(57)【要約】  とりわけ、インターロイキン−１受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ１ＲＡＰ）に結合することができる抗体が本明細書で提供される。本明細書で提供される抗体は、新規の軽鎖及び重鎖配列を含み、高い親和性及び特異性でＩＬ１ＲＡＰに結合する。本明細書で提供される抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体は、とりわけ、ＡＭＬなどのＩＬ１ＲＡＰ発現がんの治療に有用である。
2020533960.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、
軽鎖可変ドメインが、配列番号１に記載のＣＤＲ  Ｌ１、配列番号２に記載のＣＤＲ  Ｌ２及び配列番号３に記載のＣＤＲ  Ｌ３を含み、
重鎖可変ドメインが、配列番号４に記載のＣＤＲ  Ｈ１、配列番号５に記載のＣＤＲ  Ｈ２及び配列番号６に記載のＣＤＲ  Ｈ３を含む、
抗インターロイキン−１受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ１ＲＡＰ）抗体。
【請求項２】
軽鎖可変ドメインが配列番号７の配列を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
重鎖可変ドメインが配列番号８の配列を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項４】
軽鎖可変ドメインが、配列番号９に記載のＦＲ  Ｌ１、配列番号１０に記載のＦＲ  Ｌ２、配列番号１１に記載のＦＲ  Ｌ３及び配列番号１２に記載のＦＲ  Ｌ４を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項５】
重鎖可変ドメインが、配列番号１３に記載のＦＲ  Ｈ１、配列番号１４に記載のＦＲ  Ｈ２、配列番号１５に記載のＦＲ  Ｈ３及び配列番号１６に記載のＦＲ  Ｈ４を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項６】
抗体がＩｇＧである、請求項１に記載の抗体。
【請求項７】
抗体がＩｇＧ１である、請求項６に記載の抗体。
【請求項８】
抗体がＦａｂ’断片である、請求項１に記載の抗体。
【請求項９】
抗体が一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）である、請求項１に記載の抗体。
【請求項１０】
軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインが、ｓｃＦｖの一部を形成する、請求項１に記載の抗体。
【請求項１１】
ｓｃＦｖが配列番号１７の配列を含む、請求項９又は１０に記載の抗体。
【請求項１２】
抗体が、約２１ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）でＩＬ１ＲＡＰに結合することができる、請求項１に記載の抗体。
【請求項１３】
抗体のＥＣ５０が約４．９ｎｇ／ｍｌである、請求項１に記載の抗体。
【請求項１４】
抗体がＩＬ１ＲＡＰに結合している、請求項１に記載の抗体。
【請求項１５】
ＩＬ１ＲＡＰがヒトＩＬ１ＲＡＰである、請求項１４に記載の抗体。
【請求項１６】
ＩＬ１ＲＡＰが細胞の一部を形成する、請求項１４に記載の抗体。
【請求項１７】
ＩＬ１ＲＡＰが細胞の表面で発現される、請求項１６に記載の抗体。
【請求項１８】
細胞ががん細胞である、請求項１６に記載の抗体。
【請求項１９】
がん細胞が白血病幹細胞（ＬＳＣ）である、請求項１８に記載の抗体。
【請求項２０】
がん細胞が急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞である、請求項１８に記載の抗体。
【請求項２１】
請求項１に記載の抗体をコードする単離された核酸。
【請求項２２】
治療有効量の請求項１に記載の抗体及び薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項２３】
がんの治療を必要とする対象においてがんを治療する方法であって、治療有効量の請求項１に記載の抗体を対象に投与し、それにより対象においてがんを治療することを含む方法。
【請求項２４】
（ｉ）（ａ）配列番号１に記載のＣＤＲ  Ｌ１、配列番号２に記載のＣＤＲ  Ｌ２及び配列番号３に記載のＣＤＲ  Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン、及び
（ｂ）配列番号４に記載のＣＤＲ  Ｈ１、配列番号５に記載のＣＤＲ  Ｈ２及び配列番号６に記載のＣＤＲ  Ｈ３を含む重鎖可変領域ドメイン、
を含む抗体領域、並びに
（ｉｉ）膜貫通ドメイン
を含む組換えタンパク質。
【請求項２５】
軽鎖可変ドメインが配列番号７の配列を含む、請求項２４に記載の組換えタンパク質。
【請求項２６】
重鎖可変ドメインが配列番号８の配列を含む、請求項２４に記載の組換えタンパク質。
【請求項２７】
軽鎖可変ドメインが、配列番号９に記載のＦＲ  Ｌ１、配列番号１０に記載のＦＲ  Ｌ２、配列番号１１に記載のＦＲ  Ｌ３及び配列番号１２に記載のＦＲ  Ｌ４を含む、請求項２４に記載の組換えタンパク質。
【請求項２８】
重鎖可変ドメインが、配列番号１３に記載のＦＲ  Ｈ１、配列番号１４に記載のＦＲ  Ｈ２、配列番号１５に記載のＦＲ  Ｈ３及び配列番号１６に記載のＦＲ  Ｈ４を含む、請求項２４に記載の組換えタンパク質。
【請求項２９】
抗体領域が一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む、請求項２４に記載の組換えタンパク質。
【請求項３０】
ｓｃＦｖが配列番号１７の配列を含む、請求項２９に記載の組換えタンパク質。
【請求項３１】
組換えタンパク質が、約２１ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）でＩＬ１ＲＡＰに結合することができる、請求項２４に記載の組換えタンパク質。
【請求項３２】
組換えタンパク質のＥＣ５０が、約４．９ｎｇ／ｍｌである、請求項２４に記載の組換えタンパク質。
【請求項３３】
組換えタンパク質がＩＬ１ＲＡＰに結合している、請求項２４に記載の組換えタンパク質。
【請求項３４】
ＩＬ１ＲＡＰがヒトＩＬ１ＲＡＰである、請求項３３に記載の組換えタンパク質。
【請求項３５】
ＩＬ１ＲＡＰが細胞の一部を形成する、請求項３３に記載の組換えタンパク質。
【請求項３６】
ＩＬ１ＲＡＰが細胞の表面で発現される、請求項３３に記載の組換えタンパク質。
【請求項３７】
細胞ががん細胞である、請求項３６に記載の組換えタンパク質。
【請求項３８】
がん細胞が白血病幹細胞（ＬＳＣ）である、請求項３７に記載の組換えタンパク質。
【請求項３９】
がん細胞が急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞である、請求項３７に記載の組換えタンパク質。
【請求項４０】
抗体領域がＦｃドメインを含む、請求項２４に記載の組換えタンパク質。
【請求項４１】
ＦｃドメインがＩｇＧ４  Ｆｃドメインである、請求項４０に記載の組換えタンパク質。
【請求項４２】
細胞内共刺激シグナル伝達ドメインをさらに含む、請求項２４に記載の組換えタンパク質。
【請求項４３】
細胞内共刺激シグナル伝達ドメインが、ＣＤ２８細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン、４−１ＢＢ細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン、ＩＣＯＳ細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン又はＯＸ−４０細胞内共刺激シグナル伝達ドメインである、請求項４２に記載の組換えタンパク質。
【請求項４４】
細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインをさらに含む、請求項２４に記載の組換えタンパク質。
【請求項４５】
細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ζ細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインである、請求項４４に記載の組換えタンパク質。
【請求項４６】
自己開裂ペプチジル配列をさらに含む、請求項２４に記載の組換えタンパク質。
【請求項４７】
自己開裂ペプチジルリンカー配列がＴ２Ａ配列又は２Ａ配列である、請求項４６に記載の組換えタンパク質。
【請求項４８】
検出可能ドメインをさらに含む、請求項２４に記載の組換えタンパク質。
【請求項４９】
検出可能ドメインが切断型ＥＧＦＲ（ＥＧＦＲｔ）ドメインである、請求項４８に記載の組換えタンパク質。
【請求項５０】
組換えタンパク質が細胞の一部を形成する、請求項２４に記載の組換えタンパク質。
【請求項５１】
組換えタンパク質がＴ細胞の一部を形成する、請求項２４に記載の組換えタンパク質。
【請求項５２】
請求項２４に記載の組換えタンパク質をコードする単離された核酸。
【請求項５３】
治療有効量の請求項２４に記載の組換えタンパク質及び薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項５４】
がんの治療を必要とする対象においてがんを治療する方法であって、治療有効量の請求項２４に記載の組換えタンパク質を対象に投与し、それにより対象においてがんを治療することを含む方法。
【請求項５５】
（ｉ）エフェクター細胞リガンドに結合することができる第１の抗体領域、並びに
（ｉｉ）（ａ）配列番号１に記載のＣＤＲ  Ｌ１、配列番号２に記載のＣＤＲ  Ｌ２及び配列番号３に記載のＣＤＲ  Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン、及び
（ｂ）配列番号４に記載のＣＤＲ  Ｈ１、配列番号５に記載のＣＤＲ  Ｈ２及び配列番号６に記載のＣＤＲ  Ｈ３を含む重鎖可変領域ドメイン、
を含む第２の抗体領域、
を含む組換えタンパク質。
【請求項５６】
エフェクター細胞リガンドがＣＤ３タンパク質である、請求項５５に記載の組換えタンパク質。
【請求項５７】
軽鎖可変ドメインが配列番号７の配列を含む、請求項５５に記載の組換えタンパク質。
【請求項５８】
重鎖可変ドメインが配列番号８の配列を含む、請求項５５に記載の組換えタンパク質。
【請求項５９】
軽鎖可変ドメインが、配列番号９に記載のＦＲ  Ｌ１、配列番号１０に記載のＦＲ  Ｌ２、配列番号１１に記載のＦＲ  Ｌ３及び配列番号１２に記載のＦＲ  Ｌ４を含む、請求項５５に記載の組換えタンパク質。
【請求項６０】
重鎖可変ドメインが、配列番号１３に記載のＦＲ  Ｈ１、配列番号１４に記載のＦＲ  Ｈ２、配列番号１５に記載のＦＲ  Ｈ３及び配列番号１６に記載のＦＲ  Ｈ４を含む、請求項５５に記載の組換えタンパク質。
【請求項６１】
第１の抗体領域が第１のＦａｂ’断片であり又は第２の抗体領域が第２のＦａｂ’断片である、請求項５５に記載の組換えタンパク質。
【請求項６２】
第１の抗体領域が一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）であり又は第２の抗体領域が第２の一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である、請求項５５に記載の組換えタンパク質。
【請求項６３】
第２のｓｃＦｖが配列番号１７の配列を含む、請求項５５に記載の組換えタンパク質。
【請求項６４】
第２の抗体領域が、約２１ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）でＩＬ１ＲＡＰに結合することができる、請求項５５に記載の組換えタンパク質。
【請求項６５】
第２の抗体領域のＥＣ５０が、約４．９ｎｇ／ｍｌである、請求項５５に記載の組換えタンパク質。
【請求項６６】
第２の抗体領域がＩＬ１ＲＡＰに結合している、請求項５５に記載の組換えタンパク質。
【請求項６７】
ＩＬ１ＲＡＰがヒトＩＬ１ＲＡＰである、請求項６６に記載の組換えタンパク質。
【請求項６８】
ＩＬ１ＲＡＰが細胞の一部を形成する、請求項６６に記載の組換えタンパク質。
【請求項６９】
ＩＬ１ＲＡＰが細胞の表面で発現される、請求項６６に記載の組換えタンパク質。
【請求項７０】
細胞ががん細胞である、請求項６９に記載の組換えタンパク質。
【請求項７１】
がん細胞が白血病幹細胞（ＬＳＣ）である、請求項７０に記載の組換えタンパク質。
【請求項７２】
がん細胞が急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞である、請求項７０に記載の組換えタンパク質。
【請求項７３】
治療有効量の請求項５５に記載の組換えタンパク質及び薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項７４】
がんの治療を必要とする対象においてがんを治療する方法であって、治療有効量の請求項５５に記載の組換えタンパク質を対象に投与し、それにより対象においてがんを治療することを含む方法。
【請求項７５】
がんが白血病である、請求項２３、５４又は７４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７６】
がんが急性骨髄性白血病である、請求項２３、５４又は７４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７７】
方法が対象にさらに第２の治療薬を投与することを含む、請求項２３、５４又は７４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７８】
細胞の増殖を阻害する方法であって、
（ｉ）細胞を請求項１に記載の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体、請求項２４に記載の組換えタンパク質又は請求項５５に記載の組換えタンパク質に接触させ、それにより接触細胞を形成すること、及び
（ｉｉ）請求項１に記載の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体、請求項２４に記載の組換えタンパク質又は請求項５５に記載の組換えタンパク質を接触細胞上のＩＬ１ＲＡＰに結合させ、それにより細胞の増殖を阻害すること
を含む方法。
【請求項７９】
細胞ががん細胞である、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
細胞が白血病幹細胞（ＬＳＣ）である、請求項７８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は２０１７年８月１日提出の米国特許仮出願第６２／５３９，８９５号の優先権を主張し、前記特許文献はこれによりその全体を及びあらゆる目的のために参照により本明細書に組み込む。
【０００２】
配列表、表又はＡＳＣＩＩテキストファイルとして提出されるコンピュータプログラムリスト付録への言及
２０１８年８月１日作成のファイル０４８４４０−６６７００１ＷＯ＿ＳＴ２５．ＴＸＴに記入された配列表、３８，２０４バイト、機械フォーマットＩＢＭ−ＰＣ、ＭＳ  Ｗｉｎｄｏｗｓオペレーティングシステムはこれにより参照により組み込む。
【背景技術】
【０００３】
急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）は、造血不全及び死亡をもたらすことがある壊滅的造血器悪性腫瘍である。この疾患についての知識は増えているが、現在の治療選択肢から恩恵を被るのは少数のＡＭＬ患者だけである。治療の成功が限られているのは、少なくとも部分的に、化学療法及び／又は他の分子ターゲティング治療法がいわゆる白血病幹細胞（ＬＳＣ）を除去できないことに起因すると考えられている。したがって、正常な造血幹細胞を温存しつつＬＳＣを特異的に除去する治療の必要性が当技術分野には存在する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
免疫療法アプローチはＡＭＬに罹っている患者を治療する効果的な手段として有望である。しかし、成功するためには、免疫療法はＬＳＣの選択的ターゲティング及び破壊を可能にしなければならない。この疾患を治す組成物及び方法並びに当技術分野の他の必要な物が本明細書で提供される。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
（発明の要旨）
ある態様では、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、軽鎖可変ドメインが、配列番号１に記載のＣＤＲ  Ｌ１、配列番号２に記載のＣＤＲ  Ｌ２及び配列番号３に記載のＣＤＲ  Ｌ３を含み、重鎖可変ドメインが、配列番号４に記載のＣＤＲ  Ｈ１、配列番号５に記載のＣＤＲ  Ｈ２、及び配列番号６に記載のＣＤＲ  Ｈ３を含む、抗インターロイキン−１受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ１ＲＡＰ）抗体が提供される。
【０００６】
ある態様では、その実施形態を含めた本明細書に提示される抗体をコードする単離された核酸が提供される。
【０００７】
ある態様では、治療有効量の、その実施形態を含めた本明細書に提示される抗体、及び薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物が提供される。
【０００８】
ある態様では、がんの治療を必要とする対象においてがんを治療する方法であって、治療有効量の、その実施形態を含めた本明細書に提示される抗体を対象に投与し、それにより対象においてがんを治療することを含む方法が提供される。
【０００９】
ある態様では、（ｉ）配列番号１に記載のＣＤＲ  Ｌ１、配列番号２に記載のＣＤＲ  Ｌ２及び配列番号３に記載のＣＤＲ  Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン；並びに（ｂ）配列番号４に記載のＣＤＲ  Ｈ１、配列番号５に記載のＣＤＲ  Ｈ２、及び配列番号６に記載のＣＤＲ  Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン；並びに（ｉｉ）膜貫通ドメインを含む組換えタンパク質が提供される。
【００１０】
別の態様では、（ｉ）エフェクター細胞リガンドに結合することができる第１の抗体領域、並びに（ｉｉ）（ａ）配列番号１に記載のＣＤＲ  Ｌ１、配列番号２に記載のＣＤＲ  Ｌ２及び配列番号３に記載のＣＤＲ  Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン；及び（ｂ）配列番号４に記載のＣＤＲ  Ｈ１、配列番号５に記載のＣＤＲ  Ｈ２、及び配列番号６に記載のＣＤＲ  Ｈ３を含む重鎖可変ドメインを含む第２の抗体領域を含む組換えタンパク質が提供される。
【００１１】
ある態様では、その実施形態を含めた本明細書に提示される組換えタンパク質をコードする単離された核酸が提供される。
【００１２】
ある態様では、治療有効量の、その実施形態を含めた本明細書に提示される組換えタンパク質、及び薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物が提供される。
【００１３】
ある態様では、がんの治療を必要とする対象においてがんを治療する方法であって、治療有効量の、その実施形態を含めた本明細書に記載の組換えタンパク質を対象に投与し、それにより対象においてがんを治療することを含む方法が提供される。
【００１４】
ある態様では、細胞の増殖を阻害する方法であって、（ｉ）細胞を、その実施形態を含めた本明細書に提示される抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体、又はその実施形態を含めた本明細書に提示される組換えタンパク質と接触させ、それにより接触細胞を形成すること；及び（ｉｉ）その実施形態を含めた本明細書に提示される抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体、組換えタンパク質を接触細胞上のＩＬ１ＲＡＰに結合させ、それにより、細胞の増殖を阻害することを含む方法が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１Ａ】ヒトナイーブファージディスプレイライブラリーの構築を示す図である。図１Ａ：健康なドナー１０名由来の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を使用してヒト抗体ファージディスプレイライブラリーを構築した。精製されたＢ細胞のＲＮＡから合成されたｃＤＮＡを抗体重鎖可変（ＶＨ）領域及び軽鎖可変（ＶＬ）領域の増幅の鋳型として使用し、リンカー（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３と融合した。全ｓｃＦｖの混合物を制限酵素で消化し、直線化ファージミドベクターとライゲーションした。電気的形質転換後、ＴＧ１細菌を収集し、グリセロールストックを作製してライブラリーを−８０℃で保管した。ライブラリーの質を、その多様性（図１Ｂ〜１Ｃ）及び容量によって決定した。ライブラリー容量は９．７２×１０９コロニーであった。
【図１Ｂ】ヒトナイーブファージディスプレイライブラリーの構築を示す図である。図１Ｂ：ランダムに選択されたクローン５０種の重鎖（左）及び軽鎖（右）の両方のＣＤＲ３の長さを分析した。
【図１Ｃ】ヒトナイーブファージディスプレイライブラリーの構築を示す図である。図１Ｃ：ファージディスプレイライブラリーの種々の重鎖サブファミリーのカバレッジ（上）及び軽鎖サブファミリーのカバレッジ（下）を５０種のクローンの配列決定結果に基づいて分析した。ＣＤＲ３の長さ及びＶＨファミリーの分布は、抗体レパートリー次世代配列決定により以前報告された結果と一致した。
【図１Ｄ】ヒトナイーブファージディスプレイライブラリーの構築を示す図である。図１Ｄ：組換えヒトＩＬ１ＲＡＰタンパク質を使用したＩＬ１ＲＡＰ抗体のバイオパニング。第４ラウンドで富化が観察された。図１Ｄに対応する表２も参照されたい。
【図２Ａ】ヒトナイーブファージディスプレイライブラリーから選択された抗ＩＬ１ＲＡＰモノクローナル抗体を示すグラフである。スクリーニング／配列決定プロセスにより１２種の独特な抗体配列がもたらされた。したがって、出願人らは、それらのファージディスプレイライブラリーから１２種の陽性クローンを選択し、これらのクローンに由来するこれらの抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子をｅｘｐｉ２９３細胞における一過性発現のためにＩｇＧ発現ベクターにクローニングした。機能試験のために抗体をプロテインＡ樹脂によって精製した。図２Ａ：１２種の陽性クローンの組換えＩＬ１ＲＡＰタンパク質への結合。１μｇ／ｍｌの組換えＩＬ１ＲＡＰタンパク質を９６ウェルプレートに４℃で終夜コーティングした。１μｇ／ｍｌから開始した３倍段階希釈物中の精製された抗体を各ウェルに添加する。ＨＲＰ−抗ヒトＦＣ抗体を検出抗体として使用する。
【図２Ｂ】ヒトナイーブファージディスプレイライブラリーから選択された抗ＩＬ１ＲＡＰモノクローナル抗体を示すグラフである。スクリーニング／配列決定プロセスにより１２種の独特な抗体配列がもたらされた。したがって、出願人らは、それらのファージディスプレイライブラリーから１２種の陽性クローンを選択し、これらのクローンに由来するこれらの抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子をｅｘｐｉ２９３細胞における一過性発現のためにＩｇＧ発現ベクターにクローニングした。機能試験のために抗体をプロテインＡ樹脂によって精製した。図２Ｂ：１２種の陽性クローンのＥＣ５０をＥＬＩＳＡ結合曲線に基づいて算出する。
【図２Ｃ】ヒトナイーブファージディスプレイライブラリーから選択された抗ＩＬ１ＲＡＰモノクローナル抗体を示すグラフである。スクリーニング／配列決定プロセスにより１２種の独特な抗体配列がもたらされた。したがって、出願人らは、それらのファージディスプレイライブラリーから１２種の陽性クローンを選択し、これらのクローンに由来するこれらの抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子をｅｘｐｉ２９３細胞における一過性発現のためにＩｇＧ発現ベクターにクローニングした。機能試験のために抗体をプロテインＡ樹脂によって精製した。図２Ｃ：Ｃｒ５１放出アッセイによって検出された抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）。１００ｎｇ／ｍｌの抗体をＣｒ５１標識されたＭＶ４−１１細胞１×１０４個に添加する。ＮＫ細胞２×１０５個をエフェクター細胞として使用する。１０時間インキュベーション後に特異的溶解のパーセントを検出する。
【図２Ｄ】ヒトナイーブファージディスプレイライブラリーから選択された抗ＩＬ１ＲＡＰモノクローナル抗体を示すグラフである。スクリーニング／配列決定プロセスにより１２種の独特な抗体配列がもたらされた。したがって、出願人らは、それらのファージディスプレイライブラリーから１２種の陽性クローンを選択し、これらのクローンに由来するこれらの抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子をｅｘｐｉ２９３細胞における一過性発現のためにＩｇＧ発現ベクターにクローニングした。機能試験のために抗体をプロテインＡ樹脂によって精製した。図２Ｄ：Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ１００によって検出された１Ｄ５の親和性。ＥＬＩＳＡの結果とＡＤＣＣの結果を組み合わせ、二重特異性抗体及びＣＡＲ−Ｔ開発のための優良なクローンとして１Ｄ５を選択した。次いで、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ１００を使用してその正確なＫＤを確認した。１Ｄ５のＫＤは２１．２ｎＭであった。
【図３Ａ】抗ＣＤ３×ＩＬ１ＲＡＰ二重特異性抗体を示す図である。図３Ａ：抗ＣＤ３×ＩＬ１ＲＡＰ二重特異性抗体設計の略図。二重特異性抗体をｓｃＦｖ−ＦＣとしてアセンブルした。ヘテロ二量体形成を容易にするために、ノブイントゥホール構築物を出願人らの二重特異性抗体に適用する。ＦＣ「ノブイントゥホール」構築物を、部位特異的突然変異誘発キット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）を使用し、ＩｇＧ−ＦＣ骨格に基づいて設計した。ＦＣ−ノブ構築物に関しては、１つの突然変異を１つのＩｇＧ−ＦＣ骨格のＣＨ３ドメインに導入した（Ｔ３６６Ｗ、ノブと称される）。ＦＣ−ホール構築物に関しては、３つの突然変異を別のＩｇＧ−ＦＣ骨格にＣＨ３ドメインに導入した（Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖ、ホールと称される）。軽鎖及び重鎖の誤対合を回避するために、同じ抗体の重鎖と軽鎖を（Ｇｌｙ３Ｓｅｒ）４リンカーによって連結した単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を構築した。次いで、抗ＣＤ３抗体のｓｃＦｖ断片及び抗ＩＬ１ＲＡＰタンパク質抗体を、それぞれＩｇＧ−ＦＣ−ノブベクター及びＩｇＧ−ＦＣ−ホールベクターにクローニングした。ＦＣγＲのＡＭＬ細胞への非特異的結合をさらに消滅させるために、ＣＨ２領域に二重突然変異（Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ）を導入した。
【図３Ｂ】抗ＣＤ３×ＩＬ１ＲＡＰ二重特異性抗体を示す図である。図３Ｂ：単一特異性抗体及び二重特異性抗体の発現。精製されたタンパク質についてのＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルの結果から、抗ＣＤ３−ノブ−ＦＣ、抗ＩＬ１ＲＡＰ−ホール−ＦＣ、及び抗ＣＤ３×ＩＬ１ＲＡＰ抗体が全て発現したことが示された。レーン１〜３は、非還元タンパク質：抗ＣＤ３ノブ抗体、抗ＩＬ１ＲＡＰホール抗体、抗ＣＤ３×ＩＬ１ＲＡＰ二重特異性抗体である。レーン４〜６は還元タンパク質である。レーン７は、非還元二重特異性抗体であり、レーン８は還元二重特異性抗体である。図３Ｂに示されている通り、二重特異性抗体（レーン３）のサイズは２つの単一特異性抗体の間である。
【図３Ｃ】抗ＣＤ３×ＩＬ１ＲＡＰ二重特異性抗体を示す図である。図３Ｃ：抗ＣＤ３×ＩＬ１ＲＡＰ抗体のＴ細胞及びＩＬ１ＲＡＰタンパク質への二重結合をフローサイトメトリーによって検出した。二重特異性抗体をＴ細胞と一緒にインキュベートし、次いで、これにｈｉｓタグを伴う組換えＩＬ１ＲＡＰタンパク質を添加した。ＦＩＴＣ−抗ｈｉｓ抗体を使用して、ＩＬ１ＲＡＰタンパク質と二重特異性抗体の結合を検出した。
【図４Ａ】抗ＣＤ３×ＩＬ１ＲＡＰ二重特異性抗体により、ＡＭＬ細胞株におけるＴ細胞活性化及び細胞傷害性が誘導されることを示すグラフである。図４Ａ：種々のＡＭＬ細胞株におけるＩＬ１ＲＡＰ発現のゲノム平均蛍光強度（ＭＦＩ）。Ｒａｊｉを陰性対照として使用する。ゲノム蛍光強度中央値（ＭＦＩ）がＲａｊｉよりもわずかに高かったＫＧ１ａを除いて、他の６種の細胞株のＭＦＩではＲａｊｉよりも有意に高いＩＬ１ＲＡＰ発現が示される。
【図４Ｂ】抗ＣＤ３×ＩＬ１ＲＡＰ二重特異性抗体により、ＡＭＬ細胞株におけるＴ細胞活性化及び細胞傷害性が誘導されることを示すグラフである。図４Ｂ：細胞当たりに結合した抗体コピーを種々のＡＭＬ細胞株において比較した。図４Ａ及び図４Ｂに示されている結果に基づいて、機能アッセイのために、ＨＬ６０、ＭＶ４−１１、ＨＰ１、及びＫＧ１ａを一連の高〜低レベルのＩＬ１ＲＡＰを有するスペクトルとして使用し、Ｒａｊｉを陰性対照として使用することに決めた。
【図４Ｃ】抗ＣＤ３×ＩＬ１ＲＡＰ二重特異性抗体により、ＡＭＬ細胞株におけるＴ細胞活性化及び細胞傷害性が誘導されることを示すグラフである。図４Ｃ：Ｔ細胞依存性細胞傷害性（ＴＤＣＣ）を、エフェクターＴ細胞と標的ＡＭＬ細胞をＥ：Ｔ（エフェクター：標的細胞比）比３：１でインキュベートすることで試験し、特異的溶解のパーセントをインキュベート４８時間後に確認した。特異的溶解をフローサイトメトリーによって決定し、式：％特異的溶解＝（標的細胞＋Ｔ細胞−標的細胞＋ＢｓＡｂ＋Ｔ細胞）／標的細胞＋Ｔ細胞）×１００％を使用して算出した。
【図４Ｄ】抗ＣＤ３×ＩＬ１ＲＡＰ二重特異性抗体により、ＡＭＬ細胞株におけるＴ細胞活性化及び細胞傷害性が誘導されることを示すグラフである。Ｔ細胞活性化を、サイトカインＴＮＦ−α（図４Ｄ）、ＩＦＮ−γ（図４Ｅ）、グランザイムＢ（図４Ｆ）、並びに細胞膜マーカーＣＤ６９（図４Ｇ）及びＣＤ２５（図４Ｈ）の数量化によって確認した。
【図４Ｅ】抗ＣＤ３×ＩＬ１ＲＡＰ二重特異性抗体により、ＡＭＬ細胞株におけるＴ細胞活性化及び細胞傷害性が誘導されることを示すグラフである。Ｔ細胞活性化を、サイトカインＴＮＦ−α（図４Ｄ）、ＩＦＮ−γ（図４Ｅ）、グランザイムＢ（図４Ｆ）、並びに細胞膜マーカーＣＤ６９（図４Ｇ）及びＣＤ２５（図４Ｈ）の数量化によって確認した。
【図４Ｆ】抗ＣＤ３×ＩＬ１ＲＡＰ二重特異性抗体により、ＡＭＬ細胞株におけるＴ細胞活性化及び細胞傷害性が誘導されることを示すグラフである。Ｔ細胞活性化を、サイトカインＴＮＦ−α（図４Ｄ）、ＩＦＮ−γ（図４Ｅ）、グランザイムＢ（図４Ｆ）、並びに細胞膜マーカーＣＤ６９（図４Ｇ）及びＣＤ２５（図４Ｈ）の数量化によって確認した。
【図４Ｇ】抗ＣＤ３×ＩＬ１ＲＡＰ二重特異性抗体により、ＡＭＬ細胞株におけるＴ細胞活性化及び細胞傷害性が誘導されることを示すグラフである。Ｔ細胞活性化を、サイトカインＴＮＦ−α（図４Ｄ）、ＩＦＮ−γ（図４Ｅ）、グランザイムＢ（図４Ｆ）、並びに細胞膜マーカーＣＤ６９（図４Ｇ）及びＣＤ２５（図４Ｈ）の数量化によって確認した。
【図４Ｈ】抗ＣＤ３×ＩＬ１ＲＡＰ二重特異性抗体により、ＡＭＬ細胞株におけるＴ細胞活性化及び細胞傷害性が誘導されることを示すグラフである。Ｔ細胞活性化を、サイトカインＴＮＦ−α（図４Ｄ）、ＩＦＮ−γ（図４Ｅ）、グランザイムＢ（図４Ｆ）、並びに細胞膜マーカーＣＤ６９（図４Ｇ）及びＣＤ２５（図４Ｈ）の数量化によって確認した。
【図４Ｉ】抗ＣＤ３×ＩＬ１ＲＡＰ二重特異性抗体により、ＡＭＬ細胞株におけるＴ細胞活性化及び細胞傷害性が誘導されることを示すグラフである。図４Ｉ：抗ＣＤ３×ＩＬ１ＲＡＰ二重特異性抗体により、ＡＭＬ細胞株におけるＴ細胞活性化及び細胞傷害性が誘導されることを示すグラフである。種々のＥ：Ｔ比を長期死滅アッセイにおいて試験した。
【図５Ａ】ＡＭＬ患者試料では高レベルのＩＬ１ＲＡＰ発現が示されることを示すグラフである。図５Ａ：３つの代表的なＡＭＬ患者試料のＩＬ１ＲＡＰ発現レベル。
【図５Ｂ】ＡＭＬ患者試料では高レベルのＩＬ１ＲＡＰ発現が示されることを示すグラフである。図５Ｂ：異なるＡＭＬ患者試料におけるＩＬ１ＲＡＰ発現のゲノム平均蛍光強度（ＭＦＩ）。ＰＢＭＣを正常対照として使用した。健康なドナー由来のＰＢＭＣと比較して、全てのＡＭＬ患者試料で、有意に高いＭＦＩによって示される通りＩＬ１ＲＡＰ発現の増強が示された。
【図５Ｃ】ＡＭＬ患者試料では高レベルのＩＬ１ＲＡＰ発現が示されることを示すグラフである。図５Ｃ：Ｔ細胞の細胞傷害性を、Ｅ：Ｔ比５：１で４８時間長期死滅アッセイによって確認した。
【図５Ｄ】ＡＭＬ患者試料では高レベルのＩＬ１ＲＡＰ発現が示されることを示すグラフである。図５Ｄ：３連でのＴ細胞依存性細胞傷害性アッセイ（ＴＤＣＣ）。ＣＤ３４＋細胞は大きな白血病細胞と比較して同等のＩＬ１ＲＡＰ発現を示した。ＴＤＣＣにより、大多数の試料において９０％の特異的死滅、及びＩＬ１ＲＡＰ発現レベルが最低であった試料６６７では６０％の特異的死滅が示された。選別されたＣＤ３４＋と選別されていないＡＭＬ芽細胞の間で差異は観察されなかった。
【図６Ａ】ＮＳＧマウスにおいて抗ＣＤ３×ＩＬ１ＲＡＰによりＭＶ４−１１  ＡＭＬが有効に治療されることを示す図である。図６Ａ：腫瘍成長を生物発光イメージングによってモニタリングした。ＭＶ４−１１細胞１×１０６個を各マウスに尾静脈を介して注射した。７日目に二重特異性抗体２００μｇ及びＴ細胞３×１０６個を用いて処置を開始した。その後の処置及びイメージング時間が下に矢印で示されている。ビヒクル、Ｔ細胞のみ、又は対照ＢｓＡｂプラスＴ細胞で処理したＭＶ４−１１Ｌｕｃｉ細胞を移植したＮＳＧマウスでは白血病の広範な浸潤が見られた。その代わりに、Ｔ細胞及び抗ＩＬ１ＲＡＰ×ＣＤ３  ＢｓＡｂで処置されたマウスでは、１回用量の処置後、２０日目に白血病負荷量の広範な低減が見られ、３７日目には１匹のマウス以外で排除が見られた。この群のマウスのうち１匹は１８日目の４回目の処置での不適切な手順によって死亡した。
【図６Ｂ】ＮＳＧマウスにおいて抗ＣＤ３×ＩＬ１ＲＡＰによりＭＶ４−１１  ＡＭＬが有効に治療されることを示す図である。図６Ｂ：生存曲線。４匹のマウスのうち３匹が４０日目になお生存していたが、それに対して他の３群のマウスはいずれも生存していなかった。特に、Ｔ細胞又はＴ細胞及びアイソタイプ対照で処置されたマウスはまた、対照マウスよりも生存が短く、これはおそらくＴ細胞の毒性に起因するものであった。ＢｓＡｂで処置されたマウスは、おそらくサイトカイン放出に起因して体重が減少したことも観察された。
【図７Ａ】ＩＬ１ＲＡＰ  ＣＡＲを形質導入したＪｕｒｋａｔ細胞がＡＭＬ細胞株と共培養すると活性化され得ることを示す図である。図７Ａ：改変された免疫グロブリンＧ４ヒンジ、改変されたＣＤ２８の膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメイン、並びにＣＤ３ｚシグナル伝達ドメインを含有するＣＡＲの概略図。Ｔ２Ａリボソームスキップ配列及びＥＧＦＲｔ形質導入マーカーも示されている。２９３Ｔ細胞に、ｐＲＳＶ−Ｒｅｖ、ｐＭＤＬｇ／ｐＲＲＥ、ｐＭＤ２．Ｇ及びｐＥＬＮＳ  ＣＡＲプラスミドをトランスフェクトし、２４時間及び４８時間に上清を収集し、合わせ、高速超遠心分離を使用して濃縮した。ＨＴ−７８細胞を用いてレンチウイルス力価を測定し、使用するまで−８０℃で保管した。
【図７Ｂ】ＩＬ１ＲＡＰ  ＣＡＲを形質導入したＪｕｒｋａｔ細胞がＡＭＬ細胞株と共培養すると活性化され得ることを示す図である。図７Ｂ：Ｊｕｒｋａｔ細胞を、ＩＬ１ＲＡＰ  ＣＡＲ又はニセＣＡＲのいずれかを用いて形質導入した。異なるＩＬ１ＲＡＰ発現レベルを表すＨＬ６０細胞、ＴＨＰ１細胞又はＫＧ１ａ細胞と別々に共培養したＪｕｒｋａｔ細胞についてＣＤ６９を検出した。Ｒａｊｉ細胞を陰性対照として使用した。ＩＬ１ＲＡＰ−ＣＡＲ細胞の活性化に関してＣＤ６９を検出した。ＩＬ１ＲＡＰを発現する標的細胞と共培養した場合にはＩＬ１ＲＡＰ−ＣＡＲ−Ｊｕｒｋａｔ細胞の活性化が観察されたが、ニセ−ＣＡＲ−Ｊｕｒｋａｔ細胞は静止したままであった。ＩＬ１ＲＡＰ−ＣＡＲ−Ｊｕｒｋａｔ細胞は、Ｒａｊｉ細胞と共培養又は単独で培養した場合にニセ−ＣＡＲ−Ｊｕｒｋａｔ細胞と同様に不活性のままであった。
【図８Ａ】ＡＭＬに対する免疫療法標的としてのＩＬ１ＲＡＰを示すグラフである。ＩＬＲＡＰ発現がフローサイトメトリーによってＡＭＬ細胞株（図８Ａ）及びＣＤ３４富化ＡＭＬ初代細胞（図８Ｂ）では検出されたが、ＣＤ３４＋富化正常骨髄細胞では検出されなかった（図８Ｃ）。
【図８Ｂ】ＡＭＬに対する免疫療法標的としてのＩＬ１ＲＡＰを示すグラフである。ＩＬＲＡＰ発現がフローサイトメトリーによってＡＭＬ細胞株（図８Ａ）及びＣＤ３４富化ＡＭＬ初代細胞（図８Ｂ）では検出されたが、ＣＤ３４＋富化正常骨髄細胞では検出されなかった（図８Ｃ）。
【図８Ｃ】ＡＭＬに対する免疫療法標的としてのＩＬ１ＲＡＰを示すグラフである。ＩＬＲＡＰ発現がフローサイトメトリーによってＡＭＬ細胞株（図８Ａ）及びＣＤ３４富化ＡＭＬ初代細胞（図８Ｂ）では検出されたが、ＣＤ３４＋富化正常骨髄細胞では検出されなかった（図８Ｃ）。
【図８Ｄ】ＡＭＬに対する免疫療法標的としてのＩＬ１ＲＡＰを示すグラフである。図８Ｄ：種々のＡＭＬ細胞株における、フローサイトメトリーによって決定される細胞当たりの特異的な抗原結合能（ＳＡＢＣ）。
【図８Ｅ】ＡＭＬに対する免疫療法標的としてのＩＬ１ＲＡＰを示すグラフである。図８Ｅ：ＩＬ１ＲＡＰ平均蛍光強度の変化倍率をＡＭＬバルク細胞（ｎ＝２５）、ＣＤ３４＋富化ＡＭＬ細胞（ｎ＝１８）、及びＣＤ３４＋富化正常骨髄細胞（ｎ＝４）の間で比較した。
【図８Ｆ】ＡＭＬに対する免疫療法標的としてのＩＬ１ＲＡＰを示すグラフである。図８Ｆ：ＣＤ３４＋富化ＡＭＬ細胞（ｎ＝９）におけるＩＬ１ＲＡＰ＋、ＣＤ１２３＋、ＣＬＬ−１＋及びＣＤ３３＋のパーセントを符号で示した。
【図８Ｇ】ＡＭＬに対する免疫療法標的としてのＩＬ１ＲＡＰを示すグラフである。図８Ｇ：ＣＤ３４＋富化正常骨髄細胞（ｎ＝５）における平均蛍光強度の変化倍率をＩＬ１ＲＡＰ、ＣＤ１２３、ＣＬＬ−１及びＣＤ３３について比較した。
【図８Ｈ】ＡＭＬに対する免疫療法標的としてのＩＬ１ＲＡＰを示すグラフである。図８Ｈ：ＣＤ３４＋富化正常骨髄細胞（ｎ＝５）におけるＩＬ１ＲＡＰ＋、ＣＤ１２３＋、ＣＬＬ−１＋及びＣＤ３３＋のパーセントを符号で示した。
【図８Ｉ】ＡＭＬに対する免疫療法標的としてのＩＬ１ＲＡＰを示すグラフである。図８Ｉ：Ｇ０期及びＧ１期のＣＤ３４＋富化ＡＭＬ細胞におけるＩＬ１ＲＡＰの平均蛍光強度を比較した（２７６８対３１８１、有意差なし）。
【図９Ａ】抗ＩＬ１ＲＡＰ／ＣＤ３二重特異性抗体を示す図である。図９Ａ：ＥＬＩＳＡによって決定された完全ヒト抗ＩＬ１ＲＡＰモノクローナル抗体のＥＣ５０。１Ｄ５により最低のＥＣ５０（４．９ｎｇ／ｍｌ）が示された。
【図９Ｂ】抗ＩＬ１ＲＡＰ／ＣＤ３二重特異性抗体を示す図である。図９Ｂ：Ｃｒ５１放出アッセイによって決定された１２種の候補モノクローナル抗体のＡＤＣＣ有効性。１Ｄ５により最も強力なＡＤＣＣ有効性が示された。
【図１０Ａ】種々の濃度及びＥ：Ｔ比におけるＭＭ００１（ＣＤ３／ＩＬ１ＲＡＰ二重特異性抗体）により誘導されるＴ細胞活性化及びＡＭＬ細胞死滅を示すグラフである。図１０Ａ：Ｔ細胞と種々のＡＭＬ細胞株（ＨＬ６０、ＭＶ４−１１、ＴＨＰ−１及びＫＧ−１ａ）をＥ：Ｔ比１：１でインキュベートすることでＴ細胞依存性細胞傷害性（ＴＤＣＣ）を試験し、インキュベート４８時間後に特異的溶解のパーセントを確認した。特異的溶解をフローサイトメトリーによって決定し、式：％特異的溶解＝［（標的細胞＋Ｔ細胞−標的細胞＋ＢｓＡｂ＋Ｔ細胞）］／標的細胞＋Ｔ細胞）×１００％を使用して算出した。平均ＩＣ５０は４５．１４ｐＭである。
【図１０Ｂ】種々の濃度及びＥ：Ｔ比におけるＭＭ００１（ＣＤ３／ＩＬ１ＲＡＰ二重特異性抗体）により誘導されるＴ細胞活性化及びＡＭＬ細胞死滅を示すグラフである。図１０Ｂ：死滅アッセイにおいて、ＣＤ２５及びＣＤ６９の上方制御によって示される通り、Ｔ細胞が活性化された。
【図１０Ｃ】種々の濃度及びＥ：Ｔ比におけるＭＭ００１（ＣＤ３／ＩＬ１ＲＡＰ二重特異性抗体）により誘導されるＴ細胞活性化及びＡＭＬ細胞死滅を示すグラフである。図１０Ｃ：同じ死滅アッセイにおけるＴ細胞によるサイトカイン放出をＥＬＩＳＡによって数量化した。
【図１０Ｄ】種々の濃度及びＥ：Ｔ比におけるＭＭ００１（ＣＤ３／ＩＬ１ＲＡＰ二重特異性抗体）により誘導されるＴ細胞活性化及びＡＭＬ細胞死滅を示すグラフである。図１０Ｄ：ＭＶ４−１１細胞を用いた長期間死滅アッセイを種々のＥ：Ｔ比及び種々の抗体濃度で実施した場合の死滅効力を比較した。
【図１０Ｅ】種々の濃度及びＥ：Ｔ比におけるＭＭ００１（ＣＤ３／ＩＬ１ＲＡＰ二重特異性抗体）により誘導されるＴ細胞活性化及びＡＭＬ細胞死滅を示すグラフである。図１０Ｅ：抗ＩＬ１ＲＡＰ／ＣＤ３二重特異性抗体により、健康なドナー由来のＴ細胞を用いたＥ：Ｔ比１：１での長期間死滅アッセイにおいてＣＤ３４＋富化ＡＭＬ細胞の特異的溶解が誘導された。
【図１０Ｆ】種々の濃度及びＥ：Ｔ比におけるＭＭ００１（ＣＤ３／ＩＬ１ＲＡＰ二重特異性抗体）により誘導されるＴ細胞活性化及びＡＭＬ細胞死滅を示すグラフである。サイトカイン、ＴＮＦ−α（図１０Ｆ）、ＩＦＮ−γ（図１０Ｇ）、及びグランザイムＢ（図１０Ｈ）をＥＬＩＳＡによって数量化した。
【図１０Ｇ】種々の濃度及びＥ：Ｔ比におけるＭＭ００１（ＣＤ３／ＩＬ１ＲＡＰ二重特異性抗体）により誘導されるＴ細胞活性化及びＡＭＬ細胞死滅を示すグラフである。サイトカイン、ＴＮＦ−α（図１０Ｆ）、ＩＦＮ−γ（図１０Ｇ）、及びグランザイムＢ（図１０Ｈ）をＥＬＩＳＡによって数量化した。
【図１０Ｈ】種々の濃度及びＥ：Ｔ比におけるＭＭ００１（ＣＤ３／ＩＬ１ＲＡＰ二重特異性抗体）により誘導されるＴ細胞活性化及びＡＭＬ細胞死滅を示すグラフである。サイトカイン、ＴＮＦ−α（図１０Ｆ）、ＩＦＮ−γ（図１０Ｇ）、及びグランザイムＢ（図１０Ｈ）をＥＬＩＳＡによって数量化した。
【図１０Ｉ】種々の濃度及びＥ：Ｔ比におけるＭＭ００１（ＣＤ３／ＩＬ１ＲＡＰ二重特異性抗体）により誘導されるＴ細胞活性化及びＡＭＬ細胞死滅を示すグラフである。図１０Ｉ：ＡＭＬ初代試料を用い、自己Ｔ細胞を使用した長期間死滅アッセイを行った。この試料では、Ｔ細胞のパーセントは８．９７％である。さらに２つの試料を試験した（図１４）。
【図１０Ｊ】種々の濃度及びＥ：Ｔ比におけるＭＭ００１（ＣＤ３／ＩＬ１ＲＡＰ二重特異性抗体）により誘導されるＴ細胞活性化及びＡＭＬ細胞死滅を示すグラフである。図１０Ｊ：抗ＣＤ１９／ＣＤ３アイソタイプ対照により自己Ｔ細胞死滅アッセイにおけるベースライン死滅が示された。
【図１０Ｋ】種々の濃度及びＥ：Ｔ比におけるＭＭ００１（ＣＤ３／ＩＬ１ＲＡＰ二重特異性抗体）により誘導されるＴ細胞活性化及びＡＭＬ細胞死滅を示すグラフである。図１０Ｋ：長期間死滅アッセイにおける組換えＩＬ１ＲＡＰの添加により、抗ＩＬ１ＲＡＰ／ＣＤ３二重特異性抗体に対して死滅効力への有意な干渉は示されなかった。
【図１１Ａ】ＭＭ００１によりＣＤ３４＋富化正常骨髄細胞に対する最小の毒性が誘導されたことを示すグラフである。図１１Ａ：正常骨髄由来のＣＤ３４＋富化細胞におけるＩＬ１ＲＡＰ発現、ＣＤ１２３発現及びＣＤ３３発現。
【図１１Ｂ】ＭＭ００１によりＣＤ３４＋富化正常骨髄細胞に対する最小の毒性が誘導されたことを示すグラフである。図１１Ｂ：ＭＭ００１を種々の濃度（３．１５ｎＭ、１．０５ｎＭ、及び０ｎＭ）で添加して、異なる健康な３ドナー由来のＣＤ３４＋正常骨髄細胞１×１０４個を自己Ｔ細胞とＥ：Ｔ比１：１で混合して２４時間置いた。次いで、細胞の４分の１について先にコロニー形成アッセイを行った。コロニー数を比較した。
【図１１Ｃ】ＭＭ００１によりＣＤ３４＋富化正常骨髄細胞に対する最小の毒性が誘導されたことを示すグラフである。ＭＭ００１（図１１Ｃ）及びアイソタイプ対照（図１１Ｄ）によるＣＤ３４＋富化正常骨髄細胞の特異的死滅を４８時間の長期間死滅アッセイによって決定した。
【図１１Ｄ】ＭＭ００１によりＣＤ３４＋富化正常骨髄細胞に対する最小の毒性が誘導されたことを示すグラフである。ＭＭ００１（図１１Ｃ）及びアイソタイプ対照（図１１Ｄ）によるＣＤ３４＋富化正常骨髄細胞の特異的死滅を４８時間の長期間死滅アッセイによって決定した。
【図１２Ａ】ＭＭ００１のインビボ有効性試験を示す図である。図１２Ａ；実験設計。ＭＶ４−１１細胞１×１０６個を各マウスに尾静脈を介して注射した。７日目にマウス当たり二重特異性抗体２００μｇ及びＴ細胞３×１０６個を用いて処置を開始した。その後の処置及びイメージング時間を矢印で示した。
【図１２Ｂ】ＭＭ００１のインビボ有効性試験を示す図である。図１２Ｂ：腫瘍成長を生物発光イメージングによってモニタリングした。ビヒクル、Ｔ細胞のみ、又は対照ＢｓＡｂプラスＴ細胞で処理したＭＶ４−１１Ｌｕｃｉ細胞を移植したＮＳＧマウスでは白血病の広範な浸潤が見られた。
【図１２Ｃ】ＭＭ００１のインビボ有効性試験を示す図である。図１２Ｃ：各群（ｎ＝５）についての生存のカプラン・マイヤー分析。特に、Ｔ細胞で処置したマウスの生存は対照マウスよりも短く、これはおそらくＴ細胞の毒性に起因するものであった。ＢｓＡｂで処置されたマウスは、おそらくサイトカイン放出に起因して体重が減少した。
【図１２Ｄ】ＭＭ００１のインビボ有効性試験を示す図である。図１２Ｄ：各処置群についての経時的な生物発光シグナル。
【図１３Ａ】ＡＭＬ細胞における候補ＡＭＬ免疫療法標的の発現を示す図である。種々のＡＭＬ細胞株におけるＩＬ１ＲＡＰ（図１３Ａ）、ＣＤ１２３（図１３Ｂ）、及びＣＤ３３（図１３Ｃ）発現フローサイトメトリーによって検出した。
【図１３Ｂ】ＡＭＬ細胞における候補ＡＭＬ免疫療法標的の発現。種々のＡＭＬ細胞株におけるＩＬ１ＲＡＰ（図１３Ａ）、ＣＤ１２３（図１３Ｂ）、及びＣＤ３３（図１３Ｃ）発現フローサイトメトリーによって検出した。
【図１３Ｃ】ＡＭＬ細胞における候補ＡＭＬ免疫療法標的の発現。種々のＡＭＬ細胞株におけるＩＬ１ＲＡＰ（図１３Ａ）、ＣＤ１２３（図１３Ｂ）、及びＣＤ３３（図１３Ｃ）発現フローサイトメトリーによって検出した。
【図１３Ｄ】ＡＭＬ細胞における候補ＡＭＬ免疫療法標的の発現。ＡＭＬ細胞株における細胞当たりの特異的結合コピー（ＡＢＣ又は抗体結合コピー）をＩＬ１ＲＡＰ（図１３Ｄ）、ＣＤ１２３（図１３Ｅ）、及びＣＤ３３（図１３Ｆ）について決定した。
【図１３Ｅ】ＡＭＬ細胞における候補ＡＭＬ免疫療法標的の発現。ＡＭＬ細胞株における細胞当たりの特異的結合コピー（ＡＢＣ又は抗体結合コピー）をＩＬ１ＲＡＰ（図１３Ｄ）、ＣＤ１２３（図１３Ｅ）、及びＣＤ３３（図１３Ｆ）について決定した。
【図１３Ｆ】ＡＭＬ細胞における候補ＡＭＬ免疫療法標的の発現。ＡＭＬ細胞株における細胞当たりの特異的結合コピー（ＡＢＣ又は抗体結合コピー）をＩＬ１ＲＡＰ（図１３Ｄ）、ＣＤ１２３（図１３Ｅ）、及びＣＤ３３（図１３Ｆ）について決定した。
【図１４Ａ】ＭＭ００１によって誘導される自己Ｔ細胞によるＡＭＬ初代試料の死滅を示すグラフである。Ｔ細胞のパーセントは、ＡＭＬ２２２４では８．９７％であり（図１４Ａ）、ＡＭＬ２５１５では４．３５％であり（図１４Ｄ）、ＡＭＬ３４４８では３．０５％であった（図１４Ｇ）。ＩＬ１ＲＡＰ＋細胞のパーセントは、ＡＭＬ２２２４では８７．１％であり（図１４Ｂ）、ＡＭＬ２５１５では９４．２％であり（図１４Ｅ）、ＡＭＬ３４４８では９５．９％であった（図１４Ｈ）。ＡＭＬ試料に示されている濃度のＭＭ００１を添加することによって死滅アッセイを行った。４日目、６日目、及び８日目に特異的溶解を検出した。実際のＥ：Ｔ比はＡＭＬ２２２４については１：１０であり（図１４Ｃ）、ＡＭＬ２５１５については１：２１．９であり（図１４Ｆ）、ＡＭＬ３４４８については１：３１．８であった（図１４Ｉ）。
【図１４Ｂ】ＭＭ００１によって誘導される自己Ｔ細胞によるＡＭＬ初代試料の死滅を示すグラフである。Ｔ細胞のパーセントは、ＡＭＬ２２２４では８．９７％であり（図１４Ａ）、ＡＭＬ２５１５では４．３５％であり（図１４Ｄ）、ＡＭＬ３４４８では３．０５％であった（図１４Ｇ）。ＩＬ１ＲＡＰ＋細胞のパーセントは、ＡＭＬ２２２４では８７．１％であり（図１４Ｂ）、ＡＭＬ２５１５では９４．２％であり（図１４Ｅ）、ＡＭＬ３４４８では９５．９％であった（図１４Ｈ）。ＡＭＬ試料に示されている濃度のＭＭ００１を添加することによって死滅アッセイを行った。４日目、６日目、及び８日目に特異的溶解を検出した。実際のＥ：Ｔ比はＡＭＬ２２２４については１：１０であり（図１４Ｃ）、ＡＭＬ２５１５については１：２１．９であり（図１４Ｆ）、ＡＭＬ３４４８については１：３１．８であった（図１４Ｉ）。
【図１４Ｃ】ＭＭ００１によって誘導される自己Ｔ細胞によるＡＭＬ初代試料の死滅を示すグラフである。Ｔ細胞のパーセントは、ＡＭＬ２２２４では８．９７％であり（図１４Ａ）、ＡＭＬ２５１５では４．３５％であり（図１４Ｄ）、ＡＭＬ３４４８では３．０５％であった（図１４Ｇ）。ＩＬ１ＲＡＰ＋細胞のパーセントは、ＡＭＬ２２２４では８７．１％であり（図１４Ｂ）、ＡＭＬ２５１５では９４．２％であり（図１４Ｅ）、ＡＭＬ３４４８では９５．９％であった（図１４Ｈ）。ＡＭＬ試料に示されている濃度のＭＭ００１を添加することによって死滅アッセイを行った。４日目、６日目、及び８日目に特異的溶解を検出した。実際のＥ：Ｔ比はＡＭＬ２２２４については１：１０であり（図１４Ｃ）、ＡＭＬ２５１５については１：２１．９であり（図１４Ｆ）、ＡＭＬ３４４８については１：３１．８であった（図１４Ｉ）。
【図１４Ｄ】ＭＭ００１によって誘導される自己Ｔ細胞によるＡＭＬ初代試料の死滅を示すグラフである。Ｔ細胞のパーセントは、ＡＭＬ２２２４では８．９７％であり（図１４Ａ）、ＡＭＬ２５１５では４．３５％であり（図１４Ｄ）、ＡＭＬ３４４８では３．０５％であった（図１４Ｇ）。ＩＬ１ＲＡＰ＋細胞のパーセントは、ＡＭＬ２２２４では８７．１％であり（図１４Ｂ）、ＡＭＬ２５１５では９４．２％であり（図１４Ｅ）、ＡＭＬ３４４８では９５．９％であった（図１４Ｈ）。ＡＭＬ試料に示されている濃度のＭＭ００１を添加することによって死滅アッセイを行った。４日目、６日目、及び８日目に特異的溶解を検出した。実際のＥ：Ｔ比はＡＭＬ２２２４については１：１０であり（図１４Ｃ）、ＡＭＬ２５１５については１：２１．９であり（図１４Ｆ）、ＡＭＬ３４４８については１：３１．８であった（図１４Ｉ）。
【図１４Ｅ】ＭＭ００１によって誘導される自己Ｔ細胞によるＡＭＬ初代試料の死滅を示すグラフである。Ｔ細胞のパーセントは、ＡＭＬ２２２４では８．９７％であり（図１４Ａ）、ＡＭＬ２５１５では４．３５％であり（図１４Ｄ）、ＡＭＬ３４４８では３．０５％であった（図１４Ｇ）。ＩＬ１ＲＡＰ＋細胞のパーセントは、ＡＭＬ２２２４では８７．１％であり（図１４Ｂ）、ＡＭＬ２５１５では９４．２％であり（図１４Ｅ）、ＡＭＬ３４４８では９５．９％であった（図１４Ｈ）。ＡＭＬ試料に示されている濃度のＭＭ００１を添加することによって死滅アッセイを行った。４日目、６日目、及び８日目に特異的溶解を検出した。実際のＥ：Ｔ比はＡＭＬ２２２４については１：１０であり（図１４Ｃ）、ＡＭＬ２５１５については１：２１．９であり（図１４Ｆ）、ＡＭＬ３４４８については１：３１．８であった（図１４Ｉ）。
【図１４Ｆ】ＭＭ００１によって誘導される自己Ｔ細胞によるＡＭＬ初代試料の死滅を示すグラフである。Ｔ細胞のパーセントは、ＡＭＬ２２２４では８．９７％であり（図１４Ａ）、ＡＭＬ２５１５では４．３５％であり（図１４Ｄ）、ＡＭＬ３４４８では３．０５％であった（図１４Ｇ）。ＩＬ１ＲＡＰ＋細胞のパーセントは、ＡＭＬ２２２４では８７．１％であり（図１４Ｂ）、ＡＭＬ２５１５では９４．２％であり（図１４Ｅ）、ＡＭＬ３４４８では９５．９％であった（図１４Ｈ）。ＡＭＬ試料に示されている濃度のＭＭ００１を添加することによって死滅アッセイを行った。４日目、６日目、及び８日目に特異的溶解を検出した。実際のＥ：Ｔ比はＡＭＬ２２２４については１：１０であり（図１４Ｃ）、ＡＭＬ２５１５については１：２１．９であり（図１４Ｆ）、ＡＭＬ３４４８については１：３１．８であった（図１４Ｉ）。
【図１４Ｇ】ＭＭ００１によって誘導される自己Ｔ細胞によるＡＭＬ初代試料の死滅を示すグラフである。Ｔ細胞のパーセントは、ＡＭＬ２２２４では８．９７％であり（図１４Ａ）、ＡＭＬ２５１５では４．３５％であり（図１４Ｄ）、ＡＭＬ３４４８では３．０５％であった（図１４Ｇ）。ＩＬ１ＲＡＰ＋細胞のパーセントは、ＡＭＬ２２２４では８７．１％であり（図１４Ｂ）、ＡＭＬ２５１５では９４．２％であり（図１４Ｅ）、ＡＭＬ３４４８では９５．９％であった（図１４Ｈ）。ＡＭＬ試料に示されている濃度のＭＭ００１を添加することによって死滅アッセイを行った。４日目、６日目、及び８日目に特異的溶解を検出した。実際のＥ：Ｔ比はＡＭＬ２２２４については１：１０であり（図１４Ｃ）、ＡＭＬ２５１５については１：２１．９であり（図１４Ｆ）、ＡＭＬ３４４８については１：３１．８であった（図１４Ｉ）。
【図１４Ｈ】ＭＭ００１によって誘導される自己Ｔ細胞によるＡＭＬ初代試料の死滅を示すグラフである。Ｔ細胞のパーセントは、ＡＭＬ２２２４では８．９７％であり（図１４Ａ）、ＡＭＬ２５１５では４．３５％であり（図１４Ｄ）、ＡＭＬ３４４８では３．０５％であった（図１４Ｇ）。ＩＬ１ＲＡＰ＋細胞のパーセントは、ＡＭＬ２２２４では８７．１％であり（図１４Ｂ）、ＡＭＬ２５１５では９４．２％であり（図１４Ｅ）、ＡＭＬ３４４８では９５．９％であった（図１４Ｈ）。ＡＭＬ試料に示されている濃度のＭＭ００１を添加することによって死滅アッセイを行った。４日目、６日目、及び８日目に特異的溶解を検出した。実際のＥ：Ｔ比はＡＭＬ２２２４については１：１０であり（図１４Ｃ）、ＡＭＬ２５１５については１：２１．９であり（図１４Ｆ）、ＡＭＬ３４４８については１：３１．８であった（図１４Ｉ）。
【図１４Ｉ】ＭＭ００１によって誘導される自己Ｔ細胞によるＡＭＬ初代試料の死滅を示すグラフである。Ｔ細胞のパーセントは、ＡＭＬ２２２４では８．９７％であり（図１４Ａ）、ＡＭＬ２５１５では４．３５％であり（図１４Ｄ）、ＡＭＬ３４４８では３．０５％であった（図１４Ｇ）。ＩＬ１ＲＡＰ＋細胞のパーセントは、ＡＭＬ２２２４では８７．１％であり（図１４Ｂ）、ＡＭＬ２５１５では９４．２％であり（図１４Ｅ）、ＡＭＬ３４４８では９５．９％であった（図１４Ｈ）。ＡＭＬ試料に示されている濃度のＭＭ００１を添加することによって死滅アッセイを行った。４日目、６日目、及び８日目に特異的溶解を検出した。実際のＥ：Ｔ比はＡＭＬ２２２４については１：１０であり（図１４Ｃ）、ＡＭＬ２５１５については１：２１．９であり（図１４Ｆ）、ＡＭＬ３４４８については１：３１．８であった（図１４Ｉ）。
【図１５Ａ】ＩＬ１ＲＡＰを標的とするＣＡＲ−Ｔ細胞（ＣＭ００１）の設計及び有効性試験を示す図である。１５Ａ：ＣＤ８ヒンジ膜貫通ドメイン、及び４−１ＢＢの細胞内シグナル伝達ドメイン、及びＣＤ３ｚシグナル伝達ドメインを含有するＣＡＲの概略図。ＣＭ００１の死滅効力についてＭＶ４−１１細胞（１５Ｂ）、ＨＬ６０（１５Ｃ）、及びＫＧ−１ａ（１５Ｄ）を種々のＥ：Ｔ比で用いた長期間死滅アッセイを行った。
【図１５Ｂ】ＩＬ１ＲＡＰを標的とするＣＡＲ−Ｔ細胞（ＣＭ００１）の設計及び有効性試験を示す図である。ＣＭ００１の死滅効力についてＭＶ４−１１細胞（１５Ｂ）、ＨＬ６０（１５Ｃ）、及びＫＧ−１ａ（１５Ｄ）を種々のＥ：Ｔ比で用いた長期間死滅アッセイを行った。
【図１５Ｃ】ＩＬ１ＲＡＰを標的とするＣＡＲ−Ｔ細胞（ＣＭ００１）の設計及び有効性試験を示す図である。ＣＭ００１の死滅効力についてＭＶ４−１１細胞（１５Ｂ）、ＨＬ６０（１５Ｃ）、及びＫＧ−１ａ（１５Ｄ）を種々のＥ：Ｔ比で用いた長期間死滅アッセイを行った。
【図１５Ｄ】ＩＬ１ＲＡＰを標的とするＣＡＲ−Ｔ細胞（ＣＭ００１）の設計及び有効性試験を示す図である。ＣＭ００１の死滅効力についてＭＶ４−１１細胞（１５Ｂ）、ＨＬ６０（１５Ｃ）、及びＫＧ−１ａ（１５Ｄ）を種々のＥ：Ｔ比で用いた長期間死滅アッセイを行った。
【図１６Ａ】ＣＤ３４＋富化ＡＭＬ細胞を用いたＣＭ００１の有効性評価を示すグラフである。１６Ａ：示されているＥ：Ｔ比におけるＩＬ１ＲＡＰ特異的ＣＡＲ−Ｔ細胞によるＣＤ３４＋８８６ＡＭＬ細胞の死滅。サイトカインを、ＩＦＮ−γ（パネル１）、ＴＮＦ−α（パネル２）、及びグランザイムＢ（パネル３）についてＥＬＩＳＡによって決定した。
【図１６Ｂ】ＣＤ３４＋富化ＡＭＬ細胞を用いたＣＭ００１の有効性評価を示すグラフである。１６Ｂ：示されているＥ：Ｔ比におけるＩＬ１ＲＡＰ特異的ＣＡＲ−Ｔ細胞によるＣＤ３４＋２３６０ＡＭＬ細胞の死滅。サイトカインを、ＩＦＮ−γ（パネル１）、ＴＮＦ−α（パネル２）、及びグランザイムＢ（パネル３）についてＥＬＩＳＡによって決定した。
【図１６Ｃ】ＣＤ３４＋富化ＡＭＬ細胞を用いたＣＭ００１の有効性評価を示すグラフである。１６Ｃ：示されているＥ：Ｔ比におけるＩＬ１ＲＡＰ特異的ＣＡＲ−Ｔ細胞によるＣＤ３４＋２５６８ＡＭＬ細胞の死滅。サイトカインを、ＩＦＮ−γ（パネル１）、ＴＮＦ−α（パネル２）、及びグランザイムＢ（パネル３）についてＥＬＩＳＡによって決定した。
【図１６Ｄ】ＣＤ３４＋富化ＡＭＬ細胞を用いたＣＭ００１の有効性評価を示すグラフである。１６Ｄ：示されているＥ：Ｔ比におけるＩＬ１ＲＡＰ特異的ＣＡＲ−Ｔ細胞によるＣＤ３４＋１００３ＡＭＬ細胞の死滅。サイトカインを、ＩＦＮ−γ（パネル１）、ＴＮＦ−α（パネル２）、及びグランザイムＢ（パネル３）についてＥＬＩＳＡによって決定した。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明の種々の実施形態及び態様が本明細書で示され説明されるが、そのような実施形態及び態様は例としてのみ提供されていることは当業者には明らかである。本発明から逸脱することなく、数多くの変動、変化及び置き換えが、ここで当業者には思い浮かぶであろう。本発明を実行する際には、本明細書に記載される本発明の実施形態の種々の代替案を用いてもよいことは理解するべきである。
【００１７】
本明細書で使用される見出しは構成上の目的のみのものであり、記載される主題を限定すると解釈するべきではない。限定せずに、特許、特許出願、論文、書籍、説明書及び専門書を含む、本出願で引用されるすべての文書、又は文書の一部はこれによりその全体をあらゆる目的のために参照により本明細書に明白に組み込まれる。
【００１８】
定義
別段に定義されなければ、本明細書で使用される専門及び科学用語は、当業者が一般に理解しているのと同じ意味を有する。例えば、Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎら、ＤＩＣＴＩＯＮＡＲＹ  ＯＦ  ＭＩＣＲＯＢＩＯＬＯＧＹ  ＡＮＤ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ第２版、Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ＮＹ  １９９４）；Ｓａｍｂｒｏｏｋら、ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ、Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇｓ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇｓ  Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ  １９８９）を参照されたい。本明細書に記載される方法、装置及び材料に類似する又は等価であるいかなる方法、装置及び材料も、本発明の実行において使用可能である。以下の定義は、本明細書で頻繁に使用されるある特定の用語の理解を促進するために提供されており、本開示の範囲を限定することを意図していない。
【００１９】
「核酸」とは、一本鎖又は二本鎖形態のデオキシリボヌクレオチド又はリボヌクレオチド及びこのポリマー、並びにこの相補体のことである。用語「ポリヌクレオチド」は、ヌクレオチドの直鎖状配列のことである。用語「ヌクレオチド」は典型的には、ポリヌクレオチドの一単位、すなわち、モノマーのことである。ヌクレオチドは、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド又はこの改変バージョンが可能である。本明細書で想定されるポリヌクレオチドの例は、一本及び二本鎖ＤＮＡ、一本及び二本鎖ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡを含む）並びに一本及び二本鎖ＤＮＡとＲＮＡの混合物を有するハイブリッド分子を含む。本明細書で使用される核酸とは、天然に存在する核酸と同じ基本的化学構造を有する核酸のことでもある。そのような類似物は改変された糖及び／又は改変された環置換基を有するが、天然に存在する核酸と同じ基本的化学構造を保持している。核酸模倣物とは、核酸の一般的化学構造とは異なっているが、天然に存在する核酸に類似するように機能する構造を有する化学化合物のことである。そのような類似物の例は、限定せずに、ホスホロチオエート、ホスホロアミド酸、メチルホスホン酸、キラルメチルホスホン酸、２−Ｏ−メチルリボヌクレオチド及びペプチド核酸（ＰＮＡ）を含む。
【００２０】
用語「アミノ酸」とは、天然に存在する及び合成アミノ酸、並びに天然に存在するアミノ酸に類似するように機能するアミノ酸類似物及びアミノ酸模倣物のことである。天然に存在するアミノ酸は、遺伝コードによりコードされるアミノ酸、並びに後に改変されるアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタミン酸及びＯ−ホスホセリンである。アミノ酸類似物とは、天然に存在するアミノ酸と同じ基本的化学構造、すなわち、水素、カルボキシル基、アミノ基及びＲ基、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムに結合しているα炭素を有する化合物のことである。そのような類似物は、改変されたＲ基（例えば、ノルロイシン）又は改変されたペプチド骨格を有するが、天然に存在するアミノ酸と同じ基本的化学構造を保持している。アミノ酸模倣物とは、アミノ酸の一般的化学構造とは異なっているが、天然に存在するアミノ酸に類似するように機能する構造を有する化学化合物のことである。
【００２１】
アミノ酸は、本明細書では、その一般的に知られている３文字記号により又はＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎにより推奨される１文字記号により参照されてもよい。ヌクレオチドは、同様に、その一般的に認められている１文字コードにより参照されてもよい。
【００２２】
用語「ポリペプチド」、「ペプチド」及び「タンパク質」は本明細書では互換的に使用されて、アミノ酸残基のポリマーを指す。この用語は、１つ以上のアミノ酸残基が対応する天然に存在するアミノ酸の人工的化学模倣物であるアミノ酸ポリマー並びに天然に存在するアミノ酸ポリマー及び天然に存在しないアミノ酸ポリマーに当てはまる。
【００２３】
アミノ酸又はヌクレオチド塩基「位」は、Ｎ終端（又は５’末端）に対するその位置に基づいて参照配列中のそれぞれのアミノ酸（又はヌクレオチド塩基）を順次特定する数字により表される。最適アライメントを決定する際に考慮する場合がある欠失、挿入、切詰め、融合などに起因して、一般にＮ終端から単純に数えることにより決定される試験配列中のアミノ酸残基数は必ずしも参照配列中のその対応する位置の数と同じであるわけではない。例えば、整列された参照配列と比べて変異体に欠失がある場合、参照配列中の欠失部位の位置に対応するアミノ酸は変異体中には存在しないことになる。整列させた参照配列中に挿入がある場合、その挿入は参照配列中の番号を付けたアミノ酸位置に一致しないことになる。切詰め又は融合の場合、参照配列又は整列させた配列には、対応する配列中のいかなるアミノ酸とも一致しないアミノ酸のストレッチが存在しうる。
【００２４】
用語「に関して番号付けされた」又は「に対応する」とは、所与のアミノ酸又はポリヌクレオチド配列の番号付けという文脈で使用される場合、所与のアミノ酸又はポリヌクレオチド配列が参照配列と比較される場合の特定の参照配列の残基の番号付けのことである。タンパク質中のアミノ酸残基は、それが所与の残基とタンパク質内の同じ必須の構造上の位置を占める場合、所与の残基に「対応する」。例えば、選択された抗体（又はＦａｂドメイン）中の選択された残基は、選択された残基がＫａｂａｔ位４０の軽鎖スレオニンと同じ必須の空間的又は他の構造的関係を占める場合、Ｋａｂａｔ位４０の軽鎖スレオニンに対応する。一部の実施形態では、選択されたタンパク質が抗体（又はＦａｂドメイン）の軽鎖と最大相同性になるように整列される場合、スレオニン４０と整列する整列され選択されたタンパク質の位置はスレオニン４０に対応すると言われる。例えば、選択されたタンパク質の構造がＫａｂａｔ位４０の軽鎖スレオニンとの最大一致になるように整列され、全体構造が比較される場合、一次配列アライメントに代わって、三次元構造アライメントを使用することも可能である。この場合、構造モデル中のスレオニン４０と同じ必須の位置を占めるアミノ酸はスレオニン４０残基に対応すると言われる。
【００２５】
「保存的に改変された変異体」はアミノ酸配列にも核酸配列にも適用される。特定の核酸配列に関して、「保存的に改変された変異体」は同一の又は本質的に同一のアミノ酸配列をコードする核酸のことである。遺伝コードの縮重のせいで、いくつかの核酸配列は任意の与えられたタンパク質をコードする。例えば、コドンＧＣＡ、ＧＣＣ、ＧＣＧ及びＧＣＵはすべてアミノ酸アラニンをコードする。したがって、アラニンがコドンにより特定されるすべての位置で、コドンは、コードされたポリペプチド変更せずに記載された対応するコドンのいずれにも変更することが可能である。そのような核酸バリエーションは「サイレントバリエーション」であり、このバリエーションは保存的に改変されたバリエーションの一種である。ポリペプチドをコードする本明細書のすべての核酸配列は、核酸のすべての可能なサイレントバリエーションも記載している。当業者であれば、核酸のそれぞれのコドン（通常はメチオニンを表す唯一のコドンであるＡＵＧ及び通常、トリプトファンを表す唯一のコドンであるＴＧＧを除いて）は機能的に同一の分子を生じるように改変することが可能であることを認識する。したがって、ポリペプチドをコードする核酸のそれぞれのサイレントバリエーションはそれぞれの記載される配列に潜在している。
【００２６】
アミノ酸配列に関して、当業者であれば、コードされた配列中の単一のアミノ酸又はわずかなパーセントのアミノ酸を変更する、付加する又は欠失する核酸、ペプチド、ポリペプチド又はタンパク質配列への個々の置換、欠失又は付加は、変更がアミノ酸を化学的に類似するアミノ酸で置き換えることになる「保存的に改変された変異体」であることを認識する。機能的に類似するアミノ酸を提供する保存的置換表は当技術分野では周知である。そのような保存的に改変された変異体は、本発明の多形変異体、種間ホモログ及び対立遺伝子に対して追加的であり、これらを排除しない。
【００２７】
以下の８つのグループそれぞれが互いに対して保存的置換であるアミノ酸を含有する：
１）アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）；
２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）；
３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）；
４）アルギニン（Ｒ）、リジン（Ｋ）；
５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）；
６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）；
７）セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）；及び
８）システイン（Ｃ）、メチオニン（Ｍ）
（例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ（１９８４）参照）。
【００２８】
用語「同一の」又はパーセント「同一性」とは、２つ以上の核酸又はポリペプチド配列という文脈では、以下の配列比較アルゴリズムのうちの１つを使用して又は手動アライメント及び目視検査により測定される比較窓若しくは指示された領域にわたって最大一致になるように比較され整列される場合、同じである、又は同じである（すなわち、例えば、本発明の全ポリペプチド配列又は本発明のポリペプチドの個々のドメインの特定の領域にわたり６０％同一性、任意選択で６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、又は９９％同一性）特定のパーセントのアミノ酸残基若しくはヌクレオチドを有する２つ以上の配列又は部分配列のことである。次に、そのような配列は「実質的に同一である」と言われる。この定義は、試験配列の相補体のことでもある。任意選択で、少なくとも約５０ヌクレオチド長である領域にわたり、又はさらに好ましくは１００〜５００又は１０００又はそれよりも多いヌクレオチド長である領域にわたり同一性が存在する。
【００２９】
「配列同一性のパーセント」は、比較窓にわたり２つの最適に整列された配列を比べることにより決定され、比較窓中のポリヌクレオチド又はポリペプチド配列の一部は参照配列（付加も欠失も含まない）と比べた場合、付加又は欠失（すなわち、ギャップ）を含んでいてもよい。パーセントは、同一の核酸塩基又はアミノ酸残基が両方の配列中に存在する位置の数を決めて適合する位置の数を得て、適合する位置の数を比較窓中の位置の全数で割ってその結果に１００を掛けて配列同一性のパーセントを得ることにより計算される。
【００３０】
配列比較では、典型的には１つの配列は参照配列として働き、その配列と試験配列を比較する。配列比較アルゴリズムを使用する場合、試験及び参照配列をコンピュータに入力し、必要であれば配列座標を指定し、配列アルゴリズムプログラムパラメータを指定する。デフォルトプログラムパラメータを使用可能である、又は別のパラメータを指定することが可能である。次に、配列比較アルゴリズムは、プログラムパラメータに基づいて、参照配列と比べた試験配列についてパーセント配列同一性を計算する。
【００３１】
「比較窓」は、本明細書で使用される場合、配列を、２つの配列が最適に整列された後同じ数の連続する位置の参照配列と比較してもよい、例えば、完全長配列又は２０〜６００、約５０〜約２００、若しくは約１００〜約１５０アミノ酸若しくはヌクレオチドからなる群から選択される連続する位置の数のいずれか１つのセグメントへの参照を含む。比較のための配列のアライメントの方法は当技術分野では周知である。比較のための配列の最適アライメントは、例えば、Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｗａｔｅｒｍａｎ（１９７０）Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２ｃの局所的相同性アルゴリズムにより、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３の相同性アライメントアルゴリズムにより、Ｐｅａｒｓｏｎ  ａｎｄ  Ｌｉｐｍａｎ（１９８８）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：２４４４頁の類似性検索法により、これらのアルゴリズム（ｔｈｅ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ、５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩのＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ及びＴＦＡＳＴＡ）のコンピュータ処理実装により、又は手動アライメント及び目視検査により行うことが可能である（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９９５  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）参照）。
【００３２】
パーセント配列同一性及び配列類似性を決定するのに適しているアルゴリズムの例は、ＢＬＡＳＴ及びＢＬＡＳＴ２．０アルゴリズムであり、これらはそれぞれＡｌｔｓｃｈｕｌら、（１９７７）Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９〜３４０２頁及びＡｌｔｓｃｈｕｌら、（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３〜４１０頁に記載されている。ＢＬＡＳＴ解析を実施するためのソフトウェアはＮａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）を通じて一般公開されている。このアルゴリズムは先ず、問い合わせ配列中の長さＷの短いワードを同定することにより高スコアリング配列対（ＨＳＰ）を同定することを含み、このワードはデータベース配列中の同じ長さのワードと整列させると、ある正値閾値スコアと適合する又はこれを満たす。Ｔは近傍ワードスコア閾値と呼ばれる（Ａｌｔｓｃｈｕｌら、ｓｕｐｒａ）。これらの開始近傍ワードヒットは、それを含有するもっと長いＨＳＰを見つけるための検索を開始するためのシーズとして働く。ワードヒットは、累積アライメントスコアを増やすことができる限りそれぞれの配列に沿って両方向に伸長される。累積スコアは、ヌクレオチド配列ではパラメータＭ（マッチング残基の対についての報酬スコア：常に＞０）及びＮ（ミスマッチング残基についてのペナルティースコア；常に＜０）を使用して計算される。アミノ酸配列では、スコアマトリックスを使用して累積スコアを計算する。それぞれの方向でのワードの伸長は、累積アライメントスコアがその最大到達値から量Ｘ落ちた時；累積スコアが１つ以上のマイナススコアリング残基アライメントの蓄積のせいでゼロ以下になった時；又はどちらかの配列の終わりに達した時に停止させる。ＢＬＡＳＴアルゴリズムパラメータＷ、Ｔ及びＸはアライメントの感度及び速度を決定する。ＢＬＡＳＴＮプログラム（ヌクレオチド配列について）はデフォルトとしてワード長（Ｗ）１１、見込み（Ｅ）又は１０、Ｍ＝５、Ｎ＝−４及び両方の鎖の比較を使用する。アミノ酸配列では、ＢＬＡＳＴＰプログラムはデフォルトとしてワード長３、及び見込み（Ｅ）１０、並びにＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックス（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ  ａｎｄ  Ｈｅｎｉｋｏｆｆ（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：１０９１５頁参照）アライメント（Ｂ）５０、見込み（Ｅ）又は１０、Ｍ＝５、Ｎ＝−４及び両方の鎖の比較を使用する。
【００３３】
ＢＬＡＳＴアルゴリズムは２つの配列間の類似性の統計分析も実施する（例えば、Ｋａｒｌｉｎ  ａｎｄ  Ａｌｔｓｃｈｕｌ（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：５８７３〜５７８７頁参照）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムにより提供される類似性の１つの基準は、最少和確率（Ｐ（Ｎ））であり、これは２つのヌクレオチド又はアミノ酸配列間の適合が偶然起こる確率の表示を提供する。例えば、核酸は、試験核酸と参照核酸の比較で最少和確率が約０．２未満、さらに好ましくは約０．０１未満、もっとも好ましくは約０．００１未満である場合には、参照配列に類似していると見なされる。
【００３４】
下記の通り、２つの核酸配列又はポリペプチドが実質的に同じであることを示すのは、最初の核酸によりコードされるポリペプチドが第２の核酸によりコードされるポリペプチドに対して産生される抗体と免疫学的に交差反応性であることである。したがって、ポリペプチドは典型的には、例えば、２つのポリペプチドが保存的置換のみが異なっている場合には、第２のポリペプチドと実質的に同一である。下記の通り、２つの核酸配列が実質的に同一であることをもう１つ示すものは、２つの分子又はその相補体が厳密な条件下で互いにハイブリダイズすることである。２つの核酸配列が実質的に同一であることをさらにもう１つ示すものは、同じプライマーを使用してその配列を増幅することが可能なことである。
【００３５】
抗体は、複雑な内部構造を持つ大きな複合分子（分子量約１５０，０００又は約１３２０アミノ酸）である。天然の抗体分子は、それぞれの対が１つの軽鎖及び１つの重鎖を有する２つの同一対のポリペプチド鎖を含有する。それぞれの軽鎖及び重鎖は、今度は２つの領域：標的抗原との結合に関与する可変（「Ｖ」）領域、及び免疫系の他の構成成分と相互作用する定常（「Ｃ」）領域からなる。軽及び重鎖可変（ＶＨ）領域（本明細書では軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン及び重鎖可変（ＶＨ）ドメインとも呼ばれる）は三次元空間に集合して抗原（例えば、細胞表面の受容体）に結合する可変領域を形成する。それぞれの軽又は重鎖可変領域内には、相補性決定領域（「ＣＤＲ」）と呼ばれる３つの短いセグメント（平均１０アミノ酸長）が存在する。抗体可変ドメイン中の６つのＣＤＲ（３つは軽鎖由来、３つは重鎖由来）は三次元空間に互いに折り畳まれて実際の抗体結合部位を形成しこれが標的抗原とドッキングする。ＣＤＲの位置及び長さはＫａｂａｔ，Ｅ．ら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、１９８３年、１９８７年により正確に定義されてきた。可変領域のうちＣＤＲに含有されない部分はフレームワーク（「ＦＲ」）と呼ばれる。
【００３６】
本明細書で提供される「抗体変異体」とは、抗原に結合することができ、抗体又はこの断片の１つ以上の構造ドメインを含むポリペプチドのことである。抗体変異体の非限定的例は、単一ドメイン抗体又はナノボディ、アフィボディ（モノクローナル抗体よりも小さく（例えば、約６ｋＤＡ）、高い親和性で抗原に結合しモノクローナル抗体を模倣することができるポリペプチド）、単一特異性Ｆａｂ２、二重特異性Ｆａｂ２、三重特異性Ｆａｂ２、一価ＩｇＧ、ｓｃＦｖ、二重特異性ダイアボディ、三重特異性トリアボディ、ｓｃＦｖ−Ｆｃ、ミニボディ、ＩｇＮＡＲ、Ｖ−ＮＡＲ、ｈｃＩｇＧ、ＶｈＨ又はペプチボディを含む。本明細書に記載される「ナノボディ」又は「単一ドメイン抗体」は当技術分野では一般に周知であり、単一モノマー可変抗体ドメインからなる抗体断片のことである。全抗体同様、「ナノボディ」又は「単一ドメイン抗体」は特異的抗原に選択的に結合することができる。本明細書で提供される「ペプチボディ」とは、抗体のＦｃドメインに結合している（共有結合又は非共有結合リンカーを通じて）ペプチド部分のことである。当技術分野で公知の抗体変異体のさらなる非限定的例は、軟骨魚類又はラクダ類により産生される抗体を含む。ラクダ類由来の抗体及びその可変領域の概要並びにその産生、単離及び使用のための方法は参考文献国際公開第９７／４９８０５号及び国際公開第９７／４９８０５号に見出すことができ、前記特許文献は参照によりその全体を及びあらゆる目的のために本明細書に組み込む。同様に、軟骨魚類由来の抗体及びその可変領域の概要並びにその産生、単離及び使用のための方法は参考文献国際公開第２００５／１１８６２９号に見出すことができ、前記特許文献は参照によりその全体を及びあらゆる目的のために本明細書に組み込む。
【００３７】
本明細書で提供される用語「ＣＤＲ  Ｌ１」、「ＣＤＲ  Ｌ２」及び「ＣＤＲ  Ｌ３」とは、抗体の可変軽（Ｌ）鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２及び３のことである。実施形態では、本明細書で提供される可変軽鎖は、Ｎ終端からＣ終端方向に、ＣＤＲ  Ｌ１、ＣＤＲ  Ｌ２及びＣＤＲ  Ｌ３を含む。同様に、本明細書で提供される用語「ＣＤＲ  Ｈ１」、「ＣＤＲ  Ｈ２」及び「ＣＤＲ  Ｈ３」とは、抗体の可変重（Ｈ）鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２及び３のことである。実施形態では、本明細書で提供される可変重鎖は、Ｎ終端からＣ終端方向に、ＣＤＲ  Ｈ１、ＣＤＲ  Ｈ２及びＣＤＲ  Ｈ３を含む。
【００３８】
本明細書で提供される用語「ＦＲ  Ｌ１」、「ＦＲ  Ｌ２」、「ＦＲ  Ｌ３」及び「ＦＲ  Ｌ４」は当技術分野でのその一般的な意味に従って使用され、抗体の可変軽（Ｌ）鎖のフレームワーク領域（ＦＲ）１、２、３及び４のことである。実施形態では、本明細書で提供される可変軽鎖はＮ終端からＣ終端方向に、ＦＲ  Ｌ１、ＦＲ  Ｌ２、ＦＲ  Ｌ３及びＦＲ  Ｌ４を含む。同様に、本明細書で提供される用語「ＦＲ  Ｈ１」、「ＦＲ  Ｈ２」、「ＦＲ  Ｈ３」及び「ＦＲ  Ｈ４」は当技術分野でのその一般的な意味に従って使用され、抗体の可変重（Ｈ）鎖のフレームワーク領域（ＦＲ）１、２、３及び４のことである。実施形態では、本明細書で提供される可変重鎖はＮ終端からＣ終端方向に、ＦＲ  Ｈ１、ＦＲ  Ｈ２、ＦＲ  Ｈ３及びＦＲ  Ｈ４を含む。
【００３９】
例示的免疫グロブリン（抗体）構造単位はテトラマーを含む。それぞれのテトラマーは、それぞれの対が１つの「軽」（約２５ｋＤ）及び１つの「重」鎖（約５０〜７０ｋＤ）を有する２つの同一な対のポリペプチド鎖で構成されている。それぞれの鎖のＮ終端は、主に抗原認識の原因である約１００〜１１０又はそれよりも多いアミノ酸の可変領域を規定する。用語可変軽鎖（ＶＬ）、可変軽鎖（ＶＬ）ドメイン又は軽鎖可変領域及び可変重鎖（ＶＨ）、可変重鎖（ＶＨ）ドメイン又は重鎖可変領域とは、それぞれこれら軽及び重鎖領域のことである。本明細書で言及される用語可変軽鎖（ＶＬ）、可変軽鎖（ＶＬ）ドメイン及び軽鎖可変領域は互換的に使用してもよい。本明細書で言及される用語可変重鎖（ＶＨ）、可変重鎖（ＶＨ）ドメイン及び重鎖可変領域は互換的に使用してもよい。Ｆｃ（すなわち、断片結晶化可能領域）は免疫グロブリンの「土台」又は「尾部」であり、典型的には、抗体のクラスに応じて２つ又は３つの定常ドメインを与える２つの重鎖で構成されている。特定のタンパク質に結合することにより、Ｆｃ領域はそれぞれの抗体が所与の抗原に対して適切な免疫応答を生じることを保証する。Ｆｃ領域は、Ｆｃ受容体などの種々の細胞受容体、及び補体タンパク質などの他の免疫分子にも結合する。
【００４０】
用語「抗体」は当技術分野で一般的に知られている意味に従って使用される。抗体は、例えば、無傷の免疫グロブリンとして又は種々のペプチダーゼでの消化により産生されるいくつかのよく特徴付けられている断片として存在する。したがって、例えば、ペプシンはヒンジ領域中のジスルフィド結合の下で抗体を消化して、それ自体がジスルフィド結合によりＶＨ−ＣＨ１に結合している軽鎖であるＦａｂのダイマーであるＦ（ａｂ）’２を産生する。Ｆ（ａｂ）’２は穏やかな条件下で還元されてヒンジ領域中のジスルフィド結合を切断し、それによりＦ（ａｂ）’２ダイマーをＦａｂ’モノマーに変換する場合がある。Ｆａｂ’モノマーは本質的にヒンジ領域の一部を有するＦａｂである（Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｐａｕｌ  ｅｄ．、３ｄ  ｅｄ．１９９３年）参照）。種々の抗体断片は無傷の抗体の消化という観点から定義されるが、当業者であれば、そのような断片が化学的に又は組換えＤＮＡ技法を使用することにより新規に合成してもよいことを認識する。したがって、用語「抗体」は、本明細書で使用される場合、全抗体の改変により産生される断片、又は組換えＤＮＡ技法を使用して新規に合成される断片（例えば、一本鎖Ｆｖ）又はファージディスプレイライブラリーを使用して同定される断片も含む（例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２〜５５４頁（１９９０）参照）。
【００４１】
モノクローナル又はポリクローナル抗体の調製では、当技術分野で公知のいかなる技法でも使用可能である（例えば、Ｋｏｈｌｅｒ＆Ｍｉｌｓｔｅｉｎ、Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５〜４９７頁（１９７５）；Ｋｏｚｂｏｒら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  ４：７２（１９８３）；Ｃｏｌｅら、７７〜９６頁  ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ（１９８５）参照）。「モノクローナル」抗体（ｍＡｂ）とは、単一クローンに由来する抗体のことである。一本鎖抗体を産生するための技法（米国特許第４，９４６，７７８号）を適合させれば、本発明のポリペプチドへの抗体を産生することが可能である。その上、トランスジェニックマウス、又は他の哺乳動物などの他の生物を使用してヒト化抗体を発現してもよい。あるいは、ファージディスプレイ技術を使用すれば、選択された抗原に特異的に結合する抗体及びヘテロマーＦａｂ断片を同定することが可能である（例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２〜５５４頁（１９９０）；Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９〜７８３頁（１９９２）参照）。
【００４２】
ｍＡｂのエピトープは、ｍＡｂが結合するその抗原の領域のことである。２つの抗体は、それぞれがもう一方の抗体が抗原に結合するのを競合的に阻害する（遮断する）場合には、同じ又は重複しているエピトープに結合する。すなわち、１倍、５倍、１０倍、２０倍又は１００倍過剰な１つの抗体は、もう一方の抗体の結合を、競合的結合アッセイにおいて測定した場合、少なくとも３０％、しかし好ましくは５０％、７５％、９０％又は９９％でさえ阻害する（例えば、Ｊｕｎｇｈａｎｓら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５０：１４９５頁、１９９０年参照）。あるいは、１つの抗体の結合を減少する又は排除する抗原中の本質的にすべてのアミノ酸突然変異がもう一方の抗体の結合を減少する又は排除する場合、２つの抗体は同じエピトープを有する。１つの抗体の結合を減少する又は排除するいくつかのアミノ酸突然変異がもう一方の抗体の結合を減少する又は排除する場合、２つの抗体は重複しているエピトープを有する。
【００４３】
一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）は典型的には、１０〜約２５アミノ酸の短いリンカーペプチドで連結されている、免疫グロブリンの重（ＶＨ）及び軽鎖（ＶＬ）の可変領域の融合タンパク質である。リンカーは通常、柔軟性のためにグリシンが、並びに溶解性のためにセリン又はスレオニンが豊富にある場合がある。リンカーは、ＶＨのＮ終端をＶＬのＣ終端と連結させる、又は逆もまた同様である。実施形態では、リンカーは１つよりも多いセリンを含む。実施形態では、リンカーは１つよりも多いグリシンを含む。実施形態では、リンカーは−（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）３−構造を有する。
【００４４】
本発明の適切な抗体、例えば、組換え、モノクローナル又はポリクローナル抗体の調製では及び本発明に従った使用では、当技術分野で公知の多くの技法を使用可能である（例えば、Ｋｏｈｌｅｒ＆Ｍｉｌｓｔｅｉｎ、Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５〜４９７頁（１９７５）；Ｋｏｚｂｏｒら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  ４：７２頁（１９８３）；Ｃｏｌｅら、７７〜９６頁  ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ、Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ、Ｉｎｃ．（１９８５）；Ｃｏｌｉｇａｎ、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（１９９１）；Ｈａｒｌｏｗ＆Ｌａｎｅ、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（１９８８）；ａｎｄ  Ｇｏｄｉｎｇ、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ（２ｄ  ｅｄ．１９８６年）参照）。目的の抗体の重及び軽鎖をコードする遺伝子は細胞からクローニングすることが可能であり、例えば、モノクローナル抗体をコードする遺伝子はハイブリドーマからクローニングして、これを使用して組換えモノクローナル抗体を産生することが可能である。モノクローナル抗体の重及び軽鎖をコードする遺伝子ライブラリーは、ハイブリドーマ又は形質細胞から作成することも可能である。重及び軽鎖遺伝子産物の無作為な組合せは、異なった抗原特異性を有する抗体の大きなプールを生み出す（例えば、Ｋｕｂｙ、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（３ｒｄ  ｅｄ．１９９７年）参照）。一本鎖抗体又は組換え抗体の産生のための技法（米国特許第４，９４６，７７８号、米国特許第４，８１６，５６７号）を適合させれば、本発明のポリペプチドへの抗体を産生することが可能である。その上、トランスジェニックマウス、又は他の哺乳動物などの他の生物を使用してヒト化又はヒト抗体を発現してもよい（例えば、米国特許第５，５４５，８０７号、米国特許第５，５４５，８０６号、米国特許第５，５６９，８２５号、米国特許第５，６２５，１２６号、米国特許第５，６３３，４２５号、米国特許第５，６６１，０１６号、Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９〜７８３頁（１９９２）；Ｌｏｎｂｅｒｇら、Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８５６〜８５９頁（１９９４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ、Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８１２〜１３頁（１９９４）；Ｆｉｓｈｗｉｌｄら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４：８４５〜５１頁（１９９６）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４：８２６頁（１９９６）；ａｎｄ  Ｌｏｎｂｅｒｇ＆Ｈｕｓｚａｒ、Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５〜９３頁（１９９５）参照）。あるいは、ファージディスプレイ技術を使用すれば、選択された抗原に特異的に結合する抗体及びヘテロマーＦａｂ断片を同定することが可能である（例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２〜５５４頁（１９９０）；Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９〜７８３頁（１９９２）参照）。抗体は、二重特異性、すなわち、２つの異なる抗原を認識することができるようにすることも可能である（例���ば国際公開第９３／０８８２９号、Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、ＥＭＢＯ  Ｊ．１０：３６５５〜３６５９頁（１９９１）；ａｎｄ  Ｓｕｒｅｓｈら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １２１：２１０頁（１９８６）参照）。抗体はヘテロコンジュゲート、例えば、２つの共有結合している抗体、又は免疫毒素でも可能である（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号、国際公開第９１／００３６０号、国際公開第９２／２００３７３号、欧州特許第０３０８９号参照）。
【００４５】
非ヒト抗体をヒト化する又は霊長類化するための方法は当技術分野では周知である（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、米国特許第５，５３０，１０１号、米国特許第５，８５９，２０５号、米国特許第５，５８５，０８９号、米国特許第５，６９３，７６１号、米国特許第５，６９３，７６２号、米国特許第５，７７７，０８５号、米国特許第６，１８０，３７０号、米国特許第６，２１０，６７１号及び米国特許第６，３２９，５１１号、国際公開第８７／０２６７１号、欧州特許出願公開第０１７３４９４号、Ｊｏｎｅｓら、（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２頁；ａｎｄ  Ｖｅｒｈｏｙｅｎら、（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４頁）。ヒト化抗体は、例えば、Ｗｉｎｔｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３４９：２９３頁にさらに記載されている。一般に、ヒト化抗体は、１つ以上のアミノ酸残基が非ヒトである供給源から中に導入されている。これらの非ヒトアミノ酸残基は移入残基と呼ばれることも多く、この残基は典型的には移入可変ドメインから取られる。ヒト化は、齧歯類ＣＤＲ又はＣＤＲ配列をヒト抗体の対応する配列で置き換えることにより、本質的にはＷｉｎｔｅｒと共同研究者らの方法に従って実施することが可能である（例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ、８１：６８５１〜６８５５頁（１９８４）、Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２〜５２５頁（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３〜３２７頁（１９８８）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ａｎｄ  Ｏｉ、Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、４４：６５〜９２頁（１９８８）、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４〜１５３６頁（１９８８）ａｎｄ  Ｐｒｅｓｔａ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３〜５９６頁（１９９２）、Ｐａｄｌａｎ、Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎ．、２８：４８９〜４９８頁（１９９１）；Ｐａｄｌａｎ、Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎ．、３１（３）：１６９〜２１７頁（１９９４）参照）。したがって、そのようなヒト化抗体はキメラ抗体であり（米国特許第４，８１６，５６７号）、実質的に無傷のヒト可変ドメイン未満が非ヒト種由来の対応する配列により置き換えられている。実際には、ヒト化抗体は典型的には、いくつかのＣＤＲ残基及びおそらくいくつかのＦＲ残基が齧歯類抗体中の類似する部位由来の残基により置き換えられるヒト抗体である。例えば、ヒト化免疫グロブリンフレームワーク領域をコードする第１の配列及び所望の免疫グロブリン相補性決定領域をコードする第２の配列セットを含むポリヌクレオチドは、合成的に又は適切なｃＤＮＡとゲノムＤＮＡセグメントを組み合わせることにより産生することが可能である。ヒト定常領域ＤＮＡ配列は、種々のヒト細胞から周知の手順に従って単離することが可能である。
【００４６】
「キメラ抗体」は、（ａ）定常領域又はその部分が、抗原結合部位（可変領域）が異なる若しくは変更されたクラス、エフェクター機能及び／若しくは種の定常領域、又はキメラ抗体に新しい特性を与える全く異なる分子、例えば、酵素、毒素、ホルモン、成長因子、薬物、等に連結されるように、変更される、置き換えられる若しくは交換される；又は（ｂ）可変領域、若しくはその部分が、異なる若しくは変更された抗原特異性を有する可変領域で変更される、置き換えられる若しくは交換される抗体分子である。本発明の、及び本発明に従った使用のための好ましい抗体は、ヒト化及び／又はキメラモノクローナル抗体を含む。
【００４７】
治療薬を抗体にコンジュゲートするための技法は周知である（例えば、Ａｒｎｏｎら、「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ」、ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｒｅｉｓｆｅｌｄら、（ｅｄｓ．）、２４３〜５６頁（Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ、Ｉｎｃ．１９８５年）；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」ｉｎ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（２ｎｄ  Ｅｄ．）、Ｒｏｂｉｎｓｏｎら、（ｅｄｓ．）、６２３〜５３頁（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ、Ｉｎｃ．１９８７年）；Ｔｈｏｒｐｅ、「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  Ｏｆ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ  Ｒｅｖｉｅｗ」ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ‘８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｐｉｎｃｈｅｒａら、（ｅｄｓ．）、４７５〜５０６頁（１９８５）；ａｎｄ  Ｔｈｏｒｐｅら、「Ｔｈｅ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  Ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｔｏｘｉｎ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ」、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．、６２：１１９〜５８頁（１９８２）参照）。本明細書で使用される場合、用語「抗体−薬物コンジュゲート」又は「ＡＤＣ」とは、抗体にコンジュゲートされた又は他の方法で共有結合された治療薬のことである。
【００４８】
本明細書で言及される「治療薬」は、がん（例えば、白血病）などの疾患を治療する又は予防するのに有用な組成物である。実施形態では、治療薬は抗がん剤である。「抗がん剤」はこの明白な通常の意味に従って使用され、抗悪性腫瘍特性又は細胞の成長若しくは増殖を阻害する能力を有する組成物（例えば、化合物、薬物、アンタゴニスト、阻害剤、モジュレーター）のことである。実施形態では、抗がん剤は化学療法薬である。実施形態では、抗がん剤は、がんを治療する方法に効用がある本明細書で同定された薬剤である。実施形態では、抗がん剤は、ＦＤＡ又はＵＳＡ以外の国の類似する規制機関からがんの治療について認可された薬剤である。
【００４９】
語句抗体に「特異的に（又は選択的に）結合する」又は「特異的に（又は選択的に）免疫反応性である」は、タンパク質又はペプチドに言及する場合、多くの場合、タンパク質の異種集団及び他の生物製剤中でのタンパク質の存在を判定する結合反応のことである。したがって、指定された免疫アッセイ条件下で、特定の抗体が特定のタンパク質に少なくともバックグランドの２倍、さらに典型的にはバックグランドの１０倍より多い〜１００倍結合する。そのような条件下での抗体への特異的結合は、特定のタンパク質に対するその特異性について選択される抗体を必要とする。例えば、ポリクローナル抗体は、選択された抗原に特異的に免疫反応性であり、他のタンパク質には免疫反応性ではない抗体のサブセットのみを得るように選択することが可能である。この選択は、他の分子と交差反応する抗体を取り去ることにより達成してもよい。種々の免疫アッセイフォーマットを使用して、特定のタンパク質に特異的に免疫反応性である抗体を選択してもよい。例えば、固相ＥＬＩＳＡ免疫アッセイは、タンパク質に特異的に免疫反応性である抗体を選択するのに常に使用されている（例えば、Ｈａｒｌｏｗ＆Ｌａｎｅ、Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（１９９８）ｆｏｒ  ａ  ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ  ｆｏｒｍａｔｓ  ａｎｄ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ  ｔｈａｔ  ｃａｎ  ｂｅ  ｕｓｅｄ  ｔｏ  ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｉｍｍｕｎｏｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ参照）。
【００５０】
「リガンド」とは、受容体又は抗体、抗体変異体、抗体領域若しくはその断片に結合することができる作用物質、例えば、ポリペプチド又は他の分子のことである。
【００５１】
本明細書で使用される用語「ＩＬ１ＲＡＰ」とは、ＩＬ１ＲＡＰ活性を維持する（例えば、ＩＬ１ＲＡＰと比べて少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％活性内）インターロイキン−１受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ１ＲＡＰ）又はこの変異体若しくはホモログの任意の組換え又は天然に存在する形態のことである。一部の態様では、変異体又はホモログは、天然に存在するＩＬ１ＲＡＰポリペプチドと比べて、全配列又は配列の一部（例えば、１０、２０、５０、１００、１５０又は２００連続アミノ酸部分）にわたり少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％アミノ酸配列同一性を有する。実施形態では、ＩＬ１ＲＡＰは、ＵｎｉＰｒｏｔ参照番号Ｑ９ＮＰＨ３により識別されるタンパク質又はこれに実質的な同一性を有する変異体若しくはホモログに実質的に同一である。
【００５２】
「標識」又は「検出可能部分」は、分光学的、光化学的、生化学的、免疫化学的、化学的又は他の物理的手段により検出可能な組成物である。例えば、有用な標識は、３２Ｐ、蛍光色素、高電子密度試薬、酵素（例えば、ＥＬＩＳＡで一般的に使用されている）、ビオチン、ジゴキシゲニン、又はハプテン及び、例えば、放射性標識を標的ペプチドと特異的反応性のあるペプチド若しくは抗体中に組み込むことにより、検出可能にすることが可能なタンパク質若しくは他の実体を含む。抗体を標識にコンジュゲートするための当技術分野で公知のいかなる適切な方法を用いてもよく、例えば、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １９９６年、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｉｎｃ．、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏに記載されている方法を使用する。
【００５３】
「接触させる」はその明白な通常の意味に従って使用され、少なくとも２つの異なる種（例えば、抗体と抗原）を反応する、相互作用する又は物理的に触れるほど近接させるプロセスのことである。しかし、得られた反応産物は、添加された試薬間の反応から直接、又は反応混合物で産生することが可能である添加された試薬のうちの１つ以上由来の中間体から産生することが可能であることは認識されるべきである。
【００５４】
用語「接触させる」は、２つの種を反応させる、相互作用させる、又は物理的に触れさせることを含んでいてもよく、２つの種は、例えば、本明細書で提供される医薬組成物及び細胞でもよい。実施形態では、接触させることは、例えば、本明細書に記載される医薬組成物を細胞と相互作用させることを含む。
【００５５】
本明細書で使用される「細胞」とは、そのゲノムＤＮＡを保存する又は複製するのに十分な代謝機能又は他の機能を実行する細胞のことである。細胞は、例えば、無傷の膜の存在、特定の色素による染色、子孫を産する能力又は、配偶子の場合では、第２の配偶子と結合して生存可能な子孫を産む能力を含む、当技術分野では周知の方法により同定することが可能である。細胞は、原核細胞及び真核細胞を含んでいてもよい。原核細胞は細菌を含むがこれに限定されない。真核細胞は、酵母細胞並びに植物及び動物、例えば、哺乳動物、昆虫（例えば、スポドプテラ属）由来の細胞及びヒト細胞を含むがこれらに限定されない。
【００５６】
本明細書で提供される「幹細胞」とは、有糸分裂細胞分割を通じての自己複製能力及び組織又は器官に分化する潜在能力を特徴とする細胞のことである。哺乳動物幹細胞の間では、胚性幹細胞（ＥＳ細胞）と体性幹細胞（ＨＳＣ）を区別可能である。胚性幹細胞は胚盤胞に存在し胚組織を生じ、体性幹細胞は組織再生及び修復を目的に成人組織中に存在する。実施形態では、幹細胞は白血病幹細胞（ＬＳＣ）である。本明細書で提供される「白血病幹細胞」又は「ＬＳＣ」とは、免疫不全動物中に移植されると疾患（白血病）を開始することができる細胞のことであり、連続移植で白血病を生じることにより自己複製し、原因となる疾患に似ているが自己複製できない非ＬＳＣバルク芽細胞に部分的に分化することも可能である。ＬＳＣは、遺伝子突然変異を保有し有糸分裂細胞分割を通じて自己複製し、前記遺伝子突然変異を保有する造血系統に分化する場合があり、又はＬＳＣは、芽細胞としても知られる未熟な前駆細胞として残る場合がある。実施形態では、ＬＳＣはＣＤ３４を発現する。
【００５７】
本明細書で言及される用語「ＣＤ３４」は、分化３４タンパク質、又はＣＤ３４活性を維持する（ＣＤ３４と比べて少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％活性内）この変異体若しくはホモログのクラスターの組換え又は天然に存在する型のいずれかを含む。一部の態様では、変異体又はホモログは、天然に存在するＣＤ３４タンパク質と比べて、全配列又は配列の一部（例えば、５０、１００、１５０又は２００連続アミノ酸部分）にわたり少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％アミノ酸配列同一性を有する。実施形態では、ＣＤ３４タンパク質は、ＵｎｉＰｒｏｔ参照番号Ｐ２８９０６により識別されるタンパク質又はこれに実質的な同一性を有する変異体若しくはホモログに実質的に同一である。
【００５８】
用語「組換え」は、例えば、細胞、核酸、タンパク質又はベクターに関連して使用される場合、細胞、核酸、タンパク質若しくはベクターが、異種核酸若しくはタンパク質の導入又は天然の核酸若しくはタンパク質の変更により改変されていること、又は細胞がそのように改変された細胞由来であることを示す。したがって、例えば、組換え細胞が、その細胞の天然（非組換え）型内には見出されない遺伝子を発現する又は他の方法で異常に発現される、低発現される又は全く発現されない天然の遺伝子を発現する。トランスジェニック細胞及び植物は、典型的には組換え方法の結果として、異種遺伝子又はコード配列を発現する細胞及び植物である。
【００５９】
用語「異種の」は、核酸の一部に関連して使用される場合、核酸が天然では互いに同じ関係では見出されない２つ以上の部分配列を含むことを示す。例えば、核酸は典型的には、組換え的に作成され、新しい機能的核酸を作るように配置された無関係な遺伝子由来の２つ以上の配列、例えば、１つの供給源からのプロモーター及び別の供給源からのコード領域を有する。同様に、異種タンパク質は、タンパク質が天然では互いに同じ関係では見出されない２つ以上の部分配列を含む（例えば、融合タンパク質）ことを示す。
【００６０】
用語「外来性の」とは、所与の細胞又は生物の外に起源をもつ分子又は物質（例えば、化合物、核酸又はタンパク質）のことである。例えば、本明細書で言及される「外来性プロモーター」は、そのプロモーターを発現する細胞又は生物に起源を持たないプロモーターである。逆に、用語「内在性の」又は「内在性プロモーター」とは、所与の細胞又は生物原産である、又はそれ内に起源を持つ分子又は物質のことである。
【００６１】
本明細書で定義されるように、細胞増殖（例えば、がん細胞増殖）に関連して用語「阻害」、「阻害する（ｉｎｈｉｂｉｔ）」、「阻害する（ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ）」及び同類の物は、細胞にマイナスの影響を与える（例えば、増殖を減らす）又は細胞を死滅させることを意味する。一部の実施形態では、阻害とは、疾患又は疾患の症状（例えば、がん、がん細胞増殖）を低減することである。したがって、阻害は、少なくとも一部、部分的に又は全面的に刺激を遮断する、活性化を減らす、予防する若しくは遅らせる、又はシグナル伝達若しくは酵素活性若しくはタンパク質の量を不活化する、脱感作する、若しくは下方調節することを含む。同様に、「阻害剤」は、例えば、結合し、活性（例えば、受容体活性又はタンパク質活性）を部分的に若しくは全体的に遮断する、減らす、予防する、遅らせる、不活化する、脱感作する、又は下方調節することにより、受容体又は別のタンパク質を阻害する化合物又はタンパク質である。
【００６２】
「生体試料」又は「試料」とは、対象又は患者から得られる又はこれらに由来する材料のことである。生体試料は、生検及び剖検試料などの組織の切片、並びに組織学目的で採取した凍結切片を含む。そのような試料は、血液、血液画分又は産物（例えば、血清、血漿、血小板、赤血球、及び同類の物）などの体液、痰、組織、培養細胞（例えば、初代培養物、外植片、及び形質転換細胞）、便、尿、滑液、関節組織、滑膜組織、滑膜細胞、線維芽細胞様滑膜細胞、マクロファージ様滑膜細胞、免疫細胞、造血細胞、線維芽細胞、マクロファージ、Ｔ細胞、等を含む。生体試料は典型的には、霊長類などの哺乳動物などの真核生物、例えば、チンパンジー又はヒト；ウシ：イヌ；ネコ；齧歯類、例えば、モルモット、ラット、マウス；ウサギ；又はトリ；爬虫類；又は魚から得られる。
【００６３】
「対照」又は「標準対照」とは、試験試料、測定値又は値との比較のため参照、通常は既知の参照として役立つ試料、測定値又は値のことである。例えば、試験試料を所与の疾患（例えば、がん）に罹っていると疑われている患者から採取し、既知の正常な（非疾患の）個体（例えば、標準対照対象）と比較することが可能である。標準対照は、所与の疾患に罹っていない類似の個体（例えば、標準対照対象）、例えば、類似する病歴、同年齢、体重、等を有する健康な個体の集団（標準対照集団）から集めた平均測定値又は値も表すことが可能である。標準対照値は、同一個体から、例えば、疾患発症に先立つ患者由来のそれ以前に入手した試料から得ることも可能である。例えば、薬理学的データ（例えば、半減期）又は治療手段（例えば、副作用の比較）に基づいて治療効果を比較するように対照を工夫することが可能である。対照はデータの有意性を判定するのにも価値がある。例えば、所与のパラメータを表す値が標準対照において広く変わりやすい場合、試験試料の変わりやすさは有意だとは見なされない。当業者であれば、標準対照は、いかなる数のパラメータ（例えば、ＲＮＡレベル、タンパク質レベル、特定の細胞型、特定の体液、特定の組織、滑膜細胞、滑液、滑膜組織、線維芽細胞様滑膜細胞、マクロファージ様滑膜細胞、等）の評価のためにも設計することが可能であることを認識する。
【００６４】
当業者であれば、所与の状況においてどの標準対照が最も適切であるかを理解し、データを標準対照値との比較に基づいて分析することができる。標準対照は、データの有意性（例えば、統計的有意性）を判定するのにも価値がある。例えば、所与のパラメータを表す値が標準対照において広く変わりやすい場合、試験試料の変わりやすさは有意だとは見なされない。
【００６５】
「患者」又は「それを必要とする対象」とは、本明細書で提供される組成物又は医薬組成物の投与により治療することが可能な疾患又は状態に罹っている又はこれになりやすい生きた生物のことである。非限定的例は、ヒト、他の哺乳動物、ウシ、ラット、マウス、イヌ、サル、ヤギ、ヒツジ、乳牛、シカ及び他の非哺乳動物を含む。一部の実施形態では、患者はヒトである。
【００６６】
用語「疾患」又は「状態」とは、本明細書で提供される化合物又は方法を用いて治療される状態又は治療することができる患者若しくは対象の健康状態のことである。疾患はがんでもよい。一部のさらなる例では、「がん」とは、ヒトがん並びに固形及びリンパがんを含む癌、肉腫、腺癌、リンパ腫、白血病、腎臓、胸、肺、膀胱、結腸、卵巣、前立腺、膵臓、胃、脳、頭頚部、皮膚、子宮、精巣、グリオーマ、食道及び肝細胞癌を含む肝臓がん、Ｂ急性リンパ芽球性リンパ腫、非ホジキンリンパ腫（例えば、バーキット、小細胞及び大細胞型リンパ腫）、ホジキンリンパ腫を含むリンパ腫、白血病（急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、ＡＬＬ及びＣＭＬを含む）又は多発性骨髄腫のことである。
【００６７】
本明細書で使用される場合、用語「がん」は、白血病、癌及び肉腫を含む、哺乳動物（例えば、ヒト）で見出されるあらゆるタイプのがん、新生物又は悪性腫瘍のことである。本明細書で提供される化合物又は方法を用いて治療しうる例示的がんは、乳がん、結腸がん、腎臓がん、白血病、肺がん、黒色腫、卵巣がん、前立腺がん、膵臓がん、脳がん、肝臓がん、胃がん又は肉腫を含む。
【００６８】
用語「白血病」とは、広くは血液形成器官の進行性悪性疾患のことであり、一般に、血液及び骨髄中での白血球及びその前駆体の歪んだ増殖及び成長を特徴とする。白血病は一般に、（１）急性でも慢性でも、疾患の持続期間及び特長；（２）関与する細胞型；ミエロイド（骨髄性）、リンパ系（リンパ向性）又は単球性；並びに（３）白血病性でも無白血病性（亜白血性）でも、血液中の異常な細胞の数の増加又は非増加を基に臨床的に分類される。本明細書で提供される化合物又は方法を用いて治療しうる例示的白血病は、例えば、急性骨髄性白血病、急性非リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、急性顆粒球白血病、慢性顆粒球白血病、急性前骨髄球性白血病、成人Ｔ細胞白血病、非白血性白血病、白血性白血病、好塩基球性白血病、芽細胞白血病、ウシ白血病、慢性骨髄性白血病、皮膚白血病、胎生細胞性白血病、好酸球性白血病、グロス白血病、ヘアリーセル白血病、血芽球性白血病、血球芽細胞白血病、組織球白血病、幹細胞性白血病、急性単球性白血病、白血球減少性白血病、リンパ性白血病（ｌｙｍｐｈａｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ）、リンパ芽球性白血病、リンパ球性白血病、リンパ性白血病（ｌｙｍｐｈｏｇｅｎｏｕｓ  ｌｅｕｋｅｍｉａ）、リンパ性白血病（ｌｙｍｐｈｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ）、リンパ肉腫細胞性白血病、マスト細胞白血病、巨核球性白血病、小骨髄芽球性白血病、単球性白血病、骨髄芽球性白血病、骨髄性白血病、骨髄性顆粒球性白血病、骨髄単球性白血病、ネーゲリ白血病、形質細胞白血病、多発性骨髄腫、形質細胞性白血病、前骨髄球性白血病、リーダー細胞性白血病、シリング白血病、幹細胞性白血病、亜白血性白血病又は未分化細胞白血病を含む。
【００６９】
用語「肉腫」とは一般的に、胚結合組織のような物質で構成されている腫瘍のことであり、原線維又は均質な物質に包埋しているぎっしり詰まった細胞で一般に構成されている。本明細書で提供される化合物又は方法を用いて治療しうる肉腫は、軟骨肉腫、線維肉腫、リンパ肉腫、黒色肉腫、粘液肉腫、骨肉腫、アバーネシー肉腫、脂肪肉腫（ａｄｉｐｏｓｅ  ｓａｒｃｏｍａ）、脂肪肉腫（ｌｉｐｏｓａｒｃｏｍａ）、胞状軟部肉腫、エナメル上皮肉腫、ブドウ状横紋筋肉腫、緑色腫、絨毛癌、胎児性肉腫、ウィルムス腫瘍肉腫、子宮内膜肉腫、間質性肉腫、ユーイング肉腫、筋膜肉腫、線維芽細胞肉腫、巨細胞肉腫、顆粒球性肉腫、ホジキン肉腫、特発性多発性色素性出血性肉腫、Ｂ細胞の免疫芽球肉腫、Ｔ細胞の免疫芽球肉腫、イエンセン肉腫、カポジ肉腫、クッパー星細胞肉腫、血管肉腫、白血肉腫、悪性間葉腫肉腫、傍骨性肉腫、網状赤血球肉腫、ラウス肉腫、漿液嚢胞性肉腫、滑膜肉腫又は毛細血管拡張性肉芽腫を含む。
【００７０】
用語「黒色腫」は、皮膚及び他の器官のメラニン細胞系から生じる腫瘍を意味すると解釈される。本明細書で提供される化合物又は方法を用いて治療しうる黒色腫は、例えば、末端黒子型黒色腫、無色素性黒色腫、良性若年性黒色腫、クラウドマン黒色腫、Ｓ９１黒色腫、ハーディングパッセー黒色腫、若年性黒色腫、悪性黒子黒色腫、悪性黒色腫、結節型黒色腫、爪下黒色腫又は表在拡大型黒色腫を含む。
【００７１】
用語「癌」とは、周囲組織に浸潤して転移を引き起こす傾向のある上皮細胞で構成されている悪性新腫瘍のことである。本明細書で提供される化合物又は方法を用いて治療しうる例示的癌は、例えば、甲状腺髄様癌、家族性甲状腺髄様癌、腺房癌、小葉癌、腺嚢癌種、腺様嚢胞癌、腺腫性癌、副腎皮質癌、肺胞癌、肺胞上皮癌、基底細胞癌（ｂａｓａｌ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、基底細胞癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｂａｓｏｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、類基底細胞癌、基底扁平上皮細胞癌、気管支肺胞上皮癌、細気管支癌、気管支原性肺癌、大脳様癌、胆管細胞癌、絨毛癌、粘液癌、面皰癌、コーパス癌、篩状癌、鎧状癌、皮膚癌、円柱細胞癌（ｃｙｌｉｎｄｒｉｃａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、円柱細胞癌（ｃｙｌｉｎｄｒｉｃａｌ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、腺管癌、硬膜癌、胚性癌腫、脳様癌、類表皮癌、上皮性腺様癌、外向発育癌、潰瘍癌、線維性癌、ゼラチン状癌腫、コロイド腺癌、巨細胞癌（ｇｉａｎｔ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、巨細胞癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｇｉｇａｎｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、腺癌、顆粒膜細胞癌、毛母癌、血液様癌、肝細胞癌、ハースル細胞癌、硝子癌、副腎様癌、乳児胎児性癌、上皮内癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｉｎ  ｓｉｔｕ）、表皮内癌、上皮内癌（ｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、クロムペッヘル癌、クルチツキー細胞癌、大細胞癌、レンズ状癌（ｌｅｎｔｉｃｕｌａｒ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、レンズ状癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｌｅｎｔｉｃｕｌａｒｅ）、脂肪腫癌、リンパ上皮癌、髄様癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｍｅｄｕｌｌａｒｅ）、髄様癌（ｍｅｄｕｌｌａｒｙ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、黒色癌、モール癌腫、粘液性癌（ｍｕｃｉｎｏｕｓ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、粘液分泌性癌、粘液細胞癌、粘表皮癌、粘液癌、粘液性癌（ｍｕｃｏｕｓ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、粘液腫様癌、上咽頭癌、燕麦細胞癌、骨化性癌、類骨癌、乳頭癌、門脈周囲癌、前浸潤癌、有棘細胞癌、粥状癌、腎臓の腎細胞癌、予備細胞癌、肉腫様癌、シュナイダー癌、硬性癌、陰嚢癌、印環細胞癌、単純癌、小細胞癌、ソラノイド癌、回転楕円面細胞癌、紡錘細胞癌、海綿様癌、扁平上皮癌（ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、扁平上皮癌（ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、紐様癌、血管拡張性癌、毛細管拡張様癌、移行上皮癌、結節癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ）、結節癌（ｔｕｂｅｒｏｕｓ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、疣状癌又は絨毛癌を含む。
【００７２】
本明細書で使用される場合、用語「転移」、「転移性の」及び「転移性がん」は互換的に使用することが可能であり、増殖性疾患又は障害、例えば、がんの１つの器官から別の隣接していない器官又は身体部分への伝播のことである。がんは、発生部位、例えば、乳房で発生し、その部位は原発腫瘍、例えば、原発乳がんと呼ばれる。原発腫瘍又は発生部位の一部のがん細胞は、局所領域の周囲の正常な組織に侵入し浸潤する能力及び／又は系を通って身体の他の部位及び組織まで循環するリンパ系又は血管系の壁に侵入する能力を獲得する。原発腫瘍のがん細胞から形成される第２の臨床的に検出可能な腫瘍は、転移性又は続発性腫瘍と呼ばれる。癌細胞が転移すると、転移性腫瘍及びこの細胞は最初の腫瘍の細胞に類似していると推定される。したがって、肺がんが乳房まで転移する場合、乳房の部位の続発性腫瘍は異常な胚細胞及び異常ではない乳房細胞からなる。乳房の続発性腫瘍は転移性肺がんと呼ばれる。したがって、語句転移性がんとは、対象が原発性腫瘍を有している又は有していたかつ１つ以上の続発性腫瘍を有する疾患のことである。語句転移性ではないがん又は転移性ではないがんを有する対象とは、対象が原発性腫瘍は有するが１つ以上の続発性腫瘍を持たない疾患のことである。例えば、転移性肺がんとは、原発肺腫瘍を有する又はその病歴を有し、例えば、乳房において第２の位置又は複数位置で１つ以上の続発性腫瘍を有する対象の疾患のことである。
【００７３】
疾患（例えば、がん（例えば、白血病、急性骨髄性白血病））に関連する物質又は物質活性又は機能という文脈での用語「関連する」又は「に関連する」とは、疾患（例えば、がん（例えば、白血病、急性骨髄性白血病））が（全体で又は部分で）物質又は物質活性又は機能により引き起こされる、又は疾患の症状が（全体で又は部分で）物質又は物質活性又は機能により引き起こされることを意味する。あるいは、物質（例えば、ＩＬ１ＲＡＰ）は、疾患（例えば、がん（例えば、白血病、急性骨髄性白血病））の指標になりうる。したがって、関連する物質は、疾患組織（例えば、がん細胞（例えば、白血病幹細胞、急性骨髄性白血病細胞）を標的にする手段としての役目を果たしうる。
【００７４】
本明細書で使用される場合、状態、疾患若しくは障害又は状態、疾患（例えば、がん、例えば、ＡＭＬ）若しくは障害に伴う症状を「治療する」又は「の治療」とは、臨床結果を含む、有益な又は所望の結果を得るためのアプローチのことである。有益な又は所望の臨床結果は、部分的であれ全体的であれ、１つ以上の症状又は状態の軽減又は軽快、状態、障害又は疾患の程度の減弱、状態、障害又は疾患の状態の安定化、状態、障害又は疾患の発症の予防、状態、障害又は疾患の伝播の予防、状態、障害又は疾患進行の遅延又は緩徐化、状態、障害又は疾患発病の遅延又は緩徐化、状態、障害又は疾患状態の軽快又は緩和、及び寛解を含むがこれらに限定されない。「治療する」は、対象の生存を治療がない場合に予想される生存よりも延ばすことも意味することが可能である。「治療する」は、状態、障害又は疾患の進行を阻害する、状態、障害又は疾患の進行を一時的に緩徐化することを意味することも可能であるが、一部の例では、治療は状態、障害又は疾患の進行を永久に停止することを含む。本明細書で使用される場合、用語治療、治療する（ｔｒｅａｔ）又は治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）とは、プロテアーゼの発現を特徴とする疾患若しくは状態の１つ以上の症状の効果又はプロテアーゼの発現を特徴とする疾患若しくは状態の症状を低減する方法のことである。したがって、開示された方法では、治療は確立した方法では、治療は確立した疾患、状態の重症度、又は疾患若しくは状態の症状の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は１００％の低減を指すことが可能である。例えば、対照と比べた場合、対象において疾患の１つ以上の症状の１０％の低減がある場合、疾患を治療するための方法は治療と見なされる。したがって、低減は、天然又は対照レベルと比べた場合、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％又は１０％と１００％の中間の任意のパーセント低減が可能である。治療は必ずしも疾患、状態、又は疾患若しくは状態の症状の治癒又は完全な除去ではないことは理解されている。さらに、本明細書で使用される場合、減少する、低減する、又は阻害する、への言及は、対照レベルと比べた場合、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又はそれよりも多い変化を含み、そのような用語は完全な除去を含むことが可能であるが、必ずしも完全な除去を含まない。
【００７５】
用語「用量」及び「投与量」は本明細書では互換的に使用される。用量とは、それぞれの投与において個体に与えられる活性成分の量のことである。用量は、所与の治療のための正常な用量の範囲、投与の回数、個体のサイズ及び許容度、状態の重症度；副作用のリスク；及び投与経路を含む、いくつかの要因に応じて変動する。当業者であれば、用量は上記の要因に応じて又は治療進展に基づいて加減することが可能である。用語「剤形」とは、医薬品又は医薬組成物の特定のフォーマットのことであり、投与経路に依拠する。例えば、剤形は、例えば、吸入剤のための吸入投与用の液体状、例えば、経口送達のための錠剤若しくは液体、又は、例えば、注射のための生理食塩水が可能である。
【００７６】
本明細書で使用される「治療有効用量又は量」とは、それを投与する目的の効果（例えば、疾患を治療する又は予防する）を生じる用量のことである。正確な用量及び処方は治療の目的に依存し、当業者であれば公知の技法を使用して確かめられる（例えば、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ（ｖｏｌｓ．１〜３、１９９２年）；Ｌｌｏｙｄ、Ｔｈｅ  Ａｒｔ、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇ（１９９９）；Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、２０ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｇｅｎｎａｒｏ、Ｅｄｉｔｏｒ（２００３）、ａｎｄ  Ｐｉｃｋａｒ、Ｄｏｓａｇｅ  Ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎｓ（１９９９）参照）。例えば、所与のパラメータでは、治療有効量は少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、４０％、５０％、６０％、７５％、８０％、９０％又は少なくとも１００％の増加又は減少を示す。治療効果は、「〜倍」増加又は減少として表すことも可能である。例えば、治療有効量は、標準対照よりも少なくとも１．２倍、１．５倍、２倍、５倍、又はそれよりも多い効果を持つことが可能である。治療有効用量又は量は、疾患の１つ以上の症状を軽快させうる。治療有効用量又は量は、それが投与される目的の効果が疾患の発症のリスクがあるヒトを治療することである場合には、疾患又は疾患の１つ以上の症状の発症を予防する若しくは遅らせうる。
【００７７】
実施形態では、方法は、対象に追加の治療薬を投与することをさらに含む。上記のように、治療薬はがんなどの疾患を治療する又は予防するのに有用である組成物である。実施形態では、追加の治療薬は抗がん剤である。
【００７８】
用語「抗がん剤」及び「抗がん剤」はその明白な通常の意味に従って使用され、抗悪性腫瘍特性又は細胞の成長若しくは増殖を阻害する能力を有する組成物（例えば、化合物、薬物、アンタゴニスト、阻害剤、モジュレーター）のことである。一部の実施形態では、抗がん剤は化学療法薬である。一部の実施形態では、抗がん剤は、がんを治療する方法に効用のある本明細書で同定される作用物質である。一部の実施形態では、抗がん剤は、ＦＤＡ又はＵＳＡ以外の国の類似の規制機関によりがんの治療について承認された作用物質である。ＭＥＫ（例えば、ＭＥＫ１、ＭＥＫ２又はＭＥＫ１及びＭＥＫ２）阻害剤（例えば、ＸＬ５１８、ＣＩ−１０４０、ＰＤ０３５９０１、セルメチニブ／ＡＺＤ６２４４、ＧＳＫ１１２０２１２／トラメチニブ、ＧＤＣ−０９７３、ＡＲＲＹ−１６２、ＡＲＲＹ−３００、ＡＺＤ８３３０、ＰＤ０３２５９０１、Ｕ０１２６、ＰＤ９８０５９、ＴＡＫ−７３３、ＰＤ３１８０８８、ＡＳ７０３０２６、ＢＡＹ８６９７６６）、アルキル化剤（例えば、シクロホスファミド、イホスファミド、クロラムブシル、ブスルファン、メルファラン、メクロレタミン、ウラムスチン、チオテパ、ニトロソウレア、ナイトロジェンマスタード（例えば、メクロレタミン、シクロホスファミド、クロラムブシル、メイファラン）、エチレンイミン及びメチルメラミン（例えば、ヘキサメチルメラミン、チオテパ）、アルキルスルホネート（例えば、ブスルファン）、ニトロソウレア（例えば、カルムスチン、ロムスチン、セムスチン、ストレプトゾシン）、トリアゼン（ダカルバジン））、抗代謝剤（例えば、５−アザチオプリン、ロイコボリン、カペシタビン、フルダラビン、ゲムシタビン、ペメトレキセド、ラルチトレキセド、葉酸類似体（例えば、メトトレキサート）、又はピリミジン類似体（例えば、フルオロウラシル、フロクソウリジン、シタラビン）、プリン類似体（例えば、メルカプトプリン、チオグアニン、ペントスタチン）、等）、植物アルカロイド（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンデシン、ポドフィロトキシン、パクリタキセル、ドセタキセル、等）、トポイソメラーゼ阻害剤（例えば、イリノテカン、トポテカン、アムサクリン、エトポシド（ＶＰ１６）、リン酸エトポシド、テニポシド、等）、抗腫瘍抗生物質（例えば、ドキソルビシン、アドリアマイシン、ダウノルビシン、エピルビシン、アクチノマイシン、ブレオマイシン、マイトマイシン、ミトキサントロン、プリカマイシン、等）、白金系化合物（例えば、シスプラチン、オキサロプラチン、カルボプラチン）、アントラセンジオン（例えば、ミトキサントロン）、置換尿素（例えば、ヒドロキシウレア）、メチルヒドラジン誘導体（例えば、プロカルバジン）、副腎皮質抑制剤（例えば、ミトタン、アミノグルテチミド）、エピポドフィロトキシン（例えば、エトポシド）、抗生物質（例えば、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ブレオマイシン）、酵素（例えば、Ｌ−アスパラギナーゼ）、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼシグナル伝達の阻害剤（例えば、Ｕ０１２６、ＰＤ９８０５９、ＰＤ１８４３５２、ＰＤ０３２５９０１、ＡＲＲＹ−１４２８８６、ＳＢ２３９０６３、ＳＰ６００１２５、ＢＡＹ  ４３−９００６、ワートマニン、又はＬＹ２９４００２、Ｓｙｋ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、抗体（例えば、リツキサン）、ゴシフォール、ゲナセンス、ポリフェノールＥ、クロロフシン、全トランス型レチノイン酸（ＡＴＲＡ）、ブリオスタチン、腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）、５−アザ−２’−デオキシシチジン、全トランス型レチノイン酸、ドキソルビシン、ビンクリスチン、エトポシド、ゲムシタビン、イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ．ＲＴＭ．）、ゲルダナマイシン、１７−Ｎ−アリルアミノ−１７−デメトキシゲルダナマイシン（１７−ＡＡＧ）、フラボピリドール、ＬＹ２９４００２、ボルテゾミブ、トラスツズマブ、ＢＡＹ  １１−７０８２、ＰＫＣ４１２、ＰＤ１８４３５２、２０−ｅｐｉ−１、２５ジヒドロキシビタミン  Ｄ３；５−エチニルウラシル；アビラテロン、アクラルビシン；アシルフルベン；アデシペノール；アドゼレシン、アルデスロイキン；ＡＬＬ−ＴＫアンタゴニスト；アルトレタミン；アンバムスチン；アミドックス；アミフォスチン；アミノレブリン酸；アムルビシン；アムサクリン；アナグレリド；アナストロゾール；アンドログラホリド；血管新生阻害剤；アンタゴニストＤ；アンタゴニストＧ；アンタレリックス；抗ドーサライジング形態形成タンパク質−１；抗アンドロゲン前立腺癌；抗エストロゲン剤；アンチネオプラストン；アンチセンスオリゴヌクレオチド；アフィディコリングリシネート；アポトーシス遺伝子モジュレーター；アポトーシス調節剤：アプリン酸；ａｒａ−ＣＤＰ−ＤＬ−ＰＴＢＡ；アルギニンデアミナーゼ；アスラクリン；アタメスタン；アトリムスチン；アキシナスタチン１；アキシナスタチン２；アキシナスタチン３；アザセトロン；アザトキシン；アザチロシン；バッカチンＩＩＩ誘導体；バラノール；バチマスタット；ＢＣＲ／ＡＢＬアンタゴニスト；ベンゾクロリン；ベンゾイルスタウロスポリン；ベータラクタム誘導体；ベータアレチン；ベタクラマイシンＢ；ベツリン酸；ｂＦＧＦ阻害剤；ビカルタミド；ビスアントレン；ビサジリジニルスペルミン；ビスナフィド；ビストラテンＡ；ビゼレシン；ブレフラート；ブロピリミン；ブドチタン；ブチオニンスルホキシミン；カルシポトリオール；カルホスチンＣ；カンプトテシン誘導体；カナリア痘ＩＬ−２；カペシタビン；カルボキサミドアミノトリアゾール；カルボキシアミドトリアゾール；ＣａＲｅｓｔ  Ｍ３；ＣＡＲＮ  ７００；軟骨由来阻害剤；カルレゼシン；カゼインキナーゼ阻害剤（ＩＣＯＳ）；カスタノスペルミン；セクロピンＢ；セトロレリックス；クロリン；クロロキノキサリンスルホンアミド；シカプロスト；シス−ポルフィリン；クラドリビン；クロミフェン類似体；クロトリマゾール；コリスマイシンＡ；コリスマイシンＢ；コンブレタスタチンＡ４；コンブレタスタチン類似体；コナゲニン；クランベシジン８１６；クリスナトール；クリプトフィシン８；クリプトフィシンＡ誘導体；クラシンＡ；シクロペンタントラキノン；シクロプラタム；シペマイシン；シタラビンオクホスファート；細胞溶解因子；サイトスタチン；ダクリキシマブ；デシタビン；デヒドロジデムニンＢ；デスロレリン；デキサメタ��ン；デキシホスファミド；デクスラゾキサン；デクスベラパミル；ジアジコン；ジデムニンＢ；ジドックス；ジエチルノルスペルミン；ジヒドロ−５−アザシチジン；９−ジオキサマイシン；ジフェニルスピロムチン；ドコサノール；ドラセトロン；ドキシフルリジン；ドロロキシフェン；ドロナビノール；デュオカルマイシンＳＡ；エブセレン；エコムスチン；エデルフォシン；エドレコロマブ；エフロルニチン；エレメン；エミテフール；エピルビシン；エプリステリド；エストラムスチン類似体；エストロゲンアゴニスト；エストロゲンアンタゴニスト；エタニダゾール；リン酸エトポシド；エキセメスタン；ファドロゾール；ファザラビン；フェンレチニド；フィルグラスチム；フィナステリド；フラボピリドール；フレゼラスチン；フルアステロン；フルダラビン；フルオロダウノルニシン塩酸塩；ホルフェニメクス；フォルメスタン；フォストリエシン；フォテムスチン；ガドリニウムテキサフィリン；硝酸ガリウム；ガロシタビン；ガニレリックス；ゼラチナーゼ阻害剤；ゲムシタビン；グルタチオン阻害剤；ヘプスルファム；ヘレグリン；ヘキサメチレンビスアセタミド；ヒペリシン；イバンドロン酸；イダルビシン；イドキシフェン；イドラマントン；イルモホシン；イロマスタット；イミダゾアクリドン；イミキモド；免疫賦活剤ペプチド；インスリン様成長因子−１受容体阻害剤；インターフェロンアゴニスト；インターフェロン；インターロイキン；ヨーベングアン；ヨードドキソルビシン；イポメアノール，４−；イロプラクト；イルソグラジン；イソベンガゾール；イソホモハリコンドリンＢ；イタセトロン；ジャスプラキノリド；カハラリドＦ；ラメラリン−Ｎトリアセテート；ランレオチド；レイナマイシン；レノグラスチム；硫酸レンチナン；レプトルスタチン；レトロゾール；白血病阻止因子；白血球アルファインターフェロン；リュープロリド＋エストロゲン＋プロゲステロン、リュープロレリン；レバミゾール；リアロゾール；線状ポリアミン類似体；親油性二糖ペプチド；親油性白金化合物；リソクリンアミド７；ロバプラチン；ロンブリシン；ロメトレキソール；ロニダミン；ロソキサントロン；ロバスタチン；ロキソリビン；ルルトテカン；ルテチウムテキサフィリン；リソフィリン；溶解ペプチド；マイタンシン；マンノスタチンＡ；マリマスタット；マソプロコール；マスピン；マトリリシン阻害剤；マトリックスメタプロテイナーゼ阻害剤；メノガリル；メルバロン；メテレリン；メチオニナーゼ；メトクロプラミド；ＭＩＦ阻害剤；ミフェプリストン；ミルテフォシン；ミリモスチム；ミスマッチ二本鎖ＲＮＡ；ミトグアゾン；ミトラクトール；マイトマイシン類似体；ミトナフィド；マイトトキシン繊維芽細胞成長因子−サポリン；ミトキサントロン；モファロテン；モルグラモスチム；モノクローナル抗体、ヒト絨毛性ゴナドトロピン；モノホスホリドリピドＡ＋マイコバクテリウム細胞壁ｓｋ；モピダモール；多剤耐性遺伝子阻害剤；多発性腫瘍抑制剤１ベースの療法；マスタード抗がん剤；ミカペルオキシドＢ；マイコバクテリア細胞壁抽出物；ミリアポロン；Ｎ−アセチルジナリン；Ｎ−置換ベンズアミド；ナファレリン；ナグレスチップ；ナロキソン−ペンタ��シン；ナパビン；ナフテルピン；ナルトグラスチム；ネダプラチン；ネモルビシン；ネリドロン酸；中性エンドペプチダーゼ；ニルタミド；ニサマイシン；一酸化窒素モジュレーター；ニトロオキシド抗酸化剤；ニトルリン；Ｏ６−ベンジルグアニン；オクトレオチド；オキセノン；オリゴヌクレオチド；オナプリストン；オンダンセトロン；オラシン；経口サイトカイン誘導物質；オルマプラチン；オサテロン；オキサリプラチン；オキサウノマイシン；パラウアミン；パルミトイルリゾキシン；パミドロン酸；パナキシトリオール；パノミフェン；パラバクチン；パゼリプチン；ペグアスパラガーゼ；ペルデシン；ペントサンポリ硫酸ナトリウム；ペントスタチン；ペントロゾール；パーフルブロン；パーホスファミド；ペリリルアルコール；フェナジノマイシン；酢酸フェニル；ホスファターゼ阻害剤；ビシバニール；ピロカルピン塩酸塩；ピラルビシン；ピリトレキシム；プラセチンＡ；プラセチンＢ；プラスミノーゲン活性化因子阻害剤；白金複合体；白金化合物；白金トリアミン複合体；ポルフィマーナトリウム；ポルフィロマイシン；プレドニゾン；プロピルビス−アクリドン；プロスタグランジンＪ２；プロテアソーム阻害剤；プロテインＡベースの免疫モジュレーター；プロテインキナーゼＣ阻害剤；微細藻類；タンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤；プリンヌクレオシドホスホリラーゼ阻害剤；プルプリン；ピラゾロアクリジン；ピリドキシル化ヘモグロビンポリオキシエチレリエコンジュゲート；ｒａｆアンタゴニスト；ラルチトレキセド；ラモセトロン；ｒａｓファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤；ｒａｓ阻害剤；ｒａｓ−ＧＡＰ阻害剤；脱メチル化レテリプチン；レニウムＲｅ１８６エチドロネート；リゾキシン；リボザイム；ＲＩＩレチンアミド；ログレチミド；ロヒツキン；ロムルチド；ロキニメックス；ルビギノンＢ１；ルボキシル；サフィンゴール；サイントピン；ＳａｒＣＮＵ；サクロフィトールＡ；サルグラモスチム；Ｓｄｉ１模倣物；セムスチン；細胞老化由来阻害剤１；センスオリゴヌクレオチド；シグナル伝達阻害剤；シグナル伝達モジュレーター；一本鎖抗原結合タンパク質；シゾフラン；ソブゾキサン；ボロカプテイトナトリウム；フェニル酢酸ナトリウム；ソルベロール；ソマトメジン結合タンパク質；ソネルミン；スパルホス酸；スピカマイシンＤ；スピロムスチン；スプレノペンチン；スポンギ
スタチン１；スクアラミン；幹細胞阻害剤；幹細胞分裂阻害剤；スチピアミド；ストロメリシン阻害剤；スルフィノシン；超活性血管作動性腸管ペプチドアンタゴニスト；スラジスタ；スラミン；スワインソニン；合成グリコサミノグリカン；タロムスチン；タモキシフェンメチオジド；タウロムスチン；タザロテン；テコガランナトリウム；テガフール；テルルアピリリウム；テロメラーゼ阻害剤；テモポルフィン；テモゾロミド；テニポシド；テトラクロロデカオキシド；テトラゾミン；タリブラスチン；チオコラリン；トロンボポエチン；トロンボポエチン模倣物；チマルファシン；サイモポエチン受容体アゴニスト；チモトリナン；甲状腺刺激ホルモン；エチルエチオプルプリンスズ；チラパザミン；チタノセン二塩化物；トプセンチン；トレミフェン；全能性幹細胞因子；翻訳阻害剤；トレチノイン；トリアセチルウリジン；トリシリビン；トリメトレキサート；トリプトレリン；トロピセトロン；ツロステリド；チロシンキナーゼ阻害剤；チロホスチン；ＵＢＣ阻害剤；ウベニメクス；尿生殖洞由来成長抑制因子；ウロキナーゼ受容体アンタゴニスト；バプレオチド；バリオリンＢ；ベクター系、赤血球遺伝子治療；ベラレソール；ベラミン；バーデン；ベルテポルフィン；ビノレルビン；ビンキサルチン；ビタキシン；ボロゾール；ザノテロン；ゼニプラチン；ジラスコルブ；ジノスタチンスチマラマー；アドリアマイシン；ダクチノマイシン；ブレオマイシン；ビンブラスチン；シスプラチン；アシビシン；アクラルビシン；アコダゾール塩酸塩；アクロニン；アドゼレシン；アルデスロイキン；アルトレタミン；アンボマイシン；アメタントロン酢酸塩；アミノグルテチミド；アムサクリン；アナストロゾール；アントラマイシン；アスパラギナーゼ；アスペルリン；アザシチジン；アゼテパ；アゾトマイシン；バチマスタット；ベンゾデパ；ビカルタミド；ビサントレン塩酸塩；ビスナフィドジメシレート；ビゼレシン；ブレオマイシン硫酸塩；ブレキナルナトリウム；ブロピリミン；ブスルファン；カクチノマイシン；カルステロン；カラセミド；カルベチマー；カルボプラチン；カルムスチン；カルビシン塩酸塩；カルゼレシン；セデフィンゴール；クロラムブシル；シロールマイシン；クラドリビン；クリスナトールメシル酸塩；シクロホスファミド；シタラビン；ダカルバジン；ダウノルビシン塩酸塩；デシタビン；デキソルマプラチン；デザグアニン；デザグアニンメシル酸塩；ジアジコン；ドキソルビシン；ドキソルビシン塩酸塩；ドロロキシフェン；ドロロキシフェンクエン酸塩；プロピオン酸ドロモスタノロン；デュアゾマイシン；エダトレキサート；エフロルニチン塩酸塩；エルサミトルシン；エンロプラチン；エンプロマート；エピプロピジン；エピルビシン塩酸塩；エルブロゾール；エソルビシン塩酸塩；エストラムスチン；リン酸エストラムスチンナトリウム；エタニダゾール；エトポシド；エトポシドリン酸塩；エトプリン；ファドゾール塩酸塩；ファザラビン；フェンレチニド；フロクスウリジン；フルダラビンリン酸塩；フルオロウラシル；フルオロシタビン；ホスキドン；ホストリエシンナトリウム；ゲムシタビン；ゲムシタビン塩酸塩；ヒドロキシウレア；イダルビシン塩酸塩；イホスファミド；イイモホシン；インターロイキンＩ１（組換えインターロイキンＩＩ、又はｒｌＬ２を含む）、インターフェロンアルファ２ａ；インターフェロンアルファ２ｂ；インターフェロンアルファｎ１；インターフェロンアルファｎ３；インターフェロンベータ１ａ；インターフェロンガンマ１ｂ；イプロプラチン；イノリテカン塩酸塩；ランレオチド酢酸塩；レトロゾール；リュープロリド酢酸塩；リアロゾール塩酸塩；ロメトレキソールナトリウム；ロムスチン；ロソキサントロン塩酸塩；マソプロコール；マイタンシン；メクロレタミン塩酸塩；メゲストロール酢酸塩；メレンゲストロール酢酸塩；メルファラン；メノガリル；メルカプトプリン；メトトレキサート；メトトレキサートナトリウム；メトプリン；メツレデパ；ミチンドミド；ミトカルシン；ミトクロミン；マイトジリン；ミトマルシン；マイトマイシン；ミトスペル；ミトタン；ミトキサントロン塩酸塩；ミコフェノール酸；ノコダゾール；ノガラマイシン；オルマプラチン；オキシスラン；ペグアスパラガーゼ；ペリオマイシン；ペンタムスチン；ぺプロマイシン硫酸塩；パーホスファミド；ピポブロマン；ピポスルファン；ピロキサントロン塩酸塩；プリカマイシン；プロメスタン；ポルフィマーナトリウム；ポルフィロマイシン；プレドニマスチン；プロカルバジン塩酸塩；ピューロマイシン；ピューロマイシン塩酸塩；ピラゾフリン；リボプリン；ログレチミド；サフィンゴール；サフィンゴール塩酸塩；セムスチン；シムトラゼン；スパルフォセートナトリウム；スパルソマイシン；スピロゲルマニウム塩酸塩；スピロムスチン；スピロプラチン；ストレプトニグリン；ストレプトゾシン；スロフェヌル；タリソマイシン；テコガランナトリウム；テガフール；テロキサントロン塩酸塩；テモポルフィン；テニポシド；テロキシロン；テストラクトン；チアミプリン；チオグアニン；チオテパ；チアゾフリン；チラパザミン；トレミフェンクエン酸塩；トレストロン酢酸塩；トリシリビンリン酸塩；トリメトレキサート；グルクロン酸トリメトレキサート；トリプトレリン；ツブロゾール塩酸塩；ウラシルマスタード；ウレデパ；バプレオチド；ベルテポルフィン；ビンブラスチン硫酸塩；ビンデシン；ビンデシン硫酸塩；ビネピジン硫酸塩；ビングリシナート硫酸塩；ビンロイロシン硫酸塩；ビノレルビン酒石酸塩；ビンロシジン硫酸塩；ビンゾリジン硫酸塩；ボロゾール；ゼニプラチン；ジノスタチン；ゾルビシン塩酸塩；Ｇ２−Ｍ期に細胞を停止するかつ／又は微小管の形成若しくは安定性を調節する作用物質（例えば、タキソール．商標（すなわち、パクリタキセル）、タキソテール．商標、タキサン骨格を含む化合物、エルブロゾール（すなわち、Ｒ−５５１０４）、ドラスタチン１０（すなわち、ＤＬＳ−１０及びＮＳＣ−３７６１２８）、イセチオン酸ミボブリン（すなわち、ＣＩ−９８０として）、ビンクリスチン、ＮＳＣ−６３９８２９、ディスコデルモライド（すなわち、ＮＶＰ−ＸＸ−Ａ−２９６として）、ＡＢＴ−７５１（Ａｂｂｏｔｔ、すなわち、Ｅ−７０１０）、アルトヒルチン（例えば、アルトヒルチンＡ及びアルトヒルチンＣ）、スポンギスタチン（例えば、スポンギスタチン１、スポンギスタチン２、スポンギスタチン３、スポンギスタチン４、スポンギスタチン５、スポンギスタチン６、スポンギスタチン７、スポンギスタチン８及びスポンギスタチン９）、セマドチン塩酸塩（すなわち、ＬＵ−１０３７９３及びＮＳＣ−Ｄ−６６９３５６）、エポチロン（例えば、エポチロンＡ、エポチロンＢ、エポチロンＣ（すなわち、デスオキシデポチロンＡ又はｄＥｐｏＡ）、エポチロンＤ（すなわち、ＫＯＳ−８６２、ｄＥｐｏＢ及びデスオキシデポチロンＢ）、エポチロンＥ、エポチロンＦ、エポチロンＢ  Ｎ−オキシド、エポチロンＡ  Ｎ−オキシド、１６−アザーエポチロンＢ、２１−アミノエポチロンＢ（すなわち、ＢＭＳ−３１０７０５）、２１−ヒドロキシエポチロンＤ（すなわち、デスオキシエポチロンＦ及びｄＥｐｏＦ）、２６−フルオロエポチロン、アウリスタチンＰＥ（すなわち、ＮＳＣ−６５４６６３）、ソブリドチン（すなわち、ＴＺＴ−１０２７）、ＬＳ−４５５９−Ｐ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ、すなわち、ＬＳ−４５７７）、ＬＳ−４５７８（Ｐｈａｒｍａｃｉａ、すなわち、ＬＳ−４７７−Ｐ）、ＬＳ−４４７７（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、ＬＳ−４５５９（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、ＲＰＲ−１１２３７８（Ａｖｅｎｔｉｓ）、ビンクリスチン硫酸塩、ＤＺ−３３５８（Ｄａｉｉｃｈｉ）、ＦＲ−１８２８７７（Ｆｕｊｉｓａｗａ、すなわち、ＷＳ−９８８５Ｂ）、ＧＳ−１６４（Ｔａｋｅｄａ）、ＧＳ−１９８（Ｔａｋｅｄａ）、ＫＡＲ−２（Ｈｕｎｇａｒｉａｎ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＢＳＦ−２２３６５１（ＢＡＳＦ、すなわち、ＩＬＸ−６５１及びＬＵ−２２３６５１）、ＳＡＨ−４９９６０（Ｌｉｌｌｙ／Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＳＤＺ−２６８９７０（Ｌｉｌｌｙ／Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＡＭ−９７（Ａｒｍａｄ／Ｋｙｏｗａ  Ｈａｋｋｏ）、ＡＭ−１３２（Ａｒｍａｄ）、ＡＭ−１３８（Ａｒｍａｄ／Ｋｙｏｗａ  Ｈａｋｋｏ）、ＩＤＮ−５００５（Ｉｎｄｅｎａ）、クリプトフィシン５２（すなわち、ＬＹ−３５５７０３）、ＡＣ−７７３９（Ａｊｉｎｏｍｏｔｏ、すなわち、ＡＶＥ−８０６３Ａ及びＣＳ−３９．ＨＣｌ）、ＡＣ−７７００（Ａｊｉｎｏｍｏｔｏ、すなわち、ＡＶＥ−８０６２、ＡＶＥ−８０６２Ａ、ＣＳ−３９−Ｌ−Ｓｅｒ．ＨＣｌ及びＲＰＲ−２５８０６２Ａ）、ビチレブアミド、ツブリシンＡ、カナデンソール、センタウレイジン（すなわち、ＮＳＣ−１０６９６９）、Ｔ−１３８０６７（Ｔｕｌａｒｉｋ、すなわち、Ｔ−６７、ＴＬ−１３８０６７及びＴＩ−１３８０６７）、ＣＯＢＲＡ−１（Ｐａｒｋｅｒ  Ｈｕｇｈｅｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、すなわち、ＤＤＥ−２６１及びＷＨＩ−２６１）、Ｈ１０（Ｋａｎｓａｓ  Ｓｔａｔｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）、Ｈ１６（Ｋａｎｓａｓ  Ｓｔａｔｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）、オンコシジンＡ１（すなわち、ＢＴＯ−９５６及びＤＩＭＥ）、ＤＤＥ−３１３（Ｐａｒｋｅｒ  Ｈｕｇｈｅｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）、フィジアノリドＢ、ラウリマリド、ＳＰＡ−２（Ｐａｒｋｅｒ  Ｈｕｇｈｅｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）、ＳＰＡ−１（Ｐａｒｋｅｒ  Ｈｕｇｈｅｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、すなわち、ＳＰＩＫＥＴ−Ｐ）、３−ＩＡＡＢＵ（Ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ／Ｍｔ．Ｓｉｎａｉ  Ｓｃｈｏｏｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、すなわち、ＭＦ−５６９）、ナルコシン（ＮＳＣ−５３６６としても知られる）、ナスカピン、Ｄ−２４８５１（Ａｓｔａ  Ｍｅｄｉｃａ）、Ａ−１０５９７２（Ａｂｂｏｔｔ）、ヘミアステリン、３−ＢＡＡＢＵ（Ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ／Ｍｔ．Ｓｉｎａｉ  Ｓｃｈｏｏｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、すなわち、ＭＦ−１９１）、ＴＭＰＮ（Ａｒｉｚｏｎａ  Ｓｔａｔｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）、バナドセンアセチルアセトネート、Ｔ−１３８０２６（Ｔｕｌａｒｉｋ）、モンサトロール、イナノシン（すなわち、ＮＳＣ−６９８６６６）、３−ＩＡＡＢＥ（Ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ／Ｍｔ．Ｓｉｎａｉ  Ｓｃｈｏｏｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）、Ａ−２０４１９７（Ａｂｂｏｔｔ）、Ｔ−６０７（Ｔｕｉａｒｉｋ、すなわち、Ｔ−９００６０７）、ＲＰＲ−１１５７８１（Ａｖｅｎｔｉｓ）、エリューセロビン（デスメチルエリューセロビン、デスアエチルエリューセロビン、イソエリューセロビンＡ及びＺ−エリューセロビンなどの）、カリバエオシド、カリバエオリン、ハリコンドリンＢ、Ｄ−６４１３１（Ａｓｔａ  Ｍｅｄｉｃａ）、Ｄ−６８１４４（Ａｓｔａ  Ｍｅｄｉｃａ）、ジアゾナミドＡ、Ａ−２９３６２０（Ａｂｂｏｔｔ）、ＮＰＩ−２３５０（Ｎｅｒｅｕｓ）、タッカロノリドＡ、ＴＵＢ−２４５（Ａｖｅｎｔｉｓ）、Ａ−２５９７５４（Ａｂｂｏｔｔ）、ジオゾスタチン、（−）−フェニルアヒスチン（すなわち、ＮＳＣＬ−９６Ｆ０３７）、Ｄ−６８８３８（Ａｓｔａ  Ｍｅｄｉｃａ）、Ｄ−６８８３６（Ａｓｔａ  Ｍｅｄｉｃａ）、ミオセベリンＢ、Ｄ−４３４１１（Ｚｅｎｔａｒｉｓ、すなわち、Ｄ−８１８６２）、Ａ−２８９０９９（Ａｂｂｏｔｔ）、Ａ−３１８３１５（Ａｂｂｏｔｔ）、ＨＴＩ−２８６（すなわち、ＳＰＡ−１１０、トリフルオロ酢酸塩）（Ｗｙｅｔｈ）、Ｄ−８２３１７（Ｚｅｎｔａｒｉｓ）、Ｄ−８２３１８（Ｚｅｎｔａｒｉｓ）、ＳＣ−１２９８３（ＮＣＩ）、リン酸レスベラスタチンナトリウム、ＢＰＲ−ＯＹ−００７（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ）、及びＳＳＲ−２５０４１１（Ｓａｎｏｆｉ））、ステロイド（例えば、デキサメタゾン）、フィナステリド、アロマターゼ阻害剤、ゴセレリン又はリュープロリドなどのゴナドトロピン放出ホルモンアゴニスト（ＧｎＲＨ）、副腎皮質ステロイド（
例えば、プレドニゾン）、プロゲスチン（例えば、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、酢酸メゲストロール、酢酸メドロキシプロゲステロン）、エストロゲン（例えば、ジエチルスチルベストロール、エチニルエストラジオール）、抗エストロゲン剤（例えば、タモキシフェン）、アンドロゲン（例えば、プロピオン酸テストステロン、フルオキシメステロン）、抗アンドロゲン剤（例えば、フルタミド）、免疫賦活薬（例えば、バシラス・カルメット−ゲラン（ＢＣＧ）、レバミゾール、インターロイキン−２、アルファインターフェロン、等）、モノクローナル抗体（例えば、抗ＣＤ２０、抗ＨＥＲ２、抗ＣＤ５２、抗ＨＬＡ−ＤＲ及び抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体）、免疫毒素（例えば、抗ＣＤ３３モノクローナル抗体−カリチアマイシンコンジュゲート、抗ＣＤ２２モノクローナル抗体−緑膿菌外毒素コンジュゲート、等）、放射免疫療法（例えば、１１１Ｉｎ、９０Ｙ又は１３１Ｉにコンジュゲートされた抗ＣＤ２０モノクローナル抗体、等）、トリプトライド、ホモハリントニン、ダクチノマイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、トポテカン、イトラコナゾール、ビンデシン、セリバスタチン、ビンクリスチン、デオキシアデノシン、セルトラリン、ピタバスタチン、イリノテカン、クロファジミン、５−ノニルオキシトリプタミン、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、ＥＧＦＲ阻害剤、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）標的療法又は治療薬（例えば、ゲフィチニブ（Ｉｒｅｓｓａ（商標））、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（商標））、セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ（商標））、ラパチニブ（Ｔｙｋｅｒｂ（商標））、パニツムマブ（Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（商標））、バンデタニブ（Ｃａｐｒｅｌｓａ（商標））、アファチニブ／ＢＩＢＷ２９９２、ＣＩ−１０３３／カネルチニブ、ネラチニブ／ＨＫＩ−２７２、ＣＰ−７２４７１４、ＴＡＫ−２８５、ＡＳＴ−１３０６、ＡＲＲＹ３３４５４３、ＡＲＲＹ−３８０、ＡＧ−１４７８、ダコミチニブ／ＰＦ２９９８０４、ＯＳＩ−４２０／デスメチルエルロチニブ、ＡＺＤ８９３１、ＡＥＥ７８８、ペリチニブ／ＥＫＢ−５６９、ＣＵＤＣ−１０１、ＷＺ８０４０、ＷＺ４００２、ＷＺ３１４６、ＡＧ−４９０、ＸＬ６４７、ＰＤ１５３０３５、ＢＭＳ−５９９６２６）、ソラフェニブ、イマチニブ、スニチニブ、ダサチニブ又は同類の物を含むがこれらに限定されない。
【００７９】
本明細書で使用される場合、用語「投与する」は、対象への経口投与、坐薬としての投与、局所的接触、静脈内、腹腔内、筋肉内、病巣内、くも膜下腔内、鼻腔内若しくは皮下投与、又は徐放性装置、例えば、ミニ浸透圧ポンプの植込みを意味する。投与は、非経口及び経粘膜的（例えば、頬側の、舌下、口蓋、歯肉、経鼻、膣、直腸又は経皮的）を含む任意の経路による。非経口投与は、例えば、静脈内、筋肉内、細動脈内、皮内、皮下、腹腔内、脳室内及び頭蓋内を含む。他の送達様式は、リポソーム製剤、静脈内注入、経皮パッチ、等の使用を含むがこれらに限定されない。「同時投与する」とは、本明細書に記載される組成物が、１種以上の追加の療法、例えば、化学療法、ホルモン療法、放射線療法又は免疫療法などのがん療法の施行と同時に、この直前に、又は直後に投与されることを意味する。本発明の化合物（例えば、抗体、二重特異性抗体又はキメラ抗原受容体）は、患者に単独で投与することが可能である、又は同時投与することが可能である。同時投与は、化合物の個別の又は組み合わせて（１種よりも多い化合物）の同時又は逐次投与を含むことが意図されている。したがって、調製物は、必要な場合には、他の活性物質と組み合わせることも可能である（例えば、代謝分解を減らすために）。本発明の組成物は、アプリケータースティック、溶液、懸濁液、乳濁液、ゲル、クリーム、軟膏、ペースト、ゼリー、ペイント、粉末及びエアゾールとして処方して、経皮的に、局所経路により送達することが可能である。
【００８０】
本発明の組成物は、徐放性及び／又は快適性を提供するための成分をさらに含んでもよい。そのような成分は、高分子量陰イオン性粘液模倣ポリマー、ゲル化多糖及び微粉化薬物担体基質（ｆｉｎｅｌｙ−ｄｉｖｉｄｅｄ  ｄｒｕｇ  ｃａｒｒｉｅｒ  ｓｕｂｓｔｒａｔｅ）を含む。これらの成分は、米国特許第４，９１１，９２０号、米国特許第５，４０３，８４１号、米国特許第５，２１２，１６２号及び米国特許第４，８６１，７６０号でさらに詳細に考察されている。これらの特許の全内容はその全体をあらゆる目的のために参照により本明細書に組み込む。本発明の組成物は、身体内での徐放のためにマイクロスフェアとして送達することも可能である。例えば、マイクロスフェアは、皮下にゆっくり放出する薬物含有マイクロスフェアの皮内注射を介して、（Ｒａｏ，Ｊ．Ｂｉｏｍａｔｅｒ  Ｓｃｉ．Ｐｏｌｙｍ．Ｅｄ．７：６２３〜６４５頁１９９５年参照）；生分解性注射可能ゲル製剤として（例えば、Ｇａｏ  Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１２：８５７〜８６３頁、１９９５年参照）；又は経口投与用のマイクロスフェアとして（例えば、Ｅｙｌｅｓ，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４９：６６９〜６７４、１９９７年参照）投与することが可能である。実施形態では、本発明の組成物の製剤は、細胞膜と融合する又は形質膜陥入されるリポソームの使用により、すなわち、細胞の表面膜タンパク質受容体に結合して形質膜陥入を生じるリポソームに結合した受容体リガンドを用いることにより送達することが可能である。特に、リポソーム表面が標的細胞に特異的である受容体リガンドを保有する、又は他の方法で優先的に特定の器官に向けられる場合には、リポソームを使用することにより、本発明の組成物の送達をインビボで標的細胞に集中させることが可能である（例えば、Ａｌ−Ｍｕｈａｍｍｅｄ，Ｊ．Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌ．１３：２９３〜３０６頁、１９９６年；Ｃｈｏｎｎ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．６：６９８〜７０８頁、１９９５年；Ｏｓｔｒｏ、Ａｍ．Ｊ．Ｈｏｓｐ．Ｐｈａｒｍ．４６：１５７６〜１５８７頁、１９８９年参照）。本発明の組成物は、ナノ粒子として送達することも可能である。
【００８１】
本明細書で使用される場合、用語「薬学的に許容される」は「生理的に許容される」及び「薬理学的に許容される」と同義的に使用される。医薬組成物は一般に、貯蔵中の緩衝及び保存用の作用物質を含み、投与経路に応じて、適切な送達のための緩衝剤及び担体を含むことが可能である。
【００８２】
「薬学的に許容される賦形剤」及び「薬学的に許容される担体」とは、活性薬剤の対象への投与及び対象による吸収を助け、患者に対して重大な有害毒性効果を引き起こさずに、本発明の組成物に含まれることが可能である物質のことである。薬学的に許容される賦形剤の非限定的例は、水、ＮａＣｌ、通常の生理食塩水、ラクトリンゲル液、通常のサクロース、通常のグルコース、結合剤、充填剤、崩壊剤、潤滑剤、コーティング剤、甘味料、香料、塩類溶液（リンゲル液などの）、アルコール、オイル、ゼラチン、ラクトース、アミロース又はデンプンなどの炭水化物、脂肪酸エステル、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、及び染料などを含む。そのような調製物は、無菌化し、必要に応じて、本発明の化合物と有害な反応をしない潤滑剤、保存剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響を与えるための塩、緩衝剤、着色剤及び／又は芳香物質及び同類の物などの補助剤と混合することが可能である。当業者であれば、他の医薬賦形剤が本発明に有用であることを認識する。
【００８３】
用語「薬学的に許容される塩」とは、当技術分野で周知である種々の有機及び無機対イオン由来の塩のことであり、例としてのみ、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウム、テトラアルキルアンモニウム及び同類の物、並びに、分子が塩基性の官能性を含有する場合は、塩酸塩、臭化水素塩、酒石酸塩、メシル酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、シュウ酸塩及び同類の物などの有機又は無機酸の塩を含む。
【００８４】
用語「調製」は、他の担体と一緒の又はこれなしの活性成分が担体で取り囲まれており、したがって、担体は活性成分と会合しているカプセルを提供する担体としてのカプセル封入材料を用いた活性化合物の処方を含むことが意図されている。同様に、カシェ剤及びトローチが含まれる。錠剤、粉末、カプセル、ピル、カシェ剤及びトローチは、経口投与に適した固形剤形として使用することが可能である。
【００８５】
医薬調製物は、任意選択で、単位剤形である。そのような形態では、調製物は、適切な量の活性成分を含有する単位用量に小分けされる。単位剤形は、パケット化錠剤、カプセル及びガラス瓶又はアンプル中の粉末などの分離量の調製物を含有する包装である、包装調製物が可能である。その上、単位剤形は、カプセル、錠剤、カシェ剤若しくはトローチそれ自体が可能であり、又は単位剤形は、包装形態でのこれらの適切な数のいずれでも可能である。単位剤形は凍結分散液が可能である。
【００８６】
抗体組成物
とりわけ、インターロイキン−１受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ１ＲＡＰ）に結合することができる抗体が本明細書に提示される。本明細書に提示される抗体は、新規の軽鎖及び重鎖配列を含み、ＩＬ１ＲＡＰに高い効率及び特異性で結合し、それによりＩＬ−１シグナル伝達を遮断する。ＩＬ−１シグナル伝達の遮断の結果、ＩＬ１ＲＡＰ発現細胞の増殖が阻害される。さらに、エフェクター細胞の動員を通じて、本明細書に提示される抗ＩＬＲＡＰ１抗体は、ＩＬ１ＲＡＰ発現細胞の細胞死滅を誘導することができる。ＩＬ１ＲＡＰは、種々の細胞型、例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）患者の候補白血病幹細胞において発現されるが、正常な造血幹細胞では発現されない。したがって、本明細書に提示される抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体は、とりわけ、ＡＭＬなどのＩＬ１ＲＡＰ発現がんの処置に有用である。
【００８７】
ある態様では、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、軽鎖可変ドメインが、配列番号１に記載のＣＤＲ  Ｌ１、配列番号２に記載のＣＤＲ  Ｌ２及び配列番号３に記載のＣＤＲ  Ｌ３を含み、重鎖可変ドメインが、配列番号４に記載のＣＤＲ  Ｈ１、配列番号５に記載のＣＤＲ  Ｈ２、及び配列番号６に記載のＣＤＲ  Ｈ３を含む、抗インターロイキン−１受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ１ＲＡＰ）抗体が提供される。
【００８８】
上記の通り、本明細書に提示される「軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン」は、抗体、抗体変異体又はこれらの断片の軽鎖の可変領域を指す。同様に、本明細書に提示される「重鎖可変（ＶＨ）ドメイン」は、抗体、抗体変異体又はこれらの断片の重鎖の可変領域を指す。軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインが一緒になって、抗原（エピトープ）に結合するパラトープを形成する。パラトープ又は抗原結合性部位は、抗体、抗体変異体又はこれらの断片のＮ末端に形成される。複数の実施形態では、軽鎖可変（ＶＬ）ドメインは、抗体軽鎖のＣＤＲ  Ｌ１、ＣＤＲ  Ｌ２、ＣＤＲ  Ｌ３並びにＦＲ  Ｌ１、ＦＲ  Ｌ２、ＦＲ  Ｌ３及びＦＲ  Ｌ４（フレームワーク領域）を含む。複数の実施形態では、重鎖可変（ＶＨ）ドメインは、抗体重鎖のＣＤＲ  Ｈ１、ＣＤＲ  Ｈ２、ＣＤＲ  Ｈ３並びにＦＲ  Ｈ１、ＦＲ  Ｈ２、ＦＲ  Ｈ３及びＦＲ  Ｈ４（フレームワーク領域）を含む。複数の実施形態では、軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン及び軽鎖定常（ＣＬ）ドメインが抗体軽鎖の一部を形成する。複数の実施形態では、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び重鎖定常（ＣＨ１）ドメインは抗体重鎖の一部を形成する。複数の実施形態では、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び１つ以上の重鎖定常（ＣＨ１、ＣＨ２、又はＣＨ３）ドメインは抗体重鎖を形成する。したがって、複数の実施形態では、軽鎖可変（ＶＬ）ドメインは抗体の一部を形成する。複数の実施形態では、重鎖可変（ＶＨ）ドメインは抗体の一部を形成する。複数の実施形態では、軽鎖可変（ＶＬ）ドメインは治療用抗体の一部を形成する。複数の実施形態では、重鎖可変（ＶＨ）ドメインは治療用抗体の一部を形成する。複数の実施形態では、軽鎖可変（ＶＬ）ドメインはヒト抗体の一部を形成する。複数の実施形態では、重鎖可変（ＶＨ）ドメインはヒト抗体の一部を形成する。複数の実施形態では、軽鎖可変（ＶＬ）ドメインはヒト化抗体の一部を形成する。複数の実施形態では、重鎖可変（ＶＨ）ドメインはヒト化抗体の一部を形成する。複数の実施形態では、軽鎖可変（ＶＬ）ドメインはキメラ抗体の一部を形成する。複数の実施形態では、重鎖可変（ＶＨ）ドメインはキメラ抗体の一部を形成する。複数の実施形態では、軽鎖可変（ＶＬ）ドメインは抗体断片の一部を形成する。複数の実施形態では、重鎖可変（ＶＨ）ドメインは抗体断片の一部を形成する。複数の実施形態では、軽鎖可変（ＶＬ）ドメインは抗体変異体の一部を形成する。複数の実施形態では、重鎖可変（ＶＨ）ドメインは抗体変異体の一部を形成する。複数の実施形態では、軽鎖可変（ＶＬ）ドメインはＦａｂの一部を形成する。複数の実施形態では、重鎖可変（ＶＨ）ドメインはＦａｂの一部を形成する。複数の実施形態では、軽鎖可変（ＶＬ）ドメインはｓｃＦｖの一部を形成する。複数の実施形態では、重鎖可変（ＶＨ）ドメインはｓｃＦｖの一部を形成する。
【００８９】
複数の実施形態では、軽鎖可変ドメインは、配列番号７の配列を含む。複数の実施形態では、軽鎖可変ドメインは、配列番号７の配列である。複数の実施形態では、重鎖可変ドメインは、配列番号８の配列を含む。複数の実施形態では、重鎖可変ドメインは、配列番号８の配列である。複数の実施形態では、軽鎖可変ドメインは、配列番号９に記載のＦＲ  Ｌ１、配列番号１０に記載のＦＲ  Ｌ２、配列番号１１に記載のＦＲ  Ｌ３及び配列番号１２に記載のＦＲ  Ｌ４を含む。複数の実施形態では、重鎖可変ドメインは、配列番号１３に記載のＦＲ  Ｈ１、配列番号１４に記載のＦＲ  Ｈ２、配列番号１５に記載のＦＲ  Ｈ３及び配列番号１６に記載のＦＲ  Ｈ４を含む。
【００９０】
一実施形態では、抗体は、（ｉ）配列番号１に記載のＣＤＲ  Ｌ１、配列番号２に記載のＣＤＲ  Ｌ２；配列番号３に記載のＣＤＲ  Ｌ３；配列番号９に記載のＦＲ  Ｌ１、配列番号１０に記載のＦＲ  Ｌ２、配列番号１１に記載のＦＲ  Ｌ３及び配列番号１２に記載のＦＲ  Ｌ４を含む軽鎖可変ドメイン；並びに（ｉｉ）配列番号４に記載のＣＤＲ  Ｈ１、配列番号５に記載のＣＤＲ  Ｈ２、配列番号６に記載のＣＤＲ  Ｈ３；配列番号１３に記載のＦＲ  Ｈ１、配列番号１４に記載のＦＲ  Ｈ２、配列番号１５に記載のＦＲ  Ｈ３及び配列番号１６に記載のＦＲ  Ｈ４を含む重鎖可変ドメインを含む。
【００９１】
一実施形態では、抗体は、配列番号７の軽鎖可変ドメイン及び配列番号８の重鎖可変ドメインを含む。
【００９２】
複数の実施形態では、抗体は、ＩｇＧである。複数の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧである。複数の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１である。複数の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ１である。
【００９３】
複数の実施形態では、抗体は、Ｆａｂ’断片である。複数の実施形態では、抗体は、Ｆａｂ’断片の一部を形成する。複数の実施形態では、抗体は、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）である。複数の実施形態では、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインがｓｃＦｖの一部を形成する。複数の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１７の配列を含む。複数の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１７の配列である。
【００９４】
特異的なエピトープ（例えば、ＩＬ１ＲＡＰ）に結合する抗体の能力は、平衡解離定数（ＫＤ）によって説明することができる。本明細書で定義される平衡解離定数（ＫＤ）は、ＩＬ１ＲＡＰに対する抗体の解離速度（Ｋ−ｏｆｆ）と会合速度（Ｋ−ｏｎ）の比である。これは、次式：ＫＤ＝Ｋ−ｏｆｆ／Ｋ−ｏｎにより説明される。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約２１ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに２１ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約８０．６ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに８０．６ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。
【００９５】
複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに２０〜２５ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに２１〜２５ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに２２〜２５ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに２３〜２５ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに２４〜２５ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。
【００９６】
複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに７５〜８５ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに７６〜８５ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに７７〜８５ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに７８〜８５ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに７９〜８５ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに８０〜８５ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに８１〜８５ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに８２〜８５ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに８３〜８５ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに８４〜８５ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。
【００９７】
複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約２０〜約８５ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約２５〜約８５ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約３０〜約８５ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約３５〜約８５ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約４０〜約８５ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約４５〜約８５ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約５０〜約８５ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約５５〜約８５ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約６０〜約８５ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約６５〜約８５ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約７０〜約８５ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約７５〜約８５ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約８０〜約８５ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。
【００９８】
複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約２０〜約８０ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約２５〜約８０ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約３０〜約８０ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約３５〜約８０ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約４０〜約８０ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約４５〜約８０ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約５０〜約８０ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約５５〜約８０ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約６０〜約８０ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約６５〜約８０ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約７０〜約８０ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約７５〜約８０ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。
【００９９】
複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約２０〜約７０ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約２５〜約７０ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約３０〜約７０ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約３５〜約７０ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約４０〜約７０ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約４５〜約７０ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約５０〜約７０ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約５５〜約７０ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約６０〜約７０ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約６５〜約７０ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。
【０１００】
複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約２０〜約６０ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約２５〜約６０ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約３０〜約６０ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約３５〜約６０ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約４０〜約６０ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約４５〜約６０ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約５０〜約６０ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約５５〜約６０ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。
【０１０１】
複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約２０〜約５０ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約２５〜約５０ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約３０〜約５０ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約３５〜約５０ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約４０〜約５０ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約４５〜約５０ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。
【０１０２】
複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約２０〜約４０ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約２５〜約４０ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約３０〜約４０Ｍの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約３５〜約４０ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。
【０１０３】
複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約２０〜約３０ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰに約２５〜約３０ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。
【０１０４】
複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、約１ｎｇ／ｍｌ〜約２０ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、約２ｎｇ／ｍｌ〜約２０ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、約３ｎｇ／ｍｌ〜約２０ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、約４ｎｇ／ｍｌ〜約２０ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、約５ｎｇ／ｍｌ〜約２０ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、約６ｎｇ／ｍｌ〜約２０ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、約７ｎｇ／ｍｌ〜約２０ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、約８ｎｇ／ｍｌ〜約２０ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、約９ｎｇ／ｍｌ〜約２０ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約２０ｎｇ／ｍｌである。
【０１０５】
複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、約１１ｎｇ／ｍｌ〜約２０ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、約１２ｎｇ／ｍｌ〜約２０ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、約１３ｎｇ／ｍｌ〜約２０ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、約１４ｎｇ／ｍｌ〜約２０ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、約１５ｎｇ／ｍｌ〜約２０ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、約１６ｎｇ／ｍｌ〜約２０ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、約１７ｎｇ／ｍｌ〜約２０ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、約１８ｎｇ／ｍｌ〜約２０ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、約１９ｎｇ／ｍｌ〜約２０ｎｇ／ｍｌである。
【０１０６】
複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、約１ｎｇ／ｍｌ〜約１９ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、約１ｎｇ／ｍｌ〜約１８ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、約１ｎｇ／ｍｌ〜約１７ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、約１ｎｇ／ｍｌ〜約１６ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、約１ｎｇ／ｍｌ〜約１５ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、約１ｎｇ／ｍｌ〜約１４ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、約１ｎｇ／ｍｌ〜約１３ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、約１ｎｇ／ｍｌ〜約１２ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、約１ｎｇ／ｍｌ〜約１１ｎｇ／ｍｌである。
【０１０７】
複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、約１ｎｇ／ｍｌ〜約１０ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、約１ｎｇ／ｍｌ〜約９ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、約１ｎｇ／ｍｌ〜約８ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、約１ｎｇ／ｍｌ〜約７ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、約１ｎｇ／ｍｌ〜約６ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、約１ｎｇ／ｍｌ〜約５ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、約１ｎｇ／ｍｌ〜約４ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、約１ｎｇ／ｍｌ〜約３ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、約１ｎｇ／ｍｌ〜約２ｎｇ／ｍｌである。
【０１０８】
複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、約１ｎｇ／ｍｌ、２ｎｇ／ｍｌ、４ｎｇ／ｍｌ、５ｎｇ／ｍｌ、６ｎｇ／ｍｌ、７ｎｇ／ｍｌ、８ｎｇ／ｍｌ、９ｎｇ／ｍｌ、１０ｎｇ／ｍｌ、１１ｎｇ／ｍｌ、１２ｎｇ／ｍｌ、１３ｎｇ／ｍｌ、１４ｎｇ／ｍｌ、１５ｎｇ／ｍｌ、１６ｎｇ／ｍｌ、１７ｎｇ／ｍｌ、１８ｎｇ／ｍｌ、１９ｎｇ／ｍｌ又は２０ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、１ｎｇ／ｍｌ、２ｎｇ／ｍｌ、４ｎｇ／ｍｌ、５ｎｇ／ｍｌ、６ｎｇ／ｍｌ、７ｎｇ／ｍｌ、８ｎｇ／ｍｌ、９ｎｇ／ｍｌ、１０ｎｇ／ｍｌ、１１ｎｇ／ｍｌ、１２ｎｇ／ｍｌ、１３ｎｇ／ｍｌ、１４ｎｇ／ｍｌ、１５ｎｇ／ｍｌ、１６ｎｇ／ｍｌ、１７ｎｇ／ｍｌ、１８ｎｇ／ｍｌ、１９ｎｇ／ｍｌ又は２０ｎｇ／ｍｌである。
【０１０９】
複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、約４ｎｇ／ｍｌ〜約７ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、約４．５ｎｇ／ｍｌ〜約７ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、約５ｎｇ／ｍｌ〜約７ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、約５．５ｎｇ／ｍｌ〜約７ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、約６ｎｇ／ｍｌ〜約７ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、約６．５ｎｇ／ｍｌ〜約７ｎｇ／ｍｌである。
【０１１０】
複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、４ｎｇ／ｍｌ〜７ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、４．５ｎｇ／ｍｌ〜約７ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、５ｎｇ／ｍｌ〜７ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、５．５ｎｇ／ｍｌ〜７ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、６ｎｇ／ｍｌ〜７ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、６．５ｎｇ／ｍｌ〜７ｎｇ／ｍｌである。
【０１１１】
複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、約４．９ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、４．９ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、約６．８ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、６．８ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、約６．４ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、６．４ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、約５．４ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、５．４ｎｇ／ｍｌである。
【０１１２】
複数の実施形態では、抗体をＩＬ１ＲＡＰに結合させる。複数の実施形態では、ＩＬ１ＲＡＰは、ヒトＩＬ１ＲＡＰである。複数の実施形態では、ＩＬ１ＲＡＰは、細胞の一部を形成する。複数の実施形態では、ＩＬ１ＲＡＰは、細胞の表面で発現される。複数の実施形態では、細胞は、がん細胞である。複数の実施形態では、がん細胞は、白血病幹細胞（ＬＳＣ）である。複数の実施形態では、がん細胞は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞である。複数の実施形態では、がん細胞は、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞である。複数の実施形態では、がん細胞は、肺がん細胞である。複数の実施形態では、がん細胞は、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）細胞である。複数の実施形態では、がん細胞は、膵がん細胞である。複数の実施形態では、がん細胞は、黒色腫細胞である。複数の実施形態では、がん細胞は、乳がん細胞である。複数の実施形態では、がん細胞は、結腸がん細胞である。
【０１１３】
複数の実施形態では、抗インターロイキン−１受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ１ＲＡＰ）抗体は、配列番号１７の配列を有する。
【０１１４】
組換えタンパク質組成物
上記の通り、その実施形態を含めた本明細書に提示される軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン及び重鎖可変（ＶＨ）ドメインは、それぞれ独立に、抗体の一部、抗体変異体、抗体の断片、抗体変異体の断片、又は組換えタンパク質（例えば、キメラ抗原受容体、二重特異性抗体）を形成し得る。本明細書に提示される軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン及び重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含み、したがって、ＩＬ１ＲＡＰに結合し、エフェクター細胞をＩＬ１ＲＡＰ発現細胞（例えば、ＬＳＣ）に動員し、それによりＩＬ１ＲＡＰ発現細胞を排除することができる組換えタンパク質（例えば、キメラ抗原受容体、二重特異性抗体）が本明細書に提示される。複数の実施形態では、組換えタンパク質は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。複数の実施形態では、組換えタンパク質は、二重特異性抗体である。
【０１１５】
本明細書に提示される軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン及び重鎖可変（ＶＨ）ドメインは、キメラ抗原受容体の一部を形成し得る。したがって、ある態様では、（ｉ）（ａ）配列番号１に記載のＣＤＲ  Ｌ１、配列番号２に記載のＣＤＲ  Ｌ２及び配列番号３に記載のＣＤＲ  Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン；及び（ｂ）配列番号４に記載のＣＤＲ  Ｈ１、配列番号５に記載のＣＤＲ  Ｈ２、及び配列番号６に記載のＣＤＲ  Ｈ３を含む重鎖可変領域ドメイン；並びに（ｉｉ）膜貫通ドメインを含む抗体領域組換えタンパク質が提供される。
【０１１６】
本明細書に提示される「抗体領域」は、その実施形態を含めた本明細書に提示される組換えタンパク質（例えば、ＣＡＲ）の一部を形成する一価又は多価のタンパク質部分を指す。したがって、抗体領域が抗原（エピトープ）に結合することができるタンパク質部分であることは当業者にはすぐに理解されよう。したがって、本明細書に提示される抗体領域は、抗体のドメイン（例えば、軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン）又は抗体の断片（例えば、Ｆａｂ）を含み得る。複数の実施形態では、抗体領域は、タンパク質コンジュゲートである。本明細書に提示される「タンパク質コンジュゲート」は、２つ以上のポリペプチドからなる構築物を指し、ここで、ポリペプチドは、共有結合により、又は非共有結合により結合している。複数の実施形態では、タンパク質コンジュゲートは、ｓｃＦｖ部分（一価ｓｃＦｖ）と共有結合により付着したＦａｂ部分（一価Ｆａｂ）を含む。複数の実施形態では、タンパク質コンジュゲートは、複数（少なくとも２つ）のＦａｂ部分を含む。複数の実施形態では、タンパク質コンジュゲートのポリペプチドは、１つの核酸分子によってコードされる。複数の実施形態では、タンパク質コンジュゲートのポリペプチドは、異なる核酸分子によってコードされる。複数の実施形態では、ポリペプチドは、リンカーを通じて接続している。複数の実施形態では、ポリペプチドは、化学的リンカーを通じて接続している。複数の実施形態では、抗体領域は、ｓｃＦｖである。
【０１１７】
本明細書に提示される「膜貫通ドメイン」は、生体膜の一部を形成するポリペプチドを指す。本明細書に提示される膜貫通ドメインは、生体膜（例えば、細胞膜）を、膜の一方の面から膜の他方の面までまたがることができる。複数の実施形態では、膜貫通ドメインは、細胞膜の細胞内の面から細胞外の面にまたがる。膜貫通ドメインは、その実施形態を含めた本明細書に提示されるタンパク質を生体膜（例えば、Ｔ細胞の細胞膜）に繋ぎ止める非極性、疎水性残基を含み得る。その実施形態を含めた本明細書に提示されるタンパク質を繋ぎ止めることができる任意の膜貫通ドメインが意図されている。膜貫通ドメインの非限定的な例としては、ＣＤ２８、ＣＤ８、ＣＤ４又はＣＤ３−ゼータの膜貫通ドメインが挙げられる。複数の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ４膜貫通ドメインである。
【０１１８】
複数の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメインである。本明細書に提示される「ＣＤ２８膜貫通ドメイン」という用語は、ＣＤ２８の膜貫通ドメインの組換え形態若しくは天然に存在する形態、又は、ＣＤ２８膜貫通ドメイン活性（例えば、ＣＤ２８膜貫通ドメインと比較して少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の活性の範囲内）を維持するこれらの変異体若しくはホモログのいずれも含む。一部の態様では、変異体又はホモログは、天然に存在するＣＤ２８膜貫通ドメインポリペプチドと比較して、配列全体又は配列の一部（例えば、５０個、１００個、１５０個又は２００個の連続アミノ酸部分）にわたって少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のアミノ酸配列同一性を有する。複数の実施形態では、ＣＤ２８は、ＮＣＢＩ配列参照ＧＩ：３４０５４５５０６によって同定されるタンパク質、これのホモログ又は機能性断片である。
【０１１９】
複数の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８膜貫通ドメインである。本明細書に提示される「ＣＤ８膜貫通ドメイン」という用語は、ＣＤ８の膜貫通ドメインの組換え形態若しくは天然に存在する形態、又は、ＣＤ８膜貫通ドメイン活性（例えば、ＣＤ８膜貫通ドメインと比較して少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の活性の範囲内）を維持するこれらの変異体若しくはホモログのいずれも含む。一部の態様では、変異体又はホモログは、天然に存在するＣＤ８膜貫通ドメインポリペプチドと比較して、配列全体又は配列の一部（例えば、５０個、１００個、１５０個又は２００個の連続アミノ酸部分）にわたって少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のアミノ酸配列同一性を有する。複数の実施形態では、ＣＤ８は、ＮＣＢＩ配列参照ＧＩ：２２５００７５３４によって同定されるタンパク質、これのホモログ又は機能性断片である。
【０１２０】
複数の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ４膜貫通ドメインである。本明細書に提示される「ＣＤ４膜貫通ドメイン」という用語は、ＣＤ４の膜貫通ドメインの組換え形態若しくは天然に存在する形態、又は、ＣＤ４膜貫通ドメイン活性（例えば、ＣＤ４膜貫通ドメインと比較して少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の活性の範囲内）を維持するこれらの変異体若しくはホモログのいずれも含む。一部の態様では、変異体又はホモログは、天然に存在するＣＤ４膜貫通ドメインポリペプチドと比較して、配列全体又は配列の一部（例えば、５０個、１００個、１５０個又は２００個の連続アミノ酸部分）にわたって少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のアミノ酸配列同一性を有する。複数の実施形態では、ＣＤ４は、ＮＣＢＩ配列参照ＧＩ：３０３５２２４７３によって同定されるタンパク質、これのホモログ又は機能性断片である。
【０１２１】
複数の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ３−ゼータ（ＣＤ２４７としても公知）膜貫通ドメインである。本明細書に提示される「ＣＤ３−ゼータ膜貫通ドメイン」という用語は、ＣＤ３−ゼータの膜貫通ドメインの組換え形態若しくは天然に存在する形態、又は、ＣＤ３−ゼータ膜貫通ドメイン活性（例えば、ＣＤ３−ゼータ膜貫通ドメインと比較して少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の活性の範囲内）を維持するこれらの変異体若しくはホモログのいずれも含む。一部の態様では、変異体又はホモログは、天然に存在するＣＤ３−ゼータ膜貫通ドメインポリペプチドと比較して、配列全体又は配列の一部（例えば、５０個、１００個、１５０個又は２００個の連続アミノ酸部分）にわたって少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のアミノ酸配列同一性を有する。複数の実施形態では、ＣＤ３−ゼータは、ＮＣＢＩ配列参照ＧＩ：１６６３６２７２１によって同定されるタンパク質、これのホモログ又は機能性断片である。
【０１２２】
複数の実施形態では、軽鎖可変ドメインは、配列番号７の配列を含む。複数の実施形態では、軽鎖可変ドメインは、配列番号７の配列である。複数の実施形態では、重鎖可変ドメインは、配列番号８の配列を含む。複数の実施形態では、重鎖可変ドメインは、配列番号８の配列である。複数の実施形態では、軽鎖可変ドメインは、配列番号９に記載のＦＲ  Ｌ１、配列番号１０に記載のＦＲ  Ｌ２、配列番号１１に記載のＦＲ  Ｌ３及び配列番号１２に記載のＦＲ  Ｌ４を含む。複数の実施形態では、重鎖可変ドメインは、配列番号１３に記載のＦＲ  Ｈ１、配列番号１４に記載のＦＲ  Ｈ２、配列番号１５に記載のＦＲ  Ｈ３及び配列番号１６に記載のＦＲ  Ｈ４を含む。
【０１２３】
複数の実施形態では、抗体領域は、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む。複数の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１７の配列を含む。複数の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１７の配列である。
【０１２４】
複数の実施形態では、組換えタンパク質は、ＩＬ１ＲＡＰに約２１ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、組換えタンパク質は、ＩＬ１ＲＡＰに２１ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。ＩＬ１ＲＡＰ抗体に関しては本明細書において定義されるＫＤ値は、その実施形態を含めた本明細書に記載の組換えタンパク質に当てはまる。
【０１２５】
したがって、複数の実施形態では、組換えタンパク質（例えば、キメラ抗原受容体）のＥＣ５０（最大半量の有効濃度）は、約１ｎｇ／ｍｌ〜約２０ｎｇ／ｍｌである。「ＥＣ５０」又は「最大半量の有効濃度」という用語は、本明細書で使用される場合、ベースライン応答と指定の曝露時間後の最大応答の中間の応答を誘導することができる分子（例えば、抗体、キメラ抗原受容体又は二重特異性抗体）の濃度を指す。複数の実施形態では、ＥＣ５０は、分子（例えば、抗体、キメラ抗原受容体又は二重特異性抗体）の、この分子の可能性のある最大の効果の５０％を生じさせる濃度である。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、約２ｎｇ／ｍｌ〜約２０ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、約３ｎｇ／ｍｌ〜約２０ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、約４ｎｇ／ｍｌ〜約２０ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、約５ｎｇ／ｍｌ〜約２０ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、約６ｎｇ／ｍｌ〜約２０ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、約７ｎｇ／ｍｌ〜約２０ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、約８ｎｇ／ｍｌ〜約２０ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、約９ｎｇ／ｍｌ〜約２０ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約２０ｎｇ／ｍｌである。
【０１２６】
複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、約１１ｎｇ／ｍｌ〜約２０ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、約１２ｎｇ／ｍｌ〜約２０ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、約１３ｎｇ／ｍｌ〜約２０ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、約１４ｎｇ／ｍｌ〜約２０ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、約１５ｎｇ／ｍｌ〜約２０ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、約１６ｎｇ／ｍｌ〜約２０ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、約１７ｎｇ／ｍｌ〜約２０ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、約１８ｎｇ／ｍｌ〜約２０ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、約１９ｎｇ／ｍｌ〜約２０ｎｇ／ｍｌである。
【０１２７】
複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、約１ｎｇ／ｍｌ、２ｎｇ／ｍｌ、４ｎｇ／ｍｌ、５ｎｇ／ｍｌ、６ｎｇ／ｍｌ、７ｎｇ／ｍｌ、８ｎｇ／ｍｌ、９ｎｇ／ｍｌ、１０ｎｇ／ｍｌ、１１ｎｇ／ｍｌ、１２ｎｇ／ｍｌ、１３ｎｇ／ｍｌ、１４ｎｇ／ｍｌ、１５ｎｇ／ｍｌ、１６ｎｇ／ｍｌ、１７ｎｇ／ｍｌ、１８ｎｇ／ｍｌ、１９ｎｇ／ｍｌ又は２０ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、抗体のＥＣ５０は、１ｎｇ／ｍｌ、２ｎｇ／ｍｌ、４ｎｇ／ｍｌ、５ｎｇ／ｍｌ、６ｎｇ／ｍｌ、７ｎｇ／ｍｌ、８ｎｇ／ｍｌ、９ｎｇ／ｍｌ、１０ｎｇ／ｍｌ、１１ｎｇ／ｍｌ、１２ｎｇ／ｍｌ、１３ｎｇ／ｍｌ、１４ｎｇ／ｍｌ、１５ｎｇ／ｍｌ、１６ｎｇ／ｍｌ、１７ｎｇ／ｍｌ、１８ｎｇ／ｍｌ、１９ｎｇ／ｍｌ又は２０ｎｇ／ｍｌである。
【０１２８】
複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、約１ｎｇ／ｍｌ〜約１９ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、約１ｎｇ／ｍｌ〜約１８ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、約１ｎｇ／ｍｌ〜約１７ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、約１ｎｇ／ｍｌ〜約１６ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、約１ｎｇ／ｍｌ〜約１５ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、約１ｎｇ／ｍｌ〜約１４ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、約１ｎｇ／ｍｌ〜約１３ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、約１ｎｇ／ｍｌ〜約１２ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、約１ｎｇ／ｍｌ〜約１１ｎｇ／ｍｌである。
【０１２９】
複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、約１ｎｇ／ｍｌ〜約１０ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、約１ｎｇ／ｍｌ〜約９ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、約１ｎｇ／ｍｌ〜約８ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、約１ｎｇ／ｍｌ〜約７ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、約１ｎｇ／ｍｌ〜約６ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、約１ｎｇ／ｍｌ〜約５ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、約１ｎｇ／ｍｌ〜約４ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、約１ｎｇ／ｍｌ〜約３ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、約１ｎｇ／ｍｌ〜約２ｎｇ／ｍｌである。
【０１３０】
複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、約４ｎｇ／ｍｌ〜約７ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、約４．５ｎｇ／ｍｌ〜約７ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、約５ｎｇ／ｍｌ〜約７ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、約５．５ｎｇ／ｍｌ〜約７ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、約６ｎｇ／ｍｌ〜約７ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、約６．５ｎｇ／ｍｌ〜約７ｎｇ／ｍｌである。
【０１３１】
複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、４ｎｇ／ｍｌ〜７ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、４．５ｎｇ／ｍｌ〜約７ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、５ｎｇ／ｍｌ〜７ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、５．５ｎｇ／ｍｌ〜７ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、６ｎｇ／ｍｌ〜７ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、６．５ｎｇ／ｍｌ〜７ｎｇ／ｍｌである。
【０１３２】
複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、約４．９ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、４．９ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、約６．８ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、６．８ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、約６．４ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、６．４ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、約５．４ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＥＣ５０は、５．４ｎｇ／ｍｌである。
【０１３３】
複数の実施形態では、組換えタンパク質をＩＬ１ＲＡＰに結合させる。複数の実施形態では、ＩＬ１ＲＡＰは、ヒトＩＬ１ＲＡＰである。複数の実施形態では、ＩＬ１ＲＡＰは、細胞の一部を形成する。複数の実施形態では、ＩＬ１ＲＡＰは、細胞の表面で発現される。複数の実施形態では、細胞は、がん細胞である。複数の実施形態では、がん細胞は、白血病幹細胞（ＬＳＣ）である。複数の実施形態では、がん細胞は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞である。複数の実施形態では、がん細胞は、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞である。複数の実施形態では、がん細胞は、肺がん細胞である。複数の実施形態では、がん細胞は、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）細胞である。複数の実施形態では、がん細胞は、膵がん細胞である。複数の実施形態では、がん細胞は、黒色腫細胞である。複数の実施形態では、がん細胞は、乳がん細胞である。複数の実施形態では、がん細胞は、結腸がん細胞である。
【０１３４】
複数の実施形態では、抗体領域は、Ｆｃドメインを含む。複数の実施形態では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ４  Ｆｃドメインである。複数の実施形態では、抗体領域は、Ｆｃヒンジドメインを含む。複数の実施形態では、抗体領域は、ＩｇＧ４  Ｆｃヒンジドメインを含む。複数の実施形態では、抗体領域は、スペーサー領域を含む。複数の実施形態では、スペーサー領域は、膜貫通ドメインと抗体領域の間にある。本明細書に提示される「スペーサー領域」は、抗体領域を膜貫通ドメインと接続するポリペプチドである。複数の実施形態では、スペーサー領域により、重鎖定常領域が膜貫通ドメインと接続される。複数の実施形態では、スペーサー領域は、Ｆｃ領域を含む。複数の実施形態では、スペーサー領域は、Ｆｃ領域である。本明細書に提示される組換えタンパク質組成物に関して意図されているスペーサー領域の例としては、これだけに限定することなく、免疫グロブリン分子又はこれらの断片（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）及びＦｃ受容体の結合に影響を及ぼす突然変異を含む免疫グロブリン分子又はこれらの断片（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）が挙げられる。複数の実施形態では、スペーサー領域は、ヒンジ領域である。複数の実施形態では、スペーサー領域は、ＩｇＧ４ヒンジ領域である。複数の実施形態では、スペーサー領域は、改変されたＩｇＧ４ヒンジ領域である。
【０１３５】
複数の実施形態では、その実施形態を含めた本明細書に提示される組換えタンパク質は、細胞内共刺激シグナル伝達ドメインをさらに含む。本明細書に提示される「細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン」は、その実施形態を含めた本明細書に提示される抗体領域と抗原の結合に応答して共刺激シグナル伝達をもたらすことができるアミノ酸配列を含む。複数の実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインによるシグナル伝達の結果、サイトカインの産生及びサイトカインを発現するＴ細胞の増殖がもたらされる。複数の実施形態では、細胞内共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン、４−１ＢＢ細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン、ＩＣＯＳ細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン、又はＯＸ−４０細胞内共刺激シグナル伝達ドメインである。複数の実施形態では、細胞内共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８細胞内共刺激シグナル伝達ドメインである。複数の実施形態では、細胞内共刺激シグナル伝達ドメインは、４−１ＢＢ細胞内共刺激シグナル伝達ドメインである。複数の実施形態では、細胞内共刺激シグナル伝達ドメインは、ＩＣＯＳ細胞内共刺激シグナル伝達ドメインである。複数の実施形態では、細胞内共刺激シグナル伝達ドメインは、ＯＸ−４０細胞内共刺激シグナル伝達ドメインである。
【０１３６】
複数の実施形態では、その実施形態を含めた本明細書に提示される組換えタンパク質は、細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインをさらに含む。本明細書に提示される「細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメイン」は、その実施形態を含めた本明細書に提示される抗体領域と抗原の結合に応答して一次シグナル伝達をもたらすことができるアミノ酸配列を含む。複数の実施形態では、細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインによるシグナル伝達により、当該シグナル伝達ドメインを発現するＴ細胞の活性化がもたらされる。複数の実施形態では、細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインによるシグナル伝達により、当該シグナル伝達ドメインを発現するＴ細胞の増殖（細胞分裂）がもたらされる。複数の実施形態では、細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインによるシグナル伝達の結果、活性化Ｔ細胞に特徴的であることが当技術分野で公知のタンパク質（例えば、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＣＤ２８、ＣＤ６９）の前記Ｔ細胞による発現がもたらされる。複数の実施形態では、細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインは、ヒトＣＤ３複合体のゼータ鎖のシグナル伝達ドメインを含む。複数の実施形態では、細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインである。
【０１３７】
「ＣＴＬＡ−４」という用語は、本明細書で言及される場合、ＣＤ１５２（表面抗原分類１５２）としても公知の細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４タンパク質の組換え形態若しくは天然に存在する形態、又はＣＴＬＡ−４活性（例えば、ＣＴＬＡ−４と比較して少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の活性の範囲内）を維持するこれらの変異体若しくはホモログのいずれも含む。一部の態様では、変異体又はホモログは、天然に存在するＣＴＬＡ−４タンパク質と比較して、配列全体又は配列の一部（例えば、５０個、１００個、１５０個又は２００個の連続アミノ酸部分）にわたって少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のアミノ酸配列同一性を有する。複数の実施形態では、ＣＴＬＡ−４タンパク質は、ＵｎｉＰｒｏｔ参照番号Ｐ１６４１０によって同定されるタンパク質と実質的に同一である又はこれに対して実質的な同一性を有する変異体若しくはホモログである。
【０１３８】
「ＰＤ−１」という用語は、本明細書で言及される場合、ＣＤ２７９（表面抗原分類２７９）としても公知のプログラム細胞死タンパク質１タンパク質の組換え形態若しくは天然に存在する形態、又はＰＤ−１活性を維持するこれらの変異体若しくはホモログ（例えば、ＰＤ−１と比較して少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の活性の範囲内）のいずれも含む。一部の態様では、変異体又はホモログは、天然に存在するＰＤ−１タンパク質と比較して、配列全体又は配列の一部（例えば、５０個、１００個、１５０個又は２００個の連続アミノ酸部分）にわたって少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のアミノ酸配列同一性を有する。複数の実施形態では、ＰＤ−１タンパク質は、ＵｎｉＰｒｏｔ参照番号Ｑ１５１１６によって同定されるタンパク質と実質的に同一である又はこれに対して実質的な同一性を有する変異体若しくはホモログである。
【０１３９】
「ＣＤ２８」という用語は、本明細書で言及される場合、表面抗原分類２８タンパク質の組換え形態若しくは天然に存在する形態、又はＣＤ２８活性を維持するこれらの変異体若しくはホモログ（例えば、ＣＤ２８と比較して少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の活性の範囲内）のいずれも含む。一部の態様では、変異体又はホモログは、天然に存在するＣＤ２８タンパク質と比較して、配列全体又は配列の一部（例えば、５０個、１００個、１５０個又は２００個の連続アミノ酸部分）にわたって少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のアミノ酸配列同一性を有する。複数の実施形態では、ＣＤ２８タンパク質は、ＵｎｉＰｒｏｔ参照番号Ｐ１０７４７によって同定されるタンパク質と実質的に同一である又はこれに対して実質的な同一性を有する変異体若しくはホモログである。
【０１４０】
「ＣＤ６９」という用語は、本明細書で言及される場合、表面抗原分類６９タンパク質の組換え形態若しくは天然に存在する形態、又はＣＤ６９活性を維持するこれらの変異体若しくはホモログ（例えば、ＣＤ６９と比較して少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の活性の範囲内）のいずれも含む。一部の態様では、変異体又はホモログは、天然に存在するＣＤ６９タンパク質と比較して、配列全体又は配列の一部（例えば、５０個、１００個、１５０個又は２００個の連続アミノ酸部分）にわたって少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のアミノ酸配列同一性を有する。複数の実施形態では、ＣＤ６９タンパク質は、ＵｎｉＰｒｏｔ参照番号Ｑ０７１０８によって同定されるタンパク質と実質的に同一である又はこれに対して実質的な同一性を有する変異体若しくはホモログである。
【０１４１】
「４−１ＢＢ」という用語は、本明細書で言及される場合、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー９（ＴＮＦＲＳＦ９）、表面抗原分類１３７（ＣＤ１３７）としても公知であり、リンパ球活性化（ＩＬＡ）によって誘導される４−１ＢＢタンパク質の組換え形態若しくは天然に存在する形態、又は４−１ＢＢ活性を維持するこれらの変異体若しくはホモログ（例えば、４−１ＢＢと比較して少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の活性の範囲内）のいずれも含む。一部の態様では、変異体又はホモログは、天然に存在するＥＧＦＲタンパク質と比較して、配列全体又は配列の一部（例えば、５０個、１００個、１５０個又は２００個の連続アミノ酸部分）にわたって少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のアミノ酸配列同一性を有する。複数の実施形態では、４−１ＢＢタンパク質は、ＵｎｉＰｒｏｔ参照番号Ｑ０７０１１によって同定されるタンパク質と実質的に同一である又はこれに対して実質的な同一性を有する変異体若しくはホモログである。
【０１４２】
複数の実施形態では、その実施形態を含めた本明細書に提示される組換えタンパク質は、自己開裂ペプチジル配列をさらに含む。複数の実施形態では、自己開裂ペプチジルリンカー配列はＴ２Ａ配列又は２Ａ配列である。複数の実施形態では、自己開裂ペプチジルリンカー配列はＴ２Ａ配列である。複数の実施形態では、自己開裂ペプチジルリンカー配列は２Ａ配列である。
【０１４３】
複数の実施形態では、その実施形態を含めた本明細書に提示される組換えタンパク質は、検出可能ドメインをさらに含む。本明細書に提示される「検出可能ドメイン」は、分光学的、光化学的、生化学的、免疫化学的、化学的、又は他の物理的手段によって検出可能なペプチド部分である。例えば、本明細書に提示される検出可能ドメインは、例えば、放射標識を組み入れること又は抗体に対して反応性であることによって特異的に検出可能にすることができるタンパク質又は他の実体であり得る。例えば、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、１９９６年、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏに記載されている方法を使用することなど、抗体と標識をコンジュゲートするための当技術分野で公知の任意の適正な方法を使用することができる。複数の実施形態では、検出可能ドメインは、切断型ＥＧＦＲ（ＥＧＦＲｔ）ドメインである。「ＥＧＦＲｔ」という用語は、細胞内シグナル伝達能を欠く切断型上皮成長因子受容体タンパク質を指す。本明細書で使用される場合、ＥＧＦＲｔは、形質導入されたＴ細胞の同定を可能にする検出可能ドメインとして機能する不活性な細胞表面分子である。複数の実施形態では、組換えタンパク質は、細胞の一部を形成する。複数の実施形態では、組換えタンパク質は、Ｔ細胞の一部を形成する。
【０１４４】
「ＥＧＦＲ」という用語は、本明細書で言及される場合、ＥｒｂＢ−１及びＨＥＲ１としても公知の上皮成長因子受容体タンパク質の組換え形態若しくは天然に存在する形態、又はＥＧＦＲ活性を維持するこれらの変異体若しくはホモログ（例えば、ＥＧＦＲと比較して少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の活性の範囲内）のいずれも含む。一部の態様では、変異体又はホモログは、天然に存在するＥＧＦＲタンパク質と比較して、配列全体又は配列の一部（例えば、５０個、１００個、１５０個又は２００個の連続アミノ酸部分）にわたって少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のアミノ酸配列同一性を有する。複数の実施形態では、ＥＧＦＲタンパク質は、ＵｎｉＰｒｏｔ参照番号Ｐ００５３３によって同定されるタンパク質と実質的に同一である又はこれに対して実質的な同一性を有する変異体若しくはホモログである。
【０１４５】
一実施形態では、組換えタンパク質は、配列番号７の軽鎖可変ドメイン、配列番号８の重鎖可変ドメインを含み、膜貫通ドメインはＣＤ４膜貫通ドメインであり、ＦｃドメインはＩｇＧ４ヒンジドメインであり、細胞内共刺激ドメインは４−１ＢＢ細胞内共刺激ドメインであり、細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインはＣＤ３ζ細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインであり、自己開裂ペプチジル配列はＴ２Ａ配列であり、検出可能ドメインは切断型ＥＧＦＲドメインである。
【０１４６】
複数の実施形態では、組換えタンパク質は、配列番号１７の抗体領域、ＣＤ４膜貫通ドメイン、ＩｇＧ４ヒンジドメイン、４−１ＢＢ細胞内共刺激ドメイン、ＣＤ３ζ細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメイン、Ｔ２Ａ自己開裂ペプチジル配列及び切断型ＥＧＦＲドメインを含むキメラ抗原受容体である。
【０１４７】
複数の実施形態では、組換えタンパク質は、配列番号１７の抗体領域、ＣＤ８ヒンジ及びＣＤ８膜貫通ドメイン、４−１ＢＢ細胞内共刺激ドメイン、並びにＣＤ３ζ細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体である。
【０１４８】
複数の実施形態では、組換えタンパク質は、配列番号９０のキメラ抗原受容体である。
【０１４９】
本明細書に提示される軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン及び重鎖可変（ＶＨ）ドメインは、二重特異性抗体の一部を形成し得る。したがって、別の態様では、（ｉ）エフェクター細胞リガンドに結合することができる第１の抗体領域；並びに（ｉｉ）（ａ）配列番号１に記載のＣＤＲ  Ｌ１、配列番号２に記載のＣＤＲ  Ｌ２及び配列番号３に記載のＣＤＲ  Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン；及び（ｂ）配列番号４に記載のＣＤＲ  Ｈ１、配列番号５に記載のＣＤＲ  Ｈ２、及び配列番号６に記載のＣＤＲ  Ｈ３を含む重鎖可変領域ドメインを含む第２の抗体領域を含む組換えタンパク質が提供される。
【０１５０】
本明細書に提示される「エフェクター細胞リガンド」という用語は、免疫系のエフェクター細胞（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞）において発現される細胞表面分子を指す。エフェクター細胞において発現されるエフェクター細胞リガンドに第１の抗体領域が結合すると、エフェクター細胞が活性化され、その機能（例えば、悪性の感染した又は他の点で不健康な細胞の選択的死滅又は根絶）を発揮する。複数の実施形態では、エフェクター細胞リガンドは、ＣＤ３タンパク質である。複数の実施形態では、エフェクター細胞リガンドは、ＣＤ１６タンパク質である。複数の実施形態では、エフェクター細胞リガンドは、ＣＤ３２タンパク質である。複数の実施形態では、エフェクター細胞リガンドは、ＮＫｐ４６タンパク質である。本明細書に提示される第１の抗体領域は、抗体、抗体変異体、抗体の断片又は抗体変異体の断片であり得る。
【０１５１】
「ＣＤ３タンパク質」は、本明細書で言及される場合、表面抗原分類３（ＣＤ３）タンパク質の組換え形態若しくは天然に存在する形態、又はシグナルトランスダクションを媒介するＣＤ３複合体を含み、ＣＤ３複合体活性を維持する（例えば、ＣＤ３複合体と比較して少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の活性の範囲内）これらの変異体若しくはホモログのいずれも含む。一部の態様では、変異体又はホモログは、ＣＤ３複合体内の天然に存在するＣＤ３タンパク質と比較して、配列全体又は配列の一部（例えば、５０個、１００個、１５０個又は２００個の連続アミノ酸部分）にわたって少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のアミノ酸配列同一性を有する。
【０１５２】
「ＣＤ１６タンパク質」は、本明細書で言及される場合、低親和性免疫グロブリンガンマＦｃ領域受容体ＩＩＩ−Ａとしても公知の表面抗原分類１６（ＣＤ１６）タンパク質の組換え形態若しくは天然に存在する形態、又はＣＤ１６活性を維持するこれらの変異体若しくはホモログ（例えば、ＣＤ１６と比較して少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の活性の範囲内）のいずれも含む。一部の態様では、変異体又はホモログは、天然に存在するＣＤ１６タンパク質と比較して、配列全体又は配列の一部（例えば、５０個、１００個、１５０個又は２００個の連続アミノ酸部分）にわたって少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のアミノ酸配列同一性を有する。複数の実施形態では、ＣＤ１６タンパク質は、ＵｎｉＰｒｏｔ参照番号Ｐ０８６３７によって同定されるタンパク質と実質的に同一である又はこれに対して実質的な同一性を有する変異体若しくはホモログである。
【０１５３】
「ＣＤ３２タンパク質」は、本明細書で言及される場合、低親和性免疫グロブリンガンマＦｃ領域受容体ＩＩ−Ａとしても公知の表面抗原分類３２（ＣＤ３２）タンパク質の組換え形態若しくは天然に存在する形態、又はＣＤ３２活性を維持するこれらの変異体若しくはホモログ（例えば、ＣＤ３２と比較して少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の活性の範囲内）のいずれも含む。一部の態様では、変異体又はホモログは、天然に存在するＣＤ３２タンパク質と比較して、配列全体又は配列の一部（例えば、５０個、１００個、１５０個又は２００個の連続アミノ酸部分）にわたって少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のアミノ酸配列同一性を有する。複数の実施形態では、ＣＤ３２タンパク質は、ＵｎｉＰｒｏｔ参照番号Ｐ１２３１８によって同定されるタンパク質と実質的に同一である又はこれに対して実質的な同一性を有する変異体若しくはホモログである。
【０１５４】
「ＮＫｐ４６タンパク質」は、本明細書で言及される場合、細胞傷害誘発受容体１としても公知のＮＫｐ４６タンパク質の組換え形態若しくは天然に存在する形態、又はＮＫｐ４６活性を維持する（例えば、ＮＫｐ４６と比較して少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の活性の範囲内）これらの変異体若しくはホモログのいずれも含む。一部の態様では、変異体又はホモログは、天然に存在するＮＫｐ４６タンパク質と比較して、配列全体又は配列の一部（例えば、５０個、１００個、１５０個又は２００個の連続アミノ酸部分）にわたって少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のアミノ酸配列同一性を有する。複数の実施形態では、ＮＫｐ４６タンパク質は、ＵｎｉＰｒｏｔ参照番号Ｏ７６０３６によって同定されるタンパク質と実質的に同一である又はこれに対して実質的な同一性を有する変異体若しくはホモログである。
【０１５５】
複数の実施形態では、組換えタンパク質（例えば、二重特異性抗体）のＩＣ５０（半数阻害濃度）は、約１０ｐＭ〜約１００ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、約１５ｐＭ〜約１００ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、約２０ｐＭ〜約１００ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、約２５ｐＭ〜約１００ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、約３０ｐＭ〜約１００ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、約３５ｐＭ〜約１００ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、約４０ｐＭ〜約１００ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、約４５ｐＭ〜約１００ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、約５０ｐＭ〜約１００ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、約５５ｐＭ〜約１００ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、約６０ｐＭ〜約１００ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、約６５ｐＭ〜約１００ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、約７０ｐＭ〜約１００ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、約７５ｐＭ〜約１００ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、約８０ｐＭ〜約１００ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、約８５ｐＭ〜約１００ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、約９０ｐＭ〜約１００ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、約９５ｐＭ〜約１００ｐＭである。
【０１５６】
複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０（半数阻害濃度）は、１０ｐＭ〜１００ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、１５ｐＭ〜１００ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、２０ｐＭ〜１００ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、２５ｐＭ〜１００ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、３０ｐＭ〜１００ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、３５ｐＭ〜１００ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４０ｐＭ〜１００ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４５ｐＭ〜１００ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、５０ｐＭ〜１００ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、５５ｐＭ〜１００ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、６０ｐＭ〜１００ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、６５ｐＭ〜１００ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、７０ｐＭ〜１００ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、７５ｐＭ〜１００ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、８０ｐＭ〜１００ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、８５ｐＭ〜１００ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、９０ｐＭ〜１００ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、９５ｐＭ〜１００ｐＭである。
【０１５７】
複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、約４０〜約５０ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、約４１〜約５０ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、約４２〜約５０ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、約４３〜約５０ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、約４４〜約５０ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、約４５〜約５０ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、約４６〜約５０ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、約４７〜約５０ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、約４８〜約５０ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、約４９〜約５０ｐＭである。
【０１５８】
複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、約４０〜約４９ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、約４０〜約４８ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、約４０〜約４７ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、約４０〜約４６ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、約４０〜約４５ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、約４０〜約４４ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、約４０〜約４３ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、約４０〜約４２ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、約４０〜約４１ｐＭである。
【０１５９】
複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４０〜５０ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４１〜５０ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４２〜５０ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４３〜５０ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４４〜５０ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４５〜５０ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４６〜５０ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４７〜５０ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４８〜５０ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４９〜５０ｐＭである。
【０１６０】
複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４０〜４９ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４０〜４８ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４０〜４７ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４０〜４６ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４０〜４５ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４０〜４４ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４０〜４３ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４０〜４２ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４０〜４１ｐＭである。
【０１６１】
複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４０〜４８．５ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４０〜４７．５ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４０〜４６．５ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４０〜４５．５ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４０〜４４．５ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４０〜４３．５ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４０〜４２．５ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４０〜４１．５ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４０〜４０．５ｐＭである。
【０１６２】
複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４０．５〜４９ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４０．５〜４８ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４０．５〜４７ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４０．５〜４６ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４０．５〜４５ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４０．５〜４４ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４０．５〜４３ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４０．５〜４２ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４０．５〜４１ｐＭである。
【０１６３】
複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４１．５〜４９ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４１．５〜４８ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４１．５〜４７ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４１．５〜４６ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４１．５〜４５ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４１．５〜４４ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４１．５〜４３ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４１．５〜４２ｐＭである。
【０１６４】
複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４２．５〜４９ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４２．５〜４８ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４２．５〜４７ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４２．５〜４６ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４２．５〜４５ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４２．５〜４４ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４２．５〜４３ｐＭである。
【０１６５】
複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４３．５〜４９ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４３．５〜４８ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４３．５〜４７ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４３．５〜４６ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４３．５〜４５ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４３．５〜４４ｐＭである。
【０１６６】
複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４４．５〜４９ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４４．５〜４８ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４４．５〜４７ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４４．５〜４６ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４４．５〜４５ｐＭである。
【０１６７】
複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、約１０ｐＭ、２０ｐＭ、３０ｐＭ、４０ｐＭ、４１ｐＭ、４２ｐＭ、４３ｐＭ、４４ｐＭ、４５ｐＭ、４６ｐＭ、４７ｐＭ、４８ｐＭ、４９ｐＭ、５０ｐＭ、６０ｐＭ、７０ｐＭ、８０ｐＭ、９０ｐＭ、又は１００ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、１０ｐＭ、２０ｐＭ、３０ｐＭ、４０ｐＭ、４１ｐＭ、４２ｐＭ、４３ｐＭ、４４ｐＭ、４５ｐＭ、４６ｐＭ、４７ｐＭ、４８ｐＭ、４９ｐＭ、５０ｐＭ、６０ｐＭ、７０ｐＭ、８０ｐＭ、９０ｐＭ、又は１００ｐＭである。
【０１６８】
複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、約４５．１４ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４５．１４ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、約４５．１４ｐＭである。複数の実施形態では、組換えタンパク質のＩＣ５０は、４５．１４ｐＭである。
【０１６９】
複数の実施形態では、軽鎖可変ドメインは、配列番号７の配列を含む。複数の実施形態では、軽鎖可変ドメインは、配列番号７の配列である。複数の実施形態では、重鎖可変ドメインは、配列番号８の配列を含む。複数の実施形態では、重鎖可変ドメインは、配列番号８の配列である。複数の実施形態では、軽鎖可変ドメインは、配列番号９に記載のＦＲ  Ｌ１、配列番号１０に記載のＦＲ  Ｌ２、配列番号１１に記載のＦＲ  Ｌ３及び配列番号１２に記載のＦＲ  Ｌ４を含む。複数の実施形態では、重鎖可変ドメインは、配列番号１３に記載のＦＲ  Ｈ１、配列番号１４に記載のＦＲ  Ｈ２、配列番号１５に記載のＦＲ  Ｈ３及び配列番号１６に記載のＦＲ  Ｈ４を含む。
【０１７０】
複数の実施形態では、組換えタンパク質（二重特異性抗体）は、Ｋａｂａｔ位３６６に対応する位置にトリプトファンを含む。複数の実施形態では、組換えタンパク質（二重特異性抗体）は、Ｋａｂａｔ位３６６に対応する位置にセリンを含む。複数の実施形態では、組換えタンパク質（二重特異性抗体）は、Ｋａｂａｔ位３６８に対応する位置にアラニンを含む。複数の実施形態では、組換えタンパク質（二重特異性抗体）は、Ｋａｂａｔ位４０７に対応する位置にバリンを含む。複数の実施形態では、組換えタンパク質（二重特異性抗体）は、Ｋａｂａｔ位２３４に対応する位置にアラニンを含む。複数の実施形態では、組換えタンパク質（二重特異性抗体）は、Ｋａｂａｔ位２３５に対応する位置にアラニンを含む。
【０１７１】
複数の実施形態では、第１の抗体領域は第１のＦａｂ’断片である、又は第２の抗体領域は第２のＦａｂ’断片である。複数の実施形態では、第１の抗体領域は単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である、又は第２の抗体領域は第２の単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。複数の実施形態では、第２のｓｃＦｖは、配列番号１７の配列を含む。複数の実施形態では、第２のｓｃＦｖは、配列番号１７の配列である。
【０１７２】
複数の実施形態では、第２の抗体領域は、ＩＬ１ＲＡＰに約２１ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。複数の実施形態では、第２の抗体領域は、ＩＬ１ＲＡＰに２１ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で結合することができる。
【０１７３】
複数の実施形態では、第２の抗体領域のＥＣ５０は、約４．９ｎｇ／ｍｌである。複数の実施形態では、第２の抗体領域のＥＣ５０は、４．９ｎｇ／ｍｌである。
【０１７４】
複数の実施形態では、第２の抗体領域をＩＬ１ＲＡＰに結合させる。複数の実施形態では、ＩＬ１ＲＡＰは、ヒトＩＬ１ＲＡＰである。複数の実施形態では、ＩＬ１ＲＡＰは、細胞の一部を形成する。複数の実施形態では、ＩＬ１ＲＡＰは、細胞の表面で発現される。
【０１７５】
複数の実施形態では、細胞は、がん細胞である。複数の実施形態では、がん細胞は、白血病幹細胞（ＬＳＣ）である。複数の実施形態では、がん細胞は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞である。
【０１７６】
一実施形態では、組換えタンパク質は、配列番号２１の第１の抗体領域及び配列番号２０の第２の抗体領域を含む二重特異性抗体である。
【０１７７】
核酸組成物
ある態様では、その実施形態を含めた本明細書に提示される抗体をコードする単離された核酸が提供される。複数の実施形態では、核酸は、配列番号１８の配列を含む。複数の実施形態では、核酸は、配列番号１８の配列である。
【０１７８】
別の態様では、その実施形態を含めた本明細書に提示される組換えタンパク質をコードする単離された核酸が提供される。複数の実施形態では、核酸は、配列番号１８の配列を含む。
【０１７９】
医薬組成物
ある態様では、治療有効量の、その実施形態を含めた本明細書に提示される抗体、及び薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物が提供される。
【０１８０】
別の態様では、治療有効量の、その実施形態を含めた本明細書に提示される組換えタンパク質、及び薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物が提供される。
【０１８１】
治療方法
その実施形態を含めた本明細書に提示される組成物により、がん（例えば、白血病［例えば、ＡＭＬ］）などの疾患に対する有効な治療がもたらされることが意図されている。したがって、ある態様では、がんの治療を必要とする対象においてがんを治療する方法であって、その実施形態を含めた本明細書に提示される抗体を治療有効量で対象に投与し、それにより、対象においてがんを治療することを含む方法が提供される。
【０１８２】
別の態様では、がんの治療を必要とする対象においてがんを治療する方法であって、その実施形態を含めた本明細書に記載の組換えタンパク質を治療有効量で対象に投与し、それにより、対象においてがんを治療することを含む方法が提供される。複数の実施形態では、がんは、白血病である。複数の実施形態では、がんは、急性骨髄性白血病である。複数の実施形態では、がんは、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）である。複数の実施形態では、がんは、肺がんである。複数の実施形態では、がんは、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）である。複数の実施形態では、がんは、膵がんである。複数の実施形態では、がんは、黒色腫である。複数の実施形態では、がんは、乳がんである。複数の実施形態では、がんは、結腸がんである。複数の実施形態では、方法は、対象に第２の治療剤を投与することをさらに含む。
【０１８３】
複数の実施形態では、抗体を約０．０１ｎＭ〜約１０ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約０．０５ｎＭ〜約１０ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約０．１ｎＭ〜約１０ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約０．５ｎＭ〜約１０ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約１ｎＭ〜約１０ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約２ｎＭ〜約１０ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約４ｎＭ〜約１０ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体約を６ｎＭ〜約１０ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約４ｎＭ〜約１０ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約８ｎＭ〜約１０ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約０．０１ｎＭ、０．０５ｎＭ、０．１ｎＭ、０．５ｎＭ、１ｎＭ、２ｎＭ、２ｎＭ、４ｎＭ、５ｎＭ、６ｎＭ、７ｎＭ、８ｎＭ、９ｎＭ又は１０ｎＭの量で投与する。
【０１８４】
複数の実施形態では、抗体を０．０１ｎＭ〜１０ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を０．０５ｎＭ〜１０ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を０．１ｎＭ〜１０ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を０．５ｎＭ〜１０ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を１ｎＭ〜１０ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を２ｎＭ〜１０ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を４ｎＭ〜１０ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を６ｎＭ〜１０ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を４ｎＭ〜１０ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を８ｎＭ〜１０ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を０．０１ｎＭ、０．０５ｎＭ、０．１ｎＭ、０．５ｎＭ、１ｎＭ、２ｎＭ、２ｎＭ、４ｎＭ、５ｎＭ、６ｎＭ、７ｎＭ、８ｎＭ、９ｎＭ又は１０ｎＭの量で投与する。
【０１８５】
複数の実施形態では、抗体を約０．０１ｎＭ〜約８ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約０．０５ｎＭ〜約８ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約０．１ｎＭ〜約８ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約０．５ｎＭ〜約８ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約１ｎＭ〜約８ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約２ｎＭ〜約８ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約４ｎＭ〜約８ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体約を６ｎＭ〜約８ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約４ｎＭ〜約８ｎＭの量で投与する。
【０１８６】
複数の実施形態では、抗体を０．０１ｎＭ〜８ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を０．０５ｎＭ〜８ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を０．１ｎＭ〜８ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を０．５ｎＭ〜８ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を１ｎＭ〜８ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を２ｎＭ〜８ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を４ｎＭ〜８ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を６ｎＭ〜８ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を４ｎＭ〜８ｎＭの量で投与する。
【０１８７】
複数の実施形態では、抗体を約０．０１ｎＭ〜約６ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約０．０５ｎＭ〜約６ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約０．１ｎＭ〜約６ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約０．５ｎＭ〜約８ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約１ｎＭ〜約６ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約２ｎＭ〜約６ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約４ｎＭ〜約６ｎＭの量で投与する。
【０１８８】
複数の実施形態では、抗体を０．０１ｎＭ〜６ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を０．０５ｎＭ〜６ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を０．１ｎＭ〜６ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を０．５ｎＭ〜６ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を１ｎＭ〜６ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を２ｎＭ〜６ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を４ｎＭ〜６ｎＭの量で投与する。
【０１８９】
複数の実施形態では、抗体を約０．０１ｎＭ〜約４ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約０．０５ｎＭ〜約４ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約０．１ｎＭ〜約４ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約０．５ｎＭ〜約４ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約１ｎＭ〜約４ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約２ｎＭ〜約４ｎＭの量で投与する。
【０１９０】
複数の実施形態では、抗体を０．０１ｎＭ〜４ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を０．０５ｎＭ〜４ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を０．１ｎＭ〜４ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を０．５ｎＭ〜４ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を１ｎＭ〜４ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を２ｎＭ〜４ｎＭの量で投与する。
【０１９１】
複数の実施形態では、抗体を約０．０１ｎＭ〜約２ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約０．０５ｎＭ〜約２ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約０．１ｎＭ〜約２ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約０．５ｎＭ〜約２ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約１ｎＭ〜約２ｎＭの量で投与する。
【０１９２】
複数の実施形態では、抗体を０．０１ｎＭ〜２ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を０．０５ｎＭ〜２ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を０．１ｎＭ〜２ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を０．５ｎＭ〜２ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を１ｎＭ〜２ｎＭの量で投与する。
【０１９３】
複数の実施形態では、抗体を約０．０１ｎＭ〜約１ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約０．０５ｎＭ〜約１ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約０．１ｎＭ〜約１ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約０．５ｎＭ〜約１ｎＭの量で投与する。
【０１９４】
複数の実施形態では、抗体を０．０１ｎＭ〜１ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を０．０５ｎＭ〜１ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を０．１ｎＭ〜１ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を０．５ｎＭ〜１ｎＭの量で投与する。
【０１９５】
複数の実施形態では、抗体を約３．１５ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を３．１５ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約１．０５ｎＭの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を１．０５ｎＭの量で投与する。
【０１９６】
その実施形態を含めた本明細書に提示される組換えタンパク質（すなわち、二重特異性抗体又はキメラ抗原受容体）を、抗体を投与するための本明細書に記載の濃度（例えば、０．０１ｎＭ〜１０ｎＭ）のいずれかで投与することができることが理解される。
【０１９７】
複数の実施形態では、抗体を約１０μｇ〜約５００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約２０μｇ〜約５００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約３０μｇ〜約５００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約４０μｇ〜約５００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約５０μｇ〜約５００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約６０μｇ〜約５００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約７０μｇ〜約５００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約８０μｇ〜約５００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約９０μｇ〜約５００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約１００μｇ〜約５００μｇの量で投与する。
【０１９８】
複数の実施形態では、抗体を約１１０μｇ〜約５００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約１２０μｇ〜約５００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約１３０μｇ〜約５００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約１４０μｇ〜約５００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約１５０μｇ〜約５００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約１６０μｇ〜約５００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約１７０μｇ〜約５００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約１８０μｇ〜約５００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約１９０μｇ〜約５００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約２００μｇ〜約５００μｇの量で投与する。
【０１９９】
複数の実施形態では、抗体を約２１０μｇ〜約５００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約２２０μｇ〜約５００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約２３０μｇ〜約５００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約２４０μｇ〜約５００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約２５０μｇ〜約５００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約２６０μｇ〜約５００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約２７０μｇ〜約５００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約２８０μｇ〜約５００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約２９０μｇ〜約５００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約３００μｇ〜約５００μｇの量で投与する。
【０２００】
複数の実施形態では、抗体を約３１０μｇ〜約５００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約３２０μｇ〜約５００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約３３０μｇ〜約５００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約３４０μｇ〜約５００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約３５０μｇ〜約５００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約３６０μｇ〜約５００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約３７０μｇ〜約５００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約３８０μｇ〜約５００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約３９０μｇ〜約５００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約４００μｇ〜約５００μｇの量で投与する。
【０２０１】
複数の実施形態では、抗体を約４１０μｇ〜約５００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約４２０μｇ〜約５００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約４３０μｇ〜約５００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約４４０μｇ〜約５００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約４５０μｇ〜約５００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約４６０μｇ〜約５００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約４７０μｇ〜約５００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約４８０μｇ〜約５００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約４９０μｇ〜約５００μｇの量で投与する。
【０２０２】
複数の実施形態では、抗体を約１０μｇ〜約４００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約２０μｇ〜約４００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約３０μｇ〜約４００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約４０μｇ〜約４００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約５０μｇ〜約４００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約６０μｇ〜約４００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約７０μｇ〜約４００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約８０μｇ〜約４００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約９０μｇ〜約４００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約１００μｇ〜約４００μｇの量で投与する。
【０２０３】
複数の実施形態では、抗体を約１０μｇ〜約３００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約２０μｇ〜約３００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約３０μｇ〜約３００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約４０μｇ〜約３００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約５０μｇ〜約３００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約６０μｇ〜約３００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約７０μｇ〜約３００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約８０μｇ〜約３００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約９０μｇ〜約３００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約１００μｇ〜約３００μｇの量で投与する。
【０２０４】
複数の実施形態では、抗体を約１０μｇ〜約２００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約２０μｇ〜約２００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約３０μｇ〜約２００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約４０μｇ〜約２００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約５０μｇ〜約２００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約６０μｇ〜約２００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約７０μｇ〜約２００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約８０μｇ〜約２００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約９０μｇ〜約２００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約１００μｇ〜約２００μｇの量で投与する。
【０２０５】
複数の実施形態では、抗体を約１０μｇ〜約１００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約２０μｇ〜約１００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約３０μｇ〜約１００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約４０μｇ〜約１００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約５０μｇ〜約１００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約６０μｇ〜約１００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約７０μｇ〜約１００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約８０μｇ〜約１００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、抗体を約９０μｇ〜約１００μｇの量で投与する。
【０２０６】
複数の実施形態では、抗体を約１０μｇ、２０μｇ、３０μｇ、４０μｇ、５０μｇ、６０μｇ、７０μｇ、８０μｇ、９０μｇ、１００μｇ、１１０μｇ、１２０μｇ、１３０μｇ、１４０μｇ、１５０μｇ、１６０μｇ、１７０μｇ、１８０μｇ、１９０μｇ、２００μｇ、２１０μｇ、２２０μｇ、２３０μｇ、２４０μｇ、２５０μｇ、２６０μｇ、２７０μｇ、２８０μｇ、２９０μｇ、３００μｇ、３１０μｇ、３２０μｇ、３３０μｇ、３４０μｇ、３５０μｇ、３６０μｇ、３７０μｇ、３８０μｇ、３９０μｇ、４００μｇ、４１０μｇ、４２０μｇ、４３０μｇ、４４０μｇ、４５０μｇ、４６０μｇ、４７０μｇ、４８０μｇ、４９０μｇ、又は５００μｇの量で投与する。
【０２０７】
複数の実施形態では、抗体を１０μｇ、２０μｇ、３０μｇ、４０μｇ、５０μｇ、６０μｇ、７０μｇ、８０μｇ、９０μｇ、１００μｇ、１１０μｇ、１２０μｇ、１３０μｇ、１４０μｇ、１５０μｇ、１６０μｇ、１７０μｇ、１８０μｇ、１９０μｇ、２００μｇ、２１０μｇ、２２０μｇ、２３０μｇ、２４０μｇ、２５０μｇ、２６０μｇ、２７０μｇ、２８０μｇ、２９０μｇ、３００μｇ、３１０μｇ、３２０μｇ、３３０μｇ、３４０μｇ、３５０μｇ、３６０μｇ、３７０μｇ、３８０μｇ、３９０μｇ、４００μｇ、４１０μｇ、４２０μｇ、４３０μｇ、４４０μｇ、４５０μｇ、４６０μｇ、４７０μｇ、４８０μｇ、４９０μｇ、又は５００μｇの量で投与する。
【０２０８】
その実施形態を含めた本明細書に提示される組換えタンパク質（すなわち、二重特異性抗体又はキメラ抗原受容体）を、抗体を投与するための本明細書に記載の濃度（例えば、１０μｇ〜５００μｇ）のいずれかで投与することができることが理解される。
【０２０９】
複数の実施形態では、組換えタンパク質又は抗体を約２００μｇの量で投与する。複数の実施形態では、組換えタンパク質又は抗体を２００μｇの量で投与する。
【０２１０】
細胞増殖を阻害する方法
その実施形態を含めた本明細書に提示される組成物は、細胞増殖の阻害に関してもさらに意図されている。したがって、ある態様では、細胞の増殖を阻害する方法であって、（ｉ）細胞を、その実施形態を含めた本明細書に提示される抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体、又はその実施形態を含めた本明細書に提示される組換えタンパク質と接触させ、それにより接触細胞を形成すること；及び（ｉｉ）その実施形態を含めた本明細書に提示される抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体、組換えタンパク質を接触細胞上のＩＬ１ＲＡＰに結合させ、それにより細胞の増殖を阻害することを含む方法が提供される。複数の実施形態では、細胞は、がん細胞である。複数の実施形態では、細胞は、白血病幹細胞（ＬＳＣ）である。複数の実施形態では、がん細胞は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞である。複数の実施形態では、がん細胞は、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞である。複数の実施形態では、がん細胞は、肺がん細胞である。複数の実施形態では、がん細胞は、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）細胞である。複数の実施形態では、がん細胞は、膵がん細胞である。複数の実施形態では、がん細胞は、黒色腫細胞である。複数の実施形態では、がん細胞は、乳がん細胞である。複数の実施形態では、がん細胞は、結腸がん細胞である。
【実施例】
【０２１１】
以下の実施例は、例示のために提供されるが、特許請求された発明を限定するものではない。
【０２１２】
［実施例１］
急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）には生存率不良が伴い、疾患の維持に不可欠なＡＭＬ幹細胞を標的とすることが理想的である新規のより効率的な療法が緊急に必要とされている。出願人らの研究室及び他者の刊行物により、大多数のＡＭＬ患者においてＩＬ１ＲＡＰタンパク質が候補白血病幹細胞では上方制御されるが、正常な造血幹細胞では上方制御されないことが報告されている。
【０２１３】
出願人らは、ＡＭＬ細胞上のＩＬ１ＲＡＰに結合することができる新しいヒトモノクローナル抗体（１Ｄ５）を開発し、この抗体を二重特異性抗体（抗ＣＤ３×ＩＬＩＲＡＰ）及びＣＡＲ−Ｔ技法に適用した。出願人らの試験から、二重特異性抗体により、試験した全てのＡＭＬ細胞株並びに１０名の患者のＡＭＬ試料を効率的に死滅させることができることが示された。インビボ試験によっても二重特異性抗体の治療効力が実証される。
【０２１４】
インビトロ実験結果及びインビボ実験結果の両方から、当該抗体が診療所におけるＡＭＬ疾患の治療に関して大きな潜在性を有することが示される。
【０２１５】
モノクローナル抗体（１Ｄ５）を、それらの急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞において上方制御されることが報告されているＩＬ１ＲＡＰタンパク質に対するヒトナイーブファージディスプレイ抗体ライブラリーからスクリーニングした。この抗体は、組換えＩＬ１ＲＡＰタンパク質に対しておよそ２０ｎＭの親和性を示した。
【０２１６】
次いで、このモノクローナル抗体（１Ｄ５）を使用し、重特異性抗体を合成した。二重特異性抗体は、２つのアームからなる：一方はＣＤ３抗体であり、他方はモノクローナル抗体１Ｄ５である。この二重特異性抗体は、ＩＬ１ＲＡＰタンパク質を発現する細胞に結合し、次いで、Ｔ細胞がＩＬＩＲＡＰ発現細胞に動員され、この細胞を死滅させるのを助ける。次に、この抗体の７種の異なるＡＭＬ細胞株への結合を試験した。この抗体が試験した全てのＡＭＬ細胞株に結合することを確認した後、７種のＡＭＬ細胞株及び１０種のＡＭＬ患者試料の全てを用いた特異的死滅アッセイを試みた。死滅アッセイにより、ＡＭＬ細胞株及びＡＭＬ患者試料のどちらについても９０％を超える特異的死滅が示された。
【０２１７】
出願人らのインビボ試験から、この二重特異性抗体を、ＭＶ４−１１細胞株をヒトＴ細胞と共に植え付けたマウスに注入することにより、対照群と比較して、ＭＶ４−１１細胞が排除されることも実証された。
【０２１８】
この二重特異性抗体をＡＭＬの治療のためにさらに発展させることができる。モノクローナル抗体１Ｄ５が現在、ＡＭＬを治療するための別の強力な手法であるＣＡＲ−Ｔのために使用されている。
【０２１９】
［実施例２］
急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）における白血病幹細胞（ＬＳＣ）を排除するためにＩＬ１ＲＡＰを標的とする免疫療法。
【０２２０】
要約。ＡＭＬは、破壊的な造血器悪性腫瘍であり、未分化クローン芽細胞及び部分的に分化したクローン芽細胞の進行性の蓄積がもたらされ、治療せずに放置すると急速に造血不全及び死亡に至る。白血病誘発の分子機構、治療ガイダンスのためのリスク層別化戦略の実行、及び分子ターゲティング療法の使用に関する知見が増加しているにもかかわらず、現行の化学療法レジメンでは、ほんの少数のＡＭＬ患者しか治癒せず、ＡＭＬ患者の大多数は導入療法に対してすぐに不応性になるか又は一過性の完全寛解の後に再発する。現在の見解は、ＡＭＬにおける治療抵抗性及び再発が、化学療法及び／又は他の分子ターゲティング療法ではいわゆる白血病幹細胞（ＬＳＣ）を排除することができないことに起因するというものである。これらのクローン未分化細胞は白血病誘発の階層の頂点にあり、クローン性増大を無制限に維持するための幹細胞性を有する。出願人らの目的は、正常な造血幹細胞（ＨＳＣ）は残しながらＬＳＣを有効に根絶し、ＡＭＬ患者における治癒率を改善することができる新規の療法を開発することである。
【０２２１】
同種異系造血細胞移植（アロＨＣＴ）はＡＭＬ患者に首尾よく適用されており、これにより、正常に機能している（ドナー）免疫系がＬＳＣを標的とし、排除することができるという概念実証がもたらされた。しかし、内因性毒性及び移植に関連する死亡率に起因して、アロＨＣＴは、ＡＭＬ患者のほんの一部でしか実施することができない。つい最近、Ｔ細胞若しくはＮＫ細胞又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）工学的操作Ｔ細胞を動員するネイキッド、コンジュゲート又はＴ細胞会合二重特異性モノクローナル抗体（ＢｓＡｂ）などの他の免疫療法手法が、比較的毒性が軽微ながん及び白血病に対して実行可能であり有効な治療手法であることが示されている。ＢｓＡｂ又はＣＡＲ  Ｔ細胞により、免疫系ががん又は白血病細胞の表面で発現される特異的な抗原標的に向け直され、これにより、悪性細胞の免疫媒介性特異的死滅が増強される。ここで、出願人らは、ＡＭＬ  ＬＳＣにおいて特異的に富化される（正常なＨＳＣと比較して）新規の膜抗原を選択し、Ｔ細胞会合ＢｓＡｂ及び／又はＣＡＲ  Ｔ細胞を使用してこれらの膜抗原を標的とすることを提案する。最近、出願人らは、インターロイキン−１受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ１ＲＡＰ）に焦点を当ててきた。ＴＬＲ、ＩＲＡＫ／ＴＲＡＦ６、ＩＬ８／ＣＸＣＲ２及びＩＬ１シグナル伝達経路などの自然免疫成分の過剰活性化がＬＳＣにおいて実証されている。ＩＬ１ＲＡＰは、ＩＬ１受容体の共受容体である。出願人らは、ＩＬ１ＲＡＰが慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）ＬＳＣにおいて、正常なＨＳＣと比較して選択的に上方制御されること、及び、ＩＬ−１受容体アンタゴニスト（ＩＬ−１ＲＡ）を用いてＩＬ−１シグナル伝達を遮断することにより白血病成長が阻害されると同時に正常な造血は保護されることを示した。出願人らは、ＩＬ１ＲＡＰがヒトＡＭＬ  ＣＤ３４＋芽細胞の表面上でも正常なＣＤ３４＋細胞と比較して過剰発現されることを見いだし、また、他者により、ＡＭＬにおいてＩＬ１ＲＡＰの高発現が全生存不良に関連付けられることが示された。総じて、これらのデータから、ＩＬ１ＲＡＰがＬＳＣを標的とするための理想的な標的であることが示唆される。
【０２２２】
健康なドナー１０名から作製されたヒトナイーブファージディスプレイライブラリーを利用して、機能的なＩＬ１ＲＡＰモノクローナルＢｓＡｂ及びＴ細胞会合ＢｓＡｂ及びＣＡＲ−Ｔ細胞を開発した。予備データから、上述のヒトナイーブファージディスプレイライブラリーに由来するＩＬ１ＲＡＰエピトープに基づく構築物を利用して高親和性ＢｓＡｂ及びＣＡＲ−Ｔ細胞を作出することができることが示される。原理証明として、Ｔ細胞依存性細胞傷害性（ＴＤＣＣ）アッセイにおいて、インビトロにおいて抗ＩＬ１ＲＡＰ×ＣＤ３  ＢｓＡｂの存在下でＡＭＬ細胞株及び初代ＡＭＬ患者白血病芽細胞の両方が特異的に死滅すること、及び、インビボにおいて、ＭＶ４−１１  ＡＭＬ細胞を生着させ、ＢｓＡｂ及びヒトＴ細胞の両方で処置した免疫不全マウスにおいて疾患が排除されることを示した。
【０２２３】
したがって、出願人らは、ＡＭＬ  ＬＳＣ上のＩＬ１ＲＡＰを標的とする免疫療法薬を作出するための新規の構築物を有する。ＡＭＬにおいてＬＳＣを標的とするために抗ＩＬ１ＲＡＰ×ＣＤ３  ＢｓＡｂの治療有効性、用量及びスケジュールを最適化し、ヒトＡＭＬ  ＬＳＣを根絶するためにＩＬ１ＲＡＰ  ＣＡＲ−Ｔ細胞を開発し、臨床的適応性を決定し、免疫チェックポイント阻害剤を使用してＩＬ１ＲＡＰに基づく免疫療法薬の抗白血病活性を増強する。これらの実験のために、多数のＡＭＬマウスモデル及び免疫不全マウスへの初代ＡＭＬ芽細胞の逐次的な移植を利用して、ＬＳＣの排除を機能的に実証する。
【０２２４】
背景。急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）は、破壊的な造血器悪性腫瘍であり、未分化クローン芽細胞及び部分的に分化したクローン芽細胞の進行性蓄積がもたらされ、治療せずに放置すると状態は急速に造血不全及び死亡に至る［１］。ＡＭＬ芽細胞は、細胞遺伝学的異常、遺伝子突然変異、異常なコード及び非コード遺伝子ＲＮＡレベル並びにエピジェネティックな変化を含めた個々の患者における特異的な分子プロファイルを特徴とする。この不均一性は臨床的に意味があるものであり、最も適正なリスク適合治療を選択するために使用されてきた。しかし、白血病誘発の分子機構及びリスク層別化治療戦略の実行に関する知見が増加しているにもかかわらず、ほんの少数のＡＭＬ患者しか治癒せず、ＡＭＬ患者の大部分は化学療法に対してすぐに不応性になる又は完全寛解の一過性の実現後に再発する［２、３］。化学療法及び／又は他の分子ターゲティング療法によりＡＭＬを治癒できないことは、いわゆる白血病幹細胞（ＬＳＣ）の持続性に起因する可能性が高い。これらのクローン未分化細胞は白血病誘発性プロセスの階層の頂点にあり、クローン性増大を無制限に維持する幹細胞性を有する。したがって、出願人らの目的は、正常な造血幹細胞（ＨＳＣ）は残しながらＡＭＬ患者におけるＬＳＣを有効に根絶し、治癒率を改善する新規の療法を開発することである。同種異系造血細胞移植（アロＨＣＴ）がＡＭＬ患者に首尾よく適用されており、これにより、正常に機能している（ドナー）免疫系が標的とし、ＬＳＣを排除することができるという概念実証がもたらされた［４、５］。しかし、移植に関連する毒性及び死亡率に起因して、アロＨＣＴは、ＡＭＬ患者のほんの一部でしか実行可能でない。つい最近、ネイキッド、コンジュゲート又はＴ細胞会合二重特異性モノクローナル抗体（ＢｓＡｂ）、免疫チェックポイント阻害剤又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）工学的操作Ｔ細胞などの免疫系を利用する療法が、固形腫瘍、リンパ腫及び急性白血病を含めた進行したヒト悪性腫瘍において実行可能であり、有効であることが示された。これらの手法のうち、ＢｓＡｂ又はＣＡＲ−Ｔ細胞はどちらも免疫系を毒性の少ないがん細胞上の特異的な抗原標的に向け直すという原理に基づく［６、７］。出願人らは、ＡＭＬ  ＬＳＣにおいて（正常なＨＳＣと比較して）特異的に富化される新規の膜抗原を選択し、ＢｓＡｂ及び／又はＣＡＲ−Ｔ細胞を使用してこれらの膜抗原を標的とすることを提案する。最近、出願人らは、報告によればＴＬＲ、ＩＲＡＫ／ＴＲＡＦ６、ＩＬ８／ＣＸＣＲ２及びＩＬ１シグナル伝達経路などの自然免疫成分の過剰活性化がＬＳＣ恒常性に必須であることを考慮して、ＩＬ１Ｒ補助受容体であるインターロイキン−１受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ１ＲＡＰ）に焦点を当ててきた。出願人らはまた、ＩＬ１ＲＡＰが正常なＣＤ３４＋細胞と比較してヒトＡＭＬ  ＣＤ３４＋芽細胞の表面で過剰発現されることも見いだした。Ｂａｒｒｅｙｏらによって同様の結果が報告され、これは、高レベルのＩＬ１ＲＡＰタンパク質がＡＭＬ及び高リスク骨髄異形成症候群の患者由来のＨＳＣの表面で発現され、全生存不良に関連付けられることを示すものである［９］。
【０２２５】
方法。
ＡＭＬ  ＬＳＣを標的とするために抗ＩＬ１ＲＡＰ×ＣＤ３  ＢｓＡｂの治療有効性、用量及びスケジュールを最適化する。Ｔ細胞が向け直された腫瘍細胞死滅は、血液悪性腫瘍を治療するための有望な免疫学的手法である［７、１０、１１］。ＢｓＡｂは、腫瘍抗原及びＴ細胞補助受容体ＣＤ３に結合することによりポリクローナルＴ細胞を腫瘍細胞に対して向け直すことができる。この相互作用により、標的がん細胞に対するエフェクターＴ細胞の活性化及び細胞傷害性が主要組織適合性遺伝子複合体に依存しない様式で誘導され、これにより、免疫エスケープ機構が回避される［７］。抗ＩＬ１ＲＡＰ×ＣＤ３  ＢｓＡｂを創出するために、まず、健康なドナー由来の末梢血Ｂ細胞からヒトファージディスプレイライブラリーを構築し（図１Ａ〜１Ｃ、表１）、抗ＩＬ１ＲＡＰモノクローナル抗体（Ａｂ）を産生する１２種のクローンをスクリーニングした。クローンＩＤ５由来のＡｂが、組換えヒトＩＬ１ＲＡＰタンパク質に対して最も高い結合能をＥＬＩＳＡを使用して示し（図２Ａ〜２Ｂ、２Ｄ及び表２、ＥＣ５０４．９ｎｇ／ｍｌ）、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）アッセイにおいて最も高い特異的溶解率を示し（図２Ｃ）、したがって、このＡｂを抗ＩＬ１ＲＡＰ×ＣＤ３  ＢｓＡｂ（図３Ａ〜３Ｃ）及びＩＬ１ＲＡＰ−ＣＡＲ−Ｔ細胞（図７Ａ〜７Ｂ）の開発のために選択した。種々の細胞株を用いた４８時間長期死滅アッセイにおいて決定されたＥＣ５０値は、ＨＬ６０細胞については６．７１８ｎｇ／ｍｌ、ＭＯＬＭ１３細胞については５．３６２ｎｇ／ｍｌ、ＯＣＩ−ＡＭＬ３細胞については６．３６８ｎｇ／ｍｌであった。
【０２２６】
【表１】
2020533960.tif 000003
2020533960.tif 000004
2020533960.tif 000005
【０２２７】
【表２】
2020533960.tif 000006
【０２２８】
ＡＭＬ患者のサブセット由来の初代芽細胞における抗ＩＬ１ＲＡＰ×ＣＤ３  ＢｓＡｂに誘導されるＴ細胞死滅の有効性とＩＬ１ＲＡＰ発現レベルの相関を評価する。出願人は、ＩＬ１ＲＡＰがＡＭＬ細胞株（図４Ａ−４Ｂ）及び初代患者芽細胞（図５Ａ〜５Ｂ）の表面で発現されること、並びに、出願人らの抗ＩＬ１ＲＡＰ×ＣＤ３  ＢｓＡｂにより、ＡＭＬ細胞株（図４Ｃ〜４Ｉ）及びＡＭＬ患者試料（図５Ｃ〜５Ｄ）におけるＴ細胞活性化及び細胞傷害性が誘導され、死滅効率が標的細胞の表面上のＩＬ１ＲＡＰレベルと関連することを示した。ＡＭＬ患者の異なる細胞遺伝学的サブセット及び分子サブセットに基づいた有効性データを得るために、出願人らは、３つのＥＬＮ  ２０１７細胞遺伝学的／分子リスク群（予後良好、中間及び不良）［３］を表す３０の追加的な患者試料に対して抗ＩＬ１ＲＡＰ×ＣＤ３  ＢｓＡｂを用いるＴ細胞依存性細胞傷害性（ＴＤＣＣ）アッセイを実施することを提案する。これらの３０のＡＭＬ患者試料由来の選別されていない単核細胞（ＭＮＣ）及び選別されたＣＤ３４＋ＣＤ３８＋委任前駆細胞及びＣＤ３４＋ＣＤ３８−未分化前駆細胞を、ＩＬ１ＲＡＰ発現についてフローサイトメトリーによって評価した後、抗ＩＬ１ＲＡＰ×ＣＤ３  ＢｓＡｂ及びＴ細胞に曝露させる。Ｔ細胞は培養中に特異的なＴ細胞マーカーを失う可能性があるので、ＡＭＬ細胞をＴ細胞と共培養する前にＣＦＳＥで標識して双方の細胞型を分別する。予備データに基づいて、長期間死滅アッセイのためにエフェクターＴ細胞をしてＡＭＬ細胞を（Ｅ：Ｔ）比５：１で標的とする。３３０ｎｇ／ｍｌから開始した３倍段階希釈物中のＡｂを３連で試験する。生存している標的細胞（ＤＡＰＩ−ＣＳＦＥ＋）及びＴ細胞の計数を記録し、溶解率を算出する：％特異的溶解＝（標的細胞＋Ｔ細胞−標的細胞＋ＢｓＡｂ＋Ｔ細胞）］／標的細胞＋Ｔ細胞）×１００％。３０のＡＭＬ試料に対するＢｓＡｂのＥＣ５０を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍによって算出する。ＥＣ５０とＩＬ１ＲＡＰ発現レベルは相関する。特定のＡＭＬ患者のサブセットにおけるＩＬ１ＲＡＰの富化及びこれらのサブセットにおけるＢｓＡｂの有効性は、特定の細胞遺伝学的／分子ＡＭＬサブセットを標的とするためのこの新規の薬物を開発し、ＩＬ１ＲＡＰをＢｓＡｂに対する応答に関する予測バイオマーカーとして利用することに関する洞察をもたらすことに、努力を向け直させるものである。
【０２２９】
インビボにおいてＡＭＬ  ＬＳＣを標的とするために抗ＩＬ１ＲＡＰ×ＣＤ３  ＢｓＡｂ及びＴ細胞の投与の用量及びスケジュールを最適化する。出願人は、ホタルルシフェラーゼを発現するヒトＡＭＬ細胞株ＭＶ４−１１（ＭＶ４−１１Ｌｕｃｉ）細胞を移植した免疫不全（ＮＳＧ）マウスにおいて、抗ＩＬ１ＲＡＰ×ＣＤ３  ＢｓＡｂとヒトＴ細胞の組合せにより、白血病負荷量が有効に排除されることを示した（図６Ａ〜６Ｂ）。出願人らは、Ａｂ用量／スケジュールの最適化を可能にするために薬物動態学（ＰＫ）試験及び薬力学（ＰＤ）試験並びにＰＫ−ＰＤモデリングを行うことを提案する。ＮＳＧマウスを３つの対数用量レベル（１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ）のＢｓＡｂで処置する。１時間、２時間、４時間、８時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１２０時間、及び１４８時間の時点で血液を採取する（１時点当たりｎ＝６×１０時点×３用量＝１８０匹のマウス）。前臨床マウスＰＫ試験を行った広範な経験に基づいて、１時点当たり５〜７匹のマウスにより、評価される１つの対数倍率の用量範囲にわたってＰＫ及びＰＤの変動性及び特徴付けの適切な評価がもたらされる。ＢｓＡｂ血清中濃度を、ＴＤＣＣアッセイを使用して決定し、精製されたＢｓＡｂの段階希釈物から得た標準曲線に基づいて算出する。投与の最適な用量／スケジュールをＢｓＡｂ血液半減期に基づいて決定する。次に、ＮＳＧマウスにＭＶ４−１１Ｌｕｃｉ細胞１×１０６個を移植し、移植後７日目にマウスを最適化された用量／スケジュールのＢｓＡｂ及び３用量（すなわち、１×１０６個、３×１０６個又は５×１０６個）のＴ細胞で処置する。インビボイメージングを毎週行って腫瘍量をモニタリングする。各マウスにおいて算出される総生物発光強度レベルを主要なＰＤエンドポイントとして表す。標準の線形相関及び線形回帰を使用してＰＫデータとＰＤデータの関係を最初に評価し、今後のインビボ実験をガイドするためにＰＫ−ＰＤモデルを構築し、血漿中濃度−時間プロファイル及び対応するＰＤエンドポイントの実現をシミュレートするために使用した。このモデルのコンピュータシミュレーションが上手くいったら、生物発光が最大限に低減することが予測される１つ以上のＢｓＡｂ用量／スケジュールレジメンを実現する。以下の判断基準に基づいてインビボにおける検証のためのレジメンを選択するａ．）毒性がないこと、ｂ．）最大の生物発光変化が実現されることｃ．）必要とされる投薬の頻度が低いこと、及びｄ．）費用が少ないこと。検証は、３患者由来のＡＭＬ芽細胞をＮＳＧマウスに移植し（マウス１６匹／群×６群×２試料＝１９２匹のマウス）、出願人らのＰＫ／ＰＤモデルから予測される用量の抗ＩＬ１ＲＡＰ×ＣＤ３  ＢｓＡｂ及びヒトＴ細胞のインビボにおける抗白血病有効性を評価することによって実施する。マウスの１セットを生存について追跡するとともに別のセットを安楽死させ、ＢＭ及び脾臓ＭＮＣを残留するＬＳＣ負荷量に対する治療の影響を決定するための二次移植実験に利用する。
【０２３０】
ヒトＡＭＬ  ＬＳＣを根絶させるため及びこれらの臨床的適応性を決定するためのＩＬ１ＲＡＰ  ＣＡＲ−Ｔ細胞の開発。工学的に操作されたキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を用いて特異的な抗原標的に向け直されたＴ細胞は、現在血液悪性腫瘍における強力な治療手法である［１２、１３］。反応性を増強するために、遺伝子改変されていないＴ細胞であるならば免疫原性がない（又は低い）腫瘍細胞表面抗原を、特異的に標的とすることを可能にする、工学的に操作された受容体構築物を使用して、Ｔ細胞を遺伝子改変する。出願人らは、ＩＬ１ＲＡＰ  ＣＡＲ−Ｔ細胞の産生及び試験を探求することを提案する。注目すべきことに、腫瘍を標的とするＴ細胞は、上首尾の腫瘍排除のためにインビボにおいて十分な期間にわたって持続しなければならない；しかし、成熟ＣＡＲ−Ｔ細胞は短寿命のエフェクター細胞に急速に分化し、これにより、インビボにおけるこれらの抗腫瘍活性が限定される［６、１４、１５］。したがって、ＩＬ１ＲＡＰ  ＣＡＲ−Ｔ細胞を作出するために、成熟Ｔ細胞及び臍帯血ＣＤ３４＋細胞から生成したＴ細胞前駆体の両方を試験する。
【０２３１】
ＩＬ１ＲＡＰ  ＣＡＲ−Ｔ細胞の開発。出願人らは、ＩＬ１ＲＡＰ  ＣＡＲをコードするレンチウイルスベクターを開発した［１７］（図７Ａ）。ＩＬ１ＲＡＰ  ＣＡＲレンチウイルスを用いて形質導入したＪｕｒｋａｔ細胞では対照細胞と比較して細胞活性化が示され（図７Ｂ）、これにより、ＩＬ１ＲＡＰ  ＣＡＲ構築物の効果が確認される。出願人らは、ＯＫＴ３／ＣＤ２８ビーズ及びインターロイキン２（ＩＬ−２）を５０ＩＵ／ｍｌで用いて刺激した健康なドナーの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）由来のＴ細胞を精製し、これらを記載の通りＩＬ１ＲＡＰ  ＣＡＲレンチウイルスを用いて形質導入することを提案する［１７］。ＣＡＲ−Ｔ細胞前駆体も以下の通り生成する。臍帯血ＣＤ３４＋細胞を、ＩＬ１ＲＡＰ  ＣＡＲをコードするレンチウイルスベクターを用いて形質導入し、固定化されたノッチリガンドデルタ様４（ＤＬ４）と共に培養して、Ｔ細胞分化を促進する。Ｔ細胞におけるＩＬ１ＲＡＰ  ＣＡＲ発現を、ＩＬ１ＲＡＰ−ｓｃＦｖをフローサイトメトリーによって検出することにより確認する。
【０２３２】
ＩＬ１ＲＡＰ  ＣＡＲ−Ｔ細胞の有効性評価。成熟及び前駆ＩＬ１ＲＡＰ  ＣＡＲ−Ｔ細胞を得た後、これらの活性を試験する。まず、ＩＬ１ＲＡＰ  ＣＡＲ−Ｔ細胞をＡＭＬ細胞株（ＨＬ６０、ＭＶ４−１１、ＴＨＰ−１、ＫＧ−１ａ）及びＲａｊｉ細胞（陰性対照）と一緒にインキュベートする。Ｔ細胞活性化の指標としてＣＤ１０７ａレベル、ＩＦＮ−γレベル及びＴＮＦ−αレベルを６時間後にフローサイトメトリーによってモニタリングする。標的ＡＭＬ細胞の死滅効率を４時間５１Ｃｒ放出アッセイによって決定する。次に、ＩＬ１ＲＡＰ  ＣＡＲ−Ｔ細胞を初代ヒトＡＭＬ細胞と一緒にインキュベートし、Ｔ細胞活性化及びＡＭＬ細胞死滅を評価する。インビボ死滅有効性に関して、ＭＶ４−１１Ｌｕｃｉ細胞（マウス当たり１×１０６個）をＮＳＧマウスに移植し、７日後に、マウスに、３用量（すなわち、１×１０６個、３×１０６個又は５×１０６個）のＩＬ１ＲＡＰ  ＣＡＲ−Ｔ細胞を単回、２回（１日目及び１４日目）、又は３回（１日目、１４日目、２８日目）注射する。全ての対照マウスが死亡するまでインビボイメージングを毎週行って腫瘍量をモニタリングする。記載の通り、ＢｓＡｂ  ＰＫ−ＰＤモデリングを用いた実験をＩＬ１ＲＡＰ  ＣＡＲ−Ｔ細胞の経時的な血中濃度及び白血病負荷量として生物発光の変化に基づいて実施して、ＩＬ１ＲＡＰ  ＣＡＲ−Ｔ細胞投与の最適な用量及び頻度を決定する。次いで、ＡＭＬ患者試料を使用して同様の実験を実施し、インビボ有効性、Ｔ細胞持続性、及びメモリーＴ細胞形成及びチャレンジング試験を行う。ＢｓＡｂ試験について上記したものと同様に、段階的移植実験も実施してＬＳＣ排除を確実にする。
【０２３３】
免疫チェックポイント阻害剤を使用した、ＩＬ１ＲＡＰに基づく免疫療法薬（すなわち、抗ＩＬ１ＲＡＰ×ＣＤ３  ＢｓＡｂ又はＩＬ１ＲＡＰ  ＣＡＲ−Ｔ細胞）の抗白血病活性の増強。前臨床モデル及び患者における有望な結果にもかかわらず、免疫抑制経路の活性化により、養子Ｔ細胞療法がアンタゴナイズされる可能性がある［１８］。プログラム死−１（ＰＤ−１）経路ががん療法の有望な標的として現れた。ＰＤ−１は、リガンドＰＤ−Ｌ１（多くの腫瘍型において上方制御される優勢な免疫抑制メディエーター）及びマクロファージ及び樹状細胞において発現されるＰＤ−Ｌ２に結合する［１９］［２０、２１］。ヒト由来ＩｇＧ４  ＰＤ−１モノクローナルＡｂ（ｍＡｂ；ＢＭＳ−９３６５５８）を使用した最近の試験により、このＡｂがＰＤ１免疫チェックポイントを阻害し、腫瘍細胞免疫原性を回復させ、その結果、進行した悪性腫瘍の患者における長続きする臨床応答がもたらされることが示されている［１９、２１−２４］。ここで、ＰＤ−１阻害剤を抗ＩＬ１ＲＡＰ×ＣＤ３  ＢｓＡｂ又はＩＬ１ＲＡＰ  ＣＡＲ−Ｔ細胞と組み合わせて使用すれば養子Ｔ細胞機能を増強することができるという仮説を立てる。
【０２３４】
ＡＭＬ細胞株及びＡＭＬ患者試料におけるＰＤ−１遮断の抗白血病活性を決定する。報告によれば、Ｔ細胞刺激によりＡＭＬ細胞株におけるＰＤ−Ｌ１（Ｂ７−Ｈ１）発現が増強され、また、ＩＦＮ−γ処理によりＡＭＬ患者試料におけるＰＤ−Ｌ１発現が有意に増強される［２５］。白血病細胞に対する免疫応答として誘導されるか又は感染性微生物によって放出されるＩＦＮ−γ又はＴＬＲリガンドにより誘導される、ＰＤ−Ｌ１発現の増強により、白血病細胞がＴ細胞から保護され得る。ＣＡＲ又はＢｓＡｂに誘導されるＴ細胞刺激によりＰＤ−１発現が増大するかどうかを決定するために、２つのやり方を使用して、ＢｓＡｂ＋Ｔ細胞又はＩＬ１ＲＡＰ  ＣＡＲ−Ｔ細胞治療の治療有効性の増強に対する、ＰＤ−１経路を遮断することの効果を評価する。Ｔ細胞を、ＰＤ−１リガンドを上方制御するためにＩＦＮ−γで処置したＭＶ４−１１  ＡＭＬ細胞及び処置していないＭＶ４−１１  ＡＭＬ細胞と（Ｅ：Ｔ比１：１、１：５、及び１：１０）、ＰＤ−１遮断抗体（ペムブロリズマブ又はニボルマブ）を伴って、及び伴わずに共培養する。Ｔ細胞の細胞溶解活性に対するＰＤ−１遮断を溶解率に基づいて決定する。エフェクターサイトカイン分泌（ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、及びＴＮＦ−アルファ）をＥＬＩＳＡアッセイによって決定する。ＰＤ−１遮断を、ＭＶ４−１１Ｌｕｃｉを植え付け、ＰＤ−１遮断抗体を伴って又は伴わずにＣＡＲ−Ｔで処置したＮＳＧマウスにおいても評価する。白血病負荷量をインビボイメージングによって決定し、血中ＣＡＲ−Ｔ細胞をフローサイトメトリーによって測定する。
【０２３５】
ＢｓＡｂ＋Ｔ細胞又はＩＬ１ＲＡＰ  ＣＡＲ−Ｔ細胞とＰＤ−１阻害剤の組合せの抗白血病活性を決定する。ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１遮断により、ＡＭＬ細胞死滅が増強されれば、インビボにおけるＢｓＡｂ＋Ｔ細胞又はＩＬ１ＲＡＰ  ＣＡＲ−Ｔ細胞とＰＤ−１遮断の組合せの効果を評価する。ＭＶ４−１１Ｌｕｃｉを移植したＮＳＧマウス又はヒトＡＭＬ患者試料を、抗ＩＬ１ＲＡＰ×ＣＤ３  ＢｓＡｂ及びヒトＴ細胞、又はＩＬ１ＲＡＰ  ＣＡＲ−Ｔ細胞をペムブロリズマブ又はニボルマブ又はアイソタイプ対照抗体と組み合わせて処置する（基本的なプロトコールは上に記載されている。）。ＰＢ、ＢＭ及び脾臓における腫瘍量並びに生存を決定し、第２の移植を実施してＬＳＣ根絶をモニタリングする。
【０２３６】
統計学的考察。以前の経験に基づいて、生存の差異に関して少なくとも９０％の検出力を実現するために、群当たり１１匹のマウスに片側検定をα＝０．０５で使用する必要がある。カプラン・マイヤー生存曲線間の差異をログランク検定によって評価する。説明的及び図式的統計値を使用して、他のインビトロ及びＰＤ試験におけるＢｓＡｂ＋Ｔ細胞及びＩＬ１ＲＡＰ  ＣＡＲ−Ｔ細胞の効果を特徴付ける；ｔ検定及び／又はマン・ホイットニーのＵ検定を使用して形式的な比較を行う。同様の方法を使用して機能アッセイデータを解析する。
【０２３７】
【表３】
2020533960.tif 000007
2020533960.tif 000008
2020533960.tif 000009
【０２３８】
非公式の配列表
配列番号１（ＣＤＲ  Ｌ１）：ＱＳＬＬＨＳＮＧＹＫＹ
配列番号２（ＣＤＲ  Ｌ２）：ＬＧＳ
配列番号３（ＣＤＲ  Ｌ３）：ＭＱＡＬＱＴＰＬＴ
配列番号４（ＣＤＲ  Ｈ１）：ＧＹＳＦＳＳＨＷ
配列番号５（ＣＤＲ  Ｈ２）：ＩＹＰＧＤＳＤＴ
配列番号６（ＣＤＲ  Ｈ３）：ＡＲＧＥＬＰＧＥＡＹＹＦＤＮ
配列番号７（軽鎖可変領域）：
【０２３９】
【化１】
2020533960.tif 000010
【０２４０】
配列番号８（重鎖可変領域）：
【０２４１】
【化２】
2020533960.tif 000011
【０２４２】
配列番号９（ＦＲ  Ｌ１）：ＥＩＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳ
配列番号１０（ＦＲ  Ｌ２）：ＬＤＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹ
配列番号１１（ＦＲ  Ｌ３）：ＮＲＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣ
配列番号１２（ＦＲ  Ｌ４）：ＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号１３（ＦＲ  Ｈ１）：ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳ
配列番号１４（ＦＲ  Ｈ２）：ＩＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩ
配列番号１５（ＦＲ  Ｈ３）：ＲＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣ
配列番号１６（ＦＲ  Ｈ４）：ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号１７（１Ｄ５−ｓｃＦｖのアミノ酸配列）：
【０２４３】
【化３】
2020533960.tif 000012
【０２４４】
配列番号１８（１Ｄ５  ｓｃＦｖのヌクレオチド配列）：
【０２４５】
【化４】
2020533960.tif 000013
【０２４６】
配列番号１９（リンカー領域）：ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ
配列番号２０（１Ｄ５−ｓｃＦｖ−ホール−ＦＣ−ＬＡ配列）：
【０２４７】
【化５】
2020533960.tif 000014
2020533960.tif 000015
【０２４８】
配列番号２１（抗ＣＤ３−ｓｃＦｖ−ノブ−ＦＣ−ＬＡ配列）：
【０２４９】
【化６】
2020533960.tif 000016
【０２５０】
配列番号９０（１Ｄ５−ｓｃＦｖ−ＣＡＲアミノ酸配列）
【０２５１】
【化７】
2020533960.tif 000017
【０２５２】
Ｐ実施形態
Ｐ実施形態１．軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、
前記軽鎖可変ドメインが、配列番号１に記載のＣＤＲ  Ｌ１、配列番号２に記載のＣＤＲ  Ｌ２及び配列番号３に記載のＣＤＲ  Ｌ３を含み、
前記重鎖可変ドメインが、配列番号４に記載のＣＤＲ  Ｈ１、配列番号５に記載のＣＤＲ  Ｈ２及び配列番号６に記載のＣＤＲ  Ｈ３を含む、
抗インターロイキン−１受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ１ＲＡＰ）抗体。
【０２５３】
Ｐ実施形態２．前記軽鎖可変ドメインが配列番号７の配列を含む、Ｐ実施形態１に記載の抗体。
【０２５４】
Ｐ実施形態３．前記重鎖可変ドメインが配列番号８の配列を含む、Ｐ実施形態１又は２に記載の抗体。
【０２５５】
Ｐ実施形態４．前記軽鎖可変ドメインが、配列番号９に記載のＦＲ  Ｌ１、配列番号１０に記載のＦＲ  Ｌ２、配列番号１１に記載のＦＲ  Ｌ３及び配列番号１２に記載のＦＲ  Ｌ４を含む、Ｐ実施形態１〜３のいずれか１つに記載の抗体。
【０２５６】
Ｐ実施形態５．前記重鎖可変ドメインが、配列番号１３に記載のＦＲ  Ｈ１、配列番号１４に記載のＦＲ  Ｈ２、配列番号１５に記載のＦＲ  Ｈ３及び配列番号１６に記載のＦＲ  Ｈ４を含む、Ｐ実施形態１〜４のいずれか１つに記載の抗体。
【０２５７】
Ｐ実施形態６．前記抗体がＩｇＧである、Ｐ実施形態１〜５のいずれか１つに記載の抗体。
【０２５８】
Ｐ実施形態７．前記抗体がＩｇＧ１である、Ｐ実施形態１〜６のいずれか１つに記載の抗体。
【０２５９】
Ｐ実施形態８．前記抗体がＦａｂ’断片である、Ｐ実施形態１〜５のいずれか１つに記載の抗体。
【０２６０】
Ｐ実施形態９．前記抗体が一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）である、Ｐ実施形態１〜５のいずれか１つに記載の抗体。
【０２６１】
Ｐ実施形態１０．前記軽鎖可変ドメインと前記重鎖可変ドメインが、ｓｃＦｖの一部を形成する、Ｐ実施形態１〜５のいずれか１つに記載の抗体。
【０２６２】
Ｐ実施形態１１．前記ｓｃＦｖが配列番号１７の配列を含む、Ｐ実施形態９又は１０に記載の抗体。
【０２６３】
Ｐ実施形態１２．前記抗体が、約２１ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）でＩＬ１ＲＡＰに結合することができる、Ｐ実施形態１〜１１のいずれか１つに記載の抗体。
【０２６４】
Ｐ実施形態１３．前記抗体のＥＣ５０が約４．９ｎｇ／ｍｌである、Ｐ実施形態１〜１１のいずれか１つに記載の抗体。
【０２６５】
Ｐ実施形態１４．前記抗体がＩＬ１ＲＡＰに結合している、Ｐ実施形態１〜１３のいずれか１つに記載の抗体。
【０２６６】
Ｐ実施形態１５．前記ＩＬ１ＲＡＰがヒトＩＬ１ＲＡＰである、Ｐ実施形態１４に記載の抗体。
【０２６７】
Ｐ実施形態１６．前記ＩＬ１ＲＡＰが細胞の一部を形成する、Ｐ実施形態１４又は１５に記載の抗体。
【０２６８】
Ｐ実施形態１７．前記ＩＬ１ＲＡＰが前記細胞の表面で発現される、Ｐ実施形態１６に記載の抗体。
【０２６９】
Ｐ実施形態１８．前記細胞ががん細胞である、Ｐ実施形態１６又は１７に記載の抗体。
【０２７０】
Ｐ実施形態１９．前記がん細胞が白血病幹細胞（ＬＳＣ）である、Ｐ実施形態１８に記載の抗体。
【０２７１】
Ｐ実施形態２０．前記がん細胞が急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞である、Ｐ実施形態１８に記載の抗体。
【０２７２】
Ｐ実施形態２１．Ｐ実施形態１〜２１のいずれか１つに記載の抗体をコードする単離された核酸。
【０２７３】
Ｐ実施形態２２．治療有効量のＰ実施形態１〜２１のいずれか１つに記載の抗体及び薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。
【０２７４】
Ｐ実施形態２３．がんの治療を必要とする対象においてがんを治療する方法であって、治療有効量のＰ実施形態１〜２１のいずれか１つに記載の抗体を対象に投与し、それにより前記対象においてがんを治療することを含む方法。
【０２７５】
Ｐ実施形態２４．（ｉ）（ａ）配列番号１に記載のＣＤＲ  Ｌ１、配列番号２に記載のＣＤＲ  Ｌ２及び配列番号３に記載のＣＤＲ  Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン、及び
（ｂ）配列番号４に記載のＣＤＲ  Ｈ１、配列番号５に記載のＣＤＲ  Ｈ２及び配列番号６に記載のＣＤＲ  Ｈ３を含む重鎖可変領域ドメイン、
を含む抗体領域、並びに
（ｉｉ）膜貫通ドメイン
を含む組換えタンパク質。
【０２７６】
Ｐ実施形態２５．前記軽鎖可変ドメインが配列番号７の配列を含む、Ｐ実施形態２４に記載の組換えタンパク質。
【０２７７】
Ｐ実施形態２６．前記重鎖可変ドメインが配列番号８の配列を含む、Ｐ実施形態２４又は２５に記載の組換えタンパク質。
【０２７８】
Ｐ実施形態２７．前記軽鎖可変ドメインが、配列番号９に記載のＦＲ  Ｌ１、配列番号１０に記載のＦＲ  Ｌ２、配列番号１１に記載のＦＲ  Ｌ３及び配列番号１２に記載のＦＲ  Ｌ４を含む、Ｐ実施形態２４〜２６のいずれか１つに記載の組換えタンパク質。
【０２７９】
Ｐ実施形態２８．前記重鎖可変ドメインが、配列番号１３に記載のＦＲ  Ｈ１、配列番号１４に記載のＦＲ  Ｈ２、配列番号１５に記載のＦＲ  Ｈ３及び配列番号１６に記載のＦＲ  Ｈ４を含む、Ｐ実施形態２４〜２７のいずれか１つに記載の組換えタンパク質。
【０２８０】
Ｐ実施形態２９．前記抗体領域が一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む、Ｐ実施形態２４〜２８のいずれか１つに記載の組換えタンパク質。
【０２８１】
Ｐ実施形態３０．前記ｓｃＦｖが配列番号１７の配列を含む、Ｐ実施形態２９に記載の組換えタンパク質。
【０２８２】
Ｐ実施形態３１．前記組換えタンパク質が、約２１ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）でＩＬ１ＲＡＰに結合することができる、Ｐ実施形態２４〜３０のいずれか１つに記載の組換えタンパク質。
【０２８３】
Ｐ実施形態３２．前記組換えタンパク質のＥＣ５０が、約４．９ｎｇ／ｍｌである、Ｐ実施形態２４〜３１のいずれか１つに記載の組換えタンパク質。
【０２８４】
Ｐ実施形態３３．前記組換えタンパク質がＩＬ１ＲＡＰに結合している、Ｐ実施形態２４〜３２のいずれか１つに記載の組換えタンパク質。
【０２８５】
Ｐ実施形態３４．前記ＩＬ１ＲＡＰがヒトＩＬ１ＲＡＰである、Ｐ実施形態３３に記載の組換えタンパク質。
【０２８６】
Ｐ実施形態３５．前記ＩＬ１ＲＡＰが細胞の一部を形成する、Ｐ実施形態３３又は３４に記載の組換えタンパク質。
【０２８７】
Ｐ実施形態３６．前記ＩＬ１ＲＡＰが前記細胞の表面で発現される、Ｐ実施形態３３〜３５のいずれか１つに記載の組換えタンパク質。
【０２８８】
Ｐ実施形態３７．前記細胞ががん細胞である、Ｐ実施形態３６に記載の組換えタンパク質。
【０２８９】
Ｐ実施形態３８．前記がん細胞が白血病幹細胞（ＬＳＣ）である、Ｐ実施形態３７に記載の組換えタンパク質。
【０２９０】
Ｐ実施形態３９．前記がん細胞が急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞である、Ｐ実施形態３７に記載の組換えタンパク質。
【０２９１】
Ｐ実施形態４０．前記抗体領域がＦｃドメインを含む、Ｐ実施形態２４〜３９のいずれか１つに記載の組換えタンパク質。
【０２９２】
Ｐ実施形態４１．前記ＦｃドメインがＩｇＧ４  Ｆｃドメインである、Ｐ実施形態４０に記載の組換えタンパク質。
【０２９３】
Ｐ実施形態４２．細胞内共刺激シグナル伝達ドメインをさらに含む、Ｐ実施形態２４〜４１のいずれか１つに記載の組換えタンパク質。
【０２９４】
Ｐ実施形態４３．前記細胞内共刺激シグナル伝達ドメインが、ＣＤ２８細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン、４−１ＢＢ細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン、ＩＣＯＳ細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン又はＯＸ−４０細胞内共刺激シグナル伝達ドメインである、Ｐ実施形態４２に記載の組換えタンパク質。
【０２９５】
Ｐ実施形態４４．細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインをさらに含む、Ｐ実施形態２４〜４３のいずれか１つに記載の組換えタンパク質。
【０２９６】
Ｐ実施形態４５．前記細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ζ細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインである、Ｐ実施形態４４に記載の組換えタンパク質。
【０２９７】
Ｐ実施形態４６．自己開裂ペプチジル配列をさらに含む、Ｐ実施形態２４〜４５のいずれか１つに記載の組換えタンパク質。
【０２９８】
Ｐ実施形態４７．前記自己開裂ペプチジルリンカー配列がＴ２Ａ配列又は２Ａ配列である、Ｐ実施形態４６に記載の組換えタンパク質。
【０２９９】
Ｐ実施形態４８．検出可能ドメインをさらに含む、Ｐ実施形態２４〜４７のいずれか１つに記載の組換えタンパク質。
【０３００】
Ｐ実施形態４９．前記検出可能ドメインが切断型ＥＧＦＲ（ＥＧＦＲｔ）ドメインである、Ｐ実施形態４８に記載の組換えタンパク質。
【０３０１】
Ｐ実施形態５０．前記組換えタンパク質が細胞の一部を形成する、Ｐ実施形態２４〜４９のいずれか１つに記載の組換えタンパク質。
【０３０２】
Ｐ実施形態５１．前記組換えタンパク質がＴ細胞の一部を形成する、Ｐ実施形態２４〜４９のいずれか１つに記載の組換えタンパク質。
【０３０３】
Ｐ実施形態５２．Ｐ実施形態２４〜５１のいずれか１つに記載の組換えタンパク質をコードする単離された核酸。
【０３０４】
Ｐ実施形態５３．治療有効量のＰ実施形態２４〜５１のいずれか１つに記載の組換えタンパク質及び薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。
【０３０５】
Ｐ実施形態５４．がんの治療を必要とする対象においてがんを治療する方法であって、治療有効量のＰ実施形態２４〜５１のいずれか１つに記載の組換えタンパク質を対象に投与し、それにより前記対象においてがんを治療することを含む方法。
【０３０６】
Ｐ実施形態５５．（ｉ）エフェクター細胞リガンドに結合することができる第１の抗体領域、並びに
（ｉｉ）（ａ）配列番号１に記載のＣＤＲ  Ｌ１、配列番号２に記載のＣＤＲ  Ｌ２及び配列番号３に記載のＣＤＲ  Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン、及び
（ｂ）配列番号４に記載のＣＤＲ  Ｈ１、配列番号５に記載のＣＤＲ  Ｈ２及び配列番号６に記載のＣＤＲ  Ｈ３を含む重鎖可変領域ドメイン、
を含む第２の抗体領域、
を含む組換えタンパク質。
【０３０７】
Ｐ実施形態５６．前記エフェクター細胞リガンドがＣＤ３タンパク質である、Ｐ実施形態５５に記載の組換えタンパク質。
【０３０８】
Ｐ実施形態５７．前記軽鎖可変ドメインが配列番号７の配列を含む、Ｐ実施形態５５〜５６のいずれか１つに記載の組換えタンパク質。
【０３０９】
Ｐ実施形態５８．前記重鎖可変ドメインが配列番号８の配列を含む、Ｐ実施形態５５〜５７のいずれか１つに記載の組換えタンパク質。
【０３１０】
Ｐ実施形態５９．前記軽鎖可変ドメインが、配列番号９に記載のＦＲ  Ｌ１、配列番号１０に記載のＦＲ  Ｌ２、配列番号１１に記載のＦＲ  Ｌ３及び配列番号１２に記載のＦＲ  Ｌ４を含む、Ｐ実施形態５５〜５８のいずれか１つに記載の組換えタンパク質。
【０３１１】
Ｐ実施形態６０．前記重鎖可変ドメインが、配列番号１３に記載のＦＲ  Ｈ１、配列番号１４に記載のＦＲ  Ｈ２、配列番号１５に記載のＦＲ  Ｈ３及び配列番号１６に記載のＦＲ  Ｈ４を含む、Ｐ実施形態５５〜５９のいずれか１つに記載の組換えタンパク質。
【０３１２】
Ｐ実施形態６１．前記第１の抗体領域が第１のＦａｂ’断片であり又は第２の抗体領域が第２のＦａｂ’断片である、Ｐ実施形態５５〜６０のいずれか１つに記載の組換えタンパク質。
【０３１３】
Ｐ実施形態６２．前記第１の抗体領域が一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）であり又は前記第２の抗体領域が第２の一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である、Ｐ実施形態５５〜６０のいずれか１つに記載の組換えタンパク質。
【０３１４】
Ｐ実施形態６３．前記第２のｓｃＦｖが配列番号１７の配列を含む、Ｐ実施形態５５〜５６のいずれか１つに記載の組換えタンパク質。
【０３１５】
Ｐ実施形態６４．前記第２の抗体領域が、約２１ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）でＩＬ１ＲＡＰに結合することができる、Ｐ実施形態５５〜６３のいずれか１つに記載の組換えタンパク質。
【０３１６】
Ｐ実施形態６５．前記第２の抗体領域のＥＣ５０が、約４．９ｎｇ／ｍｌである、Ｐ実施形態５５〜６４のいずれか１つに記載の組換えタンパク質。
【０３１７】
Ｐ実施形態６６．前記第２の抗体領域がＩＬ１ＲＡＰに結合している、Ｐ実施形態５５〜６５のいずれか１つに記載の組換えタンパク質。
【０３１８】
Ｐ実施形態６７．前記ＩＬ１ＲＡＰがヒトＩＬ１ＲＡＰである、Ｐ実施形態６６に記載の組換えタンパク質。
【０３１９】
Ｐ実施形態６８．前記ＩＬ１ＲＡＰが細胞の一部を形成する、Ｐ実施形態６６〜６７のいずれか１つに記載の組換えタンパク質。
【０３２０】
Ｐ実施形態６９．ＩＬ１ＲＡＰが前記細胞の表面で発現される、Ｐ実施形態６６〜６８のいずれか１つに記載の組換えタンパク質。
【０３２１】
Ｐ実施形態７０．前記細胞ががん細胞である、Ｐ実施形態６９に記載の組換えタンパク質。
【０３２２】
Ｐ実施形態７１．前記がん細胞が白血病幹細胞（ＬＳＣ）である、Ｐ実施形態７０に記載の組換えタンパク質。
【０３２３】
Ｐ実施形態７２．前記がん細胞が急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞である、Ｐ実施形態７０に記載の組換えタンパク質。
【０３２４】
Ｐ実施形態７３．治療有効量のＰ実施形態５５〜７２のいずれか１つに記載の組換えタンパク質及び薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。
【０３２５】
Ｐ実施形態７４．がんの治療を必要とする対象においてがんを治療する方法であって、治療有効量のＰ実施形態５５〜７２のいずれか１つに記載の組換えタンパク質を対象に投与し、それにより前記対象においてがんを治療することを含む方法。
【０３２６】
Ｐ実施形態７５．前記がんが白血病である、Ｐ実施形態２３、５４又は７４のいずれか１つに記載の方法。
【０３２７】
Ｐ実施形態７６．前記がんが急性骨髄性白血病である、Ｐ実施形態２３、５４又は７４のいずれか１つに記載の方法。
【０３２８】
Ｐ実施形態７７．前記方法が前記対象に第２の治療薬を投与することをさらに含む、Ｐ実施形態２３、５４又は７４のいずれか１つに記載の方法。
【０３２９】
Ｐ実施形態７８．細胞の増殖を阻害する方法であって、
（ｉ）細胞をＰ実施形態１〜２１のいずれか１つに記載の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体、Ｐ実施形態２４〜５１のいずれか１つに記載の組換えタンパク質又はＰ実施形態５５〜７２のいずれか１つに記載の組換えタンパク質に接触させ、それにより接触細胞を形成すること、及び
（ｉｉ）Ｐ実施形態１〜２１のいずれか１つに記載の前記抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体、Ｐ実施形態２４〜５１のいずれか１つに記載の前記組換えタンパク質又はＰ実施形態５５〜７２のいずれか１つに記載の前記組換えタンパク質を前記接触細胞上のＩＬ１ＲＡＰに結合させ、それにより前記細胞の増殖を阻害すること
を含む方法。
【０３３０】
Ｐ実施形態７９．前記細胞ががん細胞である、Ｐ実施形態７８に記載の方法。
【０３３１】
Ｐ実施形態８０．前記細胞が白血病幹細胞（ＬＳＣ）である、Ｐ実施形態７８又は７９に記載の方法。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図４Ｅ】
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【図４Ｆ】
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【図４Ｇ】
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【図４Ｈ】
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【図４Ｉ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
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【図８Ｅ】
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【図８Ｆ】
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【図８Ｇ】
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【図８Ｈ】
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【図８Ｉ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１０Ｄ】
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【図１０Ｅ】
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【図１０Ｆ】
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【図１０Ｇ】
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【図１０Ｈ】
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【図１０Ｉ】
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【図１０Ｊ】
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【図１０Ｋ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１１Ｄ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１２Ｃ】
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【図１２Ｄ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１３Ｃ】
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【図１３Ｄ】
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【図１３Ｅ】
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【図１３Ｆ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１４Ｃ】
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【図１４Ｄ】
2020533960.tif 000085
【図１４Ｅ】
2020533960.tif 000086
【図１４Ｆ】
2020533960.tif 000087
【図１４Ｇ】
2020533960.tif 000088
【図１４Ｈ】
2020533960.tif 000089
【図１４Ｉ】
2020533960.tif 000090
【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
2020533960.tif 000092
【図１５Ｃ】
2020533960.tif 000093
【図１５Ｄ】
2020533960.tif 000094
【図１６Ａ】
2020533960.tif 000095
【図１６Ｂ】
2020533960.tif 000096
【図１６Ｃ】
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【図１６Ｄ】
2020533960.tif 000098
【配列表】
2020533960000001.app
【国際調査報告】
2020533960.tif 000099
2020533960.tif 000100