(57)【要約】本発明は、身体各部位における脂肪の異常／過剰沈着を低減するように、肥満症およびその関連疾患に罹患しやすいか罹患している被験者に有効量のプラスミノーゲンを投与することを含む、体重超過／肥満症およびその関連疾患を予防および／または治療するための方法を開示している。本発明はさらに、肥満症を予防および／または治療するための薬物、および薬物の製造における用途を開示している。【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験者に有効量のプラスミノーゲンを投与することを含む、被験者の肥満症を予防または治療するための方法。
【請求項２】
前記プラスミノーゲンは、組織器官、組織器官周囲および／または腹腔における脂質の異常沈着または過剰沈着を減少させることによって肥満症を治療する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記プラスミノーゲンは、皮下、心臓、肝臓、肺臓、腎臓、血管、腸間膜、腹膜、体腔、器官周囲における脂質の異常沈着または過剰沈着を減少させる、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記プラスミノーゲンは、被験者の血脂を低下させることによって、特にトリグリセリドおよび低密度リポタンパク質レベルを低下させることによって肥満症を治療する、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記肥満症は、単純性肥満症またはその他の疾患に継発する肥満症である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
被験者に有効量のプラスミノーゲンを投与することを含む、被験者の肥満症を予防または治療するための方法であって、前記肥満症は、内分泌障害疾患、糖代謝疾患、肝臓疾患、腎臓疾患、心血管疾患、腸疾患、甲状腺疾患、胆嚢または胆道疾患、過量飲酒、薬物作用に継発するものである、被験者の肥満症を予防または治療するための方法。
【請求項７】
被験者に有効量のプラスミノーゲンを投与することを含む、被験者の疾患と合併する肥満症を予防および／または治療するための方法であって、前記疾患と合併する肥満症は、内分泌疾患と合併する肥満症、代謝性疾患と合併する肥満症、心血管疾患と合併する肥満症、消化系疾患と合併する肥満症、退行性疾患と合併する肥満症を含む、被験者の疾患と合併する肥満症を予防および／または治療するための方法。
【請求項８】
前記肥満症は、糖尿病と合併する肥満症、高血圧と合併する肥満症、アテローム性動脈硬化症と合併する肥満症、肝臓疾患と合併する肥満症、骨粗しょう症と合併する肥満症を含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
被験者に治療に有効量のプラスミノーゲンを投与することを含む、肥満症による合併症を予防または治療するための方法であって、前記肥満症の合併症は、心脳血管疾患、代謝性疾患、筋肉骨格疾患、消化系疾患、睡眠時無呼吸、呼吸障害を含む、肥満症による合併症を予防または治療するための方法。
【請求項１０】
前記合併症は、高血圧、糖尿病、冠状動脈心臓病、狭心症、心筋梗塞、不整脈、アテローム性動脈硬化症、脳血栓、脳出血、骨関節炎、骨増殖症、胆嚢炎、脂肪肝、肝硬変である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
被験者に有効量のプラスミノーゲンを投与することを含む、被験者のアテローム性動脈硬化症の発症リスクを低めるため方法。
【請求項１２】
前記プラスミノーゲンは肥満症を治療することによって被験者のアテローム性動脈硬化症の発症リスクを低める、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
組織器官またはその周囲、皮下または腹腔における脂肪の異常または過剰沈着を減少させるように被験者に有効量のプラスミノーゲンを投与することを含む、被験者の肥満症の発症リスクを低めるため方法。
【請求項１４】
被験者の肥満症を予防または治療するための薬物の製造におけるプラスミノーゲンの用途。
【請求項１５】
前記プラスミノーゲンは、
１）皮下、心臓、肝臓、肺臓、腎臓、血管、腸間膜、腹膜、体腔、器官周囲からなる群より選ばれる一つ以上の部位における脂質の異常沈着または過剰沈着を減少させることと、
２）肝臓脂肪の除去を促進することと、
３）血中脂質の除去を促進することで被験者の心臓病の発症リスクを低めることと
からなる群より選ばれる一つ以上によって被験者体内の脂肪の異常または過剰沈着を低減する、請求項１４に記載の用途。
【請求項１６】
被験者に有効量のプラスミノーゲンを投与することを含む、被験者の血脂を低下させるため方法。
【請求項１７】
前記プラスミノーゲンは、血清のトリグリセリドレベル、低密度リポタンパク質レベルを低下させる、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
被験者に有効量のプラスミノーゲンを投与して血管壁における脂質の異常または過剰沈着を軽減することを含む、被験者のアテローム性動脈硬化症または心臓病の発症リスクを低めるため方法。
【請求項１９】
被験者に有効量のプラスミノーゲンを投与して肝臓による沈着脂肪の除去を促進することを含む、被験者の肥満症を治療するための方法。
【請求項２０】
被験者に有効量のプラスミノーゲンを投与することを含む、被験者の肥満症を治療するための方法であって、前記プラスミノーゲンは、
１）皮下、心臓、肝臓、肺臓、腎臓、血管、腸間膜、腹膜、体腔、器官周囲からなる群より選ばれる一つ以上の部位における脂質の異常沈着または過剰沈着を減少させることと、
２）肝臓脂肪の除去を促進することと、
３）血中脂質の除去を促進することと
からなる群より選ばれる一つ以上によって被験者体内の脂肪を低減する、被験者の肥満症を治療するための方法。
【請求項２１】
前記肥満症は、単純性肥満症またはその他の疾患に継発する肥満症である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記肥満症は、内分泌障害疾患、糖代謝疾患、肝臓疾患、腎臓疾患、心血管疾患、腸疾患、甲状腺疾患、胆嚢または胆道疾患、過量飲酒、薬物作用に継発するものである、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記プラスミノーゲンは一種以上のその他の薬物または治療方法と併用することができる、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記一種以上のその他の薬物は、高血圧の治療薬、糖尿病の治療薬、アテローム性動脈
硬化症の治療薬、慢性糸球体腎炎の治療薬、慢性腎盂腎炎の治療薬、腎臓病症候群の治療薬、腎機能不全の治療薬、尿毒症の治療薬、腎移植の治療薬、脂肪肝の治療薬、肝硬変の治療薬、肥満症の治療薬を含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記その他の薬物は、脂質低下薬、抗血小板薬、血圧降下薬、血管拡張薬、血糖降下薬、抗凝固薬、血栓溶解薬、肝臓保護薬、抗不整脈薬、強心薬、利尿薬、抗感染薬、抗ウイルス薬、免疫調節薬、炎症調節薬、抗腫瘍薬、ホルモン薬、チロキシンを含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記薬物は、スタチン系、フィブラート系、ニコチン酸、コレスチラミン、クロフィブラート、益壽寧や血脂平や心脈楽のような不飽和脂肪酸、硫酸多糖類のような脂質低下薬；アスピリン、ペルサンチン、クロピドグレル、シロスタのような抗血小板薬；ヒドララジン、ニトログリセリン、硝酸イソソルビド、ニトロプルシドナトリウム、プラゾシンのようなα１受容体遮断薬、フェントラミンのようなα受容体遮断薬、サルブタモールのようなβ２受容体刺激薬、カプトプリル、エナラプリル、ニフェジピン、ジルチアゼム、サルブタモール酸、ミノキシジル、プロスタグランジン、カルジオナトリンのような血管拡張薬；ウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ、組織型プラスミノーゲン活性化剤、単鎖ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化剤、ＴＮＫ−組織型プラスミノーゲン活性化剤のような血栓溶解薬；ヘパリン、エノキサパリン、ナドロパリン、ビバリルジンのような抗凝固薬を含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記プラスミノーゲンは配列２、６、８、１０または１２と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有し、且つ依然プラスミノーゲン活性を有するものである、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
前記プラスミノーゲンは配列２、６、８、１０または１２において、１−１００、１−９０、１−８０、１−７０、１−６０、１−５０、１−４５、１−４０、１−３５、１−３０、１−２５、１−２０、１−１５、１−１０、１−５、１−４、１−３、１−２、１個のアミノ酸を添加、削除および／または置換したものであり、且つ依然プラスミノーゲン活性を有するタンパク質である、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
前記プラスミノーゲンはプラスミノーゲン活性フラグメントを含有し、且つ依然プラスミノーゲン活性を有するタンパク質である、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
前記プラスミノーゲンは、Ｇｌｕ−プラスミノーゲン、Ｌｙｓ−プラスミノーゲン、ミニプラスミノーゲン、マイクロプラスミノーゲン、δ−プラスミノーゲンまたはそれらのプラスミノーゲン活性を保持した変異体である、請求項１〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
前記プラスミノーゲンは、天然または合成のヒトプラスミノーゲン、またはその依然プラスミノーゲン活性を保持した変異体若しくはフラグメントである、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３２】
前記プラスミノーゲンは、霊長類動物またはげっ歯類動物に由来するヒトプラスミノーゲンのオルソログ、またはその依然プラスミノーゲン活性を保持した変異体若しくはフラグメントである、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
前記プラスミノーゲンのアミノ酸配列は配列２、６、８、１０または１２に示される通
りである、請求項１〜３２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３４】
前記プラスミノーゲンは、ヒト由来の天然プラスミノーゲンである、請求項１〜３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
前記被験者はヒトである、請求項１〜３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３６】
前記被験者はプラスミノーゲンが不足、または欠乏している、請求項１〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
前記不足または欠乏は、先天的、継発的および／または局所的である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
請求項１〜３７のいずれか１項に記載の方法に使用されるプラスミノーゲン。
【請求項３９】
薬学的に許容される担体および請求項１〜３７のいずれか１項に記載の方法に使用されるプラスミノーゲンを含む薬物組成物。
【請求項４０】
（ｉ）請求項１〜３７のいずれか１項に記載の方法に使用されるプラスミノーゲンと、（ｉｉ）前記プラスミノーゲンを前記被験者に送達するための手段（ｍｅａｎｓ）とを含む、予防性または治療性キット。
【請求項４１】
前記手段はシリンジまたはバイアルである、請求項４０に記載のキット。
【請求項４２】
請求項１〜３７のいずれか１項に記載の方法を実施するように前記プラスミノーゲンを前記被験者に投与することを指示するラベルまたはプロトコルをさらに含む、請求項４０または４１に記載のキット。
【請求項４３】
ラベルを含む容器と、
（ｉ）請求項１〜３７のいずれか１項に記載の方法に使用されるプラスミノーゲン、またはプラスミノーゲンを含む薬物組成物とを含む製品であって、
前記ラベルは、請求項１〜３７のいずれか１項に記載の方法を実施するように前記プラスミノーゲンまたは組成物を前記被験者に投与することを指示する、製品。
【請求項４４】
その他の薬物を含む、もう一つ以上の部材または容器をさらに含む、請求項４０〜４２のいずれか１項に記載のキット、または請求項４３に記載の製品。
【請求項４５】
前記その他の薬物は、脂質低下薬、抗血小板薬、血圧降下薬、血管拡張薬、血糖降下薬、抗凝固薬、血栓溶解薬、肝臓保護薬、抗不整脈薬、強心薬、利尿薬、抗感染薬、抗ウイルス薬、免疫調節薬、炎症調節薬、抗腫瘍薬、ホルモン薬、チロキシンからなる群より選ばれる、請求項４４に記載のキットまたは製品。
【請求項４６】
プラスミノーゲンを含む抗肥満薬。
【請求項４７】
プラスミノーゲンを含む抗肥満製品。
【請求項４８】
体重を減らすためのプラスミノーゲンの用途。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、肥満症およびその関連疾患を予防および／または治療するための方法および薬物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
肥満症（оｂｅｓｉｔｙ）とは、体内において脂肪の堆積が過剰および／または分布が異常であることをいう。世界保健機関の定義によると、体重超過および肥満は、健康を害し得る体内脂肪の過剰および／または異常累積のことである。１９４８年にＷＨＯは肥満を疾患と定義し、国際疾患分類（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｉｓｅａｓｅ，ＩＣＤ）に追加した。２０１３年６月に、アメリカ医学会協会（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，ＡＭＡ）はその歴史上で初めて正式に肥満を疾患とし、医学的な介入措置でそれを予防および治療する必要があると宣言した［１］。また、体重超過と肥満は、心脳血管疾患（心臓病、高血圧、血脂異常、脳卒中）、２型糖尿病、筋肉骨格疾患（骨関節炎など）、消化系疾患（胆嚢疾患）、睡眠時無呼吸または呼吸障害およびいくつかの癌（子宮内膜癌、乳癌、結腸癌）などを含む、多くの疾患の危険要素である［２］。ＷＨＯのデータによると、２０１４年に全世界で１９億以上の成人が体重超過し、そのうち６億人以上は肥満である［２］。中国では成人の体重超過率は３１．５％であり、肥満率は１２．２％である［３］。体重超過および肥満はすでに住民の健康に影響を与える重要な疾患となっている。
【０００３】
臨床上では主に体の外部特徴を測って間接的に体内脂肪を反映する。よく使用される測定指標は、体格指数（ｂｏｄｙ  ｍａｓｓ  ｉｎｄｅｘ，ＢＭＩ）および腹囲（ｗａｉｓｔ  ｃｉｒｃｕｍｆｅｒｅｎｃｅ，ＷＣ）である。ＢＭＩは肥満症を診断するための最も重要な指標であり、腹囲は腹部の脂肪の累積程度を反映することができる。現在、世界保健機関の分類基準では、ＢＭＩ≧２５ｋｇ・ｍ２を体重超過とし、ＢＭＩ≧３０ｋｇ・ｍ２を肥満としている。この分類は主に欧州白人のデータによって制定されているが、ＢＭＩが同じである場合に、アジア人体内の脂肪の割合は西洋人より高く、腹部の肥満はより深刻である［４］。
【０００４】
中国の肥満に関するデータを研究することによって、２００３年に『中国成人体重超過および肥満症予防制御指南（試用）』ではＢＭＩ≧２４ｋｇ・ｍ２を中国成人の体重超過の限界とし、ＢＭＩ≧２８ｋｇ・ｍ２を肥満の限界とし、２０１１年に『中国成人肥満症予防治療専門家の共通認識』では、男性腹囲≧９０ｃｍ、女性腹囲≧８５ｃｍを腹部肥満の判断基準としている。
【０００５】
肥満症の治療は主にライフスタイルへの干渉、薬物治療、および外科手術治療に分けられる。現在、根拠に基づいた医学的証拠では、ライフスタイルへの干渉は第一線の治療案として推薦されている。『中国成人体重超過および肥満症予防制御指南（試用）』によると、ライフスタイルへの干渉が無効になる場合、すなわち、体重を５％と軽減できず、ＢＭＩ指数が依然として２８を超えた場合、薬物治療が薦められる。体重超過且つ一種の合併症（心血管疾患、高血圧、２型糖尿病など）が伴われる患者に対しても、ライフスタイルへの干渉が無効になった場合、薬物治療が薦められる。
【０００６】
抗肥満薬は、中枢による食欲抑制薬、食欲を抑制する胃腸ホルモン系、外周に作用して栄養物質の吸収を妨害するおよび栄養物質代謝を増加させる薬物に分けられることができる。中枢による食欲抑制薬としての三つの持効性抗肥満薬のうちの二つはすでに使用停止されている。リモナバン（ｒｉｍｏｎａｂａｎｔ）およびシブトラミン（ｓｉｂｕｔｒａ
ｍｉｎｅ）はそれぞれ精神および心血管疾患のリスクを増やすため、２００８年１０月と２０１０年１月にＥＭＥＡによって使用停止を要求され［５−６］、かつての広範応用から使用停止になったため、抗肥満薬の市場が一度空白になった。近年来、胃腸ホルモンは食欲調節、血糖コントロールにおける作用に関する研究は盛んであり、これらの薬物は動物実験において、食欲を抑制し、体重を軽減する明らかな作用があるが、その安全性および使用の有効量については、まだ多くのさらなる臨床的試験研究が必要である。外周に作用する薬物は次の二つのターゲットに対する。すなわち、１．胃腸に作用して脂肪吸収リパーゼ阻害剤とナトリウム・グルコース共輸送体２（ＳＧＬＴ２）阻害剤を減少させる；２．脂肪組織に作用して脂肪合成を減少させ、脂肪加水分解を促進する：主に脂肪代謝通路での酵素系を含む。リパーゼ阻害剤は胃腸と膵臓のリパーゼを阻害することによって飲食中の脂肪の吸収を減少させる。オルリスタット（оｒｌｉｓｔａｔ）は抗肥満の効果が明らかであり、副作用が小さいが、アメリカでは１３人の服用者には重度の肝損傷があったと報告され、最近、ＦＤＡはそのメーカーに製品プロトコルの更新を促すことを決めた［７］。
【０００７】
薬物治療を実施する前の３ヶ月において、少なくとも毎月薬物の有効性および安全性を評価し、その後も３ヶ月ごとに１回評価すべきである［８］。抗肥満薬の安全性はその広範な応用を制限する主因であり、また、薬物の抗肥満効果も限られている。そのため、現在では、薬物治療は肥満症治療の補助手段であり、医療専門家の助けでライフスタイルを改善することこそ、体重超過および肥満を治療するための第一選択方法である。肥満症は慢性疾患であり、永久の抗肥満効果を果たす薬物はなく、長期的に薬物を服用するしか体重を保持することができない。数が増え続ける体重超過および肥満の患者に面して、より安全で効果的な抗肥満薬を見つけることは、人々の切実な望みである。
【発明の概要】
【０００８】
本発明は下記項に係る。
【０００９】
１．被験者に有効量のプラスミノーゲンを投与することを含む、被験者の肥満症を予防または治療するための方法。
【００１０】
２．前記プラスミノーゲンは、組織器官、組織器官周囲および／または腹腔における脂質の異常沈着または過剰沈着を減少させることによって肥満症を治療する、項１に記載の方法。
【００１１】
３．前記プラスミノーゲンは、皮下、心臓、肝臓、肺臓、腎臓、血管、腸間膜、腹膜、体腔、器官周囲における脂質の異常沈着または過剰沈着を減少させる、項２に記載の方法。
【００１２】
４．前記プラスミノーゲンは、被験者の血脂を低下させることによって、特にトリグリセリドと低密度リポタンパク質レベルを低下させることによって肥満症を治療する、項１に記載の方法。
【００１３】
５．前記肥満症は、単純性肥満症またはその他の疾患に継発する肥満症である、項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【００１４】
６．被験者に有効量のプラスミノーゲンを投与することを含む、被験者の肥満症を予防または治療するための方法であって、前記肥満症は、内分泌障害疾患、糖代謝疾患、肝臓疾患、腎臓疾患、心血管疾患、腸疾患、甲状腺疾患、胆嚢または胆道疾患、過量飲酒、薬物作用に継発するものである、被験者の肥満症を予防または治療するための方法。
【００１５】
７．被験者に有効量のプラスミノーゲンを投与することを含む、被験者の疾患と合併する肥満症を予防および／または治療するための方法であって、前記疾患と合併する肥満症は、内分泌疾患と合併する肥満症、代謝性疾患と合併する肥満症、心血管疾患と合併する肥満症、消化系疾患と合併する肥満症、退行性疾患と合併する肥満症を含む、被験者の疾患と合併する肥満症を予防および／または治療するための方法。
【００１６】
８．前記肥満症は、糖尿病と合併する肥満症、高血圧と合併する肥満症、アテローム性動脈硬化症と合併する肥満症、肝臓疾患と合併する肥満症、骨粗しょう症と合併する肥満症を含む、項７に記載の方法。
【００１７】
９．被験者に治療に有効量のプラスミノーゲンを投与することを含む、肥満症による合併症を予防または治療するための方法であって、前記肥満症の合併症は、心脳血管疾患、代謝性疾患、筋肉骨格疾患、消化系疾患、睡眠時無呼吸、呼吸障害を含む、肥満症による合併症を予防または治療するための方法。
【００１８】
１０．前記合併症は、高血圧、糖尿病、冠状動脈心臓病、狭心症、心筋梗塞、不整脈、アテローム性動脈硬化症、脳血栓、脳出血、骨関節炎、骨増殖症、胆嚢炎、脂肪肝、肝硬変である、項９に記載の方法。
【００１９】
１１．被験者に有効量のプラスミノーゲンを投与することを含む、被験者のアテローム性動脈硬化症の発症リスクを低めるため方法。
【００２０】
１２．前記プラスミノーゲンは肥満症を治療することによって被験者のアテローム性動脈硬化症の発症リスクを低める、項１１に記載の方法。
【００２１】
１３．組織器官またはその周囲、皮下または腹腔における脂肪の異常または過剰沈着を減少させるように被験者に有効量のプラスミノーゲンを投与することを含む、被験者の肥満症の発症リスクを低めるための方法。
【００２２】
１６．被験者の肥満症を予防または治療するための薬物の製造におけるプラスミノーゲンの用途。
【００２３】
１７．前記プラスミノーゲンは、
１）皮下、心臓、肝臓、肺臓、腎臓、血管、腸間膜、腹膜、体腔、器官周囲からなる群より選ばれる一つ以上の部位における脂質の異常沈着または過剰沈着を減少させることと、
２）肝臓脂肪の除去を促進することと、
３）血中脂質の除去を促進することで被験者の心臓病の発症リスクを低めることと
からなる群より選ばれる一つ以上によって被験者体内の脂肪の異常または過剰沈着を低減する、項１６に記載の用途。
【００２４】
１８．被験者に有効量のプラスミノーゲンを投与することを含む、被験者の血脂を低下させるため方法。
【００２５】
１９．前記プラスミノーゲンは、血清のトリグリセリドレベル、低密度リポタンパク質レベルを低下させる、項１８に記載の方法。
【００２６】
２０．被験者に有効量のプラスミノーゲンを投与して血管壁における脂質の異常または過剰沈着を軽減することを含む、被験者のアテローム性動脈硬化症または心臓病の発症リスクを低めるための方法。
【００２７】
２１．被験者に有効量のプラスミノーゲンを投与して肝臓による沈着脂肪の除去を促進することを含む、被験者の肥満症を治療するための方法。
【００２８】
２２．被験者に有効量のプラスミノーゲンを投与することを含む、被験者の肥満症を治療するための方法であって、前記プラスミノーゲンは、
１）皮下、心臓、肝臓、肺臓、腎臓、血管、腸間膜、腹膜、体腔、器官周囲からなる群より選ばれる一つ以上の部位における脂質の異常沈着または過剰沈着を減少させることと、
２）肝臓脂肪の除去を促進することと、
３）血中脂質の除去を促進することと
からなる群より選ばれる一つ以上によって被験者体内の脂肪を低減する、被験者の肥満症を治療するための方法。
【００２９】
２３．前記肥満症は、単純性肥満症またはその他の疾患に継発する肥満症である、項２２に記載の方法。
【００３０】
２４．前記肥満症は、内分泌障害疾患、糖代謝疾患、肝臓疾患、腎臓疾患、心血管疾患、腸疾患、甲状腺疾患、胆嚢または胆道疾患、過量飲酒、薬物作用に継発するものである、項２３に記載の方法。
【００３１】
２５．前記プラスミノーゲンは一種以上のその他の薬物または治療方法と併用することができる、項１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【００３２】
２６．前記一種以上のその他の薬物は、高血圧の治療薬、糖尿病の治療薬、アテローム性動脈硬化症の治療薬、慢性糸球体腎炎の治療薬、慢性腎盂腎炎の治療薬、腎臓病症候群の治療薬、腎機能不全の治療薬、尿毒症の治療薬、腎移植の治療薬、脂肪肝の治療薬、肝硬変の治療薬、肥満症の治療薬を含む、項２５に記載の方法。
【００３３】
２７．前記その他の薬物は、脂質低下薬、抗血小板薬、血圧降下薬、血管拡張薬、血糖降下薬、抗凝固薬、血栓溶解薬、肝臓保護薬、抗不整脈薬、強心薬、利尿薬、抗感染薬、抗ウイルス薬、免疫調節薬、炎症調節薬、抗腫瘍薬、ホルモン薬、チロキシンを含む、項２６に記載の方法。
【００３４】
２８．前記薬物は、スタチン系、フィブラート系、ニコチン酸、コレスチラミン、クロフィブラート、益壽寧や血脂平や心脈楽のような不飽和脂肪酸、硫酸多糖類のような脂質低下薬；アスピリン、ペルサンチン、クロピドグレル、シロスタのような抗血小板薬；ヒドララジン、ニトログリセリンと硝酸イソソルビド、ニトロプルシドナトリウム、プラゾシンのようなα１受容体遮断薬、フェントラミンのようなα受容体遮断薬、サルブタモールのようなβ２受容体刺激薬、カプトプリル、エナラプリル、ニフェジピンやジルチアゼム、サルブタモール酸、ミノキシジル、プロスタグランジン、カルジオナトリンのような血管拡張薬；ウロキナーゼとストレプトキナーゼ、組織型プラスミノーゲン活性化剤、単鎖ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化剤、ＴＮＫ−組織型プラスミノーゲン活性化剤のような血栓溶解薬；ヘパリン、エノキサパリン、ナドロパリン、ビバリルジンのような抗凝固薬を含む、項２７に記載の方法。
【００３５】
２９．前記プラスミノーゲンは配列２、６、８、１０または１２と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有し、且つ依然プラスミノーゲン活性を有するものである、項１〜２８のいずれか１項に記載の方法。
【００３６】
３０．前記プラスミノーゲンは配列２、６、８、１０または１２において、１−１００、１−９０、１−８０、１−７０、１−６０、１−５０、１−４５、１−４０、１−３５、１−３０、１−２５、１−２０、１−１５、１−１０、１−５、１−４、１−３、１−２、１個のアミノ酸を添加、削除および／または置換したものであり、且つ依然プラスミノーゲン活性を有するタンパク質である、項１〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【００３７】
３１．前記プラスミノーゲンはプラスミノーゲン活性フラグメントを含有し、且つ依然プラスミノーゲン活性を有するタンパク質である、項１〜３０のいずれか１項に記載の方法。
【００３８】
３２．前記プラスミノーゲンは、Ｇｌｕ−プラスミノーゲン、Ｌｙｓ−プラスミノーゲン、ミニプラスミノーゲン、マイクロプラスミノーゲン、δ−プラスミノーゲンまたはそれらのプラスミノーゲン活性を保持した変異体である、項１〜３１のいずれか１項に記載の方法。
【００３９】
３３．前記プラスミノーゲンは、天然または合成のヒトプラスミノーゲン、またはその依然プラスミノーゲン活性を保持した変異体若しくはフラグメントである、項１〜３２のいずれか１項に記載の方法。
【００４０】
３４．前記プラスミノーゲンは、霊長類動物またはげっ歯類動物に由来するヒトプラスミノーゲンのオルソログ、またはその依然プラスミノーゲン活性を保持した変異体若しくはフラグメントである、項１〜３３のいずれか１項に記載の方法。
【００４１】
３５．前記プラスミノーゲンのアミノ酸配列は配列２、６、８、１０または１２に示される通りである、項１〜３４のいずれか１項に記載の方法。
【００４２】
３６．前記プラスミノーゲンは、ヒト由来の天然プラスミノーゲンである、項１〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【００４３】
３７．前記被験者はヒトである、項１〜３６のいずれか１項に記載の方法。
【００４４】
３８．前記被験者はプラスミノーゲンが不足、または欠乏している、項１〜３７のいずれか１項に記載の方法。
【００４５】
３９．前記不足または欠乏は、先天的、継発的および／または局所的である、項３８に記載の方法。
【００４６】
４０．項１〜３９のいずれか１項に記載の方法に使用されるプラスミノーゲン。
【００４７】
４１．薬学的に許容される担体および項１〜３９のいずれか１項に記載の方法に使用されるプラスミノーゲンを含む薬物組成物。
【００４８】
４２．（ｉ）項１〜３９のいずれか１項に記載の方法に使用されるプラスミノーゲンと、（ｉｉ）前記プラスミノーゲンを前記被験者に送達するための手段（ｍｅａｎｓ）とを含む、予防性または治療性キット。
【００４９】
４３．前記手段はシリンジまたはバイアルである、項４２に記載のキット。
【００５０】
４４．項１〜３９のいずれか１項に記載の方法を実施するように前記プラスミノーゲン
を前記被験者に投与することを指示するラベルまたはプロトコルをさらに含む、項４２または４３に記載のキット。
【００５１】
４５．ラベルを含む容器と、
（ｉ）項１〜３９のいずれか１項に記載の方法に使用されるプラスミノーゲン、またはプラスミノーゲンを含む薬物組成物とを含む製品であって、
前記ラベルは、項１〜３９のいずれか１項に記載の方法を実施するように前記プラスミノーゲンまたは組成物を前記被験者に投与することを指示する、製品。
【００５２】
４６．その他の薬物を含む、もう一つ以上の部材または容器をさらに含む、項４２〜４４のいずれか１項に記載のキット、または項４５に記載の製品。
【００５３】
４７．前記その他の薬物は、脂質低下薬、抗血小板薬、血圧降下薬、血管拡張薬、血糖降下薬、抗凝固薬、血栓溶解薬、肝臓保護薬、抗不整脈薬、強心薬、利尿薬、抗感染薬、抗ウイルス薬、免疫調節薬、炎症調節薬、抗腫瘍薬、ホルモン薬、チロキシンからなる群より選ばれる、項４６に記載のキットまたは製品。
【００５４】
４８．プラスミノーゲンを含む抗肥満薬。
【００５５】
４９．プラスミノーゲンを含む抗肥満製品。
【００５６】
５０．体重を減らすためのプラスミノーゲンの用途。
【００５７】
本発明はさらに、上記方法に用いられる薬物、薬物組成物、製品、キットの製造におけるプラスミノーゲンの用途に係る。
【００５８】
一つの局面において、本発明は、被験者に予防および／または治療に有効量のプラスミノーゲンを投与することを含む、被験者の肥満症およびその関連疾患を予防および／または治療するための方法に係る。本発明はさらに、被験者の肥満症およびその関連疾患の予防および／または治療におけるプラスミノーゲンの用途に係る。本発明はさらに、被験者の肥満症およびその関連疾患を予防および／または治療するための薬物、薬物組成物、製品、キットの製造におけるプラスミノーゲンの用途に係る。さらに、本発明は、被験者の肥満症およびその関連疾患の予防および／または治療に使用されるプラスミノーゲンに係る。本発明はさらに、被験者の肥満症およびその関連疾患を予防および／または治療するための、プラスミノーゲンを含む薬物、薬物組成物、製品、キットに係る。
【００５９】
一部の実施形態において、前記肥満症は、過剰な飲食による肥満症である。一部の実施形態において、前記肥満症は継発性肥満症であり、例えば、内分泌障害疾患、糖代謝疾患、肝臓疾患、腎臓疾患、心血管疾患、腸疾患、甲状腺疾患、胆嚢または胆道疾患、飲酒、薬物治療によって引き起こされるまたはそれに伴われる脂肪代謝障害のような脂肪代謝障害疾患に継発するものである。一部の実施形態において、前記脂肪代謝障害は、高血圧、糖尿病、慢性肝炎、肝硬変、腎損傷、慢性糸球体腎炎、慢性腎盂腎炎、腎病症候群、腎機能不全、腎移植、尿毒症、甲状腺機能低下、閉塞性胆嚢炎、閉塞性胆管炎、薬物またはホルモン治療によって引き起こされるまたはそれに伴われる脂肪代謝障害である。一部の実施形態において、前記脂肪代謝障害は、高脂血症、高リポタンパク質血症、脂肪肝、アテローム性動脈硬化症、肥満症、臓器脂肪沈着である。
【００６０】
もう一つの局面において、本発明は、被験者に有効量のプラスミノーゲンを投与することを含む、被験者の身体の組織器官における異常または過剰な脂肪沈着を予防および／または低減するための方法に係る。本発明はさらに、被験者の身体の組織器官における異常
または過剰な脂肪沈着の予防および／または低減におけるプラスミノーゲンの用途に係る。本発明はさらに、被験者の身体の組織器官における異常または過剰な脂肪沈着を予防および／または低減するための薬物、薬物組成物、製品、キットの製造におけるプラスミノーゲンの用途に係る。さらに、本発明は、被験者の身体の組織器官における異常または過剰な脂肪沈着の予防および／または低減に使用されるプラスミノーゲンに係る。本発明はさらに、被験者の身体の組織器官における異常または過剰な脂肪沈着を予防および／または低減するための、プラスミノーゲンを含む薬物、薬物組成物、製品、キットに係る。
【００６１】
もう一つの局面において、本発明は、被験者に有効量のプラスミノーゲンを投与することを含む、被験者の身体の組織器官における異常または過剰な脂肪沈着による疾患を予防および／または治療するための方法に係る。本発明はさらに、被験者の身体の組織器官における異常または過剰な脂肪沈着による疾患の予防および／または治療におけるプラスミノーゲンの用途に係る。本発明はさらに、被験者の身体の組織器官における異常または過剰な脂肪沈着による疾患を予防および／または治療するための薬物、薬物組成物、製品、キットの製造におけるプラスミノーゲンの用途に係る。さらに、本発明は、被験者の身体の組織器官における異常または過剰な脂肪沈着による疾患を予防および／または治療するための、プラスミノーゲンを含む薬物、薬物組成物、製品、キットに係る。
【００６２】
一部の実施形態において、前記身体の組織器官における異常または過剰な脂肪沈着とは、血液、皮下組織、血管壁、臓器における異常または過剰な脂肪沈着のことである。一部の実施形態において、前記身体の組織器官における異常または過剰な脂肪沈着による疾患は、肥満症、高脂血症、高リポタンパク質血症、脂肪肝、アテローム性動脈硬化症、脂質性心臓損傷、脂質性腎損傷、脂質性膵島損傷を含む。
【００６３】
もう一つの局面において、本発明は、被験者に有効量のプラスミノーゲンを投与することを含む、被験者の脂肪代謝障害による肥満症を予防および／または治療する方法に係る。本発明はさらに、被験者の脂肪代謝障害による肥満症の予防および／または治療におけるプラスミノーゲンの用途に係る。本発明はさらに、被験者の脂肪代謝障害による肥満症を予防および／または治療するための薬物、薬物組成物、製品、キットの製造におけるプラスミノーゲンの用途に係る。さらに、本発明は、被験者の脂肪代謝障害による肥満症の予防および／または治療に使用されるプラスミノーゲンに係る。本発明はさらに、被験者の脂肪代謝障害による肥満症を予防および／または治療するための、プラスミノーゲンを含む薬物、薬物組成物、製品、キットに係る。一部の実施形態において、前記疾患は、肥満症、高脂血症、高リポタンパク質血症、脂肪肝、アテローム性動脈硬化症、脂質性心臓損傷、脂質性腎損傷を含む。
【００６４】
もう一つの局面において、本発明は、被験者に有効量のプラスミノーゲンを投与することを含む、異常または過剰な脂肪沈着を低減することによって被験者の疾患を治療するための方法に係る。本発明はさらに、異常または過剰な脂肪沈着を低減することによって被験者の疾患の治療におけるプラスミノーゲンの用途に係る。本発明はさらに、異常または過剰な脂肪沈着を低減することによって被験者の疾患を治療するための薬物、薬物組成物、製品、キットの製造におけるプラスミノーゲンの用途に係る。さらに、本発明は、異常または過剰な脂肪沈着を低減することによって被験者の疾患の治療に使用されるプラスミノーゲンに係る。本発明はさらに、異常または過剰な脂肪沈着を低減することによって被験者の疾患を治療するための、プラスミノーゲンを含む薬物、薬物組成物、製品、キットに係る。
【００６５】
一部の実施形態において、前記疾患は、アテローム性動脈硬化症、冠状動脈性心臓病、狭心症、心筋梗塞、不整脈、脂肪肝、肝硬変、脳虚血、脳梗塞、腎機能不全、腎臓病症候群、腎機能不全、肥満症を含む。
【００６６】
もう一つの局面において、本発明は、被験者に有効量のプラスミノーゲンを投与することを含む、被験者の組織器官の脂質性損傷を予防および／または治療するための方法に係る。本発明はさらに、被験者の組織器官の脂質性損傷の予防および／または治療におけるプラスミノーゲンの用途に係る。本発明はさらに、被験者の組織器官の脂質性損傷を予防および／または治療するための薬物、薬物組成物、製品、キットの製造におけるプラスミノーゲンの用途に係る。さらに、本発明は、被験者の組織器官の脂質性損傷の予防および／または治療に使用されるプラスミノーゲンに係る。本発明はさらに、被験者の組織器官の脂質性損傷を予防および／または治療するための、プラスミノーゲンを含む薬物、薬物組成物、製品、キットに係る。
【００６７】
一部の実施形態において、前記組織器官は、動脈管壁、心臓、肝臓、腎臓、膵臓を含む。
【００６８】
もう一つの局面において、本発明は、被験者に有効量のプラスミノーゲンを投与することを含む、被験者の高脂血症を改善するための方法に係る。本発明はさらに、被験者の高脂血症の改善におけるプラスミノーゲンの用途に係る。本発明はさらに、被験者の高脂血症を改善するための薬物、薬物組成物、製品、キットの製造におけるプラスミノーゲンの用途に係る。さらに、本発明は、被験者の高脂血症の改善に使用されるプラスミノーゲンに係る。本発明はさらに、被験者の高脂血症を改善するための、プラスミノーゲンを含む薬物、薬物組成物、製品、キットに係る。
【００６９】
一部の実施形態において、前記高脂血症は、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、混合型高脂血症、および低高密度リポタンパク質血症からなる群より選ばれる一つ以上である。
【００７０】
もう一つの局面において、本発明は、被験者に有効量のプラスミノーゲンを投与することを含む、被験者のアテローム性動脈硬化症のリスクを低下させるための方法に係る。本発明はさらに、被験者のアテローム性動脈硬化症のリスクの低下におけるプラスミノーゲンの用途に係る。本発明はさらに、被験者のアテローム性動脈硬化症のリスクを低下させるための薬物、薬物組成物、製品、キットの製造におけるプラスミノーゲンの用途に係る。さらに、本発明は、被験者のアテローム性動脈硬化症のリスクの低下に使用されるプラスミノーゲンに係る。本発明はさらに、被験者のアテローム性動脈硬化症のリスクを低下させるための、プラスミノーゲンを含む薬物、薬物組成物、製品、キットに係る。
【００７１】
一部の実施形態において、前記被験者は、高血圧、肥満症、糖尿病、慢性肝炎、肝硬変、腎損傷、慢性糸球体腎炎、慢性腎盂腎炎、腎病症候群、腎機能不全、腎移植、尿毒症、甲状腺機能低下、閉塞性胆嚢炎、または閉塞性胆管炎に罹患している、または前記被験者は、脂肪代謝に影響する薬物またはホルモンを服用している。一部の実施形態において、前記プラスミノーゲンは、血の総コレステロールレベルを低下させることと、トリグリセリドレベルを低下させることと、低密度リポタンパク質レベルを低下させることと、高密度リポタンパク質レベルを上昇させることとからなる群より選ばれる一つ以上によって被験者のアテローム性動脈硬化症のリスクを低下させる。
【００７２】
もう一つの局面において、本発明は、被験者に有効量のプラスミノーゲンを投与することを含む、被験者の高脂血症を改善することによって疾患を治療するための方法に係る。本発明はさらに、被験者の高脂血症を改善することによって疾患を治療することにおけるプラスミノーゲンの用途に係る。本発明はさらに、被験者の高脂血症を改善することによって疾患を治療するための薬物、薬物組成物、製品、キットの製造におけるプラスミノーゲンの用途に係る。さらに、本発明は、被験者の高脂血症を改善することによって疾患を
治療することに使用されるプラスミノーゲンに係る。本発明はさらに、被験者の高脂血症を改善することによって疾患を治療するための、プラスミノーゲンを含む薬物、薬物組成物、製品、キットに係る。
【００７３】
一部の実施形態において、前記疾患は、糖尿病、高血圧、アテローム性動脈硬化症、冠状動脈性心臓病、狭心症、心筋梗塞、不整脈、慢性肝炎、脂肪肝、肝硬変、脳循環不全、脳虚血、脳梗塞、慢性腎炎、慢性腎盂腎炎、腎機能不全、腎臓病症候群、尿毒症、肥満症を含む。
【００７４】
もう一つの局面において、本発明は、被験者に有効量のプラスミノーゲンを投与することを含む、被験者の高血脂の関連疾患を予防および／または治療するための方法に係る。本発明はさらに、被験者の高血脂の関連疾患の予防および／または治療におけるプラスミノーゲンの用途に係る。本発明はさらに、被験者の高血脂の関連疾患を予防および／または治療するための薬物、薬物組成物、製品、キットの製造におけるプラスミノーゲンの用途に係る。さらに、本発明は、被験者の高血脂の関連疾患の予防および／または治療に使用されるプラスミノーゲンに係る。本発明はさらに、被験者の高血脂の関連疾患を予防および／または治療するための、プラスミノーゲンを含む薬物、薬物組成物、製品、キットに係る。一部の実施形態において、前記疾患は、糖尿病、高血圧、アテローム性動脈硬化症、冠状動脈性心臓病、狭心症、心筋梗塞、不整脈、慢性肝炎、脂肪肝、肝硬変、脳循環不全、脳虚血、脳梗塞、慢性腎炎、慢性腎盂腎炎、腎機能不全、腎臓病症候群、尿毒症、肥満症を含む。
【００７５】
本発明の上記いずれか一つの実施形態において、前記プラスミノーゲンは、一種以上のその他の薬物または治療方法と併用することができる。一部の実施形態において、前記一種以上のその他の薬物は、高血圧の治療薬、糖尿病の治療薬、アテローム性動脈硬化症の治療薬、慢性糸球体腎炎の治療薬、慢性腎盂腎炎の治療薬、腎臓病症候群の治療薬、腎機能不全の治療薬、尿毒症の治療薬、腎移植の治療薬、脂肪肝の治療薬、肝硬変の治療薬、肥満症の治療薬を含む。一部の実施形態において、前記その他の薬物は、脂質低下薬、抗血小板薬、血圧降下薬、血管拡張薬、血糖降下薬、抗凝固薬、血栓溶解薬、肝臓保護薬、抗不整脈薬、強心薬、利尿薬、抗感染薬、抗ウイルス薬、免疫調節薬、炎症調節薬、抗腫瘍薬、ホルモン薬、チロキシンを含む。一部更なる実施形態において、前記薬物は、スタチン系、フィブラート系、ニコチン酸、コレスチラミン、クロフィブラート、益壽寧や血脂平や心脈楽のような不飽和脂肪酸、硫酸多糖類のような脂質低下薬；アスピリン、ペルサンチン、クロピドグレル、シロスタのような抗血小板薬；ヒドララジン、ニトログリセリン、硝酸イソソルビド、ニトロプルシドナトリウム、プラゾシンのようなα1受容体遮断薬、フェントラミンのようなα受容体遮断薬、サルブタモールのようなβ2受容体刺激薬、カプトプリル、エナラプリル、ニフェジピン、ジルチアゼム、サルブタモール酸、ミノキシジル、プロスタグランジン、カルジオナトリンのような血管拡張薬；ウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ、組織型プラスミノーゲン活性化剤、単鎖ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化剤、ＴＮＫ−組織型プラスミノーゲン活性化剤のような血栓溶解薬；ヘパリン、エノキサパリン、ナドロパリン、ビバリルジンのような抗凝固薬を含む。
【００７６】
本発明の上記いずれか一つの実施形態において、前記プラスミノーゲンは配列２、６、８、１０または１２と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有し、且つ依然プラスミノーゲン活性を有するものである。一部の実施形態において、前記プラスミノーゲンは配列２、６、８、１０または１２において、１−１００、１−９０、１−８０、１−７０、１−６０、１−５０、１−４５、１−４０、１−３５、１−３０、１−２５、１−２０、１−１５、１−１０、１−５、１−４、１−３、１−２、１個のアミノ酸を添加、削除および／または置換したものであり、且つ依然プラスミノーゲン活性を有するタンパク質である。
【００７７】
一部の実施形態において、前記プラスミノーゲンはプラスミノーゲン活性フラグメントを含有し、且つ依然プラスミノーゲン活性を有するタンパク質である。一部の実施形態において、前記プラスミノーゲンは、Ｇｌｕ−プラスミノーゲン、Ｌｙｓ−プラスミノーゲン、ミニプラスミノーゲン、マイクロプラスミノーゲン、δ−プラスミノーゲンまたはそれらのプラスミノーゲン活性を保持した変異体である。一部の実施形態において、前記プラスミノーゲンは、天然または合成のヒトプラスミノーゲン、またはその依然プラスミノーゲン活性を保持した変異体若しくはフラグメントである。一部の実施形態において、前記プラスミノーゲンは、霊長類動物またはげっ歯類動物に由来するヒトプラスミノーゲンのオルソログ、またはその依然プラスミノーゲン活性を保持した変異体若しくはフラグメントである。一部の実施形態において、前記プラスミノーゲンのアミノ酸配列は２、６、８、１０または１２に示される通りである。一部の実施形態において、前記プラスミノーゲンはヒト由来の天然プラスミノーゲンである。
【００７８】
一部の実施形態において、前記被験者はヒトである。一部の実施形態において、前記被験者はプラスミノーゲンが不足、または欠乏している。一部の実施形態において、前記不足または欠乏は、先天的、継発的および／または局所的である。
【００７９】
一部の実施形態において、前記薬物組成物は、薬学的に許容される担体および前記方法に使用されるプラスミノーゲンを含む。一部の実施形態において、前記キットは、（ｉ）前記方法に使用されるプラスミノーゲンと、（ｉｉ）前記プラスミノーゲンを前記被験者に送達するための手段（ｍｅａｎｓ）とを含む、予防性または治療性キットであってもよい。一部の実施形態において、前記手段はシリンジまたはバイアルである。一部の実施形態において、前記キットは、前記いずれかの方法を実施するように前記プラスミノーゲンを前記被験者に投与することを指示するラベルまたはプロトコルをさらに含む。
【００８０】
一部の実施形態において、前記製品は、ラベルを含む容器と；（ｉ）前記方法に使用されるプラスミノーゲン、またはプラスミノーゲンを含む薬物組成物とを含む製品であり、前記ラベルは、前記いずれかの方法を実施するように前記プラスミノーゲンまたは組成物を前記被験者に投与することを指示する。
【００８１】
一部の実施形態において、前記キットまたは製品は、その他の薬物を含む、もう一つ以上の部材または容器をさらに含む。一部の実施形態において、前記その他の薬物は、脂質低下薬、抗血小板薬、血圧降下薬、血管拡張薬、血糖降下薬、抗凝固薬、血栓溶解薬、肝臓保護薬、抗不整脈薬、強心薬、利尿薬、抗感染薬、抗ウイルス薬、免疫調節薬、炎症調節薬、抗腫瘍薬、ホルモン薬、チロキシンからなる群より選ばれる。
【００８２】
前記方法の一部の実施形態において、前記プラスミノーゲンは全身または局所投与により投与され、好ましくは、静脈内、筋肉内、皮下という経路により投与される。前記方法の一部の実施形態において、前記プラスミノーゲンは適切なポリペプチド担体または安定剤と組み合わせて投与する。前記方法の一部の実施形態において、前記プラスミノーゲンは毎日０．０００１〜２０００ｍｇ／ｋｇ、０．００１〜８００ｍｇ／ｋｇ、０．０１〜６００ｍｇ／ｋｇ、０．１〜４００ｍｇ／ｋｇ、１〜２００ｍｇ／ｋｇ、１〜１００ｍｇ／ｋｇ、１０〜１００ｍｇ／ｋｇ（体重一キロあたりで計算）または０．０００１〜２０００ｍｇ／ｃｍ２、０．００１〜８００ｍｇ／ｃｍ２、０．０１〜６００ｍｇ／ｃｍ２、０．１〜４００ｍｇ／ｃｍ２、１〜２００ｍｇ／ｃｍ２、１〜１００ｍｇ／ｃｍ２、１０〜１００ｍｇ／ｃｍ２（体表面積平方センチメートルあたりで計算）の用量を投与し、好ましくは少なくとも一回繰り返し、好ましくは少なくとも毎日投与する。
【００８３】
本発明は、本発明に係る実施形態どうしの技術的特徴のすべての組み合わせを明確にカ
バーし、且つこれらの組み合わせた技術構成は前記実施形態が単独且つ明確に開示されているように、本出願で明確に開示されている。また、本発明はさらに各実施形態および要素のすべてのサブの組み合わせを明確にカバーし、この組み合わせた技術構成は本明細書中において明確に開示されている。
［発明の詳細な説明］
【００８４】
定義
本発明でいう「脂肪代謝障害」は「脂肪代謝異常」、「脂肪代謝乱れ」ともいわれ、脂肪代謝が異常を起こし、乱れ、あるいは障害されて引き起こされる臨床または病理的表現の総称である。本文において、「脂肪代謝障害」、「脂肪代謝異常」、「脂肪代謝乱れ」は互いに置き換えて使用することができる。本発明において、「脂肪代謝」、「脂代謝」、「脂質代謝」は互いに置き換えて使用することができる。
【００８５】
「脂肪代謝障害の関連疾患」は、脂肪代謝障害に相関する疾患の総称である。前記相関は、病因の相関、発症メカニズムの相関、病理的表現の相関、臨床症状の相関、および／または治療原則の相関であってもよい。
【００８６】
「血脂」は、トリグリセリド、コレステロール、およびリン脂質などの総称であり、リポタンパク質は、アポリポタンパク質と血脂とからなる球状高分子複合体であり、リポタンパク質が含むコレステロール、トリグリセリドの成分の違いおよび密度によって、カイロミクロン（ＣＭ）、超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）、中密度リポタンパク質（ＩＤＬ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）の５種類に分けられている。血脂危険レベルによって、臨床で最もよく見られる異常なリポタンパク質血症の類型として、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、混合型高脂血症、低高密度リポタンパク質血症が挙げられる。継発性血脂は、糖尿病、甲状腺機能低下、腎臓病症候群、腎移植、重篤肝臓病、閉塞性胆道疾患、肥満症、飲酒、エストロゲン治療などのような薬物治療によく見られており、継発性血脂を排除できれば、原発性血脂異常であることは考えられる。
【００８７】
「高血脂」は、血漿におけるコレステロール、トリグリセリド、リン脂質、および脂質化していない脂肪酸など、血脂成分が増加する病理的状況を指す。
【００８８】
「高血脂の関連疾患」とは、病因、発症メカニズム、病理的表現、臨床症状、および／または治療原則が高血脂と相関する疾患のことである。好ましくは、前記疾患は、糖尿病、高血圧、アテローム性動脈硬化症、冠状動脈性心臓病、狭心症、心筋梗塞、不整脈、慢性肝炎、脂肪肝、肝硬変、脳循環不全、脳虚血、脳梗塞、慢性腎炎、慢性腎盂腎炎、腎機能不全、腎臓病症候群、尿毒症、肥満症を含むが、これらに限られていない。
【００８９】
脂肪代謝または運転異常による血漿における一種以上の脂質異常は、「高脂血症」、「高血脂症」、または「血脂異常」（ｄｙｓｌｉｐｉｄｅｍｉａ）と称される。
【００９０】
脂質は水に溶けない、または微量に溶けるので、タンパク質と結合してリポタンパク質の形でしか血液循環において運送できないため、高脂血症はよく「高リポタンパク質血症」を反映している。
【００９１】
本発明の「高血脂の関連疾患」は、「高脂血症の関連疾患」、「高リポタンパク質血症の関連疾患」とも言われる。
【００９２】
「肥満症」は「肥満」ともいい、体内において脂肪の堆積が過剰および／または分布が異常であることをいう。肥満または肥満症によく使用される判断指標は、体格指数（ＢＭ
Ｉ）と腹囲（ＷＣ）がある。現在、世界保健機関の分類基準では、ＢＭＩ≧２５ｋｇ・ｍ２を体重超過とし、ＢＭＩ≧３０ｋｇ・ｍ２を肥満としている。しかし、この指標は、国家、地域、人種によってその上下限にはやや差がある。例えば、２００３年に『中国成人体重超過および肥満症予防制御指南（試用）』ではＢＭＩ≧２４ｋｇ・ｍ２を中国成人の体重超過の限界とし、ＢＭＩ≧２８ｋｇ・ｍ２を肥満の限界としている。以上の「肥満」と「体重超過」についての分類から見ると、体重超過と肥満は違う程度を表している。本発明の請求項および明細書でいう肥満または肥満症は、「体重超過」という意味もカバーする。本発明でいう「肥満」、「肥満症」、および［体重超過］は、様々な原因であってもよく、例えば、単なる食事することによる体重の増加過ぎでもよい。
【００９３】
本発明の実験によって、プラスミノーゲンが、体内器官、器官周囲、腹腔などの部位における脂肪の異常または過剰な沈着を改善することができることは証明されているので、プラスミノーゲンを抗肥満薬に使用して肥満または体重超過の状況を治療し、脂肪を低減して体重を軽減することができる。
【００９４】
本発明は、抗肥満薬に使用されるプラスミノーゲン、またはプラスミノーゲンを含む薬物組成物、キットまたは製品に係る。本発明のプラスミノーゲンは薬物に使用できる他、食品添加剤として食品または飲料に使用することができる。本発明のプラスミノーゲンは、ダイエットのために美容ダイエット製品に使用することもできる。そのため、本発明のプラスミノーゲンは様々な便利な形でダイエットや体重を減らすニーズのある被験者に投与することができる。
【００９５】
プラスミンはプラスミノーゲン活性化系（ＰＡ系）の重要な成分である。それは広スペクトルのプロテアーゼであり、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の幾つかの成分を加水分解することができ、これらの成分はフィブリン、ゼラチン、フィブロネクチン、ラミニンおよびプロテオグリカンを含む［９］。また、プラスミンは一部のプロマトリックスメタロプロテアーゼ（ｐｒｏ−ＭＭＰ）を活性化させて活性のあるマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）にすることができる。そのためプラスミンは細胞外タンパク加水分解作用の一つの重要な上流調節因子である［１０、１１］。プラスミンはプラスミノーゲンが二種類の生理性のＰＡ：組織型プラスミノーゲン活性化剤（ｔＰＡ）またはウロキナーゼプラスミノーゲン活性化剤（ｕＰＡ）をタンパク質加水分解することで形成されるものである。プラスミノーゲンは血漿および他の体液中において、相対的レベルが比較的高く、従来的にはＰＡ系の調節は主にＰＡの合成および活性レベルよって実現されると考えられている。ＰＡ系成分の合成は異なる要素によって厳密な制御を受け、例えばホルモン、成長因子およびサイトカインである。また、この他に、プラスミンとＰＡｓの特定の生理的阻害剤が存在する。プラスミンの主な阻害剤はα２−抗プラスミン（α２−ａｎｔｉｐｌａｓｍｉｎ）である。ＰＡｓの活性は、ｕＰＡとｔＰＡとのプラスミノーゲン活性剤阻害剤−１（ＰＡＩ−１）に同時に阻害され、ｕＰＡを主に阻害するプラスミノーゲン活性剤阻害剤−２（ＰＡＩ−２）によって調節される。一部の細胞表面には直接加水分解する活性のあるｕＰＡ特異性細胞表面受容体（ｕＰＡＲ）がある［１２、１３］。
【００９６】
プラスミノーゲンは単一鎖の糖タンパクであり、７９１個のアミノ酸からなり、分子量は約９２ｋＤａである［１４、１５］。プラスミノーゲンは主に肝臓で合成され、大量に細胞外液に存在している。血漿中に含まれるプラスミノーゲンの含有量は約２μＭである。そのためプラスミノーゲンは組織および体液中のタンパク質加水分解活性の大きな潜在的な由来である［１６、１７］。プラスミノーゲンには二種類の分子の形が存在する：グルタミン酸−プラスミノーゲン（Ｇｌｕ−ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ）およびリジン−プラスミノーゲン（Ｌｙｓ−ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ）である。天然的に分泌されかつ分解していない形のプラスミノーゲンは一つのアミノ基末端（Ｎ−末端）グルタミン酸を有し、そのためグルタミン酸−プラスミノーゲンと称される。しかし、プラスミンが存在する場
合、グルタミン酸−プラスミノーゲンはＬｙｓ７６−Ｌｙｓ７７においてリジン−プラスミノーゲンに加水分解される。グルタミン酸−プラスミノーゲンと比較して、リジン−プラスミノーゲンはフィブリンとより高い親和力を有し、さらにより高い速度でＰＡによって活性化されることができる。この二種類の形のプラスミノーゲンのＡｒｇ５６０−Ｖａｌ５６１ペプチド結合はｕＰＡ  またはｔＰＡによって切断され、これによりジスルフィド結合によって接続された二重鎖プロテアーゼプラスミンの形成をもたらす［１８］。プラスミノーゲンのアミノ基末端部分は五つの相同性三環を含み、即ちいわゆるｋｒｉｎｇｌｅｓであり、カルボキシル基末端部分はプロテアーゼドメインを含む。一部のＫｒｉｎｇｌｅｓはプラスミノーゲンとフィブリンおよびその阻害剤α２−ＡＰの特異的相互作用を介在するリジン結合部位を含む。最も新しく発見されたのは３８ｋＤａのフィブリンプラスミノーゲンフラグメントであり、ｋｒｉｎｇｌｅｌ−４を含み、血管生成の有効的な阻害剤である。このフラグメントはアンジオスタチン（Angiostatin）と命名され、幾つかのプロテアーゼ加水分解プラスミノーゲンから生成される。
【００９７】
プラスミンの主な基質はフィブリンであり、フィブリンの溶解は病理学的血栓の形成を予防するキーポイントである［１９］。プラスミンはさらにＥＣＭの幾つかの成分に対する基質特異性を有し、これらはラミニン、フィブロネクチン、プロテオグリカンおよびゼラチンを含み、これはプラスミンがＥＣＭ再建において重要な作用を有することを示している［１５、２０、２１］。間接的に、プラスミンはさらにいくつかのプロテアーゼ前駆体を活性プロテアーゼに変換することによりＥＣＭのその他の成分を分解し、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３およびＭＭＰ−９を含む。そのため、以下のように提唱する人がいる。プラスミンは細胞外タンパク加水分解の重要な上流調節因子である可能性がある［２２］。また、プラスミンはいくつかの潜在的な形の成長因子を活性化させる能力を有する［２３−２５］。体外において、プラスミンはさらに補体系の成分を加水分解させて走化性の補体フラグメントを放出することができる。
【００９８】
「プラスミン」は血液中に存在する非常に重要な酵素であり、フィブリン凝塊をフィブリン分解生成物およびＤ−二量体に加水分解する。
「プラスミノーゲン」はプラスミンの酵素前駆体の形であり、ｓｗｉｓｓ  ｐｒｏｔ中の配列に基づいて、シグナルペプチドのヒト由来の天然プラスミノーゲンのアミノ酸配列（配列４）は計算によれば８１０個のアミノ酸からなり、分子量は約９０ｋＤであり、主に肝臓において合成され且つ血液中で循環できる糖タンパク質であり、該アミノ酸配列をコードするｃＤＮＡ配列は配列３に示される通りである。フルサイズのプラスミノーゲンは七つのドメインを含む：Ｃ末端に位置するセリンプロテアーゼドメイン、Ｎ末端に位置するＰａｎ  Ａｐｐｌｅ（ＰＡｐ）ドメインおよび５つのＫｒｉｎｇｌｅドメイン（Ｋｒｉｎｇｌｅ１−５）を含む。ｓｗｉｓｓ  ｐｒｏｔ中の配列を参照すれば、そのシグナルペプチドは残基Ｍｅｔ１−Ｇｌｙ１９を含み、ＰＡｐは残基Ｇｌｕ２０−Ｖａｌ９８を含み、Ｋｒｉｎｇｌｅ１は残基Ｃｙｓ１０３−Ｃｙｓ１８１を含み、Ｋｒｉｎｇｌｅ２は残基Ｇｌｕ１８４−Ｃｙｓ２６２を含み、Ｋｒｉｎｇｌｅ３は残基Ｃｙｓ２７５−Ｃｙｓ３５２を含み、Ｋｒｉｎｇｌｅ４は残基Ｃｙｓ３７７−Ｃｙｓ４５４を含み、Ｋｒｉｎｇｌｅ５は残基Ｃｙｓ４８１−Ｃｙｓ５６０を含む。ＮＣＢＩデータによれば、セリンプロテアーゼドメインは残基Ｖａｌ５８１−Ａｒｇ８０４を含む。
【００９９】
Ｇｌｕ−プラスミノーゲンは天然のフルサイズのプラスミノーゲンであり、７９１個のアミノ酸からなる（１９個のアミノ酸からなるシグナルペプチドを含まない）。該配列をコードするｃＤＮＡ配列は配列１に示される通りであり、そのアミノ酸配列は配列２に示される通りである。体内において、さらにＧｌｕ−プラスミノーゲンの第７６−７７位のアミノ酸の位置で加水分解することにより形成されたＬｙｓ−プラスミノーゲンが存在し、例えば配列６に示されるものであり、該アミノ酸配列をコードするｃＤＮＡ配列は配列５が示す通りである。δ−プラスミノーゲン（δ−ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ）はフルサイ
ズのプラスミノーゲンにＫｒｉｎｇｌｅ２−Ｋｒｉｎｇｌｅ５構造の欠損が生じているフラグメントであり、Ｋｒｉｎｇｌｅ１およびセリンプロテアーゼドメインしか含有せず［２６、２７］、δ−プラスミノーゲンのアミノ酸配列（配列８）を報告している文献があり［２７］、該アミノ酸配列をコードするｃＤＮＡ配列は例えば配列７である。ミニプラスミノーゲン（Ｍｉｎｉ−ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ）はＫｒｉｎｇｌｅ５およびセリンプロテアーゼドメインからなり、残基Ｖａｌ４４３−Ａｓｎ７９１（シグナルペプチドＧｌｕ−プラスミノーゲン配列を含まないＧｌｕ残基を開始アミノ酸とする）について文献が報告しており［２８］、そのアミノ酸配列は配列１０に示される通りであり、該アミノ酸配列をコードするｃＤＮＡ配列は配列９が示す通りである。しかしマイクロプラスミノーゲン（Ｍｉｃｒｏ−ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ）はセリンプロテアーゼドメインのみ含有し、そのアミノ酸配列は残基Ａｌａ５４３−Ａｓｎ７９１（シグナルペプチドを含まないＧｌｕ−プラスミノーゲン配列のＧｌｕ残基は開始アミノ酸である）と文献が報告し［２９］、特許文献ＣＮ１０２１５４２５３Ａはそれが残基Ｌｙｓ５３１−Ａｓｎ７９１を含むと開示し（シグナルペプチドを含まないＧｌｕ−プラスミノーゲン配列のＧｌｕ残基を開始アミノ酸とする）、本特許の配列は特許文献ＣＮ１０２１５４２５３Ａを参照でき、そのアミノ酸配列は配列１２に示される通りであり、該アミノ酸配列をコードするｃＤＮＡ配列は配列１１に示される通りである。
【０１００】
本発明の「プラスミン」と「フィブリンプラスミン」、「繊維タンパクプラスミン」とは互いに置き換えて使用でき、その意味は同じである。「プラスミノーゲン」と「フィブリンプラスミノーゲン」、「繊維タンパクプラスミノーゲン」とは互いに置き換えて使用でき、その意味は同じである。
【０１０１】
本願において、プラスミノーゲンの「欠乏」とは、被験者体内のプラスミノーゲンの含有量または活性が正常な人より低く、被験者の正常な生理学的機能に影響を及ぼすのに十分に低いことをいう。プラスミノーゲンの「欠乏」の意味は、被験者体内のプラスミノーゲンの含有量または活性が正常な人より明らかに低く、活性または発現が極微量であり、外部供給によってのみ正常な生理学的機能を維持できることである。
【０１０２】
当業者は以下のように理解できる。本発明のプラスミノーゲンのすべての技術構成はプラスミンに適用でき、そのため、本発明に記載の技術構成はプラスミノーゲンおよびプラスミンをカバーするものである。
【０１０３】
循環プロセスにおいて、プラスミノーゲンは閉鎖した非活性コンフォメーションであるが、血栓または細胞表面に結合した際、プラスミノーゲン活性化剤（ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ  ａｃｔｉｖａｔｏｒ，ＰＡ）の介在下において、開放性のコンフォメーションを有する活性プラスミンとなる。活性を有するプラスミンはさらにフィブリン凝塊をフィブリン分解生成物およびＤ−二量体に加水分解させ、これにより血栓を溶解させる。そのうちプラスミノーゲンのＰＡｐドメインはプラスミノーゲンを非活性閉鎖コンフォメーションにする重要なエピトープであり、しかしＫＲドメインは受容体および基質上のリジン残基と結合できるものである。プラスミノーゲン活性化剤としての酵素は、既に複数種類知られ、以下を含む：組織プラスミノーゲン活性化剤（ｔＰＡ）、ウロキナーゼプラスミノーゲン活性化剤（ｕＰＡ）、カリクレインおよび血液凝固因子ＸＩＩ（ハーゲマン因子）などである。
【０１０４】
「プラスミノーゲン活性フラグメント」とはプラスミノーゲンタンパク質において、基質中のターゲット配列と結合してタンパク質加水分解機能を発揮できる活性フラグメントである。本発明はプラスミノーゲンの技術構成に係り、プラスミノーゲン活性フラグメントでプラスミノーゲンの代替とする技術構成を含む。本発明に記載のプラスミノーゲン活性フラグメントはプラスミノーゲンのセリンプロテアーゼドメインを含むタンパク質であ
り、好ましくは、本発明に記載のプラスミノーゲン活性フラグメントは配列１４、配列１４と少なくとも８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性のアミノ酸配列を含有するタンパク質を含むものである。そのため、本発明に記載のプラスミノーゲンは該プラスミノーゲン活性フラグメントを含み、且つ依然として該プラスミノーゲン活性を有するタンパク質を含む。
【０１０５】
現在、血液中のプラスミノーゲンおよびその活性測定方法は以下を含む：組織フィブリンプラスミノーゲン活性化剤の活性に対する測定（ｔ−ＰＡＡ）、血漿組織プラスミノーゲン活性化剤抗原に対する測定（ｔ−ＰＡＡｇ）、血漿組織プラスミノーゲン活性に対する測定（ｐｌｇＡ）、血漿組織プラスミノーゲン抗原に対する測定（ｐｌｇＡｇ）、血漿組織プラスミノーゲン活性化剤の阻害物活性に対する測定、血漿組織プラスミノーゲン活性化剤の阻害物抗原に対する測定、血漿プラスミン−抗プラスミン複合体に対する測定（ＰＡＰ）。最もよく見られる測定方法は発色基質法である：測定対象(被験者)の血漿中にストレプトキナーゼ（ＳＫ）と発光基質を添加し、測定対象の血漿中のプラスミノーゲンはＳＫの作用下においてプラスミンとなり、後者は発光基質に作用し、それから分光光度計で測定し、吸光度の増加はプラスミノーゲンの活性と正比例の関係となる。この他にも免疫化学法、ゲル電気泳動法、免疫比濁法、放射免疫拡散法などを用いて血液中のフィブリンプラスミノーゲン活性に対して測定を行うことができる。
【０１０６】
「オルソログ（ｏｒｔｈｏｌｏｇ）」とは異なる種どうしのホモログであり、タンパク質の相同物もＤＮＡの相同物も含む。それは具体的に異なる種どうしの同じ祖先の遺伝子から進化して得られるタンパク質または遺伝子を言う。本発明のプラスミノーゲンはヒト由来の天然プラスミノーゲンを含み、さらには異なる種に由来する、プラスミノーゲン活性を有するプラスミノーゲンオルソログを含む。
【０１０７】
「保存的置換バリアント」とはそのうちの一つの指定されたアミノ酸残基が改変されたがタンパク質または酵素の全体のコンフォメーションおよび機能を変えないものであり、これは類似の特性（例えば酸性、塩基性、疎水性など）のアミノ酸でペアレントタンパク質中のアミノ酸配列中のアミノ酸を置換するものを含むがこれらに限られない。類似の性質を有するアミノ酸は知られている通りである。例えば、アルギニン、ヒスチジンおよびリジンは親水性の塩基性アミノ酸であり且つ互いに置き換えることができる。同じように、イソロイシンは疎水アミノ酸であり、ロイシン、メチオニンまたはバリンによって置換されることができる。そのため、機能の類似する二つのタンパク質またはアミノ酸配列の類似性は異なる可能性もある。例えば、ＭＥＧＡＬＩＧＮアルゴリズムに基づいて７０％〜９９％の類似性（同一性）を有する。「保存的置換バリアント」はさらにＢＬＡＳＴまたはＦＡＳＴＡアルゴリズムに基づいて６０％以上のアミノ酸同一性を有するポリペプチドまたは酵素を含み、７５％以上に達すればさらによく、最も好ましくは８５％以上に達し、さらには９０％以上に達するのが最も好ましく、さらに天然またはペアレントタンパク質または酵素と比較して同じまたは基本的に類似する性質または機能を有する。
【０１０８】
「分離された」プラスミノーゲンとは天然環境から分離および／または回収されたプラスミノーゲンタンパク質である。いくつかの実施形態において、前記プラスミノーゲンは（１）９０％を超える、９５％を超える、または９８％を超える純度（重量で計算した場合）になるまで精製し、例えばＬｏｗｒｙ法によって決まるもので、例えば９９％（重量で計算した場合）を超えるまで精製する、（２）少なくともスピニングカップ配列分析装置によりＮ末端または内部アミノ酸配列の少なくとも１５個の残基が得られる程度になる精製する、または（３）同質性になるまで精製する。該同質性はクマシーブリリアントブルーまたは銀染色により還元性または非還元性条件下のドデシル硫酸ナトリウムーポリアクリルアミノゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）によって決まるものである。分離されたプラスミノーゲンはバイオエンジニアリング技術により組み換え細胞から製造することが
でき、さらに少なくとも一つの精製ステップで分離されたプラスミノーゲンを含む。
【０１０９】
用語の「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」は本明細書において互いに置き換えて使用でき、いかなる長さのアミノ酸の重合体を指し、遺伝的にコードされたおよび非遺伝的にコードされたアミノ酸、化学的または生化学的に修飾されまたは派生したアミノ酸、および修飾されたペプチド主鎖を有するポリペプチドを含む。該用語は融合タンパク質を含み、異種性アミノ酸配列を有する融合タンパク質を含むがこれに限られず、異種性と同種性由来のリーダー配列（Ｎ端メチオニン残基を有するか有しない）を含む融合物；等々である。
【０１１０】
参照ポリペプチド配列の「アミノ酸配列同一性パーセンテージ（％）」の定義は、必要に応じてギャップを導入することで最大のパーセンテージ配列の同一性を実現した後、如何なる保存的な置換も配列同一性の一部として見なさない場合、候補配列中における参照ポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同じアミノ酸残基のパーセンテージである。パーセンテージのアミノ酸配列の同一性を測定することを目的とした比較は本分野の技術範囲における複数種類の方式によって実現でき、例えば公衆が入手できるコンピュータソフトウエア、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウエアによって実現できる。当業者は配列をアライメントするための適切なパラメータを決めることができ、比較対象の配列のフルサイズに対して最大比較の要求を実現するための如何なるアルゴリズムも含む。しかし、本発明の目的のために、アミノ酸配列の同一性パーセンテージは配列比較コンピュータソフトウエアＡＬＩＧＮ−２により得られるものである。
【０１１１】
ＡＬＩＧＮ−２を用いることによりアミノ酸配列を比較する場合、所定のアミノ酸配列Ａの所定のアミノ酸配列Ｂに対するアミノ酸配列同一性％（または所定のアミノ酸配列Ｂに対して、と、またはについてのあるアミノ酸配列と同一性を有する又は含む所定のアミノ酸配列Ａともいう）は以下のように計算される：  
分数Ｘ／Ｙ×１００
【０１１２】
そのうちＸは配列アライメントプログラムＡＬＩＧＮ−２において該プログラムのＡおよびＢのアライメントにおいて同一でマッチングすると評価したアミノ酸残基の数であり、且つそのうちＹはＢにおけるアミノ酸残基の総数である。以下のように理解するべきである：アミノ酸配列Ａの長さとアミノ酸配列Ｂの長さが等しくない場合、ＡのＢに対するアミノ酸配列の同一性％は、ＢのＡに対するアミノ酸配列同一性％とは異なる。特に断りのない限り、本文中において使用するすべてのアミノ酸配列同一性値％は前記の段落に記載の通りであり、ＡＬＩＧＮ−２コンピュータプログラムによって得られるものである。
【０１１３】
本文において使用されているように、用語の「治療」および「処理」は期待される薬理および／または生理的効果が得られることを言う。前記効果は疾患またはその症状を完全または一部予防すること、および／または疾患および／またはその症状を一部または完全に治癒するものとすることができる。さらに以下を含む：（ａ）疾患が被験者の体内で発生することを予防し、前記被験者は疾患の要因を持っているが、該疾患を有すると診断されていない状況であること；（ｂ）疾患を抑制し、その形成を阻害すること；および（ｃ）疾患および／またはその症状を減軽し、即ち疾患および／またはその症状を減退させること。
【０１１４】
用語の「個体」、「被験者」および「患者」は本明細書中において互いに置き換えて使用でき、哺乳動物を指し、ネズミ（ラット、マウス）、ヒト以外の霊長類、ヒト、イヌ、ネコ、有蹄動物（例えばウマ、ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ）などを含むがこれらに限られない。
【０１１５】
「治療上有効量」または「有効量」とは、哺乳動物またはその他の被験者に投与して疾患の治療に用いられる際に疾患の前記予防および／または治療を実現できるプラスミノーゲンの量である。「治療上有効量」は使用するプラスミノーゲン、治療しようとする被験者の疾患および／または症状の重症度および年齢、体重などに従って変化するものである。
【０１１６】
本発明のプラスミノーゲンの調製
プラスミノーゲンは治療の用途に用いられるために、自然界から分離および精製されるものでもよく、標準的な化学ペプチド合成技術によって合成することでもよい。化学的手法によりポリペプチドを合成する際、液相または固相で合成を行うことができる。固相ポリペプチド合成（ＳＰＰＳ）（配列のＣ末端アミノ酸を不溶性支持体に附着させ、順番に配列中の残りのアミノ酸を添加する）はプラスミノーゲンの化学的合成に適したものである。各種形式のＳＰＰＳ、例えばＦｍｏｃおよびＢｏｃは、プラスミノーゲンの合成に用いることができる。固相合成に用いられる技術は以下に記載されている：ＢａｒａｎｙおよびＳｏｌｉｄ−Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；３−２８４ページ、Ｔｈｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｂｉｏｌｏｇｙ．第二巻：Ｓｐｅｃｉａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｐａｒｔ  Ａ．，Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，ｔら  Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８５：２１４９−２１５６（１９６３）；Ｓｔｅｗａｒｔら，Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｎｄ  ｅｄ．Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌ．（１９８４）；およびＧａｎｅｓａｎ  Ａ．２００６Ｍｉｎｉ  Ｒｅｖ．Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．６：３−１０およびＣａｍａｒｅｒｏ  ＪＡら  ２００５Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｅｐｔ  Ｌｅｔｔ．１２：７２３−８。簡単に言えば、その上にペプチド鎖が構築されている機能性ユニットにより不溶性の多孔ビーズを処理する。カップリング／脱保護の繰り返し循環後に、附着した固相の遊離Ｎ末端アミンと単一のＮ保護を受けているアミノ酸ユニットをカップリングさせる。それから、該ユニットを脱保護し、他のアミノ酸と接続する新しいＮ末端アミンを露出させる。ペプチドを固相上に固定したままにし、それからそれを切除する。
【０１１７】
標準的な組み換え方法により本発明のプラスミノーゲンを生産する。例えば、プラスミノーゲンをコードする核酸を発現ベクター中に挿入し、それと発現ベクター中の制御配列を操作可能に接続させる。発現制御配列はプロモーター（例えば天然に関連されているプロモーター、または異種由来のプロモーター）、シグナル配列、エンハンサーエレメントおよび転写終了配列を含むが、これらに限られない。発現の制御はベクター中の真核プロモーターシステムとすることができ、前記ベクターは真核宿主細胞（例えばＣＯＳまたはＣＨＯ細胞）を形質転換またはトランスフェクションさせる。一旦ベクターを適切な宿主に導入すれば、ヌクレオチド配列の高レベル発現およびプラスミノーゲンの収集および精製に適した条件下において宿主を維持する。
【０１１８】
適切な発現ベクターは通常宿主体内において附加体または宿主染色体ＤＮＡの整合部分として複製される。通常、発現ベクターは選択マーカー（例えばアンピシリン耐性、ハイグロマイシン耐性、テトラサイクリン耐性、カナマイシン耐性またはネオマイシン耐性）を含み、インビトロで所望のＤＮＡ配列によって形質転換されたそれらの細胞に対して測定を行うことに有用である。
【０１１９】
大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）は目的抗体をコードするポリヌクレオチドをクローンする原核宿主細胞の例である。その他の使用に適した微生物宿主は桿菌を含み、例えばバチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）およびその他の腸内細菌科（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、例えばサルモネラ属（Ｓａｌ
ｍｏｎｅｌｌａ）、セラチア属（Ｓｅｒｒａｔｉａ）、および各種シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種である。これらの原核宿主において、発現ベクターを生成でき、通常は宿主細胞と相容する発現制御配列（例えば複製開始点）を含むものである。また、多くの公知のプロモーターが存在し、例えば乳糖プロモーターシステム、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーターシステム、β−ラクタマーゼプロモーターシステム、またはファージλ由来のプロモーターシステムである。プロモーターは一般的に発現を制御し、必要に応じて遺伝子配列を制御する場合に、転写および翻訳を起動するために、さらにリボソームの結合位置配列を有してもよい。
【０１２０】
その他の微生物、例えば酵母も発現に用いることができる。酵母（例えばサッカロミセス（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ））およびピキア（Ｐｉｃｈｉａ）が適した酵母宿主細胞の例であり、そのうちの適切な担体は必要に応じて発現制御配列（例えばプロモーター）、複製開始点、終止配列などを含む。典型的なプロモーターは３−ホスホグリセリン酸キナーゼおよびその他の糖分解酵素を含む。誘導型酵母プロモーターはアルコール脱水素酵素、イソチトクロムＣ、およびマルトースとガラクトースの利用のための酵素のプロモーターを含む。
【０１２１】
微生物以外に、哺乳動物細胞（例えば体外細胞培養物中において培養された哺乳動物細胞）も本発明のプラスミノーゲンの発現および生成に用いることができる（例えば目的抗−Ｔａｕ抗体をコードするポリヌクレオチド）。例えばＷｉｎｎａｃｋｅｒ，Ｆｒｏｍ  Ｇｅｎｅｓ  ｔｏ  Ｃｌｏｎｅｓ，ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｎ．Ｙ．，Ｎ．Ｙ．（１９８７）参照。適した哺乳動物宿主細胞はＣＨＯ細胞系、各種Ｃｏｓ細胞系、ＨｅＬａ細胞、骨髄腫細胞系、および形質転換されたＢ細胞またはハイブリドーマを含む。これらの細胞に用いられる発現ベクターは発現制御配列、例えば複製開始点、プロモーター、およびエンハンサー（Ｑｕｅｅｎら，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．８９：４９（１９８６））、および必要とされる加工情報位置、例えばリボソームの結合サイト、ＲＮＡの切断サイト、ポリアデノシン酸化サイト、および転写ターミネーター配列を含むことができる。適切な発現制御配列の例はウサギ免疫グロブリン遺伝子、ＳＶ４０、アデノウイルス、ウシ乳頭腫ウィルス、サイトメガロウイルスなどの派生のプロモーターである。Ｃｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１１４９（１９９２）を参照すること。
【０１２２】
一旦合成（化学または組み換え的に）されれば、本分野の標準的な手順、例えば硫酸アンモニウム沈殿、アフィニテイカラム、カラムクロマトグラフィー、高速液相クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、ゲル電気泳動などにより本発明に記載のプラスミノーゲンを精製することができる。該プラスミノーゲンは基本的に純粋なものであり、例えば少なくとも約８０％から８５％の純度で、少なくとも約８５％〜９０％の純度で、少なくとも約９０％〜９５％の純度で、または９８％〜９９％の純度またはさらに純度が高いものであり、例えば汚染物を含まず、前記汚染物は例えば細胞砕片、目的抗体以外の大分子などである。
【０１２３】
薬物配合剤
所望の純度のプラスミノーゲンと必要に応じた薬用担体、賦形剤、または安定化剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ′ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１６版，Ｏｓｏｌ，Ａ．ｅｄ．（１９８０））とを混合して凍結乾燥製剤または水溶液を形成して治療用の配合剤を得る。許容可能な担体、賦形剤、安定化剤は所要の用量および濃度下において被験者に対して毒性がなく、さらに例えばリン酸塩、クエン酸塩およびその他の有機酸などの緩衝剤を含む。抗酸化剤はアスコルビン酸和メチオニンを含む；防腐剤（例えばオクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメチレンジアミン；塩化ベンザルコニウム（ｂｅｎｚａｌｋｏｎｉｕｍ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、ベンゼトニウムクロリド；フェノール、ブタノールまたはベンジルアルコール；アルキルパラヒドロキ
シ安息香酸エステル、例えばメチルまたはプロピルパラヒドロキシ安息香酸エステル；ピロカテコール；レソルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；ｍ−クレゾール）；低分子量ポリペプチド（少なくとも１０個の残基を有するもの）；タンパク質例えば血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン；親水性重合体、例えばポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン酸、ヒスチジン、アルギニンまたはリシンである；単糖、二糖およびその他の炭水化物はグルコース、マンノース、またはデキストリンを含む；キレート剤は例えばＥＤＴＡである；糖類は例えばショ糖、マンニトール、フコースまたはソルビトールである；塩形成対イオン、例えばナトリウム；金属複合体（例えば亜鉛−タンパク複合体）；および／または非イオン界面活性剤、例えばＴＷＥＥＮＴＭ、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳＴＭまたはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。好ましくは凍結乾燥された抗−ＶＥＧＦ抗体配合剤であり、ＷＯ  ９７／０４８０１に記載されているとおりであり、本明細書において参考とされるものである。
【０１２４】
本発明の配合剤は治療を必要とする具体的な症状の必要とする一種類以上の活性化合物を含有してもよく、好ましくは活性が相補的で互いに副作用を有しないものである。例えば、血圧降下薬、抗不整脈薬、糖尿病治療薬等である。
【０１２５】
本発明のプラスミノーゲンは例えば凝集技術または界面重合によって作られるマイクロカプセル中に内包ことができ、例えば、膠質薬物輸送系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン剤、ナノ粒子およびナノカプセル）中に入れまたは粗エマルジョン状液中のヒドロキシメチルセルロースまたはゲルーマイクロカプセルおよびポリ―（メタアクリル酸メチル）マイクロカプセル中に入れることができる。これらの技術はＲｅｍｉｎｇｔｏｎ′ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
１６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）に開示されている。
【０１２６】
体内に投与することに用いられる本発明のプラスミノーゲンは必ず無菌である必要がある。これは凍結乾燥および再度配合する前または後に除菌濾過膜で濾過することで容易に実現できる。
【０１２７】
本発明のプラスミノーゲンは緩衝製剤を調製できる。緩衝製剤の適切な実例は一定の形状を有し且つ糖タンパクを含む固体の疎水性重合体の半透過マトリックスを含み、例えば膜またはマイクロカプセルである。緩衝基質の実例はポリエステル、水性ゲル（例えばポリ（２−ヒドロキシエチル−メタアクリル酸エステル）（Ｌａｎｇｅｒら，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．，１５：１６７−２７７（１９８１）；Ｌａｎｇｅｒ，Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．，１２：９８−１０５（１９８２））またはポリ（ビニールアルコール）、ポリラクチド（米国特許３７７３９１９，ＥＰ  ５８，４８１）、Ｌ−グルタミン酸とγエチル−Ｌ−グルタミン酸の共重合体（Ｓｉｄｍａｎ，ら，Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ
２２：５４７（１９８３）），分解できないエチレン−ビニルアセテート（ｅｔｈｙｌｅｎｅ−ｖｉｎｙｌ  ａｃｅｔａｔｅ）（Ｌａｎｇｅｒ，ら，出所は前記と同じ）、または分解可能な乳酸−ヒドロキシ酢酸共重合体、例えばＬｕｐｒｏｎ  ＤｅｐｏｔＴＭ（乳酸−ヒドロキシ酢酸共重合体およびリュープロレリン（ｌｅｕｐｒｏｌｉｄｅ）酢酸エステルからなる注射可能なミクロスフェア体）、およびポリＤ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸を含む。重合体、例えばエチレン−酢酸エチルおよび乳酸−ヒドロキシ酢酸は、持続的に分子を１００日間以上放出することができ、しかしいくつかの水性ゲルがタンパク質を放出する時間は比較的短い。関連のメカニズムに応じてタンパク質を安定化させる合理的なストラテジーにより設計できる。例えば、凝集のメカニズムが硫化ジスルフィド結合の交換によって分子間Ｓ−Ｓ結合を形成するであれば、メルカプト基残基を修飾することにより、酸性溶液中から凍結乾燥させ、湿度を制御し、適切な添加剤を用いて、および特定の重合体基質組成物を開発することで安定化を実現できる。
【０１２８】
投与および使用量
異なる方式、例えば静脈内、腹膜内、皮下、頭蓋骨内、髄腔内、動脈内（例えば頸動脈）、筋肉内投与により本発明の薬物組成物の投与を実現できる。
【０１２９】
胃腸外での投与に用いられる製造物は無菌水性または非水性溶液、懸濁液および乳剤を含む。非水性溶媒の例はプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、例えばオリーブオイルのような植物油、および注射可能な有機エステル、例えばオレイン酸エチルである。水性担体は水、アルコール性／水性溶液、乳剤または懸濁液を含み、塩水および緩衝媒介を含む。胃腸外媒介物は塩化ナトリウム溶液、リンガ―デキストロース、デキストロースおよび塩化ナトリウム、または固定油である。静脈内媒介物は液体および栄養補充物、電気分解補充物などを含む。されには防腐剤およびその他の添加剤、例えば抗微生物製剤、抗酸化剤、キレート剤、不活性ガスなども存在してもよい。
【０１３０】
医療関係者は各種臨床的要素により用量案を決めることができる。例えば医学分野で公知のように、任意の患者の用量は複数の要素によって決められ、これらの要素は患者の体型、体表面積、年齢、投与される具体的な化合物、性別、投与回数および経路、全体の健康度、および同時に投与するその他の薬物を含む。本発明が含有するプラスミノーゲンの薬物組成物の用量の範囲は例えば被験者体重に対して毎日約０．０００１〜２０００ｍｇ／ｋｇであり、または約０．００１〜５００ｍｇ／ｋｇ（例えば０．０２ｍｇ／ｋｇ，０．２５ｍｇ／ｋｇ，０．５ｍｇ／ｋｇ，０．７５ｍｇ／ｋｇ，１０ｍｇ／ｋｇ，５０ｍｇ／ｋｇなど）とすることができる。例えば、用量は１ｍｇ／ｋｇ体重または５０ｍｇ／ｋｇ体重または１−５０ｍｇ／ｋｇの範囲とすることができ、または少なくとも１ｍｇ／ｋｇである。この例示性の範囲より高いまたは低い用量もカバーされ、特に前記の要素を考慮した場合である。前記範囲中の中間用量も本発明の範囲内に含まれるものである。被験者は毎日、隔日、毎週または経験分析によって決められた任意のスケジュール表に従ってこのような用量を投与できる。例示的な用量のスケジュール表は連続数日１−１０ｍｇ／ｋｇ投与することである。本発明の薬物の投与過程において治療効果および安全性はリアルタイムに評価すべきである。
【０１３１】
製品または薬物キット
本発明の一つの実施形態は製品または薬物キットに係るものであり、肥満症およびその関連疾患の治療に使用できる本発明のプラスミノーゲンまたはプラスミンを含有する。前記製品は好ましくは一つの容器、ラベルまたはプロトコルを含む。適切な容器はボトル、バイアル、注射器などである。容器は各種材料例えばガラスまたはプラスチックから作られることができる。前記容器は組成物を含有し、前記組成物は本発明の疾患または症状を有効に治療し且つ無菌の入口を有する（例えば前記容器は静脈輸液用パックまたはバイアルであり、皮下注射針によって貫通される栓を含む）。前記組成物中の少なくとも一種類の活性化剤がプラスミノーゲン／プラスミンである。前記容器上にあるまたは添付されているラベルは前記組成物を本発明の前記糖尿病によって引き起こされる肥満およびその関連疾患の治療に用いられると説明するものである。前記製品はさらに薬用緩衝液を含有する第二容器を含み、前記薬用緩衝液は例えばリン酸塩緩衝の塩水、リンガー溶液およびグルコース溶液を含む。さらには商業および使用者の角度から見ると必要とされるその他の物質、即ちその他の緩衝液、希釈剤、濾過物、針および注射器を含むことができる。また、前記製品は使用説明を有するプロトコルを含み、これは例えば前記組成物の使用者にプラスミノーゲン組成物および疾患の治療に伴うその他の薬物を患者に投与することを指示するものである。
【図面の簡単な説明】
【０１３２】
【図１】図１は高カロリー食により誘発された肥満モデルマウスにプラスミノーゲンを２８日投与した後の体重変化の計算結果を示すものである。２９日目の体重から１日目の体重を差し引いた数値が結果として示されている。その結果、ブランク対照群の体重変化は明らかではなく、溶媒ＰＢＳ投与対照群が軽減された体重はプラスミノーゲン投与群より明らかに低く、しかもその差が統計学的に有意である（＊は、Ｐ＜０．０５を表す）。これは、プラスミノーゲンが肥満モデルマウスの体重の軽減を促進することができることを示している。
【図２】図２は高カロリー食により誘発された肥満モデルマウスにプラスミノーゲンを２８日投与した後のボディマス指数の統計結果を示すものである。その結果、プラスミノーゲン投与群マウスのボディマス指数は溶媒ＰＢＳ投与対照群より明らかに低く、しかもその差が統計学的に有意であり（＊は、Ｐ＜０．０５を表し、＊＊は、Ｐ＜０．０１を表す）、しかも溶媒ＰＢＳ投与対照群と比べ、プラスミノーゲン投与群マウスのボディマス指数はブランク対照群により近い。これは、プラスミノーゲンが肥満モデルマウスのボディマス指数を有意に低め、肥満を軽減することができることを示している。
【図３】図３は高カロリー食により誘発された肥満モデルマウスにプラスミノーゲンを２８日投与した後のＬｅｅ’ｓ指数（Lee's  index）の統計結果を示すものである。その結果、プラスミノーゲン投与群マウスのＬｅｅ’ｓ指数は溶媒ＰＢＳ投与対照群より明らかに低く、しかもその差が統計学的に有意であり（＊は、Ｐ＜０．０５を表す）、しかも溶媒ＰＢＳ投与対照群と比べ、プラスミノーゲン投与群マウスのＬｅｅ’ｓ指数はブランク対照群により近い。これは、プラスミノーゲンが肥満モデルマウスのＬｅｅ’ｓ指数を有意に低め、肥満を軽減することができることを示している。
【図４】図４は高カロリー食により誘発された肥満モデルマウスの血脂検出結果を示すものである。Ａは総コレステロールであり、Ｂは低密度リポタンパク質であり、Ｃは高密度リポタンパク質である。その結果、プラスミノーゲン投与群、溶媒ＰＢＳ投与対照群、およびブランク対照群の総コレステロール、低密度リポタンパク質、および高密度リポタンパク質濃度はいずれも有意な差がない。これは、本実験で高カロリーにより誘発された肥満モデルマウスの血脂には顕著な変化がないことを示している。
【図５】図５は高カロリー食により誘発された肥満モデルマウスの血清レプチンの検出結果を示すものである。その結果、プラスミノーゲン投与群、溶媒ＰＢＳ投与対照群、およびブランク対照群のレプチン濃度はいずれも有意な差がない。これは、本実験で高カロリーにより誘発された肥満モデルマウスのレプチンには顕著な変化がないことを示している。
【図６】図６は高カロリー食により誘発された肥満モデルマウスの血清インスリンの検出結果を示すものである。その結果、プラスミノーゲン投与群、溶媒ＰＢＳ投与対照群、およびブランク対照群のインスリン濃度はいずれも有意な差がない。これは、本実験で高カロリーにより誘発された肥満モデルマウスのインスリンには顕著な変化がないことを示している。
【図７】図７は高カロリー食により誘発された肥満モデルマウスにプラスミノーゲンを２８日投与した後の腹腔脂肪係数の統計結果を示すものである。その結果、プラスミノーゲン投与群マウスの腹腔脂肪係数は溶媒ＰＢＳ投与対照群より明らかに低く、しかもその差が統計学的に有意であり（＊は、Ｐ＜０．０５を表す）、しかも溶媒ＰＢＳ投与対照群と比べ、プラスミノーゲン投与群マウスの腹腔脂肪含有量はブランク対照群により近い。これは、プラスミノーゲンが肥満モデルマウスの腹腔脂肪の沈着を有意に低めることができることを示している。
【図８】図８は高カロリー食により誘発された肥満モデルマウスにプラスミノーゲンを２８日投与した後腹腔脂肪のＨＥ染色の脂肪空胞面積の統計結果を示すものである。Ａはブランク対照群であり、Ｂは溶媒ＰＢＳ投与対照群であり、Ｃはプラスミノーゲン投与群であり、Ｄは定量分析結果である。その結果、プラスミノーゲン投与群の平均脂肪空胞の面積は溶媒ＰＢＳ投与対照群より明らかに小さく、その差が統計学的にとても有意であり（＊＊は、Ｐ＜０．０１を表す）、しかも溶媒ＰＢＳ投与対照群と比べ、プラスミノーゲン投与群の脂肪空胞面積はブランク対照群マウスにより近い。これは、プラスミノーゲンが肥満モデルマウスの脂肪細胞の大きさを有意に低め、腹腔脂肪の沈着を減少させることができることを示している。
【図９】図９は１４〜１５週齢の糖尿病マウスにプラスミノーゲンを２８日投与した後の血清レプチンの検出結果を示すものである。その結果、プラスミノーゲン投与群マウスの血清レプチン濃度は溶媒ＰＢＳ投与対照群より明らかに低く、その差が統計学的にとても有意であり（＊＊は、Ｐ＜０．０１を表す）、しかも溶媒ＰＢＳ投与対照群と比べ、プラスミノーゲン投与群の血清レプチンレベルは健常マウスにより近い。これは、プラスミノーゲンは２型糖尿病初期のマウスの血清レプチンレベルを低めることができることを示している。
【図１０】図１０は２３〜２５週齢の糖尿病マウスにプラスミノーゲンを２８日投与した後の血清レプチンの検出結果を示すものである。その結果、プラスミノーゲン投与群マウスの血清レプチン濃度は溶媒ＰＢＳ投与対照群より明らかに低く、その差が統計学的にとても有意である（＊＊は、Ｐ＜０．０１を表す）。これは、プラスミノーゲンは２型糖尿病後期のマウスの血清レプチンレベルを低めることができることを示している。
【図１１】図１１は１６週齢の高脂血症モデルマウスにプラスミノーゲンを３０日投与した後の肝臓のオイルレッドＯ染色の観察結果を示すものである。Ａは溶媒ＰＢＳ投与対照群であり、Ｂはプラスミノーゲン投与群であり、Ｃは定量分析結果である。その結果、プラスミノーゲン投与群マウスの肝臓における脂肪沈着は溶媒ＰＢＳ投与対照群より明らかに少なく、しかもその差が統計学的に有意である（＊は、Ｐ＜０．０５を表す）。これは、プラスミノーゲンが高脂血症モデルマウスの肝臓における脂肪沈着を改善できることを示している。
【図１２】図１２は１６週齢の高脂血症モデルマウスにプラスミノーゲンを３０日投与した後の大動脈洞のオイルレッドＯ染色の観察結果を示すものである。ＡおよびＣは溶媒ＰＢＳ投与対照群であり、ＢおよびＤはプラスミノーゲン投与群であり、Ｅは定量分析結果である。その結果、プラスミノーゲン投与群マウスの大動脈洞における脂肪沈着は溶媒ＰＢＳ投与対照群より明らかに少なく、しかもその差が統計学的に有意である（＊は、Ｐ＜０．０５を表す）。これは、プラスミノーゲンが高脂血症モデルマウスの大動脈洞における脂肪沈着を改善できることを示している。
【図１３】図１３はプラスミノーゲンを３０日投与した後の３％コレステロール高脂血症モデルマウスの腎臓のオイルレッドＯ染色の観察結果を示すものである。Ａはブランク対照群であり、Ｂは溶媒ＰＢＳ投与対照群であり、Ｃはプラスミノーゲン投与群であり、Ｄは定量分析結果である。その結果、プラスミノーゲン投与群マウスの腎脂肪沈着（矢印に表記される）は溶媒ＰＢＳ投与対照群より明らかに少なく、しかもその差が統計学的に有意である。また、プラスミノーゲン投与群の脂質沈着レベルはブランク対照群マウスに似ている。これは、プラスミノーゲンが高脂血症モデルマウスの腎臓における脂肪の沈着を低減でき、それによって脂肪沈着による腎損傷を減少させることができることを示している。
【図１４】図１４は３％コレステロール食により誘発された高脂血症モデルマウスにプラスミノーゲンを２０日投与した後の血清の低密度リポタンパク質コレステロールの検出結果を示すものである。その結果、プラスミノーゲン投与群マウスの血清の低密度リポタンパク質コレステロール濃度は溶媒ＰＢＳ投与対照群より明らかに低く、しかもその差が統計学的に有意である（＊は、Ｐ＜０．０５を表す）。これは、プラスミノーゲンが高脂血症モデルマウスの血清における低密度リポタンパク質コレステロールの含有量を低減することができ、高血脂を改善する機能を有することを示している。
【図１５】図１５はプラスミノーゲンを２０日投与した後の３％コレステロール高脂血症モデルマウスの血清のアテローム性動脈硬化指数の検出結果を示すものである。その結果、プラスミノーゲン投与群マウスのアテローム性動脈硬化指数は溶媒ＰＢＳ投与対照群より明らかに低く、しかもその差が統計学的にとても有意である（＊＊は、Ｐ＜０．０１を表す）。これは、プラスミノーゲンが高脂血症モデルマウスのアテローム性動脈硬化症のリスクを効果的に低下させることができることを示している。
【図１６】図１６はＡｐｏＥアテローム性動脈硬化モデルマウスにプラスミノーゲンを３０日投与した後の血清総コレステロールの検出結果を示すものである。その結果、プラスミノーゲン投与群マウスの総コレステロール濃度は溶媒ＰＢＳ投与対照群より明らかに低く、しかもその差が統計学的に有意である（＊は、Ｐ＜０．０５を表す）。これは、プラスミノーゲンがＡｐｏＥアテローム性動脈硬化モデルマウスの血清における総コレステロールの含有量を低下させ、アテローム性動脈硬化モデルマウスの血脂障害を改善できることを示している。
【図１７】図１７はＡｐｏＥアテローム性動脈硬化モデルマウスにプラスミノーゲンを３０日投与した後の血清のトリグリセリドの検出結果を示すものである。その結果、プラスミノーゲン投与群マウスのトリグリセリド濃度は溶媒ＰＢＳ投与対照群より明らかに低く、しかもその差が統計学的に有意である（＊は、Ｐ＜０．０５を表す）。これは、プラスミノーゲンがＡｐｏＥアテローム性動脈硬化モデルマウスの血清におけるトリグリセリドの含有量を低下させ、アテローム性動脈硬化モデルマウスの血脂障害を改善できることを示している。
【図１８】図１８はＡｐｏＥアテローム性動脈硬化モデルマウスにプラスミノーゲンを３０日投与した後の血清の低密度リポタンパク質コレステロールの検出結果を示すものである。その結果、プラスミノーゲン投与群マウスの血清の低密度リポタンパク質コレステロール濃度は溶媒ＰＢＳ投与対照群より明らかに低く、しかもその差が統計学的に有意である（＊は、Ｐ＜０．０５を表す）。これは、プラスミノーゲンがＡｐｏＥアテローム性動脈硬化モデルマウスの血清における低密度リポタンパク質コレステロールの含有量を低下させ、アテローム性動脈硬化モデルマウスの血脂障害を改善できることを示している。
【図１９】図１９はプラスミノーゲンを投与した後の肥満モデルマウスの視床下部レプチン受容体の免疫組織の化学的染色の結果を示すものである。ＡおよびＤはブランク対照群であり、ＢおよびＥは溶媒ＰＢＳ投与対照群であり、ＣおよびＦはプラスミノーゲン投与群であり、Ｇは定量分析結果である。その結果、溶媒ＰＢＳ投与対照群マウスの視床下部レプチン受容体の発現はブランク対照群より明らかに多いに対して、プラスミノーゲン投与群マウスの視床下部レプチン受容体の発現は溶媒ＰＢＳ投与対照群より明らかに少なく、ブランク対照群のレベルに近く、しかもその差が統計学的に有意である（Ｐ＝０．０１）。これは、プラスミノーゲンが肥満マウスの視床下部レプチン受容体の発現を有意に低めることができることを示している。
【発明を実施するための形態】
【０１３３】
［実施例１］
実施例１は、プラスミノーゲンが高カロリー食により誘発された肥満モデルマウスに対する影響に関するものである。
マウスモデルおよび群分け
８週齢のＣ５７オスマウス１４匹を取って体重によってランダムに二つの群に分け、ブランク対照群で４匹とモデル群で１０匹とした。ブランク対照群マウスに通常の維持食を与え、モデル群マウスに脂肪分４５％カロリー比高脂肪食（ＴＰ２３０００、南通トロフィー飼料科技有限公司）を１２週間給餌して肥満モデルを建築した［３０］。本文において、脂肪分４５％カロリー比高脂肪食は高カロリー食と略称される。１２週間後、モデル群マウスの体重を測って体重によってさらにランダムに二つの群に分け、プラスミノーゲン投与群と溶媒ＰＢＳ投与対照群で各群５匹ずつとした。ヒトプラスミノーゲンをＰＢＳに溶けた。プラスミノーゲン投与群マウスに１ｍｇ／０．１ｍＬ／匹／日でヒトプラスミノーゲンを尾静脈注射により投与し、溶媒ＰＢＳ投与対照群にも同じ体積のＰＢＳを尾静脈注射により投与し、ブランク対照群に対しては何の処置もしなかった。上記実験動物に連続して２８日間投与し（投与開始当日を１日目とし）、２９日目に下記処置および測定を行った。
測定および結果
体重測定
上記実験動物に対して１日目、２９日目に体重を測って体重の変化を計算した。２９日
目の体重から１日目の体重を差し引いた数値が結果として示されている。
その結果、ブランク対照群の体重変化は明らかではなく、溶媒ＰＢＳ投与対照群が軽減された体重はプラスミノーゲン投与群より明らかに少なく、しかもその差が統計学的に有意である（＊は、Ｐ＜０．０５を表す）（図１）。これは、プラスミノーゲンが肥満モデルマウスの体重を有意に低めることができることを示している。
ボディマス指数の測定
２９日目に上記マウスに対して体重を測ってマウスの体長を量り、ボディマス指数を計算した。ボディマス指数＝体重（ｋｇ）／体長２（ｍ）。
ボディマス指数は、現在国際的によく使用されている、人体の太り具合および健康であるか否かを量る基準である。ボディマス指数は肥満モデル動物の太り具合の指標とすることもできる［４３，４４］。その結果、プラスミノーゲン投与群マウスのボディマス指数は溶媒ＰＢＳ投与対照群より明らかに低く、しかもその差が統計学的に有意であり（＊は、Ｐ＜０．０５を表す）、しかも溶媒ＰＢＳ投与対照群と比べ、プラスミノーゲン投与群マウスのボディマス指数はブランク対照群により近い（図２）。これは、プラスミノーゲンが肥満モデルマウスのボディマス指数を有意に低め、肥満を軽減することができることを示している。
Ｌｅｅ’ｓ指数の測定
上記マウスに対して２９日目に体重を測ってからマウスの体長を量り、Ｌｅｅ’ｓ指数を計算した。
【数１】
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Ｌｅｅ’ｓ指数は肥満程度を反映するための有効な指数である［３１−３２］。その結果、プラスミノーゲン投与群マウスのＬｅｅ’ｓ指数は溶媒ＰＢＳ投与対照群より明らかに低く、しかもその差が統計学的に有意であり（＊は、Ｐ＜０．０５を表す）、しかも溶媒ＰＢＳ投与対照群と比べ、プラスミノーゲン投与群マウスのＬｅｅ’ｓ指数はブランク対照群により近い（図３）。これは、プラスミノーゲンが肥満モデルマウスのＬｅｅ’ｓ指数を有意に低め、肥満を軽減することができることを示している。
血脂レベルの検出
上記モデルマウスに対して２９日目に眼球を摘出して採血し、遠心分離して上澄み液を取り、血清の総コレステロール、低密度リポタンパク質および高密度リポタンパク質の検出キット（南京建成生物工程研究所、品目番号Ａ１１１−１、Ａ１１３−１、Ａ１１２−１）を用い、対応するキットに記載の方法に従って血清の総コレステロール、低密度リポタンパク質および高密度リポタンパク質濃度を測定した。
その結果、プラスミノーゲン投与群、溶媒ＰＢＳ投与対照群、およびブランク対照群の総コレステロール（図４Ａ）、低密度リポタンパク質（図４Ｂ）、および高密度リポタンパク質（図４Ｃ）の濃度はいずれも顕著な差がない。これは、本実験で高カロリー食により誘発された肥満モデルマウスの血脂には顕著な変化がないことを示している。
血清レプチンレベルの検出
血清レプチンレベル検出キット（南京建成生物工程研究所、品目番号Ｈ１７４）を用いてそのキットに記載の方法に従って上記血清中のレプチンレベルを検出した。
その結果、プラスミノーゲン投与群、溶媒ＰＢＳ投与対照群、およびブランク対照群のレプチン濃度はいずれも顕著な差がない（図５）。これは、本実験で高カロリー食により誘発された肥満モデルマウスのレプチンには顕著な変化がないことを示している。
レプチン（Ｌｅｐｔｉｎ，ＬＰ）は脂肪組織より分泌されるホルモンである。レプチンが血液循環に入ると糖、脂肪、およびエネルギー代謝の調節に参与し、生体に摂食を減少させ、エネルギーの放出を増やし、脂肪細胞の合成を抑制し、さらに体重を軽減すると考えられていた。しかし、一部の肥満体にレプチン抵抗があり、血液中のレプチンレベルが
上昇した［３４］。相関研究によると、ｄｂ／ｄｂマウスにレプチン抵抗があり、血清のレプチンレベルが顕著に上昇した［３５−３６］。
血清インスリンレベルの検出
血清インスリン検出キット（南京建成生物工程研究所、品目番号Ｈ１７４）を用いてそのキットに記載の方法に従って上記血清中のインスリンレベルを検出した。
その結果、プラスミノーゲン投与群、溶媒ＰＢＳ投与対照群、およびブランク対照群のインスリン濃度はいずれも有意な差がない（図６）。これは、本実験で高カロリー食により誘発された肥満モデルマウスのインスリンには顕著な変化がないことを示している。
腹腔脂肪量の検出
上記マウスに対して２９日目に体重を測ってから殺処分し、腹腔脂肪を取って重量を量った。腹腔脂肪係数（％）＝（腹腔脂肪重量／体重）＊１００。
その結果、プラスミノーゲン投与群マウスの腹腔脂肪係数は溶媒ＰＢＳ投与対照群より明らかに低く、しかもその差が統計学的に有意であり（＊は、Ｐ＜０．０５を表す）、しかもブランク対照群マウスの脂肪係数により近い（図７）。これは、プラスミノーゲンが肥満モデルマウスの腹腔脂肪の沈着を有意に低めることができることを示している。
腹腔皮下脂肪の空胞面積の検出
２９日目に上記マウスを殺処分し、腹腔脂肪を取って４％パラホルムアルデヒド固定液において２４〜４８時間固定を行った。固定後の組織サンプルをアルコールで段階的に脱水させおよびキシレンで透徹化処理した後にパラフィンで包埋処理を行った。組織切片の厚みは４μｍであり、切片を脱パラフィンさせ、さらに浸水してヘマトキシリンおよびエオシンで染色（ＨＥ染色）させ、１％塩酸エタノールで分別させ、アンモニア水でブルーイングさせ、さらにアルコールで段階的に脱水させて封入させ、切片を光学顕微鏡下で２００倍にて観察した。Ｉｍａｇｅ−ｐｒｏ  ｐｌｕｓ画像処理ソフトを使って脂肪空胞の面積を分析した。
肥満体のエネルギー摂取がエネルギー消耗を超えると、大量の脂質が脂肪細胞に蓄積して脂肪組織の拡張、すなわち脂肪細胞の増大を引き起こし、脂肪空胞の面積が増えることになる［３３］。
その結果、プラスミノーゲン投与群（図８Ｃ）の脂肪空胞の面積は溶媒ＰＢＳ投与対照群（図８Ｂ）より明らかに小さく、その差が統計学的にとても有意であり（＊＊は、Ｐ＜０．０１を表す）（図８Ｄ）、しかも溶媒ＰＢＳ投与対照群と比べ、プラスミノーゲン投与群の脂肪空胞面積はブランク対照群マウスにより近い（図８Ａ）。これは、プラスミノーゲンが肥満モデルマウスの脂肪細胞の大きさを有意に低め、腹腔脂肪の沈着を減少させることができることを示している。
【０１３４】
［実施例２］
実施例２は、プラスミノーゲンが糖尿病初期マウスの血清レプチンの濃度を低めることに関するものである。
１４〜１５週齢のｄｂ／ｄｂオスマウス１２匹とｄｂ／ｍマウス３匹を取り、体重を測ってからｄｂ／ｄｂマウスを体重によってランダムに二つの群に分け、それぞれ溶媒ＰＢＳ投与対照群とプラスミノーゲン投与群とで、各群６匹ずつとした。投与開始当日を１日目とし、１日目からプラスミノーゲンまたはＰＢＳを投与し始めた。プラスミノーゲン投与群マウスに２ｍｇ／０．２ｍＬ／匹／日でヒトプラスミノーゲンを尾静脈注射により投与し、溶媒ＰＢＳ投与対照群にも同じ体積のＰＢＳを尾静脈注射により投与し、２８日間連続的に投与した。ｄｂ／ｍマウスを健常対象マウスとして投薬の処置はしなかった。２８日目にマウスを１６時間禁食し、２９日目に眼球を摘出して採血し、遠心分離して上澄み液を取り、血清レプチンの濃度の検出を行った。血清レプチン検出キット（南京建成生物工程研究所、品目番号Ｈ１７４）を用い、そのキットに記載の方法に従って上記血清におけるレプチンレベルを検出した。
その結果、プラスミノーゲン投与群マウスの血清レプチン濃度は溶媒ＰＢＳ投与対照群より明らかに低く、その差が統計学的にとても有意であり（＊＊は、Ｐ＜０．０１を表す
）、しかも溶媒ＰＢＳ投与対照群と比べ、プラスミノーゲン投与群の血清レプチンレベルは健常マウスにより近い（図９）。これは、プラスミノーゲンは２型糖尿病初期のマウスの血清レプチンレベルを有意に低めることができることを示している。
【０１３５】
［実施例３］
実施例３は、プラスミノーゲンが糖尿病後期マウスの血清レプチンの濃度を低めることに関するものである。
２３〜２５週齢のｄｂ／ｄｂオスマウス１３匹を取り、体重を測ってからマウスを体重によってランダムに二つの群に分け、溶媒ＰＢＳ投与対照群で７匹とプラスミノーゲン投与群で６匹とした。１日目からプラスミノーゲンまたはＰＢＳを投与し始めた。プラスミノーゲン投与群マウスに２ｍｇ／０．２ｍＬ／匹／日でヒトプラスミノーゲンを尾静脈注射により投与し、溶媒ＰＢＳ投与対照群にも同じ体積のＰＢＳを尾静脈注射により投与し、２８日間連続的に投与した。２８日目にマウスを１６時間禁食し、２９日目に眼球を摘出して採血し、遠心分離して上澄み液を取り、血清レプチンの濃度の検出を行った。血清レプチン検出キット（南京建成生物工程研究所、品目番号Ｈ１７４）を用い、そのキットに記載の方法に従って上記血清におけるレプチンレベルを検出した。
その結果、プラスミノーゲン投与群マウスの血清レプチン濃度は溶媒ＰＢＳ投与対照群より明らかに低く、その差が統計学的にとても有意である（＊＊は、Ｐ＜０．０１を表す）（図１０）。これは、プラスミノーゲンは２型糖尿病後期のマウスの血清レプチンレベルを低めることができることを示している。
【０１３６】
［実施例４］
実施例４は、プラスミノーゲンが１６週齢の高脂血症モデルマウスの肝臓における脂肪沈着を低減することに関するものである。
６週齢のオスＣ５７マウス１１匹に高脂肪高コレステロール食（南通トロフィー、ＴＰ２０３１）を１６週間給餌して高脂血症を誘発し［３７―３８］、このモデルを１６週齢高脂血症モデルとした。モデル化後のマウスに引き続き高脂肪高コレステロール食を与えた。投薬の３日前に各マウスから５０μＬの血液を採取して総コレステロール（Ｔ−ＣＨＯ）含有量を測定し、モデルマウスをＴ−ＣＨＯ含有量によってランダムに二つの群に分け、溶媒ＰＢＳ投与対照群で６匹とプラスミノーゲン投与群で５匹とした。投薬し始めた日を１日目とし、プラスミノーゲン投与群マウスに１ｍｇ／０．１ｍＬ／匹／日でヒトプラスミノーゲンを尾静脈注射により投与し、溶媒ＰＢＳ投与対照群にも同じ体積のＰＢＳを尾静脈注射により投与した。３０日間投与し、３１日目にマウスを殺処分して肝臓を取り、４％パラホルムアルデヒド固定液において２４〜４８時間固定を行った。それぞれ１５％、３０％スクロース中において４℃で終夜沈めさせ、ＯＣＴで包埋処理を行い、凍結切片の厚みは８μｍであり、オイルレッドＯで１５分間染色し、７５％アルコールで５秒間分別し、そしてヘマトキシリンで３０秒間核を染色し、グリセリンゼラチンに封入させた。切片を光学顕微鏡下で４００倍にて観察した。
オイルレッドＯ染色は、脂質沈着を表し、脂質沈着の程度を反映することができる［３９］。その結果、プラスミノーゲン投与群（図１１Ｂ）マウスの肝臓における脂肪沈着は溶媒ＰＢＳ投与対照群（図１１Ａ）より明らかに少なく、しかもその定量分析の差が統計学的に有意である（図１１Ｃ）。これは、プラスミノーゲンが高脂血症モデルマウスの肝臓における脂肪の沈着を低減できることを示している。
【０１３７】
［実施例５］
実施例５は、プラスミノーゲンが１６週齢の高脂血症モデルマウスの大動脈洞における脂質沈着を低減することに関するものである。
６週齢のオスＣ５７マウス１１匹に高脂肪高コレステロール食（南通トロフィー、ＴＰ２０３１）を１６週間給餌して高脂血症を誘発し［３７−３８］、このモデルを１６週齢高脂血症モデルとした。モデル化後のマウスに引き続き高脂肪高コレステロール食を与え
た。投薬の３日前に各マウスから５０μＬの血液を採取して総コレステロール（Ｔ−ＣＨＯ）含有量を測定し、モデルマウスをＴ−ＣＨＯ含有量によってランダムに二つの群に分け、溶媒ＰＢＳ投与対照群で６匹とプラスミノーゲン投与群で５匹とした。投薬し始めた日を１日目とし、プラスミノーゲン投与群マウスに１ｍｇ／０．１ｍＬ／匹／日でヒトプラスミノーゲンを尾静脈注射により投与し、溶媒ＰＢＳ投与対照群にも同じ体積のＰＢＳを尾静脈注射により投与した。３０日間投与し、３１日目にマウスを殺処分して心臓組織を取り、４％パラホルムアルデヒド固定液において２４〜４８時間固定を行った。それぞれ１５％、３０％スクロース中において４℃で終夜沈めさせ、ＯＣＴで包埋処理を行い、大動脈洞の凍結切片の厚みは８μｍであり、オイルレッドＯで１５分間染色し、７５％アルコールで５秒間分別し、そしてヘマトキシリンで３０秒間核を染色し、グリセリンゼラチンに封入させた。切片を光学顕微鏡下で４０倍（図１１Ａ、１１Ｂ）、２００倍（図１１Ｃ、１１Ｄ）にて観察した。
その結果、プラスミノーゲン投与群（図１２Ｂ、１２Ｄ）マウスの大動脈洞における脂肪沈着は溶媒ＰＢＳ投与対照群（図１２Ａ、１２Ｃ）より明らかに少なく、しかもその差が統計学的に有意である（図１２Ｅ）。これは、プラスミノーゲンが高脂血症モデルマウスの大動脈洞における脂質沈着を低減できることを示している。
【０１３８】
［実施例６］
実施例６は、プラスミノーゲンが３％コレステロール食により誘発された高脂血症モデルマウスの腎脂肪沈着を低減することに関するものである。
９週齢のオスＣ５７マウス１６匹に３％コレステロール高脂肪食（南通トロフィー）を４週間給餌して高脂血症を誘発し［３７−３８］、このモデルを３％コレステロール高脂血症モデルとし、モデル化後のマウスに引き続き３％コレステロール高脂肪食を与えた。また、同じ週齢のオスＣ５７マウスを５匹取ってブランク対照群とし、実験期間中に通常の維持食を給餌した。投薬の３日前に各マウスから５０μＬの血液を採取し、総コレステロールを測定し、モデルマウスを総コレステロール濃および体重によってランダムに二つの群に分け、プラスミノーゲン投与群と溶媒ＰＢＳ投与対照群とで、各群で８匹ずつとした。投薬し始めた日を１日目とし、プラスミノーゲン投与群マウスに１ｍｇ／０．１ｍＬ／匹／日でヒトプラスミノーゲンを尾静脈注射により投与し、溶媒ＰＢＳ投与対照群にも同じ体積のＰＢＳを尾静脈注射により投与し、投与期間は３０日間である。３１日目にマウスを殺処分して腎臓を取り、４％パラホルムアルデヒド固定液において２４〜４８時間固定を行った。それぞれ１５％、３０％スクロース中において４℃で終夜沈めさせ、ＯＣＴで包埋処理を行い、凍結切片の厚みは８μｍであり、オイルレッドＯで１５分間染色し、７５％アルコールで５秒間分別し、そしてヘマトキシリンで３０秒間核を染色し、グリセリンゼラチンに封入させた。切片を光学顕微鏡下で４００倍にて観察した。
その結果、プラスミノーゲン投与群（図１３Ｃ）マウスの腎脂肪沈着（矢印に表記される）は溶媒ＰＢＳ投与対照群（図１３Ｂ）より明らかに少なく、しかもその定量分析の差が統計学的に有意である（図１３Ｄ）。また、プラスミノーゲン投与群の脂質沈着レベルはブランク対照群マウス（図１３Ａ）に似ている。これは、プラスミノーゲンが３％コレステロール高脂血症モデルマウスの腎臓における脂肪の沈着を低減でき、それによって脂肪沈着による腎損傷を減少させることができることを示している。
【０１３９】
［実施例７］
実施例７は、プラスミノーゲンが３％コレステロール食により誘発された高脂血症モデルマウスの血清における低密度リポタンパク質コレステロールレベルを低めることに関するものである。
９週齢のオスＣ５７マウス１６匹に３％コレステロール高脂肪食（南通トロフィー）を４週間給餌して高脂血症を誘発し［３７−３８］、このモデルを３％コレステロール高脂血症モデルとし、モデル化後のマウスに引き続き３％コレステロール高脂肪食を与えた。投薬の３日前に各マウスから５０μＬの血液を採取し、総コレステロール（Ｔ−ＣＨＯ）
を測定し、モデルマウスを総コレステロール濃度および体重によってランダムに二つの群に分け、各群で８匹ずつとした。投薬し始めた日を１日目とし、プラスミノーゲン投与群マウスに１ｍｇ／０．１ｍＬ／匹／日でヒトプラスミノーゲンを尾静脈注射により投与し、溶媒ＰＢＳ投与対照群にも同じ体積のＰＢＳを尾静脈注射により投与し、２０日間投与した。２０日目にマウスを１６時間禁食した後、２１日目に眼窩静脈叢から５０μＬ採血して遠心分離して上澄み液を取り、低密度リポタンパク質コレステロール検出キット（南京建成生物工程研究所、品目番号Ａ１１３−１）を用いて低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）を測定した。
その結果、プラスミノーゲン投与群マウスの（ＬＤＬ−Ｃ）濃度は溶媒ＰＢＳ投与対照群より明らかに低く、しかもその差が統計学的に有意である（図１４）。これは、プラスミノーゲンが高脂血症モデルマウスの血清における低密度ポリタンパク質コレステロール含有量を低めることができることを示している。
【０１４０】
［実施例８］
実施例８は、プラスミノーゲンが３％コレステロール食により誘発された高脂血症モデルマウスのアテローム性動脈硬化症の形成リスクを低めることに関するものである。
９週齢のオスＣ５７マウス１６匹に３％コレステロール高脂肪食（南通トロフィー）を４週間給餌して高脂血症を誘発し［３７−３８］、このモデルを３％コレステロール高脂血症モデルとし、モデル化後のマウスに引き続き３％コレステロール高脂肪食を与えた。投薬の３日前に各マウスから５０μＬの血液を採取し、総コレステロール（Ｔ−ＣＨＯ）を測定し、モデルマウスを総コレステロール濃度および体重によってランダムに二つの群に分け、各群で８匹ずつとした。投薬し始めた日を１日目とし、プラスミノーゲン投与群マウスに１ｍｇ／０．１ｍＬ／匹／日でヒトプラスミノーゲンを尾静脈注射により投与し、溶媒ＰＢＳ投与対照群にも同じ体積のＰＢＳを尾静脈注射により投与した。２０日目に投薬した後マウスを禁食し、１６時間禁食した後、２１日目に眼窩静脈叢から５０μＬ採血して遠心分離して上澄み液を取り、総コレステロール検出キット（南京建成生物工程研究所、品目番号Ａ１１１−１）を用いて総コレステロール含有量を測定し、高密度リポタンパク質コレステロール検出キット（南京建成生物工程研究所、品目番号Ａ１１１−２）を用いて高密度リポタンパク質コレステロール（ＨＤＬ−Ｃ）含有量を測定した。
アテローム性動脈硬化指数は、臨床上でアテローム性動脈硬化症を予測するための総合的指標であり、それが冠状動脈性心臓病のリスクを見積もる面における臨床的意義は、総コレステロール、トリグリセリド、高密度リポタンパク質および低密度リポタンパク質のいずれか一つより大きいと考えられている［４０］。アテローム性動脈硬化指数＝（Ｔ−ＣＨＯ−ＨＤＬ−Ｃ）／ＨＤＬ−Ｃ。
計算した結果、プラスミノーゲン投与群マウスのアテローム性動脈硬化指数は溶媒ＰＢＳ投与対照群より明らかに低く、しかもその差が統計学的にとても有意である（図１５）。これは、プラスミノーゲンが高脂血症モデルマウスのアテローム性動脈硬化症のリスクを低下させることができることを示している。
【０１４１】
［実施例９］
実施例９は、プラスミノーゲンがＡｐｏＥアテローム性動脈硬化症マウスの血清の総コレステロール含有量を低めることに関するものである。
６週齢のオスＡｐｏＥマウス１３匹に高脂肪高コレステロール食（南通トロフィー、ＴＰ２０３１）を１６週間給餌してアテローム性動脈硬化症を誘発した［４１−４２］。モデル化後のマウスに引き続き高脂肪高コレステロール食を与えた。投薬の３日前に各マウスから５０μＬの血液を採取して総コレステロール（Ｔ−ＣＨＯ）含有量を測定し、モデルマウスをＴ−ＣＨＯ含有量によってランダムに二つの群に分け、溶媒ＰＢＳ投与対照群で７匹とプラスミノーゲン投与群で６匹とした。投薬し始めた日を１日目とし、プラスミノーゲン投与群マウスに１ｍｇ／０．１ｍＬ／匹／日でヒトプラスミノーゲンを尾静脈注射により投与し、溶媒ＰＢＳ投与対照群にも同じ体積のＰＢＳを尾静脈注射により投与し
、３０日間投与した。３０日目にマウスを１６時間禁食し、３１日目に眼球を摘出して採血し、遠心分離して上澄み液を取り、総コレステロール検出キット（南京建成生物工程研究所、品目番号Ａ１１１−１）を用いて総コレステロールを測定した。
測定した結果、プラスミノーゲン投与群マウスの総コレステロール濃度は溶媒ＰＢＳ投与対照群より明らかに低く、しかもその差が統計学的に有意である（Ｐ＝０．０１４）（図１６）。これは、プラスミノーゲンがＡｐｏＥアテローム性動脈硬化症モデルマウスの血清における総コレステロール含有量を低下させ、アテローム性動脈硬化症の血脂障害を改善できることを示している。
【０１４２】
［実施例１０］
実施例１０は、プラスミノーゲンがＡｐｏＥアテローム性動脈硬化症マウスの血清のトリグリセリド含有量を低めることに関するものである。
６週齢のオスＡｐｏＥマウス１３匹に高脂肪高コレステロール食（南通トロフィー、ＴＰ２０３１）を１６週間給餌してアテローム性動脈硬化症を誘発した［４１−４２］。モデル化後のマウスに引き続き高脂肪高コレステロール食を与えた。投薬の３日前に各マウスから５０μＬの血液を採取して総コレステロール（Ｔ−ＣＨＯ）含有量を測定し、モデルマウスをＴ−ＣＨＯ含有量によってランダムに二つの群に分け、溶媒ＰＢＳ投与対照群で７匹とプラスミノーゲン投与群で６匹とした。投薬し始めた日を１日目とし、プラスミノーゲン投与群マウスに１ｍｇ／０．１ｍＬ／匹／日でヒトプラスミノーゲンを尾静脈注射により投与し、溶媒ＰＢＳ投与対照群にも同じ体積のＰＢＳを尾静脈注射により投与し、３０日間投与した。３０日目にマウスを１６時間禁食し、３１日目に眼球を摘出して採血し、遠心分離して上澄み液を取り、トリグリセリド検出キット（南京建成生物工程研究所、品目番号Ａ１１０−１）を用いてトリグリセリドを測定した。
測定した結果、プラスミノーゲン投与群マウスのトリグリセリド濃度は溶媒ＰＢＳ投与対照群より明らかに低く、しかもその差が統計学的に有意である（Ｐ＝０．０１３）（図１７）。これは、プラスミノーゲンがＡｐｏＥアテローム性動脈硬化症モデルマウスの血清におけるトリグリセリド含有量を低下させ、アテローム性動脈硬化症の血脂障害を改善できることを示している。
【０１４３】
［実施例１１］
実施例１１は、プラスミノーゲンがＡｐｏＥアテローム性動脈硬化症マウスの血清の低密度リポタンパク質コレステロール含有量を低めることに関するものである。
６週齢のオスＡｐｏＥマウス１３匹に高脂肪高コレステロール食（南通トロフィー、ＴＰ２０３１）を１６週間給餌してアテローム性動脈硬化症を誘発した［４１−４２］。モデル化後のマウスに引き続き高脂肪高コレステロール食を与えた。投薬の３日前に各マウスから５０μＬの血液を採取して総コレステロール（Ｔ−ＣＨＯ）含有量を測定し、モデルマウスをＴ−ＣＨＯ含有量によってランダムに二つの群に分け、溶媒ＰＢＳ投与対照群で７匹とプラスミノーゲン投与群で６匹とした。投薬し始めた日を１日目とし、プラスミノーゲン投与群マウスに１ｍｇ／０．１ｍＬ／匹／日でヒトプラスミノーゲンを尾静脈注射により投与し、溶媒ＰＢＳ投与対照群にも同じ体積のＰＢＳを尾静脈注射により投与し、３０日間投与した。３０日目にマウスを１６時間禁食し、３１日目に眼球を摘出して採血し、遠心分離して上澄み液を取り、低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）検出キット（南京建成生物工程研究所、品目番号Ａ１１３−１）を用いてＬＤＬ−Ｃを測定した。
測定した結果、プラスミノーゲン投与群マウスのＬＤＬ−Ｃ濃度は溶媒ＰＢＳ投与対照群より明らかに低く、しかもその差が統計学的に有意である（Ｐ＝０．０１７）（図１８）。これは、プラスミノーゲンがＡｐｏＥアテローム性動脈硬化症モデルマウスの血清における低密度リポタンパク質コレステロール含有量を低下させ、アテローム性動脈硬化症の血脂障害を改善できることを示している。
【０１４４】
［実施例１２］
実施例１２は、プラスミノーゲンが肥満モデルマウスの視床下部レプチン受容体の発現を改善することに関するものである。
８週齢のＣ５７オスマウス１４匹を取って体重によってランダムに二つの群に分け、ブランク対照群で４匹とモデル群で１０匹とした。ブランク対照群マウスに通常の維持食を与え、モデル群マウスに脂肪分４５％カロリー比高脂肪食（ＴＰ２３０００、南通トロフィー飼料科技有限公司）を１２週間給餌して肥満モデルを建築した［１］。１２週間後、モデル群マウスの体重を測って体重によってさらにランダムに二つの群に分け、プラスミノーゲン投与群と溶媒ＰＢＳ投与対照群とで各群５匹ずつとした。プラスミノーゲン投与群マウスに１ｍｇ／０．１ｍＬ／匹／日でヒトプラスミノーゲンを尾静脈注射により投与し、溶媒ＰＢＳ投与対照群にも同じ体積のＰＢＳを尾静脈注射により投与し、ブランク対照群に対しては何の液体も注射しなかった。２８日間連続的に投与し、投与期間中にマウスにモデル建築用食を引き続き与えた。２９日目にマウスを殺処分して視床下部を取り、４％パラホルムアルデヒド固定液において２４〜４８時間固定を行った。固定後の組織をアルコールで段階的に脱水させおよびキシレンで透徹化処理した後にパラフィンで包埋処理を行った。組織切片の厚みは４μｍであり、切片を脱パラフィンさせて浸水してから１回水で洗った。クエン酸で３０分間修復し、室温で１０分間冷却してから水で柔らかく流した。３％過酸化水素水で１５分間インキュベーションし、ＰＡＰマーカーで組織を丸で囲んだ。１０％のヒツジ血清液（Ｖｅｃｔｏｒ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，ＵＳＡ）で１時間ブロッキングした；時間になった後、ヒツジ血清液を廃棄した。抗レプチン受容体抗体（Ａｂｃａｍ）で４℃で終夜インキュベーションし、ＰＢＳで２回洗い、毎回５分間であった。ヤギ抗ウサギＩｇＧ（ＨＲＰ）抗体（Ａｂｃａｍ）二次抗体を室温で１時間インキュベーションし、ＰＢＳで２回洗い、毎回５分間であった。ＤＡＢキット（Ｖｅｃｔｏｒ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，ＵＳＡ）で呈色させ、３回水洗いした後にヘマトキシリンで３０秒複染色して、流水で５分間ブルーイングし、そしてＰＢＳで１回洗った。段階的に脱水させて透徹にし、封入させた後、切片を光学顕微鏡下で４０倍（図Ａ−Ｃ）、２００倍（図Ｅ−Ｆ）にて観察した。
レプチン受容体の主な生理機能は、レプチンと結合し、レプチンが体内のエネルギーバランスを調節し、脂肪貯蔵、生殖活動などの生理作用を発揮し、レプチンの自己分泌調節に関与することである。異なるタイプのレプチン受容体は中枢および外周組織において選択的に発現される［４５−４７］。
その結果、溶媒ＰＢＳ投与対照群（図１９Ｂ、Ｅ）マウスの視床下部レプチン受容体の発現はブランク対照群（図１９Ａ、Ｄ）より明らかに多いのに対して、プラスミノーゲン投与群（図１９Ｃ、Ｆ）マウスの視床下部レプチン受容体の発現は溶媒ＰＢＳ投与対照群より明らかに少なく、ブランク対照群のレベルに近く、しかもその差が統計学的に有意である（Ｐ＝０．０１）（図１９Ｇ）。これは、プラスミノーゲンが肥満マウスの視床下部レプチン受容体の発現を有意に低めることができることを示している。    
［参考文献］
[1] http: / /www． ama-assn． org /ama /pub /news /news /2013 /2013-06-18-new-ama-policies-annual-meeting［EB/OL］( 2013 − 06 − 18) ．page．
[2] http: / /www． who． int /mediacentre/factsheets/fs311/en/［EB/OL］( 2015 −01 −26) ．
[3] HOU X，LU J，WENG J，et al． Impact of waist circumference and body mass index on risk of cardiometabolic disorder and cardiovascular disease in Chinese adults: a national diabetes and metabolic disorders survey ［J］． PLoS One，2013，8 ( 3 ) :e57319．
[4] LI S，XIAO J，JI L，et al． BMI and waist circumference are associated with impaired glucose metabolism and type 2 diabetes in normal weight Chinese adults［J］． J Diabet Complicat，2014，28( 4) : 470 − 476．
[5] Christensen R,Kristensen PK,et al.Efficacy and safety of the weightloss drug
rimonabant:a meta-analysis of randomised trials [J]. Lancet,2007,370(9600):1706-1713.
[6] James WP, Caterson ID,et al. Effect of sibutramine on cardiovascular outcomes in overweight and obese subjects [J].N Engl J Med, 2010,363(10):905-917.
[7] Kopelman1 P,Groot Gde H,et al.Weight Loss,HbA1c Reduction,and Tolerability of Cetilistat in a Randomized,Placebo-controlled Phase 2 Trial in Obese Diabetics:Comparison With Orlistat (Xenical) [J]. Obesity,2010,18(1):108-115.
[8] APOVIAN CM，AＲONNE LJ，BESSESEN DH，et al． Pharmacological management of obesity: an endocrine Society clinical practice guideline［J］． J Clin Endocrinol Metab，2015，100( 2) :342 − 362．
[9] Alexander CM and Werb, Z. (1991). Extracellular matrix degradation. In Cell Biology of Extracellular Matrix, Hay ED, ed. (New York: Plenum Press), pp. 255-302.
[10] Werb, Z., Mainardi, C.L., Vater, C.A., and Harris, E.D., Jr. (1977). Endogenous activiation of latent collagenase by rheumatoid synovial cells. Evidence for a role of plasminogen activator. N. Engl. J. Med. 296, 1017-1023.
[11] He, C.S., Wilhelm, S.M., Pentland, A.P., Marmer, B.L., Grant, G.A., Eisen, A.Z., and Goldberg, G.I. (1989). Tissue cooperation in a proteolytic cascade activating human interstitial collagenase. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A 86, 2632-2636.
[12] Stoppelli, M.P., Corti, A., Soffientini, A., Cassani, G., Blasi, F., and Assoian, R.K. (1985). Differentiation-enhanced binding of the amino-terminal fragment of human urokinase plasminogen activator to a specific receptor on U937 monocytes. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A 82, 4939-4943.
[13]Vassalli, J.D., Baccino, D., and Belin, D. (1985). A cellular binding site for the Mr 55, 000 form of the human plasminogen activator, urokinase. J. Cell Biol. 100, 86-92. 
[14] Wiman, B. and Wallen, P. (1975). Structural relationship between "glutamic acid" and "lysine" forms of human plasminogen and their interaction with the NH2-terminal activation peptide as studied by affinity chromatography. Eur. J. Biochem. 50, 489-494.
[15] Saksela, O. and Rifkin, D.B. (1988). Cell-associated plasminogen activation: regulation and physiological functions. Annu. Rev. Cell Biol. 4, 93-126.
[16] Raum, D., Marcus, D., Alper, C.A., Levey, R., Taylor, P.D., and Starzl, T.E. (1980). Synthesis of human plasminogen by the liver. Science 208, 1036-1037.
[17] Wallen P (1980). Biochemistry of plasminogen. In Fibrinolysis, Kline DL and
Reddy KKN, eds. (Florida: CRC)
[18] Sottrup-Jensen, L., Zajdel, M., Claeys, H., Petersen, T.E., and Magnusson, S. (1975). Amino-acid sequence of activation cleavage site in plasminogen: homology with "pro" part of prothrombin. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A 72, 2577-2581.
[19] Collen, D. and Lijnen, H.R. (1991). Basic and clinical aspects of fibrinolysis and thrombolysis. Blood 78, 3114-3124.
[20] Alexander, C.M. and Werb, Z. (1989). Proteinases and extracellular matrix remodeling. Curr. Opin. Cell Biol. 1, 974-982. 
[21] Mignatti, P. and Rifkin, D.B. (1993). Biology and biochemistry of proteinases in tumor invasion. Physiol Rev. 73, 161-195.
[22] Collen, D. (2001). Ham-Wasserman lecture: role of the plasminogen system in
fibrin-homeostasis and tissue remodeling. Hematology. (Am. Soc. Hematol. Educ. Program. ) 1-9.
[23] Rifkin, D.B., Moscatelli, D., Bizik, J., Quarto, N., Blei, F., Dennis, P., Flaumenhaft, R., and Mignatti, P. (1990). Growth factor control of extracellular
proteolysis. Cell Differ. Dev. 32, 313-318. 
[24] Andreasen, P.A., Kjoller, L., Christensen, L., and Duffy, M.J. (1997). The urokinase-type plasminogen activator system in cancer metastasis: a review. Int.
J. Cancer 72, 1-22. 
[25] Rifkin, D.B., Mazzieri, R., Munger, J.S., Noguera, I., and Sung, J. (1999).
Proteolytic control of growth factor availability. APMIS 107, 80-85.
[26] Marder V J, Novokhatny V. Direct fibrinolytic agents: biochemical attributes, preclinical foundation and clinical potential [J]. Journal of Thrombosis and Haemostasis, 2010, 8(3): 433-444.
[27] Hunt J A, Petteway Jr S R, Scuderi P, et al. Simplified recombinant plasmin: production and fu-nctional comparison of a novel thrombolytic molecule with plasma-derived plasmin [J]. Thromb Haemost, 2008, 100(3): 413-419.
[28] Sottrup-Jensen L, Claeys H, Zajdel M, et al. The primary structure of human
plasminogen: Isolation of two lysine-binding fragments and one “mini”-plasminogen (MW, 38, 000) by elastase-catalyzed-specific limited proteolysis [J]. Progress in chemical fibrinolysis and thrombolysis, 1978, 3: 191-209.
[29] Nagai N, Demarsin E, Van Hoef B, et al. Recombinant human microplasmin: production and potential therapeutic properties [J]. Journal of Thrombosis and Haemostasis, 2003, 1(2): 307-313.
[30] Eun Young Lee ,Yeon Wook Kim,Anti-obesity effects of KR-66195, a synthetic DPP-IVinhibitor, in diet-induced obese mice and obese-diabetic ob/ob mice,Metabolism chlinical and experimental 63(2014)793-799
[31] Yang Z, Li W, He C. Potential effect of chronic Helicobacter pylori infection on glucose metabolism of Mongolian gerbils. World J Gastroenterol.  2015 Nov 28;21(44):12593-604.
[32] Hu Y, Rosa GJ, Gianola D. A GWAS assessment of the contribution of genomic imprinting to the variation of body mass index in mice. BMC Genomics. 2015 Aug 5;16:576.
[33] Goossens GH. The role of adipose tissue dysfunction in the pathogenesis of obesity-related insulin resistance. Physiol Behav. 2008 May 23;94(2):206-18.
[34]Sahu A. Leptin signaling in the hypothalamus: emphasis on energy homeostasis
and leptin resistance. Front Neuroendocrinol. 2003 Dec;24(4):225-53.
[35] Harris RB, Mitchell TD, Yan X et al.Metabolic responses to leptin in obese db/db mice are strain dependent. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 2001 Jul;281(1):R115-32.
[36] Ennequin G1, Boisseau N1, Caillaud K et al. Neuregulin 1 affects leptin levels, food intake and weight gain in normal-weight, but not obese, db/db mice. Diabetes Metab. 2015 Apr;41(2):168-72.
[37] Dominika Nackiewicz, Paromita Dey, Barbara Szczerba et al. Inhibitor of differentiation 3, a transcription factor regulates hyperlipidemia associated kidney disease. Nephron Exp Nephrol. 2014 ; 126(3): 141-147.
[38] Ming Gu1, Yu Zhang., Shengjie Fan et al. Extracts of Rhizoma Polygonati Odorati Prevent High-Fat Diet-Induced Metabolic Disorders in C57BL/6 Mice. PLoS ONE
8(11): e81724.
[39] Siobhan M. Craige, PhD, Shashi Kant et al. Endothelial NADPH oxidase 4 protects ApoE-/- mice from atherosclerotic lesions. Free Radic Biol Med. 2015 December ; 89: 1-7.
[40] Sungwon Lee, Youngjoo Lee, Jiyeon Kim et al. Atorvastatin and rosuvastatin 
improve physiological parameters and alleviate immune dysfunction in metabolic disorders. Biochem Biophys Res Commun. 2016 Sep 23;478(3):1242-7.
[41] Yutaka Nakashima, Andrew S. Plump, Elaine W. Raines et al. Arterioscler Thromb. 1994 Jan;14(1):133-40.
[42] Yvonne Nitschke , Gabriele Weissen-Plenz , Robert Terkeltaub et al. Npp1 promotes atherosclerosis in ApoE knockout mice. J. Cell. Mol. Med. Vol 15, No 11, 2011 pp. 2273-2283.
[43] Duan DM, Wu S, Hsu LA et al. Associations between TRPV4 genotypes and body mass index in Taiwanese subjects. Mol Genet Genomics. 2015 Aug;290(4):1357-65.
[44] Goossens GH. The role of adipose tissue dysfunction in the pathogenesis of obesity-related insulin resistance. Physiol Behav. 2008 May 23;94(2):206-18.
[45]Shimizu H1, Shimomura K, Negishi M et al. Circulating concentrations of soluble leptin receptor: influence of menstrual cycle and diet therapy. Nutrition. 2002 Apr;18(4):309-12.
[46]Kastin AJ1, Pan W, Maness LM et al. Decreased transport of leptin across the
blood-brain barrier in rats lacking the short form of the leptin receptor. Peptides. 1999 Dec;20(12):1449-53.
[47]Munzberg H1, Flier JS, Bjorbaek C. Region-specific leptin resistance within the hypothalamus of diet-induced obese mice. Endocrinology. 2004 Nov;145(11):4880-9. Epub 2004 Jul 22.
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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