(57)【要約】  ＩＡＩＰリガンドベースのアッセイを用いて、サンプル（例えば、対象由来の）中のＩＡＩＰレベルを定量化する方法を本明細書に記載する。ＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の測定方法、並びに前述のＩＡＩＰ定量化方法を用いた対象の評価、監視及び処置方法も開示する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象由来のサンプル中のインターα阻害剤タンパク質（ＩＡＩＰ）を定量化する方法であって：
ａ）前記サンプルを結合剤と接触させてＩＡＩＰ−結合剤複合体を生成することであって、前記結合剤は支持体に結合される、生成することと；
ｂ）前記ＩＡＩＰ−結合剤複合体を検出剤と接触させることと；
ｃ）前記ＩＡＩＰ−結合剤複合体に結合した前記検出剤の量を検出して、前記サンプル中のＩＡＩＰを定量化することと、を含む、方法。
【請求項２】
前記ＩＡＩＰがインタクトＩＡＩＰである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記結合剤が、ＩＡＩＰに結合するＩＡＩＰリガンドである、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記結合剤が、ＩＡＩＰに特異的に結合する抗体である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項５】
前記検出剤がＩＡＩＰリガンドを含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記検出剤が更に、前記ＩＡＩＰリガンド検出剤に結合する抗体を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記検出剤が、ＩＡＩＰに特異的に結合する抗体である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記ＩＡＩＰがＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体である、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記結合剤が、ＩＡＩＰに結合するＩＡＩＰリガンドである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の前記ＩＡＩＰリガンドが前記結合剤とは異なる、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記結合剤が、前記ＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の前記ＩＡＩＰリガンドに結合する抗体である、請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
前記結合剤が、前記ＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体のＩＡＩＰに特異的に結合する抗体である、請求項８に記載の方法。
【請求項１３】
前記検出剤が、ＩＡＩＰに結合するＩＡＩＰリガンドを含む、請求項８〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記検出剤が、更に、前記ＩＡＩＰリガンド検出剤に結合する抗体を含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の前記ＩＡＩＰリガンドが、前記ＩＡＩＰリガンド検出剤とは異なる、請求項１３又は１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記検出剤が、前記ＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の前記ＩＡＩＰリガンドに結合する抗体である、請求項８〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記検出剤が、前記ＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体のＩＡＩＰに特異的に結合する抗体である、請求項８〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項４、６、７、１１、１２、１４、１６、及び１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記抗体がＭＡｂ  ６９．２６又はＭＡｂ  ６９．３１である、請求項４、７、１２、及び１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＩＡＩＰリガンドが、エンドドキシン（ＬＰＳ）、ヘパリン、ヒストン、ヒアルロン酸、ビトロネクチン、フィブロネクチン、ラミニン、テネイシンＣ、アグリカン、フォン・ヴィルブランド因子、ペントラキシン−３（ＰＴＸ３）、ＴＮＦ−刺激遺伝子−６（ＴＳＧ−６）、因子ＩＸ、補体成分、因子ＸＩＩＩａ、及び組織トランスグルタミナーゼからなる群から選択される、請求項３、５、６、及び８〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記補体成分が、Ｃ１ｑ、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ８、プロパージン、又は因子Ｄである、請求項２８に記載の方法。
【請求項２２】
前記検出剤が標識を含む、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記標識が、ビオチン、酵素、酵素基質、放射標識、発光化合物、コロイド金、粒子、又は蛍光染料である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記支持体が、プレート、粒子、ナノ粒子、樹脂、膜、バイオチップ、容器、試験片、又はビーズである、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記方法が更に、ステップｂ）とｃ）の間に洗浄ステップを含む、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記方法が更に、ステップｂ）とｃ）の間に洗浄ステップを含む、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記方法が更に、ステップａ）又はステップｂ）に先立ってブロッキングステップを含む、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
ステップａ）及び／又はｂ）の前記接触させるステップが、ｐＨ約７．０〜約３．５で行われる、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記ｐＨが約５．０〜約３．５である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記ｐＨが約４．０である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記サンプルが流体である、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記流体が、血液、血漿、血清、尿、脳脊髄液、滑液、羊水、間質液、卵胞液、腹水、気管支肺胞洗浄液、母乳、痰、リンパ液、胆汁、又は組織ホモジネートである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記対象がヒト対象である、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
前記対象が、炎症性疾病若しくは状態又は感染症を有し又は発症する危険性を有すると特定されている、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記対象が、炎症性疾病若しくは状態又は感染症を有し又は発症する危険性を有すると特定されていない、請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】
前記方法が、前記対象が炎症性疾病若しくは状態又は感染症を有し又はその危険性を有するとして診断される前、診断された後、又は診断と同時に行われる、請求項３３に記載の方法。
【請求項３７】
前記方法が、前記対象の炎症性疾病若しくは状態又は感染症の処置と実質的に同時に行われる、請求項３３又は３４に記載の方法。
【請求項３８】
前記方法が、前記対象の炎症性疾病若しくは状態又は感染症の処置に先立って行われる、請求項３３〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
前記方法が、前記対象の炎症性疾病若しくは状態又は感染症の処置の後に行われる、請求項３３又は３４に記載の方法。
【請求項４０】
前記炎症性疾病又は状態が、敗血症、敗血性ショック、無菌敗血症、外傷、傷害、卒中、急性炎症性疾病、ＳＩＲＳ、急性肺傷害、ＡＲＤＳ、肺炎、壊死性腸炎、急性膵炎、腎疾病、急性腎臓傷害、肝臓傷害、急性循環不全、子癇前症、癌、癌転移、腫瘍浸潤、末梢血管疾病、１型又は２型糖尿病、アテローム硬化性心血管系疾病、間欠性跛行、重症虚血肢疾病、心筋梗塞、頸動脈閉塞、臍帯閉塞、低出生体重、早産、手術誘導炎症、腫瘍誘導炎症、多発性硬化症、肺動脈弁閉鎖不全、末梢神経障害、低酸素性虚血、細菌感染症、創傷、やけど、断裂、挫傷、骨折、外科手技、組織虚血、関節リウマチ、髄膜炎、炎症性腸疾患、慢性閉塞性肺疾患、鼻炎、早期分娩、又は感染性疾患からなる群から選択される、請求項３４〜３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
前記感染症が、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）及び髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）を含むナイセリア（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）種、ブランハメラ・カタラーリス（Ｂｒａｎｈａｍｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）を含むブランハメラ（Ｂｒａｎｈａｍｅｌｌａ）種、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）を含むエスケリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）種、エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）種、プロテウス・ミラビリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ  ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）を含むプロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）種、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、鼻疽菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｍａｌｌｅｉ）及び類鼻疽菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｓｅｕｄｏｍａｌｌｅｉ）を含むシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種、肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）を含むクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）種、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）種、赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）種、セラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）種、アシネトバクター（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ）種；インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）及び軟性下疳菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｄｕｃｒｅｙｉ）を含むヘモフィルス（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ）種、ブルセラ（Ｂｒｕｃｅｌｌａ）種、エルシニア・ペスチス（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ）及びエルシニア・エンテロコリチカ（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ）を含むエルシニア（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）種、野兎病菌（Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ  ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ）を含むフランシセラ（Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ）種、パスツレラ・マルトシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ  ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）を含むパスツレラ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ）種、コレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ）、フラボバクテリウム（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）種、メニンゴセプチカム（ｍｅｎｉｎｇｏｓｅｐｔｉｃｕｍ）、カンピロバクター・ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ）を含むカンピロバクター（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）種、バクテロイデス・フラジリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｆｒａｇｉｌｉｓ）を含むバクテロイデス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）種（口腔、咽頭の）、フソバクテリウム・ヌクレアタム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｎｕｃｌｅａｔｕｍ）を含むフソバクテリウム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）種、肉芽腫カリマトバクテリウム（Ｃａｌｙｍｍａｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｒａｎｕｌｏｍａｔｉｓ）、ストレプトバチルス・モニリホルミス（Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉｓ）を含むストレプトバチルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、及び在郷軍人病菌（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ）を含むレジオネラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ）種等のグラム陰性菌を原因とする、請求項３４〜３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
前記対象が、新生児、小児、青少年、又は成人である、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
前記方法が、１年毎に１回以上行われる、請求項１〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
前記方法が、１カ月毎に１回以上行われる、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記方法が、１週間毎に１回以上行われる、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記方法が、１日毎に１回以上行われる、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記方法が、１時間毎に１回以上行われる、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記方法が、少なくとも１回、少なくとも２回、少なくとも３回、少なくとも５回、又は少なくとも１０回行われる、請求項１〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
前記方法が、更に、ＩＡＩＰ又は治療薬を含む処置を前記対象に投与することを含む、請求項１〜４８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
前記対象が、２００μｇ／ｍＬ以下のＩＡＩＰ濃度を有する、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記対象由来の前記サンプルが、参照サンプルと比較して、ＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の高いレベルを有する、請求項４９に記載の方法。
【請求項５２】
前記対象が、炎症性疾病若しくは状態又は感染症を有し又は発症する危険性を有する、請求項４９〜５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
前記方法が、ＩＡＩＰ及び治療薬を前記対象に投与することを含む、請求項４９〜５２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
前記治療薬が、抗生剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤、抗寄生虫薬、抗炎症剤、抗癌剤、抗凝固剤、免疫調節剤、気管支拡張剤、補体阻害剤、昇圧剤、鎮静剤、又は人工呼吸からなる群から選択される、請求項４９〜５３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５５】
前記対象が、少なくとも１日間病気である、請求項１〜５４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
前記対象が、少なくとも１週間病気である、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記対象が、少なくとも１か月病気である、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記対象が、少なくとも１年間病気である、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記方法が：
ａ）前記対象の前記健康状態を評価し；
ｂ）前記対象の前記健康状態を監視し；
ｃ）炎症性疾病若しくは状態又は感染症を有し又はその危険性を有するとして前記対象を診断し；
ｄ）前記対象に投与された処置の有効性を評価し；又は
ｅ）前記対象における疾病の重症度を評価する
ためのものである、請求項１〜５８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６０】
前記方法が、更に、前記サンプルに検出されるＩＡＩＰ及び／又はＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の前記量を、正常な対象由来のサンプル中に見出されるＩＡＩＰ及び／又はＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の前記量又はカットオフ値と比較することを含む、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記正常な対象由来の前記サンプル中のＩＡＩＰの量よりも、又は前記カットオフ値に対して、低い前記サンプル中のＩＡＩＰの量は、前記対象が炎症性疾病若しくは状態又は感染症を有し又は発症する危険性を有することを示す、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記正常な対象由来の前記サンプル中のＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の量よりも、又は前記カットオフ値に対して、高い前記サンプル中のＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の量は、前記対象が炎症性疾病若しくは状態又は感染症を有し又は発症する危険性を有することを示す、請求項６０に記載の方法。
【請求項６３】
前記正常な対象由来の前記サンプル中のＩＡＩＰの前記量、又は前記カットオフ値が、＞２５０μｇ／ｍＬである、請求項６０〜６２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６４】
前記正常な対象由来の前記サンプル中のＩＡＩＰの前記量が、約２６０〜約５４０μｇ／ｍＬである、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
前記対象が２５０μｇ／ｍＬ以下のＩＡＩＰ濃度を有するという決定は、前記対象が炎症性疾病若しくは状態又は感染症を有し又は発症する高い危険性を有し、又は病的状態及び／若しくは死亡の高い危険性を有すると診断されることを示す、請求項１〜６４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６６】
前記対象が、２００〜３００μｇ／ｍＬのＩＡＩＰ濃度を有し、前記方法が、少なくとも年に１回行われる、請求項６０〜６５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６７】
前記方法が、少なくとも年に２回行われる、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
前記方法が、少なくとも月に１回行われる、請求項６６に記載の方法。
【請求項６９】
前記方法が、少なくとも週に１回行われる、請求項６６に記載の方法。
【請求項７０】
前記方法が、少なくとも１日１回行われる、請求項６６に記載の方法。
【請求項７１】
前記方法が、少なくとも１時間に１回行われる、請求項６６に記載の方法。
【請求項７２】
前記対象が、炎症性疾病若しくは状態又は感染症を以前に有していた、請求項１〜７１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７３】
前記方法が、前記処置に先立って、及び前記処置の過程中に１回以上行われる、請求項４９〜５４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７４】
前記方法が、前記処置の開始後、及び／又は前記処置の終局後に行われる、請求項４９〜７３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７５】
前記処置が、前記対象におけるＩＡＩＰの前記濃度が、前記対象におけるＩＡＩＰの以前の測定値と比較して増大している場合、及び／又は前記対象におけるＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の前記濃度が、前記対象におけるＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の以前の測定値と比較して低下している場合、有効であると決定される、請求項４９〜７４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７６】
前記処置が、ＩＡＩＰの前記濃度が、前記対象におけるＩＡＩＰの以前の測定値と比較して、前記対象において低下し又は一定のままである場合、及び／又はＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の前記濃度が、前記対象におけるＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の以前の測定値と比較して、前記対象において増加し又は一定のままである場合、無効であると決定される、請求項４９〜７４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７７】
前記方法が、更に、前記処置を修正又は変更することを含む、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
炎症性疾病又は感染症を有し又は発症する危険性を有する対象の処置方法であって、前記対象が、請求項１〜７７のいずれか一項に記載の方法に従って、処置が必要であると決定されており、前記方法が、前記対象治療的有効量のＩＡＩＰ及び／又は抗生剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤、抗寄生虫薬、抗炎症剤、抗癌剤、抗凝固剤、免疫調節剤、気管支拡張剤、補体阻害剤、昇圧剤、鎮静剤、若しくは人工呼吸からなる群から選択される治療薬を投与することを含む、方法。
【請求項７９】
前記炎症性疾病又は状態が、敗血症、敗血性ショック、無菌敗血症、外傷、傷害、卒中、急性炎症性疾病、ＳＩＲＳ、急性肺傷害、ＡＲＤＳ、肺炎、壊死性腸炎、急性膵炎、腎疾病、急性腎臓傷害、肝臓傷害、急性循環不全、手術誘導炎症、腫瘍誘導炎症、多発性硬化症、子癇前症、癌、癌転移、腫瘍浸潤、末梢血管疾病、１型又は２型糖尿病、アテローム硬化性心血管系疾病、間欠性跛行、重症虚血肢疾病、心筋梗塞、頸動脈閉塞、臍帯閉塞、低出生体重、早産、肺動脈弁閉鎖不全、末梢神経障害、低酸素性虚血、細菌感染症、創傷、やけど、断裂、挫傷、骨折、外科手技、組織虚血、関節リウマチ、髄膜炎、炎症性腸疾患、慢性閉塞性肺疾患、鼻炎、早期分娩、又は感染性疾患からなる群から選択される、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
前記感染症が、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）及び髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）を含むナイセリア（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）種、ブランハメラ・カタラーリス（Ｂｒａｎｈａｍｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）を含むブランハメラ（Ｂｒａｎｈａｍｅｌｌａ）種、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）を含むエスケリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）種、エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）種、プロテウス・ミラビリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ  ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）を含むプロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）種、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、鼻疽菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｍａｌｌｅｉ）及び類鼻疽菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｓｅｕｄｏｍａｌｌｅｉ）を含むシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種、肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）を含むクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）種、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）種、赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）種、セラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）種、アシネトバクター（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ）種；インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）及び軟性下疳菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｄｕｃｒｅｙｉ）を含むヘモフィルス（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ）種、ブルセラ（Ｂｒｕｃｅｌｌａ）種、エルシニア・ペスチス（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ）及びエルシニア・エンテロコリチカ（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ）を含むエルシニア（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）種、野兎病菌（Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ  ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ）を含むフランシセラ（Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ）種、パスツレラ・マルトシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ  ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）を含むパスツレラ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ）種、コレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ）、フラボバクテリウム（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）種、メニンゴセプチカム（ｍｅｎｉｎｇｏｓｅｐｔｉｃｕｍ）、カンピロバクター・ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ）を含むカンピロバクター（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）種、バクテロイデス・フラジリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｆｒａｇｉｌｉｓ）を含むバクテロイデス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）種（口腔、咽頭の）、フソバクテリウム・ヌクレアタム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｎｕｃｌｅａｔｕｍ）を含むフソバクテリウム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）種、肉芽腫カリマトバクテリウム（Ｃａｌｙｍｍａｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｒａｎｕｌｏｍａｔｉｓ）、ストレプトバチルス・モニリホルミス（Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉｓ）を含むストレプトバチルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、及び在郷軍人病菌（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ）を含むレジオネラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ）種等のグラム陰性菌を原因とする、請求項７８に記載の方法。
【請求項８１】
サンプル中のＩＡＩＰ又はＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体を定量化するためのキットであって、前記キットは、ＩＡＩＰ結合剤及びＩＡＩＰ検出剤、並びに場合により、以下の１つ以上：洗浄緩衝液、ブロッキング剤、標識検出のための基質、及びサンプル中のＩＡＩＰ又はＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体のレベルを定量化するための説明書、を含む、キット。
【請求項８２】
前記結合剤が、支持体上に固定化される、請求項８１に記載のキット。
【請求項８３】
前記検出剤が標識されている、請求項８１又は８２に記載のキット。
【請求項８４】
前記ＩＡＩＰ結合剤が、ＩＡＩＰ特異的抗体又はＩＡＩＰリガンドである、請求項８１〜８３のいずれか一項に記載のキット。
【請求項８５】
前記キットが更にＩＡＩＰリガンド結合剤を含む、請求項８１〜８４のいずれか一項に記載のキット。
【請求項８６】
前記ＩＡＩＰリガンド結合剤が、ＩＡＩＰリガンドに結合する抗体である、請求項８５に記載のキット。
【請求項８７】
前記ＩＡＩＰ検出剤がＩＡＩＰ特異的抗体又はＩＡＩＰリガンドである、請求項８１〜８６のいずれか一項に記載のキット。
【請求項８８】
前記キットが更にＩＡＩＰリガンド検出剤を含む、請求項８１〜８７のいずれか一項に記載のキット。
【請求項８９】
前記ＩＡＩＰリガンド検出剤が、ＩＡＩＰリガンドに特異的に結合する抗体である、請求項８８に記載のキット。
【請求項９０】
前記ＩＡＩＰ特異的抗体がモノクローナル抗体である、請求項８４又は８７に記載のキット。
【請求項９１】
前記モノクローナル抗体がＭＡｂ  ６９．２６又はＭＡｂ  ６９．３１である、請求項９０に記載のキット。
【請求項９２】
前記支持体が、プレート、樹脂、容器、膜、バイオチップ、粒子、ナノ粒子、試験片、又はビーズである、請求項８２〜９１のいずれか一項に記載のキット。
【請求項９３】
前記標識が、酵素、酵素基質、ビオチン、粒子、蛍光染料、発光化合物、又は放射標識である、請求項８１〜９２のいずれか一項に記載のキット。
【請求項９４】
前記ＩＡＩＰリガンドが、エンドドキシン（ＬＰＳ）、ヘパリン、ヒストン、ヒアルロン酸、ラミニン、テネイシンＣ、アグリカン、ビトロネクチン、フィブロネクチン、フォン・ヴィルブランド因子、ペントラキシン−３（ＰＴＸ３）、ＴＮＦ−刺激遺伝子−６（ＴＳＧ−６）、因子ＩＸ、補体成分、因子ＸＩＩＩａ、及び組織トランスグルタミナーゼからなる群から選択される、請求項８４、８６、８７、８８及び８９のいずれか一項に記載のキット。
【請求項９５】
前記結合剤が、ＩＡＩＰに結合するＩＡＩＰリガンドである、請求項１に記載の方法。
【請求項９６】
前記結合剤が、ＩＡＩＰに特異的に結合する抗体である、請求項１に記載の方法。
【請求項９７】
前記検出剤がＩＡＩＰリガンドを含む、請求項１、９５又は９６に記載の方法。
【請求項９８】
前記検出剤が、前記ＩＡＩＰリガンド検出剤に結合する抗体を更に含む、請求項９７に記載の方法。
【請求項９９】
前記検出剤が、ＩＡＩＰに特異的に結合する抗体である、請求項１、９５、又は９６に記載の方法。
【請求項１００】
前記検出剤が、ＩＡＩＰに結合するＩＡＩＰリガンドを含む、請求項８又は１１に記載の方法。
【請求項１０１】
前記検出剤が、前記ＩＡＩＰリガンド検出剤に結合する抗体を更に含む、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０２】
前記ＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の前記ＩＡＩＰリガンドが、前記ＩＡＩＰリガンド検出剤とは異なる、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０３】
前記検出剤が、前記ＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の前記ＩＡＩＰリガンドに結合する抗体である、請求項８、９又は１２に記載の方法。
【請求項１０４】
前記検出剤が、前記ＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体のＩＡＩＰに特異的に結合する抗体である、請求項８又は１１に記載の方法。
【請求項１０５】
前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項９６に記載の方法。
【請求項１０６】
前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項９７に記載の方法。
【請求項１０７】
前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０８】
前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０９】
前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１１０】
前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項１０４に記載の方法。
【請求項１１１】
前記抗体がＭＡｂ  ６９．２６又はＭＡｂ  ６９．３１である、請求項９６に記載の方法。
【請求項１１２】
前記抗体がＭＡｂ  ６９．２６又はＭＡｂ  ６９．３１である、請求項９９に記載の方法。
【請求項１１３】
前記抗体がＭＡｂ  ６９．２６又はＭＡｂ  ６９．３１である、請求項１０４に記載の方法。
【請求項１１４】
前記ＩＡＩＰリガンドが、エンドドキシン（ＬＰＳ）、ヘパリン、ヒストン、ヒアルロン酸、ビトロネクチン、フィブロネクチン、ラミニン、テネイシンＣ、アグリカン、フォン・ヴィルブランド因子、ペントラキシン−３（ＰＴＸ３）、ＴＮＦ−刺激遺伝子−６（ＴＳＧ−６）、因子ＩＸ、補体成分、因子ＸＩＩＩａ、及び組織トランスグルタミナーゼからなる群から選択される、請求項９５に記載の方法。
【請求項１１５】
前記ＩＡＩＰリガンドが、エンドドキシン（ＬＰＳ）、ヘパリン、ヒストン、ヒアルロン酸、ビトロネクチン、フィブロネクチン、ラミニン、テネイシンＣ、アグリカン、フォン・ヴィルブランド因子、ペントラキシン−３（ＰＴＸ３）、ＴＮＦ−刺激遺伝子−６（ＴＳＧ−６）、因子ＩＸ、補体成分、因子ＸＩＩＩａ、及び組織トランスグルタミナーゼからなる群から選択される、請求項９７に記載の方法。
【請求項１１６】
前記ＩＡＩＰリガンドが、エンドドキシン（ＬＰＳ）、ヘパリン、ヒストン、ヒアルロン酸、ビトロネクチン、フィブロネクチン、ラミニン、テネイシンＣ、アグリカン、フォン・ヴィルブランド因子、ペントラキシン−３（ＰＴＸ３）、ＴＮＦ−刺激遺伝子−６（ＴＳＧ−６）、因子ＩＸ、補体成分、因子ＸＩＩＩａ、及び組織トランスグルタミナーゼからなる群から選択される、請求項１００に記載の方法。
【請求項１１７】
前記ＩＡＩＰリガンドが、エンドドキシン（ＬＰＳ）、ヘパリン、ヒストン、ヒアルロン酸、ビトロネクチン、フィブロネクチン、ラミニン、テネイシンＣ、アグリカン、フォン・ヴィルブランド因子、ペントラキシン−３（ＰＴＸ３）、ＴＮＦ−刺激遺伝子−６（ＴＳＧ−６）、因子ＩＸ、補体成分、因子ＸＩＩＩａ、及び組織トランスグルタミナーゼからなる群から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１１８】
前記補体成分が、Ｃ１ｑ、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ８、プロパージン、又は因子Ｄである、請求項１１４〜１１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１９】
前記検出剤が標識を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１２０】
前記標識が、ビオチン、酵素、酵素基質、放射標識、発光化合物、コロイド金、粒子、又は蛍光染料である、請求項１１９に記載の方法。
【請求項１２１】
前記支持体が、プレート、粒子、ナノ粒子、樹脂、膜、バイオチップ、容器、試験片、又はビーズである、請求項１に記載の方法。
【請求項１２２】
前記方法が、更に、ステップａ）とｂ）の間に洗浄ステップを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１２３】
前記方法が、更に、ステップｂ）とｃ）の間に洗浄ステップを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１２４】
前記方法が、更に、ステップａ）又はステップｂ）に先立ってブロッキングステップを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１２５】
ステップａ）及び／又はｂ）の前記接触させるステップが、ｐＨ約７．０〜約３．５で行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項１２６】
前記ｐＨが約５．０〜約３．５である、請求項１２５に記載の方法。
【請求項１２７】
前記ｐＨが約４．０である、請求項１２６に記載の方法。
【請求項１２８】
前記サンプルが流体である、請求項１に記載の方法。
【請求項１２９】
前記流体が、血液、血漿、血清、尿、脳脊髄液、滑液、羊水、間質液、卵胞液、腹水、気管支肺胞洗浄液、母乳、痰、リンパ液、胆汁、又は組織ホモジネートである、請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３０】
前記対象がヒト対象である、請求項１に記載の方法。
【請求項１３１】
前記対象が、炎症性疾病若しくは状態又は感染症を有し又は発症する危険性を有すると特定されている、請求項１３０に記載の方法。
【請求項１３２】
前記対象が、炎症性疾病若しくは状態又は感染症を有し又は発症する危険性を有すると特定されていない、請求項１３０に記載の方法。
【請求項１３３】
前記方法が、前記対象が炎症性疾病若しくは状態又は感染症を有し又はその危険性を有するとして診断される前、診断された後、又は診断と同時に行われる、請求項１３０に記載の方法。
【請求項１３４】
前記方法が、前記対象の炎症性疾病若しくは状態又は感染症の処置と実質的に同時に行われる、請求項１３０に記載の方法。
【請求項１３５】
前記方法が、前記対象の炎症性疾病若しくは状態又は感染症の処置に先立って行われる、請求項１３０に記載の方法。
【請求項１３６】
前記方法が、前記対象の炎症性疾病若しくは状態又は感染症の処置後に行われる、請求項１３０に記載の方法。
【請求項１３７】
前記炎症性疾病又は状態が、敗血症、敗血性ショック、無菌敗血症、外傷、傷害、卒中、急性炎症性疾病、ＳＩＲＳ、急性肺傷害、ＡＲＤＳ、肺炎、壊死性腸炎、急性膵炎、腎疾病、急性腎臓傷害、肝臓傷害、急性循環不全、子癇前症、癌、癌転移、腫瘍浸潤、末梢血管疾病、１型又は２型糖尿病、アテローム硬化性心血管系疾病、間欠性跛行、重症虚血肢疾病、心筋梗塞、頸動脈閉塞、臍帯閉塞、低出生体重、早産、手術誘導炎症、腫瘍誘導炎症、多発性硬化症、肺動脈弁閉鎖不全、末梢神経障害、低酸素性虚血、細菌感染症、創傷、やけど、断裂、挫傷、骨折、外科手技、組織虚血、関節リウマチ、髄膜炎、炎症性腸疾患、慢性閉塞性肺疾患、鼻炎、早期分娩、又は感染性疾患からなる群から選択される、請求項１３１に記載の方法。
【請求項１３８】
前記感染症が、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）及び髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）を含むナイセリア（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）種、ブランハメラ・カタラーリス（Ｂｒａｎｈａｍｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）を含むブランハメラ（Ｂｒａｎｈａｍｅｌｌａ）種、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）を含むエスケリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）種、エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）種、プロテウス・ミラビリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ  ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）を含むプロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）種、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、鼻疽菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｍａｌｌｅｉ）、及び類鼻疽菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｓｅｕｄｏｍａｌｌｅｉ）を含むシュードモナス種、肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）を含むクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）種、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）種、赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）種、セラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）種、アシネトバクター（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ）種；インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）及び軟性下疳菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｄｕｃｒｅｙｉ）を含むヘモフィルス（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ）種、ブルセラ（Ｂｒｕｃｅｌｌａ）種、エルシニア・ペスチス（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ）及びエルシニア・エンテロコリチカ（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ）を含むエルシニア（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）種、野兎病菌（Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ  ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ）を含むフランシセラ（Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ）種、パスツレラ・マルトシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ  ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）を含むパスツレラ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ）種、コレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ）、フラボバクテリウム（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）種、メニンゴセプチカム（ｍｅｎｉｎｇｏｓｅｐｔｉｃｕｍ）、カンピロバクター・ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ）を含むカンピロバクター（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）種、バクテロイデス・フラジリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｆｒａｇｉｌｉｓ）を含むバクテロイデス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）種（口腔、咽頭の）、フソバクテリウム・ヌクレアタム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｎｕｃｌｅａｔｕｍ）を含むフソバクテリウム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）種、肉芽腫カリマトバクテリウム（Ｃａｌｙｍｍａｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｒａｎｕｌｏｍａｔｉｓ）、ストレプトバチルス・モニリホルミス（Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉｓ）を含むストレプトバチルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、及び在郷軍人病菌（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ）を含むレジオネラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ）種等のグラム陰性菌を原因とする、請求項１３１に記載の方法。
【請求項１３９】
前記対象が、新生児、小児、青少年、又は成人である、請求項１に記載の方法。
【請求項１４０】
前記方法が、１年毎に１回以上行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項１４１】
前記方法が、１カ月毎に１回以上行われる、請求項１４０に記載の方法。
【請求項１４２】
前記方法が、１週間毎に１回以上行われる、請求項１４１に記載の方法。
【請求項１４３】
前記方法が、１日毎に１回以上行われる、請求項１４２に記載の方法。
【請求項１４４】
前記方法が、１時間毎に１回以上行われる、請求項１４３に記載の方法。
【請求項１４５】
前記方法が、少なくとも１回、少なくとも２回、少なくとも３回、少なくとも５回、又は少なくとも１０回行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項１４６】
前記方法が、更に、ＩＡＩＰ又は治療薬を含む処置を前記対象に投与することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１４７】
前記対象が、２００μｇ／ｍＬ以下のＩＡＩＰ濃度を有する、請求項１４６に記載の方法。
【請求項１４８】
前記対象由来の前記サンプルが、参照サンプルと比較して、ＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の高いレベルを有する、請求項１４６に記載の方法。
【請求項１４９】
前記対象が、炎症性疾病若しくは状態又は感染症を有し又は発症する危険性を有する、請求項１４６に記載の方法。
【請求項１５０】
前記方法が、ＩＡＩＰ及び治療薬を前記対象に投与することを含む、請求項１４６に記載の方法。
【請求項１５１】
前記治療薬が、抗生剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤、抗寄生虫薬、抗炎症剤、抗癌剤、抗凝固剤、免疫調節剤、気管支拡張剤、補体阻害剤、昇圧剤、鎮静剤、又は人工呼吸からなる群から選択される、請求項１４６又は１５０に記載の方法。
【請求項１５２】
前記対象が、少なくとも１日間病気である、請求項１に記載の方法。
【請求項１５３】
前記対象が、少なくとも１週間病気である、請求項１５２に記載の方法。
【請求項１５４】
前記対象が、少なくとも１か月間病気である、請求項１５３に記載の方法。
【請求項１５５】
前記対象が、少なくとも１年間病気である、請求項１５４に記載の方法。
【請求項１５６】
前記方法が：
ｃ）前記対象の前記健康状態を評価し；
ｄ）前記対象の前記健康状態を監視し；
ｃ）炎症性疾病若しくは状態又は感染症を有し又はその危険性を有するとして前記対象を診断し；
ｄ）前記対象に投与された処置の有効性を評価し；又は
ｅ）前記対象における疾病の重症度を評価する
ためのものである、請求項１に記載の方法。
【請求項１５７】
前記方法が、更に、前記サンプル中に検出されるＩＡＩＰ及び／又はＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の前記量を、正常な対象由来のサンプル中に見出されるＩＡＩＰ及び／又はＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の前記量又はカットオフ値と比較することを含む、請求項１５６に記載の方法。
【請求項１５８】
前記正常な対象由来の前記サンプル中のＩＡＩＰの量よりも、又は前記カットオフ値に対して、低い前記サンプル中のＩＡＩＰの量は、前記対象が炎症性疾病若しくは状態又は感染症を有し又は発症する危険性を有することを示す、請求項１５７に記載の方法。
【請求項１５９】
前記正常な対象由来の前記サンプル中のＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の量よりも、又は前記カットオフ値に対して、高い前記サンプル中のＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の量は、前記対象が炎症性疾病若しくは状態又は感染症を有し又は発症する危険性を有することを示す、請求項１５７に記載の方法。
【請求項１６０】
前記正常な対象由来の前記サンプル中のＩＡＩＰの前記量、又は前記カットオフ値が、＞２５０μｇ／ｍＬである、請求項１５７に記載の方法。
【請求項１６１】
前記正常な対象由来の前記サンプル中のＩＡＩＰの前記量が、約２６０〜約５４０μｇ／ｍＬである、請求項１６０に記載の方法。
【請求項１６２】
前記対象が２５０μｇ／ｍＬ以下のＩＡＩＰ濃度を有するという決定は、前記対象が炎症性疾病若しくは状態又は感染症を有し又は発症する高い危険性を有し、又は病的状態及び／若しくは死亡の高い危険性を有すると診断されることを示す、請求項１に記載の方法。
【請求項１６３】
前記対象が２００〜３００μｇ／ｍＬのＩＡＩＰ濃度を有し、前記方法が少なくとも年に１回行われる、請求項１５７に記載の方法。
【請求項１６４】
前記方法が少なくとも年に２回行われる、請求項１６３に記載の方法。
【請求項１６５】
前記方法が少なくとも月に１回行われる、請求項１６３に記載の方法。
【請求項１６６】
前記方法が少なくとも週に１回行われる、請求項１６３に記載の方法。
【請求項１６７】
前記方法が少なくとも１日１回行われる、請求項１６３に記載の方法。
【請求項１６８】
前記方法が少なくとも１時間に１回行われる、請求項１６３に記載の方法。
【請求項１６９】
前記対象が、以前に炎症性疾病若しくは状態又は感染症を有した、請求項１に記載の方法。
【請求項１７０】
前記方法が、前記処置に先立って、及び前記処置の過程中に１回以上行われる、請求項１４６に記載の方法。
【請求項１７１】
前記方法が、前記処置の開始後、及び／又は前記処置の終局後に行われる、請求項１４６に記載の方法。
【請求項１７２】
前記処置が、前記対象におけるＩＡＩＰの前記濃度が、前記対象におけるＩＡＩＰの以前の測定値と比較して増大している場合、及び／又は前記対象におけるＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の前記濃度が、前記対象におけるＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の以前の測定値と比較して低下している場合、有効であると決定される、請求項１４６に記載の方法。
【請求項１７３】
前記処置が、ＩＡＩＰの前記濃度が、前記対象におけるＩＡＩＰの以前の測定値と比較して、前記対象において低下し又は一定のままである場合、及び／又はＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の前記濃度が、前記対象におけるＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の以前の測定値と比較して、前記対象において増加し又は一定のままである場合、無効であると決定される、請求項１４６に記載の方法。
【請求項１７４】
前記方法が、前記処置を修正又は変更することを更に含む、請求項１７３に記載の方法。
【請求項１７５】
炎症性疾病又は感染症を有し又は発症する危険性を有する対象の処置方法であって、前記対象が、請求項１の方法による処置が必要であると決定されており、前記方法が、ＩＡＩＰ及び／又は抗生剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤、抗寄生虫薬、抗炎症剤、抗癌剤、抗凝固剤、免疫調節剤、気管支拡張剤、補体阻害剤、昇圧剤、鎮静剤、若しくは人工呼吸からなる群から選択される治療的有効量の治療薬を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項１７６】
前記炎症性疾病又は状態が、敗血症、敗血性ショック、無菌敗血症、外傷、傷害、卒中、急性炎症性疾病、ＳＩＲＳ、急性肺傷害、ＡＲＤＳ、肺炎、壊死性腸炎、急性膵炎、腎疾病、急性腎臓傷害、肝臓傷害、急性循環不全、手術誘導炎症、腫瘍誘導炎症、多発性硬化症、子癇前症、癌、癌転移、腫瘍浸潤、末梢血管疾病、１型又は２型糖尿病、アテローム硬化性心血管系疾病、間欠性跛行、重症虚血肢疾病、心筋梗塞、頸動脈閉塞、臍帯閉塞、低出生体重、早産、肺動脈弁閉鎖不全、末梢神経障害、低酸素性虚血、細菌感染症、創傷、やけど、断裂、挫傷、骨折、外科手技、組織虚血、関節リウマチ、髄膜炎、炎症性腸疾患、慢性閉塞性肺疾患、鼻炎、早期分娩、又は感染性疾患からなる群から選択される、請求項１７５に記載の方法。
【請求項１７７】
前記感染症が、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）及び髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）を含むナイセリア（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）種、ブランハメラ・カタラーリス（Ｂｒａｎｈａｍｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）を含むブランハメラ（Ｂｒａｎｈａｍｅｌｌａ）種、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）を含むエスケリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）種、エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）種、プロテウス・ミラビリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ  ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）を含むプロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）種、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、鼻疽菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｍａｌｌｅｉ）及び類鼻疽菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｓｅｕｄｏｍａｌｌｅｉ）を含むシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種、肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）を含むクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）種、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）種、赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）種、セラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）種、アシネトバクター（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ）種；インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）及び軟性下疳菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｄｕｃｒｅｙｉ）を含むヘモフィルス（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ）種、ブルセラ（Ｂｒｕｃｅｌｌａ）種、エルシニア・ペスチス（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ）及びエルシニア・エンテロコリチカ（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ）を含むエルシニア（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）種、野兎病菌（Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ  ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ）を含むフランシセラ（Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ）種、パスツレラ・マルトシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ  ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）を含むパスツレラ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ）種、コレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ）、フラボバクテリウム（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）種、メニンゴセプチカム（ｍｅｎｉｎｇｏｓｅｐｔｉｃｕｍ）、カンピロバクター・ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ）を含むカンピロバクター（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）種、バクテロイデス・フラジリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｆｒａｇｉｌｉｓ）を含むバクテロイデス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）種（口腔、咽頭の）、フソバクテリウム・ヌクレアタム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｎｕｃｌｅａｔｕｍ）を含むフソバクテリウム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）種、肉芽腫カリマトバクテリウム（Ｃａｌｙｍｍａｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｒａｎｕｌｏｍａｔｉｓ）、ストレプトバチルス・モニリホルミス（Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉｓ）を含むストレプトバチルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、及び在郷軍人病菌（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ）を含むレジオネラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ）種等のグラム陰性菌を原因とする、請求項１７５に記載の方法。
【請求項１７８】
前記検出剤が標識されている、請求項８１に記載のキット。
【請求項１７９】
前記ＩＡＩＰ結合剤が、ＩＡＩＰ特異的抗体又はＩＡＩＰリガンドである、請求項８１に記載のキット。
【請求項１８０】
前記キットが、更にＩＡＩＰリガンド結合剤を含む、請求項８１に記載のキット。
【請求項１８１】
前記ＩＡＩＰリガンド結合剤が、ＩＡＩＰリガンドに結合する抗体である、請求項１８０に記載のキット。
【請求項１８２】
前記ＩＡＩＰ検出剤が、ＩＡＩＰ特異的抗体又はＩＡＩＰリガンドである、請求項８１に記載のキット。
【請求項１８３】
前記キットが、更にＩＡＩＰリガンド検出剤を含む、請求項８１に記載のキット。
【請求項１８４】
前記ＩＡＩＰリガンド検出剤が、ＩＡＩＰリガンドに特異的に結合する抗体である、請求項１８３に記載のキット。
【請求項１８５】
前記ＩＡＩＰ特異的抗体がモノクローナル抗体である、請求項１７９又は１８２に記載のキット。
【請求項１８６】
前記モノクローナル抗体が、ＭＡｂ  ６９．２６又はＭＡｂ  ６９．３１である、請求項１８５に記載のキット。
【請求項１８７】
前記支持体が、プレート、樹脂、容器、膜、バイオチップ、粒子、ナノ粒子、試験片、又はビーズである、請求項８２に記載のキット。
【請求項１８８】
前記標識が、酵素、酵素基質、ビオチン、粒子、蛍光染料、発光化合物、又は放射標識である、請求項８１に記載のキット。
【請求項１８９】
前記ＩＡＩＰリガンドが、エンドドキシン（ＬＰＳ）、ヘパリン、ヒストン、ヒアルロン酸、ラミニン、テネイシンＣ、アグリカン、ビトロネクチン、フィブロネクチン、フォン・ヴィルブランド因子、ペントラキシン−３（ＰＴＸ３）、ＴＮＦ−刺激遺伝子−６（ＴＳＧ−６）、因子ＩＸ、補体成分、因子ＸＩＩＩａ、及び組織トランスグルタミナーゼからなる群から選択される、請求項１７９〜１８４のいずれか一項に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
ＩＡＩＰ（インターα阻害剤タンパク質）は、全ての哺乳動物の血中を高濃度で循環する、天然に存在する免疫調節性血漿タンパク質のファミリーである。ＩＡＩＰは、主に肝臓で産生され、血液中に放出され、サブユニット（ビクニン）は尿中に排泄される。ＩＡＩＰは、炎症の調節に重要な役割を果たす。これらは、感染、外傷及び傷害に起因する重篤な炎症に対して広範な保護効果を有し、重要なことに、ＩＡＩＰの保護効果は、原因微生物因子又はトリガーから独立している。このファミリーのメンバーは、グリコサミノグリカンによって共有結合した重鎖及び軽鎖ポリペプチドのサブユニットから構成されている。ＩＡＩＰはインビボでは、２つの重鎖（Ｈ１及びＨ２）と１つの軽鎖（Ｌ）から構成される２５０ｋＤａの分子であるインターα阻害剤（ＩαＩ）と、１つの重鎖（Ｈ３）と１つの軽鎖（Ｌ）から構成される１２５ｋＤａの分子であるプレα阻害剤（ＰαＩ）として見出され得る。
【背景技術】
【０００２】
身体が、傷害又は感染の間に誘導されるもの等の炎症シグナルを発生すると、ＩＡＩＰは組織に輸送され、炎症部位に直接到達する。ＩＡＩＰの重鎖は、炎症カスケードの一部であるタンパク質に結合することによって抗炎症応答を増強する。又、重鎖が切断されると、それに結合したＧＡＧ（２つのクニッツドメインのために「ビクニン」と名付けられた）を有する軽鎖が放出され、軽鎖のセリンプロテアーゼ阻害活性が活性化される。ビクニンは、トリプシン、エラスターゼ、プラスミン、カテプシンＧ及びフリン等のセリンプロテアーゼの活性を阻害する。ＩＡＩＰは複数の機序を介して抗炎症作用を発揮する。これらは、補体及び細胞外ヒストン（損傷信号）等の炎症を増幅するタンパク質と結合し、それにより炎症過程を減弱させることが示されている。重鎖を介して、ＩＡＩＰは細胞外マトリクス（ＥＣＭ）タンパク質に結合でき、インビトロ及びインビボモデルの両方で傷害後の肺上皮修復を促進することが示されている。ＩＡＩＰは又、ＴＮＦ−α及びＩＬ−６等の炎症性サイトカインを下方調節することが複数のインビボモデルにおいて示されている。ビクニン欠損（そのため、ＩＡＩＰが不足している）マウスは、細胞接着の炎症性マーカーであるＶＣＡＭ−１及びＩＣＡＭ−１を減少させたことが示されている。
【０００３】
健常人では、血中の循環ＩＡＩＰの量は比較的高い（４００〜８００ｍｇ／Ｌの範囲）。しかしながら、ＩＡＩＰレベルは新生児及び成人患者における全身性炎症／敗血症の間に急速に低下し（Ｂａｅｋ  ＹＷ、ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｐｅｄｉａｔｒ．２００３；１４３：１１〜１５；Ｌｉｍ  ＹＰ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ．２００３；１８８：９１９−９２６及びＯｐａｌ  ＳＭ、ｅｔ  ａｌ．Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．２００７；３５：３８７−３９２）、ＩＡＩＰレベルの低下は疾患進行と強く相関することが示されている。疾患がより進行し、重篤な段階に進むにつれて、ＩＡＩＰレベルは急激に低下し、ＩＡＩＰが、臨床医が疾患の進行を監視し、重症肺炎、敗血症及び関連する臓器損傷、ＮＥＣ、創傷治癒、やけど、癌、脳卒中、アルツハイマー病、てんかん等のような重篤な炎症性疾病等の疾病のための情報に基づいた治療決定を行う際に、予後及びセラノスティックスのマーカーとして臨床的有用性を有することを示唆する。
【０００４】
標準化競合ＩＡＩＰイムノアッセイを用いて、細菌及びウイルス感染後の全身性炎症を有する患者からの血液サンプル中のＩＡＩＰが測定されている。競合ＩＡＩＰイムノアッセイは、軽鎖のみを検出するＩＡＩＰの測定値を提供し、従って、インタクトＩＡＩＰ及び切断ビクニンの両方がこのアッセイにおいて検出される。競合アッセイは、その抗炎症性及び組織修復特性にとって非常に重要であるＩＡＩＰの他の重要な部分；即ち重鎖とグリコサミノグリカンを検出しない。このように、競合的ＩＡＩＰイムノアッセイは、患者サンプルにおける活性ＩＡＩＰの評価において制限を有する。ＩＡＩＰが生体の保護的な自然免疫防御の重要な構成要素であり、予後バイオマーカーとしての利用可能性を考えると、ＩＡＩＰを定量的に測定するための改良された方法が必要である。理想的なアッセイは、完全な分子を捕捉するために軽鎖及び重鎖サブユニットの両方を測定するであろう。
【発明の概要】
【０００５】
本発明は、ＩＡＩＰ（例えば、インタクトＩＡＩＰ、ＩＡＩＰの重鎖、又はＩＡＩＰのグリコサミノグリカン（ＧＡＧ））に結合し及びＩＡＩＰを検出する薬剤による直接検出を介して、対象由来のサンプル中のＩＡＩＰを定量化する方法を提供する。定量化の方法は、対象を評価、診断、処置若しくは監視するために、又は対象における疾患の重症度若しくは治療有効性を評価するために用いることができる。本発明は又、本明細書に記載する方法に従ってＩＡＩＰを定量化するために使用することができるキットを特徴とする。
【０００６】
第１の態様において、サンプルを結合剤と接触させてＩＡＩＰ結合剤複合体を生成することであって、結合剤は支持体に結合される、生成することと；ｂ）ＩＡＩＰ結合剤複合体を検出剤と接触させることと；ｃ）ＩＡＩＰ結合剤複合体に結合した検出剤の量を検出して、サンプル中のＩＡＩＰを定量化することによる、対象由来のサンプル中のインターα阻害剤タンパク質（ＩＡＩＰ）を定量化する方法を特徴とする。
【０００７】
いくつかの実施形態において、ＩＡＩＰはインタクトＩＡＩＰである。
【０００８】
いくつかの実施形態において、結合剤は、ＩＡＩＰに結合するＩＡＩＰリガンドである。いくつかの態様において、結合剤は、ＩＡＩＰに特異的に結合する抗体である。
【０００９】
いくつかの実施形態において、検出剤は、ＩＡＩＰリガンドであるか、又はそれを含む。いくつかの実施形態において、検出剤は、ＩＡＩＰリガンド検出剤（例えば、ＩＡＩＰリガンド）に結合する抗体を更に含む。いくつかの実施形態において、検出剤は、ＩＡＩＰに特異的に結合する抗体である。例えば、特定の実施形態では、結合剤は、ＩＡＩＰに特異的に結合する抗体（例えば、ＭＡｂ  ６９．２６又はＭＡｂ  ６９．３１）であり、検出剤は、ＩＡＩＰに結合するＩＡＩＰリガンド（例えば、ヘパリン、ヒアルロン酸、エンドドキシン（ＬＰＳ）、又はヒストン）であるか、又はそれを含む。別の実施形態では、結合剤は、ＩＡＩＰに結合するＩＡＩＰリガンド（例えば、ヘパリン、ヒアルロン酸、ＬＰＳ、又はヒストン）であり、検出剤は、ＩＡＩＰに特異的に結合する抗体（例えば、ＭＡｂ  ６９．２６又はＭＡｂ  ６９．３１）である。
【００１０】
いくつかの実施形態において、ＩＡＩＰは、ＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体中に存在する。
【００１１】
いくつかの実施形態において、結合剤は、ＩＡＩＰに結合するＩＡＩＰリガンドである。いくつかの実施形態において、ＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体のＩＡＩＰリガンドは、結合剤とは異なる。いくつかの実施形態において、結合剤は、ＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体のＩＡＩＰリガンドに結合する抗体である。いくつかの実施形態において、結合剤は、ＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体のＩＡＩＰに特異的に結合する抗体である。
【００１２】
いくつかの実施形態において、検出剤は、ＩＡＩＰに結合するＩＡＩＰリガンドを含む。いくつかの実施形態において、検出剤は、ＩＡＩＰリガンド検出剤に結合する抗体を更に含む。いくつかの実施形態において、ＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体のＩＡＩＰリガンドは、ＩＡＩＰリガンド検出剤とは異なる。いくつかの実施形態において、検出剤は、ＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体のＩＡＩＰリガンドに結合する抗体である。いくつかの実施形態において、検出剤は、ＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体のＩＡＩＰに特異的に結合する抗体である。
【００１３】
いくつかの実施形態において、抗体はモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態において、抗体はＭＡｂ  ６９．２６又はＭＡｂ  ６９．３１である。
【００１４】
いくつかの実施形態において、ＩＡＩＰリガンドは、エンドドキシン（ＬＰＳ）、ヘパリン、ヒストン、ヒアルロン酸、ビトロネクチン、フィブロネクチン、ラミニン、テネイシンＣ、アグリカン、フォン・ヴィルブランド因子、ペントラキシン−３（ＰＴＸ３）、ＴＮＦ−刺激遺伝子−６（ＴＳＧ−６）、因子ＩＸ、補体成分、因子ＸＩＩＩａ、及び組織トランスグルタミナーゼからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、補体成分は、Ｃ１ｑ、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ８、プロパージン、又は因子Ｄである。
【００１５】
いくつかの実施形態において、検出剤は、標識を含む。いくつかの実施形態において、標識は、ビオチン、酵素、酵素基質、放射標識、発光化合物、コロイド金、粒子、又は蛍光染料である。
【００１６】
いくつかの実施形態において、支持体は、プレート、粒子、ナノ粒子、樹脂、膜、バイオチップ、容器、試験片、又はビーズである。
【００１７】
いくつかの実施形態において、方法は更に、ステップａ）とｂ）の間に洗浄ステップを含む。
【００１８】
いくつかの実施形態において、方法は更に、ステップｂ）とｃ）の間に洗浄ステップを含む。
【００１９】
いくつかの実施形態において、方法は更に、ステップａ）又はステップｂ）に先立ってブロッキングステップを含む。
【００２０】
いくつかの実施形態において、ステップａ）及び／又はｂ）における接触は、ｐＨ約７．０〜約３．５で行われる。いくつかの実施形態において、ｐＨは約５．０〜約３．５である。いくつかの実施形態において、ｐＨは約４．０である。
【００２１】
いくつかの実施形態において、サンプルは流体である。いくつかの実施形態において、流体は血液、血漿、血清、尿、脳脊髄液、滑液、羊水、間質液、卵胞液、腹水、気管支肺胞洗浄液、母乳、痰、リンパ液、胆汁、又は組織ホモジネートである。
【００２２】
いくつかの実施形態において、対象はヒト対象である。いくつかの実施形態において、対象は、炎症性疾病若しくは状態又は感染症を有し又は発症する危険性を有すると特定されている。いくつかの実施形態において、対象は、炎症性疾病若しくは状態又は感染症を有し又は発症する危険性を有すると特定されていない。いくつかの実施形態において、方法は、対象が炎症性疾病若しくは状態又は感染症を有し又はその危険性を有するとして診断される前、診断された後、又は診断と同時に行われる。いくつかの実施形態において、方法は、対象の炎症性疾病若しくは状態又は感染症の処置と実質的に同時に行われる。いくつかの実施形態において、方法は、対象の炎症性疾病若しくは状態又は感染症の処置に先立って行われる。いくつかの実施形態において、方法は、対象の炎症性疾病若しくは状態又は感染症の処置の後に行われる。
【００２３】
いくつかの実施形態において、炎症性疾病又は状態は、敗血症、敗血性ショック、無菌敗血症、外傷、傷害、卒中、急性炎症性疾病、ＳＩＲＳ、急性肺傷害、ＡＲＤＳ、肺炎、壊死性腸炎、急性膵炎、腎疾病、急性腎臓傷害、肝臓傷害、急性循環不全、子癇前症、癌、癌転移、腫瘍浸潤、末梢血管疾病、１型又は２型糖尿病、アテローム硬化性心血管系疾病、間欠性跛行、重症虚血肢疾病、心筋梗塞、頸動脈閉塞、臍帯閉塞、低出生体重、早産、手術誘導炎症、腫瘍誘導炎症、多発性硬化症、肺動脈弁閉鎖不全、末梢神経障害、低酸素性虚血、細菌感染症、創傷、やけど、断裂、挫傷、骨折、外科手技、組織虚血、関節リウマチ、髄膜炎、炎症性腸疾患、慢性閉塞性肺疾患、鼻炎、早期分娩、又は感染性疾患からなる群から選択される。
【００２４】
いくつかの実施形態において、感染症は、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）及び髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）を含むナイセリア（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）種、ブランハメラ・カタラーリス（Ｂｒａｎｈａｍｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）を含むブランハメラ（Ｂｒａｎｈａｍｅｌｌａ）種、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）を含むエスケリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）種、エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）種、プロテウス・ミラビリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ  ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）を含むプロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）種、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、鼻疽菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｍａｌｌｅｉ）及び類鼻疽菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｓｅｕｄｏｍａｌｌｅｉ）を含むシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種、肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）を含むクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）種、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）種、赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）種、セラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）種、アシネトバクター（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ）種；インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）及び軟性下疳菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｄｕｃｒｅｙｉ）を含むヘモフィルス（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ）種、ブルセラ（Ｂｒｕｃｅｌｌａ）種、エルシニア・ペスチス（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ）及びエルシニア・エンテロコリチカ（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ）を含むエルシニア（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）種、野兎病菌（Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ  ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ）を含むフランシセラ（Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ）種、パスツレラ・マルトシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ  ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）を含むパスツレラ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ）種、コレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ）、フラボバクテリウム（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）種、メニンゴセプチカム（ｍｅｎｉｎｇｏｓｅｐｔｉｃｕｍ）、カンピロバクター・ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ）を含むカンピロバクター（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）種、バクテロイデス・フラジリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｆｒａｇｉｌｉｓ）を含むバクテロイデス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）種（口腔、咽頭の）、フソバクテリウム・ヌクレアタム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｎｕｃｌｅａｔｕｍ）、肉芽腫カリマトバクテリウム（Ｃａｌｙｍｍａｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｒａｎｕｌｏｍａｔｉｓ）を含むフソバクテリウム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）種、ストレプトバチルス・モニリホルミス（Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉｓ）を含むストレプトバチルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、及び在郷軍人病菌（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ）を含むレジオネラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ）種等のグラム陰性菌を原因とする。
【００２５】
いくつかの実施形態において、対象は、新生児、小児、青少年、又は成人である。
【００２６】
いくつかの実施形態において、方法は、１年毎に１回以上行われる。いくつかの実施形態において、方法は、１カ月毎に１回以上行われる。いくつかの実施形態において、方法は、１週間毎に１回以上行われる。いくつかの実施形態において、方法は、１日毎に１回以上行われる。いくつかの実施形態において、方法は、１時間毎に１回以上行われる。
【００２７】
いくつかの実施形態において、方法は、少なくとも１回、少なくとも２回、少なくとも３回、少なくとも５回、又は少なくとも１０回行われる。
【００２８】
いくつかの実施形態において、方法は更に、ＩＡＩＰ又は治療薬を含む処置を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態において、対象は、２００μｇ／ｍＬ以下のＩＡＩＰ濃度を有する。いくつかの実施形態において、対象由来のサンプルは、参照サンプルと比較して、ＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の高いレベルを有する。いくつかの実施形態において、対象は、炎症性疾病若しくは状態又は感染症を有し又は発症する危険性を有する。
【００２９】
いくつかの実施形態において、方法は、ＩＡＩＰ及び治療薬を対象に投与することを含む。
【００３０】
いくつかの実施形態において、治療薬は、抗生剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤、抗寄生虫薬、抗炎症剤、抗癌剤、抗凝固剤、免疫調節剤、気管支拡張剤、補体阻害剤、昇圧剤、鎮静剤、又は人工呼吸からなる群から選択される。
【００３１】
いくつかの実施形態において、対象は、少なくとも１日間病気である。いくつかの実施形態において、対象は、少なくとも１週間病気である。いくつかの実施形態において、対象は、少なくとも１か月間病気である。いくつかの実施形態において、対象は、少なくとも１年間病気である。
【００３２】
いくつかの実施形態において、方法は：ａ）対象の健康状態を評価し；ｂ）対象の健康状態を監視し；ｃ）炎症性疾病若しくは状態又は感染症を有し又はその危険性を有するとして対象を診断し；ｄ）対象に投与された処置の有効性を評価し；又はｅ）対象における疾病の重症度を評価するためのものである。
【００３３】
いくつかの実施形態において、方法は更に、サンプル中に検出されるＩＡＩＰ及び／又はＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の量を、正常な対象由来のサンプル中に見出されるＩＡＩＰ及び／又はＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の量又はカットオフ値と比較することを含む。いくつかの実施形態において、正常な対象由来のサンプル中のＩＡＩＰの量よりも、又はカットオフ値に対して、低いサンプル中のＩＡＩＰの量は、対象が炎症性疾病若しくは状態又は感染症を有し又は発症する危険性を有することを示す。いくつかの実施形態において、正常な対象由来のサンプル中のＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の量よりも、又はカットオフ値に対して、高いサンプル中のＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の量は、対象が炎症性疾病若しくは状態又は感染症を有し又は発症する危険性を有することを示す。いくつかの実施形態において、正常な対象由来のサンプル中のＩＡＩＰの量、又はカットオフ値は、＞２５０μｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態において、正常な対象由来のサンプル中のＩＡＩＰの量は、約２６０〜約５４０μｇ／ｍＬである。
【００３４】
いくつかの実施形態において、対象が２５０μｇ／ｍＬ以下のＩＡＩＰ濃度を有するという決定は、対象が炎症性疾病若しくは状態又は感染症を有し又は発症する高い危険性を有し、又は病的状態及び／若しくは死亡の高い危険性を有すると診断されることを示す。
【００３５】
いくつかの実施形態において、対象は、２００〜３００μｇ／ｍＬのＩＡＩＰ濃度を有する。別の実施形態では、方法は、少なくとも年に１回、少なくとも年に２回、少なくとも月に１回、少なくとも週に１回、少なくとも１日１回、又は少なくとも１時間に１回行われる。
【００３６】
いくつかの実施形態において、対象は、炎症性疾病若しくは状態又は感染症を以前に有していた。
【００３７】
いくつかの実施形態において、方法は、処置に先立って、及び／又は処置の過程中に１回以上行われる。いくつかの実施形態において、方法は、処置の開始後、及び／又は処置の終局後に行われる。いくつかの実施形態において、処置は、対象におけるＩＡＩＰの濃度が、対象におけるＩＡＩＰの以前の測定値と比較して増大している場合、及び／又は対象におけるＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の濃度が、対象におけるＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の以前の測定値と比較して低下している場合、有効であると決定される。いくつかの実施形態において、処置は、ＩＡＩＰの濃度が、対象におけるＩＡＩＰの以前の測定値と比較して、対象において低下し又は一定のままである場合、及び／又はＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の濃度が、対象におけるＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の以前の測定値と比較して、対象において増加し又は一定のままである場合、無効であると決定される。いくつかの実施形態において、方法は更に、処置を修正又は変更することを含む。
【００３８】
第２の態様において、治療的有効量のＩＡＩＰ及び／又は抗生剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤、抗寄生虫薬、抗炎症剤、抗癌剤、抗凝固剤、免疫調節剤、気管支拡張剤、補体阻害剤、昇圧剤、鎮静剤、若しくは人工呼吸からなる群から選択される治療薬を対象に投与することによる、炎症性疾病又は感染症を有し又は発症する危険性を有する対象（例えば、新生児、小児、青少年、又は成人等のヒト）の処置方法を特徴とし、ここで対象は、第１の態様の方法に従って、処置が必要であると決定されている。
【００３９】
いくつかの実施形態において、炎症性疾病又は状態は、敗血症、敗血性ショック、無菌敗血症、外傷、傷害、卒中、急性炎症性疾病、ＳＩＲＳ、急性肺傷害、ＡＲＤＳ、肺炎、壊死性腸炎、急性膵炎、腎疾病、急性腎臓傷害、肝臓傷害、急性循環不全、手術誘導炎症、腫瘍誘導炎症、多発性硬化症、子癇前症、癌、癌転移、腫瘍浸潤、末梢血管疾病、１型又は２型糖尿病、アテローム硬化性心血管系疾病、間欠性跛行、重症虚血肢疾病、心筋梗塞、頸動脈閉塞、臍帯閉塞、低出生体重、早産、肺動脈弁閉鎖不全、末梢神経障害、低酸素性虚血、細菌感染症、創傷、やけど、断裂、挫傷、骨折、外科手技、組織虚血、関節リウマチ、髄膜炎、炎症性腸疾患、慢性閉塞性肺疾患、鼻炎、早期分娩、又は感染性疾患からなる群から選択される。
【００４０】
いくつかの実施形態において、感染症は、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）及び髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）を含むナイセリア（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）種、ブランハメラ・カタラーリス（Ｂｒａｎｈａｍｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）を含むブランハメラ（Ｂｒａｎｈａｍｅｌｌａ）種、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）を含むエスケリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）種、エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）種、プロテウス・ミラビリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ  ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）を含むプロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）種、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、鼻疽菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｍａｌｌｅｉ）及び類鼻疽菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｓｅｕｄｏｍａｌｌｅｉ）を含むシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種、肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）を含むクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）種、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）種、赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）種、セラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）種、アシネトバクター（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ）種；インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）及び軟性下疳菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｄｕｃｒｅｙｉ）を含むヘモフィルス（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ）種、ブルセラ（Ｂｒｕｃｅｌｌａ）種、エルシニア・ペスチス（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ）及びエルシニア・エンテロコリチカ（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ）を含むエルシニア（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）種、野兎病菌（Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ  ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ）を含むフランシセラ（Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ）種、パスツレラ・マルトシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ  ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）を含むパスツレラ（Ｐａｓｔｕｒｅｌｌａ）種、コレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ）、フラボバクテリウム（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）種、メニンゴセプチカム（ｍｅｎｉｎｇｏｓｅｐｔｉｃｕｍ）、カンピロバクター・ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ）を含むカンピロバクター（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）種、バクテロイデス・フラジリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｆｒａｇｉｌｉｓ）を含むバクテロイデス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）種（口腔、咽頭の）、フソバクテリウム・ヌクレアタム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｎｕｃｌｅａｔｕｍ）を含むフソバクテリウム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）種、肉芽腫カリマトバクテリウム（Ｃａｌｙｍｍａｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｒａｎｕｌｏｍａｔｉｓ）、ストレプトバチルス・モニリホルミス（Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉｓ）を含むストレプトバチルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、及び在郷軍人病菌（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ）を含むレジオネラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ）種等のグラム陰性菌を原因とする。
【００４１】
第３の態様において、サンプル中のＩＡＩＰ又はＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体を定量化するためのキットを特徴とし、ここでキットは、ＩＡＩＰ結合剤及びＩＡＩＰ検出剤、並びに場合により、以下の１つ以上を含む：洗浄緩衝液、ブロッキング剤、標識検出のための基質、及びサンプル中のＩＡＩＰ又はＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体のレベルを定量化するための説明書。キットの構成要素の１つ以上は、チューブ若しくはバイアル等の容器内に提供され、及び／又は使用の準備が整った形態にあり得る（例えば、キットの支持体（例えば、プレート又は試験片）への適用。
【００４２】
いくつかの実施形態において、結合剤は、支持体に固定化されている。
【００４３】
いくつかの実施形態において、検出剤は、標識されている。
【００４４】
いくつかの実施形態において、ＩＡＩＰ結合剤は、ＩＡＩＰ特異的抗体又はＩＡＩＰリガンドである。
【００４５】
いくつかの実施形態において、キットは更に、ＩＡＩＰリガンド結合剤を含む。いくつかの実施形態において、ＩＡＩＰリガンド結合剤は、ＩＡＩＰリガンドに結合する抗体である。
【００４６】
いくつかの実施形態において、ＩＡＩＰ検出剤は、ＩＡＩＰ特異的抗体又はＩＡＩＰリガンドである。
【００４７】
いくつかの実施形態において、キットは更に、ＩＡＩＰリガンド検出剤を含む。いくつかの実施形態において、ＩＡＩＰリガンド検出剤は、ＩＡＩＰリガンドに特異的に結合する抗体である。
【００４８】
いくつかの実施形態において、ＩＡＩＰ特異的抗体はモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体はＭＡｂ  ６９．２６又はＭＡｂ  ６９．３１である。
【００４９】
いくつかの実施形態において、支持体は、プレート、樹脂、容器、膜、バイオチップ、粒子、ナノ粒子、試験片、又はビーズである。
【００５０】
いくつかの実施形態において、標識は、酵素、酵素基質、ビオチン、粒子、蛍光染料、発光化合物、又は放射標識である。
【００５１】
いくつかの実施形態において、ＩＡＩＰリガンドは、エンドドキシン（ＬＰＳ）、ヘパリン、ヒストン、ヒアルロン酸、ラミニン、テネイシンＣ、アグリカン、ビトロネクチン、フィブロネクチン、フォン・ヴィルブランド因子、ペントラキシン−３（ＰＴＸ３）、ＴＮＦ−刺激遺伝子−６（ＴＳＧ−６）、因子ＩＸ、補体成分、因子ＸＩＩＩａ、及び組織トランスグルタミナーゼからなる群から選択される。
【００５２】
定義
本明細書で使用される用語「約」は、記載される値の１０％以上又は以下である値を指す。例えば、用語「約５ｎＭ」は、４．５ｎＭ〜５．５ｎＭの範囲を示す。
【００５３】
本明細書で使用される「投与」は、任意の有効な経路によって、対象に治療薬（例えば、ＩＡＩＰ）を提供又は与えることを指す。例示的な投与経路は、下記にて本明細書に記載される。
【００５４】
本明細書で使用される用語「抗体」（Ａｂ）は、特定の抗原に特異的に結合する、又は特定の抗原と免疫学的に反応性である免疫グロブリン分子を指し、少なくとも重鎖の可変ドメインを含み、通常、免疫グロブリンの少なくとも重鎖及び軽鎖の可変ドメインを含む。抗体及び抗原結合断片、変異体、又はそれらの誘導体としては、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、多特異的抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、霊長類化抗体、又はキメラ抗体、ヘテロコンジュゲート抗体（例えば、二、三及び四特異的抗体、ダイアボディ、トリアボディ、及びテトラボディ）、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、エピトープ結合断片、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’及びＦ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖｓ、単鎖Ｆｖｓ（ｓｃＦｖ）、ｒｌｇＧ、単鎖抗体、ジスルフィド結合Ｆｖｓ（ｓｄＦｖ）、ＶＬ又はＶＨドメインのいずれかを含む断片、Ｆａｂ発現ライブラリーによって産生される断片、及び抗イディオタイプ（抗−Ｉｄ）抗体が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の抗体分子は、免疫グロブリン分子の任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）又はサブクラスであり得る。更に、特に示さない限り、用語「モノクローナル抗体」（ｍＡｂ）は、インタクト分子、及び、標的タンパク質に特異的に結合できる抗体断片（例えば、Ｆａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片等）の両方を含むことが意図される。Ｆａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片はインタクト抗体のＦｃ断片を欠き、動物の循環からより迅速に除去され、インタクト抗体よりも非特異的組織結合が少ない可能性がある。
【００５５】
本明細書で使用される用語「抗原結合断片」は、標的抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つ以上の断片を指す。抗体の抗原結合機能は、全長抗体の断片によって行うことができる。抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、ＳＭＩＰ、ダイアボディ、トリアボディ、アフィボディ、ナノボディ、アプタマー、又はドメイン抗体であり得る。抗体の用語「抗原結合断片」に包含される結合断片の例としては：（ｉ）Ｆａｂ断片、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、及びＣＨ１ドメインからなる一価断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、ヒンジ領域においてジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片；（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）ＶＨ及びＶＬドメインを含むｄＡｂ；（ｖｉ）ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６、１９８９）；（ｖｉｉ）ＶＨ又はＶＬドメインからなるｄＡｂ；（ｖｉｉｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）；並びに（ｉｘ）場合により合成リンカーによって連結され得る２つ以上の単離されたＣＤＲの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。更に、Ｆｖ断片の２つのドメイン、ＶＬ及びＶＨは、別々の遺伝子によってコードされているが、それらは、組換え法を用いて、ＶＬ及びＶＨ領域が対合して一価分子を形成する単一のタンパク質鎖として作製されることを可能にするリンカーによって連結され得る（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として既知；例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６、１９８８、及びＨｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３、１９８８参照）。これらの抗体断片は、当業者に既知の従来の技術を用いて得ることができ、断片は、インタクト抗体と同じ方法で有用性についてスクリーニングすることができる。抗原結合断片は、組換えＤＮＡ技術、インタクト免疫グロブリンの酵素的若しくは化学的切断によって、又は、いくつかの実施形態では、当該技術分野で既知の化学的ペプチド合成手順によって作製することができる。
【００５６】
本明細書で使用される用語「インターα阻害剤タンパク質」又は「ＩＡＩＰ」は、構造的に関連した免疫調節性タンパク質のファミリーにおける大きい多成分糖タンパク質を指す。ＩＡＩＰは、好中球エラスターゼ、プラスミン、トリプシン、キモトリプシン、グランザイムＫ、前タンパク質転換酵素、フリン、カテプシンＧ、及びアクロシンを含む一連のプロテアーゼの阻害において重要であることが示されている。ＩＡＩＰは、補体、細胞外ヒストン、及び凝固因子への結合及び不活化等のセリンプロテアーゼ阻害活性に加えて、ＴＮＦ−ａ及びＩＬ−６等の炎症誘発性サイトカインの下方調節、ＶＣＡＭ及びＩＣＡＭ等の接着因子の下方調節、並びにＮＦｋＢの下方調節等、広範な抗炎症機構を発揮する。ＩＡＩＰは又、重鎖がマトリックスタンパク質に移されて細胞の移動及び増殖を促進する組織の保護及び修復の促進にも重要である。ヒト血漿中で、ＩＡＩＰは比較的高濃度（４００〜８００μｇ／Ｌ）で検出される。他の阻害剤分子とは異なり、この阻害剤のファミリーは、一般に、コンドロイチン硫酸鎖により共有結合したポリペプチド鎖の組み合わせ（軽鎖及び重鎖）を含む。ＩＡＩＰの重鎖（Ｈ１、Ｈ２、及びＨ３）は、ヒアルロン酸（ＨＡ）結合タンパク質とも称される。ヒト血漿中に見出されるＩＡＩＰの主な形態は、２つの重鎖（Ｈ１及びＨ２）及び１つの軽鎖（Ｌ）を含むインターα−阻害剤（ＩαＩ）と、１つの重鎖（Ｈ３）及び１つの軽鎖（Ｌ）を含むプレα−阻害剤（ＰαＩ）である。別のＩＡＩＰは、血漿及び組織セリンプロテアーゼを広く阻害することが既知の、グリコサミノグリカンに結合した軽鎖（２つのクニッツドメインを有するビクニン（バイクニッツ（ｂｉ−Ｋｕｎｉｔｚ）阻害剤）とも称される）である。別のＩＡＩＰは、ビクニンに結合することなく血中を循環する重鎖関連分子Ｈ４である。更なる別のＩＡＩＰは、重鎖関連分子Ｈ５である。血漿画分中に存在するＩαＩ及びＰαＩは、約６０ｋＤａ〜約２８０ｋＤａの見かけの分子量を有する。
【００５７】
本明細書で使用される用語「ＩＡＩＰリガンド」は、インビボ又はインビトロでＩＡＩＰに結合する分子又はその断片（例えば、エンドドキシン（ＬＰＳ）、ヘパリン、ヒストン、ヒアルロン酸、マトリクス細胞タンパク質（例えば、ビトロネクチン、フィブロネクチン、テネイシンＣ、ラミニン、アグリカン）、フォン・ヴィルブランド因子、ペントラキシン−３（ＰＴＸ３）、ＴＮＦ−刺激遺伝子−６（ＴＳＧ−６）、凝固因子（例えば、因子ＩＸ及び因子ＸＩＩＩａ）、補体成分、Ｃａ２＋等の二価カチオン、及び組織トランスグルタミナーゼ）を指す。ＩＡＩＰリガンドは、ドメイン構造に基づいて、ＩＡＩＰに結合することが予想される分子（例えば、ＩＡＩＰ重鎖のフォン・ヴィルブランド因子Ａドメインに結合するであろうＲＧＤドメインを有するタンパク質）も含む。本明細書に記載される方法で使用されるＩＡＩＰリガンドは、ＩＡＩＰの重鎖、ＩＡＩＰ複合体、又はＩＡＩＰのＧＡＧに結合するリガンド（例えば、ビクニンのみには結合しないリガンド）を含む。
【００５８】
本明細書で使用される用語「ＩＡＩＰ特異的抗体」又は「ＩＡＩＰに特異的に結合する抗体」は、ＩＡＩＰに結合可能であり、かついずれの他のタンパク質にも特異的に結合しない、免疫グロブリン分子の少なくとも一部分、例えば重鎖若しくは軽鎖の少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）若しくはそのリガンド結合部分、重鎖若しくは軽鎖可変領域、重鎖若しくは軽鎖定常領域、フレームワーク領域、又はそれらの任意の一部分を含む任意のタンパク質又はペプチド含有分子を指す。ＩＡＩＰに特異的に結合する抗体は、ＩＡＩＰに結合し、背景シグナル又はノイズの少なくとも２倍、より典型的には、背景の１０〜１００倍のシグナルを提供するであろう。
【００５９】
本明細書で使用される用語「モノクローナル抗体」は、任意の真核生物、原核生物、又はファージクローンを含む単一のクローンに由来する抗体を指し、それが産生される方法ではない。
【００６０】
本明細書で使用される「医薬組成物」又は「医薬製剤」は、疾病の緩和、処置又は予防において薬理学的活性又は他の直接効果を有する組成物若しくは製剤、及び／又はその完成された剤形若しくは製剤である。組成物は、例えば、ヒト使用が指示されている（例えば、Ｆ．Ｄ．Ａ．及び／又はＥ．Ｍ．Ａ．により公布されたもの等の医薬又は生物学的ガイドラインに従って）。
【００６１】
本明細書で使用される用語「薬学的に許容され得る」は、過剰な毒性、刺激作用、アレルギー応答、及び他の問題のある合併症を伴わない、理想的な利益／危険性の比に相当する、対象、例えば哺乳動物（例えば、ヒト）の組織と接触されるのに好適な化合物、材料、組成物及び／又は剤形を指す。
【００６２】
本明細書で使用される表現「発症する可能性を低減する」は、本明細書に記載される特定の疾病、症候群若しくは状態（例えば、炎症性疾病又は感染症等の本明細書に記載する状態）が疑われる、若しくはさもなければその危険性を有する、又は現在の疾病、症候群若しくは状態の程度若しくは重症度が増大する危険性を有する患者（例えば、ヒト）、例えば、重症市中感染肺炎（ｓＣＡＰ）に進行する危険性を有する市中感染肺炎（ＣＡＰ）を有する患者の予防的処置を指す。
【００６３】
本明細書で使用される用語「参照」は、試験サンプル中のパラメータとの比較目的で使用されるサンプル又は標準のパラメータ（例えば、タンパク質レベル、濃度、核酸発現レベル、及び遺伝子コピー数）を指す。例えば、参照サンプルは、健常人（例えば、炎症性疾病又は感染症を有さない個人）から得ることができる。参照レベルは、１つ以上の参照サンプルから決定した分析物（例えば、タンパク質（例えば、ＩＡＩＰ）、核酸、炭水化物等）の発現又は濃度のレベル（又はその平均）であり得る。例えば、参照は、複数の個人（例えば、健常人、又は炎症性疾病若しくは感染症を有さない個人）間の分析物（例えば、ＩＡＩＰ）の平均レベル（例えば、平均レベル又は中央レベル）であり得る。他の場合、参照レベルは、例えば、別様に決定された、例えば実験的アッセイにより決定された分析物のレベル又は濃度に基づく所定の閾値レベルであり得る。
【００６４】
本明細書で使用される用語「サンプル」は、対象（例えば、ヒト等の哺乳動物）から単離された標本（例えば、血液、血液成分（例えば、血清又は血漿）、尿、唾液、羊水、肺洗浄液（ｌｕｎｇ  ｌａｖａｇｅ）、脳脊髄液、組織（例えば、組織生検又は組織ホモジネート）、膵液、滑液、及び細胞）を指す。
【００６５】
本明細書で使用される表現「特異的に結合する」は、タンパク質及び他の生物学的分子の異質集団における分析物（例えば、ＩＡＩＰ等のタンパク質）の存在の決定要因である結合反応を指す。分析物は、例えば、抗体又はその抗原結合断片によって認識される抗原であり得る。測定するべき分析物と結合剤（例えば、抗体若しくは抗原結合断片又はリガンド）との間の特異的結合は、１００ｎＭ未満のＫＤを示す。例えば、抗原（例えば、ＩＡＩＰ）に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片は、１００ｎＭまで（例えば、１ｐＭ〜１００ｎＭ）のＫＤで抗原に結合する。特定の抗原又はそのエピトープ（例えば、ＩＡＩＰ）に対する特異的結合を示さない抗体又はその抗原結合断片は、特定の抗原又はそのエピトープに対して１００ｎＭを超える（例えば、５００ｎＭ、１μＭ、１００μＭ、５００μＭ、又は１ｍＭを超える）ＫＤを示す。多様なイムノアッセイフォーマットを使用して、特定のタンパク質又は炭水化物と特異的な免疫反応性を有する抗体を選択することができる。例えば、固相ＥＬＩＳＡイムノアッセイは、タンパク質又は炭水化物と特異的な免疫反応性を有する抗体を選択するのに日常的に使用されている。特異的な免疫反応性の決定に使用できるイムノアッセイフォーマット及び条件の説明に関しては、Ｈａｒｌｏｗ  ＆  Ｌａｎｅ、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８８）及びＨａｒｌｏｗ  ＆  Ｌａｎｅ、Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９９）を参照されたい。
【００６６】
本明細書で使用される用語「敗血症」は、感染症に対する全身応答（本明細書で「感染性敗血症」と称する）又は急性組織傷害及び自然免疫活性化に関連した非感染性プロセス（本明細書で「無菌炎症」又は「無菌敗血症」と交換可能に称される）を指し、これは組織損傷、臓器不全、及び死をもたらし得る。感染性敗血症は、細菌、ウイルス、真菌、又は寄生虫（例えば、原生動物寄生虫）等の他の微生物を原因とする感染症によりもたらされ得る。無菌敗血症は、出血性ショック、多発外傷、膵炎、移植片拒絶、自己免疫性疾病、無機化合物、結晶、化学物質、又は虚血／再灌流の後に起こり得、既知の感染症の存在に関連するものではない。
【００６７】
本明細書で使用される用語「対象」は、ヒト、又は、霊長類、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ネコ若しくはイヌ等の非ヒト哺乳動物を含むがこれらに限定されない哺乳動物を指す。対象は、患者であり得る。
【００６８】
本明細書で使用される用語「処置する」は、疾病及び／又はそれに関連する症状を軽減し又は回復させることを指す。疾患又は状態の処置は、疾患又はそれに関連する症状が完全に排除される必要はないことが認識されるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００６９】
【図１】図１は、循環（例えば、血中）ＩＡＩＰ（ＩａＩ及びＰａＩ）及び例えば尿中に排泄された遊離軽鎖（ＬＣ、ビクニン）の構造を概略的に示す。ＩＡＩＰの重鎖及び軽鎖は、グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）によって一意に結合している。
【図２Ａ】図２Ａは、競合ＩＡＩＰ  ＥＬＩＳＡアッセイを概略的に示す。このアッセイでは、精製ＩＡＩＰがマルチウェルプレート等の支持体に固定化され、次いでＩＡＩＰに指向される生物学的サンプル及び標識された抗体（例えば、ＭＡｂ  ６９．２６）が精製ＩＡＩＰに加えられる。
【図２Ｂ】図２Ｂは、競合ＩＡＩＰ  ＥＬＩＳＡアッセイにより生成されたデータの標準曲線を示すグラフである。このアッセイは、サンプル中のＩＡＩＰと、固定化された精製ＩＡＩＰとの間の競合抗体結合に基づいたＩＡＩＰの間接的測定を提供する。より低いシグナルは、サンプル中のより高い量のＩＡＩＰを示す。
【図３Ａ】図３Ａは、標識されたＩＡＩＰリガンド（例えば、ビオチン化ヘパリン又はＬＰＳ）を使用する「サンドイッチ型」ＥＬＩＳＡと、前記ＥＬＩＳＡを用いて生成された例示的な標準曲線を概略的に示す。このアッセイのバージョンでは、ＩＡＩＰに特異的な抗体（例えば、ＭＡｂ  ６９．２６）が、マルチウェルプレート等の支持体に固定化され、次いで生物学的サンプルが、固定化された抗体を含む支持体に添加される。ＩＡＩＰがサンプル中に存在する場合、ＩＡＩＰは抗体に結合した後、標識ＩＡＩＰリガンドの添加により検出されるであろう。
【図３Ｂ】図３Ｂは、各々、ヘパリン−ＩＡＩＰ及びエンドドキシン（ＬＰＳ）−ＩＡＩＰサンドイッチ型ＥＬＩＳＡに関する標準曲線を示すグラフである。このアッセイは、ＩＡＩＰ濃度の直接測定を提供し、シグナルの増大はサンプル中のＩＡＩＰのより高い濃度を示す。
【図３Ｃ】図３Ｃは、各々、ヘパリン−ＩＡＩＰ及びエンドドキシン（ＬＰＳ）−ＩＡＩＰサンドイッチ型ＥＬＩＳＡに関する標準曲線を示すグラフである。このアッセイは、ＩＡＩＰ濃度の直接測定を提供し、シグナルの増大はサンプル中のＩＡＩＰのより高い濃度を示す。
【図４】図４は、図２Ａに示した競合ＥＬＩＳＡを用いて得られたＩＡＩＰ濃度の測定値を示すグラフである。ＩＡＩＰは、入院中の連続日に重症市中感染肺炎（ｓＣＡＰ）を有する患者由来の血漿サンプル中で測定され、正常な対照対象におけるＩＡＩＰレベルと比較した。競合ＥＬＩＳＡは、ｓＣＡＰを有する患者において２５０μｇ／ｍＬ、健康な対照において３３０μｇ／ｍＬの平均ＩＡＩＰ濃度を提供し、０、１、及び３日目に、ｓＣＡＰを有する対象と健康な対照とのＩＡＩＰレベルの間に有意差が見出された。
【図５】図５は、図３Ａに示した「サンドイッチ型」リガンド−ＩＡＩＰ  ＥＬＩＳＡを用いて得られたＩＡＩＰ濃度の測定値を示すグラフである。図５に示す結果は、ヘパリンをＩＡＩＰリガンドとして使用して生成された。図４の競合ＥＬＩＳＡを用いて評価されたものと同じサンプルを、このアッセイを用いて測定した。ヘパリン−ＩＡＩＰ  ＥＬＩＳＡは、ｓＣＡＰを有する患者において１２５〜１５０μｇ／ｍＬ、健康な対照において４２２μｇ／ｍＬの平均ＩＡＩＰ濃度を提供し、全時点で競合ＥＬＩＳＡで観察された差よりも統計的に有意な、ｓＣＡＰを有する対象と健康な対照とのＩＡＩＰレベルの間の差が見出された。
【図６】図６は、図３Ａに示した「サンドイッチ型」リガンド−ＩＡＩＰ  ＥＬＩＳＡを用いて得られたＩＡＩＰ濃度の測定値を示すグラフである。図６に示す結果は、ＬＰＳをＩＡＩＰリガンドとして使用して生成された。図４の競合ＥＬＩＳＡ及び図５のヘパリン−ＩＡＩＰ  ＥＬＩＳＡを用いて評価されたものと同じサンプルを、このアッセイを用いて測定した。ＬＰＳ−ＩＡＩＰ  ＥＬＩＳＡは、ｓＣＡＰ有する患者において１１８〜１４５μｇ／ｍＬ、健康な対照において３３８μｇ／ｍＬの平均ＩＡＩＰ濃度を提供し、全時点で競合ＥＬＩＳＡで観察された差よりも統計的に有意な、ｓＣＡＰを有する対象と健康な対照とのＩＡＩＰレベルの間の差が見出された。ＬＰＳ−ＩＡＩＰ  ＥＬＩＳＡは、感度の増大、及びｓＣＡＰを有する対象と健康な対照とのＩＡＩＰレベルの間のより測定可能な差の観点から、ヘパリン−ＩＡＩＰ  ＥＬＩＳＡと同等に行われた。
【図７】図７は、ＩＡＩＰに対するヘパリン及びＩＡＩＰ特異的抗体（ＭＡｂ  ６９．２６）の結合を示す一連のブロットである。中央のブロットに示すように、ビオチン化ヘパリンは精製ＩＡＩＰ（２５０ｋＤａ  ＩαＩ及び１２５ｋＤａ  ＰαＩ）に結合したが、ＩＡＩＰ軽鎖、ビクニン、又は陰性対照ヒト血清アルブミンに結合しなかった。対照的に、ＭＡｂ  ６９．２６は、精製ＩＡＩＰ及びビクニンの両方に結合した。これらのデータは、ヘパリンがＩＡＩＰの重鎖に結合し、このことは、ヘパリン−ＩＡＩＰ  ＥＬＩＳＡにおいて、循環するインタクトＩＡＩＰのより正確な測定値をもたらし得ることを示唆する。
【図８Ａ】図８Ａ〜８Ｃは、図２Ａに示した競合ＥＬＩＳＡ及び図３Ａに示した「サンドイッチ型」リガンド−ＩＡＩＰ  ＥＬＩＳＡを用いて得られたＩＡＩＰ濃度の測定値を示す一連のグラフである。ＩＡＩＰは、重篤な肺炎、重篤な敗血症を有する患者、正常な対照対象由来の血漿サンプル中で測定した。下記に示す各グラフは、ＩＡＩＰ濃度の平均±ＳＥＭ及び試験した患者サンプルの数（括弧内）である。図８Ａに示すように、競合ＥＬＩＳＡは、重篤な肺炎を有する患者において２４６μｇ／ｍＬ、重篤な敗血症を有する患者において２５０μｇ／ｍＬ、及び健康な対照において３３０μｇ／ｍＬの平均ＩＡＩＰ濃度を提供し、重篤な肺炎を有する対象と健康な対照とのＩＡＩＰレベルの間に有意差を見出したが、重篤な敗血症を有する対象と健康な対照との間には見出さなかった。
【図８Ｂ】図８Ａ〜８Ｃは、図２Ａに示した競合ＥＬＩＳＡ及び図３Ａに示した「サンドイッチ型」リガンド−ＩＡＩＰ  ＥＬＩＳＡを用いて得られたＩＡＩＰ濃度の測定値を示す一連のグラフである。ＩＡＩＰは、重篤な肺炎、重篤な敗血症を有する患者、正常な対照対象由来の血漿サンプル中で測定した。下記に示す各グラフは、ＩＡＩＰ濃度の平均±ＳＥＭ及び試験した患者サンプルの数（括弧内）である。図８Ｂに示すように、ＬＰＳ−ＩＡＩＰ  ＥＬＩＳＡは、重篤な肺炎を有する患者において１４１μｇ／ｍＬ、重篤な敗血症を有する患者において１５０μｇ／ｍＬ、及び健康な対照において３３８μｇ／ｍＬの平均ＩＡＩＰ濃度を提供し、重篤な肺炎又は重篤な敗血症を有する対象と健康な対照とのＩＡＩＰレベルの間の有意差を見出した。
【図８Ｃ】図８Ａ〜８Ｃは、図２Ａに示した競合ＥＬＩＳＡ及び図３Ａに示した「サンドイッチ型」リガンド−ＩＡＩＰ  ＥＬＩＳＡを用いて得られたＩＡＩＰ濃度の測定値を示す一連のグラフである。ＩＡＩＰは、重篤な肺炎、重篤な敗血症を有する患者、正常な対照対象由来の血漿サンプル中で測定した。下記に示す各グラフは、ＩＡＩＰ濃度の平均±ＳＥＭ及び試験した患者サンプルの数（括弧内）である。図８Ｃに示すように、ヘパリン−ＩＡＩＰ  ＥＬＩＳＡは、重篤な肺炎を有する患者において１４５μｇ／ｍＬ、重篤な敗血症を有する患者において１９３μｇ／ｍＬ、及び健康な対照において４２２μｇ／ｍＬの平均ＩＡＩＰ濃度を提供し、重篤な肺炎又は重篤な敗血症を有する対象と健康な対照とのＩＡＩＰレベルの間の有意差を見出した。ＬＰＳ−ＩＡＩＰ  ＥＬＩＳＡは、感度の増大を有する点でヘパリン−ＩＡＩＰ  ＥＬＩＳＡと同等に行われ、競合ＥＬＩＳＡと比較してより統計的に有意な結果を提供した。
【図９】図９は、固定化された血漿由来ＩＡＩＰ、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、及びＩＡＩＰ特異的抗体ＭＡｂ  ６９．２６のＩｇＧに対するビオチン化ＬＰＳの結合を示すヒストグラムである。ＬＰＳはＩＡＩＰに対する相当の結合を示し、ＭＡｂ  ６９．２６には殆ど〜全く結合せず、陰性対照として機能した。注目すべきことに、ＬＰＳはＩＡＩＰ軽鎖、ビクニンに対する結合を示さなかった。これは、ＩＡＩＰの重鎖がＬＰＳに対する結合を促進し得ることを示す。
【図１０】図１０は、ＬＰＳ、ＢＳＡ、ＩＡＩＰ特異的抗体ＭＡｂ  ６９．２６のＩｇＧ、及び無脂肪粉乳に対するビオチン化ＩＡＩＰの結合を示すヒストグラムである。予想通り、ＩＡＩＰはＭＡｂ  ６９．２６及びＬＰＳに結合し、ＢＳＡ及び無脂肪粉乳には最小限の結合を示した。これらのデータは、図９の結果を確証する。
【図１１】図１１は、ＬＰＳ、ＢＳＡ、及びＩＡＩＰ特異的抗体ＭＡｂ  ６９．２６のＩｇＧに対するビオチン化ＩＡＩＰの結合に対するｐＨの効果を示すヒストグラムである。これらのデータは、ＩＡＩＰがｐＨ５で最も強くＬＰＳに結合し、ｐＨ６及びｐＨ７では結合が低下し、ｐＨ８以上又はｐＨ４以下では殆ど又は全く結合しないことを示す。対照的に、ＩＡＩＰはｐＨ５〜ｐＨ９でＭＡｂ  ６９．２６のＩｇＧに結合したが、ｐＨ４以下では結合しなかった。以前の実験におけるように、ＩＡＩＰはＢＳＡに結合しなかった。
【図１２】図１２は、ＬＰＳ、ＢＳＡ、及びＩＡＩＰ特異的抗体ＭＡｂ  ６９．２６のＩｇＧに対するビオチン化ＩＡＩＰの結合に対する塩（ＮａＣｌ）濃度の効果を示すヒストグラムである。これらのデータは、ＬＰＳ及びＭＡｂ  ６９．２６の両方に対するＩＡＩＰの結合が塩による影響を受けなかったことを示し、強力かつ特異的な結合を示す。試験したいずれの塩濃度でもＢＳＡに対する結合は観察されなかった。
【図１３】図１３は、ＬＰＳ、ＢＳＡ、及びＩＡＩＰ特異的抗体ＭＡｂ  ６９．２６のＩｇＧに対するビオチン化ＩＡＩＰの結合に対する非イオン性洗剤ＮＰ−４０の効果を示すヒストグラムである。ＬＰＳに対するＩＡＩＰの結合は０．０５％  ＮＰ−４０の添加により向上し、１％  ＮＰ−４０の存在下で尚観察され、強力な結合相互作用が示された。試験したいずれのＮＰ−４０濃度でもＢＳＡに対する結合は観察されなかった。
【図１４】図１４は、ＬＰＳ、ＢＳＡ、及びＩＡＩＰ特異的抗体ＭＡｂ  ６９．２６のＩｇＧに対するビオチン化ＩＡＩＰの結合に対する非イオン性洗剤Ｔｗｅｅｎ−２０の効果を示すヒストグラムである。ＬＰＳに対するＩＡＩＰの結合は、０．０５％  Ｔｗｅｅｎ−２０の添加により向上し、１％  Ｔｗｅｅｎ−２０の存在下で尚観察され、強力な結合相互作用が示された。試験したいずれのＴｗｅｅｎ−２０濃度でもＢＳＡに対する結合は観察されなかった。
【図１５Ａ−１５Ｂ】図１５Ａ〜１５Ｂは、初期症状におけるＮＥＣ（ｎ＝１４）及びＳＩＰ（ｎ＝１３）を有する乳児と、性別、体重及び妊娠期間一致健康対照（ｎ＝２６）との血液ＩＡＩＰレベル（図１５Ａ）及びＣＲＰ（図１５Ｂ）を示すヒストグラムである。ＩＡＩＰレベルの低下は、証明されたＮＥＣを有する乳児（平均±ＳＤ：１３９±２１ｕｇ／ｍＬ）に見出された一方、健康な対照（２７６±１１０ｕｇ／ｍＬ）又はＳＩＰを有する乳児（３１９±７２ｕｇ／ｍＬ）におけるレベルは、有意により高かった（ｐ＜０．０５及びｐ＜０．００５）。対照的に、ＳＩＰを有する乳児と対照におけるＩＡＩＰの間に統計的有意差はなかった（ｐ＞０．４）。ＣＲＰレベルが試験された際、ＳＩＰ、ＮＥＣ及び対照群の間で有意差は見出されなかった（ｐ＞０．０５）。
【図１６Ａ】図１６Ａ〜１６Ｂは、ＮＥＣ乳児におけるＩＡＩＰ及びＣＲＰのＲＯＣ曲線を示すグラフである。ＩＡＩＰレベルの予測値は、感度１００％、特異性８８．２％、ＰＰＶ  ４１％及びＮＰＶ  １００％であり（図１６Ａ）、感度１００％、特異性６４．７％、ＰＰＶ  １８％及びＮＰＶ  ９８％のＣＲＰ（図１６Ｂ）と比較して優れている。
【図１６Ｂ】図１６Ａ〜１６Ｂは、ＮＥＣ乳児におけるＩＡＩＰ及びＣＲＰのＲＯＣ曲線を示すグラフである。ＩＡＩＰレベルの予測値は、感度１００％、特異性８８．２％、ＰＰＶ  ４１％及びＮＰＶ  １００％であり（図１６Ａ）、感度１００％、特異性６４．７％、ＰＰＶ  １８％及びＮＰＶ  ９８％のＣＲＰ（図１６Ｂ）と比較して優れている。
【図１７】図１７は、ＮＥＣ（ｎ＝８）及びＳＩＰ（ｎ＝９）を有する乳児における血漿ＩＡＩＰレベルの長期的研究の結果を示すグラフである。疾病症状の発症の前後に血液を連続的に採取した。ＩＡＩＰレベルの有意差は、疾患発症前にＳＩＰとＮＥＣの両方の乳児群で見出されなかったが（ｐ値＞０．６）、ＮＥＣの乳児のＩＡＩＰレベルは、発症後１０日までＳＩＰの乳児のレベル（ｐ＜０．０４）と比較して有意に低かった。
【図１８】図１８は、側方流動イムノアッセイに基づくＩＡＩＰ迅速試験の概略図である。
【図１９】図１９は、ＥＳＥＱｕａｎｔリーダーを用いた迅速ＩＡＩＰ試験の標準曲線を示すグラフである。各点の値を合計１３の独立解析の平均＋ＳＤとしてプロットした。迅速試験標準曲線は，１７．５〜１１００μｇ／ｍＬの範囲のＩＡＩＰレベルの血漿サンプルに適している。
【図２０Ａ】図２０Ａ〜２０Ｃは、ＥＳＥＱｕａｎｔリーダー、Ｄｅｔｅｋｔリーダー、ｉＣａｌＱリーダーを用いるＩＡＩＰ迅速試験によって得られた結果と、確立された競合ＥＬＩＳＡフォーマットによって得られた結果との間の相関を示す一連のグラフである。
【図２０Ｂ】図２０Ａ〜２０Ｃは、ＥＳＥＱｕａｎｔリーダー、Ｄｅｔｅｋｔリーダー、ｉＣａｌＱリーダーを用いるＩＡＩＰ迅速試験によって得られた結果と、確立された競合ＥＬＩＳＡフォーマットによって得られた結果との間の相関を示す一連のグラフである。
【図２０Ｃ】図２０Ａ〜２０Ｃは、ＥＳＥＱｕａｎｔリーダー、Ｄｅｔｅｋｔリーダー、ｉＣａｌＱリーダーを用いるＩＡＩＰ迅速試験によって得られた結果と、確立された競合ＥＬＩＳＡフォーマットによって得られた結果との間の相関を示す一連のグラフである。
【図２１Ａ】図２１Ａ〜２１Ｂは、ヒアルロン酸を９６ウェルプレート上に固定化してＩＡＩＰを捕捉し、ビオチン結合ＭＡｂ  ６９．２６（ヒトＩＡＩＰに対するモノクローナル抗体）を用いてＩＡＩＰを検出する「サンドイッチ型」ＥＬＩＳＡを用いたＩＡＩＰの定量化を示す一連のグラフである。このアッセイは、ウェル当たり５０ｎｇ、１００ｎｇ又は２００ｎｇのヒアルロン酸を用いて、ヒト血漿（図２１Ａ）及び精製ＩＡＩＰ（図２１Ｂ）の両方の系列希釈におけるＩＡＩＰを定量化するために使用することができる。
【図２１Ｂ】図２１Ａ〜２１Ｂは、ヒアルロン酸を９６ウェルプレート上に固定化してＩＡＩＰを捕捉し、ビオチン結合ＭＡｂ  ６９．２６（ヒトＩＡＩＰに対するモノクローナル抗体）を用いてＩＡＩＰを検出する「サンドイッチ型」ＥＬＩＳＡを用いたＩＡＩＰの定量化を示す一連のグラフである。このアッセイは、ウェル当たり５０ｎｇ、１００ｎｇ又は２００ｎｇのヒアルロン酸を用いて、ヒト血漿（図２１Ａ）及び精製ＩＡＩＰ（図２１Ｂ）の両方の系列希釈におけるＩＡＩＰを定量化するために使用することができる。
【発明を実施するための形態】
【００７０】
サンプル中のＩＡＩＰの量を測定するために使用できる試薬（例えば、サンプル中のＩＡＩＰに直接結合する試薬、例えばＩＡＩＰリガンド、又はＩＡＩＰに結合したＩＡＩＰリガンドに結合する試薬）を使用して、サンプル（例えば、血液サンプル等の対象由来のサンプル）中のＩＡＩＰ濃度を測定する方法を特徴とする。試薬は、検出可能な標識を用いて測定することができる。方法は、炎症性疾患若しくは状態又は感染症を有し又は発症する危険性を有する対象を特定するため、対象の健康状態又は対象における疾患重症度を決定するため、及び治療薬（例えば、ＩＡＩＰ、又は炎症性疾患若しくは状態又は感染症を治療するための薬剤）を投与された対象における状態（例えば、炎症性疾患若しくは状態又は感染症）の処置を監視するために使用され得る。
【００７１】
ＩＡＩＰの定量化のためのアッセイ
対象から収集したサンプル中のＩＡＩＰの定量化方法を提供する。ＩＡＩＰを検出する従来の方法は、サンプル中のＩＡＩＰ濃度の間接的測定を提供する抗体ベースの競合ＥＬＩＳＡに依存していた。この方法は、インタクトＩＡＩＰ複合体（例えば、１つ以上の重鎖（Ｈ１−Ｈ５）及び軽鎖、ビクニンを含むＩＡＩＰ）及びビクニン単独の両方を検出する。対照的に、本明細書に記載される方法は、ＩＡＩＰ重鎖、インタクトＩＡＩＰ複合体の重鎖及び軽鎖、又はＩＡＩＰ複合体のＧＡＧに結合するが、ビクニン単独には結合しないことによって、サンプル中のＩＡＩＰを直接検出する試薬（例えば、ＩＡＩＰリガンド）を使用する。
【００７２】
理論に束縛されることを望まないが、本明細書に記載されるＩＡＩＰリガンドベースのアッセイは、ＩＡＩＰ重鎖又はインタクトＩＡＩＰ複合体の検出により、競合ＥＬＩＳＡよりも高い感度及び頑強性を示す。本方法は、切断又は分解されたＩＡＩＰ軽鎖を検出する抗体ベースのアッセイと比較してサンプル中の機能的ＩＡＩＰの量の改善された読み出しを提供する。
【００７３】
本明細書に記載される方法は、例えば、抗体等のＩＡＩＰ特異的薬剤を使用した、例えば、基質（例えば、固体支持体、例えば、プレート、樹脂、粒子、容器、膜、又はビーズ）上に補足されたＩＡＩＰを検出するためのＩＡＩＰリガンドの使用、続くＩＡＩＰ特異的抗体を用いた検出のための、ＩＡＩＰを補足するＩＡＩＰリガンドの使用、及び続く第２の、異なるＩＡＩＰリガンドを用いた検出のための、ＩＡＩＰを補足するＩＡＩＰリガンドの使用を含む。
【００７４】
サンプル中のインタクトＩＡＩＰの検出に使用できる第１の方法は、支持体に付着され、サンプル中のＩＡＩＰの補足に使用されるＩＡＩＰ結合剤（例えば、ＩＡＩＰ特異的抗体又はＩＡＩＰリガンド）を含む。次いで、ＩＡＩＰ結合剤と複合体を形成しているＩＡＩＰに結合するＩＡＩＰ検出剤（例えば、ＩＡＩＰリガンド又はＩＡＩＰ特異的抗体）が添加される。次いで、例えば、ＩＡＩＰ検出剤に直接付着し、又はＩＡＩＰ検出剤に結合する試薬に付着した標識の存在を検出することにより、ＩＡＩＰ濃度が定量化され得る。
【００７５】
サンプル中のＩＡＩＰの量の検出に使用できる第２の方法は、インビボで形成され、サンプル中に存在するＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の検出を含む。この方法も又、支持体に付着した結合剤の使用から開始する。結合剤は、ＩＡＩＰ又はＩＡＩＰリガンドのいずれかに結合し得る。次いで、検出剤が添加され、検出剤はＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の他の成分に結合する（例えば、結合剤がＩＡＩＰに指向される場合、検出剤はＩＡＩＰリガンドに指向され、逆に、結合剤がＩＡＩＰリガンドに指向される場合、検出剤はＩＡＩＰに指向される）。次いで、例えば、検出剤に直接又は間接的に不着した標識の存在を検出することにより、ＩＡＩＰの濃度が測定され得る。
【００７６】
方法及び方法ステップに使用される試薬は、下記に詳細に説明される。
【００７７】
ＩＡＩＰリガンド
本明細書に記載される方法で使用されるＩＡＩＰリガンドは、１つ以上のＩＡＩＰ重鎖、ＩＡＩＰ重鎖及び軽鎖、ビクニン（例えば、インタクトＩＡＩＰ）、又はＩＡＩＰのＧＡＧ（例えば、インタクトＩＡＩＰのＧＡＧ）に結合するリガンドを含む。インタクトＩＡＩＰは、少なくとも１つのＩＡＩＰ重鎖（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３、Ｈ４、及び／又はＨ５）及びＩＡＩＰ軽鎖（ビクニン）を含む複合体である。例えば、エンドドキシン（リポ多糖、ＬＰＳ）、ヘパリン、ヒストン、ヒアルロン酸、ビトロネクチン、フィブロネクチン、テネイシンＣ、ラミニン、アグリカン、フォン・ヴィルブランド因子、ペントラキシン−３（ＰＴＸ３）、ＴＮＦ−刺激遺伝子−６（ＴＳＧ−６）、凝固タンパク質（例えば、因子ＩＸ及び因子ＸＩＩＩａ）、補体タンパク質（例えば、Ｃ１ｑ、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ８、プロパージン、及び因子Ｄ）、二価カチオン（例えば、Ｃａ２＋）、及び組織トランスグルタミナーゼを含む、ＩＡＩＰ又はインタクトＩＡＩＰの重鎖に結合する任意のリガンドを、本明細書に記載される方法に使用することができる。ＩＡＩＰリガンドは、当該技術分野で既知の標準的な技術に従って標識され得る（例えば、１つ以上の、下記に詳細する検出可能な標識を使用して）。
【００７８】
ＩＡＩＰ抗体
ＩＡＩＰに特異的に結合する抗体は、本明細書に記載される方法における結合剤又は検出剤として使用することができる。ＩＡＩＰに特異的に結合する抗体は、ＩＡＩＰ以外のいずれのタンパク質にも特異的に結合しない抗体又はその抗原結合断片である（例えば、ＩＡＩＰ特異的抗体と非−ＩＡＩＰタンパク質との相互作用は、背景に類似したシグナルを生じる）。ＩＡＩＰに特異的に結合する抗体は、ＩＡＩＰの重鎖、ＩＡＩＰの軽鎖、又は両方、又はＩＡＩＰのＧＡＧに結合することができる。抗体は、ＩＡＩＰの重鎖又は重鎖及び軽鎖を含むインタクトＩＡＩＰに結合することが好ましい。抗体は、ヒトＩＡＩＰ、又は他の哺乳動物（例えば、非−ヒト霊長類、雌牛、豚、羊、山羊、猫、犬、ラット、マウス、兎、モルモット、又はＩＡＩＰを発現する任意の他の非−ヒト哺乳動物）由来のＩＡＩＰに対して生じ得る。ＩＡＩＰに特異的に結合する抗体は、ヒトＩＡＩＰのみに結合し得、又はヒト及び他の哺乳動物由来のＩＡＩＰに結合することが可能であり得る。抗体は、ＩＡＩＰを用いて抗体を生成するのに一般に使用される動物（例えば、兎、モルモット、ラット、マウス、羊、ロバ、山羊、ハムスター、及び鶏）の免疫化により産生され得る。ＩＡＩＰ特異的抗体は、ポリクローナル（例えば、ＰＡｂ  Ｒ１６、ＰＡｂ  Ｒ２０、ＰＡｂ  Ｒ２１）、モノクローナル（例えば、ＭＡｂ  ６９．２６又はＭＡｂ  ６９．３１）、キメラ、又は組換えであり得る。
【００７９】
標識
本明細書に記載される方法におけるＩＡＩＰの濃度を検出するための標識は、ＩＡＩＰリガンド、ＩＡＩＰ特異的抗体、又は本明細書に記載される他の試薬に付着し又はコンジュゲートされ得る。ＩＡＩＰリガンド、ＩＡＩＰリガンド特異的抗体、及び／又はＩＡＩＰ特異的抗体の検出に好適な標識としては、ビオチン、酵素（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファタゼ（ＡＰ）、β−ガラクトシダーゼ、アセチルコリンエステラーゼ及びカタラーゼ）、酵素基質、放射標識（例えば、放射性同位元素）、発光化合物、粒子（例えば、コロイド金（例えば、金ナノ粒子）、磁粒子、又はラテックス粒子）及び蛍光染料が挙げられる。次いで、標識は、直接評価され得（例えば、蛍光染料のイメージング、放射能の検出、又は粒子の検出を介して）、酵素−コンジュゲート化アビジン又はストレプトアビジン（例えば、ビオチン検出のためにＡＰ又はＨＲＰにコンジュゲートされたアビジン又はストレプトアビジン）の使用を介して、及び／又は基質の使用を介して、そして、例えば、分光光度計、蛍光光度計、ルミノメーター、又は液体シンチレーションカウンターを含む既知の方法及び装置によって可視化され得る。基質は、発色性（例えば、ＡＰ検出のためのＰＮＰＰ；又はＨＲＰ検出のためのＡＢＴＳ、ＯＰＤ、若しくはＴＭＢ）、化学発光性、又は蛍光性であり得る。基質は、放射能の検出のための液体シンチレーターも含む。当該技術分野で既知の標準的な検出方法を用いて、本明細書に記載される標識を検出することができる。
【００８０】
サンプル
本明細書に記載される方法は、対象（例えば、ヒト対象）由来のサンプルを使用して行うことができる。好適なサンプルは、流体サンプルを含む。例えば、ＩＡＩＰは、対象（例えば、炎症性疾病若しくは敗血症等の状態を有する対象、又は炎症性疾病若しくは敗血症等の状態を発症する危険性を有する対象）由来の血液又は血漿のサンプル中で測定され得る。本明細書に記載される方法は、尿、脳脊髄液、滑液、羊水、間質液、卵胞液、腹水、気管支肺胞洗浄液、母乳、痰、リンパ液、及び胆汁等の他の体液のサンプルを使用して行うこともできる。対象由来の組織サンプル（例えば、生検）を適切な緩衝液中でホモジナイズして、これらの方法を用いたＩＡＩＰの定量化のための「流体」を形成することができる。
【００８１】
アッセイに使用するサンプルの容積は、行うアッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ、側方流動イムノアッセイ、又は他のアッセイ）及び支持体（例えば、プレート、膜、試験片、又は他の支持体）のタイプに応じて変動するであろう。使用するサンプルの容積は、約１μＬ〜約５００μＬ（例えば、側方流動イムノアッセイ等のアッセイの場合、約１μＬ〜約１５０μＬ、例えば、１μＬ〜約３０μＬ、又はＥＬＩＳＡ等のアッセイの場合、約５０μＬ〜約２００μＬ）であり得る。サンプルは、アッセイで使用する前に、結合剤又は検出剤に対する結合を妨害しないであろう緩衝液（例えば、水、ＰＢＳ、又はアッセイの方法に使用される緩衝液）で希釈され得、１：２、１：３、１：４、１：５、１：１０、１：１５、１：２０、１：１００以上に希釈され得る。
【００８２】
インタクトＩＡＩＰの検出方法
第１のＩＡＩＰ定量化アッセイは、ＩＡＩＰを含むサンプルをＩＡＩＰ結合剤（例えば、ＩＡＩＰに特異的に結合する抗体又はＩＡＩＰリガンド）と接触させて、ＩＡＩＰ−結合剤複合体を形成することを含む。ＩＡＩＰ結合剤は、支持体（例えば、固体支持体）に付着され得る。好適な支持体としては、プレート（例えば、マルチウェルプレート）、粒子（例えば、磁気粒子、ナノ粒子、磁気ナノ粒子）、バイオチップ、樹脂、膜（例えば、ニトロセルロース膜、ＰＶＤＦ膜）、容器（例えば、チューブ）、試験片（例えば、セルロース、ガラス繊維、ニトロセルロース）、及びビーズ（例えば、タンパク質Ａ又はタンパク質Ｇビーズ、磁気ビーズ、ガラスビーズ、プラスチックビーズ）が挙げられる。支持体は、好ましくは、１回以上洗浄されて（例えば、ＴＢＳ、ＴＢＳ−Ｔ、ＰＢＳ、又はＰＢＳ−Ｔ等の緩衝液を使用して）、ＩＡＩＰ結合剤と結合しない材料を除去することが可能である。
【００８３】
次いで、ＩＡＩＰ−結合剤複合体をＩＡＩＰ検出剤（例えば、ＩＡＩＰリガンド又はＩＡＩＰに特異的に結合する抗体）と接触させる。ＩＡＩＰ検出剤は、標識（例えば、上述した標識の１つ以上）とコンジュゲートされ得、次いでこれは既知の検出方法を用いて検出され得る。あるいは、ＩＡＩＰ検出剤は、標識を使用することなく直接検出されてもよい。ＩＡＩＰ検出剤の添加後、追加の洗浄ステップ（例えば、１つ以上の）を行って非結合検出剤を除去してもよい。
【００８４】
次いで、ＩＡＩＰは、コンジュゲート化標識又は付着検出剤（例えば、酵素活性又は蛍光）からのシグナルに基づいて、当該技術分野で既知の標準技術を用いて測定され得る。酵素が標識として使用される場合、基質が添加されてシグナル（例えば、色変化）を生成し得、シグナルの検出に好適な装置、例えば分光光度計により読み取られ得る。シグナル（例えば、吸光度又は蛍光）を、既知のＩＡＩＰ濃度を有する標準に対してプロットして標準曲線を確立し得、又は既知の参照濃度と比較し得る。サンプル中の未知の濃度を、確立された標準曲線又は参照濃度値に基づいて計算及び決定し得る。
【００８５】
サンプルをＩＡＩＰ結合剤に添加する前に、ブロッキングステップを行って非特異的結合を防止又は低減してもよい。本明細書に記載される方法で使用されるブロッキング剤としては、中でも例えば、乳、ＢＳＡ、カゼイン、ゼラチン（例えば、魚ゼラチン）、及び血清（例えば、山羊血清、ロバ血清、馬血清、ウシ胎児血清）が挙げられる。
【００８６】
方法ステップは、ｐＨ７．０〜３．５（例えば、ｐＨ５．０〜ｐＨ３．５、例えば、ｐＨ４．０）で行うことができる。例えば、結合ステップ及び検出ステップのいずれか又は両方は、ｐＨ７．０〜３．５（例えば、ｐＨ５．０〜ｐＨ３．５、例えば、ｐＨ４．０）で行うことができる。ＩＡＩＰ結合剤は、ｐＨ７．０〜３．５（例えば、ｐＨ５．０〜ｐＨ３．５、例えば、ｐＨ４．０）の緩衝液中で調製することができ、及び／又はＩＡＩＰ検出剤（例えば、ＩＡＩＰリガンド）は、ｐＨ７．０〜３．５（例えば、ｐＨ５．０〜ｐＨ３．５、例えば、ｐＨ４．０）の緩衝液中で調製することができる。ＩＡＩＰの検出を改善するために、低いｐＨ緩衝液（例えば、ｐＨ５．０以下、例えば、ｐＨ４．０）を使用することができる。
【００８７】
又、アッセイ中にＩＡＩＰを安定化するために、二価カチオン（例えば、Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋、Ｍｎ２＋、Ｆｅ２＋等）を、ＩＡＩＰ結合剤と接触させる前若しくは間にサンプルに添加し、及び／又は、結合剤−ＩＡＩＰ複合体と接触させる前若しくは間に、検出剤を含む緩衝液に添加してもよい。二価カチオンは、１μＭ〜１Ｍ（例えば、１００μＭ〜１００ｍＭ、１ｍＭ〜１０ｍＭ）の濃度で提供され得る。
【００８８】
ａ）ＩＡＩＰ特異的抗体結合剤及びＩＡＩＰリガンド検出剤
本明細書に記載される方法の一例では、ＩＡＩＰ結合剤は、ＩＡＩＰに特異的に結合する抗体（例えば、ＭＡｂ  ６９．２６又はＭＡｂ  ６９．３１）であり、検出剤は、標識されたＩＡＩＰリガンド（例えば、ヘパリン、ヒアルロン酸、又はＬＰＳ）である。あるいは、リガンドは標識されず、ＩＡＩＰリガンドに特異的な標識抗体を使用して検出されてもよく、又は非標識リガンドはＩＡＩＰリガンドに特異的な非標識抗体を使用して検出されてもよく、これは次いで標識２次抗体（例えば、ＩＡＩＰリガンドに特異的であるがＩＡＩＰ抗体には結合しない抗体に結合する標識２次抗体、例えば、ＩＡＩＰ抗体及びＩＡＩＰリガンド抗体は、異なる宿主種から産生される）を使用して検出される。リガンドが非標識であり、標識リガンド特異的抗体、又はリガンド特異的抗体及び標識２次抗体の使用により検出される場合、各抗体とのインキュベーションの前及び／又は後に、追加の洗浄ステップが行われ得る。
【００８９】
ｂ）ＩＡＩＰリガンド結合剤及びＩＡＩＰ特異的抗体検出剤
本明細書に記載される方法の別の例では、ＩＡＩＰ結合剤は、ＩＡＩＰリガンド（例えば、ヘパリン、ヒアルロン酸、又はＬＰＳ）であり、検出剤は、ＩＡＩＰに特異的な抗体（例えば、ＭＡｂ  ６９．２６又はＭＡｂ  ６９．３１）である。この例では、ＩＡＩＰに特異的な抗体は、標識に直接コンジュゲートされてもよく、又は抗体は、ＩＡＩＰ特異的抗体に結合する標識２次抗体を使用して検出されてもよい。標識２次抗体が使用される場合、２次抗体とのインキュベーション後に洗浄ステップが行われて、ＩＡＩＰ測定に先立って非特異的シグナルを最小限にし得る。
【００９０】
ｃ）ＩＡＩＰリガンド結合剤及びＩＡＩＰリガンド検出剤
本明細書に記載される方法の第３の例では、結合剤はＩＡＩＰリガンド（例えば、ヒアルロン酸）であり、検出剤は、ＩＡＩＰの異なる領域に結合する標識されたＩＡＩＰリガンド（例えば、ヘパリン、ヒアルロン酸、又はＬＰＳ）である。この方法は、ＩＡＩＰの同じ領域に結合しない任意の２つのＩＡＩＰリガンドを用いて行われ得る（例えば、２つのＩＡＩＰリガンドＩＡＩＰに対する結合に関して競合しない、又は、当該２つのＩＡＩＰリガンドに関して、ＩＡＩＰリガンドのうちの１つの結合が、ＩＡＩＰに対する第２のＩＡＩＰリガンドの結合を立体的に妨害しない）。ＩＡＩＰ検出剤として作用するリガンドは、非標識であってもよく、検出剤として作用するＩＡＩＰリガンドに特異的な標識抗体を使用して検出され、又は当該リガンドは、検出剤として作用するＩＡＩＰリガンドに特異的な非標識抗体に結合する標識２次抗体によって検出されてもよい。検出剤として作用するＩＡＩＰリガンドの検出に標識抗体が使用される場合、各抗体とのインキュベーションの前及び／又は後に、追加の洗浄ステップを行い得る。
【００９１】
ｄ）ＩＡＩＰ特異的抗体結合剤及びＩＡＩＰ特異的抗体検出剤
本明細書に記載される方法の第４の例では、結合剤はＩＡＩＰ特異的抗体であり、検出剤は標識ＩＡＩＰ特異的抗体である。この例では、ＩＡＩＰ特異的抗体の少なくとも１つは、インタクトＩＡＩＰ又は少なくとも１つの重鎖を含むＩＡＩＰのいずれかに結合することが可能である（例えば、抗体は、少なくとも１つのＩＡＩＰ重鎖が存在しない限りビクニンに結合せず、例えば、抗体は、ビクニンを欠く切断又は分解したＩＡＩＰに結合しない）。又、アッセイで使用される２つのＩＡＩＰ特異的抗体は、ＩＡＩＰの異なるエピトープに結合する（例えば、抗体は、ＩＡＩＰの結合に関して競合しない）。２つのＩＡＩＰ特異的抗体が異なる宿主種を使用して産生された場合、検出剤として使用されるＩＡＩＰ特異的抗体は、非標識であり得、標識２次抗体を使用して検出される。標識２次抗体が使用される場合、標識２次抗体のインキュベーションの前及び／又は後に、追加の洗浄ステップを行い得る。
【００９２】
ｅ）迅速側方流動イムノアッセイ（ＬＦＩＡ）を用いるＩＡＩＰの定量化
第５の例で、本明細書に記載される方法は、側方流動イムノアッセイベースの試験を用いて行うことができる。この例では、少量のサンプル（例えば、１〜３０μＬ、例えば、１５μＬ）を試験片（例えば、セルロース、ガラス繊維、又はニトロセルロース）に非希釈形態又は希釈形態で（例えば、例えば、緩衝液（例えば、ＰＢＳ）又は水で１：２、１：５、１：１０、１：２０、１：１００以上希釈する）適用し得、次いで緩衝液を加えて、試験片を通してサンプルを押し出す。試験片は、サンプル中のＩＡＩＰに結合するＩＡＩＰ結合剤（例えば、ＩＡＩＰ特異的抗体又はＩＡＩＰリガンド）を含む。ＩＡＩＰはＩＡＩＰ検出剤（例えば、標識ＩＡＩＰ特異的抗体又は標識ＩＡＩＰリガンド）を使用して検出することができ、当該ＩＡＩＰ検出剤は、サンプルの添加の前、後、又は同時に、試験片に添加され得る。試験片は、ＩＡＩＰ検出剤に付着した標識の定量化のための適切なリーダー（例えば、中でも携帯型卓フローリーダー、ハンドル付きのＰＤＡベースのリーダー、又はスマートフォン／タブレットベースのリーダー）を使用して読み出され得る。結合剤と検出剤との組み合わせは、本明細書に概略するパラメータに基づいて選択され得る。このアッセイは、迅速に（例えば、１５分以下、例えば１５、１０、又は７分間以下で）行われ、少量のサンプルの定量的かつ迅速な測定を提供することができる。
【００９３】
天然に存在するＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の検出
天然に存在するＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体（例えば、対象（例えば、ヒト対象）内でインビボで形成され、対象由来のサンプル中に存在するＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体）を検出する方法も提供する。この方法は、サンプル（例えば、血漿、血清、血液、肺胞洗浄液、脳脊髄液、痰、尿又は他の体液等の流体サンプル）を結合剤、例えば、支持体（例えば、固体支持体）に付着された結合剤と接触させることを含む。結合剤は、ＩＡＩＰ結合剤（例えば、ＩＡＩＰに特異的に結合する抗体、例えば、ＭＡｂ  ６９．２６又はＭＡｂ  ６９．３１、又はＩＡＩＰリガンド）であってもよく、又は結合剤は、関心対象のＩＡＩＰに特異的に結合する抗体リガンド（例えば、インビボでＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体を形成したことが疑われるＩＡＩＰリガンド）であってもよい。好適な支持体としては、プレート（例えば、マルチウェルプレート）、粒子（例えば、磁気粒子、ナノ粒子、磁気ナノ粒子）、バイオチップ、樹脂、容器（例えば、チューブ）、膜（例えば、ニトロセルロース膜、ＰＶＤＦ膜）、試験片（例えば、セルロース、ガラス繊維、又はニトロセルロース）及びビーズ（例えば、タンパク質Ａ又はタンパク質Ｇビーズ、磁気ビーズ、ガラスビーズ、プラスチックビーズ）が挙げられる。支持体は、好ましくは、１回以上洗浄されて（例えば、ＴＢＳ、ＴＢＳ−Ｔ、ＰＢＳ、又はＰＢＳ−Ｔ等の緩衝液を使用して）、結合剤に結合しない材料を除去することが可能である。
【００９４】
アッセイで使用される結合剤がＩＡＩＰ結合剤（例えば、ＩＡＩＰに特異的に結合する抗体、例えば、ＭＡｂ  ６９．２６又はＭＡｂ  ６９．３１、又はＩＡＩＰリガンド）の場合、ＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体は、関心対象のＩＡＩＰリガンドに対して指向される抗体である検出剤を使用して、抗体をＩＡＩＰ複合体−結合剤複合体と接触させることにより検出され得る。アッセイで使用される結合剤が、関心対象のＩＡＩＰに特異的に結合する抗体リガンドの場合、ＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体は、ＩＡＩＰに特異的に結合する検出剤（例えば、ＩＡＩＰに特異的に結合する抗体、例えば、ＭＡｂ  ６９．２６又はＭＡｂ  ６９．３１、又は異なるＩＡＩＰリガンド）を使用して、検出剤をＩＡＩＰ複合体−結合剤複合体と接触させることにより検出され得る。
【００９５】
洗浄ステップ（例えば、１回以上の）は、検出剤とのインキュベーション後に行うことができる。又、サンプルをＩＡＩＰ又はＩＡＩＰリガンド結合剤に添加する前に、ブロッキングステップを行って非特異的結合を防止又は低減してもよい。本明細書に記載される方法で使用されるブロッキング剤としては、中でも、例えば、乳、ＢＳＡ、カゼイン、ゼラチン（例えば、魚ゼラチン）、及び血清（例えば、山羊血清、ロバ血清、馬血清、ウシ胎児血清）が挙げられる。
【００９６】
検出剤が抗体（例えば、ＩＡＩＰ特異的抗体又はＩＡＩＰリガンド特異的抗体）の場合、検出剤は標識（例えば、上述した標識）に直接コンジュゲートされてもよく、又は検出剤は、アッセイで使用される任意の他の抗体に結合しない標識２次抗体（例えば、抗体の場合、結合剤）を添加することにより可視化されてもよい。
【００９７】
検出剤が、リガンド（例えば、ＩＡＩＰリガンド、例えばアッセイにて検出されるものとは異なるＩＡＩＰリガンド等）の場合、検出剤は標識（例えば、上述した標識）に直接コンジュゲートされてもよく、又は標識されたリガンド特異的抗体を使用して検出され、この標識リガンド特異的抗体は、次いで検出される。あるいは、検出剤は、非標識リガンド特異的抗体と、アッセイに使用される任意の他の抗体に結合しない標識２次抗体（例えば、抗体の場合、結合剤）とを使用して検出され得る。検出剤が非標識であり、追加の試薬（例えば、標識１次又は２次抗体）が使用される場合、追加の試薬とのインキュベーション後に１回以上の洗浄ステップを行って、非特異的シグナルを最小限にし得る。標識は、上述したものと同じ基質及びイメージング方法を使用した、ＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の濃度の測定に使用され得る。サンプルからのシグナルを、既知の濃度のＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体を有するサンプルで測定されたシグナルと比較し得る（例えば、標準曲線を確立するために）。サンプルにおける未知の濃度は、確立された標準曲線に基づいて、又は既知の参照濃度値に基づいて計算することができる。
【００９８】
ＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体中のＩＡＩＰリガンドのアイデンティティが未知の場合、ＩＡＩＰに特異的に結合する抗体（例えば、インタクトＩＡＩＰ及び／又はＩＡＩＰ重鎖に結合する抗体）を結合剤として使用して方法を行うことができる。次いで、異なるＩＡＩＰリガンドに特異的な標識２次抗体を添加し、標識２次抗体とのインキュベーション後に洗浄し、標識からのシグナルを検出してＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体中のＩＡＩＰリガンドのアイデンティティを決定することにより、検出ステップを行うことができる。標識抗体は、ＩＡＩＰリガンドの特定に関して個々に添加及び評価されてもよく、又は、異なる標識が各抗体に付着若しくはコンジュゲートされる場合（例えば、異なる蛍光染料）、同時に添加されてもよい。一旦ＩＡＩＰリガンドが特定されたら、サンプル中のＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の量を本明細書に記載される通りに定量化することができる。
【００９９】
アッセイで補足されたＩＡＩＰの定量化
ＩＡＩＰ又はＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体は、標準曲線の形成に使用される既知の量のＩＡＩＰ又はＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体を含むサンプルと共に、関心対象のサンプルを使用して本明細書に記載される検出方法を行うことにより定量化することができる。対象由来のサンプルは、サンプル中のＩＡＩＰ又はＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の濃度が測定できるように、既知の量のＩＡＩＰ又はＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体と同時に測定されてもよい。対象由来のサンプル中の濃度を、対照集団、例えば健康な対照において同じアッセイを用いて測定したＩＡＩＰ又はＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の平均濃度と比較して、サンプル中のＩＡＩＰの濃度が正常範囲内、又は疾病対照に含まれるか否かを決定し、サンプル中のＩＡＩＰの濃度が疾病状態の範囲内に含まれるか否かを決定することができる。
【０１００】
対象由来のサンプル中のＩＡＩＰ又はＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の濃度は又、試験サンプル及び対照サンプルの両方におけるＩＡＩＰ又はＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体を、本明細書に記載される方法を用いて同時に測定することにより、健康な対照におけるＩＡＩＰ又はＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の濃度と比較することができる。対照サンプルは、同じ原材料に由来するものを含む（例えば、試験サンプル及び対照サンプルの両方は、同じ体液又は同じ組織タイプに由来する）。同じ原材料に由来することに加えて、試験サンプル及び対照サンプルは、同じ年齢及び／又は同じ性別の対象から収集して、対象間の可能な変動を最小限にすることもできる。ＩＡＩＰ濃度が対象と健康な対照との間で直接比較される場合、健康な対照と比較した対象におけるＩＡＩＰ濃度の２５％位以上の低下は、対象が炎症性疾病若しくは状態又は感染症を有し又は発症する危険性を有することを示すであろう。
【０１０１】
あるいは、対象由来のサンプル中のＩＡＩＰ又はＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の濃度は、既知の状態（例えば、健康な状態又は疾病状態）下のＩＡＩＰ又はＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の濃度に関する所定のカットオフ値と比較してもよい。カットオフ値は、正常な対象又は疾病対象の集団から決定した、ＩＡＩＰ又はＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の平均濃度であり得る。
【０１０２】
本明細書に記載される方法を用いて、健康な対照対象は、血漿中に４００±１４０μｇ／ｍＬ  ＩＡＩＰを有することが見出されているが、より高い濃度も健康な対象で観察されている。重篤な炎症性疾病を有する対象は、約２００μｇ／ｍＬ未満のＩＡＩＰの平均濃度を有することが見出されている。約２５０μｇ／ｍＬのＩＡＩＰ濃度を使用して、疾病又は状態（例えば、炎症性疾病若しくは状態又は感染症）を有し又は発症する危険性を有するとして対象を分類することができる。次いでこの分類を用いて対象に処置又は更なる診断試験を推奨することができる。中〜低いＩＡＩＰレベル（例えば、３００〜２００μｇ／ｍＬ）を有する対象は、ＩＡＩＰレベルが一定であるか又は変化しているか（例えば、増大又は低下している）を決定する経時的な反復試験（例えば、週に１回、月に２回、月に１回、２カ月に１回、年に３回、又は２年に１回）から利益を受けることができ、それは、これらのレベルが、炎症性疾病若しくは状態又は感染症を発症する危険性、炎症性疾病若しくは状態又は感染症の存在を示すことができ、又は対象に関する正常なベースラインレベルを表し得るためである。
【０１０３】
ＩＡＩＰ及びＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体検出アッセイを用いた疾病状態又は疾病の危険性の決定方法
本明細書に記載されるＩＡＩＰ及びＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体検出方法は、多様な対象、例えば疾病又は状態（例えば、炎症性疾病若しくは状態又は感染症（例えば、細菌感染症））を有する、又は有することが疑われる対象のＩＡＩＰ及び／又はＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の測定に使用することができる。例えば、対象における疾病若しくは状態の存在、又は対象が疾病若しくは状態を発症している若しくは発症しうる危険性の診断、又は疾病若しくは状態の発症若しくは分析に関する対象のモニタリングのために、そのような対象におけるＩＡＩＰ及びＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体のレベルを、上記のアッセイのいずれかを用いて評価することができる。
【０１０４】
例えば、アッセイ方法を用いて診断又は監視できる炎症性疾病又は状態としては、例えば、急性炎症性疾病、敗血症、敗血性ショック、全身炎症性応答症候群（ＳＩＲＳ）、外傷及び／又は傷害（例えば、創傷、やけど、断裂、挫傷、骨折、外科手技）、卒中（例えば、虚血性卒中、出血性卒中）、急性肺傷害、急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）、肺炎（例えば、重篤な肺炎、重症又は非重症：市中感染肺炎、院内感染肺炎、ナーシングホーム感染肺炎）、壊死性腸炎、急性膵炎、腎疾病（例えば、急性腎臓傷害、肝臓傷害、急性循環不全）、子癇前症、癌、癌転移、腫瘍浸潤、末梢血管疾病、１型又は２型糖尿病、アテローム硬化性心血管系疾病、間欠性跛行、重症虚血肢疾病、心筋梗塞、頸動脈閉塞、臍帯閉塞、低出生体重、早産、手術誘導炎症、膿瘍関連の炎症、肺動脈弁閉鎖不全、末梢神経障害、低酸素性虚血（例えば、新生児低酸素性虚血性脳傷害又は低酸素性虚血性脳症）、組織虚血（例えば、骨格筋、平滑筋、心筋、脳、皮膚間葉組織、結合組織、胃腸組織、又は骨の虚血）、関節リウマチ、髄膜炎、多発性硬化症、炎症性腸疾患（例えば、クローン病）、慢性閉塞性肺疾患、鼻炎、早期分娩、又は感染性疾患（例えば、インフルエンザ又はウイルス感染、例えば、デング熱又はウエストナイル熱）が挙げられる。
【０１０５】
例えば、アッセイ方法を用いて診断又は監視できる感染症としては、例えば、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）及び髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）を含むナイセリア（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）種、ブランハメラ・カタラーリス（Ｂｒａｎｈａｍｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）を含むブランハメラ（Ｂｒａｎｈａｍｅｌｌａ）種、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）を含む大腸菌類種、エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）種、プロテウス・ミラビリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ  ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）を含むプロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）種、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、鼻疽菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｍａｌｌｅｉ）、及び類鼻疽菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｓｅｕｄｏｍａｌｌｅｉ）を含むシュードモナス種、肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）を含むクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）種、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）種、赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）種、セラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）種、アシネトバクター（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ）種；インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）及び軟性下疳菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｄｕｃｒｅｙｉ）を含むヘモフィルス（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ）種、ブルセラ（Ｂｒｕｃｅｌｌａ）種、エルシニア・ペスチス（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ）及びエルシニア・エンテロコリチカ（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ）を含むエルシニア（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）種、野兎病菌（Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ  ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ）を含むフランシセラ（Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ）種、パスツレラ・マルトシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ  ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）を含むパスツレラ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ）種、コレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ）、フラボバクテリウム（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）種、メニンゴセプチカム（ｍｅｎｉｎｇｏｓｅｐｔｉｃｕｍ）、カンピロバクター・ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ）を含むカンピロバクター（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）種、バクテロイデス・フラジリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｆｒａｇｉｌｉｓ）を含むバクテロイデス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）種（口腔、咽頭の）、フソバクテリウム・ヌクレアタム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｎｕｃｌｅａｔｕｍ）、を含むフソバクテリウム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）種、肉芽腫カリマトバクテリウム（Ｃａｌｙｍｍａｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｒａｎｕｌｏｍａｔｉｓ）、ストレプトバチルス・モニリホルミス（Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉｓ）を含むストレプトバチルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、及び在郷軍人病菌（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ）を含むレジオネラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ）種等のグラム陰性菌による感染症が挙げられる。
【０１０６】
本明細書に記載されるアッセイは、炎症性疾病若しくは状態又は感染症を発症する危険性を有する対象におけるＩＡＩＰレベルの測定に使用することができる。危険性因子としては、免疫抑制、免疫不全（例えば、免疫無防備状態の対象）、高齢、やけど（例えば、熱傷）、外傷、手術、異物、癌、早産（例えば、未熟に生まれた新生児）、肥満症、及びメタボリック症候群が挙げられる。
【０１０７】
本明細書に記載される方法は、日常的な診断の一部として、又は健康の一般的評価として行うことができる。
【０１０８】
疾病状態又は疾病の危険性の診断
本明細書に記載されるアッセイは、従来の診断方法と共に用いて、対象が炎症性疾病若しくは状態又は感染症を有し又は発症する危険性を有するか否かを決定することができる。アッセイを用いて得られたＩＡＩＰ測定値は、患者がＩＡＩＰ又は抗炎症薬若しくは抗感染療法を用いた処置の候補、又はＩＡＩＰの投与に対する応答が予測される候補であるか否かを決定するのに使用することができる（例えば、低いＩＡＩＰレベルを有する患者は、ＩＡＩＰを用いて処置することができ、及び／又はＩＡＩＰを用いた処置に都合よく応答し得る）。ＩＡＩＰの測定に続いて、適当と思われる場合（例えば、ＩＡＩＰレベルが低い、例えば、健康な対象の正常なＩＡＩＰレベルと見なされるものより少なくとも２５％低い、又はＩＡＩＰレベルが２００μｇ／ｍＬ未満である場合）、対象へのＩＡＩＰ、抗炎症薬又は抗感染療法の投与を行ってもよい。
【０１０９】
対象由来のサンプル中のＩＡＩＰ及び／又はＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の測定は、対象が炎症性疾病若しくは状態又は感染症を有し又は発症する危険性を有するか否かの決定に使用することができる。方法は、上述した方法の１つを用いてＩＡＩＰ及び／又はＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体のレベルを測定し、そのレベルを対照値（例えば、健康な患者由来の参照サンプル、又は明らかに健康な患者の集団の測定値から得た平均値）と比較することを含む。健康な対照と比較して低い対象におけるＩＡＩＰのレベル（例えば、対照と比較して２５％、３０％、４０％、５０％以上低い対象におけるレベル）又は約２５０μｇ／ｍＬ以下のＩＡＩＰ濃度は、対象が炎症性疾病若しくは状態又は感染症を有し又は発症する危険性を有することを示す。健康な対照と比較して高い対象におけるＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体のレベル（例えば、対照と比較して５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％以上高いレベル）は、対象が炎症性疾病又は感染症を有し又は発症する危険性を有することを示す。
【０１１０】
天然に存在するＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体中のＩＡＩＰに結合したリガンドの特定は又、対象が有し又は発症する危険性を有する炎症性疾病又は感染症のタイプの洞察を提供し得る。例えば、対象由来のサンプル中の高いＩＡＩＰ−ＬＰＳ複合体のレベルの検出は、対象が感染症（例えば、細菌感染症）を有し又は発症する危険性を有することを示し得、対象由来のサンプル中の高いＩＡＩＰ−ヒストン複合体のレベルの検出は、対象が急性全身炎症性疾病（例えば、敗血症又は卒中）を有し又は発症する危険性を有することを示し得る。そのような測定値を使用して、特定の炎症性疾病又は感染症を有する対象を診断し、又は治療法若しくは処置過程を推奨することができる。
【０１１１】
疾病の重症度
本明細書に記載される方法は又、疾病の重症度の評価に使用することができる。本明細書に記載されるアッセイを用いて測定して、約２００μｇ／ｍＬよりも低いＩＡＩＰ濃度を有する対象は、重篤な炎症若しくは感染症を有し若しくは発症する高い危険性を有し、又はより高い病的状態及び／若しくは死亡の危険性を有するとして分類することができる。あるいは、本明細書に記載されるアッセイを用いて高いＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体レベルを有する対象（例えば健康な対照又は既知の参照濃度値よりも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％以上高いＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体、例えばＩＡＩＰ−ＬＰＳ複合体のレベルを有する対象）は、重篤な炎症若しくは感染症を有し若しくは発症する高い危険性を有し、又はより高い病的状態及び／若しくは死亡の危険性を有するとして分類することができる。一旦重症度が評価されたら、対応する処置過程を推奨することができる。重篤な炎症を示すＩＡＩＰ濃度を有する対象は、ＩＡＩＰ濃度が炎症性疾病又は状態を有し又は発症する中等度の又は低い危険性を示す対象よりも、より高頻度又はより積極的な処置に関して選択され得る。本明細書に記載されるアッセイを用いてインタクトＩＡＩＰを測定することができ、従ってそれらを使用して、重篤な状態を検出し、適切な治療的応答の必要性を評価することができる。
【０１１２】
モニタリング
炎症性疾病若しくは状態若しくは感染症を以前に有し、又はそれを発症する危険性を有する対象（例えば、遺伝的素因を有する対象、疾病又は感染症を有する他に暴露されている対象、又は上述した危険性因子のいずれかを有する対象）は、本明細書に記載される方法を用いて監視することができる。監視は又、特に対象が炎症又は感染症の明らかな症状を示さない場合、中〜低いＩＡＩＰレベル（例えば、３００〜２００μｇ／ｍＬ）を有する対象、及び／又はＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の僅かに高いレベルを有する対象（例えば、健康な対照又は既知の参照濃度値と比較して１％、５％、又は１０％高いＩＡＩＰ−ＬＰＳ複合体等のＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体のレベルを有する対象）に関する好適なアプローチであり得る。ＩＡＩＰ及び／又はＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の測定値は、規則的な間隔（例えば、年に１回、年に２回、３カ月に１回、１カ月に１回、２カ月に１回、又は週に１回）で行って、ＩＡＩＰ及び／又はＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体レベルが一定であるか又は変化しているかを決定することができる。ＩＡＩＰレベルの増大、及び／又はＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体のレベルの低下は、改善を示し、監視及び／又は処置の停止に繋がり得る。ＩＡＩＰレベルの低下、及び／又はＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体のレベルの増大は、回復中の対象における再発、又は炎症性疾病若しくは感染症の発症若しくは悪化を示し得、診断試験（例えば、より高頻度の）及び処置の開始又は増加又は変化に繋がり得る。
【０１１３】
処置の有効性
本明細書に記載される方法は、炎症性疾病若しくは状態又は感染症を処置されている対象（例えば、抗生物質、抗炎症剤、抗感染性薬剤、又はＩＡＩＰを用いて）における処置の有効性の評価にも使用することができる。ＩＡＩＰレベルは、処置の開始に先立って又は後に測定してもよく、次いで処置中に継続して測定してもよい（例えば、１日１回、週に１回、２週間に１回、月に１回、２カ月に１回、３カ月に１回、又は年に２回）。処置過程中のＩＡＩＰレベルの増大（例えば、以前の測定値に対して１％、５％、１０％、２０％、３０％以上の増大）は、改善を示し、処置の有効性を示すが、一定のＩＡＩＰレベル又はＩＡＩＰの低下（例えば、変化を示さない又は以前の測定値に対して１％、５％、１０％、２０％、３０％以上の低下を示す１つ以上の測定値）は、改善の欠如を示し、処置過程が修正又は変更される必要があることを示唆する（例えば、用量若しくは頻度又は両方の増大、異なる治療法への変更、又は追加の治療薬を含むという修正）。
【０１１４】
ＩＡＩＰの測定の代わりに又はそれに加えて、ＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体（例えば、ＩＡＩＰ−ＬＰＳ）の検出は、炎症性疾病又は感染症の処置又は危険性の低下のための治療法による処置の有効性の評価に用いることができる。方法は、治療法を受けている対象におけるバイオマーカーとして、ＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体のレベルを測定することを含み、当該レベルは、処置の開始に先立って又は後に、次いで処置中に継続して測定されてもよい（例えば、１日１回、週に１回、２週間に１回、月に１回、２カ月に１回、３カ月に１回、又は年に２回）。ＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体のレベルは、対照値のレベル（例えば、健康な患者からの参照サンプル、又は対照対象（例えば、健康な患者）の集団の測定値から得た平均値）と、又は対象から取得した以前の測定値と比較してもよい。ＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体のレベルの「正常なレベル」に向かう低下又は処置中の後の時点での低下（例えば、以前の測定値に対して１％、５％、１０％、２０％、３０％以上の低下）は、治療法が有効であることを示すであろう。ＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体のレベルの増大（例えば、以前の測定値又は「正常なレベル」に対して１％、５％、１０％、２０％、３０％以上の増大）は、処置が無効であり、修正を必要とすることを示すであろう（例えば、より高い用量、より頻繁な投与、若しくは両方、又は異なる治療法又は併用療法）。
【０１１５】
処置の方法
本発明は又、本明細書に記載される診断方法に従って必要性を有すると決定された対象（例えば、ヒト）（例えば、参照と比較して又は以前の測定値と比較して、ＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の低いレベル及び／又は高いＩＡＩＰレベルを有する対象）における、炎症性疾病若しくは状態又は感染症（例えば、重篤な感染症）を処置、予防、又はその発症の危険性を低減する方法を特徴とする。対象は、疾病若しくは状態及び／又はＩＡＩＰに適切な標準治療で処置することができる。対象は、新生児、小児、青少年、又は成人であってもよい。
【０１１６】
必要とする対象へのＩＡＩＰ又は他の治療薬の投与に先立って、ＩＡＩＰ濃度を対象由来のサンプル中で本明細書に記載される方法に従って測定し得る。ＩＡＩＰレベルの測定の代替として又はそれに加えて、方法は、ＩＡＩＰの投与に先立ってＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体を検出することを含み得る。例えば、方法は、細菌感染症（例えば、グラム陰性菌感染症）を有し又はそれが疑われる対象においてＩＡＩＰ−ＬＰＳ複合体を検出し、及び／又は対象由来のサンプル中のＩＡＩＰ濃度を測定し、ＩＡＩＰを対象に投与する（例えば、健康な対照又は参照値と比較して増大したＩＡＩＰ−ＬＰＳ複合体のレベル（例えば、健康な対照のレベルの１％、５％、１０％、２０％、３０％以上高いＩＡＩＰ−ＬＰＳ複合体のレベルを有する対象にＩＡＩＰを投与する）、又は全身炎症若しくはショック症候群の危険性を有する対象（例えば、健康な対照よりも少なくとも２５％低いＩＡＩＰレベルを有する対象）にＩＡＩＰを投与することを含み得る。
【０１１７】
ＩＡＩＰ又はＩＡＩＰを含む組成物は、それを必要とする対象（例えば、１つ以上の本明細書に記載される方法を用いることによって決定された）に投与され得る。ＩＡＩＰで処置され得る対象は、感染症（例えば、グラム陰性菌感染症）を有する対象、又は感染症を発症する高い危険性を有する対象（例えば、免疫抑制、免疫不全（例えば、免疫無防備状態である対象）、高齢、やけど（例えば、熱傷）、外傷、手術、異物、癌、最近の出生（ｒｅｃｅｎｔ  ｂｉｒｔｈ）（例えば、新生児）、早産（例えば、未熟に生まれた新生児）、肥満症、及びメタボリック症候群を含む１つ以上の危険因子を有する対象）を含む。感染症は、感染しているグラム陰性菌からのリポ多糖（ＬＰＳ）分子の放出により引き起こされるエンドドキシンを原因とし得る。グラム陰性菌による重篤な感染症は、重篤な全身炎症、敗血症、ショック症候群、及び死をもたらし得る。本明細書に示すように、ＩＡＩＰはＬＰＳに結合し、従って、ＩＡＩＰの投与は、グラム陰性菌で感染した対象を処置して、ＬＰＳ誘導による細胞傷害性を低減又は予防するのに用いることができる。
【０１１８】
ＩＡＩＰを用いた処置に好適な感染症は、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）及び髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）を含むナイセリア（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）種、ブランハメラ・カタラーリス（Ｂｒａｎｈａｍｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）を含むブランハメラ（Ｂｒａｎｈａｍｅｌｌａ）種、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）を含む大腸菌類種、エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）種、プロテウス・ミラビリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ  ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）を含むプロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）種、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、鼻疽菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｍａｌｌｅｉ）、及び類鼻疽菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｓｅｕｄｏｍａｌｌｅｉ）を含むシュードモナス種、肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）を含むクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）種、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）種、赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）種、セラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）種、アシネトバクター（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ）種；インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）及び軟性下疳菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｄｕｃｒｅｙｉ）を含むヘモフィルス（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ）種、ブルセラ（Ｂｒｕｃｅｌｌａ）種、エルシニア・ペスチス（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ）及びエルシニア・エンテロコリチカ（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ）を含むエルシニア（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）種、野兎病菌（Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ  ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ）を含むフランシセラ（Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ）種、パスツレラ・マルトシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ  ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）を含むパスツレラ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ）種  ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ、コレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ）、フラボバクテリウム（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）種、メニンゴセプチカム（ｍｅｎｉｎｇｏｓｅｐｔｉｃｕｍ）、カンピロバクター・ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ）を含むカンピロバクター（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）種、バクテロイデス・フラジリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｆｒａｇｉｌｉｓ）を含むバクテロイデス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）種（口腔、咽頭の）、フソバクテリウム・ヌクレアタム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｎｕｃｌｅａｔｕｍ）、を含むフソバクテリウム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）種、肉芽腫カリマトバクテリウム（Ｃａｌｙｍｍａｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｒａｎｕｌｏｍａｔｉｓ）、ストレプトバチルス・モニリホルミス（Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉｓ）を含むストレプトバチルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、及び在郷軍人病菌（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ）を含むレジオネラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ）種等のグラム陰性菌による感染症を含む。
【０１１９】
（例えば、１つ以上の本明細書に記載される方法を用いることにより）処置の必要性を有すると決定され、又はそのような決定後にＩＡＩＰで処置できると決定された対象は、急性炎症性疾病、敗血症、敗血性ショック、無菌敗血症、全身炎症性応答症候群（ＳＩＲＳ）、外傷／傷害（例えば、創傷、やけど、断裂、挫傷、骨折、外科手技）、卒中（例えば、虚血性卒中、出血性卒中）、急性肺傷害、急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）、肺炎（例えば、重篤な肺炎、重症又は非重症：市中感染肺炎、院内感染肺炎、ナーシングホーム感染肺炎）、壊死性腸炎、急性膵炎、急性腎臓傷害を含む腎疾病、肝臓傷害、急性循環不全、子癇前症、癌、癌転移、腫瘍浸潤、末梢血管疾病、１型又は２型糖尿病、アテローム硬化性心血管系疾病、間欠性跛行、重症虚血肢疾病、心筋梗塞、頸動脈閉塞、臍帯閉塞、低出生体重、早産、手術誘導炎症、膿瘍関連の炎症、肺動脈弁閉鎖不全、末梢神経障害、低酸素性虚血（例えば、新生児低酸素性虚血性脳傷害又は低酸素性虚血性脳症）、組織虚血（例えば、骨格筋、平滑筋、心筋、脳、皮膚間葉組織、結合組織、胃腸組織、又は骨の虚血）、関節リウマチ、髄膜炎、多発性硬化症、炎症性腸疾患（例えば、クローン病）、慢性閉塞性肺疾患、鼻炎、早期分娩、又は感染性疾患（例えば、インフルエンザ又はウイルス感染、例えば、デング熱又はウエストナイル熱）等の炎症性疾病又は状態を有し又は発症する危険性を有する対象；低いＩＡＩＰレベル（例えば、２５０、２２５、２００、１７５、１５０μｇ／ｍＬ以下のＩＡＩＰレベル）を有する対象、及び疾病関連のＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体（例えば、ＩＡＩＰ−ＬＰＳ又はＩＡＩＰ−ヒストン）の増大したレベルを有する対象も含む。
【０１２０】
投与
ＩＡＩＰ（例えば、ＩαＩ及び／又はＰαＩ）、又はそのようなタンパク質及び薬学的に許容され得る賦形剤、希釈剤、又は担体を含む組成物は、本明細書に記載される診断方法に従って必要性を有すると決定された、炎症性疾病若しくは状態又は感染症を有し又は発症する危険性を有する対象（例えば、参照と比較して又は以前の測定値と比較して、ＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の低いレベル及び／又は高いＩＡＩＰレベルを有する対象）（例えば、ヒト）に、例えば、非経口的に、吸入噴霧により、局所的に、鼻腔内に、頬側に、舌下に、鼻腔内に、経口投与より、吸入、坐薬、直腸内に、経腟により、又は注射によるものを含む、任意の好適な経路により投与され得る。注射による投与は、例えば、静脈内、腹腔内、皮下、真皮内、皮内、筋内、関節内、動脈内、滑液嚢内、胸骨内、くも膜下腔内、病巣内、硝子体内、及び頭蓋内注射を含む。患者が入院している場合、好ましい投与方法は、静脈内注射によるものである。
【０１２１】
ＩＡＩＰ（例えば、ＩαＩ及び／又はＰαＩ）又はそのようなタンパク質を含む組成物は、１、２、３、４、５、６、８、１２、又は２４時間毎に１回以上；１、２、３、４、５、又は６日毎に１回以上；又は１、２、３、又は４週間毎に１回以上、対象に投与され得る。他の場合、ＩＡＩＰ（例えば、ＩαＩ及び／又はＰαＩ）又はそのようなタンパク質を含む組成物は、連続注入として投与される。
【０１２２】
本発明の組成物で使用されるＩＡＩＰ（例えば、ＩαＩ及び／又はＰαＩ）は、例えば、当該技術分野で既知の方法によりヒト血漿及び血液から得ることができる（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第９，１３９，６４１号参照）。
【０１２３】
詳細には、ＩＡＩＰは、８０％〜１００％（例えば、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％）の純度で天然源（例えば、血液）から得られ、本発明の組成物の調製に使用することができる（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第７，９３２，３６５号参照）。本発明の組成物で使用されるＩＡＩＰは又、精製中、低ｐＨ条件（例えば、ｐＨ約４．０以下、例えば、約ｐＨ３．６以下の洗浄緩衝液）に暴露され得る（米国特許第９，１３９，６４１号に記載されているように）。
【０１２４】
組成物は、任意の好適なＩＡＩＰ、例えば、ＩαＩ、ＰαＩ、重鎖、軽鎖、又はそれらの任意の組み合わせを含み得る。例えば、組成物は、ＩαＩ、ＰαＩ、及び／又はビクニンを含み得る。いくつかの場合、組成物はＩαＩ及びＰαＩを含み得る。重鎖はＨ１、Ｈ２、Ｈ３、Ｈ４、又はＨ５であり得る。軽鎖はビクニンであり得る。
【０１２５】
組成物中のＩＡＩＰ（例えば、ＩαＩ及び／又はＰαＩ）の比率又は濃度は、投与量、化学的特性（例えば、疎水性）、及び投与経路を含む多数の因子に応じて変動し得る。ＩＡＩＰ（例えば、ＩαＩ及び／又はＰαＩ）は、生理学的比率で組成物中に存在し得る。生理学的比率は、例えば、健康な人若しくは動物に見出される比率、及び／又はヒト血漿中に自然に現れるＩαＩ及びＰαＩの比であり得る。生理学的比率は、典型的には約６０％〜約８０％  ＩαＩ及び約２０％〜約４０％  ＰαＩである。
【０１２６】
ＩＡＩＰ（例えば、Ｉαｌ及び／又はＰαＩ）又はその組成物は、例えば、約１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、７．５、又は１０時間を超える半減期を有し得る。ＩＡＩＰ（例えば、Ｉαｌ及び／又はＰαＩ）又はその組成物は、約５時間を超える半減期、又は好ましくは約１０時間を超える半減期を有し得る。例えば、対象に経時的に投与するのに必要な用量が低下するため、より長い半減期が好ましい。
【０１２７】
投与量
本明細書に記載される診断方法に従って必要性を有すると決定された、炎症性疾病若しくは状態又は感染症を有し又は発症する危険性を有する対象（例えば、参照と比較して又は以前の測定値と比較して、ＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の低いレベル及び／又は高いＩＡＩＰレベルを有する対象）に対する投与のための薬学的に許容され得る本発明の組成物は、ＩＡＩＰ（例えば、ＩαＩ及び／又はＰαＩ）を当該技術分野で既知の投与量で含む（例えば、その各々の全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第７，９３２，３６５号、国際特許出願公開第２００９１５４６９５号、及び米国特許出願公開第２００９／０１９０１９４号参照）。例えば、本発明の組成物は、約１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの範囲の投与量、好ましくは１０ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与され得る。用量は、１、２、３、４、５、６、８、１２若しくは２４時間毎、１、２、３、４、５若しくは６日毎、又は１、２、３若しくは４週間毎に１回以上、又は必要に応じて投与され得る。上記に挙げた用量よりも低い又は高い用量が有利であり得る。任意の特定の対象に対する特定の投与量及び処置レジメンは、使用する特定の組成物の活性、年齢、体重、全身の健康状態、性別、食事、投与時間、排泄率、薬物の組み合わせ、疾病の重症度及び過程（例えば、患者の状態及び／又は症状）、疾病に対する対象の素質、及び医療従事者（例えば、医師）の処置の判断を含む様々な因子に依存するであろう。ＩＡＩＰは、担体材料と組み合わされて単一の剤形を生成し得る。
【０１２８】
症状の改善に基づいて又は本明細書に記載されるようなＩＡＩＰ及び／又はＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体の測定値により評価して、患者の状態の改善後、必要に応じて、ＩＡＩＰ組成物又は併用療法の維持用量を投与し得る。続いて、投与量又は投与頻度、又は両方を、症状の低下の関数として、改善した状態が保持されるレベルに低下させ得る。症状が所望のレベルに軽減され、又はＩＡＩＰが増大し、及び／又はＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体が所望のレベルに低下した際、処置を終了し得る。しかしながら、対象は疾病症状の任意の再発、又はＩＡＩＰレベルの低下に基づいて、長期間の断続的な処置を必要とし得る。状態の改善は又、患者由来の生物学的サンプル（例えば、血液（例えば、全血、血漿又は血清）、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）、痰、尿、脳脊髄液（ＣＳＦ）、又は組織ホモジネート（例えば、肝臓生検のホモジネート）中のＩαＩｐのレベルに基づいて判断し得る。生物学的サンプル中のＩαＩｐ及び／又はＩＡＩＰ−ＩＡＩＰ複合体のレベルは、本明細書に記載されるアッセイの１つ以上を用いて決定することができる。
【０１２９】
製剤
本発明は、本明細書に記載される診断方法に従って必要性を有すると決定された、炎症性疾病若しくは状態又は感染症を有し又は発症する危険性を有する対象（例えば、本明細書に記載される方法を用いて測定して、低いＩＡＩＰレベル、及び／又は高いＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンド複合体、例えばＩＡＩＰ−ＬＰＳ複合体レベルを有すると見出された対象）に対するＩＡＩＰの投与方法を提供する。方法は、ＩＡＩＰ（例えば、ＩαＩ及び／又はＰαＩ）、ＩＡＩＰ（例えば、ＩαＩ及び／又はＰαＩ）及び薬学的に許容され得る賦形剤、担体若しくは希釈剤を含む組成物、又は、本明細書に記載されるような、２次処置と組み合わせたそのような組成物の投与を含む。組成物は、固体又は液体として処方され得る。組成物は、本明細書に記載されるものを含む任意の好適な手段による投与のために処方され得る。
【０１３０】
投与のためのＩＡＩＰの注射用形態が特に好ましい。ＩＡＩＰ及びそれを含む組成物は、静脈内、腹腔内、皮下、皮内、筋内、関節内、動脈内、滑液嚢内、胸骨内、くも膜下腔内、皮内、硝子体内、病巣内及び頭蓋内注射又は注入技術のために処方され得る。医薬組成物は、例えば、無菌注射用水性又は油性縣濁液としての無菌注射用製剤の形態であり得る。この縣濁液は、好適な分散剤又は湿潤剤（例えば、ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０等）及び懸濁剤を使用して、当該技術分野で既知の技術に従って処方され得る。無菌注射用製剤は又、無毒の非経口的に許容され得る希釈剤又は溶媒中の無菌注射用溶液又は縣濁液であってもよい。
【０１３１】
組成物は又、カプセル剤、錠剤、丸剤、乳剤及び水性縣濁剤、分散剤及び液剤を含むがこれらに限定されない、任意の経口的に許容され得る剤形で、経口投与用に処方されてもよい。錠剤等の固体組成物を調製するために、ＩＡＩＰは医薬賦形剤と共に混合されて、均質混合物を含む固体プレ製剤組成物を形成し得る。次いで、この固体プレ製剤は、例えば、１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇのＩＡＩＰ（例えば、ＩαＩ及び／又はＰαＩ）を含む、上述したタイプの単位剤形に更に分割され得る。固体プレ製剤は、約１０ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇのＩＡＩＰ（例えば、ＩαＩ及び／又はＰαＩ）を含み得る。本発明の錠剤又は丸剤は、被覆され、又は別様に配合されて、長期作用の利点を提供する剤形を提供することができる。
【０１３２】
組成物が経口投与用、又は注射による投与用に組み込まれ得る液体形態は、水溶液、好適には風味付けされたシロップ剤、水性又は油性縣濁液、及び、綿実油、ゴマ油、ヤシ油、又はピーナッツ油等の食用油を有する風味付けされた乳剤、並びにエリキシル剤及び同様の医薬ビヒクルを含む。
【０１３３】
吸入又は通気用の組成物は、薬学的に許容され得る水性又は有機溶媒中の溶液及び縣濁液、又はそれらの混合物、並びに粉末を含む。液体又は固体組成物は、本明細書に記載される及び／又は当該技術分野で既知のように、好適な薬学的に許容され得る賦形剤を含み得る。組成物は、局部又は全身効果のために経口又は経鼻呼吸経路により投与され得る。組成物は、不活性ガスの使用により噴霧されてもよい。
【０１３４】
組成物の局所投与は、所望の処置が局所適用によって容易に接近可能な範囲又は器官を含む場合に有用である。皮膚への局所適用のために、組成物は、担体中に懸濁又は溶解した活性成分を含む好適な軟膏を用いて処方される必要がある。あるいは、医薬組成物は、担体中に懸濁又は溶解した活性成分を含む好適なローション又はクリームと、好適な乳化剤を用いて処方され得る。
【０１３５】
医薬組成物は又、直腸投与用の坐薬の形態で投与されてもよい。この組成物は、本発明の組成物を、室温で固体であるが、直腸温度で液体であり、従って直腸内で融解して活性成分を放出する好適な非刺激性賦形剤と共に混合することにより調製され得る。局所経皮パッチも本発明に含まれる。
【０１３６】
対象に投与される組成物は、上述した医薬組成物の１つ以上の形態にあり得る。これらの組成物は、従来の滅菌技術により滅菌され得、又は無菌濾過され得る。水性溶液は、そのままで使用用に包装され、又は凍結乾燥されてもよく、凍結乾燥製剤は、投与に先立って無菌水性担体と組み合わされる。
【０１３７】
他の送達システムは、時間放出、遅延放出又は徐放送達システムを含み得る。そのようなシステムは、本発明の組成物の反復投与を避けることができ、対象及び医師に対する利便性を増大させる。多数のタイプの放出送達システムが入手可能であり、当業者に既知である。それらは、（米国特許第３，７７３，９１９号；欧州特許第５８，４８１号、欧州特許第１３３，９８８号、Ｓｉｄｍａｎ、Ｋ．Ｒ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ  ２２：５４７−５５６、及びＬａｎｇｅｒ、Ｒ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．１５：２６７−２７７；Ｌａｎｇｅｒ、Ｒ．Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．１２：９８−１０５）に記載されているもの等のポリマーベースのシステムを含む。徐放組成物の他の例としては、成形物品、例えばフィルム又はマイクロカプセルの形態の半透過性ポリマーマトリクスが挙げられる。送達システムは：脂質；ヒドロゲル放出システム；サイラスティックシステム；ペプチドベースのシステム；ワックスコーティング；従来の結合剤及び賦形剤を使用した圧縮錠剤；部分的に融合したインプラント等の非ポリマーシステムも含む。そのような製剤の調製方法は、当業者に明らかであろう（例えば、米国特許第４，４５２，７７５号、米国特許第４，６６７，０１４号、米国特許第４，７４８，０３４号及び米国特許第５，２３９，６６０号、米国特許第３，８３２，２５３号、及び米国特許第３，８５４，４８０号参照）。
【０１３８】
医薬品の処方方法は、当該技術分野で既知であり、例えば、Ｎｉａｚｉ、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ（Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ）、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ  ２００９は、液体、無菌、圧縮、半圧縮及びＯＴＣ形態の製剤開発を記載している。経皮及び粘膜送達、リンパ系送達、ナノ粒子、制御放出システム、セラノスティクス、タンパク質及びペプチド薬物、及び生物製剤送達は、Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ（Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ）、Ｗｉｌｅｙ  ２０１６に記載され；ペプチド及びタンパク質薬剤の製剤及び送達は、例えば、Ｂａｎｇａ、Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ、Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ、ａｎｄ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ）、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ  ２０１５に記載されている。
【０１３９】
併用療法
本発明の方法は、第２の処置（例えば、スタンドアローン療法として、又はＩＡＩＰ（例えば、Ｉαｌ及び／又はＰαＩ）若しくはその組成物に加えて）を、炎症性疾病又は状態（例えば、敗血症、敗血性ショック、無菌敗血症、ＳＩＲＳ、外傷／傷害（例えば、創傷、やけど、断裂、挫傷、骨折、外科手技）、卒中（例えば、虚血性卒中、出血性卒中）、急性肺傷害、ＡＲＤＳ、肺炎（例えば、重篤な肺炎、重症又は非重症：市中感染肺炎、院内感染肺炎、ナーシングホーム感染肺炎）、壊死性腸炎、急性膵炎、急性腎臓傷害を含む腎疾病、肝臓傷害、急性循環不全、子癇前症、癌、癌転移、腫瘍浸潤、末梢血管疾病、１型又は２型糖尿病、アテローム硬化性心血管系疾病、間欠性跛行、重症虚血肢疾病、心筋梗塞、頸動脈閉塞、臍帯閉塞、低出生体重、早産、手術誘導炎症、膿瘍関連の炎症、肺動脈弁閉鎖不全、末梢神経障害、低酸素性虚血、組織虚血、関節リウマチ、髄膜炎、多発性硬化症、炎症性腸疾患（例えば、クローン病）、慢性閉塞性肺疾患、鼻炎、早期分娩、又は感染性疾患）又は感染症（例えば、細菌感染症）の処置のために投与又は共投与することも含む。例えば、第２の処置は、対象が細菌感染症有し又は発症する危険性を有する場合に抗生剤、対象がウイルス感染症（例えば、デング熱又はウエストナイル熱）を有し又は発症する危険性を有する場合に抗ウイルス剤、対象が真菌感染症を有し又は発症する危険性を有する場合に抗真菌剤、対象が寄生虫感染症を有し又は発症する危険性を有する場合に抗寄生虫薬、対象が本明細書に記載される炎症性疾病又は状態を有し又は発症する危険性を有する場合に抗炎症剤、対象が癌又は癌転移を有し又は発症する危険性を有する場合に抗癌剤、対象が卒中又は心筋梗塞を有し又は発症する危険性を有する場合に抗凝血剤、対象が癌又は自己免疫性疾病若しくは状態（例えば、炎症性腸疾患又は関節リウマチ）を有する場合に免疫調節剤、及び対象が急性肺傷害、ＡＲＤＳ、又は肺炎を有し又は発症する危険性を有する場合に気管支拡張剤、補体阻害剤、昇圧剤、鎮静剤、又は人工呼吸を投与することを含み得る。
【０１４０】
方法がＩＡＩＰ（例えば、Ｉαｌ及び／又はＰαＩ）、又はＩＡＩＰ（例えば、Ｉαｌ及び／又はＰαＩ）及び薬学的に許容され得る賦形剤、希釈剤又は担体を含む組成物と、１つ以上の第２の処置薬剤との組み合わせを投与することを含む場合、各薬剤は、単剤療法レジメンで通常投与される投与量の約１〜１００％、より好ましくは約５〜９５％の投与量レベルで存在する。第２の処置の薬剤は、多用量レジメンの一部として、ＩＡＩＰ（例えば、Ｉαｌ及び／又はＰαＩ）又はその組成物とは別個に投与されてもよい。ＩＡＩＰ及び第２の処置の薬剤は、同時に、又は任意の順序で連続して投与されてもよい。あるいは、第２の処置の薬剤は、例えば、単一の組成物中でＩＡＩＰ（例えば、ＩαＩ及び／又はＰαＩ）と共に混合された単一の剤形の一部であってもよい。
【０１４１】
ＩＡＩＰ（例えば、Ｉαｌ及び／又はＰαＩ）と組み合わせて投与され得る薬剤としては、ジデオキシヌクレオシド、例えばジドブジン（ＡＺＴ）、２’，３’−ジデオキシイノシン（ｄｄＩ）及び２’，３’−ジデオキシシチジン（ｄｄＣ）、ラミブジン（３ＴＣ）、スタブジン（ｄ４Ｔ）、及びＴＲＩＺＩＶＩＲ（アバカビル＋ジドブジン＋ラミブジン）；非ヌクレオシド、例えば、エファビレンツ（ＤＭＰ−２６６、ＤｕＰｏｎｔ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ／Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、ネビラピン（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｌｅｈｅｉｍ）、及びデラビリジン（ｄｅｌａｖｉｒｉｄｉｎｅ）（Ｐｈａｒｍａｃｉａ−Ｕｐｊｏｈｎ）；Ｒｏ  ３−３３３５及びＲｏ  ２４−７４２９等のＴＡＴ拮抗薬；プロテアーゼ阻害剤、例えば、フューリン阻害剤、インジナビル（Ｍｅｒｃｋ）、リトナビル（Ａｂｂｏｔｔ）、サキナビル（Ｈｏｆｆｍａｎｎ  ＬａＲｏｃｈｅ）、ネルフィナビル（Ａｇｏｕｒｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、１４１  Ｗ９４（Ｇｌａｘｏ−Ｗｅｌｌｃｏｍｅ）、アタザナビル（Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、アンプレナビル（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ホスアンプレナビル（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、チプラナビル（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｌｅｈｅｉｍ）、ＫＡＬＥＴＲＡ（ロピナビル＋リトナビル、Ａｂｂｏｔｔ）、及び９−（２−ヒドロキシエトキシメチル）グアニン（アシクロビル）等の他の薬剤；インターフェロン、例えば、α−インターフェロン、インターロイキンＩＩ、及びホスホノギ酸（Ｆｏｓｃａｒｎｅｔ）；又は侵入阻害剤、例えば、Ｔ２０（エンフビルチド、Ｒｏｃｈｅ／Ｔｒｉｍｅｒｉｓ）又はＵＫ−４２７，８５７（Ｐｆｉｚｅｒ）、レバミソール又はサイモシン、シスプラチン、カルボプラチン、ドセタキセル、パクリタキセル、フルオロウラシル、カペシタビン、ゲムシタビン、イリノテカン、トポテカン、エトポシド、マイトマイシン、ゲフィチニブ、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ドキソルビシン、シクロホスファミド、セレコキシブ、ロフェコキシブ、バルデコキシブ、イブプロフェン、ナプロキセン、ケトプロフェン、デキサメタゾン、プレドニゾン、プレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、アセトアミノフェン、ミソニダゾール、アミホスチン、タムスロシン、フェナゾピリジン、オンダンセトロン、グラニセトロン、アロセトロン、パロノセトロン、プロメタジン、プロクロルペラジン、トリメトベンズアミド、アプレピタント、アトロピンを伴うジフェノキシラート、及び／又はロペラミド；並びに抗凝血剤、例えば、抗トロンビンＩＩＩ及び活性化タンパク質Ｃが挙げられる。
【０１４２】
ＩＡＩＰ（例えば、Ｉαｌ及び／又はＰαＩ）と組み合わせて投与され得る追加の例示的な薬剤としては、下記に説明するそれらの組成物が挙げられる。
【０１４３】
抗生剤
対象が細菌感染症（例えば、壊死性腸炎又はグラム陰性菌感染症）を有し又は発症する危険性を有する場合、第２の処置は、細菌感染症の処置に使用される抗生剤を含み得る。抗生剤の非限定的な例としては、アモキシシリン、ペニシリン、ドキシサイクリン、クラリスロマイシン、ベンジルペニシリン、アジスロマイシン、ダプトマイシン、リネゾリド、レボフロキサシン、モキシフロキサシン、ガチフロキサシン、ゲンタマイシン、マクロライド、セファロスポリン、アジスロマイシン、シプロフロキサシン、セフロキシム、アモキシリン−クラブラン酸カリウム、エリスロマイシン、スルファメトキサゾール−トリメトプリム、ドキシサイクリン一水和物、セフェピム、アンピシリン、セフポドキシム、セフトリアキソン、セファゾリン、エリスロマイシンエチルコハク酸塩、メロペネム、ピペラシリン−タゾバクタム、アミカシン、エリスロマイシンステアリン酸塩、右旋糖中のセフェピム、ドキシサイクリンｈｙｃｌａｔｅ、アンピシリン−スルバクタム、セフタジジム、ゲミフロキサシン、ゲンタマイシン硫酸塩、エリスロマイシンラクトビオン酸塩、イミペナム−シラスタチン（ｃｉｌａｓｔａｔｉｎ）、セフォキシチン、セフジトレンピボキシル、エルタペネム、ドキシサイクリン−ベンゾイル過酸化物、アンピシリン−スルバクタム、メロペネム、セフロキシム、セフォテタン、ピペラシリン−タゾバクタム、広範囲のフルオロキノロン（例えば、マイコプラズマ・ニューモニア（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）又はクラミドフィラ・ニューモニア（Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）等の異型細菌を原因とする肺炎の処置に使用され得る）、及び当該技術分野で既知のその他が挙げられる。
【０１４４】
抗ウイルス剤
対象がウイルス感染（例えば、デング熱又はウエストナイル熱）を有し又は発症する危険性を有する場合、第２の処置は、ウイルス感染の処置に使用される抗ウイルス剤を含み得る。抗ウイルス剤の非限定的な例としては、ザナミビル、オセルタミビル、ペラミビル、リバビリン、アシクロビル、ガンシクロビル、ホスカルネット、シドホビル、及び当該技術分野で既知のその他が挙げられる。
【０１４５】
抗真菌剤
対象が真菌感染症を有し又は発症する危険性を有する場合、第２の処置は、真菌感染症の処置に使用される抗真菌剤を含み得る。抗真菌剤の非限定的な例としては、アンホテリシン、カスポファンギン、ボリコナゾール、イトラコナゾール、ポサコナゾール、フルコナゾール、フルシトシン、及び当該技術分野で既知のその他が挙げられる。
【０１４６】
抗寄生虫薬
対象が寄生虫感染症を有し又は発症する危険性を有する場合、第２の処置は、寄生虫感染症（例えば、寄生虫原生動物感染症の処置に使用される抗寄生虫薬を含み得る。抗寄生虫薬の非限定的な例としては、ニタゾキサニド、メラルソプロール、エフロルニチン、メトロニダゾール、チニダゾール、ミルテホシン、メベンダゾール、ピランテルパモ酸塩、チアベンダゾール、ジエチルカルバマジン、イベルメクチン、アルベンダゾール、プラジカンテル、リファンピン、及び当該技術分野で既知のその他が挙げられる。
【０１４７】
抗炎症剤
対象が本明細書に記載される炎症性疾病又は状態を有し又は発症する危険性を有する場合、第２の処置は、炎症の処置又は軽減に使用される抗炎症剤を含み得る。抗炎症剤の非限定的な例としては、コルチコステロイド、スタチン、ステロイド、非ステロイド性抗炎症薬、グルココルチコイド、及び当該技術分野で既知のその他が挙げられる。
【０１４８】
気管支拡張剤
対象が急性肺傷害、ＡＲＤＳ、又は肺炎を有し又は発症する危険性を有する場合、第２の処置は、気管支筋肉を弛緩させて気道を拡大し、肺に空気を通すのに使用される気管支拡張剤を含み得る。気管支拡張剤の非限定的な例としては、β２作動薬、キサンチン、イプラトロピウム、オキシトロピウム、ムスカリン性受容体拮抗薬、イプラトロピウム、オキシトロピウム、テオフィリン、テオブロミン、カフェイン、サルブタモール、イソプロテレノール、アルブテロール、レバルブレロール（ｌｅｖａｌｂｕｒｅｒｏｌ）、ピルブテロール、メタプロテレノール、テルブタリン、サルメテロール、ホルモテロール、及び当該技術分野で既知のその他が挙げられる。
【０１４９】
昇圧剤
対象が急性肺傷害、ＡＲＤＳ、肺炎、又は外傷／傷害（例えば、創傷、やけど、又は外科手技）を有し又は発症する危険性を有する場合、第２の処置は、血管収縮を引き起こし及び／又は血圧を増大させる昇圧剤を含み得る。昇圧剤の非限定的な例としては、エピネフリン、イソプロテレノール、フェにレフリン、ノルエピネフリン、ドブタミン、エフェドリン、ドロキシドパ、及び当該技術分野で既知のその他が挙げられる。
【０１５０】
鎮静剤
第２の処置は、鎮静剤を含み得る。鎮静剤の非限定的な例としては、プロポフォール、ディプリバン、モルヒネ、フェンタニル、ミダゾラム、ロラゼパム、プレシード（ｐｒｅｃｅｄｅ）、インフモルフ（ｉｎｆｕｍｏｒｐｈ）、デクスメデトミジン、アルフェンタニル、及び当該技術分野で既知のその他が挙げられる。
【０１５１】
補体阻害剤
対象が急性肺傷害、ＡＲＤＳ、又は肺炎を有し又は発症する危険性を有する場合、第２の処置は、補体活性化の阻害剤を含み得る。組成物は、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３（例えば、Ｃ３ａ及びＣ３ｂ）、Ｃ４（例えば、Ｃ４ｂ）、Ｃ５（例えば、Ｃ５ａ及びＣ５ｂ）、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、膜攻撃複合体、Ｂ因子、Ｄ因子、ＭＡＳＰ−１、及びＭＡＳＰ−２、又はそれらの断片等の１つ以上の補体成分の活性化を阻害し得る。補体阻害剤は、Ｃ１−ＩＮＨ及びＲｈｕｃｉｎ／ｒｈＣ１１ＮＨ等のプロテアーゼ阻害剤、ｓＣＲ１／ＴＰ１０、ＣＡＢ−２／ＭＬＮ−２２２２等の可溶性補体制御因子、エクリズマブ／ＳＯＬＩＲＩＳ（登録商標）、ペキセリズムナ（Ｐｅｘｅｌｉｚｕｍｎａ）、オファツムマブ等の治療的抗体、コンプスタチン等の補体成分阻害剤、ＰＭＸ−５３及びｒｈＭＢＬ等の受容体拮抗薬を含み得る。
【０１５２】
キット
本発明は又、患者（例えば、新生児、小児、青少年又は成人等のヒト患者）由来のサンプル（例えば、流体サンプル）中のＩＡＩＰの測定で使用されるキットを特徴とする。キットは、以下の１つ以上を含み得る：支持体（例えば、プレート（例えば、マルチウェルプレート））、粒子（例えば、磁気ビーズ、例えば、ナノ粒子、磁気ナノ粒子）、バイオチップ、樹脂、容器（例えば、チューブ）、膜（例えば、ニトロセルロース膜、ＰＶＤＦ膜）、試験片（例えば、セルロース、ガラス繊維、又はニトロセルロース）又は固定化されたＩＡＩＰ結合剤（例えば、ＩＡＩＰ特異的抗体又はＩＡＩＰリガンド）を含むビーズ（例えば、タンパク質Ａ又はタンパク質Ｇビーズ、磁気ビーズ、ガラスビーズ、プラスチックビーズ））、標識されたＩＡＩＰ検出剤（例えば、ＩＡＩＰリガンド又はＩＡＩＰ特異的抗体）、洗浄緩衝液、ブロッキング剤、標識検出のための基質、希釈薬剤、及び検出アッセイを行うための説明書。結合剤及び検出剤は、容器内に提供されてもよく、又は結合剤は支持体に予め付着されて提供されてもよい（例えば、結合剤はプレート又は試験片に既に付着されている）。
【０１５３】
本発明は又、患者由来のサンプル（例えば、流体サンプル）中のＩＡＩＰ−ＩＡＩＰリガンドの測定で使用されるキットを特徴とする。キットは、以下の１つ以上を含み得る：支持体（例えば、プレート（例えば、マルチウェルプレート））、粒子（例えば、磁気粒子、例えば、ナノ粒子、磁気ナノ粒子）、バイオチップ、樹脂、容器（例えば、チューブ）、膜（例えば、ニトロセルロース膜、ＰＶＤＦ膜）、試験片（例えば、セルロース、ガラス繊維、又はニトロセルロース）又は固定化された結合剤（例えば、ＩＡＩＰ特異的抗体、異なるＩＡＩＰリガンド、又はＩＡＩＰに特異的に結合する抗体リガンド）を含むビーズ（例えば、タンパク質Ａ又はタンパク質Ｇビーズ、磁気ビーズ、ガラスビーズ、プラスチックビーズ））、標識された検出剤（例えば、異なるＩＡＩＰリガンド、ＩＡＩＰ特異的抗体、又はＩＡＩＰに特異的に結合する抗体リガンド）、洗浄緩衝液、ブロッキング剤、標識検出のための基質、膨張剤、及び検出アッセイを行うための説明書。結合剤及び検出剤は容器内に提供されてもよく、又は結合剤は支持体に予め付着されていてもよい（例えば、結合剤は、プレート又は試験片に既に付着されていてもよい）。
【実施例】
【０１５４】
以下の実施例は、本発明のいくつかの実施形態を更に説明するために提供され、本発明の範囲を限定することを意図するものではない；それらの例示的な性質、当業者に既知の他の手順、方法論、又は技術を代替的に使用できることが理解されるであろう。
【０１５５】
実施例１：ヘパリン−ＩＡＩＰアッセイ
ビオチン化ヘパリンの調製
ヘパリン（ヘパリンナトリウム注射ＵＳＰ、Ｓａｇｅｎｔ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、Ｃａｔ＃ＮＤＣ  ２５０２１−４００−３０）をビオチンヒドラジド試薬（ＡｐＥｘＢＩＯ、Ｃａｔ＃Ａ８７００７）を使用して製造業者の説明書に従ってビオチンとコンジュゲートした。手短には、１０００ＩＵヘパリン溶液を、以前にｐＨ４．７の０．１Ｍ  ＭＥＳ緩衝液中のＤＭＳＯに溶解した０．２５ｍｇ架橋剤試薬ＥＤＣ（１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−３エチルカルボジイミド塩酸塩、Ａｌｆａ  Ａｅｓａｒ  Ｃａｔ＃Ａ１０８０７）及び０．５ｍＭビオチンヒドラジドと混合し、室温で３時間穏やかに混合した。非コンジュゲート化ビオチン及び緩衝液交換を、５ｋＤａカットオフフィルター膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を有するＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ遠心フィルター装置上で限外濾過により行った。ｄ−Ｈ２Ｏ中での希釈後、ビオチン化ヘパリンはアッセイで使用される準備が整った。
【０１５６】
「サンドイッチ型」ヘパリン−ＩＡＩＰ  ＥＬＩＳＡ
ヒトＩＡＩＰの軽鎖に対する精製マウスモノクローナル抗体（ＭＡｂ  ６９．２６）を、９６ウェルマイクロプレート（Ｉｍｍｕｌｏｎ  ６００、Ｇｒｅｉｎｅｒ  ＢｉｏＯｎｅ）上に２００ｎｇ／ウェルで３２℃で２時間固定化した。５％無脂肪粉乳で１時間ブロッキングし、ＴＢＳ−Ｔ（ＴＢＳ＋０．０５％  Ｔｗｅｅｎ  ２０）で洗浄した後、未知のサンプル及び既知のＩＡＩＰ標準をＴＢＳ＋０．１％  Ｔｗｅｅｎ  ２０中で希釈し、マイクロプレートに加えた（最終容積５０ｕＬ／ウェル）。サンプル及び段階希釈ＩＡＩＰ標準溶液を３２℃で１時間インキュベートした。マイクロプレートをＴＢＳ−Ｔで数回洗浄した後、ビオチン化ヘパリンを２０ｍＭ酢酸＋２５ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ４．０（１：２５００）を含む緩衝液中で希釈し、ウェル当たり５０μＬを加えた。ビオチン化ヘパリンを３２℃で３０分間インキュベートし、次いでマイクロプレートをＴＢＳ−Ｔを使用して少なくとも３回洗浄した。最終的に、１：５０００（５０ｕＬ／ウェル）に希釈したＨＲＰ−コンジュゲート化ストレプトアビジン（Ｐｉｅｒｃｅ）をマイクロプレートに加えた。洗浄後、５０μＬの基質ＴＭＢを加え（Ｎｅｏｇｅｎ  Ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ｋ−Ｂｌｕｅ  ＴＭＢ基質）、５０μＬ  １Ｍ  ＨＣｌを加えることにより反応を停止し、分光光度計（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）で４５０ｎＭ波長で色変化を読み取った。４点ロジスティック回帰（ＳｏｆｔＭａｘ  Ｐｒｏソフトウエア、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用いて標準曲線を生成し、図３Ｂに示すように、最大ＩＡＩＰ濃度２．０μｇ／ｍＬから連続２倍希釈で０．０３１２５μｇ／ｍＬまでの７点曲線をプロットした。未知のサンプルのＩＡＩＰ濃度を、生成した標準曲線に基づいて計算した。
【０１５７】
実施例２：ＬＰＳ−ＩＡＩＰアッセイ
ビオチン化エンドドキシン／ＬＰＳ（リポ多糖）の調製：
大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）０５５：Ｂ５（Ｓｉｇｍａ  Ｃａｔａｌｏｇ  ＃  Ｌ２２８０）由来のリポ多糖（ＬＰＳ／エンドドキシン）を、ビオチンヒドラジド試薬（ＡｐＥｘＢＩＯ、Ｃａｔ＃Ａ８７００７）を使用して、製造業者の説明書に従って、又ヘパリンで使用したプロトコルと同様に、ビオチンで標識した。１０ｍｇのＬＰＳを０．１Ｍ  ＭＥＳ緩衝液中で再構成し、２．５ｍＭビオチン−ヒドラジド及び２．５ｍｇ  ＥＤＣ（１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−３エチルカルボジイミド塩酸塩、Ａｌｆａ  Ａｅｓａｒ  Ｃａｔ＃Ａ１０８０７）を室温で３時間穏やかに混合した。非コンジュゲート化ＬＰＳの除去及び緩衝液交換を、５ｋＤａカットオフフィルター膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を有するＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ遠心フィルター上での限外濾過により行った。ｄ−Ｈ２Ｏ中で希釈した後、ビオチン化ＬＰＳは、アッセイで使用される準備が整った。
【０１５８】
「サンドイッチ型」ＬＰＳ−ＩＡＩＰ  ＥＬＩＳＡ
上述したヘパリン−ＩＡＩＰプロトコルと同様に、ヒトＩＡＩＰの軽鎖に対する精製マウスモノクローナル抗体（ＭＡｂ  ６９．２６）を、９６ウェルマイクロプレート（Ｉｍｍｕｌｏｎ  ６００、Ｇｒｅｉｎｅｒ  ＢｉｏＯｎｅ）上に５０ｎｇ／ウェルで３２℃で２時間固定化した。５％無脂肪粉乳で１時間ブロッキングし、ＴＢＳ−Ｔ（ＴＢＳ＋０．０５％  Ｔｗｅｅｎ  ２０）で洗浄した後、未知のサンプル及び既知のＩＡＩＰ標準をＴＢＳ＋０．１％  Ｔｗｅｅｎ  ２０中で希釈し、マイクロプレートに加えた（最終容積５０ｕＬ／ウェル）。サンプル及び段階希釈ＩＡＩＰ標準溶液を３２℃で１時間インキュベートした。マイクロプレートをＴＢＳ−Ｔで数回洗浄した後、ビオチン化ＬＰＳを２０ｍＭ酢酸＋２５ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ４．０（１：３２，０００）を含む緩衝液中で希釈し、ウェル当たり５０ｕＬを加えた。ビオチン化ＬＰＳを３２℃で３０分間インキュベートし、次いでマイクロプレートをＴＢＳ−Ｔを使用して少なくとも３回洗浄した。最終的に、１：１０，０００（５０μＬ／ウェル）に希釈したＨＲＰ−コンジュゲート化ストレプトアビジン（Ｐｉｅｒｃｅ）をマイクロプレートに加えた。洗浄後、５０μＬの基質ＴＭＢを加え（Ｎｅｏｇｅｎ  Ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ｋ−Ｂｌｕｅ  ＴＭＢ基質）、５０μＬ  １Ｍ  ＨＣｌを加えることにより反応を停止し、分光光度計（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）で４５０ｎＭ波長で色変化を読み取った。４点ロジスティック回帰（ＳｏｆｔＭａｘ  Ｐｒｏソフトウエア、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用いて標識曲線を生成し、図３Ｃに示すように、最大ＩＡＩＰ濃度２．０μｇ／ｍＬから連続２倍希釈で０．０３１２５μｇ／ｍＬまでの７点曲線をプロットした。
【０１５９】
実施例３：重症市中感染肺炎（ｓＣＡＰ）と診断された患者由来の血液サンプルの分析
Ｒｈｏｄｅ  Ｉｓｌａｎｄ  Ｈｏｓｐｉｔａｌの集中治療室に入院しているｓＣＡＰの確定診断を有する患者から連続血液サンプルを収集した。１６人の患者を本研究に登録し、０（ＩＣＵ入室時）、１、３及び７日目に血漿を収集した。確立された競合ＥＬＩＳＡ（図２Ａ）及び両サンドイッチ型ＥＬＩＳＡを用いて、ビオチン化ヘパリン又はビオチン化ＬＰＳを検出分子として使用して、ＩＡＩＰのレベルを決定した（図３Ａ）。１７〜７１歳の９５人の健康な対照からの血液サンプル（健康な血液ドナーから得られ、Ｒｈｏｄｅ  Ｉｓｌａｎｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｅｎｔｅｒから購入された）を、健康対照におけるＩＡＩＰレベルとｓＣＡＰ患者で測定したレベルとの比較のために、この研究に含めた。結果を図４、５及び６に示す。
【０１６０】
結果は、入院時及び疾患進行中（７日目まで）に、ＩＡＩＰレベルが健康な対照と比較してｓＣＡＰ患者で有意に低かったことを示す。従って、ＩＡＩＰレベルは予後の評価と治療決定を行う際に医師を導くために使用できる。競合ＥＬＩＳＡはｓＣＡＰ患者のＩＡＩＰレベルの低下を示したが、ビオチン−コンジュゲート化ヘパリン及び／又はＬＰＳを特異的結合リガンドとして使用した「サンドイッチ型」ＥＬＩＳＡアッセイでは、より統計的に有意な結果が得られた（ｐ値＝０．０００１、健康な対照と比較した０、１、３及び７日目のＩＡＩＰレベルの間）。ビオチン−コンジュゲート化ヘパリン及び／又はＬＰＳを使用した「サンドイッチ型」ＥＬＩＳＡアッセイでも、ｓＣＡＰ患者のＩＡＩＰ濃度は低く、ｓＣＡＰ患者と健康な対照で測定したＩＡＩＰ濃度の間に大きな差が生じた。これらのデータは、標識ＩＡＩＰリガンドを使用する「サンドイッチ型」ＥＬＩＳＡアッセイが、競合ＥＬＩＳＡアッセイよりも感度が高く、潜在的に精度が高いことを示す。
【０１６１】
Ｒｈｏｄｅ  Ｉｓｌａｎｄ  Ｈｏｓｐｉｔａｌの集中治療室に入院した敗血症を有する対象由来のサンプルを評価するためにも、同じアッセイを用いた。これらのアッセイは類似した結果をもたらした。正常な健康な対照のＩＡＩＰ値は、競合ＥＬＩＳＡ（平均±ＳＥＭ＝３２８．９＋６．３４μｇ／ｍＬ）及び両ＬＰＳ又はヘパリン−ＩＡＩＰアッセイ（３３７．７±９．０５及び４２１．８±１４．４７μｇ／ｍＬ）で類似しているが、肺炎及び敗血症群におけるＩＡＩＰのレベルは、競合ＥＬＩＳＡで有意に高く、これは疾病群と健康な対照との間で低い統計的有意差をもたらし、又は統計的有意差がなかった（図８Ａ〜８Ｃ）。
【０１６２】
実施例４：ＩＡＩＰに対するヘパリンの結合の分析
ＩＡＩＰに対するヘパリンの特異的結合の評価を、ウェスタンブロット分析を用いて行った。高度に精製したＩＡＩＰ（１μｇ）、正常ヒト血漿（１μＬ）、精製ビクニン（注射用ウリナスタチン、Ｔｅｃｈｐｏｏｌ、２μｇ）及び陰性対照としてのヒト血清アルブミン（ＨＳＡ、２μｇ）を７．５％  ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上で分離し、ニトロセルロース膜に転写した。５％無脂肪粉乳でブロッキングした後、ニトロセルロース膜をビオチン−コンジュゲート化ヘパリン（ＴＢＳ中１：５００）と室温で一晩インキュベートした。ＴＢＳ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎで数回洗浄した後、ＨＲＰ−コンジュゲート化ストレプトアビジン（１：１５，０００）を加え、室温で１時間インキュベートした。洗浄後、基質金属増強ＤＡＢ（Ｐｉｅｒｃｅ）を加えて反応性バンドを可視化した。
【０１６３】
ビオチン−コンジュゲート化ヘパリンは、レーン２（図７）に示すように、ＭＡｂ  ６９．２６（ヒトＩＡＩＰに対するモノクローナル抗体）と同様、精製ＩＡＩＰ（２５０ｋＤａ  ＩαＩ及び１２５ｋＤａ  ＰαＩ）に特異的に結合した。軽鎖（ビクニン）に結合したＭＡｂ  ６９．２６（レーン３）とは対照的に、ビオチン−コンジュゲート化ヘパリンはＩＡＩＰの軽鎖に結合せず、ヘパリンが重鎖を介してＩＡＩＰに結合することが示唆された。ＩＡＩＰの重鎖はヘパリンに特異的に結合しているようである。
【０１６４】
ヒト血漿中のビオチンコンジュゲート化ヘパリンによって複数の反応性タンパク質バンドが検出され（図７、レーン１）、ＨＳＡへの結合は検出できなかった。
【０１６５】
更に、遊離ビクニンはヘパリン−ＩＡＩＰ又はＬＰＳ−ＩＡＩＰ  ＥＬＩＳＡでは検出されず、インタクト重鎖を有するＩＡＩＰ複合体のみがヘパリン又はＬＰＳ−ＩＡＩＰ  ＥＬＩＳＡを用いて測定されることが示唆された。これらのデータは、ヘパリン及び／又はＬＰＳ（又はＩＡＩＰリガンド）を使用したサンドイッチ型ＥＬＩＳＡが、競合ＩＡＩＰアッセイ（図２Ａ）等の他の既知のＩＡＩＰアッセイと比較して精度及び頑健性を高めた対象（例えば、病的状態の対象）における循環ＩＡＩＰ複合体の評価を提供することを示す。
【０１６６】
実施例５：固定化された血漿由来ＩＡＩＰに対するビオチン化ＬＰＳの結合
ＩＡＩＰに対するＬＰＳの直接結合をインビトロで研究するために、ＩＡＩＰ及び他の対照タンパク質（ＢＳＡ＝ウシ血清アルブミン；ビクニン（ＩＡＩＰの軽鎖）；並びにモノクローナル抗体ＭＡｂ  ６９．２６の精製ＩｇＧ）を１０００μｇ／ウェルで９６ウェルマイクロプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ  Ｍｉｃｒｏｌｏｎ  ６００）上に固定化し、無脂肪粉乳（ＴＢＳ＋０．１％Ｔｗｅｅｎ  ２０中５％）でブロッキングした。洗浄後、１００μｇビオチン化ＬＰＳ（大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）Ｏ５５：Ｂ５由来のリポ多糖、Ｓｉｇｍａから購入、Ｃａｔ＃  Ｌ２８８０）を各ウェルに加え、ＴＢＳ＋１５０ｍＭ  ＣａＣｌ２緩衝液中で室温で１時間インキュベートした。ＴＢＳ＋０．１％Ｔｗｅｅｎで数回洗浄した後、ＨＲＰ−コンジュゲート化ストレプトアビジンを加え、１時間インキュベートした。最終的に、ＴＭＢ基質を加え、１Ｍ  ＨＣｌ溶液を加えることにより反応を停止した。色変化及び吸光度を４５０ｎＭで分光測定により測定した。ＬＰＳに結合することが記載されているため（Ｄａｖｉｄ  ＳＡ、ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｎａｔｅ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １９９５；２（２）：９９−１０６）陽性対照としての役割を果たしたＢＳＡ又はＭＡｂ  ６９．２６のＩｇＧ（陰性対照）と比較して、ＩＡＩＰに対するビオチン化ＬＰＳ分子の有意な結合が見出された（図９）。ＬＰＳはＩＡＩＰの軽鎖（ビクニン）に有意に結合せず、ＩＡＩＰの重鎖がＬＰＳに対する結合を促進することが示唆された。結合は又、グリコサミノグリカン鎖により介在され得る。
【０１６７】
実施例６：固定化ＬＰＳに対するビオチン化ＩＡＩＰの結合
前の実験を逆にして、ビオチン化ＩＡＩＰ（４μｇ／ウェル）を加え、固定化ＬＰＳ（１００μｇ／ウェル）、ＢＳＡ（２μｇ／ウェル）、陽性対照としてのＭＡｂ  ６９．２６のＩｇＧ（２μｇ／ウェル）、及び陰性対照（ブランク）としての無脂肪粉乳（２μｇ／ウェル）に対して１時間固定化した。数回の洗浄後、ＨＲＰ−コンジュゲート化ストレプトアビジンを加え、続いてＴＭＢ基質をマイクロプレートウェルに加えた。固定化ＬＰＳに対するビオチン化ＩＡＩＰの有意な結合を検出した一方、固定化ＢＳＡ又は無脂肪粉乳に対するＩＡＩＰの有意に低い結合が観察された（図１０）。この実験で陽性対象としての役割を果たしたＭＡｂ  ６９．２６（ヒトＩＡＩＰに特異的なモノクローナル抗体）のＩｇＧは、ビオチン化ＩＡＩＰに強く結合した。
【０１６８】
実施例７：ＩＡＩＰ−ＬＰＳ結合に対するｐＨ効果の分析
ＩＡＩＰとＬＰＳの結合を更に特徴付けるために、同様の固相結合実験を行った。ビオチン化ＩＡＩＰを様々なｐＨ条件下で固定化ＬＰＳ、ＭＡｂ  ６９．２６のＩｇＧ（陽性対照）、又はＢＳＡ（陰性対照）と共にインキュベートした。低ｐＨ溶液（ｐＨ３〜６）には酢酸塩緩衝液（５０ｍＭ）を用い、中性又は高ｐＨ溶液（ｐＨ７〜９）を得るためにＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（５０ｍＭ）を用いた。ビオチン化ＩＡＩＰはｐＨ５で強く結合したが、ｐＨ３又は４では結合は観察されなかった（図１１）。ｐＨ５を超えて上昇したときにＩＡＩＰの結合の低下が観察された。ＩＡＩＰのその特異的モノクローナル抗体ＭＡｂ  ６９．２６への結合は、ｐＨ７でピークに達したが、興味深いことに、ｐＨをｐＨ９まで上昇させても有意な変化はなかった。同様に、ｐＨ３及び４ではモノクローナル抗体へのＩＡＩＰの結合は無視できた。ビオチン化ＩＡＩＰとＢＳＡの間には結合は観察されなかった。結果は、ＩＡＩＰとＬＰＳの間の最適結合がｐＨ４〜７の範囲、特に約ｐＨ５で起こることを明らかに示唆する。
【０１６９】
実施例８：ＩＡＩＰ−ＬＰＳ結合に対する塩濃度の効果の分析
ビオチン化ＩＡＩＰとマイクロプレート上の固定化ＬＰＳとのインキュベーション中、増大する量の塩（ＮａＣｌ）を緩衝液に加えることにより、塩濃度の効果を研究した。ＬＰＳに対するＩＡＩＰの結合は、塩濃度の増大に伴い減少したが、この減少は、塩濃度１２００ｍＭでも有意ではなく、ＬＰＳに対するＩＡＩＰの結合は、この実験で陽性対照として使用した、ヒトＩＡＩＰに対するモノクローナル抗体（ＭＡｂ  ６９．２６）に対するＩＡＩＰの特異的結合と同様に、比較的強く特異的であることが示唆された（図１２）。
【０１７０】
実施例９：ＩＡＩＰ−ＬＰＳ結合に対する非イオン性洗剤（ＮＰ−４０及びＴｗｅｅｎ−２０）の効果の分析
固定化ＬＰＳに対するビオチン化ＩＡＩＰの結合に対する、増大する濃度の非イオン性洗剤ノニルフェノキシポリエトキシエタノール（ＮＰ−４０）（図１３）及びＴｗｅｅｎ  ２０（図１４）の効果を研究するために、更なる検討を行った。０．０５％（ｗ／ｗ）ＮＰ−４０又はＴｗｅｅｎ−２０が、ＬＰＳに対するＩＡＩＰの結合反応に添加された場合、洗剤を添加しないＴＢＳ緩衝液単独と比較して、結合の増大が観察された。低い洗剤量は、ＬＰＳに対する結合を促進し得、ＬＰＳ分子の脂質結合ドメインがこの相互作用に関与し得ることが示唆される。洗剤の量が１％まで増加された場合でも、殆どのＩＡＩＰが尚ＬＰＳに結合していたため、ＩＡＩＰの結合は尚、比較的強く、インビトロでのＩＡＩＰとＬＰＳの強い相互作用が示された。同様に、ビオチン化ＩＡＩＰは高い特異性及び親和性でＭＡｂ  ６９．２６に強く結合し、１％までの洗剤の添加は結合を有意に変化させなかった。対照的に、陰性対照（ＢＳＡ）はＩＡＩＰに対する結合を示さなかった。
【０１７１】
実施例１０：迅速側方流動イムノアッセイ（ＬＦＩＡ）を用いたＩＡＩＰの定量化
本明細書に記載される方法は、側方流動イムノアッセイ（ＬＦＩＡ）を用いたＩＡＩＰの迅速定量化に使用することができる。実施例１〜３に記載し及び用いた「サンドイッチ型」ＩＡＩＰ  ＥＬＩＳＡを、重篤な炎症状態（例えば、新生児敗血症（ＮＳ）及び壊死性腸炎（ＮＥＣ））の高い危険性を有する対象（例えば、乳児、青少年又は成人）の特定に使用できるＬＦＩＡ、ポイントオブケア（ＰＯＣ）の、迅速な、信頼できる定量的及びユーザーフレンドリー試験に適合させることができる。ＬＦＩＡは、ａ）２０〜７００μｇ／ｍｌ  ＩＡＩＰの線形範囲を測定し；ｂ）１５０μｇ／ｍｌ付近（例えば、約１００〜約２００μｇ／ｍＬ）でＩＡＩＰレベルの高い精度を示し（例えば、＜５％の可変性又は誤差）；ｃ）１時間以下（例えば、１５分間以下、例えば１０、７、又は５分間以下）で結果が得られ；及びｄ）血漿又は全血サンプルの少量のサンプル容積＜１５０μＬ（例えば、１５０、１００、７５、５０、２５、１５μＬ以下）を必要とすることができる。
【０１７２】
試験は、対象（例えば、未熟児、乳児、青少年又は成人）における調節不全炎症性応答の迅速な特定に使用することができる。早期の介入は、炎症性疾病若しくは状態又は感染症を経験している患者の生存率を改善するのに重要であることが既知である。
【０１７３】
新生児において、例えば、早期介入プロトコルを適用する能力は、多くの場合、そのような状態（例えば、ＮＳ及びＮＥＣ）を重篤さが低い他の疾病から特定することの困難さにより制限される。ＩＡＩＰの卓越した陰性予測値は、例えば、現在の試験では情報が得られなかった対象（例えば、乳児、青少年、又は成人）における抗生物質処置の早期終了のような、困難な決定を行うよう臨床医を導くことを助け得る。更に、治療的タンパク質として、ＩＡＩＰは、臨床的に病気の対象（例えば、乳児、青少年、又は成人）に有益であり得、血液レベルは有用なセラノスティックマーカーの役割を果たして、医師がＩＡＩＰ又は他の付属的治療薬との代替療法に関する情報に基づく決定を行うこと及び疾病進行を監視することを助け得る。
【０１７４】
短時間（例えば、１５分以下）で読み取り可能な性格な定量的結果を有する単純な、ユーザーフレンドリーな携帯型装置を使用して、処置（例えば、抗生物質処置）の開始及び期間等の治療的決定に影響を与えるのに使用できる、ＩＡＩＰに基づく迅速ポイントオブケア試験は、革新的であるだけでなく、病的状態及び死亡率の低減を助けるのに臨床的に有用である。
【０１７５】
ＬＦＩＡは、対象由来のサンプルを試験片（例えば、セルロース、ガラス繊維、又はニトロセルロース）に加え、次いで緩衝液を使用してこれを試験片内に押し出すことを含む。試験片は、ＩＡＩＰ結合剤（例えば、ＩＡＩＰ特異的抗体又はＩＡＩＰリガンド）を含む。標識された検出剤（例えば、ＩＡＩＰ特異的抗体又はＩＡＩＰリガンド）は、サンプルの前、後、又は同時に試験片に加えられ、ＩＡＩＰの迅速定量化のための標準方法を使用して可視化され得る。
【０１７６】
ａ）金−コンジュゲート化試薬：金ナノ粒子を、その優れたコロイド安定性により、（ＬＦＩＡ）フォーマットにおいて試薬を標識するのに使用し得る。ヒドラジドで機能化した金ナノ粒子の安定な製剤は、市販されている（Ｉｎｎｏｖａ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）。通常、抗体は、検出剤としてのコロイド金に共有結合されるが、ヘパリン又はＬＰＳは、ＩｎｎｏｖａＣｏａｔ金ナノ粒子を使用して、それらの糖鎖を介して同様にコンジュゲート化され得る。ＬＰＳ及びヘパリンの金コンジュゲーションは、小規模で行われ、それらの安定性及びＬＦＩＡにおける性能を試験することができる。
【０１７７】
ｂ）ＬＦＩＡの捕捉、検出、サンプル試薬及び条件の最適化：下記に説明する競合ＬＦＩＡ開発の経験を踏まえて、捕捉ライン上のＭＡｂ  ６９．２６の調製及びコーティング条件、並びにブロッキング剤、界面活性剤及び炭水化物等の他の因子を、非特異的結合を低減し、フロー特性を改善するように選択し得る。干渉及び非特異的結合を低減する最適希釈因子及び好適な希釈剤も決定し得る。実験の多因子デザイン（ＤｏＥ）を使用して以下のパラメータの相互作用を決定し得る：１）結合剤濃度、２）コーティングｐＨ及び緩衝液タイプ（範囲＝４〜１０）、３）コーティング持続時間及び４）ブロッキング剤のタイプ（例えば、ウシ血清アルブミン、魚ゼラチン等）。
【０１７８】
ｃ）試験片構成要素、ハウジング及びリーダー：サンプルウェルを有するプラスチックカセット内に試験片を収容し、試験片の適切な範囲上に試験読み取り窓を配置し得る。様々な標準化された試験片の寸法構成を使用することができる。Ｄｅｔｅｋｔ又はＥＳＥＱｕａｎｔリーダーに適合可能なもの等の好適なハウジングを選択し得る。サンプル及びコンジュゲートパッドの組成、並びにニトロセルロース膜の細孔サイズを、所望の毛細管現象速度を達成し、従って、検出試薬とのサンプルの反応時間を達成するように選択し得る。
【０１７９】
ＬＦＩＡ性能目標は、以下に記載するように、例えば、製剤及び試験ライン試薬のストライピング条件のためのプロセス、検出分子（例えば、ＬＰＳ又はヘパリン）のコンジュゲーション方法、及び検出剤の滴定、並びにパッド及びウィックの最適材料及び寸法を変化させることにより最適化することができる：
【０１８０】
ａ．試験及び対照ラインの最適化。膜ストリッピング条件は、試験片の試験ライン（ＭＡｂ  ６９．２６）及び対照ライン（ＬＰＳ−結合タンパク質又はヘパリン−結合タンパク質（例えば凝固因子ＩＸに対する）の両方のために最適化することができる。ＬＦＩＡ膜の頑強な製造手順として、３７℃で３０分間の乾燥期間を用いて試験及び対照ラインを固定化し得る。多因子ＤｏＥを使用して、以下の膜ストリッピングパラメータの相互作用を決定し得る：１）結合剤濃度、２）ｐＨ及び緩衝液タイプ（範囲＝ｐＨ４〜１０）、３）塩濃度及び４）ストライピング容積（１〜３μＬ／試験片）及びインクジェット速度。初期の最適化研究から膜ストライピングの改善を組み込む。多因子ＤｏＥは、様々な濃度（０〜１μｇ／試験片）のタンパク質ブロッカー、界面活性剤、炭水化物、及び、金粒子非特異的結合を低減し又は膜のフロー特性を改善し得る他の薬剤を共被覆する膜の有効性の決定にも使用することができる。本発明者らの固相結合研究に基づいて、ＬＰＳ及びヘパリン結合は、５未満のｐＨでＩＡＩＰに対して有意により強かった。同様の条件をＬＦＩＡにおいて使用することができる。
【０１８１】
ｂ．試験片パラメータの最適化。サンプルパッド及びコンジュゲートパッドの組成、並びにニトロセルロース膜の細孔サイズは、毛細管現象の速度、従ってサンプルと金検出試薬との反応時間に影響を与え得るため、所望の結果を達成するように選択することができる。本発明者らは、高流速ＮＣ（ＨＦ０９０、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）が、感度及び結果までの時間に関して、設計仕様を満たすと判定した。ＤｏＥを使用して、アッセイ用のフィルター、並びにパッド及びウィック材料のタイプを評価することができる。同様に、サンプルパッド及びコンジュゲートパッドのサイズ及び形状を、所望の結果を達成するように調整することができる。
【０１８２】
サンプルパッドを：１）未希釈サンプルを受容し、２）非特異的結合を最小限にするのに必要なフォーミュラを提供し、及び３）全血サンプルを受容するように最適化し得る。下記に論じる競合ＩＡＩＰプロトタイプ迅速試験は、希釈サンプル（１：５）を使用し、これは生のサンプル容積が試験片に進入する必要性を軽減し、非特異的結合課題を軽減するブロッキングタンパク質及び界面活性剤を含有した。製剤ベースのサンプルパッド（例えば、乾燥フォーミュラ）は、成分（例えば、タンパク質ブロッカー、界面活性剤等）及びそれらの濃度に関して開発することができる。干渉及び非特異的結合を効果的かつ高い信頼性で低減するのに使用できる、入手可能なイムノアッセイ添加物が存在する。候補薬剤のスクリーニング研究の次に多因子ＤｏＥを行って、例えば、ブロッキング剤の最適濃度を決定することができる。
【０１８３】
ＬＰＳ及びヘパリンのコンジュゲーション技術は、金コロイド（ナノ粒子）及び染色ラテックス粒子ベースのコンジュゲーション技術との使用について評価することができる。
【０１８４】
ｃ．血液分離濾過膜及びプラスチックハウジングカセット。乾燥サンプルパッドフォーミュラに加えて、赤血球細胞を排除するのに好適なインライン血液分離フィルター膜を全血サンプルのために操作し得る。目標は、プロセスを簡略化し、迅速試験フォーマットの試験を、特に例えば指の針から又は収集管を介して収集した全血に直接適用する際、ポイントオブケアにおける研究室外の適用のために、ユーザーフレンドリーとすることである。Ｖｉｖｉｄ（商標）又はＣｙｔｏｓｅｐ（商標）膜（Ｐａｌｌ）又は他の製造業者（ＧＥ  Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅｓ）等の、これら血液フィルターの多数のタイプが市販されており、ＬＦＩＡに使用することができる。試験片のためのプラスチックハウジングの寸法は、リーダー（例えば、Ｄｅｔｅｋｔリーダー）と共に使用するよう選択することができる。
【０１８５】
本発明者らは、ハンドヘルドＤｅｔｅｋｔ（商標）リーダーモデルＲＤＳ−１５０  ＰＲＯ（Ｄｅｔｅｋｔ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ、Ａｕｓｔｉｎ、ＴＸ）がＬＦＩＡに使用できると判定した。迅速試験リーダーのためのＤｅｔｅｋｔの光側方流動リーダー技術は、現在、食物及び飲料安全性試験、生物学的脅威の検出、環境モニタリング及び動物健康の商業的診断装置に使用されている。リーダーは、試験片を光学的に走査し、試験及び対照ラインシグナル強度を、プログラムされた較正アルゴリズムと比較するハンドヘルド装置である。シグナル統合ソフトウエアをＩＡＩＰ用量−応答曲線を解釈するためにカスタマイズすることができ、このアルゴリズムはＤｅｔｅｋｔ（商標）ユニットに常駐することができる。Ｖｉｓｉｏｎ  Ｓｕｉｔｅ  Ｐｒｏ開発者のキットソフトウエアプログラムを製造業者、Ｄｅｔｅｋｔ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  ＬＬＣ  ｉｎ  Ａｕｓｔｉｎ、ＴＸと連携して使用して、ＤｅｔｅｋｔリーダーによるＩＡＩＰ試験片の解釈を統合することができる。ＩＡＩＰ結合曲線形状及び内部対照に基づくソフトウエアアルゴリズムを開発して以下の機能を実行することができる：ａ）試験ラインシグナル強度に対するＩＡＩＰ結合曲線の形状の確立；ｂ）試験片の実行の日々の変動の修正のための、おそらく対照ラインシグナルに基づく内部対照の確立、及びｃ）リーダーに組み込むための（例えば、バーコード走査を介した）キットロット固有の情報のためのソフトウエアの確立。
【０１８６】
開発及び最適化されたサンドイッチ型ＩＡＩＰ迅速試験の性能（上記及び本明細書に論じたパラメータによる）は、前臨床設定で評価することができる。ＬＦＩＡカセットは、以下のように試験することができる：
【０１８７】
ａ）分析感度、報告範囲及び精度−可能なＩＡＩＰ濃度範囲（２５〜８００μｇ／ｍＬ）に及ぶ既知のＩＡＩＰ濃度のサンプル／対照を、複数の操作者（Ｎ＝３最小）により、複数の日に亘って（Ｎ＝１０）複数の反復で試験することができる。データを分析して、アッセイカットオフ点（１５０μｇ／ｍＬに設定）の精度を含む、ＩＡＩＰ結合曲線の全スポットにおける精度を確立することができる。
【０１８８】
ｂ）妨害物質−既知のＩＡＩＰ濃度のサンプルプールを潜在的な妨害物質でスパイクして、用量回復に対する効果を決定することができる。Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＣＬＳＩ）ＥＰ−０７Ａプロトコルを、参照に使用することができる。患者サンプル中で高い濃度にあることが見出され得る物質（例えばヘモグロビン、ビリルビン、ヒトＩｇＧ等）のストック溶液を、ＩＡＩＰサンプル中にスパイクし、試験することができる。
【０１８９】
ｃ）ユーザーの堅牢性評価−既知のＩＡＩＰ濃度のサンプルプールを使用して、エンドユーザーにより生成される様々なシナリオ／エラーに対する試験片の堅牢性を検証することができる。試験されるパラメータには：１）追加される不正確なサンプル容積（＋２５％）、２）研究室の環境条件（温度６５〜８５°Ｆ；湿度１０〜７０％ＲＨ）及び３）不正確な試験片読み取り時間（＋５０〜１００％推奨）が含まれる。
【０１９０】
ｄ）製品の保管期間安定性−ＩＡＩＰ試験キットを異なる温度レジメン（例えば、周囲及び３７℃）下で保管し、既知のＩＡＩＰ濃度のＩＡＩＰ対照の組を使用して製造後の様々な間隔（＞１年）で試験して、製品の安定性を決定することができる。
【０１９１】
ｅ）予備的臨床サンプルにおける感度及び特異性−製品は、対象（例えば、ＮＳ及びＮＥＣが疑われ並びにそれらの診断が確認された乳児）由来の臨床サンプルを使用して試験することができる。
【０１９２】
観察的臨床試験にてＩＡＩＰ迅速試験を評価するために、日常的な臨床評価及び管理を受けている対象（例えば炎症性疾病若しくは状態又は感染症を有し又はその危険性を有する対象）からサンプルを収集することができる。同じ炎症性疾病若しくは状態又は感染症を有する対象の、幅広い異質集団を看護する多数の施設からのデータの獲得を用いて、十分な数の対象を提供し、ＩＡＩＰと疾病又は感染症との間に関連性を強化することができる。ＩＡＩＰレベルをリアルタイムで提供できるポイントオブケアベッドサイド装置は、不必要な介入の使用、又は不必要な処置（例えば、抗生物質療法）の長期化の除去を補助することができ、入院の長さ／費用を低減することができる。
【０１９３】
ＩＡＩＰ  ＬＦＩＡは、以下のように、対象の臨床評価に使用することができる：
【０１９４】
１）血液サンプルの収集：サンプルは、様々な医療施設における炎症性疾病又は状態を有し又は発症する危険性を有する対象から収集することができる。年齢、体重、性別、及び研究室結果を含む全対象の臨床及び人口統計データを記録することができる。様々な時点（例えば、０、２４、４８、７２時間）及び７ｄ）で収集した同じ対象からの連続サンプルも、ＬＦＩＡに使用することができる。ＬＦＩＡを使用して、ＩＡＩＰレベルが疾病の重症度及び進行に相関するか否か、ＩＡＩＰレベルが危険性又は続く疾病を予測するか否か、及び対象がより重篤な疾病を発症するか又は以後の治療法を改善するか否かを決定することができる。
【０１９５】
２）検出力分析：炎症性疾病若しくは状態又は感染症を有する対象の予備データ及び確立された研究を、サンプルサイズ見積もりに使用することができる。
【０１９６】
３）血液分析：収集した臨床血漿サンプルを研究バイアル内に移動し、標識し（非特定化）、試験まで凍結状態で保存することができる。ＩＡＩＰレベルは室温で２４時間、日常的な冷却臨床保存下で１４日間まで、２０℃で無制限に安定である。
【０１９７】
ＩＡＩＰレベルは、比較研究のために、ＬＦＩＡ迅速ＩＡＩＰ試験及びサンドイッチ型ＩＡＩＰ  ＥＬＩＳＡを用いて分析することができる。ＩＡＩＰ迅速試験ＬＦＩＡの概念実証の評価のために、本発明者らは、図２Ａに示すものと同様の競合ＬＦＩＡを用いて測定するよう設計した試験片カセットを生成した。下記に記載する、このイムノアッセイフォーマットを使用して生成したデータは、サンドイッチ型フォーマット（図３Ａに示すものと同様の）に基づくＬＦＩＡも使用できることを確認する。競合ＬＦＩＡを下記に記載する。
【０１９８】
新生児における敗血症及び全身炎症性応答症候群
集中治療における進歩は、対象の生存率の実質的な改善をもたらした（例えば、乳児、特に早産、非常に低出生体重（ＶＬＢＷ）（＜１，５００ｇ）の乳児）。しかしながら、未熟児は、日和見感染症、並びに急性の重篤な状態新生児敗血症（ＮＳ）及び壊死性腸炎（ＮＥＣ）に罹りやすい。最近の多施設検査では、２１％までのＶＬＢＷ乳児が遅発性の（生後＞７２時間）血液培養物により判明した敗血症の少なくとも１つの症状の発現に遭遇し、７％までのＶＬＢＷがＮＥＣを発症することが示唆されている。ＮＳ及びＮＥＣは、有害な神経発達転帰を含む重大な病的状態に関連し、ＮＳ（１０〜３０％）及びＮＥＣ（１６〜４２％）における比較的高い死亡率を有する。これらの新生児疾病の早期の前兆及び症状は、非特異的であり、目立たない場合が多く、気管支肺異形成症、未熟児の無呼吸、胃食道逆流、又は機能的腸管運動不全の悪化等の非感染性病因学に起因して容易に間違い得る。より憂慮すべきは両疾病における臨床的悪化が劇症的に進行して、臨床症状の数時間以内にショック、播種性血管内凝血、及び死をもたらし得ることである。重篤な疾病及び死に進行する患者の危険性について医師をおおまかに導く迅速試験は現在存在しない。
【０１９９】
ＮＥＣの正確な原因は未だ明らかではないが、ＮＥＣ病態形成は、感染病原体が腸管上皮層を横切って移動し、自然免疫防御を逃れ、続いて炎症及び組織壊死を引き起こす際にもたらされると広く考えられている。ＮＳ及びＮＥＣの両方は、全身炎症性応答に関連している。非特異的であり、初期段階では微妙なそれらの臨床症状は、非常に類似している。更に、ＮＳ及びＮＥＣは、多くの場合、同じ疾病症状の発現において共存する（例えば、症例−対照研究において、敗血症を有するＮＥＣは、ＮＥＣの症例の３分の１に生じた）。迅速な抗菌剤処置と支持療法による迅速な医学的管理が両状態に対する標準治療である。このように、これらの潜在的に致死的な状態の危険性を最も早い機会に特定することは実際的かつ臨床的に重要である。
【０２００】
炎症性疾病又は感染症（例えば、ＮＳ及び／又はＮＥＣ）の早期かつ正確な特定のためのバイオマーカーは、従来の試験では情報が得られなかった対象（例えば、乳児）における抗生物質処置の初期の使用及び継続、又は早期の終了に関する困難な決定を医師が行う上で非常に有用であろう。残念ながら、臨床的に有用であり、又これらの困難な疾病の管理に有効な、広く利用可能なバイオマーカーは現在存在しない。最近、プロカルシトニン（ＰＣＴ）は、下気道感染症及び敗血症を有する患者の抗生物質処置の管理を助けるバイオマーカーとして認められているが、このマーカーは、細菌感染症のみに特異的であり、ウイルス又は他の非細菌感染症を原因とする全身炎症性状態の検出には感度を有さない。更に、ＰＣＴ試験の使用は、小児患者、特に生後数日間の未熟児において依然として議論の余地がある。従って、炎症性疾病プロセスの重症度に関する情報を提供する高感度のバイオマーカーは、炎症性疾病又は感染症（例えば、未熟児におけるＮＳ及びＮＥＣ）の管理において臨床的に有用であろう。これは依然として大きな課題である。
【０２０１】
全身炎症及びより「局在性」の疾病（特発性腸管穿孔）を有する乳児の検出における、ＩＡＩＰの予測値の他のマーカーとの比較試験
本発明者らは、ＩＡＩＰが卓越した重症度のバイオマーカーであり、ＮＥＣをより限局性の炎症性疾病、特発性腸管穿孔（ＳＩＰ）と区別できることを確認する。ＩＡＩＰ試験は、ＳＩＰからＮＥＣを区別して診断する上でＣＲＰよりも優れている。
【０２０２】
ＩＡＩＰは、疾病の重症度、例えば、局部炎症性応答（ＳＩＰ）、対、全身及び潜在的に重篤な炎症性応答（ＮＥＣ及びＮＳ）を識別することができる。本発明者らは、Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｅ、ＲＩのＷｏｍｅｎ  ＆  Ｉｎｆａｎｔｓ’  Ｈｏｓｐｉｔａｌの新生児敗血症（ＮＳ）、壊死性腸炎（ＮＥＣ）及び特発性腸管穿孔（ＳＩＰ）を疑われる９５人の乳児（６４人の女児及び３１人の男児）からの血液サンプルを収集した。個々の各患者から入手可能な場合、連続サンプルも収集した。殆どの乳児は＜３０週の妊娠期間（２３〜３１週の範囲）であり、１２３５グラムの平均出生体重を有した。これらの収集サンプルから、本発明者らは、証明されたＮＥＣを有する８人の乳児、ＳＩＰを有する９人の乳児及びＮＳを有する２０人の乳児を得た。本発明者らは以前にＩＡＩＰアッセイをＮＳに関する陽性及び陰性予測値の決定に使用したため、本発明者らは、ＮＥＣ等の全身炎症性疾病状態と、ＳＩＰ等のより「局在的」及び限局的な壊死性疾病状態とにおけるＩＡＩＰレベルの予測値を評価した。本発明者らは、性別、体重及び妊娠期間一致対照に対する、これらの乳児におけるＩＡＩＰ及び他の炎症性バイオマーカーＣ−反応性タンパク質（ＣＲＰ）のレベルも比較した。ヒトＩＡＩＰ（ＭＡｂ  ６９．２６）に対して特異的な単一のモノクローナル抗体を使用する競合ＥＬＩＳＡを用いて血液ＩＡＩＰのレベルを測定し、ＣＲＰ  ＥＬＩＳＡキットを使用してＣＲＰレベルを盲検的に分析した。健康な乳児（ｐ＜０．０５）及びＳＩＰを有する乳児（Ｘ線写真ＮＥＣはない、ｐ＜０．００５）と比較して、ＮＥＣと診断された乳児（修正されたＢｅｌｌのステージＩＩ以上）において、ＩＡＩＰレベルの有意な低下が見られた。しかしながら、ＳＩＰを有する乳児と健康な対照との間に有意差は見出されなかった。対照的に、ＮＥＣ及びＳＩＰを有する両方の乳児においてＣＲＰのレベルの増大が見出されたが、この増大は統計的に有意ではなかった（ｐ＞０．０５）（図１５Ａ、１５Ｂ参照）。更に、カットオフ値＜４におけるＣＲＰの受信者動作特性（ＲＯＣ）は、感度１００％、特異性６４．７％、陽性予測値（ＰＰＶ）１８．７及び陰性予測値（ＮＰＶ）１００で０．６５（ｐ＝０．０１、９５％ＣＩ；０．５４〜０．９０）の曲線下面積（ＡＵＣ）を生成し；一方、ＩＡＩＰのＲＯＣは、カットオフ値＜２０７ｍｇ／Ｌで堅牢なＡＵＣ０．９８（ｐ＜０．０００１、９５％  ＣＩ；０．８４〜０．９９）を提供した。ＩＡＩＰの予測値は、感度１００％、特異性８８．２％、ＰＰＶ  ４１、及びＮＰＶ  １００でＣＲＰと比較して優れていた（図１６Ａ、１６Ｂ）。
【０２０３】
乳児由来の複数の連続サンプルは、ＮＥＣ及びＳＩＰの発症の前後に、数人の（全員ではない）乳児から入手可能であった。本発明者らは、更に、確立されたＩＡＩＰ競合ＥＬＩＳＡを用いてＩＡＩＰレベルを分析した。ＮＥＣを有する乳児のＩＡＩＰレベルは、診断時及び処置の開始後、ＳＩＰ患者に見出されるレベルと比較して有意に低かった（図１７）。これらは、残留する血液収集物からのみ入手可能な好都合なサンプルであった。これら結果は、ＩＡＩＰレベルがＮＥＣ（ＮＳに加えて）等の重篤な全身炎症性状態を高い感度及び特異性で特定する有用なバイオマーカーであることを示し、ＩＡＩＰレベルは又、ＳＩＰ患者において、比較的重篤な状態ではないＮＥＣを区別するように思われる。ＩＡＩＰ試験は、ＮＥＣ（１００％）及びＮＳ（９８％）の両方で卓越したＮＰＶを示した。ＩＡＩＰ試験を用いて、従来の試験では情報が得られなかった乳児における早期停止等の、処置（例えば、抗生物質処置）決定を導くことができる。
【０２０４】
血液ＩＡＩＰレベルを測定し、ＮＳ及びＮＥＣを検出する、ＩＡＩＰのための定量的競合側方流動イムノアッセイ（ＬＦＩＡ）のプロトタイプ開発
ａ）試験フォーマット及びアッセイ構造の選択：側方流動イムノアッセイベースの試験を、ＩＡＩＰ迅速試験のフォーマットのために選択した（図１８参照）。ＬＦＩＡは、１）少量のサンプル容積を使用する；２）特徴付けられた動態に従い、試験結果に迅速インターバルを提供する；３）分析的に高感度及び正確である；４）通常、装置の適切な性能を検証する内部対照を含む；５）よく特徴付けられた及び広く入手可能な原料から作製される；並びに６）試験片リーダーを使用して定量的に分析できるシグナルを生成する：ように設計されているため、迅速ポイントオブケアアッセイを開発する際に多数の利点を提供する。従って、ＬＦＩＡは、ＩＡＩＰ迅速試験として、例えばポイントオブケア設定にて使用することができる。
【０２０５】
ｂ）ＬＦＩＡの捕捉、検出及びサンプル試薬、並びに条件の最適化：当初の尽力により、側方流動イムノアッセイの捕捉、検出、サンプル試薬及び条件の最適化によって、確立された競合ＩＡＩＰ  ＥＬＩＳＡを競合ＬＦＩＡフォーマットに首尾よく取り入れることができた。本発明者らは、更に、用量応答曲線を確立し、又シグナルのタイミング、精度、及び迅速ＩＡＩＰアッセイフォーマットの再現性を評価した。試験結果のリーダーベースのデータ分析を、Ｑｉａｇｅｎ試験片リーダーを使用して採用した。これらの初期試験に続いて、本発明者らは、試験片及びアッセイ条件の最適化に進み、入手可能であり、かつ本発明者らの試験片に好適ないくつかの携帯型リーダーを試験した。
【０２０６】
ｃ）精製ＩＡＩＰ及びＩＡＩＰに対するモノクローナル抗体（ＭＡｂ  ６９．２６）：両方の試薬は、競合アッセイフォーマットで使用される重要な成分である。本発明者らは、高い収率及び高い純度をもたらす、ヒト血漿からＩＡＩＰを単離するための拡張可能なバイオプロセス方法を開発及び最適化した。抗体のインビトロでの大規模生産のために、ハイブリドーマ細胞を拡張可能なＣＥＬライン培養フラスコ（Ｉｎｔｅｇｒａ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）内で増殖させた。親和性タンパク質クロマトグラフィーによりハイブリドーマ上清からＩｇＧを単離した。
【０２０７】
ｄ）試験片：試験片の複数のパイロットロットを調製し、選択されたフォーミュラは、ヒト血漿中のＩＡＩＰの定量的測定のための安定なプラットフォームである：１）サンプルパッド：緩衝液及び界面活性剤を有するセルロースパッド；２）コンジュゲートパッド：抗ＩＡＩＰ（ＭＡｂ  ６９．２６）金コンジュゲート及びウサギＩｇＧ金コンジュゲートを有するガラス繊維パッド（対照ライン）；３）ニトロセルロース：試験されるＩＡＩＰ及び試験される山羊−抗ウサギＩｇＧを有する迅速流動（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  ＨＦ０９０）ニトロセルロース（試験ライン）（対照ライン末端ウィック：セルロースパッド（フォーミュラなし））。
【０２０８】
ｅ）サンプル：少量の血漿（１５μｌの１：５希釈サンプル）を試験片に加えた後、１１５μｌの追跡緩衝液を加えて試験片を通してサンプルを押し出した。追跡緩衝液は、最適化されていた：２ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ８．０＋１００ｍＭ  ＮａＣｌ＋０．５％  Ｂｒｉｊ＋０．０５％  Ｔｗｅｅｎ  ２０＋１．０％ウシ胎児血清。緩衝液にＢｒｉｊ界面活性剤を加えて、試験片の上流部分からのコンジュゲートの迅速除去を促進した
【０２０９】
ｆ）実行時間：血漿サンプル又はＩＡＩＰ標準物質（３つの異なる濃度で）で試験を実行し、次いで、サンプル添加から１０、１５、２０、２５、３０、４５及び６０分後にＱｉａｇｅｎリーダーにより定量化した。試験片は約７分で走り（即ち、ニトロセルロースは、無関係の金を除去していた）、その後の任意の時間に読み取ることができた。本発明者らは、１５分後にシグナルは劇的に変化しないことを見出した。従って、本発明者らは、サンプルを添加した後、１５分において試験片を均一に読み取った。
【０２１０】
ｇ）標準物質及び対照：ＥＬＩＳＡ結果に基づいて既知のヒト血漿（Ｒｈｏｄｅ  Ｉｓｌａｎｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｅｎｔｅｒ）を、標準物質及び内部標準対照として使用した。血漿を１％  ＦＣＳ含有緩衝液で希釈することにより、異なる用量を形成した。携帯型Ｑｉａｇｅｎ試験リーダー（ＥＳＥＱｕａｎｔ  ＬＦＲ）を使用して、本発明者らは、１７．５〜１１００μｇ／ｍＬの範囲の標準曲線を確立した（１：５サンプル希釈を用いて）。日々に亘る較正曲線の再現性は、一組の標準物質を１日のうちの異なる時間に、１３回まで、５日間反復及び実行することにより試験した。結果を図１９に示す。値の各々の平均及びＳＤをプロットした。結果は、試験が５日間に亘って卓越した変異係数（１５％未満のＣＶ）で狭い広がりを示したことを示す。
【０２１１】
ｈ）試験片リーダー及びソフトウエア：本発明者らのＩＡＩＰ迅速試験は定量的であることが意図されるため、本発明者らは、試験片が生成するシグナルを捕捉するためにリーダーを注意深く選択した。様々なタイプの試験片リーダーが市販されている。リーダーの選択は、工学、人間工学、及びソフトウエアロバスト性等の特徴及び仕様に基づいていた。これは迅速試験の重要な部分であるため、本発明者らは、ＩＡＩＰ迅速試験片のための異なる技術及び特徴を有する３つの異なるリーダーを試験した：１）携帯型卓上側方流動リーダー（ＱｉａｇｅｎによるＥＳＥＱｕａｎｔ  ＬＦＲ）；２）ＰＤＡベースのハンドヘルドリーダーＤｅｔｅｋｔ  ＲＤＳ  １５００  Ｐｒｏ（Ｄｅｔｅｋｔ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ、Ａｕｓｔｉｎ、ＴＸ）及び３）スマートフォン／タブレットベースのリーダーシステム（ｉＣａｌｑリーダー−ｉＣａｌｑ、Ｓａｌｔ  Ｌａｋｅ  Ｃｉｔｙ、ＵＴ）。本発明者らは、試験した他のリーダーよりもＤｅｔｅｋｔリーダーが５〜７００μｇ／ｍＬの範囲のより良好な線形曲線を生じることを見出した。
【０２１２】
最適化アッセイのインター及びイントラ−アッセイ精度の決定
迅速試験のインターアッセイ精度特性を、収集した血液サンプル（ｎ＝６）を使用して、６日連続で反復して実行して決定した。続いて、結果を３つの異なる携帯型及びハンドヘルドリーダーを使用して読み取り、変異係数（ＣＶ）を個々の各サンプルから得た結果から計算した。ＥＳＥＱｕａｎｔリーダーを使用したＩＡＩＰ迅速試験のＣＶは、４〜１６％の範囲であり、平均１３％であったが、Ｄｅｔｅｋｔリーダーは平均ＣＶ  １０％（５〜１６％の範囲）を示し、ｉＣａｌＱスマートフォンベースのリーダーは、平均ＣＶ  １６％（１０〜２３％の範囲）をもたらした。Ｄｅｔｅｋｔリーダーは、本発明者らが試験した他の２つのリーダーよりも低いＣＶを有し、より良好に働いた。試験のイントラ−アッセイ精度を評価するために、本発明者らは、８つの血漿サンプルを実行し、最適プロトコルに基づいてＩＡＩＰレベルを分析した。各サンプルから得られるシグナルを様々なリーダーで３回読み取り、確立された標準曲線に基づいてＩＡＩＰ値を個別に計算した。続いて、三重の読み取りからＣＶを決定し、２〜８％の範囲であることが見出され、試験した３つの全てのリーダーに関して５％の平均ＣＶであった。
【０２１３】
乳児血漿における迅速アッセイの性能評価
Ｗｏｍｅｎ  ＆  Ｉｎｆａｎｔｓ’  Ｈｏｓｐｉｔａｌの乳児から収集したサンプルを使用して、本発明者らは、上述したＩＡＩＰ試験片に関する最適条件に基づいて、ＩＡＩＰの分析を行った。得られたシグナルを３つの独立したリーダーを使用して連続して読み取り、リーダーの各々の標準曲線に基づいて結果を計算した。迅速試験の結果を、確立された競合ＥＬＩＳＡアッセイにより得られた結果と比較し、個々の各サンプルの値を、迅速試験の結果に対してプロットした（図２０Ａ〜２０Ｃ）。結果は、６時間の競合ＥＬＩＳＡと、ＥＳＥＱｕａｎｔリーダー（０．８３２の相関係数Ｒ２、ｎ＝３１１）及びＤｅｔｅｋｔリーダー（Ｒ２＝０．８４、ｎ＝３３９）を使用して１５分以内に生成した迅速競合ＬＦＩＡ試験結果との間で卓越した相関を示した。しかしながら、ｉＣａｌＱスマートフォンベースのリーダーは、特に高いレベルのＩＡＩＰ（＞６００μｇ／ｍｌ）を含むサンプルにおいて、ＥＬＩＳＡ結果と比較的相当しない試験結果を生成した。
【０２１４】
要約すれば、本発明者らは、６時間の研究室ベースの競合ＥＬＩＳＡを、血中の循環ＩＡＩＰ（１０〜８００μｇ／ｍＬの範囲）を正確に（ＥＬＩＳＡ結果と比較して相関係数Ｒ２＞０．８）１５分以内で測定することができ、許容可能なイントラ−及びインターアッセイ精度（２０％未満のＣＶ）を有するポイントオブケアＩＡＩＰ迅速試験に転換することに成功した。本発明者らは、血液ＩＡＩＰレベルが、高い感度（１００％）及び高い特異性（８８％）で、ＮＳのみでなくＮＥＣの有用な予測的マーカーであることを確認した。ＩＡＩＰ試験は、ＮＥＣの検出においてＣＲＰ試験よりも特異的であり、ＩＡＩＰレベルはＳＩＰ患者からＮＥＣを区別するのにも有用である。
【０２１５】
競合アッセイをＬＦＩＡフォーマットに適合させることに成功したため、本発明者らは、本明細書に記載される「サンドイッチ型」ＩＡＩＰ  ＥＬＩＳＡ（例えば、図３Ａに示すような）もＬＦＩＡフォーマットに適合させることができると予想する。ＩＡＩＰの迅速定量化は、炎症性疾病若しくは状態又は感染症（例えば、敗血症、ＮＥＣ、細菌感染症、又は他の疾病若しくは状態）を有し又は発症する危険性を有する対象（例えば、乳児、小児、青少年、又は成人等のヒト対象）の早期特定、及び最適治療法の適時開始をもたらし得る。
【０２１６】
実施例１１：ヒアルロン酸−ＩＡＩＰ固体結合アッセイ
ヒアルロン酸、ナトリウム塩（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）をｄＨ２Ｏに溶解し（ストック濃度１ｍｇ／ｍＬ）、更にｐＨ９．０で２０ｍＭ  ＮａＨＣＯ３／Ｎａ２ＣＯ３緩衝液中に希釈した。ウェル当たり５０、１００及び２００ｎｇヒアルロン酸を９６ウェルマイクロプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ  ＢｉｏＯｎｅ、Ｍｉｃｒｏｌｏｎ  ６００）上に３７℃で１２０分間固定化した。ｐＨ７．３のＴＢＳ−Ｔ（２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ緩衝生理食塩水溶液＋０．０５％  Ｔｗｅｅｎ−２０（ｖ／ｖ））中の５％無脂肪粉乳で３７℃で６０分間ブロッキングした後、ＴＢＳ−Ｔで３回洗浄し、ＩＡＩＰ（ＴＢＳ中のヒト血漿及び高純度ＩＡＩＰ）を含む段階希釈溶液をマイクロプレートに加え、３７℃で６０分間インキュベートした。地元の血液バンクから得た新鮮な凍結血漿の寒冷沈降によりヒト血漿を調製した。寒冷上清をこの実験に使用し、２５０μｇ／ｍＬのＩＡＩＰ濃度を有した。精製ＩＡＩＰは、開始濃度１ｍｇ／ｍＬであった。次いで、マイクロプレートをＴＢＳ−Ｔで３回洗浄し、ＴＢＳ中の１：１０００希釈のビオチン−コンジュゲート化ＭＡｂ  ６９．２６（ヒトＩＡＩＰに対するモノクローナル抗体）を加え、３７℃で３０分間インキュベートした。
【０２１７】
ＴＢＳ−Ｔで３回の追加の洗浄後、ＴＢＳ中で１：５０００に希釈したセイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）−コンジュゲート化ストレプトアビジン（Ｉｎｏｖａ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を加え、３７℃で３０分間インキュベートした。ＴＢＳ−Ｔで３回洗浄した後、５０μＬ  Ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ｋ−Ｂｌｕｅ  ＴＭＢ基質（Ｎｅｏｇｅｎ）を各ウェルに加え、５０μＬ  １Ｍ塩酸（ＨＣｌ）を加えることにより反応を停止した。分光光度計（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  Ｐｌｕｓマイクロプレートリーダー）を使用して６５０ｎｍ波長で色変化を読み取り、ヒト血漿又は精製ＩＡＩＰに関する標準曲線を、５０、１００及び２００ｎｇ／ウェル固定化ヒアルロン酸でプロットした（図２１Ａ、２１Ｂ）。これらのデータは、ヒアルロン酸を使用してＩＡＩＰ複合体分子を捕捉し、ＩＡＩＰの軽鎖に特異的なモノクローナル抗体（例えば、ＭＡｂ  ６９．２６）を使用して捕捉ＩＡＩＰを検出することにより、ＩＡＩＰが生物学的混合物中で定量的に測定されることを示す。図２１Ａ、２１Ｂに示すように、標準曲線は、既知のＩＡＩＰの量を有する精製ＩＡＩＰ又はヒト血漿を使用して最適化及び確立することができる。その結果、このアッセイを用いて、生物学的対象由来のサンプル中の未知のＩＡＩＰの量を定量化することができる。実施例１及び２で用いた手法と同様に、ＩＡＩＰ特異的モノクローナル抗体を使用してＩＡＩＰを捕捉し、ビオチン−標識ヒアルロン酸を結合ＩＡＩＰを検出するリガンドとして使用する、この方法に対する代替的アプローチを使用することができる。
【０２１８】
他の実施形態
上記明細書に記載されている全ての刊行物、特許及び特許出願は、それぞれの個々の刊行物、特許又は特許出願が、その全体が参照により組み込まれるように具体的かつ個別に示されているのと同じ程度に、参照により本明細書に組み込まれる。米国仮特許出願第６２／４９０，００３号及び同第６２／６１４，３３３号は、その全体が本明細書に具体的に組み込まれる。本発明の記載された方法、医薬組成物及びキットの種々の改変及び変形は、請求項に係る発明の範囲及び趣旨から逸脱することなく、当業者に明らかであろう。本開示は特定の実施形態に関連して説明されてきたが、本開示はさらなる修正が可能であり、特許請求の範囲に記載された本発明はそのような特定の実施形態に不当に限定されるべきではないことが理解されるであろう。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５Ａ−１５Ｂ】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０Ａ】
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【図２０Ｂ】
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【図２０Ｃ】
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【図２１Ａ】
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【図２１Ｂ】
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【国際調査報告】
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