(57)【要約】  セレンテラジンアナログ、当該アナログを作製する方法、当該アナログを含むキット、及びルシフェラーゼベースアッセイにおける発光の検出のために当該化合物を使用する方法が記載されている。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
2020510617.tif 000133
（Ｉ）
［式中、
Ｘ及びＹは、独立して、不在、ヒドロキシ、アミノ、−ＣＯＯＲ2、−ＳＯ2−ＯＲ3、−ＰＯ（ＯＲ4）（ＯＲ5）、または−Ｏ−（ＣＲ1aＲ1b）m−Ｚであり、
Ｒ1は、任意に置換されたアリール、任意に置換されたヘテロアリール、任意に置換された複素環、または任意に置換されたシクロアルキルであり、ただし、Ｘ及びＹの両方が不在である場合、Ｒ1が少なくとも−Ｑ−Ｌ−Ｚで置換されていることを条件とし、
各出現におけるＺは、独立して、−ＣＯＯＲ2、−ＳＯ2−ＯＲ3、−ＰＯ（ＯＲ4）（ＯＲ5）、ハロゲン、−ＮＲ6Ｒ7、または−ＮＲ8−ＣＯ−Ｒ9であり、
Ｑは、−Ｏ−、−ＮＲQ−、−ＮＲQ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＲQ−、−Ｏ−ＣＯ−ＮＲQ−、または−ＮＲQ−ＣＯ−Ｏ−であり、
Ｌは、−（ＣＲ1aＲ1b）m−または−（ＣＲ1xＲ1y−ＣＲ1xＲ1y−Ｏ）t1−（ＣＲ1xＲ1y）t2−Ｑ1−であり、式中、Ｑ1は、不在、−Ｏ−、または−ＮＲQ1−であり、
各出現におけるＲ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ8、及びＲ9は、独立して、水素、任意に置換されたＣ1−Ｃ8アルキル、任意に置換されたアリール、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロアリール、または任意に置換された複素環であり、
各出現におけるＲ6及びＲ7は、独立して、水素、任意に置換されたＣ1−Ｃ8アルキル、任意に置換されたアリール、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロアリール、または任意に置換された複素環であるか、あるいはＲ6及びＲ7は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、任意に置換された環を一緒に形成し、
各出現におけるＲ1a、Ｒ1b、ＲQ、ＲQ1、Ｒ1x、及びＲ1yは、独立して、水素、Ｃ1−Ｃ4アルキル、またはＣ1−Ｃ4ハロアルキルであり、
ｑは、０、１、または２であり、
各出現におけるｍは、独立して、１〜１２であり、
ｔ１は、１〜１０であり、
ｔ２は、０〜５である］
の化合物またはその互変異性体もしくは薬学的に許容される塩。
【請求項２】
Ｒ1が、少なくとも−Ｑ−Ｌ−Ｚで置換されており、式中、
Ｑが、−Ｏ−、−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−、−Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−、または−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ−であり、
Ｌが、−（ＣＲ1aＲ1b）m−である、
請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ1が、少なくとも−Ｑ−Ｌ−Ｚで置換されており、式中、
Ｑが、−Ｏ−であり、
Ｌが、−（ＣＲ1aＲ1b）m−である、
請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ1が、少なくとも−Ｑ−Ｌ−Ｚで置換されており、式中、
Ｌが、−（ＣＲ1xＲ1y−ＣＲ1xＲ1y−Ｏ）t1−（ＣＲ1xＲ1y）t2−Ｑ1−である、
請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ1が、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の置換基で置換されており、前記置換基の各々が独立して、ハロゲン、＝Ｏ、＝Ｓ、シアノ、ニトロ、フルオロアルキル、アルコキシフルオロアルキル、フルオロアルコキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ヘテロアルキル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、複素環、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリールアルキル、アリールアルキル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルキレン、アリールオキシ、フェノキシ、ベンジルオキシ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アシルアミノ、アミノアルキル、アリールアミノ、スルホニルアミノ、スルフィニルアミノ、スルホニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アミノスルホニル、スルフィニル、−ＣＯＯＨ、ケトン、アミド、カルバメート、シリル、置換されたシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル、アルキルスルファニル、スルファニル、アシル、及び−Ｑ−Ｌ−Ｚからなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ1が、０、１、２、３、または４個の置換基で任意に置換されたフェニルであり、前記置換基の各々が独立して、ハロゲン、＝Ｏ、＝Ｓ、シアノ、ニトロ、フルオロアルキル、アルコキシフルオロアルキル、フルオロアルコキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ヘテロアルキル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、複素環、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリールアルキル、アリールアルキル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルキレン、アリールオキシ、フェノキシ、ベンジルオキシ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アシルアミノ、アミノアルキル、アリールアミノ、スルホニルアミノ、スルフィニルアミノ、スルホニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アミノスルホニル、スルフィニル、−ＣＯＯＨ、ケトン、アミド、カルバメート、シリル、置換されたシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル、アルキルスルファニル、スルファニル、アシル、及び−Ｑ−Ｌ−Ｚからなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ1が、０、１、２、または３個の置換基で任意に置換されたフリルであり、前記置換基の各々が独立して、ハロゲン、＝Ｏ、＝Ｓ、シアノ、ニトロ、フルオロアルキル、アルコキシフルオロアルキル、フルオロアルコキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ヘテロアルキル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、複素環、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリールアルキル、アリールアルキル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルキレン、アリールオキシ、フェノキシ、ベンジルオキシ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アシルアミノ、アミノアルキル、アリールアミノ、スルホニルアミノ、スルフィニルアミノ、スルホニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アミノスルホニル、スルフィニル、−ＣＯＯＨ、ケトン、アミド、カルバメート、シリル、置換されたシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル、アルキルスルファニル、スルファニル、アシル、及び−Ｑ−Ｌ−Ｚからなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ1が、少なくとも１個の−Ｑ−Ｌ−Ｚで任意に置換されたフェニルまたはフリルであり、式中、Ｑが−Ｏ−であり、Ｌが−（ＣＲ1aＲ1b）m−である、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
ｑが１である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１０】
式（Ｉ−ａ）
2020510617.tif 000134
（Ｉ−ａ）
［式中、
Ｒ1cは、アルキル、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ハロアルキル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アミノ、及び−ＣＯＯＨからなる群から選択され、
ｎは、０、１、２、３、または４であり、
Ｘ、Ｙ、Ｒ1a、Ｒ1b、ｍ、及びＺは、請求項１で定義されている通りである］
を有する、請求項１に記載の化合物またはその互変異性体もしくは薬学的に許容される塩。
【請求項１１】
Ｘ及びＹのうちの少なくとも１つが不在である、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ1cが、ハロゲンである、請求項１０または請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
ｍが、３、４、５、６、７、８、９、または１０である、請求項１０〜１２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｚが、−ＣＯＯＲ2、−ＳＯ2−ＯＲ3、もしくは−ＰＯ（ＯＲ4）（ＯＲ5）、またはその薬学的に許容される塩である、請求項１０〜１３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｚが、−ＮＲ6Ｒ7もしくは−ＮＲ8−ＣＯ−Ｒ9、またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
Ｒ9は、−（ＣＲ9aＲ9b−ＮＨ−ＣＯ）u−Ｒ10であり、
各出現におけるＲ9a及びＲ9bは、独立して、水素、または−ＣＯＯＲ9cで任意に置換されたＣ1−Ｃ4アルキルであり、
各出現におけるＲ9cは、独立して、水素またはＣ1−Ｃ4アルキルであり、
Ｒ10は、任意に置換されたＣ1−Ｃ8アルキルであり、
ｕは、０〜１０である、
請求項１０〜１３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｚが、−ＮＲ8−ＣＯ−Ｒ9、またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
Ｒ8は、水素であり、
Ｒ9は、
2020510617.tif 000135
である、
請求項１５に記載の化合物。
【請求項１７】
式（Ｉ−ｂ）
2020510617.tif 000136
（Ｉ−ｂ）
［式中、
Ｒ1dは、アルキル、ハロゲン、シアノ、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、及び−ＣＯＯＨからなる群から選択され、
ｖは、０、１、２、または３であり、
Ｘ及びＹは、各々が独立して、不在、−ＣＯＯＲ2、−ＳＯ2−ＯＲ3、−ＰＯ（ＯＲ4）（ＯＲ5）、または−Ｏ−（ＣＲ1aＲ1b）m−Ｚであり、
Ｘ及びＹのうちの少なくとも１つが存在し、
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ1a、Ｒ1b、ｍ、及びＺは、請求項１で定義されている通りである］
を有する、請求項１に記載の化合物またはその互変異性体もしくは薬学的に許容される塩。
【請求項１８】
Ｘが、−ＣＯＯＲ2、−ＳＯ2−ＯＲ3、−ＰＯ（ＯＲ4）（ＯＲ5）、または−Ｏ−（ＣＲ1aＲ1b）m−Ｚであり、
Ｙが不在である、
請求項１７に記載の化合物。
【請求項１９】
Ｘが不在であり、
Ｙが、−ＣＯＯＲ2、−ＳＯ2−ＯＲ3、または−ＰＯ（ＯＲ4）（ＯＲ5）、または−Ｏ−（ＣＲ1aＲ1b）m−Ｚである、
請求項１７に記載の化合物。
【請求項２０】
以下の化合物：
６−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２−クロロフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸２，２，２−トリクロロエチル、
６−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）フェノキシ）ヘキサン酸ｔｅｒｔ−ブチル、
６−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）フェノキシ）ヘキサン酸、
８−ベンジル−２−（３−（（６−ブロモヘキシル）オキシ）ベンジル）−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン、
６−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）フェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸ナトリウム、
４−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）フェノキシ）ブタン酸ｔｅｒｔ−ブチル、
３−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）フェノキシ）プロパン−１−スルホン酸ナトリウム、
４−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）フェノキシ）ブタン酸、
８−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）フェノキシ）オクタン酸ｔｅｒｔ−ブチル、
８−ベンジル−２−（４−（（６−ブロモヘキシル）オキシ）−３−クロロベンジル）−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン、
８−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）フェノキシ）オクタン酸、
６−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２−クロロフェノキシ）ヘキサン酸ｔｅｒｔ−ブチル、
６−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２−クロロフェノキシ）ヘキサン酸、
６−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２−クロロフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸ナトリウム、
（Ｓ）−３−アセトアミド−４−（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（６−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）フェノキシ）ヘキシル）アミノ）−３−カルボキシ−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−カルボキシ−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−４−オキソブタン酸、
８−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２−クロロフェノキシ）オクタン−１−スルホン酸ナトリウム、
１０−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２−クロロフェノキシ）デカン−１−スルホン酸ナトリウム、
６−（５−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２−クロロフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸ナトリウム、
６−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２−フルオロフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸ナトリウム、
６−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２，６−ジフルオロフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸ナトリウム、
２−（４−（（６−アミノヘキシル）オキシ）−３−フルオロベンジル）−８−ベンジル−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン、
６−（４−（（８−ベンジル−６−（３−ヒドロキシフェニル）−３−オキソ−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２−クロロフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸、
（Ｓ）−３−アセトアミド−４−（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（６−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２−フルオロフェノキシ）ヘキシル）アミノ）−３−カルボキシ−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−カルボキシ−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−４−オキソブタン酸、
３−（８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−３−オキソ−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）安息香酸ｔｅｒｔ−ブチル、
３−（８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−３−オキソ−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）安息香酸、
４−（８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−３−オキソ−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）安息香酸、及び
６−（４−（（６−アミノヘキシル）オキシ）フェニル）−８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン
からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項２１】
請求項１〜２０のいずれかに記載の化合物を含む、キット。
【請求項２２】
請求項１〜２０のいずれか１項に記載の化合物を含む、生物発光共鳴エネルギー転移（ＢＲＥＴ）システム。
【請求項２３】
試料中の酵素を検出する方法であって、
（ａ）前記試料を、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の化合物と接触させる工程と、
（ｂ）前記試料中の発光を検出する工程と
を含む、方法。
【請求項２４】
試料中の発光を検出する方法であって、
（ａ）試料を、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の化合物と接触させる工程と、
（ｂ）前記試料中にセレンテラジン利用ルシフェラーゼが存在しない場合、前記試料をセレンテラジン利用ルシフェラーゼに接触させる工程と、
（ｃ）前記試料中の発光を検出する工程と
を含む、方法。
【請求項２５】
前記試料が、生細胞を含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
前記試料が、セレンテラジン利用ルシフェラーゼを含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２７】
試料中の細胞死を検出する方法であって、
（ａ）試料を、細胞死を誘導する化合物と接触させる工程と、
（ｂ）前記試料を、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の化合物と接触させる工程と、
（ｃ）前記試料中の発光を検出する工程と
を含み、前記試料が、セレンテラジン利用ルシフェラーゼを発現する細胞を含む、方法。
【請求項２８】
試料中の生物発光酵素の分泌を検出する方法であって、
（ａ）前記試料を、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の化合物と接触させる工程と、
（ｂ）前記試料中の発光を検出する工程と
を含み、前記試料が、分泌可能な生物発光酵素を発現する細胞を含む、方法。
【請求項２９】
遺伝子導入動物中の発光を検出する方法であって、
（ａ）請求項１〜２０のいずれか１項に記載の化合物を、遺伝子導入動物に投与する工程と、
（ｂ）発光を検出する工程と
を含み、前記遺伝子導入動物が、セレンテラジン利用ルシフェラーゼを発現する、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１６年１２月１日に出願された米国仮特許出願第６２／４２８，９９７号及び２０１７年３月２８日に出願された米国仮特許出願第６２／４７７，５１２号の優先権を主張し、これらの出願の内容全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【０００２】
技術分野
本開示は、セレンテラジンアナログと、セレンテラジンアナログを作製する方法と、ルシフェラーゼベースアッセイにおいてセレンテラジンアナログを使用する方法とに関する。
【背景技術】
【０００３】
生物発光アッセイは、細胞生理学の研究、特に遺伝子発現に関連するプロセスの研究において、広く使用されている。特に、ルシフェラーゼレポーター酵素は、当該分野において非常に価値のあるツールであり、現在に至るまで、生物発光アッセイにおいて有用であり得る小型かつ環境的に非感受性のルシフェラーゼを取得するために、懸命にタンパク質工学が駆使されてきた。全細胞のバイオセンサー測定、高スループットスクリーニングを通じての創薬、及びｉｎ  ｖｉｖｏイメージングを可能にする複数の効率的なルシフェラーゼレポーターが存在する。このｉｎ  ｖｉｖｏイメージングは、生細胞、アポトーシス、及び細胞生存率におけるタンパク質間相互作用の研究も可能にする。セレンテラジン及びセレンテラジンアナログを基質として使用するルシフェラーゼは、全細胞の用途におけるその明るさと許容性ゆえに、最も広く使用されている系に含まれる。
【発明の概要】
【０００４】
細胞表面の生物発光イメージングや、エキソサイトーシス事象（例えば、ルシフェラーゼ融合タンパク質の分泌、受容体リサイクルの定量化、細胞の取込みまたは輸送、神経伝達物質の放出、シナプス及び小胞の放出の研究など）のモニタリングには、大きな関心が寄せられている。しかし、多くの公知のセレンテラジン及びセレンテラジンアナログは細胞透過性が高いため、現状は、細胞表面または細胞外の事象を選択的に観察することができない。エキソサイトーシス事象をモニタリングまたはイメージングする現状の方法は限定されており、高価な設備を必要とするものもある。したがって、細胞不透過性セレンテラジンアナログ及びこのアナログを合成する方法が必要とされている。
【０００５】
本開示の化合物は、セレンテラジンアナログコア、共有結合鎖リンカー、及び極性基を含む。セレンテラジンアナログコアは、酵素の結合部位でルシフェラーゼに結合することができる。共有結合鎖は、極性基がセレンテラジンアナログの膜透過性を減少させるように、酵素の結合ポケットの外に拡張することができる。したがって、本開示の化合物は、ルシフェラーゼ基質コアが官能基に対し共有結合的に付着している点において、従来のルシフェラーゼ基質とは構造的に異なり、このことが、追加的な溶解性をもたらし、基質の透過性を変更することができる。その上、本開示の化合物は、予想外にも、細胞発光を発するルシフェラーゼ基質活性を維持し、同時に細胞透過性の低減を示す。
【０００６】
一態様において、式（Ｉ）の化合物
2020510617.tif 000002
（Ｉ）
またはその互変異性体もしくは薬学的に許容される塩が開示される。
［式中、
Ｘ及びＹは、独立的に、不在、ヒドロキシ、アミノ、−ＣＯＯＲ2、−ＳＯ2−ＯＲ3、−ＰＯ（ＯＲ4）（ＯＲ5）、または−Ｏ−（ＣＲ1aＲ1b）m−Ｚであり、
Ｒ1は、任意選択により置換されたアリール、任意選択により置換されたヘテロアリール、任意選択により置換された複素環、または任意選択により置換されたシクロアルキルであり、ただし、Ｘ及びＹの両方が不在である場合、Ｒ1が少なくとも−Ｑ−Ｌ−Ｚで置換されていることを条件とし、
各出現におけるＺは、独立的に、−ＣＯＯＲ2、−ＳＯ2−ＯＲ3、−ＰＯ（ＯＲ4）（ＯＲ5）、ハロゲン、−ＮＲ6Ｒ7、または−ＮＲ8−ＣＯ−Ｒ9であり、
Ｑは、−Ｏ−、−ＮＲQ−、−ＮＲQ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＲQ−、−Ｏ−ＣＯ−ＮＲQ−、または−ＮＲQ−ＣＯ−Ｏ−であり、
Ｌは、−（ＣＲ1aＲ1b）m−または−（ＣＲ1xＲ1y−ＣＲ1xＲ1y−Ｏ）t1−（ＣＲ1xＲ1y）t2−Ｑ1−であり、式中、Ｑ1は、不在、−Ｏ−、または−ＮＲQ1−であり、
各出現におけるＲ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ8、及びＲ9は、独立的に、水素、任意選択により置換されたＣ1−Ｃ8アルキル、任意選択により置換されたアリール、任意選択により置換されたシクロアルキル、任意選択により置換されたヘテロアリール、または任意選択により置換された複素環であり、
各出現におけるＲ6及びＲ7は、独立的に、水素、任意選択により置換されたＣ1−Ｃ8アルキル、任意選択により置換されたアリール、任意選択により置換されたシクロアルキル、任意選択により置換されたヘテロアリール、または任意選択により置換された複素環であり、あるいはＲ6及びＲ7は、Ｒ6及びＲ7が付着している窒素原子と一緒になって、任意選択により置換された環を一緒に形成し、
各出現におけるＲ1a、Ｒ1b、ＲQ、ＲQ1、Ｒ1x、及びＲ1yは、独立的に、水素、Ｃ1−Ｃ4アルキル、またはＣ1−Ｃ4ハロアルキルであり、
ｑは、０、１、または２であり、
各出現におけるｍは、独立的に、１〜１２であり、
ｔ１は、１〜１０であり、
ｔ２は、０〜５である］
【０００７】
また、当該化合物を作製する方法、当該化合物を含むキット、及び当該化合物をルシフェラーゼベースの発光アッセイにおけるルシフェラーゼ基質として使用する方法も、開示される。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】フリマジン（Ｆｚ）と比較した例示化合物の生物発光活性を、生化学的形式で示している。
【図２】ＨＥＫ２９３細胞における例示化合物の細胞外生物発光活性を示している。ＨＥＫ２９３細胞に対し、以下の２つの異なる膜結合ＮＡＮＯＬＵＣ（登録商標）融合体をトランスフェクションした：１）ＮａｎｏＬｕｃ：ＫＤＲ（膜の外側でＮａｎｏＬｕｃを提示）；２）ＫＤＲ：ＮａｎｏＬｕｃ（膜の内側でＮａｎｏＬｕｃを提示）。細胞不透過性のＮＡＮＯＬＵＣ（登録商標）阻害物質ＪＲＷ−０３４４（２０１６年６月２４日に出願された、Ｄｕｅｌｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．に対する米国特許出願第１５／１９２，４２０号“ＴＨＩＥＮＯＰＹＲＲＯＬＥ  ＣＯＭＰＯＵＮＤＳ  ＡＮＤ  ＵＳＥＳ  ＴＨＥＲＥＯＦ”、代理人整理番号０１６０２６−９５７３で開示）を細胞に添加して、細胞外の生物発光活性を阻害した。図２Ａは、ＮａｎｏＬｕｃ：ＫＤＲコンストラクトにおける１０μＭの基質及び±２０μＭのＪＲＷ−０３４４によるＲＬＵのデータを示している。スルホネート基（ＪＲＷ−０７０３、ＪＲＷ−０７２８、ＪＲＷ−０７６９）を含有する基質の場合、基質±阻害物質間でより大きなＲＬＵの差が観察される。基質がアミン（ＴＡＫ−００３９）、カルボキシレート（ＪＲＷ−０６８４）、またはブロミド（ＪＲＷ−０７２０）を含有する場合、基質±阻害物質間で小さなＲＬＵの差が観察される。図２Ｂは、１０μＭ及び２０μＭの基質を用いたＮＡＮＯＬＵＣ（登録商標）阻害物質ＪＲＷ−０３４４による阻害パーセントに顕著な差がないことを示している。図２Ｃは、ＫＤＲ：ＮａｎｏＬｕｃコンストラクトにおける１０μＭの基質及び±２０μＭのＪＲＷ−０３４４によるＲＬＵのデータを示している。スルホン化された細胞外基質（ＪＲＷ−０７０３、ＪＲＷ−０７２８、ＪＲＷ−０７６９）ははるかに暗く、これらの基質は、細胞外阻害物質によってバックグラウンドレベル付近にまで阻害されている可能性がある。しかし、細胞透過性基質（ＴＡＫ−００３９、ＪＲＷ−０６８４、ＪＲＷ−０７２０）からのＲＬＵは、細胞外阻害物質による影響を受けていない。図２Ｄは、１０μＭ及び２０μＭの基質を用いたＮＡＮＯＬＵＣ（登録商標）阻害物質ＪＲＷ−０３４４による阻害パーセントに顕著な差がないことを示している。
【図３】細胞透過性化合物及び細胞不透過性化合物の様々な基質濃度における活性を示している。ＨＥＫ２９３細胞に対し、膜の内側で膜結合ＮａｎｏＬｕｃを提示する融合タンパク質ＫＤＲ：ＮａｎｏＬｕｃをトランスフェクションした（１：１００のキャリアＤＮＡ）。次に、細胞をジギトニン（溶解形式用）またはＪＲＷ−０３４４（生細胞形式用）で処置した。両方のセットを様々な基質濃度で処置して、ミカエリス・メンテン型プロットを得た。細胞透過性である基質（ＴＡＫ−００３９、ＪＲＷ−０７２６、ＪＲＷ−０７２０、ＪＲＷ−０８０６）は、図３Ａ及び３Ｂに見られるような同様の用量反応曲線を有する。しかし、細胞不透過性（またはほとんど不透過性）である基質は、生細胞形式と溶解細胞形式との間で大きな差を示している（図３Ｃ）。スルホネートＪＲＷ−０７０３、ＪＲＷ−０７２８、及びＪＲＷ−０７６９は、生細胞形式において１００倍低い活性をもたらした。このことは、これらの基質における細胞内ＮａｎｏＬｕｃへのアクセスが限定されていることを示すものである。図３Ｄは、化合物ごとに「生」形式及び「溶解」形式によりプロットされた各基質における３つの濃度のうちで最も高いものを示しており、これもまた、細胞透過性基質と細胞透過性でない基質とを比較及び対比するものである。
【図４】ＨｅＬａ細胞における、フリマジン及びＪＲＷ−０７６９を用いたＮｌｕｃ−Ｂ２ＡＲのイメージング結果を示している。ＨｅＬａ細胞に対し、Ｎｌｕｃ−ｂ２アドレナリン受容体（Ｂ２ＡＲ）の発現コンストラクトをリバーストランスフェクションし、ＬａｂＴＥＫＩＩカバーグラスチェンバー（４００ｕＬの培地中ウェル当たり５０，０００細胞）にプレーティングし、一晩インキュベーションした。イメージングのために培地を除去し、ＣＯ2非依存培地で置き換えた。試料をイメージング装置に設置する直前に、フリマジンまたはＪＲＷ−０７６９を１０ｕＭの最終濃度にて細胞に添加した。画像収集をＯｌｙｍｐｕｓ  ＬＶ２００生物発光イメージャー上で実施した（４０×／０．９５ＮＡの対物レンズを使用し、電気増大ゲイン（ｅｌｅｃｔｒｏｍｕｌｔｉｐｌｙｉｎｇ  ｇａｉｎ）を４００に設定、収集時間は０．５秒（フリマジン）及び２．５秒（ＪＲＷ−０７６９））。図４Ａは、ＪＲＷ−０７６９を伴ったＮｌｕｃ−Ｂ２ＡＲが膜局在化受容体に限定されていることを示している（白矢印）。図４Ｂは、フリマジンを伴ったコントラストイメージングにおいて、細胞内のＮｌｕｃ−Ｂ２ＡＲを示している（核周囲構造、赤矢印）。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
（詳細な説明）
本明細書では、セレンテラジンアナログが開示される。本開示の化合物は、セレンテラジンアナログコア、共有結合鎖リンカー、及び極性基を含む。セレンテラジンアナログコアは、酵素の結合部位でルシフェラーゼに結合することができる。共有結合鎖は、極性基がセレンテラジンアナログの細胞膜透過性を減少させるように、酵素の結合ポケットの外に拡張することができる。したがって、本開示の化合物は、ルシフェラーゼ基質コアが極性基に対し共有結合的に繋留している点において、従来のルシフェラーゼ基質とは構造的に異なる。本開示の化合物は、予想外にも、細胞発光を発するルシフェラーゼ基質活性を維持し、同時にセレンテラジンアナログの細胞膜透過性の低減を可能にする。
【００１０】
セレンテラジンアナログは、式（Ｉ）の化合物であり、セレンテラジンを利用して発光を産生する有用なタンパク質基質であり得る。発光としては、以下に限定されないが、ルシフェラーゼ及び発光タンパク質が挙げられ、これらは様々な海洋生物に見いだされ、例えば、刺胞動物（例えば、Ｒｅｎｉｌｌａルシフェラーゼ）、クラゲ（例えば、Ａｅｑｕｏｒｅａクラゲからのエクオリン）、及び十脚類ルシフェラーゼ（例えば、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ  ｇｒａｃｉｌｉｒｏｓｔｒｉｓのルシフェラーゼ複合体）がある。本開示のセレンテラジンアナログは、安定したリンカーにより、様々な極性基に繋留され得る。極性基は、セレンテラジンアナログの細胞膜透過性を減少させることが可能であり、そのため、細胞外及び細胞表面の事象の生物発光イメージングを可能にすると考えられる。
【００１１】
本明細書では、本開示の化合物を作製する方法も開示される。記載の方法論により、様々な極性基に繋留されたセレンテラジンへのアクセスが可能となり、またこの方法論は、幅広い種類のすぐに利用可能な出発材料を利用して、穏やかな条件下で実施することができる。本開示の合成方法は、予想外にも、セレンテラジンアナログに基づいた生物発光技術における様々な新規の用途や前進をもたらす。
【００１２】
１．定義
別途定義されない限り、本明細書で使用する全ての技術的用語及び科学的用語は、当業者によって一般的に理解されている意味と同じ意味を有する。矛盾が生じる場合は、定義を含め、本文書が優先される。好ましい方法及び材料を以下に記載するが、本明細書に記載されている方法及び材料と同様または同等であるものも、本発明の実施及び試験で使用することができる。本明細書で言及されている全ての刊行物、特許出願、特許、及び他の参考文献は、その全体が参照により組み込まれる。本明細書で開示されている材料、方法、及び実施例は、例示的なものに過ぎず、限定的であるようには意図されていない。
【００１３】
本明細書で使用される「〜を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「〜を含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「〜を有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「〜を有する（ｈａｓ）」、「〜することができる（ｃａｎ）」、「〜を含有する（ｃｏｎｔａｉｎ）」という用語、及びこれらの変形は、追加的な行為または構造の可能性を排除しないオープンエンドな移行句、用語、または単語であるように意図されている。文脈による別段の明確な定めがない限り、単数形「ａ」、「ａｎ、及び「ｔｈｅ」には複数の指示対象が含まれる。また、本開示は、明示的に示されているか否かにかかわらず、本明細書で提示されている実施形態または要素「を含む」または「から本質的になる」他の実施形態も企図している。
【００１４】
量に関連して使用される「約」という修飾語は、記載された値を含み、文脈により定められた意味を有する（例えば、「約」は、少なくとも、特定の量の測定に関連した誤差の程度を含む）。また、「約」という修飾語は、２つの終点の絶対値により定義された範囲を開示するものとしてみなされるべきである。例えば、「約２〜約４」という表現は、「２〜４」という範囲も開示している。「約」という用語は、示された数字のプラスマイナス１０％を指すことができる。例えば、「約１０％」は９％〜１１％の範囲を示すことができ、「約１」は０．９〜１．１を意味することができる。「約」の他の意味は、四捨五入のように文脈から明らかになる場合があり、そのため、例えば「約１」は０．５〜１．４を意味する場合もある。
【００１５】
特定の官能基及び化学用語の定義を、下記でさらに詳細に記載する。本開示の目的において、化学元素は、Ｐｅｒｉｏｄｉｃ  Ｔａｂｌｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｌｅｍｅｎｔｓ，ＣＡＳ  ｖｅｒｓｉｏｎ，Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｐｈｙｓｉｃｓ，７５th  Ｅｄ．（表紙裏）に従って同定され、特定の官能基は、概して、当該文献に記載されている通りに定義されている。さらに、有機化学の一般的原理や、特定の機能部分及び反応性は、Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｔｈｏｍａｓ  Ｓｏｒｒｅｌｌ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｂｏｏｋｓ，Ｓａｕｓａｌｉｔｏ，１９９９；Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｍａｒｃｈ  Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，５th  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，２００１；Ｌａｒｏｃｋ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８９；Ｃａｒｒｕｔｈｅｒｓ，Ｓｏｍｅ  Ｍｏｄｅｒｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３rd  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，１９８７に記載されており、これらの各々の内容全体が、参照により本明細書に組み入れられる。
【００１６】
本明細書で使用される「アルコキシ」という用語は、本明細書で定義されているアルキル基であって、酸素原子を介して親分子部分に付加されているアルキル基を指す。アルコキシの代表例としては、以下に限定されないが、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、２−プロポキシ、ブトキシ、及びｔｅｒｔ−ブトキシが挙げられる。
【００１７】
本明細書で使用される「アルキル」という用語は、１〜１０個の炭素原子を含有する、直鎖状または分枝状の飽和した炭化水素鎖を意味する。「低級アルキル」または「Ｃ1−Ｃ6アルキル」という用語は、１〜６個の炭素原子を含有する、直鎖状鎖または分枝状鎖の炭化水素を意味する。「Ｃ1−Ｃ3アルキル」という用語は、１〜３個の炭素原子を含有する直鎖状鎖または分枝状鎖の炭化水素を意味する。アルキルの代表例としては、以下に限定されないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシル、３−メチルヘキシル、２，２−ジメチルペンチル、２，３−ジメチルペンチル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル、ｎ−ノニル、及びｎ−デシルが挙げられる。
【００１８】
本明細書で使用される「アルケニル」という用語は、少なくとも１つの炭素間二重結合を伴った、２〜１０個の炭素原子を含有する炭化水素鎖を意味する。アルケニル基は、置換されていても置換されていなくてもよい。例えば、アルケニル基は、フェニルのようなアリール基で置換されていてもよい。
【００１９】
本明細書で使用される「アルキニル」という用語は、少なくとも１つの炭素間三重結合を伴った、２〜１０個の炭素原子を含有する炭化水素鎖を意味する。アルキニル基は、置換されていても置換されていなくてもよい。例えば、アルキニル基は、フェニルのようなアリール基で置換されていてもよい。
【００２０】
本明細書で使用される「アルコキシアルキル」という用語は、本明細書で定義されているアルコキシ基であって、本明細書で定義されているアルキル基を介して親分子部分に付加されているアルコキシ基を指す。
【００２１】
本明細書で使用される「アルキレン」という用語は、１〜１０個の炭素原子の、例えば２〜５個の炭素原子の、直鎖状鎖または分枝状鎖の炭化水素に由来する、二価の基を指す。アルキレンの代表例としては、以下に限定されないが、−ＣＨ2ＣＨ2−、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2−、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2−、及び−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2−が挙げられる。
【００２２】
本明細書で使用される「アリール」という用語は、フェニル基、または二環式アリールもしくは三環式アリールの縮合環系を指す。二環式縮合環系の適例は、親分子部分に付加され、フェニル基に縮合しているフェニル基である。三環式縮合環系の適例は、親分子部分に付加され、他の２個のフェニル基に縮合しているフェニル基である。二環式アリールの代表例としては、以下に限定されないが、ナフチルが挙げられる。三環式アリールの代表例としては、以下に限定されないが、アントラセニルが挙げられる。単環式、二環式、及び三環式のアリールは、環内に含まれる任意の炭素原子を介して親分子部分に接続しており、置換されていなくても置換されていてもよい。
【００２３】
本明細書で使用される「シクロアルキル」という用語は、３〜１０個の炭素原子及び０個のヘテロ原子を含有し、任意選択により１つまたは２つの二重結合を含有する炭素環式環系を指す。シクロアルキルの代表例としては、以下に限定されないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロノニル、及びシクロデシルが挙げられる。
【００２４】
本明細書で使用される「シクロアルケニル」という用語は、少なくとも１つの炭素間二重結合を含有し、好ましくは環当たり５〜１０個の炭素原子を有する、非芳香族の単環式環系または多環式環系を意味する。例示的な単環式シクロアルケニル環としては、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、またはシクロへプテニルが挙げられる。
【００２５】
本明細書で使用される「フルオロアルキル」という用語は、本明細書で定義されているアルキル基であって、１、２、３、４、５、６、７、または８個の水素原子がフッ素により置き換えられているアルキル基を意味する。フルオロアルキルの代表例としては、以下に限定されないが、２−フルオロエチル、２，２，２−トリフルオロエチル、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、ペンタフルオロエチル、及び３，３，３−トリフルオロプロピルのようなトリフルオロプロピルが挙げられる。
【００２６】
本明細書で使用される「アルコキシフルオロアルキル」という用語は、本明細書で定義されているアルコキシ基であって、フルオロアルキル基を介して親分子部分に付加されているアルコキシ基を指す。
【００２７】
本明細書で使用される「フルオロアルコキシ」という用語は、少なくとも１個の、本明細書で定義されているフルオロアルキル基が、酸素原子を介して親分子部分に付加されていることを意味する。フルオロアルキルオキシの代表例としては、以下に限定されないが、ジフルオロメトキシ、トリフルオロメトキシ、及び２，２，２−トリフルオロエトキシが挙げられる。
【００２８】
本明細書で使用される「ハロゲン」または「ハロ」という用語は、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、またはＦを意味する。
【００２９】
本明細書で使用される「ハロアルキル」という用語は、本明細書で定義されているアルキル基であって、１、２、３、４、５、６、７、または８個の水素原子がハロゲンにより置き換えられているアルキル基を意味する。
【００３０】
本明細書で使用される「ハロアルコキシ」という用語は、少なくとも１個の、本明細書で定義されているハロアルキル基が、酸素原子を介して親分子部分に付加されていることを意味する。
【００３１】
本明細書で使用される「ヘテロアルキル」という用語は、本明細書で定義されているアルキル基であって、炭素原子のうちの１個以上が、Ｓ、Ｓｉ、Ｏ、Ｐ、及びＮから選択されるヘテロ原子により置き換えられているアルキル基を意味する。このヘテロ原子は、酸化されていてもよい。ヘテロアルキルの代表例としては、以下に限定されないが、アルキルエーテル、２級及び３級アルキルアミン、アミド、ならびにアルキルスルフィドが挙げられる。
【００３２】
本明細書で使用される「ヘテロアリール」という用語は、芳香族の単環式環、または芳香族の二環式環系、または芳香族の三環式環系を指す。芳香族の単環式環は、Ｎ、Ｏ、及びＳからなる群から独立的に選択される少なくとも１個のヘテロ原子（例えば、Ｏ、Ｓ、及びＮから独立的に選択される１、２、３、または４個のヘテロ原子）を含有する、５員または６員の環である。５員の芳香族の単環式環は、２つの二重結合を有し、６員の芳香族の単環式環は、３つの二重結合を有する。二環式ヘテロアリール基の適例は、親分子部分に付加され、かつ本明細書で定義されている単環式シクロアルキル基、本明細書で定義されている単環式アリール基、本明細書で定義されている単環式へテロアリール基、または本明細書で定義されている単環式複素環に縮合している、単環式へテロアリール環である。三環式ヘテロアリール基の適例は、親分子部分に付加され、かつ本明細書で定義されている単環式シクロアルキル基、本明細書で定義されている単環式アリール基、本明細書で定義されている単環式へテロアリール基、または本明細書で定義されている単環式複素環のうちの２つに縮合している、単環式へテロアリール環である。単環式へテロアリールの代表例としては、以下に限定されないが、ピリジニル（ピリジン−２−イル、ピリジン−３−イル、ピリジン−４−イルを含む）、ピリミジニル、ピラジニル、チエニル、フリル、チアゾリル、チアジアゾリル、イソキサゾリル、ピラゾリル、及び２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジニルが挙げられる。二環式へテロアリールの代表例としては、以下に限定されないが、クロメニル、ベンゾチエニル、ベンゾジオキソリル、ベンゾトリアゾリル、キノリニル、チエノピロリル、チエノチエニル、イミダゾチアゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾフラニル、インドリル、キノリニル、イミダゾピリジン、ベンゾオキサジアゾリル、及びベンゾピラゾリルが挙げられる。三環式ヘテロアリールの代表例としては、以下に限定されないが、ジベンゾフラニル及びジベンゾチエニルが挙げられる。単環式、二環式、及び三環式のヘテロアリールは、環内に含まれる任意の炭素原子または任意の窒素原子を介して親分子部分に接続しており、置換されていなくても置換されていてもよい。
【００３３】
本明細書で使用される「複素環」または「複素環式」という用語は、単環式複素環、二環式複素環、または三環式複素環を意味する。単環式複素環は、Ｏ、Ｎ、及びＳからなる群から独立的に選択される少なくとも１個のヘテロ原子を含有する、３員、４員、５員、６員、７員、または８員の環である。３員または４員の環は、ゼロまたは１つの二重結合と、Ｏ、Ｎ、及びＳからなる群から選択される１個のヘテロ原子とを含有する。５員の環は、ゼロまたは１つの二重結合と、Ｏ、Ｎ、及びＳからなる群から選択される１個、２個、または３個のヘテロ原子とを含有する。６員の環は、ゼロ、１つ、または２つの二重結合と、Ｏ、Ｎ、及びＳからなる群から選択される１個、２個、または３個のヘテロ原子とを含有する。７員及び８員の環は、ゼロ、１つ、２つ、または３つの二重結合と、Ｏ、Ｎ、及びＳからなる群から選択される１個、２個、または３個のヘテロ原子とを含有する。単環式複素環の代表例としては、以下に限定されないが、アゼチジニル、アゼパニル、アジリジニル、ジアゼパニル、１，３−ジオキサニル、１，３−ジオキソラニル、１，３−ジチオラニル、１，３−ジチアニル、１，３−ジメチルピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、イソチアゾリニル、イソチアゾリジニル、イソキサゾリニル、イソキサゾリジニル、モルホリニル、オキサジアゾリニル、オキサジアゾリジニル、オキサゾリニル、オキサゾリジニル、オキセタニル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピラニル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、ピロリニル、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロピリジニル、テトラヒドロチエニル、チアジアゾリニル、チアジアゾリジニル、１，２−チアジナニル、１，３−チアジナニル、チアゾリニル、チアゾリジニル、チオモルホリニル、１，１−ジオキシドチオモルホリニル（チオモルホリンスルホン）、チオピラニル、及びトリチアニルが挙げられる。二環式複素環は、フェニル基に縮合した単環式複素環、または単環式シクロアルキルに縮合した単環式複素環、または単環式シクロアルケニルに縮合した単環式複素環、または単環式複素環に縮合した単環式複素環、またはスピロ複素環基、あるいは、環における隣接していない２個の原子が、１、２、３、もしくは４個の炭素原子のアルキレン架橋により、または２、３、もしくは４個の炭素原子のアルケニレン架橋により連結している、架橋した単環式複素環環系である。二環式複素環の代表例としては、以下に限定されないが、ベンゾピラニル、ベンゾチオピラニル、クロマニル、２，３−ジヒドロベンゾフラニル、２，３−ジヒドロベンゾチエニル、２，３−ジヒドロイソキノリン、２−アザスピロ［３．３］ヘプタン−２−イル、アザビシクロ［２．２．１］ヘプチル（２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタ−２−イルを含む）、２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドリル、イソインドリニル、オクタヒドロシクロペンタ［ｃ］ピロリル、オクタヒドロピロロピリジニル、及びテトラヒドロイソキノリニルが挙げられる。三環式複素環の適例は、フェニル基に縮合した二環式複素環、または単環式シクロアルキルに縮合した二環式複素環、または単環式シクロアルケニルに縮合した二環式複素環、または単環式複素環に縮合した二環式複素環、あるいは、二環式環における隣接していない２個の原子が、１、２、３、もしくは４個の炭素原子のアルキレン架橋により、または２、３、もしくは４個の炭素原子のアルケニレン架橋により連結している、二環式複素環である。三環式複素環の例としては、以下に限定されないが、オクタヒドロ−２，５−エポキシペンタレン、ヘキサヒドロ−２Ｈ−２，５−メタノシクロペンタ［ｂ］フラン、ヘキサヒドロ−１Ｈ−１，４−メタノシクロペンタ［ｃ］フラン、アザ−アダマンタン（１−アザトリシクロ［３．３．１．１3.7］デカン）、及びオキサ−アダマンタン（２−オキサトリシクロ［３．３．１．１3.7］デカン）が挙げられる。単環式、二環式、及び三環式の複素環は、環内に含まれる任意の炭素原子または任意の窒素原子を介して親分子部分に接続しており、置換されていなくても置換されていてもよい。
【００３４】
本明細書で使用される「ヒドロキシ」という用語は、−ＯＨ基を意味する。
【００３５】
一部の場合において、ヒドロカルビル置換基（例えば、アルキルまたはシクロアルキル）における炭素原子の数は、プレフィックス「Ｃx−Ｃy−」（式中、ｘは、置換基における炭素原子の最小数であり、ｙは、置換基における炭素原子の最大数である）により示される。したがって、例えば、「Ｃ1−Ｃ3−アルキル」とは、２〜３個の炭素原子を含有するアルキル置換基を指す。
【００３６】
「置換基」という用語は、アリール、ヘテロアリール、フェニル、またはピリジニル基上でその基における任意の原子が「置換された」基を指す。任意の原子が置換され得る。
【００３７】
「置換された」という用語は、１個以上の非水素置換基でさらに置換され得る基を指す。置換基としては、以下に限定されないが、ハロゲン、＝Ｏ、＝Ｓ、シアノ、ニトロ、フルオロアルキル、アルコキシフルオロアルキル、フルオロアルコキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ヘテロアルキル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、複素環、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリールアルキル、アリールアルキル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルキレン、アリールオキシ、フェノキシ、ベンジルオキシ、アミノ、アルキルアミノ、アシルアミノ、アミノアルキル、アリールアミノ、スルホニルアミノ、スルフィニルアミノ、スルホニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アミノスルホニル、スルフィニル、−ＣＯＯＨ、ケトン、アミド、カルバメート、及びアシルが挙げられる。
【００３８】
本明細書に記載されている化合物について、その基及び置換基は、許容される原子価及び置換基に従って選択することができ、この選択及び置換により、安定した化合物、例えば、転位、環化、脱離などによるような変換を自発的に起こさない化合物がもたらされるようにする。
【００３９】
「生物発光」または「発光」という用語は、酵素と光を産生する基質との反応の結果として生成された光を指すことができる。このような酵素（生物発光酵素）の例としては、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ（例えば、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ  ｇｒａｃｉｌｉｒｏｓｔｒｉｓ）、ホタルルシフェラーゼ（例えば、Ｐｈｏｔｉｎｕｓ  ｐｙｒａｌｉｓまたはＰｈｏｔｕｒｉｓ  ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉｃａ）、コメツキムシルシフェラーゼ、Ｒｅｎｉｌｌａルシフェラーゼ、ｃｙｐｒｉｄｉｎａルシフェラーゼ、エクオリン発光タンパク質、オベリン発光タンパク質などが挙げられる。
【００４０】
「セレンテラジン基質」という用語は、ルシフェラーゼ（例えば、海洋生物ルシフェラーゼ）のような幅広い種類の生物発光タンパク質の作用を受けると発光する、レポーター分子のクラスを指す。セレンテラジン基質には、セレンテラジンに加えて、そのアナログ及び誘導体が含まれる。
【００４１】
本明細書で使用される「ハロゲン」または「ハロ」という用語は、フルオロ、クロロ、ブロモ、またはヨードラジカルを指す。
【００４２】
本明細書で互換的に使用される「発光酵素」、「生物発光酵素」、または「ルシフェラーゼ」という用語は、生物発光で使用される酸化的酵素のクラスを指し、当該酵素は、基質を与えられると、光を生成し光を発する。ルシフェラーゼは、ルシフェラーゼ基質を使用する天然存在の、組換えの、または変異体のルシフェラーゼであり得る。ルシフェラーゼ基質は、ルシフェリン、ルシフェリンの誘導体もしくはアナログ、プレルシフェリンの誘導体もしくはアナログ、セレンテラジン、またはセレンテラジンの誘導体もしくはアナログであり得る。発光酵素は、天然存在の場合、当業者により生物から容易に取得することができる。発光酵素が、天然に存在する酵素である、または組換えもしくは変異体の酵素である場合、例えば、天然存在の発光酵素のルシフェラーゼ−セレンテラジン反応またはルシフェラーゼ−ルシフェリン反応において活性を保持する酵素である場合、発光酵素は、細菌、酵母、哺乳類細胞、昆虫細胞、植物細胞などの培養物から容易に取得することができる。さらに、組換えまたは変異体の発光酵素は、ルシフェラーゼをコードする核酸を用いたｉｎ  ｖｉｔｒｏの無細胞系に由来していてもよい。好適な発光酵素としては、生物発光十脚類に由来するルシフェラーゼ、例えば、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｏｉｄｅａからのもの（例えば、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼ）、コメツキムシルシフェラーゼ（例えば、Ｐｈｏｔｉｎｕｓ  ｐｙｒａｌｉｓ、Ｐｈｏｔｕｒｉｓ  ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉｃａなど）、刺胞動物のような海洋生物（例えば、Ｒｅｎｉｌｌａルシフェラーゼ）、Ａｒｉｓｔｅｉｄａｅ、Ｓｏｌｅｎｏｃｅｒｉｄａｅ、Ｌｕｃｉｆｅｒｉｄａｅ、Ｓｅｒｇｅｓｔｉｄａｅ、Ｐａｓｉｐｈｅｉｄａｅ、及びＴｈａｌａｓｓｏｃａｒｉｄｉｄａｅの十脚類ファミリー、カイアシ類ルシフェラーゼ、例えば、Ｇａｕｓｓｉａルシフェラーゼ、例えば、Ｇａｕｓｓｉａ  ｐｒｉｎｃｅｐｓルシフェラーゼ、Ｍｅｔｒｉｄｉａルシフェラーゼ、例えば、Ｍｅｔｒｉｄｉａ  ｌｏｎｇａルシフェラーゼ及びＭｅｔｒｉｄｉａ  ｐａｃｉｆｉｃａルシフェラーゼ、Ｖａｒｇｕｌａルシフェラーゼ、例えば、Ｖａｒｇｕｌａ  ｈｉｌｇｅｎｄｏｒｆｉｉルシフェラーゼ、Ｐｌｅｕｒｏｍａｍｍａ  ｘｉｐｈｉａｓルシフェラーゼ、ならびに発光タンパク質、例えば、エクオリン、ならびにこれらのバリアント、組換え体、及び変異体が挙げられる。
【００４３】
「発光反応混合物」は、発光酵素が光シグナル、すなわち発光を産生するのを可能にする材料を含有する。この混合物は、酵素、例えば、ルシフェラーゼ酵素またはルシフェラーゼも含有することができる。発光シグナルの産生に必要な材料、ならびに特定の濃度及び／または量は、使用する発光酵素や実施するアッセイのタイプに応じて変動することになる。しばしば、以下を含めた他の材料も溶液に添加されることになる：適正なｐＨで反応を維持するための緩衝液、酵素活性を維持する一助とするためのＰＲＩＯＮＥＸまたはウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）のような添加物、還元剤、洗浄剤など。
【００４４】
本明細書で使用される「Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ」及び「Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼ」という用語は互換的に使用され、深海エビＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓ  ｇｒａｃｉｌｉｒｏｓｔｒｉｓ（例えば、配列番号１）（その野生型、バリアント、及び変異体を含む）から分泌されるルシフェラーゼを指す。例えば、好適なＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼバリアントは、米国特許第８，５５７，９７０号及び第８，６６９，１０３号で説明されており、これらの各々はその全体が参照により本明細書に組み入れられる。例示的なＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼとしては、例えば、配列番号２のもの（本明細書では、互換的に「ＮａｎｏＬｕｃ」、「Ｎｌｕｃ」、「Ｎｌｕｃルシフェラーゼ」、及び「Ｎｌｕｃ酵素」とも称される）が挙げられる。
【００４５】
本明細書で使用される「レポーター部分」という用語は、適切な条件下で検出可能なシグナルを直接的または間接的に産生する部分を指すことができる。例示的なレポーター部分としては、以下に限定されないが、フルオロフォア、発光分子、色素、放射標識、及びルシフェラーゼのような酵素用の基質が挙げられる。一部の実施形態において、レポーター部分は、例えば、レポーター部分が酵素用の基質であるとき、検出可能なシグナルを間接的に産生することができる。酵素と基質との反応は、次に、蛍光または発光のような検出可能なシグナルを産生する。本明細書で使用される「生物発光レポーター部分」という用語は、ルシフェラーゼ用の基質である部分を指すことができる。例えば、生物発光タンパク質は、ルシフェリン、ルシフェリン誘導体、例えば、プレ−ルシフェリン、アミノルシフェリン、キノリル−ルシフェリン、ナフチルルシフェリン、フルオロルシフェリン、クロロルシフェリン、ルシフェリン誘導体の前駆体、セレンテラジン、またはセレンテラジンの誘導体もしくはアナログ、例えば、フリマジンであり得る。産生された発光シグナルは、ルミノメーターを用いて検出することができる。本明細書で使用される「蛍光レポーター部分」という用語は、蛍光発光する部分を指すことができる。例えば、蛍光レポーター部分は、フルオロフォア、例えば、クマリン、Ｒ１１０、フルオレセイン、ＤＤＡＯ、レゾルフィン、クレシルバイオレット、シリルキサンテン、またはカーボピロニンであり得る。蛍光は、フルオロメーターを用いて検出することができる。
【００４６】
本明細書における数値範囲の列挙については、同じ精度を伴った、その範囲の間に介在する各々の数が明示的に企図されている。例えば、６〜９という範囲については、６と９に加えて７と８という数が企図されており、６．０〜７．０という範囲については、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、及び７．０という数が明示的に企図されている。
【００４７】
２．化合物
一態様において、式（Ｉ）の化合物：
2020510617.tif 000003
（Ｉ）
またはその互変異性体もしくは薬学的に許容される塩が開示される。
［式中、
Ｘ及びＹは、独立的に、不在、ヒドロキシ、アミノ、−ＣＯＯＲ2、−ＳＯ2−ＯＲ3、−ＰＯ（ＯＲ4）（ＯＲ5）、または−Ｏ−（ＣＲ1aＲ1b）m−Ｚであり、
Ｒ1は、任意選択により置換されたアリール、任意選択により置換されたヘテロアリール、任意選択により置換された複素環、または任意選択により置換されたシクロアルキルであり、ただし、Ｘ及びＹの両方が不在である場合、Ｒ1が少なくとも−Ｑ−Ｌ−Ｚで置換されていることを条件とし、
各出現におけるＺは、独立的に、−ＣＯＯＲ2、−ＳＯ2−ＯＲ3、−ＰＯ（ＯＲ4）（ＯＲ5）、ハロゲン、−ＮＲ6Ｒ7、または−ＮＲ8−ＣＯ−Ｒ9であり、
Ｑは、−Ｏ−、−ＮＲQ−、−ＮＲQ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＲQ−、−Ｏ−ＣＯ−ＮＲQ−、または−ＮＲQ−ＣＯ−Ｏ−であり、
Ｌは、−（ＣＲ1aＲ1b）m−または−（ＣＲ1xＲ1y−ＣＲ1xＲ1y−Ｏ）t1−（ＣＲ1xＲ1y）t2−Ｑ1−であり、式中、Ｑ1は、不在、−Ｏ−、または−ＮＲQ1−であり、
各出現におけるＲ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ8、及びＲ9は、独立的に、水素、任意選択により置換されたＣ1−Ｃ8アルキル、任意選択により置換されたアリール、任意選択により置換されたシクロアルキル、任意選択により置換されたヘテロアリール、または任意選択により置換された複素環であり、
各出現におけるＲ6及びＲ7は、独立的に、水素、任意選択により置換されたＣ1−Ｃ8アルキル、任意選択により置換されたアリール、任意選択により置換されたシクロアルキル、任意選択により置換されたヘテロアリール、または任意選択により置換された複素環であり、あるいはＲ6及びＲ7は、Ｒ6及びＲ7が付着している窒素原子と一緒になって、任意選択により置換された環を一緒に形成し、
各出現におけるＲ1a、Ｒ1b、ＲQ、ＲQ1、Ｒ1x、及びＲ1yは、独立的に、水素、Ｃ1−Ｃ4アルキル、またはＣ1−Ｃ4ハロアルキルであり、
ｑは、０、１、または２であり、
各出現におけるｍは、独立的に、１〜１２であり、
ｔ１は、１〜１０であり、
ｔ２は、０〜５である］
【００４８】
ある特定の実施形態において、Ｒ1は、少なくとも−Ｑ−Ｌ−Ｚで置換されており、式中、Ｑは、−Ｏ−、−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−、−Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−、または−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ−であり、Ｌは、−（ＣＲ1aＲ1b）m−である。
【００４９】
ある特定の実施形態において、Ｒ1は、少なくとも−Ｑ−Ｌ−Ｚで置換されており、式中、Ｑは、−Ｏ−であり、Ｌは、−（ＣＲ1aＲ1b）m−である。例えば、−Ｑ−Ｌ−Ｚは、式−Ｏ−（ＣＲ1aＲ1b）m−Ｚを有することができる。
【００５０】
ある特定の実施形態において、Ｒ1は、少なくとも−Ｑ−Ｌ−Ｚで置換されており、式中、Ｌは、−（ＣＲ1xＲ1y−ＣＲ1xＲ1y−Ｏ）t1−（ＣＲ1xＲ1y）t2−Ｑ1−である。これらの実施形態において、Ｑ1は、不在であっても存在していてもよい。例えば、Ｑ1は、存在する場合、−Ｏ−または−ＮＨ−であり得る。
【００５１】
ある特定の実施形態において、Ｒ1は、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の置換基で置換されたアリール、ヘテロアリール、複素環、またはシクロアルキルであり、置換基の各々は独立的に、ハロゲン、＝Ｏ、＝Ｓ、シアノ、ニトロ、フルオロアルキル、アルコキシフルオロアルキル、フルオロアルコキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ヘテロアルキル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、複素環、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリールアルキル、アリールアルキル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルキレン、アリールオキシ、フェノキシ、ベンジルオキシ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アシルアミノ、アミノアルキル、アリールアミノ、スルホニルアミノ、スルフィニルアミノ、スルホニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アミノスルホニル、スルフィニル、−ＣＯＯＨ、ケトン、アミド、カルバメート、シリル、置換されたシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル、アルキルスルファニル、スルファニル、アシル、及び−Ｑ−Ｌ−Ｚからなる群から選択される。例えば、Ｒ1は、０個または少なくとも１個の−Ｏ−（ＣＲ1aＲ1b）m−Ｚで置換されたアリール、ヘテロアリール、複素環、またはシクロアルキルであり得る。
【００５２】
ある特定の実施形態において、Ｒ1は、任意選択により置換されたフェニルである。例えば、ある特定の実施形態において、Ｒ1は、０、１、２、３、または４個の置換基で置換されたフェニルであり、置換基の各々は独立的に、ハロゲン、＝Ｏ、＝Ｓ、シアノ、ニトロ、フルオロアルキル、アルコキシフルオロアルキル、フルオロアルコキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ヘテロアルキル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、複素環、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリールアルキル、アリールアルキル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルキレン、アリールオキシ、フェノキシ、ベンジルオキシ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アシルアミノ、アミノアルキル、アリールアミノ、スルホニルアミノ、スルフィニルアミノ、スルホニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アミノスルホニル、スルフィニル、−ＣＯＯＨ、ケトン、アミド、カルバメート、シリル、置換されたシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル、アルキルスルファニル、スルファニル、アシル、及び−Ｑ−Ｌ−Ｚからなる群から選択される。例えば、Ｒ1は、０個または少なくとも１個の−Ｏ−（ＣＲ1aＲ1b）m−Ｚで置換されたフェニルであり得る。
【００５３】
ある特定の実施形態において、Ｒ1は、任意選択により置換されたフリルである。例えば、ある特定の実施形態において、Ｒ1は、０、１、２、または３個の置換基で置換されたフリルであり、置換基の各々は独立的に、ハロゲン、＝Ｏ、＝Ｓ、シアノ、ニトロ、フルオロアルキル、アルコキシフルオロアルキル、フルオロアルコキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ヘテロアルキル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、複素環、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリールアルキル、アリールアルキル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルキレン、アリールオキシ、フェノキシ、ベンジルオキシ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アシルアミノ、アミノアルキル、アリールアミノ、スルホニルアミノ、スルフィニルアミノ、スルホニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アミノスルホニル、スルフィニル、−ＣＯＯＨ、ケトン、アミド、カルバメート、シリル、置換されたシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル、アルキルスルファニル、スルファニル、アシル、−Ｑ−Ｌ−Ｚからなる群から選択される。Ｒ1については、０個または少なくとも１個の−Ｏ−（ＣＲ1aＲ1b）m−Ｚで置換されたフェニルであり得る。
【００５４】
ある特定の実施形態において、Ｒ1は、０個または少なくとも１個の−Ｑ−Ｌ−Ｚで置換されたフェニルまたはフリルであり、式中、Ｑは、−Ｏ−であり、Ｌは、−（ＣＲ1aＲ1b）m−である。例えば、Ｒ1は、０個または少なくとも１個の−Ｏ−（ＣＲ1aＲ1b）m−Ｚで置換されたフェニルまたはフリルであり得る。−Ｑ−Ｌ−Ｚに加えて、Ｒ1は、アルキル、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ハロアルキル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アミノ、及び−ＣＯＯＨからなる群から選択される１個以上の置換基で置換されていてもよい。
【００５５】
ある特定の実施形態において、Ｒ1は、下記からなる群から選択される。
2020510617.tif 000004
2020510617.tif 000005
【００５６】
ある特定の実施形態において、−Ｏ−（ＣＲ1aＲ1b）m−Ｚは、下記からなる群から選択される。
2020510617.tif 000006
【００５７】
ある特定の実施形態において、ｑは１である。
【００５８】
ある特定の実施形態において、Ｘは、不在、ヒドロキシ、−Ｃ（Ｏ）−ＯＨ、または−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ1−Ｃ6−アルキルであり、Ｙは不在である。ある特定の実施形態において、Ｘは不在であり、Ｙは不在である。
【００５９】
ある特定の実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ−ａ）：
2020510617.tif 000007
（Ｉ−ａ）
またはその互変異性体もしくは薬学的に許容される塩を有する。
［式中、
Ｒ1cは、アルキル、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ハロアルキル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アミノ、及び−ＣＯＯＨからなる群から選択され、
ｎは、０、１、２、３、または４であり、
Ｘ、Ｙ、Ｒ1a、Ｒ1b、ｍ、及びＺは、上記で定義されている通りである］
【００６０】
ある特定の実施形態において、化合物は式（Ｉ）または式（Ｉ−ａ）を有し、式中、Ｘ及びＹのうちの少なくとも１つは不在である。例えば、ある特定の実施形態において、化合物は式（Ｉ−ａ）を有し、式中、Ｘは不在である、またはＹは不在である、またはＸ及びＹの両方が不在である。
【００６１】
ある特定の実施形態において、化合物は式（Ｉ）または式（Ｉ−ａ）を有し、式中、Ｒ1cはハロゲン（例えば、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩ）である。
【００６２】
ある特定の実施形態において、化合物は式（Ｉ）または式（Ｉ−ａ）を有し、式中、ｍは、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。例えば、ｍは、４、６、８、または１０であり得る。
【００６３】
ある特定の実施形態において、化合物は、式（Ｉ）または式（Ｉ−ａ）（式中、Ｚは、−ＣＯＯＲ2、−ＳＯ2−ＯＲ3、もしくは−ＰＯ（ＯＲ4）（ＯＲ5）である）、またはその薬学的に許容される塩を有する。例えば、ある特定の実施形態において、化合物は式（Ｉ−ａ）を有し、Ｚは、カルボキシレート基（−ＣＯＯＨを含む）、カルボン酸エステル（例えば、ｔ−ブチルエステル）、またはその塩である。他の実施形態において、化合物は式（Ｉ−ａ）を有し、Ｚは、スルホネート基（例えば、−ＳＯ3Ｈ）、スルホン酸エステル（例えば、２，２，２−トリクロロエチルエステル）、またはその塩（例えば、ナトリウム塩）である。他の実施形態において、化合物は式（Ｉ−ａ）を有し、Ｚは、ホスホネート基（−ＰＯ（ＯＨ）2を含む）、そのモノエステルもしくはジエステルまたは塩である。
【００６４】
ある特定の実施形態において、化合物は式（Ｉ）または式（Ｉ−ａ）を有し、Ｚは、−ＮＲ6Ｒ7、またはその薬学的に許容される塩である。例えば、Ｚは、各出現におけるＲ6及びＲ7が、独立的に、水素または任意選択により置換されたＣ1−Ｃ8アルキルである−ＮＲ6Ｒ7であってもよい。
【００６５】
ある特定の実施形態において、化合物は、式（Ｉ）または式（Ｉ−ａ）を有し、Ｚは、−ＮＲ8−ＣＯ−Ｒ9、またはその薬学的に許容される塩である。
［式中、
Ｒ9は、−（ＣＲ9aＲ9b−ＮＨ−ＣＯ）u−Ｒ10であり、
各出現におけるＲ9a及びＲ9bは、独立的に、水素、または任意選択により−ＣＯＯＲ9cで置換されたＣ1−Ｃ4アルキルであり、
各出現におけるＲ9cは、独立的に、水素またはＣ1−Ｃ4アルキルであり、
Ｒ10は、任意選択により置換されたＣ1−Ｃ8アルキルであり、
ｕは、０〜１０である］
【００６６】
ある特定の実施形態において、化合物は、式（Ｉ）または式（Ｉ−ａ）を有し、Ｚは、−ＮＲ8−ＣＯ−Ｒ9、またはその薬学的に許容される塩であり、式中、Ｒ8は水素であり、Ｒ9は、
2020510617.tif 000008
である。
【００６７】
例えば、Ｚは、
2020510617.tif 000009
であってもよい。
【００６８】
ある特定の実施形態において、Ｚは、−ＮＲ8−ＣＯ−Ｒ9またはその薬学的に許容される塩であり、式中、Ｒ9は、電子的に荷電した側鎖を有するアミノ酸、例えば、アルギニン、ヒスチジン、リジン、アスパラギン酸、及びグルタミン酸、ならびにこのようなアミノ酸を含有するペプチドを含めた、１つ以上のアミノ酸またはペプチドの残基を含む。
【００６９】
ある特定の実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ−ｂ）：
2020510617.tif 000010
（Ｉ−ｂ）
またはその互変異性体もしくは薬学的に許容される塩を有する。
［式中、
Ｒ1dは、水素、アルキル、ハロゲン、シアノ、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、及び−ＣＯＯＨからなる群から選択され、
ｖは、０、１、２、または３であり、
Ｘ及びＹは、各々が独立的に、不在、−ＣＯＯＲ2、−ＳＯ2−ＯＲ3、−ＰＯ（ＯＲ4）（ＯＲ5）、または−Ｏ−（ＣＲ1aＲ1b）m−Ｚであり、
Ｘ及びＹのうちの少なくとも１つが存在し、
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ1a、Ｒ1b、ｍ、及びＺは、上記で定義されている通りである］
【００７０】
ある特定の実施形態において、化合物は式（Ｉ−ｂ）を有し、式中、Ｘは存在し、Ｙは不在である。ある特定の実施形態において、化合物は式（Ｉ−ｂ）を有し、式中、Ｘは不在であり、Ｙは存在する。
【００７１】
ある特定の実施形態において、化合物は式（Ｉ−ｂ）を有し、式中、Ｘは、−ＣＯＯＲ2、−ＳＯ2−ＯＲ3、−ＰＯ（ＯＲ4）（ＯＲ5）、または−Ｏ−（ＣＲ1aＲ1b）m−Ｚであり、Ｙは不在である。例えば、ある特定の実施形態において、化合物は式（Ｉ−ｂ）を有し、Ｘは存在し、このときＸは、カルボキシレート基（−ＣＯＯＨを含む）、カルボン酸エステル（例えば、ｔ−ブチルエステル）、またはその塩を含有する。他の実施形態において、化合物は式（Ｉ−ｂ）を有し、Ｘは存在し、このときＸは、スルホネート基（例えば、−ＳＯ3Ｈ）、スルホン酸エステル（例えば、２，２，２−トリクロロエチルエステル）、またはその塩（例えば、ナトリウム塩）を含有する。他の実施形態において、化合物は式（Ｉ−ｂ）を有し、Ｘは存在し、このときＸは、ホスホネート基（−ＰＯ（ＯＨ）2を含む）、そのモノエステルもしくはジエステルまたは塩を含有する。
【００７２】
ある特定の実施形態において、化合物は式（Ｉ−ｂ）を有し、式中、Ｘは不在であり、Ｙは、−ＣＯＯＲ2、−ＳＯ2−ＯＲ3、−ＰＯ（ＯＲ4）（ＯＲ5）、または−Ｏ−（ＣＲ1aＲ1b）m−Ｚである。例えば、ある特定の実施形態において、化合物は式（Ｉ−ｂ）を有し、Ｙは存在し、このときＹは、カルボキシレート基（−ＣＯＯＨを含む）、カルボン酸エステル（例えば、ｔ−ブチルエステル）、またはその塩を含有する。他の実施形態において、化合物は式（Ｉ−ｂ）を有し、Ｙは存在し、このときＹは、スルホネート基（例えば、−ＳＯ3Ｈ）、スルホン酸エステル（例えば、２，２，２−トリクロロエチルエステル）、またはその塩（例えば、ナトリウム塩）を含有する。他の実施形態において、化合物は式（Ｉ−ｂ）を有Ａは、Ｙは存在し、このときＹは、ホスホネート基（−ＰＯ（ＯＨ）2を含む）、そのモノエステルもしくはジエステルまたは塩を含有する。
【００７３】
好適な化合物には、下記のものが含まれる：
【００７４】
６−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２−クロロフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸２，２，２−トリクロロエチル、
【００７５】
６−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）フェノキシ）ヘキサン酸ｔｅｒｔ−ブチル、
【００７６】
６−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）フェノキシ）ヘキサン酸、
【００７７】
８−ベンジル−２−（３−（（６−ブロモヘキシル）オキシ）ベンジル）−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン、
【００７８】
６−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）フェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸ナトリウム、
【００７９】
４−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）フェノキシ）ブタン酸ｔｅｒｔ−ブチル、
【００８０】
３−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）フェノキシ）プロパン−１−スルホン酸ナトリウム、
【００８１】
４−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）フェノキシ）ブタン酸、
【００８２】
８−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）フェノキシ）オクタン酸ｔｅｒｔ−ブチル、
【００８３】
８−ベンジル−２−（４−（（６−ブロモヘキシル）オキシ）−３−クロロベンジル）−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン、
【００８４】
８−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）フェノキシ）オクタン酸、
【００８５】
６−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２−クロロフェノキシ）ヘキサン酸ｔｅｒｔ−ブチル、
【００８６】
６−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２−クロロフェノキシ）ヘキサン酸、
【００８７】
６−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２−クロロフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸ナトリウム、
【００８８】
（Ｓ）−３−アセトアミド−４−（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（６−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）フェノキシ）ヘキシル）アミノ）−３−カルボキシ−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−カルボキシ−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−４−オキソブタン酸、
【００８９】
８−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２−クロロフェノキシ）オクタン−１−スルホン酸ナトリウム、
【００９０】
１０−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２−クロロフェノキシ）デカン−１−スルホン酸ナトリウム、
【００９１】
６−（５−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２−クロロフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸ナトリウム、
【００９２】
６−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２−フルオロフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸ナトリウム、
【００９３】
６−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２，６−ジフルオロフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸ナトリウム、
【００９４】
２−（４−（（６−アミノヘキシル）オキシ）−３−フルオロベンジル）−８−ベンジル−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン、
【００９５】
６−（４−（（８−ベンジル−６−（３−ヒドロキシフェニル）−３−オキソ−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２−クロロフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸、
【００９６】
（Ｓ）−３−アセトアミド−４−（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（６−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２−フルオロフェノキシ）ヘキシル）アミノ）−３−カルボキシ−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−カルボキシ−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−４−オキソブタン酸、
【００９７】
３−（８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−３−オキソ−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）安息香酸ｔｅｒｔ−ブチル、
【００９８】
３−（８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−３−オキソ−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）安息香酸、
【００９９】
４−（８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−３−オキソ−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）安息香酸、及び
【０１００】
６−（４−（（６−アミノヘキシル）オキシ）フェニル）−８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン。
【０１０１】
化合物名は、ＣＨＥＭＤＲＡＷ（登録商標）ＵＬＴＲＡ  ｖ．１２．０の一部としてのＳｔｒｕｃｔ＝Ｎａｍｅ命名アルゴリズムを使用することにより、割り当てられている。
【０１０２】
本明細書に記載されている化合物は、塩の形態をとることができる。化合物の中性形態は、塩を塩基または酸と接触させ、従来の方法で親化合物を単離することにより再生することができる。化合物の親形態は、様々な塩形態に対し、ある特定の物理的特性（例えば、極性溶媒における溶解性）が相違するが、それ以外では、これらの塩は、本開示の目的において、化合物の親形態と同等である。
【０１０３】
例えば、化合物がアニオン性である、またはアニオン性になり得る官能基を有する場合（例えば、−ＣＯＯＨは−ＣＯＯ-になり得る）、塩は、好適なカチオンを用いて形成することができる。好適な無機カチオンの例としては、以下に限定されないが、Ｎａ+及びＫ+のようなアルカリ金属イオン、Ｃａ2+及びＭｇ2+のようなアルカリ土類カチオン、及びその他のカチオンが挙げられる。好適な有機カチオンの例としては、以下に限定されないが、アンモニウムイオン（すなわち、ＮＨ4+）及び置換されたアンモニウムイオン（例えば、ＮＨ3Ｒ1+、ＮＨ2Ｒ2+、ＮＨＲ3+、ＮＲ4+）が挙げられる。一部の好適な置換されたアンモニウムイオンの例は、以下に由来するものである：エチルアミン、ジエチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、トリエチルアミン、ブチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジン、ベンジルアミン、フェニルベンジルアミン、コリン、メグルミン、及びトロメタミン、ならびにリジン及びアルギニンのようなアミノ酸。
【０１０４】
化合物がカチオン性である、またはカチオン性になり得る官能基を有する場合（例えば、−ＮＨ2は−ＮＨ3+になり得る）、塩は、好適なアニオンを用いて形成することができる。好適な無機アニオンの例としては、以下に限定されないが、次の無機酸に由来するものが挙げられる：塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、亜硫酸、硝酸、亜硝酸、リン酸、及び亜リン酸。
【０１０５】
好適な有機アニオンの例としては、以下に限定されないが、次の有機酸に由来するものが挙げられる：２−アセチルオキシ安息香酸、酢酸、アスコルビン酸、アスパラギン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、ケイ皮酸、クエン酸、エデト酸、エタンジスルホン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルコヘプトン酸、グルコン酸、グルタミン酸、グリコール酸、ヒドロキシマレイン酸、ヒドロキシナフタレンカルボン酸、イセチオン酸、乳酸、ラクトビオン酸、ラウリン酸、マレイン酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、ムチン酸、オレイン酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸、パントテン酸、フェニル酢酸、フェニルスルホン酸、プロピオン酸、ピルビン酸、サリチル酸、ステアリン酸、コハク酸、スルファニル酸、酒石酸、トルエンスルホン酸、及び吉草酸。好適な高分子有機アニオンの例としては、以下に限定されないが、次の高分子酸に由来するものが挙げられる：タンニン酸、カルボキシメチルセルロース。
【０１０６】
別段の指定がない限り、本明細書において特定の化合物に対し言及するときには、その塩形態も含まれる。
【０１０７】
化合物は、不斉中心またはキラル中心が存在する立体異性体として存在してもよい。立体異性体は、キラル炭素原子の周囲の置換基の構成に応じて「Ｒ」または「Ｓ」である。本明細書で使用されている「Ｒ」及び「Ｓ」という用語は、ＩＵＰＡＣ  １９７４  Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  Ｓｅｃｔｉｏｎ  Ｅ，Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｉｎ  Ｐｕｒｅ  Ａｐｐｌ．Ｃｈｅｍ．，１９７６，４５：１３−３０で定義されている構成である。本開示は、様々な立体異性体及びその混合物を企図しており、それらは、本発明の範囲内に明確に含まれる。立体異性体には、エナンチオマーと、ジアステレオマーと、エナンチオマーまたはジアステレオマーの混合物とが含まれる。化合物の個々の立体異性体は、好ましくは、不斉中心もしくはキラル中心を含有する市販の出発材料から合成して、またはラセミ混合物を調製した後に当業者に周知の分割法を用いることにより、調製することができる。このような分割法の適例は、（１）エナンチオマーの混合物をキラル補助剤に付着させ、得られたジアステレオマー混合物を再結晶もしくはクロマトグラフィーにより分離し、補助剤から光学的に純粋な生成物を任意選択により遊離させる方法（Ｆｕｒｎｉｓｓ，Ｈａｎｎａｆｏｒｄ，Ｓｍｉｔｈ，ａｎｄ  Ｔａｔｃｈｅｌｌ，“Ｖｏｇｅｌ’ｓ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”，５th  ｅｄｉｔｉｏｎ（１９８９），Ｌｏｎｇｍａｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ＆  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ，Ｅｓｓｅｘ  ＣＭ２０  ２ＪＥ，Ｅｎｇｌａｎｄに記載）、または（２）キラルクロマトグラフィーカラム上で光学エナンチオマーの混合物を直接分離する方法、または（３）分別再結晶法である。
【０１０８】
一部の実施形態において、本明細書で開示されている化合物の調製物に対し、選択された立体中心に対応する選択された立体化学（例えば、ＲまたはＳ）を有する化合物の異性体が濃縮される。例えば、化合物は、少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の選択された立体中心の選択された立体化学を有する化合物に対応する純度を有する。
【０１０９】
化合物は、互変異性形態、さらに幾何異性体も有する可能性があり、これらも本発明の一態様を構成することを理解されたい。
【０１１０】
また、本開示は、１個以上の原子が、通常自然界で見いだされる原子質量または質量数とは異なる原子質量または質量数を有する原子により置き換えられている事実以外は、式（Ｉ）に挙げられている化合物と同一である、同位体標識化合物も含む。本発明の化合物に含めるのに好適な同位体の例は、水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素、及び塩素であり、例えば、以下に限定されないが、それぞれ2Ｈ、3Ｈ、13Ｃ、14Ｃ、15Ｎ、18Ｏ、17Ｏ、31Ｐ、32Ｐ、35Ｓ、18Ｆ、及び36Ｃｌである。より重い同位体（例えば、重水素、すなわち2Ｈ）による置換は、より大きい代謝安定性（例えば、ｉｎ  ｖｉｖｏの半減期増加または投薬要件の低減）に起因するある特定の治療的利点をもたらす場合があるため、一部の状況において好まれ得る。化合物は、受容体の分布を定量するための医用画像及び陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）の研究のために、陽電子を放出する同位体を組み入れることができる。式（Ｉ）の化合物に組み入れることができる好適な陽電子放出同位体は、11Ｃ、13Ｎ、15Ｏ、及び18Ｆである。概して、式（Ｉ）の同位体標識化合物は、当業者に公知の従来的技法により、または、適切な同位体標識試薬を非同位体標識試薬の代わりに用いた、付属の実施例に記載されているプロセスに類似するプロセスにより、調製することができる。
【０１１１】
式（Ｉ）の化合物の特性
式（Ｉ）の化合物は、発光を生成するためのルシフェラーゼの基質であり得る。「発光」とは、適切な条件下での、例えば、セレンテラジンアナログのような好適な基質が存在する場合におけるルシフェラーゼの光出力を指す。光出力は、発光反応の開始時における瞬時またはほぼ瞬時の光出力（「Ｔ＝０」発光または「フラッシュ」と称されることがある）の測定として測定することができ、この発光反応は、セレンテラジン基質の添加時に開始され得る。様々な実施形態において、発光反応は、溶液中で行われる。他の実施形態において、発光反応は、固体支持体上で行われる。溶液は、ライセート（例えば、原核生物または真核生物の発現系における細胞からのライセート）を含有することができる。他の実施形態において、発現は無細胞系で生じ、またはルシフェラーゼタンパク質は細胞外の媒体に分泌され、後者の場合は、ライセートを生成する必要がない。一部の実施形態において、反応は、適切な材料（例えば、セレンテラジンアナログ、緩衝液など）を、発光タンパク質を含有する反応チャンバー（例えば、９６ウェルプレートのようなマルチウェルプレートのウェル）に注入することにより、開始される。さらに他の実施形態において、ルシフェラーゼ及び／またはセレンテラジンのアナログ（例えば、式（Ｉ）の化合物）は宿主に導入され、発光の測定は、宿主またはその一部において行われる。宿主には、生物全体、またはその細胞、組織、外植片、もしくは抽出物が含まれ得る。ある特定の実施形態において、発光の測定は、宿主の表面、例えば、細胞表面で行われる。さらに他の実施形態において、ルシフェラーゼ及び／またはセレンテラジンのアナログ（例えば、式（Ｉ）の化合物）は宿主に導入され、発光の測定は、細胞外空間で行われる。反応チャンバーは、例えば、ルミノメーターまたは光電子増倍管を用いて光出力を測定することができる読取りデバイス内に位置し得る。また、光出力または発光は、例えば、同じ反応チャンバー内で、秒単位、分単位、時単位などの期間の間、経時的に計測することもできる。光出力または発光は、時間平均、シグナル減衰の半減期、ある時間期間にわたるシグナルの和、またはピーク出力として報告することができる。発光は、相対発光単位（ＲＬＵ）で測定することができる。
【０１１２】
式（Ｉ）の化合物は、セレンテラジンまたは公知のセレンテラジンアナログ（例えば、フリマジン）に対し、１以上、２以上、３以上、４以上、５以上、１０以上、２０以上、３０以上、４０以上、５０以上、または１００以上のＲＬＵを有し得る。
【０１１３】
本明細書で互換的に使用される「細胞透過性」、「細胞膜透過性」、または「膜透過性」とは、化合物が細胞膜を透過する能力を指す。この語は、化合物が細胞膜内に部分的に埋め込まれる能力を指す場合がある。この語は、化合物が細胞膜を完全に通過して細胞内空間に到達する能力を指す場合がある。本明細書で開示されているセレンテラジンアナログは、細胞透過性の低下を示すことができる。
【０１１４】
「生体適合性」とは、セレンテラジンアナログ（例えば、式（Ｉ）の化合物）に対する細胞（例えば、原核細胞または真核細胞）の認容性を指す。セレンテラジンアナログの生体適合性は、セレンテラジンアナログが宿主細胞上で引き起こすストレスに関係する。
【０１１５】
セレンテラジンアナログ（例えば、式（Ｉ）の化合物）の生体適合性の強化は、細胞生存率及び／または細胞の成長率を測定することにより、定量することができる。例えば、セレンテラジンアナログの生体適合性の強化は、セレンテラジンアナログに曝露された細胞のルシフェラーゼ発現の不在下での細胞生存率を、天然のまたは公知のセレンテラジンと比較して測定して、セレンテラジンアナログが細胞に対しどの程度適合性及び／または毒性であるかを定量することにより、定量することができる。
【０１１６】
特に、生体適合性の強化は、細胞生存率解析（例えば、ＣＥＬＬＴＩＴＥＲ−ＧＬＯ（登録商標）発光細胞生存率アッセイ）、アポトーシスアッセイ（例えば、ＣＡＳＰＡＳＥ−ＧＬＯ（登録商標）アッセイ技術）、または当技術分野で公知の別の方法を用いて定量することができる。式（Ｉ）の化合物が細胞生存率またはアポトーシスに及ぼす効果は、天然のまたは公知のセレンテラジンアナログが細胞生存率またはアポトーシスに及ぼす効果と比較することができる。
【０１１７】
また、生体適合性の強化は、セレンテラジンアナログ（例えば、式（Ｉ）の化合物）が細胞成長または遺伝子発現に及ぼす効果を測定することによっても定量することができる。例えば、式（Ｉ）の化合物における生体適合性の強化は、天然のまたは公知のセレンテラジンに曝露されているまたはセレンテラジンに曝露されていない細胞との比較で、式（Ｉ）の化合物に曝露されている細胞の試料中における、ある時間期間後の細胞数を測定することにより、またはストレス応答遺伝子の発現を定量することにより、定量することができる。式（Ｉ）の化合物が細胞成長または遺伝子発現に及ぼす効果は、天然のまたは公知のセレンテラジンと比較することができる。
【０１１８】
Ｂ．式（Ｉ）の化合物の合成
式（Ｉ）の化合物は、合成プロセスにより、または代謝プロセスにより、調製することができる。代謝プロセスによる化合物の調製は、ヒトもしくは動物の体内（ｉｎ  ｖｉｖｏ）で生じるプロセス、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏで生じるプロセスを含む。
【０１１９】
式（Ｉ）の化合物（Ｒ1基及びｑは、別段の記載がない限り、発明の概要の項に示されている意味を有する）は、スキーム１〜４及び一般手順Ａ〜Ｈに示されるように合成することができる。また、好適な合成方法としては、例えば、２０１６年２月１５日に出願されたＳｈａｋｈｍｉｎ  ｅｔ  ａｌ．に対する米国特許出願第６２／２９５，３６３号“ＣＯＥＬＥＮＴＥＲＡＺＩＮＥ  ＡＮＡＬＯＧＵＥＳ”（代理人整理番号０１６０２６−９５７４）に開示されている合成方法も挙げることができ、当該出願はその全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【０１２０】
次のスキームの説明で使用されている略語を挙げると、Ａｃ2Ｏは無水酢酸、ＣＤＩはカルボニルジイミダゾール、ＭｅＯＨはメタノール、ＴＭＧは１，１，３，３−テトラメチルグアニジン、そしてＴＦＡはトリフルオロ酢酸を表す。
【０１２１】
スキーム１．カルボキシル基を含有するセレンテラジンアナログの合成（一般手順Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ）
2020510617.tif 000011
【０１２２】
スキーム２．アミン基を含有するセレンテラジンアナログ（一般手順Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ）
2020510617.tif 000012
【０１２３】
スキーム３．スルホネート基を含有するセレンテラジンアナログ（一般手順Ａ、Ｇ、Ｈ、Ｉ）
2020510617.tif 000013
【０１２４】
スキーム４．６位の修飾を含有するセレンテラジンアナログまたはフリマジンアナログ（一般手順Ｄ、Ｅ、Ｆ）
2020510617.tif 000014
【０１２５】
一般手順
【０１２６】
一般手順Ａ（ヒドロキシルベンズアルデヒドのアルキル化）：ヒドロキシルベンズアルデヒド（１当量）のアセトニトリル中溶液に、臭化アルキル（１．５当量）及び炭酸セシウム（１．２当量）を添加した。混合物を４〜１８時間６０℃に加熱した。混合物を冷却し、酢酸エチル及び水で希釈し、水層を酢酸エチルで抽出した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーで精製した。
【０１２７】
一般手順Ｂ（鹸化）：メチルエステルまたはエチルエステル（１当量）のメタノール中溶液に、水酸化ナトリウム（２Ｍ、１．３当量）を添加した。溶液を室温にて１８時間撹拌した。溶液をＨＣｌ（２Ｍ）で酸性化し、酢酸エチル及び水で希釈し、水層を酢酸エチルで抽出した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮し、粗生成物として次のステップで使用した。
【０１２８】
一般手順Ｃ（ｔ−ブチルエステル形成）：カルボキシレート（１当量）のトルエン中懸濁液に、１，１−ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルメタンアミン（２当量）を添加した。混合物を１８時間８５℃に加熱した。混合物を冷却し、酢酸エチル及び水で希釈し、水層を酢酸エチルで抽出した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーで精製した。
【０１２９】
一般手順Ｄ（ＨＷＥ反応）：アルデヒド（１当量）及び２−（（３−ベンジル−５−フェニルピラジン−２−イル）アミノ）−２−（ジエトキシホスホリル）酢酸メチル（１当量）のメタノール中溶液に、１，１，３，３−テトラメチルグアニジン（３当量）を添加した。溶液を室温にて０．５〜２時間撹拌した。混合物をジクロロメタン及び約０．１ＭのＨＣｌで希釈し、水層をジクロロメタンで抽出した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーで精製した。
【０１３０】
一般手順Ｅ（還元）：デヒドロセレンテラジン（１当量）のジクロロメタン及びメタノール（１：１）中懸濁液を、氷浴で冷却した。水素化ホウ素ナトリウム（５当量）を添加し、混合物を０．５〜２時間撹拌した。混合物をジクロロメタン及び約０．１ＭのＨＣｌで希釈し、水層をジクロロメタンで抽出した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーで精製した。
【０１３１】
一般手順Ｆ（ＴＦＡ脱保護）：セレンテラジンアナログのジクロロメタン（１０ｍＬ）中溶液に、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）を添加した。溶液を２〜６時間撹拌した。混合物をトルエンで希釈し、濃縮し、トルエンに再懸濁させ、濃縮した。これを２回繰り返した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィーで精製した。
【０１３２】
一般手順Ｇ（スルホン化）：臭化アルキル（１当量）のエタノール中溶液を７５℃に加熱した。亜硫酸ナトリウム（５当量）の水性溶液を添加し、混合物を７５℃にて１８時間撹拌した。混合物をエタノールで希釈し、セライトに添加し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーで精製した。
【０１３３】
一般手順Ｈ（スルホネートによるＨＷＥ反応）：スルホン化アルデヒド（１当量）及び２−（（３−ベンジル−５−フェニルピラジン−２−イル）アミノ）−２−（ジエトキシホスホリル）酢酸メチル（１当量）のメタノール中溶液に、水酸化ナトリウム（２Ｍ、３当量）を添加した。溶液を室温にて０．５〜２時間撹拌した。混合物をエタノールで希釈し、セライトに添加し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーで精製した。
【０１３４】
一般手順Ｉ（スルホネートによる還元）：デヒドロセレンテラジン（１当量）のジクロロメタン及びメタノール（１：１）中懸濁液を、氷浴で冷却した。水素化ホウ素ナトリウム（５当量）を添加し、混合物を０．５〜２時間撹拌した。混合物をエタノールで希釈し、セライトに添加し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーで精製した。
【０１３５】
各個々のステップにおける最適な反応条件や反応時間は、用いる特定の反応物質や反応物質中に存在する使用置換基に応じて変動し得る。具体的な手順を実施例の項で示す。反応は、従来の様式でワークアップすることができ、例えば、当技術分野で一般に知られている方法論（例えば、以下に限定されないが、結晶化、蒸留、抽出、粉砕、及びクロマトグラフィー）に従って、残渣から溶媒を除去し、さらに精製することにより行われる。別途記載がない限り、出発材料及び試薬は、市販のものであるか、または当業者により、化学文献に記載されている方法を用いて市販の材料から調製することができる。出発材料が市販のものでない場合、出発材料は、標準的な有機化学的手法か、構造的に同様な公知の化合物の合成に類似する技法か、または上述されたスキームもしくは合成例の項に記載されている手順に類似する技法から選択される手順により、調製することができる。
【０１３６】
通例的な実験作業は、反応条件、試薬、及び合成経路の順序の適切な操作、反応条件に適合性でない恐れのある任意の化学官能性の保護、ならびに本方法の反応順序における好適なポイントでの脱保護を含めて、本発明の範囲に含まれる。好適な保護基、ならびにこのような好適な保護基を用いて種々の置換基を保護及び脱保護する方法は、当業者に周知されており、このような方法の例は、ＰＧＭ  Ｗｕｔｓ及びＴＷ  ＧｒｅｅｎｅによるＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（４th  ｅｄ．）という表題のＧｒｅｅｎｅの書籍（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹ（２００６））に見いだすことができ、当該文献は、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。本発明の化合物の合成は、上述された合成スキームまたは具体的な実施例に記載の方法に類似する方法により、遂行することができる。
【０１３７】
開示化合物の光学的活性形態が必要とされる場合、当該形態は、光学的に活性の出発材料（例えば、好適な反応ステップの不斉誘導により調製）を用いて、本明細書に記載されている手順のうちの１つを行うことにより、または標準的な手順（例えば、クロマトグラフィー分離、再結晶、もしくは酵素的分割）を用いて、化合物もしくは中間体の立体異性体混合物を分割することにより、取得することができる。
【０１３８】
同様に、化合物の純粋な幾何異性体が必要とされる場合、当該異性体は、純粋な幾何異性体を出発材料として用いて、上記手順のうちの１つを行うことにより、またはクロマトグラフィー分離のような標準的な手順を用いて、化合物もしくは中間体の幾何異性体混合物を分割することにより、取得することができる。
【０１３９】
塩基付加塩は、本開示の化合物を最終的に単離及び精製する間に、カルボキシル基を、金属カチオン（例えば、リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、もしくはアルミニウム）の好適な塩基（例えば、水酸化物、炭酸塩、もしくは重炭酸塩）、または有機１級、２級、もしくは３級アミンと反応させることにより、調製することができる。４級アミン塩、例えば、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ジエチルアミン、エチルアミン、トリブチルアミン、ピリジン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン、Ｎ−メチルピペリジン、Ｎ−メチルモルホリン、ジシクロヘキシルアミン、プロカイン、ジベンジルアミン、Ｎ，Ｎ−ジベンジルフェネチルアミン、１−エフェナミン及びＮ，Ｎ′−ジベンジルエチレンジアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペリジン、ピペラジンなどに由来するものを調製することができる。
【０１４０】
記載されている合成スキーム及び具体的な実施例は、例示的なものであり、付属の特許請求の範囲で定義されている本発明の範囲を限定するように解釈すべきではないことが理解され得る。合成方法及び具体的な実施例における全ての代替方法、変更、及び等価物は、特許請求の範囲内に含まれる。
【０１４１】
３．使用方法及びキット
本開示の化合物は、ルシフェラーゼ基質（例えば、セレンテラジンまたはセレンテラジンアナログ）が使用されている任意の方法で使用することができる。例えば、本開示の化合物は、セレンテラジンのアナログを用いて、試料中の１つ以上の分子（例えば、酵素、酵素反応のための補因子、酵素基質、酵素阻害物質、酵素活性化物質、もしくはＯＨラジカル）、または１つ以上の条件（例えば、レドックス条件）を検出する、生体発光法で使用することができる。試料としては、動物（例えば、脊椎動物）、植物、真菌、生理的液体（例えば、血液、血漿、尿、粘液分泌物）、細胞、細胞ライセート、細胞上清、または精製された細胞画分（例えば、細胞内画分）を挙げることができる。このような分子の存在、量、スペクトル分布、放出動態、または特定の活性は、検出または定量化することができる。分子は、多相溶液（例えば、エマルションもしくは懸濁液）を含めた溶液中で、または固体支持体（例えば、粒子、キャピラリー、もしくはアッセイ容器）上で、検出または定量化することができる。
【０１４２】
ある特定の実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、低分子を定量化するために使用することができる。一部の実施形態において、セレンテラジン（例えば、天然のもしくは公知のセレンテラジンまたは式（Ｉ）の化合物）は、特定の生化学活性（例えば、アポトーシスまたは薬物代謝）のプローブとして使用することができる。一部の実施形態において、セレンテラジン濃度は、目的の特定の酵素が作用し得る「プロセレンテラジン」または「プロ基質」により、その特定の酵素の活性に結び付けられる。一部の実施形態において、プロセレンテラジンは、ルシフェラーゼと合わせたときに直接的に発光を支持することはできないが、目的の特定の酵素による触媒処理を通じてセレンテラジンに変換され得る分子である。一部の実施形態において、このアプローチは、酵素、例えば、薬物代謝で使用されている酵素（例えば、シトクロムＰ４５０酵素、モノアミンオキシダーゼ、及びグルタチオンＳ−トランスフェラーゼ）や、アポトーシス（例えば、カスパーゼ）で使用されている酵素に対し使用することができる。例えば、セレンテラジン（例えば、天然のもしくは公知のセレンテラジン、または式（Ｉ）の化合物）は、６′−Ｏ−メチルのような切断可能な基を含有するように修飾することができる。一部の実施形態において、６′Ｏ−メチルは、特定のシトクロムＰ４５０酵素と共にインキュベーションすると切断され、プロセレンテラジンはセレンテラジンに変換され、ルシフェラーゼで検出することができる。一部の実施形態において、プロセレンテラジンは、発光（例えば、ルシフェラーゼのような発光タンパク質）を支持するために必要な他の構成成分と合わせて、単一の試薬及び均一アッセイをもたらすことができる。例えば、この試薬が試料に添加されると、プロセレンテラジンがセレンテラジンに変換されるに伴って発光が産生される。様々な実施形態において、同様のアッセイを、他の酵素、低分子、またはプロセレンテラジンからのセレンテラジン産生に関連付けられ得る他の細胞プロセスに対し、開発することができる。
【０１４３】
ある特定の実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、生細胞内の発光を検出するために使用することができる。ある特定の実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、細胞外事象を測定するための生体発光法で使用することができる。他の実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、細胞表面事象を測定するための生体発光法で使用することができる。一部の実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、細胞死を測定するための生体発光法で使用することができる。特定の実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、試料中の細胞死を検出する方法であって、（ａ）試料を、細胞死を誘導する化合物に接触させることと、（ｂ）当該試料を上述された化合物に接触させることと、（ｃ）当該試料中の発光を検出することとを含み、当該試料が、セレンテラジン利用ルシフェラーゼを発現する細胞を含む、方法で使用することができる。例えば、標的細胞としては、ＮａｎｏＬｕｃを発現する細胞を挙げることができ、この標的細胞に目的化合物を添加して、細胞死を誘導することができる。標的細胞としては、ＨＥＫ２９３細胞、または他の好適な細胞系もしくは細胞培養物を挙げることができる。
【０１４４】
一部の実施形態において、ＮａｎｏＬｕｃを発現する標的細胞は、エフェクター細胞と共に混合することができ、エフェクター細胞としては、以下に限定されないが、初代Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＣＡＲ−Ｔ細胞、またはＴＡＬＬ−１０４細胞が挙げられる。目的化合物は、エフェクター細胞を活性化するために細胞に添加することができる。次に続く細胞死の誘導は、本開示の化合物を用いて検出することができると考えられる。
【０１４５】
一部の実施形態において、標的細胞は、腫瘍細胞である。本開示の化合物は、細胞死をモニターするために使用することができ、そのため、抗腫瘍処置の有効性を定量するために使用することができる。例えば、目的化合物は、腫瘍細胞を殺すように設計された抗体であり得る。抗体は、腫瘍細胞を殺す任意の作用様式を有することができ、この作用様式としては、以下に限定されないが、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、ＣＤＣ、ＡＤＣ、ＢｉＴＥ、または腫瘍細胞を殺す免疫腫瘍学的薬物が挙げられる。抗体に誘導される腫瘍細胞死は、細胞内のＮａｎｏＬｕｃを腫瘍細胞から解放し、そのため本開示の細胞不透過性化合物による検出を可能にすると考えられる。
【０１４６】
一部の実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、安定した共有結合リンカーにより、細胞透過性を減少させる極性基に繋留され得る。式（Ｉ）の化合物は、細胞不透過性であることに加えて、細胞生存率の観点において天然のセレンテラジンに匹敵する生体適合性を示す。一部の実施形態において、培地中の天然のセレンテラジンの安定性を増加することが知られている化学修飾を含有する式（Ｉ）の化合物は、より堅牢な生細胞ルシフェラーゼベースのレポーターアッセイのために合成及び使用することができる。さらに他の実施形態において、ルシフェラーゼ及び式（Ｉ）の化合物を含有する試料（細胞、組織、動物などを含む）は、様々な顕微鏡及びイメージングの技法を用いてアッセイすることができる。さらに他の実施形態において、分泌可能なルシフェラーゼを、生細胞レポーター系の一部として細胞内で発現させることができ、ルシフェラーゼの分泌は、式（Ｉ）の化合物により検出することができる。特定の実施形態において、本発明化合物は、試料中の生物発光酵素の分泌を検出する方法であって、（ａ）試料を、上述された化合物に接触させることと、（ｂ）当該試料中の発光を検出することとを含み、当該試料が、分泌可能な生物発光酵素を発現する細胞を含む、方法で使用することができる。このような方法における試料としては、ＨＥＫ２９３細胞のような細胞、または他の好適な細胞系もしくは細胞培養物を挙げることができる。
【０１４７】
ある特定の実施形態において、本明細書で開示されている式（Ｉ）の化合物は、キットの一部として提供されてもよい。一部の実施形態において、キットは、使用者が本明細書で開示されているようなアッセイを実施できるように、１つ以上のルシフェラーゼ（ポリペプチド、ポリヌクレオチド、または両方の形態）及びセレンテラジンと共に好適な試薬及び使用説明書を含むことができる。セレンテラジンは、天然の化合物、公知の化合物、または本明細書で開示されている式（Ｉ）の化合物のうちのいずれであってもよい。また、キットは、本明細書で開示されている緩衝液のような１つ以上の緩衝液を含んでもよい。
【０１４８】
４．実施例
実施例１
６−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２−クロロフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸２，２，２−トリクロロエチル（ＪＲＷ−０６６５）
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【０１４９】
ステップ１．４−（（６−ブロモヘキシル）オキシ）ベンズアルデヒド（ＪＲＷ−０６５１）
2020510617.tif 000016
【０１５０】
一般手順Ａの後に、４−ヒドロキシベンズアルデヒド（２．０ｇ、１６．４ｍｍｏｌ）を１，６−ジブロモヘキサン（８．０ｇ、３２．８ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の生成物（３．１ｇ、６６％）を白色の固体として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ3） δ １０．８７ − １０．４６ （ｍ， １Ｈ）， ８．８７ − ８．４８ （ｍ， ２Ｈ）， ７．８５ − ７．７８ （ｍ， ２Ｈ）， ５．０１ − ４．６７ （ｍ， ２Ｈ）， ４．４１ − ４．０７ （ｍ， ２Ｈ）， ２．８３ − ２．５２ （ｍ， ４Ｈ）， ２．４５ − ２．２５ （ｍ， ４Ｈ）；ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ２８５ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０１５１】
スキーム５．中間体ＪＲＷ−０６５６の合成
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【０１５２】
ステップ２．Ｓ−（６−（４−ホルミルフェノキシ）ヘキシル）エタンチオエート（ＪＲＷ−０６５３）
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【０１５３】
４−（（６−ブロモヘキシル）オキシ）ベンズアルデヒド（３．００ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３０ｍＬ）中溶液に、テトラエチルアンモニウムヨージド（０．２７ｇ、１．１ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を氷浴で冷却し、チオ酢酸カリウム（１．３２ｇ、１１．６ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を１時間室温に加温し、酢酸エチル及び水で希釈し、水層を酢酸エチルで抽出した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーで精製して、所望の生成物（２．４５ｇ、８３％）を無色の油として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ3） δ ９．８７ （ｓ， １Ｈ）， ７．８５ − ７．７７ （ｍ， ２Ｈ）， ７．０２ − ６．９４ （ｍ， ２Ｈ）， ４．０２ （ｔ， Ｊ ＝ ６．４， ２Ｈ）， ２．９３ − ２．８２ （ｍ， ２Ｈ）， ２．３２ （ｓ， ３Ｈ）， １．９２ − １．３４ （ｍ， ８Ｈ）；ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ２８１ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０１５４】
ステップ３．６−（４−ホルミルフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸２，２，２−トリクロロエチル及び６−（２−クロロ−４−ホルミルフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸２，２，２−トリクロロエチル
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【０１５５】
Ｎ−クロロスクシンアミド（１．８１ｇ、１３．６ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（８ｍＬ）及びＨＣｌ（２Ｍ、２ｍＬ）中溶液に、アセトニトリル（５ｍＬ）中Ｓ−（６−（４−ホルミルフェノキシ）ヘキシル）エタンチオエート（１．０ｇ、３．６ｍｍｏｌ）を５分にわたり滴下添加した。混合物を室温にて３０分間撹拌し、エーテルで希釈し、ブラインで洗浄した。有機層を濃縮し、ＴＨＦ（２０ｍＬ）に再溶解した。トリクロロエタノール（３．５ｍＬ）及び２，６−ルチデン（２，６−ｌｕｔｉｄｅｎｅ）（１．５３ｇ、１４．３ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を８５℃にて２日間加熱した。反応物を冷却し、酢酸エチルで希釈し、ＨＣｌ（１Ｍ）及びブラインで洗浄した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーで精製して、生成物の混合物（０．５４ｇ、３６％）を淡い褐色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４１７， ４５１ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０１５６】
ステップ４．（Ｚ）−６−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２（３Ｈ）−イリデン）メチル）−２−クロロフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸２，２，２−トリクロロエチル（ＪＲＷ−０６６３）
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【０１５７】
一般手順Ｄの後に、６−（４−ホルミルフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸２，２，２−トリクロロエチル及び６−（２−クロロ−４−ホルミルフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸２，２，２−トリクロロエチルの混合物（９２ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を２−（（３−ベンジル−５−フェニルピラジン−２−イル）アミノ）−２−（ジエトキシホスホリル）酢酸ベンジル（１００ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の粗生成物（８６ｍｇ）を赤黒色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ７３４ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．注：６−（２−クロロ−４−ホルミルフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸２，２，２−トリクロロエチルのみが、これらの反応条件下で反応した。
【０１５８】
ステップ５．６−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２−クロロフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸２，２，２−トリクロロエチル（ＪＲＷ−０６６５）
2020510617.tif 000022
【０１５９】
一般手順Ｅの後に、（Ｚ）−６−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２（３Ｈ）−イリデン）メチル）−２−クロロフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸２，２，２−トリクロロエチル（８６ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を水素化ホウ素ナトリウム（１３ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の生成物（７３ｍｇ、２ステップにわたり５５％）を橙色の泡沫として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤ3ＯＤ） δ ７．５０ − ７．１５ （ｍ， １３Ｈ）， ６．９２ − ６．７５ （ｍ， ２Ｈ）， ４．７３ （ｓ， ２Ｈ）， ４．５６ （ｓ， ２Ｈ）， ４．００ − ３．９３ （ｍ， ２Ｈ）， ３．３５ − ３．２３ （ｍ， ２Ｈ）， １．８７ − １．７４ （ｍ， ２Ｈ）， １．７０ − １．４９ （ｍ， ６Ｈ）；ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ７３８ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋；ＨＰＬＣ ８８．７ ％ （ＡＵＣ）， ＴR ６．２６分；ＵＶ （ＭｅＯＨ） λ ４２８ ｎｍ， ε ６２３８．
【０１６０】
実施例２
６−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）フェノキシ）ヘキサン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＪＲＷ−０６８２）
2020510617.tif 000023
【０１６１】
ステップ１．６−（３−ホルミルフェノキシ）ヘキサン酸エチル（ＪＲＷ−０６６９）
2020510617.tif 000024
【０１６２】
一般手順Ａの後に、３−ヒドロキシベンズアルデヒド（２．０ｇ、１６．４ｍｍｏｌ）を６−ブロモヘキサン酸エチル（７．３ｇ、３２．８ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の生成物（４．２ｇ、９７％）を無色の油として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ3） δ ９．９６ （ｓ， １Ｈ）， ７．４６ − ７．４２ （ｍ， ２Ｈ）， ７．３７ − ７．３５ （ｍ， １Ｈ）， ７．１８ − ７．１２ （ｍ， １Ｈ）， ４．１３ （ｑ， Ｊ ＝ ７．１， ２Ｈ）， ４．０１ （ｔ， Ｊ ＝ ６．４， ２Ｈ）， ２．３３ （ｔ， Ｊ ＝ ７．４， ２Ｈ）， １．９１ − １．４２ （ｍ， ６Ｈ）， １．２５ （ｔ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， ３Ｈ）；ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ２６５ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０１６３】
ステップ２．６−（３−ホルミルフェノキシ）ヘキサン酸（ＪＲＷ−０６７２）
2020510617.tif 000025
【０１６４】
一般手順Ｂの後に、６−（３−ホルミルフェノキシ）ヘキサン酸エチル（４．０ｇ、１５．１ｍｍｏｌ）を水酸化ナトリウム（１９．７ｍＬ、１Ｍ、１９．７ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の生成物（３．６ｇ、定量的）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ２３７ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０１６５】
ステップ３．６−（３−ホルミルフェノキシ）ヘキサン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＪＲＷ−０６７５）
2020510617.tif 000026
【０１６６】
一般手順Ｃの後に、６−（３−ホルミルフェノキシ）ヘキサン酸（３．６ｇ、１５．２ｍｍｏｌ）を１，１−ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルメタンアミン（４．６５ｇ、２２．８ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の生成物（１．４７ｇ、３３％）を白色の固体として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ3） δ ９．９６ （ｓ， １Ｈ）， ７．４７ − ７．３３ （ｍ， ３Ｈ）， ７．２１ − ７．０９ （ｍ， １Ｈ）， ４．０１ （ｔ， Ｊ ＝ ６．４， ２Ｈ）， ２．２５ （ｔ， Ｊ ＝ ７．３， ２Ｈ）， １．８８ − １．７４ （ｍ， ２Ｈ）， １．７４ − １．５８ （ｍ， ２Ｈ）， １．５７ − １．３８ （ｍ， １１Ｈ）． ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ２９３ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０１６７】
ステップ４．（Ｚ）−６−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２（３Ｈ）−イリデン）メチル）フェノキシ）ヘキサン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＪＲＷ−０６７８）
2020510617.tif 000027
【０１６８】
一般手順Ｄの後に、６−（３−ホルミルフェノキシ）ヘキサン酸ｔｅｒｔ−ブチル（８０ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）を２−（（３−ベンジル−５−フェニルピラジン−２−イル）アミノ）−２−（ジエトキシホスホリル）酢酸ベンジル（１００ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の粗生成物（８９ｍｇ）を赤黒色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ６８４ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０１６９】
ステップ５．６−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）フェノキシ）ヘキサン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＪＲＷ−０６８２）
2020510617.tif 000028
【０１７０】
一般手順Ｅの後に、（Ｚ）−６−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２（３Ｈ）−イリデン）メチル）フェノキシ）ヘキサン酸ｔｅｒｔ−ブチル（８９ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を水素化ホウ素ナトリウム（２９ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の生成物（８８ｍｇ、２ステップにわたり８４％）を橙色の泡沫として得た。注：単離された材料は純粋ではなく、不純物が存在した。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤ2Ｃｌ2） δ ７．５０ − ７．２１ （ｍ， １３Ｈ）， ６．９２ − ６．７５ （ｍ， ２Ｈ）， ４．３９ （ｓ， ２Ｈ）， ４．１０ （ｓ， ２Ｈ）， ３．９３ − ３．８１ （ｍ， ２Ｈ）， ２．２７ − ２．１５ （ｍ， ２Ｈ）， １．８７ − １．４０ （ｍ， １２Ｈ）；ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５７８ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋；ＨＰＬＣ ８９．６ ％ （ＡＵＣ）， ＴR ６．１４分；ＵＶ （ＭｅＯＨ） λ ４３３ ｎｍ， ε ３４６２．
【０１７１】
実施例３
６−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）フェノキシ）ヘキサン酸（ＪＲＷ−０６８４）
2020510617.tif 000029
【０１７２】
一般手順Ｆの後に、６−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）フェノキシ）ヘキサン酸ｔｅｒｔ−ブチル（８０ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸（１ｍＬ）と反応させて、所望の生成物（３２ｍｇ、４４％）を橙色の固体として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤ2Ｃｌ2） δ ７．７６ − ７．１２ （ｍ， １２Ｈ）， ６．９６ − ６．８８ （ｍ， ２Ｈ）， ６．７５ − ６．６８ （ｍ， １Ｈ）， ４．３６ （ｓ， ２Ｈ）， ４．１２ （ｓ， ２Ｈ）， ３．９２ （ｔ， Ｊ ＝ ６．４， ２Ｈ）， ２．２８ （ｔ， Ｊ ＝ ７．３， ２Ｈ）， １．８２ − １．３９ （ｍ， ６Ｈ）；ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５２２ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋；ＨＰＬＣ ９７．６ ％ （ＡＵＣ）， ＴR ４．５２分；ＵＶ （ＭｅＯＨ） λ ４３１ ｎｍ， ε ８４３５．
【０１７３】
実施例４
８−ベンジル−２−（３−（（６−ブロモヘキシル）オキシ）ベンジル）−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−０６９２）
2020510617.tif 000030
【０１７４】
ステップ１．３−（（６−ブロモヘキシル）オキシ）ベンズアルデヒド（ＪＲＷ−０６９０）
2020510617.tif 000031
【０１７５】
一般手順Ａの後に、３−ヒドロキシベンズアルデヒド（２．０ｇ、１６．４ｍｍｏｌ）を１，６−ジブロモヘキサン（８．０ｇ、３２．８ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の生成物（３．４ｇ、７３％）を無色の油として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ２８５ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０１７６】
ステップ２．（Ｚ）−８−ベンジル−２−（３−（（６−ブロモヘキシル）オキシ）ベンジリデン）−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（ＪＲＷ−０６９１）
2020510617.tif 000032
【０１７７】
一般手順Ｄの後に、３−（（６−ブロモヘキシル）オキシ）ベンズアルデヒド（７８ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）を２−（（３−ベンジル−５−フェニルピラジン−２−イル）アミノ）−２−（ジエトキシホスホリル）酢酸ベンジル（１００ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の粗生成物（９３ｍｇ）を赤黒色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５６８ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０１７８】
ステップ３．８−ベンジル−２−（３−（（６−ブロモヘキシル）オキシ）ベンジル）−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−０６９２）
2020510617.tif 000033
【０１７９】
一般手順Ｅの後に、（Ｚ）−８−ベンジル−２−（３−（（６−ブロモヘキシル）オキシ）ベンジリデン）−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（９３ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）を水素化ホウ素ナトリウム（３１ｍｇ、０．８２ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の生成物（５７ｍｇ、２ステップにわたり５６％）を橙色の泡沫として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤ2Ｃｌ2） δ ７．５２ − ７０．３ （ｍ， １２Ｈ）， ６．９８ − ６．８０ （ｍ， ２Ｈ）， ６．７２ − ６．６２ （ｍ， １Ｈ）， ４．３９ （ｓ， ２Ｈ）， ４．０８ （ｓ， ２Ｈ）， ３．９２ − ３．７８ （ｍ， ２Ｈ）， ３．４１ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８， ２Ｈ）， １．９６ − １．６５ （ｍ， ４Ｈ）， １．５２ − １．３８ （ｓ， ４Ｈ）；ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５７０ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋；ＨＰＬＣ ９７．３ ％ （ＡＵＣ）， ＴR ６．１１分；ＵＶ （ＭｅＯＨ） λ ４２５ ｎｍ， ε ７２５０．
【０１８０】
実施例５
６−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）フェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸ナトリウム（ＪＲＷ−０７０３）
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【０１８１】
ステップ１．６−（３−ホルミルフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸ナトリウム（ＪＲＷ−０６９８）
2020510617.tif 000035
【０１８２】
一般手順Ｇの後に、３−（（６−ブロモヘキシル）オキシ）ベンズアルデヒド（２００ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ）を亜硫酸ナトリウム（４４２ｍｇ、３．５ｍｍｏｌ）と反応させて、粗生成物（３７５ｍｇ）を白色の固体として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤ3ＯＤ） δ ９．９３ （ｓ， １Ｈ）， ７．５２ − ７．４０ （ｍ， ３Ｈ）， ７．２８ − ７．２０ （ｍ， １Ｈ）， ４．０６ （ｔ， Ｊ ＝ ６．４， ２Ｈ）， ２．８８ − ２．７８ （ｍ， ２Ｈ）， １．８９ − １．７５ （ｍ， ４Ｈ）， １．６０ − １．４５ （ｍ， ４Ｈ）；ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ２８５ ［Ｍ − Ｈ − Ｎａ］−．
【０１８３】
ステップ２．（Ｚ）−６−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２（３Ｈ）−イリデン）メチル）フェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸ナトリウム（ＪＲＷ−０７０２）
2020510617.tif 000036
【０１８４】
一般手順Ｈの後に、６−（３−ホルミルフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸ナトリウム（８４ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）を２−（（３−ベンジル−５−フェニルピラジン−２−イル）アミノ）−２−（ジエトキシホスホリル）酢酸ベンジル（１００ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）と反応させて、粗生成物（６６ｍｇ）を赤黒色の固体として得た。
【０１８５】
ステップ３．６−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）フェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸ナトリウム（ＪＲＷ−０７０３）
2020510617.tif 000037
【０１８６】
一般手順Ｉの後に、（Ｚ）−６−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２（３Ｈ）−イリデン）メチル）フェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸ナトリウム（６６ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）を水素化ホウ素ナトリウム（２１ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の生成物（１７ｍｇ、２ステップにわたり１６％）を黄色の固体として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤ3ＯＤ） δ ７．８０ − ７．５７ （ｍ， ２Ｈ）， ７．５０ − ７．３６ （ｍ， ５Ｈ）， ７．３３ − ７．１１ （ｍ， ５Ｈ）， ６．９２ − ６．８５ （ｓ， ２Ｈ）， ６．７５ − ６．６７ （ｍ， １Ｈ）， ４．４１ （ｓ， ２Ｈ）， ４．１３ （ｓ， ２Ｈ）， ３．９９ − ３．８７ （ｓ， ２Ｈ）， ２．８３ − ２．７３ （ｍ， ２Ｈ）， １．８９ − １．６８ （ｍ， ４Ｈ）， １．５４ − １．４１ （ｍ， ４Ｈ）；ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５７２ ［Ｍ ＋ Ｈ − Ｎａ］＋；ＨＰＬＣ ９６．９ ％ （ＡＵＣ）， ＴR ４．７８分；ＵＶ （ＭｅＯＨ） λ ４３０ ｎｍ， ε ５８２４．
【０１８７】
実施例６
４−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）フェノキシ）ブタン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＪＲＷ−０７１４）
2020510617.tif 000038
【０１８８】
ステップ１．４−（３−ホルミルフェノキシ）ブタン酸メチル（ＪＲＷ−０６８８）
2020510617.tif 000039
【０１８９】
一般手順Ａの後に、３−ヒドロキシベンズアルデヒド（２．０ｇ、１６．４ｍｍｏｌ）を４−ブロモブタン酸メチル（３．５６ｇ、１９．７ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の生成物（３．５２ｇ、９６％）を無色の油として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ3） δ  １０．６５ − １０．６２ （ｍ， １Ｈ）， ８．１７ − ８．０２ （ｍ， ３Ｈ）， ７．８７ − ７．７９ （ｍ， １Ｈ）， ４．８０ − ７．６９ （ｍ， ２Ｈ）， ４．３７ （ｓ， ３Ｈ）， ３．２６ − ３．１５ （ｍ， ２Ｈ）， ２．８８ − ２．７２ （ｍ， ２Ｈ）．
【０１９０】
ステップ２．４−（３−ホルミルフェノキシ）ブタン酸（ＪＲＷ−０６８９）
2020510617.tif 000040
【０１９１】
一般手順Ｂの後に、４−（３−ホルミルフェノキシ）ブタン酸メチル（３．５ｇ、１５．８ｍｍｏｌ）を水酸化ナトリウム（２０．５ｍＬ、１Ｍ、２０．５ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の生成物（２．６４ｇ、８０％）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ２０９ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０１９２】
ステップ３．４−（３−ホルミルフェノキシ）ブタン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＪＲＷ−７０９）
2020510617.tif 000041
【０１９３】
一般手順Ｃの後に、４−（３−ホルミルフェノキシ）ブタン酸（０．５ｇ、２．４０ｍｍｏｌ）を１，１−ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルメタンアミン（０．９８ｇ、４．８０ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の生成物（０．１６ｇ、２５％）を無色の油として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ3） δ ９．９６ （ｓ， １Ｈ）， ７．５４ − ７．３２ （ｍ， ３Ｈ）， ７．２３ − ７．１１ （ｍ， １Ｈ）， ４．０５ （ｔ， Ｊ ＝ ６．２， ２Ｈ）， ２．４３ （ｔ， Ｊ ＝ ７．３， ２Ｈ）， ２．２１ − ２．０１ （ｍ， ２Ｈ）， １．４５ （ｓ， ９Ｈ）；ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ２６５ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０１９４】
ステップ４．（Ｚ）−４−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２（３Ｈ）−イリデン）メチル）フェノキシ）ブタン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＪＲＷ−０７１２）
2020510617.tif 000042
【０１９５】
一般手順Ｄの後に、４−（３−ホルミルフェノキシ）ブタン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１４８ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）を２−（（３−ベンジル−５−フェニルピラジン−２−イル）アミノ）−２−（ジエトキシホスホリル）酢酸メチル（１７５ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の粗生成物（１８０ｍｇ）を赤黒色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５８０ ［Ｍ ＋ Ｈ］+
【０１９６】
ステップ５．４−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）フェノキシ）ブタン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＪＲＷ−０７１４）
2020510617.tif 000043
【０１９７】
一般手順Ｅの後に、（Ｚ）−４−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２（３Ｈ）−イリデン）メチル）フェノキシ）ブタン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１８０ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）を水素化ホウ素ナトリウム（６２ｍｇ、１．６４ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の生成物（１１０ｍｇ、２ステップにわたり５４％）を橙色の泡沫として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤ3ＯＤ） δ ７．７５ − ７．５６ （ｍ， ３Ｈ）， ７．５１ − ７．３６ （ｍ， ５Ｈ）， ７．３２ − ７．１０ （ｍ， ４Ｈ）， ６．９３ − ６．８８ （ｍ， ２Ｈ）， ６．７５ − ６．６９ （ｍ， １Ｈ）， ４．４０ （ｓ， ２Ｈ）， ４．１３ （ｓ， ２Ｈ）， ３．９３ （ｔ， Ｊ ＝ ６．２， ２Ｈ）， ２．３６ （ｔ， Ｊ ＝ ７．３， ２Ｈ）， ２．０３ − １．９２ （ｍ， ２Ｈ）， １．３９ （ｓ， ９Ｈ）；ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５５０ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋；ＨＰＬＣ ９９．９ ％ （ＡＵＣ）， ＴR ５．８０分；ＵＶ （ＭｅＯＨ） λ ４３３ ｎｍ， ε ９８７２．
【０１９８】
実施例７
３−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）フェノキシ）プロパン−１−スルホン酸ナトリウム（ＪＲＷ−０７１３）
2020510617.tif 000044
【０１９９】
ステップ１．３−（３−ホルミルフェノキシ）プロパン−１−スルホン酸（ＪＲＷ−０６７１）
2020510617.tif 000045
【０２００】
一般手順Ａの後に、３−ヒドロキシベンズアルデヒド（１．０ｇ、８．２ｍｍｏｌ）を１，２−オキサチオラン２，２−ジオキシド（２．０ｇ、１６．４ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の生成物（３．２ｇ）を白色の固体として得た。注：単離された材料は純粋ではなく、不純物が存在した。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤ3ＯＤ） δ ９．９４ （ｓ， １Ｈ）， ７．５８ − ７．４０ （ｍ， ３Ｈ）， ７．３４ − ７．２０ （ｍ， １Ｈ）， ４．１９ （ｔ， Ｊ ＝ ６．３， ２Ｈ）， ３．３４ − ３．２８ （ｍ， ２Ｈ）， ３．０４ − ２．９５ （ｍ， ２Ｈ）， ２．３４ − ２．２１ （ｍ， ２Ｈ）；ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ２４５ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋．
【０２０１】
ステップ２．（Ｚ）−３−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２（３Ｈ）−イリデン）メチル）フェノキシ）プロパン−１−スルホン酸ナトリウム（ＪＲＷ−０７１１）
2020510617.tif 000046
【０２０２】
一般手順Ｈの後に、３−（３−ホルミルフェノキシ）プロパン−１−スルホン酸（１７９ｍｇ、０．７３ｍｍｏｌ）を２−（（３−ベンジル−５−フェニルピラジン−２−イル）アミノ）−２−（ジエトキシホスホリル）酢酸ベンジル（２００ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）と反応させて、粗生成物（４１０ｍｇ）を赤黒色の固体として得た。
【０２０３】
ステップ３．３−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）フェノキシ）プロパン−１−スルホン酸ナトリウム（ＪＲＷ−０７１３）
2020510617.tif 000047
【０２０４】
一般手順Ｉの後に、（Ｚ）−３−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２（３Ｈ）−イリデン）メチル）フェノキシ）プロパン−１−スルホン酸ナトリウム（０．３６ｍｍｏｌ）を水素化ホウ素ナトリウム（６９ｍｇ、１．８３ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の生成物（４６ｍｇ、２ステップにわたり２３％）を橙褐色の固体として得た。注：単離された材料は純粋ではなく、不純物が存在した。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤ3ＯＤ） δ ７．８１ − ７．６０ （ｓ， ２Ｈ）， ７．５１ − ７．３７ （ｍ， ５Ｈ）， ７．３７ − ７．０９ （ｍ， ５Ｈ）， ６．９６ − ６．８５ （ｍ， ２Ｈ）， ６．８４ − ６．７３ （ｍ， １Ｈ）， ４．５５ （ｓ， ２Ｈ）， ４．４２ （ｓ， ２Ｈ）， ４．２０ − ３．９７ （ｍ， ２Ｈ）， ３．０３ − ２．９０ （ｍ， ２Ｈ）， ２．３０ − ２．１６ （ｍ， ２Ｈ）；ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５３０ ［Ｍ ＋ Ｈ − Ｎａ］＋；ＨＰＬＣ ９６．５ ％ （ＡＵＣ）， ＴR ３．３５分；ＵＶ （ＭｅＯＨ） λ ４３１ ｎｍ， ε ４７４６．
【０２０５】
実施例８
４−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）フェノキシ）ブタン酸（ＪＲＷ−０７１６）
2020510617.tif 000048
【０２０６】
一般手順Ｆの後に、４−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）フェノキシ）ブタン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１００ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸（１ｍＬ）と反応させて、所望の生成物（８２ｍｇ、９１％）を橙色の固体として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤ3ＯＤ） δ ７．８０ − ７．５８ （ｍ， ３Ｈ）， ７．５１ − ７．３７ （ｍ， ５Ｈ）， ７．３５ − ７．１２ （ｍ， ４Ｈ）， ６．９５ − ６．８７ （ｍ， ２Ｈ）， ６．７８ − ６．７０ （ｍ， １Ｈ）， ４．４１ （ｓ， ２Ｈ）， ４．１３ （ｓ， ２Ｈ）， ３．９６ （ｔ， Ｊ ＝ ６．２， ２Ｈ）， ２．４４ （ｔ， Ｊ ＝ ７．３， ２Ｈ）， ２．１０ − １．９３ （ｍ， ２Ｈ）；ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４９４ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋；ＨＰＬＣ ９８．４ ％ （ＡＵＣ）， ＴR ４．９９分；ＵＶ （ＭｅＯＨ） λ ４３１ ｎｍ， ε １４７８６．
【０２０７】
実施例９
８−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）フェノキシ）オクタン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＪＲＷ−０７１９）
2020510617.tif 000049
【０２０８】
ステップ１．８−（３−ホルミルフェノキシ）オクタン酸エチル（ＪＲＷ−０６９７）
2020510617.tif 000050
【０２０９】
一般手順Ａの後に、３−ヒドロキシベンズアルデヒド（１．０ｇ、８．２ｍｍｏｌ）を８−ブロモオクタン酸エチル（２．４７ｇ、９．８ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の生成物（２．０７ｇ、８７％）を無色の油として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ3） δ ９．９７ （ｓ， １Ｈ）， ７．４７ − ７．３６ （ｍ， ３Ｈ）， ７．２０ − ７．１３ （ｍ， １Ｈ）， ４．１２ （ｑ， Ｊ ＝ ７．１， ２Ｈ）， ４．０１ （ｔ， Ｊ ＝ ６．５， ２Ｈ）， ２．２９ （ｔ， Ｊ ＝ ７．５， ２Ｈ）， １．８７ − １．７２ （ｍ， ２Ｈ）， １．７１ − １．５５ （ｍ， ２Ｈ）， １．５４ − １．３０ （ｍ， ６Ｈ）， １．２５ （ｔ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， ３Ｈ）．
【０２１０】
ステップ２．８−（３−ホルミルフェノキシ）オクタン酸（ＪＲＷ−０６９９）
2020510617.tif 000051
【０２１１】
一般手順Ｂの後に、８−（３−ホルミルフェノキシ）オクタン酸エチル（２．０７ｇ、７．１ｍｍｏｌ）を水酸化ナトリウム（９．２ｍＬ、１Ｍ、９．２ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の生成物（１．８ｇ、９６％）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ２６５ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２１２】
ステップ３．８−（３−ホルミルフェノキシ）オクタン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＪＲＷ−７１０）
2020510617.tif 000052
【０２１３】
一般手順Ｃの後に、８−（３−ホルミルフェノキシ）オクタン酸（０．５ｇ、１．９ｍｍｏｌ）を１，１−ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルメタンアミン（０．７７ｇ、３．８ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の生成物（０．１５ｇ、２５％）を無色の油として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ3） δ ９．９７ （ｓ， １Ｈ）， ７．４７ − ７．３５ （ｍ， ３Ｈ）， ７．２１ − ７．１２ （ｍ， １Ｈ）， ４．０１ （ｔ， Ｊ ＝ ６．５， ２Ｈ）， ２．２１ （ｔ， Ｊ ＝ ７．４， ２Ｈ）， １．８８ − １．７２ （ｍ， ２Ｈ）， １．７１ − １．２５ （ｍ， １７Ｈ）；ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３２１ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２１４】
ステップ４．（Ｚ）−８−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２（３Ｈ）−イリデン）メチル）フェノキシ）オクタン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＪＲＷ−０７１７）
2020510617.tif 000053
【０２１５】
一般手順Ｄの後に、８−（３−ホルミルフェノキシ）オクタン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１４１ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）を２−（（３−ベンジル−５−フェニルピラジン−２−イル）アミノ）−２−（ジエトキシホスホリル）酢酸メチル（２００ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の粗生成物（１４５ｍｇ）を赤黒色の固体として得た。
【０２１６】
ステップ５．８−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）フェノキシ）オクタン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＪＲＷ−０７１９）
2020510617.tif 000054
【０２１７】
一般手順Ｅの後に、（Ｚ）−８−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２（３Ｈ）−イリデン）メチル）フェノキシ）オクタン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１４５ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）を水素化ホウ素ナトリウム（４５ｍｇ、１．２０ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の生成物（９４ｍｇ、２ステップにわたり４２％）を橙色の泡沫として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤ3ＯＤ） δ ７．７５ − ７．５９ （ｍ， ３Ｈ）， ７．５０ − ７．３５ （ｍ， ５Ｈ）， ７．３３ − ７．１１ （ｍ， ４Ｈ）， ６．９３ − ６．８６ （ｍ， ２Ｈ）， ６．７４ − ６．６８ （ｍ， １Ｈ）， ４．４０ （ｓ， ２Ｈ）， ４．１３ （ｓ， ２Ｈ）， ３．９０ （ｔ， Ｊ ＝ ６．４， ２Ｈ）， ２．１８ （ｔ， Ｊ ＝ ７．３， ２Ｈ）， １．８０ − １．２４ （ｍ， １９Ｈ）；ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ６０６ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋；ＨＰＬＣ ＞９９ ％ （ＡＵＣ）， ＴR ７．８２分；ＵＶ （ＭｅＯＨ） λ ４３０ ｎｍ， ε ８２７２．
【０２１８】
実施例１０
８−ベンジル−２−（４−（（６−ブロモヘキシル）オキシ）−３−クロロベンジル）−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−０７２０）
2020510617.tif 000055
【０２１９】
ステップ１．４−（（６−ブロモヘキシル）オキシ）−３−クロロベンズアルデヒド（ＪＲＷ−０７０４）
2020510617.tif 000056
【０２２０】
一般手順Ａの後に、３−クロロ−４−ヒドロキシベンズアルデヒド（１．０ｇ、６．４ｍｍｏｌ）を１，６−ジブロモヘキサン（２．３４ｇ、９．６ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の生成物（１．２ｇ、５９％）を無色の油として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ3） δ ９．８６ （ｓ， １Ｈ）， ７．９０ （ｄ， Ｊ ＝ ２．０， １Ｈ）， ７．７５ （ｄｄ， Ｊ ＝ ２．０， ８．５， １Ｈ）， ７．０１ （ｔ， Ｊ ＝ ８．５， １Ｈ）， ４．１３ （ｔ， Ｊ ＝ ６．３， ３Ｈ）， ３．４３ （ｔ， Ｊ ＝ ６．７， ３Ｈ）， ２．００ − １．８０ （ｍ， ４Ｈ）， １．６６ − １．４８ （ｍ， ４Ｈ）；ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３１９ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２２１】
ステップ２．（Ｚ）−８−ベンジル−２−（４−（（６−ブロモヘキシル）オキシ）−３−クロロベンジリデン）−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（ＪＲＷ−０７１８）
2020510617.tif 000057
【０２２２】
一般手順Ｄの後に、４−（（６−ブロモヘキシル）オキシ）−３−クロロベンズアルデヒド（５３ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）を２−（（３−ベンジル−５−フェニルピラジン−２−イル）アミノ）−２−（ジエトキシホスホリル）酢酸メチル（７５ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の粗生成物（６３ｍｇ）を赤黒色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ６０２ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２２３】
ステップ３．８−ベンジル−２−（４−（（６−ブロモヘキシル）オキシ）−３−クロロベンジル）−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−０７２０）
2020510617.tif 000058
【０２２４】
一般手順Ｅの後に、（Ｚ）−８−ベンジル−２−（４−（（６−ブロモヘキシル）オキシ）−３−クロロベンジリデン）−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（６３ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）を水素化ホウ素ナトリウム（２０ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の生成物（２５ｍｇ、２ステップにわたり３０％）を橙色の泡沫として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤ3ＯＤ） δ ７．７８ − ７．５８ （ｍ， ３Ｈ）， ７．５４ − ７．１５ （ｍ， １０Ｈ）， ６．９７ − ６．９１ （ｍ， １Ｈ）， ４．４０ （ｓ， ２Ｈ）， ４．０８ （ｓ， ２Ｈ）， ３．９９ （ｔ， Ｊ ＝ ６．２， ２Ｈ）， ３．４２ （ｔ， Ｊ ＝ ６．７， ２Ｈ）， １．９１ − １．７０ （ｍ， ４Ｈ）， １．６０ − １．４３ （ｍ， ４Ｈ）；ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ６０６ ［Ｍ ＋ ２ ＋ Ｈ］＋；ＨＰＬＣ ９８．１ ％ （ＡＵＣ）， ＴR ７．６３分；ＵＶ （ＭｅＯＨ） λ ４３３ ｎｍ， ε ９１７３．
【０２２５】
実施例１１
８−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）フェノキシ）オクタン酸（ＪＲＷ−０７２２）
2020510617.tif 000059
【０２２６】
一般手順Ｆの後に、８−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）フェノキシ）オクタン酸ｔｅｒｔ−ブチル（８５ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸（１ｍＬ）と反応させて、所望の生成物（７５ｍｇ、９７％）を橙色の固体として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤ3ＯＤ） δ ７．８０ − ７．５５ （ｍ， ３Ｈ）， ７．５４ − ７．３４ （ｍ， ５Ｈ）， ７．３４ − ７．０７ （ｍ， ４Ｈ）， ６．９５ − ６．８６ （ｍ， ２Ｈ）， ６．７４ − ６．６８ （ｍ， １Ｈ）， ４．４０ （ｓ， ２Ｈ）， ４．１３ （ｓ， ２Ｈ）， ３．９０ （ｔ， Ｊ ＝ ６．３， ２Ｈ）， ２．２５ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２， ２Ｈ）， １．８１ − １．２４ （ｍ， １０Ｈ）；ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５５０ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋；ＨＰＬＣ ９９．５ ％ （ＡＵＣ）， ＴR ５．９６分；ＵＶ （ＭｅＯＨ） λ ４３２ ｎｍ， ε ９７９８．
【０２２７】
実施例１２
６−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２−クロロフェノキシ）ヘキサン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＪＲＷ−０７２５）
2020510617.tif 000060
【０２２８】
ステップ１．６−（２−クロロ−４−ホルミルフェノキシ）ヘキサン酸エチル（ＪＲＷ−０７０５）
2020510617.tif 000061
【０２２９】
一般手順Ａの後に、３−クロロ−４−ヒドロキシベンズアルデヒド（１．０ｇ、６．４ｍｍｏｌ）を６−ブロモヘキサン酸エチル（２．１４ｇ、９．６ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の生成物（０．５５ｇ、２９％）を無色の油として得た。
【０２３０】
ステップ２．６−（２−クロロ−４−ホルミルフェノキシ）ヘキサン酸（ＪＲＷ−０７０７）
2020510617.tif 000062
【０２３１】
一般手順Ｂの後に、６−（２−クロロ−４−ホルミルフェノキシ）ヘキサン酸エチル（０．５５ｇ、１．８ｍｍｏｌ）を水酸化ナトリウム（１．２ｍＬ、２Ｍ、２．４ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の生成物（０．４３ｇ）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ２７１ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２３２】
ステップ３．６−（２−クロロ−４−ホルミルフェノキシ）ヘキサン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＪＲＷ−０７２１）
2020510617.tif 000063
【０２３３】
一般手順Ｃの後に、６−（２−クロロ−４−ホルミルフェノキシ）ヘキサン酸（０．４３ｇ、１．６ｍｍｏｌ）を１，１−ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルメタンアミン（０．６５ｇ、３．２ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の生成物（９５ｍｇ、１８％）を白色の固体として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ3） δ ９．８４ （ｓ， １Ｈ）， ７．９２ − ７．８７ （ｍ， １Ｈ）， ７．７７ − ７．７１ （ｍ， １Ｈ）， ７．０４ − ６．９７ （ｍ， １Ｈ）， ４．１２ （ｔ， Ｊ ＝ ５．３， ２Ｈ）， ２．２６ （ｔ， Ｊ ＝ ６．３， ２Ｈ）， １．９６ − １．８４ （ｍ， ２Ｈ）， １．７９ − １．３７ （ｍ， １３Ｈ）．
【０２３４】
ステップ４．（Ｚ）−６−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２（３Ｈ）−イリデン）メチル）−２−クロロフェノキシ）ヘキサン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＪＲＷ−０７２４）
2020510617.tif 000064
【０２３５】
一般手順Ｄの後に、６−（２−クロロ−４−ホルミルフェノキシ）ヘキサン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１０４ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を２−（（３−ベンジル−５−フェニルピラジン−２−イル）アミノ）−２−（ジエトキシホスホリル）酢酸メチル（１５０ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の粗生成物（１８０ｍｇ）を赤黒色の固体として得た。
【０２３６】
ステップ５．６−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２−クロロフェノキシ）ヘキサン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＪＲＷ−０７２５）
2020510617.tif 000065
【０２３７】
一般手順Ｅの後に、（Ｚ）−６−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２（３Ｈ）−イリデン）メチル）−２−クロロフェノキシ）ヘキサン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１８０ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）を水素化ホウ素ナトリウム（５５ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の生成物（８３ｍｇ、２ステップにわたり４２％）を橙色の泡沫として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤ3ＯＤ） δ ７．８２ − ７．５８ （ｍ， ３Ｈ）， ７．５７ − ７．１４ （ｍ， ９Ｈ）， ６．９６ （ｄ， Ｊ ＝ ８．５， １Ｈ）， ４．４２ （ｓ， ２Ｈ）， ４．１０ （ｓ， ２Ｈ）， ４．００ （ｔ， Ｊ ＝ ６．０， ２Ｈ）， ２．２３ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２， ２Ｈ）， １．８５ − １．４０ （ｍ， １５Ｈ）；ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ６１０ ［Ｍ − Ｈ］−；ＨＰＬＣ ９８．８ ％ （ＡＵＣ）， ＴR ７．６３分；ＵＶ （ＭｅＯＨ） λ ４３４ ｎｍ， ε ９０２８．
【０２３８】
実施例１３
６−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２−クロロフェノキシ）ヘキサン酸（ＪＲＷ−０７２６）
2020510617.tif 000066
【０２３９】
一般手順Ｆの後に、６−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２−クロロフェノキシ）ヘキサン酸ｔｅｒｔ−ブチル（７５ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸（１ｍＬ）と反応させて、所望の生成物（６３ｍｇ、９２％）を橙色の固体として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤ3ＯＤ） δ ８．６０ （ｓ， １Ｈ）， ８．００ − ７．９０ （ｍ， ２Ｈ）， ７．５６ − ７．４１ （ｍ， ５Ｈ）， ７．４０ − ７．１６ （ｍ， ５Ｈ）， ７．０５ − ６．９７ （ｍ， １Ｈ）， ４．６０ （ｓ， ２Ｈ）， ４．２５ （ｓ， ２Ｈ）， ４．０２ （ｔ， Ｊ ＝ ６．２， ２Ｈ）， ２．３４ （ｔ， Ｊ ＝ ７．３， ２Ｈ）， １．８６ − １．４５ （ｍ， ６Ｈ）；ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５５７ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋；ＨＰＬＣ ９９．５ ％ （ＡＵＣ）， ＴR ５．６７分；ＵＶ （ＭｅＯＨ） λ ４２６ ｎｍ， ε ５５０９．
【０２４０】
実施例１４
６−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２−クロロフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸ナトリウム（ＪＲＷ−０７２８）
2020510617.tif 000067
【０２４１】
ステップ１．６−（２−クロロ−４−ホルミルフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸ナトリウム（ＪＲＷ−０７２３）
2020510617.tif 000068
【０２４２】
一般手順Ｇの後に、４−（（６−ブロモヘキシル）オキシ）−３−クロロベンズアルデヒド（２８０ｍｇ、０．８８ｍｍｏｌ）を亜硫酸ナトリウム（５５２ｍｇ、４．４ｍｍｏｌ）と反応させて、粗生成物（３１０ｍｇ）を白色の固体として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤ3ＯＤ） δ ９．８１ （ｓ， １Ｈ）， ７．９２ − ７．８０ （ｍ， ２Ｈ）， ７．２３ （ｄ， Ｊ ＝ ８．５， １Ｈ）， ４．１８ （ｔ， Ｊ ＝ ６．３， ２Ｈ）， ２．８５ − ２．７６ （ｍ， ２Ｈ）， １．９７ − １．７３ （ｍ， ４Ｈ）， １．６３ − １．４８ （ｍ， ４Ｈ）．
【０２４３】
ステップ２．（Ｚ）−６−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２（３Ｈ）−イリデン）メチル）−２−クロロフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸ナトリウム（ＪＲＷ−０７２７）
2020510617.tif 000069
【０２４４】
一般手順Ｈの後に、６−（２−クロロ−４−ホルミルフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸ナトリウム（２９２ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ）を２−（（３−ベンジル−５−フェニルピラジン−２−イル）アミノ）−２−（ジエトキシホスホリル）酢酸メチル（２００ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）と反応させて、粗生成物（３７０ｍｇ）を赤黒色の固体として得た。
【０２４５】
ステップ３．６−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２−クロロフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸ナトリウム（ＪＲＷ−０７２８）
2020510617.tif 000070
【０２４６】
一般手順Ｉの後に、（Ｚ）−６−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２（３Ｈ）−イリデン）メチル）−２−クロロフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸ナトリウム（０．４２ｍｍｏｌ）を水素化ホウ素ナトリウム（８０ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の生成物（１９８ｍｇ、２ステップにわたり７３％）を橙色の固体として得た。注：単離された材料は純粋ではなく、不純物が存在した。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤ3ＯＤ） δ ７．８０ − ７．５５ （ｍ， ３Ｈ）， ７．５２ − ７．１６ （ｍ， １０Ｈ）， ７．０３ − ６．９３ （ｍ， １Ｈ）， ４．４２ （ｓ， ２Ｈ）， ４．１０ （ｓ， ２Ｈ）， ４．０７ − ３．９５ （ｍ， ２Ｈ）， ２．８４ − ２．７６ （ｍ， ２Ｈ）， １．９３ − １．７２ （ｍ， ４Ｈ）， １．６５ − １．４４ （ｍ， ４Ｈ）；ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ６０５ ［Ｍ − Ｈ］−；ＨＰＬＣ ９７．９ ％ （ＡＵＣ）， ＴR ４．６４分；ＵＶ （ＭｅＯＨ） λ ４３３ ｎｍ， ε ４７７７．
【０２４７】
実施例１５
（Ｓ）−３−アセトアミド−４−（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（６−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）フェノキシ）ヘキシル）アミノ）−３−カルボキシ−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−カルボキシ−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−４−オキソブタン酸（ＪＲＷ−０７４１）
2020510617.tif 000071
【０２４８】
ステップ１．（６−（３−ホルミルフェノキシ）ヘキシル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＪＲＷ−０７３０）
2020510617.tif 000072
【０２４９】
一般手順Ａの後に、３−ヒドロキシベンズアルデヒド（０．５ｇ、４．１ｍｍｏｌ）を（６−ブロモヘキシル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１．１５ｇ、４．１ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の粗生成物（１．０２ｇ）を無色の油として得た。
【０２５０】
ステップ２．（Ｚ）−（６−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２（３Ｈ）−イリデン）メチル）フェノキシ）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＪＲＷ−０７３３）
2020510617.tif 000073
【０２５１】
一般手順Ｄの後に、（６−（３−ホルミルフェノキシ）ヘキシル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１６４ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）を２−（（３−ベンジル−５−フェニルピラジン−２−イル）アミノ）−２−（ジエトキシホスホリル）酢酸メチル（２００ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の粗生成物（１０９ｍｇ）を赤黒色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ６０５ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋．
【０２５２】
ステップ３．（６−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）フェノキシ）ヘキシル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＪＲＷ−０７３４）
2020510617.tif 000074
【０２５３】
一般手順Ｅの後に、（Ｚ）−（６−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２（３Ｈ）−イリデン）メチル）フェノキシ）ヘキシル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１０９ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を水素化ホウ素ナトリウム（３４ｍｇ、０．９０ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の生成物（７５ｍｇ、２ステップにわたり２９％）を橙色の泡沫として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ６０７ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋．
【０２５４】
ステップ４．２−（３−（（６−アミノヘキシル）オキシ）ベンジル）−８−ベンジル−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−０７３７またはＴＡＫ−００３９）
2020510617.tif 000075
【０２５５】
一般手順Ｆの後に、（６−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）フェノキシ）ヘキシル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（７５ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸（１ｍＬ）と反応させて、所望の生成物（６２ｍｇ、定量的）を橙色の油として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５０７ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋．
【０２５６】
ステップ５．（Ｓ）−３−アセトアミド−４−（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（６−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）フェノキシ）ヘキシル）アミノ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−１，４−ジオキソブタン−２−イル）アミノ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−１，４−ジオキソブタン−２−イル）アミノ）−４−オキソブタン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＪＲＷ−０７３９）
2020510617.tif 000076
【０２５７】
２−（３−（（６−アミノヘキシル）オキシ）ベンジル）−８−ベンジル−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（６２ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）及びメタノール（０．５ｍＬ）中溶液に、４−（ｔｅｒｔ−ブチル）  １−（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）  （（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アセトアミド−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−４−オキソブタンアミド）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−４−オキソブタノイル）−Ｌ−アスパルテート（１６５ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）及び２，６−ルチジン（７５ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温にて１．５時間撹拌し、ジクロロメタン及び水で希釈した。水層をジクロロメタンで抽出した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーで精製して、粗生成物（８９ｍｇ）を橙色の泡沫として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ １０６２ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋．
【０２５８】
ステップ６．（Ｓ）−３−アセトアミド−４−（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（６−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）フェノキシ）ヘキシル）アミノ）−３−カルボキシ−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−カルボキシ−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−４−オキソブタン酸（ＪＲＷ−０７４１）
2020510617.tif 000077
【０２５９】
一般手順Ｆの後に、（Ｓ）−３−アセトアミド−４−（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（６−（３−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）フェノキシ）ヘキシル）アミノ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−１，４−ジオキソブタン−２−イル）アミノ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−１，４−ジオキソブタン−２−イル）アミノ）−４−オキソブタン酸ｔｅｒｔ−ブチル（８９ｍｇ、０．０８４ｍｍｏｌ）をＴＦＡ（１ｍＬ）と反応させて、所望の生成物（７８ｍｇ、定量的）を橙赤色の固体として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤ3ＯＤ） δ ８．６３ （ｓ， １Ｈ）， ８．０２ − ７．９３ （ｓ， ２Ｈ）， ７．５８ − ７．４０ （ｍ， ５Ｈ）， ７．３９ − ７．１３ （ｍ， ４Ｈ）， ６．９３ − ６．７７ （ｍ， ３Ｈ）， ４．７３ − ４．４８ （ｓ， ５Ｈ）， ４．３０ （ｓ， ２Ｈ）， ４．０１ − ３．８８ （ｍ， ２Ｈ）， ３．２５ − ３．０８ （ｍ， ２Ｈ）， ３．００ − ２．６５ （ｍ， ７Ｈ）， １．９８ （ｓ， ３Ｈ）， １．８５ − １．６８ （ｍ， ２Ｈ）， １．６０ − １．２５ （ｓ， ６Ｈ）；ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ８９４ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋；ＨＰＬＣ ９５．３ ％ （ＡＵＣ）， ＴR ４．５３分；ＵＶ （ＭｅＯＨ） λ ２５６ ｎｍ， ε １４００７．
【０２６０】
実施例１６
８−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２−クロロフェノキシ）オクタン−１−スルホン酸ナトリウム（ＪＲＷ−０７６１）
2020510617.tif 000078
【０２６１】
ステップ１．４−（（８−ブロモオクチル）オキシ）−３−クロロベンズアルデヒド（ＪＲＷ−０７４５）
2020510617.tif 000079
【０２６２】
一般手順Ａの後に、３−クロロ−４−ヒドロキシベンズアルデヒド（６２０ｍｇ、３．９ｍｍｏｌ）を１，８−ジブロモオクタン（１．６２ｇ、５．９ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の生成物（７１５ｍｇ、５２％）を白色の固体として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ3） δ ９．８４ （ｓ， １Ｈ）， ７．９０ （ｄ， Ｊ ＝ ２．０， １Ｈ）， ７．７４ （ｄｄ， Ｊ ＝ ２．０， ８．５， １Ｈ）， ７．０１ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４， １Ｈ）， ４．１１ （ｔ， Ｊ ＝ ６．４， ２Ｈ）， ３．４１ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８， ２Ｈ）， １．９５ − １．７８ （ｍ， ４Ｈ）， １．６０ − １．２８ （ｍ， ８Ｈ）；ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３４７ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋．
【０２６３】
ステップ２．８−（２−クロロ−４−ホルミルフェノキシ）オクタン−１−スルホン酸ナトリウム（ＪＲＷ−０７４７）
2020510617.tif 000080
【０２６４】
一般手順Ｇの後に、４−（（８−ブロモオクチル）オキシ）−３−クロロベンズアルデヒド（７１５ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）を亜硫酸ナトリウム（１．３ｇ、１０．３ｍｍｏｌ）と反応させて、粗生成物（８１０ｍｇ）を白色の固体として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤ3ＯＤ） δ ９．８１ （ｓ， １Ｈ）， ７．９４ − ７．８０ （ｍ， ２Ｈ）， ７．２３ （ｄ， Ｊ ＝ ８．５， １Ｈ）， ４．１７ （ｔ， Ｊ ＝ ６．３， ２Ｈ）， ２．８７ − ２．７０ （ｍ， ２Ｈ）， １．９６ − １．７４ （ｍ， ４Ｈ）， １．６２ − １．３５ （ｍ， ８Ｈ）．
【０２６５】
ステップ３．（Ｚ）−８−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２（３Ｈ）−イリデン）メチル）−２−クロロフェノキシ）オクタン−１−スルホン酸ナトリウム（ＪＲＷ−０７６０）
2020510617.tif 000081
【０２６６】
一般手順Ｈの後に、８−（２−クロロ−４−ホルミルフェノキシ）オクタン−１−スルホン酸ナトリウム（９４ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）を２−（（３−ベンジル−５−フェニルピラジン−２−イル）アミノ）−２−（ジエトキシホスホリル）酢酸メチル（１２０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）と反応させて、粗生成物（１５０ｍｇ）を赤黒色の固体として得た。
【０２６７】
ステップ４．８−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２−クロロフェノキシ）オクタン−１−スルホン酸ナトリウム（ＪＲＷ−０７６１）
2020510617.tif 000082
【０２６８】
一般手順Ｉの後に、（Ｚ）−８−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２（３Ｈ）−イリデン）メチル）−２−クロロフェノキシ）オクタン−１−スルホン酸ナトリウム（１５０ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）を水素化ホウ素ナトリウム（４３ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の生成物（３０ｍｇ、２ステップにわたり１８％）を黄色の固体として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤ3ＯＤ） δ ８．１０ （ｓ， １Ｈ）， ７．９２ − ７．８０ （ｍ， ２Ｈ）， ７．５２ − ７．０９ （ｍ， １０Ｈ）， ６．９５ − ６．８７ （ｍ， １Ｈ）， ４．４０ （ｓ， ２Ｈ）， ４．１３ − ３．９２ （ｍ， ４Ｈ）， ２．８６ − ２．７５ （ｍ， ２Ｈ）， １．９２ − １．７０ （ｍ， ４Ｈ）， １．６１ − １．３３ （ｍ， ８Ｈ）；ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ６３４ ［Ｍ ＋ Ｈ − Ｎａ］＋；ＨＰＬＣ ８７．９ ％ （ＡＵＣ）， ＴR ３．６９分；ＵＶ （ＭｅＯＨ） λ ４０２ ｎｍ， ε ６３４５．
【０２６９】
実施例１７
１０−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２−クロロフェノキシ）デカン−１−スルホン酸ナトリウム（ＪＲＷ−０７６５）
2020510617.tif 000083
ＪＲＷ−０７６５
【０２７０】
ステップ１．４−（（１０−ブロモデシル）オキシ）−３−クロロベンズアルデヒド（ＪＲＷ−０７４６）
2020510617.tif 000084
【０２７１】
一般手順Ａの後に、３−クロロ−４−ヒドロキシベンズアルデヒド（６４０ｍｇ、４．１ｍｍｏｌ）を１，１０−ジブロモデカン（１．８４ｇ、６．１ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の生成物（７８０ｍｇ、５０％）を白色の固体として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ3） δ ９．８４ （ｓ， １Ｈ）， ７．９０ （ｄ， Ｊ ＝ ２．０， １Ｈ）， ７．７５ （ｄｄ， Ｊ ＝ ２．０， ８．５， １Ｈ）， ７．０１ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４， １Ｈ）， ４．１２ （ｔ， Ｊ ＝ ６．５， ２Ｈ）， ３．４１ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８， ２Ｈ）， １．９３ − １．７６ （ｍ， ４Ｈ）， １．５２ − １．２３ （ｍ， １２Ｈ）；ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３４７ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋．
【０２７２】
ステップ２．１０−（２−クロロ−４−ホルミルフェノキシ）デカン−１−スルホン酸ナトリウム（ＪＲＷ−０７４８）
2020510617.tif 000085
【０２７３】
一般手順Ｇの後に、４−（（１０−ブロモデシル）オキシ）−３−クロロベンズアルデヒド（７８０ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）を亜硫酸ナトリウム（１．３ｇ、１０．３ｍｍｏｌ）と反応させて、粗生成物（９１０ｍｇ）を白色の固体として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤ3ＯＤ） δ ９．８１ （ｓ， １Ｈ）， ７．９０ （ｄ， Ｊ ＝ ２．０， １Ｈ）， ７．８５ − ７．８０ （ｍ， １Ｈ）， ７．２３ （ｄ， Ｊ ＝ ８．５， １Ｈ）， ４．１７ （ｔ， Ｊ ＝ ６．３， ２Ｈ）， ２．８５ − ２．７０ （ｍ， ２Ｈ）， １．９３ − １．７１ （ｍ， ４Ｈ）， １．６０ − １．３０ （ｍ， １２Ｈ）．
【０２７４】
ステップ３．（Ｚ）−１０−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２（３Ｈ）−イリデン）メチル）−２−クロロフェノキシ）デカン−１−スルホン酸ナトリウム（ＪＲＷ−０７６３）
2020510617.tif 000086
【０２７５】
一般手順Ｈの後に、４−（（１０−ブロモデシル）オキシ）−３−クロロベンズアルデヒド（１０２ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）を２−（（３−ベンジル−５−フェニルピラジン−２−イル）アミノ）−２−（ジエトキシホスホリル）酢酸メチル（１２０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）と反応させて、粗生成物（１２０ｍｇ）を赤黒色の固体として得た。
【０２７６】
ステップ４．１０−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２−クロロフェノキシ）デカン−１−スルホン酸ナトリウム（ＪＲＷ−０７６５）
2020510617.tif 000087
【０２７７】
一般手順Ｉの後に、（Ｚ）−１０−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２（３Ｈ）−イリデン）メチル）−２−クロロフェノキシ）デカン−１−スルホン酸ナトリウム（１２０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を水素化ホウ素ナトリウム（３３ｍｇ、０．８８ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の生成物（５０ｍｇ、２ステップにわたり２９％）を橙色の固体として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤ3ＯＤ） δ ７．８１ − ７．５８ （ｍ， ３Ｈ）， ７．５６ − ７．１８ （ｍ， １０Ｈ）， ７．００ − ６．９１ （ｍ， １Ｈ）， ４．４１ （ｓ， ２Ｈ）， ４．１５ − ３．９０ （ｍ， ４Ｈ）， ２．８３ − ２．７３ （ｍ， ２Ｈ）， １．９０ − １．６８ （ｍ， ４Ｈ）， １．５８ − １．２５ （ｍ， １２Ｈ）；ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ６６２ ［Ｍ ＋ Ｈ − Ｎａ］＋；ＨＰＬＣ ９４．８ ％ （ＡＵＣ）， ＴR ４．４１分；ＵＶ （ＭｅＯＨ） λ ４３０ ｎｍ， ε ７１５６．
【０２７８】
実施例１８
６−（５−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２−クロロフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸ナトリウム（ＪＲＷ−０７６６）
2020510617.tif 000088
【０２７９】
ステップ１．３−（（６−ブロモヘキシル）オキシ）−４−クロロベンズアルデヒド（ＪＲＷ−０７５２）
2020510617.tif 000089
【０２８０】
一般手順Ａの後に、４−クロロ−３−ヒドロキシベンズアルデヒド（１．０ｇ、６．４ｍｍｏｌ）を１，６−ジブロモヘキサン（２．３４ｇ、９．６ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の生成物（１．０５ｇ、５１％）を無色の油として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ3） δ ９．９３ （ｓ， １Ｈ）， ７．５４ （ｄ， Ｊ ＝ ７．９， １Ｈ）， ７．４５ − ７．３５ （ｍ， ２Ｈ）， ４．１１ （ｔ， Ｊ ＝ ６．３， ２Ｈ）， ３．４３ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８， ２Ｈ）， ２．０１ − １．８０ （ｍ， ４Ｈ）， １．６５ − １．４７ （ｍ， ４Ｈ）；ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３１９ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋．
【０２８１】
ステップ２．６−（２−クロロ−５−ホルミルフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸ナトリウム（ＪＲＷ−０７５８）
2020510617.tif 000090
【０２８２】
一般手順Ｇの後に、３−（（６−ブロモヘキシル）オキシ）−４−クロロベンズアルデヒド（１．０ｇ、３．１ｍｍｏｌ）を亜硫酸ナトリウム（２．０ｇ、１５．６ｍｍｏｌ）と反応させて、粗生成物（２１０ｍｇ）を白色の固体として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤ3ＯＤ） δ ７．３４ （ｄ， Ｊ ＝ ８．１， １Ｈ）， ７．０９ （ｄ， Ｊ ＝ １．８， １Ｈ）， ６．９７ （ｄｄ， Ｊ ＝ １．８， ８．１， １Ｈ）， ５．３５ （ｓ， １Ｈ）， ４．０５ （ｔ， Ｊ ＝ ６．３， ２Ｈ）， ２．９１ − ２．７７ （ｍ， ２Ｈ）， １．９３ − １．７２ （ｍ， ４Ｈ）， １．６５ − １．４２ （ｍ， ４Ｈ）．
【０２８３】
ステップ３．（Ｚ）−６−（５−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２（３Ｈ）−イリデン）メチル）−２−クロロフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸ナトリウム（ＪＲＷ−０７６４）
2020510617.tif 000091
【０２８４】
一般手順Ｈの後に、６−（２−クロロ−５−ホルミルフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸ナトリウム（８７ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）を２−（（３−ベンジル−５−フェニルピラジン−２−イル）アミノ）−２−（ジエトキシホスホリル）酢酸メチル（１２０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）と反応させて、粗生成物（９０ｍｇ）を赤黒色の固体として得た。
【０２８５】
ステップ４．６−（５−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２−クロロフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸ナトリウム（ＪＲＷ−０７６６）
2020510617.tif 000092
【０２８６】
一般手順Ｉの後に、（Ｚ）−６−（５−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２（３Ｈ）−イリデン）メチル）−２−クロロフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸ナトリウム（９０ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）を水素化ホウ素ナトリウム（２７ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の生成物（３０ｍｇ、２ステップにわたり１９％）を橙赤色の固体として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤ3ＯＤ） δ ７．８０ − ７．６０ （ｍ， ３Ｈ）， ７．５８ − ７．１５ （ｍ， ９Ｈ）， ７．０６ （ｓ， １Ｈ）， ６．９６ − ６．８０ （ｍ， １Ｈ）， ４．４２ （ｓ， ２Ｈ）， ４．１４ （ｓ， ２Ｈ）， ４．０２ − ３．９６ （ｍ， ２Ｈ）， ２．９０ − ２．６８ （ｍ， ２Ｈ）， １．９０ − １．７０ （ｍ， ４Ｈ）， １．６０ − １．４０ （ｍ， ４Ｈ）；ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ６０６ ［Ｍ ＋ Ｈ − Ｎａ］＋；ＨＰＬＣ ９４．９ ％ （ＡＵＣ）， ＴR ３．３１分；ＵＶ （ＭｅＯＨ） λ ４３２ ｎｍ， ε ７８６９．
【０２８７】
実施例１９
６−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２−フルオロフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸ナトリウム（ＪＲＷ−０７６９）
2020510617.tif 000093
【０２８８】
ステップ１．４−（（６−ブロモヘキシル）オキシ）−３−フルオロベンズアルデヒド（ＪＲＷ−０７５７）
2020510617.tif 000094
【０２８９】
一般手順Ａの後に、３−フルオロ−４−ヒドロキシベンズアルデヒド（１．０ｇ、７．３ｍｍｏｌ）を１，６−ジブロモヘキサン（２．６６ｇ、１０．９ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の生成物（１．４２ｇ、６４％）を無色の油として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ3） δ ９．８５ （ｓ， １Ｈ）， ７．６７ − ７．５６ （ｍ， ２Ｈ）， ７．１０ − ７．０２ （ｍ， １Ｈ）， ４．１２ （ｔ， Ｊ ＝ ６．４， ２Ｈ）， ３．４３ （ｔ， Ｊ ＝ ６．７， ２Ｈ）， １．９７ − １．８０ （ｍ， ４Ｈ）， １．７３ − １．４１ （ｍ， ４Ｈ）；ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３０３ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋．
【０２９０】
ステップ２．６−（２−フルオロ−４−ホルミルフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸ナトリウム（ＪＲＷ−０７６２）
2020510617.tif 000095
【０２９１】
一般手順Ｇの後に、４−（（６−ブロモヘキシル）オキシ）−３−フルオロベンズアルデヒド（１．３８ｇ、４．５５ｍｍｏｌ）を亜硫酸ナトリウム（２．９ｇ、２２．７ｍｍｏｌ）と反応させて、粗生成物（１．５ｇ）を白色の固体として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ6） δ ９．８４ （ｓ， １Ｈ）， ７．８０ − ７．７０ （ｍ， １Ｈ）， ７．６６ （ｄｄ， Ｊ ＝ １．９， １１．４， １Ｈ）， ７．３７ （ｔ， Ｊ ＝ ８．３， １Ｈ）， ４．１５ （ｔ， Ｊ ＝ ６．６， ２Ｈ）， ２．４２ − ２．３４ （ｍ， ２Ｈ）， １．８０ − １．６５ （ｍ， ２Ｈ）， １．６４ − １．４９ （ｍ， ２Ｈ）， １．４７ − １．２９ （ｍ， ４Ｈ）．
【０２９２】
ステップ３．（Ｚ）−６−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２（３Ｈ）−イリデン）メチル）−２−フルオロフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸ナトリウム（ＪＲＷ−０７６７）
2020510617.tif 000096
【０２９３】
一般手順Ｈの後に、６−（２−フルオロ−４−ホルミルフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸ナトリウム（８３ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）を２−（（３−ベンジル−５−フェニルピラジン−２−イル）アミノ）−２−（ジエトキシホスホリル）酢酸メチル（１２０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）と反応させて、粗生成物（１５５ｍｇ）を赤黒色の固体として得た。
【０２９４】
ステップ４．６−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２−フルオロフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸ナトリウム（ＪＲＷ−０７６９）
2020510617.tif 000097
【０２９５】
一般手順Ｉの後に、（Ｚ）−６−（５−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２（３Ｈ）−イリデン）メチル）−２−クロロフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸ナトリウム（０．２５ｍｍｏｌ）を水素化ホウ素ナトリウム（２９ｍｇ、０．７６ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の生成物（７２ｍｇ、２ステップにわたり４７％）を橙色の固体として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤ3ＯＤ） δ ７．８０ − ７．５８ （ｍ， ３Ｈ）， ７．５０ − ７．３７ （ｍ， ５Ｈ）， ７．３５ − ７．１６ （ｍ， ３Ｈ）， ７．１３ − ６．９３ （ｍ， ３Ｈ）， ４．４１ （ｓ， ２Ｈ）， ４．１０ （ｓ， ２Ｈ）， ４．００ （ｔ， Ｊ ＝ ６．５， ２Ｈ）， ２．８６ − ２．７２ （ｍ， ２Ｈ）， １．９１ − １．７１ （ｍ， ４Ｈ）， １．６０ − １．４５ （ｍ， ４Ｈ）；ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５９０ ［Ｍ ＋ Ｈ − Ｎａ］＋；ＨＰＬＣ ９６．１ ％ （ＡＵＣ）， ＴR ２．９４分；ＵＶ （ＭｅＯＨ） λ ４３２ ｎｍ， ε ７８３１．
【０２９６】
実施例２０
６−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２，６−ジフルオロフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸ナトリウム（ＪＲＷ−０７７１）
2020510617.tif 000098
【０２９７】
ステップ１．４−（（６−ブロモヘキシル）オキシ）−３，５−ジフルオロベンズアルデヒド（ＪＲＷ−０７５３）
2020510617.tif 000099
【０２９８】
一般手順Ａの後に、３，５−ジフルオロ−４−ヒドロキシベンズアルデヒド（１．０ｇ、６．３ｍｍｏｌ）を１，６−ジブロモヘキサン（２．３１ｇ、９．５ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の生成物（０．５４ｇ、２７％）を無色の油として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ3） δ ９．８３ （ｔ， Ｊ ＝ １．８， １Ｈ）， ７．５０ − ７．３８ （ｍ， ２Ｈ）， ４．２９ （ｔ， Ｊ ＝ ６．４， ２Ｈ）， ３．４７ − ３．３６ （ｍ， ２Ｈ）， １．９５ − １．７５ （ｍ， ４Ｈ）， １．６０− １．３９ （ｍ， ４Ｈ）．
【０２９９】
ステップ２．６−（２，６−ジフルオロ−４−ホルミルフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸ナトリウム（ＪＲＷ−０７５９）
2020510617.tif 000100
【０３００】
一般手順Ｇの後に、４−（（６−ブロモヘキシル）オキシ）−３，５−ジフルオロベンズアルデヒド（５００ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）を亜硫酸ナトリウム（９８０ｍｇ、７．８ｍｍｏｌ）と反応させて、粗生成物（５３０ｍｇ）を淡いピンク色の固体として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤ3ＯＤ） δ ７．０９ − ６．９７ （ｍ， ２Ｈ）， ５．３３ （ｓ， １Ｈ）， ４．１１ （ｔ， Ｊ ＝ ６．３， ２Ｈ）， ２．９０ − ２．７７ （ｍ， ２Ｈ）， １．８９ − １．６６ （ｍ， ４Ｈ）， １．６４ − １．３１ （ｍ， ４Ｈ）．
【０３０１】
ステップ３．（Ｚ）−６−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２（３Ｈ）−イリデン）メチル）−２，６−ジフルオロフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸ナトリウム（ＪＲＷ−０７７０）
2020510617.tif 000101
【０３０２】
一般手順Ｈの後に、６−（２，６−ジフルオロ−４−ホルミルフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸ナトリウム（８０ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）を２−（（３−ベンジル−５−フェニルピラジン−２−イル）アミノ）−２−（ジエトキシホスホリル）酢酸メチル（１１０ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）と反応させて、粗生成物を赤黒色の固体として得た。
【０３０３】
ステップ４．６−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２，６−ジフルオロフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸ナトリウム（ＪＲＷ−０７７１）
2020510617.tif 000102
【０３０４】
一般手順Ｉの後に、（Ｚ）−６−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２（３Ｈ）−イリデン）メチル）−２，６−ジフルオロフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸ナトリウム（０．２３ｍｍｏｌ）を水素化ホウ素ナトリウム（２６ｍｇ、０．６９ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の生成物（８ｍｇ、２ステップにわたり５％）を橙色の固体として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤ3ＯＤ） δ ７．８１ − ７．５９ （ｍ， ３Ｈ）， ７．５５ − ７．３８ （ｍ， ５Ｈ）， ７．３５ − ７．１８ （ｍ， ３Ｈ）， ７．０５ − ６．９３ （ｍ， ２Ｈ）， ４．４２ （ｓ， ２Ｈ）， ４．１５ − ４．０１ （ｍ， ４Ｈ）， ２．８６ − ２．７１ （ｍ， ２Ｈ）， １．９０ − １．６７ （ｍ， ４Ｈ）， １．５８ − １．４０ （ｍ， ４Ｈ）；ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ６０６ ［Ｍ − Ｈ − Ｎａ］−；ＨＰＬＣ ９７．３ ％ （ＡＵＣ）， ＴR ３．１２分；ＵＶ （ＭｅＯＨ） λ ４３４ ｎｍ， ε ７４５６．
【０３０５】
実施例２１
２−（４−（（６−アミノヘキシル）オキシ）−３−フルオロベンジル）−８−ベンジル−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−０８０１）
2020510617.tif 000103
【０３０６】
ステップ１．（６−（２−フルオロ−４−ホルミルフェノキシ）ヘキシル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＪＲＷ−０７９７）
2020510617.tif 000104
【０３０７】
一般手順Ａの後に、３−フルオロ−４−ヒドロキシベンズアルデヒド（２００ｍｇ、１．４ｍｍｏｌ）を（６−ブロモヘキシル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（４００ｍｇ、１．４ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の生成物（４７０ｍｇ、９７％）を無色の油として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ3） δ ９．８５ （ｓ， １Ｈ）， ７．７０ − ７．５５ （ｍ， ２Ｈ）， ７．１０ − ７．００ （ｍ， １Ｈ）， ４．５０ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ４．１０ （ｔ， Ｊ ＝ ６．５， ２Ｈ）， ３．２０ − ３．０２ （ｍ， ２Ｈ）， １．９５ − １．７９ （ｍ， ２Ｈ）， １．７１ − １．１７ （ｍ， １５Ｈ）；ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ２４０ ［Ｍ ＋ Ｈ − Ｂｏｃ］＋．
【０３０８】
ステップ２．（Ｚ）−（６−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２（３Ｈ）−イリデン）メチル）−２−フルオロフェノキシ）ヘキシル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＪＲＷ−０７９８）
2020510617.tif 000105
【０３０９】
一般手順Ｄの後に、（６−（２−フルオロ−４−ホルミルフェノキシ）ヘキシル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（２１６ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ）を２−（（３−ベンジル−５−フェニルピラジン−２−イル）アミノ）−２−（ジエトキシホスホリル）酢酸メチル（２００ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の粗生成物（２５０ｍｇ）を赤黒色の固体として得た。
【０３１０】
ステップ３．（６−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２−フルオロフェノキシ）ヘキシル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＪＲＷ−０７９９）
2020510617.tif 000106
【０３１１】
一般手順Ｅの後に、（Ｚ）−（６−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２（３Ｈ）−イリデン）メチル）−２−フルオロフェノキシ）ヘキシル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（２５０ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）を水素化ホウ素ナトリウム（７６ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の生成物（１０８ｍｇ、２ステップにわたり４０％）を得た。
【０３１２】
ステップ４．２−（４−（（６−アミノヘキシル）オキシ）−３−フルオロベンジル）−８−ベンジル−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−０８０１）
2020510617.tif 000107
【０３１３】
一般手順Ｆの後に、（６−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２−フルオロフェノキシ）ヘキシル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１０８ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸（１ｍＬ）と反応させて、所望の生成物（１１０ｍｇ、定量的）を赤橙色の泡沫として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤ3ＯＤ） δ ７．８０ − ７．５８ （ｍ， ３Ｈ）， ７．５８ − ７．１７ （ｍ， ８Ｈ）， ７．１５ − ６．９３ （ｍ， ３Ｈ）， ４．４２ （ｓ， ２Ｈ）， ４．１６ − ３．９７ （ｍ， ４Ｈ）， ３．０１ − ２．８３ （ｍ， ２Ｈ）， １．９０ − １．３９ （ｍ， ９Ｈ）；ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５２５ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋；ＨＰＬＣ ９９．８ ％ （ＡＵＣ）， ＴR ４．１２分；ＵＶ （ＭｅＯＨ） λ ４３３ ｎｍ， ε ６０９１．
【０３１４】
実施例２２
６−（４−（（８−ベンジル−６−（３−ヒドロキシフェニル）−３−オキソ−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２−クロロフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸（ＪＲＷ−０８０５）
2020510617.tif 000108
【０３１５】
ステップ１．（Ｚ）−６−（４−（（８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−３−オキソイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２（３Ｈ）−イリデン）メチル）−２−クロロフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸ナトリウム（ＪＲＷ−０８０２）
2020510617.tif 000109
【０３１６】
一般手順Ｈの後に、６−（２−クロロ−４−ホルミルフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸ナトリウム（１００ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）を２−（（３−ベンジル−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−２−（ジエトキシホスホリル）酢酸メチル（１７５ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）と反応させて、粗生成物（１２０ｍｇ）を赤黒色の固体として得た。
【０３１７】
ステップ２．６−（４−（（８−ベンジル−６−（３−ヒドロキシフェニル）−３−オキソ−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２−クロロフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸（ＪＲＷ−０８０５）
2020510617.tif 000110
【０３１８】
一般手順Ｉの後に、（Ｚ）−６−（４−（（８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−３−オキソイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２（３Ｈ）−イリデン）メチル）−２−クロロフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸ナトリウム（１２０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）を水素化ホウ素ナトリウム（３０ｍｇ、０．７９ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の生成物（１６ｍｇ、２ステップにわたり１３％）を橙色の固体として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤ3ＯＤ） δ ８．０１ （ｓ， １Ｈ）， ７．５５ − ７．４０ （ｓ， ２Ｈ）， ７．４０ − ６．９９ （ｍ， ７Ｈ）， ６．９８ − ６．８５ （ｍ， ２Ｈ）， ６．７３ − ６．５２ （ｍ， １Ｈ）， ４．３６ （ｓ， ２Ｈ）， ４．１１ − ３．９０ （ｍ， ４Ｈ）， ２．９２ − ２．７５ （ｍ， ２Ｈ）， １．９５ − １．７２ （ｍ， ４Ｈ）， １．６５ − １．４５ （ｍ， ４Ｈ）；ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ６２０ ［Ｍ − Ｈ］−；ＨＰＬＣ ８９．６ ％ （ＡＵＣ）， ＴR ４．０９分；ＵＶ （ＭｅＯＨ） λ ３５２ ｎｍ， ε ６８３５．
【０３１９】
実施例２３
（Ｓ）−３−アセトアミド−４−（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（６−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２−フルオロフェノキシ）ヘキシル）アミノ）−３−カルボキシ−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−カルボキシ−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−４−オキソブタン酸（ＪＲＷ−０８０６）
2020510617.tif 000111
【０３２０】
ステップ１．（Ｓ）−３−アセトアミド−４−（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（６−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２−フルオロフェノキシ）ヘキシル）アミノ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−１，４−ジオキソブタン−２−イル）アミノ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−１，４−ジオキソブタン−２−イル）アミノ）−４−オキソブタン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＪＲＷ−０８０３）
2020510617.tif 000112
【０３２１】
２−（４−（（６−アミノヘキシル）オキシ）−３−フルオロベンジル）−８−ベンジル−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（４０ｍｇ、０．０７６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）及びメタノール（０．５ｍＬ）中溶液に、４−（ｔｅｒｔ−ブチル）  １−（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）  （（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アセトアミド−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−４−オキソブタンアミド）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−４−オキソブタノイル）−Ｌ−アスパルテート（７６ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）及び２，６−ルチジン（４６ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温にて３時間撹拌し、次にジクロロメタン及び水で希釈した。水層をジクロロメタンで抽出した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーで精製して、粗生成物（１１０ｍｇ）を橙色の泡沫として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ １０８０ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋．
【０３２２】
ステップ２．（Ｓ）−３−アセトアミド−４−（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（６−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２−フルオロフェノキシ）ヘキシル）アミノ）−３−カルボキシ−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−カルボキシ−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−４−オキソブタン酸（ＪＲＷ−０８０６）
2020510617.tif 000113
【０３２３】
一般手順Ｆの後に、（Ｓ）−３−アセトアミド−４−（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（６−（４−（（８−ベンジル−３−オキソ−６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２−フルオロフェノキシ）ヘキシル）アミノ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−１，４−ジオキソブタン−２−イル）アミノ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−１，４−ジオキソブタン−２−イル）アミノ）−４−オキソブタン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１１０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸（１ｍＬ）と反応させて、所望の生成物（４９ｍｇ、２ステップにわたり７０％）を赤色の固体として得た。注：単離された材料は純粋ではなく、不純物が存在した。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ９１３ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋；ＨＰＬＣ ８７．８ ％ （ＡＵＣ）， ＴR ４．４０分；ＵＶ （ＭｅＯＨ） λ ４３２ ｎｍ， ε ２８６０．
【０３２４】
実施例２４
３−（８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−３−オキソ−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）安息香酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＪＲＷ−０７５５）
2020510617.tif 000114
【０３２５】
ステップ１．３−（５−アミノ−６−ベンジルピラジン−２−イル）安息香酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＪＲＷ−０７５０）
2020510617.tif 000115
【０３２６】
３−ベンジル−５−ブロモピラジン−２−アミン（１９０ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）、（３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）フェニル）ボロン酸（１９１ｍｇ、０．８６ｍｍｏｌ）、及び［１，１′−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）（５８ｍｇ、０．０７２ｍｍｏｌ）のジオキサン（５ｍＬ）中脱気懸濁液に、炭酸セシウム（２．２ｍＬ、１Ｍ、２．２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を３０分間７５℃に加熱し、酢酸エチルで希釈し、水で洗浄した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーで精製して、所望の生成物（２０５ｍｇ、７９％）を淡い黄色の固体として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ3） δ ８．６２ − ８．４５ （ｍ， ２Ｈ）， ８．１９ − ７．９０ （ｍ， ２Ｈ）， ７．６０ − ７．２２ （ｍ， ６Ｈ）， ４．５７ （ｓ， ２Ｈ）， ４．２０ （ｓ， ２Ｈ）， １．８２ − １．４７ （ｍ， ９Ｈ）；ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３６２ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋．
【０３２７】
ステップ２．３−（６−ベンジル−５−（（１−（ジエトキシホスホリル）−２−メトキシ−２−オキソエチル）アミノ）ピラジン−２−イル）安息香酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＪＲＷ−０７５１）
2020510617.tif 000116
【０３２８】
３−（５−アミノ−６−ベンジルピラジン−２−イル）安息香酸ｔｅｒｔ−ブチル（２０５ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）のクロロベンゼン（５ｍＬ）中溶液に、２−ジアゾ−２−（ジエトキシホスホリル）酢酸メチル（４０１ｍｇ、１．７ｍｍｏｌ）及び酢酸ロジウム（１２ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を２４時間１００℃に加熱した。混合物を酢酸エチルで希釈し、セライトに添加し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーで精製して、所望の粗生成物（４４２ｍｇ）を濃い褐色の油として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ3） δ ８．６０ − ８．５２ （ｍ， １Ｈ）， ８．４４， （ｓ， １Ｈ）， ８．１５ − ８．０８ （ｍ， １Ｈ）， ８．０１ − ７．９５ （ｍ， １Ｈ）， ７．５０ （ｔ， Ｊ ＝ ７．８， １Ｈ）， ７．４０ − ７．２０ （ｍ， ５Ｈ）， ５．４３ − ５．１２ （ｍ， ２Ｈ）， ４．３３ − ４．１３ （ｍ， ４Ｈ）， ３．７４ （ｓ， ３Ｈ）， １．６１ （ｓ， ９Ｈ）， １．２８ − １．１３ （ｍ， ６Ｈ）；ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５７０ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋．
【０３２９】
ステップ３．（Ｚ）−３−（８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチレン）−３−オキソ−２，３−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）安息香酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＪＲＷ−０７５４）
2020510617.tif 000117
【０３３０】
一般手順Ｄの後に、フルフラール（１１１ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を３−（６−ベンジル−５−（（１−（ジエトキシホスホリル）−２−メトキシ−２−オキソエチル）アミノ）ピラジン−２−イル）安息香酸ｔｅｒｔ−ブチル（４４０ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の粗生成物（３６９ｍｇ）を赤黒色の固体として得た。
【０３３１】
ステップ４．３−（８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−３−オキソ−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）安息香酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＪＲＷ−０７５５）
2020510617.tif 000118
【０３３２】
一般手順Ｅの後に、（Ｚ）−３−（８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチレン）−３−オキソ−２，３−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）安息香酸ｔｅｒｔ−ブチル（０．７７ｍｍｏｌ）を水素化ホウ素ナトリウム（８７ｍｇ、２．３ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の生成物（１３０ｍｇ、２ステップにわたり３５％）を黄色の泡沫として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤ3ＯＤ） δ ８．２８ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ８．１２ − ７．８０ （ｍ， ３Ｈ）， ７．６４ − ７．１７ （ｍ， ７Ｈ）， ６．４１ − ６．００ （ｍ， ２Ｈ）， ４．４４ （ｓ， ２Ｈ）， ４．１９ （ｓ， ２Ｈ）， １．６０ （ｓ， ９Ｈ）；ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４８０ ［Ｍ − Ｈ］−；ＨＰＬＣ ９０．０ ％ （ＡＵＣ）， ＴR ５．５２分；ＵＶ （ＭｅＯＨ） λ ３０６ ｎｍ， ε ２１２０３．
【０３３３】
実施例２５
３−（８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−３−オキソ−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）安息香酸（ＪＲＷ−０７５６）
2020510617.tif 000119
【０３３４】
一般手順Ｆの後に、３−（８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−３−オキソ−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）安息香酸ｔｅｒｔ−ブチル（１１５ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸（１ｍＬ）と反応させて、所望の生成物（６４ｍｇ、６３％）を褐色の固体として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤ3ＯＤ） δ ８．７３ （ｓ， １Ｈ）， ８．６４ （ｔ， Ｊ ＝ １．６， １Ｈ）， ８．２７ − ８．１５ （ｍ， １Ｈ）， ８．１５ − ８．０２ （ｍ， １Ｈ）， ７．６０ （ｔ， Ｊ ＝ ７．８， １Ｈ）， ７．５４ − ７．３９ （ｍ， ３Ｈ）， ７．３９ − ７．１８ （ｍ， ３Ｈ）， ６．３８ − ６．２４ （ｍ， ２Ｈ）， ４．６３ （ｓ， ２Ｈ）， ４．３７ （ｓ， ２Ｈ）；ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４２５ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋；ＨＰＬＣ ９１．３ ％ （ＡＵＣ）， ＴR ３．６３分；ＵＶ （ＭｅＯＨ） λ ３０６ ｎｍ， ε １９５１８．
【０３３５】
実施例２６
４−（８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−３−オキソ−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）安息香酸（ＪＲＷ−０７９０）
2020510617.tif 000120
【０３３６】
ステップ１．４−（５−アミノ−６−ベンジルピラジン−２−イル）安息香酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＪＲＷ−０７８１）
2020510617.tif 000121
【０３３７】
３−ベンジル−５−ブロモピラジン−２−アミン（１９０ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）、（４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）フェニル）ボロン酸（１９１ｍｇ、０．８６ｍｍｏｌ）、及び［１，１′−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）（５８ｍｇ、０．０７２ｍｍｏｌ）のジオキサン（５ｍＬ）中脱気懸濁液に、炭酸セシウム（２．２ｍＬ、１Ｍ、２．２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を３０分間７５℃に加熱し、酢酸エチルで希釈し、水で洗浄した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーで精製して、所望の生成物（２４０ｍｇ、９２％）を淡い黄色の固体として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ3） δ ８．４５ （ｓ， １Ｈ）， ８．０８ − ７．９７ （ｍ， ４Ｈ）， ７．３８ − ７．１９ （ｍ， ５Ｈ）， ４．５５ （ｓ， ２Ｈ）， ４．２０ （ｓ， ２Ｈ）， １．６２ （ｓ， ９Ｈ）；ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３６２ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋．
【０３３８】
ステップ２．４−（６−ベンジル−５−（（１−（ジエトキシホスホリル）−２−メトキシ−２−オキソエチル）アミノ）ピラジン−２−イル）安息香酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＪＲＷ−０７８３）
2020510617.tif 000122
【０３３９】
４−（５−アミノ−６−ベンジルピラジン−２−イル）安息香酸ｔｅｒｔ−ブチル（２４０ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）のクロロベンゼン（５ｍＬ）中溶液に、２−ジアゾ−２−（ジエトキシホスホリル）酢酸メチル（４７０ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）及び酢酸ロジウム（１５ｍｇ、０．０３３ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を２４時間１００℃に加熱した。混合物を酢酸エチルで希釈し、セライトに添加し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーで精製して、所望の粗生成物（６２０ｍｇ）を濃い褐色の油として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５７０ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋．
【０３４０】
ステップ３．（Ｚ）−４−（８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチレン）−３−オキソ−２，３−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）安息香酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＪＲＷ−０７８７）
2020510617.tif 000123
【０３４１】
一般手順Ｄの後に、フルフラール（９５ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を３−（６−ベンジル−５−（（１−（ジエトキシホスホリル）−２−メトキシ−２−オキソエチル）アミノ）ピラジン−２−イル）安息香酸ｔｅｒｔ−ブチル（０．６６ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の粗生成物（５９０ｍｇ）を赤黒色の固体として得た。
【０３４２】
ステップ４．４−（８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−３−オキソ−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）安息香酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＪＲＷ−０７８８）
2020510617.tif 000124
【０３４３】
一般手順Ｅの後に、（Ｚ）−４−（８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチレン）−３−オキソ−２，３−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）安息香酸ｔｅｒｔ−ブチル（０．６６ｍｍｏｌ）を水素化ホウ素ナトリウム（７５ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の生成物（７２ｍｇ、３ステップにわたり２２％）を橙赤色の泡沫として得た。
【０３４４】
ステップ５．４−（８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−３−オキソ−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）安息香酸（ＪＲＷ−０７９０）
2020510617.tif 000125
【０３４５】
一般手順Ｆの後に、４−（８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−３−オキソ−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）安息香酸ｔｅｒｔ−ブチル（７２ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸（１ｍＬ）と反応させて、所望の生成物（４５ｍｇ、７１％）を橙色の固体として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤ3ＯＤ） δ ８．２１ − ７．７８ （ｍ， ５Ｈ）， ７．５５ − ７．１９ （ｍ， ６Ｈ）， ６．３５ − ６．２８ （ｍ， １Ｈ）， ６．１５ − ６．０７ （ｍ， １Ｈ）， ４．４３ （ｓ， ２Ｈ）， ４．１８ （ｓ， ２Ｈ）；ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４２６ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋；ＨＰＬＣ ９７．９ ％ （ＡＵＣ）， ＴR ４．３１分；ＵＶ （ＭｅＯＨ） λ ３９６ ｎｍ， ε ４５５４．
【０３４６】
実施例２７
６−（４−（（６−アミノヘキシル）オキシ）フェニル）−８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−０８１７）
2020510617.tif 000126
【０３４７】
ステップ１．（６−（４−（５−アミノ−６−ベンジルピラジン−２−イル）フェノキシ）ヘキシル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＪＲＷ−０８０７）
2020510617.tif 000127
【０３４８】
一般手順Ａの後に、４−（５−アミノ−６−ベンジルピラジン−２−イル）フェノール（２５０ｍｇ、０．９０ｍｍｏｌ）を（６−ブロモヘキシル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（２５２ｍｇ、０．９０ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の生成物（３５０ｍｇ、８１％）を褐色の泡沫として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ3） δ ８．３２ （ｓ， １Ｈ）， ７．８６ （ｄ， Ｊ ＝ ８．８， ２Ｈ）， ７．３９ − ７．２０ （ｍ， ５Ｈ）， ６．９７ （ｄ， Ｊ ＝ ８．８， ２Ｈ）， ４．５８ − ４．４３ （ｍ， １Ｈ）， ４．３５ （ｓ， ２Ｈ）， ４．１７ （ｓ， ２Ｈ）， ４．００ （ｔ， Ｊ ＝ ６．５， ２Ｈ）， ３．２０ − ３．０３ （ｍ， ２Ｈ）， １．８７ − １．７５ （ｍ， ２Ｈ）， １．６１ − １．３４ （ｍ， １５Ｈ）；ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４７７ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋．
【０３４９】
ステップ２．２−（（３−ベンジル−５−（４−（（６−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ヘキシル）オキシ）フェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−２−（ジエトキシホスホリル）酢酸メチル（ＪＲＷ−０８０９）
2020510617.tif 000128
【０３５０】
（６−（４−（５−アミノ−６−ベンジルピラジン−２−イル）フェノキシ）ヘキシル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（３５０ｍｇ、０．７３ｍｍｏｌ）のクロロベンゼン（５ｍＬ）中溶液に、２−ジアゾ−２−（ジエトキシホスホリル）酢酸メチル（５２０ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ）及び酢酸ロジウム（１６ｍｇ、０．０３６ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を２４時間１００℃に加熱した。混合物を酢酸エチルで希釈し、セライトに添加し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーで精製して、所望の粗生成物（１７０ｍｇ、３３％）を得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ3） δ ８．３３ （ｓ， １Ｈ）， ７．８５ （ｄ， Ｊ ＝ ８．６， ２Ｈ）， ７．３６ − ７．１９ （ｍ， ５Ｈ）， ６．９６ （ｄ， Ｊ ＝ ８．７， ２Ｈ）， ５．３３ − ５．０９ （ｍ， ２Ｈ）， ４．６０ − ４．４０ （ｍ， １Ｈ）， ４．２３ （ｓ， ２Ｈ）， ４．１５ − ３．８８ （ｍ， ６Ｈ）， ３．７３ （ｓ， ３Ｈ）， ３．１８ − ３．０３ （ｍ， ２Ｈ）， １．８８ − １．７４ （ｍ， ２Ｈ）， １．５７ − １．３０ （ｍ， １５Ｈ）， １．２９ − １．１４ （ｍ， ６Ｈ）；ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ６８５ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋．
【０３５１】
ステップ３．（Ｚ）−６−（４−（８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチレン）−３−オキソ−２，３−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）フェノキシ）ヘキシル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＪＲＷ−０８１４）
2020510617.tif 000129
【０３５２】
一般手順Ｄの後に、フルフラール（３３ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）を２−（（３−ベンジル−５−（４−（（６−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ヘキシル）オキシ）フェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−２−（ジエトキシホスホリル）酢酸メチル（１６０ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の粗生成物を黒色の固体として得た。
【０３５３】
ステップ４．（６−（４−（８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−３−オキソ−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）フェノキシ）ヘキシル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＪＲＷ−０８１５）
2020510617.tif 000130
【０３５４】
一般手順Ｅの後に、（Ｚ）−（６−（４−（８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチレン）−３−オキソ−２，３−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）フェノキシ）ヘキシル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（０．２３ｍｍｏｌ）を水素化ホウ素ナトリウム（４４ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）と反応させて、所望の生成物（２０ｍｇ、２ステップにわたり１４％）を黄色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５９７ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋．
【０３５５】
ステップ５．６−（４−（（６−アミノヘキシル）オキシ）フェニル）−８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−０８１７）
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【０３５６】
一般手順Ｆの後に、（６−（４−（８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−３−オキソ−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）フェノキシ）ヘキシル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（２０ｍｇ、０．０３３ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸（１ｍＬ）と反応させて、所望の生成物（１８ｍｇ、定量的）を褐色の固体として得た。1Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤ3ＯＤ） δ ７．７５ − ７．５３ （ｍ， ３Ｈ）， ７．４５ − ７．３５ （ｍ， ３Ｈ）， ７．３４ − ７．１９ （ｍ， ３Ｈ）， ７．００ （ｄ， Ｊ ＝ ８．５， ２Ｈ）， ６．３３ − ６．２９ （ｍ， １Ｈ）， ６．１２ − ６．０８ （ｍ， １Ｈ）， ４．４２ （ｓ， ２Ｈ）， ４．１８ （ｓ， ２Ｈ）， ４．０７ − ３．９８ （ｍ， ２Ｈ）， ３．０２ − ２．８４ （ｍ， ２Ｈ）， １．９２ − １．３８ （ｍ， ８Ｈ）；ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４９７ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋；ＨＰＬＣ ９８．６ ％ （ＡＵＣ）， ＴR ３．９３分；ＵＶ （ＭｅＯＨ） λ ４２８ ｎｍ， ε ４５３５．  
【０３５７】
実施例２８
発光特性
発光アッセイ手順：スクリーニング対象の各化合物をＤＭＳＯ（５ｍＭ）に溶解し、次にＮＡＮＯ−ＧＬＯ（登録商標）ルシフェラーゼアッセイ緩衝液中でさらに１００ｕＭに希釈した。次に、希釈した各基質を、精製したＮＡＮＯＬＵＣ（登録商標）ルシフェラーゼと等体積で合わせてＣＯ2非依存培地＋１０％のＦＢＳ中に希釈した。各基質の初期光出力をＧｌｏＭａｘ（登録商標）−Ｍｕｌｔｉ＋ルミノメーターにおいて基質を添加してから３分後に測定し、次に、シグナル半減期を定量する手段として５分間隔で測定した。例示化合物の生物発光活性を図１Ａ−Ｃに示す。Ｋｍは、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍを用いてミカエリス・メンテン非線形回帰により算出した。光出力、シグナル半減期、及びＫｍ値を表１に概括する。
表１
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【０３５８】
表１のデータは、本開示の化合物が、様々な官能基を有するにもかかわらず、ＮａｎｏＬｕｃ用の基質であることを示すものである。値は、各カテゴリーにおいてフリマジンを１とした場合（２．５ｎｇ／ｍＬのＮａｎｏＬｕｃにおいて約１．０×１０7ＲＬＵ）の相対値として表されている。
【０３５９】
実施例２９
細胞透過性及び生物発光活性  
細胞培養物：ＨＥＫ２９３細胞を、１００ＩＵ／ｍｌのペニシリン、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシン、及び１０％ウシ胎児血清を含有するＤＭＥＭ中で、３７℃にて５％ＣＯ2で維持した。ダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）、Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ、ペニシリン／ストレプトマイシン、及びトリプシン−ＥＤＴＡは、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｃａｒｌｓｂａｄ）から購入した。ウシ胎児血清（ＦＢＳ）は、ＨｙＣｌｏｎｅ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）から購入した。マイクロタイタープレートは、Ｃｏｒｎｉｎｇから購入した。
【０３６０】
細胞ベースルシフェラーゼアッセイ：ＨＥＫ２９３細胞に対し、以下の２つの異なる複合膜ＮａｎｏＬｕｃ融合タンパク質を一時的にトランスフェクションした：１）ＮａｎｏＬｕｃ：ＫＤＲ（細胞表面上にＮａｎｏＬｕｃを提示）；２）ＫＤＲ：ＮａｎｏＬｕｃ（細胞の内側でＮａｎｏＬｕｃを提示）。２４時間後、トランスフェクションした細胞を収集し、ＯｐｔｉＭに２００，０００細胞／ｍｌにて再懸濁させ、白色の９６プレートのウェルに１００μＬ／ウェルにてプレーティングした。発光測定のため、２０μＭの細胞不透過性ＮａｎｏＬｕｃ阻害物質ＪＲＷ−０３４４の存在下または不在下において、細胞を１０μＭまたは２０μＭの最終濃度の指示基質で処置した。基質添加から３分後に、ＧＬＯＭＡＸ（登録商標）Ｄｉｓｃｏｖｅｒマルチモード検出プレートリーダー（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて、発光シグナルを解析した。
【０３６１】
ＪＲＷ−０３４４が存在する場合または不在である場合における発光シグナルの差を、図２Ａ〜Ｄに示す。これらのデータは、細胞外阻害物質によって不透過性基質が顕著に阻害されていることを示している。これに対し、細胞膜の内側及び外側でＮａｎｏＬｕｃにアクセスすることができる透過性基質は、細胞外阻害物質による顕著な影響を受けていない。図２Ａは、１０μＭの基質±２０μＭのＰＢＩ  ６０９６で処置された、ＮａｎｏＬｕｃ：ＫＤＲを発現する細胞からの発光を示している。スルホネート基を含有する基質（ＪＲＷ−０７０３、ＪＲＷ−０７２８、ＪＲＷ−０７６９）で処置された細胞については、阻害物質が存在する場合と不在である場合とで、より大きなＲＬＵの差が観察された。アミンを含有する基質（ＴＡＫ−００３９）、カルボキシレートを含有する基質（ＪＲＷ−０６８４）、またはブロミドを含有する基質（ＪＲＷ−０７２０）で処置された細胞については、阻害物質が存在する場合と不在である場合とで、小さなＲＬＵの差が観察された。図２Ｂは、ＮａｎｏＬｕｃ阻害物質ＪＲＷ−０３４４による１０μＭ及び２０μＭの基質で処置された細胞において、阻害パーセントに顕著な差がなかったことを示している。図２Ｃは、１０μＭの基質及び±２０μＭのＪＲＷ−０３４４で処置された、ＫＤＲ：Ｎｌｕｃを発現する細胞についてのＲＬＵデータを示している。結果は、スルホン化された不透過性基質（ＪＲＷ−０７０３、ＪＲＷ−０７２８、ＪＲＷ−０７６９）がはるかに暗く、これらの基質が、細胞外阻害物質によってバックグラウンドレベル付近にまで阻害されている可能性があることを示している。しかし、細胞透過性基質（ＴＡＫ−００３９、ＪＲＷ−０６８４、ＪＲＷ−０７２０）からのＲＬＵは、細胞外阻害物質による影響を受けていない。図２Ｄは、ＮａｎｏＬｕｃ阻害物質ＪＲＷ−０３４４による１０μＭ及び２０μＭの基質で処置された細胞において、阻害パーセントに顕著な差がなかったことを示している。
【０３６２】
溶解形式及び生細胞形式：ＨＥＫ２９３細胞に対し、膜の内側で膜結合ＮａｎｏＬｕｃを提示する融合タンパク質ＫＤＲ：ＮａｎｏＬｕｃをトランスフェクションした（１：１００のキャリアＤＮＡ）。次に、細胞を、ジギトニンで処置して細胞膜を溶解し（溶解形式）、またはＪＲＷ−０３４４で処置して（生細胞形式）、細胞透過性基質の活性と細胞透過性でない基質の活性とを比較した。両方のセットを様々な基質濃度で処置して、ミカエリス・メンテン型プロットを得た。細胞透過性である基質（ＴＡＫ−００３９、ＪＲＷ−０７２６、ＪＲＷ−０７２０、ＪＲＷ−０８０６）は、図３Ａ及び３Ｂに見られるような同様の用量反応曲線を有する。しかし、細胞不透過性（またはほとんど不透過性）である基質は、生細胞形式と溶解細胞形式との間で大きな差を示している（図３Ｃ）。スルホネートＪＲＷ−０７０３、ＪＲＷ−０７２８、及びＪＲＷ−０７６９は、生細胞形式において１００倍低い活性をもたらした。このことは、これらの基質における細胞内ＮａｎｏＬｕｃへのアクセスが限定されていることを示すものである。図３Ｄは、化合物ごとに「生」形式及び「溶解」形式によりプロットされた各基質における３つの濃度のうちで最も高いものを示している。
【０３６３】
細胞生存率アッセイ：発光を測定した後に、ＭｕｌｔｉＴｏｘ−Ｆｌｕｏｒマルチプレックス細胞毒性アッセイ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）をプレートに添加し、プレートを３７℃、５％のＣＯ2で３０分間インキュベーションすることができる。次に蛍光を測定することができる。
【０３６４】
仮想例３０
細胞死の検出
ＮａｎｏＬｕｃを発現する標的細胞をアッセイで使用して、細胞死を検出することができる。ＨＥＫ２９３細胞は、１００ＩＵ／ｍｌのペニシリン、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシン、及び１０％ウシ胎児血清を含有するＤＭＥＭ中で、３７℃にて５％  ＣＯ2で維持され得る。ＨＥＫ２９３細胞に対し、膜の内側で膜結合ＮａｎｏＬｕｃを提示する融合タンパク質ＫＤＲ：ＮａｎｏＬｕｃをトランスフェクションすることができる（１：１００のキャリアＤＮＡ）。本開示の化合物を細胞に添加することができ、ベースライン発光シグナルは、ＧＬＯＭＡＸ（登録商標）Ｄｉｓｃｏｖｅｒマルチモード検出プレートリーダー（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて解析することができる。ベースライン測定の後に、目的化合物を標的細胞に添加して細胞死を誘導することができる。発光シグナルは、目的化合物の添加から３分後に、ＧＬＯＭＡＸ（登録商標）Ｄｉｓｃｏｖｅｒマルチモード検出プレートリーダー（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて解析することができる。目的化合物が存在する場合及び不在である場合における発光シグナルの差を算出し、これを細胞死の定量化に使用することができる。ＲＬＵの差が大きい場合、死に瀕した標的細胞からＫＤＲ：ＮａｎｏＬｕｃ融合タンパク質が解放され、本開示の細胞不透過性化合物による検出が可能になったことを示すと考えられる。
【０３６５】
仮想例３１
ルシフェラーゼ分泌の検出
分泌可能なルシフェラーゼを発現する細胞は、生細胞からのルシフェラーゼ分泌を測定する方法で使用することができる。ＨＥＫ２９３細胞は、１００ＩＵ／ｍｌのペニシリン、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシン、及び１０％ウシ胎児血清を含有するＤＭＥＭ中で、３７℃にて５％ＣＯ2で維持され得る。ＨＥＫ２９３細胞に対し、分泌可能なルシフェラーゼをトランスフェクションすることができる（１：１００のキャリアＤＮＡ）。本開示の化合物を細胞に添加することができ、発光シグナルは、ＧＬＯＭＡＸ（登録商標）Ｄｉｓｃｏｖｅｒマルチモード検出プレートリーダー（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて解析することができる。例えば、野生型ルシフェラーゼの配列は、タンパク質に細胞からの分泌を指示するシグナルペプチドを含有するように修飾することができる。分泌の際にシグナルペプチドを切断することができると考えられ、得られる野生型ルシフェラーゼは、本開示の細胞不透過性化合物により検出することができる。
【０３６６】
実施例３２
ＨｅＬａ細胞におけるＮｌｕｃ−Ｂ２ＡＲのイメージング（フリマジン及びＪＲＷ−０７６９）
ＨｅＬａ細胞に対し、Ｎｌｕｃ−ｂ２アドレナリン受容体（Ｂ２ＡＲ）の発現コンストラクトをリバーストランスフェクションし、ＬａｂＴＥＫＩＩカバーグラスチェンバー（４００ｕＬの培地中ウェル当たり５０，０００細胞）にプレーティングし、一晩インキュベーションした。イメージングのために培地を除去し、ＣＯ2非依存培地で置き換えた。試料をイメージング装置に設置する直前に、フリマジンまたはＪＲＷ−０７６９を１０ｕＭの最終濃度にて細胞に添加した。画像収集をＯｌｙｍｐｕｓ  ＬＶ２００生物発光イメージャー上で実施した（４０×／０．９５ＮＡの対物レンズを使用し、電気増大ゲインを４００に設定、収集時間は０．５秒（フリマジン）及び２．５秒（ＪＲＷ−０７６９））。
【０３６７】
以上の発明を実施するための形態及び付随する実施例は、単に例示的なものであり、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。本発明の範囲は、付属の特許請求の範囲及びその等価物によってのみ定義される。
【０３６８】
本開示の実施形態に対する様々な変更及び修正は、当業者には明白であると考えられる。このような変更及び修正（以下に限定されないが、本発明における化学構造、置換基、誘導体、中間体、合成、組成物、製剤、または使用方法に関する変更及び修正を含む）は、本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく行うことができる。
【図１Ａ】
2020510617.tif 000137
【図１Ｂ】
2020510617.tif 000138
【図１Ｃ】
2020510617.tif 000139
【図２Ａ】
2020510617.tif 000140
【図２Ｂ】
2020510617.tif 000141
【図２Ｃ】
2020510617.tif 000142
【図２Ｄ】
2020510617.tif 000143
【図３Ａ】
2020510617.tif 000144
【図３Ｂ】
2020510617.tif 000145
【図３Ｃ】
2020510617.tif 000146
【図３Ｄ】
2020510617.tif 000147
【図４Ａ】
2020510617.tif 000148
【図４Ｂ】
2020510617.tif 000149
【配列表】
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【国際調査報告】
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