(57)【要約】いくつかの態様では、対象に標識を有するチミジンキナーゼ基質を投与する方法及びポリオーマウイルス（例えば、ＪＣＶ及びＢＫ）の存在の指標として、標識の有無を検出する方法が提供される。ポリオーマウイルスを検出する方法が本明細書において提供され、この方法は、例えば、ＪＣＶの早期検出及び進行性多巣性白質脳症（ＰＭＬ）の予防に有用である。ＤＮＡ複製を実施するウイルスタンパク質をコードする代わりに、ＪＣＶは感染細胞を細胞周期のＳ（合成）期に進行させる初期遺伝子（ｌａｒｇｅＴ抗原、ｓｍａｌｌＴ抗原及びＴ’抗原）をコードする。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象の少なくとも１個の組織中にポリオーマウイルスを検出する方法であって、
前記対象に標識を有するチミジンキナーゼ基質を投与すること及び
前記対象の少なくとも１個の組織において前記標識の有無を検出することを含み、
基準レベルを超える前記標識の存在により、前記対象の前記少なくとも１個の組織におけるポリオーマウイルスの存在が示される、前記方法。
【請求項２】
前記ポリオーマウイルスがＪｏｈｎ  Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍウイルス（ＪＣＶ）を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ポリオーマウイルスがＢＫウイルスを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
標識を有する前記チミジンキナーゼ基質が放射標識を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
標識を有する前記チミジンキナーゼ基質がチミジン類似体を含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
標識を有する前記チミジンキナーゼ基質が３’−デオキシ−３’−［１８Ｆ］−フルオロチミジン（ＦＬＴ）を含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記標識が、前記対象のポジトロン断層法（ＰＥＴ）走査を実施することによって検出される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記ＰＥＴ走査が、前記対象の低増殖性組織に対して実施される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
対象においてポリオーマウイルスの有無を検出するために、少なくとも１つの追加アッセイを実施することを更に含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記少なくとも１つの追加アッセイが、前記対象から得られる尿試料、脳脊髄液試料または血液試料においてポリオーマウイルスＤＮＡまたはポリオーマウイルスタンパク質の有無を検出することを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記少なくとも１つの追加アッセイが、前記対象から得られる尿試料をリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応に付し、ポリオーマウイルスＤＮＡを検出することを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
前記少なくとも１つの追加アッセイが、前記対象から得られる血清試料において、ポリオーマウイルスに特異的に結合する抗体の有無を検出することを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
前記少なくとも１つの追加アッセイが、前記対象から得られる組織試料をポリオーマウイルスに特異的に結合する抗体で染色することを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１４】
前記ポリオーマウイルスがＪＣＶである、請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記ポリオーマウイルスがＢＫＶである、請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記少なくとも１つの追加アッセイが、前記対象から得られる血清試料において、ＪＣＶ抗体価を測定することを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＪＣＶ抗体価が所定の索引レベルを超える、索引レベルである、索引レベル未満であるかを判定することを更に含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＪＣＶ抗体価が所定の索引レベル、例えば、１．５を超える場合、前記対象がＰＭＬを発症するリスクがより高いと判定することまたは前記ＪＣＶ抗体価が所定のレベル、例えば、０．９以下である場合、前記対象がＰＭＬを発症するリスクがより低いと判定することを更に含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記対象がポリオーマウイルスにさらされていたことが既知である、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記対象がＰＭＬを発症する少なくとも１つのリスク因子を有する、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記少なくとも１つのリスク因子が弱まった免疫系及び遺伝的要因から選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記対象が後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、癌または自己免疫疾患を有する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記自己免疫疾患が多発性硬化症、クローン病、リウマチ様関節炎、乾癬及びループスから選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記対象が免疫不全である、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
前記対象が多発性硬化症を有する、請求項１７または２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記対象がクローン病を有する、請求項１７または２４に記載の方法。
【請求項２７】
前記対象がナタリズマブ治療を受けている、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
対象においてＪｏｈｎ  Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍウイルス（ＪＣＶ）を検出する方法であって、
（ａ）少なくとも１つのアッセイを実施し、対象においてＪＣＶの有無を検出すること、ならびに
（ｂ）前記対象に放射標識を有するチミジン類似体を投与すること及び前記対象に対してポジトロン断層法（ＰＥＴ）走査を実施し、前記対象おいて放射標識を検出することを含む、前記方法。
【請求項２９】
放射標識を有する前記チミジン類似体が３’−デオキシ−３’−［１８Ｆ］−フルオロチミジン（ＦＬＴ）である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
（ａ）で実施される少なくとも１つのアッセイが、前記対象から得られる尿試料をリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応に付し、ＪＣＶ  ＤＮＡを検出すること及び／または前記対象から得られる脳脊髄液試料または血液試料を、ＪＣＶタンパク質を検出するために抗ＪＣＶ抗体を使用するアッセイに付すことである、請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
（ａ）対象に第１容量の放射標識を有するチミジン類似体を投与すること及び前記対象に対してポジトロン断層法（ＰＥＴ）走査を実施し、前記対象おいて前記放射標識のレベル及び／または位置を検出すること、
（ｂ）前記対象に治療薬を投与すること、ならびに
（ｃ）前記対象に第２容量の放射標識を有する前記チミジン類似体を投与すること及び前記対象に対してＰＥＴ走査を実施し、前記対象において前記放射標識のレベル及び／または位置を検出すること
を含む、方法。
【請求項３２】
放射標識を有する前記チミジン類似体が３’−デオキシ−３’−［１８Ｆ］−フルオロチミジン（ＦＬＴ）である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記治療薬がフシジン酸である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
（ａ）で検出される放射標識のレベル及び／または位置を（ｃ）で検出される放射標識の各レベル及び／または位置と比較することを更に含む、請求項３１〜３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
前記対象から得られる尿試料をリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応に付し、ＪＣＶ  ＤＮＡを検出すること及び／または前記対象から得られる脳脊髄液試料または血液試料を、ＪＣＶタンパク質を検出するために抗ＪＣＶ抗体を使用するアッセイに付すことを更に含む、請求項３１〜３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３６】
前記対象がポリオーマウイルスにさらされていたことが既知である、請求項２８〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１７年４月２６日に出願された米国仮特許出願第６２／４９０，３６１号の米国特許法第１１９条（ｅ）の下で利益を主張し、参照によりその全体が本明細書に援用される。
【背景技術】
【０００２】
ポリオーマウイルスは小さい、エンベロープを持たないＤＮＡウイルスであり、このウイルスは集団の大分部を感染させる。ほぼ例外なく、免疫不全患者はこれらのウイルスに関連する疾患を発症する。ヒトポリオーマウイルスＢＫウイルス（ＢＫＶ）及びＪｏｈｎ  Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍウイルス（ＪＣＶ）はそれぞれ骨髄移植の被移植者に出血性膀胱炎及び免疫不全患者に進行性多巣性白質脳症（ＰＭＬ）を引き起こすことが知られている。特に、ＪＣＶは脳血液関門を越えて中枢神経系（ＣＮＳ）に侵入することができ、ＣＮＳでは乏突起膠細胞及び星状膠細胞を感染させ、複数の領域の脱髄を引き起こす。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
対象がポリオーマウイルスを有するか否かを判定する常法は、対象の尿試料、脳脊髄液試料または血液試料中にウイルスＤＮＡまたはタンパク質を検出することを含む。これらのポリオーマウイルスを検出する従来の方法は、対象においてウイルスの有無を確認するのに有用であるが、これらの方法は解剖学的に異なるウイルスリザーバーを確認するのに特に有用である。このウイルスリザーバーを使用して、特定のポリオーマウイルスに関連する疾患を発症する対象のリスク度を評価することができる。
【０００４】
本明細書において提供される実験データでは、ｍＲＮＡのレベル及びタンパク質のレベルでチミジンキナーゼ１（ＴＫ１）発現が、ＪＣＶに感染したヒト細胞及び脳組織において増加することが示される。
【０００５】
したがって、本明細書におけるいくつかの実施形態では、対象の少なくとも１個の組織中に予想より高いレベルのチミジンキナーゼ（例えば、ＴＫ１）を検出することにより、対象におけるポリオーマウイルス（例えば、ＪＣＶまたはＢＫＶ）の存在を検出する方法が提供される。
【０００６】
いくつかの実施形態では、対象の少なくとも１個の組織中にポリオーマウイルス（例えば、ＪＣＶ）を検出する方法は、対象に標識を有するチミジンキナーゼ基質を投与すること及び対象の少なくとも１個の組織中に標識の有無を検出することを含む。この方法では、基準レベルを超える標識の存在により、対象の少なくとも１個の組織におけるポリオーマウイルスの存在が示される。
【０００７】
いくつかの実施形態では、対象においてポリオーマウイルス（例えば、ＪＣＶ）を検出する方法は、少なくとも１つのアッセイを実施し、対象におけるポリオーマウイルス（例えば、ＪＣＶ）の有無を検出すること、ならびに対象に放射標識（例えば、３’−デオキシ−３’−［１８Ｆ］−フルオロチミジン（ＦＬＴ））を有するチミジン類似体を投与すること及び対象に対してポジトロン断層法（ＰＥＴ）走査を実施し、対象において放射標識を検出することを含む。いくつかの実施形態では、対象において放射標識のレベル及び／または位置が決定される。例えば、対象の１個以上の異なる組織における放射標識の存在及び／または量が決定される。
【０００８】
いくつかの実施形態では、当該方法は、対象に第１用量の放射標識を有するチミジン類似体を投与すること及び対象に対してＰＥＴ走査を実施し、対象における放射標識のレベル及び／または位置を検出すること、対象に治療薬（例えば、フシジン酸）を投与すること、ならびに対象に第２用量の放射標識を有するチミジン類似体を投与すること及び対象に対してＰＥＴ走査を実施し、対象において放射標識のレベル及び／または位置を検出することを含む。
【０００９】
対象、例えば、ＪＣＶまたはＢＫＶなどのポリオーマウイルスにさらされたことが既知である対象のリスクの階層化方法も本明細書において提供される。いくつかの実施形態では、これらの方法は、対象（例えば、ＪＣＶもしくはＢＫＶにさらされたこと及び／またはＪＣＶもしくはＢＫＶを有する疑いがあることが既知である対象）に標識を有するチミジンキナーゼ基質を投与すること及び対象の少なくとも１つのリスクが高い組織において標識の有無を検出することを含む。この方法では、対象の少なくとも１つのリスクが高い組織における基準レベルを超える標識の存在により、対象のリスクが高い組織におけるポリオーマウイルスの存在が示され、対象が進行性多巣性白質脳症（ＰＭＬ）を発症するリスクが高いことが示される。「リスクが高い」組織の非限定的な例としては、腎臓、肝臓、骨髄及び脳が挙げられる。上記のリスクの階層化方法により、対象がＰＭＬを発症するリスクが高いことが示される場合、更なる実施形態ではＰＭＬに関連する薬剤を使用する治療を控えることを含むＰＭＬのリスクを低下させる方法が提供される。
【００１０】
本発明の１以上の実施形態の詳細を以下の説明に示す。本発明の他の特徴または利点は、いくつかの実施形態の下記の図面及び詳細な説明、ならびに添付の特許請求の範囲から明らかとなる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】非感染ヒト細胞及びＪＣＶ感染ヒト細胞におけるマップされたリード１００万本当たりの転写物キロベース当たりのリード（ＲＰＫＭ）として報告されるＴＫ１ｍＲＮＡの相対存在値のグラフを示す。ＴＫ１ｍＲＮＡの相対存在値は、ヒト腎臓細胞（ＨｕＫ（ｉ）Ｇ１０）及びヒト初代星状膠細胞（ｈｕＡｓｔｒｏｃｙｔｅ）においてＪＣＶ感染とともに増加した。アーキタイプＪＣＶウイルスまたはプロトタイプＰＭＬウイルスの感染後８日目に、ＨｕＫ（ｉ）Ｇ１０及びｈｕＡｓｔｒｏｃｙｔｅ細胞のＲＮＡシーケンシングを実施した。
【図２】非感染ＨｕＫ（ｉ）Ｇ１０細胞及びＪＣＶ感染ＨｕＫ（ｉ）Ｇ１０細胞中に蛍光抗体法により検出されるＴＫ１タンパク質の画像を示す。アーキタイプＪＣＶでの感染後７日目に、非感染及びＪＣＶ感染ＨｕＫ（ｉ）Ｇ１０細胞のＴＫ１の蛍光抗体法染色が実施された。ＪＣＶ感染ＨｕＫ（ｉ）Ｇ１０細胞においては、非感染ＨｕＫ（ｉ）Ｇ１０細胞に比べ、ＴＫ１タンパク質のレベルの増加が検出された。
【図３】Ｔ抗原について共染色感染したヒト脳細胞切片中に免疫組織化学染色により検出されるＴＫ１タンパク質の画像を示す。図３Ａでは、コントロールヒト脳におけるＴＫ１タンパク質のレベルよりも高いレベルのＴＫ１タンパク質がヒト脳ＰＭＬ病変中に検出されたことを示す。図３Ｂでは、ＴＫ１タンパク質のレベルの増加及び低レベルのＪＣＶウイルス粒子（ＶＰ１）がヒト脳ＰＭＬ病変中に検出されたことを示す。このことから、ＴＫ１はＪＣＶ  Ｔ抗原を発現する細胞中に誘導され、ＶＰ１発現細胞のいては低いことが分かる。Ｔ抗原はＳ期への進行を仲介する。
【図４】非感染星状膠細胞及びＪＣＶ感染星状膠細胞における３Ｈ−ＦＬＴの取り込みのグラフを示す。ＪＣＶ感染星状膠細胞における３Ｈ−ＦＬＴの取り込みは、非感染星状膠細胞に比べ、高かった。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
ポリオーマウイルスを検出する方法が本明細書において提供され、この方法は、例えば、ＪＣＶの早期検出及び進行性多巣性白質脳症（ＰＭＬ）の予防に有用である。
【００１３】
ＤＮＡ複製を実施するウイルスタンパク質をコードする代わりに、ＪＣＶは感染細胞を細胞周期のＳ（合成）期に進行させる初期遺伝子（ｌａｒｇｅＴ抗原、ｓｍａｌｌＴ抗原及びＴ’抗原）をコードする。その後、ポリオーマウイルスは、ＪＣＶ  ｌａｒｇｅＴ抗原と協力して宿主の細胞ＤＮＡポリメラーゼ複合体によって複製される。このＪＣＶ  ｌａｒｇｅＴ抗原はＤＮＡ結合及びＤＮＡヘリカーゼ活性を有する。
【００１４】
ポリオーマウイルス感染細胞において、ＤＮＡ合成に用いられる細胞膜を越えて輸送されるチミジンをリン酸化するＴＫ１のレベルが上昇すると、効率的なポリオーマウイルス複製が可能になる。静止状態の細胞をＳ期に進行させることにより、ウイルス及び細胞のＤＮＡ複製を誘導する能力は、ポリオーマウイルス、パピローマウイルス及びアデノウイルスによって利用される一般的な機構であってもよい。ウイルスリザーバーは、ウイルス（例えば、ポリオーマウイルス）がよく蓄積し、持続する解剖学的部位（例えば、組織）である。例えば、ＪＣＶは腎臓、肝臓、骨髄及び脳によく蓄積する。例えば、脳など、特定の「リスクがある」領域におけるＪＣＶリザーバーの早期検出は、免疫不全患者におけるＰＭＬの発症または進行のリスクを予防及び／または示すことに役立てることができる。しかし、本開示の前に、ポリオーマウイルスリザーバーの検出は実施されなかった。
【００１５】
本明細書において提供されるようなポリオーマウイルスリザーバーを検出することは、ポリオーマウイルスに感染した細胞のＴＫ１のレベルの上昇に部分的に依存する。いくつかの実施形態では、対象の少なくとも１個の組織中にポリオーマウイルス（例えば、ＪＣＶ及びＢＫＶ）を検出する方法は、対象に標識を有するチミジンキナーゼ基質を投与すること及び対象の少なくとも１個の組織において標識の有無を検出することを含む。この方法では、ベースラインレベルを超える標識の存在により、対象の少なくとも１個の組織におけるポリオーマウイルスの存在が示される。
【００１６】
「ポリオーマウイルスの存在が示される」という用語は、ポリオーマウイルスが組織中に存在するという直接的な証拠を必ずしも意味するわけではないことを理解すべきである。本開示の方法は、チミジンキナーゼ基質に結合する標識の検出した細胞内のレベルに依存する。標識されたチミジンキナーゼ基質（例えば、ＦＬＴ）は、チミジンキナーゼ（例えば、チミジンキナーゼ−１、ＴＫ−１）によってリン酸化される。本明細書において記述されるようなＪＣＶ感染細胞は、多くの非感染細胞に対してより高いＴＫ−１活性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載された方法に従って有用になる標識されたチミジンキナーゼ基質は、チミジンキナーゼによるリン酸化の下で細胞内において選択的に保持される基質である。いくつかの実施形態では、リン酸化されたチミジンキナーゼ基質は、核酸または他の細胞内分子に組み込まれないが、リン酸化されていない基質に対する細胞膜透過性を低減し、その結果、高いレベルのチミジンキナーゼ活性を有する細胞において保持力を増加させる。例えば、いくつかの実施形態では、標識されたチミジンキナーゼ基質のリン酸化形態（例えば、ＦＬＴ一リン酸エステル）はＤＮＡに組み込まれず、細胞膜を通らないため、細胞内に代謝的に捕捉される。いくつかの実施形態では、一リン酸化されたチミジンキナーゼ基質を更にリン酸化し、細胞（例えば、核酸または他の細胞内分子に組み込まれない）に保持される二リン酸化、三リン酸化または他のリン酸化された生成物を形成することができる。しかし、いくつかの実施形態では、リン酸化された生成物（例えば、一リン酸化、二リン酸化、三リン酸化またはポリリン酸化された基質）はまた（または代替的に）、細胞内分子（例えば、核酸）に組み込むことができる。標識されたチミジンキナーゼ基質（例えば、ＦＬＴ一リン酸エステル）の取り込み及び蓄積を、高いＴＫ−１活性の指数として使うことができる。この指数は、ＪＣＶの存在の指数として使うことができる。したがって、基準レベル（例えば、１個以上の組織において）を超える（チミジンキナーゼ基質に結合する）標識の存在により、ＪＣＶの（潜在的な）存在が「示される」が、ＪＣＶが存在することは直接的に確証されない。いくつかの実施形態では、対象におけるＪＣＶの存在を直接的に確証するために、１以上の更なる研究が行われ得る。
【００１７】
「チミジンキナーゼ基質」とは、チミジンキナーゼによってリン酸化され、リン酸化されたチミジンキナーゼ基質を生成する分子を指す。いくつかの実施形態では、リン酸化されたチミジンキナーゼ基質は更にリン酸化され、二リン酸化されたチミジンキナーゼ及び三リン酸化されたチミジンキナーゼを生成する。
【００１８】
「標識を有するチミジンキナーゼ基質」（標識されたチミジンキナーゼ基質）は、検出可能な標識（視覚化されるまたは他の方法で、撮像されるもしくは同定することができる標識）を含む（例えば、共有結合される）チミジンキナーゼ基質を指す。いくつかの実施形態では、標識は放射標識である。いくつかの実施形態では、放射標識は１８Ｆなどの陽電子放出体または９９ｍＴｃなどの単一光子放出剤である。他のＰＥＴ／ＳＰＥＣＴ剤は、１１Ｃ、１８Ｆ、６１Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、７５Ｂｒ、７６Ｂｒ、９４ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、２０１ＴＩを含む（Ａｂｏａｇｙｅ、Ｅ．ｅｔ  ａｌ．ＷＯ２０１０／０２３４５７．Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ  Ａｎａｌｏｇｕｅｓ  Ｕｓｅｆｕｌ  ａｓ  Ｐｏｓｉｔｒｏｎ  Ｅｍｉｓｓｉｏｎ  Ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ（ＰＥＴ）  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ａｇｅｎｔｓ）。
【００１９】
いくつかの実施形態では、標識されたチミジンキナーゼ基質は標識されたチミジンである。いくつかの実施形態では、標識されたチミジンキナーゼ基質は標識されたチミジン類似体である。いくつかの実施形態では、標識されたチミジン類似体は修飾されたリボース、例えば、３’−デオキシ−３’−［１８Ｆ］−フルオロチミジン（ＦＬＴ）を含む。いくつかの実施形態では、標識されたチミジン類似体は修飾されたチミン、例えば、Ｎ３−［１８Ｆ］フルオロエチルチミジン（ＦＥＴ）を含む。いくつかの実施形態では、標識されたチミジン類似体は修飾されたリボース及び修飾されたチミンを含む。修飾されたリボース及び修飾されたチミンを含む標識されたチミジン類似体の例としては、２’−デオキシ’−１８Ｆ−フルオロ−５−メチル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシルウラシル（ＦＭＡＵ）及び２’−デオキシ−２’−１８Ｆ−フルオロ−５−ヨード−１−β−Ｄ−アラビノフラノシルウラシル（ＦＩＡＵ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２０】
本明細書に記載されるような標識されたチミジンキナーゼ基質は、ＴＫ１によってリン酸化されたチミジンキナーゼ基質を包含する。例えば、ＦＬＴは細胞に輸送され、ＴＫ１によってリン酸化され、ＦＬＴ一リン酸エステル（ＦＬＴ−ＭＰ）になる。上述したように、ＦＬＴ一リン酸エステルは細胞膜を通らないため、細胞内に代謝的に捕捉される。いくつかの実施形態では、標識されたチミジンキナーゼ基質は標識された生成物（チミジンキナーゼの基質への作用から得られる）に組み込まれる。いくつかの実施形態では、標識された生成物は一リン酸化、二リン酸化、三リン酸化もしくは他のポリリン酸化されたチミジンキナーゼ基質、またはリン酸化されたチミジンキナーゼ基質が組み込まれる他の分子となり得る。ＦＬＴリン酸エステルは放射標識され、細胞膜を通らず、ｉｎ  ｖｉｖｏでチミジンホスホリラーゼによる異化に耐性がある。
【００２１】
「投与する」は、本明細書に記載されるような標識を有するチミジンキナーゼ基質またはその組成物を埋め込む、吸収する、摂取する、注入する、吸入するまたは別の方法で対象に導入することを指す。標識されたチミジンキナーゼ基質は、標識されたチミジンキナーゼ基質を含む医薬組成物の形態で、任意には塩の形態で、薬学的に許容される剤形で、経口的にまたは非経口経路で投与され得る。投与経路に応じて、該組成物は様々な用量で投与され得る。いくつかの実施形態では、標識されたチミジンキナーゼ基質は錠剤、カプセル、卵形剤、エリキシル剤、溶液または懸濁剤の形態で経口投与され得る。いくつかの実施形態では、標識されたチミジンキナーゼ基質は非経口的に、例えば、静脈内に、動脈内に、腹膜内に、クモ膜下腔内に、脳室内に、胸骨内に、頭蓋内に、筋注にまたは皮下に投与され得る。
【００２２】
「対象」は、本明細書に提供される方法を使用してポリオーマウイルスの有無について評価される哺乳類を指す。対象はヒトでもよいが、他の哺乳類、例えば、ヒト疾患用の研究室モデルとして有用な哺乳類（例えば、マウス、ラット、ウサギまたはイヌ）も含んでもよい。いくつかの実施形態では、対象はＪＣＶにさらされたまたはＪＣＶにさらされたことが既知である（例えば、ＪＣＶを有する誰かと関係があるまたは接触していた）。いくつかの実施形態では、ＪＣＶへの暴露は体液（例えば、血清）における抗ＪＣＶ抗体の検出また体液（例えば、尿）におけるＪＣＶ  ＤＮＡの検出によって示される。いくつかの実施形態では、対象は弱まった免疫系を有するかまたは他の状態で、免疫不全である。いくつかの実施形態では、対象は多発性硬化症またはクローン病などの自己免疫疾患を有する。いくつかの実施形態では、対象は多発性硬化症またはクローン病などの自己免疫疾患の治療を受けている。例えば、対象はインターフェロンβ−１ｂ（ＢＥＴＡＳＥＲＯＮ（登録商標）、ＥＸＴＡＶＩＡ（登録商標））、インターフェロンβ−１ａ（ＡＶＯＮＥＸ（登録商標））、インターフェロンβ−１ａ（ＲＥＢＩＦ（登録商標））、グラチラマー酢酸塩（ＣＯＰＡＸＯＮＥ（登録商標））、ナタリズマブ（ＴＹＳＡＢＲＩ（登録商標））、フマル酸ジメチル（ＴＥＣＩＤＥＲＡ（登録商標））、ミトキサントロン（ＮＯＶＡＮＴＲＯＮＥ（登録商標））、フィンゴリモド（ＧＩＬＥＮＹＡ（登録商標））、テリフルノミド（ＡＵＢＡＧＩＯ（登録商標））、リツキシマブ（ＭＡＢＴＨＥＲＡ（登録商標））、アレムツズマブ（ＭＡＢＣＡＭＰＡＴＨ（登録商標））、ダクリズマブβ（ＺＩＮＢＲＹＴＡ（登録商標））及び／またはオクレリズマブ（ＯＣＲＥＶＵＳ（登録商標））を使用する治療を受けていてもよい。いくつかの実施形態では、対象は２０歳〜５０歳である。いくつかの実施形態では、対象は２０歳〜５０歳で、多発性硬化症またはクローン病などの自己免疫疾患を有する。他の実施形態では、対象は少なくとも５０歳で、ナタリズマブ、リツキシマブまたはアレムツズマブを使用する治療（または他の免疫調節性治療）を受けている。例えば、ＪＣＶ（及び例えば、ＰＭＬを発症するリスク）について検査されている対象は６０歳〜９０歳で、ナタリズマブ、リツキシマブまたはアレムツズマブを使用する治療（または他の免疫調節性治療）を受けていてもよい。
【００２３】
放射標識を含む標識を検出する方法は知られており、これらの方法のいずれかを本開示に従い使用してもよい。「検出する」は、標識の存在（あること）または不在（無いこと）を確認するプロセスを指す。いくつかの実施形態では、放射標識のイメージングによって放射標識を検出することは、ポジトロン断層法（ＰＥＴ）イメージングを含む（Ｂａｉｌｅｙ、Ｄ．Ｌ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）．Ｐｏｓｉｔｒｏｎ  Ｅｍｉｓｓｉｏｎ  Ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ：Ｂａｓｉｃ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ．Ｓｅｃａｕｃｕｓ，ＮＪ：Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ）。
【００２４】
いくつかの実施形態では、放射標識を検出することは単一光子放射断層撮影（ＳＰＥＣＴ）イメージングを含む。ＳＰＥＣＴイメージングは、ＰＥＴイメージングより安価であるが、より低い空間分解能画像を提供する。チミジンキナーゼ基質の標識に適切なＰＥＴ／ＳＰＥＣＴ同位元素の例としては、１１Ｃ、１８Ｆ、６１Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、７５Ｂｒ、７６Ｂｒ、９４ｍＴｃ、９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、２０１ＴＩを含む（Ａｂｏａｇｙｅ、Ｅ．ｅｔ  ａｌ．ＷＯ２０１０／０２３４５７．Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ  Ａｎａｌｏｇｕｅｓ  Ｕｓｅｆｕｌ  ａｓ  Ｐｏｓｉｔｒｏｎ  Ｅｍｉｓｓｉｏｎ  Ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ（ＰＥＴ）  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ａｇｅｎｔｓ）。
【００２５】
本開示の方法は、対象の少なくとも１個の組織中に標識を検出するために用いることができる。「組織」は、器官または非器官を含む局所的及び播種性細胞集団を指す。いくつかの実施形態では、組織は組織断片または組織の部分であってもよい。組織の例としては、脳、心臓、肺、肝臓、腎臓、血管、結合組織、骨髄、筋肉、腺、リンパ節、胃、脊髄、脳脊髄液（ＣＳＦ）、血液（血漿及び／または血清）、血球及び尿が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２６】
ＴＫ１はチミジンをリン酸化し、それに応じて、ＤＮＡ合成時、上方制御されるため、広く用いられる細胞増殖の指標であった。「高増殖性組織」は、細胞成長及び細胞分裂が可能な細胞を高い割合で有する細胞集団を指す。高増殖性組織の例としては、消化管、胸腺、骨髄、肝臓、血管、上皮細胞及び皮膚線維芽細胞が挙げられるが、これらに限定されない。「低増殖性組織」は、細胞成長及び細胞分裂が可能な細胞を低い割合で有する細胞集団を指す。低増殖性組織の例としては、心臓、脳、骨及び筋肉が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２７】
本明細書において提供される実験データは、ＴＫ１がＪＣＶ感染細胞において上方制御されることを示す。「リザーバー」は、ウイルス（例えば、ポリオーマウイルス）がよく蓄積し、持続する解剖学的部位（例えば、組織）を指す。ＪＣＶリザーバーが持続し得る臨床的に関連性のある細胞組織は、腎臓、肝臓、骨髄及び／または脳を含むが、これらに限定されない。
【００２８】
ポリオーマウイルス（例えば、ＪＣＶ）の存在を示す標識の検出可能なレベルは、背景（低レベル）信号の検出を説明し、且つ高増殖性組織の検出を説明するために、基準レベルと比較する必要がある。これにより、ポリオーマウイルスの存在に依存しない高レベルの標識が蓄積されるだろう。標識の基準レベルは、高増殖性組織（例えば、骨髄）の患者内のポジティブコントロール及び／または低増殖性組織（例えば、筋肉）の患者内のネガティブコントロールにおいて標識のレベルを測定することによって得ることができる。基準レベルは、ポリオーマウイルスを持たないことが既知である患者の組織からも得ることもできる。例えば、ＰＥＴ走査に用いられる基準レベルは、当該技術分野において既知であり、本開示に従って使用され得る。
【００２９】
いくつかの実施形態では、低増殖性組織における標識の検出可能なレベル（基準レベルを超える）により、ポリオーマウイルス（例えば、ＪＣＶ）の存在が示される。
【００３０】
いくつかの実施形態では、標識の検出可能なレベルは基準レベル（例えば、対象における低増殖性組織の標識のレベル）を超える少なくとも１０％である。いくつかの実施形態では、標識の検出可能なレベルは基準レベルを超える少なくとも１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または１００％である。いくつかの実施形態では、標識の検出可能なレベルは基準レベルを超える１０〜１００％、１０〜９０％、１０〜８０％、１０〜７０％、１０〜６０％、１０〜５０％、１０〜４０％、１０〜３０％、１０〜２０％、２５〜１００％、２５〜９０％、２５〜８０％、２５〜７０％、２５〜６０％、２５〜５０％、２５〜４０％、２５〜３０％、５０〜１００％、５０〜９０％、５０〜８０％、５０〜７０％または５０〜６０％である。
【００３１】
いくつかの実施形態では、脳などの臨床的に関連性のある部位においてＪＣＶ検出を使用して、進行性多巣性白質脳症（ＰＭＬ）などのＪＣＶ関連の疾患についての対象のリスク度を推定する。この疾患は、脳において乏突起膠細胞のＪＣＶ感染によって生じる消耗性及びしばしば致命的な脱髄疾患である。
【００３２】
通常、低増殖の部位（例えば、脳）である対象の臨床的に関連性のある部位においてポリオーマウイルスリザーバーを検出することにより、血液または尿中の比較的低いウイルスレベルを示す対象において治療を開始する証拠が得られ得る。例えば、対象の尿中に比較的低いレベルのＪＣＶが検出されると、対象がＰＭＬを発症するリスクがないことが示唆され得る。それにもかかわらず、本明細書において提供されるような方法を使用して、対象の脳において蓄積されるＪＣＶの存在、ＪＣＶに影響を受けた臨床的に関連性のある細胞画分を検出することができる。脳におけるＪＣＶリザーバーの存在により、対象がＰＭＬを発症するリスクがあることが示唆され、徴候がある前にＰＭＬ治療を受ける（またはＪＣＶを有する患者をＰＭＬのリスクがあるとみなす治療を中断／変更する）ことから利益を得ることができる。
【００３３】
対象の少なくとも１個の組織中にポリオーマウイルスを検出することは、対象の１個または複数個の組織中にポリオーマウイルスを検出することを含み得る。例えば、ポリオーマウイルスは対象の少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個または少なくとも１０個の組織中に検出され得る。いくつかの実施形態では、ポリオーマウイルスは対象の１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個または１０個の組織中に検出され得る。いくつかの実施形態では、ポリオーマウイルスは０〜２個の組織、０〜４個の組織、０〜６個の組織、０〜８個の組織または０〜１０個の組織中に検出され得る。いくつかの実施形態では、ポリオーマウイルスは２〜１０個の組織、４〜１０個の組織、６〜１０個の組織または８〜１０個の組織中に検出され得る。
【００３４】
本明細書に記載される方法を使用して、対象においてポリオーマウイルスＢＫ（ＢＫＶ）、Ｊｏｈｎ  Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍポリオーマウイルス（ＪＣＶ）、Ｋａｒｏｌｉｎｓｋａ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅポリオーマウイルス（ＫＩＶ）、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙポリオーマウイルス（ＷＵＶ）、メルケル細胞癌関連ポリオーマウイルス（ＭＣＶ）、ヒトポリオーマウイルス−６（ＨＰｙＶ６）、ヒトポリオーマウイルス−７（ＨＰｙＶ７）、Ｔｒｉｃｈｏｄｙｓｐｌａｓｉａ  Ｓｐｉｎｕｌｏｓａ関連ポリオーマウイルス（ＴＳＶ）、ヒトポリオーマウイルス−９（ＨＰｙＶ９）及びＭＷポリオーマウイルス（ＭＷＰｙＶ）を含むが、これらに限定されないポリオーマウイルスを検出することができる。
【００３５】
いくつかの実施形態では、免疫不全である対象の少なくとも１個の組織中にポリオーマウイルスを検出する方法は、免疫不全である対象に標識を有するチミジンキナーゼ基質を投与すること及び免疫不全である対象の少なくとも１個の組織において標識の有無を検出することを含む。この方法では、基準レベルを超える標識の存在により、免疫不全である対象の少なくとも１個の組織におけるポリオーマウイルスの存在が示される。
【００３６】
いくつかの実施形態では、多発性硬化症を有する対象の少なくとも１個の組織中にポリオーマウイルスを検出する方法は、多発性硬化症を有する対象に標識を有するチミジンキナーゼ基質を投与すること及び多発性硬化症を有する対象の少なくとも１個の組織において標識の有無を検出することを含む。この方法では、基準レベルを超える標識の存在により、多発性硬化症を有する対象の少なくとも１個の組織におけるポリオーマウイルスの存在が示される。
【００３７】
いくつかの実施形態では、クローン病を有する対象の少なくとも１個の組織中にポリオーマウイルスを検出する方法は、クローン病を有する対象に標識を有するチミジンキナーゼ基質を投与すること及びクローン病を有する対象の少なくとも１個の組織において標識の有無を検出することを含む。この方法では、基準レベルを超える標識の存在により、クローン病を有する対象の少なくとも１個の組織におけるポリオーマウイルスの存在が示される。
【００３８】
いくつかの実施形態では、ナタリズマブ治療を受けている対象の少なくとも１個の組織中にポリオーマウイルスを検出する方法は、ナタリズマブ治療を受けている対象に標識を有するチミジンキナーゼ基質を投与すること及びナタリズマブ治療を受けている対象の少なくとも１個の組織において標識の有無を検出することを含む。この方法では、基準レベルを超える標識の存在により、ナタリズマブ治療を受けている対象の少なくとも１個の組織におけるポリオーマウイルスの存在が示される。
【００３９】
対象はポリオーマウイルスを有するか、ポリオーマウイルスのリスクがあるかまたはポリオーマウイルスを有する疑いがあり得る。ポリオーマウイルスを有する対象は、本明細書に記載される方法または日常的な健康診断（例えば、臨床検査、認識検査及び／または行動試験）によって確認することができる。ポリオーマウイルスのリスクがある対象は、免疫不全である対象、例えば、多発性硬化症、クローン病を有するかまたはナタリズマブ治療を受けている対象であり得る。ポリオーマウイルスを有する疑いがある対象はポリオーマウイルスの１以上の症状を示す可能性がある。ポリオーマウイルスのリスクがある対象はそのポリオーマウイルスのリスク因子の１つ以上を有する対象で有り得、例えば、ナタリズマブ治療を受けている対象はＪＣＶを有するリスクがある。場合よっては、ヒト対象が免疫不全に関連するポリオーマウイルス、例えば、ＢＫＶ及びＪＣＶを有するか、有する疑いがあるかまたはそのリスクがある。
【００４０】
対象はポリオーマウイルスを治療していたはずであるかまたは現在、治療している。例えば、対象はＪＣＶを治療していたはずであるかまたは現在、治療し、本明細書に記載される方法を受けていてもよい。ポリオーマウイルスを治療した対象は、本明細書に記載される方法を受ける前に（例えば、本明細書に記載される方法を受ける２週間前、１ヶ月前、１年前またはそれ以上前）治療し、本明細書に記載される方法が対象に適用されたときには、その治療中ではないかもしれない対象であり得る。ポリオーマウイルスを治療している対象は、本明細書に記載される方法を受ける前に１回、２回またはそれ以上治療された対象であり得る。ポリオーマウイルスを現在、治療している対象は、本明細書に記載される方法が対象に適用されるとき、まだそのような治療中である対象である。
【００４１】
ＪＣＶなどのポリオーマウイルスに関連する疾患は、免疫不全の対象に通常発症するため、開示された方法は免疫不全である対象に特に関連性がある。「免疫不全である」は、弱まったまたは欠けている免疫系を有する対象を指す。このため、「弱まった免疫系」を有する対象は、免疫不全である。ＪＣＶに感染し、変わったまたは弱まった免疫系を有する対象は、ＰＭＬのリスクがより高いと考えられる。弱まった免疫系に導き得る可能性がある要因は、ＡＩＤＳ、癌（またはその治療）、ループス及び／またはそれを管理するために使用される治療、多発性硬化症、リウマチ様関節炎、乾癬、クローン病及び関連症状を含む自己免疫疾患のある種の薬物療法、ならびに臓器移植とともに使用されるある種の薬物療法を含む。現在、ある種の免疫調節性治療法で治療している対象について、他の免疫抑制剤の先使用がＰＭＬ発症のリスク因子であると考えられる。対象は、感染症（例えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ））または免疫抑制療法（例えば、ナタリズマブ治療）の使用を含む外因子のため、後天性免疫不全を有し得る。免疫不全の対象は、多発性硬化症またはクローン病などの自己免疫疾患、リウマチ様関節炎、乾癬またはループスを有する対象であり得る。上記のように、臓器移植とともに使用されるある種の薬物療法で治療されている対象は免疫不全になり得る。対象におけるある種の遺伝的要因により、対象はＰＭＬを発症しやすくなり得ることも示唆された。
【００４２】
免疫抑制剤を使用する治療を開始する前、免疫抑制剤の投与時、免疫抑制剤が投与された後及び／または免疫抑制治療が終了した後、本明細書において提供されるような対象においてポリオーマウイルスを検出する方法のいずれかが実施され得る。
【００４３】
対象においてポリオーマウイルスを検出するために、本明細書に開示された方法のいずれかが少なくとも１つの追加アッセイと組み合わせて実施され、対象においてポリオーマウイルスの有無を検出することができることを認識するべきである。
【００４４】
当業者は、対象から得られる尿試料、脳脊髄液試料または血液試料においてポリオーマウイルス核酸（例えば、ＤＮＡ）またはポリオーマウイルスタンパク質の有無を検出するために、当該技術分野において日常的に利用される多数の追加アッセイに気がついている。ポリオーマウイルスから核酸を検出するアッセイは当該技術分野において既知で、非限定的な例としては、ＰＣＲ、シーケンシング解析、ハイブリダイゼーション解析、プローブ解析及びマイクロアレイ解析が挙げられる。ポリオーマウイルスポリペプチド及び／または抗体の検出用アッセイの非限定的な例としては、ペプチドシーケンシング解析、質量分析、免疫吸着アッセイ（例えば、ポリペプチドの抗体への結合）及び他のタンパク質アレイが挙げられる。
【００４５】
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの追加アッセイは、対象から得られる尿試料、脳脊髄液試料または血液試料においてポリオーマウイルスＤＮＡまたはポリオーマウイルスタンパク質の有無を検出することを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの追加アッセイは、対象から得られる尿試料（またはほかの生体試料）をリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応に付し、ポリオーマウイルスＤＮＡを検出することを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの追加アッセイは、対象から得られる血清試料においてポリオーマウイルスに特異的に結合する抗体の有無を検出することを含む。例えば、ポリオーマウイルスはＪＣＶまたはＢＫＶでもよい。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの追加アッセイは、対象から得られる組織試料をポリオーマウイルスに特異的に結合する抗体で染色することを含む。
【００４６】
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの追加アッセイは、対象から得られる血清試料におけるＪＣＶ抗体価を決定すること及びＪＣＶ抗体価が所定の索引レベル（例えば、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４または１．５）を超える、所定の索引レベルであるまたは所定の索引レベル未満であるかどうかを判定することを含む（例えば、国際特許出願第ＷＯ２０１４／１９３８０４号を参照。参照により本明細書に援用される）。いくつかの実施形態では、ＪＣＶ抗体価が所定の索引レベル、例えば、１．５を超える場合、対象はＰＭＬを発症するリスクがより高いことが考えられる。いくつかの実施形態では、ＪＣＶ抗体価が所定の索引レベル、例えば、０．９以下である場合、対象がＰＭＬを発症するリスクがより低いことが考えられる。
【００４７】
ポリオーマウイルスの有無を検出するための追加アッセイは、組織病理学、免疫組織化学、フローサイトメトリー、細胞診断学、ＭＲＩ及び断層撮影法を含む病態生理学的アッセイ、神経学的アッセイ、生化学的アッセイを含むが、これらに限定されない。ポリオーマウイルスの有無を検出するための他の生化学的アッセイは、変異解析、ウイルスゲノム解析、ポリオーマウイルスの１以上のタンパク質に対する抗体の使用を含むＥＬＩＳＡ解析、ポリオーマウイルスの１つ以上のタンパク質に対する抗体の使用、特異タンパク質の解析または血小板数を含むが、これらに限定されない。
【００４８】
治療薬を投与して、対象におけるポリオーマウイルス感染を処置することと組み合わせて、対象においてポリオーマウイルスを検出するための本明細書に開示された方法のいずれかを実施することができることが理解されるべきである。本明細書において使用されるように、「処置する」という用語は、治療を必要とする対象、例えば、ポリオーマウイルス、ポリオーマウイルスの症状またはポリオーマウイルスへの疾病素質を有する対象に、ポリオーマウイルス、ポリオーマウイルスの症状またはポリオーマウイルスへの疾病素質を治療、治癒、緩和、救済、変更、改善、寛解、向上または作用する目的を有する治療薬の投与を指す。薬の分野の当業者には公知の従来の方法を使用して、処置するポリオーマウイルスまたはポリオーマウイルス感染の部位に応じて、対象に治療薬（例えば、フシジン酸）を投与することができる。
【００４９】
本明細書に使用されるように、治療薬を投与することと組み合わせて実施される開示された方法は、対象に第１用量の標識を有するチミジンキナーゼ基質を投与すること及び対象において該標識を検出すること、ならびに対象に第２用量の標識を有するチミジンキナーゼ基質を投与すること及び対象において該標識を検出することを包含する。いくつかの実施形態では、治療薬の投与の前に対象において検出された標識のレベル及び／または位置が、治療薬の投与後の対象において検出された標識のレベル及び／または位置と比較される。いくつかの実施形態では、本明細書に使用されるように、治療薬を投与することと組み合わせて実施される開示された方法は、第１用量のＦＬＴを投与すること及び対象に対してＰＥＴ走査を実施すること、対象に治療薬を投与すること、ならびに第２用量のＦＬＴを投与すること及び対象に対して第２のＰＥＴ走査を実施することを含む。
【００５０】
いくつかの実施形態では、開示された方法は、対象にＤＮＡウイルス活性（例えば、ＪＣＶ活性）を阻害する治療薬を投与することと組み合わせて実施し得る。ＤＮＡウイルス活性（例えば、ＪＣＶ活性）を阻害する治療薬の例としては、クロロアセトキシキノリン、デメチルノビレチン、プロパニル、アミノエトキシジフェニルボラン、５−ニトロ−２−フェニルプロピルアミノ安息香酸、３−β−ヒドロキシイソアロスピロステ−９（１１）−エン、レオイジン、ピクロポドフィロトキシン、チアベンダゾール、ハルマン、６，４’−ジヒドロキシフラボン、ゲンチオピクロシド、（Ｒ）アンゴレンシン、ピテロキシリン、ジピリダモール，ナブメトン、ロシグリタゾン、ジルチアゼム塩酸塩、ベタメタゾン、イクチノン、アムシノニド、リルゾール、フルフェナム酸、クリシン、ジクタムニン、ピプラルチン、ポイセニン、メトキシボン、イソトレチノイン、クロロキシレノール、トマチン、プリムレチン、メフェナム酸、ジエチルスチルベストロール、パルミチン酸クロラムフェニコール、メチルキサントキシリン、１−アラニノール、ジクロフェナクナトリウム、フルニキシン、メグルミン、デヒドロアビエタミド、パキリジン、ジクマロール、ジフラクタ酸、アセメタシン、ギンコール酸、キサントン、フシジン酸、硫酸ポリミキシンｂ、パモ酸ピランテル、４−（３−ブトキシ−４−メトキシベンジル）イミダゾリジン−２−オン、硝酸ミトコナゾール、カンテサルタンシレキセチル、エンドスルファン、ジオキシベンゾン、トルフェナム酸、メフロキン、２−メトキシキサンタン、３−ヒドロキシ−４−（スクシン−２−イル）−カリオラン  δ−ラクトン、５，７−ジヒドロキシフラボン、アボカダノフラン、ベンゾ（ａ）ピレン、β−ジヒドロゲズノール、デカヒドロガンボギン酸、ジオスメチン、ニロチシン、ペクトリナリン、酢酸トタロール、８−クロロアデノシン、３−デアザアデノシン、０６−シクロヘキシルメチルグアニン、４−エステレン−３−β  １７−β−ジオール  １７−アセテート、５−β−プレグナン−３−α  ６−α  ２０−β−トリオール  ２０−アセテートもしくは４−ペレグネン−３−β  ２０−β−ジオール  ２０−アセテート、またはその任意の組み合わせが挙げられる。
【実施例】
【００５１】
実施例１：非感染及びＪＣＶ感染ヒト細胞におけるＴＫ１  ｍＲＮＡレベル
ＲＮＡ抽出及び定量化を実施し、非感染及びＪＣＶ感染ヒト腎臓細胞におけるＴＫ１  ｍＲＮＡレベルを検出した。ヒト腎臓細胞（ＨｕＫ（ｉ）Ｇ１０）及び初代星状膠細胞（ｈｕＡｓｔｒｏｃｙｔｅ）を培養し、翌日に尿由来のＪＣＶ星状膠細胞ウイルスまたはプロトタイプＰＭＬウイルスに感染させた。感染後８日目に、感染したプレート及び非感染コントロールプレートを回収した。ＤＮａｓｅ処理によるＱＩＡＧＥＮ  ＲＮＥＡＳＹ（登録商標）キットを使用して、ＲＮＡを単離し、ゲノムＤＮＡ混入を除去した。ＲＮＡを定量化し、ポリアデニル化し、転写物をＩＬＬＵＭＩＮＡ（登録商標）ＴｒｕＳｅｑ  Ｓｔｒａｎｄｅｄ  ｍＲＮＡ  Ｈｉｇｈ  Ｓａｍｐｌｅプロトコールと適合性があるストランド特異的技術を使用してランダムプライマーで増幅し、ＩＬＬＵＭＩＮＡ（登録商標）ＨｉＳｅｑ２５００でシーケンスを実施した。次に、シーケンスリードは、ヒトゲノムにマップされ、マップされたリード１００万本当たりの転写物キロベース当たりのリード（ＲＰＫＭ）として報告される相対存在値に到達した。非感染細胞に比べ、ＪＣＶ感染細胞中にＴＫ１  ｍＲＮＡレベルの増加が検出された（図１）。
【００５２】
実施例２：非感染及びＪＣＶ感染ヒト腎臓細胞におけるＴＫ１タンパク質レベル
免疫蛍光イメージングを実施して、非感染及びＪＣＶ感染ヒト腎臓細胞においてＴＫ１タンパク質レベルを検出した。９６ウェルプレートにおいて１ウェル当たり８０００個の密度でＨｕＫ（ｉ）Ｇ１０細胞を培養した。２４時間後、培地を除去し、アーキタイプＪＣＶウイルスを含有する培地と置き換えた。感染後７日目に、細胞を１ｘＰＢＳで洗浄し、１５分間４％パラホルムアルデヒドで固定した。以下の１次抗体を使用した：ウイルス性初期遺伝子Ｔ抗原の発現を検出するために１：１０００の濃度でのＰＡＢ２０００（Ｆｒｉｓｑｕｅ  Ｒ．ｅｔ  ａｌ．Ｖｉｒｕｓ  Ｒｅｓ．１９９２  Ｓｅｐ  １５；２５（３）：２２３−３９）、ウイルス性後期遺伝子ＶＰ１の発現を検出するために１：２０００の濃度でのＰＡＢ５９７（Ｅ．Ｈａｒｌｏｗ）のヒトキメラ抗体及びチミジンキナーゼを検出するために１：５０の濃度でのＦＬ−２３４（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、カタログ番号ｓｃ−１３４４７５）。以下の２次抗体を使用した：抗マウスＡＬＥＸＡ  ＦＬＵＯＲ（登録商標）５９４、抗ヒトＡＬＥＸＡ  ＦＬＵＯＲ（登録商標）６４７及び抗ウサギＡＬＥＸＡ  ＦＬＵＯＲ（登録商標）４８８。１：１００００の濃度の４’，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）で核を染色した。ハイコンテントイメージングプラットフォームＯｐｅｒｅｔｔａ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用して画像を取得し、Ｃｏｌｕｍｂｕｓソフトウェアを使用して画像解析を実施した。免疫蛍光画像から、非感染細胞に比べ、ＪＣＶ感染細胞に非常に大量のＴＫ１タンパク質が存在することが分かった（図２）。
【００５３】
実施例３：ヒト脳組織におけるＴＫ１の免疫組織化学染色
免疫組織化学染色によって、正常で健康なヒト脳組織及びＰＭＬ病変を含む脳組織におけるＴＫ１のレベルを測定した（図３Ａ及び３Ｂ）。正常で健康な脳組織及びＰＭＬ病変を含む脳組織の染色から、コントロール組織に比べ、ＰＭＬ病変においてより高いレベルのＴＫ１タンパク質が存在することが分かった（図３）。さらに、ＰＭＬ病変の染色は、低いＶＰ１（図３Ａ（ｉｉｉ）、ピンクの染色のＬａｒｇｅ  Ｔ；図３Ａ（ｉｖ）は、強調部位の領域を拡大した）レベルを有するＰＭＬ病変において、高いレベルのＴＫ１タンパク質（図３Ａ（ｉ）、緑色の染色のＴＫ１、ピンクの染色のＶＰ１；図３Ａ（ｉｉ）は、強調部位の領域の領域を拡大した）を示した。
【００５４】
実施例４：ヒト星状膠細胞における３Ｈ−ＦＬＴ取り込み
３Ｈ−ＦＬＴの細胞取り込み、すなわち放射標識されたＴＫ１基質を解析することによって、非感染及びＪＣＶ感染ヒト星状膠細胞におけるＴＫ１の活性を測定した。３Ｈ−ＦＬＴの取り込みによって測定されるように、非感染細胞に比べ、ＪＣＶ感染ヒト星状膠細胞はＴＫ１活性のレベルの上昇を示した（図４）。
【００５５】
本明細書に開示された参考文献、特許及び特許出願はすべて、それぞれが引用される主題に関して参照により援用され、場合によっては文書全体を包含し得る。
【００５６】
本明細書及び特許請求の範囲で使用される不定冠詞「ａ」及び「ａｎ」は、明確に逆の指示がない限り、「少なくとも１つ」を意味すると理解すべきである。
【００５７】
明確に逆の指示がない限り、１より多くの工程または行為を含む本明細書に請求される任意の方法においては、方法の工程または行為の順番は必ずしも該方法の工程または行為が提唱される順番に限定されないことも理解すべきである。
【００５８】
特許請求の範囲においてならびに上記の明細書において、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「所有する」、「有する」、「含有する」、「関与する」、「保持する」、「構成される」などの移行句はすべて、オープンエンドであること、すなわち、含むが限定されないということを意味することを理解すべきである。「からなる」及び「本質的にからなる」の移行句だけは、ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｏｆｆｉｃｅ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｅｘａｍｉｎｉｎｇ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ，  Ｓｅｃｔｉｏｎ  ２１１１．０３に定めるように、それぞれ閉じた移行句または半分閉じた移行句である。
【図１】
2020517288.tif 000002
【図２】
2020517288.tif 000003
【図３】
2020517288.tif 000004
【図４】
2020517288.tif 000005
【国際調査報告】
2020517288.tif 000006
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2020517288.tif 000008