番号付け系に基づいて描写されうる。Ｋａｂａｔ基準に基づく例示的なＣＤＲを表１に示す。
【０１３３】
[0147]表１
【０１３４】
【表２】
2020502042.tif 000006
【０１３５】
[0148]上述のＣＤＲ配列は、Ｋａｂａｔの基準を用いて特定されてきているが、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、ならびに「接触」アプローチ、ＩＭＧＴアプローチ（Ｌｅｆｒａｎｃら，  ２００３，  Ｄｅｖ  Ｃｏｍｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２７：５５−７７）およびＰａｒａｔｏｍｅなどの計算プログラム（Ｋｕｎｉｋら，  ２０１２，  Ｎｕｃｌ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  Ｗ５２１−４；  ｗｗｗ．ｏｆｒａｎｌａｂ．ｏｒｇ／ｐａｒａｔｏｍｅ／）を含む、他の方法に基づいてもよいことが理解されるものとする。
【０１３６】
[0149]いくつかの態様において、抗体は、配列番号２５のアミノ酸配列の軽鎖可変領域中の少なくとも１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの態様において、抗体は、配列番号２９のアミノ酸配列の重鎖可変領域中の少なくとも１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの態様において、抗体は、配列番号２５のアミノ酸配列の軽鎖可変領域中の少なくとも１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲ、および配列番号２９のアミノ酸配列の重鎖可変領域中の少なくとも１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。
【０１３７】
[0150]いくつかの態様において、抗体は、アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）を含むＣＤＲ  Ｌ１；アミノ酸配列ＫＶＳＮＲＦＳ（配列番号４１）を含むＣＤＲ  Ｌ２；およびアミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＦＴ（配列番号４２）を含むＣＤＲ  Ｌ３より選択されるＣＤＲの少なくとも１つ、２つ、または３つを含む。いくつかの態様において、抗体は、アミノ酸配列ＮＹＬＩＥ（配列番号４３）を含むＣＤＲ  Ｈ１；アミノ酸配列ＬＩＹＰＧＳＧＧＴＮＹＮＥＫＦＫＧ（配列番号４４）を含むＣＤＲ  Ｈ２；およびアミノ酸配列ＩＹＹＧＮＲＤＹＧＭＤＹ（配列番号４５）を含むＣＤＲ  Ｈ３より選択されるＣＤＲの少なくとも１つ、２つ、または３つを含む。
【０１３８】
[0151]いくつかの態様において、抗体は、アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）を含むＣＤＲ  Ｌ１；アミノ酸配列ＫＶＳＮＲＦＳ（配列番号４１）を含むＣＤＲ  Ｌ２；アミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＦＴ（配列番号４２）を含むＣＤＲ  Ｌ３；アミノ酸配列ＮＹＬＩＥ（配列番号４３）を含むＣＤＲ  Ｈ１；アミノ酸配列ＬＩＹＰＧＳＧＧＴＮＹＮＥＫＦＫＧ（配列番号４４）を含むＣＤＲ  Ｈ２；およびアミノ酸配列ＩＹＹＧＮＲＤＹＧＭＤＹ（配列番号４５）を含むＣＤＲ  Ｈ３より選択されるＣＤＲの少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つすべてを含む。
【０１３９】
[0152]いくつかの態様において、１つまたはそれより多い特定されたＣＤＲを含有する抗体の任意の態様に関して、抗体が、適切な機能特性、例えばｓＭＩＣＡおよび／またはｓＭＩＣＢのアルファ３ドメイン中の特定されたエピトープに特異的に結合するが、細胞膜結合型ＭＩＣＡおよび／またはＭＩＣＢ上のエピトープに結合しない特性を保持する限り、ＣＤＲ配列は、１つまたはそれより多いアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有してもよい。いくつかの態様において、ＣＤＲ配列は、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはそれより多いアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有する。いくつかの態様において、ＣＤＲがアミノ酸置換を有する場合、置換は保存的置換を含む。
【０１４０】
[0153]いくつかの態様において、抗体は、配列番号２４、より詳細には配列番号２５のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれより高い配列同一性を有する、軽鎖可変領域ＶＬを含む。
【０１４１】
[0154]いくつかの態様において、抗体は、配列番号２８、より詳細には配列番号２９のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれより高い配列同一性を有する、重鎖可変領域ＶＨを含む。
【０１４２】
[0155]いくつかの態様において、抗体は、配列番号２４、より詳細には配列番号２５のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれより高い配列同一性を有する、軽鎖可変領域ＶＬ、および配列番号２８、より詳細には配列番号２９のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれより高い配列同一性を有する、重鎖可変領域ＶＨを含む。
【０１４３】
[0156]いくつかの態様において、抗体は、配列番号２４、より詳細には配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＶＬ、および配列番号２８、より詳細には配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＶＨを含む。
【０１４４】
[0157]いくつかの態様において、軽鎖可変領域に対するアミノ酸配列同一性の特定されたレベルを持つ抗体は、配列番号２４、より詳細には配列番号２５のＶＬ参照配列に比較した際、１つまたはそれより多いアミノ酸置換、欠失および／または挿入を有する。いくつかの態様において、抗体は、軽鎖可変領域参照配列に比較した際、１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはそれより多いアミノ酸置換、欠失および／または挿入を含む。いくつかの態様において、アミノ酸置換の背景において、置換は保存的アミノ酸置換を含む。特に、いくつかの態様において、保存的置換は、軽鎖可変領域参照配列のフレームワーク領域（非ＣＤＲ領域：ＦＲＬ１、ＦＲＬ２、ＦＲＬ３およびＦＲＬ４）上に存在する。
【０１４５】
[0158]いくつかの態様において、重鎖可変領域に対するアミノ酸配列同一性の特定されたレベルを持つ抗体は、配列番号２８、より詳細には配列番号２９のＶＨ参照配列に比較した際、１つまたはそれより多いアミノ酸置換、欠失および／または挿入を有する。いくつかの態様において、抗体は、重鎖可変領域参照配列に比較した際、１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはそれより多いアミノ酸置換、欠失および／または挿入を含む。いくつかの態様において、アミノ酸置換の背景において、置換は保存的アミノ酸置換を含む。特に、いくつかの態様において、保存的置換は、重鎖可変領域参照配列のフレームワーク領域（非ＣＤＲ領域：ＦＲＨ１、ＦＲＨ２、ＦＲＨ３およびＦＲＨ４）上に存在する。
【０１４６】
[0159]いくつかの態様において、特定された抗原結合ドメインのいずれかを持つ抗体は、ｓＭＩＣＡおよび／またはｓＭＩＣＢ、またはそのアルファ−３ドメインへの結合において抗原結合ドメインの機能特性が維持される限り、任意の適切なフレームワーク可変領域配列を含んでもよい。いくつかの態様において、フレームワーク配列は、齧歯類可変軽鎖および重鎖フレームワーク配列、特にマウスフレームワーク配列のものである。いくつかの態様において、抗体のフレームワーク配列は、ヒト重鎖コンセンサスフレームワーク配列のものである。ＶＨコンセンサスフレームワーク配列の例には：ヒトＶＨ下位群Ｉコンセンサスフレームワーク（配列番号３２）；ヒトＶＨ下位群ＩＩコンセンサスフレームワーク（配列番号３３）；ヒトＶＨ下位群ＩＩＩコンセンサスフレームワーク（配列番号３４）；およびヒトＶＨ下位群ＶＩＩコンセンサスフレームワーク（配列番号３５）が含まれる（図８）。いくつかの態様において、抗体のフレームワーク配列は、ヒトκ１軽鎖コンセンサスフレームワーク配列を含む。ＶＬコンセンサスフレームワーク配列の例には：ヒトＶＬカッパ下位群Ｉコンセンサスフレームワーク（配列番号３６）；ヒトＶＬカッパ下位群ＩＩコンセンサスフレームワーク（配列番号３７）；ヒトＶＬカッパ下位群ＩＩＩコンセンサスフレームワーク（配列番号３８）；およびヒトＶＬカッパ下位群ＩＶコンセンサスフレームワーク（配列番号３９）が含まれる（図８）。
【０１４７】
[0160]いくつかの態様において、特定された抗原結合ドメインのいずれかを持つ抗体は、任意の起源の軽鎖および／または重鎖上の定常領域を有してもよい。定常領域は、齧歯類、霊長類、または他の哺乳動物のものであってもよい。いくつかの態様において、定常領域はヒト起源のものである。したがって、いくつかの態様において、上記の特定された抗原結合ドメインのいずれかを持つ抗体は、ヒト定常領域、例えばヒト軽鎖定常領域ＣＬおよび／またはヒト重鎖定常領域を有してもよい。例えば、配列番号２４、より詳細には配列番号２５のＶＬアミノ酸配列は、ヒト軽鎖定常領域を有してもよく、そして配列番号２８、より詳細には配列番号２９のＶＨアミノ酸配列は、ヒト重鎖定常領域を有してもよい。いくつかの態様において、ヒト軽鎖定常領域ＣＬは、ヒトカッパまたはヒトラムダ定常領域を含む。いくつかの態様において、ヒト重鎖定常領域は、以下の少なくとも１つまたはすべてを含む：ヒトＣＨ１、ヒトヒンジ、ヒトＣＨ２およびヒトＣＨ３ドメイン。いくつかの態様において、重鎖定常領域はＦｃ部分を含み、ここでＦｃ部分はヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４またはＩｇＭアイソタイプである。
【０１４８】
[0161]いくつかの態様において、抗体は：アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）を含むＣＤＲ  Ｌ１；アミノ酸配列ＫＶＳＮＲＦＳ（配列番号４１）を含むＣＤＲ  Ｌ２；アミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＦＴ（配列番号４２）を含むＣＤＲ  Ｌ３より選択される、少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲ；およびヒト軽鎖定常領域、特にヒトカッパまたはラムダ軽鎖のヒト軽鎖定常領域を含む。
【０１４９】
[0162]いくつかの態様において、抗体は、アミノ酸配列ＮＹＬＩＥ（配列番号４３）を含むＣＤＲ  Ｈ１；アミノ酸配列ＬＩＹＰＧＳＧＧＴＮＹＮＥＫＦＫＧ（配列番号４４）を含むＣＤＲ  Ｈ２；アミノ酸配列ＩＹＹＧＮＲＤＹＧＭＤＹ（配列番号４５）を含むＣＤＲ  Ｈ３より選択される、少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲ；およびヒト重鎖定常領域、特に：ヒトＣＨ１、ヒトヒンジ、ヒトＣＨ２およびヒトＣＨ３ドメインの少なくとも１つまたはすべてを含むヒト重鎖定常領域を含む。こうした態様において、抗体は、可変領域中のヒトフレームワーク配列を含むことも可能である。いくつかの態様において、重鎖定常領域はＦｃ部分を含み、ここでＦｃ部分はヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４またはＩｇＭアイソタイプである。
【０１５０】
[0163]いくつかの態様において、抗体は：（ｉ）アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）を含むＣＤＲ  Ｌ１；アミノ酸配列ＫＶＳＮＲＦＳ（配列番号４１）を含むＣＤＲ  Ｌ２；アミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＦＴ（配列番号４２）を含むＣＤＲ  Ｌ３より選択される、少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲを有するＶＬ領域；およびヒト軽鎖定常領域、特にヒトカッパまたはラムダのヒト軽鎖定常領域、ならびに（ｉｉ）アミノ酸配列ＮＹＬＩＥ（配列番号４３）を含むＣＤＲ  Ｈ１；アミノ酸配列ＬＩＹＰＧＳＧＧＴＮＹＮＥＫＦＫＧ（配列番号４４）を含むＣＤＲ  Ｈ２；アミノ酸配列ＩＹＹＧＮＲＤＹＧＭＤＹ（配列番号４５）を含むＣＤＲ  Ｈ３より選択される、少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲを有するＶＨ領域、およびヒト重鎖定常領域、特に：ヒトＣＨ１、ヒトヒンジ、ヒトＣＨ２およびヒトＣＨ３ドメインの少なくとも１つまたはすべてを含むヒト重鎖定常領域を含む。いくつかの態様において、重鎖定常領域はＦｃ部分を含み、ここでＦｃ部分はヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４またはＩｇＭアイソタイプである。こうした態様において、抗体は、可変領域中にヒトフレームワーク配列を含んでもよい。
【０１５１】
[0164]いくつかの態様において、抗体は、配列番号２４、より詳細には配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＶＬ、およびヒト軽鎖定常（ＣＬ）領域、特にヒトカッパまたはラムダ定常領域；配列番号２８、より詳細には配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＶＨ、およびヒト重鎖定常領域、特に、ヒトＣＨ１、ヒトヒンジ、ヒトＣＨ２およびヒトＣＨ３ドメインを含むヒト重鎖定常領域を含む。いくつかの態様において、重鎖定常領域はＦｃ部分を含み、ここでＦｃ部分はヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４またはＩｇＭアイソタイプである。
【０１５２】
[0165]いくつかの態様において、抗体は、３またはそれより多い抗原結合部位を含有する多量体抗体、例えばＩｇＭアイソタイプまたは合成生成多量体抗体を含む。ＩｇＭ抗体は、一般的に、二価結合ユニットを４、５、または６ユニット有し、すなわち四量体、五量体および／または六量体に組み立てられた２つの重鎖および２つの軽鎖を有する。ＩｇＭ抗体は、Ｊ鎖を有してもまたは持たなくてもよい。Ｊ鎖を含まないＩｇＭの発現は、主に六量体を形成し、一方、Ｊ鎖を含むＩｇＭの発現は、主に五量体を形成する。多量体抗体は、より多数の抗原結合部位から生じる、ｓＭＩＣＡおよび／またはｓＭＩＣＢへの効率的な結合を促進するであろう。いくつかの態様において、ＩｇＭ抗体は、免疫した動物からＩｇＭ抗体を単離することによって、ＩｇＭアイソタイプ抗体を発現しているモノクローナル抗体産生細胞株（例えばハイブリドーマ細胞株等）を単離することによって、あるいはＪ鎖を含むまたは含まないＩｇＭ抗体またはＩｇＭ可変重鎖および可変軽鎖をコードする核酸での適切な細胞株（例えばＣＨＯ、ＣＯＳ、３Ｔ３、ＰＣ１２、ＢＨＫ、Ｖｅｒｏ、Ｃ６神経膠腫、およびＨｅＬａ）のトランスフェクション／形質転換によって、得られうる（例えばＡｚｕｍａら，  ２００７，  Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  １３：２７４５−５０；  Ｍａｄｅｒら，  ２０１３，  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｓｃｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  ４：３８−４３；米国特許第７，７０９，６１５号を参照されたい）。いくつかの態様において、最初に単離されたＩｇＧ抗体を、適切な細胞株における発現によって、ＩｇＭアイソタイプにクラススイッチングしてもよい。例えば、Ｋｕｎｅｒｔら，  ２００４，  ＡＩＤＳ  Ｒｅｓ  Ｈｕｍ  Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ，  ２０：７５５−６２およびＷｏｌｂａｎｋら，  ２００３，  Ｊ  Ｖｉｒｏｌ．  ７７：４０９５−１０３は、ＩｇＧモノクローナル抗体のＩｇＭアイソタイプへのスイッチングを記載する。いくつかの態様において、多量体抗体として産生される一本鎖抗体または抗体断片を用いて、多量体抗体を生成してもよい（例えば、Ｐｏｗｅｒら，  ２００３，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．  ２０７：３３５−５０；  Ｇａｉｌら，  １９９９，  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．  ４５３（１−２）：１６４−８を参照されたい）。当該技術分野に知られる技術、例えばゲル濾過クロマトグラフィ、イオン交換クロマトグラフィ（例えばヒドロキシアパタイト）、およびアフィニティクロマトグラフィによって、ＩｇＭまたは一本鎖多量体抗体を精製してもよい（例えば、Ｖａｌａｓｅｋら，  ２０１１，  ＢｉｏＰｒｏｃｅｓｓ  Ｉｎｔ’ｌ．  ９（１１）：２８−３７；  Ｇａｇｎｏｎら，  ２００８，  ＢｉｏＰｈａｒｍ  Ｉｎｔ’ｌ．  Ｓ２６−Ｓ３６を参照されたい）。いくつかの態様において、多量体抗体は、５０％またはそれより多い六量体、６０％またはそれより多い五量体、あるいは特に８０％またはそれより多い五量体または六量体ＩｇＭ分子を含んでもよい。いくつかの態様において、ＩｇＭまたは多量体抗体は、上述の抗体結合ドメインを含み、抗体５Ｃ９のＣＤＲまたは可変領域の多様な組み合わせが含まれる。
【０１５３】
[0166]いくつかの態様において、抗体は、全長抗体の部分を含む、本開示の抗体の断片であってもよく、そしてこれには、抗原結合性または可変領域が含まれる。例示的な抗体断片には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ断片が含まれる。パパインでの抗体のタンパク質分解的消化は、２つの同一の抗原結合断片、Ｆａｂ’断片を生じ、各々、単一の抗原結合部位を含む。ペプシンでの抗体のタンパク質分解的消化は、抗原を架橋することが可能な２つの抗原結合断片、および残ったｐＦｃ’断片を有する、Ｆ（ａｂ’）２断片を生じる。断片の他のタイプには、ディアボディ、直鎖抗体、一本鎖抗体、および抗体断片から形成される多重特異性抗体が含まれることも可能である。抗体断片は、望ましい結合特性、例えばｓＭＩＣＡおよび／またはｓＭＩＣＢのアルファ−３ドメインにおける特定されたエピトープに特異的に結合するが、細胞膜に結合したＭＩＣＡおよび／またはＭＩＣＢの細胞外ドメインには結合しない特性を保持する点で、機能性である。
【０１５４】
[0167]いくつかの態様において、抗体を、多様な標識で標識してもよく、これには、レポーター分子および検出可能標識、例えばフルオロフォア、生物発光部分、発光部分、酵素、放射標識、および補欠分子族が含まれる。例示的な酵素には、とりわけ、セイヨウワサビ（ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ）ペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、およびアセチルコリンエステラーゼが含まれる。例示的な補欠分子族には、とりわけ、ストレプトアビジン／ビオチンおよびジゴキシゲニンが含まれる。例示的なフルオロフォアには、とりわけ、フルオレセイン、イソチオシアン酸フルオレセイン、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミン・フルオレセイン、塩化ダンシル、テキサスレッドおよびフィコエリトリンが含まれる。例示的な発光標識には、ルミナールが含まれる。例示的な生物発光標識には、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、およびエクオリンが含まれる。例示的な放射標識には、とりわけ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓ、２１１Ａｔ、９０Ｙ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１４Ｃ、２２５Ａｃ、２１２Ｂｉ、２２７Ａｃ、１９４Ｏｓ、２２３Ｒａ、１４９Ｔｂ、および３Ｈが含まれる。
【０１５５】
[0168]いくつかの態様において、本開示の抗体を、エフェクター部分にコンジュゲート化してもよい。エフェクター部分は、とりわけ、抗新生物剤、薬剤、毒素、生物学的活性タンパク質、他の抗体または抗体断片、合成または天然存在ポリマー、核酸（例えばＤＮＡおよびＲＮＡ）、キレート金属、およびナノ粒子であってもよい。例えば、抗体を、エフェクター部分、例えば細胞毒性剤、放射性核種または所定の生物学的反応を修飾する薬剤部分にコンジュゲート化してもよい。エフェクター部分は、タンパク質またはポリペプチドであってもよく、例えばそして限定なしに、毒素（例えばアブリン、リシンＡ、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）外毒素、またはジフテリア毒素）、血栓剤または抗血管形成剤（例えばアンギオスタチンまたはエンドスタチン）、あるいはサイトカインまたは増殖因子などの生物学的反応修飾剤（例えば、インターロイキン−Ｉ（ＩＬ−Ｉ）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、または神経増殖因子（ＮＧＦ））であってもよい。
【０１５６】
[0169]いくつかの態様において、エフェクター部分は、細胞毒または細胞毒性剤であってもよい。例示的な細胞毒および細胞毒性剤には、タキソール、クロラムブシル、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、エチジウムブロミド、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テニポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラセンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、メルファラン、ピューロマイシン、およびその類似体または相同体が含まれる。
【０１５７】
[0170]こうしたエフェクター部分を抗体にコンジュゲート化するための技術が当該技術分野に周知である（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら，  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，  第２版，  Ｒｏｂｉｎｓｏｎら監修，  ｐｐ．  ６２３−５３  （１９８７）；  Ｔｈｏｒｐｅら，  １９８２，  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ．  ６２：１１９−５８；  Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋら，  １９９９，  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｈｅｒ．  ８３：６７−１２３）；および“Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｄｒｕｇ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｎｓ：  Ｆｒｏｍ  Ｐｒｅ−Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｔｏ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，”  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ中，  Ｇａｉｌ  Ｌｅｗｉｓ  Ｐｈｉｌｌｉｐｓ監修，  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ  （２０１２）を参照されたい）。
【０１５８】
[0171]いくつかの態様において、本開示の抗体をポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分に付着させてもよい。いくつかの態様において、抗体は抗体断片である。ＰＥＧ部分を、抗体または抗体断片中に位置する任意の利用可能なアミノ酸側鎖または末端アミノ酸官能基、例えば任意の未結合（ｆｒｅｅ）アミノ、イミノ、チオール、ヒドロキシルまたはカルボキシル基を通じて、付着させてもよい。こうしたアミノ酸は、抗体または抗体断片中に天然に存在してもよいし、あるいは組換えＤＮＡ法を用いて、抗体または断片内にあるように操作されてもよい。多数の部位を用いて、２またはそれより多いＰＥＧ分子を付着させてもよい。ＰＥＧ部分を、抗体または断片中に位置する少なくとも１つのシステイン残基のチオール基を通じて、共有結合させてもよい。チオール基を付着点として用いる場合、適切に活性化されたエフェクター部分（例えばマレイミドおよびシステイン誘導体などのチオール選択的誘導体）を用いてもよい（例えば、Ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ）  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，  Ｍｉｌｔｏｎ  ＨａｒｒｉｓおよびＳ．  Ｚａｌｉｐｓｋｙ監修，  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，  ワシントンＤ．Ｃ．（１９９７）；  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｏｕｐｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ｍ．  ＡｓｌａｍおよびＡ．  Ｄｅｎｔ監修，  Ｇｒｏｖｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，  ニューヨーク，  １９９８；ならびにＣｈａｐｍａｎ，  ２００２，  Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ．  ５４：５３１−４５を参照されたい）。
【０１５９】
[0172]別の側面において、本明細書に提供するのは、本開示の抗体または抗原結合領域をコードするポリヌクレオチドである。特に、ポリヌクレオチドは単離ポリヌクレオチドである。ポリヌクレオチドは、関心対象のポリペプチドを発現可能な組換えポリヌクレオチドを生成するよう、遺伝子発現を制御する、１つまたはそれより多い異種制御配列に、機能可能であるように連結されてもよい。適切なポリペプチドまたはタンパク質をコードする異種ポリヌクレオチドを含有する発現構築物を、適切な宿主細胞内に導入して、対応するポリペプチドを発現させてもよい。
【０１６０】
[0173]いくつかの態様において、ポリヌクレオチドは、配列番号２４、より詳細には配列番号２５のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれより高い配列同一性を有する、軽鎖可変領域ＶＬをコードする。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドは、配列番号２８、より詳細には配列番号２９のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれより高い配列同一性を有する、重鎖可変領域ＶＨをコードする。
【０１６１】
[0174]いくつかの態様において、ポリヌクレオチドは：アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）を含むＣＤＲ  Ｌ１；アミノ酸配列ＫＶＳＮＲＦＳ（配列番号４１）を含むＣＤＲ  Ｌ２；アミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＦＴ（配列番号４２）を含むＣＤＲ  Ｌ３；アミノ酸配列ＮＹＬＩＥ（配列番号４３）を含むＣＤＲ  Ｈ１；アミノ酸配列ＬＩＹＰＧＳＧＧＴＮＹＮＥＫＦＫＧ（配列番号４４）を含むＣＤＲ  Ｈ２；およびアミノ酸配列ＩＹＹＧＮＲＤＹＧＭＤＹ（配列番号４５）を含むＣＤＲ  Ｈ３より選択される１つまたはそれより多いＣＤＲをコードする。
【０１６２】
[0175]いくつかの態様において、ポリヌクレオチドは：アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）を含むＣＤＲ  Ｌ１；アミノ酸配列ＫＶＳＮＲＦＳ（配列番号４１）を含むＣＤＲ  Ｌ２；およびアミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＦＴ（配列番号４２）を含むＣＤＲ  Ｌ３より選択されるＣＤＲの少なくとも１つ、２つ、または３つをコードする。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドは：アミノ酸配列ＮＹＬＩＥ（配列番号４３）を含むＣＤＲ  Ｈ１；アミノ酸配列ＬＩＹＰＧＳＧＧＴＮＹＮＥＫＦＫＧ（配列番号４４）を含むＣＤＲ  Ｈ２；およびアミノ酸配列ＩＹＹＧＮＲＤＹＧＭＤＹ（配列番号４５）を含むＣＤＲ  Ｈ３より選択されるＣＤＲの少なくとも１つ、２つ、または３つをコードする。
【０１６３】
[0176]いくつかの態様において、ポリヌクレオチドは、配列番号２５のアミノ酸配列の軽鎖可変領域および配列番号２９のアミノ酸配列の重鎖可変領域中のＣＤＲの少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つすべてをコードする。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドは：アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）を含むＣＤＲ  Ｌ１；アミノ酸配列ＫＶＳＮＲＦＳ（配列番号４１）を含むＣＤＲ  Ｌ２；アミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＦＴ（配列番号４２）を含むＣＤＲ  Ｌ３；アミノ酸配列ＮＹＬＩＥ（配列番号４３）を含むＣＤＲ  Ｈ１；アミノ酸配列ＬＩＹＰＧＳＧＧＴＮＹＮＥＫＦＫＧ（配列番号４４）を含むＣＤＲ  Ｈ２；およびアミノ酸配列ＩＹＹＧＮＲＤＹＧＭＤＹ（配列番号４５）を含むＣＤＲ  Ｈ３より選択されるＣＤＲの少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つすべてをコードする。
【０１６４】
[0177]いくつかの態様において、ポリヌクレオチドは、アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）を含むＣＤＲ  Ｌ１；アミノ酸配列ＫＶＳＮＲＦＳ（配列番号４１）を含むＣＤＲ  Ｌ２；アミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＦＴ（配列番号４２）を含むＣＤＲ  Ｌ３より選択されるＣＤＲの少なくとも１つ、２つ、または３つ、およびヒト軽鎖定常領域、特にヒトカッパまたはラムダ軽鎖のヒト軽鎖定常領域を含むポリペプチドをコードする。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドは、アミノ酸配列ＮＹＬＩＥ（配列番号４３）を含むＣＤＲ  Ｈ１；アミノ酸配列ＬＩＹＰＧＳＧＧＴＮＹＮＥＫＦＫＧ（配列番号４４）を含むＣＤＲ  Ｈ２；アミノ酸配列ＩＹＹＧＮＲＤＹＧＭＤＹ（配列番号４５）を含むＣＤＲ  Ｈ３より選択されるＣＤＲの少なくとも１つ、２つ、または３つ、ならびにヒト重鎖定常領域、特に：ヒトＣＨ１、ヒトヒンジ、ヒトＣＨ２およびヒトＣＨ３ドメインの少なくとも１つまたはすべてを含むヒト重鎖定常領域を含むポリペプチドをコードする。いくつかの態様において、コードされる重鎖定常領域はＦｃ部分を含み、ここでＦｃ部分はヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４またはＩｇＭアイソタイプである。いくつかの態様において、コードされる抗体は、可変領域中のヒトフレームワーク配列を含んでもよい。
【０１６５】
[0178]いくつかの態様において、ポリヌクレオチドは：（ｉ）アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）を含むＣＤＲ  Ｌ１；アミノ酸配列ＫＶＳＮＲＦＳ（配列番号４１）を含むＣＤＲ  Ｌ２；アミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＦＴ（配列番号４２）を含むＣＤＲ  Ｌ３より選択される、少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲを有するＶＬ領域；およびヒト軽鎖定常領域、特にカッパまたはラムダ軽鎖のヒト軽鎖定常領域、ならびに（ｉｉ）アミノ酸配列ＮＹＬＩＥ（配列番号４３）を含むＣＤＲ  Ｈ１；アミノ酸配列ＬＩＹＰＧＳＧＧＴＮＹＮＥＫＦＫＧ（配列番号４４）を含むＣＤＲ  Ｈ２；アミノ酸配列ＩＹＹＧＮＲＤＹＧＭＤＹ（配列番号４５）を含むＣＤＲ  Ｈ３より選択される、少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲを有するＶＨ領域、およびヒト重鎖定常領域、特に：ヒトＣＨ１、ヒトヒンジ、ヒトＣＨ２およびヒトＣＨ３ドメインの少なくとも１つまたはすべてを含むヒト重鎖定常領域を含むポリペプチドをコードする。いくつかの態様において、コードされる重鎖定常領域はＦｃ部分を含み、ここでＦｃ部分はヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４またはＩｇＭアイソタイプである。こうした態様において、コードされる抗体は、可変領域中のヒトフレームワーク配列を含んでもよい。
【０１６６】
[0179]いくつかの態様において、ポリヌクレオチドは：（ｉ）配列番号２４、より詳細には配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＶＬ、およびヒト軽鎖定常（ＣＬ）領域、特にヒトカッパまたはラムダ定常領域；ならびに（ｉｉ）配列番号２８、より詳細には配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＶＨ、およびヒト重鎖定常領域、特に、ヒトＣＨ１、ヒトヒンジ、ヒトＣＨ２およびヒトＣＨ３ドメインを含むヒト重鎖定常領域を含むポリペプチドをコードする。いくつかの態様において、コードされる重鎖定常領域はＦｃ部分を含み、ここでＦｃ部分はヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４またはＩｇＭアイソタイプである。
【０１６７】
[0180]当業者には明らかであろうように、タンパク質配列がわかると、多様なアミノ酸に対応するすべてのありうるコドンがわかるため、対象タンパク質配列をコードすることが可能なポリヌクレオチドすべての説明が提供される。ありうるコドン選択に基づいて、組み合わせを選択することによって、前述のポリペプチドをコードする非常に多数の核酸が作製可能であり、そしてこうしたすべての変動は、本明細書に記載するポリペプチドに関して、具体的に開示されると見なされるものとする。
【０１６８】
[0181]いくつかの態様において、ポリヌクレオチドは、ヌクレオチドレベルで：（ａ）配列番号２６の参照ポリヌクレオチド配列に対して、少なくとも約８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％あるいはそれより高い配列同一性を有し、そして配列番号２４のポリペプチドをコードする。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドは、ヌクレオチドレベルで：（ａ）配列番号３０の参照ポリヌクレオチド配列に対して、少なくとも約８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％あるいはそれより高い配列同一性を有し、そして配列番号２８のポリペプチドをコードする。
【０１６９】
[0182]いくつかの態様において、ポリヌクレオチドは、ヌクレオチドレベルで：（ａ）配列番号２７の参照ポリヌクレオチド配列に対して、少なくとも約８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％あるいはそれより高い配列同一性を有し、そして配列番号２５のポリペプチドをコードする。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドは、ヌクレオチドレベルで：（ａ）配列番号３１の参照ポリヌクレオチド配列に対して、少なくとも約８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％あるいはそれより高い配列同一性を有し、そして配列番号２９のポリペプチドをコードする。
【０１７０】
[0183]いくつかの態様において、本明細書のポリヌクレオチドを、多様な方式で操作して、コードされるポリペプチドの発現を提供してもよい。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチドおよび／または対応するポリペプチドの発現のための、とりわけ、複製起点、転写プロモーター、リーダー配列、転写エンハンサー、リボソーム結合または進入部位、終結配列、ポリアデニル化配列、および選択可能マーカー配列を含む、制御配列に機能可能であるように連結されている。選択可能マーカー遺伝子を用いる場合、適切なマーカー遺伝子には、限定なしに、薬剤耐性マーカー（例えばＧ４１８、ハイグロマイシン、またはメトトレキセート等）、蛍光タンパク質（例えば緑色蛍光タンパク質およびその変異体、ルシフェラーゼ等）、および検出可能酵素（例えばベータ・ガラクトシダーゼ、グルクロニダーゼ）が含まれる。発現ベクターに応じて、ベクター内への挿入前に、単離ポリヌクレオチドを操作することが望ましいかまたは必要でありうる。組換えＤＮＡ法を利用して、ポリヌクレオチドおよび核酸配列を修飾するための技術が、当該技術分野に周知である。ガイダンスは、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  第３版，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  ニューヨーク（２００１）；およびＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ａｕｓｕｂｅｌ．  Ｆ．監修，  Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂ．  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  （１９９８），  ２０１３年まで改訂に提供される。
【０１７１】
[0184]いくつかの態様において、ＶＬコード核酸を、軽鎖定常領域ＣＬをコードする別の核酸に、機能可能であるように連結することによって、ＶＬ領域をコードする核酸を全長軽鎖遺伝子にしてもよい。いくつかの態様において、軽鎖定常領域は、カッパまたはラムダ、特にヒトカッパまたはラムダ軽鎖定常領域であってもよい。本明細書において、軽鎖定常領域の配列は、当該技術分野に知られる（例えば、Ｋａｂａｔら，  １９９１，  “Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  第５版”  ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２を参照されたい）。
【０１７２】
[0185]いくつかの態様において、ＶＨコード核酸を、重鎖定常領域、例えばＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２および／またはＣＨ３をコードする別の核酸に、機能可能であるように連結することによって、ＶＨ領域をコードする核酸を全長重鎖遺伝子にしてもよい。軽鎖定常領域の配列は当該技術分野に知られる（例えば、Ｋａｂａｔら，  １９９１，  “Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  第５版”  ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２を参照されたい）。いくつかの態様において、コードされる定常領域は、ＩｇＡ（例えばＩｇＡ１またはＩｇＡ２）；ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）またはＩｇＭ、特にＩｇＧ１またはＩｇＧ２、より詳細にはＩｇＧ２である。Ｆａｂ断片重鎖遺伝子を生成するため、ＶＨ領域をコードする核酸を、重鎖ＣＨ１領域をコードする別の核酸に、機能可能であるように連結してもよい。ｓｃＦｖ遺伝子を生成するため、柔軟なリンカーによって連結されたＶＬおよびＶＨ領域が、連続する一本鎖タンパク質として発現されるように、ＶＨおよびＶＬをコードする核酸を、柔軟なペプチドリンカーをコードする、例えばアミノ酸配列（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）３をコードする別の核酸を通じて、機能可能であるように共に連結してもよい。
【０１７３】
[0186]いくつかの態様において、ポリヌクレオチドは、発現ベクターの一部であってもよく、ここでベクターおよびポリヌクレオチドには、ポリヌクレオチドの発現および／またはコードされるポリペプチドの発現を制御するための、１つまたはそれより多い機能可能であるように連結された制御配列が含まれる。したがって、いくつかの態様において、発現ベクターは、コードされるポリペプチド、例えば配列番号２５および／または配列番号２９、あるいは配列番号２５のアミノ酸配列の軽鎖可変領域および配列番号２９のアミノ酸配列の重鎖可変領域中のＣＤＲの１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つすべてを含むポリペプチドの発現のため、１つまたはそれより多い制御配列に、機能可能であるように連結された、本明細書に開示するポリヌクレオチドを含む。いくつかの態様において、発現ベクターは、アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）を含むＣＤＲ  Ｌ１；アミノ酸配列ＫＶＳＮＲＦＳ（配列番号４１）を含むＣＤＲ  Ｌ２；アミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＦＴ（配列番号４２）を含むＣＤＲ  Ｌ３；アミノ酸配列ＮＹＬＩＥ（配列番号４３）を含むＣＤＲ  Ｈ１；アミノ酸配列ＬＩＹＰＧＳＧＧＴＮＹＮＥＫＦＫＧ（配列番号４４）を含むＣＤＲ  Ｈ２；およびアミノ酸配列ＩＹＹＧＮＲＤＹＧＭＤＹ（配列番号４５）を含むＣＤＲ  Ｈ３より選択されるＣＤＲの少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つすべてをコードするポリヌクレオチドを含む。組換え発現ベクターは、組換えＤＮＡ法に好適に供されうる、そしてポリヌクレオチド配列の発現を達成可能である、任意のベクター（例えばプラスミドまたはウイルス）であってもよい。ベクターの選択は、典型的には、ベクターを導入しようとする宿主細胞とベクターの適合可能性に応じるであろう。ベクターは直鎖であってもまたは閉鎖環状プラスミドであってもよい。例示的な発現ベクターには、とりわけ、Ｔ７またはＴ７ｌａｃプロモーターに基づくベクター（ｐＡＣＹ：Ｎｏｖａｇｅｎ；ｐＥＴ）；バキュロウイルスプロモーターに基づくベクター（例えばｐＢＡＣ）；Ｅｆｌ−αおよびＨＴＬＶプロモーターに基づくベクター（例えばｐＦＵＳＥ２；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、米国カリフォルニア州）；ＣＭＶエンハンサーおよびヒト・フェリチン軽鎖遺伝子プロモーターに基づくベクター（例えばｐＦＵＳＥ；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、米国カリフォルニア州）；ＣＭＶプロモーターに基づくベクター（例えばｐＦＬＡＧ：Ｓｉｇｍａ、米国）；およびジヒドロ葉酸レダクターゼプロモーターに基づくベクター（例えばｐＥＡＳＥ：Ａｍｇｅｎ、米国）が含まれる。多様なベクターを、関心対象のポリペプチドの一過性または安定発現に用いてもよい。いくつかの態様において、抗体軽鎖遺伝子および抗体重鎖遺伝子は、別個のベクター中にあってもよいし、または両方の遺伝子が同じ発現ベクター中にあってもよい。いくつかの態様において、抗体の発現のためのベクターは、すでに、定常鎖配列を含有していてもよい。例えば、ベクターは、多様な軽鎖定常領域に、軽鎖可変領域を機能可能であるように連結して、抗体の軽鎖を発現することが可能な発現ベクターを生成する様式で、ベクター内に可変軽鎖領域���挿入するように、軽鎖定常領域の配列を含有してもよい。ベクターにはまた、宿主細胞からの抗体鎖の分泌を促進するシグナルペプチドも含まれてもよい。同様に、ベクターは、重鎖定常領域に、重鎖可変領域を機能可能であるように連結して、抗体の重鎖を発現することが可能な発現ベクターを生成する様式で、ベクター内に可変重鎖領域を挿入するように、重鎖定常領域の配列を含有してもよい。
【０１７４】
[0187]別の側面において、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを、宿主細胞におけるポリペプチドの発現のため、１つまたはそれより多い制御配列に機能可能であるように連結する。したがって、いくつかの態様において、宿主細胞は、本明細書記載のポリヌクレオチドまたは発現ベクター、例えば配列番号２５および／または配列番号２９、あるいは配列番号２５のアミノ酸の軽鎖可変領域および配列番号２９のアミノ酸配列の重鎖可変領域中のＣＤＲの１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つすべてを含むポリペプチドをコードする発現ベクターまたはポリヌクレオチドを含む。いくつかの態様において、宿主細胞は：アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）を含むＣＤＲ  Ｌ１；アミノ酸配列ＫＶＳＮＲＦＳ（配列番号４１）を含むＣＤＲ  Ｌ２；アミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＦＴ（配列番号４２）を含むＣＤＲ  Ｌ３；アミノ酸配列ＮＹＬＩＥ（配列番号４３）を含むＣＤＲ  Ｈ１；アミノ酸配列ＬＩＹＰＧＳＧＧＴＮＹＮＥＫＦＫＧ（配列番号４４）を含むＣＤＲ  Ｈ２；およびアミノ酸配列ＩＹＹＧＮＲＤＹＧＭＤＹ（配列番号４５）を含むＣＤＲ  Ｈ３より選択されるＣＤＲの少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つすべてをコードする発現ベクターまたはポリヌクレオチドを含む。ポリペプチドを発現する際に使用するための宿主細胞は、当該技術分野に周知であり、そして限定されるわけではないが、これには、細菌細胞、例えば大腸菌、酵母細胞；昆虫細胞、例えばショウジョウバエ属（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）Ｓ２およびスポドプテラ属（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ）Ｓｆ９細胞；動物細胞、例えばチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）、アフリカミドリザル（Ａｆｒｉｃａｎ  Ｇｒｅｅｎ  Ｍｏｎｋｅｙ）腎臓（ＣＯＳ）、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）、マウス骨髄腫（例えばＮＳ０およびＳｐ２／０）、およびヒト胚性腎臓（ＨＥＫ）；ならびに植物細胞が含まれる。上述の宿主細胞のための適切な培地および増殖条件は、当該技術分野に周知である。いくつかの態様において、宿主細胞および発現ベクターを用いて、関心対象のポリペプチドを発現させる。いくつかの態様において、宿主細胞は、本開示の抗体のいずれかをコードする核酸、または本明細書に提供するポリヌクレオチドのいずれかを含む。
【０１７５】
[0188]いくつかの態様において、発現ベクターおよびポリヌクレオチドを含む宿主細胞を、適切な培地中で、そしてコードされるポリペプチド、例えば配列番号２５および／または配列番号２９、あるいは配列番号２５のアミノ酸配列の軽鎖可変領域および配列番号２９のアミノ酸配列の重鎖可変領域中のＣＤＲの１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つすべてを含むポリペプチドの発現に適した培養条件下で培養する。いくつかの態様において、宿主細胞を、アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）を含むＣＤＲ  Ｌ１；アミノ酸配列ＫＶＳＮＲＦＳ（配列番号４１）を含むＣＤＲ  Ｌ２；アミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＦＴ（配列番号４２）を含むＣＤＲ  Ｌ３；アミノ酸配列ＮＹＬＩＥ（配列番号４３）を含むＣＤＲ  Ｈ１；アミノ酸配列ＬＩＹＰＧＳＧＧＴＮＹＮＥＫＦＫＧ（配列番号４４）を含むＣＤＲ  Ｈ２；およびアミノ酸配列ＩＹＹＧＮＲＤＹＧＭＤＹ（配列番号４５）を含むＣＤＲ  Ｈ３より選択されるＣＤＲの少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つすべてを有するポリペプチドを発現するために適した培地中で培養する。いくつかの態様において、発現ベクターとともにｉｎ  ｖｉｔｒｏ発現系を用いて、ポリペプチドを発現させてもよい。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ発現系には、大腸菌、ウサギ網状赤血球、小麦胚芽、昆虫細胞、またはヒト細胞に基づくものが含まれる。宿主細胞でまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏで発現するのであっても、発現されたポリペプチドを、以下にさらに記載するように、単離するかまたは精製することも可能である。
【０１７６】
[0189]いくつかの態様において、抗体遺伝子をコードする組換え発現ベクターを宿主細胞に導入する場合、抗体は、宿主細胞における抗体の発現または培地内への抗体の分泌を可能にするために適した条件下で、それに十分な期間、宿主細胞を培養することによって、産生される。当該技術分野に知られる単離および／または精製法によって、宿主細胞および／または培地から抗体を回収してもよい。
【０１７７】
[0190]別の側面において、当業者に利用可能である多様な技術によって、本開示の抗体を調製してもよい。ポリクローナル抗体の調製は、当業者に周知の慣用的な方法、例えば本明細書に援用される、Ｇｒｅｅｎら，  “Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｓｅｒａ，”  ：  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ中，  Ｍａｎｓｏｎ監修，  Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ  （１９９２）；  Ｃｏｌｉｇａｎら，  “Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｓｅｒａ  ｉｎ  Ｒａｂｂｉｔｓ，  Ｒａｔｓ  Ｍｉｃｅ  ａｎｄ  Ｈａｍｓｔｅｒｓ，”  ：  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ中，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．  （１９９２）に記載される方法を使用してもよい。
【０１７８】
[0191]モノクローナル抗体の調製はまた、当該技術分野に知られる慣用技術、例えば、本明細書に援用される、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ，  １９７５，  Ｎａｔｕｒｅ  ２５６（５５１７）：４９５−７；  Ｃｏｌｉｇａｎら、上記、セクション２．５．１−２．６．７；  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．  （１９９２）；ならびにＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ監修，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，  ニューヨーク（１９８８）；  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．，  Ｖｏｌ．  ３７８，  Ａｌｂｉｔａｒ  Ｍ．監修，  Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ  （２００７）に記載される技術を用いることも可能である。モノクローナル抗体は、抗原で免疫し、そして続いて、抗体を作製するＢ細胞を単離することによって、最も頻繁にはマウスにおいて生成される。次いで、Ｂ細胞を、同じ種の別の安定な細胞タイプに融合させて、「ハイブリドーマ」を生成することによって、Ｂ細胞を不死化する。個々のＢ細胞は、１つの特異的抗体（すなわちクローン性に単一特異的である）を作製し、これは、その一次アミノ酸配列および根底にある遺伝子配列によって特定される。また、用語「ヘテロハイブリドーマ」および「ヘテロ骨髄腫」は、それぞれ、２つの異なる種由来のリンパ球および骨髄腫の融合によって不死化されたリンパ球細胞株を指す。多様な確立された技術によって、ハイブリドーマ培養から、モノクローナル抗体を単離し、そして精製してもよい。こうした単離技術には、プロテイン−Ａセファロースでのアフィニティクロマトグラフィ、サイズ排除クロマトグラフィ、およびイオン交換クロマトグラフィが含まれる（例えば、Ｃｏｌｉｇａｎら、上記、セクション２．７．１−２．７．１２およびセクション２．９．１−２．９．３；  Ｂａｒｎｅｓら，  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｇ  （ＩｇＧ），  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．中，  Ｖｏｌ．  １０，  ７９−１０４ページ，  Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ  （１９９２）を参照されたい）。抗体を調製するための例示的な方法を実施例に記載する。
【０１７９】
[0192]一般的に、ＤＮＡ、ペプチド、またはタンパク質に由来する免疫原を用いて、ポリクローナルまたはモノクローナル抗体の生成を達成してもよい。例えばマウスまたはウサギ、あるいは適切な抗体反応を生じる動物いずれかであってもよい動物を免疫することによって、ハイブリドーマを生成する。いくつかの態様において、動物内に、抗原をコードする核酸、またはタンパク質抗原、例えばＭＩＣＡ／ＭＩＣＢまたはその断片の細胞外ドメイン（例えばアルファ−３ドメイン）、あるいはＭＩＣＡ／ＭＩＣＢまたはその断片の細胞外ドメイン（例えばアルファ−３ドメイン）をコードする核酸を導入することによって、免疫を行う。いくつかの態様において、キーホールリンペット（ｋｅｙｈｏｌｅ  ｌｉｍｐｅｔ）ヘモシアニンなどの担体に、特定されたエピトープをコンジュゲート化してもよく、これにより、ペプチド単独よりもより強い抗体反応を誘発しうる。こうした変型および他の免疫スキームが当業者に利用可能である。いくつかの態様において、免疫後、例えば膜結合型ＭＩＣタンパク質で抗体調製物を吸収し、そしてＭＩＣの細胞外ドメイン、例えばｓＭＩＣＡおよび／またはｓＭＩＣＢでのアフィニティ精製に未吸収抗体を用いることによって、特定された特性を有するポリクローナル抗体を単離してもよい。ハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体を、特定されたエピトープへの結合、ｓＭＩＣおよび膜結合型ＭＩＣへの結合、ならびに本明細書に記載する他の特性に関して、スクリーニングしてもよい。所望の抗体を産生するハイブリドーマ細胞を、モノクローナル抗体産生のためにさらに選択し、そして用いてもよい。
【０１８０】
[0193]非ヒト免疫グロブリン、例えばラットまたはマウス抗体由来の可変配列、ならびにいくつかの態様において、典型的にはヒト免疫グロブリン・テンプレートから選択されるヒト免疫グロブリン定常領域を有する抗体である、キメラ抗体もまた、慣用的技術によって調製可能である。１つの方法は、可変領域をコードする非ヒト遺伝子および定常領域をコードするヒト遺伝子をクローニングして、そして組み換え技術を用いてこれらを合わせて、キメラ遺伝子を形成することである。適切な細胞における発現は、キメラタンパク質をコードするｍＲＮＡを生じる。別のプロセスは、相同組換えを用いることであり、ここで、齧歯類またはマウスハイブリドーマ細胞株を、対応する齧歯類免疫グロブリン定常領域遺伝子に相同な配列が隣接する、ヒト定常領域遺伝子でトランスフェクションする。トランスフェクションＤＮＡは、低頻度で、齧歯類遺伝子と組換えを起こし、ヒト免疫グロブリン定常領域遺伝子配列の挿入を生じる。キメラ抗体を生じるための多様な方法が、例えば、すべて本明細書にその全体が援用される、Ｍｏｒｒｉｓｏｎら，  １９８４，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．  ８１：６８５１−５；  Ｍｏｒｒｉｓｏｎら，  １９８５，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９（４７１９）：１２０２−７；  Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら，  １９８５，  Ｎａｔｕｒｅ  ３１４：２６８−７１；  Ｏｉら，  １９８６，  ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ４：２１４−２１；  Ｇｉｌｌｉｅｓら，  １９８５，  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  １２５：１９１−２０２；米国特許第５，８０７，７１５号；米国特許第４，８１６，５６７号；および米国特許第４，８１６３９７号に記載される。
【０１８１】
[0194]いくつかの態様において、本明細書の抗体をヒト化抗体として調製してもよく、これは、非ヒト免疫グロブリン由来の最小配列を含有するキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖またはその断片（例えばＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２または抗体の他のターゲット結合サブドメイン）である。一般的には、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、そして典型的には２つの可変ドメインの実質的にすべてを含み、ここでＣＤＲ領域のすべてまたは実質的にすべてが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、そしてフレームワーク領域のすべてまたは実質的にすべてがヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域、典型的にはヒト免疫グロブリンコンセンサス配列の少なくとも一部またはすべてを含むことも可能である。抗体ヒト化の方法は、例えば、すべてその全体が本明細書に援用される、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら，  １９８８，  Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−７；米国特許第５，２２５，５３９号；米国特許第５，５３０，１０１号；米国特許第５，５８５，０８９号；米国特許第５，５６５，３３２号；米国特許第５，６９３，７６１号；米国特許第５，６９３，７６２号；および米国特許第６，１８０，３７０号；ＰＣＴ公報ＷＯ  ９１／０９９６７；  Ｐａｄｌａｎ，  １９９１，  Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２８：４８９−９８；  Ｓｔｕｄｎｉｃｋａら，  １９９４，  Ｐｒｏｔ  Ｅｎｇ．  ７：８０５−１４；ならびにＲｏｇｕｓｋａら，  １９９４，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．  ９１：９６９−７３に記載される。
【０１８２】
[0195]宿主動物系でなく、ヒト免疫系の部分を所持する、トランスジェニックまたは染色体導入（ｔｒａｎｓ−ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｉｃ）動物を用いて、完全ヒト抗体を生成してもよい。これらのトランスジェニックおよび染色体導入動物には、ＨｕＭＡｂマウスおよびＫＭマウスと称されるマウスが含まれる。ＨｕＭＡｂマウスＴＭ（Ｍｅｄａｒｅｘ，  Ｉｎｃ．）は、非再編成ヒト重鎖（ミューおよびガンマ）およびカッパ軽鎖免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリン遺伝子ミニ遺伝子座を、内因性ミューおよびカッパ鎖遺伝子座を不活性化させるターゲティング突然変異とともに含有する（例えば、Ｌｏｎｂｅｒｇら，  １９９４，  Ｎａｔｕｒｅ  ３６８（６４７４）：８５６−９を参照されたい）。したがって、マウスは、マウスＩｇＭまたはカッパの発現減少を示し、そして免疫に反応して、導入されたヒト重鎖および軽鎖導入遺伝子が、クラススイッチングおよび体細胞突然変異を経て、高アフィニティヒトＩｇＧカッパ・モノクローナル抗体を生成する（Ｌｏｎｂｅｒｇ，  Ｎ．，  １９９４，  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  １１３：４９−１０１；  Ｌｏｎｂｅｒｇ，  Ｎ．およびＨｕｓｚａｒ，  Ｄ．，  １９９５，  Ｉｎｔｅｒｎ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏ１．  １３：６５−９３；ならびにＨａｒｄｉｎｇ，  Ｆ．およびＬｏｎｂｅｒｇ，  Ｎ．，  １９９５，  Ａｎｎ  ＮＹ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．  ７６４：５３６−４６）。ＨｕＭＡｂマウスの調製および使用、ならびにこうしたマウスによって所持されるゲノム修飾は、すべてその全内容が本明細書に完全に援用される、Ｔｕａｉｌｌｏｎら，  １９９４，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５２：２９１２−２０；  Ｔａｙｌｏｒら，  １９９４，  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ６：５７９−９１；  Ｆｉｓｈｗｉｌｄら，  １９９６，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  １４：８４５−５１；米国特許第５，５４５，８０６号；米国特許第５，５６９，８２５号；米国特許第５，６２５，１２６号；米国特許第５，６３３，４２５号；米国特許第５，７８９，６５０号；米国特許第５，８７７，３９７号；米国特許第５，６６１，０１６号；米国特許第５，８１４，３１８号；米国特許第５，８７４，２９９号；米国特許第５，７７０，４２９号；米国特許第５，５４５，８０７号；ならびにＰＣＴ公報ＷＯ  ９２１０３９１８、ＷＯ  ９３／１２２２７、ＷＯ  ９４／２５５８５、ＷＯ  ９７１１３８５２、ＷＯ  ９８／２４８８４；  ＷＯ  ９９／４５９６２；および  ＷＯ  ０１／１４４２４にさらに記載される。ＸｅｎｏｍｏｕｓｅＴＭ（Ａｂｇｅｎｉｘ，  Ｉｎｃ．）と称される別のトランスジェニック系を使用してもよく、これは、すべて本明細書に援用される、Ｇｒｅｅｎ，  ＬＬ．，  １９９９，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ，  ２３１（１−２）：１１−２３；米国特許第５，９３９，５９８号；米国特許第６，０７５，１８１号；米国特許第６，１１４，５９８号；米国特許第６，１５０，５８４号および米国特許第６，１６２，９６３号に記載される。
【０１８３】
[0196]いくつかの態様において、導入遺伝子および導入染色体上にヒト免疫グロブリン配列を所持するマウス、例えばＷＯ  ０２／０４３４７８に記載されるように、ヒト重鎖導入遺伝子およびヒト軽鎖導入染色体を所持するマウスを用いて、特定されたエピトープに結合し、そして本明細書記載の特性を有するヒト抗体を産生する細胞を調製してもよい。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現するウサギ系を用いて、完全ヒト抗体を生成してもよい（Ｒａｄｅｒら，  ２０００，  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．  ２７５（１８）：１３６６８−７６）。
【０１８４】
[0197]他の態様において、ヒト免疫グロブリン遺伝子のライブラリーをスクリーニングするため、ファージディスプレイ法を用いて、完全ヒトモノクローナル抗体を調製してもよい。ヒト抗体を単離するためのこうしたファージディスプレイ法は、当該技術分野に確立され、そして例えばＨｕｍａｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．，  Ｖｏｌ．  １０６０，  Ｓｔｅｉｎｉｔｚ，  Ｍ．監修，  Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ  （２０１３）；  ＭａｒｋｓおよびＢｒａｄｂｕｒｙ，  ２００４，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．，  ２４８：１６１−７６；  Ｐａｎｓｒｉら，  ＢＭＣ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．，  ９：６−２２；  Ｒａｄｅｒ，  Ｃ．，  ２０１２，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．，  ９０１：５３−７９；米国特許第５，２２３，４０９号；米国特許第５，４０３，４８４号；米国特許第５，５７１，６９８号；米国特許第５，４２７，９０８号；米国特許第５，５８０，７１７号；米国特許第５，９６９，１０８号；米国特許第６，１７２，１９７号；米国特許第５，８８５，７９３号；米国特許第６，５２１，４０４号；米国特許第６，５４４，７３１号；米国特許第６，５５５，３１３号；米国特許第６，５８２，９１５号および米国特許第６，５９３，０８１号に記載される。
【０１８５】
[0198]免疫グロブリンの可変重鎖および可変軽鎖の融合タンパク質である一本鎖抗体を、ファージディスプレイ法によって得てもよく、この場合、抗原結合ドメインは、単一ポリペプチドとして発現され、そして特異的結合活性に関してスクリーニングされる。あるいは、細胞、典型的には所望の抗体を発現しているハイブリドーマ細胞株から重鎖および軽鎖をコードする核酸をクローニングすることによって、一本鎖抗体を調製してもよい。一般的に、典型的には、長さ１０〜２５アミノ酸のリンカーペプチドを用いて、重鎖および軽鎖を連結する。リンカーは、一本鎖抗体に柔軟性および可溶性を与えるために、グリシン、セリン、および／またはスレオニンリッチであってもよい。一本鎖抗体を生成するための特異的方法は、例えば、すべて本明細書に援用される、Ｌｏｆｆｌｅｒら，  ２０００，  Ｂｌｏｏｄ  ９５（６）：２０９８−１０３；  ＷｏｒｎおよびＰｌｕｃｋｔｈｕｎ，  ２００１，  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．  ３０５，  ９８９−１０１０；  Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ中，  Ｖｏｌ．  １１３，  ｐｐ．  ２６９−３１５，  ＲｏｓｅｎｂｕｒｇおよびＭｏｏｒｅ監修，  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，  ニューヨーク（１９９４）；米国特許第５，８４０，３０１号；米国特許第５，８４４，０９３号；および米国特許第５，８９２，０２０号に記載される。いくつかの態様において、一本鎖抗体は、配列番号２５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域中のＣＤＲを含む。いくつかの態様において、一本鎖抗体は、配列番号２９のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域中のＣＤＲを含む。いくつかの態様において、一本鎖抗体は、アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）を含むＣＤＲ  Ｌ１；アミノ酸配列ＫＶＳＮＲＦＳ（配列番号４１）を含むＣＤＲ  Ｌ２；アミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＦＴ（配列番号４２）を含むＣＤＲ  Ｌ３；アミノ酸配列ＮＹＬＩＥ（配列番号４３）を含むＣＤＲ  Ｈ１；アミノ酸配列ＬＩＹＰＧＳＧＧＴＮＹＮＥＫＦＫＧ（配列番号４４）を含むＣＤＲ  Ｈ２；およびアミノ酸配列ＩＹＹＧＮＲＤＹＧＭＤＹ（配列番号４５）を含むＣＤＲ  Ｈ３より選択されるＣＤＲの少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つすべてを含む。いくつかの態様において、一本鎖抗体は、配列番号２４、より詳細には配列番号２５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域、および配列番号２８、より詳細には配列番号２９のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域を含む。
【０１８６】
[0199]抗体断片作製はまた、当該技術分野に周知である（例えば、本明細書に援用される、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ監修，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，  ニューヨーク（１９８８）を参照されたい）。抗体のタンパク質分解的消化によって、または断片をコードする核酸の大腸菌（Ｅ．  ｃｏｌｉ）における発現によって、抗体断片を調製してもよい。全抗体のペプシンまたはパパイン消化によって、抗体断片を産生してもよい。例えば、ペプシンで抗体を酵素的に切断して、Ｆ（ａｂ’）２を意味する５Ｓ断片を提供することによって、抗体断片を産生してもよい。チオール還元剤、および場合によってジスルフィド連結の切断から生じるスルフィドリル基のためのブロッキング基を用いて、この断片をさらに切断して、３．５Ｓ  Ｆａｂ’一価断片を産生してもよい。あるいは、ペプシンを用いた酵素切断は、２つの一価Ｆａｂ’断片およびＦｃ断片を直接生じる。いくつかの態様において、抗体断片をコードするポリヌクレオチドを用いた組換え技術によって、抗体断片を調製してもよい。
【０１８７】
[0200]開示の抗体を調製するための態様において、組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、組織培養、およびトランスフェクション（例えばエレクトロポレーション、リポフェクション等）のための標準技術を用いてもよい。製造者の明記にしたがって、または当該技術分野において、一般的に達成されるように、または本明細書に記載するように、酵素反応および精製技術を行ってもよい。一般的に、当業者に利用可能な慣用法にしたがって、例えば本明細書全体で引用されそして論じられる多様な一般的なそしてより特異的な参考文献に記載されるように、前述の技術および方法を行ってもよい（例えば、ＳａｍｂｒｏｏｋおよびＲｕｓｓｅｌｌ，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  第３版，  Ｖｏｌ．  １−３，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  ニューヨーク（２００１）；  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｇｒｅｅｎｆｉｅｌｄ，  Ｅ．Ａ．監修，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  ニューヨーク（２０１２）；ならびにＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  Ｃｏｌｉｇａｎら監修，  Ｗｉｌｅｙ  （１９９９），  ２０１３年まで改訂を参照されたい）。
【０１８８】
[0201]所望の抗体に関して、スクリーニングに適した条件は、慣用的なスクリーニング法において使用するものであってもよく、例えば水性緩衝溶液中、抗体と細胞またはポリペプチドをインキュベーションした後、数回洗浄してもよい。いくつかの態様において、特定されたエピトープを含有するペプチドまたはＭＩＣタンパク質発現細胞を固体表面、例えば膜またはプレート上に固定して、これを次いで候補抗体と接触させる。非特異的に結合した抗体を、非特異的競合剤、例えば適切なブロッキング剤を含有する溶液で洗い流してもよい。例示的な接触条件は、３０分〜４時間の間、氷上または４℃でのインキュベーションを含んでもよい。あるいは、室温または３７℃で接触工程を実行することも可能であり、そしてこれは、いくつかの場合、好ましい可能性もある。さらに、ブロッキング剤などの適切な試薬、例えばウシ血清アルブミン、非イオン性界面活性剤（例えばＮＰ４０、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ１００、Ｔｗｅｅｎ２０等）、または他の適切なブロッキング剤（例えば脱脂乳）を用いて、非特異的結合を減少させることも可能である。スクリーニング法の目的に応じて、当業者によって、接触条件を変化させ、そして適応させることも可能であることが認識されるであろう。
【０１８９】
[0202]いくつかの態様において、特定されたエピトープを含有するペプチドへの候補抗体の特異的結合を、表面プラズモン共鳴（例えばＢｉａｃｏｒｅ系）またはＢｉｏ−Ｌａｙｅｒインターフェロメトリー（ＢＬＩ）によって決定することも可能である。表面プラズモン共鳴に関しては、抗体をセンサーチップ上に固定し、そして特定されたエピトープを含有するペプチドにチップを曝露してもよい。ペプチドへの抗体の結合特性は、抗体とペプチドの相互作用に際して、回折の局所指標の変化によって直接測定可能である。あるいは、ペプチドをセンサーチップに結合させて、そしてチップを候補抗体に曝露してもよい（例えば、本明細書に援用される、Ｒｉｃｈ，  Ｒ．Ｌ．およびＭｙｓｚｋａ，  Ｄ．Ｇ．，  ２００７，  Ａｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ３６１（１）：１−６；ならびにＰｏｐｅら，  ２００９，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈ．  ３４１（１−２）：８６−９６を参照されたい）。ＢＬＩに関しては、ペプチド抗原（または抗体）をバイオセンサー（例えば光ファイバープローブ）に結合させ、そしてバイオセンサーを、抗体（またはペプチド抗原）を含有する溶液と接触させる。バイオセンサーチップを白色光で照射し、そして干渉パターンの変化を測定して、結合を検出する。いくつかの態様において、表面プラズモン共鳴またはＢＬＩに加えて、１つまたはそれより多い他の既知の方法、例えばＥＬＩＳＡ、ＦＡＣＳ、またはウェスタンブロッティングを用いて、適切な抗体結合潜在能力および抗体の抗原部位特異性を決定することも可能である。
【０１９０】
[0203]いくつかの態様において、単離された抗体をさらに：（１）ローリー法を用いて決定されるようなタンパク質重量によって測定可能であるように；（２）アミノ酸シーケンサーを用いることによる、Ｎ末端または内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るために十分な度合いまで；そして（３）還元または非還元条件下でのＳＤＳ−ＰＡＧＥまたはＣＥ−ＳＤＳによって均一であるまで、精製してもよい。抗体を精製するため、多様な技術を用いてもよく、例えば、そして限定でなく、クロマトグラフィ（例えばアフィニティクロマトグラフィ、例えばプロテインＡ、ペプチドエピトープ等を用いたもの；イオン交換クロマトグラフィ、例えば陽イオンおよび／または陰イオン交換媒体上；分子篩クロマトグラフ；疎水性クロマトグラフィなど）、高性能液体クロマトグラフィ、示差溶解度等によってもよい（例えば、Ｆｉｓｈｅｒ，  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ中，  ＷｏｒｋおよびＢｕｒｄｏｎ監修，  Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  （１９８０）；  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｇｒｅｅｎｆｉｅｌｄ，  Ｅ．Ａ．監修，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  ニューヨーク（２０１２）を参照されたい）。精製抗体は、前述の方法によって決定した際、重量８５％またはそれより高く、９０％またはそれより高く、９５％またはそれより高く、あるいは少なくとも９９％であることも可能である。
【０１９１】
６．３  薬学的組成物
[0204]いくつかの態様において、以下にさらに記載するように、上昇したレベルのＭＩＣタンパク質と関連する疾患または障害を治療するための薬学的組成物として、本開示の抗体を調製してもよい。したがって、いくつかの態様において、提供するのは、ｓＭＩＣタンパク質、例えばｓＭＩＣＡおよび／またはｓＭＩＣＢタンパク質の特定されたエピトープに特異的に結合する、２つまたはそれより多い抗体の組み合わせを含む、単離抗体；および抗体調製物と適合する、薬学的に許容されうる担体、賦形剤、またはビヒクルを含む、薬学的組成物である。いくつかの態様において、多様な経路、例えば静脈内、筋内、腹腔内、経皮、皮下、鼻内、クモ膜下腔内、局所または経口による投与のため、薬学的抗体組成物を調製してもよい。いくつかの態様において、望ましい度合いの純度を有する抗体を、例えば緩衝剤、安定剤、保存剤、等張化剤、非イオン性界面活性剤、酸化防止剤、および他の種々の添加物を含む、当該技術分野において典型的に使用され、すべて本明細書において、「担体」と称される、任意の薬学的に許容されうる賦形剤、ビヒクルまたは安定剤と混合することによって、凍結乾燥配合物として、または水溶液として貯蔵するために、抗体の療法配合物を調製してもよい（例えば、本明細書に援用される、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，  第１９版，  第１巻および２巻，  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ  （２０１２）；ならびにＦｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｒｏｃｅｓｓ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，  Ｊａｍｅｅｌ，  Ｆ．およびＨｅｒｓｈｅｎｓｏｎ，  Ｓ．監修  Ｗｉｌｅｙ  （２０１０）を参照されたい）。こうした添加物は、使用する投薬量および濃度で、レシピエントに対して非毒性である。
【０１９２】
[0205]いくつかの態様において、抗体組成物には緩衝剤が含まれる。緩衝剤は、生理学的条件に近づける望ましい範囲、例えばｐＨ範囲に、ｐＨを維持するよう補助する。本開示の抗体とともに使用するために適した緩衝剤には、有機および無機酸およびその塩の両方が含まれ、例えばクエン酸、コハク酸、酒石酸、フマル酸、グルコン酸、シュウ酸、乳酸、リン酸、ヒスチジン、Ｔｒｉｓおよび酢酸緩衝剤がある。
【０１９３】
[0206]いくつかの態様において、担体は、微生物増殖を遅延させる保存剤を含む。抗体調製物とともに使用するために適した保存剤には、フェノール、ベンジルアルコール、メタ−クレゾール、メチルパラベン、プロピルパラベン、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、ハロゲン化ベンザルコニウム（例えば塩化物、臭化物、およびヨウ化物）、塩化ヘキサメトニウム、およびアルキルパラベン、例えばメチルまたはプロピルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、および３−ペンタノールが含まれる。いくつかの態様において、保存剤は、０．０２％〜１％（ｗ／ｖ）の範囲の量で存在してもよい。
【０１９４】
[0207]いくつかの態様において、担体は、液体組成物の等張性を確実にするため、時に「安定剤」と称される等張化剤を含み、この例には、多価糖アルコール、例えば三価またはより高次の糖アルコール、例えばグリセリン、エリスリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトールおよびマンニトールが含まれる。安定剤は、広いカテゴリーの賦形剤を指し、これは、機能において、充填剤から、療法剤を可溶化するかあるいは変性または容器壁への付着の防止を補助する添加剤までの範囲に渡ってもよい。例示的な安定剤は、上記の多価糖アルコール；アミノ酸、例えばアルギニン、リジン、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アラニン、オルニチン、Ｌ−ロイシン、２−フェニルアラニン、グルタミン酸、スレオニン等；有機糖または糖アルコール、例えばラクトース、トレハロース、スタキオース、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、リビトール、ミオ−イノシトール、ガラクチトール、グリセロール等、イノシトールなどのシクリトールも含む；ポリエチレングリコール；アミノ酸ポリマー；イオウ含有還元剤、例えば尿素、グルタチオン、チオクト酸、チオグリコール酸ナトリウム、チオグリセロール、モノチオグリセロールおよびチオ硫酸ナトリウム；低分子量ポリペプチド（例えば１０残基またはそれより少ないペプチド）；担体タンパク質、例えばヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えばポリビニルピロリドン；単糖、例えばキシロース、マンノース、フルクトース、グルコース；二糖、例えばラクトース、マルトース、スクロース、および三糖、例えばラフィノース；ならびに多糖、例えばデキストランであってもよい。いくつかの態様において、安定剤は、活性タンパク質重量部分あたり、０．１〜１０，０００重量の範囲で存在することも可能である。
【０１９５】
[0208]時に「湿潤剤」と称される、非イオン性表面活性剤または界面活性剤を添加して、抗体の可溶化を補助し、そして攪拌誘導性凝集に対して該抗体を保護することも可能であり、該剤はまた、タンパク質の変性を引き起こすことなく、配合物が表面剪断ストレスに曝露されることを可能にする。適切な非イオン性界面活性剤には、ポリソルベート（２０、８０等）、ポロキサマー（１８４、１８８等）、プルロニックポリオール、およびポリオキシエチレンソルビタンモノエーテル（ＴＷＥＥＮ（登録商標）−２０、ＴＷＥＥＮ（登録商標）−８０等）が含まれる。いくつかの態様において、非イオン性界面活性剤は、約０．０５ｍｇ／ｍＬ〜約１．０ｍｇ／ｍＬの範囲で、例えば約０．０７ｍｇ／ｍＬ〜約０．２ｍｇ／ｍＬの範囲で存在することも可能である。
【０１９６】
[0209]さらなる賦形剤には、増量剤（例えばデンプン）、キレート剤（例えばＥＤＴＡ）、酸化防止剤（例えばアスコルビン酸、メチオニン、ビタミンＥ）、および共溶媒が含まれる。
【０１９７】
[0210]必要に応じて、上に列挙する成分の１つまたは組み合わせを含む、適切な溶媒中に、十分な量の抗体を取り込んだ後、滅菌、例えば微量濾過によって、無菌注射可能溶液を調製してもよい。一般的に、基本的分散媒体、ならびに上に列挙し、そして当該技術分野に知られるもののうち必要な他の成分を含有する、無菌ビヒクル内に、抗体を取り込むことによって、分散物を調製してもよい。無菌注射可能溶液を調製するための無菌粉末の場合、好ましい調製法には、抗体に加えて、任意のさらなる望ましい成分の粉末を生じる、真空乾燥およびフリーズドライ（凍結乾燥）が含まれる。
【０１９８】
[0211]いくつかの態様において、迅速な放出から抗体を保護可能な担体とともに、抗体を調製してもよく、これには例えば、移植体（ｉｍｐｌａｎｔ）および微量被包送達系を含む、徐放配合物がある。生物分解性、生体適合性ポリマーを用いてもよく、これには例えば、酢酸エチレンビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリ（オルトエステル）、およびポリ乳酸がある。こうした配合物の調製のための方法は、当業者に一般的に知られる(例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｊ．  Ｒ．  Ｒｏｂｉｎｓｏｎ監修，  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｉｎｃ．，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  （１９７８）を参照されたい）。
【０１９９】
[0212]混合、可溶化、安定化、濃縮、および凍結乾燥して、薬学的組成物を調製する多様な方法は、抗体療法剤に適用可能な標準的慣用的技術を用いるであろう（例えば、Ｗａｎｇら，  ２００７，  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ．  ９６（１）：１−２６；  Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，  第１９版，  第１巻および２巻，  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ  （２０１２）；ならびにＦｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｒｏｃｅｓｓ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，  ＪａｍｅｅｌおよびＨｅｒｓｈｅｎｓｏｎ監修，  Ｗｉｌｅｙ  （２０１０）を参照されたい）。
【０２００】
[0213]いくつかの態様において、本開示の抗体のあらかじめ決定した量を含有する単位用量型で、薬学的組成物を調製してもよい。いくつかの態様において、単位投薬型は、限定なしに、約５ｍｇ〜約１ｇ、約１０ｍｇ〜約１ｇ、５０ｍｇ〜約１ｇ、１００ｍｇ〜約１ｇ、２００ｍｇ〜約１ｇ、または約５００ｍｇ〜約１ｇを含有する。いくつかの態様において、単位投薬型は、約５ｍｇ〜約９００ｍｇ、約１０ｍｇ〜約８００ｍｇ、約５０ｍｇ〜約７００ｍｇ、約１００ｍｇ〜約６００ｍｇ、または約２００ｍｇ〜約５００ｍｇを含有する。いくつかの態様において、治療しようとする状態および／または投与経路に基づいて、単位投薬量を決定してもよい。いくつかの態様において、例えば、そして限定なしに、単回使用シリンジ、自動インクジェットペン、または凍結乾燥バイアル（例えば薬学的に許容されうる溶液での再構成のため）として、単位投薬型を調製してもよい。各単位用量を別個にパッケージングして、そして１またはそれより多い単位用量、例えば２の単位用量、３の単位用量、４の単位用量、または５の単位用量またはそれより多くを含有するキットとして供給してもよい。
【０２０１】
６．４  抗体の使用
[0214]別の側面において、開示の抗体を多様な診断および療法適用に適用してもよい。診断領域において、いくつかの態様において、抗体を用いて、生物学的試料、例えばＭＩＣタンパク質レベル上昇によって特徴付けられる疾患、例えば上皮癌、血液学的悪性腫瘍、および自己免疫疾患と推測されるかまたは診断されている患者から得たものにおいて、ｓＭＩＣタンパク質の存在および／またはレベルを検出してもよい。いくつかの態様において、ｓＭＩＣを検出する方法は：生物学的試料を、本開示の抗体と接触させ；そして抗体の特異的結合を決定するかまたは測定して、試料におけるｓＭＩＣのレベルを決定する工程を含む。いくつかの態様において、生物学的試料中のｓＭＩＣＡレベルを検出するための方法において抗体を使用する。いくつかの態様において、生物学的試料中のｓＭＩＣＢレベルを検出するための方法において抗体を使用する。診断法は、特定の疾患または障害に関する診断として、単独で、または他の方法およびマーカーと組み合わせて用いてもよい。
【０２０２】
[0215]生物学的試料は、細胞試料、組織試料および体液試料を含めて、分析のため被験体から採取される任意の適切な試料であることも可能である。いくつかの態様において、体液試料には、とりわけ、血液、血漿、血清、尿、脳脊髄液、リンパ液、滑液、胆汁、精液、唾液、涙、および眼房水または硝子体液が含まれる。いくつかの態様において、組織試料には、臓器生検、固形腫瘍、保存組織、全細胞、および細胞溶解物が含まれる。生物学的試料は、特定の試料に適した、当該技術分野に知られる方法によって調製可能であり、そしてこれには、とりわけ、抗体との反応前の、機械的手段、凍結への曝露（例えば液体窒素）、あるいは化学薬品、例えば界面活性剤、酸、または塩基への曝露による破壊が含まれる。ｓＭＩＣタンパク質の存在および／またはレベルを検出するためのアッセイには当該技術分野において典型的に用いられるものが含まれ、とりわけ、ＥＬＩＳＡ、免疫組織化学、競合的およびサンドイッチアッセイ、および立体阻害アッセイが含まれる。
【０２０３】
[0216]抗体の特異的結合（例えば抗体−ｓＭＩＣタンパク質複合体）の検出は、受容体分子または検出可能標識、例えば蛍光標識、検出可能酵素、または検出可能コンジュゲート系を含有する抗体の使用に頼ってもよい。いくつかの態様において、抗体の特異的結合は、二次検出剤、例えば一次抗体に特異的に結合する別の抗体に頼ってもよい。二次抗体をレポーター分子、検出可能標識、または検出可能コンジュゲートで標識してもよい。
【０２０４】
[0217]いくつかの態様において、本明細書の診断法を用いて、上昇したＭＩＣ＋レベルによって特徴付けられる疾患または障害を有すると推測される被験体の生物学的試料において、ｓＭＩＣＡおよび／またはｓＭＩＣＢのレベルを検出してもよく、これは、疾患の存在および／または疾患の進行の指標を提供しうる。
【０２０５】
[0218]いくつかの態様において、診断法を用いて、上昇したＭＩＣ＋レベルによって特徴付けられる疾患および／または障害を有するとすでに診断されている被験体の生物学的試料において、ｓＭＩＣＡおよび／またはｓＭＩＣＢのレベルを検出してもよく、これは、疾患の存在および／または疾患の進行の確認を提供しうる。
【０２０６】
[0219]いくつかの態様において、診断法を用いて、治療を経た被験体におけるｓＭＩＣＡおよび／またはｓＭＩＣＢのレベルを検出して、ｓＭＩＣＡおよび／またはｓＭＩＣＢのレベルの変化に基づいて、療法剤および／または療法措置の有効性、ならびに／あるいは疾患再発の可能性を決定してもよい。
【０２０７】
[0220]上述のように、多様な疾患が、上昇したまたは異常なｓＭＩＣＡおよび／またはｓＭＩＣＢのレベルと関連する。ＭＩＣＡおよびＭＩＣＢならびにそのＮＫＧ２Ｄ所持免疫エフェクター細胞との相互作用は、最終的にＭＩＣ＋細胞の死を生じる、ストレスを受けた細胞または疾患細胞の免疫監視に関与するが、可溶性ＭＩＣタンパク質の存在は、ＮＫＧ２Ｄ受容体レベルを下方制御し、典型的には適格性の免疫系に直面しても、ＭＩＣ＋腫瘍が生存することを可能にする。例えば、上昇したレベルのｓＭＩＣＡおよびｓＭＩＣＢは、癌患者の血液中で同定されているが、「正常」個体では見られず、そしてこれは癌病期の重症度と正に相関してきている(Ｓａｌｉｈら，  ２００２，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６９：４０９８−１０２；  Ｄｏｕｂｒｏｖｉｎａら，  ２００３，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １７１：６８９１−９；  Ｗｕら，  ２００４，  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．  １１４：５６０−８；およびＨｏｌｄｅｎｒｅｉｄｅｒ，  ２００６，  Ｉｎｔｌ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  １１８：６８４−７)。
【０２０８】
[0221]いくつかの態様において、ｓＭＩＣＡおよび／またはｓＭＩＣＢが細胞（膜）から脱落したかまたは放出された際に、選択的および特異的に結合する本明細書の抗体は、ｓＭＩＣＡおよび／またはｓＭＩＣＢの有害な影響を中和するための基盤を提供する。ＭＩＣタンパク質の脱落型に選択的に結合する抗体を用いる利点は、抗体が、細胞表面上に発現されるＭＩＣタンパク質に結合する可能性が低く、それによって、免疫エフェクター細胞の不適切な活性化による病的な自己免疫反応の可能性が減少することである。さらに、細胞膜上に存在するＭＩＣＡおよび／またはＭＩＣＢへの有意な結合が存在しないため、例えばＮＫ細胞仲介性の細胞毒性反応を通じた、ＭＩＣ発現腫瘍細胞の免疫仲介性の破壊が保持されうる。したがって、いくつかの態様において、こうした治療（すなわち減少）が必要な被験体において、ｓＭＩＣＡおよび／またはｓＭＩＣＢのレベルを減少させる方法において、本開示の抗体を用いてもよく、ここで、該方法は、被験体において、ｓＭＩＣＡおよび／またはｓＭＩＣＢのレベルを減少させるため、本開示の抗体の有効量を、必要な被験体に投与する工程を含む。
【０２０９】
[0222]いくつかの態様において、治療すべき被験体は、上昇したレベルのＭＩＣタンパク質、例えばＭＩＣＡおよび／またはＭＩＣＢを有する。多様な態様において、上昇したＭＩＣタンパク質レベルは、疾患または障害の存在に関連する。上昇したレベルは、細胞、組織上、または被験体から得た生物学的試料中であってもよい。いくつかの態様において、治療すべき被験体は上昇したレベルのｓＭＩＣＡおよび／またはｓＭＩＣＢを有する。用語「上昇した」、あるいは「より高い」または「より大きい」を含むその文法的同等物は、疾患または障害の指標である分子（例えばＭＩＣＡおよび／またはＭＩＣＢ）のレベルに関する場合、疾患を持たない集団（例えば健康な被験体）における分子レベルに比較した際、統計的に有意な方式で、疾患または障害を持つ集団においてより高い分子の量を指す。いくつかの態様において、疾患集団、あるいは疾患または障害を持つ被験体由来の生物学的試料におけるＭＩＣＡおよび／またはＭＩＣＢ、例えばｓＭＩＣＡおよび／またはｓＭＩＣＢのレベルは、疾患または障害を持たない対照集団、あるいは疾患または障害を持たない被験体から得た対照生物学的試料における同じ分子のレベルよりも、少なくとも１０％大きく、少なくとも２５％大きく、少なくとも５０％大きく、少なくとも７５％大きく、そして／または少なくとも９０％大きい。
【０２１０】
[0223]ＭＩＣＡおよび／またはＭＩＣＢレベルの上昇を示す、多様な疾患が同定されてきている。多様な態様において、こうした疾患には、とりわけ、腫瘍、癌、および血液学的悪性腫瘍が含まれる。いくつかの態様において、治療すべき被験体は、ＭＩＣ＋腫瘍または癌、あるいはＭＩＣ＋血液学的悪性腫瘍に罹患している。したがって、いくつかの態様において、本開示の抗体を用いて、ＭＩＣ＋腫瘍または癌に罹患した被験体を治療してもよく、該方法は、ＭＩＣ＋腫瘍または癌に罹患した被験体に、本明細書に記載する抗体の療法的有効量を投与する工程を含む。いくつかの態様において、ＭＩＣ＋腫瘍または癌は、ＭＩＣＡ＋および／またはＭＩＣＢ＋腫瘍または癌である。いくつかの態様において、治療すべきＭＩＣ＋腫瘍または癌は、脳癌、胆道癌、骨癌、肝臓癌、胃癌、精巣癌、子宮頸癌、卵巣癌、膣癌および外陰癌、子宮内膜癌、黒色腫、扁平上皮癌、悪性中皮腫癌、口腔癌、頭頸部癌、咽喉癌、胸腺癌、胃腸間質腫瘍（ＧＩＳＴ）癌、鼻咽頭癌、食道癌、結腸癌、肛門癌、乳癌、肺癌（例えば非小細胞肺癌、小細胞肺癌、気管支癌等）、前立腺癌、陰茎癌、膀胱癌、膵臓癌、神経芽腫、神経膠腫、肝細胞癌、および腎癌より選択されうる。いくつかの態様において、本開示の抗体は、限定されるわけではないが、肺、乳房、胃、結腸、膵臓、肝臓、卵巣、腎細胞、前立腺癌腫および黒色腫を含む、上皮腫瘍または癌の多様なタイプを治療する際に用いられる。いくつかの態様において、治療のために選択される癌は、前立腺癌である。
【０２１１】
[0224]いくつかの態様において、ＭＩＣ＋血液学的悪性腫瘍を治療する方法において、抗体を用いる。したがって、いくつかの態様において、本開示の抗体を用いて、ＭＩＣ＋血液学的悪性腫瘍に罹患した被験体を治療してもよく、該方法は、ＭＩＣ＋血液学的悪性腫瘍に罹患した被験体に、本明細書に記載する抗体の療法的有効量を投与する工程を含む。いくつかの態様において、ＭＩＣ＋血液学的悪性腫瘍は、ＭＩＣＡ＋および／またはＭＩＣＢ＋血液学的悪性腫瘍である。いくつかの態様において、血液学的悪性腫瘍は白血病またはリンパ腫である。いくつかの態様において、治療すべきＭＩＣ＋血液学的悪性腫瘍を、とりわけ、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性単球性白血病（ＡＭｏｌ）、リンパ腫（例えばホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫）、および多発性骨髄腫より選択してもよい。
【０２１２】
[0225]いくつかの態様において、ＭＩＣタンパク質の上昇したレベル、より詳細には、ｓＭＩＣＡおよび／またはｓＭＩＣＢの上昇したレベルによって特徴付けられるウイルス感染を有する被験体を治療するために、抗体を用いてもよい。上に論じるように、ＭＩＣＡおよび／またはＭＩＣＢのより高い発現、特にウイルス感染中のｓＭＩＣＡおよび／またはｓＭＩＣＢのより高いレベルは、ｓＭＩＣ仲介性免疫抑制により、感染の重症度を延長させ、そして／または増加させるようである。いくつかの態様において、ＭＩＣ＋タンパク質の上昇したレベルによって特徴付けられるウイルス感染を有する被験体を治療する方法は、ＭＩＣ＋タンパク質の上昇したレベルによって特徴付けられるウイルス感染に罹患した被験体に、本開示の抗体の療法的有効量を投与する工程を含む。いくつかの態様において、ＭＩＣ＋ウイルス感染は、ＭＩＣＡ＋および／またはＭＩＣＢ＋ウイルス感染である。ｓＭＩＣタンパク質レベル上昇を示す例示的なウイルス感染には、とりわけ、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、ヒトライノウイルス（ＨＲＶ）、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、およびヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）での感染が含まれる。
【０２１３】
[0226]いくつかの態様において、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、ヒトライノウイルス（ＨＲＶ）、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、またはヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ；例えばＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２）に感染した被験体を治療する方法は、本開示の抗体の療法的有効量を、ＨＢＶ、ＲＳＶ、ＨＲＶ、ＨＣＭＶ、ＨＣＶまたはＨＩＶ−１に感染した被験体に投与する工程を含むことも可能である。
【０２１４】
[0227]本明細書記載の任意の抗体および抗体組成物、特に薬学的組成物を、被験体に投与してもよい。抗体は、限定なしに、哺乳動物の関節、鼻粘膜、血液、肺、腸、筋肉組織、皮膚、または腹腔に送達可能である。いくつかの態様において、静脈内、腹腔内、筋内、皮下、直腸内、膣内、クモ膜下腔内、気管内、皮内、経口または吸入によって、あるいは長期にわたる漸次灌流によって、抗体組成物を投与してもよい。さらなる例において、抗体のエアロゾル調製物を、吸入によって被験体に投与してもよい。任意の所定の症例における適切な投与経路は、とりわけ、特定の抗体、被験体、疾患の性質および重症度、ならびに被験体の身体状態に応じるであろう。
【０２１５】
[0228]投与される投薬量は、とりわけ、投与経路；配合物の性質；被験体の疾患または障害の性質；被験体の大きさ、体重、表面積、年齢、および性別、ならびに投与されている他の薬剤に基づいてもよい。投与される投薬量の広い変動は、とりわけ、利用可能な多様な抗体組成物、多様な投与経路の異なる有効性、および治療すべき疾患または障害を考慮して、予期されるものである。当該技術分野に理解されるように、最適化のための標準的経験的ルーチンを用いて、これらの投薬レベルの変動を調整することも可能である。いくつかの態様において、本明細書記載の徴候の治療のため、本開示の抗体の有効用量は、約０．０００１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、約０．００１〜約７５ｍｇ／ｋｇ体重；０．００５〜約５０ｍｇ／ｋｇ体重；約０．０１〜約３０ｍｇ／ｋｇ体重；または約０．０１〜約５ｍｇ／ｋｇ体重の範囲であることも可能である。いくつかの態様において、投薬量は、約０．００１ｍｇ／ｋｇ体重；約０．０１ｍｇ／ｋｇ体重；約０．３ｍｇ／ｋｇ体重；約１ｍｇ／ｋｇ体重；約３ｍｇ／ｋｇ体重；約５ｍｇ／ｋｇ体重または約１０ｍｇ／ｋｇ体重であるか、あるいは単回（例えばボーラス）投与あたり、１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲内であってもよい。
【０２１６】
[0229]投薬措置を、望ましい反応、例えば療法反応、管理可能な毒性または副作用等を提供するために調整してもよい。例えば、単回ボーラスを投与してもよく、数回に分けた用量を長期に渡って投与してもよく、あるいは療法状況によって必要とされるように、用量を比例的に減少させるかまたは増加させてもよい。本明細書に提供する任意の組成物を用いた治療期間は、必要に応じて、最短１日から無期限までの任意の期間であってもよい。投与は、単回ボーラスまたは反復投与、例えば１日、２日、３日、５日、１週間、２週間、３週間、１ヶ月、５週間、６週間、７週間、２ヶ月、３ヶ月、またはそれより長くてもよい。反復投与は、同じ用量でもまたは異なる用量でもよい。例えば、特定された投薬措置を、疾患を治療する、例えば疾患を排除する、寛解を引き起こす、または疾患進行を止めるために必要に応じて、ある期間、例えば２週間〜６週間、３ヶ月〜１または２年、６ヶ月〜３または４年、８ヶ月〜１８ヶ月等の期間続ける。いくつかの態様において、最初の治療は、２週間から２ヶ月の特定された投薬措置、その後、維持投薬措置であってもよく、ここで、維持投薬量は、最初の治療と同じかまたはそれよりも低い用量であってもよく、疾患または障害を治療するために必要に応じて反復してもよく、例えば２週間ごと、１ヶ月ごと、２ヶ月ごと、または４ヶ月ごとに１回、あるいは医師によって決定されるような必要に応じた維持治療を行ってもよい。
【０２１７】
[0230]いくつかの態様において、抗体を単回用量として、または長期に渡って数回の用量で投与してもよい。いくつかの態様において、抗体を誘導療法として投与してもよく、すなわち最初は疾患の治療に用いる一連の療法手段で、その後、抗体での維持療法として投与してもよい。
【０２１８】
[0231]いくつかの態様において、ＭＩＣタンパク質の上昇したレベルによって特徴付けられる疾患または障害を治療するために適した他の療法剤と組み合わせて、抗体を用いてもよい。いくつかの態様において、被験体において癌を治療する方法は、治療の必要がある被験体に、本開示の抗体の療法的有効量を投与し、そして癌を治療する第二の療法剤の療法的有効量を補助的に投与する工程を含む。いくつかの態様において、被験体においてウイルス感染を治療する方法は、治療の必要がある被験体に、本開示の抗体の療法的有効量を投与し、そしてウイルス感染を治療する第二の療法剤の療法的有効量を補助的に投与する工程を含む。併用療法において、本開示の抗体および１またはそれより多い併用療法剤を併用して（例えば同時に）、連続して、一緒に、または別個に投与してもよい。
【０２１９】
[0232]いくつかの態様において、本開示の抗体を、腫瘍および癌を治療するために用いる化学療法剤と組み合わせて用いる。適切な化学療法剤には、とりわけ、細胞毒性剤、代謝拮抗剤（例えば葉酸アンタゴニスト、プリン類似体、ピリミジン類似体等）、トポイソメラーゼ阻害剤（例えばカンプトテシン誘導体、アントラセンジオン、アントラサイクリン、エピポドフィロトキシン、キノリンアルカロイド等）、抗微小管剤（例えばタキサン、ビンカアルカロイド）、タンパク質合成阻害剤（例えばセファロタキシン、カンプトテシン誘導体、キノリンアルカロイド）、アルキル化剤（例えばスルホン酸アルキル、エチレンイミン、ナイトロジェンマスタード、ニトロソ尿素、白金誘導体、トリアゼン等）、アルカロイド、テルペノイド、およびキナーゼ阻害剤が含まれてもよい。増殖性障害、例えば癌および腫瘍を治療するために典型的に用いる例示的な化学療法剤には、例えば、そして限定なしに、アファチニブ、アフレセルチブ、アレクチニブ、アリセルチブ、アルボシジブ、アモナフィド、アムバチニブ、アキシチニブ、アザシチジン、アザチオプリン、バフェチニブ、バラセルチブ、ベンダムスチン、ブレオマイシン、ボスチニブ、ボルテゾミブ、カルフィルゾミブ、イキサゾミブ、オプロゾミブ、デランゾミブ、マリゾミブ、ブスルファン、カボザンチニブ、カンプトテシン、カネルチニブ、カペシタビン、カバジタキセル、カルボプラチン、カルムスチン、セニセルチブ、セリチニブ、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、クロファラビン、クレノラニブ、クリゾチニブ、シクロホスファミド、シタラビン、ダブラフェニブ、ダカルバジン、ダコミチニブ、ダクチノマイシン、ダヌセルチブ、ダサチニブ、ダウノルビシン、デシタビン、ジナシクリブ、ドセタキセル、ドビチニブ、ドキソルビシン、エピルビシン、エピチニブ、メシル酸エリブリン、エルロチニブ、エチリノテカン、エトポシド、エベロリムス、エキセメスタン、フロクスウリジン、フルダラビン、フルオロウラシル、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、イブルチニブ、イコチニブ、イダルビシン、イホスファミド、イマチニブ、イメテルスタット、イパタセルチブ、イリノテカン、イキサベピロン、ラパチニブ、レナリドミド、レスタウルチニブ、ロムスチン、ルシタニブ、マシチニブ、メルファラン、メルカプトプリン、メトトレキセート、ミドスタウリン、マイトマイシン、ミトキサントロン、ムブリチニブ、ネララビン、ネラチニブ、ニロチニブ、ニンテダニブ、オマセタキシン・メペスクシネート、オランチニブ、オキサリプラチン、パクリタキセル、パルボシクリブ、パリホスファミド・トリス、パゾパニブ、ペリチニブ、ペメトレキセド、ペントスタチン、プリカマイシン、ポナチニブ、ポジオチニブ、プララトレキセート、プロカルバジン、キザルチニブ、ラルチトレキセド、レゴラフェニブ、ルキソリチニブ、セリシクリブ、ソラフェニブ、ストレプトゾシン、スルファチニブ、スニチニブ、タモキシフェン、タンデュチニブ、テモゾロミド、テムシロリムス、テニポシド、テリアチニブ、チオグアニン、チオテパ、トポテカン、バルプロ酸、バルルビシン、バンデタニブ、ベムラフェニブ（ゼルボラフ（登録商標））、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンデシン等が含まれる。いくつかの態様において、被験体の免疫反応に不都合に影響を及ぼさない化学療法剤を選択してもよい。
【０２２０】
[0233]いくつかの態様において、抗体を、腫瘍および癌を治療するために用いる生物薬剤と組み合わせて用いてもよい。本明細書の抗体と組み合わせて使用可能な例示的な生物薬剤の例には、とりわけ、抗ＢＡＦＦ（例えばベリムマブ）；抗ＣＣＲ４（例えばモガムリズマブ）；抗ＣＤ１９／ＣＤ３（例えばブリナツモマブ）；抗ＣＤ２０（例えばオビヌツズマブ、リツキシマブ、イブリツモマブ・チウキセタン、オファツムマブ、トシツモマブ）；抗ＣＤ２２（例えばモキセツモマブ・パスドトクス）；抗ＣＤ３０（例えばブレンツキシマブ・ベドチン）；抗ＣＤ３３（例えばゲムツズマブ）；抗ＣＤ３７（例えばオトレルツズマブ）；抗ＣＤ３８（例えばダラツムマブ）；抗ＣＤ５２（例えばアレムツズマブ）；抗ＣＤ５６（例えばロルボツズマブ・メルタンシン）；抗ＣＤ７４（例えばミラツズマブ）；抗ＣＤ１０５；抗ＣＤ２４８（ＴＥＭ１）（例えばオンツキシズマブ）；抗ＣＴＬＡ４（例えばトレメリムマブ、イピリムマブ）；抗ＥＧＦＬ７（例えばパルサツズマブ）；抗ＥＧＦＲ（ＨＥＲ１／ＥＲＢＢ１）（例えばパニツムマブ、ニモツズマブ、ネシツムマブ、セツキシマブ、イムガツズマブ、フツキシマブ）；抗ＦＺＤ７（例えばバンチクツマブ）；抗ＨＥＲ２（ＥＲＢＢ２／ｎｅｕ）（例えばマルゲツキシマブ、ペルツズマブ、アド−トラスツズマブ・エムタンシン、トラスツズマブ）；抗ＨＥＲ３（ＥＲＢＢ３）；抗ＨＧＦ（例えばリロツムマブ、フィクラツズマブ）；抗ＩＧＦ−１Ｒ（例えばガニツマブ、フィジツムマブ、シクスツムマブ、ダロツズマブ）；抗ＩＧＦ−２Ｒ；抗ＫＩＲ（例えばリリルマブ、オナルツズマブ）；抗ＭＭＰ９；抗ＰＤ−１（例えばニボルマブ、ピジリズマブ、ラムブロリズマブ）；抗ＰＤ−Ｌ１；抗ＰＤＧＦＲα（例えばラムシルマブ、トベツマブ）；抗ＰＤ−Ｌ２；抗ＰＩＧＦ（例えばジブ−アフリベルセプト）；抗ＲＡＮＫＬ（例えばデノスマブ）；抗ＴＮＦＲＳＦ９（ＣＤ１３７／４−１ＢＢ）（例えばウレルマブ）；抗ＴＲＡＩＬ−Ｒ１／ＤＲ４、Ｒ２／Ｄ５（例えばデュラネルミン）；抗ＴＲＡＩＬ−Ｒ１／Ｄ４（例えばマパツムマブ）；抗ＴＲＡＩＬ−Ｒ２／Ｄ５（例えばコナツムマブ、レキサツムマブ、アポマブ）；抗ＶＥＧＦＡ（例えばベバシズマブ、ジブ−アフリベルセプト）；抗ＶＥＧＦＢ（例えばジブ−アフリベルセプト）；および抗ＶＥＧＦＲ２（例えばラムシルマブ）が含まれる。
【０２２１】
[0234]特に、本明細書記載の抗体を、免疫系を活性化する、例えば刺激する療法剤と組み合わせて用いてもよい。いくつかの態様において、これらは、免疫系を正に活性化させる剤、または免疫活性化の下方制御を阻害する剤を含んでもよい。免疫活性化または免疫刺激剤は、小分子化合物、抗体、アンチセンス化合物、遺伝子療法等であることも可能である。療法免疫活性化剤のための多様な生物学的ターゲットには、例えば、そして限定なしに、ＣＴＬＡ−４、ＫＩＲ（キラー細胞免疫グロブリン様受容体）、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＤ１３７、ＣＤ２２７、ＩＬ−１５受容体、ＩＬ−６、ＩＬ−６受容体、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、ＴＧＦ−β３、およびアポリポタンパク質Ｊ（クラステリン）が含まれる。いくつかの態様において、免疫系活性化剤には、療法ターゲットに対して向けられる抗体または他の結合剤、例えば抗ＣＴＬＡ４、抗ＰＤ−１、抗ＰＤ−Ｌ１、抗ＰＤ−Ｌ２、抗ＣＤ１３７、抗ＴＧＦ−β１、抗ＴＧＦ−β２、抗ＴＧＦ−β３、および抗アポリポタンパク質Ｊ（クラステリン）が含まれる。いくつかの態様において、第二の療法剤には、チェックポイント阻害剤、特に抗ＣＴＬＡ４、抗ＰＤ−１、抗ＰＤ−Ｌ１、または抗ＰＤ−Ｌ２が含まれる。例示的な免疫活性化剤には、とりわけ、イピリムマブ、トレメリムマブ（Ｒｉｂａｓら，  ２０１３，  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．  ３１：６１６−２２）、ニボルマブ（Ｗｏｌｃｈｏｋら，  ２０１３，  Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．  ３６９：１２２−３３）、ＢＭＳ−９３６５５９（ＭＤＸ−１１０５：  Ｂｒａｈｍｅｒら，  ２０１２，  Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．  ３６６：２４５５−６５）、ＭＥＤＩ４７３６（抗ＰＤ−Ｌ１）、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（抗ＰＤＬ−１）、ラムブロリズマブ（Ｈａｍｉｄら，  ２０１３，  Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．  ３６９：１３４−４４）、ピジリズマブ（抗ＰＤ−１；  Ｂｅｒｇｅｒ  Ｒら  ２００８，  Ｃｌｉｎ  Ｃａｎ  Ｒｅｓ．  １４：３０４４−５１）、ＡＭＰ−２２４（ＰＤ−Ｌ２−Ｉｇ）、ラムブロリズマブ、ウレルマブ（ＬｉおよびＬｉｕ，  ２０１３，  Ｃｌｉｎ  Ｐｈａｒｍ：  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ＆  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ５（Ｓｕｐｐｌ  １）：４７−５３）、ＰＦ−０５０８２５６６（Ｆｉｓｈｅｒら，  ２０１２，  Ｃａｎｃ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．  ６１：１７２１−３３）、ＡＬＴ−８０３（ＩＬ−１５スーパーアゴニスト；  Ｘｕら，  ２０１３，  Ｃａｎｃ  Ｒｅｓ．  ７３：３０７５−８６；  Ｚｈｕら，  ２００９，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １８３：３５９８−６０７）、ＡＢ−１６Ｂ５（抗クラステリン）、ピルフェニドン（Ｎｏｂｌｅら，  ２０１１，  Ｌａｎｃｅｔ  ３７７：１７６０−９）、フレソリムマブ（Ｔｒａｃｈｔｍａｎら，  Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ．  ７９：１２３６−４３）、スルチキシマブ、およびトシリズマブが含まれる。
【０２２２】
[0235]いくつかの態様において、抗体と組み合わせて使用するための免疫調節または活性化剤は、免疫系反応を刺激するサイトカインまたはケモカイン、特にサイトカインまたはケモカインのヒト型を含んでもよい。いくつかの態様において、被験体において、ＭＩＣタンパク質の上昇したレベルによって特徴付けられる疾患または障害、例えばｓＭＩＣ＋癌またはウイルス感染を治療する方法は、治療が必要な被験体に、療法的有効量の本開示の抗体を投与し、そして療法的有効量の免疫調節または活性化サイトカインまたはケモカインを補助的に投与する工程を含む。例示的なサイトカインおよびケモカインを、とりわけ、ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−α、およびＣＣＬ−２１、特にＩＬ−１２またはＩＬ−１５より選択してもよい。いくつかの態様において、免疫刺激性サイトカインおよびケモカインをｅｘ  ｖｉｖｏで用いて、免疫細胞、特に治療しようとする被験体または患者から得られる免疫細胞を治療してもよい。特に、例えばそして限定ではなく、ＩＬ−１２およびＩＬ−１５を含む、ＮＫ細胞活性を刺激可能な免疫活性化剤を併用治療に用いてもよい。いくつかの態様において、サイトカインまたはケモカインは、サイトカインまたはケモカインの組換え型であってもよい。
【０２２３】
[0236]いくつかの態様において、本明細書記載の抗体を、癌ワクチンで活性化された抗原提示細胞（例えば樹状細胞）を含む、癌ワクチンと組み合わせて用いてもよい。例示的な癌ワクチンには、とりわけ、前立腺酸性ホスファターゼ（例えばプロベンジ（登録商標））；ｇｐ−９６−Ｉｇ（例えばＨＳ−４１０）；  ＰＡＮＶＡＣ；  ＨＥＲ２／ｎｅｕ（例えばネリペピムト−Ｓ、ＡＶＸ９０１）；  ＤＣＶａｘ（Ｒ）−Ｌ；リンドペピムト；  ＩＭＡ９５０（多重腫瘍関連ペプチド）；腫瘍由来熱ショックタンパク質ｇｐ９６（ビテスペン）；生存ペプチド（例えばＩＳＡ−５１：  ＵＳ特許公報２０１１００９１４８９）；  ＥＧＦＲｖＩＩＩ−ＮＹ−ＥＳＯ−１（例えばＡＤＵ−６２３）；  ＣＤ−１３３；葉酸結合タンパク質ワクチンＥ３９およびＪ６５；  ＨＬＡ−Ａ２腫瘍抗原ペプチド；癌胎児性抗原（ＣＥＡ）；普遍的腫瘍抗原癌胎児性抗原／未成熟ラミニン受容体タンパク質（ＯＦＡ／ｉＬＲＰ）；ママグロビン−Ａ；  ｂｉ−ｓｈＲＮＡフューリン；  ＨＬＡ−Ａ＊２４０２制限エピトープペプチドＣＤＣＡ１、ＵＲＬＣ１０、ＫＩＦ２０Ａ、ＤＥＰＤＣ１およびＭＰＨＯＳＰＨ１；高グリコシル化（ｈｙｐｅｒｇｌｏｃｏｓｙｌａｔｅｄ）ＭＵＣ１（例えばＯＮＴ−１０）；ポリ−ＩＣＬＣ；ヒト・テロメラーゼ逆転写酵素（例えば、ｈＴＥＲＴ、ＵＶ１、ＧＶ１００１）；  ＨＰＶ  Ｐ１６  ３７−６３−ペプチド；  ＨＰＶ−１６−Ｅ７（例えばＡＤＸ１１−００１）、ｐＮＧＶＬ４ａ−Ｓｉｇ；帯状疱疹（Ｈｅｒｐｅｓ  Ｚｏｓｔｅｒ）ワクチンＧＳＫ１４３７１７３Ａ；  ＮＹ−ＥＳＯ−１抗原；白血病関連抗原ＷＴ１；  ｂｃｒ−ａｂｌ  ｐ２１０−ｂ３ａ２ブレイクポイント由来ペンタペプチドＣＭＬＶＡＸ１００；ＧＭ−ＣＳＦを伴う肺癌細胞（例えばＧＶＡＸ）；ウィルムス腫瘍遺伝子１（ＷＴ１）ペプチド（例えばＯＣＶ−５０１）；ヒトＭＵＣ１抗原（例えばＬ−ＢＬＰ２５）；  ＭＵＣ１ペプチド、テセモチド；  ＨＬＡ−Ａ＊０２０１制限エピトープペプチドＵＲＬＣ１０、ＶＥＧＦＲ１および／またはＶＥＧＦＲ２  ９ＵＲＬＣ１０；癌精巣抗原（例えばＵＲＬＣ１０、ＣＤＣＡ１、ＫＩＦ２０Ａ、ＭＡＧＥ−Ｃ１、ＭＡＧＥ−Ａ３／６等）；オートファゴソーム濃縮ワクチン、ドリブル、Ｌ５２３Ｓタンパク質；  ＲＮＡｃｔｉｖｅ由来肺癌ワクチンＣＶ９２０２；  ＣＳＦ−４７０ワクチン；黒色腫抗原ＭＡＧＥ−３．Ａ１；黒色腫抗原ＮＡ１７．Ａ２；黒色腫抗原ＩＭＰ３２１；黒色腫抗原ＬＡＧ−３；  ＩＢＢＬ抗原（例えばＡ２／４−１ＢＢＬ）黒色腫ワクチン；  ＭＡＲＴ−１；  ｇｐ１００（例えばｇ２０９−２Ｍ、Ｇ２８０−９Ｖ）；  ＫＲＮ７０００；  ＰＶＸ−４１０；  ＰＲＯＳＴＶＡＣ；ペプチド、ピロＥＨＷＳＹＧＬＲＰＧ（ＰＥＰ２２３）；前立腺性特異的抗原；およびＰＳＭＡ抗原（例えばＢＰＸ−２０１）が含まれる。
【０２２４】
[0237]いくつかの態様において、抗体と組み合わせて用いる癌ワクチンは、腫瘍細胞または腫瘍細胞溶解物であってもよく、ここでワクチンには、腫瘍細胞または腫瘍細胞溶解物で活性化された抗原提示細胞（例えば樹状細胞）が含まれる。ワクチンとして有用な、例示的な腫瘍細胞および対応する腫瘍細胞溶解物には、とりわけ、膀胱癌細胞、神経膠芽腫細胞、乳癌細胞、子宮頸癌細胞、リンパ腫細胞、腎臓癌細胞、白血病細胞、肺癌細胞、黒色腫細胞、多発性骨髄腫細胞、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌細胞、肝臓癌細胞、および前立腺癌細胞が含まれる。
【０２２５】
[0238]いくつかの態様において、抗体を、上昇したＭＩＣの存在によって特徴付けられるウイルス感染、例えばＢ型肝炎ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、ヒトライノウイルス、およびヒト免疫不全ウイルスでの感染を治療するために用いる抗ウイルス薬剤と組み合わせて用いてもよい。Ｂ型肝炎ウイルス感染を治療するための薬剤には、とりわけ、インターフェロン（例えばインターフェロン・アルファ−２ｂまたはＰＥＧ化インターフェロン）、ラミブジン、アデフォビル・ジピボキシル、エンテカビル、テルビブジン、およびテノフォビルが含まれる。呼吸器合胞体ウイルスを治療するための薬剤には、とりわけ、ＲＳＶ過免疫グロブリン；パリビズマブ；ベンズイミダゾールＢＭＳ−４３３７７１、ＴＭＣ３５３１２１およびＪＮＪ−２４０８０６８；リバビリン；およびアンチセンス・ホスホロジアミデート・モルホリノオリゴマー（概説には、ＯｌｓｚｅｗｓｋａおよびＯｐｅｎｓｈａｗ，  ２００９，  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｅｍｅｒｇ  Ｄｒｕｇｓ  １４（２）：  ２０７−１７を参照されたい）。Ｃ型肝炎ウイルスを治療するための薬剤には、とりわけ、インターフェロン（例えばインターフェロン・アルファ−２ｂまたはＰＥＧ化インターフェロン）、ボセプレビル、テラプレビル、リバビリン、シメプレビル、ソホスブビル、ダクラタスビル、ベルパタスビル、エルバスビル、グラゾブレビル、オムビタスビル、パリタプレビル、リトナビル、ダサブビル、レディプサビルおよびその組み合わせが含まれる。ヒト免疫不全ウイルスを治療するための薬剤には、とりわけ、エファビレンツ、エムトリシタビン、テノフォビル・ジソプロキシル・フマレート、リルピビリン、コビシスタット、ラミブジン、ジドブジン、アバカビル、ザルシタビン、スタブジン、ネビラピン、エトラビリン、デラビルジン、チプラナビル、インジナビル、メシル酸サキナビル、ロピナビル、リトナビル、ダルナビル、硫酸アタザナビル、メシル酸ネルフィナビル、マラビロック、ラルテグラビル、エンフビルチド、およびその組み合わせが含まれる。
【０２２６】
[0239]併用療法のいくつかの態様において、本明細書記載の抗体を、他の療法剤の投与の前に、それと同時に、またはそれに続いて用いてもよい。いくつかの態様において、本開示の抗体および併用療法剤を、同じ日に、例えば同じ受診日に、連続して患者に投与してもよい。連続投与は、１、２、３、４、５、６、７または８時間、あるいはそれより長い時間離れて行ってもよい。いくつかの態様において、本開示の抗体および併用療法剤を、異なる日に、別個に投与してもよく、例えば、抗体および併用療法剤を、１日、２日、または３日、１週間、２週間または一月間隔で投与してもよい。本開示の抗体および他の療法剤の組み合わせのための他の治療措置は、本明細書のガイダンスを考慮して、当業者に明らかであろう。
【０２２７】
[0240]別の側面において、本開示は、本明細書記載の抗体および方法を実施するために有用な材料を含有する製造物品およびキットを提供する。いくつかの態様において、物品は、本開示の抗体を含む容器を含んでもよい。適切な容器には、とりわけ、瓶、バイアル、バッグ、およびシリンジが含まれる。容器は多様な材料、例えばプラスチックまたはガラスで製造されてもよい。いくつかの態様において、容器は、無菌アクセスポート、例えば皮下注射針を挿入するための栓または膜を有してもよい。いくつかの態様において、キットは、本開示の抗体の用量、特に抗体の特定される単位用量を充填したシリンジ、特に単回使用シリンジまたは自動注入ペンシリンジを含む。
【０２２８】
[0241]いくつかの態様において、物品にはまた、抗体と組み合わせて用いる材料、例えば無菌水または無菌緩衝剤、例えば組成物を再構成するためのものを含有する、少なくとも第二の容器も含まれてもよい。いくつかの態様において、第二の容器または第三の容器は、本開示の抗体組成物と組み合わせて使用するための、化学療法剤または生物学的剤を含む、さらなる療法剤を含んでもよい。
【０２２９】
[0242]いくつかの態様において、物品は、１またはそれより多い疾患状態を治療するために用いる組成物を記載する、ラベルまたは添付文書を含む。物品にはまた、適切な電子媒体、例えば光ディスクおよびスタティック・ランダム・アクセス・メモリ・チップ上に組成物の説明書または説明および使用説明書も含んでもよい。
【０２３０】
[0243]製造物品は、容器、添付文書、および／または電子媒体を含むキットの形で提供されてもよい。これは、商品流通および使用者のために望ましい他の材料、例えば他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、針およびシリンジをさらに含んでもよい。
【０２３１】
[0244]本発明をここで一般的に記載してきたが、本発明は、例示のために提供され、そして限定することを意図されない、以下の実施例を参照することによってより容易に理解されるであろう。
【実施例】
【０２３２】
７．  実施例
実施例１：ＭＩＣＡのアルファ−３ドメインに対するモノクローナル抗体の生成に関連する方法
[0245]バキュロウイルス発現による、細胞外アルファ−３ドメインＭＩＣＡ免疫原の産生。抗体産生のための免疫原として、ＭＩＣＡの細胞外アルファ−３ドメインを調製するため、バキュロウイルスタンパク質発現系を用いて、発現されたＭＩＣＡ上に適切なタンパク質グリコシル化を生成した。プロセシングされたＭＩＣＡタンパク質（例えば図４−Ａ）のアミノ酸残基１８２〜２７４である、ＭＩＣＡのアルファ−３ドメインの残基２０５〜２９７（図１Ｃ：配列番号３）をコードするＧｅｎＢａｎｋ  ＭＩＣＡ配列ＮＰ＿０００２３８．１（図１）に対応する組換えアルファ−３ドメインＭＩＣＡ  ｃＤＮＡ（アレル００１）を、バキュロウイルス・トランスファー・ベクター内にさらにサブクローニングするための慣用的な制限酵素部位と一緒に合成的に生成し、そして次いで、適切なＤＮＡクローニングベクター内に連結した。バキュロウイルストランスファーベクターは、精製のため、６つのＣ末端ヒスチジン残基タグを含有した。精製タグおよび切断部位を持つ例示的なＭＩＣＡペプチド免疫原もまた、以下から選択可能であり、ここでＭＩＣＡ配列を下線で示す：
【０２３３】
【化３】
2020502042.tif 000007
【０２３４】
[0246]マウスの免疫に用いようとする組換えタンパク質として、ＭＩＣＢ由来のアルファ−３ドメイン（図１Ｄ：配列番号４に提示する配列）を調製するために、類似の戦略を取ってもよい。精製タグおよび切断部位を含む例示的なＭＩＣＢペプチド免疫原もまた、以下から選択してもよく、ここで、ＭＩＣＢ配列を下線で示す：
【０２３５】
【化４】
2020502042.tif 000008
【０２３６】
[0247]サブクローン中のＭＩＣＡおよびさらなるＤＮＡ配列の両方を確認する際、バキュロウイルス発現系を用いて、２つのＤＮＡ構成要素を大腸菌細菌において組み換えて、組換えウイルスＤＮＡを含有するバクミド構築物を生成した。正しい配列を持つ組換えバクミドクローンを用いて、Ｓｆ９昆虫細胞内にトランスフェクションすることによって、組換えバキュロウイルスを産生した。
【０２３７】
[0248]組換えタンパク質を産生するため、Ｓｆ９細胞を血清不含培地、例えばＳＦ−９００（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で、組換えウイルスに感染させ、そして感染４日後または５日後に細胞を採取した。感染細胞からＭＩＣＡアルファ−３ドメインポリペプチドを精製するため、細胞を溶解し、短時間遠心分離して上清を収集し、そして次いで、Ｎｉ２＋キレートを用いて、アフィニティクロマトグラフィに供した。クロマトグラフィ前に試料緩衝液に８Ｍ尿素を添加することによって、タンパク質回収を改善した。炭酸緩衝液に対する透析を用いて、尿素を除去した。また、純粋なタンパク質を遠心分離フィルター（Ａｍｉｃｏｎ）によって濃縮して、より安定なタンパク質調製を達成してもよい。
【０２３８】
[0249]モノクローナル抗体生成および一次スクリーニング。アルファ−３ドメインＭＩＣＡ免疫原を水溶液（約０．５ｍｇ／ｍｌ）中で調製し、そして２週間の期間に渡って５回、ＲａｐｉｄＰｒｉｍｅＴＭ法（ＩｍｍｕｎｏＰｒｅｃｉｓｅ、カナダ・ブリティッシュコロンビア州）を用いて免疫適合マウス内に注射した。免疫後、免疫マウスのリンパ組織からリンパ球を取り出し、そしてリンパ球を化学的に、限定されるわけではないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）またはＰＥＧ誘導体を用いて、不死化のためにネズミＳＰ２／Ｏ骨髄腫細胞に融合させた。抗体を産生可能なクローン性Ｂ細胞／骨髄腫融合ハイブリドーマ細胞を選択するため、融合させた細胞をメチルセルロース含有半固形ＨＡＴ薬剤選択培地中で増殖させた。ハイブリドーマクローンの一次スクリーニングは、ＥＬＩＳＡによって、組換え抗原（ＭＩＣＡのアルファ−３ドメイン）に結合する能力に関して、抗体含有上清を試験する工程を伴った。一次スクリーニングは、総数９４８のアッセイしたハイブリドーマクローンから１４６のヒットを生じ（１５％）、一方、アイソタイプ決定アッセイは、特異的抗体タイプに関して、９８／１４６クローン（６７％）を同定し、これは９４８の最初のクローンの１０％に相当した。
【０２３９】
[0250]間接的ＥＬＩＳＡを用いた二次スクリーニング。いくつかの二次間接的ＥＬＩＳＡスクリーニングを行って、さらなる分析のため、高品質のハイブリドーマクローンを選択するよう補助した。（ａ）試験アルファ−３ドメインＭＩＣＡタンパク質；（ｂ）潜在的なＨｉｓタグ結合抗体を排除するため、ＭＩＣタンパク質に関連がないＨｉｓタグ化タンパク質；（ｃ）ヒトＭＩＣＡ由来の組換え大腸菌産生外部ドメインタンパク質（完全アルファ−３サブドメインを含むが、Ｈｉｓ−タグを含まないもの）（Ｂｉｏ  Ｂａｓｉｃ、カナダ・マーカム）；および（ｄ）ヒトＭＩＣＢ由来の組換え大腸菌産生外部ドメインタンパク質（完全アルファ−３サブドメインを含むが、Ｈｉｓ−タグを含まないもの）（Ｂｉｏ  Ｂａｓｉｃ、カナダ・マーカム）への結合に関して、抗体を含有するハイブリドーマ上清をアッセイした。
【０２４０】
[0251]上記タンパク質を、炭酸緩衝剤（ｐＨ９．６）中、ウェルあたり０．１〜０．２μｇの範囲の濃度で、ＥＬＩＳＡプレートに一晩、４℃で結合させた。次いで、プレートを脱脂粉乳／ＰＢＳ  ｐＨ７．４でブロッキングし、洗浄し、そして次いで、一次抗体（１００μｌのハイブリドーマ上清）で、または陽性対照ＭＩＣネズミモノクローナル抗体（ＢＡＭＯ３、ＭＩＣアルファ−３特異的ＩｇＧ２ａ  ｍＡｂ；およびＢＡＭＯ１、ＭＩＣアルファ１＋２特異的ＩｇＧ１  ｍＡｂ；どちらもＭＢＬ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、米国マサチューセッツ州）で、またはアイソタイプ・マッチング陰性対照抗体で１時間処理した。洗浄後、ウェルを二次ヤギ抗マウスＩｇＧ／ＩｇＭ（Ｈ＋Ｌ）−ＨＲＰコンジュゲート化抗体で１時間処理した。洗浄したウェルに、ＨＲＰ基質、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）を添加し、そして暗所で５分間発色させた。１Ｍ  ＨＣｌを添加することによって反応を停止し、そしてプレートを４５０ｎｍで読み取った。
【０２４１】
[0252]これらのＥＬＩＳＡ実験は、Ｈｉｓ−タグ化タンパク質と非常に弱く反応する少数のハイブリドーマ上清しか生じず、生成された抗体がターゲット、すなわちＭＩＣＡに特異的であることが示唆された。試験したハイブリドーマの多くは、アルファ−３ターゲットＭＩＣＡタンパク質ならびに細菌産生ＭＩＣＡおよび／またはＭＩＣＢタンパク質両方に強く結合する抗体を生じ、多様な結合可能性を持つ異なるクローンの収集を可能にした。ＥＬＩＳＡ実験もまた、遡及的に、対照ＭＩＣ抗体ＢＡＭＯ３（ＭＩＣアルファ−３特異的）が、組換えアルファ−３  ＭＩＣＡターゲットタンパク質に対する間接的ＥＬＩＳＡによって強いシグナルを産生することが可能であるが、ＢＡＭＯ１（ＭＩＣアルファ１＋２特異的）はそうではないことも示し、試験アルファ−３ドメイン抗原が、実際に、バキュロウイルス系において正しく発現されていたことを確認した。
【０２４２】
[0253]フローサイトメトリーアッセイを用いた二次スクリーニング。二次スクリーニングは、同じ抗体含有上清を用いて、間接的ＥＬＩＳＡによって、これらが、ＭＩＣＡまたはＭＩＣＢタンパク質の細胞外領域（アルファ−１、−２、および−３ドメイン）に結合する能力に関して、そしてフローサイトメトリー分析によって、ＭＩＣ発現熱ショック処理ＨＣＴ１１６結腸癌細胞およびＤＵ−１４５前立腺癌細胞の細胞表面上のＭＩＣタンパク質に結合する能力がないことに関して、試験した。
【０２４３】
[0254]細胞結合ＭＩＣタンパク質への結合に関してアッセイするため、ＭＩＣ発現熱ショック処理ＤＵ−１４５前立腺癌細胞を４２℃で９０分間熱処理し、そして次いで、３７℃で２２時間回復させた。回復に際して、非酵素的に解離させた細胞に対してトリパンブルー生存度試験を行い、そして９７％の生存度レベルが決定された。次いで、以下：（ａ）試験ハイブリドーマ上清；（ｂ）アルファ−３  ＭＩＣサブドメインのみに結合可能な陽性対照ネズミ抗体（上述のＢＡＭＯ３  ｍＡｂ：ＭＢＬ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、米国マサチューセッツ州）、あるいは（ｃ）陽性対照抗体または試験ハイブリドーマ上清のいずれかとアイソタイプマッチした陰性対照ネズミ抗体の１つより選択される一次抗体で熱処理ＤＵ−１４５細胞を処理した。インキュベーションおよび徹底的な洗浄後、細胞をイソチオシアン酸フルオレセイン（ＦＩＴＣ）コンジュゲート化ヤギ抗マウスＩｇＧ二次抗体（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｃ．、米国カリフォルニア州）で処理した。次いで、細胞をヨウ化プロピジウム（ＰＩ）で染色して生存度を測定し、保存緩衝剤中で再懸濁し、そして次いで、ＢＤ  ＦＡＣＳ−Ｃａｌｉｂｅｒ装置上でフローサイトメトリーに供した。
【０２４４】
[0255]細胞表面への強い結合は、陽性対照抗体（アルファ−３特異的）で検出されたが、陰性対照抗体（未提示）、あるいはＥＬＩＳＡアッセイ形式で、ＭＩＣＡアルファ−３サブドメイン組換えタンパク質および細菌発現ＭＩＣＡまたはＭＩＣＢ細胞外ドメイン組換えタンパク質に結合すると以前決定されている抗体のハイブリドーマ試験上清ではいずれも、結合は観察されなかった。特に、ハイブリドーマクローン５Ｃ９（ＩｇＧ２）由来の抗体は、ＤＵ−１４５細胞上の細胞表面発現ＭＩＣタンパク質に結合不能であった（図９）。
【０２４５】
実施例２：ＭＩＣタンパク質に結合する抗体の特徴付け
[0256]結合アフィニティの分析。Ｐａｌｌ  ＦｏｒｔｅＢｉｏ  Ｏｃｔｅｔ  ＲＥＤ９６装置（Ｐａｌｌ  ＦｏｒｔｅＢｉｏ、米国カリフォルニア州）を用いて、Ｂｉｏ−Ｌａｙｅｒインターフェロメトリー（ＢＬＩ）によって、ＭＩＣＡアルファ−３組換え抗原および試験抗体の間の生体分子相互作用を直接測定した。試験ＭＩＣＡモノクローナル抗体５Ｃ９、ならびに、先にＥＬＩＳＡによって決定されるように、そのうちの一方がアルファ−３  ＭＩＣＡサブドメイン抗原（陽性対照）に結合可能であり、そしてそのうちの一方が結合不能である（陰性対照）２つの対照抗体に関して、リアルタイム動力学的分析を行った。Ｏｃｔｅｔ  ＲＥＤ９６装置は、Ｂｉｏ−Ｌａｙｅｒインターフェロメトリーの原理の元に作動し、これは、分子相互作用および複合体形成を測定する標識不含技術である。技術の重要な構成要素は、光学バイオセンサーであり、そのチップを試験ウェルの液体に浸し、そして次いで、これを用いて、光波間の干渉パターンをアッセイする。ここで、リガンド（モノクローナル抗体）は、先に結合した抗マウスＩｇＧによる捕捉を通じてバイオセンサー表面に局在し、一方、分析物生体分子（抗原）は、溶液中に維持される。リガンドおよび分析物間の結合反応を測定し、そしてリアルタイムで報告した。会合および解離動力学の両方を監視し、そしてＫＤ値を計算した。このモデルは、リガンド対分析物の１：１相互作用を仮定した。
【０２４６】
[0257]ｐＨ７．４で、ＭＩＣＡアルファ−３組換えタンパク質への結合に関して、陽性対照ＭＩＣＡ抗体（ＢＡＭＯ３）に関するアフィニティ定数ＫＤは、約６．０ｘ１０−９Ｍであった。緊密に結合しない陰性対照抗体は、約９．６ｘ１０−６ＭのＫＤを有した。クローン５Ｃ９由来の抗体は、約３．３ｘ１０−９Ｍの測定されるＫＤを有した。
【０２４７】
[0258]抗原結合ドメインの配列決定。ハイブリドーマ細胞を界面活性剤含有緩衝剤で溶解し、そして標準法によってｍＲＮＡを単離した。５’ＲＡＣＥ（ＲＬＭ−ＲＡＣＥ）、ならびにマウス免疫グロブリン重鎖（ＩｇＧ１）および軽鎖（カッパ）可変領域配列を増幅する遺伝子特異的逆プライマーを用いて、ＲＴ−ＰＣＲを行った。ゲル電気泳動によって反応混合物を分離し、そして特異的ＰＣＲバンドをゲル切除した。精製ＰＣＲ産物をｐＣＲ−Ｂｌｕｎｔ  ＩＩ−ＴＯＰＯベクター内にクローニングし、そして構築物を大腸菌内に形質転換した。各鎖の２３のコロニーを摘み取り、そして配列決定前に、増幅された領域の存在に関して、ＰＣＲスクリーニングした。各鎖のＰＣＲ陽性クローン（約８〜１０）を配列決定した。ＢＬＡＳＴによってＤＮＡ配列を分析して、マウス抗体配列に対する相同性を確認した。抗体５Ｃ９の可変領域の配列を図７（Ａ〜Ｈ）に示す。
【０２４８】
実施例３：ＭＩＣ抗体のエピトープマッピング
[0259]抗体によって結合されるエピトープを、Ｐｅｐｓｃａｎ  Ｐｒｅｓｔｏ  ＢＶ（オランダ・レリスタット）のＨｉＳｅｎｓｅＴＭエピトープマッピング法を用いて決定した。ＭＩＣＡ＊００１アルファ−３配列由来の一連の重複する合成ペプチドを構築して、試験抗体への結合を評価した。さらに、二重アラニン突然変異を含有するＭＩＣＡペプチドを産生し、そして抗体結合能に対する特定のアミノ酸の重要性を確認するために用いた。
【０２４９】
[0260]合成ペプチド：ターゲット分子のエピトープを再構築するため、ペプチドライブラリーを合成した。親水性ポリマー配合物を移植した後、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）とＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）を用いて、ｔ−ブチルオキシカルボニル−ヘキサメチレンジアミン（ＢｏｃＨＭＤＡ）と反応させて、そして続いて、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を用いてＢｏｃ基を切断することによって、アミノ官能化ポリプロピレン支持体を得た。標準的Ｆｍｏｃ−ペプチド合成を用いて、カスタム修飾ＪＡＮＵＳ液体取り扱いステーション（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）によって、アミノ官能化固体支持体上で、ペプチドを合成した。最後に、過剰なＨ２Ｏでペプチドアレイを徹底的に洗浄し、そしてＰＢＳ中に１％ＳＤＳ／０．１％ベータ−メルカプトエタノールを含有する破壊緩衝液中で、７０℃で３０分間超音波処理し、その後、Ｈ２Ｏ中でさらに４５分間超音波処理した。
【０２５０】
[0261]ＥＬＩＳＡスクリーニング：合成したペプチド各々への抗体の結合を、Ｐｅｐｓｃａｎに基づくＥＬＩＳＡにおいて試験した。ペプチドアレイを一次抗体溶液とインキュベーションした（４℃で一晩）。洗浄後、ペプチドアレイを、適切な抗体・ペルオキシダーゼコンジュゲート（ＳＢＡ；ウサギ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）ＨＲＰコンジュゲート、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）の１／１０００希釈と、２５℃で１時間インキュベーションした。洗浄後、ペルオキシダーゼ基質２，２’−アジド−ジ−３−エチルベンズチアゾリンスルホネート（ＡＢＴＳ）および２０μｌ／ｍｌの３％Ｈ２Ｏ２を添加した。１時間後、発色を測定した。発色を電荷結合素子（ＣＣＤ）カメラおよび画像プロセシング系で定量化した。
【０２５１】
[0262]結果：Ｐｅｐｓｃａｎによって開発されたソフトウェアを用いて、エピトープを決定した。４００を超えるペプチドの分析からの記録されたデータによって、５Ｃ９抗体は、プロセシングされたＭＩＣＡ配列由来の番号付けに基づいて、２２８＿ＱＱＷＧＤＢＬＰ＿２３５（配列番号２２）のコア配列を含むペプチドを認識すると示唆された。さらに、データによって、２３１＿ＧＤＶＬ＿２３４（配列番号２３）の範囲のＭＩＣＡ残基の二重アラニン突然変異を含むペプチドは、抗体の結合を無効にすることが示された。同定された直鎖エピトープの構造特性を評価するため、ヒトＭＩＣＡの３Ｄ構造を用いた。図６は、エピトープマッピング研究に基づいて、抗体５Ｃ９と相互作用するＭＩＣＡ上のエピトープ残基の表面局在を示す。
【０２５２】
実施例４：前立腺癌ＤＵ−１４５細胞から脱落したＭＩＣタンパク質への結合の評価
[0263]ＤＵ−１４５前立腺癌細胞から脱落したＭＩＣリガンドへの抗体結合を示すため、サブトラクティブ免疫沈降法を使用して、特異的結合を監視し、そして定量化した。この方法において、ＤＵ−１４５細胞（ＡＴＣＣより）を高密度に増殖させて、そして次いで、４２℃で９０分間熱ショック処理した。次いで、組織培地を２％ＦＢＳ低血清含有培地に交換して、そして細胞を４８時間回復させた。この時点で、馴化培地を採取し、そして後の使用のために凍結した。プロテインＧ  ＰＬＵＳ−アガロースビーズ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、カリフォルニア州）を用いて、陽性対照抗体ＢＡＭＯ３（ＩｇＧ２ａ）、試験ハイブリドーマ上清抗体（ＩｇＧ２ｂ）、または適切な正常マウスアイソタイプ対照（多様なアイソタイプ；Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、カリフォルニア州）に４℃で３時間結合させた。インキュベーション後、ＤＵ−１４５馴化培地中の脱落ｓＭＩＣリガンドに結合する能力を評価する際にさらに使用するため、新鮮に結合した抗体を所持するビーズを、徹底的に洗浄した。処理したビーズを次いで、特定された量の馴化培地に添加し、そして次いで、免疫沈降を誘導するため、穏やかに撹拌しながら、４℃で一晩インキュベーションした。インキュベーション後、ビーズを穏やかに遠心分離して、ビーズをペレットにし、そして試験馴化培地からビーズを取り除き、そして廃棄した。ｓＭＩＣリガンドに結合する抗体／ビーズ複合体は、残りの馴化培地中のｓＭＩＣリガンドのレベルの減少を引き起こし、次いでこれをＥＬＩＳＡによってアッセイしてもよい。ＤＵ−１４５細胞によって放出される主なｓＭＩＣリガンドは、ｓＭＩＣＢであると決定され、そしてこうしたものとして、ＭＢＬ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、マサチューセッツ州からのＭＩＣＢ  ＥＬＩＳＡキット（Ａｂ−マッチ集合ヒトＭＩＣＢキットとともに、Ａｂ−Ｍａｔｃｈ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ緩衝剤キット）を用いてアッセイした（図１０を参照されたい）。抗体／ビーズ複合体がｓＭＩＣＢを捕捉した処理では、アイソタイプ（陰性）対照と比較して、減少したＥＬＩＳＡシグナルを生じた。精製ＢＡＭＯ３  ＭＩＣＡ／Ｂ抗体（膜結合型で、ＭＩＣＡ／Ｂに結合可能でもある）は陽性対照として働き、そして試料中のｓＭＩＣＢの量を、およそ８３％減少させた。ハイブリドーマ上清由来の５Ｃ９抗体は、アイソタイプ対照に比較して、ｓＭＩＣＢレベルをおよそ５１％減少させた。
【０２５３】
実施例５：Ｒａｇ２−／−マウスにおける前立腺癌ＤＵ−１４５異種移植片の増殖に対する影響
[0264]ＤＵ−１４５細胞を、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、０．１ｍＭ非必須アミノ酸、１．５ｇ／Ｌ重炭酸ナトリウムおよび１０％ＦＢＳを含有する修飾Ｅａｇｌｅ最少必須培地中、５％ＣＯ２環境で、３７℃で増殖させた。研究第０日、５．０ｘ１０６  ＤＵ−１４５腫瘍細胞を、雄Ｒａｇ２−／−マウスの背中に皮下移植した。研究第３１日、多様な治療アームにマウスをランダムに配した。すべての治療アームは、研究第３２日に投薬を開始し、そして研究第５６日で完了した。マウスの体重を週２回測定し、そしてプロトコルによって示されている個所では、３回注射した場合の最後の週以外、アイソタイプ対照または５Ｃ９抗体４００μｇを週２回腹腔内注射した。組換えマウスＩＬ−１２（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、カリフォルニア州）を投与されるようスケジューリングされたマウスに、週３回、０．５μｇの腫瘍近傍注射を行った。ノギスで腫瘍直径を測定することによって、腫瘍増殖を監視した。全研究に渡って、週２回、腫瘍長および幅の測定を行った。長さ（ｍｍ）を腫瘍のより長い軸として、等式Ｌ  Ｘ  Ｗ２／２にしたがって、腫瘍体積を計算した。研究第１０日、第３６日、第４３日、および終了時に、血液試料を収集した。血液試料から血清を生成し、そして後に、ＥＬＩＳＡ実験において用いて、ｓＭＩＣＢレベルを測定した。研究終了時、脾臓を収集し、そして重量測定した。
【０２５４】
[0265]結果：異種移植モデル：図１１は、長期間にわたる各研究アームからの平均腫瘍体積を示す。アイソタイプ対照に比較して、両方の単一療法（５Ｃ９抗体またはＩＬ−１２）は有意でなく異なった（Ｐ＞０．０５、スチューデントのＴ検定、２テール）が、研究第５８日に測定した際、これらのアームに関して、それぞれ３０％および３２％の平均腫瘍サイズの減少が注目された（図１２）。研究第５８日に評価した、５Ｃ９抗体およびＩＬ−１２を用いた併用治療に関しては、平均腫瘍体積の統計的に有意な減少（５３％）が注目された（Ｐ＜０．０５）。これらのデータは、５Ｃ９抗体がｓＭＩＣＢに結合し、そしてｓＭＩＣＢの血液レベルを減少させ、それによってＮＫ細胞上の同族受容体ＮＫＧ２Ｄによる表面結合ＭＩＣリガンドの認識を促進し、こうした効果が免疫刺激性のＩＬ−１２の添加によって増進される、示唆される作用機構と一致する。脾臓重量に関しては（図１４）、アイソタイプ対照および５Ｃ９単独または５Ｃ９に加えてＩＬ−１２治療アーム間で統計的に有意な相違が見られ、アイソタイプ対照に比較して、それぞれ、およそ２または３倍の脾臓重量が増加した。ＩＬ−１２のみを含有する治療アームに関しては、有意な相違は見られなかった。研究した動物いずれに関しても、治療中の有意な体重喪失、または剖検時の肉眼的毒性は見られなかった。
【０２５５】
[0266]イムノアッセイ：図１３は、マウス血清におけるｓＭＩＣＢのレベルを評価するために行ったＥＬＩＳＡの結果を示す。ｓＭＩＣＢレベルは、腫瘍サイズが増加するにつれて増加し、そしてしたがって、研究第１０日の初期の時点では非常に低レベルでしか検出可能でなかったが、研究および腫瘍体積が進行するにつれて一般的により高いレベルが認められた。研究第３６日、第４３日および第５３〜５８日、４つの研究アームの血清試料から、ｓＭＩＣＢレベルが決定された。ｍＡｂ  ５Ｃ９に加えてＩＬ−１２の併用治療群をアイソタイプ対照に比較した際（スチューデントのＴ検定、２テール；研究第３６日、第４３日および第５３〜５８日、それぞれのＰ値＝０．０３、０．００１および０．００２）、統計的に有意な減少に達した。統計分析によって、研究第３６日（Ｐ＝０．０８）および第４３日（Ｐ＝０．０９）に、ｍＡｂ  ５Ｃ９のみを含有する治療アームに関して、有意性に近付くことが示唆された。注目されるのは、研究第３６日、５Ｃ９単独に比較して、ＩＬ−１２治療単独アームで、ｓＭＩＣＢレベルの減少の遅延が生じるという事実であり、これは潜在的に、治療タイプ間での作用機構の相違を示唆する。
【０２５６】
[0267]ｓＭＩＣＢに加えて、サンドイッチ捕捉ＥＬＩＳＡによって、ＩＦＮ−γに関してもまたマウス血清をアッセイした。ＩＦＮ−γを測定するため、製造者の指示にしたがって、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ／ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅマウスＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳＡ  Ｒｅａｄｙ−Ｓｅｔ−Ｇｏキットを用いた。図１５は、研究第３６日のＩＦＮ−γの変化を示す。スチューデントのＴ検定（２テール）を用いて、Ｐ値を計算した。０．０５未満のＰ値を有意と見なした。図１５中の表示「＊」は、Ｐ＜０．０５を指す。５Ｃ９またはＩＬ−１２単独療法のどちらも、アイソタイプ対照とは有意に異ならなかった；が、５Ｃ９およびＩＬ−１２の併用治療は、単独療法またはアイソタイプ対照のいずれとも有意に異なった（スチューデントのＴ検定、２テール；Ｐ値＜０．０５）。より後の研究日のＩＦＮ−γに関するマウス血清の試験によって、すべての治療群は低レベルしか持たず、そして互いに有意には異ならなかった（データ未提示）。
【０２５７】
[0268]製造者の指示にしたがって、Ａｂｃａｍ  ＳｉｍｐｌｅＳｔｅｐ  ＥＬＩＳＡキットを用いて、研究第１０日、第３６日、第４３日および第５８日に、マウス血清由来のＩＰ−１０（ＣＸＣＬ１０）もまたアッセイした。図１６は、研究経過に渡るＩＰ−１０の変化を示す。研究第３６日、アイソタイプ対照に比較して、５Ｃ９およびＩＬ−１２単独療法両方を含む治療群に関して、ならびに５Ｃ９とＩＬ−１２の併用に関して、ＩＬ−１０の有意な増加（スチューデントのＴ検定、２テール；Ｐ値＜０．０５）が注目された。併用治療群は、第４３日および第５８日にも、アイソタイプ対照と有意に異なり続いてた。すべての薬剤治療群に関する平均ＩＰ−１０レベルは、研究第３６日またはその前後でピークに達するようであり、その後は減少した。これらのデータは、治療に反応したＩＦＮ−γの発現によるＩＰ−１０の誘導と一致する。
【０２５８】
[0269]本発明の特定の態様の前述の説明は、例示および説明の目的のために提示されてきている。これらは、包括的であることも、または開示する正確な型に本発明を限定することも意図されず、そして多くの修飾および変動が、上記解説を考慮して可能である。
【０２５９】
[0270]本明細書に引用するすべての特許、特許出願、刊行物、および参考文献は、各個々の刊行物または特許出願が、具体的に、そして個々に、本明細書に援用されると示されるのと同じ度合いまで、本明細書に明らかに援用される。
【図１】
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【図２】
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【図３−１】
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【図３−２】
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【図４−１】
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【図４−２】
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【図５−１】
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【図５−２】
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【図６】
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【図７−１】
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【図７−２】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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